KR20210133888A - 사스-코로나바이러스-2 감염증 예방 또는 치료용 백신 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 확장된 사스-코로나바이러스-2의 스파이크 단백질 (spike protein)의 리셉터 결합 도메인(RBD, receptor-binding domain)을 포함하는, 사스-코로나바이러스-2 감염증 예방 또는 치료용 재조합 단백질 항원 및 이를 포함하는 백신 조성물을 제공한다.
Description
본 발명은 사스-코로나바이러스-2 (SARS-CoV-2) 감염증 예방 또는 치료용 백신 조성물에 관한 것으로, 더욱 구체적으로 재조합 단백질을 이용한 사스-코로나바이러스-2 감염증 예방 또는 치료용 백신 조성물에 관한 것이다.
사스-코로나바이러스-2 (SARS-CoV-2)는 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스 2 (Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2) 또는 코비드 19 (COVID19)로 불리며, 한국에서는 코로나 19로 명명된다. 사스-코로나바이러스-2 는 2019년 12월 12일 우한 화난수산시장에서 처음 발견된 바이러스로, RNA 바이러스이며, 인간대 인간 (Human-to-human) 감염이 확인되었다.
사스-코로나바이러스-2는 생물안전 3등급 연구시설 (BSL-3 facility)에서 취급이 필요한 바이러스이며, 바이러스의 재생산지수(R0)를 1.4~3.9로 추정하고 있다. 이는 환자 1명이 최소 1.4명에서 최대 3.9명에게 바이러스를 옮길 수 있다는 것을 의미하여, 즉, 사스-코로나바이러스-2에 의한 감염병 통제가 상당히 어려운 것으로 추정하고 있으며, 2020년 3월 31일 기준으로 전세계 감염자 785,867명, 사망자 37,827명 정도로 집계되었다.
상기 바이러스 감염 후 2~14일간 발열, 호흡곤란, 신장 및 간 손상, 기침, 폐렴 등의 증상이 관찰되며, 아직까지 치료제는 개발되지 못하고 있는 상태이다.
치료제가 개발되지 못한 상황에서 감염을 예방하고, 지역사회에의 확산을 방지하기 위해 백신에 대한 연구가 절실하다. 해당 유행바이러스는 보통 고위험 병원체이기 때문에 불활화 및 생백신의 경우는 백신물질의 생산 및 인체투여에서 위험성 높다. 특히, 생백신의 경우 약독화 과정과 안전성 입증까지 매우 오랜 기간이 걸린다. 본 발명의 발명자들은 범용성, 안전성, 효력 및 상용화의 측면에서 현재 대유행 신종감염병에 적용 가능한 재조합단백질 백신에 대해 연구하고 본 발명을 완성하게 되었다.
1. Zhou Z, Post P, Chubet R, et al. A recombinant baculovirus-expressed S glycoprotein vaccine elicits high titers of SARS-associated coronavirus (SARS-CoV) neutralizing antibodies in mice. Vaccine. 2006;24(17):3624-3631.
2. Dai L, Zheng T, Xu K, et al. A Universal Design of Betacoronavirus Vaccines against COVID-19, MERS, and SARS. Cell. 2020;182(3):722-733.e11.
따라서 본 발명이 해결하고자 하는 과제는 본 발명은 상기와 같은 문제를 해결하기 위하여 사스-코로나바이러스-2의 감염증 예방 또는 치료를 위한 새로운 재조합 단백질 항원, 상기 항원을 포함하는 백신 조성물 또는 이의 제조 방법을 제공하고자 한다. 본 발명은 재조합 단백질 백신, 이를 이용한 사스-코로나바이러스-2의 감염증을 예방 또는 치료하는 방법 또는 상기 재조합 단백질 백신의 사스-코로나바이러스-2 감염증 예방 또는 치료 용도를 제공하고자 한다. 본 발명은 중화항체 생성뿐만 아니라 세포에 감염된 바이러스를 퇴치하여 체내 바이러스 양 감소 효과를 기대할 수 있는 새로운 사스-코로나바이러스-2 (SARS-CoV-2) 감염증 예방 또는 치료용 재조합 단백질을 제공하고자 한다.
상기 과제를 해결하기 위해, 본 발명의 일 양태는 사스-코로나바이러스-2 (SARS-CoV-2) 감염증 예방 또는 치료용 재조합 단백질, 상기 항원 단백질 발현을 위한 유전자 컨스트럭트, 또는 상기 재조합 단백질을 포함하는 백신 조성물을 제공한다.
본 발명은 확장된 사스-코로나바이러스-2의 스파이크 단백질 (spike protein, S protein)의 리셉터 결합 도메인(RBD, receptor-binding domain)을 포함하는 사스-코로나바이러스-2 감염증 예방 또는 치료를 위한 재조합 단백질을 제공한다. 이하에서, 야생형(wild type) 사스-코로나바이러스-2의 스파이크 단백질 (spike protein, S protein)의 리셉터 결합 도메인은 'Covid-19_S_RBP'로 칭하고, 본원의 확장된 사스-코로나바이러스-2의 스파이크 단백질의 리셉터 결합 도메인 'Extended_S_RBD'로 칭한다. 상기 Extended_S_RBD의 폴리펩타이드 서열은 바람직하게 서열번호 1, 6, 7, 및 8로 표현될 수 있다. 상기 서열의 각각 70% 이상, 80% 이상, 90% 이상, 95% 이상의 서열 상동성을 가지는 폴리펩타이드를 모두 포함할 수 있다.
SARS-CoV-2는 ACE2 (Angiotensin Converting Enzyme2) 수용체를 통해 숙주세포의 표면에 강하게 부착하는 것으로 알려져 있으며, SARS-CoV-2의 스파이크단백질의 RBD(Receptor-Binding Domain)는 ACE2 수용체와 결합하는데 이용되는 것으로 알려져 있다. 본 발명의 일 실시예에서 RBD 결정(crystal) 구조에 사용된 SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 포함된 RBD는 스파이크 단백질의 전장 폴리펩타이드 서열의 331-524에 위치하는 폴리펩타이드를 가지며, 이는 서열번호 37로 표현된다.
본 발명의 발명자들은 SARS-CoV-2의 스파이크 단백질의 RBD 영역을 포함하되, 상기 영역의 C-말단과 N-말단에 폴리펩타이드 서열이 더 포함되었을 때, 스파이크 단백질의 RBD 영역만으로는 달성하기 어려운, 항원 단백질의 구조안정화, 안정적인 이황화 결합(Disulfide bond) 형성, Glycosylation pattern의 consistency 증가, 항원 크기 증가, 면역원성 증가, 이황화 결합 패턴의 consistency 증가 등이 달성됨을 확인하고 본 발명을 완성하게 되었다. 또한, 본 발명의 발명자들은 구체적인 이유는 정확히 알 수 없으나, 본 발명의 재조합 단백질은 세포성 면역의 유도 효과가 뛰어나고, 높은 중화항체가를 기대할 수 있음을 확인하였다.
본 명세서에서 사용된 "확장된 사스-코로나바이러스-2의 스파이크 단백질의 리셉터 결합 도메인 (Extended_S_RBD)"이라 함은, SARS-CoV-2의 스파이크 단백질의 리셉터 결합 도메인 (S 단백질의 331-524 위치의 폴리펩타이드 서열, 서열번호 33을 갖는 폴리펩타이드)을 형성하는 폴리펩타이드를 포함하면서, 상기 도메인의 C-말단과 N-말단 방향으로 적어도 5개 이상의 폴리펩타이드 서열이 더 포함된 형태를 의미한다. 구체적으로, 서열번호 33의 폴리펩타이드를 포함하고, 상기 폴리펩타이드의 N 말단, 및 C 말단 방향으로 S 단백질의 폴리펩타이드 서열이 각각 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 개 또는 그 이상 더 연장된 형태를 가질 수 있다. 더 나아가, 상기 Extended_S_RBD은 도 1을 기준으로, 14-1214 위치에 해당하는 폴리펩타이드를 포함할 수 있다. 더 구체적으로 서열번호 33의 야생형 RBD 폴리펩타이드 서열의 C 말단 및 N 말단 방향으로 적어도 5개 내지 25개의 임의의 폴리펩타이드 서열이 더 연장될 수 있다. 바람직하게 Extended_S_RBD은 스파이크 단백질의 폴리펩타이드 서열의 328-531 위치 (서열번호 1)의, 321-545 위치(서열번호 6)의, 321-591 위치(서열번호 7)의, 및/또는 321-537 위치(서열번호 8)의 폴리펩타이드 서열을 가질 수 있다. 특히 321-545 위치(서열번호 6)의, 321-591 위치(서열번호 7)의, 및/또는 321-537 위치(서열번호 8)의 폴리펩타이드 서열을 포함하는 재조합 단백질, 또는 상기 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상, 또는 100%의 동일한 펩타이드 서열을 포함하거나 이로 이루어진 폴리펩타이드는 본 명세서 내의 바이러스 발현 시스템에서 단일 패턴으로 glycosylation 된 항원을 발현할 수 있으며, 특히 배큘로 바이러스 발현 시스템에서 단일 패턴으로 glycosylation 된 항원을 발현할 수 있다. 또한 본 발명의 일 실시예에 따른 Extended_S_RBD를 포함하는 항원 단백질은 원치 않는 이황화 결합을 배제하고, 이황화 결합 패턴의 일관성을 증가시킬 수 있어 단백질의 refolding 제어가 용이하고 단백질의 3차원적 구조가 안정하게 유지될 수 있다. 뿐만 아니라 상기 폴리펩타이드 서열을 갖는 단백질을 발현하는 컨스트럭트는 단백질 생산량을 증가시킬 수 있다. 또한, Extended_S_RBD를 포함하는, 본 발명의 재조합 단백질은 면역 유도 반응 증가 효과가 우수하다.
본 명세서에서 사용된 용어 "재조합 단백질"은 SARS-CoV-2 감염증 예방 또는 치료를 위한 용도로 사용될 수 있는 항원으로서 기능을 할 수 있으며, 구체적으로, SARS-CoV-2의 스파이크 단백질의 특정 위치에서 선별된, 특정 구간의 폴리펩타이드 서열을 포함하는 단백질을 의미한다. 상기 재조합 단백질은 SARS-CoV-2의 스파이크 단백질의 일부 영역의 절단, 외래 유전자와의 결합 등을 통해 인위적으로 만들어진 단백질을 의미한다. 상기 재조합 단백질은 상기 재조합 단백질의 기능적 단편 또는 유사체를 포함할 수 있다. 상기 기능적 단편 또는 유사체는 상기 재조합 단백질의 폴리펩타이드 서열의 일부가 결실, 추가, 또는 치환되더라도 기능적 동일성을 갖는 경우 본 발명의 범위에 포함될 수 있다. 상기 서열의 일부의 결실, 추가, 또는 치환은 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 또는 그 이상의 폴리펩타이드의 결실, 추가, 또는 치환을 포함할 수 있다. 상기 단편 및/또는 유사체는 상기 재조합 단백질과 적어도 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상, 또는 100% 동일한 펩타이드 서열을 포함하거나 이로 이루어질 수 있으며, 기능적 동일성을 가질 수 있다. 상기 기능적 동일성을 갖는다는 의미는 본 명세서 내에 서열로 한정된 재조합 단백질이 목적하는 효과를 달성할 수 있음을 의미한다.
일 양태에서, 상기 Extended_S_RBD의 C 말단 및/또는 N 말단은 선택적으로 T cell epitope를 더 포함할 수 있으며, 바람직하게 C 말단에 T cell epitope를 더 포함할 수 있다. 상기 T cell epitope는 백신 제조에 사용되는 T cell epitope 도메인이라면 제한 없이 사용될 수 있으며, 바람직하게 상기 T cell epitope의 하나로 Tetanus Toxoid Epitope P2 도메인 (서열번호 3)의 폴리펩타이드 서열 또는 상기 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상, 또는 100% 동일한 펩타이드 서열을 포함하거나 이로 이루어진 폴리펩타이드를 포함할 수 있다. 재조합 단백질에 상기 P2 도메인이 결합되어 더 향상된 면역 증강 효과를 나타낼 수 있다. 다른 구현예에서 상기 확장된 리셉터 결합 도메인(RBD, receptor-binding domain)은 폴돈 도메인과 연결될 수 있고, 상기 폴돈 도메인은 P2 도메인과 연결된 재조합 단백질을 제공할 수 있다. 폴돈 도메인은 당업자에게 공지된 임의의 폴돈 서열을 가질 수 있다. 바람직하게 박테리오파지 T4 피브리틴의 폴돈(foldon)이 포함될 수 있으며, 서열번호 4 또는 상기 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%이상, 또는 100% 동일한 펩타이드 서열을 포함하거나 이로 이루어진 폴리펩타이드를 포함할 수 있다. 상기 폴돈 도메인은 항원이 trimer를 형성하도록 유도하여 항원 크기를 증가시키고 이로 인한 항원성 증가시킬 수 있다.
Extended_S_RBD에 상기 P2 펩타이드 및/또는 폴돈 펩타이드는 링커로 연결되어 제공될 수 있다. 상기 연결은 적어도 적어도 3개 이상의 폴리펩타이드로 이루어진 링커로 연결될 수 있다. 링커는 예를 들어 16개 폴리펩타이드 이하 길이이며 바람직하게는 6개 이하 폴리펩타이드로 이루어질 수 있다. 링커에 사용되는 폴리펩타이드는 G(Gly, 글라이신), S(Ser, 세린), 및 A(Ala, 알라닌) 중 하나 이상이며, 바람직하게는 Gly-Ser-Gly-Ser-Gly (GSGSG), Gly-Ser-Ser-Gly (GSSG), Gly-Ser-Gly-Gly-Ser (GSGGS), Gly-Ser-Gly-Ser (GSGS), 및 Gly-Ser-Gly-Ser-Ser-Gly (GSGSSG)로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 펩타이드 링커일 수 있고, 바람직하게 본 발명의 목적상 GSGSG 펩타이드 링커일 수 있다. 상기 폴돈 도메인과 P2 도메인도 동일한 링커 또는 상이한 링커로 연결될 수 있으며, 바람직하게 동일한 링커로 연결될 수 있다. 바람직하게 상기 연결은 본 발명의 목적상 GSGSG 펩타이드 링커로 연결될 수 있다. 본 발명의 일 실시예는 바람직하게 서열번호 1, 6 내지 13 및 44 내지 48 및 서열번호 65중에서 선택된 어느 하나 이상의 재조합 단백질 또는 상기 상기 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상, 또는 100%의 동일한 펩타이드 서열을 포함하거나 이로 이루어진 재조합 단백질을 제공하며, 바람직하게 서열번호 1 및 6 내지 13 중에서 선택된 어느 하나 이상의 재조합 단백질을 제공하며, 바람직하게 서열번호 9 내지 13 중에서 선택된 어느 하나 이상의 재조합 단백질을 포함한다. 상기 재조합 단백질은 항체와의 반응이 우수하고, 높은 중화항체가를 제공할 수 있으며, 우수한 세포성 면역 반응을 유도한다. 또한, 본 발명의 백신 (또는 재조합 단백질 항원)으로 면역한 물질이 T세포에 기억되어 자극항원에 의해 사이토카인 IFN을 분비하며 면역을 활성화할 수 있다. 기존 백신이 중화항체를 활용하여 감염예방만을 목적으로 하는 반면, 본 발명은 감염 후 전파력 억제에 기여할 수 있다. 본 발명의 백신은 T 세포 활성화, 활성화된 T 세포에 의해 감염된 바이러스의 파괴에 우수한 효과를 가질 수 있다.
본 발명의 일 실시예는 사스-코로나바이러스-2 감염증 예방 또는 치료용 재조합 단백질 항원의 생산을 위한 유전자 컨스트럭트를 제공할 수 있다. 본 명세서에서 용어 "유전자 컨스트럭트"는 세포내에서 단백질 발현을 위한 최소의 엘리먼트(element)를, 또는 최소의 엘리먼트만을 포함하는 핵산분자를 의미하는 것으로 이해된다. 상기 유전자 컨스트럭트는 재조합 단백질 항원 발현을 위한 항원 발현용 컨스트럭트로 제공될 수 있다. 상기 사스-코로나바이러스-2 감염증 예방 또는 치료용 재조합 단백질 항원생산을 위한 유전자 컨스트럭트는 Extended_S_RBD를 암호화하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 오픈 리딩 프레임을 포함할 수 있다. 예를 들어, 상기 서열번호 1, 6 내지 13, 44 내지 48, 및 서열번호 65로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 재조합 단백질 항원을 발현하기 위해, 코돈 최적화된 유전자 컨스트럭트를 제공할 수 있다. 상기 유전자 컨스트럭트는 상기 오픈 리딩 프레임에 이종 유래의 시그널 펩타이드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드가 작동 가능하도록 순차적으로 연결될 수 있다. 염기서열은 다른 핵산 서열과 기능적 관계로 배치될 때 "작동가능하게 연결(operably linked)" 된다. 이는 적절한 분자(예를 들면, 전사 활성화 단백질)가 조절 서열들에 결합될 때 유전자 발현을 가능하게 하는 방식으로 연결된 유전자 및 조절 서열들일 수 있다. 상기 이종 유래의 시그널 펩타이드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드가 추가되어 단백질 분비량을 증가시킬 수 있고, 항원 생산 수율을 높일 수 있다.
상기 유전자 컨스트럭트는 Tetanus 독소의 P2 도메인을 암호화하는 폴리뉴클레오티드가 연결되어, 이종 유래의 시그널 펩타이드, 상기 오픈 리딩 프레임, 및 Tetanus 독소의 P2 도메인을 각각 암호화하는 폴리뉴클레오티드가 연결된 (더 구체적으로 작동가능하게 연결된) 뉴클레오티드를 제공할 수 있다. 상기 유전자 컨스트럭트는 확장된 리셉터 결합 도메인과 Tetanus 독소의 P2 도메인의 폴리뉴클레오티드 사이에 폴돈 도메인을 암호화하는 폴리뉴클레오티드가 더 연결되어 코돈 최적화된 폴리뉴클레오티드를 제공할 수 있다. 상기 연결은 적어도 3개 이상의 폴리펩타이드로 이루어진 링커를 암호화하는 폴리뉴클레오티드로 연결될 수 있다. 상기 유전자 컨스트럭트는 서열번호 14 내지 25 또는 서열번호 49 내지 64로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 폴리뉴클레오티드, 또는 이와 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상, 또는 100% 동일한 서열을 포함하거나 이로 이루어진 폴리뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 바람직하게 본 발명의 일 실시예는 배큘로바이러스 발현 시스템에서 우수한 재조합 단백질을 얻을 수 있도록 코돈 최적화된 뉴클레오티드 서열을 제공한다. 서열번호 14의 폴리뉴클레오티드 서열(SK-RBD), 서열번호 16의 폴리뉴클레오티드 서열(SK-RBD-P2), 서열번호 18의 폴리뉴클레오티드 서열(SK-RBD-EX1-P2), 서열번호 20의 폴리뉴클레오티드 서열(SK-RBD-EX2-P2), 서열번호 22의 폴리뉴클레오티드 서열(SK-RBD-EX3-P2), 및 서열번호 24의 폴리뉴클레오티드 서열(SK-RBD-Foldon-P2)로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 또는 바람직하게 본 발명의 일 실시예는 중국 햄스터 난소 (CHO) 세포를 숙주세포로 하는 발현 시스템에서 우수한 재조합 단백질을 얻을 수 있도록 코돈 최적화된 뉴클레오티드 서열을 제공한다. 일 예로 서열번호 15의 폴리뉴클레오티드 서열(SK-RBD), 서열번호 17의 폴리뉴클레오티드 서열(SK-RBD-P2), 서열번호 19의 폴리뉴클레오티드 서열(SK-RBD-EX1-P2), 서열번호 21의 폴리뉴클레오티드 서열(SK-RBD-EX2-P2), 서열번호 23의 폴리뉴클레오티드 서열(SK-RBD-EX3-P2), 및 서열번호 25의 폴리뉴클레오티드 서열(SK-RBD-Foldon-P2)로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 폴리뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 바람직하게 상기 폴리뉴클레오티드 서열은 DNA 서열이다.
본원에 사용된 용어 "시그널 펩티드" 또는 "시그널 서열"은 본원에서 호환적으로 사용되고 숙주 세포에서 단백질을 분비 경로로 지시하는, 새로 합성된 폴리펩타이드 사슬의 N-말단에 존재하는 짧은 펩티드 (일반적으로 5-30개 폴리펩타이드 길이를 갖지만, 이에 제한되지 않는다.)를 의미한다. 본원에서 언급된 시그널 펩티드는 단백질 분비 과정에서 제거된다. 상기 '이종 유래의 시그널 펩타이드 또는 시그널 서열'이라 함은 SARS-CoV-2의 스파이크 단백질이 갖는 시그널 서열이 아닌, 외부에서 도입되거나, 새로 합성된 시그널 서열을 의미한다. 바람직한 이종 유래의 시그널 서열은 murine phosphatase 시그널 펩타이드 서열, honeybee melittin 시그널 펩타이드 서열, 인간 알부민 시그널 펩타이드 서열 등이 있으며, 바람직하게 본 발명의 목적상 서열번호 2로 나타내는 인간 알부민 시그널 펩타이드를 사용할 수 있다.
본 발명의 일 구현예는 상기 유전자 컨스트럭트를 포함하는 재조합 발현 벡터를 제공한다. 본 발명의 재조합 단백질은 적합한 발현 벡터를 사용하여, 원핵 또는 진핵 발현 시스템에서 클로닝 및 발현에 의해 제조할 수 있다. 당해 분야에 공지된 임의의 방법을 사용할 수 있다. 바람직하게 본 발명의 목적 및 단백질 발현율 등을 고려하여, BEVS, CHO 또는 E. coli 발현시스템을 사용할 수 있으며, 바람직하게 BEVS 및/또는 CHO 발현 시스템을 사용할 수 있다. 벡터는 임의의 적절한 유형일 수 있고, 비제한적으로 파아지, 바이러스, 플라스미드, 파지미드(phagemid), 코스미드(cosmid), 백미드(bacmid) 등을 포함할 수 있다. 예를 들어 본 발명의 항원을 암호화하는 DNA 분자를 당해 분야에 널리 공지된 기법에 의해 적합하게 제작된 발현 벡터에 삽입한다. 공지된 기법은 Zhou Z, Post P, Chubet R, et al. A recombinant baculovirus-expressed S glycoprotein vaccine elicits high titers of SARS-associated coronavirus (SARS-CoV) neutralizing antibodies in mice. Vaccine. 2006;24(17):3624-3631. doi:10.1016/j.vaccine.2006.01.059 (베큘로시스템), Dai L, Zheng T, Xu K, et al. A Universal Design of Betacoronavirus Vaccines against COVID-19, MERS, and SARS. Cell. 2020;182(3):722-733.e11. doi:10.1016/j.cell.2020.06.035 (CHO시스템) 등을 참고할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에 따른 유전자 컨스트럭트는 배큘로바이러스 발현 시스템(BEVS)을 이용한다.
배큘로바이러스 발현 시스템은 업계에서 이미 재조합 단백질 생산을 위해 널리 사용되고 있는 것을 제한없이 사용할 수 있다. 예를 들어, pBAC4x-1(Novagen)과 같은 상업적으로 유용한 배큘로바이러스 벡터가 사용될 수 있다. 본 발명에서 사용하는 적당한 배큘로바이러스 프로모터는 문헌에 잘 알려져 있다. 배큘로바이러스 프로모터는 폴리헤드린(polyhedrin), p10 프로모터 등 일반적으로 사용되는 프로모터가 사용될 수 있다. 상기 항원 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 유전자 컨스트럭트가 포함된 베큘로바이러스 벡터를 대장균에 형질전환하여 얻어진 재조합 백미드 (Bacmid), 및 이를 게놈으로 포함하는 재조합 베큘로바이러스도 제공된다. 상기 재조합 백미드를 포함하거나, 상기 재조합 베큘로바이러스로 형질감염된 숙주세포도 본 발명의 범위에 포함된다.
