KR20210144725A - Anti-aging, antioxidant, anti-inflammatory and whitening agents, and cosmetics - Google Patents
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Abstract
본 발명은, 쑥속(Artemisia) 식물 발효액, 타임 발효액, 멜리사 발효액 및 수레국화 발효액 중 적어도 어느 하나의 발효액을 유효 성분으로서 함유하는 항노화제, 쑥속 식물 발효액, 타임 발효액, 멜리사 발효액 및 수레국화 발효액 중 적어도 어느 하나의 발효액을 유효 성분으로서 함유하는 항산화제, 쑥속 식물 발효액 및 멜리사 발효액 중 적어도 어느 하나의 발효액을 유효 성분으로서 함유하는 항염증제, 쑥속 식물 발효액, 멜리사 발효액 및 수레국화 발효액 중 적어도 어느 하나의 발효액을 유효 성분으로서 함유하는 미백제, 그리고 화장료이다.The present invention relates to an anti-aging agent comprising at least one of Artemisia plant fermentation broth, thyme fermentation broth, Melissa fermentation broth and cornflower fermentation broth as an active ingredient, Artemisia plant fermentation broth, thyme fermentation broth, Melissa fermented broth and cornflower fermented broth. Antioxidant containing at least one fermented broth as an active ingredient, anti-inflammatory agent containing at least one fermented broth of Mugwort plant fermentation broth and Melissa fermentation broth as an active ingredient, Artemisia plant fermentation broth, Melissa fermentation broth, and cornflower fermentation broth at least one fermentation broth is a whitening agent containing as an active ingredient, and a cosmetic.
Description
본 발명은, 식물의 국균(麴菌)에 의한 발효액을 유효 성분으로서 함유하는 항노화제, 항산화제, 항염증제 및 미백제, 그리고 상기 항노화제, 상기 항산화제, 상기 항염증제 및 상기 미백제 중 적어도 어느 하나를 함유하는 화장료에 관한 것이다.The present invention provides an anti-aging agent, an antioxidant, an anti-inflammatory agent, and a whitening agent containing a fermentation broth of a plant national bacteria as an active ingredient, and at least one of the anti-aging agent, the antioxidant, the anti-inflammatory agent, and the whitening agent It relates to a cosmetic containing
근래, 생체 성분을 산화시키는 요인으로서, 활성 산소가 주목받고 있고, 그 생체에 대한 악영향이 문제가 되고 있다. 활성 산소는, 생체 세포내의 에너지 대사 과정에서 발생하는 것이며, 슈퍼옥사이드〔즉, 산소 분자의 일전자 환원으로 발생하는 슈퍼옥사이드 음이온(·O2-), 과산화수소(H2O2), 일중항산소(1O2), 히드록시 라디칼(·OH)〕 등이 있다. 이와 같은 활성 산소는 식세포의 살균 기구에 있어서 필수이며, 바이러스나 암세포의 제거에 중요한 기능을 수행하고 있다.In recent years, active oxygen has been attracting attention as a factor that oxidizes biological components, and the adverse effect on the living body has become a problem. Active oxygen is generated in the process of energy metabolism in living cells, and superoxide [that is, superoxide anion (·O 2 -) generated by single-electron reduction of oxygen molecules, hydrogen peroxide (H 2 O 2 ), singlet oxygen ( 1 O 2 ), hydroxy radical (·OH)] and the like. Such active oxygen is essential in the sterilization mechanism of phagocytes, and performs an important function in the removal of viruses and cancer cells.
그러나, 상기 활성 산소의 과잉 생성은, 생체내의 막 및 조직을 구성하는 생체내 분자를 공격하여 각종 질환을 유발한다. 생체내에서 생산되고, 다른 활성 산소의 출발 물질이 되기도 하는 슈퍼옥사이드는, 통상, 세포내에 포함되어 있는 슈퍼옥사이드 디스무타아제(SOD)의 촉매 작용에 의해 순차적으로 소거되고 있다. 그러나, 슈퍼옥사이드의 산생(産生)이 과잉한 경우, 또는 SOD의 작용이 저하되어 있는 경우에는, 슈퍼옥사이드의 소거가 불충분하게 되어 슈퍼옥사이드 농도가 높아진다. 이것이, 관절 류머티즘, 베체트병 등의 조직 장애, 심근경색, 뇌졸중, 백내장, 기미, 주근깨, 주름, 당뇨병, 동맥경화, 어깨 결림, 냉한 체질, 피부 노화 등을 일으키는 원인의 하나라고 생각되고 있다.However, excessive production of the reactive oxygen species causes various diseases by attacking in vivo molecules constituting the in vivo membranes and tissues. Superoxide, which is produced in vivo and serves as a starting material for other active oxygen, is usually sequentially removed by the catalytic action of superoxide dismutase (SOD) contained in cells. However, when the production of superoxide is excessive, or when the action of SOD is low, the removal of superoxide becomes insufficient and the concentration of superoxide becomes high. This is considered to be one of the causes of causing tissue disorders such as rheumatoid arthritis and Behcet's disease, myocardial infarction, stroke, cataract, melasma, freckles, wrinkles, diabetes, arteriosclerosis, stiff shoulders, poor circulation, skin aging, and the like.
이들 중에서도, 피부는, 자외선 등의 환경 인자의 자극을 직접 받는 점에서, 슈퍼옥사이드가 생성되기 쉬운 기관이기 때문에, 슈퍼옥사이드 농도의 상승에 의해, 예를 들면, 콜라겐 등의 생체 조직을 분해, 변성 또는 가교하거나, 또 유지류(油脂類)를 산화하여 세포에 장애를 주는 과산화 지질을 생성하여, 피부의 주름을 형성하거나, 피부의 탄력성 저하 등의 노화, 염증, 피부의 색소 침착을 일으킨다는 문제가 있다(비특허문헌 1 참조). 따라서, 활성 산소나 생체내 라디칼의 생성을 저해·억제함으로써, 주름 형성이나 탄력 저하 등의 피부의 노화나, 관절 류머티즘이나 베체트병 등의 조직 장애, 심근경색, 뇌졸중, 백내장, 당뇨병, 동맥경화, 어깨 결림, 냉한 체질 등의 활성 산소가 관여하는 각종 장애를 예방, 치료 또는 개선할 수 있을 것으로 생각된다.Among these, the skin is an organ that is prone to produce superoxide because it is directly stimulated by environmental factors such as ultraviolet rays. Alternatively, crosslinking or oxidizing oils and fats to generate lipid peroxide that damages cells, forming wrinkles on the skin, reducing skin elasticity, aging, inflammation, and skin pigmentation There is (refer to Non-Patent Document 1). Therefore, by inhibiting and suppressing the generation of active oxygen and radicals in vivo, aging of the skin such as wrinkle formation and loss of elasticity, tissue disorders such as articular rheumatism and Behcet's disease, myocardial infarction, stroke, cataract, diabetes, arteriosclerosis, It is thought that various disorders involving active oxygen, such as stiff shoulders and poor circulation, can be prevented, treated or improved.
그래서, 활성 산소 소거 물질, 라디칼 소거 물질, 과산화수소 소거 물질 등을 안전성의 점에서 유리한 천연물로부터 얻는 시도가 이루어지고 있고, 십자화(Brassicaceae)과 브라시카(Brassica)속 식물의 추출물(특허문헌 1 참조), 돌나물(Crassulaceae)과 칼랑코에(Kalanchoe)속 식물의 추출물(특허문헌 2 참조), 목호접(Oroxylum indicum)의 추출물(특허문헌 3 참조), 스이오(Suioh)(Cleistocalyx operculatus)의 추출물(특허문헌 4 참조) 등에 유효성이 확인되고 있다.Thus, active oxygen scavenging material, radical scavenging substance, the hydrogen peroxide scavenging and is trying to get such material from the beneficial natural products in terms of safety is made, sipjahwa (Brassicaceae) and Brassica (Brassica) extracts of the genus plant (see Patent Document 1) , sedum ( Crassulaceae ) and Kalanchoe ( Kalanchoe ) Extracts of plants of the genus (see Patent Document 2), Oroxylum indicum extract (see Patent Document 3), Suioh ( Cleistocalyx operculatus ) Extracts (Patent Documents) 4), etc.), etc., are being verified for effectiveness.
또, 염증성 질환, 예를 들면, 접촉성 피부염(발진), 건선, 심상성 천포창, 그 외 피부 거칠어짐을 수반하는 각종 피부 질환 등의 원인 및 발증 기구는 다종다양하다. 그 원인으로서, 주로 히알루로니다아제의 활성의 항진에 의한 것이 알려져 있다.In addition, the causes and mechanisms of onset of inflammatory diseases such as contact dermatitis (rash), psoriasis, pemphigus vulgaris, and other various skin diseases accompanying rough skin are various. It is known that the cause is mainly due to the enhancement of the activity of hyaluronidase.
히알루로니다아제는, 히알루론산의 가수분해효소이다. 신체 조직에 대한 친화성을 유지하는 히알루론산염은, 함수계 중에서는 자외선, 산소 등에 의해 분해되고, 분자량의 저하에 수반하여 보수(保水) 효과도 감소한다. 또, 히알루론산은, 생체내에서 세포간 조직으로서 존재하고, 혈관 투과성에도 관여하고 있다. 또한, 히알루로니다아제는, 비만세포 중에 존재하는데, 그 활성화에 의해 일어나는 탈과립에 의해 유리(遊離)되어, 염증계 화학 매개체(Chemical mediator)로서 작용한다. 따라서, 히알루로니다아제의 활성을 저해함으로써, 보습의 강화 및 염증의 예방·경감이 기대된다.Hyaluronidase is a hydrolase of hyaluronic acid. Hyaluronate, which maintains affinity for body tissues, is decomposed by ultraviolet rays, oxygen, etc. in an aqueous system, and the water retention effect also decreases with a decrease in molecular weight. Moreover, hyaluronic acid exists as an intercellular tissue in a living body, and is also involved in vascular permeability. In addition, hyaluronidase, which exists in mast cells, is released by degranulation caused by its activation, and acts as an inflammatory chemical mediator. Therefore, by inhibiting the activity of hyaluronidase, enhancement of moisture retention and prevention/reduction of inflammation are expected.
이와 같은 히알루로니다아제 활성 저해 작용을 갖는 것으로서, 예를 들면, 오스벡키아(Osbeckia)속 식물의 추출물(특허문헌 5 참조), 등차(Ampelopsis grossedentata) 추출물(특허문헌 6 참조) 등이 알려져 있다.As what has such a hyaluronidase activity inhibitory action, for example, an extract of a plant of the genus Osbeckia (see Patent Document 5), Ampelopsis grossedentata extract (see Patent Document 6), etc. are known. .
또, 피부에 있어서 멜라닌은, 자외선으로부터 생체를 보호하는 역할도 수행하고 있지만, 과잉 생성이나 불균일한 축적은, 피부의 흑화나 기미의 원인이 된다. 일반적으로 멜라닌은, 색소세포 중에서 생합성되는 효소 티로시나아제의 작용에 의해, 티로신으로부터 도파, 도파로부터 도파퀴논으로 변화하고, 이어서 5,6-디히드록시인도페놀 등의 중간체를 거쳐 형성되는 것으로 여겨지고 있다. 따라서, 피부의 색흑(피부 색소 침착증), 기미, 주근깨 등을 예방, 치료 또는 개선하기 위해서는, 멜라닌의 산생에 관여하는 티로시나아제의 활성을 저해하는 것, 또는 멜라닌의 산생을 억제하는 것을 생각할 수 있다.In addition, melanin in the skin also plays a role of protecting the living body from ultraviolet rays, but excessive production or uneven accumulation causes darkening of the skin and blemishes. In general, melanin is changed from tyrosine to dopa and from dopa to dopaquinone by the action of the enzyme tyrosinase biosynthesized in pigment cells, and then it is believed to be formed through intermediates such as 5,6-dihydroxyindophenol. have. Therefore, in order to prevent, treat, or improve skin pigmentation (skin pigmentation), melasma, freckles, etc., inhibiting the activity of tyrosinase involved in the production of melanin or inhibiting the production of melanin can be considered. have.
종래, 피부 색소 침착증, 기미, 주근깨 등의 예방, 치료 또는 개선에는, 하이드로퀴논 등의 화학 합성품을 유효 성분으로 하는 미백제를 외용하는 처치가 행해져 왔다. 그러나, 하이드로퀴논 등의 화학 합성품은, 피부 자극, 알레르기 등의 부작용의 우려가 있다.Conventionally, for the prevention, treatment, or improvement of skin pigmentation, spots, freckles, and the like, external application of a whitening agent containing a chemically synthesized product such as hydroquinone as an active ingredient has been performed. However, chemical synthetic products, such as hydroquinone, may have side effects, such as skin irritation and allergy.
그래서, 안전성이 높은 천연 원료를 유효 성분으로 하는 미백제의 개발이 요망되고 있고, 티로시나아제 활성 저해 작용을 갖는 것으로는, 예를 들면, 등차(Ampelopsis grossedentata) 추출물(특허문헌 7 참조), 여뀌(Persicaria hydropiper) 추출물(특허문헌 8 참조) 등이 알려져 있다. 또, 멜라닌 산생 억제 작용을 갖는 것으로는, 예를 들면, 피마자(Ricinus communis) 뿌리부로부터의 추출물(특허문헌 9 참조), 사우스우레아(Saussurea)속에 속하는 식물로부터의 추출물(특허문헌 10 참조) 등이 알려져 있다.Therefore, the development of a whitening agent using a safe natural raw material as an active ingredient is desired, and as one having a tyrosinase activity inhibitory action, for example, Ampelopsis grossedentata extract (see Patent Document 7), Persicaria hydropiper ) extracts (see Patent Document 8) and the like are known. In addition, as those having a melanogenesis inhibitory action, for example, an extract from the root of a castor (Ricinus communis ) (see Patent Document 9), an extract from a plant belonging to the genus Saussurea (see Patent Document 10), etc. This is known
또, 피부의 표피 및 진피는, 표피세포, 섬유아세포 및 이들 세포의 밖에 있으며 피부 구조를 지지하는 콜라겐 등의 세포외 매트릭스에 의해 구성되어 있다. 젊은 피부에 있어서는, 이들 피부 조직의 상호작용이 항상성을 유지함으로써 수분 유지, 유연성, 탄력성 등이 확보되어, 피부는 외관적으로도 탱탱함이나 윤기가 있어 싱싱한 상태로 유지된다.In addition, the epidermis and dermis of the skin are composed of epidermal cells, fibroblasts, and extracellular matrix such as collagen that is outside these cells and supports the skin structure. In young skin, the interaction of these skin tissues maintains homeostasis to ensure moisture retention, flexibility, and elasticity, and the skin is maintained in a fresh state with firmness and luster in appearance.
그런데, 자외선(UV-A, UV-B)의 조사, 공기의 현저한 건조, 과도한 피부 세정 등의 어떤 종류의 외적 인자의 영향이 있거나, 가령(加齡)이 진행되거나 하면, 세포외 매트릭스의 주요 구성 성분인 콜라겐의 산생량이 감소하는 동시에 가교에 의한 탄력 저하를 일으킨다. 그 결과, 피부는 보습 기능이나 탄력성이 저하되고, 각질은 이상 박리를 시작하기 때문에, 피부는 탱탱함이나 윤기를 잃어, 거칠어짐, 주름 등의 노화 증상을 보이게 된다.However, if there is an influence of some kind of external factors such as irradiation of ultraviolet rays (UV-A, UV-B), marked drying of air, excessive skin washing, etc., or aging progresses, the main component of the extracellular matrix is The production amount of collagen, which is a component, decreases, and at the same time, it causes a decrease in elasticity due to crosslinking. As a result, the skin loses its moisturizing function and elasticity, and the keratin begins to peel abnormally, so that the skin loses its elasticity and luster, and shows signs of aging such as roughness and wrinkles.
이와 같이 피부의 노화에 수반되는 변화, 즉, 주름, 칙칙함, 부드러운 살결의 소실, 탄력성의 저하 등에는, 다양한 요인이 거론되고 있지만, 콜라겐, 히알루론산, 엘라스틴 등의 세포외 매트릭스 성분의 감소 및 변성이 관여하고 있다. 따라서, 콜라겐이나 히알루론산 등의 산생을 촉진함으로써, 피부의 노화를 방지 및 개선할 수 있을 것으로 생각된다.As described above, various factors have been discussed for the changes accompanying aging of the skin, that is, wrinkles, dullness, loss of soft texture, and decrease in elasticity, but reduction and denaturation of extracellular matrix components such as collagen, hyaluronic acid, and elastin this is involved Therefore, it is thought that by promoting the production of collagen and hyaluronic acid, it is possible to prevent and improve skin aging.
그래서, 콜라겐 산생 촉진 작용을 갖는 물질을 안전성의 점에서 유리한 천연물로부터 취득하자는 시도가 이루어지고 있다. 콜라겐 산생 촉진 작용을 갖는 것으로서, 예를 들면, 스타프루트(Averrhoa carambola) 잎 추출물(특허문헌 11 참조), 쿠스노하가시와(Mallotus philippinensis) 추출물(특허문헌 12 참조) 등이 확인되고 있다.Therefore, an attempt has been made to obtain a substance having a collagen production promoting action from an advantageous natural product in terms of safety. As those having a collagen production promoting action, for example, starfruit (Averrhoa carambola ) leaf extract (see Patent Document 11), Kusunohagashiwa ( Mallotus philippinensis ) extract (see Patent Document 12), etc. have been confirmed.
또, 천연 보습 인자(Natural Moisturizing Factors)의 주성분인 아미노산은, 케라토히알린 과립에서 유래하는 필라그린(filaggrin)이 각질층 내에서 분해되어 산생된다. 이 필라그린은, 각질층 바로 아래의 과립층에 존재하는 표피 케라티노사이트에서 프로필라그린으로서 발현한다. 그 후, 바로 인산화되어, 케라토히알린 과립에 축적되고, 탈인산, 가수분해를 거쳐 필라그린으로 분해되고, 각질층으로 이행하여, 케라틴 필라멘트의 응집 효율을 높여, 각질 세포의 내부 구축에 관여하는 것이 보고되고 있다(비특허문헌 2 참조).In addition, amino acids, which are the main components of Natural Moisturizing Factors, are produced by decomposing filaggrin derived from keratohyalin granules in the stratum corneum. This filaggrin is expressed as profilagrin in epidermal keratinocytes present in the granular layer just below the stratum corneum. Thereafter, it is immediately phosphorylated, accumulated in keratohyalin granules, dephosphorylated, hydrolyzed to filaggrin, and migrated to the stratum corneum to increase the aggregation efficiency of keratin filaments and participate in the internal construction of keratinocytes. It has been reported (refer to Non-Patent Document 2).
근래, 이 필라그린이 피부의 수분 유지에 매우 중요하고 또한 필요 불가결인 것, 및 건조 등의 조건에 의해 필라그린의 합성력이 저하되어, 각질층에서의 아미노산량이 저하되는 것이 보고되고 있다(비특허문헌 3 참조).Recently, it has been reported that filaggrin is very important and indispensable for maintaining moisture in the skin, and that the synthetic power of filaggrin decreases due to conditions such as drying, and the amount of amino acids in the stratum corneum decreases (Non-Patent Document) see 3).
따라서, 표피 케라티노사이트에 있어서 프로필라그린 mRNA의 발현 촉진을 통해, 필라그린의 합성을 촉진함으로써 각질층 내의 아미노산량을 증대시켜, 각질층의 수분 환경을 본질적으로 개선할 수 있는 것이 기대된다.Therefore, it is expected that the amount of amino acids in the stratum corneum can be increased by promoting the synthesis of filaggrin by promoting the expression of profilagrin mRNA in epidermal keratinocytes, thereby essentially improving the moisture environment of the stratum corneum.
천연물 유래의 필라그린 합성 촉진제로서, 예를 들면, 감초 추출물(특허문헌 13 참조), 천연 식물 중에 포함되는 플라바논 배당체로 알려진 리퀴리틴(특허문헌 14 참조), 또, 천연물 유래의 프로필라그린 및 필라그린 단백 산생 촉진제 중 적어도 어느 하나로서, 시트러스(Citrus)속에 속하는 식물 엑기스 또는 효모 엑기스(특허문헌 15 참조) 등이 제안되고 있다.As a natural product-derived filaggrin synthesis promoter, for example, licorice extract (see Patent Document 13), liqueuritin known as a flavanone glycoside contained in natural plants (see Patent Document 14), and natural product-derived profilagrin And as at least one of filaggrin protein production promoters, plant extracts or yeast extracts belonging to the genus Citrus (see Patent Document 15) have been proposed.
표피는, 각화 세포의 분열과 그 후의 분화에 의해, 항상 새로운 각질 세포를 만들어 냄으로써, 외계(外界)로부터의 여러 가지 자극으로부터 피부를 지키는 방어 기능을 갖는다. 특히, 각화 세포의 분화 과정에 있어서, 유극층으로부터 과립층에 걸쳐서 인볼루크린 등의 단백질이 발현하고, 효소 트랜스글루타미나아제-1의 작용에 의해 가교되어, 각화 세포를 둘러싸는 불용성의 세포막양(細胞膜樣; cell membrane-like) 구조체인 코니파이드 엔벨로프(Cornified Envelope)(이하 「CE」라고 약기한다)를 형성해, 각질 세포의 세포 골격 및 구조의 안정성에 기여한다.The epidermis has a protective function of protecting the skin from various stimuli from the outside world by always producing new keratinocytes through division of keratinocytes and subsequent differentiation. In particular, in the differentiation process of keratinocytes, proteins such as involucrin are expressed from the stratum corneum to the granular layer, crosslinked by the action of the enzyme transglutaminase-1, and the amount of insoluble cell membrane surrounding the keratinocytes (細胞膜樣; cell membrane-like) forms a cornified envelope (hereinafter abbreviated as "CE"), contributing to the stability of the cytoskeleton and structure of keratinocytes.
그러나, 다양한 요인으로 표피에서의 트랜스글루타미나아제-1의 산생량이 감소하면, CE 형성이 불완전한 상태가 되어, 각화가 정상적으로 행해지지 않게 된다. 그 결과, 각질 배리어 기능 및 피부의 보습 기능이 저하되어, 피부 거칠어짐이나 건조한 피부 등의 피부 증상을 보이게 되는 것으로 생각된다.However, when the amount of transglutaminase-1 production in the epidermis decreases due to various factors, CE formation becomes incomplete and keratinization is not performed normally. As a result, it is thought that the keratin barrier function and the moisturizing function of the skin fall, and skin symptoms, such as rough skin and dry skin, are shown.
이와 같은 점에서, 각화 세포의 표피에서의 트랜스글루타미나아제-1의 산생을 높여, CE의 형성을 촉진해 각화를 정상화함으로써, 건조나 자외선 등의 외부 자극에 수반되는 피부 배리어 기능의 저하를 억제하여, 피부의 건조나 피부 거칠어짐 등, 다양한 피부 증상을 예방·개선할 수 있을 것으로 생각된다.In this regard, by increasing the production of transglutaminase-1 in the epidermis of keratinocytes, promoting the formation of CE and normalizing the keratinization, the decrease in the skin barrier function accompanying external stimuli such as drying or ultraviolet rays can be prevented. It is thought that it is possible to prevent and improve various skin symptoms such as dry skin and rough skin.
천연물 유래의 트랜스글루타미나아제-1 산생 촉진제로서, 노니(Morinda citrifolia) 추출물(특허문헌 16 참조), 로얄젤리 추출물(특허문헌 17 참조) 등이 제안되어 있다.As a transglutaminase-1 production promoter derived from a natural product, a noni ( Morinda citrifolia ) extract (see Patent Document 16), a royal jelly extract (see Patent Document 17), and the like have been proposed.
또, 피부 세포에서는, 수분 채널로 알려진 아쿠아포린(aquaporin)이, 세포막 상에 발현하여, 세포간극의 수분을 비롯한 저분자 물질을 세포내로 흡수하는 역할을 담당하고 있는 것이 알려져 있다. 인간에게서는, 13종류의 아쿠아포린(AQP0∼AQP12)의 존재가 알려져 있다. 표피세포에 있어서는, 주로 아쿠아포린 3(Aquaporin 3; AQP3)이 존재하고 있고, 수분에 더하여, 수분 유지 작용에 관여하는 글리세롤이나 요소 등의 저분자 화합물도 흡수하는 역할을 담당하고 있는 것으로 생각되고 있다.Moreover, in skin cells, it is known that aquaporin, known as a water channel, is expressed on the cell membrane and plays a role in absorbing small-molecular substances including water in the intercellular space into the cell. In humans, the existence of 13 types of aquaporins (AQP0 to AQP12) is known. In epidermal cells, aquaporin 3 (AQP3) mainly exists, and in addition to water, it is thought that it plays a role in absorbing low molecular weight compounds such as glycerol and urea involved in water retention action.
그러나, AQP3는 가령과 함께 감소하고, 이것이 수분 유지 기능의 저하의 한 원인인 것이 시사되고 있기 때문에, AQP3의 발현을 촉진함으로써, 가령에 의한 수분 유지 기능이나 배리어 기능 등을 제어하는 것이 가능할 것으로 생각된다(비특허문헌 4 참조). AQP3 발현 촉진 작용을 갖는 것으로서, 예를 들면, 스타프루트의 잎 부분으로부터의 추출물(특허문헌 18 참조) 등이 알려져 있다.However, AQP3 decreases with age, and it is suggested that this is one cause of a decrease in water retention function. (refer to non-patent document 4). As what has AQP3 expression promoting action, the extract from the leaf part of starfruit (refer patent document 18) etc. is known, for example.
종래는, 피부의 배리어 기능은 각층(角層)만이 담당하고 있는 것으로 생각되고 있었지만, 표피 과립층에 존재하는 타이트 정션(Tight Junction)(이하 「TJ」라고 약기한다.)의 구성 단백질을 유전자 레벨에서 결손시키면 피부의 배리어 기능이 붕괴하는 점에서, 근래, TJ도 피부의 배리어 기능에 중요한 역할을 담당하는 것으로 생각되고 있다(비특허문헌 5 참조). TJ는, 인접하는 세포끼리를 밀착시킬 뿐만 아니라, 세포와 세포의 간극을 시일함으로써 물질의 투과를 제어하는 결합 장치이다. TJ를 구성하고 있는 것은 세포막 단백질의 클라우딘(claudin)이나 오클루딘(occludin)이며, 이들 단백질은 TJ 스트랜드의 골격을 구성해, TJ의 배리어 기능을 제어하는 것으로 생각되고 있다(비특허문헌 6 참조). 이상의 점으로부터, 클라우딘이나 오클루딘의 발현이 어떠한 원인으로 감소한 경우, TJ의 구조적인 파괴가 일어나, 물질의 투과 배리어로서 기능하지 않게 됨으로써, 건조한 피부, 거친 피부, 아토피성 피부염이나 각종 감염증 등의 피부 증상의 원인이 되는 것으로 예상된다.Conventionally, it was thought that only each layer was responsible for the barrier function of the skin, but the protein constituting the tight junction (hereinafter abbreviated as "TJ") existing in the granular layer of the epidermis is expressed at the gene level. Since the barrier function of the skin collapses when it is deficient, it is considered that TJ also plays an important role in the barrier function of the skin in recent years (refer nonpatent literature 5). The TJ is a bonding device that controls the permeation of a substance by not only bringing adjacent cells into close contact with each other but also sealing the gap between the cells. What constitutes TJ is claudin and occludin of a cell membrane protein, and these proteins constitute the backbone of a TJ strand, and are thought to control the barrier function of TJ (refer nonpatent literature 6). . From the above, when the expression of claudin or ocludin is reduced for some reason, the structural destruction of TJ occurs and it does not function as a permeation barrier of substances, so that dry skin, rough skin, skin such as atopic dermatitis and various infectious diseases It is expected to cause symptoms.
따라서, 표피에 있어서 클라우딘이나 오클루딘의 산생을 촉진하는 것에 의해 표피각화세포의 TJ 형성을 촉진함으로써, 피부의 배리어 기능 및 수분 유지 기능을 높여, 상기 피부 증상을 예방 또는 개선할 수 있을 것으로 생각된다. 이와 같은 생각에 의거하여, TJ 형성 촉진 작용을 통해 피부 배리어 기능을 향상시키는 것으로서, 천연물 유래의 황련(Coptis japonica) 추출물(특허문헌 19 참조), 등피(bitter orange peel) 추출물(특허문헌 20 참조) 등이 제안되어 있다.Therefore, by promoting the production of claudin and occludin in the epidermis, it is thought that by promoting the formation of TJ in epidermal keratinocytes, the barrier function and water retention function of the skin can be enhanced, and the above skin symptoms can be prevented or improved. . Based on this thought, as to improve the skin barrier function through the TJ formation promoting action, natural product-derived Coptis japonica extract (see Patent Document 19), bitter orange peel extract (see Patent Document 20) etc. have been proposed.
또 근래, 피부의 노화에 수반되는 변화를 유도하는 인자로서, 매트릭스 메탈로프로테이나아제(MMPs; Matrix metalloproteinases)의 관여가 지적되고 있다. 이 MMPs 중에서도, 매트릭스 메탈로프로테이나아제-1(MMP-1)은, 피부의 진피 세포외 매트릭스의 주요 구성 성분인 콜라겐을 분해하는 효소로서 알려져 있는데, 그 발현은 자외선의 조사에 의해 크게 증가해, 콜라겐의 감소·변성의 한 원인이 되어, 피부의 주름의 형성, 탄력성의 저하 등의 큰 요인이 되는 것으로 생각되고 있다. 따라서, MMP-1의 활성을 저해하는 것은, 피부의 노화 증상을 예방·개선하는 데 있어서 중요하다.Also, in recent years, as a factor inducing changes accompanying aging of the skin, the involvement of matrix metalloproteinases (MMPs; Matrix metalloproteinases) has been pointed out. Among these MMPs, matrix metalloproteinase-1 (MMP-1) is known as an enzyme that decomposes collagen, which is a major component of the dermal extracellular matrix of the skin, and its expression is greatly increased by irradiation with ultraviolet rays. , it is considered to be a cause of the decrease and degeneration of collagen, and become a major factor such as the formation of wrinkles of the skin and a decrease in elasticity. Therefore, inhibiting the activity of MMP-1 is important for preventing and improving skin aging symptoms.
이와 같은 MMP-1 저해 작용을 갖는 것으로는, 예를 들면, 히말라야 벚나무(Prunus cerasoides)로부터의 추출물(특허문헌 21 참조), 생강(Zingiberaceae)과 진기버 카스무나(Zingiber cassumunar) 또는 뽕나무(Moraceae)과 피쿠스 네리폴리아(Ficus neriifolia)로부터의 추출물(특허문헌 22 참조) 등이 알려져 있다.As having such an MMP-1 inhibitory action, for example, an extract from Himalayan cherry ( Prunus cerasoides ) (see Patent Document 21), ginger ( Zingiberaceae ) and ginger cassumuna ( Zingiber cassumunar ) or mulberry ( Moraceae ) Extracts from the family Ficus neriifolia (see Patent Document 22) and the like are known.
한편, 쑥(Artemisia)속 식물을 국균으로 발효시킨 발효액(특허문헌 23 참조)이나, 타임(Thymus vulgaris Linne)을 국균으로 발효시킨 발효액(특허문헌 24 참조)은 알려져 있기는 하지만, 이들 식물 발효액이, 항노화 작용, 항산화 작용, 항염증 작용, 미백 작용 등의 작용을 갖는 것은 알려져 있지 않다.On the other hand, although a fermentation broth obtained by fermenting a plant of the genus Artemisia with a Korean bacteria (see Patent Document 23) and a fermentation broth obtained by fermenting a thyme ( Thymus vulgaris Linne) with a Korean bacteria (see Patent Document 24) are known, these plant fermented liquids , anti-aging, antioxidant, anti-inflammatory, whitening, etc. are not known.
본 발명은, 종래의 상기 여러 문제를 해결하고, 이하의 목적을 달성하는 것을 과제로 한다.An object of the present invention is to solve the above problems and achieve the following objects.
즉, 본 발명은, 뛰어난 항노화 작용을 갖고, 또한 안전성이 높은 항노화제, 뛰어난 항산화 작용을 갖고, 또한 안전성이 높은 항산화제, 뛰어난 항염증 작용을 갖고, 또한 안전성이 높은 항염증제, 및 뛰어난 미백 작용을 갖고, 또한 안전성이 높은 미백제를 제공하는 것을 목적으로 한다.That is, the present invention provides an anti-aging agent with excellent anti-aging action and high safety, an anti-oxidation agent with high safety and excellent anti-inflammatory action, an anti-inflammatory agent with high safety and excellent whitening effect. An object of the present invention is to provide a whitening agent having an action and high safety.
또, 본 발명은, 뛰어난 항노화 작용, 항산화 작용, 항염증 작용 및 미백 작용으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종의 작용을 갖고, 또한 안전성이 높은 화장료를 제공하는 것을 목적으로 한다.Another object of the present invention is to provide a cosmetic which has at least one action selected from the group consisting of excellent anti-aging action, antioxidant action, anti-inflammatory action and whitening action, and is highly safe.
상기 과제를 해결하기 위한 수단으로는, 이하와 같다. 즉,As a means for solving the said subject, it is as follows. in other words,
＜1＞ 쑥속 식물(Artemisia plant)의 국균에 의한 발효액, 타임(Thymus vulgaris Linne)의 국균에 의한 발효액, 멜리사(Melissa officinalis Linne)의 국균에 의한 발효액, 및 수레국화(Centaurea cyanus Linne)의 국균에 의한 발효액 중 적어도 어느 하나의 발효액을 유효 성분으로서 함유하는 것을 특징으로 하는 항노화제이다.<1> Fermented broth by Korean bacteria of Artemisia plant, fermentation broth by Korean bacteria of thyme ( Thymus vulgaris Linne), fermentation broth by Korean bacteria of Melissa officinalis Linne, and Korean bacteria of cornflower ( Centaurea cyanus Linne) It is an anti-aging agent, characterized in that it contains at least any one of the fermentation broths as an active ingredient.
＜2＞ 쑥속 식물(Artemisia plant)의 국균에 의한 발효액, 타임(Thymus vulgaris Linne)의 국균에 의한 발효액, 멜리사(Melissa officinalis Linne)의 국균에 의한 발효액, 및 수레국화(Centaurea cyanus Linne)의 국균에 의한 발효액 중 적어도 어느 하나의 발효액을 유효 성분으로서 함유하는 것을 특징으로 하는 항산화제이다.<2> Fermented broth by Korean bacteria of Artemisia plant, fermentation broth by Korean bacteria of thyme ( Thymus vulgaris Linne), fermented broth by Korean bacteria of Melissa officinalis Linne, and Korean bacteria of cornflower ( Centaurea cyanus Linne) It is an antioxidant characterized in that it contains at least any one of the fermentation broths as an active ingredient.
＜3＞ 쑥속 식물(Artemisia plant)의 국균에 의한 발효액, 및 멜리사(Melissa officinalis Linne)의 국균에 의한 발효액 중 적어도 어느 하나의 발효액을 유효 성분으로서 함유하는 것을 특징으로 하는 항염증제이다.<3> It is an anti-inflammatory agent, characterized in that it contains as an active ingredient at least one of a fermented broth of Artemisia plant and a fermented broth of Melissa officinalis Linne as an active ingredient.
＜4＞ 쑥속 식물(Artemisia plant)의 국균에 의한 발효액, 멜리사(Melissa officinalis Linne)의 국균에 의한 발효액, 및 수레국화(Centaurea cyanus Linne)의 국균에 의한 발효액 중 적어도 어느 하나의 발효액을 유효 성분으로서 함유하는 것을 특징으로 하는 미백제이다.<4> At least one fermented broth of a fermented broth of Artemisia plant, a fermented broth of Melissa officinalis Linne, and a fermented broth of Centaurea cyanus Linne, is used as an active ingredient It is a whitening agent characterized in that it contains.
＜5＞ 상기 ＜1＞에 기재한 항노화제, 상기 ＜2＞에 기재한 항산화제, 상기 ＜3＞에 기재한 항염증제, 및 상기 ＜4＞에 기재한 미백제로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종을 함유하는 것을 특징으로 하는 화장료이다.<5> At least one selected from the group consisting of the anti-aging agent according to <1>, the antioxidant according to <2>, the anti-inflammatory agent according to <3>, and the whitening agent according to <4> It is a cosmetic characterized in that it contains a species.
본 발명에 의하면, 종래의 상기 여러 문제를 해결하고, 상기 목적을 달성할 수 있어, 뛰어난 항노화 작용을 갖고, 또한 안전성이 높은 항노화제, 뛰어난 항산화 작용을 갖고, 또한 안전성이 높은 항산화제, 뛰어난 항염증 작용을 갖고, 또한 안전성이 높은 항염증제, 및 뛰어난 미백 작용을 갖고, 또한 안전성이 높은 미백제를 제공할 수 있다.ADVANTAGE OF THE INVENTION According to this invention, it can solve the said various conventional problems, and can achieve the said objective, has an excellent anti-aging action, and also has a high safety|security anti-aging agent, has an excellent antioxidant action, and has a high safety|security antioxidant; It is possible to provide an anti-inflammatory agent having an excellent anti-inflammatory action and high safety, and a whitening agent having an excellent whitening action and high safety.
