KR20210156849A - Gpcr 헤테로머 저해제들 및 이의 용도 - Google Patents

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이지영
양창수
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Abstract

본 발명은 암과 연합된, CXC 수용체 4 (CXCR4)의 저해제-G 단백질-연결된 수용체 (GPCR) 헤테로머들 (CXCR4-GPCR 헤테로머들)에 관계하며, 여기에서 CXCR4는 다른 G 단백질-연결된 수용체들 (GPCRx)과 기능적 헤테로머를 형성한다. 보다 구체적으로, 본 발명은 CXCR4와 헤테로머를 형성하는 ADRB2에 관계하며, CXCR4 효현제와 ADRB2 효현제의 공동-자극이 있을 때, 이는 CXCR4의 다운스트림 신호전달(signaling)의 강화를 유도한다. 본 발명은 CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제를 포함하는 약제학적 조성물 및 키트, 그리고 암의 진단 및/또는 치료요법에서 동일한 것을 이용하는 치료 방법 및 이용 방법을 또한 제공한다.

Description

GPCR 헤테로머 저해제들 및 이의 용도
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2020년 5월 11일자로 제출된 미국 가출원 번호 63/022,845 및 2019년 5월 17일자로 제출된 미국 가출원 번호 62/849,755를 우선권으로 주장하며, 이의 전문이 본 명세서의 참고자료에 편입된다.
서열 목록
본 출원은 "14462-012-228_SEQ_LISTING.txt"의 제목으로 된, 2020년 5월 11일자로 생성되었으며, 1,516 바이트 크기의 ASCII 텍스트 포멧으로 된 서열 목록을 본 출원과 함께 제출하며, 이는 참고자료에 편입된다.
분야
본 발명은 암 치료요법 분야에 관계한다. 구체적으로, CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제의 조합을 포함하는 약제학적 조성물, 그리고 이를 이용한 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 그리고 약제학적 조성물의 용도를 본원에서 제공한다.
발명의 배경
G 단백질-연결된 수용체들 (GPCRs)은 G 단백질들에 연결된 7개-막 도메인 세포 표면 수용체들이다. GPCRs는 빛, 냄새, 호르몬, 신경전달물질, 케모킨, 작은-지질 분자 및 뉴클레오티드를 비롯한 자극을 감지함으로써 다양한 감각 및 생리 학적 반응을 매개한다. 인간 게놈에는 약 800 개의 GPCR 유전자가 있으며, 그 중 절반 이상이 후각, 시각 및 미각 수용체와 같은 감각 수용체를 인코드하는 것으로 예상된다(Bjarnadottir, T.K., et al.; (2006) Comprehensive repertoire and phylogenetic analysis of the G protein-coupled receptors in human and mouse, Genomics 88, 263-273). 나머지 350개의 GPCRs는 배아 발생, 거동, 기분, 인지, 혈압, 심박수 및 소화 과정의 조절, 면역계 및 염증 조절, 항상성 유지, 암의 성장 및 전이에 있어서 생리적으로 중요한 역할을 한다 (Filmore, D. (2004) It's a GPCR world. Modern Drug Discovery American Chemical Society 2004 (November), 24-28; Overington, J.P., et al., (2006) How many drug targets are there? Nat Rev Drug Discov 5, 993-996). GPCRs는 많은 질병과 연관되어 있고, 모든 처방 약물의 대략 40%가 표적으로 한다 (Filmore, D. (2004)).
CXC 수용체 4 (CXCR4)는 케모킨 수용체 패밀리 GPCR의 구성원이다. CXCR4는 대부분의 조혈 세포 유형, 골수 줄기 세포, 내피 전구 세포, 혈관 내피 세포, 뉴런 및 뉴런 줄기 세포, 미세아교세포 및 성상세포에서 발현된다(Klein, R.S., et al., (2004) Immune and nervous system CXCL12 and CXCR4: parallel roles in patterning and plasticity, Trends Immunol 25, 306-314; Griffith, J.W., et. al., (2014) Chemokines and chemokine receptors: positioning cells for host defense and immunity, Annu Rev Immunol 32, 659-702). CXCR4는 일명 간질 세포-유래된 인자 1(SDF-1)로 알려진, 이의 리간드 CXC 모티브 케모킨 리간드 12 (CXCL12)에 반응하며, 조혈, 심혈관 및 신경계의 배아 발달에 필수적인 역할을 한다 (Griffith, J.W., et. al., (2014)). CXCR4는 인간 면역결핍 바이러스 (HIV)의 공동-수용체로 발견되었으며, 성인에서 골수로의 조혈 줄기 세포(HSCs)로의 회귀(homing), 염증, 조직의 면역 감시 및 조직 재생에 있어서 중요한 역할을 한다 (Chatterjee, S., et al., (2014) The intricate role of CXCR4 in cancer, Adv Cancer Res 124, 31-82). CXCR4는 HIV 감염, 허혈, 상처 치유, 류마티스 관절염, 전신 홍반성 루푸스 (SLE), 간질성 폐렴, 혈관 질환, 다발성 경화증, 폐 섬유증 및 알레르기기도 질환과 같은 다양한 면역계 및 자가면역 질환에 연루되어 있다(Chu, T. et al., (2017) CXCL12/CXCR4/CXCR7 Chemokine Axis in the Central Nervous System: Therapeutic Targets for Remyelination in Demyelinating Diseases, Neuroscientist 23, 627-648; Debnath, B., et al., (2013) Small molecule inhibitors of CXCR4, Theranostics 3, 47-75; 그리고 Domanska, U.M., et al., (2013) A review on CXCR4/CXCL12 axis in oncology: no place to hide, Eur J Cancer 49, 219-230). CXCR4는 또한 상이한 많은 암과 관련이 있으며, 악성 종양에서 여러 가지 잠재적인 역할을 하는 것으로 간주된다. CXCR4는 유방암, 폐암, 뇌암, 신장암 (또는 신장 세포 암종), 췌장암, 난소암, 전립선암, 흑색종, 백혈병, 다발성 골수종, 위장 암 및 연조직 암종을 포함하여 23개 이상의 인간 암에서 과발현되며, 불량한 예후 마커로 간주된다(Domanska, U.M., et al., (2013); Chatterjee, S., et al., (2014); 그리고 Furusato, B., et al., (2010) CXCR4 and cancer, Pathol Int 60, 497-505).
CXCR4와 GPCR의 헤테로머들의 형성은 제한된 수의 GPCR 패밀리, 예컨대 케모킨, 아드레날린 및 오피오이드 수용체 패밀리 내에서 연구되었다. 다양한 병리학적 조건에서 CXCR4의 주요 역할 및 증가된 발현을 고려하면, 특정 질환에 독특한 특징을 부여하는 상이한 CXCR4-GPCRx 헤테로머들이 존재할 가능성이 크다.
아드레노셉터 베타 2 (때로 베타-2 아드레날린작용성 수용체 또는 β2 아드레노수용체 ("ADRB2")로도 불림)는 에피네프린, 호르몬 및 신경전달물질 (리간드 동의어, 아드레날린)과 상호작용하는 세포 막-스패닝(spanning) 베타-아드레날린 수용체로써, 다운스트림 L-타입 칼슘 채널 상호작용을 경유한 이의 신호전달은 생리학적 반응, 이를 테면, 평활근 이완 및 기관지확장을 중개한다(Gregorio, G.G., et al., (2017) Single-molecule analysis of ligand efficacy in beta2AR-G-protein activation, Nature 547, 68-73). 헤테로머 CXCR4 ADRB2 (CXCR4-ADRB2 헤테로머)의 형성, 심근세포 상에서 CXCR4와 ADRB2 (p2-AR)의 공동-발현, 그리고 공-침전 및 생물발광 공영 에너지 전달을 이용하여 CXCR4와 ADRB2의 물리적 연합 (LaRocca, T.J., et al. (2010) beta2-Adrenergic receptor signaling in the cardiac myocyte is modulated by interactions with CXCR4, J Cardiovasc Pharmacol 56, 548-559; Nakai, A., et al., (2014) Control of lymphocyte egress from lymph nodes through beta2-adrenergic receptors, J Exp Med 211, 2583-2598).
다양한 병리학적 조건에서 CXCR4의 주요 역할 및 증가된 발현을 고려하면, 특정 질환에 독특한 속성을 부여하는 CXCR4-ADRB2 헤테로머가 존재할 가능성이 크다. 따라서, CXCR4 저해제 단독치료요법에 비교하여, 더 높은 효능과 더 낮은 부작용을 갖고, CXCR4-ADRB2 헤테로머-표적화 암 치료요법제로서 사용하기 위한 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 저해제를 확인하고, 개발할 필요성이 당업계에 존재한다.
CXCR4-ADRB2 헤테로머의 저해제들, 또는 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 저해제들의 조합, 그리고 이를 포함하는 약제학적 조성물 또는 약제학적 키트, 동일한 것을 이용한 치료 방법이 본원에서 제공되며, 이때 향상된 다운스트림 신호전달은 기능적 CXCR4-ADRB2 헤테로머 형성으로 인한 것이며 (가령, CXCR4에 비교하여 강화된 신호전달 다운스트림, 또는 ADRB2에 비교하여 강화된 신호전달 다운스트림); 이때 대상체, 이를 테면, 대상체의 세포에 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 존재는 질환, 이를 테면, 암과 연관된다.
본 발명의 요약
한 측면에서, 암을 앓고 있는 대상체의 세포에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머로부터 강화된 다운스트림 신호전달을 억제하는 방법이 본원에서 제공되며, 이 방법은 해당 대상체에게 (a) CXCR4 저해제, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르(burixafor)이며; 그리고 (b) ADRB2 저해제를 투여하는 것이 내포되며; 이때: (i) 상기 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로부터 유래되며; 그리고 (ii) 투여된 저해제들 조합은 암 대상체에서 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 다운스트림 신호전달을 억제시킨다.
또다른 측면에서, CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체의 암을 치료하는 방법을 본원에서 제공하며, 이 방법 해당 대상체에게 (a) CXCR4 저해제, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르이며, 그리고 (b) ADRB2 저해제를 투여하는 것이 내포되며; 이때: (i) 상기 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로부터 유래되며; 그리고 (ii) 투여된 저해제들 조합은 암 대상체에서 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 다운스트림 신호전달을 억제시킨다.
또다른 측면에서, CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체의 암을 치료하는 방법이 본원에서 제공되며, 이 방법에는 다음이 내포된다: (a) 해당 대상체의 세포가 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 지를 결정하고, 이때 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 것이며; 그리고 (b) 만일 해당 대상체의 세포가 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유한다면, 그러면 해당 암 대상체에게 다음을 투여한다 (i) CXCR4 저해제, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르이며; 그리고 (ii) ADRB2 저해제.
또다른 측면에서, CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체의 암을 치료하는 방법이 본원에서 제공되며, 이때 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 것이며, 이 방법에는 다음이 내포된다: (1) 해당 대상체가 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포 보유 여부의 결정은 해당 대상체로부터 생물학적 샘플을 획득하거나 또는 획득하였음으로 해서 결정되며; 그리고 다음을 결정하기 위해 해당 생물학적 샘플을 분석하거나 또는 분석하였고: (i) 해당 대상체의 세포가 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 함유하는 지 여부; 또는 (ii) CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제의 조합이 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)에서 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 헤테로머-특이적 속성들 또는 기능을 변경시키는 지 여부; 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)의 헤테로머-특이적 속성들을 변경시키는 지 여부; 또는 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포들을 보유한 대상체에서 암 진행의 감소 여부; 그리고 (2) 만약 해당 대상체가 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한다면, 그러면 암 대상체에게 CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제의 조합을 투여하고, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르이며; 그리고 (3) 만약 해당 대상체가 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유하지 않는다면, 그러면 해당 암 대상체에게 부릭사포르 또는 ADRB2 저해제의 단일 저해제를 투여한다.
또다른 측면에서, CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체의 암을 치료하는 방법이 본원에서 제공되며, 이때 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 것이며, 이 방법에는 다음이 내포된다: (1) 해당 대상체가 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포 보유 여부의 결정은 해당 대상체로부터 생물학적 샘플을 획득하거나 또는 획득하였음으로 해서 결정되며; 그리고 다음을 결정하기 위해 해당 생물학적 샘플을 분석하거나 또는 분석하였고: (i) 해당 대상체의 세포가 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 함유하는 지 여부; 또는 (ii) CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제의 조합이 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)에서 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 헤테로머-특이적 속성들 또는 기능을 변경시키는 지 여부; 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)의 헤테로머-특이적 속성들을 변경시키는 지 여부; 또는 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포들을 보유한 대상체에서 암 진행의 감소 여부; 그리고 (2) 만약 해당 대상체가 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한다면, 그러면 암 대상체에게 CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제의 조합을 투여하고, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르이며; 그리고 (3) 만약 해당 대상체가 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유하지 않는다면, 그러면 해당 암 대상체에게 부릭사포르 또는 ADRB2 저해제의 단일 저해제를 투여하고, 이때: (a) 부릭사포르 또는 ADRB2 저해제중 단일 저해제 투여와 비교하여, 해당 암 대상체에게 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 조합을 투여할 때, 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체에서 암의 진행은 5-100% 범위에서 더 감소되며; (b) 부릭사포르가 단일 저해제로 투여될 때 이의 효능과 비교하여, 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체에게 ADRB2 저해제와 복합하여 투여할 때, 부릭사포르의 효능은 5-2000% 범위로 증가되며; 및/또는 (c) ADRB2가 단일 저해제로 투여될 때 이의 효능과 비교하여, 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체에게 부릭사포르와 복합하여 투여될 때, ADRB2 저해제의 효능은 5-2000% 범위로 증가된다.
또다른 측면에서, CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체의 암을 치료하는 방법이 본원에서 제공되며, 이때 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 것이며, 이 방법에는 다음이 내포된다: (1) 해당 대상체의 세포가 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 지의 여부는 해당 대상체로부터 생물학적 샘플을 획득하거나 또는 획득하였고, 해당 생물학적 샘플을 분석하거나 또는 분석하였음으로 해서 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머가 이 대상체의 세포에 존재하는 지 여부를 결정하고; 이때 해당 생물학적 샘플에서 실행된 분석은 다음중 하나 또는 그 이상이거나 또는 다음중 하나 또는 그 이상을 포함하며: 공동-내재화 분석, 공동-국소화 분석, 제자리 혼성화, 면역조직화학, 면역전자 현미경, 근접성-기반 분석, 공동-면역침전 분석, 효소-연계된 면역흡착 분석 (ELISA), 유동세포분석, RNAseq, RT-qPCR, 마이크로어레이, 또는 형광 동물 분석; 그리고 (2) 만일 해당 대상체의 세포가 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유한다면, 그러면 암 대상체에게 CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제의 조합을 투여하고, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르이며; 그리고 (3) 만약 해당 대상체의 세포가 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하지 않는다면, 그러면 해당 암 대상체에게 부릭사포르 또는 ADRB2 저해제의 단일 저해제를 투여한다 .
또다른 측면에서, CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체의 암을 치료하는 방법이 본원에서 제공되며, 이때 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 것이며, 이 방법에는 다음이 내포된다: (1) 해당 대상체의 세포가 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 지의 여부는 해당 대상체로부터 생물학적 샘플을 획득하거나 또는 획득하였음으로 해서 해당 생물학적 샘플을 분석하거나 또는 분석하였음으로 해서 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머가 이 대상체의 세포에 존재하는 지 여부를 결정하고; 이때 해당 생물학적 샘플에서 실행된 분석은 다음중 하나 또는 그 이상이거나 또는 다음중 하나 또는 그 이상을 포함하며: 공동-내재화 분석, 공동-국소화 분석, 제자리 혼성화, 면역조직화학, 면역전자 현미경, 근접성-기반 분석, 공동-면역침전 분석, 효소-연계된 면역흡착 분석 (ELISA), 유동세포분석, RNAseq, RT-qPCR, 마이크로어레이, 또는 형광 동물 분석; 그리고 (2) 만일 해당 대상체의 세포가 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유한다면, 그러면 암 대상체에게 CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제의 조합을 투여하고, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르이며; 그리고 (3) 만약 해당 대상체의 세포가 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하지 않는다면, 그러면 해당 암 대상체에게 부릭사포르 또는 ADRB2 저해제의 단일 저해제를 투여하고; 이때: (a) 부릭사포르 또는 ADRB2 저해제중 단일 저해제 투여와 비교하여, 해당 암 대상체에게 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 조합을 투여할 때, 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체에서 암의 진행은 5-100% 범위에서 더 감소되며; (b) 부릭사포르가 단일 저해제로 투여될 때 이의 효능과 비교하여, 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체에게 ADRB2 저해제와 복합하여 투여할 때, 부릭사포르의 효능은 5-2000% 범위로 증가되고; 및/또는 (c) ADRB2가 단일 저해제로 투여될 때 이의 효능과 비교하여, 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체에게 부릭사포르와 복합하여 투여될 때, ADRB2 저해제의 효능은 5-2000% 범위로 증가된다.
또다른 측면에서, CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체의 암 치료에 사용을 위한 약제학적 키트가 본원에서 제공되며, 상기 약제학적 키트에는 다음이 내포된다: (a) CXCR4 저해제, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르이며; 그리고 (b) ADRB2 저해제; 이때 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 것이다.
또다른 측면에서, CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체의 암 치료에 사용을 위한 약제학적 조성물이 본원에서 제공되며, 상기 약제학적 조성물에는 다음이 내포된다: (a) CXCR4 저해제, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르이며; (b) ADRB2 저해제; 그리고 (c) 약제학적으로 수용가능한 담체; 이때 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 것이다.
또다른 측면에서, 다음의 것들이 내포된 약제학적 조성물이 본원에서 제공된다 (a) CXCR4 저해제, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르이며; (b) ADRB2 저해제; 그리고 (c) 약제학적으로 수용가능한 담체.
도면의 간단한 설명
도 1: 이중분자 형광 상보성 (BiFC) 검정의 계략도를 보여준다. GPCR A는 황색 형광 단백질 (YFP) 비너스(Venus)의 N-말단 단편 (VN)에 융합되고, GPCRB는 비너스의 C-말단 단편 (VC)에 융합된다. GPCR A와 B가 헤테로머를 형성할 때, 상보성 VN 과 VC는 기능성 비너스를 형성하도록 충분히 근접해 있다.
도 2A-2D: BiFC 검정을 이용한 ADRB2와의 CXCR4-상호작용 식별을 보여준다. 음성 BiFC 신호를 나타낸 대표 영상: CXCR4-VN과 HA-VC (도 2A), 그리고 CXCR4-VN과 GCGR-VC (도 2C). 양성 BiFC 신호를 보이는 CXCR4와 GPCRx의 대표 영상: CXCR4-VN과 CXCR4-VC (도 2B), 그리고 CXCR4-VN과 ADRB2-VC (도 2D).
도 3A-3B: GPCR 공동-내재화 연구의 원리를 보여준다. CXCR4-GFP와 GPCRx를 공동발현시키는 세포들은 GPCRx 특이적 효현제로 처리된다. (도 3A) CXCR4와 GPCRx는 서로 물리적으로 상호작용하지 않는다. GPCRx 효현제는 GPCRx의 내재화는 유도하지만, 그러나 CXCR4-GFP의 내재화는 유도하지 않는다. (도 3B) CXCR4와 GPCRx는 물리적으로 상호작용하여, 헤테로머를 형성한다. GPCRx 효현제는 GPCRx의 내재화를 유도하고, CXCR4-GFP는 GPCRx와 공동-내재화된다.
도 4A-4B: GPCRx와 이의 대응하는 효현제로 자극 시, CXCR4-EGFP의 공동-내재화를 보여준다 (대조군: CXCR4-GFP (도 4A)). U-2 OS 세포는 CXCR4-EGFP와 GPCRx-VC를 인코딩하는 아데노바이러스로 공동-형질도입되었고, 다음의 GPCRx 짝들은 CXCR4-EGFP와의 헤테로머의 형성 및 CXCR4-EGFP의 공동-내재화를 유도하는 지에 대해 검사되었다: GPCRx는 ADRB2를 나타낸다 (도 4B).
도 5A-5D: CXCR4와 ADRB2를 공동-발현시키는 세포에서 이들의 각각 선택적 효현제로 공동-자극 시에 칼슘 반응의 강화를 보여준다. MDA-MB-231 인간 유방암 세포는 CXCR4와 HA-VC를 인코딩하는 아데노바이러스로 형질도입되었다 (도 5A), ADRB2와 HA-VC (도 5B), 또는 CXCR4와 ADRB2 (도 5C). HA-VC를 인코딩하는 아데노바이러스를 이용하여 형질도입된 아데노바이러스의 총량을 조정하였다. 세포는 2일간 GPCR를 발현하도록 하였고, Cal-520 AM과 함께 2 hr 동안 항온처리되었고, 그리고 15 nM의 CXCL12, 100 nM의 살메테롤(salmeterol) (ADRB2-선택적 효현제), 또는 CXCL12와 살메테롤과 함께 처리되었다. 칼슘 동원은 FlexStation 3 다중-모드 마이크로플레이트 판독기(Multi-Mode Microplate Reader)를 이용하여 측정되었다. 결과들은 기선(base-line) 활성에 대하여 표준화하였다. 데이터는 세 가지 독립적인 실험을 나타낸다 (평균 ± SEM). (도 5D) 칼슘 동원은 A-C에서 각 그래프의 곡선-아래-면적(AUC)를 산출함으로써 정량화되었다. 데이터는 CXCR4를 단독 발현시키는 세포에서 CXCL12-자극된 칼슘 반응에 대하여 표준화되었다. 합은 강화의 시각화를 위하여, CXCR4와 ADRB2를 공동-발현시키는 세포에서 CXCL12와 살메테롤에 의한 개별적 자극 후 획득된 반응의 산출된 부가 효과를 나타낸다. ***P < 0.001; Student's t 테스트.
도 6: 두 길항제를 공동-투여하면, CXCR4와 ADRB2를 발현시키고, CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포가 CXCL12 및 ADRB2 효현제 살메테롤로 동시 자극되었을 경우, 강화된 칼슘 반응이 효과적으로 억제됨을 보여준다. MDA-MB-231 세포들은 CXCR4와 ADRB2를 인코딩하는 아데노바이러스로 공동-형질도입되었다. 세포를 Cal-520 AM으로 2 hr 동안, ADRB2 길항제 또는 비히클로 30분 동안 항온처리하였고, 표시된 양의 CXCL12, ADRB2 효현제 살메테롤, 또는 CXCL12 및 ADRB2 효현제 살메테롤로 자극하였다. 칼슘 동원은 도 5D에서 기술된 바와 같이 정량화되었다. 데이터는 세 가지 독립적인 실험을 나타낸다 (평균 ± SEM). *P < 0.05, **P < 0.01, ***P < 0.001; Student's t 테스트.
도 7: 내재화 억제 연구의 원리를 보여준다. CXCR4-GFP 및 GPCRx를 공동-발현시키는 세포들은 CXCL12 (SDF-1) 및/또는 GPCRx 특이적 길항제로 처리되었다. 시나리오 A: CXCR4와 GPCRx는 헤테로머를 형성한다. CXCR4 효현제, CXCL12 (SDF-1)는 CXCR4-GFP 단독 또는 GPCRx와 함께 CXCR4-GFP의 내재화를 유도하였다. 시나리오 B: GPCRx 길항제는 CXCR4-GFP의 내재화를 유도하지 않는다. 시나리오 C: CXCL12 (SDF-1) 자극된 CXCR4-GFP의 내재화는 GPCRx 특이적 길항제에 의해 억제된다.
도 8: CXCR4-ADRB2 헤테로머에 대한 ADRB2 길항제에 의한 내재화의 억제를 보여준다. CXCR4-GFP를 발현시키는 U-2 OS 세포들은 ADRB2를 인코딩하는 아데노바이러스로 형질도입되었다. CXCL12, CXCR4 효현제로 처리하면 CXCR4-ADRB2 내재화가 유도되었다. 그러나, ADRB2 길항제인 카르베디롤(Carvedilol)은 내재화를 유도하지 못하였다. CXCL12 및 카르베디롤의 공동-처리는 CXCL12 유도된 CXCR4-ADRB2 내재화를 부분적으로 억제하였다.
도 9: 암 환자에서 당해 환자 유래된 세포 (PDCs) 생존에 있어서 ADRB2 길항제의 효과를 보여준다. PDC의 생존에 있어서 ADRB2 길항제 (카르베디롤)의 효과. 카르베디롤은 세포 생존을 상당히 감소되도록 유도하였다 (IC50=11.69 μM).
도 10A-10C: CXCR4와 ADRB2를 과다-발현시키는 U-2 OS 세포에서 PLA 및 RT-qPCR에 의한 CXCR4-ADRB2 헤테로다이머 탐지를 보여준다. CXCR4-GFP를 발현시키는 U-2 OS 세포는 상이한 MOIs에서 2일간 ADRB2를 인코딩하는 아데노바이러스로 형질도입되었다. 그 다음, CXCR4-ADRB2를 공동-발현시키는 U-2 OS 세포에서 PLA가 실행되었다. 도 10A: PLA에 의한 CXCR4-ADRB2 헤테로머 탐지 영상 도 10B: PLA 신호의 증가는 용량 의존적 방식으로 ADRB2의 발현 수준에 비례한다. 도 10C: RT-qPCR의 데이터는 U-2 OS 세포들의 내생성 ADRB2 발현 수준을 보여준다.
도 11A-11B: PLA에 의한 PDC에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머 탐지를 보여준다. GBM 기원의 PDCs (샘플 IDs: 986T, 948T, 783T, 777T, 352T1, 352T2, 578T, 559T, 464T, 448T, 096T)는 챔버 슬라이드에 플레이팅시키고, CXCR4-ADRB2 헤테로머는 CXCR4와 ADRB2 특이적 항체들을 이용한 PLA에 의해 탐지되었다. 도 11A: CXCR4-ADRB2 헤테로머 탐지 영상. DAPI 착색으로 핵을 시각화시켰고, CXCR4-ADRB2 헤테로머들은 작은 점들로 나타났다. 도 11B: PDC에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 비율.
도 12A-12B: PDX에서 CXCR4-GPCRx 헤테로머 탐지의 결과들을 보여준다. GBM 기원의 PDXs (샘플 IDs; 777T, 783T, 948T, 559T)는 CXCR4와 ADRB2 특이적 항체들과 함께 PLA에 의해 CXCR4-ADRB2 헤테로머가 탐지되었다. 도 12A: CXCR4-ADRB2 헤테로머 탐지 영상. DAPI 착색으로 핵을 시각화시켰고, CXCR4-ADRB2 헤테로머들은 작은 점들로 나타났다. 도 12B: PDX에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 비율.
도 13: CXCR4와 ADRB2를 공동-발현시키는 세포를 ADRB2 효현제로 공동-자극시, 칼슘 반응의 강화를 보여준다. MDA-MB-23 1 세포는 CXCR4와 ADRB2를 인코딩하는 아데노바이러스로 형질도입된다. 세포는 3일간 배양되었고, Cal-520 AM로 착색되었고, 그리고 CXCL12 (30 nM) 단독으로, 또는 살메테롤 단독으로 용량을 증가시키면서, 또는 30 nM의 CXCL12의 조합과 함께 살메테롤의 용량을 증가시키면서 처리되었다. 칼슘 동원은 FlexStation 3을 이용하여 측정되었다. 합은 30 nM의 CXCL12 단독 (빈 네모)으로, 그리고 표시된 용량(검정 원)에서 ADRB2 리간드 단독으로 야기된 반응의 산출된 부가값을 나타낸다. 합 그래프는 역 삼각형이 있는 파선으로 표시된다. 각 점에서 합(역 삼각형)과 공동-처리(채워진 네모) 사이의 통계학적으로 유의적인 차이는 Student's t 테스트에 의해 결정되었다. *P < 0.05; **P < 0.01; ***P < 0.001; 데이터는 평균 ± SD (n = 3)을 나타낸다.
도 14: CXCR4-ADRB2 헤테로머를 발현시키는 세포를 일제히 CXCL12와 ADRB2 효현제로 자극시킬 때, 항-CXCR4 항체 및 ADRB2 길항제의 공동-처리에 의해 강화된 칼슘 반응의 효과적인 억제를 보여준다. MDA-MB-231 세포들은 CXCR4와 ADRB2를 인코딩하는 아데노바이러스로 공동-형질도입되었다. 세포는 표시된 농도의 ADRB2 길항제 (카르베디롤), 항-CXCR4 항체 (12G5), 또는 비히클로 처리되었고, Cal 6으로 2 시간 동안 항온처리되었다. 세포를 후속적으로 표시된 양의 CXCL12, ADRB2 효현제 (살메테롤), 또는 CXCL12 및 ADRB2 효현제로 자극하였다.
도 15A-15B: 도 15A: 이식 후 28일 시점에 부모 세포 A549, 안정적으로 CXCR4를 과다발현시키는 A549-CXCR4, 그리고 안정적으로 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 과다발현시키는 A549-CXCR4-ADRB2로 차례로 이식받은 마우스의 사진을 나타내고; 도 15B: 도 15A의 이식된 세포 간의 종양 성장을 비교하는 그래프를 나타내고; 매 3일 또는 4일 차에 종양의 길이(L)와 폭(IF)을 측정하고, 다음의 식에 기초하여 종양 용적을 산출함으로써, 종양 성장을 모니터하였다: 용적 = 0.5 LW 2 . 결과는 3마리 개체의 평균 ± 표준 편차로 나타낸다.
도 16A-16B: CXCR4-ADRB2 헤테로머를 발현시키는 MDA-MB-231 세포에서 CXCL12 및/또는 살메테롤의 자극에 의한 ERK 활성화를 보여준다. 도 16A는 CXCL12 (10 nM) 및/또는 살메테롤 (10 nM)로 20분 동안 처리된 MDA-MB-231 세포, MDA-MB-231-CXCR4와 MDA-MB-231-CXCR4-ADRB2에서 포스포-ERK1/2 Thr202/Tyr204 및 전체 ERK1/2의 웨스턴 블랏 분석을 보여준다. 도 16B는 전체 ERK 단백질 수준과 비교하였을 때, 포스포-ERK1/2 Thr202/Tyr204 단백질의 농도계 분석 (iBright 분석 소프트웨어)을 나타낸다.
도 17A-17B: CXCR4-ADRB2 헤테로머를 발현시키는 A549 세포에서 CXCL12 및/또는 살메테롤의 자극에 의한 ERK 활성화를 보여준다. 도 17A는 CXCL12 (10 nM) 및/또는 살메테롤 (10 nM)로 10 분 동안 처리된 A549, A549-CXCR4, 및 A549-CXCR4-ADRB2 세포에서 포스포-ERK1/2 Thr202/Tyr204와 전체 ERK1/2의 웨스턴 블랏 분석을 보여준다. 도 17B는 전체 ERK 단백질 수준과 비교하였을 때, 포스포-ERK1/2 Thr202/Tyr204 단백질의 농도계 분석 (iBright 분석 소프트웨어)을 나타낸다.
도 18A-18E: CXCR4-CXCL12 매개된 증식 증가에서 CXCR4 길항제의 효과를 보여준다. A549-더블 네가티브 (RLuc-Luc2P) 그리고 CXCR4와 ADRB2를 과다발현시키는 A549-CXCR4-ADRB2 세포를 96-웰 플레이트에 도말하고, 혈청 없는 조건에서 72 hr 동안 CXCL12 및/또는 표시된 약물로 자극하였다 (도 18A: AMD3100 (10 μM), 도 18B: LY2510924 (10 μM), 도 18C: AMD070 (1 μM), 도 18D: TG-0054 (10 μM), 그리고 도 18E: BKT-140 (10 μM)). 3중 복제(replicate) 웰에서 형광을 측정하고, 데이터는 형광(약물 처리 /비히클)의 평균 비율 ±SEM로 표시된다.
도 19A-19C: CXCR4-ADRB2 헤테로머 발현과 종양 성장 간의 상관관계를 나타낸다: 도 19A는 A549 부모 세포, CXCR4 단량체를 발현시키는 A549-CXCR4 세포 계통, 그리고 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 발현시키는 A549-CXCR4-ADRB2 세포 계통에서 PLA에 의한 CXCR4-ADRB2 헤테로머 탐지를 보여주고; 도 19B는 A549, A549-CXCR4, 및 A549-CXCR4-ADRB2에서 PLA에 의해 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 정량화시킨 것을 나타내고; 그리고 도 19C는 A549 부모 세포를 품고있는 마우스와 A549-CXCR4-ADRB2 세포를 품고있는 마우스 간의 종양 성장을 비교한 것을 나타낸다.
도 20A-20C: CXCR4-ADRB2 헤테로머 발현과 종양 성장 간의 상관관계를 나타낸다. 도 20A는 MDA-MB-231 부모 세포, CXCR4 단량체를 발현시키는 MDA-MB-231-CXCR4 세포 계통, 그리고 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 발현시키는 MDA-MB-231-CXCR4-ADRB2 세포 계통에서 PLA에 의해 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 탐지한 것을 나타내고; 도 20B는 PLA를 통하여 MDA-MB-231, MDA-MB-231-CXCR4, 및 MDA-MB-231-CXCR4-ADRB2에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 정량화시킨 것을 나타내고; 그리고 도 20C는 MDA-MB-231 부모 세포, MDA-MB-231-CXCR4, 또는 MDA-MB-23 1-CXCR4-ADRB2 세포를 품고있는 마우스 간의 종양 성장을 비교한 것을 나타낸다.
도 21A-21D: CXCR4-ADRB2 헤테로머를 발현시키는 A549 이종이식된(xenografted) 마우스에서 종양 성장에 있어서 CXCR4 저해제 단독 효과를 나타낸다. CXCR4-ADRB2 헤테로머를 발현시키는 A549 세포 계통을 이식받은 마우스에게 다양한 종류의 CXCR4 저해제들, AMD3100 (도 21A), LY25 10924 (도 2IB), AMD070 (도 21C), 또는 TG-0054 (도 21D)을 용량 의존적 방식으로 처리하여, 종양 크기를 비교하였다.
도 22A-22D: CXCR4-ADRB2 헤테로머를 발현시키는 세포를 마우스에 이식하였고, CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제 카르베디롤을 단독으로 또는 조합하여 처리하였을 때, 종양의 상대적 성장을 보여준다. 도 22A-22C: CXCR4-ADRB2 헤테로머를 발현시키는 MDA-MB-231 세포가 마우스에 정위적으로(orthotopically) 이식되었으며, CXCR4 저해제 (AMD3100 (도 22A), LY2510924 (도 22B), 또는 AMD070 (도 22C)) 및 ADRB2 저해제 카르베디롤을 단독으로 또는 조합하여 처리하였을 때, 종양의 상대적 성장을 보여준다. 결과는 5마리 개체의 평균 ± 표준 편차로 나타낸다. 도 22D: CXCR4-ADRB2 헤테로머를 발현시키는 A549 세포를 마우스에 이식하였고 (A549 이종이식편 모델), AMD3100 (CXCR4 저해제) 및 카르베디롤 (ADRB2 저해제)을 단독으로 또는 조합하여 처리하였을 때, 종양의 상대적 성장을 보여준다. 매 3일 또는 4일 차에 종양의 길이(L)와 폭(W)을 측정하고, 다음의 식에 기초하여 종양 용적을 산출함으로써, 종양 성장을 모니터하였다: 용적 = 0.5 LW2. 결과는 10마리 개체의 평균 ± 표준 편차로 나타낸다.
도 23A: 표시된 MOIs에서 Ad-CXCR4와 Ad-ADRB2로 일시적으로 감염되었고, 프로프라놀롤 (1μM)이 경쟁자로 존재하거나 또는 부재하에 TZ14011-tb 및 프로프라놀롤-g2로 라벨된 A549 세포 상에서 관찰된 리간드-기반 TR-FRET 신호를 보여준다.
도 23B: 표시된 MOIs에서 Ad-CXCR4와 Ad-ADRB2로 일시적으로 감염된 U2OS 세포 상에서 관찰된 항체-기반 TR-FRET 신호를 보여준다. 토끼 항-CXCR4 항체 및 마우스 항-ADRB2 항체, 테르비움 크립테이트로 라벨링된 염소 항-토끼 IgG 그리고 Alexa Fluor 647로 라벨링된 염소 항-마우스 IgG로 항온처리 후, TR-FRET에 이용되었다.
도 24A-24C: PLA를 통한 CXCR4-ADRB2 헤테로머 탐지, 그리고 고형 종양[A549 (폐암), U2OS (골육종), 및 MDA-MB-231 (유방 암종)] 암 세포 계통에서 RT-qPCR에 의해 RNA 발현 수준을 통하여 CXCR4 또는 ADRB2의 정량화를 보여준다. 도 24A는 RT-qPCR에 의한 CXCR4와 ADRB2의 RNA 발현 수준을 보여주고; 도 24B는 PLA에 의해 검출된 CXCR4와 ADRB2 헤테로머 영상을 보여주며; 그리고 도 24C는 PLA에 의해 CXCR4와 ADRB2 헤테로머를 정량화시킨 것을 보여준다.
도 25A-25C: PLA를 통한 CXCR4-ADRB2 헤테로머 탐지) 및 혈액 암 [HL60 (백혈병), U937 (백혈병), 및 RPMI8226 (골수종)] 세포 계통에서 RT-qPCR에 의해 RNA 발현 수준을 통하여 CXCR4 또는 ADRB2의 정량화를 보여준다. 도 25A는 RT-qPCR에 의한 CXCR4와 ADRB2의 RNA 발현 수준을 보여주고; 도 25B는 PLA에 의해 검출된 CXCR4와 ADRB2 헤테로머 영상을 보여주며; 그리고 도 25C는 PLA에 의해 CXCR4와 ADRB2 헤테로머를 정량화시킨 것을 보여준다.
도 26A-26B: CXCL12 및 ADRB2 효현제 (포르모테롤)로 공동-자극될 때, CXCR4-ADRB2 헤테로머를 발현시키는 세포에서 칼슘 반응 강화를 보여준다. 도 26A는 CXCL12 및 ADRB2 효현제 포르모테롤로 공동-자극될 때, CXCR4-ADRB2 헤테로머를 발현시키는 U937 세포에서 칼슘 반응 강화를 보여준고; 도 26B는 CXCL12 및 ADRB2 효현제 포르모테롤로 공동-자극될 때, CXCR4-ADRB2 헤테로머를 발현시키는 HL-60 세포에서 칼슘 반응 강화를 보여준다.
약어:
달리 명시되지 않는 한, 본원에 기술된 용어에 대하여 다음의 약어들이 포함된다: 급성 골수성 백혈병 (AML), 아데노바이러스 고-처리량 시스템 (AdHTS), 아드레날린수용체 베타 2 (ADRB2), 이중분자 형광 상보성 (BiFC), 생물발광 공명 에너지 전달 (BRET), 소 혈청 알부민 (BSA), 암 줄기 세포 (CSCs), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수성 백혈병 (CML), 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD), 비너스의 C-말단 단편 (VC), C-X-C 모티프 케모킨 리간드 12 (CXCL12), CXC 수용체 4 (CXCR4), 효소-연계된 면역흡착 검정 (ELISA), 포르말린-고정된 파라핀-매립된 (FFPE), 형광 공명 에너지 전달 (FRET), G 단백질-연결된 수용체 (GPCR), 다형 교아종 (GBM), 글루타곤 수용체 (GCGR), GPCR 헤테로머 식별 기술 (GPCR-HIT), 과립구-콜로니 자극 인자 (G-CSF), 조혈 줄기 세포 (HSCs), 간세포 암종 (HCC), 인간 면역결핍 바이러스 (HIV), International Union of Basic and Clinical Pharmacology Committee on Receptor Nomenclature and Drug Classification (NC-IUPHAR), 다발성 골수종 (MM), 감염 다중도 (MOI), 골수형상이상 증후군 (MDS), 비-호지킨 림프종 (NHL), 비-소-세포 폐암 (NSCLC), 비너스의 N-말단 단편 (VN), 환자 유래된 세포 (PDC), 환자-유래된 이종이식편 (PDX), 양전자 방출 단층촬영 (PET), 전산화 단층촬영 (CT), 근접성 결찰 검정 (PLA), 역 전사-정량적 중합효소 연쇄 반응 (때로 RT-qPCR, 또는 qRT-PCR, 또는 qPCR, 또는 실시간 PCR로 지칭됨), 단일-광자 방출 전산화 단층촬영 (SPECT), 소세포 림프구성 림프종 (SLL), 작은-세포 폐암 (SCLC), 간질 세포-유래된 인자 1 (SDF-1), 전신 홍반성 루프스 (SLE), 임계 사이클 (Ct), 시-분해 FRET (TR-FRET), 종양 미세환경 (TME), 맥관 평활근 세포 (VSMC), WHIM 증후군 (Warts, 저감마글로블린혈증, 감염, 및 골수배출장애), 녹색 형광 단백질 (GFP), 그리고 황색 형광 단백질 (YFP).
발명의 상세한 설명
본 명세서에서 이용된 바와 같이, 용어 단수 관사("a", "an" 및 "the")은 당해 글의 문법적 대상의 하나 또는 하나 이상을 지칭한다. 예를 들어, 샘플은 하나의 샘플 또는 둘 또는 그 이상의 샘플을 지칭한다.
본원에서 이용된 바와 같이, 용어 "대상체"란 포유 동물을 지칭한다. 대상체는 인간 또는 개, 고양이, 소, 말, 마우스, 렛(rat), 토끼 또는 이들의 유전자삽입된(transgenic) 종과 같은 인간이 아닌 포유동물일 수 있다. 상기 대상체는 환자, 또는 암 환자일 수 있다.
본원에 이용된 바와 같이, "샘플"이라는 용어는 하나 또는 그 이상의 관심 성분을 포함하는 재료 또는 재료의 혼합물을 지칭한다. 대상체로부터 구한 샘플은 생체 내 또는 제자리(in situ)에서 획득된, 도달된 또는 수집된 생물학적 조직 또는 체액 기원의 샘플을 비롯한, 대상체로부터 얻은 샘플을 말한다. 샘플은 전-암성 또는 암 세포 또는 조직을 함유하는 대상체의 영역에서 얻을 수 있다. 이러한 샘플은 포유동물로부터 단리된 장기, 조직, 분획 및 세포일 수 있지만, 이에 국한되지 않는다. 특정 구체예들에서, 상기 샘플은 생물학적 샘플, 이를 테면, 생물학적 유체 샘플 또는 생물학적 조직 샘플일 수 있다. 샘플은 조직 생검일 수 있다. 특정 구체예들에서, 상기 생물학적 샘플에는 림프절, 혈액 샘플, 혈장 샘플, 전체 혈액, 부분적으로 순수분리된 혈액, 혈청, 골수, 세포 용해물, 세포 배양물, 세포 계통, 조직, 경구 조직, 위장 조직, 장기, 소기관(organelle), 생물학적 유체, 소변 샘플, 피부 샘플, 타액 샘플, 뇌 유체 샘플, 또는 눈의 유체 샘플이 내포되나, 이에 국한되지 않는다.
본원에 이용된 바와 같이, 암 환자와 관련하여 사용될 때 용어 "치료하다", 치료하는", 및 "치료"란 암의 진행암의 중증도를 감소시키는 또는 암의 진행을 지연 또는 느리게 하는 작용을 말하는데, (a) 암 성장을 억제하거나 또는 암의 진행을 정지시키는 것, 그리고 (b) 암의 퇴행을 유발하거나, 또는 암이 존재함으로써 연합된 하나 또는 그 이상의 증상을 지연시키거나 또는 최소화하는 것이 내포된다.
본원에 이용된 바와 같이, "투여하다", "투여하는" 또는 "투여"라는 용어는 화합물, 화합물의 조합 또는 이를 포함하는 약제학적 조성물을 본 명세서에 기재된 방법 또는 당업계에 공지된 방법을 통하여 대상체의 신체로 전달하거나, 또는 전달되도록 하는 행위를 지칭한다. 화합물, 화합물의 조합, 또는 이를 포함하는 약제학적 조성물을 투여하는 것은 환자의 체내로 전달될 화합물, 화합물의 조합, 또는 이를 포함하는 약제학적 조성물을 처방하는 것이 내포된다. 투여의 예시적인 형태에는 경구 투약형, 이를 테면, 정제, 캡슐, 시럽, 현탁액; 주사가능한 투여 형태, 이를 테면, 정맥내(IV), 근육내(IM), 또는 복강내(IP) 주사; 피하(SC), 두개내(IC) 투여; 크림, 젤리, 분말 또는 패치를 비롯한 경피 투여 형태; 볼 투여 형태; 흡입 분말, 스프레이, 현탁액 및 직장 좌약이 내포된다.
본원에 이용된 바와 같이, 어구 "치료요법적 제제"는 암 및/또는 이에 관련된 증상의 치료, 개선, 방지, 또는 관리에 이용될 수 있는 임의의 제제를 지칭한다. 특정 구체예들에서, 치료요법적 제제란 본 발명의 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 저해제를 지칭한다. 치료요법적 제제는 암 및/또는 이에 관련된 증상의 치료, 개선, 방지, 또는 관리에 유용한 것으로 공지된, 또는 이용되었던, 또는 현재 이용중인 제제일 수 있다.
본원에 이용된 바와 같이, 본원에서 이용된 어구 "유효량"은 유익한 또는 원하는 효과를 얻는데 충분한 양을 지칭한다. 유효량은 하나 또는 그 이상의 투여, 도포(applications) 또는 투약형으로 투여될 수 있다. 이러한 전달은 개별 투여 단위가 사용되는 기간, 제제의 생체 이용률, 투여 경로 등을 포함하는 많은 변수에 의존적이다.
본원에 이용된 바와 같이, 질환 또는 장애와 관련하여 사용될 경우, 화합물 (가령, 치료요법적 제제, 이를 테면, 본원에서 제공된 저해제, 길항제, 또는 임의의 다른 치료요법적 제제) 또는 화합물의 조합의 "치료요법적 유효량"이란 용어란 해당 질환 또는 장애의 치료 또는 관리에 있어서 치료요법적 이익을 제공하거나, 또는 해당 질환 또는 장애와 연합된 하나 또는 그 이상의 증상을 지연 또는 최소화하는데 충분한 양을 지칭한다. 화합물의 치료요법적 유효량이란 해당 화합물이 단독으로 또는 다른 치료제와 조합하여 사용될 때, 해당 질환 또는 장애의 치료 또는 관리에 치료요법적 이익을 제공하는 이 화합물의 양을 의미한다. 이 용어는 전반적인 치료요법을 개선고, 증상을 감소 또는 회피하거나, 또는 또다른 치료요법적 제제의 치료 효능을 향상시키는 양이 포괄된다. 이 용어는 연구원, 수의사, 의사 또는 임상의들이 추구하는 생물학적 분자 (가령, 단백질, 효소, RNA, 또는 DNA), 세포, 조직, 시스템, 동물, 또는 인간의 생물학적 또는 의학적 반응을 충분히 유도할 수 있는 화합물의 양을 또한 지칭한다.
본원에 이용된 바와 같이, 용어 "헤테로머(heteromer)"란 CXCR4 단위 (또는 CXCR4-함유하는 헤테로머 구성에서 확인될 때, 차례로 CXCR4 단량체 또는 ADRB2 단량체의 생화학적 속성들과는 명백히 상이한 생화학적 속성들, 또는 CXCR4 단량체와 ADRB2 단량체 모두의 생화학적 속성들과는 명백히 상이한 생화학적 속성들을 갖고 있는, CXCR4 프로토머(protomer)로 때로 지칭됨) 및 ADRB2 단위 (또는 ADRB2-함유하는 헤테로머 구성에서 확인될 때, ADRB2 프로토머로 때로 지칭됨)로 구성된 거대분자 복합체를 지칭한다. 헤테로머화는 제자리 혼성화법, 면역조직화학법, RNAseq, 역 전사-정량적 PCR (때로 RT-qPCR, 또는 qRT-PCR, 또는 qPCR, 또는 실시간 PCR), 식별된 헤테로머의 각 단량체 또는 프로토머의 발현 수준 (가령, CXCR4-ADRB2 헤테로머와 연합된 CXCR4와 ADRB2의 발현 수준), 마이크로어레이, 근접성 결찰 검정 (PLA), 시-분해 FRET (TR-FRET), 몸통-전체-단일-광자 방출 전산화 단층촬영 (SPECT) 또는 양전자 방출 단층촬영/전산화 단층촬영 (PET/CT)에 의해 평가될 수 있다.
본원에 이용된 바와 같이, 어구 "세포내 Ca2+ 검정", "칼슘 동원 검정", 또는 이들의 변형은 GPCR 활성화 또는 억제, 이를 테면, CXCR4 활성화 또는 억제 및/또는 ADRB2 활성화 또는 억제와 연합된 칼슘 유동(flux)를 측정하기 위한 세포-기반 검정을 지칭한다. 상기 방법은 대부분 세포의 세포질로 취입되는 칼슘 민감성 형광 염료를 이용한다. 이 염료는 세포내 저장고로부터 방출되는 칼슘에 결합하고, 염료의 형광은 증가된다. 형광 강도의 변화는 관심 대상 수용체의 리간드 활성화에 반응하여 세포질 내로 방출되는 세포 내 칼슘의 양과 직접적으로 상관된다. 특정 구체예들에서, 상기 GPCR은 CXCR4이다. 특정 구체예들에서, 상기 GPCR은 ADRB2이다. 특정 구체예들에서, 상기 세포-기반 검정은 CXCR4-ADRB2 헤테로머 활성화 또는 억제와 연합된 칼슘 유동을 측정한다.
본원에 이용된 바와 같이, 어구 "근접성-기반 분석"이란 본원에서 이용된 바의 어구 "근접성-기반 검정"은 시험관(세포 용해질) 및 살아있는 세포 안에서 2개 단백질 분자의 의 근접 및/또는 결합, 이를 테면, CXCR4 단백질 (단량체 또는 단위) 및 ADRB2 단백질 (단량체 또는 단위)의 근접성 및/또는 결합을 모니터할 수 있는 생물물리학, 생화학 기술을 지칭하는데, 생물발광 공명 에너지 전달 (BRET), 이중분자 형광 공명 에너지 전달 (FRET), 이중-분자 형광 상보성 (BiFC), 근접성 결찰 검정 (PLA), 시스테인 가교, 및 공-면역침전 (Ferre, S., et al., (2009) Building a new conceptual framework for receptor heteromers, Nat Chem Biol 5, 131-134; Gomes, T., et al., (2016) G Protein-Coupled Receptor Heteromers, Annu Rev Pharmacol Toxicol 56, 403-425)이 포함된다.
CXCR4-ADRB2 헤테로머 형성을 탐지하는 대체 방법들에는 다음이 내포되나, 이에 국한되지 않는다: 면역착색 (Bushlin, T., et al., (2012) Dimerization with cannabinoid receptors allosterically modulates delta opioid receptor activity during neuropathic pain, PLoS One 7, e49789; Decaillot, F.M., et al., (2008) Cell surface targeting of mu-delta opioid receptor heterodimers by RTP4, Proc Natl Acad Sci U S A 105, 16045-16050); 면역전자 현미경(Fernandez-Duenas, V., et al., (2015) Untangling dopamine-adenosine receptor-receptor assembly in experimental parkinsonism in rats, Dis Model Mech 8, 57-63); BRET (Pfleger, K.D., et al., (2006) Illuminating insights into protein-protein interactions using bioluminescence resonance energy transfer (BRET), Nat Methods 3, 165-174); 시-분해된 FRET 검정 (Fernandez-Duenas, V., et al., 2015); 제자리 혼성화 ((He, S.Q., et al., (2011) Facilitation of mu-opioid receptor activity by preventing delta-opioid receptor-mediated codegradation, Neuron 69, 120-131); FRET (Lohse, M.J., et al., (2012) Fluorescence / bioluminescence resonance energy transfer techniques to study G-protein-coupled receptor activation and signaling, Pharmacol Rev 64, 299-336); BRET, FRET, BiFC, 이중분자 발광 상보성, 효소 분획화 검정, 및 Tango Tango GPCR 검정 시스템 (Thermo Fisher Scientific) (Mustafa, S., et al., (2010) Uncovering GPCR heteromer-biased ligands, Drug Discov Today Technol 7, e1-e94)을 이용하여 GPCR 헤테로머 식별 기술(GPCR-HIT, Dimerix Bioscience) (Mustafa, S., et al., (2011) G protein-coupled receptor heteromer identification technology: identification and profiling of GPCR heteromers, J Lab Autom 16, 285-291)을 이용한 β-어레스틴 보충 검정; PRESTO-Tango 시스템 (Kroeze, W.K., et al., (2015) PRESTO-Tango as an open-source resource for interrogation of the druggable human GPCRome, Nat Struct Mol Biol 22, 362-369); 제어된 분비/응집 기술 (ARIAD Pharmaceuticals) (Hansen, J.L., et al., (2009) Lack of evidence for AT1R/B2R heterodimerization in COS-7, HEK293, and NIH3T3 cells: how common is the AT1R/B2R heterodimer? J Biol Chem 284, 1831-1839); 수용체 선별 및 증폭 기술 (ACADIA Pharmaceuticals) (Hansen, J.L., et al., 2009); DimerScreen (Cara Therapeutics) (Mustafa, S., 2010); 이량체/상호작용 단백질 전좌 검정 (Patobios) (Mustafa, S., 2010); 공동-면역침전 (Abd Alla, J., et al., (2009) Calreticulin enhances B2 bradykinin receptor maturation and heterodimerization, Biochem Biophys Res Commun 387, 186-190); 표면 효소-연계된 면역흡착 분석 (ELISA) (Decaillot, F.M., et al., 2008) 또는 유동세포분석을 이용하여 GPCR 내재화 검정 (Law, P.Y., et al., (2005) Heterodimerization of mu- and delta-opioid receptors occurs at the cell surface only and requires receptor-G protein interactions, J Biol Chem 280, 11152-11164); 온전체 세포 포스포릴화 검정 (Pfeiffer, M., et al., (2002) Heterodimerization of somatostatin and opioid receptors cross-modulates phosphorylation, internalization, and desensitization, J Biol Chem 277, 19762-19772); 그리고 근접성-결찰 검정 (PLA) (Frederick, A.L., et al., (2015) Evidence against dopamine D1/D2 receptor heteromers, Mol Psychiatry 20, 1373-1385).
