KR20210104713A - Ｂ 세포 악성 종양 치료를 위한 조작된 ｔ 세포 투약 방법 - Google Patents

Ｂ 세포 악성 종양 치료를 위한 조작된 ｔ 세포 투약 방법 Download PDF

Info

Publication number
KR20210104713A
KR20210104713A KR1020217018399A KR20217018399A KR20210104713A KR 20210104713 A KR20210104713 A KR 20210104713A KR 1020217018399 A KR1020217018399 A KR 1020217018399A KR 20217018399 A KR20217018399 A KR 20217018399A KR 20210104713 A KR20210104713 A KR 20210104713A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
cells
subject
car
administered
cell
Prior art date
Application number
KR1020217018399A
Other languages
English (en)
Inventor
니콜라우스 세바스챤 트레드
티나 알베르트손
브라이언 크리스틴
레이첼 케이. 요스트
미셸 캉
라이언 피. 라슨
제프리 테오
Original Assignee
주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 filed Critical 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드
Publication of KR20210104713A publication Critical patent/KR20210104713A/ko

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/14—Blood; Artificial blood
    • A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/66—Phosphorus compounds
    • A61K31/675—Phosphorus compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. pyridoxal phosphate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7076—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines containing purines, e.g. adenosine, adenylic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/001102—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A61K39/001111—Immunoglobulin superfamily
    • A61K39/001112—CD19 or B4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/463—Cellular immunotherapy characterised by recombinant expression
    • A61K39/4631—Chimeric Antigen Receptors [CAR]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
    • A61K39/4643—Vertebrate antigens
    • A61K39/4644—Cancer antigens
    • A61K39/464402—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A61K39/464411—Immunoglobulin superfamily
    • A61K39/464412—CD19 or B4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/70521—CD28, CD152
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70578—NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0636—T lymphocytes
    • C12N5/0638—Cytotoxic T lymphocytes [CTL] or lymphokine activated killer cells [LAK]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/515—Animal cells
    • A61K2039/5156—Animal cells expressing foreign proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/515—Animal cells
    • A61K2039/5158—Antigen-pulsed cells, e.g. T-cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/31—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterized by the route of administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/38—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/46—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the cancer treated
    • A61K2239/48—Blood cells, e.g. leukemia or lymphoma
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/03—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a transmembrane segment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/33—Fusion polypeptide fusions for targeting to specific cell types, e.g. tissue specific targeting, targeting of a bacterial subspecies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2510/00—Genetically modified cells

Abstract

특정 B 세포 악성 종양과 같은 질환 및 병태를 가지는 대상체를 치료하기 위한 조작된 T 세포 용량의 투여를 포함하는 치료 방법 및 용도, 및 관련 방법, 조성물, 용도 및 제조 물품이 제공된다. 조작된 세포는 일반적으로 키메라 항원 수용체(CAR)와 같은 재조합 수용체를 발현한다. 일부 구현예에서, 질환 또는 병태는 급성 림프모구 백혈병(ALL) 또는 비호지킨 림프종(NHL)이다. 일부 구현예에서, 대상체는 소아 대상체와 같이 25세 이하인 대상체와 같은 특정 연령 범위 내에 있다.

Description

B 세포 악성 종양 치료를 위한 조작된 T 세포 투약 방법
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2018년 11월 16일에 출원된 미국 가출원 제62/786,844호(제목 “METHODS OF DOSING ENGINEERED T CELLS FOR THE TREATMENT OF B CELL MALIGNANCIES”)와 2019년 10월 11일에 출원된 미국 가출원 제62/914,303호 (제목 “METHODS OF DOSING ENGINEERED T CELLS FOR THE TREATMENT OF B CELL MALIGNANCIES”)의 우선권을 주장하고, 이의 내용들은 그 전체가 참조로 포함된다.
서열 목록의 참조 포함
본 출원은 전자 형식의 서열 목록과 함께 제출된다.　서열 목록은 2019년 11월 10일에 생성된 735042019540SeqList.txt라는 제목의 파일로 제공되며 이의 크기는 34.0 킬로바이트이다.　전자 형식의 서열 목록 내 정보는 그 전체가 참조로 포함된다.
기술 분야
본 개시는 일부 측면에서, 질병 및 병태, 예컨대 특정 B 세포 악성 종양을 갖는 대상체의 치료를 위해 조작된 T세포 용량의 투여를 포함하는 치료 방법 및 용도, 및 관련 방법, 조성물, 용도 및 제조 물품에 관한 것이다. 조작된 세포는 일반적으로 키메라 항원 수용체(CARs)와 같은 재조합 수용체를 발현한다. 일부 구현예에서, 질병 또는 병태는 급성 림프모구 백혈병(acute lymphoblastic leukemia, ALL) 또는 급성 림프모구 백혈병(acute lymphoblastic leukemia, ALL) 이다. 일부 구현예에서, 대상체는 25세 또는 그 이하, 예컨대 소아 대상체와 같은 특정 연령 범위 내에 있다.
배경 기술
질병 및 병태를 치료하기 위한 다양한 면역 요법 및/또는 세포 치료 방법이 이용 가능하다. 입양 세포 요법(다른 입양 면역 세포 및 입양 T 세포 요법뿐만 아니라 키메라 항원 수용체(CAR) 및/또는 다른 재조합 항원 수용체와 같은 관심 질병 또는 장애에 특이적인 키메라 수용체를 발현하는 세포의 투여를 수반하는 것을 포함)은 B세포 악성 종양 또는 혈액 악성 종양과 같은 질병 또는 장애의 치료에 유익할 수 있다. 개선된 접근법이 필요하다. 상기 필요를 충족시키는 방법 및 용도가 제공된다.
요약
재발성 및/또는 불응성인 이의 악성 종양을 포함하는 B-ALL 또는 B-NHL과 같은 B세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법이 본원에 제공되며, 25세 이하, 또는 일부 경우 18세 미만의 대상체에 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T세포를 포함하는 T 세포 조성물을 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다. 상기 방법 및 용도는 예컨대, 항-CD19 CAR T 세포 조성물의 질병 또는 장애의 치료에 효과적인 유효량으로의 투여를 포함하는 치료 방법 및 용도를 포함한다.　용도는 상기 방법 및 치료에서, 및 상기 치료 방법을 수행하기 위한 약제의 제조에서, 그러한 항-CD19 CAR-발현의 용도를 포함한다.　일부 구현예에서, 본 방법은 이를 통해 대상체에서 질병 또는 병태 또는 장애를 치료한다.
항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25 세 이하의 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법이 본원에 제공되며, 여기서 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 미만이고 18 세 미만인 경우, 대상체 체중의 (약) 0.05 x 106개의 CAR+ T 세포/kg 내지 (약) 1.5 x 106개의 CAR+ T 세포/kg; 및 (ii) 대상체가 체중이 100 킬로그램 (kg) 이상이거나 18세부터 25세까지인 경우, (약) 0.05 x 108개의 CAR+ T 세포 내지 (약) 1.5 x 108개의 CAR+ T 세포. 일부 임의의 구현예에서, 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, T 세포 조성물은 (약) 0.05 x 108개의 CAR + T 세포 내지 (약) 1.5 x 108개의 CAR + T 세포의 양으로 투여된다.
본원에서는 B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25 세 이하 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 미만이고 18 세 미만인 경우, 대상체 체중의 (약) 0.5 x 106개의 CAR+ T 세포/kg 내지 (약) 1.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg; 및 (ii) 대상체가 체중이 100 킬로그램 (kg) 이상이거나 18세부터 25세까지인 경우, (약) 0.5 x 108개의 CAR+ T 세포 내지 (약) 1.5 x 108 개의 CAR+ T 세포. 일부 임의의 구현예에서, 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, T 세포 조성물은 (약) 0.5 x 108 개의 CAR+ T 세포 내지 (약) 1.5 x 108 개의 CAR+ T 세포의 양으로 투여된다.
일부 임의의 구현예에서, (i) 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 미만이고 18 세 미만인 경우, 상기 T세포 조성물은 대상체 체중의 (약) 0.05 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 내지 (약) 0.75 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg의 양으로 투여되고; 및 (ii) 대상체가 체중이 100 킬로그램 (kg) 이상이거나 18세부터 25세까지인 경우, 상기 T세포 조성물은 (약) 0.05 x 108 개의 CAR+ T 세포 내지 (약) 0.75 x 108 개의 CAR+ T 세포의 양으로 투여된다.
본원에서는 B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 18 세 미만의 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 T세포 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 미만인 경우, 대상체 체중의 (약) 0.05 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 내지 (약) 1.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg; 및 (ii) 대상체가 체중이 100 킬로그램 (kg) 이상인 경우, (약) 0.05 x 108 개의 CAR+ T 세포 내지 (약) 1.5 x 108 개의 CAR+ T 세포.
본원에서는 B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 18 세 미만의 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 T세포 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 미만인 경우, 대상체 체중의 (약) 0.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 내지 (약) 1.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg; 및 (ii) 대상체가 체중이 100 킬로그램 (kg) 이상인 경우, (약) 0.5 x 108 개의 CAR+ T 세포 내지 (약) 1.5 x 108 개의 CAR+ T 세포.
일부 임의의 구현예에서, (i) 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 미만인 경우, 상기 T세포 조성물은 대상체 체중의 (약) 0.05 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 내지 (약) 0.75 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg의 양으로 투여되고; 및 (ii) 대상체가 체중이 100 킬로그램 (kg) 이상인 경우, 상기 T세포 조성물은 (약) 0.05 x 108 개의 CAR+ T 세포 내지 (약) 0.75 x 108 개의 CAR+ T 세포의 양으로 투여된다.
일부 임의의 구현예에서, 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 미만인 경우, T 세포 조성물은 대상체 체중의 (약) 0.05 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 내지 (약) 1 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg의 양으로 투여된다. 일부 임의의 구현예에서, 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 미만인 경우, T 세포 조성물은 대상체 체중의 (약) 0.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 내지 (약) 1 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg의 양으로 투여된다.
일부 임의의 구현예에서, 대상체가 체중이 100 킬로그램 (kg) 이상인 경우, T 세포 조성물은 (약) 0.05 x 108 개의 CAR+ T 세포 내지 (약) 1.5 x 108 개의 CAR + T 세포의 양으로 투여된다. 일부 임의의 구현예에서, 대상체가 체중이 100 킬로그램 (kg) 이상인 경우, T 세포 조성물은 (약) 0.05 x 108 개의 CAR+ T 세포 내지 (약) 1 x 108 개의 CAR + T 세포의 양으로 투여된다. 일부 임의의 구현예에서, 대상체가 체중이 100 킬로그램 (kg) 이상인 경우, T 세포 조성물은 (약) 0.5 x 108 개의 CAR + T 세포 내지 (약) 1.5 x 108 개의 CAR + T 세포의 양으로 투여된다. 일부 임의의 구현예에서, 대상체가 체중이 100 킬로그램 (kg) 이상인 경우, T 세포 조성물은 (약) 0.5 x 108 개의 CAR+ T 세포 내지 (약) 1 x 108 개의 CAR+ T 세포의 양으로 투여된다.
본원에서는 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 18 세 미만의 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 T세포 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 미만인 경우, 대상체 체중의 (약) 0.05 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg ; 및 (ii) 대상체가 체중이 100 킬로그램 (kg) 이상인 경우, (약) 0.05 x 108 개의 CAR+ T 세포.
일부 임의의 구현예에서, T 세포 조성물의 투여 후 (약) 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 또는 35 일에 대상체가 반응을 나타내지 않고 독성을 나타내지 않는 경우; 다음으로부터 선택된 양으로 추가 용량의 T 세포 조성물을 대상체에게 투여하는 것을 추가로 포함한다: (i) 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 미만인 경우, 대상체 체중의 (약) 0.1 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg ; 및 (ii) 대상체가 체중이 100 킬로그램 (kg) 이상인 경우, (약) 0.1 x 108 개의 CAR+ T 세포.
본원에서는 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 18 세 미만의 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 T세포 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 미만인 경우, 대상체 체중의 (약) 0.15 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg ; 및 (ii) 대상체가 체중이 100 킬로그램 (kg) 이상인 경우, (약) 0.15 x 108 개의 CAR+ T 세포.
본원에서는 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 18 세 미만의 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 T세포 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 미만인 경우, 대상체 체중의 (약) 0.3 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg ; 및 (ii) 대상체가 체중이 100 킬로그램 (kg) 이상인 경우, (약) 0.3 x 108 개의 CAR+ T 세포.
본원에서는 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 18 세 미만의 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 T세포 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 미만인 경우, 대상체 체중의 (약) 0.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg ; 및 (ii) 대상체가 체중이 100 킬로그램 (kg) 이상인 경우, (약) 0.5 x 108 개의 CAR+ T 세포.
본원에서는 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 18 세 미만의 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 T세포 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 미만인 경우, 대상체 체중의 (약) 0.75 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg ; 및 (ii) 대상체가 체중이 100 킬로그램 (kg) 이상인 경우, (약) 0.75 x 108 개의 CAR+ T 세포.
본원에서는 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 18 세 미만의 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 T세포 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 미만인 경우, 대상체 체중의 (약) 1.0 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg ; 및 (ii) 대상체가 체중이 100 킬로그램 (kg) 이상인 경우, (약) 1.0 x 108 개의 CAR+ T 세포.
본원에서는 B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25 세 이하 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 18 세 미만인 경우, 대상체 체중의 (약) 0.05 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 내지 (약) 1.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg, 그러나 이는 (약) 1.5 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않으며; 또는 (ii) 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, (약) 0.05 x 108 개의 CAR+ T 세포 내지 (약) 1.5 x 108 개의 CAR+ T 세포.
본원에서는 B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25 세 이하 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 18 세 미만인 경우, 대상체 체중의 (약) 0.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 내지 (약) 1.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg, 그러나 이는 (약) 1.5 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않으며; 또는 (ii) 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, (약) 0.5 x 108 개의 CAR+ T 세포 내지 (약) 1.5 x 108 개의 CAR+ T 세포.
일부 임의의 구현예에서,: (i) 대상체가 18 세 미만인 경우, 상기 T세포 조성물은 대상체 체중의 (약) 0.05 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 내지 (약) 0.75 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg, 그러나 이는 (약) 0.75 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는 용량으로 투여되며; 및 (ii) 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, 상기 T세포 조성물은 (약) 0.05 x 108 개의 CAR+ T 세포 내지 (약) 0.75 x 108 개의 CAR+ T 세포의 용량으로 투여된다.
본원에서는, 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25 세 이하 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 상기 조성물은 대상체 체중의 (약) 0.05 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 내지 (약) 1.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg의 용량으로 투여되며, 그러나 이는 (약) 1.5 x 108 개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는다.
일부 임의의 구현예에서, 상기 T 세포 조성물은 대상체 체중의 (약) 0.05 x 106 개의 CAR + T 세포/kg 내지 (약) 0.75 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 의 용량으로 투여되며, 그러나 이는 (약) 0.75 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는다.
일부 임의의 구현예에서, 상기 T 세포 조성물은 대상체 체중의 적어도 (약) 0.05 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 의 용량으로 투여되며, 그러나 이는 (약) 0.05 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는다. 일부 임의의 구현예에서, T 세포 조성물의 투여 후 (약) 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 또는 35 일에 대상체가 반응을 나타내지 않고 독성을 나타내지 않는 경우; 추가 용량의 T 세포 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함하며, 여기서 T 세포 조성물의 추가 용량은 대상체 체중의 적어도 (약) 0.1 x 106 개의 CAR + T 세포/kg 인 양으로 투여되며, 그러나 이는 (약) 0.1 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는다. 일부 임의의 구현예에서, 상기 T 세포 조성물은 대상체 체중의 적어도 (약) 0.15 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 의 용량으로 투여되며, 그러나 이는 (약) 0.15 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는다. 일부 임의의 구현예에서, 상기 T 세포 조성물은 대상체 체중의 적어도 (약) 0.3 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 의 용량으로 투여되며, 그러나 이는 (약) 0.3 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는다. 일부 임의의 구현예에서, 상기 T 세포 조성물은 대상체 체중의 적어도 (약) 0.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 의 용량으로 투여되며, 그러나 이는 (약) 0.5 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는다. 일부 임의의 구현예에서, 상기 T 세포 조성물은 대상체 체중의 적어도 (약) 0.75 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 의 용량으로 투여되며, 그러나 이는 (약) 0.75 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는다. 일부 임의의 구현예에서, 상기 T 세포 조성물은 대상체 체중의 적어도 (약) 1.0 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 의 용량으로 투여되며, 그러나 이는 (약) 1.0 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는다.
일부 임의의 구현예에서, 대상체가 18세 미만인 경우, 상기 T 세포 조성물은 대상체 체중의 (약) 0.05 x 106 개의 CAR + T 세포/kg 내지 (약) 1.0 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 의 용량으로 투여되며, 그러나 이는 (약) 1.0 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는다.
일부 임의의 구현예에서, 대상체가 18세 미만인 경우, 상기 T 세포 조성물은 대상체 체중의 (약) 0.5 x 106 개의 CAR + T 세포/kg 내지 (약) 1.0 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 의 용량으로 투여되며, 그러나 이는 (약) 1.0 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는다.
일부 임의의 구현예에서, 대상체가 18세 미만인 경우, 상기 T 세포 조성물은 대상체 체중의 적어도 (약) 0.05 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 의 용량으로 투여되며, 그러나 이는 (약) 0.05 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는다. 일부 임의의 구현예에서, T 세포 조성물의 투여 후 (약) 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 또는 35 일에 대상체가 반응을 나타내지 않고 독성을 나타내지 않는 경우; 추가 용량의 T 세포 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함하며, 여기서 대상체가 18세 미만인 경우, T 세포 조성물의 추가 용량은 대상체 체중의 적어도 (약) 0.1 x 106 개의 CAR + T 세포/kg 인 양으로 투여되며, 그러나 이는 (약) 0.1 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는다. 일부 임의의 구현예에서, 대상체가 18세 미만인 경우, 상기 T 세포 조성물은 대상체 체중의 적어도 (약) 0.15 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 의 용량으로 투여되며, 그러나 이는 (약) 0.15 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는다. 일부 임의의 구현예에서, 대상체가 18세 미만인 경우, 상기 T 세포 조성물은 대상체 체중의 적어도 (약) 0.3 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 의 용량으로 투여되며, 그러나 이는 (약) 0.3 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는다. 일부 임의의 구현예에서, 대상체가 18세 미만인 경우, 상기 T 세포 조성물은 대상체 체중의 적어도 (약) 0.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 의 용량으로 투여되며, 그러나 이는 (약) 0.5 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는다. 일부 임의의 구현예에서, 대상체가 18세 미만인 경우, 상기 T 세포 조성물은 대상체 체중의 적어도 (약) 0.75 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 의 용량으로 투여되며, 그러나 이는 (약) 0.75 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는다. 일부 임의의 구현예에서, 대상체가 18세 미만인 경우, 상기 T 세포 조성물은 대상체 체중의 적어도 (약) 1.0 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 의 용량으로 투여되며, 그러나 이는 (약) 1.0 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는다.
일부 임의의 구현예에서, 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, T 세포 조성물은 (약) 0.05 x 108 개의 CAR + T 세포 내지 (약) 1.0 x 108 개의 CAR+ T 세포의 양으로 투여된다. 일부 임의의 구현예에서, 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, T 세포 조성물은 (약) 0.5 x 108 개의 CAR+ T 세포 내지 (약) 1.0 x 108 개의 CAR+ T 세포의 양으로 투여된다. 일부 임의의 구현예에서, 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, T 세포 조성물은 (약) 0.05 x 108 개의 CAR+ T 세포의 양으로 투여된다. 일부 임의의 구현예에서, 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, T 세포 조성물은 (약) 0.15 x 108 개의 CAR+ T 세포의 양으로 투여된다. 일부 임의의 구현예에서, 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, T 세포 조성물은 (약) 0.3 x 108 개의 CAR+ T 세포의 양으로 투여된다. 일부 임의의 구현예에서, 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, T 세포 조성물은 (약) 0.5 x 108 개의 CAR+ T 세포의 양으로 투여된다. 일부 임의의 구현예에서, 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, T 세포 조성물은 (약) 0.75 x 108 CAR+ T 세포의 양으로 투여된다. 일부 임의의 구현예에서, 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, T 세포 조성물은 (약) 1.0 x 108 개의 CAR+ T 세포의 양으로 투여된다.
제공된 방법 또는 용도의 임의의 일부에서, 상기 대상체는 체중이 적어도 (약) 6kg이다. 제공된 방법 또는 용도의 임의의 일부에서, 상기 대상체는 체중이 적어도 (약) 12kg이다.
본원에서는 B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25 세 이하이고, 무게가 12kg 이상인 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 T세포 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 18 세 미만인 경우, 대상체 체중의 (약) 0.05 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg, 그러나 이는 (약) 0.05 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않으며; 및 (ii) 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, (약) 0.05 x 108 개의 CAR+ T 세포.
본원에서는 B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25 세 이하이고, 무게가 12kg 이상인 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 T세포 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 18 세 미만인 경우, 대상체 체중의 (약) 0.15 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg, 그러나 이는 (약) 0.15 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않으며; 및 (ii) 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, (약) 0.15 x 108 개의 CAR+ T 세포.
본원에서는 B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25 세 이하이고, 무게가 12kg 이상인 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 T세포 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 18 세 미만인 경우, 대상체 체중의 (약) 0.3 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg, 그러나 이는 (약) 0.3 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않으며; 및 (ii) 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, (약) 0.3 x 108 개의 CAR+ T 세포.
본원에서는 B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25 세 이하이고, 무게가 12kg 이상인 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 T세포 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 18 세 미만인 경우, 대상체 체중의 (약) 0.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg, 그러나 이는 (약) 0.5 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않으며; 및 (ii) 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, (약) 0.5 x 108 개의 CAR+ T 세포.
본원에서는 B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25 세 이하이고, 무게가 12kg 이상인 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 T세포 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 18 세 미만인 경우, 대상체 체중의 (약) 0.75 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg, 그러나 이는 (약) 0.75 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않으며; 및 (ii) 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, (약) 0.75 x 108 개의 CAR+ T 세포.
본원에서는 B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25 세 이하이고, 무게가 12kg 이상인 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 T세포 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 18 세 미만인 경우, 대상체 체중의 (약) 1 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg, 그러나 이는 (약) 1 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않으며; 및 (ii) 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, (약) 1 x 108 개의 CAR+ T 세포.
본원에서는, B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25 세 이하이고, 무게가 6kg 이상인 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 상기 T세포 조성물은 (i) 대상체가 18 세 미만인 경우, 대상체 체중의 (약) 1 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg, 그러나 이는 (약) 1 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않으며; 및 (ii) 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, (약) 1.0 x 108 개의 CAR+ T 세포인 것으로부터 선택된 양으로 투여된다.
본원에서는, B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 18 세 이하이고, 무게가 12kg 이상인 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 상기 조성물은 대상체 체중의 (약) 0.05 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 내지 (약) 1.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg의 용량으로 투여되며, 그러나 이는 (약) 1.5 x 108 개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는다. 일부 임의의 구현예에서, 조성물은 대상체 체중의 (약) 0.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 내지 (약) 1.0 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 의 용량으로 투여되며, 그러나 이는 (약) 1.0 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는다.
본원에서는, B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 18세 미만이고 무게가 12kg 이상인 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 상기 조성물은 대상체 체중의 약 0.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 내지 약 1.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg의 용량으로 투여되며, 그러나 이는 1.5 x 108 개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는다. 일부 임의의 구현예에서, 조성물은 대상체 체중의 (약) 0.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 내지 (약) 1.0 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 의 용량으로 투여되며, 그러나 이는 (약) 1.0 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는다.
일부 임의의 구현예에서, 조성물은 대상체 체중의 적어도 (약) 0.05 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 의 용량으로 투여되며, 그러나 이는 (약) 0.05 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는다. 일부 임의의 구현예에서, 조성물은 대상체 체중의 (약) 0.05 x 106 개의 CAR + T 세포/kg 내지 (약) 0.75 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 의 용량으로 투여되며, 그러나 이는 (약) 0.75 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는다. 일부 임의의 구현예에서, 조성물은 대상체 체중의 적어도 (약) 0.15 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 의 용량으로 투여되며, 그러나 이는 (약) 0.15 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는다. 일부 임의의 구현예에서, 조성물은 대상체 체중의 적어도 (약) 0.3 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 의 용량으로 투여되며, 그러나 이는 (약) 0.3 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는다. 일부 임의의 구현예에서, 조성물은 대상체 체중의 적어도 (약) 0.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 의 용량으로 투여되며, 그러나 이는 (약) 0.5 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는다. 일부 임의의 구현예에서, 조성물은 대상체 체중의 적어도 (약) 0.75 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 의 용량으로 투여되며, 그러나 이는 (약) 0.75 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는다. 일부 임의의 구현예에서, 조성물은 대상체 체중의 적어도 (약) 1.0 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 의 용량으로 투여되며, 그러나 이는 (약) 1.0 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는다.
일부 임의의 구현예에서, T 세포 조성물의 2.5 x 106 세포/mL 이상의 농도에서 적어도 0.05 mL의 총 부피가 투여된다. 일부 임의의 구현예에서, T 세포 조성물의 2.5 x 106 세포/mL 이상의 농도에서 적어도 0.1 mL의 총 부피가 투여된다. 일부 임의의 방법 또는 용도에서, T 세포 조성물의 2.5 x 106 세포/mL 이상의 농도에서 적어도 0.5 mL의 총 부피가 투여된다.
본원에서는 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25 세 이하의 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 T세포 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 18 세 미만인 경우, 적어도 0.1 mL 의 부피에서 (약) 1.5 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는 양; 및 (ii) 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, (약) 1.5 x 108 개의 CAR+ T 세포 미만.
본원에서는 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25 세 이하의 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 T세포 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 18 세 미만인 경우, 적어도 0.1 mL 의 부피에서 (약) 0.05 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는 양; 및 (ii) 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, (약) 0.05 x 108 개의 CAR+ T 세포.
본원에서는 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25 세 이하의 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 T세포 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 18 세 미만인 경우, 적어도 0.1 mL 의 부피에서 (약) 0.15 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는 양; 및 (ii) 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, (약) 0.15 x 108 개의 CAR+ T 세포.
본원에서는 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25 세 이하의 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 T세포 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 18 세 미만인 경우, 적어도 0.1 mL 의 부피에서 (약) 0.3 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는 양; 및 (ii) 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, (약) 0.3 x 108 개의 CAR+ T 세포.
본원에서는 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25 세 이하의 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 T세포 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 18 세 미만인 경우, 적어도 0.1 mL 의 부피에서 (약) 0.5 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는 양; 및 (ii) 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, (약) 0.5 x 108 개의 CAR+ T 세포.
본원에서는 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25 세 이하의 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 T세포 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 18 세 미만인 경우, 적어도 0.1 mL 의 부피에서 (약) 0.75 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는 양; 및 (ii) 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, (약) 0.75 x 108 개의 CAR+ T 세포.
임의의 구현예 중 일부에서, T 세포의 농도는 2.5 x 106 세포/mL 이상이다.
본원에서는 B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 2.5 x 106 세포/mL 이상의 농도에서 25 세 이하의 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 T세포 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 18 세 미만인 경우, 적어도 0.05 mL 의 부피에서 (약) 0.05 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는 양; 및 (ii) 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, (약) 0.05 x 108 개의 CAR+ T 세포.
본원에서는 B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 2.5 x 106 세포/mL 이상의 농도에서 25 세 이하의 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 T세포 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 18 세 미만인 경우, 적어도 0.15 mL 의 부피에서 (약) 0.15 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는 양; 및 (ii) 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, (약) 0.15 x 108 개의 CAR+ T 세포.
본원에서는 B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 2.5 x 106 세포/mL 이상의 농도에서 25 세 이하의 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 T세포 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 18 세 미만인 경우, 적어도 0.3 mL 의 부피에서 (약) 0.3 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는 양; 및 (ii) 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, (약) 0.3 x 108 개의 CAR+ T 세포.
본원에서는, B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 2.5 x 106 세포/mL 이상의 농도로 25 세 이하인 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 상기 T 세포 조성물은 (i) 대상체가 18 세 미만인 경우, 적어도 0.5 mL 의 부피에서 (약) 0.5 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는 양; 및 (ii) 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, (약) 0.5 x 108 개의 CAR+ T 세포인 것으로부터 선택된 양으로 투여된다.
본원에서는 B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 2.5 x 106 세포/mL 이상의 농도에서 25 세 이하의 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 T세포 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 18 세 미만인 경우, 적어도 0.75 mL 의 부피에서 (약) 0.75 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는 양; 및 (ii) 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, (약) 0.75 x 108 개의 CAR+ T 세포.
본원에서는 B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 2.5 x 106 세포/mL 이상의 농도에서 25 세 이하의 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 T세포 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 18 세 미만인 경우, 적어도 0.5 mL 의 부피에서 (약) 1 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는 양; 및 (ii) 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, (약) 1.0 x 108 개의 CAR+ T 세포. 일부 임의의 구현예에서, 적어도(약) 0.05 mL의 T 세포 조성물의 총 부피가 투여된다. 일부 임의의 구현예에서, 적어도(약) 0.1 mL의 T 세포 조성물의 총 부피가 투여된다. 일부 임의의 구현예에서, 적어도(약) 0.5 mL의 T 세포 조성물의 총 부피가 투여된다. 일부 임의의 구현예에서, 적어도(약) 1.0 mL의 T 세포 조성물의 총 부피가 투여된다.
일부 임의의 구현예에서, 투여된 T 세포 조성물의 총 부피는 적어도 0.05 mL이다. 일부 임의의 구현예에서, 투여된 T 세포 조성물의 총 부피는 적어도 0.1 mL이다. 일부 임의의 제공된 구현예에서, 투여된 T 세포 조성물의 총 부피는 적어도 1.0 mL이다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, T 세포 조성물의 농도는 (약) 5 x 106 세포/mL 이상이거나 (약) 5 x 106 세포/mL이다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, T 세포 조성물의 농도는 (약) 10 x 106 세포/mL 이상이거나 (약) 10 x 106 세포/mL이다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, T 세포 조성물의 농도는 약 15 x 106 세포/mL 이상이거나 약 15 x 106 세포/mL이다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 상기 T 세포 조성물은 CD4+ 및 CD8+ CAR+ T세포를 포함한다. 일부 임의의 구현예에서, 상기 조성물은 CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포 중 하나를 포함하는 제1 조성물 및 CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포 중 다른 것을 포함하는 제2 조성물을 포함한다. 일부 임의의 구현예에서, 제1 조성물 및 제2 조성물은 별도로 투여된다. 일부 임의의 구현예에서, 제1 조성물 및 제2 조성물은 동시에 투여된다. 일부 임의의 구현예에서, 제1 조성물 및 제2 조성물은 어느 순서로든 순차적으로 투여된다. 일부 측면에서, 제1 조성물은 CD4+ CAR+ T 세포를 포함하고 제2 조성물은 CD8+ T 세포를 포함한다. 일부 측면에서, 제1 조성물은 CD8+ CAR+ T 세포를 포함하고 제2 조성물은 CD4+ CAR+ T 세포를 포함한다.
임의의 구현예 중 일부에서, 투여되는 T 세포 조성물의 양은 (약) 1:1 또는 (약) 1:3 내지 (약) 3:1인, CD4+ CAR+ T 세포 대 CD8+ CAR+ T 세포 및/또는 CD4+ T 세포 대 CD8+ T 세포의 정의된 비율을 포함한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 예를 들어 제1 및 제2 조성물의 투여를 포함하고, 제1 및 제2 조성물 중 하나의 CD4+ CAR+ T 세포 및 제1 및 제2 조성물 중 다른 하나의 CD8+ CAR+ T 세포는 (약) 1:1 또는 (약) 1:3 내지 (약) 3:1인 정의된 비율로 존재한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 예를 들어 제1 및 제 2 조성물의 투여를 포함하고, 제 1 및 제 2 조성물에 투여 된 CD4+ CAR+ T 세포 및 CD8+ CAR+ T 세포는 정의 된 비율로 존재하며, 이 비율은 (약) 1:1 또는 (약) 1:3 내지 (약) 3:1이다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 정의된 비율은 (약) 1:1 이다.
임의의 방법 또는 용도의 일부에서, B 세포 악성 종양은 림프종 또는 백혈병이다. 임의의 구현예 중 일부에서, B 세포 악성 종양은 재발성 및/또는 불응성이다.
일부 임의의 방법 또는 용도에서, B 세포 악성 종양은 B-세포 급성 림프모구 백혈병이다 (B-ALL). 임의의 구현예 중 일부에서, B 세포 악성 종양은 B-세포 급성 림프모구 백혈병(B-ALL), 선택적으로 CD19+ B-ALL이다. 임의의 구현예 중 일부에서, B 세포 악성 종양은 재발성 또는 불응성 (r/r) B-세포 급성 림프모구 백혈병이다. 임의의 구현예 중 일부에서, r/r B-ALL을 가진 대상체는 골수 질환의 형태학적 증거를 가지며, 선택적으로 여기서 대상체는 형태학적으로 5 % 이상의 림프아구를 갖는다. 임의의 구현예 중 일부에서, 대상체는 다음 중 하나인 B-ALL을 갖는다: 첫번째 또는 그 이상의 골수 재발, 동종이계 조혈 줄기 세포 이식 (HSCT) 후 임의의 골수 재발; 선택적으로 2 개 이상의 개별 유도 요법에 따르는 1차 불응성; 선택적으로 재발성 백혈병에 대한 화학 요법의 1주기 후, 화학 불응성; 또는 동종이계 HSCT 부적격. 임의의 구현예 중 일부에서, B-ALL은 재발성 및/또는 불응성이다. 임의의 구현예 중 일부에서, 대상체는 다음 중 하나를 포함하는 B-ALL을 갖는다: 첫번째 또는 그 이상의 골수 재발, 동종이계 조혈 줄기 세포 이식 (HSCT) 후 임의의 골수 재발; 선택적으로 2 개 이상의 개별 유도 요법 후, 선택적으로 완전 반응 (CR) 또는 불완전 혈구 수 회복 (CRi)으로 완전 반응을 달성하지 못한, 1 차 불응성; 선택적으로 재발성 백혈병에 대한 화학 요법의 1주기 후, 선택적으로 CR /Cri를 달성하지 못한, 화학 불응성; 또는 동종이계 HSCT 부적격.
임의의 구현예 중 일부에서, B-ALL은 미세 잔존 질병 양성(MRD+)이다. 임의의 구현예 중 일부에서, B-ALL을 가진 대상체는 2 회 요법 후 골수 세포에서 1 x10-4 이상의 빈도로 검증된 분석에 의해 검출된 형태학 및/또는 최소 잔류 질환 양성 (MRD +) 질환에 의해 5 % 미만의 림프 모세포를 갖는다.
임의의 구현예 중 일부에서, 대상체는 필라델피아 염색체 양성 ALL을 가지고 있고, 하나 이상의 티로신-키나아제 억제제 (TKI) 요법에 대해 불내성이거나 실패했거나, TKI 요법이 금기이다.
임의의 방법 또는 용도의 일부에서, B 세포 악성 종양은 B 세포 비호지킨 림프종(NHL)이다. 임의의 구현예 중 일부에서, B 세포 악성 종양은 B-세포 비호지킨 림프종(B-NHL), 선택적으로 CD19+ B-NHL이다. 임의의 구현예 중 일부에서, B 세포 악성 종양은 재발성 또는 불응성 (r/r) 비호지킨 림프종(B-NHL)이다.
임의의 구현예 중 일부에서, B-NHL은 확산성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), 1차 종격동 거대 B 세포 림프종(PMBCL), 또는 버킷 림프종이다. 임의의 구현예 중 일부에서, 대상체는 1 개 이상의 화학 요법 후 측정 가능한 질병이 있거나 HSCT에 실패했거나, HSCT에 적합하지 않은 B-NHL을 갖는다. 임의의 구현예 중 일부에서, B-NHL은 재발성 및/또는 불응성이다.
본원에 제공된 임의의 방법 또는 용도의 일부 구현예에서, 투여 전에, 대상체는 플루다라빈 및/또는 사이클로포스파미드의 투여를 포함하는 림프구 고갈 요법으로 사전 조절되었다. 본원에 제공된 임의의 방법 또는 용도의 일부 구현예에서, 상기 방법은 상기 투여 직전에 대상체에게 플루다라빈 및/또는 사이클로포스파미드의 투여를 포함하는 림프구 고갈 요법을 투여하는 단계를 더 포함한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 림프구 고갈 요법은 2-4일 동안, 임의적으로 3일 동안 매일, 약 200-400mg/m2의, 임의적으로 (약) 300mg/m2(수치 포함)의 사이클로포스파미드의 투여, 및/또는 약 20-40mg/m2의, 임의적으로 30mg/m2의 플루다라빈의 투여를 포함한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 림프구 고갈 요법은 (약) 300 mg/m2 의 사이클로포스파미드를 3일 동안 매일 투여하는 것 및 약 30 mg/m2의 플루다라빈을 3일 동안 매일 투여하는 것을 포함한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 사이클로포스파미드 및 플루다라빈은 동시에 투여된다. 임의의 구현예 중 일부에서, 사이클로포스파미드 및 플루다라빈은 정맥 투여된다. 임의의 구현예 중 일부에서, 림프구 고갈 요법은 T 세포 조성물의 투여 2-7 일 전에 투여된다.
본원에 제공된 임의의 방법 또는 용도에서, 상기 대상체는 인간이다.
본원에 제공된 임의의 방법 또는 용도에서, CAR은 인간 CD19에 특이적인 scFv, 막관통 도메인, 공자극 분자로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인, 및 1차 신호 전달 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인을 포함한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, CAR은 인간 CD19에 특이적인 scFv, 막관통 도메인, 공자극 분자로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인, 및 1차 신호 전달 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인을 순서대로 포함한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 공자극 분자로부터 유래된 세포질 도메인은 인간 4-1BB이거나 이를 포함한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 1 차 신호 전달 ITAM 함유 분자로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인은 인간 Cd3zeta 신호 전달 도메인이거나 이를 포함한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, CAR은 막관통 도메인과 scFv 사이에 스페이서를 선택적으로 더 포함한다.
상기 임의의 구현예에서, CAR은 인간 CD19에 특이적인 scFv, 스페이서, 막관통 도메인, 공자극 분자로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인, 및 1차 신호 전달 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인을 순서대로 포함한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 공자극 분자로부터 유래된 세포질 도메인은 인간 4-1BB이거나 이를 포함한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 1 차 신호 전달 ITAM 함유 분자로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인은 인간 Cd3zeta 신호 전달 도메인이거나 이를 포함한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 스페이서는 면역글로불린 힌지 또는 이의 변형된 버전(선택적으로 IgG4 힌지, 또는 이의 변형된 버전)의 전부 또는 일부를 포함하거나 이로 구성되는 폴리펩타이드 스페이서이다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 스페이서는 약 15개 이하의 아미노산이고, CD28 세포 외 영역 또는 CD8 세포 외 영역을 포함하지 않는다. 제공된 임의의 일부 구현예에서, 스페이서는 약 12개의 아미노산 길이이다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서 일부에서, 스페이서는 서열 번호: 1, 서열 번호: 2에 의해 암호화된 서열, 서열 번호: 30, 서열 번호: 31, 서열 번호: 32, 서열 번호: 33, 서열 번호: 34의 서열 또는 이에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 이상의 서열 동일성을 갖는 상기 중 어느 하나의 변이체를 포함하거나 이로 구성된다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 스페이서는 화학식 X1PPX2P 를 포함하거나 이로 구성되며, 여기서 X1은 글리신, 시스테인 또는 아르기닌이고 X2 는 시스테인 또는 트레오닌이다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 공자극 분자, 즉 공자극 도메인으로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인은 서열 번호 12 또는 적어도 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 또는 그 이상의 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 포함한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 1 차 신호 전달 ITAM 함유 분자, 즉 1차 신호 전달 도메인으로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인은 이의 적어도 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 또는 그 이상의 서열 동일성을 갖는 서열 번호 13, 14 또는 15를 포함한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, scFv는 RASQDISKYLN(서열 번호: 35)의 CDRL1 서열을 포함하는 가변 경쇄(VL) 사슬, SRLHSGV(서열 번호: 36)의 CDRL2 서열 및 GNTLPYTFG(서열 번호: 37)의 CDRL3 서열, 및 DYGVS(서열 번호: 38)의 CDRH1 서열을 포함하는 가변 중쇄(VH) 사슬, VIWGSETTYYNSALKS(서열 번호: 39)의 CDRH2 서열 및 YAMDYWG(서열 번호: 40)의 CDRH3 서열을 포함한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, scFv는 FMC63의 CDRL1 서열, FMC63의 CDRL2 서열, FMC63의 CDRL3 서열 및 FMC63의 CDRH1 서열, FMC63의 CDRH2 서열 및 FMC63의 CDRH3 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, scFv는 서열 번호: 41에 제시된 VH 및 서열 번호: 42에 제시된 VL을 포함한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, VH 및 VL 은 가요성 링커에 의해 분리된다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 가요성 링커는 서열 번호: 24에 제시된 서열이거나 이를 포함한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, scFv는 서열 번호: 43에 제시된 서열이거나 이를 포함한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 상기 T 세포는 대상체로부터 수득된 1차 T 세포이다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, T 세포는 대상체 자기 유래이다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조성물을 투여하기 전에, 대상체는 CD19를 발현하는 세포를 갖는 것으로 확인되거나 확인되었다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, CD19의 발현은 말초 혈액 또는 골수에서 유세포 분석 및/또는 골수 생검의 면역 조직 화학에 의해 검출된다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, CD19의 발현은 선택적으로, 말초 혈액 또는 골수에서 유세포 분석 및/또는 선택적으로, 골수 생검의 면역 조직 화학에 의해 검출된다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 대상체는 CAR을 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물의 투여를 포함하는 이전의 세포 요법을 받지 않았다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 대상체는 CAR을 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물의 투여를 포함하는 이전의 세포 요법을 받았다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 대상체는 CD19를 표적화하는 사전 요법을 받았으며, 선택적으로, 여기서 대상체는 CD19를 표적화하는 사전 요법의 완료 후 CD19를 발현하는 세포를 갖거나 CD19- 양성 질환을 갖는 것으로 확인되거나 확인되었다.
임의의 구현예 중 일부에서, 조성물 내 적어도 (약) 35 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 또는 그 이상의 CAR-발현 T 세포, CAR-발현 CD4+ T 세포 또는 CAR-발현 CD8+ T 세포는 CCR7, CD27, CD45RA 및/또는 CD28에 대해 표면 양성이다. 임의의 구현예 중 일부에서, 조성물 내 적어도 (약) 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 또는 그 이상의 CAR-발현 T, CAR- 발현 CD4+ T 세포 또는 CAR-발현 CD8+ T 세포는 CCR7에 대해 표면 양성이다. 임의의 구현예 중 일부에서, 조성물 내 적어도 (약) 35 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 또는 그 이상의 CAR-발현 T 세포, CAR-발현 CD4+ T 세포 또는 CAR-발현 CD8+ T 세포는 CCR7 및 CD45RA에 대해 표면 양성이다.
임의의 구현예 중 일부에서, 조성물 내 적어도 (약) 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 또는 그 이상의 CAR-발현 T, CAR-발현 CD4+ T 세포 또는 CAR-발현 CD8+ T 세포는 CD27에 대해 표면 양성이다. 임의의 구현예 중 일부에서, 조성물 내 적어도 (약) 60 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 또는 그 이상의 CAR-발현 T 세포, CAR-발현 CD4+ T 세포 또는 CAR-발현 CD8+ T 세포는 CD27 및 CD28에 대해 표면 양성이다. 임의의 구현예 중 일부에서, 조성물 내 적어도 (약) 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 또는 그 이상의 CAR-발현 T 세포, CAR-발현 CD4+ T 세포 또는 CAR-발현 CD8+ T 세포는 활성 카스파제 3 대해 음성이다.
또한, 항-CD19 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 세포 요법의 조성물, 또는 세포 요법의 복수의 조성물 중 하나를 포함하는 제조 물품 및 세포 요법을 투여하기위한 지침이 본원에 제공되며, 여기서 지침은 제공된 방법 중 임의의 것에 따라 T 세포 조성물을 투여하는 것을 명시한다.
발명을 실시하기 위한 구체적인 내용
제공된 구체예 중에는 일반적으로 B 세포 악성 종양 또는 혈액 악성 종양이거나 이를 포함하는 질환 또는 상태를 갖는 대상체의 치료를 위해 조작된 세포 (예를 들어, T 세포) 및/또는 이의 조성물의 투여를 포함하는 치료 방법 또는 용도와 같은 방법 및 용도가 있다. 일부 구현예에서, B 세포 악성 종양은 B-세포 급성 림프모구 백혈병(B-ALL) 또는 B-세포 비호지킨 림프종(non B-NHL)이다. 일부 구현예에서, 조작된 세포는 B 세포 악성 종양과 관련된 항원을 표적으로하고, 결합하고 /하거나 인식할 수 있는 재조합 수용체, 예컨대 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현한다. 일부 측면에서, 대상체는 소아 대상체 또는 젊은 성인 대상체와 같은 25 세 이하인 대상체를 포함한다. 일부 측면에서, 상기 방법은 소아 대상체 또는 젊은 성인 대상체와 같이 25 세 이하인 대상체와 같은 대상체의 특정 그룹에서의 치료를 위해 투여하기위한 조작된 세포의 양, 수 또는 용량을 결정하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 대상체는 소아이다. 일부 구현예에서, 대상체는 젊은 성인이다. 또한, 예를 들어 본원에 기재된 방법 및 용도에 따른 세포 요법에 사용하기위한 조성물이 제공된다. 또한, 예를 들어 본원에 제공된 방법 또는 용도에 사용하기위한 제조 물품 및 키트가 제공된다. 일부 구현예에서, 제조 물품 및 키트는 선택적으로 본 명세서에 제공된 방법 또는 용도에 따라, 사용하기 위한 지침을 함유한다.
입양 세포 요법(다른 입양 면역 세포 및 입양 T 세포 요법뿐만 아니라 키메라 항원 수용체(CAR) 및/또는 다른 재조합 항원 수용체와 같은 관심 질병 또는 장애에 특이적인 키메라 수용체를 발현하는 세포의 투여를 수반하는 것을 포함)은 혈액 악성 종양 또는 B세포 악성 종양 및 다른 암과 같은 다른 질병 및 장애의 치료에 효과적일 수 있다.　특정 맥락에서, 입양 세포 요법에 대한 이용 가능한 접근법이 항상 완전히 만족스럽지 않을 수 있다. 일부 맥락에서, 치료에 대한 최적 반응은 투여된 세포의 표적, 예를 들어 표적 항원을 인식하고 이에 결합, 대상체, 종양 및 이의 환경 내에서 적절한 부위로 왕래, 국소화 및 성공적 진입, 활성화되고, 확장되고, 세포 독성 사멸 및 사이토 카인과 같은 다양한 인자의 분비를 포함한 다양한 이펙터 기능을 발휘하고, 장기를 포함하여 지속되고, 특정 표현형 상태로의 분화, 전환 또는 재프로그래밍에 관여하고, 클리어런스 및 표적 리간드 또는 항원에 대한 재노출 후에 효과적이고 강력한 리콜 반응을 제공하고, 소진, 아네르기(Anergy), 말단 분화 및/또는 억제 상태로의 분화를 피하거나 감소시키는 능력에 의존할 수 있다.
일부 측면에서, 입양 세포 요법의 치료 효과는 그러한 세포가 투여되는 대상체에서 위험 및/또는 독성의 발달에 의해 제한될 수 있으며, 일부 경우 독성은 특정 용량에서 또는 투여된 세포의 노출에서 심각할 수 있다. 일부 경우에, 이러한 세포의 더 높은 용량은 예를 들어 확장 및/또는 지속성을 촉진하는 것과 같이 세포에 대한 노출을 증가시킴으로써 치료 효과를 증가시킬 수 있지만, 독성 또는 더 심각한 독성이 발생할 위험이 훨씬 더 커질 수도 있다. 또한, 일부 경우에, 질병 부담이 더 높은 대상체는 또한 독성 또는 더 심각한 독성이 발생할 위험이 더 클 수 있다. 또한, 세포 요법 (예 : CAR-T 세포 요법)의 세포 용량 투여 후 독성이 발생할 위험, 상대적 위험 및/또는 확률을 증가시킬 수있는 요인 중에는 체중 기반 세포의 용량(예 : 체중이 더 큰 피험자에게 더 많은 세포를 투여)로 인해 대상체에게 투여된 세포의 수가 포함된다. 대상체에게 세포 요법을 투여하는 특정 이용가능한 방법은 항상 완전히 만족스럽지는 않을 수 있다. 세포 용량을 증가시키거나 대상체에게 투여된 세포의 확장 또는 증식을 촉진하는 것은 더 높은 반응률과 관련될 수 있지만 독성 발생의 증가와도 관련이 있다.
일부 측면에서, 소아 대상체 또는 젊은 성인 대상체과 같은 특정 대상체 그룹은 신체 크기, 순환 부피 및/또는 활성 또는 투여된 세포의 기능의 차이로 인해 입양 세포 요법 및/또는 투여 후 독성 발생에 대한 반응에서 차이를 나타낼 수 있다. 일부 측면에서, 유리한 결과 또는 반응 및/또는 지속적인 반응 또는 결과와 같은 치료 결과의 높거나 특정된 원하는 정도의 가능성을 가져오고, 또한 세포 요법의 대상체에게 투여한 후 독성 결과 또는 독성이 발생할 위험이 상대적으로 낮거나 최소화되거나 원하는 정도인 특정 대상체 그룹에 대한 적절한 용량을 결정하는 것은 어려울 수 있다. 상기 결과를 달성한 방법 및 용도가 제공된다.
따라서, 일부 구체예에서, 제공된 방법, 용도, 제조 물품 및/또는 조성물은 입양 세포 요법과 같은 치료를 위한 다른 이용 가능한 방법 또는 용액 또는 접근법에 비해 이점을 제공할 수 있다. 구체적으로, 제공된 구체예 중에는 항-CD19 CAR과 같은 CAR을 발현하는 T 세포 (CD4 및 / 또는 CD8 T 세포)를 함유하는 T 세포 요법을, 예를 들어 B-ALL 또는 B-NHL과 같은 B 세포 악성 종양이 있는 소아 대상체 또는 젊은 성인 대상체와 같은 25 세 이하의 대상체에게 투여하는 방법을 포함하는 것들이 있다. 제공된 방법 및 용도는 증가된 반응 가능성 및 감소된 독성 발생 위험 가능성을 달성하거나 이와 연관될 수 있는 세포의 투여를 허용한다.
본 출원에서 언급된 특허 문헌, 과학 논문 및 데이터베이스를 포함한 모든 출판물은 각각의 개별 출판물이 개별적으로 참조로 통합된 것과 동일한 정도로 모든 목적을 위해 그 전체가 참조로 포함된다. 본원에 제시된 정의가 본원에 참조로 포함된 특허, 출원, 공개된 출원 및 기타 출판물에 제시된 정의와 상반되거나 달리 부합하지 않는 경우, 본원에 제시된 정의가 본원에 참조로 포함된 정의보다 우선한다.
본원에 사용된 섹션 제목은 단지 조직화를 위한 목적이며 기재된 주제를 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다.
Ⅰ. 유전자 조작된 T 세포를 이용한 세포 치료의 방법 및 용도
일반적으로 B 세포 악성 종양 또는 혈액 악성 종양이거나 이를 포함하는 질환 또는 상태를 갖는 대상체의 치료를 위해 조작된 세포 (예를 들어, T 세포) 및/또는 이의 조성물의 투여를 포함하는 치료 방법 또는 용도와 같은 방법 및 용도가 제공된다. 일부 측면에서, B 세포 악성 종양은 B-세포 급성 림프모구 백혈병(B-ALL) 또는 B-세포 비호지킨 림프종(non B-NHL)이다. 일부 측면에서, 상기 방법 또는 용도는 소아 대상체 또는 젊은 성인 대상체와 같이 25 세 이하인 대상체와 같은 대상체의 특정 그룹에서의 치료를 위한 것이다.
