CN114051416A - Gpcr异聚体抑制剂及其用途 - Google Patents

Gpcr异聚体抑制剂及其用途 Download PDF

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徐亨宇
李智英
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Abstract

本发明涉及与癌症相关的CXC受体4(CXCR4)‑G蛋白偶联受体(GPCR)异聚体(CXCR4‑GPCR异聚体)的抑制剂，其中CXCR4与其他G蛋白偶联受体(GPCRx)形成功能性异聚体。更具体而言，本发明涉及与CXCR4形成异聚体的ADRB2，其在用CXCR4激动剂和ADRB2激动剂共刺激之后导致CXCR4的下游信号传导增强。本发明还提供了包含CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂的药物组合物和药盒，以及其治疗和使用方法，以及其在癌症的诊断和/或治疗中的方法。

Description

GPCR异聚体抑制剂及其用途
相关申请的交叉引用
本申请要求于2020年5月11日提交的美国临时专利申请号63/022,845和在2019年5月17日提交的美国临时专利申请号62/849,755的权益，各申请的公开内容均以引用的方式整体并入本文。
序列表
本申请以引用的方式并入以ASCII文本格式与本申请一起提交的序列表，所述序列表的标题为“14462-012-185_SEQ_LISTING.txt”，创建于2020年5月11日，并且大小为1,516字节。
技术领域
本发明是关于癌症治疗的领域。具体地说，本文提供了包含CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂的组合的药物组合物，以及使用所述药物组合物的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒和所使用的药物组合物。
背景技术
G蛋白偶联受体(GPCR)是与G蛋白偶联的七跨膜结构域细胞表面受体。GPCR通过感知包括光、气味分子、激素、神经递质、趋化因子、小脂质分子和核苷酸的刺激来介导各种感觉和生理反应。人类基因组中大约有800个GPCR基因，并且预测其中多于一半编码诸如嗅觉、视觉和味觉受体的感觉受体(Bjarnadottir,T.K.等人,(2006)Comprehensiverepertoire and phylogenetic analysis of the G protein-coupled receptors inhuman and mouse,Genomics 88,263-273)。剩余350个GPCR在胚胎发育，行为，情绪，认知，血压、心率和消化过程的调节、免疫***和炎症的调节，体内稳态的维持以及癌症的生长和转移中起着重要生理作用(Filmore,D.,(2004)It's a GPCR world.Modern DrugDiscovery American Chemical Society 2004(November),24–28；Overington,J.P.等人,(2006)How many drug targets are there？Nat Rev Drug Discov 5,993-996)。GPCR与许多疾病相关，并且是所有处方药中约40％的靶标(Filmore,D.(2004))。
CXC受体4(“CXCR4”)是趋化因子受体家族GPCR的成员。CXCR4在大多数造血细胞类型、骨髓干细胞、内皮祖细胞、血管内皮细胞、神经元和神经元干细胞、小神经胶质细胞和星状细胞中表现(Klein,R.S.等人,(2004)Immune and nervous system CXCL12 and CXCR4:parallel roles in patterning and plasticity,Trends Immunol 25,306-314；Griffith,J.W.等人,(2014)Chemokines and chemokine receptors:positioning cellsfor host defense and immunity,Annu Rev Immunol 32,659-702)。CXCR4对其配体CXC基序趋化因子配体12(CXCL12)(还称为基质细胞衍生因子1(SDF-1))有反应，并且在造血、心血管和神经***的胚胎发育中起重要作用(Griffith,J.W.等人,(2014))。CXCR4经发现为人类免疫缺陷病毒(HIV)的共同受体，并且在造血干细胞(HSC)向骨髓的归巢、炎症、组织的免疫监视以及成人中的组织再生中起重要作用(Chatterjee,S.等人,(2014)Theintricate role of CXCR4 in cancer,Adv Cancer Res 124,31-82)。CXCR4涉及多种免疫和自体免疫疾病，诸如HIV感染、局部缺血、伤口愈合、类风湿性关节炎、全身性红斑狼疮(SLE)、间质性肺炎、血管疾病、多发性硬化症、肺纤维化和过敏性气道疾病(Chu,T.等人,(2017)CXCL12/CXCR4/CXCR7 Chemokine Axis in the Central Nervous System:Therapeutic Targets for Remyelination in Demyelinating Diseases,Neuroscientist 23,627-648；Debnath,B.等人,(2013)Small molecule inhibitors ofCXCR4,Theranostics 3,47-75；和Domanska,U.M.等人,(2013)A review on CXCR4/CXCL12axis in oncology:no place to hide,Eur J Cancer 49,219-230)。CXCR4还与多种不同癌症相关，并且被认为在恶性肿瘤中具有多种潜在作用。CXCR4在超过23种人类癌症中过表达，包括乳腺癌、肺癌、脑癌、肾癌(或肾细胞癌)、胰脏癌、卵巢癌、***癌、黑色素瘤、白血病、多发性骨髓瘤、胃肠道癌和软组织肉瘤，并且被认为是不良预后标志物(Domanska,U.M.等人,(2013)；Chatterjee,S.等人,(2014)；和Furusato,B.等人,(2010)CXCR4 andcancer,Pathol Int 60,497-505)。
已研究了有限数目的GPCR家族诸如趋化因子、肾上腺素和阿片受体家族中CXCR4和GPCR的异聚体的形成。考虑到CXCR4在多种病理状况下的主要作用和表达增加，很有可能存在为特定疾病赋予独特特征的不同CXCR4-GPCRx异聚体。
肾上腺素受体β2(有时称为β-2肾上腺素受体或β2肾上腺素受体(“ADRB2”))是与肾上腺素(epinephrine)相互作用的跨细胞膜β-肾上腺素受体，肾上腺素是其经由下游L型钙通道相互作用的信号传导介导生理反应诸如平滑肌松弛和支气管扩张的激素和神经递质(配体同物异名，肾上腺素(adrenaline))(Gregorio,G.G.等人,(2017)Single-moleculeanalysis of ligand efficacy in beta2AR-G-protein activation,Nature 547,68-73)。CXCR4和ADRB2的异聚体(CXCR4-ADRB2异聚体)的形成，以及CXCR4和ADRB2(β2-AR)在心肌细胞上的共表达，以及使用免疫共沉淀和生物发光共振能量转移的CXCR4与ADRB2的物理关联(LaRocca,T.J.等人,(2010)beta2-Adrenergic receptor signaling in thecardiac myocyte is modulated by interactions with CXCR4,J CardiovascPharmacol 56,548-559；Nakai,A.等人,(2014)Control of lymphocyte egress fromlymph nodes through beta2-adrenergic receptors,J Exp Med 211,2583-2598)。
考虑到CXCR4在多种病理状况下的主要作用和表达增加，很有可能存在可为特定疾病赋予独特特征的CXCR4-ADRB2异聚体。因此，本领域需要鉴定和开发CXCR4-ADRB2异聚体的抑制剂，以用作例如相对于CXCR4抑制剂单一疗法，具有较高功效和较低副作用的靶向CXCR4-ADRB2异聚体的癌症治疗剂。
本文提供了CXCR4-ADRB2异聚体的抑制剂或CXCR4-ADRB2异聚体的抑制剂的组合，以及包含它们的药物组合物或药盒，以及它们的治疗和使用方法，其中增强的下游信号传导由功能性CXCR4-ADRB2异聚体形成产生(例如，相对于CXCR4下游增强的信号传导，或相对于ADRB2下游增强的信号传导)；其中受试者诸如受试者的细胞中所述CXCR4-ADRB2异聚体的存在与疾病诸如癌症有关。
发明内容
在一个方面，本文提供了用于抑制罹患癌症的受试者的细胞中的由CXCR4-ADRB2异聚体产生的增强的下游信号传导的方法，所述方法包括向受试者施用：(a)CXCR4抑制剂，其中CXCR4抑制剂是布利沙福(burixafor)；和(b)ADRB2抑制剂；其中：(i)增强的下游信号传导由CXCR4-ADRB2异聚体产生；并且(ii)所施用的抑制剂的组合抑制癌症受试者中的来自所述CXCR4-ADRB2异聚体的增强的下游信号传导。
在另一个方面，本文提供了用于治疗具有含有CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的癌症的方法，所述方法包括向受试者施用：(a)CXCR4抑制剂，其中CXCR4抑制剂是布利沙福；和(b)ADRB2抑制剂；其中：(i)增强的下游信号传导由CXCR4-ADRB2异聚体产生；并且(ii)所施用的抑制剂的组合抑制癌症受试者中的来自所述CXCR4-ADRB2异聚体的增强的下游信号传导。
在另一个方面，本文提供了用于治疗具有含有CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的癌症的方法，所述方法包括：(a)确定受试者细胞是否含有CXCR4-ADRB2异聚体，其中增强的下游信号传导由CXCR4-ADRB2异聚体产生；和(b)如果受试者的细胞含有所述CXCR4-ADRB2异聚体，那么向癌症受试者施用：(i)CXCR4抑制剂，其中CXCR4抑制剂是布利沙福；和(ii)ADRB2抑制剂。
在另一个方面，本文提供了用于治疗具有含有CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的癌症的方法，其中增强的下游信号传导由CXCR4-ADRB2异聚体产生，所述方法包括：(1)通过以下方式确定受试者是否具有含有CXCR4-ADRB2异聚体的细胞：获得或已获得来自受试者的生物样品；和对生物样品进行或已进行测定以确定是否：(i)受试者的细胞含有所述CXCR4-ADRB2异聚体；或(ii)CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂的组合：改变一个或多个受试者源性细胞中所述CXCR4-ADRB2异聚体的异聚体特异性性质或功能；改变一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的异聚体特异性性质；或降低具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的癌症进展；和(2)如果受试者具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞，那么向癌症受试者施用CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂的组合，其中所述CXCR4抑制剂是布利沙福；和(3)如果受试者不具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞，那么向癌症受试者施用布利沙福或ADRB2抑制剂的单一抑制剂。
在另一个方面，本文提供了用于治疗具有含有CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的癌症的方法，其中增强的下游信号传导由CXCR4-ADRB2异聚体产生，所述方法包括：(1)通过以下方式确定受试者是否具有含有CXCR4-ADRB2异聚体的细胞：获得或已获得来自受试者的生物样品；和对生物样品进行或已进行测定以确定是否：(i)受试者的细胞含有所述CXCR4-ADRB2异聚体；或(ii)CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂的组合：改变一个或多个受试者源性细胞中所述CXCR4-ADRB2异聚体的异聚体特异性性质或功能；改变一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的异聚体特异性性质；或降低具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的癌症进展；和(2)如果受试者具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞，那么向癌症受试者施用CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂的组合，其中所述CXCR4抑制剂是布利沙福；和(3)如果受试者不具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞，那么向癌症受试者施用布利沙福或ADRB2抑制剂的单一抑制剂；其中：(a)相对于施用布利沙福或ADRB2抑制剂的单一抑制剂，在向癌症受试者施用布利沙福和ADRB2抑制剂的组合后，具有含有CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的癌症的进展多降低5-100％的范围；(b)相对于作为单一抑制剂施用时布利沙福的功效，当与ADRB2抑制剂组合向具有所述含有CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者施用时，布利沙福的功效增加5-2000％的范围；和/或(c)相对于作为单一抑制剂施用时ADRB2抑制剂的功效，当与布利沙福组合向具有所述含有CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者施用时，ADRB2抑制剂的功效增加5-2000％的范围。
在另一个方面，本文提供了用于治疗具有含有CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的癌症的方法，其中增强的下游信号传导由CXCR4-ADRB2异聚体产生，所述方法包括：(1)通过以下方式确定受试者的细胞是否含有CXCR4-ADRB2异聚体：获得或已获得来自受试者的生物样品，和对生物样品进行或已进行测定以确定所述CXCR4-ADRB2异聚体是否存在于受试者的细胞中；其中对生物样品进行的测定是或包括以下中的一项或多项：共内化测定、共定位测定、原位杂交、免疫组织化学、免疫电子显微镜术、基于接近性的测定(proximity-based assay)、免疫共沉淀测定、酶联免疫吸附测定(ELISA)、流式细胞分析技术、RNAseq、RT-qPCR、微阵列或荧光动物测定；和(2)如果受试者的细胞含有所述CXCR4-ADRB2异聚体，那么向癌症受试者施用CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂的组合，其中CXCR4抑制剂是布利沙福；和(3)如果受试者的细胞不含有所述CXCR4-ADRB2异聚体，那么向癌症受试者施用布利沙福或ADRB2抑制剂的单一抑制剂。
在另一个方面，本文提供了用于治疗具有含有CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的癌症的方法，其中增强的下游信号传导由CXCR4-ADRB2异聚体产生，所述方法包括：(1)通过以下方式确定受试者的细胞是否含有CXCR4-ADRB2异聚体：获得或已获得来自受试者的生物样品，和对生物样品进行或已进行测定以确定所述CXCR4-ADRB2异聚体是否存在于受试者的细胞中；其中对生物样品进行的测定是或包含以下中的一项或多项：共内化测定、共定位测定、原位杂交、免疫组织化学、免疫电子显微镜术、基于接近性的测定、免疫共沉淀测定、酶联免疫吸附测定(ELISA)、流式细胞分析技术、RNAseq、RT-qPCR、微阵列或荧光动物测定；和(2)如果受试者的细胞含有所述CXCR4-ADRB2异聚体，那么向癌症受试者施用CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂的组合，其中CXCR4抑制剂是布利沙福；和(3)如果受试者的细胞不含有所述CXCR4-ADRB2异聚体，那么向癌症受试者施用布利沙福或ADRB2抑制剂的单一抑制剂；其中：(a)相对于施用布利沙福或ADRB2抑制剂的单一抑制剂，在向癌症受试者施用布利沙福和ADRB2抑制剂的组合之后，具有所述含有CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的癌症的进展多降低5-100％的范围；(b)相对于作为单一抑制剂施用时布利沙福的功效，当与ADRB2抑制剂组合向具有所述含有CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者施用时，布利沙福的功效增加5-2000％的范围；和/或(c)相对于作为单一抑制剂施用时ADRB2抑制剂的功效，当与布利沙福组合向具有所述含有CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者施用时，ADRB2抑制剂的功效增加5-2000％的范围。
在另一个方面，本文提供了在治疗具有含有CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的癌症中所使用的药盒，所述药盒包含：(a)CXCR4抑制剂，其中CXCR4抑制剂是布利沙福；和(b)ADRB2抑制剂；其中增强的下游信号传导由CXCR4-ADRB2异聚体产生。
在另一个方面，本文提供了在治疗具有含有CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的癌症中所使用的药物组合物，所述药物组合物包括：(a)CXCR4抑制剂，其中CXCR4抑制剂是布利沙福；(b)ADRB2抑制剂；和(c)药学上可接受的载剂；其中增强的下游信号传导由CXCR4-ADRB2异聚体产生。
在另一个方面，本文提供了药物组合物，其包括：(a)CXCR4抑制剂，其中CXCR4抑制剂是布利沙福；(b)ADRB2抑制剂；和(c)药学上可接受的载剂。
附图说明
图1：示出了双分子荧光互补(BiFC)测定的示意图。GPCR A与黄色荧光蛋白(YFP)Venus的N末端片段(VN)融合，并且GPCR B与Venus的C末端片段(VC)融合。当GPCR A和B形成异聚体时，互补VN和VC足够接近以形成功能性Venus。
图2A至图2D：示出了使用BiFC测定的CXCR4与ADRB2相互作用的鉴定。显示出负BiFC信号的代表性图像；CXCR4-VN和HA-VC(图2A)以及CXCR4-VN和GCGR-VC(图2C)。显示出正BiFC信号的CXCR4和GPCRx的代表性图像：CXCR4-VN和CXCR4-VC(图2B)以及CXCR4-VN和ADRB2-VC(图2D)。
图3A至图3B：示出了GPCR共内化研究的原理。用GPCRx特异性激动剂处理共表达CXCR4-GFP和GPCRx的细胞。(图3A)CXCR4和GPCRx彼此不物理相互作用。GPCRx激动剂诱导GPCRx内化，但不诱导CXCR4-GFP内化。(图3B)CXCR4和GPCRx物理相互作用并形成异聚体。GPCRx激动剂诱导GPCRx内化，并且CXCR4-GFP与GPCRx共内化。
图4A至图4B：示出了在用对应激动剂对GPCRx进行刺激之后CXCR4-EGFP的共内化(对照：CXCR4-GFP(图4A))。将U-2 OS细胞用编码CXCR4-EGFP和GPCRx-VC的腺病毒共转导，然后检查GPCRx伴侣与CXCR4-EGFP形成异聚体和诱导CXCR4-EGFP共内化：GPCRx表示ADRB2(图4B)。
图5A至图5D：示出了用相应选择性激动剂共刺激之后共同表达CXCR4和ADRB2的细胞中钙反应的增强。用编码CXCR4和HA-VC(图5A)、ADRB2和HA-VC(图5B)或CXCR4和ADRB2(图5C)的腺病毒转导MDA-MB-231人乳腺癌细胞。使用编码HA-VC的腺病毒调整转导的腺病毒的总量。使细胞表达GPCR2天，与Cal-520 AM孵育2小时，并用15nM CXCL12、100nM沙美特罗(salmeterol)(ADRB2选择性激动剂)或CXCL12和沙美特罗一起处理。使用FlexStation 3多模式酶标仪测量钙动员。将结果归一化为基线活性。数据代表三个独立实验(平均值±SEM)。(图5D)钙动员通过计算A-C中每个图的曲线下面积(AUC)来定量。将数据归一化为单独表达CXCR4的细胞中CXCL12刺激的钙反应。总和表示单独地在共表达CXCR4和ADRB2的细胞中CXCL12和沙美特罗的刺激之后获得的反应的计算累加效应，以实现增强作用的可视化。***P<0.001；学生t检验。
图6：显示出当用CXCL12和ADRB2激动剂沙美特罗同时刺激表达CXCR4和ADRB2并含有CXCR4-ADRB2异聚体的细胞时，用两种拮抗剂进行的共同施用有效抑制了增强的钙反应。将MDA-MB-231细胞用编码CXCR4和ADRB2的腺病毒共转导。将细胞与Cal-520 AM孵育2小时，与ADRB2拮抗剂或媒介物孵育30min，并用指定量的CXCL12、ADRB2激动剂沙美特罗或CXCL12和ADRB2激动剂沙美特罗刺激。钙动员如图5D中所述进行定量。数据代表三个独立实验(平均值±SEM)。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001；学生t检验。
图7：示出了内化抑制研究的原理。将共表达CXCR4-GFP和GPCRx的细胞用CXCL12(SDF-1)和/或GPCRx特异性拮抗剂处理。情况A：CXCR4和GPCRx形成异聚体。CXCR4激动剂CXCL12(SDF-1)诱导单独CXCR4-GFP或CXCR4-GFP与GPCRx的内化。情况B：GPCRx拮抗剂不诱导CXCR4-GFP的内化。情况C：GPCRx特异性拮抗剂抑制CXCL12(SDF-1)刺激的CXCR4-GFP的内化。
图8：示出了针对CXCR4-ADRB2异聚体的通过ADRB2拮抗剂的内化的抑制。用编码ADRB2的腺病毒转导表达CXCR4-GFP的U-2 OS细胞。通过CXCR4激动剂CXCR12进行的处理诱导CXCR4-ADRB2内化。但是ADRB2拮抗剂卡维地洛(Carvedilol)不诱导内化。用CXCL12和卡维地洛的共同处理部分抑制了CXCL12诱导的CXCR4-ADRB2内化。
图9：示出了ADRB2拮抗剂对来自癌症患者的患者源性细胞(PDC)的存活的作用。ADRB2拮抗剂卡维地洛对PDC的存活的作用。卡维地洛诱导细胞的存活显著降低(IC50＝11.69μM)。
图10A至图10C：示出了通过PLA和RT-qPCR在过表达CXCR4和ADRB2的U-2 OS细胞中的CXCR4-ADRB2异二聚体检测。在不同MOI下，用编码ADRB2的腺病毒转导表达CXCR4-GFP的U-2 OS细胞2天。然后对共表达CXCR4-ADRB2的U-2 OS细胞进行PLA。图10A：通过PLA的CXCR4-ADRB2异聚体检测的图像。图10B：PLA信号的增加以剂量依赖的方式与ADRB2的表达水平成比例。图10C：来自RT-qPCR的数据示出了U-2 OS细胞的内源性ADRB2表达水平。
图11A至图11B：示出了通过PLA的在PDC中的CXCR4-ADRB2异聚体检测。将GBM来源的PDC(样品ID：986T、948T、783T、777T、352T1、352T2、578T、559T、464T、448T、096T)铺板在腔室玻片上，并且用CXCR4和ADRB2特异性抗体通过PLA检测CXCR4-ADRB2异聚体。图11A：CXCR4-ADRB2异聚体检测的图像。用DAPI染色使细胞核可视化，并且CXCR4-ADRB2异聚体示出为小点。图11B：PDC中CXCR4-ADRB2异聚体的比率。
图12A至图12B：示出了PDX中CXCR4-GPCRx异聚体检测的结果。GBM来源的PDX(样品ID；777T、783T、948T、559T)用CXCR4和ADRB2特异性抗体通过PLA检测CXCR4-ADRB2异聚体。图12A：CXCR4-ADRB2异聚体检测的图像。用DAPI染色使细胞核可视化，并且CXCR4-ADRB2异聚体示出为小点。图12B：PDX中CXCR4-ADRB2异聚体的比率。
图13：示出了在用ADRB2激动剂共刺激之后共表达CXCR4和ADRB2的细胞中钙反应的增强。将MDA-MB-231细胞用编码CXCR4和ADRB2的腺病毒转导。将细胞培养3天，用Cal-520AM染色，并用单独CXCL12(30nM)、递增剂量的单独沙美特罗或递增剂量的沙美特罗与30nMCXCL12的组合进行处理。使用FlexStation 3测量钙动员。总和表示由单独30nM CXCL12(空心正方形)和指定剂量的单独ADRB2配体(实心圆圈)引起的反应的计算相加值。总和图描绘为带有倒三角形的虚线。通过学生t检验确定各点处总和(倒三角形)与共同处理(实心正方形)之间的统计学显著性差异。*P<0.05；**P<0.01；***P<0.001；数据代表平均值±SD(n＝3)。
图14：示出了当将表达CXCR4-ADRB2异聚体的细胞用CXCL12和ADRB2激动剂同时刺激时，通过抗CXCR4抗体和ADRB2拮抗剂的共同处理对增强的钙反应的有效抑制。将MDA-MB-231细胞用编码CXCR4和ADRB2的腺病毒共转导。将细胞用指定浓度的ADRB2拮抗剂(卡维地洛)、抗CXCR4抗体(12G5)或媒介物处理，并与Cal 6孵育2小时。随后用指定量CXCL12、ADRB2激动剂(沙美特罗)或CXCL12和ADRB2激动剂刺激细胞。
图15A至图15B：图15A：示出了分别用亲代细胞A549、稳定过表达CXCR4的A549-CXCR4和稳定过表达CXCR4-ADRB2异聚体的A549-CXCR4-ADRB2移植的三只小鼠在移植之后28天的图像；图15B：示出了比较图15A的移植细胞之间的肿瘤生长的图；通过测量肿瘤的长度(L)和宽度(W)并根据下式计算肿瘤体积，每三天或四天监测肿瘤生长：体积＝0.5LW2。结果表示为3个个体的平均值±标准差。
图16A至图16B：示出了在表达CXCR4-ADRB2异聚体的MDA-MB-231细胞中通过CXCL12和/或沙美特罗的刺激的ERK活化。图16A示出了用CXCL12(10nM)和/或沙美特罗(10nM)处理20分钟的MDA-MB-231细胞、MDA-MB-231-CXCR4和MDA-MB-231-CXCR4-ADRB2中的磷酸-ERK1/2Thr202/Tyr204和总ERK1/2的蛋白质印迹分析。图16B示出了相对于总ERK蛋白水平的磷酸-ERK1/2 Thr202/Tyr204蛋白表达的光密度分析(iBright分析软件)。
图17A至图17B：示出了在表达CXCR4-ADRB2异聚体的A549细胞中通过CXCL12和/或沙美特罗的刺激的ERK活化。图17A示出了用CXCL12(10nM)和/或沙美特罗(10nM)处理10分钟的A549、A549-CXCR4、和A549-CXCR4-ADRB2细胞中的磷酸-ERK1/2 Thr202/Tyr204和总ERK1/2的蛋白质印迹分析。图17B示出了相对于总ERK蛋白水准的磷酸-ERK1/2 Thr202/Tyr204蛋白表达的光密度分析(iBright分析软件)。
图18A至图18E：示出了CXCR4拮抗剂对CXCR4-CXCL12介导的增殖增加的作用。将过表达CXCR4和ADRB2的A549双阴性(RLuc-Luc2P)细胞和A549-CXCR4-ADRB2细胞铺板到96孔板中，并在无血清条件下用CXCL12和/或指定药物刺激72小时(图18A：AMD3100(10μM)；图18B：LY2510924(10μM)；图18C：AMD070(1μM)；图18D：TG-0054(10μM)；和图18E：BKT-140(10μM))。测量来自三个重复孔的荧光，并且将数据表示为荧光的平均比率(药物处理/媒介物)±SEM。
图19A至图19C：示出了CXCR4-ADRB2异聚体表达与肿瘤生长之间的相关性：图19A示出了在A549亲代细胞、表达CXCR4同聚体的A549-CXCR4细胞系和表达CXCR4-ADRB2异聚体的A549-CXCR4-ADRB2细胞系中通过PLA的CXCR4-ADRB2异聚体的检测；图19B示出了在A549、A549-CXCR4和A549-CXCR4-ADRB2中通过PLA的CXCR4-ADRB2异聚体的定量；并且图19C示出了带有A549亲代细胞的小鼠与带有A549-CXCR4-ADRB2细胞的小鼠之间的肿瘤生长的比较。
图20A至图20C：示出了CXCR4-ADRB2异聚体表达与肿瘤生长之间的相关性。图20A示出了在MDA-MB-231亲代细胞、表达CXCR4同聚体的MDA-MB-231-CXCR4细胞系和表达CXCR4-ADRB2异聚体的MDA-MB-231-CXCR4-ADRB2细胞系中通过PLA的CXCR4-ADRB2异聚体的检测；图20B示出了在MDA-MB-231、MDA-MB-231-CXCR4和MDA-MB-231-CXCR4-ADRB2中通过PLA的CXCR4-ADRB2异聚体的定量；并且图20C示出了带有MDA-MB-231亲代细胞、带有MDA-MB-231-CXCR4或MDA-MB-231-CXCR4-ADRB2细胞的小鼠之间肿瘤生长的比较。
图21A至图21D：示出了单独CXCR4抑制剂对表达CXCR4-ADRB2异聚体的A549异种移植小鼠中的肿瘤生长的作用。以剂量依赖性方式使移植有表达CXCR4-ADRB2异聚体的A549细胞系的小鼠经受各种CXCR4抑制剂、AMD3100(图21A)、LY2510924(图21B)、AMD070(图21C)或TG-0054(图21D)以便比较肿瘤大小。
图22A至图22D：示出了当将表达CXCR4-ADRB2异聚体的细胞移植至小鼠中并单独或以组合方式用CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂卡维地洛处理时，肿瘤的相对生长。图22A至图22C：示出了当将表达CXCR4-ADRB2异聚体的MDA-MB-231细胞原位移植至小鼠中并单独或以组合方式用CXCR4抑制剂(AMD3100(图22A)、LY2510924(图22B)或AMD070(图22C)和ADRB2抑制剂卡维地洛处理时，肿瘤的相对生长。结果表示为5个个体的平均值±标准差。图22D：示出了当将表达CXCR4-ADRB2异聚体的A549细胞移植至小鼠(A549异种移植模型)中并单独或以组合方式用AMD3100(CXCR4抑制剂)和卡维地洛(ADRB2抑制剂)处理时，肿瘤的相对生长。通过测量肿瘤的长度(L)和宽度(W)并根据下式计算肿瘤体积，每三天或四天监测肿瘤生长：体积＝0.5LW2。结果表示为10个个体的平均值±标准差。
图23A：示出了在不存在或存在作为竞争剂的***(Propranolol)(1μM)的情况下，对在指定MOI下在用Ad-CXCR4和Ad-ADRB2瞬时感染并用TZ14011-tb和***-g2标记的A549细胞上观察到的基于配体的TR-FRET信号。
图23B：示出了对在指定MOI下在用Ad-CXCR4和Ad-ADRB2瞬时感染的U2OS细胞上观察到的基于抗体的TR-FRET信号。随后与兔抗CXCR4抗体和小鼠抗ADRB2抗体一起孵育，将用铽穴状化合物标记的山羊抗兔IgG和用Alexa Fluor 647标记的山羊抗小鼠IgG用于TR-FRET。
图24A至图24C：示出了在实体肿瘤癌细胞系A549(肺癌)、U2OS(骨肉瘤)和MDA-MB-231(乳腺癌)中通过PLA的CXCR4-ADRB2异聚体检测以及通过RT-qPCR的经由RNA表达水平的CXCR4或ADRB2的定量。图24A示出了通过RT-qPCR的CXCR4和ADRB2的RNA表达水平；图24B示出了通过PLA所检测的CXCR4和ADRB2异聚体的图像；并且图24C示出了通过PLA的CXCR4和ADRB2异聚体的定量。
图25A至图25C：示出了在血癌细胞系HL60(白血病)、U937(白血病)和RPMI8226(骨髓瘤)中通过PLA的CXCR4-ADRB2异聚体检测以及通过RT-qPCR经由RNA表达水平的CXCR4或ADRB2的定量。图25A示出了通过RT-qPCR的CXCR4和ADRB2的RNA表达水平；图25B示出了通过PLA所检测的CXCR4和ADRB2异聚体的图像；并且图25C示出了通过PLA的CXCR4和ADRB2异聚体的定量。
图26A至图26B：示出了当用CXCL12和ADRB2激动剂(福莫特罗(formoterol))共刺激时，表达CXCR4-ADRB2异聚体的细胞中钙反应的增强。图26A示出了在用CXCL12和ADRB2激动剂福莫特罗共刺激之后，表达CXCR4-ADRB2异聚体的U937细胞中钙反应的增强；图26B示出了在用CXCL12和ADRB2激动剂福莫特罗共刺激之后，表达CXCR4-ADRB2异聚体的HL-60细胞中钙反应的增强。
缩写
除非另外指定，否则以下内容包括本文所公开的术语的缩写：急性髓系白血病(AML)、腺病毒高通量***(AdHTS)、肾上腺素受体β2(ADRB2)、双分子荧光互补(BiFC)、生物发光共振能量转移(BRET)、牛血清白蛋白(BSA)、癌症干细胞(CSC)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、慢性髓系白血病(CML)、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、Venus的C末端片段(VC)、C-X-C基序趋化因子配体12(CXCL12)、CXC受体4(CXCR4)、酶联免疫吸附测定(ELISA)、***固定石蜡包埋(FFPE)、荧光共振能量转移(FRET)、G蛋白偶联受体(GPCR)、多形性胶质母细胞瘤(GBM)、胰高血糖素受体(GCGR)、GPCR异聚体鉴定技术(GPCR-HIT)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、造血干细胞(HSC)、肝细胞癌(HCC)、人类免疫缺陷病毒(HIV)、国际基础和临床药理学联合会的受体命名法和药物分类委员会(NC-IUPHAR)、多发性骨髓瘤(MM)、感染复数(MOI)、骨髓增生异常综合征(MDS)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、非小细胞肺癌(NSCLC)、Venus的N末端片段(VN)、患者源性细胞(PDC)、患者源性异种移植(PDX)、正电子发射断层扫描(PET)、电脑断层扫描(CT)、邻位连接测定(PLA)、逆转录定量聚合酶链反应(有时称为RT-qPCR、或qRT-PCR、或qPCR、或即时PCR)、单光子发射电脑断层扫描(SPECT)、小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL)、小细胞肺癌(SCLC)、基质细胞衍生因子1(SDF-1)、全身性红斑狼疮(SLE)、循环阈值(Ct)、时间分辨FRET(TR-FRET)、肿瘤微环境(TME)、血管平滑肌细胞(VSMC)、WHIM综合征(疣、低丙球蛋白血症、感染和嗜中性白血球骨髓保留症(Myelokathexis))、绿色荧光蛋白(GFP)和黄色荧光蛋白(YFP)。
具体实施方式
如本文所用，冠词“一个”、“一种”和“所述”是指所述冠词的语法对象中的一项或多于一项。例如，样品是指一个样品或两个或更多个样品。
如本文所用，术语“受试者”是指哺乳动物。受试者可以是人类或非人类哺乳动物，诸如狗、猫、牛、马、小鼠、大鼠、兔或其基因转殖物种。受试者可以是患者或癌症患者。
如本文所用，术语“样品”是指含有一种或多种所关注的组分的材料或材料的混合物。来自受试者的样品是指从受试者获得的样品，包括体内或原位获得、达到或收集的生物组织或流体来源的样品。可以从受试者的含有癌前或癌细胞或组织的区域获得样品。此类样品可以是但不限于从哺乳动物分离而来的器官、组织、级分和细胞。在某些实施方案中，样品可以是生物样品，诸如生物流体样品或生物组织样品。样品还可以是组织活检。在某些实施方案中，生物样品包括但不限于***、血液样品、血浆样品、全血、部分纯化的血液、血清、骨髓、细胞溶解产物、细胞培养物、细胞系、组织、口腔组织、胃肠组织、器官、细胞器、生物流体、尿液样品、皮肤样品、唾液样品、脑液样品或眼液样品。
如本文所用，术语“治疗(treat、treating和treatment)”，当用于指代癌症患者时，是指降低癌症的严重程度或延缓或减慢癌症的进展的作用，包括(a)抑制癌症生长或阻止癌症的发展，和(b)引起癌症消退，或者延迟或最小化与癌症的存在相关的一种或多种症状。
如本文所用，术语“施用(administer、administering或administration)”是指通过本文所述或本领域另外已知的方法将化合物、化合物的组合或包含它们的药物组合物递送至受试者体内或导致其递送至受试者体内的行为。施用化合物、化合物的组合或包含它们的药物组合物包括开出将递送至患者体内的化合物、化合物的组合或包含它们的药物组合物。示例性施用形式包括：口服剂型，诸如片剂，胶囊，糖浆，混悬液；可注射剂型，诸如静脉内(IV)、肌肉内(IM)或腹膜内(IP)；皮下(SC)、颅内(IC)；透皮剂型，包括霜剂、凝胶剂、散剂或贴剂；含服剂型；吸入散剂、喷雾剂、混悬液和直肠栓剂。
如本文所用，短语“治疗剂”是指可用于治疗、改善、预防或管理癌症和/或与其相关的症状的任何剂。在某些实施方案中，治疗剂是指本发明的CXCR4-ADRB2异聚体的抑制剂。治疗剂可以是众所周知可用于，或者已经或目前用于治疗、改善、预防或管理癌症和/或与其相关的症状的剂。
如本文所用，如本文所用的短语“有效量”是指足以实现有益或所期望结果的量。有效量可以一次或多次施用、应用或剂量的形式施用。这种递送取决于许多变量，包括单独剂量单位将被使用的时间段、剂的生物利用度、施用途径等。
如本文所用，当与疾病或病症结合使用时，化合物(例如，本文所提供的治疗剂诸如抑制剂、拮抗剂或任何其他治疗剂)或化合物的组合的术语“治疗有效量”是指足以在疾病或病症的治疗或管理中提供治疗益处或足以延迟或最小化与所述疾病或病症有关的一种或多种症状的量。化合物的治疗有效量意指当单独使用或与其他疗法组合使用时在疾病或病症的治疗或管理中提供治疗益处的化合物的量。所述术语涵盖改善总体治疗，减少或避免症状，或者增强另一种治疗剂的治疗功效的量。所述术语还指足以引起由研究人员、兽医、医师或临床医师寻求的生物分子(例如，蛋白、酶、RNA或DNA)、细胞、组织、***、动物或人类的生物学或医学反应的化合物的量。
如本文所用，术语“异聚体”是指由CXCR4单元(或当在含CXCR4的异聚体的情境下鉴定时，有时称为CXCR4元体)和ADRB2单元(或当在含ADRB2的异聚体的情境下鉴定时，有时称为ADRB2元体)组成的大分子复合物，其生物化学性质分别与CXCR4单体或ADRB2单体的生物化学性质明显不同，或分别与CXCR4单体和ADRB2单体的生物化学性质明显不同。可通过以下来评估异聚化：原位杂交、免疫组织化学、RNAseq、逆转录定量PCR(有时称为RT-qPCR、或qRT-PCR、或qPCR、或即时PCR)、所鉴定的异聚体的各单体或元体的表达水平(例如，与CXCR4-ADRB2异聚体相关的CXCR4和ADRB2的表达水平)、微阵列、邻位连接测定(PLA)、时间分辨FRET(TR-FRET)、全身单光子发射电脑断层扫描(SPECT)或正电子发射断层扫描/电脑断层扫描(PET/CT)。
如本文所用，短语“细胞内Ca2+测定”、“钙动员测定”或它们的变形是指测量与GPCR激活或抑制(诸如，CXCR4激活或抑制和/或ADRB2激活或抑制)相关的钙通量的基于细胞的测定。所述方法利用钙敏感荧光染料，所述染料被吸收至大多数细胞的细胞质中。染料结合从胞内钙库(intracellular store)释放的钙，并且其荧光增加。荧光强度的变化与响应于所关注的受体的配体激活而释放至细胞质中的胞内钙的量直接相关。在某些实施方案中，GPCR是CXCR4。在某些实施方案中，GPCR是ADRB2。在某些实施方案中，基于细胞的测定测量与CXCR4-ADRB2异聚体激活或抑制有关的钙通量。
如本文所用，短语“基于接近性的测定”是指能够在体外(在细胞溶解产物中)和在活细胞中监测两个蛋白分子的接近性和/或结合(诸如CXCR4蛋白(单体或单元)与ADRB2蛋白(单体或单元)的接近性和/或结合)的生物物理和生物化学技术，包括生物发光共振能量转移(BRET)、荧光共振能量转移(FRET)、双分子荧光互补(BiFC)、邻位连接测定(PLA)、半胱氨酸交联和免疫共沉淀(Ferre,S.等人,(2009)Building a new conceptual frameworkfor receptor heteromers,Nat Chem Biol 5,131-134；Gomes,I.等人,(2016)G Protein-Coupled Receptor Heteromers,Annu Rev Pharmacol Toxicol 56,403-425)。
用于检测CXCR4-ADRB2异聚体形成的替代方法包括但不限于：免疫染色(Bushlin,I.等人,(2012)Dimerization with cannabinoid receptors allosterically modulatesdelta opioid receptor activity during neuropathic pain,PLoS One 7,e49789；Decaillot,F.M.等人,(2008)Cell surface targeting of mu-delta opioid receptorheterodimers by RTP4,Proc Natl Acad Sci U S A 105,16045-16050)；免疫电子显微镜术(Fernandez-Duenas,V.等人,(2015)Untangling dopamine-adenosine receptor-receptor assembly in experimental parkinsonism in rats,Dis Model Mech 8,57-63)；BRET(Pfleger,K.D.等人,(2006)Illuminating insights into protein-proteininteractions using bioluminescence resonance energy transfer(BRET),NatMethods 3,165-174)；时间分辨FRET测定(Fernandez-Duenas,V.等人,2015)；原位杂交(He,S.Q.等人,(2011)Facilitation of mu-opioid receptor activity by preventingdelta-opioid receptor-mediated codegradation,Neuron 69,120-131)；FRET(Lohse,M.J.等人,(2012)Fluorescence/bioluminescence resonance energy transfertechniques to study G-protein-coupled receptor activation and signaling,Pharmacol Rev 64,299-336)；使用GPCR异聚体鉴定技术(GPCR-HIT,Dimerix Bioscience)(Mustafa,S.等人,(2011)G protein-coupled receptor heteromer identificationtechnology:identification and profiling of GPCR heteromers,J Lab Autom 16,285-291)、使用BRET、FRET、BiFC、双分子发光互补、酶片段测定和Tango Tango GPCR测定***(Thermo Fisher Scientific)(Mustafa,S.等人,(2010)Uncovering GPCR heteromer-biased ligands,Drug Discov Today Technol 7,e1-e94)的β-抑制蛋白(β-arrestin)募集测定；PRESTO-Tango***(Kroeze,W.K.等人,(2015)PRESTO-Tango as an open-sourceresource for interrogation of the druggable human GPCRome,Nat Struct Mol Biol22,362-369)；调节分泌/聚集技术(ARIAD Pharmaceuticals)(Hansen,J.L.等人,(2009)Lack of evidence for AT1R/B2R heterodimerization in COS-7,HEK293,and NIH3T3cells:how common is the AT1R/B2R heterodimer？J Biol Chem 284,1831-1839)；受体选择和扩增技术(ACADIA Pharmaceuticals)(Hansen,J.L.等人,2009)；DimerScreen(CaraTherapeutics)(Mustafa，S.，2010)；二聚体/相互作用蛋白易位测定(Patobios)(Mustafa，S.，2010)；免疫共沉淀法(Abd Alla,J.等人,(2009)Calreticulin enhances B2bradykinin receptor maturation and heterodimerization,Biochem Biophys ResCommun 387,186-190)；使用表面酶联免疫吸附测定(ELISA)(Decaillot,F.M.等人,2008)或流式细胞分析技术(Law,P.Y.等人,(2005)Heterodimerization of mu-and delta-opioid receptors occurs at the cell surface only and requires receptor-Gprotein interactions,J Biol Chem 280,11152-11164)的GPCR内化测定；全细胞磷酸化测定(Pfeiffer,M.等人,(2002)Heterodimerization of somatostatin and opioidreceptors cross-modulates phosphorylation,internalization,anddesensitization,J Biol Chem 277,19762-19772)；和邻位连接测定(PLA)(Frederick,A.L.等人,(2015)Evidence against dopamine D1/D2 receptor heteromers,MolPsychiatry 20,1373-1385)。