또, 본 발명은, 뛰어난 항노화 작용, 항산화 작용, 항염증 작용 및 미백 작용으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종의 작용을 갖고, 또한 안전성이 높은 화장료를 제공할 수 있다.Further, the present invention can provide a cosmetic which has at least one action selected from the group consisting of an excellent anti-aging action, an antioxidant action, an anti-inflammatory action and a whitening action, and is highly safe.
도 1a는, 제조예 1의 산쑥(Artemisia tridentata) 발효액 1의 접촉각 측정 시의 액적(液滴)의 일례를 나타내는 사진이다.
도 1b는, 제조예 2의 산쑥(Artemisia tridentata) 발효액 2의 접촉각 측정 시의 액적의 일례를 나타내는 사진이다.
도 1c는, 비교 제조예 1의 산쑥(Artemisia tridentata) 추출액의 접촉각 측정 시의 액적의 일례를 나타내는 사진이다.
도 2a는, 제조예 3의 사철쑥(Artemisia capillaris) 발효액 1의 접촉각 측정 시의 액적의 일례를 나타내는 사진이다.
도 2b는, 제조예 4의 사철쑥(Artemisia capillaris) 발효액 2의 접촉각 측정 시의 액적의 일례를 나타내는 사진이다.
도 2c는, 비교 제조예 2의 사철쑥(Artemisia capillaris) 추출액의 접촉각 측정 시의 액적의 일례를 나타내는 사진이다.
도 3a는, 제조예 5의 타임(Thymus vulgaris Linne) 발효액 1의 접촉각 측정 시의 액적의 일례를 나타내는 사진이다.
도 3b는, 제조예 6의 타임(Thymus vulgaris Linne) 발효액 2의 접촉각 측정 시의 액적의 일례를 나타내는 사진이다.
도 3c는, 비교 제조예 3의 타임(Thymus vulgaris Linne) 추출액의 접촉각 측정 시의 액적의 일례를 나타내는 사진이다.
도 4a는, 제조예 7의 멜리사(Melissa officinalis Linne) 발효액 1의 접촉각 측정 시의 액적의 일례를 나타내는 사진이다.
도 4b는, 제조예 8의 멜리사(Melissa officinalis Linne) 발효액 2의 접촉각 측정 시의 액적의 일례를 나타내는 사진이다.
도 4c는, 비교 제조예 4의 멜리사(Melissa officinalis Linne) 추출액의 접촉각 측정 시의 액적의 일례를 나타내는 사진이다.
도 5a는, 제조예 9의 수레국화(Centaurea cyanus Linne) 발효액 1의 접촉각 측정 시의 액적의 일례를 나타내는 사진이다.
도 5b는, 제조예 10의 수레국화(Centaurea cyanus Linne) 발효액 2의 접촉각 측정 시의 액적의 일례를 나타내는 사진이다.
도 5c는, 비교 제조예 5의 수레국화(Centaurea cyanus Linne) 추출액의 접촉각 측정 시의 액적의 일례를 나타내는 사진이다.1A is a photograph showing an example of droplets at the time of measuring the contact angle of Artemisia tridentata fermented liquid 1 of Production Example 1. FIG.
FIG. 1B is a photograph showing an example of a droplet at the time of measuring the contact angle of Artemisia tridentata fermented broth 2 of Production Example 2. FIG.
1C is a photograph showing an example of a droplet at the time of measuring the contact angle of the Artemisia tridentata extract of Comparative Preparation Example 1.
2A is a photograph showing an example of a droplet at the time of measuring the contact angle of Artemisia capillaris fermentation broth 1 of Preparation Example 3.
2B is a photograph showing an example of a droplet at the time of measuring the contact angle of Artemisia capillaris fermentation broth 2 of Preparation Example 4.
Figure 2c is a photograph showing an example of a droplet at the time of measuring the contact angle of the Artemisia capillaris extract of Comparative Preparation Example 2.
Figure 3a is a photograph showing an example of a droplet at the time of measuring the contact angle of the thyme ( Thymus vulgaris Linne) fermentation broth 1 of Preparation Example 5.
Figure 3b is a photograph showing an example of a droplet at the time of measuring the contact angle of the thyme ( Thymus vulgaris Linne) fermentation broth 2 of Preparation Example 6.
Figure 3c is a photograph showing an example of a droplet at the time of measuring the contact angle of the extract of Thymus vulgaris Linne of Comparative Preparation Example 3.
Figure 4a is a photograph showing an example of a droplet at the time of measuring the contact angle of Melissa officinalis Linne fermentation broth 1 of Preparation Example 7.
Figure 4b is a photograph showing an example of a droplet at the time of measuring the contact angle of Melissa (Melissa officinalis Linne) fermentation broth 2 of Preparation Example 8.
4C is a photograph showing an example of a droplet when measuring the contact angle of the Melissa officinalis Linne extract of Comparative Preparation Example 4;
5A is a photograph showing an example of a droplet at the time of measuring the contact angle of the cornflower ( Centaurea cyanus Linne) fermented broth 1 of Preparation Example 9;
5B is a photograph showing an example of a droplet at the time of measuring the contact angle of the cornflower ( Centaurea cyanus Linne) fermented broth 2 of Production Example 10. FIG.
Figure 5c is a photograph showing an example of a droplet at the time of measuring the contact angle of the cornflower ( Centaurea cyanus Linne) extract of Comparative Preparation Example 5.
(항노화제, 항산화제, 항염증제 및 미백제)(Anti-aging, antioxidant, anti-inflammatory and whitening agent)
＜항노화제＞<Anti-aging agent>
본 발명의 항노화제는, 쑥속 식물(Artemisia plant)의 국균에 의한 발효액(이하, 「쑥속 식물 발효액」이라고 칭하는 경우가 있다), 타임(Thymus vulgaris Linne)의 국균에 의한 발효액(이하, 「타임 발효액」이라고 칭하는 경우가 있다), 멜리사(Melissa officinalis Linne)의 국균에 의한 발효액(이하, 「멜리사 발효액」이라고 칭하는 경우가 있다), 및 수레국화(Centaurea cyanus Linne)의 국균에 의한 발효액(이하, 「수레국화 발효액」이라고 칭하는 경우가 있다) 중 적어도 어느 하나의 발효액을 유효 성분으로서 함유하고, 필요에 따라, 추가로 그 외의 성분을 함유한다.The anti-aging agent of the present invention is a fermentation broth (hereinafter, sometimes referred to as a "fermented broth of an Artemisia plant") by a domestic bacteria of Artemisia plant, a fermentation broth by a Korean bacteria of Thymus vulgaris Linne (hereinafter, "thyme"). Fermented broth”), a fermented broth of Melissa officinalis Linne (hereinafter, may be referred to as “melissa fermented broth”), and a fermented broth of cornflower (Centaurea cyanus Linne) (hereinafter, referred to as “fermented broth”) "Fermented cornflower broth" may be referred to) as an active ingredient, and other ingredients are further contained as necessary.
상기 쑥속 식물 발효액, 상기 타임 발효액, 상기 멜리사 발효액, 및 상기 수레국화 발효액은, 매트릭스 메탈로프로테이나아제-1(matrix metalloproteinase-1; MMP-1) 활성 저해 작용, 히알루론산 합성효소 3(hyaluronan synthase 3; HAS3) mRNA 발현 촉진 작용, Ⅰ형 콜라겐 산생 촉진 작용, 클라우딘-1 mRNA 발현 촉진 작용, 클라우딘-4 mRNA 발현 촉진 작용, 오클루딘 mRNA 발현 촉진 작용, 트랜스글루타미나아제-1(transglutaminase-1; TGM-1) mRNA 발현 촉진 작용, 아쿠아포린 3(Aquaporin 3; AQP3) mRNA 발현 촉진 작용, 및 필라그린 mRNA 발현 촉진 작용으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종의 작용을 갖고 있고, 이들 작용을 이용하여, 항노화제의 유효 성분으로서 사용할 수 있다.The mugwort plant fermentation broth, the thyme fermentation broth, the Melissa fermentation broth, and the cornflower fermentation broth have a matrix metalloproteinase-1 (MMP-1) activity inhibitory action, hyaluronan synthase 3 (hyaluronan synthase) 3; HAS3) mRNA expression promoting action, type I collagen production promoting action, claudin-1 mRNA expression promoting action, claudin-4 mRNA expression promoting action, occludin mRNA expression promoting action, transglutaminase-1 ; TGM-1) has at least one action selected from the group consisting of mRNA expression promoting action, Aquaporin 3 (AQP3) mRNA expression promoting action, and filaggrin mRNA expression promoting action, and using these actions Therefore, it can be used as an active ingredient of an anti-aging agent.
따라서, 상기 항노화제는, MMP-1 활성 저해 작용, 히알루론산 합성효소 3 mRNA 발현 촉진 작용, Ⅰ형 콜라겐 산생 촉진 작용, 클라우딘-1 mRNA 발현 촉진 작용, 클라우딘-4 mRNA 발현 촉진 작용, 오클루딘 mRNA 발현 촉진 작용, 트랜스글루타미나아제-1 mRNA 발현 촉진 작용, 아쿠아포린 3 mRNA 발현 촉진 작용, 및 필라그린 mRNA 발현 촉진 작용으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종의 작용을 갖는 것이다.Accordingly, the anti-aging agent has an MMP-1 activity inhibitory action, hyaluronic acid synthase 3 mRNA expression promoting action, type I collagen production promoting action, claudin-1 mRNA expression promoting action, claudin-4 mRNA expression promoting action, occludin It has at least one action selected from the group consisting of mRNA expression promoting action, transglutaminase-1 mRNA expression promoting action, aquaporin 3 mRNA expression promoting action, and filaggrin mRNA expression promoting action.
상기 쑥속 식물 발효액, 상기 타임 발효액, 상기 멜리사 발효액, 및 상기 수레국화 발효액이 갖는, MMP-1 활성 저해 작용, 히알루론산 합성효소 3 mRNA 발현 촉진 작용, Ⅰ형 콜라겐 산생 촉진 작용, 클라우딘-1 mRNA 발현 촉진 작용, 클라우딘-4 mRNA 발현 촉진 작용, 오클루딘 mRNA 발현 촉진 작용, 트랜스글루타미나아제-1 mRNA 발현 촉진 작용, 아쿠아포린 3 mRNA 발현 촉진 작용, 및 필라그린 mRNA 발현 촉진 작용 중 적어도 어느 하나를 발휘하는 물질의 상세에 대해서는 불분명하지만, 상기 쑥속 식물 발효액, 상기 타임 발효액, 상기 멜리사 발효액, 및 상기 수레국화 발효액이 이와 같은 뛰어난 작용을 갖고, 항노화제로서 유용하다는 것은, 종래에는 전혀 알려져 있지 않았으며, 본 발명자들에 의한 새로운 지견(知見)이다.MMP-1 activity inhibitory action, hyaluronic acid synthase 3 mRNA expression promoting action, type I collagen production promoting action, claudin-1 mRNA expression of the mugwort plant fermentation broth, the thyme fermentation broth, the Melissa fermentation broth, and the cornflower fermentation broth at least one of a facilitating action, a claudin-4 mRNA expression promotion action, an occludin mRNA expression promotion action, a transglutaminase-1 mRNA expression promotion action, aquaporin 3 mRNA expression promotion action, and a filaggrin mRNA expression promotion action Although the details of the substances exerted are unclear, it has not been known in the past that the mugwort fermented broth, the thyme fermented broth, the Melissa fermented broth, and the cornflower fermented broth have such an excellent action and are useful as anti-aging agents. and is a new knowledge by the present inventors.
＜항산화제＞<Antioxidant>
본 발명의 항산화제는, 쑥속 식물(Artemisia plant)의 국균에 의한 발효액(쑥속 식물 발효액), 타임(Thymus vulgaris Linne)의 국균에 의한 발효액(타임 발효액), 멜리사(Melissa officinalis Linne)의 국균에 의한 발효액(멜리사 발효액), 및 수레국화(Centaurea cyanus Linne)의 국균에 의한 발효액(수레국화 발효액) 중 적어도 어느 하나의 발효액을 유효 성분으로서 함유하고, 추가로 필요에 따라, 그 외의 성분을 함유하여 이루어진다.Antioxidants of the present invention, by Aspergillus in ssuksok plant fermented by Aspergillus in (Artemisia plant) (ssuksok plant the fermentation broth), the time the fermentation broth by Aspergillus in (Thymus vulgaris Linne) (the time the fermentation broth), Melissa (Melissa officinalis Linne) It is made by containing as an active ingredient at least one fermented broth (fermented solution of Melissa) and a fermented broth (fermented solution of cornflower) by the national bacteria of Cornflower (Centaurea cyanus Linne), and further, if necessary, other ingredients .
상기 쑥속 식물 발효액, 상기 타임 발효액, 상기 멜리사 발효액, 및 상기 수레국화 발효액은, 디페닐-p-피크릴히드라질(DPPH) 라디칼 소거 작용을 갖고 있고, 이 작용을 이용하여, 항산화제의 유효 성분으로서 사용할 수 있다.The fermented mugwort plant ferment, the thyme fermented broth, the Melissa fermented broth, and the fermented cornflower have a diphenyl-p-picrylhydrazyl (DPPH) radical scavenging action, and using this action, an active ingredient of an antioxidant can be used as
따라서, 상기 항산화제는, DPPH 라디칼 소거 작용을 갖는 것이다.Therefore, the antioxidant has a DPPH radical scavenging action.
상기 쑥속 식물 발효액, 상기 타임 발효액, 상기 멜리사 발효액, 및 상기 수레국화 발효액이 갖는, DPPH 라디칼 소거 작용을 발휘하는 물질의 상세에 대해서는 불분명하지만, 상기 쑥속 식물 발효액, 상기 타임 발효액, 상기 멜리사 발효액, 및 상기 수레국화 발효액이 이와 같은 뛰어난 작용을 갖고, 항산화제로서 유용하다는 것은, 종래에는 전혀 알려져 있지 않았으며, 본 발명자들에 의한 새로운 지견이다.Although the details of the fermented mugwort plant, the thyme fermented broth, the melissa fermented broth, and the fermented cornflower, the details of the substances exhibiting a DPPH radical scavenging action are unclear, the mugwort fermented broth, the thyme fermented broth, the melissa fermented broth, and It has not been known at all in the past that the fermented cornflower broth has such an excellent action and is useful as an antioxidant, and it is a new finding by the present inventors.
＜항염증제＞<Anti-inflammatory agent>
본 발명의 항염증제는, 쑥속 식물(Artemisia plant)의 국균에 의한 발효액(쑥속 식물 발효액) 및 멜리사(Melissa officinalis Linne)의 국균에 의한 발효액(멜리사 발효액) 중 적어도 어느 하나의 발효액을 유효 성분으로서 함유하고, 추가로 필요에 따라, 그 외의 성분을 함유하여 이루어진다.The anti-inflammatory agent of the present invention contains, as an active ingredient, at least one of the fermentation broth ( fermented broth of the Artemisia plant) and the fermentation broth (fermented broth of Melissa) by the national bacteria of the Artemisia plant (Melissa officinalis Linne). , In addition, if necessary, it is made by containing other components.
상기 쑥속 식물 발효액 및 상기 멜리사 발효액은, 히알루로니다아제 활성 저해 작용을 갖고 있고, 이 작용을 이용하여, 항염증제의 유효 성분으로서 사용할 수 있다.The said mugwort fermented broth and the said melissa fermented liquid have a hyaluronidase activity inhibitory action, and can use this action as an active ingredient of an anti-inflammatory agent.
따라서, 상기 항염증제는, 히알루로니다아제 활성 저해 작용을 갖는 것이다.Accordingly, the anti-inflammatory agent has a hyaluronidase activity inhibitory action.
상기 쑥속 식물 발효액 및 상기 멜리사 발효액이 갖는 히알루로니다아제 활성 저해 작용을 발휘하는 물질의 상세에 대해서는 불분명하지만, 상기 쑥속 식물 발효액 및 상기 멜리사 발효액이 이와 같은 뛰어난 작용을 갖고, 항염증제로서 유용하다는 것은, 종래에는 전혀 알려져 있지 않았으며, 본 발명자들에 의한 새로운 지견이다.Although the details of the substances exhibiting the hyaluronidase activity inhibitory action of the mugwort fermented broth and the fermented Melissa are unclear, It was not known at all in the past, and it is new knowledge by the present inventors.
＜미백제＞<Whitening agent>
본 발명의 미백제는, 쑥속(Artemisia plant) 식물의 국균에 의한 발효액(쑥속 식물 발효액), 멜리사(Melissa officinalis Linne)의 국균에 의한 발효액(멜리사 발효액), 및 수레국화(Centaurea cyanus Linne)의 국균에 의한 발효액(수레국화 발효액) 중 적어도 어느 하나의 발효액을 유효 성분으로서 함유하고, 추가로 필요에 따라, 그 외의 성분을 함유하여 이루어진다.The whitening agent of the present invention is a fermented broth (fermented broth of a mugwort plant) of Artemisia plant plants, a fermentation broth of Melissa officinalis Linne (Melissa fermented broth), and a broth of cornflower ( Centaurea cyanus Linne). The fermented broth (fermented cornflower) according to the present invention contains at least any one of the fermented broths as an active ingredient, and further contains other ingredients as necessary.
상기 쑥속 식물 발효액, 멜리사 발효액, 및 상기 수레국화 발효액은, 티로시나아제 활성 저해 작용 및 멜라닌 산생 억제 작용 중 적어도 1종의 작용을 갖고 있고, 이 작용을 이용하여, 미백제의 유효 성분으로서 사용할 수 있다.The fermented mugwort plant fermented broth, the Melissa fermented broth, and the fermented cornflower broth have at least one action of tyrosinase activity inhibitory action and melanogenesis inhibitory action, and can be used as an active ingredient in a whitening agent by using this action. .
따라서, 상기 미백제는, 티로시나아제 활성 저해 작용 및 멜라닌 산생 억제 작용 중 적어도 1종의 작용을 갖는 것이다.Therefore, the above-mentioned whitening agent has at least one action of inhibiting tyrosinase activity and inhibiting melanogenesis.
상기 쑥속 식물 발효액, 상기 멜리사 발효액, 및 상기 수레국화 발효액이 갖는 티로시나아제 활성 저해 작용 및 멜라닌 산생 억제 작용 중 적어도 어느 하나를 발휘하는 물질의 상세에 대해서는 불분명하지만, 상기 쑥속 식물 발효액, 상기 멜리사 발효액, 및 상기 수레국화 발효액이 이와 같은 뛰어난 작용을 갖고, 미백제로서 유용하다는 것은, 종래에는 전혀 알려져 있지 않았으며, 본 발명자들에 의한 새로운 지견이다.Although the details of the substance exhibiting at least one of the tyrosinase activity inhibitory action and the melanogenesis inhibitory action of the mugwort fermented broth, the melissa fermented broth, and the cornflower fermented broth are unclear, the Artemisia fermented broth and the Melissa fermented broth , and that the fermented cornflower broth has such an excellent action and is useful as a whitening agent has not been known at all in the past, and is a new knowledge by the present inventors.
＜＜쑥속 식물(Artemisia plant) 발효액＞＞<< Artemisia plant fermented liquid>>
상기 쑥속 식물 발효액은, 쑥속에 속하는 식물(이하, 「쑥속 식물」이라고 칭하는 경우가 있다)의 국균에 의한 발효액이다.The said mugwort plant fermented liquid is a fermented liquid by the national bacteria of the plant belonging to the mugwort genus (Hereinafter, it may call "the mugwort plant").
-쑥속 식물--Mugwort plant-
상기 발효 원료로서 사용하는 상기 쑥속 식물은, 국화과(Compositae) 쑥속(Artemisia)에 속하는 다년생 초본이며, 고대부터 식품이나 약용의 원료로서 이용되고 있다. 홋카이도, 혼슈, 시코쿠, 규슈 등의 일본 국내에서 널리 자생 또는 재배되고 있고, 이들 지역에서 용이하게 입수 가능하다.The mugwort plant used as the fermentation raw material is a perennial herb belonging to the Compositae family Artemisia , and has been used as a raw material for food or medicine since ancient times. It is widely wild or cultivated in Japan, such as Hokkaido, Honshu, Shikoku, and Kyushu, and is easily available in these regions.
상기 쑥속 식물의 종류로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면, 산쑥(Artemisia montana(Nakai) Pamp.), 사철쑥(Artemisia capillaris Thunbergii), 약쑥(Artemisia princeps Pampan.), 제비쑥(Artemisia japonica Thunb.), 쓴쑥(Artemisia absinthium L.), 흰꽃 쑥(Artemisia lactiflora Wall.), 산토닌쑥(Artemisia maritima L.), 비쑥(Artemisia scoparia Waldst.et kit.) 등을 들 수 있다. 이들은, 1종 단독으로 사용해도 되고, 2종 이상을 병용해도 된다.A type of the ssuksok plant is not particularly limited and can be appropriately selected according to the purpose, for example, sanssuk (Artemisia montana (Nakai) Pamp. ), Sacheolssuk (Artemisia capillaris Thunbergii), wormwood (Artemisia princeps Pampan.) , Artemisia japonica Thunb., Artemisia absinthium L., White flower mugwort ( Artemisia lactiflora Wall.), Santonin mugwort ( Artemisia maritima L.), and Artemisia scoparia Waldst.et kit. . These may be used individually by 1 type, and may use 2 or more types together.
상기 쑥속 식물의 입수 방법으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 자연계에서 채취해도 되고, 시판품을 이용해도 된다.There is no restriction|limiting in particular as a method of obtaining the said mugwort plant, According to the objective, it can select suitably, You may collect|collect from nature, and a commercial item may be used.
상기 발효 원료로서 사용하는 상기 쑥속 식물의 사용 부위로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면, 꽃, 꽃봉오리, 과실, 과피, 종자, 종피, 줄기, 잎, 가지, 지엽 등의 지상부; 뿌리, 뿌리줄기 등의 지하부 등을 들 수 있다. 이들은, 1종 단독으로 사용해도 되고, 2종 이상을 병용해도 된다. 이들 중에서도, 상기 쑥속 식물의 사용 부위로는, 지상부가 바람직하다.The site of use of the mugwort plant used as the fermentation raw material is not particularly limited and may be appropriately selected depending on the purpose, for example, flowers, buds, fruits, pericarp, seeds, seed coats, stems, leaves, branches. , above-ground parts such as branches; underground parts, such as a root and a rhizome, etc. are mentioned. These may be used individually by 1 type, and may use 2 or more types together. Among these, an above-ground part is preferable as a use site|part of the said mugwort plant.
상기 발효 원료로서 사용하는 상기 쑥속 식물의 크기로는, 상기 국균의 배양이 가능한 크기이면, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면, 채취한 그대로의 크기, 절단한 원하는 크기, 미분(파우더)화된 크기 등을 들 수 있다.The size of the mugwort plant used as the fermentation raw material is not particularly limited, as long as it is a size capable of culturing the Kukbacterium, and may be appropriately selected according to the purpose, for example, the size as it is collected, the desired size cut , a finely divided (powdered) size, and the like.
상기 발효 원료로서 사용하는 상기 쑥속 식물의 상태로는, 상기 국균의 배양이 가능한 상태이면, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면, 채취한 그대로의 상태, 건조한 상태, 분쇄한 상태, 착즙 상태, 추출물의 상태 등을 들 수 있다. 이들 중에서도, 상기 국균이 작용하기 쉬운 점에서, 채취한 그대로의 상태, 분쇄한 상태, 착즙 상태, 추출물의 상태가 바람직하고, 채취한 그대로의 상태, 분쇄한 상태가 보다 바람직하다.The state of the mugwort plant used as the fermentation raw material is not particularly limited, as long as it is a state in which the culture of the Mycobacterium is possible, and it can be appropriately selected according to the purpose, for example, as it is collected, dried, crushed One state, the juice state, the state of the extract, etc. are mentioned. Among these, from the viewpoint of easy action of the above-mentioned bacteria, the state as collected, pulverized, juiced, and extract are preferable, and the as-collected state and pulverized state are more preferable.
상기 쑥속 식물을 건조한 상태로 하는 방법으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면, 천일(天日)로 건조하는 방법, 통상 사용되는 건조기를 이용하여 건조하는 방법 등을 들 수 있다.There is no particular limitation on the method for drying the mugwort plant, and it can be appropriately selected depending on the purpose, for example, a method of drying in the sun, a method of drying using a commonly used dryer, etc. can be heard
상기 쑥속 식물을 상기 분쇄한 상태로 하는 방법으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면, 믹서, 슈가밀(sugar mill), 파워밀(power mill), 제트밀(jet mill), 충격식 분쇄기 등에 의해 분쇄하는 방법 등을 들 수 있다.There is no particular limitation on the method of bringing the mugwort plant into the pulverized state, and it may be appropriately selected according to the purpose, for example, a mixer, a sugar mill, a power mill, a jet mill ( jet mill), a method of pulverizing with an impact pulverizer, and the like.
상기 쑥속 식물을 상기 착즙 상태로 하는 방법으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면 압착 등을 들 수 있다.There is no restriction|limiting in particular as a method of making the said mugwort plant into the said juice state, According to the objective, it can select suitably, For example, compression etc. are mentioned.
상기 쑥속 식물을 상기 추출물의 상태로 하는 방법으로는, 특별히 제한은 없고, 식물의 추출에 일반적으로 이용되는 방법을, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있다.There is no restriction|limiting in particular as a method of making the said mugwort plant into the state of the said extract, A method generally used for extraction of a plant can be suitably selected according to the objective.
상기 발효 원료로서 사용하는 상기 쑥속 식물은, 상기 국균의 접종 전에 멸균되는 것이 바람직하다. 상기 쑥속 식물을 멸균하는 수단으로는, 특별히 제한은 없고, 공지의 방법 중에서 적절히 선택할 수 있다.It is preferable that the mugwort plant used as the fermentation raw material is sterilized before the inoculation of the Kukbacterium. There is no restriction|limiting in particular as a means for sterilizing the said mugwort plant, It can select suitably from well-known methods.
-국균--Kukkyun-
상기 쑥속 식물을 발효시키는 상기 국균으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면, 아스페르길루스 오리제(Aspergillus oryzae), 아스페르길루스 소야(Aspergillus sojae) 등의 황국균; 아스페르길루스 루추엔시스(Aspergillus luchuensis) 등의 흑국균; 아스페르길루스 가와우치(Aspergillus kawauchii) 등의 백국균; 이들의 변이주 등을 들 수 있다. 이들은, 1종 단독으로 사용해도 되고, 2종 이상을 병용해도 된다. 이들 중에서도, 상기 국균으로는, 아스페르길루스 오리제(Aspergillus oryzae)가, 항노화 작용, 항산화 작용, 항염증 작용 및 미백 작용 중 적어도 어느 하나의 작용이 뛰어난 점에서 바람직하다.There is no particular limitation on the bacterium for fermenting the mugwort plant, and it can be appropriately selected according to the purpose, for example, Aspergillus oryzae , Aspergillus sojae , etc. Hwang, Kook-Gyun; Black yeast bacteria such as Aspergillus luchuensis; Aspergillus kawauchii ( Aspergillus kawauchii ) and other white chrysanthemums; These mutants, etc. are mentioned. These may be used individually by 1 type, and may use 2 or more types together. Among these, Aspergillus oryzae is preferred as the above-mentioned national bacteria in that it is excellent in at least any one of an anti-aging action, an antioxidant action, an anti-inflammatory action and a whitening action.
상기 국균의 입수 방법으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 자연계에서 채취해도 되고, 시판품을 이용해도 된다. 또, 상기 국균으로서, 쌀 등을 원료로 한 종국(種麴)을 사용해도 되고, 후술하는 쑥속 식물 종국을 사용해도 되며, 배지(한천 배지, 액체 배지 등)에서 배양한 국균을 사용해도 된다. 이들 중에서도, 항노화 작용, 항산화 작용, 항염증 작용 및 미백 작용 중 적어도 어느 하나의 작용이 뛰어난 점에서, 상기 쑥속 식물 종국을 이용하는 것이 바람직하다.There is no restriction|limiting in particular as a method of obtaining the said national bacteria, According to the objective, it can select suitably, You may collect|collect from nature, or a commercial item may be used. In addition, as the above-mentioned domestic bacteria, a seed broth made from rice or the like as a raw material may be used, a seed stock of a plant of the genus Mugwort described later may be used, or a broth cultured in a medium (agar medium, liquid medium, etc.) may be used. Among these, it is preferable to use the seed of the genus Artemisia from the viewpoint of excellent at least any one of an anti-aging action, an antioxidant action, an anti-inflammatory action, and a whitening action.
상기 발효 원료로서 사용하는 상기 쑥속 식물에 대한, 상기 국균의 접종량으로는, 상기 쑥속 식물을 발효할 수 있는 양인 한, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있지만, 상기 발효 원료가 액체 상태인 경우에는, 1×103개/mL∼1×108개/mL가 바람직하고, 상기 발효 원료가 고체 상태인 경우에는, 1×103개/g∼1×108개/g이 바람직하다.The inoculation amount of the Mugwort plant used as the fermentation raw material is not particularly limited as long as it is an amount capable of fermenting the mugwort plant, and it can be appropriately selected depending on the purpose, but the fermentation raw material is in a liquid state. In this case, 1×10 3 pieces/ mL to 1×10 8 pieces/mL is preferable, and when the fermentation raw material is in a solid state, 1×10 3 pieces/g to 1×10 8 pieces/g is preferable .
상기 쑥속 식물에 상기 국균을 접종할 때, 물을 첨가하는 것이 바람직하다. 상기 물의 첨가량으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있지만, 상기 쑥속 식물 100 질량부에 대해, 500 질량부∼5,000 질량부 첨가하는 것이 바람직하고, 1,000 질량부∼4,000 질량부 첨가하는 것이 보다 바람직하며, 1,500 질량부∼3,000 질량부 첨가하는 것이 특히 바람직하다.It is preferable to add water when inoculating the Kukbacterium into the mugwort plant. The amount of water to be added is not particularly limited and can be appropriately selected depending on the purpose. It is preferable to add 500 parts by mass to 5,000 parts by mass, and to add 1,000 parts by mass to 4,000 parts by mass relative to 100 parts by mass of the mugwort plant. It is more preferable, and it is especially preferable to add 1,500 mass parts - 3,000 mass parts.
상기 발효(배양)의 온도로는, 상기 국균에 의한 발효를 할 수 있는 온도의 범위 내이면, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있지만, 20℃∼40℃가 바람직하고, 25℃∼35℃가 보다 바람직하다. 상기 발효의 온도가 20℃ 미만이면, 상기 쑥속 식물을 충분히 발효시키지 못하여, 항노화 작용, 항산화 작용, 항염증 작용 및 미백 작용 중 적어도 어느 하나의 작용이 불충분해지는 경우가 있다. 또한, 50℃를 넘으면, 상기 국균이 증식할 수 없는 경우가 있다.The temperature of the fermentation (cultivation) is not particularly limited as long as it is within the range of the temperature capable of fermenting by the above-mentioned domestic bacteria, and can be appropriately selected depending on the purpose, but 20°C to 40°C is preferable, and 25°C to 35 degreeC is more preferable. When the temperature of the fermentation is less than 20° C., the Mugwort plant cannot be sufficiently fermented, and at least one of anti-aging action, antioxidant action, anti-inflammatory action and whitening action may be insufficient. Moreover, when it exceeds 50 degreeC, the said national bacteria may not be able to proliferate.
상기 발효(배양)의 시간으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있지만, 10시간∼40시간이 바람직하고, 20시간∼30시간이 보다 바람직하다. 상기 발효의 시간이 10시간 미만이면, 상기 쑥속 식물을 충분히 발효시키지 못하여, 항노화 작용, 항산화 작용, 항염증 작용 및 미백 작용 중 적어도 어느 하나의 작용이 불충분해지는 경우가 있다.There is no restriction|limiting in particular as time of the said fermentation (cultivation), Although it can select suitably according to the objective, 10 hours - 40 hours are preferable, and 20 hours - 30 hours are more preferable. If the fermentation time is less than 10 hours, the mugwort plant cannot be sufficiently fermented, and at least one of anti-aging action, antioxidant action, anti-inflammatory action and whitening action may be insufficient.
상기 발효(배양)를 정지하는 방법으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면 가열하는 방법 등을 들 수 있다.There is no restriction|limiting in particular as a method of stopping the said fermentation (cultivation), According to the objective, it can select suitably, For example, the method of heating etc. are mentioned.
상기 발효를 정지하기 위한 가열 온도로는, 상기 국균을 생육할 수 없는 온도이면, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있지만, 50℃ 이상이 바람직하고, 70℃ 이상이 보다 바람직하며, 100℃∼130℃가 특히 바람직하다. 상기 가열 온도가 50℃ 미만이면, 상기 발효를 정지할 수 없는 경우가 있고, 130℃를 넘으면, 항노화 작용, 항산화 작용, 항염증 작용 및 미백 작용 중 적어도 어느 하나의 작용이 불충분해지는 경우가 있다.The heating temperature for stopping the fermentation is not particularly limited as long as it is a temperature at which the Korean bacteria cannot grow, and may be appropriately selected depending on the purpose. C to 130° C. are particularly preferred. If the heating temperature is less than 50 ° C., the fermentation may not be stopped. If it exceeds 130 ° C., at least any one of anti-aging action, antioxidant action, anti-inflammatory action and whitening action may become insufficient. .
상기 발효를 정지하기 위한 가열 시간으로는, 상기 국균을 생육할 수 없는 상태로 할 수 있으면, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있지만, 5분간 이상이 바람직하고, 10분간∼20분간이 보다 바람직하다. 상기 가열 시간이 5분간 미만이면, 상기 발효를 정지할 수 없는 경우가 있고, 20분간을 넘으면, 항노화 작용, 항산화 작용, 항염증 작용 및 미백 작용 중 적어도 어느 하나의 작용이 불충분해지는 경우가 있다.The heating time for stopping the fermentation is not particularly limited, as long as it can be made in a state in which the bacterium cannot be grown, and it can be appropriately selected depending on the purpose. more preferably. If the heating time is less than 5 minutes, the fermentation may not be stopped, and if it exceeds 20 minutes, at least any one of anti-aging action, antioxidant action, anti-inflammatory action and whitening action may become insufficient. .
또한, 상기 발효를 정지한 후의 상기 쑥속 식물 발효액은, 냉각되는 것이 바람직하다. 냉각하는 방법으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면, 상온, 냉장고 등에 정치(靜置)하는 방법 등을 들 수 있다.Moreover, it is preferable that the said mugwort plant fermentation broth after stopping the said fermentation is cooled. There is no restriction|limiting in particular as a method of cooling, According to the objective, it can select suitably, For example, the method of standing still at normal temperature, a refrigerator, etc. are mentioned.
상기 쑥속 식물의 상기 국균에 의한 발효를 행하는 횟수로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 1회여도 되고, 복수회여도 된다.There is no restriction|limiting in particular as the frequency|count of performing the fermentation by the said national bacteria of the said mugwort plant, According to the objective, it can select suitably, It may be once or it may be multiple times.
상기 발효를 복수회 행하는 경우, 상기 국균은, 첫 회만 접종해도 되고, 수회(數回)만 접종해도 되며, 모든 회에서 접종해도 되지만, 첫 회에만 접종하는 것이 바람직하다.In the case where the fermentation is performed multiple times, the Kukbacterium may be inoculated only the first time, may be inoculated only several times, or may be inoculated at all times, but it is preferable to inoculate only the first time.
상기 발효를 복수회 행하는 경우, 발효 온도 및 발효 시간은, 각각 달라도 되고, 동일해도 된다.When performing the said fermentation in multiple times, fermentation temperature and fermentation time may differ, respectively, and may be the same.
--쑥속 식물 종국----Mugwort plant end--
상기 쑥속 식물 종국은, 상기 쑥속 식물을 종국 원료로서 사용하고, 해당 종국 원료에 국균을 접종하여, 해당 쑥속 식물에 충분한 양의 포자를 착생시킨 것이다. 이것을 상기 발효에 있어서 사용함으로써, 피부 발림성이 뛰어난 쑥속 식물 발효액을 보다 효율 좋고 용이하게 얻을 수 있는 점에서 유리하다.The seed of the mugwort plant is obtained by using the plant of the genus Artemisia as a seed raw material, inoculating the seed raw material with a kojimycobacterium, and engrafting a sufficient amount of spores on the plant of the genus mugwort. By using this in the above fermentation, it is advantageous in that a fermented Mugwort plant fermented broth having excellent spreadability on the skin can be obtained more efficiently and easily.