일부 구현예에서, 상기 방법 및 용도는, B-ALL 또는 B-NHL과 같은 B 세포 악성 종양에 의해 발현, 관련 및/또는 특이적인 항원 및/또는 그것이 유래된 세포 유형에 결합하거나 인식하는, 키메라 항원 수용체(CAR)와 같은 키메라 수용체를 일반적으로 포함하는, 유전자 조작된 (재조합) 세포 표면 수용체를 발현하는 세포를 대상체에 투여하는 것을 포함한다. 상기 세포는 일반적으로 투여용으로 제형화된 조성물로 투여된다. 일부 구현예에서, 조작된 세포 또는 조작 된 세포를 포함하는 조성물은 예를 들어, 입양 T 세포 요법과 같은 입양 세포 요법을 통해 B 세포 악성 종양을 갖는 대상체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 방법은 항원 수용체-발현 세포 (예를 들어, CAR- 발현 세포)의 용량으로 B 세포 악성 종양을 갖는 대상체를 치료하는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 방법은 특정 양, 예를 들어 하나 이상의 용량의 세포를 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 양 또는 용량 (들)은 특정 수 또는 상대적인 수의 세포 또는 조작된 세포, 및/또는 정의된 비율 또는 CD4 대 CD8 T 세포, 또는 대상체의 체중 당 세포의 특정 수 또는 상대적인 수 (예를 들어, 킬로그램 (kg) 체중 당)와 같은 조성물 내 2 개 이상의 하위 유형의 조성물을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 대상체가 특정 최대 체중을 초과하면 특정 수 또는 상대적인 세포 수가 투여된다. 일부 구현예에서, 방법은 대상체의 연령 및/또는 체중에 따라 대상체에게 양 또는 용량을 투여하는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 제공된 방법 및 용도는 특정 그룹 또는 대상체의 서브세트, 예를 들어 25 세 이하의 대상체와 같은 특정 연령의 대상체를 치료하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 제공된 방법 및 용도는 예를 들어 18 세 이하의 대상체와 같은 특정 연령의 대상체를 치료하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 제공된 방법 및 용도는 소아 대상체 또는 젊은 성인 대상체를 치료하는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 방법, 용도 및 제조 물품은 예를 들어 연령, 특정 유형의 질병, 진단 기준, 선행 치료 및/또는 선행 치료에 대한 반응에 기초하여 특정 그룹 또는 서브세트의 대상체를 선택하거나 확인하는 것을 포함한 대상체의 치료를 위해 사용되거나 이를 수반한다. 일부 구현예에서, 방법은 하나 이상의 선행 요법으로 치료 후 완화 후에 재발했거나 하나 이상의 선행 요법에 불응성이 된 대상체; 또는 하나 이상의 선행 요법, 예를 들어 하나 이상의 표준 요법 방식에 대해 재발하였거나 불응성(R/R)인 대상체;를 치료하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 제공된 방법 및 용도는 표준 요법에 대한 R/R을 갖는 B 세포 악성 종양을 갖는 것으로 확인된 소아 대상체 및/또는 젊은 성인 대상체와 같은 대상체의 특정 그룹 또는 서브 세트의 치료를 포함한다. 일부 구현예에서, 대상체는 공격적이거나 예후가 좋지 않거나 표준 요법에 대한 R/R을 갖는 B세포 악성 종양과 같은 고위험 질환을 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 방법은 미세 잔존 질병(MRD+ B-ALL)을 나타내는 R/R B-ALL, R/R B-NHL 또는 B-ALL을 갖는 대상체를 치료하는 것을 포함한다. 일부 측면에서, NHL은 확산성 거대 B 세포 림프종 (DLBCL), 버킷 림프종 (BL) 또는 1차 종격동 B 세포 림프종 (PMBCL)을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 R/R DLBCL, R/R BL 또는 R/R PMBCL을 갖는다.
일부 구현예에서, 항원 수용체(예를 들어, CAR)는 B-ALL 또는 B-NHL과 같은 B 세포 악성 종양과 관련된 것과 같은 질환, 장애 또는 상태와 관련된 표적 항원에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 질병 또는 장애와 관련된 항원은 CD19, CD20, CD22, ROR1, CD45, CD21, CD5, CD33, Ig카파, Ig람다, CD79a, CD79b 또는 CD30 이다. 일부 구현예에서, 질병 또는 장애와 관련된 항원은 CD19에서 선택된다.
일부 측면에서, 높은 반응률 및/또는 높은 반응 지속성 및 낮은 수준 및/또는 독성 발생과 관련된 특정 용량으로 세포 요법의 정의된 조성물의 투여를 위한 조성물, 방법 및 용도가 제공된다. 일부 구현예에서, 일부 대상체에 대해 투여되는 조성물 또는 용량은 대상체의 킬로그램 (kg) 체중 당 세포의 특정 양 또는 수와 같은 체중 기반 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 일부 대상체에 대해, 특정 수의 그러한 세포와 같은 특정 표현형을 갖는 세포 및/또는 하나 이상의 세포의 균일 및/또는 고정 용량, 예컨대 정확한 균일 용량으로 투여되는 조성물 또는 용량 또는 목표 숫자와 비교하여 특정 범위 및/또는 변동성 또는 분산 정도 내에있는 숫자이다.
일부 구현예에서, 재발성 및/또는 불응성인 이의 악성 종양을 포함하는 B-ALL 또는 B-NHL과 같은 B세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 25세 이하, 또는 일부 경우 18세 미만의 대상체에 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T세포를 포함하는 T 세포 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 상기 방법 및 용도는 예컨대, 항-CD19 CAR 발현 T 세포 조성물의 질병 또는 장애의 치료에 효과적인 유효량으로의 투여를 포함하는 치료 방법 및 용도를 포함한다. 용도는 상기 방법 및 치료에서, 및 상기 치료 방법을 수행하기 위한 약제의 제조에서, 그러한 항-CD19 CAR-발현 T세포 또는 조성물의 용도를 포함한다.　또한, 본원에 제공된 방법에 따라, 예를 들어 이러한 항 -CD19 CAR- 발현 T 세포를 포함하는 조성물, 예컨대 제약 조성물이 제공된다. 일부 구현예에서, 본 방법 및 용도는 이를 통해 대상체에서 질병 또는 병태 또는 장애를 치료한다.
일부 구현예에서, 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25 세 이하의 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 방법 및 용도가 제공되며, 여기서 상기 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 미만이고 18 세 미만인 경우, 대상체 체중의 (약) 0.05 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 내지 (약) 1.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg; 및 (ii) 대상체가 체중이 100 킬로그램 (kg) 이상이거나 18세부터 25세까지인 경우, (약) 0.05 x 108 개의 CAR+ T 세포 내지 (약) 1.5 x 108 개의 CAR+ T 세포. 일부 임의의 구현예에서, 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, T 세포 조성물은 (약) 0.05 x 108 개의 CAR+ T 세포 내지 (약) 1.5 x 108 개의 CAR+ T 세포의 양으로 투여된다.
일부 구현예에서, B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25 세 이하 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 미만이고 18 세 미만인 경우, 대상체 체중의 (약) 0.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 내지 (약) 1.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg; 및 (ii) 대상체가 체중이 100 킬로그램 (kg) 이상이거나 18세부터 25세까지인 경우, (약) 0.5 x 108 개의 CAR+ T 세포 내지 (약) 1.5 x 108 개의 CAR+ T 세포. 일부 구현예에서, 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, T 세포 조성물은 (약) 0.5 x 108 개의 CAR + T 세포 내지 (약) 1.5 x 108 개의 CAR+ T 세포의 양으로 투여된다.
일부 구현예에서, 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 18 세 미만의 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 방법 및 용도가 제공되며, 여기서 상기 T 세포 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 미만인 경우, 대상체 체중의 (약) 0.05 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 내지 (약) 1.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg; 및 (ii) 대상체가 체중이 100 킬로그램 (kg) 이상인 경우, (약) 0.05 x 108 개의 CAR+ T 세포 내지 (약) 1.5 x 108 개의 CAR+ T 세포.
일부 구현예에서, B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법이 제굉되며, 상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 18 세 미만의 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 T세포 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 미만인 경우, 대상체 체중의 (약) 0.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 내지 (약) 1.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg; 및 (ii) 대상체가 체중이 100 킬로그램 (kg) 이상인 경우, (약) 0.5 x 108 개의 CAR+ T 세포 내지 (약) 1.5 x 108 개의 CAR+ T 세포. 일부 구현예에서, 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 미만인 경우, T 세포 조성물은 대상체 체중의 (약) 0.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 내지 (약) 1 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg의 양으로 투여된다. 일부 구현예에서, 대상체가 체중이 100 킬로그램 (kg) 이상인 경우, T 세포 조성물은 (약) 0.5 x 108 개의 CAR+ T 세포 내지 (약) 1.5 x 108 개의 CAR+ T 세포의 양으로 투여된다.
일부 임의의 구현예에서, 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 미만인 경우, T 세포 조성물은 대상체 체중의 (약) 0.05 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 내지 (약) 1 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg의 양으로 투여된다.
일부 구현예에서, B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25 세 이하 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 18 세 미만인 경우, 대상체 체중의 (약) 0.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 내지 (약) 1.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg, 그러나 이는 (약) 1.5 x 108 총 개의 CAR+ T 세포를 초과하지 않으며; 또는 (ii) 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, (약) 0.5 x 108 개의 CAR+ T 세포 내지 (약) 1.5 x 108 개의 CAR+ T 세포.
일부 구현예에서, 대상체가 18세 미만인 경우, 상기 T 세포 조성물은 대상체 체중의 (약) 0.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 내지 (약) 1.0 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 의 용량으로 투여되며, 그러나 이는 (약) 1.0 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는다. 일부 구현예에서, 대상체가 18세 미만인 경우, 상기 T 세포 조성물은 대상체 체중의 적어도 (약) 0.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 의 용량으로 투여되며, 그러나 이는 (약) 0.5 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는다. 일부 구현예에서, 대상체가 18세 미만인 경우, 상기 T 세포 조성물은 대상체 체중의 적어도 (약) 1.0 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 의 용량으로 투여되며, 그러나 이는 (약) 1.0 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는다. 일부 구현예에서, 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, T 세포 조성물은 (약) 0.5 x 108 개의 CAR + T 세포 내지 (약) 1.0 x 108 개의 CAR+ T 세포의 양으로 투여된다. 일부 구현예에서, 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, T 세포 조성물은 (약) 0.5 x 108 개의 CAR+ T 세포의 양으로 투여된다. 일부 구현예에서, 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, T 세포 조성물은 (약) 1.0 x 108 개의 CAR+ T 세포의 양으로 투여된다.
제공된 방법 또는 용도의 일부에서, 상기 대상체는 체중이 적어도 (약) 6kg이다. 제공된 방법 또는 용도의 일부에서, 상기 대상체는 체중이 적어도 (약) 12kg이다. 제공된 방법 또는 용도의 일부에서, 상기 대상체는 체중이 (약) 100kg 이하이다.
일부 구현예에서, B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25 세 이하이고, 무게가 12kg 이상인 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 T세포 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 18 세 미만인 경우, 대상체 체중의 (약) 0.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg, 그러나 이는 (약) 0.5 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않으며; 및 (ii) 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, (약) 0.5 x 108 개의 CAR+ T 세포.
일부 구현예에서, B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25 세 이하이고, 무게가 6kg 이상인 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 상기 T세포 조성물은 (i) 대상체가 18 세 미만인 경우, 대상체 체중의 (약) 1 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg, 그러나 이는 (약) 1 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않으며; 및 (ii) 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, (약) 1.0 x 108 개의 CAR+ T 세포인 것으로부터 선택된 양으로 투여된다.
일부 구현예에서, B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 18세 미만이고 무게가 12kg 이상인 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 상기 조성물은 대상체 체중의 (약) 0.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 내지 (약) 1.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg의 용량으로 투여되며, 그러나 이는 (약) 1.5 x 108 개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는다. 일부 구현예에서, 조성물은 대상체 체중의 (약) 0.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 내지 (약) 1.0 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 의 용량으로 투여되며, 그러나 이는 (약) 1.0 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는다. 일부 구현예에서, 조성물은 대상체 체중의 적어도 (약) 0.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 의 용량으로 투여되며, 그러나 이는 (약) 0.5 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는다.
일부 구현예에서, 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25 세 이하의 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 상기 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 18 세 미만인 경우, 대상체 체중의 (약) 0.05 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 내지 (약) 1.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg, 그러나 이는 (약) 1.5 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않으며; 또는 (ii) 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, (약) 0.05 x 108 개의 CAR+ T 세포 내지 (약) 1.5 x 108 개의 CAR+ T 세포.
상기 방법 또는 용도의 일부에서, T 세포 조성물의 2.5 x 106 세포/mL 이상의 농도에서 적어도 0.05 mL의 총 부피가 투여된다. 상기 방법 또는 용도의 일부에서, T 세포 조성물의 2.5 x 106 세포/mL 이상의 농도에서 적어도 0.5 mL의 총 부피가 투여된다.
일부 임의의 구현예에서, 대상체가 18세 미만인 경우, 상기 T 세포 조성물은 대상체 체중의 (약) 0.05 x 106 개의 CAR + T 세포/kg 내지 (약) 1.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 의 용량으로 투여되며, 그러나 이는 (약) 1.5 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는다.
일부 임의의 구현예에서, 대상체가 18세 미만인 경우, 상기 T 세포 조성물은 대상체 체중의 적어도 (약) 0.05 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 의 용량으로 투여되며, 그러나 이는 (약) 0.05 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는다. 일부 임의의 구현예에서, 대상체가 18세 미만인 경우, 상기 T 세포 조성물은 대상체 체중의 적어도 (약) 0.15 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 의 용량으로 투여되며, 그러나 이는 (약) 0.15 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는다. 일부 임의의 구현예에서, 대상체가 18세 미만인 경우, 상기 T 세포 조성물은 대상체 체중의 적어도 (약) 0.3 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 의 용량으로 투여되며, 그러나 이는 (약) 0.3 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는다. 일부 임의의 구현예에서, 대상체가 18세 미만인 경우, 상기 T 세포 조성물은 대상체 체중의 적어도 (약) 0.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 의 용량으로 투여되며, 그러나 이는 (약) 0.5 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는다. 일부 임의의 구현예에서, 대상체가 18세 미만인 경우, 상기 T 세포 조성물은 대상체 체중의 적어도 (약) 0.75 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 의 용량으로 투여되며, 그러나 이는 (약) 0.75 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는다. 일부 임의의 구현예에서, 대상체가 18세 미만인 경우, 상기 T 세포 조성물은 대상체 체중의 적어도 (약) 1.0 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 의 용량으로 투여되며, 그러나 이는 (약) 1.0 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는다.
일부 임의의 구현예에서, 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, T 세포 조성물은 (약) 0.05 x 108 개의 CAR + T 세포 내지 (약) 1.0 x 108 개의 CAR + T 세포의 양으로 투여된다. 일부 임의의 구현예에서, 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, T 세포 조성물은 (약) 0.05 x 108 개의 CAR + T 세포의 양으로 투여된다. 일부 임의의 구현예에서, 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, T 세포 조성물은 (약) 0.15 x 108 CAR + T 세포의 양으로 투여된다. 일부 임의의 구현예에서, 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, T 세포 조성물은 (약) 0.3 x 108 개의 CAR+ T 세포의 양으로 투여된다. 일부 임의의 구현예에서, 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, T 세포 조성물은 (약) 0.5 x 108 개의 CAR+ T 세포의 양으로 투여된다. 일부 임의의 구현예에서, 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, T 세포 조성물은 (약) 0.75 x 108 개의 CAR+ T 세포의 양으로 투여된다. 일부 임의의 구현예에서, 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, T 세포 조성물은 (약) 1.0 x 108 개의 CAR+ T 세포의 양으로 투여된다.
일부 구현예에서, B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 2.5 x 106 세포/mL 이상의 농도로 25 세 이하인 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 상기 T 세포 조성물은 (i) 대상체가 18 세 미만인 경우, 적어도 0.5 mL 의 부피에서 (약) 0.5 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는 양; 및 (ii) 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, (약) 0.5 x 108 개의 CAR+ T 세포인 것으로부터 선택된 양으로 투여된다.
일부 구현예에서, B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 2.5 x 106 세포/mL 이상의 농도에서 25 세 이하의 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 T세포 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 18 세 미만인 경우, 적어도 0.5 mL 의 부피에서 (약) 1 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는 양; 및 (ii) 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, (약) 1.0 x 108 개의 CAR+ T 세포.
일부 임의의 구현예에서, 투여된 T 세포 조성물의 총 부피는 적어도 0.05 mL이다. 일부 임의의 구현예에서, 투여된 T 세포 조성물의 총 부피는 적어도 0.1 mL이다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 투여된 T 세포 조성물의 총 부피는 적어도 1.0 mL이다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, T 세포 조성물의 농도는 (약) 5 x 106 세포/mL 이상이거나 (약) 5 x 106 세포/mL이다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, T 세포 조성물의 농도는 (약) 10 x 106 세포/mL 이상이거나 (약) 10 x 106 세포/mL이다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, T 세포 조성물의 농도는 약 15 x 106 세포/mL 이상이거나 (약) 15 x 106 세포/mL이다.
일부 구현예에서, 투여되는 조성물 또는 용량은 CD4+ 및 CD8+ 세포의 정의된 비율 (예를 들어, CD4+ : CD8+ CAR + T 세포의 1 : 1 비율)을 포함하고/하거나 이러한 비율로부터 일정 정도의 가변성 내에있는 비율, 예를들어 +10 % 이하, 예를 들어 +8 % 이하, 예를 들어 + 10 % 이하, +8 % 이하와 같은 분산 정도로 포함한다. 일부 구현예에서, CD4+ 및 CD8+ 세포는 개별적으로 제형화되고 투여된다. 일부 구현예에서, 투여된 세포는 일관된 활성 및/또는 기능, 예를 들어 사이토카인 생산, 세포자연사 및/또는 확장을 나타낸다. 일부 구현예에서, 제공된 조성물은 예를 들어, 조성물에서 또는 제제간에 세포 수, 세포 기능 및/또는 세포 활성과 관련하여 매우 일관되고 정의된 활성 및 낮은 가변성을 나타낸다. 일부 구현예에서, 활성 및/또는 기능의 일관성, 예를 들어, 조성물 제제 간의 낮은 가변성은 개선된 효능 및/또는 안전성을 허용한다. 일부 구현예에서, 정의된 조성물의 투여는 높은 이질성을 갖는 세포 조성물의 투여에 비해 낮은 생성물 가변성 및 낮은 독성 (예를 들어 CRS 또는 신경 독성)을 초래한다. 일부 구현예에서, 정의되고 일관된 조성물은 또한 일관된 세포 확장을 나타낸다. 이러한 일관성은 용량 확인, 치료 창, 용량 반응 평가 및 안전성 또는 독성 결과와 관련될 수 있는 대상체의 인자 확인을 용이하게 할 수 있다.
일부 구현예에서, 특정 용량 수준의 단일 주입을 받은 특정 코호트의 대상체에서 6 개월 후 60 % 이상의 지속적인 반응률을 달성할 수 있다. 일부 구현예에서, 일부 코호트의 대상체는 6 개월에 80 % 이상의 전체 반응률 (ORR, 일부 경우 객관적 반응률이라고도 함), 60 % 이상의 완전 반응 (CR) 비율 및/또는 높은 지속적 CR 비율을 달성할 수 있다. 일부 구현예에서, 정의된 용량을 받은 대상체는 예를 들어, CRS 또는 NT를 나타내지 않는 대상체의 2/3 이상과 같이 개선된 안전성 결과를 보인다. 일부 측면에서, 중증 CRS 또는 중증 NT의 비율은 낮다. 일부 구현예에서, 특정 정의된 용량으로 관찰된 더 높은 노출 (예를들어, Cmax 및 AUC0-28)은 증가된 독성 (예를들어, CRS 또는 NT)과 관련이 없다. 일부 구현예에서, 대상체의 특정 인자, 예를 들어 특정 바이오 마커를 사용하여 독성 위험을 예측할 수 있다. 일부 구현예에서, 제공된 구현예는 낮은 독성 위험으로 높은 반응률을 달성하기 위해 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 제공된 조성물, 제조 물품, 키트, 방법 및 용도를 사용하여 치료받은 대상체의 25 % 이하, 20 % 이하, 15 % 이하, 10 % 이하 또는 5 % 이하는 세포 요법의 투여 전 또는 후에 독성을 개선, 치료 또는 예방하기 위해 제제 (예를들어, 토실리주맙 및/또는 덱사메타손)를 투여 받는다. 일부 구현예에서, 대상체는 조작된 세포 (예를들어, CAR-T 세포)를 받기 전에 어떠한 예방 치료도 받지 않는다.
일부 구현예에서, 상기 방법, 세포 및 조성물은 다양한 환자 특성 및/또는 종양 부담에 걸쳐 대상체에게 높은 비율의 지속적인 반응을 제공 할 수 있다. 일부 구현예에서, 방법, 세포 및 조성물은 부작용 또는 독성의 위험이 감소한 불량한 예후를 가진 고위험 환자에게 높은 비율의 지속적인 반응을 제공할 수 있다. 일부 구현예에서, 방법 및 용도는 신경독성(NT) 또는 사이토카인 방출 증후군(CRS)과 같은 세포 요법과 관련될 수 있는 독성 또는 기타 부작용의 위험 감소 및/또는 보다 지속적인 반응 또는 효능 및/또는 보다 높은 반응 비율을 제공하거나 달성한다. 일부 측면에서, 제공된 관찰은 중증 NT (sNT) 또는 중증 CRS (sCRS)의 낮은 비율과 독성이없는 높은 비율의 환자(예 : NT 또는 CRS)를 나타낸다.
A. 치료 방법
*본원에 제공된 방법은 조작된 세포 또는 조작된 T 세포와 같은 조작된 세포를 함유하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는 치료 방법이다. 또한, 예를 들어, B 세포 악성 종양 또는 혈액 악성 종양과 같은 질환, 장애 또는 상태를 갖는 대상체의 치료를 위한 방법 또는 용도를 포함하는, 조작된 세포 (예를 들어, T 세포) 및/또는 이의 조성물의 치료 및 예방 용도와 같은 방법 및 용도가 제공되며, 이는 조작된 세포 및/또는 이의 조성물의 투여를 포함한다. 이러한 방법 및 용도는 예를 들어, B 세포 악성 또는 혈액 악성 종양, 예컨대 B 세포 급성 림프 모구 백혈병 (B-ALL) 또는 B 세포 비호지킨 림프종 (B-NHL)을 갖는 대상체에게 조작된 세포 또는 이를 함유하는 조성물의 투여를 포함하는 치료 방법 및 용도를 포함한다. 일부 구현예에서, 분자, 세포 및/또는 조성물은 질병, 장애 또는 상태의 치료에 효과적인 유효량으로 투여된다.
일부 측면에서, 제공된 방법은 조작된 세포 또는 조작된 세포, 예컨대 조작된 T 세포를 함유하는 조성물을 혈액 악성 또는 B 세포 악성 종양을 갖는 대상체와 같은 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 일부 측면에서, 또한, 본원에 기재된 임의의 방법에 따라, 일부 측면에서, 조작된 세포 또는 조작된 세포, 예컨대 조작된 T 세포를 함유하는 조성물의 B 세포 악성 종양 또는 혈액 악성 종양을 치료하기위한 용도가 제공된다. 일부 측면에서, 또한, 예를 들어, 이러한 치료 방법을 수행하기 위해 B 세포 악성 종양의 치료를 위한 약제의 제조를 위한 조작된 세포 또는 조작된 세포, 예컨대 조작된 T 세포를 함유하는 조성물의 용도가 제공된다. 일부 측면에서, 또한, B 세포 악성 종양의 치료에 사용하기 위해, 또는 B 세포 악성 종양을 갖는 대상체에게 투여하기 위해, 조작된 세포 또는 조작된 세포, 예컨대 조작된 T 세포를 함유하는 조성물을 투여하는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 본 방법은 조작된 세포 또는 이를 포함하는 조성물을, B세포 악성 종양을 가진 것으로 의심되거나, 가지고 있거나, 가졌었던 대상체에 투여함으로써 수행된다. 일부 구현예에서, 본 방법은 이를 통해 대상체에서 B세포 악성 종양을 치료한다. 또한 B세포 악성 종양의 치료를 위한, 본 명세서에 제공된 임의의 조성물, 예컨대 약학 조성물의 용도, 예컨대 치료 요법에서의 용도를 본 명세서에서 제공한다.
일부 측면에서, 제공된 방법 및 용도는 특정 대체 방법과 비교하여 개선된 반응 및/또는 더 오래 지속되는 반응 또는 효능 및/또는 독성 또는 다른 부작용의 감소된 위험, 예를 들어 치료된 대상체의 특정 그룹을 달성할 수 있다.
일반적인 입양 세포 요법을 위한 세포의 투여 방법은 공지되어 있으며 제공된 방법 및 조성물과 관련하여 사용될 수 있다. 예를 들어, 입양 T 세포 요법 방법은 예를 들어 문헌[미국 특허 출원 공개 번호 2003/0170238; 미국 특허 번호 4,690,915; Rosenberg (2011) Nat Rev Clin Oncol. 8(10):577-85)]에 기재되어 있다. 예를 들어, 문헌[Themeli 등 (2013) Nat Biotechnol. 31(10): 928-933; Tsukahara 등 (2013) Biochem Biophys Res Commun 438(1): 84-9; Davila 등 (2013) PLoS ONE 8(4): e61338] 참조한다.
일부 구현예에서, 방법 및 용도는 예를 들어 연령, 특정 유형의 질병, 진단 기준, 선행 치료 및/또는 선행 치료에 대한 반응에 기초하여 특정 그룹 또는 특정 서브세트의 대상체를 선택하거나 확인하는 것을 포함하는 대상체의 치료를 위해 사용되거나 이를 수반한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법 및 용도에 따라 치료될 B 세포 악성 종양 또는 혈액 악성 종양은, B 세포 악성 종양 또는 혈액 악성 종양의 원인과 관련되고/되거나 연관되는, 예컨대 원인, 악화 또는 그렇지 않으면 B세포 악성 종양 또는 혈액 악성 종양에 관여하는, 항원을 발현하는 임의의 것일 수 있다. 일부 측면에서, B 세포 악성 종양은 세포의 형질 전환 (예컨대, 암)과 관련이 있다. 특정 구현예에서, 재조합 수용체, 예를 들어 CAR은 B 세포 악성 종양 또는 혈액 악성 종양과 관련된 항원에 특이적으로 결합한다.
일부 구현예에서, B 세포 악성 종양 또는 혈액 악성 종양은 종양, 암, 신생물 또는 기타 증식성 질환 또는 장애와 관련이 있다. 일부 측면에서, 상기 질병은 백혈병, 림프종, 예를 들어, 급성 골수성(또는 골수형성) 백혈병(acute myeloid (or myelogenous) leukemia, AML), 만성 골수성(또는 골수형성) 백혈병(chronic myeloid (or myelogenous) leukemia, CML), 급성 림프구성(또는 림프모구성) 백혈병(acute lymphocytic (or lymphoblastic) leukemia, ALL), 만성 림프구성 백혈병(chronic lymphocytic leukemia, CLL), 모발 세포 백혈병(hairy cell leukemia, HCL), 작은 림프구성 림프종(small lymphocytic lymphoma, SLL), 외투 세포 림프종(Mantle cell lymphoma, MCL), 변연부 림프종, 버킷 림프종, 호지킨 림프종(Hodgkin lymphoma, HL), 비호지킨 림프종(non-Hodgkin lymphoma, NHL), 역형성 거대 세포 림프종(Anaplastic large cell lymphoma, ALCL), 여포성 림프종(follicular lymphoma), 불응성 여포성 림프종, 확산성 거대 B 세포 림프종(diffuse large B-cell lymphoma, DLBCL) 및 다발성 골수종(multiple myeloma, MM)을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 일부 구현예에서, 질병 또는 병태는 급성 림프모구 백혈병(acute lymphoblastic leukemia, ALL), 성인 ALL, 만성 림프모구 백혈병(chronic lymphoblastic leukemia, CLL), 비호지킨 림프종(non-Hodgkin lymphoma, NHL) 및 확산성 거대 B세포 림프종(Diffuse Large B-Cell Lymphoma, DLBCL)에서 선택된 B 세포 악성 종양이다. 일부 구현예에서, 질병 또는 병태는 NHL이고 상기 NHL은 공격적인 NHL, 확산성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), NOS(새로이 또는 비활동성으로부터 형질전환됨), 1차 종격동 거대 B 세포 림프종(primary mediastinal large B cell lymphoma, PMBCL), T 세포/조직세포 풍부 거대 B 세포 림프종(T cell/histocyte-rich large B cell lymphoma, TCHRBCL), 버킷 림프종(BL), 외투 세포 림프종(MCL), 여포성 림프종(FL), 및/또는 여포성 림프종 3B 등급(follicular lymphoma Grade 3B, FL3B)으로 이루어진 그룹에서 선택된다. B 세포 악성 종양 중에는 B-세포 급성 림프모구 백혈병(B-ALL) 또는 B-세포 비호지킨 림프종(non B-NHL)이 있다. 일부 측면에서, NHL은 확산성 거대 B 세포 림프종 (DLBCL), 버킷 림프종 (BL) 또는 1차 종격동 B 세포 림프종 (PMBCL)을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, B 세포 악성 종양은 B 세포 급성 림프 구성 백혈병 (B-ALL)과 같은 급성 림프 구성 백혈병(ALL) 이다. 일부 측면에서, 혈액과 골수의 공격적인 암인 ALL은 세계 보건기구 (WHO)에 의해 주로 B 세포 유형의 전구 림프종 신생물로 분류되며, T세포와 관련된 사례의 약 10 내지 15 %에 불과하다. 일부 측면에서, CD79a, CD19, 인간 백혈구 항원-항원 D 관련 (HLA-DR) 및 기타 B 세포 항원을 발현하는 전구 B 세포 ALL (B-ALL)은 아동기 ALL의 80% 내지 85%, 모든 소아암의 약 30%를 차지한다. ALL은 미국 (US)에서 어린이와 청소년에게 가장 많이 발생하는 암으로, 20 세 미만의 인간에서 진단된 모든 암의 20 %를 나타낸다. 일부 측면에서, 질병, 장애 또는 상태는, 골수 침윤(BM)이 25 % 미만인 경우 림프 모세포 림프종 (LBL)이라고 할 수 있으며, BM 관련이 25 % 이상이면 질병, 장애 또는 상태를 백혈병과 같이 지칭할 수 있다.
일부 측면에서, 면역 표현형(예컨대, 유세포 분석에 의한) 및/또는 세포 유전학은 B 와 T 전구체 ALL을 구별하는 데 사용될 수 있으며, 악성 B 세포의 분화 상태(예컨대, pro-B, 보통의, pre-B, 및 성숙한 B 세포)를 나타낸다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법 및 용도에 따라 치료될 대상체는 ALL을 가지며, 예를 들어 표 2에 기재된 바와 같이, 상이한 유형의 ALL과 관련된 면역 표현형 또는 세포 유전학적 특징을 갖는 것으로 확인될 수 있다. 일부 경우에, 질병 유형 및 분화 상태의 결정은 치료 선택에 필수적이다. 일부 측면에서, ALL은 가장 흔한 전구체 B 세포 신생물 형태이며, 혈액과 골수에 축적되는 악성, 형질 전환 및 미성숙 조혈 세포 ("아세포")의 증식 및 축적을 특징으로 한다(예컨대, Gokbuget 등, Blood. 2012 Aug 30;120(9):1868-76 참조한다.). 일반적으로 ALL의 진단을 위해서는 골수 분석이 필요하다. 일부 측면에서, ALL을 가진 아이들의 골수 분석은 ALL을 가진 아이들의 대다수가 50 % 이상의 아세포에 대한 대규모 백혈병 침윤을 나타낸다는 것을 광학 현미경으로 보여준다. 일부 경우에, 림프절 및 비장과 같은 다른 림프 기관과 비림프 기관, 특히 중추 신경계 (CNS)도 영향을 받을 수 있다. 일부 측면에서, 소아 대상체의 10 % 미만이 증상이 있는 CNS 관련이 있지만, 성숙한 B-ALL을 가진 대상체에서 빈도가 더 높다 (Faderl 등, Cancer. 2010 Mar 01; 116 (5) : 1165-76.). 일반적으로, ALL 발병의 위험 요소에는 연령, 화학 요법 또는 방사선 요법에 대한 노출 및 다운 증후군을 포함한 유전 질환이 포함된다. 일부 측면에서, ALL 발병 위험은 5 세 미만의 어린이에게서 가장 높다; 상기 위험은 20대 중반까지 서서히 감소하고 50 세 이후에 다시 증가하기 시작한다. 일부 경우에, B-ALL 환자의 약 75 %는 재발성 염색체 위치이동 또는 체세포 이수성을 가지고 있으며, 그중 일부는 질병 예후에 사용될 수 있다. 일부 측면에서, 소아기 ALL 환자의 약 절반은 염색체 위치이동을 가지고 있다. 일부 경우에, 이러한 염색체 위치이동은 기존의 세포 유전학적 분석으로는 감지할 수 없지만 형광 제자리 교잡법(ISH) 또는 중합 효소 연쇄 반응 (PCR)을 사용하여 감지된다. 일반적으로, ALL에 대한 가장 일반적인 염색체 위치이동은 t (12; 21) 위치이동으로, 소아 국립 암 연구소(NCI) 표준-위험 B-ALL의 20 % 내지 25 %에서 발생하는 ETV6-런트 관련 전사 인자 1 융합이 발생한다. 일부 경우에, 이러한 유전적 변화를 가진 소아들은 최대 a>95 %의 전체 생존율 (OS)을 보일 수 있다.
일부 측면에서, 다약제 화학 요법은 소아기 ALL을 위한 치료 옵션이며 경우에 따라 1 차 요법으로 사용된다. 일부 측면에서, 제시된 특징에 관계없이 1 차 유도 요법에는 빈크리스틴, 덱사메타손 (또는 프레드니손), 아스파라기나아제 및 독소루비신 (일부 경우 베를린-프랑크푸르트-뮌스터 (BFM) 요법이라고도 함)이 포함된다. 일부 경우에, 1 차 치료를 받는 소아의 95 % 이상이 치료 첫 4 주 이내에 완전 반응 (CR)을 달성할 수 있으며, 5 년 전체 생존율 (OS)은 거의 90 %에 가깝다(Pui 등, J Clin Oncol. 2015 Sep 20;33(27):2938-48). 일부 경우에, 중추 신경계 (CNS) 질환, 척수강 내 삼중 요법 (메토트렉세이트 (MTX), 시타라빈 및 프레드니솔론 투여)을 나타내는 대상체는 조직 재발의 위험을 줄이기 위해 정맥 (IV) 고용량 MTX와 함께 유도 요법 동안 사용할 수 있다. 일부 경우에, 방사선 요법은 CNS 재발 위험이 특히 높은 제한된 상황에서 척수강 내 MTX와 함께 사용할 수 있지만, 신경인지 장애가 지연될 위험이 있기 때문에 방사선 요법은 1차 요법으로 거의 사용되지 않는다. 일부 측면에서, 대상체가 완전 반응 (CR)을 달성하면 유도 후 치료는 위험 그룹 할당에 따라 달라질 수 있다. 일반적으로, 모든 대상체는 CR 후 및 유지 요법을 시작하기 전에 강화 요법을 받는다. 일부 측면에서, 일반적으로 사용되는 요법에는 사이클로포스파미드, 저용량 시타라빈, 및 티오퓨린이 포함된다. 일부 경우에, 유지 요법에는 머캅토퓨린, 저용량 MTX, 일부 경우에는 빈 크리스틴/스테로이드 펄스가 포함될 수 있다. 일부 측면에서, 치료 요법은 환자의 위험 범주에 의존할 수 있다. 후기 독성의 위험으로 인해 어떤 경우에는 표준 위험 ALL을 가진 소아의 안트라사이클린 및 알킬화제에 대한 노출이 제한될 수 있다. 일부 경우에, 대상체가 최소 잔류 질환 (MRD)을 나타내는 경우 안트라 사이클린 및 알킬화제를 사용할 수 있다. 일부 측면에서, ALL의 경우, MRD 수준의 증가는 결과 악화와 관련될 수 있다. 일부 경우에, 12주에 MRD의 지속성은 약 40%의 5 년 무병 생존율 (DFS)로 매우 나쁜 예후 요인이 될 수 있다(Borowitz 등, Blood. 2015 Aug 20;126(8):964-71). 일부 경우에, ALL의 중간 위험 BM 재발을 가진 대상체에서 유도 후 낮은 MRD는 기존의 화학/방사선 요법으로 좋은 장기 예후와 관련 될 수 있다. 대조적으로, 일부 경우에는 반응이 불충분한 대상체는 예후가 매우 나쁘다. 일부 측면에서, 유도 후 MRD 수준은 ALL의 중간 위험 BM 재발이 있는 소아의 장기 결과에 대한 강력한 독립적 예후 인자가 될 수 있다.
일부 측면에서, ALL은 급성 림프 모구 백혈병의 세계 보건기구 분류에 따라 추가로 분류될 수 있다. 일부 측면에서, 상기 분류는 세포 유전학 및 분자 진단 테스트를 통해 발견 된 유전적, 면역 표현형, 분자 및 형태학적 특징을 기반으로 할 수 있다. (예를들어, Arber 등, Blood. 127(20): 2391-2405; Mrozek 등, Hematol Oncol Clin North Am. 2009 October; 23(5): 991-v 참조한다.). 일부 측면에서, B 세포 림프모구 백혈병/림프종의 분류는 다음과 같은 범주를 포함한다: 재발성 유전적 이상; t (9;22)(q34.1;q11.2), BCR-ABL1; t(v;11q23.3), KMT2A가 재배열됨; t(12;21)(p13.2;q22.1), ETV6-RUNX1; t(5;14)(q31.1;q32.3), IL3-IGH; t(1;19)(q23;p13.3),TCF3-PBX1; 배수성; 저배수성; 및 달리 지정되지 않음(NOS). 일부 측면에서, ALL은 T- 림포모구 백혈병/림프종을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, ALL은 다음과 같이 분류되는 모호한 계통의 급성 백혈병을 포함 할 수 있다: 급성 미분화 백혈병; 혼합 표현형 급성 백혈병(MPAL)과 t(9;22)(q34.1;q11.2), BCR-ABL1; t (v; 11q23.3), KMT2A가 재배열된 MPAL; MPAL, B/골수성, NOS; 및 MPAL, T/골수성, NOS.
일부 측면에서, B-ALL은 세포의 표현형에 따라 다음과 같이 세분 될 수 있다: 초기 pre B-ALL (TdT+, CD19+, CD10-); 공통 ALL (CD19+, CD10+/CALLA+); pre B ALL (CD10+/-, CD19+, HLA Dr+, 세포질 IgM+); 및 성숙 B ALL (CD10+, CD19+, CD20+, CD22+, 표면 IgM+).
일부 측면에서, ALL은 다음과 같이 FAB (French-American-British) 시스템을 기반으로 분류될 수 있다: ALL-L1 (T 세포 또는 pre-B 세포; 작고 균질한(균일한) 세포); ALL-L2 (T 세포 또는 pre-B 세포; 크고 이질적인(다양한) 세포); 및 ALL-L3 (B 세포; 액포가 있는 크고 다양한 세포). 일부 측면에서, 성숙 B 세포 ALL은 Burkitt 백혈병이라고도 할 수 있다.
일부 측면에서, ALL은 ALL의 필라델피아 염색체 양성 (Ph +) 하위 유형이다. 이 하위 유형은 부분적으로 표준 화학 요법의 치료 결과가 좋지 않다는 특징이 있다. 필라델피아 염색체는 소아 급성 림프모구 백혈병(Ph+ ALL)의 3 ~ 4 %, 성인 ALL 경우의 약 25 %로 존재한다. 특정 구현예에서, 필라델피아 염색체는 위치이동, t (9; 22) (q34; ql 1)를 포함하여, 염색체 22의 BCR 유전자와 염색체 9의 Abelson 티로신 키나아제 (ABL1)를 암호화하는 유전자를 융합하는 새로운 키메라 유전자와 단백질을 생성한다. 생성된 BCR-ABL1 융합 전사체 및 단백질은 조혈 줄기 세포에서 백혈병 형질 전환을 촉진하기위해 다양한 신호 전달 경로를 활성화하는 구성적으로 활성화된 티로신 키나아제이다. 일부 구현예에서, ALL의 Ph+ 하위 유형을 갖는 대상체는 골수 세포와 같은 필라델피아 염색체를 갖는 하나 이상의 세포를 갖는다. 일부 측면에서, ALL은 ALL의 필라델피아-유사 (Ph-유사) 하위 유형이다. 일부 구현예에서, Ph-유사 하위 유형은 "클러스터 그룹 R8", "필라델피아 염색체(Ph)-유사", "Ph-유사", "BCR-ABL1-유사" 또는 "활성화된 티로신 키나제 유전자 발현 시그니처"로 다양하게 지칭되는 관련 유전자 발현 시그니처를 특징으로 한다. 이러한 유전자 발현 특징은 Ph+ ALL 대상체에서 측정된 유전자 발현 프로파일과 매우 유사한 것으로 나타났지만, 이러한 사실에도 불구하고, 일부 측면에서 Ph-유사 대상체는 필라델피아 염색체 위치이동 또는 BCR-ABL1 융합 전사체를 갖지 않는다. Ph-유사 하위유형의 유병률은 소아에서 약 12%, 청소년(16~20세)에서 21%, 40세 이상 성인에서 20~24%이며,21~39세 젊은 성인 연령에서 최고(27%)이다. 일부 경우에 남성 개인과 다운 증후군 환자에게서 더 자주 발생한다. Ph-유사 ALL은 히스패닉 민족에서 과도하게 대표되며 GATA3(rs3824662)의 유전된 유전 변이와 관련이 있다. 일부 측면에서, Ph-유사 ALL은 B-ALL의 임상적 및 생물학적으로 이질적인 하위 유형이다.
일부 측면에서, 비호지킨 림프종 (NHL)은 치료에 대한 다른 임상 과정과 반응을 보이는 이질적인 림프 증식성 악성 종양 그룹이다. 일부 측면에서, WHO 림프종 분류 체계는 림프종의 특정 하위 유형을 정의하고 기원 세포(B, T 또는 자연 살해(NK)) 및 림프구의 분화 상태에 따라 이들을 세분화한다. 일부 측면에서, NHL의 80% 내지 90%는 B 세포 기원이며 CD19를 발현한다. 일부 경우에, NHL의 예후는 조직학적 유형(나태성 대 공격성), 병기, 연령 및 치료에 의존한다. 일부 구현예에서, 성인 및 소아 집단에서 발생하는 NHL 하위 유형은 유사성과 차이점을 모두 보여준다. 일부 구현예에서, 소아기 NHL은 공격적인 임상 과정을 나타내는 반면, 일부 구현예에서 성인 NHL은 나태하고 공격적인 조직학적 형태를 모두 나타낸다. 일부 구현예에서, 성인에서 발생하는 나태한 NHL 하위 유형은 여포성 림프종(FL), 변연부 림프종(MZL) 및 만성 림프구성 백혈병(CLL)을 포함한다. 일부 구현예에서, 공격적인 B 세포 하위 유형에는 확산성 거대 B 세포 림프종(DLBCL) 및 외투 세포 림프종(MCL)이 포함된다.
일부 측면에서, FL, CLL 및 MCL을 포함한 많은 NHL 유형은 성인에게 비교적 일반적으로 발생하지만 소아에는 거의 발생하지 않는다. 일부 경우에, 3가지 주요 조직학적 하위 유형으로 구성된 소아 B 세포 비호지킨 림프종(B-NHL)은 공격성으로 분류된다: 전체 발병률의 내림차순으로, 버킷 림프종(BL), DLBCL 및 1차 종격동 거대 B 세포 림프종(PMBCL). 일부 구현예에서, LBL 케이스는 T 세포 계통이며 나머지는 pre-B 또는 성숙한 B 세포 면역표현형이 있다.
일부 측면에서, 영아에서 NHL의 발생은 드물고 성인에서 발생률은 나이가 들수록 증가한다. 일부 측면에서, 청소년은 소아에 비해 사망률이 높다. 일부 측면에서, 소아 B-NHL의 일반적인 형태는 모든 소아기 NHL의 약 60%를 구성한다. 일부 측면에서, 약 25 내지 30 %의 소아는 재발하거나 치료율이 30 % 미만인 불응성 질환을 경험한다 (Jourdain 등, Haematologica. 2015 Jun;100(6):810-7).
일부 경우에, 공격적이고 나태한 하위 유형 모두에 대해 r/r 소아 B-NHL은 치료 과제를 나타낸다. 일부 경우에, 재발 후 예후는 상대적으로 좋지 않다. 일부 구현예에서, 구제 치료는 고용량 화학 요법에 이어 자가 또는 동종 조혈 SCT(HSCT)를 통한 강화 단계로 구성된다.
일부 측면에서, 확산성 거대 B 세포 림프종(DLBCL)은 소아 B 세포 림프종의 10 내지 20%를 차지하며 청소년에서 더 자주 발생한다. 일부 측면에서, 확산성 거대 B 세포 림프종은 소아 및 청소년에서 널리 퍼진 NHL 형태로, 청소년에서 더 많이 발생하고 15세에서 19세 범위의 모든 NHL의 최대 37%를 차지한다.
일부 측면에서, BL은 14세 이하의 소아에게 가장 흔한 NHL이며 북미와 유럽에서 전체 NHL의 30 내지 40%를 차지한다. 일부 측면에서, NHL은 복부 및/또는 두경부 영역에서 발생할 수 있으며 환자의 약 20% 내지 25%에서 골수 및/또는 CNS를 포함하는 진행성 질환으로 나타난다. 일부 측면에서, BL의 발병률은 나이가 들면서 증가할 수 있는 DLBCL을 포함한 다른 NHL 하위 유형과 대조적으로 평생 동안 비교적 일정하게 유지된다. 일부 측면에서, BL은 사하라 사막 이남의 아프리카에서 유행하는 엡스타인-바 바이러스(EBV) 및 말라리아 감염과의 연관성 때문에 뚜렷한 역학적 패턴을 가지고 있다.
일부 측면에서, 최근까지 PMBCL은 전체 사례의 10% 이하를 구성하는 DLBCL의 한 형태로 간주되었다. 일부 경우에, PMBCL은 일부 측면에서 PMBCL이 다른 조직과 비교하여 뚜렷한 면역 표현형, 유전자 발현 프로필 및 임상 양상을 갖기 때문에 이제 WHO 분류에서 별개의 실체로 인식된다. 일부 측면에서, PMBCL의 발병률은 30대 또는 40대에 최고조에 달하며 여성에서 더 흔하다.
일부 구현예에서, NHL은 Lugano 분류에 기초한 단계일 수 있다(예를 들어 Cheson 등, (2014) JCO 32(27):3059-3067; Cheson, B.D. (2015) Chin Clin Oncol 4(1):5 참조한다.). 일부 경우에, 병기는 로마 숫자 I에서 IV(1-4)로 설명되며, 림프계 외부 기관(절외 기관)에 영향을 미치는 제한된 병기(I 또는 II) 림프종은 E로 표시된다. I 단계는 하나의 결절 또는 인접한 결절 그룹의 관여 또는 결절 관여가 없는 단일 결절 외 병변(IE)을 나타낸다. 2 단계는 횡격막의 같은 쪽에 있는 2 이상의 노드 그룹 또는 제한된 인접하는 림프절외 관여(IIE)를 갖는 노드 규모에 의한 I 또는 II 단계의 관여를 나타낸다. III 단계는 비장 관여와 함께 횡경막 위의 노드 또는 횡경막 양쪽에 있는 노드의 관여를 나타낸다. IV 단계는 추가의 비인접한 림프절 외 개입의 관여를 나타낸다. 또한, "부피가 큰 질병(bulky disease)"은 특히 II 단계에 관한 가슴의 거대 종양을 설명하는데 사용될 수 있다. 질병의 정도는 열성 림프종에 대해서는 양전자 방출 단층 촬영(positron emission tomography, PET)-컴퓨터 단층 촬영(computed tomography, CT) 및 비열성 조직 구조에 대해서는 CT에 의해 결정된다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법 및 용도에 따라 치료될 대상체는 NHL을 가지며, 예를 들어 표 2에 기재된 바와 같이, 면역 표현형 또는 세포 유전학적 특징을 갖는 것으로 확인되었거나 확인된 바 있다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법 및 용도에 따라 치료될 대상체는 NHL을 가지며, 대상체는 이중/삼중 히트 림프종 또는 이중/삼중 히트 분자 하위 유형의 림프종을 갖는 것으로 확인되거나 확인되었다. 일부 구현예에서, 림프종은 MYC(골수 세포증 종양 유전자), BCL2(B-세포 림프종 2) 및/또는 BCL6(B-세포 림프종 6) 유전자 재배열(예를 들어 위치이동)의 존재를 특징으로 하는 이중 히트 림프종이다. 일부 구현예에서, 상기 유전자 재배열은 다른 유전자 재배열과 조합하여 MYC/8q24 유전자좌에 영향을 미친다. 예를 들어, 다른 유전자 재배열은 BCL2를 수반하는 t(14;18)(q32;q21)를 포함한다. 일부 구현예에서, 유전자 재배열은 BCL6/3q27과 조합하여 MYC/8q24 유전자좌에 영향을 미친다. 일부 구현예에서, 림프종은 MYC, BCL2 및 BCL6 유전자 재배열의 존재를 특징으로 하는 삼중 히트 림프종이다; 예를 들어, 문헌[Aukema 등, (2011) Blood 117:2319-2331]을 참조한다. 상기 구현예의 일부 측면에서, 대상체는 ECOG 0-1이거나 MZL 또는 CLL로부터 형질 전환된 DLBCL을 갖지 않거나 갖는 것으로 의심되지 않거나 특성화되지 않는다. 측면에서, 요법은 상기 대상체에 대해 표시되고/거나 지침은 상기 집단 내의 대상체에 대한 투여를 나타낸다. 일부 구현예에서, 2016년 WHO 기준(Swerdlow {FF54} 등, (2016) Blood 127(20):2375-2390)에 기초하여, 이중/삼중 히트 림프종은 DLBCL 조직 구조(이중/삼중 히트)를 갖는 MYC 및 BCL2 및/또는 BCL6 재배열을 갖는 고급 B 세포 림프종으로 간주될 수 있다.
일부 구현예에서, B 세포 악성 종양 또는 혈액 악성 종양의 유형은 예를 들어, 본 명세서에 기재된 세포유전학적 특징, 예를 들어 표 2에 기초하여, 이상에 대해 염색체 구조를 평가 및/또는 분석함으로써 확인될 수 있다. 예를들어, 일부 구현예에서, 염색체는 예를 들어 G-밴딩 기술과 같은 핵형 분석에 의해 분석된다. G-밴딩은 개인의 핵형을 생성하며, 여기서 Giemsa 염색은 일련의 어둡고 밝은 밴드를 생성하는 데 사용되며 각 염색체는 광학 현미경 하에서 고유한 밴딩 패턴을 표시한다. 각 염색체는 센트로미어의 위치(중부 동원체형, 차중부 동원체형, 차단부 동원체형)에 의해 더 구별될 수 있으며, 이를 더 짧은 팔, p(작은) 팔 및 q 팔이라고 하는 더 긴 팔로 나뉜다. 그런 다음, 결실, 복제 또는 기타 구조적 재배열을 포함한 이상을 감지하기 위해, 염색체는 쌍으로 나란히 배열된다. 이 기술은 비교적 저렴하고 이상에 대한 좋은 1차 검사이지만 이 기술의 한계는 작은 삭제 또는 재배열을 감지할 수 없다는 것이다.
일부 구현예에서, B 세포 악성 종양 또는 혈액 악성 종양의 유형을 결정하는 데 사용할 수 있는 다른 기술에는 형광 계내 혼성화(FISH) 및 형광 표지된 프로브를 사용하여 특정 염색체 세그먼트 또는 유전자의 존재 또는 부재를 검출하는 다색 FISH가 있다. FISH 및 다색 FISH는 작은 결실, 중복 및/또는 미묘한 염색체 재배열을 감지할 수 있다. FISH 및 다색 FISH 분석은 염색체 분석을 위해 얻은 동일한 표본에 대해 수행할 수 있다. 일부 구현예에서, B 세포 악성 종양의 유형은 FISH 및/또는 다색 FISH에 의해 식별 및/또는 감지된다.