用于检测表达CXCR4和ADRB2两者的细胞中的药理学性质、信号传导性质和/或转运性质的变化的替代方法包括但不限于：放射性配体结合测定(Bushlin,I.等人,2012；Pfeiffer,M.等人,2002)；细胞表面生物素化和免疫印迹法(He,S.Q.等人,2011)；免疫染色(Bushlin,I.等人,2012；Decaillot,F.M.等人,2008)；免疫电子显微镜术(Fernandez-Duenas,V.等人,2015)；[35S]GTP-γS结合测定(Bushlin,I.等人,2012)；使用诸如Fura 2-乙酰甲氧基酯(Molecular Probes)、Fluo-4 NW钙染料(Thermo Fisher Scientific)或FLIPR5染料(Molecular Devices)的Calcuim成像或测定；使用放射性免疫测定盒的cAMP测定(Amersham Biosciences)；AlphaScreen(PerkinElmer Life Sciences)；ParameterCyclic AMP测定(R&D Systems)；femto cAMP盒(Cisbio)；cAMP直接免疫测定盒(Calbiochem)或GloSensor cAMP测定(Promega)；GTP酶测定(Pello,O.M.等人,(2008)Ligand stabilization of CXCR4/delta-opioid receptor heterodimers reveals amechanism for immune response regulation,Eur J Immunol 38,537-549)；PKA激活(Stefan,E.等人,(2007)Quantification of dynamic protein complexes usingRenilla luciferase fragment complementation applied to protein kinase Aactivities in vivo,Proc Natl Acad Sci U S A 104,16916-16921)；ERK1/2和/或Akt/PKB磷酸化测定(Callen,L.等人,(2012)Cannabinoid receptors CB1 and CB2 formfunctional heteromers in brain,J Biol Chem 287,20851-20865)；报告基因测定诸如cAMP反应元件(CRE)；血清反应元件(SRE)；血清反应因子反应元件(SRF-RE)；和分泌型碱性磷酸酶测定(Decaillot,F.M.等人,2011)；使用TR-FRET或[3H]肌醇来测量1-磷酸肌醇产生(Mustafa,S.等人,(2012)Identification and profiling of novel alpha1A-adrenoceptor-CXC chemokine receptor 2 heteromer,J Biol Chem 287,12952-12965)；用于测量下游靶基因表达的RT-qPCR(Mustafa,S.等人,2012)；和腺苷酸环化酶活性(George,S.R.等人,(2000)Oligomerization of mu-and delta-opioidreceptors.Generation of novel functional properties.J Biol Chem 275,26128-26135)；下一代测序(NGS)；以及可以检测由于受体异二聚化所产生的受体功能变化的任何其他测定。
如本文所用，术语“ADRB2”是指肾上腺素受体β2(还称为β-2肾上腺素受体或β2肾上腺素受体)，是与肾上腺素(epinephrine)相互作用的跨细胞膜β-肾上腺素受体，肾上腺素是其经由下游L型钙通道相互作用的信号传导介导生理反应诸如平滑肌松弛和支气管扩张的激素和神经递质(配体同物异名，肾上腺素(adrenaline))(Gregorio,G.G.等人,2017)。ADRB2还通过如表1所示的独特示例性数据库标识符(ID)和替代名称来鉴定。ADRB2在肌肉***(诸如平滑肌松弛、运动神经末梢、肝糖分解)和循环***(诸如心肌收缩、心输出量增加)中起作用。在正常眼睛中，沙丁胺醇(salbutamol)对β-2的刺激经由网络增加眼内压。在消化***中，ADRB2诱导肝脏的肝糖分解和葡萄糖新生以及胰腺的胰岛素分泌(Fitzpatrick,D.等人,(2004)「Table 20:2」(Mass:Sunderland))。ADRB2的激活可刺激促进肿瘤生长和转移的信号传导通路(Antoni,M.H.等人,(2006)Nat Rev Cancer 6:240-248；Thaker,P.H.等人,(2006)Nat Med 12:939-944)，包括Ras介导的Raf原癌基因丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Raf)/双特异性促***原激活蛋白激酶激酶(MEK)/胞外信号调节激酶(ERK)、磷酸肌醇3-激酶(PI3K)/RAC丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Akt)和cAMP/蛋白激酶A/促***原激活蛋白激酶通路，其促进细胞增殖和入侵并抑制癌细胞的凋亡，从而可增强肿瘤生长并促进转移(
Figure BDA0003442169160000131
Lu'o'ng,K.V.等人,(2012)Cancer Manag Res 4:431-445)。
如本文所用，术语“CXCR4”是指C-X-C基序趋化因子受体4，其还通过如表1所示的独特示例性数据库标识符(ID)和替代名称来鉴定(Chatterjee,S.等人,2014；Debnath,B.等人,2013；Domanska,U.M.等人,2013；Guo,F.等人,(2016)CXCL12/CXCR4:a symbioticbridge linking cancer cells and their stromal neighbors in oncogeniccommunication networks,Oncogene 35,816-826；Peled,A.等人,(2012)Development ofnovel CXCR4-based therapeutics,Expert Opin Investig Drugs 21,341-353；Roccaro,A.M.等人,(2014)SDF-1inhibition targets the bone marrow niche for cancertherapy,Cell Rep 9,118-128；Walenkamp,A.M.E.等人,(2017)CXCR4 Ligands:The NextBig Hit？J Nucl Med 58，77S-82S)。CXCL12与CXCR4的结合启动配体结合下游的不同信号传导通路，这可导致多种反应，诸如趋化性、细胞存活和/或增殖、细胞内钙增加和基因转录。已经证明趋化性是经由MAPK，通过PKC或通过Gαi介导的，所述通路可通过Erk/1/2进行信号传导(Mellado,M.等人,(2001)Annu Rev Immunol；19:397–421；Bendall,L.J.等人,(2005)Cancer Res；65:3290–8)。趋化因子CXCL12和趋化因子受体CXCR4对在肿瘤形成的许多阶段起重要作用。CXCR4在多种人类癌症中过表达，并且此过表达与多种癌症受试者(包括乳腺癌、肺癌、肾癌、结肠癌、卵巢癌和脑癌以及淋巴瘤和白血病)中的复发风险增加和总体生存不佳相关(Balkwill,F.,(2004)Nat Rev Cancer；4:540–50.1–5；Orimo,A.等人,(2005)Cell；121:335–48；Domanska,U.M.等人,2013)。CXCR4在癌症和其他疾病中的关键作用引发了供临床使用的选择性CXCR4抑制剂的开发。
表1
Figure BDA0003442169160000141
Figure BDA0003442169160000151
*GCID：Genecards鉴定
HGNC：HUGO基因命名委员会
如本文所用，术语“CXCL12”(或基质衍生的因子1(“SDF-1”))是指淋巴细胞的强趋化剂。在胚胎发生期间，CXCL12引导造血细胞从胎儿肝脏向骨的迁移，并且在成年期，CXCL12通过CXCR4依赖性机制募集内皮祖细胞而在血管生成中发挥重要作用。CXCL12还在脾红髓和***髓索内表达(Pitt等人,(2015)Cancer Cell,27:755-768；和Zhao等人,(2011)Proc.Natl.Acad.Sci.USA108:337-342)。人CXCL12的示例性氨基酸序列和对应编码核酸序列可分别在GENBANK登录号：NP_954637.1和NM_199168.3处找到。
沙美特罗是长效β2肾上腺素受体激动剂(LABA)并具有链长为11个胺原子的芳基烷基。这种庞大性(bulkiness)被认为使所述化合物更具亲脂性并且对β2肾上腺素受体具有选择性。沙美特罗由Glaxo(现为GlaxoSmithKline，GSK)于1980年代首次销售和制造，于1990年作为
Figure BDA0003442169160000152
发售。所述产品由GSK在英国以Allen&Hanburys品牌销售。沙美特罗用于维持和预防哮喘症状以及维持慢性阻塞性肺病(COPD)症状(2010年全球慢性阻塞性疾病倡议(2010 Global initiative for chronic obstructive disease))。支气管痉挛的症状包括呼吸短促、喘鸣、咳嗽和胸闷。沙美特罗还用于预防运动期间的呼吸困难(运动诱导的支气管收缩)。
如本文所用，术语“ADRB2抑制剂”是指抑制或压制ADRB2单体或者CXCR4-ADRB2异聚体的ADRB2单元或元体的功能的分子。本文所提供的可用于治疗方法、抑制方法、药物组合物和/或药盒以及其方法和用途的ADRB2抑制剂的非限制性实例包括但不限于：ADRB2拮抗剂、ADRB2反向激动剂、ADRB2正向变构调节剂、ADRB2负向变构调节剂、ADRB2特异性抗体或其抗原结合部分(包括单结构域抗体样支架)、具有通过间隔臂接合至对CXCR4有选择性的药效团的对ADRB2有选择性的药效团的二价配体、针对ADRB2和CXCR4的双特异性抗体、与CXCR4配体连接的放射性标记的ADRB2配体以及抑制CXCR4-ADRB2异聚体选择性信号传导的小分子配体。在某些实施方案中，ADRB2抑制剂抑制或压制ADRB2单体的功能。在某些实施方案中，ADRB2抑制剂抑制或压制CXCR4-ADRB2异聚体的ADRB2单元或元体的功能。在某些实施方案中，ADRB2抑制剂抑制或压制CXCR4-ADRB2异聚体的功能。在某些实施方案中，ADRB2抑制剂抑制或压制在用ADRB2单体的ADRB2激动剂刺激之后的增强的反应。在某些实施方案中，ADRB2抑制剂抑制或压制在用CXCR4-ADRB2异聚体的ADRB2单元的ADRB2激动剂刺激之后的增强的反应。在某些实施方案中，ADRB2抑制剂抑制或压制在用CXCR4-ADRB2异聚体的ADRB2单元的ADRB2激动剂和CXCR4激动剂共刺激之后的增强的反应。在某些实施方案中，ADRB2抑制剂抑制或压制在用CXCR4-ADRB2异聚体的ADRB2激动剂和CXCR4激动剂共刺激之后的增强的反应。在某些实施方案中，增强的反应是增强的Ca2+反应。在某些实施方案中，增强的反应是具有一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的增强的癌症进展。在某些实施方案中，增强的癌症进展是具有一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的增强的细胞增殖。在某些实施方案中，增强的癌症进展是具有一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的增强的细胞迁移。在某些实施方案中，增强的癌症进展是具有一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的增强的转移。在某些实施方案中，增强的癌症进展是具有一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的增强的肿瘤生长。在某些实施方案中，增强的癌症进展是具有一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的增强的血管生成。在某些实施方案中，所述一个或多个细胞是一个或多个癌细胞。在某些实施方案中，所述一个或多个细胞来源于受试者。在某些实施方案中，所述一个或多个细胞来自从受试者获得的生物样品。表2列出了ADRB2抑制剂的某些实例。
如本文所用，术语“CXCR4抑制剂”是指抑制或压制CXCR4单体或者CXCR4-ADRB2异聚体的CXCR4单元或元体的功能的分子。本文所提供的可用于治疗方法、抑制方法、药物组合物和/或药盒以及其方法和用途的CXCR4抑制剂的非限制性实例包括但不限于：CXCR4拮抗剂、CXCR4反向激动剂、CXCR4正向变构调节剂、CXCR4负向变构调节剂、CXCR4特异性抗体或其抗原结合部分(包括单结构域抗体样支架)、具有通过间隔臂接合至对ADRB2有选择性的药效团的对CXCR4有选择性的药效团的二价配体、针对ADRB2和CXCR4的双特异性抗体、与CXCR4配体连接的放射性标记的ADRB2配体以及抑制CXCR4-ADRB2异聚体选择性信号传导的小分子配体。在某些实施方案中，CXCR4抑制剂抑制或压制CXCR4单体的功能。在某些实施方案中，CXCR4抑制剂抑制或压制CXCR4-ADRB2异聚体的CXCR4单元或元体的功能。在某些实施方案中，CXCR4抑制剂抑制或压制CXCR4-ADRB2异聚体的功能。在某些实施方案中，CXCR4抑制剂抑制或压制在用CXCR4单体的CXCR4激动剂刺激之后的增强的反应。在某些实施方案中，CXCR4抑制剂抑制或压制在用CXCR4-ADRB2异聚体的CXCR4单元的CXCR4激动剂刺激之后的增强的反应。在某些实施方案中，CXCR4抑制剂抑制或压制在用CXCR4-ADRB2异聚体的CXCR4单元的CXCR4激动剂和ADRB2激动剂共刺激之后的增强的反应。在某些实施方案中，CXCR4抑制剂抑制或压制在用CXCR4-ADRB2异聚体的CXCR4激动剂和ADRB2激动剂共刺激之后的增强的反应。在某些实施方案中，增强的反应是增强的Ca2+反应。在某些实施方案中，增强的反应是具有一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的增强的癌症进展。在某些实施方案中，增强的癌症进展是具有一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的增强的细胞增殖。在某些实施方案中，增强的癌症进展是具有一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的增强的细胞迁移。在某些实施方案中，增强的癌症进展是具有一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的增强的转移。在某些实施方案中，增强的癌症进展是具有一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的增强的肿瘤生长。在某些实施方案中，增强的癌症进展是具有一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的增强的血管生成。在某些实施方案中，所述一个或多个细胞是一个或多个癌细胞。在某些实施方案中，所述一个或多个细胞来源于受试者。在某些实施方案中，所述一个或多个细胞来自从受试者获得的生物样品。表2列出了CXCR4抑制剂的某些实例。
如本文所用，术语“拮抗剂”是指通过结合并阻断受体来阻断或阻抑生物反应的一类受体配体或药物，还称为阻断剂。拮抗剂对它们的同源受体具有亲和力，并且它们的结合破坏了相互作用并抑制了在同源受体处激动剂或反向激动剂的功能。例如，ADRB2拮抗剂可以是通过结合和/或阻断ADRB2受体来阻断或阻抑生物反应的ADRB2配体或ADRB2药物。在某些实施方案中，ADRB2拮抗剂可破坏ADRB2激动剂或ADRB2反向激动剂与ADRB2(例如，ADRB2单体或者CXCR4-ADRB2异聚体的ADRB2元体或单元)的相互作用和/或抑制ADRB2激动剂或ADRB2反向激动剂与ADRB2(例如，ADRB2单体或者CXCR4-ADRB2异聚体的ADRB2元体或单元)的功能。在某些实施方案中，ADRB2拮抗剂阻断、抑制或压制ADRB2单体的功能。在某些实施方案中，ADRB2拮抗剂阻断、抑制或压制CXCR4-ADRB2异聚体的ADRB2单元或元体的功能。在某些实施方案中，ADRB2拮抗剂阻断、抑制或压制CXCR4-ADRB2异聚体的功能。在某些实施方案中，ADRB2拮抗剂阻断、抑制或压制在用ADRB2单体的ADRB2激动剂刺激之后的增强的反应。在某些实施方案中，ADRB2拮抗剂阻断、抑制或压制在用CXCR4-ADRB2异聚体的ADRB2单元的ADRB2激动剂刺激之后的增强的反应。在某些实施方案中，ADRB2拮抗剂阻断、抑制或压制在用CXCR4-ADRB2异聚体的ADRB2单元的ADRB2激动剂和CXCR4激动剂共刺激之后的增强的反应。在某些实施方案中，ADRB2拮抗剂阻断、抑制或压制在用CXCR4-ADRB2异聚体的ADRB2激动剂和CXCR4激动剂共刺激之后的增强的反应。例如，CXCR4拮抗剂可以是通过结合和/或阻断CXCR4受体来阻断或阻抑生物反应的CXCR4配体或CXCR4药物。在某些实施方案中，CXCR4拮抗剂可破坏CXCR4激动剂或CXCR4反向激动剂与CXCR4(例如，CXCR4单体或者CXCR4-ADRB2异聚体的CXCR4元体或单元)的相互作用和/或抑制CXCR4激动剂或CXCR4反向激动剂与CXCR4(例如，CXCR4单体或者CXCR4-ADRB2异聚体的CXCR4元体或单元)的功能。在某些实施方案中，CXCR4拮抗剂阻断、抑制或压制CXCR4单体的功能。在某些实施方案中，CXCR4拮抗剂阻断、抑制或压制CXCR4-ADRB2异聚体的CXCR4单元或元体的功能。在某些实施方案中，CXCR4拮抗剂阻断、抑制或压制CXCR4-ADRB2异聚体的功能。在某些实施方案中，CXCR4拮抗剂阻断、抑制或压制在用CXCR4单体的CXCR4激动剂刺激之后的增强的反应。在某些实施方案中，CXCR4拮抗剂阻断、抑制或压制在用CXCR4-ADRB2异聚体的CXCR4单元的CXCR4激动剂刺激之后的增强的反应。在某些实施方案中，CXCR4拮抗剂阻断、抑制或压制在用CXCR4-ADRB2异聚体的CXCR4单元的ADRB2激动剂和CXCR4激动剂共刺激之后的增强的反应。在某些实施方案中，CXCR4拮抗剂阻断、抑制或压制在用CXCR4-ADRB2异聚体的ADRB2激动剂和CXCR4激动剂共刺激之后的增强的反应。在某些实施方案中，增强的反应是增强的Ca2+反应。在某些实施方案中，增强的反应是具有一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的增强的癌症进展。在某些实施方案中，增强的癌症进展是具有一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的增强的细胞增殖。在某些实施方案中，增强的癌症进展是具有一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的增强的细胞迁移。在某些实施方案中，增强的癌症进展是具有一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的增强的转移。在某些实施方案中，增强的癌症进展是具有一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的增强的肿瘤生长。在某些实施方案中，增强的癌症进展是具有一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的增强的血管生成。在某些实施方案中，所述一个或多个细胞是一个或多个癌细胞。在某些实施方案中，所述一个或多个细胞来源于受试者。在某些实施方案中，所述一个或多个细胞来自从受试者获得的生物样品。表2列出了CXCR4拮抗剂和ADRB2拮抗剂的某些实例。
表2
Figure BDA0003442169160000191
如本文所用，短语“蛋白-蛋白相互作用抑制剂”、“PPI抑制剂”或它们的变形是指可干扰蛋白-蛋白相互作用的任何分子。与涉及明确定义的结合口袋(binding pocket)的酶-底物相互作用不同，蛋白-蛋白相互作用是蛋白之间在相对较大区域上的瞬时相互作用或结合并通常由静电相互作用、疏水相互作用、氢键和/或范德华力驱动。PPI抑制剂可包括但不限于与破坏GPCR异聚体界面的肽序列融合的膜渗透性肽或脂质，例如CXCR4和/或ADRB2单元的跨膜螺旋、胞内环或C末端尾。CXCR4-ADRB2异聚体的PPI抑制剂例如可以是与靶向一个或多个CXCR4-ADRB2异聚体界面的肽缀合的膜渗透性肽或细胞穿透肽(CPP)，或可以是靶向一个或多个CXCR4-ADRB2异聚体界面的细胞穿透脂化肽。
例如，膜渗透性肽或细胞穿透肽包括：HIV-1TAT肽，诸如TAT48-60和TAT49-57；渗透蛋白(Penetratin)，诸如pAntp(43-58)；聚精氨酸(Rn，诸如R5至R12)；Diatos肽载体1047(DPV1047，
Figure BDA0003442169160000201
)；MPG(与SV40大T抗原的核定位信号(NLS)融合的HIV gp41)；Pep-1(与SV40大T抗原的NLS融合的富含色氨酸的簇)；pVEC肽(血管内皮钙粘着蛋白)；基于p14替代阅读框(ARF)蛋白的ARF(1-22)；未加工的牛朊病毒蛋白BPrPr的N末端(1-28)；模型两亲性肽(MAP)；转运蛋白(Transportan)；天青蛋白衍生的p28肽；两亲性β折叠肽，诸如VT5；富含脯氨酸的CPP，诸如Bac 7(Bac1-24)；疏水性CPP，诸如衍生自α1-抗胰蛋白酶的C105Y；衍生自合成C105Y的PFVYLI；Pep-7肽(CHL8肽噬菌体克隆)；以及修饰的疏水性CPP，诸如装订肽(stapled peptide)和异戊二烯化肽(Guidotti,G.等人,(2017)Cell-PenetratingPeptides:From Basic Research to Clinics,Trends Pharmacol Sci 38,406-424；Kristensen,M.等人,(2016)Applications and Challenges for Use of Cell-Penetrating Peptides as Delivery Vectors for Peptide and Protein Cargos,Int JMol Sci 17)。膜渗透性肽或细胞穿透肽可进一步包括例如TAT衍生细胞穿透肽、基于信号序列的(例如，NLS)细胞穿透肽、疏水性膜移位序列(MTS)肽和富含精氨酸的分子转运蛋白。细胞穿透脂质化肽包括例如pepducin，诸如ICL1/2/3、C-尾短棕榈酰化肽(Covic,L.等人,(2002)Activation and inhibition of G protein-coupled receptors by cell-penetrating membrane-tethered peptides,Proc Natl Acad Sci USA,99,643-648；和O’Callaghan,K.等人,(2012)Turning receptors on and off with intracellularpepducins:new insights into G-protein-coupled receptor drug development.JBiol Chem 287,12787-12796)。
靶向CXCR4-ADRB2异聚体界面的一种或多种肽可以是例如CXCR4的跨膜结构域、ADRB2的跨膜结构域、CXCR4的胞内环、ADRB2的胞内环、CXCR4的C末端结构域或ADRB2的C末端结构域、CXCR4的胞外环、ADRB2的胞外环、CXCR4的N末端区或ADRB2的N末端区。
如本文所用，当与基因结合使用时，术语“表达(express、expression或expressing)”等是指基因所携带的信息因表型而变成显性的过程，包括将基因转录成信使RNA(mRNA)，随后将mRNA分子转译成多肽链并将其组装成最终蛋白。在某些实施方案中，可根据特定基因的表达，诸如根据来自特定基因的最终蛋白的表达来表征疾病，诸如癌症。例如，癌症可表征为表达CXCR4的癌症、表达ADRB2的癌症或表达CXCR4并且表达ADRB2的癌症。
如本文所用，当与基因结合使用时，短语“表达水平”是指基因的表达产物的量或累积，诸如例如基因的RNA产物的量(基因的RNA水平)或基因的蛋白产物的量(基因的蛋白水平)。除非另有说明，否则如果基因具有多于一个等位基因，那么基因的表达水平是指此基因的所有现有等位基因的表达产物的累积总量。例如，癌症可与基因的特定产物(诸如，基因的特定RNA产物或基因的特定蛋白产物)的表达水平(量)有关。例如，癌症可与基因的特定产物(诸如，基因的特定RNA产物或基因的特定蛋白产物)的表达水平(量)有关。例如，癌症可具有CXCR4基因的特定表达水平。例如，癌症可具有ADRB2基因的特定表达水平。例如，癌症可具有CXCR4基因的特定表达水平和ADRB2基因的特定表达水平。例如，癌症可具有CXCR4蛋白的特定表达水平。例如，癌症可具有ADRB2蛋白的特定表达水平。例如，癌症可具有CXCR4蛋白的特定表达水平和ADRB2蛋白的特定表达水平。
如本文所用，当与可定量值结合使用时，术语“参考”是指可用于确定如在样品中所测量的值的显著性的预定值。
如本文所用，短语“参考表达水平”是指可用于确定细胞中或样品中基因的表达水平的显著性的基因的预定表达水平。基因的参考表达水平可以是本领域普通技术人员所确定的参考细胞中基因的表达水平。例如，CXCR4基因的参考表达水平可以是其在细胞(诸如T细胞或癌细胞)中的平均表达水平。因此，如果高于细胞(诸如T细胞或癌细胞)中基因的平均表达水平，那么可确定细胞(或细胞样品)中CXCR4基因的表达水平指示所述细胞(或细胞样品)是表达CXCR4的细胞(或表达CXCR4的细胞样品)。例如，ADRB2基因的参考表达水平可以是其在细胞(诸如T细胞或癌细胞)中的平均表达水平。因此，如果高于细胞(诸如T细胞或癌细胞)中基因的平均表达水平，那么可确定ADRB2基因在细胞(或细胞样品)中的表达水平指示所述细胞是表达ADRB2的细胞(或表达ADRB2的细胞样品)。基因的参考表达水平还可以是本领域普通技术人员通过对各种样品细胞群中基因的表达水平进行的统计分析所确定的截止值。例如，癌症的样品中CXCR4基因的表达水平可高于CXCR4基因的参考水平。例如，癌症的样品中CXCR4蛋白的表达水平可高于CXCR4蛋白的参考水平。例如，癌症的样品中ADRB2基因的表达水平可高于ADRB2基因的参考水平。例如，癌症的样品中ADRB2蛋白的表达水平可高于ADRB2蛋白的参考水平。例如，癌症的样品中CXCR4基因的表达水平和ADRB2基因的表达水平可分别高于CXCR4基因的参考水平和ADRB2基因的参考水平。例如，癌症的样品中CXCR4蛋白的表达水平和ADRB2蛋白的表达水平可分别高于CXCR4蛋白的参考水平和ADRB2蛋白的参考水平。在某些实施方案中，例如，通过分析具有至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％已知表达此基因的细胞的样品细胞群中所述基因的表达水平，本领域普通技术人员可确定作为基因的参考表达水平的截止值，所述截止值可用于指示在未知组成的细胞群中表达所述基因的细胞的百分比。
如本文所用，关于受试者(例如，癌症受试者，诸如癌症患者)，术语“选择(selecting)”和“所选的(selected)”用于意指特定受试者基于(由于)具有预定标准或一组预定标准而明确选自较大受试者群，例如，受试者的CXCLR4表达水平大于参考水平、受试者的ADRB2表达水平大于参考水平的或者受试者的CXCR4表达水平和ADRB2表达水平大于相应参考水平。类似地，“选择性治疗受试者”是指向以下受试者(例如，癌症受试者，诸如癌症患者)提供治疗，所述受试者基于(由于)具有预定标准或一组预定标准而明确选自较大受试者群，例如，受试者的CXCR4表达水平大于参考水平、受试者的ADRB2表达水平大于参考水平或者受试者的CXCR4表达水平和ADRB2表达水平大于相应参考水平。类似地，“选择性施用”是指向以下受试者(例如，癌症受试者，诸如癌症患者)施用药物，所述受试者基于(由于)具有预定标准或一组预定标准而明确选自较大受试者群，例如，受试者的CXCR4表达水平大于参考水平、受试者的ADRB2表达水平大于参考水平或者受试者的CXCR4表达水平和ADRB2表达水平大于相应参考水平。选择、选择性治疗和选择性施用意指受试者是基于受试者的生物学而递送针对疾病或病症(例如癌症)的个性化疗法，而不是仅基于患有疾病或病症(例如癌症)而递送标准治疗方案。
传统上认为GPCR起在配体结合之后与异三聚体G蛋白相互作用的单体的作用，并且药物是基于单体GPCR或同聚GPCR而开发的(Milligan,G.(2008)A day in the life ofa G protein-coupled receptor:the contribution to function of G protein-coupled receptor dimerization,Br J Pharmacol 153 Suppl 1,S216-229)。这种观点已发生了巨大变化，因为发现GPCR可形成异聚体，并且异聚化对于一些GPCR而言是必不可少的。已知GPCR异聚化改变GPCR成熟和细胞表面递送、配体结合亲和力、信号传导强度和通路以及受体脱敏和再循环(Terrillon,S.等人,(2004)Roles of G-protein-coupledreceptor dimerization,EMBO Rep 5,30-34；Ferre,S.等人,(2009)；Rozenfeld,R.等人,(2010)Receptor heteromerization and drug discovery,Trends Pharmacol Sci 31,124-130；Gomes,I.等人,(2016)；Farran,B.(2017)An update on the physiological andtherapeutic relevance of GPCR oligomers,Pharmacol Res 117,303-327)。不同GPCR异聚体显示出不同功能和药理性质，并且GPCR异聚化可根据细胞类型、组织和疾病或病理状况而有所不同(Terrillon,S.等人,2004；Ferre,S.等人,2009；Rozenfeld,R.等人,2010；Gomes,I.等人,2016；Farran,B.,2017)。现在，GPCR异聚化被认为是普遍现象，并且解释GPCR异聚化为理解受体功能、生理学、在疾病和病理状况中的作用方面开辟了新途径。因此，鉴定GPCR异聚体及其功能性质为开发新药品或寻找具有较少副作用、较高功效和增加组织选择性的旧药物的新用途提供了新机会(Ferre,S.等人,2009；Rozenfeld,R.等人,2010；Farran,B.,2017)。
真正GPCR异聚体的鉴定需要透彻且严格的评估。为了将GPCR异聚体与GPCR的简单结合区分开，本领域的研究人员以及国际基础和临床药理学联合会的受体命名法和药物分类委员会(International Union of Basic and Clinical Pharmacology Committee onReceptor Nomenclature and Drug Classification；NC-IUPHAR)宣布GPCR异聚体为“由至少两个具有明显不同于其单独组分的生物化学性质的(功能性)受体单元‘元体’组成的大分子复合物”，并且这些异聚体存在于天然组织中(Ferre,S.等人,2009；Gomes,I.等人,2016；Pin,J.P.等人,(2007)International Union of Basic and Clinical Pharmacology.LXVII.Recommendations for the recognition and nomenclature of G protein-coupled receptor heteromultimers,Pharmacol Rev 59,5-13)。他们提出了三个标准来证明GPCR异聚体：(1)异聚体应表现出适当共定位和相互作用，以使用免疫共沉淀、原位杂交或基于接近性的技术(包括邻位连接测定)在表达两种受体的细胞/组织中实现变构，而在缺乏受体之一的细胞/组织中不实现变构；(2)异聚体应仅在表达两种受体的细胞/组织中表现出不同性质，诸如信号传导、配体结合和/或转运的变化，而在缺乏受体之一的细胞/组织中不表现；和(3)异聚体选择性试剂应改变异聚体特异性性质。异聚体选择性试剂包括异聚体选择性抗体、膜渗透性肽和二价/双功能配体(Gomes,I.等人,2016；Pin,J.P.等人,2007)。尽管已使用在异源细胞中表达的重组受体在体外鉴定出许多GPCR异聚体，但由于技术问题，仅少数展示出新颖性质，并且极少显示出天然组织中GPCR异聚化的证据(Gomes,I.等人,2016)。NC-IUPHAR宣布对于批准新GPCR异聚体，应提供满足上述三个标准中的至少两个标准的证据(Pin,J.P.等人,2007)。
如本文所公开，在确定CXCR4-ADRB2异聚体的存在(presence/existence)时，为了确立否满足3个标准中的标准1(关于异聚体组分是否直接或经由充当变构的通道的中间蛋白来共定位并物理相互作用)，可利用以下方法中的一种或多种，包括但不限于：共内化测定；共定位测定(确定细胞区室内受体元体的共定位)，诸如原位杂交、免疫组织化学或免疫电子显微镜术；基于接近性的测定，诸如基于接近性的生物物理技术，包括共振能量转移(RET)、生物发光RET(BRET)、荧光RET(FRET)、时间分辨荧光RET(TR-FRET)、抗体辅助FRET、配体辅助FRET、双分子荧光互补(BiFC)、CXCR4和ADRB2的表达水平以及邻位连接测定(PLA)；免疫共沉淀测定；或荧光动物。例如，利用BiFC、共内化测定、CXCR4和ADRB2的表达水平或PLA来评估CXCR4-ADRB2异聚体是否满足3个标准中的标准1。
如本文所公开，为了确立是否满足3个标准中的标准2(关于CXCR4-ADRB2异聚体是否表现出不同于单独元体的性质)，诸如增强的下游信号传导，例如增加的钙动员(诸如通过钙动员测定来确定)，对上文所讨论的满足3个标准中的标准1的CXCR4-ADRB2异聚体采用了双层方法：(1)确定在单独元体情境中是否存在增强的下游信号传导，例如增加的钙动员(协同作用)，在(a)用CXCL12和ADRB2激动剂共刺激之后，相对于(b)用单独CXCL12或单独ADRB2激动剂刺激，比较共表达HA-VC和元体之一(CXCR4或ADRB2)的细胞中的钙动员；和(2)确定在CXCR4-ADRB2异聚体情境中是否存在增强的下游信号传导，例如增加的钙动员(协同作用)，在(a)用CXCL12和ADRB2激动剂共刺激之后，相对于(b)用单独CXCL12或单独ADRB2激动剂的刺激的总和，比较共表达CXCR4和ADRB2的细胞中的钙动员。如本文所公开，为了满足3个标准中的标准2并认为CXCR4-ADRB2异聚体产生增强的下游信号传导，例如增加的钙动员，必须(1)在任一元体情境(即CXCR4和HA-VC情境或ADRB2和HA-VC情境)中不存在增强的下游信号传导，例如增加的钙动员，并且(2)在CXCR4-ADRB2异聚体情境中存在增强的下游信号传导，例如增加的钙动员。在元体情境和CXCR4-ADRB2异聚体情境中，用于刺激细胞的CXCL12(作为单一剂或与ADRB2激动剂组合)的浓度和用于刺激细胞的ADRB2激动剂(ADRB2的内源性激动剂或已知选择性激动剂)(作为单一剂或与CXCL12组合)的浓度独立地处于100倍EC50浓度或更低的浓度。例如，用于刺激细胞的CXCL12(作为单一剂或与ADRB2激动剂组合)的浓度处于15nM的浓度(大约是针对CXCR4的EC50浓度)。
如本文所公开，在确定CXCR4-ADRB2异聚体的存在时，为了确立是否满足3个标准中的标准3(关于异聚体选择性试剂是否应改变异聚体特异性性质)，满足3个标准中的标准1和3个标准中的标准2的受试者源性细胞在拮抗剂(CXCR4拮抗剂、ADRB2拮抗剂或CXCR4-ADRB2异聚体拮抗剂)的存在下受到影响，诸如影响含有CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的细胞增殖。
在一些实施方案中，如本文所公开的用于治疗的方法、用于抑制的方法、药物组合物或药盒包括或依赖于确立细胞中CXCR4和ADRB2的结合满足以下标准或特征中的至少两个以便被认为是CXCR4-ADRB2异聚体，所述标准或特征包括：1)细胞中的CXCR4-ADRB2异聚体组分直接或经由充当变构的通道的中间蛋白来共定位并物理相互作用，如经由以下中的一项或多者所确定：共内化测定、共定位测定、原位杂交、免疫组织化学、免疫电子显微镜术、CXCR4和ADRB2的表达水平、基于接近性的测定、免疫共沉淀测定或荧光动物测定；2)增加的钙动员量，以使得：a)细胞中在单独元体情境中用CXCL12和ADRB2激动剂共刺激之后CXCR4或ADRB2产生等于或小于用CXCL12或ADRB2激动剂进行单一激动剂刺激所产生的钙动员量的总和的钙动员量；和b)相对于用所述CXCL12或所述ADRB2激动剂进行单一激动剂刺激所产生的所述钙动员量的总和，在用所述CXCL12和所述ADRB2激动剂共刺激之后，所述CXCR4-ADRB2异聚体表现出增加的钙动员，如经由钙动员测定所确定；或3)CXCR4-ADRB2异聚体选择性试剂：i)改变受试者源性细胞中的CXCR4-ADRB2异聚体的异聚体特异性性质；ii)改变受试者源性细胞中的CXCR4-ADRB2异聚体的异聚体特异性功能；iii)改变含有CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的异聚体特异性性质；或iv)降低具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的癌症进展(诸如，一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的癌症进展的降低、含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的一个或多个受试者源性细胞的细胞增殖的降低、一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的细胞迁移的降低、一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的转移的降低和/或一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的血管生成的降低)。在一些实施方案中，CXCR4-ADRB2异聚体选择性试剂改变受试者源性细胞中的CXCR4-ADRB2异聚体的异聚体特异性性质，如通过以下方法中的至少一种所确定：PLA；放射性配体结合测定；[35S]GTP-γS结合测定；Calcuim测定；cAMP测定；GTP酶测定；PKA活化；ERK1/2和/或Akt/PKB磷酸化测定；Src和STAT3磷酸化测定；CRE报告基因测定；NFAT-RE报告基因测定；SRE报告基因测定；SRF-RE报告基因测定；分泌型碱性磷酸酶测定；1-磷酸肌醇产生测定；腺苷酸环化酶活性测定；通过RT-PCR、RT-qPCR、RNAseq、下一代测序(NGS)或微阵列分析靶基因表达。在一些实施方案中，CXCR4-ADRB2异聚体选择性试剂改变受试者源性细胞中的CXCR4-ADRB2异聚体的异聚体特异性功能，如通过以下方法中的至少一种所确定：PLA；放射性配体结合测定；[35S]GTP-γS结合测定；Calcuim测定；cAMP测定；GTP酶测定；PKA活化；ERK1/2和/或Akt/PKB磷酸化测定；Src和STAT3磷酸化测定；CRE报告基因测定；NFAT-RE报告基因测定；SRE报告基因测定；SRF-RE报告基因测定；NF-kB-RE报告基因测定；分泌型碱性磷酸酶测定；1-磷酸肌醇产生测定；腺苷酸环化酶活性测定；通过RT-PCR、RT-qPCR、RNAseq或微阵列来分析靶基因表达。在一些实施方案中，CXCR4-ADRB2异聚体选择性试剂改变含有CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的异聚体特异性性质，如通过以下方法中的至少一种所确定：对癌细胞的增殖、迁移、入侵和耐药性(存活)的测定；对免疫细胞功能的调节的测定；对血管生成的测定；对血管发生的测定；对转移的测定；对耐药性的测定；对组织微阵列(TMA)的测定；和对癌细胞-肿瘤微环境(TME)相互作用的测定。例如，在一些实施方案中，如本文所公开的用于治疗的方法、用于抑制的方法、药物组合物或药盒包括或依赖于确立细胞中CXCR4和ADRB2的结合满足以下标准或特征中的至少两个以便被认为是CXCR4-ADRB2异聚体，所述标准和特征包括：1)细胞中的CXCR4-ADRB2异聚体组分直接或经由充当变构的通道的中间蛋白来共定位并物理相互作用，如经由以下中的一项或多者所确定：共内化测定、双分子荧光互补(BiFC)、CXCR4和ADRB2的表达水平或邻位连接测定(PLA)；2)增加的钙动员量，以使得：a)细胞中在单独元体情境中用CXCL12和ADRB2激动剂共刺激之后CXCR4或ADRB2产生等于或小于用CXCL12或ADRB2激动剂进行单一激动剂刺激所产生的钙动员量的总和的钙动员量；和b)相对于用所述CXCL12或所述ADRB2激动剂进行单一激动剂刺激所产生的所述钙动员量的总和，在用所述CXCL12和所述ADRB2激动剂共刺激之后，所述CXCR4-ADRB2异聚体表现出增加的钙动员，如经由钙动员测定所确定；或3)CXCR4-ADRB2异聚体选择性试剂：i)改变受试者源性细胞中的CXCR4-ADRB2异聚体的异聚体特异性性质；ii)改变受试者源性细胞中的CXCR4-ADRB2异聚体的异聚体特异性功能；iii)改变含有CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的异聚体特异性性质；或iv)降低具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的癌症进展(诸如，一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的癌症进展的降低、一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的细胞增殖的降低、含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的一个或多个受试者源性细胞的细胞迁移的降低、一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的转移的降低和/或一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的血管生成的降低)。在一些实施方案中，如本文所公开的用于治疗的方法、用于抑制的方法、药物组合物或药盒包括或依赖于确立细胞中CXCR4和ADRB2的结合满足标准1和2以便被认为是CXCR4-ADRB2异聚体。在一些实施方案中，如本文所公开的用于治疗的方法、用于抑制的方法、药物组合物或药盒包括或依赖于确立细胞中CXCR4和ADRB2的结合满足标准1和3以便被认为是CXCR4-ADRB2异聚体。在一些实施方案中，如本文所公开的用于治疗的方法、用于抑制的方法、药物组合物或药盒包括或依赖于确立细胞中CXCR4和ADRB2的结合满足标准2和3以便被认为是CXCR4-ADRB2异聚体。在一些实施方案中，如本文所公开的用于治疗的方法、用于抑制的方法、药物组合物或药盒包括或依赖于确立细胞中CXCR4和ADRB2的结合满足标准1、2和3以便被认为是CXCR4-ADRB2异聚体。
如本文所公开，满足三个标准中的至少两个的CXCR4-ADRB2异聚体可具有、引起或产生增强的下游信号传导。增强的下游信号传导可能是由CXCR4-ADRB2异聚体，诸如CXCR4-ADRB2异聚体的激动作用、CXCR4-ADRB2异聚体的CXCR4激动作用、CXCR4-ADRB2异聚体的ADRB2激动作用和/或CXCR4-ADRB2异聚体的CXCR4激动作用和ADRB2激动作用产生的结果。在一些实施方案中，增强的下游信号传导可在CXCR4、ADRB2或CXCR4-ADRB2异聚体的下游。在一些实施方案中，相对于在相应单独元体情境中来自CXCR4元体或ADRB2元体的下游信号传导，增强的下游信号传导可来自CXCR4-ADRB2异聚体。在一些实施方案中，相对于在单独元体情境中来自CXCR4元体的下游信号传导，增强的下游信号传导可来自CXCR4-ADRB2异聚体。在一些实施方案中，相对于在单独元体情境中来自ADRB2元体的下游信号传导，增强的下游信号传导可来自CXCR4-ADRB2异聚体。在一些实施方案中，相对于在相应单独元体情境中来自CXCR4元体和ADRB2元体的下游信号传导，增强的下游信号传导可来自CXCR4-ADRB2异聚体。在一些实施方案中，来自所述CXCR4-ADRB2异聚体的增强的下游信号传导可在癌症受试者中被抑制，诸如在受试者的癌细胞中被抑制。在一些实施方案中，来自所述CXCR4-ADRB2异聚体的增强的下游信号传导可以是增加的钙动员量(或协同钙动员量)，其可以通过胞内Ca2+测定(诸如钙动员测定)来确定。
如本文所公开，满足三个标准中的至少两个的CXCR4-ADRB2异聚体可具有、引起或产生增强的下游信号传导，其中增强的下游信号传导是增加的钙动员量。来自CXCR4-ADRB2异聚体的增加的钙动员量可以是在用CXCL12和ADRB2激动剂共刺激之后，与用CXCL12或ADRB2激动剂对所述细胞进行的单一激动剂刺激所产生的钙动员量的总和相比大至少10％的钙动员量，如经由钙动员测定所确定。在一些实施方案中，来自CXCR4-ADRB2异聚体的增加的钙动员量可以是在用CXCL12和ADRB2激动剂共刺激之后，与用CXCL12或ADRB2激动剂对所述细胞进行的单一激动剂刺激所产生的钙动员量的总和相比大至少10％的协同钙动员量，如经由钙动员测定所确定。例如，来自CXCR4-ADRB2异聚体的增加的钙动员量(或协同钙动员量)可以是在用CXCL12和ADRB2激动剂共刺激之后，与用CXCL12或ADRB2激动剂对所述细胞进行的单一激动剂刺激所产生的钙动员量的总和相比大至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少75％、至少90％、至少100％、至少150％或至少200％的钙动员量，如经由钙动员测定所确定。在一些实施方案中，来自CXCR4-ADRB2异聚体的增加的钙动员量(或协同钙动员量)可以是在用CXCL12和ADRB2激动剂共刺激之后，与用CXCL12或ADRB2激动剂对所述细胞进行的单一激动剂刺激所产生的钙动员量的总和相比大10-100％之间的钙动员量，如经由钙动员测定所确定，例如可以是在用CXCL12和ADRB2激动剂共刺激之后，与用CXCL12或ADRB2激动剂对所述细胞进行的单一激动剂刺激所产生的钙动员量的总和相比大25-100％之间、50-100％之间、75-100％之间或100-200％之间的钙动员量，如经由钙动员测定所确定。
