KR20210107073A - 약물 접합체 - Google Patents

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KR20210107073A
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KR
South Korea
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ligand
therapeutic molecule
saponin
effector moiety
molecule
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KR1020217023075A
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English (en)
Inventor
루벤 포스텔
헨드릭 푸치스
Original Assignee
사프렘 테크놀로지스 비.브이.
샤리떼 우니베지테츠메디친 베를린
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Abstract

본 발명은 공유 연결된 사포닌을 포함하는 모이어티와 ADC의 공동-투여에 의해 강화되는 항체-약물 접합체(ADC)에 관한 것이다. 본 발명은 또한 공유 연결된 사포닌을 포함하는 모이어티와 AOC의 공동-투여에 의해 강화되는 항체-올리고뉴클레오티드 접합체(AOC)에 관한 것이다. 본 발명은 또한 공유 링커를 통해 사포닌과 접합된 ADC 및 AOC에 관한 것이다. 본 발명은 나아가 공유 링키지를 통해 사포닌과 접합된 예를 들어, BNA와 같은 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 독소와 같은 이펙터 모이어티에 관한 것이다. 본 발명은 또한 항체와 같은 표적화 모이어티와 공유적으로 접합된 BNA에 관한 것이다. 본 발명은 또한 항체와 같은 세포-표적화 모이어티 및 이에 공유 결합된 BNA와 같은 안티센스 올리고뉴클레오티드의 접합체를 포함하는 제1 약학적 조성물 및 유리 사포닌 또는 사포닌이 공유 연결된 항체와 같은 세포-표적화 모이어티의 접합체를 포함하는 제2 약학적 조성물을 포함하는 치료 조합에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 약물로서 사용하기 위한 이들 접합체 또는 치료 조성물 또는 치료 조합 중 어느 것에 관한 것이다. 본 발명은 또한 암의 치료 또는 예방 방법에 사용하기 위한 이들 접합체 또는 치료 조성물 또는 치료 조합 중 어느 것에 관한 것이다. 마지막으로, 본 발명은 본 발명의 임의의 이러한 접합체를 제조하는 방법에 관한 것이다.
[도면]
[도 1-1]
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[도 2-1]
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Description

약물 접합체
본 발명은 공유 결합된 사포닌을 포함하는 모이어티와 ADC의 공동-투여에 의해 강화되는 항체-약물 접합체 (ADC, antibody-drug conjugates)에 관한 것이다. 본 발명은 또한 공유 연결된 사포닌을 포함하는 모이어티와 AOC의 공동-투여에 의해 강화되는 항체-올리고뉴클레오티드 접합체 (antibodyoligonucleotide conjugates, AOC)에 관한 것이다. 본 발명은 또한 공유 링커(covalent linker)를 통해 사포닌과 접합된 ADC 및 AOC에 관한 것이다. 본 발명은 또한 공유 결합을 통해 사포닌과 접합된 예를 들어 BNA와 같은 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 독소(toxin)와 같은 이펙터 모이어티(effector moiety)에 관한 것이다. 본 발명은 또한 항체와 같은 세포-표적화 모이어티와 이에 공유 결합된 BNA와 같은 안티센스 올리고뉴클레오티드를 포함하는 제1 약학적 조성물을 포함하고, 유리 사포닌(free saponin) 또는 사포닌이 공유 결합된 항체와 같은 세포-표적화 모이어티의 접합체를 포함하는 제2 약학적 조성물을 포함하는 치료 조합(therapeutic combination)에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 약제로 사용하기 위한 임의의 이들 접합체 또는 치료 조성물 또는 치료 조합에 관한 것이다. 본 발명은 또한 암의 치료 또는 예방 방법에 사용하기 위한 임의의 이들 접합체 또는 치료 조성물 또는 치료 조합에 관한 것이다. 마지막으로, 본 발명은 본 발명의 이들 접합체 중 임의의 것을 제조하는 방법에 관한 것이다.
치료학적 생물학적 활성을 갖는 분자는 필요한 인간 환자에서 암과 같은 질환의 치료를 위한 효과적인 치료 약물로서 적용하기에 이론상 적합한 많은 경우가 있다. 전형적인 예는 소분자 생물학적 활성 모이어티이다. 그러나 현재 클리닉에서 사용되는 모든 잠재적 약물-유사(drug-like) 분자 및 치료제는, 모두는 아니라도 많은 것이 과다한 단점과 결함 중 적어도 하나의 근심이 있다. 인체에 투여 될 때, 치료 활성 분자는 치료될 질병 또는 건강 문제의 근본적인 견지에 대한 생물학적 활성에 추가하여 표적을 벗어난(off-target) 효과를 발휘할 수 있다. 이러한 표적을 벗어나 효과는 바람직하지 않으며 투여된 분자의 건강- 또는 심지어 생명을 위협하는 부작용을 유발할 위험이 있다. 많은 약물 유사 화합물 및 치료 모이어티가 3 상 임상 시험 또는 심지어 4 상 임상 시험 (시판 후 후속 조치)에 실패하는 것은 이러한 부작용의 발생이다. 따라서, 약물 분자의 치료 효과는 예를 들어, 무엇보다도 (1) 질병을 유발하는 생물학적 요인 또는 생물학적 과정에 대해 고도로 특이 적이어야 하고/하거나 (2) 충분히 안전하고/하거나, (3) 충분히 효능이 있고/있거나, (4) 비-병든 세포에 대한 표적을 벗어난 활성(off-target activity)이 거의 또는 전혀없이 병든 세포에 충분히 지시되어야(directed) 하고/하거나, (5) 충분히 시기 적절한 작용 방식 (예, 투여된 약물 분자는 특정 시간 프레임 내에 인간 환자의 표적 부위에 도달해야 하며 특정 시간 프레임 동안 표적 부위에 남아 있어야 한다)이어야 하며/하거나 (6) 환자의 신체에서 충분히 오래 지속되는 치료 활성을 갖는, 소분자 치료제와 같은 약물 분자를 제공하려는 강한 욕구가 있다. 안타깝게도, 지금까지 위에서 설명한 많은 또는 심지어 모든 유익한 특성을 갖는 '이상적인' 치료제는 이미 오래 지속되고 집중적인 연구와 직면한 어려움과 결함을 개별적으로 해결된 여러 영역에서 이루어진 인상적인 진전에도 불구하고 환자에게 제공되지 않는다.
화학 요법은 암 치료를 위한 가장 중요한 치료 선택 사항 중 하나이다. 그러나, 건강한 조직에서 세포를 분할하는 것보다 암세포에 대한 특이성이 없기 때문에, 종종 낮은 치료 윈도우(therapeutic window)를 나타낸다. 모노클로날 항체의 발명은 정상 세포를 아끼면서(sparing), 암세포에 세포 독성제를 표적 전달하기 위한 메커니즘으로서 이들의 특이적 결합 특성의 이용 가능성을 제공하였다. 이는 항체-약물 접합체 (ADC)를 생성하기 위해 세포 독성 이펙터 (페이로드(payload) 또는 워헤드(warheads)라고도 함)를 항체에 화학적으로 접합(conjugation)함으로써 달성 할 수 있다. 전형적으로, 접합되지 않은 형태에서 제한된 치료 지수 (독성 용량 대 유효 용량을 비교하는 비율)를 가진 엠탄신(DM1)과 같은 매우 강력한 페이로드가 사용된다. 카드시클라(Kadcycla)로도 알려진, 트라스투주맙(trastuzumab)에 대한 DM1의 접합 (아도-트라스투주맙 엠탄신(ado-trastuzumab emtansine))은 원숭이에서 DM1의 허용 용량을 적어도 2 배 향상시킨다. 지난 수십 년 동안, 치료 ADC를 개발하기 위해 엄청난 노력과 투자가 이루어졌다. 그러나, 유망한 전임상 데이터에도 불구하고, ADC를 임상에 도입하는 것은 여전히 어려운 일이다. 임상용으로 승인된 최초의 ADC는 2000년 재발성 급성 골수성 백혈병(AML)에 대한 젬투주맙 오조가미신(gemtuzumab ozogamicin)(마일로타그(Mylotarg), CD33 표적화, Pfizer/Wyeth)였다. 그러나, 마일로타그는 안전성 프로파일을 포함한 많은 우려로 인해 연방 의약품국 (FDA)의 요청으로 시장에서 철수되었다. 마일로타그로 치료받은 환자는 기존 화학 요법으로 치료받은 환자보다 사망하는 경우가 더 많았다. 마일로타그는 2017 년에 더 낮은 권장 용량, 화학 요법과의 조합 또는 자체적으로 다른 스케쥴, 및 새로운 환자 모집단으로 다시 시장에 출시되었다. 현재까지, 5가지의 ADC 만 임상용으로 승인되었으며, 약 55 가지의 ADC에 대한 임상개발이 중단되었다. 그러나, 관심은 여전히 높으며 현재 약 600개의 임상 시험에서 약 80 가지의 ADC가 여전히 임상개발 중이다.
일반적으로 환자가 견딜 수 없는 독성 페이로드를 사용할 가능성이 있음에도 불구하고, 낮은 치료 지수 (독성 용량 대 유효 용량을 비교하는 비율)는 임상개발에서 많은 ADC의 중단을 설명하는 주요 문제이며, 이는 정상 세포에 대한 표적-외 독성, 세포 독성제에 대한 저항성 발달 및 순환에서 약물의 조기 방출과 같은 여러 메커니즘에 기인할 수 있다. FDA의 ADC에 대한 체계적인 검토에 따르면, 대부분의 ADC의 독성 프로파일은 사용된 페이로드에 따라 분류될 수 있지만, 사용된 항체에는 따라 분류되지 않았으며, 이는 독성이 대부분 페이로드의 조기 방출에 의해 결정된다는 것을 제시한다. 중단된 약 55개의 ADC 중 적어도 23개는 저조한 치료 지수로 인한 것으로 추정된다. 예를 들어, 트라스투주맙 테시린 접합체 (ADCT-502, HER-2 표적화, ADC 치료제)의 개발은 아마도 HER2를 상당한 수준으로 발현하는 폐 조직에서 표적 내(on-target), 조직 외(off-tissue) 효과에 기인한, 좁은 치료 지수로 인하여 최근에 중단되었다. 또한, 3 상 시험에서 여러 ADC가 1 차 평가 변수의 누락으로 인하여 중단되었다. 예를 들어, 새로 진단된 교모세포종 환자에서 테스트된 데파투시주맙 마포도틴 접합체 (ABT-414, EGFR 표적화, AbbVie), 및 백금 내성 난소 암 환자에서 테스트된 미르베툭시맙 소라브탄신 접합체 (IMGN853, 엽산 수용체 알파(FRα) 표적화, ImmunoGen)에 대한 3 상 시험은 최근 중단되어 생존 혜택을 보이지 않는다. 일부 ADC의 임상적으로 사용되는 용량은 완전한 항암 활성에 충분하지 않을 수 있다는 점에 유의하는 것이 중요하다. 예를 들어, 아도-트라스투주맙 엠탄신은 인간에게서 3.6 mg/kg의 MTD이다. 유방암의 전임상 모델에서, 아도-트라스투주맙 엠탄신은 3mg/kg 이상의 용량 수준에서 종양 퇴화를 유도했지만, 15mg/kg에서 더 강력한 효능이 관찰되었다. 이는 임상적으로 투여된 용량에서, 아도-트라스투주맙 엠탄신이 이의 최대 잠재적 항종양 효과를 발휘하지 못할 수 있음을 제시한다.
ADC는 주로 항체, 페이로드와 같은 세포 독성 모이어티 및 링커로 구성된다. ADC의 각 구성 요소를 대상으로 기존 문제를 극복하기 위해 새로운 ADC의 디자인 및 개발에서 몇 가지 새로운 전략이 제안되고 수행되었다. 예를 들어, 항체 성분에 대한 적합한 항원 표적의 확인 및 검증에 의해, 종양에서 높은 발현 수준을 갖고 정상 조직에서는 발현이 거의 또는 전혀 없는 항원, 순환하는 ADC에 접근할 수 있도록 세포 표면에 존재하는 항원, 및 결합 후 ADC를 세포 내로 내재화(internalizing)할 수 있는 항원을 선택함으로써; 및 활성의 대체 메커니즘; 및 ADC의 용해도 및 약물-대-항체 비율 (DAR)의 향상 및 화학 요법제를 세포 밖으로 운반할 수 있는 단백질에 의해 유도된 내성을 극복하는 링커의 디자인 및 최적화; 더 많은 페이로드를 포함하여 DAR 비율을 향상시키고 항체를 선택 및 최적화하여 항체 균질성과개발 가능성을 개선한다. ADC의 기술개발 외에도, 새로운 임상 및 변형 전략(translational strategy)이 전개되어 치료 지수, 예컨대 분별 투여를 통한 투여 일정 변경을 극대화하고; 생물 분포 연구를 수행하고; 환자 선택을 최적화하고, 반응 신호를 조기에 포착하고, 반응의 기간과 깊이를 모니터링하고, 조합 연구에 정보를 제공하는 바이오마커를 포함한다.
임상 가능성이 있는 ADC의 예는 림프성 악성 종양 및 다발성 골수종에 대한 치료 선택 사항으로 평가되는, 브렌투시맙 베도틴, 이노투주맙 오조가미신, 목세 투모맙 파수도톡스 및 폴라투주맙 베도틴과 같은 ADC이다. (악성) B 세포에서 CD79b에 결합하는 폴라투주맙 베도틴 및 CD22에 결합하는 피나투주맙 베도틴은, 각각의 ADC가 CD20에 결합하는 모노클로날 항체인 공동 투여된 리툭시맙과 조합되고 페이로드가 제공되지 않는 임상 시험에서 테스트된다[B. Yu and D. Liu, Antibody-drug conjugates in clinical trials for lymphoid malignancies and multiple myeloma; Journal of Hematology & Oncology (2019) 12:94]. 이러한 예와 같은 모노클로날 항체의 조합은 앞서 언급한 ADC의 원하는 특성을 많이 또는 심지어 모두 조합하는 '마법의 총알'에 도달하려는 추가 접근법이며 시도이다.
한편 지난 수십 년 동안, 핵산 기반 치료제가 개발 중이다. 치료 핵산은 유전자 치료와 같은 접근법을 위해, 데옥시리보 핵산 (DNA) 또는 리보 핵산 (RNA), 안티센스 올리고뉴클레오티드 (ASO, AON) 및 짧은 간섭 RNA (siRNA), MicroRNA, 그리고 DNA 및 RNA 앱타머, RNA 간섭(RNAi)을 기반으로 할 수 있다. 이들 중 다수는 DNA 또는 RNA 발현을 억제함으로써 질병 관련 비정상 단백질의 발현을 방지하는 작용의 동일한 기본적인 기반을 공유한다. 가장 많은 수의 임상 시험이 유전자 치료 분야에서 수행되고 있으며, 전 세계적으로 거의 2600 건의 진행 중이거나 완료된 임상 시험이 진행되고 있지만 약 4% 만이 3 상 진입에 들어간다. 그 후, ASO를 사용한 임상 시험이 이어진다. ADC와 유사하게, 많은 수의 기술이 연구되고 있음에도 불구하고, 치료용 핵산은 임상개발 과정에서 두 가지 주요 문제를 공유한다; 세포로의 전달 및 표적-외(off-target) 영향. 예를 들어, ASO, 예컨대 펩티드 핵산 (PNA), 포스포라미데이트 모르폴리노 올리고머 (PMO), 잠금 핵산 (LNA, locked nucleic acid) 및 브리지 핵산 (BNA, bridged nucleic acid)은 특이적으로 표적 유전자, 특히 소분자 억제제 또는 중화 항체로 표적화하기 어려운 유전자를 억제하는 매력적인 전략으로 조사되고 있다. 현재, 헌팅턴 질환, 파킨슨 질환, 알츠하이머 질환, 근위축성 측삭 경화증과 같은 많은 신경 퇴화성 질환과 여러 암 단계에서 다양한 ASO의 효능이 연구되고 있다. 잠재적 치료제로 ASO를 적용하려면 표적 세포 및 조직의 세포질 및/또는 핵으로의 이들의 전달을 위한 안전하고 효과적인 방법이 필요하다. ASO의 임상적 관련성이 입증되었지만, 시험관 내 및 생체 내에서 비효율적인 세포 흡수는 ASO의 효능을 제한하고 치료용개발의 장벽이 되었다. 세포 흡수는 용량의 2% 미만일 수 있으므로 효과적이고 지속적인 결과를 위해서는 활성 부위에서 ASO 농도가 너무 낮다. 이는 결과적으로 오프 타겟 외 영향을 유도하는 투여 용량의 증가를 필요로 한다. 가장 일반적인 부작용은 보체 캐스케이드의 활성화, 응고 캐스케이드(clotting cascade)의 억제 및 면역 시스템의 톨-유사(toll-like) 수용체 매개 자극이다.
화학 요법제는 가장 일반적으로 소분자이지만, 그 효능은 심각한 타겟 외 사이드 독성뿐만 아니라 저조한 용해도, 빠른 제거 및 제한된 종양 노출로 인해 방해를 받는다. 폴리머-약물 접합체 (PDC)와 같은 스캐폴드-소분자 약물 접합체는 담체 스캐폴드(예, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG))에 결합된 하나 이상의 소분자 약물 분자를 포함하는 약리학적 활성을 갖는 거대 분자 구성체이다.
이러한 접합 원리는 많은 관심을 끌었으며 수십 년 동안 조사 중에 있다. 전임상 또는 임상개발중인 대부분의 저분자 약물 접합체는 종양학적 적응증(oncological indication)을 위한 것이다. 그러나, 2014년에, 비종양학적 적응성인 만성 통증 환자의 오피오이드 유발 변비에 대해 암과 관련이 없는 최신 약물(모반틱(Movantik), 오피오이드 길항제 날록손의 PEG 올리고머 접합체, AstraZeneca) 만 승인되었다.
인간 대상체의 치료에 대한 약물-스캐폴드 접합체의 변형 적용은 지금까지 임상적 성공을 거의 제공하지 못했다. 예를 들어, PK1(N-(2-하이드록시프로필)메타크릴아미드(HPMA) 코폴리머 독소루비신; Pharmacia, Pfizer에 의해개발됨)은 뮤린 모델(murine model)에서 고형 종양과 백혈병 모두에서 뛰어난 항암 활성을 보였으며, 종양학적 징후에 대한 임상 조사 중이었다. 비특이적 독성의 현저한 감소와 인간에서의 약동학적(pharmacokinetics) 개선을 입증 했음에도 불구하고, 항암 효능의 개선은 환자에서 미미한 것으로 판명되었고, 그 결과 PK1의 추가개발이 중단되었다.
스캐폴드-소분자 약물 접합체의 실패는 적어도 부분적으로 종양 부위에서의 이의 저조한 축적에 기인한다. 예를 들어, 뮤린 모델에서 PK1은 건강한 조직 (간, 신장, 폐, 비장 및 심장)에서 보다 종양에 45-250배 더 높은 축적을 보였지만, 종양에서의 축적은 임상에서 일부 환자의 하위 그룹에서만 관찰되었다.
상기한 문제에 대한 잠재적인 해결 방안은 리포좀과 같은 약물 전달을 위한 나노 입자 시스템의 적용이다. 리포좀은 인지질이 물에 분산될 때 자발적으로 형성되는 하나 이상의 인지질 이중층으로 구성된 구형 소포이다. 인지질의 양친매성 특성은 자체 조립, 에멀션화 및 습윤 특징의 특성을 제공하며, 이러한 특성은 신약 및 신약 전달 시스템의 설계에 사용될 수 있다. 리포솜 전달 시스템에서 캡슐화된 약물은 약물의 직접 투여에 비해, 약동학 및 약력학, 조직 표적화 특성, 감소된 독성 및 향상된 약물 활성에 대한 개선 및 제어와 같은 몇 가지 이점을 전달할 수 있다. 이러한 성공의 예는 임상용으로 승인된, 소분자 화학 요법제 독소루비신 (독실: 독소루비신의 페길화 리포좀-캡슐화된 형태; 마이오셋: 비-폐길화 리포좀 독소루비신이다.
따라서, 원하는 경우에, 비-전신적 사용(non-systemic use)에 적용할 수 있는 항종양 요법과 같은 약물 요법을 허용하는 해결 방안이 여전히 발견되어야 하며, 여기서 약물은 예를 들어 허용 가능한 안전성 프로파일, 적은 표적-외 활성, 충분한 효능, 환자의 신체로부터 충분히 낮은 제거율(clearance rate) 등을 갖는다.
본 발명에 의한 일 구현예에서, 첫번째 목표는개선된 생물학적 활성 화합물 또는 이러한개선된 생물학적 활성 화합물을 포함하는 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명에 의일 구현예의 여러 목적 중 하나는 소분자 치료 활성 화합물을 이를 필요로 하는 인간 환자에게 투여할 때 발생하는, 비특이성 문제에 대한 해결 방안을 제공하는 것이다. 본 발명에 의일 구현예의 여러 목적 중 하나는 질환을 유발하는 생물학적 요인 또는 생물학적 과정에 대해 비-최적 특이성(non-optimal specificity)을 갖는 약물의 문제에 대한 해결 방안을 제공하는 것이다. 본 발명에 의일 구현예의 여러 목적 중 하나는, 이를 필요로 하는 인간 환자에게 투여될 때 현재 약물의 불충분한 안전성 특징 문제에 대한 해결 방안을 제공하는 것이다. 본 발명에 의일 구현예의 여러 목적 중 하나는, 이를 필요로 하는 인간 환자에게 투여될 때, 현재 약물이 원하는 것보다 덜 효과적이라는 문제에 대한 해결 방안을 제공하는 것이다. 본 발명에 의일 구현예의 여러 목적 중 하나는, 이를 필요로 하는 인간 환자에게 투여될 때, 비-병든 세포에 대한 표적-외 활성이 거의 또는 전혀 없이 현재 약물이 질환에 걸린 세포에 충분히 지시되지 않는 문제에 대한 해결 방안을 제공하는 것이다. 본 발명에 의일 구현예의 여러 목적 중 하나는, 이를 필요로 하는 인간 환자에게 투여될 때, 현재의 약물이 충분히 시기 적절한 작용 방식을 갖지 않는다는 문제에 대한 해결 방안(예, 투여된 약물 분자는 특정 시간 프레임 내에 인간 환자의 표적 부위에 도달해야 하며, 특정 시간 프레임 동안 표적 부위에 남아 있어야 한다)을 제공하는 것이다. 본 발명에 의일 구현예의 여러 목적 중 하나는, 이를 필요로 하는 인간 환자에게 투여될 때, 현재 약물이 환자의 신체에서 충분히 오래 지속되는 치료 활성을 갖지 않는다는 문제에 대한 해결 방안을 제공하는 것이다.
본 발명의 구현예의 상기 목적 중 적어도 하나는 바람직하게는 세포 표적화 모이어티 및 적어도 하나의 사포닌을 포함하는 본 발명의 접합체를 제공함으로써 달성되며, 접합체는 또한 본 발명에 따른, 약제로 사용하기에 적합하거나 또는 본 발명에 따른 약학적 조합에의 포함(implication)에 적합하고, ADC 또는 본 발명의 항체-올리고 뉴클레오티드 접합체 (AOC)의 제조에서 반제품으로서 사용하기에 적합하다. 치료 조합은 예를 들어 공유 결합된 사포닌을 포함하는 본 발명의 접합체를 포함하고, 예를 들어 이펙터(effector) 모이어티 또는 페이로드로도 지칭되는 이펙터 분자를 포함하는 제2 접합체를 포함하며, 여기서 접합체는 표적 세포의 상이한 세포 표면 분자에서 노출된 상이한 에피토프에 대한 상이한 결합 부위를 포함하며, 상이한 세포 표면 분자는 동일한 표적 세포에 의해 발현되고 동일한 표적 세포의 표면에 노출되거나, 접합체는 상기 표적 세포의 동일한 세포 표면 분자에서 동일한 에피토프에 대해 동일한 결합 부위를 포함한다.
본 발명은 특정일 구현예에 대해 설명될 것이지만, 본 발명은 이에 제한되지 않고 청구 범위에 의해서만 제한된다. 본원에 기술된 발명의 구현예는 달리 명시되지 않는 한, 조합 및 협조하여 운용될 수 있다.
본 발명의 일 견지는 함께 공유 결합된, 항체 및 안티센스 올리고뉴클레오티드, 예컨대 안티센스 BNA를 포함하거나 이로 구성되는 접합체에 관한 것이다. 도 1-5에, 이러한 접합체의 유전자-침묵 활성이 도시된다(동물 종양 모델에서 생체 내 테스트). 실시예 섹션도 참조된다.
본 발명의 일 견지는 함께 공유 결합된, 항체 및 안티센스 올리고뉴클레오티드, 예컨대 안티센스 BNA를 포함하거나 이로 구성되는 접합체를 포함하는 제1 조성물, 및 본 발명의 유리 사포닌을 포함하는 제2 조성물의 조합에 관한 것이다 (표 A1, 및 스킴 I 참조). 도 1-7A 및 도 1-7C에, 이러한 접합체의 유전자 침묵 활성이 도시된다(인간 종양 세포를 사용한 시험관 내 세포 기반 바이오어세이). 실시예 섹션도 참조된다.
본 발명의 일 견지는 항체 및 안티센스 올리고뉴클레오티드, 예컨대 안티센스 BNA를 포함하거나 이로 구성되는 제1 접합체를 포함하는 제1 조성물, 및 동일한 항체 및 본 발명의 적어도 하나의 사포닌을 포함하거나 이로 구성되는 제1 접합체를 포함하는 제2 조성물을 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다. 도 1-5에, 이러한 접합체의 유전자-침묵 활성이 도시된다(동물 종양 모델에서 생체 내 테스트). 도 8-5에, 이러한 접합체의 유전자-침묵 활성이 도시된다(인간 종양 세포를 사용한 시험관 내 세포 기반 바이오어세이). 실시예 섹션도 참조된다.
본 발명의 일 견지는 항체 및 안티센스 올리고뉴클레오티드, 예컨대 안티센스 BNA를 포함하거나 이로 구성되는 제 4 접합체를 포함하는 제 4 조성물, 및 다른 항체 및 본 발명의 사포닌을 포함하거나 이로 구성되는 제1 접합체를 포함하는 제 5 조성물을 포함하거나 이로 구성되는 약학적 조합에 관한 것이다. 도 10-6A 및 ㄷ도 10-6C에 러한 접합체의 유전자-침묵 활성이 도시된다(인간 종양 세포를 사용한 시험관 내 세포 기반 바이오어세이). 실시예 섹션도 참조된다.
본 발명의 일 견지는 본 발명의 적어도 하나의 사포닌에 공유 결합된 안티센스 올리고뉴클레오티드, 예컨대 안티센스 BNA를 포함하거나 이로 구성되는 접합체에 관한 것이다. 도 1-3에, 이러한 접합체의 유전자 침묵 활성이 도시된다 (인간 종양 세포를 사용한 시험관 내 세포 기반 바이오어세이). 실시예 섹션도 참조된다.
본 발명의 일 견지는 폴리머 스캐폴드, 예컨대 G4-덴드론과 같은 덴드론에 공유 결합된, 안티센스 올리고뉴클레오티드, 예컨대 안티센스 BNA를 포함하거나 이로 구성되는 접합체에 관한 것이며, 여기서 폴리머 스캐폴드는 본 발명의 하나 이상의 사포닌 분자, 예컨대 4개의 사포닌 분자와 같은 공유 접합(covalently conjugated)된다. 도 1-3에, 이러한 접합체의 유전자 침묵 활성이 도시된다 (인간 종양 세포를 사용한 시험관 내 세포 기반 바이오어세이). 실시예 섹션도 참조된다.
본 발명의 일 견지는 적어도 하나의 안티센스 올리고뉴클레오티드 분자, 예컨대 안티센스 BNA에 공유 연결되고, 본 발명의 적어도 하나의 사폰닌 분자에 공유 연결(covalently linked)되고, 종양 마커 또는 종양 세포 수용체에 대한 특이성을 갖는 항체, 예컨대 모노클로날 항체를 포함하거나 이로 구성되는 집합체에 관한 것이다. 도 2-4에, 이러한 접합체의 유전자 침묵 활성이 도시된다 (동물 종양 모델에서 생체 내 테스트). 실시예 섹션도 참조된다.
본 발명의 일 견지는 3 작용성 링커, 예컨대 스킴 II의 링커를 경유하여 적어도 하나의 안티센스 올리고뉴클레오티드 분자, 예컨대 안티센스 BNA에 공유 연결되고, 동일한 3 작용성 링커를 경유하여 본 발명의 적어도 하나의 사폰닌 분자에 공유 연결되고, 종양 마커 또는 종양 세포 수용체에 대한 특이성을 갖는 항체, 예컨대 모노클로날 항체를 포함하거나 이로 구성되는 집합체에 관한 것이다. 도 1-1에, 이러한 접합체의 유전자 침묵 활성이 도시된다 (동물 종양 모델에서 생체 내 테스트). 실시예 섹션도 참조된다.
본 발명의 일 견지는 바람직하게는 적어도 하나의 링커, 바람직하게는 생리적으로 산성 조건하에서 절단될 수 있는, 적어도 하나의 절단 가능한 링커(cleavable linker)를 경유하여 본 발명의 적어도 하나의 사포닌 분자에 공유 연결되고, 종양 마커 또는 종양 세포 수용체에 대한 특이성을 갖는 항체, 예컨대 모노클로날 항체를 포함하거나 이로 구성되는 집합체를 포함하는 제 8 조성물로 구성되거나 이를 포함하며, 추가로 안티센스 올리고뉴클레오티드, 예컨대 안티센스 BNA 분자를 포함하는 제 9 조성물을 포함하는 치료 조합에 관한 것이다. 도 6-2에, 이러한 접합체의 유전자 침묵 활성이 도시된다 (동물 종양 모델에서 생체 내 테스트). 도 5-2A 및 도 5-2C에, 이러한 접합체의 유전자 침묵 활성이 도시된다 (인간 종양 세포를 사용한 시험관 내 세포 기반 바이오어세이). 실시예 섹션도 참조된다.
본 발명의 일 견지는 약제로서 사용하기 위한 임의의 상기한 접합체 또는 조성물 또는 치료 조합에 관한 것이다.
본 발명의 일 견지는 암의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 임의의 상기한 접합체 또는 조성물 또는 치료 조합에 관한 것이다.
본 발명의 일 견지는 화합물 I의 화학 구조를 갖는 치료 분자에 관한 것이다:
A1m ((-L9w) ((- L1q - B1n)u ((- L2r - L3s) (- L4v - C)p)t))x
(화합물 I),
여기서,
B1이 제1 이펙터 모이어티이면, A1은 제1 리간드이거나, B1이 제1 리간드이면, A1은 제1 이펙터 모이어티이고;
C는 사포닌이고;
A1이 제1 리간드이고 B1이 제1 이펙터 모이어티이면, m = 0 또는 1이고;
A1이 제1 이펙터 모이어티이고 B1이 제1 리간드이면, m = 0-32이고;
B1이 제1 리간드이고 A1이 제1 이펙터 모이어티이거나, A1이 제1 리간드이고 B1이 제1 이펙터 모이어티이면, n = 0 또는 1이고;
p = 1-128 중 어느 하나이고;
L1은 2개의 화학기를 공유 커플링(covalently coupling)하기 위한 적어도 하나의 링커이고;
L2는 2개의 화학기를 공유 커플링하기 위한 적어도 하나의 링커이고;
L3은 2개의 화학기를 공유 커플링하기 위한 적어도 하나의 올리고머 또는 폴리머 스캐폴드이고;
L4는 2개의 화학기를 공유 커플링하기 위한 적어도 하나의 링커이고;
L9는 3개의 화학기를 공유 커플링하기 위한 3 작용성 링커이고;
q = 0 또는 1이고;
r = 0 또는 1이고;
s = 0 또는 1이고;
s = 0이면, t = 0, 1 또는 2이고, s = 1이면, t = 0-16 중 어느 하나이고;
A1이 제1 리간드이고 B1이 제1 이펙터 모이어티이면, u = 0-32 중 어느 하나이거나, A1이 제1 이펙터 모이어티이고 B1이 제1 리간드이면, u = 1이고;
v = 0 또는 1이고;
w = 1 또는 0; 그리고
x = 1-16이다.
일 구현예는 본 발명에 따른 치료 분자 및 화합물 II의 화학 구조를 갖는 제2 치료 분자를 포함하는 치료 조합에 관한 것이다:
A2a ((-L10j) ((- L5d - B2b)h ((- L6e - L7f) (- L8i - C)c)g))k
(화합물 II),
여기서,
B2가 제2 이펙터 모이어티이면, A2는 제2 리간드이거나, B2가 제2 리간드이면, A2는 제2 이펙터 모이어티이고;
C는 사포닌이고;
A2가 제2 리간드이고 B2가 제2 이펙터 모이어티이면, a = 0 또는 1이거나, A2가 제2 이펙터 모이어티이고 B2가 제2 리간드이면, a = 0-32이고;
B2가 제2 리간드이고 A2가 제2 이펙터 모이어티이거나, A2가 제2 리간드이고 B2가 제2 이펙터 모이어티이면, b = 0 또는 1이고;
c = 1-128 중 어느 하나이고;
L5는 2개의 화학기를 공유 커플링하기 위한 적어도 하나의 링커이고;
L6은 2개의 화학기를 공유 커플링하기 위한 적어도 하나의 링커이고;
L7은 2개의 화학기를 공유 커플링하기 위한 적어도 하나의 올리고머 또는 폴리머 스캐폴드이고;
L8은 2개의 화학기를 공유 커플링하기 위한 적어도 하나의 링커이고;
L10은 3개의 화학기를 공유 커플링하기 위한 3 작용성 링커이고;
d = 0 또는 1이고;
e = 0 또는 1이고;
f = 0 또는 1이고;
f = 0이면, g = 0, 1 또는 2이고, f = 1이면, g = 0-16 중 어느 하나이고;
A2가 제2 리간드이고 B2가 제2 이펙터 모이어티이면, h = 0-32 중 어느 하나이거나, A2가 제2 이펙터 모이어티이고 B2가 제2 리간드이면, h = 1이고;
i = 0 또는 1이고;
j = 1 또는 0 그리고;
k = 1-16이다.
일 구현예는 r = 0, s = 0, v = 0, s = 0, v = 0, p = 0, t = 0, 리간드 A1은 제3 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 따른 모노클로날 항체 또는 이의 적어도 하나의 결합 단편 또는 -도메인이고, m = 1, 이펙터 모이어티 B1은 제8항에 따른 이펙터 모이어티, 바람직하게는 BNA이고, q = 0, n = 1 및 u = 2-4이거나 q = 1, n = 2-4, u = 2-4이고 링커 L1은 제21항 내지 제30항 중 어느 한 항에 따른 올리고머 또는 폴리머 스캐폴드 L3인, 본 발명의 치료 분자에 관한 것이다.
일 구현예는 본 발명의 치료 조합이고, 여기서 치료 분자는 이전 구현예의 치료 분자이고, 제2 리간드 A2는 본 발명에 따른 모노클로날 항체 또는 이의 적어도 하나의 결합 단편 또는 -도메인이고, a = 1, d = 0, b = 0, h = 0, e = 0, L7은 본 발명에 따른 스캐폴드이고 f = 1, 또는 L7은 부재이고 f = 0, L8은 본 발명에 따른 링커 또는 절단 가능한(cleavable) 링커이고, i = 1, c = 2-4 그리고 f = 1이면 g = 2-4이고 f = 0이면 g = 0이고, 사포닌 C는 본 발명에 따른 사포닌이고, 바람직하게는 사포닌 C는 SO1861이고/이거나 QS-21이고, 리간드 A1 및 리간드 A2는 동일하거나 상이하다.
본 발명의 일 견지는 치료 조합에 관한 것으로, 치료 조합은 (a) 본 발명에 따른 화합물 I의 화학 구조를 갖는 치료 분자를 포함하고, 선택적으로 약학적으로 허용가능한 부형제를 추가로 포함하는 제1 약학적 조성물; 및 (b) 본 발명에 따른 화합물 II의 화학 구조를 갖는 제2 치료 분자를 포함하고, 선택적으로 약학적으로 허용가능한 부형제를 추가로 포함하는 제2 약학적 조성물을 포함한다.
본 발명의 일 견지는 의약으로서 사용하기 위한 본 발명의 제1 약학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 일 견지는 인간 대상체에서 암의 치료 또는 방지에 사용하기 위한 치료 조합에 관한 것으로, 치료 조합은: (a) 본 발명의 제1 약학적 조성물; 및 (b) 본 발명의 제2 약학적 조성물을 포함하며, 여기서 리간드 A1 또는 B1 및 리간드 A2 또는 B2는 종양-세포 표면 분자, 바람직하게는 종양-세포 특이적 표면 분자상의 종양-세포 에피토프, 바람직하게는 종양-세포 특이적 에피토프에 결합할 수 있으며, 리간드 A1 또는 B1이 결합할 수 있는 종양-세포 에피토프 또는 종양-세포 특이적 에피토프는 리간드 A2 또는 B2가 결합할 수 있는 종양-세포 에피토프 또는 종양-세포 특이적 에피토프와 동일하거나 상이하다.
본 발명의 일 견지는 본 발명의 제2 치료 분자를 추가로 포함하는 본 발명의 제1 약학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 일 견지는 의약으로 사용하기 위한, 본 발명의 제2 치료 분자를 추가로 포함하는 본 발명의 제1 약학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 일 견지는 인간 대상체에서 암의 치료 또는 방지에 사용하기 위한, 본 발명의 제2 치료 분자를 추가로 포함하는 본 발명의 제1 약학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 일 견지는 하기의 ADC 및 AOC 중 어느 것, 및 이들의 반제품 접합체로서 이는 본 발명의 공유 연결된 사포닌을 포함하는 접합체를 포함하고 및/또는 본 발명의 예를 들어, 항체에 연결된 페이로드 또는 이펙터 모이어티를 포함하는 접합체를 포함하고, 그리고 선택적으로 본 발명의 적어도 하나의 이펙터 분자를 추가로 포함하거나 선택적으로 본 발명의 적어도 하나의 사포닌을 추가로 포함하거나, 또는 이들 둘 모두를 포함한다:
항-EGFR 항체 - 사포닌;
항-EGFR 항체- 위치 C-23에서 알데히드 작용을 갖는 12,13-디히드로올레아난(12,13-dehydrooleanane)의 유형에 속하며, 선택적으로 상기 사포닌의 C-3베타-OH 기에서 카보하이드레이트 치환체에 글루쿠론산(glucuronic acid) 작용을 포함하는 비스데스모시딕 트리테르펜(bisdesmosidic triterpene) 사포닌 및/또는 트리테르페노이드 사포닌;
항-EGFR 항체 - SO1861;
항-EGFR 항체 - GE1741;
항-EGFR 항체 - SA1641;
항-EGFR 항체 - Quil-A;
항-EGFR 항체 - QS-21;
항-EGFR 항체 - 퀼라자 사포나리아의 수용성 사포닌 분획물 중의 사포닌;
세툭시맙 - 사포닌;
세툭시맙 - 위치 C-23에서 알데히드 작용을 갖는 12,13-디히드로올레아난(12,13-dehydrooleanane)의 유형에 속하며, 선택적으로 상기 사포닌의 C-3베타-OH 기에서 카보하이드레이트 치환체에 글루쿠론산(glucuronic acid) 작용을 포함하는 비스데스모시딕 트리테르펜(bisdesmosidic triterpene) 사포닌 및/또는 트리테르페노이드 사포닌;
세툭시맙 - SO1861;
세툭시맙 - GE1741;
세툭시맙 - SA1641;
세툭시맙 - Quil-A;
세툭시맙 - QS-21;
세툭시맙 - 퀼라자 사포나리아의 수용성 사포닌 분획 중의 사포닌
항-HER2 항체 - 사포닌;
항-HER2 항체 - 위치 C-23에서 알데히드 작용을 갖는 12,13-디히드로올레아난(12,13-dehydrooleanane)의 유형에 속하며, 선택적으로 상기 사포닌의 C-3베타-OH 기에서 카보하이드레이트 치환체에 글루쿠론산(glucuronic acid) 작용을 포함하는 비스데스모시딕 트리테르펜(bisdesmosidic triterpene) 사포닌 및/또는 트리테르페노이드 사포닌;
항-HER2 항체 - SO1861;
항-HER2 항체 - GE1741;
항-HER2 항체 - SA1641;
항-HER2 항체 - Quil-A;
항-HER2 항체 - QS-21;
항-HER2 항체 - 퀼라자 사포나리아의 수용성 사포닌 분획 중의 사포닌;
트라스투주맙 - 사포닌;
트라스투주맙 - 위치 C-23에서 알데히드 작용을 갖는 12,13-디히드로올레아난(12,13-dehydrooleanane)의 유형에 속하며, 선택적으로 상기 사포닌의 C-3베타-OH 기에서 카보하이드레이트 치환체에 글루쿠론산(glucuronic acid) 작용을 포함하는 비스데스모시딕 트리테르펜(bisdesmosidic triterpene) 사포닌 및/또는 트리테르페노이드 사포닌;
트라스투주맙 - SO1861;
트라스투주맙 - GE1741;
트라스투주맙 - SA1641;
트라스투주맙 - Quil-A;
트라스투주맙 - QS-21;
트라스투주맙 - 퀼라자 사포나리아의 수용성 사포닌 분획 중의 사포닌;
항-CD71 항체 - 사포닌;
항-CD71 항체 - 위치 C-23에서 알데히드 작용을 갖는 12,13-디히드로올레아난(12,13-dehydrooleanane)의 유형에 속하며, 선택적으로 상기 사포닌의 C-3베타-OH 기에서 카보하이드레이트 치환체에 글루쿠론산(glucuronic acid) 작용을 포함하는 비스데스모시딕 트리테르펜(bisdesmosidic triterpene) 사포닌 및/또는 트리테르페노이드 사포닌;
항-CD71 항체 - SO1861;
항-CD71 항체 - GE1741;
항-CD71 항체 - SA1641;
항-CD71 항체 - Quil-A;
항-CD71 항체 - QS-21;
항-CD71 항체 - 퀼라자 사포나리아의 수용성 사포닌 분획 중의 사포닌;
OKT-9 - 사포닌;
OKT-9 - 위치 C-23에서 알데히드 작용을 갖는 12,13-디히드로올레아난(12,13-dehydrooleanane)의 유형에 속하며, 선택적으로 상기 사포닌의 C-3베타-OH 기에서 카보하이드레이트 치환체에 글루쿠론산(glucuronic acid) 작용을 포함하는 비스데스모시딕 트리테르펜(bisdesmosidic triterpene) 사포닌 및/또는 트리테르페노이드 사포닌;
OKT-9 - SO1861;
OKT-9 - GE1741;
OKT-9 - SA1641;
OKT-9 - Quil-A;
OKT-9 - QS-21;
OKT-9 - 퀼라자 사포나리아의 수용성 사포닌 분획 중의 사포닌;
항-EGFR 항체 - 올리고뉴클레오티드;
항-EGFR 항체 - 안티센스 올리고뉴클레오티드;
항-EGFR 항체 - siRNA;
항-EGFR 항체 - 안티센스 BNA;
항-EGFR 항체 - 안티센스 BNA(HSP27);
항-EGFR 항체 - 단백질성 독소;
항-EGFR 항체 - 리보좀 불활성화 단백질;
항-EGFR 항체 - 디안틴;
항-EGFR 항체 - 사포린;
세툭시맙 - 올리고뉴클레오티드;
세툭시맙 - 안티센스 올리고뉴클레오티드;
세툭시맙 - siRNA;
세툭시맙 - 안티센스 BNA;
세툭시맙 - 안티센스 BNA(HSP27);
세툭시맙 - 단백질성 독소;
세툭시맙 - 리보좀 불활성화 단백질;
세툭시맙 - 디안틴
세툭시맙 - 사포린;
항-HER2 항체 - 올리고뉴클레오티드;
항-HER2 항체 - 안티센스 올리고뉴클레오티드;
항-HER2 항체 - siRNA;
항-HER2 항체 - 안티센스 BNA;
항-HER2 항체 - 안티센스 BNA(HSP27);
항-HER2 항체 - 단백질성 독소;
항-HER2 항체 - 리보좀 불활성화 단백질;
항-HER2 항체 - 디안틴;
항-HER2 항체 - 사포린;
트라스투주맙 - 올리고뉴클레오티드;
트라스투주맙 - 안티센스 올리고뉴클레오티드;
트라스투주맙 - siRNA;
트라스투주맙 - 안티센스 BNA;
트라스투주맙 - 안티센스 BNA(HSP27);
트라스투주맙 - 단백질성 독소;
트라스투주맙 - 리보좀 불활성화 단백질;
트라스투주맙 - 디안틴;
트라스투주맙 - 사포린;
항-CD71 항체 - 올리고뉴클레오티드;
항-CD71 항체 - 안티센스 올리고뉴클레오티드;
항-CD71 항체 - siRNA;
항-CD71 항체 - 안티센스 BNA;
항-CD71 항체 - 안티센스 BNA(HSP27);
항-CD71 항체 - 단백질성 독소;
항-CD71 항체 - 리보좀 불활성화 단백질;
항-CD71 항체 - 디안틴;
항-CD71 항체 - 사포린;
OKT-9 - 올리고뉴클레오티드;
OKT-9 - 안티센스 올리고뉴클레오티드;
OKT-9 - siRNA;
OKT-9 - 안티센스 BNA;
OKT-9 - 안티센스 BNA(HSP27);
OKT-9 - 단백질성 독소;
OKT-9 - 리보좀 불활성화 단백질;
OKT-9 - 디안틴;
OKT-9 - 사포린;
항-EGFR 항체 (- 올리고뉴클레오티드)(- 사포닌), 여기서 올리고뉴클레오티드는 안티센스 올리고뉴클레오티드, siRNA, 안티센스 BNA, 및 안티센스 BNA(HSP27) 중 임의의 하나 이상이고, 그리고 여기서 사포닌은 위치 C-23에서 알데히드 작용을 갖는 12,13-디히드로올레아난(12,13-dehydrooleanane)의 유형에 속하며, 선택적으로 상기 사포닌의 C-3베타-OH 기에서 카보하이드레이트 치환체에 글루쿠론산(glucuronic acid) 작용을 포함하는 비스데스모시딕 트리테르펜(bisdesmosidic triterpene) 사포닌 및/또는 트리테르페노이드 사포닌, SO1861, GE1741, SA1641, Quil-A, QS-21, 및 퀼라자 사포나리아의 수용성 사포닌 분획 중의 사포닌 중 임의의 하나 이상이고, 여기서 항-EGFR 항체는 바람직하게 세툭시맙임;
항-EGFR 항체 (- 단백질성 독소)(- 사포닌), 여기서 단백질성 독소는 리보좀 불활성화 단백질, 디안틴 및 사포린 중 임의의 하나 이상이고, 그리고 여기서 사포닌은 위치 C-23에서 알데히드 작용을 갖는 12,13-디히드로올레아난(12,13-dehydrooleanane)의 유형에 속하며, 선택적으로 상기 사포닌의 C-3베타-OH 기에서 카보하이드레이트 치환체에 글루쿠론산(glucuronic acid) 작용을 포함하는 비스데스모시딕 트리테르펜(bisdesmosidic triterpene) 사포닌 및/또는 트리테르페노이드 사포닌, SO1861, GE1741, SA1641, Quil-A, QS-21, 및 퀼라자 사포나리아의 수용성 사포닌 분획 중의 사포닌 중 임의의 하나 이상이고, 여기서 항-EGFR 항체는 바람직하게 세툭시맙임;
항-HER2 항체 (- 올리고뉴클레오티드)(- 사포닌), 여기서 올리고뉴클레오티드는 안티센스 올리고뉴클레오티드, siRNA, 안티센스 BNA 및 안티센스 BNA(HSP27) 중 임의의 하나 이상이고, 그리고 여기서 사포닌은 위치 C-23에서 알데히드 작용을 갖는 12,13-디히드로올레아난(12,13-dehydrooleanane)의 유형에 속하며, 선택적으로 상기 사포닌의 C-3베타-OH 기에서 카보하이드레이트 치환체에 글루쿠론산(glucuronic acid) 작용을 포함하는 비스데스모시딕 트리테르펜(bisdesmosidic triterpene) 사포닌 및/또는 트리테르페노이드 사포닌, SO1861, GE1741, SA1641, Quil-A, QS-21, 및 퀼라자 사포나리아의 수용성 사포닌 분획 중의 사포닌 중 임의의 하나 이상이고, 여기서 항-HER2 항체는 바람직하게 트라스투주맙임;
항-HER2 항체 (- 단백질성 독소)(- 사포닌), 여기서 단백질성 독소는 리보좀 불활성화 단백질, 디안틴 및 사포린 중 임의의 하나 이상이고, 그리고 여기서 사포닌은 위치 C-23에서 알데히드 작용을 갖는 12,13-디히드로올레아난(12,13-dehydrooleanane)의 유형에 속하며, 선택적으로 상기 사포닌의 C-3베타-OH 기에서 카보하이드레이트 치환체에 글루쿠론산(glucuronic acid) 작용을 포함하는 비스데스모시딕 트리테르펜(bisdesmosidic triterpene) 사포닌 및/또는 트리테르페노이드 사포닌, SO1861, GE1741, SA1641, Quil-A, QS-21, 및 퀼라자 사포나리아의 수용성 사포닌 분획 중의 사포닌 중 임의의 하나 이상이고, 여기서 항-HER2 항체는 바람직하게 트라스투주맙임;
항-CD71 항체 (- 올리고뉴클레오티드)(- 사포닌), 여기서 올리고뉴클레오티드는 안티센스 올리고뉴클레오티드, siRNA, 안티센스 BNA, 및 안티센스 BNA(HSP27) 중 임의의 하나 이상이고, 그리고 여기서 사포닌은 위치 C-23에서 알데히드 작용을 갖는 12,13-디히드로올레아난(12,13-dehydrooleanane)의 유형에 속하며, 선택적으로 상기 사포닌의 C-3베타-OH 기에서 카보하이드레이트 치환체에 글루쿠론산(glucuronic acid) 작용을 포함하는 비스데스모시딕 트리테르펜(bisdesmosidic triterpene) 사포닌 및/또는 트리테르페노이드 사포닌, SO1861, GE1741, SA1641, Quil-A, QS-21, 및 퀼라자 사포나리아의 수용성 사포닌 분획 중의 사포닌 중 임의의 하나 이상이고, 여기서 항-CD71 항체는 바람직하게 OKT-9임; 그리고
항-CD71 항체 (- 단백질성 독소)(- 사포닌), 여기서 단백질성 독소는 리보좀 불활성화 단백질, 디안틴 및 사포린 중 임의의 하나 이상이고, 그리고 여기서 사포닌은 위치 C-23에서 알데히드 작용을 갖는 12,13-디히드로올레아난(12,13-dehydrooleanane)의 유형에 속하며, 선택적으로 상기 사포닌의 C-3베타-OH 기에서 카보하이드레이트 치환체에 글루쿠론산(glucuronic acid) 작용을 포함하는 비스데스모시딕 트리테르펜(bisdesmosidic triterpene) 사포닌 및/또는 트리테르페노이드 사포닌, SO1861, GE1741, SA1641, Quil-A, QS-21, 및 퀼라자 사포나리아의 수용성 사포닌 분획 중의 사포닌 중 임의의 하나 이상이고, 여기서 항-CD71 항체는 바람직하게 OKT-9임.
일 구현예는 본 발명의 제1 단백질성 분자, 본 발명의 반-제품 접합체(semi-finished conjugate) 또는 본 발명의 접합체이며, 여기서 제1 결합 부위는 세툭시맙, 트라스투주맙, OKT-9로부터 선택되고, 및/또는 여기서 이펙터 분자는 디안틴, 사포린 및 안티센스 BNA(HSP27)로부터 선택되고, 및/또는 여기서 사포닌은 SO1861, GE1741, SA1641, Quil-A, QS-21, 및 퀼라자 사포나리아의 수용성 사포닌 분획 중의 사포닌으로부터 선택된다.
일 구현예는 본 발명에 따른 접합체이며, 여기서 제1 단백질성 분자는 세툭시맙, 트라스투주맙, OKT-9 로부터 선택되고, 및/또는 여기서 이펙터 분자는 디안틴, 사포린 및 안티센스 BNA(HSP27)로부터 선택되고, 및/또는 여기서 사포닌은 SO1861, GE1741, SA1641, Quil-A, QS-21, 및 퀼라자 사포나리아의 수용성 사포닌 분획 중의 사포닌으로부터 선택된다.
본 발명의 일 견지는 본 발명의 항체-사포닌 접합체를 포함하고, 본 발명의 적어도 하나의 이펙터 분자를 포함하고 및/또는 본 발명의 적어도 하나의 사포닌을 포함하는, 구조 C의 ADC 또는 AOC 또는 반제품의 ADC 접합체 또는 반제품의 AOC 접합체에 관한 것이다:
A(- S)b(- E)c
구조 C,
여기서 A는 제1 결합 부위이고;
S는 사포닌이고;
E는 이펙터 분자이고;
b = 0-64, 바람직하게는 0, 1, 2, 3, 4, 8, 16, 32, 64 또는 그 사이의 임의의 정수 또는 분수이며;
c = 0-8, 바람직하게는 0, 1, 2, 3, 4, 6, 8 또는 그 사이의 임의의 정수 또는 분수이며;
여기서 S는 A 및/또는 E에 커플링되고(coupled), E는 A 및/또는 S에 커플링되고, 바람직하게 S는 A에 커플링되고, E는 A에 커플링된다.
일 구현예는 본 발명의 구조 C이며, 여기서 A는 세툭시맙과 같은 항-EGFR 항체, 트라스투주맙과 같은 항-HER2 항체, OKT-9와 같은 항-CD71 항체이며, 및/또는 여기서 S는 사포닌, C-23 위치에 알데히드 작용을 갖는 12,13-디히드로올레아난의 유형에 속하며, 선택적으로 상기 사포닌의 C-3베타-OH 기에서 카보하이드레이트 치환체에 글루쿠론산 작용을 포함하는 비스데스모시딕 트리테르펜 사포닌 및/또는 트리테르페노이드 사포닌, SO1861, GE1741, SA1641, Quil-A, QS-21, 및 퀼라자 사포나리아의 수용성 사포닌 분획 중의 사포닌 중 임의의 하나 이상이고, 및/또는 E는 올리고뉴클레오티드, 안티센스 올리고뉴클레오티드, siRNA, 안티센스 BNA 및 안티센스 BNA(HSP27) 중 임의의 하나 이상, 및/또는 단백질성 독소, 리보좀 불활성화 단백질, 디안틴 및 사포린 중 임의의 하나 이상이다.
일 구현예는 본 발명의 구조 C, 본 발명의 접합체 또는 본 발명의 반-제품 접합체 또는 본 발명의 제1 단백질성 분자이며, 여기서 존재하는 경우, 사포닌, 및/또는 존재하는 경우, 이펙터 분자는 예컨대 절단 가능한 링커와 같은 적어도 하나의 링커를 통해, 및/또는 N-ε-말레이미도카프로산 히드라지드(EMCH) 숙신이미딜 3-(2-피리딜디티오)프로피오네이트 또는 3-(2-피리딜디티오)프로피온산 N-히드록시숙신이미드 에스테르(SPDP), 및 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트(HATU)에 기초한 링커와 같은, 및 G4-덴드론과 같은 덴드론에 기초한 스캐폴드와 같은 적어도 하나의 올리고머 또는 폴리머 스캐폴드 또는 스킴 II의 3-작용성 링커와 같은 3-작용성 링커를 통해 공유 커플링되며, 및/또는 항체, 바람직하게 모노클로날 항체 또는 이의 단편 또는 도메인의 제1 결합 부위의 적어도 라이신 측쇄 및/또는 시스테인 측쇄는 사포닌 및/또는 이펙터 분자 및/또는 링커 및/또는 절단 가능한 링커 및/또는 스캐폴드와의 공유 결합에 관여하며, 여기서 바람직하게는 사포닌 및/또는 이펙터 분자는 항체, 바람직하게는 모노클로날 항체의 제1 결합 부위에 공유 연결(link)되며, 여기서 공유 연결은 아미드 결합, 히드라존 결합, 디설파이드 결합을 포함하거나 이로 구성된다.
본 발명의 일 견지는 본 발명의 상기한 접합체 또는 본 발명의 반-제품 접합체 또는 본 발명의 항체-사포닌 접합체 중 어느 것을 의약으로서의 용도에 관한 것이다.
본 발명의 일 견지는 본 발명의 접합체 또는 본 발명의 반-제품 접합체 또는 본 발명의 항체-사포닌 접합체를 암 또는 자가면역 질환의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 용도에 관한 것이다.
도 25 및 도 26은 공유 커플링된 사포닌(들)을 갖는 본 발명의 ADC 및 공유 커플링된 사포닌(들)을 갖는 본 발명의 OAC의 예를 나타낸다.
물론, 임의의 및 모든 a, b, c, d, e, f, g, h, I, j, k, m, n, p, q, r, s, t, u, v, w 및/또는 x는 본 발명에 따른 임의의 및 모든 상기한 일 견지 및 구현예에 대해 본 발명의 각각의 개별적인 견지 및 구현예에 따른 값을 갖는다. 또한, (3작용성) 링커 L1, L2, L4, L5, L6, L8, L9 및/또는 L10은, 본 발명의 분자 또는 접합체 또는 모이어티에 존재하는 경우, 당업자에 의해 용이하게 이해되는 바와 같이, 본 발명의 각각의 그리고 임의의 상기한 일 견지 및 구현예에 대하여 나타낸 바와 같은 (3 작용성) 링커이다. 본 발명의 분자 또는 접합체 또는 모이어티에 존재하는 경우, 올리고머 또는 폴리머 스캐폴드 L3 및/또는 L7은 당업자에 의해 용이하게 이해되는 바와 같이, 본 발명의 각각의 그리고 임의의 상기한 일 견지 및 구현예에 대하여 나타낸 바와 같은 올리고머 또는 폴리머 스캐폴드이다. 또한, 제1 리간드 A1 및 제1 이펙터 모이어티 B1 (존재하는 경우), 및 제2 리간드 A2 및 제2 이펙터 모이어티 B2 (존재하는 경우), 및 제1 이펙터 모이어티 A1 및 제1 리간드 B1 (존재하는 경우), 및 제2 이펙터 모이어티 A2 및 제2 리간드 B2 (존재하는 경우)는 상기에 개략적으로 나타낸, 본 발명의 제1, 제2, 제3, 제 4, 제 5 및 제 6 일련의 구현예 및 견지, 그리고 본 발명의 모든 추가 구현예 및 견지에 대하여 개시된 바와 같이 선택되고 나타내어지는 리간드 및 이펙터 모이어티이다. 사포닌 C는 본 발명의 상기한 임의의 견지 및 구현예에 언급되고 열거된 임의의 하나 이상의 사포닌, 특히 스킴 I 및/또는 표 A1로부터 선택된 하나 이상의 사포닌이다.
정의
용어 "링커"는 이의 표준적인 과학적 의미를 가지며, 본원에서는 분자 또는 원자를 다른 분자, 예를 들어 리간드 또는 이펙터 분자 또는 스캐폴드에 부착하는, 펩티드 결합을 통해 복합체화된 아미노산 잔기의 선형 스트레치 또는 화학적 모이어티를 지칭한다. 전형적으로 링커는 화학 결합으로 연결된 원자의 사슬을 포함한다. 당업계에 공지된 임의의 링커 분자 또는 링커 기술이 본 개시사항에 사용될 수 있다. 지시된 경우, 링커는 링커와의 공유 연결(covalent linkage) 또는 결합(bond)을 형성하기에 적합한 이러한 분자상의 화학기(chemical group)를 통해 분자를 공유 결합하기 위한 링커이다. 링커는 절단 불가능한(non-cleavable) 링커일 수 있으며, 예를 들어 링커는 생리학적 조건에서 안정하다. 링커는 예를 들어 절단 가능한(cleavable) 링커일 수 있으며, 예를 들어 링커는 효소의 존재 또는 특정 pH 범위 또는 값에서, 또는 생리학적 조건, 예컨대 후기 엔도좀(late endosomes)과 같은 엔도좀 및 인간 세포와 같은 포유류 세포의 리소좀에서의 세포내 조건과 같은 생리학적 조건 하에서 절단 가능하다. 본 개시사항의 문맥에서 사용될 수 있는 예시적인 링커는 N-ε-말레이미도카프로산 히드라지드(EMCH), 숙신이미딜 3-(2-피리딜디티오)프로피오네이트 또는 3-(2-피리딜디티오)프로피온산 N-히드록시숙신이미드 에스테르(SPDP) 및 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로 [4,5-b] 피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트(HATU)를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
용어 "3-작용성 링커"는 이의 표준적인 과학적 의미를 가지며, 본원에서는 3개의 분자 각각의 화학기를 통해 3개의 분자를 부착하는 링커를 지칭한다. 당업자는 본 개시사항 및 통상의 일반적인 지식에 기초하여 이러한 3-작용성 링커를 설계할 수 있다. 이러한 3-작용성 링커는, 예를 들어 티올-엔 반응을 수행하도록 티올기를 나타내는 표적화 리간드(targeting ligand)에 대한 접합에 사용될 수 있는 말레이미도기를 나타낼 수 있다. 또한, 3-작용성 링커는 아지도 함유 사포닌과 함께 소위 변형-촉진 알킨-아지드 고리화첨가(strain-promoted alkyne-azide ycloaddition)(SPAAC, 클릭 화학(click chemistry))를 수행하도록 디벤조시클로옥틴(DBCO) 기를 나타낼 수 있다. 마지막으로, 3-작용성 링커는 테트라진(Tz) 함유 이펙터 분자와 소위 역 전자 요구 다이엘-앨더(IEDDA, inverse electron demand Diels-Alder) 반응을 수행하는 트랜스-시클로옥텐(TCO) 기와 같은 제3 작용기를 획득할 수 있다. 당업자는 3-작용성 링커의 화학기가 3개 모두 동일하거나 상이할 수 있거나, 링커가 분자를 3-작용성 링커에 연결하기 위한 동일한 화학기 중 2개의 화학기를 포함할 수 있음을 알 수 있을 것이다. 3-작용성 링커 사이에 형성된 결합은 공유 또는 비공유일 수 있으며, 공유 결합이 바람직하다. 각각의 화학기를 통한 3-작용성 링커와 1개 또는 2개 또는 3개의 결합된 분자 사이에 형성된 결합은 인간 세포와 같은 포유류 세포의 리소좀 및 엔도좀과 같은 세포 내부의 산성 조건 하에서 절단 가능한 것과 같이 절단 가능한(불안정한) 결합일 수 있거나, 또는 절단 불가능한(non-cleavable) 결합일 수 있다. 물론, 3-작용성 링커는 공유 결합을 형성하기 위한 1개 또는 2개의 화학기를 포함할 수 있는 반면, 추가의 2개 또는 1개의 화학기(들)는 각각 비공유 결합을 형성하기 위한 것이다. 물론, 3-작용성 링커는 절단 가능한 결합을 형성하기 위한 1개 또는 2개의 화학기를 포함할 수 있는 반면, 추가의 2개 또는 1개의 화학기(들)는 각각 절단 불가능한 결합을 형성하기 위한 것이다.
용어 "절단 가능한 링커" 또는 "절단 가능한 결합"에 사용된 것과 같은 용어 "절단 가능한(cleavable)"은 이의 표준적인 과학적 의미를 가지며, 본원에서는 산성 조건, 환원성 조건, 효소 조건 또는 광-유도 조건 하에서 절단되는 것을 지칭한다. 예를 들어, 절단 가능한 링커는 산성 조건 하에서 절단될 수 있으며, 바람직하게는 상기 절단 가능한 링커는 포유류 세포, 바람직하게는 인간 세포의 엔도좀 및/또는 리소좀에 존재하는 산성 조건, 바람직하게는 pH 4.0 내지 6.5, 그리고 보다 바람직하게는 pH ≤ 5.5 하에서 생체 내 절단된다. 다른 예로서, 절단 가능한 링커는 효소, 예를 들어, 카텝신에 의해 절단될 수 있다. 더욱이, 환원성 조건 하에서 절단 가능한 공유 결합의 예는 디설파이드(disulphide) 결합이다.
올리고머 또는 폴리머 스캐폴드의 문맥에서 용어 "올리고머" 및 "폴리머"는 이의 표준적인 과학적 의미를 갖는다. 본원에서 폴리머는 서로 결합된 다수의 동일하거나 유사한 단위(unit)으로부터 주로 또는 완전히 구축된(built up) 분자 구조를 갖는 물질을 지칭하며; 본원에서 올리고머는 분자가 상대적으로 적은 반복 단위로 구성된 폴리머를 지칭한다. 예를 들어, 5-10개 이하의 동일하거나 유사한 단위(unit)를 포함하는 구조를 올리고머 구조라고 할 수 있고, 10-50개 모노머 단위 이상을 포함하는 구조를 폴리머 구조라고 할 수 있고, 10개 모노머 단위의 구조는 올리고머 또는 폴리머로 지칭될 수 있다.
용어 "결합 부위"는 표준적인 과학적 의미를 가지며, 본원에서는 다른 분자가 결합할 수 있는 분자상의 영역 또는 에피토프, 예를 들어, 단백질, DNA 또는 RNA를 지칭한다.
용어 "스캐폴드"는 규칙적인 과학적 의미를 가지며, 본원에서는 하나 이상의 분자, 예를 들어 리간드 분자, 이펙터 분자가 직접적으로 또는 절단 가능한 링커와 같은 링커를 통해 공유 결합될 수 있는 올리고머 또는 폴리머 템플레이트 또는 담체 또는 염기(염기 분자 또는 염기 구조)를 지칭한다. 스캐폴드는 폴리머, 올리고머, 덴드리머, 덴드론화된 폴리머 또는 덴드론화된 올리고머와 같은 구조적으로 정렬된 형성물(formation)을 가질 수 있거나 하이드로겔, 마이크로겔, 나노겔, 안정화된 폴리머 미셀 또는 리포좀과 같은 에셈블리된 폴리머 구조를 가질 수 있지만, 콜레스테롤/인지질 혼합물과 같은 모노머의 비공유 어셈블리로 구성되는 구조는 제외한다. 스캐폴드는 폴리머 또는 올리고머 구조, 예컨대 폴리- 또는 올리고(아민), 예를 들어 폴리에틸렌이민 및 폴리(아미도아민); 또는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리- 또는 올리고(에스테르), 예컨대 폴리(락티드), 폴리(락탐), 폴리락티드-코-글리콜라이드 코폴리머와 같은 구조; 또는 폴리(덱스트린), 폴리- 또는 올리고당류, 예컨대 시클로덱스트린 또는 폴리덱스트로스; 또는 천연 및/또는 인공 폴리- 또는 올리고 아미노산, 예컨대 폴리-라이신 또는 펩티드 또는 단백질, DNA 올리고- 또는 폴리머, 안정화된 RNA 폴리머 또는 PNA(펩티드 핵산) 폴리머와 같은 구조를 포함할 수 있다. 바람직하게는, 폴리머 또는 올리고머 구조는 생체 적합성(biocompatible)이며, 여기서 생체 적합성은 폴리머 또는 올리고머 구조가 유기체에서 실질적인 급성 또는 만성 독성을 나타내지 않고 그대로 배설되거나 신체 대사에 의해 배설 및/또는 생리학적 화합물로 완전히 분해될 수 있음을 의미한다.
용어 "리간드"는 표준적인 과학적 의미를 가지며, 본원에서는 표적 세포, 예를 들어, 표적 암세포 또는 표적 자가-면역 세포에서 발현되는 표적 세포-표면 분자 또는 표적 세포-표면 수용체에 선택적으로 결합할 수 있는 임의의 분자 또는 분자들을 지칭한다. 리간드는 표적 세포상의 다른 항원 또는 수용체에 의해 포함된 에피토프에 결합할 수 있다. 바람직하게는, 세포-결합 리간드는 항체이다.
본원에 사용된 용어 "항체"는 가장 넓은 의미로 사용되며, 이는 IgG, IgM, IgE, IgA 또는 IgD(또는 이의 임의의 서브클래스) 클래스에 속하는 단백질로 정의 된 면역 글로불린(Ig), 또는 면역 글로불린의 기능적 결합 단편(functional binding fragment) 또는 결합 도메인을 지칭할 수 있다. 본 발명의 문맥에서, 면역 글로불린의 "결합 단편" 또는 "결합 도메인"은 이러한 모 면역 글로불린의 항원 결합 활성을 본질적으로 유지하는 모 면역 글로불린의 항원-결합 단편 또는 -도메인 또는 기타 유도체로 정의된다. 기능적 단편 및 기능적 도메인은, 항원에 대한 친화성이 모 면역 글로불린보다 낮더라도 본 발명의 의미에서 항체이다. 본 발명에 따른 "기능적 단편 및 -도메인"은 F(ab')2 단편, Fab'단편, Fab 단편, scFv, dsFv, 단일-도메인 항체(sdAb), 1가 IgG, scFv-Fc, 환원된 IgG(rIgG), 미니바디, 디아바디, 트리아바디, 테트라바디, Fc 융합 단백질, 나노바디, 가변 V 도메인, 예컨대 Vhh, Vh, 및 면역 글로불린 단편 및 도메인을 인식하는 다른 유형의 항원을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 단편 및 도메인은 CH1과 CL 도메인 사이에서 발생하는 분자간 디설파이드 상호 작용을 최소화하거나 완전히 제거하도록 조작될 수 있다. 기능적 단편 및 -도메인은 크기가 작기 때문에 더 큰 종양 침투의 이점을 제공한다. 또한 기능적 단편 또는 -도메인은 전체 면역 글로불린에 비해 종양 덩어리 전체에 더 고르게 분포될 수 있다.
본 발명의 항체 (면역 글로불린)는 2 작용성 또는 다작용성(multifunctional)일 수 있다. 예를 들어, 2 작용성 항체는 하나의 수용체 또는 항원에 대한 특이성을 갖는 한쪽 팔을 가지고 있는 반면 다른 팔은 다른 수용체 또는 항원을 인식한다. 대안적으로, 2 작용성 항체의 각각의 팔은 표적 세포의 동일한 수용체 또는 항원의 상이한 에피토프에 대한 특이성을 가질 수 있다.
본 발명의 항체 (면역 글로불린)는 폴리클로날 항체, 모노클로날 항체, 인간 항체, 인간화 항체, 키메라 항체, 재표면화 항체(resurfaced antibodies), 항-이디오유형 항체(anti-idiotypic antibodies), 마우스 항체, 랫트 항체, 랫트/마우스 하이브리드 항체, 라마 항체, 라마 중쇄(heavy-chain) 전용 항체, 중쇄 전용 항체 및 수의학 항체일 수 있으나 이에 제한되지는 않는다. 바람직하게는, 본 발명의 항체 (면역 글로불린)는 모노클로날 항체이다. 재표면화, 키메라, 인간화 및 완전 인간 항체는 또한 인간에서 면역원성을 유발할 가능성이 적기 때문에 보다 바람직하다. 본 발명의 ADC의 항체는 바람직하게는 암 세포, 자가 면역 세포, 병든 세포, 비정상 세포의 표면에서 발현된 항원에 특이적으로 결합하는 반면, 임의의 건강한 세포는 본질적으로 변하지 않은 상태로 남겨둔다 (예, 이러한 정상 세포에 결합하지 않음으로써, 또는 이러한 건강한 세포에 대한 수 및/또는 친화성이 더 적은 정도로 결합함으로써).
본 발명의 ADC에 사용될 수 있는 특정한 항체는 항-HER2 모노클로날 항체 예컨대 트라투주맙 및 페르투주맙, 항-CD20 모노클로날 항체 예컨대 리투시맙, 오파투무맙, 토시투모맙 및 이부리투모맙, 항-CA125 모노클로날 항체 예컨대 오레고보맙, 항-EpCAM (17-1A) 모노클로날 항체 예컨대 에드레콜로맙, 항-EGFR 모노클로날 항체 예컨대 세툭시맙, 파니투무맙 및 니모투주맙, 항-CD30 모노클로날 항체 예컨대 브렌투시맙, 항-CD33 모노클로날 항체 예컨대 겜투주맙 및 huMy9-6, 항-혈관 인테그린 알파-v 베타-3 모노클로날 항체 예컨대 에타라시주맙, 항-CD52 모노클로날 항체 예컨대 알렘투주맙, 항-CD22 모노클로날 항체 예컨대 에프라투주맙, 항-CEA 모노클로날 항체 예컨대 라베투주맙, 항-CD44v6 모노클로날 항체 예컨대 비바투주맙, 항-FAP 모노클로날 항체 예컨대 시브로투주맙, 항-CD19 모노클로날 항체 예컨대 huB4, 항-CanAg 모노클로날 항체 예컨대 huC242, 항-CD56 모노클로날 항체 예컨대 huN901, 항-CD38 모노클로날 항체 예컨대 다라투무맙, 항-CA6 모노클로날 항체 예컨대 DS6, 항-IGF-IR 모노클로날 항체 예컨대 시수투무맙 및 3B7, 항-인테그린 모노클로날 항체 예컨대 CNTO 95, 및 항-신데칸-1 모노클로날 항체 예컨대 B-B4를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
표적 세포의 항원 또는 세포 수용체에 결합하는 항체 이외의 임의의 다른 분자도 본 발명의 리간드-약물 접합체용 세포-결합 리간드 및 본 발명에 따른 공유 결합된 사포닌이 제공되는 리간드로서 사용될 수 있다. 이들 리간드는 단백질, 폴리펩티드, 펩티드, 소분자를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 이러한 비-항체 리간드의 예는 인터페론 (예, IFN-α, IFN-β 및 IFN-γ), 트랜스페린, 렉틴, 표피(epidermal) 성장 인자(EGF) 및 EGF-유사 도메인, 가스트린-방출 펩티드 (GRP), 혈소판-유래 성장 인자 (PDGF), 형질 전환 성장 인자 (TGF), 우두(vaccinia) 성장 인자 (VGF), 인슐린 및 인슐린-유사 성장 인자 (IGF, 예, IGF-1 및 IGF-2), 기타 적합한 호르몬, 예컨대 티로트로핀 방출 호르몬 (TRH), 멜라닌 세포-자극 호르몬 (MSH), 스테로이드 호르몬 (예, 에스트로겐 및 안드로겐), 소마토스타틴, 림포카 인 (예, IL-2, IL-3, IL-4 및 IL-6), 집락 자극 인자 (CSF, 예, G-CSF, M-CSF 및 GM-CSF), 봄베신, 가스트린, Arg-Gly-Asp 또는 RGD, 앱타머 (예, AS-1411, GBI-10, HIV 당단백질에 대한 RNA 앱타머), 소분자 (예, 엽산, 아니사미드 페닐보론산), 비타민 (예, 비타민 D), 카보하이드레이트 (예, 히알루론산, 갈락토스)이다.
"이펙터 분자" 또는 "이펙터 모이어티" 또는 "페이로드"는 규칙적인 과학적 의미를 가지며, 본 발명의 문맥에서 세포 내 이펙터 분자 표적과의 상호 작용에 의해 세포의 대사에 영향을 미치는 임의의 물질이며, 여기서 이 이펙터 분자 표적은 엔도사이틱(endocytic) 및 재순환(recycling) 경로의 소포(vesicle) 및 구획(compartment)의 루멘을 제외하지만, 이들 소포 및 구획의 막을 포함하는 세포 내부의 임의의 분자 또는 구조이다. 따라서 세포 내부의 상기 구조는 핵, 미토콘드리아, 엽록체, 소포체, 골지체, 기타 수송 소포, 원형질막의 내부 부분 및 사이토솔(cytosol)을 포함한다.
이펙터 분자 또는 -모이어티는 단백질성 독소, 약물, 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드와 같은 독소와 같은 약학적 활성 물질이다. 본 발명에서 약학적 활성 물질은 유기체, 바람직하게는 척추 동물, 보다 바람직하게는 비인간 대상체 또는 인간/대상체와 같은 포유류에서 유익한 결과를 달성하도록 사용되는 이펙터 분자 또는 -모이어티이다. 혜택은 질환 및/또는 증상 및/또는 건강 문제의 진단, 예후, 치료, 처치 및 방지(예방)를 포함한다. 약학적 활성 물질은 또한 바람직하지 않고 때로는 심지어 해로운 부작용 (임상 시험 중에 관찰되는 것과 같은 유해 사례)을 초래할 수도 있다. 이 경우, 약학적 활성 물질이 특정 경우에 적합한지 여부를 결정하기 위해 장단점을 고려해야 한다. 세포 내부에서 약학적 활성 물질의 효과가 전체적으로 유기체에 주로 유익한 경우, 세포를 표적 세포라고 한다. 세포 내부에서의 효과가 전체적으로 유기체에 주로 해로운 경우, 세포를 표적-외(off-target) 세포라고 한다. 세포 배양 및 바이오 반응기와 같은 인공 시스템에서, 표적 세포와 표적-외 세포는 목적에 따라 다르며 사용자에 의해 정의된다. 이펙터 분자 및 -모이어티의 예는 약물, 독소, 폴리펩티드 (예, 효소), 폴리뉴클레오티드 (비천연 아미노산 또는 핵산을 포함하는 폴리펩티드 및 폴리뉴클레오티드 포함) 및 이들의 임의 조합이다.
약물인 이펙터 분자 또는 이펙터 모이어티는 항암제, 항염증제 및 항감염제 (예, 항진균제, 항균제, 항기생충제, 항바이러스제)를 포함할 수 있지만 이에 제한되지 않는다. 바람직하게는, 본 발명의 약물 분자는 항암제 또는 항자가면역제이다. 적합한 항암제는 알킬화제, 대사길항제(antimetabolites), 방추독 식물(spindle poison plant) 알칼로이드, 세포 독성/항종양 항생제, 토포이소머라제 억제제, 광감작제 및 키나제 억제제를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 또한 "항암제"의 정의에 포함되는 것은: 예를 들어, (i) 종양에 대한 호르몬 작용을 조절하거나 억제하는 작용을 하는 항-호르몬제, 예컨대 항-에스트로겐 및 선택적 에스트로겐 수용체 조절제; (ii) 부신에서 에스트로겐 생산을 조절하는 효소 아로마타제를 억제하는 아로마타제 억제제; (iii) 항-안드로겐; (iv) 단백질 키나제 억제제; (v) 지질 키나제 억제제; (vi) 안티센스 올리고뉴클레오티드, 특히 비정상적인 세포 증식과 관련된 신호 전달 경로에서 유전자의 발현을 억제하는 것; (vii) VEGF 발현 억제제 및 HER2 발현 억제제와 같은 리보자임; (viii) 유전자 치료 백신과 같은 백신; 토포이소머라제1 억제제; (ix) 항-혈관형성제(anti-angiogenic agents); 및 상기한 것 중 임의의 것의 약학적으로 허용가능한 염, 산, 용매화물 및 유도체이다.
독소인 이펙터 분자 또는 -모이어티는 단백질성 독소 (예, 박테리아-유래 독소 및 식물-유래 독소), 튜불린 필라멘트 표적화 독소(toxins targeting tubulin filaments), DNA 표적화 독소, RNA 표적화 독소를 포함할 수 있지만 이에 제한되지는 않는다. 단백질성 독소의 예는 사포린, 디안틴, 리신(ricin), 모데신, 아브린, 볼켄신, 비스큐민, 시가 독소, 시가-유사 독소, 슈도모나스 엑소톡신 (PE, 엑소톡신 A로도 알려짐), 디프테리아 독소 (DT) 및 콜레라 독소이다. 튜불린 필라멘트-표적화 독소의 예는 메이탄시노이드 (예, DM1 및 DM4), 아우리스타틴 (예, 모노메틸 아우리스타틴 E (MMAE) 및 모노메틸 아우리스타틴 F (MMAF)), 톡소이드, 튜불리신, 크립토피신, 리족신이다. DNA-표적화 독소의 예는 칼리케아미신: N-아세틸-γ-칼리케아미신, CC-1065 유사체, 듀오카르마이신, 독소루비신, 메토트렉세이트, 벤조디아제핀, 캄프토테신 유사체 및 안트라사이클린이다. DNA-표적화 독소의 예는 아마니틴, 스플리세오스타틴 및 타이란스타틴이다. 본 발명에서 사용되는 독소는 세포를 죽이거나 비활성화시킬 수 있는 약학적 활성 물질로 정의된다. 바람직하게는, 표적화된 독소는 표적 세포에 대해서만 또는 적어도 우세하게 독성이지만 표적-외 세포에는 독성이 없는 독소이다. 표적화된 독소의 순 효과는 바람직하게는 유기체 전체에 유익하다.