본 발명의 항원 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자들은 전사 및 번역 조절 신호를 갖는 벡터에 삽입시킬 수 있다. 상기 도입된 DNA에 의해 안정하게 형질전환된 세포를, 또한 상기 발현 벡터를 함유하는 숙주 세포의 선택을 허용하는 하나 이상의 마커를 도입시킴으로써 선택할 수 있다. 상기 마커는 예를 들어 항생제 내성, 결핍 영양소 합성 유전자 등을 제공할 수 있다. 일단 상기 구조물을 함유하는 벡터 또는 DNA 서열을 발현을 위해 제조하였으면, 상기 DNA 구조물을 다양한 적합한 수단들 중 어느 하나, 즉 형질전환, 형질감염, 접합, 원형질체 융합, 일렉트로포레이션, 칼슘 포스페이트-침전, 직접 미세주입 등에 의해 적합한 숙주 세포에 도입시킬 수 있다.
바람직한 숙주 세포는 진핵 숙주 세포로, 예를 들어, 곤충 세포로 Baculovirus 발현시스템을 이용하는 Sf9, Sf21과 같은 Spodopterafrugiperda (Sf) 세포, 하이 파이브 (Hi-5) 세포와 같은 Trichoplusiani 세포 및 Drosophila S2 세포들을 포함할 수 있고, 포유류 세포로 중국 햄스터 난소(CHO) 세포를 포함할 수 있다. 적당한 숙주 세포주는 임의의 중국 햄스터 난소 (CHO) 세포주일 수 있다. '숙주세포'라는 용어는 배양액에서 성장할 수 있고 목적하는 단백질 재조합 산물 단백질을 발현할 수 있는 세포를 지칭한다. 적당한 세포주로는, 예컨대, CHO K1, CHO pro3-, CHO DG44, CHO P12 등을 포함할 수 있으며, 이에 제한되지 않는다.
상기 숙주 세포를 통해 우수한 발현율의 재조합 단백질을 얻을 수 있다. 비제한적인 예로 본 발명의 목적을 저해하지 않는 범위 내에서 상기 진핵 숙주 세포의 예로 효모, 조류, 식물, 꼬마선충(또는 선충) 등을 포함할 수 있고, 원핵 숙주 세포들은, 예를 들어, 대장균(E. coli, B. subtilis), 살모넬라티피균(Salmonella typhi) 및 마이코박테리아와 같은 박테리아 세포를 포함할 수 있다. 벡터의 도입 후, 상기 숙주 세포를 일반배지 또는 선택성 배지(벡터 함유 세포의 성장을 위해 선택한다)에서 증식시킨다. 상기 클로닝된 유전자 서열(들)의 발현 결과 목적하는 단백질이 생산된다. 상기 재조합 단백질의 정제를 상기 목적으로 공지된 방법들 중 어느 하나, 즉 추출, 침전, 크로마토그래피, 전기영동 등을 수반하는 임의의 통상적인 과정에 의해 수행할 수 있다.
본 발명의 또 다른 태양은 상기 재조합 단백질의 제조 방법을 제공하며, 상기 방법은 본 발명의 폴리뉴클레오티드 서열을 함유하는 벡터로 형질전환시킨 숙주 세포를 배양하고 목적하는 생성물을 단리함을 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 구현예는 사스-코로나바이러스-2 감염증 예방 또는 치료를 위한, 상기 재조합 단백질 항원의 새로운 용도를 제공하며, 상기 항원을 개체에 투여하여 사스-코로나바이러스-2 감염을 예방 또는 치료하는 사스-코로나바이러스-2 감염증 예방 방법을 제공한다.
본 발명의 또 다른 구현 예에서는 확장된 사스-코로나바이러스-2의 스파이크 단백질 (spike protein)의 리셉터 결합 도메인(RBD, receptor-binding domain)을 형성하는 폴리펩타이드를 포함하는 재조합 단백질 및 약학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제를 포함하는, 사스-코로나바이러스-2 감염증 예방 또는 치료용 백신 조성물을 제공한다.
상기 '사스-코로나바이러스-2 감염증'이라 함은 사스-코로나바이러스-2 자체의 감염뿐만 아니라, 상기 바이러스의 감염으로부터 발생되는 여러가지 병증 (예를 들어, 호흡기 질환, 폐렴 등)을 넓게 포함하는 개념으로 이해될 수 있다. 본 발명에서 상기 백신은 당업계에서 잘 알려진 통상적인 방법으로 제조될 수 있고, 당업계에서 백신 제조 시 사용할 수 있는 여러 첨가물을 선택적으로 더 포함할 수 있다. 본 발명에 따른 백신 조성물은 상기 재조합 단백질 항원 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함할 수 있다. 이에 제한되는 것은 아니지만 예를 들면, 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약제학적 조성물은 상기 성분들 이외에 TWEEN™, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 등과 같은 비-이온성 계면 활성제, 아스코르브 산을 포함하는 항산화제, 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함하여 사용될 수 있다. 본 발명에서 상기 백신은, 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화 함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 오일 또는 수성 매질중의 용액, 현탁액 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 형태일 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다. 본 발명에서 상기 백신의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다. 한편, 본 발명에 따른 백신의 투여량은 바람직하게는 도즈 당 1 ~ 500 ug 일 수 있다. 본 발명의 일 구체 예에서는 상기 재조합 단백질을 유효성분으로 포함하는 백신은 정맥내주사, 근육 내주사, 피하내주사, 경피전달 또는 기도흡입으로 체내에 투여될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 백신 조성물은 면역 반응 효과를 향상시키기 위해, 면역학적 애쥬반트를 더 포함할 수 있으며, 상기 면역학적 애쥬반트와 함께 또는 면역학적 애쥬반트없이 사스-코로나바이러스-2의 nucleocapsid (N) 단백질을 더 포함할 수 있다.
상기 면역학적 애쥬반트는 예를 들어 백신 제조 업계에서 잘 알려진 AS03, 씨피지(CpG), 스쿠알렌(MF59), 리포솜, TLR agonist, MPL(monophosphoryl lipid A)(AS04), 마그네슘 하이드록사이드, 마그네슘 카보네이트 하이드독사이드 펜타하이드데이트, 티타듐다이독사이드, 칼슘 카보네이트, 바륨 옥사이드, 바륨 하이이드록사이드, 바륨 퍼옥사이드, 바륨 설페이트, 칼슘 설페이트, 칼슘 파이로포스페이트, 마그네슘 카보네이트, 마그네슘 옥사이드, 알루미늄 하이드록사이드, 알루미늄 포스페이트 및 수화된 알루미늄 포타슘 설페이트(Alum)로부터 선택된 어느 하나 이상일 수 있으며, 바람직하게 씨피지(CpG), 알루미늄 하이드록사이드, 또는 이들의 혼합물을 포함할 수 있고, 가장 바람직하게 면역 유도 효과가 우수하고, 높은 중화항체가를 유도할 수 있는 씨피지(CpG) 와 알루미늄 하이드록사이드의 혼합물을 포함할 수 있으며, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 '사스-코로나바이러스-2의 nucleocapsid (N) 단백질'은 서열번호 26의 인위적으로 만들어진 사스-코로나바이러스-2의 nucleocapsid (N) 단백질을 포함하며, 이와 기능적 동일성을 갖는 단편, 및/또는 유사체를 포함할 수 있다. 상기 서열번호 26의 단백질의 폴리펩타이드 서열 일부가 결실, 추가, 또는 치환되더라도 기능적 동일성을 갖는 경우 본 발명의 범위에 포함될 수 있다. 상기 서열의 일부의 결실, 추가, 또는 치환은 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 또는 그 이상의 폴리펩타이드의 결실, 추가, 또는 치환을 포함할 수 있다. 예를 들어, 상기 서열번호 26의 폴리펩타이드 서열의 잔기 중 어느 하나 또는 그 이상의 결실, 치환, 또는 부가를 포함할 수 있으며, 예를 들어, 서열번호 26의 1번 또는 그 외 나머지 잔기 중 어느 하나 이상의 결실을 포함할 수 있다. 상기 단편 및/또는 유사체는 상기 서열번호 26과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 가질 수 있으며, 기능적 동일성을 가질 수 있다. 상기 기능적 동일성을 갖는다는 의미는 상기 N 단백질이 본 발명에서 목적하는 바와 유사한 목적, 효과를 달성할 수 있다는 것을 의미한다.
N 단백질은 세포성 면역을 유도할 수 있으며, 본 발명의 일 구현예에 따라 얻어진 재조합된 항원 단백질과 함께 사용하여 증가된 보호면역원성을 유도할 수 있다. N 단백질은 안정성이 높고 상당한 면역원성 유도능을 보이며 이를 이용한 세포성 면역은 바이러스를 감염 초기에 효과적으로 방어할 수 있다. 또한, N 단백질의 투여로 RBD-specific IgG titer의 높은 증가를 보일 수 있다. 일 실시예에 따라 얻은 재조합 단백질 항원과 N 단백질의 동시 투여로, 향상된 세포성 면역원성 증가를 기대할 수 있다. 특히, N 단백질 동시 투여로, 바이러스를 감염 초기에 효과적으로 방어할 수 있음을 확인하였다. N 단백질은 세포독성 림프구(Cytotoxic T lymphocytes)의 유도와 관련이 있으며, 일 구현예에 따라 얻은 백신의 세포성 면역 반응 유도를 위해 이용될 수 있다.
상기 서열번호 26의 단백질의 N 단백질 발현을 위한 컨스트럭트는 상기 N 단백질의 N-말단에 인간 알부민 시그널 펩타이드를 발현할 수 있는 폴리뉴클레오티드 서열이 연결되어 제공될 수 있다. 바람직하게 BEV 발현 시스템에서 최적화된 폴리뉴클레오티드 서열은 서열번호 28로, CHO 발현 시스템에서 최적화된 폴리뉴클레오티드 서열은 서열번호 29로 표현된다. 상기 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상, 또는 100%의 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함하거나 이로 이루어진 폴리뉴클레오티드도 본 발명의 범위에 포함될 수 있다. 선택적으로 백신 조성물은 사스-코로나바이러스-2의 매트릭스(Matrix, M) 단백질, 및 외피(Small envelope, E) 단백질로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 사스-코로나바이러스-2 유래 단백질을 이루는 폴리펩타이드를 더 포함할 수 있다. 백신 조성물은 바람직하게 상기 재조합 단백질 및 N 단백질을 이루는 폴리펩타이드를 포함하고, N 단백질: 재조합 단백질의 혼합 비율이 1: 1 내지 500의 중량비, 바람직하게 1: 1 내지 400, 바람직하게 1: 1 내지 300, 바람직하게 1: 1 내지 200, 바람직하게 1: 1 내지 100, 바람직하게 1: 1 내지 80의 중량비, 바람직하게 1:30 내지 50로 포함될 수 있다. 상기 비율로 포함될 때 항체와의 결합력이 우수하거나, 높은 중화항체가가 확인될 수 있다.
본 발명의 다른 구현예는 본원의 재조합 단백질 항원, 또는 (또는 구체적으로) 서열번호 1, 6 내지 13 및 44 내지 48, 및 서열번호 65로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 재조합 단백질, 또는 이와 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 펩타이드를 포함하거나 이로 이루어진 재조합 단백질을 동물에 투여하는 것을 포함하는, 동물에서의 면역반응을 평가하는 방법을 제공한다. 상기 면역반응을 평가하는 방법은 인간을 제외하는 경우도 포함될 수 있다. 상기 방법은 동물의 혈청으로부터 IgG 항체가 (antibody titer) 또는 중화항체가를 측정하여 면역 반응을 평가할 수 있으며, 상기 IgG 항체가는 RBD 특이적인 항체가, 및/또는 N 단백질 특이적인 항체가를 포함할 수 있다. 본원 명세서에서, "동물"이라 함은, 특별히 제한되지 않으나, 인간, 개, 고양이, 말, 양, 돼지, 소, 가금류 및 어류를 포함하는 동물을 포함할 수 있으나, 인간을 제외할 수도 있다.
일 구현예에서 바람직하게 서열번호 1, 서열번호 6 내지 13, 서열번호 44 내지 48, 및 서열번호 65로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 재조합 단백질 또는 이와 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 펩타이드를 포함하거나 이로 이루어진 재조합 단백질을 포함하는 조성물을 동물에 투여하여, 서열번호 37의 Covid-19_S_RBP의 펩타이드 또는 서열번호 34의 S 단백질 투여하는 것과 비교하여 항체에 대한 특이성을 증가시키는 방법을 제공할 수 있다. 상기 항체는 인간으로부터 분리된 혈청에 포함된 항체일 수 있다. 상기 조성물은 서열번호 26의 N 단백질 또는 이와 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 펩타이드 서열을 포함하거나 이로 이루어진 단백질 및 알루미늄 하이드록사이드, CpG 올리고폴리뉴클레오티드 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 면역학적 애쥬반트를 포함할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에 따른 재조합 단백질 및/또는 재조합 바이러스 백신은 안전성이 높다.
본 발명의 일 구현예에 따른 백신은 우수한 면역원성을 가지며, 백신으로 우수한 효능을 갖는다.
본 발명의 백신은 중화항체가가 높다.
본 발명의 백신은 세포성 면역의 유도 효과가 우수하다. 기존 백신이 중화항체를 활용하여 감염예방만을 목적으로 하는 반면, 본 발명은 감염 후 전파력 억제에 기여할 수 있다. 본 발명의 백신은 T 세포 활성화, 활성화된 T 세포에 의해 감염된 바이러스의 파괴에 우수한 효과를 가질 수 있다.
본 발명은 사스-코로나바이러스-2 감염에 대한 예방 및 치료효과가 우수하다.
본 발명의 재조합 단백질은 안정적인 형태의 3차원 RBD 단백질 구조를 유지할 수 있다. 본 발명의 재조합된 항원을 이용해 높은 항체 생성율을 가질 수 있다.
주요 항원인 RBD 단백질로 이루어진 합성항원 백신은 중화능이 없는 항체를 다량으로 유도시키는 ADE(Antibody-dependent effect)와 같은 부작용을 최소화할 수 있다는 장점을 가지고 있다.
본 발명의 백신은 냉장온도인 2∼8℃에서 보관할 수 있어 유통이 더욱 쉬우며, 부작용이 적고 안전하다는 장점이 있다.
본 명세서에 첨부되는 다음의 도면들은 본 발명의 바람직한 실시예를 예시하는 것이며, 전술한 발명의 내용과 함께 본 발명의 기술사상을 더욱 이해시키는 역할을 하는 것이므로, 본 발명은 그러한 도면에 기재된 사항에만 한정되어 해석되어서는 아니 된다.
도 1은 SARS-CoV2 spike full-length protein 도메인 구조의 schematic diagram을 나타낸다.
도 2는 S 단백질의 펩타이드 서열을 기초로 만들어진 재조합 단백질 항원(SK-RBD, SK-RBD-P2, SK-RBD-Ex1-P2, SK-RBD-Ex2-P2, SK-RBD-Ex3-P2) 발현을 위한 컨스트럭트를 도식화한 그림이다. 예를 들어, SK-RBD로 칭하는 유전자 컨스트럭트의 경우, SP의 1~18은 18개의 폴리펩타이드 서열을 갖는 시그널 펩타이드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드의 오픈 리딩 프레임이 SK-RBD의 펩타이드 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오티드의 오픈 리딩 프레임과 작동가능하게 연결된 형태를 보여준다. SK-RBD-P2로 칭하는 유전자 컨스트럭트의 경우, SP의 1~18은 18개의 폴리펩타이드 서열을 갖는 시그널 펩타이드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드의 오픈 리딩 프레임이 SK-RBD의 펩타이드 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오티드의 오픈 리딩 프레임과 작동가능하게 연결되고, P2 도메인을 암호화하는 폴리뉴클레오티드가 연결된 형태를 보여준다.
도 3은 본 발명의 일 구현예로 만들어진 재조합 항원이 안정적인 3차원 구조를 형성함을 보여주는 전기영동 사진이다.
도 4a 및 4b는 공격시험에 따른 몸무게 비교 결과와 사망률을 나타낸다.
도 5는 SK-RBD-P2의 세포성 면역 분석 결과 (a) 및 T 세포 B 세포의 활성 분석 결과 (b)를 나타낸다.
도 6은 RBD에 특이적으로 반응하는 IFN-γ secreting T 세포 증가 정도를 보여주는 결과이다. 면역한 물질이 T세포에 기억되어 자극항원에 의해 사이토카인 IFN을 분비하며 활성화함을 확인하였다.
도 7은 BLI를 통한 ACE2와 RBD-Ex1-P2 항원 간의 결합력 평가(a) 및 CR3022와 백신용 항원 간의 결합력 평가(b)를 보여준다.
도 8은 RBD 정제 원액에서 anti-RBD ELISA 결과를 나타낸다.
도 9는 본 발명의 일 구현예로 얻은 항원으로 면역한 후 IFN-gamma 분비 T세포의 증가를 확인한 결과이다.
도 1은 SARS-CoV2 spike full-length protein 도메인 구조의 schematic diagram을 나타낸다.
도 2는 S 단백질의 펩타이드 서열을 기초로 만들어진 재조합 단백질 항원(SK-RBD, SK-RBD-P2, SK-RBD-Ex1-P2, SK-RBD-Ex2-P2, SK-RBD-Ex3-P2) 발현을 위한 컨스트럭트를 도식화한 그림이다. 예를 들어, SK-RBD로 칭하는 유전자 컨스트럭트의 경우, SP의 1~18은 18개의 폴리펩타이드 서열을 갖는 시그널 펩타이드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드의 오픈 리딩 프레임이 SK-RBD의 펩타이드 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오티드의 오픈 리딩 프레임과 작동가능하게 연결된 형태를 보여준다. SK-RBD-P2로 칭하는 유전자 컨스트럭트의 경우, SP의 1~18은 18개의 폴리펩타이드 서열을 갖는 시그널 펩타이드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드의 오픈 리딩 프레임이 SK-RBD의 펩타이드 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오티드의 오픈 리딩 프레임과 작동가능하게 연결되고, P2 도메인을 암호화하는 폴리뉴클레오티드가 연결된 형태를 보여준다.
도 3은 본 발명의 일 구현예로 만들어진 재조합 항원이 안정적인 3차원 구조를 형성함을 보여주는 전기영동 사진이다.
도 4a 및 4b는 공격시험에 따른 몸무게 비교 결과와 사망률을 나타낸다.
도 5는 SK-RBD-P2의 세포성 면역 분석 결과 (a) 및 T 세포 B 세포의 활성 분석 결과 (b)를 나타낸다.
도 6은 RBD에 특이적으로 반응하는 IFN-γ secreting T 세포 증가 정도를 보여주는 결과이다. 면역한 물질이 T세포에 기억되어 자극항원에 의해 사이토카인 IFN을 분비하며 활성화함을 확인하였다.
도 7은 BLI를 통한 ACE2와 RBD-Ex1-P2 항원 간의 결합력 평가(a) 및 CR3022와 백신용 항원 간의 결합력 평가(b)를 보여준다.
도 8은 RBD 정제 원액에서 anti-RBD ELISA 결과를 나타낸다.
도 9는 본 발명의 일 구현예로 얻은 항원으로 면역한 후 IFN-gamma 분비 T세포의 증가를 확인한 결과이다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예 등을 들어 상세하게 설명하기로 한다. 그러나, 본 발명에 따른 실시예들은 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 하기 실시예들에 한정되는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본 발명의 실시예들은 본 발명이 속한 분야에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.
1. 사스-코로나바이러스-2의 Spike protein을 이용한 항원 발현용 컨스트럭트 제조
백신 제조에 사용하는 항원 단백질을 제작하기 위해 Genbank # MN908947 Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 isolate Wuhan-Hu-1의 서열을 참고하여 S 유전자, N 유전자, M 유전자 서열을 준비하였다.
도 1은 SARS-CoV2 spike full-length protein 도메인 구조의 schematic diagram을 나타내며, 여기서 RBD는 전장 펩타이드 서열의 331-524번째 폴리펩타이드로 이루어진 도메인이다.
연구자들은 새롭게 디자인된 확장된 RBD 재조합 단백질 (SK-RBD (서열번호 1), 또는 (각각 서열번호 6, 7, 및 8로 표현되는 SK-RBD-ex1, SK-RBD-ex2, 및 SK-RBD-ex3))를 이용하여 재조합 단백질 항원을 디자인하고, 이를 도 2에 상세히 도시하였다. SP는 시그널 단백질을, P2는 Tetanus P2 domain(CD4 T cell epitope)을, foldon은 폴돈 단백질 도메인을 의미한다. 여기서 P2 도메인과 폴돈 단백질 도메인은 각각 GSGSG 펩타이드 링커로 연결되게 하였다. 이렇게 디자인된 재조합 단백질 항원은 서열번호 9 내지 12로 나타냈다. 폴돈 도메인이 포함된 재조합 단백질 항원을 제작하고, 서열번호 13으로 나타냈다.
이들 재조합 단백질 항원을 발현하기 위한 발현용 컨스트럭트는 발현 시에 periplasmic region 혹은 배양 배지로 재조합 단백질이 secretion 될 수 있도록 각 발현 시스템에 적당한 signal peptide를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 추가하거나 원래 가지고 있는 signal peptide 대신 이종의 signal peptide가 발현될 수 있도록 폴리뉴클레오티드를 교체하여 디자인하였다. Spike 단백질은 N-terminal 1~13 폴리펩타이드(MFVFLVLLPLVSS)이 자체 signal peptide이며, 재조합 단백질 항원이 발현되는 배큘로바이러스 시스템, CHO cell 발현 시스템, mammalian cell 발현 시스템에서는 human albumin signal peptide (서열번호 2) 로 교체된 폴리펩타이드가 발현되게 하거나, 원래의 시그널 펩타이드가 그대로 발현될 수 있게 하였다.
하기 표 1은 도 2에서 도시한 유전자 컨스트럭트로 얻어진 항원 단백질의 특성을 나타낸다.
구분 | residues | Length | MW | PI | Charge at pH7 | Extinction Coefficient | Cys 수 | Cyc % | |
확장된 RBD | SK-RBD (서열번호 1) |
328-531 | 204 | 22.928 | 8.18 | 4.47 | 33850 | 8 | 3.9 |
RBD-ex1 (서열번호 6) |
321~545 | 225 | 25.276 | 8.26 | 5.40 | 33850 | 9 | 4.0 | |
RBD-ex2(서열번호 7) | 321~591 | 271 | 30.311 | 7.69 | 2.34 | 33975 | 10 | 3.7 | |
RBD-ex3(서열번호 8) | 321~537 | 217 | 24.380 | 8.36 | 5.47 | 33850 | 8 | 3.7 |
상기 표의 PI는 등전점을 나타낸다. 상기 길이는 폴리펩타이드 수이며, 상기 분자량 (MW)의 단위는 kDa이다.
상기 표 1에서 확인할 수 있듯이, 디자인된 재조합 단백질 항원은 애쥬반트에 흡착성이 우수하고, 발현된 단백질의 refolding 효율이 우수함을 알 수 있었다.
서열번호 6, 7, 8의 경우 BEV 발현시 glycosylation 패턴이 안정적인 단일 패턴으로 관찰되었다. 한편, RBD-P2 발현용 컨스트럭트를 통해 얻어진 RBD-P2 단백질은 glycosylation pattern이 달라 2 band로 나왔고, 나머지는 단일밴드를 형성했다. 당화과정이 동일한 단일 패턴의 단백질 형성은 homogeneous한 항원성을 의미하고 이는 면역원성 유도에서 중요한 의미를 나타낸다. 또한 단백질의 N-/C-말단 부분은 expression 및 purification 과정에서 다른 위치의 폴리펩타이드에 비해 post-translational modification (PTM)의 발생 가능성이 높으며, 단백질의 안정성, 활성 그리고 기타 면역거부 반응 등에 연관될 수 있기에 고려되어야 할 중요한 요소이다.
본 발명의 재조합 단백질은 단백질의 단일 항원성을 고려하여 3차원적 구조가 안정하게 유지될 수 있도록 디자인하였고 그 활성을 확인할 수 있었다.
확장된 RBD 재조합 단백질 항원은 N-말단과 C-말단이 안정화될 수 있게 구조를 변경하였고, 이러한 구조 변경으로 단백질 발현은 유지되면서 ACE2와의 binding 능력이 증가될 수 있음을 확인하였다.
CR3022, ACE2와 RBD단백질의 결합력을 평가하기 위해 BioLayer Interferometry (BLI)를 사용하였다.