在一些实施方案中，根据如本文所公开的用于治疗的方法、用于抑制的方法、药物组合物或药盒，CXCR4-ADRB2异聚体满足三个标准中的至少两个，从而具有、引起或产生增强的下游信号传导，其中增强的下游信号传导是增加的钙动员量，以使得：a)细胞中在单独元体情境中在用CXCL12和ADRB2激动剂共刺激之后CXCR4或ADRB2产生等于或小于用CXCL12或ADRB2激动剂进行单一激动剂刺激所产生的钙动员量的总和的钙动员量；和b)相对于用所述CXCL12或所述ADRB2激动剂进行单一激动剂刺激所产生的所述钙动员量的总和，在用所述CXCL12和所述ADRB2激动剂共刺激之后，所述CXCR4-ADRB2异聚体表现出增加的钙动员；如经由钙动员测定所确定。例如，在一些实施方案中，来自CXCR4-ADRB2异聚体的增强的下游信号传导是增加的钙动员量，以使得：i)细胞中在单独元体情境中，来自元体CXCR4或ADRB2的钙动员是非协同的，如经由钙动员测定所确定；并且ii)细胞中来自CXCR4-ADRB2异聚体的钙动员是协同的，如经由钙动员测定所确定。在一些实施方案中，单独元体情境可以是：a)在不存在单独元体ADRB2的情况下，细胞中的单独元体CXCR4；或b)在不存在单独元体CXCR4的情况下，细胞中的单独元体ADRB2；在用CXCL12和ADRB2激动剂共刺激之后产生等于或小于用CXCL12或ADRB2激动剂进行单一激动剂刺激所产生的钙动员量的总和的钙动员量，如经由钙动员测定所确定。在一些实施方案中，单独元体情境可独立地是：a)在不存在单独元体ADRB2的情况下，细胞中的单独元体CXCR4；和b)在不存在单独元体CXCR4的情况下，细胞中的单独元体ADRB2；在用CXCL12和ADRB2激动剂共刺激之后产生等于或小于用CXCL12或ADRB2激动剂进行单一激动剂刺激所产生的钙动员量的总和的钙动员量，如经由钙动员测定所确定。例如，在一些实施方案中，在用CXCL12和ADRB2激动剂共刺激之后，CXCR4-ADRB2异聚体可产生大于用CXCL12或ADRB2激动剂对所述细胞进行单一激动剂刺激所产生的钙动员量的总和的钙动员量，如经由钙动员测定所确定。
本文提供了用于抑制罹患癌症的受试者的细胞中的由CXCR4-ADRB2异聚体产生的增强的下游信号传导的方法，所述方法包括向受试者施用：(a)CXCR4抑制剂，其中CXCR4抑制剂是布利沙福；和(b)ADRB2抑制剂；其中：(i)增强的下游信号传导由CXCR4-ADRB2异聚体产生；并且(ii)所施用的抑制剂的组合抑制癌症受试者中的来自所述CXCR4-ADRB2异聚体的增强的下游信号传导。在特定实施方案中，CXCR4抑制剂是布利沙福，并且ADRB2抑制剂是卡维地洛。
本文提供了用于治疗具有含有CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的癌症的方法，所述方法包括向受试者施用：(a)CXCR4抑制剂，其中CXCR4抑制剂是布利沙福；和(b)ADRB2抑制剂；其中：(i)增强的下游信号传导由CXCR4-ADRB2异聚体产生；并且(ii)所施用的抑制剂的组合抑制癌症受试者中的来自所述CXCR4-ADRB2异聚体的增强的下游信号传导。在特定实施方案中，CXCR4抑制剂是布利沙福，并且ADRB2抑制剂是卡维地洛。
本文提供了用于治疗具有含有CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的癌症的方法，所述方法包括：(a)确定受试者的细胞是否含有CXCR4-ADRB2异聚体，其中增强的下游信号传导由CXCR4-ADRB2异聚体产生；和(b)如果受试者的细胞含有所述CXCR4-ADRB2异聚体，那么向癌症受试者施用：(i)CXCR4抑制剂，其中CXCR4抑制剂是布利沙福；和(ii)ADRB2抑制剂。在特定实施方案中，CXCR4抑制剂是布利沙福，并且ADRB2抑制剂是卡维地洛。
本文提供了用于治疗具有含有CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的癌症的方法，其中增强的下游信号传导由CXCR4-ADRB2异聚体产生，所述方法包括：(1)通过以下方式确定受试者是否具有含有CXCR4-ADRB2异聚体的细胞：获得或已获得来自受试者的生物样品；和对生物样品进行或已进行测定以确定是否：(i)受试者的细胞含有所述CXCR4-ADRB2异聚体；或(ii)CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂的组合：改变一个或多个受试者源性细胞中所述CXCR4-ADRB2异聚体的异聚体特异性性质或功能；改变一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的异聚体特异性性质；或降低具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的癌症进展；和(2)如果受试者具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞，那么向癌症受试者施用CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂的组合，其中CXCR4抑制剂是布利沙福；和(3)如果受试者不具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞，那么向癌症受试者施用布利沙福或ADRB2抑制剂的单一抑制剂。在特定实施方案中，CXCR4抑制剂是布利沙福，且ADRB2抑制剂是卡维地洛。
本文提供了用于治疗具有含有CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的癌症的方法，其中增强的下游信号传导由CXCR4-ADRB2异聚体产生，所述方法包括：(1)通过以下方式确定受试者是否具有含有CXCR4-ADRB2异聚体的细胞：获得或已获得来自受试者的生物样品；和对生物样品进行或已进行测定以确定是否：(i)受试者的细胞含有所述CXCR4-ADRB2异聚体；或(ii)CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂的组合：改变一个或多个受试者源性细胞中所述CXCR4-ADRB2异聚体的异聚体特异性性质或功能；改变一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的异聚体特异性性质；或降低具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的癌症进展；和(2)如果受试者具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞，那么向癌症受试者施用CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂的组合，其中所述CXCR4抑制剂是布利沙福；和(3)如果受试者不具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞，那么向癌症受试者施用布利沙福或ADRB2抑制剂的单一抑制剂；其中：(a)相对于施用布利沙福或ADRB2抑制剂的单一抑制剂，在向癌症受试者施用布利沙福和ADRB2抑制剂的组合之后，具有含有CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的癌症的进展多降低5-100％的范围；(b)相对于作为单一抑制剂施用时布利沙福的功效，当与ADRB2抑制剂组合向具有所述含有CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者施用时，布利沙福的功效增加5-2000％的范围；和/或(c)相对于作为单一抑制剂施用时ADRB2抑制剂的功效，当与布利沙福组合向具有所述含有CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者施用时，ADRB2抑制剂的功效增加5-2000％的范围。在特定实施方案中，CXCR4抑制剂是布利沙福，并且ADRB2抑制剂是卡维地洛。
本文提供了用于治疗具有含有CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的癌症的方法，其中增强的下游信号传导由CXCR4-ADRB2异聚体产生，所述方法包括：(1)通过以下方式确定受试者的细胞是否含有CXCR4-ADRB2异聚体：获得或已获得来自受试者的生物样品，和对生物样品进行或已进行测定以确定所述CXCR4-ADRB2异聚体是否存在于受试者的细胞中；其中对生物样品进行的测定是或包括以下中的一项或多项：共内化测定、共定位测定、原位杂交、免疫组织化学、免疫电子显微镜术、基于接近性的测定、免疫共沉淀测定、酶联免疫吸附测定(ELISA)、流式细胞分析技术、RNAseq、RT-qPCR、微阵列或荧光动物测定；和(2)如果受试者的细胞含有所述CXCR4-ADRB2异聚体，那么向癌症受试者施用CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂的组合，其中CXCR4抑制剂是布利沙福；和(3)如果受试者的细胞不含有所述CXCR4-ADRB2异聚体，那么向癌症受试者施用布利沙福或ADRB2抑制剂的单一抑制剂。在特定实施方案中，CXCR4抑制剂是布利沙福，并且ADRB2抑制剂是卡维地洛。
本文提供了用于治疗具有含有CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的癌症的方法，其中增强的下游信号传导由CXCR4-ADRB2异聚体产生，所述方法包括：(1)通过以下方式确定受试者的细胞是否含有CXCR4-ADRB2异聚体：获得或已获得来自受试者的生物样品，和对生物样品进行或已进行测定以确定所述CXCR4-ADRB2异聚体是否存在于受试者的细胞中；其中对生物样品进行的测定是或包括以下中的一项或多项：共内化测定、共定位测定、原位杂交、免疫组织化学、免疫电子显微镜术、基于接近性的测定、免疫共沉淀测定、酶联免疫吸附测定(ELISA)、流式细胞分析技术、RNAseq、RT-qPCR、微阵列或荧光动物测定；和(2)如果受试者的细胞含有所述CXCR4-ADRB2异聚体，那么向癌症受试者施用CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂的组合，其中CXCR4抑制剂是布利沙福；和(3)如果受试者的细胞不含有所述CXCR4-ADRB2异聚体，那么向癌症受试者施用布利沙福或ADRB2抑制剂的单一抑制剂；其中：(a)相对于施用布利沙福或ADRB2抑制剂的单一抑制剂，在向癌症受试者施用布利沙福和ADRB2抑制剂的组合之后，具有所述含有CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的癌症的进展多降低5-100％的范围；(b)相对于呈单一抑制剂施用时布利沙福的功效，当与ADRB2抑制剂组合向具有所述含有CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者施用时，布利沙福的功效增加5-2000％的范围；和/或(c)相对于作为单一抑制剂施用时ADRB2抑制剂的功效，当与布利沙福组合向具有所述含有CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者施用时，ADRB2抑制剂的功效增加5-2000％的范围。在特定实施方案中，CXCR4抑制剂是布利沙福，并且ADRB2抑制剂是卡维地洛。
本文提供了在治疗具有含有CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的癌症中所使用的药盒，所述药盒包含：(a)CXCR4抑制剂，其中CXCR4抑制剂是布利沙福；和(b)ADRB2抑制剂；其中增强的下游信号传导由CXCR4-ADRB2异聚体产生。在特定实施方案中，CXCR4抑制剂是布利沙福，并且ADRB2抑制剂是卡维地洛。
本文提供了在治疗具有含有CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的癌症中所使用的药物组合物，所述药物组合物包含：(a)CXCR4抑制剂，其中CXCR4抑制剂是布利沙福；(b)ADRB2抑制剂；和(c)药学上可接受的载剂；其中增强的下游信号传导由CXCR4-ADRB2异聚体产生。在特定实施方案中，CXCR4抑制剂是布利沙福，并且ADRB2抑制剂是卡维地洛。
本文提供了包含以下的药物组合物：(a)CXCR4抑制剂，其中CXCR4抑制剂是布利沙福；(b)ADRB2抑制剂；和(c)药学上可接受的载剂。在特定实施方案中，CXCR4抑制剂是布利沙福，并且ADRB2抑制剂是卡维地洛。
本文提供了用于抑制细胞中的由CXCR4-ADRB2异聚体产生的增强的下游信号传导的方法，所述方法包括向细胞施用：(a)CXCR4抑制剂，其中CXCR4抑制剂是布利沙福；和(b)ADRB2抑制剂；其中：(i)增强的下游信号传导由CXCR4-ADRB2异聚体产生；并且(ii)与布利沙福和ADRB2抑制剂的接触抑制细胞中来自所述CXCR4-ADRB2异聚体的增强的下游信号传导。在某些实施方案中，所述方法还包括确定细胞是否含有CXCR4-ADRB2异聚体。在特定实施方案中，细胞是受试者的细胞。在特定实施方案中，受试者的细胞是癌细胞。在特定实施方案中，细胞是癌细胞。在特定实施方案中，CXCR4抑制剂是布利沙福，并且ADRB2抑制剂是卡维地洛。
本文提供了在抑制细胞中的由CXCR4-ADRB2异聚体产生的增强的下游信号传导中所使用的药盒，所述药盒包含：(a)CXCR4抑制剂，其中CXCR4抑制剂是布利沙福；和(b)ADRB2抑制剂；其中增强的下游信号传导由CXCR4-ADRB2异聚体产生。在特定实施方案中，细胞是受试者的细胞。在特定实施方案中，受试者的细胞是癌细胞。在特定实施方案中，细胞是癌细胞。在特定实施方案中，CXCR4抑制剂是布利沙福，并且ADRB2抑制剂是卡维地洛。
本文提供了在抑制细胞中的由CXCR4-ADRB2异聚体产生的增强的下游信号传导中所使用的药物组合物，所述药物组合物包含：(a)CXCR4抑制剂，其中CXCR4抑制剂是布利沙福；(b)ADRB2抑制剂；和(c)药学上可接受的载剂；其中增强的下游信号传导由CXCR4-ADRB2异聚体产生。在特定实施方案中，细胞是受试者的细胞。在特定实施方案中，受试者的细胞是癌细胞。在特定实施方案中，细胞是癌细胞。在特定实施方案中，CXCR4抑制剂是布利沙福，并且ADRB2抑制剂是卡维地洛。
在一些实施方案中，本文所提供的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物还包括检测癌症受试者中的CXCR4-ADRB2异聚体的存在。在一些实施方案中，本文所提供的方法和用途还包括鉴定癌症受试者中的CXCR4-ADRB2异聚体。在一些实施方案中，本文所提供的方法和用途还包括获得来自受试者的生物样品。在一些实施方案中，本文所提供的方法和用途还包括对从所述受试者获得的生物样品进行测定。在一些实施方案中，本文所提供的方法和用途还包括：(i)获得或已获得来自癌症受试者的生物样品；(ii)进行或已进行确定从癌症受试者获得的生物样品中的CXCR4-ADRB2异聚体的存在、同一性或存在与同一性的诊断测定；和(iii)选择与布利沙福组合施用的以抑制由CXCR4-ADRB2异聚体产生的增强的下游信号传导的ADRB2抑制剂。在一些实施方案中，本文所提供的方法和用途还包括确定受试者的细胞是否含有CXCR4-ADRB2异聚体，其包括对从受试者获得的生物样品进行测定。在一些实施方案中，本文所提供的方法和用途还包括确定受试者的细胞是否含有CXCR4-ADRB2异聚体，其包括获得来自受试者的生物样品，和对从所述受试者获得的生物样品进行测定。在一些实施方案中，本文所提供的方法和用途包括其中从所述受试者获得的生物样品含有CXCR4-ADRB2异聚体。在一些实施方案中，受试者的生物样品是生物流体样品。在一些实施方案中，生物流体样品是血液样品、血浆样品、唾液样品、脑液样品、眼液样品或尿液样品。在一些实施方案中，本文所提供的方法和用途还包括其中对生物流体样品进行液体活检。在一些实施方案中，受试者的生物样品是生物组织样品。在一些实施方案中，生物组织样品是器官组织样品、骨组织样品或肿瘤组织样品。在一些实施方案中，本文所提供的方法和用途还包括其中对生物组织样品进行组织样品测定。在一些实施方案中，本文所提供的方法和用途包括其中受试者的细胞含有CXCR4-ADRB2异聚体。在一些实施方案中，细胞是癌细胞。在一些实施方案中，受试者的细胞是癌细胞。在一些实施方案中，受试者是患者。
在一些实施方案中，本文所提供的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物还包括其中CXCR4-ADRB2异聚体具有以下特征中的两个或更多个：(1)CXCR4-ADRB2异聚体组分直接或经由充当变构的通道的中间蛋白而在细胞中共定位并物理相互作用；(2)增强的下游信号传导由CXCR4-ADRB2异聚物产生；和/或(3)布利沙福和ADRB2抑制剂的组合：(i)改变一个或多个受试者源性细胞中CXCR4-ADRB2异聚体的异聚体特异性性质；(ii)改变一个或多个受试者源性细胞中CXCR4-ADRB2异聚体的异聚体特异性功能；(iii)改变一个或多个含有CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的异聚体特异性性质；和/或(iv)降低具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的癌症进展。
在一些实施方案中，本文所提供的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物包括其中CXCR4-ADRB2异聚体的特征在于具有以下特征：细胞中的CXCR4-ADRB2异聚体组分直接或经由充当变构的通道的中间蛋白而共定位并物理相互作用。在特定实施方案中，本文所提供的方法和用途还包括进行鉴定或确定细胞中CXCR4-ADRB2异聚体的CXCR4和ADRB2组分直接或经由充当变构的通道的中间蛋白的共定位和物理相互作用的测定。在特定实施方案中，确定细胞中的CXCR4-ADRB2异聚体组分的共定位和物理相互作用的测定包括以下中的一项或多项：共内化测定、共定位测定、原位杂交、免疫组织化学、免疫电子显微镜术、基于接近性的测定、免疫共沉淀测定、酶联免疫吸附测定(ELISA)、流式细胞分析技术、RNAseq、RT-PCR、RT-qPCR、CXCR4的表达水平、ADRB2的表达水平、CXCR4和ADRB2的表达水平、微阵列或荧光动物测定。在特定实施方案中，测定是共内化测定。在特定实施方案中，测定是共定位测定。在特定实施方案中，测定是原位杂交测定。在特定实施方案中，测定是免疫共沉淀测定。在特定实施方案中，测定是基于接近性的测定。在特定实施方案中，基于接近性的测定是或包括共振能量转移(RET)、生物发光RET(BRET)、荧光RET(FRET)、时间分辨荧光RET(TR-FRET)、基于抗体的FRET、基于配体的FRET、双分子荧光互补(BiFC)或邻位连接测定(PLA)。在特定实施方案中，TR-FRET是基于配体的TR-FRET。在特定实施方案中，TR-FRET是基于抗体的TR-FRET。在特定实施方案中，测定是双分子荧光互补(BiFC)。在特定实施方案中，测定是邻位连接测定(PLA)。在特定实施方案中，测定是酶联免疫吸附测定(ELISA)。在特定实施方案中，测定是流式细胞分析技术测定。在特定实施方案中，测定确定CXCR4的表达水平、ADRB2的表达水平和/或CXCR4和ADRB2的表达水平。在特定实施方案中，测定经由RNAseq确定CXCR4的表达水平、ADRB2的表达水平和/或CXCR4和ADRB2的表达水平。在特定实施方案中，测定经由RT-PCR确定CXCR4的表达水平、ADRB2的表达水平和/或CXCR4和ADRB2的表达水平。在特定实施方案中，测定经由RT-qPCR确定CXCR4的表达水平、ADRB2的表达水平和/或CXCR4和ADRB2的表达水平。在特定实施方案中，测定是微阵列测定。在特定实施方案中，测定是荧光动物测定。在特定实施方案中，测定确定从所述受试者获得的生物样品中CXCR4-ADRB2异聚体的存在。在特定实施方案中，测定确定受试者中CXCR4-ADRB2异聚体的存在。在特定实施方案中，测定确定受试者的细胞中CXCR4-ADRB2异聚体的存在。
在一些实施方案中，本文所提供的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物包括其中CXCR4-ADRB2异聚体的特征在于具有以下特征：增强的下游信号传导由CXCR4-ADRB2异聚体产生。在特定实施方案中，CXCR4-ADRB2异聚体产生增强的下游信号传导。在特定实施方案中，增强的下游信号传导由所述受试者细胞中的CXCR4-ADRB2异聚体的存在产生。在特定实施方案中，CXCR4-ADRB2异聚体在受试者细胞中产生增强的下游信号传导。在特定实施方案中，增强的下游信号传导由CXCR4-ADRB2异聚体的激动作用产生。在特定实施方案中，增强的下游信号传导由CXCR4-ADRB2异聚体的CXCR4激动作用产生。在特定实施方案中，增强的下游信号传导由CXCR4-ADRB2异聚体的ADRB2激动作用产生。在特定实施方案中，增强的下游信号传导由CXCR4-ADRB2异聚体的CXCR4激动作用和ADRB2激动作用产生。在特定实施方案中，增强的下游信号传导在CXCR4、ADRB2或CXCR4-ADRB2异聚体的下游。在特定实施方案中，增强的下游信号传导在CXCR4的下游。在特定实施方案中，增强的下游信号传导在ADRB2的下游。在特定实施方案中，增强的下游信号传导在CXCR4-ADRB2异聚体的下游。在特定实施方案中，来自CXCR4-ADRB2异聚体的增强的下游信号传导与在相应单独元体情境中来自CXCR4元体或ADRB2元体的下游信号传导有关。在特定实施方案中，来自CXCR4-ADRB2异聚体的增强的下游信号传导与在单独元体情境中来自CXCR4元体的下游信号传导有关。在特定实施方案中，来自CXCR4-ADRB2异聚体的增强的下游信号传导与在单独元体情境中来自ADRB2元体的下游信号传导有关。在特定实施方案中，来自CXCR4-ADRB2异聚体的增强的下游信号传导与在相应单独元体情境中来自CXCR4元体和ADRB2元体的下游信号传导有关。在特定实施方案中，增强的下游信号传导是增加的钙动员量。在特定实施方案中，增强的反应是具有一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的增强的癌症进展。在特定实施方案中，增强的癌症进展是具有一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的增强的细胞增殖。在特定实施方案中，增强的癌症进展是具有一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的增强的细胞迁移。在特定实施方案中，增强的癌症进展是具有一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的增强的转移。在特定实施方案中，增强的癌症进展是具有一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的增强的肿瘤生长。在特定实施方案中，增强的癌症进展是具有一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的增强的血管生成。在特定实施方案中，所述一个或多个细胞是一个或多个癌细胞。在特定实施方案中，所述一个或多个细胞是一个或多个受试者源性细胞。在特定实施方案中，所述一个或多个细胞来自从受试者获得的生物样品。
在一些实施方案中，本文所提供的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物包括其中CXCR4-ADRB2异聚体的特征在于具有以下特征：增强的下游信号传导由CXCR4-ADRB2异聚体产生；其中增加的钙动员量通过胞内Ca2+测定来确定。在特定实施方案中，胞内Ca2+测定是钙动员测定。在特定实施方案中，钙动员测定确定CXCR4-ADRB2异聚体产生增强的下游信号传导。在特定实施方案中，钙动员测定确定增强的下游信号传导由CXCR4-ADRB2异聚体的存在产生。在特定实施方案中，CXCR4-ADRB2异聚体表现出增加的钙动员量，以使得：a)细胞中在单独元体情境中在用CXCL12和ADRB2激动剂共刺激之后CXCR4或ADRB2产生等于或小于用所述CXCL12或所述ADRB2激动剂进行单一激动剂刺激所产生的钙动员量的总和的钙动员量；和b)相对于用所述CXCL12或所述ADRB2激动剂进行单一激动剂刺激所产生的所述钙动员量的总和，在用所述CXCL12和所述ADRB2激动剂共刺激之后，所述CXCR4-ADRB2异聚体表现出增加的钙动员；如经由钙动员测定所确定。在特定实施方案中，细胞中在单独元体情境中，来自元体CXCR4或ADRB2的钙动员是非协同的，如经由钙动员测定所确定；并且细胞中来自CXCR4-ADRB2异聚体的钙动员是协同的，如经由钙动员测定所确定。在特定实施方案中，其中在单独元体情境中：a)在不存在单独元体ADRB2的情况下，细胞中的单独元体CXCR4；或b)在不存在单独元体CXCR4的情况下，细胞中的单独元体ADRB2；在用CXCL12和ADRB2激动剂共刺激之后产生的钙动员量等于或小于用CXCL12或ADRB2激动剂进行单一激动剂刺激所产生的钙动员量的总和，如经由钙动员测定所确定。在特定实施方案中，其中在单独元体情境中，独立地：a)在不存在单独元体ADRB2的情况下，细胞中的单独元体CXCR4；和b)在不存在单独元体CXCR4的情况下，细胞中的单独元体ADRB2；在用CXCL12和ADRB2激动剂共刺激之后产生的钙动员量等于或小于用CXCL12或ADRB2激动剂进行单一激动剂刺激所产生的钙动员量的总和，如经由钙动员测定所确定。在特定实施方案中，用CXCR4-ADRB2异聚体的CXCL12和ADRB2激动剂共刺激之后产生的钙动员量大于用CXCL12或ADRB2激动剂对所述细胞进行单一激动剂刺激所产生的钙动员量的总和，如经由钙动员测定所确定。在特定实施方案中，相对于由所述CXCR4-ADRB2异聚体的单一激动剂刺激所产生的钙动员的总和，由CXCR4-ADRB2异聚体的共刺激所产生的钙动员量是增加的钙动员量，如经由钙动员测定所确定。在特定实施方案中，由CXCR4-ADRB2异聚体所产生的增加的钙动员量是在用CXCL12和ADRB2激动剂共刺激之后，与用CXCL12或ADRB2激动剂对所述细胞进行的单一激动剂刺激所产生的钙动员量的总和相比较大的钙动员量，如经由钙动员测定所确定。在特定实施方案中，由CXCR4-ADRB2异聚体产生的增加的钙动员量是在用CXCL12和ADRB2激动剂共刺激之后，与用CXCL12或ADRB2激动剂对所述细胞进行单一激动剂刺激所产生的钙动员量的总和相比大至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少75％或至少90％的钙动员量，如经由钙动员测定所确定。在特定实施方案中，由CXCR4-ADRB2异聚体产生的增加的钙动员量是在用CXCL12和ADRB2激动剂共刺激之后，与用CXCL12或ADRB2激动剂对所述细胞进行单一激动剂刺激所产生的钙动员量的总和相比大至少100％的钙动员量，如经由钙动员测定所确定。在特定实施方案中，增加的钙动员量是协同钙动员量。在特定实施方案中，来自含有CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的协同钙动员量是在用CXCL12和ADRB2激动剂共刺激之后，与用CXCL12或ADRB2激动剂对所述细胞进行单一激动剂刺激所产生的钙动员量的总和相比大至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少75％或至少90％的钙动员量，如经由钙动员测定所确定。
在一些实施方案中，本文所提供的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物包括其中CXCR4-ADRB2异聚体的特征在于具有以下特征：由所述CXCR4-ADRB2异聚体的刺激诸如所述CXCR4-ADRB2异聚体的共刺激所产生的增强的反应(或增强的下游信号传导)。在某些实施方案中，增强的反应(或增强的下游信号传导)是增加的钙动员量。在某些实施方案中，钙动员通过胞内Ca2+测定来确定。在特定实施方案中，胞内Ca2+测定是钙动员测定。在某些实施方案中，增强的反应是具有一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的增强的癌症进展。在某些实施方案中，增强的癌症进展是具有一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的增强的细胞增殖。在某些实施方案中，增强的癌症进展是具有一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的增强的细胞迁移。在某些实施方案中，增强的癌症进展是具有一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的增强的转移。在某些实施方案中，增强的癌症进展是具有一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的增强的肿瘤生长。在某些实施方案中，增强的癌症进展是具有一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的增强的血管生成。在某些实施方案中，所述一个或多个细胞是一个或多个癌细胞。在某些实施方案中，所述一个或多个细胞来源于受试者。在某些实施方案中，所述一个或多个细胞来自从受试者获得的生物样品。
在一些实施方案中，本文所提供的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物包括其中CXCR4-ADRB2异聚体的特征在于具有选自由以下组成的组的特征中的一个或多个：(1)布利沙福和ADRB2抑制剂的组合改变一个或多个受试者源性细胞中CXCR4-ADRB2异聚体的异聚体特异性性质；(2)布利沙福和ADRB2抑制剂的组合改变一个或多个受试者源性细胞中CXCR4-ADRB2异聚体的异聚体特异性功能；(3)布利沙福和ADRB2抑制剂的组合改变一个或多个含有CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的异聚体特异性性质；和(4)布利沙福和ADRB2抑制剂的组合降低一个或多个含有CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的癌症进展。在特定实施方案中，CXCR4-ADRB2异聚体的特征如下：布利沙福和ADRB2抑制剂的组合改变一个或多个受试者源性细胞中CXCR4-ADRB2异聚体的异聚体特异性性质。在特定实施方案中，CXCR4-ADRB2异聚体的特征如下：布利沙福和ADRB2抑制剂的组合改变一个或多个受试者源性细胞中CXCR4-ADRB2异聚体的异聚体特异性功能。在特定实施方案中，CXCR4-ADRB2异聚体的特征如下：布利沙福和ADRB2抑制剂的组合改变一个或多个含有CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的异聚体特异性性质。在特定实施方案中，CXCR4-ADRB2异聚体的特征如下：布利沙福和ADRB2抑制剂的组合降低一个或多个含有CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的癌症进展。在特定实施方案中，降低的癌症进展包括一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的癌症进展的降低。在特定实施方案中，降低的癌症进展包括一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的细胞增殖的降低。在特定实施方案中，降低的癌症进展包括一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的细胞迁移的降低。在特定实施方案中，降低的癌症进展包括一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的转移的降低。在特定实施方案中，降低的癌症进展包括一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的血管生成的降低。在特定实施方案中，CXCR4抑制剂是布利沙福，并且ADRB2抑制剂是卡维地洛。
在一些实施方案中，本文所提供的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物包括其中CXCR4-ADRB2异聚体的特征在于具有以下特征：相对于由用CXCR4激动剂或ADRB2激动剂对所述CXCR4-ADRB2异聚体进行单刺激所产生的下游ERK信号传导量，用CXCR4激动剂和ADRB2激动剂对CXCR4-ADRB2异聚体进行共刺激产生较大的下游ERK信号传导量。在一些实施方案中，用CXCR4激动剂和ADRB2激动剂共刺激所产生的下游ERK信号传导量大于用CXCR4激动剂单刺激所产生的量。在一些实施方案中，用CXCR4激动剂和ADRB2激动剂共刺激所产生的下游ERK信号传导量与用CXCR4激动剂单刺激所产生的量相比大至少5％。在一些实施方案中，用CXCR4激动剂和ADRB2激动剂共刺激所产生的下游ERK信号传导量与用CXCR4激动剂单刺激所产生的量相比大至少10％、至少25％、至少50％、至少75％或至少90％。在一些实施方案中，用CXCR4激动剂和ADRB2激动剂共刺激所产生的下游ERK信号传导量与用CXCR4激动剂单刺激所产生的量相比大在5-15％、10-25％、20-50％、40-75％或60-100％之间的范围。在一些实施方案中，与用ADRB2激动剂单刺激所产生的量相比，用CXCR4激动剂和ADRB2激动剂共刺激所产生的下游ERK信号传导量较大。在一些实施方案中，与用ADRB2激动剂单刺激所产生的量相比，用CXCR4激动剂和ADRB2激动剂共刺激所产生的下游ERK信号传导量大至少5％。在一些实施方案中，与用ADRB2激动剂单刺激所产生的量相比，用CXCR4激动剂和ADRB2激动剂共刺激所产生的下游ERK信号传导量大至少10％、至少25％、至少50％、至少75％或至少90％。在一些实施方案中，与用ADRB2激动剂单刺激所产生的量相比，用CXCR4激动剂和ADRB2激动剂共刺激所产生的下游ERK信号传导量大在5-15％、10-25％、20-50％、40-75％或60-100％之间的范围。在特定实施方案中，CXCR4激动剂是CXCL12，并且ADRB2激动剂是沙美特罗。
在一些实施方案中，本文所提供的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物包括其中所施用的布利沙福和ADRB2抑制剂的组合：(i)改变一个或多个受试者源性细胞中CXCR4-ADRB2异聚体的异聚体特异性性质；(ii)改变一个或多个受试者源性细胞中CXCR4-ADRB2异聚体的异聚体特异性功能；(iii)改变一个或多个含有CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的异聚体特异性性质；和/或(iv)降低具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的癌症进展。在特定实施方案中，所施用的布利沙福和ADRB2抑制剂的组合改变一个或多个受试者源性细胞中CXCR4-ADRB2异聚体的异聚体特异性性质。在特定实施方案中，所施用的布利沙福和ADRB2抑制剂的组合改变一个或多个受试者源性细胞中CXCR4-ADRB2异聚体的异聚体特异性功能。在特定实施方案中，所施用的布利沙福和ADRB2抑制剂的组合改变一个或多个含有CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的异聚体特异性性质。在特定实施方案中，所施用的布利沙福和ADRB2抑制剂的组合降低具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的癌症进展。在特定实施方案中，降低的癌症进展包括一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的癌症进展的降低。在特定实施方案中，降低的癌症进展包括一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的细胞增殖的降低。在特定实施方案中，降低的癌症进展包括一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的细胞迁移的降低。在特定实施方案中，降低的癌症进展包括一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的转移的降低。在特定实施方案中，降低的癌症进展包括一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的血管生成的降低。在特定实施方案中，CXCR4抑制剂是布利沙福，并且ADRB2抑制剂是卡维地洛。
在一些实施方案中，本文所提供的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物包括其中施用的布利沙福和ADRB2抑制剂的组合抑制来自所述CXCR4-ADRB2异聚体(例如来自癌症受试者中的所述CXCR4-ADRB2异聚体，诸如来自细胞中的所述CXCR4-ADRB2异聚体，或来自癌症受试者的细胞中的所述CXCR4-ADRB2异聚体)的增强的下游信号传导。在特定实施方案中，CXCR4-ADRB2异聚体组分包含CXCR4和ADRB2的单独元体。在一些实施方案中，在单独元体情境中含有CXCR4或ADRB2的细胞分别包含：(i)在存在或不存在单独元体ADRB2的情况下，单独元体CXCR4；(ii)在存在或不存在单独元体CXCR4的情况下，单独元体ADRB2。在一些实施方案中，在单独元体情境中含有CXCR4的细胞在存在或不存在单独元体ADRB2的情况下包含单独元体CXCR4。在特定实施方案中，在单独元体情境中含有CXCR4的细胞在不存在单独元体ADRB2的情况下包含所述单独元体CXCR4。在特定实施方案中，在单独元体情境中含有CXCR4的细胞在存在单独元体ADRB2的情况下包含所述单独元体CXCR4。在一些实施方案中，在单独元体情境中含有ADRB2的细胞在存在或不存在单独元体CXCR4的情况下包含单独元体ADRB2。在特定实施方案中，在单独元体情境中含有ADRB2的细胞在不存在单独元体CXCR4的情况下包含所述单独元体ADRB2。在特定实施方案中，在单独元体情境中含有ADRB2的细胞在存在单独元体CXCR4的情况下包含所述单独元体ADRB2。在特定实施方案中，CXCR4抑制剂是布利沙福，并且ADRB2抑制剂是卡维地洛。
在一些实施方案中，相对于向所述受试者施用作为单一抑制剂的CXCR4抑制剂或ADRB2抑制剂，在施用抑制剂的组合之后，癌症的进展协同降低。在一些实施方案中，在施用抑制剂的组合之后，癌症进展的降低大于通过向所述受试者施用作为单一抑制剂的CXCR4抑制剂或ADRB2抑制剂所实现的进展水平降低的总和。在一些实施方案中，根据本文所提供的用于治疗的方法、用于抑制的方法、药盒或药物组合物，相对于向所述受试者施用作为单一抑制剂的CXCR4抑制剂或ADRB2抑制剂，在施用抑制剂的组合之后，具有所述含有CXCR4-ADRB2异聚体的癌细胞的受试者中的癌症进展多降低5-100％的范围，诸如相对于向所述受试者施用作为单一抑制剂的CXCR4抑制剂或ADRB2抑制剂，在施用抑制剂的组合之后，多降低5-100％、10-100％、20-100％、30-100％、40-100％、50-100％、60-100％、75-100％、5-75％、5-50％或5-25％的范围。在特定实施方案中，CXCR4抑制剂是布利沙福。在特定实施方案中，ADRB2抑制剂是卡维地洛。在特定实施方案中，癌症进展通过肿瘤大小的百分比变化来确定。在特定实施方案中，癌症进展通过在1个月、2个月、3个月、6个月、1年或2年的时期内肿瘤大小的百分比变化来确定。
在一些实施方案中，根据本文所提供的用于治疗的方法、用于抑制的方法、药盒或药物组合物，相对于作为单一抑制剂施用时CXCR4抑制剂的功效，当与ADRB2抑制剂组合向具有所述含有CXCR4-ADRB2异聚体的癌细胞的受试者施用时，CXCR4抑制剂的功效增加5-5000％的范围，诸如相对于作为单一抑制剂施用时CXCR4抑制剂的功效，当与ADRB2抑制剂组合向具有所述含有CXCR4-ADRB2异聚体的癌细胞的受试者施用时，增加5-4500％、5-4000％、5-3500％、5-3000％、5-2500％、5-2000％、5-1750％、5-1500％、5-1250％、5-1000％、5-900％、5-800％、5-700％、5-500％、5-400％、5-250％、5-200％、5-100％、5-75％、5-50％、5-40％、5-30％、5-25％、1000-3000％、2000-4000％、3000-5000％、3500-4500％、4000-5000％、100-2000％、200-2000％、300-2000％、500-2000％、750-2000％、1000-2000％、1250-2000％、1500-2000％、5-1500％、25-1500％、50-1500％、75-1500％、100-1500％、200-1500％、300-1500％、500-1500％、750-1500％、1000-1500％或1250-1500％的范围。在特定实施方案中，CXCR4抑制剂是布利沙福。在特定实施方案中，ADRB2抑制剂是卡维地洛。在特定实施方案中，CXCR4抑制剂针对受试者细胞中CXCR4-ADRB2异聚体的功效的增加(诸如在抑制来自CXCR4-ADRB2异聚体的增强的下游信号传导方面)通过CXCR4抑制剂与ADRB2抑制剂组合施用时的IC50值相对于CXCR4抑制剂作为单一抑制剂施用时的IC50值的变化来确定。在特定实施方案中，根据本文所公开的测定确定CXCR4抑制剂的IC50值可利用浓度范围在1-10μM之间诸如浓度为1、2、3、4、5、6、7、8、9或10μM的ADRB2抑制剂。在特定实施方案中，根据本文所公开的测定确定CXCR4抑制剂的IC50值可利用在针对ADRB2的IC90浓度下的ADRB2抑制剂，诸如ADRB2抑制剂浓度范围在1-1,000nM之间例如1-500nM之间、100-750nM之间或600-1,000nM之间，诸如浓度为10、25、50、100、250、500、600、700、800、900或1,000nM。
在一些实施方案中，根据本文所提供的用于治疗的方法、用于抑制的方法、药盒或药物组合物，相对于作为单一抑制剂施用时ADRB2抑制剂的功效，当与CXCR4抑制剂组合向具有所述含有CXCR4-ADRB2异聚体的癌细胞的受试者施用时，ADRB2抑制剂的功效增加5-5000％的范围，诸如相对于作为单一抑制剂施用时ADRB2抑制剂的功效，当与CXCR4抑制剂组合向具有所述含有CXCR4-ADRB2异聚体的癌细胞的受试者施用时，增加5-4500％、5-4000％、5-3500％、5-3000％、5-2500％、5-2000％、5-1750％、5-1500％、5-1250％、5-1000％、5-900％、5-800％、5-700％、5-500％、5-400％、5-250％、5-200％、5-100％、5-75％、5-50％、5-40％、5-30％、5-25％、1000-3000％、2000-4000％、3000-5000％、3500-4500％、4000-5000％、100-2000％、200-2000％、300-2000％、500-2000％、750-2000％、1000-2000％、1250-2000％、1500-2000％、5-1500％、25-1500％、50-1500％、75-1500％、100-1500％、200-1500％、300-1500％、500-1500％、750-1500％、1000-1500％或1250-1500％的范围。在特定实施方案中，CXCR4抑制剂是布利沙福。在特定实施方案中，ADRB2抑制剂是卡维地洛。在特定实施方案中，ADRB2抑制剂针对受试者细胞中CXCR4-ADRB2异聚体的功效的增加(诸如在抑制来自CXCR4-ADRB2异聚体的增强的下游信号传导方面)通过ADRB2抑制剂与CXCR4抑制剂组合施用时的IC50值相对于ADRB2抑制剂作为单一抑制剂施用时的IC50值的变化来确定。在特定实施方案中，根据本文所公开的测定确定ADRB2抑制剂的IC50值可利用浓度范围在1-10μM之间诸如浓度为1、2、3、4、5、6、7、8、9或10μM的CXCR4抑制剂。在特定实施方案中，根据本文所公开的测定确定ADRB2抑制剂的IC50值可利用在针对CXCR4的IC90浓度下的CXCR4抑制剂，诸如CXCR4抑制剂浓度范围在1-1,000nM之间例如1-500nM之间、100-750nM之间或600-1,000nM之间，诸如浓度为10、25、50、100、250、500、600、700、800、900或1,000nM。
在一些实施方案中，本文所提供的用于治疗的方法、用于抑制的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物包括施用CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂，其中相对于单一抑制剂施用，所述方法或用途对癌症受试者中的由CXCR4-ADRB2异聚体产生的增强的下游信号传导的抑制范围在5-2000倍之间，诸如相对于单一抑制剂施用，对癌症受试者中的由CXCR4-ADRB2异聚体产生的增强的下游信号传导的抑制范围在5-1750倍、5-1500倍、5-1250倍、5-1000倍、5-900倍、5-800倍、5-700倍、5-500倍、5-400倍、5-250倍、5-200倍、5-100倍、5-75倍、5-50倍、5-40倍、5-30倍、5-25倍、100-2000倍、200-2000倍、300-2000倍、500-2000倍、750-2000倍、1000-2000倍、1250-2000倍、1500-2000倍、5-1500倍、25-1500倍、50-1500倍、75-1500倍、100-1500倍、200-1500倍、300-1500倍、500-1500倍、750-1500倍、1000-1500倍或1250-1500倍之间。在特定实施方案中，CXCR4抑制剂是布利沙福。在特定实施方案中，ADRB2抑制剂是卡维地洛。