폴리펩티드인 이펙터 분자 또는 -모이어티는 예를 들어 효소 대체, 유전자 조절 기능 또는 독소와 같은 상실된 기능을 회복하는, 예를 들어 폴리펩티드일 수 있다. 이펙터 분자로서 폴리펩티드의 예는 예를 들어 Cas9; 독소 (예, 사포린, 디안틴, 겔로닌, (디)보우가닌, 아그로스틴, 리신 (독소 A 체인(chain)); 포크위드(pokeweed) 항바이러스 단백질, 아폽틴, 디프테리아 독소, 슈도모나스 엑소톡신) 대사 효소 (예, 아르기니노숙시네이트 리아제, 아르기니노숙시네이트 합성효소(synthetase)), 응고 캐스케이드의 효소, 복구 효소; 세포 신호 전달을 위한 효소; 세포주기 조절 인자; 유전자 조절 인자 (NF-KB와 같은 전사 인자 또는 메티오닌 리프레서와 같은 유전자 리프레서)이다.
폴리뉴클레오티드인 이펙터 분자 또는 이펙터 모이어티는 예를 들어, 유전자 또는 단백질을 인코딩하는 오픈 리딩 프레임과 같은 코딩 정보를 포함하는 폴리뉴클레오티드일 수 있다. 이는 또한 조절 정보, 예를 들어, 프로모터 또는 조절 요소 결합 영역, 또는 마이크로 RNA를 코딩하는 서열을 포함할 수 있다. 이러한 폴리뉴클레오티드는 천연 및 인공 핵산을 포함할 수 있다. 인공 핵산은 예를 들어 펩티드 핵산 (PNA), 모노폴리노 및 잠금 핵산 (LNA, locked nucleic acid) 뿐만 아니라 글리콜 핵산 (GNA) 및 트레오스 핵산 (TNA)을 포함할 수 있다. 이들 각각은 분자 골격의 변화에 의해 자연 발생 DNA 또는 RNA와 구별된다. 이펙터 분자로서 뉴클레오티드의 예는 예를 들어 DNA: 단일 가닥 DNA (예, 아데닌 포스포리보실트랜스퍼라제에 대한 DNA); 선형 이중 가닥 DNA (예, 응고 인자(clotting factor) IX 유전자); 원형 이중 가닥 DNA (예, 플라스미드); RNA: mRNA (예, TAL 이펙터 분자 뉴클레아제), tRNA, rRNA, siRNA, miRNA, 안티센스 RNA; 안티센스 올리고뉴클레오티드 (ASO, AON, 예를 들어 PNA, PMO, LNA 및 BNA)이지만 이에 제한되지 않는다.
예를 들어 "단백질성 분자" 및 "단백질성 독소"에 사용된 용어 "단백질성(proteinaceous)"은 단일 mRNA로부터의 발현 생성물로 수득될 수 있는 적어도 여러 개의(a string of) 아미노산 잔기를 포함하는 분자 및 독소이다. 이러한 분자 또는 독소는 임의의 번역 후 변형(modification)의 결과로 임의의 번역 후 변형, N- 또는 O-연결 카보하이드레이트와 같은 카보하이드레이트, 디설파이드 결합, 인산화(phosphorylation), 황산염화(sulphatation) 등을 추가로 포함할 수 있고/있거나 화학적 변형(예, 예를 들어 아미노산 측쇄에 직접, 또는 단백질성 분자를 화학적으로 변형시키기 위해 분자에 (공유적으로) 결합된 및 단백질성 분자에 화학적으로 결합된 (공유적으로) 적어도 하나의 링커를 통한 이펙터 모이어티, 사포닌, 스캐폴드, 리간드 등의 연결)에 기인한 것과 같은 임의의 다른 변형을 추가로 포함할 수 있다. 용어 "단백질성"은 또한 이러한 분자의 어셈블리, 예를 들어, 호모다이머, 헤테로트라이며, 헤테로헥사머 또는 리보좀과 같은 복합 어셈블리를 또한 망라하고 포함한다.
예를 들어, "특이적 결합" 및 "종양 세포의 표면에 특이적으로 존재하거나 발현되는 수용체 또는 분자 표적" 등의 문맥에서 용어 "특이적" 및 "특이적으로"는 당해 분야에 공지된 통상의 과학적 의미를 가지며, 본원에서는 예를 들어, 제2 분자와 상이한 추가 분자에 대한 제1 분자의 임의의 추정 결합에 비하여 더 높은 친화도로 일어나는 제1 분자와 제2 분자의 결합 상호 작용, 또는 예를 들어, 발현 또는 건강한 세포와 같은 제2 유형의 세포에서 동일한 수용체 또는 분자 표적의 발현 정도에 비하여 종양 세포, 자가 면역 세포, 병든 세포, 비정상 세포와 같은 제1 유형의 세포 표면상의 세포-표면 수용체 또는 분자 표적의 더 높은 정도의 발현(예, 수용체 또는 분자 표적으로 수가 고려될 때)을 지칭하며, 여기서 제2 유형 세포에서의 발현은 종양 세포 등의 임의의 발현 정도에 비해 완전히 없거나 매우 낮을 수 있다. 또한, 예를 들어 "특이적 결합"에서 용어 "특이적"은 당업계에 공지된 통상의 과학적 의미를 가지며, 본원에서는 분자 간의 백그라운드 상호 작용보다 더 높은 결합 친화도로 다른 분자와 상호 작용할 수 있는 분자를 나타내는 의미를 갖는다. 유사하게, 용어 "특이성(specificity)"은 예를 들어 두 분자 간의 또는 세포와 분자 간의 상호 작용을 지칭하며, 이는 분자 간의 백그라운드 상호 작용보다 더 높은 결합 친화도를 갖는다. 면역 글로불린과 같은 결합 분자는 면역 글로불린의 면역 글로불린 가변 영역과 같은 이들의 결합 부위를 통해, 분자 간의 백그라운드 상호 작용보다 더 높은 결합 친화도로 에피토프, 세포-표면 수용체 등과 같은 분자의 결합 부위에 결합한다. 본 발명의 문맥에서, 백그라운드 상호 작용은 전형적으로 10E-4 M의 KD보다 낮은 친화도를 갖는 상호 작용이다. 유사하게, "특이적 결합 도메인"은 분자 간의 백그라운드 상호 작용보다 더 높은 결합 친화도로 에피토프, 세포-표면 수용체 등과 같은 분자상의 결합 부위에 우선적으로 결합하는 도메인이다. 본 발명의 문맥에서, "백그라운드 상호 작용"은 전형적으로 10E-4 M의 KD보다 낮은 친화도를 갖는 상호 작용이다. 바람직하게는, 특이적 결합 도메인은 약 10E-5 M의 KD 보다 높은 친화도로 결합한다.
용어 "결합(binding)"은 백그라운드 상호 작용과 구별될 수 있는 분자 간의 상호 작용으로 정의된다.
명세서 전반에서, 용어 "단편"은 단백질 도메인의 일부이거나 온전한 단백질 도메인을 구축하는 아미노산 서열을 지칭한다. 본 발명에 따른 결합 단편은, 예를 들 종양 세포와 같은 병든 세토의 표면 상의 세포-표면 수용체와 같은 각각의 표적에 대해 결합 특이성을 가져야 한다.
용어 "ADC" 또는 "항체-약물 접합체(antibody-drug conjugate)"는 당업자에게 공지된 표준적인 과학적 의미를 가지며, 본원에서는 예를 들어, 암 치료를 위한 표적화된 요법으로 설계된 생물약제학 약물의 부류를 지칭한다. 화학 요법과 달리, ADC는 건강한 세포를 아끼면서 종양 세포를 표적으로 하여 사멸하기 위한 것이다. ADC는 생물학적 활성 세포독성 (항암) 페이로드 또는 약물에 연결된 항체로 구성된다. ADC는 모노클로날 항체의 표적화 능력과 세포 독성 약물의 암-사멸 능력을 조합한다. 이들은 건강한 세포와 종양의 종양 세포와 같은 병든 조직을 구별하도록 설계된다.
용어 "사포늄 앨범(Saponinum album)"은 일반적인 의미를 가지며 본원에서는 집포필라 파니큘레이트(Gypsophila paniculata) 및 집포필라 아로스티(Gypsophila arostii)로 부터의 사포닌을 함유하는 Merck KGaA (Darmstadt, 독일)에서 생산된 사포닌의 혼합물을 지칭하며, SA1657 및 주로 SA1641을 함유한다.
용어 "퀼라자사포닌(Quillajasaponin)"은 이의 일반적인 의미를 가지며 본원에서는 퀼라자 사포나리아(Quillaja saponaria)의 사포닌 분획, 그리고 따라서, 주로 QS-18 및 QS-21을 포함하는 다른 모든 QS 사포닌에 대한 공급원을 지칭한다.
"QS-21" 또는 "QS21"은 표준적인 과학적 의미를 가지며 본원에서는 QS-21 A-apio (~ 63%), QS-21 A-xylo (~ 32%), QS-21 B-apio (~ 3.3%) 및 QS-21 B-xylo (~ 1.7%)의 혼합물을 지칭한다.
마찬가지로, "QS-21A"는 이의 표준적인 과학적 의미를 가지며 본원에서는 QS-21 A-apio (~ 65%)와 QS-21 A-xylo (~ 35%)의 혼합물을 지칭한다.
마찬가지로, "QS-21B"는 이의 표준적인 과학적 의미를 가지며 본원에서는 QS-21 B-apio (~ 65%)와 QS-21 B-xylo (~ 35%)의 혼합물을 지칭한다.
용어 "Quil-A"는 퀼라자 사포나리아에서 상업적으로 입수할 수 있는 반정제 추출물을 지칭하며 50가지 보다 많은 별개의 사포닌을 다양한 양으로 함유하며, 이들 중 다수는 QS-7, QS-17, QS18, QS-21에서 발견되는 C-3베타-OH기에 트리테르펜-트리사카라이드 하위 구조 Gal-(1→2)-[Xyl-(1→3)]-GlcA-를 포함한다. Quil-A에서 발견된 사포닌은 van Setten (1995), 표 2 [Dirk C. van Setten, Gerrit van de Werken, Gijsbert Zomer and Gideon F. A. Kersten, Glycosyl Compositions and Structural Characteristics of the Potential Immuno-adjuvant Active Saponins in the Quillaja saponaria Molina Extract Quil A, RAPID COMMUNICATIONS IN MASS SPECTROMETRY, VOL. 9,660-666 (1995)]에 열거되어 있다. Quil-A 및 또한 퀼라자사포닌은 퀼라자 사포나리아로 부터의 사포닌의 분획이며 둘 모두 내용(content)이 대부분 중복되는 다른 사포닌을 매우 다양하게 함유한다. 두 분획은 다른 정제 절차에 의해 얻어지므로 두 분획은 특정 조성이 다르다.
용어 "QS1861" 및 용어 "QS1862"는 QS-7 및 QS-7 api를 지칭한다. QS1861의 분자량(molecular mass)은 1861 달톤이고 QS1862의 분자량은 1862 달톤이다. QS1862는 Fleck 등 (2019)에, 표 1의 행 번호. 28 [Juliane Deise Fleck, Andresa Heemann Betti, Francini Pereira da Silva, Eduardo Artur Troian, Cristina Olivaro, Fernando Ferreira and Simone Gasparin Verza, Saponins from Quillaja saponaria and Quillaja brasiliensis: Particular Chemical Characteristics and Biological Activities, Molecules 2019, 24, 171; doi:10.3390/molecules24010171]에 기재되어 있다. 기재된 구조는 QS-7의 api-변종(variant) QS1862이다. 분자량은 글루쿠론산에서 양성자를 포함하는 공식 질량(formal mass)으로서 1862 달톤이다. 중성 pH에서, 분자는 탈양성자화된다. 음이온 모드에서 질량 분석법으로 측정할 때, 측정된 질량은 1861 달톤이다.
설명 및 청구 범위에서 용어 제1, 제2, 제3 등은 유사한 구성요소를 구별하기 위해 사용되며 반드시 순차적 또는 연대순을 설명하기 위해 사용되는 것은 아니다. 상기 용어는 적절한 상황 하에서 상호 교환 가능하다. 본 발명의 구현예는 본원에서 기술되거나 예시된 것과 다른 순서로 작동할 수 있다.
더욱이, "바람직한" 또는 "예" 또는 "예를 들어" 또는 "특히"로 언급되었지만, 다양일 구현예는 본 발명의 범위를 제한하는 것이 아니라 본 발명이 구현될 수 있는 예시적인 방식으로 해석되어야 한다.
청구 범위에 사용된 용어 "포함하는"은 이후에 열거된 구성요소 또는 단계로 제한되는 것으로 해석되어서는 안되며; 이는 다른 구성요소 또는 단계를 제외하지 않는다. 이는 언급된 대로 명시된 특징, 정수, 단계 또는 성분의 존재를 구체적으로 명시하는 것으로 해석되어야 하지만 하나 이상의 다른 특징, 정수, 단계 또는 성분 또는 이의 그룹의 존재 또는 추가를 배제하지는 않는다. 따라서, 표현 "A 및 B를 포함하는 약학적 조성물"의 범위는 성분 A 및 B로만 구성된 약학적 조성물로 제한되어서는 안되며, 오히려 본 발명과 관련하여, 약학적 조성물의 열거된 성분이 단지 A 및 B이며, 나아가 청구범위는 이들 성분의 등가물을 포함하는 것으로 해석되어야 한다. 유사하게, 표현 "단계 A 및 단계 B를 포함하는 방법"의 범위는 단계 A 및 B로만 구성된 방법으로 제한되어서는 안되며, 오히려 본 발명과 관련하여, 방법의 열거된 단계가 단지 A 및 B이며, 나아가 청구범위는 이들 단계의 등가물을 포함하는 것으로 해석되어야 한다.
또한, 부정 관사 "a" 또는 "an"에 의한 특징에 대한 언급은 문맥이 하나 그리고 특징 중 단지 하나만 있는 것이 요구되는 것이 명백하지 않는 한, 예를 들어, 성분, 부형제, 사포닌 등과 같은 특징이 하나 보다 많이 존재하는 가능성을 배제하지 않는다. 따라서 부정 관사 "a" 또는 "an"은 일반적으로 "적어도 하나"를 의미한다.
[도면의 간단한 설명]
도 1-1: 30 mg/kg 세툭시맙-Cys-(SO1861-L-3 작용성 링커-L-HSP27BNA), 25 mg/kg 세툭시맙-(Lys-L)-HSP27BNA)4 또는 25 mg/kg 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)로 처리된 A431 제노그래프(xenograph) '누드' 마우스 종양 모델에서 생체 내 HSP27 발현.
도 2-1: 세툭시맙-Cys-(SO1861-L-3 작용성 링커-L-HSP27BNA), 세툭시맙-(Lys-L-HSP27BNA)4 또는 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)로 처리하여 EGFR 발현 A431 세포에서 시험관 내 향상된 HSP27 유전자 침묵.
도 3-1: 도 A, B, C 및 D의 기호 설명과 축은 동일하다. A. 세툭시맙, 세툭시맙 + 10pM 세툭시맙-사포린, 세툭시맙-Cys-(덴드론(-L-SO1861)4)3,9 및 세툭시맙-Cys-(덴드론(-L-SO1861)4)3,9 + 10pM 세툭시맙-사포린에 의한 EGFR 발현 세포 (MDA-MB-468)에서의 세포 사멸 활성. B. 트라스투주맙, 트라스투주맙 + 50 pM 트라스투주맙-사포린, 트라스투주맙-Cys-(덴드론(-L-SO1861)4)4 및 트라스투주맙-Cys-(덴드론(-L-SO1861)4)4 + 50pM 트라스투주맙-사포린에 의한 HER2 발현 세포(SK-BR-3)에서 세포 사멸 활성. C. 세툭시맙, 세툭시맙 + 10pM 세툭시맙-사포린, 세툭시맙-Cys-(덴드론(-L-SO1861)4)3,9 및 세툭시맙-Cys-(덴드론(-L-SO1861)4)3,9 + 10pM 세툭시맙-사포린에 의한 EGFR 발현 세포(HeLa)에서의 세포 사멸 활성. D. 트라스투주맙, 트라스투주맙 + 50 pM 트라스투주맙-사포린, 트라스투주맙-Cys-(덴드론(-L-SO1861)4)4 및 트라스투주맙-Cys-(덴드론(-L-SO1861)4)4 + 50pM 트라스투주맙-사포린에 의한 HER2 발현 세포(JIMT-1)에서의 세포 사멸 활성.
도 4-1: 도 A, B, C 및 D의 기호 설명과 축은 동일하다. A. 세툭시맙, 세툭시맙 + 10 pM CD71mab-사포린, 세툭시맙-Cys-(덴드론(-L-SO1861)4)3,9, 세툭시맙-Cys-(덴드론(-L-SO1861)4)3,9 + 10 pM CD71mab-사포린, 세툭시맙-Lys-(덴드론(-L-SO1861)4)4,4 또는 세툭시맙-Lys-(덴드론(-L-SO1861)4)4,4 + 10pM CD71mab-사포린의 EGFR++/CD71+ 세포(MDA-MB-468)에서의 세포 사멸 활성. B. 트라스투주맙, 트라스투주맙 + 10 pM CD71mab-사포린, 트라스투주맙-Cys-(덴드론(-L-SO1861)4)4, 트라스투주맙-Cys-(덴드론(-L-SO1861)4)4 + 10 pM CD71mab-사포린, 트라스투주맙-Lys-(덴드론(-L-SO1861)4)4,7 또는 트라스투주맙-Lys-(덴드론(-L-SO1861)4)4,7 + 10pM CD71mab-사포린의 HER2++/CD71+ (SK-BR-3) 세포주에서의 세포 사멸 활성. C. 세툭시맙, 세툭시맙 + 10 pM CD71mab-사포린, 세툭시맙-Cys-(덴드론(-L-SO1861)4)3,9, 세툭시맙-Cys-(덴드론(-L-SO1861)4)3,9 + 10 pM CD71mab-사포린, 세툭시맙-Lys-(덴드론(-L-SO1861)4)4,4 또는 세툭시맙-Lys-(덴드론(-L-SO1861)4)4,4 + 10 pM CD71mab-사포린의 EGFR+/CD71+ 세포 (CaSki)에서의 세포 사멸 활성. D. 트라투주맙, 트라투주맙 + 10 pM CD71mab-사포린, 트라투주맙-Cys-(덴드론(-L-SO1861)4)4, 트라투주맙-Cys-(덴드론(-L-SO1861)4)4 + 10 pM CD71mab-사포린, 트라투주맙-Lys-(덴드론(-L-SO1861)4)4,7 또는 트라투주맙-Lys-(덴드론(-L-SO1861)4)4,7 + 10 pM CD71mab-사포린의 HER2+/-/CD71+ 세포 (JIMT-1)에서의 세포 사멸 활성.
도 5-1: T-DM1, T-DM1 + 25.6 nM 트라투주맙 또는 T-DM1 + 5.3 nM 트라투주맙-Cys-(덴드론(-L-SO1861)4)4의 HER2 발현 세포(SK-BR-3)에서의 세포 사멸 활성.
도 6-1: HSP27BNA 단독 대비 HSP27BNA-덴드론(-L-SO1861)4의 HSP27 유전자 침묵 활성.
도 7-1: 산성 조건 하에서 덴드론(-L-SO1861)4로부터 SO1861의 방출에 대한 개략도.
도 8-1: 도 A와 B의 기호 설명과 축은 동일하다. A. '네이키드' 덴드론 (덴드론(NEM)4), 덴드론(NEM)4 + 10 pM EGF디안틴, 덴드론(-L-SO1861)4 또는 덴드론(L-SO1861)4 + 10 pM EGF디안틴에 의한 EGFR 발현 A431 세포(EGFR expressing A431 cell)에서 세포 사멸 활성. B. '네이키드' 덴드론 (덴드론(NEM)4), 덴드론(NEM)4 + 10 pM EGF디안틴, 덴드론(-L-SO1861)4 또는 덴드론(L-SO1861)4 + 10 pM EGF디안틴에 의한 EGFR 발현 HeLa 세포에서 세포 사멸 활성.
도 9-1: 도 A, B 및 C의 기호 설명과 축은 동일하다. A. 일련의 암세포의 세포 생존력(viability)에 대한 트라스투주맙의 효과. B. 일련의 암 세포의 세포 생존력에 대한 세툭시맙의 효과. C. 일련의 암 세포의 세포 생존력에 대한 T-DM1의 효과.
도 10-1: 모노클로날 항체-(SO1861-스캐폴드-안티센스 BNA 올리고) 접합체의 개략도.
도 11-1: 독소에 결합된 모노클로날 항체 및 사포닌을 포함하는 스캐폴드에 결합된 동일한 모노클로날 항체를 사용한 1-표적 2-성분 시스템의 개략도.
도 12-1: 독소에 결합된 모노클로날 항체 및 사포닌을 포함하는 스캐폴드에 결합된 다른 표적을 갖는 다른 모노클로날 항체를 사용한 2-표적 2-성분 시스템의 개략도.
도 13-1: 덴드론(-L-SO1861)4의 개략도.
도 14-1: 덴드론(-L-SO1861)8의 개략도.
도 15-1: SO1861-L-3작용성 링커-L-HSP27BNA의 개략도.
도 16-1: 덴드론(SO1861)4-HSP27BNA 올리고 접합체의 합성 반응 스킴.
도 17-1: 시프(Schiff) 염기(이민)를 통한 사포닌 결합을 위한 4개의 분자 ㅍ팔(arm) 및 클릭 화학을 위한 하나의 팔로 구성된 모델 스캐폴드. 폴리머 구조는 제1 세대의 5가 폴리에틸렌 글리콜계 덴드리머이다.
도 18-1: 펜타머 덴드리머 (펜트리머(pentrimer)), SA1641 존재에서의 펜트리머, 디안틴-EGF, SA1641 존재에서의 디안틴-EFG, 디안틴-EFG 존재에서의 펜트리머, 및 디안틴-EGF뿐만 아니라 SA1641 존재에서의 펜트리머로 처리한 후 HER14 세포의 세포 생존력.
도 19-1: 엔도조말 탈출(endosomal escape)을 향상하는 사포닌을 폴리머 구조에 접합하기 위한 화학기가 강조 표시된 SO1861 구조. 강조 표시된 기는 알데히드(검은색 원), 카르복실산(점선 원), 알켄(점선 오각형) 및 알코올(점선 박스)이다.
도 20-1: A. SO-1861-EMCH 접합체의 표준 분자 구조. 말레이미드기는 원으로 표시된다. B. SO1861-EMCH 접합체의 3D 모델. 말레이미드기는 원으로 표시된다.
도 21-1: 모노머로 SO1861-EMCH, 중합개시제로 APS/TMEDA 시스템, 그리고 라디칼 켄쳐(Quencher)로 아미노프로판티올을 사용하는 폴리(SO1861)의 제조를 위한 반응 스킴.
도 22-1: DNA 접근법의 개략도. 글리코시드 분자를 접합하고 방출할 수 있는 DNA 기반 스캐폴드를 생성하기 위한 DNA-오리가미(origami)의 원리 사용. 또한, DNA 가닥 중 하나는 작용화된(functionalized) 스캐폴드를 형성하기 위해 표적화된 독소에 접합하는데 사용될 수 있는 클릭 화학 모이어티를 얻는다. bp: 염기쌍.
도 23-1: 폴리(펩티드-SO1861) 접근법의 개략도. 클리코시드 분자를 접합 및 방출할 수 있고 자체 반응하여 폴리(펩티드-SO1861) 구조를 형성할 수 있는 펩티드 서열의 사용. 폴리(펩티드) 사슬 말단은 독소에 대한 접합에 사용될 수 있는 클릭 화학 모이어티(예, BCN-NHS 링커)로 추가로 변형될 수 있다.
도 24-1: 보호된 아미노기를 갖는 G4-덴드론의 분자 구조.
도 25-1: 임의의 원하는 이펙터 분자를 연결하는 클릭 화학 기능을 갖는 기본 스캐폴드의 개략도.
도 26-1: 사전-결합된 이펙터 분자 및 임의의 원하는 리간드를 연결하는 클릭 화학 기능이 있는 작용화된 스캐폴드의 개략도. 선택적으로, 엔도좀에 도달한 후 스캐폴드로부터 이펙터 분자를 방출하기 위해 pH-민감성 연결(linkage)이 제공될 수 있다.
도 1-2. 항체-단백질 독소 + 비접합된 SO1861 생체 연구. 다양한 농도의 트라투주맙-사포린 (i.v.) + 1.5 mg/kg 비접합된 SO1861으로 처리된 BT474 종양 함유 마우스(트라투주맙-사포린 처리 1시간 전에 subQ 주사).
도 2-2. 비접합된 사포닌-매개 엔도좀 탈출 및 표적 세포 사멸 향상. A) 1.5 pM EGF디안틴이 있거나 없이, SO1861, SO1832, SO1862(SO1861의 이성질체) 또는 SO1904로 처리된 HeLa 세포(EGFR+)의 세포 생존력 분석 B) EGF디안틴 및 고정 농도의 SO1861, SO1832, SO1862(SO1861의 이성질체) 또는 SO1904로 처리된 HeLa 세포(EGFR+)의 세포 생존력 분석. C)1.5pM EGF디안틴이 있거나 없이 SO1861 또는 GE1741로 처리된 HeLa 세포(EGFR+)의 세포 생존력 분석. D) 1.5pM EGF디안틴이 있거나 없이, 다양한 QSmix(퀼라이아 사포나리아로부터의 사포닌 혼합물)로 처리된 HeLa 세포(EGFR+)의 세포 생존력 분석.
도 3-2. 비접합된 SO1861 대 SO1861-EMCH 활성. 본 발명에 따른 암세포에서의 EGFR 표적화된 안티센스 BNA 올리고 전달 및 유전자 침묵. A, B, C) 1.5pM EG 디안틴이 있거나 없이, SO1861 또는 SO1861-EMCH로 처리된 A431 (EGFR++), HeLa (EGFR+) 또는 A2058 (EGFR-) 세포의 세포 생존력 분석. D, E) 1.5pM EGF디안틴이 있거나 없이, SO1861 또는 SO1861-N3으로 처리된 A431 (EGFR++) 또는 HeLa (EGFR+) 세포의 세포 생존력 분석.
도 4-2. 비접합된 SO1861 대 SO1861-EMCH(불안정) 대 SO1861-S(안정). EGF디안틴이 있거나 없이, SO1861, SO1861-S(S = HATU, 안정 링커) 및 SO1861-EMCH(불안정 링커)로 처리된 HeLa 세포 (EGFR+)의 세포 생존력 분석.
도 5-2. EGFR 표적화된 안티센스 BNA 올리고뉴클레오티드 전달 및 유전자 침묵. 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3.9 또는 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3.9 + 100nM HSP27BNA로 처리된 A431 (EGFR++) 및 A2058 (EGFR-) 세포의 HSP27 mRNA 발현 분석.
도 6-2. 종양 함유 마우스에서 종양 표적화된 안티센스 BNA 올리고뉴클레오티드 전달 및 유전자 침묵. A431 종양 함유 마우스에서 HSP27BNA + 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,9로 처리된 마우스는 대조군(control)과 비교하여 효율적인 종양 표적화된 유전자 침묵을 나타낸다.
도 1-3: A431 암 세포주에서 HSP27BNA, HSP27BNA-SO1861 및 HSP27BNA-덴드론-(SO1861)4의 HSP27BNA 유전자 침묵 활성.
도 1-4: 종양 표적화된 단백질 독소 전달은 종양 함유 마우스에서 종양 부피 감소 및 종양 성장 억제를 초래한다. A. A431 종양 함유 마우스에서 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,9(Lys-S-디안틴)2의 용량 증량(복강내, i.p.)은 대조군과 비교하여 종양 부피 감소를 나타낸다. B. A431 종양 함유 마우스에서 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,9(Lys-L-디안틴)2의 복강내, i.p, 용량 증량은 대조군과 비교하여 종양 성장 감소를 나타낸다. C. A431 종양 함유 마우스에서 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,9(Lys-L-디안틴)2의 정맥내, i.v. 용량 증량은 대조군과 비교하여 종양 성장 감소를 나타낸다.
도 2-4: 종양 함유 마우스에서 종양 표적화된 안티센스 BNA 올리고뉴클레오티드 전달 및 유전자 침묵. A431 종양 함유 마우스에서 30 mg/kg 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,9(Lys-L-HSP27BNA)1,8은 대조군과 비교하여 유도된 효율적인 종양 표적화된 유전자 침묵을 나타낸다.
도 3-4: 종양 함유 마우스에서 종양 표적화된 안티센스 BNA 올리고뉴클레오티드 전달 및 유전자 침묵. A431 종양 함유 마우스에서 30 mg/kg 세툭시맙-Cys-(SO1861-L-3작용성 링커-L-HSP27BNA)3,7은 대조군과 비교하여 유도된 효율적인 종양 표적화된 유전자 침묵을 나타낸다.
도 4-4: 본 발명에 따른 암 세포에서의 HER2 또는 EGFR 표적화된 단백질 독소 전달 및 세포 사멸. A. SK-BR-3 세포 (HER2++)에 대한 트라투주맙-(Cys-L-SO1861)3,8(Lys-L-디안틴)1,7 또는 트라투주맙-(Cys-L-SO1861)3,8(Lys-S-디안틴)1,7 처리 및 대조군 B. MDA-MB-468 세포 (HER2-)에 대한 트라투주맙-(Cys-L-SO1861)3,8(Lys-L-디안틴)1,7 또는 트라투주맙-(Cys-L-SO1861)3,8(Lys-S-디안틴)1,7 처리 및 대조군. C. A431 세포 (EGFR++)에 대한 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,8(Lys-L-디안틴)1,7 또는 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,8(Lys-S-디안틴)1,7 처리 및 대조군 D. A2058 세포 (EGFR-)에 대한 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,8(Lys-L-디안틴)1,7 또는 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,8(Lys-S-디안틴)1,7 처리 및 대조군.
도 5-4: 본 발명에 따른 암 세포에서의 EGFR 표적화된 안티센스 BNA 올리고 전달 및 유전자 침묵. A. A431 세포 (EGFR++)에 대한 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,8(Lys-L-HSP27BNA)1,7 처리 및 대조군 B. A2058 세포 (EGFR-)에 대한 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,8(Lys-L-HSP27BNA)1,7 처리 및 대조군.
도 6-4: 본 발명에 따른 암세포에서 HER2 표적화된 안티센스 BNA 올리고 전달 및 유전자 침묵. SK-BR-3 세포 (HER2++)에 대한 트라투주맙-(Cys-L-SO1861)3,8(Lys-L-HSP27BNA)3,5 처리 및 대조군.
도 7-4: 본 발명에 따른 암세포에서 EGFR 표적화된 안티센스 BNA 올리고 전달 및 유전자 침묵. A. A431 세포 (EGFR++)에 대한 세툭시맙-Cys-(SO1861-L-3작용성 링커-L-HSP27BNA)3,7 처리 및 대조군. B. A2058 세포 (EGFR-)에 대한 세툭시맙-Cys-(SO1861-L-3작용성 링커-L-HSP27BNA)3,7 처리 및 대조군.
도 8-4: 모든 세포주에 대한 대조군 처리. 트라투주맙 (A), 세툭시맙 (B), T-DM1, (C) 유리 독소: 사포린 및 디안틴 (D) 또는 비-세포 결합 IgG에 커플링된 사포린(D)이 나타낸 세포주 SK-BR-3, JIMT-1, MDA-MB-468, A431, CaSki, HeLa, A2058, BT-474 처리에 사용될 때의 세포 생존력.
도 9-4:(S)n-(L)(E)개념: mAb-(SO1861) n (단백질 독소) n . 시스테인 잔기 (Cys)의 SO1861 및 라이신 잔기의 단백질 독소 (리보조말 불활성 단백질)는 모두 표적 세포로의 전달 및 내재화를 위해 동일한 항체(mAb)에 접합된다. 1) mAb-(Cys-L-SO1861)4(Lys-단백질 독소)2는 이의 상응하는 세포 표면 수용체에 결합하고, 2) 접합체의 수용체-매개 엔도사이토시스(endocytosis)가 일어나고, 3) 낮은 엔도리소조말(endolysosomal) pH 및 적절한 농도에서, SO1861이 활성화되어 엔도리소조말 탈출을 가능하게 하고, 4) 세포질로의 독소 방출이 일어나고 5) 독소가 세포 사멸을 유도한다.
도 10-4: (S)n - (L)(E)개념: mAb-(SO1861) n (안티센스 BNA 올리고) n . 시스테인 잔기(Cys)의 SO1861 및 라이신 잔기의 안티센스 BNA 올리고 뉴클레오티드는 모두 표적 세포로의 전달 및 내재화를 위해 동일한 항체(mAb)에 접합된다. 1) mAb-(Cys-SO1861)4(Lys-BNA올리고)2는 이의 상응하는 세포 표면 수용체에 결합하고, 2) 두 접합체의 수용체-매개 엔도사이토시스가 일어나고, 3) 낮은 엔도리소조말 pH 및 적절한 농도에서, SO1861이 활성화되어 엔도리소조말 탈출을 가능하게 하고, 4) 세포질로의 BNA 올리고의 방출이 일어나고 5) 표적 유전자 침묵이 유도된다.
도 11-4: (S)n - (L)(E)개념: mAb-(SO1861-스캐폴드-안티센스 BNA 올리고) n . (SO1861-3작용성 링커-BNA올리고)n은 표적 세포로의 전달 및 내재화를 위해 항체(mAb)에 접합된다. 1) mAb-(SO1861-3작용성 링커-BNA올리고)4는 이의 상응하는 세포 표면 수용체에 결합하고, 2) 두 접합체의 수용체-매개 엔도사이토시스가 일어나고, 3) 낮은 엔도리소조말(endolysosomal) pH 및 적절한 농도에서, SO1861이 활성화되어 엔도리소조말 탈출을 가능하게 하고, 4) 세포질로의 BNA 올리고의 방출이 일어나고 5) 표적 유전자 침묵이 유도된다.
도 12-4: 항체-SO1861 접합 절차. 도시된 것은 식물 유래 사포닌 SO1861의 4개의 모이어티를 항체의 경쇄(light chain)에 있는 4개의 시스테인에 연결하는 커플링 반응이다. 첫째, IgG의 디설파이드 결합은 TCEP(트리스(2-카르복시에틸)포스핀)에 대한 노출의 영향으로 파괴되고; 둘째, 화학적 링커가 결합된 사포닌 SO1861을 트리플루오로 아세트산과 함께 첨가하고, 4개의 사포닌 모이어티가 IgG에 연결된다. 절단 가능한 '접합이 가능한(ready to conjugate)'사포닌을 제조하기 위해, SO1861의 알데히드기가 EMCH(ε-말레이미도카프로산 히드라지드) 링커와 반응되었다. EMCH의 히드라지드기는 SO1861의 알데히드와 산 절단 가능한 히드라존(hydrazone) 결합을 형성한다. 동시에 EMCH 링커는 티올(설프하이드릴기) 반응성인 말레이미드기를 제공하므로 IgG의 티올, 즉 리간드 모이어티에 접합될 수 있다. 이와 함께, 본 발명의 엔도조말 탈출 향상 접합체가 제공되고/되거나 본 발명의 제1 결합 분자가 제공된다.
도 1-5: 1T2C 생체 내 활성. A431 종양 함유 마우스에서 50mg/kg 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)4 + 25 mg/kg 세툭시맙-(-L-HSP27BNA)4의 1T2C 조합은 대조군과 비교하여 강력한 종양 표적화된 유전자 침묵을 나타낸다.
도 2-5: 1T2C 생체 내 활성. PDX 종양 마우스 모델(고 HER2 발현)에서 40 mg/kg 트라투주맙-(Cys-L-SO1861)4 + 0.02/0.03 mg/kg 트라투주맙-사포린의 1T2C 조합은 효과적인 종양 성장 억제를 나타낸다.
도 3-5: 1-표적 2-성분. 본 발명에 따른 치료 조합에 의한 A431 세포 (EGFR++) (A, C) 및 CaSKi 세포 (EGFR+) (B, D)에서의 EGFR 표적화된 세포 사멸. A, B) A431 (A) 및 CaSKi (B) 세포에 대한 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,7 적정 + 고정 농도 10 pM 세툭시맙-사포린 및 대조군. C, D) A431 (C) 및 CaSKi (D) 세포에 대한 세툭시맙-사포린 적정 + 고정 농도인 75nM 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,7 및 대조군. 비고: 각 세포주의 표적 수용체 발현 데이터(FACS 분석에 의해 결정됨)는 표 19를 참조.
도 4-5: 1-표적-2-성분. 본 발명에 따른 치료 조합에 의한 HeLa 세포 (EGFR+/-) (A, C) 및 A2058 세포 (EGFR-) (B, D)에서의 EGFR 표적화된 세포 사멸. A, B) HeLa (A) 및 CaSKi (B) 세포에 대한 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,7 적정 + 고정 농도 10 pM 세툭시맙-사포린 및 대조군. C, D) Hela (C) 및 A2058 (D) 세포에 대한 세툭시맙-사포린 적정 + 고정 농도인 75nM 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,7 및 대조군. 비고: 각 세포주의 표적 수용체 발현 데이터(FACS 분석에 의해 결정됨)는 표 19를 참조.
도 5-5: 1-표적 2-성분. 본 발명에 따른 치료 조합에 의한 SKBR3 세포 (HER2++) (A, B)에서의 HER2 표적화된 세포 사멸. A) SKBR3 세포에 대한 트라투주맙-(Cys-L-SO1861)4 적정 + 고정 농도 50 pM 트라투주맙-사포린 및 대조군. B) SKBR3 세포에 대한 트라투주맙-사포린 적정 + 고정 농도인 2.5nM 트라투주맙-(Cys-L-SO1861)4 및 대조군. 비고: 각 세포주의 표적 수용체 발현 데이터(FACS 분석에 의해 결정됨)는 표 19를 참조.
도 6-5: 1-표적-2-성분. 본 발명에 따른 치료 조합에 의한 JIMT-1 세포 (HER2+/-) (A, C) 및 MDA-MB-468 세포 (HER2-) (B, D)에서의 HER2 표적화된 세포 사멸. A, B) JIMT-1 (A) 및 MDA-MB-468 (B) 세포에 대한 트라투주맙-(Cys-L-SO1861)4 적정 + 고정 농도인 50 pM 트라투주맙-사포린 및 대조군. C, D) JIMT-1 (C) 및 MDA-MB-468 (D) 세포에 대한 트라투주맙-사포린 적정 + 고정 농도인 2.5nM 트라투주맙-(Cys-L-SO1861)4 및 대조군. 비고: 각 세포주의 표적 수용체 발현 데이터(FACS 분석에 의해 결정됨)는 표 19를 참조.
도 7-5: 클로로퀸은 1-표적 2-성분을 억제한다. 본 발명에 따른 치료 조합 + 클로로퀸에 의한 SK-BR-3 (HER2++) 및 A431 세포 (EGFR++)에서의 HER2 및 EGFR 표적화된 세포 사멸. A) SK-BR-3 세포에 대한 트라투주맙-사포린 적정 + 고정 농도인 5nM 트라투주맙-(Cys-L-SO1861)4 + 0.5 μM 클로로퀸 및 대조군. B) A431 세포에 대한 세툭시맙-사포린 적정 + 고정 농도인 5 nM 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,8 + 0.5 μM 클로로퀸 및 대조군. 비고: 각 세포주의 표적 수용체 발현 데이터(FACS 분석에 의해 결정됨)는 표 19를 참조.
도 8-5: 1-표적-2-성분. 본 발명에 따른 치료 조합에 의한 A431 세포 (EGFR++) 및 A2058 세포 (EGFR-)에서의 EGFR 표적화된 유전자 침묵. A,B) A431 세포 (A) 및 A2058 세포 (B)에 대한 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,8 적정 + 고정 농도인 100 nM 세툭시맙-(Lys-L-HSP27BNA)4 및 대조군. C, D) A431 세포 (C) 및 A2058 세포 (D)에 대한 세툭시맙-(Lys-L-HSP27BNA)4 적정 + 고정 농도인 77 nM 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,8 및 대조군. 비고: 각 세포주의 표적 수용체 발현 데이터(FACS 분석에 의해 결정됨)는 표 19를 참조.
도 9-5: 2-표적 2-성분. 본 발명에 따른 치료 조합에 의한 A) MDA-MB-468 세포 (EGFR++) 및 HeLa 세포 (EGFR+/-)에서의 EGFR 및 HER2 표적화된 세포 사멸 및 SK-BR-3 세포 (HER2++) 및 JIMT-1 세포 (HER2+/-)에서의 HER2 표적화된 세포 사멸. A) MDA-MB-468 세포 (A) 및 HeLa 세포 (B)에서 세툭시맙-Cys-(덴드론(-L-SO1861)4)3,9 적정 + 고정 농도 10 pM 세툭시맙-사포린 및 대조군. C,D) SK-BR-3 세포 (C) 및 JIMT-1 세포 (D)에서 트라투주맙-Cys-(덴드론(-L-SO1861)4)4 적정 + 고정 농도 50 pM 트라투주맙-사포린 및 대조군. 비고: 각 세포주의 표적 수용체 발현 데이터(FACS 분석에 의해 결정됨)는 표 19를 참조.
도 10-5: 1-표적-2-성분. SK-BR-3 세포 (HER2+/-)는 본 발명에 따른 치료 조합인, 트라투주맙-사포린 + 2.5 nM 트라투주맙-(Cys-L-SO1861)4로 효율적으로 사멸될 수 있지만, T-DM1 + 2.5 nM 트라투주맙-(Cys-L-SO1861)4의 적정은 이러한 낮은 독소 농도에서 효과적이지 않다. T-DM1은 트라투주맙-엠탄신 (Kadcyla®)으로, 항체 당 ~3.5 엠탄신 (DM1) 독소분자 (DAR3.5)를 가지고 있다. 비고: 각 세포주의 표적 수용체 발현 데이터(FACS 분석에 의해 결정됨)는 표 19를 참조.
도 11-5: 모든 세포주에 대한 대조군 처리. AD) 트라투주맙 (A), 세툭시맙 (B), T-DM1, (C) 유리 독소(free toxin): 사포린 및 디안틴 (D) 또는 비-세포 결합 IgG에 결합된 사포린(D)이 나타낸 세포주 SK-BR-3, JIMT-1, MDA-MB-468, A431, CaSki, HeLa, A2058, BT-474로 처리될 때의 세포 생존력. 비고: 각 세포주의 표적 수용체 발현 데이터(FACS 분석에 의해 결정됨)는 표 19를 참조.
도 12-5: 1-표적-2-성분. 본 발명에 따른 치료 조합에 의한 A431 세포 (EGFR++) (A) 및 CaSKi 세포 (EGFR+) (B) 및 A2058 세포 (EGFR-)에서의 EGFR 표적화된 세포 사멸. A, B, C) A431 세포 (A), CaSKi 세포 (B) 및 A2058 세포 (C)에 대한 세툭시맙-(Cys-L-QSmix)4,1 적정 + 고정 농도 10 pM 세툭시맙-사포린 또는 10pM 세툭시맙-디안틴 및 대조군. QSmix는 퀼라자 사포나리아 추출물에서 추출한 사포닌의 혼합물이다. 비고: 각 세포주의 표적 수용체 발현 데이터(FACS 분석에 의해 결정됨)는 표 19를 참조.
도 13-5: 1-표적 2-성분개념: mAb1-SO1861 + mAb1-단백질 독소. SO1861 및 독소(리보조말 불활성화 단백질)는 각각 독립적으로 항체(mAb1)에 접합되어 표적 세포로 전달 및 내재화된다. 1) mAb1-SO1861 및 mAb1-단백질 독소가 세포 표면 수용체에 결합하고, 2) 두 접합체의 수용체-매개 엔도사이토시스가 일어나고, 3) 낮은 엔도리소조말 pH 및 적절한 농도에서 SO1861이 활성화되어 엔도리소조말(endolysosomal) 탈출을 가능하게 하고, 4) 세포질 내로의 독소의 방출이 일어나고 5) 독소가 세포 사멸을 유도한다.
도 14-5: 1-표적 2-성분개념: mAb1-SO1861 + mAb2-BNA 올리고. SO1861 및 안티센스 BNA 올리고뉴클레오티드는 각각 독립적으로 항체(mAb1)에 접합되어 표적 세포로 전달 및 내재화된다. 1) mAb1-SO1861 및 mAb1-BNA올리고는 세포 표면 수용체에 결합하고, 2) 두 접합체의 수용체-매개 엔도사이토시스가 일어나고, 3) 낮은 엔도리소조말 pH와 적절한 농도에서 SO1861이 활성화되어 엔도리소조말 탈출을 가능하게 하고, 4) 세포질로의 BNA 올리고의 방출이 일어나고, 5) 표적 유전자 침묵.
도 15-5: 1-표적 2-성분개념: mAb1-(스캐폴드(-SO1861) n ) n + mAb1-단백질 독소. 덴드론(-SO1861)n 및 단백질 독소 (리보조말 불활성 단백질)은 각각 독립적으로 항체(mAb1)에 접합되어 표적 세포로 전달 및 내재화된다. 1) mAb1-덴드론(-SO1861)4 및 mAb1-단백질 독소가 세포 표면 수용체에 결합하고, 2) 두 접합체의 수용체-매개 엔도사이토시스가 일어나고, 3) 낮은 엔도리소조말 pH와 적절한 농도에서 SO1861이 활성화되어 엔도리소조말 탈출을 가능하게 하고, 4) 세포질로의 독소의 방출이 일어나고 5) 독소가 세포 사멸을 유도한다.
도 1-6: A431 종양 함유 마우스 모델에서 테스트된 2T2 성분 시스템은 종양 퇴화를 나타낸다.
도 2-6: A431 종양 함유 마우스 모델에서 테스트된 2T2 성분 시스템은 종양 퇴화 및 박멸을 나타낸다.
도 3-6: 2-표적 2-성분. 본 발명에 따른 치료 조합에 의한 A431 세포 (EGFR++/HER2+/-) (A, C) 및 CaSKi 세포 (EGFR++/HER2+/-) (B, D)에서의 EGFR/HER2 표적화된 세포 사멸. A, B) A431 세포에 대한 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,7 적정 + 고정 농도 50 pM 트라투주맙-사포린 및 대조군. C, D) Caski 세포에 대한 트라투주맙-사포린 적정 + 고정 농도인 75nM 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,7 및 대조군. 기호 설명 및/또는 축은 A, B, C 또는 D 모두에 대해 동일하다.
도 4-6: 2-표적 2-성분. 본 발명에 따른 치료 조합에 의한 HeLa 세포 (EGFR+/-/HER2+/-) (A, C) 및 A2058 세포 (EGFR-/HER2+/-) (B, D)에서의 EGFR/HER2 표적화된 세포 사멸. A, B) HeLa 세포에 대한 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,7 적정 + 고정 농도 50 pM 트라투주맙-사포린 및 대조군. C, D) A2058 세포에 대한 트라투주맙-사포린 적정 + 고정 농도인 75nM 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,7 및 대조군. 기호 설명 및/또는 축은 A, B, C 또는 D 모두에 대해 동일하다.
도 5-6: 2-표적 2-성분. 본 발명에 따른 치료 조합에 의한 SKBR3 세포 (HER2++/EGFR+/-) (A, B)에서의 HER2/EGFR 표적화된 세포 사멸. A SKBR3 세포에 대한 트라투주맙-(Cys-L-SO1861)4 적정 + 고정 농도 1.5 pM EGF디안틴 및 대조군. B) SKBR3 세포에 대한 EGF디안틴 적정 + 고정 농도인 2.5nM 트라투주맙-(Cys-L-SO1861)4 및 대조군.
도 6-6: 2-표적 2-성분. 본 발명에 따른 치료 조합에 의한 JIMT-1 세포 (HER2+/-EGFR+/-) (A, C) 및 MDA-MB-468 세포 (HER2-/EGFR++) (B, D)에서의 HER2/EGFR 표적화된 세포 사멸. A, B) JIMT-1 세포에 대한 트라투주맙-(Cys-L-SO1861)4 적정 + 고정 농도 1.5 pM EGF디안틴 및 대조군. C, D) MDA-MB-468 세포에 대한 EGF디안틴 적정 + 고정 농도인 2.5nM 트라투주맙-(Cys-L-SO1861)4 및 대조군. 기호 설명 및/또는 축은 A, B, C 또는 D 모두에 대해 동일하다.
도 7-6: 2-표적 2-성분. 본 발명에 따른 치료 조합에 의한 SKBR3 세포 (HER2++/EGFR+/-) (A, B)에서의 HER2/EGFR 표적화된 세포 사멸. A) SKBR3 세포에 대한 트라투주맙-(Cys-L-SO1861)4 적정 + 고정 농도 10 pM 세툭시맙-사포린 및 대조군. B) SKBR3 세포에 대한 세툭시맙-사포린 적정 + 고정 농도인 2.5nM 트라투주맙-(Cys-L-SO1861)4 및 대조군.
도 8-6: 2-표적 2-성분. 본 발명에 따른 치료 조합에 의한 JIMT-1 세포 (HER2+/-EGFR+/-) (A, C) 및 MDA-MB-468 세포 (HER2-/EGFR++) (B, D)에서의 HER2/EGFR 표적화된 세포 사멸. A, B) JIMT-1 세포에 대한 트라투주맙-(Cys-L-SO1861)4 적정 + 고정 농도 10 pM 세툭시맙-사포린 및 대조군. C, D) MDA-MB-468 세포에 대한 세툭시맙-사포린 적정 + 고정 농도인 2.5nM 트라투주맙-(Cys-L-SO1861)4 및 대조군. 기호 설명 및/또는 축은 A, B, C 또는 D 모두에 대해 동일하다.
도 9-6: 클로로퀸은 2-표적 2-성분을 억제한다. 본 발명에 따른 치료 조합 + 클로로퀸에 의한 A431 세포 (EGFR++/HER2+/-/CD71+) (A, B), MDA-MB-468 세포 (EGFR++/HER2-/CD71+) (C) 또는 SK-BR-3 (HER2++/EGFR+/-/CD71+) (D)에서의 EGFR/HER2, EGFR/CD71 또는 HER2/CD71 표적화된 세포 사멸. A) A431 세포에 대한 트라투주맙-디안틴 또는 트라투주맙-사포린 적정 + 고정 농도인 75nM 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,9 + 800 nM 클로로퀸 및 대조군. B) A431 세포에 대한 CD71mab-사포린 적정 + 고정 농도인 10.5 nM 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,9 + 500 nM 클로로퀸 및 대조군. C) MDA-MB-468 세포에 대한 CD71mab-사포린 적정 + 고정 농도인 10.5 nM 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,9 + 500 nM 클로로퀸 및 대조군. D) SK-BR-3 세포에 대한 CD71mab-사포린 적정 + 고정 농도인 5 nM 트라투주맙-(Cys-L-SO1861)3,9 + 500 nM 클로로퀸 및 대조군.
도 10-6: 2-표적 2-성분. 본 발명에 따른 치료 조합에 의한 A431 세포 (EGFR++/HER2+/-) (A) 및 A2058 세포 (EGFR-/HER2+/-) (B)에서의 EGFR/HER2 표적화된 유전자 침묵. A) A431 세포 (A) 및 A2058 세포 (B)에 대한 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,9 적정 + 고정 농도인 100 nM 트라투주맙-(Lys-L-HSP27BNA)4,4 및 대조군. C, D) A431 세포 (A) 및 A2058 세포 (B)에 대한 트라투주맙-(Lys-L-HSP27BNA)4,4 적정 + 고정 농도인 77nM 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,9 및 대조군. 기호 설명 및/또는 축은 A, B, C 또는 D 모두에 대해 동일하다.
도 11-6: 2-표적 2-성분. A) 본 발명에 따른 치료 조합에 의한 MDA-MB-468 세포 (EGFR++/CD71+) (A) HeLa 세포 (EGFR+/-/CD71+), SK-BR-3 세포 (HER2++/CD71+) (B) 및 JIMT-1 세포 (HER2+/-/CD71+)에서의 EGFR/CD71 또는 HER2/CD71 표적화된 세포 사멸. A) MDA-MB-468 세포에 대한 세툭시맙-Cys-(덴드론(-L-SO1861)4)3,9 적정 + 고정 농도 10 pM CD71mab-사포린 및 대조군. B) A) HeLa 세포에 대한 세툭시맙-Cys-(덴드론(-L-SO1861)4)3,9 적정 + 고정 농도 10 pM CD71mab-사포린 및 대조군. C) SK-BR-3 세포에 대한 트라투주맙-Cys-(덴드론(-L-SO1861)4)4 적정 + 고정 농도 10 pM CD71mab-사포린 및 대조군. D) JIMT-1 세포에 대한 트라투주맙-Cys-(덴드론(-L-SO1861)4)4 적정 + 고정 농도 10 pM CD71mab-사포린 및 대조군.
도 12-6: 2-표적 2-성분 대 T-DM1. A431 세포 (EGFR++/HER2+/-)는 본 발명에 따른 치료 조합인, 트라투주맙-사포린 + 75 nM 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,9으로 효과적으로 사멸될 수 있으나, T-DM1 + 75 nM 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,9의 적정은 이러한 낮은 독소 농도에서 효과적이지 않다. T-DM1은 트라투주맙-엠탄신 (Kadcyla®)으로, 항체 당 ~3.5 엠탄신 (DM1) 독소분자를 갖는다.
도 13-6: 2-표적 2-성분. 본 발명에 따른 치료 조합에 의한 A431 세포 (EGFR+++/HER2+/-) (A) 및 CaSKi 세포 (EGFR++/HER2+/-) (B) 및 A2058 세포 (EGFR-/HER2+/-)에서의 EGFR/CD71 및 EGFR/HER2 표적화된 세포 사멸. A, B, C) A431 세포 (A), CaSKi 세포 (B) 및 A2058 세포 (C)에 대한 세툭시맙-(Cys-L-QSmix)4,1 적정 + 고정 농도 10 pM 트라투주맙-사포린 또는 10 pM CD71mab-사포린 및 대조군. QSmix는 퀼라자 사포나리아 추출물로부터의 사포닌의 혼합물이다.
도 14-6: 모든 세포주에 대한 대조군 처리. A-D) 트라투주맙 (A), 세툭시맙 (B), T-DM1, (C) 유리 독소: 사포린 및 디안틴 (D) 또는 비세포 결합 IgG에 커플링된 사포린 (D)이 나타내어진 세포주 SK-BR-3, JIMT-1, MDA-MB-468, A431, CaSki, HeLa, A2058, BT-474로 처리된 경우의 세포 생존력. 기호 설명 및/또는 축은 A, B, C 또는 D모두에 대해 동일하다.
도 15-6: 2-표적 2-성분 개념: mAb1-SO1861 + mAb2-단백질 독소. SO1861 및 독소(리보조말 불활성화 단백질)는 각각 독립적으로 항체(mAb)에 접합되어 표적 세포로 전달 및 내재화된다. 1) mAb1-SO1861 및 mAb2-단백질 독소가 이의 상응하는 세포 표면 수용체에 결합하고, 2) 두 접합체의 수용체-매개 엔도사이토시스가 일어나고, 3) 낮은 엔도리소조말 pH 및 적절한 농도에서, SO1861이 활성화되어 엔도리소조말 탈출을 가능하게 하고, 4) 세포질로의 독소의 방출이 일어나고 5) 독소가 세포사를 유도한다.
도 16-6: 2-표적 2-성분개념: mAb1-SO1861 + mAb2-BNA 올리고. SO1861 및 안티센스 BNA 올리고뉴클레오티드는 각각 개별적으로 항체(mAb)에 접합되어 표적 세포로 전달 및 내재화된다. 1) mAb1-SO1861 및 mAb2-BNA올리고가 이의 상응하는 세포 표면 수용체에 결합하고, 2) 두 접합체의 수용체-매개 엔도사이토시스가 일어나고, 3) 낮은 엔도리소조말 pH 및 적절한 농도에서, SO1861이 활성화되어 엔도리소조말 탈출을 가능하게 하고, 4) 세포질로의 BNA 올리고의 방출이 일어나고 5) 표적 유전자 침묵.
도 1-7: A431 세포 (A) 및 A2058 세포 (B)에 대한 비접합화된 SO1861-EMCH 및 HSP27BNA의 조합, 및 SO1861-EMCH 및 세툭시맙-(Lys-L-HSP27BNA) 적정 + 고정 농도인 4000 nM SO1861-EMCH 및 대조군에 의한 A431 세포 (EGFR++) (A) 및 A2058 세포 (EGFR-) (B)에서의 EGFR 표적화된 유전자 침묵. (A) 및 (B)는 HSP27BNA 또는 세툭시맙-HSP27BNA 접합체 (nM) 기반의 그래프이다. A431 세포 (C) 및 A2058 세포 (D)에 대한 비접화화된 SO1861-EMCH와 유리 HSP27BNA의 조합, 및 SO1861-EMCH 및 접합체 세툭시맙-(Lys-L-HSP27BNA) 적정 + 고정 농도인 4000 nM SO1861-EMCH 및 대조군에 의한 A431 세포 (EGFR++) (A) 및 A2058 세포 (EGFR-) (B)에서의 EGFR 표적화된 유전자 침묵. (C) 및 (D)는 HSP27BNA (nM) 기반의 그래프이다. 도 1-7B 및 D의 기호 설명은 도 1-7A 및 C에도 적용된다.
생활성 분자가 작용하도록 하기 위하여, 분자는 예를 들어 혈액 혈청에서, 세포 표면의 외부에서 또는 세포 또는 세포 소기관(organelle)의 내부에서, 이의 표적과 체결(engage)될 수 있어야 한다. 대부분의 모든 단백질-기반 표적화된 독소의 활성 모이어티는, 예를 들어, 이의 표적 조절 효과를 매개하기 위해 표적 세포의 사이토솔(cytosol)에 진입하여야 한다. 많은 컨스텔레이션(constellations)에서, (1) 표적화 모이어티(targeting moiety)가 저조하게 내재화(internalized)되고 세포의 외부에 결합된 채로 남아있기 때문에, (2) 내재화 후에 세포 표면으로 다시 재순환되거나 또는 (3) 엔도리소좀으로 수송되고 여기서 분해되기 때문에, 독소는 비효과적으로 남아 있게 된다. 이러한 기본적인 문제는 수십년 동안 알려져 있었으며, 500개를 넘는 표적화된 독소가 과거의 수십년동안 조사되었음에도 불구하고, 문제가 아직 해결되지 않았고 단지 하나의 항체-표적화된 단백질 독소, 모세투모맙 파슈도톡소-tdfk(LUMOXITI®, AstraZeneca Pharmaceuticals LP)만이 지금까지 FDA에 의해 재발된 또는 난치성 모발 세포 백혈병에 대해 승인되었다.
이러한 문제를 극복하기 위해, 소포체 내의 생합성 경로의 내인성 세포 막 수송 복합체(endogenous cellular membrane transport complexes)에 독소를 다시 보내기(redirect) 위한 접근법 및 엔도좀의 막 완전성(membrane integrity), 즉 세포에서의 엔도사이틱 경로(endocytic pathway)의 구획(compartment)을 파괴하거나 약화시키는 기술, 및 이에 따라 엔도좀 탈출(endosomal escape)을 용이하게 하는 기술을 포함하는 많은 전략이 기술되었다. 이는 리소조모트로픽 아민, 카르복실산 이오노포어(carboxylic ionophores), 칼슘 채널 안타고니스트, 바이러스, 박테리아, 식물, 동물, 사람 및 합성 기원의 다양한 세포-투과성 펩티드, 다른 유기 분자 및 광-유도 기술의 사용을 포함한다. 표적화된 독소의 효능은 전형적으로 세포 배양물에서 백- 또는 천-배, 예외적인 경우 백만-배 초과 증가됨에도 불구하고, 엔도좀 탈출 인핸서를 다른 물질과의 동시-투여해야 하는 요건은 추가적인 부작용, 표적 특이성의 손실, 치료 윈도우 및 세포 유형-의존적 변이를 결정하는 어려움을 포함하는 새로운 문제를 가지고 있다.
물리화학적 기술을 포함한 모든 전략은 막과 다소 직접적으로 상호작용하며 필수적으로 작은 화학적 분자, 2차 대사산물, 펩티드 및 단백질을 포함하는 인핸서 분자를 필요로 한다. 모든 이러한 물질의 일반적인 특징은 이들이 그 자체로 표적 세포-특이성이 아니고 표적화된 독소 이외의 다른 동역학(kinetics)으로 분배되는 것이다. 이는 현재의 접근법의 주요한 한 가지 결점이다.
본 발명은 특정일 구현예와 관련하여 기술될 것이지만, 본 발명은 이에 한정되지 않고 단지 청구범위에 의해서만 한정된다. 본원에 기술된 본 발명의 구현예는 달리 명시되지 않는 한, 조합 및 합동하여 작동할 수 있다.
본 발명이 몇몇 구현예에 관하여 기술되었지만, 대안, 변형, 치환 및 그 등가물은 본 명세서를 읽고, 도면 및 그래프를 연구함으로써 당업자에게 명백할 것이다. 본 발명은 예시된 구현예 의해 어떠한 방식으로도 한정되지 않는다. 첨부된 청구범위에 의해 정의된 범위를 벗어나지 않고 변경될 수 있다.
본 발명의 일 견지는 화학식 I의 화학구조를 갖는 치료 분자에 관한 것이다:
A1m ((-L9w) ((- L1q - B1n)u ((- L2r - L3s) (- L4v - C)p)t))x
(화합물 I),
여기서,
B1이 제1 이펙터 모이어티이면, A1은 제1 리간드이거나, B1이 제1 리간드이면, A1은 제1 이펙터 모이어티이고;
C는 사포닌이고;
A1이 제1 리간드이고 B1이 제1 이펙터 모이어티이면, m = 0 또는 1이고;
A1이 제1 이펙터 모이어티이고 B1이 제1 리간드이면, m = 0-32이고;
B1이 제1 리간드이고 A1이 제1 이펙터 모이어티이거나, A1이 제1 리간드이고 B1이 제1 이펙터 모이어티이면, n = 0 또는 1이고;
p = 1-128 중 어느 하나이고;
L1은 2개의 화학기를 공유 커플링(covalently coupling)하기 위한 적어도 하나의 링커이고;
L2는 2개의 화학기를 공유 커플링하기 위한 적어도 하나의 링커이고;
L3은 2개의 화학기를 공유 커플링하기 위한 적어도 하나의 올리고머 또는 폴리머 스캐폴드이고;
L4는 2개의 화학기를 공유 커플링하기 위한 적어도 하나의 링커이고;
L9는 3개의 화학기를 공유 커플링하기 위한 3작용성 링커이고;
q = 0 또는 1이고;
r = 0 또는 1이고;
s = 0 또는 1이고;
s = 0이면, t = 0, 1 또는 2이고, s = 1이면, t = 0-16 중 어느 하나이고;
A1이 제1 리간드이고 B1이 제1 이펙터 모이어티이면, u = 0-32 중 어느 하나이거나, A1이 제1 이펙터 모이어티이고 B1이 제1 리간드이면, u = 1이고;
v = 0 또는 1이고;
w = 1 또는 0; 그리고
x = 1-16이다.
본 발명의 일 견지는 본 발명에 따른 치료 분자 및 화합물 II의 화학 구조를 갖는 제2 치료 분자를 포함하는 치료 조합에 관한 것이다:
A2a ((-L10j) ((- L5d - B2b)h ((- L6e - L7f) (- L8i - C)c)g))k
(화합물 II),
여기서,
B2가 제2 이펙터 모이어티이면, A2는 제2 리간드이거나, B2가 제2 리간드이면, A2는 제2 이펙터 모이어티이고;
C는 사포닌이고;
A2가 제2 리간드이고 B2가 제2 이펙터 모이어티이면, a = 0 또는 1이거나, A2가 제2 이펙터 모이어티이고 B2가 제2 리간드이면, a = 0-32이고;
B2가 제2 리간드이고 A2가 제2 이펙터 모이어티이거나, A2가 제2 리간드이고 B2가 제2 이펙터 모이어티이면, b = 0 또는 1이고;
c = 1-128 중 어느 하나이고;
L5는 2개의 화학기를 공유 커플링하기 위한 적어도 하나의 링커이고;
L6은 2개의 화학기를 공유 커플링하기 위한 적어도 하나의 링커이고;
L7은 2개의 화학기를 공유 커플링하기 위한 적어도 하나의 올리고머 또는 폴리머 스캐폴드이고;
L8은 2개의 화학기를 공유 커플링하기 위한 적어도 하나의 링커이고;
L10은 3개의 화학기를 공유 커플링하기 위한 3작용성 링커이고;
d = 0 또는 1이고;
e = 0 또는 1이고;
f = 0 또는 1이고;
f = 0이면, g = 0, 1 또는 2이고, f = 1이면, g = 0-16 중 하나이고;
A2가 제2 리간드이고 B2가 제2 이펙터 모이어티이면, h = 0-32 중 어느 하나이거나, A2가 제2 이펙터 모이어티이고 B2가 제2 리간드이면, h = 1;
i = 0 또는 1이고;
j = 1 또는 0 그리고;
k = 1-16이다.
일 구현예는 f = 0이고 t> 0이면, g = 0, 1 또는 2, f = 0이고 t = 0이면, g = 1 또는 2, f = 1이고 t> 0이면, g = 0-16 중 어느 하나, 그리고 f = 1이고 t = 0이면, g = 1-16 중 어느 하나인, 제2 치료 분자이다.
일 구현예는 제1 리간드 A1 또는 B1 및/또는 제2 리간드 A2 또는 B2는 면역 글로불린, 면역 글로불린의 결합 도메인 또는 면역 글로불린의 결합 단편, 예컨대 항체, IgG, Vhh 도메인 또는 Vh 도메인을 포함하거나 이로 구성되는 분자, Fab, scFv, Fv, dAb, F(ab)2, Fcab 단편을 포함하거나 이로 구성되거나, 또는 적어도 하나의 비-단백질성 리간드 및/또는 적어도 하나의 단백질성 리간드, 세포-표면 분자에 대한 결합을 위한 리간드, 예컨대 EGF 또는 사이토카인을 포함하거나 이로 구성되며, 제1 리간드 및 제2 리간드는 동일하거나 상이한, 본 발명의 치료 분자 또는 본 발명의 제2 치료 분자이다.
일 구현예는 제1 리간드 A1 또는 B1 및/또는 제2 리간드 A2 또는 B2가 종양-세포 수용체, 바람직하게는 종양-세포 특이적 수용체, 바람직하게는 CD71, CA125, EpCAM(17-1A), CD52, CEA, CD44v6, FAP, EGF-IR, 인테그린(integrin), 신데칸-1(syndecan-1), 바스큘라 인테그린 알파-V 베타-3(vascular integrin alpha-V beta-3), HER2, EGFR, CD20, CD22, 엽산 수용체 1(Folate receptor 1), CD146, CD56, CD19, CD138, CD27L 수용체, PSMA, CanAg, 인테그린-알파V, CA6, CD33, 메소텔린, 크립토, CD3, CD30, CD239, CD70, CD123, CD352, DLL3, CD25, 에프린A4, MUC1, Trop2, CEACAM5, CEACAM6, HER3, CD74, PTK7, Notch3, FGF2, C4.4A, FLT3, CD38, FGFR3, CD7, PD-L1, CTLA4, CD52, PDGFRA, VEGFR1, VEGFR2로부터 선택된 것, 보다 바람직하게는 CD71, EGFR 및 HER2로부터 선택되는 것의 종양-세포 에피토프, 바람직하게는 종양-세포 특이적 에피토프에 결합하며, 제1 리간드 및 제2 리간드는 동일하거나 상이한 종양-세포 에피토프, 바람직하게는 종양-세포 특이적 에피토프에 결합하며/하거나 제1 리간드가 결합할 수 있는 종양-세포 수용체, 바람직하게는 종양-세포 특이적 수용체는 제2 리간드가 결합할 수 있는 종양-세포 수용체, 바람직하게는 종양-세포 특이적 수용체와 동일하거나 상이한, 본 발명의 치료 분자 또는 본 발명의 제2 치료 분자이다.
일 구현예는 제1 리간드 A1 또는 B1 및/또는 제2 리간드 A2 또는 B2가 세툭시맙, 다라투무맙, 젬투주맙, 트라스투주맙, 파니투무맙, 브렌투시맙, 이노투주맙, 모세투모맙, 폴라투주맙, 오비누투주맙, IgG 유형의 OKT-9 항-CD71 모노클로날 항체, 페르투주맙, 리투시맙, 오파투무맙, 허셉틴, 알렘투주맙, 피나투주맙, OKT-10 항-CD38 모노클로날 항체, 표 A2 또는 표 A3 또는 표 A4의 항체, 바람직하게는 세툭시맙 또는 트라스투주맙 또는 OKT-9, 또는 바람직하게는 (a) 종양-세포 특이적 수용체 결합-도메인(들) 및/또는 (a) 종양-세포 특이적 수용체 결합 단편(들)인 이의 적어도 하나의 종양-세포 수용체 결합-도메인 및/또는 이의 적어도 하나의 종양-세포 수용체 결합-단편을 포함하거나 이러 구성되며, 제1 리간드는 제2 리간드와 동일하거나 상이한, 본 발명의 치료 분자 또는 본 발명의 제2 치료 분자이다.
일 구현예는 제1 리간드 A1 또는 B1은 제1 리간드가 종양 세포상의 이의 결합 파트너에 결합한 후에 종양 세포에 의해 내재화(internalized)되고, 바람직하게는 종양 세포에 대한 제1 리간드의 결합 후에 제1 리간드와 종양 세포 상의 제1 리간드의 결합 파트너의 복합체의, 예를 들어, 엔도사이토시스를 통한 종양-세포 수용체-매개 내재화되는, 본 발명의 치료 분자 또는 본 발명의 제2 치료 분자이다.
일 구현예는 제1 리간드 A2 또는 B2는 제2 리간드가 종양 세포상의 이의 결합 파트너에 결합한 후에 종양 세포에 의해 내재화되고, 바람직하게는 종양 세포에 대한 제2 리간드의 결합 후에 제2 리간드와 종양 세포 상의 제2 리간드의 결합 파트너의 복합체의, 예를 들어, 엔도사이토시스를 통한 종양-세포 수용체-매개 내재화되는, 본 발명의 치료 분자 또는 본 발명의 제2 치료 분자이다.
일 구현예는 제1 이펙터 모이어티 A1 또는 B1 및/또는 제2 이펙터 모이어티 A2 또는 B2가 올리고뉴클레오티드, 핵산 및 제노 핵산의 임의의 하나 이상 중 적어도 하나, 바람직하게는 벡터, 유전자, 세포 자살 유도 트랜스진, 데옥시리보핵산 (DNA), 리보핵산 (RNA), 안티센스 올리고뉴클레오티드 (ASO, AON), 짧은 간섭 RNA (siRNA), 마이크로RNA (miRNA), DNA 앱타머, RNA 앱타머, mRNA, 미니-서클 DNA, 펩티드 핵산 (PNA), 포스포라미데이트 모르폴리노 올리고머 (PMO), 잠금 핵산 (LNA), 브리지 핵산 (BNA), 2'-디옥시-2'-플루오로아라비노 핵산 (FANA), 2'-O-메톡시에틸-RNA (MOE), 2'-O, 4'-아미노에틸렌 브리지 핵산, 3'-플루오로 헥시톨 핵산 (FHNA), 플라스미드, 글리콜 핵산 (GNA) 및 트레오스 핵산 (TNA) 또는 이의 유도체 중 임의의 하나 이상으로부터 선택된 것, 보다 바람직하게는 BNA, 예를 들어 HSP27 단백질 발현을 침묵시키는 BNA를 포함하거나 이로 구성되며, 제1 이펙터 모이어티 및 제2 이펙터 모이어티는 동일하거나 상이한, 본 발명의 치료 분자 또는 본 발명의 제2 치료 분자이다.
일 구현예는 제1 이펙터 모이어티 A1 또는 B1 및/또는 제2 이펙터 모이어티 A2 또는 B2가 적어도 하나의 단백질성 분자, 바람직하게는 펩티드, 단백질, 효소, 예컨대 우레아제 및 Cre-재조합효소, 단백질성 독소, 리보좀-불활성화 단백질, 표 A5 및/또는 박테리아 독소로부터 선택된 적어도 하나의 단백질 독소, 식물 독소 중 임의의 하나 이상으로부터 선택된, 보다 바람직하게는 바이러스 독소, 예컨대 아폽틴; 박테리아 독소, 예컨대 시가(Shiga) 독소, 시가-유사(Shiga-like) 독소, 슈도모나스 아에루기노사 엑소톡신(Pseudomonas aeruginosa exotoxin) (PE) 또는 PE의 엑소톡신 A, 전장 또는 절단된(truncated) 디프테리아 독소 (DT), 콜레라 독소; 곰팡이 독소, 예컨대 알파-사르신; 리보좀-불활성화 단백질 및 2형 리보좀-불활성화 단백질의 A 체인, 예컨대 디안틴, 예를 들어, 디안틴-30 또는 디안틴-32, 사포린 예를 들어, 사포린-S3 또는 사포린-S6, 보우가닌 또는 보우가닌의 탈-면역화(de-immunized) 유도체 디보우가닌, 시가-유사 독소 A, 포크위드(pokeweed) 항바이러스 단백질, 리신(ricin), 리신 A 체인, 모데신, 모데신 A 체인, 아브린, 아브린 A 체인, 볼켄신, 볼켄신 A 체인, 비스쿠민, 비스쿠민 A 체인을 포함하는 식물 독소; 또는 동물 또는 인간 독소, 예컨대 개구리 RNase, 또는 인간으로부터의 안지오게닌, 또는 그랜자임 B, 또는 이의 임의의 단편 또는 유도체 중 임의의 하나 이상으로부터 선택된 것을 포함하거나 이로 구성되며; 바람직하게는 단백질 독소가 디안틴 및/또는 사포린이며, 제1 이펙터 모이어티/모이어티들 및 제2 이펙터 모이어티/모이어티들은 동일하거나 상이한, 본 발명의 치료 분자 또는 본 발명의 제2 치료 분자이다.
일 구현예는 제1 이펙터 모이어티 A1 또는 B1 및/또는 제2 이펙터 모이어티 A2 또는 B2가 적어도 하나의 페이로드, 바람직하게는 리보좀 표적화 독소(toxin targeting ribosomes), 연장 인자 표적화 독소(toxin targeting elongation factors), 튜불린을 표적화 독소, DNA 표적화 독소, 및 RNA 표적화 독소 중 임의의 하나 이상으로부터 선택된 것, 보다 바람직하게는, 엠탄신, 파수도톡스, 메이탄시노이드 유도체 DM1, 메이탄시노이드 유도체 DM4, 모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE, 베도틴), 모노메틸 아우리스타틴F(MMAF, 마포도틴), 칼리케아미신, N-아세틸-y-칼리케아미신, 피롤로벤조디아제핀 (PBD) 다이머, 벤조디아제핀, CC-1065 유사체, 듀오카르마이신, 독소루비신, 파클리타셀, 도세타셀, 시스플라틴, 시클로포스파미드, 에토포사이드, 도세타셀, 5-플루오로우라실(5-FU), 미토산트론, 튜불리신, 인돌리노벤조디아제핀, AZ13599185, 크립토피신, 리조신, 메토트레세이트, 안트라사이클린, 캠토테신 유사체, SN-38, DX-8951f, 엑사테칸 메실레이트, 슈도모나스 아에루기노사 엑소톡신(PE38)의 절단된 형태, 듀오카르마이신 유도체, 아마니틴, a-아마니틴, 스플라이세오스타틴, 타일란스타틴, 오조가미신, 테시린, 앰버스타틴269 및 소라브탄신, 또는 이의 유도체 중 임의의 하나 이상으로부터 선택된 것을 포함하거나 이로 구성되는, 본 발명의 치료 분자 또는 본 발명의 제2 치료 분자이다.
일 구현예는 치료 분자 및/또는 제2 치료 분자가 젬투주맙 오조가미신, 브렌투시맙 베도틴, 트라스투주맙 엠탄신, 이노투주맙 오조가미신, 모세투모맙 파수도톡스 및 폴라투주맙 베도틴 및 표 A2 및 표 A3의 항체-약물 접합체, 또는 바람직하게는 (a) 종양-세포 특이적 수용체 결합-도메인(들) 및/또는 (a) 종양-세포 특이적 수용체 결합-단편(들)인 이의 적어도 하나의 종양-세포 특이적 수용체 결합-도메인 및/또는 이의 적어도 하나의 종양-세포 특이적 수용체 결합-단편 중 임의의 하나를 포함하거나 이로 구성되며, 치료 분자 또는 제2 치료 분자는 동일하거나 상이한, 본 발명의 치료 분자 또는 본 발명의 제2 치료 분자이다.
일 구현예는 사포닌 C가 위치 C-23에서 알데히드 작용(function)을 갖는 12,13-디하이드로올레아난 유형에 속하며, 선택적으로 사포닌의 C-3 베타-OH기에서 카보하이드레이트 치환체에 글루쿠론산 작용을 포함하는, 비스데스모시딕 트리테르펜 사포닌 또는 트리테르페노이드 사포닌 및/또는 집소필라(Gypsophila) 종 및/또는 사포나리아(Saponaria) 종 및/또는 아그로스템마(Agrostemma) 종 및/또는 퀼라자(Quillaja) 종, 예컨대 퀼라자 사포나리아(Quillaja saponaria)에서 분리된(isolated) 사포닌인, 본 발명의 치료 분자 또는 본 발명의 제2 치료 분자이다.
일 구현예는 사포닌 C가 단일 특이적 사포닌이거나 또는 2개 이상의 상이한 사포닌의 혼합물, 예컨대 표 A1 또는 스킴 I, S01861, SA1657, GE1741, SA1641, QS-21, QS-21A, QS-21 A-api, QS-21 A-xyl, QS-21B, QS-21 B-api, QS-21 B-xyl, QS-7-xyl, QS-7-api, QS-17-api, QS-17-xyl, QS1861, QS1862, 퀼라자사포닌(Quillajasaponin), 사포늄 앨범(Saponinum album), QS-18, Quil-A, Gyp1, 집소사이드(gypsoside) A, AG1, AG2, S01542, S01584, S01658, S01674, S01832, 또는 이들의 임의의 입체 이성질체 및/또는 이들의 임의의 조합 중 하나 이상이며, 바람직하게는 사포닌은 SO1861 및/또는 GE1741 및/또는 SA1641 및/또는 QS-21 및/또는 퀼라익산 아글리콘 코어(quillaic acid aglycon core), C-3베타-OH기에 Gal-(1→2)-[Xyl-(1→3)]-GlcA 카보하이드레이트 치환체 및 C-28-OH기에 Glc-(1→3)-Xyl-(1→4)-Rha-(1→2)-[Xyl-(1→3)-4-OAc-Qui-(1→4)]-Fuc 카보하이드레이트 치환체를 갖는 사포닌이며/이거나 3-O-베타-D-갈락토피라노실-(1→2)-[베타-D-자일로피라노실-(1→3)]-베타-D-글루쿠로노피라노실 퀼라익산 28-0-베타-D-글루코피라노실-(1→3)-베타-D-자일로피라노실-(1→4)-알파-L-람노피라노실-(1→2)-[베타-D자일로피라노실-(1→3)-4-OAc-베타-D-퀴노보피라노실-(1→4)]-베타-D-푸코피라노사이드이며, 보다 바람직하게는 사포닌은 SO1861 및/또는 QS-21인, 본 발명의 치료 분자 또는 본 발명의 제2 치료 분자이다.