일부 구현예에서, 방법은 하나 이상의 선행 요법으로 치료 후 완화 후에 재발했거나 하나 이상의 선행 요법에 불응성이 된 대상체; 또는 하나 이상의 선행 요법, 예를 들어 하나 이상의 표준 요법 방식에 대해 재발하였거나 불응성(R/R)인 대상체;를 치료하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 제공된 방법 및 용도는 표준 요법에 대한 R/R을 갖는 B 세포 악성 종양을 갖는 것으로 확인된 소아 대상체와 같은 대상체의 특정 그룹 또는 서브 세트의 치료를 포함한다. 일부 구현예에서, 대상체는 공격적이고/거나 예후가 좋지 않고/거나 표준 요법에 대한 R/R을 갖는 B세포 악성 종양과 같은 고위험 질환을 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 방법은 미세 잔존 질병(MRD+ B-ALL)을 나타내는 R/R B-ALL, R/R B-NHL 또는 B-ALL을 갖는 대상체를 치료하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 대상체는 R/R DLBCL, R/R BL 또는 R/R PMBCL을 갖는다.
일부 구현예에서, 제공된 방법 및 용도는 특정 그룹 또는 대상체의 서브세트, 예를 들어 25 세 이하의 대상체와 같은 특정 연령의 대상체를 치료하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 대상체는 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16 또는 15세 이하이다. 일부 구현예에서, 제공된 방법 및 용도는 예를 들어 25 세 이하의 대상체와 같은 특정 연령의 대상체를 치료하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 제공된 방법 및 용도는 예를 들어 18 세 미만의 대상체와 같은 특정 연령의 대상체를 치료하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 제공된 방법 및 용도는 소아 대상체 또는 젊은 성인 대상체를 치료하는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 제공된 방법 및 용도는 체중이 약 6kg 이상인 대상체에게 CAR-발현 세포를 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 제공된 방법 및 용도는 CAR-발현 세포를 약 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 체중 20kg 이상의 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 제공된 방법 및 용도는 체중이 약 12kg 이상인 대상체에게 CAR-발현 세포를 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 대상의 체중은 약 100kg 미만이다.
일부 구현예에서, 대상체는 18세 미만이고 체중이 약 12kg 이상이다. 일부 구현예에서, 대상체는 18세 미만이고 체중이 약 6kg 이상이다. 일부 구현예에서, 대상체는 25세 이하이고 체중이 약 12kg 이상이다. 일부 구현예에서, 대상체는 25세 이하이고 체중이 약 6kg 이상이다.
일부 구현예에서, 세포 또는 조성물을 투여하기 전에, 대상체는 재조합 수용체(예를 들어, CD19)에 의해 표적화된 항원을 발현하는 세포를 갖는 것으로 확인되었거나 확인되었다. 일부 구현예에서, 대상체 또는 대상체의 생물학적 샘플은 유세포 분석(예: 말초 혈액 또는 골수 샘플) 또는 면역조직화학염색법(예: 골수 생검)을 통해 결정된 바와 같이 CD19 발현의 증거를 나타내거나 CD19-발현 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 항원(예를 들어, CD19)의 발현은 말초혈액 또는 골수에서 유세포분석에 의해, 및/또는 골수 생검의 면역조직화학염색법에 의해 검출된다.
일부 구현예에서, 세포 또는 조성물을 투여하기 전에, 대상체가 16세 이상인 경우 Karnofsky 점수가 50 이상이고, 대상체가 16세 미만인 경우 Lansky 점수가 50 이상인 것으로 확인되었다.
일부 구현예에서, 방법은 ALL 또는 NHL의 특정 예후 또는 위험을 갖는 것으로 선택되거나 확인된 대상체에 세포의 투여를 포함한다. 일부 경우에, ALL 또는 NHL을 가진 대상체는 질병 예후 및/또는 권장되는 치료 전략을 알려줄 수 있는 그룹으로 분류될 수 있다. 일부 경우에, 상기 그룹은 “낮은 위험(low risk)”, “중간 위험(intermediate risk)”, “높은 위험(high risk)” 및/또는 “매우 높은 위험(very high risk)”일 수 있고, 환자는 유전적 이상 및/또는 형태학적 또는 물리적 특성을 포함하되 이에 국한되지 않는 여러 요인에 따라 분류될 수 있다. 일부 구현예에서, 방법 및/또는 제조 물품 또는 조성물에 따라 치료되는 대상체는 ALL 또는 NHL의 위험에 기초하여 분류되거나 식별된다. 일부 구현예에서, 대상체는 고위험 ALL 또는 고위험 NHL을 가진 대상체이다.
일부 구현예에서, 대상체는 재조합 수용체를 발현하는 세포의 투여 전에 질병 또는 병태, 예를 들어, ALL 또는 NHL을 표적으로 하는 요법 또는 치료제로 앞서 치료되었다. 일부 구현예에서, 대상체는 조혈 줄기 세포 이식(hematopoietic stem cell transplantation, HSCT), 예를 들어, 동종 HSCT 또는 자가 HSCT로 앞서 치료되었다. 일부 구현예에서, 대상체는 표준 요법으로 치료 후 예후가 좋지 않았고/거나 선행 요법 중 하나 이상의 방식에 실패하였다. 일부 구현예에서, 대상체는 림프고갈 요법 및/또는 항원 수용체를 발현하는 세포의 용량 이외의 ALL 또는 NHL을 치료하기 위한 적어도 또는 약 적어도 또는 약 1, 2, 3, 또는 4개의 다른 요법을 치료받았거나 이전에 받은 적이 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 화학요법 또는 방사선 요법으로 앞서 치료되었다. 일부 측면에서, 대상체는 다른 요법 또는 치료제에 대해 불응성이거나 반응적이지 않다. 일부 구현예에서, 대상체는 예를 들어, 화학요법 또는 방사선을 포함한 다른 요법 또는 치료적 개입으로 치료 후, 질병이 지속되거나 재발하였다.
일부 구현예에서, 대상체는 조혈 줄기세포 이식(HSCT), 예를 들어, 동종이계 HSCT에 적합한 것과 같이 이식에 적합한 대상체이다. 일부 구현예에서, 대상체는 자격이 있음에도 불구하고, 본 명세서에 제공된 바와 같은 대상체에게 조작된 세포(예를 들어, CAR-T 세포) 또는 세포를 함유하는 조성물을 투여하기 이전에 이식을 받은 적이 없다.
일부 구현예에서, 대상체는 이식에 적합하지 않은, 예컨대 조혈 줄기세포 이식(HSCT), 예를 들어, 동종이계 HSCT에 적합하지 않은 대상체이다. 일부 구현예에서, 이러한 대상체에는 조작된 세포(예를 들어, CAR-T 세포) 또는 본원에 제공된 구현예에 따른 세포를 함유하는 조성물이 투여된다.
일부 구현예에서, 세포 또는 조성물을 투여하기 전에, 대상체는 재발성 및/또는 불응성(R/R) B-ALL을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 골수 질환의 형태학적 증거로 특징지어질 수 있는 R/R B-ALL, 예를 들어 형태학에 따른 5% 이상의 림프모구 및 다음 중 임의의 것을 갖는다: (a) 1차 이상의 골수 재발, 또는 (b) 동종이계 조혈 줄기 세포 이식(HSCT) 후의 임의의 골수 재발, 또는 (c) 2개 이상의 개별 유도 요법 후에 완전 반응(CR) 또는 불완전 혈구 수 회복(CRi)을 포함하는 완전 반응을 달성하지 못한 것으로 정의되는 1차 불응성(또는 재발성 백혈병에 대한 표준 화학 요법의 1주기 후에 CR/CRi를 달성하지 못한 화학 불응성), 또는 (d) 동종이계 HSCT 부적격.
일부 구현예에서, 세포 또는 조성물을 투여하기 전에, 대상체는 최소 잔류 질환 양성(MRD+) B-ALL을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 형태에 의해 5% 미만의 림프모구를 갖는 것으로 특징지어질 수 있는 MRD+ B-ALL을 갖고/거나, MRD는 두 라인의 치료 후 BM 세포에서 1 x 10-4 이상의 빈도로 검증된 분석으로 검출할 수 있다.
일부 구현예에서, 세포 또는 조성물을 투여하기 전에, 대상체는 B-ALL을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 B-NHL을 가지고 있으며, 이는 1회 이상의 화학요법 후 측정 가능한 질병을 갖고/있거나 HSCT에 실패했거나 HSCT에 부적격인 것으로 특징지어질 수 있다.
일부 구현예에서, 세포 또는 조성물을 투여하기 전에, 대상체가, 대상체는 필라델피아 염색체 양성 ALL을 가지고 있고, 하나 이상의 티로신-키나아제 억제제 (TKI) 요법에 대해 불내성이거나 실패했거나, TKI 요법이 금기이다.
일부 구현예에서, 세포 또는 조성물을 투여하기 전에, 대상체는 적절한 골수 기능, 적절한 신장 기능, 적절한 폐 기능 및/또는 적절한 심장 기능과 같은 적절한 기관 기능을 갖는 것으로 나타났다. 일부 측면에서, 적절한 골수 기능은 림프구 고갈 요법을 받기에 적절한 골수 기능으로 특징지어질 수 있다. 일부 측면에서, 적절한 신장 기능은 Schwartz 공식을 사용하여 계산된 크레아티닌 제거율 또는 방사성 동위원소 사구체 여과율(GFR) > 70 mL/min/1.73 m2로 특징지어질 수 있다. 일부 측면에서, 적절한 폐 기능은 CTCAE(Common Toxicity Criteria for Adverse Events) 및 실내 공기의 산소 포화도(SaO2) ≥ 92%에 따라 ≤ 1등급 호흡곤란으로 특징지어질 수 있다. 일부 측면에서, 적절한 심장 기능은 백혈구 성분채집술 전 4주 이내에 심초음파(ECHO) 또는 다중 게이트 획득 스캔(MUGA)으로 평가할 때 좌심실 박출률(LVEF) ≥ 40%로 특징지어질 수 있다.
일부 구현예에서, 세포 또는 조성물을 투여하기 전에, 대상체는 백혈구 성분채집술 절차를 위한 적절한 혈관 접근을 갖는 것으로 나타났다.
일부 구현예에서, 세포 또는 조성물을 사용한 치료 요법 전 및 동안, 대상체는 효과적인 피임을 사용한다.
일부 경우에, 특정 대상체는 치료에 부적격하거나 제공된 방법 및 용도에 따라 치료에서 제외된다. 일부 측면에서, 제공된 방법 및 용도에 따라 자격이 없거나 치료에서 제외된 대상체는 다음 중 임의, 일부 또는 전부의 존재를 포함할 수 있다: 대상체가 치료 요법을 받는 것을 방해하는 임의의 중대한 의학적 상태, 실험실 이상 또는 정신 질환이 있음; 대상체는 방법 및 용도에 따라 치료할 경우 대상체를 허용할 수 없는 위험에 처하게 할 수 있는 실험실 이상의 존재를 포함하여 임의의 상태를 가지고 있음; 대상체는 치료 결과를 해석하는 능력을 혼란스럽게 만드는 임의의 상태를 가지고 있음; 세포 투여 전 적어도 2년 동안 차도 상태에 있지 않은 또 다른 1차 악성 종양의 병력이 있는 대상체; 항원(예: CD19)을 발현하지 않는 것으로 나타나거나 이전 요법을 완료한 후 CD19-음성 질환을 나타내는 경우, 세포에 의해 발현된 재조합 수용체(예: CD19)에 의해 표적화된 동일한 항원을 표적으로 하는 이전 요법을 받은 대상체; CAR T 세포 또는 기타 유전적으로 변형된 T 세포 요법을 포함하는 이전 요법을 받은 대상체; B형 간염, C형 간염 또는 인간 면역결핍 바이러스(HIV) 감염의 이전 병력 또는 활동성이 있는 대상체; 백혈구 성분채집술 또는 조작된 세포 투여 시 적절한 항생제 또는 기타 치료에도 불구하고 통제되지 않는 전신 진균, 세균, 바이러스 또는 기타 감염(결핵 포함)이 있는 대상체; 대상체는 급성 또는 만성 이식편 대 숙주 질병(graft-versus-host disease, GvHD)의 존재를 가지고 있음; 면역억제 요법을 필요로 하는 활성 자가면역 질환이 있는 대상체; 대상체는 백혈구 성분채집술 또는 조작된 세포 투여 전 6개월 이내에 심장 장애(CTCAE 버전 4.03 등급 3 또는 4)를 가짐; 다운 증후군을 제외하고 수반되는 유전 증후군이 있는 대상체; 활동성 중추신경계(CNS) 질환 및 상당한 신경학적 악화가 있는 대상체(CNS-2 또는 CNS-3 관련이 있는 대상체는 무증상이고 심각한 신경학적 악화가 없는 경우 적격하거나 투여를 받을 수 있음); 임상적으로 관련된 CNS 병리의 병력 또는 존재가 있는 대상체; 임신 중이거나 수유 중인 대상체.
일부 측면에서, 다음 치료 또는 요법 중 하나 이상을 받은 대상체는 제공된 방법 또는 용도에 따른 치료에 부적격하거나 제외될 수 있다: 백혈구 성분채집술 전 7일 또는 조작된 세포 투여 전 72시간 이내에 코르티코스테로이드(>20 mg/일 프레드니손 또는 등가물로 정의됨)의 치료 용량(생리학적 대체, 국소 및 흡입 스테로이드 제외); 질병 조절을 유지하기 위해 백혈구 성분채집술 후에 제공되는 저용량 화학요법(예: 빈크리스틴, 리툭시맙, 사이클로포스파미드 ≤ 300 mg/m2)은 림프고갈 ≥7일 전에 중단해야 함; 백혈구 성분채집술 전 1주 이내에 림프독성으로 간주되지 않는 세포독성 화학요법제(백혈구 성분채집술 전에 반감기가 적어도 3회 경과한 경우, 레날리도마이드 및 이브루티닙을 포함한 경구용 항암제는 제외); 백혈구 성분채집술 전 2주 이내에 림프독성 화학요법제(예: 시클로포스파미드, 이포스파미드, 벤다무스틴); 반응이 없거나 PD가 실험 요법에 대해 문서화되지 않고 백혈구 성분채집술 전에 적어도 3회의 반감기가 경과한 경우를 제외하고 백혈구 성분채집술 전 4주 이내의 실험 제제; 백혈구 성분채집술 및 조작된 세포 투여 전 4주 이내의 면역억제 요법(예: 칼시뉴린 억제제, 메토트렉세이트 또는 기타 화학요법제, 미코페놀레이트, 라파마이신, 탈리도마이드, 항종양 괴사 인자(TNF), 항-IL-6 또는 항-IL-6R과 같은 면역억제 항체); 조작된 세포 투여 전 6주 이내에 공여자 림프구 주입(DLI); 백혈구 성분채집술 전 6주 이내에 방사선 조사(대상체는 조작된 세포 투여를 받을 자격이 있으려면 조사된 병변에 진행성 질병(PD)이 있거나 추가로 조사되지 않은 병변이 있어야 하며, 추가로 조사되지 않고 측정 가능한 병변이 존재하는 경우 백혈구 성분채집술 2주 전 단일 병변에 대한 방사선은 허용될 수 있음); 또는 백혈구 성분채집술 전 90일 이내에 동종이계 HSCT.
일부 구현예에서, 동부 종양학 그룹 협회(Eastern Cooperative Oncology Group, ECOG) 수행 상태 지표는 치료를 위한 대상체, 예를 들어 선행 요법으로부터 수행도가 좋지 않았던 대상체를 평가하거나 선택하기 위해 사용될 수 있다(예를 들어, 문헌[Oken 등 (1982) Am J Clin Oncol. 5:649-655] 참조한다.). 수행 상태의 ECOG 척도는 스스로를 돌보는 능력, 일상 활동 및 신체 능력(예를 들어, 걷기, 일하기 등)의 관점에서 환자의 기능 수준을 설명한다. 일부 구현예에서, 0의 ECOG 수행 상태는 대상체가 정상적인 활동을 수행할 수 있음을 나타낸다. 일부 측면에서, 1의 ECOG 수행 상태를 갖는 대상체는 신체 활동에 일부 제한을 보이나 대상체는 완전히 보행할 수 있다. 일부 측면에서, 2의 ECOG 수행 상태를 갖는 환자는 50% 이상 보행할 수 있다. 일부 경우에, 2의 ECOG 수행 상태를 갖는 대상체는 스스로를 돌볼 수도 있다; 예를 들어, 문헌[Sørensen 등, (1993) Br J Cancer 67(4) 773-775]을 참조한다. ECOG 성능 상태를 반영하는 기준은 아래 표 1에 설명되어 있다:
표 1. ECOG 수행 상태 기준
등급 ECOG 수행 상태
0 제한없이 모든 질병 전 수행을 수행할 수 있는, 완전히 활동적임
1 육체적으로 격렬한 활동에서 제한되나 걸을 수 있고 가볍거나 앉아서 일하는 성질의 일, 예를 들어 가벼운 집안 일, 사무실 작업을 수행할 수 있음
2 걸을 수 있고 모든 자기 관리가 가능하나 어떠한 작업 활동도 수행할 수 없음; 깨어있는 시간의 50 % 이상
3 제한된 자가 관리만 가능함; 깨어있는 시간의 50% 이상을 침대나 의자에 국한
4 완전히 지체 부자유한; 어떠한 자기 관리도 수행할 수 없음; 침대나 의자에 완전히 국한
5 죽음
일부 구현예에서, 방법은 0-1 또는 0-2의 ECOG(Eastern Cooperative Oncology Group Performance Status)를 갖는 대상체를 치료하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 방법은 하나 이상, 예컨대 2 또는 3의 염색체 위치이동(예컨대 “이중-히트(double-hit)” 또는 “삼중-히트(triple-hit)” 림프종으로 명명되고; 보통 t (14; 18) (q32; q21) bcl-2 유전자 및/또는 BCL6/3q27 염색체 위치이동과의 조합으로 MYC/8q24 유전자좌 위치이동을 가짐; 예를 들어 Xu 등 (2013) Int J Clin Exp Pathol. 6(4): 788-794, 참조한다.)을 갖고/거나 자가 줄기 세포 이식(autologous stem cell transplant, ASCT) 투여 후 재발, 선택적으로 12개월 내에 재발하였고/거나 화학 요법 불응성으로 간주되어온 집단과 같이 요법 또는 특정 기준 요법에 대해 일반적으로 불량하게 반응하는 불량한 예후 집단 또는 DLBCL 환자 또는 이의 대상체 집단을 치료한다.일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법 및 용도에 사용되는 조작된 세포 또는 이러한 세포를 함유하는 조성물은 B 세포 악성종양 또는 혈액 악성종양과 관련된 항원을 표적으로 하는 재조합 수용체를 함유한다. 일부 구현예에서, 수용체에 의해 표적화되는 항원은 다수의 공지된 B 세포 표지자 중 어느 하나와 같은 B 세포 악성 종양과 관련된 항원을 포함한다. 일부 구현예에서, 항원은 CD19, CD20, CD22, ROR1, CD45, CD21, CD5, CD33, Ig카파, Ig람다, CD79a, CD79b 또는 CD30이거나 이를 포함한다.
일부 구현예에서, 세포 요법(예를 들어, 입양 T 세포 요법)은 자가 전달에 의해 수행되며, 세포는 세포 요법을 받을 대상체 또는 상기 대상체로부터 유래된 샘플로부터 단리 및/또는 달리 제조된다. 따라서, 일부 측면에서, 세포는 대상체, 예를 들어 치료가 필요한 환자로부터 유래되고, 세포는 단리 및 가공 후에 동일한 대상체에 투여된다.
일부 구현예에서, 세포 요법(예를 들어, 입양 T 세포 요법)은 동종이계 전달에 의해 수행되며, 세포는 세포 요법을 받을 예정이거나 최종적으로 받은 대상체, 예를 들어 제1 대상체 외의 대상체로부터 단리 및/또는 달리 제조된다. 상기 구현예에서, 이어서 세포는 상이한 대상체, 예를 들어, 같은 종의 제2 대상체에 투여된다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 대상체는 유전적으로 동일하다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 대상체는 유전적으로 유사하다. 일부 구현예에서, 제2 대상체는 제1 대상체와 동일한 HLA 클래스(HLA class) 또는 수퍼타입(supertype)을 발현한다.
세포는, 임의의 적합한 수단, 예를 들어 볼루스 주입, 주사, 예를 들어 정맥내 또는 피하 주사, 안구내(intraocular) 주사, 안구주위(periocular) 주사, 망막하(subretinal) 주사, 유리체내(intravitreal) 주사, 중격-경유성(trans-septal) 주사, 공막하(subscleral) 주사, 맥락막내(intrachoroidal) 주사, 전방내(intracameral) 주사, 결막하 주사(subconjectval injection, subconjuntival injection), 서브 테논(sub-Tenon) 주사, 안구뒤(retrobulbar) 주사, 안구주위(peribulbar) 주사 또는 후부 점막 주사(posterior juxtascleral) 전달에 의해 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 이는 비경구, 폐내 및 비강내 및 국소 치료가 바람직한 경우 병변내 투여에 의해 투여된다. 비경구 주입은 근육내, 정맥내, 동맥내, 복강내 또는 피하 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 주어진 단위 용량이 세포의 단일 볼루스 투여에 의해 투여된다. 일부 구현예에서, 이는 예를 들어, 3일 이내의 기간에 걸쳐 세포의 다중 볼루스 투여에 의해, 또는 세포의 지속적인 주입 투여에 의해 투여된다. 일부 구현예에서, 세포 단위 용량 또는 임의의 추가 요법, 예를 들어 림프구 고갈 요법, 중재 요법 및/또는 병용 요법의 투여는 외래 환자 전달을 통해 수행된다.
질병의 예방 또는 치료를 위해, 적절한 투여량은 치료될 질병의 유형, 세포 또는 재조합 수용체의 유형, 질병의 중증도 및 진행 과정, 세포가 예방 또는 치료 목적으로 투여되는지 여부, 선행 요법, 대상체의 임상 이력과 세포에 대한 반응 및 주치의의 재량에 따라 달라질 수 있다. 일부 구현예에서 조성물 및 세포는 한 번에 또는 일련의 치료에 걸쳐 대상체에 적합하게 투여된다.
일부 구현예에서, 세포는 다른 또는 추가적인 치료적 개입, 예컨대 항체 또는 조작된 세포 또는 수용체 또는 제제, 예컨대 세포 독성제 또는 치료제와 예컨대 동시에 또는 순차적으로, 임의 순서로 병용 치료의 일부로서 투여된다. 일부 구현예에서, 세포는 하나 이상의 추가 치료제와 함께 또는 다른 치료적 개입과 관련하여 동시이든 순차적이든 임의의 순서로 공동-투여된다. 일부 구현예에서, 추가 치료제는 섹션 IV에 기재된 임의의 조합 요법 제제와 같은 본원에 기재된 임의의 개입 또는 제제, 또는 본원(예를 들어 섹션 I.D.)에 기재된 독성 증상을 개선할 수 있는 임의의 개입 또는 제제이다. 일부 맥락에서, 세포는 세포의 집단이 하나 이상의 추가 치료제의 효과를 강화하도록(또는 그 역으로 강화하도록) 충분히 가까운 시점에 다른 요법과 공동-투여된다. 일부 구현예에서, 세포는 하나 이상의 추가 치료제보다 앞서 투여된다. 일부 구현예에서, 세포는 하나 이상의 추가 치료제 후에 투여된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 추가 제제는 예를 들어, 지속성을 향상시키기 위해 IL-2와 같은 사이토카인을 포함한다. 일부 구현예에서, 방법은 화학적 치료제의 투여를 포함한다.
일부 구현예에서, 방법은 예를 들어 투여 전에 종양 부담을 감소시키기 위한 화학요법제, 예를 들어, 조절 화학요법제의 투여를 포함한다.
일부 측면에서 면역 고갈(예를 들어, 림프구 고갈) 요법으로 대상체를 사전 조절하면 입양 세포 요법(ACT)의 효과를 향상시킬 수 있다.
따라서, 일부 구현예에서, 방법은 세포 요법의 개시 전에 대상체에 사이클로포스파미드, 플루다라빈 또는 이의 조합물과 같은 림프구 고갈 또는 화학요법제와 같은 사전 조절제를 투여하는 것을 포함한다. 예를 들어, 대상체는 세포 요법의 개시 적어도 2일 전, 예컨대 적어도 3, 4, 5, 6 또는 7일 전에 사전 조절제를 투여받을 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 세포 요법의 개시 7일 이내 전, 예컨대 6, 5, 4, 3 또는 2일 이내 전에 사전 조절제를 투여받는다.
일부 구현예에서, 대상체는 대상체의 체중 1kg 당 (약) 20mg 내지 (약) 100mg, 예컨대 (약) 40mg 내지 (약) 80mg의 용량의 시클로포스파미드로 사전조절된다. 일부 측면에서, 대상체에 약 60mg/kg의 시클로포스파미드를 투여한다. 일부 구현예에서, 시클로포스파미드는 1일 또는 2일 동안 매일 1회 투여한다. 일부 구현예에서, 림프구 고갈제가 시클로포스파미드를 포함하는 경우, 대상체에 (약) 100mg/m2 내지 500mg/m2(대상체의 체표면적), 예컨대 (약) 200mg/m2 내지 400mg/m2 또는 250mg/m2 내지 350mg/m2(수치 포함)의 단위 용량으로 시클로포스파미드를 투여한다. 일부 경우에, 대상체에 약 100mg/m2의 시클로포스파미드를 투여한다. 일부 경우에, 대상체에 약 150mg/m2의 시클로포스파미드를 투여한다. 일부 경우에, 대상체에 약 200mg/m2의 시클로포스파미드를 투여한다. 일부 경우에, 대상체에 약 250mg/m2의 시클로포스파미드를 투여한다. 일부 경우에, 대상체에 약 300mg/m2의 시클로포스파미드를 투여한다. 일부 구현예에서, 시클로포스파미드는 단일 단위 용량으로 투여될 수 있거나, 예컨대 매일, 격일 또는 3일마다 주어진 복수의 단위 용량으로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 시클로포스파미드는 예컨대 1 내지 5일 동안, 예를 들어 3 내지 5일 동안 매일 투여된다. 일부 경우에, 대상체에 세포 요법의 개시 전 3일 동안 매일 대상체의 체표면적 m2 당 약 300 mg의 사이클로포스파미드가 투여된다. 일부 구현예에서, 대상체는 세포 요법을 시작하기 전에 총 (약) 300 mg/m2, 400 mg/m2, 500 mg/m2, 600 mg/m2, 700 mg/m2, 800 mg/m2, 900 mg/m2, 1000 mg/m2, 1200 mg/m2, 1500 mg/m2, 1800 mg/m2, 2000 mg/m2, 2500 mg/m2, 2700 mg/m2, 3000 mg/m2, 3300 mg/m2, 3600 mg/m2, 4000 mg/m2 또는 5000 mg/m2의 시클로포스파미드, 또는 상기 중 임의의 것에 의해 정의된 범위로 투여된다.
일부 구현예에서, 림프구 고갈제가 플루다라빈을 포함하는 경우, 대상체에 (약) 1mg/m2 내지 100mg/m2(대상체의 체표면적), 예컨대 (약) 10mg/m2 내지 75mg/m2, 15mg/m2 내지 50mg/m2, 20mg/m2 내지 40mg/m2 또는 24mg/m2 내지 35mg/m2(수치 포함)의 단위 용량으로 플루다라빈을 투여한다. 일부 경우에, 대상체에 약 10mg/m2의 플루다라빈을 투여한다. 일부 경우에, 대상체에 약 15mg/m2의 플루다라빈을 투여한다. 일부 경우에, 대상체에 약 20mg/m2의 플루다라빈을 투여한다. 일부 경우에, 대상체에 약 25mg/m2의 플루다라빈을 투여한다. 일부 경우에, 대상체에 약 30mg/m2의 플루다라빈을 투여한다. 일부 구현예에서, 플루다라빈은 단일 단위 용량으로 투여될 수 있거나, 예컨대 매일, 격일 또는 3일마다 주어진 복수의 단위 용량으로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 플루다라빈은 예컨대 1 내지 5일 동안, 예를 들어 2 내지 4일 동안 매일 투여된다. 일부 경우에, 대상체에 세포 요법의 개시 전 3일 동안 매일 대상체의 체표면적 m2 당 약 30 mg의 플루다라빈이 투여된다. 일부 구현예에서, 대상체는 세포 요법을 시작하기 전에 총 (약) 10 mg/m2, 20 mg/m2, 25 mg/m2, 30 mg/m2, 40 mg/m2, 50 mg/m2, 60 mg/m2, 70 mg/m2, 80 mg/m2, 90 mg/m2, 100 mg/m2, 120 mg/m2, 150 mg/m2, 180 mg/m2, 200 mg/m2, 250 mg/m2, 270 mg/m2, 300 mg/m2, 330 mg/m2, 360 mg/m2, 400 mg/m2 또는 500 mg/m2의 시클로포스파미드, 또는 상기 중 임의의 것에 의해 정의된 범위로 투여된다.
일부 구현예에서, 림프구 고갈제는 시클로포스파미드 또는 플루다라빈과 같은 단일 제제를 포함한다. 일부 구현예에서, 대상체는 플루다라빈 또는 다른 림프구 고갈제 없이 시클로포스파미드만 투여한다. 일부 구현예에서, 투여 전에, 대상체는 2 내지 4일 동안 매일 체표면적 m2 당 (약) 200-400 mg/m2 또는 (약) 300 mg/m2의 시클로포스파미드의 투여를 포함하는 림프구 고갈 요법을 받았다. 일부 구현예에서, 대상체는 시클로포스파미드 또는 다른 림프구 고갈제 없이 플루다라빈만 투여한다. 일부 구현예에서, 투여 전에, 대상체는 2 내지 4일 동안 매일 체표면적 m2 당 (약) 20-40 mg/m2 또는 (약) 30 mg/m2의 플루다라빈 투여를 포함하는 림프구 고갈 요법을 받았다.
일부 구현예에서, 림프구 고갈제는 시클로포스파미드 및 플루다라빈의 조합물과 같은 제제의 조합물을 포함한다. 따라서, 제제의 조합물은 상기 기재된 바와 같은 임의의 단위 용량 또는 투여 일정의 시클로포스파미드 및 상기 기재된 바와 같은 임의의 단위 용량 또는 투여 일정의 플루다라빈을 포함할 수 있다. 예를 들어, 일부 측면에서, 대상체에 제1 또는 후속 단위 용량 전에 60mg/kg(~2g/m2)의 시클로포스파미드 및 3 내지 5 단위 용량의 25mg/m2 플루다라빈이 투여된다. 일부 대상체는 세포를 투여하기 전에 플루다라빈(3일 동안 30 mg/m2/일) 및 사이클로포스파미드(3일 동안 300 mg/m2/일)(flu/cy)를 동시에 정맥내 투여한다.
일부 구현예에서 세포의 투여 후에, 조작된 세포의 집단의 생물학적 활성이 예를 들어, 공지된 다수의 방법 중 하나에 의해 측정된다. 평가 매개변수는 생체 내에서, 예를 들어 영상화에 의해 또는 생체 외 시험에서, 예를 들어 ELISA 또는 유세포 분석에 의해 항원에 조작된 또는 천연 T 세포 또는 다른 면역 세포를 특이적으로 결합하는 것을 포함한다. 특정 구현예서, 조작된 세포가 표적 세포를 파괴하는 능력은 예를 들어 문헌[Kochenderfer 등, J. Immunotherapy, 32(7): 689-702 (2009), 및 Herman 등 J. Immunological Methods, 285(1): 25-40 (2004)]에 기술된 세포 독성 분석과 같은 공지된 임의의 적합한 방법을 이용하여 측정될 수 있다. 특정 구현예에서, 세포의 생물학적 활성은 하나 이상의 사이토카인, 예컨대 CD107a, IFNγ, IL-2 및 TNF의 발현 및/또는 분비를 분석하여 측정된다. 일부 측면에서, 생물학적 활성은 종양 부담 또는 부하 감소와 같은 임상 결과를 산정하여 측정한다.
특정 구현예에서, 조작된 세포는 이들의 치료적 또는 예방적 효능이 증가하도록 임의의 다수의 방법으로 추가 변형된다. 예를 들어, 집단에 의해 발현된 조작된 재조합 수용체는 표적화 모이어티에 링커를 통해 직접적으로든 간접적으로든 접합될 수 있다. 화합물, 예를 들어 CAR을 표적화 모이어티에 접합시키는 실시는 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌[Wadwa 등, J. Drug Targeting 3: 1 1 1 (1995) 및 미국 특허 5,087,616]을 참조한다. 일부 구현예에서, 세포는 다른 치료적 개입, 예컨대 항체 또는 조작된 세포 또는 수용체 또는 제제, 예컨대 세포 독성제 또는 치료제와 예컨대 동시에 또는 순차적으로, 임의 순서로 병용 치료의 일부로서 투여된다. 일부 구현예에서, 세포는 하나 이상의 추가 치료제와 함께 또는 다른 치료적 개입과 관련하여 동시이든 순차적이든 임의의 순서로 공동-투여된다. 일부 맥락에서, 세포는 세포의 집단이 하나 이상의 추가 치료제의 효과를 강화하도록(또는 그 역으로 강화하도록) 충분히 가까운 시점에 다른 요법과 공동-투여된다. 일부 구현예에서, 세포는 하나 이상의 추가 치료제보다 앞서 투여된다. 일부 구현예에서, 세포는 하나 이상의 추가 치료제 후에 투여된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 추가 제제는 예를 들어, 지속성을 향상시키기 위해 IL-2와 같은 사이토카인을 포함한다.
B. 투약(dosing)
일부 구현예에서, 제공된 방법 및 용도는 키메라 항원 수용체(CAR)와 같은 재조합 수용체를 발현하는 조작된 T 세포와 같은 세포를 함유하는 조성물의 전부 또는 일부를 투여하는 것을 포함한다. 일부 측면에서, 특정 양 또는 수의 세포, 또는 특정 양 또는 수의 세포를 함유하는 조성물의 특정 양이 대상체에게 투여된다. 일부 측면에서, 특정 양 또는 수의 세포를 함유하는 하나 이상의 용량의 세포 또는 특정 양 또는 수의 세포를 함유하는 특정 양의 조성물이 대상체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 단위 용량의 세포가 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물과 부합되게 대상체에 투여된다. 일부 구현예에서, 단위 용량의 크기 또는 시기는 대상체의 연령에 따라 결정된다. 일부 구현예에서, 단위 용량의 크기 또는 시기는 대상체의 체중에 따라 결정된다. 일부 구현예에서, 단위 용량의 크기 또는 시기는 대상체의 특정 유형의 B 세포 악성종양 또는 혈액 악성종양의 기능으로 결정된다.
일부 구현예에서, 단위 량 내 세포의 양 또는 수는 대상체의 연령에 따라 결정된다. 일부 구현예에서, 제공된 방법 및 용도는 CAR-발현 세포를 25세 이하의 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 제공된 방법 및 용도는 CAR-발현 세포를 18세 미만의 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 제공된 방법 및 용도는 CAR-발현 세포를 소아 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 제공된 방법 및 용도는 CAR-발현 세포를 젊은 성인 대상체에게 투여하는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 방법 및 용도에서 투여되는 세포의 양 또는 수는, 재조합 수용체-발현 세포, 키메라 항원 수용체(CAR)-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 말초혈 단핵 세포(PBMC)의 양 또는 수를 기준으로 한다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 방법 및 용도에서 투여되는 세포의 양 또는 수는, CD3+ T 세포, CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, 및 일부 경우에 또한 재조합 수용체-발현 또는 CAR-발현 T 세포의 양 또는 수를 기준으로 한다.
일부 구현예에서, 단위 량 내 세포의 양 또는 수는 대상체의 체중에 따라 결정된다. 일부 구현예에서, 제공된 방법 및 용도는 체중이 약 100kg 미만인 대상체에게 CAR-발현 세포를 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 제공된 방법 및 용도는 체중이 약 100kg 이상인 대상체에게 CAR-발현 세포를 투여하는 것을 포함한다. 일부 측면에서, 대상체의 체중에 기초하여, 대상체는 체중(예를 들어, 대상체 체중의 세포/kg)에 따라 계산되는 용량 또는 균일 또는 고정 용량이 투여된다.
일부 구현예에서, 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25 세 이하의 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 상기 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 미만이고 18 세 미만인 경우, 대상체 체중의 (약) 0.05 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 내지 (약) 1.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg; 및 (ii) 대상체가 체중이 100 킬로그램 (kg) 이상이거나 18세부터 25세까지인 경우, (약) 0.05 x 108 개의 CAR+ T 세포 내지 (약) 1.5 x 108 개의 CAR+ T 세포. 일부 구현예에서, 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, T 세포 조성물은 (약) 0.05 x 108 개의 CAR+ T 세포 내지 (약) 1.5 x 108 개의 CAR+ T 세포의 양으로 투여된다.
일부 구현예에서, 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 미만인 경우, T 세포 조성물은 대상체 체중의 (약) 0.05 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 내지 (약) 1 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg의 양으로 투여된다.
일부 구현예에서, 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25 세 이하의 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 방법 및 용도가 제공되며, 여기서 상기 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 미만인 경우, 대상체 체중의 (약) 0.05 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 내지 (약) 1.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg; 및 (ii) 대상체가 체중이 100 킬로그램 (kg) 이상인 경우, (약) 0.05 x 108 개의 CAR+ T 세포 내지 (약) 1.5 x 108 개의 CAR+ T 세포.
일부 구현예에서, 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 18 세 미만의 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 방법 및 용도가 제공되며, 여기서 상기 T 세포 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 미만인 경우, 대상체 체중의 (약) 0.05 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 내지 (약) 1.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg; 및 (ii) 대상체가 체중이 100 킬로그램 (kg) 이상인 경우, (약) 0.05 x 108 개의 CAR+ T 세포 내지 (약) 1.5 x 108 개의 CAR+ T 세포.
일부 구현예에서, 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 미만인 경우, T 세포 조성물은 대상체 체중의 (약) 0.05 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 내지 (약) 1 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg의 양으로 투여된다. 일부 구현예에서, 대상체가 체중이 100 킬로그램 (kg) 이상인 경우, T 세포 조성물은 (약) 0.05 x 108 개의 CAR+ T 세포 내지 (약) 1 x 108 개의 CAR+ T 세포의 양으로 투여된다.
일부 구현예에서, 제공된 구현예는 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25 세 이하의 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 상기 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 18 세 미만인 경우, 대상체 체중의 (약) 0.05 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 내지 (약) 1.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg, 그러나 이는 (약) 1.5 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않으며; 또는 (ii) 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, (약) 0.05 x 108 개의 CAR+ T 세포 내지 (약) 1.5 x 108 개의 CAR+ T 세포.
일부 구현예에서, 대상체가 18세 미만인 경우, 상기 T 세포 조성물은 대상체 체중의 (약) 0.05 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 내지 (약) 1.0 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 의 용량으로 투여되며, 그러나 이는 (약) 1.0 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는다.
일부 구현예에서, 18세 미만의 대상체에게는 대상체의 체중을 기준으로 결정되지만 최대 양 또는 최대 세포 수, 또는 상한 양 또는 상한 세포 수에 따라 결정되는 용량이 투여된다. 일부 구현예에서, 단위 용량에서 세포의 최대 또는 상한 수 또는 양은 고정된 수 또는 양이 될 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 18세 미만이고, 대상체의 체중 킬로그램(세포/kg)당 최대 세포 수까지 CAR-발현 세포와 같은 세포의 용량이 투여된다. 일부 구현예에서, 대상체는 18세 미만이고, 대상체 체중의 (약) 0.5 x 106 개의 CAR + T 세포/kg 내지 (약) 1.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 이 투여되며, 그러나 이는 (약) 1.5 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는다. 일부 구현예에서, 대상체는 18세 미만이고, 대상체 체중의 (약) 0.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 내지 (약) 1.0 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 이 투여되며, 그러나 이는 (약) 1.0 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는다. 일부 구현예에서, 대상체는 18세 미만이고, 대상체 체중의 적어도 (약) 0.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 이지만 약 0.5 x 108 개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는 양으로 투여된다. 일부 구현예에서, 대상체는 18세 미만이고, 대상체 체중의 적어도 또는 (약) 1.0 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg이지만, (약) 1.0 x 108 개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는 양으로 투여된다.
일부 구현예에서, 대상체는 18세 미만이며 체중이 100 킬로그램(kg) 미만이고, 상기 대상체는 대상체 체중의 (약) 0.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 내지 (약) 1.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg로 투여된다. 일부 구현예에서, 대상체는 18세 미만이며 체중이 100 킬로그램(kg) 미만이고, 상기 대상체는 대상체 체중의 (약) 0.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg로 투여된다. 일부 구현예에서, 대상체는 18세 미만이며 체중이 100 킬로그램(kg) 미만이고, 상기 대상체는 대상체 체중의 (약) 1.0 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg로 투여된다.
일부 구현예에서, 체중 기반 용량의 세포가 투여되는 대상체의 경우, CAR-발현 세포와 같은 세포의 용량은 대상체의 체중 kg 당 (약) 2 x 105 세포 (세포/kg) 내지 (약) 2 x 106 세포/kg 예컨대, (약) 4 x 105 세포/kg 내지 (약) 1 x 106 세포/kg 또는 (약) 6 x 105 세포/kg 내지 (약) 8 x 105 세포/kg를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포의 단위 용량은 대상체 체중 1 킬로그램 당 2 x 105 이내의 세포(세포/kg), 예컨대 (약) 3 x 105 이내의 세포/kg, (약) 4 x 105 이내의 세포/kg, (약) 5 x 105 이내의 세포/kg, (약) 6 x 105 이내의 세포/kg, (약) 7 x 105 이내의 세포/kg, (약) 8 x 105 이내의 세포/kg, (약) 9 x 105 이내의 세포/kg, (약) 1 x 106 이내의 세포/kg 또는 (약) 2 x 106 이내의 세포/kg를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포의 단위 용량은 대상체의 체중 1 킬로그램 당 약 또는 적어도 (약) 2 x 105의 세포(세포/kg), 예컨대 약 또는 적어도 (약) 3 x 105 세포/kg, 약 또는 적어도 (약) 4 x 105 세포/kg, 약 또는 적어도 (약) 5 x 105 세포/kg, 약 또는 적어도 (약) 6 x 105 세포/kg, 약 또는 적어도 (약) 7 x 105 세포/kg, 약 또는 적어도 (약) 8 x 105 세포/kg, 약 또는 적어도 (약) 9 x 105 세포/kg, 약 또는 적어도 (약) 1 x 106 세포/kg, 또는 약 또는 적어도 (약) 2 x 106의 세포/kg를 포함한다.
일부 구현예에서, 대상체는 18세 미만이며 체중이 100 킬로그램(kg) 이상이고, 상기 대상체는 대상체 체중의 (약) 0.5 x 108 개의 CAR+ T 세포/kg 내지 (약) 1.5 x 108 개의 CAR+ T 세포/kg로 투여된다. 일부 구현예에서, 대상체는 18세 미만이며 체중이 100 킬로그램(kg) 이상이고, 상기 대상체는 대상체 체중의 (약) 0.5 x 108 개의 CAR+ T 세포/kg 내지 (약) 1.0 x 108 개의 CAR+ T 세포/kg로 투여된다. 일부 구현예에서, 대상체는 18세 미만이며 체중이 100킬로그램(kg) 이상이고, 상기 대상체는 대상체 체중의 (약) 0.5 x 108 개의 CAR+ T 세포/kg로 투여된다. 일부 구현예에서, 대상체는 18세 미만이며 체중이 100킬로그램(kg) 이상이고, 상기 대상체는 대상체 체중의 (약) 1.0 x 108 개의 CAR+ T 세포/kg로 투여된다.
일부 임의의 구현예에서, 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 18 세 미만의 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 방법 및 용도가 제공되며, 여기서 상기 T 세포 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 미만인 경우, 대상체 체중의 (약) 0.05 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg ; 및 (ii) 대상체가 체중이 100 킬로그램 (kg) 이상인 경우, (약) 0.05 x 108 개의 CAR+ T 세포.
일부 임의의 구현예에서, 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 18 세 미만의 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 방법 및 용도가 제공되며, 여기서 상기 T 세포 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 미만인 경우, 대상체 체중의 (약) 0.15 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg ; 및 (ii) 대상체가 체중이 100 킬로그램 (kg) 이상인 경우, (약) 0.15 x 108 개의 CAR+ T 세포.
일부 임의의 구현예에서, 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 18 세 미만의 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 방법 및 용도가 제공되며, 여기서 상기 T 세포 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 미만인 경우, 대상체 체중의 (약) 0.3 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg; 및 (ii) 대상체가 체중이 100 킬로그램 (kg) 이상인 경우, (약) 0.3 x 108 개의 CAR+ T 세포.
일부 임의의 구현예에서, 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 18 세 미만의 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 방법 및 용도가 제공되며, 여기서 상기 T 세포 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 미만인 경우, 대상체 체중의 (약) 0.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg ; 및 (ii) 대상체가 체중이 100 킬로그램 (kg) 이상인 경우, (약) 0.5 x 108 개의 CAR+ T 세포.
일부 임의의 구현예에서, 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 18 세 미만의 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 방법 및 용도가 제공되며, 여기서 상기 T 세포 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 미만인 경우, 대상체 체중의 (약) 0.75 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg; 및 (ii) 대상체가 체중이 100 킬로그램 (kg) 이상인 경우, (약) 0.75 x 108 개의 CAR+ T 세포.
일부 임의의 구현예에서, 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 18 세 미만의 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 방법 및 용도가 제공되며, 여기서 상기 T 세포 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 미만인 경우, 대상체 체중의 (약) 1.0 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg ; 및 (ii) 대상체가 체중이 100 킬로그램 (kg) 이상인 경우, (약) 1.0 x 108 개의 CAR+ T 세포.
일부 구현예에서, 대상체가 18세 미만인 경우, 상기 T 세포 조성물은 대상체 체중의 적어도 (약) 0.05 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 의 용량으로 투여되며, 그러나 이는 (약) 0.05 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는다. 상기 구현예중 일부에서, 대상체의 체중 kg당 (약) 0.05 x 106개의 개의 CAR+ T 세포의 투여 후, 그러나 (약) 0.05 x 108 개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는 경우, 대상체는 반응이나 부작용, 예를 들어 CRS 또는 NT와 같은 독성을 나타내지 않고, 초기 투여 후 28일 또는 그 경에, 대상체는 또 다른 림프구 고갈 요법을 받으며, 단위 용량은 (약) 0.1 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg로 증량되지만 이는 (약) 0.1 x 108 개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는다. 일부 구현예에서, 대상체가 18세 미만인 경우, 상기 T 세포 조성물은 대상체 체중의 적어도 (약) 0.1 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 의 용량으로 투여되며, 그러나 이는 (약) 0.1 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는다. 일부 구현예에서, 대상체가 18세 미만인 경우, 상기 T 세포 조성물은 대상체 체중의 적어도 (약) 0.15 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 의 용량으로 투여되며, 그러나 이는 (약) 0.15 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는다. 일부 구현예에서, 대상체가 18세 미만인 경우, 상기 T 세포 조성물은 대상체 체중의 적어도 (약) 0.3 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 의 용량으로 투여되며, 그러나 이는 (약) 0.3 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는다. 일부 구현예에서, 대상체가 18세 미만인 경우, 상기 T 세포 조성물은 대상체 체중의 적어도 (약) 0.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 의 용량으로 투여되며, 그러나 이는 (약) 0.5 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는다. 일부 구현예에서, 대상체가 18세 미만인 경우, 상기 T 세포 조성물은 대상체 체중의 적어도 (약) 0.75 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 의 용량으로 투여되며, 그러나 이는 (약) 0.75 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는다. 일부 구현예에서, 대상체가 18세 미만인 경우, 상기 T 세포 조성물은 대상체 체중의 적어도 (약) 1.0 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 의 용량으로 투여되며, 그러나 이는 (약) 1.0 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는다.
일부 구현예에서, 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, T 세포 조성물은 (약) 0.05 x 108 개의 CAR + T 세포 내지 (약) 1.0 x 108 개의 CAR+ T 세포의 양으로 투여된다. 일부 구현예에서, 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, T 세포 조성물은 (약) 0.05 x 108 개의 CAR+ T 세포의 양으로 투여된다. 일부 구현예에서, 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, T 세포 조성물은 (약) 0.15 x 108 개의 CAR+ T 세포의 양으로 투여된다. 일부 구현예에서, 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, T 세포 조성물은 (약) 0.3 x 108 개의 CAR+ T 세포의 양으로 투여된다. 일부 구현예에서, 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, T 세포 조성물은 (약) 0.5 x 108 개의 CAR+ T 세포의 양으로 투여된다. 일부 구현예에서, 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, T 세포 조성물은 (약) 0.75 x 108 개의 CAR+ T 세포의 양으로 투여된다. 일부 구현예에서, 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, T 세포 조성물은 (약) 1.0 x 108 CAR + T 세포의 양으로 투여된다.
일부 구현예에서, 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25 세 이하 및 체중 12kg 이상의 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 방법 및 용도가 제공되며, 여기서 상기 T 세포 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 18 세 미만인 경우, 대상체 체중의 (약) 0.05 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg, 그러나 이는 (약) 0.05 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않으며; 및 (ii) 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, (약) 0.05 x 108 개의 CAR+ T 세포.
일부 구현예에서, 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25 세 이하 및 체중 12kg 이상의 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 방법 및 용도가 제공되며, 여기서 상기 T 세포 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 18 세 미만인 경우, 대상체 체중의 (약) 0.15 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg, 그러나 이는 (약) 0.15 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않으며; 및 (ii) 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, (약) 0.15 x 108 개의 CAR+ T 세포.
일부 구현예에서, 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25 세 이하 및 체중 12kg 이상의 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 방법 및 용도가 제공되며, 여기서 상기 T 세포 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 18 세 미만인 경우, 대상체 체중의 (약) 0.3 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg, 그러나 이는 (약) 0.3 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않으며; 및 (ii) 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, (약) 0.3 x 108 개의 CAR+ T 세포.
일부 구현예에서, 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25 세 이하 및 체중 12kg 이상의 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 방법 및 용도가 제공되며, 여기서 상기 T 세포 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 18 세 미만인 경우, 대상체 체중의 (약) 0.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg, 그러나 이는 (약) 0.5 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않으며; 및 (ii) 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, (약) 0.5 x 108 개의 CAR+ T 세포.
일부 구현예에서, 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25 세 이하 및 체중 12kg 이상의 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 방법 및 용도가 제공되며, 여기서 상기 T 세포 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 18 세 미만인 경우, 대상체 체중의 (약) 0.75 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg, 그러나 이는 (약) 0.75 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않으며; 및 (ii) 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, (약) 0.75 x 108 개의 CAR+ T 세포.
일부 구현예에서, 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25 세 이하 및 체중 12kg 이상의 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 방법 및 용도가 제공되며, 여기서 상기 T 세포 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 18 세 미만인 경우, 대상체 체중의 (약) 1 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg, 그러나 이는 (약) 1 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않으며; 및 (ii) 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, (약) 1 x 108 개의 CAR+ T 세포.
일부 구현예에서, 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25 세 이하 및 체중 6kg 이상의 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 방법 및 용도가 제공되며, 여기서 상기 T 세포 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 18 세 미만인 경우, 대상체 체중의 (약) 1 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg, 그러나 이는 (약) 1 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않으며; 및 (ii) 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, (약) 1.0 x 108 개의 CAR+ T 세포.
일부 구현예에서, 제공된 방법 및 용도는 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 18세 미만이고 무게가 12kg 이상인 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 상기 조성물은 대상체 체중의 (약) 0.05 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 내지 (약) 1.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg의 용량으로 투여되며, 그러나 이는 (약) 1.5 x 108 개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는다.