在一些实施方案中，本文所提供的用于治疗的方法、用于抑制的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物包括施用CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂，其中相对于在它们相应的单独元体情境中抑制由CXCR4元体或ADRB2元体产生的下游信号传导，所述方法或用途对癌症受试者中的由CXCR4-ADRB2异聚体产生的增强的下游信号传导的抑制范围在5-2000倍之间，诸如相对于在相应单独元体情境中抑制CXCR4元体或ADRB2元体产生的下游信号传导，对癌症受试者中的由CXCR4-ADRB2异聚体产生的增强的下游信号传导的抑制范围在5-1750倍、5-1500倍、5-1250倍、5-1000倍、5-900倍、5-800倍、5-700倍、5-500倍、5-400倍、5-250倍、5-200倍、5-100倍、5-75倍、5-50倍、5-40倍、5-30倍、5-25倍、100-2000倍、200-2000倍、300-2000倍、500-2000倍、750-2000倍、1000-2000倍、1250-2000倍、1500-2000倍、5-1500倍、25-1500倍、50-1500倍、75-1500倍、100-1500倍、200-1500倍、300-1500倍、500-1500倍、750-1500倍、1000-1500倍或1250-1500倍之间。在特定实施方案中，CXCR4抑制剂是布利沙福。在特定实施方案中，ADRB2抑制剂是卡维地洛。
在根据本文所公开的方法来抑制来自CXCR4-ADRB2异聚体的增强的下游信号传导方面和/或在根据本文所公开的测定来确定IC50值方面，关于是否有效或治疗上有效来对抑制剂或抑制剂的组合进行初步测试和评估可利用浓度范围在1-10μM之间的抑制剂(或组合的每种抑制剂的浓度范围在1-10μM之间)，诸如浓度为1、2、3、4、5、6、7、8、9或10μM。如果抑制剂对信号的抑制对于可确定的测量值而言不足够明显，那么可使用更大浓度的抑制剂以更好地评估可确定的测量值，诸如IC50值。如果抑制剂对信号的抑制非常强，那么可使用更低浓度的抑制剂以更好地评估可确定的测量值，诸如IC50值。
在一些实施方案中，本文所提供的方法用于治疗、改善或预防有需要的受试者中的疾病。在一些实施方案中，本文所提供的方法可包括向受试者施用治疗有效量的本文所提供的药物组合物。例如，本文所提供的药物组合物可包含CXCR4抑制剂、ADRB2抑制剂或CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂的组合；和药学上可接受的载剂。可使用本发明的方法治疗或预防的疾病包括但不限于癌症、肿瘤、转移和/或血管生成。例如，在一些实施方案中，本文所提供的方法可用于治疗癌症或相关症状，其中癌症、肿瘤和/或微环境的细胞表达CXCR4-ADRB2异聚体。在一些实施方案中，癌症是血液学癌症或实体肿瘤。在一些实施方案中，癌症为复发性或难治性癌症。在一些实施方案中，癌症为血液学癌症。在一些实施方案中，血液学癌症选自由以下组成的组：淋巴瘤、白血病、骨髓瘤和多发性骨髓瘤。在一些实施方案中，血液学癌症选自由以下组成的组：多发性骨髓瘤、急性髓系白血病、急性单核细胞性白血病、弥漫性大B细胞淋巴瘤、B细胞急性淋巴母细胞性白血病、霍奇金氏淋巴瘤(Hodgkinslymphoma)、急性前髓细胞性白血病、慢性嗜酸性粒细胞白血病和伯基特淋巴瘤(Burkittlymphoma)。在一些实施方案中，可使用本发明的方法治疗、改善或预防的癌症或肿瘤的非限制性实例包括胃肠道肿瘤，例如乳腺癌、肺癌、肺小细胞癌、肝细胞癌、脑癌、肾癌、胰脏癌或胰脏腺癌、卵巢癌、***癌、黑色素瘤、淋巴瘤、白血病、多发性骨髓瘤、肾细胞癌、软组织肉瘤、胃肠道癌、胃癌、结肠癌、结肠直肠癌、结肠直肠腺癌、膀胱腺癌、食道癌以及胃、食道、咽喉和泌尿生殖道腺癌。在一些实施方案中，淋巴瘤是B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤或NK细胞淋巴瘤。在一些实施方案中，淋巴瘤是复发性或难治性淋巴瘤。在一些实施方案中，淋巴瘤选自由以下组成的组：霍奇金氏淋巴瘤(Hodgkin’s lymphoma)、非霍奇金淋巴瘤、皮肤B细胞淋巴瘤、活化的B细胞淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、伯基特淋巴瘤、套细胞淋巴瘤(MCL)、滤泡性淋巴瘤(FL)、滤泡性中心淋巴瘤、转化性淋巴瘤、中间分化的淋巴细胞性淋巴瘤、中间淋巴细胞性淋巴瘤(ILL)、弥漫性低分化淋巴细胞性淋巴瘤(PDL)、中心细胞性淋巴瘤、弥漫性小核裂细胞淋巴瘤(DSCCL)、外周T细胞淋巴瘤(PTCL)、皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)、套区淋巴瘤和低级滤泡性淋巴瘤。在一些实施方案中，白血病是：(a)选自由以下组成的组的急性白血病：急性淋巴细胞性白血病(ALL)、T细胞急性淋巴细胞性白血病(T-ALL)、B细胞急性淋巴母细胞白血病、急性单核细胞性白血病、急性前髓细胞性白血病、急性髓细胞性白血病(AML)、急性髓系白血病、急性骨髓性白血病和成髓细胞、前髓细胞性、骨髓单核细胞性、单核细胞性和红白血病；(b)选自由以下组成的组的慢性白血病：慢性髓细胞性(粒细胞性)白血病、慢性骨髓性白血病(慢性髓系白血病；CML)和慢性淋巴细胞性白血病(CLL)；或(c)慢性骨髓单核细胞性白血病(CMML)、慢性嗜酸性粒细胞白血病、幼年型骨髓单核细胞性白血病(JMML)、真性红细胞增多症、自然杀伤细胞白血病(NK白血病)或毛细胞白血病。在一些实施方案中，癌症是实体肿瘤。在一些实施方案中，实体肿瘤是良性肿瘤或癌症。在一些实施方案中，实体肿瘤是癌或肉瘤。在一些实施方案中，实体肿瘤选自由以下组成的组：胰脏腺癌、胰脏导管腺癌、肾细胞癌、乳腺癌(breast cancer)、乳腺癌(breastadenocarcinoma)、乳导管腺癌、卵巢浆液性腺癌、卵巢透明细胞腺癌、卵巢粘液性囊腺癌、子宫癌肉瘤、子宫内膜腺癌、子宫内膜基质性肉瘤、子宫内膜癌、胃管状腺癌、胃腺鳞癌、多发性内分泌瘤病、黑色素瘤、甲状腺癌、***癌、肝细胞癌、肝内胆管癌、肺腺癌、小细胞肺癌、腺鳞肺癌、恶性上皮样间皮瘤、胶质母细胞瘤、髓母细胞瘤、星形细胞瘤、肺泡横纹肌肉瘤和骨肉瘤。在一些实施方案中，实体肿瘤选自由以下组成的组：纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、骨肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、恶性上皮样间皮瘤、尤文氏肿瘤(Ewing'stumor)、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、胃癌、结肠直肠癌、食管癌、结肠癌、淋巴恶性肿瘤、胰脏癌、胰脏腺癌、胰脏导管腺癌、乳腺癌、乳腺癌、乳导管腺癌、肺癌、小细胞肺癌、肺腺癌、腺鳞肺癌、肺泡横纹肌肉瘤、卵巢癌、卵巢透明细胞腺癌、卵巢粘液性囊腺癌、卵巢浆液性腺癌、***癌、肝细胞癌、软组织肉瘤、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、甲状腺髓样癌、甲状腺***状癌、甲状腺癌、嗜铬细胞瘤皮脂腺癌、***状癌、***状腺癌、髓样癌、支气管癌、胃肠道癌、胃管状腺癌、胃腺鳞癌、肾癌、肝内胆管癌、肾细胞癌、肝瘤、胆管癌、绒毛膜癌、威尔姆氏瘤(Wilms’tumor)、子宫癌肉瘤、子宫内膜腺癌、子宫内膜间质肉瘤、子宫内膜癌、子***、睾丸肿瘤、***瘤、膀胱癌、黑色素瘤、多发性骨髓瘤、多发性内分泌瘤病、CNS肿瘤、胶质母细胞瘤、星形细胞瘤、CNS淋巴瘤、生殖细胞瘤、成神经管细胞瘤、神经鞘瘤颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、成血管细胞瘤、听神经瘤、少突神经胶质瘤、脑膜瘤、成神经细胞瘤、视网膜母细胞瘤和脑转移瘤。在一些实施方案中，实体肿瘤选自由以下组成的组：乳腺癌、肺癌和肝细胞癌。在一些实施方案中，实体肿瘤是乳腺癌。在一些实施方案中，实体肿瘤是肺癌。在一些实施方案中，实体肿瘤是肝细胞癌。在一些实施方案中，用于治疗癌症的方法是用于抑制由CXCR4-ADRB2异聚体产生的增强的下游信号传导的方法。在一些实施方案中，用于抑制由CXCR4-ADRB2异聚体产生的增强的下游信号传导的方法是用于治疗癌症的方法。在一些实施方案中，癌症是表达CXCR4的癌症。在一些实施方案中，癌症是表达ADRB2的癌症。在一些实施方案中，癌症是表达CXCR4的癌症和表达ADRB2的癌症。在一些实施方案中，受试者中的CXCR4表达水平大于参考水平。在一些实施方案中，受试者中的ADRB2表达水平大于参考水平。在一些实施方案中，受试者中的CXCR4表达水平和ADRB2表达水平大于相应参考水平。在一些实施方案中，细胞中的CXCR4表达水平大于参考水平。在一些实施方案中，细胞中的ADRB2表达水平大于参考水平。在一些实施方案中，细胞中的CXCR4表达水平和ADRB2表达水平大于相应参考水平。
在一些实施方案中，本文所提供的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物还包括确定细胞、受试者或从受试者获得的样品中的CXCR4基因的表达水平，其中如果表达水平大于CXCR4基因的参考水平，那么确定细胞、受试者或从受试者获得的样品具有表达CXCR4的癌症。在特定实施方案中，本文所提供的方法或用途确定细胞中CXCR4基因的表达水平。在特定实施方案中，本文所提供的方法或用途确定受试者中CXCR4基因的表达水平。在特定实施方案中，本文所提供的方法或用途确定从受试者获得的样品中CXCR4基因的表达水平。在一些实施方案中，癌症是表达CXCR4的癌症。在特定实施方案中，细胞中的CXCR4基因表达水平大于参考水平。在特定实施方案中，受试者中的CXCR4基因表达水平大于参考水平。在特定实施方案中，从受试者获得的样品中的CXCR4基因表达水平大于参考水平。在CXCR4基因表达水平大于参考水平的特定实施方案中，本文所提供的方法或用途包括施用CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂。在特定实施方案中，CXCR4抑制剂是布利沙福。在特定实施方案中，ADRB2抑制剂是卡维地洛。
在一些实施方案中，本文所提供的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物还包括确定细胞、受试者或从受试者获得的样品中的ADRB2基因的表达水平，其中如果表达水平大于ADRB2基因的参考水平，那么确定细胞、受试者或从受试者获得的样品具有表达ADRB2的癌症。在特定实施方案中，本文所提供的方法或用途确定细胞中ADRB2基因的表达水平。在特定实施方案中，本文所提供的方法或用途确定受试者中ADRB2基因的表达水平。在特定实施方案中，本文所提供的方法或用途确定从受试者获得的样品中ADRB2基因的表达水平。在特定实施方案中，癌症是表达ADRB2的癌症。在特定实施方案中，细胞中的ADRB2基因表达水平大于参考水平。在特定实施方案中，受试者中的ADRB2基因表达水平大于参考水平。在特定实施方案中，从受试者获得的样品中的ADRB2基因表达水平大于参考水平。在ADRB2基因表达水平大于参考水平的特定实施方案中，本文所提供的方法或用途包括施用CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂。在特定实施方案中，CXCR4抑制剂是布利沙福。在特定实施方案中，ADRB2抑制剂是卡维地洛。
在一些实施方案中，本文所提供的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物还包括确定细胞、受试者或从受试者获得的样品中的CXCR4基因和ADRB2基因的表达水平，其中如果CXCR4基因和ADRB2基因的表达水平大于CXCR4基因和ADRB2基因的相应参考水平，那么确定细胞、受试者或从受试者获得的样品具有表达CXCR4和表达ADRB2的癌症。在特定实施方案中，本文所提供的方法或用途确定细胞中CXCR4基因和ADRB2基因的表达水平。在特定实施方案中，本文所提供的方法或用途确定受试者中CXCR4基因和ADRB2基因的表达水平。在特定实施方案中，本文所提供的方法或用途确定从受试者获得的样品中CXCR4基因和ADRB2基因的表达水平。在特定实施方案中，癌症是表达CXCR4和表达ADRB2的癌症。在特定实施方案中，细胞中的CXCR4基因和ADRB2基因表达水平大于相应参考水平。在特定实施方案中，受试者中的CXCR4基因和ADRB2基因表达水平大于相应参考水平。在特定实施方案中，从受试者获得的样品中的CXCR4基因和ADRB2基因表达水平大于相应参考水平。在CXCR4基因和ADRB2基因表达水平大于相应参考水平的特定实施方案中，本文所提供的方法或用途包括施用CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂。在特定实施方案中，CXCR4抑制剂是布利沙福。在特定实施方案中，ADRB2抑制剂是卡维地洛。
在一些实施方案中，本文所提供的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物还包括确定细胞、受试者或从受试者获得的样品中的CXCR4蛋白的表达水平，其中如果表达水平大于CXCR4蛋白的参考水平，那么确定细胞、受试者或从受试者获得的样品具有表达CXCR4的癌症。在特定实施方案中，本文所提供的方法或用途确定细胞中CXCR4蛋白的表达水平。在特定实施方案中，本文所提供的方法或用途确定受试者中CXCR4蛋白的表达水平。在特定实施方案中，本文所提供的方法或用途确定从受试者获得的样品中CXCR4蛋白的表达水平。在特定实施方案中，癌症是表达CXCR4的癌症。在特定实施方案中，细胞中的CXCR4蛋白表达水平大于参考水平。在特定实施方案中，受试者中的CXCR4蛋白表达水平大于参考水平。在特定实施方案中，从受试者获得的样品中的CXCR4蛋白表达水平大于参考水平。在CXCR4蛋白表达水平大于参考水平的特定实施方案中，本文所提供的方法或用途包括施用CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂。在特定实施方案中，CXCR4抑制剂是布利沙福。在特定实施方案中，ADRB2抑制剂是卡维地洛。
在一些实施方案中，本文所提供的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物还包括确定细胞、受试者或从受试者获得的样品中的ADRB2蛋白的表达水平，其中如果表达水平大于ADRB2蛋白的参考水平，那么确定细胞、受试者或从受试者获得的样品具有表达ADRB2的癌症。在特定实施方案中，本文所提供的方法或用途确定细胞中ADRB2蛋白的表达水平。在特定实施方案中，本文所提供的方法或用途确定受试者中ADRB2蛋白的表达水平。在特定实施方案中，本文所提供的方法或用途确定从受试者获得的样品中ADRB2蛋白的表达水平。在特定实施方案中，癌症是表达ADRB2的癌症。在特定实施方案中，细胞中的ADRB2蛋白表达水平大于参考水平。在特定实施方案中，受试者中的ADRB2蛋白表达水平大于参考水平。在特定实施方案中，从受试者获得的样品中的ADRB2蛋白表达水平大于参考水平。在ADRB2蛋白表达水平大于参考水平的特定实施方案中，本文所提供的方法或用途包括施用CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂。在特定实施方案中，CXCR4抑制剂是布利沙福。在特定实施方案中，ADRB2抑制剂是卡维地洛。
在一些实施方案中，本文所提供的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物还包括确定细胞、受试者或从受试者获得的样品中的CXCR4蛋白和ADRB2蛋白的表达水平，其中如果CXCR4蛋白和ADRB2蛋白的表达水平大于CXCR4蛋白和ADRB2蛋白的相应参考水平，那么确定细胞、受试者或从受试者获得的样品具有表达CXCR4和表达ADRB2的癌症。在特定实施方案中，本文所提供的方法或用途确定细胞中CXCR4蛋白和ADRB2蛋白的表达水平。在特定实施方案中，本文所提供的方法或用途确定受试者中CXCR4蛋白和ADRB2蛋白的表达水平。在特定实施方案中，本文所提供的方法或用途确定从受试者获得的样品中CXCR4蛋白和ADRB2蛋白的表达水平。在特定实施方案中，癌症是表达CXCR4和表达ADRB2的癌症。在特定实施方案中，细胞中的CXCR4蛋白和ADRB2蛋白表达水平大于相应参考水平。在特定实施方案中，受试者中的CXCR4蛋白和ADRB2蛋白表达水平大于相应参考水平。在特定实施方案中，从受试者获得的样品中的CXCR4蛋白和ADRB2蛋白表达水平大于相应参考水平。在CXCR4蛋白和ADRB2蛋白表达水平大于相应参考水平的特定实施方案中，本文所提供的方法或用途包括施用CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂。在特定实施方案中，CXCR4抑制剂是布利沙福。在特定实施方案中，ADRB2抑制剂是卡维地洛。
在一些实施方案中，本文所提供的药物组合物(有时在本文称为“药物制剂”)包括CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂的组合以及药学上可接受的载剂。在一些实施方案中，本文所提供的药物组合物包括CXCR4抑制剂和药学上可接受的载剂。在一些实施方案中，本文所提供的药物组合物包括ADRB2抑制剂和药学上可接受的载剂。可用于本发明的药物组合物中的药学上可接受的载剂包括本领域已知的任何标准药物载剂，诸如生理上可接受的载剂、赋形剂或稳定剂，例如磷酸盐缓冲盐水溶液、水和乳液诸如油和水乳液，以及各种润湿剂。这些药物组合物可以液体单位剂型或足以将CXCR4抑制剂、ADRB2抑制剂或CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂的组合递送至需要治疗的受试者的靶区域的任何其他剂量形式的形式制备。例如，可以适用于所选的施用方式的任何方式来制备药物组合物，施用方式例如血管内、肌肉内、皮下、皮内、鞘内等。本领域技术人员能容易地选择其他任选的组分例如药物级稳定剂、缓冲液、防腐剂、赋形剂等。考虑到pH、等渗性、稳定性等，药物组合物的制备在本领域技术水平内。
在一些实施方案中，可用于本文提所供的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物的本文所提供的药物组合物包括：(a)CXCR4抑制剂，其中CXCR4抑制剂是布利沙福；(b)ADRB2抑制剂；和(c)药学上可接受的载剂。在一些实施方案中，本文所提供的药物组合物或利用它的本文所提供的使用方法包括其中ADRB2抑制剂是ADRB2的拮抗剂、ADRB2的反向激动剂、ADRB2的部分拮抗剂、ADRB2的变构调节剂、ADRB2的抗体、ADRB2的抗体片段、ADRB2的配体或抗体-药物缀合物。在特定实施方案中，本文所提供的药物组合物或利用它的本文所提供的使用方法包括其中ADRB2抑制剂是ADRB2的拮抗剂。在特定实施方案中，本文所提供的药物组合物或利用它的本文所提供的使用方法包括其中ADRB2抑制剂是ADRB2的反向激动剂。在特定实施方案中，本文所提供的药物组合物或利用它的本文所提供的使用方法包括其中ADRB2抑制剂是ADRB2的部分拮抗剂。在特定实施方案中，本文所提供的药物组合物或利用它的本文所提供的使用方法包括其中ADRB2抑制剂是ADRB2的变构调节剂。在特定实施方案中，本文所提供的药物组合物或利用它的本文所提供的使用方法包括其中ADRB2抑制剂是ADRB2的抗体。在特定实施方案中，本文所提供的药物组合物或利用它的本文所提供的使用方法包括其中ADRB2抑制剂是ADRB2的抗体片段。在特定实施方案中，本文所提供的药物组合物或利用它的本文所提供的使用方法包括其中ADRB2抑制剂是ADRB2的配体。在特定实施方案中，本文所提供的药物组合物或利用它的本文所提供的使用方法包括其中ADRB2抑制剂是抗体-药物缀合物。在特定实施方案中，本文所提供的药物组合物或利用它的本文所提供的使用方法包括其中ADRB2抑制剂选自由以下组成的组：阿普洛尔、阿替洛尔、倍他洛尔、布拉洛尔、布托沙明、卡那洛尔、卡维地洛、CGP12177、环丙洛尔、ICI 118551、ICYP、拉贝洛尔、左旋倍他洛尔、左旋布诺洛尔、LK 204-545、美托洛尔、纳多洛尔、NIHP、NIP、普罗帕酮、***、索他洛尔、SR59230A和噻吗洛尔。在特定实施方案中，本文所提供的药物组合物或利用它的本文所提供的使用方法包括其中ADRB2抑制剂是卡维地洛。在特定实施方案中，本文所提供的药物组合物或利用它的本文所提供的使用方法包括其中向受试者施用治疗有效量的布利沙福。在特定实施方案中，本文所提供的药物组合物或利用它的本文所提供的使用方法包括其中向受试者施用次治疗有效量的布利沙福。在特定实施方案中，本文所提供的药物组合物或利用它的本文所提供的使用方法包括其中向受试者施用治疗有效量的ADRB2抑制剂。在特定实施方案中，本文所提供的药物组合物或利用它的本文所提供的使用方法包括其中向受试者施用次治疗有效量的ADRB2抑制剂。
在一些实施方案中，本文所提供的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物包括其中作为包含药学上可接受的载剂的药物组合物施用布利沙福。在一些实施方案中，本文所提供的方法或用途包括其中作为包含药学上可接受的载剂的药物组合物施用ADRB2抑制剂。在一些实施方案中，本文所提供的方法或用途包括其中依序、并行或同时施用布利沙福和ADRB2抑制剂的组合。在一些实施方案中，本文所提供的方法或用途包括其中作为进一步包含药学上可接受的载剂的药物组合物施用布利沙福和ADRB2抑制剂的组合。在一些实施方案中，本文所提供的方法或用途包括其中作为药物组合物的组合施用布利沙福和ADRB2抑制剂。在一些实施方案中，本文所提供的方法或用途包括其中药物组合物的组合包含：(a)包含布利沙福和药学上可接受的载剂的药物组合物；和(b)包含ADRB2抑制剂和药学上可接受的载剂的药物组合物。在一些实施方案中，本文所提供的方法或用途包括其中依序、并行、或同时施用药物组合物的组合。
可通过将具有所期望纯度的抑制剂与任选的生理学上可接受的载剂、赋形剂或稳定剂混合(Remington's Pharmaceutical Sciences(1990)，Mack Publishing Co.，Easton，PA)来以冻干制剂或水溶液的形式制备含有CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂的药物制剂、含有CXCR4抑制剂的药物制剂和含有ADRB2抑制剂的药物制剂以供储存。可接受的载剂、赋形剂或稳定剂在所采用的剂量和浓度下对接受者无毒，并且包括：缓冲液诸如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和蛋氨酸；防腐剂，诸如十八烷基二甲基芐基氯化铵；氯化六甲铵；苯扎氯铵、苄索氯铵；苯酚、丁醇或苯甲醇；对羟基苯甲酸烷基酯，诸如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚；少于约10个残基的低分子量多肽；蛋白，诸如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，诸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，诸如EDTA；糖，诸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成盐反离子，诸如钠；金属络合物，诸如锌蛋白络合物；和/或非离子表面活性剂，诸如TWEENTM、PLURONICSTM或聚乙二醇(PEG)。
应当理解，在本文提供的本发明的定义内，还提供了基本上不影响本发明的各种实施方案的活性的修改。因此，以下实施例意图说明而非限制本文所公开的发明。
实施例
实施例1.通过BiFC测定评估CXCR4-GPCRx异聚体形成
为了鉴定新颖CXCR4-GPCRx异聚体，制备了重组腺病毒，其编码143个与黄色荧光蛋白Venus的N末端片段(VN)融合的GPCR和147个与Venus的C末端片段(VC)融合的GPCR(参见例如Song,Y.B.等人,(2014)Monitoring G protein-coupled receptor activationusing an adenovirus-based beta-arrestin bimolecular fluorescencecomplementation assay,Anal Biochem 449,32-41；韩国专利号KR 101029972 B1，在2011年4月12日授予；Y.B.,(2012)“Global analysis of GPCR dimerization using AdBiFCassay，”在部分满足首尔国立大学生物科学学院博士学位的要求下提交的论文，126页)。使用双分子荧光互补(BiFC)测定鉴定了CXCR4-GPCR异聚体(图1)，其中仅当Venus的两个互补VN和VC片段通过其所融合的两个不同蛋白之间的相互作用而足够接近时，这两个片段才重构荧光信号(Hu,C.D.等人,(2002)Visualization of interactions among bZIP and Relfamily proteins in living cells using bimolecular fluorescencecomplementation,Mol Cell 9,789-798)。
将U-2 OS细胞铺板在96孔板上，用30MOI编码CXCR4-VN和GPCRx-VC或CXCR4-VC和GPCRx-VN的每种腺病毒共转导，并使其表达GPCR 2天。在用Hoechst 33342对细胞进行染色之后，使用IN Cell Analyzer 1000从每孔三个视野获得BiFC和核图像。用IN CellDeveloper ToolBox(GE Healthcare，Waukesha，WI)中的多目标分析软件，分析了每个孔中约200个细胞的图像。基于Hoechst信号标记细胞边界，并测量每个细胞的荧光强度。将荧光强度高于背景水平的细胞视为BiFC阳性细胞。将显示出极高强度的死亡细胞从细胞计数中排除。确定阳性细胞，并且将阳性细胞计数比(“BiFC评分”)计算为(阳性细胞/总细胞)×100。
当CXCR4-VN与HA-VC(图2A)或GCGR-VC(编码胰高血糖素受体的GPCR)(图2C)共表达时，未观察到黄色荧光蛋白(YFP)信号(BiFC信号)。相比之下，当CXCR4-VN与CXCR4-VC共表达时(图2B)，在质膜和细胞质中观察到BiFC信号。当CXCR4-VN与ADRB2-VC共转导时，在质膜和细胞质中观察到强BiFC信号(图2D)。将显示出BiFC荧光信号高于背景水平的细胞计数为BiFC阳性细胞，并计算BiFC评分。
蛋白-蛋白相互作用可通过干扰伴侣蛋白的表达、折叠或定位受到融合标签(诸如BiFC中的荧光蛋白片段或BRET中的海肾荧光素酶)的影响。伴侣蛋白还会损害融合标签的表达或折叠，并影响基于接近性的测定结果。因此，特定组合的两种蛋白之间不存在信号并不一定意味所述蛋白没有相互作用，而是仅意味所连接的供体和受体分子处于不允许发生相互作用的特定构形(Eidne,K.A.等人,(2002)Applications of novel resonanceenergy transfer techniques to study dynamic hormone receptor interactions inliving cells,Trends Endocrinol Metab 13,415-421；Kerppola,T.K.,(2006)Designand implementation of bimolecular fluorescence complementation(BiFC)assaysfor the visualization of protein interactions in living cells,Nat Protoc 1,1278-1286)。
因此，将在CXCR4-VN和GPCRx-VC或CXCR4-VC和GPCRx-VN组合中产生BiFC信号的CXCR4和GPCRx视为相互作用蛋白。众所周知的同聚物CXCR4-VN和CXCR4-VC对的BiFC评分为9.9。因此，选择得到等于或高于10的BiFC评分的CXCR4-GPCRx对作为CXCR-GPCRx异聚体的候选物。CXCR4-ADRB2的CXCR4-GPCRx对得到24的BiFC评分，并且因此被视为CXCR-GPCRx异聚体候选物。2018年12月18日提交的国际申请PCT/KR2018/016166报导了关于BiFC分析的其他GPCR的评估。
实施例2.通过共内化测定评估CXCR4-GPCRx异聚体形成
已知一些GPCR异聚体由于异聚化而表现出改变的转运性质，诸如伴侣GPCR(GABA(B)受体)的成熟(White,1998)、激动剂介导的伴侣GPCR从细胞表面的内化(DOR-GRPR，A2A-D2R)(Hillion，J.等人,(2002)Coaggregation,cointernalization,andcodesensitization of adenosine A2A receptors and dopamine D2 receptors,J BiolChem 277,18091-18097；Liu,X.Y.等人,(2011)Unidirectional cross-activation ofGRPR by MOR1D uncouples itch and analgesia induced by opioids,Cell 147,447-458；Torvinen,M.等人,(2005)Trafficking of adenosine A2A and dopamine D2receptors,J Mol Neurosci 25,191-200)以及伴侣GPCR从胞内区室向细胞表面的定位变化(DOR-CB1)(Rozenfeld,R.等人,(2012)Receptor heteromerization expands therepertoire of cannabinoid signaling in rodent neurons,PLoS One 7,e29239)。
共表达的GPCR对的响应于仅对于所述对中的一个具有选择性的激动剂的共内化已用于确认GPCR异聚化(Milligan，G.,2008)。为了检查GPCRx在共表达时是否调节CXCR4的转运并形成CXCR4-GPCRx异聚体，并且还为了确认使用BiFC测定所鉴定的CXCR4与GPCRx之间的物理相互作用，将细胞用编码CXCR4-GFP和GPCRx的腺病毒共转导并在用GPCRx激动剂刺激之前和之后30min获得GFP图像。将细胞表面上GFP表达的丧失或细胞内GFP颗粒的出现视为CXCR4-GFP与GPCRx的共内化(图3A至图3B)。
在图4A至图4B中，分别用10nM CXCL12(图4A)和100nM福莫特罗(图4B)，用对CXCR4(图4A)和ADRB2(图4B)具有特异性的GPCRx激动剂刺激细胞。在激动剂刺激之前和之后30min获得图像，并使用IN Cell Analyzer 2000进行分析。最初，将这些GPCRx激动剂的浓度选择设置为相应特定GPCRx的EC50浓度(或可选地，Ki或Kd浓度)，并且如果所得信号太强，则浓度降低至低于EC50，并且如果所得信号太弱，则浓度增加至不多于EC50浓度的10,000倍。
用CXCL12刺激表达CXCR4-GFP的细胞导致GFP从质膜重新定位至不同的胞内颗粒，显示出表面CXCR4-GFP内化至细胞质中(图4A)。关于通过BiFC测定所鉴定的CXCR4-ADRB2异聚体，如通过共表达CXCR4-GFP和ADRB2的细胞中胞内GFP颗粒增加和质膜中GFP信号减少所展现，ADRB2诱导CXCR4的内化(图4B)，确认了异聚体共内化。2018年12月18日提交的国际申请PCT/KR2018/016166报导了关于CXCR4的诱导内化的其他GPCR的评估。
实施例3.通过Ca2+动员测定评估CXCR4-GPCRx异聚体形成之后增强的CXCR4下游 信号传导和增强的信号传导的抑制
为了进一步检查CXCR4-GPCRx异聚体是否表现出与单独元体(在缺乏受体之一的细胞中)不同的性质，评估了在表达任一GPCR或两种GPCR的细胞中存在一种或两种激动剂的情况下的钙信号传导。在这个实施例中，如在实施例2中所说明，将这些GPCRx激动剂的浓度选择设置为相应特定GPCRx的EC50浓度(或可选地，Ki或Kd浓度)，并且如果所得Ca2+信号太强，则浓度降低至低于EC50，并且如果所得Ca2+信号太弱，则浓度增加至不多于EC50浓度的100倍。
当用编码CXCR4的腺病毒转导MDA-MB-231人乳腺癌细胞时，用CXCL12刺激引起胞内钙动员(图5A)。用沙美特罗(ADRB2选择性激动剂)刺激细胞不诱导钙反应，表明CXCL12引起的钙反应是由CXCR4介导的。与单独CXCL12所诱导的钙反应相比，用CXCL12和沙美特罗共刺激细胞诱导类似的钙反应。在过表达单独ADRB2的细胞中，单独CXCL12不诱导钙反应，而单独沙美特罗诱导钙反应，显示出沙美特罗通过ADRB2诱导钙反应(图5B)。用两种激动剂进行的共刺激诱导与通过单独沙美特罗所刺激的钙反应类似的钙反应。
在过表达CXCR4和ADRB2的细胞中，用每种激动剂进行刺激诱导与表达单独CXCR4或ADRB2的细胞中所示出的钙反应类似的钙反应(图5C对图5A和图5B)。相比之下，与通过单独激动剂所引起的钙反应相比，用两种激动剂一起进行共刺激显著增加了钙反应(图5C和图5D)。仅在表达CXCR4和ADRB2的细胞中观察到增强的钙信号传导，而在表现单独CXCR4或ADRB2的细胞中未观察到。这些结果表明，CXCR4-ADRB2异聚体表现出与其相应单独GPCR元体不同的性质。
进一步检查了在用CXCL12和GPCRx配体共刺激之后共表达CXCR4和GPCRx的细胞中的增强的钙反应是否被GPCRx拮抗剂抑制。具体而言，如图6所示，在共表达CXCR4和ADRB2的细胞中，施用ADRB2拮抗剂卡维地洛(10μM)显著抑制增强的钙信号传导，并且共同施用CXCR4拮抗剂(AMD3100；10uM)和ADRB2拮抗剂卡维地洛(10μM)引起对钙信号传导的较大抑制。这些结果表明，CXCR4拮抗剂、ADRB2拮抗剂或CXCR4拮抗剂与ADRB2拮抗剂的组合可用作针对CXCR4-ADRB2异聚体的治疗剂。2018年12月18日提交的国际申请PCT/KR2018/016166报导了关于在存在一种或两种相应激动剂的情况下以及在存在一种或两种相应拮抗剂的情况下的钙信号传导的其他GPCR的评估。
共同施用结果还表明，小剂量靶向异聚体的每个相应元体的拮抗剂可提供有效抑制CXCR4-GPCRx异聚体反应同时避免与高剂量单独相应拮抗剂相关的副作用的新颖治疗工具。
实施例4.GPCRx拮抗剂对内化的抑制
为了进一步研究是否被伴侣GPCRx拮抗剂阻止了CXCR4异二聚体的共内化，进行了内化抑制测定。如图4B所示(其中GPCRx是ADRB2)，当将CXCR4和GPCRx同时转导至细胞时，伴侣GPCRx特异性激动剂共内化表达CXCR4-GFP的U-2 OS细胞(对照：CXCR4-GFP(图4A))。如果CXCR4与GPCRx形成异二聚体并由伴侣GPCRx共内化，那么它可被GPCRx特异性拮抗剂阻断。
用编码GPCRx(ADRB2)的腺病毒转导稳定表达CXCR4-GFP的U-2 OS细胞。2天之后，在用CXCR4特异性激动剂CXCL12(20nM)和/或GPCRx特异性拮抗剂(10μM)刺激细胞之前和之后20分钟获得图像。使用IN Cell Analyzer 2500，观察到作为GFP颗粒的CXCR4-GFP的内化。将细胞表面上GFP表达的丧失或细胞内GFP颗粒的出现视为CXCR4-GFP共内化。在此，所评估的GPCRx是ADRB2。用CXCR4激动剂CXCL12进行刺激诱导CXCR4-GFP与ADRB2的内化(图8，左图)。施用ADRB2拮抗剂卡维地洛对异聚体的内化没有影响(图8，中间图)。ADRB2拮抗剂抑制了CXCL12刺激的CXCR4-GFP与ADRB2的内化(图8，右图)。2018年12月18日提交的国际申请PCT/KR2018/016166报导关于通过GPCRx抑制内化的其他GPCR的评估。
这些数据表明，通过抑制CXCR4异聚体的内化，可阻断过表达CXCR4-ADRB2异聚体的细胞(诸如癌症)中异常的下游信号，以达到治疗目的。
实施例5.通过细胞增殖测定评估CXCR4-GPCRx异聚体信号传导的抑制剂对肿瘤生 长的表型作用
为了开发基于CXCR4-GPCRx异聚体的治疗剂，评估了共同施用CXCR4拮抗剂和GPCRx拮抗剂对细胞增殖的作用，特别是关于ADRB2。
制备了来自患者的经切除和分离的胶质母细胞瘤组织的单细胞悬浮液(由韩国首尔的Samsung Seoul医院提供)。将这些细胞在正常神经元干细胞的增殖和非分化的最佳条件下培养。培养基由补充有碱性FGF和EGF的无血清Neurobasal培养基组成。
使用ATPlite(PerkinElmer，目录号6016739试剂)评估了GPCRx拮抗剂对患者源性细胞(PDC)的存活的作用。ATPlite是基于萤火虫荧光素酶的三磷酸腺苷监测***。这种发光测定可替代比色测定、荧光测定和放射性同位素测定，以用于定量评估培养的哺乳动物细胞的增殖和细胞毒性。将细胞以500个细胞/孔于40μL培养基中接种在384孔板中。隔夜生长之后，将细胞在存在若干剂量的GPCRx拮抗剂或单独DMSO的情况下培养7天。孵育7天之后，将15μL ATPlite加入至各孔中，并且在定轨摇床中以700rpm将平板振荡5分钟。在PerkinElmer TopCount检测仪上在30分钟内检测发光信号。使用以下等式计算细胞活力：细胞活力(％)＝(拮抗剂处理的OD/仅DMSO处理的OD)×100％。
当向表达CXCR4和ADRB2的PDC施用ADRB2特异性拮抗剂卡维地洛时，细胞的生长被显著抑制(IC50＝11.69μM，图9)。2018年12月18日提交的国际申请PCT/KR2018/016166报导了关于细胞增殖的其他GPCR的评估。
这些结果表明，在表达CXCR4-ADRB2异聚体的细胞中，ADRB2拮抗剂可阻断CXCR4异聚体诱导的异常的细胞增殖，表明在携带CXCR4-ADRB2异聚体的患者中使用ADRB2拮抗剂抑制癌细胞生长可克服单独施用CXCR4抑制剂作为癌症治疗剂的单一疗法的局限性。
实施例6.使用邻位连接测定(PLA)评估患者源性细胞(PDC)中的CXCR4-GPCRx异聚 体形成
为了研究天然组织中GPCR复合物的存在，使用了多种方法，诸如原子力显微术(Fotiadis,D.等人,(2006)Structure of the rhodopsin dimer:a working model forG-protein-coupled receptors,Curr Opin Struct Biol 16,252-259)、免疫共沉淀(Gomes,I.等人,(2004)A role for heterodimerization of mu and delta opiatereceptors in enhancing morphine analgesia,Proc Natl Acad Sci USA,101(14):5135-5139)和结合或功能测定(Wreggett,K.A.等人,(1995)Cooperativity manifest inthe binding properties of purified cardiac muscarinic receptors,J Biol Chem270,22488-22499)。监测相互作用的最方便的方法是基于用标记蛋白进行的共振能量转移。可通过诸如抗体或荧光配体的选择性探针进行标记(Roess,D.A.等人,(2000)Luteinizing hormone receptors are self-associated in the plasma membrane,Endocrinology 141,4518-4523；Patel,R.C.等人,(2002)Ligand binding tosomatostatin receptors induces receptor-specific oligomer formation in livecells,Proc Natl Acad Sci U S A 99,3294-3299)。
Bazin等人采用了基于时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)的方法，所述方法提供高得多的信噪比(Bazin,H.等人,(2002)Time resolved amplification of cryptateemission:a versatile technology to trace biomolecular interactions,JBiotechnol 82,233-250)。FRET是基于密切接近时两个荧光团(供体和受体)之间的能量转移。生物分子之间的分子相互作用可通过将每个伴侣与荧光标记偶联并通过检测能量转移的水平来评估。在***激发与荧光测量之间引入大约50至150微秒的时间延迟实现了清除所有非特异性的短时发射信号。
邻位连接测定(PLA)是将传统免疫测定的能力扩展成包括以高特异性和敏感性直接检测蛋白、蛋白相互作用和修饰的技术(Gullberg,M.等人,(2004)Cytokine detectionby antibody-based proximity ligation,Proc Natl Acad Sci U S A 101,8420-8424)。在不同物种中产生的两种第一抗体识别所关注的蛋白上的靶抗原。针对不同第一抗体恒定区的第二抗体(称为PLA探针)与第一抗体结合。每个PLA探针均有与其连接的独特短DNA链。如果PLA探针密切接近(即，如果两种所关注的原始蛋白密切接近，或者是蛋白复合物的一部分，如图所示)，那么当加入适当的基质和酶时，DNA链可参与滚环DNA合成。DNA合成反应导致DNA环的数百倍扩增。接下来，加入荧光标记的互补寡核苷酸探针，并且它们与扩增的DNA结合。当用荧光显微镜观察时，很容易看到呈明显亮点的所得高浓度荧光(Gustafsdottir,S.M.等人,(2005)Proximity ligation assays for sensitive andspecific protein analyses,Anal Biochem 345,2-9)。
用表达ADRB2的腺病毒Ad-ADRB2以0、2.5、10、40MOI的剂量感染过表达CXCR4的细胞系U2OS-CXCR4 2天。如先前所述进行PLA(Brueggemann,L.I.等人,(2014)Differentialprotein kinase C-dependent modulation of Kv7.4 and Kv7.5 subunits of vascularKv7 channels,J Biol Chem 289,2099-2111；Tripathi,A.等人,(2014)CXC chemokinereceptor 4 signaling upon co-activation with stromal cell-derived factor-1alpha and ubiquitin,Cytokine 65,121-125)。为了进行PLA，将感染的细胞用4％多聚甲醛(PFA)固定在16孔组织培养玻片上。用Duolink提供的封闭溶液封闭玻片，并与小鼠抗CXCR4(1:200，Santacruz，Sc-53534)、兔抗ADRB2(1:200，Thermoscientific，PA5-33333)、兔抗CHRM1(1:200，Ls bio，Ls-C313301)在37℃的加湿室中一起孵育1h。然后洗涤玻片，并与缀合有正和负Duolink II PLA探针的二级抗兔和抗小鼠抗体孵育(在37℃下1h)。再次洗涤玻片，然后与连接-连接酶溶液孵育(在37℃下30min)，接着与扩增-聚合酶溶液孵育(在37℃下2h)。然后用最小体积含有4',6-二脒基-2苯基吲哚(DAPI)的Duolink II封固培养基(mounting medium)将玻片封固15-30min，并且在IN Cell分析仪2500下鉴定呈荧光斑点的PLA信号(Duolink In Situ Detection Reagents Green(λ激发/发射495/527nm)或Red(λ激发/发射575/623nm))。
如图10A至图10B所示，PLA信号随着ADRB2的表达水平以剂量依赖性方式增加。在图10A中，在一系列MOI(感染复数)上来自表达CXCR4-ADRB2异聚体的U2OS细胞的PLA信号的图像。在图10B中，对红色信号斑点进行计数并通过针对阴性对照的归一化进行计算。PLA信号以剂量依赖的方式与ADRB2的表达水平成比例地增加。用ADRB2特异性引物进行通过qRT-PCR的分析，以研究内源性ADRB2表达。如图10C所示，U2OS细胞的内源性ADRB2表达水平非常高，表明即使在没有病毒感染的切片中也检测到了PLA信号(对于ADRB2，MOI为0)。
传统上，胶质母细胞瘤(GBM)是最常见和最致命的原发性脑肿瘤。临床前癌症生物学在很大程度上依赖于体外人癌细胞系的使用以及经建立的这些细胞系的异种移植过程。然而，建立常规细胞系的过程会导致重要生物学性质的不可逆丧失，并且因此，异种移植肿瘤模型不能保持原始肿瘤中存在的基因组和表型特征。
直接从胶质母细胞瘤衍生的患者源性细胞(PDC)与正常神经干细胞具有广泛的相似性，并重演了人胶质母细胞瘤的基因型、基因表达模式和体内生物学。
为了用PDC样品进行PLA，将患者源性细胞在16孔组织培养玻片上进行铺板并用4％PFA固定。用Duolink提供的封闭溶液封闭玻片，并与小鼠抗CXCR4(1:200，Santa Cruz，Sc-53534)、兔抗ADRB2(1:200，Thermo Scientific，PA5-33333)、兔抗CHRM1(1:200，Lsbio，Ls-C313301)在37℃的加湿室中一起孵育1h。然后洗涤玻片，并与缀合有正和负Duolink IIPLA探针的二级抗兔和抗小鼠抗体孵育(在37℃下1h)。再次洗涤玻片，然后与连接-连接酶溶液孵育(在37℃下30min)，接着与扩增-聚合酶溶液孵育(在37℃下2h)。然后用最小体积含有4',6'-二脒基-2苯基吲哚(DAPI)的Duolink II封固培养基(mounting medium)将玻片封固15-30min，并且在IN Cell分析仪2500下鉴定呈荧光斑点的PLA信号(Duolink In SituDetection Reagents Green(λ激发/发射495/527nm)或Red(λ激发/发射575/623nm))。
如在图11A至图11B中所示，PLA比率是指CXCR4-ADRB2异聚体，并且异聚体形成的频率根据患者而变化。PLA比率计算为：PDC样品中的荧光斑点数/阴性对照中的荧光斑点数。阴性对照(NC)表示背景荧光信号，其通过当在PLA加工中在没有第一抗体(小鼠抗CXCR4、兔抗ADRB2)处理的情况下仅对与正和负Duolink II PLA探针缀合的第二抗体进行处理时的斑点数表示。这些数据展示了癌症患者样品中CXCR4-ADRB2异二聚体的定量分析。2018年12月18日提交的国际申请PCT/KR2018/016166报导了关于PDC中的异聚体形成的其他GPCR的评估。
实施例7.使用PDX模型评估体内CXCR4-GPCRx异聚体形成
为了用患者源性异种移植(PDX)样品进行PLA，使用了胶质母细胞瘤患者源性FFPE样品(由韩国首尔的Samsung Seoul医院提供)。在将FFPE样品脱蜡之后，在100℃下进行热诱导抗原修复持续15分钟。用Duolink提供的封闭溶液封闭玻片，并与兔抗CXCR4(1:200，Thermoscientific，PA3305)、小鼠抗ADRB2(1:200，Santacruz，Sc-271322)在37℃的加湿室中一起孵育1h。其他过程与上述过程相同(用PDC进行的PLA)。
在图12A中，用DAPI染色可视化细胞核，并且用PLA将CXCR4-ADRB4异聚体通过染色为小点。如图12B中所示，PLA比率根据患者而不同，并且基于此结果，表明有可能通过伴随诊断来进行个性化医疗。