SK-RBD (서열번호 1)의 경우 단백질 수율이 17.1 mg/L였으나, RBD-P2의 경우 58.5 mg/L를 보여 증가된 수율을 확인할 수 있었고, RBD-Ex1-P2에서도 RBD-P2와 유사한 수준의 수율이 확인되었다.
한편, SK-RBD-Ex1-P2 항원(서열번호 10)은 단백질 발현 수율을 유지하면서 ACE2와의 결합 능력이 27.4 KD에서 4.1 KD로 증가하였다.
항원단백질 | ACE2단백질과의 결합력(KD)-nM |
참조품(Sino-RBD) | 4.4 |
SK-RBD (서열번호 1) | 13.3 |
SK-RBD-P2 (서열번호 9) | 27.4 |
SK-RBD-Ex1-P2(서열번호 10) | 4.1 |
2. 기타 단백질을 이용한 항원 제조
사스-코로나-2 바이러스의 N 단백질 유전자를 기초로 서열번호 26의 N 단백질 항원을 제조하였다.
3. 코돈 최적화
재조합 단백질을 암호화하는 DNA 서열은 진스크립트 (GenScript)에서 곤충 세포, 및 Chinese Hamster Ovary(CHO) cell에 최적화된 코돈으로 각각 합성되었다.
각 발현시스템에 코돈-최적화된 서열은 다음과 같다. 하기 서열은 폴리뉴클레오티드 서열이다.
구분 | BEVS | CHO |
서열번호 | 서열번호 | |
SK-RBD | 14 | 15 |
SK-RBD-P2 | 16 | 17 |
SK-RBD-Ex1-P2 | 18 | 19 |
SK-RBD-Ex2-P2 | 20 | 21 |
SK-RBD-Ex3-P2 | 22 | 23 |
SK-RBD-Foldon-P2 | 24 | 25 |
SK-S-trimer-P2 | 67 | 66 |
또한 최근 유행하는 Wuhan virus 변종 4종(B.1.1.7, B.1.351, B.1.1.248, B.1.429)에 상응하는 spike protein 서열(서열번호44~48)을 참고로 단백질 백신을 디자인하였고, Insect 및 CHO 발현시스템에 맞게 코돈-최적화하여 서열번호 49 내지 64 및 66-67로 나타냈다.
4. 재조합 단백질 백신 제조
베큘로바이러스 및 CHO 세포를 이용하여 하기와 같은 과정으로 재조합 단백질 백신을 생산하였다.
4-1.
배큘로바이러스 발현시스템을 이용한 재조합단백질 생산
도 2와 같이 디자인된 재조합 단백질 (SK-RBD, SK-RBD-P2, SK-RBD-Ex1-P2, SK-RBD-Ex2-P2, SK-RBD-Ex3-P2, 및 SK-RBD-Foldon-P2), 및 N 단백질을 배큘로바이러스 발현 시스템으로 발현하기 위해 코돈 최적화된 서열번호 14, 16, 18, 20, 22 및 24, 그리고 서열번호 28로 각각 표현되는 유전자 컨스트럭트를 준비하였다. 전이 벡터 pFastBac vector에 상기 준비된 컨스트럭트 유전자를 삽입하여 클로닝하고, 유전자서열을 분석하였다.
제조된 플라스미드를 bacmid 제조용 E. coli에 형질전환 (Transformation)하여 재조합백미드 (Recombinant bacmid)를 제조하고 유전자서열을 분석하였다.
재조합백미드를 단층으로 배양된 Sf9 세포에 접종하여 형질감염 (Transfection)하고 재조합배큘로바이러스 (P0)를 제조하여 플라그시험법으로 정량하였다.
배양된 Hi-5 세포에 재조합배큘로바이러스를 감염시켜 P1 바이러스를 확보하고, 상등액에서 생산된 항원단백질을 확인하였다.
상기 P1 바이러스를 Hi-5 세포에 감염시켜 생산된 항원단백질을 회수하였다.
수거된 재조합단백질을 필터를 이용하여 여과하고, 적절한 크로마토그라피법 (Ion Exchange, Size Exclusion 등)을 이용하여 재조합단백질을 정제하였다.
4-2.
CHO세포 발현시스템을 이용한 재조합단백질 생산
도 2와 같이 디자인된 재조합 단백질 (SK-RBD, SK-RBD-P2, RBD-Ex1-P2, RBD-Ex2-P2, RBD-Ex3-P2, 및 SK-RBD-Foldon-P2), 및 N 단백질을 배큘로바이러스 발현 시스템으로 발현하기 위해 코돈 최적화된 서열번호 15, 17, 19, 21, 23 및 25, 그리고 서열번호 29로 각각 표현되는 유전자 컨스트럭트를 준비하였다.
발현벡터에 합성된 유전자를 삽입하여 클로닝하고, 유전자서열을 분석하였다.
단백질생산용 CHO 세포(CHO K-1 세포주)에 재조합플라스미드를 형질전환하였다.
항생제를 이용하여 재조합단백질을 발현하는 형질전환세포를 동정하였다.
동정된 형질전환 CHO세포를 대량배양하고 재조합 단백질을 수거하였다.
수거된 재조합단백질을 필터를 이용하여 여과하고, 적절한 크로마토그라피법 (Ion Exchange, Size Exclusion 등)을 이용하여 재조합단백질을 정제하였다.
4-3. 재조합단백질 확인 및 정량
SDS-PAGE 및 Western blot법을 이용하여 재조합단백질의 발현 여부를 확인하였다. 기본적인 총단백질 정량법 (Lowry법, BCA법 등)을 이용하여 재조합단백질을 정량하였다.
5. 재조합 항원 단백질의 평가
5-1.
면역원성 시험 (Immunogenicity Test)
동물 모델에 정제된 재조합단백질을 면역증강제 (예/Aluminum hydroxide) 와 조합하여 2~3주 간격으로 2~3회 접종하였다. 체중 및 체온 변화를 측정하여 안전성을 확인하였다. 최종 접종 2~3주 후, 전혈하여 분리된 혈청과 비장세포를 얻었다.
5-2. 방어능 시험 (Protection Test)
동물 모델에 정제된 재조합단백질을 면역증강제 (예/Aluminum hydroxide) 와 조합하여 2~3주 간격으로 2~3회 접종하였다. 최종 접종 2~3주 후, 치사량의 야생형 사스-코로나바이러스-2 바이러스를 감염하였다. 감염 후 1주일 간, 비강, 기도, 장기 등에서의 바이러스 shedding을 평가하였다. 감염 후 2주일 간, 체중 및 체온 변화, 사망률 등을 평가하였다.
5-3.
면역원성 평가 분석
면역원성 평가 분석은 IgG ELISA 분석법을 사용하였다. 코팅용 항원 (RBD, S1, S2, N 등)을 96웰-플레이트에 코팅하고, 블로킹버퍼로 플레이트를 블로킹함. 검체 (혈청)를 플레이트에 반응시켰다. IgG 검출항체를 플레이트에 반응시켰다. 기질버퍼를 첨가하여 발색시키고, 흡광도를 측정하였다.
5-4. 슈도바이러스 제조
발현용벡터에 사스-코로나바이러스-2의 S 단백질 유전자를 클로닝하였다. 전이벡터에 reporter유전자를 클로닝하였다. 두 유전자를 슈도바이러스 생산용 세포에 형질전환 (Transfection)하여 reporter단백질을 발현하는 슈도바이러스를 제조하였다.
5-5. 중화항체가 평가
계대 희석된 검체 (혈청)를 슈도바이러스와 반응시켰다. 반응한 슈도바이러스를 96웰-플레이트에 배양된 감염용 세포 (Vero E6 등)에 감염하여 배양하였다. 4~6시간 뒤 PBS로 세척하고 새로운 배지로 교체하였다. 24~72시간 배양하여 reporter 단백질 발현량을 비교하여 중화항체가를 평가하였다.
5-6. 세포성면역 평가
96웰-플레이트에 항 인터페론-감마 항체 (anti-IFN-γ antibody)에 코팅하였다. 블로킹버퍼로 플레이트를 블로킹하고, 비장세포와 촉진제항원 (Stimulate)을 넣고 24~36시간을 배양하였다. 인터페론-감마 검출 항체를 반응시키고, 기질을 첨가하여 반응시켰다. ELISPOT 리더를 이용하여 면역세포를 평가하였다.
면역특성 분석을 위하여, 면역세포 특이 항체와 사이토카인 항체를 분리한 비장세포와 2시간 반응시켰다. 유동세포분석법을 통해 T 세포 분포 및 싸이토카인 발현율을 측정하였다.
5-7. 백신용 항원의 항원성 평가
CR3022와의 결합력을 평가하기 위해 BioLayer Interferometry (BLI)를 사용하였다. CR3022는 Recombinant SARS-CoV-2 Spike Glycoprotein S1에 대한 인간 단클론 항체이다. (Abcam사의 CAT#: ab273073)
BLI는 항체와 항원 간에 association과 dissociation을 통해 친화성 상수 KD값 (Kdis/Kon)을 측정하며 이 값이 작을수록 친화력이 높다. 코로나19 S-특이 항체를 ProA sensor chip (ForteBio)에 Octet K2를 이용해 immobilize 하였다. Sensor chip을 100nM 부터 2-fold로 희석된 항원 시료에 dipping 하여 association을 측정하고 Kinetic buffer만 포함하는 well에 dipping 하여 dissociation을 측정하였다. Octet Data Analysis software(11.0)를 이용하여 결과 값에서 reference를 뺀 데이터를 1:1 binding model에 fitting 하여 분석하였다.
항원의 생물학적 활성과 구조적 완건성을 입증하고자 효소 면역 측정법을 수행하였다. 당사에서 제조된 재조합 코로나19 백신에서 주요 항원인 RBD 단백질과 Anti-SARS-CoV-2 Neutralizing Antibody, Human IgG1 (Acrobiosystems, Cat No. SAD-S53)중화항체 또는 SARS-CoV-2 Spike Neutralizing Antibody, Mouse Mab(SinoBio, Cat No. MM57)를 사용하여 면역 특이적 반응을 확인하였다.
6. 총항체가/중화항체가 분석을 통한 면역원성 실험 결과
6-1. BALB/c를 이용한 SK-RBD와 SK-RBD-P2의 면역원성 비교 실험 결과
6주령 female 마우스를 이용하여 SK-RBD(서열번호 1)와 SK-RBD-P2(서열번호 9) 면역원성 물질을 3주간격으로 3회 근육주사(IM) 면역 후 채혈하여 혈청을 분리하고 면역원성을 분석하였다. 분석결과 SK-RBD(서열번호 1)와 SK-RBD-P2(서열번호 9)에 의해 항체가 형성됨을 확인하였다. 1번 및 2번 그룹은 항원 투여없이 각각 PBS 및 aluminum hydroxide (=Alum. H)를 3번 내지 6번 그룹과 같은 양으로 투여하였다. 하기 표 4에서 확인할 수 있듯이, 두 그룹 모두 6, 8주차에 높은 IgG 항체가를 보였으나 SK-RBD-P2(서열번호 9)의 경우 8주차에 saturation양상을 보였다. 8주차 면역 샘플의 total IgG 값은 SK-RBD(서열번호 1)에서는 2581, SK-RBD-P2(서열번호 9)에서는 136462의 수준을 보였다. SK-RBD-P2(서열번호 9)에 의해 유도된 총항체 값은 5배 이상의 높은 항체가를 보이며 보다 우수한 면역원성을 증명했다. N 단백질 (서열번호 26)이 함께 면역된 그룹 4, 6에서도 N단백질 특이 IgG 항체를 확인할 수 있었다(표 4).
No. | 항원 | 항원량 (μg/dose) | 개체수 | Adjuvant | RBD-specific total IgG | N-specific total IgG | ||||
4w | 6W | 8W | 4W | 6W | 8W | |||||
1 | Vehicle 1 | 0 | 10 | PBS | 67 | 25 | 25 | 189 | 128 | 385 |
2 | Vehicle 2 | 0 | 10 | Alum. H | 25 | 25 | 25 | 70 | 83 | 276 |
3 | SK-RBD-P2(서열번호 9) | 10 | 10 | Alum. H | 26796 | 146153 | 136462 | 73 | 81 | 229 |
4 | SK-RBD-P2(서열번호 9) + N(서열번호 26) | 10+1 | 10 | Alum. H | 2923 | 8291 | 89642 | 560185 | 3318538 | 486428 |
5 | SK-RBD(서열번호 1) | 10 | 10 | Alum. H | 3916 | 7041 | 25182 | 108 | 110 | 210 |
6 | SK-RBD(서열번호 1) + N(서열번호 26) | 10+1 | 10 | Alum. H | 3489 | 9029 | 12076 | 154435 | 317386 | 301893 |
6-2. SK-RBD-P2(서열번호 9)를 면역한 마우스의 총항체가 및 중화항체가 분석 (BALB/c 마우스)
6주령 female 마우스를 이용하여 SK-RBD-P2(서열번호 9) 와 N(서열번호 26)항원을 3주간격으로 2회 IM 면역 후 채혈하고 혈청을 분리하여 면역원성을 분석하였다. 4주, 6주차의 마우스 면역 혈청으로 ELISA를 수행하여 총항체가를 측정하였다. 분석 결과 SK-RBD-P2(서열번호 9)의 투여한 항원 양이 증가할수록 (5, 10, 30 μg) 항체가가 dose-dependent 하게 증가하는 패턴을 보였다. N 항원이 함께 면역된 혈청에서는 N특이적 항체가 형성됨을 확인하였다. 하기 표 5의 3번 그룹과 6번 그룹을 보면, N 단백질 항원을 함께 투여했을 때, 중화항체 값에서 차이가 없지만, 세포성 면역 유도능이 우수하므로, 이를 이용해 바이러스 감염 초기에 효과적인 방어가 가능하도록 한다.
No. | 항원 |
항원량
(μg/dose) |
개체 수 | Adjuvant | Total IgG titer | 중화항체가 | |||
4w | 6w | 4w | 6w | ||||||
RBD-specific | N-specific | PBNA 50 | |||||||
1 | Vehicle 1 | 0 | 5 | PBS | 25 | 25 | 114 | 223 | 10 |
2 | SK-RBD-P2(서열번호 9)-5 | 5 | 5 | Alum. H | 1666 | 2536 | 159 | 467 | ND |
3 | SK-RBD-P2(서열번호 9)-10 | 10 | 5 | Alum. H | 7323 | 20336 | 252 | 781 | 10 |
4 | SK-RBD-P2(서열번호 9)-30 | 30 | 5 | Alum. H | 30499 | 215966 | 252 | 781 | 320 |
5 | SK-RBD-P2(서열번호 9)-5 + N(서열번호 26)-0.5 |
5+0.5 | 5 | Alum. H | 100 | 313 | 84210 | 566945 | 20 |
6 | SK-RBD-P2(서열번호 9)-10 + N(서열번호 26)-1 | 10+1 | 5 | Alum. H | 1504 | 7044 | 86971 | 877576 | 10 |
7 | SK-RBD-P2(서열번호 9)-30 + N(서열번호 26)-3 | 30+3 | 5 | Alum. H | 7399 | 27697 | 176099 | 1394533 | 160 |
*ND : Not Detected
6-3. RBD-Ex1-P2(서열번호 10)과 RBD-Ex2-P2(서열번호 11)를 면역한 마우스의 총항체가 및 중화항체가 분석 (BALB/c 마우스)
BALB/c 마우스 6주령, female를 준비하고, Alum Hydroxide와 혼합한 RBD-Ex1-P2(서열번호 10), RBD-Ex2-P2(서열번호 11) 와 N(서열번호 26) 단백질을 근육에 0.1 mL 3주 간격으로 2회 면역하고 채혈하여 혈청을 분리하고 분석하였다. 분석 결과 RBD-Ex1-P2(서열번호 10)와 RBD-Ex2-P2(서열번호 11)에 의해 RBD 특이 항체 및 N 특이 항체가 형성됨을 확인하였고, 투여한 항원의 양이 증가할수록 (5, 10, 30 μg) dose-dependent 하게 증가하는 패턴을 보였다. 또한 N을 1/10분량 같이 투여시 RBD 특이 IgG 항체가는 다소 낮아지는 경향이 있었지만 중화항체가는 동일 수준으로 유도되었다. Alum 단독보다는 Alum + CpG adjuvant 가 함께 면역된 그룹에서 높은 RBD 특이 IgG 항체가와 중화 항체가를 보였다. 상기 CpG는 Dynavax 사의 상품명 CpG 1018 adjuvant을 사용하였다.
10 μg 투여시 alum adjuvant의 경우 RBD 특이 항체가는 4221, 중화항체가는 vehicle 과 유사하여 거의 유도되지 않았지만 alum+CpG의 경우 RBD 특이 항체가 5389108, 중화항체가는 320 이상으로 매우 높게 유도되었다(표 6).
No. | 항원 |
항원량
(ug/dose) |
개체수 | Adjuvant | Total IgG titer | PBNA 50 | |||
3 w | 5 w | 3 w | 5 w | ||||||
RBD-specific | N-specific | ||||||||
1 | Vehicle 1 | 0 | 5 | Alum | 25 | 25 | 23995 | 592 | 40 |
2 | RBD-Ex1-P2(서열번호 10)-5 | 5 | 5 | Alum. H | 25 | 2706 | 123 | 119 | 10 |
3 | RBD-Ex1-P2(서열번호 10)-10 | 10 | 5 | Alum. H | 25 | 4221 | 151 | 127 | 40 |
4 | RBD-Ex1-P2(서열번호 10)-30 | 30 | 5 | Alum. H | 1207 | 104476 | 177 | 353 | 80 |
5 | RBD-Ex1-P2(서열번호 10)-5 + N(서열번호 26)-0.5 | 5+0.5 | 5 | Alum. H | 74 | 3686 | 930 | 542933 | 0 |
6 | RBD-Ex1-P2(서열번호 10)-10 + N(서열번호 26)-1 | 10+1 | 5 | Alum. H | 25 | 2174 | 3460 | 282976 | 10 |
7 | RBD-Ex1-P2(서열번호 10)-30 + N(서열번호 26)-3 | 30+3 | 5 | Alum. H | 61 | 29738 | 15264 | 388091 | 160 |
8 | RBD-Ex2-P2(서열번호 11)-5 | 5 | 5 | Alum. H | 25 | 1104 | 98 | 25 | 0 |
9 | RBD-Ex2-P2(서열번호 11)-10 | 10 | 5 | Alum. H | 25 | 2839 | 137 | 60 | 0 |
10 | RBD-Ex2-P2(서열번호 11)-30 | 30 | 5 | Alum. H | 2600 | 43961 | 161 | 25 | 80 |
11 | RBD-Ex2-P2(서열번호 11)-5 + N(서열번호 26)-0.5 | 5+0.5 | 5 | Alum. H | 167 | 25 | 772 | 61379 | 0 |
12 | RBD-Ex2-P2(서열번호 11)-10 + N(서열번호 26)-1 | 10+1 | 5 | Alum. H | 58 | 704 | 2640 | 536857 | 0 |
13 | RBD-Ex2-P2(서열번호 11)-30 + N(서열번호 26)-3 | 30+3 | 5 | Alum. H | 25 | 6329 | 5593 | 1314727 | 80 |
14 | RBD-Ex1-P2(서열번호 10)-10 | 10 | 5 | Alum. H+CpG | 112478 | 5389108 | 121 | 115 | >320 |
15 | RBD-Ex1-P2(서열번호 10)-10 + N(서열번호 26)-1 | 10+1 | 5 | Alum. H+CpG | 13988 | 900862 | 198650 | 235167 | >320 |
상기 결과들을 통해, 14번 그룹 등의 재조합 단백질 항원은 중화 항체 생성에 탁월하였음을 알 수 있었다. 아울러, N 단백질을 함께 투여했을 때, 중화 항체의 생성뿐만 아니라, 초기 바이러스 방어를 위해 필요한 세포성 면역 반응을 유도하는데 효과적이라는 결과를 얻었다.
6-4. RBD-Ex1-P2(서열번호 10)와 N(서열번호 26)의 비율에 따른 총항체가 및 중화항체가 분석 (BALB/c 마우스)
6주령 female 마우스를 이용하여 항원을 3주간격으로 2회 IM 면역 후 채혈하여 혈청을 분리하고 면역원성을 분석하였다. 분석결과 RBD-Ex1-P2(서열번호 10)와 N(서열번호 26)에 의해 항체가 형성됨을 확인하였다. N 단백질 접종에 따른 면역원성 차이를 확인하기 위하여 N(서열번호 26) 항원양을 RBD-Ex1-P2(서열번호 10) 항원양의 1/10, 1/50 두가지 도즈로 면역하고 RBD 특이 항체가, N 특이 항체가, 중화항체가를 분석하였다. 분석 결과 N(서열번호 26)을 RBD-Ex1-P2(서열번호 10)항원량의 1/10 수준으로 투여 시 RBD 특이 항체가 소폭 감소하는 경향이 있지만 중화항체는 유사하거나 약간 증가하며, 1/50 수준으로 투여 시 RBD 특이 항체 및 중화항체가 모두 크게 증가한다. RBD-Ex1-P2(서열번호 10) 단독 투여 시 RBD 특이 항체가와 중화항체가는 5~50ug 도즈 범위에서 도즈 의존적으로 증가하는 양상을 보였지만, N(서열번호 26)을 RBD-Ex1-P2(서열번호 10) 항원량의 1/50 수준으로 병용 투여할 경우 RBD-Ex1-P2(서열번호 10)를 30ug 투여한 경우가 50ug 투여한 경우보다 더 높은 수준의 RBD 특이 항체 및 중화항체가 유도되었다.
No. | 항원 |
항원량
(ug/dose) |
개체수
|
Adjuvant
|
Total IgG titer | PBNA 50 | |||
3 w | 6 w | 3 w | 6 w | ||||||
RBD-specific | N-specific | ||||||||
1 | Vehicle 1 | 0 | 5 | Alum. H | 30 | 25 | 33 | 25 | 0 |
2 | RBD-Ex1-P2(서열번호 10)-30 | 30 | 5 | Alum. H | 121 | 57364 | 39 | 25 | 80 |
3 | RBD-Ex1-P2(서열번호 10)-30 + N(서열번호 26)-3 | 30 + 3 | 5 | Alum. H | 35 | 52590 | 4089 | 190572 | 320 |
4 | RBD-Ex1-P2(서열번호 10)-30 + N(서열번호 26)-0.6 | 30 + 0.6 | 5 | Alum. H | 498 | 109455 | 1503 | 84553 | 1280 |
6-5. RBD-Ex1-P2(서열번호 10)와 N (서열번호 26)의 총항체가 분석 (SD-Rat)
7주령 female 랫드를 이용하여 항원을 3주간격으로 2회 IM 면역 후 채혈하여 혈청을 분리하고 면역원성을 분석하였다. 분석결과 RBD-Ex1-P2(서열번호 10)특이, N (서열번호 26) 특이 항체가 형성됨을 확인하였다. 동시투여된 N 단백질 접종에 따른 면역원성 차이를 확인하기 위하여 면역이 완료된 마우스의 혈청으로 총항체가와 중화항체를 분석하였다. 분석 결과 아래 그래프와 같이 RBD특이적, N특이적 IgG 항체가 형성됨을 확인하였고, 5번 그룹, RBD-Ex1-P2(서열번호 10)와 N (서열번호 26) 단백질을 각각 50 ug, 5 ug 면역시 가장 높은 수준의 총항체가 형성됨을 확인하였다.
no. | 항원 |
항원량
(ug/dose) |
개체수 | Adjuvant | RBD-specific IgG titer | N-specific IgG titer |
1 | Vehicle 1 | 0 | 10 | Alum. H | 28 | 172 |
2 | RBD-Ex1-P2(서열번호 10)-30 | 30 | 10 | Alum. H | 6875 | 71 |
3 | RBD-Ex1-P2(서열번호 10)-50 | 50 | 10 | Alum. H | 13145 | 71 |
4 | RBD-Ex1-P2(서열번호 10)-30 + N (서열번호 26)-3 | 30+3 | 10 | Alum. H | 6392 | 16220 |
5 | RBD-Ex1-P2(서열번호 10)-50 + N (서열번호 26)-5 | 50+5 | 10 | Alum. H | 31943 | 107793 |
6-6. RBD-Ex1-P2(서열번호 10)와 N (서열번호 26)의 세포성 면역원성 분석 (SD-Rat)
상기 표 8과 동일한 군으로 랫트의 세포성면역원성 유도를 확인하기 위하여 면역이 완료된 Rat의 비장을 분리하여 ELISPot을 진행하였다. 분석한 결과 면역그룹 (G2~G5)에서 RBD-Ex1-P2(서열번호 10)항원 자극에 특이적으로 반응하는 IFN-gamma 분비 T세포의 증가를 확인하였다. 또한 N (서열번호 26) 항원으로 면역된 그룹 G4, G5에서 자극항원 N (서열번호 26)에 특이적으로 반응하는 IFN-gamma 분비 T세포의 증가도 확인하였다.