CXCR4와 ADRB2를 모두 발현시키는 세포에서 약리학적 성질, 신호전달 성질, 및/또는 트래피킹 성질의 변화를 탐지하는 대체 방법은 다음을 포함하나, 이에 국한되지 않는다: 방사리간드 결합 검정 (Bushlin, T., et al., 2012; Pfeiffer, M., et al., 2002); 세포 표면 바이오티닐화 및 면역블랏팅 (He, S.Q., et al., 2011); 면역착색 (Bushlin, T., et al., 2012; Decaillot, F.M., et al., 2008); 면역전자 현미경법 (Fernandez-Duenas, V., et al., 2015); [35S]GTP-yS 결합 검정 (Bushlin, T., et al., 2012); 염료, 이를 테면, Fura 2-아세토메톡시 에스테르 (Molecular Probes), Fluo-4 NW 칼슘 염료 (Thermo Fisher Scientific), 또는 FLIPR5 염료 (Molecular Devices)와 같은 염료를 이용한 칼슘 영상화 또는 검정; 방사능면역검정 키트 (Amersham Biosciences)를 이용한 cAMP 검정; AlphaScreen (PerkinElmer Life Sciences); 매개변수 사이클릭 AMP 검정 (R&D Systems); femto cAMP 키트 (Cisbio); cAMP 직접 면역검정 키트 (Calbiochem) 또는 GloSensor cAMP 검정 (Promega); GTPase 검정 (Pello, O.M., et al., (2008) Ligand stabilization of CXCR4/delta-opioid receptor heterodimers reveals a mechanism for immune response regulation, Eur J Immunol 38, 537-549); PKA 활성화 (Stefan, E., et al., (2007) Quantification of dynamic protein complexes using Renilla luciferase fragment complementation applied to protein 키나제 A activities in vivo, Proc Natl Acad Sci U S A 104, 16916-16921); ERK1/2 및/또는 Akt/PKB 인산화 검정 (Callen, L., et al., (2012) Cannabinoid receptors CB1 and CB2 form functional heteromers in brain, J Biol Chem 287, 20851-20865); 리포터 검정 이를 테면, cAMP 반응 요소 (CRE); 혈청 반응 요소 (SRE); 혈청 반응 인자 반응 요소 (SRF-RE); 그리고 분비된 알카리 포스파타제 검정 (Decaillot, F.M., et al., 2011); TR-FRET 또는 [3H]myo-이노시톨 (Mustafa, S., et al., (2012) Identification and profiling of novel alpha1A-adrenoceptor-CXC chemokine receptor 2 heteromer, J Biol Chem 287, 12952-12965)를 이용한 이노시톨 1-포스페이트 생산 측정; 다운스트림 표적 유전자 발현을 측정하기 위한 RT-qPCR (Mustafa, S., et al., 2012); 그리고 아데닐일 사이클라제 활성 (George, S.R., et al., (2000) Oligomerization of mu- and delta-opioid receptors). Generation of novel functional properties. J Biol Chem 275, 26128-26135); 차세대 시퀀싱 (NGS); 그리고 수용체 헤테로다이머화 결과로써 수용체 기능 변화를 탐지할 수 있는 임의의 다른 검정.
본원에 이용된 바와 같이, 용어 "ADRB2"는 아드레노셉터 베타 2 (베타-2 아드레날린작용성 수용체 또는 β2 아드레노수용체로도 불림)는 에피네프린, 호르몬 및 신경전달물질 (리간드 동의어, 아드레날린)과 상호작용하는 세포 막-스패닝(spanning) 베타-아드레날린 수용체로써, 다운스트림 L-타입 칼슘 채널 상호작용을 경유한 이의 신호전달은 생리학적 반응, 이를 테면, 평활근 이완 및 기관지확장을 중개한다(Gregorio, G.G., et al., (2017). ADRB2는 또한 표 1에 표시된 특유의 예시적인 데이터베이스 식별자(IDs) 및 대체 이름으로도 식별된다. ADRB2는 근육계에서 이를 테면, 평활근 이완, 운동 신경 말단, 글리코겐분해 기능을 하고, 순환계에서 이를 테면, 심근 수축, 심장 출력 증가(cardiac output increase) 기능을 한다. 정상적인 눈에서 살부타몰(salbutamol)에 의한 베타-2 자극은 네트(net)를 통해 안압을 증가시킨다. 소화계에서 ADRB2는 간에서 글리코겐 분해 및 포도당 생성을 유도하고, 췌장에서 인슐린 분비를 유도한다 (Fitzpatrick, D., et al., (2004) "Table 20:2" (Mass: Sunderland)). ADRB2의 활성화는 Ras-매개된 Raf 프로토-온코진 세린/트레오닌-단백질 키나제 (Raf)/듀얼 특이성 미토겐-활성화된 단백질 키나제 키나제 (MEK)/세포외 신호-조절된 키나제 (ERK), 포스포이노시티드 3-키나제 (PI3K)/RAC 세린/트레오닌-단백질 키나제 (Akt) 및 세포성 증식 및 침입을 촉진시키고, 암 세포에서 아팝토시스를 억제시켜, 종양 성장을 강화시키고, 전이를 촉진시킬 수 있는 cAMP/단백질 키나제 A/미토겐-활성화된 단백질 키나제 경로 (
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Lu'o'ng, K.V., et al., (2012) Cancer Manag Res 4: 431-445)를 비롯하여, 종양 성장 및 전이를 촉진시키는 신호전달 경로를 자극시킬 수 있다 (Antoni, M.H., et al., (2006) Nat Rev Cancer 6: 240-248; Thaker, P.H., et al., (2006) Nat Med 12: 939-944).
본원에 이용된 바와 같이, 용어 "CXCR4"는 C-X-C 모티프 케모킨 수용체 4로도 지칭되는데, 표 1에 나타낸 바와 같이, 고유한 데이터베이스 식별자 (IDs) 및 대체명으로 또한 식별된다 (Chatterjee, S., et al., 2014; Debnath, B., et al., 2013; Domanska, U.M., et al., 2013; Guo, F., et al., (2016) CXCL12/CXCR4: a symbiotic bridge linking cancer cells and their stromal neighbors in oncogenic communication networks, Oncogene 35, 816-826; Peled, A., et al., (2012) Development of novel CXCR4-based therapeutics, Expert Opin Investig Drugs 21, 341-353; Roccaro, A.M., et al., (2014) SDF-1 inhibition targets the bone marrow niche for cancer therapy, Cell Rep 9, 118-128; Walenkamp, A.M.E., et al., (2017) CXCR4 Ligands: The Next Big Hit? J Nucl Med 58, 77S-82S). CXCL12가 CXCR4에 결합함으로써 리간드 결합의 다운스트림 방사성 신호전달 경로가 개시되며, 이는 다양한 반응 이를 테면, 화학주성, 세포 생존 및/또는 증식, 세포내 칼슘의 증가, 및 유전자 전사를 초래할 수 있다. 화학주성은 PKC를 통하여, 또는 Goa를 통하여 MAPK를 경유하여 매개되는 것을 보여주었으며, 이는 Erk/1/2를 통하여 신호를 전달할 수 있다 (Mellado, M., et al., (2001) Amur Rev Immunol;19:397-421; Bendall, L.J., et al., (2005) Cancer Res;65:3290-8). 케모킨 CXCL12와 케모킨 수용체 CXCR4의 쌍은 많은 종양형성 단계에서 중요한 역할을 한다. CXCR4는 다양한 인간 암에서 과다발현되며, 이러한 과다발현은 유방암, 폐암, 신장암, 결장암, 난소암, 뇌암, 림프종 및 백혈병을 비롯한 다중 암 대상체에서 재발 위험 증가 및 전체 생존율 저하와 상관관계가 있다 (Balkwill, F., (2004) Nat Rev Cancer; 4:540-50. 1-5; Orimo, A., et al., (2005) Cell; 121:335-48; Domanska, U.M., et al., 2013). 암 및 기타 질환들에서 CXCR4의 중요한 역할은 임상 사용을 위한 선택적 CXCR4 저해제 개발을 촉발시켰다.
표 1
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본원에 이용된 바와 같이, 용어 "CXCL12" (또는 간질 유래된 인자 1 ("SDF-1"))란 림프구에 대한 강력한 화학주성 제제를 지칭한다. 배아 발생 동안, CXCL12는 태아 간으로부터 뼈로 조혈 세포의 이동을 지시하고,, 그리고 성인기에는 CXCL12는 CXCR4-의존적 기전을 통해 내피 전구 세포를 보충함으로써 혈관 신생에 중요한 역할을 한다. CXCL12는 비장 적색 치수 및 림프절 수질에서도 또한 발현된다 (Pitt, et al., (2015) Cancer Cell, 27:755-768; 그리고 Zhao, et al., (2011) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 108:337-342). 인간 CXCL12을 인코딩하는 예시적인 아미노산 서열 및 대응하는 핵산 서열은 차례로 GENBANK 수탁 번호: NP_954637.1 및 NM_199168.3에서 볼 수 있을 것이다.
살메테롤은 장기-작용 β2 아드레날린작용성 수용체 효현제 (LABA)이며, 아민으로부터 11개 원자 길이의 쇄를 갖는 아릴 알킬기를 보유한다. 이러한 덩어리가 큰 부피는 화합물을 보다 친유성으로 만들고, β2 아드레날린성 수용체에 대해 선택적으로 만드는 것으로 여겨진다. 살메테롤은 1980년대에 Glaxo(현재, GlaxoSmithKline, GSK)에서 처음으로 판매 및 제조되었고, 1990년에 Serevent®로 출시되었다. 이 제품은 영국에서 Allen & Hanburys 브랜드로 GSK에서 판매된다. 이용된 살메테롤은 천식 증후군의 유지 및 예방, 그리고 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD)증후군의 유지다 (2010 Global initiative for chronic obstructive disease). 기관지 경련의 증상으로는 호흡곤란, 쌕쌕거림, 기침, 가슴 답답함 등이 있다. 살메테롤은 운동하는 동안 호흡 곤란을 방시하는데 또한 이용된다(운동-유발 기관지 수축).
본원에 이용된 바와 같이, 용어 "ADRB2 저해제"는 ADRB2 단량체, 또는 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 ADRB2 단위 또는 프로토머를 저해시키거나 또는 억제하는 분자를 지칭한다. 본원에서 제공되는 치료 방법, 억제 방법, 약제학적 조성물 및/또는 약제학적 키트, 그리고 이를 이용하는 방법에 이용될 수 있는 ADRB2 저해제의 비-제한적인 예로는 다음의 것들이 내포되나, 이에 국한되지 않는다: ADRB2 길항제, ADRB2 역-효현제, ADRB2 양성 알로스테릴 조절자, ADRB2 네가티브 알로스테릴 조절자, ADRB2-특이적 항체 또는 단일-도메인 항체-유사 스캐폴드를 비롯한 이의 항원 결합 부분, CXCR4에 선택적인 약물분자구조(pharmacophore)에 스페이스 암(arm)을 통하여 연결된 ADRB2에 선택적 약물분자구조를 갖는 이가(bivalent) 리간드들, ADRB2와 CXCR4에 대항하는 이중특이적 항체, CXCR4 리간드에 연계된 방사능라벨된 ADRB2 리간드, 그리고 CXCR4-ADRB2 헤테로머-선택성 신호전달을 저해시키는 작은 분자 리간드들. 특정 구체예들에서, 상기 ADRB2 저해제는 ADRB2 단량체의 기능을 저해시키거나 또는 억제시킨다. 특정 구체예들에서, 상기 ADRB2 저해제는 상기 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 ADRB2 단위 또는 프로토머의 기능을 저해시키거나 또는 억제시킨다. 특정 구체예들에서, 상기 ADRB2 저해제는 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 기능을 저해시키거나 또는 억제시킨다. 특정 구체예들에서, 상기 ADRB2 저해제는 ADRB2 단량체의 ADRB2 효현제로 자극시 강화된 반응을 저해시키거나 또는 억제시킨다. 특정 구체예들에서, 상기 ADRB2 저해제는 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 ADRB2 단위의 ADRB2 효현제로 자극시 강화된 반응을 저해시키거나 또는 억제시킨다. 특정 구체예들에서, 상기 ADRB2 저해제는 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 ADRB2 단위의 ADRB2 효현제 및 CXCR4 효현제로 공동-자극시 강화된 반응을 저해시키거나 또는 억제시킨다. 특정 구체예들에서, 상기 ADRB2 저해제는 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 ADRB2 효현제 및 CXCR4 효현제의 ADRB2 효현제 및 CXCR4 효현제로 공동-자극시 강화된 반응을 저해시키거나 또는 억제시킨다. 특정 구체예들에서, 상기 강화된 반응은 강화된 Ca2+ 반응이다. 특정 구체예들에서, 상기 강화된 반응이란 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포(들)을 보유하는 대상체에서 암 진행의 강화다. 특정 구체예들에서, 상기 강화된 암 진행은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포(들)을 보유하는 대상체에서 세포 증식의 강화이다. 특정 구체예들에서, 상기 강화된 암 진행은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포(들)을 보유하는 대상체에서 세포 이동의 강화다. 특정 구체예들에서, 상기 강화된 암 진행은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포(들)을 보유하는 대상체에서 전이의 강화다. 특정 구체예들에서, 상기 강화된 암 진행은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포(들)을 보유하는 대상체에서 종양 성장의 강화다. 특정 구체예들에서, 상기 강화된 암 진행은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포(들)을 보유하는 대상체에서 혈관 신생의 강화다. 특정 구체예들에서, 상기 세포(들)이란 암 세포(들)이다. 특정 구체예들에서, 상기 세포(들)은 대상체로부터 유래된다. 특정 구체예들에서, 상기 세포(들)은 대상체로부터 획득한 생물학적 샘플로부터 유래된다. ADRB2 저해제들의 특정 예시들은 표 2에 열거된다.
본원에 이용된 바와 같이, 용어 "CXCR4 저해제"란 CXCR4 단량체, 또는 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 CXCR4 단위 또는 프로토머를 저해시키거나 또는 억제하는 분자를 지칭한다. 본원에서 제공되는 치료 방법, 억제 방법, 약제학적 조성물 및/또는 약제학적 키트, 그리고 이를 이용하는 방법에 이용될 수 있는 CXCR4 저해제의 비-제한적인 예로는 다음의 것들이 내포되나, 이에 국한되지 않는다: CXCR4 길항제, CXCR4 역-효현제, CXCR4 양성 알로스테릴 조절자, CXCR4 네가티브 알로스테릴 조절자, CXCR4-특이적 항체 또는 단일-도메인 항체-유사 스캐폴드를 비롯한 이의 항원 결합 부분, ADRB2에 선택적인 약물분자구조(pharmacophore)에 스페이스 암(arm)을 통하여 연결된 CXCR4에 선택적 약물분자구조를 갖는 이가(bivalent) 리간드들, ADRB2와 CXCR4에 대항하는 이중특이적 항체, ADRB2 리간드에 연계된 방사능라벨된 CXCR4 리간드, 그리고 CXCR4-ADRB2 헤테로머-선택성 신호전달을 저해시키는 작은 분자 리간드들. 특정 구체예들에서, CXCR4 저해제는 CXCR4 단량체의 기능을 저해시키거나 또는 억제시킨다. 특정 구체예들에서, 상기 CXCR4 저해제는 상기 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 CXCR4 단위 또는 프로토머의 기능을 저해시키거나 또는 억제시킨다. 특정 구체예들에서, 상기 CXCR4 저해제는 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 기능을 저해시키거나 또는 억제시킨다. 특정 구체예들에서, 상기 CXCR4 저해제는 CXCR4 단량체의 CXCR4 효현제로 자극시 강화된 반응을 저해시키거나 또는 억제시킨다. 특정 구체예들에서, CXCR4 저해제는 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 CXCR4 단위의 CXCR4 효현제로 자극시 강화된 반응을 저해시키거나 또는 억제시킨다. 특정 구체예들에서, CXCR4 저해제는 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 CXCR4 단위의 ADRB2 효현제와 CXCR4 효현제로 공동-자극시 강화된 반응을 저해시키거나 또는 억제시킨다. 특정 구체예들에서, CXCR4 저해제는 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 CXCR4 효현제 및 ADRB2 효현제로 공동-자극시 강화된 반응을 저해시키거나 또는 억제시킨다. 특정 구체예들에서, 상기 강화된 반응은 강화된 Ca2+ 반응이다. 특정 구체예들에서, 상기 강화된 반응이란 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포(들)을 보유하는 대상체에서 암 진행의 강화다. 특정 구체예들에서, 상기 강화된 암 진행은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포(들)을 보유하는 대상체에서 세포 증식의 강화이다. 특정 구체예들에서, 상기 강화된 암 진행은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포(들)을 보유하는 대상체에서 세포 이동의 강화다. 특정 구체예들에서, 상기 강화된 암 진행은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포(들)을 보유하는 대상체에서 전이의 강화다. 특정 구체예들에서, 상기 강화된 암 진행은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포(들)을 보유하는 대상체에서 종양 성장의 강화다. 특정 구체예들에서, 상기 강화된 암 진행은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포(들)을 보유하는 대상체에서 혈관 신생의 강화다. 특정 구체예들에서, 상기 세포(들)이란 암 세포(들)이다. 특정 구체예들에서, 상기 세포(들)은 대상체로부터 유래된다. 특정 구체예들에서, 상기 세포(들)은 대상체로부터 획득한 생물학적 샘플로부터 유래된다. CXCR4 저해제들의 특정 예시들은 표 2에 열거된다.
본원에 이용된 바와 같이, 용어 "길항제"는 수용체에 결합하여, 수용체를 차단시켜, 생물학적 반응을 차단 또는 약화시키는 (소위 차단제(blockers)로 불리는) 수용체 리간드 또는 약물 타입을 지칭한다. 길항제는 친화력을 갖고, 이들의 결합으로 당해 상호작용을 파괴하고, 당해 동족 수용체들에서 효현제 또는 역 효현제의 기능을 저해시킨다. 예를 들면, ADRB2 길항제는 ADRB2 수용체에 결합하거나, 및/또는 이를 차단함으로써 생물학적 반응을 차단하거나 약화시키는 ADRB2 리간드 또는 ADRB2 약물일 수 있다. 특정 구체예들에서, 상기 ADRB2 길항제는 ADRB2 효현제 또는 ADRB2 역-효현제와 ADRB2 (가령, ADRB2 단량체, 또는 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 ADRB2 프로토머 또는 단위)와의 상호작용을 파괴시킬 수 있거나, 및/또는 ADRB2 효현제 또는 ADRB2 역-효현제와 ADRB2 (가령, ADRB2 단량체, 또는 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 ADRB2 프로토머 또는 단위)의 기능을 억제시킬 수 있다. 특정 구체예들에서, 상기 ADRB2 길항제는 상기 ADRB2 단량체의 기능을 차단시키거나, 저해시키거나 또는 억제시킨다. 특정 구체예들에서, 상기 ADRB2 길항제는 상기 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 ADRB2 단위 또는 프로토머의 기능을 차단시키거나, 저해시키거나 또는 억제시킨다. 특정 구체예들에서, 상기 ADRB2 길항제는 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 기능을 차단시키거나, 저해시키거나 또는 억제시킨다. 특정 구체예들에서, 상기 ADRB2 길항제는 ADRB2 단량체의 ADRB2 효현제로 자극 시 상기 강화된 반을을 차단시키거나, 저해시키거나 또는 억제시킨다. 특정 구체예들에서, 상기 ADRB2 길항제는 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 ADRB2 단위의 ADRB2 효현제로 자극 시 상기 강화된 반을을 차단시키거나, 저해시키거나 또는 억제시킨다. 특정 구체예들에서, 상기 ADRB2 길항제는 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 ADRB2 단위의 ADRB2 효현제 및 CXCR4 효현제로 공동-자극 시 상기 강화된 반을을 차단시키거나, 저해시키거나 또는 억제시킨다. 특정 구체예들에서, 상기 ADRB2 길항제는 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 ADRB2 효현제 및 CXCR4 효현제로 공동-자극 시 상기 강화된 반을을 차단시키거나, 저해시키거나 또는 억제시킨다. 예를 들면, CXCR4 길항제는 CXCR4 수용체에 결합하거나, 및/또는 이를 차단함으로써 생물학적 반응을 차단하거나 약화시키는 CXCR4 리간드 또는 CXCR4 약물일 수 있다. 특정 구체예들에서, 상기 CXCR4 길항제는 CXCR4 효현제 또는 CXCR4 역-효현제와 CXCR4 (가령, CXCR4 단량체, 또는 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 CXCR4 프로토머 또는 단위)와의 상호작용을 파괴시킬 수 있거나, 및/또는 CXCR4 효현제 또는 CXCR4 역-효현제와 CXCR4 (가령, CXCR4 단량체, 또는 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 CXCR4 프로토머 또는 단위)의 기능을 억제시킬 수 있다. 특정 구체예들에서, 상기 CXCR4 길항제는 상기 CXCR4 단량체의 기능을 차단시키거나, 저해시키거나 또는 억제시킨다. 특정 구체예들에서, 상기 CXCR4 길항제는 상기 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 CXCR4 단위 또는 프로토머의 기능을 차단시키거나, 저해시키거나 또는 억제시킨다. 특정 구체예들에서, 상기 CXCR4 길항제는 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 기능을 차단시키거나, 저해시키거나 또는 억제시킨다. 특정 구체예들에서, 상기 CXCR4 길항제는 CXCR4 단량체의 CXCR4 효현제로 자극 시 상기 강화된 반을을 차단시키거나, 저해시키거나 또는 억제시킨다. 특정 구체예들에서, 상기 CXCR4 길항제는 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 CXCR4 단위의 CXCR4 효현제로 자극 시 상기 강화된 반을을 차단시키거나, 저해시키거나 또는 억제시킨다. 특정 구체예들에서, 상기 CXCR4 길항제는 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 CXCR4 단위의 ADRB2 효현제 및 CXCR4 효현제로 공동-자극 시 상기 강화된 반을을 차단시키거나, 저해시키거나 또는 억제시킨다. 특정 구체예들에서, CXCR4 길항제는 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 ADRB2 효현제 및 CXCR4 효현제로 공동-자극 시 상기 강화된 반을을 차단시키거나, 저해시키거나 또는 억제시킨다. 특정 구체예들에서, 상기 강화된 반응은 강화된 Ca2+ 반응이다. 특정 구체예들에서, 상기 강화된 반응이란 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포(들)을 보유하는 대상체에서 암 진행의 강화다. 특정 구체예들에서, 상기 강화된 암 진행은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포(들)을 보유하는 대상체에서 세포 증식의 강화이다. 특정 구체예들에서, 상기 강화된 암 진행은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포(들)을 보유하는 대상체에서 세포 이동의 강화다. 특정 구체예들에서, 상기 강화된 암 진행은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포(들)을 보유하는 대상체에서 전이의 강화다. 특정 구체예들에서, 상기 강화된 암 진행은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포(들)을 보유하는 대상체에서 종양 성장의 강화다. 특정 구체예들에서, 상기 강화된 암 진행은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포(들)을 보유하는 대상체에서 혈관 신생의 강화다. 특정 구체예들에서, 상기 세포(들)이란 암 세포(들)이다. 특정 구체예들에서, 상기 세포(들)은 대상체로부터 유래된다. 특정 구체예들에서, 상기 세포(들)은 대상체로부터 획득한 생물학적 샘플로부터 유래된다. CXCR4 길항제 및 ADRB2 길항제의 특정 예시들은 표 2에 열거된다.
표 2
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본원에서 이용된 바와 같이, 어구 "단백질-단백질 상호작용 저해제", "PPI 저해제", 또는 이들의 변이는 단백질-단백질 상호작용을 간섭할 수 있는 임의의 분자를 지칭한다. 잘 특정된 결합 포켓을 포함하는 효소-기질 상호 작용과 달리, 단백질-단백질 상호작용은 비교적 넓은 영역에 걸친 단백질간의 일시적인 상호 작용 또는 연관이며, 대개 정전기적 상호작용, 소수성 상호작용, 수소 결합 및/또는 Van der Waals힘에 의해 구동된다. PPI 저해제들에는 GPCR 헤테로머 계면(interface)을 파괴시키는 펩티드 서열에 융합된 막-투과성 펩티드 또는 리질, 예를 들면, 막 헬릭스, 세포내 루프, 또는 CXCR4와 또는 ADRB2 단위의 C-말단 꼬리를 포함하나, 이에 국한되지 않을 것이다. CXCR4-ADRB2 헤테로머의 PPI 저해제는 예를 들면, CXCR4-ADRB2 헤테로머 계면(들)을 표적으로 하는 펩티드에 콘쥬게이트된 막-투과성 펩티드 또는 세포-침투 펩티드 (CPP)이거나, 또는 CXCR4-ADRB2 헤테로머 계면(들)을 표적으로 하는 지질화된 세포-침투 펩티드일 수 있다.
예를 들면, 상기 막-투과성 펩티드 또는 세포-침투 펩티드에는 다음이 포함된다: HIV-1 TAT 펩티드, 이를 테면, TAT48-60 및 TAT49-57; 페네트라틴(Penetratins), 이를 테면, pAntp(43-58); 폴리아르기닌 (Rn 이를 테면, R5 내지 R12); Diatos 펩티드 벡터 1047 (DPV1047, Vectocell®); MPG (SV40 큰 T 항원의 핵 국소화 신호(NLS)에 융합된 HIV gp41); Pep-1 (SV40 큰 T 항원의 NLS에 융합된 트립토판-풍부 클러스터); pVEC 펩티드 (맥관 내피 캐드헤린); p14 대체 판독 틀 (ARF) 단백질-기반의 ARF(1-22); 처리안된 소의 프리온 단백질 BPrPr(1-28)의 N-말단; 모델 양친매성(amphipathic) 펩티드 (MAP); 트란스포르탄(Transportans); 아주린(Azurin)-유래된 p28 펩티드; 양친매성 β-쉬트 펩티드, 이를 테면, VT5; 프롤린-풍부 CPPs, 이를 테면, Bac 7 (Bac1-24); 소수성 CPPs, 이를 테면, α1-안티트립신으로부터 유래된 C105Y; 합성 C105Y로부터 유래된 PFVYLI; Pep-7 펩티드 (CHL8 펩티드 파아지(phage) 클론); 그리고 변형된 소수성 CPPs, 이를 테면, 스테이플화된(stapled) 펩티드 및 프레닐화된(prenylated) 펩티드 (Guidotti, G., et al., (2017) Cell-Penetrating Peptides: From Basic Research to Clinics, Trends Pharmacol Sci 38, 406-424; Kristensen, M., et al., (2016) Applications and Challenges for Use of Cell-Penetrating Peptides as Delivery Vectors for Peptide and Protein Cargos, Int J Mol Sci 17). 막-투과성 펩티드 또는 세포-침투 펩티드는 예를 들면, TAT-유래된 세포-침투 펩티드, 신호 서열-기반의 (가령, NLS) 세포-침투 펩티드, 소수성 막 전위(translocating) 서열 (MTS) 펩티드, 그리고 아르기닌-풍부 분자 운반자를 더 포함할 수 있다. 세포-침투 라피데이트화된(lapidated) 펩티드는 예를 들면, 펩두신(pepducins), 이를 테면, ICL1/2/3, C-꼬리-짧은 팔미토일화된(palmitoylated) 펩티드를 포함한다 (Covic, L., et al., (2002) Activation and inhibition of G protein-coupled receptors by cell-penetrating membrane-tethered peptides, Proc Natl Acad Sci USA, 99, 643-648; and O'Callaghan, K., et al., (2012) Turning receptors on and off with intracellular pepducins: new insights into G-protein-coupled receptor drug development. J Biol Chem 287, 12787-12796).
CXCR4-ADRB2 헤테로머 계면을 표적으로 하는 펩티드(들)은 예를 들면, CXCR4의 막 도메인, ADRB2의 막 도메인, CXCR4의 세포내 루프, ADRB2의 세포내 루프, CXCR4의 C-말단 도메인, 또는 ADRB2의 C-말단 도메인, CXCR4의 세포외 루프, ADRB2의 세포외 루프, CXCR4의 N-말단 영역, 또는 ADRB2의 N-말단 영역일 수 있다.
본원에 이용된 바와 같이, 용어 "발현하다", "발현" 또는 "발현하는" 및 이와 유사한 것들은 유전자와 관련하여 사용될 때, 유전자가 메신저 RNA(mRNA)로 전사되고, mRNA 분자가 후속적으로 폴리펩티드 쇄로 해독되고, 궁극적인 단백질로 어셈블리되는 것을 비롯한, 해당 유전자에 의해 전달되는 정보가 표현형으로 나타나게 되는 과정을 지칭한다. 특정 구체예들에서, 질환, 이를 테면, 암은 특정 유전자의 발현, 이를 테면, 특정 유전자로부터 궁극적 단백질의 발현을 특징으로 할 수 있다. 예를 들면, 암은 CXCR4-발현시키는 암, ADRB2-발현시키는 암, 또는 CXCR4-발현시키는 암과 ADRB2-발현시키는 암으로 특징화될 수 있다.
본원에 이용된 바와 같이, 어구 "발현 수준"이란 유전자와 관련하여 사용될 때, 예를 들어, 유전자의 발현 산물의 양 또는 축적, 이를 테면, 해당 유전자의 RNA 산물의 양 (또는 이 유전자의 RNA 수준) 또는 해당 유전자의 단백질 산물의 양 (또는 이 유전자의 단백질 수준)을 말한다. 해당 유전자가 하나 이상의 대립유전자를 가지고 있는 경우, 유전자의 발현 수준은 달리 명시되지 않는 한, 이 유전자에 대해 존재하는 모든 대립유전자의 발현 산물의 총 축적량을 의미한다. 예를 들면, 암은 유전자의 특정 산물, 이를 테면, 해당 유전자의 특정 RNA 산물 또는 해당 유전자의 특정 단백질 산물의 발현 수준(양)과 관련될 수 있다. 예를 들면, 암은 유전자의 특정 산물, 이를 테면, 해당 유전자의 특정 RNA 산물 또는 해당 유전자의 특정 단백질 산물의 발현 수준(양)과 관련될 수 있다. 예를 들면, 암은 CXCR4 유전자의 특정 발현 수준을 가질 수 있다. 예를 들면, 암은 ADRB2 유전자의 특정 발현 수준을 가질 수 있다. 예를 들면, 암은 CXCR4 유전자의 특정 발현 수준과 ADRB2 유전자의 특정 발현 수준을 가질 수 있다. 예를 들면, 암은 CXCR4 단백질의 특정 발현 수준을 가질 수 있다. 예를 들면, 암은 ADRB2 단백질의 특정 발현 수준을 가질 수 있다. 예를 들면, 암은 CXCR4 단백질의 특정 발현 수준과 ADRB2 단백질의 특정 발현 수준을 가질 수 있다.
본원에 이용된 바와 같이, 정량화 가능한 값과 관련하여 사용될 때 용어 "참조"란 샘플에서 측정된 값의 중요성을 결정하는 데 사용할 수 있는 사전-결정된 값을 말한다.
본원에 이용된 바와 같이, 어구 "참조 발현 수준"이란 세포 또는 샘플에서 해당 전자의 발현 수준의 중요성을 결정하기 위해 사용할 수 있는 사전-결정된 유전자의 발현 수준을 지칭한다. 유전자의 참조 발현 수준은 참조 세포에서 당업자에 의해 결정된 유전자의 발현 수준일 수 있다. 예를 들면, CXCR4 유전자의 참조 발현 수준은 세포, 이를 테면, T 세포 또는 암 세포에서의 이의 평균 발현 수준일 수 있다. 따라서, 세포 (또는 세포의 샘플)에서 CXCR4의 발현 수준을 결정할 수 있고, 만일 세포, 이를 테면, T 세포 또는 암 세포에서 해당 유전자의 평균 발현 수준보다 높다는 것은 이 세포 (또는 이 세포의 샘플)는 CXCR4-발현시키는 세포 (또는 CXCR4-발현시키는 세포의 샘플)임을 나타낸다. 예를 들면, ADRB2 유전자의 참조 발현 수준은 세포, 이를 테면, T 세포 또는 암 세포에서의 이의 평균 발현 수준일 수 있다. 따라서, 세포 (또는 세포의 샘플)에서 ADRB2의 발현 수준을 결정할 수 있고, 만일 세포, 이를 테면, T 세포 또는 암 세포에서 해당 유전자의 평균 발현 수준보다 높다는 것은 이 세포는 ADRB2-발현시키는 세포 (또는 ADRB2-발현시키는 세포의 샘플)임을 나타낸다. 유전자의 참조 발현 수준은 다양한 샘플 세포 집단에서 유전자의 발현 수준의 통계적 분석을 통해 당업자에 의해 결정된 컷오프 값일 수도 있다. 예를 들면, 암은 샘플에서 CXCR4 유전자의 참조 수준보다 더 높은 CXCR4 유전자 발현 수준을 가질 수 있다. 예를 들면, 암은 샘플에서 CXCR4 단백질의 참조 수준보다 더 높은 CXCR4 단백질 발현 수준을 가질 수 있다. 예를 들면, 암은 샘플에서 ADRB2 유전자의 참조 수준보다 더 높은 ADRB2 유전자 발현 수준을 가질 수 있다. 예를 들면, 암은 샘플에서 ADRB2 단백질의 참조 수준보다 더 높은 ADRB2 단백질 발현 수준을 가질 수 있다. 예를 들면, 암은 샘플에서 CXCR4 유전자의 참조 수준 및 ADRB2 유전자의 참조 수준보다 각각 더 높은 CXCR4 유전자 발현 수준 및 ADRB2 유전자 발현 수준을 가질 수 있다. 예를 들면, 암은 샘플에서 CXCR4 단백질의 참조 수준 및 ADRB2 단백질의 참조 수준보다 각각 더 높은 CXCR4 단백질 발현 수준 및 ADRB2 단백질 발현 수준을 가질 수 있다. 특정 구체예들에서, 예를 들면, 해당 유전자를 발현시키는 것으로 공지된 세포를 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90% 보유하는 샘플 세포 집단에서 이 유전자의 발현 수준을 분석함으로써, 당업자는 구성이 알려지지 않은 세포 집단에서 유전자를 발현시키는 세포의 백분율을 나타내는데 사용될 수 있는 유전자의 참조 발현 수준으로서 컷오프 값을 결정할 수 있다.
본원에 이용된 바와 같이, 대상체 (가령, 암 대상체, 이를 테면, 암 환자)와 관련하여 용어 "선택성" 및 "선택된"이란 특정 대상체는 사전-결정된 기준 또는 기준 세트를 보유하는 특정 대상체를 기반으로(이로 인하여) 더 큰 집단의 대상체로부터 특이적으로 선발된다는 의미로 이용되는데, 가령, 참조 수준보다 더 큰 CXCLR4 발현 수준을 갖는 대상체, 참조 수준보다 더 큰 ADRB2 발현 수준을 갖는 대상체, 또는 각 참조 수준보다 더 큰 CXCR4 발현 수준 및 ADRB2 발현 수준을 갖는 대상체를 의미한다. 유사하게, "선택적으로 대상체를 치료한다"라는 의미는 사전-결정된 기준 또는 기준 세트를 보유하는 특정 대상체를 기반으로 (이로 인하여) 더 큰 집단의 대상체로부터 특이적으로 선발된 대상체, 가령, 참조 수준보다 더 큰 CXCR4 발현 수준을 갖는 대상체, 참조 수준보다 더 큰 ADRB2 발현 수준을 갖는 대상체, 또는 각 참조 수준보다 더 큰 CXCR4 발현 수준 및 ADRB2 발현 수준을 갖는 대상체에게 치료를 제공한다는 의미다. 유사하게, "선택적으로 투여한다"라는 의미는 사전-결정된 기준 또는 기준 세트를 보유하는 특정 대상체를 기반으로 (이로 인하여) 더 큰 집단의 대상체로부터 특이적으로 선발된 대상체, 가령, 참조 수준보다 더 큰 CXCR4 발현 수준을 갖는 대상체, 참조 수준보다 더 큰 ADRB2 발현 수준을 갖는 대상체, 또는 각 참조 수준보다 더 큰 CXCR4 발현 수준 및 ADRB2 발현 수준을 갖는 대상체에게 약물을 투여한다는 것을 지칭한다. 선별하고, 선택적으로 치료하고, 그리고 선택적으로 투여함으로써, 해당 질환 또는 장애 (가령, 암)를 갖는 것에만 오로지 근거한 표준 치료 섭생을 대상체에게 제공하기 보다는, 대상체의 생물학에 기반을 두고 질환 또는 장애, 가령, 암과 관련된 개인맞춤화된 치료요법을 해당 대상체에게 전달한다.
전통적으로 GPCRs는 리간드 결합 시, 헤테로-트리머 G 단백질과 상호 작용하는 모노머로서 기능하는 것으로 여겨졌으며, 약물은 모노머 또는 등가동의(homomeric) GPCRs에 기초하여 개발되었다 (Milligan, G. (2008) A day in the life of a G protein-coupled receptor: the contribution to function of G protein-coupled receptor dimerization, Br J Pharmacol 153 Suppl 1, S216-229). GPCRs가 헤테로머들을 형성할 수 있다는 발견에 의해 이 견해가 크게 바뀌었고, 일부 GPCRs의 경우 헤테로머화는 필수적이다. GPCR 헤테로머화는 GPCR 성숙 및 세포 표면 전달, 리간드 결합 친화력, 신호전달 강도 및 경로, 뿐만 아니라 수용체 탈민감성(desensitization) 및 재순환을 변경시키는 것으로 알려져 있다 (Terrillon, S., et al., (2004) Roles of G-protein-coupled receptor dimerization, EMBO Rep 5, 30-34; Ferre, S., et al., (2009); Rozenfeld, R., et al., (2010) Receptor heteromerization and drug discovery, Trends Pharmacol Sci 31, 124-130; Gomes, T., et al., (2016); Farran, B. (2017) An update on the physiological and therapeutic relevance of GPCR oligomers, Pharmacol Res 117, 303-327). 상이한 GPCR 헤테로머들은 별개의 기능성 성질 및 약리학적 성질을 나타내고, GPCR 헤테로머화는 세포 타입, 조직, 및 질환 또는 병리학적 상태에 따라 가변적일 수 있다 (Terrillon, S., et al., 2004; Ferre, S., et al., 2009; Rozenfeld, R., et al., 2010; Gomes, T., et al., 2016; Farran, B., 2017). 이제 GPCR 헤테로머화는 일반적인 현상으로 간주되며, GPCR 헤테로머화 판독으로 수용체 기능, 생리학, 질병 및 병리학 적 상태에서의 역할을 이해하기 위한 새로운 길이 열리게 된다. 따라서, GPCR 헤테로머들의 식별 및 이들의 기능성 성질의 식별은 부작용이 적고, 효능이 높으며, 조직 선택성이 증가된 새로운 제약을 개발하거나, 또는 오래된 약물의 새로운 용도를 찾을 수 있는 새로운 기회를 제공한다 (Ferre, S., et al., 2009; Rozenfeld, R., et al., 2010; Farran, B., 2017).
진정한 GPCR 헤테로머를 식별하려면 집중적이고, 임계적인(critical) 평가가 필요하다. GPCRs의 단순 연합으로부터 GPCR 헤테로머들을 구별해내기 위하여, 이 분야의 연구자들 및 International Union of Basic and Clinical Pharmacology Committee on Receptor Nomenclature and Drug Classification (NC-IUPHAR)는 GPCR 헤테로머는 적어도 2개의 (기능성) 수용체 단위 [프로토머]로 구성되고, 이의 개별 성분들과는 입증적으로 상이한 생화학 성질을 갖는 거대분자 복합체"로 규정하고, 이들 헤테로머은 고유 조직에 존재한다고 규정하였다 (Ferre, S., et al., 2009; Gomes, I., et al., 2016; Pin, J.P., et al., (2007) International Union of Basic and Clinical Pharmacology. LXVII. Recommendations for the recognition and nomenclature of G protein-coupled receptor heteromultimers, Pharmacol Rev 59, 5-13). GPCR 헤테로머들을 설명하기 위해 이들은 세 가지 기준을 제안했다: (1) 헤테로머들은 공동-면역침전, 제자리 혼성화법, 또는 이들 두 수용체를 모두 발현시키는 세포/조직과 이들 수용체중 하나가 결여된 세포/조직에서 근접성 결찰 검정을 포함하는 근접성-기반 기술을 이용하여 적절한 공동-국소화(co-localization) 및 상호작용이 다른자리입체성(allosterism)을 가능하게 함을 보여주어야 하고; (2) 헤테로머들은 분명히 다른 성질, 이를 테면, 오직 이들 두 수용체를 모두 발현시키는 세포/조직에서만 신호전달, 리간드 결합, 및/또는 트래피킹(trafficking)에서의 변화를 나타내고, 이들 수용체중 하나가 결여된 세포/조직에서는 변화를 나타내지 않아야 하고; 그리고 (3) 헤테로머-선택적 시약들은 헤테로머-특이적 성질을 변경해야만 한다. 헤테로머-선택적 시약들은 헤테로머-선택적 항체들, 막-투과성 펩티드, 그리고 이가(bivalent)/이(bi)기능성 리간드들을 포함한다 (Gomes, I., et al., 2016; Pin, J.P., et al., 2007). 이종성(heterologous) 세포에서 발현된 재조합 수용체들을 이용하여 시험관에서 많은 GPCR 헤테로머들이 식별되기는 했지만, 단지 몇몇만이 새로운 특성을 보여 주었고, 기술적 문제로 인해 고유 조직에서 GPCR 헤테로머화에 대한 증거를 보여준 것은 극소수이다 (Gomes, I., et al., 2016). NC-IUPHAR은 새로운 GPCR 헤테로머들의 승인을 위해, 위의 세 가지 기준 중 적어도 두 가지를 충족시키는 증거를 제공해야 한다고 발표했다 (Pin, J.P., et al., 2007).
본원에서 기술된 바와 같이, 3가지 기준중 기준 1을 만족하는 지를 알아보기 위하여 (CXCR4와 ADRB2 헤테로머의 존재/실재를 결정함에 있어서, 헤테로머 성분들이 공동국소화하고, 직접적으로, 또는 다른자리입체성을 위한 전달관으로 작용하는 중간 단백질을 통하여 물리적으로 상호작용하는 지에 관하여), 다음을 포함하나 이에 국한되지 않는 다음 방법들중 하나 또는 그 이상이 이용될 수 있다: 공동-내재화 검정; 공동-국소화 검정 (세포의 격실 안에 수용체 포르토머(portomers)의 공동-국소화를 졀정) 이를 테면, 제자리 혼성화법, 면역조직화학법, 또는 면역전자 현미경법; 근접성-기반 검정, 이를 테면, 공명 에너지 전달 (RET), 생물발광 RET (BRET), 형광 RET (FRET), 시-분해 형광 RET (TR-FRET), 항체-지원된 FRET, 리간드-지원된 FRET, 이중분자 형광 상보성 (BiFC), CXCR4와 ADRB2의 발현 수준, 그리고 근접성 결찰 검정 (PLA)을 비롯한 근접성-기반 생물물리학 기술; 공동-면역침전 검정; 또는 형광 동물(fluorescent animals). CXCR4-ADRB2 헤테로머가 3가지 기준중 기준 1을 충족하는 지를 평가하기 위하여, 예를 들면, BiFC, 공동-내재화 분석, CXCR4와 ADRB2의 발현 수준, 또는 PLA를 이용하였다.
본원에서 기술된 바와 같이, 3가지 기준중 기준 2를 충족하는 지를 알아보기 위하여 (헤테로머가 개별 프로토머들의 것과 뚜렷히 상이한 성질을 나타내는 지에 관련하여), 이를 테면, CXCR4-ADRB2 헤테로머가 강화된 다운스트림 신호전달, 예를 들면 강화된 칼슘 동원 (이를 테면, 칼슘 동원 검정에 의해 결정됨)을 초래하는 지에 대하여, 상기에서 논의된 3가지 기준중 기준 1을 충족시킨 CXCR4-ADRB2 헤테로머들에서 2-단(tiered) 접근법이 이용되었다: (1) 예를 들면, CXCL12 단독 또는 ADRB2 효현제 단독으로 자극(b)에 비교하여 CXCL12와 ADRB2 효현제의 공동-자극(a) 시에, HA-VC와 프로토머 (CXCR4 또는 ADRB2)중 하나를 공동-발현시키는 세포에서 칼슘 동원을 비교하는 내용-에서 개별 프로토머에서 강화된 칼슘 동원(상승작용)과 같은 강화된 다운스트림 신호전달의 존재/부재의 결정; 그리고 (2) CXCL12 단독으로 또는 ADRB2 효현제 단독 자극의 합(b)에 비교하여 CXCL12와 ADRB2 효현제의 공동-자극(a) 시에, CXCR4와 ADRB2를 공동-발현시키는 세포에서 칼슘 동원을 비교하는 내용-에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머에서 강화된 칼슘 동원 (상승작용)와 같은, 강화된 다운스트림 신호전달의 존재/부재의 결정. 본원에서 기술된 바와 같이, 3가지 기준중 기준 2를 만족시키고, 그리고 강화된 다운스트림 신호전달, 예를 들면 강화된 칼슘 동원을 야기하는 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 간주되기 위하여, (1) 강화된 다운스트림 신호전달, 예를 들면, 프로토머 구성 (가령, CXCR4와 HA-VC 구성 또는 ADRB2와 HA-VC 구성)에서 강화된 칼슘 동원이 없어야 하고, 그리고 (2) 강화된 다운스트림 신호전달, 예를 들면 CXCR4-ADRB2 헤테로머 구성에서 강화된 칼슘 동원이 존재해야 한다. 상기 프로토머 문맥 및 CXCR4-ADRB2 헤테로머 문맥 모두에서, 당해 세포를 자극하는데 이용되는 CXCL12의 농도 (단일 물질로써, 또는 ADRB2 효현제와 조합하여) 및 당해 세포를 자극하는데 이용된 ADRB2 효현제 (내생성 효현제 또는 ADRB2에 대한 공지의 선택적 효현제)의 농도 (단일 물질로써, 또는 CXCL12와 조합하여)는 독립적으로 EC50 농도에 100x을 한 농도이거나 또는 이보다 더 낮다. 예를 들면, 당해 세포를 자극하는데 이용된 CXCL12 (단일 물질로써, 또는 ADRB2 효현제와 조합하여)의 농도는 15 nM (CXCR4에 대한 대략적 EC50 농도임)의 농도이다.
본원에서 기술된 바와 같이, CXCR4-ADRB2 헤테로머의 존재/현존을 결정함에 있어서, 3가지 기준중 기준 3을 만족하는 지를 알아보기 위하여 (헤테로머-선택적 시약들이 헤테로머-특이적 성질을 변경해야 하는지에 대하여), 3가지 기준중 기준 1과 3가지 기준중 기준 2를 만족하는 대상체 유래된 세포는 길항제 (CXCR4 길항제, ADRB2 길항제, 또는 CXCR4-ADRB2 헤테로머 길항제)의 존재 하에서 영향을 받는데, 이를 테면, CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 당해 대상체 유래된 세포의 세포 증식에 영향을 준다.
일부 구체예들에서, 본원에서 기술된 바와 같이, 치료 방법, 억제 방법, 약제학적 조성물, 또는 약제학적 키트는 세포에서 CXCR4와 ADRB2의 연합이 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 간주되는 다음의 기준 또는 특징중 적어도 2개를 충족하는 지를 포함하거나, 또는 이에 의존한다: 1) 공동-내재화 검정, 공동-편재화 검정, 제자리 혼성화법, 면역조직화학법, 면역전자 현미경법, CXCR4-ADRB2의 발현 수준, 근접성-기반 검정, 공동-면역침전 검정, 또는 형광 동물 검정중 하나 또는 그 이상을 통하여 결정하였을 때, 세포에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머 성분들은 공동국소화하고, 직접적으로 또는 다른자리입체성을 위한 전달관으로 작용하는 중간 단백질들을 경유하여 물리적으로 상호작용하고; 2) 강화된 양의 칼슘 동원, 이를 테면: (a) CXCL12 또는 ADRB2 효현제로 공동-자극 시, 세포에서 개별 프로토머 구성에서 CXCR4 또는 ADRB2는 CXCL12 또는 ADRB2 효현제로 단일 효현재 자극으로 인한 칼슘 동원 양의 총합에 대등하거나 또는 이보다 적은 칼슘 동원 양을 초래하고; 그리고 (b) 칼슘 동원 검정으로 결정되었을 때, CXCR4-ADRB2 헤테로머는 CXCL12 또는 ADRB2 효현제로 단일 효현제 자극으로 인한 칼슘 동원양의 합에 비교하여, CXCL12와 ADRB2 효현제로 공동-자극 시 강화된 칼슘 동원을 나타내고; 또는 3) CXCR4-ADRB2 헤테로머-선택적 시약은 i) 대상체 유래된 세포에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 헤테로머-특이적 성질을 변경시키고; ii) 대상체 유래된 세포에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 헤테로머-특이적을 변경시키고; iii) CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 대상체 유래된 세포의 헤테로머-특이적 성질을 변경시키고; 또는 iv) 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포들을 보유한 대상체에서 암 진행의 감소 여부 (이를 테면, 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)에서 암 진행의 감소, 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)에서 세포 증식의 감소, 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)에서 세포 이동의 감소, 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)에서 전이의 감소, 및/또는 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)에서 혈관신행의 감소). 일부 구체예들에서, 다음 방법중 적어도 하나에 의해 결정되었을 때, CXCR4-ADRB2 헤테로머-선택적 시약은 대상체 유래된 세포에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 헤테로머-특이적 성질을 변경시킨다: PLA, 방사리간드 결합 검정, [35S]GTP-yS 결합 검정, 칼슘 검정, cAMP 검정, GTPase 검정, PKA 활성화, ERK1/2 및/또는 Akt/PKB 인산화 검정, Src 및 STAT3 인산화 검정, CRE-리포터 검정, NFAT-RE-리포터 검정, SRE-리포터 검정, SRF-RE 리포터 검정, 분비된 알카리 포스파타제 검정, 이노시톨 1-포스페이트 생산 검정, 아데닐일 사이클라제 활성 검정, RT-PCR, RT-qPCR, RNAseq, 차세대 시퀀싱 (NGS), 또는 마이크로어레이에 의한 표적 유전자 발현 분석. 일부 구체예들에서, 다음 방법중 적어도 하나에 의해 결정되었을 때, CXCR4-ADRB2 헤테로머-선택적 시약은 대상체 유래된 세포에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 헤테로머-특이적 기능을 변경시킨다: PLA, 방사리간드 결합 검정, [35S]GTP-yS 결합 검정, 칼슘 검정, cAMP 검정, GTPase 검정, PKA 활성화, ERK1/2 및/또는 Akt/PKB 인산화 검정, Src 및 STAT3 인산화 검정, CRE-리포터 검정, NFAT-RE-리포터 검정, SRE-리포터 검정, SRF-RE 리포터 검정, NF-kB-RE 리포터 검정, 분비된 알카리 포스파타제 검정, 이노시톨 1-포스페이트 생산 검정, 아데닐일 사이클라제 활성 검정, RT-PCR, RT-qPCR, RNAseq, 또는 마이크로어레이에 의한 표적 유전자 발현 분석. 일부 구체예들에서, 다음 방법중 적어도 하나에 의해 결정될 때, CXCR4-ADRB2 헤테로머-선택적 시약은 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 대상체 유래된 세포의 헤테로머-특이적 성질을 변경시킨다: 암 세포의 증식, 이동, 침범, 및 약물 저항성 (생존), 면역 세포 기능의 조정, 혈관신생, 맥관형성, 전이, 약물 저항성, 조직 마이크로어레이 (TMA), 그리고 암 세포-종양 미세환경 (TME) 상호작용의 검정. 예를 들면, 일부 구체예들에서, 본원에서 기술된 바와 같이, 치료 방법, 억제 방법, 약제학적 조성물, 또는 약제학적 키트는 세포에서 CXCR4와 ADRB2의 연합이 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 간주되는 다음의 기준 또는 특징중 적어도 2개를 충족하는 지를 포함하거나, 또는 이에 의존한다: 1) 공동-내재화 검정, 이중분자 형광 상보성 (BiFC), CXCR4와 ADRB2의 발현 수준, 또는 근접성 결찰 검정 (PLA)중 하나 또는 그 이상을 통하여 결정하였을 때, 세포에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머 성분들은 공동국소화하고, 직접적으로 또는 다른자리입체성을 위한 전달관으로 작용하는 중간 단백질들을 경유하여 물리적으로 상호작용하고; 2) 강화된 양의 칼슘 동원, 이를 테면: a) CXCL12 또는 ADRB2 효현제로 공동-자극 시, 세포에서 개별 프로토머 구성에서 CXCR4 또는 ADRB2는 CXCL12 또는 ADRB2 효현제로 단일 효현재 자극으로 인한 칼슘 동원 양의 총합에 대등하거나 또는 이보다 적은 칼슘 동원 양을 초래하고; 그리고 b) 칼슘 동원 검정으로 결정되었을 때, CXCR4-ADRB2 헤테로머는 CXCL12 또는 ADRB2 효현제로 단일 효현제 자극으로 인한 칼슘 동원양의 합에 비교하여, CXCL12와 ADRB2 효현제로 공동-자극 시 강화된 칼슘 동원을 나타내고; 또는 3) CXCR4-ADRB2 헤테로머-선택적 시약은 i) 대상체 유래된 세포에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 헤테로머-특이적 성질을 변경시키고; ii) 대상체 유래된 세포에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 헤테로머-특이적을 변경시키고; iii) CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 대상체 유래된 세포의 헤테로머-특이적 성질을 변경시키고; 또는 iv) 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포들을 보유한 대상체에서 암 진행의 감소 여부 (이를 테면, 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)에서 암 진행의 감소, 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)에서 세포 증식의 감소, 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)에서 세포 이동의 감소, 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)에서 전이의 감소, 및/또는 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)에서 혈관신행의 감소). 일부 구체예들에서, 본원에서 기술된 바와 같이, 치료 방법, 억제 방법, 약제학적 조성물, 또는 약제학적 키트에는 세포에서 CXCR4와 ADRB2의 연합이 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 간주되는 기준 1 및 기준 2를 충족하는 지가 내포되거나, 또는 이에 의존한다. 일부 구체예들에서, 본원에서 기술된 바와 같이, 치료 방법, 억제 방법, 약제학적 조성물, 또는 약제학적 키트에는 세포에서 CXCR4와 ADRB2의 연합이 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 간주되는 기준 1 및 기준 3을 충족하는 지가 내포되거나, 또는 이에 의존한다. 일부 구체예들에서, 본원에서 기술된 바와 같이, 치료 방법, 억제 방법, 약제학적 조성물, 또는 약제학적 키트에는 세포에서 CXCR4와 ADRB2의 연합이 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 간주되는 기준 2 및 기준 3을 충족하는 지가 내포되거나, 또는 이에 의존한다. 일부 구체예들에서, 본원에서 기술된 바와 같이, 치료 방법, 억제 방법, 약제학적 조성물, 또는 약제학적 키트에는 세포에서 CXCR4와 ADRB2의 연합이 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 간주되는 기준 1, 기준 2 및 기준 3을 충족하는 지가 내포되거나, 또는 이에 의존한다.