일부 구현예에서, 18세 미만의 대상체에게는 조성물의 특정 부피를 기준으로 결정되지만 최대 또는 상한선 양 또는 세포 수까지 결정되는 용량이 투여된다. 일부 구현예에서, 대상체는 18세 미만이고, 특정 농도에서 최대 세포 수까지 세포를 함유하는 조성물의 최소 부피를 함유하는 CAR-발현 세포와 같은 세포의 용량이 투여된다. 일부 구현예에서, 투여될 세포의 최소 부피는 적어도 (약) 0.05mL이다. 일부 구현예에서, 투여될 세포의 최소 부피는 적어도 (약) 0.1mL이다. 일부 구현예에서, 투여될 세포의 최소 부피는 적어도 (약) 0.5mL이다. 일부 구현예에서, 투여될 세포의 최소 부피는 적어도 (약) 0.75mL이다. 일부 구현예에서, 투여될 세포의 최소 부피는 적어도 (약) 1.0mL이다.
일부 구현예에서, 조성물은 (약) 0.05mL의 부피로 투여된다. 일부 구현예에서, 조성물은 (약) 0.1mL의 부피로 투여된다. 일부 구현예에서, 조성물은 (약) 0.5mL의 부피로 투여된다. 일부 구현예에서, 조성물은 (약) 0.75mL의 부피로 투여된다. 일부 구현예에서, 조성물은 (약) 1.0mL의 부피로 투여된다.
일부 구현예에서, 세포의 두 가지 개별 조성물이 투여되며, 예를 들어, CD4+ CAR+ T 세포를 포함하는 조성물 및 CD8+ CAR+ T 세포를 포함하는 조성물을 포함하고, 각각의 조성물은 적어도 (약) 0.5 mL 또는 적어도 (약) 1.0 mL의 최소 부피로 투여된다.
일부 구현예에서, T 세포 조성물의 2.5 x 106 세포/mL 이상의 농도에서 적어도 0.05 mL의 총 부피가 투여된다. 일부 구현예에서, T 세포 조성물의 2.5 x 106 세포/mL 이상의 농도에서 적어도 0.5 mL의 총 부피가 투여된다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 0.25 x 106 세포/mL 이상의 농도에서 25 세 이하의 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 T세포 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 18 세 미만인 경우, 적어도 0.5 mL 의 부피에서 (약) 0.05 x 108 CAR+ T세포 내지 (약) 1.5 x 108 CAR+ T세포의 양; 및 (ii) 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, (약) 0.05 x 108 개의 CAR+ T 세포 내지 (약) 1.5 x 108 개의 CAR+ T 세포.
일부 구현예에서, 제공된 방법 및 용도는 2.5 x 106 세포/mL 이상의 농도에서 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25 세 이하의 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 상기 T 세포 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 18 세 미만인 경우, 적어도 0.5 mL 의 부피에서 (약) 0.5 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는 양; 및 (ii) 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, (약) 0.5 x 108 개의 CAR+ T 세포.
일부 구현예에서, 제공된 방법 및 용도는 2.5 x 105 세포/mL 이상의 농도에서 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25 세 이하의 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 상기 T 세포 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 18 세 미만인 경우, 적어도 0.5 mL 의 부피에서 (약) 0.05 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는 양; 및 (ii) 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, (약) 0.05 x 108 개의 CAR+ T 세포.
일부 구현예에서, 제공된 방법 및 용도는 2.5 x 106 세포/mL 이상의 농도에서 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25 세 이하의 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 상기 T 세포 조성물은 다음으로부터 선택된 양으로 투여된다: (i) 대상체가 18 세 미만인 경우, 적어도 0.5 mL 의 부피에서 (약) 1 x 108 개의 총 CAR + T 세포를 초과하지 않는 양; 및 (ii) 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, (약) 1.0 x 108 개의 CAR+ T 세포.
일부 임의의 구현예에서, 투여된 T 세포 조성물의 총 부피는 적어도 0.05 mL이다. 일부 임의의 구현예에서, 투여된 T 세포 조성물의 총 부피는 적어도 0.1 mL이다. 일부 임의의 구현예에서, 투여된 T 세포 조성물의 총 부피는 적어도 0.15 mL이다. 일부 임의의 구현예에서, 투여된 T 세포 조성물의 총 부피는 적어도 0.3 mL이다. 일부 임의의 구현예에서, 투여된 T 세포 조성물의 총 부피는 적어도 0.5 mL이다. 일부 임의의 구현예에서, 투여된 T 세포 조성물의 총 부피는 적어도 0.75 mL이다. 일부 임의의 구현예에서, 투여된 T 세포 조성물의 총 부피는 적어도 1.0 mL이다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, T 세포 조성물의 농도는 (약) 0.5 x 106 세포/mL 이상이거나 (약) 0.5 x 106 세포/mL이다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, T 세포 조성물의 농도는 (약) 1 x 106 세포/mL 이상이거나 (약) 1 x 106 세포/mL이다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, T 세포 조성물의 농도는 (약) 1.5 x 106 세포/mL 이상이거나 (약) 1.5 x 106 세포/mL이다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, T 세포 조성물의 농도는 (약) 3 x 106 세포/mL 이상이거나 (약) 3 x 106 세포/mL이다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, T 세포 조성물의 농도는 (약) 5 x 106 세포/mL 이상이거나 (약) 5 x 106 세포/mL이다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, T 세포 조성물의 농도는 (약) 7.5 x 106 세포/mL 이상이거나 (약) 7.5 x 106 세포/mL이다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, T 세포 조성물의 농도는 (약) 10 x 106 세포/mL 이상이거나 (약) 10 x 106 세포/mL이다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, T 세포 조성물의 농도는 (약) 15 x 106 세포/mL 이상이거나 (약) 15 x 106 세포/mL이다.
일부 구현예에서, 조성물은 특정 농도의 세포에서 제형화된다. 일부 구현예에서, 조성물 중 세포의 농도는 약 10 x 106 세포/mL 내지 약 70 x 106 세포/mL, 약 10 x 106 세포/mL 내지 약 50 x 106 세포/mL, 약 10 x 106 세포/mL 내지 약 25 x 106 세포/mL, 약 10 x 106 세포/mL 내지 약15 x 106 세포/mL, 15 x 106 세포/mL 내지 약 70 x 106 세포/mL, 약15 x 106 세포/mL 내지 약 50 x 106 세포/mL, 약 15 x 106 세포/mL 내지 약 25 x 106 세포/mL, 약 25 x 106 세포/mL 내지 약 70 x 106 세포/mL, 약 25 x 106 세포/mL 내지 약 50 x 106 세포/mL, 및 약 50 x 106 세포/mL 내지 약 70 x 106 세포/mL이다. 일부 구현예에서, T 세포 조성물의 농도는 (약) 5 x 106 세포/mL 이상이거나 (약) 5 x 106 세포/mL이다. 일부 구현예에서, T 세포 조성물의 농도는 (약) 10 x 106 세포/mL 이상이거나 (약) 10 x 106 세포/mL이다. 일부 구현예에서, T 세포 조성물의 농도는 (약) 15 x 106 세포/mL 이상이거나 (약) 15 x 106 세포/mL이다. 일부 구현예에서, 이러한 조성물 중 적어도 (약) 0.5mL 또는 적어도 (약) 1.0mL의 최소 부피가 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 18세부터 25세까지의 대상체는 세포의 용량이 대상체의 체표면적 또는 체중과 관련되거나 이에 기초하지 않도록 세포의 균일 용량 또는 고정 용량인 용량이 투여된다. 일부 구현예에서, 대상체는 18세부터 25세까지고, (약) 0.5 x 108 개의 CAR + T 세포 내지 (약) 1.5 x 108 개의 CAR + T 세포로 투여된다. 일부 구현예에서, 대상체는 18세부터 25세까지고, (약) 0.5 x 108 개의 CAR+ T 세포 내지 (약) 1.0 x 108 개의 CAR+ T 세포로 투여된다. 일부 구현예에서, 대상체가 18세부터 25세까지고, (약) 0.5 x 108 개의 CAR+ T 세포로 투여된다. 일부 구현예에서, 대상체는 18세부터 25세까지고, (약) 1.0 x 108 개의 CAR+ T 세포로 투여된다.
일부 구현예에서, 투여할 세포의 최대(또는 상한) 양 또는 수는 약 50kg 내지 약 150kg과 같은 특정 체중을 갖는 대상체에 대한 체중 기반 용량과 등가인 양 또는 수이다. 일부 구현예에서, 투여할 세포의 최대(또는 상한) 양 또는 수는 약 100kg의 체중을 갖는 대상체에 대한 체중 기반 용량과 등가인 양 또는 수이다. 일부 구현예에서, 투여할 세포의 최대(또는 상한) 양 또는 수는 약 150kg의 체중을 갖는 대상체에 대한 체중 기반 용량과 등가인 양 또는 수이다. 일부 구현예에서, 체중 기반 용량은 대상체 체중의 (약) 0.05 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 내지 (약) 1.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg; 또는 (약) 0.05 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 내지 (약) 1.0 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg; 또는 (약) 0.05 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg; 또는 (약) 1.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg이다. 일부 구현예에서, 체중 기반 용량은 대상체 체중의 (약) 0.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 내지 (약) 1.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg; 또는 (약) 0.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 내지 (약) 1.0 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg; 또는 (약) 0.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg; 또는 (약) 1.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg이다.
일부 구현예에서, 대상체, 예를 들어 18세부터 25세까지인 대상체에 투여될 균일 또는 고정된 양 또는 수의 세포는 약 50kg 내지 약 150kg과 같은 특정 체중을 갖는 대상체에 대한 체중-기준 용량과 등가인 양 또는 수이다. 일부 구현예에서, 대상체, 예를 들어 18세부터 25세까지인 대상체에 투여될 균일 또는 고정된 양 또는 수의 세포는 약 100kg의 체중을 갖는 대상체에 대한 체중-기준 용량과 등가인 양 또는 수이다. 일부 구현예에서, 대상체, 예를 들어 18세부터 25세까지인 대상체에 투여될 균일 또는 고정된 양 또는 수의 세포는 약 150kg의 체중을 갖는 대상체에 대한 체중-기준 용량과 등가인 양 또는 수이다. 일부 구현예에서, 체중 기반 용량은 대상체 체중의 (약) 0.05 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 내지 (약) 1.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg; 또는 (약) 0.05 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 내지 (약) 1.0 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg; 또는 (약) 0.05 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg; 또는 (약) 1.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg이다. 일부 구현예에서, 체중 기반 용량은 대상체 체중의 (약) 0.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 내지 (약) 1.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg; 또는 (약) 0.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg 내지 (약) 1.0 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg; 또는 (약) 0.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg; 또는 (약) 1.5 x 106 개의 CAR+ T 세포/kg이다.
일부 구현예에서, 균일하거나 고정된 수의 세포가 투여되는 대상체의 경우, 세포의 투여량이 대상체의 체표면적 또는 체중에 결부되거나 이에 기초하지 않도록 하는 세포의 투여량이다. 일부 구현예에서, 균일한 용량 또는 고정 용량의 세포가 투여되는 대상체의 경우, 용량은 약 100만 내지 약 1000억 개의 세포 범위 및/또는 체중 킬로그램당 세포의 양을 포함하고, 예컨대, 예를 들어, 1백만 내지 약 500억 세포(예를 들어, 약 5백만 세포, 약 2천 5백만 세포, 약 5억 세포, 약 10억 세포, 약 50억 세포, 약 200억 세포, 약 300억 세포, 약 400억 세포 또는 전술한 수치 중 임의의 2개에 의해 정의된 범위), 예컨대 약 1천만 내지 약 1000억 세포(예를 들어, 약 2천만 세포, 약 3천만 세포, 약 4천만 세포, 약 6천만 세포, 약 7천만 세포, 약 8천만 세포, 약 9천만 세포, 약 100억 세포, 약 250억 세포, 약 500억 세포, 약 750억 세포, 약 900억 세포 또는 전술한 수치 중 임의의 2개에 의해 정의된 범위), 및 일부 경우에 약 1억 세포 내지 약 500억 세포(예를 들어, 약 1억 2천만 세포, 약 2억 5천만 세포, 약 3억 5천만 세포, 약 4억 5천만 세포, 약 6억 5천만 세포, 약 8억 세포, 약 9억 세포, 약 30억 세포, 약 300억 세포, 약 450억 세포) 또는 이 범위 사이의 값이다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 세포의 양 또는 수는 재조합 수용체-발현 세포, 키메라 항원 수용체(CAR)-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 말초혈액 단핵 세포(PBMC)의 양 또는 수, 또는 CD3+ T 세포, CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, 및 일부 경우에는 또한 재조합 수용체-발현 또는 CAR-발현 T 세포의 양 또는 수를 기준으로 한다.
일부 구현예에서, 균일한 용량 또는 고정 용량의 세포의 단위 용량은 (약) 1 x 105 내지 5 x 108개의 총 CAR+ T 세포, 1 x 105 내지 2.5 x 108개의 총 CAR+ T 세포, 1 x 105 내지 1 x 108개의 총 CAR+ T 세포, 1 x 105 내지 5 x 107개의 총 CAR+ T 세포, 1 x 105 내지 2.5 x 107개의 총 CAR+ T 세포, 1 x 105 내지 1 x 107개의 총 CAR+ T 세포, 1 x 105 내지 5 x 106개의 총 CAR+ T 세포, 1 x 105 내지 2.5 x 106개의 총 CAR+ T 세포, 1 x 105 내지 1 x 106개의 총 CAR+ T 세포, 1 x 106 내지 5 x 108개의 총 CAR+ T 세포, 1 x 106 내지 2.5 x 108개의 총 CAR+ T 세포, 1 x 106 내지 1 x 108개의 총 CAR+ T 세포, 1 x 106 내지 5 x 107개의 총 CAR+ T 세포, 1 x 106 내지 2.5 x 107개의 총 CAR+ T 세포, 1 x 106 내지 1 x 107개의 총 CAR+ T 세포, 1 x 106 내지 5 x 106개의 총 CAR+ T 세포, 1 x 106 내지 2.5 x 106개의 총 CAR+ T 세포, 2.5 x 106 내지 5 x 108개의 총 CAR+ T 세포, 2.5 x 106 내지 2.5 x 108개의 총 CAR+ T 세포, 2.5 x 106 내지 1 x 108개의 총 CAR+ T 세포, 2.5 x 106 내지 5 x 107개의 총 CAR+ T 세포, 2.5 x 106 내지 2.5 x 107개의 총 CAR+ T 세포, 2.5 x 106 내지 5 x 107개의 총 CAR+ T 세포, 5 x 106 내지 1 x 107개의 총 CAR+ T 세포, 1 x 107 내지 5 x 108개의 총 CAR+ T 세포, 1 x 107 내지 2.5 x 108개의 총 CAR+ T 세포, 1 x 107 내지 1 x 108개의 총 CAR+ T 세포, 1 x 107 내지 5 x 107개의 총 CAR+ T 세포, 1 x 107 내지 2.5 x 107개의 총 CAR+ T 세포, 2.5 x 107 내지 5 x 108개의 총 CAR+ T 세포, 2.5 x 107 내지 2.5 x 108개의 총 CAR+ T 세포, 2.5 x 107 내지 1 x 108개의 총 CAR+ T 세포, 2.5 x 107 내지 5 x 107개의 총 CAR+ T 세포, 5 x 107 내지 5 x 108개의 총 CAR+ T 세포, 5 x 107 내지 2.5 x 108개의 총 CAR+ T 세포, 5 x 107 내지 1 x 108개의 총 CAR+ T 세포, 1 x 108 내지 5 x 108개의 총 CAR+ T 세포, 1.5 x 108 내지 2.5 x 108개의 총 CAR+ T 세포, 또는 2.5 x 108 내지 5 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 포함한다.
일부 구현예에서, 유전자 조작된 세포의 단위 용량은 적어도 (약) 1 x 105개 CAR+ T 세포, 적어도 (약) 2.5 x 105개 CAR+ T 세포, 적어도 (약) 5 x 105개 CAR+ T 세포, 적어도 (약) 1 x 106개 CAR+ T 세포, 적어도 (약) 2.5 x 106개 CAR+ T 세포, 적어도 (약) 5 x 106개 CAR+ T 세포, 적어도 (약) 1 x 107개 CAR+ T 세포, 적어도 (약) 2.5 x 107개 CAR+ T 세포, 적어도 (약) 5 x 107개 CAR+ T 세포, 적어도 (약) 1 x 108개 CAR+ T 세포, 적어도 (약) 2.5 x 108개 CAR+ T 세포, 또는 적어도 (약) 5 x 108개 CAR+ T 세포를 포함한다.
일부 구현예에서, 단위 용량의 T 세포는 CD4+ T 세포, CD8+ T 세포 또는 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 포함한다.
일부 구현예에서, 예를 들어, CD4+ 및 CD8+ T 세포를 포함하는 단위 용량에 포함된 단위 용량의 CD8+ T 세포는 (약) 1 x 106 내지 5 x 108개의 총 CAR+ CD8+ 세포, 예를 들어, (약) 5 x 106 내지 1 x 108개의 상기 세포의 범위내, 예컨대 5 x 106, 1 x 107, 1.5 x 107, 3 x 107, 2.5 x 107, 5 x 107, 7.5 x 107, 1 x 108, 1.5 x 108, 또는 5 x 108 개의 총 상기 세포 수, 또는 전술한 수치 중 임의의 2개 사이의 범위내 수를 포함한다. 일부 구현예에서, 대상체는 다중 단위 용량으로 투여받고, 각각의 단위 용량 또는 총 용량은 전술한 수치 중 어느 하나 내에 있을 수 있다. 일부 구현예에서, 세포의 단위 용량은 (약) 1 x 107 내지 0.75 x 108개의 총 CAR+ CD8+ T 세포, (약) 1 x 107 내지 2.5 x 107개의 총 CAR+ CD8+ T 세포, (약) 1 x 107 내지 0.75 x 108개의 총 CAR+ CD8+ T 세포(각 수치 포함)의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포의 단위 용량은 (약) 5 x 106, 1 x 107, 1.5 x 107, 3 x 107, 2.5 x 107, 5 x 107, 7.5 x 107, 1 x 108, 1.5 x 108, 또는 5 x 108개의 총 CAR+ CD8+ T 세포의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, T 세포의 단위 용량은 약 5 x 107 개의 CAR+ T 세포 또는 약 2.5 x 107 CAR+ CD8+ T 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, T 세포의 단위 용량은 약 1 x 108 개의 CAR+ T 세포 또는 약 5 x 107 CAR+ CD8+ T 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, T 세포의 단위 용량은 약 1.5 x 108 개의 CAR+ T 세포 또는 약 0.75 x 108 CAR+ CD8+ T 세포를 포함한다.
일부 구현예에서, 세포, 예를 들어 재조합 수용체-발현 T 세포의 단위 용량이 단일 단위 용량으로 대상체에 투여되거나 2주, 1개월, 3개월, 6개월, 1년 이상의 기간 내에 1회만 투여된다.
입양 세포 요법의 맥락에서, 주어진 “용량(dose)”의 투여는 단일 조성물 및/또는 단일 비중단 투여, 예를 들어 단일 주사 또는 연속 주입으로서 주어진 세포의 양 또는 수의 투여를 포괄하며 또한 다중 개별 조성물 또는 주입제로 제공된 경우 명시된 기간에 걸쳐, 예컨대 3일 이내에 걸쳐 분할된 단위 용량 또는 복수의 조성물로서 주어진 세포의 양 또는 수의 투여를 포괄한다. 따라서, 일부 맥락에서, 용량은 단일 시점에서 주어진 또는 개시된, 명시된 세포 수의 단일 또는 연속 투여이다. 그러나, 일부 맥락에서, 용량은 3일 동안 또는 2일 동안 하루에 한 번 또는 하루의 기간에 걸쳐 다중 주입에 의한 것과 같이 3일 이내의 기간에 걸쳐 다중 주사 또는 주입으로 투여된다.
따라서, 일부 측면에서, 용량의 세포는 단일 약학 조성물로 투여된다. 일부 구현예에서, 용량의 세포는 총체적으로 단위 용량의 세포를 함유하는 복수의 조성물로 투여된다.
일부 구현예에서, 용어 “분할 용량(split dose)”은 1일 이상에 걸쳐 투여되도록 분할된 단위 용량을 지칭한다. 상기 유형의 투약은 본 방법에 포괄되고 단일 용량으로 간주된다.
따라서, 단위 용량의 세포는 분할 용량, 예를 들어, 시간에 걸쳐 투여되는 분할 단위 용량으로 투여될 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 단위 용량은 2일 또는 3일에 걸쳐 대상체에 투여될 수 있다. 분할 투약에 대한 예시적인 방법은 첫 날에 용량의 25%를 투여하고 두 번째 날에 용량의 나머지 75%를 투여하는 것을 포함한다. 다른 구현예에서, 용량의 33%가 첫 날에 투여되고 두 번째 날에 나머지 67%가 투여될 수 있다. 일부 측면에서, 용량의 10%가 첫 날에 투여되고, 단위 용량의 30%가 두 번째 날에 투여되며, 용량의 60%가 셋째 날에 투여된다. 일부 구현예에서, 분할 용량은 3일을 초과하는 기간에 걸쳐 나뉘지는 않는다.
일부 구현예에서, 용량의 세포는 복수의 조성물 또는 용액, 예컨대 제1 및 제2, 임의적으로 그 이상의 투여로 투여될 수 있고, 각각은 용량의 세포를 일부 함유한다. 일부 측면에서, 각각이 상이한 세포의 집단 및/또는 하위 유형의 세포를 함유하는 복수의 조성물이 임의적으로 특정 기간 내에 별도로 또는 독립적으로 투여된다. 예를 들어, 세포의 집단 및/또는 하위 유형의 세포는 각각 CD8+ 및 CD4+ T 세포 및/또는 각각 CD8+- 및 CD4+-농축 집단, 예를 들어, CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포를 포함할 수 있고 각각은 개별적으로 재조합 수용체를 발현하도록 유전자 조작된 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 용량의 투여는 CD8+ T 세포의 용량 또는 CD4+ T 세포의 단위 용량을 포함하는 제1 조성물의 투여 및 CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포의 다른 용량을 포함하는 제2 조성물의 투여를 포함한다.
일부 구현예에서, 조성물 또는 용량의 투여, 예를 들어, 복수의 세포 조성물의 투여는 세포 조성물의 별도 투여를 수반한다. 일부 측면에서, 별도 투여는 동시든 순차적이든 임의의 순서로 수행된다. 일부 구현예에서, 용량은 제1 조성물 및 제2 조성물을 포함하고, 제1 조성물 및 제2 조성물은 0 내지 12시간 간격으로, 0 내지 6시간 간격또는 0 내지 2시간 간격으로 투여된다. 일부 구현예에서, 제1 조성물의 투여 개시 및 제2 조성물의 투여 개시는 2시간 이내, 1시간 이내 또는 30분 이내의 간격, 15분 이내, 10분 이내 또는 5분 이내의 간격으로 수행된다. 일부 구현예에서, 제1 조성물의 투여 개시 및/또는 완료 및 제2 조성물의 투여 개시 및/또는 완료는 2시간 이내, 1시간 이내 또는 30분 이내의 간격, 15분 이내, 10분 이내 또는 5분 이내의 간격으로 수행된다.
일부 조성물에서, 제1 조성물, 예를 들어, 용량의 제1 조성물은 CD4+ T 세포를 포함한다. 일부 조성물에서, 제1 조성물, 예를 들어, 용량의 제1 조성물은 CD8+ T 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 조성물은 제2 조성물 전에 투여된다.
일부 구현예에서, 용량의 세포 또는 세포 조성물은 재조합 수용체를 발현하는 CD4+ 세포 대 재조합 수용체를 발현하는 CD8+ 세포 및/또는 CD4+ 세포 대 CD8+ 세포의 정의된 비율 또는 표적 비율을 포함하고, 상기 비율은 임의적으로 대략 1:1이거나 대략 1:3 내지 대략 3:1 사이, 예컨대 대략 1:1이다. 일부 측면에서, 표적 비율 또는 원하는 비율의 상이한 세포의 집단(예컨대 CD4+:CD8+ 비율 또는 CAR+CD4+:CAR+CD8+ 비율, 예를 들어, 1:1)을 갖는 조성물 또는 용량의 투여는 집단들 중 하나를 함유하는 세포 조성물의 투여 후 집단들 중 다른 것을 포함하는 별도의 세포 조성물의 투여를 수반하고, 상기 투여는 표적 비율 또는 원하는 비율이거나 대략적인 표적 비율 또는 원하는 비율로 수행된다. 일부 측면에서, 정의된 비율로 용량의 세포 또는 세포 조성물의 투여는 T 세포 요법의 증폭, 지속성 및/또는 항종양 활성의 향상으로 이어진다.
일부 구현예에서, 대상체는 세포의 다중 용량, 예를 들어 둘 이상의 용량 또는 다중 연속 단위 용량을 받는다. 일부 구현예에서, 두 용량이 대상체에 투여된다. 일부 구현예에서, 대상체는 연속적인 용량, 예를 들어 제2 용량을 받는데, 이는 첫 번째 용량 후 대략 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 또는 21일에 투여된다. 일부 구현예에서, 다중 연속 용량은 제1 용량 후에 투여되어 추가적인 용량 또는 용량들이 연속 용량의 투여 후에 투여되도록 한다. 일부 측면에서, 추가 용량으로 대상체에 투여되는 세포의 수는 제1 단위 용량 및/또는 연이은 단위 용량과 동일하거나 이와 유사하다. 일부 구현예에서, 추가 용량 또는 용량들은 선행 용량들보다 더 크다.
일부 측면에서, 제1 및/또는 연속 용량의 크기는 하나 이상의 기준 예컨대 선행 치료, 예를 들어 화학요법에 대한 대상체의 반응, 대상체에서 질병 부담, 예컨대 종양 부하, 부피, 크기 또는 전이의 정도, 범위 또는 유형, 단계 및/또는 대상체가 독성 결과, 예를 들어 CRS, 대식세포 활성화 증후군, 종양 용해 증후군, 신경 독성을 발달시킬 가능성 또는 발생률 및/또는 투여되는 세포 및/또는 재조합 수용체에 대한 숙주 면역 반응에 기초하여 결정된다.
일부 측면에서, 제1 용량의 투여와 연속 용량의 투여 사이의 시간은 약 9 내지 약 35일, 약 14일 내지 약 28일 또는 15일 내지 27일이다. 일부 구현예에서, 연속 용량의 투여는 제1 용량의 투여 후 약 14일 초과 및 약 28일 미만의 시점에 수행한다. 일부 측면에서, 제1 용량 및 연속 용량 사이 시간은 약 21일이다. 일부 구현예에서, 추가 용량 또는 용량들, 예를 들어, 연속 용량들은 연속 용량 투여 후 투여된다. 일부 측면에서, 추가 연속 용량 또는 용량들은 선행 용량 투여 후 약 14일 이상 및 약 28일 미만에 투여된다. 일부 구현예에서, 추가 용량은 선행 용량 후 약 14일 미만, 예를 들어, 선행 용량 후 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 13일에 투여된다. 일부 구현예에서, 선행 용량 후 약 14일 미만 및/또는 선행 용량 후 약 28일 이상에는 어떤 용량도 투여되지 않는다.
일부 구현예에서, 세포, 예를 들어 재조합 수용체 발현 세포의 용량은 제1 용량의 T 세포 및 연속 용량의 T 세포를 포함한 2 용량(예를 들어, 2배 용량)을 포함하며, 여기서 제1 용량 및 제2 용량 중 하나 또는 둘 모두는 T 세포의 분할 용량 투여를 포함한다.
일부 구현예에서, 세포의 용량은 일반적으로 질병 부담을 감소시키는 데 효과적일 만큼 충분히 크다.
일부 구현예에서, 세포는 원하는 투여량으로 투여되며, 이는 일부 측면에서 원하는 용량 또는 세포 수 또는 세포 유형(들) 및/또는 세포 유형의 원하는 비율을 포함한다. 따라서, 일부 구현예에서 세포의 투여량은 세포의 총 수(또는 체중 1kg당 수) 및 개별 집단 또는 하위 유형의 원하는 비율, 예컨대 CD4+ 대 CD8+ 비율에 기초한다. 일부 구현예에서, 세포의 투여량은 개별 집단 내 세포 또는 개별 세포 유형의 원하는 총 수(또는 체중 1kg당 수)에 기초한다. 일부 구현예에서, 투여량은 개별 집단에서 원하는 총 세포의 수, 원하는 비율 및 원하는 세포의 총 수와 같은 상기 특성의 조합에 기초한다.
일부 구현예에서, CD8+ 및 CD4+ T 세포와 같은 세포의 집단 또는 하위 유형의 세포는 원하는 T 세포의 용량과 같이 원하는 총 세포의 용량의 허용된 차이로 또는 허용된 차이 내로 투여된다. 일부 측면에서, 원하는 용량은 원하는 세포 수 또는 세포가 투여되는 대상체의 체중 단위 당 원하는 세포 수, 예를 들어 세포/kg이다. 일부 측면에서, 원하는 용량은 최소 세포 수 또는 체중 단위당 최소 세포 수 이상이다. 일부 측면에서, 원하는 용량으로 투여되는 총 세포 중, 개별 집단 또는 하위 유형은 원하는 산출 비율(예컨대 CD4+ 대 CD8+ 비율)로 또는 부근의 비율로, 예를 들어 상기 비율의 특정 허용된 차이 또는 오차 내로 존재한다.
일부 구현예에서, 세포는 CD4+ 세포의 원하는 용량 및/또는 CD8+ 세포의 원하는 용량과 같은 하나 이상의 개별 세포의 집단 또는 하위 유형의 세포의 원하는 용량의 허용된 차이 또는 차이 내에서 투여된다. 일부 측면에서, 원하는 용량은 원하는 하위 유형 또는 집단의 세포 수 또는 세포가 투여되는 대상체의 체중 단위 당 원하는 상기 세포 수, 예를 들어 세포/kg이다. 일부 측면에서, 원하는 용량은 집단 또는 하위 유형의 최소 세포 수 또는 체중 단위당 집단 또는 하위 유형의 최소 세포 수 이상이다.
따라서, 일부 구현예에서, 투여량은 총 세포의 원하는 고정 단위 용량 및 원하는 비율에 기초하고/거나 하나 이상, 예를 들어 각각의 개별 하위 유형 또는 하위 집단의 원하는 고정 용량에 기초한다. 따라서, 일부 구현예에서, 투여량은 T 세포의 원하는 고정 또는 최소 용량 및 CD4+ 대 CD8+ 세포의 원하는 비율에 기초하고/거나 CD4+ 및/또는 CD8+ 세포의 원하는 고정 또는 최소 용량에 기초한다.
일부 구현예에서, 세포는 CD4+ 및 CD8+ 세포 또는 하위 유형과 같은 다중 세포의 집단 또는 하위 유형의 원하는 산출 비율의 허용된 범위에서 또는 범위 내에서 투여된다. 일부 측면에서, 원하는 비율은 특정 비율일 수 있거나 비율의 범위일 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 원하는 비율(예를 들어, CD4+ 대 CD8+ 세포의 비율)은 (약) 5:1 내지 (약) 5:1(또는 약 1:5 초과 내지 약 5:1 미만), 또는 (약) 1:3 내지 (약) 3:1(또는 약 1:3 초과 내지 약 3:1 미만), 예컨대 (약) 2:1 내지 (약) 1:5(또는 약 1:5 초과 내지 약 2:1 미만), 예컨대 (약) 5:1, 4.5:1, 4:1, 3.5:1, 3:1, 2.5:1, 2:1, 1.9:1, 1.8:1, 1.7:1, 1.6:1, 1.5:1, 1.4:1, 1.3:1, 1.2:1, 1.1:1, 1:1, 1:1.1, 1:1.2, 1:1.3, 1:1.4, 1:1.5, 1:1.6, 1:1.7, 1:1.8, 1:1.9, 1:2, 1:2.5, 1:3, 1:3.5, 1:4, 1:4.5 또는 1:5이다. 일부 측면에서, 허용된 차이는 원하는 비율의 약 1%, 약 2%, 약 3%, 약 4% 약 5%, 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50% (상기 범위 사이의 임의의 수치 포함) 이내이다.
특정 구현예에서, 세포의 수 및/또는 농도는 재조합 수용체(예를 들어, CAR) 발현 세포의 수를 지칭한다. 다른 구현예에서, 세포의 수 및/또는 농도는 투여된 모든 세포, T 세포 또는 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)의 수 또는 농도를 지칭한다.
일부 측면에서, 용량의 크기는 하나 이상의 기준 예컨대 선행 치료, 예를 들어 화학요법에 대한 대상체의 반응, 대상체에서 질병 부담, 예컨대 종양 부하, 부피, 크기 또는 전이의 정도, 범위 또는 유형, 단계 및/또는 대상체가 독성 결과, 예를 들어 CRS, 대식세포 활성화 증후군, 종양 용해 증후군, 신경 독성을 발달시킬 가능성 또는 발생률 및/또는 투여되는 세포 및/또는 재조합 수용체에 대한 숙주 면역 반응에 기초하여 결정된다.
일부 구현예에서, 방법 또는 용도는 또한 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 세포의 하나 이상의 추가 단위 용량의 투여 및/또는 림프구 고갈 요법 및/또는 복합 요법을 포함하고/거나 방법 중 하나 이상의 단계가 반복된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 추가 용량은 초기 용량과 동일하다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 추가 용량은 초기 용량과 상이하며, 예를 들어, 초기 단위 용량보다 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배 또는 10배 또는 그 이상과 같이 더 높거나, 초기 단위 용량보다 예를 들어 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배 또는 10배 또는 그 이상과 같이 더 낮다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 추가 용량의 투여는 초기 치료 또는 임의의 선행 치료에 대한 대상체의 반응, 대상체에서 질병 부담, 예컨대 종양 부하, 부피, 크기 또는 전이의 정도, 범위 또는 유형, 단계 및/또는 대상체가 독성 결과, 예를 들어 CRS, 대식세포 활성화 증후군, 종양 용해 증후군, 신경 독성을 발달시킬 가능성 또는 발생률 및/또는 투여되는 세포 및/또는 재조합 수용체에 대한 숙주 면역 반응에 기초하여 결정된다.
C. 반응, 효능 및 생존
일부 구현예에서, 방법 및 용도에 따른 투여는 대상체의 질병 또는 상태의 치료를 초래할 수 있다. 일부 구현예에서, 방법 및 용도에 따른 투여는 치료에 대한 반응(예를 들어, 임상 반응)을 나타내는 대상체를 초래할 수 있다. 일부 구현예에서, 방법 및 용도에 따른 투여는 대상체가 다른 요법에 내성이 있음에도 불구하고 대상체를 치료할 수 있다.
일부 구현예에서, 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40% 또는 적어도 50%가 완전 관해(CR)를 달성하고; 및/또는 상기 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 (약) 40%, 적어도 (약) 50%, 적어도 (약) 60% 또는 적어도 (약) 70%가 객관적 반응(OR)을 달성한다. 일부 구현예에서, 대상체의 적어도(약) 또는 약 50% 이상, 대상체의 적어도(약) 또는 약 60%, 대상체의 적어도(약) 또는 약 70%, 대상체의 적어도(약) 또는 약 80% 또는 방법 및 용도에 따라 치료된 대상체의 적어도 또는 약 90%가 CR을 달성하고/하거나 객관적인 반응(OR)을 달성한다.
일부 구현예에서, 치료에 대한 반응에 대해 평가된 기준에는 전체 반응률(ORR, 어떤 경우에는 객관적 반응률이라고도 함), 완전 반응(CR, 일부 경우 완전 반응이라고도 함), 반응 기간(DOR), 무진행 생존(PFS), 전체 생존(OS), 미세 잔존 질병(MRD) 음성 비율, 무재발 생존( RFS), 무사건 생존(EFS), 조작된 세포의 투여 후 조혈 줄기 세포 이식(HSCT) 비율, 및/또는 Cmax, Tmax 및 곡선 아래 면적(AUC)과 같은 약동학적 매개변수가 포함된다.
일부 구현예에서, 평가된 척도 또는 기준은 전체 반응률(ORR)이다. 일부 구현예에서, 특정 대상체에 대한 ORR은, 조작된 세포의 투여 후 일정 기간 후, 예를 들어, 28일 및/또는 56일에 불완전 혈구 수 회복(CRi)이 있는, 완전 반응(CR) 또는 CR을 달성한 대상체의 총 수로 설명될 수 있다. 일부 구현예에서, 방법 및 용도에 따라 치료된 대상체의 ORR은 적어도 (약) 50%, 적어도 (약) 60%, (약) 70%, 적어도 (약) 80%, 적어도 (약) 85%, 적어도 (약) 90%, 적어도 (약) 95%이다.
일부 구현예에서, 평가된 척도 또는 기준은 미세 잔존 질병(MRD)이다. 일부 구현예에서, MRD 음성 반응은 조작된 세포의 투여 후 일정 기간 후, 예를 들어 28일 및/또는 56일에 MRD 음성 반응을 달성한 대상체의 총 수로 설명된다. 일부 구현예에서, 방법 및 용도에 따라 치료된 대상체의 MRD 음성 응답률은 적어도 (약) 50%, 적어도 (약) 60%, 적어도 (약) 70%, 적어도 (약) 80%, 적어도 (약) 85%, 적어도 (약) 90%, 적어도 (약) 95%이다. 일부 구현예에서, MRD는 본원에 설명된 임의의 기준을 사용하여 측정할 수 있다. 일부 측면에서, 치료 후 MRD 재발은 초기 MRD 음성(1 x 10-4 미만) 완전 반응(CR) 또는 불완전 혈구 수 회복(CRi)이 있는 완전 반응 후 BM 세포에서 1 x 10-4 이상의 빈도로 검증된 분석에 의한 MRD 검출로 설명할 수 있다.
일부 측면에서, MRD 음성 비율은 28일에 MRD 음성 BM으로 CR 또는 CRi를 달성하고 56일에 확인된 대상체의 비율을 분석에 포함된 총 대상체 수로 나눈 것으로 설명할 수 있다. 일부 측면에서, 첫 번째 평가는 CAR-발현 세포의 투여 후 28일에 수행된다. 일부 구현예에서, 대상체가 저형성 골수로 인해 CR/CRi에 대해 평가될 수 없는 경우, MRD 음성 관해가 평가될 수 있는 조혈 회복의 증거가 있을 때 반복 골수 검사가 수행된다. 일부 경우에, MRD 음성 CR 또는 CRi로 간주되는 최상의 전반적인 질병 반응에 대해 말초 혈액, 골수, 뇌척수액 및 골수에서 MRD가 검출되지 않은 골수외 질환 평가(해당되는 경우)에 의해 평가된 바와 같이 재발의 임상 증거가 없다(검출 수준 미만, 검증된 분석에 의해 <0.01%). 일부 측면에서, MRD 결과는 MRD 음성 CR 또는 CRi의 초기 달성 후 최소 4주(28일)에 확인된다. 일부 측면에서, 추가 평가도 동일한 평가에 포함된다. 일부 구현예에서, 평가된 척도 또는 기준은 전체 반응률(ORR)이다. 일부 구현예에서, 특정 대상체에 대한 ORR은, 조작된 세포의 투여 후 일정 기간 후, 예를 들어, 28일 및/또는 56일에 불완전 혈구 수 회복 PR)이 있는, 완전 반응(CR) 또는 부분 반응(PR)을 달성한 대상체의 총 수로 설명될 수 있다. 일부 구현예에서, 방법 및 용도에 따라 치료된 대상체의 ORR은 적어도 (약) 50%, 적어도 (약) 60%, (약) 70%, 적어도 (약) 80%, 적어도 (약) 85%, 적어도 (약) 90%, 적어도 (약) 95%이다.
일부 구현예에서, 평가된 척도 또는 기준은 응답 기간(FOR)이다. 일부 구현예에서, DOR은 첫 번째 반응부터 진행성 질병(PD), 질병 재발 또는 모든 원인으로 인한 사망 중 먼저 발생하는 시간까지의 시간으로 설명할 수 있다. 일부 측면에서, DOR은 조작된 세포를 투여한 후 최대 약 2, 3 또는 4년까지 측정된다. 일부 측면에서, 반응은, 방법 및 용도에 따라 치료된 대상의 적어도(약) 20%, 적어도(약) 30%, 적어도(약) 40%, 적어도(약) 50%, 적어도(약) 60%, 적어도(약) 70%, 적어도(약) 80%, 적어도(약) 85%, 적어도(약) 90% 또는 적어도(약) 95%에서, 조작된 세포의 투여 개시 후 적어도 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 18, 24, 36 또는 48개월 동안 지속된다.
일부 구현예에서, 평가된 척도 또는 기준은 재발 없는 생존 (RFS)이다. 일부 구현예에서, RFS는 진행성 질병(PD), 질병 재발 또는 모든 원인으로 인한 사망(둘 중 먼저 발생하는 것)의 문서화에 대한 첫 번째 반응부터 시간으로 설명할 수 있다. 일부 측면에서, RFS은 조작된 세포를 투여한 후 최대 약 2, 3 또는 4년까지 측정된다. 일부 측면에서, RFS는, 방법 및 용도에 따라 치료된 대상의 적어도 (약) 20%, 적어도 (약) 30%, 적어도 (약) 40%, 적어도 (약) 50%, 적어도 (약) 60%, 적어도 (약) 70%, 적어도 (약) 80%, 적어도 (약) 85%, 적어도 (약) 90% 또는 적어도 (약) 95%에서, 조작된 세포의 투여 개시 후 적어도 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 18, 24, 36 또는 48개월이다.
일부 구현예에서, 평가된 척도 또는 기준은 무사건 생존(EFS)이다. 일부 구현예에서, EFS는 주입 시작부터 진행성 질병(PD), 질병 재발, 새로운 항암 요법 시작 또는 모든 원인으로 인한 사망 중 먼저 발생하는 시간으로 설명할 수 있다. 일부 측면에서, EFS은 조작된 세포를 투여한 후 최대 약 2, 3 또는 4년까지 측정된다. 일부 측면에서, EFS는, 방법 및 용도에 따라 치료된 대상의 적어도 (약) 20%, 적어도 (약) 30%, 적어도 (약) 40%, 적어도 (약) 50%, 적어도 (약) 60%, 적어도 (약) 70%, 적어도 (약) 80%, 적어도 (약) 85%, 적어도 (약) 90% 또는 적어도 (약) 95%에서, 조작된 세포의 투여 개시 후 적어도 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 18, 24, 36 또는 48개월이다.
일부 구현예에서, 평가된 척도 또는 기준은 전체 생존(OS)이다. 일부 구현예에서, OS는 조작된 세포의 투여 시작부터 모든 원인으로 인한 사망까지의 시간으로 설명될 수 있다. 일부 측면에서, OS은 조작된 세포를 투여한 후 최대 약 2, 3 또는 4년까지 측정된다. 일부 측면에서, OS는, 방법 및 용도에 따라 치료된 대상의 적어도 (약) 20%, 적어도 (약) 30%, 적어도 (약) 40%, 적어도 (약) 50%, 적어도 (약) 60%, 적어도 (약) 70%, 적어도 (약) 80%, 적어도 (약) 85%, 적어도 (약) 90% 또는 적어도 (약) 95%에서, 조작된 세포의 투여 개시 후 적어도 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 18, 24, 36 또는 48개월이다.
일부 구현예에서, 평가된 척도 또는 기준은 미세 잔존 질병(MRD)이다. 일부 구현예에서, 일부 대상체에서 MRD 음성 반응은 조작된 세포를 투여한 후 일정 기간 후에 CR 또는 CRi 및 음성 MRD 골수를 달성한 B-ALL 대상체의 백분율로 설명될 수 있다. 일부 측면에서, MRD 음성 반응은 조작된 세포를 투여한 후 최대 약 2, 3 또는 4년까지 측정된다. 일부 구현예에서, 방법 및 용도에 따라 치료된 대상체의 MRD 음성 반응률은 적어도 (약) 20%, 적어도 (약) 30%, 적어도 (약) 40%, 적어도 (약) 50%, 적어도 (약) 60%, 적어도 (약) 70%, 적어도 (약) 80%, 적어도 (약) 85%, 적어도 (약) 90%, 적어도 (약) 95%이다.
일부 구현예에서, 평가된 척도 또는 기준은 조작된 세포 투여에 대한 반응 후 조혈 줄기 세포 이식(HSCT) 비율이다. 일부 구현예에서, HSCT 비율은 조작된 세포를 투여한 후 반응을 달성하고 HSCT를 계속 받는 대상체의 백분율로 설명할 수 있다. 일부 측면에서, HSCT 비율은 조작된 세포를 투여한 후 최대 약 2, 3 또는 4년까지 측정된다. 일부 구현예에서, 방법 및 용도에 따라 치료된 대상체의 반응 후 HSCT 비율은 약 80% 이하, 약 70% 이하, 약 60% 이하, 약 50% 이하, 약 40% 이하, 약 30% 이하, 약 20% 이하 % 또는 약 10% 이하이다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 40% 또는 적어도 50%가 완전한 관해(CR; 일부 경우에는 완전 반응으로도 알려짐)를 달성하고, 약 3개월, 6개월 또는 12개월 또는 13개월 초과 또는 대략 14개월 초과의 무진행 생존(PFS) 및/또는 전체 생존(OS)을 나타내거나; 평균적으로, 상기 방법에 따라 치료된 대상체는 약 6개월, 12개월 또는 18개월에 PFS 또는 OS 중앙값을 나타내거나; 및/또는 대상체는 적어도 약 6, 12, 18개월 또는 그 이상 동안의 요법 후에 PFS 또는 OS를 나타낸다.
일부 구현예에서, 제공된 방법에 따라 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물로 치료된 대상체 중 35% 이상, 40% 이상, 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상 또는 적어도 75% 이상이 완전한 반응(CR)을 달성한다. 일부 구현예에서, 제공된 방법에 따라 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물로 치료된 대상체 중 50% 이상, 60% 이상, 70%이상, 80% 이상, 또는 90% 이상은 객관적인 반응(OR)을 달성한다. 일부 구현예에서, 제공된 방법에 따라 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물로 치료된 대상체 중 60% 이상, 70% 이상, 80% 이상, 90% 이상, 적어도 95% 이상이 1개월, 2개월 또는 3개월까지 CR 또는 OR을 달성한다.
일부 구현예에서, 제공된 방법에 따라 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물로 치료된 대상체 중 60% 이상, 70% 이상, 80% 이상, 90% 이상, 적어도 95% 이상이 세포 요법 투여 개시 후 3개월, 4개월, 5개월, 6개월 이상까지 CR 또는 OR과 같은 반응을 유지한다. 일부 구현예에서, CR 또는 OR과 같은 상기 반응은 1개월 또는 3개월까지 CR을 달성한 상기 대상체에서 또는 예컨대 제공된 방법에 따라 치료된 대상체 중 60% 이상, 70% 이상, 80% 이상, 90% 이상, 적어도 95% 이상, 또는 약 60% 이상, 70% 이상, 80% 이상, 90% 이상, 적어도 95% 이상에서, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 7개월, 8개월 또는 9개월 이상 동안 지속 가능하다. 일부 구현예에서, 1개월 또는 3개월까지 CR을 달성한 상기 대상체 또는 제공된 방법에 따라 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물로 치료된 대상체 중 60% 이상, 70% 이상, 80% 이상, 90% 이상, 적어도 95% 이상이 (약) 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 7개월, 8개월 또는 9개월보다 더 오랫동안 진행없이 생존하거나 생존한다.
일부 구현예에서, 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따른 치료에 의해 이러한 대상체에서 관찰된 결과 반응은 치료 대상의 대다수에서 독성 위험이 낮거나 중증 독성 위험이 낮다. 일부 구현예에서, 제공된 방법에 따라 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물로 치료된 대상체의 약 30%, 35%, 40%, 50%, 55%, 60% 이상은, 어떤 등급의 CRS 또는 어떤 등급의 신경독성(NT)도 나타내지 않는다. 일부 구현예에서, 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 치료된 대상체의 약 50%, 60%, 70%, 80% 이상은, 중증 CRS 또는 3등급 이상의 CRS를 나타내지 않는다. 일부 구현예에서, 제공된 방법에 따라 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물로 치료된 대상체의 약 50%, 60%, 70%, 80% 이상은, 중증 신경독성 또는 4등급 또는 5등급 신경독성과 같은 3등급 이상의 신경독성을 나타내지 않는다.
일부 구현예에서, 제공된 방법에 따라 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물로 치료된 대상체의 약 45%, 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 95% 이상은, 조기 발병 CRS 또는 신경독성을 나타내지 않고/하거나 투여 개시 후 1일, 2일, 3일 또는 4일 이전에 CRS의 발병을 나타내지 않는다. 일부 구현예에서, 제공된 방법에 따라 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물로 치료된 대상체의 약 45%, 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 95% 이상은, 투여 개시 후 3일, 4일, 5일, 6일 또는 7일 이전에 신경독성의 발병을 나타내지 않는다. 일부 측면에서, 방법에 따라 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물로 치료된 대상체 간의 신경독성 발병 중앙값은 방법에 따라 치료된 대상체에서 CRS의 중앙값 피크 또는 소실까지의 시간 중앙값 또는 그 이후이다. 일부 경우에, 방법에 따라 치료된 대상체 사이의 신경독성 발병 중앙값은 약 8, 9, 10, 또는 11일째 또는 그 이상이다.
일부 측면에서, 단위 용량은 이러한 세포의 수(예를 들어, 총 CAR+ T 세포 또는 CD8+ 및/또는 CD4+ CAR+ T 세포의 수) 사이의 상관관계가 관찰되는 범위(선택적으로 선형 관계), 및 치료 반응, 또는 이의 기간(예를 들어, 관해, 완전한 관해 및/또는 특정 관해의 특정 기간을 달성할 가능성) 및/또는 전술한 것 중 임의의 것의 기간을 나타내는 하나 이상의 결과 내에 있다. 일부 측면에서, 더 높은 용량의 세포가 투여되면 대상체에서, 독성(예를들어, 중증 CRS 또는 중증 신경 독성)의 발병률 또는 위험, 또는 독성(예를들어, CRS 또는 신경독성)의 발병률 또는 위험에 실질적으로 영향을 미치거나 영향을 미치지 않으면서 더 큰 반응을 초래할 수 있는 것으로 밝혀졌다.
일부 측면에서, 제공된 방법은 높은 또는 특정 비율의 반응(예컨대 3개월 또는 6개월과 같은 투여 후 특정 기간 후에 평가된 바와 같은 집단 중 반응 비율), 예를 들어, 40% 이상, 45% 이상, 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 또는 80% 또는 81%, 82%, 83%, 84% 또는 85% 이상의 ORR(예컨대 6개월 또는 3개월 ORR) 및 30% 이상, 35% 이상, 40% 이상, 45% 이상, 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 71%, 72%, 73% 이상 또는 대략 75% 이상의 CR 비율(예컨대 6개월 또는 3개월 CR 비율)을 달성할 수 있고, 이는 또한 예컨대 특정 기간 또는 특정 기간 이상 동안 지속가능하고, 예를 들어, 요법 개시 후 1, 3 또는 6개월 이상 또는 9개월 이상 동안 지속된다. 일부 구현예에서, 이러한 반응 속도 및 지속성은 이러한 요법의 단일 투여 또는 용량 후에 제공된다. 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 의한 이러한 대상체의 치료, 일부 구현예에서, 대상체는 높은 반응률을 달성하지만 더 높은 세포 투여량에서도 신경독성 또는 CRS와 같은 발달 독성의 더 높은 발병률을 나타내지 않는다. 일부 구현예에서, 이러한 반응을 달성한 대상체의 약 50%, 55% 또는 60% 이상이 CRS 및/또는 신경독성과 같은 독성 등급을 나타내지 않는다.