6-7. RBD-Ex1-P2(서열번호 10)를 면역한 형질전환 마우스의 총항체가 및 중화항체가 분석 (hACE2 TG 마우스)
5주, 6주차의 Human ACE2 유전자를 발현하는 TG 마우스 면역 혈청으로 ELISA를 수행하여 총항체가를 측정하였다. 분석 결과 아래 그래프와 같이 RBD특이 항체가 6주차에 136077 수준의 형성됨을 확인하였다. 6주차 RBD-Ex1-P2(서열번호 10) 항원으로 면역된 마우스 혈청을 가지고 PBNA 중화항체가 분석을 수행하였다. Wild-type SARS-CoV-2에 susceptible한 hACE2 TG 마우스에서도 6주차 혈청은 PBNA50 값 320을 보이며 중화항체가 형성됨을 확인하였다.
no. | 항원 |
항원량
(ug/dose) |
개체수 | Adjuvant | RBD specific total IgG | PBNA 50 | |
5w | 6w | ||||||
1 | Vehicle 1 | 0 | 5 | Alum. H | 25 | 25 | 20 |
2 | SK-RBD-P2 (서열번호 9) | 20 | 5 | Alum. H | 28307 | 161692 | 640 |
no. | 항원 |
항원량
(ug/dose) |
개체수 | Adjuvant |
1 | Vehicle 1 | 0 | 5 | Alum. H |
2 | SK-RBD-P2 (서열번호 9) | 20 | 5 | Alum. H |
3 | RBD-Ex1-P2(서열번호 10) | 20 | 5 | Alum. H |
야생형 SARS-CoV-2 바이러스(NCCP 43326)를 5 x 104 pfu/mouse로 비강으로 감염한 후 12일 동안 몸무게의 변화와 사망률을 조사한 결과, Vehicle 1 군의 경우 6일차 1수 사망, 8일차 2수 사망, 11일차 1수 사망하여 감염이 안된 1수 제외 100% 사망이 발생하였으나, RBD-P2백신이 투여된 그룹의 동물은 80%, RBD-Ex1-P2 백신이 투여된 그룹의 동물은 모든 개체가 살아남았다. 즉, 80% 이상의 생존율을 보여, 본 발명의 재조합 단백질 항원이 뛰어난 면역원으로 작용할 수 있음을 확인하였다. 또한, 감염 후 체중의 변화에서 백신 그룹은 20% 이내 범위에서 감소했다가 점차 회복되는 양상을 보이지만, Vehicle 그룹의 경우 ~30% 정도의 급격한 체중 감소현상을 보이면서 사망에 이르렀다. 해당 백신은 SARS-CoV-2 바이러스에 susceptible 하게 변형한 TG 마우스에서 100% protective 하였다(도 4a 및 도 4b).
7. 마우스의 세포성 면역 결과 분석
7-1. RBD-P2를 면역한 BALB/c 마우스의 세포성 면역원성 분석 결과
C57BL/6를 이용한 동물실험에서 IgG subtype 분석과 세포성 면역 유도의 양상을 분석하였다. 혈청내의 IgG1과 IgG2c의 isotype 항체 분석을 진행한 결과, RBD-P2 항원으로 접종한 혈청에서 IgG1과 IgG2 subtype 항체가가 모두 증가하는 것을 확인할 수 있었으며, CD4+, CD8+ T 세포가 증가하는 경향을 FACS 분석을 통해 확인할 수 있었다(도 5(a)).
T 세포 면역과 B 세포 면역 분석을 위해 활성화된 CD8+ 세포와 CD4+ 세포 분석을 진행하였다. 도 11에서 보는 것처럼, Vehicle 그룹 대비 RBD-P2 면역 그룹에서 RBD 특이 T 세포의 활성이 증가하는 경향을 보였다. 또한 germinal center 안의 B세포 증가 양상을 확인하였다(도 5(b)).
7-2. RBD-Ex1-P2를 면역한 BALB/c 마우스의 세포성 면역원성 분석 결과BALB/c를 이용한 면역 실험에서 세포성 면역 유도를 확인하기 위하여 일부 개체를 2차 면역 후 3주차에 비장 세포를 분리하여 IFN-γ secreting T 세포를 측정하는 ELISpot을 수행하였다. 그 결과, 백신 투여 군들에서 RBD-Ex1-P2 단백질 항원에 특이적으로 반응하는 T 세포의 수가 크게 증가함을 확인하였다 (표 12, 도 6).
Group | 항원 |
항원량
(ug/dose) |
개체수 | Adjuvant |
1 | Vehicle | 0 | 5 | Alum. H |
2 | RBD-Ex1-P2(서열번호 10)-10 | 10 | 5 | Alum. H |
3 | RBD-Ex1-P2(서열번호 10)-10 + N (서열번호 26)-1 | 10 | 5 | Alum. H |
4 | RBD-Ex1-P2(서열번호 10)-10 | 10 | 5 | Alum. H + CpG |
5 | RBD-Ex1-P2(서열번호 10)-10 + N (서열번호 26)-1 | 10 | 5 | Alum. H + CpG |
8. 결합력 평가 결과
제조한 항원의 receptor인 ACE2에 잘 결합하는지 확인하기 위한 작업은 Bio-layer Interferometry (BLI) 원리를 이용하였다. 백신용 항원과 ACE2(도 7(a))및 CR3022(도 7(b))간의 결합력을 평가하였다. 아래와 같은 Dissociation constant(KD)값을 보이며 참조품 RBD(sino, Cat. 40592-V08B, Sino-RBD)가 보이는 결합력(KD=4.4nM)과 유사함을 확인하였고, RBD-Ex1-P2(서열번호 10)가 ACE2 binding site에 문제가 없고 결합 function에 문제가 없음을 확인하였다(도 7).
구체적으로, 도 7은 BLI를 통한 ACE2와 RBD-Ex1-P2 항원 간의 결합력 평가(a) 및 CR3022와 백신용 항원 간의 결합력 평가(b)를 보여준다. 본 발명의 확장된 RBD의 말단 구조는 변형되기 전의 RBD와 비교할 때 구조가 안정화되고, 이로 인해 단백질 발현량이 증가하고 ACE2와의 binding 도 증가하여 세포성 면역 반응이 증가되었다. 낮은 KD값은 우수한 binding(KD=Koff/Kon)을 나타내는데, 도 7(a) 결과를 통해 보여주듯이, CR3022 대비 KD 값이 높게 나타나, ACE2와의 결합력이 우수하다는 것을 확인하였다.
효소 면역 측정법을 통하여 RBD-Ex1-P2(서열번호 10)의 주요 항원부위인 RBD 단백질을 면역 특이적으로 확인하였다. 중화 항체를 이용하여 단백질 결합을 확인함으로써 RBD-Ex1-P2(서열번호 10)항원의 생물학적 활성과 면역학적활성에 이상이 없음을 확인할 수 있었다(도 8). RBDPC 는 Sino biological RBD 참조품 (SinoBiologinal, 40592-V08H)을 의미한다.
이를 통해 합성 서열 및 정보, 단백질 발현 확인, 단백질 분리 정제, 재조합 단백질 백신 후보물질을 확보할 수 있었다.
이를 통해 코로나감염증을 예방할 수 있게 충분한 항체 및 보호면역을 유도할 수 있다.
9. BALB/c를 이용한 SK-RBD-P2 (서열번호 9), SK-RBD-P2 (서열번호 9)+ N(서열번호 26), S-Trimer-P2 (서열번호 65)+ N(서열번호 26)의 면역원성 비교 실험 결과
6주령 female 마우스를 이용하여 SK-RBD-P2 (서열번호 9), SK-RBD-P2 (서열번호 9)+ N(서열번호 26), S-Trimer-P2 (서열번호 65) + N(서열번호 26) 항원을 2주간격으로 2회 IM 면역 후 채혈하여 혈청을 분리하고 면역원성을 분석하였다. 분석결과 모든 면역그룹(G2~G4)에서 RBD 단백질 특이 항체가 형성됨을 확인하였다. N단백질 특이 항체는 면역그룹(G3, G4) 두 그룹에서 4주차에 높은 IgG titer를 보이며 우수한 면역원성을 증명했다(표 13).
No. | 항원 |
항원량
(ug/dose) |
개체수 | Adjuvant | Total IgG titer | PBNA 50 | |||
2 w | 4 w | 2 w | 4 w | ||||||
RBD-specific | N-specific | ||||||||
1 | Vehicle 1 | 0 | 5 | Alum. H | 25 | 25 | 233 | 190 | ND |
2 | SK-RBD-P2 (서열번호 9) | 10 | 5 | Alum. H | 52 | 12564 | 109 | 67 | ND |
3 | SK-RBD-P2 (서열번호 9) + N(서열번호 26) | 10+1 | 5 | Alum. H | 25 | 5423 | 1321 | 152911 | ND |
4 | S-Trimer-P2 (서열번호 65)+ N(서열번호 26) | 10+1 | 5 | Alum. H | 25 | 730 | 291 | 3949 | 40 |
10. SK-RBD-P2 (서열번호 9), SK-RBD-P2 (서열번호 9) + N(서열번호 26), S-Trimer-P2 (서열번호 65) + N(서열번호 26)의 세포성 면역원성 분석 (Balb/c 마우스)
상기 표 13의 항원으로 면역한 마우스의 세포성 면역원성 유도를 확인하기 위하여 면역이 완료된 마우스의 비장을 분리하여 ELISPot을 진행하였다. 분석한 결과 vehicle을 제외한 면역그룹 (상기 No.2-4)에서 면역한 항원 및 N-peptide, p2 peptide 자극에 특이적으로 반응하는 IFN-gamma 분비 T세포의 증가를 확인하였다. 결과를 도 9에 나타냈다. 이러한 결과를 통해 알 수 있듯이, 본 발명의 항원들은 세포성 면역 반응에 탁월한 효과를 나타내었다.
11. SK-RBD (서열번호 1), S-Trimer-P2 (서열번호 65), N(서열번호 26)을 각각 면역한 형질전환 랫드의 총항체가 및 중화항체가 분석
표 14의 RBD 면역 그룹(G2, G3)의 혈청 분석 결과, Vehicle 그룹(G1) 대비 Day 14, 28, 43에서 RBD 특이적인 IgG 항체가 증가하였고, Day 57에는 감소하는 추세를 보였다. S-Trimer-P2 (서열번호 65)의 경우, Vehicle 그룹(G1) 대비 Day43까지 S-Trimer-P2 (서열번호 65) 특이 항체가 증가하는 양상을 보였고, 이후 항체가는 감소하였다. N이 함께 면역된 그룹(G3, G5)의 혈청에서 N 특이적 항체 생성을 분석한 결과, Day 43까지 Vehicle그룹 대비 227~2106배 정도 항체가 증가하다가 이 후에는 saturation 양상을 보였다.
항원 | Group No. | Group No. | IgG Titer | ||||
Day 0 | Day 14 | Day 28 | Day 43 | Day 57 | |||
SK RBD (서열번호 1) | G1 | Vehicle | 25 | 25 | 29 | 25 | 25 |
G2 | SK-RBD (서열번호 1) | 25 | 52 | 6373 | 166915 | 77863 | |
G3 | SK-RBD (서열번호 1)+ N(서열번호 26) | 25 | 83 | 4663 | 169083 | 74617 | |
S-Trimer-P2 (서열번호 65) | G1 | Vehicle | 25 | 25 | 33 | 38 | 37 |
G4 | S-Trimer-P2 (서열번호 65) | 25 | 1094 | 39042 | 116311 | 99781 | |
G5 | S-Trimer-P2 (서열번호 65)+ N (서열번호 26) | 25 | 1887 | 53134 | 146681 | 110747 | |
N (서열번호 26) | G1 | Vehicle | 25 | 25 | 25 | 25 | 32 |
G2 | SK-RBD (서열번호 1) | 25 | 25 | 25 | 25 | 25 | |
G3 | SK-RBD (서열번호 1)+ N(서열번호 26) | 25 | 245 | 12611 | 52646 | 41609 | |
G4 | S-Trimer-P2 (서열번호 65) | 25 | 25 | 36 | 179 | 242 | |
G5 | S-Trimer-P2 (서열번호 65)+ N (서열번호 26) | 25 | 85 | 1604 | 5683 | 5128 |
하기 표 15는 서열정보를 나타낸다.
상기 (CHO)는 CHO 발현 시스템에 최적화된 폴리뉴클레오티드를, (BEVS)는 BEVS 발현 시스템에 최적화된 폴리뉴클레오티드를 의미하고, 서열목록에서는 각각 _CHO 및 _BEVS로 표시된다.
<110> SK bioscience Co., Ltd.
<120> Vaccine composition for preventing or treating infection of
SARS-CoV-2
<130> P21-032
<150> KR 10-2020-0052855
<151> 2020-04-29
<150> KR 10-2020-0115694
<151> 2020-09-09
<150> KR 10-2020-0123308
<151> 2020-09-23
<150> KR 10-2020-0166091
<151> 2020-12-01
<160> 67
<170> KoPatentIn 3.0
<210> 1
<211> 204
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SK_RBD
<400> 1
Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn
1 5 10 15
Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser
20 25 30
Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser
35 40 45
Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys
50 55 60
Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val
65 70 75 80
Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr
85 90 95
Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn
100 105 110
Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu
115 120 125
Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu
130 135 140
Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn
145 150 155 160
Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val
165 170 175
Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His
180 185 190
Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys Lys Ser Thr
195 200
<210> 2
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> human_albumin_SP
<400> 2
Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala
1 5 10 15
Tyr Ser
<210> 3
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Tetanus Toxoid Epitope-P2 domain
<400> 3
Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu Leu
1 5 10 15
<210> 4
<211> 27
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Foldon domain
<400> 4
Gly Tyr Ile Pro Glu Ala Pro Arg Asp Gly Gln Ala Tyr Val Arg Lys
1 5 10 15
Asp Gly Glu Trp Val Leu Leu Ser Thr Phe Leu
20 25
<210> 5
<211> 222
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SP-SK_RBD
<400> 5
Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala
1 5 10 15
Tyr Ser Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val
20 25 30
Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg
35 40 45
Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser
50 55 60
Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp
65 70 75 80
Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp
85 90 95
Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr
100 105 110
Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn
115 120 125
Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr
130 135 140
Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser
145 150 155 160
Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly
165 170 175
Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn
180 185 190
Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu
195 200 205
Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys Lys Ser Thr
210 215 220
<210> 6
<211> 225
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> RBD-ex1
<400> 6
Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys
1 5 10 15
Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala
20 25 30
Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu
35 40 45
Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro
50 55 60
Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe
65 70 75 80
Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly
85 90 95
Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys
100 105 110
Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn
115 120 125
Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe
130 135 140
Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys
145 150 155 160
Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly
165 170 175
Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val
180 185 190
Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys
195 200 205
Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe Asn
210 215 220
Gly
225
<210> 7
<211> 271
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> RBD-ex2
<400> 7
Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys
1 5 10 15
Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala
20 25 30
Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu
35 40 45
Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro
50 55 60
Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe
65 70 75 80
Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly
85 90 95
Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys
100 105 110
Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn
115 120 125
Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe
130 135 140
Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys
145 150 155 160
Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly
165 170 175
Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val
180 185 190
Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys
195 200 205
Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe Asn
210 215 220
Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu
225 230 235 240
Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp Ala Val
245 250 255
Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro Cys Ser
260 265 270
<210> 8
<211> 217
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> RBD-ex3
<400> 8
Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys
1 5 10 15
Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala
20 25 30
Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu
35 40 45
Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro
50 55 60
Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe
65 70 75 80
Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly
85 90 95
Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys
100 105 110
Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn
115 120 125
Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe
130 135 140
Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys
145 150 155 160
Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly
165 170 175
Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val
180 185 190
Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys
195 200 205
Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys
210 215
<210> 9
<211> 224
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SK_RBD-P2
<400> 9
Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn
1 5 10 15
Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser
20 25 30
Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser
35 40 45
Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys
50 55 60
Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val
65 70 75 80
Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr
85 90 95
Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn
100 105 110
Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu
115 120 125
Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu
130 135 140
Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn
145 150 155 160
Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val
165 170 175
Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His
180 185 190
Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys Lys Ser Thr Gly Ser Gly Ser
195 200 205
Gly Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu Leu
210 215 220
<210> 10
<211> 245
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> RBD-ex1-P2
<400> 10
Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys
1 5 10 15
Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala
20 25 30
Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu
35 40 45
Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro
50 55 60
Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe
65 70 75 80
Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly
85 90 95
Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys
100 105 110
Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn
115 120 125
Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe
130 135 140
Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys
145 150 155 160
Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly
165 170 175
Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val
180 185 190
Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys
195 200 205
Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe Asn
210 215 220
Gly Gly Ser Gly Ser Gly Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile
225 230 235 240
Gly Ile Thr Glu Leu
245
<210> 11
<211> 291
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> RBD-ex2-P2
<400> 11
Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys
1 5 10 15
Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala
20 25 30
Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu
35 40 45
Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro
50 55 60
Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe
65 70 75 80
Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly
85 90 95
Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys
100 105 110
Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn
115 120 125
Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe
130 135 140
Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys
145 150 155 160
Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly
165 170 175
Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val
180 185 190
Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys
195 200 205
Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe Asn
210 215 220
Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu
225 230 235 240
Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp Ala Val
245 250 255
Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro Cys Ser Gly
260 265 270
Ser Gly Ser Gly Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile
275 280 285
Thr Glu Leu
290
<210> 12
<211> 237
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> RBD-ex3-P2
<400> 12
Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys
1 5 10 15
Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala
20 25 30
Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu
35 40 45
Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro
50 55 60
Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe
65 70 75 80
Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly
85 90 95
Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys
100 105 110
Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn
115 120 125
Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe
130 135 140
Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys
145 150 155 160
Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly
165 170 175
Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val
180 185 190
Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys
195 200 205
Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Gly Ser Gly Ser Gly Gln Tyr
210 215 220
Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu Leu
225 230 235
<210> 13
<211> 269
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> RBD-Foldon-P2
<400> 13
Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys
1 5 10 15
Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala
20 25 30
Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu
35 40 45
Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro
50 55 60
Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe
65 70 75 80
Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly
85 90 95
Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys
100 105 110
Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn
115 120 125
Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe
130 135 140
Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys
145 150 155 160
Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly
165 170 175
Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val
180 185 190
Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys
195 200 205
Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Gly Ser Gly Gly Ser Gly Tyr
210 215 220
Ile Pro Glu Ala Pro Arg Asp Gly Gln Ala Tyr Val Arg Lys Asp Gly
225 230 235 240
Glu Trp Val Leu Leu Ser Thr Phe Leu Gly Ser Gly Ser Gly Gln Tyr
245 250 255
Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu Leu
260 265
<210> 14
<211> 669
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SK_RBD_BEVS
<400> 14
atgaagtggg tgaccttcat cagcctgctg ttcctgttct ccagcgccta ctctaggttc 60
ccaaacatca ccaacctgtg ccctttcgga gaggtgttca acgctactag attcgccagc 120
gtctacgctt ggaaccgcaa gcgtatcagc aactgcgtcg ccgactactc tgtgctgtac 180
aactctgctt cattctccac tttcaagtgc tacggtgtca gccctaccaa gctgaacgac 240
ctgtgcttca ctaacgtcta cgccgactct ttcgtgatcc gcggcgacga agtccgtcag 300
atcgctcctg gtcagaccgg aaagatcgct gactacaact acaagctgcc agacgacttc 360
actggttgcg tgatcgcttg gaactcaaac aacctggact ccaaggtcgg tggcaactac 420
aactacctgt acaggctgtt cagaaagtcc aacctgaagc ctttcgagcg cgacatctca 480
accgaaatct accaggccgg ttccaccccc tgcaacggtg tggagggctt caactgctac 540
ttccccctgc aatcatacgg tttccagcca accaacggag tcggttacca gccttaccgc 600
gtggtcgtgc tgtccttcga actgctccac gctcctgcta ctgtgtgcgg ccccaagaag 660
tcaacttaa 669
<210> 15
<211> 669
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SK_RBD_CHO
<400> 15
atgaagtggg tcactttcat cagcctgttg tttctgttca gctccgccta ctctagattc 60
ccaaacatca ccaatctgtg ccccttcggc gaggtgttta acgccacacg ctttgcttcc 120
gtgtatgcct ggaacaggaa gcggatctct aattgcgtgg ctgactattc cgtgctgtac 180
aattccgcca gcttctctac ctttaagtgc tatggcgtgt ccccaaccaa gctgaacgac 240
ctgtgcttca caaacgtgta cgctgacagc tttgtgatca ggggcgatga ggtgcggcag 300
atcgctcctg gccagaccgg caagatcgcc gactacaact ataagctgcc agacgatttc 360
acaggctgcg tgatcgcctg gaactccaac aatctggata gcaaagtggg cggcaactac 420
aattatctgt acagactgtt ccgcaagagc aacctgaagc cctttgagag ggacatcagc 480
accgaaatct accaggctgg ctctacacct tgcaacggcg tggagggctt caattgttat 540
tttcctctcc agtcttacgg cttccagcca acaaatggcg tgggctatca gccctacagg 600