상기 종국 원료로서 사용하는 상기 쑥속 식물은, 상기 -쑥속 식물-에서 기재한 것과 마찬가지의 것을 사용할 수 있고, 상기 쑥속 식물의 사용 부위, 크기, 상태 등의 양태에 대해서도 마찬가지이다.The mugwort plant used as the final raw material may be the same as that described in the above -Mugwort plant-, and the same applies to aspects such as the site of use, size, and state of the mugwort plant.
상기 쑥속 식물 종국의 제작에 있어서 사용하는 상기 국균으로는, 상기 -국균-에서 기재한 것과 마찬가지의 것을 사용할 수 있다.As the above-mentioned domestic bacteria used in the production of the seed stock of the genus Artemisia, the same ones as those described in the above -Kukbacterium- can be used.
상기 종국 원료로서 사용하는 상기 쑥속 식물에 대한, 상기 국균의 접종량으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있지만, 상기 쑥속 식물 100 질량부에 대해, 멸균수에 현탁한 국균(1×103개/mL∼1×108개/mL)을 5 질량부∼100 질량부 접종하는 것이 바람직하고, 10 질량부∼50 질량부 접종하는 것이 보다 바람직하며, 20 질량부∼30 질량부 접종하는 것이 특히 바람직하다. 상기 쑥속 식물 100 질량부에 대한 상기 국균의 접종량이 5 질량부 미만이면, 상기 쑥속 식물에 충분한 양의 포자를 착생할 수 없는 경우가 있고, 100 질량부를 넘으면, 수분 과다로 이상 번식하는 경우가 있다.There is no particular limitation on the amount of inoculum inoculation of the Mugwort plant used as the seed material, and it can be appropriately selected depending on the purpose. It is preferable to inoculate 5 mass parts - 100 mass parts of 10 3 pieces/mL - 1x10 8 pieces/mL), It is more preferable to inoculate 10 mass parts - 50 mass parts, 20 mass parts - 30 mass parts inoculation It is particularly preferable to If the inoculation amount of the bacterium relative to 100 parts by mass of the mugwort plant is less than 5 parts by mass, there may be cases where a sufficient amount of spores cannot be epigenetized on the mugwort plant, and when it exceeds 100 parts by mass, abnormal reproduction may occur due to excessive moisture. .
상기 종국 원료로서 사용하는 상기 쑥속 식물에 상기 국균을 접종할 때, 물을 첨가하는 것이 바람직하다. 상기 물의 첨가량으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있지만, 상기 쑥속 식물 100 질량부에 대해, 10 질량부∼250 질량부 첨가하는 것이 바람직하고, 20 질량부∼200 질량부 첨가하는 것이 보다 바람직하며, 30 질량부∼150 질량부 첨가하는 것이 특히 바람직하다. 상기 쑥속 식물 100 질량부에 대한 상기 물의 첨가량이 10 질량부 미만이면, 상기 쑥속 식물에 충분한 양의 포자를 착생할 수 없는 경우가 있다.It is preferable to add water when inoculating the Kukki bacteria into the mugwort plant used as the seed material. The amount of water added is not particularly limited and can be appropriately selected depending on the purpose, but it is preferable to add 10 parts by mass to 250 parts by mass, and to add 20 parts by mass to 200 parts by mass relative to 100 parts by mass of the mugwort plant. It is more preferable, and it is especially preferable to add 30 mass parts - 150 mass parts. When the amount of the water added to 100 parts by mass of the mugwort plant is less than 10 parts by mass, a sufficient amount of spores may not be able to be epigenetized on the mugwort plant.
상기 배양의 온도로는, 상기 국균을 생육할 수 있는 온도의 범위 내이면, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있지만, 20℃∼40℃가 바람직하고, 25℃∼35℃가 보다 바람직하다. 상기 배양의 온도가 20℃ 미만이면, 상기 쑥속 식물에 충분한 양의 포자를 착생할 수 없는 경우가 있다. 또한, 50℃를 넘으면, 상기 국균이 증식할 수 없는 경우가 있다.The temperature of the culture is not particularly limited as long as it is within the range of the temperature at which the Kukbacterium can grow, and can be appropriately selected depending on the purpose. do. If the temperature of the culture is less than 20° C., there may be cases in which a sufficient amount of spores cannot be epigenetized on the mugwort plant. Moreover, when it exceeds 50 degreeC, the said national bacteria may not be able to proliferate.
상기 배양의 시간으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있지만, 80시간∼210시간이 바람직하고, 100시간∼190시간이 보다 바람직하며, 120시간∼170시간이 특히 바람직하다. 상기 배양의 시간이 80시간 미만이면, 상기 쑥속 식물에 충분한 양의 포자를 착생할 수 없는 경우가 있고, 210시간을 넘으면, 포자의 발아율이 떨어지는 경우가 있다.There is no restriction|limiting in particular as said culture|cultivation time, Although it can select suitably according to the objective, 80 hours - 210 hours are preferable, 100 hours - 190 hours are more preferable, and 120 hours - 170 hours are especially preferable. If the incubation time is less than 80 hours, there may be cases where a sufficient amount of spores cannot be epigenetized on the mugwort plant, and if it exceeds 210 hours, the germination rate of spores may be lowered.
상기 쑥속 식물 발효액은, 상기 국균의 균체를 함유한 것이어도 되고, 상기 국균의 균체를 제거한 것이어도 되지만, 상기 국균의 균체를 제거한 것인 것이 바람직하다.The said Mugwort fermented liquid may contain the said Kook bacterium cells, and may remove the said Kook bacterium cells, but it is preferable that the said Kook bacterium cells have been removed.
상기 쑥속 식물 발효액의 상태로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면, 상기 쑥속 식물 발효액 그 자체여도 되고, 상기 쑥속 식물 발효액의 정제물, 상기 쑥속 식물 발효액의 농축물, 상기 쑥속 식물 발효액의 희석물 등이어도 된다. 또, 상기 쑥속 식물 발효액은, 해당 쑥속 식물 발효액의 건조물을 재차, 물이나 친수성 용매 등의 용매에 혼합 또는 용해시킨 것이어도 된다.The state of the mugwort plant fermentation broth is not particularly limited and may be appropriately selected depending on the purpose. For example, the mugwort plant fermentation broth itself may be used, a purified product of the mugwort plant fermentation broth, and a concentrate of the mugwort plant fermentation broth , a diluted product of the fermented broth of the genus Artemisia plant may be used. Moreover, the said mugwort plant fermentation broth may be mixed or dissolved again in solvent, such as water and a hydrophilic solvent, the dried product of the said mugwort plant fermentation broth.
상기 쑥속 식물 발효액의 정제물로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면, 상기 쑥속 식물 발효액 중의 고형분(예를 들면, 상기 쑥속 식물의 식물체, 국균의 균체, 침전물 등)이 제거된 것 등을 들 수 있다.The purified product of the mugwort plant fermentation broth is not particularly limited and may be appropriately selected according to the purpose, for example, solid content in the mugwort plant ferment broth (for example, the mugwort plant plant body, bacteria of the genus Artemisia, sediment, etc.) ) is removed, and the like.
상기 제거의 수단으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면 여과 등을 들 수 있다.There is no restriction|limiting in particular as a means of the said removal, According to the objective, it can select suitably, For example, filtration etc. are mentioned.
상기 여과의 방법으로는, 특별히 제한은 없고, 공지의 방법 중에서, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있다.There is no restriction|limiting in particular as a method of the said filtration, According to the objective, it can select suitably from well-known methods.
상기 쑥속 식물 발효액의 희석물 및 상기 쑥속 식물 발효액의 농축물로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면, 쑥속 식물 발효액이 원하는 농도로 조제된 것 등을 들 수 있다.The diluent of the mugwort plant fermentation broth and the concentrate of the mugwort plant fermentation broth are not particularly limited and may be appropriately selected depending on the purpose, for example, those prepared in a desired concentration of the mugwort plant fermented broth, etc. .
상기 희석의 수단으로는, 특별히 제한은 없고, 공지의 방법 중에서, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있다.There is no restriction|limiting in particular as a means of the said dilution, According to the objective, it can select suitably from well-known methods.
상기 농축의 수단으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면 감압 농축 등을 들 수 있다.There is no restriction|limiting in particular as a means of the said concentration, According to the objective, it can select suitably, For example, reduced pressure concentration etc. are mentioned.
상기 쑥속 식물 발효액의 건조물로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면, 쑥속 식물 발효액이 건조된 것 등을 들 수 있다.There is no restriction|limiting in particular as a dried product of the said mugwort plant fermented broth, According to the objective, it can select suitably, For example, what dried the mugwort plant fermentation broth etc. are mentioned.
상기 건조의 수단으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면 동결건조 등을 들 수 있다.There is no restriction|limiting in particular as said drying means, According to the objective, it can select suitably, For example, freeze-drying etc. are mentioned.
상기 쑥속 식물 발효액은, 쑥속 식물의 국균에 의한 발효액인 한, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있지만, 피부 발림성이 좋은 점에서, 접촉각이 81°이하인 쑥속 식물 발효액이 바람직하고, 접촉각이 78°이하인 쑥속 식물 발효액이 보다 바람직하다.The mugwort plant fermented broth is not particularly limited as long as it is a fermented broth by the Mugwort plant, and can be appropriately selected depending on the purpose. A fermented broth of the genus Artemisia of 78° or less is more preferable.
본 명세서에 있어서, 접촉각이란, 동적 접촉각·표면장력 측정장치(FTA1000 Falcon, First Ten Angstroms사 제조)를 이용하고, 상기 장치의 샘플 스테이지에 측정 시료를 3μL 적하해, 온도 22℃, 상대습도 20％의 조건하에서, 액적법으로 측정을 행하여, 1,000ms의 접촉각 θ(°)를 θ/2법으로 구한 값을 나타낸다.In the present specification, the contact angle refers to a dynamic contact angle/surface tension measuring device (FTA1000 Falcon, manufactured by First Ten Angstroms), and 3 μL of a measurement sample is dropped onto the sample stage of the device, temperature 22°C, relative humidity 20% The measurement was performed by the droplet method under the conditions of , and the contact angle θ (°) of 1,000 ms was obtained by the θ/2 method.
상기 접촉각은, 「젖음」을 나타내는 지표로서 사용되고 있고, 「정지 액체의 자유 표면이 고체벽에 접하는 장소에서 액면과 고체면이 이루는 각(액체의 내부에 있는 각을 취한다)을 말한다」(이화학 사전 제4판, 가부시키가이샤 이와나미 쇼텐 참조)고 정의되어 있다. 상기 접촉각은, 액체 분자 간의 응집력과 고체벽 간의 부착력의 대소 관계에 따라 정해지고, 액체가 고체를 적시는(부착력이 큰) 경우에는 예각, 적시지 않을 때에는 둔각이다. 따라서, 접촉각이 작을수록, 젖기 쉬운, 즉, 피부 발림성이 좋은 것을 나타내므로, 상기 쑥속 식물 발효액의 접촉각의 하한으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있다.The above contact angle is used as an index indicating “wetting” and refers to “the angle between the liquid level and the solid surface at the place where the free surface of the still liquid is in contact with the solid wall (take the angle inside the liquid)” (physics and chemistry) Dictionary 4th edition, see K. Iwanami Shoten). The contact angle is determined according to the magnitude relationship between the cohesive force between the liquid molecules and the adhesive force between the solid walls, and is an acute angle when the liquid wets the solid (large adhesive force), and an obtuse angle when the liquid does not wet the solid. Therefore, the lower the contact angle, the easier it is to get wet, that is, the better the skin spreadability. Therefore, the lower limit of the contact angle of the mugwort fermented broth is not particularly limited and may be appropriately selected according to the purpose.
＜＜타임(Thymus vulgaris Linne) 발효액＞＞<< Thymus (Thymus vulgaris Linne) fermentation broth>>
상기 타임 발효액은, 타임의 국균에 의한 발효액이다.The said thyme fermented liquid is the fermented liquid by the national bacteria of thyme.
-타임--time-
상기 발효 원료로서 사용하는 타임(Thymus vulgaris Linne)은, 꿀풀과(Labiatae) 백리향(Thymus)속에 속하는 다년생 목본이며, 허브의 일종이고, 고대부터 식용이나 약용의 원료로서 이용되고 있다. 별명으로서, 커먼 타임(Common thyme) 등이 있다. 원산지는 지중해 연안이지만, 일본 국내에서도 자생 또는 재배되고 있고, 이들 지역에서 용이하게 입수 가능하다. Thymus ( Thymus vulgaris Linne ) used as the fermentation raw material is a perennial wood belonging to the genus Lamiaceae ( Labiatae ) thymus ( Thymus ), is a kind of herb, and has been used as a raw material for food or medicine since ancient times. As a nickname, there are common thyme and the like. The place of origin is the Mediterranean coast, but it is also native or cultivated in Japan, and is easily available in these regions.
상기 타임의 입수 방법으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 자연계에서 채취해도 되고, 시판품을 이용해도 된다.There is no restriction|limiting in particular as a method of obtaining the said thyme, According to the objective, it can select suitably, You may extract|collect from the natural world, and a commercial item may be used.
상기 발효 원료로서 사용하는 상기 타임의 사용 부위로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면, 꽃, 꽃봉오리, 과실, 과피, 종자, 종피, 줄기, 잎, 가지, 나무껍질, 나무줄기, 지엽 등의 지상부; 뿌리, 뿌리줄기 등의 지하부 등을 들 수 있다. 이들은, 1종 단독으로 사용해도 되고, 2종 이상을 병용해도 된다. 이들 중에서도, 상기 타임의 사용 부위로는, 지상부가 바람직하다.The part of the thyme used as the fermentation raw material is not particularly limited and may be appropriately selected according to the purpose, for example, flowers, buds, fruits, pericarp, seeds, seed coats, stems, leaves, branches, above-ground parts such as bark, tree trunks, and branches; underground parts, such as a root and a rhizome, etc. are mentioned. These may be used individually by 1 type, and may use 2 or more types together. Among these, an above-ground part is preferable as a use site|part of the said thyme.
상기 발효 원료로서 사용하는 상기 타임의 크기로는, 상기 국균의 배양이 가능한 크기이면, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면, 채취한 그대로의 크기, 절단한 원하는 크기, 미분(파우더)화된 크기 등을 들 수 있다.The size of the thyme used as the fermentation raw material is not particularly limited as long as it is a size capable of culturing the Korean bacteria, and may be appropriately selected depending on the purpose, for example, the size as it is collected, the desired size cut, and a finely divided (powdered) size.
상기 발효 원료로서 사용하는 상기 타임의 상태로는, 상기 국균의 배양이 가능한 상태이면, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면, 채취한 그대로의 상태, 건조한 상태, 분쇄한 상태, 착즙 상태, 추출물의 상태 등을 들 수 있다. 이들 중에서도, 상기 국균이 작용하기 쉬운 점에서, 채취한 그대로의 상태, 분쇄한 상태, 착즙 상태, 추출물의 상태가 바람직하고, 채취한 그대로의 상태, 분쇄한 상태가 보다 바람직하다.The state of the thyme used as the fermentation raw material is not particularly limited as long as it is a state in which the culture of the Korean bacteria is possible, and may be appropriately selected according to the purpose, for example, as collected, dried, pulverized state, juice state, state of the extract, etc. are mentioned. Among these, from the viewpoint of easy action of the above-mentioned bacteria, the state as collected, pulverized, juiced, and extract are preferable, and the as-collected state and pulverized state are more preferable.
상기 타임을 건조한 상태로 하는 방법으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면, 천일로 건조하는 방법, 통상 사용되는 건조기를 이용하여 건조하는 방법 등을 들 수 있다.There is no restriction|limiting in particular as a method of making the said time into a dry state, According to the objective, it can select suitably, For example, the method of drying in the sun, the method of drying using the dryer normally used, etc. are mentioned.
상기 타임을 상기 분쇄한 상태로 하는 방법으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면, 믹서, 슈가밀, 파워밀, 제트밀, 충격식 분쇄기 등에 의해 분쇄하는 방법 등을 들 수 있다.There is no particular limitation on the method of making the time into the pulverized state, and it can be appropriately selected according to the purpose, for example, pulverizing with a mixer, sugar mill, power mill, jet mill, impact mill, etc. can be heard
상기 타임을 상기 착즙 상태로 하는 방법으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면 압착 등을 들 수 있다.There is no restriction|limiting in particular as a method of making the said time into the said juice state, According to the objective, it can select suitably, For example, crimping|compression-bonding etc. are mentioned.
상기 타임을 상기 추출물의 상태로 하는 방법으로는, 특별히 제한은 없고, 식물의 추출에 일반적으로 이용되는 방법을, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있다.There is no restriction|limiting in particular as a method of making the said time into the state of the said extract, A method generally used for extraction of a plant can be suitably selected according to the objective.
상기 발효 원료로서 사용하는 상기 타임은, 상기 국균의 접종 전에 멸균되는 것이 바람직하다. 상기 타임을 멸균하는 수단으로는, 특별히 제한은 없고, 공지의 방법 중에서 적절히 선택할 수 있다.It is preferable that the said thyme used as the said fermentation raw material is sterilized before inoculation of the said national bacteria. There is no restriction|limiting in particular as a means for sterilizing the said time, It can select suitably from well-known methods.
-국균--Kukkyun-
상기 타임을 발효시키는 상기 국균으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면, 상기 ＜＜쑥속 식물 발효액＞＞에서 기재한 것 등을 들 수 있다. 이들은, 1종 단독으로 사용해도 되고, 2종 이상을 병용해도 된다. 이들 중에서도, 상기 국균으로는, 아스페르길루스 오리제(Aspergillus oryzae)가, 항노화 작용 및 항산화 작용 중 적어도 어느 하나의 작용이 뛰어난 점에서 바람직하다.There is no restriction|limiting in particular as said bacterium for fermenting the said thyme, According to the objective, it can select suitably, For example, what was described in the said <<Fermented Mugwort Plant>>, etc. are mentioned. These may be used individually by 1 type, and may use 2 or more types together. Among these, as the said national bacteria, Aspergillus oryzae is preferable at the point which is excellent in the action of at least any one of an anti-aging action and an antioxidant action.
상기 국균의 입수 방법으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 자연계에서 채취해도 되고, 시판품을 이용해도 된다. 또, 상기 국균으로서, 쌀 등을 원료로 한 종국을 사용해도 되고, 후술하는 타임 종국을 사용해도 되며, 배지(한천 배지, 액체 배지 등)에서 배양한 국균을 사용해도 된다. 이들 중에서도, 항노화 작용 및 항산화 작용 중 적어도 어느 하나의 작용이 뛰어난 점에서, 상기 타임 종국을 이용하는 것이 바람직하다.There is no restriction|limiting in particular as a method of obtaining the said national bacteria, According to the objective, it can select suitably, You may collect|collect from nature, or a commercial item may be used. Further, as the above-mentioned domestic bacteria, a seed broth made from rice or the like as a raw material may be used, a thyme seed broth described later may be used, or a broth cultured in a medium (agar medium, liquid medium, etc.) may be used. Among these, it is preferable to use the thyme end product from the viewpoint of being excellent in at least any one of an anti-aging action and an antioxidant action.
상기 발효 원료로서 사용하는 상기 타임에 대한, 상기 국균의 접종량으로는, 상기 타임을 발효할 수 있는 양인 한, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있지만, 상기 발효 원료가 액체 상태인 경우에는, 1×103개/mL∼1×108개/mL가 바람직하고, 상기 발효 원료가 고체 상태인 경우에는, 1×103개/g∼1×108개/g이 바람직하다.The inoculum of the thyme used as the fermentation raw material is not particularly limited as long as it is an amount capable of fermenting the thyme, and may be appropriately selected depending on the purpose, but when the fermentation raw material is in a liquid state, , 1×10 3 pieces/ mL to 1×10 8 pieces/mL are preferable, and when the fermentation raw material is in a solid state, 1×10 3 pieces/g to 1×10 8 pieces/g are preferable.
상기 타임에 상기 국균을 접종할 때, 물을 첨가하는 것이 바람직하다. 상기 물의 첨가량으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있지만, 상기 타임 100 질량부에 대해, 500 질량부∼5,000 질량부 첨가하는 것이 바람직하고, 1,000 질량부∼4,000 질량부 첨가하는 것이 보다 바람직하며, 1,500 질량부∼3,000 질량부 첨가하는 것이 특히 바람직하다.It is preferable to add water when inoculating the Korean bacteria at the above time. There is no restriction|limiting in particular as said addition amount of water, Although it can select suitably according to the objective, It is preferable to add 500 mass parts - 5,000 mass parts with respect to 100 mass parts of said time, and adding 1,000 mass parts - 4,000 mass parts It is more preferable, and it is especially preferable to add 1,500 mass parts - 3,000 mass parts.
상기 발효(배양)의 온도로는, 상기 국균에 의한 발효를 할 수 있는 온도의 범위 내이면, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있지만, 20℃∼40℃가 바람직하고, 25℃∼35℃가 보다 바람직하다. 상기 발효의 온도가 20℃ 미만이면, 상기 타임을 충분히 발효시키지 못하여, 항노화 작용 및 항산화 작용 중 적어도 어느 하나의 작용이 불충분해지는 경우가 있다.The temperature of the fermentation (cultivation) is not particularly limited as long as it is within the range of the temperature capable of fermenting by the above-mentioned domestic bacteria, and can be appropriately selected depending on the purpose, but 20°C to 40°C is preferable, and 25°C to 35 degreeC is more preferable. When the temperature of the fermentation is less than 20° C., the thyme cannot be sufficiently fermented, and at least one of an anti-aging action and an antioxidant action may be insufficient.
상기 발효(배양)의 시간으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있지만, 10시간∼40시간이 바람직하고, 20시간∼30시간이 보다 바람직하다. 상기 발효의 시간이 10시간 미만이면, 상기 타임을 충분히 발효시키지 못하여, 항노화 작용 및 항산화 작용 중 적어도 어느 하나의 작용이 불충분해지는 경우가 있다.There is no restriction|limiting in particular as time of the said fermentation (cultivation), Although it can select suitably according to the objective, 10 hours - 40 hours are preferable, and 20 hours - 30 hours are more preferable. If the fermentation time is less than 10 hours, the fermentation time may not be sufficiently fermented, and at least one of an anti-aging action and an antioxidant action may be insufficient.
상기 발효(배양)를 정지하는 방법으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면 가열하는 방법 등을 들 수 있다.There is no restriction|limiting in particular as a method of stopping the said fermentation (cultivation), According to the objective, it can select suitably, For example, the method of heating etc. are mentioned.
상기 발효를 정지하기 위한 가열 온도로는, 상기 국균을 생육할 수 없는 온도이면, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있지만, 50℃ 이상이 바람직하고, 70℃ 이상이 보다 바람직하며, 100℃∼130℃가 특히 바람직하다. 상기 가열 온도가 50℃ 미만이면, 상기 발효를 정지할 수 없는 경우가 있고, 130℃를 넘으면, 항노화 작용 및 항산화 작용 중 적어도 어느 하나의 작용이 불충분해지는 경우가 있다.The heating temperature for stopping the fermentation is not particularly limited as long as it is a temperature at which the Korean bacteria cannot grow, and may be appropriately selected depending on the purpose. C to 130° C. are particularly preferred. If the heating temperature is less than 50° C., the fermentation may not be stopped, and if it exceeds 130° C., at least one of an anti-aging action and an antioxidant action may become insufficient.
상기 발효를 정지하기 위한 가열 시간으로는, 상기 국균을 생육할 수 없는 상태로 할 수 있으면, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있지만, 5분간 이상이 바람직하고, 10분간∼20분간이 보다 바람직하다. 상기 가열 시간이 5분간 미만이면, 상기 발효를 정지할 수 없는 경우가 있고, 20분간을 넘으면, 항노화 작용 및 항산화 작용 중 적어도 어느 하나의 작용이 불충분해지는 경우가 있다.The heating time for stopping the fermentation is not particularly limited, as long as it can be made in a state in which the bacterium cannot be grown, and it can be appropriately selected depending on the purpose. more preferably. If the heating time is less than 5 minutes, the fermentation may not be stopped, and if it exceeds 20 minutes, at least one of an anti-aging action and an antioxidant action may become insufficient.
또한, 상기 발효를 정지한 후의 상기 타임 발효액은, 냉각되는 것이 바람직하다. 냉각하는 방법으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면, 상온, 냉장고 등에 정치하는 방법 등을 들 수 있다.Moreover, it is preferable that the said thyme fermentation broth after stopping the said fermentation is cooled. There is no restriction|limiting in particular as a method of cooling, According to the objective, it can select suitably, For example, the method of standing still at normal temperature, a refrigerator, etc. are mentioned.
상기 타임의 상기 국균에 의한 발효를 행하는 횟수로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 1회여도 되고, 복수회여도 된다.There is no restriction|limiting in particular as the frequency|count of performing fermentation by the said domestic bacteria of the said time, According to the objective, it can select suitably, 1 time may be sufficient, and multiple times may be sufficient as it.
상기 발효를 복수회 행하는 경우, 상기 국균은, 첫 회만 접종해도 되고, 수회만 접종해도 되며, 모든 회에서 접종해도 되지만, 첫 회에만 접종하는 것이 바람직하다.In the case where the fermentation is performed multiple times, the national bacteria may be inoculated only the first time, may be inoculated only several times, or may be inoculated at all times, but it is preferable to inoculate only the first time.
상기 발효를 복수회 행하는 경우, 발효 온도 및 발효 시간은, 각각 달라도 되고, 동일해도 된다.When performing the said fermentation in multiple times, fermentation temperature and fermentation time may differ, respectively, and may be the same.
--타임 종국----Time is over--
상기 타임 종국은, 상기 타임을 종국 원료로서 사용하고, 해당 종국 원료에 국균을 접종하여, 해당 타임에 충분한 양의 포자를 착생시킨 것이다. 이것을 상기 발효에 있어서 사용함으로써, 피부 발림성이 뛰어난 타임 발효액을 보다 효율 좋고 용이하게 얻을 수 있는 점에서 유리하다.The thyme seed is one in which the thyme is used as a final raw material, and the koji bacteria is inoculated into the final raw material, and a sufficient amount of spores are epigenetized at the corresponding thyme. By using this in the said fermentation, it is advantageous at the point which can obtain more efficiently and easily the thyme fermentation broth excellent in skin application property.
상기 종국 원료로서 사용하는 상기 타임은, 상기 -타임-에서 기재한 것과 마찬가지의 것을 사용할 수 있고, 상기 타임의 사용 부위, 크기, 상태 등의 양태에 대해서도 마찬가지이다.As the said thyme used as the said final raw material, the thing similar to that described in the said -time- can be used, and it is the same also about the aspect, such as the part of use of the said thyme, a size, a state.
상기 타임 종국의 제작에 있어서 사용하는 상기 국균으로는, 상기 -국균-에서 기재한 것과 마찬가지의 것을 사용할 수 있다.As the above-mentioned domestic bacteria used in the production of the above-mentioned time seed, the same ones as those described in the above -Kukbacterium- can be used.
상기 종국 원료로서 사용하는 상기 타임에 대한, 상기 국균의 접종량으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있지만, 상기 타임 100 질량부에 대해, 멸균수에 현탁한 국균(1×103개/mL∼1×108개/mL)을 5 질량부∼100 질량부 접종하는 것이 바람직하고, 10 질량부∼50 질량부 접종하는 것이 보다 바람직하며, 20 질량부∼30 질량부 접종하는 것이 특히 바람직하다. 상기 타임 100 질량부에 대한 상기 국균의 접종량이 5 질량부 미만이면, 상기 타임에 충분한 양의 포자를 착생할 수 없는 경우가 있고, 100 질량부를 넘으면, 수분 과다로 이상 번식하는 경우가 있다.Wherein, the inoculum size of the Aspergillus for the time to be used as the end material is not particularly limited, Aspergillus which does not, as appropriate may be selected, with respect to the time 100 parts by weight, were suspended in sterilized water according to the object (1 × 10 3 and the open / mL~1 × 10 8 pieces / mL) is more preferable to be inoculated are preferred, and 10 parts by mass to 50 parts by mass to 5 parts by weight to 100 parts by weight of inoculation, vaccination to 20 parts by mass to 30 parts by weight Especially preferred. If the inoculation amount of the domestic bacteria with respect to 100 parts by mass of the thyme is less than 5 parts by mass, a sufficient amount of spores may not be able to epigenerate at the thyme, and if it exceeds 100 parts by mass, abnormal propagation may occur due to excessive moisture.
상기 종국 원료로서 사용하는 상기 타임에 상기 국균을 접종할 때, 물을 첨가하는 것이 바람직하다. 상기 물의 첨가량으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있지만, 상기 타임 100 질량부에 대해 10 질량부∼250 질량부 첨가하는 것이 바람직하고, 20 질량부∼200 질량부 첨가하는 것이 보다 바람직하며, 30 질량부∼150 질량부 첨가하는 것이 특히 바람직하다. 상기 타임 100 질량부에 대한 상기 물의 첨가량이 10 질량부 미만이면, 상기 타임에 충분한 양의 포자를 착생할 수 없는 경우가 있다.It is preferable to add water when inoculating the said national bacteria at the said time used as said seed material. There is no restriction|limiting in particular as said addition amount of water, Although it can select suitably according to the objective, It is preferable to add 10 mass parts - 250 mass parts with respect to 100 mass parts of said time, It is more preferable to add 20 mass parts - 200 mass parts. It is preferable, and it is especially preferable to add 30 mass parts - 150 mass parts. If the amount of the water added with respect to 100 parts by mass of the time is less than 10 parts by mass, there may be cases in which a sufficient amount of spores cannot be formed in the time.
상기 배양의 온도로는, 상기 국균을 생육할 수 있는 온도의 범위 내이면, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있지만, 20℃∼40℃가 바람직하고, 25℃∼35℃가 보다 바람직하다. 상기 배양의 온도가 20℃ 미만이면, 상기 타임에 충분한 양의 포자를 착생할 수 없는 경우가 있다. 또한, 50℃를 넘으면, 상기 국균이 증식할 수 없는 경우가 있다.The temperature of the culture is not particularly limited as long as it is within the range of the temperature at which the Kukbacterium can grow, and can be appropriately selected depending on the purpose. do. If the temperature of the culture is less than 20°C, there may be cases where a sufficient amount of spores cannot be epigenetized at the time. Moreover, when it exceeds 50 degreeC, the said national bacteria may not be able to proliferate.
상기 배양의 시간으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있지만, 80시간∼210시간이 바람직하고, 100시간∼190시간이 보다 바람직하며, 120시간∼170시간이 특히 바람직하다. 상기 배양의 시간이, 80시간 미만이면, 상기 타임에 충분한 양의 포자를 착생할 수 없는 경우가 있고, 210시간을 넘으면, 포자의 발아율이 떨어지는 경우가 있다.There is no restriction|limiting in particular as said culture|cultivation time, Although it can select suitably according to the objective, 80 hours - 210 hours are preferable, 100 hours - 190 hours are more preferable, and 120 hours - 170 hours are especially preferable. If the incubation time is less than 80 hours, a sufficient amount of spores may not be able to be epigenetized at the time, and if it exceeds 210 hours, the germination rate of spores may drop.
상기 타임 발효액은, 상기 국균의 균체를 함유한 것이어도 되고, 상기 국균의 균체를 제거한 것이어도 되지만, 상기 국균의 균체를 제거한 것인 것이 바람직하다.The thyme fermentation broth may contain the bacteria of the Kukbacterium or may be obtained by removing the cells of the Kukbacterium.
상기 타임 발효액의 상태로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면, 상기 타임 발효액 그 자체여도 되고, 상기 타임 발효액의 정제물, 상기 타임 발효액의 농축물, 상기 타임 발효액의 희석물 등이어도 된다. 또, 상기 타임 발효액은, 해당 타임 발효액의 건조물을 재차, 물이나 친수성 용매 등의 용매에 혼합 또는 용해시킨 것이어도 된다.The state of the thyme fermentation broth is not particularly limited and may be appropriately selected according to the purpose. For example, the thyme fermented broth itself may be used, a purified product of the thyme fermented broth, a concentrate of the thyme fermented broth, and the thyme fermented broth may be a dilution of Moreover, the said thyme fermentation broth may mix or melt|dissolve the dried product of the said thyme fermentation broth again in solvents, such as water and a hydrophilic solvent.
상기 타임 발효액의 정제물로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면, 상기 타임 발효액 중의 고형분(예를 들면, 상기 타임의 식물체, 국균의 균체, 침전물 등)이 제거된 것 등을 들 수 있다.The purified product of the thyme fermentation broth is not particularly limited and may be appropriately selected depending on the purpose, for example, solid content in the thyme fermentation broth (for example, the plants of the thyme, bacterial cells of the thyme, sediment, etc.) is removed. what has been done, and the like.
상기 제거의 수단으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면 여과 등을 들 수 있다.There is no restriction|limiting in particular as a means of the said removal, According to the objective, it can select suitably, For example, filtration etc. are mentioned.
상기 여과의 방법으로는, 특별히 제한은 없고, 공지의 방법 중에서, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있다.There is no restriction|limiting in particular as a method of the said filtration, According to the objective, it can select suitably from well-known methods.
상기 타임 발효액의 희석물 및 상기 타임 발효액의 농축물로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면, 타임 발효액이 원하는 농도로 조제된 것 등을 들 수 있다.The dilution of the thyme fermentation broth and the concentrate of the thyme fermented broth are not particularly limited, and may be appropriately selected depending on the purpose, and examples thereof include those prepared in a desired concentration of the thyme fermented broth.
상기 희석의 수단으로는, 특별히 제한은 없고, 공지의 방법 중에서, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있다.There is no restriction|limiting in particular as a means of the said dilution, According to the objective, it can select suitably from well-known methods.
상기 농축의 수단으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면 감압 농축 등을 들 수 있다.There is no restriction|limiting in particular as a means of the said concentration, According to the objective, it can select suitably, For example, reduced pressure concentration etc. are mentioned.
상기 타임 발효액의 건조물로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면, 타임 발효액이 건조된 것 등을 들 수 있다.There is no restriction|limiting in particular as a dried product of the said thyme fermentation broth, According to the objective, it can select suitably, For example, the thing by which the thyme fermentation broth was dried, etc. are mentioned.
상기 건조의 수단으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면 동결건조 등을 들 수 있다.There is no restriction|limiting in particular as said drying means, According to the objective, it can select suitably, For example, freeze-drying etc. are mentioned.
상기 타임 발효액은, 타임의 국균에 의한 발효액인 한, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있지만, 피부 발림성이 좋은 점에서, 접촉각이 87°이하인 타임 발효액이 바람직하고, 접촉각이 81°이하인 타임 발효액이 보다 바람직하다.The thyme fermentation broth is not particularly limited as long as it is a fermented broth by local bacteria of thyme, and can be appropriately selected depending on the purpose. A thyme fermentation broth is more preferable.
＜＜멜리사(Melissa officinalis Linne) 발효액＞＞<< Fermented Melissa officinalis Linne>>
상기 멜리사 발효액은, 멜리사의 국균에 의한 발효액이다.The said Melissa fermented liquid is the fermented liquid by the national bacteria of Melissa.
-멜리사--balm-
상기 발효 원료로서 사용하는 멜리사(Melissa officinalis Linne)은, 꿀풀과(Labiatae) 멜리사(Melissa)속에 속하는 다년생 초본이다. 허브의 일종이며, 고대부터 식용이나 약용의 원료로서 이용되고 있다. 별명으로서, 레몬밤, 서양산 박하 등이 있다. 원산지는, 남유럽이지만, 일본 국내에서도 자생 또는 재배되고 있고, 이들 지역에서 용이하게 입수 가능하다.Melissa (Melissa officinalis Linne) to be used as the fermentation raw material is a perennial plant belonging to the Lamiaceae (Labiatae), Melissa (Melissa). It is a kind of herb and has been used as a raw material for food or medicine since ancient times. Nicknames include lemon balm and western mint. Although the country of origin is southern Europe, it is also natively grown or cultivated in Japan, and it is easily available in these regions.
상기 멜리사의 입수 방법으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 자연계에서 채취해도 되고, 시판품을 이용해도 된다.There is no restriction|limiting in particular as an acquisition method of the said Melissa, According to the objective, it can select suitably, You may extract|collect from nature, and a commercial item may be used.
상기 발효 원료로서 사용하는 상기 멜리사의 사용 부위로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면, 꽃, 꽃봉오리, 과실, 과피, 종자, 종피, 줄기, 잎, 가지, 지엽 등의 지상부; 뿌리, 뿌리줄기 등의 지하부 등을 들 수 있다. 이들은, 1종 단독으로 사용해도 되고, 2종 이상을 병용해도 된다. 이들 중에서도, 상기 멜리사의 사용 부위로는, 지상부가 바람직하다.The site of use of the melissa used as the fermentation raw material is not particularly limited and may be appropriately selected according to the purpose, for example, flowers, buds, fruits, pericarp, seeds, seed coats, stems, leaves, branches, above-ground parts such as leaves; underground parts, such as a root and a rhizome, etc. are mentioned. These may be used individually by 1 type, and may use 2 or more types together. Among these, an above-ground part is preferable as a use site|part of the said melissa.