본원에서 기술된 바와 같이, 상기 3가지 기준중 적어도 2개를 충족시키는 CXCR4-ADRB2 헤테로머는 강화된 다운스트림 신호전달을 갖거나, 야기시키거나, 또는 만들 수 있다. 상기 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 결과일 수 있는데, 이를 테면, CXCR4-ADRB2 헤테로머의 효현성으로 인하여, CXCR4-ADRB2 헤테로머의 CXCR4 효현성으로 인하여, CXCR4-ADRB2 헤테로머의 ADRB2 효현성으로 인하여, 및/또는 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 CXCR4 효현성과 ADRB2 효현성으로 인한 겨로가일 수 있다. 일부 구체예들에서, 상기 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4, ADRB2, 또는 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 다운스트림일 수 있다. 일부 구체예들에서, 상기 강화된 다운스트림 신호전달은 이들의 각각의 개별 프로토머 구성에서 CXCR4 프로토머 또는 ADRB2 프로토머로부터 유래된 다운스트림 신호전달에 관련하여 CXCR4-ADRB2 헤테로머로부터 유래될 수 있다. 일부 구체예들에서, 상기 강화된 다운스트림 신호전달은 개별 프로토머 구성에서 CXCR4 프로토머로부터 유래된 다운스트림 신호전달에 관련하여 CXCR4-ADRB2 헤테로머로부터 유래될 수 있다. 일부 구체예들에서, 상기 강화된 다운스트림 신호전달은 개별 프로토머 구성에서 ADRB2 프로토머로부터 유래된 다운스트림 신호전달에 관련하여 CXCR4-ADRB2 헤테로머로부터 유래될 수 있다. 일부 구체예들에서, 상기 강화된 다운스트림 신호전달은 이들의 각각의 개별 프로토머 구성에서 CXCR4 프로토머 및 ADRB2 프로토머로부터 유래된 다운스트림 신호전달에 관련하여 CXCR4-ADRB2 헤테로머로부터 유래될 수 있다. 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머로부터의 강화된 다운스트림 신호전달은 일부 구체예들에서, 암 대상체에서 억제될 수 있는데, 이를 테면, 당해 대상체의 암 세포에 억제된다. 일부 구체예들에서, 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머로부터의 강화된 다운스트림 신호전달은 강화된 양의 칼슘 동원 (또는 칼슘 동원의 상승적 양)일 수 있는데, 세포내 Ca2+ 검정, 이를 테면, 칼슘 동원 검정에 의해 결정될 수 있다.
본원에서 기술된 바와 같이, 상기 3가지 기준 중 적어도 2개를 충족시키는 CXCR4-ADRB2 헤테로머는 강화된 다운스트림 신호전달을 갖거나, 야기시키거나, 또는 만들 수 있고, 이때 강화된 다운스트림 신호전달은 강화된 양의 칼슘 동원이다. 칼슘 동원 검정을 통하여 결정하였을 때, 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머로부터의 강화된 양의 칼슘 동원은 CXCL12와 ADRB2 효현제의 공동-자극 시, CXCL12 또는 ADRB2 효현제로 전술한 세포의 단일 효현제 자극으로 인한 칼슘 동원 양의 합보다 적어도 10% 이상인 칼슘 동원양일 수 있다. 일부 구체예들에서, 칼슘 동원 검정을 통하여 결정하였을 때, CXCR4-ADRB2 헤테로머로부터의 강화된 양의 칼슘 동원은 CXCL12와 ADRB2 효현제의 공동-자극 시, CXCL12 또는 ADRB2 효현제로 전술한 세포의 단일 효현제 자극으로 인한 칼슘 동원의 양의 합보다 적어도 10% 이상인, 상승적 칼슘 동원양일 수 있다. 칼슘 동원 검정을 통하여 결정하였을 때, 예를 들면, CXCR4-ADRB2 헤테로머로부터의 상기 강화된 양의 칼슘 동원 (또는 칼슘 동원의 상승적 양)은 CXCL12와 ADRB2 효현제의 공동-자극 시에, CXCL12 또는 ADRB2 효현제로 전술한 세포의 단일 효현제 자극으로 인한 칼슘 동원 양의 합보다 적어도 20% 이상, 적어도 30% 이상, 적어도 40% 이상, 적어도 50% 이상, 적어도 75% 이상, 적어도 90% 이상, 적어도 100% 이상, 적어도 150% 이상, 또는 적어도 200% 이상인 칼슘 동원 양일 수 있다. 일부 구체예들에서, 칼슘 동원 검정을 통하여 결정하였을 때, CXCR4-ADRB2 헤테로머로부터의 상기 강화된 양의 칼슘 동원 (또는 칼슘 동원의 상승적 양)은 CXCL12와 ADRB2 효현제의 공동-자극 시에, CXCL12 또는 ADRB2 효현제로 전술한 세포의 단일 효현제 자극으로 인한 칼슘 동원 양의 합보다 10-100% 범위로 더 클 수 있고, 예를 들면, 칼슘 동원 검정을 통하여 결정하였을 때, CXCL12와 ADRB2 효현제의 공동-자극 시에, CXCL12 또는 ADRB2 효현제로 전술한 세포의 단일 효현제 자극으로 인한 칼슘 동원 양의 합보다 25-100% 이상, 50-100% 이상, 75-100% 이상, 또는 100-200% 이상이 될 수 있는 칼슘 동원 양일 수 있다.
일부 구체예들에서, 본원에서 기술된 바와 같이, 치료 방법, 억제 방법, 약제학적 조성물, 또는 약제학적 키트에 따르면, CXCR4-ADRB2 헤테로머는 상기 3가지 기준중 적어도 2개를 충족하고, 이로 인하여 강화된 다운스트림 신호전달을 갖거나, 야기시키거나, 또는 만들고, 이때 강화된 다운스트림 신호전달은 강화된 양의 칼슘 동원이며, 이를 테면: a) CXCL12와 ADRB2 효현제로 공동-자극 시에, 세포에서 개별 프로토머 구성에서 CXCR4 또는 ADRB2는 CXCL12 또는 ADRB2 효현제로 단일 효현제 자극으로 생성된 칼슘 동원 양의 합에 대등하거나 또는 이보다 적은 칼슘 동원 양을 초래하고; 그리고 b) 칼슘 동원 검정을 통하여 결정하였을 때, CXCR4-ADRB2 헤테로머는 CXCL12와 ADRB2 효현제의 공동-자극 시에 CXCL12 또는 ADRB2 효현제로 단일 효현제 자극으로 생성된 칼슘 동원 양의 합과 관련하여 강화된 칼슘 동원을 나타낸다. 예를 들면, 일부 구체예들에서, CXCR4-ADRB2 헤테로머로부터 강화된 다운스트림 신호전달은 강화된 양의 칼슘 동원이며, 이를 테면: i) 칼슘 동원 검정을 통하여 결정하였을 때, 세포에서 개별 프로토머 구성에서 프로토머 CXCR4 또는 ADRB2로부터의 칼슘 동원은 비-상승적이며; 그리고 ii) 칼슘 동원 검정을 통하여 결정하였을 때, 당해 세포에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머로부터의 칼슘 동원은 상승적이다. 일부 구체예들에서, 개별 프로토머 구성은 다음의 것일 수 있다: 칼슘 동원 검정을 통하여 결정하였을 때, (a) 개별 프로토머 ADRB2 부재 하에 세포에서 개별 프로토머 CXCR4; 또는 (b) 개별 프로토머 CXCR4 부재 하에 세포에서 개별 프로토머 ADRB2는 CXCL12와 ADRB2 효현제의 공동-자극 시에 CXCL12 또는 ADRB2 효현제로 단일 효현제 자극으로 인한 칼슘 동원 양의 합에 대등한 또는 이보다 적은 칼슘 동원 양을 초래한다. 일부 구체예들에서, 개별 프로토머 구성은 독립적으로 다음의 것일 수 있다: 칼슘 동원 검정을 통하여 결정하였을 때, (a) 개별 프로토머 ADRB2 부재 하에 세포에서 개별 프로토머 CXCR4; 그리고 (b) 개별 프로토머 CXCR4 부재 하에 세포에서 개별 프로토머 ADRB2는 CXCL12와 ADRB2 효현제의 공동-자극 시에 CXCL12 또는 ADRB2 효현제로 단일 효현제 자극으로 인한 칼슘 동원 양의 합에 대등한 또는 이보다 적은 칼슘 동원 양을 초래한다. 예를 들면, 일부 구체예들에서, 칼슘 동원 검정을 통하여 결정하였을 때, CXCR4-ADRB2 헤테로머는 CXCL12와 ADRB2 효현제의 공동-자극 시에, CXCL12 또는 ADRB2 효현제로 전술한 세포의 단일 효현제 자극으로 인한 칼슘 동원 양의 합보다 더 큰 칼슘 동원 양을 초래할 수 있다.
암을 앓고 있는 대상체의 세포에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머로부터 강화된 다운스트림 신호전달을 억제하는 방법이 본원에서 제공되며, 이 방법은 해당 대상체에게 (a) CXCR4 저해제, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르(burixafor)이며; 그리고 (b) ADRB2 저해제를 투여하는 것을 포함하며; 이때: (i) 상기 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로부터 유래되며; 그리고 (ii) 투여된 저해제들 조합은 암 대상체에서 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 다운스트림 신호전달을 억제시킨다. 특이적 구체예들에서, CXCR4 저해제는 부릭사포르이며, ADRB2 저해제는 카르베디롤이다.
CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체의 암을 치료하는 방법을 본원에서 제공하며, 이 방법은 해당 대상체에게 (a) CXCR4 저해제, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르이며; 그리고 (b) ADRB2 저해제를 투여하는 것을 포함하며; 이때: (i) 상기 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로부터 유래되며; 그리고 (ii) 투여된 저해제들 조합은 암 대상체에서 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 다운스트림 신호전달을 억제시킨다. 특이적 구체예들에서, CXCR4 저해제는 부릭사포르이며, ADRB2 저해제는 카르베디롤이다.
CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체의 암을 치료하는 방법이 본원에서 제공되며, 이 방법은 다음을 포함하고: (a) 해당 대상체의 세포가 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 지를 결정하고, 이때 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 것이며; 그리고 (b) 만일 해당 대상체의 세포가 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유한다면, 그러면 해당 암 대상체에게 다음을 투여한다 (i) CXCR4 저해제, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르이며; 그리고 (ii) ADRB2 저해제. 특이적 구체예들에서, CXCR4 저해제는 부릭사포르이며, ADRB2 저해제는 카르베디롤이다.
또다른 측면에서, CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체의 암을 치료하는 방법이 본원에서 제공되며, 이때 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 것이며, 이 방법은 다음을 포함하고: (1) 해당 대상체가 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포 보유 여부의 결정은 해당 대상체로부터 생물학적 샘플을 획득하거나 또는 획득하였음으로 해서 결정되며; 그리고 다음을 결정하기 위해 해당 생물학적 샘플을 분석하거나 또는 분석하였고: (i) 해당 대상체의 세포가 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 함유하는 지 여부; 또는 (ii) CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제의 조합이 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)에서 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 헤테로머-특이적 속성들 또는 기능을 변경시키는 지 여부; 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)의 헤테로머-특이적 속성들을 변경시키는 지 여부; 또는 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포들을 보유한 대상체에서 암 진행의 감소 여부; 그리고 (2) 만약 해당 대상체가 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한다면, 그러면 암 대상체에게 CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제의 조합을 투여하고, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르이며; 그리고 (3) 만약 해당 대상체가 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유하지 않는다면, 그러면 해당 암 대상체에게 부릭사포르 또는 ADRB2 저해제의 단일 저해제를 투여한다 . 특이적 구체예들에서, CXCR4 저해제는 부릭사포르이며, ADRB2 저해제는 카르베디롤이다.
또다른 측면에서, CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체의 암을 치료하는 방법이 본원에서 제공되며, 이때 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 것이며, 이 방법은 다음을 포함하고: (1) 해당 대상체가 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포 보유 여부의 결정은 해당 대상체로부터 생물학적 샘플을 획득하거나 또는 획득하였음으로 해서 결정되며; 그리고 다음을 결정하기 위해 해당 생물학적 샘플을 분석하거나 또는 분석하였고: (i) 해당 대상체의 세포가 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 함유하는 지 여부; 또는 (ii) CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제의 조합이 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)에서 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 헤테로머-특이적 속성들 또는 기능을 변경시키는 지 여부; 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)의 헤테로머-특이적 속성들을 변경시키는 지 여부; 또는 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포들을 보유한 대상체에서 암 진행의 감소 여부; 그리고 (2) 만약 해당 대상체가 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한다면, 그러면 암 대상체에게 CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제의 조합을 투여하고, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르이며; 그리고 (3) 만약 해당 대상체가 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유하지 않는다면, 그러면 해당 암 대상체에게 부릭사포르 또는 ADRB2 저해제의 단일 저해제를 투여하고, 이때: (a) 부릭사포르 또는 ADRB2 저해제중 단일 저해제 투여와 비교하여, 해당 암 대상체에게 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 조합을 투여할 때, 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체에서 암의 진행은 5-100% 범위에서 더 감소되며; (b) 부릭사포르가 단일 저해제로 투여될 때 이의 효능과 비교하여, 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체에게 ADRB2 저해제와 복합하여 투여할 때, 부릭사포르의 효능은 5-2000% 범위로 증가되며; 및/또는 (c) ADRB2가 단일 저해제로 투여될 때 이의 효능과 비교하여, 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체에게 부릭사포르와 복합하여 투여될 때, ADRB2 저해제의 효능은 5-2000% 범위로 증가된다. 특이적 구체예들에서, CXCR4 저해제는 부릭사포르이며, ADRB2 저해제는 카르베디롤이다.
또다른 측면에서, CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체의 암을 치료하는 방법이 본원에서 제공되며, 이때 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 것이며, 이 방법은 다음을 포함하고: (1) 해당 대상체의 세포가 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 지의 여부는 해당 대상체로부터 생물학적 샘플을 획득하거나 또는 획득하였고, 해당 생물학적 샘플을 분석하거나 또는 분석하였음으로 해서 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머가 이 대상체의 세포에 존재하는 지 여부를 결정하고; 이때 해당 생물학적 샘플에서 실행된 분석은 다음중 하나 또는 그 이상이거나 또는 다음중 하나 또는 그 이상을 포함하며: 공동-내재화 분석, 공동-국소화 분석, 제자리 혼성화, 면역조직화학, 면역전자 현미경, 근접성-기반 분석, 공동-면역침전 분석, 효소-연계된 면역흡착 분석 (ELISA), 유동세포분석, RNAseq, RT-qPCR, 마이크로어레이, 또는 형광 동물 분석; 그리고 (2) 만일 해당 대상체의 세포가 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유한다면, 그러면 암 대상체에게 CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제의 조합을 투여하고, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르이며; 그리고 (3) 만약 해당 대상체의 세포가 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하지 않는다면, 그러면 해당 암 대상체에게 부릭사포르 또는 ADRB2 저해제의 단일 저해제를 투여한다. 특이적 구체예들에서, CXCR4 저해제는 부릭사포르이며, ADRB2 저해제는 카르베디롤이다.
또다른 측면에서, CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체의 암을 치료하는 방법이 본원에서 제공되며, 이때 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 것이며, 이 방법은 다음을 포함하고: (1) 해당 대상체의 세포가 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 지의 여부는 해당 대상체로부터 생물학적 샘플을 획득하거나 또는 획득하였음으로 해서 해당 생물학적 샘플을 분석하거나 또는 분석하였음으로 해서 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머가 이 대상체의 세포에 존재하는 지 여부를 결정하고; 이때 해당 생물학적 샘플에서 실행된 분석은 다음중 하나 또는 그 이상이거나 또는 다음중 하나 또는 그 이상을 포함하며: 공동-내재화 분석, 공동-국소화 분석, 제자리 혼성화, 면역조직화학, 면역전자 현미경, 근접성-기반 분석, 공동-면역침전 분석, 효소-연계된 면역흡착 분석 (ELISA), 유동세포분석, RNAseq, RT-qPCR, 마이크로어레이, 또는 형광 동물 분석; 그리고 (2) 만일 해당 대상체의 세포가 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유한다면, 그러면 암 대상체에게 CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제의 조합을 투여하고, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르이며; 그리고 (3) 만약 해당 대상체의 세포가 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하지 않는다면, 그러면 해당 암 대상체에게 부릭사포르 또는 ADRB2 저해제의 단일 저해제를 투여하고; 이때: (a) 부릭사포르 또는 ADRB2 저해제중 단일 저해제 투여와 비교하여, 해당 암 대상체에게 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 조합을 투여할 때, 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체에서 암의 진행은 5-100% 범위에서 더 감소되며; (b) 부릭사포르가 단일 저해제로 투여될 때 이의 효능과 비교하여, 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체에게 ADRB2 저해제와 복합하여 투여할 때, 부릭사포르의 효능은 5-2000% 범위로 증가되고; 및/또는 (c) ADRB2가 단일 저해제로 투여될 때 이의 효능과 비교하여, 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체에게 부릭사포르와 복합하여 투여될 때, ADRB2 저해제의 효능은 5-2000% 범위로 증가된다. 특이적 구체예들에서, CXCR4 저해제는 부릭사포르이며, ADRB2 저해제는 카르베디롤이다.
CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체의 암 치료에 사용을 위한 약제학적 키트가 본원에서 제공되며, 상기 약제학적 키트는 다음을 포함하고: (a) CXCR4 저해제, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르이며; 그리고 (b) ADRB2 저해제; 이때 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 것이다. 특이적 구체예들에서, CXCR4 저해제는 부릭사포르이며, ADRB2 저해제는 카르베디롤이다.
CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체의 암 치료에 사용을 위한 약제학적 조성물이 본원에서 제공되며, 상기 약제학적 조성물은 다음을 포함하고: (a) CXCR4 저해제, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르이며; (b) ADRB2 저해제; 그리고 (c) 약제학적으로 수용가능한 담체; 이때 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 것이다. 특이적 구체예들에서, CXCR4 저해제는 부릭사포르이며, ADRB2 저해제는 카르베디롤이다.
다음의 것들을 포함하는 약제학적 조성물이 본원에서 제공된다 (a) CXCR4 저해제, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르이며; (b) ADRB2 저해제; 그리고 (c) 약제학적으로 수용가능한 담체. 특이적 구체예들에서, CXCR4 저해제는 부릭사포르이며, ADRB2 저해제는 카르베디롤이다.
세포에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 다운스트림 신호전달을 억제하는 방법이 본원에서 제공되며, 이 방법은 해당 세포에 다음을 투여하는 것을 포함하고: (a) CXCR4 저해제, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르이며; 그리고 (b) ADRB2 저해제; 이때: (i) 상기 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 것이며; 그리고 (ii) 부릭사포르 및 상기 ADRB2 저해제와 접촉됨으로써, 해당 세포에서 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 다운스트림 신호전달이 억제된다. 특정 구체예들에서, 이 방법에는 해당 세포가 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 지 여부를 결정하는 것이 더 내포된다. 특이적 구체예들에서, 해당 세포는 대상체의 세포다. 특이적 구체예들에서, 해당 대상체의 세포는 암 세포다. 특이적 구체예들에서, 해당 세포는 암 세포다. 특이적 구체예들에서, CXCR4 저해제는 부릭사포르이며, ADRB2 저해제는 카르베디롤이다.
세포에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 다운스트림 신호전달을 억제하는데 사용하기 위한 약제학적 키트가 본원에서 제공되며, 상기 약제학적 키트는 다음을 포함하고: (a) CXCR4 저해제, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르이며; 그리고 (b) ADRB2 저해제; 이때 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 것이다. 특이적 구체예들에서, 해당 세포는 대상체의 세포다. 특이적 구체예들에서, 해당 대상체의 세포는 암 세포다. 특이적 구체예들에서, 해당 세포는 암 세포다. 특이적 구체예들에서, CXCR4 저해제는 부릭사포르이며, ADRB2 저해제는 카르베디롤이다.
세포에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 다운스트림 신호전달을 억제하는데 사용하기 위한 약제학적 조성물을 제공하는데, 상기 약제학적 조성물은 다음을 포함하고: (a) CXCR4 저해제, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르이며; (b) ADRB2 저해제; 그리고 (c) 약제학적으로 수용가능한 담체; 이때 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 것이다. 특이적 구체예들에서, 해당 세포는 대상체의 세포다. 특이적 구체예들에서, 해당 대상체의 세포는 암 세포다. 특이적 구체예들에서, 해당 세포는 암 세포다. 특이적 구체예들에서, CXCR4 저해제는 부릭사포르이며, ADRB2 저해제는 카르베디롤이다.
일부 구체예들에서, 본 발명에서 제공되는 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물에는 암 대상체에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 존재를 탐지하는 것이 더 내포된다. 일부 구체예들에서, 본원에서 제공된 방법 및 용도에는 암 대상체에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 식별해내는 것이 더 내포된다. 일부 구체예들에서, 본원에서 제공된 방법 및 용도에는 해당 대상체로부터 생물학적 샘플을 획득하는 것이 더 내포된다. 일부 구체예들에서, 본원에서 제공된 방법 및 용도에는 전술한 대상체로부터 획득된 생물학적 샘플에서 검정을 실행하는 것이 더 내포된다. 일부 구체예들에서, 본원에서 제공된 방법 및 용도에는 다음이 더 내포된다: (i) 암 대상체로부터 생물학적 샘플을 획득하고, 또는 획득하였고; (ii) 해당 암 대상체로부터 획득된 생물학적 샘플 안에 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 존재, 실체, 또는 존재와 실체를 결정하기 위한 진단학적 검정을 실행하거나 또는 실행하였고; 그리고 (iii) CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 다운스트림 신호전달을 억제하기 위해, 부릭사포르와 조합하여 투여되는 ADRB2 저해제를 선택한다. 일부 구체예들에서, 본원에서 제공된 방법 및 용도에는 해당 대상체의 세포가 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 지의 여부를 결정하는 것이 더 내포되는데, 해당 대상체로부터 획득된 생물학적 샘플 상에서 검정을 실행하는 것을 포함한다. 일부 구체예들에서, 본원에서 제공된 방법 및 용도에는 해당 대상체의 세포가 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 지의 여부를 결정하는 것이 더 내포되는데, 이것은 해당 대상체로부터 생물학적 샘플을 획득하고, 그리고 전술한 대상체로부터 획득된 생물학적 샘플 상에서 검정을 실행하는 것을 포함한다. 일부 구체예들에서, 본원에서 제공된 방법 및 용도에는 전술한 대상체로부터 획득된 생물학적 샘플이 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 것이 내포된다. 일부 구체예들에서, 상디 대상체의 생물학적 샘플은 생물학적 유체 샘플이다. 일부 구체예들에서, 상기 생물학적 유체 샘플은 혈액 샘플, 혈장 샘플, 타액 샘플, 뇌 유체 샘플, 눈의 유체 샘플, 또는 소변 샘플이다. 일부 구체예들에서, 본원에서 제공된 방법 및 용도에는 생물학적 유체 샘플 상에서 액체 생검이 실행되는 것이 더 내포된다. 일부 구체예들에서, 상기 대상체의 생물학적 샘플은 생물학적 조직 샘플이다. 일부 구체예들에서, 상기 생물학적 조직 샘플은 장기 조직 샘플, 골 조직 샘플, 또는 종양 조직 샘플이다. 일부 구체예들에서, 본원에서 제공된 방법 및 용도에는 생물학적 유체 샘플 상에서 조직 샘플 검정이 실행되는 것이 더 내포된다. 일부 구체예들에서, 본원에서 제공된 방법 및 용도에는 대상체의 세포가 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 것이 내포된다. 일부 구체예들에서, 상기 세포는 암 세포다. 일부 구체예들에서, 상기 대상체의 세포는 암 세포다. 일부 구체예들에서, 상기 대상체는 환자다.
일부 구체예들에서, 본 발명에서 제공되는 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물에는 다음 특징중 두 가지 또는 그 이상을 갖는 CXCR4-ADRB2 헤테로머가 더 포함된다: (1) CXCR4-ADRB2 헤테로머 성분들은 세포에서 공동-국소화되고, 직접적으로, 또는 다른자리 입체성의 전달관으로 작용하는 중간체 단백질을 경유하여 물리적으로 상호작용하고; (2) 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 것이며; 및/또는 (3) 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 조합은 (i) 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 헤테로머-특이적 속성들을 변경시키고; (ii) 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 헤테로머-특이적 기능들을 변경시키고; (iii) CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)의 헤테로머-특이적 속성들을 변경시키고; 및/또는 (iv) 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포들을 보유한 대상체에서 암 진행이 감소된다.
일부 구체예들에서, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물이 본원의 제공에 내포되며, 이때 CXCR4-ADRB2 헤테로머는 다음의 특징을 보유하는 것으로 특징화된다: CXCR4-ADRB2 헤테로머 성분들은 세포에서 공동-국소화되고, 직접적으로, 또는 다른자리 입체성의 전달관으로 작용하는 중간체 단백질을 경유하여 물리적으로 상호작용한다. 특이적 구체예들에서, 본원에서 제공된 방법 및 용도에는 세포에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 CXCR4와 ADRB2 성분들의 공동-국소화, 그리고 직접적으로, 또는 다른자리 입체성의 전달관으로 작용하는 중간체 단백질을 경유하여, 물리적으로 상호작용하는 지를 식밸해내고, 이를 결정하는 검정이 실행되는 것이 더 내포된다. 특이적 구체예들에서, 세포에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머 성분들의 공동-국소화 및 물리적 상호작용을 결정하는 검정에는 다음중 하나 또는 그 이상이 내포된다: 공동-내재화 분석, 공동-국소화 분석, 제자리 혼성화, 면역조직화학, 면역전자 현미경, 근접성-기반 분석, 공동-면역침전 분석, 효소-연계된 면역흡착 분석 (ELISA), 유동세포분석, RNAseq, RT-PCR, RT-qPCR, CXCR4의 발현 수준, ADRB2의 발현 수준, CXCR4와 ADRB2의 발현 수준, 마이크로어레이, 또는 형광 동물 분석. 특이적 구체예들에서, 상기 검정은 공동-내재화 분석이다. 특이적 구체예들에서, 상기 검정은 공동-국소화 분석이다. 특이적 구체예들에서, 상기 검정은 제자리 혼성화 검정이다. 특이적 구체예들에서, 상기 검정은 공동-면역침전 분석이다. 특이적 구체예들에서, 상기 검정은 근접성-기반 분석이다. 특이적 구체예들에서, 상기 근접성-기반 분석은 공명 에너지 전달 (RET), 생물발광 RET (BRET), 형광 RET (FRET), 시-분해 형광 RET (TR-FRET), 항체-기반 FRET, 리간드-기반 FRET, 이중분자 형광 상보성 (BiFC), 또는 근접성 결찰 검정 (PLA)이거나, 또는 이를 포함한다. 특이적 구체예들에서, TR-FRET는 리간드-기반 TR-FRET이다. 특이적 구체예들에서, TR-FRET는 항체-기반 TR-FRET이다. 특이적 구체예들에서, 상기 검정은 이중분자 형광 상보성 (BiFC)이다. 특이적 구체예들에서, 상기 검정은 근접성 결찰 검정 (PLA)이다. 특이적 구체예들에서, 상기 검정은 효소-연계된 면역흡착 분석 (ELISA)이다. 특이적 구체예들에서, 상기 검정은 유동세포분석 검정이다. 특이적 구체예들에서, 상기 검정은 CXCR4의 발현 수준, ADRB2의 발현 수준, 및/또는 CXCR4와 ADRB2의 발현 수준을 결정한다. 특이적 구체예들에서, 상기 검정은 RNAseq를 통하여 CXCR4의 발현 수준, ADRB2의 발현 수준, 및/또는 CXCR4와 ADRB2의 발현 수준을 결정한다. 특이적 구체예들에서, 상기 검정은 RT-PCR을 통하여 CXCR4의 발현 수준, ADRB2의 발현 수준, 및/또는 CXCR4와 ADRB2의 발현 수준을 결정한다. 특이적 구체예들에서, 상기 검정은 RT-qPCR을 통하여 CXCR4의 발현 수준, ADRB2의 발현 수준, 및/또는 CXCR4와 ADRB2의 발현 수준을 결정한다. 특이적 구체예들에서, 상기 검정은 마이크로어레이 검정이다. 특이적 구체예들에서, 상기 검정은 형광 동물 분석이다. 특이적 구체예들에서, 상기 검정은 전술한 대상체로부터 획득된 생물학적 샘플에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 존재를 결정한다. 특이적 구체예들에서, 상기 검정은 대상체에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 존재를 결정한다. 특이적 구체예들에서, 상기 검정은 대상체의 세포에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 존재를 결정한다.
일부 구체예들에서, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물이 본원의 제공에 내포되며, 이때 CXCR4-ADRB2 헤테로머는 다음의 특징을 보유하는 것으로 특징화된다: 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 것이다. 특이적 구체예들에서, CXCR4-ADRB2 헤테로머는 강화된 다운스트림 신호전달을 만든다. 특이적 구체예들에서, 상기 강화된 다운스트림 신호전달은 전술한 대상체의 세포에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 존재로 인한 것이다. 특이적 구체예들에서, CXCR4-ADRB2 헤테로머는 대상체의 세포에서 강화된 다운스트림 신호전달을 만든다. 특이적 구체예들에서, 상기 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 효현성(agonism)으로 인한 것이다. 특이적 구체예들에서, 상기 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 CXCR4 효현성으로 인한 것이다. 특이적 구체예들에서, 상기 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 ADRB2 효현성으로 인한 것이다. 특이적 구체예들에서, 상기 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 CXCR4 효현성과 ADRB2 효현성으로 인한 것이다. 특이적 구체예들에서, 상기 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4, 상기 ADRB2, 또는 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 다운스트림이다. 특이적 구체예들에서, 상기 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4의 다운스트림이다. 특이적 구체예들에서, 상기 강화된 다운스트림 신호전달은 ADRB2의 다운스트림이다. 특이적 구체예들에서, 상기 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 다운스트림이다. 특이적 구체예들에서, 일부 구체예들에서, CXCR4-ADRB2 헤테로머로부터 강화된 다운스트림 신호전달은 이들의 각각의 개별 프로토머 구성에서 CXCR4 프로토머 또는 ADRB2 프로토머로부터 유래된 다운스트림 신호전달에 관련된다. 특이적 구체예들에서, 일부 구체예들에서, CXCR4-ADRB2 헤테로머로부터 강화된 다운스트림 신호전달은 이들의 각각의 개별 프로토머 구성에서 CXCR4 프로토머로부터 유래된 다운스트림 신호전달에 관련된다. 특이적 구체예들에서, 일부 구체예들에서, CXCR4-ADRB2 헤테로머로부터 강화된 다운스트림 신호전달은 이들의 각각의 개별 프로토머 구성에서 ADRB2 프로토머로부터 유래된 다운스트림 신호전달에 관련된다. 특이적 구체예들에서, 일부 구체예들에서, CXCR4-ADRB2 헤테로머로부터 강화된 다운스트림 신호전달은 이들의 각각의 개별 프로토머 구성에서 CXCR4 프로토머와 ADRB2 프로토머로부터 유래된 다운스트림 신호전달에 관련된다. 특이적 구체예들에서, 상기 강화된 다운스트림 신호전달은 칼슘 동원의 강화된 양이다. 특이적 구체예들에서, 상기 강화된 반응이란 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포(들)을 보유하는 대상체에서 암 진행의 강화다. 특이적 구체예들에서, 상기 강화된 암 진행은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포(들)을 보유하는 대상체에서 세포 증식의 강화이다. 특이적 구체예들에서, 상기 강화된 암 진행은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포(들)을 보유하는 대상체에서 세포 이동의 강화이다. 특이적 구체예들에서, 상기 강화된 암 진행은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 전이의 강화이다. 특이적 구체예들에서, 상기 강화된 암 진행은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포(들)을 보유하는 대상체에서 종양 성장의 강화이다. 특이적 구체예들에서, 상기 강화된 암 진행은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 혈관신생 의 강화이다. 특이적 구체예들에서, 상기 세포(들)은 암 세포(들)이다. 특이적 구체예들에서, 상기 세포(들)은 대상체의 유래된 세포(들)이다. 특이적 구체예들에서, 상기 세포(들)은 대상체로부터 획득한 생물학적 샘플로부터 유래된다.
일부 구체예들에서, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물이 본원의 제공에 내포되며, 이때 CXCR4-ADRB2 헤테로머는 다음의 특징을 보유하는 것으로 특징화된다: 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 것이고; 이때 상기 강화된 양의 칼슘 동원은 세포내 Ca2+ 검정에 의해 결정된다. 특이적 구체예들에서, 상기 세포내 Ca2+ 검정은 칼슘 동원 검정이다. 특이적 구체예들에서, 상기 칼슘 동원 검정은 CXCR4-ADRB2 헤테로머가 상기 강화된 다운스트림 신호전달을 만드는 지를 결정한다. 특이적 구체예들에서, 상기 칼슘 동원 검정은 상기 강화된 다운스트림 신호전달이 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 존재로 인한 것인지를 결정한다. 특이적 구체예들에서, CXCR4-ADRB2 헤테로머는 칼슘 동원의 강화된 양을 나타내는데, 이를 테면: a) CXCL12와 ADRB2 효현제로 공동-자극 시에, 세포에서 개별 프로토머 구성에서 CXCR4 또는 ADRB2는 CXCL12 또는 ADRB2 효현제로 단일 효현제 자극으로 생성된 칼슘 동원 양의 합에 대등하거나 또는 이보다 적은 칼슘 동원 양을 초래하고; 그리고 b) 칼슘 동원 검정을 통하여 결정하였을 때, CXCR4-ADRB2 헤테로머는 CXCL12와 ADRB2 효현제의 공동-자극 시에 CXCL12 또는 ADRB2 효현제로 단일 효현제 자극으로 생성된 칼슘 동원 양의 합과 관련하여 강화된 칼슘 동원을 나타낸다. 특이적 구체예들에서, 세포에서 개별 프로토머 구성에서 프로토머 CXCR4 또는 ADRB2로부터 칼슘 동원은 칼슘 동원 검정을 통하여 결정하였을 때, 비-상승적이며; 그리고 칼슘 동원 검정을 통하여 결정하였을 때, 당해 세포에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머로부터의 칼슘 동원은 상승적이다. 특이적 구체예들에서, 이때 개별 프로토머 구성에서: 칼슘 동원 검정을 통하여 결정하였을 때, (a) 개별 프로토머 ADRB2 부재 하에 세포에서 개별 프로토머 CXCR4; 또는 (b) 개별 프로토머 CXCR4 부재 하에 세포에서 개별 프로토머 ADRB2는 CXCL12와 ADRB2 효현제의 공동-자극 시에 CXCL12 또는 ADRB2 효현제로 단일 효현제 자극으로 인한 칼슘 동원 양의 합에 대등한 또는 이보다 적은 칼슘 동원 양을 초래한다. 특이적 구체예들에서, 이때 개별 프로토머 구성에서 독립적으로: 칼슘 동원 검정을 통하여 결정하였을 때, (a) 개별 프로토머 ADRB2 부재 하에 세포에서 개별 프로토머 CXCR4; 그리고 (b) 개별 프로토머 CXCR4 부재 하에 세포에서 개별 프로토머 ADRB2는 CXCL12와 ADRB2 효현제의 공동-자극 시에 CXCL12 또는 ADRB2 효현제로 단일 효현제 자극으로 인한 칼슘 동원 양의 합에 대등한 또는 이보다 적은 칼슘 동원 양을 초래한다. 특이적 구체예들에서, CXCL12와 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 ADRB2 효현제와 공동-자극은 칼슘 동원 검정을 통하여 결정하였을 때, CXCL12 또는 ADRB2 효현제로 전술한 세포를 단일 효현제 자극으로 인한 칼슘 동원 양의 합보다 더 큰 칼슘 동원 양을 초래한다. 특이적 구체예들에서, CXCR4-ADRB2 헤테로머의 공동-자극으로 인한 칼슘 동원 양은 칼슘 동원 검정을 통하여 결정하였을 때, 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 단일 효현제 자극으로 인한 칼슘 동원 합과 비교하여, 칼슘 동원의 양이 강화된다. 특이적 구체예들에서, 상기 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 양의 칼슘 동원은 칼슘 동원 검정을 통하여 결정하였을 때, CXCL12와 ADRB2 효현제의 공동-자극 시, CXCL12 또는 상기 ADRB2 효현제로 전술한 세포의 단일 효현제 자극으로 인한 칼슘 동원의 합보다 더 크다. 특이적 구체예들에서, 상기 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 양의 칼슘 동원은 칼슘 동원 검정을 통하여 결정하였을 때, CXCL12와 ADRB2 효현제의 공동-자극 시, CXCL12 또는 상기 ADRB2 효현제로 전술한 세포의 단일 효현제 자극으로 인한 칼슘 동원의 합보다 적어도 10% 더 크고, 적어도 20% 더 크고, 적어도 30% 더 크고, 적어도 40% 더 크고, 적어도 50% 더 크고, 적어도 75% 더 크고, 또는 적어도 90% 더 크다. 특이적 구체예들에서, 상기 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 양의 칼슘 동원은 칼슘 동원 검정을 통하여 결정하였을 때, CXCL12와 ADRB2 효현제의 공동-자극 시, CXCL12 또는 상기 ADRB2 효현제로 전술한 세포의 단일 효현제 자극으로 인한 칼슘 동원의 합보다 적어도 100% 더 크다. 특이적 구체예들에서, 상기 강화된 양의 칼슘 동원은 칼슘 동원의 상승적 양이다. 특이적 구체예들에서, CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포의 칼슘 동원의 상승적 양은 칼슘 동원 검정을 통하여 결정하였을 때, CXCL12와 ADRB2 효현제의 공동-자극 시, CXCL12 또는 상기 ADRB2 효현제로 전술한 세포의 단일 효현제 자극으로 인한 칼슘 동원의 합보다 적어도 10% 더 크고, 적어도 20% 더 크고, 적어도 30% 더 크고, 적어도 40% 더 크고, 적어도 50% 더 크고, 적어도 75% 더 크고, 또는 적어도 90% 더 크다.
일부 구체예들에서, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물이 본원의 제공에 내포되며, 이때 CXCR4-ADRB2 헤테로머는 다음의 특징을 보유하는 것으로 특징화된다: 강화된 반응 (또는 강화된 다운스트림 신호전달)은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 자극, 이를 테면, 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 공동-자극으로 인한 것이다. 특정 구체예들에서, 상기 강화된 반응 (또는 강화된 다운스트림 신호전달)은 칼슘 동원의 강화된 양이다. 특정 구체예들에서, 상기 칼슘 동원은 세포내 Ca2+ 검정에 의해 결정된다. 특이적 구체예들에서, 상기 세포내 Ca2+ 검정은 칼슘 동원 검정이다. 특정 구체예들에서, 상기 강화된 반응이란 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포(들)을 보유하는 대상체에서 암 진행의 강화다. 특정 구체예들에서, 상기 강화된 암 진행은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포(들)을 보유하는 대상체에서 세포 증식의 강화이다. 특정 구체예들에서, 상기 강화된 암 진행은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포(들)을 보유하는 대상체에서 세포 이동의 강화다. 특정 구체예들에서, 상기 강화된 암 진행은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포(들)을 보유하는 대상체에서 전이의 강화다. 특정 구체예들에서, 상기 강화된 암 진행은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포(들)을 보유하는 대상체에서 종양 성장의 강화다. 특정 구체예들에서, 상기 강화된 암 진행은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포(들)을 보유하는 대상체에서 혈관 신생의 강화다. 특정 구체예들에서, 상기 세포(들)이란 암 세포(들)이다. 특정 구체예들에서, 상기 세포(들)은 대상체로부터 유래된다. 특정 구체예들에서, 상기 세포(들)은 대상체로부터 획득한 생물학적 샘플로부터 유래된다.
일부 구체예들에서, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물이 본원의 제공에 내포되며, 이때 CXCR4-ADRB2 헤테로머는 다음으로 구성된 군에서 선택된 하나 또는 그 이상의 특징을 보유하는 것으로 특징화된다: (1) 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 조합은 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 헤테로머-특이적 속성들을 변경시키고; (2) 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 조합은 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 헤테로머-특이적 기능을 변경시키고; (3) 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 조합은 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)의 헤테로머-특이적 속성들을 변경시키고; 그리고 (4) 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 조합은 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 대상체 유래된 세포(들)의 암 진행을 감소시킨다. 특이적 구체예들에서, CXCR4-ADRB2 헤테로머는 다음을 특징으로 한다: 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 조합은 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 헤테로머-특이적 속성들을 변경시킨다. 특이적 구체예들에서, CXCR4-ADRB2 헤테로머는 다음을 특징으로 한다: 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 조합은 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 헤테로머-특이적 기능을 변경시킨다. 특이적 구체예들에서, CXCR4-ADRB2 헤테로머는 다음을 특징으로 한다: 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 조합은 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)의 헤테로머-특이적 속성들을 변경시킨다. 특이적 구체예들에서, CXCR4-ADRB2 헤테로머는 다음을 특징으로 한다: 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 조합은 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 대상체 유래된 세포(들)의 암 진행을 감소시킨다. 특이적 구체예들에서, 상기 감소된 암 진행은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)의 암 진행 감소를 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 감소된 암 진행은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)의 세포 증식 감소를 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 감소된 암 진행은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)의 세포 이동 감소를 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 감소된 암 진행은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 해당 대상체로부터 유래된 전이 감소를 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 감소된 암 진행은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 해당 대상체로부터 유래된 혈관신생 감소를 포함한다. 특이적 구체예들에서, CXCR4 저해제는 부릭사포르이며, ADRB2 저해제는 카르베디롤이다.
일부 구체예들에서, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물이 본원의 제공에 내포되며, 이때 CXCR4-ADRB2 헤테로머는 다음의 특징을 보유하는 것으로 특징화된다: CXCR4 효현제 또는 상기 ADRB2 효현제와 함께 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 단일-자극으로 인한 다운스트림 ERK 신호전달의 양과 비교하여, CXCR4-ADRB2 헤테로머 그리고 CXCR4 효현제 및 ADRB2 효현제의 공동-자극으로 인한 다운스트림 ERK 신호전달의 양이 더 크다. 일부 구체예들에서, CXCR4 효현제와 ADRB2 효현제의 공동-자극으로 인한 다운스트림 ERK 신호전달의 양은 CXCR4 효현제의 단일-자극으로 인한 양보다 더 크다. 일부 구체예들에서, CXCR4 효현제와 ADRB2 효현제의 공동-자극으로 인한 다운스트림 ERK 신호전달의 양은 CXCR4 효현제의 단일-자극으로 인한 양보다 적어도 5% 더 크다. 일부 구체예들에서, CXCR4 효현제와 ADRB2 효현제의 공동-자극으로 인한 다운스트림 ERK 신호전달의 양은 CXCR4 효현제의 단일-자극으로 인한 양보다 적어도 10%, 적어도 25%, 적어도 50%, 적어도 75%, 또는 적어도 90% 더 크다. 일부 구체예들에서, CXCR4 효현제와 ADRB2 효현제의 공동-자극으로 인한 다운스트림 ERK 신호전달의 양 보다 CXCR4 효현제의 단일-자극으로 인한 양보다 5-15%, 10-25%, 20-50%, 40-75%, 또는 60-100% 범위로 더 크다. 일부 구체예들에서, CXCR4 효현제와 ADRB2 효현제의 공동-자극으로 인한 다운스트림 ERK 신호전달의 양은 ADRB2효현제의 단일-자극으로 인한 양보다 더 크다. 일부 구체예들에서, CXCR4 효현제와 ADRB2 효현제의 공동-자극으로 인한 다운스트림 ERK 신호전달의 양은 ADRB2 효현제의 단일-자극으로 인한 양보다 적어도 5% 더 크다. 일부 구체예들에서, CXCR4 효현제와 ADRB2 효현제의 공동-자극으로 인한 다운스트림 ERK 신호전달의 양은 ADRB2 효현제의 단일-자극으로 인한 양보다 적어도 10%, 적어도 25%, 적어도 50%, 적어도 75%, 또는 적어도 90% 더 크다. 일부 구체예들에서, CXCR4 효현제와 ADRB2 효현제의 공동-자극으로 인한 다운스트림 ERK 신호전달의 양 보다 ADRB2 효현제의 단일-자극으로 인한 양보다 5-15%, 10-25%, 20-50%, 40-75%, 또는 60-100% 범위로 더 크다. 특이적 구체예들에서, CXCR4 효현제는 CXCL12이며, ADRB2 효현제는 살메테롤이다.
일부 구체예들에서, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물이 본원의 제공에 내포되며, 이때 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 복합 투여로: (i) 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 헤테로머-특이적 속성들이 변경되며; (ii) 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 헤테로머-특이적 기능이 변경되며; (iii) CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)의 헤테로머-특이적 속성들이 변경되며; 또는 (iv) 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포들을 보유한 대상체에서 암 진행이 감소된다. 특이적 구체예들에서, 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 복합 투여로 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 헤테로머-특이적 속성들이 변경된다. 특이적 구체예들에서, 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 복합 투여로 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 헤테로머-특이적 기능이 변경된다. 특이적 구체예들에서, 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 복합 투여로 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)의 헤테로머-특이적 속성들이 변경된다. 특이적 구체예들에서, 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 복합 투여로 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포들을 보유한 대상체에서 암 진행이 감소된다. 특이적 구체예들에서, 상기 감소된 암 진행은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)의 암 진행 감소를 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 감소된 암 진행은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)의 세포 증식 감소를 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 감소된 암 진행은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)의 세포 이동 감소를 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 감소된 암 진행은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 해당 대상체로부터 유래된 전이 감소를 포함한다. 특이적 구체예들에서, 상기 감소된 암 진행은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 해당 대상체로부터 유래된 혈관신생 감소를 포함한다. 특이적 구체예들에서, CXCR4 저해제는 부릭사포르이며, ADRB2 저해제는 카르베디롤이다.
일부 구체예들에서, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물이 본원의 제공에 내포되며, 이때 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 복합 투여로 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머로부터, 예를 들면, 암 대상체에서 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머로부터, 이를 테면, 세포에서 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머로부터, 또는 암 대상체의 세포에서 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머로부터 강화된 다운스트림 신호전달이 억제된다. 특이적 구체예들에서, CXCR4-ADRB2 헤테로머 성분들은 CXCR4와 ADRB2의 개별 프로토머를 포함한다. 일부 구체예들에서, 개별 프로토머 구성에서 CXCR4 또는 ADRB2를 함유하는 세포는 다음을 포함한다: 각각 (i) 개별 프로토머 ADRB2의 존재 또는 부재 하에서 개별 프로토머 CXCR4; 또는 (ii) 개별 프로토머 CXCR4의 존재 또는 부재 하에서 개별 프로토머 ADRB2. 일부 구체예들에서, 개별 프로토머 구성에서 CXCR4를 함유하는 세포는 개별 프로토머 ADRB2의 존재 또는 부재 하에서 개별 프로토머 CXCR4를 포함한다. 특이적 구체예들에서, 개별 프로토머 구성에서 CXCR4를 함유하는 세포는 개별 프로토머 ADRB2 부재 하에서 전술한 개별 프로토머 CXCR4를 포함한다. 특이적 구체예들에서, 개별 프로토머 구성에서 CXCR4를 함유하는 세포는 개별 프로토머 ADRB2 존재 하에서 전술한 개별 프로토머 CXCR4를 포함한다. 일부 구체예들에서,개별 프로토머 구성에서 ADRB2를 함유하는 세포는 개별 프로토머 CXCR4의 존재 또는 부재 하에서 개별 프로토머 ADRB2를 포함한다. 특이적 구체예들에서,개별 프로토머 구성에서 ADRB2를 함유하는 세포는 개별 프로토머 CXCR4 부재 하에서 전술한 개별 프로토머 ADRB2를 포함한다. 특이적 구체예들에서,개별 프로토머 구성에서 ADRB2를 함유하는 세포는 개별 프로토머 CXCR4 존재 하에서 전술한 개별 프로토머 ADRB2를 포함한다. 특이적 구체예들에서, CXCR4 저해제는 부릭사포르이며, ADRB2 저해제는 카르베디롤이다.
일부 구체예들에서, 저해제들의 조합을 투여할 때, CXCR4 저해제 또는 ADRB2 저해제를 단일 저해제로써 전술한 대상체에게 투여하는 것에 비교하여, 저해제들의 조합을 투여할 때, 암의 진행이 상승적으로 감소된다. 일부 구체예들에서, 저해제들의 조합을 투여할 때 암의 진행의 감소는 CXCR4 저해제 또는 ADRB2 저해제를 단일 저해제로써 전술한 대상체에게 투여했을 때 획득되는 진행의 감소 수준의 합했을 때 획득되는 진행의 감소 수준의 합보다 더 크다. 일부 구체예들에서, 본원에서 제공된 치료 방법, 억제 방법, 약제학적 키트, 또는 약제학적 조성물에 따르면, CXCR4-ADRB2 헤테로머를 내포하는 전술한 암 세포를 갖는 당해 대상체에서 암 진행은 전술한 대상체에게 단일 저해제로써 CXCR4 저해제 또는 ADRB2 저해제를 투여하는 것과 비교하여, 상기 저해제들의 조합을 투여할 때, 5-100% 범위로 감소되는데, 이를 테면, 전술한 대상체에게 단일 저해제로써 CXCR4 저해제 또는 ADRB2 저해제를 투여하는 것과 비교하여, 상기 저해제들의 조합을 투여할 때, 5-100% 이상, 10-100% 이상, 20-100% 이상, 30-100% 이상, 40-100% 이상, 50-100% 이상, 60-100% 이상, 75-100% 이상, 5-75% 이상, 5-50% 이상, 또는 5-25% 이상 범위로 감소된다. 특이적 구체예들에서, CXCR4 저해제는 부릭사포르이다. 특이적 구체예들에서, ADRB2 저해제는 카르베디롤이다. 특이적 구체예들에서, 암의 진행은 종양 크기에서 변화 백분율에 의해 결정된다. 특이적 구체예들에서, 암의 진행은 1 개월, 2 개월, 3 개월, 6 개월, 1 년, 또는 2 년의 기간에 걸쳐 종양 크기에서 변화 백분율에 의해 결정된다.
일부 구체예들에서, 본원에서 제공된 치료 방법, 억제 방법, 약제학적 키트, 또는 약제학적 조성물에 따르면, CXCR4-ADRB2 헤테로머를 내포하는 전술한 암 세포를 갖는 당해 대상체에게 ADRB2 저해제와 조합하여 투여할 때, CXCR4 저해제를 단일 저해제로 투여하였을 때 효과와 비교하여, CXCR4 저해제의 효능은 5-5000% 범위로 증가되는데, 이를 테면, CXCR4-ADRB2 헤테로머를 내포하는 전술한 암 세포를 갖는 당해 대상체에게 상기 ADRB2 저해제와 조합하여 투여할 때, CXCR4 저해제를 단일 저해제로 투여하였을 때 효과와 비교하여, 5-4500%, 5-4000%, 5-3500%, 5-3000%, 5-2500%, 5-2000%, 5-1750%, 5-1500%, 5-1250%, 5-1000%, 5-900%, 5-800%, 5-700%, 5-500%, 5-400%, 5-250%, 5-200%, 5-100%, 5-75%, 5-50%, 5-40%, 5-30%, 5-25%, 1000-3000%, 2000-4000%, 3000-5000%, 3500-4500%, 4000-5000%, 100-2000%, 200-2000%, 300-2000%, 500-2000%, 750-2000%, 1000-2000%, 1250-2000%, 1500-2000%, 5-1500%, 25-1500%, 50-1500%, 75-1500%, 100-1500%, 200-1500%, 300-1500%, 500-1500%, 750-1500%, 1000-1500%, 또는 1250-1500% 범위로 증가된다. 특이적 구체예들에서, CXCR4 저해제는 부릭사포르이다. 특이적 구체예들에서, ADRB2 저해제는 카르베디롤이다. 특이적 구체예들에서, 대상체의 세포에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머에 대항하는 CXCR4 저해제의 효능 증가 (이를 테면, CXCR4-ADRB2 헤테로머로부터 강화된 다운스트림 신호전달의 억제에서)는 CXCR4 저해제가 단일 저해제로 투여될 때 IC50 값에 비교하여, CXCR4 저해제를 ADRB2 저해제와 조합하여 투여할 때 IC50 값의 변화에 의해 결정된다. 특이적 구체예들에서, 본원에 기술된 검정에 따라 CXCR4 저해제의 IC50 값 결정은 1-10 μM 범위, 이를 테면, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10 μM의 ADRB2 저해제 농도를 이용할 수 있다. 특이적 구체예들에서, 본원에 기술된 검정에 따라 CXCR4 저해제의 IC50 값 결정은 ADRB2에 대항하는 ADRB2 저해제의 IC90 농도, 이를 테면, 1-1,000 nM 범위, 예를 들면, 1-500 nM, 100-750 nM, 또는 600-1,000 nM, 이를 테면, 10, 25, 50, 100, 250, 500, 600, 700, 800, 900, 또는 1,000 nM의 농도에서 ADRB2 저해제 농도를 이용할 수 있다.