gtggtggtgc tgtcttttga gctgctgcac gctccagcta ccgtgtgcgg ccctaagaag 660
tccacatga 669
<210> 16
<211> 729
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SK_RBD-P2_BEVS
<400> 16
atgaagtggg tgaccttcat cagcctgctg ttcctgttct ccagcgccta ctctaggttc 60
ccaaacatca ccaacctgtg ccctttcgga gaggtgttca acgctactag attcgccagc 120
gtctacgctt ggaaccgcaa gcgtatcagc aactgcgtcg ccgactactc tgtgctgtac 180
aactctgctt cattctccac tttcaagtgc tacggtgtca gccctaccaa gctgaacgac 240
ctgtgcttca ctaacgtcta cgccgactct ttcgtgatcc gcggcgacga agtccgtcag 300
atcgctcctg gtcagaccgg aaagatcgct gactacaact acaagctgcc agacgacttc 360
actggttgcg tgatcgcttg gaactcaaac aacctggact ccaaggtcgg tggcaactac 420
aactacctgt acaggctgtt cagaaagtcc aacctgaagc ctttcgagcg cgacatctca 480
accgaaatct accaggccgg ttccaccccc tgcaacggtg tggagggctt caactgctac 540
ttccccctgc aatcatacgg tttccagcca accaacggag tcggttacca gccttaccgc 600
gtggtcgtgc tgtccttcga actgctccac gctcctgcta ctgtgtgcgg ccccaagaag 660
tcaactggca gcggatctgg acagtacatc aaggctaact ccaagttcat cggaatcact 720
gagctgtaa 729
<210> 17
<211> 729
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SK_RBD-P2_CHO
<400> 17
atgaagtggg tcactttcat cagcctgttg tttctgttca gctccgccta ctctagattc 60
ccaaacatca ccaatctgtg ccccttcggc gaggtgttta acgccacacg ctttgcttcc 120
gtgtatgcct ggaacaggaa gcggatctct aattgcgtgg ctgactattc cgtgctgtac 180
aattccgcca gcttctctac ctttaagtgc tatggcgtgt ccccaaccaa gctgaacgac 240
ctgtgcttca caaacgtgta cgctgacagc tttgtgatca ggggcgatga ggtgcggcag 300
atcgctcctg gccagaccgg caagatcgcc gactacaact ataagctgcc agacgatttc 360
acaggctgcg tgatcgcctg gaactccaac aatctggata gcaaagtggg cggcaactac 420
aattatctgt acagactgtt ccgcaagagc aacctgaagc cctttgagag ggacatcagc 480
accgaaatct accaggctgg ctctacacct tgcaacggcg tggagggctt caattgttat 540
tttcctctcc agtcttacgg cttccagcca acaaatggcg tgggctatca gccctacagg 600
gtggtggtgc tgtcttttga gctgctgcac gctccagcta ccgtgtgcgg ccctaagaag 660
tccacaggct ccggctccgg ccagtacatc aaggccaact ccaagttcat cggcatcacc 720
gagctgtaa 729
<210> 18
<211> 792
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> RBD-ex1-P2_BEVS
<400> 18
atgaagtggg tgactttcat ctccctgctg ttcctgttct ccagcgctta cagccagcct 60
accgaatcaa tcgtccgttt cccaaacatc actaacctgt gccctttcgg agaggtgttc 120
aacgccacca gattcgcttc cgtctacgcc tggaaccgca agcgtatctc taactgcgtc 180
gctgactact cagtgctgta caacagcgcc tctttctcaa ccttcaagtg ctacggagtg 240
tctcctacta agctgaacga cctgtgcttc accaacgtct acgctgactc attcgtgatc 300
cgcggtgacg aggtccgtca gatcgctccc ggacagactg gcaagatcgc cgactacaac 360
tacaagctgc cagacgactt caccggttgc gtgatcgcct ggaactctaa caacctggac 420
tcaaaggtcg gtggcaacta caactacctg tacaggctgt tcagaaagtc taacctgaag 480
cctttcgagc gcgacatctc cactgaaatc taccaggctg gtagcacccc ctgcaacggc 540
gtggaaggat tcaactgcta cttccctctg caatcatacg gcttccagcc cactaacggc 600
gtcggatacc agccataccg tgtggtcgtg ctgtccttcg agctgctcca cgctcctgct 660
actgtgtgcg gccccaagaa gagcaccaac ctggtcaaga acaagtgcgt gaacttcaac 720
ttcaacggag gctccggaag cggacagtac atcaaggcca acagcaagtt catcggtatc 780
accgagctgt aa 792
<210> 19
<211> 792
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> RBD-ex1-P2_CHO
<400> 19
atgaagtggg tcactttcat cagcctgttg tttctgttca gctccgccta ctctcagccc 60
accgagtcca tcgtgagatt cccaaacatc accaatctgt gccccttcgg cgaggtgttt 120
aacgccacac gctttgcttc cgtgtatgcc tggaacagga agcggatctc taattgcgtg 180
gctgactatt ccgtgctgta caattccgcc agcttctcta cctttaagtg ctatggcgtg 240
tccccaacca agctgaacga cctgtgcttc acaaacgtgt acgctgacag ctttgtgatc 300
aggggcgatg aggtgcggca gatcgctcct ggccagaccg gcaagatcgc cgactacaac 360
tataagctgc cagacgattt cacaggctgc gtgatcgcct ggaactccaa caatctggat 420
agcaaagtgg gcggcaacta caattatctg tacagactgt tccgcaagag caacctgaag 480
ccctttgaga gggacatcag caccgaaatc taccaggctg gctctacacc ttgcaacggc 540
gtggagggct tcaattgtta ttttcctctc cagtcttacg gcttccagcc aacaaatggc 600
gtgggctatc agccctacag ggtggtggtg ctgtcttttg agctgctgca cgctccagct 660
accgtgtgcg gccctaagaa gtccacaaat ctggtgaaga acaagtgcgt gaacttcaac 720
ttcaacggcg gctccggctc cggccagtac atcaaggcca actccaagtt catcggcatc 780
accgagctgt aa 792
<210> 20
<211> 930
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> RBD-ex2-P2_BEVS
<400> 20
atgaagtggg tgactttcat ctccctgctg ttcctgttct ccagcgctta cagccagcct 60
accgaatcaa tcgtccgttt cccaaacatc actaacctgt gccctttcgg agaggtgttc 120
aacgccacca gattcgcttc cgtctacgcc tggaaccgca agcgtatctc taactgcgtc 180
gctgactact cagtgctgta caacagcgcc tctttctcaa ccttcaagtg ctacggagtg 240
tctcctacta agctgaacga cctgtgcttc accaacgtct acgctgactc attcgtgatc 300
cgcggtgacg aggtccgtca gatcgctccc ggacagactg gcaagatcgc cgactacaac 360
tacaagctgc cagacgactt caccggttgc gtgatcgcct ggaactctaa caacctggac 420
tcaaaggtcg gtggcaacta caactacctg tacaggctgt tcagaaagtc taacctgaag 480
cctttcgagc gcgacatctc cactgaaatc taccaggctg gtagcacccc ctgcaacggc 540
gtggaaggat tcaactgcta cttccctctg caatcatacg gcttccagcc cactaacggc 600
gtcggatacc agccataccg tgtggtcgtg ctgtccttcg agctgctcca cgctcctgct 660
actgtgtgcg gccccaagaa gagcaccaac ctggtcaaga acaagtgcgt gaacttcaac 720
ttcaacggac tgaccggtac tggcgtgctg accgaatcca acaagaagtt cctgcctttc 780
cagcagttcg gtcgcgacat cgctgacacc actgacgccg tccgtgaccc tcagaccctg 840
gagatcctgg acatcactcc ctgctccggc tccggaagcg gacagtacat caaggccaac 900
agcaagttca tcggtatcac cgagctgtaa 930
<210> 21
<211> 930
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> RBD-ex2-P2_CHO
<400> 21
atgaagtggg tcactttcat cagcctgttg tttctgttca gctccgccta ctctcagccc 60
accgagtcca tcgtgagatt cccaaacatc accaatctgt gccccttcgg cgaggtgttt 120
aacgccacac gctttgcttc cgtgtatgcc tggaacagga agcggatctc taattgcgtg 180
gctgactatt ccgtgctgta caattccgcc agcttctcta cctttaagtg ctatggcgtg 240
tccccaacca agctgaacga cctgtgcttc acaaacgtgt acgctgacag ctttgtgatc 300
aggggcgatg aggtgcggca gatcgctcct ggccagaccg gcaagatcgc cgactacaac 360
tataagctgc cagacgattt cacaggctgc gtgatcgcct ggaactccaa caatctggat 420
agcaaagtgg gcggcaacta caattatctg tacagactgt tccgcaagag caacctgaag 480
ccctttgaga gggacatcag caccgaaatc taccaggctg gctctacacc ttgcaacggc 540
gtggagggct tcaattgtta ttttcctctc cagtcttacg gcttccagcc aacaaatggc 600
gtgggctatc agccctacag ggtggtggtg ctgtcttttg agctgctgca cgctccagct 660
accgtgtgcg gccctaagaa gtccacaaat ctggtgaaga acaagtgcgt gaacttcaac 720
ttcaacggcc tgaccggcac aggcgtgctg accgagtcca ataagaagtt cctgcccttt 780
cagcagttcg gcagagacat cgccgatacc acagacgctg tgcgcgatcc ccagaccctg 840
gagatcctgg acatcacacc ttgcagcggc tccggctccg gccagtacat caaggccaac 900
tccaagttca tcggcatcac cgagctgtaa 930
<210> 22
<211> 768
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> RBD-ex3-P2_BEVS
<400> 22
atgaagtggg tgactttcat ctccctgctg ttcctgttct ccagcgctta cagccagcct 60
accgaatcaa tcgtccgttt cccaaacatc actaacctgt gccctttcgg agaggtgttc 120
aacgccacca gattcgcttc cgtctacgcc tggaaccgca agcgtatctc taactgcgtc 180
gctgactact cagtgctgta caacagcgcc tctttctcaa ccttcaagtg ctacggagtg 240
tctcctacta agctgaacga cctgtgcttc accaacgtct acgctgactc attcgtgatc 300
cgcggtgacg aggtccgtca gatcgctccc ggacagactg gcaagatcgc cgactacaac 360
tacaagctgc cagacgactt caccggttgc gtgatcgcct ggaactctaa caacctggac 420
tcaaaggtcg gtggcaacta caactacctg tacaggctgt tcagaaagtc taacctgaag 480
cctttcgagc gcgacatctc cactgaaatc taccaggctg gtagcacccc ctgcaacggc 540
gtggaaggat tcaactgcta cttccctctg caatcatacg gcttccagcc cactaacggc 600
gtcggatacc agccataccg tgtggtcgtg ctgtccttcg agctgctcca cgctcctgct 660
actgtgtgcg gccccaagaa gagcaccaac ctggtcaaga acaagggctc cggaagcgga 720
cagtacatca aggccaacag caagttcatc ggtatcaccg agctgtaa 768
<210> 23
<211> 768
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> RBD-ex3-P2_CHO
<400> 23
atgaagtggg tcactttcat cagcctgttg tttctgttca gctccgccta ctctcagccc 60
accgagtcca tcgtgagatt cccaaacatc accaatctgt gccccttcgg cgaggtgttt 120
aacgccacac gctttgcttc cgtgtatgcc tggaacagga agcggatctc taattgcgtg 180
gctgactatt ccgtgctgta caattccgcc agcttctcta cctttaagtg ctatggcgtg 240
tccccaacca agctgaacga cctgtgcttc acaaacgtgt acgctgacag ctttgtgatc 300
aggggcgatg aggtgcggca gatcgctcct ggccagaccg gcaagatcgc cgactacaac 360
tataagctgc cagacgattt cacaggctgc gtgatcgcct ggaactccaa caatctggat 420
agcaaagtgg gcggcaacta caattatctg tacagactgt tccgcaagag caacctgaag 480
ccctttgaga gggacatcag caccgaaatc taccaggctg gctctacacc ttgcaacggc 540
gtggagggct tcaattgtta ttttcctctc cagtcttacg gcttccagcc aacaaatggc 600
gtgggctatc agccctacag ggtggtggtg ctgtcttttg agctgctgca cgctccagct 660
accgtgtgcg gccctaagaa gtccacaaat ctggtgaaga acaagggctc cggctccggc 720
cagtacatca aggccaactc caagttcatc ggcatcaccg agctgtaa 768
<210> 24
<211> 864
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> RBD-Foldon-P2_BEVS
<400> 24
atgaagtggg tgactttcat ctccctgctg ttcctgttct ccagcgctta cagccagcct 60
accgaatcaa tcgtccgttt cccaaacatc actaacctgt gccctttcgg agaggtgttc 120
aacgccacca gattcgcttc cgtctacgcc tggaaccgca agcgtatctc taactgcgtc 180
gctgactact cagtgctgta caacagcgcc tctttctcaa ccttcaagtg ctacggagtg 240
tctcctacta agctgaacga cctgtgcttc accaacgtct acgctgactc attcgtgatc 300
cgcggtgacg aggtccgtca gatcgctccc ggacagactg gcaagatcgc cgactacaac 360
tacaagctgc cagacgactt caccggttgc gtgatcgcct ggaactctaa caacctggac 420
tcaaaggtcg gtggcaacta caactacctg tacaggctgt tcagaaagtc taacctgaag 480
cctttcgagc gcgacatctc cactgaaatc taccaggctg gtagcacccc ctgcaacggc 540
gtggaaggat tcaactgcta cttccctctg caatcatacg gcttccagcc cactaacggc 600
gtcggatacc agccataccg tgtggtcgtg ctgtccttcg agctgctcca cgctcctgct 660
actgtgtgcg gccccaagaa gagcaccaac ctggtcaaga acaagggaag cggtggctcc 720
ggttacatcc ctgaagctcc ccgcgacgga caggcctacg tccgtaagga cggagagtgg 780
gtgctgctgt caactttcct gggatctggt tcaggccagt acatcaaggc taactccaag 840
ttcatcggta tcaccgaact gtaa 864
<210> 25
<211> 864
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> RBD-Foldon-P2_CHO
<400> 25
atgaagtggg tcactttcat cagcctgttg tttctgttca gctccgccta ctctcagccc 60
accgagtcca tcgtgagatt cccaaacatc accaatctgt gccccttcgg cgaggtgttt 120
aacgccacac gctttgcttc cgtgtatgcc tggaacagga agcggatctc taattgcgtg 180
gctgactatt ccgtgctgta caattccgcc agcttctcta cctttaagtg ctatggcgtg 240
tccccaacca agctgaacga cctgtgcttc acaaacgtgt acgctgacag ctttgtgatc 300
aggggcgatg aggtgcggca gatcgctcct ggccagaccg gcaagatcgc cgactacaac 360
tataagctgc cagacgattt cacaggctgc gtgatcgcct ggaactccaa caatctggat 420
agcaaagtgg gcggcaacta caattatctg tacagactgt tccgcaagag caacctgaag 480
ccctttgaga gggacatcag caccgaaatc taccaggctg gctctacacc ttgcaacggc 540
gtggagggct tcaattgtta ttttcctctc cagtcttacg gcttccagcc aacaaatggc 600
gtgggctatc agccctacag ggtggtggtg ctgtcttttg agctgctgca cgctccagct 660
accgtgtgcg gccctaagaa gtccacaaat ctggtgaaga acaagggctc cggcggctcc 720
ggttacatcc ctgaagctcc ccgcgacgga caggcctacg tccgtaagga cggagagtgg 780
gtgctgctgt caactttcct gggctccggc tccggccagt acatcaaggc caactccaag 840
ttcatcggca tcaccgagct gtaa 864
<210> 26
<211> 418
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> N protein of SARS-CoV-2
<400> 26
Ser Asp Asn Gly Pro Gln Asn Gln Arg Asn Ala Pro Arg Ile Thr Phe
1 5 10 15
Gly Gly Pro Ser Asp Ser Thr Gly Ser Asn Gln Asn Gly Glu Arg Ser
20 25 30
Gly Ala Arg Ser Lys Gln Arg Arg Pro Gln Gly Leu Pro Asn Asn Thr
35 40 45
Ala Ser Trp Phe Thr Ala Leu Thr Gln His Gly Lys Glu Asp Leu Lys
50 55 60
Phe Pro Arg Gly Gln Gly Val Pro Ile Asn Thr Asn Ser Ser Pro Asp
65 70 75 80
Asp Gln Ile Gly Tyr Tyr Arg Arg Ala Thr Arg Arg Ile Arg Gly Gly
85 90 95
Asp Gly Lys Met Lys Asp Leu Ser Pro Arg Trp Tyr Phe Tyr Tyr Leu
100 105 110
Gly Thr Gly Pro Glu Ala Gly Leu Pro Tyr Gly Ala Asn Lys Asp Gly
115 120 125
Ile Ile Trp Val Ala Thr Glu Gly Ala Leu Asn Thr Pro Lys Asp His
130 135 140
Ile Gly Thr Arg Asn Pro Ala Asn Asn Ala Ala Ile Val Leu Gln Leu
145 150 155 160
Pro Gln Gly Thr Thr Leu Pro Lys Gly Phe Tyr Ala Glu Gly Ser Arg
165 170 175
Gly Gly Ser Gln Ala Ser Ser Arg Ser Ser Ser Arg Ser Arg Asn Ser
180 185 190
Ser Arg Asn Ser Thr Pro Gly Ser Ser Arg Gly Thr Ser Pro Ala Arg
195 200 205
Met Ala Gly Asn Gly Gly Asp Ala Ala Leu Ala Leu Leu Leu Leu Asp
210 215 220
Arg Leu Asn Gln Leu Glu Ser Lys Met Ser Gly Lys Gly Gln Gln Gln
225 230 235 240
Gln Gly Gln Thr Val Thr Lys Lys Ser Ala Ala Glu Ala Ser Lys Lys
245 250 255
Pro Arg Gln Lys Arg Thr Ala Thr Lys Ala Tyr Asn Val Thr Gln Ala
260 265 270
Phe Gly Arg Arg Gly Pro Glu Gln Thr Gln Gly Asn Phe Gly Asp Gln
275 280 285
Glu Leu Ile Arg Gln Gly Thr Asp Tyr Lys His Trp Pro Gln Ile Ala
290 295 300
Gln Phe Ala Pro Ser Ala Ser Ala Phe Phe Gly Met Ser Arg Ile Gly
305 310 315 320
Met Glu Val Thr Pro Ser Gly Thr Trp Leu Thr Tyr Thr Gly Ala Ile
325 330 335
Lys Leu Asp Asp Lys Asp Pro Asn Phe Lys Asp Gln Val Ile Leu Leu
340 345 350
Asn Lys His Ile Asp Ala Tyr Lys Thr Phe Pro Pro Thr Glu Pro Lys
355 360 365
Lys Asp Lys Lys Lys Lys Ala Asp Glu Thr Gln Ala Leu Pro Gln Arg
370 375 380
Gln Lys Lys Gln Gln Thr Val Thr Leu Leu Pro Ala Ala Asp Leu Asp
385 390 395 400
Asp Phe Ser Lys Gln Leu Gln Gln Ser Met Ser Ser Ala Asp Ser Thr
405 410 415
Gln Ala
<210> 27
<211> 436
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> N protein of SARS-CoV-2 linked to Human albumin signal peptide
<400> 27
Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala
1 5 10 15
Tyr Ser Ser Asp Asn Gly Pro Gln Asn Gln Arg Asn Ala Pro Arg Ile
20 25 30
Thr Phe Gly Gly Pro Ser Asp Ser Thr Gly Ser Asn Gln Asn Gly Glu
35 40 45
Arg Ser Gly Ala Arg Ser Lys Gln Arg Arg Pro Gln Gly Leu Pro Asn
50 55 60
Asn Thr Ala Ser Trp Phe Thr Ala Leu Thr Gln His Gly Lys Glu Asp
65 70 75 80
Leu Lys Phe Pro Arg Gly Gln Gly Val Pro Ile Asn Thr Asn Ser Ser
85 90 95
Pro Asp Asp Gln Ile Gly Tyr Tyr Arg Arg Ala Thr Arg Arg Ile Arg
100 105 110
Gly Gly Asp Gly Lys Met Lys Asp Leu Ser Pro Arg Trp Tyr Phe Tyr
115 120 125
Tyr Leu Gly Thr Gly Pro Glu Ala Gly Leu Pro Tyr Gly Ala Asn Lys
130 135 140
Asp Gly Ile Ile Trp Val Ala Thr Glu Gly Ala Leu Asn Thr Pro Lys
145 150 155 160
Asp His Ile Gly Thr Arg Asn Pro Ala Asn Asn Ala Ala Ile Val Leu
165 170 175
Gln Leu Pro Gln Gly Thr Thr Leu Pro Lys Gly Phe Tyr Ala Glu Gly
180 185 190
Ser Arg Gly Gly Ser Gln Ala Ser Ser Arg Ser Ser Ser Arg Ser Arg
195 200 205
Asn Ser Ser Arg Asn Ser Thr Pro Gly Ser Ser Arg Gly Thr Ser Pro
210 215 220
Ala Arg Met Ala Gly Asn Gly Gly Asp Ala Ala Leu Ala Leu Leu Leu
225 230 235 240
Leu Asp Arg Leu Asn Gln Leu Glu Ser Lys Met Ser Gly Lys Gly Gln
245 250 255
Gln Gln Gln Gly Gln Thr Val Thr Lys Lys Ser Ala Ala Glu Ala Ser
260 265 270
Lys Lys Pro Arg Gln Lys Arg Thr Ala Thr Lys Ala Tyr Asn Val Thr
275 280 285
Gln Ala Phe Gly Arg Arg Gly Pro Glu Gln Thr Gln Gly Asn Phe Gly
290 295 300
Asp Gln Glu Leu Ile Arg Gln Gly Thr Asp Tyr Lys His Trp Pro Gln
305 310 315 320
Ile Ala Gln Phe Ala Pro Ser Ala Ser Ala Phe Phe Gly Met Ser Arg
325 330 335
Ile Gly Met Glu Val Thr Pro Ser Gly Thr Trp Leu Thr Tyr Thr Gly
340 345 350
Ala Ile Lys Leu Asp Asp Lys Asp Pro Asn Phe Lys Asp Gln Val Ile
355 360 365
Leu Leu Asn Lys His Ile Asp Ala Tyr Lys Thr Phe Pro Pro Thr Glu
370 375 380
Pro Lys Lys Asp Lys Lys Lys Lys Ala Asp Glu Thr Gln Ala Leu Pro
385 390 395 400
Gln Arg Gln Lys Lys Gln Gln Thr Val Thr Leu Leu Pro Ala Ala Asp
405 410 415
Leu Asp Asp Phe Ser Lys Gln Leu Gln Gln Ser Met Ser Ser Ala Asp
420 425 430
Ser Thr Gln Ala
435
<210> 28
<211> 1311
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> N protein_BEVS
<400> 28
atgaaatggg tcaccttcat cagtctgctg ttcctgttct cttccgctta ctcctccgac 60
aacggtcctc aaaaccaacg caacgcaccc cgcatcacct tcggtggccc aagcgactct 120
actggttcca accagaacgg tgaacgctca ggcgctcgtt ccaagcagcg ccgtccacag 180
ggcctgccta acaacaccgc ttcctggttc accgccctga ctcagcacgg aaaggaggac 240
ctgaagttcc ctcgtggaca gggtgtgccc atcaacacca actccagccc tgacgaccag 300
atcggatact acaggagagc cactcgccgt atcaggggag gtgacggcaa gatgaaggac 360
ctgtccccca gatggtactt ctactacctc ggcaccggac ccgaggctgg actgccatac 420
ggtgccaaca aggacggtat catctgggtg gctaccgaag gcgccctgaa cactcccaag 480
gaccacatcg gtactaggaa cccagctaac aacgctgcca tcgtcctgca actgccacag 540
ggcaccactc tgcctaaggg tttctacgct gaaggcagcc gcggcggatc tcaggcctct 600
tcacgttcca gctctcgctc ccgtaactca tccaggaaca gcaccccagg cagctctagg 660
ggaacttctc ctgctagaat ggctggaaac ggtggcgacg ctgccctggc tctgctgctg 720
ctggacagac tgaaccagct ggagagcaag atgtctggca agggacagca gcagcaggga 780
cagactgtga ccaagaagtc cgctgctgag gcttccaaga agcccaggca gaagagaacc 840
gctactaagg cctacaacgt cacccaggcc ttcggaagga gaggtccaga gcagactcag 900
ggcaacttcg gtgaccagga actgatccgc cagggcaccg actacaagca ctggcctcag 960
atcgctcagt tcgccccctc agcttccgcc ttcttcggaa tgtctcgtat cggtatggaa 1020
gtgaccccat caggcacttg gctgacctac actggagcta tcaagctgga tgacaaggac 1080
cctaacttca aggaccaggt catcctgctg aacaagcaca tcgacgccta caagaccttc 1140
cctcccactg agcctaagaa ggacaagaag aagaaggctg acgaaaccca ggccctgcct 1200
cagcgccaga agaagcagca gactgtcact ctgctgcccg ctgccgacct ggacgacttc 1260
agcaagcagc tgcaacagtc tatgtcatcc gctgactcaa ctcaggccta a 1311
<210> 29
<211> 1311
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> N protein_CHO
<400> 29
atgaagtggg tcactttcat cagcctgttg tttctgttca gctccgccta ctcttcagat 60
aacggtccac agaaccagcg gaatgctccc agaatcacct tcggcggtcc aagcgactca 120
acaggcagta accagaacgg cgagcggtcc ggcgctagat ccaagcagag acggcctcag 180
ggcctgccaa acaacaccgc ctcttggttt accgctctga cccagcacgg caaggaggac 240
ctgaagtttc ccagaggcca gggcgtgccc atcaatacca actccagccc agatgaccag 300
atcggctatt accggagagc cacaaggaga atccgcggcg gcgacggcaa gatgaaggac 360
ctgtccccac ggtggtactt ctactatctg ggcaccggcc ccgaggctgg cctgccttat 420
ggcgctaaca aggatggcat catctgggtg gctacagagg gcgctctgaa tacccctaag 480
gatcacatcg gcacaagaaa tccagctaat aacgccgcta tcgtgctgca actgccccag 540
ggcaccacac tgccaaaggg cttttacgct gagggctctc gcggcggctc ccaggcttct 600
tccagaagct cttccagatc cagaaactcc tctcgcaact ctacccctgg ctcttccaga 660
ggcacaagcc ctgctagaat ggccggcaat ggcggcgacg ccgctctggc cctgctgctg 720
ctggataggc tgaaccagct ggagtccaag atgtctggca agggccagca gcagcagggc 780
cagacagtga ccaagaagtc tgccgctgag gcttccaaga agcctcggca gaagagaacc 840
gccacaaagg cttataacgt gacccaggct tttggcagaa gaggccctga gcagacccag 900
ggcaacttcg gcgatcagga gctgatcaga cagggcaccg attacaagca ttggccacag 960
atcgcccagt ttgctccttc cgccagcgcc ttctttggca tgtccaggat cggcatggag 1020
gtgacaccct ctggcacctg gctgacatat accggcgcta tcaagctgga cgataaggac 1080
ccaaacttca aggatcaggt aatcctgctg aacaagcaca tcgacgccta caagacattc 1140
ccacctaccg agccaaagaa ggacaagaag aagaaggccg atgaaaccca ggccctgccc 1200
cagagacaga agaagcagca gacagtgacc ctgctgccag ctgccgatct ggacgatttc 1260
tcaaaacagc ttcagcagtc aatgtcatcc gccgattcaa ctcaggcata a 1311
<210> 30
<211> 3822
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Nucleotide sequence of the gene coding for the spike protein of
SARS-CoV-2
<400> 30
atgtttgttt ttcttgtttt attgccacta gtctctagtc agtgtgttaa tcttacaacc 60
agaactcaat taccccctgc atacactaat tctttcacac gtggtgttta ttaccctgac 120
aaagttttca gatcctcagt tttacattca actcaggact tgttcttacc tttcttttcc 180
aatgttactt ggttccatgc tatacatgtc tctgggacca atggtactaa gaggtttgat 240
aaccctgtcc taccatttaa tgatggtgtt tattttgctt ccactgagaa gtctaacata 300
ataagaggct ggatttttgg tactacttta gattcgaaga cccagtccct acttattgtt 360
aataacgcta ctaatgttgt tattaaagtc tgtgaatttc aattttgtaa tgatccattt 420
ttgggtgttt attaccacaa aaacaacaaa agttggatgg aaagtgagtt cagagtttat 480
tctagtgcga ataattgcac ttttgaatat gtctctcagc cttttcttat ggaccttgaa 540
ggaaaacagg gtaatttcaa aaatcttagg gaatttgtgt ttaagaatat tgatggttat 600
tttaaaatat attctaagca cacgcctatt aatttagtgc gtgatctccc tcagggtttt 660
tcggctttag aaccattggt agatttgcca ataggtatta acatcactag gtttcaaact 720
ttacttgctt tacatagaag ttatttgact cctggtgatt cttcttcagg ttggacagct 780
ggtgctgcag cttattatgt gggttatctt caacctagga cttttctatt aaaatataat 840
gaaaatggaa ccattacaga tgctgtagac tgtgcacttg accctctctc agaaacaaag 900
tgtacgttga aatccttcac tgtagaaaaa ggaatctatc aaacttctaa ctttagagtc 960
caaccaacag aatctattgt tagatttcct aatattacaa acttgtgccc ttttggtgaa 1020
gtttttaacg ccaccagatt tgcatctgtt tatgcttgga acaggaagag aatcagcaac 1080
tgtgttgctg attattctgt cctatataat tccgcatcat tttccacttt taagtgttat 1140
ggagtgtctc ctactaaatt aaatgatctc tgctttacta atgtctatgc agattcattt 1200