일 구현예는 사포닌 C는 분자량이 적어도 1.500 달톤이고 C-3 위치에 제1 분지형 카보하이드레이트 측쇄를 가지며, 제1 분지형 카보하이드레이트 측쇄가 선택적으로 글루쿠론산을 함유하는, C-23 위치에 알데히드기를 함유하고 선택적으로 C-16 위치에 히드록실기를 함유하는 올레아난형(oleanan-type) 트리테르펜을 포함하는 비스데스모시딕 사포닌이며, 사포닌은 C-28 위치에 제2 분지형 카보하이드레이트 측쇄를 갖는 에스테르기를 함유하며, 제2 분지형 카보하이드레이트 사슬은 선택적으로 적어도 하나의 아세틸 잔기, 예컨대 2개의 아세틸 잔기 및/또는 적어도 하나의 디옥시 카보하이드레이트 및/또는 퀴노보스 및/또는 글루코스 및/또는 4-메톡시신남산을 함유하며, 및/또는 선택적으로 5-0-[5-0-Ara/Api-3,5-디하이드록시-6-메틸-옥타노일]-3,5-디하이드록시-6-메틸-옥탄산(octanoic acid)을 포함하며, 및/또는 선택적으로 에스테르 결합을 통해 카보하이드레이트에 결합된 5-0-[5-0-Rha-(1→2)-Ara/Api-3,5-디하이드록시-6-메틸-옥타노일]-3,5-디하이드록시-6-메틸-옥탄산을 포함하는, 적어도 4개의 카보하이드레이트 유닛을 바람직하게 포함하거나, 적어도 하나의 사포닌은 QS-21 또는 QS-21A, QS-21 A-api, QS-21 A-xyl, QS-21B, QS-21 B-api, QS-21 B-xyl, QS-7-xyl, QS-7-api, QS-17-api, QS-17-xyl, QS-18, QS1861, 양성자화된 QS1861 (QS1862), Quil-A 중 임의의 하나 이상인, 본 발명의 치료 분자 또는 본 발명의 제2 치료 분자이다.
일 구현예는 사포닌 C가 위치 C-23에 알데히드 작용을 갖는 12,13-디하이드로올레아난 유형에 속하는 비스데스모시딕 트리테르펜 사포닌이며, 사포닌 C는 사포닌 C의 알데히드 작용, 바람직하게는 위치 C-23의 알데히드 작용, 바람직하게는 링커 L2, L4, L6, L8, L9 및/또는 L10을 통해, 보다 바람직하게는 절단 가능한 링커 L2, L4, L6, L8, L9 및 L10을 통해 제1 리간드 A1 또는 B1 및/또는 제1 이펙터 모이어티 B1 또는 A1 및/또는 제2 리간드 A2 또는 B2 및/또는 제2 이펙터 모이어티 B2 또는 A2의 아미노산 잔기에 공유 커플링되며, 상기 아미노산 잔기는 바람직하게는 시스테인 및 라이신으로부터 선택되는, 본 발명의 치료 분자 또는 본 발명의 제2 치료 분자이다.
일 구현예는 사포닌 C가 위치 C-23에 알데히드 작용을 갖는 12,13-디하이드로올레아난 유형에 속하는 비스데스모시딕 트리테르펜 사포닌이며, 적어도 하나의 사포닌의 위치 C-23의 알데히드 작용은 링커 N-ε-말레이미도카프로산 히드라지드에 공유 커플링되고, 링커는 티오-에테르 결합을 통해 제1 리간드 A1 또는 B1 및/또는 제1 이펙터 모이어티 B1 또는 A1 및/또는 제2 리간드 A2 또는 B2 및/또는 제2 이펙터 모이어티 B2 또는 A2의 설프하이드릴기(sulfhydryl group), 예컨대 시스테인의 설프하이드릴기에 공유 커플링되는, 본 발명의 치료 분자 또는 본 발명의 제2 치료 분자이다.
일 구현예는 사포닌 C가 위치 C-23에서 알데히드 작용을 갖는 12,13-디하이드로올레아난 유형에 속하며 사포닌의 C-3베타-OH기에서 카보하이드레이트 치환체에 글루쿠론산 작용을 포함하는 비스데스모시딕 트리테르펜 사포닌이며, 사포닌 C는 사포닌 C의 글루크론산 작용을 통해, 존재하면, 바람직하게는 링커 L2, L4, L6, L8, L9 및/또는 L10을 통해 제1 리간드 A1 또는 B1 및/또는 제1 이펙터 모이어티 B1 또는 A1 및/또는 제2 리간드 A2 또는 B2 및/또는 제2 이펙터 모이어티 B2 또는 A2의 아미노산 잔기에 공유 커플링되고, 아미노산 잔기는 바람직하게는 시스테인 및 라이신으로부터 선택되고, 보다 바람직하게는 아미노산 잔기는 라이신인, 본 발명의 치료 분자 또는 본 발명의 제2 치료 분자이다.
일 구현예는 사포닌 C가 위치 C-23에서 알데히드 작용을 갖는 12,13-디하이드로올레아난 유형에 속하며 사포닌의 C-3베타-OH기의 카보하이드레이트 치환체에 글루쿠론산 작용을 포함하는 비스데스모시딕 트리테르펜 사포닌이며, 적어도 하나의 사포닌의 C-3베타-OH기의 카보하이드레이트 치환체의 글루쿠론산 작용은 링커 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트에 공유 커플링되며, 링커는 아미드 결합을 통해 제1 리간드 A1 또는 B1 및/또는 제1 이펙터 모이어티 B1 또는 A1 및/또는 제2 리간드 A2 또는 B2 및/또는 제2 이펙터 모이어티 B2 또는 A2의 아민기, 예컨데 제1 리간드 A1 또는 B1 및/또는 제1 이펙터 모이어티 B1 또는 A1 및/또는 제2 리간드 A2 또는 B2 및/또는 제2 이펙터 모이어티 B2 또는 A2의 N-말단(terminus) 또는 라이신의 아민기에 공유 커플링되는, 본 발명의 치료 분자 또는 본 발명의 제2 치료 분자이다.
일 구현예는 제1 리간드 A1 또는 B1 및/또는 제1 이펙터 모이어티 B1 또는 A1 및/또는 제2 리간드 A2 또는 B2 및/또는 제2 이펙터 모이어티 B2 또는 A2가 하나 이상의 공유 결합된 사포닌 C, 바람직하게는 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 16, 32, 64, 128 또는 1-100개의 사포닌, 또는 그 사이의 임의의 수의 사포닌, 예컨대 7, 9, 12개의 사포닌을 포함하는, 본 발명의 치료 분자 또는 본 발명의 제2 치료 분자이다.
일 구현예는 제1 리간드 A1 또는 B1 및/또는 제1 이펙터 모이어티 B1 또는 A1 및/또는 제2 리간드 A2 또는 B2 및/또는 제2 이펙터 모이어티 B2 또는 A2가 하나 이상의 공유 결합된 사포닌 C를 포함하고, 사포닌(들) C는 r, s, v, e, f 및 i가 0인 경우에, 제1 리간드 A1 또는 B1 및/또는 제1 이펙터 모이어티 B1 또는 A1 및/또는 제2 리간드 A2 또는 B2 및/또는 제2 이펙터 모이어티의 아미노산 잔기에, 바람직하게는 시스테인 및/또는 라이신에 직접 공유 결합되며/결합되거나 적어도 하나의 링커 L2, L4, L6, L8, L9 및/또는 L10을 통해, 또는 적어도 하나의 절단 가능한 링커 L2, L4, L6, L8, L9 및/또는 L10을 통해 및/또는 적어도 하나의 올리고머 또는 폴리머 스캐폴드 L3 및/또는 L7, 바람직하게는 이러한 스캐폴드의 1-8개 또는 이러한 스캐폴드의 2-4개를 통해 공유 결합되며, 적어도 하나의 스캐폴드는 선택적으로 덴드론을 기반으로 하며, 1-32개의 사포닌, 바람직하게는 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 16, 32개의 사포닌, 또는 그 사이의 임의의 수의 사포닌, 예컨대 7, 9, 12개의 사포닌이 적어도 하나의 스캐폴드에 공유 결합되는, 본 발명의 치료 분자 또는 본 발명의 제2의 치료 분자이다.
일 구현예는 사포닌 C가 위치 C-23에 알데히드 작용을 갖는 12,13-디하이드로올레아난 유형에 속하는 비스데스모시딕 트리테르펜 사포닌이며, 사포닌 C는 사포닌 C의 알데히드 작용을 통해, 바람직하게는 위치 C-23의 알데히드 작용, 바람직하게는 링커 L2, L4, L6, L8, L9 및/또는 L10을 통해, 보다 바람직하게는 절단 가능한 링커 L2, L4, L6, L8, L9 및 L10을 통해 제1 리간드 A1 또는 B1 및/또는 제1 이펙터 모이어티 B1 또는 A1 및/또는 제2 리간드 A2 또는 B2 및/또는 제2 이펙터 모이어티 B2 또는 A2의 아미노산 잔기에 공유 커플링되며, 상기 아미노산 잔기는 바람직하게는 시스테인 및 라이신으로부터 선택되며, 절단 가능한 링커 L2, L4, L6, L8, L9 및/또는 L10은 산성 조건, 환원성 조건, 효소 조건 또는 광-유도 조건 하에서 절단되며, 바람직하게는 절단 가능한 링커는 사포닌에 결합될 때, 산성 조건 하에서 절단될 수 있는 히드라존 결합 또는 히드라지드 결합을 포함하고 및/또는 사포닌에 결합될 때, 단백질 분해(proteolysis), 예를 들어 카셉신 B에 의해 단백질 분해될 수 있는 결합을 포함하고 및/또는 절단 가능한 링커는 환원성 조건 하에서의 절단될 수 있는 디설파이드 결합을 포함하는, 본 발명의 치료 분자, 또는 본 발명의 제2 치료 분자이다.
일 구현예는 사포닌 C가 위치 C-23에 알데히드 작용을 갖는 12,13-디하이드로올레아난 유형에 속하는 비스데스모시딕 트리테르펜 사포닌이며, 사포닌 C는 사포닌 C의 알데히드 작용을 통해, 바람직하게는 위치 C-23의 알데히드 작용, 바람직하게는 링커 L2, L4, L6, L8, L9 및/또는 L10을 통해, 보다 바람직하게는 절단 가능한 링커 L2, L4, L6, L8, L9 및 L10을 통해 제1 리간드 A1 또는 B1 및/또는 제1 이펙터 모이어티 B1 또는 A1 및/또는 제2 리간드 A2 또는 B2 및/또는 제2 이펙터 모이어티 B2 또는 A2의 아미노산 잔기에 공유 커플링되며, 상기 아미노산 잔기는 바람직하게는 시스테인 및 라이신으로부터 선택되며, 절단 가능한 링커 L2, L4, L6, L8, L9 및/또는 L10은 포유류 세포, 바람직하게는 인간 세포의 엔도좀 및/또는 리소좀에 존재하는 산성 조건, 바람직하게는 pH 4.0-6.5, 그리고 보다 바람직하게는 pH ≤ 5.5 하에서 생체내(in vivo)에서 절단되는, 본 발명의 치료 분자 또는 본 발명의 제2 치료 분자이다.
일 구현예는 폴리머 또는 올리고머 스캐폴드 L3 및/또는 L7이 폴리머 또는 올리고머 구조를 포함하고 화학기를 포함하고, 화학기는 폴리머 또는 올리고머 스캐폴드 L3 및/또는 L7을 제1 리간드 및/또는 제1 이펙터 모이어티 및/또는 제2 리간드 및/또는 제2 이펙터 모이어티의 아미노산 잔기에 공유 커플링하기 위한 것인, 본 발명의 치료 분자 또는 본 발명의 제2 치료 분자이다.
일 구현예는 사포닌 C가 위치 C-23에서 알데히드 작용을 갖는 12,13-디하이드로올레아난 유형에 속하며 사포닌의 C-3베타-OH기의 카보하이드레이트 치환체에 글루쿠론산 작용을 포함하는 비스데스모시딕 트리테르펜 사포닌이며, 적어도 하나의 사포닌의 C-3베타-OH기의 카보하이드레이트 치환체의 글루쿠론산 작용은 링커 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트에 공유 커플링되며, 링커는 아미드 결합을 통해 제1 리간드 A1 또는 B1 및/또는 제1 이펙터 모이어티 B1 또는 A1 및/또는 제2 리간드 A2 또는 B2 및/또는 제2 이펙터 모이어티 B2 또는 A2의 아민기, 예컨데 제1 리간드 A1 또는 B1 및/또는 제1 이펙터 모이어티 B1 또는 A1 및/또는 제2 리간드 A2 또는 B2 및/또는 제2 이펙터 모이어티 B2 또는 A2의 N-말단(terminus) 또는 라이신의 아민기에 공유 커플링되며, 적어도 하나의 사포닌은 절단 가능한 링커 L4 및/또는 L8를 통해 스캐폴드 L3 및/또는 L7의 폴리머 또는 올리고머 구조에 공유 결합되는, 본 발명의 치료 분자 또는 본 발명의 제2 치료 분자이다.
일 구현예는 스캐폴드를 제1 리간드 및/또는 제1 이펙터 모이어티 및/또는 제2 리간드 및/또는 제2 이펙터 모이어티의 아미노산 잔기에 공유 커플링하기 위한 폴리머 또는 올리고머 스캐폴드 L3 및/또는 L7의 화학기가 클릭 화학기(click chemistry group), 바람직하게는 테트라진, 아지드, 알켄 또는 알킨, 또는 이들 기의 사이클릭 유도체로부터 선택되는 것이며, 보다 바람직하게는 클릭 화학기는 아지드인, 본 발명의 치료 분자 또는 본 발명의 제2 치료 분자이다.
일 구현예는 제1 리간드 A1 또는 B1 및/또는 제1 이펙터 모이어티 B1 또는 A1 및/또는 제2 리간드 A2 또는 B2 및/또는 제2 이펙터 모이어티 B2 또는 A2가 하나 이상의 공유 결합된 사포닌 C, 바람직하게는 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 16, 32, 64, 128 또는 1-100개의 사포닌, 또는 그 사이의 임의의 수의 사포닌, 예컨대 7, 9, 12개의 사포닌을 포함하며, 적어도 하나의 사포닌이 제1 리간드 및/또는 제1 이펙터 모이어티 및/또는 제2 리간드 및/또는 제2 이펙터 모이어티에, 직접적으로 또는 적어도 하나의 링커, 예컨대 2-작용성 링커, 예를 들어 N-ε-말레이미도카프로산 히드라지드에 기초한 및/또는 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트에 기초한 2-작용성 링커, 또는 w = 1인 경우에, 3-작용성 링커 및/또는 j = 1인 경우에, 3-작용성 링커 L10, 예컨대 스킴 II의 3-작용성 링커를 통해 공유 결합되는, 본 발명의 치료 분자 또는 본 발명의 제2 치료 분자이다.
일 구현예는 w = 1인 경우에, 3-작용성 링커 및/또는 j = 1인 경우에, 3-작용성 링커 L10은 공유 결합된 적어도 하나의 사포닌을 갖는 제2 화학기, 제1 및/또는 제2 리간드에 대한 공유 결합을 위한 제3 화학기 및 적어도 하나의 제1 및/또는 제2 이펙터 모이어티에 대한 공유 결합을 위한 제1 화학기를 포함하며, 바람직하게는 3-작용성 링커는 스킴 II의 3작용성 링커인, 본 발명의 그리고 이전의 구현예를 포함하는 치료 분자 또는 이전의 구현예를 포함하는 본 발명의 제2 치료 분자이다.
일 구현예는 적어도 하나의 사포닌이 j = 1인 경우에, 3-작용성 링커 L9 및/또는 w = 1인 경우에, 3-작용성 링커 L10을 포함하는 적어도 하나의 링커를 통해 제1 리간드 및/또는 제1 이펙터 모이어티 및/또는 제2 리간드 및/또는 제2 이펙터 모이어티에 공유 결합되며, 제1 리간드 및 적어도 하나의 제1 이펙터 모이어티 모두가 3-작용성 링커에 결합되고 및/또는 제2 리간드 및 적어도 하나의 제2 이펙터 모이어티 모두가 3작용성 링커에 결합되며, 바람직하게는 3-작용성 링커는 스킴 II의 3 작용성 링커인, 본 발명의 치료 분자 또는 본 발명의 제2 치료 분자이다.
일 구현예는 스캐폴드 L3 및/또는 L7의 폴리머 또는 올리고머 구조가 선형, 분지형 및/또는 고리형 폴리머, 올리고머, 덴드리머, 덴드론, 덴드론화된 폴리머, 덴드론화된 올리고머, DNA, 폴리펩티드, 폴리-라이신, 폴리에틸렌 글리콜, 또는 이들 폴리머, 또는 올리고머 구조의 어셈블리를 포함하며, 이 어셈블리는 바람직하게는 공유 가교에 의해 구축되는, 본 발명의 치료 분자 또는 본 발명의 제2 치료 분자이다.
일 구현예는 제1 리간드 A1 또는 B1 및/또는 제1 이펙터 모이어티 B1 또는 A1 및/또는 제2 리간드 A2 또는 B2 및/또는 제2 이펙터 모이어티 B2 또는 A2가 하나 이상의 공유 결합된 사포닌 C, 바람직하게는 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 16, 32, 64, 128 또는 1-100개의 사포닌, 또는 그 사이의 임의의 수의 사포닌, 예컨대 7, 9, 12개의 사포닌을 포함하며, 제1 리간드 A1 또는 B1은 각각 적어도 하나의 링커 L1을 통해 제1 이펙터 모이어티 B1 또는 A1에 공유 결합되고 및/또는 제2 리간드 A2 또는 B2는 각각 적어도 하나의 링커 L5를 통해 제2 이펙터 모이어티 B2 또는 A2에 공유 결합되는, 본 발명의 치료 분자 또는 본 발명의 제2 치료 분자이다.
일 구현예는 제1 리간드 A1은 제3항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 모노클로날 항체 또는 이의 적어도 하나의 결합 단편 또는 -도메인이고, m = 1, q = 0, n = 0, u = 0, r = 0, L3은 본 발명에 따른 스캐폴드이고, s = 1이거나, L3이 부재이고 s = 0, L4는 본 발명에 따른 링커 또는 절단 가능한 링커이고, v = 1, p = 2-4 그리고 s = 1이면 t = 2-4 그리고 s = 0이면, t = 0이고, 사포닌 C는 본 발명에 따른 사포닌이고, 바람직하게는 사포닌 C가 SO1861 및/또는 QS-21이고, 이펙터 모이어티 A2는 올리고뉴클레오티드, 핵산 및 제노 핵산 중 임의의 하나 이상, 바람직하게는 벡터, 유전자, 세포 자살 유도 트랜스진, 데옥시리보핵산 (DNA), 리보핵산 (RNA), 안티센스 올리고뉴클레오티드 (ASO, AON), 짧은 간섭 RNA (siRNA, short interfering RNA), 마이크로RNA (miRNA), DNA 앱타머, RNA 앱타머, mRNA, 미니-서클 DNA(mini-circle DNA), 펩티드 핵산 (PNA), 포스포라미데이트 모르폴리노 올리고머 (PMO), 잠금 핵산 (LNA, locked nucleic acid), 브리지 핵산 (BNA), 2'-디옥시-2'-플루오로아라비노 핵산 (FANA), 2'-O-메톡시에틸-RNA (MOE), 2'-O, 4'-아미노에틸렌 브리지 핵산, 3'-플루오로 헥시톨 핵산 (FHNA), 플라스미드, 글리콜 핵산 (GNA) 및 트레오스 핵산 (TNA) 또는 이의 유도체 중 임의의 하나 이상으로부터 선택된 이펙터 모이어티이고, 보다 바람직하게는 BNA, 예를 들어 HSP27 단백질 발현을 침묵시키는 BNA이며, a = 1, d = 0, b = 0, h = 0, e = 0, f = 0, i = 0, c = 0 및 g = 0인, 본 발명의 치료 조합이다.
일 구현예는 r = 0, s = 0, v = 0, s = 0, v = 0, p = 0, t = 0, 리간드 A1이 본 발명 중 어느 하나에 따른 모노클로날 항체 또는 이의 적어도 하나의 결합 단편 또는 -도메인이고, m = 1, 이펙터 모이어티 B1은 올리고뉴클레오티드, 핵산 및 제노 핵산 중 임의의 하나 이상, 바람직하게는 벡터, 유전자, 세포 자살 유도 트랜스진, 데옥시리보핵산 (DNA), 리보핵산 (RNA), 안티센스 올리고뉴클레오티드 (ASO, AON), 짧은 간섭 RNA (siRNA, short interfering RNA), 마이크로RNA (miRNA), DNA 앱타머, RNA 앱타머, mRNA, 미니-서클 DNA(mini-circle DNA), 펩티드 핵산 (PNA), 포스포라미데이트 모르폴리노 올리고머 (PMO), 잠금 핵산 (LNA, locked nucleic acid), 브리지 핵산 (BNA), 2'-디옥시-2'-플루오로아라비노 핵산 (FANA), 2'-O-메톡시에틸-RNA (MOE), 2'-O, 4'-아미노에틸렌 브리지 핵산, 3'-플루오로 헥시톨 핵산 (FHNA), 플라스미드, 글리콜 핵산 (GNA) 및 트레오스 핵산 (TNA) 또는 이의 유도체 중 임의의 하나 이상으로부터 선택된 이펙터 모이어티이고, 보다 바람직하게는 BNA, 예를 들어 HSP27 단백질 발현을 침묵시키는 BNA이며, q = 0, n = 1 및 u = 2-4, 또는 q = 1, n = 2-4, u = 2-4이고 링커 L1은 본 발명에 따른 올리고머 또는 폴리머 스캐폴드 L3인, 본 발명의 치료 분자이다.
일 구현예는 치료 분자가 이전 구현예의 치료 분자이고, 제2 리간드 A2가 본 발명에 따른 모노클로날 항체 또는 이의 적어도 하나의 결합 단편 또는 -도메인이고, a = 1, d = 0, b = 0, h = 0, e = 0, L7은 본 발명에 따른 스캐폴드이고 f = 1이거나, L7이 부재이고 f = 0이고, L8은 본 발명에 따른 링커 또는 절단 가능한 링커이고, i = 1, c = 2-4 및f = 1이면 g = 2-4 그리고 f = 0이면, g = 0이고, 사포닌 C는 본 발명에 따른 사포닌이고, 바람직하게는 사포닌 C는 SO1861 및/또는 QS-21이고, 리간드 A1 및 리간드 A2는 동일하거나 상이한, 본 발명의 치료 조합이다.
본 발명의 일 견지는 치료 조합에 관한 것으로서, 치료 조합은 (a) 본 발명에 따른 화합물 I의 화학 구조를 갖는 치료 분자를 포함하는 제1 약학적 조성물로서, 제1 약학적 조성물은 선택적으로 약학적으로 허용가능한 부형제를 추가로 포함하는, 제1 약학적 조성물; 및 (b) 본 발명에 따른 화합물 II의 화학 구조를 갖는 제2 치료 분자를 포함하는 제2 약학적 조성물로서, 제2 약학적 조성물은 선택적으로 약학적으로 허용가능한 부형제를 추가로 포함하는 제2 약학적 조성물을 포함한다.
본 발명의 일 견지는 의약으로서 사용하기 위한 본 발명의 제1 약학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 일 견지는 인간 대상체에서 암의 치료 또는 방지에 사용하기 위한 치료 조합에 관한 것으로서, 치료 조합은: (a) 본 발명의 제1 약학적 조성물; 및 (b) 본 발명의 제2 약학적 조성물을 포함하며, 여기서 리간드 A1 또는 B1 및 리간드 A2 또는 B2는 종양-세포 표면 분자, 바람직하게는 종양-세포 특이적 표면 분자상의 종양-세포 에피토프, 바람직하게는 종양-세포 특이적 에피토프에 결합할 수 있으며, 리간드 A1 또는 B1이 결합할 수 있는 종양-세포 에피토프 또는 종양-세포 특이적 에피토프는 리간드 A2 또는 B2가 결합할 수 있는 종양-세포 에피토프 또는 종양-세포 특이적 에피토프와 동일하거나 상이하다.
본 발명의 일 견지는 필요로 하는 환자에서 암의 치료 또는 예방(prophylaxis)에 사용하기 위한, 본 발명의 제1 약학적 조성물로서, 여기서 리간드 A1 또는 B1이 종양-세포 표면 분자, 바람직하게는 바람직하게는 종양-세포 특이적 표면 분자상의 종양-세포 에피토프, 바람직하게는 종양-세포 특이적 에피토프에 결합할 수 있다.
일 구현예는 본 발명의 제2 약학적 조성물 및 본 발명의 제1 약학적 조성물이 이를 필요로 하는 환자에게 투여되는, 본 발명에 따라 사용하기 위한 제1 약학적 조성물 또는 본 발명에 따라 사용하기 위한 치료 조합이다.
본 발명의 일 견지는 본 발명의 제2 치료 분자를 추가로 포함하는, 본 발명의 제1 약학적 조성물에 관한 것이다.
일 발명의 일 견지는 의약으로 사용하기 위한 본 발명의 제2 치료 분자를 추가로 포함하는 본 발명의 제1 약학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 일 견지는 인간 대상체에서 암의 치료 또는 방지에 사용하기 위한 본 발명의 제2 치료 분자를 추가로 포함하는 본 발명의 제1 약학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 제1 일련의 견지 및 구현예 내의 본 발명의 견지는 적어도 하나의 생물학적 활성 분자를 담체 분자에 공유 결합하기에 적합한 스캐폴드에 관한 것으로, 상기 스캐폴드는 폴리머 또는 올리고머 구조 및 상기 폴리머 또는 올리고머 구조에 공유 결합된 적어도 하나의 생물학적 활성 분자를 포함하며, 여기서 스캐폴드는 스캐폴드를 담체 분자에 공유 커플링하기 위한 제1 화학기를 추가로 포함한다.
본 발명의 제1 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 스캐폴드이며, 여기서 적어도 하나의 생물학적 활성 분자는 3.000 달톤 이하, 바람직하게는 2.500 달톤 이하, 더욱 바람직하게는 2.300 달톤 이하, 가장 바람직하게는 2.000 Dalton 이하, 예컨대 1.700 Dalton-1.950 Dalton의 분자량(molecular mass)을 갖는다.
본 발명의 제1 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 스캐폴드이며, 여기서 적어도 하나의 생물학적 활성 분자는 양친매성 분자이다.
본 발명의 제1 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 스캐폴드이며, 여기서 적어도 하나의 생물학적 활성 분자는, 하나 보다 많은 생물학적 활성 분자가 스캐폴드에 의해 포함되는 폴리머 또는 올리고머 구조에 공유 결합되는 경우에, 다른 분자의 혼합물이거나 또는 단일 특이적 분자이다.
본 발명의 제1 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 스캐폴드이며, 여기서 적어도 하나의 생물학적 활성 분자는 글리코시드, 바람직하게는 비스데스모시딕 트리테르펜 또는 트리테르페노이드 사포닌, 보다 바람직하게는 비스데스모시딕 트리테르펜 사포닌, 가장 바람직하게는 위치 C-23에서 알데히드 작용(function)을 갖는 12,13-디하이드로올레아난 유형에 속하며, 선택적으로 사포닌의 C-3베타-OH 기에서 카보하이드레이트 치환체에 글루쿠론산 작용을 포함하는, 비스데스모시딕 트리테르펜 사포닌이다.
본 발명의 제1 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 스캐폴드이며, 여기서 적어도 하나의 생물학적 활성 분자는 집소필라(Gypsophila) 종 및/또는 사포나리아(Saponaria) 종 및/또는 아그로스템마(Agrostemma) 종 및/또는 퀼라자(Quillaja) 종, 예컨대 퀼라자 사포나리아(Quillaja saponaria)에서 분리될 수 있는 사포닌이거나, 단일 특이적 사포닌이거나, 또는 2개 이상의 상이한 사포닌의 혼합물, 예컨대 표 A1 또는 스킴 I, S01861, SA1657, GE1741, SA1641, QS-21, QS-21A, QS-21 A-api, QS-21 A-xyl, QS-21B, QS-21 B-api, QS-21 B-xyl, QS-7-xyl, QS-7-api, QS-17-api, QS-17-xyl, QS1861, QS1862, 퀼라자사포닌(Quillajasaponin), 사포늄 앨범(Saponinum album), QS-18, Quil-A, Gyp1, 집소사이드(gypsoside) A, AG1, AG2, S01542, S01584, S01658, S01 674, S01832, 또는 이들의 임의의 입체 이성질체 및/또는 이들의 임의의 조합 중 하나 이상이며, 바람직하게는 사포닌은 SO1861 및/또는 GE1741 및/또는 SA1641 및/또는 QS-21 및/또는 퀼라익산 아글리콘 코어(quillaic acid aglycon core), C-3베타-OH기에 Gal-(1→2)-[Xyl-(1→3)]-GlcA 카보하이드레이트 치환체 및 C-28-OH기에 Glc-(1→3)-Xyl-(1→4)-Rha-(1→2)-[Xyl-(1→3)-4-OAc-Qui-(1→4)]-Fuc 카보하이드레이트 치환체를 갖는 사포닌이며/이거나 3-O-베타-D-갈락토피라노실-(1→2)-[베타-D-자일로피라노실-(1→3)]-베타-D-글루쿠로노피라노실 퀼라익산 28-0-베타-D-글루코피라노실-(1→3)-베타-D-자일로피라노실-(1→4)-알파-L-람노피라노실-(1→2)-[베타-D자일로피라노실-(1→3)-4-OAc-베타-D-퀴노보피라노실-(1→4)]-베타-D-푸코피라노사이드이며, 보다 바람직하게는 사포닌은 SO1861 및/또는 QS-21이다.
본 발명의 제1 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 스캐폴드이며, 여기서 적어도 하나의 생물학적 활성 분자는 분자량이 적어도 1.500 달톤이고 C-3 위치에 제1 분지형 카보하이드레이트 측쇄를 가지며, 제1 분지형 카보하이드레이트 측쇄가 선택적으로 글루쿠론산을 함유하는, C-23 위치에 알데히드기를 함유하고 선택적으로 C-16 위치에 히드록실기를 함유하는 올레아난형(oleanan-type) 트리테르펜을 포함하는 비스데스모시딕 사포닌이며, 여기서 사포닌은 C-28 위치에 제2 분지형 카보하이드레이트 측쇄를 갖는 에스테르기를 함유하며, 제2 분지형 카보하이드레이트 체인(chain)은 선택적으로 적어도 하나의 아세틸 잔기, 예컨대 2개의 아세틸 잔기를 함유하고 및/또는 선택적으로 디옥시 카보하이드레이트를 포함하고 및/또는 선택적으로 퀴노보스를 포함하고 및/또는 선택적으로 글루코스를 포함하고 및/또는 선택적으로 4-메톡시신남산을 포함하고 및/또는 선택적으로 5-0-[5-0-Ara/Api-3,5-디하이드록시-6-메틸-옥타노일]-3,5-디하이드록시-6-메틸-옥탄산을 포함하고 및/또는 선택적으로 에스테르 결합을 통해 카보하이드레이트에 결합된 5-0-[5-0-Rha-(1→2)-Ara/Api-3,5-디하이드록시-6-메틸-옥타노일]-3,5-디하이드록시-6-메틸-옥탄산을 포함하는, 적어도 4개의 카보하이드레이트 유닛을 바람직하게 포함하거나, 적어도 하나의 사포닌은 QS-21 또는 QS-21A, QS-21 A-api, QS-21 A-xyl, QS-21B, QS-21 B-api, QS-21 B-xyl, QS-7-xyl, QS-7-api, QS-17-api, QS-17-xyl, QS-18, QS1861, 양성자화된 QS1861 (QS1862), Quil-A 중 임의의 하나 이상이다.
본 발명의 제1 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 스캐폴드이며, 여기서 적어도 하나의 생물학적 활성 분자는 절단 불가능한 결합(non-cleavable bond)을 통해 또는 절단 가능한 결합을 통해 폴리머 또는 올리고머 구조에 공유 결합되며, 여기서 바람직하게는 절단 가능한 결합은 산성 조건, 환원성 조건, 효소 조건 또는 광-유도 조건 하에서 절단되며, 보다 바람직하게는 절단 가능한 결합은 산성 조건 하에서 절단되는 히드라존 결합 또는 히드라지드 결합이고/이거나 단백질 분해(proteolysis), 예를 들어 카셉신 B에 의해 단백질 분해될 수 있는 결합이고/있거나 환원성 조건 하에서의 절단될 수 있는 결합, 예컨대 디설파이드 결합이다.
본 발명의 제1 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 스캐폴드이며, 여기서 적어도 하나의 생물학적 활성 분자는 절단 가능한 결합을 통해 폴리머 또는 올리고머 구조에 공유 결합되며, 여기서 절단 가능한 결합은 포유류 세포, 바람직하게는 인간 세포의 엔도좀 및/또는 리소좀에 존재하는 산성 조건, 바람직하게는 pH 4.0-6.5, 그리고 보다 바람직하게는 pH ≤ 5.5 하에서 생체내(in vivo)에서 절단된다.
본 발명의 제1 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 스캐폴드이며, 여기서 적어도 하나의 생물학적 활성 분자는 이민 결합, 히드라존 결합, 히드라지드 결합, 옥심 결합, 1,3-디옥솔란 결합, 디설파이드 결합(disulphide bond), 티오-에테르 결합, 아미드 결합, 펩티드 결합 또는 에스테르 결합을 통해, 바람직하게는 적어도 하나의 링커를 통해 스캐폴드의 폴리머 또는 올리고머 구조에 공유 결합된다.
본 발명의 제1 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 스캐폴드이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌의 위치 C-23에서의 알데히드 작용(function)은 스캐폴드의 폴리머 또는 올리고머 구조에 대한 공유 결합에 관여하며/하거나 존재하면, 적어도 하나의 사포닌의 C-3베타-OH 기에서의 카보하이드레이트 치환체에서의 글루구론산 작용은 직접 결합을 통해 또는 적어도 하나의 링커를 통해 스캐폴드의 폴리머 또는 올리고머 구조에 대한 공유 결합에 관여한다.
본 발명의 제1 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 스캐폴드이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌의 위치 C-23에서의 알데히드 작용(function)은 링커 N-ε-말레이미도카프로산 히드라지드에 공유 커플링되고, 이 링커는 아미드 결합을 통해 스캐폴드의 폴리머 또는 올리고머 구조의 아민기, 예를 들어, 단백질성 분자의 N-말단 또는 라이신의 아민기에 공유 커플링된다.
본 발명의 제1 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 스캐폴드이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌의 C-3베타-OH기에서의 카보하이드레이트 치환체에서의 글루구론산 작용은 링커 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트에 공유 커플링되며, 이 링커는 아미드 결합을 통해 스캐폴드의 폴리머 또는 올리고머 구조의 아민기, 예컨대 단백질성 분자의 N-말단(terminus) 또는 라이신의 아민기에 공유 커플링된다.
본 발명의 제1 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 스캐폴드이며, 여기서 스캐폴드를 담체 분자에 공유 커플링하기 위한 화학기는 클릭 화학기이다.
본 발명의 제1 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 스캐폴드이며, 여기서 클릭 화학기는 테트라진, 아지드, 알켄 또는 알킨, 또는 이들 기 중 임의의 시클릭 유도체(cyclic derivative), 바람직하게는 아지드이다.
본 발명의 제1 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 스캐폴드이며, 여기서 스캐폴드는 공유 결합된 적어도 하나의 생물학적 활성 분자를 갖는 제2 화학기를 포함하고, 분자에 대한 공유 결합을 위한 제3 화학기를 포함하고 및 담체에 대한 공유 결합을 위한 제1 화학기를 포함하는 3-작용성 링커이며, 바람직하게는 3-작용성 링커는 스킴 II 및 구조 B의 3-작용성 링커이다.
본 발명의 제1 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 스캐폴드이며, 여기서 적어도 하나의 생물학적 활성 분자는 정의된 수의 글리코시드 분자 또는 정의된 범위의 글리코시드 분자, 바람직하게는 1-128 또는 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 16, 32, 64 또는 128개의 글리코시드 분자, 또는 그 사이의 임의의 수의 글리코시드 분자, 예컨대 7, 9, 12개의 글리코시드 분자이다.
본 발명의 제1 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 스캐폴드이며, 여기서 폴리머 또는 올리고머 구조가 선형, 분지형 및/또는 고리형 폴리머, 올리고머, 덴드리머, 덴드론, 덴드론화된 폴리머, 덴드론화된 올리고머, DNA, 폴리펩티드, 폴리-라이신, 폴리에틸렌 글리콜, 또는 이들 폴리머, 또는 올리고머 구조의 어셈블리를 포함하며, 이 어셈블리는 바람직하게는 공유 가교에 의해 구축된다.
본 발명의 제1 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 스캐폴드이며, 여기서 담체 분자는 단백질성 분자, 단백질, 펩티드, 핵산, 올리고뉴클레오티드, 지질, 지방, 지방산, 나노 입자, 카보하이드레이트, 또는 이들의 조합의 임의의 공유 결합된 접합체 또는 공유 결합된 복합체를 포함하거나 이로 구성된다.
본 발명의 제1 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 스캐폴드이며, 여기서 담체(carrier) 분자는 면역 글로불린, 면역 글로불린의 적어도 하나의 결합 도메인 및/또는 면역 글로불린의 적어도 하나의 결합 단편, 예컨대 항체, IgG, Vhh 도메인 또는 Vh 도메인을 포함하거나 이로 구성되는 분자, Fab, scFv, Fv, dAb, F(ab)2, Fcab 단편을 포함하거나 이로 구성되거나, 또는 세포-표면 분자에 대한 결합을 위한 적어도 하나의 비-단백질성 리간드 및/또는 적어도 하나의 단백질성 리간드, 예컨대 예컨대 EGF 또는 사이토카인을 포함하거나 이로 구성된다.
본 발명의 제1 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 스캐폴드이며, 여기서 담체 분자는 세포-표면 수용체, 예컨대 CD71, CA125, EpCAM(17-1A), CD52, CEA, CD44v6, FAP, EGF-IR, 인테그린(integrin), 신데칸-1(syndecan-1), 바스큘라 인테그린 알파-V 베타-3(vascular integrin alpha-V beta-3), HER2, EGFR, CD20, CD22, 엽산 수용체 1(Folate receptor 1), CD146, CD56, CD19, CD138, CD27L 수용체, PSMA, CanAg, 인테그린-알파V, CA6, CD33, 메소텔린, 크립토, CD3, CD30, CD239, CD70, CD123, CD352, DLL3, CD25, 에프린A4, MUC1, Trop2, CEACAM5, CEACAM6, HER3, CD74, PTK7, Notch3, FGF2, C4.4A, FLT3, CD38, FGFR3, CD7, PD-L1, CTLA4, CD52, PDGFRA, VEGFR1, VEGFR2로부터 선택되는, 바람직하게는 CD71, EGFR, HER2로부터 선택되는 종양-세포 특이적 세포-표면 수용체에 대한 결합을 위한 적어도 하나의 결합 도메인 및/또는 적어도 하나의 결합 단편을 포함하거나 이로 구성된다.
본 발명의 제1 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 스캐폴드이며, 여기서 담체 분자는 세툭시맙, 다라투무맙, 젬투주맙, 트라스투주맙, 파니투무맙, 브렌투시맙, 이노투주맙, 모세투모맙, 폴라투주맙, 오비누투주맙, IgG 유형의 OKT-9 항-CD71 모노클로날 항체, 페르투주맙, 리투시맙, 오파투무맙, 허셉틴, 알렘투주맙, 피나투주맙, OKT-10 항-CD38 모노클로날 항체, 표 A2 또는 표 A3 또는 표 A4의 항체, 바람직하게는 세툭시맙 또는 트라스투주맙 또는 OKT-9, 또는 이의 적어도 하나의 종양-세포 수용체 결합-단편 및/또는 이의 적어도 하나의 종양-세포 수용체 결합-도메인, 예컨대 이의 적어도 하나의 종양-세포 특이적 수용체 결합-단편 및/또는 이의 적어도 하나의 종양-세포 특이적 수용체 결합-도메인 중 임의의 하나를 포함하거나 이로 구성된다.
본 발명의 제1 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 스캐폴드이며, 여기서 스캐폴드는 담체 분자와 공유 결합을 형성하는데 적합하며, 상기 공유 결합은, 담체 분자가 적어도 시스테인 및/또는 라이신을 포함하는 경우, 담체 분자의 시스테인 측쇄 및/또는 담체 분자의 라이신 측쇄를 바람직하게 포함한다.
본 발명의 제1 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 스캐폴드이며, 여기서 담체 분자는 적어도 하나의 이펙터 분자를 포함하거나 이로 구성되거나, 또는 담체는 적어도 하나의 이펙터 분자를 추가로 포함하고, 여기서 이펙터 분자는 적어도 하나의 활성 약학적 물질, 예컨대 페이로드, 독소, 약물, 폴리펩티드, 올리고뉴클레오티드, 핵산, 제노 핵산, 효소, 예컨대 우레아제 및 Cre-재조합효소, 단백질 독소, 리보좀-비활성화 단백질 중 임의의 하나 이상이다.
본 발명의 제1 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 스캐폴드이며, 여기서 단백질 독소는 표 A5 및/또는 바이러스 독소, 예컨대 아폽틴; 박테리아 독소, 예컨대 시가(Shiga) 독소, 시가-유사(Shiga-like) 독소, 슈도모나스 아에루기노사 엑소톡신(Pseudomonas aeruginosa exotoxin) (PE) 또는 PE의 엑소톡신 A, 전장 또는 절단된(truncated) 디프테리아 독소 (DT), 콜레라 독소; 곰팡이 독소, 예컨대 알파-사르신; 리보좀-불활성화 단백질 및 2 유형 리보좀-불활성화 단백질의 A 체인, 예컨대 디안틴, 예를 들어, 디안틴-30 또는 디안틴-32, 사포린 예를 들어, 사포린-S3 또는 사포린-S6, 보우가닌 또는 보우가닌의 탈-면역화(de-immunized) 유도체 디보우가닌, 시가-유사 독소 A, 포크위드(pokeweed) 항바이러스 단백질, 리신(ricin), 리신 A 체인, 모데신, 모데신 A 체인, 아브린, 아브린 A 체인, 볼켄신, 볼켄신 A 체인, 비스쿠민, 비스쿠민 A 체인을 포함하는 식물 독소; 또는 동물 또는 인간 독소, 예컨대 개구리 RNase, 또는 인간으로부터의 안지오게닌, 또는 그랜자임 B, 또는 이의 임의의 단편 또는 유도체 중 임의의 하나 이상을 포함하거나 이로 구성되며; 바람직하게는 단백질 독소가 디안틴 및/또는 사포린이다.
본 발명의 제1 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 스캐폴드이며, 여기서 올리고뉴클레오티드, 제노 핵산(xeno nucleic acid) 또는 핵산은 벡터, 유전자, 세포 자살 유도 트랜스진, 데옥시리보핵산 (DNA), 리보핵산 (RNA), 안티센스 올리고뉴클레오티드 (ASO, AON), 짧은 간섭 RNA (siRNA), 마이크로RNA (miRNA), DNA 앱타머, RNA 앱타머, mRNA, 미니-서클 DNA, 펩티드 핵산 (PNA), 포스포라미데이트 모르폴리노 올리고머 (PMO), 잠금 핵산 (LNA), 브리지 핵산 (BNA), 2'-디옥시-2'-플루오로아라비노 핵산 (FANA), 2'-O-메톡시에틸-RNA (MOE), 2'-O, 4'-아미노에틸렌 브리지 핵산, 3'-플루오로 헥시톨 핵산 (FHNA), 플라스미드, 글리콜 핵산 (GNA) 및 트레오스 핵산 (TNA) 또는 이의 유도체 중 임의의 하나 이상, 바람직하게는 BNA, 예를 들어 HSP27 단백질 발현을 침묵시키는 BNA를 포함하거나 이로 구성된다.
본 발명의 제1 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 스캐폴드이며, 여기서 이펙터 분자는 적어도 하나의 페이로드, 바람직하게는 리보좀 표적화 독소(toxin targeting ribosomes), 연장 인자 표적화 독소(toxin targeting elongation factors), 튜불린을 표적화 독소, DNA 표적화 독소, 및 RNA 표적화 독소 중 임의의 하나 이상으로부터 선택되며, 보다 바람직하게는, 엠탄신, 파수도톡스, 메이탄시노이드 유도체 DM1, 메이탄시노이드 유도체 DM4, 모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE, 베도틴), 모노메틸 아우리스타틴F(MMAF, 마포도틴), 칼리케아미신, N-아세틸-y-칼리케아미신, 피롤로벤조디아제핀 (PBD) 다이머, 벤조디아제핀, CC-1065 유사체, 듀오카르마이신, 독소루비신, 파클리타셀, 시스플라틴, 시클로포스파미드, 에토포사이드, 도세타셀, 5-플루오로우라실(5-FU), 미토산트론, 튜불리신, 인돌리노벤조디아제핀, AZ13599185, 크립토피신, 리조신, 메토트레세이트, 안트라사이클린, 캠토테신 유사체, SN-38, DX-8951f, 엑사테칸 메실레이트, 슈도모나스 아에루기노사 엑소톡신(PE38)의 절단된 형태, 듀오카르마이신 유도체, 아마니틴, a-아마니틴, 스플라이세오스타틴, 타일란스타틴, 오조가미신, 테시린, 앰버스타틴269 및 소라브탄신, 또는 이의 유도체 중 임의의 하나 이상으로부터 선택된 것을 포함하거나 이로 구성된다.
본 발명의 제1 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 스캐폴드이며, 여기서 담체 분자는 이펙터 분자와 모노클로날 항체의 공유 결합된 조합, 바람직하게는 젬투주맙 오조가미신, 브렌투시맙 베도틴, 트라스투주맙 엠탄신, 이노투주맙 오조가미신, 모세투모맙 파수도톡스 및 폴라투주맙 베도틴 및 표 A2 및 표 A3의 항체-약물 접합체로부터 선택된 것을 포함하거나 또는 이로 구성된다.
본 발명의 제1 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 적어도 하나의 생물학적 활성 분자를 담체 분자에 공유 결합하기에 적합한 스캐폴드를 제조하는 방법에 관한 것으로, 상기 방법은 a) 폴리머 구조 또는 올리고머 구조를 담체 분자에 공유 커플링하기 위한 제1 화학기를 포함하고, 제1 화학기와 상이한 적어도 하나의 제2 화학기를 포함하며, 각각의 제2 화학기는 적어도 하나의 생물학적 활성 분자 중 하나를 올리고머 또는 폴리머 구조에 공유 커플링하기 위한 것인, 폴리머 또는 올리고머 구조를 제공하는 단계; 및 b) 제2 화학기(들)을 통해 적어도 하나의 생물학적 활성 분자를 상기 폴리머 또는 올리고머 구조에 공유 커플링하는 단계를 포함하며, 여기서 바람직하게 생물학적 활성 분자(들)는 본 발명의 생물학적 활성 분자 중 어느 하나이고, 보다 바람직하게는 SO1861 및/또는 GE1741 및/또는 SA1641 및/또는 QS-21이고, 이에 따라 스캐폴드가 제공된다.
본 발명의 제1 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 방법이며, 스캐폴드는 적어도 하나의 공유 결합된 생물학적 활성 분자를 포함하고, 상기 방법은: a) 상기 스캐폴드에서 폴리머 또는 올리고머 구조에 공유 결합된 적어도 하나의 생물학적 활성 분자를 포함하는 스캐폴드를 제공하는 단계, 바람직하게는 본 발명에 따른 스캐폴드 또는 본 발명에 따른 방법에 의해 수득가능한 스캐폴드 또는 본 발명에 따른 방법으로 수득된 스캐폴드를 제공하는 단계; 및 b) a)의 스캐폴드를 본 발명에 따른 담체 분자에 공유 커플링하는 단계를 포함하며, 이에 의해 담체 분자에 공유 결합된 스캐폴드가 제공되며, 스캐폴드는 적어도 하나의 공유 결합된 생물학적 활성 분자를 포함한다.
본 발명의 제1 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 방법이며, 여기서 상기 이펙터 분자가 스캐폴드에 공유 결합되고 포유류 세포와 접촉되는 경우, 또는 상기 이펙터 분자가 스캐폴드의 존재 하에 포유류 세포와 접촉되는 경우에, 스캐폴드는 본 발명에 따른 이펙터 분자의 엔도좀 탈출 및/또는 리소좀 탈출을 증가시킬 수 있다.
본 발명의 제2 일련의 견지 및 구현예 내의 본 발명의 견지는 제1 세포-표면 분자의 제1 에피토프에 대한 결합을 위한 제1 결합 부위를 포함하는 제1 단백질성 분자에 관한 것으로, 제1 단백질성 분자에는 적어도 하나의 링커를 통해 및/또는 올리고머 또는 폴리머 스캐폴드를 통해 상기 제1 단백질성 분자의 아미노산 잔기에 공유 결합되거나, 상기 제1 단백질성 분자의 아미노산 잔기에 직접 공유 결합된, 적어도 하나의 사포닌이 제공된다.
본 발명의 제2 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 제1 단백질성 분자이며, 여기서 제1 결합 부위는 면역 글로불린, 또는 면역 글로불린의 적어도 하나의 결합 도메인 및/또는 면역 글로불린의 적어도 하나의 결합 부위, 예컨대 항체, IgG, Vhh 도메인 또는 Vh 도메인을 포함하거나 이로 구성되는 분자, Fab, scFv, Fv, dAb, F(ab)2, Fcab 단편을 포함하고 및/또는 세포-표면 분자에 대한 결합을 위한 적어도 하나의 리간드, 예컨대 EGF 또는 사이토카인을 포함하거나 이로 구성된다.
본 발명의 제2 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 제1 단백질성 분자이며, 제1 세포-표면 분자의 제1 에피토프는 제1 종양-세포 표면 분자의 종양-세포 특이적 제1 에피토프이고, 보다 바람직하게는 종양 세포 상에 특이적으로 존재하는 제1 종양-세포 표면 수용체의 종양-세포 특이적 제1 에피토프이다.
본 발명의 제2 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 제1 단백질성 분자이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌은 위치 C-23에서 알데히드 작용(function)을 갖는 12,13-디하이드로올레아난 유형에 속하며, 선택적으로 사포닌의 C-3 베타-OH 기에서 카보하이드레이트 치환체에 글루쿠론산 작용을 포함하는, 비스데스모시딕 트리테르펜 사포닌 또는 트리테르페노이드 사포닌 및/또는 집소필라(Gypsophila) 종 및/또는 사포나리아(Saponaria) 종 및/또는 아그로스템마(Agrostemma) 종 및/또는 퀼라자(Quillaja) 종, 예컨대 퀼라자 사포나리아(Quillaja saponaria)에서 분리된 사포닌이다.
본 발명의 제2 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 제1 단백질성 분자이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌은 단일 특이적 사포닌이거나 또는 둘 이상의 상이한 사포닌의 혼합물, 예컨대 표 A1 또는 스킴 I, S01861, SA1657, GE1741, SA1641, QS-21, QS-21A, QS-21 A-api, QS-21 A-xyl, QS-21B, QS-21 B-api, QS-21 B-xyl, QS-7-xyl, QS-7-api, QS-17-api, QS-17-xyl, QS1861, QS1862, 퀼라자사포닌(Quillajasaponin), 사포늄 앨범(Saponinum album), QS-18, Quil-A, Gyp1, 집소사이드(gypsoside) A, AG1, AG2, S01542, S01584, S01658, S01674, S01832, 또는 이들의 임의의 입체 이성질체 및/또는 이들의 임의의 조합 중 하나 이상이며, 바람직하게는 사포닌은 SO1861 및/또는 GE1741 및/또는 SA1641 및/또는 QS-21 및/또는 퀼라익산 아글리콘 코어(quillaic acid aglycon core), C-3베타-OH기에 Gal-(1→2)-[Xyl-(1→3)]-GlcA 카보하이드레이트 치환체 및 C-28-OH기에 Glc-(1→3)-Xyl-(1→4)-Rha-(1→2)-[Xyl-(1→3)-4-OAc-Qui-(1→4)]-Fuc 카보하이드레이트 치환체를 갖는 사포닌이며/이거나 3-O-베타-D-갈락토피라노실-(1→2)-[베타-D-자일로피라노실-(1→3)]-베타-D-글루쿠로노피라노실 퀼라익산 28-0-베타-D-글루코피라노실-(1→3)-베타-D-자일로피라노실-(1→4)-알파-L-람노피라노실-(1→2)-[베타-D자일로피라노실-(1→3)-4-OAc-베타-D-퀴노보피라노실-(1→4)]-베타-D-푸코피라노사이드이며, 보다 바람직하게는 사포닌은 SO1861 및/또는 QS-21이다.
본 발명의 제2 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 제1 단백질성 분자이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌은 분자량이 적어도 1.500 달톤이고 C-3 위치에 제1 분지형 카보하이드레이트 측쇄를 가지며, 이 제1 분지형 카보하이드레이트 측쇄가 선택적으로 글루쿠론산을 함유하는, C-23 위치에 알데히드기를 함유하고 선택적으로 C-16 위치에 히드록실기를 함유하는 올레아난형(oleanan-type) 트리테르펜을 포함하는 비스데스모시딕 사포닌이며, 여기서 사포닌은 C-28 위치에 제2 분지형 카보하이드레이트 측쇄를 갖는 에스테르기를 함유하며, 이 제2 분지형 카보하이드레이트 체인(chain)은 선택적으로 적어도 하나의 아세틸 잔기, 예컨대 2개의 아세틸 잔기를 함유하고 및/또는 선택적으로 디옥시 카보하이드레이트를 포함하고 및/또는 선택적으로 퀴노보스를 포함하고 및/또는 선택적으로 글루코스를 포함하고 및/또는 선택적으로 4-메톡시신남산을 포함하고 및/또는 선택적으로 5-0-[5-0-Ara/Api-3,5-디하이드록시-6-메틸-옥타노일]-3,5-디하이드록시-6-메틸-옥탄산을 포함하고 및/또는 선택적으로 에스테르 결합을 통해 카보하이드레이트에 결합된 5-0-[5-0-Rha-(1→2)-Ara/Api-3,5-디하이드록시-6-메틸-옥타노일]-3,5-디하이드록시-6-메틸-옥탄산을 포함하는, 적어도 4개의 카보하이드레이트 유닛을 바람직하게 포함하고, 또는 여기서 적어도 하나의 사포닌은 QS-21 또는 QS-21A, QS-21 A-api, QS-21 A-xyl, QS-21B, QS-21 B-api, QS-21 B-xyl, QS-7-xyl, QS-7-api, QS-17-api, QS-17-xyl, QS-18, QS1861, 양성자화된 QS1861 (QS1862), Quil-A 중 임의의 하나 이상이다.
본 발명의 제2 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 제1 단백질성 분자이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌은 위치 C-23에서 알데히드 작용(function)을 갖는 12,13-디하이드로올레아난 유형에 속하는 비스데스모시딕 트리테르펜 사포닌이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌은 사포닌의 알데히드 작용을 통해, 바람직하게는 위치 C-23에서 상기 알데히드 작용, 바람직하게는 적어도 하나의 링커를 통해, 보다 바람직하게는 적어도 하나의 절단 가능한 링커를 통해 제1 단백질성 분자의 아미노산 잔기에 공유 커플링되며, 여기서 아미노산 잔기는 바람직하게는 시스테인 및 라이신으로부터 선택된다.
일 구현예는 본 발명에 따른 제1 단백질성 분자이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌은 위치 C-23에서 알데히드 작용을 갖는 12,13-디하이드로올레아난 유형에 속하며 사포닌의 C-3베타-OH기의 카보하이드레이트 치환체에 글루쿠론산 작용을 포함하는 비스데스모시딕 트리테르펜 사포닌이며, 적어도 하나의 사포닌은 상기 사포닌의 C-3베타-OH기의 카보하이드레이트 치환체의 글루쿠론산(glucuronic acid) 작용을 통해, 바람직하게 적어도 하나의 링커를 통해, 제1 단백질성 분자의 아미노산 잔기에 공유 커플링되며, 여기서 아미노산 잔기는 바람직하게 시스테인 및 라이신으로부터 선택된다.
본 발명의 제2 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 제1 단백질성 분자이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌의 위치 C-23에서의 알데히드 작용은 링커 N-ε-말레이미도카프로산 히드라지드에 공유 커플링되고, 이 링커는 제1 단백질성 분자의 설프하이드릴기, 예컨대 시스테인의 설프하이드릴기에 티오-에테르 결합을 통해 공유 커플링된다.
본 발명의 제2 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 제1 단백질성 분자이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌의 C-3베타-OH기의 카보하이드레이트 치환체에서의 글루쿠론산 작용은 링커 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트에 공유 커플링되며, 이 링커는 아미드 결합을 통해 제1 단백질성 분자의 아민기, 예컨대 제1 단백질성 분자의 N-말단 또는 라이신의 아민기에 공유 커플링된다.
본 발명의 제2 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 제1 단백질성 분자이며, 여기서 제1 단백질성 분자의 제1 결합 부위가 결합하는 제1 세포-표면 분자의 제1 에피토프는 종양-세포 특이적 수용체의 종양-세포 특이적 제1 에피토프이며, 바람직하게는 CD71, CA125, EpCAM(17-1A), CD52, CEA, CD44v6, FAP, EGF-IR, 인테그린, 신데칸-1(syndecan-1), 바스큘라 인테그린 알파-V 베타-3(vascular integrin alpha-V beta-3), HER2, EGFR, CD20, CD22, 엽산 수용체 1(Folate receptor 1), CD146, CD56, CD19, CD138, CD27L 수용체, PSMA, CanAg, 인테그린-알파V, CA6, CD33, 메소텔린, 크립토, CD3, CD30, CD239, CD70, CD123, CD352, DLL3, CD25, 에프린A4, MUC1, Trop2, CEACAM5, CEACAM6, HER3, CD74, PTK7, Notch3, FGF2, C4.4A, FLT3, CD38, FGFR3, CD7, PD-L1, CTLA4, CD52, PDGFRA, VEGFR1, VEGFR2로부터 선택되며, 보다 바람직하게는 CD71, EGFR, HER2로부터 선택된다.
본 발명의 제2 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 제1 단백질성 분자이며, 여기서 종양 세포-특이적 제1 에피토프, 제1 종양-세포 표면 분자 또는 제1 종양-세포 특이적 수용체는 본 발명의 제1 단백질성 분자를 제1 에피토프 또는 제1 분자 또는 제1 수용체에 결합한 후에 종양 세포에 의해 내재화되는 제1 에피토프 또는 제1 분자 또는 제1 수용체이며, 그리고 여기서 바람직하게는 제1 단백질성 분자는, 제1 에피토프, 종양-세포 표면 분자 또는 종양-세포 특이적 수용체를 포함하는 세포-표면 분자에 결합되는 경우에, 예를 들어, 엔도사이토시스를 통해 종양-세포 표면 분자 매개 내재화, 또는 예를 들어 엔도사이토시스를 통해 종양-세포 수용체-매개 내재화된다.
본 발명의 제2 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 제1 단백질성 분자이며, 여기서 제1 단백질성 분자의 제1 결합 부위는 세툭시맙, 다라투무맙, 젬투주맙, 트라스투주맙, 파니투무맙, 브렌투시맙, 이노투주맙, 모세투모맙, 폴라투주맙, 오비누투주맙, IgG 유형의 OKT-9 항-CD71 모노클로날 항체, 페르투주맙, 리투시맙, 오파투무맙, 허셉틴, 알렘투주맙, 피나투주맙, OKT-10 항-CD38 모노클로날 항체, 표 A2 또는 표 A3 또는 표 A4의 항체, 바람직하게는 세툭시맙 또는 트라스투주맙 또는 OKT-9, 또는 이의 적어도 하나의 종양-세포 수용체 결합-단편 및/또는 이의 적어도 하나의 종양-세포 수용체 결합-도메인, 바람직하게는 이의 적어도 하나의 종양-세포 특이적 수용체 결합-단편 및/또는 이의 적어도 하나의 종양-세포 특이적 수용체-도메인 중 임의의 하나를 포함하거나 이로 구성된다.
본 발명의 제2 일련의 견지 및 구현예 내의 본 발명의 일 견지는 치료 조합이며, 여기서 치료 조합은 (a) 본 발명의 제1 단백질성 분자 및 선택적으로 약학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 제1 약학적 조성물; 및 (b) 제1 단백질성 분자와 상이한 제2 단백질성 분자를 포함하는 제2 약학적 조성물로서, 제2 단백질성 분자는 제1 세포-표면 분자와 상이한 제2 세포-표면 분자의 제2 에피토프에 결합하는 제2 결합 부위를 포함하고, 이펙터 모이어티를 포함하며, 제2 약학적 조성물은 선택적으로 약학적으로 허용가능한 부형제를 추가로 포함하고, 여기서 제2 에피토프는 제1 에피토프와 상이한, 제2 약학적 조성물을 포함한다.
본 발명의 제2 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 치료 조합이며, 여기서 치료 조합은 (a) 본 발명에 따른 제1 단백질성 분자를 포함하는 본 발명에 따른 제1 약학적 조성물로서, 여기서 제1 세포-표면 분자 상의 제1 에피토프는 제1 종양 세포-특이적 표면 분자 상의 종양-세포 특이적 제1 에피토프, 바람직하게는 종양 세포에 특이적으로 존재하는 제1 세포-표면 수용체 상의 종양-세포 특이적 제1 에피토프인, 제1 약학적 조성물; 및 (b) 본 발명에 따른 제2 약학적 조성물로서, 여기서 제2 세포-표면 분자는 제1 종양 세포-특이적 표면 분자와 상이한 제2 종양 세포-특이적 표면 분자이며, 바람직하게는 종양 세포에 특이적으로 존재하는 제1 세포-표면 수용체와 상이한 상기 종양 세포에 특이적으로 존재하는 제2 세포-표면 수용체이며, 그리고 여기서 제2 에피토프는 종양-세포 특이적 제2 에피토프인, 제2 약학적 조성물을 포함한다.
본 발명의 제2 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 치료 조합이며, 여기서 치료 조합은 (a) 본 발명에 따른 제1 단백질성 분자를 포함하고, 제1 세포-표면 분자 상의 제1 에피토프에 결합하는 제1 결합 부위를 포함하는 본 발명의 제1 약학적 조성물로서, 제1 약학적 조성물은 선택적으로 약학적으로 허용가능한 부형제를 추가로 포함하는, 제1 약학적 조성물; 및 (b) 제3 단백질성 분자를 포함하는 제3 약학적 조성물로서, 제3 단백질성 분자는 (a)의 세포-표면 분자 상의 제1 에피토프에 결합하기 위한 제1 결합 부위 및 이펙터 모이어티를 포함하며, 제3 약학적 조성물은 선택적으로 약학적으로 허용가능한 부형제를 추가로 포함하는 제3 약학적 조성물을 포함하며, 여기서 제1 단백질성 분자의 제1 결합 부위 및 제3 단백질성 분자의 제1 결합 부위는 동일하며, 그리고 여기서 제1 단백질성 분자가 결합할 수 있는 제1 세포-표면 분자 상의 제1 에피토프, 및 제1 세포-표면 분자와 제3 단백질성 분자가 결합할 수 있는 제1 세포-표면 분자 상의 제1 에피토프 및 제1 세포-표면 분자는 동일하다.
본 발명의 제2 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 치료 조합이며, 여기서 치료 조합은 (a) 본 발명에 따른 제1 약학적 조성물; 및 (b) 본 발명에 따른 제3 약학적 조성물을 포함하며, 여기서 제1 세포-표면 분자는 종양 세포 표면 상에 발현되고, 바람직하게는 제1 세포-표면 분자는 종양 세포-특이적 표면 분자이며, 여기서 바람직하게는 제1 에피토프는 제1 종양-세포 특이적 에피토프이다.
본 발명의 제2 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 제1 단백질성 분자 또는 본 발명에 따른 치료 조합이며, 여기서 제1 세포 표면 분자 상의 제1 에피토프에 대한 결합을 위한 제1 결합 부위는 종양 세포에 특이적으로 존재하는 제1 세포-표면 수용체 상의 종양-세포 특이적 제1 에피토프에 대한 결합 부위이다.
본 발명의 제2 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 치료 조합이며, 여기서 제2 단백질성 분자의 제2 결합 부위 및/또는 제3 단백질성 분자의 제1 결합 부위는 면역 글로불린, 면역 글로불린의 적어도 하나의 결합 도메인 및/또는 면역 글로불린의 적어도 하나의 결합 단편, 예컨대 항체, IgG, Vhh 도메인 또는 Vh 도메인을 포함하거나 이로 구성되는 분자, Fab, scFv, Fv, dAb, F(ab)2, Fcab 단편을 포함하거나 이로 구성되고 및/또는 세포-표면 분자, 예컨대 EGF 또는 사이토카인에 결합하기 위한 적어도 하나의 리간드를 포함하거나 이로 구성된다.
본 발명의 제2 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 치료 조합이며, 여기서 제2 에피토프에 대한 결합을 위한 제2 단백질성 분자의 제2 결합 부위는 종양 세포에 특이적으로 존재하는 제2 세포-표면 수용체상의 종양-세포 특이적 제2 에피토프에 대한 제2 결합부위이며, 여기서 제2 결합 부위는 제1 결합 부위와 상이하다.
본 발명의 제2 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 제1 단백질성 분자 또는 본 발명에 따른 치료 조합이며, 여기서 제1 및 제2 단백질성 분자는 제1 및 제2 종양-세포 특이적 수용체상의 제1 및 제2 종양-세포 특이적 에피토프 각각에 대한 결합을 위한 제1 및 제2 결합 부위를 포함하며, 수용체는 상이하고 동일한 종양 세포에 존재하며, 여기서 제1 및 제2 결합 부위는 상이하고 제1 및 제2 종양 세포 특이적 에피토프는 상이하다.
본 발명의 제2 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 제1 단백질성 분자 또는 본 발명에 따른 치료 조합이며, 여기서 제1 및 제3 단백질성 분자는 제1 종양-세포 특이적 수용체상의 제1 종양-세포 특이적 에피토프에 대한 결합을 위한 동일한 제1 결합 부위를 포함한다.
본 발명의 제2 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 제1 단백질성 분자 또는 본 발명에 따른 치료 조합이며, 여기서 제1 수용체 및/또는 제2 수용체는 CD71, CA125, EpCAM(17-1A), CD52, CEA, CD44v6, FAP, EGF-IR, 인테그린(integrin), 신데칸-1(syndecan-1), 바스큘라 인테그린 알파-V 베타-3(vascular integrin alpha-V beta-3), HER2, EGFR, CD20, CD22, 엽산 수용체 1(Folate receptor 1), CD146, CD56, CD19, CD138, CD27L 수용체, PSMA, CanAg, 인테그린-알파V, CA6, CD33, 메소텔린, 크립토, CD3, CD30, CD239, CD70, CD123, CD352, DLL3, CD25, ephrinA4, MUC1, Trop2, CEACAM5, CEACAM6, HER3, CD74, PTK7, Notch3, FGF2, C4.4A, FLT3, CD38, FGFR3, CD7, PD-L1, CTLA4, CD52, PDGFRA, VEGFR1, VEGFR2로부터 선택되며, 바람직하게는 CD71, EGFR 및 HER2로부터 선택된다.
본 발명의 제2 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 제1 단백질성 분자 및/또는 본 발명에 따른 치료 조합이며, 여기서 제1 및 제2 종양-세포 특이적 수용체는 본 발명에 따른 제1 단백질성 분자 및/또는 본 발명에 따른 제2 단백질성 분자에 결합한 후에 종양 세포에 의해 내재화되며, 여기서 바람직하게는 제1 및 제2 종양-세포 특이적 수용체 각각에 대한 제1 단백질성 분자 및/또는 제2 단백질성 분자의 결합에 의해, 예를 들어, 엔도사이토시스를 통해 제1 단백질성 분자와 제1 종양-세포 특이적 수용체의 복합체 및 제2 단백질성 분자와 제2 종양-세포 특이적 수용체의 복합체가 종양-세포 수용체-매개 내재화된다.
본 발명의 제2 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 치료 조합 또는 제1 약학적 조성물이며, 여기서 제1 종양-세포 수용체, 바람직하게는 제1 종양-세포 특이적 수용체는 본 발명에 따른 제1 단백질성 분자에 대한 결합 후에 및/또는 본 발명에 따른 제3 단백질성 분자에 대한 결합 후에 종양 세포에 의해 내재화되며, 여기서 바람직하게는 예를 들어, 엔도사이토시스를 통해 제1 단백질성 분자와 제1 종양-세포 수용체의 복합체 및 제3 단백질성 분자와 제1 종양-세포 수용체의 복합체가 종양-세포 수용체-매개 내재화된다.
본 발명의 제2 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 제1 단백질성 분자, 및/또는 본 발명에 따른 치료 조합이며, 여기서 제1 결합 부위 및/또는 제2 결합 부위는 모노클로날 항체 또는 이의 적어도 하나의 세포-표면 분자 결합 단편 및/또는 -도메인이거나 이를 포함하며, 바람직하게는 세툭시맙, 다라투무맙, 젬투주맙, 트라스투주맙, 파니투무맙, 브렌투시맙, 이노투주맙, 모세투모맙, 폴라투주맙, 오비누투주맙, IgG 유형의 OKT-9 항-CD71 모노클로날 항체, 페르투주맙, 리투시맙, 오파투무맙, 허셉틴, 알렘투주맙, 피나투주맙, OKT-10 항-CD38 모노클로날 항체, 표 A4의 항체, 바람직하게는 세툭시맙 또는 트라스투주맙 또는 OKT-9, 또는 이의 적어도 하나의 세포-표면 분자 결합 단편 및/또는 -도메인 중 어느 하나를 포함하거나 이로 구성되며, 제1 단백질성 분자의 제1 결합 부위는 제2 단백질성 분자의 제2 결합 부위와 상이하다.
본 발명의 제2 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 치료 조합 또는 본 발명에 따른 제1 약학적 조성물이며, 여기서 제1 단백질성 분자 및 제3 단백질성 분자의 제1 결합 부위는 모노클로날 항체 또는 이의 적어도 하나의 세포-표면 분자 결합 도메인 및/또는 -단편을 포함하며, 바람직하게는 세툭시맙, 다라투무맙, 젬투주맙, 트라스투주맙, 파니투무맙, 브렌투시맙, 이노투주맙, 모세투모맙, 폴라투주맙, 오비누투주맙, IgG 유형의 OKT-9 항-CD71 모노클로날 항체, 페르투주맙, 리투시맙, 오파투무맙, 허셉틴, 알렘투주맙, 피나투주맙, OKT-10 항-CD38 모노클로날 항체, 표 A2 또는 표 A3 또는 표 A4의 항체, 바람직하게는 세툭시맙 또는 트라스투주맙 또는 OKT-9, 또는 이의 적어도 하나의 세포-표면 분자 결합 단편 및/또는 -도메인 중 어느 하나를 포함하거나 이로 구성되며, 제1 단백질성 분자의 제1 결합 부위는 제3 단백질성 분자의 제1 결합 부위와 동일하다.
본 발명의 제2 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 치료 조합이며, 여기서 제2 단백질성 분자의 제2 결합 부위 및/또는 제3 단백질성 분자의 제1 결합 부위는 모노클로날 항체 또는 이의 적어도 하나의 세포-표면 분자 결합 분획 또는 -도메인이거나 이를 포함하며, 바람직하게는 젬투주맙 오조가미신, 브렌투시맙 베도틴, 트라스투주맙 엠탄신, 이노투주맙 오조가미신, 모세투모맙 파수도톡스 및 폴라투주맙 베도틴 및 표 A2 및 표 A3의 항체-약물 접합체 중 어느 하나를 포함하거나 이로 구성된다.
본 발명의 제2 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 치료 조합이며, 여기서 제2 단백질성 분자 및/또는 제3 단백질성 분자에 의해 포함되는 이펙터 모이어티는 올리고뉴클레오티드, 핵산 및 제노 핵산 중 임의의 하나 이상, 바람직하게는 벡터, 유전자, 세포 자살 유도 트랜스진, 데옥시리보핵산 (DNA), 리보핵산 (RNA), 안티센스 올리고뉴클레오티드 (ASO, AON), 짧은 간섭 RNA (siRNA), 마이크로RNA (miRNA), DNA 앱타머, RNA 앱타머, mRNA, 미니-서클 DNA, 펩티드 핵산 (PNA), 포스포라미데이트 모르폴리노 올리고머 (PMO), 잠금 핵산 (LNA), 브리지 핵산 (BNA), 2'-디옥시-2'-플루오로아라비노 핵산 (FANA), 2'-O-메톡시에틸-RNA (MOE), 2'-O, 4'-아미노에틸렌 브리지 핵산, 3'-플루오로 헥시톨 핵산 (FHNA), 플라스미드, 글리콜 핵산 (GNA) 및 트레오스 핵산 (TNA) 또는 이의 유도체 중 임의의 하나 이상으로부터 선택된 것, 보다 바람직하게는 BNA, 예를 들어 HSP27 단백질 발현을 침묵시키는 BNA를 포함하거나 이로 구성된다.
본 발명의 제2 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 치료 조합이며, 여기서 제2 단백질성 분자 및/또는 제3 단백질성 분자에 의해 포함되는 이펙터 모이어티는 적어도 하나의 단백질성 분자, 바람직하게는 펩티드, 단백질, 효소, 예컨대 우레아제 및 Cre-재조합효소, 리보좀-불활성화 단백질, 단백질성 독소 중 임의의 하나 이상으로부터 선택되는 것, 보다 바람직하게는 표 A5 및/또는 바이러스 독소, 예컨대 아폽틴; 박테리아 독소 예컨대 시가(Shiga) 독소, 시가-유사(Shiga-like) 독소, 슈도모나스 아에루기노사 엑소톡신(Pseudomonas aeruginosa exotoxin) (PE) 또는 PE의 엑소톡신 A, 전장 또는 절단된(truncated) 디프테리아 독소 (DT), 콜레라 독소; 곰팡이 독소, 예컨대 알파-사르신; 리보좀-불활성화 단백질 및 2형 리보좀-불활성화 단백질의 A 체인, 예컨대 디안틴, 예를 들어, 디안틴-30 또는 디안틴-32, 사포린 예를 들어, 사포린-S3 또는 사포린-S6, 보우가닌 또는 보우가닌의 탈-면역화(de-immunized) 유도체 디보우가닌, 시가-유사 독소 A, 포크위드(pokeweed) 항바이러스 단백질, 리신(ricin), 리신 A 체인, 모데신, 모데신 A 체인, 아브린, 아브린 A 체인, 볼켄신, 볼켄신 A 체인, 비스쿠민, 비스쿠민 A; 또는 동물 또는 인간 독소, 예컨대 개구리 RNase, 또는 인간으로부터의 안지오게닌, 또는 그랜자임 B, 또는 이의 임의의 단편 또는 유도체 중 임의의 하나 이상으로부터 선택되는 것을 포함하거나 이로 구성되며; 바람직하게는 단백질 독소가 디안틴 및/또는 사포린이다.
본 발명의 제2 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 치료 조합이며, 여기서 제2 단백질성 분자 및/또는 제3 단백질성 분자에 의해 포함되는 이펙터 모이어티는 적어도 하나의 페이로드, 바람직하게는 리보좀 표적화 독소(toxin targeting ribosomes), 연장 인자 표적화 독소(toxin targeting elongation factors), 튜불린을 표적화 독소, DNA 표적화 독소, 및 RNA 표적화 독소 중 임의의 하나 이상으로부터 선택된 것, 보다 바람직하게는, 엠탄신, 파수도톡스, 메이탄시노이드 유도체 DM1, 메이탄시노이드 유도체 DM4, 모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE, 베도틴), 모노메틸 아우리스타틴F(MMAF, 마포도틴), 칼리케아미신, N-아세틸-y-칼리케아미신, 피롤로벤조디아제핀 (PBD) 다이머, 벤조디아제핀, CC-1065 유사체, 듀오카르마이신, 독소루비신, 파클리타셀, 도세타셀, 시스플라틴, 시클로포스파미드, 에토포사이드, 도세타셀, 5-플루오로우라실(5-FU), 미토산트론, 튜불리신, 인돌리노벤조디아제핀, AZ13599185, 크립토피신, 리조신, 메토트레세이트, 안트라사이클린, 캠토테신 유사체, SN-38, DX-8951f, 엑사테칸 메실레이트, 슈도모나스 아에루기노사 엑소톡신(PE38)의 절단된 형태, 듀오카르마이신 유도체, 아마니틴, a-아마니틴, 스플라이세오스타틴, 타일란스타틴, 오조가미신, 테시린, 앰버스타틴269 및 소라브탄신, 또는 이의 유도체 중 임의의 하나 이상으로부터 선택된 것을 포함하거나 이로 구성된다.
본 발명의 제2 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 제1 단백질성 분자이며, 여기서 제1 단백질성 분자는 제1 단백질성 분자의 아미노산 잔기, 바람직하게는 시스테인 및/또는 라이신에 직접 공유 결합되고 및/또는 적어도 하나의 링커를 통해 및/또는 적어도 하나의 절단 가능한 링커를 통해 및/또는 적어도 하나의 폴리머 또는 올리고머 스캐폴드, 바람직하게는 1-8개의 이러한 스캐폴드 또는 2-4개의 이러한 스캐폴드를 통해 공유 결합되는, 하나 보다 많은 사포닌, 바람직하게는 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 16, 32, 64, 128 또는 1-100개의 사포닌, 또는 그 사이의 임의의 수의 사포닌, 예컨대 7, 9, 12개의 사포닌을 포함하며, 여기서 적어도 하나의 스캐폴드는 선택적으로 덴드론을 기반으로 하며, 여기서 1-32개의 사포닌 예컨대 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 16, 32개의 사포닌, 또는 이들 사이의 임의의 수의 사포닌, 예컨대 7, 9, 12개의 사포닌는 적어도 하나의 스캐폴드에 공유 결합된다.
본 발명의 제2 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 제1 단백질성 분자이며, 여기서 적어도 하나의 링커는 절단 불가능한 링커 또는 절단 가능한 링커이며, 여기서 절단 가능한 링커는 예를 들어 산성 조건, 환원성 조건, 효소 조건 또는 광-유도 조건 하에서 절단되며, 바람직하게는 절단 가능한 링커는 사포닌에 결합될 때, 산성 조건 하에서 절단되는 히드라존 결합 또는 히드라지드 결합을 포함하고 및/또는 사포닌에 결합될 때, 단백질 분해(proteolysis), 예를 들어 카셉신(Cathepsin) B에 의해 단백질 분해될 수 있는 결합을 포함하고 및/또는 사포닌에 결합될 때, 환원성 조건 하에서의 절단될 수 있는(susceptible for) 결합, 예컨대 디설파이드 결합이다.
본 발명의 제2 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 제1 단백질성 분자이며, 여기서 절단 가능한 링커는, 절단 가능한 링커가 사포닌에 결합되는 경우, 포유류 세포, 바람직하게는 인간 세포의 엔도좀 및/또는 리소좀에 존재하는 산성 조건, 바람직하게는 pH 4.0-6.5, 그리고 보다 바람직하게는 pH ≤ 5.5 하에서 생체내(in vivo)에서 절단된다.
본 발명의 제2 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 제1 단백질성 분자이며, 여기서 올리고머 또는 폴리머 스캐폴드는 폴리머 또는 올리고머 구조를 포함하고 화학기를 포함하며, 화학기는 상기 제1 단백질성 분자의 아미노산 잔기에 대한 스캐폴드의 공유 커플링을 위한 것이다.
본 발명의 제2 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 제1 단백질성 분자이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌은 본 발명에 따른 적어도 하나의 절단 가능한 링커를 통해 올리고머 또는 폴리머 스캐폴드의 폴리머 또는 올리고머 구조에 공유 결합된다.
본 발명의 제2 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 is 본 발명에 따른 제1 단백질성 분자이며, 여기서 상기 제1 단백질성 분자의 아미노산 잔기에 대한 올리고머 또는 폴리머 스캐폴드를 공유 결합하기 위한, 올리고머 또는 폴리머 스캐폴드의 화학기는 클릭 화학기이고, 바람직하게는 테트라진, 아지드, 알켄 또는 알킨, 또는 이들 기 중 임의의 시클릭 유도체(cyclic derivative)로부터 선택된 것이며, 보다 바람직하게는 상기 화학기는 아지드이다.