实施例8.通过Ca2+动员测定评估在CXCR4-GPCRx异聚体形成之后增强的CXCR4下 游信号传导
用编码CXCR4和ADRB2的腺病毒转导MDA-MB-231细胞(图13)。将细胞培养3天，用Cal-520 AM染色，并用单独CXCL12(30nM)、递增剂量的单独沙美特罗或沙美特罗与30nMCXCL12的组合进行处理。使用FlexStation 3测量钙动员。在过表达CXCR4和ADRB2的MDA-MB-231细胞中，用单独沙美特罗进行刺激不以剂量依赖方式引起钙动员(图13)。但是，当在CXCL12存在的情况下用沙美特罗共刺激细胞时，在广泛的沙美特罗浓度范围(诸如10nM至300nM之间的浓度)中，钙信号传导大大增强。
实施例9.通过Ca2+动员测定评估CXCR4-GPCRx异聚体形成之后增强的CXCR4下游 信号传导和增强的信号传导的抑制
在过表达CXCR4和ADRB2的MDA-MB-231细胞中，相对于通过用相应单独激动剂进行单一刺激所引起的钙反应，用CXCR12(CXCR4激动剂)和沙美特罗(ADRB2选择性激动剂)进行共刺激显著增加钙反应(图14)。这些结果证明CXCR4-ADRB2异聚体表现出不同于个别GPCRCXCR4和ADRB2的性质。
还检查在用CXCL12和ADRB2配体进行共刺激之后共表达CXCR4和ADRB2的细胞中的增强的钙反应是否通过作为CXCR4拮抗剂的抗CXCR4抗体抑制。在共表达CXCR4和ADRB2的细胞中，2μg抗CXCR4抗体12G5的施用抑制了增强的钙信号传导，如图14所示。并且两种拮抗剂(ADRB2拮抗剂卡维地洛和CXCR4拮抗剂12G5一起)的共同施用导致对钙信号传导的更显著抑制。这些结果证明，抗CXCR4抗体和ADRB2拮抗剂可用作针对CXCR4-ADRB2异聚体介导的疾病的有效治疗剂(或联合疗法)。
具体地说，利用钙动员测定，将MDA-MB-231人乳腺癌细胞以每孔20,000个细胞于补充有10％FBS的100μL RPMI 1640中接种在黑色透明底96孔板(Corning Costar,#3340)中。第二天，将细胞用10MOI CXCR4和30MOI GPCRx共转导。2天后，用指定量的ADRB2拮抗剂卡维地洛(Tocris)、抗CXCR4抗体12G5(Thermo Scientific，35-8800)处理细胞，并与Cal 6(Molecular Devices的
Figure BDA0003442169160000531
钙6测定试剂盒，目录号R8191)一起孵育2小时。然后用指定量CXCL12、ADRB2激动剂或CXCL12和ADRB2激动剂刺激细胞。使用FlexStation 3多模式酶标仪测量钙动员。将结果归一化为基线活性。通过计算每个图的曲线下面积(AUC)来定量钙动员。将数据归一化为表达单独CXCR4的细胞中CXCL12刺激的钙反应。数据表示三个独立实验(平均值±SEM)。*P<0.05；学生t检验。
实施例10.CXCR4-ADRB2异聚体对肿瘤生长的作用
为了研究CXCR4-ADRB2异聚体对肿瘤生长的作用，在A549肺癌细胞中制备稳定过表达单独CXCR4(“A549-CXCR4细胞”)或CXCR4和ADRB2两者以使得细胞含有CXCR4-ADRB2异聚体(“A549-CXCR4-ADRB2细胞”)的细胞系，并在裸鼠中皮下注射相同量细胞(1×107个细胞/头)以比较肿瘤生长速率。如图15A至图15B中所示，A549的移植之后28天的肿瘤大小为351.4±214.7mm3，A549-CXCR4细胞为726.9±259.6mm3，并且A549-CXCR4-ADRB2细胞为1012.2±556.1mm3。移植有A549-CXCR4细胞(过表达CXCR4)的小鼠的肿瘤生长速率快于携带单独亲代A549细胞的小鼠的肿瘤生长速度，并且在移植有A549-CXCR4-ADRB2细胞(过表达CXCR4和ADRB2两者)的小鼠中观察到最快肿瘤生长。这些结果表明，CXCR4-ADRB2异聚体的形成协同增加Ca2+反应，并且因此促进肿瘤生长。
图15A示出了移植有亲代细胞A549、A549-CXCR4细胞(稳定过表达CXCR4)或A549-CXCR4-ADRB2细胞(稳定过表达CXCR4和ADRB2)的三只小鼠在移植之后28天的图像。这些图像显示，携带A549-CXCR4-ADRB2细胞(稳定过表达CXCR4和ADRB2)的小鼠的肿瘤大小是其中最大的(加速最大)。这三只不同小鼠随时间推移的肿瘤生长速率在图15B中用图形说明。通过测量肿瘤的长度(L)和宽度(W)并根据下式计算肿瘤体积，每三或四天监测肿瘤生长：体积＝0.5LW2。如与携带亲代细胞A549的小鼠相比，携带A549-CXCR4细胞的小鼠显示出相对快速的肿瘤生长，并且在移植有A549-CXCR4-ADRB2细胞(稳定过表达CXCR4和ADRB2两者)的小鼠中，肿瘤生长最快。
实施例11.CXCR4-ADRB2异聚体形成之后增强的CXCR4下游信号传导的Ca2+动员抑 制-单一抑制剂处理与组合抑制剂处理的比较
比较了布利沙福(CXCR4抑制剂，还称为TG-0054)的抑制程度(作为Ca2+反应的IC50值来测量)，作为以下进行评估：在表达单独CXCR4的MDA-MB-231细胞(单体或单独元体情境；“MDA-MB-231-CXCR4细胞”)中的单一处理；在过表达CXCR4和ADRB2的含有CXCR4-ADRB2异聚体的MDA-MB-231细胞系(“MDA-MB-231-CXCR4-ADRB2细胞”)中的单一处理；以及在MDA-MB-231-CXCR4-ADRB2细胞中与ADRB2抑制剂(卡维地洛；10μM)共同处理。
将MDA-MB-231细胞用仅编码CXCR4或编码CXCR4和ADRB2的腺病毒转导。将细胞培养2天，并用单独布利沙福(CXCR4抑制剂)处理或用布利沙福和ADRB2抑制剂(卡维地洛；10uM)共同处理。然后将细胞用Cal-6染色2小时，并用CXCR4激动剂(CXCL12；20nM)和ADRB2激动剂(Salmeterol；1μM)刺激。使用FlexStation3测量钙动员，其结果显示在表3中，示出了以下细胞中的Ca2+反应的IC50：(1)仅用布利沙福处理的MDA-MB-231-CXCR4细胞(第二栏)；(2)用布利沙福和ADRB2抑制剂卡维地洛同时处理的MDA-MB-231-CXCR4-ADRB2细胞(第3栏)；和(3)仅用布利沙福处理的MDA-MB-231-CXCR4-ADRB2细胞(第4栏)。
表3：
Figure BDA0003442169160000541
如表3所示，相对于用单独CXCR4抑制剂TG-0054的单一处理(第4栏)，当与ADRB2抑制剂卡维地洛组合处理时(第3栏)，含有CXCR4-ADRB2异聚体的MDA-MB-231-CXCR4-ADRB2细胞中Ca2+反应的IC50值降低了4500倍或更多。这个结果表明，在含有CXCR4-ADRB2异聚体的MDA-MB-231-CXCR4-ADRB2细胞中，与用单独布利沙福的单一处理相比，用布利沙福和ADRB2抑制剂的共同处理更有效地抑制增加的Ca2+反应。
为了确定CXCR4-ADRB2异聚体形成诱导构形变化和/或改变对CXCR4抑制剂的结合亲和力的可能性，比较了在表达单独CXCR4的MDA-MB-231-CXCR4细胞与含有CXCR4-ADRB2异聚体的MDA-MB-231-CXCR4-ADRB2细胞中用布利沙福(TG-0054)单一处理之间的Ca2+反应的IC50值。结果表明，相对于MDA-MB-231-CXCR4细胞(第2栏)，在MDA-MB-231-CXCR4-ADRB2细胞(第4栏)中用CXCR4抑制剂的单一处理仅使IC50值改变约1.4倍。这个结果表明与用CXCR4抑制剂的单一处理相比，用CXCR4抑制剂例如布利沙福(TG-0054)和ADRB2抑制剂的共同处理可增加对含有CXCR4-ADRB2异聚体的受试者和/或受试者细胞/组织的治疗功效，达到某些CXCR4抑制剂的显著程度。
如表3所示，用布利沙福和卡维地洛的共同处理导致含有CXCR4-ADRB2异聚体的细胞中的Ca2+反应的IC50值降低。由于过剂ADRB2拮抗剂可影响对应体CXCR4的活性，因此通过将在650nM的IC90值浓度下的卡维地洛与一系列CXCR4拮抗剂组合来测量CXCR4拮抗剂的IC50值变化。表4中提供了数据。
表4：
Figure BDA0003442169160000542
Figure BDA0003442169160000551
如表4所示，关于在CXCR4-ADRB2异聚体情境中的Ca2+反应，相对于用单独CXCR4抑制剂的单一施用(第4栏)，当与ADRB2抑制剂组合施用时(第3栏)，CXCR4抑制剂的IC50值降低。例如，在分别将卡维地洛(600nM，在单体情境中针对ADRB2的IC90浓度值)与AMD3100、乌克普鲁单抗、BKT140和TG-0054共同施用之后，在CXCR4-ADRB2异聚体情境中的Ca2+反应的IC50值降低了约10.5倍(从22.45nM至2.12nM)、约29.3倍(从0.88nM至0.03nM)、约45.7倍(从88.66nM至1.94nM)、约60.7倍(从约90.54nM至1.49nM)。这个结果表明，与用CXCR4抑制剂的单一施用相比，用低剂量CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂的共同施用可增加对含有CXCR4-ADRB2异聚体的受试者的治疗功效。
实施例12.用CXCL12和/或沙美特罗进行的刺激诱导含有CXCR4-ADRB2异聚体的细 胞系中ERK信号传导的激活
ERK1/2调节不同细胞型中的趋化性或存活(Riol-Blanco,L.等人,(2005)Thechemokine receptor CCR7 activates in dendritic cells two signaling modulesthat independently regulate chemotaxis and migratory speed,J.Immunol.174(7),4070–4080；Klemke,R.L.等人,(1997)Regulation of cell motility by mitogen-activated protein kinase,J.Cell Biol.137(2),481–492；Copp,J.等人,(2009)ORC-specific phosphorylation of mammalian target of rapamycin(mTOR):phospho-Ser2481 is a marker for intact mTOR signaling complex 2,Cancer Res.69(5),1821–1827)。在用CXCL12(CXCR4激动剂)和/或沙美特罗(ADRB2激动剂)刺激细胞中的CXCR4或CXCR4-ADRB2异聚体之后，评估ERK1/2活性。具体而言，CXCL12刺激表达Rluc-luc2P的MDA-MB-231细胞(“MDA-MB-231亲代细胞”)、表达CXCR4的MDA-MB-231细胞(“MDA-MB-231-CXCR4细胞”)和含有CXCR4-ADRB2异聚体的MDA-MB-231细胞(“MDA-MB-231-CXCR4-ADRB2细胞”)，在10分钟后诱导ERK1/2激活，并在60分钟后达到最高活性水平。沙美特罗刺激MDA-MB-231亲代细胞、MDA-MB-231-CXCR4细胞和MDA-MB-231-CXCR4-ADRB2细胞，也在20分钟后诱导ERK激活，并在60分钟后降至基础水平(数据未显示)。
为了确定CXCR4和ADRB2信号传导的协同作用，在CXCL12和沙美特罗刺激后测量ERK1/2活化水平。将表现Rluc-luc2P或CXCR4或含有CXCR4-ADRB2异聚体的MDA-MB-231细胞和A549细胞以每孔5×105个细胞的密度接种在6孔板中。血清饥饿16小时后，在MDA-MB-231亲代细胞、MDA-MB-231-CXCR4细胞和MDA-MB-231-CXCR4-ADRB2细胞中用10nM CXCL12和/或10nM沙美特罗将相应细胞处理20分钟，并且在表达Rluc-luc2P的A549细胞(“A549亲代细胞”)、表达单独CXCR4的A549细胞(单体或单独元体情境；“A549-CXCR4细胞”)和稳定过表达CXCR4和ADRB2的含有CXCR4-ADRB2异聚体的A549细胞系(“A549-CXCR4-ADRB2细胞”)中处理10分钟。此后，收获每组细胞并进行蛋白质印迹分析。
在用单独CXCL12或沙美特罗的刺激中，MDA-MB-231-CXCR4细胞中的ERK1/2激活水平高于MDA-MB-231亲代细胞。与MDA-MB-231-CXCR4细胞相比，MDA-MB-231-CXCR4-ADRB2细胞中的ERK1/2磷酸化显著增加。当同时用CXCL12和沙美特罗刺激MDA-MB-231亲代细胞时，诱导了水平与单一激动剂刺激的水平类似的ERK1/2磷酸化。在MDA-MB-231-CXCR4细胞中，ERK1/2磷酸化增加了各单独激动剂的总和，而在MDA-MB-231-CXCR4-ADRB2细胞中，ERK1/2活化协同地增加(图16A至图16B)。
还研究了A549亲代细胞、A549-CXCR4细胞和A549-CXCR4-ADRB2细胞中的ERK1/2活化。在用单独CXCL12或沙美特罗刺激之后，检测了A549-CXCR4细胞或A549-CXCR4-ADRB2细胞中的ERK1/2磷酸化。在A549亲代细胞中，ERK1/2磷酸化未通过用单独CXCL12或沙美特罗刺激而诱导，但在用CXCL12和沙美特罗共刺激之后显著增加。在A549-CXCR4细胞中，ERK1/2磷酸化由每个单独激动剂诱导，并且当用CXCL12和沙美特罗共刺激时，增加了各刺激的总和。在A549-CXCR4-ADRB2细胞中，与用单独CXCL12相比，当用单独沙美特罗刺激时诱导了多得多的ERK1/2磷酸化，并且当用CXCL12和沙美特罗共刺激时ERK1/2磷酸化被显著激活(图17A至图17B)。
这些结果表明，癌细胞中CXCR4和ADRB2的表达，并且特别是当癌细胞含有CXCR4-ADRB2异聚体时，可导致显著诱导下游ERK活化，并可对癌细胞增殖和趋化性产生重大影响。
实施例13.CXCR4拮抗剂对含有CXCR4-ADRB2异聚体的A549细胞系中的CXCR4/ CXCL12介导的增殖增加的作用
为了研究癌细胞中CXCR4-ADRB2异聚体的存在对癌细胞生长的影响，将含有稳定过表达CXCR4和ADRB2的CXCR4-ADRB2异聚体的A549细胞(“A549-CXCR4-ADRB2细胞”)的生长与作为对照的表达Rluc-luc2P的A549细胞(A549双阴性细胞；“A549亲代细胞”)进行比较，并取决于CXCL12激动剂的存在。
将A549亲代细胞或A549-CXCR4-ADRB2细胞以1×104个细胞/孔的密度铺板在96孔板中，并在培养基中孵育24小时以实现粘附。洗涤后，加入无血清培养基±CXCL12，在无血清条件下含或不含指定CXCR4抑制剂(图18A：AMD3100(10μM)；图18B：LY2510924(10μM)；图18C：AMD070(1μM)；图18D：TG-0054(10μM)；和图18E：BKT-140(10μM)，并将细胞孵育72小时(接种后96小时)。孵育结束时，根据制造商的说明，通过使用Prestoblue细胞活力试剂(Thermo Fisher Scientific)评估细胞增殖。
图18A至图18E显示出在存在CXCL12激动剂的情况下观察到细胞增殖速率增加约20％，并且这种增加被所测试的每种CXCR4拮抗剂阻断。在正常细胞生长条件(10％血清)下，在A549亲代细胞与A549-CXCR4-ADRB2细胞之间未观察到细胞增殖速率的差异。然而，在无血清条件中，在存在CXCL12的情况下，A549-CXCR4-ADRB2细胞(非A549亲代细胞)表现出以剂量依赖方式的细胞增殖增加(数据未显示)。在存在100nM CXCL12的情况下持续72小时实现约20％的最大增加。CXCL12介导的细胞增殖增加随着血清浓度增加而减少(数据未显示)。为了确认细胞增殖速率的增加是通过CXCR4/CXCL12特异性信号传导而介导的，评估了若干CXCR4特异性拮抗剂AMD3100、LY210924、AMD070、TG-0054和BKT-140。所测试的每种CXCR4拮抗剂均阻断了CXCL12对细胞增殖的作用。CXCR4/CXCL12信号传导轴在无血清条件下使细胞增殖率增加约20％，此情况与先前报导一致，即CXCR4/CXCL12仅在次优条件下诱导增殖增加(Balkwill,Fran(2004)Nature Reviews Cancer,Cancer and the ChemokineNetwork,4:540-550)。
靶向CXCR4的抑制剂可抑制例如仅与在存在CXCL12的情况下增加的一样多，并且使用较高浓度CXCR4抑制剂可引起细胞毒性(数据未显示)。这些结果可解释与在临床中针对癌症治疗使用CXCR4抑制剂作为唯一活性剂有关的肿瘤生长抑制的功效低和不良作用的观察结果。在含有CXCR4-ADRB2异聚体的受试者中，虽然用单独CXCR4抑制剂处理可能无法有效抑制肿瘤生长，但CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂的共同施用可有效抑制肿瘤生长。
实施例14.CXCR4-ADRB2异聚体量与肿瘤生长之间的相关性
为了研究CXCR4-ADRB2异聚体量与肿瘤生长之间的相关性，制备了稳定过表达CXCR4同聚物的A549细胞系(“A549-CXCR4细胞”)和稳定过表达CXCR4和ADRB2的含有CXCR4-ADRB2异聚体的A549细胞系(“A549-CXCR4-ADRB2细胞”)。经由PLA比较了经工程改造的细胞系中的CXCR4-ADRB2异聚体量。图19A至图19B显示，如通过PLA所确定，在A549亲代细胞、A549-CXCR4细胞和A549-CXCR4-ADRB2细胞中分别检测到约30、约80和超过150个CXCR4-ADRB2异聚体。
为了确定含有CXCR4-ADRB2异聚体(如在细胞水平上通过PLA所证实)是否以剂量依赖性方式增加肿瘤生长，制备了A549亲代细胞和A549-CXCR4-ADRB2细胞，并将相同量细胞(1×107个细胞/头)皮下注射于裸鼠体内以比较肿瘤生长速率。通过测量肿瘤的长度(L)和宽度(W)并根据下式计算肿瘤体积，每三或四天监测肿瘤生长：体积＝0.5LW2。如图19C所示，在A549异种移植小鼠(具有A549亲代细胞)中移植后44天的肿瘤大小为562.8±245.9mm3，并且在A549-CXCR4-CXCR4-ADRB2异种移植小鼠(具有A549-CXCR4-ADRB2细胞)中为967.2±493.0mm3。移植有A549-CXCR4-ADRB2细胞的小鼠的肿瘤生长速率比移植有A549亲代细胞的小鼠的肿瘤生长速率快。这些结果表明，CXCR4-ADRB2异聚体的形成协同增加Ca2+反应，并且因此促进肿瘤生长。
在A549肺癌细胞系和MDA-MB-231乳腺癌细胞系中确认了CXCR4-ADRB2异聚体的(存在和)量与肿瘤增殖之间的相关性。以与A549细胞系情境相同的方式，制备了过表达CXCR4同聚物的MDA-MB-231-CXCR4细胞系(“MDA-MB-231-CXCR4细胞”)和通过过表达CXCR4和ADRB2而含有CXCR4-ADRB2异聚体的MDA-MB-231细胞系(“MDA-MB-231-CXCR4-ADRB2细胞”)，然后通过PLA比较CXCR4-ADRB2异聚体表达量。如在图20A至图20B所示，在MDA-MB-231亲代细胞、MDA-MB-231-CXCR4细胞和MDA-MB-231-CXCR4-ADRB2细胞中分别检测到约65、约80和超过180个CXCR4-ADRB2异聚体。为了确定CXCR4-ADRB2异聚体的(存在和)量(如在细胞水平上通过PLA所证实)是否以剂量依赖性方式增加肿瘤生长，制备了MDA-MB-231亲代细胞、MDA-MB-231-CXCR4细胞和MDA-MB-231-CXCR4-ADRB2细胞，并将相同量细胞(5×106个细胞/头)原位注射于裸鼠中的乳腺脂肪垫以比较肿瘤生长速率。如图20C所示，在MDA-MB-231异种移植小鼠(具有MDA-MB-231亲代细胞)中移植后67天的肿瘤大小为265.8±161.8mm3，在MDA-MB-231-CXCR4异种移植小鼠(具有MDA-MB-231-CXCR4细胞)中为459.2±399.6mm3并且在MDA-MB-231-CXCR4-ADRB2异种移植小鼠(具有MDA-MB-231-CXCR4-ADRB2细胞)中为1107.0±184.8mm3。以MDA-MB-231-CXCR4-ADRB2异种移植小鼠、MDA-MB-231-CXCR4异种移植小鼠和MDA-MB-231异种移植小鼠的顺序观察到肿瘤大小，此情况表明肿瘤大小取决于CXCR4-ADRB2异构体存在的量而增加。这些结果表明，随着CXCR4-ADRB2异聚体量增加，肿瘤变得更加恶性。因此，可通过施用靶向CXCR4-ADRB2异聚体的抑制剂或抑制剂的组合，诸如CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂，来有效治疗具有CXCR4-ADRB2异聚体的癌症。
实施例15.单独CXCR4抑制剂对含有CXCR4-ADRB2异聚体的A549异种移植小鼠中的 肿瘤生长的作用
使用目前正在开发或在市场上出售的CXCR4抑制剂评估了移植有通过稳定过表达CXCR4和ADRB2而含有CXCR4-ADRB2的A549细胞(“A549-CXCR4-ADRB2细胞”)的小鼠中的抗肿瘤作用。将A549-CXCR4-ADRB2细胞(1×107个细胞/头)皮下注射于裸鼠中。当肿瘤大小达到约50-100mm3的平均大小时，用CXCR4抑制剂处理小鼠(n＝10/测试组)：AMD3100(图21A)、LY2510924(图21B)、AMD070(图21C)或TG-0054(图21D)。每天一次施用CXCR4抑制剂，持续4周。
如图21A至图21D所示，所测试的大多数CXCR4抑制剂显示出肿瘤生长的有限抑制。另外，未观察到剂量依赖性肿瘤减少，并且抑制作用不显著。此外，尽管施用的剂量大于通常剂量，但是对肿瘤生长的抑制作用有限。用10mpk的高剂量LY2510924的处理导致仅在2个剂量中所测试的10只小鼠中有3只死亡。
如实施例11和表3至表4中所述，在含有CXCR4-ADRB2异聚体(具有增加的Ca 2+信号)的细胞中，用CXCR4拮抗剂和ADRB2抑制剂的共同处理比用单独CXCR4拮抗剂的单一处理有效。如细胞生长测定(实施例13和图18A至图18E)所述，CXCR4抑制剂减少了由CXCL12刺激所产生的增加的细胞增殖。增加CXCR4抑制剂的量导致细胞毒性。这些结果表明，在抑制CXCR4-ADRB2异聚体的功能方面和在抑制肿瘤生长方面，CXCR4抑制剂与ADRB2抑制剂的共同施用可比施用单独CXCR4抑制剂有效。
实施例16.单独或以组合方式的CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂对含有CXCR4-ADRB2 异聚体的MDA-MB-231细胞原位异种移植小鼠(或A549细胞异种移植小鼠)中的肿瘤生长的 作用
含有CXCR4-ADRB2异聚体的MDA-MB-231细胞原位异种移植小鼠：
在移植有通过稳定过表达CXCR4和ADRB2而含有CXCR4-ADRB2异聚体的MDA-MB-231细胞(“MDA-MB-231-CXCR4-ADRB2细胞”)的小鼠中，施用单独CXCR4抑制剂不是有效的抗肿瘤治疗。如图22A至图22C所示，通过比较CXCR4抑制剂(AMD3100(图22A)、LY2510924(图22B)、AMD070(图22C))和ADRB2抑制剂(卡维地洛)的单独或组合施用来评估对由于存在CXCR4-ADRB2异聚体所导致的增加的肿瘤生长的抑制(抗肿瘤作用)。将Balb/c-nu/nu雌性小鼠原位移植MDA-MB-231-CXCR4-ADRB2细胞(1×106个细胞/头)。每天一次施用AMD3100(2.5mg/kg，7.5mg/kg)、LY2510924(1mg/kg，3mg/kg)、AMD070(3mg/kg，10mg/kg)和/或卡维地洛(30mg/kg)，持续4周(总计28次)。皮下施用AMD3100、LY2510924和AMD070，并且口服施用卡维地洛。通过将在药物施用的第一天的肿瘤大小转换为100来计算肿瘤大小(肿瘤生长％)。如图22C所示，施用单独CXCR4抑制剂AMD070或单独ADRB2抑制剂卡维地洛显示出肿瘤生长的有限抑制。然而，与相应单一施用相比，AMD070与卡维地洛的共同施用有效抑制了肿瘤的生长，并且当施用组合(包括卡维地洛)时，随着CXCR4抑制剂AMD070的量增加，肿瘤的生长还以剂量依赖性方式减少。这些结果表明，可通过共同施用CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂来抑制由于CXCR4-ADRB2异聚体形成导致的肿瘤增大(抗肿瘤作用)。
含有CXCR4-ADRB2异聚体的A549细胞异种移植小鼠：
为了研究CXCR4-ADRB2异聚体抑制剂对肿瘤生长的抗肿瘤作用，将通过稳定过表达CXCR4和ADRB2而含有CXCR4-ADRB2异聚体的A549细胞(“A549-CXCR4-ADRB2细胞”)(1×107个细胞/头)皮下注射于裸鼠中。当肿瘤大小达到平均50-100mm3时，单独或组合施用CXCR4抑制剂(AMD3100)、ADRB2抑制剂(卡维地洛)。
图22D是比较肿瘤生长速率的图，针对CXCR4抑制剂AMD3100(2.5mg/kg，7.5mg/kg)和/或ADRB2抑制剂卡维地洛(30mg/kg)的体内抗肿瘤作用，经由单一施用或共同施用来每天施用一次达4周(总计28次)；皮下施用AMD3100，并且口服施用卡维地洛。通过测量肿瘤的长度(L)和宽度(W)并根据下式计算肿瘤体积，每三或四天监测肿瘤生长：体积＝0.5LW2。
实施例17A至实施例17B.通过基于配体的TR-FRET的CXCR4-ADRB2异聚体检测
使用时间分辨荧光能量转移(TR-FRET)评估CXCR4-ADRB2异聚体的检测。TR-FRET将时间分辨荧光法(TRF)的低背景方面与FRET的均质测定形式组合在一起。所得测定提供涉及两个荧光团(供体和受体)的FRET的灵活性、可靠性和灵敏性的增加。如果供体和受体在给定彼此接近性内，那么能量源对供体的激发产生至受体的能量转移。受体继而以其特征波长发射光。将A549细胞以每孔20,000个细胞的密度接种在96孔板中。CXCR4和ADRB2通过腺病毒感染在A549细胞中瞬时过表达，然后在37℃、5％CO2下孵育48小时。以0、0.1、0.5、1.25、2.5、5、10和20的MOI处理表达CXCR4的腺病毒，并以3倍高MOI处理表达ADRB2的腺病毒。编码HA-VC的腺病毒用于调整转导的腺病毒的总量。为了表征CXCR4-ADRB2异聚体，用荧光标记的***和铽标记的TZ14011进行了用标记配体的TR-FRET测定。图23A显示，FRET信号的增加取决于CXCR4和ADRB2表达的量(其影响形成的CXCR4-ADRB2异聚体的量)，并且当将未标记的***处理为ADRB2拮抗剂***-g2的竞争物时，FRET信号消失，表明它是CXCR4-ADRB2特异性信号。这些结果表明，可通过基于配体的TR-FRET方法定量检测CXCR4-ADRB2异聚体。
除了使用荧光与GPCR特异性配体缀合的配体-荧光复合物之外，可将荧光与GPCR特异性抗体或第二抗体缀合的抗体-荧光复合物用于TR-FRET。
将U2OS细胞以每孔20,000个细胞的密度接种在96孔板中。在37℃潮湿孵育器中孵育隔夜之后，使用腺病毒***(0.9-30MOI携带CXCR4的腺病毒和0.5-15MOI携带ADRB2的腺病毒)瞬时过表达CXCR4和ADRB2。为了分析针对CXCR4和ADRB2的基于抗体的TR-FRET的动态范围和检测极限，采用携带CXCR4和ADRB2的腺病毒(分别为Ad-CXCR4和Ad-ADRB2)的广泛感染复数(MOI)。每种腺病毒感染48h之后，洗涤细胞并在室温下用4％多聚甲醛固定10分钟。洗涤细胞两次之后，为了使细胞透化，将含有0.1％Triton X-100的DPBS在室温下处理10分钟。然后将细胞在室温下封闭30分钟，接着在室温下与兔抗CXCR4抗体和小鼠抗ADRB2抗体一起孵育3小时。用DPBS洗涤细胞4次后，将用铽穴状化合物标记的山羊抗兔IgG和用AlexaFluor 647标记的山羊抗小鼠IgG在室温下处理1小时。然后将细胞用DPBS洗涤4次，接着使用Varioskan LUX多模式酶标仪进行分析。
基于抗体的TR-FRET的进行显示出以2Ad-CXCR4:1Ad-ADRB2之比的最高信号(图23B)。因此，分别从30MOI和15MOI对Ad-CXCR4和Ad-ADRB2进行连续半数稀释。将携带HA-VC的腺病毒用作阴性对照。在0.9MOI Ad-CXCR4和0.5MOI Ad-ADRB2中成功检测到FRET效率，并且还观察到剂量依赖性。这些结果表明，基于抗体的TR-FRET可以是GPCR异聚体诊断的有前途的工具。
实施例18A至实施例18C.在血癌和实体肿瘤细胞系中通过PLA的CXCR4-ADRB2异聚 体检测和通过RT-qPCR的CXCR4或ADRB2RNA表达水平的定量
检查了血癌和实体肿瘤细胞系中所检测的由单独GPCR(CXCR4和ADRB2)产生的RNA量与CXCR4-ADRB2异聚体的量之间的关系。CXCR4在多种人类癌症中过表达，例如，血液学癌症诸如骨髓瘤和白血病，以及实体肿瘤诸如肺癌和乳腺癌。并且这种过表达与复发风险增加和总体生存不佳有关。
在通过qPCR测试的所有三种实体肿瘤细胞系中观察到CXCR4和ADRB2RNA的表达：A549(肺癌)、U2OS(骨肉瘤)和MDA-MB-231(乳腺癌)(图24A)。为了评估A549、U2OS和MDA-MB-231细胞中CXCR4-ADRB2异聚体的内源表达水平，使用针对CXCR4和ADRB2两种不同的第一抗体来利用PLA。所得滚环扩增(RCA)产物示出为红色荧光信号，在整个细胞表面上广泛染色，覆盖细胞核(用DAPI染色)和细胞质(图24B)。每个细胞的平均PLA信号显示为RCA产物除以细胞数。平均而言，每个MDA-MB-231细胞具有约60RCA产物的值，其次是具有约35RCA产物的A549细胞和具有约20RCA产物的U2OS细胞(图24C)。与A549和U2OS细胞相比，MDA-MB-231细胞系中CXCR4和ADRB2的RNA表达水平最高(CXCR4/ADRB2的ΔCt：7.4/8.8、10.6/12.4、12.8/10.5)，并且与A549或U2OS细胞相比，MDA-MB-231中的PLA值最高。可以看出，RNA表达与PLA值之间存在显著相关性。这些结果表明，可通过分析PLA和RNA表达水平来筛选具有CXCR4-ADRB2异聚体的患者。
在通过qPCR测试的所有三种血癌细胞系中观察到CXCR4和ADRB2 RNA的表达：HL60(白血病)、U937(白血病)和RPMI 8226(骨髓瘤)(图25A)。为了评估HL-60、U937和RPMI 8226细胞中CXCR4-ADRB2异聚体的内源表达水平，使用针对CXCR4和ADRB2两种不同的第一抗体来利用PLA。所得滚环扩增(RCA)产物示出为在整个细胞表面上广泛染色的红色荧光信号(图25B)。每个细胞的平均PLA信号显示为RCA产物除以细胞数。平均而言，每个HL-60细胞具有30RCA产物的值，其次是U937细胞和RPMI 8226细胞，它们大约是HL-60值的一半(图25C)。通过定量PCR比较CXCR4和ADRB2的RNA表达水平，三种细胞中的ADRB2表达类似(ΔCt：9)，但HL60细胞中CXCR4的表达水平是其他细胞系U937和RPMI 8226的两倍(ΔCt值：4.7、5.9、5.8)。这些差异显示出PLA值的类似模式，表明RNA表达水平与PLA值之间存在显著相关性。这些结果表明能够成功检测到悬浮细胞的PLA信号，表明HL-60细胞的CXCR4-ADRB2异聚体量是U937和RPMI 8226细胞两倍。
对于筛选表达CXCR4异聚体的受试者并根据伴侣GPCR类型提供所选药物而言，CXCR4异聚体的诊断至关重要。已经在我们研究所建立作为诊断CXCR4异聚体的方法的PLA是一种使用抗体、在***固定石蜡包埋(FFPE)样品中诊断从实体癌受试者中提取的组织的方法。这些结果提供了检测液体活检中的CXCR4异聚体的可能性，例如血液癌受试者样品、尿液和沉积物。
实施例19.通过Ca2+动员测定评估内源性表达CXCR4和ADRB2元体的天然细胞中增 强的CXCR4下游信号传导
CXCR4-GPCRx异聚体诸如CXCR4-ADRB2异聚体的性质经由钙动员测定在每个内源性表达CXCR4和ADRB2的U937细胞(图26A)和HL-60细胞(图26B)中，通过测量用相应激动剂中的一种或两种刺激或共刺激之后产生的钙信号传导来评估。使用FlexStation3测量钙动员。
在U937细胞(图26A)和HL-60细胞(图26B)中，用单独CXCR4激动剂CXCL12(200nM)刺激引起胞间钙动员，而用单独ADRB2激动剂福莫特罗(10uM)刺激未诱导钙反应。然而，相对于通过单激动剂刺激所引起的反应，用两种激动剂(CXCL12和福莫特罗，分别为200nM和10uM)共刺激在U937细胞(图26A)和HL-60细胞(图26B)中产生显著增加的钙反应(相对于用CXCL12的单刺激，U937细胞的钙反应增加约4倍，并且相对于用CXCL12的单刺激，HL-60细胞的钙反应增加约8倍)。
实施例20.U937和HL-60细胞系中在CXCR4-ADRB2异聚体形成之后增强的CXCR4下 游信号传导的Ca2+动员抑制-单一抑制剂处理与组合抑制剂处理的比较
在存在或不存在卡维地洛(代表性ADRB2抑制剂)的情况下，测量了CXCR4抑制剂在U937细胞和HL-60细胞中抑制CXCR4-ADRB2异聚体的钙反应增强的效率(实施例19)。如实施例19中所讨论，通过激动剂CXCL12(200nM)和福莫特罗(10μM)诱导CXCR4-ADRB2异聚体的钙反应增加，并且在用激动剂处理细胞之前2小时，加入CXCR4抑制剂(在存在或不存在ADRB2抑制剂卡维地洛的情况下)。使用FlexStation3测量钙动员，并使用GraphPad Prism软件计算所得Ca2+反应的IC50。数据示于表5。
表5：
Figure BDA0003442169160000621
如表5所示，在U937细胞中，在存在10μM卡维地洛的情况下，CXCR4抑制剂AMD3100、乌克普鲁单抗和TG-0054更有效地抑制了CXCR4-ADRB2信号传导，如相应CXCR4抑制剂的IC50值减小所示。具体地说，在存在卡维地洛的情况下，TG-0054的IC50值显著减小。卡维地洛分别与AMD3100、乌克普鲁单抗或TG-0054共同处理之后，Ca2+反应的IC50值降低约6.4倍(从3.34nM至0.52nM)、约4.8倍(从1.25nM至0.26nM)和约69倍(从24nM至0.35nM)。
如表5所示，在HL-60细胞中，在存在10μM卡维地洛的情况下，每种CXCR4抑制剂都更有效地抑制了CXCR4-ADRB2信号传导。卡维地洛分别与AMD3100、乌克普鲁单抗、AMD070或TG-0054共同处理之后，Ca2+反应的IC50值降低约4.4倍(从1.50nM至0.34nM)、约3.3倍(从0.02nM至0.006nM)、约12.7倍(从3.56nM至0.28nM)和约12.5倍(从4nM至0.32nM)。
这些结果表明在含有CXCR4-ADRB2异聚体的细胞中，与用单独CXCR4抑制剂的单一处理相比，用CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂的共同处理更有效地抑制增加的Ca2+反应。
实施例21.MDA-MB-231细胞系中在CXCR4-ADRB2异聚体形成之后增强的CXCR4下游 信号传导的Ca2+动员抑制-单一抑制剂处理与组合抑制剂处理的比较
在用仅编码ADRB2的腺病毒转导的MDA-MB-231细胞中，测量了ADRB2抑制剂在抑制ADRB2的钙反应中的效率，并在用沙美特罗(1μM)刺激细胞后测量了信号传导。数据示于表6。另外，在存在或不存在AMD3100(代表性CXCR4抑制剂)的情况下，在用编码CXCR4和ADRB2的腺病毒共转导的MDA-MB-231细胞中，测量了ADRB2抑制剂在抑制CXCR4-ADRB2异聚体的增加的钙反应(增强的信号传导)中的效率。在用CXCL12(20nM)和沙美特罗(1μM)共刺激MDA-MB-231细胞之后测量Ca2+通量，并在用激动剂处理细胞前2小时加入ADRB2抑制剂(在存在或不存在CXCR4抑制剂AMD3100的情况下)。使用FlexStation3测量钙动员，并使用GraphPadPrism软件计算所得钙反应的IC50值。数据示于表6。
表6：
Figure BDA0003442169160000631
如表6所示，在MDA-MB-231细胞中，布拉洛尔的单一处理以0.82nM作为IC50值抑制ADRB2信号传导，而拉贝洛尔的单一治疗以24.81nM作为IC50值抑制ADRB2信号传导。相对于在不存在AMD3100的情况下ADRB2抑制剂的IC50值，在存在650nM(IC90)的AMD3100的情况下，如以减小的IC50值所示，ADRB2抑制剂布拉洛尔或拉贝洛尔更有效地抑制CXCR4-ADRB2信号传导，效力较大。相对于单一处理，布拉洛尔与AMD3100组合时的IC50值降低约33倍(从3.12nM至0.10nM)，而相对于单一处理，拉贝洛尔与AMD3100组合时的IC50降低约107倍(从57.98nM至0.54nM)。这些结果表明在含有CXCR4-ADRB2异聚体的细胞中，与用单独ADRB2抑制剂的单一处理相比，用CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂的共同处理更有效地抑制增加的Ca2+反应。
实施例22.MDA-MB-231细胞系中在CXCR4-ADRB2异聚体形成之后增强的CXCR4下游 信号传导的Ca2+动员抑制-TG-0054单一处理与组合抑制剂处理的比较
在用仅编码CXCR4的腺病毒转导的MDA-MB-231细胞中，测量了TG-0054(CXCR4抑制剂)在抑制CXCR4的钙反应中的效率，并在用CXCL12(20nM)刺激细胞后测量了信号传导。在MDA-MB-231细胞(表达CXCR4)中，测量出TG-0054的IC50值(nM)为65.78±1.34。接下来，在用编码CXCR4和ADRB2的腺病毒共转导的MDA-MB-231细胞中，在存在或不存在ADRB2抑制剂(10uM)的情况下，测量TG-0054在抑制CXCR4-ADRB2异聚体的增强的信号传导中的效率。数据示于表7。在用CXCL12(20nM)和沙美特罗(1μM)共刺激MDA-MB-231细胞之后测量Ca2+通量，并在用激动剂处理细胞前2小时加入CXCR4抑制剂TG-0054(在存在或不存在ADRB2抑制剂的情况下)。使用FlexStation3测量钙动员，并使用GraphPad Prism软件计算所得钙反应的IC50值。数据显示于表7。
表7：
TG-0054+ADRB2抑制剂 TG-0054IC<sub>50</sub>[nM]
-(仅TG-0054) 92.89±31.27
卡维地洛 0.02±0.013
拉贝洛尔 0.026±0.014
阿普洛尔 9.19±5.94
卡那洛尔 6.98±0.05
普罗帕酮 6.53±1.67
噻吗洛尔 11.02±8.06
如上所述，在MDA-MB-231细胞中，TG-0054的单一处理在仅转导CXCR4的MDA-MB-231中以65.78nM作为IC50值抑制CXCR4信号传导。如表7所示，相对于在不存在ADRB2抑制剂的情况下的单一处理，在存在ADRB2抑制剂的情况下，如以减小的IC50值所示，TG-0054更有效地抑制CXCR4-ADRB2信号传导，效力较大。TG-0054与卡维地洛组合时IC50值降低约4645倍(从92.89nM至0.02nM)，与拉贝洛尔组合时降低约3573倍(从92.89nM至0.026nM)，并且当与ADRB2抑制剂阿普洛尔、卡那洛尔、普罗帕酮或噻吗洛尔中的任何一种组合处理时降低约10倍或更多。这些结果表明在含有CXCR4-ADRB2异聚体的细胞中，与用单独TG-0054的单一处理相比，用TG-0054和ADRB2抑制剂一起的共同处理更有效地抑制增加的Ca2+反应。
示例性实施方案
实施方案A1.一种用于抑制罹患癌症的受试者的细胞中的由CXCR4-ADRB2异聚体产生的增强的下游信号传导的方法，所述方法包括向所述患者施用：
a)CXCR4抑制剂，其中所述CXCR4抑制剂是布利沙福；和
b)ADRB2抑制剂；
其中：
i)所述增强的下游信号传导由所述CXCR4-ADRB2异聚体产生；并且
ii)所述所施用的布利沙福和ADRB2抑制剂抑制所述癌症受试者中来自所述CXCR4-ADRB2异聚体的所述增强的下游信号传导。
实施方案A2.一种用于治疗具有含有CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用：
a)CXCR4抑制剂，其中所述CXCR4抑制剂是布利沙福；和
b)ADRB2抑制剂；
其中：
i)增强的下游信号传导由所述CXCR4-ADRB2异聚体产生；并且
ii)所述所施用的布利沙福和ADRB2抑制剂抑制所述癌症受试者中来自所述CXCR4-ADRB2异聚体的所述增强的下游信号传导。
实施方案A3.一种用于治疗具有含有CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的癌症的方法，所述方法包括：
a)确定所述受试者的细胞是否含有CXCR4-ADRB2异聚体，其中增强的下游信号传导由所述CXCR4-ADRB2异聚体产生；和
b)如果所述受试者的细胞含有所述CXCR4-ADRB2异聚体，那么向所述癌症受试者施用：
i)CXCR4抑制剂，其中所述CXCR4抑制剂是布利沙福；和
ii)ADRB2抑制剂。
实施方案A4.一种用于治疗具有含有CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的癌症的方法，其中增强的下游信号传导由所述CXCR4-ADRB2异聚体产生，所述方法包括：
1)通过以下方式确定所述受试者是否具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞：获得或已获得来自所述受试者的生物样品；和对所述生物样品进行或已进行测定以确定是否：
i)所述受试者的细胞含有所述CXCR4-ADRB2异聚体；或
ii)CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂的组合：改变所述一个或多个受试者源性细胞中所述CXCR4-ADRB2异聚体的异聚体特异性性质或功能；改变所述一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的异聚体特异性性质；或降低具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的所述受试者中的癌症进展；和
2)如果所述受试者具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞，那么向所述癌症受试者施用CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂的组合，其中所述CXCR4抑制剂是布利沙福；和
3)如果所述受试者不具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞，那么向所述癌症受试者施用所述布利沙福或所述ADRB2抑制剂的单一抑制剂。
实施方案A5.一种用于治疗具有含有CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的癌症的方法，其中增强的下游信号传导由所述CXCR4-ADRB2异聚体产生，所述方法包括：
1)通过以下方式确定所述受试者是否具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞：获得或已获得来自所述受试者的生物样品；和对所述生物样品进行或已进行测定以确定是否：
i)所述受试者的细胞含有所述CXCR4-ADRB2异聚体；或
ii)CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂的组合：改变所述一个或多个受试者源性细胞中所述CXCR4-ADRB2异聚体的异聚体特异性性质或功能；改变所述一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的异聚体特异性性质；或降低具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的所述受试者中的癌症进展；和
2)如果所述受试者具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞，那么向所述癌症受试者施用CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂的组合，其中所述CXCR4抑制剂是布利沙福；和
3)如果所述受试者不具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞，那么向所述癌症受试者施用所述布利沙福或所述ADRB2抑制剂的单一抑制剂；
其中：
a)相对于施用所述布利沙福或所述ADRB2抑制剂的所述单一抑制剂，在向所述癌症受试者施用所述布利沙福和所述ADRB2抑制剂的所述组合之后，具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的所述细胞的所述受试者中的所述癌症的进展多降低5-100％的范围；
b)相对于作为单一抑制剂施用时所述布利沙福的功效，当与所述ADRB2抑制剂组合向具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的所述细胞的所述受试者施用时，所述布利沙福的功效增加5-2000％的范围；和/或
c)相对于作为单一抑制剂施用时所述ADRB2抑制剂的功效，当与所述布利沙福组合向具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的所述细胞的所述受试者施用时，所述ADRB2抑制剂的功效增加5-2000％的范围。
实施方案A6.一种用于治疗具有含有CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的癌症的方法，其中增强的下游信号传导由所述CXCR4-ADRB2异聚体产生，所述方法包括：
1)通过以下方式确定所述受试者的细胞是否含有所述CXCR4-ADRB2异聚体：获得或已获得来自所述受试者的生物样品，和对所述生物样品进行或已进行测定以确定所述CXCR4-ADRB2异聚体是否存在于所述受试者的细胞中；其中对所述生物样品进行的所述测定为或包含以下中的一项或多项：共内化测定、共定位测定、原位杂交、免疫组织化学、免疫电子显微镜术、基于接近性的测定、免疫共沉淀测定、酶联免疫吸附测定(ELISA)、流式细胞分析技术、RNAseq、RT-qPCR、CXCR4的表达水平、ADRB2的表达水平、CXCR4和ADRB2的表达水平、微阵列或荧光动物测定；和
2)如果所述受试者的细胞含有所述CXCR4-ADRB2异聚体，那么向所述癌症受试者施用CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂的组合，其中所述CXCR4抑制剂是布利沙福；和