gtaattagag gtgatgaagt cagacaaatc gctccagggc aaactggaaa gattgctgat 1260
tataattata aattaccaga tgattttaca ggctgcgtta tagcttggaa ttctaacaat 1320
cttgattcta aggttggtgg taattataat tacctgtata gattgtttag gaagtctaat 1380
ctcaaacctt ttgagagaga tatttcaact gaaatctatc aggccggtag cacaccttgt 1440
aatggtgttg aaggttttaa ttgttacttt cctttacaat catatggttt ccaacccact 1500
aatggtgttg gttaccaacc atacagagta gtagtacttt cttttgaact tctacatgca 1560
ccagcaactg tttgtggacc taaaaagtct actaatttgg ttaaaaacaa atgtgtcaat 1620
ttcaacttca atggtttaac aggcacaggt gttcttactg agtctaacaa aaagtttctg 1680
cctttccaac aatttggcag agacattgct gacactactg atgctgtccg tgatccacag 1740
acacttgaga ttcttgacat tacaccatgt tcttttggtg gtgtcagtgt tataacacca 1800
ggaacaaata cttctaacca ggttgctgtt ctttatcagg atgttaactg cacagaagtc 1860
cctgttgcta ttcatgcaga tcaacttact cctacttggc gtgtttattc tacaggttct 1920
aatgtttttc aaacacgtgc aggctgttta ataggggctg aacatgtcaa caactcatat 1980
gagtgtgaca tacccattgg tgcaggtata tgcgctagtt atcagactca gactaattct 2040
cctcggcggg cacgtagtgt agctagtcaa tccatcattg cctacactat gtcacttggt 2100
gcagaaaatt cagttgctta ctctaataac tctattgcca tacccacaaa ttttactatt 2160
agtgttacca cagaaattct accagtgtct atgaccaaga catcagtaga ttgtacaatg 2220
tacatttgtg gtgattcaac tgaatgcagc aatcttttgt tgcaatatgg cagtttttgt 2280
acacaattaa accgtgcttt aactggaata gctgttgaac aagacaaaaa cacccaagaa 2340
gtttttgcac aagtcaaaca aatttacaaa acaccaccaa ttaaagattt tggtggtttt 2400
aatttttcac aaatattacc agatccatca aaaccaagca agaggtcatt tattgaagat 2460
ctacttttca acaaagtgac acttgcagat gctggcttca tcaaacaata tggtgattgc 2520
cttggtgata ttgctgctag agacctcatt tgtgcacaaa agtttaacgg ccttactgtt 2580
ttgccacctt tgctcacaga tgaaatgatt gctcaataca cttctgcact gttagcgggt 2640
acaatcactt ctggttggac ctttggtgca ggtgctgcat tacaaatacc atttgctatg 2700
caaatggctt ataggtttaa tggtattgga gttacacaga atgttctcta tgagaaccaa 2760
aaattgattg ccaaccaatt taatagtgct attggcaaaa ttcaagactc actttcttcc 2820
acagcaagtg cacttggaaa acttcaagat gtggtcaacc aaaatgcaca agctttaaac 2880
acgcttgtta aacaacttag ctccaatttt ggtgcaattt caagtgtttt aaatgatatc 2940
ctttcacgtc ttgacaaagt tgaggctgaa gtgcaaattg ataggttgat cacaggcaga 3000
cttcaaagtt tgcagacata tgtgactcaa caattaatta gagctgcaga aatcagagct 3060
tctgctaatc ttgctgctac taaaatgtca gagtgtgtac ttggacaatc aaaaagagtt 3120
gatttttgtg gaaagggcta tcatcttatg tccttccctc agtcagcacc tcatggtgta 3180
gtcttcttgc atgtgactta tgtccctgca caagaaaaga acttcacaac tgctcctgcc 3240
atttgtcatg atggaaaagc acactttcct cgtgaaggtg tctttgtttc aaatggcaca 3300
cactggtttg taacacaaag gaatttttat gaaccacaaa tcattactac agacaacaca 3360
tttgtgtctg gtaactgtga tgttgtaata ggaattgtca acaacacagt ttatgatcct 3420
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tcaccagatg ttgatttagg tgacatctct ggcattaatg cttcagttgt aaacattcaa 3540
aaagaaattg accgcctcaa tgaggttgcc aagaatttaa atgaatctct catcgatctc 3600
caagaacttg gaaagtatga gcagtatata aaatggccat ggtacatttg gctaggtttt 3660
atagctggct tgattgccat agtaatggtg acaattatgc tttgctgtat gaccagttgc 3720
tgtagttgtc tcaagggctg ttgttcttgt ggatcctgct gcaaatttga tgaagacgac 3780
tctgagccag tgctcaaagg agtcaaatta cattacacat aa 3822
<210> 31
<211> 2058
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Nucleotide sequence of the gene coding for the S1 domain of spike
protein of SARS-CoV-2
<400> 31
atgtttgttt ttcttgtttt attgccacta gtctctagtc agtgtgttaa tcttacaacc 60
agaactcaat taccccctgc atacactaat tctttcacac gtggtgttta ttaccctgac 120
aaagttttca gatcctcagt tttacattca actcaggact tgttcttacc tttcttttcc 180
aatgttactt ggttccatgc tatacatgtc tctgggacca atggtactaa gaggtttgat 240
aaccctgtcc taccatttaa tgatggtgtt tattttgctt ccactgagaa gtctaacata 300
ataagaggct ggatttttgg tactacttta gattcgaaga cccagtccct acttattgtt 360
aataacgcta ctaatgttgt tattaaagtc tgtgaatttc aattttgtaa tgatccattt 420
ttgggtgttt attaccacaa aaacaacaaa agttggatgg aaagtgagtt cagagtttat 480
tctagtgcga ataattgcac ttttgaatat gtctctcagc cttttcttat ggaccttgaa 540
ggaaaacagg gtaatttcaa aaatcttagg gaatttgtgt ttaagaatat tgatggttat 600
tttaaaatat attctaagca cacgcctatt aatttagtgc gtgatctccc tcagggtttt 660
tcggctttag aaccattggt agatttgcca ataggtatta acatcactag gtttcaaact 720
ttacttgctt tacatagaag ttatttgact cctggtgatt cttcttcagg ttggacagct 780
ggtgctgcag cttattatgt gggttatctt caacctagga cttttctatt aaaatataat 840
gaaaatggaa ccattacaga tgctgtagac tgtgcacttg accctctctc agaaacaaag 900
tgtacgttga aatccttcac tgtagaaaaa ggaatctatc aaacttctaa ctttagagtc 960
caaccaacag aatctattgt tagatttcct aatattacaa acttgtgccc ttttggtgaa 1020
gtttttaacg ccaccagatt tgcatctgtt tatgcttgga acaggaagag aatcagcaac 1080
tgtgttgctg attattctgt cctatataat tccgcatcat tttccacttt taagtgttat 1140
ggagtgtctc ctactaaatt aaatgatctc tgctttacta atgtctatgc agattcattt 1200
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tataattata aattaccaga tgattttaca ggctgcgtta tagcttggaa ttctaacaat 1320
cttgattcta aggttggtgg taattataat tacctgtata gattgtttag gaagtctaat 1380
ctcaaacctt ttgagagaga tatttcaact gaaatctatc aggccggtag cacaccttgt 1440
aatggtgttg aaggttttaa ttgttacttt cctttacaat catatggttt ccaacccact 1500
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ccagcaactg tttgtggacc taaaaagtct actaatttgg ttaaaaacaa atgtgtcaat 1620
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cctttccaac aatttggcag agacattgct gacactactg atgctgtccg tgatccacag 1740
acacttgaga ttcttgacat tacaccatgt tcttttggtg gtgtcagtgt tataacacca 1800
ggaacaaata cttctaacca ggttgctgtt ctttatcagg atgttaactg cacagaagtc 1860
cctgttgcta ttcatgcaga tcaacttact cctacttggc gtgtttattc tacaggttct 1920
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gagtgtgaca tacccattgg tgcaggtata tgcgctagtt atcagactca gactaattct 2040
cctcggcggg cacgtagt 2058
<210> 32
<211> 1764
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Nucleotide sequence of the gene coding for the S2 domain of spike
protein of SARS-CoV-2
<400> 32
gtagctagtc aatccatcat tgcctacact atgtcacttg gtgcagaaaa ttcagttgct 60
tactctaata actctattgc catacccaca aattttacta ttagtgttac cacagaaatt 120
ctaccagtgt ctatgaccaa gacatcagta gattgtacaa tgtacatttg tggtgattca 180
actgaatgca gcaatctttt gttgcaatat ggcagttttt gtacacaatt aaaccgtgct 240
ttaactggaa tagctgttga acaagacaaa aacacccaag aagtttttgc acaagtcaaa 300
caaatttaca aaacaccacc aattaaagat tttggtggtt ttaatttttc acaaatatta 360
ccagatccat caaaaccaag caagaggtca tttattgaag atctactttt caacaaagtg 420
acacttgcag atgctggctt catcaaacaa tatggtgatt gccttggtga tattgctgct 480
agagacctca tttgtgcaca aaagtttaac ggccttactg ttttgccacc tttgctcaca 540
gatgaaatga ttgctcaata cacttctgca ctgttagcgg gtacaatcac ttctggttgg 600
acctttggtg caggtgctgc attacaaata ccatttgcta tgcaaatggc ttataggttt 660
aatggtattg gagttacaca gaatgttctc tatgagaacc aaaaattgat tgccaaccaa 720
tttaatagtg ctattggcaa aattcaagac tcactttctt ccacagcaag tgcacttgga 780
aaacttcaag atgtggtcaa ccaaaatgca caagctttaa acacgcttgt taaacaactt 840
agctccaatt ttggtgcaat ttcaagtgtt ttaaatgata tcctttcacg tcttgacaaa 900
gttgaggctg aagtgcaaat tgataggttg atcacaggca gacttcaaag tttgcagaca 960
tatgtgactc aacaattaat tagagctgca gaaatcagag cttctgctaa tcttgctgct 1020
actaaaatgt cagagtgtgt acttggacaa tcaaaaagag ttgatttttg tggaaagggc 1080
tatcatctta tgtccttccc tcagtcagca cctcatggtg tagtcttctt gcatgtgact 1140
tatgtccctg cacaagaaaa gaacttcaca actgctcctg ccatttgtca tgatggaaaa 1200
gcacactttc ctcgtgaagg tgtctttgtt tcaaatggca cacactggtt tgtaacacaa 1260
aggaattttt atgaaccaca aatcattact acagacaaca catttgtgtc tggtaactgt 1320
gatgttgtaa taggaattgt caacaacaca gtttatgatc ctttgcaacc tgaattagac 1380
tcattcaagg aggagttaga taaatatttt aagaatcata catcaccaga tgttgattta 1440
ggtgacatct ctggcattaa tgcttcagtt gtaaacattc aaaaagaaat tgaccgcctc 1500
aatgaggttg ccaagaattt aaatgaatct ctcatcgatc tccaagaact tggaaagtat 1560
gagcagtata taaaatggcc atggtacatt tggctaggtt ttatagctgg cttgattgcc 1620
atagtaatgg tgacaattat gctttgctgt atgaccagtt gctgtagttg tctcaagggc 1680
tgttgttctt gtggatcctg ctgcaaattt gatgaagacg actctgagcc agtgctcaaa 1740
ggagtcaaat tacattacac ataa 1764
<210> 33
<211> 582
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Nucleotide sequence of the gene coding for the RBD of spike
protein of SARS-CoV-2
<400> 33
aatattacaa acttgtgccc ttttggtgaa gtttttaacg ccaccagatt tgcatctgtt 60
tatgcttgga acaggaagag aatcagcaac tgtgttgctg attattctgt cctatataat 120
tccgcatcat tttccacttt taagtgttat ggagtgtctc ctactaaatt aaatgatctc 180
tgctttacta atgtctatgc agattcattt gtaattagag gtgatgaagt cagacaaatc 240
gctccagggc aaactggaaa gattgctgat tataattata aattaccaga tgattttaca 300
ggctgcgtta tagcttggaa ttctaacaat cttgattcta aggttggtgg taattataat 360
tacctgtata gattgtttag gaagtctaat ctcaaacctt ttgagagaga tatttcaact 420
gaaatctatc aggccggtag cacaccttgt aatggtgttg aaggttttaa ttgttacttt 480
cctttacaat catatggttt ccaacccact aatggtgttg gttaccaacc atacagagta 540
gtagtacttt cttttgaact tctacatgca ccagcaactg tt 582
<210> 34
<211> 1274
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Amino acid sequence of the spike protein of SARS-CoV-2
<400> 34
Met Phe Val Phe Leu Val Leu Leu Pro Leu Val Ser Ser Gln Cys Val
1 5 10 15
Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr Asn Ser Phe
20 25 30
Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser Ser Val Leu
35 40 45
His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn Val Thr Trp
50 55 60
Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys Arg Phe Asp
65 70 75 80
Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala Ser Thr Glu
85 90 95
Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr Leu Asp Ser
100 105 110
Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn Val Val Ile
115 120 125
Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu Gly Val Tyr
130 135 140
Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe Arg Val Tyr
145 150 155 160
Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln Pro Phe Leu
165 170 175
Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu Arg Glu Phe
180 185 190
Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser Lys His Thr
195 200 205
Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser Ala Leu Glu
210 215 220
Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg Phe Gln Thr
225 230 235 240
Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser
245 250 255
Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro
260 265 270
Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala
275 280 285
Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys
290 295 300
Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg Val
305 310 315 320
Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys
325 330 335
Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala
340 345 350
Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu
355 360 365
Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro
370 375 380
Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe
385 390 395 400
Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly
405 410 415
Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys
420 425 430
Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn
435 440 445
Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe
450 455 460
Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys
465 470 475 480
Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly
485 490 495
Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val
500 505 510
Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys
515 520 525
Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe Asn
530 535 540
Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu
545 550 555 560
Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp Ala Val
565 570 575
Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro Cys Ser Phe
580 585 590
Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Thr Ser Asn Gln Val
595 600 605
Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Glu Val Pro Val Ala Ile
610 615 620
His Ala Asp Gln Leu Thr Pro Thr Trp Arg Val Tyr Ser Thr Gly Ser
625 630 635 640
Asn Val Phe Gln Thr Arg Ala Gly Cys Leu Ile Gly Ala Glu His Val
645 650 655
Asn Asn Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala Gly Ile Cys Ala
660 665 670
Ser Tyr Gln Thr Gln Thr Asn Ser Pro Arg Arg Ala Arg Ser Val Ala
675 680 685
Ser Gln Ser Ile Ile Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Ala Glu Asn Ser
690 695 700
Val Ala Tyr Ser Asn Asn Ser Ile Ala Ile Pro Thr Asn Phe Thr Ile
705 710 715 720
Ser Val Thr Thr Glu Ile Leu Pro Val Ser Met Thr Lys Thr Ser Val
725 730 735
Asp Cys Thr Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys Ser Asn Leu
740 745 750
Leu Leu Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln Leu Asn Arg Ala Leu Thr
755 760 765
Gly Ile Ala Val Glu Gln Asp Lys Asn Thr Gln Glu Val Phe Ala Gln
770 775 780
Val Lys Gln Ile Tyr Lys Thr Pro Pro Ile Lys Asp Phe Gly Gly Phe
785 790 795 800
Asn Phe Ser Gln Ile Leu Pro Asp Pro Ser Lys Pro Ser Lys Arg Ser
805 810 815
Phe Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala Gly
820 825 830
Phe Ile Lys Gln Tyr Gly Asp Cys Leu Gly Asp Ile Ala Ala Arg Asp
835 840 845
Leu Ile Cys Ala Gln Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val Leu Pro Pro Leu
850 855 860
Leu Thr Asp Glu Met Ile Ala Gln Tyr Thr Ser Ala Leu Leu Ala Gly
865 870 875 880
Thr Ile Thr Ser Gly Trp Thr Phe Gly Ala Gly Ala Ala Leu Gln Ile
885 890 895
Pro Phe Ala Met Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly Ile Gly Val Thr
900 905 910
Gln Asn Val Leu Tyr Glu Asn Gln Lys Leu Ile Ala Asn Gln Phe Asn
915 920 925
Ser Ala Ile Gly Lys Ile Gln Asp Ser Leu Ser Ser Thr Ala Ser Ala
930 935 940
Leu Gly Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn
945 950 955 960
Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val
965 970 975
Leu Asn Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val Gln
980 985 990
Ile Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val
995 1000 1005
Thr Gln Gln Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser Ala Asn Leu
1010 1015 1020
Ala Ala Thr Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser Lys Arg Val
1025 1030 1035 1040
Asp Phe Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro Gln Ser Ala
1045 1050 1055
Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val Pro Ala Gln Glu
1060 1065 1070
Lys Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His Asp Gly Lys Ala His
1075 1080 1085
Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe Val Ser Asn Gly Thr His Trp Phe Val
1090 1095 1100
Thr Gln Arg Asn Phe Tyr Glu Pro Gln Ile Ile Thr Thr Asp Asn Thr
1105 1110 1115 1120
Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp Val Val Ile Gly Ile Val Asn Asn Thr
1125 1130 1135
Val Tyr Asp Pro Leu Gln Pro Glu Leu Asp Ser Phe Lys Glu Glu Leu
1140 1145 1150
Asp Lys Tyr Phe Lys Asn His Thr Ser Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp
1155 1160 1165
Ile Ser Gly Ile Asn Ala Ser Val Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp
1170 1175 1180
Arg Leu Asn Glu Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu
1185 1190 1195 1200
Gln Glu Leu Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr Ile
1205 1210 1215
Trp Leu Gly Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met Val Thr Ile
1220 1225 1230
Met Leu Cys Cys Met Thr Ser Cys Cys Ser Cys Leu Lys Gly Cys Cys
1235 1240 1245
Ser Cys Gly Ser Cys Cys Lys Phe Asp Glu Asp Asp Ser Glu Pro Val
1250 1255 1260
Leu Lys Gly Val Lys Leu His Tyr Thr ***
1265 1270
<210> 35
<211> 673
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Amino acid sequence of the S1 domain of spike protein of
SARS-CoV-2
<400> 35
Gln Cys Val Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr
1 5 10 15
Asn Ser Phe Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser
20 25 30
Ser Val Leu His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn
35 40 45
Val Thr Trp Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys
50 55 60
Arg Phe Asp Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala
65 70 75 80
Ser Thr Glu Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr
85 90 95
Leu Asp Ser Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn
100 105 110
Val Val Ile Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu
115 120 125
Gly Val Tyr Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe
130 135 140
Arg Val Tyr Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln
145 150 155 160
Pro Phe Leu Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu
165 170 175
Arg Glu Phe Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser
180 185 190
Lys His Thr Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser
195 200 205
Ala Leu Glu Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg
210 215 220
Phe Gln Thr Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp
225 230 235 240
Ser Ser Ser Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr
245 250 255
Leu Gln Pro Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile
260 265 270
Thr Asp Ala Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys
275 280 285
Thr Leu Lys Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn
290 295 300
Phe Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr
305 310 315 320
Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser
325 330 335
Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr
340 345 350
Ser Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly
355 360 365
Val Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala
370 375 380
Asp Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly
385 390 395 400
Gln Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe
405 410 415
Thr Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val
420 425 430
Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu
435 440 445
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450 455 460
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465 470 475 480
Ser Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg
485 490 495
Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys
500 505 510
Gly Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe
515 520 525
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530 535 540
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545 550 555 560
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645 650 655
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660 665 670
Ser
<210> 36
<211> 588
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Amino acid sequence of the S2 domain of spike protein of
SARS-CoV-2
<400> 36
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1 5 10 15
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50 55 60
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130 135 140
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145 150 155 160
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225 230 235 240
Phe Asn Ser Ala Ile Gly Lys Ile Gln Asp Ser Leu Ser Ser Thr Ala
245 250 255
Ser Ala Leu Gly Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala
260 265 270
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275 280 285
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580 585
<210> 37
<211> 194
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Amino acid sequence of the RBD of spike protein of SARS-CoV-2
<400> 37
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1 5 10 15
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130 135 140
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Pro Tyr Arg Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala
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Thr Val
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<211> 732
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> RBD-ex1_BEVS
<400> 38
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accgaatcaa tcgtccgttt cccaaacatc actaacctgt gccctttcgg agaggtgttc 120
aacgccacca gattcgcttc cgtctacgcc tggaaccgca agcgtatctc taactgcgtc 180
gctgactact cagtgctgta caacagcgcc tctttctcaa ccttcaagtg ctacggagtg 240