본 발명의 제2 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 제1 단백질성 분자이며, 여기서 올리고머 또는 폴리머 스캐폴드의 폴리머 또는 올리고머 구조는 폴리머 또는 올리고머 구조가 선형, 분지형 및/또는 고리형 폴리머, 올리고머, 덴드리머, 덴드론, 덴드론화된 폴리머, 덴드론화된 올리고머, DNA, 폴리펩티드, 폴리-라이신, 폴리에틸렌 글리콜, 또는 이들 폴리머 또는 올리고머 구조의 어셈블리를 포함하며, 이 어셈블리는 바람직하게는 공유 가교에 의해 구축된다.
본 발명의 제2 일련의 견지 및 구현예 내의 본 발명의 일 견지는 본 발명에 따른 제1 단백질성 분자 및 본 발명에 따른 제2 단백질성 분자를 포함하는 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 제2 일련의 견지 및 구현예 내의 본 발명의 일 견지는 본 발명에 따른 제1 단백질성 분자 및 본 발명에 따른 제3 단백질성 분자를 포함하는 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 제2 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 조성물이며, 제2 단백질성 분자 또는 제3 단백질성 분자에 의해 포함되는 이펙터 모이어티는 본 발명에 따른 이펙터 모이어티 중 임의의 하나, 바람직하게는 BNA이다.
본 발명의 제2 일련의 견지 및 구현예 내의 일 견지는 본 발명에 따른 제1 단백질성 분자 및 올리고뉴클레오티드, 핵산 및 제노 핵산 중 임의의 하나 이상, 바람직하게는 벡터, 유전자, 세포 자살 유도 트랜스진, 데옥시리보핵산 (DNA), 리보핵산 (RNA), 안티센스 올리고뉴클레오티드 (ASO, AON), 짧은 간섭 RNA (siRNA), 마이크로RNA (miRNA), DNA 앱타머, RNA 앱타머, mRNA, 미니-서클 DNA, 펩티드 핵산 (PNA), 포스포라미데이트 모르폴리노 올리고머 (PMO), 잠금 핵산 (LNA), 브리지 핵산 (BNA), 2'-디옥시-2'-플루오로아라비노 핵산 (FANA), 2'-O-메톡시에틸-RNA (MOE), 2'-O, 4'-아미노에틸렌 브리지 핵산, 3'-플루오로 헥시톨 핵산 (FHNA), 플라스미드, 글리콜 핵산 (GNA) 및 트레오스 핵산 (TNA) 또는 이의 유도체 중 적어도 하나로부터 선택된 것, 보다 바람직하게는 BNA, 예를 들어 HSP27 단백질 발현을 침묵시키는 BNA를 포함하는 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 제2 일련의 견지 및 구현예 내의 본 발명의 일 견지는 본 발명에 따른 제1 단백질성 분자 및 이펙터 모이어티를 포함하는 리간드-약물 접합체 또는 항체-약물 접합체에 관한 것이다.
본 발명의 제2 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 리간드-약물 접합체 또는 항체-약물 접합체이며, 여기서 항체는 CD71, CA125, EpCAM(17-1A), CD52, CEA, CD44v6, FAP, EGF-IR, 인테그린(integrin), 신데칸-1(syndecan-1), 바스큘라 인테그린 알파-V 베타-3(vascular integrin alpha-V beta-3), HER2, EGFR, CD20, CD22, 엽산 수용체 1(Folate receptor 1), CD146, CD56, CD19, CD138, CD27L 수용체, PSMA, CanAg, 인테그린-알파V, CA6, CD33, 메소텔린, 크립토, CD3, CD30, CD239, CD70, CD123, CD352, DLL3, CD25, 에프린A4, MUC1, Trop2, CEACAM5, CEACAM6, HER3, CD74, PTK7, Notch3, FGF2, C4.4A, FLT3, CD38, FGFR3, CD7, PD-L1, CTLA4, CD52, PDGFRA, VEGFR1, VEGFR2, 바람직하게는 CD71, EGFR, HER2 중 임의의 하나에 결합될 수 있고, 및/또는 세툭시맙, 다라투무맙, 젬투주맙, 트라스투주맙, 파니투무맙, 브렌투시맙, 이노투주맙, 모세투모맙, 폴라투주맙, 오비누투주맙, IgG 유형의 OKT-9 항-CD71 모노클로날 항체, 페르투주맙, 리투시맙, 오파투무맙, 허셉틴, 알렘투주맙, 피나투주맙, OKT-10 항-CD38 모노클로날 항체, 표 A2 또는 표 A3 또는 표 A4의 항체 중 임의의 하나, 바람직하게는 세툭시맙 또는 트라스투주맙 또는 OKT-9, 또는 이의 적어도 하나의 종양-세포 수용체 결합-단편 및/또는 이의 적어도 하나의 종양-세포 수용체 결합-도메인이거나 이를 포함하며 및/또는 여기서 항체-약물 접합체는 젬투주맙 오조가미신, 브렌투시맙 베도틴, 트라스투주맙 엠탄신, 이노투주맙 오조가미신, 모세투모맙 파수도톡스 및 폴라투주맙 베도틴 및 표 A2 및 표 A3의 항체-약물 접합체 중 임의의 하나를 포함하고, 또는 여기서 리간드-약물 접합체는 세포-표면 분자에 대한 결합을 위한 적어도 하나의 리간드, 예컨대 EGF 또는 사이토카인을 포함한다.
본 발명의 제2 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 리간드-약물 접합체 또는 항체-약물 접합체이며, 여기서 이펙터 모이어티는 본 발명에 따른 이펙터 모이어티 중 임의의 하나 이상이다.
본 발명의 제2 일련의 견지 및 구현예 내의 본 발명의 일 견지는 본 발명에 따른 조성물 또는 본 발명에 따른 항체-약물 접합체 또는 본 발명에 따른 리간드-약물 접합체를 포함하고, 그리고 선택적으로 약학적으로 허용가능한 부형제를 추가로 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 제2 일련의 견지 및 구현예 내의 본 발명의 일 견지는 의약으로 사용하기 위한 본 발명에 따른 치료 조합 또는 조성물 또는 항체-약물 접합체 또는 리간드-약물 접합체 또는 약학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 제2 일련의 견지 및 구현예 내의 본 발명의 일 견지는 암 또는 자가면역성 질환의 치료 또는 방지에 사용하기 위한 본 발명에 따른 치료 조합 또는 조성물 또는 항체-약물 접합체 또는 리간드-약물 접합체 또는 약학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 제3 일련의 견지 및 구현예 내의 본 발명의 일 견지는 포유류 세포 내에 존재할 때 세포 내 효과(intracellular effect)를 유도할 수 있는 이펙터 모이어티에 관한 것으로, 이 이펙터 모이어티는 적어도 하나의 사포닌과 접합되고, 여기서 적어도 하나의 사포닌은 적어도 하나의 링커를 통해 이펙터 모이어티에 공유 결합되거나, 상기 이펙터 모이어티에 직접 공유 결합된다.
본 발명의 제3 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 적어도 하나의 올리고뉴클레오티드, 핵산 및 제노 핵산, 바람직하게는 벡터, 유전자, 세포 자살 유도 트랜스진, 데옥시리보핵산 (DNA), 리보핵산 (RNA), 안티센스 올리고뉴클레오티드 (ASO, AON), 짧은 간섭 RNA (siRNA, short interfering RNA), 마이크로RNA (miRNA), DNA 앱타머, RNA 앱타머, mRNA, 미니-서클 DNA, 펩티드 핵산 (PNA), 포스포라미데이트 모르폴리노 올리고머 (PMO), 잠금 핵산 (LNA), 브리지 핵산 (BNA), 2'-디옥시-2'-플루오로아라비노 핵산 (FANA), 2'-O-메톡시에틸-RNA (MOE), 2'-O, 4'-아미노에틸렌 브리지 핵산, 3'-플루오로 헥시톨 핵산 (FHNA), 플라스미드, 글리콜 핵산 (GNA) 및 트레오스 핵산 (TNA) 또는 이의 유도체 중 임의의 하나 이상으로부터 선택된 것, 보다 바람직하게는 BNA, 예를 들어 HSP27 단백질 발현을 침묵시키는 BNA를 포함하거나 이로 구성되는 본 발명에 따른 이펙터 모이어티이다.
본 발명의 제3 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 적어도 하나의 단백질성 분자를 포함하는 본 발명에 따른 이펙터 모이어티이며, 단백질성 분자는 바람직하게는 펩티드, 단백질, 효소, 예컨대 우레아제 및 Cre-재조합효소, 리보좀-불활성화 단백질, 단백질성 독소, 예컨대 표 A5 및/또는 박테리아 독소로부터 선택된 단백질 독소 또는 식물 독소 중 임의의 하나 이상으로부터 선택된, 보다 바람직하게는 바이러스 독소, 예컨대 아폽틴; 박테리아 독소, 예컨대 시가(Shiga) 독소, 시가-유사(Shiga-like) 독소, 슈도모나스 아에루기노사 엑소톡신(Pseudomonas aeruginosa exotoxin) (PE) 또는 PE의 엑소톡신 A, 전장 또는 절단된(truncated) 디프테리아 독소 (DT), 콜레라 독소; 곰팡이 독소(fungal toxin), 예컨대 알파-사르신; 리보좀-불활성화 단백질 및 2형 리보좀-불활성화 단백질의 A 체인, 예컨대 디안틴, 예를 들어, 디안틴-30 또는 디안틴-32, 사포린 예를 들어, 사포린-S3 또는 사포린-S6, 보우가닌 또는 보우가닌의 탈-면역화(de-immunized) 유도체 디보우가닌, 시가-유사 독소 A, 포크위드(pokeweed) 항바이러스 단백질, 리신(ricin), 리신 A 체인, 모데신, 모데신 A 체인, 아브린, 아브린 A 체인, 볼켄신, 볼켄신 A 체인, 비스쿠민, 비스쿠민 A 체인; 또는 동물 또는 인간 독소, 예컨대 개구리 RNase, 또는 인간으로부터의 안지오게닌, 또는 그랜자임 B, 또는 이의 임의의 단편 또는 유도체 중 임의의 하나 이상으로부터 선택되며; 바람직하게는 단백질 독소가 디안틴 및/또는 사포린이다.
본 발명의 제3 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 적어도 하나의 페이로드를 포함하는 본 발명에 따른 이펙터 모이어티이며, 상기 페이로드는 바람직하게는 리보좀 표적화 독소, 연장 인자 표적화 독소, 튜불린을 표적화 독소, DNA 표적화 독소, 및 RNA 표적화 독소 중 임의의 하나 이상으로부터 선택되며, 보다 바람직하게는, 엠탄신, 파수도톡스, 메이탄시노이드 유도체 DM1, 메이탄시노이드 유도체 DM4, 모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE, 베도틴), 모노메틸 아우리스타틴 F(MMAF, 마포도틴), 칼리케아미신, N-아세틸-γ-칼리케아미신, 피롤로벤조디아제핀 (PBD) 다이머, 벤조디아제핀, CC-1065 유사체, 듀오카르마이신, 독소루비신, 파클리타셀, 도세타셀, 시스플라틴, 시클로포스파미드, 에토포사이드, 도세타셀, 5-플루오로우라실(5-FU), 미토산트론, 튜불리신, 인돌리노벤조디아제핀, AZ13599185, 크립토피신, 리조신, 메토트레세이트, 안트라사이클린, 캠토테신 유사체, SN-38, DX-8951f, 엑사테칸 메실레이트, 슈도모나스 아에루기노사 엑소톡신(PE38)의 절단된 형태, 듀오카르마이신 유도체, 아마니틴, α-아마니틴, 스플라이세오스타틴, 타일란스타틴, 오조가미신, 테시린, 앰버스타틴269 및 소라브탄신, 또는 이의 유도체 중 임의의 하나 이상으로부터 선택된다.
본 발명의 제3 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 이펙터 모이어티이며, 여기서 적어도 하나 사포닌은 위치 C-23에서 알데히드 작용(function)을 갖는 12,13-디하이드로올레아난 유형에 속하며, 선택적으로 사포닌의 C-3베타-OH 기에서 카보하이드레이트 치환체에 글루쿠론산 작용을 포함하는, 비스데스모시딕 트리테르펜 사포닌 및/또는 트리테르페노이드 사포닌 및/또는 집소필라(Gypsophila) 종 및/또는 사포나리아(Saponaria) 종 및/또는 아그로스템마(Agrostemma) 종 및/또는 퀼라자(Quillaja) 종, 예컨대 퀼라자 사포나리아(Quillaja saponaria)에서 분리된 사포닌이다.
본 발명의 제3 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 이펙터 모이어티이며, 여기서 적어도 하나 사포닌은 단일 특이적 사포닌이거나 둘 이상의 상이한 사포닌의 혼합물이다.
본 발명의 제3 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 이펙터 모이어티이며, 여기서 사포닌은 표 A1 또는 스킴 I, S01861, SA1657, GE1741, SA1641, QS-21, QS-21A, QS-21 A-api, QS-21 A-xyl, QS-21B, QS-21 B-api, QS-21 B-xyl, QS-7-xyl, QS-7-api, QS-17-api, QS-17-xyl, QS1861, QS1862, 퀼라자사포닌(Quillajasaponin), 사포늄 앨범(Saponinum album), QS-18, Quil-A, Gyp1, 집소사이드 A(gypsoside A), AG1, AG2, S01542, S01584, S01658, S01674, S01832, 또는 이들의 임의의 입체 이성질체 및/또는 이들의 임의의 조합 중 하나 이상이며, 바람직하게는 사포닌은 SO1861 및/또는 GE1741 및/또는 SA1641 및/또는 QS-21 및/또는 퀼라익산 아글리콘 코어(quillaic acid aglycon core), C-3베타-OH기에 Gal-(1→2)-[Xyl-(1→3)]-GlcA 카보하이드레이트 치환체 및 C-28-OH기에 Glc-(1→3)-Xyl-(1→4)-Rha-(1→2)-[Xyl-(1→3)-4-OAc-Qui-(1→4)]-Fuc 카보하이드레이트 치환체를 갖는 사포닌이며/이거나 3-O-베타-D-갈락토피라노실-(1→2)-[베타-D-자일로피라노실-(1→3)]-베타-D-글루쿠로노피라노실 퀼라익산 28-0-베타-D-글루코피라노실-(1→3)-베타-D-자일로피라노실-(1→4)-알파-L-람노피라노실-(1→2)-[베타-D자일로피라노실-(1→3)-4-OAc-베타-D-퀴노보피라노실-(1→4)]-베타-D-푸코피라노사이드이며, 보다 바람직하게는 사포닌은 SO1861 및/또는 QS-21이다.
본 발명의 제3 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 이펙터 모이어티이며, 여기서 사포닌은 분자량이 적어도 1.500 달톤이고 C-3 위치에 제1 분지형 카보하이드레이트 측쇄를 가지며, 제1 분지형 카보하이드레이트 측쇄가 선택적으로 글루쿠론산을 함유하는, C-23 위치에 알데히드기를 함유하고 선택적으로 C-16 위치에 히드록실기를 함유하는 올레아난형(oleanan-type) 트리테르펜을 포함하는 비스데스모시딕 사포닌이며, 사포닌은 C-28 위치에 제2 분지형 카보하이드레이트 측쇄를 갖는 에스테르기를 함유하며, 제2 분지형 카보하이드레이트 사슬은 바람직하게는 적어도 4개의 카보하이드레이트 유닛을 포함하며, 선택적으로 적어도 하나의 아세틸 잔기, 예컨대 2개의 아세틸 잔기를 함유하고 및/또는 선택적으로 하나 이상의 디옥시 카보하이드레이트 및/또는 퀴노보스 및/또는 글루코스 및/또는 4-메톡시신남산을 포함하고 및/또는 선택적으로 에스테르 결합을 통해 카보하이드레이트에 결합된 5-0-[5-0-Rha-(1→2)-Ara/Api-3,5-디하이드록시-6-메틸-옥타노일]-3,5-디하이드록시-6-메틸-옥탄산을 포함하며 및/또는 선택적으로 5-0-[5-0-Ara/Api-3,5-디하이드록시-6-메틸-옥타노일]-3,5-디하이드록시-6-메틸-옥탄산을 포함하며, 또는 여기서 적어도 하나의 사포닌은 QS-21 또는 QS-21A, QS-21 A-api, QS-21 A-xyl, QS-21B, QS-21 B-api, QS-21 B-xyl, QS-7-xyl, QS-7-api, QS-17-api, QS-17-xyl, QS-18, QS1861, 양성자화된 QS1861 (QS1862), Quil-A 중 임의의 하나 이상이다.
본 발명의 제3 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 이펙터 모이어티이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌은 위치 C-23에 알데히드 작용을 갖는 12,13-디하이드로올레아난 유형에 속하는 비스데스모시딕 트리테르펜 사포닌이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌은 사포닌의 알데히드 작용, 바람직하게는 위치 C-23의 알데히드 작용, 바람직하게는 적어도 하나의 링커를 통해, 보다 바람직하게는 적어도 하나의 절단 가능한 링커를 통해, 존재하는 경우에, 이펙터 모이어티의 아미노산 잔기에 공유 커플링되며, 여기서 아미노산 잔기는 바람직하게는 시스테인 및 라이신으로부터 선택된다.
본 발명의 제3 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 이펙터 모이어티이며, 여기서 적어도 하나 사포닌은 위치 C-23에서 알데히드 작용을 갖는 12,13-디하이드로올레아난 유형에 속하며 사포닌의 C-3베타-OH기에서의 카보하이드레이트 치환체에 글루쿠론산 작용을 포함하는 비스데스모시딕 트리테르펜 사포닌이며, 여기서 사포닌은 사포닌의 C-3베타-OH기에서의 카보하이드레이트 치환체에서의 글루쿠론산 작용을 통해, 바람직하게는 적어도 하나의 링커를 통해, 존재하는 경우에, 이펙터 모이어티의 아미노산 잔기에 공유 커플링되며, 여기서 아미노산 잔기는 바람직하게는 시스테인 및 라이신으로부터 선택된다.
본 발명의 제3 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 이펙터 모이어티이며, 여기서 적어도 하나의 링커는 적어도 하나 절단 불가능한 링커 및/또는 적어도 하나 절단 가능한 링커를 포함하며, 여기서 선택적으로 상기 절단 가능한 링커는 산성, 환원성(reductive), 효소 또는 광-유도 조건 하에서 절단되며, 바람직하게는 절단 가능한 링커는 산성 조건 하에서 절단되는 히드라존 결합 또는 히드라지드 결합 및/또는 단백질 분해(proteolysis), 예를 들어 카셉신 B에 의한 단백질 분해될 수 있는 결합, 및/또는 환원성 조건 하에서의 절단될 수 있는 결합, 예컨대 디설파이드 결합을 포함한다.
본 발명의 제3 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 이펙터 모이어티이며, 여기서 적어도 하나의 링커는 포유류 세포, 바람직하게는 인간 세포의 엔도좀 및/또는 리소좀에 존재하는 산성 조건, 바람직하게는 pH 4.0-6.5, 그리고 보다 바람직하게는 pH ≤ 5.5 하에서 생체내(in vivo)에서 절단되는 적어도 하나의 절단 가능한 링커를 포함한다.
본 발명의 제3 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 이펙터 모이어티이며, 여기서 적어도 하나 사포닌은 라이신 측쇄에 공유 결합되어 아미드 결합을 형성하고/하거나 시스테인 측쇄에 공유 결합되어 티오-에테르 링키지 또는 디설파이드 결합을 형성하고, 여기서 라이신 및/또는 시스테인은 이펙터 모이어티에 의해 포함되며, 여기서 사포닌은 이펙터 모이어티에 직접 결합되거나 적어도 하나 링커를 통해 결합된다.
본 발명의 제3 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 이펙터 모이어티이며, 여기서 적어도 하나 사포닌은 이펙터 모이어티에 적어도 하나 링커를 통해 공유 결합되며, 여기서 링커는 폴리머 또는 올리고머 구조 그리고 스캐폴드를 이펙터 모이어티에 공유 커플링하기 위한 화학기를 포함하는 스캐폴드이거나 이를 포함한다.
본 발명의 제3 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 이펙터 모이어티이며, 여기서 적어도 하나 사포닌은 스캐폴드의 폴리머 또는 올리고머 구조에 절단 가능한 결합을 통해 공유 결합된다.
본 발명의 제3 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 이펙터 모이어티이며, 여기서 절단 가능한 결합은 임의의 산성 조건, 환원성 조건, 효소 조건 및 광-유도 조건 하에서 절단되며, 보다 바람직하게는 절단 가능한 결합은 산성 조건 하에서 절단되는 히드라존 결합 또는 히드라지드 결합 및/또는 단백질 분해(proteolysis), 예를 들어 카셉신 B에 의해 단백질 분해될 수 있는 결합, 및/또는 환원성 조건 하에서의 절단될 수 있는 결합, 예컨대 디설파이드 결합이다.
본 발명의 제3 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 이펙터 모이어티이며, 여기서 절단 가능한 결합은 포유류 세포, 바람직하게는 인간 세포의 엔도좀 및/또는 리소좀에 존재하는 산성 조건, 바람직하게는 pH 4.0-6.5, 그리고 보다 바람직하게는 pH ≤ 5.5 하에서 생체내(in vivo)에서 절단된다.
본 발명의 제3 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 이펙터 모이어티이며, 여기서 적어도 하나 사포닌은 이민 결합, 히드라존 결합, 히드라지드 결합, 옥심 결합, 1,3-디옥솔란 결합, 디설파이드 결합(disulphide bond), 티오-에테르 결합, 아미드 결합, 펩티드 결합 및/또는 에스테르 결합을 통해, 바람직하게는 적어도 하나 링커, 바람직하게는 아미드 결합, 히드라지드 결합, 티오-에테르 결합, 및/또는 히드라존 결합을 통해 스캐폴드의 폴리머 또는 올리고머 구조에 공유 결합된다.
본 발명의 제3 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 이펙터 모이어티이며, 여기서 적어도 하나 사포닌은 스캐폴드의 폴리머 또는 올리고머 구조에, 공유 결합에서 적어도 하나의 사포닌의 위치 C-23에서 알데히드 작용을 수반(존재하는 경우에, 공유 결합은 바람직하게는 이민 결합 또는 히드라존 결합 또는 아미드 결합 또는 티오-에테르 결합 또는 디설파이드 결합이다)하며 및/또는 공유 결합에서 적어도 하나의 사포닌의 C-3베타-OH기에서의 카보하이드레이트 치환체에서의 글루쿠론산 작용을 수반(존재하는 경우에, 바람직하게는 공유 결합은 아미드 결합 또는 디설파이드 결합 또는 티오-에테르 결합이다)하여 공유 결합된다.
본 발명의 제3 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 이펙터 모이어티이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌의 위치 C-23에서의 알데히드 작용은 링커 N-ε-말레이미도카프로산 히드라지드에 공유 커플링되며, 이 링커는 스캐폴드의 폴리머 또는 올리고머 구조의 설프하이드릴기, 예컨대 시스테인의 설프하이드릴기에 티오-에테르 결합을 통해 공유 커플링된다.
본 발명의 제3 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 이펙터 모이어티이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌의 C-3베타-OH기의 카보하이드레이트 치환체에서의 글루쿠론산 작용은 링커 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트에 공유 커플링되며, 이 링커는 아미드 결합을 통해 스캐폴드의 폴리머 또는 올리고머 구조의 아민기, 예컨대 스캐폴드의 폴리머 또는 올리고머 구조의 N-말단 또는 라이신의 아민기에 공유 커플링된다.
본 발명의 제3 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 이펙터 모이어티이며, 여기서 이펙터 모이어티에 대한 스캐폴드의 공유 커플링을 위한, 스캐폴드의 화학기는 클릭 화학기이며, 바람직하게는 테트라진, 아지드, 알켄 또는 알킨, 또는 이들 기 중 임의의 시클릭 유도체(cyclic derivative)로부터 선택된 것이며, 보다 바람직하게는 상기 화학기는 아지드이다.
본 발명의 제3 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 이펙터 모이어티이며, 여기서 스캐폴드의 폴리머 또는 올리고머 구조는 선형, 분지형 및/또는 고리형 폴리머, 올리고머, 덴드리머, 덴드론, 덴드론화된 폴리머, 덴드론화된 올리고머, DNA, 폴리펩티드, 폴리-라이신, 폴리에틸렌 글리콜, 또는 이들 폴리머 또는 올리고머 구조의 어셈블리를 포함하며, 이 어셈블리는 바람직하게는 공유 가교에 의해 구축된다.
본 발명의 제3 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 이펙터 모이어티이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌은 정의된 수의 사포닌 또는 정의된 범위의 사포닌, 바람직하게는 1-128개의 사포닌 또는 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 16, 32, 64 또는 128개의 사포닌, 또는 그 사이의 임의의 수의 사포닌, 예컨대 7, 9, 12개의 사포닌이다.
본 발명의 제3 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 이펙터 모이어티이며, 여기서 이펙터 모이어티는 이펙터 모이어티의 아미노산 잔기, 바람직하게는 시스테인 및/또는 라이신에 직접 공유 결합되고 및/또는 적어도 하나 링커를 통해 및/또는 적어도 하나 절단 가능한 링커를 통해 및/또는 제14항 내지 제23항 중 어느 한 항의 적어도 하나 폴리머 또는 올리고머 스캐폴드, 바람직하게는 1-8개의 이러한 스캐폴드 또는 2-4개의 이러한 스캐폴드를 통해 공유 결합되는, 하나 보다 많은 사포닌, 바람직하게는 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 16, 32, 64, 128 또는 1-100개의 사포닌, 또는 그 사이의 임의의 수의 사포닌, 예컨대 7, 9, 12개의 사포닌을 포함하며, 여기서 1-32개의 사포닌 예컨대 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 16, 32개의 사포닌은 적어도 하나의 스캐폴드에 공유 결합된다.
본 발명의 제3 일련의 견지 및 구현예 내의 본 발명의 일 견지는 본 발명에 따른 이펙터 모이어티를 포함하는 항체-약물 접합체, 또는 본 발명에 따른 이펙터 모이어티를 포함하는 리간드-약물 접합체에 관한 것이다.
본 발명의 제3 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 항체-약물 접합체, 또는 리간드-약물 접합체에 관한 것이며, 여기서 항체는 CD71, CA125, EpCAM(17-1A), CD52, CEA, CD44v6, FAP, EGF-IR, 인테그린(integrin), 신데칸-1(syndecan-1), 바스큘라 인테그린 알파-V 베타-3(vascular integrin alpha-V beta-3), HER2, EGFR, CD20, CD22, 엽산 수용체 1(Folate receptor 1), CD146, CD56, CD19, CD138, CD27L 수용체, PSMA, CanAg, 인테그린-알파V, CA6, CD33, 메소텔린, 크립토, CD3, CD30, CD239, CD70, CD123, CD352, DLL3, CD25, 에프린A4, MUC1, Trop2, CEACAM5, CEACAM6, HER3, CD74, PTK7, Notch3, FGF2, C4.4A, FLT3, CD38, FGFR3, CD7, PD-L1, CTLA4, CD52, PDGFRA, VEGFR1, VEGFR2, 바람직하게는 CD71, EGFR, HER2 중 임의의 하나에 결합될 수 있고, 및/또는 여기서 항체-약물 접합체의 항체는 세툭시맙, 다라투무맙, 젬투주맙, 트라스투주맙, 파니투무맙, 브렌투시맙, 이노투주맙, 모세투모맙, 폴라투주맙, 오비누투주맙, IgG 유형의 OKT-9 항-CD71 모노클로날 항체, 페르투주맙, 리투시맙, 오파투무맙, 허셉틴, 알렘투주맙, 피나투주맙, OKT-10 항-CD38 모노클로날 항체, 표 A2 또는 표 A3 또는 표 A4의 항체, 바람직하게는 세툭시맙 또는 트라스투주맙 또는 OKT-9, 또는 이의 적어도 하나의 종양-세포 특이적 수용체 결합-단편 및/또는 이의 적어도 하나의 종양-세포 특이적 수용체 결합-도메인 중 임의의 하나이거나 이를 포함하고, 및/또는 항체-약물 접합체는 젬투주맙 오조가미신, 브렌투시맙 베도틴, 트라스투주맙 엠탄신, 이노투주맙 오조가미신, 모세투모맙 파수도톡스 및 폴라투주맙 베도틴 및 표 A2 및 표 A3의 항체-약물 접합체 중 임의의 하나를 포함하고 및/또는 리간드-악물 접합체는 세포-표면 분자에 대한 결합을 위한 적어도 하나의 비단백질성 리간드 및/또는 적어도 하나의 단백질성 리간드, 예컨대 EGF 또는 사이토카인을 포함하거나 이로 구성된다.
본 발명의 제3 일련의 견지 및 구현예 내의 본 발명의 일 견지는 (a) 본 발명에 따른 이펙터 모이어티 및 선택적으로 약학적으로 허용가능한 부형제; 및 (b) 항체-약물 접합체 또는 리간드-약물 접합체, 및 선택적으로 약학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 치료 조합에 관한 것이다.
본 발명의 제3 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 치료 조합이며, 여기서 항원-약물 접합체는 종양-세포 수용체 CD71, CA125, EpCAM(17-1A), CD52, CEA, CD44v6, FAP, EGF-IR, 인테그린(integrin), 신데칸-1(syndecan-1), 바스큘라 인테그린 알파-V 베타-3(vascular integrin alpha-V beta-3), HER2, EGFR, CD20, CD22, 엽산 수용체 1(Folate receptor 1), CD146, CD56, CD19, CD138, CD27L 수용체, PSMA, CanAg, 인테그린-알파V, CA6, CD33, 메소텔린, 크립토, CD3, CD30, CD239, CD70, CD123, CD352, DLL3, CD25, 에프린A4, MUC1, Trop2, CEACAM5, CEACAM6, HER3, CD74, PTK7, Notch3, FGF2, C4.4A, FLT3, CD38, FGFR3, CD7, PD-L1, CTLA4, CD52, PDGFRA, VEGFR1, VEGFR2, 바람직하게는 CD71, EGFR, HER2 중 임의의 하나에 결합될 수 있고, 및/또는 여기서 항체-약물 접합체의 항체는 세툭시맙, 다라투무맙, 젬투주맙, 트라스투주맙, 파니투무맙, 브렌투시맙, 이노투주맙, 모세투모맙, 폴라투주맙, 오비누투주맙, IgG 유형의 OKT-9 항-CD71 모노클로날 항체, 페르투주맙, 리투시맙, 오파투무맙, 허셉틴, 알렘투주맙, 피나투주맙, OKT-10 항-CD38 모노클로날 항체, 표 A2 또는 표 A3 또는 표 A4의 항체 중 임의의 하나, 바람직하게는 세툭시맙 또는 트라스투주맙 또는 OKT-9, 또는 이의 적어도 하나의 종양-세포 특이적 수용체 결합-단편 및/또는 이의 적어도 하나의 종양-세포 특이적 수용체 결합-도메인이거나 이를 포함하고, 및/또는 항체-약물 접합체는 젬투주맙 오조가미신, 브렌투시맙 베도틴, 트라스투주맙 엠탄신, 이노투주맙 오조가미신, 모세투모맙 파수도톡스 및 폴라투주맙 베도틴 및 표 A2 및 표 A3의 항체-약물 접합체 중 임의의 하나를 포함하고 및/또는 리간드-악물 접합체는 세포-표면 분자에 대한 결합을 위한 적어도 하나의 비단백질성 리간드 및/또는 적어도 하나의 단백질성 리간드, 예컨대 EGF 또는 사이토카인을 포함하거나 이로 구성된다.
본 발명의 제3 일련의 견지 및 구현예 내의 본 발명의 일 견지는 본 발명에 따른 이펙터 모이어티 또는 본 발명에 따른 항체-약물 접합체, 또는 본 발명에 따른 리간드-약물 접합체 및 약학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 제3 일련의 견지 및 구현예 내의 본 발명의 일 견지는 의약으로 사용하기 위한, 본 발명에 따른 이펙터 모이어티 또는 본 발명에 따른 항체-약물 접합체, 또는 본 발명에 따른 치료 조합 또는 본 발명에 따른 리간드-약물 접합체 또는 본 발명에 따른 약학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 제3 일련의 견지 및 구현예 내의 본 발명의 일 견지는 암 또는 자가면역 질환의 치료 또는 방지에 사용하기 위한, 본 발명에 따른 이펙터 모이어티 또는 본 발명에 따른 항체-약물 접합체, 또는 본 발명에 따른 리간드-약물 접합체 또는 본 발명에 따른 치료 조합 또는 본 발명에 따른 약학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 제4 일련의 견지 및 구현예 내의 본 발명의 일 견지는 세포-표면 분자 표적화 분자(cell-surface molecule targeting molecule) 및 적어도 하나 이펙터 모이어티를 포함하고 추가로 적어도 하나 공유 결합된 사포닌을 포함하는 접합체에 관한 것이다.
본 발명의 제4 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 접합체이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌은 위치 C-23에서 알데히드 작용(function)을 갖는 12,13-디하이드로올레아난 유형에 속하며, 선택적으로 사포닌의 C-3베타-OH 기에서 카보하이드레이트 치환체에 글루쿠론산 작용을 포함하는, 비스데스모시딕 트리테르펜 사포닌 및/또는 트리테르페노이드 사포닌 및/또는 집소필라(Gypsophila) 종 및/또는 사포나리아(Saponaria) 종 및/또는 아그로스템마(Agrostemma) 종 및/또는 퀼라자(Quillaja) 종, 예컨대 퀼라자 사포나리아(Quillaja saponaria)에서 분리된 사포닌이다.
본 발명의 제4 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 접합체이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌은 단일 특이적 사포닌이거나 둘 이상의 상이한 사포닌의 혼합물이다.
본 발명의 제4 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 접합체이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌은 3.000 달톤 이하, 바람직하게는 2.500 달톤 이하, 보다 바람직하게는 2.300 달톤 이하, 가장 바람직하게는, 2.000 달톤 이하, 예컨대 1.500 달톤 - 1.900 달톤의 분자량을 갖는다.
본 발명의 제4 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 접합체이며, 여기서 사포닌은 표 A1 또는 스킴 I, S01861, SA1657, GE1741, SA1641, QS-21, QS-21A, QS-21 A-api, QS-21 A-xyl, QS-21B, QS-21 B-api, QS-21 B-xyl, QS-7-xyl, QS-7-api, QS-17-api, QS-17-xyl, QS1861, QS1862, 퀼라자사포닌(Quillajasaponin), 사포늄 앨범(Saponinum album), QS-18, Quil-A, Gyp1, 집소사이드 A(gypsoside A), AG1, AG2, S01542, S01584, S01658, S01674, S01832, 또는 이들의 임의의 입체 이성질체 및/또는 이들의 임의의 조합 중 하나 이상이며, 바람직하게는 사포닌은 SO1861 및/또는 GE1741 및/또는 SA1641 및/또는 QS-21 및/또는 퀼라익산 아글리콘 코어(quillaic acid aglycon core), C-3베타-OH기에 Gal-(1→2)-[Xyl-(1→3)]-GlcA 카보하이드레이트 치환체 및 C-28-OH기에 Glc-(1→3)-Xyl-(1→4)-Rha-(1→2)-[Xyl-(1→3)-4-OAc-Qui-(1→4)]-Fuc 카보하이드레이트 치환체를 갖는 사포닌이며/이거나 3-O-베타-D-갈락토피라노실-(1→2)-[베타-D-자일로피라노실-(1→3)]-베타-D-글루쿠로노피라노실 퀼라익산 28-O-베타-D-글루코피라노실-(1→3)-베타-D-자일로피라노실-(1→4)-알파-L-람노피라노실-(1→2)-[베타-D-자일로피라노실-(1→3)-4-OAc-베타-D-퀴노보피라노실-(1→4)]-베타-D-푸코피라노사이드이며, 보다 바람직하게는 적어도 하나의 사포닌은 SO1861 및/또는 QS-21이다.
본 발명의 제4 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 접합체이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌은 분자량이 적어도 1.500 달톤이고 C-3 위치에 제1 분지형 카보하이드레이트 측쇄를 가지며, 제1 분지형 카보하이드레이트 측쇄가 선택적으로 글루쿠론산을 함유하는, C-23 위치에 알데히드기를 함유하고 선택적으로 C-16 위치에 히드록실기를 함유하는 올레아난형(oleanan-type) 트리테르펜을 포함하는 비스데스모시딕 사포닌이며, 여기서 사포닌은 C-28 위치에 제2 분지형 카보하이드레이트 측쇄를 갖는 에스테르기를 함유하며, 제2 분지형 카보하이드레이트 사슬은 선택적으로 적어도 하나의 아세틸 잔기, 예컨대 2개의 아세틸 잔기를 함유하고 및/또는 선택적으로 디옥시 카보하이드레이트를 포함하고 및/또는 선택적으로 퀴노보스를 포함하고 및/또는 선택적으로 글루코스를 포함하고 및/또는 선택적으로 4-메톡시신남산을 포함하고 및/또는 선택적으로 에스테르 결합을 통해 카보하이드레이트에 결합된 5-0-[5-0-Rha-(1→2)-Ara/Api-3,5-디하이드록시-6-메틸-옥타노일]-3,5-디하이드록시-6-메틸-옥탄산을 포함하며 및/또는 선택적으로 5-0-[5-0-Ara/Api-3,5-디하이드록시-6-메틸-옥타노일]-3,5-디하이드록시-6-메틸-옥탄산을 포함하는, 적어도 4개의 카보하이드레이트 유닛을 바람직하게 포함하며, 또는 여기서 적어도 하나의 사포닌은 QS-21 또는 QS-21A, QS-21 A-api, QS-21 A-xyl, QS-21B, QS-21 B-api, QS-21 B-xyl, QS-7-xyl, QS-7-api, QS-17-api, QS-17-xyl, QS-18, QS1861, 양성자화된 QS1861 (QS1862), Quil-A 중 임의의 하나 이상이다.
본 발명의 제4 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 접합체이며, 여기서 세포-표면 분자 표적화 분자는 세포-표면 분자에 대한 결합을 위한 단백질성 결합 분자 또는 단백질성 리간드 또는 리간드를 포함하거나 이로 구성된다.
본 발명의 제4 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 접합체이며, 여기서 세포-표면 분자 표적화 분자는 세포-표면 분자에 대한 결합을 위한 비-단백질성 리간드 및/또는 단백질성 리간드, 예컨대 EGF 또는 사이토카인을 포함하거나 이로 구성되며, 및/또는 면역 글로블린, 면역 글로불린의 적어도 하나의 결합 도메인, 및/또는 면역 글로불린의 적어도 하나의 결합 단편, 예컨대 항체, IgG, Vhh 도메인 또는 Vh 도메인을 포함하거나 이로 구성되는 분자, Fab, scFv, Fv, dAb, F(ab)2, Fcab 단편을 포함하거나 이로 구성되며, 이는 세포-표면 분자에 결합될 수 있다.
본 발명의 제4 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 접합체이며, 여기서 세포-표면 분자 표적화 분자는 종양-세포 표면 분자, 바람직하게는 종양-세포 수용체 예컨대 종양-세포 특이적 수용체, 보다 바람직하게는 CD71, CA125, EpCAM(17-1A), CD52, CEA, CD44v6, FAP, EGF-IR, 인테그린(integrin), 신데칸-1(syndecan-1), 바스큘라 인테그린 알파-V 베타-3(vascular integrin alpha-V beta-3), HER2, EGFR, CD20, CD22, 엽산 수용체 1(Folate receptor 1), CD146, CD56, CD19, CD138, CD27L 수용체, PSMA, CanAg, 인테그린-알파V, CA6, CD33, 메소텔린, 크립토, CD3, CD30, CD239, CD70, CD123, CD352, DLL3, CD25, ephrinA4, MUC1, Trop2, CEACAM5, CEACAM6, HER3, CD74, PTK7, Notch3, FGF2, C4.4A, FLT3, CD38, FGFR3, CD7, PD-L1, CTLA4, CD52, PDGFRA, VEGFR1, VEGFR2로부터 선택된 수용체, 바람직하게는 CD71, HER2 및 EGFR로 부터 선택된 수용체에 결합될 수 있다.
본 발명의 제4 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 접합체이며, 여기서 종양-세포 수용체는 본 발명의 세포-표면 분자 표적 분자 및 본 발명의 접합체에 결합한 후에 종양 세포에 의해 내재화되며, 여기서 바람직하게는 종양-세포 수용체에 대한 접합체의 결합 후에 접합체와 종양-세포 수용체의 복합체가 예를 들어 엔도사이토시스를 통해 종양-세포 수용체-매개 내재화된다.
본 발명의 제4 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 접합체이며, 여기서 세포-표면 분자 표적화 분자는 모노클로날 항체 또는 이의 적어도 하나의 세포-표면 분자 결합 단편 또는 -도메인이거나 이를 포함하며, 바람직하게는 세툭시맙, 다라투무맙, 젬투주맙, 트라스투주맙, 파니투무맙, 브렌투시맙, 이노투주맙, 모세투모맙, 폴라투주맙, 오비누투주맙, IgG 유형의 OKT-9 항-CD71 모노클로날 항체, 페르투주맙, 리투시맙, 오파투무맙, 허셉틴, 알렘투주맙, 피나투주맙, OKT-10 항-CD38 모노클로날 항체, 표 A2 또는 표 A3 또는 표 A4의 항체, 바람직하게는 세툭시맙 또는 트라스투주맙 또는 OKT-9, 또는 이의 적어도 하나의 세포-표면 분자 결합 단편 또는 -도메인 중 임의의 하나를 포함하거나 이로 구성된다.
본 발명의 제4 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 접합체이며, 여기서 적어도 하나의 이펙터 모이어티는 올리고뉴클레오티드, 핵산 및 제노 핵산 중 임의의 하나 이상, 바람직하게는 벡터, 유전자, 세포 자살 유도 트랜스진, 데옥시리보핵산 (DNA), 리보핵산 (RNA), 안티센스 올리고뉴클레오티드 (ASO, AON), 짧은 간섭 RNA (siRNA), 마이크로RNA (miRNA), DNA 앱타머, RNA 앱타머, mRNA, 미니-서클 DNA, 펩티드 핵산 (PNA), 포스포라미데이트 모르폴리노 올리고머 (PMO), 잠금 핵산 (LNA), 브리지 핵산 (BNA), 2'-디옥시-2'-플루오로아라비노 핵산 (FANA), 2'-O-메톡시에틸-RNA (MOE), 2'-O, 4'-아미노에틸렌 브리지 핵산, 3'-플루오로 헥시톨 핵산 (FHNA), 플라스미드, 글리콜 핵산 (GNA) 및 트레오스 핵산 (TNA) 또는 이의 유도체 중 임의의 하나 이상으로부터 선택된 것, 보다 바람직하게는 BNA, 예를 들어 HSP27 단백질 발현을 침묵시키는 BNA를 포함하거나 이로 구성된다.
본 발명의 제4 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 접합체이며, 여기서 적어도 하나의 이펙터 모이어티는 적어도 하나의 단백질성 분자, 바람직하게는 펩티드, 단백질, 효소, 예컨대 우레아제 및 Cre-재조합효소, 리보좀-불활성화 단백질, 표 A5로부터 선택된 단백질성 독소 중 하나 이상으로부터 선택된 것, 그리고 보다 바람직하게는 바이러스 독소, 예컨대 아폽틴; 박테리아 독소 예컨대 시가(Shiga) 독소, 시가-유사(Shiga-like) 독소, 슈도모나스 아에루기노사 엑소톡신(Pseudomonas aeruginosa exotoxin) (PE) 또는 PE의 엑소톡신 A, 전장 또는 절단된(truncated) 디프테리아 독소 (DT), 콜레라 독소; 곰팡이 독소(fungal toxin), 예컨대 알파-사르신; 리보좀-불활성화 단백질 및 2형 리보좀-불활성화 단백질의 A 체인, 예컨대 디안틴, 예를 들어, 디안틴-30 또는 디안틴-32, 사포린 예를 들어, 사포린-S3 또는 사포린-S6, 보우가닌 또는 보우가닌의 탈-면역화(de-immunized) 유도체 디보우가닌, 시가-유사 독소 A, 포크위드(pokeweed) 항바이러스 단백질, 리신(ricin), 리신 A 체인, 모데신, 모데신 A 체인, 아브린, 아브린 A 체인, 볼켄신, 볼켄신 A 체인, 비스쿠민, 비스쿠민 A; 또는 동물 또는 인간 독소, 예컨대 개구리 RNase, 또는 인간으로부터의 안지오게닌, 또는 그랜자임 B, 또는 이의 임의의 단편 또는 유도체 중 임의의 하나 이상으로부터 선택되는 것을 포함하거나 이로 구성되며; 바람직하게는 단백질 독소가 디안틴 및/또는 사포린이다.
본 발명의 제4 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 접합체이며, 여기서 적어도 하나의 이펙터 모이어티는 적어도 하나의 페이로드, 바람직하게는 리보좀 표적화 독소(toxin targeting ribosomes), 연장 인자 표적화 독소(toxin targeting elongation factors), 튜불린을 표적화 독소, DNA 표적화 독소, 및 RNA 표적화 독소 중 임의의 하나 이상, 보다 바람직하게는, 엠탄신, 파수도톡스, 메이탄시노이드 유도체 DM1, 메이탄시노이드 유도체 DM4, 모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE, 베도틴), 모노메틸 아우리스타틴F(MMAF, 마포도틴), 칼리케아미신, N-아세틸-γ-칼리케아미신, 피롤로벤조디아제핀 (PBD) 다이머, 벤조디아제핀, CC-1065 유사체, 듀오카르마이신, 독소루비신, 파클리타셀, 도세타셀, 시스플라틴, 시클로포스파미드, 에토포사이드, 도세타셀, 5-플루오로우라실(5-FU), 미토산트론, 튜불리신, 인돌리노벤조디아제핀, AZ13599185, 크립토피신, 리조신, 메토트레세이트, 안트라사이클린, 캠토테신 유사체, SN-38, DX-8951f, 엑사테칸 메실레이트, 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 엑소톡신(PE38)의 절단된 형태, 듀오카르마이신 유도체, 아마니틴, α-아마니틴, 스플라이세오스타틴, 타일란스타틴, 오조가미신, 테시린, 앰버스타틴269 및 소라브탄신, 또는 이의 유도체 중 임의의 하나 이상으로부터 선택된 것을 포함하거나 이로 구성된다.
본 발명의 제4 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 접합체이며, 여기서 적어도 하나의 이펙터 모이어티는 적어도 하나의 링커를 통해 세포-표면 분자 표적화 분자에 공유 결합되거나 또는 세포-표면 분자 표적화 분자에 직접 공유 결합된다.
본 발명의 제4 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 접합체이며, 여기서 적어도 하나의 이펙터 모이어티는 세포-표면 분자 표적화 분자에 공유 결합되며, 이에 의해 항체-약물 접합체 젬투주맙 오조가미신, 브렌투시맙 베도틴, 트라스투주맙 엠탄신, 이노투주맙 오조가미신, 모세투모맙 파수도톡스 및 폴라투주맙 베도틴 및 표 A2 및 표 A3의 항체-약물 접합체 중 임의의 하나를 형성한다.
본 발명의 제4 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 접합체이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌은 세포-표면 분자 표적화 분자, 바람직하게는 세포-표면 분자 표적화 분자의 아미노산 잔기에 사포닌의 알데히드 작용을 통해, 및/또는 적어도 하나의 이펙터 모이어티에 바람직하게는 적어도 하나의 이펙터 모이어티의 아미노산 잔기를 통해, 사포닌에서의 알데히드 작용, 바람직하게는 12,13-디하이드로올레아난 유형에 속하는 비스데스모시딕 트리테르펜 사포닌의 위치 C-23에서의 알데히드 작용을 통해 공유 결합된다.
본 발명의 제4 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 접합체이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌에서의 알데히드 작용, 바람직하게는 적어도 하나의 사포닌의 위치 C-23에서의 알데히드 작용은 링커 N-ε-말레이미도카프로산 히드라지드에 공유 커플링되고, 이 링커는 티오-에테르 결합을 통해 세포-표면 분자 표적화 분자 및/또는 적어도 하나의 이펙터 모이어티의 설프하이드릴기(sulfhydryl group), 예컨대 시스테인의 설프하이드릴기에 공유 커플링된다.
본 발명의 제4 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 접합체이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌은 위치 C-23에서 알데히드 작용을 갖는 12,13-디하이드로올레아난 유형에 속하며 사포닌의 C-3베타-OH기의 카보하이드레이트 치환체에 글루쿠론산 작용을 포함하는 비스데스모시딕 트리테르펜 사포닌이며, 여기서 사포닌은 글루쿠론산(glucuronic acid) 작용을 통해, 그리고 바람직하게 적어도 하나의 이펙터 모이어티의 아미노산 잔기를 통해 세포-표면 분자 표적화 분자의 아미노산 잔기 및/또는 적어도 하나의 이펙터 모이어티에 공유 결합된다.
본 발명의 제4 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 접합체이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌의 C-3베타-OH기에서의 카보하이드레이트 치환체에서의 글루쿠론산 작용은 링커 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트에 공유 커플링되며, 이 링커는 아미드 결합을 통해 세포-표면 분자 표적화 분자 및/또는 적어도 하나의 이펙터 모이어티의 아민기, 예컨대 세포-표면 분자 표적화 분자 및/또는 적어도 하나의 이펙터 모이어티의 N-말단 또는 라이신의 아민기에 공유 커플링된다.
본 발명의 제4 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 접합체이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌은 세포-표면 분자 표적화 분자 및/또는 적어도 하나의 이펙터 모이어티에 직접 또는 적어도 하나 링커 예컨대 2작용성 링커, 예를 들어, N-ε-말레이미도카프로산 히드라지드에 기초한 및/또는 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트에 기초한 2작용성 링커, 또는 3작용성 링커, 예컨대 스킴 II 및 구조 B의 3작용성 링커를 통해 공유 결합된다.
본 발명의 제4 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 접합체이며, 여기서 3작용성 링커는 적어도 하나의 사포닌이 공유 결합된 제2 화학기, 세포-표면 분자 표적화 분자에 대한 공유 결합을 위한 제3 화학기 및 적어도 하나의 이펙터 모이어티에 대한 공유 결합을 위한 제1 화학기를 포함하며, 바람직하게는 3작용성 링커는 스킴 II 및 구조 B의 3작용성 링커이다.
본 발명의 제4 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 접합체이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌은 세포-표면 분자 표적화 분자 및 적어도 하나의 이펙터 모이어티에 3작용성 링커를 포함하는 적어도 하나의 링커를 통해 공유 결합되며, 3작용성 링커에 세포-표면 분자 표적화 분자 및 적어도 하나의 이펙터 모이어티 모두가 결합되고, 바람직하게는 3작용성 링커는 스킴 II 및 구조 B의 3작용성 링커이다.
본 발명의 제4 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 접합체이며, 여기서 적어도 하나의 링커는 적어도 하나의 절단 가능한 링커를 포함하며, 여기서 선택적으로 절단 가능한 링커는 임의의 산성, 환원성, 효소 또는 광-유도 조건 하에서 절단되며, 바람직하게는 절단 가능한 링커는 산성 조건 하에서 절단되는 히드라존 결합 또는 히드라지드 결합 및/또는 단백질 분해(proteolysis), 예를 들어 카셉신 B에 의해 단백질 분해될 수 있는 결합, 및/또는 환원성 조건 하에서의 절단될 수 있는 결합, 예컨대 디설파이드 결합으로부터 선택된다.
본 발명의 제4 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 접합체이며, 여기서 적어도 하나의 링커는 적어도 하나의 절단 가능한 링커를 포함하며, 여기서 절단 가능한 링커 포유류 세포, 바람직하게는 인간 세포의 엔도좀 및/또는 리소좀에 존재하는 산성 조건, 바람직하게는 pH 4.0-6.5, 그리고 보다 바람직하게는 pH ≤ 5.5 하에서 생체내(in vivo)에서 절단된다.
본 발명의 제4 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 접합체이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌은 라이신 측쇄에 공유 결합되어 아미드 결합을 형성하고/하거나 시스테인 측쇄에 공유 결합되어 티오-에테르 링키지 또는 디설파이드 결합을 형성하고, 여기서 라이신 및/또는 시스테인은 세포-표면 분자 표적화 분자에 의해 포함되고/되거나 적어도 하나의 이펙터 모이어티에 의해 포함되며, 여기서 적어도 하나의 사포닌은 라이신 및/또는 시스테인에 직접 결합되거나, 선택적으로 절단 가능한 링커 및/또는 3작용성 링커, 예컨대 스킴 II 및 구조 B의 3작용성 링커를 포함하는 적어도 하나의 링커를 통해 결합된다.
본 발명의 제4 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 접합체이며, 여기서 링커는 N-ε-말레이미도카프로산 히드라지드에 기초한 및/또는 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트에 기초한 것, 3작용성 링커, 예컨대 스킴 II 및 구조 B의 3작용성 링커, 절단 가능한 링커이며, 및/또는 디설파이드 결합, 티오-에테르 결합, 아미드 결합, 히드라지드 결합 중 임의의 하나 이상을 포함한다.
본 발명의 제4 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 접합체이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌은 세포-표면 분자 표적화 분자 및/또는 적어도 하나의 이펙터 모이어티에 적어도 하나 링커를 통해 공유 결합되며, 여기서 링커는 폴리머 또는 올리고머 구조를 포함하며 추가로 스캐폴드를 세포-표면 분자 표적화 분자 및/또는 적어도 하나의 이펙터 모이어티에 공유 커플링하기 위한 적어도 하나 4개의 화학기를 포함하는 스캐폴드이거나 이를 포함한다.
본 발명의 제4 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 접합체이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌은 스캐폴드의 폴리머 또는 올리고머 구조에 절단 가능한 결합 및/또는 절단 불가능한 결합(non-cleavable bond)을 통해 공유 결합된다.
본 발명의 제4 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 접합체이며, 여기서 절단 가능한 결합은 임의의 산성 조건, 환원성 조건, 효소 조건 및 광-유도 조건 하에서 절단되며, 바람직하게는 절단 가능한 결합은 산성 조건 하에서 절단되는 히드라존 결합 또는 히드라지드 결합 및/또는 단백질 분해(proteolysis), 예를 들어 카셉신 B에 의해 단백질 분해될 수 있는 결합, 및/또는 환원성 조건 하에서의 절단될 수 있는 결합, 예컨대 디설파이드 결합을 포함한다.
본 발명의 제4 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 접합체이며, 여기서 절단 가능한 결합은 포유류 세포, 바람직하게는 인간 세포의 엔도좀 및/또는 리소좀에 존재하는 산성 조건, 바람직하게는 pH 4.0-6.5, 그리고 보다 바람직하게는 pH ≤ 5.5 하에서 생체내(in vivo)에서 절단된다.
본 발명의 제4 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 접합체이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌은 이민 결합, 히드라존 결합, 히드라지드 결합, 옥심 결합, 1,3-디옥솔란 결합, 디설파이드 결합(disulphide bond), 티오-에테르 결합, 아미드 결합, 펩티드 결합 또는 에스테르 결합을 통해, 바람직하게는 적어도 하나 링커를 통해, 스캐폴드의 폴리머 또는 올리고머 구조에 공유 결합된다.
본 발명의 제4 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 접합체이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌은 스캐폴드의 폴리머 또는 올리고머 구조에 이민 결합, 히드라존 결합, 및 히드라지드 결합 중 임의의 하나 이상을 통해 공유 결합되며, 이 결합은 바람직하게는 본 발명에 따라 절단될 수 있으며, 여기서 바람직하게는 적어도 하나의 사포닌은 스캐폴드의 폴리머 또는 올리고머 구조에 적어도 하나의 사포닌의 위치 C-23에서의 알데히드 작용을 통해 공유 결합된다.
본 발명의 제4 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 접합체이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌의 위치 C-23에서의 알데히드 작용은 링커 N-ε-말레이미도카프로산 히드라지드에 공유 커플링되며, 이 링커는 스캐폴드의 폴리머 또는 올리고머 구조의 설프하이드릴기, 예컨대 시스테인의 설프하이드릴기에 티오-에테르 결합을 통해 공유 커플링된다.
본 발명의 제4 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 접합체이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌은 스캐폴드의 폴리머 또는 올리고머 구조에 아미드 결합을 통해 공유 결합되며, 여기서 바람직하게는 적어도 하나의 사포닌은 스캐폴드의 폴리머 또는 올리고머 구조에, 존재하는 경우에, 적어도 하나의 사포닌의 C-3베타-OH기에서의 카보하이드레이트 치환체에서의 글루쿠론산 작용을 통해 공유 결합된다.
본 발명의 제4 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 접합체이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌의 C-3베타-OH기에서의 카보하이드레이트 치환체에서의 글루쿠론산 작용은 링커 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트에 공유 커플링되며, 이 링커는 아미드 결합을 통해 스캐폴드의 폴리머 또는 올리고머 구조의 아민기, 예컨대 스캐폴드의 폴리머 또는 올리고머 구조의 N-말단 또는 라이신의 아민기에 공유 커플링된다.
본 발명의 제4 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 접합체이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌은 스캐폴드의 폴리머 또는 올리고머 구조에 공유 결합되며, 존재하는 경우에, 공유 결합에 적어도 하나의 사포닌의 위치 C-23에서의 알데히드 작용이 수반되고 및/또는 존재하는 경우에, 공유 결합에서 적어도 하나의 사포닌의 C-3베타-OH기에서의 카보하이드레이트 치환체에서의 글루쿠론산 작용이 수반된다.
본 발명의 제4 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 접합체이며, 여기서 스캐폴드를 세포-표면 분자 표적화 분자 및/또는 적어도 하나의 이펙터 모이어티에 공유 커플링하기 위한 적어도 하나 4개의 화학기는 클릭 화학기이며, 바람직하게는 테트라진, 아지드, 알켄 또는 알킨, 또는 이들 기 중 임의의 시클릭 유도체(cyclic derivative) 중 임의의 하나 이상으로부터 선택되며, 바람직하게는 아지드기이다.
본 발명의 제4 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 접합체이며, 여기서 스캐폴드의 폴리머 또는 올리고머 구조는 선형, 분지형 및/또는 고리형 폴리머, 올리고머, 덴드리머, 덴드론, 덴드론화된 폴리머, 덴드론화된 올리고머, DNA, 폴리펩티드, 폴리-라이신, 폴리에틸렌 글리콜, 또는 이들 폴리머 또는 올리고머 구조의 어셈블리를 포함하며, 이 어셈블리는 바람직하게는 공유 가교에 의해 구축된다.
본 발명의 제4 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 접합체이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌은 정의된 수의 사포닌 또는 정의된 범위의 사포닌, 바람직하게는 1-128개의 사포닌 또는 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 16, 32, 64 또는 128개의 사포닌, 또는 그 사이의 임의의 수의 사포닌, 예컨대 7, 9, 12개의 사포닌이다.
본 발명의 제4 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 접합체이며, 여기서 접합체는 적어도 하나의 이펙터 모이어티 및/또는 세포-표면 분자 표적화 분자의 아미노산 잔기에 직접 그리고 바람직하게는 적어도 하나의 이펙터 모이어티의 아미노산 잔기를 통해, 바람직하게는 시스테인 및/또는 라이신에 공유 결합되고 및/또는, 본 발명의 적어도 하나의 링커 및/또는 적어도 하나의 절단 가능한 링커 및/또는 적어도 하나의 폴리머 또는 올리고머 스캐폴드, 바람직하게는 1-8개의 이러한 스캐폴드 또는 2-4개의 이러한 스캐폴드를 통해 공유 결합되는, 하나 보다 많은 사포닌, 바람직하게는 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 16, 32, 64 또는 1-100개의 사포닌, 또는 이들 사이의 임의의 수의 사포닌, 예컨대 7, 9, 12개의 사포닌을 포함하며, 여기서 1-32개의 사포닌, 바람직하게는 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 16 또는 32개의 사포닌, 또는 이들 사이의 임의의 수의 사포닌, 예컨대 7, 9, 12개의 사포닌은 적어도 하나 스캐폴드에 공유 결합된다.
본 발명의 제4 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 접합체이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌은 세포-표면 분자 표적화 분자 및 적어도 하나의 이펙터 모이어티에 3 작용성 링커를 통해 공유 결합되며, 3 작용성 링커는 직접 또는 링커 예컨대 절단 가능한 링커 및/또는 폴리머 또는 올리고머 구조를 포함하는 스캐폴드를 통해 공유 결합된 적어도 하나의 사포닌을 갖는 제2 화학기 및 3 작용성 링커에 스캐폴드를 공유 결합하기 위한 본 발명에 따른 제4 화학기를 포함하며, 3 작용성 링커는 세포-표면 분자 표적화 분자에 대한 공유 결합하기 위한 제3 화학기를 추가로 포함하고 적어도 하나의 이펙터 모이어티에 대한 공유 결합하기 위한 제1 화학기를 포함하며, 여기서 세포-표면 분자 표적화 분자는 제3 화학기에 결합되고 및/또는 적어도 하나의 이펙터 모이어티는 제1 화학기에 결합되고, 바람직하게는 제3 작용성 링커는 스킴 II 및 구조 B의 제3 작용성 링커이다.
본 발명의 제4 일련의 견지 및 구현예 내의 본 발명의 일 견지는 본 발명의 접합체 및 선택적으로 약학적으로 허용가능한 부형제 및/또는 약학적으로 허용가능한 희석제를 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 제4 일련의 견지 및 구현예 내의 본 발명의 일 견지는 의약으로 사용하기 위한 본 발명의 접합체 또는 본 발명의 약학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 제4 일련의 견지 및 구현예 내의 본 발명의 일 견지는 암 또는 자가면역 질환의 치료 또는 방지에 사용하기 위한 본 발명의 접합체 또는 본 발명의 약학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 제5 일련의 견지 및 구현예 내의 본 발명의 일 견지는 의약으로 사용하기 위한 치료 조합에 관한 것이며, 여기서 치료 조합은: (a) 세포-표면 분자상의 에피토프에 결합하기 위한 결합 부위를 포함하는 제4 단백질성 분자 및 상기 제4 단백질성 분자, 바람직하게는 상기 제4 단백질성 분자의 아미노산 잔기에 공유 커플링된 적어도 하나의 사포닌을 포함하는 제4 약학적 조성물로서, 제4 약학적 조성물은 선택적으로 약학적으로 허용가능한 부형제를 추가로 포함하는 제4 약학적 조성물; 및 (b) 제5 단백질성 분자를 포함하는 제5 약학적 조성물로서, 제5 단백질성 분자는 (a)의 세포 표면 분자상의 에피토프에 결합하기 위한 결합 부위 및 이펙터 모이어티를 포함하며, 제5 약학적 조성물은 선택적으로 약학적으로 허용가능한 부형제를 추가로 포함하는 제5 약학적 조성물을 포함하며, 여기서 제4 단백질성 분자의 결합 부위와 제5 단백질성 분자의 결합 부위는 동일하고, 제4 단백질성 분자가 결합할 수 있는 세포-표면 분자와 세포-표면 분자상의 에피토프와 제5 단백질성 분자가 결합할 수 있는 세포-표면 분자와 세포-표면 분자상의 에피토프는 동일하다.
본 발명의 제5 일련의 견지 및 구현예 내의 본 발명의 일 견지는 의약으로 사용하기 위한 본 발명의 제4 약학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 제5 일련의 견지 및 구현예 내의 본 발명의 일 견지는 인간 대상체에서 암의 치료 또는 방지에 사용하기 위한 치료 조합에 관한 것이며, 여기서 치료 조합은: (a) 본 발명의 제4 약학적 조성물; 및 (b) 본 발명의 제5 약학적 조성물을 포함하며, 여기서 세포-표면 분자는 종양 세포 표면 상에서 발현되고, 바람직하게는 세포-표면 분자는 종양 세포-특이적 표면 분자이며, 여기서 바람직하게는 에피토프 종양-세포 특이적 에피토프이다.
본 발명의 제5 일련의 견지 및 구현예 내의 본 발명의 일 견지는 이를 필요로 하는 환자에서 암의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 본 발명의 제4 약학적 조성물에 관한 것이며, 세포-표면 분자는 종양 세포 표면 상에서 발현되고, 바람직하게는 세포-표면 분자는 종양 세포-특이적 표면 분자이며, 여기서 바람직하게는 에피토프 종양-세포 특이적 에피토프이다.
본 발명의 제5 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 사용하기 위한 제4 약학적 조성물 또는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합이며, 여기서 본 발명의 제5 약학적 조성물 및 제4 약학적 조성물은 이를 필요로 하는 환자에게 투여된다.
본 발명의 제5 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합, 또는 본 발명에 따른 사용하기 위한 제4 약학적 조성물이며, 여기서 제4 단백질성 분자 및 제5 단백질성 분자의 결합 부위는 면역 글로불린, 또는 면역 글로불린의 결합 단편 또는 면역 글로불린의 결합 도메인, 예컨대 항체, IgG, Vhh 도메인 또는 Vh 도메인을 포함하거나 이로 구성되는 분자, Fab, scFv, Fv, dAb, F(ab)2, Fcab 단편을 포함하거나 이로 구성되고, 및/또는 적어도 하나의 리간드를 포함하거나 이로 구성되며, 리간드는 예컨대 EGF 또는 사이토카인와 같은 세포-표면 분자에 대한 결합을 위한 것이다.
본 발명의 제5 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합, 또는 본 발명에 따른 사용하기 위한 제4 약학적 조성물이며, 여기서 종양-세포 표면 분자는 종양 세포에 특이적으로 존재하는 세포-표면 수용체이며, 여기서 바람직하게는 에피토프는 종양-세포 특이적 에피토프이다.
본 발명의 제5 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합, 또는 본 발명에 따른 사용하기 위한 제4 약학적 조성물이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌은 위치 C-23에서 알데히드 작용(function)을 갖는 12,13-디하이드로올레아난 유형에 속하며, 선택적으로 사포닌의 C-3베타-OH 기에서 카보하이드레이트 치환체에 글루쿠론산 작용을 포함하는, 비스데스모시딕 트리테르펜 사포닌 및/또는 트리테르페노이드 사포닌 및/또는 집소필라(Gypsophila) 종 및/또는 사포나리아(Saponaria) 종 및/또는 아그로스템마(Agrostemma) 종 및/또는 퀼라자(Quillaja) 종, 예컨대 퀼라자 사포나리아(Quillaja saponaria)에서 분리된 사포닌이다.
본 발명의 제5 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합, 또는 본 발명에 따른 사용하기 위한 제4 약학적 조성물이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌은 단일의 특이적 사포닌이거나 2 이상의 상이한 사포닌의 혼합물, 예컨대 표 A1 또는 스킴 I의 사포닌, S01861, SA1657, GE1741, SA1641, QS-21, QS-21A, QS-21 A-api, QS-21 A-xyl, QS-21B, QS-21 B-api, QS-21 B-xyl, QS-7-xyl, QS-7-api, QS-17-api, QS-17-xyl, QS1861, QS1862, 퀼라자사포닌(Quillajasaponin), 사포늄 앨범(Saponinum album), QS-18, Quil-A, Gyp1, 집소사이드 A(gypsoside A), AG1, AG2, S01542, S01584, S01658, S01674, S01832, 또는 이들의 임의의 입체 이성질체 및/또는 이들의 임의의 조합 중 하나 이상이며, 바람직하게는 사포닌은 SO1861 및/또는 GE1741 및/또는 SA1641 및/또는 QS-21 및/또는 퀼라익산 아글리콘 코어(quillaic acid aglycon core), C-3베타-OH기에 Gal-(1→2)-[Xyl-(1→3)]-GlcA 카보하이드레이트 치환체 및 C-28-OH기에 Glc-(1→3)-Xyl-(1→4)-Rha-(1→2)-[Xyl-(1→3)-4-OAc-Qui-(1→4)]-Fuc 카보하이드레이트 치환체를 갖는 사포닌이며, 및/또는 3-O-베타-D-갈락토피라노실-(1→2)-[베타-D-자일로피라노실-(1→3)]-베타-D-글루쿠로노피라노실 퀼라익산 28-O-베타-D-글루코피라노실-(1→3)-베타-D-자일로피라노실-(1→4)-알파-L-람노피라노실-(1→2)-[베타-D-자일로피라노실-(1→3)-4-OAc-베타-D-퀴노보피라노실-(1→4)]-베타-D-푸코피라노사이드이며, 보다 바람직하게는 사포닌은 SO1861 및/또는 QS-21이다.
본 발명의 제5 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합, 또는 본 발명에 따른 사용하기 위한 제4 약학적 조성물이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌은 분자량이 적어도 1.500 달톤이고 C-3 위치에 제1 분지형 카보하이드레이트 측쇄를 가지며, 제1 분지형 카보하이드레이트 측쇄가 선택적으로 글루쿠론산을 함유하는, C-23 위치에 알데히드기를 함유하고 선택적으로 C-16 위치에 히드록실기를 함유하는 올레아난형(oleanan-type) 트리테르펜을 포함하는 비스데스모시딕 사포닌이며, 여기서 사포닌은 C-28 위치에 제2 분지형 카보하이드레이트 측쇄를 갖는 에스테르기를 함유하며, 제2 분지형 카보하이드레이트 사슬은 선택적으로 적어도 하나의 아세틸 잔기, 예컨대 2개의 아세틸 잔기를 함유하고 및/또는 선택적으로 적어도 하나의 디옥시 카보하이드레이트 및/또는 퀴노보스 및/또는 글루코스 및/또는 4-메톡시신남산을 함유하고 및/또는 선택적으로 에스테르 결합을 통해 카보하이드레이트에 결합된 5-0-[5-0-Rha-(1→2)-Ara/Api-3,5-디하이드록시-6-메틸-옥타노일]-3,5-디하이드록시-6-메틸-옥탄산을 포함하며 및/또는 선택적으로 5-0-[5-0-Ara/Api-3,5-디하이드록시-6-메틸-옥타노일]-3,5-디하이드록시-6-메틸-옥탄산을 포함하는 적어도 4개의 카보하이드레이트 유닛을 바람직하게 포함하며, 또는 여기서 적어도 하나의 사포닌은 QS-21 또는 QS-21A, QS-21 A-api, QS-21 A-xyl, QS-21B, QS-21 B-api, QS-21 B-xyl, QS-7-xyl, QS-7-api, QS-17-api, QS-17-xyl, QS-18, QS1861, 양성자화된 QS1861 (QS1862), Quil-A 중 임의의 하나 이상이다.
본 발명의 제5 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합, 또는 본 발명에 따른 사용하기 위한 제4 약학적 조성물이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌은 위치 C-23에서 알데히드 작용(function)을 갖는 12,13-디하이드로올레아난 유형에 속하는 비스데스모시딕 트리테르펜 사포닌이며, 여기서 사포닌은 사포닌의 알데히드 작용, 바람직하게는 위치 C-23의 알데히드 작용, 바람직하게는 적어도 하나의 링커를 통해, 및/또는 적어도 하나의 절단 가능한 링커를 통해, 제4 단백질성 분자에 공유 커플링되며, 바람직하게는 제4 단백질성 분자의 아미노산 잔기에 공유 커플링되며, 여기서 아미노산 잔기는 바람직하게는 시스테인 및 라이신으로부터 선택된다.
본 발명의 제5 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합, 또는 본 발명에 따른 사용하기 위한 제4 약학적 조성물이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌의 위치 C-23에서의 알데히드 작용은 링커 N-ε-말레이미도카프로산 히드라지드에 공유 커플링되고, 이 링커는 티오-에테르 결합을 통해 제4 단백질성 분자의 설프하이드릴기(sulfhydryl group), 예컨대 시스테인의 설프하이드릴기에 공유 커플링된다.
본 발명의 제5 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합, 또는 본 발명에 따른 사용하기 위한 제4 약학적 조성물이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌은 위치 C-23에서 알데히드 작용을 갖는 12,13-디하이드로올레아난 유형에 속하며 사포닌의 C-3베타-OH기의 카보하이드레이트 치환체에 글루쿠론산 작용을 포함하는 비스데스모시딕 트리테르펜 사포닌이며, 여기서 사포닌은 사포닌의 C-3베타-OH기의 카보하이드레이트 치환체에 글루쿠론산 작용을 통해, 바람직하게 적어도 하나의 링커를 통해 제4 단백질성 분자의 아미노산 잔기에 공유 커플링되며, 여기서 아미노산 잔기는 바람직하게는 시스테인 및 라이신으로부터 선택된다.
본 발명의 제5 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합, 또는 본 발명에 따른 사용하기 위한 제4 약학적 조성물이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌의 C-3베타-OH기에서의 카보하이드레이트 치환체에서의 글루쿠론산 작용은 링커 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트에 공유 커플링되며, 이 링커는 아미드 결합을 통해 제4 단백질성 분자의 아민기에, 예컨대 제4 단백질성 분자의의 N-말단 또는 라이신의 아민기에 공유 커플링된다.
본 발명의 제5 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합, 또는 본 발명에 따른 사용하기 위한 제4 약학적 조성물이며, 여기서 에피토프는 종양-세포 수용체 상의 에피토프, 바람직하게는 종양-세포 특이적 에피토프이며, 여기서 수용체는 바람직하게는 종양-세포 특이적 수용체, 보다 바람직하게는 CD71, CA125, EpCAM(17-1A), CD52, CEA, CD44v6, FAP, EGF-IR, 인테그린(integrin), 신데칸-1(syndecan-1), 바스큘라 인테그린 알파-V 베타-3(vascular integrin alpha-V beta-3), HER2, EGFR, CD20, CD22, 엽산 수용체 1(Folate receptor 1), CD146, CD56, CD19, CD138, CD27L 수용체, PSMA, CanAg, 인테그린-알파V, CA6, CD33, 메소텔린, 크립토, CD3, CD30, CD239, CD70, CD123, CD352, DLL3, CD25, ephrinA4, MUC1, Trop2, CEACAM5, CEACAM6, HER3, CD74, PTK7, Notch3, FGF2, C4.4A, FLT3, CD38, FGFR3, CD7, PD-L1, CTLA4, CD52, PDGFRA, VEGFR1, VEGFR2로부터 선택된, 가장 바람직하게는 CD71, HER2 및 EGFR로 부터 선택된 수용체이다.
본 발명의 제5 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합, 또는 본 발명에 따른 사용하기 위한 제4 약학적 조성물이며, 여기서 종양-세포 수용체, 바람직하게는 종양-세포 특이적 수용체는 본 발명의 제4 단백질성 분자에 결합된 후 및/또는 본 발명의 제5 단백질성 분자에 결합된 후에 종양 세포에 의해 내재화되며, 여기서 바람직하게는 종양-세포 수용체, 예컨대 종양-세포 특이적 수용체에 제4 단백질성 분자 및/또는 제5 단백질성 분자가 결합된 후에 예를 들어 엔도사이토시스를 통해 제4 단백질성 분자와 종양-세포 수용체의 복합체 및 제5 단백질성 분자와 종양-세포 수용체의 복합체가 종양-세포 수용체-매개 내재화된다.
본 발명의 제5 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합, 또는 본 발명에 따른 사용하기 위한 제4 약학적 조성물이며, 여기서 제4 단백질성 분자 및 제5 단백질성 분자의 결합 부위는 모노클로날 항체 또는 이의 세포-표면 분자 결합 도메인 및/또는 -단편 중 적어도 하나를 포함하며, 바람직하게는 세툭시맙, 다라투무맙, 젬투주맙, 트라스투주맙, 파니투무맙, 브렌투시맙, 이노투주맙, 모세투모맙, 폴라투주맙, 오비누투주맙, IgG 유형의 OKT-9 항-CD71 모노클로날 항체, 페르투주맙, 리투시맙, 오파투무맙, 허셉틴, 알렘투주맙, 피나투주맙, OKT-10 항-CD38 모노클로날 항체, 표 A2 또는 표 A3 또는 표 A4의 항체 중 임의의 하나, 바람직하게는 세툭시맙 또는 트라스투주맙 또는 OKT-9, 또는 적어도 하나의 이의 세포-표면 분자 결합 단편 및/또는 -도메인을 포함하거나 이로 구성되며, 제4 결합 부위는 제5 결합부위와 동일하다.
본 발명의 제5 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합이며, 여기서 제5 단백질성 분자에 의해 포함되는 이펙터 모이어티는 올리고뉴클레오티드, 핵산 및 제노 핵산 중 임의의 하나 이상, 바람직하게는 벡터, 유전자, 세포 자살 유도 트랜스진, 데옥시리보핵산 (DNA), 리보핵산 (RNA), 안티센스 올리고뉴클레오티드 (ASO, AON), 짧은 간섭 RNA (siRNA), 마이크로RNA (miRNA), DNA 앱타머, RNA 앱타머, mRNA, 미니-서클 DNA, 펩티드 핵산 (PNA), 포스포라미데이트 모르폴리노 올리고머 (PMO), 잠금 핵산 (LNA), 브리지 핵산 (BNA), 2'-디옥시-2'-플루오로아라비노 핵산 (FANA), 2'-O-메톡시에틸-RNA (MOE), 2'-O, 4'-아미노에틸렌 브리지 핵산, 3'-플루오로 헥시톨 핵산 (FHNA), 플라스미드, 글리콜 핵산 (GNA) 및 트레오스 핵산 (TNA) 또는 이의 유도체 중 임의의 하나 이상으로부터 선택된 것, 보다 바람직하게는 BNA, 예를 들어 HSP27 단백질 발현을 침묵시키는 BNA를 포함하거나 이로 구성된다.
본 발명의 제5 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합이며, 여기서 제5 단백질성 분자에 의해 포함되는 이펙터 모이어티는 적어도 하나의 단백질성 분자, 바람직하게는 펩티드, 단백질, 효소, 예컨대 우레아제 및 Cre-재조합효소, 단백질성 독소, 리보좀-불활성화 단백질, 표 A5로부터 선택된 단백질 독소 및/또는 박테리아 독소, 식물 독소 중 임의의 하나 이상으로부터 선택된 것, 보다 바람직하게는 바이러스 독소, 예컨대 아폽틴; 박테리아 독소 예컨대 시가(Shiga) 독소, 시가-유사(Shiga-like) 독소, 슈도모나스 아에루기노사 엑소톡신(Pseudomonas aeruginosa exotoxin) (PE) 또는 PE의 엑소톡신 A, 전장 또는 절단된(truncated) 디프테리아 독소 (DT), 콜레라 독소; 곰팡이 독소(fungal toxin), 예컨대 알파-사르신; 리보좀-불활성화 단백질 및 2형 리보좀-불활성화 단백질의 A 체인, 예컨대 디안틴, 예를 들어, 디안틴-30 또는 디안틴-32, 사포린 예를 들어, 사포린-S3 또는 사포린-S6, 보우가닌 또는 보우가닌의 탈-면역화(de-immunized) 유도체 디보우가닌, 시가-유사 독소 A, 포크위드(pokeweed) 항바이러스 단백질, 리신(ricin), 리신 A 체인, 모데신, 모데신 A 체인, 아브린, 아브린 A 체인, 볼켄신, 볼켄신 A 체인, 비스쿠민, 비스쿠민 A; 또는 동물 또는 인간 독소, 예컨대 개구리 RNase, 또는 인간으로부터의 안지오게닌, 또는 그랜자임 B, 또는 이의 임의의 단편 또는 유도체 중 임의의 하나 이상으로부터 선택되는 것을 포함하거나 이로 구성되며; 바람직하게는 단백질 독소가 디안틴 및/또는 사포린이다.