상기 발효 원료로서 사용하는 상기 멜리사의 크기로는, 상기 국균의 배양이 가능한 크기이면, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면, 채취한 그대로의 크기, 절단한 원하는 크기, 미분(파우더)화된 크기 등을 들 수 있다.The size of the melissa used as the fermentation raw material is not particularly limited as long as it is a size capable of culturing the Korean bacteria, and may be appropriately selected according to the purpose, for example, the size as it is collected, the desired size cut, and a finely divided (powdered) size.
상기 발효 원료로서 사용하는 상기 멜리사의 상태로는, 상기 국균의 배양이 가능한 상태이면, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면, 채취한 그대로의 상태, 건조한 상태, 분쇄한 상태, 착즙 상태, 추출물의 상태 등을 들 수 있다. 이들 중에서도, 상기 국균이 작용하기 쉬운 점에서, 채취한 그대로의 상태, 분쇄한 상태, 착즙 상태, 추출물의 상태가 바람직하고, 채취한 그대로의 상태, 분쇄한 상태가 보다 바람직하다.The state of the melissa used as the fermentation raw material is not particularly limited, as long as it is a state in which the culture of the Korean bacteria is possible, and may be appropriately selected depending on the purpose, for example, as collected, dried, pulverized state, juice state, state of the extract, etc. are mentioned. Among these, from the viewpoint of easy action of the above-mentioned bacteria, the state as collected, pulverized, juiced, and extract are preferable, and the as-collected state and pulverized state are more preferable.
상기 멜리사를 건조한 상태로 하는 방법으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면, 천일로 건조하는 방법, 통상 사용되는 건조기를 이용하여 건조하는 방법 등을 들 수 있다.There is no restriction|limiting in particular as a method of making the said melissa dry, it can select suitably according to the objective, For example, the method of drying in the sun, the method of drying using the dryer normally used, etc. are mentioned.
상기 멜리사를 상기 분쇄한 상태로 하는 방법으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면, 믹서, 슈가밀, 파워밀, 제트밀, 충격식 분쇄기 등에 의해 분쇄하는 방법 등을 들 수 있다.There is no particular limitation on the method of making the melissa into the pulverized state, and it can be appropriately selected according to the purpose, for example, a method of pulverizing by a mixer, sugar mill, power mill, jet mill, impact mill, etc. can be heard
상기 멜리사를 상기 착즙 상태로 하는 방법으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면 압착 등을 들 수 있다.There is no restriction|limiting in particular as a method of making the said melissa into the said juice state, According to the objective, it can select suitably, For example, compression etc. are mentioned.
상기 멜리사를 상기 추출물의 상태로 하는 방법으로는, 특별히 제한은 없고, 식물의 추출에 일반적으로 이용되는 방법을, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있다.There is no restriction|limiting in particular as a method of making the said melissa into the state of the said extract, A method generally used for extraction of a plant can be suitably selected according to the objective.
상기 발효 원료로서 사용하는 상기 멜리사는, 상기 국균의 접종 전에 멸균되는 것이 바람직하다. 상기 멜리사를 멸균하는 수단으로는, 특별히 제한은 없고, 공지의 방법 중에서 적절히 선택할 수 있다.It is preferable that the said melissa used as the said fermentation raw material is sterilized before the said national bacteria inoculation. There is no restriction|limiting in particular as a means for sterilizing the said melissa, It can select suitably from well-known methods.
-국균--Kukkyun-
상기 멜리사를 발효시키는 상기 국균으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면, 상기 ＜＜쑥속 식물 발효액＞＞에서 기재한 것 등을 들 수 있다. 이들은, 1종 단독으로 사용해도 되고, 2종 이상을 병용해도 된다. 이들 중에서도, 상기 국균으로는, 아스페르길루스 오리제(Aspergillus oryzae)가, 항노화 작용, 항산화 작용, 항염증 작용 및 미백 작용 중 적어도 어느 하나의 작용이 뛰어난 점에서 바람직하다.There is no restriction|limiting in particular as said bacterium for fermenting the said melissa, According to the objective, it can select suitably, For example, the thing described in the said <<Fermented Mugwort Plant>> etc. are mentioned. These may be used individually by 1 type, and may use 2 or more types together. Among these, Aspergillus oryzae is preferred as the above-mentioned national bacteria in that it is excellent in at least any one of an anti-aging action, an antioxidant action, an anti-inflammatory action and a whitening action.
상기 국균의 입수 방법으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 자연계에서 채취해도 되고, 시판품을 이용해도 된다. 또, 상기 국균으로서, 쌀 등을 원료로 한 종국을 사용해도 되고, 후술하는 멜리사 종국을 사용해도 되며, 배지(한천 배지, 액체 배지 등)에서 배양한 국균을 사용해도 된다. 이들 중에서도, 항노화 작용, 항산화 작용, 항염증 작용 및 미백 작용 중 적어도 어느 하나의 작용이 뛰어난 점에서, 상기 멜리사 종국을 이용하는 것이 바람직하다.There is no restriction|limiting in particular as a method of obtaining the said national bacteria, According to the objective, it can select suitably, You may collect|collect from nature, or a commercial item may be used. In addition, as the above-mentioned domestic bacteria, a seed broth made from rice or the like as a raw material may be used, a Melissa seed broth described later may be used, or a broth cultured in a medium (agar medium, liquid medium, etc.) may be used. Among these, it is preferable to use the melissa seed extract from the viewpoint of excellent at least any one of an anti-aging action, an antioxidant action, an anti-inflammatory action, and a whitening action.
상기 발효 원료로서 사용하는 상기 멜리사에 대한, 상기 국균의 접종량으로는, 상기 멜리사를 발효할 수 있는 양인 한, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있지만, 상기 발효 원료가 액체 상태인 경우에는, 1×103개/mL∼1×108개/mL가 바람직하고, 상기 발효 원료가 고체 상태인 경우에는, 1×103개/g∼1×108개/g이 바람직하다.The inoculation amount of the Kuk bacteria to the melissa used as the fermentation raw material is not particularly limited as long as it is an amount capable of fermenting the melissa, and may be appropriately selected depending on the purpose, but when the fermentation raw material is in a liquid state , 1×10 3 pieces/ mL to 1×10 8 pieces/mL are preferable, and when the fermentation raw material is in a solid state, 1×10 3 pieces/g to 1×10 8 pieces/g are preferable.
상기 멜리사에 상기 국균을 접종할 때, 물을 첨가하는 것이 바람직하다. 상기 물의 첨가량으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있지만, 상기 멜리사 100 질량부에 대해, 500 질량부∼5,000 질량부 첨가하는 것이 바람직하고, 1,000 질량부∼4,000 질량부 첨가하는 것이 보다 바람직하며, 1,500 질량부∼3,000 질량부 첨가하는 것이 특히 바람직하다.When the melissa is inoculated with the Kukbacterium, it is preferable to add water. The amount of water added is not particularly limited and can be appropriately selected depending on the purpose. It is preferable to add 500 parts by mass to 5,000 parts by mass, and to add 1,000 parts by mass to 4,000 parts by mass relative to 100 parts by mass of the melissa. It is more preferable, and it is especially preferable to add 1,500 mass parts - 3,000 mass parts.
상기 발효(배양)의 온도로는, 상기 국균에 의한 발효를 할 수 있는 온도의 범위 내이면, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있지만, 20℃∼40℃가 바람직하고, 25℃∼35℃가 보다 바람직하다. 상기 발효의 온도가 20℃ 미만이면, 상기 멜리사를 충분히 발효시키지 못하여, 항노화 작용, 항산화 작용, 항염증 작용 및 미백 작용 중 적어도 어느 하나의 작용이 불충분해지는 경우가 있다.The temperature of the fermentation (cultivation) is not particularly limited as long as it is within the range of the temperature capable of fermenting by the above-mentioned domestic bacteria, and can be appropriately selected depending on the purpose, but 20°C to 40°C is preferable, and 25°C to 35 degreeC is more preferable. When the temperature of the fermentation is less than 20° C., the melissa cannot be sufficiently fermented, and at least one of an anti-aging action, an antioxidant action, an anti-inflammatory action, and a whitening action may become insufficient.
상기 발효(배양)의 시간으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있지만, 10시간∼40시간이 바람직하고, 20시간∼30시간이 보다 바람직하다. 상기 발효의 시간이 10시간 미만이면, 상기 멜리사를 충분히 발효시키지 못하여, 항노화 작용, 항산화 작용, 항염증 작용 및 미백 작용 중 적어도 어느 하나의 작용이 불충분해지는 경우가 있다.There is no restriction|limiting in particular as time of the said fermentation (cultivation), Although it can select suitably according to the objective, 10 hours - 40 hours are preferable, and 20 hours - 30 hours are more preferable. If the fermentation time is less than 10 hours, the melissa cannot be sufficiently fermented, and at least one of anti-aging action, antioxidant action, anti-inflammatory action and whitening action may be insufficient.
상기 발효(배양)를 정지하는 방법으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면 가열하는 방법 등을 들 수 있다.There is no restriction|limiting in particular as a method of stopping the said fermentation (cultivation), According to the objective, it can select suitably, For example, the method of heating etc. are mentioned.
상기 발효를 정지하기 위한 가열 온도로는, 상기 국균을 생육할 수 없는 온도이면, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있지만, 50℃ 이상이 바람직하고, 70℃ 이상이 보다 바람직하며, 100℃∼130℃가 특히 바람직하다. 상기 가열 온도가 50℃ 미만이면, 상기 발효를 정지할 수 없는 경우가 있고, 130℃를 넘으면, 항노화 작용, 항산화 작용, 항염증 작용 및 미백 작용 중 적어도 어느 하나의 작용이 불충분해지는 경우가 있다.The heating temperature for stopping the fermentation is not particularly limited as long as it is a temperature at which the Korean bacteria cannot grow, and may be appropriately selected depending on the purpose. C to 130° C. are particularly preferred. If the heating temperature is less than 50 ° C., the fermentation may not be stopped. If it exceeds 130 ° C., at least any one of anti-aging action, antioxidant action, anti-inflammatory action and whitening action may become insufficient. .
상기 발효를 정지하기 위한 가열 시간으로는, 상기 국균을 생육할 수 없는 상태로 할 수 있으면, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있지만, 5분간 이상이 바람직하고, 10분간∼20분간이 보다 바람직하다. 상기 가열 시간이 5분간 미만이면, 상기 발효를 정지할 수 없는 경우가 있고, 20분간을 넘으면, 항노화 작용, 항산화 작용, 항염증 작용 및 미백 작용 중 적어도 어느 하나의 작용이 불충분해지는 경우가 있다.The heating time for stopping the fermentation is not particularly limited, as long as it can be made in a state in which the bacterium cannot be grown, and it can be appropriately selected depending on the purpose. more preferably. If the heating time is less than 5 minutes, the fermentation may not be stopped, and if it exceeds 20 minutes, at least any one of anti-aging action, antioxidant action, anti-inflammatory action and whitening action may become insufficient. .
또한, 상기 발효를 정지한 후의 상기 멜리사 발효액은, 냉각되는 것이 바람직하다. 냉각하는 방법으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면, 상온, 냉장고 등에 정치하는 방법 등을 들 수 있다.Moreover, it is preferable that the said Melissa fermentation broth after stopping the said fermentation is cooled. There is no restriction|limiting in particular as a method of cooling, According to the objective, it can select suitably, For example, the method of standing still at normal temperature, a refrigerator, etc. are mentioned.
상기 멜리사의 상기 국균에 의한 발효를 행하는 횟수로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 1회여도 되고, 복수회여도 된다.There is no restriction|limiting in particular as the frequency|count of performing the said melissa fermentation by the said national bacteria, According to the objective, it can select suitably, and it may be once or multiple times may be sufficient as it.
상기 발효를 복수회 행하는 경우, 상기 국균은, 첫 회만 접종해도 되고, 수회만 접종해도 되며, 모든 회에서 접종해도 되지만, 첫 회에만 접종하는 것이 바람직하다.In the case where the fermentation is performed multiple times, the national bacteria may be inoculated only the first time, may be inoculated only several times, or may be inoculated at all times, but it is preferable to inoculate only the first time.
상기 발효를 복수회 행하는 경우, 발효 온도 및 발효 시간은, 각각 달라도 되고, 동일해도 된다.When performing the said fermentation in multiple times, fermentation temperature and fermentation time may differ, respectively, and may be the same.
--멜리사 종국----Melissa End--
상기 멜리사 종국은, 상기 멜리사를 종국 원료로서 사용하고, 해당 종국 원료에 국균을 접종하여, 해당 멜리사에 충분한 양의 포자를 착생시킨 것이다. 이것을 상기 발효에 있어서 사용함으로써, 피부 발림성이 뛰어난 멜리사 발효액을 보다 효율 좋고 용이하게 얻을 수 있는 점에서 유리하다.The melissa seed is obtained by using the melissa as a final raw material, inoculating the seed raw material with a Korean bacteria, and engrafting a sufficient amount of spores on the melissa. By using this in the said fermentation, it is advantageous in that it can obtain more efficiently and easily the Melissa fermented liquid excellent in skin application property.
상기 종국 원료로서 사용하는 상기 멜리사는, 상기 -멜리사-에서 기재한 것과 마찬가지의 것을 사용할 수 있고, 상기 멜리사의 사용 부위, 크기, 상태 등의 양태에 대해서도 마찬가지이다.The Melissa used as the final raw material may be the same as that described in -Melissa-, and the same applies to aspects such as the use site, size, and state of the Melissa.
상기 멜리사 종국의 제작에 있어서 사용하는 상기 국균으로는, 상기 -국균-에서 기재한 것과 마찬가지의 것을 사용할 수 있다.As the above-mentioned domestic bacteria used in the preparation of the above-mentioned melissa seeds, the same ones as those described in the above -Kukbacterium- can be used.
상기 종국 원료로서 사용하는 상기 멜리사에 대한, 상기 국균의 접종량으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있지만, 상기 멜리사 100 질량부에 대해, 멸균수에 현탁한 국균(1×103개/mL∼1×108개/mL)을 5 질량부∼100 질량부 접종하는 것이 바람직하고, 10 질량부∼50 질량부 접종하는 것이 보다 바람직하며, 20 질량부∼30 질량부 접종하는 것이 특히 바람직하다. 상기 멜리사 100 질량부에 대한 상기 국균의 접종량이 5 질량부 미만이면, 상기 멜리사에 충분한 양의 포자를 착생할 수 없는 경우가 있고, 100 질량부를 넘으면, 수분 과다로 이상 번식하는 경우가 있다., The inoculum size of the Aspergillus for the Melissa used as the end material is not particularly limited, Aspergillus which does not, and can be appropriately selected according to the purposes and, for the Melissa 100 parts by weight, were suspended in sterile water (1 × 10 3 and the open / mL~1 × 10 8 pieces / mL) is more preferable to be inoculated are preferred, and 10 parts by mass to 50 parts by mass to 5 parts by weight to 100 parts by weight of inoculation, vaccination to 20 parts by mass to 30 parts by weight Especially preferred. If the inoculation amount of the Kukbacteria relative to 100 parts by mass of the Melissa is less than 5 parts by mass, a sufficient amount of spores may not be able to epigenerate on the Melissa.
상기 종국 원료로서 사용하는 상기 멜리사에 상기 국균을 접종할 때, 물을 첨가하는 것이 바람직하다. 상기 물의 첨가량으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있지만, 상기 멜리사 100 질량부에 대해, 10 질량부∼250 질량부 첨가하는 것이 바람직하고, 20 질량부∼200 질량부 첨가하는 것이 보다 바람직하며, 30 질량부∼150 질량부 첨가하는 것이 특히 바람직하다. 상기 멜리사 100 질량부에 대한 상기 물의 첨가량이 10 질량부 미만이면, 상기 멜리사에 충분한 양의 포자를 착생할 수 없는 경우가 있다.When the melissa used as the seed material is inoculated with the Kukbacterium, it is preferable to add water. The amount of water added is not particularly limited and can be appropriately selected depending on the purpose. It is preferable to add 10 parts by mass to 250 parts by mass, and to add 20 parts by mass to 200 parts by mass relative to 100 parts by mass of the melissa. It is more preferable, and it is especially preferable to add 30 mass parts - 150 mass parts. When the amount of the water added to 100 parts by mass of the melissa is less than 10 parts by mass, there may be cases in which a sufficient amount of spores cannot be epigenetized on the melissa.
상기 배양의 온도로는, 상기 국균을 생육할 수 있는 온도의 범위 내이면, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있지만, 20℃∼40℃가 바람직하고, 25℃∼35℃가 보다 바람직하다. 상기 배양의 온도가 20℃ 미만이면, 상기 멜리사에 충분한 양의 포자를 착생할 수 없는 경우가 있다. 또한, 50℃를 넘으면, 상기 국균이 증식할 수 없는 경우가 있다.The temperature of the culture is not particularly limited as long as it is within the range of the temperature at which the Kukbacterium can grow, and can be appropriately selected depending on the purpose. do. If the temperature of the culture is less than 20° C., there may be cases in which a sufficient amount of spores cannot be formed on the melissa. Moreover, when it exceeds 50 degreeC, the said national bacteria may not be able to proliferate.
상기 배양의 시간으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있지만, 80시간∼210시간이 바람직하고, 100시간∼190시간이 보다 바람직하며, 120시간∼170시간이 특히 바람직하다. 상기 배양의 시간이 80시간 미만이면, 상기 멜리사에 충분한 양의 포자를 착생할 수 없는 경우가 있고, 210시간을 넘으면, 포자의 발아율이 떨어지는 경우가 있다.There is no restriction|limiting in particular as said culture|cultivation time, Although it can select suitably according to the objective, 80 hours - 210 hours are preferable, 100 hours - 190 hours are more preferable, and 120 hours - 170 hours are especially preferable. If the incubation time is less than 80 hours, there may be cases where a sufficient amount of spores cannot be epigenetized on the melissa, and if it exceeds 210 hours, the germination rate of spores may drop.
상기 멜리사 발효액은, 상기 국균의 균체를 함유한 것이어도 되고, 상기 국균의 균체를 제거한 것이어도 되지만, 상기 국균의 균체를 제거한 것인 것이 바람직하다.The Melissa fermented broth may contain the bacteria of the Kukbacterium or may be obtained by removing the cells of the Kukbacterium.
상기 멜리사 발효액의 상태로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면, 상기 멜리사 발효액 그 자체여도 되고, 상기 멜리사 발효액의 정제물, 상기 멜리사 발효액의 농축물, 상기 멜리사 발효액의 희석물 등이어도 된다. 또, 상기 멜리사 발효액은, 해당 멜리사 발효액의 건조물을 재차, 물이나 친수성 용매 등의 용매에 혼합 또는 용해시킨 것이어도 된다.The state of the fermented Melissa is not particularly limited and may be appropriately selected depending on the purpose. For example, the fermented Melissa itself may be used, a purified product of the fermented Melissa, a concentrate of the fermented Melissa, and the fermented Melissa. may be a dilution of Moreover, the said Melissa fermentation broth may be mixed or dissolved again in solvents, such as water and a hydrophilic solvent, the dried product of the said Melissa fermentation broth.
상기 멜리사 발효액의 정제물로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면, 상기 멜리사 발효액 중의 고형분(예를 들면, 상기 멜리사의 식물체, 국균의 균체, 침전물 등)이 제거된 것 등을 들 수 있다.The purified product of the Melissa fermented broth is not particularly limited, and may be appropriately selected depending on the purpose, for example, the solid content in the Melissa fermented broth (eg, the Melissa plant body, the bacteria of the Korean bacteria, sediment, etc.) is removed. what has been done, and the like.
상기 제거의 수단으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면 여과 등을 들 수 있다.There is no restriction|limiting in particular as a means of the said removal, According to the objective, it can select suitably, For example, filtration etc. are mentioned.
상기 여과의 방법으로는, 특별히 제한은 없고, 공지의 방법 중에서, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있다.There is no restriction|limiting in particular as a method of the said filtration, According to the objective, it can select suitably from well-known methods.
상기 멜리사 발효액의 희석물 및 상기 멜리사 발효액의 농축물로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면, 멜리사 발효액이 원하는 농도로 조제된 것 등을 들 수 있다.The dilution of the fermented Melissa and the concentrate of the fermented Melissa are not particularly limited, and may be appropriately selected depending on the purpose, for example, those prepared in a desired concentration of the fermented Melissa.
상기 희석의 수단으로는, 특별히 제한은 없고, 공지의 방법 중에서, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있다.There is no restriction|limiting in particular as a means of the said dilution, According to the objective, it can select suitably from well-known methods.
상기 농축의 수단으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면 감압 농축 등을 들 수 있다.There is no restriction|limiting in particular as a means of the said concentration, According to the objective, it can select suitably, For example, reduced pressure concentration etc. are mentioned.
상기 멜리사 발효액의 건조물로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면, 멜리사 발효액이 건조된 것 등을 들 수 있다.There is no restriction|limiting in particular as a dried product of the said Melissa fermented broth, According to the objective, it can select suitably, For example, the thing by which the Melissa fermented broth was dried, etc. are mentioned.
상기 건조의 수단으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면 동결건조 등을 들 수 있다.There is no restriction|limiting in particular as said drying means, According to the objective, it can select suitably, For example, freeze-drying etc. are mentioned.
상기 멜리사 발효액은, 멜리사의 국균에 의한 발효액인 한, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있지만, 피부 발림성이 좋은 점에서, 접촉각이 85°이하인 멜리사 발효액이 바람직하고, 접촉각이 79°이하인 멜리사 발효액이 보다 바람직하다.The Melissa fermented broth is not particularly limited as long as it is a fermented broth of Melissa's national bacteria, and it can be appropriately selected depending on the purpose, but in terms of good skin spreadability, the Melissa fermented broth having a contact angle of 85° or less is preferable, and the contact angle is 79° or less. Melissa fermentation broth is more preferable.
＜＜수레국화(Centaurea cyanus Linne) 발효액＞＞<<Fermented cornflower ( Centaurea cyanus Linne)>>
상기 수레국화 발효액은, 수레국화의 국균에 의한 발효액이다.The said cornflower fermented liquid is the fermented liquid by the national bacteria of cornflower.
-수레국화--Cornflower-
상기 발효 원료로서 사용하는 수레국화(Centaurea cyanus Linne)는, 국화과(Compositae) 수레국화속(Centaurea)에 속하는 일년생 초본이며, 고대부터 식용이나 약용의 원료로서 이용되고 있다. 별명으로서, 도깨비부채, 켄타우레아, 센토레아 등이 있다. 원산지는 유럽이지만, 일본 국내에서도 자생 또는 재배되고 있고, 이들 지역에서 용이하게 입수 가능하다. Cornflower (Centaurea cyanus Linne) used as the fermentation raw material is an annual herb belonging to the Asteraceae ( Compositae ) and the cornflower genus ( Centaurea ), and has been used as a raw material for food or medicine since ancient times. Nicknames include Goblin Fan, Centaurea, and Centorea. The country of origin is Europe, but it is also native or cultivated in Japan, and is readily available in these regions.
상기 수레국화의 입수 방법으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 자연계에서 채취해도 되고, 시판품을 이용해도 된다.There is no restriction|limiting in particular as a method of obtaining the said cornflower, According to the objective, it can select suitably, You may collect|collect from nature, and a commercial item may be used.
상기 발효 원료로서 사용하는 상기 수레국화의 사용 부위로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면, 꽃, 꽃봉오리, 과실, 과피, 종자, 종피, 줄기, 잎, 가지, 지엽 등의 지상부; 뿌리, 뿌리줄기 등의 지하부 등을 들 수 있다. 이들은, 1종 단독으로 사용해도 되고, 2종 이상을 병용해도 된다. 이들 중에서도, 상기 수레국화의 사용 부위로는, 지상부가 바람직하다.The site of use of the cornflower used as the fermentation raw material is not particularly limited and may be appropriately selected depending on the purpose, for example, flowers, buds, fruits, pericarp, seeds, seed coats, stems, leaves, branches. , above-ground parts such as branches; underground parts, such as a root and a rhizome, etc. are mentioned. These may be used individually by 1 type, and may use 2 or more types together. Among them, the above-mentioned cornflower is preferably used as an above-ground part.
상기 발효 원료로서 사용하는 상기 수레국화의 크기로는, 상기 국균의 배양이 가능한 크기이면, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면, 채취한 그대로의 크기, 절단한 원하는 크기, 미분(파우더)화된 크기 등을 들 수 있다.The size of the cornflower used as the fermentation raw material is not particularly limited, as long as it is a size capable of culturing the Kukbacterium, and may be appropriately selected depending on the purpose, for example, the size as it is collected, the desired size cut , a finely divided (powdered) size, and the like.
상기 발효 원료로서 사용하는 상기 수레국화의 상태로는, 상기 국균의 배양이 가능한 상태이면, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면, 채취한 그대로의 상태, 건조한 상태, 분쇄한 상태, 착즙 상태, 추출물의 상태 등을 들 수 있다. 이들 중에서도, 상기 국균이 작용하기 쉬운 점에서, 채취한 그대로의 상태, 분쇄한 상태, 착즙 상태, 추출물의 상태가 바람직하고, 채취한 그대로의 상태, 분쇄한 상태가 보다 바람직하다.The state of the cornflower used as the fermentation raw material is not particularly limited, as long as the culture of the Kukbacterium is possible, and it can be appropriately selected according to the purpose, for example, as it is collected, dried, crushed One state, the juice state, the state of the extract, etc. are mentioned. Among these, from the viewpoint of easy action of the above-mentioned bacteria, the state as collected, pulverized, juiced, and extract are preferable, and the as-collected state and pulverized state are more preferable.
상기 수레국화를 건조한 상태로 하는 방법으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면, 천일로 건조하는 방법, 통상 사용되는 건조기를 이용하여 건조하는 방법 등을 들 수 있다.There is no restriction|limiting in particular as a method of making the said cornflower in a dry state, According to the objective, it can select suitably, For example, the method of sun-drying, the method of drying using a normally used dryer, etc. are mentioned. .
상기 수레국화를 상기 분쇄한 상태로 하는 방법으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면, 믹서, 슈가밀, 파워밀, 제트밀, 충격식 분쇄기 등에 의해 분쇄하는 방법 등을 들 수 있다.There is no particular limitation on the method of making the cornflower into the pulverized state, and it can be appropriately selected according to the purpose. For example, a method of pulverizing by a mixer, sugar mill, power mill, jet mill, impact mill, etc. and the like.
상기 수레국화를 상기 착즙 상태로 하는 방법으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면 압착 등을 들 수 있다.There is no restriction|limiting in particular as a method of making the said cornflower into the said juice state, According to the objective, it can select suitably, For example, compression etc. are mentioned.
상기 수레국화를 상기 추출물의 상태로 하는 방법으로는, 특별히 제한은 없고, 식물의 추출에 일반적으로 이용되는 방법을, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있다.There is no restriction|limiting in particular as a method of making the said cornflower into the state of the said extract, A method generally used for extraction of a plant can be suitably selected according to the objective.
상기 발효 원료로서 사용하는 상기 수레국화는, 상기 국균의 접종 전에 멸균되는 것이 바람직하다. 상기 수레국화를 멸균하는 수단으로는, 특별히 제한은 없고, 공지의 방법 중에서 적절히 선택할 수 있다.It is preferable that the said cornflower used as the said fermentation raw material is sterilized before the said national bacteria inoculation. There is no restriction|limiting in particular as a means for sterilizing the said cornflower, It can select suitably from well-known methods.
-국균--Kukkyun-
상기 수레국화를 발효시키는 상기 국균으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면, 상기 ＜＜쑥속 식물 발효액＞＞에서 기재한 것 등을 들 수 있다. 이들은, 1종 단독으로 사용해도 되고, 2종 이상을 병용해도 된다. 이들 중에서도, 상기 국균으로는, 아스페르길루스 오리제(Aspergillus oryzae)가, 항노화 작용, 항산화 작용 및 미백 작용 중 적어도 어느 하나의 작용이 뛰어난 점에서 바람직하다.There is no restriction|limiting in particular as said bacterium for fermenting the said cornflower, According to the objective, it can select suitably, For example, the thing described in the said <<Fermented Mugwort Plant>> etc. are mentioned. These may be used individually by 1 type, and may use 2 or more types together. Among these, Aspergillus oryzae is preferred as the above-mentioned national bacteria from the viewpoint of excellent at least any one of an anti-aging action, an antioxidant action and a whitening action.
상기 국균의 입수 방법으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 자연계에서 채취해도 되고, 시판품을 이용해도 된다. 또, 상기 국균으로서, 쌀 등을 원료로 한 종국을 사용해도 되고, 후술하는 수레국화 종국을 사용해도 되며, 배지(한천 배지, 액체 배지 등)에서 배양한 국균을 사용해도 된다. 이들 중에서도, 항노화 작용, 항산화 작용 및 미백 작용 중 적어도 어느 하나의 작용이 뛰어난 점에서, 상기 수레국화 종국을 이용하는 것이 바람직하다.There is no restriction|limiting in particular as a method of obtaining the said national bacteria, According to the objective, it can select suitably, You may collect|collect from nature, or a commercial item may be used. Further, as the above-mentioned domestic bacteria, a seed broth made from rice or the like as a raw material may be used, a cornflower seed seed described later may be used, or a broth cultured in a medium (agar medium, liquid medium, etc.) may be used. Among these, it is preferable to use the cornflower seed from the viewpoint of excellent at least any one of an anti-aging action, an antioxidant action, and a whitening action.
상기 발효 원료로서 사용하는 상기 수레국화에 대한 상기 국균의 접종량으로는, 상기 수레국화를 발효할 수 있는 양인 한, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있지만, 상기 발효 원료가 액체 상태인 경우에는, 1×103개/mL∼1×108개/mL가 바람직하고, 상기 발효 원료가 고체 상태인 경우에는, 1×103개/g∼1×108개/g이 바람직하다.There is no particular limitation as to the amount of inoculation of the Kukbacterium for the cornflower used as the fermentation raw material, as long as it is an amount capable of fermenting the cornflower, and may be appropriately selected depending on the purpose, but when the fermentation raw material is in a liquid state 1×10 3 pieces/ mL to 1×10 8 pieces/mL is preferable, and when the fermentation raw material is in a solid state, 1×10 3 pieces/g to 1×10 8 pieces/g is preferable.
상기 수레국화에 상기 국균을 접종할 때, 물을 첨가하는 것이 바람직하다. 상기 물의 첨가량으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있지만, 상기 수레국화 100 질량부에 대해, 500 질량부∼5,000 질량부 첨가하는 것이 바람직하고, 1,000 질량부∼4,000 질량부 첨가하는 것이 보다 바람직하며, 1,500 질량부∼3,000 질량부 첨가하는 것이 특히 바람직하다.When the cornflower is inoculated with the Kukbacterium, it is preferable to add water. The amount of water to be added is not particularly limited and may be appropriately selected depending on the purpose, but it is preferable to add 500 parts by mass to 5,000 parts by mass, and to add 1,000 parts by mass to 4,000 parts by mass relative to 100 parts by mass of the cornflower. It is more preferable, and it is especially preferable to add 1,500 mass parts - 3,000 mass parts.
상기 발효(배양)의 온도로는, 상기 국균에 의한 발효를 할 수 있는 온도의 범위 내이면, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있지만, 20℃∼40℃가 바람직하고, 25℃∼35℃가 보다 바람직하다. 상기 발효의 온도가 20℃ 미만이면, 상기 수레국화를 충분히 발효시키지 못하여, 항노화 작용, 항산화 작용 및 미백 작용 중 적어도 어느 하나의 작용이 불충분해지는 경우가 있다.The temperature of the fermentation (cultivation) is not particularly limited as long as it is within the range of the temperature capable of fermenting by the above-mentioned domestic bacteria, and can be appropriately selected depending on the purpose, but 20°C to 40°C is preferable, and 25°C to 35 degreeC is more preferable. When the temperature of the fermentation is less than 20° C., the cornflower cannot be sufficiently fermented, and at least one of an anti-aging action, an antioxidant action, and a whitening action may be insufficient.
상기 발효(배양)의 시간으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있지만, 10시간∼40시간이 바람직하고, 20시간∼30시간이 보다 바람직하다. 상기 발효의 시간이 10시간 미만이면, 상기 수레국화를 충분히 발효시키지 못하여, 항노화 작용, 항산화 작용 및 미백 작용 중 적어도 어느 하나의 작용이 불충분해지는 경우가 있다.There is no restriction|limiting in particular as time of the said fermentation (cultivation), Although it can select suitably according to the objective, 10 hours - 40 hours are preferable, and 20 hours - 30 hours are more preferable. If the fermentation time is less than 10 hours, the cornflower may not be sufficiently fermented, and at least one of an anti-aging action, an antioxidant action, and a whitening action may be insufficient.
상기 발효(배양)를 정지하는 방법으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면 가열하는 방법 등을 들 수 있다.There is no restriction|limiting in particular as a method of stopping the said fermentation (cultivation), According to the objective, it can select suitably, For example, the method of heating etc. are mentioned.
상기 발효를 정지하기 위한 가열 온도로는, 상기 국균을 생육할 수 없는 온도이면, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있지만, 50℃ 이상이 바람직하고, 70℃ 이상이 보다 바람직하며, 100℃∼130℃가 특히 바람직하다. 상기 가열 온도가 50℃ 미만이면, 상기 발효를 정지할 수 없는 경우가 있고, 130℃를 넘으면, 항노화 작용, 항산화 작용 및 미백 작용 중 적어도 어느 하나의 작용이 불충분해지는 경우가 있다.The heating temperature for stopping the fermentation is not particularly limited as long as it is a temperature at which the Korean bacteria cannot grow, and may be appropriately selected depending on the purpose. C to 130° C. are particularly preferred. If the heating temperature is less than 50° C., the fermentation may not be stopped. If it exceeds 130° C., at least any one of an anti-aging action, an antioxidant action, and a whitening action may become insufficient.
상기 발효를 정지하기 위한 가열 시간으로는, 상기 국균을 생육할 수 없는 상태로 할 수 있으면, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있지만, 5분간 이상이 바람직하고, 10분간∼20분간이 보다 바람직하다. 상기 가열 시간이 5분간 미만이면, 상기 발효를 정지할 수 없는 경우가 있고, 20분간을 넘으면, 항노화 작용, 항산화 작용 및 미백 작용 중 적어도 어느 하나의 작용이 불충분해지는 경우가 있다.The heating time for stopping the fermentation is not particularly limited, as long as it can be made in a state in which the bacterium cannot be grown, and it can be appropriately selected depending on the purpose. more preferably. If the heating time is less than 5 minutes, the fermentation may not be stopped, and if it exceeds 20 minutes, at least any one of an anti-aging action, an antioxidant action, and a whitening action may become insufficient.
또한, 상기 발효를 정지한 후의 상기 수레국화 발효액은, 냉각되는 것이 바람직하다. 냉각하는 방법으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면, 상온, 냉장고 등에 정치하는 방법 등을 들 수 있다.Moreover, it is preferable that the said cornflower fermentation broth after stopping the said fermentation is cooled. There is no restriction|limiting in particular as a method of cooling, According to the objective, it can select suitably, For example, the method of standing still at normal temperature, a refrigerator, etc. are mentioned.
상기 수레국화의 상기 국균에 의한 발효를 행하는 횟수로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 1회여도 되고, 복수회여도 된다.There is no restriction|limiting in particular as the frequency|count of performing the said cornflower fermentation by the said national bacteria, According to the objective, it can select suitably, It may be once or it may be several times.
상기 발효를 복수회 행하는 경우, 상기 국균은, 첫 회만 접종해도 되고, 수회만 접종해도 되며, 모든 회에서 접종해도 되지만, 첫 회에만 접종하는 것이 바람직하다.In the case where the fermentation is performed multiple times, the national bacteria may be inoculated only the first time, may be inoculated only several times, or may be inoculated at all times, but it is preferable to inoculate only the first time.
상기 발효를 복수회 행하는 경우, 발효 온도 및 발효 시간은, 각각 달라도 되고, 동일해도 된다.When performing the said fermentation in multiple times, fermentation temperature and fermentation time may differ, respectively, and may be the same.
--수레국화 종국----The end of the cornflower--
상기 수레국화 종국은, 상기 수레국화를 종국 원료로서 사용하고, 해당 종국 원료에 국균을 접종하여, 해당 수레국화에 충분한 양의 포자를 착생시킨 것이다. 이것을 상기 발효에 있어서 사용함으로써, 피부 발림성이 뛰어난 수레국화 발효액을 보다 효율 좋고 용이하게 얻을 수 있는 점에서 유리하다.The cornflower seed is obtained by using the cornflower as a seed material, inoculating the seed material into the seed material, and engrafting a sufficient amount of spores for the cornflower seed. By using this in the said fermentation, it is advantageous at the point which can obtain more efficiently and easily the cornflower fermented liquid excellent in skin application property.