일부 측면에서, ALL 또는 NHL을 갖는 대상체와 같은 대상체의 반응 속도는 루가노 기준(Lugano criteria)에 기초한다. (Cheson 등, (2014) JCO 32(27):3059-3067; Johnson 등, (2015) Radiology 2:323-338; Cheson, B.D. (2015) Chin Clin Oncol 4(1):5). 일부 측면에서, 반응 평가는 임상적, 혈액학적 및/또는 분자적 방법 중 어느 하나를 활용한다. 일부 측면에서, 루가노 기준을 사용하여 평가된 반응은 적절한 것으로 양전자 방출 단층 촬영(positron emission tomography, PET)-컴퓨터 단층 촬영(computed tomography, CT) 및/또는 CT의 사용을 수반한다. PET-CT 평가는 FDG-친화성 림프종(FDG-avid lymphoma)에 대한 플루오로데옥시글루코스(fluorodeoxyglucose, FDG)의 사용을 더 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 루가노 기준을 사용하여 평가된 반응은 영상 평가에 적절한 것으로 양전자 방출 단층 촬영(positron emission tomography, PET)-컴퓨터 단층 촬영(computed tomography, CT) 및/또는 CT의 사용을 수반한다. FDG 열성 림프종에는 호지킨 림프종(HL) 및 확산성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), 공격적인 변형이 있는 변연부 NHL 및 FDG 열성 결절 림프종(기본적으로 만성 림프구성 백혈병(CLL), 소림프구성 림프종, 림프형질구성 림프종/발덴스트롬 거대글로불린혈증 및 균상식육종을 제외한 모든 조직학적 유형)을 포함한 특정 비호지킨 림프종(NHL)이 포함된다. 일부 경우에 비-FDG-열성 조직학의 경우 CT가 선호되는 이미징 방법이다. 일부 측면에서, 치료 후 스캔은 치료 투여 후 가능한 오래 소요된다. 일부 측면에서, 치료 후 스캔은 치료 후 최소 3주, 예를 들어, 치료의 투여 후 3주, 4주, 5주, 6주, 7주, 8주, 9주, 10주, 11주, 12주 또는 그 이후에 수행된다. 일부 측면에서, PET-CT가 FDG-친화성 조직 구조에서 반응을 평가하는데 사용될 경우, 5점 척도를 사용할 수 있다. 일부 측면에서, 5점 척도는 하기 기준을 포함한다: 1, 바탕 위 흡수 없음; 2, 흡수 ≤ 종경막; 3, 흡수 > 종경막이나 ≤ 간; 4, 적당히 흡수 > 간; 5, 간 및/또는 새로운 병변에서보다 현저히 많은 흡수; X, 림프종과 관련이 있을 것 같지 않은 새로운 영역 흡수.
일부 측면에서, PET-CT가 FDG 열성 조직학의 반응을 평가하는 데 사용되는 경우 Deauville 5점 척도(Deauville 5ps)와 같은 5점 척도가 평가 또는 병기 결정에 사용될 수 있다. Deauville 점수는 두 개의 참조 기관인 종격동(즉, 혈액 풀) 및 간과 비교한 각 병변의 플루오로데옥시글루코스(FDG) 흡수를 PET/CT 스캔으로 시각화한 시각적 해석을 기반으로 한다. 한 번의 평가(초기 병기결정)는 치료 전에 이루어지며 두 번째 라운드의 FDG PET/CT 스캔은 치료 중 및/또는 치료 후 잔여 질량(참조 기관의 FDG 업데이트와 비교)을 평가하는 데 사용된다. 척도 범위는 1에서 5까지이며 1이 가장 좋고 5가 가장 나쁘다. 각 FDG-avid(또는 이전 FDG-avid) 병변은 독립적으로 평가된다. 일부 측면에서, 5점 척도는 하기 기준을 포함한다: 1, 바탕 위 흡수 없음; 2, 흡수 ≤ 종경막; 3, 흡수 > 종경막이나 ≤ 간; 4, 적당히 흡수 > 간; 5, 간보다 현저히 높은 흡수(예: 최대 표준 흡수 값(SUVMAX > 2x 간, 5a) 및/또는 림프종과 관련될 수 있는 새로운 병변(반응 평가 시)(5b); X, 림프종과 관련이 있을 것 같지 않은 새로운 영역 흡수.
Deauville 점수 1 또는 2는 치료 중간 및 종료 시 완전한 대사 반응(CMR)을 나타내는 것으로 간주된다. Deauville 점수 3도 CMR을 나타내지만 점수 3의 해석은 평가 시기, 임상 상황 및 치료에 따라 다르다. 중간에 Deauville 점수 4 또는 5는 부분 대사 반응을 나타내는 것으로 간주된다. 그러나 치료 종료 시 Deauville 점수 4 또는 5는 잔여 대사 질환을 나타내며, 흡수가 기준선에서 감소한 경우; 기준선으로부터 흡수에 변화가 없는 경우 대사 반응(NMR) 없음; 및 기준선에서 흡수 증가 및/또는 새로운 병변이 있는 경우 진행성 대사 질환(PMD)이다. 치료 중간 및 종료 시 NMR 또는 PMD는 치료 실패를 나타낸다.
일부 측면에서, 루가노 기준을 사용하여 기재된 바와 같은 완전한 반응은 다양한 측정 가능한 부위에서의 완전한 대사 반응 및 완전한 방사선 반응을 포함한다. 일부 측면에서, 상기 부위는 림프절 및 림프 외 부위를 포함하며, 여기서 CR은 PET-CT가 사용될 경우 5점 척도에서 잔류 질량을 갖거나 갖지 않는 1, 2 또는 3의 점수로 기재된다. 일부 측면에서, 생리학적 흡수가 많거나 비장 또는 골수 내 활성화(예를 들어, 화학 요법 또는 골수성 콜로니 자극 인자 사용)가 있는 왈데이어 고리(Waldeyer’s ring) 또는 결절 외 부위에서, 흡수가 정상 종격막 및/또는 간에서보다 더 많을 수 있다. 상기 상황에서, 조직이 많은 생리적 흡수를 하더라도 초기 관여 부위에서의 흡수가 주변 정상 조직보다 더 많지 않으면 완전한 대사 반응이 유추될 수 있다. 일부 측면에서, 반응은 CT를 사용하여 림프절에서 평가되며, 여기서 CR은 질병 및 표적 결절/결절의 집합체의 림프 외 부위가 병변의 가장 긴 횡방향 직경(LDi)에서 ≤ 1.5 cm까지 퇴화해서는 안되는 것으로 설명된다. 추가 평가 부위는 골수를 포함하며, 여기서 PET-CT 기반 평가는 골수에서 FDG-친화성 질병의 증거가 부족함을 나타내야 하고, CT 기반 평가는 정상적인 형태를 나타내야 하며, 불명확한 경우 IHC 음성이어야 한다. 추가 부위는 정상으로 회귀해야 하는 기관 확대의 평가를 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 측정되지 않은 병변 및 새로운 병변이 평가되며, 이는 CR의 경우 없어야 한다 (Cheson 등, (2014) JCO 32(27):3059-3067; Johnson 등, (2015) Radiology 2:323-338; Cheson, B.D. (2015) Chin Clin Oncol 4(1):5).
일부 측면에서, 루가노 기준을 사용하여 기재된 바와 같은 부분 반응(PR; 어떤 경우에는 부분 관해라고도 함)은 다양한 측정 가능한 부위에서의 부분적인 대사 반응 및/또는 방사선 반응을 포함한다. 일부 측면에서, 상기 부위는 림프절 및 림프 외 부위를 포함하며, 여기서 PR은 PET-CT가 사용될 경우 기준선 및 잔류 질량(들)의 임의의 크기와 비교하여 섭취가 감소된 4 또는 5의 점수로 기재된다. 잠정적으로, 상기 발견은 반응하는 질병을 나타낼 수 있다. 치료 말기에, 상기 발견은 잔류 질병을 나타낼 수 있다. 일부 측면에서, 반응은 CT를 사용하여 림프절에서 평가되며, 여기서 PR은 최대 6개의 표적 측정 가능한 노드 및 림프절 외 부위의 SPD가 50% 이상 감소하는 것으로 설명된다. 병변이 너무 작아 CT에서 측정할 수 없는 경우 5mm × 5mm가 기본값으로 지정되며; 병변이 더 이상 보이지 않으면 값은 0mm × 0mm; 5mm × 5mm를 초과하지만 정상보다 작은 노드의 경우 실제 측정값이 계산에 사용된다. 추가 평가 부위는 골수를 포함하며, 여기서 PET-CT 기반 평가는 기준선(허용된 화학 요법으로부터의 반응 변화와 양립 가능한 확산 흡수)과 비교하여 감소되나 정상 골수에서의 흡수보다 더 많은 잔류 흡수를 나타내야 한다. 일부 측면에서, 결절 반응의 맥락에서 골수에서 지속적인 병소의 변화가 있는 경우, MRI 또는 생검법 또는 간격 검사로 추가 평가를 하는 것이 고려되어야 한다. 일부 측면에서, 추가 부위는 기관 확대의 평가를 포함할 수 있으며, 비장은 길이에 있어 정상 이상으로 >50%까지 퇴화되었어야 한다. 일부 측면에서, 비측정 병변 및 새로운 병변이 평가되고, PR의 경우 부재/정상, 퇴화되어야 하나 증가해서는 안된다. 무반응/안정 질환(SD) 또는 진행성 질환(PD)도 PET-CT 및/또는 CT 기반 평가를 사용하여 측정할 수 있다(Cheson 등, (2014) JCO 32(27):3059-3067; Johnson 등, (2015) Radiology 2:323-338; Cheson, B.D. (2015) Chin Clin Oncol 4(1):5).
일부 측면에서, 무진행성 생존(progression-free survival, PFS)은 대상체가 질병을 갖고 살지만 악화되지 않는 암과 같은 질병의 치료 중 및 치료 후의 시간 길이로 설명된다. 일부 측면에서, 객관적인 반응(objective response, OR)은 측정 가능한 반응으로 설명된다. 일부 측면에서, 객관적인 반응율(objective response rate, ORR; 경우에 따라 전체 응답률이라고도 함)은 CR 또는 PR을 달성한 환자의 비율로 설명된다. 일부 측면에서, 전반적인 생존(overall survival, OS)은 질병으로 진단된 대상체가 여전히 살아 있는, 암과 같은 질병에 대한 치료 시작 또는 진단일 중 하나로부터의 시간 길이로 설명된다. 일부 측면에서, 이벤트 없는 생존(event-free survival, EFS)은 치료가 방해 또는 지연되도록 의도된 특정 합병증 또는 이벤트 없는 채로 대상체가 존속하는 치료 후 암 말기 동안 시간의 길이로 설명된다. 상기 이벤트는 뼈에까지 퍼지는 암으로부터의 뼈 통증과 같은 특정 증상의 개시 또는 암의 재발 또는 죽음을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 반응 기간(duration of response, DOR)의 측정은 종양 반응의 문서화에서 질병 진행까지의 시간을 포함한다. 일부 구현예에서, 반응을 평가하기 위한 파라미터에는 지속적인 반응, 예를 들어, 요법 개시로부터 기간 후에 지속되는 반응이 포함될 수 있다. 일부 구현예에서, 지속적인 반응은 요법 개시 후 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 18 또는 24개월에서의 반응율로 표시된다. 일부 구현예에서, 반응은 3개월 또는 6개월보다 더 오랫동안 지속된다.
일부 측면에서, RECIST 기준은 객관적인 종양 반응(일부 측면에서, 고형 종양에서)을 결정하는 데 사용된다(Eisenhauer 등, European Journal of Cancer 45 (2009) 228-247.). 일부 측면에서, RECIST 기준은 표적 병변을 위한 객관적인 종양 반응을 결정하기 위해 이용된다. 일부 측면에서, RECIST 기준을 사용하여 결정된 바와 같은 완전한 반응은 모든 표적 병변의 소멸로 설명되고, 임의의 병리적 림프절(표적이건 비표적이건)이 단축에서 <10 mm까지 축소되어야 한다. 다른 측면에서, RECIST 기준을 사용하여 결정된 바와 같은 부분 반응은 기준선 합계 직경을 기준으로 하여, 표적 병변의 직경의 합계에서 30% 이상의 감소로 설명된다. 다른 측면에서, 진행성 질병(PD)은 연구 중 가장 작은 합계를 기준으로 하여(이는 상기 값이 연구 중 가장 작은 경우 기준선 합계를 포함함) 표적 병변의 직경의 합계에서 20% 이상의 증가로 설명된다. 20%의 상대적 증가 외에, 합계는 5mm 이상의 절대적인 증가를 또한 입증해야 한다(일부 측면에서, 하나 이상의 새로운 병변의 출현도 진행성으로 간주된다). 다른 측면에서, 안정된 질병(stable disease, SD)은 연구 중인 가장 작은 합계 직경을 기준으로 하여, PR에 적격인 충분한 축소도 없고, PD에 적격인 충분한 증가도 없는 것으로 설명된다.
일부 측면에서, 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 부합하는 투여는 일반적으로 대상체에서 질병 또는 병태의 확대 또는 부담을 감소시키거나 방지한다. 예를 들어, 질병 또는 병태가 종양인 경우, 방법은 일반적으로 골수 또는 분자 검출 가능한 암에서 종양 크기, 규모, 전이, 아형의 비율을 감소시키고/거나 예후 또는 생존 또는 종양 부담과 관련된 다른 증상을 개선한다.
질병 부담은 종양 또는 예를 들어, 전이를 나타내는 다른 위치의 기관 또는 조직과 같은 대상체 또는 대상체의 기관, 조직 또는 체액에서 질병의 총 세포 수를 포함할 수 있다. 예를 들어, 종양 세포는 특정 혈액학적 악성 종양의 맥락에서 혈액, 또는 골수에서 검출 및/또는 정량화될 수 있다. 일부 구현예에서, 질병 부담은 종양의 질량, 전이의 수 또는 범위 및/또는 골수에 존재하는 아세포의 백분율을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 대상체는 백혈병을 갖는다. 질병 부담의 정도는 혈액이나 골수의 잔류 백혈병을 평가하여 결정할 수 있다.
일부 측면에서, CLL을 갖는 대상체와 같은 대상체에서의 반응율은 만성 림프구성 백혈병 반응 기준에 대한 국제 워크숍(International Workshop on Chronic Lymphocytic Leukemia, IWCLL)에 기초한다(Hallek, et al ., Blood 2008, Jun 15; 111(12): 5446-5456). 일부 측면에서, 상기 기준은, 일부 측면에서 면역 표현형에 의한 말초 혈액 클론성 림프구의 부재, 림프샘 장애(lymphadenopathy)의 부재, 간 비대 또는 비장 비대의 부재, 체질상의 증상 및 충분한 혈액 수의 부재를 요구하는, 완전한 진정(complete remission, CR; 경우에 따라 완전한 응답이라고도 함); 일부 측면에서 정상적인 혈액 수를 갖지 않는, 상기 CR로 기술되는 불완전한 골수 회복을 갖는 완전한 진정(complete remission with incomplete marrow recovery, CRi); 일부 측면에서 말초 혈액 수에서의 개선과 함께, 림프구 수에서 ≥ 50%에 속하고, 림프샘 장애에서 ≥ 50% 감소 또는 간 또는 비장에서 ≥ 50%의 감소로 기술되는, 부분적인 진정(partial remission, PR; 경우에 따라 부분 반응이라고도 함); 일부 측면에서 림프구 수에 있어서 > 5 x109/L 까지의 ≥ 50% 상승, 림프샘 장애에 있어서 ≥ 50% 증가, 간 또는 비장 크기에 있어서 ≥ 50% 증가, 리히터의 형질전환(Richter’s transformation) 또는 CLL로 인한 새로운 혈구 감소증(cytopenia)으로 기술되는 진행성 질병(progressive disease, PD); 일부 측면에서 CR, CRi, PR 또는 PD에 대한 기준을 충족하지 않는 것으로 기술되는 안정적인 질병;으로 기술된다.
일부 구현예에서, 대상체는 단위 용량의 세포 투여 후 1개월 이내에, 대상체의 림프절 크기가 (약) 20mm 미만, (약) 10mm 미만이거나 (약) 10mm 미만인 경우 CR 또는 OR을 나타낸다.
일부 구현예에서, CLL의 지표 클론은 대상체의 골수(또는 본 방법에 따라 치료된 대상체의 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 이상을 초과한 골수)에서 검출되지 않는다. 일부 구현예에서, CLL의 지표 클론은 IgH 심층 시퀀싱에 의해 평가된다. 일부 구현예에서, 지표 클론은 세포의 투여 후 (약) 1, 2, 3, 4, 5, 6, 12, 18 또는 24개월 또는 (약) 1, 2, 3, 4, 5, 6, 12, 18 또는 24개월 이상의 시기에 검출되지 않는다.
일부 구현예에서, 대상체는, 예를 들어 광학 현미경에 의해 검출된 바와 같이, 골수에서 5% 이상의 아세포, 예컨대 골수에서 10% 이상의 아세포, 골수에서 20% 이상의 아세포, 골수에서 30% 이상의 아세포, 골수에서 40% 이상의 아세포 또는 골수에서 50% 이상의 아세포가 존재할 경우 형태학적 질병을 나타낸다. 일부 구현예에서, 골수에 5% 미만의 아세포가 존재하는 경우, 대상체는 완전한 또는 임상적 진정을 나타낸다.
일부 구현예에서, 대상체는 백혈병을 갖는다. 질병 부담의 정도는 혈액이나 골수의 잔류 백혈병을 평가하여 결정할 수 있다.
*일부 구현예에서, 대상체는, 예를 들어 광학 현미경에 의해 검출된 바와 같이, 골수에서 5% 이상의 아세포, 예컨대 골수에서 10% 이상의 아세포, 골수에서 20% 이상의 아세포, 골수에서 30% 이상의 아세포, 골수에서 40% 이상의 아세포 또는 골수에서 50% 이상의 아세포가 존재할 경우 형태학적 질병을 나타낸다. 일부 구현예에서, 골수에 5% 미만의 아세포가 존재하는 경우, 대상체는 완전한 또는 임상적 진정을 나타낸다.
일부 구현예에서, 대상체는 완전한 진정을 나타낼 수 있으나, 형태학적으로 검출 불가능한(광학 현미경 기술에 의함) 작은 비율의 잔류 백혈병 세포가 존재한다. 대상체가 골수에서 5% 미만의 아세포를 나타내고 분자적으로 검출 가능한 암을 나타내는 경우 최소 잔류 질병(minimum residual disease, MRD)을 나타낸다고 한다. 일부 구현예에서, 분자적으로 검출 가능한 암은 소수의 세포의 민감한 검출을 허용하는 다양한 임의의 분자 기술을 사용하여 평가될 수 있다. 일부 측면에서, MRD는 BM 세포에서 1 x 10-4 이상의 빈도로 검증된 분석에 의해 검출된다. 일부 측면에서, 상기 기술은 염색체 전좌에 의해 생성된 유일한 Ig/T 세포 수용체 유전자 재배열 또는 융합 전사물을 결정할 수 있는 PCR 평가를 포함한다. 일부 구현예에서, 유동 세포 분석은 백혈병 특이적 면역 표현형에 기초한 암 세포 확인에 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 암의 분자 검출은 100,000개의 정상 세포에서 1개의 백혈병 세포만을 검출할 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 100,000개 세포 중 적어도 1개 또는 그 이상의 백혈병 세포가 PCR 또는 유세포 분석에 의해 검출되는 경우 분자적으로 검출 가능한 MRD를 나타낸다. 일부 구현예에서, 대상체의 질병 부담은 분자적으로 검출 불가능하거나 MRD-이어서 일부 경우에 PCR 또는 유세포 분석 기술을 사용하여 대상체에서 백혈병 세포를 검출할 수 없다.
일부 구현예에서, 백혈병의 지표 클론은 대상체의 골수(또는 본 방법에 따라 치료된 대상체의 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 이상을 초과한 골수)에서 검출되지 않는다. 일부 구현예에서, 백혈병의 지표 클론은 IGH 심층 시퀀싱에 의해 평가된다. 일부 구현예에서, 지표 클론은 세포의 투여 후 (약) 1, 2, 3, 4, 5, 6, 12, 18 또는 24개월 또는 (약) 1, 2, 3, 4, 5, 6, 12, 18 또는 24개월 이상의 시기에 검출되지 않는다.
일부 측면에서, MRD는 유세포 분석에 의해 검출된다. 유세포 분석을 사용하여 암세포에 대한 골수 및 말초 혈액 샘플을 모니터링할 수 있다. 특정 측면에서, 유세포 분석은 골수에서 암세포의 존재를 감지하거나 모니터링하는 데 사용된다. 일부 측면에서, 유세포 분석에 의한 다중 매개변수 면역학적 검출은 암세포를 검출하는 데 사용된다 (예를들어, Coustan-Smith 등, (1998) Lancet 351:550-554 참조한다.). 일부 측면에서, 질량 세포계측법에 의한 다중 매개변수 면역학적 검출은 암세포를 검출하는 데 사용된다. 일부 예에서, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 또는 50개의 매개변수는 암세포를 탐지하는 데 사용된다. 검출에 사용되는 항원은 검출되는 암에 따라 선택된다 (Foon and Todd (1986) Blood 68:1-31).
일부 예에서, 골수는 골수 흡인물 또는 골수 생검에 의해 수확되고, 림프구는 분석을 위해 분리된다. 형광색소(예: 플루오레세인 이소티오시아네이트(FITC), 피코에리트린, 페리디닌 클로로필 단백질 또는 비오틴)에 접합된 단일클론 및/또는 다중클론 항체를 사용하여 분리된 림프구에서 말단 데옥시뉴클레오티딜 전이효소(TdT), CD3, CD10, CD11c, CD13, CD14, CD33, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD34, CD45, CD56, CD79b, IgM, 및/또는 KORSA3544 와 같은 에피토프를 검출할 수 있다. 그런 다음 다중 에피토프를 감지하기 위해 다중 매개변수 유세포 분석 또는 질량 세포 분석과 같은 유세포 분석을 사용하여 표지된 세포를 감지할 수 있다.
일부 구현예에서, ALL에서 MRD의 존재는 형태학에 의해 5% 미만의 림프모 세포를 갖는 것에 기초하여 결정되는 수 있고/거나 2선 요법 후 골수 세포에서 1 x10-4 이상의 빈도로 검증된 분석에 의해 검출된 MRD를 기준으로 할 수 있다. 일부 측면에서, MRD 반응률은 분석에 사용할 수 있는 대상체의 수 이상에서 조작된 세포 조성물의 투여 후 최대 24개월에 걸쳐 골수에서 MRD가 검출되지 않고(예를 들어, 검증된 분석에 의해 <0.01%) CR 또는 CRi를 달성한 대상체의 비율로부터 결정될 수 있다.
림프 세포는 광산란 점 플롯을 기반으로 식별 및 게이팅된 다음, 관심 면역표현형 특징을 발현하는 세포 집단을 식별하기 위해 이차적으로 게이팅될 수 있다. 예시적인 에피토프는 하기 표 2에 제시되어 있다. 백혈병 및 림프종의 다른 면역학적 분류는 예를 들어 문헌[Foon and Todd Blood (1986) 68(1): 1-31, and Mrozek 등, Hematol Oncol Clin North Am. 2009 October; 23(5): 991-v]에 기술된 것들을 포함한다. 일부 측면에서, MRD의 유세포 분석 평가는 하나 이상의 ALL 또는 NHL 표현형을 보유하는 살아있는 림프구를 정량화함으로써 달성될 수 있다. 일부 측면에서, MRD의 유세포 분석 평가는 하나 이상의 CLL 면역표현형(예: 낮은 전방/측면 산란; CD3neg; CD5+; CD14neg; CD19+; CD23+; CD45+; CD56neg)을 보유하는 살아있는 림프구를 정량화하여 달성될 수 있다.
표 2. 예시적인 면역표현형 및 세포유전학 특성
질병 면역표현형 세포유전학
급성 림프모구 백혈병(acute lymphoblastic leukemia, ALL) B 세포 계통:
CD19+; CD22+; CD79a+; TdT+; CD10+/-; 세포질 Ig +/-; 표면 Ig +/-

T 세포 계통: CD2+; CD3+; CD4+; CD5+; CD7+; CD8+; TdT+		 cryptic t(12;21)
t(1;19)(q23;p13)
필라델피아 염색체(t(9;22)(q34;q11))
t(4;11)(q21;q23)
t(8;14)(q24;q32)
t(11;14)(p13;q11)
t(v;11q23.3)
초이배체(hyperdiploidy)
저배수성(hypodiploidy)
반복되는 유전적 이상
필라델피아 염색체 유사 (Philadelphia chromosome-like)
B 세포 급성 림프모구 백혈병/림프종 CD19+; CD22+; CD79a+; TdT+; CD10+/-; 세포질 Ig +/-; 표면 Ig +/- t(9;22)(q34.1;q11.2)t(v;11q23.3)
t(12;21)(p13.2;q22.1)
t(5;14)(q31.1;q32.3)
t(1;19)(q23;p13.3)
만성 림프구성 백혈병(CLL) Pan-B+; CD5+; CD23+; CD79b/CD22 weak; FMC7-; sIg weak Trisomy12del(13)(q14.3)
del 11q22-q23
del 17p13(p53)
t(11;14)(q13;q32) BCL1/IgH 재배열
t(14;19)(q32;q13)
IgH 결실(14q32)
del(6q)
%8q24
+3
+18
Del 6q21
소림프구성 림프종(SLL) Pan-B+; CD5+; CD23+; CD10-; sIgM+ faint del(6)(q21 -23)
림프형질구성 림프종(Lymphoplasmacytic lymphoma) Pan-B+; CD5-; CD10-; cyIgM+ t(9;14)(p13;q32) PAX5/IgH
여포 중심 세포 림프종(Follicle center cell lymphoma) Pan-B+; CD10+/-; CD5-; sIg+ t(14;18)(q32;q21) / BCL2 Rearr
확산성 대세포 림프종(Diffuse large cell lymphoma) CD19+; CD22+; CD10-/+; SIg+ t(14;18) 및 p53 돌연변이t(3; V)(q27; V) / BCL6 Rearr
variants c-MYC Rearr
버킷 림프종(BL) Pan-B+; TdT-; CD10+; CD5-; sIgM+ t(8;14)(q24;q32) 변이체/ c- MYC Rearr
버킷형 림프종 Pan-B+; TdT-; CD10-/+ CD5-; sIg+ t(8;14) 또는 변이체 t(8;14)+ t(14;18)
외투 세포 림프종 Pan-B +; CD5+; CD23-; CD10-/+; sIgM+ bright t(11;14)(q13;q32) / BCL1 Rearr
변연부 B 세포 림프종(MZBCL) pan-B+; CD5-/+; CD10-; CD23-; CD11c+/-; cyIg + (40% of the cells), sIgM+ bright; sIgD- t(11;18)(q21;q21) / PI2 인간 MLT 융합: 림프절 외 저등급 MALT 림프종; 무통성 질병t(1;14)(p21;q32): 림프절 외 MALT 림프종
del(7)(q22 -31): 비장 MZBCL
/+3q: 결절, 결절 외 및 비장 MZBCL
+: 케이스의 >90%에서 양성
+/-: 케이스의 50% 이상에서 양성
-/+: 케이스의 50% 미만에서 양성
-: 케이스의 <10%에서 양성
Pan-B 표지자: 예: CD19, CD20, CD79a
sIG: 표면 면역글로불린
cyIg: 세포질 면역글로불린
일부 측면에서, 수확된 B 세포의 면역글로불린 중쇄(IGH) 유전자좌의 딥 시퀀싱을 사용하여 최소 잔류 질병(MRD)을 검출할 수 있다. 특정 IgG 재배열의 클론 존재는 ALL 또는 NHL과 같은 B 세포 악성종양의 존재 및/또는 이의 악성 세포의 잔류 존재를 검출하는 표지자를 제공할 수 있다. 일부 측면에서, B 세포를 함유하거나 함유하는 것으로 의심되는 집단과 같은 세포를 채취하고 혈액으로부터 단리한다. 일부 측면에서, 세포는 골수로부터, 예를 들어 골수 흡인물 또는 골수 생검으로부터 및/또는 다른 생물학적 샘플로부터 수확되고 단리된다. 일부 측면에서, 상보성 결정 영역 3(CDR3)의 중합효소 연쇄 반응(PCR) 증폭은, 최소 잔류 질병을 평가할 목적으로 세포의 클론 집단을 식별하는 데 사용할 수 있는 유전자 좌위의 V 및 J 영역 내에서 고도로 보존된 서열에 대한 프라이머를 사용하여 달성된다. 특정 계통의 세포 수에 관한 정보를 제공하고/하거나 클론 집단과 같은 이의 결합 부위 또는 가변 중쇄와 같은 특정 가변 사슬을 발현하는 것을 포함하는 단일 세포 시퀀싱 접근법과 같은 클론 집단을 검출하기 위한 다른 방법이 사용될 수 있다. 일부 측면에서, IGH DNA는 IGH 서열의 공통 V 및 퇴행 공통 J 영역을 인식하는 것과 같은 상이한 세포 클론 간에 공유되는 가변 사슬의 영역을 인식하는 퇴화 프라이머 또는 프라이머를 사용하여 증폭된다. V 영역의 예시적인 서열은 ACACGGCCTCGTGTATTACTGT (서열번호: 57)이다. J 영역의 예시적인 퇴화 공통서열은 ACCTGAGGAGACGGTGACC(서열 번호: 58)이다. 일부 측면에서 PCR 산물 또는 시퀀싱 결과는 재배열된 대립유전자에 특이적이며 MRD 검출을 위한 클론 표지자 역할을 한다. CDR3 영역의 PCR 증폭 후, PCR 산물은 CAR-T 세포 요법(예컨대, CD19 CAR-T 세포 요법)으로 B 세포 악성 종양을 치료한 후 MRD의 민감한 검출을 위한 대립유전자 특이적 PCR을 위한 프로브로 구성된 환자 특이적 올리고뉴클레오티드를 생성하도록 시퀀싱될 수 있다. 공통 프라이머를 사용하여 PCR 산물이 생성되지 않는 예에서 프레임워크 영역 1에 대한 V 영역 패밀리 특이적 프라이머가 대신 사용될 수 있다.
일부 측면에서, 치료 후 ALL 또는 NHL과 같은 B 세포 악성 종양의 세포, 예를 들어 악성 또는 클론 IGH 서열에 상응하는 검출 가능한 IGH 서열과 같은 PCR-검출 가능한 종양 세포의 지속성은 재발 위험 증가와 관련이 있다. 일부 측면에서, 치료 후 악성 IGH 서열에 대해 음성인 환자(일부 측면에서, 진행성 질환을 나타내는 다른 기준의 맥락에서 또는 림프절 비대의 지속 또는 일부 맥락에서 질병 또는 완전한 반응의 부족과 관련될 수 있는 기타 기준과 같은 부분적 반응만을 나타내는 경우에도)는 지속적인 악성 IGH 서열을 가진 환자와 비교하여 PFS의 가능성이 증가하거나 CR 또는 지속성 CR로 진입하거나 생존 기간이 연장되는 것으로 간주될 수 있다. 일부 구현예에서, 이러한 예후 및 병기 결정은 예를 들어 림프절 크기 또는 기타 병기 기준과 같은 다른 임상 증상의 해결과 비교하여 요법 투여 후 단기간 내에 악성 세포의 제거가 관찰되는 치료에 특히 관련이 있다. 예를 들어, 일부 그러한 측면에서, 골수와 같은 샘플에서 검출 가능한 IGH의 부재 또는 최소 잔류 질병은 다른 이용 가능한 병기결정 또는 예후 접근법과 비교하여 반응 또는 반응 가능성 또는 그의 지속성에 대한 바람직한 판독일 수 있다. 일부 측면에서, MRD의 결과(예: IGH 딥 시퀀싱 정보)는 추가 개입 또는 이의 부족을 알릴 수 있다. 예를 들어, 일부 상황에서 방법 및 기타 제공된 실시예는 악성 IGH에 대해 음성으로 간주되는 대상체는 일부 측면에서 추가 치료를 받지 않거나 제공된 요법의 용량을 추가로 투여받지 않을 수 있거나 대상체에게 더 낮거나 감소된 용량을 투여할 수 있음을 제공한다. 역으로, IGH 딥 시퀀싱을 통해 MRD를 나타내는 대상체가 추가 치료, 예를 들어 초기에 유사하거나 더 높은 용량으로 투여된 요법 또는 추가 치료로 제공되거나 명시될 수 있다. 일부 측면에서, 첫 번째 용량의 투여 후 질병 또는 상태가 지속되고/하거나 첫 번째 용량의 투여가 대상에서 질병 또는 상태를 근절하기에 충분하지 않다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 질병이나 상태의 부담, 예컨대 종양 세포의 수, 종양의 크기, 환자 생존 기간 또는 무사건 생존 기간을 대체 투여 요법을 사용하는 비교 가능한 방법으로 관찰되는 감소와 비교하여 더 큰 정도 및/또는 더 긴 기간 동안, 예를 들어 대상체가 하나 이상의 대체 치료제를 받는 경우 및/또는 제공된 방법 및/또는 제공된 물품에 따라 피험자가 세포 및/또는 림프절 고갈제의 용량을 받지 않는 경우 제조 또는 구성보다 줄인다. 일부 구체예에서, 대상체의 질병 또는 상태의 부담이 검출, 평가 또는 측정된다. 질병 부담은 일부 측면에서 대상체에서 또는 혈액 또는 혈청과 같은 대상체의 장기, 조직 또는 체액에서 질병 또는 질병 관련 세포, 예를 들어 종양 세포의 총 수를 검출함으로써 검출될 수 있다. 일부 측면에서, 대상체의 생존, 특정 기간 내의 생존, 생존의 정도, 무사건 또는 무증상 생존의 존재 또는 기간, 또는 무재발 생존이 평가된다. 일부 구현예에서, 질병이나 상태의 모든 증상이 평가된다. 일부 구현예에서, 질병 또는 상태 부담의 척도가 특정된다.
일부 구현예에서, 상기 방법에 의해 대상체의 무사건 생존율 또는 전체 생존율이, 다른 방법, 예컨대 대상체가 하나 이상의 대체 치료제를 받는 방법 및/또는 제공된 방법 및/또는 제공된 물품에 따라 피험자가 세포 및/또는 림프구 고갈제의 용량을 받지 않는 방법 제조 또는 구성에 비해, 개선된다. 예를들어, 일부 구현예에서, 투여 후 6개월에 상기 방법에 의해 치료된 대상체에 대한 무사건 생존율 또는 확률은 약 40% 초과, 약 50% 초과, 약 60%초과, 약 70%초과, 약 80% 초과, 약 90%초과, 약 95% 초과이다. 일부 측면에서, 전체 생존율은 약 40% 초과, 약 50% 초과, 약 60% 초과, 약 70% 초과, 약 80% 초과, 약 90% 초과, 또는 약 95% 초과이다. 일부 구현예에서, 상기 방법으로 치료된 대상체는 무사건 생존, 무재발 생존, 또는 적어도 6개월까지, 또는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10년까지의 생존을 나타낸다. 일부 구현예에서, 약 6개월 이상, 또는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10년의 진행까지의 시간과 같은 진행까지의 시간이 개선된다.
일부 구현예에서, 방법 또는 용도에 따른 치료 후 재발 가능성이, 다른 방법 예컨대 대상체가 하나 이상의 대체 치료제를 받는 방법 및/또는 제공된 방법 및/또는 제공된 물품 또는 조성에 따라 대상체가 세포 및/또는 림프구 고갈제의 용량을 받지 않는 방법에 비해, 개선된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 제1 투여 후 6개월에 재발 확률은 약 80% 미만, 약 70% 미만, 약 60% 미만, 약 50% 미만, 약 40% 미만, 약 30% 미만, 약 20% 미만, 또는 약 10% 미만이다.
일부 구현예에서, 평가된 측정 또는 기준은 약동학적 매개변수 또는 노출과 관련된 매개변수이다. 일부 구현예에서, 약동학적 매개변수는 조작된 세포의 투여 후 일정 기간 후 대상체에 존재하는 조작된 세포의 최대 농도(Cmax)이다. 일부 구현예에서, Cmax는 조작된 세포의 투여 후 최대 대략 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 18 또는 24개월까지 측정된다. 일부 구현예에서, 약동학적 매개변수는 대상체에 존재하는 조작된 세포의 최대 농도까지의 시간(Tmax)이다. 일부 구현예에서, T max는 조작된 세포의 투여 후 최대 대략 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 18 또는 24개월까지 측정된다. 일부 구현예에서, 약동학적 매개변수는 대상체에 존재하는 조작된 세포의 곡선 하 면적(AUC)이다. 일부 구현예에서, AUC 는 조작된 세포의 투여 후 최대 대략 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 18 또는 24개월까지 측정된다.
일부 경우에, 약동학 특성은 투여 이후 최대(피크) 혈장 농도(Cmax), 피크 시간(즉, 최대 혈장 농도(Cmax)가 발생할 때; Tmax), 최저 혈장 농도(즉, 치료제, 예를 들어 CAR+ T 세포의 단위 용량들 사이의 최저 혈장 농도; Cmin), 배설 반감기(T1/2) 및 곡선 하 면적(즉, 플로팅 시간 대 치료제 CAR+ 세포의 혈장 농도를 그려 생성된 곡선 하 면적; AUC)와 같은 매개변수를 측정하여 평가할 수 있다. 투여 후 혈장 내 특정 치료제, 예를 들어 CAR+ T 세포의 농도는, 혈액 샘플에서 치료제, 예를 들어, CAR+ T 세포의 농도를 평가하기에 적합한 당업계에 공지된 임의의 방법, 또는 본원에 기재된 임의의 방법을 사용하여 측정될 수 있다. 예를 들어, 정량적 PCR(qPCR) 또는 유세포 분석 기반 방법과 같은 핵산 기반 방법 또는 면역분석, ELISA 또는 크로마토그래피/질량 분석 기반 분석과 같은 기타 분석을 사용할 수 있다.
일부 구현예에서, 투여된 세포, 예를 들어, CAR+ T 세포 조성물의 약동학(PK)은 투여된 세포의 이용률, 예를 들어, 생체이용률을 평가하기 위해 결정된다. 일부 구현예에서, 투여된 세포의 결정된 약동학적 매개변수는, CD3+ CAR+ 세포, CD4+ CAR+ 세포 및/또는 CD8+ CAR+ T 세포의 Cmax와 같은 최대(피크) 혈장 농도(Cmax); CD3+ CAR+ 세포, CD4+ CAR+ 세포 및/또는 CD8+ CAR+ T 세포의 Tmax와 같은 Cmax가 달성되는 시점(Tmax), 및/또는 CD3+ CAR+ 세포, CD4+ CAR+ 세포 및/또는 CD8+ CAR+ T 세포의 AUC0-28과 같은 곡선 아래 면적(AUC)을 포함한다. 일부 구현예에서, 약동학적 매개변수는 피크 CD3+ CAR+ T 세포 농도(Cmax CD3+ CAR+ T 세포) 또는 CD8+ CAR+ T 세포 농도(Cmax CD8+ CAR+ T 세포)이다. 일부 구현예에서, 약동학적 매개변수는CD3+ CAR+ T 세포(AUC0-28 CD3+ CAR+ T 세포)의 AUC0-28 또는 CD8+ CAR+ T 세포(AUC0-28 CD8+ CAR+ T 세포)의 AUC0-28이다.
일부 구현예에서, “노출”은 특정 기간에 걸쳐 치료제의 투여 후에 혈장(혈액 또는 혈청) 내 치료제, 예를 들어, CAR+ T 세포의 신체 노출을 지칭할 수 있다. 일부 구현예에서, 노출은 치료제, 예를 들어, CAR+ T 세포의 단위 용량 투여 후에 약동학적 분석에 의해 결정되는, 치료제 농도-시간 곡선 하 면적(AUC)으로 제시될 수 있다. 일부 경우에, AUC는 세포 요법에 투여된 세포에 대하여 세포수*일수/μL로, 또는 그에 대한 해당 단위로 표현된다. 일부 구현예에서, AUC는 샘플 환자 집단 등의 환자 집단 내 평균 AUC, 예를 들어, 하나 이상의 환자의 평균 AUC로 측정된다. 일부 구현예에서, 전신 노출(systemic exposure)은 예를 들어 0일부터 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 21, 28일 또는 그 이상까지, 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15주 또는 그 이상까지, 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 18, 24, 48개월 또는 그 이상까지, 특정 기간 내 곡선 하 면적(AUC)을 지칭한다. 일부 구현예에서, AUC는 샘플 환자 집단과 같은 환자 집단의 평균 AUC 같은 측정된 약동학적(PK) 매개변수로부터 추정된 데이터 및 모든 측정된 데이터를 포함하여, 치료제, 예를 들어, CAR+ T 세포 투여 후에 0일부터 28일까지의 AUC(AUC0-28)로 측정된다. 일부 구현예에서, 시간에 따른 노출, 예를 들어, AUC0-28과 같이 특정 기간 동안의 AUC를 결정하기 위해, 여러 측정치 또는 시간에 따른 매개변수, 예를 들어, 세포 농도의 평가, 예를 들어, 매 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 21 또는 28일 또는 그 이상일마다 취한 측정치를 사용하여 치료제 농도-시간 곡선을 생성한다.
일부 구현예에서, T 세포 투여 이후 및 요법 투여 이전, 도중 및/또는 이후 대상체 내 재조합 수용체를 발현하는 세포(예를 들어, T 세포 기반 요법을 위해 투여된 CAR 발현 세포)의 존재 및/또는 양을 검출한다. 일부 측면에서, 정량적 PCR(qPCR)과 같은 핵산 기반 방법은 대상체의 혈액 또는 혈청 또는 기관 또는 조직 샘플(예를 들어, 질병 부위, 예를 들어, 종양 샘플)에서 재조합 수용체(예를 들어, T 세포 기반 요법을 위해 투여된 CAR 발현 세포)를 발현하는 세포의 양을 분석하기 위해 사용된다. 일부 측면에서, 지속성은 DNA 마이크로그램당 수용체, 예를 들어, CAR을 암호화하는 DNA 또는 플라스미드의 카피수로 또는 샘플, 예를 들어 혈액 또는 혈청 마이크로리터당 수용체 발현, 예를 들어, CAR 발현 세포 수로 또는 샘플 마이크로리터당 말초 혈액 단핵 세포(PBMC) 또는 백혈구 또는 T 세포의 총 수당으로 정량화된다. 일부 구현예에서, qPCR 또는 다른 핵산 기반 방법에 사용되는 프라이머 또는 프로브는 재조합 수용체를 암호화하는 핵산, 및/또는 예를 들어 프로모터, 전사 및/또는 전사 후 조절 요소 또는 반응 요소, 또는 표지자(예를 들어, 대리 표지자) 등의 조절 요소를 포함한 플라스미드 및/또는 벡터의 기타 구성요소 또는 요소를 결합, 인식 및/또는 증폭하는 데 특이적이다. 일부 구현예에서, 프라이머는 우드척 간염 바이러스 전사 후 조절 요소(WPRE)와 같은 조절 요소에 특이적일 수 있다.
일부 구현예에서, 세포는 T 세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포의 투여 후 적어도 4, 14, 15, 27, 또는 28일에 대상체에서 검출된다. 일부 측면에서, 세포는 T 세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포의 투여 후 적어도 2, 4 또는 6주 이후 또는 3, 6 또는 12, 18 또는 24 또는 30 또는 36개월 후 또는 1, 2, 3, 4, 5년 이상 후에 검출된다.
일부 구현예에서, 피크 수준 및/또는 AUC를 평가하고 및/또는 유전자 조작된 세포의 투여 시작 이후 적어도 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 15일, 16일, 17일, 18일, 19일, 20일 또는 21일의 시점에 대상체에서 샘플을 수득한다. 일부 구현예에서, 피크 수준 및/또는 AUC를 평가하고 및/또는 유전자 조작된 세포의 투여 시작 이후 (약) 11일 내지 22일, 12일 내지 18일 또는 14일 내지 16일(각 수치 포함) 사이 시점에 대상체에서 샘플을 수득한다.
증폭 및/또는 지속성을 나타내는 노출, 예를 들어, 세포, 예를 들어 T 세포 요법을 위해 투여된 T 세포 수 또는 농도는, 대상체가 노출된 최대 세포 수 또는 농도, 특정 수 또는 백분율 이상에서 검출 가능한 세포 또는 세포들의 지속 기간, 시간에 따른 세포 수 또는 농도에 대한 곡선 하 면적(AUC) 및/또는 이의 조합 및 이의 지표의 관점에서 명시된다. 특정 샘플, 예를 들어 혈액, 혈청, 혈장 또는 조직, 예컨대 종양 샘플에서 핵산 또는 DNA의 총 양에 비해 재조합 수용체를 암호화하는 핵산의 카피 수를 검출하기 위해 qPCR과 같은 공지된 방법 및/또는 일반적으로 수용체에 특이적인 항체를 이용하여 수용체 발현 세포를 검출하는 유동 세포 분석법을 이용하여 상기 결과를 평가할 수 있다. 세포 기반 분석법 또한 수용체에 의해 인식되는 항원을 발현하거나 질병 또는 병태의 세포에 대해 반응, 예를 들어 세포 독성 반응을 유도하고 및/또는 중화하고 및/또는 이에 결합할 수 있는 세포와 같은 기능성 세포의 수 또는 백분율 또는 농도를 검출하기 위해 사용될 수 있다.
일부 경우에, 투여된 세포, 예를 들어 입양 전달된 세포의 약동학은 투여된 세포의 가용성, 예를 들어 생체이용률을 평가하기 위해 결정된다. 입양 전달된 세포의 약동학을 결정하는 방법에는 조작된 세포가 투여된 대상체로부터 말초 혈액을 채취하고 말초 혈액에서 조작된 세포의 수 또는 비율을 결정하는 것이 포함될 수 있다. 세포 선택 및/또는 분리를 위한 접근 방식은, 키메라 항원 수용체(CAR) 특이적 항체(예를들어, Brentjens 등, Sci. Transl. Med. 2013 Mar; 5(177): 177ra38) 단백질 L(Zheng 등, J. Transl. Med. 2012 Feb; 10:29), CAR의 특정 부위에 직접 도입되어 Strep-Tag에 대한 결합 시약을 사용하여 CAR을 직접 평가하는 Strep-Tag 서열과 같은 에피토프 태그(Liu 등 (2016) Nature Biotechnology, 34:430; 국제 특허 출원 공개 번호 WO2015095895), 및 CAR 폴리펩타이드에 특이적으로 결합하는 모노클로날 항체의 용도를 포함할 수 있다. 외인성 표지 유전자는 일부 경우에 세포의 검출 또는 선택을 가능하게 하도록, 일부 경우에 또한 세포 자살을 촉진하도록, 조작된 세포 요법과 관련하여 사용될 수 있다. 일부 경우에 절단된 표피 성장 인자 수용체(EGFRt)는 형질도입된 세포에서 관심 있는 이식유전자(예를 들어, CAR를 인코딩함)와 공동-발현될 수 있다(예를 들어, 미국 특허 번호 8,802,374 참조한다.). EGFRt는 항체 세툭시맙(Erbitux®) 또는 다른 치료용 항-EGFR 항체 또는 결합 분자에 의해 인식되는 에피토프를 함유할 수 있으며, 이는 EGFRt 작제물 및 또 다른 재조합 수용체, 예컨대 키메라 항원 수용체(CAR)로 조작된 세포를 확인 또는 선택하기 위해 및/또는 수용체를 발현하는 세포를 제거 또는 분리하기 위해 사용될 수 있다. 문헌[미국 특허 번호 8,802,374 및 Liu 등, Nature Biotech. 2016 April; 34(4): 430-434]을 참조한다.
일부 구현예에서, 환자로부터 얻은 생물학적 샘플, 예를 들어 혈액에서 CAR+ T 세포의 수는 예를 들어 세포의 약동학을 결정하기 위해 세포 요법의 투여 후 일정 기간에 결정될 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체의 혈액에서, 또는 상기 방법으로 치료된 대다수의 대상체에서 검출 가능한 CAR+ T 세포, 임의로 CAR+ CD8+ T 세포 및/또는 CAR+ CD4+ T 세포의 수는 μL당 1개 세포 이상, μL당 5개 이상 세포 또는 μL당 10개 세포 이상이다.
D. 독성
일부 구현예에서, 제공된 방법 및 용도는, 예를 들어, 대체 세포 요법의 투여, 예를 들어 대체 CAR+ T 세포 조성물 및/또는 세포의 대체 투여, 예를 들어 정의된 비율로 투여되지 않은 세포의 투여와 비교하여, 더 낮은 비율 및/또는 더 낮은 정도의 독성, 독성 결과 또는 증상, 독성 촉진 프로필, 요인 또는 특성(예: 사이토카인 방출 증후군(CRS) 또는 신경독성)을 초래하는 기능을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 특정 다른 세포 요법과 비교하여, 제공된 방법 및 용도는 독성 또는 독성 결과의 높은 비율 또는 가능성을 초래하지 않으며, 또는 신경독성(NT), 사이토카인 방출 증후군(CRS)과 같은 독성 또는 독성 결과의 비율 또는 가능성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 중증 NT(sNT), 중증 CRS(sCRS), 대식세포 활성화 증후군, 종양 용해 증후군, 3일 이상 동안 약 38℃ 이상의 열 및 약 20mg/dL 이상의 CRP 혈장 수준을 유발하거나 위험을 증가시키지 않는다. 일부 구현예에서, 제공된 방법에 따라 치료된 대상체의 약 30%, 35%, 40%, 50%, 55%, 60% 이상은 CRS 등급 또는 신경독성 등급을 나타내지 않는다. 일부 구현예에서, 치료된 대상의 50% 이하(예를 들어, 치료 대상의 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90% 또는 그 이상)는 2등급보다 높은 사이토카인 방출 증후군(CRS) 및/또는 2등급보다 높은 신경독성을 나타낸다. 일부 구현예에서, 상기 방법에 따라 치료된 대상의 적어도 50%(예를 들어, 치료 대상의 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90% 또는 그 이상)는 중증 독성 결과(예: 중증 CRS 또는 중증 신경독성)를 나타내지 않으며, 예컨대 3등급 이상의 신경독성을 나타내지 않고/거나 중증 CRS를 나타내지 않거나, 또는 치료 후 특정 기간, 예를 들어 세포 투여 후 1주일, 2주 또는 1개월 이내에 그렇게 하지 않는다. 일부 구현예에서, 특정 독성을 결정하기 위해 평가된 매개변수는 유해 사례(AE), 용량 제한 독성(DLT), CRS 및 NT를 포함한다.
키메라 항원 수용체를 발현하는 T 세포로 치료하는 것과 같은 입양 T 세포 요법의 투여는 사이토카인 방출 증후군 및 신경독성과 같은 독성 효과 또는 결과를 유발할 수 있다. 일부 예에서, 그러한 효과 또는 결과는 관찰된 독성의 기초가 될 수 있는 높은 수준의 순환 사이토카인과 평행을 이룬다.
일부 구현예에서, 유해 사례(AE)의 존재 또는 발달은 조작된 세포의 투여 후에 측정되거나 결정된다. 일부 측면에서, 유해 사례(AE), 중증 유해 사례(SAE), 및 실험실 이상(전체 및 임상, 조직학적 및 분자 하위 그룹에서)의 유형, 빈도 및 중증도가 측정된다. 일부 구현예에서, 제공된 방법에 따라 치료된 대상체의 약 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 50%, 55%, 60% 이상은 어떠한 AE 또는 SAE도 나타내지 않는다.
일부 측면에서, 독성 결과는 사이토카인 방출 증후군(CRS) 또는 중증 CRS(sCRS)와 연관되거나 이를 나타낸다. CRS(예: sCRS)는 입양 T 세포 치료 및 다른 생물학적 제제의 대상체에게 투여한 후 일부 경우에 발생할 수 있다. Davila 등, Sci Transl Med 6, 224ra25 (2014); Brentjens 등, Sci. Transl. Med. 5, 177ra38 (2013); Grupp 등, N. Engl. J. Med. 368, 1509-1518 (2013); 및 Kochenderfer 등, Blood 119, 2709-2720 (2012); Xu 등, Cancer Letters 343 (2014) 172-78를 참조한다.
일반적으로 CRS는 예를 들어 T 세포, B 세포, NK 세포, 단핵구 및/또는 대식세포에 의해 매개되는 과장된 전신 면역 반응에 의해 유발된다. 이러한 세포는 사이토카인 및 케모카인과 같은 염증 매개체를 다량으로 방출할 수 있다. 사이토카인은 급성 염증 반응을 유발하고/거나 내피 기관 손상을 유발하여 미세혈관 누출, 심부전 또는 사망을 초래할 수 있다. 생명을 위협하는 중증 CRS는 폐 침윤 및 폐 손상, 신부전 또는 파종성 혈관내 응고를 유발할 수 있다. 생명을 위협하는 다른 중증 독성에는 심장 독성, 호흡 곤란, 신경학적 독성 및/또는 간부전이 포함될 수 있다.