본 발명의 제5 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합이며, 여기서 제5 단백질성 분자에 의해 포함되는 이펙터 모이어티는 적어도 하나의 페이로드, 바람직하게는 리보좀 표적화 독소(toxin targeting ribosomes), 연장 인자 표적화 독소(toxin targeting elongation factors), 튜불린을 표적화 독소, DNA 표적화 독소, 및 RNA 표적화 독소 중 임의의 하나 이상, 보다 바람직하게는, 엠탄신, 파수도톡스, 메이탄시노이드 유도체 DM1, 메이탄시노이드 유도체 DM4, 모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE, 베도틴), 모노메틸 아우리스타틴F(MMAF, 마포도틴), 칼리케아미신, N-아세틸-γ-칼리케아미신, 피롤로벤조디아제핀 (PBD) 다이머, 벤조디아제핀, CC-1065 유사체, 듀오카르마이신, 독소루비신, 파클리타셀, 도세타셀, 시스플라틴, 시클로포스파미드, 에토포사이드, 도세타셀, 5-플루오로우라실(5-FU), 미토산트론, 튜불리신, 인돌리노벤조디아제핀, AZ13599185, 크립토피신, 리조신, 메토트레세이트, 안트라사이클린, 캠토테신 유사체, SN-38, DX-8951f, 엑사테칸 메실레이트, 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 엑소톡신(PE38)의 절단된 형태, 듀오카르마이신 유도체, 아마니틴, α-아마니틴, 스플라이세오스타틴, 타일란스타틴, 오조가미신, 테시린, 앰버스타틴269 및 소라브탄신, 또는 이의 유도체 중 임의의 하나 이상으로부터 선택된 것을 포함하거나 이로 구성된다.
본 발명의 제5 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합이며, 여기서 제5 단백질성 분자는 젬투주맙 오조가미신, 브렌투시맙 베도틴, 트라스투주맙 엠탄신, 이노투주맙 오조가미신, 모세투모맙 파수도톡스 및 폴라투주맙 베도틴 및 표 A2 및 표 A3의 항체-약물 접합체, 또는 이의 적어도 하나의 종양-세포 수용체 결합-도메인 및/또는 이의 적어도 하나의 종양-세포 수용체 결합-단편 중 임의의 하나를 포함하거나 이로 구성되며, 여기서 상기 도메인(들) 또는 단편(들)은 이펙터 모이어티를 포함하며, 바람직하게는 종양-세포 특이적 수용체 결합-도메인(들) 및/또는 종양-세포 특이적 수용체 결합-단편(들)이다.
본 발명의 제5 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합이며, 여기서 제4 단백질성 분자는 하나 보다 많은 공유 결합된 사포닌, 바람직하게는 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 16, 32, 64 또는 128 또는 1-100개의 사포닌, 또는 그 사이의 임의의 수의 사포닌, 예컨대 7, 9, 12개의 사포닌을 포함한다.
본 발명의 제5 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌은 제4 단백질성 분자의 아미노산 잔기, 바람직하게는 시스테인 및/또는 라이신에 직접 공유 결합되고 및/또는 적어도 하나의 링커 및/또는 적어도 하나의 절단 가능한 링커 및/또는 적어도 하나의 올리고머 또는 폴리머 스캐폴드, 바람직하게는 1-8개의 이러한 스캐폴드 또는 2-4개의 이러한 스캐폴드를 통해 공유 결합되며, 여기서 적어도 하나의 스캐폴드는 선택적으로 덴드론에 기초한 것이며, 여기서 1-32개의 사포인, 예컨대 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 16, 32개의 사포닌, 또는 이들 사이의 임의의 수의 사포닌, 예컨대 7, 9, 12개의 사포닌이 적어도 하나 스캐폴드에 공유 결합된다.
본 발명의 제5 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합이며, 여기서 절단 가능한 링커는 산성 조건, 환원성 조건, 효소 조건 또는 광-유도 조건 하에서 절단되며, 바람직하게는 절단 가능한 링커는 산성 조건 하에서 절단되는 히드라존 결합 또는 히드라지드 결합 및/또는 단백질 분해(proteolysis), 예를 들어 카셉신 B에 의해 단백질 분해될 수 있는 결합, 및/또는 환원성 조건 하에서 절단될 수 있는 결합, 예컨대 디설파이드 결합으로부터 선택된 절단 가능한 결합을 포함한다.
본 발명의 제5 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합이며, 여기서 절단 가능한 링커는 포유류 세포, 바람직하게는 인간 세포의 엔도좀 및/또는 리소좀에 존재하는 산성 조건, 바람직하게는 pH 4.0-6.5, 그리고 보다 바람직하게는 pH ≤ 5.5 하에서 생체내(in vivo)에서 절단된다.
본 발명의 제5 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합이며, 여기서 올리고머 또는 폴리머 스캐폴드는 폴리머 또는 올리고머 구조를 포함하며, 적어도 하나의 화학기를 포함하며, 적어도 하나의 화학기는 스캐폴드를 상기 제4 단백질성 분자의 아미노산 잔기에 공유 커플링하기 위한 것이다.
본 발명의 제5 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌은 본 발명에 따른 절단 가능한 링커를 통해 스캐폴드의 폴리머 또는 올리고머 구조에 공유 결합된다.
본 발명의 제5 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌은 이민 결합, 히드라존 결합, 히드라지드 결합, 옥심 결합, 1,3-디옥솔란 결합, 디설파이드 결합(disulphide bond), 티오-에테르 결합, 아미드 결합, 펩티드 결합 또는 에스테르 결합을 통해, 바람직하게는 적어도 하나 링커를 통해, 스캐폴드의 폴리머 또는 올리고머 구조에 공유 결합된다.
본 발명의 제5 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌은 위치 C-23에 알데히드 작용을 그리고 선택적으로 적어도 하나의 사포닌의 C-3베타-OH기의 카보하이드레이트 치환체에 글루쿠론산 작용을 포함하며, 직접 결합 또는 적어도 하나의 링커를 통해, 이 알데히드 작용은 스캐폴드의 폴리머 또는 올리고머 구조에 대한 공유 결합에 관여하며, 및/또는, 존재하면, 글루쿠론산 작용은, 스캐폴드의 폴리머 또는 올리고머 구조에 대한 공유 결합에 관여한다.
본 발명의 제5 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌의 위치 C-23에서의 알데히드 작용은 링커 N-ε-말레이미도카프로산 히드라지드에 공유 커플링되고, 이 링커는 티오-에테르 결합을 통해 스캐폴드의 폴리머 또는 올리고머 구조의 설프하이드릴기(sulfhydryl group), 예컨대 시스테인의 설프하이드릴기에 공유 커플링된다.
본 발명의 제5 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌의 C-3베타-OH기에서의 카보하이드레이트 치환체에서의 글루쿠론산 작용은 링커 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트에 공유 커플링되며, 이 링커는 아미드 결합을 통해 스캐폴드의 폴리머 또는 올리고머 구조의 아민기, 예컨대 단백질성 분자의 N-말단 또는 라이신의 아민기에 공유 커플링된다.
본 발명의 제5 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합이며, 여기서 올리고머 또는 폴리머 스캐폴드를 상기 제4 단백질성 분자의 아미노산 잔기에 공유 커플링하기 위한, 스캐폴드의 적어도 하나의 화학기는 클릭 화학기, 바람직하게는 테트라진, 아지드, 알켄 또는 알킨, 또는 이들 기 중 임의의 시클릭 유도체(cyclic derivative)로부터 선택된 것이며, 보다 바람직하게는 클릭 화학기는 아지드기이다.
본 발명의 제5 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합이며, 여기서 스캐폴드의 폴리머 또는 올리고머 구조는 선형, 분지형 및/또는 고리형 폴리머, 올리고머, 덴드리머, 덴드론, 덴드론화된 폴리머, 덴드론화된 올리고머, DNA, 폴리펩티드, 폴리-라이신, 폴리에틸렌 글리콜, 또는 이들 폴리머 또는 올리고머 구조의 어셈블리를 포함하며, 이 어셈블리는 바람직하게는 공유 가교(covalent cross-linking)에 의해 구축된다.
본 발명의 제5 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합이며, 여기서 제4 약학적 조성물 및 제5 약학적 조성물은 이를 필요로는 환자에게 투여된다.
본 발명의 제5 일련의 견지 및 구현예 내의 본 발명의 일 견지는 본 발명의 제5 단백질성 분자를 추가로 포함하는, 본 발명의 제4 약학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 제5 일련의 견지 및 구현예 내의 본 발명의 일 견지는 의약으로서 사용하기 위한 본 발명의 제5 단백질성 분자를 추가로 포함하는, 본 발명의 제4 약학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 제5 일련의 견지 및 구현예 내의 본 발명의 일 견지는 이를 필요로 하는 환자에게서 암의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 본 발명의 제5 단백질성 분자를 추가로 포함하는, 본 발명의 제4 약학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 제6 일련의 견지 및 구현예 내의 본 발명의 일 견지는 의약으로 사용하기 위한 치료 조합에 관한 것이며, 여기서 치료 조합은: (a) 제6 세포-표면 분자에 대한 결합을 위한 제 6 결합 부위를 포함하는 제6 단백질성 분자 및 상기 제6 단백질성 분자에 공유 결합된, 바람직하게는 상기 제6 단백질성 분자의 아미노산 잔기에 공유 결합된 적어도 하나의 사포닌을 포함하는 제6 약학적 조성물로서, 제6 약학적 조성물은 선택적으로 약학적으로 허용가능한 부형제를 추가로 포함하는 제6 약학적 조성물; 및 (b) 바람직하게는 제6 단백질성 분자와 상이한 제7 단백질성 분자를 포함하는 제7 약학적 조성물로서, 제7 단백질성 분자는 제6 세포-표면 분자와 상이한 제7 세포-표면 분자에 대한 결합을 위한 제7 결합 부위 및 이펙터 모이어티를 포함하며, 제7 약학적 조성물은 선택적으로 약학적으로 허용가능한 부형제를 추가로 포함하는 제7 약학적 조성물을 포함한다.
본 발명의 제6 일련의 견지 및 구현예 내의 본 발명의 일 견지는 의약으로 사용하기 위한 본 발명의 제6 약학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 제6 일련의 견지 및 구현예 내의 본 발명의 일 견지는 인간 대상체에서 암의 치료 또는 방지에 사용하기 위한 치료 조합에 관한 것이며, 여기서 치료 조합은: (a) 본 발명의 제6 약학적 조성물로서, 여기서 제6 세포-표면 분자는 제6 종양-세포 표면 분자, 바람직하게는 제6 종양 세포-특이적 표면 분자인 제6 약학적 조성물; 및 (b) 본 발명의 제7 약학적 조성물로서, 여기서 제7 세포-표면 분자는 제6 종양-세포 표면 분자와 상이한 제7 종양-세포 표면 분자이며, 바람직하게는 제7 세포-표면 분자는 제6 종양 세포-특이적 표면 분자와 상이한 제7 종양 세포-특이적 표면 분자인 제7 약학적 조성물을 포함한다.
본 발명의 제6 일련의 견지 및 구현예 내의 본 발명의 일 견지는 이를 필요로 하는 환자에서 암의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 본 발명의 제6 약학적 조성물에 관한 것이며, 여기서 제6 세포-표면 분자는 제6 종양-세포 표면 분자, 바람직하게는 제6 종양 세포-특이적 표면 분자이다.
본 발명의 제6 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명에 따른 사용하기 위한 제6 약학적 조성물 또는 본 발명의 치료 조합이며, 여기서 본 발명의 제7 약학적 조성물 및 제6 약학적 조성물은 이를 필요로 하는 환자에게 투여되며, 여기서 제7 종양-세포 표면 분자는 제6 종양-세포 표면 분자와 상이하고, 바람직하게는 제7 종양 세포-특이적 표면 분자는 제6 종양 세포-특이적 표면 분자와 상이하다.
본 발명의 제6 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합, 또는 본 발명에 따른 사용하기 위한 제6 약학적 조성물이며, 여기서 제6 단백질성 분자의 제6 결합 부위는 제6 세포-표면 분자에 대한 결합을 위한 면역 글로불린, 또는 면역 글로불린의 결합 단편 또는 -도메인, 예컨대 항체, IgG, Vhh 도메인 또는 Vh 도메인을 포함하거나 이로 구성되는 분자, Fab, scFv, Fv, dAb, F(ab)2, Fcab 단편을 포함하거나 이로 구성되고 및/또는 적어도 하나의 리간드, 바람직하게는 세포-표면 분자에 대한 결합을 위한 적어도 하나의 리간드, 예컨대 EGF 또는 사이토카인을 포함하거나 이로 구성된다.
본 발명의 제6 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합, 또는 본 발명에 따른 사용하기 위한 제6 약학적 조성물이며, 여기서 제6 종양-세포 표면 분자, 바람직하게는 종양 세포-특이적 표면 분자에 대한 결합을 위한 제6 결합 부위는 종양 세포에 존재하는, 바람직하게는 종양 세포에 특이적으로 존재하는 제6 세포-표면 수용체에 대한 제6 결합 부위이다.
본 발명의 제6 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합, 또는 본 발명에 따른 사용하기 위한 제6 약학적 조성물이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌은 위치 C-23에서 알데히드 작용(function)을 갖는 12,13-디하이드로올레아난 유형에 속하며, 선택적으로 사포닌의 C-3베타-OH 기에서 카보하이드레이트 치환체에 글루쿠론산 작용을 포함하는, 비스데스모시딕 트리테르펜 사포닌 및/또는 트리테르페노이드 사포닌 및/또는 집소필라(Gypsophila) 종 및/또는 사포나리아(Saponaria) 종 및/또는 아그로스템마(Agrostemma) 종 및/또는 퀼라자(Quillaja) 종, 예컨대 퀼라자 사포나리아(Quillaja saponaria)에서 분리된 사포닌이다.
본 발명의 제6 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합, 또는 본 발명에 따른 사용하기 위한 제6 약학적 조성물이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌은 단일의 특이적 사포닌이거나 2 이상의 상이한 사포닌의 혼합물, 예컨대 표 A1 또는 스킴 I의 사포닌, S01861, SA1657, GE1741, SA1641, QS-21, QS-21A, QS-21 A-api, QS-21 A-xyl, QS-21B, QS-21 B-api, QS-21 B-xyl, QS-7-xyl, QS-7-api, QS-17-api, QS-17-xyl, QS1861, QS1862, 퀼라자사포닌(Quillajasaponin), 사포늄 앨범(Saponinum album), QS-18, Quil-A, Gyp1, 집소사이드 A(gypsoside A), AG1, AG2, S01542, S01584, S01658, S01674, S01832, 또는 이들의 임의의 입체 이성질체 및/또는 이들의 임의의 조합 중 하나 이상이며, 바람직하게는 사포닌은 SO1861 및/또는 GE1741 및/또는 SA1641 및/또는 QS-21 및/또는 퀼라익산 아글리콘 코어(quillaic acid aglycon core), C-3베타-OH기에 Gal-(1→2)-[Xyl-(1→3)]-GlcA 카보하이드레이트 치환체 및 C-28-OH기에 Glc-(1→3)-Xyl-(1→4)-Rha-(1→2)-[Xyl-(1→3)-4-OAc-Qui-(1→4)]-Fuc 카보하이드레이트 치환체를 갖는 사포닌이며/이거나 3-O-베타-D-갈락토피라노실-(1→2)-[베타-D-자일로피라노실-(1→3)]-베타-D-글루쿠로노피라노실 퀼라익산 28-O-베타-D-글루코피라노실-(1→3)-베타-D-자일로피라노실-(1→4)-알파-L-람노피라노실-(1→2)-[베타-D-자일로피라노실-(1→3)-4-OAc-베타-D-퀴노보피라노실-(1→4)]-베타-D-푸코피라노사이드이며, 보다 바람직하게는 사포닌은 SO1861 및/또는 QS-21이다.
본 발명의 제6 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합, 또는 본 발명에 따른 사용하기 위한 제6 약학적 조성물이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌은 분자량이 적어도 1.500 달톤이고 C-3 위치에 제1 분지형 카보하이드레이트 측쇄를 가지며, 제1 분지형 카보하이드레이트 측쇄가 선택적으로 글루쿠론산을 함유하는, C-23 위치에 알데히드기를 그리고 선택적으로 C-16 위치에 히드록실기를 함유하는 올레아난형(oleanan-type) 트리테르펜을 포함하는 비스데스모시딕 사포닌이며, 여기서 사포닌은 C-28 위치에 제2 분지형 카보하이드레이트 측쇄를 갖는 에스테르기를 함유하며, 제2 분지형 카보하이드레이트 사슬은 선택적으로 적어도 하나의 아세틸 잔기, 예컨대 2개의 아세틸 잔기 및/또는 적어도 하나의 디옥시 카보하이드레이트 및/또는 퀴노보스 및/또는 글루코스 및/또는 4-메톡시신남산을 함유하고 및/또는 선택적으로 에스테르 결합을 통해 카보하이드레이트에 결합되는 5-0-[5-0-Rha-(1→2)-Ara/Api-3,5-디하이드록시-6-메틸-옥타노일]-3,5-디하이드록시-6-메틸-옥탄산을 포함하며 및/또는 선택적으로 5-0-[5-0-Ara/Api-3,5-디하이드록시-6-메틸-옥타노일]-3,5-디하이드록시-6-메틸-옥탄산을 포함하는 적어도 4개의 카보하이드레이트 유닛을 바람직하게 포함하며, 또는 여기서 적어도 하나의 사포닌은 QS-21 또는 QS-21A, QS-21 A-api, QS-21 A-xyl, QS-21B, QS-21 B-api, QS-21 B-xyl, QS-7-xyl, QS-7-api, QS-17-api, QS-17-xyl, QS-18, QS1861, 양성자화된(protonated) QS1861 (QS1862), Quil-A 중 임의의 하나 이상이다.
본 발명의 제6 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합, 또는 본 발명에 따른 사용하기 위한 제6 약학적 조성물이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌은 위치 C-23에서 알데히드 작용(function)을 갖는 12,13-디하이드로올레아난 유형에 속하는 비스데스모시딕 트리테르펜 사포닌이며, 여기서 사포닌은 사포닌의 알데히드 작용, 바람직하게는 위치 C-23의 알데히드 작용을 통해, 바람직하게는 적어도 하나의 링커를 통해, 및/또는 적어도 하나의 절단 가능한 링커를 통해, 제6 단백질성 분자에 공유 결합되며, 바람직하게는 제6 단백질성 분자의 아미노산 잔기에 공유 커플링되며, 여기서 아미노산 잔기는 바람직하게는 시스테인 및 라이신으로부터 선택된다.
본 발명의 제6 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합, 또는 본 발명에 따른 사용하기 위한 제6 약학적 조성물이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌의 위치 C-23에서의 알데히드 작용은 링커 N-ε-말레이미도카프로산 히드라지드에 공유 커플링되고, 이 링커는 티오-에테르 결합을 통해 제6 단백질성 분자의 설프하이드릴기(sulfhydryl group), 예컨대 시스테인의 설프하이드릴기에 공유 커플링된다.
본 발명의 제6 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합, 또는 본 발명에 따른 사용하기 위한 제6 약학적 조성물이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌은 위치 C-23에서 알데히드 작용을 갖는 12,13-디하이드로올레아난 유형에 속하며 사포닌의 C-3베타-OH기의 카보하이드레이트 치환체에 글루쿠론산 작용을 포함하는 비스데스모시딕 트리테르펜 사포닌이며, 여기서 사포닌은 사포닌의 C-3베타-OH기의 카보하이드레이트 치환체에서의 글루쿠론산 작용을 통해, 바람직하게 적어도 하나의 링커를 통해 제6 단백질성 분자의 아미노산 잔기에 공유 커플링되며, 여기서 아미노산 잔기는 바람직하게는 시스테인 및 라이신으로부터 선택된다.
본 발명의 제6 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합, 또는 본 발명에 따른 사용하기 위한 제6 약학적 조성물이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌의 C-3베타-OH기에서의 카보하이드레이트 치환체에서의 글루쿠론산 작용은 링커 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트에 공유 커플링되며, 이 링커는 아미드 결합을 통해 제6 단백질성 분자의 아민기에, 예컨대 제6 단백질성 분자의 N-말단 또는 라이신의 아민기에 공유 커플링된다.
본 발명의 제6 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합, 또는 본 발명에 따른 사용하기 위한 제6 약학적 조성물이며, 여기서 제7 단백질성 분자의 제7 결합 부위는 제7 세포-표면 분자에 대한 결합을 위한 면역 글로불린, 및/또는 면역 글로불린의 적어도 하나의 결합 도메인 및/또는 면역 글로불린의 적어도 하나의 결합 단편, 예컨대 항체, IgG, Vhh 도메인 또는 Vh 도메인을 포함하거나 이로 구성되는 분자, Fab, scFv, Fv, dAb, F(ab)2, Fcab 단편을 포함하거나 이로 구성되고 및/또는 적어도 하나의 리간드, 바람직하게는 제7 세포-표면 분자에 대한 결합을 위한 리간드, 예컨대 EGF 또는 사이토카인을 포함하거나 이로 구성된다.
본 발명의 제6 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합, 또는 본 발명에 따른 사용하기 위한 제6 약학적 조성물이며, 여기서 제7 종양-세포 표면 분자, 바람직하게는 제7 종양 세포-특이적 표면 분자에 대한 결합을 위한 제7 결합 부위는 종양 세포에 존재하는, 바람직하게는 종양 세포에 특이적으로 존재하는 제7 세포-표면 수용체에 대한 제7 결합 부위이다.
본 발명의 제6 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합, 또는 본 발명에 따른 사용하기 위한 제6 약학적 조성물이며, 여기서 제6 결합 부위 및 제7 결합 부위는 제6 및 제7 종양-세포 수용체 각각에 대한 결합을 위한, 바람직하게는 동일한 종양 세포에 존재하는 바람직하게는 제6 및 제7 종양-세포 특이적 수용체 각각에 대한 결합을 위한 결합 부위이고, 여기서 제6 및 제7 종양-세포 수용체는 바람직하게는 종양-세포 특이적 수용체이며, 및/또는 CD71, CA125, EpCAM(17-1A), CD52, CEA, CD44v6, FAP, EGF-IR, 인테그린(integrin), 신데칸-1(syndecan-1), 바스큘라 인테그린 알파-V 베타-3(vascular integrin alpha-V beta-3), HER2, EGFR, CD20, CD22, 엽산 수용체 1(Folate receptor 1), CD146, CD56, CD19, CD138, CD27L 수용체, PSMA, CanAg, 인테그린-알파V, CA6, CD33, 메소텔린, 크립토, CD3, CD30, CD239, CD70, CD123, CD352, DLL3, CD25, ephrinA4, MUC1, Trop2, CEACAM5, CEACAM6, HER3, CD74, PTK7, Notch3, FGF2, C4.4A, FLT3, CD38, FGFR3, CD7, PD-L1, CTLA4, CD52, PDGFRA, VEGFR1, VEGFR2로부터 선택되고, 보다 바람직하게는 HER2, CD71 및 EGFR로 부터 선택되며, 제6 결합 부위는 제7 결합 부위와 상이하고 제6 및 제7 종양-세포 특이적 수용체, 바람직하게는 제6 및 제7 종양-세포 특이적 수용체는 다른 수용체이다.
본 발명의 제6 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합, 또는 본 발명에 따른 사용하기 위한 제6 약학적 조성물이며, 여기서 제6 결합 부위 및 제7 결합 부위는 세툭시맙, 다라투무맙, 젬투주맙, 트라스투주맙, 파니투무맙, 브렌투시맙, 이노투주맙, 모세투모맙, 폴라투주맙, 오비누투주맙, IgG 유형의 OKT-9 항-CD71 모노클로날 항체, 페르투주맙, 리투시맙, 오파투무맙, 허셉틴, 알렘투주맙, 피나투주맙, OKT-10 항-CD38 모노클로날 항체, 표 A2 또는 표 A3 또는 표 A4의 항체, 바람직하게는 세툭시맙 또는 트라스투주맙 또는 OKT-9, 또는 적어도 하나의 이의 종양-세포 수용체 결합-도메인 및/또는 적어도 하나의 이의 종양-세포 수용체 결합-단편을 포함하거나 이로 구성되며, 제6 결합 부위는 제7 결합부위와 상이하다.
본 발명의 제6 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합, 또는 본 발명에 따른 사용하기 위한 제6 약학적 조성물이며, 여기서 제6 종양-세포 수용체는 본 발명의 제6 단백질성 분자에 결합된 후에 종양 세포에 의해 내재화되며, 여기서 바람직하게는 제6 종양-세포 수용체에 제6 단백질성 분자가 결합된 후에 예를 들어 엔도사이토시스를 통해 제6 단백질성 분자와 제6 종양-세포 수용체의 복합체가 종양-세포 수용체-매개 내재화가 되며, 여기서 제6 종양-세포 수용체는 바람직하게는 제6 종양-세포 특이적 수용체이다.
본 발명의 제6 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합이며, 여기서 제7 종양-세포 수용체는 본 발명의 제7 단백질성 분자에 결합된 후에 종양 세포에 의해 내재화되며, 여기서 바람직하게는 제7 종양-세포 수용체에 제7 단백질성 분자가 결합된 후에 예를 들어 엔도사이토시스를 통해 제7 단백질성 분자와 제7 종양-세포 수용체의 복합체가 종양-세포 수용체-매개 내재화가 되며, 여기서 제7 종양-세포 수용체는 바람직하게는 제7 종양-세포 특이적 수용체이다.
본 발명의 제6 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합, 또는 본 발명에 따른 사용하기 위한 제6 약학적 조성물이며, 여기서 제7 단백질성 분자에 의해 포함되는 이펙터 모이어티는 올리고뉴클레오티드, 핵산 및 제노 핵산 중 적어도 하나, 바람직하게는 벡터, 유전자, 세포 자살 유도 트랜스진, 데옥시리보핵산 (DNA), 리보핵산 (RNA), 안티센스 올리고뉴클레오티드 (ASO, AON), 짧은 간섭 RNA (siRNA), 마이크로RNA (miRNA), DNA 앱타머, RNA 앱타머, mRNA, 미니-서클 DNA, 펩티드 핵산 (PNA), 포스포라미데이트 모르폴리노 올리고머 (PMO), 잠금 핵산 (LNA), 브리지 핵산 (BNA), 2'-디옥시-2'-플루오로아라비노 핵산 (FANA), 2'-O-메톡시에틸-RNA (MOE), 2'-O, 4'-아미노에틸렌 브리지 핵산, 3'-플루오로 헥시톨 핵산 (FHNA), 플라스미드, 글리콜 핵산 (GNA) 및 트레오스 핵산 (TNA) 또는 이의 유도체 중 임의의 하나 이상으로부터 선택된 것, 보다 바람직하게는 BNA, 예를 들어 HSP27 단백질 발현을 침묵시키는 BNA를 포함하거나 이로 구성된다.
본 발명의 제6 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합, 또는 본 발명에 따른 사용하기 위한 제6 약학적 조성물이며, 여기서 제7 단백질성 분자에 의해 포함되는 이펙터 모이어티는 적어도 하나의 단백질성 분자, 바람직하게는 펩티드, 단백질, 효소, 예컨대 우레아제 및 Cre-재조합효소, 단백질성 독소, 리보좀-불활성화 단백질, 표 A5로부터 선택된 단백질 독소 및/또는 박테리아 독소, 식물 독소 중 임의의 하나 이상으로부터 선택된 것, 보다 바람직하게는 바이러스 독소, 예컨대 아폽틴; 박테리아 독소 예컨대 시가(Shiga) 독소, 시가-유사(Shiga-like) 독소, 슈도모나스 아에루기노사 엑소톡신(Pseudomonas aeruginosa exotoxin) (PE) 또는 PE의 엑소톡신 A, 전장 또는 절단된(truncated) 디프테리아 독소 (DT), 콜레라 독소; 곰팡이 독소(fungal toxin), 예컨대 알파-사르신; 리보좀-불활성화 단백질 및 2형 리보좀-불활성화 단백질의 A 체인, 예컨대 디안틴, 예를 들어, 디안틴-30 또는 디안틴-32, 사포린 예를 들어, 사포린-S3 또는 사포린-S6, 보우가닌 또는 보우가닌의 탈-면역화(de-immunized) 유도체 디보우가닌, 시가-유사 독소 A, 포크위드(pokeweed) 항바이러스 단백질, 리신(ricin), 리신 A 체인, 모데신, 모데신 A 체인, 아브린, 아브린 A 체인, 볼켄신, 볼켄신 A 체인, 비스쿠민, 비스쿠민 A; 또는 동물 또는 인간 독소, 예컨대 개구리 RNase, 또는 인간으로부터의 안지오게닌, 또는 그랜자임 B, 또는 이의 임의의 단편 또는 유도체 중 임의의 하나 이상으로부터 선택되는 것을 포함하거나 이로 구성되며; 바람직하게는 단백질 독소는 디안틴 및/또는 사포린이다.
본 발명의 제6 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합, 또는 본 발명에 따른 사용하기 위한 제6 약학적 조성물이며, 여기서 제7 단백질성 분자에 의해 포함되는 이펙터 모이어티는 적어도 하나의 페이로드, 바람직하게는 리보좀 표적화 독소(toxin targeting ribosomes), 연장 인자 표적화 독소(toxin targeting elongation factors), 튜불린을 표적화 독소, DNA 표적화 독소, 및 RNA 표적화 독소 중 임의의 하나 이상으로부터 선택된 것, 보다 바람직하게는, 엠탄신, 파수도톡스, 메이탄시노이드 유도체 DM1, 메이탄시노이드 유도체 DM4, 모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE, 베도틴), 모노메틸 아우리스타틴F(MMAF, 마포도틴), 칼리케아미신, N-아세틸-γ-칼리케아미신, 피롤로벤조디아제핀 (PBD) 다이머, 벤조디아제핀, CC-1065 유사체, 듀오카르마이신, 독소루비신, 파클리타셀, 도세타셀, 시스플라틴, 시클로포스파미드, 에토포사이드, 도세타셀, 5-플루오로우라실(5-FU), 미토산트론, 튜불리신, 인돌리노벤조디아제핀, AZ13599185, 크립토피신, 리조신, 메토트레세이트, 안트라사이클린, 캠토테신 유사체, SN-38, DX-8951f, 엑사테칸 메실레이트, 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 엑소톡신(PE38)의 절단된 형태, 듀오카르마이신 유도체, 아마니틴, α-아마니틴, 스플라이세오스타틴, 타일란스타틴, 오조가미신, 테시린, 앰버스타틴269 및 소라브탄신, 또는 이의 유도체 중 임의의 하나 이상으로부터 선택된 것을 포함하거나 이로 구성된다.
본 발명의 제6 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합이며, 여기서 제7 단백질성 분자는 젬투주맙 오조가미신, 브렌투시맙 베도틴, 트라스투주맙 엠탄신, 이노투주맙 오조가미신, 모세투모맙 파수도톡스 및 폴라투주맙 베도틴 및 표 A2 및 표 A3의 항체-약물 접합체, 또는 이의 적어도 하나의 종양-세포 수용체 결합-도메인 및/또는 이의 적어도 하나의 종양-세포 수용체 결합-단편 중 임의의 하나를 포함하거나 이로 구성되며, 여기서 상기 도메인(들) 또는 단편(들)은 이펙터 모이어티를 포함하며, 바람직하게는 종양-세포 특이적 수용체 결합-도메인(들) 및/또는 종양-세포 특이적 수용체 결합-단편(들)이다.
본 발명의 제6 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합 또는 본 발명에 따른 사용하기 위한 제6 단백질성 분자이며, 여기서 제6 단백질성 분자는 하나 보다 많은 공유 결합된 사포닌, 바람직하게는 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 16, 32, 64 또는 128 또는 1-100개의 사포닌, 또는 그 사이의 임의의 수의 사포닌, 예컨대 7, 9, 12개의 사포닌을 포함한다.
본 발명의 제6 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합 또는 본 발명에 따른 사용하기 위한 제6 단백질성 분자이며, 여기서 하나 보다 많은 공유 결합된 사포닌은 제6 단백질성 분자의 아미노산 잔기, 바람직하게는 시스테인 및/또는 라이신에 직접 공유 결합되고 및/또는 적어도 하나의 링커를 통해 및/또는 적어도 하나의 절단 가능한 링커를 통해 및/또는 적어도 하나의 올리고머 또는 폴리머 스캐폴드를 통해, 바람직하게는 1-8개의 이러한 스캐폴드 또는 2-4개의 이러한 스캐폴드를 통해 공유 결합되며, 여기서 적어도 하나의 스캐폴드는 선택적으로 덴드론에 기반한 것이며, 여기서 1-32개의 사포인, 바람직하게는 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 16, 32개의 사포닌, 또는 이들 사이의 임의의 수의 사포닌, 예컨대 7, 9, 12개의 사포닌이 적어도 하나 스캐폴드에 공유 결합된다.
본 발명의 제6 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합이며, 여기서 절단 가능한 링커는 산성 조건, 환원성 조건, 효소 조건 또는 광-유도 조건 하에서 절단되며, 바람직하게는 절단 가능한 링커는 산성 조건 하에서 절단되는 히드라존 결합 또는 히드라지드 결합 및/또는 단백질 분해(proteolysis), 예를 들어 카셉신 B에 의해 단백질 분해될 수 있는 결합, 및/또는 환원성 조건 하에서 절단될 수 있는 결합, 예컨대 디설파이드 결합으로부터 선택된 절단 가능한 결합을 포함한다.
본 발명의 제6 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합이며, 여기서 절단 가능한 링커는 포유류 세포, 바람직하게는 인간 세포의 엔도좀 및/또는 리소좀에 존재하는 산성 조건, 바람직하게는 pH 4.0-6.5, 그리고 보다 바람직하게는 pH ≤ 5.5 하에서 생체내(in vivo)에서 절단된다.
본 발명의 제6 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합이며, 여기서 올리고머 또는 폴리머 스캐폴드는 폴리머 또는 올리고머 구조를 포함하며, 적어도 하나의 화학기를 포함하며, 적어도 하나의 화학기는 스캐폴드를 상기 제6 단백질성 분자의 아미노산 잔기에 공유 커플링하기 위한 것이다.
본 발명의 제6 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌은 본 발명에 따른 절단 가능한 링커를 통해 스캐폴드의 폴리머 또는 올리고머 구조에 공유 결합된다.
본 발명의 제6 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌은 이민 결합, 히드라존 결합, 히드라지드 결합, 옥심 결합, 1,3-디옥솔란 결합, 디설파이드 결합(disulphide bond), 티오-에테르 결합, 아미드 결합, 펩티드 결합 또는 에스테르 결합을 통해, 바람직하게는 적어도 하나 링커를 통해, 스캐폴드의 폴리머 또는 올리고머 구조에 공유 결합된다.
본 발명의 제6 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌은 위치 C-23에 알데히드 작용을 그리고 선택적으로 적어도 하나의 사포닌의 C-3베타-OH기에서의 카보하이드레이트 치환체에 글루쿠론산 작용을 포함하며, 직접 결합 또는 적어도 하나의 링커를 통해, 이 알데히드 작용은 스캐폴드의 폴리머 또는 올리고머 구조에 대한 공유 결합에 관여하며, 및/또는, 존재하면, 글루쿠론산 작용은, 스캐폴드의 폴리머 또는 올리고머 구조에 대한 공유 결합에 관여한다.
본 발명의 제6 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌의 위치 C-23에서의 알데히드 작용은 링커 N-ε-말레이미도카프로산 히드라지드에 공유 커플링되고, 이 링커는 티오-에테르 결합을 통해 스캐폴드의 폴리머 또는 올리고머 구조의 설프하이드릴기(sulfhydryl group), 예컨대 시스테인의 설프하이드릴기에 공유 커플링된다.
본 발명의 제6 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌의 C-3베타-OH기에서의 카보하이드레이트 치환체에서의 글루쿠론산 작용은 링커 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트에 공유 커플링되며, 이 링커는 아미드 결합을 통해 스캐폴드의 폴리머 또는 올리고머 구조의 아민기, 예컨대 단백질성 분자의 N-말단 또는 라이신의 아민기에 공유 커플링된다.
본 발명의 제6 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합이며, 여기서 스캐폴드를 상기 제6 단백질성 분자의 아미노산 잔기에 공유 커플링하기 위한, 폴리머 또는 올리고머 스캐폴드의 화학기는 클릭 화학기, 바람직하게는 테트라진, 아지드, 알켄 또는 알킨, 또는 이들 기 중 시클릭 유도체(cyclic derivative)로부터 선택된 것이며, 보다 바람직하게는 클릭 화학기는 아지드이다.
본 발명의 제6 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합이며, 여기서 스캐폴드의 폴리머 또는 올리고머 구조는 선형, 분지형 및/또는 고리형 폴리머, 올리고머, 덴드리머, 덴드론, 덴드론화된 폴리머, 덴드론화된 올리고머, DNA, 폴리펩티드, 폴리-라이신, 폴리에틸렌 글리콜, 또는 이들 폴리머 또는 올리고머 구조의 어셈블리를 포함하며, 이 어셈블리는 바람직하게는 공유 가교(covalent cross-linking)에 의해 구축된다.
본 발명의 제6 일련의 견지 및 구현예 내의 일 구현예는 본 발명의 사용하기 위한 치료 조합이며, 여기서 제6 약학적 조성물 및 제7 약학적 조성물은 이를 필요로는 환자에게 투여된다.
본 발명의 제6 일련의 견지 및 구현예 내의 본 발명의 일 견지는 본 발명의 제7 단백질성 분자를 추가로 포함하는, 본 발명의 제6 약학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 제6 일련의 견지 및 구현예 내의 본 발명의 일 견지는 의약으로서 사용하기 위한 본 발명의 제7 단백질성 분자를 추가로 포함하는, 본 발명의 제6 약학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 제6 일련의 견지 및 구현예 내의 본 발명의 일 견지는 이를 필요로 하는 환자에게서 암의 치료 또는 예방에 사용하기 위한, 본 발명의 제7 단백질성 분자를 추가로 포함하는, 본 발명의 제6 약학적 조성물에 관한 것이다.
물론, 임의의 및 모든 a, b, c, d, e, f, g, h, I, j, k, m, n, p, q, r, s, t, u, v, w 및/또는 x는 본 발명에 따른 임의의 및 모든 상기한 일 견지 및 구현예에 대해 본 발명의 각각의 개별적인 구현예 및 견지에 따른 값을 갖는다. 또한, (3작용성) 링커 L1, L2, L4, L5, L6, L8, L9 및/또는 L10은, 본 발명의 분자 또는 접합체 또는 모이어티에 존재하는 경우, 당업자에 의해 용이하게 이해되는 바와 같이, 본 발명의 각각의 그리고 임의의 상기한 일 견지 및 구현예에 대하여 나타낸 바와 같은 (3작용성) 링커이다. 본 발명의 분자 또는 접합체 또는 모이어티에 존재하는 경우, 올리고머 또는 폴리머 스캐폴드 L3 및/또는 L7은 또한 당업자에 의해 용이하게 이해되는 바와 같이, 본 발명의 각각의 그리고 임의의 상기한 일 견지 및 구현예에 대하여 나타낸 바와 같은 올리고머 또는 폴리머 스캐폴드이다. 또한, 제1 리간드 A1 및 제1 이펙터 모이어티 B1 (존재하는 경우), 및 제2 리간드 A2 및 제2 이펙터 모이어티 B2 (존재하는 경우), 및 제1 이펙터 모이어티 A1 및 제1 리간드 B1 (존재하는 경우), 및 제2 이펙터 모이어티 A2 및 제2 리간드 B2 (존재하는 경우)는 본원에서 상기에 개략적으로 나타낸, 본 발명의 제1, 제2, 제3, 제 4, 제 5 및 제 6 일련의 구현예 및 견지, 그리고 본 발명의 추가 구현예 및 견지에 대하여 개시된 바와 같이, 선택되고 나타낸 리간드 및 이펙터 모이어티이다. 사포닌 C는 본 발명의 임의의 상기한 일 견지 및 구현예에 언급되고 열거된 임의의 하나 이상의 사포닌, 특히 스킴 I 및/또는 표 A1로부터 선택된 하나 이상의 사포닌이다.
일 구현예는 스킴 I의 구조 A의 사포닌의 표시된 구조적 특징 중 하나 또는 몇가지 또는 모두를 포함하는 사포닌 및/또는 스킴 I의 추가 사포닌 중 임의의 이상으로부터 선택된 사포닌을 포함하는 본 발명의 제1, 제 4 또는 제 6 단백질성 분자이고, 제1 단백질성 분자와 접촉한 세포의 엔도좀에 존재하는 이펙터 모이어티에 대한 엔도좀 탈출 향상 활성시에, 구조 A의 사포닌은 '이상적인' 구조의 사포닌으로 지칭되며, 및/또는 사포닌은 스킴 I의 추가 사포닌의 임의의 하나 이상으로부터 선택된다:
Figure pct00001
Figure pct00002
Figure pct00003
Figure pct00004
Figure pct00005
본 발명에 따라, 본 발명의 제2 또는 제3 또는 제5 또는 제7 단백질성 분자에 결합된 이펙터 분자의 엔도좀 탈출을 향상시키는 목적에 대하여 '이상적인' 구조를 갖는, 본 발명의 제1, 제4 및/또는 제6 단백질성 분자에 결합된, 본 발명에 따른 사포닌 C과 같은 글리코시드는 스킴 I의 구조 A에 따른 비스데스모시딕 사포닌이고, 이는 적어도 1,500달톤의 분자량을 가지며, 그리고 C-3 위치에 제1 분지형 카보하이드레이트 측쇄를 가지며, 제1 분지형 카보하이드레이트 측쇄가 선택적으로 글루쿠론산을 함유하는, C-23 위치에 알데히드기를 그리고 선택적으로 C-16 위치에 히드록실기를 함유하는 올레아난형(oleanan-type) 트리테르펜을 포함하며, 여기서 사포닌은 C-28 위치에 제2 분지형 카보하이드레이트 측쇄를 갖는 에스테르기를 함유하며, 제2 분지형 카보하이드레이트 사슬은 선택적으로 적어도 하나의 아세틸 잔기, 예컨대 2개의 아세틸 잔기를 함유하고 및/또는 선택적으로 디옥시 카보하이드레이트를 포함하고 및/또는 선택적으로 퀴노보스를 포함하고 및/또는 선택적으로 글루코스를 포함하고 및/또는 4-메톡시신남산을 포함하고 및/또는 선택적으로 에스테르 결합을 통해 카보하이드레이트에 결합되는 5-0-[5-0-Rha-(1→2)-Ara/Api-3,5-디하이드록시-6-메틸-옥타노일]-3,5-디하이드록시-6-메틸-옥탄산을 포함하고 및/또는 선택적으로 5-0-[5-0-Ara/Api-3,5-디하이드록시-6-메틸-옥타노일]-3,5-디하이드록시-6-메틸-옥탄산을 포함하는, 적어도 4개의 카보하이드레이트 유닛을 바람직하게 포함한다.
SO1861은 퀴노보스에 단지 하나의 아세틸 잔기를 가지며, 그리고 부가적인 자일로오스를 갖는 점에서만 스킴 I에 나타낸 "이상적인 구조(ideal structure)," 구조 A와 상이하다. 이펙터 분자 또는 이펙터 모이어티 또는 페이로드의 엔도좀 탈출을 향상시키기는 사포닌의 '이상적인 구조'는 바람직하게는 스킴 I의 구조 A를 갖는 사포닌이고, 엔도좀 탈출 향상 활성을 나타내는 사포닌은 스킴 I의 구조 A에 나타낸 구조적 특징 중 하나 이상을 갖는다. 임의의 이론에 구속되지 않고, 본 발명자는 스킴 I의 구조 A가 엔도좀 탈출 향상 활성에 "이상적인 사포닌" (및 최소 요건 사포닌이 아님)을 나타내는 것으로 믿으며, 이는 모든 구조(화학기)가 사이토솔 내의 이펙터 모이어티의 축적을 촉진시키기 위해 적어도 충분한 엔도좀 탈출 향상 활성을 갖는 각각의 사포닌에 존재할 수 있거나 존재해야만 한다는 것을 의미하는 것은 아니며, 이는 일부 사포닌이 아실쇄(acyl chain)와 같은 다른 구조 요소(element)를 가질 수 있고, 및/또는 다른 사포닌은 여전히 엔도좀 탈출 향상 활성을 나타내며, 당은 스킴 I에 나타낸 당과 상이할 수 있음을 의미한다. 예를 들어, QS-21 사포닌 및 퀼라자 사포나리아(Quillaja saponins; Quil-A)의 수용성 분획 중의 사포닌의 일부는 스킴 I에서 구조 A의 이상적인 구조가 고려될 경우에 C-28에서의 카보하이드레이트 변형(modification)이 상이하다: 예를 들어 QS-21에서 아실쇄의 존재. 퀼라자 사포나리아의 수용성 분획에서, QS-7, QS1862와 같은 사포닌은 이상적인 구조 A와 유사하며, SO1861과 유사하다.
일 구현예는 스킴 II에 따른, 스캐폴드 코어 구조로서 올리고머 3-작용성 링커를 포함하는 본 발명의 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자이다:
Figure pct00006
여기서, 사포닌은 불안정한(labile, 화학변화를 일으키기 쉬운), 절단 가능한 히드라존 링커(산 민감성)를 통해 및/또는 결합을 포함하는 말레이미드를 통해 3-작용성 링커 스캐폴드 L9 및/또는 L10에 공유 결합되어 있는 반면, 항체와 같은 결합 부위에 대한 스캐폴드의 결합은 불안정한, 절단 가능한 히드라존 링커(산 민감성)를 통해 및/또는 1, 2, 3 또는 4개의 시스테인과 같은 결합 부위에서 시스테인과의 결합을 포함하는 말레이미드를 통해 확립되어, 구조 B를 형성한다:
Figure pct00007
1-4 스캐폴드가 예를 들어 모노클로날 항체와 같은 단일의 항체에 공유 결합된다. 본 발명에 따르면, 구조 B에 나타낸 2개의 사포닌 중 하나는 공유 결합된 이펙터 모이어티, 이펙터 분자, 페이로드로 또한 대체될 수 있거나, 2개의 사포닌은 공유 결합된 2개의 이펙터 모이어티, 이펙터 분자, 3 작용 성 링커에 결합된 페이로드가 없다. 결합 부위는 예를 들어 항체 또는 이의 결합 단편 또는 결합 도메인이다.
본 발명자는 본 발명의 제2 또는 제3 또는 제5 또는 제7 약학적 조성물 중의 제2 및 제3 및 제5 및 제7 단백질성 분자와 같은 항체 약물 접합체의 치료 윈도우가, 제1, 제4 또는 제6 약학적 조성물이 또한 투여된 종양-함유 포유류(마우스)에 투여될 때, 각각 증가한다는 것을 확립하였다. 제1, 제4 또는 제6 단백질성 단백질은 이에 결합된, 바람직하게는 공유적으로, 보다 바람직하게는 절단 가능한 링커를 통해 결합된 사포닌 C와 같은 적어도 하나의 글리코시드(glycoside)를 갖는다. 사포닌 C는, 아마도 이펙터 모이어티의 활성이 요구되는 사이토솔 내로 이펙터 모이어티의 엔도좀 탈출을 향상시키는 것에 의해, 제2 및 제3 및 제5 및 제7 단백질성 분자에 결합된 이펙터 모이어티 A1, B1, A2 또는 B2의 치료 효능을 증강시킨다. 이러한 방식으로, ADC, 즉 제2 또는 제3 또는 제5 또는 제7 단백질성 분자의 통상적인 투여량보다 낮은 투여량에서, 이미 치료 효과가 표적화된 세포 근처, 표적화된 세포에서 및/또는 표적화된 세포 내에서 사포닌 C를 포함하는 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자의 존재의 영향 하에서 확립된다. 표적화된 세포는, 예를 들어 종양 세포 또는 자가-면역 세포 또는 B-세포 질환 관련 B-세포 등과 같은 병든 세포(diseased cell)이다. 이펙터 모이어티 A1, B1, A2 또는 B2는, 예를 들어 본 발명에 따른 AOC의 일부로서 BNA와 같은 올리고뉴클레오티드 또는 ADC의 일부로서 독소이다.
제1 및 제2, 또는 제4 및 제5, 또는 제6 및 제7 단백질성 분자로 (2개의) 상이한 세포-표면 분자를 표적으로 함으로써, 상기 세포 표면에 (2개의 상이한) 세포-표면 분자를 노출시키는, 매우 동일한 표적화된 세포의 사이토솔에서 그리고 내에서 사포닌 C 및 이펙터 분자 A1, B1, A2 또는 B2의 전달이, 세포-표적화된 사포닌 C(제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자)의 존재 없이, ADC 또는 AOC와 같은 제2, 제3, 제5 또는 제7 단백질성 분자에만 이러한 세포를 노출시키는 것과 비교하여, 개선되고 보다 특이적이다. 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자의 결합 부위에 의해 그리고 제2, 제3, 제5 또는 제7 단백질성 분자의 결합 부위에 의한 개별적인 표적화를 위해 선택된 이상 세포로서, 결합 부위가 상이하며, 제1 및 제2 단백질성 분자가 결합하는 에피토프가 상이하며, 2개의 상이한 수용체와 같은 상이한 종류 및 유형의 세포-표면 분자 내/상에 위치하는, 이상 세포는, 이상적으로는 제1 세포-표면 분자 및 제2 세포-표면 분자 상 각각에 제1 에피토프 및 제2 에피토프를 높은 정도로 함유하며(즉, 예를 들어, 건강한 세포와 같은 비-표적화된(non-targeted cell) 세포 상에서의 발현에 비해, 예를 들어, 종양 세포 또는 자가면역 세포와 같은 표적화된 세포 상에서의 2개의 구별되는 상이한 세포-표면 분자의 상대적으로 더 높은 발현), 및/또는 제1 및 제2 세포-표면 분자, 특히 환자의 (이웃하는) 건강한 세포가 고려된 경우에, 제1 및 제2 세포-표면 분자를 노출시킨다. 바람직하게는, 제1 및 제2 결합 부위에 의해 표적화된 두 세포-표면 분자는, 본 발명의 분자 및 접합체로 표적화되는 것으로 의도되지 않는 건강한 세포에 비하여 표적화된(병든, 종양) 세포 상에서 비교적 높게 및/또는 특이적으로 발현된다. 일 구현예는 약학적 조합으로서, 여기서 제1(제4, 제6) 및 제2(제5, 제7) 결합 부위 중 적어도 하나, 및 이에 따라 제1(제4, 제6) 및 제2(제5, 제7) 세포-표면 분자, 예컨대 제1(제4, 제6) 및 제2(제5, 제7) 종양-세포 수용체 중 적어도 하나는, 건강한(이웃) 세포의 표면 상의 제1(제4, 제6) 세포-표면 분자 및/또는 제2(제5, 제7) 세포-표면 분자의 발현과 비교할 때 특이적으로 또는 비교적 높은 정도로 발현된다. 따라서, 제1(제4, 제6) 에피토프 또는 제2(제5, 제7) 에피토프, 바람직하게는, 표적화된 세포-표면 분자 상의 제1(제4, 제6) 에피토프 및 제2(제5, 제7) 에피토프는 표적화된 병든 세포에 이상적으로 고유(unique)하며, 표적화된 세포의 표면에 적어도 특이적으로 존재하며 노출된다. 표적화된 세포 상의 이들 각각의 제1(제4, 제6) 및 제2(제5, 제7) 에피토프에 대한 제1(제4, 제6) 및 제2(제5, 제7) 단백질성 분자의 결합 후에 제1(제4, 제6) 단백질성 분자와 제1(제4, 제6) 표적 세포-표면 분자 및 제2(제5, 제7) 단백질성 분자와 제2(제5, 제7) 표적 세포-표면 분자의 복합체가 엔도사이토시스된다. 제1 및 제2 단백질성 분자는, 표적화되지 않아야 하는 건강한 세포와 비교되는 경우에, 표적화된 세포 상에 충분한 정도로 또는 고유하게 모두 발현되는 두개의 상이한 세포-표면 분자와의 결합 상호작용을 통해 동일한 표적 세포에 도입되어야 하기 때문에, 표적 세포 내의 제1 및 제2 단백질성 분자의 치료적 활성 양의 축적은, 두개의 별개의 표적화된 세포-표면 분자의 발현 수준이 모두 특정 최소 발현 역치 보다 높을 때만 가능하고 일어날 수 있다. 이와 동시에, 제1 및 제2 단백질성 분자 모두가 충분히 노출되고 발현된 제1 및 제2 세포-표면 분자에 결합하여 충분한 양으로 표적 세포에 진입할 수 있는 경우에만, 공유 결합된 사포닌을 함유하는 제1(제4, 제6) 단백질성 분자의 존재 하에, 제2(제5, 제7) 단백질성 분자에 결합된 이펙터 모이어티가 단지 이의 세포내(예, 세포 독성(cytotoxic) 또는 유전자 침묵) 활성에 영향을 미칠 수 있다는 사실은, 또한 제1 및 제2 세포-표면 분자 중 적어도 하나의 발현이 건강한 세포에서 충분히 낮은 경우에, 그리고 바람직하게는 제1 및 제2 표적화된 세포-표면 분자 모두의 발현이 건강한 세포에서 충분히 낮은 경우에, 이펙터 모이어티에 의해 표적화 및 영향을 받지 않아야 하는 예를 들어 건강한 세포 및 건강한 조직에 대한 이펙터 모이어티의 부정적이며 원하지 않는 부작용에 대한 보호장치(safeguard)를 제공한다. 즉, 제1 및 제2 단백질성 분자의 제1 및 제2 결합 부위에 의해 각각 결합된, 제1 및 제2 세포-표면 분자 및 제1 세포-표면 분자 또는 제2 세포-표면 분자 중 적어도 하나에 대한 노출된 제1 및 제2 세포-표면 분자의 충분히 낮은 발현 또는 심지어 부재는, 제1 단백질성 분자에 결합된 사포닌의 영향 하에서 이펙터 모이어티의 엔도좀 탈출을 협력하여 초래할 수 있는 양으로 제1 및 제2 단백질성 분자 모두의 (비표적화된) 건강한 세포로의 진입을 이상적으로 허용하지 않는다. ADC 또는 AOC는 제1 단백질성 분자가 치료 요법에 첨가되지 않을 때와 비교하여 더 낮은 투여량으로 사용될 수 있으므로, 건강한 세포로의 낮은 정도의 ADC 또는 AOC 진입은, 예를 들어 종양 세포 및 자가면역 세포와 같은 표적 병든 세포의 표적화 및 사멸이 고려될 때 원하지 않는 부작용의 발생에 대하여 이미 보다 낮은 위험성을 갖는다.
동기화(synchronization)는 마우스에 대한 성공적인 전달 전략과 인간에서의 그의 응용에 대한 미싱 링크(missing link)이다. 실제로, 본 발명자는 유리 사포닌의 투여량 및 ADC(본 발명에 따른 제2 또는 제3 또는 제5 또는 제7 단백질성 분자)의 투여량을 마우스에 개별적으로 투여하는 일련의 생체내 마우스 종양 모델에서, ADC 및 유리 사포닌으로 처리되지 않은 대조군 동물에 비해, 지연된 종양 성장, 종양 퇴화, 감소 및 더 느린 종양 성장과 같은 임의의 바람직한 항-종양 활성을 초래하지 않았다는 것을 확립하였다. 유리 사포닌을 다양한 투여 경로를 사용하여 그리고 ADC 투여 순간에 비해 유리 사포닌을 투여하는 다양한 시점(ADC 투여 전, 도중 및 후에 유리 사포닌 투여)을 사용하여 투여하였다. 생체내 종양 모델에서 시험된 ADC는 세툭시맙-디안틴(유리 S01861을 가짐), 또는 트라스투주맙-사포닌(유리 S01861을 가짐)이었다. 유리 사포닌의 투여량을 변화시키는 것은 효과적인 항종양 활성을 제공하지 않았다. 언급된 ADC는 그 자체로 종양-함유 동물에 대해 어떠한 유익한 항-종양 효과를 가하지 않는 투여량으로 투여되었다. 놀랍게도, 본 발명자는 다양한 시험관내 포유류 세포-기반 바이오어세이에서 및/또는 다양한 생체내 동물 종양 모델에서 동물을 선택적으로, 본 발명에 따른 스캐폴드, 즉 본 발명의 제1 및 제2 또는 제1 및 제3 또는 제4 및 제5 또는 제6 및 제7 단백질성 분자의 조합물을 포함하는, 본 발명에 따른 접합체로 처리함으로써 유익한 항-종양 활성이 달성될 수 있다는 것을 이제 확립하였다. 예를 들어 스캐폴드는 절단 가능한 또는 절단 불가능한 결합을 통해 공유 결합된 사포닌(예, S01861, QS-21)을 갖는, 및/또는 절단 불가능한 또는 절단 가능한 결합을 통해 공유 결합된 이펙터 모이어티(예, 디안틴, 침묵 BNA(HSP27))를 갖는, 및/또는 공유 결합된 모노클로날 항체, 예컨대 세툭시맙, 트라스투주맙, OKT-9를 갖는 3-작용성 링커이거나, 또는 덴드론과 같은 스캐폴드, 예컨대 예를 들어 4개의 사포닌 분자와 같이 4개의 모이어티가 결합할 수 있는 덴드론, 또는 예를 들어 2개의 사포닌과 2개의 이펙터 분자를 결합하는 덴드론이며, 덴드론은 리간드 또는 항체 또는 이의 단편 또는 도메인에 대한 (공유) 커플링을 위한 화학기를 포함한다. 예를 들어 단백질성 독소에 의해 발휘된 세포 독성이 고려될 때 또는 종양 세포에서 유전자 침묵이 고려될 때 생체내 및/또는 시험관내 항-종양 세포 활성을 나타내는, 본 발명에 따른 다양한 이러한 스캐폴드의 예시는 실시예 항목을 참고할 수 있다.
임의의 이론에 의한 제한 없이, 유리 사포닌과 함께 ADC를 이용한 종양-함유 동물의 처리시 관찰된 실패를 고려한 관점에서, 예를 들어, 표적 세포(예를 들어, 종양 세포 또는 자가면역 세포)의 엔도사이틱 경로의 구획(compartment) 또는 소포체(vesicles)에서, 적어도 하나의 사포닌, 및 이펙터 모이어티, 바람직하게는 독소 또는 (안티센스) 올리고뉴클레오티드의 모두의 존재를 동기화(synchronize) 하는 것이 바람직하다. ADC (및/또는 AOC) 및 유리 사포닌으로, 생체내 시너지 효과를 얻기 위해, 후기 엔도좀 내에 상기 분자의 존재를 동기화하는 것은 본 발명자의 시도에 따라 유리하게 얻을 수 없었다. 일 견지에서, 본 발명은 바람직하게는 제2, 제3, 제5 또는 제7 단백질성 분자에 의해 포함된 이펙터 모이어티 및 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자에 의해 포함된 사포닌을 결합하는 것과 관련하여 적어도 다음의 문제를 해결한다: 임의의 이론에 의한 제한 없이, 예를 들어, (공유적으로) 특히 단일이고 절단 가능한, 보유 가능한 커플링에 사용될 수 있는 사포닌 내의 유일한 합당한 화학기가 엔도좀 탈출 활성에 요구된다. 예를 들어, 표 A1 및 스킴 I에 열거된 예를 들어, 사포닌의 현저한 엔도좀 탈출 인핸서(enhancer) 효과가 10년이 넘게 알려져 있음에도 불구하고, 공지된 제한이 아마도 사포닌이, 면역-증강 보조 물질의 사용이 암시된 백신 요법에서의 사포닌의 적용 이외에, 임상 연구에서 약학적 활성 물질과 조합하여 사용되지 않은 가장 큰 이유일 것 같다. 예를 들어, 공유 접합된 스캐폴드를 갖는 본 발명의 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자를 제공하는 것은 이러한 어려움을 적어도 부분적으로 해결한다. 놀랍게도, 보조 성분으로서 사포닌을 포함하는 백신 접종 상황에서 이들의 면역 증강 활성을 위해 이전에 적용된 사포닌도, 이제 또한 시험관내 및 생체내 항-종양 활성을 위한, 본 발명의 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자에 대한 (공유) 커플링에 적합하다.
본 발명에 유용한 이펙터 모이어티는 바람직하게는 이의 효과를 발휘하기 위해 후기 엔도좀 탈출(late endosomal escape)에 의존한다. 일부 이펙터, 예컨대, 예를 들어 슈도모나스 엑소톡신(pseudomonas extoxin)은 "후기 엔도좀 단계(late endosomal stage)" 이전에 다른 소기관으로 경로변경(rerouted)되고, 따라서 본 발명에 따른 제2 단백질성 분자에 대한 커플링으로부터 일반적으로 이익을 얻지 못할 것이다. 그러나, 이러한 독소는, 예를 들어 경로변경을 담당하는 신호 펩티드를 제거함으로써 본 발명과 함께 사용하도록 적응될 수 있다. 매우 독성이며, 세포 사멸을 위해 엔도좀을 탈출하는데 단지 하나의 분자만을 요구하는 특정 독소는 아미도 효력이 감소되도록 변형된다. 적어도 2개, 보다 바람직하게는 적어도 5개, 보다 바람직하게는 적어도 10개, 보다 바람직하게는 적어도 20개, 보다 바람직하게는 적어도 50개, 가장 바람직하게는 적어도 100개의 독소분자가 엔도좀을 탈출하는 경우, 세포를 사멸시키는 독소를 사용하는 것이 바람직하다. 또한, 본 발명의 제2 단백질성 분자는 공유 접합된 작용화된 스캐폴드, 즉, 종양 세포 또는 자가-면역 세포와 같은 표적 세포에 결합된 이펙터 모이어티(들)을 포함하는 스캐폴드를 표적하기 위해 공유 결합된 이펙터 모이어티(들)를 포함하는 스캐폴드를 포함한다. 또한, 표적-외 독성을 감소시키기 위해, 세포막 비투과성 소분자 독소가 세포막 투과성 독소에 비해 바람직한 이펙터 분자이다.
본 발명에서 사용되는 용어 "리간드"는 이의 일반적인 의미를 가지며, 바람직하게는 표적 세포의 세포 표면 상의 다른 분자 또는 구조에 결합할 수 있는 분자 또는 구조를 의미하며, 여기서 세포 표면 상의 분자 또는 구조는 엔도사이토시스될 될 수 있으며, 바람직하게는 표적-외 세포 상에 존재하지 않거나 덜 두드러진다. 바람직하게는, 세포 표면 상의 상기 분자 또는 구조는 구성적으로 엔도사이토시스된다(endocytosed). 보다 바람직하게는, 본 발명에서 리간드는 상기 분자 또는 구조에 결합된 후 표적 세포의 세포 표면 상의 상기 분자 또는 구조의 엔도사이토시스(endocytosis)를 유도한다. 이는 예를 들어, 다양한 암 세포의 표면 상에 존재하는, 표피 성장 인자 수용체(Epidermal Growth Factor Receptor, EGFR)에 대한 경우이다. 구성적으로 엔도사이토시스되는 표적 세포의 세포 표면 상의 분자 또는 구조의 예는, 예를 들어, 클라우딘-1(Claudin-1) 또는 주요 조직 적합성 복합체 클래스 II 당단백질이다. 리간드는, 예를 들어 항체, 성장 인자 또는 사이토카인일 수 있다. 담체 분자에서 독소를 리간드와 결합하는 것은 표적화된 독소를 생성하는 한 가지 가능성이다. 표적 세포에서 발생하는 프로세스와 간섭하기 때문에, 표적 세포에만 독성이 있는 독소는 또한 표적화된 독소로서 보여질 수 있다(표적-외 세포에서와 같이, 이는 이의 독성 작용, 예를 들어, 아폽틴(apoptin))을 발휘할 수 없다). 바람직하게는, 표적화된 독소는, (표적 세포에 대해서만 결합하고 엔도사이토시스됨으로) 표적 세포에서 활성이고 표적-외 세포에서는 그렇지 않도록 하기 위해, 리간드 또는 예를 들어 모노클로날 항체와 결합된 독소이다. 리간드 및 이펙터 모이어티를 포함하는 담체 분자를 포함하는 작용화된 스캐폴드(즉, 제2 또는 제3 단백질성 분자)에서, 리간드 또는 모노클로날 항체는 이펙터 모이어티 및 스캐폴드를 타겟 세포로 안내한다. 내재화 후, 적어도 하나의 글리코시드, 바람직하게는 제1 단백질성 분자와 사포닌의 접합체에 의해 포함된 사포닌은 이펙터 모이어티의 엔도좀 탈출을 매개한다. 사포닌은 전형적으로 표 A1 및 스킴 I에 열거된 사포닌이고, 바람직하게 사포닌은 S01861 및/또는 QS-21, 및/또는 SA1641 및/또는 GE1741이다.
본 발명자는 면역 글로불린, 이의 도메인, 리간드 등이 (제1) 결합 부위를 포함하는 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자의 (제1) 결합 부위 (및 제3 단백질성 분자의 동일한 결합 부위)로서 적용하기에 특히 적합하다는 것을 확립하였다. 유사하게, 본 발명자는 면역 글로불린, 이의 도메인, 리간드 등이 제2, 제5 또는 제7 결합 부위를 포함하는 제2, 제5 또는 제7 단백질성 분자의 제2, 제5 또는 제7 결합 부위로서 적용하기에 특히 적합하다는 것을 확립하였다. 예를 들어, 항체 및 항체의 결합 도메인은 선택된 세포-표면 분자의 노출된 표면 상의 에피토프를 표적화하는데 적합하며, 따라서 이는 제1 및 제3, 및 제4 및 제6 단백질성 분자에 의해 표적되는 세포-표면 분자를 발현하는 세포를 표적하기 위해 및/또는 제2, 또는 제5 또는 제7 단백질성 분자에 의해 표적되는 제2, 또는 제5 또는 제7 세포-표면 분자를 발현하는 세포를 또한 표적하기 위해, 제1 및 제3 및 제4 및 제6 (및 별도로 제2, 제5 및 제7) 단백질성 분자를 표적하며, 이들 세포는 또한 (동일한 세포-표면 분자인) 제1 및 제3, 및 제4 및 제6 세포-표면 분자를 발현하며, 그리고 이들의 세포 표면 상에 상기 세포-표면 분자를 갖는다. 유사하게, 표적 세포 상의 EGFR을 표적하는 EGF와 같은 리간드는 제1 및 제3, 및 제4 및 제6 단백질성 분자 내의 결합 부위로서, 또는 제2, 또는 제5 또는 제7 단백질성 분자 내의 제2 또는 제5 또는 제7 결합 부위로서 적용하기에 적합하고, 제2, 제5 및 제7 결합 부위는 제1 및 제3 및 제4 및 제6 결합 부위와 상이하며, 제1 및 제3 결합 부위는 동일하다. 바람직한 것은 제1, 제4, 제6 세포-표면 분자에 대한 제1 및 제3, 제5, 제6 단백질성 분자의 결합을 위해, 및/또는 제2, 제5, 제7 세포-표면 분자에 대한 제2, 제5, 제7 단백질성 분자의 결합을 위해 특이적인, 제1 및 제3, 제4, 제6 에피토프에 대한 또는 제2, 제5, 제7 에피토프에 대한 결합 부위이며, 제1 (제3, 제4, 제6) 및 제2(제5, 제7) 세포-표면 분자는 매우 동일한 표적 세포 상에 노출된다. 항체 또는 이의 도메인 또는 결합 단편에 기초한 결합 부위는 예를 들어, 병든 세포, 종양 세포, 자가-면역 세포 등과 같은 표적화를 위해 선택된 세포의 선택된 제1 또는 제2 또는 제3 (제1과 동일), 제4, 제5, 제6, 제7 세포-표면 분자 상의 선택된 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7 에피토프에 대한 이러한 원하는 특이성을 제공한다. 따라서, 항체 또는 결합 분자(단편, 도메인)에 기초한 제1, 제2 및 제3 그리고 제4, 제5, 제6, 및 제7 결합 부위는 제1 및 제2 및 제3, 및 제4, 및 제5, 및 제6, 및 제7 단백질성 분자에 대해 바람직하다.
제1 및 제3, 그리고 제4 및 제5 단백질성 분자로 동일한 세포-표면 분자를 표적화함으로써, 매우 동일한 표적화된 세포의 세포질에서 그리고 내부에서 사포닌 C 및 이펙터 모이어티 A1, B1, A2 또는 B2의 전달은 개선되고 더욱 특이적이다. 제1 및 제3, 또는 제4 및 제5 단백질성 분자의 결합 부위에 의한 표적화를 위해 선택된 이상 세포는, 환자에서 (이웃하는) 건강한 세포가 고려될 경우, 세포-표면 분자를 높은 정도 그리고/또는 특이적으로 이상적으로는 함유한다. 따라서, 표적화된 세포-표면 분자 상의 에피토프는 이상적으로는 표적화된 병든 세포에 고유하고, 표적화된 세포의 표면에 적어도 특이적으로 존재하며 노출된다. 제1 및 제3 또는 제4 및 제5 단백질성 분자의 결합 후에, 제1 단백질성 분자와 표적 세포-표면 분자 및 제3 단백질성 분자와 표적 세포-표면 분자의, 또는 제4 단백질성 분자와 표적 세포-표면 분자 및 제5 단백질성 분자와 표적 세포-표면 분자의 복합체가 엔도사이토시스된다. 제1 및 제3, 또는 제4 및 제5 단백질성 분자는 매우 동일한 세포-표면 분자와의 결합 상호작용을 통해 동일한 표적 세포 내로 진입해야 하므로, 표적 세포 내의 제1 및 제3, 또는 제4 및 제5 단백질성 분자의 치료 활성 양의 축적은, 표적화된 세포-표면 분자의 발현 수준이 특정 최소 발현 역치를 넘는 경우에만 가능하고 일어날 수 있다. 동시에, 제1 및 제3 단백질성 분자 모두, 또는 제4 및 제5 단백질성 분자 모두가 충분히 노출되고 발현된 세포-표면 분자에 결합하여 충분한 양으로 표적 세포에 진입할 수 있었던 경우에만, 제3 및 제5 단백질성 분자에 결합된 이펙터 모이어티가 공유 결합된 사포닌을 함유하는 제1 또는 제4 단백질성 분자의 존재하에 이의 세포 내(예를 들어, 세포독성 또는 유전자 침묵) 활성을 나타낼 수 있다는 사실은, 또한 예를 들어 표적화된 세포-표면 분자의 발현이 건강한 세포에서 충분히 낮은 경우에, 이펙터 모이어티에 의해 표적되고 영향받는 것을 의미하지 않는 건강한 세포 및 건강한 조직에 대한 이펙터 모이어티의 부정적이며 원하지 않는 부작용에 대한 보호장치(safeguard)를 제공한다. 즉, 제1 및 제3, 또는 제4 및 제5 단백질성 분자의 결합 부위에 의해 결합된 세포-표면 분자의 낮은 발현은, 제1 및 제4 단백질성 분자에 결합된 사포닌의 영향 하에서 이펙터 모이어티의 엔도좀 탈출을 협력하여 초래할 수 있는 양으로 제1 및 제3 단백질성 분자 모두, 또는 제4 및 제5 단백질성 분자 모두의 진입을 허용하지 않는다. ADC 또는 AOC는, 제1 또는 제4 단백질성 분자가 치료 요법에 첨가되지 않을 때와 비교하여 더 낮은 투여량으로 사용될 수 있기 때문에, 건강한 세포에서 낮은 정도로 ADC 또는 AOC 진입은, 예를 들어 종양 세포 및 자가면역 세포와 같은 표적 병든 세포의 표적화 및 사멸이 고려될 때 원하지 않는 부작용의 발생에 대한 보다 낮은 위험성을 이미 보유한다.
명세서 및 청구범위(전체 적용) 전반에 걸쳐, 용어 '제1' 및 '제3'은 제1 및 제3 에피토프, 제1 및 제3 결합 부위, 제1 및 제3 세포-표면 분자가 고려될 때 동일한 의미를 갖는다. 즉, 제1 및 제3 단백질성 분자에 대해, 표적화된 에피토프가 동일하고, 결합 부위가 동일하며, 종양-세포 (특이적) 수용체와 같은 표적화된 세포-표면 분자가 동일하다. 이는 용어 '제4' 및 '제5'에 대하여도 동일하다.
표 A2, A3 및 A4는 제1 (제3, 제4 및 제6) 단백질성 분자의 제1 (제3, 제4 및 제6) 결합 부위에 대한 제1 (제3, 제4 및 제6) 에피토프를 포함하는 제1, 제3, 제4 및 제6 세포-표면 분자의 바람직한 예를 열거한다. 또한, 표 A2, A3 및 A4는 또한 제2, 제5, 제7 단백질성 분자의 제2, 제5, 및 제7 결합 부위에 대한 제2, 제5, 및 제7 에피토프를 포함하는 제2, 제5, 및 제7 세포-표면 분자의 바람직한 예를 열거한다. 제1, 제3, 제4, 제6 및/또는 제2, 제5, 제7 세포-표면 분자가, 바람직하게는 제1, 제3, 제4, 제6 및 제2, 제5, 제7 세포-표면 분자 모두가 표적 세포 상에서 특이적으로 발현될 때, 및 제1 결합 부위 및/또는 제2 결합 부위가 각각 결합될 수 있는 제1 및 제2 세포-표면 분자 상의 제1 및 제2 에피토프가 각각 제1 및/또는 제2 세포-표면 분자에 특이적으로 존재할 때, 제1 및 제2 종양-세포 표면 분자를 노출시키는 종양 세포와 같은 동일한 원하는 표적 세포에 대한 제1, 제3 및/또는 제2 단백질성 분자의 특이적인 표적화가 용이하게 되며, 반면에 제1 및/또는 제2 세포-표면 분자를 발현하지 않거나 제1 및/또는 제2 세포-표면 분자를 보다 낮은 정도로 발현하는, 바람직하게는 제1 및 제2 세포-표면 분자를 발현하지 않거나 표적화된 (이상) 세포 상에서 세포-표면 분자(들)의 발현에 비해 제1 및 제2 세포-표면 분자를 보다 낮은 정도로 발현하는 건강한 세포와 같은 다른 세포는 제1, 제3 및 제2 단백질성 분자에 의해 표적화되지 않거나 보다 낮은 정도로 표적화된다.
본 발명의 약학적 활성 물질은 유기체, 바람직하게는 척추동물, 더욱 바람직하게는 암 환자 또는 자가면역 환자와 같은 인간에서 유익한 결과를 달성하도록 사용되는 이펙터 모이어티이다. 이익은 질환 및/또는 증상의 진단, 예후, 치료, 치유 및/또는 방지를 포함한다. 약학적 활성 물질은 또한 바람직하지 않은 유해한 부작용을 초래할 수 있다. 이 경우, 장단점(pros and cons)은 약학적 활성 물질이 특정 경우에 적합한지의 여부를 결정하기 위해 평가되어야 한다. 세포 내 약학적 활성 물질의 효과가 전체 유기체에 대개 유익하면, 세포가 표적 세포로 지칭된다. 세포 내의 효과가 전체 유기체에 대해 대개 유해하면, 세포가 표적-외(off-target) 세포로 지칭된다. 세포 배양물 및 생물반응기(bioreactor)와 같은 인공 시스템에서, 표적 세포 및 표적-외 세포는 목적에 따라 달라지며, 사용자에 의해 정의된다.
폴리펩티드인 이펙터 모이어티는, 예를 들어, 효소 대체, 유전자 조절 기능, 또는 독소와 같은 손실된 기능을 회복하는 폴리펩티드일 수 있다.
일 구현예는 본 발명의 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자로서, 여기서 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자는, 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자의 아미노산 잔기, 바람직하게는 시스테인 및/또는 라이신에 직접 공유 결합되고 및/또는 적어도 하나의 링커를 통해 및/또는 적어도 하나의 절단 가능한(cleavable) 링커를 통해 및/또는 적어도 하나의 폴리머 또는 올리고머 스캐폴드 L3, L7, 바람직하게 1-8개의 이러한 스캐폴드 또는 2-4개의 이러한 스캐폴드를 통해 공유 결합된, 하나 보다 많은 사포닌 C, 바람직하게는 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 16, 32, 64 또는 1-100개의 사포닌, 또는 이들 사이에 있는 임의의 수의 사포닌, 예컨대 7, 9, 12개의 사포닌을 포함하며, 여기서 적어도 하나의 스캐폴드는 선택적으로 덴드론에 기초하며, 여기서 1-32개의 사포닌, 예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 16, 32개의 사포닌, 또는 이들 사이에 있는 임의의 수의 사포닌, 예컨대 7, 9, 12개의 사포닌은 적어도 하나의 스캐폴드에 공유 결합된다.
표 A1 및 스킴 I 및 상기 구현예는 일련의 사포닌 C가 제2 분자(예, 이펙터 모이어티 또는 이펙터 분자, 페이로드, 예컨대 독소, 올리고뉴클레오티드)와 함께 유리 형태로 포유류 세포, 특히 인간 종양 세포와 접촉되는 경우에 이들의 엔도좀 탈출 향상 활성에 대해 확인된 일련의 사포닌 C를 요약한다. 실제로, 인간 종양 세포를 사용한 세포-기반 바이오어세이에서, 본원에 기술된 표 A1에 표로 작성된 사포닌 및 스킴 I 및 본 발명의 다양일 구현예의 사포닌에 대해, 이들 사포닌의 영향 하에, 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자에 결합된 경우, 제2 또는 제3 또는 제5 또는 제7 단백질성 분자에 결합된, 제2 분자(이펙터 모이어티) 예컨대 핵산 및/또는 독소 예컨대 단백질 독소(예, 표 A5에 열거된 단백질 독소 중 하나 이상)가, 아마도 (후기(late)) 엔도좀 및 리소좀으로부터 세포내 방출을 통해, 증가된 효율 및/또는 효능으로 사이토솔 내로 전달되는 것이 확립되었다. 즉, 제2 분자(본 발명의 제2 또는 제3 또는 제5 또는 제7 단백질성 분자에 결합된 이펙터 모이어티), 예를 들어, 핵산 및/또는 독소의 엔도좀 및/또는 리소좀 탈출은 사포닌의 부재 하에서 덜 효율적이다.
놀랍게도, 본 발명자는 QS-21 및 이의 패밀리 구성원, QS-21A, QS-21 A-api, QS-21 A-xyl, QS-21B, QS-21 B-api, QS-21 B-xyl, QS-7-xyl, QS-7-api, QS-17-api, QS-17-xyl, QS1861, QS1862, QS-18 및 Quil-A를 포함하는 퀼라자 사포나리아로부터의 수용성 사포닌 분획이, 또한, 이펙터 모이어티(상술한 제2 및/또는 제3 및/또는 제5 및/또는 제7 단백질성 분자) 및 공유 접합체로서 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자에 의해 포함된, 이러한 QS-21 제조물(예, 퀼라자 사포나리아의 수용성 분획)에 포괄되는 QS-21 및 이의 패밀리 구성원 사포닌과 같은 적어도 하나의 글리코시드를 포함하는 제2 및/또는 제3 및/또는 제5 및/또는 제7 단백질성 분자와 함께, 모노클로날 항체(본 발명의 제1, 제4, 제6 단백질성 분자)를 포함하는 공유 접합체(여기서 이펙터 분자 및 글리코시드, 예를 들어, 퀼라자 사포나리아의 사포닌 분획, QS-21, SO1861, SA1641, GE1741은 예를 들어 상기 단백질성 분자에 직접 또는 적어도 하나의 링커를 통하여, 직접적으로 또는 링커를 통해, 또는 폴리머 또는 올리고머 스캐폴드를 통해 공유 결합된다)의 형태로 표유류 종(인간)의 종양 세포에 투여될 경우에, 예를 들어, 모노클로날 항체에 결합된 핵산 또는 모노클로날 항체에 결합된 단백질 독소(공유 결합된 올리고뉴클레오티드 또는 페이로드, 예컨대 (단백질) 독소를 포함하는 본 발명의 제2 및/또는 제3 및/또는 제5 및/또는 제7 단백질성 분자의 예들)의 시험관내 생물학적 효과를 증강시키는 능력을 나타냄을 이제 입증한다. 임의의 이론에 의한 제한없이, 시험관내에서 퀼라자 사포나리아로부터 유래된 사포닌의 존재하에, 예를 들어 종양-세포 HSP27 발현의 안티센스 BNA 매개된 감소(HSP27 유전자 침묵)의 관찰된 자극 또는 강화작용(potentiation)은 사포닌에 의한 종양 세포에서의 인플라마솜(inflammasome)의 활성화와 (또한) 관련될 수 있으며, 이는 예를 들어 종양 파이롭토시스(pyroptosis)을 초래한다. 본 발명자는, 예를 들어 안티센스 BNA 또는 디안틴에 접합된 제2 및 제3 및 제5 및 제7 단백질성 분자가, 사포닌을 포함하는 본 발명의 제1 또는 제4 또는 제6 단백질성 분자의 존재 하에, 그리고 제2 및/또는 제3 및/또는 제5 및/또는 제7 단백질성 분자에 의해 표적화된 세포 표면 분자와 동일한 (종양) 세포에 표적화된 경우에, 바이오-기반(bio-based) 세포 분석에서 세포와 접촉시, 시험관내에서 모두 임의의 항종양 세포 활성을 발휘하거나 항종양 세포 활성을 개선시켰으나, 반면에 제1, 제4, 제6 단백질성 분자의 부재하에서 그리고 이에 따라 사포닌의 부재하에서는 종양 세포에 대해 이러한 활성이 관찰되지 않았음을 확립하였다.