상기 종국 원료로서 사용하는 상기 수레국화는, 상기 -수레국화-에서 기재한 것과 마찬가지의 것을 사용할 수 있고, 상기 수레국화의 사용 부위, 크기, 상태 등의 양태에 대해서도 마찬가지이다.The cornflower used as the seed material may be the same as that described in -Cornflower- above, and the same applies to aspects such as the use site, size, and state of the cornflower.
상기 수레국화 종국의 제작에 있어서 사용하는 상기 국균으로는, 상기 -국균-에서 기재한 것과 마찬가지의 것을 사용할 수 있다.As the koji bacterium to be used in the production of the cornflower seed stock, the same thing as described in the above - koji bacterium- can be used.
상기 종국 원료로서 사용하는 상기 수레국화에 대한 상기 국균의 접종량으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있지만, 상기 수레국화 100 질량부에 대해, 멸균수에 현탁한 국균(1×103개/mL∼1×108개/mL)을 5 질량부∼100 질량부 접종하는 것이 바람직하고, 10 질량부∼50 질량부 접종하는 것이 보다 바람직하며, 20 질량부∼30 질량부 접종하는 것이 특히 바람직하다. 상기 수레국화 100 질량부에 대한 상기 국균의 접종량이 5 질량부 미만이면, 상기 수레국화에 충분한 양의 포자를 착생할 수 없는 경우가 있고, 100 질량부를 넘으면, 수분 과다로 이상 번식하는 경우가 있다.There is no particular limitation on the amount of inoculation of the Kukbacterium to the cornflower used as the seed material, and it can be appropriately selected depending on the purpose. 3 / mL~1 × 10 8 gae / mL) to 5 parts by weight to 100 parts by mass, and it is preferable to inoculate, more preferably 10 parts by mass to 50 parts by weight of the inoculation, 20 parts by mass to 30 parts by weight of inoculation It is particularly preferred. If the inoculation amount of the bacterium relative to 100 parts by mass of the cornflower is less than 5 parts by mass, there may be cases where a sufficient amount of spores for the cornflower cannot be epigenetized, and if it exceeds 100 parts by mass, abnormal reproduction may occur due to excessive moisture. .
상기 종국 원료로서 사용하는 상기 수레국화에 상기 국균을 접종할 때, 물을 첨가하는 것이 바람직하다. 상기 물의 첨가량으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있지만, 상기 수레국화 100 질량부에 대해, 10 질량부∼250 질량부 첨가하는 것이 바람직하고, 20 질량부∼200 질량부 첨가하는 것이 보다 바람직하며, 30 질량부∼150 질량부 첨가하는 것이 특히 바람직하다. 상기 수레국화 100 질량부에 대한 상기 물의 첨가량이 10 질량부 미만이면, 상기 수레국화에 충분한 양의 포자를 착생할 수 없는 경우가 있다.When inoculating the cornflower to be used as the seed material, water is preferably added. The amount of water added is not particularly limited and can be appropriately selected depending on the purpose, but it is preferable to add 10 parts by mass to 250 parts by mass, and add 20 parts by mass to 200 parts by mass relative to 100 parts by mass of the cornflower. It is more preferable, and it is especially preferable to add 30 mass parts - 150 mass parts. If the amount of the water added to 100 parts by mass of the cornflower is less than 10 parts by mass, there may be cases in which a sufficient amount of spores for the cornflower cannot be epigenetized.
상기 배양의 온도로는, 상기 국균을 생육할 수 있는 온도의 범위 내이면, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있지만, 20℃∼40℃가 바람직하고, 25℃∼35℃가 보다 바람직하다. 상기 배양의 온도가 20℃ 미만이면, 상기 수레국화에 충분한 양의 포자를 착생할 수 없는 경우가 있다. 또한, 50℃를 넘으면, 상기 국균이 증식할 수 없는 경우가 있다.The temperature of the culture is not particularly limited as long as it is within the range of the temperature at which the Kukbacterium can grow, and can be appropriately selected depending on the purpose. do. When the temperature of the culture is less than 20° C., there may be cases in which a sufficient amount of spores for the cornflower cannot be epigenetized. Moreover, when it exceeds 50 degreeC, the said national bacteria may not be able to proliferate.
상기 배양의 시간으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있지만, 80시간∼210시간이 바람직하고, 100시간∼190시간이 보다 바람직하며, 120시간∼170시간이 특히 바람직하다. 상기 배양의 시간이 80시간 미만이면, 상기 수레국화에 충분한 양의 포자를 착생할 수 없는 경우가 있고, 210시간을 넘으면, 포자의 발아율이 떨어지는 경우가 있다.There is no restriction|limiting in particular as said culture|cultivation time, Although it can select suitably according to the objective, 80 hours - 210 hours are preferable, 100 hours - 190 hours are more preferable, and 120 hours - 170 hours are especially preferable. If the incubation time is less than 80 hours, a sufficient amount of spores for the cornflower may not be able to be epigenetized, and if it exceeds 210 hours, the germination rate of spores may decrease.
상기 수레국화 발효액은, 상기 국균의 균체를 함유한 것이어도 되고, 상기 국균의 균체를 제거한 것이어도 되지만, 상기 국균의 균체를 제거한 것인 것이 바람직하다.The said fermented cornflower liquid may contain the said national bacteria cell body, and may remove the said national bacterial cell body, However, It is preferable that the said national bacteria cell body was removed.
상기 수레국화 발효액의 상태로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면, 상기 수레국화 발효액 그 자체여도 되고, 상기 수레국화 발효액의 정제물, 상기 수레국화 발효액의 농축물, 상기 수레국화 발효액의 희석물 등이어도 된다. 또, 상기 수레국화 발효액은, 해당 수레국화 발효액의 건조물을 재차, 물이나 친수성 용매 등의 용매에 혼합 또는 용해시킨 것이어도 된다.The state of the fermented cornflower broth is not particularly limited and may be appropriately selected depending on the purpose. , or a diluted product of the fermented cornflower broth. Moreover, the said cornflower fermented liquid may be mixed or dissolved again in solvent, such as water or a hydrophilic solvent, the dried product of the said cornflower fermented liquid.
상기 수레국화 발효액의 정제물로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면, 상기 수레국화 발효액 중의 고형분(예를 들면, 상기 수레국화의 식물체, 국균의 균체, 침전물 등)이 제거된 것 등을 들 수 있다.The purified product of the cornflower fermented broth is not particularly limited, and may be appropriately selected depending on the purpose. ) is removed, and the like.
상기 제거의 수단으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면 여과 등을 들 수 있다.There is no restriction|limiting in particular as a means of the said removal, According to the objective, it can select suitably, For example, filtration etc. are mentioned.
상기 여과의 방법으로는, 특별히 제한은 없고, 공지의 방법 중에서, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있다.There is no restriction|limiting in particular as a method of the said filtration, According to the objective, it can select suitably from well-known methods.
상기 수레국화 발효액의 희석물 및 상기 수레국화 발효액의 농축물로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면, 수레국화 발효액이 원하는 농도로 조제된 것 등을 들 수 있다.The dilution of the fermented cornflower broth and the concentrate of the fermented cornflower broth are not particularly limited and may be appropriately selected depending on the purpose, for example, those prepared in a desired concentration of the cornflower fermented broth, etc. .
상기 희석의 수단으로는, 특별히 제한은 없고, 공지의 방법 중에서, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있다.There is no restriction|limiting in particular as a means of the said dilution, According to the objective, it can select suitably from well-known methods.
상기 농축의 수단으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면 감압 농축 등을 들 수 있다.There is no restriction|limiting in particular as a means of the said concentration, According to the objective, it can select suitably, For example, reduced pressure concentration etc. are mentioned.
상기 수레국화 발효액의 건조물로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면, 수레국화 발효액이 건조된 것 등을 들 수 있다.There is no restriction|limiting in particular as a dried product of the said cornflower fermented broth, According to the objective, it can select suitably, For example, the dried cornflower fermented broth etc. are mentioned.
상기 건조의 수단으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면 동결건조 등을 들 수 있다.There is no restriction|limiting in particular as said drying means, According to the objective, it can select suitably, For example, freeze-drying etc. are mentioned.
상기 수레국화 발효액은, 수레국화의 국균에 의한 발효액인 한, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있지만, 피부 발림성이 좋은 점에서, 접촉각이 85°이하인 수레국화 발효액이 바람직하고, 접촉각이 79°이하인 수레국화 발효액이 보다 바람직하다.The cornflower fermented broth is not particularly limited as long as it is a fermented broth by the Kukbacterium of cornflower, and can be appropriately selected depending on the purpose. A fermented cornflower broth of 79° or less is more preferable.
＜＜그 외의 성분＞＞<<other ingredients>>
상기 항노화제, 항산화제, 항염증제 및 미백제에 있어서의 상기 그 외의 성분으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면, 부형제, 방습제, 방부제, 강화제, 증점제, 유화제, 산화 방지제, 감미료, 산미료, 조미료, 착색료, 향료, 미백제, 보습제, 유성 성분, 자외선 흡수제, 계면활성제, 알코올류, 분말 성분, 색제, 수성 성분, 물, 피부 영양제 등을 들 수 있다. 이들은, 1종 단독으로 사용해도 되고, 2종 이상을 병용해도 된다.The above-mentioned other components in the anti-aging agent, antioxidant, anti-inflammatory agent and whitening agent are not particularly limited and may be appropriately selected depending on the purpose, for example, excipients, desiccant agents, preservatives, strengthening agents, thickeners, emulsifiers, antioxidants, sweeteners, acidulants, seasonings, colorants, fragrances, whitening agents, moisturizers, oily ingredients, ultraviolet absorbers, surfactants, alcohols, powder ingredients, colorants, aqueous ingredients, water, skin nutrients, and the like. These may be used individually by 1 type, and may use 2 or more types together.
상기 그 외의 성분의 함유량으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있다.There is no restriction|limiting in particular as content of the said other component, According to the objective, it can select suitably.
-용도--purpose-
본 발명의 항노화제, 항산화제, 항염증제 및 미백제는, 뛰어난 항노화 작용, 항산화 작용, 항염증 작용 및 미백 작용 중 적어도 어느 하나의 작용을 가지므로, 예를 들면, 의약품, 의약부외품, 화장품, 음식품 등으로서 적합하게 이용할 수 있고, 그 배합량, 용법 및 제형으로는, 그 사용 목적에 따라 적절히 선택할 수 있다.Since the anti-aging agent, antioxidant, anti-inflammatory agent and whitening agent of the present invention have at least any one of excellent anti-aging action, antioxidant action, anti-inflammatory action and whitening action, for example, pharmaceuticals, quasi-drugs, cosmetics, It can be used suitably as food-drinks, etc., The compounding quantity, a usage method, and a dosage form can be suitably selected according to the purpose of use.
상기 배합량으로는, 상기 발효액의 생리 활성 등에 따라 적절히 조정할 수 있다. 또, 상기 항노화제, 상기 항산화제, 상기 항염증제 및 상기 미백제는, 상기 발효액 그 자체여도 된다.As said compounding quantity, it can adjust suitably according to the physiological activity of the said fermentation broth, etc. Moreover, the said fermentation broth itself may be sufficient as the said anti-aging agent, the said antioxidant, the said anti-inflammatory agent, and the said whitening agent.
상기 용법으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면 경구용, 비경구용, 외용 등의 용법을 들 수 있다. 이들 중에서도 외용이 바람직하다.There is no restriction|limiting in particular as said usage, According to the objective, it can select suitably, For example, usages, such as oral use, parenteral use, and external use, are mentioned. Among these, external use is preferable.
상기 제형으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면, 정제, 분제, 캡슐제, 과립제, 엑기스제 및 시럽제 등의 경구 투여제; 주사제, 점적제(点滴劑) 및 좌제 등의 비경구 투여제; 화장수, 유액, 크림, 연고, 미용액, 로션, 팩, 젤리, 립크림, 립스틱, 파운데이션, 입욕제, 비누, 보디 샴푸, 아스트린젠트, 헤어토닉, 헤어크림, 헤어리퀴드, 포마드, 샴푸, 린스 등의 외용제 등을 들 수 있다.The dosage form is not particularly limited and may be appropriately selected according to the purpose, and for example, oral administration agents such as tablets, powders, capsules, granules, extracts and syrups; parenteral administration agents such as injections, drops, and suppositories; lotion, emulsion, cream, ointment, serum, lotion, pack, jelly, lip cream, lipstick, foundation, bath agent, soap, body shampoo, astringent, hair tonic, hair cream, hair liquid, pomade, shampoo, conditioner, etc. can be heard
또, 본 발명의 항노화제, 항산화제, 항염증제 및 미백제는, 항노화 작용, 항산화 작용, 항염증 작용 또는 미백 작용의 작용 기구에 관한 연구의 시약으로서도 이용할 수 있다.In addition, the anti-aging agent, antioxidant, anti-inflammatory agent and whitening agent of the present invention can also be used as a reagent for research on the mechanism of action of anti-aging action, antioxidant action, anti-inflammatory action or whitening action.
본 발명의 항노화제, 항산화제, 항염증제 및 미백제는, 인간에게 적합하게 적용되는 것이지만, 각각의 작용 효과를 나타내는 한, 인간 이외의 동물(예를 들면, 마우스, 래트, 햄스터, 개, 고양이, 소, 돼지, 원숭이 등)에게 적용할 수도 있다.Although the anti-aging agent, antioxidant, anti-inflammatory agent and whitening agent of the present invention are suitably applied to humans, animals other than humans (e.g., mice, rats, hamsters, dogs, cats, It can also be applied to cattle, pigs, monkeys, etc.).
(화장료)(cosmetics)
본 발명의 화장료는, 본 발명의 항노화제, 항산화제, 항염증제 및 미백제로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종을 함유하고, 필요에 따라, 추가로 그 외의 성분을 함유한다.The cosmetic of the present invention contains at least one selected from the group consisting of an anti-aging agent, an antioxidant, an anti-inflammatory agent and a whitening agent of the present invention, and, if necessary, further contains other ingredients.
＜항노화제, 항산화제, 항염증제, 미백제＞<Anti-aging agent, antioxidant, anti-inflammatory, whitening agent>
상기 화장료에 있어서의 상기 항노화제, 상기 항산화제, 상기 항염증제 및 상기 미백제로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종의 함유량으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있지만, 상기 화장료의 전체량에 대해, 5 체적％ 이상이 바람직하고, 20 체적％ 이상이 보다 바람직하다. 상기 항노화제, 상기 항산화제, 상기 항염증제 및 상기 미백제로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종의 함유량이 5 체적％ 미만이면, 항노화 작용, 항산화 작용, 항염증 작용 및 미백 작용 중 적어도 어느 하나의 작용이 불충분해지는 경우가 있다. 또한, 상기 항노화제, 상기 항산화제, 상기 항염증제 및 상기 미백제로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종의 함유량은 많을수록 바람직하고, 그 상한으로는, 특별히 제한은 없으며, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있다. 또, 상기 화장료는, 상기 항노화제, 상기 항산화제, 상기 항염증제 및 상기 미백제로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종 그 자체여도 된다.The content of at least one selected from the group consisting of the anti-aging agent, the antioxidant, the anti-inflammatory agent and the whitening agent in the cosmetic is not particularly limited and can be appropriately selected depending on the purpose, 5 volume% or more is preferable with respect to an amount, and 20 volume% or more is more preferable. When the content of at least one selected from the group consisting of the anti-aging agent, the antioxidant, the anti-inflammatory agent and the whitening agent is less than 5% by volume, at least one of anti-aging action, antioxidant action, anti-inflammatory action and whitening action In some cases, the action becomes insufficient. In addition, the content of at least one selected from the group consisting of the anti-aging agent, the antioxidant, the anti-inflammatory agent and the whitening agent is more preferably, and the upper limit is not particularly limited, and may be appropriately selected according to the purpose. Moreover, the said cosmetic may be at least 1 sort(s) itself selected from the group which consists of the said anti-aging agent, the said antioxidant, the said anti-inflammatory agent, and the said whitening agent.
＜그 외의 성분＞<Other ingredients>
상기 화장료는, 추가로 필요에 따라 본 발명의 목적 및 작용 효과를 해치지 않는 범위에서, 화장료의 제조에 통상 사용되는 각종 주제(主劑), 조제(助劑), 그 외의 성분을 첨가할 수 있다.To the cosmetic, various main agents, adjuvants, and other ingredients commonly used in the manufacture of cosmetics can be added as needed, within the range that does not impair the purpose and effect of the present invention. .
상기 그 외의 성분으로는, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면, 수렴제, 살균제, 항균제, 자외선 흡수제, 세포 부활제, 유지류, 납류(waxes), 탄화수소류, 지방산류, 알코올류, 에스테르류, 계면활성제, 향료 등을 들 수 있다. 이들은, 1종 단독으로 사용해도 되고, 2종 이상을 병용해도 된다. 이들 성분은, 상기 항노화제, 상기 항산화제, 상기 항염증제 및 상기 미백제로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종과 병용한 경우, 상승적으로 작용하여, 통상 기대되는 이상의 뛰어난 작용 효과를 가져오는 경우가 있다.The other components are not particularly limited and may be appropriately selected according to the purpose, for example, astringents, bactericides, antibacterial agents, ultraviolet absorbers, cell activators, oils and fats, waxes, hydrocarbons, fatty acids, alcohols, esters, surfactants, fragrances, and the like. These may be used individually by 1 type, and may use 2 or more types together. When these ingredients are used in combination with at least one selected from the group consisting of the anti-aging agent, the antioxidant, the anti-inflammatory agent and the whitening agent, they act synergistically, resulting in superior effect than normally expected. .
상기 화장료에 있어서의 상기 그 외의 성분의 함유량으로는, 본 발명의 효과를 해치지 않는 한 특별히 제한은 없고, 목적에 따라 적절히 선택할 수 있다.There is no restriction|limiting in particular as content of the said other component in the said cosmetic, unless the effect of this invention is impaired, According to the objective, it can select suitably.
＜용도＞<Use>
상기 화장료의 용도로는, 특별히 제한은 없고, 일반적인 화장료 중에서 적절히 선택할 수 있으며, 예를 들면, 화장수, 유액, 크림, 연고, 미용액, 로션, 팩, 젤리, 립크림, 립스틱, 파운데이션, 입욕제, 비누, 보디 샴푸 등의 피부 화장료; 아스트린젠트, 헤어토닉, 헤어크림, 헤어리퀴드, 포마드, 샴푸, 린스 등의 두피 두발 화장료 등을 들 수 있다.The use of the cosmetic is not particularly limited and may be appropriately selected from general cosmetics, for example, lotion, emulsion, cream, ointment, cosmetic liquid, lotion, pack, jelly, lip cream, lipstick, foundation, bath agent, soap, skin cosmetics such as body shampoo; and scalp hair cosmetics such as astringent, hair tonic, hair cream, hair liquid, pomade, shampoo, and conditioner.
상기 화장료는, 상기 항노화제, 상기 항산화제, 상기 항염증제 및 상기 미백제로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종을, 그 활성을 방해하지 않도록 임의의 화장료에 배합한 것이어도 되고, 상기 항노화제, 상기 항산화제, 상기 항염증제 및 상기 미백제로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종을 주성분으로 한 화장료여도 된다. 또, 상기 화장료는, 상기 항노화제, 상기 항산화제, 상기 항염증제 및 상기 미백제로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종 그 자체여도 된다.The cosmetic may include at least one selected from the group consisting of the anti-aging agent, the antioxidant, the anti-inflammatory agent and the whitening agent, mixed with any cosmetic so as not to interfere with its activity, and the anti-aging agent; The cosmetic may be a cosmetic containing at least one selected from the group consisting of the antioxidant, the anti-inflammatory agent and the whitening agent as a main component. Moreover, the said cosmetic may be at least 1 sort(s) itself selected from the group which consists of the said anti-aging agent, the said antioxidant, the said anti-inflammatory agent, and the said whitening agent.
본 발명의 화장료는, 인간에게 적합하게 적용되는 것이지만, 각각의 작용 효과를 나타내는 한, 인간 이외의 동물(예를 들면, 마우스, 래트, 햄스터, 개, 고양이, 소, 돼지, 원숭이 등)에게 적용할 수도 있다.Although the cosmetic of the present invention is suitably applied to humans, it is applied to non-human animals (eg, mice, rats, hamsters, dogs, cats, cattle, pigs, monkeys, etc.) as long as each action and effect is shown. You may.
본 발명의 화장료는, 상기 항노화제, 상기 항산화제, 상기 항염증제 및 상기 미백제로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종을 함유하므로, 피부에 사용한 경우, 뛰어난 항노화 작용, 항산화 작용, 항염증 작용 및 미백 작용 중 적어도 어느 하나의 작용을 발휘하는 점에서 유용하다.Since the cosmetic of the present invention contains at least one selected from the group consisting of the anti-aging agent, the antioxidant, the anti-inflammatory agent and the whitening agent, it has excellent anti-aging action, antioxidant action, anti-inflammatory action and It is useful in that it exhibits at least any one of the whitening actions.
실시예Example
이하에 제조예 및 시험예를 들어 본 발명을 구체적으로 설명하지만, 본 발명은 이들 시험예에 조금도 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be specifically described with reference to production examples and test examples, but the present invention is not limited to these test examples at all.
＜제조예 1: 산쑥(Artemisia tridentata) 발효액 1의 조제＞<Preparation Example 1: Preparation of Artemisia tridentata fermented liquid 1>
-종국 조제 공정--Final preparation process-
국균(Aspergillus oryzae, 균주명: AOK1714, 가부시키가이샤 아키타 곤노 쇼텐 제조)을 백금이(白金耳; platinum loop)로 취하고, 멸균수 50mL에 현탁하여 국균 용액을 제작했다. 상기 국균 용액의 균수를, 토마 혈구 계산판(Thoma hemocytometer)(EKDS 제조)을 이용하여 산정한바, 1.0×105개/mL였다. Aspergillus oryzae , strain name: AOK1714, manufactured by Akita Konno Shoten, Ltd.) was taken as a platinum ear (white gold; platinum loop), and suspended in 50 mL of sterilized water to prepare a Korean bacterial solution. The number of bacteria in the Korean bacterial solution was calculated using a Thomas hemocytometer (manufactured by EKDS), and was 1.0×10 5 cells/mL.
이어서, 0.5cm∼5cm로 절단한 산쑥(Artemisia tridentata)(가부시키가이샤 알비온 제조) 10g을 삼각 플라스크에 넣어, 가압 멸균하고, 여기에 상기 국균 용액을 2mL 접종해, 30℃에서 168시간 정치 배양했다. 배양 종료 후, 45℃에서 24시간 건조하여, 「산쑥 종국」을 얻었다. Next, 10 g of Artemisia tridentata (manufactured by Albion, Ltd.) cut into 0.5 cm to 5 cm was placed in an Erlenmeyer flask, autoclaved, and 2 mL of the above-mentioned stock solution was inoculated thereto, followed by stationary culture at 30 ° C. for 168 hours. . After completion of the culture, it was dried at 45° C. for 24 hours to obtain “Samsara Seed”.
-발효 공정--Fermentation process-
분쇄기(슈가밀)를 이용하여 산쑥(Artemisia tridentata)(가부시키가이샤 알비온 제조)을 분쇄하고, 2mm의 메시 스크린을 통과시켜, 산쑥 분쇄물을 얻었다. 이 산쑥 분쇄물 50g에 물을 1,000mL 첨가하고, 혼합한 후, 상기 종국 조제 공정에서 얻은 산쑥 종국(균수: 약 1.0×106개/mL)을 20mL 접종했다. 이어서, 25℃에서 22시간 전(前)배양했다. 얻어진 발효액을, 규조토를 이용해 여과하여, 「산쑥 발효액 1」을 얻었다. Artemisia tridentata (manufactured by Albion Co., Ltd.) was pulverized using a grinder (sugar mill), and passed through a 2 mm mesh screen to obtain a pulverized mugwort. After adding and mixing 1,000 mL of water to 50 g of this milled wild mugwort seed, 20 mL of wild mugwort seed (the number of bacteria: about 1.0×10 6 pieces/mL) obtained in the seed preparation step above was inoculated. Then, it was pre-cultured at 25°C for 22 hours. The obtained fermented liquid was filtered using diatomaceous earth, and "Sagebrew fermented liquid 1" was obtained.
＜제조예 2: 산쑥(Artemisia tridentata) 발효액 2의 조제＞<Production Example 2: Preparation of Artemisia tridentata fermented broth 2>
상기 제조예 1에 있어서, 산쑥 종국을, 쌀을 원료로 한 종국(Aspergillus oryzae, 백국 시라카미, 가부시키가이샤 아키타 곤노 쇼텐 제조)(이하, 「쌀 종국(米種麴)」이라고 칭하는 경우가 있다)으로 변경한 것 이외에는, 상기 제조예 1과 마찬가지의 방법으로 「산쑥 발효액 2」를 얻었다.In the above production example 1, wild mugwort seed as a raw material ( Aspergillus oryzae , produced by Akita Konno Shoten Co., Ltd., Shirakami Shirakami, Ltd.) (hereinafter, "rice seed" may be called. ), "fermented mugwort 2" was obtained in the same manner as in Production Example 1 above.
＜비교 제조예 1: 산쑥(Artemisia tridentata) 추출액의 조제＞<Comparative Preparation Example 1: Preparation of Artemisia tridentata extract>
분쇄기(슈가밀)를 이용하여 산쑥(Artemisia tridentata)(가부시키가이샤 알비온 제조)을 분쇄하고, 2mm의 메시 스크린을 통과시켜, 산쑥 분쇄물을 얻었다. 이 산쑥 분쇄물 50g에 물을 1,000mL 첨가하고, 혼합한 후, 25℃에서 22시간 교반했다. 이어서, 얻어진 교반물을, 규조토를 이용해 여과하여, 「산쑥 추출액」을 얻었다. Artemisia tridentata (manufactured by Albion Co., Ltd.) was pulverized using a grinder (sugar mill), and passed through a 2 mm mesh screen to obtain a pulverized mugwort. After adding and mixing 1,000 mL of water to 50 g of this wild mugwort pulverized product, it stirred at 25 degreeC for 22 hours. Next, the obtained stirred product was filtered using diatomaceous earth to obtain a "Sagebrush extract".
(시험예 A-1: 접촉각의 측정)(Test Example A-1: Measurement of contact angle)
제조예 1에서 얻어진 산쑥 발효액 1, 제조예 2에서 얻어진 산쑥 발효액 2, 및 비교 제조예 1에서 얻어진 산쑥 추출액을 시험 시료로 하여, 이하의 방법으로 접촉각을 측정했다.The contact angle was measured by using the fermented wild mugwort fermented broth 1 obtained in Production Example 1, the wild mugwort fermented broth 2 obtained in Production Example 2, and the wild mugwort extract obtained in Comparative Production Example 1 as test samples.
구체적으로는, 동적 접촉각·표면장력 측정장치(FTA1000 Falcon, First Ten Angstroms사 제조)를 이용하고, 상기 장치의 샘플 스테이지(알루미늄제)에 각 시험 시료를 각각 3μL 적하해, 온도 22℃, 상대습도 20％의 조건하에서, 액적법으로 측정을 행하였다. 1,000ms의 접촉각 θ(°)를 θ/2법으로 구했다. 접촉각의 측정은 3회 행하고, 그 평균치를 구했다. 결과를 하기 표 1에 나타낸다. 또, 각 시험 시료의 접촉각 측정 시의 액적의 일례를 도 1a∼도 1c에 나타낸다.Specifically, using a dynamic contact angle/surface tension measuring apparatus (FTA1000 Falcon, manufactured by First Ten Angstroms), 3 µL of each test sample was respectively dropped onto the sample stage (aluminum) of the apparatus, temperature 22°C, relative humidity Measurement was performed by the droplet method under the conditions of 20%. The contact angle θ (°) of 1,000 ms was obtained by the θ/2 method. The measurement of the contact angle was performed 3 times, and the average value was calculated|required. The results are shown in Table 1 below. In addition, an example of the droplet at the time of the contact angle measurement of each test sample is shown to FIG. 1A - FIG. 1C.
[표 1][Table 1]
비교 제조예 1에서 얻어진 산쑥 추출액에 비하여, 제조예 1에서 얻어진 산쑥 발효액 1 및 제조예 2에서 얻어진 산쑥 발효액 2는, 모두 접촉각이 작고, 81°이하이며, 피부 발림성이 뛰어난 것이었다. 또한, 제조예 1에서 얻어진 산쑥 발효액 1은, 접촉각이 78°이하이며, 보다 피부 발림성이 뛰어난 것이었다.Compared to the mugwort extract obtained in Comparative Preparation Example 1, the fermented wild mugwort fermented broth 1 obtained in Production Example 1 and the fermented wild mugwort fermented broth 2 obtained in Production Example 2 both had a small contact angle and were 81° or less, and had excellent skin application properties. In addition, the mugwort fermented broth 1 obtained in Production Example 1 had a contact angle of 78° or less, and was more excellent in application to the skin.
(시험예 1-1: 매트릭스 메탈로프로테이나아제-1(MMP-1) 활성 저해 작용 시험)(Test Example 1-1: matrix metalloproteinase-1 (MMP-1) activity inhibitory activity test)
제조예 1에서 얻어진 산쑥 발효액 1, 제조예 2에서 얻어진 산쑥 발효액 2, 및 비교 제조예 1에서 얻어진 산쑥 추출액을 피험 시료로서 이용하여, Wunsch and Heidrich법을 일부 개변한 하기의 시험 방법에 의해, 매트릭스 메탈로프로테이나아제-1(MMP-1) 활성 저해 작용을 시험했다.Using the wild mugwort fermented broth 1 obtained in Production Example 1, the wild mugwort fermented broth 2 obtained in Production Example 2, and the wild mugwort extract obtained in Comparative Production Example 1 as test samples, according to the following test method with some modifications of the Wunsch and Heidrich method, a matrix Metalloproteinase-1 (MMP-1) activity inhibitory activity was tested.
뚜껑이 있는 시험관에서, 각 피험 시료를 20mmol/L 염화칼슘 함유 0.1mol/L Tris-HCl 완충액(pH 7.1)에 용해했다. 이어서, 상기 피험 시료의 용해액 50μL와, MMP-1(COLLAGENASE Type IV from Clostridium histolyticum, Sigma사 제조) 용액 50μL와, Pz-peptide(Pz-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg-OH, BACHEM Feinchemikalien AG사 제조) 용액 400μL를 혼합하고, 3℃에서 30분간 반응시킨 후, 25mmol/L 구연산 용액 1mL를 첨가하여 반응을 정지했다. 또한, 이때의 상기 피험 시료의 종(終)농도는, 하기 표 2에 나타내는 농도였다. 이어서, 초산(酢酸)에틸 5mL를 첨가하고, 세차게 진탕(振蕩)했다. 이것을 1,600×g으로 10분간 원심분리하여, 초산에틸층의 파장 320nm에 있어서의 흡광도를 측정했다.In a test tube with a lid, each test sample was dissolved in 0.1 mol/L Tris-HCl buffer (pH 7.1) containing 20 mmol/L calcium chloride. Then, 50 µL of the solution of the test sample, 50 µL of MMP-1 (COLLAGENASE Type IV from Clostridium histolyticum, manufactured by Sigma), 50 µL of Pz-peptide (Pz-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg-OH, After mixing 400 microliters of BACHEM Feinchemikalien AG solutions and making it react at 3 degreeC for 30 minutes, 1 mL of 25 mmol/L citric acid solution was added and reaction was stopped. Incidentally, the species concentration of the test sample at this time was the concentration shown in Table 2 below. Next, 5 mL of ethyl acetate was added, and it shook vigorously. This was centrifuged at 1,600 x g for 10 minutes, and the absorbance of the ethyl acetate layer at a wavelength of 320 nm was measured.
또, 블랭크로서, MMP-1 용액(효소 용액)을, 0.1mol/L Tris-HCl 완충액(pH 7.1)으로 변경한 것 이외에는, 상기와 마찬가지의 조작 및 흡광도의 측정을 행하였다.In addition, as a blank, the same operation and absorbance measurement were performed as above except that the MMP-1 solution (enzyme solution) was changed to 0.1 mol/L Tris-HCl buffer (pH 7.1).
또한, 컨트롤로서, 피험 시료의 용해액을, 피험 시료를 포함하지 않는 20mmol/L 염화칼슘 함유 0.1mol/L Tris-HCl 완충액(pH 7.1)으로 변경한 것 이외에는, 상기와 마찬가지의 조작 및 흡광도의 측정을 행하였다.In addition, as a control, the same operation as above and measurement of absorbance except that the solution of the test sample was changed to 0.1 mol/L Tris-HCl buffer (pH 7.1) containing 20 mmol/L calcium chloride not containing the test sample. was done.
얻어진 흡광도의 측정치로부터, 하기 식 1에 의거하여 MMP-1 활성 저해율을 산출했다. 결과를 하기 표 2에 나타낸다.From the obtained absorbance measurement value, the MMP-1 activity inhibition rate was calculated based on the following formula (1). The results are shown in Table 2 below.
＜식 1＞<Formula 1>
MMP-1 활성 저해율(％)＝{1-(C-D)/(A-B)}×100 MMP-1 activity inhibition rate (%) = {1-(C-D)/(A-B)}×100
상기 식 1에 있어서, A∼D는 각각 이하를 나타낸다.In the formula (1), A to D each represent the following.
A: 피험 시료 무첨가, 효소 첨가에서의 파장 320nm에 있어서의 흡광도 A: Absorbance at a wavelength of 320 nm in the absence of test sample and addition of enzyme
B: 피험 시료 무첨가, 효소 무첨가에서의 파장 320nm에 있어서의 흡광도 B: Absorbance at a wavelength of 320 nm with no test sample added and no enzyme added
C: 피험 시료 첨가, 효소 첨가에서의 파장 320nm에 있어서의 흡광도 C: Absorbance at a wavelength of 320 nm in the addition of the test sample and the addition of the enzyme
D: 피험 시료 첨가, 효소 무첨가에서의 파장 320nm에 있어서의 흡광도 D: Absorbance at a wavelength of 320 nm with addition of test sample and no enzyme
[표 2][Table 2]
(시험예 1-2: 히알루론산 합성효소 3(HAS3) mRNA 발현 촉진 작용 시험)(Test Example 1-2: Hyaluronic acid synthase 3 (HAS3) mRNA expression promotion test)
제조예 1에서 얻어진 산쑥 발효액 1, 제조예 2에서 얻어진 산쑥 발효액 2, 및 비교 제조예 1에서 얻어진 산쑥 추출액을 피험 시료로서 이용하여, 하기의 시험 방법에 의해, 히알루론산 합성효소 3(HAS3) mRNA 발현 촉진 작용을 시험했다.Using the wild mugwort fermented broth 1 obtained in Production Example 1, the wild mugwort fermented broth 2 obtained in Production Example 2, and the wild mugwort extract obtained in Comparative Production Example 1 as test samples, hyaluronic acid synthase 3 (HAS3) mRNA was performed by the following test method. The expression promoting action was tested.
정상 인간 표피각화세포 기초 배지(HuMedia-KB2, 구라시키 보우세키 가부시키가이샤 제조)에, 종농도가 하기 표 3에 나타내는 농도가 되도록, 각 피험 시료를 용해하여, 피험 시료 첨가 배지를 조제했다.Each test sample was dissolved in a normal human epidermal keratinocyte basal medium (HuMedia-KB2, manufactured by Kurashiki Boseki Co., Ltd.) so that the final concentration became the concentration shown in Table 3 below to prepare a test sample-added medium.
정상 인간 신생아 표피각화세포(Normal Human Epidermal Keratinocytes; NHEK, 구라시키 보우세키 가부시키가이샤 제조)를, 정상 인간 표피각화세포 증식용 배지(HuMedia-KG2, 구라시키 보우세키 가부시키가이샤 제조)를 이용하여 37℃, 5％ CO2의 조건하에서 컨플루언트(confluent)가 될 때까지 배양한 후, 트립신 처리에 의해 세포를 회수했다. 이것을 정상 인간 표피각화세포 증식용 배지(HuMedia-KG2)에 의해 1.5×105 세포/mL로 조정했다.Normal Human Epidermal Keratinocytes (NHEK, manufactured by Kurashiki Boseki Co., Ltd.) were prepared using a medium for normal human epidermal keratinocyte proliferation (HuMedia-KG2, manufactured by Kurashiki Boseki Co., Ltd.) After culturing until confluent under conditions of 37°C and 5% CO 2 , cells were recovered by trypsinization. This was adjusted to 1.5×10 5 cells/mL with a medium for proliferation of normal human epidermal keratinocytes (HuMedia-KG2).