일부 구체예들에서, 본원에서 제공된 치료 방법, 억제 방법, 약제학적 키트, 또는 약제학적 조성물에 따르면, CXCR4-ADRB2 헤테로머를 내포하는 전술한 암 세포를 갖는 당해 대상체에게 CXCR4 저해제와 조합하여 투여할 때, ADRB2 저해제를 단일 저해제로 투여하였을 때 효과와 비교하여, ADRB2 저해제의 효능은 5-5000% 범위로 증가되는데, 이를 테면, CXCR4-ADRB2 헤테로머를 내포하는 전술한 암 세포를 갖는 당해 대상체에게 상기 CXCR4 저해제와 조합하여 투여할 때, ADRB2 저해제를 단일 저해제로 투여하였을 때 효과와 비교하여, 5-4500%, 5-4000%, 5-3500%, 5-3000%, 5-2500%, 5-2000%, 5-1750%, 5-1500%, 5-1250%, 5-1000%, 5-900%, 5-800%, 5-700%, 5-500%, 5-400%, 5-250%, 5-200%, 5-100%, 5-75%, 5-50%, 5-40%, 5-30%, 5-25%, 1000-3000%, 2000-4000%, 3000-5000%, 3500-4500%, 4000-5000%, 100-2000%, 200-2000%, 300-2000%, 500-2000%, 750-2000%, 1000-2000%, 1250-2000%, 1500-2000%, 5-1500%, 25-1500%, 50-1500%, 75-1500%, 100-1500%, 200-1500%, 300-1500%, 500-1500%, 750-1500%, 1000-1500%, 또는 1250-1500% 범위로 증가된다. 특이적 구체예들에서, CXCR4 저해제는 부릭사포르이다. 특이적 구체예들에서, ADRB2 저해제는 카르베디롤이다. 특이적 구체예들에서, 대상체의 세포에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머에 대항하는 ADRB2 저해제의 효능 증가 (이를 테면, CXCR4-ADRB2 헤테로머로부터 강화된 다운스트림 신호전달의 억제에서)는 ADRB2 저해제가 단일 저해제로 투여될 때 IC50 값에 비교하여, ADRB2 저해제를 CXCR4 저해제와 조합하여 투여할 때 IC50 값의 변화에 의해 결정된다. 특이적 구체예들에서, 본원에 기술된 검정에 따라 ADRB2 저해제의 IC50 값 결정은 1-10 μM 범위, 이를 테면, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10 μM의 CXCR4 저해제 농도를 이용할 수 있다. 특이적 구체예들에서, 본원에 기술된 검정에 따라 ADRB2 저해제의 IC50 값 결정은 CXCR4에 대항하는 CXCR4 저해제의 IC90 농도, 이를 테면, 1-1,000 nM 범위, 예를 들면, 1-500 nM, 100-750 nM, 또는 600-1,000 nM, 이를 테면, 10, 25, 50, 100, 250, 500, 600, 700, 800, 900, 또는 1,000 nM의 농도에서 CXCR4 저해제 농도를 이용할 수 있다.
일부 구체예들에서, 본원에서 제공된 치료 방법, 억제 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물에는 CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제의 투여가 내포되는데, 이때 이 방법 또는 용도는 단일 저해제 투여와 비교하여, 암 대상체에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 다운스트림 신호전달을 5-2000 배 범위에서 억제하는데, 이를 테면, 단일 저해제 투여와 비교하여, 암 대상체에서 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 다운스트림 신호전달을 5-1750 배, 5-1500 배, 5-1250 배, 5-1000 배, 5-900 배, 5-800 배, 5-700 배, 5-500 배, 5-400 배, 5-250 배, 5-200 배, 5-100 배, 5-75 배, 5-50 배, 5-40 배, 5-30 배, 5-25 배, 100-2000 배, 200-2000 배, 300-2000 배, 500-2000 배, 750-2000 배, 1000-2000 배, 1250-2000 배, 1500-2000 배, 5-1500 배, 25-1500 배, 50-1500 배, 75-1500 배, 100-1500 배, 200-1500 배, 300-1500 배, 500-1500 배, 750-1500 배, 1000-1500 배, 또는 1250-1500 배 범위로 억제한다. 특이적 구체예들에서, CXCR4 저해제는 부릭사포르이다. 특이적 구체예들에서, ADRB2 저해제는 카르베디롤이다.
일부 구체예들에서, 본원에서 제공된 치료 방법, 억제 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물에는 CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제의 투여가 내포되며, 이때 이 방법 또는 용도는 각 개별 프로토머 구성에서 CXCR4 프로토머 또는 ADRB2 프로토머로부터 다운스트림 신호전달의 억제와 비교하여, 암 대상체에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 다운스트림 신호전달을 5-2000 배 범위로 억제하고, 이를 테면, 각 개별 프로토머 구성에서 CXCR4 프로토머 또는 ADRB2 프로토머로부터 다운스트림 신호전달의 억제와 비교하여, 암 대상체에서 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 다운스트림 신호전달을 5-1750 배, 5-1500 배, 5-1250 배, 5-1000 배, 5-900 배, 5-800 배, 5-700 배, 5-500 배, 5-400 배, 5-250 배, 5-200 배, 5-100 배, 5-75 배, 5-50 배, 5-40 배, 5-30 배, 5-25 배, 100-2000 배, 200-2000 배, 300-2000 배, 500-2000 배, 750-2000 배, 1000-2000 배, 1250-2000 배, 1500-2000 배, 5-1500 배, 25-1500 배, 50-1500 배, 75-1500 배, 100-1500 배, 200-1500 배, 300-1500 배, 500-1500 배, 750-1500 배, 1000-1500 배, 또는 1250-1500 배 범위에서 억제한다. 특이적 구체예들에서, CXCR4 저해제는 부릭사포르이다. 특이적 구체예들에서, ADRB2 저해제는 카르베디롤이다.
본원에서 기술된 방법에 따른 CXCR4-ADRB2 헤테로머로부터 강화된 다운스트림 신호전달 억제에 있어서 효과적인지, 또는 치료요법적으로 효과적인지에 대하여, 또는 본원에 기술된 검정에 따른 IC50 값을 결정함에 있어서, 저해제, 또는 저해제들의 조합을 우선 테스트 및 평가는 상기 저해제 농도 범위 1-10 μM (또는 상기 조합의 각 상기 저해제들의 농도 범위는 1-10 μM이며), 이를 테면, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10 μM의 농도를 이용할 수 있다. 상기 저해제에 의한 신호 억제가 결정가능한 측정에 충분하지 않다면, 이를 테면, IC50 값과 같은 결정가능한 측정을 더 잘 평가하기 위하여 더 큰 농도의 저해제가 이용될 수 있다. 상기 저해제에 의한 신호 억제가 너무 강하다면, 이를 테면, IC50 값과 같은 결정가능한 측정을 더 잘 평가하기 위하여 더 큰 농도의 저해제가 이용될 수 있다.
일부 구체예들에서, 본원에서 제공된 방법은 이를 필요로 하는 대상체의 질환을 치료, 개선, 또는 방지하기 위한 방법이다. 일부 구체예들에서, 본원에서 제공된 방법에는 본원에서 제공된 약제학적 조성물의 치료요법적 유효량을 대상체에게 투여하는 것이 내포될 수 있다. 예를 들면, 본원에서 제공된 약제학적 조성물에는 CXCR4 저해제, ADRB2 저해제, 또는 CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제의 조합; 그리고 약제학적으로 수용가능한 담체가 내포될 수 있다. 본 발명의 방법을 이용하여 치료될 수 있는, 또는 예방될 수 있는 질환들에는 암, 종양, 전이, 및/또는 혈관신생이 내포되지만, 이에 국한되지 않는다. 예를 들면, 일부 구체예들에서, 본원에서 제공된 방법은 암 또는 관련된 증후군의 치료에 유용하며, 이때 암, 종양, 및/또는 미세환경의 세포들은 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 발현시킨다. 일부 구체예들에서, 상기 암은 혈액학적 암 또는 고형 종양이다. 일부 구체예들에서, 상기 암은 재발된 또는 난치성 암이다. 일부 구체예들에서, 상기 암은 혈액학적 암이다. 일부 구체예들에서, 상기 혈액학적 암은 림프종, 백혈병, 골수종, 및 다발성 골수종으로 구성된 군에서 선택된다. 일부 구체예들에서, 상기 혈액학적 암은 다발성 골수종, 급성 골수성 백혈병, 급성 단핵구성 백혈병, 미만성 거대 B-세포 림프종, B-세포 급성 림프모구성 백혈병, 호지킨 림프종, 급성 전-골수성 백혈병, 만성 호산구성 백혈병, 및 버킷(Burkitt) 림프종으로 구성된 군에서 선택된다. 일부 구체예들에서, 본 발명의 방법을 이용하여 치료되거나, 개선되거나, 또는 예방되는 암 또는 종양의 예로는 위장관 종양, 예를 들면, 유방암, 폐암, 폐의 소(small) 세포 암종, 간세포 암종, 뇌 암, 신장 암, 췌장암 또는 췌장 선종, 난소암, 전립선암, 흑색종, 림프종, 백혈병, 다발성 골수종, 신장 세포 암종, 연(soft) 조직 육종, 위장 암, 위암, 결장 암, 결장직장 암, 결장직장 선종, 방광 선종, 식도 암, 그리고 위, 식도, 기관지 및 뇨도관의 선종이 포함된다. 일부 구체예들에서, 림프종은 B 세포 림프종, T-세포 림프종, 또는 NK 세포 림프종이다. 일부 구체예들에서, 림프종은 재발된 또는 난치성 림프종이다. 일부 구체예들에서, 림프종은 다음으로 구성된 군에서 선택된다: 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종, 피부 B-세포 림프종, 활성화된 B-세포 림프종, 미만성 거대 B-세포 림프종 (DLBCL), 버킷 림프종, 맨틀 세포 림프종 (MCL), 소포 림프종 (FL), 소포 중심 림프종, 변형된 림프종, 중간 분화된 림프구성 림프종, 중간 림프구성 림프종 (ILL), 미만성 분화가 잘 안된 림프구성 림프종 (PDL), 구심성 림프종, 미만성 작게-절개된 세포 림프종 (DSCCL), 말초 T-세포 림프종 (PTCL), 피부 T-세포 림프종 (CTCL), 맨틀 구역 림프종, 및 저-등급 소포 림프종. 일부 구체예들에서, 백혈병은 (a) 급성 림프구성 백혈병 (ALL), T-세포 급성 림프구성 백혈병 (T-ALL), B-세포 급성 림프모구성 백혈병, 급성 단핵구성 백혈병, 급성 전-골수성 백혈병, 급성 골수구성 백혈병 (AML), 급성 골수성 백혈병, 급성 골수형성 백혈병 및 골수아세포 백혈병, 전-골수성 백혈병, 골수단핵구성 백혈병, 단핵구성 백혈병, 및 적아구백혈병으로 구성된 군에서 선택된 급성 백혈병; (b) 만성 골수구성 (과립구) 백혈병, 만성 골수형성 백혈병 (만성 골수 백혈병; CML), 및 만성 림프구성 백혈병 (CLL)으로 구성된 군에서 선택된 만성 백혈병; 또는 (c) 만성 골수단핵구성 백혈병 (CMML), 만성 호산구성 백혈병, 청소년 골수단핵구성 백혈병 (JMML), 진성다혈구증, 천연 킬러 세포 백혈병 (NK 백혈병), 또는 털모양 세포 백혈병이다. 일부 구체예들에서, 상기 암은 고형 종양이다. 일부 구체예들에서, 상기 고형 종양은 양성 종양 또는 암이다. 일부 구체예들에서, 상기 고형 종양은 암종 또는 육종이다. 일부 구체예들에서, 상기 고형 종양은 다음으로 구성된 군에서 선택된다: 췌장 선암종, 췌장 관의 선암종, 신장 세포 암종, 유방 선암종, 유방 암종, 유방 관의 선암종, 난소 장액 선암종, 난소 투명 세포 선암종, 난소 점액성 낭선암종, 자궁의 암육종, 자궁내막 선암종, 자궁내막의 간질의 육종, 자궁내막의 암종, 위 관모양의 선암종, 위의 선편평성 암종, 다발성 엔도크린 신생물, 흑색종, 갑상선 암종, 전립선 암종, 간세포성 암종, 간내 담관암종, 폐 선암종, 작은 세포 폐 암종, 선편평성 폐 암종, 악성 상피양 중피종, 교모세포종, 수모세포종, 성상세포종, 폐포 횡문근육종, 및 골육종. 일부 구체예들에서, 상기 고형 종양은 다음으로 구성된 군에서 선택된다: 섬유육종, 점액육종, 지방육종, 연골육종, 골육종, 윤활막육종, 중피종, 악성 상피양 중피종, 유윙(Ewing's) 종양, 평활근육종, 횡문근육종, 위암, 결장직장 암, 식도 암, 결장 암종, 림프성 악성종양, 췌장 암, 췌장 선암종, 췌장 관의 선암종, 유방암, 유방 선암종, 유방 관의 선암종, 폐암, 작은 세포 폐 암종, 폐 선암종, 선편평성 폐 암종, 폐포 횡문근육종, 난소 암, 난소 투명 세포 선암종, 난소 점액성 낭선암종, 난소 장액 선암종, 전립선 암, 간세포성 암종, 연 조직 육종, 편평 세포 암종, 기저 세포 암종, 선암종, 땀샘 암종, 갑상선 수질 암종, 유두 갑상선 암종, 갑상선 암종, 갈색 세포종 피지선 암종, 유두모양 암종, 유두모양 선암종, 수질 암종, 기관지 암종, 위장 암, 위 관모양의 선암종, 위의 선편평성 암종, 신장 암, 간내 담관암종,신장 세포 암종, 간종양, 담관 암종, 융모막암종, 윌름(Wilms') 종양, 자궁의 암육종, 자궁내막 선암종, 자궁내막의 간질의 육종, 자궁내막의 암종, 자궁의 암, 고환 종양, 생식세포종, 방광 암종, 흑색종, 다발성 골수종, 다발성 엔도크린 신생물, CNS 종양, 교모세포종, 성상세포종, CNS 림프종, 생식세포종, 수모세포종, 신경신경초종, 뇌실막종, 송과종, 혈관모세포종, 청각 신경종, 희소돌기아교종, 수막종, 신경모세포종, 망막모세포종 그리고 뇌 전이. 일부 구체예들에서, 상기 고형 종양은 다음으로 구성된 군에서 선택된다: 유방암, 폐암, 및 간세포성 암종. 일부 구체예들에서, 상기 고형 종양은 유방암이다. 일부 구체예들에서, 상기 고형 종양은 폐암이다. 일부 구체예들에서, 상기 고형 종양은 간세포성 암종이다. 일부 구체예들에서, 암을 치료하는 방법은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 다운스트림 신호전달을 억제하는 방법이다. 일부 구체예들에서, CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 다운스트림 신호전달을 억제하는 방법이 암을 치료하는 방법이다. 일부 구체예들에서, 상기 암은 CXCR4-발현시키는 암이다. 일부 구체예들에서, 상기 암은 ADRB2-발현시키는 암이다. 일부 구체예들에서, 상기 암은 CXCR4-발현시키는 암과 ADRB2-발현시키는 암이다. 일부 구체예들에서, 대상체에서 CXCR4 발현 수준은 참조 수준보다 더 크다. 일부 구체예들에서, 대상체에서 ADRB2 발현 수준은 참조 수준보다 더 크다. 일부 구체예들에서, 대상체에서 CXCR4 발현 수준과 ADRB2 발현 수준은 각각 참조 수준보다 더 크다. 일부 구체예들에서, 세포에서 CXCR4 발현 수준은 참조 수준보다 더 크다. 일부 구체예들에서, 세포에서 ADRB2 발현 수준은 참조 수준보다 더 크다. 일부 구체예들에서, 세포에서 CXCR4 발현 수준과 ADRB2 발현 수준은 각각 참조 수준보다 더 크다.
일부 구체예들에서, 본 발명에서 제공되는 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물에는 세포에서, 대상체에서, 또는 대상체에서 획득된 샘플에서 CXCR4 유전자의 발현 수준의 결정이 더 내포되며, 이때 상기 발현 수준이 CXCR4 유전자의 참조 수준보다 더 크다면, 세포, 대상체, 또는 대상체에서 획득된 샘플은 CXCR4-발현시키는 암을 보유하는 것으로 결정된다. 특이적 구체예들에서, 본원에서 제공된 방법 또는 용도는 세포에서 CXCR4 유전자의 발현 수준을 결정한다. 특이적 구체예들에서, 본원에서 제공된 방법 또는 용도는 대상체에서 CXCR4 유전자의 발현 수준을 결정한다. 특이적 구체예들에서, 본원에서 제공된 방법 또는 용도는 대상체로부터 획득된 샘플에서 CXCR4 유전자의 발현 수준을 결정한다. 특이적 구체예들에서, 상기 암은 CXCR4-발현시키는 암이다. 특이적 구체예들에서, 세포에서 CXCR4 유전자 발현 수준은 참조 수준보다 더 크다. 특이적 구체예들에서, 대상체에서 CXCR4 유전자 발현 수준은 참조 수준보다 더 크다. 특이적 구체예들에서, 대상체로부터 획득된 샘플에서 CXCR4 유전자 발현 수준은 참조 수준보다 더 크다. CXCR4 유전자 발현 수준이 참조 수준보다 더 큰 특이적 구체예들에서, 본원에서 제공된 방법 또는 용도에는 CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제의 투여가 내포된다. 특이적 구체예들에서, CXCR4 저해제는 부릭사포르이다. 특이적 구체예들에서, ADRB2 저해제는 카르베디롤이다.
일부 구체예들에서, 본 발명에서 제공되는 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물에는 세포에서, 대상체에서, 또는 대상체에서 획득된 샘플에서 ADRB2 유전자의 발현 수준의 결정이 더 내포되며, 이때 상기 발현 수준이 ADRB2 유전자의 참조 수준보다 더 크다면, 세포, 대상체, 또는 대상체에서 획득된 샘플은 ADRB2-발현시키는 암을 보유하는 것으로 결정된다. 특이적 구체예들에서, 본원에서 제공된 방법 또는 용도는 세포에서 ADRB2 유전자의 발현 수준을 결정한다. 특이적 구체예들에서, 본원에서 제공된 방법 또는 용도는 대상체에서 ADRB2 유전자의 발현 수준을 결정한다. 특이적 구체예들에서, 본원에서 제공된 방법 또는 용도는 대상체로부터 획득된 샘플에서 ADRB2 유전자의 발현 수준을 결정한다. 특이적 구체예들에서, 상기 암은 ADRB2-발현시키는 암이다. 특이적 구체예들에서, 세포에서 ADRB2 유전자 발현 수준은 참조 수준보다 더 크다. 특이적 구체예들에서, 대상체에서 ADRB2 유전자 발현 수준은 참조 수준보다 더 크다. 특이적 구체예들에서, 대상체로부터 획득된 샘플에서 ADRB2 유전자 발현 수준은 참조 수준보다 더 크다. ADRB2 유전자 발현 수준이 참조 수준보다 더 큰 특이적 구체예들에서, 본원에서 제공된 방법 또는 용도에는 CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제의 투여가 내포된다. 특이적 구체예들에서, CXCR4 저해제는 부릭사포르이다. 특이적 구체예들에서, ADRB2 저해제는 카르베디롤이다.
일부 구체예들에서, 본 발명에서 제공되는 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물에는 세포에서, 대상체에서, 또는 대상체에서 획득된 샘플에서 CXCR4 유전자와 ADRB2 유전자의 발현 수준의 결정이 더 내포되며, 이때 상기 CXCR4 유전자와 ADRB2 유전자의 발현 수준이 CXCR4 유전자와 ADRB2 유전자 각각의 참조 수준보다 더 크다면, 세포, 대상체, 또는 대상체에서 획득된 샘플은 CXCR4-발현시키는 암과 ADRB2-발현시키는 암을 보유하는 것으로 결정된다. 특이적 구체예들에서, 본원에서 제공된 방법 또는 용도는 세포에서 CXCR4 유전자와 ADRB2 유전자의 발현 수준을 결정한다. 특이적 구체예들에서, 본원에서 제공된 방법 또는 용도는 대상체에서 CXCR4 유전자와 ADRB2 유전자의 발현 수준을 결정한다. 특이적 구체예들에서, 본원에서 제공된 방법 또는 용도는 대상체로부터 획득된 샘플에서 CXCR4 유전자와 ADRB2 유전자의 발현 수준을 결정한다. 특이적 구체예들에서, 상기 암은 CXCR4-발현시키는 암과 ADRB2-발현시키는 암이다. 특이적 구체예들에서, 세포에서 CXCR4 유전자와 ADRB2 유전자 발현 수준은 각각 참조 수준보다 더 크다. 특이적 구체예들에서, 대상체에서 CXCR4 유전자와 ADRB2 유전자 발현 수준은 각각 참조 수준보다 더 크다. 특이적 구체예들에서, 대상체로부터 획득된 샘플에서 CXCR4 유전자와 ADRB2 유전자 발현 수준은 각각 참조 수준보다 더 크다. CXCR4 유전자와 ADRB2 유전자 발현 수준 각각 참조 수준보다 더 큰 특이적 구체예들에서, 본원에서 제공된 방법 또는 용도에는 CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제의 투여가 내포된다. 특이적 구체예들에서, CXCR4 저해제는 부릭사포르이다. 특이적 구체예들에서, ADRB2 저해제는 카르베디롤이다.
일부 구체예들에서, 본 발명에서 제공되는 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물에는 세포에서, 대상체에서, 또는 대상체에서 획득된 샘플에서 CXCR4 단백질의 발현 수준의 결정이 더 내포되며, 이때 상기 발현 수준이 CXCR4 단백질의 참조 수준보다 더 크다면, 세포, 대상체, 또는 대상체에서 획득된 샘플은 CXCR4-발현시키는 암을 보유하는 것으로 결정된다. 특이적 구체예들에서, 본원에서 제공된 방법 또는 용도는 세포에서 CXCR4 단백질의 발현 수준을 결정한다. 특이적 구체예들에서, 본원에서 제공된 방법 또는 용도는 대상체에서 CXCR4 단백질의 발현 수준을 결정한다. 특이적 구체예들에서, 본원에서 제공된 방법 또는 용도는 대상체로부터 획득된 샘플에서 CXCR4 단백질의 발현 수준을 결정한다. 특이적 구체예들에서, 상기 암은 CXCR4-발현시키는 암이다. 특이적 구체예들에서, 세포에서 CXCR4 단백질 발현 수준은 참조 수준보다 더 크다. 특이적 구체예들에서, 대상체에서 CXCR4 단백질 발현 수준은 참조 수준보다 더 크다. 특이적 구체예들에서, 대상체로부터 획득된 샘플에서 CXCR4 단백질 발현 수준은 참조 수준보다 더 크다. CXCR4 단백질 발현 수준이 참조 수준보다 더 큰 특이적 구체예들에서, 본원에서 제공된 방법 또는 용도에는 CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제의 투여가 내포된다. 특이적 구체예들에서, CXCR4 저해제는 부릭사포르이다. 특이적 구체예들에서, ADRB2 저해제는 카르베디롤이다.
일부 구체예들에서, 본 발명에서 제공되는 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물에는 세포에서, 대상체에서, 또는 대상체에서 획득된 샘플에서 ADRB2 단백질의 발현 수준의 결정이 더 내포되며, 이때 상기 발현 수준이 ADRB2 단백질의 참조 수준보다 더 크다면, 세포, 대상체, 또는 대상체에서 획득된 샘플은 ADRB2-발현시키는 암을 보유하는 것으로 결정된다. 특이적 구체예들에서, 본원에서 제공된 방법 또는 용도는 세포에서 ADRB2 단백질의 발현 수준을 결정한다. 특이적 구체예들에서, 본원에서 제공된 방법 또는 용도는 대상체에서 ADRB2 단백질의 발현 수준을 결정한다. 특이적 구체예들에서, 본원에서 제공된 방법 또는 용도는 대상체로부터 획득된 샘플에서 ADRB2 단백질의 발현 수준을 결정한다. 특이적 구체예들에서, 상기 암은 ADRB2-발현시키는 암이다. 특이적 구체예들에서, 세포에서 ADRB2 단백질 발현 수준은 참조 수준보다 더 크다. 특이적 구체예들에서, 대상체에서 ADRB2 단백질 발현 수준은 참조 수준보다 더 크다. 특이적 구체예들에서, 대상체로부터 획득된 샘플에서 ADRB2 단백질 발현 수준은 참조 수준보다 더 크다. ADRB2 단백질 발현 수준이 참조 수준보다 더 큰 특이적 구체예들에서, 본원에서 제공된 방법 또는 용도에는 CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제의 투여가 내포된다. 특이적 구체예들에서, CXCR4 저해제는 부릭사포르이다. 특이적 구체예들에서, ADRB2 저해제는 카르베디롤이다.
일부 구체예들에서, 본 발명에서 제공되는 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물에는 세포에서, 대상체에서, 또는 대상체에서 획득된 샘플에서 CXCR4 단백질과 ADRB2 단백질의 발현 수준의 결정이 더 내포되며, 이때 CXCR4 단백질과 ADRB2 단백질의 발현 수준이 CXCR4 단백질과 ADRB2 단백질 각각의 참조 수준보다 더 크다면, 세포, 대상체, 또는 대상체에서 획득된 샘플은 CXCR4-발현시키는 암과 ADRB2-발현시키는 암을 보유하는 것으로 결정된다. 특이적 구체예들에서, 본원에서 제공된 방법 또는 용도는 세포에서 CXCR4 단백질과 ADRB2 단백질의 발현 수준을 결정한다. 특이적 구체예들에서, 본원에서 제공된 방법 또는 용도는 대상체에서 CXCR4 단백질과 ADRB2 단백질의 발현 수준을 결정한다. 특이적 구체예들에서, 본원에서 제공된 방법 또는 용도는 대상체로부터 획득된 샘플에서 CXCR4 단백질과 ADRB2 단백질의 발현 수준을 결정한다. 특이적 구체예들에서, 상기 암은 CXCR4-발현시키는 암과 ADRB2-발현시키는 암이다. 특이적 구체예들에서, 세포에서 CXCR4 단백질과 ADRB2 단백질 발현 수준은 각각 참조 수준보다 더 크다. 특이적 구체예들에서, 대상체에서 CXCR4 단백질과 ADRB2 단백질 발현 수준은 각각 참조 수준보다 더 크다. 특이적 구체예들에서, 대상체로부터 획득된 샘플에서 CXCR4 단백질과 ADRB2 단백질 발현 수준은 각각 참조 수준보다 더 크다. CXCR4 단백질과 ADRB2 단백질 발현 수준 각각 참조 수준보다 더 큰 특이적 구체예들에서, 본원에서 제공된 방법 또는 용도에는 CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제의 투여가 내포된다. 특이적 구체예들에서, CXCR4 저해제는 부릭사포르이다. 특이적 구체예들에서, ADRB2 저해제는 카르베디롤이다.
일부 구체예들에서, 본원에서 제공된 약제학적 조성물 (때로 본원에서 "약제학적 제형"으로 언급됨)에는 CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제의 조합, 그리고 약제학적으로 수용가능한 담체가 내포된다. 일부 구체예들에서, 본원에서 제공된 약제학적 조성물에는 CXCR4 저해제와 약제학적으로 수용가능한 담체가 내포된다. 일부 구체예들에서, 본원에서 제공된 약제학적 조성물에는 ADRB2 저해제, 그리고 약제학적으로 수용가능한 담체가 내포된다. 본 발명의 약제학적 조성물에 이용될 수 있는 약제학적으로 수용가능한 운반체는 당분야에 공지된 임의의 표준 약제학적 운반체들을 포함하는데, 이를 테면, 생리학적으로 허용되는 운반체, 부형제 또는 안정화제, 예를 들어, 포스페이트 완충 염수 용액, 물 및 유제, 예컨대, 오일 및 물 유제, 그리고 다양한 유형의 습윤제를 포함한다. 이들 약제학적 조성물은 CXCR4 저해제, ADRB2 저해제, 또는 CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제 조합을 치료를 요하는 대상체의 표적 영역으로 전달하는데 충분한 액체 단위 투여 형태 또는 임의의 다른 투여 형태로 제조될 수 있다. 예를 들면, 약제학적 조성물은 선택된 투여 방식, 예를 들어 혈관 내, 근육 내, 피하, 피내(intradermal), 척수강 내 등에 적합한 임의의 방식으로 제조될 수 있다. 다른 임의의 선택적 성분, 예를 들어, 제약 등급 안정제, 완충제, 보존제, 부형제 및 이와 유사한 것등은 당업자에 의해 용이하게 선택될 수 있다. pH, 등장성, 안정성 등과 관련하여 약제학적 조성물의 제조는 당업자의 수준 범위 안에 있다.
일부 구체예들에서, 본원에서 제공된 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물이 이용될 수 있는 본원에서 제공된 약제학적 조성물에는 다음이 내포된다: (a) CXCR4 저해제, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르이며; (b) ADRB2 저해제; 그리고 (c) 약제학적으로 수용가능한 담체. 일부 구체예들에서, 본원에서 제공된 약제학적 조성물, 또는 동일한 것을 이용하는 본원 발명에서 제공되는 사용 방법에는 ADRB2 저해제가 ADRB2의 길항제, ADRB2의 역-효현제, ADRB2의 부분 길항제, ADRB2의 알로스테릴 조절자, ADRB2의 항체, ADRB2의 항체 단편, ADRB2의 리간드, 또는 항체-약물 콘쥬게이트인 ADRB2 저해제들이 내포된다. 특이적 구체예들에서, 본원에서 제공된 약제학적 조성물, 또는 동일한 것을 이용하는 본원 발명에서 제공되는 사용 방법에는 ADRB2 저해제가 길항제 ADRB2인 것이 내포된다. 특이적 구체예들에서, 본원에서 제공된 약제학적 조성물, 또는 동일한 것을 이용하는 본원 발명에서 제공되는 사용 방법에는 ADRB2 저해제가 역-효현제 ADRB2인 것이 내포된다. 특이적 구체예들에서, 본원에서 제공된 약제학적 조성물, 또는 동일한 것을 이용하는 본원 발명에서 제공되는 사용 방법에는 ADRB2 저해제가 부분 길항제 ADRB2인 것이 내포된다. 특이적 구체예들에서, 본원에서 제공된 약제학적 조성물, 또는 동일한 것을 이용하는 본원 발명에서 제공되는 사용 방법에는 ADRB2 저해제가 ADRB2의 알로스테릴 조절자인 것이 내포된다. 특이적 구체예들에서, 본원에서 제공된 약제학적 조성물, 또는 동일한 것을 이용하는 본원 발명에서 제공되는 사용 방법에는 ADRB2 저해제가 ADRB2의 항체인 것이 내포된다. 특이적 구체예들에서, 본원에서 제공된 약제학적 조성물, 또는 동일한 것을 이용하는 본원 발명에서 제공되는 사용 방법에는 ADRB2 저해제가 ADRB2의 항체 단편인 것이 내포된다. 특이적 구체예들에서, 본원에서 제공된 약제학적 조성물, 또는 동일한 것을 이용하는 본원 발명에서 제공되는 사용 방법에는 ADRB2 저해제가 ADRB2의 리간드인 것이 내포된다. 특이적 구체예들에서, 본원에서 제공된 약제학적 조성물, 또는 동일한 것을 이용하는 본원 발명에서 제공되는 사용 방법에는 ADRB2 저해제가 항체-약물 콘쥬게이트인 것이 내포된다. 특이적 구체예들에서, 본원에서 제공된 약제학적 조성물, 또는 동일한 것을 이용하는 본원 발명에서 제공되는 사용 방법에는 ADRB2 저해제가 다음으로 구성된 군에서 선택된 것이 내포된다: 알프레놀롤(Alprenolol), 아테놀롤(atenolol), 베탁솔롤(betaxolol), 부프라놀롤(bupranolol), 부톡사민(butoxamine), 카라졸롤(carazolol), 카르베딜롤(carvedilol), CGP 12177, 시클로프롤롤(cicloprolol), ICI 118551, ICYP, 라베타롤(labetalol), 레보베타옥솔롤(levobetaxolol), 레보부노롤(levobunolol), LK 204-545, 메토프롤롤(metoprolol), 나돌롤(nadolol), NIHP, NIP, 프로파페논(propafenone), 프로프라놀롤(propranolol), 소탈롤(sotalol), SR59230A, 및 티몰롤(timolol). 특이적 구체예들에서, 본원에서 제공된 약제학적 조성물, 또는 동일한 것을 이용하는 본원 발명에서 제공되는 사용 방법에는 ADRB2 저해제가 카르베디롤인 것이 내포된다. 특이적 구체예들에서, 본원에서 제공된 약제학적 조성물, 또는 동일한 것을 이용하는 본원 발명에서 제공되는 사용 방법에는 부릭사포르의 치료요법적 유효량이 상기 대상체에게 투여되는 것이 내포된다. 특이적 구체예들에서, 본원에서 제공된 약제학적 조성물, 또는 동일한 것을 이용하는 본원 발명에서 제공되는 사용 방법에는 부릭사포르의 준-치료요법적 유효량이 상기 대상체에게 투여되는 것이 내포된다. 특이적 구체예들에서, 본원에서 제공된 약제학적 조성물, 또는 동일한 것을 이용하는 본원 발명에서 제공되는 사용 방법에는 ADRB2 저해제의 치료요법적 유효량이 대상체에게 투여되는 것이 내포된다. 특이적 구체예들에서, 본원에서 제공된 약제학적 조성물, 또는 동일한 것을 이용하는 본원 발명에서 제공되는 사용 방법에는 ADRB2 저해제의 준-치료요법적 유효량이 대상체에게 투여되는 것이 내포된다.
일부 구체예들에서, 본 발명에서 제공되는 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물에는 부릭사포르가 약제학적으로 수용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물로써 투여되는 것이 내포된다. 일부 구체예들에서, 본원에서 제공된 방법 또는 용도에는 ADRB2 저해제가 약제학적으로 수용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물로써 투여되는 것이 내포된다. 일부 구체예들에서, 본원에서 제공된 방법 또는 용도에는 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 조합이 투여된 순차적으로, 함께(concurrently), 또는 일제히(simultaneously) 투여되는 것이 내포된다. 일부 구체예들에서, 본원에서 제공된 방법 또는 용도에는 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 조합이 약제학적으로 수용가능한 담체를 더 포함하는 약제학적 조성물로써 투여되는 것이 내포된다. 일부 구체예들에서, 본원에서 제공된 방법 또는 용도에는 부릭사포르와 ADRB2 저해제가 약제학적 조성물의 조합으로써 투여되는 것이 내포된다. 일부 구체예들에서, 본원에서 제공된 방법 또는 용도에는 다음을 포함하는 약제학적 조성물의 조합이 내포된다: (a) 부릭사포르와 약제학적으로 수용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물; 그리고 (b) ADRB2 저해제와 약제학적으로 수용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물. 일부 구체예들에서, 본원에서 제공된 방법 또는 용도에는 상기 약제학적 조성물의 조합이 순차적으로, 함께, 또는 일제히 투여되는 것이 내포된다.
본원에서 제공된, CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제를 함유하는 약제학적 제형, CXCR4 저해제를 함유하는 약제학적 제형, 그리고 ADRB2 저해제를 함유하는 약제학적 제형은 원하는 수준의 저해제들을 임의선택적으로 생리학적으로 수용가능한 운반체, 부형제 또는 안정화제 (Remington's Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, PA)와 혼합하여, 보관용으로 동결건조된 제형 또는 수성 용액 형태로 만들어질 수 있다. 수용가능한 운반체, 부형제, 또는 안정화제는 이용되는 투약형 및 농도에서 수령자에게 비독성이며, 그리고 생리학적으로 수용가능한 담체의 예로는 완충액, 이를 테면, 인산염, 시트르산염, 및 다른 유기산; 아스코르브산, 메티오닌을 포함하는 항산화제; 보존제 (이를 테면, 옥타데실디메틸벤질 암모니움 클로라이드; 헥사메토니움 클로라이드; 벤잘코니움 클로로이드, 벤제토니움 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알코올; 알킬 파라벤 이를 테면, 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레소르씨놀; 사이클로헥사놀; 3-펜타놀; 그리고 m-크레솔); 약 10개 미만의 아미노산 잔기의 저분자량 폴리펩티드; 단백질, 이를 테면, 혈청 알부민, 젤라틴, 또는 면역글로블린; 친수성 폴리머 이를 테면, 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 이를 테면, 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌, 또는 리신; 모노사카라이드, 디사카라이드, 그리고 글루코스, 만노스, 또는 덱스트린이 포함된 기타 탄수화물; 킬레이트 물질들, 이를 테면 EDTA; 슈가, 이를 테면, 수크로스, 만니톨, 트레할로스, 또는 솔비톨; 염-형성 카운터-이온, 이를 테면, 나트륨, 금속 착물, 가령, Zn-단백질 착물; 및/또는 비이온성 계면활성제, 이를 테면, TWEEN™, PLURONICS™ 또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)을 포함한다.
본 발명의 다양한 구체 예의 활성에 실질적으로 영향을 미치지 않는 변형이 또한 본원에 제공된 본 발명의 정의 내에서 제공되는 것으로 이해된다. 따라서, 하기 실시예들은 본원에 개시된 본 발명을 예시하기 위한 것이며, 이에 국한되는 것은 아니다.
실시예
실시예 1. BiFC 검정에 의한 CXCR4-GPCRx 헤테로머 형성 평가.
새로운 CXCR4-GPCRx 헤테로머들을 식별해내기 위해, 황색 형광 단백질 비너스(VN)의 N-말단 단편과 융합된 143개의 GPCRs 및 비너스(VC)의 C-말단 단편과 융합된 147개의 GPCRs를 인코딩하는 재조합 아데노바이러스를 준비했다(가령, Song, Y.B., et al., (2014) Monitoring G protein-coupled receptor activation using an adenovirus-based beta-arrestin bimolecular fluorescence complementation assay, Anal Biochem 449, 32-41; 대한민국 특허 번호 KR 101029972 B1, 2011년 4월 12 등록됨; Y.B., (2012) "Global analysis of GPCR dimerization using AdBiFC assay," A Thesis Submitted in Partial Fulfillment of the Requirements for the Degree of Doctor of Philosophy, School of Biological Sciences, Seoul National University, 126 pages). 이중분자 형광 상보성 (BiFC) 검정을 이용하여 CXCR4-GPCR 헤테로머들이 확인되었는데 (도 1), 이때 비너스의 상보적인 2개의 VN 단편과 VC 단편은 이들이 융합된 2개의 상이한 단백질 간에 상호작용을 통하여 이둘 두 단편 모두가 충분히 근접할 때에만 형광 신호를 재구성한다 (Hu, C.D., et al., (2002) Visualization of interactions among bZIP and Rel family proteins in living cells using bimolecular fluorescence complementation, Mol Cell 9, 789-798).
U-2 OS 세포는 96-웰 플레이트에 도말되었고, CXCR4-VN과 GPCRx-VC 또는 CXCR4-VC와 GPCRx-VN을 인코딩하는 아데노 바이러스 각 30 MOI로 공동-형질도입되었고, 그리고 2 일 동안 GPCRs의 발현을 허용하였다. Hoechst 33342로 세포를 착색한 후, IN Cell Analyzer 1000을 이용하여 웰 당 3개 필드로부터 BiFC 및 핵 영상을 얻었다. 각 웰로부터 약 200가지 세포 영상을 IN Cell Developer ToolBox (GE Healthcare, Waukesha, WI)에서 다중-표적 분석 소프트웨어로 분석하였다. 세포 경계는 Hoechst 신호에 근거하여 표시되며, 세포 당 형광 강도가 측정되었다. 배경 수준 이상의 형광 강도를 갖는 세포는 BiFC 양성 세포로 간주되었다. 극단적으로 높은 강도를 보였던 죽은 세포는 세포 카운트에서 배제되었다. 양성 세포를 결정하였고, 양성 세포 카운트 비율 ("BiFC 점수")은 (양성 세포/전체 세포) x 100으로 산출되었다.
CXCR4-VN이 HA-VC (도 2A) 또는 GCGR-VC, 글루타곤 수용체를 인코딩하는 GPCR (도 2C)과 공동-발현될 때, 황색 형광 단백질 (YFP) 신호 (BiFC 신호)는 관찰되지 않았다. 대조적으로, CXCR4-VN이 CXCR4-VC (도 2B)와 공동-발현될 때, 혈장 막과 세포질에서 BiFC 신호가 관찰되었다. CXCR4-VN이 ADRB2-VC와 공동-형질도입될 때, 혈장 막과 세포질에서 강력한 BiFC 신호가 관찰되었다 (도 2D). 배경 수준보다 더 높은 BiFC 형광 신호를 보였던 세포는 BiFC 양성 세포로 간주되었고, BiFC 점수가 산출되었다.
단백질-단백질 상호작용은 융합 테그, 이를 테면, 짝 단백질의 발현, 폴딩, 또는 국소화의 간섭을 통하여 BiFc에서 형광 단백질 단편, 또는 BRET에서 레닐라(renilla) 루시퍼라제에 의해 영향을 받을 수 있다. 짝 단백질은 또한 융합 테그의 발현 또는 폴딩을 손상시키고, 근접성-기반 검정 결과에 영향을 줄 수 있다. 따라서, 특이적 조합에서 두 단백질 간의 신호 부재가 이들 단백질이 상호작용을 하지 않는다는 것을 반드시 암시하는 것은 아니지만, 부착된 공여자 및 수용자 분자는 상호작용의 발생을 허용하지 않은 특정한 형태구조에 있음을 단순히 나타낸다 (Eidne, K.A., et al., (2002) Applications of novel resonance energy transfer techniques to study dynamic hormone receptor interactions in living cells, Trends Endocrinol Metab 13, 415-421; Kerppola, T.K., (2006) Design and implementation of bimolecular fluorescence complementation (BiFC) assays for the visualization of protein interactions in living cells, Nat Protoc 1, 1278-1286).
따라서, CXCR4-VN과 GPCRx-VC 또는 CXCR4-VC와 GPCRx-VN 조합에서 BiFC 신호를 제공하였던 CXCR4와 GPCRx는 상호작용 단백질들로 간주되었다. 잘-알려진 호모머(homomer)인 CXCR4-VN과 CXCR4-VC 쌍의 BiFC 점수는 9.9이다. 따라서, BiFC 점수가 10이거나 또는 이보다 큰 CXCR4-GPCRx 쌍은 CXCR-GPCRx 헤테로머 후보로 선별되었다. CXCR4-ADRB2의 CXCR4-GPCRx 쌍은 BiFC 점수가 24점이었고, 따라서 CXCR-GPCRx헤테로머 후보로 간주되었다. BiFC 분석에 있어서 GPCRs의 추가적인 평가는 2018년 12월 18일에 출원된 국제 출원 PCT/KR2018/016166에 보고되었습다.
실시예 2. 공동내재화 검정에 의한 CXCR4-GPCRx 헤테로머 형성 평가.
헤테로머화 결과로써 일부 GPCR 헤테로머들은 변경된 트래피킹 성질, 이를 테면, 짝 GPCR (GABA(B) 수용체)의 성숙 (White, 1998), 세포 표면으로부터 짝 GPCR (DOR-GRPR, A2A-D2R)의 효현제-매개된 내재화 (Hillion, T., et al., (2002) Coaggregation, cointernalization, and codesensitization of adenosine A2A receptors and dopamine D2 receptors, J Biol Chem 277, 18091-18097; Liu, X.Y., et al., (2011) Unidirectional cross-activation of GRPR by MOR1D uncouples itch and analgesia induced by opioids, Cell 147, 447-458; Torvinen, M., et al., (2005) Trafficking of adenosine A2A and dopamine D2 receptors, J Mol Neurosci 25, 191-200), 그리고 짝 GPCR(DOR-CB1)의 세포내 격실로부터 세포 표면으로의 국소화에서 변화(Rozenfeld, R., et al., (2012) Receptor heteromerization expands the repertoire of cannabinoid signaling in rodent neurons, PLoS One 7, e29239)를 나타내는 것으로 알려져 있다.
상기 쌍중 오직 하나에만 선택적인 효현제에 반응하여 공동-발현된 GPCRs 쌍의 공동-내재화를 이용하여 GPCR 헤테로머화를 확인하였다 (Milligan, G, 2008). GPCRx가 공동-발현되고, CXCR4-GPCRx 헤테로머를 형성할 때, CXCR4의 트래피킹을 조정하는지를 검사하고, BiFC 검정을 이용하여 확인된 CXCR4와 GPCRx 간의 물리적 상호작용을 또한 확인하기 위하여, 세포는 CXCR4-GFP와 GPCRx를 인코딩하는 아데노바이러스로 공동-형질도입되었으며, GPCRx 효현제로 자극-전과 자극-후 30분에 GFP 영상을 확보하였다. 세포 표면 상에서 GFP 발현의 상실 또는 세포 내부에 GFP 과립의 존재는 GPCRx와 공동-내재화된 CXCR4-GFP로 간주되었다 (도 3A-3B).
도 4A-4B에서, CXCR4 (도 4A) 및 ADRB2 (도 4B)에 대해 특이적인 GPCRx 효현제, 차례로 각각 10 nM의 CXCL12 (도 4A) 및 100 nM의 포르모테롤 (도 4B)로 세포를 자극하였다. 효현제 자극-전, 그리고 자극-후 30 분 시점에 이미지를 수득하고, IN Cell Analyzer 2000을 사용하여 분석하였다. 이들 GPCRx 효현제 농도의 선택은 각각의 특이적 GPCRx에 대하여 EC50 농도로 설정되었으며 (또는 대안적으로, Ki 또는 Kd 농도), 그리고 만약 생성 신호가 너무 강한 경우, 농도를 EC50 이하로 낮추었고, 만약 생성 신호가 너무 약한 경우, 이 농도는 EC50 농도의 10,000x 미만까지 증가시켰다.
CXCL12와 함께 CXCR4-GFP를 발현시키는 세포의 자극으로 인하여 혈장 막으로부터 별개의 세포내 과립으로의 GFP가 재-국소화되었으며, 이는 표면 CXCR4-GFP가 세포질로의 내재화를 보여준다 (도 4A). BiFC 검정에 의해 확인된 CXCR4-ADRB2 헤테로머에 있어서, ADRB2는 세포내 GFP 과립 증가와 CXCR4-GFP 및 ADRB2 (도 4B)를 공동-발현시키는 세포의 혈장 막에서 GFP 신호 감소로 드러나는 것과 같이, CXCR4의 내재화를 유도하였고, 헤테로머 공동-내재화가 확인되었다. CXCR4의 유도된 내재화에 대한 GPCRs의 추가적인 평가는 2018년 12월 18일에 출원된 국제 출원 PCT/KR2018/016166에 보고되었습다.
실시예 3. CXCR4-GPCRx 헤테로머 형성 시에 강화된 CXCR4 다운스트림 신호전달 및 상기 강화된 신호전달의 억제는 Ca2+ 동원 검정에 의해 평가
이들 CXCR4-GPCRx 헤테로머는 (이 수용체들중 하나가 결여된 세포에서) 개별 프로토머로부터 별개의 성질을 나타내는지를 추가 검사하기 위하여, GPCR 또는 두 GPCRs를 함께 발현시키는 세포에서 하나의 또는 두 효현제 존재 하에 칼슘 신호전달을 평가하였다. 실시예 2에서 명시된 바와 같이, 본 실시예에서 이들 GPCRx 효현제 농도의 선택은 각각의 특이적 GPCRx에 대하여 EC50 농도로 설정되었으며 (또는 대안적으로, Ki 또는 Kd 농도), 그리고 생성 Ca2+ 신호가 너무 강한 경우, 농도를 EC50 이하로 낮추었고, 생성 Ca2+ 신호가 너무 약한 경우, 이 농도는 EC50 농도의 100x 미만까지 증가시켰다.
MDA-MB-231 인간 유방암 세포는 CXCR4와 HA-VC를 인코딩하는 아데노바이러스로 형질도입되었고, CXCL12의 자극으로 세포내 칼슘 동원이 유발되었다 (도 5A). 이 세포를 ADRB2-선택적 효현제인 살메테롤로 자극시키면 칼슘 반응이 유도되지 않았고, 이것은 CXCL12에 의해 유발되는 칼슘 반응은 CXCR4에 의해 매개됨을 나타낸다. CXCL12와 살메테롤로 이 세포를 공동-자극하면, CXCL12 단독으로 유도된 것과 비교하였을 때, 유사한 칼슘 반응이 유도되었다. ADRB2 만을 과다발현시키는 세포에서 CXCL12는 단독으로 칼슘 반응을 유도하지 않았지만, 살메테롤은 단독으로 칼슘 반응을 유도하였고, 이것은 살메테롤이 ADRB2를 통하여 칼슘 반응을 유도함을 보여준다 (도 5B). 두 효현제로 공동-자극은 살메테롤 단독으로 자극된 것과 유사한 칼슘 반응을 유도하였다.
CXCR4와 ADRB2를 모두 과다발현시키는 세포에서, 각 효현제에 의한 자극은 CXCR4 또는 ADRB2만을 발현시키는 세포에서 나타난 것과 유사한 칼슘 반응을 유도하였다 (도 5C 대비 5A 및 5B). 대조적으로, 두 효현제로 함께 공동-자극하면 개별 효현제에 의해 유발된 것과 비교하였을 때 칼슘 반응이 유의적으로 증가되었다 (도 5C & 5D). 상기 강화된 칼슘 신호전달은 CXCR4와 ADRB2 모두를 발현시키는 세포에서만 관찰되었지만, 그러나 CXCR4 또는 ADRB2만을 단독으로 발현시키는 세포에서는 관찰되지 않았다. 이 결과로부터 CXCR4-ADRB2 헤테로머는 각각의 개별 GPCR와는 별개의 성질을 나타낸다는 것이 입증된다.
CXCR4와 GPCRx를 공동-발현시키는 세포를 CXCL12와 GPCRx 리간드들로 공동-자극시에 강화된 칼슘 반응이 GPCRx 길항제에 의해 저해되는지를 더 검사하였다. 특이적으로, 도 6에 나타낸 것과 같이, CXCR4와 ADRB2를 공동-발현시키는 세포, ADRB2 길항제 카르베디롤 (10 μM)은 강화된 칼슘 신호전달을 상당히 억제하였고, CXCR4 길항제 (AMD3100; 10 uM)와 ADRB2 길항제 카르베디롤 (10 μM) 모두의 공동-투여는 상기 칼슘 신호전달을 훨씬 더 크게 억제하였다. 이들 결과에서 CXCR4 길항제, ADRB2 길항제, 또는 CXCR4 길항제와 ADRB2 길항제의 조합은 CXCR4-ADRB2 헤테로머에 대항하는 치료제로 이용될 수 있음이 실증된다. 각각 효현제중 하나 또는 둘 모두 존재 하에, 그리고 각각 길항제중 하나 또는 둘 모두 존재 하에서 칼슘 신호전달에 대한 GPCRs의 추가적인 평가는 2018년 12월 18일에 출원된 국제 출원 PCT/KR2018/016166에 보고되었다.
공동-투여 결과에서 헤테로머의 각 프로토머를 표적으로 하는 길항제의 소량은 개별 각각 길항제의 높은 용량과 연합된 부작용을 피하면서, CXCR4-GPCRx 헤테로머 반응을 효과적으로 억제시키는 새로운 치료 도구를 제공한다는 것이 또한 제시된다.
실시예 4. GPCRx 길항제에 의한 내재화의 억제.
CXCR4 헤테로다이머의 공동-내재화가 짝 GPCRx 길항제에 의해 차단되는 지를 더 연구하기 위하여, 내재화 억제 검정이 실행되었다. 도 4B (이때 GPCRx는 ADRB2임)에서 나타낸 바와 같이, CXCR4와 GPCRx가 일제히 세포로 형질도입될 때 (대조군: CXCR4-GFP (도 4A)), CXCR4-GFP를 발현시키는 U-2 OS 세포는 짝 GPCRx 특이적 효현제에 의해 공동-내재화되었다. CXCR4가 GPCRx와 헤테로다이머를 형성하고, 짝 GPCRx에 의해 공동-내재화된다면, GPCRx 특이적 길항제에 의해 차단될 것이다.
CXCR4-GFP를 안정적으로 발현시키는 U-2 OS 세포에 GPCRx (ADRB2)를 인코딩하는 아데노바이러스를 형질도입시켰다. 2 일 후, CXCR4-특이적 효현제, CXCL12 (20 nM), 및/또는 GPCRx-특이적 길항제 (10 μM)로 세포를 자극하기 전, 그리고 자극 후 20분 시점에 영상을 확보하였다. IN Cell Analyzer 2500을 이용하여 CXCR4-GFP 내재화는 GFP 과립으로 관찰되었다. 세포 표면 상에서 GFP 발현의 상실 또는 세포 내부에 GFP 과립의 출현은 CXCR4-GFP 공동-내재화로 간주되었다. 여기에서, 평가된 GPCRx는 ADRB2이었다. CXCR4 효현제, CXCL12로의 자극으로 ADRB2와 CXCR4-GFP의 내재화가 유도되었다 (도 8, 좌측 패널). ADRB2 길항제, 카르베디롤의 투여는 헤테로머의 내재화에 영향이 없었다 (도 8, 중간 패널). CXCR4-GFP와 ADRB2로 자극된 CXCL12의 내재화는 ADRB2 길항제에 의해 저해되었다 (도 8, 우측 패널). GPCRx 길항제에 의한 내재화 억제에 대한 GPCRs의 추가적인 평가는 2018년 12월 18일에 출원된 국제 출원 PCT/KR2018/016166에 보고되었다.
이들 데이터로부터 CXCR4 헤테로머 내재화 억제에 의해, CXCR4-ADRB2 헤테로머 과다발현된 세포, 이를 테면, 암에서 비정상적인 다운스트림 신호는 치료 목적으로 차단될 수 있음이 추가 실증된다.
실시예 5. 세포 증식 검정에 의해 종양 성장에 있어서 CXCR4-GPCRx 헤테로머 신호전달의 저해제의 표현형 효과 평가
CXCR4-GPCRx 헤테로머-기반 치료요법적 제제를 개발하기 위해, 세포 증식에 있어서 CXCR4 길항제 및 GPCRx 길항제의 공동-투여 효과가 평가되었는데, 특히 ADRB2에 대해 평가되었다.