3)如果所述受试者的细胞不含有所述CXCR4-ADRB2异聚体，那么向所述癌症受试者施用所述布利沙福或所述ADRB2抑制剂的单一抑制剂。
实施方案A7.一种用于治疗具有含有CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的癌症的方法，其中增强的下游信号传导由所述CXCR4-ADRB2异聚体产生，所述方法包括：
1)通过以下方式确定所述受试者的细胞是否含有所述CXCR4-ADRB2异聚体：获得或已获得来自所述受试者的生物样品，和对所述生物样品进行或已进行测定以确定所述CXCR4-ADRB2异聚体是否存在于所述受试者的细胞中；其中对所述生物样品进行的所述测定为或包含以下中的一项或多项：共内化测定、共定位测定、原位杂交、免疫组织化学、免疫电子显微镜术、基于接近性的测定、免疫共沉淀测定、酶联免疫吸附测定(ELISA)、流式细胞分析技术、RNAseq、RT-qPCR、CXCR4的表达水平、ADRB2的表达水平、CXCR4和ADRB2的表达水平、微阵列或荧光动物测定；和
2)如果所述受试者的细胞含有所述CXCR4-ADRB2异聚体，那么向所述癌症受试者施用CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂的组合，其中所述CXCR4抑制剂是布利沙福；和
3)如果所述受试者的细胞不含有所述CXCR4-ADRB2异聚体，那么向所述癌症受试者施用所述布利沙福或所述ADRB2抑制剂的单一抑制剂；
其中：
a)相对于施用所述布利沙福或所述ADRB2抑制剂的所述单一抑制剂，在向所述癌症受试者施用所述布利沙福和所述ADRB2抑制剂的所述组合之后，具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的所述细胞的所述受试者中的所述癌症的进展多降低5-100％的范围；
b)相对于作为单一抑制剂施用时所述布利沙福的功效，当与所述ADRB2抑制剂组合向具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的所述细胞的所述受试者施用时，所述布利沙福的功效增加5-2000％的范围；和/或
c)相对于作为单一抑制剂施用时所述ADRB2抑制剂的功效，当与所述布利沙福组合向具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的所述细胞的所述受试者施用时，所述ADRB2抑制剂的功效增加5-2000％的范围。
实施方案A8.一种在治疗具有含有CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的癌症中所使用的药盒，所述药盒包含：
a)CXCR4抑制剂，其中所述CXCR4抑制剂是布利沙福；和
b)ADRB2抑制剂；
其中增强的下游信号传导由所述CXCR4-ADRB2异聚体产生。
实施方案A9.一种在治疗具有含有CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的癌症中所使用的药物组合物，所述药物组合物包含：
a)CXCR4抑制剂，其中所述CXCR4抑制剂是布利沙福；
b)ADRB2抑制剂；和
c)药学上可接受的载剂；
其中增强的下游信号传导由所述CXCR4-ADRB2异聚体产生。
实施方案A10.一种用于抑制细胞中的由CXCR4-ADRB2异聚体产生的增强的下游信号传导的方法，所述方法包括向所述细胞施用：
a)CXCR4抑制剂，其中所述CXCR4抑制剂是布利沙福；和
b)ADRB2抑制剂；
其中：
i)所述增强的下游信号传导由所述CXCR4-ADRB2异聚体产生；并且
ii)与所述布利沙福和所述ADRB2抑制剂的接触抑制所述细胞中的由所述CXCR4-ADRB2异聚体产生的所述增强的下游信号传导。
实施方案A11.如实施方案A10所述的用于抑制的方法，其中所述方法还包括确定所述细胞是否含有所述CXCR4-ADRB2异聚体。
实施方案A12.一种在抑制细胞中的由CXCR4-ADRB2异聚体产生的增强的下游信号传导中所使用的药盒，所述药盒包含：
a)CXCR4抑制剂，其中所述CXCR4抑制剂是布利沙福；和
b)ADRB2抑制剂；
其中增强的下游信号传导由所述CXCR4-ADRB2异聚体产生。
实施方案A13.一种在抑制细胞中的由CXCR4-ADRB2异聚体产生的增强的下游信号传导中所使用的药物组合物，所述药物组合物包含：
a)CXCR4抑制剂，其中所述CXCR4抑制剂是布利沙福；
b)ADRB2抑制剂；和
c)药学上可接受的载剂；
其中增强的下游信号传导由所述CXCR4-ADRB2异聚体产生。
实施方案A14.如实施方案A10-A13中任一项所述的用于抑制的方法，其中所述细胞是受试者细胞。
实施方案A15.如实施方案A14的用于抑制的方法，其中所述受试者细胞是癌细胞。
实施方案A16.如实施方案A1-A13中任一项所述的用于抑制的方法，其中所述细胞是癌细胞。
实施方案A17.如实施方案A1-A9中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述方法还包括检测所述癌症受试者中的所述CXCR4-ADRB2异聚体的存在。
实施方案A18.如实施方案A1-A9或A17中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述方法还包括鉴定所述癌症受试者中的所述CXCR4-ADRB2异聚体。
实施方案A19.如实施方案A1-A9或A17-A18中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述方法还包括获得来自所述受试者的生物样品。
实施方案A20.如实施方案A1-A9或A17-A19中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述方法还包括对从所述受试者获得的所述生物样品进行测定。
实施方案A21.如实施方案A1-A9或A17-A20中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述方法还包括：
i)获得或已获得来自所述癌症受试者的生物样品；
ii)进行或已进行确定从所述癌症受试者获得的所述生物样品中的CXCR4-ADRB2异聚体的存在、同一性或存在和同一性的诊断测定；和
iii)选择与布利沙福组合施用以抑制由所述CXCR4-ADRB2异聚体产生的所述增强的下游信号传导的所述ADRB2抑制剂。
实施方案A22.如实施方案A1-A9或A17-A21中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述方法还包括确定所述受试者细胞是否含有所述CXCR4-ADRB2异聚体，包括对从所述受试者获得的生物样品进行测定。
实施方案A23.如实施方案A1-A9或A17-A22中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述方法还包括确定所述受试者细胞是否含有所述CXCR4-ADRB2异聚体，包括获得来自所述受试者的生物样品，和对从所述受试者获得的所述生物样品进行测定。
实施方案A24.如实施方案A1-A9或A17-A23中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中从所述受试者获得的所述生物样品含有所述CXCR4-ADRB2异聚体。
实施方案A25.如实施方案A1-A9或A14-A24中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述受试者细胞含有所述CXCR4-ADRB2异聚体。
实施方案A26.如实施方案A1-A25中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述CXCR4-ADRB2异聚体具有以下特征中的两个或更多个：
1)所述CXCR4-ADRB2异聚体组分直接或经由充当变构的通道的中间蛋白在所述细胞中共定位并物理相互作用；
2)增强的下游信号传导由所述CXCR4-ADRB2异聚体产生；和/或
3)布利沙福和ADRB2抑制剂的组合：
i)改变所述细胞中所述CXCR4-ADRB2异聚体的异聚体特异性性质；
ii)改变所述细胞中所述CXCR4-ADRB2异聚体的异聚体特异性功能；和/或
iii)改变含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的所述细胞的异聚体特异性性质。
实施方案A27.如实施方案A1-A9或A14-A25中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述CXCR4-ADRB2异聚体具有以下特征中的两个或更多个：
1)所述CXCR4-ADRB2异聚体组分直接或经由充当变构的通道的中间蛋白在所述细胞中共定位并物理相互作用；
2)增强的下游信号传导由所述CXCR4-ADRB2异聚体产生；和/或
3)布利沙福和ADRB2抑制剂的组合：
i)改变所述一个或多个受试者源性细胞中所述CXCR4-ADRB2异聚体的异聚体特异性性质；
ii)改变所述一个或多个受试者源性细胞中所述CXCR4-ADRB2异聚体的异聚体特异性功能；
iii)改变所述一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的异聚体特异性性质；和/或
iv)降低具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的所述受试者中的癌症进展。
实施方案A28.如实施方案A1-A27中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述CXCR4-ADRB2异聚体的特征在于具有以下特征：所述细胞中的所述CXCR4-ADRB2异聚体组分直接或经由充当变构的通道的中间蛋白共定位并物理相互作用。
实施方案A29.如实施方案A1-A28中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述细胞中的所述CXCR4-ADRB2异聚体组分直接或经由充当变构的通道的中间蛋白共定位并物理相互作用，通过以下中的一项或多项来确定：共内化测定、共定位测定、原位杂交、免疫组织化学、免疫电子显微镜术、基于接近性的测定、免疫共沉淀测定、酶联免疫吸附测定(ELISA)、流式细胞分析技术、RNAseq、RT-qPCR、CXCR4的表达水平、ADRB2的表达水平、CXCR4和ADRB2的表达水平、微阵列或荧光动物测定。
实施方案A30.如实施方案A1-A29中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述基于接近性的测定是或包括共振能量转移(RET)、生物发光RET(BRET)、荧光RET(FRET)、时间分辨荧光RET(TR-FRET)、基于抗体的FRET、基于配体的FRET、双分子荧光互补(BiFC)或邻位连接测定(PLA)。
实施方案A31.如实施方案A30所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述TR-FRET是基于配体的TR-FRET。
实施方案A32.如实施方案A30所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述TR-FRET是基于抗体的TR-FRET。
实施方案A33.如实施方案A1-A30中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述细胞中的所述CXCR4-ADRB2异聚体组分直接或经由充当变构的通道的中间蛋白共定位并物理相互作用，通过以下中的一项或多项来确定：共内化测定、双分子荧光互补(BiFC)、RT-PCR、RT-qPCR、CXCR4的表达水平、ADRB2的表达水平、CXCR4和ADRB2的表达水平或邻位连接测定(PLA)。
实施方案A34.如实施方案A33所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述细胞中的所述CXCR4-ADRB2异聚体组分直接或经由充当变构的通道的中间蛋白共定位并物理相互作用，通过共内化测定来确定。
实施方案A35.如实施方案A33所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述细胞中的所述CXCR4-ADRB2异聚体组分直接或经由充当变构的通道的中间蛋白共定位并物理相互作用，通过双分子荧光互补(BiFC)来确定。
实施方案A36.如实施方案A33所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述细胞中的所述CXCR4-ADRB2异聚体组分直接或经由充当变构的通道的中间蛋白共定位并物理相互作用，通过邻位连接测定(PLA)来确定。
实施方案A37.如实施方案A1-A9或A17-A36中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述测定确定从所述受试者获得的所述生物样品中所述CXCR4-ADRB2异聚体的存在。
实施方案A38.如实施方案A1-A37中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述测定确定所述CXCR4-ADRB2异聚体中所述CXCR4和ADRB2组分的共定位和相互作用。
实施方案A39.如实施方案A1-A9或A14-A38中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述测定确定所述受试者细胞中所述CXCR4-ADRB2异聚体的存在。
实施方案A40.如实施方案A1-A9或A17-A39中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述测定确定从所述受试者获得的所述生物样品中所述CXCR4-ADRB2异聚体的存在。
实施方案A41.如实施方案A1-A9或A17-A40中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述测定确定所述受试者中所述CXCR4-ADRB2异聚体的存在。
实施方案A42.如实施方案A1-A41中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述CXCR4-ADRB2异聚体的特征在于具有以下特征：增强的下游信号传导由所述CXCR4-ADRB2异聚体产生。
实施方案A43.如实施方案A1-A9或A14-A42中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述增强的下游信号传导由所述受试者细胞中的所述CXCR4-ADRB2异聚体产生。
实施方案A44.如实施方案A1-A9或A14-A43中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述增强的下游信号传导由所述受试者细胞中的所述CXCR4-ADRB2异聚体的存在产生。
实施方案A45.如实施方案A1-A44中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述CXCR4-ADRB2异聚体产生所述增强的下游信号传导。
实施方案A46.如实施方案A1-A9或A14-A45中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述CXCR4-ADRB2异聚体在所述受试者细胞中产生所述增强的下游信号传导。
实施方案A47.如实施方案A1-A46中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述增强的下游信号传导由所述CXCR4-ADRB2异聚体的激动作用产生。
实施方案A48.如实施方案A1-A47中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述增强的下游信号传导由所述CXCR4-ADRB2异聚体的CXCR4激动作用产生。
实施方案A49.如实施方案A1-A47中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述增强的下游信号传导由所述CXCR4-ADRB2异聚体的ADRB2激动作用产生。
实施方案A50.如实施方案A1-A47中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述增强的下游信号传导由所述CXCR4-ADRB2异聚体的CXCR4激动作用和ADRB2激动作用产生。
实施方案A51.如实施方案A1-A50中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述增强的下游信号传导在所述CXCR4、所述ADRB2或所述CXCR4-ADRB2异聚体的下游。
实施方案A52.如实施方案A51所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述增强的下游信号传导在所述CXCR4的下游。
实施方案A53.如实施方案A51所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述增强的下游信号传导在所述ADRB2的下游。
实施方案A54.如实施方案A51所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述增强的下游信号传导在所述CXCR4-ADRB2异聚体的下游。
实施方案A55.如实施方案A1-A50中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中来自所述CXCR4-ADRB2异聚体的所述增强的下游信号传导与在它们相应的单独元体情境中来自CXCR4元体或ADRB2元体的下游信号传导有关。
实施方案A56.如实施方案A55所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中来自所述CXCR4-ADRB2异聚体的所述增强的下游信号传导与在单独元体情境中来自CXCR4元体的下游信号传导有关。
实施方案A57.如实施方案A55所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中来自所述CXCR4-ADRB2异聚体的所述增强的下游信号传导与在单独元体情境中来自ADRB2元体的下游信号传导有关。
实施方案A58.如实施方案A55所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中来自所述CXCR4-ADRB2异聚体的所述增强的下游信号传导与在它们相应的单独元体情境中来自CXCR4元体和ADRB2元体的下游信号传导有关。
实施方案A59.如实施方案A1-A58中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述增强的下游信号传导是增加的钙动员量。
实施方案A60.如实施方案A59所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述增加的钙动员量通过胞内Ca2+测定来确定。
实施方案A61.如实施方案A1-A60中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中来自所述CXCR4-ADRB2异聚体的所述增强的下游信号传导通过胞内Ca2+测定来确定。
实施方案A62.如实施方案A61所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其所述中胞内Ca2+测定是钙动员测定。
实施方案A63.如实施方案A62所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述钙动员测定确定所述CXCR4-ADRB2异聚体产生所述增强的下游信号传导。
实施方案A64.如实施方案A62或A63所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述钙动员测定确定所述增强的下游信号传导由所述CXCR4-ADRB2异聚体的存在产生。
实施方案A65.如实施方案A1-A64中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述CXCR4-ADRB2异聚体表现出所述增加的钙动员量，使得：
a)所述细胞中在单独元体情境中在用CXCL12和ADRB2激动剂共刺激之后所述CXCR4或所述ADRB2产生等于或小于用所述CXCL12或所述ADRB2激动剂进行单一激动剂刺激所产生的钙动员量的总和的钙动员量；和
b)相对于用所述CXCL12或所述ADRB2激动剂进行单一激动剂刺激所产生的所述钙动员量的总和，在用所述CXCL12和所述ADRB2激动剂共刺激之后，所述CXCR4-ADRB2异聚体表现出增加的钙动员；
如经由钙动员测定所确定。
实施方案A66.如实施方案A1-A65中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中：
i)所述细胞中在所述单独元体情境中，来自所述元体CXCR4或ADRB2的所述钙动员是非协同的，如经由钙动员测定所确定；且
ii)所述细胞中来自所述CXCR4-ADRB2异聚体的所述钙动员是协同的，如经由钙动员测定所确定。
实施方案A67.如实施方案A1-A66中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中在所述单独元体情境中：
a)在不存在所述单独元体ADRB2的情况下，所述细胞中的所述单独元体CXCR4；或
b)在不存在所述单独元体CXCR4的情况下，所述细胞中的所述单独元体ADRB2；
在用CXCL12和ADRB2激动剂共刺激之后产生等于或小于用所述CXCL12或所述ADRB2激动剂进行单一激动剂刺激所产生的钙动员量的总和的钙动员量，如经由钙动员测定所确定。
实施方案A68.如实施方案A1-A67中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中在所述单独元体情境中，独立地：
a)在不存在所述单独元体ADRB2的情况下，所述细胞中的所述单独元体CXCR4；和
b)在不存在所述单独元体CXCR4的情况下，所述细胞中的所述单独元体ADRB2；
在用CXCL12和ADRB2激动剂共刺激之后产生等于或小于用所述CXCL12或所述ADRB2激动剂进行单一激动剂刺激所产生的钙动员量的总和的钙动员量，如经由钙动员测定所确定。
实施方案A69.如实施方案A1-A68中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述CXCR4-ADRB2异聚体在用所述CXCL12和所述ADRB2激动剂共刺激之后产生大于用所述CXCL12或所述ADRB2激动剂对所述细胞进行单一激动剂刺激所产生的钙动员量的总和的钙动员量，如经由钙动员测定所确定。
实施方案A70.如实施方案A1-A69中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中相对于由所述CXCR4-ADRB2异聚体的单一激动剂刺激所产生的钙动员的总和，由所述CXCR4-ADRB2异聚体的所述共刺激所产生的所述钙动员量是增加的钙动员量，如经由钙动员测定所确定。
实施方案A71.如实施方案A1-A70中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中由所述CXCR4-ADRB2异聚体产生的所述增加的钙动员量是用CXCL12和ADRB2激动剂共刺激之后大于用所述CXCL12或所述ADRB2激动剂对所述细胞进行单一激动剂刺激所产生的钙动员量的总和的钙动员量，如经由钙动员测定所确定。
实施方案A72.如实施方案A71所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中由所述CXCR4-ADRB2异聚体产生的所述增加的钙动员量是用所述CXCL12和所述ADRB2激动剂共刺激之后与用所述CXCL12或所述ADRB2激动剂对所述细胞进行单一激动剂刺激所产生的钙动员量的总和相比大至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少75％或至少90％的钙动员量，如经由钙动员测定所确定。
实施方案A73.如实施方案A71或A72所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中由所述CXCR4-ADRB2异聚体产生的所述增加的钙动员量是用所述CXCL12和所述ADRB2激动剂共刺激之后与用所述CXCL12或所述ADRB2激动剂对所述细胞进行单一激动剂刺激所产生的钙动员量的总和相比大至少100％的钙动员量，如经由钙动员测定所确定。
实施方案A74.如实施方案A71-A73中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述增加的钙动员量是协同钙动员量。
实施方案A75.如实施方案A74所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中来自含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的所述细胞的所述协同钙动员量是用所述CXCL12和所述ADRB2激动剂共刺激之后与用所述CXCL12或所述ADRB2激动剂对所述细胞进行单一激动剂刺激所产生的钙动员量的总和相比大至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少75％或至少90％的钙动员量，如经由钙动员测定所确定。
实施方案A76.如实施方案A1-A75中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述增加的钙动员量的特征如下：
a)在用CXCL12和ADRB2激动剂共刺激之后，细胞中在单独元体情境中所述CXCR4或所述ADRB2产生等于或小于用所述CXCL12或所述ADRB2激动剂进行单一激动剂刺激所产生的钙动员量的总和的钙动员量；和
b)相对于用所述CXCL12或所述ADRB2激动剂进行单一激动剂刺激所产生的所述钙动员量的总和，在用所述CXCL12和所述ADRB2激动剂共刺激之后，所述CXCR4-ADRB2异聚体表现出增加的钙动员；
如经由钙动员测定所确定。
实施方案A77.如实施方案A1-A76中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述CXCR4-ADRB2异聚体的特征在于具有以下特征：相对于由用CXCR4激动剂或ADRB2激动剂对所述CXCR4-ADRB2异聚体进行单刺激所产生的下游ERK信号传导量，用所述CXCR4激动剂和所述ADRB2激动剂对所述CXCR4-ADRB2异聚体共刺激产生较大的下游ERK信号传导量。
实施方案A78.如实施方案A77所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中用所述CXCR4激动剂和所述ADRB2激动剂共刺激所产生的下游ERK信号传导量大于用所述CXCR4激动剂单刺激所产生的量。
实施方案A79.如实施方案A78所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中用所述CXCR4激动剂和所述ADRB2激动剂共刺激所产生的下游ERK信号传导量与用所述CXCR4激动剂单刺激所产生的量相比大至少5％。
实施方案A80.如实施方案A78所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中用所述CXCR4激动剂和所述ADRB2激动剂共刺激所产生的下游ERK信号传导量与用所述CXCR4激动剂单刺激所产生的量相比大至少10％、至少25％、至少50％、至少75％或至少90％。
实施方案A81.如实施方案A78-A80中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中用所述CXCR4激动剂和所述ADRB2激动剂共刺激产生的下游ERK信号传导量与用所述CXCR4激动剂单刺激所产生的量相比大5-15％、10-25％、20-50％、40-75％或60-100％之间的范围。
实施方案A82.如实施方案A77所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中用所述CXCR4激动剂和所述ADRB2激动剂共刺激所产生的下游ERK信号传导量大于用所述ADRB2激动剂单刺激所产生的量。
实施方案A83.如实施方案A82所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中用所述CXCR4激动剂和所述ADRB2激动剂共刺激所产生的下游ERK信号传导量与用所述ADRB2激动剂单刺激所产生的量相比大至少5％。
实施方案A84.如实施方案A82所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中用所述CXCR4激动剂和所述ADRB2激动剂共刺激所产生的下游ERK信号传导量与用所述ADRB2激动剂单刺激所产生的量相比大至少10％、至少25％、至少50％、至少75％或至少90％。
实施方案A85.如实施方案A82-A84中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中用所述CXCR4激动剂和所述ADRB2激动剂共刺激产生的下游ERK信号传导量与用所述ADRB2激动剂单刺激所产生的量相比大5-15％、10-25％、20-50％、40-75％或60-100％之间的范围。
实施方案A86.如实施方案A1-A9或A14-A85中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述CXCR4-ADRB2异聚体的特征在于具有以下特征：布利沙福和ADRB2抑制剂的组合改变所述一个或多个受试者源性细胞中所述CXCR4-ADRB2异聚体的异聚体特异性性质。
实施方案A87.如实施方案A1-A9或A14-A86中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述CXCR4-ADRB2异聚体的特征在于具有以下特征：布利沙福和ADRB2抑制剂的组合改变所述一个或多个受试者源性细胞中所述CXCR4-ADRB2异聚体的异聚体特异性功能。
实施方案A88.如实施方案A1-A9或A14-A87中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述CXCR4-ADRB2异聚体的特征在于具有以下特征：布利沙福和ADRB2抑制剂的组合改变所述一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的异聚体特异性性质。
实施方案A89.如实施方案A1-A9或A14-A88中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述CXCR4-ADRB2异聚体的特征在于具有以下特征：布利沙福和ADRB2抑制剂的组合降低所述一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的癌症进展。
实施方案A90.如实施方案A1-A89中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中施用的所述布利沙福和所述ADRB2抑制剂的所述组合抑制来自所述CXCR4-ADRB2异聚体的所述增强的下游信号传导。
实施方案A91.如实施方案A1-A90中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中施用的所述布利沙福和所述ADRB2抑制剂的所述组合抑制所述细胞中来自所述CXCR4-ADRB2异聚体的所述增强的下游信号传导。
实施方案A92.如实施方案A1-A9或A17-A91中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中施用的所述布利沙福和所述ADRB2抑制剂的所述组合抑制所述癌症受试者中来自所述CXCR4-ADRB2异聚体的所述增强的下游信号传导。
实施方案A93.如实施方案A1-A9或A17-A92中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中施用的所述布利沙福和所述ADRB2抑制剂的所述组合抑制所述癌症受试者的所述细胞中来自所述CXCR4-ADRB2异聚体的所述增强的下游信号传导。
实施方案A94.如实施方案A1-A93中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述CXCR4-ADRB2异聚体组分包含CXCR4和ADRB2的单独元体。
实施方案A95.如实施方案A1-A94中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中在单独元体情境中含有所述CXCR4的所述细胞在存在或不存在所述单独元体ADRB2的情况下包含所述单独元体CXCR4。
实施方案A96.如实施方案A95所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中在单独元体情境中含有所述CXCR4的所述细胞在不存在所述单独元体ADRB2的情况下包含所述单独元体CXCR4。
实施方案A97.如实施方案A95所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中在单独元体情境中含有所述CXCR4的所述细胞在存在所述单独元体ADRB2的情况下包含所述单独元体CXCR4。
实施方案A98.如实施方案A1-A94中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中在单独元体情境中含有所述ADRB2的所述细胞在存在或不存在所述单独元体CXCR4的情况下包含所述单独元体ADRB2。
实施方案A99.如实施方案A98所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中在单独元体情境中含有所述ADRB2的所述细胞在不存在所述单独元体CXCR4的情况下包含所述单独元体ADRB2。
实施方案A100.如实施方案A98所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中在单独元体情境中含有所述ADRB2的所述细胞在存在所述单独元体CXCR4的情况下包含所述单独元体ADRB2。
实施方案A101.如实施方案A1-A100中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中施用的布利沙福和ADRB2抑制剂的所述组合：
i)改变所述细胞中所述CXCR4-ADRB2异聚体的异聚体特异性性质；
ii)改变所述细胞中所述CXCR4-ADRB2异聚体的异聚体特异性功能；和/或
iii)改变含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的所述细胞的异聚体特异性性质。
实施方案A102.如实施方案A1-A9或A14-A101中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中施用的所述布利沙福和所述ADRB2抑制剂的所述组合：
i)改变所述一个或多个受试者源性细胞中所述CXCR4-ADRB2异聚体的异聚体特异性性质；
ii)改变所述一个或多个受试者源性细胞中所述CXCR4-ADRB2异聚体的异聚体特异性功能；
iii)改变所述一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的异聚体特异性性质；或
iv)降低具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的所述受试者中的癌症进展。
实施方案A103.如实施方案A102所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中施用的所述布利沙福和所述ADRB2抑制剂的所述组合改变所述一个或多个受试者源性细胞中所述CXCR4-ADRB2异聚体的异聚体特异性性质。
实施方案A104.如实施方案A102或A103所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中施用的所述布利沙福和所述ADRB2抑制剂的所述组合改变所述一个或多个受试者源性细胞中所述CXCR4-ADRB2异聚体的异聚体特异性功能。
实施方案A105.如实施方案A102-A104中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中施用的所述布利沙福和所述ADRB2抑制剂的所述组合改变所述一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的异聚体特异性性质。
实施方案A106.如实施方案A102-A105中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中施用的所述布利沙福和所述ADRB2抑制剂的所述组合降低具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的所述受试者中的癌症进展。
实施方案A107.如实施方案A102-A106中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述CXCR4-ADRB2异聚体的特征在于具有以下特征：布利沙福和ADRB2抑制剂的组合降低所述一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的癌症进展。
实施方案A108.如实施方案A102-A107中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述降低的癌症进展包括所述一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的癌症进展的降低。
实施方案A109.如实施方案A102-A108中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述降低的癌症进展包括所述一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的细胞增殖的降低。
实施方案A110.如实施方案A102-A109中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述降低的癌症进展包括所述一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的细胞迁移的降低。
实施方案A111.如实施方案A102-A110中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述降低的癌症进展包括所述一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的转移的降低。
实施方案A112.如实施方案A102-A111中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述降低的癌症进展包括所述一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的血管生成的降低。
实施方案A113.如实施方案A1-A112中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述布利沙福作为包含药学上可接受的载剂的药物组合物施用。
实施方案A114.如实施方案A1-A113中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述ADRB2抑制剂作为包含药学上可接受的载剂的药物组合物施用。
实施方案A115.如实施方案A1-A114中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中依序、并行或同时施用所述布利沙福和所述ADRB2抑制剂的所述组合。
实施方案A116.如实施方案A1-A115中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述布利沙福和所述ADRB2抑制剂的所述组合作为进一步包含药学上可接受的载剂的药物组合物施用。
实施方案A117.如实施方案A1-A116中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述布利沙福和所述ADRB2抑制剂作为药物组合物的组合施用。
实施方案A118.如实施方案A117所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中药物组合物的所述组合包含：
a)包含所述布利沙福和药学上可接受的载剂的药物组合物；和
b)包含所述ADRB2抑制剂和药学上可接受的载剂的药物组合物。
实施方案A119.如实施方案A117或A118所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中依序、并行或同时施用所述药物组合物的所述组合。
实施方案A120.如实施方案A1-A119中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述癌症是血液学癌症或实体肿瘤。
实施方案A121.如实施方案A120所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述癌症是血液学癌症。
实施方案A122.如实施方案A121所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述血液学癌症选自由以下组成的组：淋巴瘤、白血病、骨髓瘤和多发性骨髓瘤。
实施方案A123.如实施方案A122所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述淋巴瘤是B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤或NK细胞淋巴瘤。
实施方案A124.如实施方案A122或A123所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述淋巴瘤是复发性或难治性淋巴瘤。
实施方案A125.如实施方案A122-A124中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述淋巴瘤选自由以下组成的组：霍奇金氏淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、皮肤B细胞淋巴瘤、活化的B细胞淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、伯基特淋巴瘤、套细胞淋巴瘤(MCL)、滤泡性淋巴瘤(FL)、滤泡性中心淋巴瘤、转化性淋巴瘤、中间分化的淋巴细胞性淋巴瘤、中间淋巴细胞性淋巴瘤(ILL)、弥漫性低分化淋巴细胞性淋巴瘤(PDL)、中心细胞性淋巴瘤、弥漫性小核裂细胞淋巴瘤(DSCCL)、外周T细胞淋巴瘤(PTCL)、皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)、套区淋巴瘤和低级滤泡性淋巴瘤。
实施方案A126.如实施方案A122所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述白血病是：
a)选自由以下组成的组的急性白血病：急性淋巴细胞性白血病(ALL)、T细胞急性淋巴细胞性白血病(T-ALL)、B细胞急性淋巴母细胞白血病、急性单核细胞性白血病、急性前髓细胞性白血病、急性髓细胞性白血病(AML)、急性髓系白血病、急性骨髓性白血病和成髓细胞、前髓细胞性、骨髓单核细胞性、单核细胞性和红白血病；
(b)选自由以下组成的组的慢性白血病：慢性髓细胞性(粒细胞性)白血病、慢性骨髓性白血病(慢性髓系白血病；CML)和慢性淋巴细胞性白血病(CLL)；或
(c)慢性骨髓单核细胞性白血病(CMML)、慢性嗜酸性粒细胞白血病、幼年型骨髓单核细胞性白血病(JMML)、真性红细胞增多症、自然杀伤细胞白血病(NK白血病)或毛细胞白血病。
实施方案A127.如实施方案A120所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述癌症是实体肿瘤。
实施方案A128.如实施方案A127所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述实体肿瘤是良性肿瘤或癌症。
实施方案A129.如实施方案A127所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述实体肿瘤是癌或肉瘤。
实施方案A130.如实施方案A127所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述实体肿瘤选自由以下组成的组：纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、骨肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、恶性上皮样间皮瘤、尤文氏肿瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、胃癌、结肠直肠癌、食管癌、结肠癌、淋巴恶性肿瘤、胰脏癌、胰脏腺癌、胰脏导管腺癌、乳腺癌、乳腺癌、乳腺导管腺癌、肺癌、小细胞肺癌、肺腺癌、腺鳞肺癌、肺泡横纹肌肉瘤、卵巢癌、卵巢透明细胞腺癌、卵巢粘液性囊腺癌、卵巢浆液性腺癌、***癌、肝细胞癌、软组织肉瘤、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、甲状腺髓样癌、甲状腺***状癌、甲状腺癌、嗜铬细胞瘤皮脂腺癌、***状癌、***状腺癌、髓样癌、支气管癌、胃肠道癌、胃管状腺癌、胃腺鳞癌、肾癌、肝内胆管癌、肾细胞癌、肝瘤、胆管癌、绒毛膜癌、威尔姆氏瘤、子宫癌肉瘤、子宫内膜腺癌、子宫内膜间质肉瘤、子宫内膜癌、子***、睾丸肿瘤、***瘤、膀胱癌、黑色素瘤、多发性骨髓瘤、多发性内分泌瘤病、CNS肿瘤、胶质母细胞瘤、星形细胞瘤、CNS淋巴瘤、生殖细胞瘤、成神经管细胞瘤、神经鞘瘤颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、成血管细胞瘤、听神经瘤、少突神经胶质瘤、脑膜瘤、成神经细胞瘤、视网膜母细胞瘤和脑转移瘤。
实施方案A131.如实施方案A130所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述实体肿瘤选自由以下组成的组：乳腺癌、肺癌和肝细胞癌。
实施方案A132.如实施方案A131所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述实体肿瘤是乳腺癌。
实施方案A133.如实施方案A131所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述实体肿瘤是肺癌。