QS-21, 및 또한 퀼라자 사포나리아로부터의 QS-21을 포함하는 수용성 사포닌 분획은 이미 오랜 기간 동안 공지되어 있었으며, 이전에는 이의 면역 증강 능력에 대하여, 예를 들어 서브-단위 백신에서 예를 들어, 보조제로서 집중적으로 적용되었다. 예를 들어, QS-21은 QS-21(Glaxo-Smith-Kline, MAGRIT trial, DERMA study)을 포함하는 보조제와 혼합된 서브-단위 백신으로 백신접종된 인간 환자에서 2개의 3상 임상 시험에 적용되고, 여기서 서브-단위는 MAGE-A3 단백질이고, 이는 구체적으로 종양 세포에 의해 발현되고 제시된다. 항-종양 백신접종은 QS-21로 증강되었고, 암 환자(흑색종; 비-소세포 폐암)의 무질환 생존 연장을 목적으로 하였다. 또한, QS-21은, 항암 백신 치료개발을 위해, HIV-1 감염에 대한 백신의 개발을 위해, B형 간염에 대한 백신의개발에서, 및 Glaxo-Smith-Kline의 보조제 AS01 및 AS02를 포함하는 QS-21을 이용한 항-말라리아 백신 개발을 위해, 임상 시험에서 보조제로 테스트되었다. 이전 연구는 보조제(AS15; GSK)를 포함하는 QS-21 사포닌의 영향 하에서, 암 세포 표면에서 제시된 MAGE-A3 펩티드에 대해 유도된 면역 반응을 나타내었다. 본 발명자는 놀랍게도, 퀼라자 사포나리아, 및 이에 따라 (퀼라자 사포나리아의 수용성 사포닌 분획의 일부로서) 이와 유사한 QS-21의 사포닌 분획물은, 예를 들어 제2, 제5, 제7 단백질성 분자(예, 리간드 EGF)에 결합된 페이로드, 예컨대 단백질 독소(디안틴)의 항종양 세포 활성을 증강시킨다.
본 발명자는 공유 결합된 안티센스 BNA 예컨대 BNA(HSP27)이 제공되고, 공유 결합된 사포닌(예, SO1861, QS-21)을 갖는 본 발명의 제1 또는 제4 단백질성 분자와 함께 종양 세포와 접촉된 종양-세포 표적화 모노클로날 항체로서, BNA 및 사포닌 모두는 절단 가능한 결합을 통해 제1 및 제3 또는 제4 및 제5 단백질성 분자의 각각의 항체(예, 세툭시맙)에 결합된, 종양-세포 표적화 모노클로날 항체는, 대조군에 비해 그리고 결합된 사포닌을 갖는 제1 또는 제4 단백질성 분자가 존재하지 않는, 단지 AOC(제3 및 제5 단백질성 분자)에 비해, 생체내 종양에서 HSP27을 침묵시킬 수 있다는 것을 보여준다. 따라서, ADC 또는 항체-올리고뉴클레오티드 접합체(AOC), 예컨대 항체-BNA 접합체를, 사포닌을 갖는 제1 또는 제4 단백질성 분자와 함께 공동투여하는 것은, ADC 또는 AOC에, 동일한 투여량에서 ADC 단독 또는 AOC 단독에서는 볼 수 없었던 항종양 활성을 부여한다. 주목할 만하게, AOC(제2 또는 제3 또는 제5 단백질성 분자) 및 공유 결합된 사포닌을 갖는 모노클로날 항체(제1 또는 제4 단백질성 분자)는, 개별의 마우스 그룹에서 종양-함유 마우스에 개별적으로 투여한 경우, 대조군(오직 비이클만 투여됨)에 비해 종양 세포에서 HSP27 발현을 증가시킨다. 본 발명의 이펙터 모이어티를 포함하는 AOC(제2 또는 제3 또는 제5 단백질성 분자) 및 공유 결합된 사포닌을 갖는 제1 또는 제4 단백질성 분자의 동시 투여만이 대조군에 비해 감소된 HSP27 발현을 나타낸다. 안티센스 BNA(HSP27)는 문헌[Zhang et al. (2011) [Y Zhang, Z Qu, S Kim, V Shi, B Liao1, P Kraft, R Bandaru, Y Wu, LM Greenberger and ID Horak, Down-modulation of cancer targets using locked nucleic acid (LNA)-based antisense oligonucleotides without transfection, Gene Therapy (2011) 18, 326-333]에 따른 올리고 핵산 서열 5'-GGCacagccagtgGCG-3'을 갖는 BNA이었다. 주목할 만하게, 본 발명자가 아는 지식으로, BNA는 유리 핵산으로서 적용되도록 설계된다. 본 발명자는 이제, 유전자-침묵 활성이 시험관내 그리고 보다 중요하게는 종양-함유 동물의 종양 세포에서 생체내에서 보유되는 방식으로, 안티센스 BNA가 (비-)절단 가능한 링커를 통해 리간드 또는 항체와 공유 결합될 수 있다는 것을 최초로 입증한다. BNA 기반 AOC를 제공하는 이러한 접근방식은 표적화된 BNA를 이를 필요로 하는 인간(암)환자에게 투여하는 새로운 방식을 연다.
본 발명자는 퀼라자 사포나리아, QS-21, SA1641, SO1861, 표 A1, 스킴 I의 수용성 분획의 사포닌과 같은 사포닌을, 예를 들어, 스킴 II 및 구조 B의 3-작용성 링커와 같은 3-작용성 링커를 통해, 또는 공유 결합된 사포닌을 포함하는 올리고머 또는 폴리머 구조의 스캐폴드를 통해 제1 또는 제4 단백질성 분자에 공유 결합시키는 것이, 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자 내에 공유 결합된 사포닌의 영향 하에, 제2 및/또는 제3 및/또는 제5 및/또는 제7 단백질성 분자에 의해 포함된 독소와 같은 이펙터 모이어티에 의해 발휘되는개선된 세포 독성을 초래한다는 것을 본원에서 개시한다.
본 발명에 따르면, 전형적으로 사포닌은 표 A1, 스킴 I에 열거된 사포닌이다. 사포닌이 히드라존 결합, 및/또는 히드라지드 결합, 및/또는 디설파이드 결합을 수반하여 제1 또는 제4 또는 제6 단백질성 분자에 공유 결합될 경우에, 세포 내로의 진입 및 제2 또는 제3 또는 제5 또는 제7 단백질성 분자에 공유 결합된 이펙터 모이어티의 사이토솔 내부에의 축적이 고려될 경우, 사포닌의 활성, 예를 들어, 세포 내부의 엔도좀 탈출 향상 활성에 유익한 것으로 입증되었다. 이러한 결합 유형은 포유류 세포, 예를 들어 인간 세포의 (후기) 엔도좀 및 리소좀 내부의 산성 조건 하에서, 및/또는 환원성 조건 하에서 쉽게 절단된다. 대안적으로, 본 발명자는 또한, 예를 들어, (후기) 엔도좀, 리소좀, 사이토솔과 같은 세포 내부의 생리학적 조건 하에서 쉽게 절단될 수 없는 결합을 통한 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자에 대한 사포닌의 공유 결합이 또한 예를 들어, 핵산(예, BNA 침묵 HSP27)과 같은 이펙터 모이어티 및 사포린과 같은 단백질성 독소의 생물학적 효과에 대한 사포닌의 강화 활성에 유익하다는 것을 입증한다. 청구범위를 포함하는 출원서 전체에 걸쳐, 예를 들어, 링커를 통해 및/또는 히드라존 결합 또는 디설파이드 결합을 통한 스캐폴드를 통해 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자에 결합된 사포닌을 갖는 스캐폴드를 선택적으로 포함하는 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자와 같은 본 발명의 접합체가 언급될 경우에, (후기) 엔도좀 및/또는 리소좀 내의 이러한 결합 또는 링커의 절단의 문맥에서, 용어 '절단 가능한 링커', '절단 가능한 결합' 등은 또한 '불안정한 링커(labile linker)'('L') 및 '불안정한 결합(labile bond)'으로 지칭된다. 예를 들어, 도 1-1, 도 6-2, 도 2-4 및 도 1-5는 마우스에서 인간 종양의 생체내 HSP27 유전자 침묵을 나타낸다. 종양-함유 마우스는 예를 들어, 본 발명에 따른 불안정한 링커(히드라존 결합)를 통해 결합된 사포닌을 갖는 모노클로날 항체로 구성된 제1 단백질성 분자로 처리되었으며, 반면에 제3 단백질성 분자는 디설파이드 결합을 통해 모노클로날 항체(제1 모노클로날 항체와 동일한 유형)에 공유 커플링된, 종양 세포에서 HSP27 유전자를 침묵시키기 위한 결합된 안티센스 BNA를 포함하였다. 즉, 임의의 이론에 의한 제한없이, 히드라존 결합 및 디설파이드 결합은, 본 발명의 치료 조합이 예를 들어 엔도사이토시스에 의해 내재화되면, 세포 표면에서 표적화된 세포-표면 분자, 여기서는 EGFR 상에서 에피토프를 발현하는 표적화된 종양 세포의 (후기)엔도좀 및/또는 리소좀에서 절단된다. 상기 결합의 절단은 엔도좀 및/또는 리소좀으로부터의 BNA가 사이토솔 내로 진입하는 것이 고려될 경우, 사포닌의 엔도좀 탈출 향상 활성에 기여할 가능성이 있지만, 이러한 절단은 본 발명의 세툭시맙-S01861 접합체 및 세툭시맙-BNA 접합체의 조합의 유전자 침묵 효과를 관찰하기에 필수적인 것은 아니다.
당업자는 3-작용성 링커가 1개, 2개 또는 3개의 사포닌 모이어티를 공유 커플링하는데 적합한 본 발명의 스캐폴드임을 이해할 것이다. 1개 또는 2개의 사포닌 모이어티의 3-작용성 링커 공유 커플링이 바람직하다. 제2 및/또는 제3 결합 부위는 예를 들어 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자와 같은 단백질성 리간드를 공유 커플링하는데 적합하다. 전형적인 단백질성 리간드는 세포 표면에서 EGFR을 발현하는 (종양)세포를 표적화하는 EGF, 및 종양 세포 또는 자가면역 세포를 표적화하는 사이토카인이다. 또한, 3-작용성 링커의 제2 또는 제3 결합 부위는 종양 세포 표면 분자, 바람직하게 종양-세포 특이적 분자, 보다 바람직하게 종양 세포의 표면에서 특이적으로 (과-)발현되는 종양 세포 수용체와 같은 세포 표면 분자에 대한 결합을 위한 면역 글로불린, 예컨대 모노클로날 항체, 즉, 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자의 공유 커플링에 적합하다. 유사하게, 면역 글로불린, 또는 면역 글로불린의 결합 특이성을 포함하는 이의 임의의 단편(들) 및/또는 이의 도메인(들)은 자가면역 세포의 표면에서 발현되는 수용체와 같은 세포 표면 분자에 결합하는데 적합하다. 따라서, 일 구현에서, 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자는 3-작용성 링커를 포함하며, 상기 링커는 공유 결합된 사포닌, 예를 들어, QS-21, SO1861 및 공유 결합된 결합 부위, 예컨대 종양 세포, 자가면역 세포, 병든 세포, 이상 세포, 건강하지 않은 세포, B 세포 질환에 대한 (특이적) 결합을 위한 리간드 또는 항체와 같은 세포 표적 모이어티를 포함하거나 이로 구성된다.
따라서, 본 발명에 따른 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자는 적어도 하나의 사포닌을 포함한다. 이러한 문맥에서 "적어도 하나"는, 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자가 하나의 사포닌 분자를 포함하지만, 사포닌의 결합(예, 2, 3 또는 4) 또는 복수의(예, 10, 20 또는 100) 사포닌을 포함할 수도 있다는 것을 의미한다. 용도에 따라, 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자는 공유 결합된 사포닌을 갖는 공유 결합된 스캐폴드를 포함할 수 있으며, 여기서 스캐폴드는 정의된 수의 사포닌을 포함하도록 설계될 수 있다. 바람직하게는, 본 발명에 따른 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자는 무작위한 수보다는 규정된 수 또는 범위의 사포닌을 포함한다. 이는 특히 마케팅 인가(marketing authorization)와 관련하여 약물개발에 유리하다. 이와 관련하여 규정된 수는 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자가 바람직하게는 이전에 규정된 수의 사포닌을 포함함을 의미한다. 이는 예를 들어 사포닌(들)이 부착될 수 있는 특정 수의 가능한 모이어티를 갖는 폴리머 구조를 포함하는 스캐폴드를 설계함으로써 달성된다. 이상적인 상황에서, 이들 모이어티 모두는, 이전에 규정된 수의 사포닌을 포함하는 것보다 사포닌 및 스캐폴드에 결합된다. 이는 예를 들어, 2, 4, 8, 16, 32, 64개 등의 사포닌을 포함하는 스캐폴드의 표준 세트를 제공하여 최적의 수가 사용자의 필요에 따라 사용자에 의해 용이하게 시험될 수 있도록 하는 것이 예상된다. 일 구현예는 본 발명의 스캐폴드를 포함하는 본 발명의 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자로서, 여기서 사포닌은 예를 들어 폴리머 구조에 존재하는 모든 모이어티가 사포닌과 결합하지는 않은 비-이상적인 상황에서, 규정된 범위로 존재한다. 이러한 범위는 예를 들어 스캐폴드 당 2-4개의 사포닌 분자, 스캐폴드 당 3-6개의 사포닌 분자, 스캐폴드당 4-8개의 사포닌 분자, 스캐폴드당 6-8개의 사포닌 분자, 스캐폴드당 6-12개의 사포닌 분자 등일 수 있다. 이러한 경우, 본 발명에 따른 스캐폴드를 포함하는 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자는 이에 따라 상기 범위가 2-4로 정의되는 경우 2, 3 또는 4개의 사포닌을 포함한다.
스캐폴드(scaffold)는 근본적으로 스캐폴드에 공유 결합된 사포닌의 유형에독립적이며, 스캐폴드는 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자에 후속적으로(순차적인 순서로) 공유 결합되어 있다. 따라서, 스캐폴드를 포함하는 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자는 새로운 플랫폼 기술의 기본 생성물이다. 적어도 하나의 공유 결합된 사포닌은 제2, 제3, 제5 또는 제7 단백질성 분자에 결합된 이펙터 모이어티의 세포내 전달을 매개하기 때문에, 본 발명에 따른 스캐폴드 기술은 사포닌에 의한 제어된 세포내 이펙터 모이어티 전달을 매개하는 것으로 알려진 첫번째 시스템이다. 스캐폴드는 사포닌(들)에 결합될 수 있으며 그리고 단일의 정의된 위치에서 예를 들어 리간드, 항체 등과 같은 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자에 의해 포함된 결합 부위에 결합될 수 있는 최적화되고 기능적으로 활성적인 유닛을 제공한다.
일 구현예는 본 발명에 따른 스캐폴드를 포함하는 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자로서, 여기서 폴리머 또는 올리고머 구조의 모노머의 수는 정확히 정의된 수 또는 범위이다. 바람직하게는, 폴리머 또는 올리고머 구조는 구조, 예컨대 폴리(아민), 예를 들어, 폴리에틸렌이민 및 폴리(아미도아민), 또는 구조, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜, 폴리(에스테르), 예컨대 폴리(락타이드), 폴리(락탐), 폴리락타이드-코-글리콜라이드 코폴리머, 폴리(덱스트린), 또는 펩티드 또는 단백질, 또는 구조, 예컨대 천연 및/또는 인공 폴리아미노산, 예를 들어, 선형, 분지형 또는 고리형 폴리머인 PNA(펩티드 핵산) 폴리머, 안정화된 RNA 폴리머, DNA 폴리머, 또는 폴리-라이신, 올리고머, 덴드리머, 덴드론, 덴드론화 폴리머, 덴드론화 올리고머 또는 이러한 구조의 어셈블리를 포함하며, 순수하거나 혼합된다. 바람직하게, 폴리머 또는 올리고머 구조는 생체적합성(biocompatible)이며, 여기서 생체적합성이란 폴리머 또는 올리고머 구조가 유기체에서 실질적인 급성 또는 만성 독성을 나타내지 않으며, 그대로 배설되거나 또는 신체 대사에 의해 완전히 분해되어 배설될 수 있고/있거나 생리학적 화합물로 분해될 수 있는 것을 의미한다. 어셈블리는 공유 가교 또는 비공유 결합 및/또는 인력(attraction)에 의해 형성될 수 있다. 따라서, 이들은 또한 나노겔, 마이크로겔 또는 하이드로겔을 형성할 수 있거나, 또는 이들은 담체, 예컨대 콜레스테롤 및/또는 인지질을 포함하는 무기 나노입자, 콜로이드, 리포좀, 미셀 또는 입자-유사 구조에 부착될 수 있다. 상기 폴리머 또는 올리고머 구조는 바람직하게는 글리코시드 분자 (및/또는 이펙터 분자 및/또는 담체 분자, 예컨대 리간드, 모노클로날 항체 또는 이의 단편)의 커플링을 위한 정확하게 규정된 수 또는 범위의 커플링 모이어티를 갖는다. 폴리머 또는 올리고머 구조 내의 정확하게 정의된 수 또는 범위의 커플링 모이어티의 바람직하게는 적어도 50%, 보다 바람직하게는 적어도 75%, 보다 바람직하게는 적어도 85%, 보다 바람직하게는 적어도 90%, 보다 바람직하게는 적어도 95%, 보다 바람직하게는 적어도 98%, 보다 바람직하게는 적어도 99%, 가장 바람직하게는 100%이 본 발명에 따른 스캐폴드의 글리코시드 분자에 의해 차지된다.
바람직하게, 덴드론은 포컬 포인트(focal point)라 불리는 나무(tree)의 기원에 단일의 화학적으로 어드레스할 수 있는(addressable) 기를 갖는 분지형의, 명확하게 정의된 나무 모양의(tree-like) 폴리머이다. 덴드리머(dendrimer)는 포컬 포인트에서의 2개 이상의 덴드론이 연결된 것이다. 덴드론화 폴리머는 폴리머에 하나 이상의 덴드론의 포컬 포인트가 연결된 것이다. 바람직일 구현예에서, 본 발명에 따른 스캐폴드가 제공되며, 여기서 폴리머 또는 올리고머 구조는 선형, 분지형 또는 시클릭 폴리머, 올리고머, 덴드리머, 덴드론, 덴드론화 폴리머, 덴드론화 올리고머 또는 이들 구조의 어셈블리를 순수 또는 혼합으로 포함하며, 여기서 어셈블리는 공유 가교 또는 비공유 인력에 의해 구축될 수 있고, 나노겔, 마이크로겔 또는 하이드로겔을 형성할 수 있고, 그리고 여기서, 바람직하게는, 폴리머는 폴리(아민)의 유도체, 예를 들어, 폴리에틸렌이민 및 폴리(아미도아민), 및 구조, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜, 폴리(에스테르), 예컨대 폴리(락타이드), 폴리(락탐), 폴리락타이드-코-글리콜라이드 코폴리머, 및 폴리(덱스트린), 또는 구조 예컨대 천연 및/또는 인공 폴리아미노산, 예컨대 폴리-라이신, 또는 펩티드 또는 단백질, 또는 DNA 폴리머, 안정화된 RNA 폴리머 또는 PNA(펩티드 핵산) 폴리머를 포함한다. 바람직하게, 폴리머 또는 올리고머 구조는 생체적합성이다.
일 구현예는 본 발명의 치료 조합 또는 본 발명에 따른 용도를 위한 치료 조합이며, 여기서 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자는 하나 보다 많은 공유 결합된 사포닌, 바람직하게는 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 16, 32, 64, 128 또는 1-100개의 사포닌, 또는 이들 사이의 임의의 수의 사포닌, 예컨대 7, 9, 12개의 사포닌을 포함한다.
일 구현예는 본 발명의 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자이며, 여기서 적어도 하나의 사포닌은 본 발명에 따른 적어도 하나의 절단 가능한 링커를 통해 올리고머 또는 폴리머 스캐폴드의 폴리머 또는 올리고머 구조에 공유 결합된다.
일 구현예는 본 발명의 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자이며, 여기서 상기 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자의 아미노산 잔기에 대한 올리고머 또는 폴리머 스캐폴드의 공유 결합을 위한, 올리고머 또는 폴리머 스캐폴드의 화학기는 클릭 화학기이고, 바람직하게는 테트라진, 아지드, 알켄 또는 알킨, 또는 이들 기의 사이클릭 유도체로부터 선택되고, 보다 바람직하게 상기 화학기는 아지드이다.
일 구현예는 본 발명의 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자이며, 여기서 올리고머 또는 폴리머 스캐폴드의 폴리머 또는 올리고머 구조는 선형, 분지형 및/또는 고리형 폴리머, 올리고머, 덴드리머, 덴드론, 덴드론화 폴리머, 덴드론화 올리고머, DNA, 폴리펩티드, 폴리-라이신, 폴리-에틸렌 글리콜, 또는 이들 폴리머 또는 올리고머 구조의 어셈블리를 포함하며, 이 어셈블리는 바람직하게는 공유 가교(cross-linking)에 의해 구축된다.
본 발명자는 상기한 본원의 임의의 구현예에 따른, 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자에 대한 사포닌의 공유 커플링, 바람직하게는 절단 가능한 결합 또는 링커를 통한 공유 커플링이 제2 및 제3 및 제5 및 제7 단백질성 분자에 결합된 이펙터 모이어티의 활성의 효율적이고 세포-표적화된 강화작용을 제공(여기서 제1 및 제3 및 제4 및 제6 단백질성 분자는 동일한 제1, 제4 또는 제6 결합 부위를 포함하고, 여기서 제1 (제4, 제6) 및 제2 (제5, 제7) 단백질성 분자는 상이한 제1 (제3, 제4, 제6) 및 제2 (제5, 제7) 결합 부위를 포함한다)한다는 것을 확립하였다.
모노클로날 항체와 같은 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자의 시스테인 측쇄 또는 라이신 측쇄에 사포닌을 직접적으로 또는 링커를 통해 커플링하는 것은, 제1 및 제2, 제7 단백질성 분자가 고려되는 경우, 다른 제1 및 제2, 제7 결합 부위를 포함하고, 제3 또는 제5 단백질성 분자가 고려되는 경우, 제1 단백질성 분자로서 동일한 제1 결합 부위를 포함하는 제2 및/또는 제3 및/또는 제5 및/또는 제7 단백질성 분자를 사용하여 동일한 표적 세포로 이펙터 모이어티가 전달되는 경우에, 표적 세포 내에서 이펙터-모이어티 강화 작용 활성의 특이적이고 효율적인 전달의 유익한 방법인 것으로 입증되었다.
본 발명을 보다 상세하게 설명하기 위해, (본 발명자는 임의의 이론에 의해 제한되는 것을 바라지 않음에도 불구하고) 물질의 세포 흡수의 프로세스 및 본 발명의 사용된 용어가 기술된다. 소포 (vesicle) 버딩(budding)에 의한 세포 내로의 세포외 물질의 흡수는 엔도사이토시스(endocytosis)로 지칭된다. 상기 소포 버딩은 (1) 사이토솔 단백질 클라트린(clathrin)에 의해 매개되는 수용체-의존성 리간드 흡수, (2) 콜레스테롤-결합 단백질 카베올린(caveolin)에 의해 매개되는 리피드-라프트(lipid-raft) 흡수, (3) 비특이적 유체 흡수(피노사이토시스), 또는 (4) 비특이적 입자 흡수(파고사이토시스)에 의해 특징지워질 수 있다. 소포 수송 및 물질 선별의 다음 세포 프로세스로의 모든 유형의 엔도사이토시스는 엔도사이토시스 경로라 불린다. 엔도사이토시스 경로는 복잡하고 완전히 이해되지 않는다. 임의의 이론에 의한 제한없이, 소기관(organelle)은 데노보(de novo)로 형성되어, 엔도사이틱 경로(endocytic pathway)를 따라 다음 소기관으로 성숙될 수 있다. 그러나, 이제는 엔도사이틱 경로가 소포성 트래픽에 의해 연결된 안정한 구획을 포함하는 것으로 가정된다. 구획(compartment)은 세포에 대한 필수 기능의 특정 세트에 특화된 복합, 다기능 막 소기관(organolle)이다. 소포는 과도적인 소기관(transient organelle)인 것으로 간주되고, 조성이 더 간단하고, 기존의 구획으로부터 버딩에 의해 데노보(de novo)를 형성하는 막-폐쇄된 컨테이너로서 정의된다. 구획과 대조적으로, 소포는 생리적으로 비가역적인 일련의 생화학적 변화인 성숙을 겪을 수 있다. 초기 엔도좀 및 후기 엔도좀(late endosomes)은 엔도사이틱 경로에서 안정한 구획을 나타내지만, 일차 엔도사이틱 소포, 파고솜(phagosomes), 다소포체(multivesicular body)(또한 엔도좀 담체 소포(endosome carrier vesicles)라고도 함), 분비 그래뉼(secretory granules), 및 심지어 리소좀(solesomes)은 소포를 나타낸다. 클라트린-코팅된 피트(clathrin-coated pits)로부터 가장 두드러지게, 플라즈마막에서 발생하는 엔도사이틱 소포는 초기 엔도좀과 일차 융합되며, 이는 약 pH 6.5의 주요 분류 구획(sorting compartment)이다. 내재화된 카르고(cargo) 및 막의 대부분은 재순환 소포(재순환 경로)를 통해 원형질막으로 다시 재순환된다. 분해되어야 하는 성분은 다소포체(multivesicular body)를 통해 산성 후기 엔도좀(6 보다 낮은 pH)으로 수송된다. 리소좀은 성숙한 리소좀 효소를 저장할 수 있고, 필요한 경우 이를 후기 엔도좀 구획에 전달할 수 있는 소포이다. 그 결과 형성된 소기관은 하이브리드 소기관 또는 엔도리소좀으로 불린다. 리소좀은 리소좀 재형성이라고 하는 프로세스에서 하이브리드 소기관을 버드 오프(bud off)시킨다. 후기 엔도좀, 리소좀 및 하이브리드 소기관은 매우 역동적인 소기관이며, 그들 사이의 구별은 종종 어렵다. 세포내 이입된(endocytosed) 분자의 분해는 엔도리소좀 또는 리소좀 내부에서 일어난다. 엔도좀 탈출은 엔도사이틱 경로로부터, 바람직하게는 클라트린-매개 엔도사이토시스로부터, 또는 사이토솔로의 재순환 경로로부터, 임의의 종류의 구획 또는 소포의 내부강(inner lumen)으로부터의 물질의 적극적 또는 수동적 방출이다. 따라서, 엔도좀 탈출은 이들의 중간체 및 하이브리드 소기관을 포함하는 엔도좀, 엔도리소좀(endolysosomes) 또는 리소좀으로부터의 방출을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
달리 구체적으로 명시되지 않는 한 그리고 특히 본 발명의 사포닌과 같은 글리코시드 분자의 엔도좀 탈출 메커니즘에 관한 경우, 본원에서 단어 "엔도좀" 또는 "엔도좀 탈출(endosomal escape)"이 사용될 때마다, 이는 또한 엔도리소좀 및 리소좀, 그리고 각각 엔도리소좀 및 리소좀으로부터의 탈출을 포함한다. 사이토솔에 진입 후, 상기 물질은 핵과 같은 다른 세포 유닛으로 이동할 수 있다.
정식 용어에 있어서, 글리코시드는 당 기(sugar group)가 이의 아노머(anomeric) 탄소를 통해 다른 기에 글리코시드 결합을 통해 결합된 임의의 분자이다. 본 발명의 문맥에서, 사포닌과 같은 글리코시드 분자는, 나아가, 임의의 이론에 의한 제한 없이, 특히 이펙터 모이어티의 엔도좀 탈출을 용이하게 함으로써, 이펙터 모이어티의 효과를 향상시킬 수 있는 그러한 분자이다. 임의의 이론에 의해 제한 없이, 글리코시드 분자(표 A1에 열거된 것들과 같은 사포닌)은 엔도사이틱 및 재순환 경로의 구획 및 소포의 막과 상호작용하고, 이들을 상기 이펙터 모이어티에 대해 누출되도록 하여, 증가된 엔도좀 탈출을 초래한다. 용어 "스캐폴드는 이펙터 모이어티의 엔도좀 탈출을 증가시킬 수 있다"는 것은 스캐폴드의 폴리머 또는 올리고머 구조에 결합된 적어도 하나의 사포닌(글리코시드 분자)이, 두 분자 모두 엔도좀, 예를 들어 후기 엔도좀 내에 있는 경우, 이펙터 모이어티의 엔도좀 탈출을 증가시킬 수 있으며, 선택적으로 그리고 바람직하게는 사포닌과 같은 적어도 하나의 글리코시드가, 예를 들어, 적어도 하나의 글리코시드(사포닌)와 제1, 제4, 제6 단백질성 분자 사이의 절단 가능한 결합의 절단에 의해(예를 들어, 스캐폴드의 폴리머 또는 올리고머 구조를 통해 및/또는 링커를 통해), 제1, 제4, 제6 단백질성 분자, 예컨대 상기 제1, 제4, 제6 단백질성 분자에 의해 포함된 링커 또는 폴리머 또는 올리고머 구조로부터 방출된 후에, 이펙터 모이어티의 엔도좀 탈출을 증가시킬 수 있다는 것을 의미한다. 본 발명에 따른 사포닌과 같은 적어도 하나의 글리코시드와 제1, 제4, 제6 단백질성 분자 사이의 결합, 선택적으로 링커 또는 스캐폴드를 통한, 결합은 "안정한 결합'일 수 있으며, 이는 예를 들어 효소에 의해 엔도좀에서 이러한 결합이 절단될 수 없다는 것을 의미하는 것은 아니다. 예를 들어, 글리코시드 또는 사포닌은, 선택적으로 링커 또는 스캐폴드의 올리고머 또는 폴리머 구조의 일부와 함께, 글리코시드 또는 사포닌은 남아있는 링커 단편 또는 올리고머 또는 폴리머 구조로부터 절단될 수 있다. 예를 들어, 프로테아제는 (단백질성) 링커 또는 단백질성 폴리머 구조, 예를 들어 알부민을 절단하고, 이에 의해 적어도 하나의 글리코시드, 사포닌을 방출시킬 수 있다. 그러나, 글리코시드 분자 (바람직하게는 사포닌)는 활성 형태로 방출되며, 바람직하게는 선택적으로 링커 및/또는 올리고머 또는 폴리머 스캐폴드를 통해 제1, 제4, 제6 단백질성 분자에 결합되어 있기(결합되도록 제조되기) 전에, 가지고 있었던 원래 형태로 방출되며; 따라서, 글리코시드(사포닌)는 이러한 절단 후에 그의 본래 구조를 가지거나, 또는 글리코시드(사포닌)는 이러한 절단 후, 이에 결합된 화학기 또는 링커(의 일부)를 가지며, 한편 글리코시드 생물학적 활성 (사포닌 생물학적 활성), 예를 들어, 동일한 엔도좀 또는 리소좀에 존재하는 이펙터 모이어티에 대한 엔도좀/리소좀 탈출 증강 활성은, 글리코시드(사포닌)과 담체 분자, 즉, 선택적으로 본 발명의 링커 및/또는 스캐폴드를 포함하는 제1, 제4, 제6 단백질성 분자 사이의 결합의 상기 절단시 유지되거나 복원된다. 본 발명과 관련하여, 예를 들어 사포닌과 제1, 제4, 제6 단백질성 분자의 아미노산 잔기, 링커, (스캐폴드의) 폴리머 또는 올리고머 구조, 리간드, (모노클로날) 면역 글로불린 또는 이의 결합 도메인 또는 -단편, 및/또는 이펙터(이펙터 모이어티, 이펙터 분자) 사이의 결합에 대한 용어 "안정한"은, 그 결합이 쉽게 깨지지 않거나 적어도 예를 들어 pH 차이, 염 농도, 또는 UV-광, 환원성 조건에 의해 쉽게 깨지도록 설계되지 않음을 의미한다. 본 발명과 관련하여, 예를 들어 사포닌과 제1, 제4, 제6 단백질성 분자, 링커, 아미노산 잔기, 스캐폴드의 폴리머 또는 올리고머 구조, 리간드, 항체 및/또는 이펙터 사이의 결합과 관련하여 "절단 가능한"이란 용어는, 그 결합이 예를 들어, pH 차이, 염 농도, 환원성 조건 하 등에 의해 쉽게 깨지도록 설계됨을 의미한다. 당업자는 이러한 절단 가능한 결합 및 이를 제조하는 방법을 잘 알고 있다.
본 발명 이전에 ADC 및 AOC를 시장에 도입하는 것의 주요 장애물 중 하나는 작은 치료 윈도우였다: ADC 또는 AOC의 치료 유효 투여량은 ADC를 이용한 환자의 치료에 있어서 (수용할 수 없는) 부작용, 개발 및 영향의 방해를 수반한다. 본 발명의 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자의 적용에 의해, 본 발명에 따른 페이로드를 운반하는 ACD와 함께 또는 BNA와 같은 올리고뉴클레오티드와 접합된 (모노클로날) 항체와 함께 (즉, 본 발명의 특정한 제2 또는 제3 또는 제5 또는 제7 단백질성 분자)와 함께, 하나 또는 다수의 글리코시드 분자(사포닌)를 (표적) 세포로 안내하는 것이 이제 가능하게 되었다. 특히, 제2 또는 제3 또는 제5 또는 제7 단백질성 분자의 이펙터 모이어티 및 이펙터 모이어티 당 (미리 규정된, 제어 가능한) 특정 수 또는 범위의 글리코시드 분자(사포닌)를 세포, 예를 들어 세포의 엔도사이토시스 경로를 통해서와 같이 세포의 사이토솔로 동시에 특이적으로 안내하는 것이 이전에는 불가능하였다.
본 발명에 의해 제공되는 해결방안은 제1 또는 제4 또는 제6 단백질성 분자에 적어도 하나의 사포닌의 공유 결합을 포함한다. 본 발명에 의해 제공되는 추가의 해결방안은 (먼저) 올리고머 또는 폴리머 스캐폴드를 사용하여 글리코시드 분자(사포닌)를 중합하고, 공유 결합된 사포닌의 클러스터를 갖는 제1, 또는 제4 또는 제6 단백질성 분자를 제공하는 단계를 포함하며, 이는 사포닌의 작용 모드가 요망되는 세포내 부위에서, 예를 들어 엔도사이토시스 후에, 하나 이상의 사포닌의 재-모노머화(re-monomerization)를 가능하게 한다. 이러한 문맥에서 "폴리머화화(polymerizes)"는, 링커(linker)를 통해, 또는 직접적으로 또는 폴리머 또는 올리고머 구조를 통한 제1, 제4, 제6 단백질성 분자에 대한 사포닌 분자의 가역적 및/또는 비가역적 다중 접합(conjugation)으로 스캐폴드를 형성하거나, 또는 (변형된) 사포닌의 가역적 및/또는 비가역적 다중 접합에 의해 폴리머 또는 올리고머 구조를 형성하여 스캐폴드를 형성하는 것을 의미한다. 이러한 문맥에서, "재-모노머화"는. 예를 들어, 엔도사이토시스 후에, 제1, 제4, 제6 단백질성 분자로부터, 제1, 제4, 제6 단백질성 분자에 대해 사포닌(들)을 결합하는 링커로부터 또는 스캐폴드로부터, 사포닌의 절단, 및 결합되지 않은 사포닌의 (본래의) 화학적 상태를 다시 얻는 것을 의미하며, 이 결합되지 않은 사포닌은 부가적인 화학기, 예컨대 링커, 제1 단백질성 분자의 아미노산 잔기 또는 스캐폴드에 사포닌을 결합시키기 위한 화학기, 및/또는 알데히드기 또는 카르복실산기와 같은 사포닌의 화학기에 결합된 (화학적) 링커를 포함하거나 포함하지 않을 수 있다. 사포닌의 복잡한 화학으로 인하여, 예를 들어 스캐폴드 또는 다른 연결 링커에서 사포닌의 '폴리머화' 및 예를 들어, 엔도사이토시스 후에, 세포내와 같이 원하는 위치에서, 이들의 '재-모노머화'는 도전적인 작업이었다. 특히, 링커 및 예를 들어 트리테페노이드 사포닌과 같은 제1, 제4, 제6 단백질성 분자에 대한 공유 결합을 위한 공유 결합된 글리코시드를 포함하는 스캐폴드를 제공하기 위해 사용된 화학 반응(글리코시드의 중합)은 일반적으로 무수(water-free) 유기 용매에서 일어나지만, 사포닌 및 예를 들어 결합된 사포닌을 함유하기 위한 스캐폴드로서 적용된 생체적합성 폴리머는 수용성 분자이다. 개질되지 않은 사포닌의 화학적 특성은 그 자체로서 중합이 더욱 금지되었으며, 이펙터 분자에 (직접적으로) 복수의 사포닌을 결합시키기 위한, 다른 가능한 해결방안은, 이펙터 분자(약물, 독소, 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드)가 전형적으로 충분한 결합 부위를 제공하지 못하며, 그리고 커플링 생성물은 상당히 이질적이며 그리고/또는 사포닌과 같은 생물학적으로 활성인 분자 및 예를 들어 펩티드, 독소, 핵산을 함께 커플링하는 것은 이러한 사포닌-함유 접합체에 함께 결합된 분자의 하나 또는 심지어 둘 모두의 활성에 영향을 주고 방해할 위험을 갖기 때문에, 매우 유망하지 않을 것으로 추정되었다. 또한, 제2 또는 제3 또는 제5 또는 제7 단백질성 분자에 의해 포함된 이펙터 모이어티가, 예를 들어 ADC 또는 항체-올리고뉴클레오티드 접합체(AOC)에 대한 사포닌의 커플링 후에 이의 기능을 상실하는 상당한 위험이 있었다. 본 발명의 구현예는 이러한 결점 중 적어도 하나를 해결한다.
본 발명의 일 견지는 본 발명의 제1 또는 제4 또는 제6 단백질성 분자 및 본 발명의 제2, 제3, 제5 또는 제7 단백질성 분자를 포함하는 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 일 견지는 본 발명의 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자 및 본 발명의 제3 또는 제5 단백질성 분자를 포함하는 조성물에 관한 것이다.
일 구현예는 본 발명의 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자 및 본 발명의 제2, 또는 제7 단백질성 분자를 포함하는 조성물이거나, 또는 본 발명의 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자 및 본 발명의 제3 또는 제5 단백질성 분자를 포함하는 조성물이며, 여기서 제2, 제5 또는 제7 단백질성 분자에 의해 또는 제3 단백질성 분자에 의해 포함되는 이펙터 모이어티는 본 발명에 따른 이펙터 모이어티들 중 임의의 하나, 바람직하게는 BNA이다.
본 발명의 일 견지는 본 발명의 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자 및 올리고뉴클레오티드, 핵산 및 제노 핵산 중 임의의 하나 이상, 바람직하게는 벡터, 유전자, 세포 자살 유도 트랜스진, 데옥시리보핵산(DNA), 리보핵산(RNA), 안티센스 올리고뉴클레오티드(ASO, AON), 짧은 간섭 RNA(siRNA), 마이크로 RNA(miRNA), DNA 앱타머, RNA 앱타머, mRNA, 미니-서클 DNA, 펩티드 핵산(PNA), 포스포아미데이트 모르폴리노 올리고머(PMO), 잠금 핵산(locked nucleic acid, LNA)이다), 브리지 핵산(BNA), 2'-데옥시-2'-플루오로아라비노 핵산(FANA), 2'-0-메톡시에틸-RNA(MOE), 2'-O,4'-아미노에틸렌 브리지 핵산, 3'-플루오로 헥시톨 핵산(FHNA), 플라스미드, 글리콜 핵산(GNA) 및 트레오스(threose) 핵산(TNA), 또는 이의 유도체 중 적어도 하나로부터 선택된 것, 보다 바람직하게 BNA, 예를 들어 HSP27 단백질 발현을 침묵시키는 BNA(안티센스 BNA(HSP27))를 포함하는 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 문맥에서, 이펙터 분자, 또는 이펙터 모이어티는 세포내 이펙터 분자 표적과의 상호작용에 의해 세포의 대사에 영향을 미치는 임의의 물질이며, 여기서 이 이펙터 분자 표적은 엔도사이틱 및 재순환 경로의 구획 및 소포의 루멘을 제외한, 하지만 이들 구획 및 소포의 막을 포함하는 세포 내의 임의의 분자 또는 구조이다. 따라서, 세포 내의 상기 구조는 핵, 미토콘드리아, 클로로플라스트(chloroplasts), 소포체, 골지체, 다른 운반 소포(transport vesicles), 원형질막의 내부 부분 및 사이토솔(cytosol)을 포함한다. 본 발명의 문맥에서 이펙터 모이어티의 사이토솔 전달(cytosolic delivery)은 바람직하게는 이펙터 모이어티가, 엔도좀(및/또는 리소좀)을 탈출할 수 있고, 이는 이전에 규정된 바와 같이 엔도리소좀 및 리소좀의 탈출을 포함하며, 바람직하게는 본원에 기재된 바와 같이 이펙터 모이어티 표적에 도달할 수 있는 것을 의미한다. 본 발명은 또한, 이펙터 모이어티가 본 발명의 제2 또는 제3 또는 제5 또는 제7 단백질성 분자에 의해 포함되고, 사포닌이 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자에 의해 포함되는 경우에, 이펙터 모이어티 및 본 발명의 사포닌과 같은 적어도 하나의 글리코시드 분자 모두를 예정된 비율로 동시에 엔도좀으로 가져오는 것을 제공하는, 스캐폴드로 지칭되는 새로운 유형의 분자를 포함한다. 본 발명의 문맥에서, 스캐폴드의 폴리머 또는 올리고머 구조는 폴리머, 올리고머, 덴드리머, 덴드론화된 폴리머, 또는 덴드론화된 올리고머와 같은 구조적으로 정렬된 형태이거나, 또는 이는 하이드로젤, 마이크로겔, 나노겔, 안정화된 폴리머 마이셀 또는 리포솜과 같은 어셈블리된 폴리머 구조이지만, 콜레스테롤/인지질 혼합물과 같은 모노머의 비공유 어셈블리로 구성된 구조는 배제한다. 용어 "폴리머, 올리고머, 덴드리머, 덴드론화된 폴리머, 또는 덴드론화된 올리고머"는 이들의 일반적인 의미를 갖는다. 특히, 폴리머는 함께 결합된 다수의 동일하거나 유사한 유닛으로부터 주로 또는 완전하게 형성된 분자 구조를 갖는 물질이며, 올리고머는 분자가 비교적 적은 반복 단위로 구성되는 폴리머이다. 폴리머 및 올리고머 각각의 상기 정의에서 사용된 "다수(many)" 및 "몇몇(a few)"에 대한 하나의 특정 컷-오프(cut-off)에 대한 합의(consensus)는 없다. 그러나, 스캐폴드가 폴리머 또는 올리고머 구조, 또는 둘 모두를 포함할 수 있기 때문에, 함께 결합된 유사한 단위의 수의 전체 범위는 이러한 구조, 즉 2개의 모노머 단위 내지 100개의 모노머 단위, 1000개의 모노머 단위 및 보다 많은 모노머 단위에 적용된다. 예를 들어, 5개 이하를 포함하는 구조가 올리고머 구조라고 불릴 수 있는 반면, 50개의 모노머 단위를 포함하는 구조는 폴리머 구조라고 불릴 수 있다. 10개의 모노머 단위의 구조는 올리고머 또는 폴리머라고 불릴 수 있다. 본원에 정의된 스캐폴드는 본 발명의 사포닌과 같은 적어도 하나의 글리코시드 분자를 추가로 포함한다. 스캐폴드는 바람직하게는 폴리머 또는 올리고머 구조, 예컨데 폴리- 또는 올리고(아민), 예를 들어, 폴리에틸렌이민 및 폴리(아미도아민), 및 생체적합성 구조, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜, 폴리- 또는 올리고(에스테르), 예컨대 폴리(락티드), 폴리(락탐), 폴리락타이드-코-글리코라이드 코폴리머, 및 폴리(덱스트린), 폴리- 또는 올리고사카라이드, 예컨대 시클로덱스트린 또는 폴리덱스트로즈, 및 폴리- 또는 올리고아미노산, 예컨대 폴리-라이신 또는 펩티드 또는 단백질 또는 DNA 올리고- 또는 폴리머를 포함한다. 본원에 정의된 바와 같은 어셈블리된 폴리머 구조는 적어도 하나의 스캐폴드 및 선택적으로, 다른 개별 폴리머 또는 올리고머 구조를 포함한다. 상기 어셈블리의 다른 개별 폴리머 또는 올리고머 구조는 (a) 스캐폴드 (따라서 본 발명의 사포닌과 같은 적어도 하나의 글리코시드 분자를 포함함), (b) 작용화된 스캐폴드 (따라서 제1 단백질성 분자로서 사포닌과 같은 적어도 하나의 글리코시드 분자, 리간드, 항체 등을 포함), (c) 제1 단백질성 분자로서 리간드, 항체 등이 없는 본 발명의 사포닌과 같은 글리코시드 분자가 없는 폴리머 또는 올리고머 구조(예를 들어, 표 A1 참조)일 수 있다. 작용화된 어셈블리된 폴리머 구조는 (a) 적어도 하나의 작용화된 스캐폴드 또는 (b) 적어도 하나의 스캐폴드 및 제1 단백질성 분자로서 적어도 하나의 리간드, 항체 등을 포함하는 적어도 하나의 폴리머 구조를 함유하는 어셈블리된 폴리머 구조이다. 상기 언급된 분자 중 임의의 것을 포함하지 않는 어셈블리된 폴리머 구조 내의 폴리머 또는 올리고먼 구조(즉, 사포닌과 같은 글리코시드가 없는, 리간드, 항체와 같은 제1 단백질성 분자가 없는)는 특히 어셈블리된 구조의 구조적 성분으로서 추가되며, 이는 어셈블리된 구조("접착제-유사(glue-like))"를 형성하거나 안정화시키는데 도움을 준다. 임의의 이론으로 제한하고자 하는 것은 아니나, 산성 환경은 글리코시드(사포닌)와 이펙터 모이어티 사이의 상승 작용(synergistic action)을 위한 전제조건(prerequisite)인 것으로 보인다.
하나 이상의 (절단 가능한) 링커 및/또는 선택적으로 스캐폴드를 추가로 포함하거나 포함하지 않더라도, 사포닌을 포함하는 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자가 산성 환경을 방해할 수 있고, 적어도 하나의 글리코시드(사포닌)의 엔도좀 탈출 작용을 억제할 수 있는지 여부는 당업계에 공지된 어세이(assay)로 쉽게 결정될 수 있다. 억제(inhibition)는 "50% 세포 사멸을 유도하는데 필요한 글리코시드의 배량(fold amount) 증가"로서 기술된다. 스캐폴드(scaffold)는 적어도 양성 대조군으로서 클로로퀸(Chloroquine)을 사용할 경우 관찰되는 50% 세포 사멸을 얻는데 필요한 글리코시드 분자(사포닌)의 증가인 증가를 초래하지 않는 것이 바람직하다. 대안적으로, 그리고 바람직하게는, 하나 이상의 (절단 가능한) 링커 및/또는 선택적으로 스캐폴드를 추가로 포함하거나 포함하지 않는, 사포닌을 포함하는 제1, 제4, 제6 단백질성 분자는 50% 세포 사멸을 유도하는데 글리코시드 분자의 적어도 4배 증가를 초래하지 않으며, 보다 바람직하게 적어도 2배 증가를 초래하지 않는다. 배(fold) 증가는 양성 대조군으로서 클로로퀸이 글리코시드 양, 바람직하게는 사포닌 양의 2배 증가를 유도하며, 여기서 사포닌은 50% 세포 사멸을 관찰하기 위한 본 발명의 사포닌 중 임의의 하나 이상 (표 A1, 스킴 I, 이전 구현예 참조)인, 어세이로 측정되는 것이다.
"이펙터 모이어티의 효과의 개선 또는 향상"이란, 글리코시드 분자, 바람직하게는 본 발명의 사포닌이 이펙터 모이어티의 기능적 효능(예, 독소 또는 약물 또는 BNA와 같은 올리고뉴클레오티드의 치료 지수; 생명공학적 프로세스에서 개질제의 대사 효과; 세포 배양 연구 실험에서 유전자의 트랜스펙션(transfection) 효능)을, 바람직하게는 이의 표적 체결(engagement)를 가능하게 하거나 향상시킴으로써, 증가시키는 것을 의미한다. 항원-특이적 면역 반응의 촉진, 연장, 또는 증가는 바람직하게는 포함되지 않는다. 치료 효능은 바람직하게는 더 낮은 투여량 및/또는 더 적은 부작용(side effects)으로 더 강한 치료 효과를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. "이펙터 모이어티의 효과 개선"은 또한 효과의 부족으로 사용될 수 없었던 (그리고 예를 들어, 이펙터 모이어티로 알려지지 않았던) 이펙터 모이어티가 본 발명과 결합하여 사용될 경우에 효과적이게 되는 것을 의미할 수 있다. 본 발명에 의해 제공되는 바와 같이, 이펙터 모이어티와 제2 또는 제3 단백질성 분자의 조합에 기인할 수 있는 유익하거나 요구되는, 임의의 다른 효과는 "개선된 효과"인 것으로 여겨진다. 일 구현예에서, 결합된 사포닌(들)을 포함하며 그리고 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자에 의해 포함되는 스캐폴드는, 의도된 및/또는 원하는 효과인, 제2, 제3, 제5 또는 제7 단백질성 분자에 의해 포함된 이펙터 모이어티의 효과를 향상시킨다. 단백질성 스캐폴드에 결합된 사포닌을 포함하는 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자에서, 이러한 스캐폴드의 단백질성 폴리머 구조는, 예를 들어 혈류 내 콜로이드 삼투압에 대한 영향을 가질 수 있다. 이러한 효과가 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자에 의해 포함되는 이러한 작용화된 스캐폴드의 의도된 또는 원하는 효과가 아니면, 스캐폴드의 단백질성 구조는 본 발명에 정의된 바와 같은 이펙터 모이어티가 아니다. 또는, 예를 들어, 결합된 사포닌을 가지며 제1 단백질성 분자에 의해 포함되는 DNA- 또는 RNA-기반 스캐폴드의 경우, 그 DNA 또는 RNA의 일부는 예를 들어 발현을 간섭함으로써 (의도되지 않은) 기능을 가질 수 있다. 이러한 간섭이 궁극적인 작용화된 스캐폴드의 의도된 또는 원하는 효과가 아니면, 스캐폴드의 DNA- 또는 RNA 폴리머 구조는 본 발명에 정의된 바와 같은 이펙터 모이어티가 아니다.
제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자, 즉 글리코시드 또는 사포닌, 바람직하게는 본 발명에 따른 사포닌에 의해 포함된 엔도좀 탈출 인핸서(endosomal escape enhancer)에 대한 다수의 바람직한 특징이 공식화될 수 있다: (1) 이들은 바람직하게는 독성이 아니고 면역 반응을 유발하지 않으며, (2) 이들은 바람직하게는 표적-외 세포로의 이펙터 모이어티의 사이토솔 흡수를 매개하지 않으며, (3) 작용의 부위에서 이들의 존재는 바람직하게는 이펙터 모이어티의 존재와 동기화되며, (4) 이들은 바람직하게는 생분해성 또는 배설 가능하며, (5) 이들은 바람직하게는 엔도좀 탈출 인핸서(endosomal escape enhancer)가 예를 들어 호르몬과의 상호작용으로 결합된 이펙터 분자의 생물학적 활성과 관련되지 않은 유기체의 생물학적 프로세스를 실질적으로 억제하지 않는다. 상기한 기준을 충족하는 본 발명의 사포닌과 같은 글리코시드 분자의 예는, 적어도 어느 정도로, 비스데스모시딕 트리테르펜, 바람직하게는 비스데스모시딕 트리테르펜 사포닌, 예컨대 SO1861, SA1641, QS-21, GE1741 및 표 A1, 스킴 I의 사포닌이다.
본 발명의 일 견지는 본 발명의 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자 및 이펙터 모이어티를 포함하는 항체-약물 접합체 또는 항체-올리고뉴클레오티드 접합체 또는 리간드-약물 접합체에 관한 것이다.
상기한 바와 같이, 본 발명에 따른 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자에 의해 포함된 적어도 하나의 사포닌은 본 발명에 정의된 바와 같이 적어도 현재의 그리고 새로운 이펙터 모이어티의 효능을 증가시킨다. 효능의 저하없이, 제2 또는 제3 또는 제5 또는 제7 단백질성 분자에 의해 포함된 이펙터 모이어티의 투여량의 감소로 인해 잠재적인 부작용(potential side-effects)이 감소될 것이다. 따라서, 본 발명은 약제에 사용되거나 의약으로서 사용하기 위한 본 발명에 따른 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자를 제공한다. 따라서, 본 발명의 일 견지는 의약으로서 사용하기 위한 본 발명에 따른 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자에 관한 것으로, 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자는 적어도 사포닌을 포함한다. 또한, 본 발명에 따른 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자의 의약 제조를 위한 용도가 제공된다. 특히, 암 약제, 그리고 특히 고전적 화학요법 의약은 이들의 부작용으로 악명이 높다. 제2 또는 제3 또는 제5 또는 제7 단백질성 분자에 의해 포함된 약학적으로 활성인 물질 및 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자에 의해 포함된 사포닌 모두의 표적화 및 시간 및 위치에서의 동기화(synchronization) 때문에, 제1 및 제3 및/또는 제4 및 제5 단백질성 분자는 동일한 세포-표면 분자 상의 동일한 에피토프에 대한 동일한 결합 부위를 갖거나, 또는 제1 및 제2, 또는 제6 및 제7 단백질성 분자는 각각 제1 및 제2, 또는 제6 및 제7 세포-표면 분자 상의 상이한 제1 및 제2, 또는 제6 및 제7 에피토프에 대한 상이한 결합 부위를 가지므로, 본 발명에 따른 치료 조합은 특히 의약으로서, 특히 암 치료 방법에 사용하기에 가치가 있다. 따라서, 본 발명은 암을 치료하는 방법에 사용하기 위한 본 발명에 따른 치료 조합 또는 본 발명의 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자를 제공한다. 또한, 본 발명은 후천적 또는 유전적 장애, 특히 단발성 결핍증 장애(monogenic deficiency disorder)을 치료하는 방법에 사용하기 위한, 본 발명에 따른 치료적 조합 또는 본 발명의 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자를 제공한다. 따라서, 상기 치료 조합은 제1 및 제2 단백질성 분자를 포함하고 및/또는 제1 및 제3 단백질성 분자 및/또는 제4 및 제5 단백질성 분자 및/또는 제6 및 제7 단백질성 분자를 포함한다. 따라서, 본 발명의 일 견지는 본 발명에 따른 치료 조합에 관한 것이며, 여기서 제2 또는 제3 또는 제5 또는 제7 단백질성 분자는 암 또는 자가-면역 질환의 치료 방법에 사용하기 위한 공유 결합된 이펙터 모이어티를 포함한다.
의약에서 본 발명의 제1, 제2 및 제3, 제4, 제5, 제6, 제7 단백질성 분자의 추가적인 적용은, 불충분한 양 또는 불충분한 기능으로 세포내 효소를 생산하는 표적 세포에서의 세포내 효소의 대체이다. 이에 따른 질환은 유전성(hereditary)이거나 후천적일 수 있다. 대부분의 경우, 단지 증상적인 치료만이 가능하고, 많은 희귀 질환에 대해, 불충분한 치료 옵션은 관련 환자의 수명 단축을 초래한다. 이러한 질환에 대한 예는 페닐케톤뇨증(phenylketonuria)이며, 이는 선천성 대사 오류로 아미노산 페닐알라닌의 대사 감소를 초래한다. 이 질환은 간 효소 페닐알라닌 히드록시라아제의 유전자의 돌연변이가 특징이다. 페닐케톤뇨증은 현재까지 치료 불가능하다. 그 발병률은 약 1:10,000으로, 알려진 가장 높은 발명률은 터키에서 1:2,600이다. 결합된 페닐알라닌 히드록시라제를 갖거나 페닐알라닌 히드록시라제를 인코딩하는 결합된 폴리뉴클레오티드를 갖는, 제2 또는 제3 또는 제5 또는 제7 단백질성 분자, 바람직하게는 항체가 적합한 특이적 항체를 사용하여 간세포를 표적하는데 사용될 수 있고, 간세포에서 결함 효소를 대체하는데 사용될 수 있다. 이는 사포닌이 결합된 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자 및 본 발명에 따른 효소 또는 올리고뉴클레오티드가 결합된 제2 또는 제3 또는 제5 또는 제7 단백질성 분자를 포함하는 본 발명의 치료 조합을 대체(substitution) 또는 유전자 치료에 사용하는 일 예이다. 바람직한 일 구현예에서, 유전자 치료 또는 대체 치료의 방법에 사용하기 위한 본 발명에 따른 치료 조합이 제공된다.
본 발명은 또한, 본 발명에 따른 치료 조합을 포함하는 의약을, 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 바람직하게는, 이를 필요로 하는 환자, 바람직하게는 인간 암 환자에게 상기 의약의 유효 투여량을 투여하는 것을 포함하는, 암을 치료하는 방법을 제공한다.
투여에 적합한 형태에 관한 고려 사항은 당업계에 공지되어 있으며, 독성 효과, 용해도, 투여 경로, 및 유지 활성을 포함한다. 예를 들어, 혈류 내로 주입되는 약학적 조성물은 가용성이어야 한다.
적합한 투여 형태는, 예를 들어 경피 또는 주사에 의한 진입 경로 또는 용도에 따라 일부 달라진다. 이러한 투여 형태는 표적 세포가 다세포 숙주에 존재하는지 여부에 따라 화합물이 표적 세포에 도달하도록 해야 한다. 다른 인자는 당업계에 공지되어 있으며, 화합물 또는 조성물을 이의 효과를 발휘하는 것을 지연시키는 독성 및 투여 형태와 같은 고려 사항을 포함한다.
일 구현예는 적어도 하나의 공유 결합된 사포닌을 포함하는 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자를 포함하는 본 발명에 따른 엔도좀 탈출 향상 접합체와, 결합 모이어티의 조합으로서, 여기서 결합 모이어티는 적어도 하나의 이펙터 모이어티를 포함하고, 결합 모이어티는 결합된 이펙터 모이어티를 포함하는 제2 또는 제3 또는 제5 또는 제7 단백질성 분자이고, 여기서 엔도좀 탈출 향상 접합체 및 결합 모이어티는 서로 독립적으로 표적 세포-특이적 표면 분자 또는 구조에 특이적으로 결합할 수 있으며, 이에 따라, 엔도좀 탈출 향상 접합체와 표적 세포-특이적 표면 분자의 복합체, 및 결합 모이어티와 표적 세포-특이적 표면 분자의 복합체의 수용체-매개 엔도사이토시스를 유도하며, 여기서 엔도좀 탈출 향상 접합체 및 결합 모이어티는 이들의 동일한 결합 부위를 통해 동일한 표적 세포-특이적 표면 분자에 결합할 수 있거나, 또는 여기서 엔도좀 탈출 향상 접합체 및 결합 모이어티는 이들의 결합 부위를 통해 상이한 표적 세포-특이적 표면 분자에 결합할 수 있다. 일 구현예는 본 발명에 따른 조합으로서, 여기서 엔도좀 탈출 향상 접합체는 표적 세포-특이적 표면 분자 또는 구조에 결합하기 위한 결합 모이어티와 경합할 수 있다. 일 구현예는 본 발명에 따른 조합으로서, 여기서 엔도좀 탈출 향상 접합체 및 결합 모이어티는 서로 독립적으로 동일한 에피토프에, 또는 상이한 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있다. 일 구현예는 암과 같은 비정상을 치료하기 위한 방법에서 사용하기 위한 본 발명에 따른 조합으로서, 여기서 상기 엔도좀 탈출 향상 접합체 및 상기 결합 모이어티는 동시에 또는 순차적으로, 바람직하게는 동시에 투여된다.
본 발명의 일 견지는 본 발명에 따른 엔도좀 탈출 향상 접합체(즉, 제1, 제4 또는 제6 단백질성 분자)를 함유하는 제1 용기 및 본 발명에 따른 결합 모이어티(즉, 제2 및/또는 제3 및/또는 제5 및/또는 제7 단백질성 분자)를 함유하는 제2 용기를 포함하는 키트에 관한 것이며, 상기 키트는 결합 분자(즉, 제1 및 제2 또는 제1 및 제3 또는 제4 및 제5 또는 제6 및 제7 약학적 조성물을 포함하는 치료 조합)를 사용하기 위한 설명서를 추가로 포함한다.
본 발명의 일부로서, 본 발명의 치료 조합, 제1 약학적 조성물, 제1 단백질성 분자, 제2 또는 제3 약학적 조성물 또는 제2 또는 제3 단백질성 분자는 결합 분자 또는 결합 모이어티 및 사포닌의 공유 접합체(복합체)와 추가로 조합되거나, 또는 약학적 화합물, 항체 등과 추가적으로 조합되어, 사포닌에 결합되거나 결합되지 않은, 그리고 리간드, 예컨대 표적 면역 글로불린, 이의 도메인 또는 단편에 결합되거나 결합되지 않은, 약제와 추가로 조합된, 이펙터 분자와 복합체화된 결합 모이어티와 조합된, 3개 이상의 인핸서, 약학적으로 활성인 성분 등, 예를 들어 본 발명의 접합체(예, 제1 단백질성 분자 및/또는 제2 또는 제3 단백질성 분자)를 포함하는 조성물을 제공한다. 또한, 일 구현은 본 발명의 치료 조합, 제1 약학적 조성물, 제1 단백질성 분자, 제2 또는 제3 약학적 조성물 또는 제2 또는 제3 단백질성 분자이며, 여기서 제2 또는 제3 단백질성 분자에는 2개 이상의 이펙터 모이어티, 예컨대 독소 또는 면역독소가 제공되며, 여기서 2개 이상의 이펙터 모이어티는 동일하거나 상이하다.
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본 발명의 일 견지는 함께 공유적으로 연결된(linked) 항체 및 안티센스 올리고뉴클레오티드 예컨대 안티센스 BNA를 포함하거나 이로 구성된 접합체에 관한 것이다. 도 1-5에, 이러한 접합체의 유전자-침묵 활성(gene-silencing activity)이 도시된다(동물 종양 모델에서 생체 내 테스트). 실시예 섹션도 참조된다.
본 발명의 일 견지는 함께 공유적으로 연결된, 항체 및 안티센스 올리고뉴클레오티드, 예컨대 안티센스 BNA를 포함하거나 이로 구성되는 접합체를 포함하는 제 1 조성물, 및 본 발명의 유리 사포닌을 포함하는 제 2 조성물의 조합에 관한 것이다 (표 A1, 및 스킴 I 참조). 도 1-7A 및 도 1-7C에, 이러한 접합체의 유전자-침묵 활성이 도시된다(인간 종양 세포를 사용한 시험관 내 세포-기반 바이오어세이(bioassay). 실시예 섹션도 참조된다.
본 발명의 일 견지는 항체 및 안티센스 올리고뉴클레오티드, 예컨대 안티센스 BNA를 포함하거나 이로 구성되는 제 1 접합체를 포함하는 제 1 조성물, 및 동일한 항체 및 본 발명의 적어도 하나의 사포닌을 포함하거나 이로 구성되는 제 1 접합체를 포함하는 제 2 조성물을 포함하는 약학적 조합에 관한 것이다. 도 1-5에, 이러한 접합체의 유전자-침묵 활성이 도시된다(동물 종양 모델에서 생체 내 테스트). 도 8-5에, 이러한 접합체의 유전자-침묵 활성이 도시된다(인간 종양 세포를 사용한 시험관 내 세포 기반 바이오어세이). 실시예 섹션도 참조된다.
본 발명의 일 견지는 항체 및 안티센스 올리고뉴클레오티드, 예컨대 안티센스 BNA를 포함하거나 이로 구성되는 제 4 접합체를 포함하는 제 4 조성물, 및 다른 항체 및 본 발명의 적어도 하나의 사포닌을 포함하거나 이로 구성되는 제 1 접합체를 포함하는 제 5 조성물을 포함하거나 이로 구성되는 약학적 조합에 관한 것이다. 도 10-6A 및 도 10-6C에 이러한 접합체의 유전자-침묵 활성이 도시된다(인간 종양 세포를 사용한 시험관 내 세포 기반 바이오어세이). 실시예 섹션도 참조된다.
본 발명의 일 견지는 본 발명의 적어도 하나의 사포닌에 공유 결합된 안티센스 올리고뉴클레오티드, 예컨대 안티센스 BNA를 포함하거나 이로 구성되는 접합체에 관한 것이다. 도 1-3에, 이러한 접합체의 유전자-침묵 활성이 도시된다(인간 종양 세포를 사용한 시험관 내 세포-기반 바이오어세이). 실시예 섹션도 참조된다.
본 발명의 일 견지는 폴리머 스캐폴드, 예컨대 G4-덴드론과 같은 덴드론에 공유 결합된, 안티센스 올리고뉴클레오티드, 예컨대 안티센스 BNA를 포함하거나 이로 구성되는 접합체에 관한 것이며, 여기서 폴리머 스캐폴드는 본 발명의 하나 이상의 사포닌 분자, 예컨대 4개의 사포닌 분자와 같은 공유 접합(covalently conjugated)된다. 도 1-3에, 이러한 접합체의 유전자-침묵 활성이 도시된다 (인간 종양 세포를 사용한 시험관 내 세포-기반 바이오어세이). 실시예 섹션도 참조된다.
본 발명의 일 견지는 적어도 하나의 안티센스 올리고뉴클레오티드 분자, 예컨대 안티센스 BNA에 공유 연결되고, 본 발명의 적어도 하나의 사폰닌 분자에 공유 연결(covalently linked)되고, 종양 마커 또는 종양-세포 수용체에 대한 특이성을 갖는 항체, 예컨대 모노클로날 항체를 포함하거나 이로 구성되는 집합체에 관한 것이다. 도 2-4에, 이러한 접합체의 유전자-침묵 활성이 도시된다 (동물 종양 모델에서 생체 내 테스트). 실시예 섹션도 참조된다.
본 발명의 일 견지는 3-관능성 링커, 예컨대 스킴 II의 링커를 통해 적어도 하나의 안티센스 올리고뉴클레오티드 분자, 예컨대 안티센스 BNA에 공유 연결되고, 동일한 3-관능성 링커를 경유하여 본 발명의 적어도 하나의 사폰닌 분자에 공유 연결되고, 종양 마커 또는 종양-세포 수용체에 대한 특이성을 갖는 항체, 예컨대 모노클로날 항체를 포함하거나 이로 구성되는 집합체에 관한 것이다. 도 1-1에, 이러한 접합체의 유전자-침묵 활성이 도시된다 (동물 종양 모델에서 생체 내 테스트). 실시예 섹션도 참조된다.
본 발명의 일 견지는 바람직하게는 적어도 하나의 링커, 바람직하게는 생리적으로 산성 조건하에서 절단될 수 있는, 적어도 하나의 절단 가능한 링커(cleavable linker)를 통해 본 발명의 적어도 하나의 사폰닌 분자에 공유 연결되고, 종양 마커 또는 종양-세포 수용체에 대한 특이성을 갖는 항체, 예컨대 모노클로날 항체를 포함하거나 이로 구성되는 집합체를 포함하는 제 8 조성물로 구성되거나 이를 포함하며, 추가로 안티센스 올리고뉴클레오티드, 예컨대 안티센스 BNA 분자를 포함하는 제 9 조성물을 포함하는 치료 조합에 관한 것이다. 도 6-2에, 이러한 접합체의 유전자-침묵 활성이 도시된다 (동물 종양 모델에서 생체 내 테스트). 도 5-2A 및 도 5-2C에, 이러한 접합체의 유전자-침묵 활성이 도시된다 (인간 종양 세포를 사용한 시험관 내 세포-기반 바이오어세이). 실시예 섹션도 참조된다.
본 발명의 일 견지는 의약으로서 사용하기 위한 임의의 상기한 접합체 또는 조성물 또는 치료 조합에 관한 것이다.
본 발명의 일 견지는 암의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 임의의 상기한 접합체 또는 조성물 또는 치료 조합에 관한 것이다.
물론, 상기한 바와 같이, 임의의 및 모든 a, b, c, d, e, f, g, h, I, j, k, m, n, p, q, r, s, t, u, v, w 및/또는 x는 본 발명에 따른 임의의 및 모든 상기한 일 견지 및 구현예에 대해 본 발명의 각각의 개별적인 견지 및 구현예에 따른 값을 갖는다. 또한, (3작용성) 링커 L1, L2, L4, L5, L6, L8, L9 및/또는 L10은, 본 발명의 분자 또는 접합체 또는 모이어티에 존재하는 경우, 당업자에 의해 용이하게 이해되는 바와 같이, 본 발명의 각각의 임의의 상기한 일 견지 및 구현예에 대하여 나타낸 바와 같은 (3작용성) 링커이다. 본 발명의 분자 또는 접합체 또는 모이어티에 존재하는 경우, 올리고머 또는 폴리머 스캐폴드 L3 및/또는 L7은 당업자에 의해 용이하게 이해되는 바와 같이, 본 발명의 각각의 임의의 상기한 일 견지 및 구현예에 대하여 나타낸 바와 같은 올리고머 또는 폴리머 스캐폴드이다. 또한, 제 1 리간드 A1 및 제 1 이펙터 모이어티 B1(존재하는 경우), 그리고 제 2 리간드 A2 및 제 2 이펙터 모이어티 B2 (존재하는 경우), 및 제 1 이펙터 모이어티 A1 및 제 1 리간드 B1 (존재하는 경우), 및 제 2 이펙터 모이어티 A2 및 제 2 리간드 B2 (존재하는 경우)는 상기에 개략적으로 나타낸, 본 발명의 제1, 제2, 제3, 제4, 제5 및 제6 일련의 구현예 및 견지, 그리고 본 발명의 모든 추가 구현예 및 견지에 개시된 바와 같이, 선택되고 나타낸 리간드 및 이펙터 모이어티이다. 사포닌 C는 본 발명의 임의의 전술 일 견지 및 구현예에 언급되고 열거된 임의의 하나 이상의 사포닌, 특히 스킴 I 및/또는 표 A1로부터 선택된 하나 이상의 사포닌이다.
본 발명은 어떤 방식으로든 본 발명을 제한하는 것으로 해석되어서는 안되는 하기 실시예에 의해 추가로 예시된다.
실시예
실시예 A - ADC와 조합된 본 발명의 접합체를 이용한 포유류 종양-함유 동물(MAMMALIAN TUMOR-BEARING ANIMAL) 치료는 생존 및 종양 퇴화를 일으킨다.
암컷 Balb/c 누드 마우스에 인간 A431 종양 세포의 현탁액을 피하 주사하였다. 마우스의 피부 아래에, 이종이식 동물 종양 모델에서 인간 표피암종(epidermal carcinoma)이 발달되었다. 종양 세포의 주입 후, 이종이식 종양이 약 170-180 ㎣의 크기로 발달되도록 하였다. A431 종양 세포는 다음과 같은 특징을 갖는다: 높은 EGFR 발현자, 중간 CD71 발현자, 낮은 HER2 발현자.
표 A에, 대조군 마우스 및 종양-함유 마우스의 치료의 결과가 제시된다. 종양-함유 마우스는 이종이식 종양 상의 세포-표면 수용체인 인간 Her2/neu, 인간 EGFR 또는 인간 CD71에 대한 지시된 항체로 처리되었다. 세툭시맙은 사포닌 S01861과 공유 결합되었다. S01861에 링커 EMCH(N-ε-말레이미도카프로산 히드라지드)가 처음 제공되며, 이 EMCH는 카보닐(알데히드 또는 케톤; 여기서 사포닌의 위치 C-23에서 알데히드의 카보닐)에 대한 설프히드릴(항체의 환원된 시스테인)을 공유 결합하기 위한 말레이미드-및-히드라지드(maleimide-and-hydrazide) 가교제이다. 사포닌-EMCH는 세툭시맙의 환원된 시스테인에 공유 결합되어 EMCH와 시스테인 측쇄 사이에 공유 티오-에테르 결합을 형성하였다. ADC 트라스투주맙-사포닌(공유 접합체) 및 안티-CD71 mAb(OKT-9, IgG)-사포닌(공유 접합체)를 마우스에서 이들의 종유-공격 효능에 대해 테스트하였으며, ADC를 이용한 치료의 시작 후 시간에 따른 종양 부피로 측정되었다. ADC의 투여량은 종양 모델에서 부-최적(sub-optimal)이었다. 즉, 이전의 실험으로부터, 종양-퇴화 또는 종양 성장의 저지가 관찰될 수 없었던 ADC의 부-최적 투여량에서 확립되었다.
Figure pct00034
이러한 결과는 ADC 단독으로 종양-함유 마우스의 치료가 고려된 경우에 비효과적인 (종양 성장, 마우스의 사망이 방지되지 않음 (안락사)) 투여량에서 ADC와, 사포닌, 즉 SO1861에 공유 결합된 항체를 표적하는 종양-세포 특이적 수용체로 구성된 본 발명의 접합체의 조합 치료가, 단독으로 투여될 경우에 비효과적인(종양 성장, 마우스의 사망이 방지되지 않음(안락사)) 투여량으로 암으로 고통받는 마우스에 투여된 공유 접합체가 처리된 동물의 종양 퇴화 및 생존 연장(실험의 기간을 초과하여)으로 표현되는 효율적이고 효과적인 치료 요법을 제공한다는 것을 입증한다. 단독으로 투여될 경우 항-종양 활성을 갖지 않는 본 발명의 공유 결합된 사포닌-포함 접합체와 조합된 ADC의 부-최적 투여량은, 이에 따라 암 환자에 대한 효과적인 치료 옵션을 제공하며, 여기서 ADC의 상대적인 낮은 투여량이 효과적이다. ADC의 투여량이 낮을 수록 부작용 위험이 적거나, 부작용이 전혀 없다. 또한, ADC의 효능이 고려될 때, 본 발명의 사포닌-함유 접합체의 촉진 효과(stimulatory effect)는, ADC 효능이 현재의 예가 입증된 바와 같이, 조합 요법 설정에서 개선되므로, 종양 환자 치료가 관련된 경우 종래 효능이 부족한 것으로 이전에 입증된 ADC가 새로운 관심과 가치를 얻을 수 있음을 보여준다. 이전에 인간 임상 설정에서 조사되었지만, 이후 추가의 임상 조사에서 철회된 일부 ADC에 대한 ADC를 요약한 표 A2 및 표 A3이 참조된다. 특히, 관찰된 효능 부족으로 인해 및/또는 허용 불가능한 유해 사례 발생으로 인해 임상개발이 종료된 ADC는, 시험된 세툭시맙-사포닌과 같이 본 발명의 공유 결합된 사포닌-포함 접합체와 조합될 경우, 암 환자에 새로운 가치를 얻을 수 있는 ADC이다.
실시예 B - 엔도좀/리소좀 탈출 증가 활성을 갖는 QS-21을 포함하는 퀼라자 사포나리아(Quillaja saporia)의 사포닌 혼합물
스킴 I은 일련의 QS-21 사포닌의 공통 분자 구조를 나타낸다(부분적으로 다음 문헌에서 수정됨: Conrado Pedebos, Laercio Pol-Fachin, Ramon Pons, Cilaine V. Teixeira Hugo Verli, Atomic Model and Micelle Dynamics of QS-21 Saponin, Molecules 2014, 19, 3744-3760). 퀼라자 사포나리아로부터 얻어진 수용성 사포닌의 혼합물(Sigma-Aldrich, product No. S4521; Roth, Item No. 6857; InvivoGen, product 'Quil-A')이, 예를 들어, QS-21과 같은 혼합물에 존재하는 적어도 하나의 개별 사포닌의 엔도좀/리소좀 탈출 향상 특성에 기초하여, 또는 QS-21 및 QS-7과 같은 혼합물에 의해 포함된 둘 이상의 사포닌들의 조합에 기초하여, 본 발명의 엔도좀/리소좀 탈출 향상 접합체, 조성물, 조합에 적용될 수 있다.
본 발명자는 2.5 마이크로그램/ml 투여량의 퀼라자 사포나리아로부터의 사포닌 혼합물이, 세포-기반 바이오어세이에서 포유류 종양 세포로 테스트된 바와 같이, 디안틴의 엔도좀 탈출을 향상시킬 수 있음을 입증하였다. 세포에 노출된 이펙터 모이어티는 리간드 EGF:EGF-디안틴에 공유 결합된 디안틴이었다. 시험된 세포는 유리 사포닌에 대해서는 종양 세포주 HeLa이었으며, 그리고 세툭시맙에 공유 결합된 경우의 사포닌을 테스트하기 위해서는 A431, MDA-MB-468, CaSki 및 A2058이었다.
실시예 1
3 작용성 링커 스캐폴드는 한쪽 팔에는 SO1861 분자가 있고 다른 쪽 팔에는 안티센스 HSP27BNA 올리고뉴클레오티드를 갖는 접합체(불안정, (L) 접합)에 대한 특정한 화학적 말단기(DBCO, TCO)를 갖도록 설계 및 생산되어(암 세포에서 종량-표적(onco-target) hsp27 mRNA의 분해 유도 및 표적화) SO1861-L-3작용성 링커-L-HSP27BNA를 생성한다(도 16-1). SO1861-L-3작용성 링커-L-HSP27BNA는 시스테인 잔기(Cys) 항-EGFR 항체인 세툭시맙(세툭시맙-Cys-(SO1861-L-3작용성 링커-L-HSP27BNA)4)에 세 번째 팔(말레이미드)과 접합되었다.
접합체를 포함하는 이 스캐폴드는 EGFR-매개 종양 표적화된 유전자 침묵 활성에 대해 A431 xenograph '누드' 마우스 종양 모델에서 테스트되었다. 종양 크기가 ~170mm3에 도달한 12일째에 투여를 시작하고 첫 번째 투여 후 72시간에 종양 샘플을 수집하고 세포 대조군 mRNA 발현(레퍼런스 유전자)과 비교하여 HSP27 유전자 발현에 대해 분석했다. 이는 25mg/kg 세툭시맙-Cys-(SO1861-L-3작용성 링커-L-HSP27BNA)3,7의 1회 투여가 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,8 또는 세툭시맙-(Lys-L-HSP27BNA)4 단일 요법의 단일 투여에 비하여 종양에서 HSP27 유전자 발현을 40% 감소하는 결과를 나타내었다 (도 1-1). 비히클 대조군 종양과 비교하여 25% 유전자 침묵의 감소가 관찰되었다. 이는 접합된 SO1861이 생체 내에서 종양에서 치료용 올리고뉴클레오티드의 표적된 전달을 효율적으로 유도할 수 있음을 보여주고 가능하게 한다.
이를 더욱 강화하기 위해, 세툭시맙-Cys-(SO1861-L-3작용성 링커-L-HSP27BNA DAR4)4를 도 2-1에 도시된 바과 같이 시험관 내에서, EGFR 발현(A431)에서 향상된 HSP27 유전자 침묵에 대해 테스트했다. 세툭시맙-Cys-(SO1861-L-3작용성 링커-L-HSP27BNA)3,7은 세툭시맙-(Lys-L-HSP27BNA)4 또는 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,8 단독에 비하여 A431 세포에서 HSP27 유전자 침묵을 효과적으로 유도(IC50=...)한다 (도 2-1).