환자로부터 절제 및 해리된 교모세포종 조직의 단일 세포 현탁액이 준비되었다 (Samsung Seoul hospital, Seoul, Korea에서 제공). 이들 세포는 정상 뉴런 줄기 세포의 증식 및 비-분화에 최적 상태에서 배양되었다. 배지는 기본 (basic) FGF 및 EGF가 보충된 무-혈청 Neurobasal 배지로 구성되었다.
환자 유래된 세포 (PDCs)의 생존에 있어서 GPCRx 길항제의 효과는 ATPlite (PerkinElmer, Cat. No. 6016739 시약을 이용하여 평가되었다. ATPlite는 초파리 루시퍼라제에 기초한 아데노신 트리포스페이트 모니터링 시스템이다. 이 발광 검정은 배양된 포유류 세포의 증식 및 세포 독성의 정량적 평가를 위한 비색(colorimetric), 형광 및 방사성 동위 원소 분석에 대한 대안 검정이다. 세포를 40 pL 배양 배지에서 500개 세포/웰로 384-웰 플레이트에 씨딩하였다(seeded). 하룻밤 성장 후, 상기 세포는 몇 가지 용량의 GPCRx 길항제 존재 하에 또는 DMSO 단독으로 존재 하에 7일간 배양되었다. 이와 같은 7-일 항온처리 후, 15 pL ATPlite를 각 웰에 추가하였고, 당해 플레이트는 700 rpm의 오비털(orbital) 진탕기에서 5분간 교반되었다. 발광 신호는 PerkinElmer TopCount 검출 기기에서 30 분 이내에 탐지되었다. 세포 생존력(viability)은 다음의 식을 이용하여 산출되었다: 세포 생존력 (%) = (길항제 처리시 OD/오직 DMSO만의 처리시 OD) x 100%.
ADRB2 특이적 길항제인 카르베디롤이 CXCR4와 ADRB2를 발현시키는 PDC로 투여되었으며, 세포 성장은 유의적으로 저해되었다 (IC50=11.69 pM, 도 9). 세포 증식에 대한 GPCRs의 추가적인 평가는 2018년 12월 18일에 출원된 국제 출원 PCT/KR2018/016166에 보고되었다.
이 결과로부터 CXCR4 헤테로머 유도된 비정상적인 세포 증식은 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 발현시키는 세포에서 ADRB2 길항제에 의해 차단될 수 있음이 실증되었고, CXCR4-ADRB2 헤테로머를 품고 있는 환자들에서 ADRB2 길항제를 이용한 암 세포 성장 억제는 암 치료제로써 단독으로 CXCR4 저해제 만을 투여하는 모노-치료요법의 한계를 극복할 수 있음이 암시된다.
실시예 6. 환자유래된 세포 (PDC)에서 근접성 결찰 검정 (PLA)를 이용한 CXCR4-GPCRx 헤테로머 형성 평가
고유(native) 조직에서 GPCR 복합체 존재를 조사하기 위하여, 다양한 방식 이를 테면, 원자력 현미경검사 (Fotiadis, D., et al., (2006) Structure of the rhodopsin dimer: a working model for G-protein-coupled receptors, Curr Opin Struct Biol 16, 252-259), 공동-면역침전co-immunoprecipitation (Gomes, I., et al., (2004) A role for heterodimerization of mu and delta opiate receptors in enhancing morphine analgesia, Proc Natl Acad Sci USA, 101(14):5135-5139) 그리고 결합 또는 기능적 검정 (Wreggett, K.A., et al., (1995) Cooperativity manifest in the binding properties of purified cardiac muscarinic receptors, J Biol Chem 270, 22488-22499)이 이용되었다. 상호 작용을 모니터링하는 가장 편리한 방법은 라벨된 단백질로 수행된 공명 에너지 전달을 기반으로 한다. 선택적 프로브, 이를 테면, 항체들 또는 형광 리간드들에 의해 라벨링이 실행될 수 있다 (Roess, D.A., et al., (2000) Luteinizing hormone receptors are self-associated in the plasma membrane, Endocrinology 141, 4518-4523; Patel, R.C., et al., (2002) Ligand binding to somatostatin receptors induces receptor-specific oligomer formation in live cells, Proc Natl Acad Sci U S A 99, 3294-3299).
Bazin et al.은 시-분해 형광 공명 에너지 전달 (TR-FRET)-기반 방식을 이용하였는데, 이 방식은 훨씬 더 높은 신호-대-노이즈 비율을 제시한다 (Bazin, F[., et al., (2002) Time resolved amplification of cryptate emission: a versatile technology to trace biomolecular interactions, J Biotechnol 82, 233-250). FRET은 근접한 경우, 두 개의 형광단인 공여자와 수용체 사이의 에너지 전달을 기반으로 한다. 각 짝을 형광 라벨과 결합시키고, 에너지 전달 수준을 검출함으로써, 생체분자 간의 분자 상호작용을 평가할 수 있다. 시스템 여기(excitation)와 형광 측정 사이에 대략적으로 50 내지 150 마이크로초(pseconds)의 시간 지연을 도입함으로써 이 신호에서 모든 비-특이적 단명 방출이 제거하도록 한다.
근접성 결찰 검정 (PLA)은 높은 특이성 및 민감도를 갖는 단백질의 직접적인 검출, 단백질 상호작용 및 변형이 포함하도록 전통적인 면역검정 능력을 확장하는 기술이다(Gullberg, M., et al., (2004) Cytokine detection by antibody-based proximity ligation, Proc Natl Acad Sci U S A 101, 8420-8424). 상이한 종에서 생성된 2가지 일차 항체들은 관심 대상 단백질 상의 표적 항원을 인지한다. 일명 PLA 프로브라고 불리는 상이한 일차 항체의 불변 영역을 지향하는 2차 항체들은 당해 일차 항체에 결합한다. 각 PLA 프로브에는 고유한 짧은 DNA 가닥이 부착되어 있다. 만약 이 PLA 프로브가 근접에 있다면 (즉, 도면에 나타낸 것과 같이, 관심 대상의 2가지 원래 단백질들이 근접해있거나, 또는 단백질 복합체의 일부분이), 당해 DNA 가닥들은 적절한 기질 및 효소가 첨가될 때 써클 DNA 합성 구동에 참여할 수 있다. DNA 합성 반응은 DNA 써클의 수-백배 증폭을 초래한다. 그 다음, 형광-라벨된 상보적 올리고뉴클레오티드 프로브가 추가되어, 이들은 증폭된 DNA에 결합한다. 생성된 고농도 형광은 형광 현미경으로 봤을 때, 뚜렷한 밝은 점으로 쉽게 볼 수 있다 (Gustafsdottir, S.M., et al., (2005) Proximity ligation assays for sensitive and specific protein analyses, Anal Biochem 345, 2-9).
CXCR4를 과다발현시키는 세포 계통인, U2OS-CXCR4는 ADRB2를 발현시키는 아데노바이러스인 Ad-ADRB2를 0, 2.5, 10, 40 MOIs 용량으로 2 일 동안 감염시켰다. PLA는 이미 설명된 바와 같이 실행되었다 (Brueggemann, L.I., et al., (2014) Differential protein kinase C-dependent modulation of Kv7.4 and Kv7.5 subunits of vascular Kv7 channels, J Biol Chem 289, 2099-2111; Tripathi, A., et al., (2014) CXC chemokine receptor 4 signaling upon co-activation with stromal cell-derived factor-1alpha and ubiquitin, Cytokine 65, 121-125). PLA를 수행하기 위하여, 감염된 세포는 16-웰 조직 배양 슬라이드 상에서 4% 파라포름알데히드 (PFA)로 고정되었다. 슬라이드는 Duolink에서 제공되는 차단 용액으로 차단되었고, 마우스 항-CXCR4 (1:200, Santacruz, Sc-53534), 토끼 항-ADRB2(1:200, Thermoscientific, PA5-33333), 토끼 항-CHRM1(1:200, Ls bio, Ls-C313301)와 함께 37℃에서 가습 챔버에서 1 h 동안 항온처리되었다. 그 다음 슬라이드를 세척하고, + 및 - Duolink II PLA 프로브와 콘쥬게이트된 2차 항-토끼 항체 및 항-마우스 항체와 함께 항온처리되었다 (37℃에서 1 h 동안). 슬라이드를 다시 한번 세척하고, 그 다음 결찰-리게이즈 용액으로 항온처리하고 (30분 동안 37℃에서), 증폭-중합효소 용액 (2 h 동안 37℃에서)으로 항온처리하였다. 그 다음, 슬라이드에 4',6-디아미디노-2페닐인돌 (DAPI)과 함께 Duolink II 탑재 배지의 최소 용적을 15-30분 동안 탑재하였고, 그리고 PLA 신호 [Duolink In Situ Detection Reagents Green (λ 여기/방출 495/527 nm) 또는 Red (λ 여기/방출 575/623 nm)는 IN Cell Analyzer 2500 하에서 형광 스팟으로 확인되었다.
도 10A-10B에 나타낸 것과 같이, PLA 신호 증가는 ADRB2의 발현 수준의 발현 수준으로써 용량-의존적 방식으로 증가된다. 도 10A는 일련의 MOIs (감염 다중도)에 걸쳐 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 발현시키는 U2OS 세포로부터 PLA 신호 영상. 도 10B에서 적색 신호 스팟을 계수하고, 음성 대조군에 대하여 표준화시켜 산출하였다. PLA 신호는 용량 의존적 방식으로 ADRB2의 발현 수준에 비례하여 증가되었다. 내생성 ADRB2 발현을 조사하기 위하여, qRT-PCR에 의한 분석은 ADRB2 특이적 프라이머와 함께 수행되었다. 그들은 도 1과 같이 다르게 명명되었다. pH: 도 10C에 나타낸 바와 같이, U2OS 세포의 내생성 ADRB2 발현 수준은 꽤 높았고, 이것은 바이러스 감염 (ADRB2의 경우 MOI는 0) 없는 구역에서도 PLA 신호가 검출됨을 나타낸다.
전통적으로, 교아종 (GBM)은 가장 흔하며, 치명적인 원발성(primary) 뇌 종양이다. 전임상 암 생물학은 시험관내에서 인간 암 세포주를 사용하고, 이들 세포주를 확립하는 이종이식편 과정에 크게 의존하고 있다. 그러나, 통상적인 세포주를 확립하는 과정은 중요한 생물학적 특성의 비-가역적 손실을 초래하고, 그 결과, 이종이식편 종양 모델은 원래 종양에 존재하는 게놈 및 표현형 특성을 유지하지 못한다.
교아포종으로부터 직접 유래된 환자-유래 세포 (PDC)는 정상적인 신경 줄기 세포와 요약하자면 인간 교아종종의 유전자형, 유전자 발현 패턴 및 생체내 생물학에서 광범위하게 유사하다.
PDC 샘플로 PLA를 수행하기 위하여, 당해 환자 유래된 세포를 16-웰 조직 배양 슬라이드에 플레이팅하고, 4% PFA로 고정시켰다. 슬라이드는 Duolink에서 제공되는 블락킹 용액으로 차단되었고, 마우스 항-CXCR4 (1:200, Santa Cruz, Sc-53534), 토끼 항-ADRB2 (1:200, Thermo Scientific, PA5-33333), 토끼 항-CHRM1 (1:200, Lsbio, Ls-C313301)와 함께 37℃에서 가습 챔버에서 1 h 동안 항온처리되었다. 그 다음, 슬라이드를 세철하고, + 및 - Duolink II PLA 프로브와 콘쥬게이트된 2차 항-토끼 항체 및 항-마우스 항체와 함께 항온처리되었다(1 h 동안 37℃에서). 슬라이드를 다시 한번 세척하고, 그 다음 결찰-리게이즈 용액으로 항온처리하고 (37℃에서 30분 동안), 증폭-중합효소 용액 (37℃에서 2 h 동안)으로 항온처리하였다. 그 다음, 슬라이드에 4',6'-디아미디노-2-페닐인돌 (DAPI)과 함께 Duolink II 탑재 배지의 최소 용적을 15-30분 동안 탑재하였고, 그리고 PLA 신호 [Duolink In Situ Detection Reagents Green (λ 여기/방출 495/527 nm) 또는 Red (λ 여기/방출 575/623 nm)는 IN Cell Analyzer 2500 하에서 형광 스팟으로 확인되었다.
도 11A-11B에 나타낸 바와 같이, PLA 비율은 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 지칭하고, 해당 헤테로머 형성의 빈도는 당해 환자에 따라 달라진다. PLA 비율은 다음과 같이 산출되었다: PDC 샘플에서 형광 스팟 수 / 음성 대조군에서 형광 스팟 수. 음성 대조군 (NC)은 배경 형광 신호로써, + 및 - Duolink II PLA 프로브와 콘쥬게이트된 2차 항체로만 처리된 경우(PLA 프로세싱에서 일차 항체 (마우스 항-CXCR4, 토끼 항-ADRB2)의 처리 없이, 스팟의 수를 나타낸다. 이들 데이터는 암 환자 샘플 안에 CXCR4-ADRB2 헤테로다이머의 정량적 분석을 보여준다. 헤테로머 형성에 대한 GPCRs의 추가적인 평가는 2018년 12월 18일에 출원된 국제 출원 PCT/KR2018/016166에 보고되었다.
실시예 7. PDX 모델을 이용하여 생체내에서 CXCR4-GPCRx 헤테로머 형성 평가
환자-유래된 이종이식편 (PDX) 샘플을 이용하여 PLA를 실행하기 위하여, 교아종 환자 유래된 FFPE 샘플이 이용되었다 (Samsung Seoul hospital in Seoul, Korea 제공). FFPE 샘플을 탈-파라핀처리하고, 100℃에서 15분 동안 열 유도된 항원 회수(retrieval)가 실행되었다. 슬라이드는 Duolink에서 제공되는 블락킹 용액으로 차단되었고, 토끼 항-CXCR4 (1:200, Thermoscientific, PA3305), 마우스 항-ADRB2 (1:200, Santacruz, Sc-271322)와 함께 37℃에서 가습 챔버에서 1 h 동안 항온처리되었다. 다른 공정은 전술한 것 (PDC를 이용한 PLA)과 동일하다.
도 12A에서 DAPI 착색으로 핵을 시각화시켰고, CXCR4-ADRB4 헤테로머들은 PLA에 의해 작은 점으로 착색되었다. 도 12B에서 PLA 비율은 환자별로 상이하며, 이 결과에 동반 진단(companion diagnostics)에 의해 개인맞춤 약물 시행이 가능함을 나타낸다.
실시예 8. CXCR4-GPCRx 헤테로머 형성 시에 강화된 CXCR4 다운스트림 신호전달을 Ca2+ 동원 검정으로 평가
MDA-MB-231 세포는 CXCR4와 ADRB2를 인코딩하는 아데노바이러스로 형질도입된다 (도 13). 세포는 3일간 배양되었고, Cal-520 AM로 착색되었고, 그리고 CXCL12 (30 nM) 단독으로, 또는 살메테롤 단독으로 용량을 증가시키면서, 또는 30 nM의 CXCL12의 조합과 함께 살메테롤로 처리되었다. 칼슘 동원은 FlexStation 3을 이용하여 측정되었다. CXCR4와 ADRB2를 모두 과다발현시키는 MDA-MB-231 세포에서, 살메테롤만으로 자극하면 용량-의존적 칼슘 동원이 유도되지 않았다(도 13). 그러나, CXCL12 존재 하에 당해 세포를 살메테롤과 함께 공동-자극할 때, 칼슘 신호전달은 광범위의 살메테롤 농도, 이를 테면, 10 nM 내지 300 nM 범위의 농도에서 상당히 강화되었다.
실시예 9. CXCR4-GPCRx 헤테로머 형성 시에 강화된 CXCR4 다운스트림 신호전달 및 상기 강화된 신호전달의 억제는 Ca2+ 동원 검정에 의해 평가
CXCR4와 ADRB2를 모두 과다발현시키는 MDA-MB-231 세포에서, CXCR4 효현제인 CXCL12 그리고 ADRB2-선택성 효현제인 살메테롤로 공동-자극하면, 각각 개별 효현제를 이용한 단일-자극에 의해 유발된 것과 비교하여 칼슘 반응을 유의적으로 증가시켰다 (도 14). 이 결과로부터 CXCR4-ADRB2 헤테로머는 각각의 개별 GPCRs CXCR4와 ADRB2와는 별개의 성질을 나타낸다는 것이 입증된다.
세포 CXCR4와 ADRB2를 공동-발현시키는 세포에서 CXCL12와 ADRB2 리간드의 공동-자극 시 강화된 칼슘 반응이 CXCR4 길항제로써 항-CXCR4 항체에 의해 저해되는 지를 검사하였다. CXCR4와 ADRB2를 공동-발현시키는 세포에서, 2pg의 항-CXCR4 항체, 12G5 투여로 도 14에 나타낸 것과 같이 강화된 칼슘 신호전달을 억제하였다. 그리고 길항제 (카르베디롤, ADRB2 길항제와 12G5, CXCR4 길항제를 함께)의 공동-투여는 칼슘 신호전달의 더 유의적인 억제를 초래하였다. 이들 결과에서 항-CXCR4 항체와 ADRB2 길항제는 CXCR4-ADRB2 헤테로머 매개된 질환에 대항하는 효과적인 치료제 (또는 복합-치료요법)로 이용될 수 있음이 실증된다.
구체적으로, 칼슘 동원 검정을 이용하여, MDA-MB-231 인간 유방암 세포는 검정색 투명 바닥 96-웰 플레이트 (Corning Costar, #3340)의 10% FBS가 보충된 100 pL의 RPMI 1640에서 웰당 20,000개 세포를 씨딩하였다. 다음 날, 세포에 10 MOI의 CXCR4와 30 MOI의 GPCRx를 공동-형질도입시켰다. 2 일 후, 세포를 지정된 양의 ADRB2 길항제, 카르베디롤 (Tocris), 항-CXCR4 항체, 12G5 (Thermo Scientific, 35-8800)로 처리하였고, Cal 6 (FLIPR® 칼슘 6 검정 키트, Molecular Devices, Cat. R8191)로 2 hr 동안 항온처리하였다. 그 다음, 세포는 표시된 양의 ADRB2 효현제인 CXCL12, 또는 CXCL12와 ADRB2 효현제로 자극되었다. 칼슘 동원은 FlexStation 3 다중-모드 마이크로플레이트 판독기(Multi-Mode Microplate Reader)를 이용하여 측정되었다. 결과들은 기선(base-line) 활성에 대하여 표준화하였다. 칼슘 동원은 각 그래프의 곡선-아래-면적(AUC)를 산출함으로써 정량화되었다. 데이터는 CXCR4만을 단독으로 발현시키는 세포에서 CXCL12-자극된 칼슘 반응에 대하여 표준화되었다. 데이터는 세 가지 독립적인 실험을 나타낸다 (평균 ± SEM). *P < 0.05; Student's t 테스트.
실시예 10. 종양 성장에서의 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 효과.
종양 성장에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 효과를 조사하기 위하여, CXCR4 만을 안정적으로 과다발현시키는 세포 계통 ("A549-CXCR4 세포") 또는 CXCR4와 ADRB2를 모두 발현시키는 세포 계통 [이 세포는 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유함] ("A549-CXCR4-ADRB2 세포")을 A549 폐암 세포에서 준비되었고, 동량의 세포 (1x107 세포/머리)는 종양 성장율을 비교하기 위하여 누드(nude) 마우스의 피하로 주사되었다. 도 15A-15B에 나타낸 바와 같이, 이식 후 28일 시점에 종양 크기는 A549의 경우 351.4 ± 214.7 mm3 이었고, A549-CXCR4 세포의 경우 726.9 ± 259.6 mm3이었고, 그리고 A549-CXCR4-ADRB2 세포의 경우 1012.2 ± 556.1 mm3이었다. CXCR4를 과다발현시키는 A549-CXCR4 세포가 이식된 마우스의 종양 성장율은 부모계 A549 만을 보유하는 마우스의 것보다 더 빨랐으며, 그리고 A549-CXCR4-ADRB2 세포 (CXCR4와 ADRB2 모두를 과다발현시키는)가 이식된 마우스에서 가장 빠른 종양 성장이 관찰되었다. 이 결과는 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 형성이 상승적으로 Ca2+ 반응을 증가시키고, 따라서 종양 성장이 촉진됨을 암시한다.
부모계 세포 A549, A549-CXCR4 세포 (CXCR4를 안정적으로 과다발현시킴), 또는 A549-CXCR4-ADRB2 세포 (CXCR4와 ADRB2를 모두 안정적으로 과다발현시킴)가 이식된, 이식 후 28일 시점에서 이들 3마리 마우스의 영상을 도 15A에 나타낸다. A549-CXCR4-ADRB2 세포 (CXCR4와 ADRB2를 모두 안정적으로 과다발현시킴)를 품고 있는 마우스의 종양 크기가 그 중에서 가장 컸다(가장 가속화됨)는 것을 이들 영상이 보여준다. 시간 경과에 따른 이들 상이한 3 마리 마우스의 종양 성장율은 도 15B에서 그래프로 도시된다. 매 3일 또는 4일 차에 종양의 길이(L)와 폭(W)을 측정하고, 다음의 식에 기초하여 종양 용적을 산출함으로써, 종양 성장을 모니터하였다: 용적 = 0.5 LW2. A549-CXCR4 세포를 품고 있는 마우스는 부모계 세포 A549만을 품고있는 마우스와 비교하였을 때 상대적으로 빠른 종양 성장을 보이며, 그리고 종양 성장은 A549-CXCR4-ADRB2 세포 (CXCR4와 ADRB2를 모두 안정적으로 과다발현시킴)로 형질도입된 마우스에서 가장 빨랐다.
실시예 11. CXCR4-ADRB2 헤테로머 형성 시에 강화된 CXCR4 다운스트림 신호전달의 Ca2+ 동원 억제- 단일 저해제 처리에 대한 조합 저해제 처리의 비교
억제 정도(Ca2+ 반응에 대한 IC50 값으로 측정됨)는 부릭사포르 (CXCR4 저해제, 또한 TG-0054으로도 불림)와 비교하였는데, 이는 CXCR4만을 발현시키는 MDA-MB-231 세포 (단량체 또는 개별 프로토머 구성; "MDA-MB-231-CXCR4 세포")에서 단일 처리, CXCR4와 ADRB2를 모두 과다발현시키는 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 MDA-MB-231 세포 계통에서 단일 처리 ("MDA-MB-231-CXCR4-ADRB2 세포"), 그리고 MDA-MB-231-CXCR4-ADRB2 세포에서 ADRB2 저해제 (카르베디롤; 10 μM)로 공동-처리로 평가되었다.
MDA-MB-231 세포는 오로지 CXCR4 만을, 또는 CXCR4와 ADRB2를 인코딩하는 아데노바이러스로 형질도입된다. 당해 세포는 2 일 동안 배양되었고, 부릭사포르 (CXCR4 저해제) 단독으로, 또는 부릭사포르와 ADRB2 저해제 (카르베디롤; 10 uM)로 공동-처리되었다. 그 다음, 당해 세포는 Cal-6으로 2 시간 동안 착색되었고, CXCR4 효현제 (CXCL12; 20 nM) 및 ADRB2 효현제 (살메테롤; 1 μM)로 자극되었다. 칼슘 동원은 FlexStation3을 이용하여 측정되었고, 이 결과는 표 3에 나타내며, 다음에서의 Ca2+ 반응의 IC50를 보여준다: (1) 부릭사포르 만으로 처리된 MDA-MB-231-CXCR4 (두번째 컬럼); (2) 부릭사포르와 ADRB2 저해제 카르베디롤로 일제히 처리된 MDA-MB-231-CXCR4-ADRB2 세포 (세번째 컬럼); 그리고 (3) 부릭사포르만으로 처리된 MDA-MB-231-CXCR4-ADRB2 세포 (네번째 컬럼).
표 3:
Figure pct00004
표 3에 나타낸 바와 같이, CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 MDA-MB-231-CXCR4-ADRB2 세포에서 Ca2+ 반응의 IC50 값은 ADRB2 저해제, 카르베디롤 (세번째 컬럼)과의 조합으로 처리하였을 때, CXCR4 저해제, TG-0054만으로 단일 처리한 경우 (네번째 컬럼)와 비교하여 4500 배 또는 그 이상으로 감소되었다. 이들 결과는 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 공동-처리는 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 MDA-MB-231-CXCR4-ADRB2 세포에서 단일 처리한 것보다 증가된 Ca2+ 반응을 훨씬 효과적으로 저해함을 암시한다.
CXCR4-ADRB2 헤테로머 형성이 CXCR4 저해제에 대한 입체구조 변화 유도, 및/또는 결합 친화력 변화 유도의 가능성을 결정하기 위하여, CXCR4 만을 발현시키는 MDA-MB-231-CXCR4 세포와 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 MDA-MB-231-CXCR4-ADRB2 세포에서 부릭사포르 (TG-0054)로 단일 처리에 있어서 Ca2+ 반응의 IC50 값을 비교하였다. 결과로부터 CXCR4 저해제로 단일 처리하면 MDA-MB-231-CXCR4 세포와 비교하여 (두번째 컬럼), MDA-MB-231-CXCR4-ADRB2 세포 (네번째 컬럼)에서 IC50 값이 겨우 대략 1.4배 변경되었음을 보여주었다. 이 결과는 CXCR4 저해제, 가령, 부릭사포르 (TG-0054), 그리고 ADRB2 저해제의 공동-처리는 CXCR4 저해제로 단일 처리한 것과 비교하였을 때, CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 대상체 및/또는 대상체 세포/조직에 대한 치료요법적 효과를 증가시키고, 특정 CXCR4 저해제들의 경우에는 극적인 정도로 증가될 수 있음이 암시된다.
표 3에 나타낸 바와 같이, 부릭사포르와 카르베디롤의 공동-처리는 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포에서 Ca2+ 반응의 IC50 값을 감소시킨다. ADRB2 길항제의 과량-투여는 대응부 CXCR4의 활성에 영향을 미칠 수 있기 때문에, CXCR4 길항제의 IC50 값의 변화는 일련의 CXCR4 길항제와 조합된 카르베디롤 (이의 650nM의 IC90 값 농도에서)으로 측정되었다. 표 4에 데이터가 제시된다.
표 4:
Figure pct00005
표 4에 나타낸 바와 같이, CXCR4-ADRB2 헤테로머 구성에서 Ca2+ 반응의 IC50 값은 CXCR4 저해제 단독으로 단일 투여된 것 (네번째 컬럼)에 비하여 ADRB2 저해제와의 조합으로 투여된 경우 (세번째 컬럼) 감소되었다. 예를 들면, CXCR4-ADRB2 헤테로머 구성에서 Ca2+ 반응의 IC 50 값은 카르베디롤 (600 nM, 단량체 구성에서 ADRB2에 대한 이의 IC90 농도 값)을 AMD3100, 울로쿠플루맙, BKT140, TG-0054와 차례로 각각 공동-투여될 때, 약 10.5 배 (22.45 nM에서 2.12 nM로), 약 29.3 배 (0.88 nM에서 0.03 nM로), 약 45.7 배 (88.66 nM에서 1.94 nM로), 약 60.7 배 (90.54 nM에서 1.49 nM로) 감소되었다. 이 결과는 낮은 용량의 CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제의 공동-투여로 CXCR4 저해제만으로 단일 투여한 경우와 비교하였을 때, CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 대상체에 대한 치료요법적 효과를 증가시킬 수 있음이 암시된다.
실시예 12. CXCL12 및/또는 살메테롤을 사용한 자극은 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포 계통에서 ERK 신호전달의 활성화를 유도한다
ERK1/2는 다른 세포 유형에서 화학주성 또는 생존을 조절한다 (Riol-Blanco, L., et al., (2005) The chemokine receptor CCR7 activates in dendritic cells two signaling modules that independently regulate chemotaxis and migratory speed, J. Immunol. 174(7), 4070-4080; Klemke, R.L., et al., (1997) Regulation of cell motility by mitogen-activated protein kinase, J. Cell Biol. 137(2), 481-492; Copp, J., et al., (2009) ORC-specific phosphorylation of mammalian target of rapamycin (mTOR): phospho-Ser2481 is a marker for intact mTOR signaling complex 2, Cancer Res. 69(5), 1821-1827). 세포에서 CXCL12 (CXCR4 효현제) 및/또는 살메테롤 (ADRB2 효현제)와 함께 CXCR4 또는 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 자극하여 ERK1/2 활성이 평가되었다. 특이적으로, Rluc-luc2P를 발현하는 MDA-MB-231 세포 ("MDA-MB-231 부모 세포"), CXCR4를 발현하는 MDA-MB-231 세포 ("MDA-MB-231-CXCR4 세포"), 그리고 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 발현하는 MDA-MB-231 세포("MDA-MB-231-CXCR4-ADRB2 세포")를 CXCL12로 자극하면, 10분 후 ERK1/2 활성화가 유도되었고, 60분 후 최고 수준의 활성에 도달하였다. MDA-MB-231 부모 세포, MDA-MB-231-CXCR4 세포, 그리고 MDA-MB-231-CXCR4-ADRB2 세포를 살메테롤로 자극하면 20분 후 ERK 활성화를 또한 유도하였고, 60분 후 기저 수준으로 감소되었다 (데이터 나타내지 않음).
CXCR4와 ADRB2 신호전달의 상승적 효과를 결정하기 위해, CXCL12 및 살메테롤 자극 후 ERK1/2 활성화 수준이 측정되었다. Rluc-luc2P 또는 CXCR4를 발현시키는, 또는 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 MDA-MB-231세포 및 A549 세포를 웰 당 5x105 세포의 밀도로 6-웰 플레이트에 씨딩하였다. 혈청 단식(starvation) 16시간 후, MDA-MB-231 부모 세포, MDA-MB-231-CXCR4 세포, 그리고 MDA-MB-231-CXCR4-ADRB2 세포에서 20분 동안 CXCL12 10 nM 및/또는 살메테롤 10 nM로 처리하고, 그리고 Rluc-luc2P를 발현시키는 A549 세포 ("A549 부모 세포"), CXCR4 단독으로 발현시키느 A549 세포 (단량체 또는 개별 프로토머 구성; "A549-CXCR4 세포"), 그리고 CXCR4와 ADRB2를 안정적으로 발현시키는 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 발현시키는 A549 세포 계통("A549-CXCR4-ADRB2 세포")에서 10분 동안 각각 세포에서 처리하였다. 그 후, 각각의 세포 세트를 수확하고 웨스턴 블롯팅 분석을 수행하였다.
CXCL12 또는 살메테롤을 단독으로 자극할 때, MDA-MB-231-CXCR4 세포에서 ERK1/2 활성화의 수준은 MDA-MB-231 부모 세포보다는 더 높았다. ERK1/2 인산화는 MDA-MB-231-CXCR4 세포와 비교하였을 때, MDA-MB-231-CXCR4-ADRB2 세포에서 상당히 증가되었다. MDA-MB-231 부모 세포를 동시에 CXCL12와 살메테롤로 자극했을 때, ERK1/2 인산화는 단일 효현제로 자극될 때 유사한 수준으로 유도되었다. MDA-MB-231-CXCR4 세포에서, ERK1/2 인산화는 각 효현제 단독의 합으로 증가되었지만, MDA-MB-231-CXCR4-ADRB2 세포에서, ERK1/2 활성화는 상승적으로 증가되었다 (도 16A-16B).
ERK1/2 활성화는 A549 부모 세포, A549-CXCR4 세포, 그리고 A549-CXCR4-ADRB2 세포에서 또한 조사되었다. CXCL12 또는 살메테롤을 단독으로 자극할 때, A549-CXCR4 세포 또는 A549-CXCR4-ADRB2 세포에서 ERK1/2 인산화가 탐지되었다. A549 부모 세포에서, CXCL12 또는 살메테롤 만으로 자극했을 때, ERK1/2 인산화가 유도되지 않았지만, 그러나 CXCL12와 살메테롤로 공동-자극될 때 상당히 증가되었다. A549-CXCR4 세포에서, 각 효현제 단독으로 ERK1/2 인산화가 유도되었고, CXCL12와 살메테롤로 공동-자극될 때, 각 자극의 합으로 증가되었다. A549-CXCR4-ADRB2 세포에서, CXCL12 만으로 자극될 경우보다 살메테롤 만으로 자극될 때, ERK1/2 인산화가 훨씬 더 많이 유도되었고, CXCL12와 살메테롤로 공동-자극될 때 유의적으로 활성화되었다 (도 17A-17B).
이들 결과는 암 세포, 특히 암 세포가 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 경우, CXCR4와 ADRB2의 발현으로 다운스트림 ERK 활성화를 유의적으로 유도할 수 있으며, 그리고 암 세포 증식과 화학주성에 있어서 상당한 효과를 가질 수 있다.
실시예 13. CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 A549 세포 계통에서 CXCR4/CXCL12 매개된 증식 증가에 대해 CXCR4 길항제의 효과
암 세포 성장에 대해 암 세포에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 존재의 영향을 조가하기 위해, CXCR4와 ADRB2 모두를 안정적으로 과다발현시켜, CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 A549 세포("A549-CXCR4-ADRB2 세포")의 성장은 대조군으로써 Rluc-luc2P를 발현시키는 A549 세포 (A549-더블 네가티브 세포; "A549 부모 세포")과 비교하여, 그리고 CXCL12 효현제의 존재에 따라 비교되었다.
A549 부모 세포 또는 A549-CXCR4-ADRB2 세포를 96-웰 플레이트에서 웰당 1x104 세포의 밀도로 플레이팅하였고, 그리고 24 hr 동안 흡착이 되도록 배양 배지에서 항온처리하였다. 세척 후, 혈청 없는 조건에서 무(free)-혈청 배지 ± CXCL12, 표시된 CXCR4 저해제들과 함께, 또는 없이 (도 18A: AMD3100 (10 μM), 도 18B: LY2510924 (10 μM), 도 18C: AMD070 (1 μM), 도 18D: TG-0054 (10 μM), 그리고 도 18E: BKT-140 (10 μM))가 추가되었고, 세포는 72 hr 동안 항온처리되었다 (씨딩 후 96hr). 배양이 끝나면 제조사의 지시에 따라 Prestoblue Cell Viability Reagent (Thermo Fisher Scientific)를 사용하여 세포 증식을 평가했다.
도 18A-18E에서 세포 증식 속도는 CXCL12 효현제의 존재 하에 약 20% 증가하는 것으로 관찰되었으며, 이러한 증가는 시험된 각각의 CXCR4 길항제에 의해 차단되었다. 정상 세포 성장 조건 (10% 혈청)에서는 A549 모세포와 A549-CXCR4-ADRB2 세포 간에 세포 증식 속도의 차이가 관찰되지 않았다. 그러나, 혈청 없는 조건에서, A549-CXCR4-ADRB2 세포 (A549 부모 세포는 아님)는 CXCF12 존재 하에서 용량 의존적 방식으로 세포 증식 증가를 보였다 (데이터는 나타내지 않음). CXCF12 100 nM 존재 하에, 72 hr 동안 약 20%의 최대 증가를 얻었다. CXCF12 매개된 세포 증식 증가는 혈청 농도가 증가될 때 감소되었다 (데이터는 나타내지 않음). 세포 증식율의 증가는 CXCR4/CXCF12 특이적 신호전달에 의해 매개됨을 확인하기 위해, 몇 가지 CXCR4 특이적 길항제, AMD3100, FY210924, AMD070, TG-0054, 및 BKT-140가 평가되었다. 테스트된 각 CXCR4 길항제는 세포 증식에 대한 CXCL12 효과를 차단시켰다. CXCR4/CXCL12 신호전달 축은 세포 증식율을 혈청 없는 조건에서 약 20% 증가시키는데, 이점은 CXCR4/CXCL12가 준-최적 조건에서만 증식 증가를 유도한다는 기존 보고와 일관된다 (Balkwill, Fran (2004) Nature Reviews Cancer, Cancer and the Chemokine Network, 4:540-550).
CXCR4를 표적으로 하는 저해제는 예를 들면, CXCL12의 존재가 증가되는 만큼 억제할 수 있으며, 더 높은 농도의 CXCR4 저해제들은 세포독성을 야기할 수 있다 (데이터는 나타내지 않음). 이러한 결과는 암 치료를 위한 임상에서 CXCR4 저해제를 단독 활성제로 사용하는 것과 관련된 종양 성장 억제의 낮은 효능 및 부작용의 관찰을 설명할 수 있다. CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 대상체에서 CXCR4 저해제 단독 치료는 종양 성장을 효과적으로 억제하지 못할 수 있지만, CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제의 공동-투여는 종양 성장을 효과적으로 억제할 수 있다.
실시예 14. CXCR4-ADRB2 헤테로머 양과 종양 성장 간의 상관관계
CXCR4-ADRB2 헤테로머의 양과 종양 성장 간의 상관관계를 조사하기 위해, CXCR4 단량체를 안정적으로 발현시키는 A549 세포 계통 ("A549-CXCR4 세포") 그리고 CXCR4와 ADRB2 모두를 안정적으로 발현시키고, CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 A549 세포 계통("A549-CXCR4-ADRB2 세포")이 준비되었다. CXCR4-ADRB2 헤테로머의 양은 조작된 세포 계통에서 PLA를 통하여 비교되었다. 도 19A-19B에서는 PLA에 의해 결정하였을 때, A549 부모 세포, A549-CXCR4 세포, 그리고 A549-CXCR4-ADRB2 세포에서 차례로 각각 약 30, 약 80, 그리고 150 이상의 CXCR4-ADRB2 헤테로머가 존재한다는 것을 보여준다.
세포 수준에서 PLA로 입증되는 바와 같이 CXCR4-ADRB2 헤테로머 함유로 용량 의존적 방식으로 종양 성장을 증가시키는 지를 결정하기 위해, A549 부모 세포와 A549-CXCR4-ADRB2 세포를 준비하였고, 동량의 세포 (한 마리 두(head) 당 1x107 세포)를 누드 마우스의 피하루 주사하였고, 종양 성장율을 비교하였다. 매 3일 또는 4일 차에 종양의 길이(L)와 폭(W)을 측정하고, 다음의 식에 기초하여 종양 용적을 산출함으로써, 종양 성장을 모니터하였다: 용적 = 0.5 LW2. 도 19C에서 나타난 것과 같이, A549 이종이식편 마우스 (A549 부모 세포를 갖는)에서 이식 후 44일차 시점에서 종양 크기가 562.8 ± 245.9 mm3이었고, 그리고 A549-CXCR4-CXCR4-ADRB2 이종이식편 마우스 (A549-CXCR4-ADRB2 세포를 갖는)에서는 967.2 ± 493.0 mm3이었다. A549-CXCR4-ADRB2 세포가 이식된 마우스의 종양 성장율은A549 부모 세포가 이식된 마우스보다 더 빨랐다. 이 결과는 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 형성이 상승적으로 Ca2+ 반응을 증가시키고, 따라서 종양 성장이 촉진됨을 암시한다.
CXCR4-ADRB2 헤테로머(존재 및 양)와 종양 증식 간의 상관관계는 A549 폐암 세포 계통과 MDA-MB-231 유방암 세포 계통에서 확인되었다. A549 세포 계통 구성과 동일한 방식에서, CXCR4 단량체를 과다발현시키는 MDA-MB-231-CXCR4 세포 계통 ("MDA-MB-231-CXCR4 세포")과 CXCR4와 ADRB2 모두를 과다발현시킴으로써, CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 MDA-MB-231 세포 계통 ("MDA-MB-231-CXCR4-ADRB2 세포")을 준비하였고, 그 다음 CXCR4-ADRB2 헤테로머 발현의 양은 PLA를 통하여 비교하였다. 도 20A-20B에서 MDA-MB-231 부모 세포, MDA-MB-231-CXCR4 세포, 그리고 MDA-MB-231-CXCR4-ADRB2 세포에서 차례로 각각 약 65, 약 80, 및 180이상의 CXCR4-ADRB2 헤테로머가 탐지됨을 보여준다. 세포성 수준에서 PLA에 의해 입증된 바와 같이, CXCR4-ADRB2 헤테로머의 (존재 및) 양이 용량 의존적 방식으로 종양 성장을 증가시키는 지를 결정하기 위해, MDA-MB-231 부모 세포, MDA-MB-231-CXCR4 세포, 및 MDA-MB-231-CXCR4-ADRB2 세포를 준비하였고, 동량의 세포 (한 마리 두(head) 당 5x106 세포)를 누드 마우스의 유방 지방 층의 정위로 주사하였고, 종양 성장율을 비교하였다. 도 20C에 나타낸 것과 같이, 이식 후 67일 시점에서 종양 크기는 MDA-MB-231 이종이식편 마우스 (MDA-MB-231 부모 세포를 갖는)에서 265.8 ± 161.8 mm3, MDA-MB-231-CXCR4 이종이식편 (MDA-MB-231-CXCR4 세포를 갖는)에서 459.2 ± 399.6 mm3, 그리고 MDA-MB-231-CXCR4-ADRB2 이종이식편 마우스 (MDA-MB-231-CXCR4-ADRB2 세포를 갖는)에서 1107. 0 ± 184.8 mm3이었다. MDA-MB-231-CXCR4-ADRB2 이종이식편 마우스, MDA-MB-231-CXCR4 이종이식편 마우스, 및 MDA-MB-231 이종이식편 마우스의 순서로 종양 크기가 관찰되었고, 이점은 존재하는 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 양에 따라 종양의 크기가 증가함을 나타낸다. 이들 결과는 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 양이 증가될 때, 종양은 더욱 악성이 됨을 암시한다. 따라서, CXCR4-ADRB2 헤테로머를 갖는 암은 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 표적으로 하는 저해제, 또는 저해제들, 이를 테면, CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제의 조합을 투여함으로써 효과적으로 치료될 수 있을 것이다.
실시예 15. CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 A549 이종이식된 마우스의 종양 성장에 있어서 CXCR4 저해제 단독 효과
CXCR4와 ADRB2를 모두 안정적으로 발현시킴으로써, CXCR4-ADRB2를 함유하는 A549 세포 ("A549-CXCR4-ADRB2 세포")가 이식된 마우스에서 항종양 효과는 현재 개발중이거나 또는 시판되는 CXCR4 저해제들을 이용하여 평가되었다. 누드 마우스의 피하로 A549-CXCR4-ADRB2 세포 (마우스 두당 1x107 세포)를 주사하였다. 종양 평균 크기가 약 50-100mm3에 도달될 때, 마우스를 (테스트 그룹 당 n=10) 다음의 CXCR4 저해제로 처리하였다: AMD3100 (도 21A), LY2510924 (도 21B), AMD070 (도 21C), 또는 TG-0054 (도 21D). CXCR4 저해제들을 4주 동안 하루에 한 번씩 투여하였다.
도 21A-21D에 나타낸 것과 같이, 테스트된 대부분의 CXCR4 저해제들은 종양 성장의 제한된 억제를 보였다. 또한, 용량-의존적 종양 감소는 관찰되지 않았고, 억제 효과는 유의적이지 않았다. 더욱이, 통상의 용량 이상 투여에도 불구하고, 종양 성장 억제는 한정적이었다. 10 mpk의 고 용량에서 LY2510924를 이용한 처리는 단지 2개 용량에서 테스트된 10 마리 마우스중 3마리만 사망하는 결과를 가져왔다.
실시예 11, 그리고 표 3-4에서 나타낸 것과 같이, CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포 (증가된 Ca 2+ 신호를 보유함)를 CXCR4 길항제와 ADRB2 저해제로 공동-처리는 CXCR4 길항제 단독을 이용한 단일 처리보다 더 효과적이다. 세포 성장 검정 (실시예 13, 및 도 18A-18E)에서 주지된 바와 같이, CXCR4 저해제는 CXCL12 자극으로 인한 세포 증식 증가를 감소시켰다. CXCR4 저해제의 양을 증가시키면 세포독성이 야기되었다. 이들 결과에서 CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제 조합의 공동-투여는 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 기능 저해 및 종양 성장 저해에 있어서 CXCR4 저해제만으로 투여하는 것보다 더 효과적일 수 있음이 암시된다.
실시예 16. CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 MDA-MB-231 세포가 정위적으로 이종이식된 마우스 (또는 A549 세포 이종이식편 마우스)의 종양 성장에 있어서 CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제 단독 또는 조합의 효과
CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 MDA-MB-231 세포가 정위적으로(orthotopic) 이종이식된 마우스:
CXCR4와 ADRB2를 모두 안정적으로 과다발현시킴으로써 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 MDA-MB-231 세포 ("MDA-MB-231-CXCR4-ADRB2 세포")가 이식된 마우스에서 CXCR4 저해제의 단독 투여는 효과적인 항종양 치료가 아니었다. 도 22A-22C에 나타낸 것과 같이, CXCR4-ADRB2 헤테로머의 존재 (항종양 효과)로 인하여 증가된 종양 성장의 억제는 CXCR4 저해제 (AMD3100 (도 22A), LY2510924 (도 22B), AMD070 (도 22C)), 그리고 ADRB2 저해제 (카르베디롤) 단독으로 또는 조합하여 투여하고, 비교함으로써 평가되었다. Balb/c-nu/nu 암컷 마우스에게 MDA-MB-231-CXCR4-ADRB2 세포 (마우스 두당 1x106 세포)가 정위적으로 이식되었다. 4주 동안 하루에 한 번씩 (총 28회) AMD3100 (2.5 mg/kg, 7.5mg/kg), LY2510924 (1 mg/kg, 3 mg/kg), AMD070 (3 mg/kg, 10mg/kg) 및/또는 카르베디롤 (30 mg/kg)이 투여되었다. AMD3100, LY2510924, 및 AMD070은 피하로 투여되었으며, 그리고 카르베디롤은 경구 투여되었다. 종양 크기는 약물 투여 첫날 종양 크기를 100으로 변환하여 산출하였다 (종양 성장 %). 도 22C에 나타낸 것과 같이, CXCR4 저해제 AMD070 단독 또는 ADRB2 저해제 카르베디롤의 단독 투여는 종양 성장 억제가 제한적인 것을 보여주었다. 그러나, AMD070과 카르베디롤의 공동-투여는 각각의 단일 투여와 비교하였을 때, 종양 성장을 효과적으로 억제하였고, 조합 (카르베디롤이 내포됨)적으로 투여되면 CXCR4 저해제 AMD070의 양이 증가될 때, 조 종양 성장은 또한 용량-의존적으로 감소되었다. 이들 결과는 CXCR4-ADRB2 헤테로머 형성으로 인하여 (항종양 효과), CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제의 공동-투여를 통하여 증가된 종양 크기의 억제가 제공될 수 있음을 암시한다.
CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 A549 세포가 이종이식된 마우스:
종양 성장에 있어서 CXCR4-ADRB2 헤테로머 저해제들의 항-종양 효과를 조사하기 위해, CXCR4와 ADRB2 모두를 안정적으로 과다발현시킴으로써 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 A549 세포 ("A549-CXCR4-ADRB2 세포"), (마우스 두당 1x107 세포)를 누드 마우스의 피하로 주사하였다. 평균 종양 크기가 50-100mm3에 도달하면, CXCR4 저해제 (AMD3100), ADRB2 저해제 (카르베디롤)를 단독 또는 조합을 투여하였다.
도 22D는 단일 투여 또는 공동-투여를 통하여 4주 동안 일일 일회 투여하였을 때(총 28회), CXCR4 저해제 AMD3100 (2.5 mg/kg, 7.5mg/kg) 및/또는 ADRB2 저해제 카르베디롤 (30 mg/kg)의 생체내 항종양 효과에 대해 종양 성장율을 비교한 그래프이고; AMD3100은 피하로 투여되었으며, 카르베디롤은 경구로 투여되었다. 매 3일 또는 4일 차에 종양의 길이(L)와 폭(W)을 측정하고, 다음의 식에 기초하여 종양 용적을 산출함으로써, 종양 성장을 모니터하였다: 용적 = 0.5 LW 2 .
실시예 17A-17B. 리간드 기반의 TR-FRET에 의한 CXCR4-ADRB2 헤테로머 탐지
CXCR4-ADRB2 헤테로머는 시-분해 형광 에너지 전달 (TR-FRET)을 이용하여 평가되었다. TR-FRET는 낮은 배경 시-분해 형광측정법 (TRF)과 FRET 형식의 균질 분석을 결합한다. FRET의 유연성, 신뢰성 및 감도의 증가를 제공하는 결과 분석에는 2개의 형광단, 공여자 및 수용자가 연루된다. 에너지 공급원에 의한 공여자의 여기(excitation)는 두 개가 서로 주어진 근접도 범위 내에 있는 경우, 수용자로 에너지를 전달한다. 수용자는 다시 이의 고유 파장의 빛을 방출하게 된다. A549 세포를 웰당 20,000개 세포의 밀도로 96-웰 플레이트에 씨딩하였다. CXCR4와 ADRB2는 아데노바이러스 감염에 의해 A549 세포에서 일시적으로 과다-발현되었고, 37℃, 5% CO2에서 48시간 항온처리되었다. CXCR4 발현하는 아데노바이러스는 0, 0.1, 0.5, 1.25, 2.5, 5, 10 및 20의 MOI로 처리되었고, ADRB2 발현하는 아데노바이러스는 3배 더 높은 MOI에서 처리되었다. HA-VC를 인코딩하는 아데노바이러스를 이용하여 형질도입된 아데노바이러스의 총량을 조정하였다. CXCR4-ADRB2 헤테로머를 특징화시키기 위해, 라벨된 리간드와 함께 TR-FRET 검정은 형광으로 라벨된 프로프라놀롤과 테르븀 라벨된 TZ14011로 실행되었다. 도 23A에서는 FRET 신호가 CXCR4와 ADRB2 발현 양에 따라 증가되었고(이는 형성되는 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 양에 영향을 주고), 라벨안된 프로프라놀롤을 ADRB2 길항제 프로프라놀롤-g2에 대한 경쟁자로 처리할 때, FRET 신호는 사라지며, 이것은 CXCR4-ADRB2 특이적 신호임을 나타낸다. 이들 결과는 CXCR4-ADRB2 헤테로머가 리간드-기반 TR-FRET 방법에 의해 정량적으로 탐지될 수 있음을 나타낸다.
리간드-형광 복합체 (이때 형광은 GPCR-특이적 리간드에 콘쥬게이트되고)의 사용에 추가하여, 항체-형광 복합체 (이때 형광은 GPCR-특이적 항체 또는 이차 항체에 콘쥬게이트됨)를 TR-FRET에 이용할 수 있다.
U2OS 세포를 웰당 20,000개 세포의 밀도로 96-웰 플레이트에 씨딩하였다. 37℃ 가습 배양기에서 하룻밤 동안 항온처리한 후, CXCR4와 ADRB2는 모두 아데노바이러스 시스템 (0.9-30 MOI의 CXCR4-휴대 아데노바이러스 및 0.5-15 MOI의 ADRB2-휴대하는 아데노바이러스)를 이용하여 일시적으로 과다발현되었다. CXCR4와 ADRB2에 대한 항체-기반 TR-FRET의 탐지를 위한 동적 범위 및 한계를 분석하기 위해, 광범위한 감염 다중성 (MOI)의 CXCR4- 및 ADRB2-휴대하는 아데노바이러스 (Ad-CXCR4와 Ad-ADRB2, 각각)를 채택하였다. 각 아데노바이러스의 48h 감염-후 세포를 세척하고, 실온에서 10분 동안 4% 파라포름알데히드로 고정하였다. 세포를 두 번 세척한 후, 세포를 투과성으로 만들기 위해 0.1% Triton X-100이 포함된 DPBS로 실온에서 10분간 처리하였다. 이어서, 세포를 실온에서 30분 동안 차단시킨 후, 토끼 항-CXCR4 항체와 마우스 항-ADRB2 항체 둘 모두와 함께 실온에서 3시간 동안 항온처리하였다. 해당 세포를 DPBS로 4회 세척후, 테르비움 크립테이트로 라벨링된 염소 항-토끼 IgG 그리고 Alexa Fluor 647로 라벨링된 염소 항-마우스 IgG를 실온에서 1 시간 처리하였다. 그런 다음, 세포를 DPBS로 4회 세척한 후, Varioskan LUX Multimode Microplate Reader를 사용하여 분석했다.
항체-기반 TR-FRET 수행에서 2:1의 Ad-CXCR4: Ad-ADRB2비율에서 최고 신호를 나타내었다 (도 23B). 따라서, Ad-CXCR4와 Ad-ADRB2는 각각 30 MOI 및 15 MOI의 절반에서 연속적으로 희석되었다. HA-VC-휴대하는 아데노바이러스는 음성 대조군으로 이용되었다. FRET 효능은 0.9 MOI의 Ad-CXCR4와 0.5 MOI의 Ad-ADRB2에서 성공적으로 탐지되었으며, 용량-의존성 역시 관찰되었다. 이들 결과에서 항체-기반 TR-FRET는 GPCR 헤테로머 진단을 위한 유망한 도구가 될 수 있다.
실시예 18A-18C. PLA를 통한 CXCR4-ADRB2 헤테로머 탐지 및 혈액 암 및 고형 종양 세포 계통에서 RT-qPCR에 의한 CXCR4 또는 ADRB2 RNA 발현 수준을 통하여 CXCR4 또는 ADRB2의 정량화
개별 GPCRs, CXCR4와 ADRB2에 의해 생성되는 RNA의 양, 그리고 혈액 암 및 고형 종양 세포 계통에서 탐지되는 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 양 간의 상관관계가 검토되었다. CXCR4는 인간의 다양한 암, 예를 들면, 혈액학적 암, 이를 테면, 골수종과 백혈병, 그리고 고형 종양, 이를 테면, 폐암과 유방 암종에서 과다발현된다. 그리고 이러한 과다발현은 재발 위험 증가와 전체 생존율 저하와 상관관계가 있다.