CRS는 항-IL-6 요법과 같은 항염증 요법, 예를 들어 항-IL-6 항체, 예를 들어 토실리주맙, 또는 설명된 바와 같은 항생제 또는 기타 제제를 사용하여 치료될 수 있다. CRS의 결과, 징후 및 증상은 알려져 있으며 본원에 설명된 것들을 포함한다. 일부 구현예에서, 특정 투여 요법 또는 투여가 주어진 CRS 관련 결과, 징후 또는 증상에 영향을 미치거나 영향을 미치지 않는 경우, 특정 결과, 징후 및 증상 및/또는 이의 양 또는 정도가 명시될 수 있다.
CAR-발현 세포를 투여하는 맥락에서, CRS는 일반적으로 CAR을 발현하는 세포의 주입 후 6-20일에 발생한다. Xu 등, Cancer Letters 343 (2014) 172-78를 참조한다. 일부 경우에, CRS가 CAR T 세포 주입 후 6일 미만 또는 20일 이후에 발생한다. CRS의 발생 정도 및 시기는 기준 사이토카인 수준 또는 주입 시점의 종양 부담과 관련될 수 있다. 일반적으로 CRS는 인터페론(IFN)-γ, 종양 괴사 인자(TNF)-α 및/또는 인터루킨(IL)-2의 혈청 수준 상승을 포함한다. CRS에서 빠르게 유도될 수 있는 다른 사이토카인은 IL-1β, IL-6, IL-8 및 IL-10이다.
CRS와 관련된 예시적인 결과는 발열, 경직, 오한, 저혈압, 호흡곤란, 급성 호흡 곤란 증후군(ARDS), 뇌병증, ALT/AST 상승, 신부전, 심장 장애, 저산소증, 신경 장애 및 사망을 포함한다. 신경학적 합병증에는 섬망, 발작과 같은 활동, 혼란, 단어 찾기 어려움, 실어증 및/또는 둔해짐이 포함된다. 다른 CRS 관련 결과에는 피로, 메스꺼움, 두통, 발작, 빈맥, 근육통, 발진, 급성 혈관 누출 증후군, 간 기능 손상 및 신부전이 포함된다. 일부 측면에서, CRS는 혈청-페리틴, d-이량체, 아미노트랜스퍼라제, 젖산 탈수소효소 및 트리글리세리드와 같은 하나 이상의 인자의 증가, 또는 저섬유소원혈증 또는 간비장종대와 관련이 있다. CRS와 관련된 다른 예시적인 징후 또는 증상은 혈역학적 불안정성, 열성 호중구감소증, 혈청 C-반응성 단백질(CRP)의 증가, 응고 매개변수의 변화(예: 국제 표준화 비율(INR), 프로트롬빈 시간(PTI) 및/또는 피브리노겐), 심장 및 기타 장기 기능의 변화, 및/또는 절대 호중구 수(ANC)를 포함한다.
일부 구현예에서, CRS와 관련된 결과에는 다음 중 하나 이상이 포함된다: 지속적인 발열, 예를 들어, 2일 이상, 예를 들어 3일 이상, 예를 들어 4일 이상 또는 연속 3일 이상 동안 특정 온도의 열, 예를 들어 섭씨 약 38도 이상; 섭씨 약 38도 이상의 열; 적어도 두 개의 시토카인(예를 들어, 인터페론 감마(IFNγ), GM-CSF, IL-6, IL-10, Flt-3L, 프랙트알킨 및 IL-5로 구성된 군 중 적어도 두 개, 및/또는 종양 괴사 인자 알파(TNFα))의 전처리 수준과 비교하여 적어도 (약) 75의 최대 배수 변화 또는 이러한 사이토카인 중 적어도 하나의 최대 배수 변화, 예를 들어 적어도 (약) 250; 및/또는 적어도 하나의 독성 임상 징후, 예를 들어, 저혈압(예를 들어, 적어도 하나의 정맥내 혈관활성 승압기에 의해 측정됨); 저산소증(예를 들어, 약 90% 이하의 혈장 산소(PO2) 수준); 및/또는 하나 이상의 신경학적 장애(정신 상태 변화, 둔함 및 발작 포함).
예시적인 CRS-관련 결과는 사이토카인 및 케모카인 및 CRS와 관련된 기타 인자를 포함하는 하나 이상의 인자의 증가되거나 높은 혈청 수준을 포함한다. 예시적인 결과는 이러한 인자 중 하나 이상의 합성 또는 분비의 증가를 추가로 포함한다. 이러한 합성 또는 분비는 T 세포 또는 T 세포와 상호작용하는 세포, 예를 들어 선천성 면역 세포 또는 B 세포에 의한 것일 수 있다.
일부 구현예에서, CRS-관련 혈청 인자 또는 CRS-관련 결과는 인터페론 감마(IFN-γ), TNF-α, IL-1β, IL-2, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12, sIL-2Ra을 포함하는 염증성 사이토카인 및/또는 케모카인, 과립구 대식세포 집락 자극 인자(GM-CSF), 대식세포 염증 단백질(MIP)-1, 종양 괴사 인자 알파(TNFα), IL-6 및 IL-10, IL-1β, IL-8, IL-2, MIP-1, Flt-3L, 프렉탈카인 및/또는 Il-5를 포함한다. 일부 구현예에서, 인자 또는 결과는 C 반응성 단백질(CRP)을 포함한다. CRS에 대해 조기에 그리고 쉽게 측정할 수 있는 위험 인자인 것 외에도 CRP는 세포 확장의 표지자이기도 하다. 일부 구현예에서, ≥15 mg/dL과 같이 높은 수준의 CRP를 갖는 것으로 측정된 대상체는 CRS를 갖는다. 일부 구현예에서, 높은 수준의 CRP를 갖는 것으로 측정된 대상체는 CRS를 갖지 않는다. 일부 구현예에서, CRS의 척도는 CRP의 척도와 CRS를 나타내는 또 다른 인자를 포함한다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 염증성 사이토카인 또는 케모카인은 CAR 치료 전, 치료 중 또는 치료 후에 모니터링된다. 일부 측면에서, 하나 이상의 사이토카인 또는 케모카인은 IFN-γ, TNF-α, IL-2, IL-1β, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12, sIL-2Rα, 과립구 대식세포 집락 자극 인자(GM-CSF), 또는 대식세포 염증 단백질(MIP)을 포함한다. 일부 구현예에서, IFN-γ, TNF-α 및 Il-6은 모니터링된다.
sCRS 발병 위험이 더 높은 환자를 예측하기 위해 CRS 발병과 상관관계가 있는 것으로 보이는 CRS 기준이 개발되었다 (Davilla 등 Science translational medicine. 2014;6(224):224Ra25 참조한다.). 요인으로는 발열, 저산소증, 저혈압, 신경학적 변화, 염증성 사이토카인의 혈청 수준 상승(예: 치료로 인한 상승이 치료 전 종양 부담 및 sCRS 증상과 잘 관련될 수 있는 7가지 사이토카인 세트 (IFNγ, IL-5, IL-6, IL-10, Flt-3L, 프렉탈카인, 및 GM-CSF))이 포함된다. CRS의 진단 및 관리에 대한 기타 지침은 알려져 있다(예를들어, Lee et al, Blood. 2014;124(2):188-95 참조한다.). 일부 구현예에서, CRS 등급을 반영하는 기준은 아래 표 3과 같다.
표 3: CRS에 대한 예시적인 등급 기준
등급 증상 설명
1
경미함(Mild)		 생명을 위협하지 않으며 해열제, 항구토제와 같은 대증요법만 필요함(예: 발열, 메스꺼움, 피로, 두통, 근육통, 권태감)
2
중간(Moderate)		 중간 개입 요구 및 대응:
산소 요구량 < 40%, 또는
체액에 반응하는 저혈압 또는 저용량의 단일 승압제, 또는
2등급 기관 독성 (CTCAE v4.0 기준)
3
중증(Severe)		 적극적인 개입 요구 및 대응:
산소 요구량 ≥ 40%, 또는
단일 승압제를 고용량으로 사용해야 하는 저혈압(예: 노르에피네프린 ≥ 20 μg/kg/min, 도파민 ≥ 10 μg/kg/min, 페닐에프린 ≥ 200 μg/kg/min 또는 에피네프린 ≥ 10 μg/kg/min), 또는
다중 승압제를 필요로 하는 저혈압(예: 바소프레신 + 위의 약제 중 하나 또는 ≥ 20 μg/kg/min 노르에피네프린과 동등한 복합 승압제), 또는
3등급 장기 독성 또는 4등급 아미노전이염(CTCAE v4.0 기준)
4
생명-위협(Life-threatening)
　		 생명-위협(Life-threatening):
인공호흡기 지원 또는
4등급 장기 독성 요구 사항 (아미노전이염 제외)
5
치명적인(Fatal)		 죽음(Death)
일부 구현예에서, 대상체가 투여 후 대상체가 다음을 나타내는 경우, 대상체는 세포 요법 또는 그의 세포 용량의 투여에 반응하거나 이에 대해 이차적으로 "중증 CRS"("sCRS")가 발병하는 것으로 간주된다: (1) 최소 3일 동안 섭씨 38도 이상의 발열; (2) 다음 중 하나를 포함하는 사이토카인 상승 (a) 투여 직후의 수준과 비교하여 7개의 사이토카인의 다음 그룹 중 적어도 2개에 대해 75 이상의 최대 배수 변화: 인터페론 감마(IFNγ), GM-CSF, IL-6, IL-10, Flt-3L, 프렉탈카인, 및 IL-5, 및/또는 (b) 투여 직후의 수준과 비교하여 7개의 사이토카인의 다음 그룹 중 적어도 하나에 대해 250 이상의 최대 배수 변화: 인터페론 감마(IFNγ), GM-CSF, IL-6, IL-10, Flt -3L, 프렉탈카인, 및 IL-5; 및 (c) 저혈압(최소한 하나의 정맥 혈관 활성 승압기가 필요함) 또는 저산소증(PO2 < 90%) 또는 하나 이상의 신경학적 장애(정신 상태 변화, 둔함 및/또는 발작 포함)와 같은 독성의 적어도 하나의 임상 징후. 일부 구현예에서, 중증 CRS는 표 3에 명시된 바와 같이 3등급 이상의 CRS를 포함한다.일부 구현예에서, 중증 CRS 또는 3등급 CRS 이상(예: 4등급 이상)과 관련된 결과에는 다음 중 하나 이상이 포함된다: 지속적인 발열, 예를 들어, 2일 이상, 예를 들어 3일 이상, 예를 들어 4일 이상 또는 연속 3일 이상 동안 특정 온도의 열, 예를 들어 섭씨 약 38도 이상; 섭씨 약 38도 이상의 열; 적어도 두 개의 시토카인(예를 들어, 인터페론 감마(IFNγ), GM-CSF, IL-6, IL-10, Flt-3L, 프랙트알킨 및 IL-5로 구성된 군 중 적어도 두 개, 및/또는 종양 괴사 인자 알파(TNFα) )의 전처리 수준과 비교하여 적어도 (약) 75의 최대 배수 변화 또는 이러한 사이토카인 중 적어도 하나의 최대 배수 변화, 예를 들어 적어도 (약) 250; 및/또는 적어도 하나의 독성 임상 징후, 예를 들어, 저혈압(예를 들어, 적어도 하나의 정맥내 혈관활성 승압기에 의해 측정됨); 저산소증(예를 들어, 약 90% 이하의 혈장 산소(PO2) 수준); 및/또는 하나 이상의 신경학적 장애(정신 상태 변화, 둔함 및 발작 포함). 일부 구현예에서, 중증 CRS에는 중환자실(ICU)에서 관리 또는 치료가 필요한 CRS가 포함된다.
일부 구현예에서, 중증 CRS와 같은 CRS는 (1) 지속적인 발열(최소 3일 동안 섭씨 38도 이상) 및 (2) CRP의 혈청 수준이 약 20mg/dL 이상인 조합을 포함한다. 일부 구현예에서, CRS는 2개 이상의 승압제를 사용해야 하는 저혈압 또는 기계적 환기가 필요한 호흡부전을 포함한다. 일부 구현예에서, 두 번째 또는 후속 투여에서 승압제의 용량이 증가한다.
일부 구현예에서, 중증 CRS 또는 3등급 CRS는 알라닌 아미노전이효소 증가, 아스파르테이트 아미노전이효소 증가, 오한, 열성 호중구감소증, 두통, 좌심실 기능장애, 뇌병증, 수두증 및/또는 떨림을 포함한다.
다양한 결과를 측정하거나 감지하는 방법은 지정할 수 있다.
일부 측면에서, 독성 결과는 신경 독성이거나 이와 관련이 있다. 일부 구현예에서, 신경독성의 임상적 위험과 관련된 증상은 착란, 섬망, 실어증, 표현형 실어증, 둔감, 근육간대경련, 혼수, 정신 상태 변화, 경련, 발작 유사 활동, 발작(선택적으로 뇌파검사[EEG]로 확인됨), 베타 아밀로이드(Aβ) 수치 상승, 글루타메이트 수치 상승 및 산소 라디칼 수치 상승을 포함한다. 일부 구현예에서, 신경 독성은 심각도에 따라 등급이 매겨진다(예를들어, 1-5 등급 척도를 사용) (예를들어, Guido Cavaletti & Paola Marmiroli Nature Reviews Neurology 6, 657-666 (December 2010); National Cancer Institute―Common Toxicity Criteria version 4.03 (NCI-CTCAE v4.03) 참조한다.).
어떤 경우에는 신경학적 증상이 sCRS의 초기 증상일 수 있다. 일부 구현예에서, 신경학적 증상은 세포 요법 주입 후 5 내지 7일에 시작되는 것으로 보인다. 일부 구현예에서, 신경학적 변화의 지속 기간은 3일에서 19일 사이이다. 일부 경우에, 신경학적 변화의 회복은 sCRS의 다른 증상이 해결된 후에 발생한다. 일부 구현예에서, 항-IL-6 및/또는 스테로이드(들)로의 치료로 신경학적 변화의 시간 또는 해결 정도가 빨라지지 않는다.　
일부 구현예에서, 대상체는 투여 후 대상체가 다음 중에서 자가 관리를 제한하는 증상을 나타내는 경우, 세포 요법 또는 이의 세포 용량의 투여에 대한 반응으로 또는 이차적으로 "중증 신경독성"이 발생하는 것으로 간주된다: 1) 말초 운동 신경의 염증 또는 변성을 포함한 말초 운동 신경병증의 증상; 2) 말초 감각 신경의 염증 또는 퇴화, 감각 이상, 예컨대 비정상적이고 불쾌한 감각을 유발하는 감각 지각의 왜곡, 신경 또는 신경 그룹을 따라 나타나는 강렬한 통증과 같은 신경통, 및/또는 감각 뉴런의 기능적 장애로 인해 자극의 부재 하에 따끔거림, 무감각, 압박감, 추위 및 온기와 같은 비정상적인 피부 감각을 초래하는 감각 이상을 포함한 말초 감각 신경병증의 증상. 일부 구현예에서, 중증 신경독성은 표 4에 제시된 바와 같이 3등급 이상의 신경독성을 포함한다.
표 4: 신경 독성에 대한 예시적인 등급 기준
등급 증상 설명
1
무증상 또는 경증		 경증 또는 무증상 증상
2중간(Moderate) 식사 준비, 식료품이나 옷 쇼핑, 전화 사용, 금전 관리와 같은 일상 생활의 도구적 활동(ADL)을 제한하는 증상의 존재
3중증(Severe) 목욕, 옷 입기 및 옷벗기, 스스로 식사하기, 화장실 이용, 약물 복용 등 자기 관리 ADL을 제한하는 증상의 존재
4생명-위협(Life-threatening) 긴급한 개입이 필요한 생명을 위협하는 증상
5
치명적인(Fatal)		 죽음(Death)
일부 구현예에서, 상기 방법은 다른 방법에 비해 CRS 또는 신경 독성과 관련된 증상을 감소시킨다. 일부 측면에서, 제공된 방법은 다른 방법과 비교하여 중증 CRS 또는 3등급 이상의 CRS와 관련된 증상, 결과 또는 요인을 포함하여 CRS와 관련된 증상, 결과 또는 요인을 감소시킨다. 예를 들어, 본 방법에 따라 치료된 대상체는 검출가능하지 않거나 및/또는 감소된 증상, 결과 또는 CRS (예를 들어 설명된 것과 같은 중증 CRS 또는 3등급 이상의 CRS, 예를 들어, 표 3에 표시됨)의 인자를 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 본 방법에 따라 치료된 대상체는, 다른 방법으로 치료받은 대상체에 비해, 사지 약화 또는 마비, 기억, 시력 및/또는 지능의 상실, 통제할 수 없는 집착 및/또는 강박 행동, 망상, 두통, 운동 조절 상실을 포함한 인지 및 행동 문제, 인지 저하, 자율 신경계 기능 장애 및 성기능 장애와 같은 신경 독성 증상의 감소를 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 본 방법에 따라 치료된 대상체는 말초 운동 신경병증, 말초 감각 신경병증, 감각 이상, 신경통 또는 감각 이상과 관련된 증상의 감소를 가질 수 있다.일부 구현예에서, 상기 방법은 신경 세포의 죽음과 같은 신경계 및/또는 뇌의 손상을 포함하여 신경 독성과 관련된 결과를 감소시킨다. 일부 측면에서, 상기 방법은 베타 아밀로이드(Aβ), 글루타메이트 및 산소 라디칼과 같은 신경 독성과 관련된 요인의 수준을 감소시킨다.
일부 구현예에서, 독성 결과는 용량 제한 독성(DLT)이다. 일부 구현예에서, 독성 결과는 용량 제한 독성이다. 일부 구현예에서, 독성 결과는 용량 제한 독성이 없다. 일부 구현예에서, 용량 제한 독성(DLT)은 특정 독성을 평가하기 위해 알려지거나 발표된 지침(위에 설명된 임의의 것과 NCI(National Cancer Institute)의 CTCAE(Common Terminology Criteria for Adverse Events) 버전 4.0을 포함)에 의해 평가된 3등급 이상의 독성으로 정의된다.
일부 구현예에서, 낮은 비율, 위험 또는 독성 발생 가능성, 예컨대 CRS 또는 신경독성 또는 중증 CRS 또는 신경독성, 예컨대 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 T 세포의 용량을 투여하여 관찰되는 등급 3 이상의 CRS 또는 신경독성은 외래 환자 기준으로 세포 요법의 투여를 허용한다. 일부 구현예에서, 세포 요법의 투여, 예를 들어 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따른 T 세포(예를 들어, CAR+ T 세포)의 투여는, 외래 환자를 기준으로 수행되거나 하룻밤 입원이 필요한 병원 입원과 같이 대상체에 대한 병원 입원을 필요로 하지 않는다.
일부 측면에서, 세포 요법(예를 들어 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따른 T 세포(예: CAR+ T 세포)의 투여(외래환자 기준으로 치료받는 대상 포함)) 투여받은 대상체는 대상체가 신경독성 또는 CRS와 같은 독성의 징후 또는 증상을 나타내지 않는 한 또는 그 때까지 세포 용량의 투여 전 또는 투여와 함께 임의의 독성을 치료하기 위한 중재를 대상체에게 투여하지 않는다. 독성을 치료, 지연, 약화 또는 개선하기 위한 예시적인 제제가 본원에 개시된다.
일부 구현예에서, 외래 환자 기준으로 치료된 대상체를 포함하여, 대상체가 세포 요법 (예를 들어 T 세포(예: CAR+ T 세포)의 투여)을 받은 경우, 발열을 나타내는 대상체는 열을 낮추기 위한 치료를 받거나 투여하도록 제공받거나 지시 받는다. 일부 구현예에서, 대상체의 열은 특정 임계 온도 또는 수준 이상인(또는 측정된) 대상체의 체온으로 특징지어진다. 일부 측면에서, 임계 온도는 최소한 저열, 최소한 중등도 열 및/또는 최소한 고열과 관련된 온도이다. 일부 구현예에서, 임계 온도는 특정 온도 또는 범위이다. 예를 들어, 임계 온도는 약 또는 적어도 (약) 섭씨 38, 39, 40, 41, 또는 42도 및/또는 섭씨 약 38도에서 섭씨 약 39도의 범위, 섭씨 약 39도 내지 약 섭씨 40도의 범위, 섭씨 약 40도 내지 약 41도의 범위 또는 섭씨 약 41도 내지 섭씨 약 42도의 범위일 수 있다.
일부 구현예에서, 열을 내리기 위해 고안된 치료에는 해열제 치료가 포함된다. 해열제는 열을 감소시키는 임의의 제제, 예를 들어 화합물, 조성물 또는 성분, 예컨대, 해열 효과가 있는 것으로 알려진 여러 약제 중 하나, 예컨대 NSAID(예컨대, 이부프로펜, 나프록센, 케토프로펜, 니메술리드), 살리실산염, 예컨대 아스피린, 살리실산콜린, 살리실산마그네슘 및 살리실산나트륨, 파라세타몰, 아세트아미노펜, 메타미졸, 나부메톤, 페낙손, 안티피린, 페브리퓨즈를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 해열제는 아세트아미노펜이다. 일부 구현예에서, 아세트아미노펜은 최대 4시간마다 12.5mg/kg의 용량으로 경구 또는 정맥내 투여할 수 있다. 일부 구현예에서, 이부프로펜 또는 아스피린이거나 이를 포함한다.
일부 구현예에서, 열이 지속되는 열인 경우, 대상체는 본 명세서에 기술된 것과 같은 독성 치료를 위한 대체 치료법이 투여된다. 외래 환자를 기준으로 치료된 대상체의 경우, 대상체가 지속되는 열이 있고/있거나 열이 지속되는 것으로 판단되는 경우 병원으로 돌아가도록 지시받는다. 일부 구현예에서, 특정 치료, 예컨대 NSAID 또는 살리실산염(이부프로펜, 아세트아미노펜 또는 아스피린)과 같은 해열제로 치료하는 것과 같이 열을 내리기 위해 고안된 치료 이후, 해당 임계 온도 이상으로 발열이 있고 대상체의 열 또는 체온이 감소하지 않거나 일정량 이상 감소하지 않은 경우 (예컨대, 1℃ 이상, 일반적으로 약 0.5℃, 0.4℃, 0.3℃ 또는 0.2℃ 이상 변동하지 않음) 대상체는 지속적인 발열이 있고/있거나 열이 지속되는 것으로 판단되거나 간주된다. 예를들어, 아세트아미노펜과 같은 해열제로 치료한 후에도 6시간 동안, 8시간 동안, 또는 12시간 동안, 또는 24시간 동안, 약 0.5℃, 0.4℃, 0.3℃ 또는 0.2℃, 또는 약 1%, 2%, 3%, 4% 또는 5% 이상 감소되지 않거나 그 이상 감소하지 않는 적어도 약 38 또는 39°C의 열을 나타내거나 나타내는 것으로 판단되는 경우, 대상체는 지속적인 열이 있는 것으로 간주된다. 일부 구현예에서, 해열제의 투여량은 예를 들어 세균 또는 바이러스 감염, 예를 들어 국부적 또는 전신적 감염과 관련된 열과 같은 특정 유형의 열 또는 열을 감소시키는 대상체에게 일반적으로 효과적인 투여량이다.
일부 구현예에서, 대상체가 해당 임계 온도 이상으로 발열을 나타내고 피험자의 열 또는 체온이 약 1℃ 이상 변동하지 않고 일반적으로 약 0.5℃, 0.4℃, 0.3℃, 또는 0.2℃ 이상 변동하지 않는 경우, 대상체는 지속적인 발열이 있거나/있거나 그러한 것으로 판단되거나 간주된다. 특정 양 이상 또는 특정 양에서 이러한 변동의 부재는 일반적으로 주어진 기간(예: 발열의 첫 징후 또는 표시된 임계값 이상의 첫 번째 온도에서 측정할 수 있는 24시간, 12시간, 8시간, 6시간, 3시간 또는 1시간의 기간 동안)에 걸쳐 측정된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 6시간 동안, 8시간 동안, 또는 12시간 동안, 또는 24시간 동안 약 0.5℃, 0.4℃, 0.3℃ 또는 0.2 ℃ 이상의 온도 변동이 없는 섭씨 38도 또는 39도 이상의 열이 나는 경우, 대상체는 지속적인 발열을 나타내는 것으로 간주되거나 판단된다.
일부 구현예에서, 발열은 지속적인 발열이며; 일부 측면에서, T 세포(예를 들어, CAR+ T 세포)의 투여와 같은 세포 요법과 같이 독성을 유발할 가능성이 있는 초기 요법 후, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6시간 이내와 같이 지속적인 발열이 있는 것으로 대상체가 결정된 때 또는 처음으로 결정된 때에 대상체는 한 번에 치료된다.
일부 구현예에서, 독성 표적 요법과 같은 독성 치료를 위한 하나 이상의 중재 또는 작용제는, 예를 들어, 전술한 구현예 중 임의의 것에 따라 측정된 바와 같이, 대상체가 지속된 발열을 나타내는 것으로 결정되거나 확인된 (예를 들어, 처음으로 결정되거나 확인된) 시간 또는 직후에 투여된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 독성 표적 치료제는 그러한 확인 또는 결정의 특정 기간, 예를 들어 30분, 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 6시간 또는 8시간 이내에 투여된다.
Ⅱ. 재조합 수용체
일부 구현예에서, 제공된 방법과 관련하여 사용 또는 투여되는 세포는 조작된 수용체, 예를 들어 키메라 항원 수용체(CAR)와 같은 조작된 항원 수용체를 함유하거나 함유하도록 조작된다. 상기 세포의 집단, 상기 세포를 함유하는 조성물 및/또는 상기 세포에 대해 농축된, 예컨대 T 세포 또는 CD8+ 또는 CD+ 세포와 같은 특정 유형의 세포가 농축되거나 선택된 조성물이 또한 제공된다. 조성물 중에는 예컨대 입양 세포 요법을 위한 투여용 약학 조성물 및 제형이 있다. 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물과 부합되게 대상체, 예를 들어 환자에게 세포 및 조성물을 투여하기 위한 치료 방법이 또한 제공된다.
일부 구현예에서, 세포는 유전자 조작을 통해 도입된 하나 이상의 핵산을 포함하고 이로써 상기 핵산의 재조합 또는 유전자 조작된 산물을 발현한다. 일부 구현예에서, 유전자 전달은 먼저 세포를 자극하고, 예컨대 세포를 증식, 생존 및/또는 활성화와 같은 반응을 유도하는 자극과 조합하고, 예를 들어 사이토카인 또는 활성화 표지자의 발현에 의해 측정된 바와 같이, 뒤이어 핵산의 도입, 예를 들어, 자극된 세포의 형질도입 및 임상 적용에 충분한 수로 배양에서 선택적으로 인큐베이션 또는 팽창시켜 달성된다.
세포는 일반적으로 전이유전자 T 세포 수용체(TCR)와 같은 키메라 항원 수용체(CAR) 및 다른 항원 결합 수용체를 포함하는 항원 수용체와 같은 재조합 수용체를 발현한다. 또한 수용체 중에는 다른 키메라 수용체가 있다.
A. 키메라 항원 수용체(CAR)
제공된 방법 및 용도의 일부 구현예에서, 키메라 항원 수용체와 같은 키메라 수용체는 원하는 항원(예: 종양 항원)에 대한 특이성을 제공하는 항원 또는 리간드 결합 도메인(예: 항체 또는 항체 단편)을 세포내 신호전달 도메인과 결합하는 하나 이상의 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포내 신호전달 도메인은 1차 활성화 신호 또는 1차 신호를 제공하는 T 세포 자극 또는 활성화 도메인과 같은 자극 또는 활성화 세포내 도메인 부분이다. 일부 구현예에서, 세포내 신호전달 도메인은 효과기 기능을 촉진하기 위해 공동자극 신호전달 도메인을 포함하거나 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 면역 세포에 유전적으로 조작된 키메라 수용체는 T 세포 활동을 조절할 수 있으며, 어떤 경우에는 T 세포 분화 또는 항상성을 조절할 수 있어, 입양 세포 치료 방법에서와 같이 생체 내에서 수명, 생존 및/또는 지속성이 개선된 유전자 조작된 세포를 생성할 수 있다.
CAR을 포함하는 예시적 항원 수용체 및 상기 수용체를 조작하고 세포 내로 도입하는 방법은 예를 들어 문헌[WO200014257, WO2013126726, WO2012/129514, WO2014031687, WO2013/166321, WO2013/071154, WO2013/123061, 미국 특허 출원 공개 번호 US2002131960, US2013287748, US20130149337, 미국 특허 번호 6,451,995, 7,446,190, 8,252,592, 8,339,645, 8,398,282, 7,446,179, 6,410,319, 7,070,995, 7,265,209, 7,354,762, 7,446,191, 8,324,353, 및 8,479,118, 및 유럽 특허 출원 번호 EP2537416, 및/또는 those described by Sadelain 등, Cancer Discov. 2013 April; 3(4): 388-398; Davila 등 (2013) PLoS ONE 8(4): e61338; Turtle 등, Curr. Opin. Immunol., 2012 October; 24(5): 633-39; Wu 등, Cancer, 2012 March 18(2): 160-75]에 기재된 것들을 포함한다. 일부 측면에서, 항원 수용체는 문헌[미국 특허 번호 7,446,190]에 기재된 바와 같은 CAR 및 문헌[WO/2014055668]에 기재된 것을 포함한다. CAR의 예로는 전술한 간행물 중 어느 하나, 예컨대 문헌[WO2014031687, US 8,339,645, US 7,446,179, US 2013/0149337, US 7,446,190, US 8,389,282, Kochenderfer 등, (2013) Nature Reviews Clinical Oncology, 10, 267-276; Wang 등 (2012) J. Immunother. 35(9): 689-701; 및 Brentjens 등, Sci Transl Med. 2013 5(177)]에 개시된 바와 같은 CAR이 포함된다. 또한 문헌[WO2014031687, US 8,339,645, US 7,446,179, US 2013/0149337, US 7,446,190, 및 US 8,389,282]을 참조한다.
CAR과 같은 재조합 수용체는 일반적으로 항체 분자의 부분과 같은 세포외 항원 결합 도메인, 일반적으로 항체의 가변 중쇄(VH) 영역 및/또는 가변 경쇄(VL) 영역, 예를 들어, scFv 항체 단편을 포함한다.
일부 구현예에서, 수용체에 의해 표적화되는 항원은 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, 이는 탄수화물 또는 다른 분자이다. 일부 구현예에서, 항원은 정상 또는 비-표적화 세포 또는 조직과 비교하여 질병 또는 병태의 세포 상에서, 예를 들어 종양 또는 병원성 세포 상에서 선택적으로 발현되거나 과발현된다. 다른 구현예에서, 항원은 정상 세포 상에서 발현되고/거나 조작된 세포 상에서 발현된다.
일부 구현예에서, 수용체에 의해 표적화된 항원은 B 세포 악성종양과 관련된 항원, 예를 들어 다수의 공지된 B 세포 표지자 중 임의의 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 수용체에 의해 표적화되는 항원은 CD20, CD19, CD22, ROR1, CD45, CD21, CD5, CD33, Ig카파, Ig람다, CD79a, CD79b 또는 CD30이다.
일부 구현예에서, 키메라 항원 수용체는 항체 또는 항체 단편을 함유하는 세포외 부분을 포함한다. 일부 측면에서, 키메라 항원 수용체는 항체 또는 단편을 함유하는 세포외 부분 및 세포내 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 단편은 scFv를 포함한다.
일부 구현예에서, 항원 결합 도메인이 표적으로 하는 항원은 CD19이다. 일부 측면에서, 재조합 수용체, 예를 들어 CAR의 항원 결합 도메인, 및 항원 결합 도메인은 인간 CD19와 같은 CD19에 결합, 예를 들어 특이적으로 결합하거나 특이적으로 인식한다. 일부 구현예에서, scFv는 CD19에 특이적인 항체 또는 항체 단편으로부터 유래된 VH 및 VL을 함유한다. 일부 구현예에서, CD19에 결합하는 항체 또는 항체 단편은 FMC63 및 SJ25C1과 같은 마우스 유래 항체이다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항체 단편은 예를 들어, 문헌[미국 특허 공개 번호 US 2016/0152723]에 기재된 바와 같은 인간 항체이다.
본 명세서에서 용어 “항체(antibody)”는 가장 넓은 의미로 사용되며, 온전한 항체 및 기능성(항원-결합) 항체 단편을 포함하는 다클론 및 단클론 항체를 포함하며, 항원에 특이적으로 결합할 수 있는 단편 항원 결합(Fab) 단편, F(ab’)2 단편, Fab’ 단편, Fv 단편, 재조합 IgG(rIgG) 단편, 가변 중쇄(VH) 영역, 단일 사슬 가변 단편(scFv)을 포함한 단일 사슬 항체 단편 및 단일 도메인 항체(예를 들어, sdAb, sdFv, 나노바디(nanobody)) 단편을 포함한다. 상기 용어는 유전자 조작된 및/또는 달리 변형된 형태의 면역글로불린, 예컨대 인트라바디(intrabodies), 펩티바디(peptibodies), 키메라 항체, 완전한 인간 항체, 인간화된 항체 및 이종 접합 항체, 다중 특이적(예를 들어, 이중 특이적 또는 삼중 특이적) 항체, 디아바디(diabodies), 트리아바디(triabodies) 및 테트라바디(tetrabodies), 탠덤 디-scFv, 탠덤 트리-scFv를 포괄한다. 달리 언급되지 않는 한, 용어 “항체”는 본 명세서에서 “항원 결합 단편(antigen-binding fragment)”으로도 지칭되는 이의 기능성 항체 단편을 포괄하는 것으로 이해되어야 한다. 상기 용어는 또한 IgG 및 이의 하위 클래스, IgM, IgE, IgA 및 IgD를 포함하는 임의의 클래스 또는 하위 클래스의 항체를 포함하는 온전한 또는 전장 항체를 포괄한다.
용어 “초가변 영역(hypervariable region)” 또는 “HVR”과 동의어인 “상보성 결정 영역(complementarity determining region)” 및 “CDR”은 항원 특이성 및/또는 결합 친화도를 부여하는 항체 가변 영역 내의 비인접 아미노산 서열을 지칭하는 것으로 공지되어 있다. 일반적으로, 각각의 중쇄 가변 영역에는 3개의 CDR(CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3)이 있고 각각의 경쇄 가변 영역에는 3개의 CDR(CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3)이 있다. “프레임워크 영역(framework region)” 및 “FR”은 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 비-CDR 부분을 지칭하는 것으로 공지되어 있다. 일반적으로, 각각의 전장 중쇄 가변 영역에는 4개의 FR(FR-H1, FR-H2, FR-H3 및 FR-H4)이 있고, 각각의 전장 경쇄 가변 영역에는 4개의 FR(FR-L1, FR-L2, FR-L3 및 FR-L4)이 있다.
주어진 CDR 또는 FR의 정확한 아미노산 서열 경계는 문헌[Kabat 등 (1991), “Sequences of Proteins of Immunological Interest,” 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (“Kabat” 넘버링 체계); Al-Lazikani 등, (1997) JMB 273,927-948 (“Chothia” 넘버링 체계); MacCallum 등, J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996), “Antibody-antigen interactions: Contact analysis and binding site topography,” J. Mol. Biol. 262, 732-745.” (“Contact” 넘버링 체계); Lefranc MP 등, “IMGT unique numbering for immunoglobulin and T cell receptor variable domains and Ig superfamily V-like domains,” Dev Comp Immunol, 2003 Jan;27(1):55-77 (“IMGT” 넘버링 체계); Honegger A and Pl
Figure pct00001
ckthun A, “Yet another numbering scheme for immunoglobulin variable domains: an automatic modeling and analysis tool,” J Mol Biol, 2001 Jun 8;309(3):657-70, (“Aho” 넘버링 체계); 및 Martin 등, “Modeling antibody hypervariable loops: a combined algorithm,” PNAS, 1989, 86(23):9268-9272, (“AbM” 넘버링 체계)]에 기재된 것을 포함한 다수의 잘 알려진 체계 중 어느 하나를 사용하여 용이하게 결정될 수 있다.
주어진 CDR 또는 FR의 경계는 식별에 사용된 체계에 따라 달라질 수 있다. 예를 들어, Kabat 체계는 구조적 정렬을 기반으로 하는 반면 Chothia 체계는 구조 정보를 기반으로 한다. Kabat 및 Chothia 체계 모두에 대한 넘버링은 삽입 문자, 예를 들어 “30a”에 의해 수용되는 삽입(insertion) 및 일부 항체에서 나타나는 결실(deletion)이 있는 가장 일반적인 항체 영역 서열 길이에 기반한다. 이 두 체계는 상이한 위치에 특정 삽입 및 결실(“삽입-결실(indel)”)을 배치하여 차이가 있는 넘버링이 된다. Contact 체계는 복잡한 결정 구조의 분석에 기반하며 여러 측면에서 Chothia 넘버링 체계와 유사하다. AbM 체계는 Oxford Molecular’s AbM 항체 모델링 소프트웨어에서 사용된 것에 기반한 Kabat와 Chothia 정의 사이의 절충안이다.
하기 표 5은 Kabat, Chothia, AbM 및 Contact 체계에 의해 각각 확인된 바와 같은 CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3 및 CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3의 예시적인 위치 경계를 열거한다. CDR-H1의 경우, Kabat 및 Chothia 넘버링 체계 둘 다를 사용하여 잔기 넘버링이 나열된다. FR들은 예를 들어 CDR-L1 앞에 위치한 FR-L1, CDR-L1과 CDR-L2 사이에 위치한 FR-L2, CDR-L2와 CDR-L3 사이에 위치한 FR-L3과 같은 식으로 CDR들 사이에 위치한다. 도시된 Kabat 넘버링 체계는 H35A 및 H35B에 삽입을 배치하기 때문에, 도시된 Kabat 넘버링 관례를 사용하여 넘버링될 때 Chothia CDR-H1 루프의 끝은 루프의 길이에 따라 H32와 H34 사이에서 변한다.
다양한 넘버링 체계에 따른 CDR의 경계
CDR Kabat Chothia AbM Contact
CDR-L1 L24--L34 L24--L34 L24--L34 L30--L36
CDR-L2 L50--L56 L50--L56 L50--L56 L46--L55
CDR-L3 L89--L97 L89--L97 L89--L97 L89--L96
CDR-H1
(Kabat 넘버링1) 		H31--H35B H26--H32.34 H26--H35B H30--H35B
CDR-H1
(Chothia 넘버링2)		 H31--H35 H26--H32 H26--H35 H30--H35
CDR-H2 H50--H65 H52--H56 H50--H58 H47--H58
CDR-H3 H95--H102 H95--H102 H95--H102 H93--H101
1 - Kabat 등 (1991), “Sequences of Proteins of Immunological Interest,” 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD2 - Al-Lazikani 등, (1997) JMB 273,927-948따라서, 달리 명시되지 않는 한, 주어진 항체 또는 이의 영역, 예컨대 이의 가변 영역의 “CDR” 또는 “상보적 결정 영역(complementary determining region)” 또는 개별 지정 CDR(예를 들어, CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3)은 전술한 체계 중 어느 하나 또는 다른 공지된 체계에 의해 정의된 바와 같은 (또는 특정) 상보성 결정 영역을 포괄하는 것으로 이해되어야 한다. 예를 들어, 특정 CDR(예를 들어, CDR-H3)이 주어진 VH 또는 VL 영역 아미노산 서열에 있는 해당 CDR의 아미노산 서열을 함유한다고 언급될 경우, 상기 CDR은 전술한 체계 중 어느 하나 또는 다른 공지된 체계에 의해 정의된 바와 같은 가변 영역 내의 해당 CDR(예를 들어, CDR-H3)의 서열을 갖는다고 이해된다. 일부 구현예에서, 특정 CDR 서열이 명시된다. 제공된 항체의 예시적인 CDR 서열은 다양한 넘버링 체계를 사용하여 기재되지만, 제공된 항체는 전술한 다른 넘버링 체계 중 어느 하나 또는 당업자에게 공지된 다른 넘버링 체계에 따라 기재된 바와 같은 CDR을 포함할 수 있는 것으로 이해된다.
마찬가지로, 달리 명시되지 않는 한, 주어진 항체 또는 이의 영역, 예컨대 이의 가변 영역의 FR 또는 개별 지정 FR(들)(예를 들어, FR-H1, FR-H2, FR-H3, FR-H4)은 공지된 체계 중 어느 하나에 의해 정의된 바와 같은 (또는 특정) 프레임워크 영역을 포괄하는 것으로 이해되어야 한다. 일부 경우에, CDR과 같은 특정 CDR, FR 또는 FR들 또는 CDR들의 식별을 위한 체계는 Kabat, Chothia, AbM 또는 Contact 방법 또는 다른 공지된 체계에 의해 정의된 바와 같이 명시된다. 다른 경우에, CDR 또는 FR의 특정 아미노산 서열이 제공된다.
용어 “가변 영역(variable region)” 또는 “가변 도메인(variable domain)”은 항체가 항원에 결합하는 데 관여하는 항체의 중쇄 또는 경쇄의 도메인을 지칭한다. 천연 항체의 중쇄 및 경쇄(각각 VH 및 VL) 가변 영역은 일반적으로 유사한 구조를 가지며, 각각의 도메인은 4개의 보존된 프레임워크 영역(framework region, FR) 및 3개의 CDR을 포함한다. (예를 들어, 문헌[Kindt 등 Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., page 91 (2007)]을 참조한다). 단일 VH 또는 VL 도메인은 항원 결합 특이성을 부여하기에 충분할 수 있다. 또한, 특정 항원에 결합하는 항체는 상보적 VL 또는 VH 도메인 라이브러리를 각각 선별하기 위해 항원에 결합하는 항체로부터의 VH 또는 VL 도메인을 사용하여 단리될 수 있다. 예를 들어, 문헌[Portolano 등, J. Immunol. 150:880-887 (1993); Clarkson 등, Nature 352:624-628 (1991)]을 참조한다.
제공된 CAR에 포함된 항체 중에는 항체 단편이 있다. “항체 단편(antibody fragment)” 또는 “항원 결합 단편(antigen-binding fragment)”은 온전한 항체가 결합하는 항원에 결합하는 온전한 항체의 일부를 포함하는 온전한 항체 이외의 분자를 지칭한다. 항체 단편의 예는 Fv, Fab, Fab’, Fab’-SH, F(ab’)2; 디아바디; 선형 항체; 중쇄 가변(VH) 영역, scFv와 같은 단일 사슬 항체 분자 및 VH 영역만을 포함하는 단일 도메인 항체; 및 항체 단편들로 형성된 다중 특이적 항체를 포함하나 이에 한정되지 않는다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR에 있는 항원 결합 도메인은 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL) 영역을 포함하는 항체 단편이거나 이를 포함한다. 특정 구현예에서, 항체는 scFv와 같은 중쇄 가변(VH) 영역 및/또는 경쇄 가변(VL) 영역을 포함하는 단일 사슬 항체 단편이다.
일부 구현예에서, 항원은 CD19이다. 일부 구현예에서, scFv는 CD19에 특이적인 항체 또는 항체 단편으로부터 유래된 VH 및 VL을 함유한다. 일부 구현예에서, CD19에 결합하는 항체 또는 항체 단편은 FMC63 및 SJ25C1과 같은 마우스 유래 항체이다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항체 단편은 예를 들어, 문헌[미국 특허 공개 번호 US 2016/0152723]에 기재된 바와 같은 인간 항체이다.
일부 구현예에서, scFv는 FMC63로부터 유래한다. FMC63은 일반적으로 인간 기원의 CD19를 발현하는 Nalm-1 및 -16 세포에 대하여 발생된 마우스 단클론성 IgG1 항체를 지칭한다(Ling, N. R., 등 (1987). Leucocyte typing III. 302). 일부 구현예에서, FMC63 항체는 서열 번호: 38 및 39에 각각 제시된 CDR-H1 및 CDR-H2 및 서열 번호: 40 또는 54에 제시된 CDR-H3 및 서열 번호: 35에 제시된 CDR-L1 및 서열 번호: 36 또는 55에 제시된 CDR-L2 및 서열 번호: 37 또는 34에 제시된 CDR-L3을 포함한다. 일부 구현예에서, FMC63 항체는 서열 번호: 41의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열 번호: 42의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 35의 CDR-L1 서열, 서열 번호: 36의 CDR-L2 서열, 서열 번호: 37의 CDR-L3 서열을 함유하는 가변 경쇄 및/또는 서열 번호: 38의 CDR-H1 서열, 서열 번호: 39의 CDR-H2 서열, 및 서열 번호: 40의 CDR-H3 서열을 함유하는 가변 중쇄를 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 41에 제시된 가변 중쇄 영역 및 서열 번호: 42에 제시된 가변 경쇄 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 가변 중쇄 및 가변 경쇄는 링커에 의해 연결된다. 일부 구현예에서, 링커는 서열 번호: 56에 제시된다. 일부 구현예에서, scFv는 VH, 링커 및 VL을 순서대로 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 VL, 링커 및 VH를 순서대로 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 57에 제시된 뉴클레오타이드 서열 또는 서열 번호: 57에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 나타내는 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 43에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 43에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 나타내는 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 SJ25C1로부터 유래한다. SJ25C1은 인간 기원의 CD19를 발현하는 Nalm-1 및 -16 세포에 대하여 발생된 마우스 단클론성 IgG1 항체이다(Ling, N. R., 등 (1987). Leucocyte typing III. 302). 일부 구현예에서, SJ25C1 항체는 서열 번호: 47-49에 각각 제시된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 서열 및 서열 번호: 44-46에 각각 제시된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, SJ25C1 항체는 서열 번호: 50의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열 번호: 51의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 44의 CDR-L1 서열, 서열 번호: 45의 CDR-L2 서열, 서열 번호: 46의 CDR-L3 서열을 함유하는 가변 경쇄 및/또는 서열 번호: 47의 CDR-H1 서열, 서열 번호: 48의 CDR-H2 서열, 및 서열 번호: 49의 CDR-H3 서열을 함유하는 가변 중쇄를 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 50에 제시된 가변 중쇄 영역 및 서열 번호: 51에 제시된 가변 경쇄 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 가변 중쇄 및 가변 경쇄는 링커에 의해 연결된다. 일부 구현예에서, 링커는 서열 번호: 52에 제시된다. 일부 구현예에서, scFv는 VH, 링커 및 VL을 순서대로 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 VL, 링커 및 VH를 순서대로 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 53에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 53에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 나타내는 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 재조합 수용체, 예를 들어 CAR의 항체 부분은 힌지 영역, 예를 들어, IgG4 힌지 영역, 및/또는 CH1/CL 및/또는 Fc 영역과 같은 면역글로불린 불변 영역의 적어도 일부를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 불변 영역 또는 부분은 IgG4 또는 IgG1과 같은 인간 IgG의 것이다. 일부 측면에서, 불변 영역의 부분은 항원-인식 성분, 예를 들어, scFv와 막관통 도메인 사이에서 스페이서 영역으로 기능한다. 스페이서는 스페이서의 부재와 비교하여 항원 결합 후에 세포의 반응성 증가를 제공하는 길이일 수 있다. 예시적인 스페이서는 문헌[Hudecek 등 (2013) Clin. Cancer Res., 19:3153, WO2014031687, 미국 특허 번호 8,822,647 또는 출원 공개 번호 US 2014/0271635]에 기재된 것을 포함하나 이에 한정되지는 않는다.
일부 구현예에서, 불변 영역 또는 부분은 IgG4 또는 IgG1과 같은 인간 IgG의 것이다. 일부 구현예에서, 스페이서는 (서열 번호 1에 제시된) 서열 ESKYGPPCPPCP를 가지며, 서열 번호 2에 제시된 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열 번호: 3에 제시된 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열 번호: 4에 제시된 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 불변 영역 또는 부분은 IgD의 것이다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열 번호: 5에 제시된 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열 번호: 1, 3, 4 또는 5 중 어느 하나에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열 번호: 26-34에 제시된 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열 번호: 26-34 중 어느 하나에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 항원 수용체는 세포외 도메인에 직접 또는 간접적으로 연결된 세포내 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 키메라 항원 수용체는 세포외 도메인과 세포내 신호 전달 도메인을 연결하는 막관통 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포내 신호전달 도메인은 ITAM을 포함한다. 예를 들어, 일부 측면에서 항원 인식 도메인(예: 세포외 도메인)은 일반적으로 CAR의 경우에 TCR 복합체와 같은 항원 수용체 복합체를 통한 활성화 및/또는 다른 세포 표면 수용체를 통한 신호를 모방하는 신호 전달 성분과 같은 하나 이상의 세포내 신호 전달 성분에 연결된다. 일부 구현예에서, 키메라 수용체는 세포외 도메인(예: scFv)과 세포내 신호전달 도메인 사이에 연결되거나 융합된 막횡단 도메인을 포함한다. 따라서, 일부 구현예에서, 항원 결합 성분(예를 들어, 항체)은 하나 이상의 막관통 도메인 및 세포내 신호 전달 도메인에 연결된다.
일 구현예에서, 수용체, 예를 들어 CAR에 있는 도메인 중 하나와 자연적으로 회합하는 막관통 도메인이 사용된다. 일부 경우에, 막관통 도메인은 동일하거나 상이한 표면 막 단백질의 막관통 도메인에 대한 상기 도메인의 결합을 피하도록 아미노산 치환에 의해 변형되거나 선택되어 수용체 복합체의 다른 멤버와의 상호 작용이 최소화된다.
일부 구현예에서, 막관통 도메인은 천연 또는 합성 공급원으로부터 유래된다. 공급원이 천연인 경우, 일부 측면에서, 도메인은 임의의 막-결합 또는 막관통 단백질로부터 유래된다. 막 관통 영역은 T 세포 수용체의 알파, 베타 또는 제타 사슬, CD28, CD3 엡실론, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, CD154로부터 유래된 것을 포함한다(즉 적어도 이들의 막관통 영역(들)을 포함한다). 대안적으로 일부 구현예에서 막관통 도메인은 합성이다. 일부 측면에서, 합성 막관통 도메인은 주로 류신 및 발린과 같은 소수성 잔기를 포함한다. 일부 측면에서, 페닐알라닌, 트립토판 및 발린의 트리플릿(triplet)이 합성 막관통 도메인의 각 말단에서 발견될 것이다. 일부 구현예에서, 연결은 링커, 스페이서 및/또는 막관통 도메인(들)에 의한 것이다. 일부 측면에서, 막관통 도메인은 CD28의 막관통 부분을 함유한다.
일부 구현예에서, 세포외 도메인과 막관통 도메인은 직접 또는 간접적으로 연결될 수 있다. 일부 구현예에서, 세포외 도메인과 막관통은 본원에 기술된 임의 것과 같은 스페이서에 의해 연결된다. 일부 구현예에서, 수용체는 막관통 도메인이 유래된 분자의 세포외 부분, 예컨대 CD28 세포외 부분을 함유한다.
세포내 신호 전달 도메인 중에는 천연 항원 수용체를 통한 신호, 공자극 수용체와 조합으로 상기 수용체를 통한 신호 및/또는 공자극 수용체 단독을 통한 신호를 모방하거나 이와 유사한 것이 있다. 일부 구현예에서, 짧은 올리고- 또는 폴리펩타이드 링커, 예를 들어 글리신 및 세린, 예를 들어 글리신-세린 더블릿(doublet)을 함유하는 것과 같은 2 내지 10개 아미노산 길이의 링커가 CAR의 막관통 도메인과 세포질 신호 전달 도메인 사이에 존재하고 연결을 형성한다.
일부 측면에서, T 세포 활성화는 두 종류의 세포질 신호 전달 서열, 즉 TCR을 통한 항원-의존적 1차 활성화를 개시하는 서열(1차 세포질 신호 전달 서열) 및 항원-비의존적 방식으로 작용하여 2차 또는 공자극 신호를 제공하는 서열(2차 세포질 신호 전달 서열)에 의해 매개되는 것으로 설명된다. 일부 측면에서, CAR은 상기 신호 전달 성분 중 하나 또는 둘 모두를 포함한다.
수용체, 예를 들어 CAR은 일반적으로 하나 이상의 세포내 신호 전달 성분 또는 성분들을 포함한다. 일부 측면에서, CAR은 TCR 복합체의 1차 활성화를 조절하는 1차 세포질 신호 전달 서열을 포함한다. 자극 방식으로 작용하는 1차 세포질 신호 전달 서열은 면역수용체 티로신-기반 활성화 모티프 또는 ITAM으로 공지된 신호 전달 모티프를 함유할 수 있다. 1차 세포질 신호 전달 서열을 함유하는 ITAM의 예에는 CD3 제타 사슬, FcR 감마, CD3 감마, CD3 델타 및 CD3 엡실론으로부터 유래된 것이 포함된다. 일부 구현예에서, CAR의 세포질 신호 전달 분자(들)은 CD3 제타로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인, 이의 부분, 또는 서열을 함유한다.