tctcctacta agctgaacga cctgtgcttc accaacgtct acgctgactc attcgtgatc 300
cgcggtgacg aggtccgtca gatcgctccc ggacagactg gcaagatcgc cgactacaac 360
tacaagctgc cagacgactt caccggttgc gtgatcgcct ggaactctaa caacctggac 420
tcaaaggtcg gtggcaacta caactacctg tacaggctgt tcagaaagtc taacctgaag 480
cctttcgagc gcgacatctc cactgaaatc taccaggctg gtagcacccc ctgcaacggc 540
gtggaaggat tcaactgcta cttccctctg caatcatacg gcttccagcc cactaacggc 600
gtcggatacc agccataccg tgtggtcgtg ctgtccttcg agctgctcca cgctcctgct 660
actgtgtgcg gccccaagaa gagcaccaac ctggtcaaga acaagtgcgt gaacttcaac 720
ttcaacggat aa 732
<210> 39
<211> 732
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> RBD-ex1_CHO
<400> 39
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aggggcgatg aggtgcggca gatcgctcct ggccagaccg gcaagatcgc cgactacaac 360
tataagctgc cagacgattt cacaggctgc gtgatcgcct ggaactccaa caatctggat 420
agcaaagtgg gcggcaacta caattatctg tacagactgt tccgcaagag caacctgaag 480
ccctttgaga gggacatcag caccgaaatc taccaggctg gctctacacc ttgcaacggc 540
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accgtgtgcg gccctaagaa gtccacaaat ctggtgaaga acaagtgcgt gaacttcaac 720
ttcaacggct aa 732
<210> 40
<211> 870
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> RBD-ex2_BEVS
<400> 40
atgaagtggg tgactttcat ctccctgctg ttcctgttct ccagcgctta cagccagcct 60
accgaatcaa tcgtccgttt cccaaacatc actaacctgt gccctttcgg agaggtgttc 120
aacgccacca gattcgcttc cgtctacgcc tggaaccgca agcgtatctc taactgcgtc 180
gctgactact cagtgctgta caacagcgcc tctttctcaa ccttcaagtg ctacggagtg 240
tctcctacta agctgaacga cctgtgcttc accaacgtct acgctgactc attcgtgatc 300
cgcggtgacg aggtccgtca gatcgctccc ggacagactg gcaagatcgc cgactacaac 360
tacaagctgc cagacgactt caccggttgc gtgatcgcct ggaactctaa caacctggac 420
tcaaaggtcg gtggcaacta caactacctg tacaggctgt tcagaaagtc taacctgaag 480
cctttcgagc gcgacatctc cactgaaatc taccaggctg gtagcacccc ctgcaacggc 540
gtggaaggat tcaactgcta cttccctctg caatcatacg gcttccagcc cactaacggc 600
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actgtgtgcg gccccaagaa gagcaccaac ctggtcaaga acaagtgcgt gaacttcaac 720
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<210> 41
<211> 870
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> RBD-ex2_CHO
<400> 41
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gagatcctgg acatcacacc ttgcagctaa 870
<210> 42
<211> 708
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> RBD-ex3_BEVS
<400> 42
atgaagtggg tgactttcat ctccctgctg ttcctgttct ccagcgctta cagccagcct 60
accgaatcaa tcgtccgttt cccaaacatc actaacctgt gccctttcgg agaggtgttc 120
aacgccacca gattcgcttc cgtctacgcc tggaaccgca agcgtatctc taactgcgtc 180
gctgactact cagtgctgta caacagcgcc tctttctcaa ccttcaagtg ctacggagtg 240
tctcctacta agctgaacga cctgtgcttc accaacgtct acgctgactc attcgtgatc 300
cgcggtgacg aggtccgtca gatcgctccc ggacagactg gcaagatcgc cgactacaac 360
tacaagctgc cagacgactt caccggttgc gtgatcgcct ggaactctaa caacctggac 420
tcaaaggtcg gtggcaacta caactacctg tacaggctgt tcagaaagtc taacctgaag 480
cctttcgagc gcgacatctc cactgaaatc taccaggctg gtagcacccc ctgcaacggc 540
gtggaaggat tcaactgcta cttccctctg caatcatacg gcttccagcc cactaacggc 600
gtcggatacc agccataccg tgtggtcgtg ctgtccttcg agctgctcca cgctcctgct 660
actgtgtgcg gccccaagaa gagcaccaac ctggtcaaga acaagtaa 708
<210> 43
<211> 708
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> RBD-ex3_CHO
<400> 43
atgaagtggg tcactttcat cagcctgttg tttctgttca gctccgccta ctctcagccc 60
accgagtcca tcgtgagatt cccaaacatc accaatctgt gccccttcgg cgaggtgttt 120
aacgccacac gctttgcttc cgtgtatgcc tggaacagga agcggatctc taattgcgtg 180
gctgactatt ccgtgctgta caattccgcc agcttctcta cctttaagtg ctatggcgtg 240
tccccaacca agctgaacga cctgtgcttc acaaacgtgt acgctgacag ctttgtgatc 300
aggggcgatg aggtgcggca gatcgctcct ggccagaccg gcaagatcgc cgactacaac 360
tataagctgc cagacgattt cacaggctgc gtgatcgcct ggaactccaa caatctggat 420
agcaaagtgg gcggcaacta caattatctg tacagactgt tccgcaagag caacctgaag 480
ccctttgaga gggacatcag caccgaaatc taccaggctg gctctacacc ttgcaacggc 540
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<210> 44
<211> 1273
<212> PRT
<213> Unknown
<220>
<223> Spike protein of B.1.429 variant
<400> 44
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1 5 10 15
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Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser Ser Val Leu
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Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys Arg Phe Asp
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115 120 125
Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu Gly Val Tyr
130 135 140
Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe Arg Val Tyr
145 150 155 160
Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln Pro Phe Leu
165 170 175
Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu Arg Glu Phe
180 185 190
Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser Lys His Thr
195 200 205
Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser Ala Leu Glu
210 215 220
Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg Phe Gln Thr
225 230 235 240
Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser
245 250 255
Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro
260 265 270
Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala
275 280 285
Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys
290 295 300
Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg Val
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Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys
325 330 335
Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala
340 345 350
Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu
355 360 365
Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro
370 375 380
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385 390 395 400
Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly
405 410 415
Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys
420 425 430
Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn
435 440 445
Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe
450 455 460
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485 490 495
Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val
500 505 510
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515 520 525
Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe Asn
530 535 540
Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu
545 550 555 560
Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp Ala Val
565 570 575
Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro Cys Ser Phe
580 585 590
Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Thr Ser Asn Gln Val
595 600 605
Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Glu Val Pro Val Ala Ile
610 615 620
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625 630 635 640
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645 650 655
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675 680 685
Ser Gln Ser Ile Ile Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Ala Glu Asn Ser
690 695 700
Val Ala Tyr Ser Asn Asn Ser Ile Ala Ile Pro Thr Asn Phe Thr Ile
705 710 715 720
Ser Val Thr Thr Glu Ile Leu Pro Val Ser Met Thr Lys Thr Ser Val
725 730 735
Asp Cys Thr Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys Ser Asn Leu
740 745 750
Leu Leu Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln Leu Asn Arg Ala Leu Thr
755 760 765
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Leu Ile Cys Ala Gln Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val Leu Pro Pro Leu
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<220>
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<210> 49
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Codon-optimized nucleic acid sequence of RBD ext1-P2 of variant
B.1.1.7 for CHO expression system
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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<223> Codon-optimized nucleic acid sequence of RBD ext1-P2 of variant
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Codon-optimized nucleic acid sequence of RBD ext1-P2 of variant
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<211> 792
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Codon-optimized nucleic acid sequence of RBD ext1-P2 of variant
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Codon-optimized nucleic acid sequence of RBD ext3-foldon-P2 of
variant B.1.1.7 for CHO expression system
<400> 53
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Codon-optimized nucleic acid sequence of RBD ext3-foldon-P2 of
variant B.1.351 for CHO expression system
<400> 54
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Codon-optimized nucleic acid sequence of RBD ext3-foldon-P2 of
variant B.1.1.248 for CHO expression system
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<210> 56
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Codon-optimized nucleic acid sequence of RBD ext3-foldon-P2 of
variant B.1.429 for CHO expression system
<400> 56
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ccatttgaga gagacatctc caccgaaatc taccaggctg gcagcacacc atgcaacgga 540
gtggagggct tcaattgtta ttttcccctg cagtcctacg gcttccagcc taccaatggc 600
gtgggctatc agccataccg cgtggtggtg ctgtcctttg agctgctgca cgctccagct 660
accgtgtgcg gacccaagaa gagcacaaac ctggtgaaga ataagggcag cggcggctct 720
ggctatatcc ccgaggctcc tagagacggc caggcctacg tgcgcaagga tggcgagtgg 780
gtgctgctgt ctaccttcct gggctctggc tccggccagt acatcaaggc caactccaag 840
tttatcggca tcacagagct gtga 864
<210> 57
<211> 792
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Codon-optimized nucleic acid sequence of RBD ext1-P2 of variant
B.1.1.7 for insect expression system
<400> 57
atgaagtggg tgaccttcat cagcctgctg ttcctgttct ccagcgccta ctcacagcca 60
accgagtcca tcgtcaggtt cccaaacatc actaacctgt gccctttcgg tgaagtgttc 120
aacgctacca gattcgcctc cgtctacgct tggaaccgca agcgtatctc aaactgcgtc 180
gccgactact ccgtgctgta caactctgct tcattctcca ctttcaagtg ctacggagtg 240
tcacctacca agctgaacga cctgtgcttc actaacgtct acgccgactc cttcgtgatc 300
cgcggtgacg aggtccgtca gatcgctcct ggacagaccg gcaagatcgc tgactacaac 360
tacaagctgc cagacgactt cactggctgc gtgatcgctt ggaacagcaa caacctggac 420
tctaaggtcg gtggcaacta caactacctg tacaggctgt tcagaaagtc aaacctgaag 480
cctttcgagc gcgacatcag caccgaaatc taccaggccg gttctactcc ctgcaacggc 540
gtggagggat tcaactgcta cttccccctg cagtcctacg gcttccagcc aacctacggc 600
gtcggatacc agccttaccg cgtggtcgtg ctgagcttcg aactgctcca cgctcctgct 660
actgtctgcg gacccaagaa gtctactaac ctggtcaaga acaagtgcgt gaacttcaac 720
ttcaacggag gtagcggttc tggccagtac atcaaggcta actctaagtt catcggaatc 780
actgaactgt aa 792
<210> 58
<211> 792
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Codon-optimized nucleic acid sequence of RBD ext1-P2 of variant
B.1.351 for insect expression system
<400> 58
atgaagtggg tgaccttcat cagcctgctg ttcctgttct ccagcgccta ctcacagcca 60
accgagtcca tcgtcaggtt cccaaacatc actaacctgt gccctttcgg tgaagtgttc 120
aacgctacca gattcgcctc cgtctacgct tggaaccgca agcgtatctc aaactgcgtc 180
gccgactact ccgtgctgta caactctgct tcattctcca ctttcaagtg ctacggagtg 240
tcacctacca agctgaacga cctgtgcttc actaacgtct acgccgactc cttcgtgatc 300
cgcggtgacg aggtccgtca gatcgctcct ggacagaccg gtaacatcgc tgactacaac 360
tacaagctgc cagacgactt cactggctgc gtgatcgctt ggaacagcaa caacctggac 420
tctaaggtcg gtggcaacta caactacctg tacaggctgt tcagaaagtc aaacctgaag 480
cctttcgagc gcgacatcag caccgaaatc taccaggccg gttctactcc ctgcaacggc 540
gtgaagggat tcaactgcta cttccccctg cagtcctacg gcttccagcc aacctacggc 600
gtcggatacc agccttaccg cgtggtcgtg ctgagcttcg agctgctcca cgctcctgct 660
actgtctgcg gacccaagaa gtctactaac ctggtcaaga acaagtgcgt gaacttcaac 720
ttcaacggag gtagcggttc tggccagtac atcaaggcta actctaagtt catcggaatc 780
actgaactgt aa 792
<210> 59
<211> 792
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Codon-optimized nucleic acid sequence of RBD ext1-P2 of variant
B.1.1.248 for insect expression system
<400> 59
atgaagtggg tgaccttcat cagcctgctg ttcctgttct ccagcgccta ctcacagcca 60
accgagtcca tcgtcaggtt cccaaacatc actaacctgt gccctttcgg tgaagtgttc 120
aacgctacca gattcgcctc cgtctacgct tggaaccgca agcgtatctc aaactgcgtc 180
gccgactact ccgtgctgta caactctgct tcattctcca ctttcaagtg ctacggagtg 240
tcacctacca agctgaacga cctgtgcttc actaacgtct acgccgactc cttcgtgatc 300
cgcggtgacg aggtccgtca gatcgctcct ggacagaccg gtactatcgc tgactacaac 360
tacaagctgc cagacgactt cactggctgc gtgatcgctt ggaacagcaa caacctggac 420
tctaaggtcg gtggcaacta caactacctg tacaggctgt tcagaaagtc aaacctgaag 480
cctttcgagc gcgacatcag caccgaaatc taccaggccg gttctactcc ctgcaacggc 540
gtgaagggat tcaactgcta cttccccctg cagtcctacg gcttccagcc aacctacggc 600
gtcggatacc agccttaccg cgtggtcgtg ctgagcttcg agctgctcca cgctcctgct 660
actgtctgcg gacccaagaa gtctactaac ctggtcaaga acaagtgcgt gaacttcaac 720
ttcaacggag gtagcggttc tggccagtac atcaaggcta actctaagtt catcggaatc 780
actgaactgt aa 792
<210> 60
<211> 792
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Codon-optimized nucleic acid sequence of RBD ext1-P2 of variant
B.1.429 for insect expression system
<400> 60
atgaagtggg tcacgttcat ttccctcctg ttcctgttct caagtgctta ctcacaacca 60
accgagtcca tcgtccgttt ccctaacatc accaacctgt gccctttcgg agaggtgttc 120
aacgctactc gcttcgcctc cgtctacgct tggaaccgca agcgtatcag caactgcgtc 180
gccgactact ctgtgctgta caactccgct tccttctcta ccttcaagtg ctacggtgtg 240
agccctacca agctgaacga cctgtgcttc actaacgtct acgccgactc tttcgtgatc 300
cgcggcgacg aagtccgtca gatcgctcct ggtcagaccg gcaagatcgc tgactacaac 360
tacaagctgc ctgacgactt cactggttgc gtgatcgctt ggaactcaaa caacctggac 420
tccaaggtcg gtggcaacta caactacagg tacagactgt tcaggaagag caacctgaag 480
cccttcgaga gagacatctc aaccgaaatc taccaggccg gctccactcc atgcaacgga 540
gtggagggtt tcaactgcta cttcccactg cagtcttacg gattccagcc tactaacggc 600
gtcggatacc agccctaccg cgtggtcgtg ctgtcattcg aactgctcca cgctcctgct 660
actgtctgcg gacccaagaa gtccactaac ctggtcaaga acaagtgcgt gaacttcaac 720
ttcaacggag gttctggcag cggacaatac atcaaggcaa acagcaaatt catcggcatt 780
acggaactct aa 792
<210> 61
<211> 864
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Codon-optimized nucleic acid sequence of RBD-ext3-foldon-P2 of
variant B.1.1.7 for insect expression system
<400> 61
atgaagtggg tcactttcat cagcctgctg ttcctgttct ccagcgctta cagccagcct 60
accgaatcaa tcgtccgttt cccaaacatc actaacctgt gccctttcgg agaggtgttc 120
aacgccaccc gtttcgcttc cgtgtacgcc tggaacagga agagaatcag caactgcgtc 180
gctgactact ctgtgctgta caactcagcc tccttcagca ccttcaagtg ctacggcgtg 240
tcacccacta agctgaacga cctgtgcttc accaacgtct acgccgactc cttcgtgatc 300
aggggagacg aggtcagaca gatcgctcca ggtcaaactg gcaagatcgc cgactacaac 360
tacaagctgc ctgacgactt caccggctgc gtcatcgctt ggaacagcaa caacctggac 420
tctaaagtgg gtggcaacta caactacctg taccgcctgt tccgtaagtc aaacctgaag 480
cccttcgagc gcgacatctc aactgaaatc taccaggctg gttccacccc atgcaacgga 540
gtcgagggtt tcaactgcta cttccctctg caatcctacg gtttccagcc cacttacgga 600
gtgggttacc agccataccg tgtggtcgtg ctgagcttcg aactgctgca cgcccctgct 660
actgtgtgcg gtcccaagaa gagcaccaac ctggtcaaga acaagggaag cggtggctcc 720
ggttacatcc ctgaagctcc ccgcgacgga caggcctacg tccgtaagga cggagagtgg 780
gtgctgctgt caactttcct gggatctggt tcaggccagt acatcaaggc taactccaag 840
ttcatcggta tcaccgaact gtaa 864
<210> 62
<211> 864
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Codon-optimized nucleic acid sequence of RBD-ext3-foldon-P2 of
variant B.1.351 for insect expression system
<400> 62
atgaagtggg tcactttcat cagcctgctg ttcctgttct ccagcgctta cagccagcct 60
accgaatcaa tcgtccgttt cccaaacatc actaacctgt gccctttcgg agaggtgttc 120
aacgccaccc gtttcgcttc cgtgtacgcc tggaacagga agagaatcag caactgcgtc 180
gctgactact ctgtgctgta caactcagcc tccttcagca ccttcaagtg ctacggcgtg 240
tcacccacta agctgaacga cctgtgcttc accaacgtct acgccgactc cttcgtgatc 300
aggggagacg aggtcagaca gatcgctcca ggtcaaactg gcaacatcgc cgactacaac 360
tacaagctgc ctgacgactt caccggctgc gtcatcgctt ggaacagcaa caacctggac 420
tctaaagtgg gtggcaacta caactacctg taccgcctgt tccgtaagtc aaacctgaag 480
cccttcgagc gcgacatctc aactgaaatc taccaggctg gttccacccc atgcaacgga 540
gtcaagggtt tcaactgcta cttccctctg caatcctacg gtttccagcc cacttacgga 600
gtgggttacc agccataccg tgtggtcgtg ctgagcttcg aactgctgca cgcccctgct 660
actgtgtgcg gtcccaagaa gagcaccaac ctggtcaaga acaagggaag cggtggctcc 720
ggttacatcc ctgaagctcc ccgcgacgga caggcctacg tccgtaagga cggagagtgg 780
gtgctgctgt caactttcct gggatctggt tcaggccagt acatcaaggc taactccaag 840
ttcatcggta tcaccgaact gtaa 864
<210> 63
<211> 864
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Codon-optimized nucleic acid sequence of RBD-ext3-foldon-P2 of
variant B.1.1.248 for insect expression system
<400> 63
atgaagtggg tcactttcat cagcctgctg ttcctgttct ccagcgctta cagccagcct 60
accgaatcaa tcgtccgttt cccaaacatc actaacctgt gccctttcgg agaggtgttc 120
aacgccaccc gtttcgcttc cgtgtacgcc tggaacagga agagaatcag caactgcgtc 180
gctgactact ctgtgctgta caactcagcc tccttcagca ccttcaagtg ctacggcgtg 240
tcacccacta agctgaacga cctgtgcttc accaacgtct acgccgactc cttcgtgatc 300
aggggagacg aggtcagaca gatcgctcca ggtcaaactg gcacgatcgc cgactacaac 360
tacaagctgc ctgacgactt caccggctgc gtcatcgctt ggaacagcaa caacctggac 420
tctaaagtgg gtggcaacta caactacctg taccgcctgt tccgtaagtc aaacctgaag 480
cccttcgagc gcgacatctc aactgaaatc taccaggctg gttccacccc atgcaacgga 540
gtcaagggtt tcaactgcta cttccctctg caatcctacg gtttccagcc cacttacgga 600
gtgggttacc agccataccg tgtggtcgtg ctgagcttcg aactgctgca cgcccctgct 660
actgtgtgcg gtcccaagaa gagcaccaac ctggtcaaga acaagggaag cggtggctcc 720
ggttacatcc ctgaagctcc ccgcgacgga caggcctacg tccgtaagga cggagagtgg 780
gtgctgctgt caactttcct gggatctggt tcaggccagt acatcaaggc taactccaag 840
ttcatcggta tcaccgaact gtaa 864
<210> 64
<211> 864
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Codon-optimized nucleic acid sequence of RBD-ext3-foldon-P2 of
variant B.1.429 for insect expression system
<400> 64
atgaagtggg tcactttcat cagcctgctg ttcctgttct ccagcgctta cagccagcct 60
accgaatcaa tcgtccgttt cccaaacatc actaacctgt gccctttcgg agaggtgttc 120
aacgccaccc gtttcgcttc cgtgtacgcc tggaacagga agagaatcag caactgcgtc 180
gctgactact ctgtgctgta caactcagcc tccttcagca ccttcaagtg ctacggcgtg 240
tcacccacta agctgaacga cctgtgcttc accaacgtct acgccgactc cttcgtgatc 300
aggggagacg aggtcagaca gatcgctcca ggtcaaactg gcaagatcgc cgactacaac 360
tacaagctgc ctgacgactt caccggctgc gtcatcgctt ggaacagcaa caacctggac 420
tctaaagtgg gtggcaacta caactaccgg taccgcctgt tccgtaagtc aaacctgaag 480
cccttcgagc gcgacatctc aactgaaatc taccaggctg gttccacccc atgcaacgga 540
gtcgagggtt tcaactgcta cttccctctg caatcctacg gtttccagcc cactaacgga 600
gtgggttacc agccataccg tgtggtcgtg ctgagcttcg aactgctgca cgcccctgct 660
actgtgtgcg gtcccaagaa gagcaccaac ctggtcaaga acaagggaag cggtggctcc 720
ggttacatcc ctgaagctcc ccgcgacgga caggcctacg tccgtaagga cggagagtgg 780
gtgctgctgt caactttcct gggatctggt tcaggccagt acatcaaggc taactccaag 840
ttcatcggta tcaccgaact gtaa 864
<210> 65
<211> 1204
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SK-S-trimer-P2 recombinant antigen
<400> 65
Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala
1 5 10 15
Tyr Ser Gln Cys Val Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala
20 25 30
Tyr Thr Asn Ser Phe Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe
35 40 45
Arg Ser Ser Val Leu His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe
50 55 60
Ser Asn Val Thr Trp Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly
65 70 75 80
Thr Lys Arg Phe Asp Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr
85 90 95
Phe Ala Ser Thr Glu Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly
100 105 110
Thr Thr Leu Asp Ser Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala
115 120 125
Thr Asn Val Val Ile Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro
130 135 140
Phe Leu Gly Val Tyr Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser
145 150 155 160
Glu Phe Arg Val Tyr Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val
165 170 175