실시예 2
1 표적 2 성분 시스템은 도 11-1에 도시된 바와 같이 mAb1-(덴드론(SO1861)n)n과 mAb1-이펙터의 조합 처리인 반면, 2 표적 2 성분계는 도 12-1에 도시된 바와 같이 mAb1-(덴드론(SO1861)n)n + mAb2-이펙터의 조합이다.
덴드론(-L-SO1861)4는 DAR3,9로 시스테인 잔기(Cys) 접합을 통해 항-EGFR 항체인 세툭시맙에 접합되어 세툭시맙-Cys-(덴드론(-L-SO1861)4)3,9를 형성하였으며, EGFR 발현 세포(MDA-MB-468)에서 항-EGFR 항체-단백질 독소 접합체(세툭시맙-사포린)와 조합하여 향상된 세포 사멸 활성에 대하여 테스트되었다. 세툭시맙-Cys-(덴드론(-L-SO1861)4)3,9 + 10 pM 세툭시맙-사포린은 높은 EGFR 발현 세포에서 독소-매개 세포 사멸을 효율적으로 유도하지만(IC50=…), 이는 세툭시맙-Cys-(덴드론(-L-SO1861)4)3,9 또는 세툭시맙(등가) + 10pM 세툭시맙-사포린 또는 세툭시맙에 의해서 유도되지 않았다 (도 3-1A). 낮은 수준의 EGFR(HeLa)을 발현하는 세포에서의 유사한 실험은 세툭시맙-Cys-(덴드론(-L-SO1861)4)3,9의 활성이 없음을 나타내었으며(도 3-1C), 이는 충분한 EGFR 수용체 발현이 없는 경우에, 효과적인 세포내 SO1861 농도는 엔도좀 단백질 독소 탈출 및 독소-매개 세포 사멸을 유도하는데 (역치에) 도달하지 않음을 나타낸다.
다음으로, 덴드론(-L-SO1861)4를 DAR4로 시스테인 접합(Cys)을 통해 항-HER2 항체인 트라스투주맙에 접합하여 트라스투주맙-Cys-(덴드론(-L-SO1861)4)4를 형성하였으며, HER2 발현 세포(SK-BR-3)에서 항-HER2 항체-단백질 독소 접합체(트라스투주맙-사포린)와 조합하여 향상된 세포 사멸 활성에 대하여 테스트하였으며, 트라스투주맙-Cys-(덴드론(-L-SO1861)4)4 + 50 pM 트라스투주맙-사포린은 독소-매개 세포 사멸을 효율적으로 유도하지만(IC50=…), 이는 트라스투주맙-Cys-(덴드론(-L-SO1861)4)4 또는 트라스투주맙(등가) + 50nM 트라스투주맙-사포린 또는 트라스투주맙에 의해 유도되지 않았다 (도 3-1B). 낮은 수준의 HER2(JIMT-1)를 발현하는 세포에서의 유사한 실험은 트라스투주맙-Cys-(덴드론(-L-SO1861)4)4의 활성이 없음을 나타내었으며, 이는 충분한 HER2 수용체 발현이 없는 경우, 효과적인 세포내 SO1861 농도는 엔도좀 단백질 독소 탈출 및 독소 매개 세포 사멸을 유도하는데 (역치에) 도달하지 않음을 나타낸다.
다음으로, 세툭시맙-Cys-(덴드론(-L-SO1861)4)3,9 또는 세툭시맙-Lys-(덴드론(-L-SO1861)4)4,4(항체의 라이신에 접합된 Lys=덴드론(-L-SO1861)4)는 EGFR++/CD71+ 세포(MDA-MB-468)에서 2 표적 2 성분 시스템에서 10pM CD71mab-사포린과 조합하여 테스트되었다. 이는 두 접합체 모두에 대해 세포 사멸 활성(각각 IC50=.. IC50=..)의 강력한 향상을 보여주었지만, 이는 세툭시맙-Cys-(덴드론(-L-SO1861)4)3,9 또는 세툭시맙-Lys-(덴드론(-L-SO1861)4)4,4 또는 세툭시맙(등가(equivalent)) + 10 pM CD71mab-사포린 또는 세툭시맙에 의해 유도되지 않았다(도 4-1A). 낮은 수준의 EGFR(CaSKi, EGFR+/CD71+)을 발현하는 세포에서의 유사한 실험은 고 발현자(expressor)에서의 활성(도 4-1A)과 비교하여 세툭시맙-Cys-(덴드론(-L-SO1861)4)3,9 또는 세툭시맙-Lys-(덴드론(-L- SO1861)4)4,4 모두에 대한 감소될 활성을 나타내었으며 (도 4-1C), 이는 낮은 EGFR 수용체 발현 수준을 갖는 세포에서, 효과적인 세포내 SO1861 농도가 낮아 감소된 독소-매개 세포 사멸 활성을 초래함을 나타낸다.
HER2++/CD71+(SK-BR-3) 세포주에서 CD71mab-사포린과 조합된 트라스투주맙-Cys-(덴드론(-L-SO1861)4)4 또는 트라스투주맙-Lys-(덴드론(-L-SO1861)4)4,7로 동일한 실험을 수행하였으며 대조군과 비교하여 강한 세포 사멸 활성을 나타내었다(도 4-1B). 트라스투주맙-Cys-(덴드론(-L-SO1861)4)4 또는 트라스투주맙-Lys-(덴드론(-L-SO1861)4)4,7이 10 pM CD71mab-사포린과 조합하여 HER2+/-/CD71+(JIMT-1)에서 테스트되었을 때, 세포 사멸 활성이 관찰되지 않았으며, 이는 충분한 HER2 수용체 발현이 없는 경우, 세포내 SO1861 농도가 엔도좀 단백질 독소 탈출 및 독소-매개 세포 사멸을 유도하기에 효과적인 것에 (역치에) 도달하지 않음을 나타낸다.
다음으로, 트라스투주맙-Cys-(덴드론(-L-SO1861)4)4 + 트라스투주맙-엠타신(T-DM1, 항체-소분자 독소 접합체)을 HER2 발현 세포(SK-BR-3)에서의 향상된 세포 사멸 활성에 대하여 테스트하였다. 엔도좀 막이 소분자가 세포질에 도달하는 장벽을 형성하지 않기 때문에, T-DM1 단독 또는 T-DM1 + 등가의 트라스투주맙과 비교하여 이 조합에서 향상된 세포 사멸이 관찰되지 않았다(도 5-1).
실시예 3
재료 및 방법
덴드론(SO1861) 4 -BNA 올리고 합성 (도 17-1)
HSP27BNA 올리고 디설파이드(1.1mg, 0.187μmol)를 1.0mM TCEP(500μL)가 포함된 20mM NH4HCO3에 용해하고 혼합물을 1분 동안 진탕하고 실온에서 방치했다. 1시간 후, 반응 혼합물을 3000 Da의 분자량 컷-오프(cut-off)를 갖는 원심 필터를 사용하여 여과하였다(30분 동안 14000 x g). 잔류 용액을 1.0mM TCEP(500μL)를 포함하는 20mM NH4HCO3로 희석하고 결과물인 혼합물을 상기와 동일한 조건 하에서 다시 여과하였다. 잔류 용액을 20mM NH4HCO3/아세토니트릴(3:1, v/v, 1.0mL)로 희석하고 결과물인 혼합물을 덴드론(SO1861)4-말레이미드1(3.54mg, 0.375μmol)에 첨가했다(도 17-1). 반응 혼합물을 1분 동안 진탕하고 실온에서 방치하였다. 10분 후, 반응 혼합물을 분취용 LC-MS에 적용하였다.4A 생성물에 상응하는 분획을 즉시 함께 모으고, 동결시키고 밤새 동결건조하여 표제 화합물(1.25 mg, 85%)을 백색의 거품 같은(fluffy) 고체로서 수득하였다. LC-MS 94% 기준 순도
LRMS(m/z): 1896 [M-8]8-, 2167 [M-7]7-
LC-MS r.t. (최소): 3.776B
결과
HSP27BNA 올리고(암 표적의 mRNA 전사체(transcript)를 표적으로 하는 안티센스 BNA 올리고, 열 충격 단백질 27(HSP27BNA))는 덴드론(-L-SO1861)4(HSP27BNA-덴드론(-L-SO1861)4에 접합되었고 (도 17-1), A431 암세포에 동시 투여되었다. 판독으로서, A431 세포에서 HSP27 mRNA의 유전자 침묵이 결정되었다. 이는 HSP27BNA-덴드론(-L-SO1861)4 처리가 HSP27BNA 단독에 비해 HSP27 유전자 침묵 활성의 개선을 초래함을 나타내었다(도 6-1).
실시예 4
방법
SO1861 방출 어세이
덴드론(SO1861)4-Cbz(0.05mg)(도 7-1)에 물/아세토니트릴/TFA(1.00mL/1.00mL/4방울)를 함유하는 용액 50μL를 첨가했다. 반응 혼합물을 1분 동안 진탕하고 실온에서 방치하였다. SO1861 방출은 시간이 지남에 따라 UPLC-MS를 사용하여 이어졌다.4
결과
산성 조건에서 덴드론(-L-SO1861)4으로부터의 SO1861 분자의 방출 효율이 결정되었다(도 7-1).
다음으로, 덴드론(-L-SO1861)4는 EGFR 발현 세포(A431 및 HeLa)에 대한 표적된 독소 EGF디안틴의 향상된 전달에 대해 테스트되었다. 이는 덴드론(L-SO1861)4 + 10 pM EGF디안틴이 향상된 독소-매개 세포 사멸(IC50 … nM)을 유도할 수 있는 반면, '네이키드(naked)' 덴드론 (덴드론(NEM)4) 또는 덴드론(-L-SO1861)4 또는 덴드론(NEM)4 + 10 pM EGF디안틴은 이러한 농도에서 향상된 세포 사멸을 나타내지 않는다(도 8-1A, 8-1B).
실시예 5
재료 및 방법
현재 작업에서 본 발명자는 Schiff(쉬프) 염기(이민)를 통한 사포닌 결합을 위한 4개의 분자 팔과 클릭 화학을 위한 하나의 팔로 구성된 모델 스캐폴드를 조사했다. 폴리머 구조(도 19-1)는 Iris Biotech GmbH(Marktredwitz, 독일)에서 구입한 1세대의 5가 폴리에틸렌 글리콜-기반 덴드리머(즉, 반복된 분기 사이클의 수)이다. 사포닌(본 실시예에서 SA1641)은 Merck(Darmstadt, 독일)에서 입수한 사포늄 앨범(Saponinum album)이라고 불리는 집소필라(Gypsophila) 종의 사포닌 복합 원료 추출물로부터 정제되었다. 분말 원료 추출물(2.5g)을 소듐 히드록시드(0.2g)로 물(100mL)에서 가수분해하였다. 그 용액을 40℃에서 20시간 동안 교반한 다음, pH 5.0에 도달할 때까지 빙초산을 보충하였다. 타닌(tannin)을 제거하기 위해, 분리 깔때기에서 30mL 부탄올과 함께 용액을 진탕시켰다. 수상을 재포획하고 부탄올 추출을 2회 반복하였다. 부탄올 상(phase)에 무수 소듐 설페이트로 보충하고, 여과하고, 모았다. 부탄올을 증발시키고, 나머지 사포닌 분말을 최종 농도 30 mg/mL로 20% 메탄올에 용해시켰다. 짧은 초음파 처리 후, 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)로 상이한 사포닌을 분리했다. 튜브(컬럼 제외)를 1.5mL/min의 유속으로 따뜻한 물(40℃)로 헹군 다음, 이소프로판올(100%)이 함유된 Eurospher RP-C18-컬럼(5 μm, 250 × 8 mm)을 포함시켰다. 사포닌을 컬럼에 적용하고, 메탄올 구배로 용리했다(0.01% 트리플루오로아세트산이 보충된 물에서 1.5mL/min으로 30분 내 20% 메탄올에서 70% 메탄올로, 그 다음 추가 60분동안 70% 메탄올)(Sama et al., 2018). 분획의 분취량을 전자분무 이온화 질량 분석기(ESI-MS)로 SA1641 함량에 대해 분석했다. 순수한 SA1641을 함유하는 분획을 모으고 메탄올을 증발시켰다. 수용액을 드라이아이스를 사용하여 회전하는 둥근 바닥 플라스크에서 박막으로 동결시켰다. -80℃에서 16시간 동안 보관한 후, 샘플을 동결건조했다. 본 발명에 정의된 스캐폴드를 생성하기 위해, 폴리머 구조(0.2mM) 및 SA1641(3.2mM)을 물(약 pH 8)에 용해시키고, 동일한 부피로 혼합하고 26℃에서 24시간 동안 진탕시켰다. 그 후 소듐 시아노보로하이드라이드(NaCNBH3; 0.1 M)를 SA1641에 대해 4배 몰 과량으로 첨가하고, 샘플을 추가로 24시간 동안 인큐베이션했다. 그런 다음 구조를 초고성능 액체 크로마토그래피(UPLC)/ESI-MS로 확인했다. 샘플을 RP-C4-컬럼에 적용하고, 메탄올 구배(0.01% 트리플루오로아세트산이 보충된 물에서 15분 내 25% 메탄올에서 80% 메탄올로, 그 다음 추가 10분 동안 80% 메탄올)로 용리했다. 분획은 Waters Corporation의 LC-TOF(time-of-flight) 질량 분석기를 사용하여 전자분무 이온화로 정확한 질량 측정을 위해 특별히 설계된 이온 소스인 LockSpray™를 사용하여 분석했다.
실시예 6
재료 및 방법
약학 활성 물질의 예로서, 본 발명자는 표적화된 독소 디안틴-표피 성장 인자(디안틴-EGF)를 사용하였다. 플라스미드 His-디안틴-EGF-pET11d(Weng et al, 2009)(100ng)를 20μL Escherichia coli Rosetta™ 2(DE3) pLysS Competent Cells(Novagen, San Diego, CA, USA)에 첨가하였다. 세포를 열 충격(얼음에서 30분, 42℃에서 90초 및 얼음에서 1분)으로 형질전환시켰다. 그 후, 300 μL 리소제니 브로스(LB)를 첨가하고 현탁액을 200 rpm으로 진탕하면서 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 50μg/mL 암피실린이 포함된 예열된 리소제니 브로스 한천 플레이트에 100μl 박테리아 현탁액을 접종하고, 플레이트를 37℃에서 밤새 배양했다. 50μg/mL 암피실린이 포함된 리소제니 브로스(3mL)에 플레이트의 콜로니를 접종하고 박테리아를 37℃ 및 200rpm에서 8시간 동안 인큐베이션했다. 현탁액(50μL)을 50μg/mL 암피실린이 포함된 500mL의 리소제니 브로스에 첨가하고 37℃ 및 200rpm에서 밤새 인큐베이션했다. 이어서, 부피를 2.0 L로 스케일-업하고 파장 600 nm에서의 광학 밀도가 0.9에 도달할 때까지 동일한 조건에서 박테리아를 성장시켰다. 이후, 이소프로필 β-D-1-티오갈락토피라노사이드(IPTG)를 최종 농도 1mM으로 첨가하여 단백질 발현을 유도하였다. 단백질 발현은 37℃ 및 200rpm에서 3시간 동안 지속되었다. 마지막으로, 박테리아 현탁액을 5,000 × g 및 4℃에서 5분 동안 원심분리하고, 20mL PBS(137mM NaCl, 2.7mM KCl, 8.1mM Na2HPO4, 1.47mM KH2PO4)에 재현탁하고 사용할 때까지 -20℃에서 보관했다. 정제를 위해, 박테리아 현탁액을 해동하고 초음파 처리하여 용해시켰다. 용해물을 원심분리하고(15,800×g, 4℃, 30분) 이미다졸을 최종 농도 20mM로 첨가했다. 상층액을 20mM 이미다졸의 존재 하에 4℃에서 30분 동안 연속 진탕 하에 2mL의 Ni-니트릴로트리아세트산 아가로오스와 함께 인큐베이션하였다. 이어서, 그 물질을 20mL 컬럼에 붓고 10mL 세정 버퍼(50mM NaH2PO4, 300mM NaCl, 20mM 이미다졸)로 3회 세척하고, 디안틴-EGF을 세정 버퍼 중의 이미다졸 농도가 증가되는 10mL-부분(portion)(31, 65, 125 및 250mM)으로 용리하였다. 용리액(eluate) 분획(2mL)을 2.0L PBS에 대해 4℃에서 밤새 투석했다. 탈염된 디안틴-EGF를 Amicon® Ultra-15(10kDa)로 농축하고 단백질 농도를 정량했다.
적절한 클릭 화학기를 디안틴-EGF에 도입하기 위해, 디안틴-EGF에 대해 언급된 8배 몰 과량의 알킨-PEG5-N-히드록시석신이미딜 에스테르를 디메틸 설폭사이드에 용해시키고, 9부피의 디안틴-EGF(0.2M NaH2PO4/Na2HPO4 중 1 mg, pH 8)에 첨가했다. 실온에서 4시간 동안 배양한 후, PD10 컬럼(GE-Healthcare, Freiburg, 독일)을 사용하여 결합되지 않은 알킨을 분리했다. 폴리머 구조를 갖는 클릭 화학은 구리(I)-촉매화된 알킨-아지드 고리화 첨가에 의해 수행되었다. 알킨-디안틴-EGF(0.02mM), 덴드리머(0.05mM), CuSO4(0.1mM), 트리스(3-히드록시프로필트리아졸릴메틸)아민(0.5mM) 및 소듐아스코르베이트(5mM)을 0.1M NaH2PO4/Na2HPO4, pH 8에서, 실온에서 1시간 동안 부드러운 교반 하에 인큐베이션하였다. 그런 다음 PD10 컬럼을 사용하여 저분자량 물질을 분리했다.
본 발명의 효능을 시험하기 위해, 본 발명자는 HER14 세포로 생존력 어세이를 수행하였다. 이들 세포는 인간 표피 성장 인자 수용체로 안정적으로 형질감염된 섬유아세포이며, 따라서 표적화된 독소 디안틴-EGF에 대한 표적 세포이다. HER14 세포(2,000개 세포/100μL/웰)를 96웰 세포 배양 플레이트의 웰에 파종하고, 37℃, 5% CO2 및 98% 습도에서 10% 소태아 혈청 및 1% 페니실린/스트렙토마이신이 보충된 DMEM 배지에서 24시간 동안 인큐베이션했다. 그런 다음 다른 테스트 물질(결과 및 도 21-1 참조)을 25μL의 부피로 3회 첨가하고, 배지 25μL를 추가로 보충했다. 72시간 인큐베이션 후, 30 μL 3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-2,5-디페닐테트라졸륨 브로마이드(물 중 0.5 mg/mL)를 웰 마다 첨가하고, 2시간 동안 인큐베이션했다. 그 후, 배지를 조심스럽게 제거하고, 10%(v/v) 이소프로판올, 5%(w/v) 소듐 도데실 설페이트 및 400mM HCl을 함유하는 수용액으로 교체하고, 5분 동안 인큐베이션하였다. 가용화된 포르마잔은 마이크로플레이트 판독기(Spectra MAX 340 PC, Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA)에서 570nM에서 광도계로 정량화되었다. 비처리된 세포는 1로 정규화되었고, 모든 샘플은 비처리된 대조군을 참조했다. 유의성은 짝을 이루지 않은 2-샘플 t-테스트에 의해 결정되었다.
결과
펜타머 덴드리머(펜트리머)의 예에서 폴리머 구조는 SA1641이 부재 또는 존재 무두에서, 표적 세포에 임의의 세포독성 효과를 갖지 않는다(도 21-1, 컬럼 2 및 3). 스캐폴드가 없는 경우, 표적화된 독소(디안틴-EGF)는 0.1nM 농도에서 최대 독성의 절반을 나타낸다(컬럼 4). SA1641의 존재하에서 동일한 농도는 모든 세포의 사멸을 초래하며, 이는 엔도좀 탈출의 인핸서로 작용하는 SA1641의 일반적인 능력을 나타낸다 (컬럼 5). 폴리머 구조의 존재는 SA1641의 존재 또는 부재 모두에서 디안틴-EGF의 독성에 영향을 미치지 않으며(컬럼 6 및 7), 이는 스캐폴드가 디안틴-EGF의 독성에 영향을 미치지 않음을 나타낸다. 클릭 화학을 통해 모델 폴리머 구조를 디안틴-EGF의 예시적인 약학적 활성 물질에 커플링하기 위해, 그 물질은 이전에 알킨기와 결합되어야 했다. 약학적 활성 물질의 제조자는 합성 도중에 클릭 위치를 물질의 활성이 영향을 받지 않은 상태로 유지되는 자신이 선택한 위치에서 물질에 직접 도입할 수 있다. 알킨-변형된 약학적 활성 물질을 폴리머 구조에 클릭하는 경우에, 추가적인 활성 손실은 없었으며, 이는 폴리머 구조 자체가 독성이 없음을 나타낸다.
실시예 7
SO1861 분자에 대한 접합 반응에 사용 가능한 화학기를 고려하여, 4개의 화학기가 확인되었다. 도 19-1에 하이라이트 표시된 바와 같이, 당 잔기의 알코올과 디올, 트리테르페노이드 골격상의 알데히드기, 당 잔기 중 하나의 상의 카르복실산(글루쿠론산), 및 트리테르페노이드 골격의 알켄기.
확인된 각 화학기의 장단점의 견지에서(표 1), 가역적 접합 반응에는 알데히드 및 알코올기가 가장 적합하고, 비가역적/안정적 접합 반응에는 알켄 및 카르복실산(글루쿠론산)이 가장 적합한 기이다. 그러나, SO1861의 분자 구조 내 알데히드기가 알코올에 대한 가역적 접합 반응에 가장 적합하다. 한편으로는, 화학 선택 반응을 허용하는 구조에 단지 하나의 알데히드가 존재하기 때문이다. 한편으로, 알데히드는 아민, 히드라지드 및 히드록실아민과 같은 다양한 화학기와 가역적 접합 반응을 수행하여 이민, 히드라존 및 옥심과 같은 산-절단 가능한 모이어티를 형성할 수 있기 때문이다. 이 인자는 원하는 가역적 접합 반응에 대한 화학기에 대한 선택의 자유를 가능하게 한다. 반면, 알코올은 또한 아세탈과 케탈의 형성을 통한 가역적 접합 반응의 좋은 후보이지만, 글리코시드 구조에 다량으로 존재하기 때문에 화학 선택성이 부족하다.
비가역적이고 안정적인 결합의 형성을 위해, 카르복시산은 펩티드 화학에 사용되는 일반적인 도구(예, 카르보디이미드 매개 아미드 형성을 통한 아민과의 반응)로 아미드 및 에스테르를 형성할 수 있기 때문에 가장 적합하다.
Figure pct00035
폴리머 구조에 접합하기 위한 이상적인 EMCH 스페이서 길이와 관련하여, 컴퓨터 시뮬레이션(PerkinElmer, ChemBio3D, Ver. 13.0.0.3015)은 SO1861-EMCH상의 말레이미드기가 분자 주변에 위치하므로, 티올 함유 폴리머 구조에 접근할 수 있어야 함을 보여준다(도 27-1).
폴리머 구조로 16개의 작용성 아미노 말단기와 포컬 포인트(focal point)에 아지도기가 있는 G4-덴드론(PFd-G4-아지드-NH-BOC, Polymer Factory)을 SO1861에 대한 접합에 사용했다(도 24-1). 덴드리머보다 덴드론을 사용하는 이점은 덴드론 구조가 나타내는 포컬 포인트이다.
논의된 폴리머 및 단백질 접근법 중 SO1861 스캐폴드개발을 위한 다른 접근법은 폴리(SO1861) 접근법이다. 이 접근법의 아이디어는 SO1861을 방출하는 pH에 민감한 절단 가능한 결합과 함께 SO1861 분자로만 구성된 폴리머를 생성하는 것이다. 또한, 폴리(SO1861)는 독소 및 바이오폴리머에 대한 접합 반응을 수행할 수 있어야 합다. 이 접근법의 주요 목표는 가능한 한 간단하고 비용 효율적으로 유지하는 것이다. 산 절단 가능한 SO1861의 생성을 위한 프로토콜이 이미개발되었기 때문에(SO1861-EMCH 접근법), SO1861을 추가로 변형하거나 SO1861 분자의 다른 접합 부위를 식별하지 않고 중합개시제의 간단한 추가를 통해 SO1861-EMCH를 중합할 수 있는지 확인하는 것이 흥미로울 것이다. 과거에, 여러 논문에서 말레이미드 기의 이중 결합을 공격하여 말레이미드의 이중 결합을 따라 라디칼 중합을개시하는 라디칼개시제를 사용하여 말레이미드 기의 중합에 대해 논의되어왔다. SO1861-EMCH는 구조에서 말레이미드기를 나타내기 때문에, 이 기는 산 절단 가능한 작용을 갖는 폴리(SO1861)를 생성하기 위해 라디칼 중합 반응에 대해 잠재적으로 탐구될 수 있다. 중합 반응이 합리적인 반응 시간을 갖는다면 생성된 SO1861 폴리머는, 반응을 켄칭할 뿐만 아니라 독소 또는 바이오폴리머 접합을 위한 작용기를 생성하는 라디칼 켄처(quencher)로 켄칭될 수 있다. 여기에서, 암모늄 퍼설페이트(APS) 및 테트라메틸에틸렌디아민(TMEDA)의 시스템은 예시적인 방식으로 라디칼 발생제로 표시되고 아미노프로판티올은 모델 라디칼 켄처로서 역할을 한다. 아미노프로판티올을 켄처로서 사용하면, 생성된 아민기를 클릭할 수 있는 기로 구체적으로 추가로 변형하거나 폴리(SO1861)를 독소에 직접 접합하는데 사용할 수 있다.
SO1861 스캐폴드개발을 위한 또 다른 접근법은 DNA 접근법이다. 이 접근법의 아이디어는 소위 DNA-오리가미(DNA-origami)의개념을 활용하는 것이다(Kolb et al, 2004; Bird et al, 1988). 사포닌을 접합하기 위한 폴리머 또는 어셈블리된 폴리머 구조로서의 DNA-오리가미는 안정성, 확장성, 결과물인 DNA-사포닌 스캐폴드의 최종 크기 및 형태의 정밀한 제어를 포함하는 여러 고유한 이점을 제공할 수 있다. 이러한 DNA 나노담체는 천연 DNA로 구성되어 있기 때문에, 이는 생체 적합성이 있고 살아있는 세포에 독성을 나타내지 않으며, 내부 세포 구획에서 적재물(cargo)의 방출을 용이하게 할 수 있다. 이러한 구조의 다가(multivalency)는 형광단(fluorophores) 및 독소와 같은 다양한 페이로드에 대한 미세 조정 표적화 역량 및 높은 능력(capacity)을 추가로 허용할 수 있다. 따라서, 이 접근법에서 DNA 가닥은 각각 3' 및 5' 말단에 화학적 작용기를 제공하고 구성물의 최종 형태를 제어할 수 있도록 하는 서열의 특정 원하는 영역에서만 혼성화(hybridize)할 수 있는 것으로 확인된다. 예를 들어 이미개발된 SO1861-EMCH와 3' 및 5' DNA 가닥 중 하나에 있는 티올기 사이의 티올-엔 반응을 통해 사포닌을 커플링하기 위해 화학기가 사용되어야 한다. 상보적인 DNA 가닥은 표적화된 독소에 대한 커플링에 사용될 수 있는 클릭 작용기를 제공할 수 있다. 개념은 도 23-1에 도시된다.
사포닌에 결합 및 방출할 수 있고 중합되어 큰 폴리(펩티드) 유사 구조를 형성할 수 있는 DNA 가닥 대신 특정 펩티드 서열을 사용하여 유사한 접근법을 생각할 수 있다. 이 접근법에서, 길이가 SO1861-EMCH 분자의 계산된 크기에 맞고, 서열 중간에 시스테인 잔기를 제공하고 N-말단 및 C-말단 모두에 아민기를 얻는 펩티드 서열이 확인되고 구입되었다. 시스테인 잔기는 SO1861-EMCH의 말레이미드기와 시스테인 잔기의 티올기의 티올-엔 반응을 통해 SO1861-EMCH를 접합하는데 사용될 수 있다. 2개의 아민기를 사용하여 적절한 가교제로 펩타이드-SO1861 접합체를 중합할 수 있다.
실시예 8
S01861-BNA 올리고 접합
HSP27 BNA 올리고 디설파이드(1.10mg, 0.187μmol)를 1.0mM TCEP(500μL)가 포함된 20mM NH4HCO3에 용해시키고 혼합물을 1분 동안 진탕하고 실온에서 방치하였다. 1시간 후, 반응 혼합물을 3000 Da의 분자량 컷오프를 갖는 원심 필터를 사용하여 여과하였다(30분 동안 14000 x g). 잔류 용액을 1.0mM TCEP(500μL)가 포함된 20mM NH4HCO3로 희석하고 결과물인 혼합물을 상기와 설명한 동일한 조건에서 다시 여과하였다. 잔류 용액을 20mM NH4HCO3/아세토니트릴(3:1, v/v, 1.00mL)로 희석하고 결과물인 혼합물을 SO1861-EMCH(3.54mg, 0.375μmol)에 첨가했다. 반응 혼합물을 1분 동안 진탕하고 실온에서 방치하였다. 10분 후, 반응 혼합물을 제조용(preparative) LC-MS에 적용하였다.4A 생성물에 상응하는 분획을 즉시 함께 모으고, 동결시키고 밤새 동결건조하여 표제 화합물(1.25 mg, 85%)을 백색 거품 같은 고체로서 수득하였다. LC-MS에 기초한 순도 100%.
LRMS (m/z):　1561　[M-5]5-, 1951　[M-4]4-　
LC-MS　r.t.　(min):　2.466B　
덴드로(S01861) 4 -BNA 올리고 접합
HSP27 BNA 올리고 디설파이드(1.1mg, 0.187μmol)를 1.0mM TCEP(500μL)가 포함된 20mM NH4HCO3에 용해하고 혼합물을 1분 동안 진탕하고 실온에서 방치했다. 1시간 후, 반응 혼합물을 3000 Da의 분자량 컷오프를 갖는 원심 필터를 사용하여 여과하였다(30분 동안 14000 x g). 잔류 용액을 1.0mM TCEP(500μL)가 포함된 20mM NH4HCO3로 희석하고 생성된 혼합물을 위에서 상기와 동일한 조건에서 다시 여과하였다. 잔류 용액을 20mM NH4HCO3/아세토니트릴(3:1, v/v, 1.0mL)로 희석하고 생성된 혼합물을 덴드론(SO1861)4-말레이미드1(3.54mg, 0.375μmol)에 첨가했다. 반응 혼합물을 1분 동안 진탕하고 실온에서 방치하였다. 10분 후, 반응 혼합물을 제조용 LC-MS에 적용하였다4A. 생성물에 상응하는 분획을 즉시 함께 모으고, 동결시키고 밤새 동결건조하여 표제 화합물(1.25 mg, 85%)을 백색 거품 같은 고체로서 수득하였다. LC-MS에 기초한 순도 94%
LRMS (m/z):　1896　[M-8]8-, 2167　[M-7]7-　
LC-MS　r.t.　(min):　3.776B　
세포 배양(Cell culture)
세포를 100 μL/웰로 5,000 c/w로 96 웰 플레이트에서 10% 소 태아 혈청(PAN-Biotech GmbH) 및 1% 페니실린/스트렙토마이신(PAN-Biotech GmbH)이 보충된 DMEM(PAN-Biotech GmbH)에 시딩하고, 37℃ 및 5% CO2에서 밤새 인큐베이션했다. 다음날 샘플을 DMEM에서 준비하고 세포를 처리했다.
유전자 침묵
RNA 분리 및 Qpcr 분석은 표준 절차 및 프로토콜에 따라 수행되었다.
HSP27 프라이머: F: R:
HSP27BNA 올리고
HSP27BNA(-티올) 올리고(서열 5'-GGCacagccagtgGCG-3')(Zhang et al., 2011)는 Bio-synthesis Inc.(Lewisville, 텍사스)에서 주문했다.
결과
BNA올리고, 암 표적의 mRNA 전사체를 표적으로 하는 안티센스 BNA 올리고(암 세포에서 상향조절됨), 열 충격 단백질 27(HSP27BNA)은 SO1861-EMCH(HSP27BNA-L-SO1861) 또는 덴드론(-L-SO1861)4(HSP27BNA-덴드론(-L-SO1861)4)에 접합하여 본 발명에 따라 A431 암 세포주에 공동 투여되었다. 판독으로서, A431 세포에서 HSP27 mRNA의 유전자 침묵이 결정되었다. 이는 HSP27BNA-L-SO1861 처리가 HSP27BNA 단독에 비해 HSP27 유전자 억제 활성의 개선을 초래한 반면, HSP27BNA-덴드론(-L-SO1861)4(4 SO1861 분자/BNA)의 활성이 HSP27BNA 단독의 유전자 침묵 활성과 비교하여 훨씬 강함(3-배)을 나타내었다(도 1-3). 이는 1개 이상의 SO1861 분자의 접합이 SO1861 매개 엔도좀 탈출 및 안티센스 BNA의 세포질 전달의 향상으로 인해 치료 BNA 올리고뉴클레오티드의 유전자 침묵 활성을 향상시킨다는 것을 보여준다.
실시예 9
세툭시맙(인간 EGFR을 인식 및 결합하는 모노클로날 항체)에 S01861은 시스테인 잔기(Cys)를 통해 접합되고(불안정성), 디안틴(단백질 독소)은 라이신 잔기(Lys)를 통해 접합되어(안정성), 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,9(Lys-S-디안틴)2이 생성되었다. 이 접합체는 A431 (EGFR++) 이종이식 마우스 종양 모델에서 도 9-4에 도시된 바와 같이 EGFR 종양 표적화된 세포 사멸에 대해 테스트되었다. 종양이 ~150㎣의 크기에 도달한 12일째에 투여를 시작하고, 매 투여 후 종양 부피를 측정하였다. 마우스(n=3)를 12일째에 0.5 mg/kg; 15일째에 1 mg/kg 그리고 24일째에 1.5 mg/kg으로 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,9(Lys-S-디안틴)2 또는 세툭시맙-(Lys-S-디안틴)1,6으로 처리(복강내; i.p.; 투여량 증가)하였다. 26일째에, 대조군에 비해, 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,9(Lys-S-디안틴)2으로 처리된 종양 함유 마우스에서 종양 부피 감소가 관찰될 수 있었다(도 1-4A). 이는 항체-단백질 독소(안정성) 접합체에 대한 SO1861의 불안정성 접합이 종양 표적화된 항체-단백질 독소의 표적화된 치료 효능을 향상시켜, 보다 효과적인 종양 표적 치료를 유도할 수 있음을 보여준다.
다음으로, 세툭시맙(인간 EGFR을 인식 및 결합하는 모노클로날 항체)에 S01861은 시스테인 잔기(Cys)를 통해 접합되고(불안정성), 디안틴(단백질 독소)은 라이신 잔기(Lys)를 통해 접합되어(안정성), 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,9(Lys-L-디안틴)2이 생성되었다. 이 접합체는 A431(EGFR++) 이종이식 마우스 종양 모델에서 도 9-4에 도시된 바와 같이 EGFR 종양 표적화된 세포 사멸에 대해 테스트되었다. 종양이 ~150㎣의 크기에 도달한 12일째에 투여를 시작하고, 매 투여 후 종양 부피를 측정하였다. 마우스(n=3)를 12일째에 0.5 mg/kg; 15일째에 1 mg/kg 그리고 24일째에 1.5 mg/kg으로 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,9(Lys-L-디안틴)2 또는 세툭시맙-(Lys-L-디안틴)1,6으로 처리(복강내; i.p.; 투여량 증가)하였다. 이는 35일 후에, 대조군에 비해, 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,9(Lys-L-디안틴)2로 처리된 종양 함유 마우스에서 종양 성장 억제가 나타냈다(도 1-4B). 마우스(n=3)를 12일째에 0.5 mg/kg; 15일째에 1 mg/kg, 18일째에 2 mg/kg, 24일째에 2.5 mg/kg으로 본 발명에 따른 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,9(Lys-L-디안틴)2로 처리(정맥내; i.v.; 투여량 증가)한 경우에도 대조군에 비해 종양 성장 억제가 관찰될 수 있었다(데이터는 마우스 1마리에 대해 나타내었으며, 2마리는 처리 도중에 사망하였기 때문이다). 이는 항체-단백질 독소(불안정성) 접합체에 대한 SO1861의 불안정성 접합이 종양 표적화된 항체-단백질 독소의 표적화된 치료 효능을 향상시켜, 보다 효과적인 종양 표적화된 치료를 유도할 수 있음을 보여준다.
다음으로, 세툭시맙(인간 EGFR을 인식 및 결합하는 모노클로날 항체)에 S01861-EMCH는, DAR 3.9로, 시스테인 잔기(Cys)를 통해 접합되고, (암세포에서 온코-표적 hsp27 mRNA의 분해를 표적 및 유도(유전자 침묵)하는) 안티센스 HSP27BNA 올리고뉴클레오티드는, DAR 1.8로, 불안정한 (L) 링커를 통해 항체의 라이신 잔기(Lys)에 접합되어, 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,9(Lys-L-HSP27BNA)1,8이 생성되었다. 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,9(Lys-L-HSP27BNA)1,8는 A431 이종이식 '누드' 마우스 종양 모델에서 도 10-4에 도시된 바와 같이 본 발명에 따라 EGFR-매개 종양 표적화된 유전자 침묵에 대해 테스트되었다. 종양이 ~150㎣의 크기에 도달한 12일째에 투여를 시작하고, HSP27 mRNA 발현이 결정되었다. 이를 위해, 1차 투여 후 72h에 종양 샘플을 수집하고, 세포 대조군 mRNA 발현 수준(레퍼런스 유전자)과 비교한 HSP27 유전자 발현 수준을 분석하였다. 30 mg/kg 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,9(Lys-L-HSP27BNA)1,8로 처리된 (복강내; i.p.) 종양 함유 마우스(n=3)는 1 투여 후에, 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,8 또는 세툭시맙-(Lys-L-HSP27BNA)1,5의 단일 투여에 비해 종양에서 HSP27 mRNA 발현의 40% 감소를 나타내었다(도 2-4). 비이클 대조군의 종양에 비해, 25% HSP27 유전자 발현의 감소가 관찰되었다. 이는 본 발명에 따른, 동일한 표적 항체에 대한 S01861 및 HSP27BNA의 접합이 종양 함유 마우스의 고형 종양에서 치료 안티센스 올리고뉴클레오티드의 SO1861-매개 향상된 세포질 전달을 효율적으로 유도하여, 종양 표적화된 유전자 침묵을 유도함을 나타내고 가능하게 한다. 다른 예에서, 삼작용성 링커 스캐폴드는 SO1861-L-3 작용성 링커-L-HSP27BNA를 생성하기 위해, 한 팔에서 SO1861과 다른 팔에서 HSP27BNA와의 접합을 위한 3개의 특이적 화학 말단기를 갖도록 디자인 및 제조되었다. 다음으로, SO1861-L-3 작용성 링커-L-HSP27BNA는 항-EGFR 항체인 세툭시맙(세툭시맙-Cys-(SO1861-L-3 작용성 링커-L-HSP27BNA)3.7)의 시스테인 잔기(Cys)에 세 번째 팔과 접합되고, 도 11-4에 도시된 바와 같이 본 발명에 따라, EGFR-매개 종양 표적화된 유전자 침묵 활성에 대해 A431 이종이식 '누드' 마우스 종양 모델에서 테스트되었다. 종양이 ~150㎣의 크기에 도달한 12일째에 투여를 시작하고, HSP27 mRNA 발현이 결정되었다. 이를 위해, 1차 투여 후 72시간에 종양 샘플을 수집하고, 세포 대조군 mRNA 발현 수준(레퍼런스 유전자)과 비교한 HSP27 유전자 발현 수준을 분석하였다. 이는 30 mg/kg 세툭시맙-Cys-(SO1861-L-3 작용성 링커-L-HSP27BNA)3.7의 1 투여가 25 mg/kg 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,8 또는 25 mg/kg 세툭시맙-(Lys-L-HSP27BNA)4 단일 치료의 단일 투여에 비해 종양에서 HSP27 유전자 발현을 40% 감소를 일으키는 것으로 나타났다(도 3-4). 비이클 대조군 종양에 비해, 세툭시맙-Cys-(SO1861-L-3 작용성 링커-L-HSP27BNA)3.7의 1 투여로 처리된 종양 함유 마우스에서 25% HSP27 유전자 발현의 감소가 관찰되었다. 이는 세툭시맙-Cys-(SO1861-L-3 작용성 링커-L-HSP27BNA)3.7이 종양 함유 마우스의 고형 종양에서 치료 안티센스 올리고뉴클레오티드의 SO1861-매개 향상된 세포질 전달을 효율적으로 유도하여, 생체내에서 종양 표적화된 유전자 침묵을 유도함을 나타내며 가능하게 한다.
실시예 10
본 발명에 따른 다른 예에서, SO1861(불안정) 및 단백질 독소, 디안틴(불안정 또는 안정)은 HER2 표적화 항체, 트라스투주맙에 접합되었다. 트라스투주맙-(Cys-L-SO1861)3,8(Lys-L-디안틴)1,7 또는 트라스투주맙-(Cys-L-SO1861)3,8(Lys-S-디안틴)1,7이 제조되고, 도 9-4에 도시된 바와 같이 SK-BR-3(HER2++) 및 MDA-MB-468 (HER2-) 세포에서 향상된 세포 사멸에 대해 테스트되었다. 트라스투주맙-(Cys-L-SO1861)3,8(Lys-L-디안틴)1,7 (IC50= 0,8 nM) 및 트라스투주맙-(Cys-L-SO1861)3,8(Lys-S-디안틴)1,7 (IC50= 0,8 nM) 모두 SK-BR-3 세포(HER2++)의 세포 사멸을 효율적으로 유도한다(도 4-4A). 이는 트라스투주맙, 트라스투주맙-(Lys-L-디안틴)1,7, 트라스투주맙-(Lys-S-디안틴)1,7 또는 트라스투주맙-(L-SO1861)3,8 단독으로 처리된 SK-BR-3 세포에서는 관찰되지 않았다(도 4-4A). MDA-MB-468 세포(HER2-)에서, 본 발명에 따른 접합체 중 어느 것에 대해서도 세포 사멸 활성이 관찰될 수 없었다(도 4-4B). 이는 HER 표적화 항체-단백질 독소 접합체에 대한 SO1861의 접합이 표적 세포에서 단백질 독소의 SO1861-매개 향상된 세포질 전달을 효과적으로 유도하여, 표적 세포 사멸을 초래함을 보여준다.
본 발명에 따른 다른 예에서, SO1861(불안정) 및 단백질 독소, 디안틴(불안정 또는 안정)은 EGFR 표적 항체, 세툭시맙에 접합되었다. 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,9(Lys-L-디안틴)2 또는 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,9(Lys-S-디안틴)2이 도 9-4에 도시된 바와 같이 A431 세포(EGFR++) 및 A2058 세포(EGFR-)에서의 향상된 세포 사멸에 대해 테스트되었다. 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,9(Lys-L-디안틴)2 (IC50= 0,3 nM) 및 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,8(Lys-S-디안틴)1,7 (IC50= 0,3 nM) 모두 세툭시맙-(Lys-L-디안틴)1,6 (IC50= 2pM), 세툭시맙-(Lys-S-디안틴)1,6 (IC5= 2pM) 단독에 비해 A431 세포(EGFR++)에서 향상된 세포 사멸을 나타내었다(도 4-4C). A2058 세포(EGFR-)에서, 본 발명에 따른 조합은 어떠한 세포 사멸 활성을 나타내지 않았다(IC50> 200nM; 도 4-4D). 이는 EGFR 표적화 항체-단백질 독소 접합체에 대한 SO1861의 접합이 표적 세포에서 단백질 독소의 SO1861-매개 세포질 전달을 효율적으로 향상시켜, 표적 세포 사멸을 향상시키는 것을 보여준다.
실시예 11
본 발명에 따른 다른 실시예에서, SO1861(불안정) 및 HSP27BNA 올리고(불안정)는 EGFR 표적화 항체, 세툭시맙에 접합되었다. 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,8(Lys-L-HSP27BNA)3,8이 도 10-4에 도시된 바와 같이 본 발명에 따라 A431 세포(EGFR++) 및 A2058(EGFR-) 세포에서 향상된 HSP27 유전자 침묵에 대해 테스트되었다. 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,8(Lys-L-HSP27BNA)3,8은 세툭시맙, 세툭시맙-(Lys-L-HSP27BNA)3,9 또는 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,8 단독에 비해 A431 세포(IC50= 3nM)에서 HSP27 유전자 침묵을 효율적으로 유도한다(도 5-4A). A2058 세포(EGFR-)에서는 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,8(Lys-L-HSP27BNA)3,8로 유전자 침묵 활성이 관찰될 수 없었다(IC50> 100nM; 도 5-4B). 이는 본 발명에 따른 동일한 표적화 항체에 대한 SO1861 및 HSP27BNA의 접합이 표적 세포에서 치료 안티센스 올리고뉴클레오티드의 SO1861-매개 향상된 세포질 전달을 효과적으로 유도하여, 표적화된 유전자 침묵을 유도함을 나타내고 가능하게 한다.
본 발명에 따른 다른 예에서, SO1861(불안정) 및 HSP27BNA 올리고(불안정)가 HER2 표적화 항체, 트라스투주맙에 접합되었다. 트라스투주맙-(Cys-L-SO1861)3,8(Lys-L-HSP27BNA)3,5가 도 10-4에 도시된 바와 같이 본 발명에 따라 SK-BR-3 세포(HER2++)에서 향상된 HSP27 유전자 침묵에 대해 테스트되었다. 트라스투주맙-(Cys-L-SO1861)3,8(Lys-L-HSP27BNA)3,5는 트라스투주맙-(Lys-L-HSP27BNA)4,4 단독에 비해 SK-BR-3 세포(IC50= 9 nM)에서 HSP27 유전자 침묵을 효율적으로 유도한다(도 6-4). 이는 본 발명에 따른 HER2 표적화 항체에 대한 SO1861 및 HSP27BNA의 접합이 표적 세포에서 치료 안티센스 올리고뉴클레오티드의 SO1861-매개 향상된 세포질 전달을 효과적으로 유도하여, 표적화된 유전자 침묵을 유도함을 나타내고 가능하게 한다.
또 다른 예에서, 세툭시맙-Cys-(SO1861-L-삼작용성 링커-L-HSP27BNA)3,7은 도 11-4에 도시된 바와 같이 본 발명에 따른 A431(EGFR++) 및 A2058(EGFR-) 세포에서 향상된 HSP27 유전자 침묵에 대해 테스트되었다. 세툭시맙-Cys-(SO1861-L-3작용성 링커-L-HSP27BNA)3,7은 세툭시맙-(Lys-L-HSP27BNA)4 또는 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,7 단독에 비해 A431 세포(IC50= 2nM)에서 HSP27 유전자 침묵을 효율적으로 유도한다(도 7-4A). A2058 세포(EGFR-)에서 유전자 침묵 활성은 높은(> 80nM) 농도의 세툭시맙-Cys-(SO1861-L-삼작용성 링커-L-HSP27BNA)3,7(IC50=100nM; 도 7-4B)에서만 관찰되었다. 이는 높은 EGFR 발현 세포에서 세툭시맙-Cys-(SO1861-L-3작용성 링커-L-HSP27BNA)3,7이 표적 세포에서 치료 안티센스 올리고뉴클레오티드의 SO1861-매개 향상된 세포질 전달을 효과적으로 유도하여, 표적화된 유전자 침묵을 유도함을 나타내고 가능하게 한다.
실시예 12
도 8-4A-D는 트라스투주맙(도 8-4A), 세툭시맙(도 8-4B) 또는 T-DM1(도 8-4C), 비접합 단백질 독소, 사포린, 디안틴 및 (비-세포 결합) IgG 항체에 접합된 사포린(도 8-4D)이 다양한 암 세포주 SK-BR-3, JIMT-1, MDA-MB-468, A431, CaSki, HeLa, A2058에 투여된 경우, 상대적인 세포 생존력을 나타낸다.
트라스투주맙과 세툭시맙은 대부분의 세포주에 노출되었을 때 세포 생존력에 영향을 미치지 않거나 거의 영향을 미치지 않으며, 트라스투주맙이 SK-BR-3 세포에 비교적 높은 농도로 노출되었을 때 HER2 성장 인자 수용체의 작용을 차단하여 세포 성장 억제에 약간의 영향을 미치며, 그리고 세툭시맙이 MDA-MB-468 세포에 비교적 높은 용량으로 노출될 때 EGFR 성장 인자 수용체의 작용을 차단하여 세포 성장 억제에 약간의 영향을 미친다.
TDM-1, 또는 아도-트라스투주맙 엠탄신은 이전에 허셉틴(Herceptin)(화학명: 트라스투주맙) 및 탁산 화학요법으로 치료되어 온 HER2 양성 전이성 유방암; 허셉틴 및 탁산(taxane) 화학요법으로 신보조(neoadjuvant)(수술 전) 치료 후 잔류 질환이 발견된 경우 수술 후 초기 HER2 양성 유방암 치료에 미국 식품의약국에 의해 승인된 표적화된 치료제이다. TDM-1은 허셉틴(트라스투주맙)과 화학요법 의약 엠탄신의 조합이다. 도 8-4C는 TDM-1이 >1000 pM 농도에서 시험된 모든 세포주에 대해 감소된 세포 생존력을 초래함을 나타낸다.
시험된 세포주 상의 임의의 세포 표면 분자에 대한 친화도가 없는 대조군 IgG에 커플링된 독소 사포린, 유리 독소(free toxin) 사포린 및 디안틴은, 최대 100.000 pM의 시험된 독소의 광범위한 농도에 걸쳐 세포 생존력에 임의의 영향을 미치지 않거나 거의 영향을 미치지 않는다(도 8-4D).
실시예 13 (실시예 1 발명 5)
도 13-5에 도시된 바와 같이, 1 표적 2-성분 시스템(1T2C)은 mAb1-단백질 독소 및 mAb1-S01861의 조합 치료이다. 세툭시맙(인간 EGFR을 인식 및 결합하는 모노클로날 항체)에 S01861-EMCH는 시스테인 잔기(Cys)를 통해 접합되었고, HSP27BNA 올리고는 시스테인 잔기(Cys)를 통해 접합되었으며, 둘 모두 DAR 4로 접합되었으며, 이는 2개의 접합체: 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)4 및 세툭시맙-(Lys-L-HSP27BNA)4을 생성하였다. 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)4(복강내 투여, (i.p.)) 및 세툭시맙-(Lys-L-HSP27BNA)4(정맥내 투여, (i.v.))의 조합은 EGFR 종양 표적화된 유전자 침묵 활성에 대한 A431 이종이식 마우스 종양 모델에서 테스트되었다. 종양이 ~150㎣의 크기에 도달한 경우 12일째에 투여를 시작하였으며, 종양 샘플은 1차 투여 후 72시간에 수집하였고, 대조군 유전자 mRNA 발현 수준(레퍼런스 유전자)과 비교하여 HSP27 유전자 발현에 대해 분석하였다. 이는 50 mg/kg 세툭시맙-(Cys-L-S01861)4 + 25 mg/kg 세툭시맙-(Lys-L-HSP27BNA)4의 1회 투여가 세툭시맙-(Cys-L-S01861)4 또는 세툭시맙-(Lys-L-HSP27BNA)4 단일 치료의 단일 투여에 비해 A431 종양에서 HSP27 유전자 발현을 50% 감소시킨 것으로 나타났다(도 1-5). 비이클 대조군 종양과 비교하여, 40% HSP27 유전자 침묵의 감소가 관찰되었다. 이는 1T2C 발명에 따른, 세툭시맙-접합된 SO1861 + 세툭시맙-접합된 HSP27BNA 올리고의 조합이 고형 종양 세포의 세포질 내에서 치료 안티센스 올리고뉴클레오티드의 효율적인 표적화된 전달을 유도하여, 생체내 종양 표적화된 유전자 침묵을 유도함을 보여주고 가능하게 한다.
다음으로, S01861-EMCH를 시스테인 잔기(Cys)를 통해 DAR 4로 트라스투주맙(인간 HER2를 인식 및 결합하는 모노클로날 항체)에 접합되었으며, 트라스투주맙-(Cys-L-SO1861)4을 생성하였다. 트라스투주맙-(Cys-L-SO1861)4 및 트라스투주맙-사포린(트라스투주맙 단백질 독소 접합체)의 조합은 HER2 발현 수준이 높고 트라스투주맙 단일 치료에 대해 내성이 있는 마우스 종양 모델(환자 유래 이종이식 종양 모델, PDX)에서 테스트되었다. 40 mg/kg 트라스투주맙-(Cys-L-SO1861)4 (복강내 투여, (i.p.)) + 0.03 (1일째, 8)/ 0.02 (15, 22, 30, 36, 43일째) mg/kg 트라스투주맙-사포린(정맥내 투여, (i.v.))의 1T2C 발명에 따른, 조합은 비이클 대조군 및 40 mg/kg 트라스투주맙-(Cys-L-SO1861)4 또는 0.03/0.02 mg/kg 트라스투주맙-사포린 단일 치료에 비해 강한 종양 성장 억제를 나타내었다(도 2-5). 뿐만 아니라, 보다 낮은 투여량 조합(40 mg/kg 트라스투주맙-(Cys-L-SO1861)4 + 0.01 mg/kg 트라스투주맙-사포린)으로 처리된 종양 함유 마우스에서, 종양 성장 억제 활성은 관찰되지 않았다(도 2-5). 이는 트라스투주맙 접합된 SO1861 + 트라스투주맙 접합된 단백질 독소의 1T2C 조합이 고형 종양 세포의 세포질 내에서 치료 단백질 독소의 효율적인 표적화된 전달을 유도하여, 생체내 종양 세포 사멸 및 종양 성장 억제를 유도함을 나타내며 가능하게 한다.
실시예 14
1 표적 2-성분 시스템(1T2C)은 mAb1-SO1861과 mAb1-단백질 독소의 조합 치료이다(도 13-5).
S01861-EMCH는 시스테인 잔기(Cys)를 통해 DAR 3,7로 세툭시맙(인간 EGFR을 인식 및 결합하는 모노클로날 항체)에 접합되었다(세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,7). 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,7은 10 pM 세툭시맙-사포린(단백질 독소, 사포린에 접합된 세툭시맙)의 고정 농도에 적정되고, EGFR 발현 세포(A431, EGFR++; CaSKi, EGFR+) 상에서 표적화된 단백질 독소 매개 세포 사멸이 결정되었다. 이는 낮은 농도의 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,7에서 강한 세포 사멸을 나타내었으나(A431: IC50= 0,6 nM 및 Caski IC50= 1 nM; 도 5A, 3-5B), 반면에 세툭시맙, 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,7 또는 세툭시맙 + 10 pM 세툭시맙-사포린은 EGFR 발현 세포에서 어떠한 세포 사멸 활성을 유도할 수 없었다. 이는 세툭시맙 접합된 SO1861이 (비효과적인 농도에서) 세툭시맙 접합된 단백질 독소의 엔도좀 탈출을 효율적으로 향상시켜, EGFR 발현 세포의 세포 사멸을 유도함을 보여준다. A431의 세포 사멸 활성은 이들 세포주에서 EGFR 발현 수준과 상관관계가 있는 CaSki에 비해 더 효과적이다. 1T2C 내의 두 접합체 사이의 EGFR 수용체 결합 경합은 또한, 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,7 농도가 증가할 경우에 관찰되며, 세툭시맙-사포린의 수용체 결합 및 내재화의 경재 우위로 인하여 세포 사멸 활성이 감소한다(도 3-5A, 3-5B).
다음으로, 세툭시맙-사포린을 75 nM 세툭시맙-(Cys-L-S01861)3,7의 고정 농도에 적정하고, EGFR 발현 세포 상에서 표적화된 단백질 독소 매개 세포 사멸이 결정되었다. 이는 저농도 세툭시맙-사포린과 조합된 75 nM 세툭시맙-(Cys-L-S01861)3,7이 EGFR 발현 세포에서 이미 효율적인 세포 사멸을 유도하였으나(A431: IC50= 0.4 pM; 및 CaSKi: (IC50= 2 pM; 도 3-5C 및 3-5D), 반면에 세툭시맙-사포린 단독 또는 세툭시맙-사포린 + 75 nM 세툭시맙은 두 세포주 모두에서 고농도 세툭시맙-사포린에서만 세포 사멸을 보여주는 것으로 나타났다(각각, IC50= 40 pM, IC50= 1000 pM)(도 3-5C, 3-5D). 이 모두는 비교적 낮은 농도의 세툭시맙-사포린이 높은 EGFR 발현 세포에서 낮은 세툭시맙-S01861 농도와 조합된 경우에만 효과적일 수 있고, 세포 사멸을 유도할 수 있음을 보여준다. 1T2C 시스템 내의 두 접합체 간의 수용체 경합은, 75 nM 세툭시맙이 있거나 없는 세툭시맙-사포린의 세포 사멸 활성을 비교할 때 세툭시맙-독소 적정 처리에서 또한 관찰된다(도 3-5C, 3-5D).
다음으로, 세툭시맙-(Cys-L-S01861)3,7을 10 pM 세툭시맙-사포린의 고정 농도에 적정하고 낮은 EGFR 발현 세포 또는 EGFR 발현이 없는 세포(HeLa, EGFR+/-; A2058, EGFR-) 상에서 표적화된 단백질 독소 매개 세포 사멸이 결정되었다. EGFR 발현이 낮거나(HeLa) 또는 없는(A2058) 세포는 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,7 + 10 pM 세툭시맙-사포린의 어떠한 조합에 대해서 전혀 민감하지 않았다(HeLa: IC50> 1000 nM; A2058: IC50> 1000 nM; 도 4-5A, 4-5B). 이는 충분한 EGFR 수용체 발현의 부재시, 효과적인 세포내 전달된 S01861 농도가 엔도좀 단백질 독소 탈출 및 독소-매개 세포 사멸을 유도하기에 최적(역치)이 아님을 보여준다. 다음으로, 세툭시맙-사포린을 75 nM 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,7 의 고정 농도에 적정하고, 낮은 EGFR 발현 세포(HeLa) 또는 EGFR 발현이 없는 세포(A2058) 상에서 표적화된 단백질 독소 매개 세포 사멸이 결정되었다. 저 EGFR 발현 세포(HeLa)는 75 nM 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,7과 조합된 높은 세툭시맙-사포린 농도에서만 세포 사멸을 보였으며(HeLa: IC50= 60 pM, 도 4-5C), 반면에 A2058 세포(EGFR-)는 테스트된 어떠한 농도에서도 민감하지 않았다(A2058: IC50> 10.000 pM; 도 4-5D). 이 모두는 EGFR 수용체 발현이 낮거나 없는 세포는, 단백질 독소의 탈출을 용이하게 하기 위한, 엔도리소좀 구획 내의 충분한 SO1861의 항체-매개 전달을 용이하게 하는 충분한 EGFR 수용체의 부족으로 인해, 세툭시맙(Cys-L-SO1861)3,7 + 세툭시맙-사포린의 조합에 대해 민감하지 않음을 보여준다.
다음으로, S01861-EMCH가 시스테인 잔기(Cys)를 통해 DAR 4로 트라스투주맙(인간 HER2를 인식 및 결합하는 모노클로날 항체)에 접합되었다(트라스투주맙-(Cys-L-SO1861)4). 트라스투주맙-(Cys-L-SO1861)4는 50 pM 트라스투주맙-사포린(단백질 독소, 사포린에 접합된 트라스투주맙)의 고정 농도에 적정되고, HER2 발현 세포(SK-BR-3, HER2++) 상에서 표적화된 단백질 독소 매개 세포 사멸이 결정되었다. 이는 낮은 농도의 트라스투주맙-(Cys-L-SO1861)4에서 강한 세포 사멸을 나타내었으나(SK-BR-3: IC50= 0,8 nM; 도 5-5A), 반면에 등가 농도(equivalent concentration) 트라스투주맙, 트라스투주맙-(Cys-L-SO1861)4 또는 트라스투주맙 + 50 pM 트라스투주맙-사포린은 HER2 발현 세포에서 어떠한 세포 사멸 활성을 유도할 수 없었다. 이는 트라스투주맙 접합된 SO1861이 (비효과적인 농도에서) 트라스투주맙 접합된 단백질 독소의 엔도좀 탈출을 효율적으로 향상시켜, HER2 발현 세포의 세포 사멸을 유도함을 보여준다. 1T2C 내의 두 접합체 간의 수용체 경합은 또한, 트라스투주맙-(Cys-L-SO1861)4 농도가 증가할 경우에 관찰되며, 트라스투주맙-사포린의 수용체 결합 및 내재화 경쟁 우위로 인하여 세포 사멸 활성이 감소한다(도 5-5A).
다음으로, 트라스투주맙-사포린을 본 발명에 따른 2,5 nM 트라스투주맙-(Cys-L-S01861)4의 고정 농도에 적정하고, HER2 발현 세포 상에서 표적화된 단백질 독소 매개 세포 사멸이 결정되었다. 이는 저농도 트라스투주맙-사포린과 조합된 2,5 nM 트라스투주맙-(Cys-L-S01861)4가 HER2 발현 세포에서 이미 효율적인 세포 사멸을 유도하였으나(SK-BR-3:IC50 = 2 pM; 도 5-5B), 반면에, 트라스투주맙-사포린 단독 또는 트라스투주맙-사포린 + 2,5 nM 트라스투주맙은 고농도 트라스투주맙-사포린에서만 세포 사멸을 나타내는 것으로 밝혀졌다(도 5-5B). 이 모두는 높은 HER2 발현 세포에서 낮은 트라스투주맙-(Cys-L-S01861)4 농도와 조합시에만 비교적 낮은 농도의 트라스투주맙-사포린이 효과적일 수 있고, 세포 사멸을 유도할 수 있다는 것을 보여준다.
다음으로, 트라스투주맙-(Cys-L-S01861)4를 본 발명에 따른 50 pM 트라스투주맙-사포린의 고정 농도에 적정하고, 낮은 HER2 발현 세포(A431 HER2+/-) 또는 HER2 발현이 없는 세포(JIMT-1: HER2+; MDA-MB-468: HER2-) 상에서 표적화된 단백질 독소 매개 세포 사멸이 결정되었다. HER2 발현이 낮거나 없는 세포는 트라스투주맙-(Cys-L-SO1861)4 + 50 pM 트라스투주맙-사포린의 어떠한 조합에 대해 전혀 민감하지 않았다(JIMT-1: IC50> 1000 nM; MDA-MB-468: IC50> 1000 nM; 도 6-5A, 6-5B). 이는 충분한 HER2 수용체 발현의 부재시, 효과적인 세포내 전달된 SO1861 농도가 엔도좀 단백질 독소 탈출 및 독소-매개 세포 사멸을 유도하기에 최적(역치)이 아님을 보여준다. 다음으로, 트라스투주맙-사포린을 2,5 nM 트라스투주맙-(Cys-L-SO1861)4의 고정 농도에 적정하고, 저 또는 무(no) HER2 발현 세포 상에서 표적화된 단백질 독소 매개 세포 사멸이 결정되었다. 저 HER2 발현 세포(JIMT-1)는 2,5 nM 트라스투주맙-(Cys-L-SO1861)4와 조합시 높은 트라스투주맙-사포린 농도에서만 세포 사멸을 보였으나(JIMT-1: IC50> 10.000 pM; 도 6-5C), 반면에 MDA-MB-468 세포(HER2-)는 시험된 어떠한 농도에서도 민감하지 않았다(MDA-MB-468: IC50> 10.000 pM; 도 6-5D).
이 모두는 단백질 독소의 탈출을 용이하게 하기 위한, 엔도리소좀 구획 내의 충분한 S01861의 항체-매개 전달을 용이하게 하는 충분한 HER2 수용체의 부재로 인해, HER2 수용체가 낮거나 없는 세포는 트라스투주맙-(Cys-L-S01861)3,7 + 트라스투주맙-사포린의 조합에 민감하지 않음을 보여준다.
실시예 15
1T2C 시스템의 활성이 엔도리소좀 구획의 산성화에 의해 구동되는 것을 보여주기 위해, 본 발명에 따른 1T2C 시스템은 엔도좀 산성화 억제제, 클로로퀸(chloroquine)과 조합하여 테스트되었다. 트라스투주맙-사포린을 클로로퀴틴과 조합하거나 조합하지 않고, 5 nM 트라스투주맙-(Cys-L-S01861)4와의 조합에 적정하였다. 트라스투주맙-사포린 + 5 nM 트라스투주맙-(Cys-L-S01861)4는 높은 HER2 발현 세포에서 강한 세포 사멸 활성을 나타내었지만(SK-BR-3, HER2++; IC50= 0.2 pM), 트라스투주맙-사포린 + 5 nM 트라스투주맙-(Cys-L-S01861)4 + 0.5 μM 클로로퀸은 SK-BR-3(HER2++) 세포에서 1T2C 세포 사멸 활성을 강하게 억제하였다(IC50 = 40 pM). 이는 엔도리소좀의 산성화가 방해되는 경우에 항체 접합된 S01861의 활성이 감소/차단됨을 보여준다(도 7-5A). 동일한 결과는 EGFR 발현 세포에서 세툭시맙-사포린 + 5 nM 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,8 + 0.5 μM 클로로퀸(IC50= 200 pM)과 비교한, 세툭시맙-사포린 + 5 nM 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,8의 본 발명에 따른 1T2C 조합(IC50= 1 pM)으로 유도되었다(A431, EGFR++; 도 7-5B).
실시예 16
1 표적 2-성분 시스템(1T2C)은 또한 도 14-5에 도시된 바와 같이 mAb1-S01861 및 mAb1-안티센스 BNA 올리고뉴클레오티드의 조합 치료일 수 있다. 이를 위해 본 발명자는 (암 세포에서 상향조절된) 암 특이적 표적 유전자의 mRNA에 대한 안티센스 BNA 올리고뉴클레오티드, 열 충격 단백질 27(HSP27)를 사용하였다, 세포질 내로 방출시, 안티센스 BNA는 HSP27를 인코딩하는 mRNA를 인식하고 결합하여, 파괴를 위해 mRNA를 표적하여, 암 세포 내에서 HSP27 mRNA 발현을 고갈시킨다. 본 발명에 따라, HSP27BNA를 DAR4로 세툭시맙과 접합시키고(세툭시맙-(Lys-L-HSP27BNA)4), EGFR 발현 세포(A431, EGFR++) 및 비-발현 세포(A2058, EGFR)에서 향상된 HSP27 유전자 침묵 활성을 위해 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,8과 조합하여 시험하였다(도 14-5). 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,8 + 100 nM 세툭시맙-(Lys-L-HSP27BNA)4는 EGFR 발현 세포에서 강한 HSP27 유전자 침묵을 나타내었으나(A431: IC50= nM, 도 8-5A), 반면에 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,8 단독은 어떠한 유전자 침묵 활성을 나타내지 않았다. A2058 세포(EGFR)에서, 유전자 침묵 활성은 1T2C 조합에서 관찰되지 않았다(도 8-5B). 그 다음, 세툭시맙-(Lys-L-HSP27BNA)4 + 76.9 nM 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,8은 EGFR 발현 세포에서 강한 HSP27 유전자 침묵 활성을 나타내었으며(A431:IC50 = 4 nM, 도 8-5C), 반면에 세툭시맙-(Lys-L-HSP27BNA)4 또는 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,8 또는 세툭시맙-(Lys-L-HSP27BNA)4 + 77 nM 세툭시맙의 조합은 어떠한 현저한 유전자 침묵 활성을 나타내지 않았다(IC50 > 100 nM). 실험이 EGFR 비-발현 세포(A2058)에서 수행된 경우, 1T2C 조합에서 유전자 침묵 활성이 관찰되지 않았다(IC50 > 100 nM; 도 8-5D). 이 모두는 1T2C 시스템이 높은 EGFR 발현 세포의 세포질로 안티센스 BNA 올리고를 효율적으로 전달하여, BNA 표적 mRNA의 mRNA 분해를 유도하여, 표적 유전자 침묵을 초래하는 것을 나타낸다.
실시예 17
1 표적 2-성분 시스템(1T2C)은 또한 도 15-5에 도시된 바와 같이 mAb1-(스캐폴드(-S01861)n)n 및 mAb1-단백질 독소의 조합 치료일 수 있다. 덴드론(-L-S01861)4는 DAR 3,9로 시스테인 잔기(Cys) 접합을 통해 세툭시맙에 접합되었으며, 세툭시맙-Cys-(덴드론(-L-SO1861)4)3,9은 EGFR 발현 세포(MDA-MB-468)에서 항-EGFR 항체-단백질 독소 접합체(세툭시맙-사포린)와 조합하여 향상된 세포 사멸 활성에 대하여 테스트되었다. 세툭시맙-Cys-(덴드론(-L-SO1861)4)3,9 + 10 pM 세툭시맙-사포린은 고 EGFR 발현 세포에서 독소-매개 세포 사멸을 효율적으로 유도하였으나(IC50= 0.4 nM; 도 9-5A), 반면에 이는 세툭시맙-Cys-(덴드론(-L-SO1861)4)3,9 또는 세툭시맙 + 10 pM 세툭시맙-사포린 또는 세툭시맙에 의해서는 유도되지 않았다(도 9-5A). 이는 1T2C 발명에 따라, 세툭시맙 접합된 덴드론(-L-SO1861)4이 (비-유효 농도에서) 세툭시맙 접합된 단백질 독소의 엔도좀 탈출을 효율적으로 향상시켜, 고 HER2 발현 세포의 세포 사멸을 유도함을 보여준다. 유사한 1T2C 실험은 낮은 수준의 EGFR를 발현하는 세포(HeLa, EGFR+/-)에서 수행되었으며, 이는 본 발명에 따른 1T2C 조합이 사용된 경우 세포 사멸 활성을 보이지 않았으며(IC50> 100pM; 도 9-5B), 이는 충분한 EGFR 수용체 발현의 부재하에서, 효과적인 세포내 SO1861 농도가 독소-매개 세포 사멸을 초래하는 단백질 독소의 세포질 전달을 유도하기 위한 최적(역치)이 아님을 나타낸다.
다음으로, 덴드론(-L-S01861)4를 DAR4로 시스테인 접합(Cys)을 통해 항-HER2 항체, 트라스투주맙에 접합하고, 트라스투주맙-Cys-(덴드론(-L-S01861)4)4를 생성하고, 이는 HER2 발현 세포(SK-BR-3, HER2++)에서 항-HER2 항체-단백질 독소 접합체(트라스투주맙-사포린)와 조합하여 향상된 세포 사멸 활성에 대해 시험하였다. 트라스투주맙-Cys-(덴드론(-L-SO1861)4)4 + 50 pM 트라스투주맙-사포린은 독소-매개 세포 사멸을 효율적으로 유도하였으나(IC50= 2 nM, 도 9-5C), 반면에 이는 트라스투주맙-Cys-(덴드론(-L-SO1861)4)4 또는 트라스투주맙 + 50nM 트라스투주맙-사포린 또는 트라스투주맙에 의해서는 유도되지 않았다(도 9-5C). 이는 트라스투주맙 접합된 덴드론(-L-SO1861)4이 (비-유효 농도에서) 트라스투주맙 접합된 단백질 독소의 엔도좀 탈출을 효율적으로 향상시켜, 고 HER2 발현 세포의 세포 사멸을 유도함을 보여준다. 낮은 수준의 HER2(JIMT-1, HER2+/-)를 발현하는 세포에서의 유사한 실험은 트라스투주맙-Cys-(덴드론(-L-SO1861)4)4 + 50 pM 트라스투주맙-사포린의 활성을 보이지 않았으며(IC50> 200 nM; 도 9-5D), 이는 충분한 HER2 수용체 발현의 부재하에서, 효과적인 세포내 SO1861 농도가 엔도좀 단백질 독소 탈출 및 독소-매개 세포 사멸을 유도하기 위한 최적(역치(threshold)이 아님을 나타낸다.
실시예 18
임상적으로 승인된 ADC, 트라스투주맙-엠탄신(T-DM1)은 항-Her2 항체, 트라스투주맙 및 소분자 독소 엠탄신의 접합체(DAR3.5)이다. T-DM1은 트라스투주맙-(Cys-L-SO1861)4과 조합하여 적정되었고, 본 발명에 따른 항체 단백질 독소 접합체, 트라스투주맙-사포린 + 트라스투주맙-(Cys-L-S01861)4와 비교하였다. 트라스투주맙-사포린 + 2.5 nM 트라스투주맙-(Cys-L-S01861)4는 트라스투주맙-사포린 + 2.5 nM 트라스투주맙 또는 트라스투주맙-사포린 단독에 비해 향상된 활성을 나타내었으나(IC50= 2 pM, 도 10-5), T-DM1 + 25.6 nM 트라스투주맙-(Cys-L-SO1861)4는 향상된 세포 사멸 활성을 보이지 않았다(IC50> 100 pM; 도 10-5). 이는 소분자가 이미 (엔도리소좀)막을 수동적으로 횡단할 수 있기 때문에, 본 발명에 따른 1T2C 시스템이 항체 소분자 접합체의 전달을 향상시킬 수 없음을 보여준다.
실시예 19
도 11-5A-D는 트라스투주맙(도 11-5A), 세툭시맙(도 11-5B) 또는 T-DM1(도 11-5C), 비접합 단백질 독소, 사포린, 디안틴 및 (비-세포 결합) IgG 항체에 접합된 사포린(도 11-5D)이 다양한 암 세포주 SK-BR-3, JIMT-1, MDA-MB-468, A431, CaSki, HeLa, A2058에 투여된 경우, 상대적인 세포 생존력을 나타낸다.
트라스투주맙과 세툭시맙은 대부분의 세포주에 노출되었을 때 세포 생존력에 영향을 미치지 않거나 거의 영향을 미치지 않으며, 트라스투주맙이 SK-BR-3 세포에 비교적 높은 농도로 노출될 때 HER2 성장 인자 수용체의 작용 차단을 통해 세포 성장 억제에 약간의 영향을 미치며, 그리고 세툭시맙이 MDA-MB-468 세포에 비교적 높은 용량으로 노출될 때 EGFR 성장 인자 수용체의 작용 차단을 통해 세포 성장 억제에 약간의 영향을 미친다.
TDM-1, 또는 아도-트라스투주맙 엠탄신은, 이전에 허셉틴(Herceptin)(화학명: 트라스투주맙) 및 탁산 화학요법으로 치료되는 HER2 양성 전이성 유방암; 허셉틴 및 탁산(taxane) 화학요법으로 신보조(neoadjuvant)(수술 전) 치료 후 잔류 질환이 발견된 경우 수술 후 초기 HER2 양성 유방암을 치료하는 미국 식품의약국에 의해 승인된 표적화된 치료제이다. TDM-1은 허셉틴(트라스투주맙)과 화학요법 의약 엠탄신의 조합이다. 도 11-5C는 TDM-1이 >1000 pM 농도에서 테스트된 모든 세포주에 대해 감소된 세포 생존력을 초래함을 보여준다.
시험된 세포주 상의 어떠한 세포 표면 분자에 대한 친화도가 없는 대조군 IgG에 결합된 독소 사포린, 및 유리 독소 사포린 및 디안틴은, 테스트된 독소의 최대 100,000 pM의 광범위한 농도에 걸쳐 세포 생존력에 영향을 미치지 않거나 거의 영향을 미치지 않는다(도 11-5D).
실시예 20
1 표적 2-성분 시스템(1T2C)은 또한 mAb1-QSmix(퀼라자 사포나리아로부터의 사포닌의 혼합물) 및 mAb1-단백질 독소의 조합 치료일 수 있다.
QSmix-EMCH를 DAR 4.1로 시스테인 잔기(Cys)를 통해 세툭시맙(인간 EGFR을 인식 및 결합하는 모노클로날 항체)에 접합하였다(세툭시맙-(Cys-L-QSmix)4,1). 세툭시맙-(Cys-L-QSmix)4,1을 10 pM 세툭시맙-사포린 또는 10 pM 세툭시맙-디안틴의 고정 농도에 적정하고, A431(EGFR++), CaSKi(EGFR+) 및 A2058(EGFR-) 세포 상에서 표적화된 단백질 독소 매개 세포 사멸이 결정되었다. 이는 A431(EGFR++) 및 CaSKi(EGFR+) 세포에서 저농도의 세툭시맙-(Cys-L-QSmix)4.1 + 10 pM 세툭시맙-사포린 또는 10pM 세툭시맙-디안틴에서 강한 세포 사멸을 나타내었으나 (A431: IC50= 3 nM, 도 12-5A; CaSKi: IC50= 1nM, 도 12-5B), 반면에 모든 대조군 처리는 EGFR 발현 세포에서 어떠한 세포 사멸을 유도할 수 없는 것으로 나타났다. EGFR을 발현하지 않는 세포(A2058; EGFR-)에서, 본 발명에 따른 조합으로 HSP27 유전자 침묵이 관찰되지 않았다(IC50> 1000 nM; 도 12-5C). 이는 세툭시맙 접합된 QS21mix가 (비-유효 농도에서) 세툭시맙 접합된 단백질 독소의 엔도좀 탈출을 효율적으로 향상시켜, EGFR 발현 세포에서만 세포 사멸을 유도함을 보여준다.
실시예 21 2 표적 2-성분 시스템(생체내)
2 표적 2-성분 시스템(2T2C)은 mAb1-SO1861 및 mAb2-단백질 독소의 조합 처리이다(도 15-6; 16-6; 17-6). SO1861-EMCH는 DAR 4로 시스테인 잔기(Cys)를 통해 세툭시맙(인간 EGFR을 인식하고 결합하는 모노클로날 항체)에 접합되어, 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)4 생성물로 되었다. 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)4 및 트라스투주맙-사포린 또는 CD71mab-사포린의 조합은 도 1-6 및 도 2-6에 도시된 바와 같이 EGFR 종양 표적화된 세포 사멸을 위한 A431(EGFR++/HER2+/-/CD71+) 이종이식 '누드' 마우스 종양 모델에서 테스트되었다. 치료 효능을 결정하기 위해 용량 증량을 수행했다(9일째: 0.3mg/kg 트라스투주맙-사포린 또는 0.1mg/kg CD71mab-사포린 + 5mg/kg 세툭시맙-(Cys-L-SO1861) 4 ; 14일째, 18일째: 0.1 mg/kg 트라스투주맙-사포린 또는 0.05 mg/kg CD71mab-사포린 + 5 mg/kg 세툭시맙-(Cys-L-SO1861) 4 , 21일째: 0.05 mg/kg 트라스투주맙-사포린 또는 0.05 mg/kg CD71mab-사포린 + 15 mg/kg 세툭시맙-(Cys-L-SO1861) 4 ; 28일째: 0.02 mg/kg 트라스투주맙-사포린 또는 0.02 mg/kg CD71mab-사포린 + 15 mg/kg 세툭시맙-(Cys-L-SO1861) 4 트라스투주맙-사포린/세툭시맙-SO1861. 대조군은 각각 동일한 투여 계획이었으며, 세툭시맙(i.v.)만 치료일마다 25mg/kg이 제공되었다). 32일째(점선), 35일 및 39일째에 발명자는 25 mg/kg 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)4의 2T2C 발명에 따라, 조합을 시작하였으며 (복강내 주사(i.p.) + 0.02 mg/kg 트라스투주맙-사포린 또는 0.02 CD71mab-사포린(정맥내 투여, (i.v.))), 이는 비히클 대조군, 25 mg/kg 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)4 또는 0.02 mg/kg 트라스투주맙-사포린/CD71mab-사포린 단일 요법에 비교하여 두 2T2C 조합 그룹 모두에 대해 강력한 종양 퇴화를 나타냈다 (도 1-6, 2-6). 2T2C 시스템은 EGFR에 대해 임상적으로 사용되는 모노클로날 항체인, 세툭시맙을 심지어 능가한다. 다음으로 발명자는 동일한 실험을 수행했지만 발명자는 9일 및 14일에 투여 및 이후 주당 1회 투여의 처리로 25 mg/kg 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)4로 시작했다(복강내 주사 (i.p.) + 0.03 mg/kg 트라스투주맙-사포린 또는 0.03 CD71mab-사포린 (정맥내 투여, (i.v.)). 본 발명에 따른 2T2C 시스템은 모든 마우스에서 종양 퇴화를 보였고, 심지어 두 2T2C 그룹 모두에서 1마리의 마우스에서도 완전한 종양 소거(eradication)(종양 부피 = 0 mm3)을 나타냈다(도 2-6). 또한 여기에서 대조군은 종양 부피의 강한 증가를 보인 반면, 이 A431 마우스 모델에 대한 양성 대조군인, 세툭시맙은 종양 성장 억제만을 나타내었지만 퇴화는 나타내지 않았다(도 2-6). 이는, 종양 함유 마우스의 고형 종양의 세포질에서 치료 단백질 독소의 고효율 표적화된 전달을 유도하는 세툭시맙 접합된 SO1861 + 트라스투주맙 접합된 단백질 독소 또는 CD71mab 접합된 단백질 독소의, 본 발명에 따른 2T2C 시스템 접근을 보여주고 가능하게 하며, 따라서 일부 마우스에서는 심지어 완전한 종양 소거를 유도하고 다른 마우스에서는 큰 크기의 종양(2000mm3)에서도 강력한 종양 퇴화를 유도한다.