CXCR4 및 ADRB2 RNA의 발현은 qPCR에 의해 테스트된 3가지 고형 종양 세포 계통 모두에서 관찰되었다: A549 (폐암), U2OS (골육종), 그리고 MDA-MB-231 (유방 암종) (도 24A). A549, U2OS, 및 MDA-MB-231 세포에서 내생성 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 내생성 발현 수준을 평가하기 위해, CXCR4와 ADRB2에 대한 두 가지 상이한 일차 항체를 이용하여 PLA를 실행하였다. 생성된 롤링 서클 증폭 (RCA) 산물은 핵 (DAPI로 염색됨) 및 세포질을 덮고 있는 세포 표면 전체에 광범위하게 염색된 적색 형광 신호로 표시되었다 (도 24B). 각 세포에 대한 평균 PLA 신호는 RCA 산물을 세포 수로 나눈 값으로 표시되었다. 평균적으로, 각 MDA-MB-231 세포는 약 60가지 RCA 산물의 값을 가지고 있으며, A549 세포는 약 35가지 RCA 산물을 가지고 있으며, U2OS 세포는 약 20가지 RCA 산물을 가지고 있다 (도 24C). CXCR4와 ADRB2의 RNA 발현 수준은 A549 및 U2OS 세포의 것과 비교하였을 때, MDA-MB-231 세포 계통에서 최고였으며 (CXCR4/ADRB2의 델타 Ct: 7.4/8.8, 10.6/12.4, 12.8/10.5), PLA 값 또한 A549 세포 또는 U2OS 세포와 비교하였을 때, MDA-MB-231 세포에서 최고였다. RNA 발현과 PLA 값 사이에는 유의적인 상관관계가 있음을 알 수 있다. 이러한 결과는 PLA 및 RNA 발현 수준의 분석을 통하여 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 갖는 환자를 스크리닝할 수 있음을 나타낸다.
CXCR4 및 ADRB2 RNA의 발현은 qPCR로 테스트한 다음 3가지 혈액암 세포주 모두에서 관찰되었다: HL60 (백혈병), U937 (백혈병), 그리고 RPMI 8226 (골수종) (도 25A). HL-60, U937 및 RPMI 8226 세포에서 내생성 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 내생성 발현 수준을 평가하기 위해, CXCR4와 ADRB2에 대한 두 가지 상이한 일차 항체를 이용하여 PLA를 실행하였다. 생성된 롤링 서클 증폭 (RCA) 산물은 세포 표면 전체에 착색된 적색 형광 신호로 표시되었다 (도 25B). 각 세포에 대한 평균 PLA 신호는 RCA 산물을 세포 수로 나눈 값으로 표시되었다. 평균적으로, 각 HL-60 세포에는 30가지 RCA 산물 값이 있었고, U937 및 RPMI 8226 세포는 모두 그 뒤를 이었는데, 이들은 HL-60 값의 대략 절반이었다 (도 25C). CXCR4와 ADRB2의 RNA 발현 수준을 정량적 PCR을 통하여 비교하였을 때, ADRB2 발현은 이들 3가지 세포에서 유사하였고 (델타 Ct: 9), 그러나 HL60 세포에서 CXCR4의 발현 수준은 다른 세포 계통 U937 및 RPMI 8226 세포의 두배였다 (델타 Ct 값: 4.7, 5.9, 5.8). 이러한 차이는 PLA 값에서 유사한 패턴을 보이며, RNA 발현 수준과 PLA 값 사이의 유의적인 상관 관계를 나타낸다. 이러한 결과는 현탁 세포의 PLA 신호가 성공적으로 검출될 수 있음을 보여주며, 이는 HL-60 세포가 U937 세포와 RPMI 8226 세포보다 2배 많은 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 갖는다는 것을 보여준다.
CXCR4 헤테로머의 진단은 CXCR4 헤테로머를 발현시키는 대상체를 스크리닝하고, 짝 GPCR의 종류에 따른 선별된 약물 공급에 필수적이다. PLA [우리 연구소에 이미 CXCR4 헤테로머 진단 방법으로 설정됨]는 포르말린 고정된 파라핀 매립된(FFPE: formalin fixed paraffinembedded) 샘플에 들어 있는 항체를 이용하여 고형암 대상체로부터 추출한 조직을 진단하는 방법이다. 이들 결과는 액체 생검 이를 테면, 혈액 암 대상체 샘플, 소변, 및 침전물에서 CXCR4 헤테로머의 탐지 가능성을 제공한다.
실시예 19. CXCR4와 ADRB2 프로토머를 내생적으로 발현시키는 고유 세포에서 강화된 CXCR4 다운스트림 신호전달의 Ca2+ 동원 검정으로 평가
CXCR4-GPCRx 헤테로머, 이를 테면, CXCR4-ADRB2 헤테로머의 속성들은 U937 세포 (도 26A) 및 HL-60 세포 (도 26B) - 이들 각각은 내생적으로 CXCR4와 ADRB2를 모두 발현시킴 -에서 각각 효현제중 하나 또는 둘 모두를 이용한 자극 또는 공동-자극될 때 생성되는 칼슘 신호전달을 측정함으로써 칼슘 동원 검정을 통하여 평가되었다. 칼슘 동원은 FlexStation3을 이용하여 측정되었다.
U937 세포 (도 26A) 및 HL-60 세포 (도 26B) 모두에서, CXCR4 효현제인 CXCL12 단독 (200 nM)으로 자극할 경우 세포간 칼슘 동원을 야기하는 한편, ADRB2 효현제인 포르모테롤 단독 (10 uM)으로 자극할 경우 칼슘 반응을 유도하지 못하였다. 그러나, 두 효현제 (CXCL12 및 포르모테롤, 각각 차례로 200 nM 및 10 uM)는 단일-효현제 자극에 의해 야기되는 반응과 비교하여 U937 세포 (도 26A) 및 HL-60 세포 (도 26B) 모두에서 상당히 증가된 칼슘 반응을 만들었다 (CXCL12를 이용한 단일-자극과 비교하여 U937 세포에서는 약 4배 증가된 칼슘 반응, 그리고 CXCL12를 이용한 단일-자극과 비교하여 HL-60 세포에서 약 8배 증가된 칼슘 반응).
실시예 20. U937 및 HL-60 세포 계통에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머 형성될 때 강화된 CXCR4 다운스트림 신호전달의 Ca2+ 동원 억제- 단일 저해제 처리에 대해 저해제 조합 처리의 비교
U937 세포 및 HL-60 세포에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 증가된 칼슘 반응 억제에 있어서 CXCR4 저해제들의 효능은 대표적인 ADRB2 저해제인 카르베디롤의 존재 하에 또는 부재 하에서 측정되었다(실시예 19). 실시예 19에서 논의된 바와 같이, CXCR4-ADRB2 헤테로머의 증가된 칼슘 반응은 효현제 CXCL12 (200 nM) 및 포르모테롤 (10 μM)에 의해 유도되었고, CXCR4 저해제들 (ADRB2 저해제 카르베디롤 존재 또는 부재 하에서)은 해당 효현제로 이들 세포를 처리하기 전 2시간 시점에 추가되었다. 칼슘 동원은 FlexStation3을 이용하여 측정되었고, Ca2+ 반응의 결과 IC50은 GraphPad Prism 소프트웨어를 이용하여 산출되었다. 표 5에 데이터가 제시된다.
표 5:
Figure pct00006
표 5에서 나타낸 바와 같이, U937 세포에서 CXCR4 저해제인 AMD3100, 울로쿠플루맙 및 TG-0054는 각각 CXCR4 저해제들의 감소된 IC50 값으로 나타나는 바와 같이, 10 μM의 카르베디롤 존재 하에서 CXCR4-ADRB2 신호전달을 더 효과적으로 억제하였다. 구체적으로, TG-0054의 IC50 값은 카르베디롤 존재 하에서 유의미적으로 감소되었다. Ca2+ 반응의 IC50 값은 카르베디롤과 함께 차례로 각각 AMD3100, 울로쿠플루맙, 또는 TG-0054로 공동-처리하면, 약 6.4 배 (3.34 nM에서 0.52 nM로), 약 4.8 배 (1.25 nM에서 0.26 nM로) 그리고 약 69 배 (24 nM에서 0.35 nM로) 감소되었다.
표 5에 나타낸 바와 같이, HL-60 세포에서 각 CXCR4 저해제는 10 μM의 카르베디롤 존재 하에서 CXCR4-ADRB2 신호전달을 더 효과적으로 억제하였다. Ca2+ 반응의 IC50 값은 카르베디롤과 함께 각각 차례로 AMD3100, 울로쿠플루맙, AMD070 및 TG-0054로 공동-처리되면, 약 4.4 배 (1.50 nM에서 0.34 nM로), 약 3.3 배 (0.02 nM에서 0.006 nM로), 약 12.7 배 (3.56 nM에서 0.28 nM로) 그리고 약 12.5 배 (4 nM에서 0.32 nM로) 감소되었다.
이들 결과는 CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제 를 함께 공동-처리하면 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포에서 CXCR4 저해제만으로 단일 처리하는 것보다 Ca2+ 반응을 훨씬 효과적으로 저해함을 시사한다.
실시예 21. MDA-MB-231 세포 계통에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머 형성될 때 강화된 CXCR4 다운스트림 신호전달의 Ca2+ 동원 억제- 단일 저해제 처리에 대해 저해제 조합 처리의 비교
ADRB2의 칼슘 반응 억제에서 ADRB2 저해제들의 효능은 ADRB2를 인코딩하는 아데노바이러스 만으로 형질도입된 MDA-MB-231 세포에서 측정되었으며, 이 신호전달은 살메테롤 (1 μM)로 세포를 자극하였을 때 측정되었다. 표 6에 데이터가 제시된다. 또한, CXCR4와 ADRB2를 인코딩하는 아데노바이러스로 공동-형질도입된 MDA-MB-231 세포에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 증가된 칼슘 반응 (강화된 신호전달) 억제에 있어서 ADRB2 저해제들의 효능은 대표적인 CXCR4 저해제인 AMD3100의 존재 하에 또는 부재 하에서 측정되었다. Ca2+ 유동은 CXCL12 (20 nM) 및 살메테롤 (1 μM)로 MDA-MB-231 세포를 공동-자극하였을 때 측정되었으며, ADRB2 저해제들 (CXCR4 저해제 AMD3100의 존재 하에서 또는 부재 하에서)은 해당 효현제로 세초를 처리하기 전 2시간 시점에 추가되었다. 칼슘 동원은 FlexStation3을 이용하여 측정되었고, 칼슘 반응의 결과 IC50 값은 GraphPad Prism 소프트웨어를 이용하여 산출되었다. 표 6에 데이터가 제시된다.
표 6:
Figure pct00007
표 6에 나타낸 바와 같이, MDA-MB-231 세포에서, 부프라놀롤의 단일 처리는 IC50 값이 0.82 nM로써 ADRB2 신호전달을 저해하였고, 라베타롤의 단일 처리는 IC50 값이 24.81 nM로써 ADRB2 신호전달을 저해하였다. ADRB2 저해제들, 부프라놀롤 또는 라베타롤은 AMD3100 부재 하에서 ADRB2 저해제들의 IC50 값과 비교하여, 감소된 IC50 값으로 나타난 바와 같이, 650 nM (IC90)의 AMD3100 존재 하에서 더 큰 잠재능으로 CXCR4-ADRB2 신호전달을 억제하였는데, 이것은 다. 부프라놀롤의 IC50 값은 단일 처리와 비교하여 AMD3100와 조합될 때 약 33배로 감소되었으며 (3.12 nM에서 0.10 nM로), 한편 라베타롤의 IC50은 단일 처리와 비교하여 AMD3100와 조합될 때 약 107배로 감소되었다 (57.98 nM에서 0.54 nM로). 이들 결과는 CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제 를 함께 공동-처리하면 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포에서 ADRB2 저해제만으로 단일 처리하는 것보다 Ca2+ 반응을 훨씬 효과적으로 저해함을 시사한다.
실시예 22. MDA-MB-231 세포 계통에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머 형성될 때 강화된 CXCR4 다운스트림 신호전달의 Ca2+ 동원 억제- TG-0054 단일 처리에 대해 저해제 조합 처리의 비교
CXCR4의 반응 억제에서 TG-0054, CXCR4 저해제의 효능은 오로지 CXCR4만을 인코딩하는 아데노바이러스 만으로 형질도입된 MDA-MB-231 세포에서 측정되었으며, 이 신호전달은 CXCL12 (20 nM)로 세포를 자극하였을 때 측정되었다. MDA-MB-231 세포 (CXCR4를 발현시킴)에서, TG-0054의 IC50 값 (nM)은 65.78 ± 1.34인 것으로 측정되었다. 그 다음, CXCR4-ADRB2 헤테로머의 강화된 신호전달 억제에서 TG-0054의 효능은 ADRB2 저해제들 (10 uM 농도)의 존재 또는 부재 하에서 CXCR4와 ADRB2를 인코딩하는 아데노바이러스로 공동-형질도입된 MDA-MB-231 세포에서 측정되었다. 표 7에 데이터가 제시된다. Ca2+ 유동은 CXCL12 (20 nM)와 살메테롤 (1 μM)로 MDA-MB-231 세포를 공동-자극하였을 때 측정되었으며, CXCR4 저해제 TG-0054 (ADRB2의 존재 하에서 또는 부재 하에서)은 해당 효현제로 세초를 처리하기 전 2시간 시점에 추가되었다. 칼슘 동원은 FlexStation3을 이용하여 측정되었고, 칼슘 반응의 결과 IC50 값은 GraphPad Prism 소프트웨어를 이용하여 산출되었다. 표 7에 데이터가 제시된다.
표 7:
Figure pct00008
상기에서 나타낸 바와 같이, MDA-MB-231 세포에서, TG-0054의 단일 처리는 CXCR4 만으로 형질도입된 MDA-MB-231에서 IC50 값은 65.78 nM로써, CXCR4 신호전달을 저해하였다. 표 7에 나타낸 바와 같이, TG-0054는 ADRB2 저해제의 부재 하에서 단일 처리와 비교하여, 감소된 IC50 값으로 나타난 바와 같이, ADRB2 저해제들 존재 하에서 더 큰 잠재능으로 CXCR4-ADRB2 신호전달을 억제하였다. TG-0054의 IC50 값은 카르베디롤과 조합하였을 때 약 4645배(92.89 nM에서 0.02 nM로) 감소되었고, 라베타롤과 조합하였을 때 약 3573배 (92.89 nM에서 0.026 nM로) 감소되었으며, 그리고 ADRB2 저해제들인 알프레놀롤, 카라졸롤, 프로파페논, 또는 티몰롤중 하나와 조합하여 처리될 때, 약 10배 또는 그 이상으로 감소되었다. 이들 결과에서 TG-0054와 ADRB2 저해제로 공동-처리하면, CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포에서 TG-0054 만으로 단일 처리한 경우보다 증가된 Ca2+ 반응을 훨씬 효과적으로 저해함을 시사한다.
예시적인 구체예들
구체예 A1. 암을 앓고 있는 대상체의 세포에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 다운스트림 신호전달을 억제시키는 방법, 이 방법은 상기 대상체에게 다음을 투여하는 것을 포함한다:
a) CXCR4 저해제, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르이며; 그리고
b) ADRB2 저해제;
이때:
i) 상기 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 것이며; 그리고
ii) 투여된 부릭사포르와 ADRB2 저해제는 암 대상체에서 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 다운스트림 신호전달을 억제한다.
구체예 A2. CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체에서 암을 치료하는 방법, 이 방법은 상기 대상체에게 다음을 투여하는 것을 포함한다:
a) CXCR4 저해제, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르이며; 그리고
b) ADRB2 저해제;
이때:
i) 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 것이며; 그리고
ii) 투여된 부릭사포르와 ADRB2 저해제는 암 대상체에서 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 다운스트림 신호전달을 억제한다.
구체예 A3. CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체에서 암을 치료하는 방법, 이 방법은 다음을 포함한다:
a) 해당 대상체의 세포가 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 지의 여부를 결정하고, 이때 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 것이며; 그리고
b) 만일 해당 대상체의 세포가 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유한다면, 그러면 해당 암 대상체에게 다음을 투여한다:
i) CXCR4 저해제, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르이며; 그리고
ii) ADRB2 저해제.
구체예 A4. CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체에서 암을 치료하는 방법, 이때 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 것이며, 이 방법은 다음을 포함한다:
1) 해당 대상체가 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포의 보유 여부는 다음에 의해 결정된다: 해당 대상체로부터 생물학적 샘플을 획득하거나 또는 획득하였음으로 해서; 그리고 다음을 결정하기 위해 해당 생물학적 샘플을 분석하거나 또는 분석하였고:
i) 해당 대상체의 세포가 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 함유하는 지 여부; 또는
ii) CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제의 조합이 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)에서 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 헤테로머-특이적 속성들 또는 기능을 변경시키는 지 여부; 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)의 헤테로머-특이적 속성들을 변경시키는 지 여부; 또는 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포들을 보유한 대상체에서 암 진행의 감소 여부; 그리고
2) 만약 해당 대상체가 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한다면, 그러면 암 대상체에게 CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제의 조합을 투여하고, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르이며; 그리고
3) 만약 해당 대상체가 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유하지 않는다면, 그러면 해당 암 대상체에게 부릭사포르 또는 ADRB2 저해제의 단일 저해제를 투여한다.
구체예 A5. CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체에서 암을 치료하는 방법, 이때 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 것이며, 이 방법은 다음을 포함한다:
1) 해당 대상체가 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포의 보유 여부는 다음에 의해 결정된다: 해당 대상체로부터 생물학적 샘플을 획득하거나 또는 획득하였음으로 해서; 그리고 다음을 결정하기 위해 해당 생물학적 샘플을 분석하거나 또는 분석하였고:
i) 해당 대상체의 세포가 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 함유하는 지 여부; 또는
ii) CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제의 조합이 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)에서 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 헤테로머-특이적 속성들 또는 기능을 변경시키는 지 여부; 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)의 헤테로머-특이적 속성들을 변경시키는 지 여부; 또는 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포들을 보유한 대상체에서 암 진행의 감소 여부; 그리고
2) 만약 해당 대상체가 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한다면, 그러면 암 대상체에게 CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제의 조합을 투여하고, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르이며; 그리고
3) 만약 해당 대상체가 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유하지 않는다면, 그러면 해당 암 대상체에게 부릭사포르 또는 ADRB2 저해제의 단일 저해제를 투여하고;
이때:
a) 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체에서 암의 진행은 부릴사포르 또는 부릭사포르 또는 ADRB2 저해제의 단일 저해제 투여와 비교하여, 부릭사포르 또는 ADRB2 저해제의 조합을 해당 암 대상체에게 투여하였을 때 5-100% 범위에서 더 감소되고;
b) 부릭사포르가 단일 저해제로 투여될 때 이의 효능과 비교하여, 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체에게 ADRB2 저해제와 복합하여 투여할 때, 부릭사포르의 효능은 5-2000% 범위로 증가되고; 및/또는
c) ADRB2가 단일 저해제로 투여될 때 이의 효능과 비교하여, 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체에게 부릭사포르와 복합하여 투여될 때, ADRB2 저해제의 효능은 5-2000% 범위로 증가된다.
구체예 A6. CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체에서 암을 치료하는 방법, 이때 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 것이며, 이 방법은 다음을 포함한다:
1) 해당 대상체의 세포가 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 지의 여부는 다음에 의해 결정되고: 해당 대상체로부터 생물학적 샘플을 획득하거나 또는 획득하였음으로 해서 해당 생물학적 샘플을 분석하거나 또는 분석하였음으로 해서 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머가 이 대상체의 세포에 존재하는 지 여부를 결정하고; 이때 해당 생물학적 샘플에서 실행된 분석은 다음중 하나 또는 그 이상이거나 또는 다음중 하나 또는 그 이상을 포함하고: 공동-내재화 분석, 공동-국소화 분석, 제자리 혼성화, 면역조직화학, 면역전자 현미경, 근접성-기반 분석, 공동-면역침전 분석, 효소-연계된 면역흡착 분석 (ELISA), 유동세포분석, RNAseq, RT-qPCR, CXCR4의 발현 수준, ADRB2의 발현 수준, CXCR4와 ADRB2의 발현 수준, 마이크로어레이, 또는 형광 동물 분석; 그리고
2) 만일 해당 대상체의 세포가 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유한다면, 그러면 암 대상체에게 CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제의 조합을 투여하고, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르이며; 그리고
3) 만약 해당 대상체의 세포가 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하지 않는다면, 그러면 해당 암 대상체에게 부릭사포르 또는 ADRB2 저해제의 단일 저해제를 투여한다.
구체예 A7. CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체에서 암을 치료하는 방법, 이때 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 것이며, 이 방법은 다음을 포함한다:
1) 해당 대상체의 세포가 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 지의 여부는 다음에 의해 결정되고: 해당 대상체로부터 생물학적 샘플을 획득하거나 또는 획득하였음으로 해서 해당 생물학적 샘플을 분석하거나 또는 분석하였음으로 해서 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머가 이 대상체의 세포에 존재하는 지 여부를 결정하고; 이때 해당 생물학적 샘플에서 실행된 분석은 다음중 하나 또는 그 이상이거나 또는 다음중 하나 또는 그 이상을 포함하고: 공동-내재화 분석, 공동-국소화 분석, 제자리 혼성화, 면역조직화학, 면역전자 현미경, 근접성-기반 분석, 공동-면역침전 분석, 효소-연계된 면역흡착 분석 (ELISA), 유동세포분석, RNAseq, RT-qPCR, CXCR4의 발현 수준, ADRB2의 발현 수준, CXCR4와 ADRB2의 발현 수준, 마이크로어레이, 또는 형광 동물 분석; 그리고
2) 만일 해당 대상체의 세포가 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유한다면, 그러면 암 대상체에게 CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제의 조합을 투여하고, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르이며; 그리고
3) 만약 해당 대상체의 세포가 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하지 않는다면, 그러면 해당 암 대상체에게 부릭사포르 또는 ADRB2 저해제의 단일 저해제를 투여하고;
이때:
a) 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체에서 암의 진행은 부릴사포르 또는 부릭사포르 또는 ADRB2 저해제의 단일 저해제 투여와 비교하여, 부릭사포르 또는 ADRB2 저해제의 조합을 해당 암 대상체에게 투여하였을 때 5-100% 범위에서 더 감소되고;
b) 부릭사포르가 단일 저해제로 투여될 때 이의 효능과 비교하여, 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체에게 ADRB2 저해제와 복합하여 투여할 때, 부릭사포르의 효능은 5-2000% 범위로 증가되고; 및/또는
c) ADRB2가 단일 저해제로 투여될 때 이의 효능과 비교하여, 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체에게 부릭사포르와 복합하여 투여될 때, ADRB2 저해제의 효능은 5-2000% 범위로 증가된다.
구체예 A8. CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체의 암 치료에 사용을 위한 용도의 약제학적 키트, 이 약제학적 키트는 다음을 포함한다:
a) CXCR4 저해제, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르이며; 그리고
b) ADRB2 저해제;
이때 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 것이다.
구체예 A9. CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체의 암 치료에 사용을 위한 용도의 약제학적 조성물, 이 약제학적 조성물은 다음을 포함한다:
a) CXCR4 저해제, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르이며;
b) ADRB2 저해제; 그리고
c) 약제학적으로 수용가능한 담체;
이때 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 것이다.
구체예 A10. 세포에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 다운스트림 신호전달을 억제하는 방법, 이 방법은 해당 세포에 다음을 투여하는 것을 포함한다:
a) CXCR4 저해제, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르이며; 그리고
b) ADRB2 저해제;
이때:
i) 상기 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 것이며; 그리고
ii) 부릭사포르와 ADRB2 저해제와의 접촉으로 이 세포에서 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 다운스트림 신호전달이 억제된다.
구체예 A11. 구체예 A10의 억제 방법, 이때 이 방법은 해당 세포가 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 지를 결정하는 지를 더 포함한다.
구체예 A12. 세포에서 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 다운스트림 신호전달을 억제하는데 사용을 하기 위한 용도의 약제학적 키트, 이 약제학적 키트는 다음을 포함하고:
a) CXCR4 저해제, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르이며; 그리고
b) ADRB2 저해제;
이때 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 것이다.
구체예 A13. 세포에서 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 다운스트림 신호전달을 억제하는데 사용을 하기 위한 용도의 약제학적 조성물, 이 약제학적 조성물은 다음을 포함한다:
a) CXCR4 저해제, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르이며;
b) ADRB2 저해제; 그리고
c) 약제학적으로 수용가능한 담체;
이때 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 것이다.
구체예 A14. 구체예 A10-A13중 임의의 하나의 억제 방법, 이때 상기 세포는 대상체의 세포다.
구체예 A15. 구체예 A14의 억제 방법, 이때 상기 대상체의 세포는 암 세포다.
구체예 A16. 구체예 A1-A13중 임의의 하나의 억제 방법, 이때 상기 세포는 암 세포다.
구체예 A17. 구체예 A1-A9중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 이 방법은 해당 암 대상체에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 존재를 탐지하는 것을 더 포함한다.
구체예 A18. 구체예 A1-A9 또는 A17중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 이 방법은 해당 암 대상체에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 식별해내는 것을 더 포함한다.
구체예 A19. 구체예 A1-A9 또는 A17-A18중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 이 방법은 해당 대상체로부터 생물학적 샘플을 획득하는 것을 더 포함한다.
구체예 A20. 구체예 A1-A9 또는 A17-A19중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 이 방법은 전술한 대상체로부터 획득된 생물학적 샘플에서 검정을 실행하는 것을 더 포함한다.
구체예 A21. 구체예 A1-A9 또는 A17-A20중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 이 방법은 다음을 더 포함한다:
i) 암 대상체로부터 획득된 생물학적 샘플을 획득하거나 또는 획득하였고;
ii) 당해 암 대상체로부터 획득된 생물학적 샘플에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 존재, 실제 또는 존재 및 실체를 결정하기 위한 진단적 검정을 실행하거나, 또는 실행하였고; 그리고
iii) CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 다운스트림 신호전달을 억제하기 위해, 부릭사포르와 조합하여 투여될 ADRB2 저해제를 선택한다.
구체예 A22. 구체예 A1-A9 또는 A17-A21중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 이 방법은 해당 대상체의 세포가 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 지의 여부 결정이 포함되며, 이 결정은 해당 대상체로부터 획득된 생물학적 샘플 상에서 검정을 실행하는 것을 포함한다.
구체예 A23. 구체예 A1-A9 또는 A17-A22중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 이 방법은 해당 대상체의 세포가 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 지의 여부 결정이 포함되며, 이 결정은 해당 대상체로부터 생물학적 샘플을 획득하고, 그리고 전술한 대상체로부터 획득된 생물학적 상에서 검정을 실행하는 것을 포함한다.
구체예 A24. 구체예 A1-A9 또는 A17-A23중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 전술한 대상체로부터 획득된 생물학적 샘플은 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유한다.
구체예 A25. 구체예 A1-A9 또는 A14-A24중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 상기 대상체의 세포는 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유한다.
구체예 A26. 구체예 A1-A25중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 CXCR4-ADRB2 헤테로머는 다음 특징중 두 가지 또는 그 이상을 갖는다:
1) CXCR4-ADRB2 헤테로머 성분들은 공동-국소화되고, 그리고 직접적으로, 또는 다른자리 입체성의 전달관으로 작용하는 중간체 단백질을 경유하여, 물리적으로 상호작용하고;
2) 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 것이며; 및/또는
3) 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 조합은
i) 세포에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 헤테로머-특이적 속성들을 변경시키고;
ii) 세포에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 헤테로머-특이적 기능을 변경시키고; 및/또는
iii) CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포의 헤테로머-특이적 속성들을 변경시킨다.
구체예 A27. 구체예 A1-A9 또는 A14-A25중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 CXCR4-ADRB2 헤테로머는 다음 특징중 두 가지 또는 그 이상을 갖는다.
1) CXCR4-ADRB2 헤테로머 성분들은 공동-국소화되고, 그리고 직접적으로, 또는 다른자리 입체성의 전달관으로 작용하는 중간체 단백질을 경유하여, 물리적으로 상호작용하고;
2) 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 것이며; 및/또는
3) 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 조합은
i) 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 헤테로머-특이적 속성들을 변경시키고;
ii) 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 헤테로머-특이적 기능을 변경시키고;
iii) CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)의 헤테로머-특이적 속성들을 변경시키고; 및/또는
iv) 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포들을 보유한 대상체에서 암 진행의 감소시킨다.
구체예 A28. 구체예 A1-A27중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 CXCR4-ADRB2 헤테로머는 다음의 특징을 보유하는 것으로 특징화된다: CXCR4-ADRB2 헤테로머 성분들은 세포에서 공동-국소화되고, 직접적으로, 또는 다른자리 입체성의 전달관으로 작용하는 중간체 단백질을 경유하여 물리적으로 상호작용한다.
구체예 A29. 구체예 A1-A28중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 세포에서 공동-국소화되고, 직접적으로, 또는 다른자리 입체성의 전달관으로 작용하는 중간체 단백질을 경유하여 물리적으로 상호작용하는 CXCR4-ADRB2 헤테로머 성분들은 다음중 하나 또는 그 이상에 의해 결정된다: 공동-내재화 분석, 공동-국소화 분석, 제자리 혼성화, 면역조직화학, 면역전자 현미경, 근접성-기반 분석, 공동-면역침전 분석, 효소-연계된 면역흡착 분석 (ELISA), 유동세포분석, RNAseq, RT-qPCR, CXCR4의 발현 수준, ADRB2의 발현 수준, CXCR4와 ADRB2의 발현 수준, 마이크로어레이, 또는 형광 동물 분석.
구체예 A30. 구체예 A1-A29중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 근접성-기반 분석은 공명 에너지 전달 (RET), 생물발광 RET (BRET), 형광 RET (FRET), 시-분해 형광 RET (TR-FRET), 항체-기반 FRET, 리간드-기반 FRET, 이중분자 형광 상보성 (BiFC), 또는 근접성 결찰 검정 (PLA)이거나, 또는 이를 포함한다.
구체예 A31. 구체예 A30의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 TR-FRET는 리간드-기반 TR-FRET이다.
구체예 A32. 구체예 A30의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 TR-FRET는 항체-기반 TR-FRET이다.
구체예 A33. 구체예 A1-A30중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 세포에서 공동-국소화되고, 직접적으로, 또는 다른자리 입체성의 전달관으로 작용하는 중간체 단백질을 경유하여 물리적으로 상호작용하는 CXCR4-ADRB2 헤테로머 성분들은 다음중 하나 또는 그 이상에 의해 결정된다: 공동-내재화 분석, 이중분자 형광 상보성 (BiFC), RT-PCR, RT-qPCR, CXCR4의 발현 수준, ADRB2의 발현 수준, CXCR4와 ADRB2의 발현 수준, 또는 근접성 결찰 검정 (PLA).
구체예 A34. 구체예 A33의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 세포에서 공동-국소화되고, 직접적으로, 또는 다른자리 입체성의 전달관으로 작용하는 중간체 단백질을 경유하여 물리적으로 상호작용하는 CXCR4-ADRB2 헤테로머 성분들은 공동-내재화 분석에 의해 결정된다.
구체예 A35. 구체예 A33의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 세포에서 공동-국소화되고, 직접적으로, 또는 다른자리 입체성의 전달관으로 작용하는 중간체 단백질을 경유하여 물리적으로 상호작용하는 CXCR4-ADRB2 헤테로머 성분들은 이중분자 형광 상보성 (BiFC)에 의해 결정된다.
구체예 A36. 구체예 A33의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 세포에서 공동-국소화되고, 직접적으로, 또는 다른자리 입체성의 전달관으로 작용하는 중간체 단백질을 경유하여 물리적으로 상호작용하는 CXCR4-ADRB2 헤테로머 성분들은 근접성 결찰 검정 (PLA)에 의해 결정된다.
구체예 A37. 구체예 A1-A9 또는 A17-A36중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 상기 검정은 전술한 대상체로부터 획득된 생물학적 샘플 안에 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 존재를 결정한다.
구체예 A38. 구체예 A1-A37중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 상기 검정은 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 CXCR4와 ADRB2 성분들의 공동-국소화 및 상호작용을 결정한다.
구체예 A39. 구체예 A1-A9 또는 A14-A38중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 상기 검정은 대상체의 세포 안에 CXCR4-ADRB2 헤테로머 존재를 결정한다.
구체예 A40. 구체예 A1-A9 또는 A17-A39중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 상기 검정은 전술한 대상체로부터 획득된 생물학적 샘플 안에 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 존재를 결정한다.
구체예 A41. 구체예 A1-A9 또는 A17-A40중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 상기 검정은 해당 대상체에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 존재를 결정한다.
구체예 A42. 구체예 A1-A41중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 CXCR4-ADRB2 헤테로머는 다음 특징을 보유하는 것을 특징으로 한다: 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 것이다.
구체예 A43. 구체예 A1-A9 또는 A14-A42중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 상기 강화된 다운스트림 신호전달은 전술한 대상체의 세포에 있는 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 것이다.
구체예 A44. 구체예 A1-A9 또는 A14-A43중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 상기 강화된 다운스트림 신호전달은 전술한 대상체 세포 안에 CXCR4-ADRB2 헤테로머 존재로 인한 것이다.
구체예 A45. 구체예 A1-A44중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 CXCR4-ADRB2 헤테로머는 강화된 다운스트림 신호전달을 만든다.
구체예 A46. 구체예 A1-A9 또는 A14-A45중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 CXCR4-ADRB2 헤테로머는 대상체의 세포에서 강화된 다운스트림 신호전달을 만든다.
구체예 A47. 구체예 A1-A46중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 상기 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 효현성(agonism)으로 인한 것이다.
구체예 A48. 구체예 A1-A47중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 상기 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 CXCR4 작용으로 인한 것이다.
구체예 A49. 구체예 A1-A47중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 상기 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 ADRB2 작용으로 인한 것이다.
구체예 A50. 구체예 A1-A47중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 상기 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 CXCR4 작용과 ADRB2 작용으로 인한 것이다.
구체예 A51. 구체예 A1-A50중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 상기 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4, 상기 ADRB2, 또는 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 다운스트림이다.
구체예 A52. 구체예 A51의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 상기 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4의 다운스트림이다.
구체예 A53. 구체예 A51의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 상기 강화된 다운스트림 신호전달은 ADRB2의 다운스트림이다.
구체예 A54. 구체예 A51의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 상기 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 다운스트림이다.
구체예 A55. 구체예 A1-A50중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 다운스트림 신호전달은 각각 개별 프로토머 구성에서 CXCR4 프로토머 또는 ADRB2 프로토머로 인한 다운스트림 신호전달과 비교하여 강화된 다운스트림 신호전달이다.
구체예 A56. 구체예 A55의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 다운스트림 신호전달은 각각 개별 프로토머 구성에서 CXCR4 프로토머 로 인한 다운스트림 신호전달과 비교하여 강화된 다운스트림 신호전달이다.
구체예 A57. 구체예 A55의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 다운스트림 신호전달은 각각 개별 프로토머 구성에서 ADRB2 프로토머 로 인한 다운스트림 신호전달과 비교하여 강화된 다운스트림 신호전달이다.
구체예 A58. 구체예 A55의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 다운스트림 신호전달은 각각 개별 프로토머 구성에서 CXCR4 프로토머 및 ADRB2 프로토머로 인한 다운스트림 신호전달과 비교하여 강화된 다운스트림 신호전달이다.
구체예 A59. 구체예 A1-A58중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 상기 강화된 다운스트림 신호전달은 강화된 양의 칼슘 동원이다.
구체예 A60. 구체예 A59의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 상기 강화된 양의 칼슘 동원은 세포내 Ca2+ 검정에 의해 결정된다.
구체예 A61. 구체예 A1-A60중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 다운스트림 신호전달은 세포내 Ca2+ 검정에 의해 결정된다.
구체예 A62. 구체예 A61의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 상기 세포내 Ca2+ 검정은 칼슘 동원 검정이다.
구체예 A63. 구체예 A62의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 상기 칼슘 동원 검정으로 CXCR4-ADRB2 헤테로머가 강화된 다운스트림 신호전달을 만드는지를 결정한다.
구체예 A64. 구체예 A62 또는 A63의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 상기 칼슘 동원 검정은 상기 강화된 다운스트림 신호전달이 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 존재로 인한 것인지를 결정한다.
구체예 A65. 구체예 A1-A64중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 CXCR4-ADRB2 헤테로머는 칼슘 동원 검정을 통하여 결정하였을 때, 다음과 같이 칼슘 동원의 강화된 양을 나타낸다:
a) 세포 안에서 개별 프로토머 구성에서 CXCR4 또는 ADRB2 효현제는 CXCL12와 ADRB2 효현제로 공동-자극시, CXCL12 또는 ADRB2 효현제와의 단일 효현제 자극으로 인한 칼슘 동원 양의 합에 대등한 또는 이보다 적은 칼슘 동원 양을 결과하고; 그리고
b) CXCR4-ADRB2 헤테로머는 CXCL12와 ADRB2 효현제로의 공동-자극할 때, CXCL12 또는 ADRB2 효현제로의 단일 효현제 자극으로 인한 칼슘 동원 양의 합과 비교하여, 강화된 칼슘 동원을 나타낸다.
구체예 A66. 구체예 A1-A65중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때:
i) 칼슘 동원 검정을 통하여 결정하였을 때, 세포에서 개별 프로토머 구성에서 프로토머 CXCR4 또는 ADRB2로부터의 칼슘 동원은 비-상승적이며; 그리고
ii) 칼슘 동원 검정을 통하여 결정하였을 때, 세포에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머로부터의 칼슘 동원은 상승적이다.
구체예 A67. 구체예 A1-A66중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 개별 프로토머 구성:
a) 세포에서 각각의 개별 프로토머 ADRB2 부재 하에서 개별 프로토머 CXCR4; 그리고
b) 세포에서 각각의 개별 프로토머 CXCR4 부재 하에서 개별 프로토머 ADRB2;
CXCL12와 ADRB2 효현제의 공동-자극 시, 칼슘 동원 검정을 통하여 결정하였을 때, CXCL12 또는 ADRB2 효현제로 단일 효현제 자극으로 인한 칼슘 동원 양의 합과 같거나, 또는 이보다 적은 칼슘 동원 양을 결과한다.
구체예 A68. 구체예 A1-A67중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 독립적으로 개별 프로토머 구성:
a) 세포에서 각각의 개별 프로토머 ADRB2 부재 하에서 개별 프로토머 CXCR4; 그리고
b) 세포에서 각각의 개별 프로토머 CXCR4 부재 하에서 개별 프로토머 ADRB2;
CXCL12와 ADRB2 효현제의 공동-자극 시, 칼슘 동원 검정을 통하여 결정하였을 때, CXCL12 또는 ADRB2 효현제로 단일 효현제 자극으로 인한 칼슘 동원 양의 합과 같거나, 또는 이보다 적은 칼슘 동원 양을 결과한다.
구체예 A69. 구체예 A1-A68중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 칼슘 동원 검정을 통하여 결정하였을 때, CXCR4-ADRB2 헤테로머는 CXCL12와 ADRB2 효현제의 공동-자극 시에, CXCL12 또는 ADRB2 효현제로 전술한 세포의 단일 효현제 자극으로 인한 칼슘 동원 양의 합보다 더 큰 칼슘 동원 양을 초래한다.
구체예 A70. 구체예 A1-A69중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 공동-자극으로 인한 칼슘 동원 양은 칼슘 동원 검정을 통하여 결정하였을 때, 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 단일 효현제 자극으로 인한 칼슘 동원 합과 비교하여, 칼슘 동원의 양이 강화된다.
구체예 A71. 구체예 A1-A70중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 상기 CXCL4-ADRB2 헤테로머로 인하여 CXCL12와 ADRB2 효현제로 공동-자극시 강화된 양의 칼슘 동원은 칼슘 동원 검정을 통하여 결정하였을 때, 전술한 세포를 CXCL12 또는 ADRB2 효현제로 단일 효현제 자극으로 인한 칼슘 동원 양의 합보다 더 큰, 칼슘 동원 양을 초래한다.
구체예 A72. 구체예 A71의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 칼슘 동원의 강화된 양은 칼슘 동원 검정을 통하여 결정하였을 때, CXCL12와 ADRB2 효현제의 공동-자극 시, CXCL12 또는 상기 ADRB2 효현제로 전술한 세포의 단일 효현제 자극으로 인한 칼슘 동원의 합보다 적어도 10% 더 크고, 적어도 20% 더 크고, 적어도 30% 더 크고, 적어도 40% 더 크고, 적어도 50% 더 크고, 적어도 75% 더 크고, 또는 적어도 90% 더 크다.
구체예 A73. 구체예 A71 또는 A72의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 상기 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 양의 칼슘 동원은 칼슘 동원 검정을 통하여 결정하였을 때, CXCL12 및 ADRB2 효현제로 공동-자극 시 전술한 세포를 CXCL12 또는 ADRB2 효현제로 단일 효현제 자극으로 인한 칼숨 동원 양의 합보다 적어도 100% 더 큰, 칼슘 동원 양이다.
구체예 A74. 구체예 A71-A73중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 상기 강화된 양의 칼슘 동원은 상승적 양의 칼슘 동원이다.
구체예 A75. 구체예 A74의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포의 칼슘 동원의 상승적 양은 칼슘 동원 검정을 통하여 결정하였을 때, CXCL12 및 ADRB2 효현제로 공동-자극 시, 전술한 세포를 CXCL12 또는 ADRB2 효현제로 단일 효현제 자극으로 인한 칼슘 동원 양의 합보다 적어도 10% 더 크고, 적어도 20% 더 크고, 적어도 30% 더 크고, 적어도 40% 더 크고, 적어도 50% 더 크고, 적어도 75% 더 크고, 또는 적어도 90% 더 큰 칼슘 동원 양이다.
구체예 A76. 구체예 A1-A75중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 상기 강화된 양의 칼슘 동원은 칼슘 동원 검정을 통하여 결정하였을 때, 다음을 특징으로 한다:
a) 세포 안에서 개별 프로토머 구성에서 CXCR4 또는 ADRB2 효현제는 CXCL12와 ADRB2 효현제로 공동-자극시, CXCL12 또는 ADRB2 효현제와의 단일 효현제 자극으로 인한 칼슘 동원 양의 합에 대등한 또는 이보다 적은 칼슘 동원 양을 결과하고; 그리고
b) CXCR4-ADRB2 헤테로머는 CXCL12와 ADRB2 효현제로의 공동-자극할 때, CXCL12 또는 ADRB2 효현제로의 단일 효현제 자극으로 인한 칼슘 동원 양의 합과 비교하여, 강화된 칼슘 동원을 나타낸다.
구체예 A77. 구체예 A1-A76중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 CXCR4-ADRB2 헤테로머는 다음의 특징을 보유하는 것으로 특징화된다: CXCR4 효현제 또는 상기 ADRB2 효현제와 함께 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 단일-자극으로 인한 다운스트림 ERK 신호전달의 양과 비교하여, CXCR4-ADRB2 헤테로머 그리고 CXCR4 효현제 및 ADRB2 효현제의 공동-자극으로 인한 다운스트림 ERK 신호전달의 양이 더 크다.
구체예 A78. 구체예 A77의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 CXCR4 효현제와 ADRB2 효현제의 공동-자극으로 인한 다운스트림 ERK 신호전달의 양은 CXCR4 효현제의 단일-자극으로 인한 양보다 더 크다.
구체예 A79. 구체예 A78의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 CXCR4 효현제와 ADRB2 효현제의 공동-자극으로 인한 다운스트림 ERK 신호전달의 양은 CXCR4 효현제의 단일-자극으로 인한 양보다 적어도 5% 더 크다.
구체예 A80. 구체예 A78의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 CXCR4 효현제와 ADRB2 효현제의 공동-자극으로 인한 다운스트림 ERK 신호전달의 양은 CXCR4 효현제의 단일-자극으로 인한 양보다 적어도 10%, 적어도 25%, 적어도 50%, 적어도 75%, 또는 적어도 90% 더 크다.
구체예 A81. 구체예 A78-A80중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 CXCR4 효현제와 ADRB2 효현제의 공동-자극으로 인한 다운스트림 ERK 신호전달의 양은 CXCR4 효현제의 단일-자극으로 인한 양보다 5-15%, 10-25%, 20-50%, 40-75%, 또는 60-100% 범위에서 더 크다.
구체예 A82. 구체예 A77의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 CXCR4 효현제와 ADRB2 효현제의 공동-자극으로 인한 다운스트림 ERK 신호전달의 양은 ADRB2 효현제의 단일-자극으로 인한 양보다 더 크다.
구체예 A83. 구체예 A82의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 CXCR4 효현제와 ADRB2 효현제의 공동-자극으로 인한 다운스트림 ERK 신호전달의 양은 ADRB2 효현제의 단일-자극으로 인한 양보다 적어도 5% 더 크다.
구체예 A84. 구체예 A82의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 CXCR4 효현제와 ADRB2 효현제의 공동-자극으로 인한 다운스트림 ERK 신호전달의 양은 ADRB2효현제의 단일-자극으로 인한 양보다 적어도 10%, 적어도 25%, 적어도 50%, 적어도 75%, 또는 적어도 90% 더 크다.
구체예 A85. 구체예 A82-A84중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 CXCR4 효현제와 ADRB2 효현제의 공동-자극으로 인한 다운스트림 ERK 신호전달의 양은 ADRB2 효현제의 단일-자극으로 인한 양보다 5-15%, 10-25%, 20-50%, 40-75%, 또는 60-100% 범위에서 더 크다.
구체예 A86. 구체예 A1-A9 또는 A14-A85중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 CXCR4-ADRB2 헤테로머는 다음의 특징을 보유하는 것으로 특징화된다: 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 조합은 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 헤테로머-특이적 속성들을 변경시킨다.
구체예 A87. 구체예 A1-A9 또는 A14-A86중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 CXCR4-ADRB2 헤테로머는 다음의 특징을 보유하는 것으로 특징화된다: 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 조합은 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 헤테로머-특이적 기능을 변경시킨다.
구체예 A88. 구체예 A1-A9 또는 A14-A87중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 CXCR4-ADRB2 헤테로머는 다음의 특징을 보유하는 것으로 특징화된다: 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 조합 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)의 헤테로머-특이적 속성들을 변경시킨다.
구체예 A89. 구체예 A1-A9 또는 A14-A88중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 CXCR4-ADRB2 헤테로머는 다음의 특징을 보유하는 것으로 특징화된다: 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 조합은 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 대상체 유래된 세포(들)의 암 진행을 감소시킨다.
구체예 A90. 구체예 A1-A89중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 복합 투여는 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 다운스트림 신호전달을 억제시킨다.
구체예 A91. 구체예 A1-A90중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 복합 투여는 해당 세포에서 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 다운스트림 신호전달을 억제시킨다.
구체예 A92. 구체예 A1-A9 또는 A17-A91중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 복합 투여는 암 대상체에서 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 다운스트림 신호전달을 억제시킨다.
구체예 A93. 구체예 A1-A9 또는 A17-A92중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 복합 투여는 암 대상체의 세포에서 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 다운스트림 신호전달을 억제시킨다.
구체예 A94. 구체예 A1-A93중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 CXCR4-ADRB2 헤테로머 성분들은 CXCR4와 ADRB2의 개별 프로토머를 포함한다.
구체예 A95. 구체예 A1-A94중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 개별 프로토머 구성에서 CXCR4를 함유하는 세포는 개별 프로토머 ADRB2의 존재 또는 부재 하에서 개별 프로토머 CXCR4를 포함한다.
구체예 A96. 구체예 A95의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 개별 프로토머 구성에서 CXCR4를 함유하는 세포는 개별 프로토머 ADRB2 부재 하에서 전술한 개별 프로토머 CXCR4를 포함한다.
구체예 A97. 구체예 A95의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 개별 프로토머 구성에서 CXCR4를 함유하는 세포는 개별 프로토머 ADRB2 존재 하에서 전술한 개별 프로토머 CXCR4를 포함한다.
구체예 A98. 구체예 A1-A94중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 개별 프로토머 구성에서 ADRB2를 함유하는 세포는 개별 프로토머 CXCR4의 존재 또는 부재 하에서 개별 프로토머 ADRB2를 포함한다.
구체예 A99. 구체예 A98의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 개별 프로토머 구성에서 ADRB2를 함유하는 세포는 개별 프로토머 CXCR4 부재 하에서 전술한 개별 프로토머 ADRB2를 포함한다.
구체예 A100. 구체예 A98의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 개별 프로토머 구성에서 ADRB2를 함유하는 세포는 개별 프로토머 CXCR4 존재 하에서 전술한 개별 프로토머 ADRB2를 포함한다.
구체예 A101. 구체예 A1-A100중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 조합 투여는:
i) 세포에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 헤테로머-특이적 속성들을 변경시키고;
ii) 세포에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 헤테로머-특이적 기능을 변경시키고; 및/또는
iii) CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포의 헤테로머-특이적 속성들을 변경시킨다.
구체예 A102. 구체예 A1-A9 또는 A14-A101중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 조합 투여는:
i) 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 헤테로머-특이적 속성들을 변경시키고;
ii) 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 헤테로머-특이적 기능을 변경시키고;
iii) CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)의 헤테로머-특이적 속성들을 변경시키고; 또는
iv) 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포들을 보유한 대상체에서 암 진행의 감소시킨다.
구체예 A103. 구체예 A102의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 복합 투여로 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 헤테로머-특이적 속성들이 변경된다.
구체예 A104. 구체예 A102 또는 103의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 복합 투여로 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 헤테로머-특이적 기능이 변경된다.
구체예 A105. 구체예 A102-A104중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 복합 투여로 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)의 헤테로머-특이적 속성들이 변경된다.
구체예 A106. 구체예 A102-A105중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 복합 투여로 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포들을 보유한 대상체에서 암 진행이 감소된다.
구체예 A107. 구체예 A102-A106중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 CXCR4-ADRB2 헤테로머는 다음의 특징을 보유하는 것으로 특징화된다: 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 조합은 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 대상체 유래된 세포(들)의 암 진행을 감소시킨다.
구체예 A108. 구체예 A102-A107중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 감소된 암 진행은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)의 암 진행의 감소를 포함한다.
구체예 A109. 구체예 A102-A108중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 감소된 암 진행은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)의 세포 증식의 감소를 포함한다.
구체예 A110. 구체예 A102-A109중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 감소된 암 진행은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)의 세포 이동 감소를 포함한다.
구체예 A111. 구체예 A102-A110중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 암 진행의 감소는 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)의 전이 감소를 포함한다.
구체예 A112. 구체예 A102-A111중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 암 진행의 감소는 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)의 혈관신행의 감소를 포함한다.
구체예 A113. 구체예 A1-A112중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 부릭사포르는 약제학적으로 수용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물로써 투여된다.
구체예 A114. 구체예 A1-A113중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 ADRB2 저해제는 약제학적으로 수용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물로써 투여된다.
구체예 A115. 구체예 A1-A114중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 조합은 순차적으로, 함께, 또는 일제히 투여된다.
구체예 A116. 구체예 A1-A115중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 조합은 약제학적으로 수용가능한 담체를 더 포함하는 약제학적 조성물로써 투여된다.
구체예 A117. 구체예 A1-A116중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 부릭사포르와 ADRB2 저해제는 약제학적 조성물의 조합으로써 투여된다.
구체예 A118. 구체예 A117의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 약제학적 조성물의 조합은 다음을 포함한다:
a) 부릭사포르와 약제학적으로 수용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물; 그리고
b) ADRB2 저해제와 약제학적으로 수용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
구체예 A119. 구체예 A117 또는 A118의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 상기 약제학적 조성물의 조합은 순차적으로, 함께, 또는 일제히 투여된다.
구체예 A120. 구체예 A1-A119중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 상기 암은 혈액학적 암 또는 고형 종양이다.
구체예 A121. 구체예 A120의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 상기 암은 혈액학적 암이다.
구체예 A122. 구체예 A121의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 혈액학적 암은 다음으로 구성된 군에서 선택된다: 림프종, 백혈병, 골수종, 및 다발성 골수종.
구체예 A123. 구체예 A122의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 림프종은 B 세포 림프종, T-세포 림프종, 또는 NK 세포 림프종이다.
구체예 A124. 구체예 A122 또는 A123의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 림프종은 재발된 또는 난치성 림프종이다.
구체예 A125. 구체예 A122-A124중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 림프종은 다음으로 구성된 군에서 선택된다: 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종, 피부 B-세포 림프종, 활성화된 B-세포 림프종, 미만성 거대 B-세포 림프종 (DLBCL), 버킷 림프종, 맨틀 세포 림프종 (MCL), 소포 림프종 (FL), 소포 중심 림프종, 변형된 림프종, 중간 분화된 림프구성 림프종, 중간 림프구성 림프종 (ILL), 미만성 분화가 잘 안된 림프구성 림프종 (PDL), 구심성 림프종, 미만성 작게-절개된 세포 림프종 (DSCCL), 말초 T-세포 림프종 (PTCL), 피부 T-세포 림프종 (CTCL), 맨틀 구역 림프종, 및 저-등급 소포 림프종.
구체예 A126. 구체예 A122의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 백혈병은 다음과 같다:
a) 급성 백혈병 다음으로 구성된 군에서 선택된다: 급성 림프구성 백혈병 (ALL), T-세포 급성 림프구성 백혈병 (T-ALL), B-세포 급성 림프모구성 백혈병, 급성 단핵구성 백혈병, 급성 전-골수성 백혈병, 급성 골수구성 백혈병 (AML), 급성 골수성 백혈병, 급성 골수형성 백혈병 및 골수아세포, 전-골수성, 골수단핵구성, 단핵구성, 그리고 적아구백혈병;
b) 만성 백혈병 다음으로 구성된 군에서 선택된다: 만성 골수구성 (과립구) 백혈병, 만성 골수형성 백혈병 (만성 골수 백혈병; CML), 및 만성 림프구성 백혈병 (CLL); 또는
c) 만성 골수단핵구성 백혈병 (CMML), 만성 호산구성 백혈병, 청소년 골수단핵구성 백혈병 (JMML), 진성다혈구증, 천연 킬러 세포 백혈병 (NK 백혈병), 또는 털모양 세포 백혈병.
구체예 A127. 구체예 A120의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 상기 암은 고형 종양이다.
구체예 A128. 구체예 A127의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 상기 고형 종양은 양성 종양 또는 암이다.
구체예 A129. 구체예 A127의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 상기 고형 종양은 암종 또는 육종이다.