Ser Gln Pro Phe Leu Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys
180 185 190
Asn Leu Arg Glu Phe Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile
195 200 205
Tyr Ser Lys His Thr Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly
210 215 220
Phe Ser Ala Leu Glu Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile
225 230 235 240
Thr Arg Phe Gln Thr Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro
245 250 255
Gly Asp Ser Ser Ser Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val
260 265 270
Gly Tyr Leu Gln Pro Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly
275 280 285
Thr Ile Thr Asp Ala Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr
290 295 300
Lys Cys Thr Leu Lys Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr
305 310 315 320
Ser Asn Phe Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn
325 330 335
Ile Thr Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe
340 345 350
Ala Ser Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala
355 360 365
Asp Tyr Ser Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys
370 375 380
Tyr Gly Val Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val
385 390 395 400
Tyr Ala Asp Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala
405 410 415
Pro Gly Gln Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp
420 425 430
Asp Phe Thr Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser
435 440 445
Lys Val Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser
450 455 460
Asn Leu Lys Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala
465 470 475 480
Gly Ser Thr Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro
485 490 495
Leu Gln Ser Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro
500 505 510
Tyr Arg Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr
515 520 525
Val Cys Gly Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val
530 535 540
Asn Phe Asn Phe Asn Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser
545 550 555 560
Asn Lys Lys Phe Leu Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp
565 570 575
Thr Thr Asp Ala Val Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile
580 585 590
Thr Pro Cys Ser Phe Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn
595 600 605
Thr Ser Asn Gln Val Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Glu
610 615 620
Val Pro Val Ala Ile His Ala Asp Gln Leu Thr Pro Thr Trp Arg Val
625 630 635 640
Tyr Ser Thr Gly Ser Asn Val Phe Gln Thr Arg Ala Gly Cys Leu Ile
645 650 655
Gly Ala Glu His Val Asn Asn Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly
660 665 670
Ala Gly Ile Cys Ala Ser Tyr Gln Thr Gln Thr Asn Ser Pro Arg Arg
675 680 685
Ala Arg Ser Val Ala Ser Gln Ser Ile Ile Ala Tyr Thr Met Ser Leu
690 695 700
Gly Ala Glu Asn Ser Val Ala Tyr Ser Asn Asn Ser Ile Ala Ile Pro
705 710 715 720
Thr Asn Phe Thr Ile Ser Val Thr Thr Glu Ile Leu Pro Val Ser Met
725 730 735
Thr Lys Thr Ser Val Asp Cys Thr Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser Thr
740 745 750
Glu Cys Ser Asn Leu Leu Leu Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln Leu
755 760 765
Asn Arg Ala Leu Thr Gly Ile Ala Val Glu Gln Asp Lys Asn Thr Gln
770 775 780
Glu Val Phe Ala Gln Val Lys Gln Ile Tyr Lys Thr Pro Pro Ile Lys
785 790 795 800
Asp Phe Gly Gly Phe Asn Phe Ser Gln Ile Leu Pro Asp Pro Ser Lys
805 810 815
Pro Ser Lys Arg Ser Phe Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr
820 825 830
Leu Ala Asp Ala Gly Phe Ile Lys Gln Tyr Gly Asp Cys Leu Gly Asp
835 840 845
Ile Ala Ala Arg Asp Leu Ile Cys Ala Gln Lys Phe Asn Gly Leu Thr
850 855 860
Val Leu Pro Pro Leu Leu Thr Asp Glu Met Ile Ala Gln Tyr Thr Ser
865 870 875 880
Ala Leu Leu Ala Gly Thr Ile Thr Ser Gly Trp Thr Phe Gly Ala Gly
885 890 895
Ala Ala Leu Gln Ile Pro Phe Ala Met Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn
900 905 910
Gly Ile Gly Val Thr Gln Asn Val Leu Tyr Glu Asn Gln Lys Leu Ile
915 920 925
Ala Asn Gln Phe Asn Ser Ala Ile Gly Lys Ile Gln Asp Ser Leu Ser
930 935 940
Ser Thr Ala Ser Ala Leu Gly Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn
945 950 955 960
Ala Gln Ala Leu Asn Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly
965 970 975
Ala Ile Ser Ser Val Leu Asn Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val
980 985 990
Glu Ala Glu Val Gln Ile Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser
995 1000 1005
Leu Gln Thr Tyr Val Thr Gln Gln Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg
1010 1015 1020
Ala Ser Ala Asn Leu Ala Ala Thr Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly
1025 1030 1035 1040
Gln Ser Lys Arg Val Asp Phe Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser
1045 1050 1055
Phe Pro Gln Ser Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr
1060 1065 1070
Val Pro Ala Gln Glu Lys Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His
1075 1080 1085
Asp Gly Lys Ala His Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe Val Ser Asn Gly
1090 1095 1100
Thr His Trp Phe Val Thr Gln Arg Asn Phe Tyr Glu Pro Gln Ile Ile
1105 1110 1115 1120
Thr Thr Asp Asn Thr Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp Val Val Ile Gly
1125 1130 1135
Ile Val Asn Asn Thr Val Tyr Asp Pro Leu Gln Pro Glu Leu Asp Ser
1140 1145 1150
Gly Ser Gly Gly Ser Gly Tyr Ile Pro Glu Ala Pro Arg Asp Gly Gln
1155 1160 1165
Ala Tyr Val Arg Lys Asp Gly Glu Trp Val Leu Leu Ser Thr Phe Leu
1170 1175 1180
Gly Ser Gly Ser Gly Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly
1185 1190 1195 1200
Ile Thr Glu Leu
<210> 66
<211> 3600
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Codon-optimized nucleic acid sequence of SK-S-trimer-P2 antigen
for CHO expression system
<400> 66
atgttcgtgt ttctggtgct gctgccactg gtgtccagcc agtgcgtgaa cctgaccaca 60
agaacccagc tgccccctgc ctataccaat agcttcacaa ggggcgtgta ctatcccgat 120
aaggtgttca ggtcctccgt gctgcacagc acacaggacc tgtttctgcc tttcttttct 180
aacgtgacct ggttccacgc tatccacgtg tccggcacca atggcacaaa gaggttcgat 240
aatccagtgc tgccctttaa cgacggcgtg tacttcgcct ccaccgagaa gagcaacatc 300
atccggggct ggatctttgg caccacactg gattctaaga cacagtccct gctgatcgtg 360
aacaatgcta ccaacgtggt catcaaggtg tgcgagttcc agttttgtaa tgacccattc 420
ctgggcgtgt actatcataa gaacaataag agctggatgg agtctgagtt tcgcgtgtat 480
agctctgcca acaattgtac atttgagtac gtgagccagc ccttcctgat ggatctggag 540
ggcaagcagg gcaatttcaa gaacctgaga gagttcgtgt ttaagaatat cgacggctac 600
ttcaaaatct actctaagca caccccaatc aacctggtgc gcgatctgcc acagggcttc 660
tccgccctgg agccactggt ggacctgccc atcggcatca acatcaccag gtttcagaca 720
ctgctggccc tgcatcggtc ttacctgaca ccaggcgatt ccagctctgg atggaccgct 780
ggcgccgctg cctactatgt gggctacctc cagcccagaa ccttcctgct gaagtacaac 840
gagaatggca ccatcacaga cgctgtggat tgcgccctgg accccctgtc tgagacaaag 900
tgtacactga agtcctttac cgtggagaag ggcatctatc agacatccaa tttcagagtg 960
cagcctaccg agagcatcgt gcgctttccc aatatcacaa acctgtgccc ttttggcgag 1020
gtgttcaacg ctacccgctt cgcctccgtg tacgcttgga atagaaagcg catcagcaac 1080
tgcgtggccg attattctgt gctgtacaac tccgcctcct tctccacctt caagtgctat 1140
ggcgtgagcc ccacaaagct gaatgacctg tgctttacca acgtgtacgc tgattctttc 1200
gtgatcagag gcgacgaggt gcgccagatc gcccctggcc agacaggcaa gatcgctgat 1260
tacaattata agctgcctga cgatttcacc ggctgcgtga tcgcctggaa cagcaacaat 1320
ctggactcta aagtgggcgg caactacaat tatctgtaca ggctgtttcg gaagtccaat 1380
ctgaagccat tcgagagaga catcagcaca gaaatctacc aggctggctc taccccctgc 1440
aatggcgtgg agggctttaa ctgttatttc cctctccaga gctacggctt ccagccaacc 1500
aacggcgtgg gctatcagcc ctaccgcgtg gtggtgctgt cctttgagct gctgcacgct 1560
cctgctacag tgtgcggccc aaagaagagc accaatctgg tgaagaacaa gtgcgtgaac 1620
ttcaacttca acggcctgac cggcacaggc gtgctgaccg agtccaacaa gaagttcctg 1680
ccttttcagc agttcggcag agacatcgcc gataccacag acgctgtgcg cgatcctcag 1740
accctggaga tcctggacat cacaccatgc tccttcggcg gcgtgagcgt gatcacacca 1800
ggcaccaata caagcaacca ggtggccgtg ctgtatcagg atgtgaattg taccgaggtg 1860
cccgtggcta tccacgctga ccagctgacc cctacatgga gggtgtactc taccggctcc 1920
aacgtgtttc agacacgggc cggatgtctg atcggagctg agcatgtgaa caattcctat 1980
gagtgcgaca tccctatcgg cgccggcatc tgtgcctcct accagaccca gacaaacagc 2040
ccaaggcggg ccaggtctgt ggcttcccag agcatcatcg cctataccat gtccctgggc 2100
gccgagaata gcgtggctta cagcaacaat tctatcgcta tccctaccaa cttcacaatc 2160
tctgtgacca cagagatcct gccagtgtct atgaccaaga catccgtgga ttgcacaatg 2220
tatatctgtg gcgactccac cgagtgcagc aacctgctgc tccagtacgg ctccttttgt 2280
acccagctga atagagccct gacaggcatc gctgtggagc aggacaagaa cacacaggag 2340
gtgttcgccc aggtgaagca aatctacaag accccaccca tcaaggattt tggcggcttc 2400
aatttttccc agatcctgcc cgacccttcc aagcccagca agaggtcttt tatcgaggat 2460
ctgctgttca acaaggtgac cctggctgac gccggcttca tcaagcagta tggcgattgc 2520
ctgggcgaca tcgctgccag ggacctgatc tgcgcccaga agtttaatgg cctgaccgtg 2580
ctgcctccac tgctgacaga cgagatgatc gctcagtaca catctgctct gctggccggc 2640
accatcacat ccggatggac cttcggcgct ggagccgccc tccagatccc ttttgccatg 2700
cagatggctt atcggttcaa cggcatcggc gtgacccaga atgtgctgta cgagaaccag 2760
aagctgatcg ccaatcagtt taactctgct atcggcaaga tccaggattc tctgtccagc 2820
acagcttccg ccctgggcaa gctccaggac gtggtgaatc agaacgctca ggccctgaat 2880
accctggtga agcagctgtc ctccaacttc ggcgccatca gctctgtgct gaatgacatc 2940
ctgtccaggc tggacaaggt ggaggctgag gtgcagatcg acaggctgat caccggcagg 3000
ctccagtccc tccagaccta cgtgacacag cagctgatca gagctgccga gatccgcgct 3060
tccgccaacc tggctgccac caagatgtcc gagtgcgtgc tgggacagag caagagggtg 3120
gatttttgtg gcaagggcta tcacctgatg tctttcccac agtccgcccc tcacggcgtg 3180
gtgtttctgc atgtgaccta cgtgccagct caggagaaga acttcaccac agctccagcc 3240
atctgccacg acggcaaggc tcattttcct agagagggcg tgttcgtgag caacggcacc 3300
cattggtttg tgacacagcg caatttctat gagccacaga tcatcaccac agataataca 3360
tttgtgagcg gcaactgtga cgtggtcatc ggcatcgtga acaataccgt gtacgatcct 3420
ctccagccag agctggactc tggaagcggt ggctccggct acatccccga ggccccccgc 3480
gacggccagg cctacgtgcg caaggacggc gagtgggtgc tgctgtccac cttcctggga 3540
agcggtggct cccagtacat caaggccaac tccaagttca tcggcatcac cgagctgtaa 3600
3600
<210> 67
<211> 3615
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Codon-optimized nucleic acid sequence of SK-S-trimer-P2 antigen
for BEV expression system
<400> 67
atgaagtggg tcactttcat cagcctgctg ttcctgttct ccagcgctta ctctcagtgt 60
gttaatctta caaccagaac tcaattaccc cctgcataca ctaattcttt cacacgtggt 120
gtttattacc ctgacaaagt tttcagatcc tcagttttac attcaactca ggacttgttc 180
ttacctttct tttccaatgt tacttggttc catgctatac atgtctctgg gaccaatggt 240
actaagaggt ttgataaccc tgtcctacca tttaatgatg gtgtttattt tgcttccact 300
gagaagtcta acataataag aggctggatt tttggtacta ctttagattc gaagacccag 360
tccctactta ttgttaataa cgctactaat gttgttatta aagtctgtga atttcaattt 420
tgtaatgatc catttttggg tgtttattac cacaaaaaca acaaaagttg gatggaaagt 480
gagttcagag tttattctag tgcgaataat tgcacttttg aatatgtctc tcagcctttt 540
cttatggacc ttgaaggaaa acagggtaat ttcaaaaatc ttagggaatt tgtgtttaag 600
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ctccctcagg gtttttcggc tttagaacca ttggtagatt tgccaatagg tattaacatc 720
actaggtttc aaactttact tgctttacat agaagttatt tgactcctgg tgattcttct 780
tcaggttgga cagctggtgc tgcagcttat tatgtgggtt atcttcaacc taggactttt 840
ctattaaaat ataatgaaaa tggaaccatt acagatgctg tagactgtgc acttgaccct 900
ctctcagaaa caaagtgtac gttgaaatcc ttcactgtag aaaaaggaat ctatcaaact 960
tctaacttta gagtccaacc aacagaatct attgttagat ttcctaatat tacaaacttg 1020
tgcccttttg gtgaagtttt taacgccacc agatttgcat ctgtttatgc ttggaacagg 1080
aagagaatca gcaactgtgt tgctgattat tctgtcctat ataattccgc atcattttcc 1140
acttttaagt gttatggagt gtctcctact aaattaaatg atctctgctt tactaatgtc 1200
tatgcagatt catttgtaat tagaggtgat gaagtcagac aaatcgctcc agggcaaact 1260
ggaaagattg ctgattataa ttataaatta ccagatgatt ttacaggctg cgttatagct 1320
tggaattcta acaatcttga ttctaaggtt ggtggtaatt ataattacct gtatagattg 1380
tttaggaagt ctaatctcaa accttttgag agagatattt caactgaaat ctatcaggcc 1440
ggtagcacac cttgtaatgg tgttgaaggt tttaattgtt actttccttt acaatcatat 1500
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gaacttctac atgcaccagc aactgtttgt ggacctaaaa agtctactaa tttggttaaa 1620
aacaaatgtg tcaatttcaa cttcaatggt ttaacaggca caggtgttct tactgagtct 1680
aacaaaaagt ttctgccttt ccaacaattt ggcagagaca ttgctgacac tactgatgct 1740
gtccgtgatc cacagacact tgagattctt gacattacac catgttcttt tggtggtgtc 1800
agtgttataa caccaggaac aaatacttct aaccaggttg ctgttcttta tcaggatgtt 1860
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gtcaacaact catatgagtg tgacataccc attggtgcag gtatatgcgc tagttatcag 2040
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actatgtcac ttggtgcaga aaattcagtt gcttactcta ataactctat tgccataccc 2160
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atcaccgagt tgtaa 3615
Claims (30)
- 확장된 사스-코로나바이러스-2의 스파이크 단백질 (spike protein)의 리셉터 결합 도메인(RBD, receptor-binding domain)을 형성하는 폴리펩타이드를 포함하는, 사스-코로나바이러스-2 감염증 예방 또는 치료용 재조합 단백질.
- 제1항에 있어서, 상기 재조합 단백질은 확장된 리셉터 결합 도메인의 N 말단 또는 C 말단에 선택적으로 Tetanus 독소의 P2 도메인을 형성하는 폴리펩타이드가 연결되는 것을 특징으로 하는, 재조합 단백질.
- 제2항에 있어서, 상기 확장된 리셉터 결합 도메인을 형성하는 폴리펩타이드와 Tetanus 독소의 P2 도메인을 형성하는 폴리펩타이드 사이에 서열번호 4의 폴돈 도메인을 형성하는 폴리펩타이드가 연결되는 것을 특징으로 하는, 재조합 단백질.
- 제2항 또는 제3항에 있어서, 상기 연결은 적어도 적어도 3개 이상의 폴리펩타이드로 이루어진 링커로 연결되는 것을 특징으로 하는, 재조합 단백질.
- 제1항에 있어서, 상기 확장된 사스-코로나바이러스-2의 스파이크 단백질의 리셉터 결합 도메인을 형성하는 폴리펩타이드는
서열번호 33의 야생형 RBD 폴리펩타이드 서열을 포함하고, 상기 폴리펩타이드의 C 말단 및 N 말단 방향으로 적어도 5개 내지 25개의 임의의 폴리펩타이드 서열이 추가된 것을 특징으로 하는, 재조합 단백질. - 제1항 내지 제3항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 재조합 단백질은 서열번호 1, 6 내지 13, 및 65로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나인 재조합 단백질.
- 사스-코로나바이러스-2 감염증 예방 또는 치료용 재조합 단백질 항원생산을 위한 유전자 컨스트럭트로,
상기 컨스트럭트는
확장된 사스-코로나바이러스-2의 스파이크 단백질 (spike protein)의 리셉터 결합 도메인(RBD, receptor-binding domain)을 암호화하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 오픈 리딩 프레임을 포함하는
것을 특징으로 하는, 유전자 컨스트럭트. - 제7항에 있어서, 상기 유전자 컨스트럭트는
상기 오픈 리딩 프레임에
이종 유래의 시그널 펩타이드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드가
작동 가능하도록 순차적으로 연결된, 유전자 컨스트럭트. - 제7항에 있어서, 상기 유전자 컨스트럭트는
Tetanus 독소의 P2 도메인을 암호화하는 폴리뉴클레오티드가 연결되어,
이종 유래의 시그널 펩타이드, 상기 오픈 리딩 프레임, 및 Tetanus 독소의 P2 도메인을 각각 암호화하는 폴리뉴클레오티드가 연결된 것을 특징으로 하는, 유전자 컨스트럭트. - 제9항에 있어서, 상기 유전자 컨스트럭트는
확장된 리셉터 결합 도메인과 Tetanus 독소의 P2 도메인의 폴리뉴클레오티드 사이에
폴돈 도메인을 암호화하는 폴리뉴클레오티드가 더 연결된 것을 특징으로 하는, 유전자 컨스트럭트. - 제9항 또는 제10항에 있어서, 상기 연결은 적어도 3개 이상의 폴리펩타이드로 이루어진 링커를 암호화하는 폴리뉴클레오티드로 연결되는 것을 특징으로 하는, 유전자 컨스트럭트.
- 제7항 내지 제10항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 유전자 컨스트럭트는 서열번호 14 내지 25, 49 내지 64, 66, 및 67 로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 폴리뉴클레오티드로 이루어진, 유전자 컨스트럭트.
- 제7항 내지 제10항 중 어느 하나의 항에 따른 유전자 컨스트럭트를 포함하는 재조합 발현 벡터.
- 제13항의 재조합 발현 벡터를 갖는 숙주 세포.
- 제14항에 있어서, 상기 숙주 세포는 중국 햄스터 난소 (CHO) 세포이며, 상기 유전자 컨스트럭트는 서열번호 15, 17, 19, 21, 23, 25, 47 내지 60, 및 66으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상인 숙주 세포.
- 제7항 내지 제10항 중 어느 하나의 항에 따른 유전자 컨스트럭트를 포함하는 베큘로바이러스 (baculovirus) 재조합 벡터.
- 제16항에 있어서, 상기 유전자 컨스트럭트는 서열번호 14, 16, 18, 20, 22, 24, 61 내지 64, 및 67로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 유전자 컨스트럭트를 포함하는 베큘로바이러스 (baculovirus) 재조합 벡터.
- 제16항에 따른 베큘로바이러스 재조합 벡터를 대장균에 형질전환하여 얻어진 재조합 백미드 (Bacmid).
- 제18항에 따른 재조합 백미드를 포함하는 숙주세포.
- 제19항에 있어서, 상기 숙주세포는 Sf21 또는 Sf9을 포함하는 곤충세포인 것을 특징으로 하는, 숙주세포.
- 제13항 또는 제19항의 숙주 세포를 배양하고 목적하는 생성물을 단리함을 포함하는, 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 따른 항원 단백질의 제조 방법.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 하나의 항에 따른 재조합 단백질 항원 및 약학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제를 포함하는, 사스-코로나바이러스-2 감염증 예방 또는 치료용 백신 조성물.
- 제22항에 있어서, 상기 조성물은
서열번호 26의 사스-코로나바이러스-2의 뉴클레오캡시드 (Nucleocapsid, N) 단백질, 매트릭스(Matrix, M) 단백질, 및 외피(Small envelope, E) 단백질로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 사스-코로나바이러스-2 유래 단백질을 이루는 폴리펩타이드; 면역학적 애쥬반트; 또는 이들의 혼합물을 더 포함하는, 사스-코로나바이러스-2 감염증 예방 또는 치료용 백신 조성물. - 제22항에 있어서, 상기 조성물은 i) 재조합 단백질을 이루는 폴리펩타이드 및 ii) N 단백질을 이루는 폴리펩타이드 또는 이의 단편, 또는 이의 유사체를를 포함하고,
이들은 재조합 단백질: N 단백질을 이루는 폴리펩타이드의 혼합 비율이 1: 1 ~500의 중량비로 포함되는 것을 특징으로 하는, 사스-코로나바이러스-2 감염증 예방 또는 치료용 백신 조성물. - 제23항에 있어서, 상기 면역학적 애쥬반트는 알루미늄 하이드록사이드, CpG 올리고데옥시뉴클레오티드 또는 이들의 혼합물을 포함하는, 사스-코로나바이러스-2 감염증 예방 또는 치료용 백신 조성물.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 하나의 항에 따른 재조합 단백질 항원;
또는 서열번호 1, 6 내지 13, 44 내지 48 및 서열번호 65로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 재조합 단백질 항원을 동물에 투여하는 것을 포함하는, 동물에서의 면역반응을 평가하는 방법. - 제26항에 있어서, 상기 방법은 동물의 혈청으로부터 IgG 항체가 (antibody titer) 또는 중화항체가를 측정하여 면역 반응을 평가하는 것인, 방법.
- 서열번호 1, 서열번호 6 내지 13, 및 서열번호 44 내지 48 및 서열번호 65로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 재조합 단백질을 포함하는 조성물을 동물에 투여하여,
서열번호 37의 RBD 펩타이드 또는 서열번호 34의 S 단백질 투여하는 것과 비교하여 항체에 대한 특이성을 증가시키는 방법. - 제28항에 있어서, 상기 조성물은 서열번호 26의 N 단백질, 및 알루미늄 하이드록사이드, CpG 올리고폴리뉴클레오티드 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 면역학적 애쥬반트를 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 서열번호 37의 RBD 펩타이드 또는 서열번호 34의 S 단백질 투여하는 것과 비교하여 항체에 대한 특이성을 증가시키는 방법.
- 제28항에 있어서, 상기 동물은 인간을 제외하는 것을 특징으로 하는 방법.
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Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2023182868A1 (ko) * | 2022-03-24 | 2023-09-28 | 가톨릭대학교 산학협력단 | 병인 비멘틴 발현유도와 감염병 동반된 자가면역 섬유화 질환 환자 약물 스크리닝 플랫폼 모델 |
Families Citing this family (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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BR112022019781A2 (pt) | 2020-04-22 | 2022-12-13 | BioNTech SE | Vacina para o coronavírus |
US20240042008A1 (en) * | 2020-10-28 | 2024-02-08 | Sk Bioscience Co., Ltd. | Vaccine composition for prevention or treatment of sars-coronavirus-2 infection |
US11564983B1 (en) | 2021-08-20 | 2023-01-31 | Betagen Scientific Limited | Efficient expression system of SARS-CoV-2 receptor binding domain (RBD), methods for purification and use thereof |
CN113755421B (zh) * | 2021-09-28 | 2024-04-12 | 梦芊细胞因子有限公司 | 一种用于covid-19的口服性疫苗及抗体加强剂 |
CA3238197A1 (en) * | 2021-11-12 | 2023-05-19 | Longhorn Vaccines And Diagnostics, Llc | Immunogenic compositions and vaccines in the treatment and prevention of infections |
WO2023166054A1 (en) * | 2022-03-02 | 2023-09-07 | ISR Immune System Regulation Holding AB (publ) | Vaccine composition comprising an antigen and a tlr3 agonist |
KR20230153258A (ko) | 2022-04-27 | 2023-11-06 | 포항공과대학교 산학협력단 | 핫스팟 유래 펩타이드-핵산 하이브리드 분자를 포함하는, 변이 코로나 바이러스에 의한 감염증 치료용 조성물 |
CN115073565B (zh) * | 2022-06-13 | 2023-02-21 | 华素生物科技(北京)有限公司 | 重组新型冠状病毒s蛋白三聚体及其制备方法与应用 |
US11878055B1 (en) | 2022-06-26 | 2024-01-23 | BioNTech SE | Coronavirus vaccine |
WO2024018036A1 (en) * | 2022-07-20 | 2024-01-25 | Bioinnova S.R.L.S. | Microalgae expressing biologically active products |
CN117582492A (zh) * | 2022-08-12 | 2024-02-23 | 上海市公共卫生临床中心 | 重组多价疫苗 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20180334480A1 (en) * | 2015-09-17 | 2018-11-22 | Ramot At Tel-Aviv University Ltd. | Coronaviruses epitope-based vaccines |
-
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2022
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Patent Citations (1)
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---|---|---|---|---|
US20180334480A1 (en) * | 2015-09-17 | 2018-11-22 | Ramot At Tel-Aviv University Ltd. | Coronaviruses epitope-based vaccines |
Non-Patent Citations (5)
Title |
---|
1. Zhou Z, Post P, Chubet R, et al. A recombinant baculovirus-expressed S glycoprotein vaccine elicits high titers of SARS-associated coronavirus (SARS-CoV) neutralizing antibodies in mice. Vaccine. 2006;24(17):3624-3631. |
2. Dai L, Zheng T, Xu K, et al. A Universal Design of Betacoronavirus Vaccines against COVID-19, MERS, and SARS. Cell. 2020;182(3):722-733.e11. |
J. Yang 등, Nature, 586:572-577 (2020.07.29.)* * |
W. Tai 등, Cellular & Molecular Immunology, 17:613-620 (2020.03.19.)* * |
X. Wen 등, Vaccine, 32:4420-4427 (2014)* * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2023182868A1 (ko) * | 2022-03-24 | 2023-09-28 | 가톨릭대학교 산학협력단 | 병인 비멘틴 발현유도와 감염병 동반된 자가면역 섬유화 질환 환자 약물 스크리닝 플랫폼 모델 |
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