实施方案A134.如实施方案A131所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述实体肿瘤是肝细胞癌。
实施方案A135.如实施方案A1-A9或A17-A134中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述受试者的生物样品是生物流体样品。
实施方案A136.如实施方案A135所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中对所述生物流体样品进行液体活检。
实施方案A137.如实施方案A135或A136所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述生物流体样品是血液样品、血浆样品、唾液样品、脑液样品、眼液样品或尿液样品。
实施方案A138.如实施方案A1-A9或A17-A137中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述受试者的生物样品是生物组织样品。
实施方案A139.如实施方案A138所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中对所述生物组织样品进行组织样品测定。
实施方案A140.如实施方案A138或A139所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述生物组织样品是器官组织样品、骨组织样品或肿瘤组织样品。
实施方案A141.如实施方案A1-A140中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述用于治疗癌症的方法是用于抑制由所述CXCR4-ADRB2异聚体产生的增强的下游信号传导的方法。
实施方案A142.如实施方案A1-A140中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述用于抑制由所述CXCR4-ADRB2异聚体产生的增强的下游信号传导的方法是用于治疗癌症的方法。
实施方案A143.如实施方案A1-A9或A17-A142中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中相对于施用所述布利沙福或所述ADRB2抑制剂的所述单一抑制剂，在向所述癌症受试者施用所述布利沙福和所述ADRB2抑制剂的所述组合之后，具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的所述细胞的所述受试者中所述癌症的进展多降低5-100％的范围。
实施方案A144.如实施方案A1-A9或A17-A143中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中相对于作为单一抑制剂施用时所述布利沙福的功效，当与所述ADRB2抑制剂组合向具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的所述细胞的所述受试者施用时，所述布利沙福的功效增加5-5000％的范围。
实施方案A145.如实施方案A1-A9或A17-A144中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中相对于作为单一抑制剂施用时所述ADRB2抑制剂的功效，当与所述布利沙福组合向具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的所述细胞的所述受试者施用时，ADRB2抑制剂的功效增加5-5000％的范围。
实施方案A146.如实施方案A1-A9或A17-A145中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中相对于单一抑制剂施用，向所述癌症受试者施用所述布利沙福和所述ADRB2抑制剂的所述组合对所述癌症受试者中由所述CXCR4-ADRB2异聚体产生的所述增强的下游信号传导的抑制为5-2000倍之间的范围。
实施方案A147.如实施方案A1-A9或A17-A146中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中相对于在它们相应的单独元体情境中由CXCR4元体或ADRB2元体所产生的下游信号传导的抑制，向所述癌症受试者施用所述布利沙福和所述ADRB2抑制剂的所述组合对所述癌症受试者中由所述CXCR4-ADRB2异聚体产生的所述增强的下游信号传导的抑制为5-2000倍之间的范围。
实施方案A148.如实施方案A17-A147中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述细胞是癌细胞。
实施方案A149.如实施方案A17-A147中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述细胞是受试者细胞。
实施方案A150.如实施方案A149所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述受试者细胞是癌细胞。
实施方案A151.如实施方案A1-A150中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述受试者是癌症受试者。
实施方案A152.如实施方案A1-A151中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述受试者是患者。
实施方案A153.一种药物组合物，其包含：
a)CXCR4抑制剂，其中所述CXCR4抑制剂是布利沙福；
b)ADRB2抑制剂；和
c)药学上可接受的载剂。
实施方案A154.如实施方案A1-A153中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述ADRB2抑制剂是ADRB2的拮抗剂、ADRB2的反向激动剂、ADRB2的部分拮抗剂、ADRB2的变构调节剂、ADRB2的抗体、ADRB2的抗体片段、ADRB2的配体或抗体-药物缀合物。
实施方案A155.如实施方案A154所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述ADRB2抑制剂是ADRB2拮抗剂。
实施方案A156.如实施方案A154所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述ADRB2抑制剂是ADRB2反向激动剂。
实施方案A157.如实施方案A154所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述ADRB2抑制剂是ADRB2部分拮抗剂。
实施方案A158.如实施方案A154所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述ADRB2抑制剂是ADRB2的变构调节剂。
实施方案A159.如实施方案A154所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述ADRB2抑制剂是ADRB2的抗体。
实施方案A160.如实施方案A154所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述ADRB2抑制剂是ADRB2的抗体片段。
实施方案A161.如实施方案A154所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述ADRB2抑制剂是ADRB2的配体。
实施方案A162.如实施方案A154所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述ADRB2抑制剂是抗体-药物缀合物。
实施方案A163.如实施方案A154所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述ADRB2抑制剂选自由以下组成的组：
阿普洛尔、阿替洛尔、倍他洛尔、布拉洛尔、布托沙明、卡那洛尔、卡维地洛、CGP12177、环丙洛尔、ICI 118551、ICYP、拉贝洛尔、左旋倍他洛尔、左旋布诺洛尔、LK 204-545、美托洛尔、纳多洛尔、NIHP、NIP、普罗帕酮、***、索他洛尔、SR59230A和噻吗洛尔。
实施方案A164.如实施方案A163所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述ADRB2抑制剂是卡维地洛。
实施方案A165.如实施方案A1-A9或A17-A164中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中向所述受试者施用治疗有效量的所述布利沙福。
实施方案A166.如实施方案A1-A9或A17-A164中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中向所述受试者施用次治疗有效量的所述布利沙福。
实施方案A167.如实施方案A1-A9或A17-A166中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中向所述受试者施用治疗有效量的所述ADRB2抑制剂。
实施方案A168.如实施方案A1-A9或A17-A166中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中向所述受试者施用次治疗有效量的所述ADRB2抑制剂。
实施方案A169.如实施方案A1-A9或A14-A168中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述方法或用途还包括确定所述细胞、所述受试者或从所述受试者获得的所述样品中所述CXCR4基因的表达水平，其中如果所述表达水平大于所述CXCR4基因的参考水平，那么确定所述细胞、所述受试者或从所述受试者获得的所述样品具有表达CXCR4的癌症。
实施方案A170.如实施方案A169所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述癌症是表达CXCR4的癌症。
实施方案A171.如实施方案A169或A170所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述细胞中的所述CXCR4表达水平大于参考水平。
实施方案A172.如实施方案A169或A170所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述受试者中的所述CXCR4表达水平大于参考水平。
实施方案A173.如实施方案A169或A170所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中从所述受试者获得的所述样品中的所述CXCR4表达水平大于参考水平。
实施方案A174.如实施方案A169-A173中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，在确定所述CXCR4基因表达水平大于参考水平之后，所述方法或用途包括施用CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂，其中所述CXCR4抑制剂是布利沙福。
实施方案A175.如实施方案A1-A9或A14-A168中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述方法或用途还包括确定所述细胞、所述受试者或从所述受试者获得的所述样品中的所述ADRB2基因的所述表达水平，其中如果所述表达水平大于所述ADRB2基因的参考水平，那么确定所述细胞、所述受试者或从所述受试者获得的所述样品具有表达ADRB2的癌症。
实施方案A176.如实施方案A175所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述癌症是表达ADRB2的癌症。
实施方案A177.如实施方案A175或A176所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述细胞中的所述ADRB2表达水平大于参考水平。
实施方案A178.如实施方案A175或A176所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述受试者中的所述ADRB2表达水平大于参考水平。
实施方案A179.如实施方案A175或A176所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中从所述受试者获得的所述样品中的所述ADRB2表达水平大于参考水平。
实施方案A180.如实施方案A175-179中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，在确定所述ADRB2基因表达水平大于参考水平之后，所述方法或用途包括施用CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂，其中所述CXCR4抑制剂是布利沙福。
实施方案A181.如实施方案A1-A9或A14-A168中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述方法或用途还包括确定所述细胞、所述受试者或从所述受试者获得的所述样品中的所述CXCR4基因和所述ADRB2基因的所述表达水平，其中如果所述CXCR4基因和所述ADRB2基因的所述表达水平大于所述CXCR4基因和所述ADRB2基因的相应参考水平，那么确定所述细胞、所述受试者或从所述受试者获得的所述样品具有表达CXCR4和表达ADRB2的癌症。
实施方案A182.如实施方案A181所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述癌症是表达CXCR4的癌症和表达ADRB2的癌症。
实施方案A183.如实施方案A181或A182所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述细胞中的所述CXCR4表达水平和所述ADRB2表达水平大于相应参考水平。
实施方案A184.如实施方案A181或A182所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述受试者中的所述CXCR4表达水平和所述ADRB2表达水平大于相应参考水平。
实施方案A185.如实施方案A181或A182所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中从所述受试者获得的所述样品中的所述CXCR4表达水平和所述ADRB2表达水平大于相应参考水平。
实施方案A186.如实施方案A181-A185中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中在确定所述CXCR4基因表达水平和所述ADRB2基因表达水平大于相应参考水平之后，所述方法或用途包括施用CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂，其中所述CXCR4抑制剂是布利沙福。
实施方案A187.如实施方案A1-A9或A14-A168中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述方法或用途还包括确定所述细胞、所述受试者或从所述受试者获得的所述样品中所述CXCR4蛋白的所述表达水平，其中如果所述表达水平大于所述CXCR4蛋白的参考水平，那么确定所述细胞、所述受试者或从所述受试者获得的所述样品具有表达CXCR4的癌症。
实施方案A188.如实施方案A187所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述癌症是表达CXCR4的癌症。
实施方案A189.如实施方案A187或A188所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述细胞中的所述CXCR4表达水平大于参考水平。
实施方案A190.如实施方案A187或A188所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述受试者中的所述CXCR4表达水平大于参考水平。
实施方案A191.如实施方案A187或A188所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中从所述受试者获得的所述样品中的所述CXCR4表达水平大于参考水平。
实施方案A192.如实施方案A187-A191中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，在确定所述CXCR4蛋白表达水平大于参考水平之后，所述方法或用途包括施用CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂，其中所述CXCR4抑制剂是布利沙福。
实施方案A193.如实施方案A1-A9或A14-A168中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述方法或用途还包括确定所述细胞、所述受试者或从所述受试者获得的所述样品中的所述ADRB2蛋白的所述表达水平，其中如果所述表达水平大于所述ADRB2蛋白的参考水平，那么确定所述细胞、所述受试者或从所述受试者获得的所述样品具有表达ADRB2的癌症。
实施方案A194.如实施方案A193所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述癌症是表达ADRB2的癌症。
实施方案A195.如实施方案A193或A194所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述细胞中的所述ADRB2表达水平大于参考水平。
实施方案A196.如实施方案A193或A194所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述受试者中的所述ADRB2表达水平大于参考水平。
实施方案A197.如实施方案A193或A194所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中从所述受试者获得的所述样品中的所述ADRB2表达水平大于参考水平。
实施方案A198.如实施方案A193-A197中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，在确定所述ADRB2蛋白表达水平大于参考水平之后，所述方法或用途包括施用CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂，其中所述CXCR4抑制剂是布利沙福。
实施方案A199.如实施方案A1-A9或A14-A168中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述方法或用途还包括确定所述细胞、所述受试者或从所述受试者获得的所述样品中的所述CXCR4蛋白和所述ADRB2蛋白的所述表达水平，其中如果所述CXCR4蛋白和所述ADRB2蛋白的所述表达水平大于所述CXCR4蛋白和所述ADRB2蛋白的相应参考水平，那么确定所述细胞、所述受试者或从所述受试者获得的所述样品具有表达CXCR4和表达ADRB2的癌症。
实施方案A200.如实施方案A199所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述癌症是表达CXCR4的癌症和表达ADRB2的癌症。
实施方案A201.如实施方案A199或A200所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述细胞中的所述CXCR4表达水平和所述ADRB2表达水平大于相应参考水平。
实施方案A202.如实施方案A199或A200所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述受试者中的所述CXCR4表达水平和所述ADRB2表达水平大于相应参考水平。
实施方案A203.如实施方案A199或A200所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中从所述受试者获得的所述样品中的所述CXCR4表达水平和所述ADRB2表达水平大于相应参考水平。
实施方案A204.如实施方案A199-A203中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中在确定所述CXCR4蛋白表达水平和所述ADRB2蛋白表达水平大于相应参考水平之后，所述方法或用途包括施用CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂，其中所述CXCR4抑制剂是布利沙福。
实施方案A205.如实施方案A1-A204中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述ADRB2抑制剂是卡维地洛。
实施方案A206.如实施方案A1-A205中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述增强的下游信号传导是对用CXCR4激动剂和ADRB2激动剂对所述CXCR4-ADRB2异聚体进行共刺激的增强的反应。
实施方案A207.如实施方案A1-A206中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述增强的下游信号传导是具有一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的所述受试者中的增强的癌症进展。
实施方案A208.如实施方案A207所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述增强的癌症进展是具有一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的所述受试者中的增强的细胞增殖。
实施方案A209.如实施方案A207或A208所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述增强的癌症进展是具有一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的所述受试者中的增强的细胞迁移。
实施方案A210.如实施方案A207-A209中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述增强的癌症进展是具有一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的所述受试者中的增强的转移。
实施方案A211.如实施方案A207-A210中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述增强的癌症进展是具有一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的所述受试者中的增强的肿瘤生长。
实施方案A212.如实施方案A207-A211中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述增强的癌症进展是具有一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的所述受试者中的增强的血管生成。
实施方案A213.如实施方案A207-A212中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述一个或多个细胞是一个或多个癌细胞。
实施方案A214.如实施方案A207-A213中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述一个或多个细胞来源于受试者。
实施方案A215.如实施方案A207-A214中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述一个或多个细胞来自从受试者获得的生物样品。
材料和方法
试剂
CXCL12购自R&D systems(Minneapolis，Minnesota，USA)。乌克普鲁单抗和BKT140分别购自Creative Biolabs(Shirley，NY，USA)和Chem Scene(Monmouth Junction，NJ，USA)。AMD3100获自Cayman Chemical Company(Ann Arbor，MI，USA)。AMD070和LY2510924购自Medchem express(Princeton，NJ，USA)。TG-0054(Brixafor)购自MedKoo Biosciences,Inc(Triangle Park，North Carolina，USA)。卡维地洛购自4Chem Laboratory(Korea)。所使用的药物的信息如下：重组人SDF-1α(CXCL12)(PEPROTECH，目录号300-28A，Rocky Hill，NJ，USA)、沙美特罗(Tocris，目录号4712，Minneapolis，MN，USA)、卡维地洛(Tocris，目录号2685，Minneapolis，MN，USA)、AMD3100(Tocris，目录号3299，Minneapolis，MN，USA)、TG-0054(MedKoo Biosciencex，Inc.，目录号206522，Morrisville，NC，USA)、布拉洛尔(Abcam，ab141132，Cambridge，CB20AX，UK)、拉贝洛尔(Prestwick Chemical
Figure BDA0003442169160000891
Prestw-277)、阿普洛尔(Prestwick Chemical
Figure BDA0003442169160000892
Prestw-250，Boulevard Gonthier d'Andernach Parc d'innovation 67400ILLKIRCH-France)、卡那洛尔(PubChem，目录号71739，Bethesda，MD，USA)、普罗帕酮(Prestwick Chemical
Figure BDA0003442169160000893
Prestw-499)和噻吗洛尔(Prestwick Chemical
Figure BDA0003442169160000894
Prestw-948)。
细胞培养
所有细胞系均购自美国典型培养物保藏中心(Manassas,VA,USA)。A549、MDA-MB-231、U2OS、HL-60、U937和RPMI 8226细胞在补充有10％胎牛血清(Gibco)和1％青霉素-链霉素(Gibco)的RPMI培养基1640(Thermo Fisher Scientific，Waltham，MA，USA)中生长。所有细胞系在存在5％CO2的情况下于37℃下生长。
稳定细胞系的构建
为了建立稳定的表达Rluc和luc2P的细胞系作为具有潮霉素和杀稻瘟素抗性的对照细胞系，通过将ViraPower Lentiviral Packaging Mix(Invitrogen，K497500)和pLenti6-Rluc表达构建体共转染到293FT生产细胞系中来产生慢病毒原种(含有包装的pLenti6-Rluc表达构建体，所述构建体在pLenti-CMV Hygro DEST(Addgene，#17454)中***了Rluc基因)。将此慢病毒原种转导至A549细胞系，接着用潮霉素(100μg/mL)进行选择。为了建立稳定的表达Rluc-luc2P的细胞系，通过将ViraPower Packaging Mix和pLenti6/V5-luc2P表达构建体共转染到293FT生产细胞系中来产生慢病毒原种(含有包装的pLenti6/V5-luc2P表达构建体，所述构建体在pLenti6/V5-DEST GatewayTM载体(Invitrogen,V49610)中***了Luc2P基因)。将此慢病毒原种转导至A549-Rluc细胞系，然后用杀稻瘟素(5μg/mL)进行选择。然后选择对抗生素具有抗性的克隆并进行RT-qPCR和免疫荧光，以确认***的基因Rluc和luc2P的表达。
为了建立稳定的表达CXCR4的细胞系，通过将ViraPower Lentiviral PackagingMix(Invitrogen，K497500)和pLenti6-CXCR4表达构建体共转染到293FT生产细胞系中来产生慢病毒原种(含有包装的pLenti6-CXCR4表达构建体，所述构建体在pLenti-CMV HygroDEST(Addgene，#17454)中***了CXCR4基因)。将此慢病毒原种转导至A549细胞系，然后用潮霉素(100μg/mL)进行选择。为了建立稳定的表达CXCR4-ADRB2异聚体的细胞系，通过将ViraPower Packaging Mix和pLenti6/V5-ADRB2表达构建体共转染到293FT生产细胞系中来产生慢病毒原种(含有包装的pLenti6/V5-ADRB2表达构建体，所述构建体在pLenti6/V5-DEST GatewayTM载体(Invitrogen,V49610)中***了ADRB2基因)。将此慢病毒原种转导至A549-CXCR4细胞系，然后用潮霉素(100μg/mL)和杀稻瘟素(5μg/mL)进行选择。然后选择对抗生素具有抗性的克隆并进行RT-qPCR和免疫荧光，以确认***的基因CXCR4和ADRB2的表达。pLenti CMV Hygro DEST(w117-1)是Eric Campeau和Paul Kaufman的礼物(Addgene质粒#17454)(Campeau，E.等人,(2009)A versatile viral system for expression anddepletion of proteins in mammalian cells,PLoS One 4,e6529)。使用LR重组将CXCR4cDNA***慢病毒载体。使用ViraPower慢病毒表达***(Lentiviral Expression Systems)(Invirtogen)产生编码CXCR4的慢病毒。
为了在MDA-MB-231乳腺癌细胞中建立稳定的表达CXCR4的细胞系，通过将ViraPower Lentiviral Packaging Mix(Invitrogen，K497500)和pLenti6-CXCR4表达构建体共转染到293FT生产细胞系中来产生慢病毒原种(含有包装的pLenti6-CXCR4表达构建体，所述构建体在pLenti-CMV Hygro DEST(Addgene，#17454)中***了CXCR4基因)。将此慢病毒原种转导至MDA-MB-231细胞系，然后用潮霉素(100μg/mL)进行选择。为了建立稳定的表达CXCR4和ADRB2的细胞系以使得细胞含有CXCR4-ADRB2异聚体，通过将ViraPowerPackaging Mix和pLenti6/V5-ADRB2表达构建体共转染到293FT生产细胞系中来产生慢病毒原种(含有包装的pLenti6/V5-ADRB2表达构建体，所述构建体在pLenti6/V5-DESTGatewayTM载体(Invitrogen,V49610)中***了ADRB2基因)。将此慢病毒原种转导至MDA-MB-231-CXCR4细胞系，然后用潮霉素(100μg/mL)和杀稻瘟素(5μg/mL)进行选择。然后选择对抗生素具有抗性的克隆并进行RT-qPCR和免疫荧光，以确认***的基因CXCR4和ADRB2的表达。
钙动员测定
将MDA-MB-231人乳腺癌细胞以每孔20,000个细胞于补充有10％FBS的100μL RPMI1640中接种在黑色透明底96孔板(Corning Costar,#3340)中。第二天，将细胞用10MOICXCR4和30MOI GPCRx共转导。使用编码HA-VC的腺病毒来调整转导的腺病毒的总量。2天后，将细胞用指定量拮抗剂处理，并与Cal 6(Molecular Devices的
Figure BDA0003442169160000911
钙6测定试剂盒，目录号R8191)一起孵育2h。随后用指定量CXCL12、ADRB2激动剂或CXCL12和ADRB2激动剂刺激细胞。使用FlexStation 3多模式酶标仪(Molecular Devices,Sunnyvale,CA,USA)测量钙的动员。将结果归一化为基线活性。在37℃下使用490nm的激发波长和525nm的发射波长测量钙动员，并通过计算每个图的曲线下面积(AUC)进行定量。将数据归一化为表达单独CXCR4的细胞中CXCL12刺激的钙反应。数据代表三个独立实验(平均值±SEM)。
利用钙动员测定，将U937(人髓系白血病细胞)和HL-60(人白血病细胞)细胞以每孔100,000个细胞于补充有10％FBS的100μL的RPMI 1640中接种在黑色透明底96孔板(Corning Costar,#3340)中。并将细胞以100xg离心1分钟。将细胞用稀释于测定缓冲液(不含酚红的汉克平衡盐溶液(Hank’s balanced salt solution))中的Cal 6(MolecularDevices的
Figure BDA0003442169160000912
钙6测定试剂盒，目录号R8191)染色，并孵育2h。需要时，在激动剂处理前2小时加入拮抗剂。用指定量CXCR4激动剂(CXCL12，200nM)、ADRB2激动剂(福莫特罗，10μM)刺激细胞。使用FlexStation 3多模式酶标仪(Molecular Devices,Sunnyvale,CA,USA)测量钙的动员。在490nm的激发波长和525nm的发射波长下于37℃测量胞内Ca2+。将结果归一化为基线活性。通过计算每个图的曲线下面积(AUC)来定量钙动员。将数据归一化为表达单独CXCR4的细胞中CXCL12刺激的钙反应。使用GraphPad Prism软件计算IC50值。
蛋白质印迹分析
将细胞以每孔5×105个细胞的密度接种在6孔板中。血清饥饿16小时后，将细胞用10nM SDF-1(PEROTECH，#300-28A)和沙美特罗(TOCRIS，#4712)进行处理，对于MDA-MB-231、MDA-MB-231-CXCR4和MDA-MB-231-CXCR4-ADRB2细胞持续20分钟，并且对于A549、A549-CXCR4、A549-CXCR4-ADRB2细胞持续10分钟。之后，使用补充有磷酸酶抑制剂混合物(Roche，#4906845001)和蛋白酶抑制剂混合物(Thermo Fisher Scientific，#A32953)的NP-40裂解缓冲液(Thermo Fisher Scientific，#FNN0021)收获细胞。通过Bio-Rad蛋白测定(Bio-Rad，#5000006)确定细胞溶解产物浓缩物的蛋白。使用干式转印***(ThermoFisher Scientific，#IB21001)将20μg蛋白样品进行还原SDS-PAGE并转移至PVDF(聚偏二氟乙烯)。将膜用含1％Tween-20的Tris缓冲盐水中的5％脱脂乳(BD Difco，#232100)封闭1小时，并与磷酸-ERK1/2Thr202/Tyr204(Cell Signaling Technology，#4370)和总ERK1/2(Cell Signaling Technology，#4695)抗体一起孵育。通过与辣根过氧化物酶偶联的第二抗体(Cell Signaling Technology)一起孵育，接着与SuperSignal West Femto最大灵敏度底物(Maximum Sensitivity Substrate)(Thermo Fisher Scientific，#34096)一起孵育来检测抗原-抗体复合物。通过iBright蛋白质印迹成像***(Thermo FisherScientific，#A32752)捕获和分析蛋白质印迹图像。
定量聚合酶链反应(qPCR)
使用TRIzol(Invitrogen)提取总RNA，并用DNA酶I(Sigma)处理后，从1μg总RNA合成cDNA。使用SensiFAST SYBR试剂盒(Bioline)进行qPCR。引物序列如下：
ADRB2-F：5'-CTCTTCCATCGTGTCCTTCTAC-3'(SEQ ID NO:1)；
ADRB2-R：5'-AATCTTCTGGAGCTGCCTTT-3'(SEQ ID NO:2)；
CXCR4-F：5'-CCACCATCTACTCCATCATCTTC-3'(SEQ ID NO:3)；
CXCR4-R：5'-ACTTGTCCGTCATGCTTCTC-3'(SEQ ID NO:4)；
β-肌动蛋白-F：5'-GGAAATCGTGCGTGACATTAAG-3'(SEQ ID NO:5)，
β-肌动蛋白-R：5'-AGCTCGTAGCTCTTCTCTCCA-3'(SEQ ID NO:6)；
循环阈值(Ct)由QuantStudio 3实时PCR***(Thermo Fisher Scientific)计算。ΔCt对应于CtSOI(所关注的序列)与常用看家基因序列Ct RS(参考序列)之间的差；ΔCt＝Ct(CXCR4或ADRB2)-Ct(肌动蛋白)。
含有GPCR cDNA的腺病毒载体的构建
人GPCR cDNA克隆获自Missouri S&T cDNA资源中心(Rolla,MO,USA)。通过PCR扩增GPCR cDNA，并将其克隆到pDONR201载体中。通过在含有GPCR的入门克隆与pAdHTS载体之间进行体外LR重组，随后使用AdHTS***转染到293A细胞中来获得编码GPCR的腺病毒，如先前所述(Choi,E.W.等人,(2012)AdHTS:a high-throughput system for generatingrecombinant adenoviruses,JBiotechnol 162,246-252；和Song,Y.B.等人,(2014))。
增殖测定
将A549双阴性(RLuc-lucP)细胞或过表达CXCR4和ADRB2的A549-CXCR4-ADRB2细胞系以1×104个细胞/孔的密度铺板在96孔板中并在培养基中孵育24小时以实现粘附。洗涤后，加入含或不含指定药物的无血清RPMI1640±SDF-1α，并将细胞在37℃、5％CO2下孵育72小时(接种后96小时)。孵育结束时，根据制造商的说明，通过使用Prestoblue细胞活力试剂(Thermo Fisher Scientific，目录号A13262)评估细胞增殖。简单地说，将细胞在1xPrestoblue细胞活力试剂中于37℃下孵育1h。使用Varioskan LUX多模式酶标仪(ThermoFisher Scientific)在560nm激发和590nm发射下测量荧光。检测到的荧光量与孔内的细胞数成比例。结果表示为来自三个重复孔的平均比率(荧光药物/荧光仅媒介物)±SEM。
小鼠异种移植模型
五周大的雌性Balb/c-nu/nu小鼠获自Envigo(France)，并保持在无特定病原体的动物设施中。Qubest Bio(South Korea)动物实验伦理委员会基于动物保护法批准了所有有关动物使用和安乐死的方案。将1×107个A549或A549-CXCR4-ADRB2细胞悬浮在100μL磷酸盐缓冲盐水(PBS)中，然后皮下植入小鼠右侧锁骨与胸壁之间的腋窝区域。通过用电子卡尺测量肿瘤的长度(L)和宽度(W)并根据下式计算肿瘤体积，每三或四天监测肿瘤生长：体积＝0.5LW2。
抗肿瘤作用研究
对于使用CXCR4抑制剂的抗肿瘤功效测试，将在A549肺癌细胞系中过表达CXCR4和ADRB2的A549-CXCR4-ADRB2细胞系皮下施用(100μL PBS中的1×107个细胞/头)至BALB/c-nu中。当肿瘤大小达到50-100mm3时，向每组十只小鼠施用媒介物(含1％二甲基纤维素的PBS)、AMD3100(7.5mpk，在PBS中配制为22.5mpk)、LY2510924(3mpk，在PBS中配制为10mpk)、AMD070(10mpk，在含1％二甲基纤维素的PBS中配制为30mpk)或TG-0054(10mpk，在PBS中配制为30mpk)或卡维地洛(在含1％二甲基纤维素的PBS中配制为20mpk)。皮下注射AMD3100、LY2510924和TG-0054，并且每天一次口服施用AMD070和卡维地洛，持续4周(总计28次)。通过测量肿瘤的长度(L)和宽度(W)，每三或四天监测肿瘤生长：体积＝0.5LW2。
原位模型
使用不含FBS的培养基对Balb/c-nu/nu雌性小鼠原位施用MDA-MB-231细胞或MDA-MB-231-CXCR4-ADRB2细胞(5×106个细胞/头(100μL细胞+100μL基质胶))。在施用之前，通过以下方式用MatrigelTM(BD,354248)处理细胞。1)基质胶以及用于施用的注射器和针头也保持10℃的条件直到施用。2)将基质胶与细胞悬浮液以50:50的比率混合，并使用23G的针头大小以防止细胞破坏。
将针尖放在施用前部位(***2和3之间)并向右或向左移动，以形成宽大的皮下袋。将基质胶混合物(基质胶:细胞悬浮液＝50:50)注射至皮下袋中。在确认液体没有在注射部位溢出之后，将动物放在繁殖箱中。当肿瘤大小达到约50-100mm3时，每天以指定剂量单独或以组合方式用CXCR4抑制剂或ADRB2抑制剂处理，持续4周。药物处理当天定义为第1天。AMD3100(2.5mg/kg，在PBS中7.5mg/kg)、LY2510924(1mg/kg，在PBS中3mg/kg)、AMD070(3mg/kg，在含1％甲基纤维素的PBS中10mg/kg)和/或卡维地洛(在含1％甲基纤维素的PBS中30mg/kg)每天施用一次，持续4周(总计28次)。皮下施用AMD3100、LY2510924和AMD070，并且口服施用卡维地洛。通过将在药物施用的第一天的肿瘤大小转换为100来计算肿瘤大小。结果表示为5个个体的平均值±标准差。
抗体TR-FRET
在TR-FRET测定之前，将10,000个细胞铺板在96孔半区板(Corning)的各孔中。在37℃潮湿孵育器中孵育隔夜之后，使用腺病毒***(0.9-30MOI携带CXCR4的腺病毒和0.5-15MOI携带ADRB2的腺病毒)瞬时过表达CXCR4和ADRB2。每种腺病毒感染48h后，用DPBS洗涤细胞两次并在室温下用4％多聚甲醛固定10分钟。洗涤细胞两次之后，为了使细胞透化，将含有0.1％Triton X-100的DPBS在室温下处理10分钟。然后在室温下，将细胞用补充有2％牛血清白蛋白(Sigma-Aldrich，St.Louis，MO，USA)的DPBS封闭30分钟，随后在室温下与兔抗CXCR4抗体(#ab124824，abcam)和小鼠抗ADRB2抗体(#sc271322，Santa CruzBiotechnology)一起孵育3小时。用DPBS洗涤细胞4次后，将用铽穴状化合物标记的山羊抗兔IgG(Cisbio，Bedford，MA，USA)和用Alexa Fluor 647标记的山羊抗小鼠IgG(ThermoFisher)在室温下处理1小时。然后将细胞用DPBS洗涤4次，接着使用Varioskan LUX多模式酶标仪(Thermo Fisher Scientific)进行分析。将各孔的FRET比率简单计算为520nm处的受体FRET信号与620nm处的供体发射之间的比率。
FRET比＝520nm处的信号/620nm处的信号×10000
所得数据代表FRET效率。ΔF％的计算基于不同的FRET比率。
ΔF％＝(比率样品–比率阴性)/比率阴性×100
ΔF％考虑了供体浓度的变化，并且与阴性对照相比，对应于FRET增加的百分比。然而，ΔF％参数不允许比较未用相同供体-配体浓度进行的实验。
配体TR-FRET
将A549细胞以每孔20,000个细胞的密度接种在96孔板(Corning,New York，USA#3688)中。CXCR4和ADRB2通过腺病毒感染在A549细胞中瞬时过表达，接着在37℃、5％CO2下孵育48h，。以0、0.1、0.5、1.25、2.5、5、10和20的MOI处理表达CXCR4的腺病毒，并以3倍高MOI处理表达ADRB2的腺病毒。编码HA-VC的腺病毒用于调整转导的腺病毒的总量。
为了表征CXCR4:ADRB2异聚体，用荧光标记的***和铽标记的TZ14011(Cisbio，USA)进行用标记配体的TR-FRET测定。感染CXCR4和ADRB2 18小时后，在冰冷的Tris-KREBS缓冲液(20mM Tris-HCl、118mM NaCl、5.6mM葡萄糖、1.2mM KH2PO4、1.2mMMgSO4、4.7mM KCl、1.8mM CaCl2，pH 7.4)中单独制备配体并保存在冰上(通过在低于15℃下运作，可以避免所有内化现象)。在此步骤中，用Tris-KREBS缓冲液以所期望最终浓度的5倍制备所有配体溶液。通过在黑暗中于4℃下孵育18小时，在96孔板上用10nM TZ14011-tb、20nM***-g2(Cisbio，USA#L0011GRE)和10mM未标记的***(PRESTWICKCHEMICAL，France)标记细胞，并且用Varioskan LUX Multimode(Thermo FisherScientific，USA)读板器测量TR-FRET信号。将制备物在334nm下激发，并且在VARIOSKAN上在针对供体的620nm(TZ14011-Tb)和取决于受体的520nm(***-g2)下测量荧光发射。数据分析与抗体TR-FRET分析相同。
邻位连接测定(PLA)
根据制造商的方案(Olink Proteomics，Uppsala，Sweden)进行Unfold PLA。由于测定中使用的细胞是漂浮的，因此所有重悬步骤均通过以2,000rpm离心3分钟的方式进行。在所有反应之间使用离心将每个洗涤步骤进行两次。将培养的细胞在1mL DPBS(ThermoFisher Scientific)中洗涤，接着在室温下将细胞在4％多聚甲醛中固定10分钟。然后将细胞在含有0.1％Triton X-100的DPBS中透化，并在37℃下于封闭溶液中封闭1小时。然后除去封闭溶液，并且通过第一抗体溶液将细胞重悬浮。将小鼠抗CXCR4抗体(#35-8800，ThermoFisher Scientific)和兔抗ADRB2抗体(#PA5-33333，Thermo Fisher Scientific)稀释于抗体稀释液中(分别为1:200和1:2000)。在37℃下孵育1小时后，以1:50稀释于抗体稀释液中的稀释度应用PLA探针。将探针与细胞在37℃下孵育1小时。在37℃下消化探针1小时，接着在37℃下进行连接步骤30分钟。然后将细胞的扩增混合物在37℃下处理100分钟。用20μL含有DAPI的VECTASHIELD防褪色封固培养基(Antifade Mounting Medium)(VectorLaboratories)来封固细胞。用IN Cell Analyzer 2500(GE Healthcare)采集PLA图像。
在本说明书中提到的所有出版物和专利申请均以引用的方式整体并入本文，其程度与具体且单独地指出每个单独出版物或专利申请来以引用的方式并入的程度相同。
虽然已经在本文中示出和描述了优选实施方案，但是对于本领域技术人员将很明显，此类实施方案仅作为实例提供。意图以下权利要求限定本发明的范围，并且由此涵盖在这些权利要求及其等同物范围内的方法和结构。
序列表
<110> GPCR治疗公司(GPCR THERAPEUTICS, INC.)