구체예 A130. 구체예 A127의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 상기 고형 종양은 다음으로 구성된 군에서 선택된다: 섬유육종, 점액육종, 지방육종, 연골육종, 골육종, 윤활막육종, 중피종, 악성 상피양 중피종, 유윙 종양, 평활근육종, 횡문근육종, 위암, 결장직장 암, 식도 암, 결장 암종, 림프성 악성종양, 췌장 암, 췌장 선암종, 췌장 관의 선암종, 유방암, 유방 선암종, 유방 관의 선암종, 폐암, 작은 세포 폐 암종, 폐 선암종, 선편평성 폐 암종, 폐포 횡문근육종, 난소 암, 난소 투명 세포 선암종, 난소 점액성 낭선암종, 난소 장액 선암종, 전립선 암, 간세포성 암종, 연 조직 육종, 편평 세포 암종, 기저 세포 암종, 선암종, 땀샘 암종, 갑상선 수질 암종, 유두 갑상선 암종, 갑상선 암종, 갈색 세포종 피지선 암종, 유두모양 암종, 유두모양 선암종, 수질 암종, 기관지 암종, 위장 암, 위 관모양의 선암종, 위의 선편평성 암종, 신장 암, 간내 담관암종,신장 세포 암종, 간종양, 담관 암종, 융모막암종, 윌름 종양, 자궁의 암육종, 자궁내막 선암종, 자궁내막의 간질의 육종, 자궁내막의 암종, 자궁의 암, 고환 종양, 생식세포종, 방광 암종, 흑색종, 다발성 골수종, 다발성 엔도크린 신생물, CNS 종양, 교모세포종, 성상세포종, CNS 림프종, 생식세포종, 수모세포종, 신경신경초종, 뇌실막종, 송과종, 혈관모세포종, 청각 신경종, 희소돌기아교종, 수막종, 신경모세포종, 망막모세포종 그리고 뇌 전이.
구체예 A131. 구체예 A130의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 상기 고형 종양은 다음으로 구성된 군에서 선택된다: 유방암, 폐암, 및 간세포성 암종.
구체예 A132. 구체예 A131의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 상기 고형 종양은 유방암이다.
구체예 A133. 구체예 A131의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 상기 고형 종양은 폐암이다.
구체예 A134. 구체예 A131의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 상기 고형 종양은 간세포성 암종이다.
구체예 A135. 구체예 A1-A9 또는 A17-A134중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 상기 대상체의 생물학적 샘플은 생물학적 유체 샘플이다.
구체예 A136. 구체예 A135의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 액체 생검은 생물학적 유체 샘플 상에서 실행된다.
구체예 A137. 구체예 A135 또는 A136의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 생물학적 유체 샘플은 혈액 샘플, 혈장 샘플, 타액 샘플, 뇌 유체 샘플, 눈의 유체 샘플, 또는 소변 샘플이다.
구체예 A138. 구체예 A1-A9 또는 A17-A137중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 상기 대상체의 생물학적 샘플은 생물학적 조직 샘플이다.
구체예 A139. 구체예 A138의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 조직 샘플 검정은 생물학적 조직 샘플 상에 실행된다.
구체예 A140. 구체예 A138 또는 A139의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 생물학적 조직 샘플은 장기 조직 샘플, 뼈 조직 샘플, 또는 종양 조직 샘플이다.
구체예 A141. 구체예 A1-A140중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 암을 치료하는 방법은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 다운스트림 신호전달을 억제하는 방법이다.
구체예 A142. 구체예 A1-A140중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 다운스트림 신호전달을 억제하는 방법은 암을 치료하는 방법이다.
구체예 A143. 구체예 A1-A9 또는 A17-A142중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체에서 암의 진행은 부릴사포르 또는 부릭사포르 또는 ADRB2 저해제의 단일 저해제 투여와 비교하여, 부릭사포르 또는 ADRB2 저해제의 조합을 해당 암 대상체에게 투여하였을 때 5-100% 범위에서 더 감소된다.
구체예 A144. 구체예 A1-A9 또는 A17-A143중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 부릭사포르가 단일 저해제로 투여될 때 이의 효능과 비교하여, 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체에게 ADRB2 저해제와 복합하여 투여할 때, 부릭사포르의 효능은 5-5000% 범위로 증가된다.
구체예 A145. 구체예 A1-A9 또는 A17-A144중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 ADRB2가 단일 저해제로 투여될 때 이의 효능과 비교하여, 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체에게 부릭사포르와 복합하여 투여될 때, ADRB2 저해제의 효능은 5-5000% 범위로 증가된다.
구체예 A146. 구체예 A1-A9 또는 A17-A145중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 암 대상체에게 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 조합을 투여하면, 단일 저해제 투여와 비교하여 전술한 암 대상체에서 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 다운스트림 신호전달을 5-2000 배 범위에서 억제시킨다.
구체예 A147. 구체예 A1-A9 또는 A17-A146중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 암 대상체에게 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 조합을 투여하면, 각 개별 프로토머 구성에서 CXCR4 프로토머 또는 ADRB2 프로토머로 인한 다운스트림 신호전달의 억제와 비교하여 전술한 암 대상체에서 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 다운스트림 신호전달을 5-2000 배 범위에서 억제시킨다.
구체예 A148. 구체예 A17-A147중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 상기 세포는 암 세포다.
구체예 A149. 구체예 A17-A147중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 상기 세포는 대상체의 세포다.
구체예 A150. 구체예 A149의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 상기 대상체의 세포는 암 세포다.
구체예 A151. 구체예 A1-A150중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 상기 대상체는 암 대상체이다.
구체예 A152. 구체예 A1-A151중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 상기 대상체는 환자다.
구체예 A153. 다음을 포함하는 약제학적 조성물:
a) CXCR4 저해제, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르이며;
b) ADRB2 저해제; 그리고
c) 약제학적으로 수용가능한 담체.
구체예 A154. 구체예 A1-A153중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물, 이때 상기 ADRB2 저해제는 ADRB2의 길항제, ADRB2의 역-효현제, ADRB2의 부분 길항제, ADRB2의 알로스테릴 조절자, ADRB2의 항체, ADRB2의 항체 단편, ADRB2의 리간드, 또는 항체-약물 콘쥬게이트다.
구체예 A155. 구체예 A154의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 상기 ADRB2 저해제는 길항제 ADRB2이다.
구체예 A156. 구체예 A154의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 상기 ADRB2 저해제는 역-효현제 ADRB2이다.
구체예 A157. 구체예 A154의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 상기 ADRB2 저해제는 부분 길항제 ADRB2이다.
구체예 A158. 구체예 A154의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 상기 ADRB2 저해제는 ADRB2의 알로스테릴 조절자다.
구체예 A159. 구체예 A154의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 상기 ADRB2 저해제는 ADRB2의 항체다.
구체예 A160. 구체예 A154의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 상기 ADRB2 저해제는 ADRB2의 항체 단편이다.
구체예 A161. 구체예 A154의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 상기 ADRB2 저해제는 ADRB2의 리간드다.
구체예 A162. 구체예 A154의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 상기 ADRB2 저해제는 항체-약물 콘쥬게이트이다.
구체예 A163. 구체예 A154의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 상기 ADRB2 저해제는 다음으로 구성된 군에서 선택된다:
알프레놀롤(Alprenolol), 아테놀롤(atenolol), 베탁솔롤(betaxolol), 부프라놀롤(bupranolol), 부톡사민(butoxamine), 카라졸롤(carazolol), 카르베딜롤(carvedilol), CGP 12177, 시클로프롤롤(cicloprolol), ICI 118551, ICYP, 라베타롤(labetalol), 레보베타옥솔롤(levobetaxolol), 레보부노롤(levobunolol), LK 204-545, 메토프롤롤(metoprolol), 나돌롤(nadolol), NIHP, NIP, 프로파페논(propafenone), 프로프라놀롤(propranolol), 소탈롤(sotalol), SR59230A, 및 티몰롤(timolol).
구체예 A164. 구체예 A163의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 상기 ADRB2 저해제는 카르베디롤이다.
구체예 A165. 구체예 A1-A9 또는 A17-A164중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 부릭사포르의 치료요법적 유효량이 상기 대상체에게 투여된다.
구체예 A166. 구체예 A1-A9 또는 A17-A164중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 부릭사포르의 준-치료요법적 유효량이 상기 대상체에게 투여된다.
구체예 A167. 구체예 A1-A9 또는 A17-A166중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 ADRB2 저해제의 치료요법적 유효량이 대상체에게 투여된다.
구체예 A168. 구체예 A1-A9 또는 A17-A166중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 ADRB2 저해제의 준-치료요법적 유효량이 대상체에게 투여된다.
구체예 A169. 구체예 A1-A9 또는 A14-A168중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 이 방법 또는 용도는 세포에서, 대상체에서, 또는 대상체에서 획득된 샘플에서 CXCR4 유전자의 발현 수준의 결정을 더 포함하고, 이때 상기 발현 수준이 CXCR4 유전자의 참조 수준보다 더 크다면, 세포, 대상체, 또는 대상체에서 획득된 샘플은 CXCR4-발현시키는 암을 보유하는 것으로 결정된다.
구체예 A170. 구체예 A169의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 상기 암은 CXCR4-발현시키는 암이다.
구체예 A171. 구체예 A169 또는 A170의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 세포에서 CXCR4 발현 수준은 참조 수준보다 더 크다.
구체예 A172. 구체예 A169 또는 A170의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 대상체에서 CXCR4 발현 수준은 참조 수준보다 더 크다.
구체예 A173. 구체예 A169 또는 A170의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 대상체로부터 획득된 샘플에서 CXCR4 발현 수준은 참조 수준보다 더 크다.
구체예 A174. 구체예 A169-A173중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, CXCR4 유전자 발현 수준을 결정할 때, 수준이 참조 수준보다 더 큰 경우, 이 방법 또는 용도는 CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제를 투여하는 것을 포함하며, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르이다.
구체예 A175. 구체예 A1-A9 또는 A14-A168중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 이 방법 또는 용도는 세포에서, 대상체에서, 또는 대상체에서 획득된 샘플에서 ADRB2 유전자의 발현 수준을 결정하는 것을 더 포함하고, 이때 만약 ADRB2 유전자의 발현 수준이 이의 참조 수준보다 더 크다면, 세포, 대상체, 또는 대상체에서 획득된 샘플은 ADRB2-발현시키는 암을 보유하는 것으로 결정된다.
구체예 A176. 구체예 A175의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 상기 암은 ADRB2-발현시키는 암이다.
구체예 A177. 구체예 A175 또는 A176의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 세포에서 ADRB2 발현 수준은 참조 수준보다 더 크다.
구체예 A178. 구체예 A175 또는 A176의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 대상체에서 ADRB2 발현 수준은 참조 수준보다 더 크다.
구체예 A179. 구체예 A175 또는 A176의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 대상체로부터 획득된 샘플에서 ADRB2 발현 수준은 참조 수준보다 더 크다.
구체예 A180. 구체예 A175-179중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, ADRB2 유전자 발현 수준을 결정할 때, 수준이 참조 수준보다 더 큰 경우, 이 방법 또는 용도는 CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제를 투여하는 것을 포함하며, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르이다.
구체예 A181. 구체예 A1-A9 또는 A14-A168의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 이 방법 또는 용도는 세포에서, 대상체에서, 또는 대상체에서 획득된 샘플에서 CXCR4 유전자와 ADRB2 유전자의 발현 수준을 결정하는 것을 더 포함하며, 이때 만약 CXCR4 유전자와 ADRB2 유전자의 발현 수준이 CXCR4 유전자와 ADRB2 유전자의 각각의 참조 수준보다 더 크다면, 세포, 대상체, 또는 대상체에서 획득된 샘플은 CXCR4-발현시키는 암과 ADRB2-발현시키는 암을 보유하는 것으로 결정된다.
구체예 A182. 구체예 A181의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 상기 암은 CXCR4-발현시키는 암과 ADRB2-발현시키는 암이다.
구체예 A183. 구체예 A181 또는 A182의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 세포에서 CXCR4 발현 수준과 ADRB2 발현 수준은 각각 참조 수준보다 더 크다.
구체예 A184. 구체예 A181 또는 A182의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 대상체에서 CXCR4 발현 수준과 ADRB2 발현 수준은 각각 참조 수준보다 더 크다.
구체예 A185. 구체예 A181 또는 A182의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 대상체로부터 획득된 샘플에서 CXCR4 발현 수준과 ADRB2 발현 수준은 각각 참조 수준보다 더 크다.
구체예 A186. 구체예 A181-A185의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 CXCR4 유전자와 ADRB2 유전자 발현 수준을 결정할 때, 수준이 참조 수준보다 더 크다면, 이 방법 또는 용도는 CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제를 투여하는 것을 포함하며, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르이다.
구체예 A187. 구체예 A1-A9 또는 A14-A168중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 이 방법 또는 용도는 세포에서, 대상체에서, 또는 대상체에서 획득된 샘플에서 CXCR4 단백질의 발현 수준의 결정을 더 포함하고, 이때 상기 발현 수준이 CXCR4 단백질의 참조 수준보다 더 크다면, 세포, 대상체, 또는 대상체에서 획득된 샘플은 CXCR4-발현시키는 암을 보유하는 것으로 결정된다.
구체예 A188. 구체예 A187의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 상기 암은 CXCR4-발현시키는 암이다.
구체예 A189. 구체예 A187 또는 A188의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 세포에서 CXCR4 발현 수준은 참조 수준보다 더 크다.
구체예 A190. 구체예 A187 또는 A188의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 대상체에서 CXCR4 발현 수준은 참조 수준보다 더 크다.
구체예 A191. 구체예 A187 또는 A188의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 대상체로부터 획득된 샘플에서 CXCR4 발현 수준은 참조 수준보다 더 크다.
구체예 A192. 구체예 A187-A191의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, CXCR4 단백질 발현 수준을 결정할 때, 수준이 참조 수준보다 더 큰 경우, 이 방법 또는 용도는 CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제를 투여하는 것을 포함하며, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르이다.
구체예 A193. 구체예 A1-A9 또는 A14-A168중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 이 방법 또는 용도는 세포에서, 대상체에서, 또는 대상체에서 획득된 샘플에서 ADRB2 단백질의 발현 수준을 결정하는 것을 더 포함하고, 이때 만약 ADRB2 단백질의 발현 수준이 이의 참조 수준보다 더 크다면, 세포, 대상체, 또는 대상체에서 획득된 샘플은 ADRB2-발현시키는 암을 보유하는 것으로 결정된다.
구체예 A194. 구체예 A193의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 상기 암은 ADRB2-발현시키는 암이다.
구체예 A195. 구체예 A193 또는 A194의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 세포에서 ADRB2 발현 수준은 참조 수준보다 더 크다.
구체예 A196. 구체예 A193 또는 A194의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 대상체에서 ADRB2 발현 수준은 참조 수준보다 더 크다.
구체예 A197. 구체예 A193 또는 A194의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 상기 대상체로부터 획득된 샘플에서 ADRB2 발현 수준은 참조 수준보다 더 크다.
구체예 A198. 구체예 A193-A197중 임의의 하나의 억제 방법의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, ADRB2 단백질 발현 수준을 측정할 때, 수준이 참조 수준보다 클 경우, 이 방법 또는 용도는 CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제를 투여하는 것을 포함하며, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르이다.
구체예 A199. 구체예 A1-A9 또는 A14-A168중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 이 방법 또는 용도는 세포에서, 대상체에서, 또는 대상체에서 획득된 샘플에서 CXCR4 단백질과 ADRB2 단백질의 발현 수준을 결정하는 것을 더 포함하며, 이때 만약 CXCR4 단백질과 ADRB2 단백질의 발현 수준이 CXCR4 단백질과 ADRB2 단백질의 각각 참조 수준보다 더 크다면, 세포, 대상체, 또는 대상체에서 획득된 샘플은 CXCR4-발현시키는 암과 ADRB2-발현시키는 암을 보유하는 것으로 결정된다.
구체예 A200. 구체예 A199의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 상기 암은 CXCR4-발현시키는 암과 ADRB2-발현시키는 암이다.
구체예 A201. 구체예 A199 또는 A200의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 세포에서 CXCR4 발현 수준과 ADRB2 발현 수준은 각각 참조 수준보다 더 크다.
구체예 A202. 구체예 A199 또는 A200의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 대상체에서 CXCR4 발현 수준과 ADRB2 발현 수준은 각각 참조 수준보다 더 크다.
구체예 A203. 구체예 A199 또는 A200의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 대상체로부터 획득된 샘플에서 CXCR4 발현 수준과 ADRB2 발현 수준은 각 참조 수준보다 더 크다.
구체예 A204. 구체예 A199-A203중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 CXCR4 단백질과 ADRB2 단백질 발현 수준을 결정할 때, 그 수준이 각각 참조 수준보다 더 클 경우, 이 방법 또는 용도는 CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제를 투여하는 것을 포함하며, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르이다.
구체예 A205. 구체예 A1-A204의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 상기 ADRB2 저해제는 카르베디롤이다.
구체예 A206. 구체예 A1-A205중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 상기 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 CXCR4 효현제와 ADRB2 효현제의 공동-자극에 대한 강화된 반응이다.
구체예 A207. 구체예 A1-A206중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 상기 강화된 다운스트림 신호전달은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포(들)을 보유하는 대상체에서 강화된 암 진행이다.
구체예 A208. 구체예 A207의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 상기 강화된 암 진행은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포(들)을 보유하는 대상체에서 강화된 세포 증식이다.
구체예 A209. 구체예 A207 또는 A208의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 상기 강화된 암 진행은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포(들)을 보유하는 대상체에서 세포 이동의 강화다.
구체예 A210. 구체예 A207-A209중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 상기 강화된 암 진행은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포(들)을 보유하는 대상체에서 전이의 강화다.
구체예 A211. 구체예 A207-A210중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 상기 강화된 암 진행은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포(들)을 보유하는 대상체에서 종양 성장의 강화다.
구체예 A212. 구체예 A207-A211중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 상기 강화된 암 진행은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포(들)을 보유하는 대상체에서 혈관신생의 강화다.
구체예 A213. 구체예 A207-A212중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 상기 세포(들)은 암 세포(들)이다.
구체예 A214. 구체예 A207-A213중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 상기 세포(들)은 대상체로부터 유래된다.
구체예 A215. 구체예 A207-A214중 임의의 하나의 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물 또는 약제학적 조성물, 이때 상기 세포(들)은 대상체로부터 획득된 생물학적 샘플에서 유래된다.
재료 및 방법
시약
CXCL12는 R&D systems (Minneapolis, Minnesota, EISA)에서 구입하였다. 울로쿠플루맙 및 BKT140는 차례로 Creative Biolabs (Shirley, NY, USA) 및 Chem Scene (Monmouth Junction, NJ, USA)에서 구입하였다. AMD3100은 Cayman Chemical Company (Ann Arbor, MI, USA)에서 구입하였다. AMD070 및 LY2510924는 Medchem express (Princeton, NJ, USA)에서 구입하였다. TG-0054 (Brixafor)는 MedKoo Biosciences, Inc (Triangle Park, North Carolina, USA)에서 구입하였다. 카르베디롤은 4 Chem Laboratory (Korea)에서 구입하였다. 이용된 약물에 관한 정보는 다음과 같다: 재조합 인간 SDF-1α (CXCL12) (PEPROTECH, Cat.300-28A, Rocky Hill, NJ, USA), 살메테롤 (Tocns, Cat.4712, Minneapolis, MN,USA), 카르베디롤 (Tocris, Cat.2685, Minneapolis, MN,USA), AMD3100 (Tocris, Cat.3299, Minneapolis, MN,USA), TG-0054 (MedKoo Biosciencex, Inc., Cat.206522, Morrisville, NC, USA), 부프라놀롤 (Abeam, ab141132, Cambridge, CB2 0AX, UK), 라베타롤 (Prestwick Chemical Library®, Prestw-277), 알프레놀롤 (Prestwick Chemical Library®, Prestw-250, Boulevard Gonthier d'Andernach Parc d'innovation 67400 ILLKIRCH - France), 카라졸롤 (PubChem, Cat. 71739, Bethesda, MD, USA), 프로파페논 (Prestwick Chemical Library®, Prestw-499), 및 티몰롤 (Prestwick Chemical Library®, Prestw-948).
세포 배양물
모든 세포 계통은 American Type Culture Collection (Manassas, VA, USA)에서 구입하였다. A549, MDA-MB-231, U2OS, HL-60, U937 및 RPMI 8226 세포는 10% 태아 소 혈청 (Gibco) 및 1% 페니실린-스트렙토마이신 (Gibco)이 보충된 RPMI 배지 1640 (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA)에서 성장시켰다. 모든 세포 계통은 37℃, 5% CO2 존재 하에서 성장시켰다.
안정적인 세포 계통 구축
하이그로마이신 및 블라스티시딘 저항성을 갖는 대조군 세포 계통으로써, Rluc 및 luc2P를 안정적으로 발현시키는 세포 계통을 확립하기 위하여, 렌티바이러스 스톡 (pLenti-CMV Hygro DEST (Addgene, #17454)에 Rluc유전자와 함께 삽입된 pLenti6-Rluc 발현 구조체의 패키지를 포함)은 ViraPower Lentiviral Packaging Mix (Invitrogen, K497500)와 pLenti6-Rluc 발현 구조체를 293FT 생산자 세포 계통에 공동-형질감염시킴으로써 만들어졌다. 이 렌티바이러스 스톡을 A549 세포 계통으로 형질도입시키고, 이어서 하이그로마이신 (100 pg/mL)으로 선별하였다. Rluc-luc2P를 안정적으로 발현시키는 세포 계통을 확립하기 위하여, 렌티바이러스 스톡 (pLenti6/V5-DEST Gateway™ Vector(Invitrogen, V49610)에 Luc2P 유전자와 함께 삽입된 pLenti6/V5-luc2P 발현 구조체 패키지 포함)는 ViraPower Packaging Mix와 pLenti6/V5-luc2P 발현 구조체를 293FT 생산자 세포 계통에 공동-형질감염시킴으로써 만들어졌다. 이 렌티바이러스 스톡을 A549 세포 계통으로 형질도입시키고, 이어서 블라스티시틴 (5 pg/mL)으로 선별하였다. 그 다음, 항생제에 저항성을 보이는 클론이 선별되었고, RT-qPCR 및 면역형광이 실행되어, 삽입된 유전자 Rluc 및 luc2P의 발현을 확인하였다.
CXCR4를 안정적으로 발현시키는 세포 계통을 확립하기 위하여, 렌티바이러스 스톡 (pLenti-CMV Hygro DEST (Addgene, #17454)에 CXCR4 유전자와 함께 삽입된 pLenti6-CXCR4 발현 구조체의 패키지를 포함)은 ViraPower Lentiviral Packaging Mix (Invitrogen, K497500)와 pLenti6-CXCR4 발현 구조체를 293FT 생산자 세포 계통에 공동-형질감염시킴으로써 만들어졌다. 이 렌티바이러스 스톡을 A549 세포 계통으로 형질도입시키고, 이어서 하이그로마이신 (100 pg/mL)으로 선별하였다. CXCR4-ADRB2 헤테로머를 안정적으로 발현시키는 세포 계통을 확립하기 위하여, 렌티바이러스 스톡 (pLenti6/V5-DEST GatewayTM Vector(Invitrogen, V49610)에 ADRB2 유전자와 함께 삽입된 pLenti6/V5-ADRB2 발현 구조체 패키지 포함)는 ViraPower Packaging Mix와 pLenti6/V5-ADRB2 발현 구조체를 293FT 생산자 세포 계통에 공동-형질감염시킴으로써 만들어졌다. 이 렌티바이러스 스톡을 A549-CXCR4 세포 계통으로 형질도입시키고, 이어서 하이그로마이신 (100 pg/mL) 및 블라스티씨틴 (5 pg/mL)으로 선별하였다. 그러면, 항생제에 내성이 있는 클론을 선별하고, RT-qPCR를 수행하고, 그리고 면역형광법을 수행하여, 삽입된 유전자인 CXCR4 및 ADRB2의 발현을 확인하였다. pLenti CMV Hygro DEST (w117-1)는 Eric Campeau & Paul Kaufman (Addgene plasmid # 17454) (Campeau, E., et al., (2009) A versatile viral system for expression and depletion of proteins in mammalian cells, PLoS One 4, e6529)로부터 기증받았다. CXCR4 cDNA를 LR 재조합을 이용하여 렌티바이러스 벡터 안에 삽입하였다. CXCR4를 인코딩하는 렌티바이러스는 ViraPower Lentiviral Expression Systems (Invirtogen)을 이용하여 만들었다.
MDA-MB-231 유방암 세포에서 CXCR4를 안정적으로 발현시키는 세포 계통을 확립하기 위하여, 렌티바이러스 스톡 (pLenti-CMV Hygro DEST (Addgene, #17454)에 CXCR4 유전자와 함께 삽입된 pLenti6-CXCR4 발현 구조체의 패키지를 포함)은 ViraPower Lentiviral Packaging Mix (Invitrogen, K497500)와 pLenti6-CXCR4 발현 구조체를 293FT 생산자 세포 계통에 공동-형질감염시킴으로써 만들어졌다. 이 렌티바이러스 스톡을 MDA-MB-231 세포 계통으로 형질도입시키고, 이어서 하이그로마이신 (100 μ/mL)으로 선별하였다. CXCR4-ADRB2 헤테로머를 세포가 함유하고 있도록 하기 위해 CXCR4와 ADRB2를 모두 발현시키는 안정적인 세포 계통을 확립하기 위하여, 렌티바이러스 스톡 (pLenti6/V5-DEST GatewayTM Vector (Invitrogen, V49610)에 ADRB2 유전자와 함께 삽입된 pLenti6/V5-ADRB2 발현 구조체 패키지 포함)는 ViraPower Packaging Mix와 pLenti6/V5-ADRB2 발현 구조체를 293FT 생산자 세포 계통에 공동-형질감염시킴으로써 만들어졌다. 이 렌티바이러스 스톡을 MDA-MB-231-CXCR4 세포 계통으로 형질도입시키고, 이어서 하이그로마이신 (100 pg/mL) 및 블라스티씨틴 (5 pg/mL)으로 선별하였다. 그 다음 항생제에 저항성을 보이는 클론이 선별되었고, RT-qPCR 및 면역형광이 실행되어, 삽입된 유전자 CXCR4와 ADRB2의 발현을 확인하였다.
칼슘 동원 검정
MDA-MB-231 인간 유방암 세포는 검정색 투명 바닥 96-웰 플레이트 (Corning Costar, #3340)의 10% FBS가 보충된 100 μL의 RPMI 1640에서 웰당 20,000개 세포를 씨딩하였다. 다음 날, 세포에 10 MOI의 CXCR4와 30 MOI의 GPCRx를 공동-형질도입시켰다. HA-VC를 인코딩하는 아데노바이러스를 이용하여 형질도입된 아데노바이러스의 총량을 조정하였다. 2 일 후, 세포를 지정된 양의 길항제로 처리하였고, Cal 6 (FLIPR® Calcium 6 Assay Kit, by Molecular Devices, Cat. R8191)로 2 hr 동안 항온처리하였다. 그 다음, 세포는 표시된 양의 CXCL12, ADRB2 효현제, 또는 CXCL12와 ADRB2 효현제로 자극되었다. 칼슘 동원은 FlexStation 3 다중-모드 마이크로플레이트 판독기(Multi-Mode Microplate Reader) (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA)를 이용하여 측정되었다. 결과들은 기선(base-line) 활성에 대하여 표준화하였다. 칼슘 동원은 37 ℃에서 490 nm의 여기 파장과 525 nm의 방출 파장을 이용하여 측정되었고,각 그래프의 곡선 아래 면적(AUC)을 계산하여 정량화된다. 데이터는 CXCR4만을 단독으로 발현시키는 세포에서 CXCL12-자극된 칼슘 반응에 대하여 표준화되었다. 데이터는 세 가지 독립적인 실험을 나타낸다 (평균 ± SEM).
상기 칼슘 동원 검정을 이용하여, U937 세포 (인간 골수 백혈병 세포)와 HL-60 세포 (인간 백혈병 세포)는 검정색 투명 바닥 96-웰 플레이트 (Corning Costar, #3340)에서 10% FBS가 보충된 100 μL의 RPMI 1640에서 웰당 100,000개 세포를 씨딩하였다. 그리고 이들 세포를 100 x g에서 1 분 동안 원심분리하였다. 세포를 검정 완충액 (페놀 레드 없이 Hank의 균형 염 용액)에서 희석시킨 Cal 6 (FLIPR® Calcium 6 Assay Kit by Molecular Devices, Cat. R8191)으로 착색시키고, 2 hr 동안 항온처리하였다. 필요하다면, 길항제는 효현제 처리 2시간 전에 추가하였다. 세포를 표시된 양의 CXCR4 효현제 (CXCL12, 200 nM), ADRB2 효현제 (포르모테롤, 10μM)로 자극하였다. 칼슘 동원은 FlexStation 3 다중-모드 마이크로플레이트 판독기(Multi-Mode Microplate Reader) (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA)를 이용하여 측정되었다. 세포내 Ca2+은 37 ℃에서 490 nm의 여기 파장과 525 nm의 방출 파장을 이용하여 측정되었다. 결과들은 기선(base-line) 활성에 대하여 표준화하였다. 칼슘 동원은 각 그래프의 곡선-아래-면적(AUC)를 산출함으로써 정량화되었다. 데이터는 CXCR4만을 단독으로 발현시키는 세포에서 CXCL12-자극된 칼슘 반응에 대하여 표준화되었다. 그리고 IC50 값은 GraphPad Prism 소프트웨어를 이용하여 산출되었다.
웨스턴 블랏 분석
세포를 웰당 5 × 105개 세포의 밀도로 6-웰 플레이트에 씨딩하였다. 혈청 부족 16 시간 후, 이들 세포를 10 nM의 SDF-1 (PEROTECH, #300-28A) 및 살메테롤 (TOCRIS, #4712)로 MDA-MB-231, MDA-MB-231-CXCR4, 및 MDA-MB-231-CXCR4-ADRB2 세포의 경우 20분 동안 처리하였고, A549, A549-CXCR4, A549-CXCR4-ADRB2 세포의 경우 10분 동안 처리하였다. 그 다음, 이들 세포는 포스포타제 저해제 칵테일 (Roche, #4906845001)과 프로테아제 저해제 칵테일 (Thermo Fisher Scientific, #A32953)이 보충된, NP-40 용해 완충액 (Thermo Fisher Scientific, #FNN0021)을 이용하여 수거하였다. 세포 용해물의 단백질 농도는 Bio-Rad 단백질 검정 (Bio-Rad, #5000006)을 통하여 결정하였다. 20 μg의 단백질 샘플은 환원 SDS-PAGE를 거치고, 건조 전달 시스템 (Thermo Fisher Scientific, #IB21001)을 이용한 PVDF (폴리비닐리덴 디플로라이드)로 옮겼다. 막은 1 시간 동안 Tris-완충된 염수에서 5% 탈지유 (BD Difco, #232100)와 1% Tween-20으로 차단시켰고, 포스포-ERK1/2 Thr202/Tyr204 (Cell Signaling Technology, #4370) 및 전체-ERK1/2 (Cell Signaling Technology, #4695) 항체들과 함께 항온처리되었다. 항원-항체 복합체들은 양고추냉이 과산화효소 연결된 이차 항체들 (Cell Signaling Technology)과 함께 항온처리하고, 이어서 SuperSignal West Femto Maximum Sensitivity Substrate (Thermo Fisher Scientific, #34096)과 함께 항온처리하여 탐지되었다. 웨스턴 블랏 영상을 캡쳐하고, iBright Western Blot Imaging System (Thermo Fisher Scientific, #A32752)을 이용하여 분석하였다.
정량적 중합효소 연쇄 반응 (qPCR)
TRIzol (Invitrogen)를 이용하여 전체 RNA를 추출하였고, DNase I (Sigma)로 처리 후 1μg의 전체 RNA로부터 cDNA를 합성하였다. qPCR은 SensiFAST SYBR 키트 (Bioline)를 이용하여 실행되었다. 프라이머 서열은 다음과 같다:
ADRB2-F: 5'-CTCTTCCATCGTGTCCTTCTAC-3' (서열 식별 번호:1),
ADRB2-R: 5'-AATCTTCTGGAGCTGCCTTT-3' (서열 식별 번호:2);
CXCR4-F: 5'- CCACCATCTACTCCATCATCTTC-3' (서열 식별 번호:3),
CXCR4-R: 5'-ACTTGTCCGTCATGCTTCTC-3' (서열 식별 번호:4);
β-액틴-F: 5'-GGAAATCGTGCGTGACATTAAG-3' (서열 식별 번호:5),
β-액틴-R: 5'-AGCTCGTAGCTCTTCTCCA-3' (서열 식별 번호:6); 임계 사이클 (Ct)은 QuantStudio 3 Real-Time PCR 시스템 (Thermo Fisher Scientific)을 이용하여 산출되었다. 델타 Ct (ACt)는 CtSOI(관심대상 서열)와 Ct RS(참조 서열), 통상의 하우스 키핑(house keeping) 서열 간의 상이성에 상응한다; 델타 Ct (ACt)= Ct(CXCR4 또는 ADRB2)-Ct (액틴).
GPCR cDNAs를 함유하는 아데노바이러스 벡터의 구축
인간 GPCR cDNA 클론은 Missouri S&T cDNA Resource Center (Rolla, MO, USA)로부터 구하였다. GPCR cDNAs는 PCR에 의해 증폭되었고, pDONR201 벡터 안에 클로닝되었다. GPCR을 인코드하는 아데노바이러스는 GPCR을 포함하는 엔트리 클론과 pAdHTS 벡터 사이의 시험관내 LR 재조합을 통하여 얻었고, 그리고 기존에 설명된 바와 같이 (Choi, E.W., et al., (2012) AdHTS: a high-throughput system for generating recombinant adenoviruses, J Biotechnol 162, 246-252; 그리고 Song, Y.B., et al., (2014)) AdHTS 시스템을 이용하여 293A 세포로 후속적으로 형질감염되었다.
증식 검정
A549 더블 네가티브 (RLuc-lucP), 또는 CXCR4와 ADRB2 모두를 과다발현시키는 A549-CXCR4-ADRB2 세포 계통을 96-웰 플레이트에서 웰당 1x104 세포의 밀도로 플레이팅하였고, 그리고 24 hr 동안 흡착이 되도록 배양 배지에서 항온처리하였다. 세척-후, 무-혈청 RPMI1640 ± SDF-Iα (표시된 약물과 함께, 또는 이런 약물 없이)를 추가하였고, 해당 세포를 37℃, 5% CO2에서 72 hr 동안 항온처리하였다(씨딩 후 96 hr) 배양이 끝나면 제조사의 지시에 따라 Prestoblue Cell Viability Reagent (Thermo Fisher Scientific, Cat. A13262)를 사용하여 세포 증식을 평가했다. 간략하게 설명하자면, 세포를 37℃에서 1 hr 동안 1x Prestoblue Cell Viability Reagent에서 항온처리하였다. 560 nm에서 여기(excitation), 그리고 590 nm에서 방출(emission)에서 Varioskan FUX 다중모드 마이크로플레이트 판독기 (Thermo Fisher Scientific)를 이용하여 형광을 측정하였다. 탐지된 형광 양은 웰에 존재하는 세포의 수에 직접적으로 비례한다. 결과는 3중 웰 값±SEM로 평균 비율로 표시된다 (형광 Dmg/형광 비히클만).
마우스 이종이식편 모델
5-주령의 암컷 Balb/c-nu/nu 마우스는 Envigo (France)로부터 구하였고, 특정 병원균-없는 동물 시설에 유지시켰다. 동물 사용 및 안락사에 대한 모든 프로토콜은 동물 보호법(Animal Protection Act) 근거한 Qubest Bio (한국) 동물 실험 윤리위원회(Animal Experimental Ethics Committee)의 승인을 받았다. 1x107 세포의 A549 또는 A549-CXCR4-ADRB2는 100 μL의 포스페이트-완충된 염수 (PBS)에 현탁되었고, 후속적으로 마우스 오른쪽의 쇄골과 흉벽 사이의 겨드랑이 부위에 피하로 이식하였다. 매 3일 또는 4일 차에 전자 칼리퍼(electronic caliper)를 이용하여 종양의 길이(L)와 폭(IV)을 측정하고, 다음의 식에 기초하여 종양 용적을 산출함으로써, 종양 성장을 모니터하였다: 용적 = 0.5 LW 2 .
항-종양 효과 연구
CXCR4 저해제의 항종양 효능을 테스트하기 위하여, 폐암 세포 계통인 A549에서 CXCR4와 ADRB2를 과다발현시키는 A549-CXCR4-ADRB2 세포 계통을 BALB/c-nu에게 피하 투여하였다(두당 1x107 세포/100pL PBS). 종양 크기가 50-100 mm3에 도달될 때, 열 마리 마우스 군에게 비히클 (PBS 안에 1% 디메틸셀룰로오스), AMD3100 (7.5 mpk, PBS에서 재형화된 22.5 mpk), LY2510924 (3 mpk, PBS에서 재형화된 10 mpk), AMD070 (10 mpk, PBS에서 1% 디메틸셀룰로오스에서 재형화된 30 mpk) 또는 TG-0054 (10 mpk, PBS 에서 재형화된 30 mpk) 또는 카르베디롤 (PBS에서 1% 디메틸셀룰로오스에서 재형화된20 mpk)를 투여하였다. 4주 동안 하루에 한 차례(총 28회) AMD3100, LY2510924 및 TG-0054는 피하로 투여되었고, AMD070 와 카르베디롤은 경구로 투여되었다. 매 3일 또는 4일 차에 종양의 길이)/.)와 폭)
Figure pct00009
)를 측정함으로써 종양 성장은 모니터되었다: 용적 = 0.5 LW 2 .
정위(Orthotopic) 모델
MDA-MB-231 세포 또는 MDA-MB-231-CXCR4-ADRB2 세포를 FBS 프리(free) 배지를 이용하여 Balb/c-nu/nu 암컷 마우스에게 정위적으로 투여하였다(두당 5x106 세포 (100 pL 세포 + 100 pL Matrigel)) 다음과 같은 방식으로 투여하기 전, 세포를 Matrigel™ (BD, 354248)로 처리하였다. 1) 투여에 사용되는 Matrigel과 주사기와 바늘도 투여 시까지 10℃ 조건을 유지한다. 2) Matrigel은 세포 현탁액과 50:50의 비율로 혼합되며, 세포 파괴를 방지하기 위해 23G의 바늘 크기를 사용한다.
투여 전 부위 (유두 2와 3 사이)에 바늘 끝을 놓고, 좌우로 움직여 넓은 피하 주머니를 만든다. Matrigel 혼합물(마트리겔: 세포 현탁액 = 50:50)을 피하 주머니에 주입한다. 주사 부위에 액체가 엎질러지지 않았는 지를 확인한 후, 동물을 사육 상자에 넣는다. 종양 크기가 약 50-100 mm3에 도달될 때, CXCR4 저해제 또는 ADRB2 저해제 단독 또는 조합으로 표시된 용량을 4주 동안 매일 처리하였다. 약물 처리 당일을 1일차로 특정한다. AMD3100 (2.5 mg/kg, PBS에서 7.5mg/kg), LY2510924 (1 mg/kg, PBS에서 3 mg/kg), AMD070 (3 mg/kg, PBS에서 1% 메틸셀룰로오스에서 10 mg/kg) 및/또는 카르베디롤 (PBS에서 1% 메틸셀룰로오스에서 30 mg/kg)를 4주 동안 하루에 한 번씩 (총 28회) 투여하였다. AMD3100, LY2510924, 및 AMD070은 피하 투여되었으며, 카르베디롤은 경구 투여되었다. 종양 크기는 약물 투여 첫날 종양 크기를 100으로 변환하여 산출하였다. 결과는 5마리 개체의 평균 ± 표준 편차로 나타낸다.
항체 TR-FRET
TR-FRET 검정에 앞서, 10,000개 세포를 96-웰 절반-면적 플레이트(Corning)의 각 웰에 도말하였다. 37℃ 가습 배양기에서 하룻밤 동안 항온처리한 후, CXCR4와 ADRB2는 모두 아데노바이러스 시스템 (0.9-30 MOI의 CXCR4-휴대 아데노바이러스 및 0.5-15 MOI의 ADRB2-휴대하는 아데노바이러스)를 이용하여 일시적으로 과다발현되었다. 각 아데노바이러스의 48h 감염-후 세포를 DPBS로 두 차례 세척하고, 실온에서 10분 동안 4% 파라포름알데히드로 고정하였다. 세포를 두 번 세척한 후, 세포를 투과성으로 만들기 위해 0.1% Triton X-100이 포함된 DPBS로 실온에서 10분간 처리하였다. 그 다음 세포를 2% 소 혈청 알부민 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA)이 보충된 DPBS로 실온에서 30분 동안 차단시키고, 이어서 토끼 항-CXCR4 항체 (#ab124824, abeam)와 마우스 항-ADRB2 항체 (#sc271322, Santa Cruz Biotechnology) 모두와 함께, 실온에서 3 시간 동안 함께 항온처리하였다. 해당 세포를 DPBS로 4회 세척후, 테르비움 크립테이트(Cisbio, Bedford, MA, USA) 로 라벨링된 염소 항-토끼 IgG 그리고 Alexa Fluor 647 (Thermo Fisher)로 라벨링된 염소 항-마우스 IgG를 실온에서 1 시간 처리하였다. 그런 다음, 세포를 DPBS로 4회 세척한 후, Varioskan LUX Multimode Microplate Reader(Thermo Fisher Scientific)를 사용하여 분석했다. FRET 비율은 520 nm에서 수용자 FRET 신호와 620 nm에서 공여자 방출 사이의 비율로 각 웰에 대해 간단하게 산출된다.
FRET 비율= 520 nm에서 신호/620 nm에서 신호 X 10000
결과 데이터는 FRET 효율성을 나타낸다. A F%의 계산은 다른 FRET 비율을 기반으로 한다.
AF%=(비율샘플 - 비율음성)/비율음성X100
AF%는 공여자 농도의 변화를 고려하고, 음성 대조군과 비교하여 FRET 증가의 백분율에 상응한다. 그러나, AF% 매개변수는 동일한 공여자 - 리간드 농도로 수행되지 않은 실험들은 비교하지 못한다.
리간드 TR-FRET
A549 세포를 웰당 20,000개 세포의 밀도로 96-웰 플레이트(Corning, New York, USA #3688)에 씨딩하였다. CXCR4와 ADRB2는 아데노바이러스 감염에 의해 A549 세포에서 일시적으로 과다-발현되었고, 37℃, 5% CO2에서 48시간 항온처리되었다. CXCR4 발현시키는 아데노바이러스는 0, 0.1, 0.5, 1.25, 2.5, 5, 10 및 20의 MOI로 처리되었고, ADRB2 발현하는 아데노바이러스는 3배 더 높은 MOI에서 처리되었다. HA-VC를 인코딩하는 아데노바이러스를 이용하여 형질도입된 아데노바이러스의 총량을 조정하였다.
CXCR4:ADRB2 헤테로머를 특징화시키기 위해, 라벨된 리간드와 함께 TR-FRET 검정은 형광으로 라벨된 프로프라놀롤과 테르븀 라벨된 TZ14011(Cisbio, USA)로 실행되었다. CXCR4와 ADRB2로 감염시킨 후 18시간 시점에, 해당 리간드를 별도로 얼음-냉각된 Tris-KREBS 완충액 (20 mM Tris-HCl, 118 mM NaCl, 5.6 mM 글루코스, 1.2 mM KH2PO4, 1.2 mM MgSO4, 4.7 mM KCl, 1.8 mM CaCh, pH 7.4)에서 준비하고, 얼음에서 유지시킨다 (15℃ 이하에서 작업하고, 모든 내재화 현상은 회피한다). 이 단계에서, 모든 용액은 Tris-KREBS 완충액을 이용하여 원하는 최종 투입량으로 5회 준비하였다. 세포는 96-웰 플레이트에서 10 nM TZ14011-tb, 20 nM 프로프라놀롤-g2(Cisbio, USA #L0011GRE)와 10 mM 라벨안된 프로프라놀롤 (PRESTWICK CHEMICAL, France)과 함께 암 상태에서 18 hr 동안 4℃에서 항온처리함으로써, 해당 세포를 라벨링시키고, TR-FRET 신호는 Varioskan LUX Multimode (Thermo Fisher Scientific, USA) 플레이트 판독기를 이용하여 측정하였다. 조제물은 334 nm에서 여기되었고, 형광 방출은 VARIOSKAN의 수용체-의존적으로 공여자의 경우 620 nm(TZ14011-Tb) 및 520 nm(Propranolol-g2)에서 측정되었다. 데이터 분석은 항체 TR-FRET 분석의 경우와 동일하다.
근접성 결찰 검정 (PLA)
언폴드 PLA는 제조업체의 프로토콜(Olink Proteomics, Uppsala, Sweden)에 따라 수행되었다. 분석에 사용된 세포는 부유(floating)하기 때문에, 모든 재현탁 단계는 2,000rpm에서 3분 동안 원심분리하여 수행되었다. 각 세척 단계는 모든 반응 사이에 원심분리를 사용하여 두 번 수행되었다. 배양된 세포를 1mL의 DPBS(Thermo Fisher Scientific)로 세척한 후, 세포를 4% 파라포름알데히드에 실온에서 10분간 고정하였다. 그런 다음, 세포를 0.1% Triton X-100을 함유하는 DPBS에 투과화하고, 37℃에서 1시간 동안 차단 용액에서 차단하였다. 그런 다음, 차단 용액을 제거하였고, 세포를 일차 항체 용액으로 재현탁시켰다. 마우스 항-CXCR4 항체 (#35-8800, Thermo Fisher Scientific) 와 토끼 항-ADRB2 항체 (#PA5-33333, Thermo Fisher Scientific) 모두 항체 희석제에서 희석되었다 (차례로 각각 1:200 및 1:2000). 37℃에서 1시간 동안 항온처리한 후, PLA 프로브를 항체 희석제에 1:50으로 희석하였다. 프로브를 세포와 함께 37℃에서 1시간 동안 항온처리하였다. 프로브를 37℃에서 1시간 동안 절단시킨 후, 37℃에서 30분 동안 결찰 단계를 수행하였다. 그런 다음, 증폭 혼합물을 37℃에서 100분 동안 세포에 처리했다. DAPI(Vector Laboratories)가 있는 VECTASHIELD Antifade Mounting Medium 20 μL를 세포에 탑재한다. PLA 영상은 IN Cell Analyzer 2500 (GE Healthcare)로 획득하였다.
본 명세서에 언급된 모든 공보 및 특허 출원은 각각의 개별 공보 또는 특허 출원이 구체적이고 개별적으로 참조로 포함된 것으로 표시되는 것과 동일한 정도로 본원에 이들의 전문이 참고자료로 편입된다.
바람직한 구체예들이 여기에 도시되고 설명되었지만, 이러한 구체예들은 단지 예시로서 제공되는 것임을 당업자는 명백하게 인지할 것이다. 하기 청구범위는 본 발명의 범위를 정의하며 이러한 청구범위에 속하는 방법들 및 구성들 및 이들의 균등예들은 청구범위에 의해 뒷받침되는 것으로 본다.
SEQUENCE LISTING <110> GPCR THERAPEUTICS, INC. <120> GPCR HETEROMER INHIBITORS AND USES THEREOF <130> 14462-012-228 <140> <141> <150> 63/022,845 <151> 2020-05-11 <150> 62/849,755 <151> 2019-05-17 <160> 6 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer DNA sequence of ADRB2-F <400> 1 ctcttccatc gtgtccttct ac 22 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer DNA sequence of ADRB2-R <400> 2 aatcttctgg agctgccttt 20 <210> 3 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer DNA sequence of CXCR4-F <400> 3 ccaccatcta ctccatcatc ttc 23 <210> 4 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer DNA sequence of CXCR4-R <400> 4 acttgtccgt catgcttctc 20 <210> 5 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer DNA sequence of Beta-actin-F <400> 5 ggaaatcgtg cgtgacatta ag 22 <210> 6 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer DNA sequence of Beta-actin-R <400> 6 agctcgtagc tcttctcca 19

Claims (215)

  1. 암을 앓고 있는 대상체의 세포에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 다운스트림 신호전달을 억제시키는 방법에 있어서, 이 방법은 상기 대상체에게 다음을 투여하는 것을 포함하는, 방법:
    a) CXCR4 저해제, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르이며; 그리고
    b) ADRB2 저해제;
    이때:
    i) 상기 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 것이며; 그리고
    ii) 투여된 부릭사포르와 ADRB2 저해제는 암 대상체에서 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 다운스트림 신호전달을 억제한다.
  2. CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체에서 암을 치료하는 방법에 있어서, 이 방법은 상기 대상체에게 다음을 투여하는 것을 포함하는, 방법:
    a) CXCR4 저해제, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르이며; 그리고
    b) ADRB2 저해제;
    이때:
    i) 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 것이며; 그리고
    ii) 투여된 부릭사포르와 ADRB2 저해제는 암 대상체에서 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 다운스트림 신호전달을 억제한다.
  3. CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체에서 암을 치료하는 방법에 있어서, 이 방법은 다음을 포함하는 방법:
    a) 해당 대상체의 세포가 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 지의 여부를 결정하고, 이때 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 것이며; 그리고
    b) 만일 해당 대상체의 세포가 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유한다면, 그러면 해당 암 대상체에게 다음을 투여한다:
    i) CXCR4 저해제, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르이며; 그리고
    ii) ADRB2 저해제.
  4. CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체에서 암을 치료하는 방법에 있어서, 이때 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 것이며, 이 방법은 다음을 포함하는 방법:
    1) 해당 대상체가 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포의 보유 여부는 다음에 의해 결정된다: 해당 대상체로부터 생물학적 샘플을 획득하거나 또는 획득하였음으로 해서; 그리고 다음을 결정하기 위해 해당 생물학적 샘플을 분석하거나 또는 분석하였고:
    i) 해당 대상체의 세포가 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 함유하는 지 여부; 또는
    ii) CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제의 조합이 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)에서 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 헤테로머-특이적 속성들 또는 기능을 변경시키는 지 여부; 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)의 헤테로머-특이적 속성들을 변경시키는 지 여부; 또는 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포들을 보유한 대상체에서 암 진행의 감소 여부; 그리고
    2) 만약 해당 대상체가 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한다면, 그러면 암 대상체에게 CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제의 조합을 투여하고, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르이며; 그리고
    3) 만약 해당 대상체가 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유하지 않는다면, 그러면 해당 암 대상체에게 부릭사포르 또는 ADRB2 저해제의 단일 저해제를 투여한다.
  5. CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체에서 암을 치료하는 방법에 있어서, 이때 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 것이며, 이 방법은 다음을 포함하는, 방법:
    1) 해당 대상체가 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포의 보유 여부는 다음에 의해 결정된다: 해당 대상체로부터 생물학적 샘플을 획득하거나 또는 획득하였음으로 해서; 그리고 다음을 결정하기 위해 해당 생물학적 샘플을 분석하거나 또는 분석하였고:
    i) 해당 대상체의 세포가 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 함유하는 지 여부; 또는
    ii) CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제의 조합이 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)에서 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 헤테로머-특이적 속성들 또는 기능을 변경시키는 지 여부; 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)의 헤테로머-특이적 속성들을 변경시키는 지 여부; 또는 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포들을 보유한 대상체에서 암 진행의 감소 여부; 그리고
    2) 만약 해당 대상체가 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한다면, 그러면 암 대상체에게 CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제의 조합을 투여하고, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르이며; 그리고
    3) 만약 해당 대상체가 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유하지 않는다면, 그러면 해당 암 대상체에게 부릭사포르 또는 ADRB2 저해제의 단일 저해제를 투여하고;
    이때:
    a) 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체에서 암의 진행은 부릴사포르 또는 부릭사포르 또는 ADRB2 저해제의 단일 저해제 투여와 비교하여, 부릭사포르 또는 ADRB2 저해제의 조합을 해당 암 대상체에게 투여하였을 때 5-100% 범위에서 더 감소되고;
    b) 부릭사포르가 단일 저해제로 투여될 때 이의 효능과 비교하여, 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체에게 ADRB2 저해제와 복합하여 투여할 때, 부릭사포르의 효능은 5-2000% 범위로 증가되고; 및/또는
    c) ADRB2가 단일 저해제로 투여될 때 이의 효능과 비교하여, 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체에게 부릭사포르와 복합하여 투여될 때, ADRB2 저해제의 효능은 5-2000% 범위로 증가된다.
  6. CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체에서 암을 치료하는 방법에 있어서, 이때 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 것이며, 이 방법은 다음을 포함하는, 방법:
    1) 해당 대상체의 세포가 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 지의 여부는 다음에 의해 결정되고: 해당 대상체로부터 생물학적 샘플을 획득하거나 또는 획득하였음으로 해서 해당 생물학적 샘플을 분석하거나 또는 분석하였음으로 해서 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머가 이 대상체의 세포에 존재하는 지 여부를 결정하고; 이때 해당 생물학적 샘플에서 실행된 분석은 다음중 하나 또는 그 이상이거나 또는 다음중 하나 또는 그 이상을 포함하고: 공동-내재화 분석, 공동-국소화 분석, 제자리 혼성화, 면역조직화학, 면역전자 현미경, 근접성-기반 분석, 공동-면역침전 분석, 효소-연계된 면역흡착 분석 (ELISA), 유동세포분석, RNAseq, RT-qPCR, CXCR4의 발현 수준, ADRB2의 발현 수준, CXCR4와 ADRB2의 발현 수준, 마이크로어레이, 또는 형광 동물 분석; 그리고
    2) 만일 해당 대상체의 세포가 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유한다면, 그러면 암 대상체에게 CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제의 조합을 투여하고, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르이며; 그리고
    3) 만약 해당 대상체의 세포가 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하지 않는다면, 그러면 해당 암 대상체에게 부릭사포르 또는 ADRB2 저해제의 단일 저해제를 투여한다.