일부 구현예에서, 수용체는 T-세포 활성화 및 세포 독성을 매개하는 TCR CD3 사슬, 예를 들어 CD3 제타 사슬과 같은 TCR 복합체의 세포내 성분을 포함한다. 따라서, 일부 측면에서, 항원 결합 부분은 하나 이상의 세포 신호 전달 모듈에 연결된다. 일부 구현예에서, 세포 신호 전달 모듈은 CD3 막관통 도메인, CD3 세포내 신호 전달 도메인 및/또는 기타 CD 막관통 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 수용체, 예를 들어 CAR은 또한 Fc 수용체 γ, CD8, CD4, CD25 또는 CD16과 같은 하나 이상의 추가 분자의 일부를 포함한다. 예를 들어, 일부 측면에서, CAR 또는 다른 키메라 수용체는 CD3-제타(CD3-ζ) 또는 Fc 수용체 γ와 CD8, CD4, CD25 또는 CD16 사이에 키메라 분자를 포함한다.
일부 구현예에서, CAR 또는 다른 키메라 수용체의 결찰시, 수용체의 세포질 도메인 또는 세포내 신호 전달 도메인은 면역 세포, 예를 들어 CAR을 발현하도록 조작된 T 세포의 정상 효과기 기능 또는 반응 중 적어도 하나를 활성화시킨다. 예를 들어, 일부 맥락에서, CAR은 T 세포의 기능, 예컨대 세포 용해 활성 또는 T-헬퍼 활성, 예컨대 사이토카인 또는 기타 인자의 분비를 유도한다. 일부 구현예에서, 항원 수용체 성분 또는 공자극 분자의 세포내 신호 전달 도메인의 절단 부분은 예를 들어 그것이 효과기 기능 신호를 전달하는 경우 온전한 면역 자극 사슬 대신에 사용된다. 일부 구현예에서, 세포내 신호 전달 도메인 또는 도메인들은 T 세포 수용체(TCR)의 세포질 서열 및 일부 측면에서는 또한 자연적 맥락에서 항원 수용체 결합 후에 신호 전달을 개시하기 위해 상기 수용체와 협력하여 작용하는 공-수용체의 세포질 서열을 포함한다.
천연 TCR의 맥락에서, 완전한 활성화는 일반적으로 TCR을 통한 신호 전달뿐만 아니라 공자극 신호가 필요하다. 따라서, 일부 구현예에서, 완전한 활성화를 촉진하기 위해, 2차 또는 공자극 신호를 생성하기 위한 성분이 CAR에 또한 포함된다. 다른 구현예에서, CAR은 공자극 신호를 생성하기 위한 성분을 포함하지 않는다. 일부 측면에서, 추가의 CAR이 동일한 세포에서 발현되고 2차 또는 공자극 신호를 생성하기 위한 성분을 제공한다.
일부 구현예에서, 키메라 항원 수용체는 T 세포 공자극 분자의 세포내 도메인을 함유한다. 일부 구현예에서, CAR은 CD28, 4-1BB, OX40, DAP10 및 ICOS와 같은 공자극 수용체의 신호 전달 도메인 및/또는 막관통 부분을 포함한다. 일부 측면에서, 동일한 CAR은 활성화 및 공자극 성분 둘 다를 포함한다. 일부 구현예에서, 키메라 항원 수용체는 T 세포 공자극 분자로부터 유래한 세포내 도메인 또는 이의 기능적 변이체를, 예컨대 막관통 도메인과 세포내 신호 전달 도메인 사이에 함유한다. 일부 측면에서, T 세포 공자극 분자는 CD28 또는 41BB이다.
일부 구현예에서, 활성화 도메인은 하나의 CAR 내에 포함되는 반면, 공자극 성분은 다른 항원을 인식하는 다른 CAR에 의해 제공된다. 일부 구현예에서, CAR은 활성화 또는 자극성 CAR, 공자극 CAR을 포함하며, 둘 다 동일한 세포 상에서 발현된다(WO2014/055668 참조한다.). 일부 측면에서, 세포는 하나 이상의 자극성 또는 활성화 CAR 및/또는 공자극 CAR을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포는 억제성 CAR(iCAR, Fedorov 등 Sci. Transl. Medicine, 5(215) (December, 2013) 참조한다.), 예컨대 질병 또는 병태에 특이적이고/거나 이와 관련된 것 외의 항원을 인식하고, 이로써 질병 표적화 CAR을 통해 전달된 활성화 신호가 예를 들어 표적외 효과를 감소시키도록 이의 리간드에 대한 억제성 CAR의 결합에 의해 감소 또는 억제되는, CAR을 추가로 포함한다.
특정 구현예에서, 세포내 신호 전달 도메인은 CD3(예를 들어, CD3-제타) 세포내 도메인에 연결된 CD28 막관통 및 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포내 신호 전달 도메인은 CD3 제타 세포내 도메인에 연결된 키메라 CD28 및 CD137(4-1BB, TNFRSF9) 공자극 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, CAR은 세포질 부분에서 하나 이상의, 예를 들어 2개 이상의 공자극 도메인 및 활성화 도메인, 예를 들어 1차 활성화 도메인을 포함한다. 예시적인 CAR에는 CD3-제타, CD28 및 4-1BB의 세포내 성분이 포함된다.
일부 구현예에서, 항원 수용체는 표지자 및/또는 CAR을 발현하는 세포를 추가로 포함하거나 다른 항원 수용체는 수용체를 발현하기 위한 세포의 형질도입 또는 조작을 확인하는 데 사용될 수 있는 대리 표지자, 예컨대 세포 표면 표지자를 추가로 포함한다. 일부 측면에서, 표지자는 CD34, NGFR, 또는 이러한 세포 표면 수용체(예를 들어, tEGFR)의 절단된 버전과 같은 표피 성장 인자 수용체의 전부 또는 일부(예를 들어, 절단된 형태)를 포함한다. 일부 구현예에서, 표지자를 암호화하는 핵산은 절단 가능한 링커 서열(예를 들어, T2A)과 같은 링커 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드에 작동 가능하게 연결된다. 예를 들어, 표지자 및 임의적으로 링커 서열은 문헌[특허 출원 번호 WO2014031687]에 개시된 바와 같은 어느 하나일 수 있다. 예를 들어, 표지자는 선택적으로 링커 서열, 예컨대 T2A 절단 가능한 링커 서열에 연결된 절단형 EGFR(tEGFR)일 수 있다.
절단된 EGFR(예를 들어, tEGFR)에 대한 예시적인 폴리펩타이드는 서열 번호: 7 또는 16에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 7 또는 16에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함한다. 예시적인 T2A 링커 서열은 서열 번호 6 또는 17에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호 6 또는 17에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 표지자는 T 세포에서 자연적으로 발견되지 않거나 또는 T 세포 표면에서 자연적으로 발견되지 않는 분자(예를 들어, 세포 표면 단백질) 또는 이의 부분이다. 일부 구현예에서, 분자는 비자기 분자, 예를 들어 비자기 단백질, 즉 세포가 입양으로 전달될 숙주의 면역 시스템에 의해 “자기(self)”로 인식되지 않는 분자이다.
일부 구현예에서, 표지자는 치료 기능을 제공하지 않고/거나 유전자 조작, 예를 들어 성공적으로 조작된 세포를 선택하기 위한 표지자로서 사용되는 것 외에 다른 효과를 생성하지 않는다. 기타 구현예에서, 표지자는 치료적 분자 또는 달리 일부 원하는 효과를 나타내는 분자, 예컨대 생체 내에서 세포가 조우하게 될 리간드, 예컨대 입양 전달 및 리간드와의 조우 시 세포의 반응을 강화하고/거나 약화시키는 공자극 또는 면역 관문 분자일 수 있다.
일부 경우에, CAR은 제1, 제2 및/또는 제3 세대 CAR로 지칭된다. 일부 측면에서, 제1 세대 CAR은 항원 결합 시 CD3 사슬 유도 신호만을 제공하는 것이고; 일부 측면에서, 제2 세대 CAR은 상기 신호 및 CD28 또는 CD137과 같은 공자극 수용체로부터의 세포내 신호 전달 도메인을 포함하는 것과 같은 공자극 신호를 제공하는 것이고; 일부 측면에서, 제3 세대 CAR은 상이한 공자극 수용체의 다중 공자극 도메인을 포함하는 것이다.
예를 들어, 일부 구현예에서, CAR은 항체(예를 들어, 항체 단편), CD28의 막관통 부분 또는 이의 기능적 변이체이거나 이를 함유하는 막관통 도메인, 및 CD28의 신호 전달 부분 또는 이의 기능적 변이체와 CD3 제타의 신호 전달 부분 또는 이의 기능적 변이체를 함유하는 세포내 신호 전달 도메인을 함유한다. 일부 구현예에서, CAR은 항체(예를 들어, 항체 단편), CD28의 막관통 부분 또는 이의 기능적 변이체이거나 이를 함유하는 막관통 도메인, 및 4-1BB의 신호 전달 부분 또는 이의 기능적 변이체와 CD3 제타의 신호 전달 부분 또는 이의 기능적 변이체를 함유하는 세포내 신호 전달 도메인을 함유한다. 일부 상기 구현예에서, 수용체는 Ig 분자, 예컨대 인간 Ig 분자의 일부, 예컨대 Ig 힌지, 예를 들어 IgG4 힌지, 예컨대 힌지 전용 스페이서를 함유하는 스페이서를 더 포함한다.
일부 구현예에서, 재조합 수용체(예를 들어, CAR)의 막관통 도메인은 인간 CD28(예를 들어 수탁 번호 P01747.1) 또는 이의 변이체의 막관통 도메인, 예컨대 서열 번호: 8 에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 8 에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 막관통 도메인이거나 이를 포함하고; 일부 구현예에서, 재조합 수용체의 일부를 함유하는 막관통 도메인은 서열 번호: 9에 제시된 아미노산 서열 또는 이에 대해 적어도 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 재조합 수용체(예를 들어, CAR)의 세포내 신호 전달 성분(들)은 인간 CD28의 세포내 공자극 신호 전달 도메인 또는 이의 기능적 변이체 또는 부분, 예컨대 천연 CD28 단백질의 위치 186-187에 LL의 GG로의 치환이 있는 도메인을 함유한다. 예를 들어, 세포내 신호 전달 도메인은 서열 번호: 10 또는 11에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 10 또는 11에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 세포내 도메인은 4-1BB(예를 들어, 수탁 번호: Q07011.1)의 세포내 공자극 신호 전달 도메인 또는 이의 기능성 변이체 또는 부분, 예컨대 서열 번호 12에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호 12에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 재조합 수용체(예를 들어, CAR)의 세포내 신호 전달 도메인은 인간 CD3 제타 자극성 신호 전달 도메인 또는 이의 기능적 변이체, 예컨대 인간 CD3ζ(수탁 번호: : P20963.2)의 동형 단백질 3의 112 AA 세포질 도메인 또는 문헌[미국 특허 번호 : 7,446,190 또는 미국 특허 번호 8,911,993]에 기재된 바와 같은 CD3 제타 신호 전달 도메인을 포함한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 세포내 신호 전달 도메인은 서열 번호: 13, 14 또는 15에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 13, 14 또는 15에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 측면에서, 스페이서는 IgG의 힌지 영역 단독, 예컨대 IgG4 또는 IgG1의 힌지 단독, 예컨대 서열 번호 1에 제시된 힌지 단독 스페이서를 함유한다. 다른 구현예에서, 스페이서는 CH2 및/또는 CH3 도메인에 선택적으로 연결된 Ig 힌지(예를 들어, IgG4-유래 힌지)이다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열 번호: 4에 제시된 바와 같이 CH2 및 CH3 도메인에 연결된, Ig 힌지, 예를 들어 IgG4 힌지이다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열 번호: 3에 제시된 바와 같이 CH3 도메인에만 연결된 Ig 힌지(예를 들어, IgG4 힌지)이다. 일부 구현예에서, 스페이서는 글리신-세린 풍부 서열 또는 공지된 가요성 링커(flexible linker)와 같은 다른 가요성 링커이거나 이를 포함한다.
예를 들어, 일부 구현예에서, CAR은 scFv를 포함한 항체 단편과 같은 항체, 스페이서, 예컨대 면역글로불린 분자의 부분, 예컨대 힌지 영역을 및/또는 하나 이상의 중쇄 분자의 불변 영역을 함유한 스페이서, 예컨대 Ig-힌지 함유 스페이서, CD28-유래 막관통 도메인의 전부 또는 일부를 함유한 막관통 도메인, CD28-유래 세포내 신호 전달 도메인, 및 CD3 제타 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, CAR은 scFv와 같은 항체 또는 단편, 임의의 Ig-힌지 함유 스페이서와 같은 스페이서, CD28-유래 막관통 도메인, 4-1BB-유래 세포내 신호 전달 도메인, 및 CD3 제타-유래 신호 전달 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 CAR 작제물을 암호화하는 핵산 분자는 T2A 라이보솜 스킵 요소 및/또는 tEGFR 서열, 예를 들어, CAR을 암호화하는 서열의 하류를 더 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 서열은 서열 번호 6 또는 17에 제시된 T2A 리보솜 스킵 요소, 또는 서열 번호 6 또는 17에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 암호화한다. 일부 구현예에서, 항원 수용체(예를 들어, CAR)를 발현하는 T 세포는 또한 (예를 들어, 동일한 작제물로부터 두 개의 단백질을 발현하도록 T2A 리보솜 스위치에 의해 분리된 CAR 및 EGFRt을 암호화하는 작제물의 도입에 의해) 비-면역원성 선택 에피토프로서 절단형 EGFR(EGFRt)을 발현하도록 생성될 수 있고, 그런 후 이는 상기 세포를 검출하는 표지자로 사용될 수 있다(예를 들어, 문헌[미국 특허 번호 8,802,374] 참조한다.). 일부 구현예에서, 상기 서열은 서열 번호 7 또는 16에 제시된 tEGFR 서열, 또는 서열 번호 7 또는 16에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 암호화한다. 일부 경우에, T2A와 같은 펩타이드는 리보솜이 2A 요소의 C-말단에서 펩타이드 결합의 합성을 건너뛰도록(리보솜 스키핑) 유발할 수 있으며, 이는 2A 서열의 말단과 다음(next) 펩타이드 하류 사이의 분리로 이어진다(예를 들어, 문헌[de Felipe. Genetic Vaccines and Ther. 2:13 (2004) and deFelipe 등 Traffic 5:616-626 (2004)] 참조한다.). 많은 2A 요소가 공지되어 있다. 본원에 개시된 방법 및 핵산에 사용될 수 있는 2A 서열의 예에는 문헌[미국 특허 공개 번호 20070116690]에 기술된 바와 같은 구제역 바이러스(F2A, 예를 들어, 서열번호: 21), 말 비염 A 바이러스(E2A, 예를 들어, 서열번호: 20), 토세아 아시그나 바이러스(T2A, 예를 들어, 서열번호: 6 또는 17) 및 돼지 테스코 바이러스-1(P2A, 예를 들어, 서열번호: 18 또는 19)이 있으며, 하지만 이에 한정되지 않는다.
대상체에 투여되는 세포에 의해 발현되는 CAR과 같은 재조합 수용체는 일반적으로 치료하는 질병 또는 병태 또는 그 세포에서 발현되고, 그와 연관되고 및/또는 이에 특이적인 분자를 인식하거나 그 분자에 특이적으로 결합한다. 분자(예를 들어, 항원)에 특이적 결합 시, 수용체는 일반적으로 면역 자극 신호,예컨대 ITAM-전달 신호를 세포에 전달하여 질병 또는 병태에 표적화된 면역 반응을 촉진한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 세포는 질병 또는 병태의 또는 질병 또는 병태와 관련된 세포 또는 조직에 의해 발현되는 항원에 특이적으로 결합하는 CAR을 발현한다.
B. T 세포 수용체(TCR)
일부 구현예에서, 제공된 방법, 용도, 제조 물품 또는 조성물과 관련하여 사용되는 T 세포와 같은 조작된 세포는 종양, 바이러스 또는 자가면역 단백질의 항원과 같은 표적 폴리펩티드의 펩티드 에피토프 또는 T 세포 에피토프를 인식하는 T 세포 수용체(TCR) 또는 이의 항원 결합 부분을 발현하는 세포이다.
일부 구현예에서, “T 세포 수용체(T cell receptor)”또는 “TCR”은 가변 α 및 β 사슬(각각 TCRα 및 TCRβ로도 공지) 또는 가변 γ 및 δ 사슬(각각 TCRγ 및 TCRδ로도 공지) 또는 이의 항원 결합 부분을 함유하는 분자이고 이는 MHC 분자에 결합된 펩타이드에 특이적으로 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, TCR은 αβ 형태이다. 통상적으로, αβ 및 γδ 형태로 존재하는 TCR은 일반적으로 구조적으로 유사하지만, 이들을 발현하는 T 세포는 별개의 해부학적 위치 또는 기능을 가질 수 있다. TCR은 세포 표면 상에서 또는 가용성 형태로 발견될 수 있다. 일반적으로 TCR은 T 세포(또는 T 림프구)의 표면 상에서 발견되며, 이는 일반적으로 주요 조직적합성 복합체(MHC) 분자에 결합된 항원의 인식을 담당한다.
달리 언급되지 않는 한, 용어 “TCR”은 완전한(full) TCR뿐만 아니라 이의 항원 결합 부분 또는 항원 결합 단편을 포괄하는 것으로 이해되어야 한다. 일부 구현예에서, TCR은 αβ 형태 또는 γδ 형태의 TCR을 포함하는 온전한 또는 전장 TCR이다. 일부 구현예에서, TCR은 전장 미만의 TCR이지만 MHC-펩타이드 복합체에 결합하는 것과 같이 MHC 분자에서 결합된 특정 펩타이드에 결합하는 항원 결합 부분이다. 일부 경우에, TCR의 항원 결합 부분 또는 단편은 전장 또는 온전한 TCR의 구조적 도메인의 일부만을 함유할 수 있으나, 그럼에도 완전한 TCR이 결합하는 MHC-펩타이드 복합체와 같은 펩타이드 에피토프에 결합할 수 있다. 일부 경우에, 항원 결합 부분은 특정 MHC-펩타이드 복합체에 결합하기 위한 결합 부위를 형성하기에 충분한 TCR의 가변 α 사슬 및 가변 β 사슬과 같은 TCR의 가변 도메인을 함유한다. 일반적으로, TCR의 가변 사슬은 펩타이드, MHC 및/또는 MHC-펩타이드 복합체의 인식에 관여하는 상보성 결정 영역을 함유한다.
C. 다중 표적화
일부 구현예에서, 제공된 방법, 용도, 제조 물품 및 조성물과 관련하여 사용되는 세포는 세포 상의 2개 이상의 유전자 조작된 수용체의 발현과 같은 다중 표적화 전략을 사용하는 세포를 포함하며, 각각은 상이한 항원의 동일한 것을 인식하고 전형적으로, 각각은 상이한 세포내 신호전달 성분을 포함한다. 상기 다중 표적화 전략은 예를 들어, 문헌[WO 2014055668(활성화 및 공자극 CAR의 조합, 예를 들어, 표적 외, 예를 들어 정상 세포 상에 개별적으로 존재하나 치료될 질병 또는 병태의 세포에만 함께 존재하는 2개의 상이한 항원을 표적화하는 것을 기술) 및 Fedorov 등, Sci. Transl. Medicine, 5(215) ( 2013)(활성화 및 억제성 CAR을 발현하는 세포, 예컨대 활성화 CAR이 정상 또는 비-질병 세포 및 치료될 질병 또는 병태의 세포 둘 다에서 발현되는 하나의 항원에 결합하고, 억제성 CAR이 치료가 바람직하지 않은 세포 또는 정상 세포에서만 발현되는 다른 항원에 결합함을 기술)]에 기술되어 있다.
예를 들어, 일부 구현예에서, 세포는 일반적으로 제1 수용체에 의해 인식되는 항원, 예를 들어 제1 항원에 특이적인 결합시 세포에 대한 활성화 또는 자극적인 신호를 유도할 수 있는 제1 유전자 조작 항원 수용체(예를 들어, CAR)를 발현하는 수용체를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포는 또한 일반적으로 제2 수용체에 의해 인식되는 제2 항원에 특이적인 결합시 면역 세포에 대해 공자극 신호를 유도할 수 있는 제2 유전자 조작된 항원 수용체(예를 들어, CAR), 예를 들어, 키메라 공자극 수용체를 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 항원 및 제2 항원은 동일하다. 일부 구현예에서, 제1 항원 및 제2 항원은 상이하다.
일부 구현예에서, 제1 및/또는 제2 유전자 조작 항원 수용체(예를 들어 CAR)는 세포에 대한 활성화 신호를 유도할 수 있다. 일부 구현예에서, 수용체는 ITAM 또는 ITAM 유사 모티프를 함유하는 세포내 신호 전달 성분을 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 수용체에 의해 유도된 활성화는 면역 반응의 개시, 예컨대 ITAM 인산화 및/또는 ITAM 매개 신호 전달 계단식 다단계 반응의 개시, 면역학적 시냅스의 형성 및/또는 결합된 수용체(예를 들어, CD4 또는 CD8 등) 근처 분자의 클러스터링, 하나 이상의 전사 인자, 예컨대 NF-κB 및/또는 AP-1의 활성화, 및/또는 사이토카인과 같은 인자의 유전자 발현, 증식 및/또는 생존의 유도를 초래하는 세포에서의 신호 전달 또는 단백질 발현의 변화를 수반한다.
일부 구현예에서, 제1 및/또는 제2 수용체는 CD28, CD137(4-1BB), OX40 및/또는 ICOS와 같은 공자극 수용체의 세포내 신호 전달 도메인 또는 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 수용체는 상이한 공자극 수용체의 세포내 신호 전달 도메인을 포함한다. 일 구현예에서, 제1 수용체는 CD28 공자극 신호 전달 영역을 함유하고 제2 수용체는 4-1BB 공자극 신호 전달 영역을 함유하거나 반대로 함유한다.
일부 구현예에서, 제1 및/또는 제2 수용체는 ITAM 또는 ITAM 유사 모티프를 함유하는 세포내 신호 전달 도메인 및 공자극 수용체의 세포내 신호 전달 도메인 둘 다를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 수용체는 ITAM 또는 ITAM 유사 모티프를 함유하는 세포내 신호 전달 도메인을 함유하고 제2 수용체는 공자극 수용체의 세포내 신호 전달 도메인을 함유한다. 동일한 세포에서 유도된 활성화 신호와 결합한 공자극 신호는 면역 반응, 예컨대 강력하고 지속적인 면역 반응, 예컨대 유전자 발현, 사이토카인 및 기타 인자의 분비 및 세포 사멸과 같은 T 세포 매개 작동체 기능의 증가를 초래하는 것이다.
일부 구현예에서, 제1 수용체 단독의 결찰 또는 제2 수용체 단독의 결찰은 모두 강력한 면역 반응을 유도하지 못한다. 일부 측면에서, 하나의 수용체만 결찰되는 경우에, 세포는 항원에 내성화되거나 반응하지 않게 되거나 억제되고/거나 증식 또는 인자 분비 또는 작동 기능을 수행하도록 유도되지 않는다. 그러나, 일부 상기 구현예에서, 복수의 수용체가 결찰되고 예컨대 제1 및 제2 항원을 발현하는 세포와의 조우 시, 예를 들어, 하나 이상의 사이토카인 분비, 증식, 지속성 및/또는 표적 세포의 세포 독성 사멸과 같은 면역 작동체 기능의 수행에 의해 나타난 바와 같이 전체 면역 활성화 또는 자극과 같은 원하는 반응이 달성된다.
일부 구현예에서, 2개의 수용체는 각각 세포에 활성화 및 억제 신호를 유도하는데, 항원에 수용체 중 하나가 결합하면 세포를 활성화하거나 반응을 유도하지만, 항원에 제2 억제 수용체가 결합하면 해당 반응을 억제하거나 약화시키는 신호를 유도한다. 활성화 CAR 및 억제성 CAR 즉 iCAR을 조합하는 예가 있다. 예를 들어, 상기 전략은 활성화 CAR이 질병 또는 병태에서 발현되나 정상 세포에서도 발현되는 항원에 결합하고, 억제성 수용체는 정상 세포에서 발현되나 질병 또는 병태의 세포에서는 발현되지 않는 별개의 항원에 결합하는 것과 같이 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 다중 표적화 전략은 특정 질환 또는 병태와 관련된 항원이 비질환 세포에서 발현되고/거나 조작된 세포 자체에서 일시적으로(예를 들어, 유전자 조작과 함께 자극시) 또는 상시적으로 발현되는 경우에 사용된다. 상기 경우에, 2개의 별도의 및 개별적으로 특이적인 항원 수용체의 결찰을 요구함으로써, 특이성, 선택성 및/또는 효능이 향상될 수 있다.
일부 구현예에서, 복수의 항원, 예를 들어, 제1 및 제2 항원이 암세포 상과 같은 표적화되는 세포, 조직 또는 질병 또는 병태에서 발현된다. 일부 측면에서, 세포, 조직, 질병 또는 병태는 다발성 골수종 또는 다발성 골수종 세포이다. 일부 구현예에서, 복수의 항원 중 하나 이상은 일반적으로 정상 또는 비질병 세포 또는 조직 및/또는 조작된 세포 자체와 같이 세포 요법으로 표적화하는 것이 바람직하지 않은 세포 상에서도 발현된다. 상기 구현예에서, 세포의 반응을 달성하기 위해 다중 수용체의 결찰을 요구함으로써, 특이성 및/또는 효능이 달성된다.
D. 키메라 자가항체 수용체(CAAR)
일부 구현예에서, 재조합 수용체는 키메라 자가항체 수용체(CAAR)이다. 일부 구현예에서, CAAR은 자가항체에 결합(예를 들어, 특이적으로 결합)하거나 이를 인식한다. 일부 구현예에서, CAAR을 발현하도록 조작된 T 세포와 같은 CAAR을 발현하는 세포는 정상적인 항체 발현 세포가 아닌 자가항체 발현 세포에 결합하여 이를 사멸하는 데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, CAAR 발현 세포는 자가면역 질환과 같은 자가항원 발현과 관련된 자가면역 질환을 치료하는 데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, CAAR 발현 세포는 궁극적으로 자가항체를 생산하고 세포 표면에 자가항체를 나타내는 B 세포를 표적화할 수 있고, 치료적 개입을 위한 질병 특이적 표적으로 상기 B 세포를 표지할 수 있다. 일부 구현예에서, CAAR 발현 세포는 항원 특이적 키메라 자가항체 수용체를 이용하여 질병을 유발하는 B 세포를 표적화함으로써 자가면역 질환에서 병원성 B 세포를 효율적으로 표적화하고 사멸시키는 데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 재조합 수용체는 문헌[미국 특허 출원 공개 번호 US 2017/0051035]에 기술된 어느 하나와 같은 CAAR이다.
일부 구현예에서, CAAR은 자가항체 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 하나 이상의 세포내 신호 전달 영역 또는 도메인(상호 교환적으로 세포질 신호 전달 도메인 또는 영역으로도 불림)을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포내 신호 전달 영역은 세포내 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포내 신호 전달 도메인은 1차 신호 전달 도메인, T 세포에서 1차 활성화 신호를 자극 및/또는 유도할 수 있는 신호 전달 도메인, T 세포 수용체(TCR) 성분의 신호 전달 도메인(예를 들어, CD3-제타(CD3ζ) 사슬의 세포내 신호 전달 도메인 또는 영역 또는 이의 기능적 변이체 또는 신호 전달 부분) 및/또는 면역수용체 티로신 기반 활성화 모티프(ITAM)를 포함하는 신호 전달 도메인이거나 이를 포함한다.
일부 구현예에서, 자가항체 결합 도메인은 자가항원 또는 이의 단편을 포함한다. 자가항원의 선택은 표적화되는 자가항체의 유형에 따라 달라질 수 있다. 예를 들어, 자가 항원은 특정 질병 상태, 예를 들어 자가면역 질환, 예컨대 자가항체 매개 자가면역 질환과 관련된 B 세포와 같은 표적 세포 상의 자가항체를 인식하기 때문에 선택될 수 있다. 일부 구현예에서, 자가면역 질환은 심상성 천포창(pemphigus vulgaris, PV)을 포함한다. 예시적인 자가항원은 데스모글레인 1(desmoglein 1, Dsg1) 및 Dsg3을 포함한다.
E. 세포 조작 방법
일부 구현예에서, 조작된 세포, 예를 들어 본원에 제공된 방법 및 용도와 관련하여 사용되는 조작된 세포는 하나 이상의 입력 조성물 및/또는 단일 생물학적 샘플로부터 농축 T 세포의 출력 조성물을 생성하는 프로세스에 의해 생성된다. 특정 구현예에서, 출력 조성물은 재조합 수용체, 예를 들어 CAR, 예컨대 항-CD19 CAR을 발현하는 세포를 함유한다. 특정 구현예에서, 출력 조성물의 세포는 자가 세포 요법을 포함하여 본원에 제공된 임의의 방법 및 용도에 따라 요법으로서 대상체에게 투여하기에 적합하다. 일부 구현예에서, 출력 조성물은 농축 CD4+ 또는 CD8+ T 세포의 조성물이다.
일부 구현예에서, 조작된 세포를 생성하거나 생산하는 공정은 다음 단계 중 일부 또는 전부를 포함하는 공정에 의한 것이다: 생물학적 샘플을 수집하거나 획득; 생물학적 샘플에서 입력 세포를 분리, 선택 또는 농축; 입력 세포를 냉동 보존하고 저장; 자극 조건하에서 입력 세포를 해동 및/또는 인큐베이션; 재조합 폴리뉴클레오타이드, 예를 들어 CAR과 같은 재조합 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 발현하거나 함유하도록 자극된 세포를 조작; 예를 들어 임계 값, 밀도 또는 확장까지 조작된 세포를 배양; 배양된 세포를 출력 조성물로 제형화; 및/또는 세포가 주입을 위해 방출되고/되거나 대상체에게 투여하기에 적합할 때까지 제형화된 출력 세포를 동결보존 및 저장. 특정 구현예에서, 프로세스는 별도의 CD4+ 조성물 및 별도의 CD8+ 조성물과 같은 농축 T 세포의 2개 이상의 입력 조성물로 수행되며, 이는 동일한 시작 또는 초기 생물학적 샘플에서 별도로 처리 및 조작되고 정의된 비율(예를 들어 CD4+ 대 CD8+ T 세포의 1:1 비율)로 대상체에 다시 주입된다. 일부 구현예에서, 농축 T 세포는 조작된 T 세포, 예를 들어 재조합 수용체를 발현하도록 형질도입된 T 세포이거나 이를 포함한다.
특정 구현예에서, 재조합 수용체(예: 항-CD19 CAR)를 발현하는 조작된 세포의 출력 조성물은 세포의 초기 및/또는 입력 조성물로부터 생성된다. 일부 구현예에서, 입력 조성물은 농축 T 세포, 농축 CD4+ T 세포 및/또는 농축 CD8+ T 세포의 조성물이다 (이하에서 농축 T 세포의 조성물, 농축 CD4+ T 세포의 조성물 및 농축 CD8+ T 세포의 조성물로도 각각 지칭됨). 일부 구현예에서, CD4+ T 세포가 농축된 조성물은 적어도 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99% 또는 99.9%의 CD4+ T 세포를 포함한다. 특정 구현예에서, 농축 CD4+ T 세포의 조성물은 100%의 CD4+ T 세포를 포함하고 약 100% CD4+ T 세포를 포함한다. 특정 구현예에서, 농축 T 세포의 조성물은 20% 미만, 10% 미만, 5% 미만, 1% 미만, 0.1% 미만 또는 0.01% 미만의 CD8+ T 세포를 포함하거나 함유하고/하거나 CD8+ T 세포를 함유하지 않고/하거나 CD8+ T 세포를 함유하지 않거나 실질적으로 함유하지 않는다. 일부 구현예에서, 세포 집단은 본질적으로 CD4+ T 세포로 구성된다. 일부 구현예에서, CD8+ T 세포가 농축된 조성물은 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99% 또는 99.9%의 CD8+ T 세포를 함유하거나, 또는 약 100% CD8+ T 세포를 포함한다. 특정 구현예에서, 농축 CD8+ T 세포의 조성물은 20% 미만, 10% 미만, 5% 미만, 1% 미만, 0.1% 미만 또는 0.01% 미만의 CD4+ T 세포를 포함하거나 함유하고/하거나 CD4+ T 세포를 함유하지 않고/하거나 CD4+ T 세포를 함유하지 않거나 실질적으로 함유하지 않는다. 일부 구현예에서, 세포 집단은 본질적으로 CD8+ T 세포로 구성된다.
특정 구현예에서, 조작된 세포를 생산하는 방법은 다음 중 하나 이상을 추가로 포함할 수 있다: 세포, 예를 들어 입력 조성물의 세포를 활성화 및/또는 자극; 활성화 및/또는 자극된 세포를 유전적으로 조작하여, 예를 들어 형질도입 또는 형질감염에 의해 재조합 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 도입; 및/또는 예를 들어, 증식 및/또는 확장을 촉진하는 조건 하에 조작된 세포를 배양. 특정 구현예에서, 제공된 방법은 세포가 인큐베이션, 활성화, 자극, 조작, 형질도입, 형질감염 및/또는 배양된 후에 생성된 출력 조성물을 수확, 수집 및/또는 제형화하는 것과 관련하여 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 제공된 방법 및 용도에 따라 사용되는 기술된 바와 같은 항-CD19 CAR을 발현하는 것과 같은 조작된 세포는 세포를 선택, 단리, 활성화, 자극, 확장, 배양 및/또는 제형화하는 과정에 의해 생산되거나 생성된다. 일부 구현예에서, 이러한 방법에는 설명된 방법이 포함된다.
일부 구현예에서, 제공된 방법 및 용도에 따라 사용되는, 기재된 바와 같은 항-CD19 CAR을 발현하는 것과 같은 조작된 세포는 예를 들어 WO 2019/089855 및 WO 2015/164675에 기재된 바와 같은 예시적인 공정에 의해 생산 또는 생성된다.
일부 구현예에서, 기술된 바와 같은 항-CD19 CAR을 발현하는 것과 같은, 조작된 세포 또는 이러한 세포를 포함하는 조성물(예를 들어 동일한 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 각각 발현하는 조작된 CD4+ T 세포 및 조작된 CD8+ T 세포를 포함하는 조성물)을 생성, 생산 또는 제조하기 위한 예시적인 공정은, 농축 CD4+ 및 농축 CD8+ 세포 집단을 개별적으로 처리 단계에 적용하는 것을 포함한다. 조작된 세포를 생성 또는 제조하기 위한 예시적인 공정의 일부 측면에서, CD4+ 및 CD8+ 세포는 인간 말초혈액 단핵 세포(PBMC)로부터 개별적으로 선택되며, 예를 들어, 백혈구 성분채집술에 의해 수득되어 별도의 농축 CD4+ 및 농축 CD8+ 세포 조성물을 생성한다. 일부 측면에서, 이러한 세포는 동결 보존될 수 있다. 일부 측면에서, CD4+ 및 CD8+ 조성물은 이후에 해동될 수 있고 개별적으로 자극, 형질도입 및 확장 단계를 거칠 수 있다.
조작된 세포를 생성 또는 제조하기 위한 예시적인 공정의 일부 측면에서, 해동된 CD4+ 및 CD8+ 세포는 예를 들어 항-CD3 및 항-CD28 항체에 결합된 상자성 폴리스티렌 코팅 비드의 존재 하에 개별적으로 자극된다(예: 1:1 비드 대 세포 비율). 일부 측면에서, 자극은 인간 재조합 IL-2, 인간 재조합 IL-15 및 N-아세틸 시스테인(NAC)을 포함하는 배지에서 수행된다. 일부 측면에서, CD4+ 세포용 세포 배양 배지는 또한 인간 재조합 IL-7을 포함할 수 있다.
조작된 세포를 생성 또는 제조하기 위한 예시적인 공정의 일부 측면에서, 비드 도입 후 CD4+ 및 CD8+ 세포는 동일한 항-CD19 CAR과 같은 동일한 CAR을 암호화하는 렌티바이러스 벡터로 별도로 형질도입된다. 일부 측면에서, CAR은 뮤린 항체로부터 유래된 항-CD19 scFv, 면역글로불린 스페이서, CD28로부터 유래된 막횡단 도메인, 4-1BB로부터 유래된 공동자극 영역, 및 CD3-제타 세포내 신호전달 도메인을 함유할 수 있다. 일부 측면에서, 벡터는 T2A 서열에 의해 CAR 구축물에 연결된 CAR 발현에 대한 대리 표지자 역할을 하는 절단된 수용체를 암호화할 수 있다. 예시적인 방법의 일부 측면에서, 세포는 10㎍/ml 황산프로타민의 존재하에 형질도입된다.
조작된 세포를 생성 또는 제조하기 위한 예시적인 공정의 일부 측면에서, 형질도입 후, 자기장에 노출시켜 비드는 세포 조성물로부터 제거된다. 일부 측면에서, CD4+ 및 CD8+ 세포 조성물은 생물반응기(예: Xuri W25 생물반응기)에 의한 지속적인 혼합 및 산소 전달과 함께 확장을 위해 별도로 배양된다. 일부 측면에서, 폴록사머가 배지에 추가된다. 일부 측면에서, CD4+ 및 CD8+ 세포 조성물 모두는 IL-2 및 IL-15의 존재 하에 배양된다. 일부 측면에서, CD4+ 세포 배지에는 IL-7도 포함된다. 일부 경우에, CD4+ 및 CD8+ 세포는 각각 수확 전에 4배 증폭으로 배양된다. 일부 측면에서, 임계값에 도달한 후 하루가 지나면 각 조성물의 세포를 별도로 수확하고 제형화하고 동결 보존할 수 있다. 일부 구현예에서, 기술된 바와 같이 항-CD19 CAR을 발현하는 것과 같은, 조작된 세포 또는 이러한 세포를 포함하는 조성물(예를 들어 동일한 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 각각 발현하는 조작된 CD4+ T 세포 및 조작된 CD8+ T 세포를 포함하는 조성물)을 생성, 생산 또는 제조하기 위한 예시적인 방법은 아래 표 6에 설명된 것들을 포함한다.
CD4+ 및 CD8+ CAR-T 세포를 생성하기 위한 예시적인 과정
단계 CD4+ 세포 CD8+ 세포
자극(1-2일차) ·항-CD3/CD28 항체 접합 비드
·1:1 비드 대 세포 비율
·배지: IL-2, IL-7, IL-15 및 NAC 		·항-CD3/CD28 항체 접합 비드
·1:1 비드 대 세포 비율
·배지: IL-2, IL-15 및 NAC
형질도입(2-5일차) ·형질도입 아쥬번트(예를 들어, 10 μg/ml 프로타민 설페이트) ·형질도입 아쥬번트(예를 들어, 10 μg/ml 프로타민 설페이트)
비드 제거(5일차*) ·자성 비드 제거 ·자성 비드 제거
확장(5일차 * -수확) ·흔들림 동작(rocking motion) 생물반응기 및/또는 연속 혼합
·배지: IL-2, IL-7, IL-15 및 폴록사머		 ·흔들림 동작(rocking motion) 생물반응기 및/또는 연속 혼합
·배지: IL-2, IL-15 및 폴록사머
**대략
다른 측면에서, 조작된 세포 또는 이러한 세포를 포함하는 조성물을 생성, 생산 또는 제조하기 위한 상이한 예시적 공정은 다음과 같은 점에서 상기 예시적 공정과 상이한 공정을 포함한다: NAC는 자극하는 동안 배지에 추가되지 않음; CD4+ 세포 배지에는 IL-2가 포함되어 있지 않음; 세포는 3:1의 비드 대 세포 비율로 자극됨; 세포는 더 높은 농도의 황산 프로타민으로 형질도입됨; 비드 제거는 약 7일째에 발생함; 및 증폭은 정적 설정, 즉 연속 혼합 또는 관류(예: 반연속 및/또는 단계적 관류) 없이, 그리고 폴록사머 없이 수행됨.
일부 구현예에서, 농축 CD4+ T 세포의 하나 이상의 개별 조성물 및 농축 CD8+ T 세포의 하나 이상의 개별 조성물은 단일 생물학적 샘플, 예를 들어 환자 또는 건강한 개인과 같은 동일한 공여자로부터의 PBMC 또는 기타 백혈구의 샘플로부터 단리, 선택, 농축되거나 획득된다. 일부 구현예에서, 농축 CD4+ T 세포의 별도 조성물 및 농축 CD8+ T 세포의 별도 조성물은, 예를 들어 단일 대상체로부터 획득, 수집 및/또는 채취한 단일 생물학적 샘플과 같은 동일한 생물학적 샘플로부터 초기에 분리, 선택 및/또는 농축되었다. 일부 구현예에서, 생물학적 샘플은 먼저 CD4+ T 세포의 선택을 받고, 여기서 음성 및 양성 분획은 모두 유지되고 음성 분획은 추가로 CD8+ T 세포의 선택을 받는다. 다른 구현예에서, 생물학적 샘플은 먼저 CD8+ T 세포의 선택을 받고, 여기서 음성 및 양성 분획은 모두 유지되고 음성 분획은 추가로 CD4+ T 세포의 선택을 받는다. 일부 구현예에서, 선택 방법은 국제 PCT 공개 번호 WO2015/164675에 설명된 대로 수행된다. 일부 구현예에서, 선택 방법은 국제 PCT 공개 번호 WO 2019/089855에 설명된 대로 수행된다. 일부 측면에서, 생물학적 샘플은 먼저 CD8+ T 세포에 대해 양성적으로 선택되어 농축 CD8+ T 세포의 하나 이상의 조성물을 생성하고, 음성 분획은 CD4+ T 세포에 대해 양성적으로 선택되어 농축 CD4+ T 세포의 적어도 하나의 조성물을 생성하여, 농축 CD8+ T 세포의 하나 이상의 조성물 및 농축 CD4+ T 세포의 하나 이상의 조성물이 동일한 생물학적 샘플, 예를 들어 동일한 공여자 환자 또는 건강한 개체로부터의 별개의 조성물이 되도록 한다. 일부 측면에서, 농축 T 세포의 2개 이상의 개별 조성물 (예를 들어, 적어도 하나는 농축 CD4+ T 세포의 조성물이고 적어도 하나는 동일한 공여자로부터의 농축 CD8+ T 세포의 별개의 조성물)은 예를 들어, 동결 보호 또는 동결 보존 배지에 동결 보존되어 별도로 동결된다.
일부 측면에서, 농축 T 세포의 2개 이상의 개별 조성물 (예를 들어, 적어도 하나는 농축 CD4+ T 세포의 조성물이고 적어도 하나는 동일한 생물학적 샘플로부터 농축 CD8+ T 세포의 별도의 조성물)은, 자극 시약과의 접촉에 의해 활성화 및/또는 자극된다 (예: T 세포 활성화를 위한 CD3/CD28 접합 자기 비드와의 인큐베이션에 의해). 일부 측면에서, 각각의 활성화/자극된 세포 조성은, 각 세포 조성물의 CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포에서 동일한 재조합 단백질을 발현하도록 재조합 단백질(예: CAR)을 암호화하는 바이러스 벡터를 사용하여 조작, 형질도입 및/또는 형질감염된다. 일부 측면에서, 상기 방법은 자극 시약, 예를 들어 자기 비드를 세포 조성물로부터 제거하는 것을 포함한다. 일부 측면에서, 조작된 CD4+ T 세포를 함유하는 세포 조성물 및 조작된 CD8+ T 세포를 함유하는 세포 조성물은 예를 들어 CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포 집단의 개별 증폭을 위해 별도로 배양된다. 특정 구현예에서, 배양물로부터의 세포 조성물은, 예를 들어 제제 완충액에서 세포 조성물을 세척함으로써 수확 및/또는 수집 및/또는 제제화된다. 특정 구현예에서, CD4+ T 세포를 포함하는 제형화된 세포 조성물 및 CD8+ T 세포를 포함하는 제형화된 세포 조성물은 동결, 예를 들어 동결보존 배지에서 동결보호되거나 동결보존된다. 일부 측면에서, 각 제형의 조작된 CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포는 동일한 공여자 또는 생물학적 샘플에서 유래하고 동일한 재조합 단백질(예: CAR, 예컨대 항-CD19 CAR)을 발현한다. 일부 측면에서, 별도의 조작된 CD4+ 제제 및 별도의 조작된 CD8+ 제제는 동일한 공여자와 같이 이를 필요로 하는 대상에게 정의된 비율(예를들어, 1:1)로 투여된다.
1. 유전자 조작을 위한 세포 및 세포 제조
일부 구현예에서, 제공된 방법, 용도, 제조 물품 또는 조성물과 관련하여 사용되는 T 세포와 같은 세포는 재조합 수용체, 예를 들어 CAR 또는 TCR, 예컨대 본원에 기재된 것들을 발현하도록 유전자 조작된 세포이다. 일부 구현예에서, 조작된 세포는 세포 요법, 예를 들어 입양 세포 요법의 맥락에서 사용된다. 일부 구현예에서, 조작된 세포는 면역 세포이다. 일부 예에서, 조작된 세포는 CD4+ 또는 CD8+ T 세포와 같은 T 세포이다.
일부 구현예에서, 핵산, 예컨대 재조합 수용체를 암호화하는 핵산은 이종 기원이다, 즉 예를 들어, 조작된 세포 및/또는 상기 세포가 유래한 유기체에서 보통 발견되지 않는 다른 유기체 또는 세포로부터 수득된 것과 같이 세포 또는 세포로부터 수득된 샘플에는 정상적으로 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, 핵산은 천연 발생이 아니고, 예컨대 다수의 상이한 세포 유형으로부터 다양한 도메인을 암호화하는 핵산의 키메라 조합을 포함하는 것을 포함해, 자연계에서 발견되지 않는 핵산이다.
세포는 일반적으로 포유류 세포와 같은 진핵 세포이며, 통상적으로 인간 세포이다. 일부 구현예에서, 세포는 혈액, 골수, 림프, 또는 림프성 기관으로부터 유래되며, 선천성 또는 적응성 면역 세포와 같은 면역 계통의 세포, 예를 들어 림프구, 통상적으로 T 세포 및/또는 NK 세포를 포함한 골수성 또는 림프성 세포이다. 다른 예시적인 세포에는 유도된 다능성 줄기세포(induced pluripotent stem cell: iPSC)를 포함한, 다분화능 및 다능성 줄기세포와 같은 줄기세포가 포함된다. 세포는 통상적으로 대상체로부터 직접 단리되고/거나 대상체로부터 단리되고 동결된 세포와 같은 1차 세포이다. 일부 구현예에서, 세포에는 T 세포 또는 다른 세포 유형의 하나 이상의 서브세트, 예컨대 전체 T 세포의 집단, CD4+ 세포, CD8+ 세포 및 이의 하위 집단, 예컨대 기능, 활성화 상태, 성숙도, 분화 가능성, 팽창, 재순환, 국소화 및/또는 지속성 용량, 항원 특이성, 항원 수용체 유형, 특정 기관 또는 구획에의 존재, 표지자 또는 사이토카인 분비 프로필 및/또는 분화 정도에 의해 정의되는 것이 포함된다. 치료될 대상체와 관련하여, 세포는 동종이계 및/또는 자가일 수 있다. 상기 방법 중에는 기성 방법이 포함된다. 일부 측면에서, 예컨대 기성 기술에 대해, 세포는 유도된 다능성 줄기세포(iPSC)와 같은 줄기세포 등과 같은 다능성 및/또는 다분화능이다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 대상체로부터 세포를 단리하고, 세포를 제조, 가공, 배양 및/또는 조작하고, 냉동 보존 전 또는 후에 동일한 대상체에 이 세포를 재도입하는 것을 포함한다.
T 세포 및/또는 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포의 하위 유형 및 하위 집단 중에는 나이브 T(na
Figure pct00002
ve T, TN) 세포, 효과기 T 세포(effector T cell, TEFF), 기억 T 세포 및 이들의 하위-유형, 예컨대 줄기세포 기억 T(stem cell memory T, TSCM), 중앙 기억 T(central memory T, TCM), 효과기 기억 T(effector memory T, TEM) 또는 말단 분화된 효과기 기억 T 세포, 종양 침윤성 림프구(tumor-infiltrating lymphocytes, TIL), 미성숙 T 세포, 성숙 T 세포, 헬퍼 T 세포, 세포 독성 T 세포, 점막 연관 불변 T(mucosa-associated invariant T, MAIT) 세포, 천연 발생 및 적응성 조절 T(regulatory T, TREG) 세포, 헬퍼 T 세포, 예컨대 TH1 세포, TH2 세포, TH3 세포, TH17 세포, TH9 세포, TH22 세포, 여포성 헬퍼 T 세포, 알파/베타 T 세포 및 델타/감마 T 세포가 있다.
일부 구현예에서, 세포는 자연 살생(natural killer, NK) 세포이다. 일부 구현예에서, 세포는 단핵구 또는 과립구, 예를 들어 골수성 세포, 대식 세포, 호중구, 수지상 세포, 비만 세포, 호산구 및/또는 호염기구이다.
일부 구현예에서, 세포는 유전자 조작을 통해 도입된 하나 이상의 핵산을 포함하고 이로써 상기 핵산의 재조합 또는 유전자 조작된 산물을 발현한다. 일부 구현예에서, 핵산은 이종 기원이다, 즉, 다른 유기체 또는 세포로부터 수득된 것과 같이 세포 또는 세포로부터 수득된 샘플에는 정상적으로 존재하지 않으며, 예를 들어, 이는 조작되는 세포 및/또는 상기 세포가 유래한 유기체에서 보통 발견되지 않는다. 일부 구현예에서, 핵산은 천연 발생이 아니고, 예컨대 다수의 상이한 세포 유형으로부터 다양한 도메인을 암호화하는 핵산의 키메라 조합을 포함하는 것을 포함해, 자연계에서 발견되지 않는 핵산이다.
일부 구현예에서, 조작된 세포의 제조는 하나 이상의 배양 및/또는 제조 단계를 포함한다. CAR과 같은 전이 유전자 수용체를 암호화하는 핵산의 도입을 위한 세포는, 생물학적 샘플, 예를 들어 대상체로부터 수득되거나 유래된 것과 같은 샘플로부터 단리될 수 있다. 일부 구현예에서, 세포가 단리되는 대상체는 질병 또는 병태가 있거나 세포 요법이 필요하거나 또는 세포 요법이 투여될 대상체이다. 일부 구현예에서, 대상체는 입양 세포 요법과 같은(이를 위해 세포를 단리, 가공 및/또는 조작함) 특정한 치료적 개입이 필요한 인간이다.
따라서, 일부 구현예에서 세포는 일차 세포, 예를 들어 1차 인간 세포이다. 샘플에는 대상체에서 직접 채취한 조직, 유체 및 기타 샘플뿐만 아니라 분리, 원심분리, 유전자 조작(예를 들어 바이러스 벡터를 이용한 형질도입), 세척 및/또는 인큐베이션과 같은 하나 이상의 가공 단계에서 생성된 샘플이 포함된다. 생물학적 샘플은 생물학적 공급원으로부터 직접 수득된 샘플 또는 가공된 샘플일 수 있다. 생물학적 샘플에는 혈액, 혈장, 혈청, 뇌척수액, 활액, 소변 및 땀과 같은 체액, 조직 및 장기 샘플(이들로부터 유래된 가공 샘플 포함)이 포함되나, 이에 한정되지 않는다.
일부 측면에서, 세포가 유래되거나 단리된 샘플은 혈액 또는 혈액 유래 샘플이거나, 성분채집술 또는 백혈구 성분채집술 산물이거나 이로부터 유래된다. 예시적인 샘플에는 전혈, 말초 혈액 단핵 세포(peripheral blood mononuclear cell, PBMC), 백혈구, 골수, 흉선, 조직 생검, 종양, 백혈병, 림프종, 림프절, 장 관련 림프 조직, 점막 관련 림프 조직, 비장, 기타 림프 조직, 간, 폐, 위, 창자, 결장, 신장, 췌장, 유방, 뼈, 전립선, 자궁경부, 고환, 난소, 편도 또는 기타 장기 및/또는 이로부터 유래된 세포가 포함된다. 샘플에는 세포 요법, 예를 들어, 입양 세포 요법의 맥락에서 자가 및 동종이계 공급원으로부터의 샘플이 포함된다.