실시예 22 2 표적 2성분 시스템(시험관 내)
결과
2 표적 2-성분 시스템(2T2C)은 mAb1-SO1861 및 mAb2-단백질 독소의 조합 처리이다(또한 도 1-6, 2-6, 15-6, 16-6, 17-6 참조). SO1861-EMCH는 DAR 3,7로 시스테인 잔기(Cys)를 통해 세툭시맙(인간 EGFR을 인식하고 결합하는 모노클로날 항체)에 접합되어 (세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,7)로 되었다. 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,7은 50pM의 트라스트주맙-사포린(단백질 독소에 접합된 트라스투주맙, 사포린)의 고정 농도에 적정되었고 EGFR/HER2 발현 세포(A431, EGFR++/HER2+/-, CaSKi, EGFR+/HER2+/-)에 대한 표적화된 단백질 독소 매개 세포 사멸은 도 3-6에 도시된 바와 같이 결정되었다. 이는 낮은 농도의 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,7에서 강력한 세포 사멸을 나타내는(A431: IC50= 3 nM 및 CaSKi IC50= 10 nM; 도 3-6A, 3-6B) 반면, 등가 농도(equivalent concentration)의 세툭시맙, 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,7 또는 세툭시맙 + 50 pM 트라스투주맙-사포린은 EGFR/HER2 발현 세포에서 임의의 세포 사멸 활성을 유도할 수 없었다. 이는 상대적으로 낮은 농도의 세툭시맙-SO1861 접합체가 트라스투주맙 접합된 단백질 독소의 엔도좀 탈출을 효율적으로 향상시켜(비-유효 농도에서), 이에 의해 높은 EGFR/낮은 HER2 발현 세포의 효율적인 세포 사멸을 유도한다는 것을 나타낸다.
다음으로, 트라스투주맙-사포린을 75nM 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,7의 고정 농도에 적정하고 EGFR/HER2 발현 세포에 대한 표적화된 단백질 독소 매개 세포 사멸을 결정하였다. 이는 낮은 농도의 트라스투주맙-사포린과 조합된 75 nM 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,7이 EGFR/HER2 발현 세포에서 이미 효율적인 세포 사멸을 유도함을 나타내었으며(A431:IC50= 5 pM; 및 CaSKi:IC50= 1 pM; 도 3-6C 및 3-6D), 반면 트라스투주맙-사포린 단독 또는 트라스투주맙-사포린 + 75 nM 세툭시맙은 두 세포주에서 유의한 세포 사멸 활성(IC50> 10.000 pM)을 나타내지 않았다(도 3-6C, 3-6D). 이 모두는 상대적으로 낮은 농도의 트라스투주맙-사포린이 효과적일 수 있고 높은 EGFR/낮은 HER2 발현 세포에서 낮은 세툭시맙-SO1861 접합체 농도와 조합하여 세포 사멸을 유도할 수 있음을 나타낸다.
다음으로, 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,7을 50pM 트라스트주맙-사포린의 고정 농도에 적정하고 HeLa(EGFR+/-/HER2+/-) 또는 A2058(EGFR-/HER2+/-)에 대한 표적화된 단백질 독소 매개 세포 사멸은 도 4-6, 15-6 - 17-6에 도시된 바와 같이 결정되었다. HeLa(EGFR+/-/HER2+/-) 및 A2058(EGFR-/HER2+/-) 세포 모두 낮은 농도의 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,7 + 50 pM 트라스투주맙-사포린에서 세포 사멸을 나타내지 않는다 (HeLa: IC50= 400nM, A2058: IC50> 400nM, 도 4-6A, 4-6B). 이는 충분한 수용체 발현이 없는 경우에 효과적인 세포내 전달된 SO1861 농도가 단백질 독소의 엔도좀 탈출 및 세포질 전달을 유도하는데 (역치에) 도달되지 않음을 나타낸다. 다음으로, 트라스투주맙-사포린은 75 nM 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,7의 고정 농도에 적정되었고 HeLa(EGFR+/-/HER2+/-) 또는 A2058(EGFR-/HER2+/-)에 대한 표적화된 단백질 독소 매개 세포 사멸이 결정되었다. HeLa(EGFR+/-/HER2+/-) 및 A2058(EGFR-/HER2+/-) 세포 모두는 세포 사멸 활성을 나타내지 않았다(HeLa: IC50> 10.000 pM; A2058: IC50> 10.000 pM; 도 4-6C, 4-6D). 이 모두는, 세포의 세포질 내 독소의 엔도좀 탈출을 보장하기에 충분한 SO1861(역치)의 항체-매개 전달을 촉진하는 충분한 EGFR 수용체의 부족으로 인하여, EGFR 수용체 발현이 낮거나 없는 세포가 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,7 + 트라스투주맙-사포린의 조합에 민감하지 않음을 나타낸다.
다음으로, SO1861-EMCH는 DAR4로 시스테인 잔기(Cys)를 통해 트라스트주맙(인간 HER2를 인식하고 결합하는 모노클로날 항체)에 접합되었다 (트라스트주맙-(Cys-L-SO1861)4). 트라스트주맙-(Cys-L-SO1861)4는 고정 농도의 1.5pM EGF디안틴(EGFR 표적화된 리간드 독소 융합 단백질)에 적정되었고 HER2/EGFR 발현 세포(SK-BR-3: HER2++/EGFR+/-)에 대한 표적화된 단백질 독소 매개 세포 사멸이 결정되었다. 이는 낮은 농도의 트라스트주맙-(Cys-L-SO1861)4 + 1.5pM EGF디안틴에서 강력한 세포 사멸을 나타내었으며(SK-BR-3: IC50= 1nM; 도 5-6A), 반면 등가 농도(equivalent concentration)의 트라스트주맙, 트라스트주맙-(Cys- L-SO1861)4 또는 트라스트주맙 + 1.5pM EGF디안틴은 HER2++/EGFR+/- 발현 세포에서 임의의 세포 사멸 활성을 유도할 수 없었다. 이는 트라스투주맙 접합된 SO1861이 EGF 융합 단백질 독소의 엔도좀 탈출을 효율적으로 향상시켜(비효과적인 농도에서), 높은 HER2/낮은 EGFR 발현 세포의 세포 사멸을 유도함을 나타낸다.
다음으로, EGF디안틴은 2.5nM 트라스트주맙-(Cys-L-SO1861)4의 고정 농도에 적정되었고 SK-BR-3(HER2++/EGFR+/-) 발현 세포에 대한 표적화된 단백질 독소 매개 세포 사멸이 결정되었다. 이는 낮은 농도의 EGF디안틴과 조합된 2.5nM 트라스트주맙-(Cys-L-SO1861)4가 HER2/EGFR 발현 세포에서 이미 효율적인 세포 사멸을 유도하였으며(SK-BR-3: IC50=1pM)(도 5-6B), 반면에 EGF디안틴 단독 또는 EGF디안틴 + 2.5 nM 트라스트주맙은 세포 사멸 활성을 나타내지 않음(IC50>10.000 pM)(도 5-6B)을 나타낸다. 이 모두는 상대적으로 낮은 농도의 EGF디안틴이 효과적일 수 있고 높은 HER2/낮은 EGFR 발현 세포에서 낮은 트라스트주맙-(Cys-L-SO1861)4 농도와 조합하여만 세포 사멸을 유도할 수 있음을 나타내었다.
다음으로, 트라스트주맙-(Cys-L-SO1861)4는 1.5pM EGF디안틴의 고정 농도에 적정되었고 JIMT-1(HER2+/-/EGFR+/-) 또는 MDA-MB-468: HER2-/EGFR++)에 대한 표적화된 단백질 독소 매개 세포 사멸이 결정되었다. 두 세포주는 트라스트주맙-(Cys-L-SO1861)4 + 1.5pM EGF디안틴(JIMT-1: IC50> 1000nM; MDA-MB-468: IC50> 1000nM; 도 6-6A, 6-6B)의 임의의 조합에 대해 민감하지 않았다. 이는 충분한 HER2 수용체 발현이 없는 경우, 엔도좀 탈출 및 단백질 독소의 세포질 전달을 유도하기에 효과적인 세포내 전달된 SO1861 농도에 (역치에) 도달하지 않음을 나타낸다.
다음으로, EGF디안틴은 2.5nM 트라스트주맙-(Cys-L-SO1861)4의 고정 농도에 적정되었고 JIMT-1(HER2+/-/EGFR+/-) 또는 MDA-MB-468(HER2-/EGFR++)에 대한 표적화된 단백질 독소 매개 세포 사멸이 결정되었다. 두 세포주 모두 2,5 nM 트라스투주맙-(Cys-L-SO1861)4의 유무에 관계없이 높은 EGF디안틴 농도에서 세포 사멸을 나타내었다 (JIMT-1: IC50= 10.000 pM; MDA-MB-468: IC50= 200 pM, 도 6-6C, 6-6D).
이 모두는 세포의 세포질 내 독소의 엔도좀 탈출을 보장하기에 충분한 SO1861(역치)의 항체-매개 전달을 촉진하는 충분한 HER2 수용체의 부족으로 인하여, HER2 수용체 발현이 낮거나 없는 세포가 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,7 + 1.5pM EGF디안틴의 조합에 민감하지 않음을 나타낸다.
다음으로, SO1861-EMCH는 DAR 4로 시스테인 잔기(Cys)를 통해 트라스투주맙(인간 HER2를 인식하고 결합하는 모노클로날 항체)에 접합되었다(트라스트주맙-(Cys-L-SO1861)4). 트라스트주맙-(Cys-L-SO1861)4는 5pM 세툭시맙-사포린(EGFR 표적화 항체-단백질 독소 접합체)의 고정 농도에 적정되었으며, HER2/EGFR 발현 세포(SK-BR-3: HER2++/EGFR+/-)에 대한 표적화된 단백질 독소 매개 세포 사멸이 도 15-6 - 17-6에 도시된 바와 같이 결정되었다. 이는 낮은 농도의 트라스투주맙-(Cys-L-SO1861)4 + 5 pM 세툭시맙-사포린에서 강력한 세포 사멸을 나타내는(SK-BR-3: IC50= 1 nM; 도 7-6A) 반면, 등가 농도의 트라스투주맙, 트라스투주맙-(Cys-L-SO1861)4 또는 트라스투주맙 + 5 pM 세툭시맙-사포린은 HER2++/EGFR+/- 발현 세포에서 임의의 세포 사멸 활성을 유도할 수 없었다. 이는 트라스투주맙 접합된 SO1861이 세툭시맙 접합된 단백질 독소의 엔도좀 탈출을 효율적으로 향상시켜(비효과적인 농도에서), HER2++/EGFR+/- 발현 세포의 세포 사멸을 유도함을 나타낸다.
다음으로, 세툭시맙-사포린은 2.5nM 트라스트주맙-(Cys-L-SO1861)4 및 75nM 트라스트주맙-(Cys-L-SO1861)4의 고정 농도에서 적정되었고 HER2/EGFR 발현 세포 (SK-BR-3: HER2++/EGFR+/-)에 대한 대한 표적화된 단백질 독소 매개 세포 사멸이 결정되었다. 이는 낮은 농도의 세툭시맙-사포린과 조합된 2.5 nM 트라스투주맙-(Cys-L-SO1861)4가 SK-BR-3 세포에서 이미 효과적인 세포 사멸을 유도했음을 나타내는(SK-BR-3: IC50= 1 pM; 도 7-6B) 반면, 세툭시맙-사포린 단독 또는 세툭시맙-사포린 + 2.5nM 트라스투주맙은 고농도 트라스투주맙-사포린에서만 세포 사멸을 나타내었다(SK-BR-3: IC50> 4000 pM; 도 7-6B). 이 모두는 상대적으로 낮은 농도의 세툭시맙-사포린이 효과적일 수 있고 HER2++/EGFR+/- 발현 세포에서 낮은 트라스투주맙-(Cys-L-SO1861)4 농도와의 조합에서만 세포 사멸을 유도할 수 있음을 나타낸다.
다음으로, 트라스트주맙-(Cys-L-SO1861)4는 5 pM 세툭시맙-사포린의 고정 농도에 적정되었고 JIMT-1(HER2+/-/EGFR+/-) 및 MDA-MB-468 (HER2-/EGFR++) 세포에 대한 표적화된 단백질 독소 매개 세포 사멸이 결정되었다. 두 세포주는 트라스투주맙-(Cys-L-SO1861)4 + 5pM 세툭시맙-사포린의 조합에 대해 민감하지 않았다 (JIMT-1: IC50> 1000 nM; MDA-MB-468: IC50> 1000nM; 도 8-6A, 8-6B). 이는 충분한 HER2 수용체 발현이 없는 경우, 엔도좀 탈출 및 단백질 독소의 세포질 전달을 유도하기에 효과적인 세포내 전달된 SO1861 농도에 (역치에) 도달하지 않음을 나타낸다.
다음으로, 세툭시맙-사포린은 2.5nM 트라스투주맙-(Cys-L-SO1861)4의 고정 농도에 적정되었고 JIMT-1(HER2+/-/EGFR+/-) 및 MDA-MB-468 (HER2-/EGFR++) 세포에 대한 표적화된 단백질 독소 매개 세포 사멸이 결정되었다. 두 세포주는 2.5nM 트라스트주맙-(Cys-L-SO1861)4의 유무에 관계없이 유사한 세툭시맙-사포린 농도에서 세포 사멸을 나타내었다(JIMT-1: IC50= 80pM; MDA-MB-468: IC50= 100pM; 도 8-6C, 8-6D).
이 모두는, 세포의 세포질 내 독소의 엔도좀 탈출을 보장하기에 충분한 SO1861(역치)의 항체-매개된 전달을 촉진하는 충분한 HER2 수용체가 없기 때문에, HER2 수용체 발현이 낮거나 없는 세포가 트라스트주맙-(Cys-L-SO1861)4 + 세툭시맙-사포린의 조합에 민감하지 않음을 나타낸다.
실시예 23
접합된 SO1861의 활성이 엔도좀 구획의 산성화에 의해 유도된다는 것을 보여주기 위해, 본 발명에 따른 2T2 성분 시스템을 엔도좀 산성화 억제제인 클로로퀸과 조합하여 테스트하였다. 트라스트주맙-사포린 + 77 nM 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,9 또는 트라스트주맙-디안틴 + 77 nM 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,9는 A431(EGFR++/HER2+/-) 세포에서 강한 세포 사멸을 나타내었으나, 반면 본 발명에 따른 이러한 2T2C 활성은, 800 nM 클로로퀸이 두 조합에 동시 투여될 때 억제되었다(도 9-6A). CD71mab-사포린 + 10.5 nM 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,9 + 500 nM 클로로퀸이 A431(EGFR++/CD71+) 및 MDA-MB-468(EGFR++/CD71+) 세포에서 테스트되었을 때 (도 9-6B, 9C) 또는 CD71mab-사포린 + 5 nM 트라스투주맙-(Cys-L-SO1861)4 + 500 nM 클로로퀸이 SK-BR-3(HER2++/CD71+) 세포에서 테스트되었을 때(도 9-6D), 동일한 결과가 관찰되었다. 이는 엔도좀의 산성화가 차단될 때, 2T2C 시스템 내에서 접합된 SO1861의 세포내 활성이 억제될 수 있음을 나타낸다.
실시예 24
2 표적 2-성분 시스템(2T2C)은 또한 mAb1-SO1861 및 mAb2-안티센스 BNA 올리고뉴클레오티드의 조합 처리이다(도 16-6). 따라서, 2T2C 시스템은 또한 암 특이적 표적 유전자인 열 충격 단백질 27(HSP27)의 mRNA에 대해 안티센스 BNA 올리고뉴클레오티드와 조합하여 테스트되었다. 세포질 내로 방출시, 안티센스 BNA는 HSP27을 인코딩하는 mRNA를 인식하고 결합하여 파괴를 위해 mRNA를 표적화함으로써 암세포 내에서 HSP27 발현을 고갈시킨다. HSP27BNA는 DAR4.4로 트라스트주맙에 접합되었고(트라스트주맙-(Lys-L-HSP27BNA)4,4), 도 16-6에 도시된 바와 같이, A431(EGFR++/HER2+/-) 세포 및 A2058(EGFR-/HER2+/-) 세포에서의 HSP27 유전자 침묵 활성의 향상에 대해 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,9와 함께 테스트되었다. 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,9를 100nM 트라스트주맙-(Lys-L-HSP27BNA)4,4의 고정 농도에 적정하였고 표적화된 HSP27BNA-매개 유전자 침묵 활성을 결정하였다. 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,9 + 100 nM 트라스투주맙-(Lys-L-HSP27BNA)4,4는, 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,9 단독과 비교하여 A431 세포(EGFR++/HER2+/-)에서 강력한 유전자 침묵 활성을 나타낸다(A431: IC50= 1 nM; 도 10-6A). A2058 세포(EGFR-/HER2+/-)에서, 본 발명에 따른 조합은 HSP27 유전자 침묵을 나타내지 않았다(A2058: IC50 > 100nM; 도 10-6B). 이는 세툭시맙 접합된 SO1861이 트라스투주맙 접합된 BNA 올리고뉴클레오티드의 엔도좀 탈출을 (비효과적인 농도에서) 효율적으로 향상시켜, EGFR++/HER2+/- 발현 세포에서 표적 유전자 침묵을 유도한다는 것을 나타낸다.
다음으로, 트라스트주맙-(Lys-L-HSP27BNA)4,4를 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,9의 고정 농도에 적정하고 도 16-6에 도시된 바와 같이 A431(EGFR++/HER2+/-) 세포 및 A2058(EGFR-/HER2+/-) 세포에서 표적화된 HSP27BNA-매개 유전자 침묵 활성이 결정되었다. 트라스트주맙-(Lys-L-HSP27BNA)4,4 + 77 nM 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,9는 A431 세포(EGFR++/HER2+/-)에서 강력한 유전자 침묵 활성을 나타내며(A431: IC50= 1nM; 도 10-6C), 반면 트라스투주맙-(Lys-L-HSP27BNA)4,4 단독 또는 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,9 단독 또는 트라스투주맙-(Lys-L-HSP27BNA)4,4 + 77 nM 세툭시맙은 임의의 유의미한 유전자 침묵 활성을 나타내지 않았다(IC50>100nM). A2058(EGFR-/HER2+/-) 세포는 본 발명에 따른 조합에서 임의의 유전자 침묵 활성을 나타내지 않았다(A2058: IC50> 100nM; 도 10-6D).이 모두는 상대적으로 낮은 농도의 트라스투주맙-HSP27BNA가 HER2++/EGFR+/- 발현 세포에서 낮은 농도의 세툭시맙-(-L-SO1861) 농도와 조합된 경우에만 세포 사멸에 효과적일 수 있고 유도할 수 있음을 나타낸다.
실시예 25
2 표적 2-성분 시스템(2T2C)은 또한 mAb1-(덴드론(-SO1861)n)n 및 mAb2-단백질 독소의 조합 처리일 수 있다. 덴드론(-L-SO1861)4는 DAR3,9로 시스테인 잔기(Cys)를 통해 항-EGFR 항체인 세툭시맙에 접합되었으며(세툭시맙-Cys-(덴드론(-L-SO1861)4)3,9), 도 17-6에 도시된 바와 같이 MDA-MB-468(EGFR++/CD71+) 발현 세포에서 항-CD71 항체 단백질 독소 접합체(CD71mab-사포린)와 조합하여 향상된 세포 사멸 활성에 대해 테스트되었다. 세툭시맙-Cys-(덴드론(-L-SO1861)4)3,9 + 10 pM CD71mab-사포린은 MDA-MB-468(EGFR++/CD71+) 발현 세포에서 독소-매개 세포 사멸을 효율적으로 유도하며(IC50= 0.4 nM, 도 11-6A), 반면에 이는 세툭시맙-Cys-(덴드론(-L-SO1861)4)3,9) 또는 세툭시맙 + 10 pM CD71mab-사포린 또는 세툭시맙에 의해 유도될 수 없었다(도 11-6A). 이는 세툭시맙 접합된 덴드론(-L-SO1861)4가 CD71mab-단백질 독소의 엔도좀 탈출을 (비-효과적인 농도에서) 효율적으로 향상시켜 EGFR++/CD71+ 발현 세포의 세포 사멸을 유도함을 나타낸다. 유사한 실험이 HeLa 세포(HER2+/-/CD71+) 세포에서 수행되었으며 이는 세툭시맙-Cys-(덴드론(-L-SO1861)4)3,9) + 10pM CD71mab-사포린의 활성을 나타내지 않았으며 (IC50> 100nM, 도 11-6B), 이는 충분한 EGFR 수용체 발현이 없는 경우, 단백질 독소의 세포질 전달 및 엔도좀 탈출을 유도하기에 효과적인 세포내 SO1861 농도(역치)에 도달하지 않음을 나타낸다.
다음으로, 덴드론(-L-SO1861)4를 DAR4로 시스테인 접합(Cys)을 통해 항-HER2 항체인 트라스트주맙에 접합하여, 트라스트주맙-Cys-(덴드론(-L-SO1861)4)4를 형성하고, SK-BR-3 세포(HER2++/CD71+) 발현 세포에서 항-CD71 항체 단백질 독소 접합체(CD71mab-사포린)와 조합하여 향상된 세포 사멸 활성에 대해 테스트되었다. 트라스투주맙-Cys-(덴드론(-L-SO1861)4)4 + 10 pM CD71mab-사포린은 SK-BR3 세포에서 독소-매개 세포 사멸을 효율적으로 유도하지만(IC50= 3 nM, 도 11-6C), 이는 트라스투주맙-Cys-(덴드론(-L-SO1861)4)4 또는 트라스투주맙(등가(equivalent)) + 10 pM CD71mab-사포린 또는 트라스투주맙에 의해 유도되지 않았다(도 11-6C). 이는 본 발명에 따른 트라스투주맙 접합된 덴드론(-L-SO1861)4이 CD71mab-단백질 독소의 엔도좀 탈출을 (비-효과적인 농도에서) 효율적으로 향상시켜 HER2++/CD71+ 발현 세포의 세포 사멸을 유도함을 나타낸다. 유사한 실험이 JIMT-1 세포(HER2+/-/CD71+)에서 수행되었으며 이는 트라스투주맙-Cys-(덴드론(-L-SO1861)4)4 + 10pM CD71mab-사포린의 활성을 나타내지 않았으며(IC50> 100nM 도 11-6C), 이는 충분한 HER2 수용체 발현이 없는 경우, 단백질 독소의 세포질 전달 및 엔도좀 탈출을 유도하기에 효과적인 세포내 SO1861 농도(역치)에 도달하지 않음을 나타낸다.
실시예 26
임상적으로 승인된 ADC인 트라스투주맙-엠탄신(T-DM1)은 항-Her2 항체인 트라스투주맙과 소분자 독소 엠탄신(DAR3-4)의 접합체이다. T-DM1은 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)4와 조합하여 본 발명에 따라 2T2C 시스템 내에서 테스트되었다. T-DM1 + 77 nM 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,9는 T-DM1 단독 또는 T-DM1 + 77 nM 세툭시맙과 비교하여 향상된 세포 사멸 활성을 나타내지 않았으나 (IC50= 80.000 pM, 도 12-6), 반면, 본 발명에 따른 트라스투주맙-사포린 + 75 nM 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,7은 트라스투주맙-사포린 + 75 nM 세툭시맙 또는 트라스투주맙-사포린 단독에 비하여 향상된 세포 사멸 활성을 나타내었다 (IC50=3 pM, 도 12-6). 이 모두는 2T2C 시스템이 이미 수동적으로 세포(엔도좀) 막을 통과할 수 있는, 항체 접합된 소분자의 전달을 향상시키지 않음을 나타낸다.
실시예 1-2
다양한 농도의 트라스투주맙-사포린(HER2 표적된 단백질-독소 접합체; 정맥내)을 1.5 mg/kg SO1861(항체-독소 주입 1시간 전; 피하)과 조합하여 BT474 (HER2++) 이종이식 마우스 모델에서의 향상된 효능에 대해 테스트하였다. 종양 크기가 약 ~150㎣에 도달하였을 때 13일째에 투여를 시작하고, 모든 처리 후에 종양 부피를 측정하였다. 종양 성장 억제가 1 mg/kg 및 0.3 mg/kg 트라스투주맙-사포린으로 처리된 마우스에서 관찰되었음에도 불구하고, 트라스투주맙-사포린 + SO1861의 조합으로 처리된 마우스에서 향상된 종양 성작 억제는 관찰되지 않았다. 이는 접합되지 않은 S01861이 현재의 설정 및 마우스 모델에서 항체-단백질 독소를 향상시킬 수 없음을 보여준다.
실시예 2-2
재료:
QSmix (1): S4521 (Sigma Aldrich); QSmix (2): 6857.1 (Carl Roth) QSmix (3): Quil-A® Adjuvant: vac-quil (InvivoGen/Brenntag).
이전에, 다양한 사포닌(S01861, S01642)의 효능은 리간드 독소 융합체(예를 들어, EGF디안틴) 또는 항체-단백질 독소 접합체와 조합하여 세포에 '유리' 비접합 분자로서 공동 투여되었으며, 이는 표적 발현 세포의 향상된 세포 사멸 활성을 초래하였다. 여기서, 사포나리아 오피시날리스(Saponaria officinalis)의 뿌리 추출물로부터 분리된 3개의 상이한 사포닌 분자(SO1861, SO01862(SO1861의 이성질체), S01832 및 SO1904)를 HeLa(EGFR+) 세포 상에서 비-유효 고정 농도의 1.5 pM EGFR디안틴의 존재 및 부재하에 적정하였다. 이는 EGFR디안틴을 이용하지 않은 처리에 비해, 시험된 모든 사포닌 변이체(IC50 = 300 nM; 도 2-2A)에 대한 세포 사멸 활성의 강한 향상을 나타내었다. 그 다음, EGFR디안틴은 고정 농도의 사포닌(~ 1000 nM)으로 적정되었고, 이는 낮은 pM 농도의 EGF디안틴 (IC50= 0.4 pM; 도 2-2B)에서 강한 표적된 세포 사멸 향상을 나타내었으며, 이는 사용된 모든 사포닌 SO1861, SO1862(S01861의 이성질체), S01832 및 SO1904에 대해 관찰되었다. EGF-디안틴 단독은 매우 높은 농도(IC50 = 10.000 pM)에서만 세포 사멸을 유도할 수 있었다. 이는 이러한 특정 유형의 사포닌 모두가 매우 적은 양의 이용가능한 표적된 독소만을 이용하여 엔도좀 탈출을 효율적으로 유도하는 고유한 능력을 가지고 있음을 보여준다.
이 테스트를 확장하기 위해, 다른 공급원의 사포닌을 분석하였다. 집소필라 엘레간스(Gypsophila elegans) M.Bieb.의 뿌리 추출물로부터 정제된 사포닌(GE1741)을 1.5 pM EGF디안틴의 존재 및 부재하에서 HeLa 세포 상에 적정하고, 정제된 S01861과 비교하였다. GE1741은 또한 EGF디안틴 유도된 HeLa 세포 사멸을 향상시키지만, S01861에 비해 약간 적은 효능을 나타내며(GE1741 IC50 = 800 nM; 도 2-2C), 또한 더 높은 일반적인 독성을 나타낸다(EGF디안틴의 부재에서 IC50= 5.000 nM; 도 2-2C). 다른 부분적으로 정제된 퀼라자 사포나리아 사포닌의 혼합물(QSmix 1-3)이 HeLa 세포 상에 1.5 pM EGF디안틴과 함께 공동-투여된 유사한 시험이 수행되었으며, 이는 3개 중 2개에 대해 SO1861와 유사한 활성을 나타내었다(IC50 QSmix/QSmix3=300nM; 도 2-2D). QSimix(2)는 1.5 pM EGF디안틴 유도 세포 사멸을 향상시키는데 덜 효율적이나(IC50 = 2000 nM; 도 2-2D), 일반적인 독성이 관찰되지 않았다. 이는 또한 QS 추출물에서, 특정 유형의 사포닌을 이용하여 표적화 리간드 독소 EGF디안틴의 엔도좀 탈출을 효율적으로 유도할 수 있음을 나타낸다.
실시예 3-2
본 발명에 따라, S01861 분자를 항체에 접합시키기 위하여, 불안정성/산 민감성 링커(-EMCH 또는 -N3)를 알데히드기를 통해 S01861에 접합시켜, S01861-EMCH 또는 S01861-N3를 생성하였다. S01861-EMCH의 활성을 입증하기 위해, EGFR 발현(A431, HeLa) 및 비-발현 세포(A2058) 상에 고정된 비-효능(1.5 pM) EGF디안틴 농도의 존재 및 부재하에서 상기 분자를 적정하였다. 3가지 모든 세포주에서 SO1861 단독은 강한 세포 생존력 감소를 나타냈으나, 단일 화합물로서 SO1861-EMCH는 최대 25.000 nM까지 독성을 나타내지 않았다(도 3-2A-C). S01861-EMCH를 1.5 pM EGF디안틴과 조합한 경우, EGFR+ A431 및 HeLa 세포에서 강한 표적 특이적 세포 생존력 감소가 관찰되지만(IC50 = 3.000 nM; 도 3-2A,B), EGFR- A2058 세포는 전혀 영향을 받지 않는다(도 3-2C). 유사한 결과를 S01861-N3에 대해서 얻었다. 1.5 pM EGF디안틴과 공동-투여된 S01861-N3 또한 A431 및 HeLa 세포 상에서 효율적인 세포 사멸을 나타내지만(IC50 = 3.000 nM), EGFR디안틴이 없는 경우, 일반적인 독성은 10.000 nM 초과에서 관찰된다(도 3-2D, 3-2E).
본 발명에 따른, 항체에 대한 S01861의 안정한 접합을 위해, 안정한 링커(HATU)가 S01861의 카복실산기를 통해 S01861에 접합되어, S01861-(S)를 생성하였다. 활성을 측정하기 위해, 상이한 농도의 S01861-(S)를 1.5 pM EGF디안틴과 함께 공동-투여하고, EGFR 발현 HeLa 세포에서 세포 사멸 활성에 대해 시험하였다. S01861-(S)는 S01861과 유사한 활성을 나타내었으며, 이는 카르복실산에 대한 접합이 S01861-EMCH(도 4-2)에서 관찰되는 바와 같이 상기 분자의 엔도좀 탈출 향상 효능에 영향을 미치지 않음을 나타낸다.
실시예 4-2
불안정한 S01861은 DAR3.9로 시스테인 잔기(Cys)를 통해 항-EGFR 항체 세툭시맙(인간 EGFR을 인식 및 결합하는 모노클로날 항체)에 접합하고(세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3.9), 향상된 표적 유전자 침묵을 초래하는 안티센스 BNA 올리고뉴클레오티드의 향상된 전달에 대해 테스트하였다. 본 연구에서, 본 발명자는 암 특이적 표적 유전자의 mRNA에 대한 안티센스 BNA 올리고뉴클레오티드, 열 충격 단백질 27(HSP27)을 사용하였다. 세포의 세포질 내에서 HSP27BNA는 HSP27을 인코딩하는 mRNA에 결합하고, 파괴를 위해 mRNA를 표적화함으로써, 암 세포 내에서 HSP27 발현을 감소시킨다. 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3.9를 EGFR++(A431) 및 EGFR-(A2058) 세포 상에서 100 nM HSP27BNA의 고정 농도에 적정하였다. 본 발명에 따른 조합은 A431에서 효과적인 HSP27 침묵을 나타내었으나(IC50= 2 nM; 도 5-2A), 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3.9 단독에 대해서는 침묵이 관찰되지 않았다. 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3.9 + 100nM HSP27BNA는 EGFR- 세포(A2058)에서 유전자 침묵 활성을 나타내지 않았다(도 5-2B). 이는 낮은 농도의 항체-접합된 S01861이 안티센스 BNA 올리고뉴클레오티드의 엔도리소좀 탈출 및 세포질 전달을 효율적으로 향상시킬 수 있어서, 표적 발현 세포에서 효율적인 유전자 침묵을 유도할 수 있음을 나타낸다.
다음으로, HSP27BNA를 고정 농도의 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3.9과 조합된 EGFR++(A431) 및 EGFR-(A2058) 세포 상에 적정하였다. 이는 28.6 nM 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3.9 또는 77 nM 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3.9과 조합된 HSP27BNA가 A431 세포에서 HSP27 유전자 침묵을 매우 효율적으로 향상시킨다는 것을 나타낸다(IC50 = 10 nM; 도 5-2C). HSP27BNA 단독 또는 77 nM 세툭시맙의 고정된 등가(equivalent)와의 조합은 덜 효과적이다(IC50= 1.000 nM; 도 5-2C). HSP27BNA + 77 nM 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3.9의 조합 치료가 또한 EGFR-세포(A2058) 상에서 테스트되었고, 이는 HSP27 유전자 침묵 향상을 나타내지 않았다(IC50=1.000 nM; 도 5-2D). 이는 EGFR 수용체 발현이 낮거나 없는 세포는 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,9 + HSP27BNA의 조합에 대해 민감하지 않으나, 세툭시맙 표적화된 SO1861은 고 EGFR 세포에서 저농도의 비표적화된 HS27BNA에서 효율적으로 HSP27 유전자 침묵을 향상시킬 수 있음을 나타낸다.
다음으로, S01861-EMCH를 DAR 3,8로 시스테인 잔기(Cys)를 통해 세툭시맙(인간 EGFR을 인식 및 결합하는 모노클로날 항체)에 접합하였다. 본 발명에 따른 조합, 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,8 + HSP27BNA(암세포에서 종양-표적(onco-target) hsp27 mRNA를 표적하고 분해(유전자 침묵)를 유도하는 안티센스 HSP27BNA 올리고뉴클레오티드)를 A431 이종이식 '누드' 마우스 종양 모델에서 EGFR-매개 종양 표적화된 HSP27 유전자 침묵에 대해 테스트하였다. 종양이 ~150㎣의 크기에 도달한 12일째에 투여를 시작하고, HSP27 mRNA 발현을 결정하였다. 이를 위해, 1차 투여 후 72시간에 종양 샘플을 수집하고, 세포 대조군 mRNA 발현 수준(레퍼런스 유전자)과 비교한 HSP27 유전자 발현 수준을 분석하였다. 종양 함유 마우스(n=3)를 12일째에 25 mg/kg 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,8 + 25 mg HSP27BNA로 처리하고, 15일째에 25 mg/kg 세툭시맙-(Cys-L-SO1861)3,8 + 10 mg HSP27BNA로 처리하였으며, 이는 비이클 대조군 또는 25 mg/kg HSP27BNA의 단일 투여에 비교하여 종양에서 HSP27 mRNA 발현의 25% 감소를 나타내었다(도 6-2). 이는 본 발명에 따른, 표적화 항체에 대한 SO1861의 접합이 종양 함유 마우스의 고형 종양에서 치료 안티센스 올리고뉴클레오티드의 SOI861-매개 향상된 세포질 전달을 효율적으로 유도하여, 생체내에서 종양 표적화된 유전자 침묵을 유도함을 나타낸다.
실시예 1-7 - 항체에 결합된 표적화된 안티센스 올리고뉴클레오티드
세툭시맙-(Lys-L-HSP27BNA) + 사포닌 SO1861
암 특이적 표적 유전자인 열 충격 단백질 27(HSP27)의 mRNA에 대한 안티센스 BNA 올리고뉴클레오티드는 세포질로 방출되면 HSP27을 인코팅하는 mRNA를 인식하고 결합하고, 파괴를 위해 mRNA를 표적으로 하여 암 세포 내에서 HSP27 발현을 낮춘다. 표적-외화된 HSP27BNA는 사포닌과 조합하여 HSP27 유전자 침묵을 테스트하기 위해 EGFR++(A431) 및 EGFR-(A2058) 세포에 적정되었다. 데이터는 HSP27BNA가 4000nM SO1861-ECMH과 조합되는 경우에 두 A431 A2058 세포에서 효율적인 HS27 침묵이 나타냈지만 (IC50= 10nM; 도 1-7A, 1-7B), 단일 HSP27BNA 처리에서는 침묵이 관찰되지 않았다(IC50≥nM1; 도 1-7A, 1-7B).
다음으로, HSP27BNA는 DAR1.5 및 DAR3.9로 세툭시맙의 라이신에 접합되어 세툭시맙-(Lys-L-HSP27BNA)1.5 및 세툭시맙-(Lys-L-HSP27BNA)3.9가 생성되었다. 접합된 세툭시맙-HSP27BNA 샘플을 다시 EGFR++(A431) 및 EGFR-(A2058) 세포에 적정하여 사포닌과 조합하여 표적화된 HSP27 유전자 침묵에 대하여 테스트하였다. 이러한 접합체는 4000 nM SO1861-EMCH의 존재 하에 A431(EGFR++) 세포에서 매우 효율적인 HSP27 유전자 침묵을 나타내는 (DAR1.5 IC50= 0.05 nM 및 DAR3.9 IC50= 0.3 nM; 도 1-7A)는 반면, 표적화된 HSP27BNA 샘플은 SO1861-EMCH가 없는 비표적화된 HSP27BNA와 비슷하다. A2058(EGFR-) 세포에서의 침묵은 일반적으로 비표적화된 HSP27BNA에 비해개선되지 않는다. SO1861의 유무 모두에서, 유사한 HSP27BNA(접합체) 양이 침묵을 유도하는데 요구된다(도 1-7B). 이는 높은 EGFR 수용체 발현을 갖는 매우 효율적인 표적화된 HSP27 유전자 침묵을 갖는 세포가 SO1861과 조합된 표적화된 HSP27BNA를 사용하여 달성될 수 있음을 보여준다.
암 특이적 표적 유전자인 열 충격 단백질 27(HSP27)의 mRNA에 대한 안티센스 BNA 올리고뉴클레오티드는 세포질로 방출되면 HSP27을 인코딩하는 mRNA를 인식하고 결합하고, 파괴를 위해 mRNA를 표적으로 하여 암 세포 내에서 HSP27 발현을 낮춘다. 비표적화된 HSP27BNA는 사포닌과 조합하여 HSP27 유전자 침묵을 테스트하기 위해 EGFR++(A431) 및 EGFR-(A2058) 세포에 적정되었다. 데이터는 HSP27BNA가 4000nM SO1861-ECMH와 조합되는 경우에 두 A431 A2058 세포에서 효율적인 HS27 침묵이 나타났지만(IC50= 10nM, 도 1-7C, 1-7D), 단일 HSP27BNA 처리에서는 침묵이 관찰되지 않았다(IC50≥1.000 nM; 도 1-7C, 1-7D).
다음으로, HSP27BNA는 DAR1.5 및 DAR3.9로 세툭시맙의 라이신에 접합되어 세툭시맙-(Lys-L-HSP27BNA)1.5 및 세툭시맙-(Lys-L-HSP27BNA)3.9가 생성되었다. 접합된 세툭시맙-HSP27BNA 샘플을 다시 EGFR++(A431) 및 EGFR-(A2058) 세포에 적정하여 사포닌과 조합하여 표적화된 HSP27 유전자 침묵을 테스트했다. 이러한 접합체는 4000 nM SO1861-EMCH의 존재 하에 A431(EGFR++) 세포에서 매우 효율적인 HSP27 유전자 침묵을 보여주며, 더 적은 HSP27BNA 올리고(IC50= 0.04 nM; 도 1-7C)를 필요로 하는 반면, 표적화된 HSP27BNA 샘플의 침묵은 SO1861-EMCH가 없는 경우의 비표적화된 HSP27BNA와 비슷하다. A2058(EGFR-) 세포에서의 침묵은 일반적으로 비표적화된 HSP27BNA에 비해개선되지 않는다. 심지어 SO1861이 존재하면 약 10배 더 많은 HSP27BNA 올리고가 필요한 것으로 보이지만, SO1861 없이는 유의미한 침묵이 관찰되지 않는다(도 1-7D). 이는 높은 EGFR 수용체 발현을 갖는 매우 효율적인 표적화된 HSP27 유전자 침묵을 갖는 세포가 SO1861과 조합된 표적화된 HSP27BNA를 사용하여 달성될 수 있음을 보여준다.
참조문헌
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Claims (42)

  1. 화합물 I의 화학 구조를 갖는 치료 분자:
    A1m ((-L9w) ((- L1q - B1n)u ((- L2r - L3s) (- L4v - C)p)t))x
    (화합물 I),
    (여기서,
    B1이 제1 이펙터 모이어티이면, A1이 제1 리간드이고, 또는 B1이 제1 리간드이면, A1이 제1 이펙터 모이어티이고;
    C는 사포닌이고;
    A1이 제1 리간드이고 B1이 제1 이펙터 모이어티이면, m = 0 또는 1이고;
    A1이 제1 이펙터 모이어티이고 B1이 제1 리간드이면, m = 0-32이고;
    B1이 제1 리간드이고 A1이 제1 이펙터 모이어티이고, 또는 A1이 제1 리간드이고 B1이 제1 이펙터 모이어티이면, n = 0 또는 1이고;
    p = 1-128 중 어느 하나이고;
    L1은 2개의 화학기를 공유 커플링(covalently coupling)하기 위한 적어도 하나의 링커이고;
    L2는 2개의 화학기를 공유 커플링하기 위한 적어도 하나의 링커이고;
    L3은 2개의 화학기를 공유 커플링하기 위한 적어도 하나의 올리고머 또는 폴리머 스캐폴드이고;
    L4는 2개의 화학기를 공유 커플링하기 위한 적어도 하나의 링커이고;
    L9는 3개의 화학기를 공유 커플링하기 위한 3 작용성 링커이고;
    q = 0 또는 1이고;
    r = 0 또는 1이고;
    s = 0 또는 1이고;
    s = 0이면, t = 0, 1 또는 2이고, s = 1이면, t = 0-16 중 어느 하나이고;
    A1이 제1 리간드이고 B1이 제1 이펙터 모이어티이면, u = 0-32 중 어느 하나이거나, A1이 제1 이펙터 모이어티이고 B1이 제1 리간드이면, u = 1;
    v = 0 또는 1이고;
    w = 1 또는 0이고; 그리고
    x = 1-16).
  2. 제1항에 따른 치료 분자 및 화합물 II의 화학 구조를 갖는 제2 치료 분자를 포함하는 치료 조합:
    A2a ((-L10j) ((- L5d - B2b)h ((- L6e - L7f) (- L8i - C)c)g))k
    (화합물 II).
    (여기서,
    B2가 제2 이펙터 모이어티이면, A2가 제2 리간드이고, 또는 B2가 제2 리간드이면, A2가 제2 이펙터 모이어티이고;
    C는 사포닌이고;
    A2가 제2 리간드이고 B2가 제2 이펙터 모이어티이면, a = 0 또는 1이고, 또는 A2가 제2 이펙터 모이어티이고 B2가 제2 리간드이면, a = 0-32이고;
    B2가 제2 리간드이고 A2가 제2 이펙터 모이어티이거나, 또는 A2가 제2 리간드이고 B2가 제2 이펙터 모이어티이면, b = 0 또는 1이고;
    c = 1-128 중 어느 하나이고;
    L5는 2개의 화학기를 공유 커플링하기 위한 적어도 하나의 링커이고;
    L6은 2개의 화학기를 공유 커플링하기 위한 적어도 하나의 링커이고;
    L7은 2개의 화학기를 공유 커플링하기 위한 적어도 하나의 올리고머 또는 폴리머 스캐폴드이고;
    L8은 2개의 화학기를 공유 커플링하기 위한 적어도 하나의 링커이고;
    L10은 3개의 화학기를 공유 커플링하기 위한 3 작용성 링커이고;
    d = 0 또는 1이고;
    e = 0 또는 1이고;
    f = 0 또는 1이고;
    f = 0이면, g = 0, 1 또는 2이고, f = 1이면, g = 0-16 중 어느 하나이고;
    A2가 제2 리간드이고 B2가 제2 이펙터 모이어티이면, h = 0-32 중 어느 하나이고, 또는 A2가 제2 이펙터 모이어티이고 B2가 제2 리간드이면, h = 1이고;
    i = 0 또는 1이고;
    j = 1 또는 0이고 그리고;
    k = 1-16).
  3. 제2항에 있어서,
    f = 0이고 t> 0이면, g = 0, 1 또는 2이고, f = 0이고 t = 0이면, g = 1 또는 2이고, f = 1이고 t> 0이면, g = 0-16 중 어느 하나 이고, 그리고 f = 1이고 t = 0이면, g = 1-16 중 어느 하나인, 제2 치료 분자.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항의 치료 분자 또는 제2항 또는 제3항의 제2 치료 분자에 있어서,
    제1 리간드 A1 또는 B1 및/또는 제2 리간드 A2 또는 B2는 면역 글로불린, 면역 글로불린의 결합 도메인 또는 면역 글로불린의 결합 단편, 예컨대 항체, IgG, Vhh 도메인 또는 Vh 도메인을 포함하거나 이로 구성되는 분자, Fab, scFv, Fv, dAb, F(ab)2, Fcab 단편을 포함하거나 이로 구성되거나,
    또는 적어도 하나의 비-단백질성 리간드 및/또는 적어도 하나의 단백질성 리간드, EGF 또는 사이토카인 같은 세포 표면 분자에 대한 결합을 위한 리간드를 포함하거나 이로 구성되며, 제1 리간드 및 제2 리간드는 동일하거나 상이한, 치료 분자 또는 제2 치료 분자.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 치료 분자 또는 제2항 내지 제4항 중 어느 한 항의 제2 치료 분자에 있어서,
    제1 리간드 A1 또는 B1 및/또는 제2 리간드 A2 또는 B2가 바람직하게는 CD71, CA125, EpCAM(17-1A), CD52, CEA, CD44v6, FAP, EGF-IR, 인테그린(integrin), 신데칸-1(syndecan-1), 바스큘라 인테그린 알파-V 베타-3(vascular integrin alpha-V 베타-3), HER2, EGFR, CD20, CD22, 엽산 수용체 1(Folate receptor 1), CD146, CD56, CD19, CD138, CD27L 수용체, PSMA, CanAg, 인테그린-알파V, CA6, CD33, 메소텔린, 크립토, CD3, CD30, CD239, CD70, CD123, CD352, DLL3, CD25, 에프린A4, MUC1, Trop2, CEACAM5, CEACAM6, HER3, CD74, PTK7, Notch3, FGF2, C4.4A, FLT3, CD38, FGFR3, CD7, PD-L1, CTLA4, CD52, PDGFRA, VEGFR1, VEGFR2로부터 선택되는, 보다 바람직하게는 CD71, EGFR 및 HER2로부터 선택되는 종양-세포 수용체, 바람직하게는 종양-세포 특이적 수용체의 종양-세포 에피토프, 바람직하게는 종양-세포 특이적 에피토프에 결합하며, 제1 리간드 및 제2 리간드는 동일하거나 상이한 종양-세포 에피토프, 바람직하게는 종양-세포 특이적 에피토프에 결합하고/하거나 제1 리간드가 결합할 수 있는 종양-세포 수용체, 바람직하게는 종양-세포 특이적 수용체는 제2 리간드가 결합할 수 있는 종양-세포 수용체, 바람직하게는 종양-세포 특이적 수용체와 동일하거나 상이한, 치료 분자 또는 제2 치료 분자.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항의 치료 분자 또는 제2항 내지 제5항 중 어느 한 항의 제2 치료 분자에 있어서,
    제1 리간드 A1 또는 B1 및/또는 제2 리간드 A2 또는 B2가 세툭시맙, 다라투무맙, 젬투주맙, 트라스투주맙, 파니투무맙, 브렌투시맙, 이노투주맙, 모세투모맙, 폴라투주맙, 오비누투주맙, IgG 유형의 OKT-9 항(anti)-CD71 모노클로날 항체(monoclonal antibody), 페르투주맙, 리투시맙, 오파투무맙, 허셉틴, 알렘투주맙, 피나투주맙, OKT-10 항-CD38 모노클로날 항체, 표 A2 또는 표 A3 또는 표 A4의 항체, 바람직하게는 세툭시맙 또는 트라스투주맙 또는 OKT-9, 또는 이의 적어도 하나의 종양-세포 수용체 결합-도메인 및/또는 이의 적어도 하나의 종양-세포 수용체 결합-단편, 바람직하게는 (a) 종양-세포 특이적 수용체 결합-도메인(들) 및/또는 (a) 종양-세포 특이적 수용체 결합 단편(들)을 포함하거나 이로 구성되며, 제1 리간드는 제2 리간드와 동일하거나 상이한, 치료 분자 또는 제2 치료 분자.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항의 치료 분자 또는 제2항 내지 제6항 중 어느 한 항의 제2 치료 분자에 있어서,
    제1 리간드 A1 또는 B1은 제1 리간드가 종양 세포상의 이의 결합 파트너에 결합한 후에 종양 세포에 의해 내재화(internalized)되고, 바람직하게는 종양 세포에 대한 제1 리간드의 결합 후에 제1 리간드와 종양 세포 상의 제1 리간드의 결합 파트너의 복합체가, 예를 들어, 엔도사이토시스를 통해, 종양-세포 수용체-매개 내재화되는, 치료 분자 또는 제2 치료 분자.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항의 치료 분자 또는 제2항 내지 제7항 중 어느 한 항의 제2 치료 분자에 있어서,
    제2 리간드 A2 또는 B2는 제2 리간드가 종양 세포상의 이의 결합 파트너에 결합한 후에 종양 세포에 의해 내재화되고, 바람직하게는 종양 세포에 대한 제2 리간드의 결합 후에 제2 리간드와 종양 세포 상의 제2 리간드의 결합 파트너의 복합체가, 예를 들어, 엔도사이토시스를 통해, 종양-세포 수용체-매개 내재화되는, 치료 분자 또는 제2 치료 분자.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항의 치료 분자 또는 제2항 내지 제8항 중 어느 한 항의 제2 치료 분자에 있어서,
    제1 이펙터 모이어티 A1 또는 B1 및/또는 제2 이펙터 모이어티 A2 또는 B2는 올리고뉴클레오티드, 핵산 및 제노 핵산(xeno nucleic acid) 중 임의의 하나 이상 중 적어도 하나, 바람직하게는 벡터, 유전자, 세포 자살 유도 트랜스진, 데옥시리보핵산 (DNA), 리보핵산 (RNA), 안티센스 올리고뉴클레오티드 (ASO, AON), 짧은 간섭 RNA (siRNA), 마이크로RNA (miRNA), DNA 앱타머, RNA 앱타머, mRNA, 미니-서클 DNA, 펩티드 핵산 (PNA), 포스포라미데이트 모르폴리노 올리고머 (PMO), 잠금 핵산 (LNA, locked nucleic acid), 브리지 핵산 (BNA, bridged nucleic acid), 2'-디옥시-2'-플루오로아라비노 핵산 (FANA), 2'-O-메톡시에틸-RNA (MOE), 2'-O, 4'-아미노에틸렌 브리지 핵산, 3'-플루오로 헥시톨 핵산 (FHNA), 플라스미드, 글리콜 핵산 (GNA) 및 트레오스 핵산 (TNA) 또는 이의 유도체 중 임의의 하나 이상으로부터 선택된 것, 보다 바람직하게는 BNA, 예를 들어 HSP27 단백질 발현을 침묵시키는 BNA를 포함하거나 이로 구성되며, 제1 이펙터 모이어티 및 제2 이펙터 모이어티는 동일하거나 상이한, 치료 분자 또는 제2 치료 분자.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 치료 분자 또는 제2항 내지 제9항 중 어느 한 항의 제2 치료 분자에 있어서,
    제1 이펙터 모이어티 A1 또는 B1 및/또는 제2 이펙터 모이어티 A2 또는 B2가 적어도 하나의 단백질성 분자, 바람직하게는 펩티드, 단백질, 효소, 예컨대 우레아제 및 Cre-재조합효소, 단백질성 독소, 리보좀-불활성화 단백질, 표 A5로부터 선택된 적어도 하나의 단백질 독소 및/또는 박테리아 독소, 식물 독소 중 임의의 하나 이상으로부터 선택된 것, 보다 바람직하게는 바이러스 독소, 예컨대 아폽틴; 박테리아 독소, 예컨대 시가(Shiga) 독소, 시가-유사(Shiga-like) 독소, 슈도모나스 아에루기노사 엑소톡신(Pseudomonas aeruginosa exotoxin) (PE) 또는 PE의 엑소톡신 A, 전장 또는 절단된(truncated) 디프테리아 독소 (DT), 콜레라 독소; 곰팡이 독소, 예컨대 알파-사르신; 리보좀-불활성화 단백질 및 2형 리보좀-불활성화 단백질의 A 체인, 예컨대 디안틴, 예를 들어, 디안틴-30 또는 디안틴-32, 사포린 예를 들어, 사포린-S3 또는 사포린-S6, 보우가닌 또는 보우가닌의 탈-면역화(de-immunized) 유도체 디보우가닌, 시가-유사 독소 A, 포크위드(pokeweed) 항바이러스 단백질, 리신(ricin), 리신 A 체인, 모데신, 모데신 A 체인, 아브린, 아브린 A 체인, 볼켄신, 볼켄신 A 체인, 비스쿠민, 비스쿠민 A 체인을 포함하는 식물 독소; 또는 동물 또는 인간 독소, 예컨대 개구리 RNase, 또는 인간으로부터의 안지오게닌, 또는 그랜자임 B, 또는 이의 임의의 단편 또는 유도체 중 임의의 하나 이상으로부터 선택된 것을 포함하거나 이로 구성되며; 바람직하게는 단백질 독소가 디안틴 및/또는 사포린이고, 제1 이펙터 모이어티/모이어티들 및 제2 이펙터 모이어티/모이어티들은 동일하거나 상이한, 치료 분자 또는 제2 치료 분자.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항의 치료 분자 또는 제2항 내지 제10항 중 어느 한 항의 제2 치료 분자에 있어서,
    제1 이펙터 모이어티 A1 또는 B1 및/또는 제2 이펙터 모이어티 A2 또는 B2가 적어도 하나의 페이로드, 바람직하게는 리보좀 표적화 독소(toxin targeting ribosome), 연장 인자 표적화 독소, 튜불린 표적화 독소, DNA 표적화 독소, 및 RNA 표적화 독소 중 임의의 하나 이상으로부터 선택되는 것, 보다 바람직하게는, 엠탄신, 파수도톡스, 메이탄시노이드 유도체 DM1, 메이탄시노이드 유도체 DM4, 모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE, 베도틴), 모노메틸 아우리스타틴 F(MMAF, 마포도틴), 칼리케아미신, N-아세틸-γ-칼리케아미신, 피롤로벤조디아제핀 (PBD) 다이머, 벤조디아제핀, CC-1065 유사체(analogue), 듀오카르마이신, 독소루비신, 파클리타셀, 도세타셀, 시스플라틴, 시클로포스파미드, 에토포사이드, 도세타셀, 5-플루오로우라실(5-FU), 미토산트론, 튜불리신, 인돌리노벤조디아제핀, AZ13599185, 크립토피신, 리조신, 메토트레세이트, 안트라사이클린, 캠토테신 유사체, SN-38, DX-8951f, 엑사테칸 메실레이트, 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 엑소톡신(PE38)의 절단된 형태, 듀오카르마이신 유도체, 아마니틴, α-아마니틴, 스플라이세오스타틴, 타일란스타틴, 오조가미신, 테시린, 앰버스타틴269 및 소라브탄신, 또는 이의 유도체 중 임의의 하나 이상으로부터 선택된 것을 포함하거나 이로 구성되는, 치료 분자 또는 제2 치료 분자.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항의 치료 분자 또는 제2항 내지 제11항 중 어느 한 항의 제2 치료 분자에 있어서,
    치료 분자 및/또는 제2 치료 분자가 젬투주맙 오조가미신, 브렌투시맙 베도틴, 트라스투주맙 엠탄신, 이노투주맙 오조가미신, 모세투모맙 파수도톡스 및 폴라투주맙 베도틴 및 표 A2 및 표 A3의 항체-약물 접합체, 또는 이의 적어도 하나의 종양-세포 특이적 수용체 결합-도메인 및/또는 이의 적어도 하나의 종양-세포 특이적 수용체 결합-단편, 바람직하게는 (a) 종양-세포 특이적 수용체 결합-도메인(들) 및/또는 (a) 종양-세포 특이적 수용체 결합-단편(들) 중 임의의 하나를 포함하거나 이로 구성되며, 치료 분자 또는 제2 치료 분자는 동일하거나 상이한, 치료 분자 또는 제2 치료 분자.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 치료 분자 또는 제2항 내지 제12항 중 어느 한 항의 제2 치료 분자에 있어서,
    사포닌 C가 위치 C-23에서 알데히드 작용(function)을 갖는 12,13-디하이드로올레아난 유형에 속하며, 선택적으로 사포닌의 C-3베타-OH 기에서 카보하이드레이트 치환체에 글루쿠론산 작용을 포함하는, 비스데스모시딕 트리테르펜 사포닌 또는 트리테르페노이드 사포닌 및/또는 집소필라(Gypsophila) 종 및/또는 사포나리아(Saponaria) 종 및/또는 아그로스템마(Agrostemma) 종 및/또는 퀼라자(Quillaja) 종, 예컨대 퀼라자 사포나리아(Quillaja saponaria)에서 분리된 사포닌인, 치료 분자 또는 제2 치료 분자.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항의 치료 분자 또는 제2항 내지 제13항 중 어느 한 항의 제2 치료 분자에 있어서,
    사포닌 C가 단일 특이적 사포닌이거나 또는 2개 이상의 상이한 사포닌의 혼합물, 예컨대 표 A1 또는 스킴 I의 사포닌, S01861, SA1657, GE1741, SA1641, QS-21, QS-21A, QS-21 A-api, QS-21 A-xyl, QS-21B, QS-21 B-api, QS-21 B-xyl, QS-7-xyl, QS-7-api, QS-17-api, QS-17-xyl, QS1861, QS1862, 퀼라자사포닌(Quillajasaponin), 사포늄 앨범(Saponinum album), QS-18, Quil-A, Gyp1, 집소사이드 A(gypsoside A), AG1, AG2, S01542, S01584, S01658, S01674, S01832, 또는 이들의 임의의 입체 이성질체 및/또는 이들의 임의의 조합 중 하나 이상이며, 바람직하게는 사포닌은 SO1861 및/또는 GE1741 및/또는 SA1641 및/또는 QS-21 및/또는 퀼라익산 아글리콘 코어(quillaic acid aglycon core), C-3베타-OH기에 Gal-(1→2)-[Xyl-(1→3)]-GlcA 카보하이드레이트 치환체 및 C-28-OH기에 Glc-(1→3)-Xyl-(1→4)-Rha-(1→2)-[Xyl-(1→3)-4-OAc-Qui-(1→4)]-Fuc 카보하이드레이트 치환체를 갖는 사포닌 및/또는 3-O-베타-D-갈락토피라노실-(1→2)-[베타-D-자일로피라노실-(1→3)]-베타-D-글루쿠로노피라노실 퀼라익산 28-0-베타-D-글루코피라노실-(1→3)-베타-D-자일로피라노실-(1→4)-알파-L-람노피라노실-(1→2)-[베타-D-자일로피라노실-(1→3)-4-OAc-베타-D-퀴노보피라노실-(1→4)]-베타-D-푸코피라노사이드이며, 보다 바람직하게는 사포닌은 SO1861 및/또는 QS-21인, 치료 분자 또는 제2 치료 분자.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항의 치료 분자 또는 제2항 내지 제14항 중 어느 한 항의 제2 치료 분자에 있어서,
    사포닌 C는 분자량이 적어도 1.500 달톤이고 C-3 위치에 제1 분지형 카보하이드레이트 측쇄를 가지며, 제1 분지형 카보하이드레이트 측쇄가 선택적으로 글루쿠론산을 함유하는, C-23 위치에 알데히드기를 함유하고, 선택적으로 C-16 위치에 히드록실기를 함유하는 올레아난형(oleanan-type) 트리테르펜을 포함하는 비스데스모시딕 사포닌이며, 상기 사포닌은 C-28 위치에 제2 분지형 카보하이드레이트 측쇄를 갖는 에스테르기를 함유하며, 제2 분지형 카보하이드레이트 사슬은 바람직하게는 선택적으로 적어도 하나의 아세틸 잔기, 예컨대 2개의 아세틸 잔기 및/또는 적어도 하나의 디옥시 카보하이드레이트 및/또는 퀴노보스 및/또는 글루코스 및/또는 4-메톡시신남산을 함유하며, 및/또는 선택적으로 5-0-[5-0-Ara/Api-3,5-디하이드록시-6-메틸-옥타노일]-3,5-디하이드록시-6-메틸-옥탄산을 포함하며, 및/또는 선택적으로 에스테르 결합을 통해 카보하이드레이트에 결합된 5-0-[5-0-Rha-(1→2)-Ara/Api-3,5-디하이드록시-6-메틸-옥타노일]-3,5-디하이드록시-6-메틸-옥탄산을 포함하는, 적어도 4개의 카보하이드레이트 유닛을 포함하거나, 적어도 하나의 사포닌은 QS-21 또는 QS-21A, QS-21 A-api, QS-21 A-xyl, QS-21B, QS-21 B-api, QS-21 B-xyl, QS-7-xyl, QS-7-api, QS-17-api, QS-17-xyl, QS-18, QS1861, 양성자화된 QS1861 (QS1862), Quil-A 중 임의의 하나 이상인, 치료 분자 또는 제2 치료 분자.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항의 치료 분자 또는 제2항 내지 제15항 중 어느 한 항의 제2 치료 분자에 있어서,
    사포닌 C가 위치 C-23에 알데히드 작용을 갖는 12,13-디하이드로올레아난 유형에 속하는 비스데스모시딕 트리테르펜 사포닌이며, 사포닌 C는 사포닌 C의 알데히드 작용, 바람직하게는 위치 C-23의 알데히드 작용, 바람직하게는 링커 L2, L4, L6, L8, L9 및/또는 L10을 통해, 보다 바람직하게는 절단 가능한 링커 L2, L4, L6, L8, L9 및/또는 L10을 통해 제1 리간드 A1 또는 B1 및/또는 제1 이펙터 모이어티 B1 또는 A1 및/또는 제2 리간드 A2 또는 B2 및/또는 제2 이펙터 모이어티 B2 또는 A2의 아미노산 잔기에 공유 커플링(covalently coupled)되며, 상기 아미노산 잔기는 바람직하게는 시스테인 및 라이신으로부터 선택되는, 치료 분자 또는 제2 치료 분자.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항의 치료 분자 또는 제2항 내지 제16항 중 어느 한 항의 제2 치료 분자에 있어서,
    사포닌 C가 위치 C-23에 알데히드 작용을 갖는 12,13-디하이드로올레아난 유형에 속하는 비스데스모시딕 트리테르펜 사포닌이며, 적어도 하나의 사포닌의 위치 C-23의 알데히드 작용은 링커 N-ε-말레이미도카프로산 히드라지드에 공유 커플링되고, 링커는 티오-에테르 결합을 통해 제1 리간드 A1 또는 B1 및/또는 제1 이펙터 모이어티 B1 또는 A1 및/또는 제2 리간드 A2 또는 B2 및/또는 제2 이펙터 모이어티 B2 또는 A2의 설프하이드릴기(sulfhydryl group), 예컨대 시스테인의 설프하이드릴기에 공유 커플링되는, 치료 분자 또는 제2 치료 분자.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항의 치료 분자 또는 제2항 내지 제17항 중 어느 한 항의 제2 치료 분자에 있어서,
    사포닌 C가 위치 C-23에서 알데히드 작용을 갖는 12,13-디하이드로올레아난 유형에 속하며 사포닌의 C-3베타-OH기에서 카보하이드레이트 치환체에 글루쿠론산 작용을 포함하는 비스데스모시딕 트리테르펜 사포닌이며, 사포닌 C는 사포닌 C의 글루크론산 작용을 통해, 존재하면, 바람직하게는 링커 L2, L4, L6, L8, L9 및/또는 L10을 통해 제1 리간드 A1 또는 B1 및/또는 제1 이펙터 모이어티 B1 또는 A1 및/또는 제2 리간드 A2 또는 B2 및/또는 제2 이펙터 모이어티 B2 또는 A2의 아미노산 잔기에 공유 커플링되고, 아미노산 잔기는 바람직하게는 시스테인 및 라이신으로부터 선택되고, 보다 바람직하게는 아미노산 잔기는 라이신인, 치료 분자 또는 제2 치료 분자.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 치료 분자 또는 제2항 내지 제18항 중 어느 한 항의 제2 치료 분자에 있어서,
    사포닌 C가 위치 C-23에서 알데히드 작용을 갖는 12,13-디하이드로올레아난 유형에 속하며 사포닌의 C-3베타-OH기의 카보하이드레이트 치환체에 글루쿠론산 작용을 포함하는 비스데스모시딕 트리테르펜 사포닌이며, 적어도 하나의 사포닌의 C-3베타-OH기의 카보하이드레이트 치환체의 글루쿠론산 작용은 링커 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트에 공유 커플링되며, 링커는 아미드 결합을 통해 제1 리간드 A1 또는 B1 및/또는 제1 이펙터 모이어티 B1 또는 A1 및/또는 제2 리간드 A2 또는 B2 및/또는 제2 이펙터 모이어티 B2 또는 A2의 아민기, 예컨데 제1 리간드 A1 또는 B1 및/또는 제1 이펙터 모이어티 B1 또는 A1 및/또는 제2 리간드 A2 또는 B2 및/또는 제2 이펙터 모이어티 B2 또는 A2의 N-말단(terminus) 또는 라이신의 아민기에 공유 커플링되는, 치료 분자 또는 제2 치료 분자.
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항의 치료 분자 또는 제2항 내지 제19항 중 어느 한 항의 제2 치료 분자에 있어서,
    제1 리간드 A1 또는 B1 및/또는 제1 이펙터 모이어티 B1 또는 A1 및/또는 제2 리간드 A2 또는 B2 및/또는 제2 이펙터 모이어티 B2 또는 A2가 하나 이상의 공유 결합된 사포닌 C, 바람직하게는 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 16, 32, 64, 128 또는 1-100개의 사포닌, 또는 그 사이의 임의의 수의 사포닌, 예컨대 7, 9, 12개의 사포닌을 포함하는, 치료 분자 또는 제2 치료 분자.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항의 치료 분자 또는 제2항 내지 제20항 중 어느 한 항의 제2 치료 분자에 있어서,
    제1 리간드 A1 또는 B1 및/또는 제1 이펙터 모이어티 B1 또는 A1 및/또는 제2 리간드 A2 또는 B2 및/또는 제2 이펙터 모이어티 B2 또는 A2가 하나 이상의 공유 결합된 사포닌 C를 포함하고, 사포닌(들) C는 제1 리간드 A1 또는 B1 및/또는 제1 이펙터 모이어티 B1 또는 A1 및/또는 제2 리간드 A2 또는 B2 및/또는 제2 이펙터 모이어티의 아미노산 잔기에, 바람직하게는 시스테인 및/또는 라이신에, r, s, v, e, f 및 i가 0인 경우에, 직접 공유 결합되며/결합되거나 적어도 하나의 링커 L2, L4, L6, L8, L9 및/또는 L10을 통해, 또는 적어도 하나의 절단 가능한 링커 L2, L4, L6, L8, L9 및/또는 L10을 통해 및/또는 적어도 하나의 올리고머 또는 폴리머 스캐폴드 L3 및/또는 L7, 바람직하게는 1-8개의 이러한 스캐폴드 또는 2-4개의 이러한 스캐폴드를 통해 공유 결합되며, 적어도 하나의 스캐폴드는 선택적으로 덴드론을 기반으로 하며, 1-32개의 사포닌, 바람직하게는 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 16, 32개의 사포닌, 또는 그 사이의 임의의 수의 사포닌, 예컨대 7, 9, 12개의 사포닌이 적어도 하나의 스캐폴드에 공유 결합되는, 치료 분자 또는 제2의 치료 분자.
  22. 제16항에 있어서,
    절단 가능한 링커 L2, L4, L6, L8, L9 및/또는 L10은 산성 조건, 환원성 조건, 효소 조건 또는 광-유도 조건 하에서 절단되며, 바람직하게는 절단 가능한 링커는 사포닌에 결합될 때, 산성 조건 하에서 절단되는 히드라존 결합 또는 히드라지드 결합을 포함하고 및/또는 사포닌에 결합될 때, 단백질 분해(proteolysis), 예를 들어 카셉신 B에 의한 단백질 분해될 수 있는 결합을 포함하고 및/또는 절단 가능한 링커는 환원성 조건 하에서의 절단될 수 있는 디설파이드 결합을 포함하는, 치료 분자 또는 제2 치료 분자.
  23. 제16항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서,
    절단 가능한 링커 L2, L4, L6, L8, L9 및/또는 L10은 포유류 세포, 바람직하게는 인간 세포의 엔도좀 및/또는 리소좀에 존재하는 산성 조건, 바람직하게는 pH 4.0-6.5, 그리고 보다 바람직하게는 pH ≤ 5.5 하에서 생체내(in vivo)에서 절단되는, 치료 분자 또는 제2 치료 분자.
  24. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항의 치료 분자 또는 제2항 내지 제23항 중 어느 한 항의 제2 치료 분자에 있어서,
    폴리머 또는 올리고머 스캐폴드 L3 및/또는 L7이 폴리머 또는 올리고머 구조를 포함하고 화학기를 포함하고, 화학기는 제1 리간드 및/또는 제1 이펙터 모이어티 및/또는 제2 리간드 및/또는 제2 이펙터 모이어티의 아미노산 잔기에 대한 폴리머 또는 올리고머 스캐폴드 L3 및/또는 L7의 공유 커플링을 위한 것인, 치료 분자 또는 제2 치료 분자.
  25. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항 또는 제2항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서,
    적어도 하나의 사포닌은 제19항 내지 제23항 중 어느 한 항에 따른 절단 가능한 링커 L4 및/또는 L8를 통해 스캐폴드 L3 및/또는 L7의 폴리머 또는 올리고머 구조에 공유 결합되는, 치료 분자 또는 제2 치료 분자.
  26. 제20항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서,
    제1 리간드 및/또는 제1 이펙터 모이어티 및/또는 제2 리간드 및/또는 제2 이펙터 모이어티의 아미노산 잔기에 대한 스캐폴드의 공유 커플링을 위한 폴리머 또는 올리고머 스캐폴드 L3 및/또는 L7의 화학기가 클릭 화학기(click chemistry group), 바람직하게는 테트라진, 아지드, 알켄 또는 알킨, 또는 이들 기의 사이클릭 유도체(cyclic derivative)로부터 선택되는 것이며, 보다 바람직하게는 클릭 화학기는 아지드인, 치료 분자 또는 제2 치료 분자.
  27. 제20항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서,
    적어도 하나의 사포닌이 제1 리간드 및/또는 제1 이펙터 모이어티 및/또는 제2 리간드 및/또는 제2 이펙터 모이어티에, 직접적으로 또는 적어도 하나의 링커, 예컨대 2-작용성 링커, 예를 들어 N-ε-말레이미도카프로산 히드라지드에 기초한 및/또는 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트에 기초한 2-작용성 링커, 또는 w = 1인 경우에, 3 작용성 링커 L9 및/또는 j = 1인 경우에, 3 작용성 링커 L10, 예컨대 스킴 II의 3 작용성 링커를 통해 공유 결합되는, 치료 분자 또는 제2 치료 분자.
  28. 제27항에 있어서,
    w = 1인 경우에, 3-작용성 링커 L9 및/또는 j = 1인 경우에, 3-작용성 링커 L10은 적어도 하나의 사포닌이 공유 결합된 제2 화학기, 제1 및/또는 제2 리간드에 대한 공유 결합을 위한 제3 화학기 및 적어도 하나의 제1 및/또는 제2 이펙터 모이어티에 대한 공유 결합을 위한 제1 화학기를 포함하며, 바람직하게는 3-작용성 링커는 스킴 II의 3작용성 링커인, 치료 분자 또는 제2 치료 분자.
  29. 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항의 치료 분자 또는 제2항 내지 제28항 중 어느 한 항의 제2 치료 분자에 있어서,
    적어도 하나의 사포닌이 j = 1인 경우에, 3-작용성 링커 L9 및/또는 w = 1인 경우에, 3-작용성 링커 L10을 포함하는 적어도 하나의 링커를 통해 제1 리간드 및/또는 제1 이펙터 모이어티 및/또는 제2 리간드 및/또는 제2 이펙터 모이어티에 공유 결합되며, 제1 리간드 및 적어도 하나의 제1 이펙터 모이어티 모두가 3-작용성 링커에 결합되고 및/또는 제2 리간드 및 적어도 하나의 제2 이펙터 모이어티 모두가 3작용성 링커에 결합되며, 바람직하게는 3-작용성 링커는 스킴 II의 3 작용성 링커인, 치료 분자 또는 제2 치료 분자.
  30. 제20항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서,
    스캐폴드 L3 및/또는 L7의 폴리머 또는 올리고머 구조가 선형, 분지형 및/또는 고리형 폴리머, 올리고머, 덴드리머, 덴드론, 덴드론화된 폴리머, 덴드론화된 올리고머, DNA, 폴리펩티드, 폴리-라이신, 폴리에틸렌 글리콜, 또는 이들 폴리머, 또는 올리고머 구조의 어셈블리를 포함하며, 어셈블리는 바람직하게는 공유 가교에 의해 구축되는, 치료 분자 또는 제2 치료 분자.
  31. 제20항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서,
    제1 리간드 A1 또는 B1은 각각 적어도 하나의 링커 L1을 통해 제1 이펙터 모이어티 B1 또는 A1에 공유 결합되고 및/또는 제2 리간드 A2 또는 B2는 각각 적어도 하나의 링커 L5를 통해 제2 이펙터 모이어티 B2 또는 A2에 공유 결합되는, 치료 분자 또는 제2 치료 분자.
  32. 제2항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서,
    제1 리간드 A1은 제3항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 모노클로날 항체 또는 이의 적어도 하나의 결합 단편 또는 -도메인이고, m = 1, q = 0, n = 0, u = 0, r = 0, L3은 제20항 내지 제29항 중 어느 한 항에 따른 스캐폴드이고 s = 1이거나, L3이 부재이고 s = 0이고, L4는 제15항 내지 제28항 중 어느 한 항에 따른 링커 또는 절단 가능한 링커이고, v = 1, p = 2-4 그리고 s = 1이면 t = 2-4 그리고 s = 0이면, t = 0이고, 사포닌 C는 제12항 내지 제18항 중 어느 한 항에 따른 사포닌이고, 바람직하게는 사포닌 C는 SO1861 및/또는 QS-21이고, 이펙터 모이어티 A2는 제8항에 따른 이펙터 모이어티, 바람직하게는 BNA이고, a = 1, d = 0, b = 0, h = 0, e = 0, f = 0, i = 0, c = 0 및 g = 0인, 치료 조합.
  33. 제1항에 있어서,
    r = 0, s = 0, v = 0, s = 0, v = 0, p = 0, t = 0, 리간드 A1이 제3항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 모노클로날 항체 또는 이의 적어도 하나의 결합 단편 또는 -도메인이고, m = 1, 이펙터 모이어티 B1은 제8항에 따른 이펙터 모이어티, 바람직하게는 BNA이고, q = 0, n = 1 및 u = 2-4이거나 q = 1, n = 2-4, u = 2-4이고 링커 L1은 제21항 내지 제30항 중 어느 한 항에 따른 올리고머 또는 폴리머 스캐폴드 L3인, 치료 분자.
  34. 제2항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서,
    치료 분자가 제33항의 치료 분자이고, 제2 리간드 A2가 제3항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 모노클로날 항체 또는 이의 적어도 하나의 결합 단편 또는 -도메인이고, a = 1, d = 0, b = 0 , h = 0 , e = 0, L7은 제20항 내지 제29항 중 어느 한 항에 따른 스캐폴드이고 f = 1이거나, L7이 부재이고 f = 0이고, L8은 제15항 내지 제24항 중 어느 한 항에 따른 링커 또는 절단 가능한 링커이고, i = 1, c = 2-4 및 f = 1이면 g = 2-4 그리고 f = 0이면, g = 0이고, 사포닌 C는 제12항 내지 제18항 중 어느 한 항에 따른 사포닌이고, 바람직하게는 사포닌 C는 SO1861 및/또는 QS-21이고, 리간드 A1 및 리간드 A2는 동일하거나 상이한, 치료 조합.
  35. 치료 조합으로서,
    치료 조합은
    (a) 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 따른 화합물 I의 화학 구조를 갖는 치료 분자를 포함하고, 선택적으로 약학적으로 허용가능한 부형제를 추가로 포함하는 제1 약학적 조성물; 및
    (b) 제2항 내지 제34항 중 어느 한 항에 따른 화합물 II의 화학 구조를 갖는 제2 치료 분자를 포함하고, 선택적으로 약학적으로 허용가능한 부형제를 추가로 포함하는 제2 약학적 조성물
    을 포함하는, 치료 조합.
  36. 의약으로서 사용하기 위한 제35항의 제1 약학적 조성물.
  37. 인간 대상체에서 암의 치료 또는 방지에 사용하기 위한 치료 조합으로서,
    치료 조합은:
    (a) 제35항의 제1 약학적 조성물; 및
    (b) 제35항의 제2 약학적 조성물을 포함하며,
    리간드 A1 또는 B1 및 리간드 A2 또는 B2는 종양-세포 표면 분자 상의, 바람직하게는 종양 세포-특이적 표면 분자 상의 종양-세포 에피토프, 바람직하게는 종양-세포 특이적 에피토프에 결합할 수 있으며, 리간드 A1 또는 B1이 결합할 수 있는 종양-세포 에피토프 또는 종양-세포 특이적 에피토프는 리간드 A2 또는 B2가 결합할 수 있는 종양-세포 에피토프 또는 종양-세포 특이적 에피토프와 동일하거나 상이한, 치료 조합.
  38. 제35항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서,
    리간드 A1 또는 B1이 종양-세포 표면 분자, 바람직하게는 종양 세포-특이적 표면 분자 상의 종양-세포 에피토프, 바람직하게는 종양-세포 특이적 에피토프에 결합할 수 있는, 필요로 하는 환자에서 암의 치료 또는 예방에 사용하기 위한, 제1 약학적 조성물.
  39. 제36항 또는 제38항, 또는 제35항 또는 제37항에 있어서,
    제35항 또는 제37항의 제2 약학적 조성물 및 제35항 내지 제38항 중 어느 한 항의 제1 약학적 조성물이 이를 필요로 하는 환자에게 투여되는, 사용하기 위한 제1 약학적 조성물 또는 사용하기 위한 치료 조합.
  40. 제35항에 있어서,
    제2항 내지 제35항 중 어느 한 항의 제2 치료 분자를 추가로 포함하는, 제1 약학적 조성물.
  41. 의약으로 사용하기 위한 제40항의 제1 약학적 조성물.
  42. 인간 대상체에서 암의 치료 또는 방지에 사용하기 위한 제40항의 제1 약학적 조성물.
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