  7. CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체에서 암을 치료하는 방법에 있어서, 이때 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 것이며, 이 방법은 다음을 포함하는, 방법:
    1) 해당 대상체의 세포가 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 지의 여부는 다음에 의해 결정되고: 해당 대상체로부터 생물학적 샘플을 획득하거나 또는 획득하였음으로 해서 해당 생물학적 샘플을 분석하거나 또는 분석하였음으로 해서 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머가 이 대상체의 세포에 존재하는 지 여부를 결정하고; 이때 해당 생물학적 샘플에서 실행된 분석은 다음중 하나 또는 그 이상이거나 또는 다음중 하나 또는 그 이상을 포함하고: 공동-내재화 분석, 공동-국소화 분석, 제자리 혼성화, 면역조직화학, 면역전자 현미경, 근접성-기반 분석, 공동-면역침전 분석, 효소-연계된 면역흡착 분석 (ELISA), 유동세포분석, RNAseq, RT-qPCR, CXCR4의 발현 수준, ADRB2의 발현 수준, CXCR4와 ADRB2의 발현 수준, 마이크로어레이, 또는 형광 동물 분석; 그리고
    2) 만일 해당 대상체의 세포가 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유한다면, 그러면 암 대상체에게 CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제의 조합을 투여하고, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르이며; 그리고
    3) 만약 해당 대상체의 세포가 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하지 않는다면, 그러면 해당 암 대상체에게 부릭사포르 또는 ADRB2 저해제의 단일 저해제를 투여하고;
    이때:
    a) 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체에서 암의 진행은 부릴사포르 또는 부릭사포르 또는 ADRB2 저해제의 단일 저해제 투여와 비교하여, 부릭사포르 또는 ADRB2 저해제의 조합을 해당 암 대상체에게 투여하였을 때 5-100% 범위에서 더 감소되고;
    b) 부릭사포르가 단일 저해제로 투여될 때 이의 효능과 비교하여, 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체에게 ADRB2 저해제와 복합하여 투여할 때, 부릭사포르의 효능은 5-2000% 범위로 증가되고; 및/또는
    c) ADRB2가 단일 저해제로 투여될 때 이의 효능과 비교하여, 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체에게 부릭사포르와 복합하여 투여될 때, ADRB2 저해제의 효능은 5-2000% 범위로 증가된다.
  8. CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체의 암 치료에 사용을 위한 용도의 약제학적 키트에 있어서, 이 약제학적 키트는 다음을 포함하는, 약제학적 키트:
    a) CXCR4 저해제, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르이며; 그리고
    b) ADRB2 저해제;
    이때 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 것이다.
  9. CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체의 암 치료에 사용을 위한 용도의 약제학적 조성물에 있어서, 이 약제학적 조성물은 다음을 포함하는, 약제학적 조성물:
    a) CXCR4 저해제, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르이며;
    b) ADRB2 저해제; 그리고
    c) 약제학적으로 수용가능한 담체;
    이때 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 것이다.
  10. 세포에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 다운스트림 신호전달을 억제하는 방법에 있어서, 이 방법은 해당 세포에 다음을 투여하는 것을 포함하는, 방법:
    a) CXCR4 저해제, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르이며; 그리고
    b) ADRB2 저해제;
    이때:
    i) 상기 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 것이며; 그리고
    ii) 부릭사포르와 ADRB2 저해제와의 접촉으로 이 세포에서 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 다운스트림 신호전달이 억제된다.
  11. 청구항 10에 있어서, 이때 이 방법은 이 세포가 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 지에 대한 결정을 더 포함하는, 방법.
  12. 세포에서 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 다운스트림 신호전달을 억제하는데 사용을 하기 위한 용도의 약제학적 키트에 있어서, 이 약제학적 키트는 다음을 포함하는, 약제학적 키트:
    a) CXCR4 저해제, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르이며; 그리고
    b) ADRB2 저해제;
    이때 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 것이다.
  13. 세포에서 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 다운스트림 신호전달을 억제하는데 사용을 하기 위한 용도의 약제학적 조성물에 있어서, 이 약제학적 조성물은 다음을 포함하는 약제학적 조성물:
    a) CXCR4 저해제, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르이며;
    b) ADRB2 저해제; 그리고
    c) 약제학적으로 수용가능한 담체;
    이때 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 것이다.
  14. 청구항 10-13중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 세포는 대상체의 세포인, 방법.
  15. 청구항 14에 있어서, 이때 상기 대상체의 세포는 암 세포인, 방법.
  16. 청구항 1-13중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 세포는 암 세포인, 방법.
  17. 청구항 1-9중 임의의 한 항에 있어서, 이때 이 방법은 암 대상체에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 존재를 탐지하는 것을 더 포함하는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  18. 청구항 1-9 또는 17중 임의의 한 항에 있어서, 이때 이 방법은 암 대상체에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 식별해내는 것을 더 포함하는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  19. 청구항 1-9 또는 17-18중 임의의 한 항에 있어서, 이때 이 방법은 해당 대상체로부터 생물학적 샘플을 획득하는 것을 더 포함하는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  20. 청구항 1-9 또는 17-19중 임의의 한 항에 있어서, 이때 이 방법은 전술한 대상체로부터 획득된 생물학적 샘플에서 검정을 실행하는 것을 더 포함하는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  21. 청구항 1-9 또는 17-20중 임의의 한 항에 있어서, 이때 이 방법은 다음을 더 포함하는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
    i) 암 대상체로부터 획득된 생물학적 샘플을 획득하거나 또는 획득하였고;
    ii) 당해 암 대상체로부터 획득된 생물학적 샘플에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 존재, 실제 또는 존재 및 실체를 결정하기 위한 진단적 검정을 실행하거나, 또는 실행하였고; 그리고
    iii) CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 다운스트림 신호전달을 억제하기 위해, 부릭사포르와 조합하여 투여될 ADRB2 저해제를 선택한다.
  22. 청구항 1-9 또는 17-21중 임의의 한 항에 있어서, 이때 이 방법은 해당 대상체의 세포가 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 지의 여부 결정이 포함되며, 이 결정은 해당 대상체로부터 획득된 생물학적 샘플 상에서 검정을 실행하는 것을 포함하는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  23. 청구항 1-9 또는 17-22중 임의의 한 항에 있어서, 이때 이 방법은 해당 대상체의 세포가 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 지의 여부를 결정하는 것을 더 포함하고, 이 결정은 해당 대상체로부터 생물학적 샘플을 획득하고, 그리고 전술한 대상체로부터 획득된 생물학적 샘플에서 검정을 실행하는 것을 포함하는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  24. 청구항 1-9 또는 17-23중 임의의 한 항에 있어서, 이때 전술한 대상체로부터 획득된 생물학적 샘플은 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  25. 청구항 1-9 또는 14-24중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 대상체의 세포는 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  26. 청구항 1-25중 임의의 한 항에 있어서, 이때 CXCR4-ADRB2 헤테로머는 다음 특징중 두 가지 또는 그 이상을 갖는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물:
    1) CXCR4-ADRB2 헤테로머 성분들은 공동-국소화되고, 그리고 직접적으로, 또는 다른자리 입체성의 전달관으로 작용하는 중간체 단백질을 경유하여, 물리적으로 상호작용하고;
    2) 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 것이며; 및/또는
    3) 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 조합은
    i) 세포에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 헤테로머-특이적 속성들을 변경시키고;
    ii) 세포에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 헤테로머-특이적 기능을 변경시키고; 및/또는
    iii) CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포의 헤테로머-특이적 속성들을 변경시킨다.
  27. 청구항 1-9 또는 14-25중 임의의 한 항에 있어서, 이때 CXCR4-ADRB2 헤테로머는 다음 특징중 두 가지 또는 그 이상을 갖는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물:
    1) CXCR4-ADRB2 헤테로머 성분들은 공동-국소화되고, 그리고 직접적으로, 또는 다른자리 입체성의 전달관으로 작용하는 중간체 단백질을 경유하여, 물리적으로 상호작용하고;
    2) 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 것이며; 및/또는
    3) 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 조합은
    i) 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 헤테로머-특이적 속성들을 변경시키고;
    ii) 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 헤테로머-특이적 기능을 변경시키고;
    iii) CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)의 헤테로머-특이적 속성들을 변경시키고; 및/또는
    iv) 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포들을 보유한 대상체에서 암 진행의 감소시킨다.
  28. 청구항 1-27중 임의의 한 한에 있어서, 이때 CXCR4-ADRB2 헤테로머는 다음의 특징을 보유하는 것으로 특징화되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물: CXCR4-ADRB2 헤테로머 성분들은 세포에서 공동-국소화되고, 직접적으로, 또는 다른자리 입체성의 전달관으로 작용하는 중간체 단백질을 경유하여 물리적으로 상호작용한다.
  29. 청구항 1-28중 임의의 한 항에 있어서, 이때 세포에서 공동-국소화되고, 직접적으로, 또는 다른자리 입체성의 전달관으로 작용하는 중간체 단백질을 경유하여 물리적으로 상호작용하는 CXCR4-ADRB2 헤테로머 성분들은 다음중 하나 또는 그 이상에 의해 결정되는,억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물: 공동-내재화 분석, 공동-국소화 분석, 제자리 혼성화, 면역조직화학, 면역전자 현미경, 근접성-기반 분석, 공동-면역침전 분석, 효소-연계된 면역흡착 분석 (ELISA), 유동세포분석, RNAseq, RT-qPCR, CXCR4의 발현 수준, ADRB2의 발현 수준, CXCR4와 ADRB2의 발현 수준, 마이크로어레이, 또는 형광 동물 분석.
  30. 청구항 1-29중 임의의 한 항에 있어서, 이때 the 근접성-기반 분석은 공명 에너지 전달 (RET), 생물발광 RET (BRET), 형광 RET (FRET), 시-분해 형광 RET (TR-FRET), 항체-기반 FRET, 리간드-기반 FRET, 이중분자 형광 상보성 (BiFC), 또는 근접성 결찰 검정 (PLA)이거나, 또는 이를 포함하는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  31. 청구항 30에 있어서, 이때 TR-FRET는 리간드-기반 TR-FRET인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  32. 청구항 30에 있어서, 이때 TR-FRET는 항체-기반 TR-FRET인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  33. 청구항 1-30중 임의의 한 항에 있어서, 이때 세포에서 공동-국소화되고, 직접적으로, 또는 다른자리 입체성의 전달관으로 작용하는 중간체 단백질을 경유하여 물리적으로 상호작용하는 CXCR4-ADRB2 헤테로머 성분들은 다음중 하나 또는 그 이상에 의해 결정되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물: 공동-내재화 분석, 이중분자 형광 상보성 (BiFC), RT-PCR, RT-qPCR, CXCR4의 발현 수준, ADRB2의 발현 수준, CXCR4와 ADRB2의 발현 수준, 또는 근접성 결찰 검정 (PLA).
  34. 청구항 33에 있어서, 이때 세포에서 공동-국소화되고, 직접적으로, 또는 다른자리 입체성의 전달관으로 작용하는 중간체 단백질을 경유하여 물리적으로 상호작용하는 CXCR4-ADRB2 헤테로머 성분들은 공동-내재화 분석에 의해 결정되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  35. 청구항 33에 있어서, 이때 세포에서 공동-국소화되고, 직접적으로, 또는 다른자리 입체성의 전달관으로 작용하는 중간체 단백질을 경유하여 물리적으로 상호작용하는 CXCR4-ADRB2 헤테로머 성분들은 이중분자 형광 상보성 (BiFC)에 의해 결정되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  36. 청구항 33에 있어서, 이때 세포에서 공동-국소화되고, 직접적으로, 또는 다른자리 입체성의 전달관으로 작용하는 중간체 단백질을 경유하여 물리적으로 상호작용하는 CXCR4-ADRB2 헤테로머 성분들은 근접성 결찰 검정 (PLA)에 의해 결정되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  37. 청구항 1-9 또는 17-36중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 검정은 전술한 대상체로부터 획득된 생물학적 샘플 안에 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 존재를 결정하는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  38. 청구항 1-37중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 검정은 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 CXCR4와 ADRB2 성분들의 공동-국소화 및 상호작용을 결정하는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  39. 청구항 1-9 또는 14-38중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 검정은 상기 대상체의 세포 안에 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 존재를 결정하는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  40. 청구항 1-9 또는 17-39중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 검정은 전술한 대상체로부터 획득된 생물학적 샘플에 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 존재를 결정하는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  41. 청구항 1-9 또는 17-40중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 검정은 대상체에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 존재를 결정하는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  42. 청구항 1-41중 임의의 한 항에 있어서, 이때 CXCR4-ADRB2 헤테로머는 다음의 특징을 보유하는 것으로 특징화된, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물: CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 다운스트림 신호전달을 갖는다.
  43. 청구항 1-9 또는 14-42, 이때 전술한 대상체의 세포에 있는 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 다운스트림 신호전달이 강화된 것인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  44. 청구항 1-9 또는 14-43중 임의의 한 항에 있어서, 이때 전술한 대상체의 세포 안에 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 존재로 인하여 다운스트림 신호전달이 강화된 것인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  45. 청구항 1-44중 임의의 한 항에 있어서, 이때 CXCR4-ADRB2 헤테로머는 강화된 다운스트림 신호전달을 만드는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  46. 청구항 1-9 또는 14-45중 임의의 한 항에 있어서, 이때 CXCR4-ADRB2 헤테로머는 상기 대상체의 세포에서 강화된 다운스트림 신호전달을 만드는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  47. 청구항 1-46중 임의의 한 항에 있어서, 이때 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 효현성으로 인하여 다운스트림 신호전달이 강화되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  48. 청구항 1-47중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머에서 CXCR4의 효현성으로 인하여 강화되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  49. 청구항 1-47중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머에서 ADRB2의 효현성으로 인하여 강화되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  50. 청구항 1-47중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 CXCR4 효현성과 ADRB2의 효현성으로 인하여 강화되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  51. 청구항 1-50중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4, ADRB2, 또는 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 다운스트림인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  52. 청구항 51에 있어서, 이때 상기 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4의 다운스트림인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  53. 청구항 51에 있어서, 이때 상기 강화된 다운스트림 신호전달은 ADRB2의 다운스트림인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  54. 청구항 51에 있어서, 이때 상기 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 다운스트림인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  55. 청구항 1-50중 임의의 한 항에 있어서, 이때 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 다운스트림 신호전달은 이들의 각각 개별 프로토머 구성에서 CXCR4 프로토머 또는 ADRB2 프로토머로 인한 다운스트림 신호전달에 관련되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  56. 청구항 55에 있어서, 이때 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 다운스트림 신호전달은 개별 프로토머 구성에서 CXCR4 프로토머로 인한 다운스트림 신호전달에 관련되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  57. 청구항 55에 있어서, 이때 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 다운스트림 신호전달은 개별 프로토머 구성에서 ADRB2 프로토머로 인한 다운스트림 신호전달에 관련되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  58. 청구항 55에 있어서, 이때 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 다운스트림 신호전달은 이들 각각 개별 프로토머 구성에서 CXCR4 프로토머와 ADRB2 프로토머로 인한 다운스트림 신호전달에 관련되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  59. 청구항 1-58중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 강화된 다운스트림 신호전달은 칼슘 동원의 양의 강화인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  60. 청구항 59에 있어서, 이때 상기 강화된 양의 칼슘 동원은 세포내 Ca2+ 검정에 의해 결정되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  61. 청구항 1-60중 임의의 한 항에 있어서, 이때 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 다운스트림 신호전달은 세포내 Ca2+ 검정에 의해 결정되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  62. 청구항 61에 있어서, 이때 상기 세포내 Ca2+ 검정은 칼슘 동원 검정인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  63. 청구항 62에 있어서, 이때 상기 칼슘 동원 검정으로 CXCR4-ADRB2 헤테로머가 강화된 다운스트림 신호전달을 만들어내는 지의 여부가 결정되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  64. 청구항 62 또는 청구항 63에 있어서, 이때 상기 칼슘 동원 검정으로 상기 강화된 다운스트림 신호전달이 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 존재로 인한 것인지가 결정되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  65. 청구항 1-64중 임의의 한 항에 있어서, 이때 CXCR4-ADRB2 헤테로머는 다음과 같이, 칼슘 동원의 강화된 양을 나타내는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
    칼슘 동원 검정을 통하여 결정하였을 때,
    a) 세포 안에서 개별 프로토머 구성에서 CXCR4 또는 ADRB2 효현제는 CXCL12와 ADRB2 효현제로 공동-자극시, CXCL12 또는 ADRB2 효현제와의 단일 효현제 자극으로 인한 칼슘 동원 양의 합에 대등한 또는 이보다 적은 칼슘 동원 양을 결과하고; 그리고
    b) CXCR4-ADRB2 헤테로머는 CXCL12와 ADRB2 효현제로의 공동-자극할 때, CXCL12 또는 ADRB2 효현제로의 단일 효현제 자극으로 인한 칼슘 동원 양의 합과 비교하여, 강화된 칼슘 동원을 나타낸다.
  66. 청구항 1-65중 임의의 한 항에 있어서, 이때 다음을 나타내는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물:
    i) 칼슘 동원 검정을 통하여 결정하였을 때, 세포에서 개별 프로토머 구성에서 프로토머 CXCR4 또는 ADRB2로부터의 칼슘 동원은 비-상승적이며; 그리고
    ii) 칼슘 동원 검정을 통하여 결정하였을 때, 세포에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머로부터의 칼슘 동원은 상승적이다.
  67. 청구항 1-66중 임의의 한 항에 있어서, 이때 개별 프로토머 구성에서 다음을 나타내는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물:
    a) 세포에서 각각의 개별 프로토머 ADRB2 부재 하에서 개별 프로토머 CXCR4; 그리고
    b) 세포에서 각각의 개별 프로토머 CXCR4 부재 하에서 개별 프로토머 ADRB2; 그리고
    CXCL12와 ADRB2 효현제의 공동-자극 시, 칼슘 동원 검정을 통하여 결정하였을 때, CXCL12 또는 ADRB2 효현제로 단일 효현제 자극으로 인한 칼슘 동원 양의 합과 같거나, 또는 이보다 적은 칼슘 동원 양을 결과한다.
  68. 청구항 1-67중 임의의 한 항에 있어서, 이때 개별 프로토머 구성에서 독립적으로 다음을 나타내는 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물:
    a) 세포에서 각각의 개별 프로토머 ADRB2 부재 하에서 개별 프로토머 CXCR4; 그리고
    b) 세포에서 각각의 개별 프로토머 CXCR4 부재 하에서 개별 프로토머 ADRB2; 그리고
    CXCL12와 ADRB2 효현제의 공동-자극 시, 칼슘 동원 검정을 통하여 결정하였을 때, CXCL12 또는 ADRB2 효현제로 단일 효현제 자극으로 인한 칼슘 동원 양의 합과 같거나, 또는 이보다 적은 칼슘 동원 양을 결과한다.
  69. 청구항 1-68중 임의의 한 항에 있어서, 이때 칼슘 동원 검정을 통하여 결정하였을 때, CXCR4-ADRB2 헤테로머는 CXCL12와 ADRB2 효현제의 공동-자극 시에, CXCL12 또는 ADRB2 효현제로 전술한 세포의 단일 효현제 자극으로 인한 칼슘 동원 양의 합보다 더 큰 칼슘 동원 양을 초래하는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  70. 청구항 1-69중 임의의 한 항에 있어서, 이때 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 공동-자극으로 인한 칼슘 동원 양은 칼슘 동원 검정을 통하여 결정하였을 때, 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 단일 효현제 자극으로 인한 칼슘 동원 합과 비교하여, 칼슘 동원의 양이 강화되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  71. 청구항 1-70중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 양의 칼슘 동원은 칼슘 동원 검정을 통하여 결정하였을 때, CXCL12와 ADRB2 효현제의 공동-자극 시, 전술한 세포를 CXCL12 또는 ADRB2 효현제로 단일 효현제 자극으로 인한 칼슘 동원 양의 합보다 더 큰, 칼슘 동원 양을 초래하는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  72. 청구항 71에 있어서, 이때 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인한 칼슘 동원의 강화된 양은 칼슘 동원 검정을 통하여 결정하였을 때, CXCL12와 ADRB2 효현제의 공동-자극 시, CXCL12 또는 ADRB2 효현제로 전술한 세포의 단일 효현제 자극으로 인한 칼슘 동원의 합보다 적어도 10% 더 크고, 적어도 20% 더 크고, 적어도 30% 더 크고, 적어도 40% 더 크고, 적어도 50% 더 크고, 적어도 75% 더 크고, 또는 적어도 90% 더 큰, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  73. 청구항 71 또는 72에 있어서, 이때 상기 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 양의 칼슘 동원은 칼슘 동원은 칼슘 동원 검정을 통하여 결정하였을 때, CXCL12 및 ADRB2 효현제로 공동-자극 시, 전술한 세포를 CXCL12 또는 ADRB2 효현제로 단일 효현제 자극으로 인한 칼숨 동원 양의 합보다 적어도 100% 더 큰, 칼슘 동원 양이 되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  74. 청구항 71-73중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 강화된 양의 칼슘 동원은 상승적 양의 칼슘 동원인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  75. 청구항 74에 있어서, 이때 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포의 칼슘 동원의 상승적 양은 칼슘 동원 검정을 통하여 결정하였을 때, CXCL12 및 ADRB2 효현제로 공동-자극 시, 전술한 세포를 CXCL12 또는 ADRB2 효현제로 단일 효현제 자극으로 인한 칼슘 동원 양의 합보다 적어도 10% 더 크고, 적어도 20% 더 크고, 적어도 30% 더 크고, 적어도 40% 더 크고, 적어도 50% 더 크고, 적어도 75% 더 크고, 또는 적어도 90% 더 큰 칼슘 동원 양이 되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  76. 청구항 1-75중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 강화된 양의 칼슘 동원은 다음을 특징으로 하는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물:
    칼슘 동원 검정을 통하여 결정하였을 때,
    a) 세포 안에서 개별 프로토머 구성에서 CXCR4 또는 ADRB2 효현제는 CXCL12와 ADRB2 효현제로 공동-자극시, CXCL12 또는 ADRB2 효현제와의 단일 효현제 자극으로 인한 칼슘 동원 양의 합에 대등한 또는 이보다 적은 칼슘 동원 양을 결과하고; 그리고
    b) CXCR4-ADRB2 헤테로머는 CXCL12와 ADRB2 효현제로의 공동-자극할 때, CXCL12 또는 ADRB2 효현제로의 단일 효현제 자극으로 인한 칼슘 동원 양의 합과 비교하여, 강화된 칼슘 동원을 나타낸다.
  77. 청구항 1-76중 임의의 한 항에 있어서, 이때 CXCR4-ADRB2 헤테로머는 다음의 특징을 보유하는 것으로 특징화되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물: CXCR4 효현제 또는 ADRB2 효현제와 함께 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 단일-자극으로 인한 다운스트림 ERK 신호전달의 양과 비교하여, CXCR4-ADRB2 헤테로머 그리고 CXCR4 효현제 및 ADRB2 효현제의 공동-자극으로 인한 다운스트림 ERK 신호전달의 양이 더 크다.
  78. 청구항 77에 있어서, 이때 CXCR4 효현제와 ADRB2 효현제의 공동-자극으로 인한 다운스트림 ERK 신호전달의 양은 CXCR4 효현제의 단일-자극으로 인한 양보다 더 큰, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  79. 청구항 78에 있어서, 이때 CXCR4 효현제와 ADRB2 효현제의 공동-자극으로 인한 다운스트림 ERK 신호전달의 양은 CXCR4 효현제의 단일-자극으로 인한 양보다 적어도 5% 더 큰, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  80. 청구항 78에 있어서, 이때 CXCR4 효현제와 ADRB2 효현제의 공동-자극으로 인한 다운스트림 ERK 신호전달의 양은 CXCR4 효현제의 단일-자극으로 인한 양보다 적어도 10%, 적어도 25%, 적어도 50%, 적어도 75%, 또는 적어도 90% 더 큰, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  81. 청구항 78-80중 임의의 한 항에 있어서, 이때 CXCR4 효현제와 ADRB2 효현제의 공동-자극으로 인한 다운스트림 ERK 신호전달의 양은 CXCR4 효현제의 단일-자극으로 인한 양보다 5-15%, 10-25%, 20-50%, 40-75%, 또는 60-100% 범위로 더 큰, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  82. 청구항 77에 있어서, 이때 CXCR4 효현제와 ADRB2 효현제의 공동-자극으로 인한 다운스트림 ERK 신호전달의 양은 ADRB2 효현제의 단일-자극으로 인한 양보다 더 큰, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  83. 청구항 82에 있어서, 이때 CXCR4 효현제와 ADRB2 효현제의 공동-자극으로 인한 다운스트림 ERK 신호전달의 양은 ADRB2 효현제의 단일-자극으로 인한 양보다 적어도 5% 더 큰, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  84. 청구항 82에 있어서, 이때 CXCR4 효현제와 ADRB2 효현제의 공동-자극으로 인한 다운스트림 ERK 신호전달의 양은 ADRB2 효현제의 단일-자극으로 인한 양보다 적어도 10%, 적어도 25%, 적어도 50%, 적어도 75%, 또는 적어도 90% 더 큰, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  85. 청구항 82-84중 임의의 한 항에 있어서, 이때 CXCR4 효현제와 ADRB2 효현제의 공동-자극으로 인한 다운스트림 ERK 신호전달의 양은 ADRB2 효현제의 단일-자극으로 인한 양보다 5-15%, 10-25%, 20-50%, 40-75%, 또는 60-100% 범위로 더 큰, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  86. 청구항 1-9 또는 14-85중 임의의 한 항에 있어서, 이때 CXCR4-ADRB2 헤테로머는 다음의 특징을 보유하는 것으로 특징화되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물: 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 조합은 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 헤테로머-특이적 속성들을 변경시킨다.
  87. 청구항 1-9 또는 14-86중 임의의 한 항에 있어서, 이때 CXCR4-ADRB2 헤테로머는 다음의 특징을 보유하는 것으로 특징화되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물: 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 조합은 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 헤테로머-특이적 기능을 변경시킨다.
  88. 청구항 1-9 또는 14-87중 임의의 한 항에 있어서, 이때 CXCR4-ADRB2 헤테로머는 다음의 특징을 보유하는 것으로 특징화되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물: 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 조합은 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)의 헤테로머-특이적 속성들을 변경시킨다.
  89. 청구항 1-9 또는 14-88중 임의의 한 항에 있어서, 이때 CXCR4-ADRB2 헤테로머는 다음의 특징을 보유하는 것으로 특징화되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물: 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 조합은 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 대상체 유래된 세포(들)의 암 진행을 감소시킨다.
  90. 청구항 1-89중 임의의 한 항에 있어서, 이때 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 복합 투여로 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 다운스트림 신호전달이 억제되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  91. 청구항 1-90중 임의의 한 항에 있어서, 이때 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 복합 투여로 해당 세포에서 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 다운스트림 신호전달이 억제되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  92. 청구항 1-9 또는 17-91중 임의의 한 항에 있어서, 이때 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 복합 투여로 암 대상체에서 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 다운스트림 신호전달이 억제되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  93. 청구항 1-9 또는 17-92중 임의의 한 항에 있어서, 이때 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 복합 투여로 암 대상체의 세포에서 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 다운스트림 신호전달이 억제되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  94. 청구항 1-93중 임의의 한 항에 있어서, 이때 CXCR4-ADRB2 헤테로머 성분들은 CXCR4와 ADRB2의 개별 프로토머를 포함하는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  95. 청구항 1-94중 임의의 한 항에 있어서, 이때 개별 프로토머 구성에서 CXCR4를 함유하는 세포는 개별 프로토머 ADRB2의 존재 또는 부재 하에서 개별 프로토머 CXCR4를 포함하는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  96. 청구항 95에 있어서, 이때 개별 프로토머 구성에서 CXCR4를 함유하는 세포는 개별 프로토머 ADRB2 부재 하에서 전술한 개별 프로토머 CXCR4를 포함하는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  97. 청구항 95에 있어서, 이때 개별 프로토머 구성에서 CXCR4를 함유하는 세포는 개별 프로토머 ADRB2 존재 하에서 전술한 개별 프로토머 CXCR4를 포함하는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  98. 청구항 1-94중 임의의 한 항에 있어서, 이때개별 프로토머 구성에서 ADRB2를 함유하는 세포는 개별 프로토머 CXCR4의 존재 또는 부재 하에서 개별 프로토머 ADRB2를 포함하는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  99. 청구항 98에 있어서, 이때 개별 프로토머 구성에서 ADRB2를 함유하는 세포를 개별 프로토머 CXCR4 부재 하에서 전술한 개별 프로토머 ADRB2를 포함하는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  100. 청구항 98에 있어서, 이때 개별 프로토머 구성에서 ADRB2를 함유하는 세포는 개별 프로토머 CXCR4 존재 하에서 전술한 개별 프로토머 ADRB2를 포함하는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  101. 청구항 1-100중 임의의 한 항에 있어서, 이때 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 조합 투여로 다음이 결과되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물:
    i) 세포에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 헤테로머-특이적 속성들을 변경시키고;
    ii) 세포에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 헤테로머-특이적 기능을 변경시키고; 및/또는
    iii) CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포의 헤테로머-특이적 속성들을 변경시킨다.
  102. 청구항 1-9 또는 14-101중 임의의 한 항에 있어서, 이때 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 복합 투여로 다음이 결과되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물:
    i) 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 헤테로머-특이적 속성들을 변경시키고;
    ii) 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 헤테로머-특이적 기능을 변경시키고;
    iii) CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)의 헤테로머-특이적 속성들을 변경시키고; 또는
    iv) 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포들을 보유한 대상체에서 암 진행의 감소시킨다.
  103. 청구항 102에 있어서, 이때 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 복합 투여로 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 헤테로머-특이적 속성들이 변경되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  104. 청구항 102 또는 103에 있어서, 이때 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 복합 투여로 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)에서 CXCR4-ADRB2 헤테로머의 헤테로머-특이적 기능이 변경되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  105. 청구항 102-104중 임의의 한 항에 있어서, 이때 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 복합 투여로 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)의 헤테로머-특이적 속성들이 변경되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  106. 청구항 102-105중 임의의 한 항에 있어서, 이때 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 복합 투여로 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포들을 보유한 대상체에서 암 진행이 감소되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  107. 청구항 102-106중 임의의 한 항에 있어서, 이때 CXCR4-ADRB2 헤테로머는 다음의 특징을 보유하는 것으로 특징화되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물: 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 조합은 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 대상체 유래된 세포(들)의 암 진행을 감소시킨다.
  108. 청구항 102-107중 임의의 한 항에 있어서, 이때 감소된 암 진행은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)에서 암 진행의 감소를 포함하는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  109. 청구항 102-108중 임의의 한 항에 있어서, 이때 감소된 암 진행은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)에서 세포 증식 감소를 포함하는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  110. 청구항 102-109중 임의의 한 항에 있어서, 이때 감소된 암 진행은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)에서 세포 이동 감소를 포함하는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  111. 청구항 102-110중 임의의 한 항에 있어서, 이때 감소된 암 진행은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)에서 전이 감소를 포함하는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  112. 청구항 102-111중 임의의 한 항에 있어서, 이때 감소된 암 진행은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 해당 대상체로부터 유래된 세포(들)에서 혈관신생 감소를 포함하는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  113. 청구항 1-112중 임의의 한 항에 있어서, 이때 부릭사포르는 약제학적으로 수용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물로써 투여되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  114. 청구항 1-113중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ADRB2 저해제는 약제학적으로 수용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물로써 투여되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  115. 청구항 1-114중 임의의 한 항에 있어서, 이때 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 조합은 순차적으로, 함께, 또는 일제히 투여되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  116. 청구항 1-115중 임의의 한 항에 있어서, 이때 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 조합은 약제학적으로 수용가능한 담체를 더 포함하는 약제학적 조성물로써 투여되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  117. 청구항 1-116중 임의의 한 항에 있어서, 이때 부릭사포르와 ADRB2 저해제는 약제학적 조성물의 조합으로써 투여되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  118. 청구항 117에 있어서, 이때 약제학적 조성물의 조합은 다음을 포함하는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물:
    a) 부릭사포르와 약제학적으로 수용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물; 그리고
    b) ADRB2 저해제와 약제학적으로 수용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
  119. 청구항 117 또는 118에 있어서, 이때 상기 약제학적 조성물의 조합은 순차적으로, 함께, 또는 일제히 투여되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  120. 청구항 1-119중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 암은 혈액학적 암 또는 고형 종양인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  121. 청구항 120에 있어서, 이때 상기 암은 혈액학적 암인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  122. 청구항 121에 있어서, 이때 상기 혈액학적 암은 다음으로 구성된 군에서 선택되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물: 림프종, 백혈병, 골수종, 및 다발성 골수종.
  123. 청구항 122에 있어서, 이때 림프종은 B 세포 림프종, T-세포 림프종, 또는 NK 세포 림프종인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  124. 청구항 122 또는 123에 있어서, 이때 림프종은 재발된 또는 난치성 림프종인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  125. 청구항 122-124중 임의의 한 항에 있어서, 이때 림프종 다음으로 구성된 군에서 선택되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물: 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종, 피부 B-세포 림프종, 활성화된 B-세포 림프종, 미만성 거대 B-세포 림프종 (DLBCL), 버킷 림프종, 맨틀 세포 림프종 (MCL), 소포 림프종 (FL), 소포 중심 림프종, 변형된 림프종, 중간 분화된 림프구성 림프종, 중간 림프구성 림프종 (ILL), 미만성 분화가 잘 안된 림프구성 림프종 (PDL), 구심성 림프종, 미만성 작게-절개된 세포 림프종 (DSCCL), 말초 T-세포 림프종 (PTCL), 피부 T-세포 림프종 (CTCL), 맨틀 구역 림프종, 및 저-등급 소포 림프종.
  126. 청구항 122에 있어서, 이때 백혈병은 다음과 같은, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물:
    a) 급성 백혈병 다음으로 구성된 군에서 선택된다: 급성 림프구성 백혈병 (ALL), T-세포 급성 림프구성 백혈병 (T-ALL), B-세포 급성 림프모구성 백혈병, 급성 단핵구성 백혈병, 급성 전-골수성 백혈병, 급성 골수구성 백혈병 (AML), 급성 골수성 백혈병, 급성 골수형성 백혈병 및 골수아세포, 전-골수성, 골수단핵구성, 단핵구성, 그리고 적아구백혈병;
    b) 만성 백혈병 다음으로 구성된 군에서 선택된다: 만성 골수구성 (과립구) 백혈병, 만성 골수형성 백혈병 (만성 골수 백혈병; CML), 및 만성 림프구성 백혈병 (CLL); 또는
    c) 만성 골수단핵구성 백혈병 (CMML), 만성 호산구성 백혈병, 청소년 골수단핵구성 백혈병 (JMML), 진성다혈구증, 천연 킬러 세포 백혈병 (NK 백혈병), 또는 털모양 세포 백혈병.
  127. 청구항 120에 있어서, 이때 상기 암은 고형 종양인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  128. 청구항 127에 있어서, 이때 상기 고형 종양은 양성 종양 또는 암인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  129. 청구항 127에 있어서, 이때 상기 고형 종양은 암종 또는 육종인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  130. 청구항 127에 있어서, 이때 상기 고형 종양은 다음으로 구성된 군에서 선택되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물: 섬유육종, 점액육종, 지방육종, 연골육종, 골육종, 윤활막육종, 중피종, 악성 상피양 중피종, 유윙 종양, 평활근육종, 횡문근육종, 위암, 결장직장 암, 식도 암, 결장 암종, 림프성 악성종양, 췌장 암, 췌장 선암종, 췌장 관의 선암종, 유방암, 유방 선암종, 유방 관의 선암종, 폐암, 작은 세포 폐 암종, 폐 선암종, 선편평성 폐 암종, 폐포 횡문근육종, 난소 암, 난소 투명 세포 선암종, 난소 점액성 낭선암종, 난소 장액 선암종, 전립선 암, 간세포성 암종, 연 조직 육종, 편평 세포 암종, 기저 세포 암종, 선암종, 땀샘 암종, 갑상선 수질 암종, 유두 갑상선 암종, 갑상선 암종, 갈색 세포종 피지선 암종, 유두모양 암종, 유두모양 선암종, 수질 암종, 기관지 암종, 위장 암, 위 관모양의 선암종, 위의 선편평성 암종, 신장 암, 간내 담관암종,신장 세포 암종, 간종양, 담관 암종, 융모막암종, 윌름 종양, 자궁의 암육종, 자궁내막 선암종, 자궁내막의 간질의 육종, 자궁내막의 암종, 자궁의 암, 고환 종양, 생식세포종, 방광 암종, 흑색종, 다발성 골수종, 다발성 엔도크린 신생물, CNS 종양, 교모세포종, 성상세포종, CNS 림프종, 생식세포종, 수모세포종, 신경신경초종, 뇌실막종, 송과종, 혈관모세포종, 청각 신경종, 희소돌기아교종, 수막종, 신경모세포종, 망막모세포종 그리고 뇌 전이.
  131. 청구항 130에 있어서, 이때 상기 고형 종양은 다음으로 구성된 군에서 선택되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물: 유방암, 폐암, 및 간세포성 암종.
  132. 청구항 131에 있어서, 이때 상기 고형 종양은 유방암인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  133. 청구항 131에 있어서, 이때 상기 고형 종양은 폐암인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  134. 청구항 131에 있어서, 이때 상기 고형 종양은 간세포성 암종인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  135. 청구항 1-9 또는 17-134중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 대상체의 생물학적 샘플은 생물학적 유체 샘플인, 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  136. 청구항 135에 있어서, 이때 액체 생검은 생물학적 유체 샘플에서 실행되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  137. 청구항 135 또는 136에 있어서, 이때 생물학적 유체 샘플은 혈액 샘플, 혈장 샘플, 타액 샘플, 뇌 유체 샘플, 눈의 유체 샘플, 또는 소변 샘플인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  138. 청구항 1-9 또는 17-137중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 대상체의 생물학적 샘플은 생물학적 조직 샘플인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  139. 청구항 138에 있어서, 이때 조직 샘플 검정은 생물학적 조직 샘플에서 실행되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  140. 청구항 138 또는 139에 있어서, 이때 생물학적 조직 샘플은 장기 조직 샘플, 뼈 조직 샘플, 또는 종양 조직 샘플인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  141. 청구항 1-140중 임의의 한 항에 있어서, 이때 암을 치료하는 방법은 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 다운스트림 신호전달을 억제하는 방법인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  142. 청구항 1-140중 임의의 한 항에 있어서, 이때 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 다운스트림 신호전달을 억제하는 방법이 암을 치료하는 방법인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  143. 청구항 1-9 또는 17-142중 임의의 한 항에 있어서, 이때 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체에서 암의 진행은 부릴사포르 또는 부릭사포르 또는 ADRB2 저해제의 단일 저해제 투여와 비교하여, 부릭사포르 또는 ADRB2 저해제의 조합을 해당 암 대상체에게 투여하였을 때 5-100% 범위에서 더 감소되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  144. 청구항 1-9 또는 17-143중 임의의 한 항에 있어서, 이때 부릭사포르가 단일 저해제로 투여될 때 이의 효능과 비교하여, 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체에게 ADRB2 저해제와 복합하여 투여할 때, 부릭사포르의 효능은 5-5000% 범위로 증가되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  145. 청구항 1-9 또는 17-144중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ADRB2 저해제의 효능은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포를 보유한 대상체에게 부릭사포르와 복합하여 투여될 때, ADRB2가 단일 저해제로 투여될 때 이의 효능과 비교하여 5-5000% 범위에서 증가되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  146. 청구항 1-9 또는 17-145중 임의의 한 항에 있어서, 이때 암 대상체에게 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 조합을 투여하면, 단일 저해제 투여와 비교하여 전술한 암 대상체에서 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 다운스트림 신호전달을 5-2000 배 범위에서 억제시키는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  147. 청구항 1-9 또는 17-146중 임의의 한 항에 있어서, 이때 암 대상체에게 부릭사포르와 ADRB2 저해제의 조합을 투여하면, 각 개별 프로토머 구성에서 CXCR4 프로토머 또는 ADRB2 프로토머로 인한 다운스트림 신호전달의 억제와 비교하여 전술한 암 대상체에서 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머로 인하여 강화된 다운스트림 신호전달을 5-2000 배 범위에서 억제시키는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  148. 청구항 17-147중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 세포는 암 세포인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  149. 청구항 17-147중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 세포는 대상체의 세포인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  150. 청구항 149에 있어서, 이때 상기 대상체의 세포는 암 세포인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  151. 청구항 1-150중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 대상체는 암 대상체인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  152. 청구항 1-151중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 대상체는 환자인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물.
  153. 다음을 포함하는, 약제학적 조성물:
    a) CXCR4 저해제, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르이며;
    b) ADRB2 저해제; 그리고
    c) 약제학적으로 수용가능한 담체.
  154. 청구항 1-153중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 ADRB2 저해제는 ADRB2의 길항제, ADRB2의 역-효현제, ADRB2의 부분 길항제, ADRB2의 알로스테릴 조절자, ADRB2의 항체, ADRB2의 항체 단편, ADRB2의 리간드, 또는 항체-약물 콘쥬게이트인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  155. 청구항 154에 있어서, 이때 상기 ADRB2 저해제는 길항제 ADRB2인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  156. 청구항 154에 있어서, 이때 상기 ADRB2 저해제는 역-효현제 ADRB2인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  157. 청구항 154에 있어서, 이때 상기 ADRB2 저해제는 부분 길항제 ADRB2인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  158. 청구항 154에 있어서, 이때 상기 ADRB2 저해제는 ADRB2의 알로스테릴 조절자인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  159. 청구항 154에 있어서, 이때 상기 ADRB2 저해제는 ADRB2의 항체인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  160. 청구항 154에 있어서, 이때 상기 ADRB2 저해제는 ADRB2의 항체 단편인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  161. 청구항 154에 있어서, 이때 상기 ADRB2 저해제는 ADRB2의 리간드인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  162. 청구항 154에 있어서, 이때 상기 ADRB2 저해제는 항체-약물 콘쥬게이트인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  163. 청구항 154에 있어서, 이때 상기 ADRB2 저해제는 다음으로 구성된 군에서 선택되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물:
    알프레놀롤(Alprenolol), 아테놀롤(atenolol), 베탁솔롤(betaxolol), 부프라놀롤(bupranolol), 부톡사민(butoxamine), 카라졸롤(carazolol), 카르베딜롤(carvedilol), CGP 12177, 시클로프롤롤(cicloprolol), ICI 118551, ICYP, 라베타롤(labetalol), 레보베타옥솔롤(levobetaxolol), 레보부노롤(levobunolol), LK 204-545, 메토프롤롤(metoprolol), 나돌롤(nadolol), NIHP, NIP, 프로파페논(propafenone), 프로프라놀롤(propranolol), 소탈롤(sotalol), SR59230A, 및 티몰롤(timolol).
  164. 청구항 163에 있어서, 이때 상기 ADRB2 저해제는 카르베디롤인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  165. 청구항 1-9 또는 17-164중 임의의 한 항에 있어서, 이때 부릭사포르의 치료요법적 유효량이 상기 대상체에게 투여되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  166. 청구항 1-9 또는 17-164중 임의의 한 항에 있어서, 이때 부릭사포르의 준-치료요법적 유효량이 상기 대상체에게 투여되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  167. 청구항 1-9 또는 17-166중 임의의 한 항에 있어서, 이때 ADRB2 저해제의 치료요법적 유효량이 대상체에게 투여되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  168. 청구항 1-9 또는 17-166, 이때 ADRB2 저해제의 준-치료요법적 유효량이 대상체에게 투여되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  169. 청구항 1-9 또는 14-168중 임의의 한 항에 있어서, 이때 이 방법 또는 용도는 세포에서, 대상체에서, 또는 대상체에서 획득된 샘플에서 CXCR4 유전자의 발현 수준의 결정을 더 포함하고, 이때 상기 발현 수준이 CXCR4 유전자의 참조 수준보다 더 크다면, 세포, 대상체, 또는 대상체에서 획득된 샘플은 CXCR4-발현시키는 암을 보유하는 것으로 결정되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  170. 청구항 169에 있어서, 이때 상기 암은 CXCR4-발현시키는 암인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  171. 청구항 169 또는 170에 있어서, 이때 세포에서 CXCR4 발현 수준은 참조 수준보다 더 큰, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  172. 청구항 169 또는 170에 있어서, 이때 대상체에서 CXCR4 발현 수준은 참조 수준보다 더 큰, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  173. 청구항 169 또는 170에 있어서, 이때 대상체로부터 획득된 샘플에서 CXCR4 발현 수준은 참조 수준보다 더 큰, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  174. 청구항 169-173중 임의의 한 항에 있어서, CXCR4 유전자 발현 수준이 참조 수준보다 더 클 때, 이 방법 또는 용도에는 CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제의 투여를 포함하며, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  175. 청구항 1-9 또는 14-168중 임의의 한 항에 있어서, 이때 이 방법 또는 용도에는 세포에서, 대상체에서, 또는 대상체에서 획득된 샘플에서 ADRB2 유전자의 발현 수준을 결정하는 것을 더 포함하며, 이때 만약 ADRB2 유전자의 발현 수준이 이의 참조 수준보다 더 크다면, 세포, 대상체, 또는 대상체에서 획득된 샘플은 ADRB2-발현시키는 암을 보유하는 것으로 결정되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  176. 청구항 175에 있어서, 이때 상기 암은 ADRB2-발현시키는 암인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  177. 청구항 175 또는 176에 있어서, 이때 세포에서 ADRB2 발현 수준은 참조 수준보다 더 큰, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  178. 청구항 175 또는 176에 있어서, 이때 대상체에서 ADRB2 발현 수준 참조 수준보다 더 큰, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  179. 청구항 175 또는 176에 있어서, 이때 상기 대상체로부터 획득된 샘플에서 ADRB2 발현 수준은 참조 수준보다 더 큰, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  180. 청구항 175-179중 임의의 한 항에 있어서, ADRB2 전자 발현 수준이 참조 수준보다 더 클 때, 이 방법 또는 용도에는 CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제의 투여를 포함하며, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  181. 청구항 1-9 또는 14-168중 임의의 한 항에 있어서, 이때 이 방법 또는 용도는 세포에서, 대상체에서, 또는 대상체에서 획득된 샘플에서 CXCR4 유전자와 ADRB2 유전자의 발현 수준을 결정하는 것을 더 포함하며, 이때 만약 CXCR4 유전자와 ADRB2 유전자의 발현 수준이 CXCR4 유전자와 ADRB2 유전자의 각각의 참조 수준보다 더 크다면, 세포, 대상체, 또는 대상체에서 획득된 샘플은 CXCR4-발현시키는 암과 ADRB2-발현시키는 암을 보유하는 것으로 결정되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  182. 청구항 181에 있어서, 이때 상기 암은 CXCR4-발현시키는 암과 ADRB2-발현시키는 암인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  183. 청구항 181 또는 182에 있어서, 이때 세포에서 CXCR4 발현 수준과 ADRB2 발현 수준은 각각 참조 수준보다 더 큰, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  184. 청구항 181 또는 182에 있어서, 이때 대상체에서 CXCR4 발현 수준과 ADRB2 발현 수준은 각각 참조 수준보다 더 큰, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  185. 청구항 181 또는 182에 있어서, 이때 대상체로부터 획득된 샘플에서 CXCR4 발현 수준과 ADRB2 발현 수준은 각각 참조 수준보다 더 큰, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  186. 청구항 181-185중 임의의 한 항에 있어서, 이때 CXCR4 유전자와 ADRB2 유전자 발현 수준을 결정할 때, 수준이 참조 수준보다 더 크다면, 이 방법 또는 용도에는 CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제를 투여하는 것을 포함하며, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  187. 청구항 1-9 또는 14-168중 임의의 한 항에 있어서, 이때 이 방법 또는 용도는 세포에서, 대상체에서, 또는 대상체에서 획득된 샘플에서 CXCR4 단백질의 발현 수준의 결정을 더 포함하고, 이때 상기 발현 수준이 CXCR4 단백질의 참조 수준보다 더 크다면, 세포, 대상체, 또는 대상체에서 획득된 샘플은 CXCR4-발현시키는 암을 보유하는 것으로 결정되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  188. 청구항 187에 있어서, 이때 상기 암은 CXCR4-발현시키는 암인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  189. 청구항 187 또는 188에 있어서, 이때 세포에서 CXCR4 발현 수준은 참조 수준보다 더 큰, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  190. 청구항 187 또는 188에 있어서, 이때 대상체에서 CXCR4 발현 수준은 참조 수준보다 더 큰, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  191. 청구항 187 또는 188에 있어서, 이때 대상체로부터 획득된 샘플에서 CXCR4 발현 수준은 참조 수준보다 더 큰, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  192. 청구항 187-191중 임의의 한 항에 있어서, CXCR4 단백질 발현 수준이 참조 수준보다 더 클 때, 이 방법 또는 용도에는 CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제의 투여를 포함하며, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  193. 청구항 1-9 또는 14-168중 임의의 한 항에 있어서, 이때 이 방법 또는 용도에는 세포에서, 대상체에서, 또는 대상체에서 획득된 샘플에서 ADRB2 단백질의 발현 수준을 결정하는 것을 더 포함하며, 이때 만약 ADRB2 단백질의 발현 수준이 이의 참조 수준보다 더 크다면, 세포, 대상체, 또는 대상체에서 획득된 샘플은 ADRB2-발현시키는 암을 보유하는 것으로 결정되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  194. 청구항 193에 있어서, 이때 상기 암은 ADRB2-발현시키는 암인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  195. 청구항 193 또는 194에 있어서, 이때 세포에서 ADRB2 발현 수준은 참조 수준보다 더 큰, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  196. 청구항 193 또는 194에 있어서, 이때 대상체에서 ADRB2 발현 수준 참조 수준보다 더 큰, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  197. 청구항 193 또는 194에 있어서, 이때 상기 대상체로부터 획득된 샘플에서 ADRB2 발현 수준은 참조 수준보다 더 큰, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  198. 청구항 193-197중 임의의 한 항에 있어서, 상기 ADRB2 단백질 발현 수준이 참조 수준보다 더 클 때, 이 방법 또는 용도에는 CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제의 투여를 포함하며, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  199. 청구항 1-9 또는 14-168중 임의의 한 항에 있어서, 이때 이 방법 또는 용도에는 세포에서, 대상체에서, 또는 대상체에서 획득된 샘플에서 CXCR4 단백질과 ADRB2 단백질의 발현 수준을 결정하는 것을 더 포함하며, 이때 만약 CXCR4 단백질과 ADRB2 단백질의 발현 수준이 CXCR4 단백질과 ADRB2 단백질의 각각 참조 수준보다 더 크다면, 세포, 대상체, 또는 대상체에서 획득된 샘플은 CXCR4-발현시키는 암과 ADRB2-발현시키는 암을 보유하는 것으로 결정되는, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  200. 청구항 199에 있어서, 이때 상기 암은 CXCR4-발현시키는 암과 ADRB2-발현시키는 암인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  201. 청구항 199 또는 200에 있어서, 이때 세포에서 CXCR4 발현 수준과 ADRB2 발현 수준은 각각 참조 수준보다 더 큰, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  202. 청구항 199 또는 200에 있어서, 이때 대상체에서 CXCR4 발현 수준과 ADRB2 발현 수준은 각각 참조 수준보다 더 큰, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  203. 청구항 199 또는 200에 있어서, 이때 대상체로부터 획득된 샘플에서 CXCR4 발현 수준과 ADRB2 발현 수준은 각각 참조 수준보다 더 큰, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  204. 청구항 199-203중 임의의 한 항에 있어서, 이때 CXCR4 단백질와 ADRB2 단백질 발현 수준을 결정할 때, 수준이 참조 수준보다 더 크다면, 이 방법 또는 용도에는 CXCR4 저해제와 ADRB2 저해제를 투여하는 것을 포함하며, 이때 CXCR4 저해제는 부릭사포르인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  205. 청구항 1-204중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 ADRB2 저해제는 카르베디롤인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  206. 청구항 1-205중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 강화된 다운스트림 신호전달은 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 CXCR4 효현제와 ADRB2 효현제의 공동-자극에 대한 강화된 반응인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  207. 청구항 1-206중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 강화된 다운스트림 신호전달은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포(들)을 보유하는 대상체에서 암 진행의 강화인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  208. 청구항 207에 있어서, 이때 상기 강화된 암 진행은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포(들)을 보유하는 대상체에서 세포 증식의 강화인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  209. 청구항 207 또는 208에 있어서, 이때 상기 강화된 암 진행은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포(들)을 보유하는 대상체에서 세포 이동의 강화인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  210. 청구항 207-209중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 강화된 암 진행은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포(들)을 보유하는 대상체에서 전이의 강화인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  211. 청구항 207-210중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 강화된 암 진행은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포(들)을 보유하는 대상체에서 종양 성장의 강화인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  212. 청구항 207-211중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 강화된 암 진행은 전술한 CXCR4-ADRB2 헤테로머를 함유하는 세포(들)을 보유하는 대상체에서 혈관신생의 강화인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  213. 청구항 207-212중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 세포(들)은 암 세포(들)인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  214. 청구항 207-213중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 세포(들)은 대상체로부터 유래된, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
  215. 청구항 207-214중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 세포(들)은 대상체로부터 획득된 생물학적 샘플의 세포인, 억제 방법, 치료 방법, 사용을 위한 약제학적 키트, 또는 사용을 위한 약제학적 조성물, 또는 약제학적 조성물.
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20210098872A (ko) * 2020-02-03 2021-08-11 한국과학기술연구원 세로토닌 수용체의 세포 내 편향적 신호전달 검증 방법

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6855807B1 (en) * 1999-06-16 2005-02-15 New York University Heterodimeric opioid G-protein coupled receptors
US20090028832A1 (en) * 2006-08-10 2009-01-29 Chung Leland F Compositions and methods for targeted tumor therapy
WO2010129987A1 (en) * 2009-05-11 2010-11-18 Dimerix Bioscience Pty Ltd Novel receptor hetero-dimers/-oligomers
CN107427574B (zh) * 2015-01-09 2022-02-08 阿达尔塔有限公司 Cxcr4结合分子
WO2017020128A1 (en) * 2015-08-03 2017-02-09 Université de Montréal Markers for acute myeloid leukemias with core binding factor rearrangements and other genetic subtypes and uses thereof
CN111741752A (zh) * 2017-12-19 2020-10-02 Gpcr治疗公司 Gpcr异聚体抑制剂及其用途

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20210098872A (ko) * 2020-02-03 2021-08-11 한국과학기술연구원 세로토닌 수용체의 세포 내 편향적 신호전달 검증 방법

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