이어서, 35mm 샤알레에 상기 NHEK(1.5×105 세포/mL)를 2mL 파종하고, 37℃, 5％ CO2 조건하에서 하룻밤 배양했다. 배양 종료 후, 배지를 정상 인간 표피각화세포 기초 배지(HuMedia-KB2)로 교환하고, 24시간 더 배양했다. 배양 종료 후, 배지를 상기 피험 시료 첨가 배지 2mL로 교환하고, 37℃, 5％ CO2의 조건하에서 24시간 배양했다. 배양 종료 후, 배양액을 제거하고, RNA 추출용 시약(ISOGEN Ⅱ(카탈로그 번호: 311-07361), 가부시키가이샤 니폰 진 제조)으로 총 RNA를 추출해, 각각의 RNA량을 분광 광도계로 측정하고, 정제수를 이용하여 200ng/μL가 되도록 총 RNA를 조제했다.Next, 2 mL of the NHEK (1.5×10 5 cells/mL) was seeded in a 35 mm petri dish, and cultured overnight at 37° C. under 5% CO 2 conditions. After completion of the culture, the medium was replaced with a normal human epidermal keratinocyte basal medium (HuMedia-KB2), and the culture was further performed for 24 hours. After completion of the culture, the medium was replaced with 2 mL of the test sample addition medium, and cultured at 37°C and 5% CO 2 for 24 hours. After completion of the culture, the culture solution is removed, total RNA is extracted with a reagent for RNA extraction (ISOGEN II (catalog number: 311-07361), manufactured by Nippon Gene Co., Ltd.), the amount of each RNA is measured with a spectrophotometer, and purified water was used to prepare total RNA so as to be 200 ng/μL.
또, 컨트롤로서, 상기 피험 시료 첨가 배지 2mL를, 피험 시료를 포함하지 않는 정상 인간 표피각화세포 기초 배지(HuMedia-KB2) 2mL로 변경한 것 이외에는, 상기와 마찬가지의 조작 및 흡광도의 측정을 행하고, 상기와 마찬가지의 방법으로 200ng/μL가 되도록 총 RNA를 조제했다.In addition, as a control, the same operation and absorbance measurement were performed as above, except that 2 mL of the test sample addition medium was changed to 2 mL of normal human epidermal keratinocyte basal medium (HuMedia-KB2) not containing the test sample, Total RNA was prepared so that it might become 200 ng/microliter by the method similar to the above.
상기 각 총 RNA를 주형(鑄型)으로 하여, 히알루론산 합성효소 3(HAS3) mRNA 및 내부 표준인 글리세르알데히드-3-인산 디히드로게나아제(GAPDH) mRNA의 발현량을 측정했다. mRNA의 검출은, 리얼타임 PCR 장치(Thermal Cycler DIce(등록상표) Real Time System Ⅲ, 다카라 바이오 가부시키가이샤 제조), 및 SYBR(등록상표) PrimeScript(등록상표) RT-PCR Kit(Perfect Real Time(카탈로그 번호: RR063A), 다카라 바이오 가부시키가이샤 제조)를 이용한 2스텝 RT-PCR 반응에 의해 행하였다.Using each of the total RNAs as a template, the expression levels of hyaluronic acid synthase 3 (HAS3) mRNA and internal standard glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) mRNA were measured. The detection of mRNA was performed by a real-time PCR apparatus (Thermal Cycler DIce (registered trademark) Real Time System Ⅲ, manufactured by Takara Bio Corporation), and SYBR (registered trademark) PrimeScript (registered trademark) RT-PCR Kit (Perfect Real Time ( It was carried out by a two-step RT-PCR reaction using catalog number: RR063A) (manufactured by Takara Bio Co., Ltd.).
피험 시료 무첨가 및 피험 시료 첨가의 HAS3 mRNA의 발현량은, GAPDH mRNA의 발현량으로 보정했다. 이 보정치로부터, 하기 식 2에 의거하여 HAS3 mRNA 발현 촉진율을 산출했다. 결과를 하기 표 3에 나타낸다.The expression level of HAS3 mRNA without the addition of the test sample and with the addition of the test sample was corrected by the expression level of GAPDH mRNA. From this correction value, the HAS3 mRNA expression promotion rate was calculated based on the following formula (2). The results are shown in Table 3 below.
＜식 2＞<Formula 2>
HAS3 mRNA 발현 촉진율(％)＝A/B×100HAS3 mRNA expression promotion rate (%) = A/B × 100
상기 식 2에 있어서, A 및 B는 각각 이하를 나타낸다.In Formula 2, A and B each represent the following.
A: 피험 시료 첨가 시의 보정치 A: Correction value at the time of addition of test sample
B: 피험 시료 무첨가 시의 보정치 B: Correction value when no test sample is added
[표 3][Table 3]
(시험예 1-3: DPPH 라디칼 소거 작용 시험)(Test Example 1-3: DPPH radical scavenging action test)
제조예 1에서 얻어진 산쑥 발효액 1, 제조예 2에서 얻어진 산쑥 발효액 2, 및 비교 제조예 1에서 얻어진 산쑥 추출액을 피험 시료로서 이용하여, 하기의 시험 방법에 의해, DPPH 라디칼 소거 작용을 시험했다.The DPPH radical scavenging activity was tested by the following test method, using the mugwort fermented broth 1 obtained in Production Example 1, the wild mugwort fermented broth 2 obtained in Production Example 2, and the mugwort extract obtained in Comparative Production Example 1 as test samples.
에탄올 용액(후지필름 와코 준야쿠 가부시키가이샤 제조)에, 각 피험 시료를 용해하여, 피험 시료 용액을 조제했다.Each test sample was dissolved in an ethanol solution (manufactured by FUJIFILM Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) to prepare a test sample solution.
150μmol/L DPPH(diphenyl-p-picrylhydrazyl) 에탄올 용액 3mL에, 상기 피험 시료 용액 3mL를 첨가하고, 바로 용기를 밀전(密栓)하여 흔들어 섞고, 30분간 정치한 후, 파장 520nm의 흡광도를 측정했다. 또한, 이때의 상기 피험 시료의 종농도는, 하기 표 4에 나타내는 농도였다.To 3 mL of 150 μmol/L DPPH (diphenyl-p-picrylhydrazyl) ethanol solution, 3 mL of the test sample solution was added, the container was immediately sealed tightly, shaken, and left still for 30 minutes, and then the absorbance at a wavelength of 520 nm was measured. In addition, the final concentration of the test sample at this time was the concentration shown in Table 4 below.
또, 블랭크로서, DPPH 에탄올 용액을, DPPH를 포함하지 않는 에탄올 용액으로 변경한 것 이외에는, 상기와 마찬가지의 조작 및 흡광도의 측정을 행하였다.In addition, as a blank, except having changed the DPPH ethanol solution into the ethanol solution which does not contain DPPH, the operation similar to the above and the measurement of absorbance were performed.
또한, 컨트롤로서, 피험 시료 용액을, 피험 시료를 포함하지 않는 에탄올 용액(후지필름 와코 준야쿠 가부시키가이샤 제조)으로 변경한 것 이외에는, 상기와 마찬가지의 조작 및 흡광도의 측정을 행하였다.In addition, as a control, the same operation and absorbance measurement were performed as described above, except that the test sample solution was changed to an ethanol solution containing no test sample (manufactured by FUJIFILM Wako Pure Chemical Industries, Ltd.).
얻어진 흡광도의 측정치로부터, 하기 식 3에 의거하여 DPPH 라디칼 소거율을 산출했다. 결과를 하기 표 4에 나타낸다.From the obtained absorbance measurement value, the DPPH radical scavenging rate was calculated based on the following formula (3). The results are shown in Table 4 below.
＜식 3＞<Formula 3>
DPPH 라디칼 소거율(％)＝{A-(B-C)}/A×100DPPH radical scavenging rate (%) = {A-(B-C)}/A×100
상기 식 3에 있어서, A∼C는 각각 이하를 나타낸다.In the formula (3), A to C each represent the following.
A: 피험 시료 무첨가, DPPH 첨가에서의 파장 520nm에 있어서의 흡광도 A: Absorbance at a wavelength of 520 nm in the absence of test sample and addition of DPPH
B: 피험 시료 첨가, DPPH 첨가에서의 파장 520nm에 있어서의 흡광도 B: Absorbance at a wavelength of 520 nm with addition of test sample and addition of DPPH
C: 피험 시료 무첨가, DPPH 무첨가의 파장 520nm에 있어서의 흡광도 C: Absorbance at a wavelength of 520 nm with no addition of test sample and no addition of DPPH
[표 4][Table 4]
(시험예 1-4: 히알루로니다아제 활성 저해 작용 시험)(Test Example 1-4: Hyaluronidase activity inhibition test)
제조예 1에서 얻어진 산쑥 발효액 1, 제조예 2에서 얻어진 산쑥 발효액 2, 및 비교 제조예 1에서 얻어진 산쑥 추출액을 피험 시료로서 이용하여, 하기의 시험 방법에 의해, 히알루로니다아제 활성 저해 작용을 시험했다.The hyaluronidase activity inhibitory activity was tested by the following test method using the wild mugwort fermented broth 1 obtained in Production Example 1, the wild mugwort fermented broth 2 obtained in Production Example 2, and the wild mugwort extract obtained in Comparative Production Example 1 as test samples. did.
각 피험 시료를 0.1mol/L 초산 완충액(pH 3.5)에 용해하여, 피험 시료 용액을 조제했다.Each test sample was dissolved in 0.1 mol/L acetate buffer (pH 3.5) to prepare a test sample solution.
상기 피험 시료 용액 0.2mL에, 히알루로니다아제 용액(Type IV-S(from bovine testis), 400 NF units/mL, SIGMA사 제조) 0.1mL를 첨가하고, 37℃에서 20분간 반응시켰다. 이어서, 활성화제로서 2.5mmol/L 염화칼슘 0.2mL를 첨가하고, 37℃에서 20분간 더 반응시켰다. 이것에 0.8mg/mL 히알루론산 나트륨 용액(from rooster comb)(후지필름 와코 준야쿠 가부시키가이샤 제조) 0.5mL를 첨가하고, 37℃에서 40분간 반응시켰다. 또한, 이때의 상기 피험 시료의 종농도는, 하기 표 5에 나타내는 농도였다. 이어서, 0.4mol/L 수산화나트륨 0.2mL를 첨가하고 반응을 정지해, 냉각한 후, 각 반응 용액에 붕산 용액 0.2mL를 첨가하고, 3분간 자비(煮沸)했다. 빙냉(氷冷) 후, p-DABA 시약(p-디메틸아미노벤즈알데히드 10g을 10N 염산 12.5mL와 초산 87.5mL의 혼합액에 용해하고, 초산으로 10배로 희석한 것) 6mL를 첨가하고, 37℃에서 20분간 반응시켰다. 이어서, 파장 585nm에 있어서의 흡광도를 측정했다.To 0.2 mL of the test sample solution, 0.1 mL of a hyaluronidase solution (Type IV-S (from bovine testis), 400 NF units/mL, manufactured by SIGMA) was added and reacted at 37°C for 20 minutes. Then, 0.2 mL of 2.5 mmol/L calcium chloride was added as an activator, and the reaction was further carried out at 37°C for 20 minutes. 0.5 mL of a 0.8 mg/mL sodium hyaluronate solution (from rooster comb) (manufactured by FUJIFILM Wako Junyaku Co., Ltd.) was added to this, and it was made to react at 37 degreeC for 40 minutes. In addition, the final concentration of the test sample at this time was the concentration shown in Table 5 below. Then, 0.2 mL of 0.4 mol/L sodium hydroxide was added, reaction was stopped, and after cooling, 0.2 mL of boric-acid solution was added to each reaction solution, and it boiled for 3 minutes. After cooling on ice, 6 mL of p-DABA reagent (10 g of p-dimethylaminobenzaldehyde dissolved in a mixture of 12.5 mL of 10N hydrochloric acid and 87.5 mL of acetic acid and diluted 10-fold with acetic acid) is added, and 20 at 37°C reacted for minutes. Next, the absorbance at a wavelength of 585 nm was measured.
또, 블랭크로서, 히알루로니다아제 용액(효소 용액)을, 0.1mol/L 초산 완충액(pH 3.5)으로 변경한 것 이외에는, 상기와 마찬가지의 조작 및 흡광도의 측정을 행하였다.In addition, the same operation and absorbance measurement were performed as above except that the hyaluronidase solution (enzyme solution) was changed to 0.1 mol/L acetate buffer (pH 3.5) as a blank.
또한, 컨트롤로서, 피험 시료 용액을, 피험 시료를 포함하지 않는 0.1mol/L 초산 완충액(pH 3.5)으로 변경한 것 이외에는, 상기와 마찬가지의 조작 및 흡광도의 측정을 행하였다.In addition, as a control, the same operation and absorbance measurement were performed as above, except that the test sample solution was changed to a 0.1 mol/L acetate buffer (pH 3.5) containing no test sample.
얻어진 흡광도의 측정치로부터, 하기 식 4에 의거하여 히알루로니다아제 활성 저해율을 산출했다. 결과를 하기 표 5에 나타낸다.From the obtained absorbance measurement value, the hyaluronidase activity inhibition rate was calculated based on the following formula (4). The results are shown in Table 5 below.
＜식 4＞<Formula 4>
히알루로니다아제 활성 저해율(％)＝{1-(C-D)/(A-B)}×100Hyaluronidase activity inhibition rate (%) = {1-(C-D)/(A-B)}×100
상기 식 4에 있어서, A∼D는 각각 이하를 나타낸다.In the formula (4), A to D each represent the following.
A: 피험 시료 무첨가, 효소 첨가에서의 파장 585nm에 있어서의 흡광도 A: Absorbance at a wavelength of 585 nm in the absence of test sample and addition of enzyme
B: 피험 시료 무첨가, 효소 무첨가에서의 파장 585nm에 있어서의 흡광도 B: Absorbance at a wavelength of 585 nm with no test sample added and no enzyme added
C: 피험 시료 첨가, 효소 첨가에서의 파장 585nm에 있어서의 흡광도 C: Absorbance at a wavelength of 585 nm in addition of test sample and enzyme
D: 피험 시료 첨가, 효소 무첨가에서의 파장 585nm에 있어서의 흡광도 D: Absorbance at a wavelength of 585 nm with addition of test sample and no enzyme
[표 5][Table 5]
(시험예 1-5: 티로시나아제 활성 저해 작용 시험)(Test Example 1-5: Tyrosinase activity inhibitory activity test)
제조예 1에서 얻어진 산쑥 발효액 1, 제조예 2에서 얻어진 산쑥 발효액 2, 및 비교 제조예 1에서 얻어진 산쑥 추출액을 피험 시료로서 이용하여, 하기의 시험 방법에 의해, 티로시나아제 활성 저해 작용을 시험했다.The tyrosinase activity inhibitory activity was tested by the following test method using the wild mugwort fermented broth 1 obtained in Production Example 1, the wild mugwort fermented broth 2 obtained in Production Example 2, and the wild mugwort extract obtained in Comparative Production Example 1 as test samples. .
각 피험 시료를 25％ DMSO 용액에 용해하여, 피험 시료 용액을 조제했다.Each test sample was dissolved in a 25% DMSO solution to prepare a test sample solution.
48 웰(well) 플레이트에, 맥바인(Mcllvaine) 완충액(pH 6.8) 0.2mL와, 0.3mg/mL 티로신 용액 0.06mL와, 상기 피험 시료 용액 0.18mL를 첨가하고, 37℃에서 10분간 정치했다. 이것에, 800 유닛/mL 티로시나아제 용액(SIGMA사 제조) 0.02mL를 첨가하고, 37℃에서 15분간 더 반응시켰다. 반응 종료 후, 파장 475nm에 있어서의 흡광도를 측정했다. 또한, 이때의 상기 피험 시료의 종농도는, 하기 표 6에 나타내는 농도였다.To a 48-well plate, 0.2 mL of Mcllvaine buffer (pH 6.8), 0.06 mL of a 0.3 mg/mL tyrosine solution, and 0.18 mL of the test sample solution were added, and the mixture was left still at 37°C for 10 minutes. To this, 0.02 mL of an 800 unit/mL tyrosinase solution (manufactured by SIGMA) was added, and the mixture was further reacted at 37°C for 15 minutes. After completion of the reaction, the absorbance at a wavelength of 475 nm was measured. In addition, the final concentration of the test sample at this time was the concentration shown in Table 6 below.
또, 블랭크로서, 티로시나아제 용액(효소 용액)을, 맥바인 완충액(pH 6.8)으로 변경한 것 이외에는, 상기와 마찬가지의 조작 및 흡광도의 측정을 행하였다.In addition, as a blank, the same operation and absorbance measurement as above were performed except that the tyrosinase solution (enzyme solution) was changed to McVine buffer (pH 6.8).
또한, 컨트롤로서, 피험 시료 용액을, 피험 시료를 포함하지 않는 25％ DMSO 용액으로 변경한 것 이외에는, 상기와 마찬가지의 조작 및 흡광도의 측정을 행하였다.In addition, as a control, the same operation and absorbance measurement were performed as described above, except that the test sample solution was changed to a 25% DMSO solution containing no test sample.
얻어진 흡광도의 측정치로부터, 하기 식 5에 의거하여 티로시나아제 활성 저해율을 산출했다. 결과를 하기 표 6에 나타낸다.From the obtained absorbance measurement value, the tyrosinase activity inhibition rate was calculated based on the following formula (5). The results are shown in Table 6 below.
＜식 5＞<Formula 5>
티로시나아제 활성 저해율(％)＝{1-(C-D)/(A-B)}×100Tyrosinase activity inhibition rate (%) = {1-(C-D)/(A-B)}×100
상기 식 5에 있어서, A∼D는 각각 이하를 나타낸다.In the formula (5), A to D each represent the following.
A: 피험 시료 무첨가, 효소 첨가에서의 파장 475nm에 있어서의 흡광도 A: Absorbance at a wavelength of 475 nm in the absence of test sample and addition of enzyme
B: 피험 시료 무첨가, 효소 무첨가에서의 파장 475nm에 있어서의 흡광도 B: Absorbance at a wavelength of 475 nm with no test sample added and no enzyme added
C: 피험 시료 첨가, 효소 첨가에서의 파장 475nm에 있어서의 흡광도 C: Absorbance at a wavelength of 475 nm in addition of test sample and enzyme
D: 피험 시료 첨가, 효소 무첨가에서의 파장 475nm에 있어서의 흡광도 D: Absorbance at a wavelength of 475 nm with addition of test sample and no enzyme
[표 6][Table 6]
＜제조예 3: 사철쑥(Artemisia capillaris Thunbergii) 발효액 1의 조제＞<Production Example 3: Preparation of Artemisia capillaris Thunbergii fermented broth 1>
상기 제조예 1의 종국 조제 공정에 있어서, 산쑥을, 사철쑥(Artemisia capillaris Thunbergii)(가부시키가이샤 알비온 제조)으로 변경한 것 이외에는, 상기 제조예 1의 종국 조제 공정과 마찬가지의 방법으로 「사철쑥 종국」을 조제했다.In the final preparation step of Production Example 1, except that wild mugwort was changed to Artemisia capillaris Thunbergii (manufactured by Albion Co., Ltd.), in the same manner as in the final preparation step of Production Example 1, "Mugwort final" was prepared
또, 상기 제조예 1의 발효 공정에 있어서, 산쑥을, 사철쑥(Artemisia capillaris Thunbergii)(가부시키가이샤 알비온 제조)으로 변경한 것 이외에는, 상기 제조예 1의 발효 공정과 마찬가지의 방법으로 「사철쑥 발효액 1」을 얻었다.In addition, in the fermentation process of Production Example 1, except that wild mugwort was changed to Artemisia capillaris Thunbergii (manufactured by Albion Co., Ltd.), in the same manner as in the fermentation process of Production Example 1, "Fermented mugwort 1 ' was obtained.
＜제조예 4: 사철쑥(Artemisia capillaris Thunbergii) 발효액 2의 조제＞<Production Example 4: Preparation of Artemisia capillaris Thunbergii fermented broth 2>
상기 제조예 3에 있어서, 사철쑥 종국을, 쌀 종국(Aspergillus oryzae, 백국 시라카미, 가부시키가이샤 아키타 곤노 쇼텐 제조)으로 변경한 것 이외에는, 상기 제조예 3과 마찬가지의 방법으로 「사철쑥 발효액 2」를 얻었다.In Production Example 3, "Mugwort fermented broth 2" was prepared in the same manner as in Production Example 3, except for changing the mugwort seed broth to rice seed broth (Aspergillus oryzae, Shirakami, Akita Konno Shoten, Ltd.). got it
＜비교 제조예 2: 사철쑥(Artemisia capillaris Thunbergii) 추출액의 조제＞<Comparative Preparation Example 2: Preparation of Artemisia capillaris Thunbergii extract>
상기 비교 제조예 1에 있어서, 산쑥을, 사철쑥(Artemisia capillaris Thunbergii)(가부시키가이샤 알비온 제조)으로 변경한 것 이외에는, 상기 비교 제조예 1과 마찬가지의 방법으로 「사철쑥 추출액」을 얻었다.In Comparative Production Example 1, "Mugwort extract" was obtained in the same manner as in Comparative Production Example 1, except that wild mugwort was changed to Artemisia capillaris Thunbergii (manufactured by Albion Co., Ltd.).
(시험예 A-2: 접촉각의 측정)(Test Example A-2: Measurement of contact angle)
상기 시험예 A-1에 있어서, 시험 시료를, 제조예 3에서 얻어진 사철쑥 발효액 1, 제조예 4에서 얻어진 사철쑥 발효액 2, 및 비교 제조예 2에서 얻어진 사철쑥 추출액으로 변경한 것 이외에는, 상기 시험예 A-1과 마찬가지의 방법으로 접촉각을 측정했다. 결과를 하기 표 7에 나타낸다. 또, 각 시험 시료의 접촉각 측정 시의 액적의 일례를 도 2a∼도 2c에 나타낸다.In Test Example A-1, except that the test samples were changed to the fermented mugwort fermented solution 1 obtained in Production Example 3, the fermented mugwort fermented in Production Example 4, and the mugwort extract obtained in Comparative Production Example 2, Test Example A The contact angle was measured in the same way as -1. The results are shown in Table 7 below. In addition, an example of the droplet at the time of the contact angle measurement of each test sample is shown to FIG. 2A - FIG. 2C.
[표 7][Table 7]
비교 제조예 2에서 얻어진 사철쑥 추출액에 비하여, 제조예 3에서 얻어진 사철쑥 발효액 1 및 제조예 4에서 얻어진 사철쑥 발효액 2는, 모두 접촉각이 작고, 81°이하이며, 피부 발림성이 뛰어난 것이었다. 또한, 제조예 3에서 얻어진 사철쑥 발효액 1은, 접촉각이 78°이하이며, 보다 피부 발림성이 뛰어난 것이었다.Compared to the mugwort wormwood extract obtained in Comparative Preparation Example 2, the fermented mugwort fermented liquid 1 obtained in Preparation Example 3 and the fermented mugwort fermented in Preparation Example 4 both had a small contact angle of 81° or less, and had excellent skin application properties. In addition, the mugwort fermented broth 1 obtained in Production Example 3 had a contact angle of 78° or less, and was more excellent in skin spreadability.
(시험예 2-1: 히알루론산 합성효소 3(HAS3) mRNA 발현 촉진 작용 시험)(Test Example 2-1: Hyaluronic acid synthase 3 (HAS3) mRNA expression promotion test)
시험예 1-2에 있어서, 피험 시료를, 제조예 3에서 얻어진 사철쑥 발효액 1, 제조예 4에서 얻어진 사철쑥 발효액 2, 및 비교 제조예 2에서 얻어진 사철쑥 추출액으로 변경하고, 피험 시료의 종농도를 하기 표 8에 나타내는 농도로 변경한 것 이외에는, 시험예 1-2와 마찬가지의 방법으로 히알루론산 합성효소 3(HAS3) mRNA 발현 촉진 작용을 시험했다. 결과를 하기 표 8에 나타낸다.In Test Example 1-2, the test sample was changed to the fermented mugwort fermented liquid 1 obtained in Preparation Example 3, the fermented mugwort fermented in Preparation Example 4, and the mugwort extract obtained in Comparative Preparation Example 2, and the final concentration of the test sample was Hyaluronic acid synthase 3 (HAS3) mRNA expression promoting action was tested in the same manner as in Test Example 1-2, except that the concentration was changed as shown in Table 8. The results are shown in Table 8 below.
[표 8][Table 8]
(시험예 2-2: Ⅰ형 콜라겐 산생 촉진 작용 시험)(Test Example 2-2: Type I collagen production promoting action test)
제조예 3에서 얻어진 사철쑥 발효액 1, 제조예 4에서 얻어진 사철쑥 발효액 2, 및 비교 제조예 2에서 얻어진 사철쑥 추출액을 피험 시료로서 이용하여, 하기의 시험 방법에 의해, Ⅰ형 콜라겐 산생 촉진 작용을 시험했다.The fermented mugwort mugwort fermented solution 1 obtained in Production Example 3, the fermented mugwort mugwort fermented solution 2 obtained in Production Example 4, and the mugwort mugwort extract obtained in Comparative Production Example 2 were used as test samples. .
0.25％ 소 태아 혈청(Fetal bovine serum; FBS, biosera사 제조) 함유 둘베코(Dulbecco) MEM(닛스이 세이야쿠 가부시키가이샤 제조)에, 종농도가 하기 표 9에 나타내는 농도가 되도록, 각 피험 시료를 용해하여, 피험 시료 첨가 배지를 조제했다.Each test sample was added to Dulbecco MEM (manufactured by Nisui Seiyaku Co., Ltd.) containing 0.25% fetal bovine serum (FBS, manufactured by biosera) so that the final concentration was the concentration shown in Table 9 below. was dissolved to prepare a test sample addition medium.
정상 인간 섬유아세포(NB1RGB, RIKEN BRC에서 구입)를, 10％ FBS 함유 DMEM을 이용하여 37℃, 5％ CO2의 조건하에서 컨플루언트가 될 때까지 배양한 후, 트립신 처리에 의해 세포를 회수했다. 이것을 10％ FBS 함유 DMEM에 의해 1.6×105 세포/mL로 조정했다.Normal human fibroblasts (NB1RGB, purchased from RIKEN BRC) were cultured using DMEM containing 10% FBS under the conditions of 37°C and 5% CO 2 until confluent, and then the cells were recovered by trypsinization. did. This was adjusted to 1.6x10 5 cells/mL with DMEM containing 10% FBS.
이어서, 96 웰 마이크로 플레이트에 상기 NB1RGB(1.6×105 세포/mL)를, 1 웰당 100μL씩 파종하고, 37℃, 5％ CO2의 조건하에서 하룻밤 배양했다. 배양 종료 후, 배지를 피험 시료 첨가 배지 100μL로 교환하고, 37℃, 5％ CO2의 조건하에서 3일간 배양했다. 배양 종료 후, 각 웰의 배지 중의 Ⅰ형 콜라겐량을 ELISA법에 의해 측정했다.Next, 100 µL of the NB1RGB (1.6×10 5 cells/mL) was seeded per well in a 96-well microplate, and cultured overnight at 37°C under 5% CO 2 conditions. After completion of the culture, the medium was replaced with 100 µL of the test sample addition medium, and cultured at 37°C and 5% CO 2 for 3 days. After completion of the culture, the amount of type I collagen in the medium of each well was measured by ELISA method.
구체적으로는, 배양 상청 90μL를 ELISA 플레이트로 옮기고, 4℃, 하룻밤 동안 플레이트에 흡착시킨 후, 용액을 버리고, 0.05％ Tween-20을 포함하는 인산 생리 완충액(PBS-T)으로 세정을 행하였다. 그 후, 1％ FBS를 포함하는 인산 생리 완충액으로, 블로킹 조작을 행하였다. 용액을 버리고, 0.05％ Tween-20을 포함하는 인산 생리 완충액(PBS-T)으로 세정을 행하고, 항인간 콜라겐 타입 I 항체(토끼 IgG, 케미콘사 제조)를 반응시켰다. 용액을 버리고, 0.05％ Tween-20을 포함하는 인산 생리 완충액(PBS-T)으로 세정을 행하고, HRP 표지 항토끼 IgG 항체와 반응시킨 후, 마찬가지의 세정 조작을 행하고, 발색 반응을 행하였다.Specifically, 90 µL of the culture supernatant was transferred to an ELISA plate, adsorbed to the plate at 4°C overnight, the solution was discarded, and washing was performed with a physiological phosphate buffer (PBS-T) containing 0.05% Tween-20. Thereafter, a blocking operation was performed with a physiological phosphate buffer containing 1% FBS. The solution was discarded, washed with a physiological phosphate buffer (PBS-T) containing 0.05% Tween-20, and an anti-human collagen type I antibody (rabbit IgG, manufactured by Chemicon) was reacted. The solution was discarded, washed with a physiological phosphate buffer (PBS-T) containing 0.05% Tween-20, and reacted with an HRP-labeled anti-rabbit IgG antibody, followed by a similar washing operation and color development reaction.
Ⅰ형 콜라겐량은, 표준품을 이용하여 상기 ELISA를 행하고, 검량선을 작성하여 산출했다.The amount of type I collagen was calculated by performing the above ELISA using a standard product and creating a calibration curve.
또, 컨트롤로서, 피험 시료 용액을, 피험 시료를 포함하지 않는 0.25％ FBS 함유 DMEM으로 변경한 것 이외에는, 상기와 마찬가지의 조작 및 ELISA법에 의한 측정을 행하였다.In addition, as a control, the same operation as above and measurement by ELISA method were performed except that the test sample solution was changed to the DMEM containing 0.25% FBS which does not contain a test sample.
얻어진 측정치로부터, 하기 식 6에 의거하여 Ⅰ형 콜라겐 산생 촉진율을 산출했다. 결과를 하기 표 9에 나타낸다.From the obtained measured values, the rate of promoting type I collagen production was calculated based on the following formula (6). The results are shown in Table 9 below.
＜식 6＞<Formula 6>
Ⅰ형 콜라겐 산생 촉진율(％)＝A/B×100Type I collagen production promotion rate (%) = A/B × 100
상기 식 6에 있어서, A 및 B는 각각 이하를 나타낸다.In the formula (6), A and B each represent the following.
A: 피험 시료 첨가 시의 Ⅰ형 콜라겐량 A: Amount of type I collagen upon addition of test sample
B: 피험 시료 무첨가 시의 Ⅰ형 콜라겐량 B: Amount of type I collagen when no test sample was added
[표 9][Table 9]
(시험예 2-3: 클라우딘-1 mRNA 발현 촉진 작용 시험)(Test Example 2-3: Claudin-1 mRNA expression promotion test)
제조예 3에서 얻어진 사철쑥 발효액 1, 제조예 4에서 얻어진 사철쑥 발효액 2, 및 비교 제조예 2에서 얻어진 사철쑥 추출액을 피험 시료로서 이용하여, 하기의 시험 방법에 의해, 클라우딘-1 mRNA 발현 촉진 작용을 시험했다.The claudin-1 mRNA expression promoting effect was tested by using the fermented mugwort fermented solution 1 obtained in Production Example 3, the fermented mugwort mugwort 2 obtained in Production Example 4, and the mugwort extract obtained in Comparative Production Example 2 as test samples. did.
정상 인간 표피각화세포 기초 배지(HuMedia-KB2, 구라시키 보우세키 가부시키가이샤 제조)에, 종농도가 하기 표 10에 나타내는 농도가 되도록, 각 피험 시료를 용해하여, 피험 시료 첨가 배지를 조제했다.Each test sample was dissolved in a normal human epidermal keratinocyte basal medium (HuMedia-KB2, manufactured by Kurashiki Boseki Co., Ltd.) so that the final concentration became the concentration shown in Table 10 below to prepare a test sample-added medium.
정상 인간 신생아 표피각화세포(NHEK, 구라시키 보우세키 가부시키가이샤 제조)를, 정상 인간 표피각화세포 증식용 배지(HuMedia-KG2, 구라시키 보우세키 가부시키가이샤 제조)를 이용하여 37℃, 5％ CO2의 조건하에서 컨플루언트가 될 때까지 배양한 후, 트립신 처리에 의해 세포를 회수했다. 이것을 정상 인간 표피각화세포 증식용 배지(HuMedia-KG2)에 의해 1.5×105 세포/mL로 조정했다.Normal human neonatal epidermal keratinocytes (NHEK, manufactured by Kurashiki Boseki Co., Ltd.) were treated with a medium for normal human epidermal keratinocyte proliferation (HuMedia-KG2, manufactured by Kurashiki Boseki Co., Ltd.) at 37° C., 5% After culturing until confluent under CO 2 conditions, cells were recovered by trypsinization. This was adjusted to 1.5×10 5 cells/mL with a medium for proliferation of normal human epidermal keratinocytes (HuMedia-KG2).
이어서, 35mm 샤알레에 상기 NHEK(1.5×105 세포/mL)를 2mL 파종하고, 37℃, 5％ CO2 조건하에서 하룻밤 배양했다. 배양 종료 후, 배지를 정상 인간 표피각화세포 기초 배지(HuMedia-KB2)로 교환하고, 24시간 더 배양했다. 배양 종료 후, 배지를 상기 피험 시료 첨가 배지 2mL로 교환하고, 37℃, 5％ CO2의 조건하에서 24시간 배양했다. 배양 종료 후, 배양액을 제거하고, RNA 추출용 시약(ISOGEN Ⅱ(카탈로그 번호: 311-07361), 가부시키가이샤 니폰 진 제조)으로 총 RNA를 추출해, 각각의 RNA량을 분광 광도계로 측정하고, 정제수를 이용하여 200ng/μL가 되도록 총 RNA를 조제했다.Next, 2 mL of the NHEK (1.5×10 5 cells/mL) was seeded in a 35 mm petri dish, and cultured overnight at 37° C. under 5% CO 2 conditions. After completion of the culture, the medium was replaced with a normal human epidermal keratinocyte basal medium (HuMedia-KB2), and the culture was further performed for 24 hours. After completion of the culture, the medium was replaced with 2 mL of the test sample addition medium, and cultured at 37°C and 5% CO 2 for 24 hours. After completion of the culture, the culture solution is removed, total RNA is extracted with a reagent for RNA extraction (ISOGEN II (catalog number: 311-07361), manufactured by Nippon Gene Co., Ltd.), the amount of each RNA is measured with a spectrophotometer, and purified water was used to prepare total RNA so as to be 200 ng/μL.
또, 컨트롤로서, 상기 피험 시료 첨가 배지 2mL를, 피험 시료를 포함하지 않는 정상 인간 표피각화세포 기초 배지(HuMedia-KB2) 2mL로 변경한 것 이외에는, 상기와 마찬가지의 조작 및 흡광도의 측정을 행하고, 상기와 마찬가지의 방법으로 200ng/μL가 되도록 총 RNA를 조제했다.In addition, as a control, the same operation and absorbance measurement were performed as above, except that 2 mL of the test sample addition medium was changed to 2 mL of normal human epidermal keratinocyte basal medium (HuMedia-KB2) not containing the test sample, Total RNA was prepared so that it might become 200 ng/microliter by the method similar to the above.
상기 각 총 RNA를 주형으로 하여, 클라우딘-1 mRNA 및 내부 표준인 GAPDH mRNA의 발현량을 측정했다. mRNA의 검출은, 리얼타임 PCR 장치(Thermal Cycler DIce(등록상표) Real Time System Ⅲ, 다카라 바이오 가부시키가이샤 제조), 및 SYBR(등록상표) PrimeScript(등록상표) RT-PCR Kit(Perfect Real Time(카탈로그 번호: RR063A), 다카라 바이오 가부시키가이샤 제조)를 이용한 2스텝 리얼타임 PCR 반응에 의해 행하였다.Using each of the total RNAs as a template, the expression levels of claudin-1 mRNA and GAPDH mRNA as an internal standard were measured. The detection of mRNA was performed by a real-time PCR apparatus (Thermal Cycler DIce (registered trademark) Real Time System Ⅲ, manufactured by Takara Bio Corporation), and SYBR (registered trademark) PrimeScript (registered trademark) RT-PCR Kit (Perfect Real Time ( It was carried out by a two-step real-time PCR reaction using catalog number: RR063A) (manufactured by Takara Bio Co., Ltd.).
피험 시료 무첨가 및 피험 시료 첨가 클라우딘-1 mRNA의 발현량은, GAPDH mRNA의 발현량으로 보정했다. 이 보정치로부터, 하기 식 7에 의거하여 클라우딘-1 mRNA 발현 촉진율을 산출했다. 결과를 하기 표 10에 나타낸다.The expression level of claudin-1 mRNA without the addition of the test sample and with the addition of the test sample was corrected by the expression level of GAPDH mRNA. From this corrected value, the claudin-1 mRNA expression promotion rate was calculated based on the following formula (7). The results are shown in Table 10 below.
＜식 7＞<Formula 7>
클라우딘-1 mRNA 발현 촉진율(％)＝A/B×100Claudin-1 mRNA expression promotion rate (%) = A/B×100
상기 식 7에 있어서, A 및 B는 각각 이하를 나타낸다.In the formula 7, A and B each represent the following.