<120> GPCR异聚体抑制剂及其用途
<130> 14462-012-185
<140>
<141>
<150> 63/022,845
<151> 2020-05-11
<150> 62/849,755
<151> 2019-05-17
<160> 6
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> ADRB2-F的引物DNA序列
<400> 1
ctcttccatc gtgtccttct ac 22
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> ADRB2-R的引物DNA序列
<400> 2
aatcttctgg agctgccttt 20
<210> 3
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CXCR4-F的引物DNA序列
<400> 3
ccaccatcta ctccatcatc ttc 23
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CXCR4-R的引物DNA序列
<400> 4
acttgtccgt catgcttctc 20
<210> 5
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> β-肌动蛋白-F的引物DNA序列
<400> 5
ggaaatcgtg cgtgacatta ag 22
<210> 6
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> β-肌动蛋白-R的引物DNA序列
<400> 6
agctcgtagc tcttctcca 19

Claims (215)

1.一种用于抑制罹患癌症的受试者的细胞中的由CXCR4-ADRB2异聚体产生的增强的下游信号传导的方法，所述方法包括向所述患者施用：
a)CXCR4抑制剂，其中所述CXCR4抑制剂是布利沙福；和
b)ADRB2抑制剂；
其中：
i)所述增强的下游信号传导由所述CXCR4-ADRB2异聚体产生；并且
ii)所述施用的布利沙福和ADRB2抑制剂抑制所述癌症受试者中来自所述CXCR4-ADRB2异聚体的所述增强的下游信号传导。
2.一种用于治疗具有含有CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用：
a)CXCR4抑制剂，其中所述CXCR4抑制剂是布利沙福；和
b)ADRB2抑制剂；
其中：
i)增强的下游信号传导由所述CXCR4-ADRB2异聚体产生；并且
ii)所述施用的布利沙福和ADRB2抑制剂抑制所述癌症受试者中来自所述CXCR4-ADRB2异聚体的所述增强的下游信号传导。
3.一种用于治疗具有含有CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的癌症的方法，所述方法包括：
a)确定所述受试者细胞是否含有CXCR4-ADRB2异聚体，其中增强的下游信号传导由所述CXCR4-ADRB2异聚体产生；以及
b)如果所述受试者细胞含有所述CXCR4-ADRB2异聚体，那么向所述癌症受试者施用：
i)CXCR4抑制剂，其中所述CXCR4抑制剂是布利沙福；和
ii)ADRB2抑制剂。
4.一种用于治疗具有含有CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的癌症的方法，其中增强的下游信号传导由所述CXCR4-ADRB2异聚体产生，所述方法包括：
1)通过以下方式确定所述受试者是否具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的所述细胞：获得或已获得来自所述受试者的生物样品；和对所述生物样品进行或已进行测定以确定是否：
i)所述受试者细胞含有所述CXCR4-ADRB2异聚体；或
ii)CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂的组合：改变所述一个或多个受试者源性细胞中所述CXCR4-ADRB2异聚体的异聚体特异性性质或功能；改变所述一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的异聚体特异性性质；或降低具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的所述受试者中的癌症进展；和
2)如果所述受试者具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞，那么向所述癌症受试者施用CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂的组合，其中所述CXCR4抑制剂是布利沙福；和
3)如果所述受试者不具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞，那么向所述癌症受试者施用所述布利沙福或所述ADRB2抑制剂的单一抑制剂。
5.一种用于治疗具有含有CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的癌症的方法，其中增强的下游信号传导由所述CXCR4-ADRB2异聚体产生，所述方法包括：
1)通过以下方式确定所述受试者是否具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的所述细胞：获得或已获得来自所述受试者的生物样品；和对所述生物样品进行或已进行测定以确定是否：
i)所述受试者细胞含有所述CXCR4-ADRB2异聚体；或
ii)CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂的组合：改变所述一个或多个受试者源性细胞中所述CXCR4-ADRB2异聚体的异聚体特异性性质或功能；改变所述一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的异聚体特异性性质；或降低具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的所述受试者中的癌症进展；和
2)如果所述受试者具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞，那么向所述癌症受试者施用CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂的组合，其中所述CXCR4抑制剂是布利沙福；和
3)如果所述受试者不具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞，那么向所述癌症受试者施用所述布利沙福或所述ADRB2抑制剂的单一抑制剂；
其中：
a)相对于施用所述布利沙福或所述ADRB2抑制剂的所述单一抑制剂，在向所述癌症受试者施用所述布利沙福和所述ADRB2抑制剂的所述组合之后，具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的所述细胞的所述受试者的所述癌症的进展多降低5-100％的范围；
b)相对于作为单一抑制剂施用时所述布利沙福的功效，当与所述ADRB2抑制剂组合向具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的所述细胞的所述受试者施用时，所述布利沙福的功效增加5-2000％的范围；和/或
c)相对于作为单一抑制剂施用时所述ADRB2抑制剂的功效，当与所述布利沙福组合向具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的所述细胞的所述受试者施用时，所述ADRB2抑制剂的功效增加5-2000％的范围。
6.一种用于治疗具有含有CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的癌症的方法，其中增强的下游信号传导由所述CXCR4-ADRB2异聚体产生，所述方法包括：
1)通过以下方式确定所述受试者细胞是否含有所述CXCR4-ADRB2异聚体：获得或已获得来自所述受试者的生物样品，和对所述生物样品进行或已进行测定以确定所述受试者细胞中是否存在所述CXCR4-ADRB2异聚体；其中对所述生物样品进行的所述测定是或包括以下中的一项或多项：共内化测定、共定位测定、原位杂交、免疫组织化学、免疫电子显微镜术、基于接近性的测定、免疫共沉淀测定、酶联免疫吸附测定(ELISA)、流式细胞分析技术、RNAseq、RT-qPCR、CXCR4的表达水平、ADRB2的表达水平、CXCR4和ADRB2的表达水平、微阵列或荧光动物测定；和
2)如果所述受试者细胞含有所述CXCR4-ADRB2异聚体，那么向所述癌症受试者施用CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂的组合，其中所述CXCR4抑制剂是布利沙福；和
3)如果所述受试者细胞不含有所述CXCR4-ADRB2异聚体，那么向所述癌症受试者施用所述布利沙福或所述ADRB2抑制剂的单一抑制剂。
7.一种用于治疗具有含有CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的癌症的方法，其中增强的下游信号传导由所述CXCR4-ADRB2异聚体产生，所述方法包括：
1)通过以下方式确定所述受试者细胞是否含有所述CXCR4-ADRB2异聚体：获得或已获得来自所述受试者的生物样品，和对所述生物样品进行或已进行测定以确定所述受试者细胞中是否存在所述CXCR4-ADRB2异聚体；其中对所述生物样品进行的所述测定是或包括以下中的一项或多项：共内化测定、共定位测定、原位杂交、免疫组织化学、免疫电子显微镜术、基于接近性的测定、免疫共沉淀测定、酶联免疫吸附测定(ELISA)、流式细胞分析技术、RNAseq、RT-qPCR、CXCR4的表达水平、ADRB2的表达水平、CXCR4和ADRB2的表达水平、微阵列或荧光动物测定；和
2)如果所述受试者细胞含有所述CXCR4-ADRB2异聚体，那么向所述癌症受试者施用CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂的组合，其中所述CXCR4抑制剂是布利沙福；和
3)如果所述受试者细胞不含有所述CXCR4-ADRB2异聚体，那么向所述癌症受试者施用所述布利沙福或所述ADRB2抑制剂的单一抑制剂；
其中：
a)相对于施用所述布利沙福或所述ADRB2抑制剂的所述单一抑制剂，在向所述癌症受试者施用所述布利沙福和所述ADRB2抑制剂的所述组合之后，具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的所述细胞的所述受试者的所述癌症的进展多降低5-100％的范围；
b)相对于作为单一抑制剂施用时所述布利沙福的功效，当与所述ADRB2抑制剂组合向具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的所述细胞的所述受试者施用时，所述布利沙福的功效增加5-2000％的范围；和/或
c)相对于作为单一抑制剂施用时所述ADRB2抑制剂的功效，当与所述布利沙福组合向具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的所述细胞的所述受试者施用时，所述ADRB2抑制剂的功效增加5-2000％的范围。
8.一种用于治疗具有含有CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的癌症的药盒，所述药盒包含：
a)CXCR4抑制剂，其中所述CXCR4抑制剂是布利沙福；和
b)ADRB2抑制剂；
其中增强的下游信号传导由所述CXCR4-ADRB2异聚体产生。
9.一种用于治疗具有含有CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的受试者中的癌症药物组合物，所述药物组合物包含：
a)CXCR4抑制剂，其中所述CXCR4抑制剂是布利沙福；
b)ADRB2抑制剂；和
c)药学上可接受的载剂；
其中增强的下游信号传导由所述CXCR4-ADRB2异聚体产生。
10.一种用于抑制细胞中的由CXCR4-ADRB2异聚体产生的增强的下游信号传导的方法，所述方法包括向所述细胞施用：
a)CXCR4抑制剂，其中所述CXCR4抑制剂是布利沙福；和
b)ADRB2抑制剂；
其中：
i)所述增强的下游信号传导由所述CXCR4-ADRB2异聚体产生；并且
ii)与所述布利沙福和所述ADRB2抑制剂的接触抑制所述细胞中的由所述CXCR4-ADRB2异聚体产生的所述增强的下游信号传导。
11.如权利要求10所述的用于抑制的方法，其中所述方法还包括确定所述细胞是否含有所述CXCR4-ADRB2异聚体。
12.一种用于抑制细胞中的由CXCR4-ADRB2异聚体产生的增强的下游信号传导的药盒，所述药盒包含：
a)CXCR4抑制剂，其中所述CXCR4抑制剂是布利沙福；和
b)ADRB2抑制剂；
其中增强的下游信号传导由所述CXCR4-ADRB2异聚体产生。
13.一种用于抑制细胞中的由CXCR4-ADRB2异聚体产生的增强的下游信号传导的药物组合物，所述药物组合物包含：
a)CXCR4抑制剂，其中所述CXCR4抑制剂是布利沙福；
b)ADRB2抑制剂；和
c)药学上可接受的载剂；
其中增强的下游信号传导由所述CXCR4-ADRB2异聚体产生。
14.如权利要求10-13中任一项所述的用于抑制的方法，其中所述细胞是受试者细胞。
15.如权利要求14所述的用于抑制的方法，其中所述受试者细胞是癌细胞。
16.如权利要求1-13中任一项所述的用于抑制的方法，其中所述细胞是癌细胞。
17.如权利要求1-9中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述方法还包括检测所述癌症受试者中的所述CXCR4-ADRB2异聚体的存在。
18.如权利要求1-9或17中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述方法还包括鉴定所述癌症受试者中的所述CXCR4-ADRB2异聚体。
19.如权利要求1-9或17-18中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述方法还包括获得来自所述受试者的生物样品。
20.如权利要求1-9或17-19中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述方法还包括对从所述受试者获得的所述生物样品进行测定。
21.如权利要求1-9或17-20中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述方法还包括：
i)获得或已获得来自所述癌症受试者的生物样品；
ii)进行或已进行确定从所述癌症受试者获得的所述生物样品中的CXCR4-ADRB2异聚体的存在、同一性或存在和同一性的诊断测定；和
iii)选择与布利沙福组合施用以抑制由所述CXCR4-ADRB2异聚体产生的所述增强的下游信号传导的所述ADRB2抑制剂。
22.如权利要求1-9或17-21中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述方法还包括确定所述受试者细胞是否含有所述CXCR4-ADRB2异聚体，包括对从所述受试者获得的生物样品进行测定。
23.如权利要求1-9或17-22中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述方法还包括确定所述受试者细胞是否含有所述CXCR4-ADRB2异聚体，包括从所述受试者获得生物样品，和对从所述受试者获得的所述生物样品进行测定。
24.如权利要求1-9或17-23中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中从所述受试者获得的所述生物样品含有所述CXCR4-ADRB2异聚体。
25.如权利要求1-9或14-24中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述受试者细胞含有所述CXCR4-ADRB2异聚体。
26.如权利要求1-25中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述CXCR4-ADRB2异聚体具有以下特征中的两个或更多个：
1)所述CXCR4-ADRB2异聚体组分直接或经由充当变构的通道的中间蛋白在所述细胞中共定位并物理相互作用；
2)增强的下游信号传导由所述CXCR4-ADRB2异聚体产生；和/或
3)布利沙福和ADRB2抑制剂的组合：
i)改变所述细胞中所述CXCR4-ADRB2异聚体的异聚体特异性性质；
ii)改变所述细胞中所述CXCR4-ADRB2异聚体的异聚体特异性功能；和/或
iii)改变含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的所述细胞的异聚体特异性性质。
27.如权利要求1-9或14-25中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述CXCR4-ADRB2异聚体具有以下特征中的两个或更多个：
1)所述CXCR4-ADRB2异聚体组分直接或经由充当变构的通道的中间蛋白在所述细胞中共定位并物理相互作用；
2)增强的下游信号传导由所述CXCR4-ADRB2异聚体产生；和/或
3)布利沙福和ADRB2抑制剂的组合：
i)改变所述一个或多个受试者源性细胞中所述CXCR4-ADRB2异聚体的异聚体特异性性质；
ii)改变所述一个或多个受试者源性细胞中所述CXCR4-ADRB2异聚体的异聚体特异性功能；
iii)改变所述一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的异聚体特异性性质；和/或
iv)降低具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的所述受试者中的癌症进展。
28.如权利要求1-27中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述CXCR4-ADRB2异聚体的特征在于具有以下特征：所述细胞中的所述CXCR4-ADRB2异聚体组分直接或经由充当变构的通道的中间蛋白共定位并物理相互作用。
29.如权利要求1-28中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述细胞中的所述CXCR4-ADRB2异聚体组分直接或经由充当变构的通道的中间蛋白共定位并物理相互作用，通过以下中的一项或多项来确定：共内化测定、共定位测定、原位杂交、免疫组织化学、免疫电子显微镜术、基于接近性的测定、免疫共沉淀测定、酶联免疫吸附测定(ELISA)、流式细胞分析技术、RNAseq、RT-qPCR、CXCR4的表达水平、ADRB2的表达水平、CXCR4和ADRB2的表达水平、微阵列或荧光动物测定。
30.如权利要求1-29中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述基于接近性的测定是或包括共振能量转移(RET)、生物发光RET(BRET)、荧光RET(FRET)、时间分辨荧光RET(TR-FRET)、基于抗体的FRET、基于配体的FRET、双分子荧光互补(BiFC)或邻位连接测定(PLA)。
31.如权利要求30所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述TR-FRET是基于配体的TR-FRET。
32.如权利要求30所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述TR-FRET是基于抗体的TR-FRET。
33.如权利要求1-30中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述细胞中的所述CXCR4-ADRB2异聚体组分直接或经由充当变构的通道的中间蛋白共定位并物理相互作用，通过以下中的一项或多项来确定：共内化测定、双分子荧光互补(BiFC)、RT-PCR、RT-qPCR、CXCR4的表达水平、ADRB2的表达水平、CXCR4和ADRB2的表达水平或邻位连接测定(PLA)。
34.如权利要求33所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述细胞中的所述CXCR4-ADRB2异聚体组分直接或经由充当变构的通道的中间蛋白共定位并物理相互作用，通过共内化测定来确定。
35.如权利要求33所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述细胞中的所述CXCR4-ADRB2异聚体组分直接或经由充当变构的通道的中间蛋白共定位并物理相互作用，通过双分子荧光互补(BiFC)来确定。
36.如权利要求33所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述细胞中的所述CXCR4-ADRB2异聚体组分直接或经由充当变构的通道的中间蛋白共定位并物理相互作用，通过邻位连接测定(PLA)来确定。
37.如权利要求1-9或17-36中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述测定确定从所述受试者获得的所述生物样品中所述CXCR4-ADRB2异聚体的存在。
38.如权利要求1-37中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述测定确定所述CXCR4-ADRB2异聚体的所述CXCR4和ADRB2组分的共定位和相互作用。
39.如权利要求1-9或14-38中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述测定确定所述受试者细胞中所述CXCR4-ADRB2异聚体的存在。
40.如权利要求1-9或17-39中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述测定确定从所述受试者获得的所述生物样品中所述CXCR4-ADRB2异聚体的存在。
41.如权利要求1-9或17-40中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述测定确定所述受试者中所述CXCR4-ADRB2异聚体的存在。
42.如权利要求1-41中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述CXCR4-ADRB2异聚体的特征在于具有以下特征：增强的下游信号传导由所述CXCR4-ADRB2异聚体产生。
43.如权利要求1-9或14-42中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述增强的下游信号传导由所述受试者细胞中的所述CXCR4-ADRB2异聚体产生。
44.如权利要求1-9或14-43中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述增强的下游信号传导由所述受试者细胞中的所述CXCR4-ADRB2异聚体的存在产生。
45.如权利要求1-44中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述CXCR4-ADRB2异聚体产生所述增强的下游信号传导。
46.如权利要求1-9或14-45中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述CXCR4-ADRB2异聚体在所述受试者细胞中产生所述增强的下游信号传导。
47.如权利要求1-46中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述增强的下游信号传导由所述CXCR4-ADRB2异聚体的激动作用产生。
48.如权利要求1-47中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述增强的下游信号传导由所述CXCR4-ADRB2异聚体的CXCR4激动作用产生。
49.如权利要求1-47中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述增强的下游信号传导由所述CXCR4-ADRB2异聚体的ADRB2激动作用产生。
50.如权利要求1-47中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述增强的下游信号传导由所述CXCR4-ADRB2异聚体的CXCR4激动作用和ADRB2激动作用产生。
51.如权利要求1-50中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述增强的下游信号传导在所述CXCR4、所述ADRB2或所述CXCR4-ADRB2异聚体的下游。
52.如权利要求51所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述增强的下游信号传导在所述CXCR4的下游。
53.如权利要求51所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述增强的下游信号传导在所述ADRB2的下游。
54.如权利要求51所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述增强的下游信号传导在所述CXCR4-ADRB2异聚体的下游。
55.如权利要求1-50中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中来自所述CXCR4-ADRB2异聚体的所述增强的下游信号传导与在它们相应的单独元体情境中来自CXCR4元体或ADRB2元体的下游信号传导有关。
56.如权利要求55的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中来自所述CXCR4-ADRB2异聚体的所述增强的下游信号传导与在单独元体情境中来自CXCR4元体的下游信号传导有关。
57.如权利要求55所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中来自所述CXCR4-ADRB2异聚体的所述增强的下游信号传导与在单独元体情境中来自ADRB2元体的下游信号传导有关。
58.如权利要求55所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中来自所述CXCR4-ADRB2异聚体的所述增强的下游信号传导与在它们相应的单独元体情境中来自CXCR4元体和ADRB2元体的下游信号传导有关。
59.如权利要求1-58中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述增强的下游信号传导是增加的钙动员量。
60.如权利要求59所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述增加的钙动员量通过胞内Ca2+测定来确定。
61.如权利要求1-60中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中来自所述CXCR4-ADRB2异聚体的所述增强的下游信号传导通过胞内Ca2+测定来确定。
62.如权利要求61所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其所述中胞内Ca2+测定是钙动员测定。
63.如权利要求62所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述钙动员测定确定所述CXCR4-ADRB2异聚体产生所述增强的下游信号传导。
64.如权利要求62或63所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述钙动员测定确定所述增强的下游信号传导由所述CXCR4-ADRB2异聚体的存在产生。
65.如权利要求1-64中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述CXCR4-ADRB2异聚体表现出所述增加的钙动员量，使得：
a)所述细胞中在单独元体情境中在用CXCL12和ADRB2激动剂共刺激之后所述CXCR4或所述ADRB2产生等于或小于用所述CXCL12或所述ADRB2激动剂进行单一激动剂刺激所产生的钙动员量的总和的钙动员量；和
b)相对于用所述CXCL12或所述ADRB2激动剂进行单一激动剂刺激所产生的所述钙动员量的总和，在用所述CXCL12和所述ADRB2激动剂共刺激之后，所述CXCR4-ADRB2异聚体表现出增加的钙动员；
如经由钙动员测定所确定。
66.如权利要求1-65中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中：
i)所述细胞中在所述单独元体情境中，来自所述元体CXCR4或ADRB2的所述钙动员是非协同的，如经由钙动员测定所确定；并且
ii)所述细胞中来自所述CXCR4-ADRB2异聚体的所述钙动员是协同的，如经由钙动员测定所确定。
67.如权利要求1-66中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中在所述单独元体情境中：
a)在不存在所述单独元体ADRB2的情况下，所述细胞中的所述单独元体CXCR4；或
b)在不存在所述单独元体CXCR4的情况下，所述细胞中的所述单独元体ADRB2；
在用CXCL12和ADRB2激动剂共刺激之后产生等于或小于用所述CXCL12或所述ADRB2激动剂进行单一激动剂刺激所产生的钙动员量的总和的钙动员量，如经由钙动员测定所确定。
68.如权利要求1-67中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中在所述单独元体情境中，独立地：
a)在不存在所述单独元体ADRB2的情况下，所述细胞中的所述单独元体CXCR4；和
b)在不存在所述单独元体CXCR4的情况下，所述细胞中的所述单独元体ADRB2；
在用CXCL12和ADRB2激动剂共刺激之后产生等于或小于用所述CXCL12或所述ADRB2激动剂进行单一激动剂刺激所产生的钙动员量的总和的钙动员量，如经由钙动员测定所确定。
69.如权利要求1-68中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述CXCR4-ADRB2异聚体在用所述CXCL12和所述ADRB2激动剂共刺激之后产生大于用所述CXCL12或所述ADRB2激动剂对所述细胞进行单一激动剂刺激所产生的钙动员量的总和的钙动员量，如经由钙动员测定所确定。
70.如权利要求1-69中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中相对于由所述CXCR4-ADRB2异聚体的单一激动剂刺激所产生的钙动员的总和，由所述CXCR4-ADRB2异聚体的所述共刺激所产生的所述钙动员量是增加的钙动员量，如经由钙动员测定所确定。
71.如权利要求1-70中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中由所述CXCR4-ADRB2异聚体产生的所述增加的钙动员量是用CXCL12和ADRB2激动剂共刺激之后大于用所述CXCL12或所述ADRB2激动剂对所述细胞进行单一激动剂刺激所产生的钙动员量的总和的钙动员量，如经由钙动员测定所确定。
72.如权利要求71所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中由所述CXCR4-ADRB2异聚体产生的所述增加的钙动员量是用所述CXCL12和所述ADRB2激动剂共刺激之后与用所述CXCL12或所述ADRB2激动剂对所述细胞进行单一激动剂刺激所产生的钙动员量的总和相比大至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少75％或至少90％的钙动员量，如经由钙动员测定所确定。
73.如权利要求71或72所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中由所述CXCR4-ADRB2异聚体产生的所述增加的钙动员量是用所述CXCL12和所述ADRB2激动剂共刺激之后与用所述CXCL12或所述ADRB2激动剂对所述细胞进行单一激动剂刺激所产生的钙动员量的总和相比大至少100％的钙动员量，如经由钙动员测定所确定。
74.如权利要求71-73中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述增加的钙动员量是协同钙动员量。
75.如权利要求74所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中来自含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的所述细胞的所述协同钙动员量是用所述CXCL12和所述ADRB2激动剂共刺激之后与用所述CXCL12或所述ADRB2激动剂对所述细胞进行单一激动剂刺激所产生的钙动员量的总和相比大至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少75％或至少90％的钙动员量，如经由钙动员测定所确定。
76.如权利要求1-75中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述增加的钙动员量的特征如下：
a)在用CXCL12和ADRB2激动剂共刺激之后，细胞中在单独元体情境中所述CXCR4或所述ADRB2产生等于或小于用所述CXCL12或所述ADRB2激动剂进行单一激动剂刺激所产生的钙动员量的总和的钙动员量；和
b)相对于用所述CXCL12或所述ADRB2激动剂进行单一激动剂刺激所产生的所述钙动员量的总和，在用所述CXCL12和所述ADRB2激动剂共刺激之后，所述CXCR4-ADRB2异聚体表现出增加的钙动员；
如经由钙动员测定所确定。
77.如权利要求1-76中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述CXCR4-ADRB2异聚体的特征在于具有以下特征：相对于由用CXCR4激动剂或ADRB2激动剂对所述CXCR4-ADRB2异聚体进行单刺激所产生的下游ERK信号传导量，用所述CXCR4激动剂和所述ADRB2激动剂对所述CXCR4-ADRB2异聚体共刺激产生较大的下游ERK信号传导量。
78.如权利要求77所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中由所述CXCR4激动剂和所述ADRB2激动剂共刺激产生的下游ERK信号传导量大于由所述CXCR4激动剂单刺激产生的量。
79.如权利要求78所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中由所述CXCR4激动剂和所述ADRB2激动剂共刺激产生的下游ERK信号传导量与由所述CXCR4激动剂单刺激产生的量相比大至少5％。
80.如权利要求78所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中由所述CXCR4激动剂和所述ADRB2激动剂共刺激所产生的下游ERK信号传导量与由所述CXCR4激动剂单刺激所产生的量相比大至少10％、至少25％、至少50％、至少75％或至少90％。
81.如权利要求78-80中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中由所述CXCR4激动剂和所述ADRB2激动剂共刺激所产生的下游ERK信号传导量与由所述CXCR4激动剂单刺激所产生的量相比大在5-15％、10-25％、20-50％、40-75％或60-100％之间的范围。
82.如权利要求77所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中由所述CXCR4激动剂和所述ADRB2激动剂共刺激所产生的下游ERK信号传导量大于由所述ADRB2激动剂单刺激所产生的量。
83.如权利要求82所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中由所述CXCR4激动剂和所述ADRB2激动剂共刺激所产生的下游ERK信号传导量与由所述ADRB2激动剂单刺激所产生的量相比大至少5％。
84.如权利要求82所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中由所述CXCR4激动剂和所述ADRB2激动剂共刺激所产生的下游ERK信号传导量与由所述ADRB2激动剂单刺激所产生的量相比大至少10％、至少25％、至少50％、至少75％或至少90％。
85.如权利要求82-84中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中由所述CXCR4激动剂和所述ADRB2激动剂共刺激所产生的下游ERK信号传导量与由所述ADRB2激动剂单刺激所产生的量相比大在5-15％、10-25％、20-50％、40-75％或60-100％之间的范围。
86.如权利要求1-9或14-85中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述CXCR4-ADRB2异聚体的特征在于具有以下特征：布利沙福和ADRB2抑制剂的组合改变所述一个或多个受试者源性细胞中所述CXCR4-ADRB2异聚体的异聚体特异性性质。
87.如权利要求1-9或14-86中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述CXCR4-ADRB2异聚体的特征在于具有以下特征：布利沙福和ADRB2抑制剂的组合改变所述一个或多个受试者源性细胞中所述CXCR4-ADRB2异聚体的异聚体特异性功能。
88.如权利要求1-9或14-87中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述CXCR4-ADRB2异聚体的特征在于具有以下特征：布利沙福和ADRB2抑制剂的组合改变所述一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的异聚体特异性性质。
89.如权利要求1-9或14-88中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述CXCR4-ADRB2异聚体的特征在于具有以下特征：布利沙福和ADRB2抑制剂的组合降低所述一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的癌症进展。
90.如权利要求1-89中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中施用的所述布利沙福和所述ADRB2抑制剂的所述组合抑制来自所述CXCR4-ADRB2异聚体的所述增强的下游信号传导。
91.如权利要求1-90中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中施用的所述布利沙福和所述ADRB2抑制剂的所述组合抑制所述细胞中来自所述CXCR4-ADRB2异聚体的所述增强的下游信号传导。
92.如权利要求1-9或17-91中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中施用的所述布利沙福和所述ADRB2抑制剂的所述组合抑制所述癌症受试者中来自所述CXCR4-ADRB2异聚体的所述增强的下游信号传导。
93.如权利要求1-9或17-92中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中施用的所述布利沙福和所述ADRB2抑制剂的所述组合抑制所述癌症受试者的所述细胞中来自所述CXCR4-ADRB2异聚体的所述增强的下游信号传导。
94.如权利要求1-93中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述CXCR4-ADRB2异聚体组分包含CXCR4和ADRB2的单独元体。
95.如权利要求1-94中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中在单独元体情境中含有所述CXCR4的所述细胞在存在或不存在所述单独元体ADRB2的情况下包含所述单独元体CXCR4。
96.如权利要求95所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中在单独元体情境中含有所述CXCR4的所述细胞在不存在所述单独元体ADRB2的情况下包含所述单独元体CXCR4。
97.如权利要求95所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中在单独元体情境中含有所述CXCR4的所述细胞在存在所述单独元体ADRB2的情况下包含所述单独元体CXCR4。
98.如权利要求1-94中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中在单独元体情境中含有所述ADRB2的所述细胞在存在或不存在所述单独元体CXCR4的情况下包含所述单独元体ADRB2。
99.如权利要求98所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中在单独元体情境中含有所述ADRB2的所述细胞在不存在所述单独元体CXCR4的情况下包含所述单独元体ADRB2。
100.如权利要求98所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中在单独元体情境中含有所述ADRB2的所述细胞在存在所述单独元体CXCR4的情况下包含所述单独元体ADRB2。
101.如权利要求1-100中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中施用的布利沙福和ADRB2抑制剂的所述组合：
i)改变所述细胞中所述CXCR4-ADRB2异聚体的异聚体特异性性质；
ii)改变所述细胞中所述CXCR4-ADRB2异聚体的异聚体特异性功能；和/或
iii)改变含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的所述细胞的异聚体特异性性质。
102.如权利要求1-9或14-101中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中施用的所述布利沙福和所述ADRB2抑制剂的所述组合：
i)改变所述一个或多个受试者源性细胞中所述CXCR4-ADRB2异聚体的异聚体特异性性质；
ii)改变所述一个或多个受试者源性细胞中所述CXCR4-ADRB2异聚体的异聚体特异性功能；
iii)改变所述一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的异聚体特异性性质；或
iv)降低具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的所述受试者中的癌症进展。
103.如权利要求102所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中施用的所述布利沙福和所述ADRB2抑制剂的所述组合改变所述一个或多个受试者源性细胞中所述CXCR4-ADRB2异聚体的异聚体特异性性质。
104.如权利要求102或103所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中施用的所述布利沙福和所述ADRB2抑制剂的所述组合改变所述一个或多个受试者源性细胞中所述CXCR4-ADRB2异聚体的异聚体特异性功能。
105.如权利要求102-104中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中施用的所述布利沙福和所述ADRB2抑制剂的所述组合改变所述一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的异聚体特异性性质。
106.如权利要求102-105中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中施用的所述布利沙福和所述ADRB2抑制剂的所述组合降低具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的所述受试者中的癌症进展。
107.如权利要求102-106中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述CXCR4-ADRB2异聚体的特征在于具有以下特征：布利沙福和ADRB2抑制剂的组合降低所述一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的癌症进展。
108.如权利要求102-107中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述降低的癌症进展包括所述一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的癌症进展的降低。
109.如权利要求102-108中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述降低的癌症进展包括所述一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的细胞增殖的降低。
110.如权利要求102-109中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述降低的癌症进展包括所述一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的细胞迁移的降低。
111.如权利要求102-110中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述降低的癌症进展包括所述一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的转移的降低。
112.如权利要求102-111中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述降低的癌症进展包括所述一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的受试者源性细胞的血管生成的降低。
113.如权利要求1-112中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述布利沙福作为包含药学上可接受的载剂的药物组合物施用。
114.如权利要求1-113中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述ADRB2抑制剂作为包含药学上可接受的载剂的药物组合物施用。
115.如权利要求1-114中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中依序、并行或同时施用所述布利沙福和所述ADRB2抑制剂的所述组合。
116.如权利要求1-115中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述布利沙福和所述ADRB2抑制剂的所述组合作为进一步包含药学上可接受的载剂的药物组合物施用。
117.如权利要求1-116中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述布利沙福和所述ADRB2抑制剂作为药物组合物的组合施用。
118.如权利要求117所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中药物组合物的所述组合包含：
a)包含所述布利沙福和药学上可接受的载剂的药物组合物；和
b)包含所述ADRB2抑制剂和药学上可接受的载剂的药物组合物。
119.如权利要求117或118所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中依序、并行或同时施用所述药物组合物的所述组合。
120.如权利要求1-119中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述癌症是血液学癌症或实体肿瘤。
121.如权利要求120所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述癌症是血液学癌症。
122.如权利要求121所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述血液学癌症选自由以下组成的组：淋巴瘤、白血病、骨髓瘤和多发性骨髓瘤。
123.如权利要求122所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述淋巴瘤是B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤或NK细胞淋巴瘤。
124.如权利要求122或123所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述淋巴瘤是复发性或难治性淋巴瘤。
125.如权利要求122-124中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述淋巴瘤选自由以下组成的组：霍奇金氏淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、皮肤B细胞淋巴瘤、活化的B细胞淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、伯基特淋巴瘤、套细胞淋巴瘤(MCL)、滤泡性淋巴瘤(FL)、滤泡性中心淋巴瘤、转化性淋巴瘤、中间分化的淋巴细胞性淋巴瘤、中间淋巴细胞性淋巴瘤(ILL)、弥漫性低分化淋巴细胞性淋巴瘤(PDL)、中心细胞性淋巴瘤、弥漫性小核裂细胞淋巴瘤(DSCCL)、外周T细胞淋巴瘤(PTCL)、皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)、套区淋巴瘤和低级滤泡性淋巴瘤。
126.如权利要求122所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述白血病是：
a)选自由以下组成的组的急性白血病：急性淋巴细胞性白血病(ALL)、T细胞急性淋巴细胞性白血病(T-ALL)、B细胞急性淋巴母细胞白血病、急性单核细胞性白血病、急性前髓细胞性白血病、急性髓细胞性白血病(AML)、急性髓系白血病、急性骨髓性白血病和成髓细胞、前髓细胞性、骨髓单核细胞性、单核细胞性和红白血病；
(b)选自由以下组成的组的慢性白血病：慢性髓细胞性(粒细胞性)白血病、慢性骨髓性白血病(慢性髓系白血病；CML)和慢性淋巴细胞性白血病(CLL)；或
(c)慢性骨髓单核细胞性白血病(CMML)、慢性嗜酸性粒细胞白血病、幼年型骨髓单核细胞性白血病(JMML)、真性红细胞增多症、自然杀伤细胞白血病(NK白血病)或毛细胞白血病。
127.如权利要求120所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述癌症是实体肿瘤。
128.如权利要求127所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述实体肿瘤是良性肿瘤或癌症。
129.如权利要求127所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述实体肿瘤是癌或肉瘤。
130.如权利要求127所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述实体肿瘤选自由以下组成的组：纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、骨肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、恶性上皮样间皮瘤、尤文氏肿瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、胃癌、结肠直肠癌、食管癌、结肠癌、淋巴恶性肿瘤、胰脏癌、胰脏腺癌、胰脏导管腺癌、乳腺癌、乳腺癌、乳腺导管腺癌、肺癌、小细胞肺癌、肺腺癌、腺鳞肺癌、肺泡横纹肌肉瘤、卵巢癌、卵巢透明细胞腺癌、卵巢粘液性囊腺癌、卵巢浆液性腺癌、***癌、肝细胞癌、软组织肉瘤、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、甲状腺髓样癌、甲状腺***状癌、甲状腺癌、嗜铬细胞瘤皮脂腺癌、***状癌、***状腺癌、髓样癌、支气管癌、胃肠道癌、胃管状腺癌、胃腺鳞癌、肾癌、肝内胆管癌、肾细胞癌、肝细胞瘤、胆管癌、绒毛膜癌、威尔姆氏瘤、子宫癌肉瘤、子宫内膜腺癌、子宫内膜间质肉瘤、子宫内膜癌、***、睾丸肿瘤、***瘤、膀胱癌、黑色素瘤、多发性骨髓瘤、多发性内分泌瘤病、CNS肿瘤、胶质母细胞瘤、星形细胞瘤、CNS淋巴瘤、生殖细胞瘤、成神经管细胞瘤、神经鞘瘤颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、成血管细胞瘤、听神经瘤、少突神经胶质瘤、脑膜瘤、成神经细胞瘤、视网膜母细胞瘤和脑转移瘤。
131.如权利要求130所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述实体肿瘤选自由以下组成的组：乳腺癌、肺癌和肝细胞癌。
132.如权利要求131所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述实体肿瘤是乳腺癌。
133.如权利要求131所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述实体肿瘤是肺癌。
134.如权利要求131所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述实体肿瘤是肝细胞癌。
135.如权利要求1-9或17-134中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述受试者的生物样品是生物流体样品。
136.如权利要求135所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中对所述生物流体样品进行液体活检。
137.如权利要求135或136所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述生物流体样品是血液样品、血浆样品、唾液样品、脑液样品、眼液样品或尿液样品。
138.如权利要求1-9或17-137中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述受试者的生物样品是生物组织样品。
139.如权利要求138所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中对所述生物组织样品进行组织样品测定。
140.如权利要求138或139所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述生物组织样品是器官组织样品、骨组织样品或肿瘤组织样品。
141.如权利要求1-140中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述用于治疗癌症的方法是用于抑制由所述CXCR4-ADRB2异聚体产生的增强的下游信号传导的方法。
142.如权利要求1-140中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述用于抑制由所述CXCR4-ADRB2异聚体产生的增强的下游信号传导的方法是用于治疗癌症的方法。
143.如权利要求1-9或17-142中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中相对于施用所述布利沙福或所述ADRB2抑制剂的所述单一抑制剂，在向所述癌症受试者施用所述布利沙福和所述ADRB2抑制剂的所述组合之后，具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的所述细胞的所述受试者中所述癌症的进展多降低5-100％的范围。
144.如权利要求1-9或17-143中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中相对于作为单一抑制剂施用时所述布利沙福的功效，当与所述ADRB2抑制剂组合向具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的所述细胞的所述受试者施用时，所述布利沙福的功效增加5-5000％的范围。
145.如权利要求1-9或17-144中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中相对于作为单一抑制剂施用时ADRB2抑制剂的功效，当与所述布利沙福组合向具有含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的所述细胞的所述受试者施用时，所述ADRB2抑制剂的功效增加5-5000％的范围。
146.如权利要求1-9或17-145中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中相对于单一抑制剂施用，向所述癌症受试者施用所述布利沙福和所述ADRB2抑制剂的所述组合对所述癌症受试者中由所述CXCR4-ADRB2异聚体产生的所述增强的下游信号传导的抑制为5-2000倍之间的范围。
147.如权利要求1-9或17-146中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中相对于在它们相应的单独元体情境中由CXCR4元体或ADRB2元体所产生的下游信号传导的抑制，向所述癌症受试者施用所述布利沙福和所述ADRB2抑制剂的所述组合对所述癌症受试者中由所述CXCR4-ADRB2异聚体产生的所述增强的下游信号传导的抑制为5-2000倍之间的范围。
148.如权利要求17-147中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述细胞是癌细胞。
149.如权利要求17-147中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述细胞是受试者细胞。
150.如权利要求149所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述受试者细胞是癌细胞。
151.如权利要求1-150中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述受试者是癌症受试者。
152.如权利要求1-151中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒或所使用的药物组合物，其中所述受试者是患者。
153.一种药物组合物，其包含：
a)CXCR4抑制剂，其中所述CXCR4抑制剂是布利沙福；
b)ADRB2抑制剂；和
c)药学上可接受的载剂。
154.如权利要求1-153中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述ADRB2抑制剂是ADRB2的拮抗剂、ADRB2的反向激动剂、ADRB2的部分拮抗剂、ADRB2的变构调节剂、ADRB2的抗体、ADRB2的抗体片段、ADRB2的配体或抗体-药物缀合物。
155.如权利要求154所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述ADRB2抑制剂是ADRB2拮抗剂。
156.如权利要求154所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述ADRB2抑制剂是ADRB2反向激动剂。
157.如权利要求154所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述ADRB2抑制剂是ADRB2部分拮抗剂。
158.如权利要求154所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述ADRB2抑制剂是ADRB2的变构调节剂。
159.如权利要求154所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述ADRB2抑制剂是ADRB2的抗体。
160.如权利要求154所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述ADRB2抑制剂是ADRB2的抗体片段。
161.如权利要求154所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述ADRB2抑制剂是ADRB2的配体。
162.如权利要求154所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述ADRB2抑制剂是抗体-药物缀合物。
163.如权利要求154所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述ADRB2抑制剂选自由以下组成的组：
阿普洛尔、阿替洛尔、倍他洛尔、布拉洛尔、布托沙明、卡那洛尔、卡维地洛、CGP 12177、环丙洛尔、ICI 118551、ICYP、拉贝洛尔、左旋倍他洛尔、左旋布诺洛尔、LK 204-545、美托洛尔、纳多洛尔、NIHP、NIP、普罗帕酮、***、索他洛尔、SR59230A和噻吗洛尔。
164.如权利要求163所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述ADRB2抑制剂是卡维地洛。
165.如权利要求1-9或17-164中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中向所述受试者施用治疗有效量的所述布利沙福。
166.如权利要求1-9或17-164中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中向所述受试者施用次治疗有效量的所述布利沙福。
167.如权利要求1-9或17-166中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中向所述受试者施用治疗有效量的所述ADRB2抑制剂。
168.如权利要求1-9或17-166中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中向所述受试者施用次治疗有效量的所述ADRB2抑制剂。
169.如权利要求1-9或14-168中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述方法或用途还包括确定所述细胞、所述受试者或从所述受试者获得的所述样品中所述CXCR4基因的表达水平，其中如果所述表达水平大于所述CXCR4基因的参考水平，那么确定所述细胞、所述受试者或从所述受试者获得的所述样品具有表达CXCR4的癌症。
170.如权利要求169所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述癌症是表达CXCR4的癌症。
171.如权利要求169或170所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述细胞中的所述CXCR4表达水平大于参考水平。
172.如权利要求169或170的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述受试者中的所述CXCR4表达水平大于参考水平。
173.如权利要求169或170所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中从所述受试者获得的所述样品中的所述CXCR4表达水平大于参考水平。
174.如权利要求169-173中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，在确定所述CXCR4基因表达水平大于所述参考水平之后，所述方法或用途包括施用CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂，其中所述CXCR4抑制剂是布利沙福。
175.如权利要求1-9或14-168中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述方法或用途还包括确定所述细胞、所述受试者或从所述受试者获得的所述样品中的所述ADRB2基因的表达水平，其中如果所述表达水平大于所述ADRB2基因的参考水平，则确定所述细胞、所述受试者或从所述受试者获得的所述样品具有表达ADRB2的癌症。
176.如权利要求175所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述癌症是表达ADRB2的癌症。
177.如权利要求175或176所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述细胞中的所述ADRB2表达水平大于参考水平。
178.如权利要求175或176所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述受试者中的所述ADRB2表达水平大于参考水平。
179.如权利要求175或176所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中从所述受试者获得的所述样品中的所述ADRB2表达水平大于参考水平。
180.如权利要求175-179中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，在确定所述ADRB2基因表达水平大于所述参考水平之后，所述方法或用途包括施用CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂，其中所述CXCR4抑制剂是布利沙福。
181.如权利要求1-9或14-168中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述方法或用途还包括确定所述细胞、所述受试者或从所述受试者获得的所述样品中的所述CXCR4基因和所述ADRB2基因的表达水平，其中如果所述CXCR4基因和所述ADRB2基因的表达水平大于所述CXCR4基因和所述ADRB2基因的相应参考水平，那么确定所述细胞、所述受试者或从所述受试者获得的所述样品具有表达CXCR4和表达ADRB2的癌症。
182.如权利要求181的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述癌症为表达CXCR4的癌症和表达ADRB2的癌症。
183.如权利要求181或182所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述细胞中的所述CXCR4表达水平和所述ADRB2表达水平大于相应参考水平。
184.如权利要求181或182所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述受试者中的所述CXCR4表达水平和所述ADRB2表达水平大于相应参考水平。
185.如权利要求181或182所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中从所述受试者获得的所述样品中的所述CXCR4表达水平和所述ADRB2表达水平大于相应参考水平。
186.如权利要求181-185中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中在确定所述CXCR4基因表达水平和所述ADRB2基因表达水平大于所述相应参考水平之后，所述方法或用途包括施用CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂，其中所述CXCR4抑制剂是布利沙福。
187.如权利要求1-9或14-168中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述方法或用途还包括确定所述细胞、所述受试者或从所述受试者获得的所述样品中所述CXCR4蛋白的表达水平，其中如果所述表达水平大于所述CXCR4蛋白的参考水平，则确定所述细胞、所述受试者或从所述受试者获得的所述样品具有表达CXCR4的癌症。
188.如权利要求187所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述癌症是表达CXCR4的癌症。
189.如权利要求187或188所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述细胞中的所述CXCR4表达水平大于参考水平。
190.如权利要求187或188所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述受试者中的所述CXCR4表达水平大于参考水平。
191.如权利要求187或188所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中从所述受试者获得的所述样品中的所述CXCR4表达水平大于参考水平。
192.如权利要求187-191中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，在确定所述CXCR4蛋白表达水平大于所述参考水平之后，所述方法或用途包括施用CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂，其中所述CXCR4抑制剂是布利沙福。
193.如权利要求1-9或14-168中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述方法或用途还包括确定所述细胞、所述受试者或从所述受试者获得的所述样品中的所述ADRB2蛋白的表达水平，其中如果所述表达水平大于所述ADRB2蛋白的参考水平，那么确定所述细胞、所述受试者或从所述受试者获得的所述样品具有表达ADRB2的癌症。
194.如权利要求193所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述癌症是表达ADRB2的癌症。
195.如权利要求193或194所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述细胞中的所述ADRB2表达水平大于参考水平。
196.如权利要求193或194所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述受试者中的所述ADRB2表达水平大于参考水平。
197.如权利要求193或194所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中从所述受试者获得的所述样品中的所述ADRB2表达水平大于参考水平。
198.如权利要求193-197中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，在确定所述ADRB2蛋白表达水平大于所述参考水平之后，所述方法或用途包括施用CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂，其中所述CXCR4抑制剂是布利沙福。
199.如权利要求1-9或14-168中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述方法或用途还包括确定所述细胞、所述受试者或从所述受试者获得的所述样品中的所述CXCR4蛋白和所述ADRB2蛋白的表达水平，其中如果所述CXCR4蛋白和所述ADRB2蛋白的表达水平大于所述CXCR4蛋白和所述ADRB2蛋白的相应参考水平，那么确定所述细胞、所述受试者或从所述受试者获得的所述样品具有表达CXCR4和表达ADRB2的癌症。
200.如权利要求199所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述癌症是表达CXCR4的癌症和表达ADRB2的癌症。
201.如权利要求199或200所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述细胞中的所述CXCR4表达水平和所述ADRB2表达水平大于相应参考水平。
202.如权利要求199或200所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述受试者中的所述CXCR4表达水平和所述ADRB2表达水平大于相应参考水平。
203.如权利要求199或200所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中从所述受试者获得的所述样品中的所述CXCR4表达水平和所述ADRB2表达水平大于相应参考水平。
204.如权利要求199-203中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中在确定所述CXCR4蛋白表达水平和所述ADRB2蛋白表达水平大于所述相应参考水平之后，所述方法或用途包括施用CXCR4抑制剂和ADRB2抑制剂，其中所述CXCR4抑制剂是布利沙福。
205.如权利要求1-204中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述ADRB2抑制剂是卡维地洛。
206.如权利要求1-205中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述增强的下游信号传导是对用CXCR4激动剂和ADRB2激动剂对所述CXCR4-ADRB2异聚体进行共刺激的增强的反应。
207.如权利要求1-206中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述增强的下游信号传导是具有一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的所述受试者中的增强的癌症进展。
208.如权利要求207所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述增强的癌症进展是具有一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的所述受试者中的增强的细胞增殖。
209.如权利要求207或208所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述增强的癌症进展是具有一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的所述受试者中的增强的细胞迁移。
210.如权利要求207-209中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述增强的癌症进展是具有一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的所述受试者中的增强的转移。
211.如权利要求207-210中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述增强的癌症进展是具有一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的所述受试者中的增强的肿瘤生长。
212.如权利要求207-211中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述增强的癌症进展是具有一个或多个含有所述CXCR4-ADRB2异聚体的细胞的所述受试者中的增强的血管生成。
213.如权利要求207-212中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述一个或多个细胞是一个或多个癌细胞。
214.如权利要求207-213中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述一个或多个细胞来源于受试者。
215.如权利要求207-214中任一项所述的用于抑制的方法、用于治疗的方法、所使用的药盒、所使用的药物组合物或药物组合物，其中所述一个或多个细胞来自从受试者获得的生物样品。
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