A: 피험 시료 첨가 시의 보정치 A: Correction value at the time of addition of test sample
B: 피험 시료 무첨가 시의 보정치 B: Correction value when no test sample is added
[표 10][Table 10]
(시험예 2-4: 클라우딘-4 mRNA 발현 촉진 작용 시험)(Test Example 2-4: Claudin-4 mRNA expression promotion test)
제조예 3에서 얻어진 사철쑥 발효액 1, 제조예 4에서 얻어진 사철쑥 발효액 2, 및 비교 제조예 2에서 얻어진 사철쑥 추출액을 피험 시료로서 이용하여, 하기의 시험 방법에 의해, 클라우딘-4 mRNA 발현 촉진 작용을 시험했다.Using the fermented mugwort fermented solution 1 obtained in Production Example 3, the fermented mugwort mugwort 2 obtained in Production Example 4, and the wormwood extract obtained in Comparative Production Example 2 as test samples, the claudin-4 mRNA expression promoting effect was tested by the following test method. did.
정상 인간 표피각화세포 기초 배지(HuMedia-KB2, 구라시키 보우세키 가부시키가이샤 제조)에 종농도가 하기 표 11에 나타내는 농도가 되도록, 각 피험 시료를 용해하여, 피험 시료 첨가 배지를 조제했다.Each test sample was dissolved in a normal human epidermal keratinocyte basal medium (HuMedia-KB2, manufactured by Kurashiki Boseki Co., Ltd.) so that the final concentration became the concentration shown in Table 11 below, to prepare a test sample-added medium.
정상 인간 신생아 표피각화세포(NHEK, 구라시키 보우세키 가부시키가이샤 제조)를, 정상 인간 표피각화세포 증식용 배지(HuMedia-KG2, 구라시키 보우세키 가부시키가이샤 제조)를 이용하여 37℃, 5％ CO2의 조건하에서 컨플루언트가 될 때까지 배양한 후, 트립신 처리에 의해 세포를 회수했다. 이것을 정상 인간 표피각화세포 증식용 배지(HuMedia-KG2)에 의해 1.5×105 세포/mL로 조정했다.Normal human neonatal epidermal keratinocytes (NHEK, manufactured by Kurashiki Boseki Co., Ltd.) were treated with a medium for normal human epidermal keratinocyte proliferation (HuMedia-KG2, manufactured by Kurashiki Boseki Co., Ltd.) at 37° C., 5% After culturing until confluent under CO 2 conditions, cells were recovered by trypsinization. This was adjusted to 1.5×10 5 cells/mL with a medium for proliferation of normal human epidermal keratinocytes (HuMedia-KG2).
이어서, 35mm 샤알레에 상기 NHEK(1.5×105 세포/mL)를 2mL 파종하고, 37℃, 5％ CO2 조건하에서 하룻밤 배양했다. 배양 종료 후, 배지를 정상 인간 표피각화세포 기초 배지(HuMedia-KB2)로 교환하고, 24시간 더 배양했다. 배양 종료 후, 배지를 상기 피험 시료 첨가 배지 2mL로 교환하고, 37℃, 5％ CO2의 조건하에서 24시간 배양했다. 배양 종료 후, 배양액을 제거하고, RNA 추출용 시약(ISOGEN Ⅱ(카탈로그 번호: 311-07361), 가부시키가이샤 니폰 진 제조)으로 총 RNA를 추출해, 각각의 RNA량을 분광 광도계로 측정하고, 정제수를 이용하여 200ng/μL가 되도록 총 RNA를 조제했다.Next, 2 mL of the NHEK (1.5×10 5 cells/mL) was seeded in a 35 mm petri dish, and cultured overnight at 37° C. under 5% CO 2 conditions. After completion of the culture, the medium was replaced with a normal human epidermal keratinocyte basal medium (HuMedia-KB2), and the culture was further performed for 24 hours. After completion of the culture, the medium was replaced with 2 mL of the test sample addition medium, and cultured at 37°C and 5% CO 2 for 24 hours. After completion of the culture, the culture solution is removed, total RNA is extracted with a reagent for RNA extraction (ISOGEN II (catalog number: 311-07361), manufactured by Nippon Gene Co., Ltd.), the amount of each RNA is measured with a spectrophotometer, and purified water was used to prepare total RNA so as to be 200 ng/μL.
또, 컨트롤로서, 상기 피험 시료 첨가 배지 2mL를, 피험 시료를 포함하지 않는 정상 인간 표피각화세포 기초 배지(HuMedia-KB2) 2mL로 변경한 것 이외에는, 상기와 마찬가지의 조작 및 흡광도의 측정을 행하고, 상기와 마찬가지의 방법으로 200ng/μL가 되도록 총 RNA를 조제했다.In addition, as a control, the same operation and absorbance measurement were performed as above, except that 2 mL of the test sample addition medium was changed to 2 mL of normal human epidermal keratinocyte basal medium (HuMedia-KB2) not containing the test sample, Total RNA was prepared so that it might become 200 ng/microliter by the method similar to the above.
상기 각 총 RNA를 주형으로 하여, 클라우딘-4 mRNA 및 내부 표준인 GAPDH mRNA의 발현량을 측정했다. mRNA의 검출은, 리얼타임 PCR 장치(Thermal Cycler DIce(등록상표) Real Time System Ⅲ, 다카라 바이오 가부시키가이샤 제조), 및 SYBR(등록상표) PrimeScript(등록상표) RT-PCR Kit(Perfect Real Time(카탈로그 번호: RR063A), 다카라 바이오 가부시키가이샤 제조)를 이용한 2스텝 리얼타임 PCR 반응에 의해 행하였다.Using each of the total RNAs as a template, the expression levels of claudin-4 mRNA and GAPDH mRNA as an internal standard were measured. The detection of mRNA was performed by a real-time PCR device (Thermal Cycler DIce (registered trademark) Real Time System Ⅲ, manufactured by Takara Bio Co., Ltd.), and SYBR (registered trademark) PrimeScript (registered trademark) RT-PCR Kit (Perfect Real Time ( It was carried out by a two-step real-time PCR reaction using catalog number: RR063A) (manufactured by Takara Bio Co., Ltd.).
피험 시료 무첨가 및 피험 시료 첨가 클라우딘-4 mRNA의 발현량은, GAPDH mRNA의 발현량으로 보정했다. 이 보정치로부터, 하기 식 8에 의거하여 클라우딘-4 mRNA 발현 촉진율을 산출했다. 결과를 하기 표 11에 나타낸다.The expression levels of claudin-4 mRNA without the addition of the test sample and with the addition of the test sample were corrected by the expression level of GAPDH mRNA. From this corrected value, the claudin-4 mRNA expression promotion rate was calculated based on the following formula (8). The results are shown in Table 11 below.
＜식 8＞<Formula 8>
클라우딘-4 mRNA 발현 촉진율(％)＝A/B×100Claudin-4 mRNA expression promotion rate (%) = A/B×100
상기 식 8에 있어서, A 및 B는 각각 이하를 나타낸다.In the formula (8), A and B each represent the following.
A: 피험 시료 첨가 시의 보정치 A: Correction value at the time of addition of test sample
B: 피험 시료 무첨가 시의 보정치 B: Correction value when no test sample is added
[표 11][Table 11]
(시험예 2-5: 오클루딘 mRNA 발현 촉진 작용 시험)(Test Example 2-5: Ocludin mRNA expression promotion test)
제조예 3에서 얻어진 사철쑥 발효액 1, 제조예 4에서 얻어진 사철쑥 발효액 2, 및 비교 제조예 2에서 얻어진 사철쑥 추출액을 피험 시료로서 이용하여, 하기의 시험 방법에 의해, 오클루딘 mRNA 발현 촉진 작용을 시험했다.The occludin mRNA expression promoting action was tested by using the fermented mugwort fermented solution 1 obtained in Production Example 3, the fermented mugwort mugwort fermented solution 2 obtained in Production Example 4, and the mugwort extract obtained in Comparative Production Example 2 as test samples. .
정상 인간 표피각화세포 기초 배지(HuMedia-KB2, 구라시키 보우세키 가부시키가이샤 제조)에 종농도가 하기 표 12에 나타내는 농도가 되도록, 각 피험 시료를 용해하여, 피험 시료 첨가 배지를 조제했다.Each test sample was dissolved in a normal human epidermal keratinocyte basal medium (HuMedia-KB2, manufactured by Kurashiki Boseki Co., Ltd.) so that the final concentration was the concentration shown in Table 12 below to prepare a test sample-added medium.
정상 인간 신생아 표피각화세포(NHEK, 구라시키 보우세키 가부시키가이샤 제조)를, 정상 인간 표피각화세포 증식용 배지(HuMedia-KG2, 구라시키 보우세키 가부시키가이샤 제조)를 이용하여 37℃, 5％ CO2의 조건하에서 컨플루언트가 될 때까지 배양한 후, 트립신 처리에 의해 세포를 회수했다. 이것을 정상 인간 표피각화세포 증식용 배지(HuMedia-KG2)에 의해 1.5×105 세포/mL로 조정했다.Normal human neonatal epidermal keratinocytes (NHEK, manufactured by Kurashiki Boseki Co., Ltd.) were treated with a medium for normal human epidermal keratinocyte proliferation (HuMedia-KG2, manufactured by Kurashiki Boseki Co., Ltd.) at 37° C., 5% After culturing until confluent under CO 2 conditions, cells were recovered by trypsinization. This was adjusted to 1.5×10 5 cells/mL with a medium for proliferation of normal human epidermal keratinocytes (HuMedia-KG2).
이어서, 35mm 샤알레에 상기 NHEK(1.5×105 세포/mL)를 2mL 파종하고, 37℃, 5％ CO2 조건하에서 하룻밤 배양했다. 배양 종료 후, 배지를 정상 인간 표피각화세포 기초 배지(HuMedia-KB2)로 교환하고, 24시간 더 배양했다. 배양 종료 후, 배양액을 제거하고, RNA 추출용 시약(ISOGEN Ⅱ(카탈로그 번호: 311-07361), 가부시키가이샤 니폰 진 제조)으로 총 RNA를 추출해, 각각의 RNA량을 분광 광도계로 측정하고, 정제수를 이용하여 200ng/μL가 되도록 총 RNA를 조제했다.Next, 2 mL of the NHEK (1.5×10 5 cells/mL) was seeded in a 35 mm petri dish, and cultured overnight at 37° C. under 5% CO 2 conditions. After completion of the culture, the medium was replaced with a normal human epidermal keratinocyte basal medium (HuMedia-KB2), and the culture was further performed for 24 hours. After completion of the culture, the culture solution is removed, total RNA is extracted with a reagent for RNA extraction (ISOGEN II (catalog number: 311-07361), manufactured by Nippon Gene Co., Ltd.), the amount of each RNA is measured with a spectrophotometer, and purified water was used to prepare total RNA so as to be 200 ng/μL.
또, 컨트롤로서, 상기 피험 시료 첨가 배지 2mL를, 피험 시료를 포함하지 않는 정상 인간 표피각화세포 기초 배지(HuMedia-KB2) 2mL로 변경한 것 이외에는, 상기와 마찬가지의 조작 및 흡광도의 측정을 행하고, 상기와 마찬가지의 방법으로 200ng/μL가 되도록 총 RNA를 조제했다.In addition, as a control, the same operation and absorbance measurement were performed as above, except that 2 mL of the test sample addition medium was changed to 2 mL of normal human epidermal keratinocyte basal medium (HuMedia-KB2) not containing the test sample, Total RNA was prepared so that it might become 200 ng/microliter by the method similar to the above.
상기 각 총 RNA를 주형으로 하여, 오클루딘 mRNA 및 내부 표준인 GAPDH mRNA의 발현량을 측정했다. mRNA의 검출은, 리얼타임 PCR 장치(Thermal Cycler DIce(등록상표) Real Time System Ⅲ, 다카라 바이오 가부시키가이샤 제조), 및 SYBR(등록상표) PrimeScript(등록상표) RT-PCR Kit(Perfect Real Time(카탈로그 번호: RR063A), 다카라 바이오 가부시키가이샤 제조)를 이용한 2스텝 리얼타임 PCR 반응에 의해 행하였다.Using each of the total RNAs as a template, the expression levels of ocludin mRNA and GAPDH mRNA as an internal standard were measured. The detection of mRNA was performed by a real-time PCR device (Thermal Cycler DIce (registered trademark) Real Time System Ⅲ, manufactured by Takara Bio Co., Ltd.), and SYBR (registered trademark) PrimeScript (registered trademark) RT-PCR Kit (Perfect Real Time ( It was carried out by a two-step real-time PCR reaction using catalog number: RR063A) (manufactured by Takara Bio Co., Ltd.).
피험 시료 무첨가 및 피험 시료 첨가 오클루딘 mRNA의 발현량은, GAPDH mRNA의 발현량으로 보정했다. 이 보정치로부터, 하기 식 9에 의거하여 오클루딘 mRNA 발현 촉진율을 산출했다. 결과를 하기 표 12에 나타낸다.The expression levels of occludin mRNA without the addition of the test sample and with the addition of the test sample were corrected by the expression level of GAPDH mRNA. From this corrected value, the occludin mRNA expression promotion rate was calculated based on the following formula (9). The results are shown in Table 12 below.
＜식 9＞<Formula 9>
오클루딘 mRNA 발현 촉진율(％)＝A/B×100Ocludin mRNA expression promotion rate (%) = A/B × 100
상기 식 9에 있어서, A 및 B는 각각 이하를 나타낸다.In the formula (9), A and B each represent the following.
A: 피험 시료 첨가 시의 보정치 A: Correction value at the time of addition of test sample
B: 피험 시료 무첨가 시의 보정치 B: Correction value when no test sample is added
[표 12][Table 12]
＜제조예 5: 타임(Thymus vulgaris Linne) 발효액 1의 조제＞<Production Example 5: Preparation of thyme ( Thymus vulgaris Linne) fermentation broth 1>
상기 제조예 1의 종국 조제 공정에 있어서, 산쑥을, 타임(Thymus vulgaris Linne)(가부시키가이샤 알비온 제조)으로 변경한 것 이외에는, 상기 제조예 1의 종국 조제 공정과 마찬가지의 방법으로 「타임 종국」을 조제했다.In the final preparation step of Production Example 1, wild wormwood was changed to Thymus vulgaris Linne (manufactured by Albion Co., Ltd.) in the same manner as in the final preparation step of Production Example 1, except that “thyme was finished” was prepared
또, 상기 제조예 1의 발효 공정에 있어서, 산쑥을, 타임(Thymus vulgaris Linne)(가부시키가이샤 알비온 제조)으로 변경한 것 이외에는, 상기 제조예 1의 발효 공정과 마찬가지의 방법으로 「타임 발효액 1」을 얻었다.In addition, the, sanssuk in the fermentation process of the Production Example 1, the time (Thymus vulgaris Linne) except for changing the (manufactured by Albion manufacture, Ltd.), a fermentation process, the method similar to the Preparation Example 1 "the time the fermentation broth 1 ' was obtained.
＜제조예 6: 타임(Thymus vulgaris Linne) 발효액 2의 조제＞<Preparation Example 6: Preparation of Thymus (Thymus vulgaris Linne) Fermented Liquid 2>
상기 제조예 5에 있어서, 타임 종국을, 쌀 종국(Aspergillus oryzae, 백국 시라카미, 가부시키가이샤 아키타 곤노 쇼텐 제조)으로 변경한 것 이외에는, 상기 제조예 5와 마찬가지의 방법으로 「타임 발효액 2」를 얻었다.In Production Example 5, "thyme fermentation broth 2" was prepared in the same manner as in Production Example 5, except that the thyme broth was changed to rice broth (Aspergillus oryzae, Shirakami, Akita Konno Shoten, Ltd.). got it
＜비교 제조예 3: 타임(Thymus vulgaris Linne) 추출액의 조제＞<Comparative Preparation Example 3: Preparation of Thymus (Thymus vulgaris Linne) Extract>
상기 비교 제조예 1에 있어서, 산쑥을, 타임(Thymus vulgaris Linne)(가부시키가이샤 알비온 제조)으로 변경한 것 이외에는, 상기 비교 제조예 1과 마찬가지의 방법으로 「타임 추출액」을 얻었다.In Comparative Production Example 1, "thyme extract" was obtained in the same manner as in Comparative Production Example 1, except that wild mugwort was changed to Thymus vulgaris Linne (manufactured by Albion Corporation).
(시험예 A-3: 접촉각의 측정)(Test Example A-3: Measurement of contact angle)
상기 시험예 A-1에 있어서, 시험 시료를, 제조예 5에서 얻어진 타임 발효액 1, 제조예 6에서 얻어진 타임 발효액 2, 및 비교 제조예 3에서 얻어진 타임 추출액으로 변경한 것 이외에는, 상기 시험예 A-1과 마찬가지의 방법으로 접촉각을 측정했다. 결과를 하기 표 13에 나타낸다. 또, 각 시험 시료의 접촉각 측정 시의 액적의 일례를 도 3a∼도 3c에 나타낸다.In Test Example A-1, except that the test sample was changed to the thyme fermentation broth 1 obtained in Production Example 5, the thyme fermentation broth 2 obtained in Production Example 6, and the thyme extract obtained in Comparative Production Example 3, the test sample A The contact angle was measured in the same way as -1. The results are shown in Table 13 below. In addition, an example of the droplet at the time of the contact angle measurement of each test sample is shown to FIG. 3A - FIG. 3C.
[표 13][Table 13]
비교 제조예 3에서 얻어진 타임 추출액에 비하여, 제조예 5에서 얻어진 타임 발효액 1 및 제조예 6에서 얻어진 타임 발효액 2는, 모두 접촉각이 작고, 87°이하이며, 피부 발림성이 뛰어난 것이었다. 또한, 제조예 5에서 얻어진 타임 발효액 1은, 접촉각이 81°이하이며, 보다 피부 발림성이 뛰어난 것이었다.Compared to the thyme extract obtained in Comparative Preparation Example 3, the thyme fermentation broth 1 obtained in Preparation Example 5 and the thyme fermentation broth 2 obtained in Preparation Example 6 both had a small contact angle and were 87° or less, and were excellent in application to the skin. In addition, the thyme fermentation broth 1 obtained in Production Example 5 had a contact angle of 81° or less, and was more excellent in application to the skin.
(시험예 3-1: 트랜스글루타미나아제-1(TGM-1) mRNA 발현 촉진 작용 시험)(Test Example 3-1: Transglutaminase-1 (TGM-1) mRNA expression promotion test)
제조예 5에서 얻어진 타임 발효액 1, 제조예 6에서 얻어진 타임 발효액 2, 및 비교 제조예 3에서 얻어진 타임 추출액을 피험 시료로서 이용하여, 하기의 시험 방법에 의해, 트랜스글루타미나아제-1(TGM-1) mRNA 발현 촉진 작용을 시험했다.Using the thyme fermentation broth 1 obtained in Production Example 5, the thyme fermentation broth 2 obtained in Production Example 6, and the thyme extract obtained in Comparative Production Example 3 as test samples, transglutaminase-1 (TGM) was performed by the following test method. -1) mRNA expression promoting action was tested.
정상 인간 표피각화세포 기초 배지(HuMedia-KB2, 구라시키 보우세키 가부시키가이샤 제조)에 종농도가 하기 표 14에 나타내는 농도가 되도록, 각 피험 시료를 용해하여, 피험 시료 첨가 배지를 조제했다.Each test sample was dissolved in a normal human epidermal keratinocyte basal medium (HuMedia-KB2, manufactured by Kurashiki Boseki Co., Ltd.) so that the final concentration became the concentration shown in Table 14 below, to prepare a test sample-added medium.
정상 인간 신생아 표피각화세포(NHEK, 구라시키 보우세키 가부시키가이샤 제조)를, 정상 인간 표피각화세포 증식용 배지(HuMedia-KG2, 구라시키 보우세키 가부시키가이샤 제조)를 이용하여 37℃, 5％ CO2의 조건하에서 컨플루언트가 될 때까지 배양한 후, 트립신 처리에 의해 세포를 회수했다. 이것을 정상 인간 표피각화세포 증식용 배지(HuMedia-KG2)에 의해 1.5×105 세포/mL로 조정했다.Normal human neonatal epidermal keratinocytes (NHEK, manufactured by Kurashiki Boseki Co., Ltd.) were treated with a medium for normal human epidermal keratinocyte proliferation (HuMedia-KG2, manufactured by Kurashiki Boseki Co., Ltd.) at 37° C., 5% After culturing until confluent under CO 2 conditions, cells were recovered by trypsinization. This was adjusted to 1.5×10 5 cells/mL with a medium for proliferation of normal human epidermal keratinocytes (HuMedia-KG2).
이어서, 35mm 샤알레에 상기 NHEK(1.5×105 세포/mL)를 2mL 파종하고, 37℃, 5％ CO2 조건하에서 하룻밤 배양했다. 배양 종료 후, 배지를 정상 인간 표피각화세포 기초 배지(HuMedia-KB2)로 교환하고, 24시간 더 배양했다. 배양 종료 후, 배지를 상기 피험 시료 첨가 배지 2mL로 교환하고, 37℃, 5％ CO2의 조건하에서 24시간 배양했다. 배양 종료 후, 배양액을 제거하고, RNA 추출용 시약(ISOGEN Ⅱ(카탈로그 번호: 311-07361), 가부시키가이샤 니폰 진 제조)으로 총 RNA를 추출해, 각각의 RNA량을 분광 광도계로 측정하고, 정제수를 이용하여 200ng/μL가 되도록 총 RNA를 조제했다.Next, 2 mL of the NHEK (1.5×10 5 cells/mL) was seeded in a 35 mm petri dish, and cultured overnight at 37° C. under 5% CO 2 conditions. After completion of the culture, the medium was replaced with a normal human epidermal keratinocyte basal medium (HuMedia-KB2), and the culture was further performed for 24 hours. After completion of the culture, the medium was replaced with 2 mL of the test sample addition medium, and cultured at 37°C and 5% CO 2 for 24 hours. After completion of the culture, the culture solution is removed, total RNA is extracted with a reagent for RNA extraction (ISOGEN II (catalog number: 311-07361), manufactured by Nippon Gene Co., Ltd.), the amount of each RNA is measured with a spectrophotometer, and purified water was used to prepare total RNA so as to be 200 ng/μL.
또, 컨트롤로서, 상기 피험 시료 첨가 배지 2mL를, 피험 시료를 포함하지 않는 정상 인간 표피각화세포 기초 배지(HuMedia-KB2) 2mL로 변경한 것 이외에는, 상기와 마찬가지의 조작 및 흡광도의 측정을 행하고, 상기와 마찬가지의 방법으로 200ng/μL가 되도록 총 RNA를 조제했다.In addition, as a control, the same operation and absorbance measurement were performed as above, except that 2 mL of the test sample addition medium was changed to 2 mL of normal human epidermal keratinocyte basal medium (HuMedia-KB2) not containing the test sample, Total RNA was prepared so that it might become 200 ng/microliter by the method similar to the above.
상기 각 총 RNA를 주형으로 하여, 트랜스글루타미나아제-1(TGM-1) mRNA 및 내부 표준인 GAPDH mRNA의 발현량을 측정했다. mRNA의 검출은, 리얼타임 PCR 장치(Thermal Cycler DIce(등록상표) Real Time System Ⅲ, 다카라 바이오 가부시키가이샤 제조), 및 SYBR(등록상표) PrimeScript(등록상표) RT-PCR Kit(Perfect Real Time(카탈로그 번호: RR063A), 다카라 바이오 가부시키가이샤 제조)를 이용한 2스텝 리얼타임 PCR 반응에 의해 행하였다.Using each of the total RNAs as a template, the expression levels of transglutaminase-1 (TGM-1) mRNA and GAPDH mRNA as an internal standard were measured. The detection of mRNA was performed by a real-time PCR device (Thermal Cycler DIce (registered trademark) Real Time System Ⅲ, manufactured by Takara Bio Co., Ltd.), and SYBR (registered trademark) PrimeScript (registered trademark) RT-PCR Kit (Perfect Real Time ( It was carried out by a two-step real-time PCR reaction using catalog number: RR063A) (manufactured by Takara Bio Co., Ltd.).
피험 시료 무첨가 및 피험 시료 첨가의 TGM-1 mRNA의 발현량은, GAPDH mRNA의 발현량으로 보정했다. 이 보정치로부터, 하기 식 10에 의거하여 TGM-1 mRNA 발현 촉진율을 산출했다. 결과를 하기 표 14에 나타낸다.The expression level of TGM-1 mRNA without the addition of the test sample and with the addition of the test sample was corrected by the expression level of GAPDH mRNA. From this correction value, the TGM-1 mRNA expression promotion rate was calculated based on the following formula (10). The results are shown in Table 14 below.
＜식 10＞<Equation 10>
TGM-1 mRNA 발현 촉진율(％)＝A/B×100TGM-1 mRNA expression promotion rate (%) = A/B × 100
상기 식 10에 있어서, A 및 B는 각각 이하를 나타낸다.In the formula (10), A and B each represent the following.
A: 피험 시료 첨가 시의 보정치 A: Correction value at the time of addition of test sample
B: 피험 시료 무첨가 시의 보정치 B: Correction value when no test sample is added
[표 14][Table 14]
(시험예 3-2: 아쿠아포린 3(AQP3) mRNA 발현 촉진 작용 시험)(Test Example 3-2: Aquaporin 3 (AQP3) mRNA expression promotion test)
제조예 5에서 얻어진 타임 발효액 1, 제조예 6에서 얻어진 타임 발효액 2, 및 비교 제조예 3에서 얻어진 타임 추출액을 피험 시료로서 이용하여, 하기의 시험 방법에 의해, 아쿠아포린 3(AQP3) mRNA 발현 촉진 작용을 시험했다.Using the thyme fermentation broth 1 obtained in Production Example 5, the thyme fermentation broth 2 obtained in Production Example 6, and the thyme extract obtained in Comparative Production Example 3 as test samples, aquaporin 3 (AQP3) mRNA expression was promoted by the following test method action was tested.
정상 인간 표피각화세포 기초 배지(HuMedia-KB2, 구라시키 보우세키 가부시키가이샤 제조)에 종농도가 하기 표 15에 나타내는 농도가 되도록, 각 피험 시료를 용해하여, 피험 시료 첨가 배지를 조제했다.Each test sample was dissolved in a normal human epidermal keratinocyte basal medium (HuMedia-KB2, manufactured by Kurashiki Boseki Co., Ltd.) so that the final concentration was the concentration shown in Table 15 below, to prepare a test sample-added medium.
정상 인간 신생아 표피각화세포(NHEK, 구라시키 보우세키 가부시키가이샤 제조)를, 정상 인간 표피각화세포 증식용 배지(HuMedia-KG2, 구라시키 보우세키 가부시키가이샤 제조)를 이용하여 37℃, 5％ CO2의 조건하에서 컨플루언트가 될 때까지 배양한 후, 트립신 처리에 의해 세포를 회수했다. 이것을 정상 인간 표피각화세포 증식용 배지(HuMedia-KG2)에 의해 1.5×105 세포/mL로 조정했다.Normal human neonatal epidermal keratinocytes (NHEK, manufactured by Kurashiki Boseki Co., Ltd.) were treated with a medium for normal human epidermal keratinocyte proliferation (HuMedia-KG2, manufactured by Kurashiki Boseki Co., Ltd.) at 37° C., 5% After culturing until confluent under CO 2 conditions, cells were recovered by trypsinization. This was adjusted to 1.5×10 5 cells/mL with a medium for proliferation of normal human epidermal keratinocytes (HuMedia-KG2).
이어서, 35mm 샤알레에 상기 NHEK(1.5×105 세포/mL)를 2mL 파종하고, 37℃, 5％ CO2 조건하에서 하룻밤 배양했다. 배양 종료 후, 배지를 정상 인간 표피각화세포 기초 배지(HuMedia-KB2)로 교환하고, 24시간 더 배양했다. 배양 종료 후, 배지를 상기 피험 시료 첨가 배지 2mL로 교환하고, 37℃, 5％ CO2의 조건하에서 24시간 배양했다. 배양 종료 후, 배양액을 제거하고, RNA 추출용 시약(ISOGEN Ⅱ(카탈로그 번호: 311-07361), 가부시키가이샤 니폰 진 제조)으로 총 RNA를 추출해, 각각의 RNA량을 분광 광도계로 측정하고, 정제수를 이용하여 200ng/μL가 되도록 총 RNA를 조제했다.Next, 2 mL of the NHEK (1.5×10 5 cells/mL) was seeded in a 35 mm petri dish, and cultured overnight at 37° C. under 5% CO 2 conditions. After completion of the culture, the medium was replaced with a normal human epidermal keratinocyte basal medium (HuMedia-KB2), and the culture was further performed for 24 hours. After completion of the culture, the medium was replaced with 2 mL of the test sample addition medium, and cultured at 37°C and 5% CO 2 for 24 hours. After completion of the culture, the culture solution is removed, total RNA is extracted with a reagent for RNA extraction (ISOGEN II (catalog number: 311-07361), manufactured by Nippon Gene Co., Ltd.), the amount of each RNA is measured with a spectrophotometer, and purified water was used to prepare total RNA so as to be 200 ng/μL.
또, 컨트롤로서, 상기 피험 시료 첨가 배지 2mL를, 피험 시료를 포함하지 않는 정상 인간 표피각화세포 기초 배지(HuMedia-KB2) 2mL로 변경한 것 이외에는, 상기와 마찬가지의 조작 및 흡광도의 측정을 행하고, 상기와 마찬가지의 방법으로 200ng/μL가 되도록 총 RNA를 조제했다.In addition, as a control, the same operation and absorbance measurement were performed as above, except that 2 mL of the test sample addition medium was changed to 2 mL of normal human epidermal keratinocyte basal medium (HuMedia-KB2) not containing the test sample, Total RNA was prepared so that it might become 200 ng/microliter by the method similar to the above.
상기 각 총 RNA를 주형으로 하여, 아쿠아포린 3(AQP3) mRNA 및 내부 표준인 GAPDH mRNA의 발현량을 측정했다. mRNA의 검출은, 리얼타임 PCR 장치(Thermal Cycler DIce(등록상표) Real Time System Ⅲ, 다카라 바이오 가부시키가이샤 제조), 및 SYBR(등록상표) PrimeScript(등록상표) RT-PCR Kit(Perfect Real Time(카탈로그 번호: RR063A), 다카라 바이오 가부시키가이샤 제조)를 이용한 2스텝 리얼타임 PCR 반응에 의해 행하였다.Using each of the total RNAs as a template, the expression levels of aquaporin 3 (AQP3) mRNA and GAPDH mRNA as an internal standard were measured. The detection of mRNA was performed by a real-time PCR device (Thermal Cycler DIce (registered trademark) Real Time System Ⅲ, manufactured by Takara Bio Co., Ltd.), and SYBR (registered trademark) PrimeScript (registered trademark) RT-PCR Kit (Perfect Real Time ( It was carried out by a two-step real-time PCR reaction using catalog number: RR063A) (manufactured by Takara Bio Co., Ltd.).
피험 시료 무첨가 및 피험 시료 첨가의 AQP3 mRNA의 발현량은, GAPDH mRNA의 발현량으로 보정했다. 이 보정치로부터, 하기 식 11에 의거하여 AQP3 mRNA 발현 촉진율을 산출했다. 결과를 하기 표 15에 나타낸다.The expression level of AQP3 mRNA without the addition of the test sample and with the addition of the test sample was corrected by the expression level of GAPDH mRNA. From this correction value, the AQP3 mRNA expression promotion rate was calculated based on the following formula (11). The results are shown in Table 15 below.
＜식 11＞<Formula 11>
AQP3 mRNA 발현 촉진율(％)＝A/B×100AQP3 mRNA expression promotion rate (%) = A/B × 100
상기 식 11에 있어서, A 및 B는 각각 이하를 나타낸다.In the formula (11), A and B each represent the following.
A: 피험 시료 첨가 시의 보정치 A: Correction value at the time of addition of test sample
B: 피험 시료 무첨가 시의 보정치 B: Correction value when no test sample is added
[표 15][Table 15]
(시험예 3-3: 오클루딘 mRNA 발현 촉진 작용 시험)(Test Example 3-3: Ocludin mRNA expression promotion test)
시험예 2-5에 있어서, 피험 시료를, 제조예 5에서 얻어진 타임 발효액 1, 제조예 6에서 얻어진 타임 발효액 2, 및 비교 제조예 3에서 얻어진 타임 추출액으로 변경하고, 피험 시료의 종농도를 하기 표 16에 나타내는 농도로 변경한 것 이외에는, 시험예 2-5와 마찬가지의 방법으로 오클루딘 mRNA 발현 촉진 작용을 시험했다. 결과를 하기 표 16에 나타낸다.In Test Example 2-5, the test sample was changed to the thyme fermentation broth 1 obtained in Production Example 5, the thyme fermentation broth 2 obtained in Production Example 6, and the thyme extract obtained in Comparative Production Example 3, and the final concentration of the test sample was The occludin mRNA expression promoting effect was tested in the same manner as in Test Example 2-5, except that the concentration was changed to the concentration shown in Table 16. The results are shown in Table 16 below.
[표 16][Table 16]
(시험예 3-4: DPPH 라디칼 소거 작용 시험)(Test Example 3-4: DPPH radical scavenging action test)
시험예 1-3에 있어서, 피험 시료를, 제조예 5에서 얻어진 타임 발효액 1, 제조예 6에서 얻어진 타임 발효액 2, 및 비교 제조예 3에서 얻어진 타임 추출액으로 변경하고, 피험 시료의 종농도를 하기 표 17에 나타내는 농도로 변경한 것 이외에는, 시험예 1-3과 마찬가지의 방법으로 DPPH 라디칼 소거 작용을 시험했다. 결과를 하기 표 17에 나타낸다.In Test Example 1-3, the test sample was changed to the thyme fermentation broth 1 obtained in Production Example 5, the thyme fermentation broth 2 obtained in Production Example 6, and the thyme extract obtained in Comparative Production Example 3, and the final concentration of the test sample was The DPPH radical scavenging action was tested in the same manner as in Test Example 1-3 except for changing the concentration shown in Table 17. The results are shown in Table 17 below.
[표 17][Table 17]
＜제조예 7: 멜리사(Melissa officinalis Linne) 발효액 1의 조제＞<Preparation Example 7: Preparation of Melissa officinalis Linne Fermented Liquid 1>
상기 제조예 1의 종국 조제 공정에 있어서, 산쑥을, 멜리사(Melissa officinalis Linne)(가부시키가이샤 알비온 제조)로 변경한 것 이외에는, 상기 제조예 1의 종국 조제 공정과 마찬가지의 방법으로 「멜리사 종국」을 조제했다.In the final preparation step of Production Example 1, except that wild mugwort was changed to Melissa officinalis Linne (manufactured by Albion Co., Ltd.), in the same manner as in the final preparation step of Production Example 1, "Melissa final" was prepared
또, 상기 제조예 1의 발효 공정에 있어서, 산쑥을, 멜리사(Melissa officinalis Linne)(가부시키가이샤 알비온 제조)로 변경한 것 이외에는, 상기 제조예 1의 발효 공정과 마찬가지의 방법으로 「멜리사 발효액 1」을 얻었다.In addition, in the fermentation step of Production Example 1, except that wild mugwort was changed to Melissa officinalis Linne (manufactured by Albion Co., Ltd.), in the same manner as in the fermentation step of Production Example 1, "Melissa fermented broth 1"' was obtained.
＜제조예 8: 멜리사(Melissa officinalis Linne) 발효액 2의 조제＞<Preparation Example 8: Preparation of Melissa officinalis Linne fermented broth 2>
상기 제조예 7에 있어서, 멜리사 종국을, 쌀 종국(Aspergillus oryzae, 백국 시라카미, 가부시키가이샤 아키타 곤노 쇼텐 제조)으로 변경한 것 이외에는, 상기 제조예 7과 마찬가지의 방법으로 「멜리사 발효액 2」를 얻었다.In Production Example 7, "Melissa Fermented Liquid 2" was prepared in the same manner as in Production Example 7, except that the melissa broth was changed to rice broth (Aspergillus oryzae, Shirakami, Akita Konno Shoten, Ltd.). got it
＜비교 제조예 4: 멜리사(Melissa officinalis Linne) 추출액의 조제＞<Comparative Preparation Example 4: Preparation of Melissa officinalis Linne Extract>
상기 비교 제조예 1에 있어서, 산쑥을, 멜리사(Melissa officinalis Linne)(가부시키가이샤 알비온 제조)로 변경한 것 이외에는, 상기 비교 제조예 1과 마찬가지의 방법으로 「멜리사 추출액」을 얻었다.In Comparative Production Example 1, "Melissa Extract" was obtained in the same manner as in Comparative Production Example 1, except that wild mugwort was changed to Melissa officinalis Linne (manufactured by Albion Corporation).
(시험예 A-4: 접촉각의 측정)(Test Example A-4: Measurement of contact angle)
상기 시험예 A-1에 있어서, 시험 시료를, 제조예 7에서 얻어진 멜리사 발효액 1, 제조예 8에서 얻어진 멜리사 발효액 2, 및 비교 제조예 4에서 얻어진 멜리사 추출액으로 변경한 것 이외에는, 상기 시험예 A-1과 마찬가지의 방법으로 접촉각을 측정했다. 결과를 하기 표 18에 나타낸다. 또, 각 시험 시료의 접촉각 측정 시의 액적의 일례를 도 4a∼도 4c에 나타낸다.In Test Example A-1, the test sample was changed to Melissa fermented broth 1 obtained in Production Example 7, Melissa fermented broth 2 obtained in Production Example 8, and Melissa extract obtained in Comparative Production Example 4, except that the test sample was changed to Test Example A The contact angle was measured in the same way as -1. The results are shown in Table 18 below. In addition, an example of the droplet at the time of the contact angle measurement of each test sample is shown to FIG. 4A - FIG. 4C.
[표 18][Table 18]
비교 제조예 4에서 얻어진 멜리사 추출액에 비하여, 제조예 7에서 얻어진 멜리사 발효액 1 및 제조예 8에서 얻어진 멜리사 발효액 2는, 모두 접촉각이 작고, 85°이하이며, 피부 발림성이 뛰어난 것이었다. 또한, 제조예 7에서 얻어진 멜리사 발효액 1은, 접촉각이 79°이하이며, 보다 피부 발림성이 뛰어난 것이었다.Compared to the Melissa extract obtained in Comparative Preparation Example 4, the Melissa fermented broth 1 obtained in Preparation Example 7 and the Melissa fermented broth 2 obtained in Preparation Example 8 both had a small contact angle, and were 85° or less, and were excellent in skin spreadability. In addition, the Melissa fermented broth 1 obtained in Production Example 7 had a contact angle of 79° or less, and was more excellent in skin spreadability.
(시험예 4-1: Ⅰ형 콜라겐 산생 촉진 작용 시험)(Test Example 4-1: Type I collagen production promoting action test)
시험예 2-2에 있어서, 피험 시료를, 제조예 7에서 얻어진 멜리사 발효액 1, 제조예 8에서 얻어진 멜리사 발효액 2, 및 비교 제조예 4에서 얻어진 멜리사 추출액으로 변경하고, 피험 시료의 종농도를 하기 표 19에 나타내는 농도로 변경한 것 이외에는, 시험예 2-2와 마찬가지의 방법으로 Ⅰ형 콜라겐 산생 촉진 작용을 시험했다. 결과를 하기 표 19에 나타낸다.In Test Example 2-2, the test sample was changed to the Melissa fermented broth 1 obtained in Production Example 7, the Melissa fermented broth 2 obtained in Production Example 8, and the Melissa extract obtained in Comparative Production Example 4, and the final concentration of the test sample was Type I collagen production promoting action was tested in the same manner as in Test Example 2-2, except that the concentration was changed to the concentration shown in Table 19. The results are shown in Table 19 below.
[표 19][Table 19]
(시험예 4-2: 아쿠아포린 3(AQP3) mRNA 발현 촉진 작용 시험)(Test Example 4-2: Aquaporin 3 (AQP3) mRNA expression promotion test)
시험예 3-2에 있어서, 피험 시료를, 제조예 7에서 얻어진 멜리사 발효액 1, 제조예 8에서 얻어진 멜리사 발효액 2, 및 비교 제조예 4에서 얻어진 멜리사 추출액으로 변경하고, 피험 시료의 종농도를 하기 표 20에 나타내는 농도로 변경한 것 이외에는, 시험예 3-2와 마찬가지의 방법으로 아쿠아포린 3(AQP3) mRNA 발현 촉진 작용을 시험했다. 결과를 하기 표 20에 나타낸다.In Test Example 3-2, the test sample was changed to the Melissa fermented broth 1 obtained in Production Example 7, the Melissa fermented broth 2 obtained in Production Example 8, and the Melissa extract obtained in Comparative Production Example 4, and the final concentration of the test sample was set to the following Aquaporin 3 (AQP3) mRNA expression promoting action was tested in the same manner as in Test Example 3-2, except that the concentration was changed as shown in Table 20. The results are shown in Table 20 below.
[표 20][Table 20]
(시험예 4-3: DPPH 라디칼 소거 작용 시험)(Test Example 4-3: DPPH radical scavenging action test)
시험예 1-3에 있어서, 피험 시료를, 제조예 7에서 얻어진 멜리사 발효액 1, 제조예 8에서 얻어진 멜리사 발효액 2, 및 비교 제조예 4에서 얻어진 멜리사 추출액으로 변경하고, 피험 시료의 종농도를 하기 표 21에 나타내는 농도로 변경한 것 이외에는, 시험예 1-3과 마찬가지의 방법으로 DPPH 라디칼 소거 작용을 시험했다. 결과를 하기 표 21에 나타낸다.In Test Example 1-3, the test sample was changed to the Melissa fermented broth 1 obtained in Production Example 7, the Melissa fermented broth 2 obtained in Production Example 8, and the Melissa extract obtained in Comparative Production Example 4, and the final concentration of the test sample was set to the following The DPPH radical scavenging action was tested in the same manner as in Test Example 1-3 except for changing the concentration shown in Table 21. The results are shown in Table 21 below.
[표 21][Table 21]
(시험예 4-4: 히알루로니다아제 활성 저해 작용 시험)(Test Example 4-4: Hyaluronidase activity inhibition test)
시험예 1-4에 있어서, 피험 시료를, 제조예 7에서 얻어진 멜리사 발효액 1, 제조예 8에서 얻어진 멜리사 발효액 2, 및 비교 제조예 4에서 얻어진 멜리사 추출액으로 변경하고, 피험 시료의 종농도를 하기 표 22에 나타내는 농도로 변경한 것 이외에는, 시험예 1-4와 마찬가지의 방법으로 히알루로니다아제 활성 저해 작용을 시험했다. 결과를 하기 표 22에 나타낸다.In Test Example 1-4, the test sample was changed to the Melissa fermented broth 1 obtained in Production Example 7, the Melissa fermented broth 2 obtained in Production Example 8, and the Melissa extract obtained in Comparative Production Example 4, and the final concentration of the test sample was set to the following Hyaluronidase activity inhibitory activity was tested in the same manner as in Test Example 1-4 except for changing the concentration shown in Table 22. The results are shown in Table 22 below.
[표 22][Table 22]
(시험예 4-5: 티로시나아제 활성 저해 작용 시험)(Test Example 4-5: Tyrosinase activity inhibitory activity test)
시험예 1-5에 있어서, 피험 시료를, 제조예 7에서 얻어진 멜리사 발효액 1, 제조예 8에서 얻어진 멜리사 발효액 2, 및 비교 제조예 4에서 얻어진 멜리사 추출액으로 변경하고, 피험 시료의 종농도를 하기 표 23에 나타내는 농도로 변경한 것 이외에는, 시험예 1-5와 마찬가지의 방법으로 티로시나아제 활성 저해 작용을 시험했다. 결과를 하기 표 23에 나타낸다.In Test Example 1-5, the test sample was changed to the Melissa fermented broth 1 obtained in Production Example 7, the Melissa fermented broth 2 obtained in Production Example 8, and the Melissa extract obtained in Comparative Production Example 4, and the final concentration of the test sample was set to the following The tyrosinase activity inhibitory action was tested in the same manner as in Test Example 1-5, except that the concentration was changed to the concentration shown in Table 23. The results are shown in Table 23 below.
[표 23][Table 23]
＜제조예 9: 수레국화(Centaurea cyanus Linne) 발효액 1의 조제＞<Preparation Example 9: Preparation of Cornflower ( Centaurea cyanus Linne) Fermented Liquid 1>
상기 제조예 1의 종국 조제 공정에 있어서, 산쑥을, 수레국화(Centaurea cyanus Linne)(가부시키가이샤 알비온 제조)로 변경한 것 이외에는, 상기 제조예 1의 종국 조제 공정과 마찬가지의 방법으로 「수레국화 종국」을 조제했다.In the final preparation step of Production Example 1, except that wild mugwort was changed to Centaurea cyanus Linne (manufactured by Albion Co., Ltd.), in the same manner as in the final preparation step of Production Example 1, "Cornflower" The end” was prepared.
또, 상기 제조예 1의 발효 공정에 있어서, 산쑥을, 수레국화(Centaurea cyanus Linne)(가부시키가이샤 알비온 제조)로 변경한 것 이외에는, 상기 제조예 1의 발효 공정과 마찬가지의 방법으로 「수레국화 발효액 1」을 얻었다.Further, in the fermentation step of Production Example 1, "Cornflower" in the same manner as in the fermentation step of Production Example 1, except that wild mugwort was changed to Cornflower (Centaurea cyanus Linne) (manufactured by Albion Corporation). Fermented liquid 1" was obtained.
＜제조예 10: 수레국화(Centaurea cyanus Linne) 발효액 2의 조제＞<Preparation Example 10: Preparation of Cornflower ( Centaurea cyanus Linne) Fermented Liquid 2>
상기 제조예 9에 있어서, 수레국화 종국을, 쌀 종국(Aspergillus oryzae, 백국 시라카미, 가부시키가이샤 아키타 곤노 쇼텐 제조)으로 변경한 것 이외에는, 상기 제조예 9와 마찬가지의 방법으로 「수레국화 발효액 2」를 얻었다.In Production Example 9, the same method as in Production Example 9, except that the cornflower seed was changed to rice seed broth (Aspergillus oryzae, Shirakami, Akita Konno Shoten, Ltd.) "Fermented cornflower 2" ' was obtained.
＜비교 제조예 5: 수레국화(Centaurea cyanus Linne) 추출액의 조제＞<Comparative Preparation Example 5: Preparation of Cornflower ( Centaurea cyanus Linne) Extract>
상기 비교 제조예 1에 있어서, 산쑥을, 수레국화(Centaurea cyanus Linne)(가부시키가이샤 알비온 제조)로 변경한 것 이외에는, 상기 비교 제조예 1과 마찬가지의 방법으로 「수레국화 추출액」을 얻었다.In Comparative Production Example 1, "Cornflower Extract" was obtained in the same manner as in Comparative Production Example 1, except that wild mugwort was changed to Cornflower ( Centaurea cyanus Linne) (manufactured by Albion Corporation).
(시험예 A-5: 접촉각의 측정)(Test Example A-5: Measurement of contact angle)
상기 시험예 A-1에 있어서, 시험 시료를, 제조예 9에서 얻어진 수레국화 발효액 1, 제조예 10에서 얻어진 수레국화 발효액 2, 및 비교 제조예 5에서 얻어진 수레국화 추출액으로 변경한 것 이외에는, 상기 시험예 A-1과 마찬가지의 방법으로 접촉각을 측정했다. 결과를 하기 표 24에 나타낸다. 또, 각 시험 시료의 접촉각 측정 시의 액적의 일례를 도 5a∼도 5c에 나타낸다.In Test Example A-1, the test sample was changed to the cornflower fermented broth 1 obtained in Production Example 9, the cornflower fermented broth 2 obtained in Production Example 10, and the cornflower extract obtained in Comparative Production Example 5. The contact angle was measured by the method similar to Test Example A-1. The results are shown in Table 24 below. In addition, an example of the droplet at the time of the contact angle measurement of each test sample is shown to FIG. 5A - FIG. 5C.
[표 24][Table 24]
비교 제조예 5에서 얻어진 수레국화 추출액에 비하여, 제조예 9에서 얻어진 수레국화 발효액 1 및 제조예 10에서 얻어진 수레국화 발효액 2는, 모두 접촉각이 작고, 85°이하이며, 피부 발림성이 뛰어난 것이었다. 또한, 제조예 9에서 얻어진 수레국화 발효액 1은, 접촉각이 79°이하이며, 보다 피부 발림성이 뛰어난 것이었다.Compared to the cornflower extract obtained in Comparative Production Example 5, the cornflower fermented broth 1 obtained in Production Example 9 and the cornflower fermented broth 2 obtained in Production Example 10 both had a small contact angle and were 85° or less, and were excellent in skin spreadability. In addition, the cornflower fermented broth 1 obtained in Production Example 9 had a contact angle of 79 degrees or less, and was more excellent in skin spreadability.
(시험예 5-1: Ⅰ형 콜라겐 산생 촉진 작용 시험)(Test Example 5-1: Type I collagen production promoting action test)
시험예 2-2에 있어서, 피험 시료를, 제조예 9에서 얻어진 수레국화 발효액 1, 제조예 10에서 얻어진 수레국화 발효액 2, 및 비교 제조예 5에서 얻어진 수레국화 추출액으로 변경하고, 피험 시료의 종농도를 하기 표 25에 나타내는 농도로 변경한 것 이외에는, 시험예 2-2와 마찬가지의 방법으로 Ⅰ형 콜라겐 산생 촉진 작용을 시험했다. 결과를 하기 표 25에 나타낸다.In Test Example 2-2, the test sample was changed to the cornflower fermented broth 1 obtained in Production Example 9, the cornflower fermented broth 2 obtained in Production Example 10, and the cornflower extract obtained in Comparative Production Example 5, and the species of the test sample Type I collagen production promoting action was tested in the same manner as in Test Example 2-2, except that the concentration was changed to the concentration shown in Table 25 below. The results are shown in Table 25 below.
[표 25][Table 25]
(시험예 5-2: 트랜스글루타미나아제-1 mRNA 발현 촉진 작용 시험)(Test Example 5-2: Transglutaminase-1 mRNA expression promotion test)
시험예 3-1에 있어서, 피험 시료를, 제조예 9에서 얻어진 수레국화 발효액 1, 제조예 10에서 얻어진 수레국화 발효액 2, 및 비교 제조예 5에서 얻어진 수레국화 추출액으로 변경하고, 피험 시료의 종농도를 하기 표 26에 나타내는 농도로 변경한 것 이외에는, 시험예 3-1과 마찬가지의 방법으로 트랜스글루타미나아제-1 mRNA 발현 촉진 작용을 시험했다. 결과를 하기 표 26에 나타낸다.In Test Example 3-1, the test sample was changed to the cornflower fermented broth 1 obtained in Production Example 9, the cornflower fermented broth 2 obtained in Production Example 10, and the cornflower extract obtained in Comparative Production Example 5, and the species of the test sample Transglutaminase-1 mRNA expression promoting action was tested in the same manner as in Test Example 3-1, except that the concentration was changed to the concentration shown in Table 26 below. The results are shown in Table 26 below.
[표 26][Table 26]
(시험예 5-3: 필라그린 mRNA 발현 촉진 작용 시험)(Test Example 5-3: Filaggrin mRNA expression promotion test)
제조예 9에서 얻어진 수레국화 발효액 1, 제조예 10에서 얻어진 수레국화 발효액 2, 및 비교 제조예 5에서 얻어진 수레국화 추출액을 피험 시료로서 이용하여, 하기의 시험 방법에 의해, 필라그린 mRNA 발현 촉진 작용을 시험했다.Using the cornflower fermented broth 1 obtained in Production Example 9, the cornflower fermented broth 2 obtained in Production Example 10, and the cornflower extract obtained in Comparative Production Example 5 as test samples, by the following test method, filaggrin mRNA expression promoting action was tested
정상 인간 표피각화세포 기초 배지(HuMedia-KB2, 구라시키 보우세키 가부시키가이샤 제조)에 종농도가 하기 표 27에 나타내는 농도가 되도록, 각 피험 시료를 용해하여, 피험 시료 첨가 배지를 조제했다.Each test sample was dissolved in a normal human epidermal keratinocyte basal medium (HuMedia-KB2, manufactured by Kurashiki Boseki Co., Ltd.) so that the final concentration was the concentration shown in Table 27 below, to prepare a test sample-added medium.
정상 인간 신생아 표피각화세포(NHEK, 구라시키 보우세키 가부시키가이샤 제조)를, 정상 인간 표피각화세포 증식용 배지(HuMedia-KG2, 구라시키 보우세키 가부시키가이샤 제조)를 이용하여 37℃, 5％ CO2의 조건하에서 컨플루언트가 될 때까지 배양한 후, 트립신 처리에 의해 세포를 회수했다. 이것을 정상 인간 표피각화세포 증식용 배지(HuMedia-KG2)에 의해 1.5×105 세포/mL로 조정했다.Normal human neonatal epidermal keratinocytes (NHEK, manufactured by Kurashiki Boseki Co., Ltd.) were treated with a medium for normal human epidermal keratinocyte proliferation (HuMedia-KG2, manufactured by Kurashiki Boseki Co., Ltd.) at 37° C., 5% After culturing until confluent under CO 2 conditions, cells were recovered by trypsinization. This was adjusted to 1.5×10 5 cells/mL with a medium for proliferation of normal human epidermal keratinocytes (HuMedia-KG2).
이어서, 35mm 샤알레에 상기 NHEK(1.5×105 세포/mL)를 2mL 파종하고, 37℃, 5％ CO2 조건하에서 하룻밤 배양했다. 배양 종료 후, 배지를 정상 인간 표피각화세포 기초 배지(HuMedia-KB2)로 교환하고, 24시간 더 배양했다. 배양 종료 후, 배지를 상기 피험 시료 첨가 배지 2mL로 교환하고, 37℃, 5％ CO2의 조건하에서 24시간 배양했다. 배양 종료 후, 배양액을 제거하고, RNA 추출용 시약(ISOGEN Ⅱ(카탈로그 번호: 311-07361), 가부시키가이샤 니폰 진 제조)으로 총 RNA를 추출해, 각각의 RNA량을 분광 광도계로 측정하고, 정제수를 이용하여 200ng/μL가 되도록 총 RNA를 조제했다.Next, 2 mL of the NHEK (1.5×10 5 cells/mL) was seeded in a 35 mm petri dish, and cultured overnight at 37° C. under 5% CO 2 conditions. After completion of the culture, the medium was replaced with a normal human epidermal keratinocyte basal medium (HuMedia-KB2), and the culture was further performed for 24 hours. After completion of the culture, the medium was replaced with 2 mL of the test sample addition medium, and cultured at 37°C and 5% CO 2 for 24 hours. After completion of the culture, the culture solution is removed, total RNA is extracted with a reagent for RNA extraction (ISOGEN II (catalog number: 311-07361), manufactured by Nippon Gene Co., Ltd.), the amount of each RNA is measured with a spectrophotometer, and purified water was used to prepare total RNA so as to be 200 ng/μL.
또, 컨트롤로서, 상기 피험 시료 첨가 배지 2mL를, 피험 시료를 포함하지 않는 정상 인간 표피각화세포 기초 배지(HuMedia-KB2) 2mL로 변경한 것 이외에는, 상기와 마찬가지의 조작 및 흡광도의 측정을 행하고, 상기와 마찬가지의 방법으로 200ng/μL가 되도록 총 RNA를 조제했다.In addition, as a control, the same operation and absorbance measurement were performed as above, except that 2 mL of the test sample addition medium was changed to 2 mL of normal human epidermal keratinocyte basal medium (HuMedia-KB2) not containing the test sample, Total RNA was prepared so that it might become 200 ng/microliter by the method similar to the above.
상기 각 총 RNA를 주형으로 하여, 필라그린 mRNA 및 내부 표준인 GAPDH mRNA의 발현량을 측정했다. mRNA의 검출은, 리얼타임 PCR 장치(Thermal Cycler DIce(등록상표) Real Time System Ⅲ, 다카라 바이오 가부시키가이샤 제조), 및 SYBR(등록상표) PrimeScript(등록상표) RT-PCR Kit(Perfect Real Time(카탈로그 번호: RR063A), 다카라 바이오 가부시키가이샤 제조)를 이용한 2스텝 리얼타임 PCR 반응에 의해 행하였다.Using each of the total RNAs as a template, the expression levels of filaggrin mRNA and GAPDH mRNA as an internal standard were measured. The detection of mRNA was performed by a real-time PCR device (Thermal Cycler DIce (registered trademark) Real Time System Ⅲ, manufactured by Takara Bio Co., Ltd.), and SYBR (registered trademark) PrimeScript (registered trademark) RT-PCR Kit (Perfect Real Time ( It was carried out by a two-step real-time PCR reaction using catalog number: RR063A) (manufactured by Takara Bio Co., Ltd.).
피험 시료 무첨가 및 피험 시료 첨가의 필라그린 mRNA의 발현량은, GAPDH mRNA의 발현량으로 보정했다. 이 보정치로부터, 하기 식 12에 의거하여 필라그린 mRNA 발현 촉진율을 산출했다. 결과를 하기 표 27에 나타낸다.The expression levels of filaggrin mRNA without the addition of the test sample and with the addition of the test sample were corrected by the expression level of GAPDH mRNA. From this correction value, the filaggrin mRNA expression promotion rate was calculated based on Equation 12 below. The results are shown in Table 27 below.
＜식 12＞<Formula 12>
필라그린 mRNA 발현 촉진율(％)＝A/B×100Filaggrin mRNA expression promotion rate (%) = A/B×100
상기 식 12에 있어서, A 및 B는 각각 이하를 나타낸다.In the formula 12, A and B each represent the following.
A: 피험 시료 첨가 시의 보정치 A: Correction value at the time of addition of test sample
B: 피험 시료 무첨가 시의 보정치 B: Correction value when no test sample is added
[표 27][Table 27]
(시험예 5-4: 아쿠아포린 3(AQP3) mRNA 발현 촉진 작용 시험)(Test Example 5-4: Aquaporin 3 (AQP3) mRNA expression promotion test)
시험예 3-2에 있어서, 피험 시료를, 제조예 9에서 얻어진 수레국화 발효액 1, 제조예 10에서 얻어진 수레국화 발효액 2, 및 비교 제조예 5에서 얻어진 수레국화 추출액으로 변경하고, 피험 시료의 종농도를 하기 표 28에 나타내는 농도로 변경한 것 이외에는, 시험예 3-2와 마찬가지의 방법으로 아쿠아포린 3(AQP3) mRNA 발현 촉진 작용을 시험했다. 결과를 하기 표 28에 나타낸다.In Test Example 3-2, the test sample was changed to the cornflower fermented broth 1 obtained in Production Example 9, the cornflower fermented broth 2 obtained in Production Example 10, and the cornflower extract obtained in Comparative Production Example 5, and the species of the test sample Aquaporin 3 (AQP3) mRNA expression promoting action was tested in the same manner as in Test Example 3-2, except that the concentration was changed to the concentration shown in Table 28 below. The results are shown in Table 28 below.
[표 28][Table 28]
(시험예 5-5: 히알루론산 합성효소 3(HAS3) mRNA 발현 촉진 작용 시험)(Test Example 5-5: Hyaluronic acid synthase 3 (HAS3) mRNA expression promotion test)
시험예 1-2에 있어서, 피험 시료를, 제조예 9에서 얻어진 수레국화 발효액 1, 제조예 10에서 얻어진 수레국화 발효액 2, 및 비교 제조예 5에서 얻어진 수레국화 추출액으로 변경하고, 피험 시료의 종농도를 하기 표 29에 나타내는 농도로 변경한 것 이외에는, 시험예 1-2와 마찬가지의 방법으로 히알루론산 합성효소 3(HAS3) mRNA 발현 촉진 작용을 시험했다. 결과를 하기 표 29에 나타낸다.In Test Example 1-2, the test sample was changed to the cornflower fermented broth 1 obtained in Production Example 9, the cornflower fermented broth 2 obtained in Production Example 10, and the cornflower extract obtained in Comparative Production Example 5, and the species of the test sample Hyaluronic acid synthase 3 (HAS3) mRNA expression promoting action was tested in the same manner as in Test Example 1-2, except that the concentration was changed to the concentration shown in Table 29 below. The results are shown in Table 29 below.
[표 29][Table 29]
(시험예 5-6: 클라우딘-1 mRNA 발현 촉진 작용 시험)(Test Example 5-6: Claudin-1 mRNA expression promoting action test)
시험예 2-3에 있어서, 피험 시료를, 제조예 9에서 얻어진 수레국화 발효액 1, 제조예 10에서 얻어진 수레국화 발효액 2, 및 비교 제조예 5에서 얻어진 수레국화 추출액으로 변경하고, 피험 시료의 종농도를 하기 표 30에 나타내는 농도로 변경한 것 이외에는, 시험예 2-3과 마찬가지의 방법으로 클라우딘-1 mRNA 발현 촉진 작용을 시험했다. 결과를 하기 표 30에 나타낸다.In Test Example 2-3, the test sample was changed to the cornflower fermented broth 1 obtained in Production Example 9, the cornflower fermented broth 2 obtained in Production Example 10, and the cornflower extract obtained in Comparative Production Example 5, and the species of the test sample The claudin-1 mRNA expression promoting effect was tested in the same manner as in Test Example 2-3, except that the concentration was changed to the concentration shown in Table 30 below. The results are shown in Table 30 below.
[표 30][Table 30]
(시험예 5-7: 클라우딘-4 mRNA 발현 촉진 작용 시험)(Test Example 5-7: Claudin-4 mRNA expression promotion test)
시험예 2-4에 있어서, 피험 시료를, 제조예 9에서 얻어진 수레국화 발효액 1, 제조예 10에서 얻어진 수레국화 발효액 2, 및 비교 제조예 5에서 얻어진 수레국화 추출액으로 변경하고, 피험 시료의 종농도를 하기 표 31에 나타내는 농도로 변경한 것 이외에는, 시험예 2-4와 마찬가지의 방법으로 클라우딘-4 mRNA 발현 촉진 작용을 시험했다. 결과를 하기 표 31에 나타낸다.In Test Example 2-4, the test sample was changed to the cornflower fermented broth 1 obtained in Production Example 9, the cornflower fermented broth 2 obtained in Production Example 10, and the cornflower extract obtained in Comparative Production Example 5, and the species of the test sample The claudin-4 mRNA expression promoting effect was tested in the same manner as in Test Example 2-4, except that the concentration was changed to the concentration shown in Table 31 below. The results are shown in Table 31 below.
[표 31][Table 31]
(시험예 5-8: 오클루딘 mRNA 발현 촉진 작용 시험)(Test Example 5-8: Ocludin mRNA expression promoting action test)
시험예 2-5에 있어서, 피험 시료를, 제조예 9에서 얻어진 수레국화 발효액 1, 제조예 10에서 얻어진 수레국화 발효액 2, 및 비교 제조예 5에서 얻어진 수레국화 추출액으로 변경하고, 피험 시료의 종농도를 하기 표 32에 나타내는 농도로 변경한 것 이외에는, 시험예 2-5와 마찬가지의 방법으로 오클루딘 mRNA 발현 촉진 작용을 시험했다. 결과를 하기 표 32에 나타낸다.In Test Example 2-5, the test sample was changed to the cornflower fermented broth 1 obtained in Production Example 9, the cornflower fermented broth 2 obtained in Production Example 10, and the cornflower extract obtained in Comparative Production Example 5, and the species of the test sample The occludin mRNA expression promoting effect was tested in the same manner as in Test Example 2-5, except that the concentration was changed to the concentration shown in Table 32 below. The results are shown in Table 32 below.
[표 32][Table 32]
(시험예 5-9: DPPH 라디칼 소거 작용 시험)(Test Example 5-9: DPPH radical scavenging action test)
시험예 1-3에 있어서, 피험 시료를, 제조예 9에서 얻어진 수레국화 발효액 1, 제조예 10에서 얻어진 수레국화 발효액 2, 및 비교 제조예 5에서 얻어진 수레국화 추출액으로 변경하고, 피험 시료의 종농도를 하기 표 33에 나타내는 농도로 변경한 것 이외에는, 시험예 1-3과 마찬가지의 방법으로 DPPH 라디칼 소거 작용을 시험했다. 결과를 하기 표 33에 나타낸다.In Test Example 1-3, the test sample was changed to the cornflower fermented broth 1 obtained in Production Example 9, the cornflower fermented broth 2 obtained in Production Example 10, and the cornflower extract obtained in Comparative Production Example 5, and the species of the test sample The DPPH radical scavenging action was tested in the same manner as in Test Example 1-3, except that the concentration was changed to the concentration shown in Table 33 below. The results are shown in Table 33 below.
[표 33][Table 33]
(시험예 5-10: B16 멜라노마 세포에 대한 멜라닌 산생 억제 작용 시험)(Test Example 5-10: Melanogenesis inhibitory action test on B16 melanoma cells)
제조예 9에서 얻어진 수레국화 발효액 1, 제조예 10에서 얻어진 수레국화 발효액 2, 및 비교 제조예 5에서 얻어진 수레국화 추출액을 피험 시료로서 이용하여, 하기의 시험 방법에 의해, B16 멜라노마 세포에 대한 멜라닌 산생 억제 작용을 시험했다.Using the cornflower fermented broth 1 obtained in Production Example 9, the cornflower fermented broth 2 obtained in Production Example 10, and the cornflower extract obtained in Comparative Production Example 5 as test samples, the B16 melanoma cells were tested by the following test method. Melanogenesis inhibitory action was tested.
10％ FBS(biosera사 제조) 및 1mmol/L 테오필린(theophylline)(후지필름 와코 준야쿠 가부시키가이샤 제조) 함유 DMEM(닛스이 세이야쿠 가부시키가이샤 제조)에, 각 피험 시료를 용해하여, 피험 시료 첨가 배지를 조제했다.Each test sample was dissolved in DMEM (manufactured by Nissui Seiyaku Co., Ltd.) containing 10% FBS (manufactured by Biosera) and 1 mmol/L theophylline (manufactured by FUJIFILM Wako Junyaku Co., Ltd.), and test sample An additive medium was prepared.
B16 멜라노마 세포를, 10％ FBS 함유 DMEM을 이용하여 37℃, 5％ CO2의 조건하에서 컨플루언트가 될 때까지 배양한 후, 트립신 처리에 의해 세포를 회수했다. 이것을 10％ FBS 및 1mmol/L 테오필린 함유 DMEM에 의해 2.4×105 세포/mL로 조정했다.B16 melanoma cells were cultured using DMEM containing 10% FBS under the conditions of 37°C and 5% CO 2 until they became confluent, and then the cells were recovered by trypsinization. This was adjusted to 2.4×10 5 cells/mL with DMEM containing 10% FBS and 1 mmol/L theophylline.
이어서, 48 웰 플레이트에 상기 B16 멜라노마 세포(2.4×105 세포/mL)를, 1 웰당 300μL씩 파종하고, 37℃, 5％ CO2의 조건하에서 6시간 배양했다. 배양 종료 후, 배지를 피험 시료 첨가 배지 100μL로 교환하고, 37℃, 5％ CO2의 조건하에서 3일간 배양했다. 배양 종료 후, 상기 피험 시료 첨가 배지를 각각 1 웰당 300μL 첨가하고, 37℃, 5％ CO2의 조건하에서 4일간 배양했다. 또한, 이때의 상기 피험 시료의 종농도는, 하기 표 34에 나타내는 농도였다.Then, the B16 melanoma cells (2.4 × 10 5 cells/mL) were seeded at a rate of 300 µL per well in a 48-well plate, and cultured at 37°C and 5% CO 2 for 6 hours. After completion of the culture, the medium was replaced with 100 µL of the test sample addition medium, and cultured at 37°C and 5% CO 2 for 3 days. After completion of the culture, 300 µL of each of the test sample addition medium was added per well, and cultured at 37°C and 5% CO 2 for 4 days. In addition, the final concentration of the test sample at this time was the concentration shown in Table 34 below.
배양 종료 후, 각 웰로부터 배지를 제거하고, 2mol/L 수산화나트륨 용액 200μL를 첨가하여 초음파 파쇄기에 의해 세포를 파괴하고, 파장 475nm에 있어서의 흡광도를 측정했다.After completion of the culture, the medium was removed from each well, 200 µL of a 2 mol/L sodium hydroxide solution was added thereto, the cells were disrupted by a sonicator, and the absorbance at a wavelength of 475 nm was measured.
측정한 흡광도의 값으로부터, 합성 멜라닌(SIGMA사 제조)을 이용하여 작성한 검량선을 토대로 멜라닌량을 산출했다.From the value of the measured absorbance, the amount of melanin was computed based on the calibration curve created using synthetic melanin (made by SIGMA).
또, 세포 생존율을 측정하기 위해, 상기 방법과 마찬가지의 방법으로, 상기 피험 시료 첨가 배지를 이용하여 B16 멜라노마 세포를 배양한 후, 배지를 제거하고 400μL의 PBS 완충액으로 세정했다. 이어서, 뉴트럴 레드(neutral red)를 종농도 0.05mg/mL로 10％ FBS 함유 DMEM에 용해한 용액을 각 웰에 200μL 첨가하고, 2.5시간 배양했다. 배양 종료 후, 뉴트럴 레드 용액을 제거하고, 에탄올·초산 용액(에탄올:초산:물 ＝50:1:49(체적비))을 각 웰에 200μL 첨가하고, 색소를 추출했다. 추출 후, 파장 540nm에 있어서의 흡광도를 측정했다.In order to measure the cell viability, in the same manner as the above method, B16 melanoma cells were cultured using the test sample addition medium, then the medium was removed and washed with 400 µL of PBS buffer. Next, 200 µL of a solution obtained by dissolving neutral red in DMEM containing 10% FBS at a final concentration of 0.05 mg/mL was added to each well and cultured for 2.5 hours. After completion of the culture, the neutral red solution was removed, and 200 µL of an ethanol/acetic acid solution (ethanol:acetic acid:water=50:1:49 (volume ratio)) was added to each well, and the dye was extracted. After extraction, the absorbance at a wavelength of 540 nm was measured.
또, 컨트롤로서, 피험 시료 용액을, 피험 시료를 포함하지 않는 10％ FBS 및 1mmol/L 테오필린 함유 DMEM으로 변경한 것 이외에는, 상기와 마찬가지의 조작 및 흡광도의 측정을 행하였다.In addition, as a control, the same operation and absorbance measurement were performed as described above, except that the test sample solution was changed to DMEM containing 10% FBS and 1 mmol/L theophylline not containing the test sample.
얻어진 측정치로부터, 하기 식 13에 의거하여 산출한 세포 생존율에 따라 보정한 멜라닌 산생 억제율(％)을, 하기 식 14에 의거하여 산출했다. 결과를 하기 표 34에 나타낸다.From the obtained measured values, the melanogenesis inhibition rate (%) corrected according to the cell viability calculated based on the following formula (13) was calculated based on the following formula (14). The results are shown in Table 34 below.
＜식 13＞<Formula 13>
세포 생존율(％)＝(D/C)×100Cell viability (%) = (D/C) x 100
상기 식 13에 있어서, C 및 D는 각각 이하를 나타낸다.In the formula (13), C and D each represent the following.
C: 피험 시료 무첨가에서의 파장 540nm에 있어서의 흡광도 C: Absorbance at a wavelength of 540 nm in the absence of test sample
D: 피험 시료 첨가에서의 파장 540nm에 있어서의 흡광도 D: Absorbance at a wavelength of 540 nm in the addition of the test sample
＜식 14＞<Formula 14>
멜라닌 산생 억제율(％)＝{1-(B/D)/(A/C)}×100Melanogenesis inhibition rate (%) = {1-(B/D)/(A/C)}×100
상기 식 14에 있어서, A∼D는 각각 이하를 나타낸다.In the formula (14), A to D each represent the following.
A: 피험 시료 무첨가에서의 멜라닌량 A: Amount of melanin in no test sample
B: 피험 시료 첨가에서의 멜라닌량 B: Amount of melanin in addition of test sample
C: 피험 시료 무첨가에서의 파장 540nm에 있어서의 흡광도 C: Absorbance at a wavelength of 540 nm in the absence of test sample
D: 피험 시료 첨가에서의 파장 540nm에 있어서의 흡광도 D: Absorbance at a wavelength of 540 nm in the addition of the test sample
[표 34][Table 34]
산업상 이용가능성Industrial Applicability
본 발명의 항노화제, 항산화제, 항염증제 및 미백제는, 뛰어난 항노화 작용, 항산화 작용, 항염증 작용 및 미백 작용 중 적어도 어느 하나의 작용을 갖고, 안전성이 높은 천연물계의 것인 점에서, 화장료, 식품, 의약품 등 분야를 불문하고 폭넓게 이용 가능하다.The anti-aging agent, antioxidant, anti-inflammatory and whitening agent of the present invention has at least any one of an excellent anti-aging action, an antioxidant action, an anti-inflammatory action and a whitening action, and is a natural product with high safety. It can be widely used regardless of fields such as , food, and pharmaceuticals.
본 발명의 화장료는, 본 발명의 상기 항노화제, 상기 항산화제, 상기 항염증제 및 상기 미백제로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종을 함유함으로써, 화장수, 유액, 크림, 연고, 미용액, 로션, 팩, 젤리, 립크림, 립스틱, 파운데이션, 입욕제, 비누, 보디 샴푸 등의 피부 화장료; 아스트린젠트, 헤어토닉, 헤어크림, 헤어리퀴드, 포마드, 샴푸, 린스 등의 두피 두발 화장료 등에 적합하게 이용 가능하다.The cosmetic of the present invention contains at least one selected from the group consisting of the anti-aging agent, the antioxidant, the anti-inflammatory agent and the whitening agent of the present invention, thereby providing a lotion, emulsion, cream, ointment, serum, lotion, pack, skin cosmetics such as jelly, lip cream, lipstick, foundation, bath agent, soap, and body shampoo; It can be used suitably for scalp hair cosmetics such as astringent, hair tonic, hair cream, hair liquid, pomade, shampoo, and conditioner.
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