일부 구현예에서, 세포는 세포주, 예를 들어 T 세포주로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 세포는 이종성 공급원, 예를 들어 마우스, 랫트, 비인간 영장류 및 돼지로부터 수득된다.
일부 구현예에서, 세포의 단리는 하나 이상의 조제 및/또는 비친화도 기반 세포 분리 단계를 포함한다. 일부 실시예에서, 세포는 예를 들어 원치 않는 성분의 제거, 원하는 성분의 농축, 특정 시약에 민감한 세포를 용해하거나 제거하기 위해, 하나 이상의 시약의 존재 하에 세척, 원심분리 및/또는 인큐베이션된다. 일부 실시예에서, 세포는 하나 이상의 특성, 예컨대 밀도, 부착 특성, 크기, 특정 성분에 대한 민감성 및/또는 내성에 기초하여 분리된다.
일부 실시예에서, 대상체의 순환 혈액으로부터의 세포는 예를 들어 성분채집술 또는 백혈구 성분채집술에 의해 수득된다. 일부 측면에서, 샘플은 T 세포, 단핵구, 과립구, B 세포, 기타 유핵 백혈구, 적혈구 및/또는 혈소판을 포함한 림프구를 함유하고, 일부 측면에서 적혈구 및 혈소판 이외의 세포를 함유한다.
일부 구현예에서, 대상체로부터 수집된 혈액 세포는, 예를 들어 혈장 분획을 제거하고 후속 가공 단계를 위한 적절한 완충제 또는 배지에 세포를 배치하기 위해 세척한다. 일부 구현예에서, 세포는 인산 완충 식염수(phosphate buffered saline, PBS)로 세척된다. 일부 구현예에서, 세척 용액에는 칼슘 및/또는 마그네슘 및/또는 많은 또는 모든 2가 양이온이 결여되어 있다. 일부 측면에서, 세척 단계는 제조업체의 지침에 따라 반자동 “플로우-쓰루(flow-through)” 원심 분리기(예를 들어, Cobe 2991 세포 프로세서, Baxter)로 달성된다. 일부 측면에서, 세척 단계는 제조업체의 지침에 따라 접선 유동 여과(tangential flow filtration, TFF)에 의해 달성된다. 일부 구현예에서, 세포는 세척 후 다양한 생체 적합성 완충제, 예를 들어 Ca++/Mg++이 없는 PBS에 재현탁된다. 특정 구현예에서, 혈액 세포 샘플의 성분이 제거되고 이 세포는 배양 배지에서 직접 재현탁된다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 밀도 기반 세포 분리 방법, 예컨대 적혈구를 용해시켜 말초 혈액으로부터 백혈구의 조제 및 Percoll 또는 Ficoll 구배를 통한 원심분리를 포함한다.
일부 구현예에서, 선택 단계의 적어도 일부는 선택 시약과 함께 세포의 인큐베이션을 포함한다. 예를 들어 하나 이상의 상이한 세포 유형의 선택을 위한 하나 이상의 선택 시약을 이용하여 수행될 수 있는 선택 방법의 일부로서 선택 시약 또는 시약들과의 인큐베이션은 하나 이상의 특정 분자, 예컨대 표면 표지자, 예를 들어 표면 단백질, 세포내 표지자 또는 핵산의 세포 상 또는 세포 내 발현 또는 존재에 기초한다. 일부 구현예에서, 상기 표지자에 기초한 분리를 위한 선택 시약 또는 시약들을 사용하는 임의의 공지된 방법이 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 선택 시약 또는 시약들은 친화도 또는 면역 친화도 기반 분리인 분리를 초래한다. 예를 들어, 일부 측면에서 선택은 하나 이상의 표지자, 전형적으로 세포 표면 표지자의 세포의 발현 또는 발현 수준에 기초하여, 예를 들어 상기 표지자에 특이적으로 결합하는 항체 또는 결합 파트너와의 인큐베이션 후 일반적으로 세척 단계 및 항체 또는 결합 파트너와 결합하지 않은 세포와 항체 또는 결합 파트너와 결합한 세포의 분리에 의한 세포 및 세포의 집단의 분리를 위한 시약 또는 시약들과의 인큐베이션을 포함한다.
상기 공정의 일부 측면에서, 일정 부피의 세포를 일정량의 원하는 친화도 기반 선택 시약과 혼합한다. 면역 친화도 기반 선택은 분리되는 세포와, 세포 상의 표지자, 예를 들어 고체 표면, 예를 들어 입자 상의 항체 또는 기타 결합 파트너에 특이적으로 결합하는 분자 간의 양호하고 활발한 상호작용을 초래하는 임의의 시스템 또는 방법을 사용하여 수행될 수 있다. 일부 구현예에서, 방법은 세포의 표지자에 특이적인 선택 제제(예를 들어, 항체)로 비드(예를 들어, 자성 비드) 같은 코팅된 입자를 사용하여 수행된다. 입자(예를 들어, 비드)는 일정한 세포 밀도 대 입자(예를 들어, 비드) 비율로 흔들거나 혼합하면서 튜브나 백과 같은 용기에서 세포와 배양 또는 혼합되어 양호한 상호작용의 활발한 촉진을 도울 수 있다. 다른 경우에, 상기 방법은 선택의 전부 또는 일부가 원심분리 챔버의 내부 공동에서 예를 들어, 원심분리 회전 하에서 수행되는 세포의 선택을 포함한다. 일부 구현예에서, 면역 친화도 기반 선택 시약과 같은 선택 시약과 함께 세포의 인큐베이션은 원심분리 챔버에서 수행된다. 특정 구현예에서, 문헌[국제 특허 출원, 공개 번호 WO2009/072003 또는 미국 20110003380 A1]에 기재된 시스템, 디바이스 또는 장치를 이용하여 단리 또는 분리가 수행된다. 일 예에서, 시스템은 문헌[국제 공개 번호 WO2016/073602]에 기재된 바와 같은 시스템이다.
일부 구현예에서, 상기 선택 단계 또는 이의 일부(예를 들어, 항체 코팅된 입자, 예를 들어 자성 비드와의 인큐베이션)를 원심분리 챔버의 공동에서 수행함으로써, 사용자는 다양한 용액의 부피, 가공 중 용액의 첨가 및 이의 타이밍과 같은 특정 매개변수를 제어할 수 있으며, 이는 다른 이용 가능한 방법에 비해 이점을 제공할 수 있다. 예를 들어, 인큐베이션 중 공동의 액체 부피를 감소시키는 능력은 선택에 사용되는 입자(예를 들어, 비드 시약)의 농도를 증가시킬 수 있어서 공동 내 세포의 총 수에는 영향을 주지 않고 용액의 화학적 전위를 증가시킬 수 있다. 이는 결국 가공되는 세포와 선택에 사용되는 입자 사이의 쌍 방향 상호작용을 증진할 수 있다. 일부 구현예에서, 예를 들어, 본원에 기술된 바와 같은 시스템, 회로 및 제어와 연관된 경우, 챔버에서의 인큐베이션 단계 수행은 사용자가 인큐베이션 중에 원하는 시간에 용액의 교반에 영향을 미칠 수 있게 하고, 이는 또한 상호작용을 향상시킬 수 있다.
일부 구현예에서, 선택 단계의 적어도 일부는 원심분리 챔버에서 수행되고, 이는 선택 시약과 세포의 인큐베이션을 포함한다. 상기 공정의 일부 측면에서, 일정 부피의 세포를 제조 업체의 지침에 따라 동일한 수의 세포 및/또는 동일한 부피의 세포의 선택을 위해 튜브 또는 용기에서 유사한 선택을 수행할 때 일반적으로 사용되는 것보다 훨씬 적은 원하는 친화도 기반 선택 시약의 양과 혼합한다. 일부 구현예에서, 제조사의 지침에 따라 동일한 수의 세포 및/또는 동일한 부피의 세포에 대해 튜브 또는 용기 기반 인큐베이션에서 세포의 선택을 위해 사용되는 동일한 선택 시약(들)의 양의 5% 이내, 10% 이내 , 15% 이내, 20% 이내, 25% 이내, 50% 이내 , 60% 이내, 70% 이내 또는 80% 이내 양의 선택 시약 또는 시약들의 양이 사용된다.
일부 구현예에서, 세포의 선택, 예를 들어 면역 친화도 기반 선택을 위해, 세포는 선택 시약, 예컨대 농축 및/또는 고갈이 바림직한 세포 상에는 있으나 임의적으로 지지체(scaffold) 예컨대 중합체 또는 표면, 예를 들어 비드, 예를 들어 자성 비드, 예컨대 CD4 및 CD8에 대해 특이적인 단클론 항체에 결합된 자성 비드에 결합된 항체와 같은 조성물 중의 다른 세포 상에는 없는 표면 표지자에 특이적으로 결합하는 분자와 같은 선택 시약을 갖는 선택 완충제를 또한 함유하는 챔버의 공동 내 조성물에서 인큐베이션된다. 일부 구현예에서, 기술된 바와 같이, 선택이 흔들거나 회전하는 튜브에서 수행될 경우 같은 수의 세포 또는 같은 부피의 세포와 대략 동일하거나 유사한 선택 효율을 달성하기 위해 전형적으로 사용되거나 필요한 선택 시약의 양과 비교하여 실질적으로 보다 적은 양(예를 들어, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70% 또는 80% 이내의 양)으로 챔버의 공동에 있는 세포에 선택 시약을 첨가한다. 일부 구현예에서, 인큐베이션은 예를 들어 10 mL 내지 200 mL, 예컨대 적어도 또는 적어도 약 10 mL, 20 mL, 30 mL, 40 mL, 50 mL, 60 mL, 70 mL, 80 mL, 90 mL, 100 mL, 150 mL 또는 200 mL의 시약의 인큐베이션을 갖는 표적 부피를 달성하기 위해 선택 완충제에 세포 및 선택 시약의 첨가로 수행된다. 일부 구현예에서, 선택 완충제 및 선택 시약은 세포에 첨가되기 전에 미리 혼합된다. 일부 구현예에서, 선택 완충제 및 선택 시약은 세포에 별도로 첨가된다. 일부 구현예에서, 선택 인큐베이션은 주기적으로 부드럽게 혼합하는 조건으로 수행되며, 이는 양호한 상호작용을 활발하게 촉진하는 데 도움이 될 수 있으며, 이로써 높은 선택 효율을 달성하면서 전반적으로 선택 시약을 보다 적게 사용하는 것이 가능할 수 있다.
일부 구현예에서, 선택 시약을 가진 인큐베이션의 총 지속 기간은 30분 내지 3시간, 예를 들어 적어도 또는 적어도 약 30분, 60분, 120분 또는 180분과 같이 약 5분 내지 6시간이다.
일부 구현예에서, 인큐베이션은 일반적으로 스피닝(spinning)이 존재하는 것과 같은 혼합 조건 하에서 수행되며, 일반적으로 이는 상대적으로 낮은 힘 또는 속도, 예컨대 세포를 펠릿화하기 위해 사용되는 것보다 더 낮은 속도, 예컨대 (약) 600rpm 내지 (약) 1700rpm(예를 들어, (약) 600rpm, 1000rpm 또는 1500rpm 또는 1700rpm 또는 600rpm, 1000rpm 또는 1500rpm 또는 1700rpm 이상)에서, 예컨대 (약) 80g 내지 100g(예를 들어, (약) 80g, 85g, 90g, 95g 또는 100g 또는 80g, 85g, 90g, 95g 또는 100g 이상)의 챔버 또는 다른 용기의 벽 또는 샘플에서 RCF로 수행된다. 일부 구현예에서, 스핀은 상기와 같은 낮은 속도의 스핀과 이어지는 휴지 기간(rest period), 예컨대 스핀 및/또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10초 동안의 휴지, 예컨대, 대략 1 또는 2초의 스핀과 이어지는 대략 5, 6, 7 또는 8초 동안의 휴지의 구간을 반복하여 수행된다.
일부 구현예에서, 상기 공정은 챔버와 일체형인 완전히 폐쇄된 시스템 내에서 수행된다. 일부 구현예에서, 본 공정(및 일부 측면에서 또한 하나 이상의 추가 단계, 예컨대 성분채집술 샘플과 같은 세포를 함유하는 샘플을 세척하는 사전 세척 단계)은 자동화된 방식으로 수행되어, 자동화 프로그램을 이용하여 단일 폐쇄 시스템에서 세척 및 결합 단계를 완료하기 위해 세포, 시약 및 기타 성분이 적절한 시간 및 달성된 원심분리에서 챔버로 유입되고 챔버 밖으로 밀어내어진다.
일부 구현예에서, 세포 및 선택 시약 및/또는 시약들의 인큐베이션 및/또는 혼합 후, 인큐베이션된 세포는 특정 시약 또는 시약들의 존재 또는 부재에 기초하여 세포 선택을 위한 분리를 거친다. 일부 구현예에서, 분리는 선택 시약과 세포의 인큐베이션이 수행되었던 동일한 폐쇄 시스템에서 수행된다. 일부 구현예에서, 선택 시약과 함께 인큐베이션 후, 선택 시약이 결합된 세포를 포함하는 인큐베이션된 세포는 세포의 면역 친화도 기반 분리를 위한 시스템으로 전달된다. 일부 구현예에서, 면역 친화도 기반 분리를 위한 시스템은 자성 분리 컬럼이거나 이를 함유한다.
일부 구현예에서, 단리 방법은 표면 표지자, 예를 들어, 표면 단백질, 세포내 표지자 또는 핵산과 같은 하나 이상의 특정 분자의 세포에서의 발현 또는 존재에 기초한 상이한 세포 유형의 분리를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 표지자에 기초한 분리를 위한 임의의 공지된 방법이 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 분리는 친화도- 또는 면역 친화도-기반 분리이다. 예를 들어, 일부 측면에서 단리에는 하나 이상의 표지자, 통상적으로 세포 표면 표지자의 세포 발현 또는 발현 수준에 기초하여, 예를 들어 상기 표지자에 특이적으로 결합하는 항체 또는 결합 파트너와의 인큐베이션 후 일반적으로 세척 단계 및 항체 또는 결합 파트너와 결합하지 않은 세포로부터 항체 또는 결합 파트너와 결합한 세포의 분리에 의한 세포 및 세포의 집단의 분리가 포함된다.
상기 분리 단계는 시약에 결합된 세포가 추가 사용을 위해 유지되는 양성 선택 및/또는 항체 또는 결합 파트너에 결합하지 않은 세포가 유지되는 음성 선택에 기초할 수 있다. 일부 실시예에서, 두 분획 모두 추가 사용을 위해 유지된다. 일부 측면에서, 음성 선택은 이종 집단에서 세포 유형을 특이적으로 식별하는 항체가 이용 가능하지 않은 경우에 특히 유용할 수 있어서, 분리는 원하는 집단 이외의 세포에 의해 발현된 표지자에 기초하여 가장 잘 수행된다.
분리는 특정 표지자를 발현하는 특정 세포의 집단 또는 세포의 100% 농축 또는 제거로 귀결될 필요는 없다. 예를 들어, 표지자를 발현하는 것과 같은 특정 유형의 세포에 대한 양성 선택 또는 농축은 상기 세포의 수 또는 백분율을 증가시키는 것을 지칭하나, 상기 표지자를 발현하지 않는 세포의 완전한 부재로 귀결될 필요는 없다. 마찬가지로, 표지자를 발현하는 것과 같은 특정 유형의 세포의 음성 선택, 제거 또는 고갈은 상기 세포의 수 또는 백분율을 감소시키는 것을 지칭하나, 상기 모든 세포의 완전한 제거로 귀결될 필요는 없다.
일부 예에서, 다수 라운드의 분리 단계가 수행되고, 여기서 한 단계에서 양성 또는 음성 선택된 분획은 후속 양성 또는 음성 선택과 같은 또 다른 분리 단계를 거친다. 일부 예에서, 단일 분리 단계는 예컨대 각각 음성 선택을 위해 표적화된 표지자에 대해 특이적인 다수의 항체 또는 결합 파트너와 세포를 인큐베이션함으로써 동시에 다수의 표지자를 발현하는 세포를 고갈시킬 수 있다. 마찬가지로, 다수의 세포 유형이 다양한 세포 유형에서 발현되는 복수의 항체 또는 결합 파트너와 세포를 인큐베이션함으로써 동시에 양성 선택될 수 있다.
예를 들어, 일부 측면에서, 예컨대 하나 이상의 표면 표지자를 높은 수준으로 발현하거나 양성인 세포와 같은 T 세포, 예를 들어 CD28+, CD62L+, CCR7+, CD27+, CD127+, CD4+, CD8+, CD45RA+ 및/또는 CD45RO+ T 세포의 특정 하위 집단은 양성 또는 음성 선택 기술에 의해 단리된다.
예를 들어, CD3+, CD28+ T 세포는 항-CD3/항-CD28 접합 자성 비드(예를 들어, DYNABEADS® M-450 CD3/CD28 T Cell Expander)를 사용하여 양성 선택될 수 있다.
일부 구현예에서, 단리는 양성 선택에 의한 특정 세포의 집단에 대한 농축 또는 음성 선택에 의한 특정 세포의 집단의 고갈에 의해 수행된다. 일부 구현예에서, 양성 또는 음성 선택은 각각 양성 또는 음성 선택된 세포 상에서 발현(표지자+)되거나 상대적으로 보다 높은 수준으로 발현(표지자high)된 하나 이상의 표면 표지자에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 항체 또는 다른 결합제와 세포를 인큐베이션함으로써 달성된다.
특정 구현예에서, 생물학적 샘플, 예를 들어 PBMC 샘플 또는 다른 백혈구 샘플은 음성 및 양성 분획이 모두 유지되는 CD4+ T 세포의 선택의 대상이된다. 특정 구현예에서, CD8+ T 세포는 음성 분획으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 생물학적 샘플은 음성 및 양성 분획이 모두 유지되는 CD8+ T 세포의 선택의 대상이 된다. 특정 구현예에서, CD4+ T 세포는 음성 분획으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, T 세포는 B 세포, 단핵구 또는 다른 백혈구, 예컨대 CD14와 같은 비-T 세포 상에서 발현되는 표지자의 음성 선택에 의해 PBMC 샘플로부터 분리된다. 일부 측면에서, CD4+ 또는 CD8+ 선택 단계는 CD4+ 헬퍼 및 CD8+ 세포 독성 T 세포를 분리하는 데 사용된다. 상기 CD4+ 및 CD8+ 집단은, 하나 이상의 나이브(naive), 기억 및/또는 효과기(effector) T 세포 하위 집단 상에서 발현되거나 상대적으로 보다 높은 정도로 발현되는 표지자에 대한 양성 또는 음성 선택에 의해 하위 집단으로 추가 분류될 수 있다.
일부 구현예에서, CD8+ 세포는 예컨대 각각의 하위 집단과 관련된 표면 항원에 기초한 양성 또는 음성 선택에 의해 나이브, 중앙 기억, 효과기 기억 및/또는 중앙 기억 줄기세포에 대해 추가로 농축되거나 고갈된다. 일부 구현예에서, 중앙 기억 T(TCM) 세포의 농축은 효능을 증가시키기 위해, 예컨대 투여 후의 장기간 생존, 팽창 및/또는 생착을 향상하기 위해 수행되며, 이는 일부 측면에서 상기 하위 집단에서 특히 견고하다. 문헌[Terakura 등 (2012) Blood.1:72-82; Wang 등 (2012) 35(9):689-701]을 참조한다. 일부 구현예에서, TCM-농축 CD8+ T 세포 및 CD4+ T 세포의 조합은 효능을 더욱 증진한다.
일부 구현예에서, 기억 T 세포는 CD8+ 말초 혈액 림프구의 CD62L+ 및 CD62L- 서브세트 모두에 존재한다. PBMC는 예컨대 항-CD8 및 항-CD62L 항체를 사용하여 CD62L-CD8+ 및/또는 CD62L+CD8+ 분획에 대해 농축되거나 고갈될 수 있다.
일부 구현예에서, 중앙 기억 T(TCM) 세포의 농축은 CD45RO, CD62L, CCR7, CD28, CD3 및/또는 CD127의 양성 또는 고도의 표면 발현에 기초하고; 일부 측면에서, 이는 CD45RA 및/또는 그랜자임 B를 발현하거나 고도로 발현하는 세포에 대한 음성 선택에 기초한다. 일부 측면에서, TCM 세포에 대해 농축된 CD8+ 집단의 단리는 CD4, CD14, CD45RA를 발현하는 세포의 고갈 및 CD62L을 발현하는 세포에 대한 양성 선택 또는 농축에 의해 수행된다. 일 측면에서, 중앙 기억 T(TCM) 세포의 농축은 CD4 발현에 기초하여 선택된 세포의 음성 분획으로 시작하여 수행되며, 이는 CD14 및 CD45RA의 발현에 기초한 음성 선택 및 CD62L에 기초한 양성 선택을 거친다. 일부 측면에서, 상기 선택은 동시에 수행되며 다른 측면에서, 순차적으로, 어떠한 순서로든 수행된다. 일부 측면에서, CD8+ 세포의 집단 또는 하위 집단을 제조하는 데 사용된 동일한 CD4 발현 기반 선택 단계가 CD4+ 세포의 집단 또는 하위 집단을 생성하는 데 또한 사용되어, CD4 기반 분리로부터의 양성 및 음성 분획 모두가 유지되고, 선택적으로 하나 이상의 추가적인 양성 또는 음성 선택 단계 후에 방법의 후속 단계에서 사용된다.
특정 예에서, PBMC 샘플 또는 다른 백혈구 샘플은, 음성 및 양성 분획 모두가 유지되는 CD4+ 세포의 선택을 거친다. 이어서 음성 분획은 CD14 및 CD45RA 또는 CD19의 발현에 기초한 음성 선택 및 CD62L 또는 CCR7과 같은 중앙 기억 T 세포의 특유한 표지자에 기초한 양성 선택을 거치고, 양성 및 음성 선택은 어느 순서로든 수행된다.
CD4+ T 헬퍼 세포는 세포 표면 항원을 갖는 세포 집단을 식별하여 나이브, 중앙 기억 및 효과기 세포(effector cell)로 분류된다. CD4+ 림프구는 표준 방법으로 수득될 수 있다. 일부 구현예에서, 나이브 CD4+ T 림프구는 CD45RO-, CD45RA+, CD62L+, CD4+ T 세포이다. 일부 구현예에서, 중앙 기억 CD4+ 세포는 CD62L+ 및 CD45RO+이다. 일부 구현예에서, 주효인자 CD4+ 세포는 CD62L- 및 CD45RO-이다.
일 예에서, 음성 선택에 의해 CD4+ 세포를 농축하기 위해, 단클론 항체 칵테일은 통상적으로 CD14, CD20, CD11b, CD16, HLA-DR 및 CD8에 대한 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 결합 파트너는 양성 및/또는 음성 선택을 위한 세포의 분리가 가능하도록 자성 비드 또는 상자성 비드와 같은 고체 지지체 또는 매트릭스에 결합된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 세포 및 세포의 집단은 면역자성(또는 자성친화도) 분리 기법을 사용하여 분리되거나 단리된다(문헌[Methods in Molecular Medicine, vol. 58: Metastasis Research Protocols, Vol. 2: Cell Behavior In Vitro and In Vivo, p 17-25 Edited by: S. A. Brooks and U. Schumacher ⓒ Humana Press Inc., Totowa, NJ]에서 검토됨).
일부 측면에서, 분리될 세포 샘플 또는 세포 조성물은 작고, 자화 가능한 또는 자성 반응 물질, 예컨대 자성 반응 입자 또는 미세입자, 예컨대 상자성 비드(예를 들어, Dynalbeads 또는 MACS 비드)와 함께 인큐베이션된다. 자성 반응성 물질(예를 들어, 입자)은 일반적으로 분리가 바람직한, 예를 들어 음성 또는 양성 선택이 바람직한 세포 또는 세포의 집단에 존재하는 분자(예를 들어, 표면 표지자)에 특이적으로 결합하는 결합 파트너(예를 들어, 항체)에 직접 또는 간접적으로 부착된다.
일부 구현예에서, 자성 입자 또는 비드는 항체 또는 다른 결합 파트너와 같은 특이적인 결합 부재에 결합되는 자성 반응성 물질을 포함한다. 자성 분리 방법에 사용되는 널리 공지된 많은 자성 반응 물질이 있다. 적합한 자성 입자에는 본 명세서에 참조로 통합된 문헌[Molday, 미국 특허 번호 4,452,773 및 유럽 특허 명세서 EP 452342 B]에 기재된 것이 포함된다. 콜로이드 크기의 입자, 예컨대 문헌[Owen 미국 특허 번호 4,795,698 및 Liberti 등, 미국 특허 번호 5,200,084]에 기재된 것이 다른 예이다.
인큐베이션은 일반적으로 항체 또는 결합 파트너 또는 분자, 예컨대 자성 입자 또는 비드에 부착된 상기 항체 또는 결합 파트너에 특이적으로 결합하는 2차 항체 또는 다른 시약이 샘플 내의 세포 상에 존재하는 경우 세포 표면 분자에 특이적으로 결합하는 조건하에서 수행된다.
일부 측면에서, 샘플은 자기장에 배치되고, 이에 부착된 자성 반응성 또는 자화 가능 입자를 갖는 상기 세포는 자석에 끌려당겨지고 표지되지 않은 세포로부터 분리될 것이다. 양성 선택의 경우, 자석에 끌려당겨진 세포가 유지되고; 음성 선택의 경우, 끌려당겨지지 않은 세포(비표지 세포)가 유지된다. 일부 측면에서, 양성 및 음성 선택의 조합이 동일한 선택 단계 동안 수행되며, 상기 양성 및 음성 분획은 유지되고 추가적으로 가공되거나 추가적인 분리 단계를 거친다.
특정 구현예에서, 자성 반응성 입자는 1차 항체 또는 다른 결합 파트너, 2차 항체, 렉틴, 효소 또는 스트렙타비딘으로 코팅된다. 특정 구현예에서, 자성 입자는 하나 이상의 표지자에 특이적인 1차 항체의 코팅을 통해 세포에 부착된다. 특정 구현예에서, 비드보다는 세포가 1차 항체 또는 결합 파트너로 표지되고, 이어서 세포 유형 특이적 2차 항체- 또는 다른 결합 파트너(예를 들어, 스트렙타비딘)-코팅된 자성 입자가 첨가된다. 특정 구현예에서, 스트렙타비딘 코팅된 자성 입자는 비오틴이 부착된 1차 또는 2차 항체와 함께 사용된다.
일부 구현예에서, 자성 반응성 입자는 후속적인 인큐베이션, 배양 및/또는 조작될 세포에 부착되어 남아있고; 일부 측면에서, 상기 입자는 환자에게 투여하기 위한 세포에 부착되어 남아있는다. 일부 구현예에서, 자화 가능 또는 자성 반응성 입자는 세포로부터 제거된다. 세포에서 자화 가능 입자를 제거하는 방법은 공지되어 있고, 예를 들어 경쟁 비-표지 항체 및 절단 가능한 링커에 접합된 자화 가능 입자 또는 항체 등의 사용을 포함한다. 일부 구현예에서, 자화 가능 입자는 생분해성이다.
일부 구현예에서, 친화도 기반 선택은 자성 활성화 세포 분류(magnetic-activated cell sorting, MACS, Miltenyi Biotec, Auburn, CA)를 통한 것이다. 자성 활성화 세포 분류(MACS) 시스템은 자화된 입자가 부착되어 있는 세포를 고순도로 선택할 수 있다. 특정 구현예에서, MACS는 외부 자기장의 적용 후에 비 표적 종 및 표적 종이 순차적으로 용리되는 방식으로 작동한다. 즉, 자화된 입자에 부착된 세포는 부착되지 않은 종이 용리되는 반면 제자리에 유지된다. 이어서, 상기 제1 용리 단계가 완료된 후, 자기장에 포획되고 용리가 방지된 종은 용리 및 회수될 수 있는 상당한 방식으로 해제된다. 특정 구현예에서, 비 표적 세포는 표지되고 이종 세포의 집단으로부터 고갈된다.
특정 구현예에서, 단리 또는 분리는 본 방법의 단리, 세포 조제, 분리, 가공, 인큐베이션, 배양 및/또는 제형화 단계 중 하나 이상을 수행하는 시스템, 디바이스 또는 장치를 사용하여 수행된다. 일부 측면에서, 시스템은 예를 들어 오류, 사용자 취급 및/또는 오염을 최소화하기 위해 폐쇄 또는 멸균 환경에서 상기 단계 각각을 수행하는 데 사용된다. 일 예에서, 시스템은 문헌[WO2009/072003 또는 US 20110003380]에 기재된 바와 같은 시스템이다.
일부 구현예에서, 시스템 또는 장치는 통합 또는 독립 언어 시스템 및/또는 자동화되거나 프로그램 가능한 방식으로 단리, 가공, 조작 및 제형화 단계 중 하나 이상, 예를 들어 모두를 수행한다. 일부 측면에서, 시스템 또는 장치는 사용자가 가공, 단리, 조작 및 제형화 단계의 결과를 프로그램, 제어, 산정하고/거나 가공, 단리, 조작 및 제형화 단계의 다양한 측면을 조정할 수 있게 하는, 상기 시스템 또는 장치와 통신하는 컴퓨터 및/또는 컴퓨터 프로그램을 포함한다.
일부 측면에서, 분리 및/또는 다른 단계는 예를 들어 폐쇄 및 멸균 시스템에서 임상 규모 수준으로 세포의 자동 분리를 위해 CliniMACS 시스템(Miltenyi Biotec)을 사용하여 수행된다. 구성 요소에는 통합 마이크로 컴퓨터, 자성 분리 유닛, 연동 펌프 및 다양한 핀치 밸브가 포함될 수 있다. 일부 측면에서, 통합 컴퓨터는 기기의 모든 구성 요소를 제어하고 시스템에 표준화된 순서로 반복된 절차를 수행하도록 지시한다. 일부 측면에서, 자성 분리 유닛은 이동 가능한 영구 자석 및 선택 칼럼을 위한 홀더를 포함한다. 연동 펌프는 배관 세트 전체의 유량을 제어하고, 핀치 밸브와 함께 시스템을 통한 완충제의 흐름 제어와 세포의 지속적인 현탁을 보장한다.
일부 측면에서, CliniMACS 시스템은 멸균, 비발열성 용액으로 공급되는 항체 결합 자화 가능 입자를 사용한다. 일부 구현예에서, 자성 입자로 세포를 표지한 후 세포를 세척하여 과량의 입자를 제거한다. 이어서, 세포 조제 백은 배관 세트에 연결되고, 이는 차례로 완충제를 함유한 백 및 세포 수집 백에 연결된다. 배관 세트는 전치칼럼 및 분리 컬럼을 포함한 사전 조립된 멸균 배관으로 구성되며 일회용이다. 분리 프로그램이 시작된 후, 시스템은 세포 샘플을 분리 컬럼에 자동으로 적용한다. 표지된 세포는 컬럼 내에 유지되는 반면, 표지되지 않은 세포는 일련의 세척 단계에 의해 제거된다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 방법과 함께 사용하기 위한 세포의 집단은 표지되지 않고 컬럼에 유지되지 않는다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 방법과 함께 사용하기 위한 세포의 집단은 표지되고 컬럼에 유지된다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 방법과 함께 사용하기 위한 세포의 집단은 자기장을 제거한 후 컬럼으로부터 용리되고, 세포 수집 백 내에 수집된다.
특정 구현예에서, 분리 및/또는 다른 단계는 CliniMACS Prodigy 시스템(Miltenyi Biotec)을 사용하여 수행된다. 일부 측면에서, CliniMACS Prodigy 시스템에는 원심 분리에 의한 세포의 자동 세척 및 세포의 분획화가 가능한 세포 가공 유닛이 구비되어 있다. CliniMACS Prodigy 시스템에는 공급원 세포 산물의 거시적인 층을 판별하여 최적의 세포 분획화 종점을 알아내는 내장 카메라 및 이미지 인식 소프트웨어도 포함될 수 있다. 예를 들어, 말초 혈액은 적혈구, 백혈구 및 혈장 층으로 자동 분리된다. CliniMACS Prodigy 시스템에는 또한 예를 들어, 세포 분화 및 팽창, 항원 로딩 및 장기 세포 배양과 같은 세포 배양 프로토콜을 달성하는 통합 세포 배양 챔버가 포함될 수 있다. 입력 포트는 배지의 멸균 제거 및 보충을 가능하게 할 수 있고 통합 현미경을 사용하여 세포를 모니터링할 수 있다. 예를 들어, 문헌[Klebanoff 등 (2012) J Immunother. 35(9): 651-660, Terakura 등 (2012) Blood.1:72-82, 및 Wang 등 (2012) J Immunother. 35(9):689-701]을 참조한다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 세포 집단은 유세포 분석을 통해 수집 및 농축(또는 고갈)되고, 여기서 다수의 세포 표면 표지자에 대해 염색된 세포는 유체 스트림으로 운반된다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 세포 집단은 제조 규모(FACS) 분류를 통해 수집 및 농축(또는 고갈)된다. 특정 구현예에서, 본 명세서에 기재된 세포 집단은 FACS 기반 검출 시스템과 조합된 미세전자기계 시스템(microelectromechanical system, MEMS) 칩을 사용하여 수집 및 농축(또는 고갈)된다(예를 들어, 문헌[WO 2010/033140, Cho 등 (2010) Lab Chip 10, 1567-1573; 및 Godin 등 (2008) J Biophoton. 1(5):355-376] 참조한다.). 두 경우 모두에서, 세포는 다수의 표지자로 표지될 수 있으며, 이는 고순도로 명확한 T 세포 서브세트의 단리를 가능하게 한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 결합 파트너는 하나 이상의 검출 가능한 표지자로 표지되어, 양성 및/또는 음성 선택을 위한 분리를 용이하게 한다. 예를 들어, 분리는 형광 표지된 항체에 대한 결합에 기초할 수 있다. 일부 실시예에서, 하나 이상의 세포 표면 표지자에 특이적인 항체 또는 다른 결합 파트너의 결합에 기초한 세포의 분리는 예를 들어 유세포 분석 검출 시스템과 조합하여 예컨대 조제 규모(FACS) 및/또는 미세전자기계 시스템(MEMS) 칩을 포함하는 형광 활성화 세포 분류(fluorescence-activated cell sorting, FACS)에 의해 유체 스트림에서 수행된다. 상기 방법은 다수의 표지자에 기초하여 양성 및 음성 선택을 동시에 가능하게 한다.
일부 구현예에서, 제조 방법은 단리, 인큐베이션 및/또는 조작 전이든 후이든 세포를 동결하는 단계, 예를 들어, 냉동 보존하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 동결 및 후속 해동 단계는 세포의 집단에서 과립구 및 어느 정도 단핵구를 제거한다. 일부 구현예에서, 세포는 예를 들어, 혈장 및 혈소판을 제거하기 위한 세척 단계 이후에 동결 용액에서 현탁된다. 일부 측면에서, 공지된 임의의 다양한 동결 용액 및 매개변수가 사용될 수 있다. 일 예는 20 % DMSO 및 8 % 인간 혈청 알부민(HSA)을 함유하는 PBS 또는 다른 적합한 세포 동결 배지를 사용하는 것을 포함한다. 이어서, 상기를 DMSO 및 HSA의 최종 농도가 각각 10% 및 4%가 되도록 배지로 1:1로 희석시킨다. 이어서 세포를 일반적으로 분당 1°의 속도로 -80 ℃까지 동결시키고 액체 질소 저장 탱크의 기상(vapor phase)에서 저장한다.
일부 구현예에서, 단리 및/또는 선택은 농축 T 세포, 예를 들어, CD3+ T 세포, CD4+ T 세포, 및/또는 CD8+ T 세포의 하나 이상의 입력 조성물을 생성한다. 일부 구현예에서, 2개 이상의 개별 입력 조성물이 단일 생물학적 샘플에서 분리, 선택, 농축되거나 수득된다. 일부 구현예에서, 별도의 입력 조성물은 동일한 대상에서 수집, 채취 및/또는 수득된 별도의 생물학적 샘플에서 분리, 선택, 농축 및/또는 수득된다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 입력 조성물은 적어도 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 적어도 99.5%, 적어도 99.9%, 또는 약 100%의 CD3+ T 세포를 포함하는 농축 T 세포의 조성물이거나 이를 포함한다. 특정 구현예에서, 농축 T 세포의 입력 조성물은 본질적으로 CD3+ T 세포로 구성된다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 입력 조성물은 적어도 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 적어도 99.5%, 적어도 99.9%, 또는 약 100%의 CD4+ T 세포를 포함하는 농축 CD4+ T 세포의 조성물이거나 이를 포함한다. 특정 구현예에서, CD4+ 세포의 입력 조성물은 40% 미만, 35% 미만, 30% 미만, 25% 미만, 20% 미만, 15% 미만, 10% 미만, 5% 미만, 1% 미만, 0.1% 미만, 또는 0.01% 미만의 CD8+ T 세포를 포함하고/거나 CD8+ T 세포를 포함하지 않거나 및/또는 CD8+ T 세포가 없거나 실질적으로 없다. 일부 구현예에서, 농축 T 세포의 구성은 본질적으로 CD4+ T 세포로 구성된다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 조성물은 적어도 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 적어도 99.5%, 적어도 99.9%, 또는 약 100%의 CD8+ T 세포를 포함하는 CD8+ 세포의 조성물이거나 이를 포함한다. 특정 구현예에서, CD8+ 세포의 조성물은 40% 미만, 35% 미만, 30% 미만, 25% 미만, 20% 미만, 15% 미만, 10% 미만, 5% 미만, 1% 미만, 0.1% 미만, 또는 0.01% 미만의 CD4+ T 세포를 포함하고/거나 CD4+ T 세포를 포함하지 않거나 및/또는 CD4+ T 세포가 없거나 실질적으로 없다. 일부 구현예에서, 농축 T 세포의 구성은 본질적으로 CD8+ T 세포로 구성된다.
2. 활성화 및 자극
일부 구현예에서, 세포는 유전자 조작과 관련하여 또는 그 전에 인큐베이션 및/또는 배양된다. 인큐베이션 단계는 배양, 양성, 자극, 활성화 및/또는 번식(propagation)을 포함할 수 있다. 인큐베이션 및/또는 조작은 배양 용기, 예컨대 유닛, 챔버, 웰(well), 컬럼, 관, 배관 세트, 밸브, 바이알(vial), 배양 접시, 백(bag) 또는 세포 배양 또는 양성을 위한 다른 용기에서 수행될 수 있다. 일부 구현예에서, 조성물 또는 세포는 자극 조건 또는 자극제의 존재 하에 인큐베이션된다. 상기 조건은 집단에서 세포의 증식, 팽창, 활성화 및/또는 생존을 유도하고, 항원 노출을 모방하고, 및/또는 재조합 항원 수용체의 도입과 같은 유전자 조작을 위해 세포를 프라이밍하도록 설계된 것을 포함한다.
상기 조건은 특정 배지, 온도, 산소 함량, 이산화탄소 함량, 시간, 제제(agents), 예를 들어 영양소, 아미노산, 항생제, 이온 및/또는 자극 인자, 예컨대 사이토카인, 케모카인(chemokines), 항원, 결합 파트너, 융합 단백질, 재조합 가용성 수용체 및 세포를 활성화시키기 위해 설계된 임의의 기타 제제 중 하나 이상을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 자극 조건 또는 제제는 TCR 복합체의 세포내 신호 전달 도메인을 자극 또는 활성화시킬 수 있는 하나 이상의 제제(예를 들어, 리간드)를 포함한다. 일부 측면에서, 상기 제제는 T 세포에서 TCR/CD3 세포내 신호 전달 계단식 다단계 반응을 켜거나 개시한다. 상기 제제는 항체, 예컨대 TCR에 특이적인 것, 예를 들어 항-CD3을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 자극 조건은 공자극 수용체, 예를 들어 항-CD28을 자극할 수 있는 하나 이상의 제제(예를 들어, 리간드)를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 제제 및/또는 리간드는 비드와 같은 고체 지지체 및/또는 하나 이상의 사이토카인에 결합될 수 있다. 임의적으로, 팽창 방법은 (예를 들어, 적어도 약 0.5ng/ml 이상의 농도에서) 배양 배지에 항-CD3 및/또는 항-CD28 항체를 첨가하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 자극제는 IL-2, IL-15 및/또는 IL-7을 포함한다. 일부 측면에서, IL-2 농도는 적어도 약 10 단위/mL 이다.
일부 측면에서, 인큐베이션은 예컨대 문헌[미국 특허 번호 6,040,1 77 Riddell 등, Klebanoff 등 (2012) J Immunother. 35(9): 651-660, Terakura 등 (2012) Blood.1:72-82 및/또는 Wang 등 (2012) J Immunother. 35(9):689-701]에 기재된 기술에 따라 수행된다.
일부 구현예에서, T 세포는 배양 개시 조성물 배양보조 세포, 예컨대 비분할 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)에 첨가하고(예를 들어 생성된 세포 집단은 증폭될 초기 집단 중 각각의 T 림프구에 대해 적어도 약 5, 10, 20 또는 40 이상의 PBMC 배양보조 세포를 함유하도록); 상기 배양물을 인큐베이션(예를 들어 T 세포 수를 증폭하기에 충분한 시간 동안)하여 증폭된다. 일부 측면에서, 비분할 배양보조 세포는 감마-조사된(gamma-irradiated) PBMC 배양보조 세포를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, PBMC에 약 3000 내지 3600 라드(rad) 범위의 감마선을 조사하여 세포 분열을 방지한다. 일부 측면에서, 배양보조 세포는 T 세포의 집단의 첨가 전에 배양 배지에 첨가된다.
일부 구현예에서, 자극 조건은 인간 T 림프구의 성장에 적합한 온도, 예를 들어, 적어도 약 25℃ 이상, 일반적으로 적어도 약 30℃ 이상 및 일반적으로 (약) 37℃를 포함한다. 선택적으로, 인큐베이션은 배양보조 세포로서 비분할 EBV 형질전환 림프아구 세포(LCL)를 첨가하는 것을 더 포함할 수 있다. LCL은 약 6000 내지 10,000 라드 범위의 감마선으로 조사될 수 있다. 일부 측면에서, LCL 배양보조 세포는 임의의 적합한 양으로 제공되며, 예컨대 LCL 배양보조 세포 대 초기 T 림프구의 비율이 적어도 약 10:1 이상으로 제공된다.
구현예에서, 항원 특이적 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포와 같은 항원 특이적 T 세포는 항원으로 나이브 또는 항원 특이적 T 림프구를 자극하여 수득된다. 예를 들어, 항원 특이적 T 세포주 또는 클론은 감염된 대상체로부터 T 세포를 단리하고 시토메갈로 바이러스 항원으로 시험관 내에서 세포를 자극함으로써 같은 항원에 대해 생성될 수 있다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 자극 조건 또는 자극제의 존재 하에서 인큐베이션의 적어도 일부는 예를 들어 문헌[국제 공개 번호 WO2016/073602]에 기재된 바와 같은 원심분리 회전 하에서, 원심분리기 챔버의 내부 공동에서 수행된다. 일부 구현예에서, 원심분리 챔버에서 수행되는 인큐베이션의 적어도 일부는 자극 및/또는 활성화를 유도하기 위한 시약 또는 시약들과 혼합하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 선택된 세포와 같은 세포는 원심분리 챔버에서 자극 조건 또는 자극제와 혼합된다. 상기 과정의 일부 측면에서, 일정 부피의 세포를 세포 배양 플레이트 또는 다른 시스템에서 유사한 자극을 수행할 때 일반적으로 사용되는 것보다 훨씬 적은 하나 이상의 자극 조건 또는 제제의 양과 혼합한다.
일부 구현예에서, 자극제는, 선택이 원심분리 챔버에서, 예를 들어 주기적으로 흔들거나 회전하는 튜브나 백에서 혼합되지 않고 수행될 경우 같은 수의 세포 또는 같은 부피의 세포와 대략 동일하거나 유사한 선택 효율을 달성하기 위해 전형적으로 사용되거나 필요한 자극제의 양과 비교하여 실질적으로 보다 적은 양(예를 들어, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70% 또는 80% 이내의 양)으로 챔버의 공동에 있는 세포에 첨가된다. 일부 구현예에서, 인큐베이션은 예를 들어 10 mL 내지 200 mL, 예컨대 적어도 (약) 또는 약 10 mL, 20 mL, 30 mL, 40 mL, 50 mL, 60 mL, 70 mL, 80 mL, 90 mL, 100 mL, 150 mL 또는 200 mL의 시약의 인큐베이션을 갖는 표적 부피를 달성하기 위해 세포 및 자극제에 인큐베이션 완충제의 첨가로 수행된다. 일부 구현예에서, 인큐베이션 완충제 및 자극제는 세포에 첨가하기 전에 미리 혼합된다. 일부 구현예에서, 인큐베이션 완충제 및 자극제는 세포에 별도로 첨가된다. 일부 구현예에서, 자극 인큐베이션은 주기적으로 부드럽게 혼합하는 조건으로 수행되며, 이는 양호한 상호작용을 활발하게 촉진하는데 도움이 될 수 있으며, 이로써 세포의 자극 및 활성화를 달성하면서 전반적으로 자극제의 보다 적은 사용이 가능할 수 있다.
일부 구현예에서, 인큐베이션은 일반적으로 스피닝(spinning)이 존재하는 것과 같은 혼합 조건 하에서 수행되며, 일반적으로 이는 상대적으로 낮은 힘 또는 속도, 예컨대 세포를 펠릿화하기 위해 사용되는 것보다 더 낮은 속도, 예컨대 (약) 600rpm 내지 (약) 1700rpm(예를 들어, (약) 600rpm, 1000rpm 또는 1500rpm 또는 1700rpm 또는 600rpm, 1000rpm 또는 1500rpm 또는 1700rpm 이상)에서, 예컨대 (약) 80g 내지 100g(예를 들어, (약) 80g, 85g, 90g, 95g 또는 100g 또는 80g, 85g, 90g, 95g 또는 100g 이상)의 챔버 또는 다른 용기의 벽 또는 샘플에서 RCF로 수행된다. 일부 구현예에서, 스핀은 상기와 같은 낮은 속도의 스핀과 이어지는 휴지 기간(rest period), 예컨대 스핀 및/또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10초 동안의 휴지, 예컨대, 대략 1 또는 2초의 스핀과 이어지는 대략 5, 6, 7 또는 8초 동안의 휴지의 구간을 반복하여 수행된다.
일부 구현예에서, 예를 들어 자극제와 인큐베이션의 총 지속 시간은 (약) 1시간 내지 96시간, 1시간 내지 72시간, 1시간 내지 48시간, 4시간 내지 36시간, 8시간 내지 30시간 또는 12시간 내지 24시간, 예컨대 적어도 (약) 6시간, 12시간, 18시간, 24시간, 36시간 또는 72시간이다. 일부 구현예에서, 추가 인큐베이션은 (약) 1시간 내지 48시간, 4시간 내지 36시간, 8시간 내지 30시간 또는 12시간 내지 24시간(수치 포함) 동안이다.
특정 구현예에서, 자극 조건은 하나 이상의 사이토카인과 함께 및/또는 존재하에 농축 T 세포의 조성물을 인큐베이션, 배양 및/또는 양성하는 것을 포함한다. 특정 구현예에서, 하나 이상의 사이토카인은 재조합 사이토카인이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 사이토카인은 인간 재조합 사이토카인이다. 특정 구현예에서, 하나 이상의 사이토카인은 T 세포 대해 내인성이고/거나 T 세포에 의해 발현되는 수용체에 결합하고/거나 결합할 수 있다. 특정 구현예에서, 하나 이상의 사이토카인은 사이토카인의 4-알파-헬릭스 번들 패밀리의 멤버이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 사이토카인의 4-알파-헬릭스 번들 패밀리의 멤버는 인터루킨-2(IL-2), 인터루킨-4(IL-4), 인터루킨-7(IL-7), 인터루킨-9 (IL-9), 인터루킨 12(IL-12), 인터루킨 15(IL-15), 과립구 콜로니 자극 인자(granulocyte colony-stimulating factor, G-CSF) 및 과립구 대식세포 콜로니 자극 인자(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor, GM-CSF)를 포함하되 이에 국한되지 않는다.
일부 구현예에서, 예를 들어 형질도입 전에 자극은 세포의 활성화 및/또는 증식을 초래한다.
3. 유전자 조작을 위한 벡터 및 방법
일부 구현예에서, 제공된 방법, 용도, 제조 물품 또는 조성물과 관련하여 사용되는 T 세포와 같은 조작된 세포는 재조합 수용체, 예를 들어 CAR, 예컨대 본원에 기재된 것들을 발현하도록 유전자 조작된 세포이다. 일부 구현예에서, 세포는 재조합 수용체 및/또는 기타 분자를 암호화하는 핵산 서열의 도입, 전송 또는 전달에 의해 조작된다.
일부 구현예에서, 조작된 세포를 생산하는 방법은 재조합 수용체(예: 항-CD19 CAR)를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 세포, 예를 들어 자극된 또는 활성화된 세포로 도입하는 것을 포함한다. 특정 구현예에서, 재조합 단백질은 기술된 것과 같은 재조합 수용체이다. 세포에서 재조합 수용체와 같은 재조합 단백질을 암호화하는 핵산 분자의 도입은 공지된 다수의 임의의 벡터를 사용하여 수행될 수 있다. 상기 벡터에는 렌티바이러스 및 감마레트로바이러스 시스템을 포함한 바이러스 및 비-바이러스 시스템뿐만 아니라 PiggyBac 또는 Sleeping Beauty 기반 유전자 전달 시스템과 같은 트랜스포손 기반 시스템이 포함된다. 예시적인 방법은 바이러스, 예를 들어 레트로바이러스 또는 렌티바이러스, 형질도입, 트랜스포손 및 전기 천공법을 통한 것을 포함하여 수용체를 암호화하는 핵산의 전달을 위한 방법을 포함한다. 일부 구현예에서, 조작은 농축 T 세포의 하나 이상의 조작된 조성물을 생성한다.
특정 구현예에서, 자극된 T 세포의 하나 이상의 조성물은 농축 T 세포의 2개의 개별 자극된 조성물이거나 이를 포함한다. 특정 구현예에서, 농축 T 세포의 2개의 개별 조성, 예를 들어 동일한 생물학적 샘플로부터 선택, 단리 및/또는 농축된 농축 T 세포의 2개의 개별 조성은 개별적으로 조작된다. 특정 구현예에서, 두 개의 개별 조성물은 농축 CD4+ T 세포의 조성물을 포함한다. 특정 구현예에서, 두 개의 개별 조성물은 농축 CD8+ T 세포의 조성물을 포함한다. 일부 구현예에서, 농축 CD4+ T 세포 및 농축 CD8+ T 세포의 두 가지 개별 조성물은 별도로 유전적으로 조작된다.
일부 구현예에서, 유전자 전달은 먼저 세포를 자극하고, 예컨대 세포를 증식, 생존 및/또는 활성화와 같은 반응을 유도하는 자극과 조합하고, 예를 들어 사이토카인 또는 활성화 표지자의 발현에 의해 측정된 바와 같이, 뒤이어 활성화된 세포의 형질도입 및 임상 적용에 충분한 수로 배양에서 팽창시켜 달성된다. 특정 구현예에서, 유전자 전달은 설명된 임의의 방법과 같은 자극 조건 하에 세포를 배양함으로써 달성된다.
일부 구현예에서, 유전자 조적 방법은, 재조합 단백질, 예를 들어 재조합 수용체를 암호화하는 핵산 분자와 조성물의 하나 이상의 세포를 접촉시킴으로써 수행된다. 일부 구현예에서, 접촉은 회전 접종(예를 들어 원심분리 접종)과 같은 원심분리로 달성될 수 있다. 상기 방법은 문헌[국제 공개 번호 WO2016/073602]에 기재된 바와 같은 임의의 것을 포함한다. 예시적인 원심분리 챔버는 Biosafe SA에 의해 생산 및 판매되는 챔버를 포함하며, Sepax® 및 Sepax® 2 시스템과 함께 사용하기 위한 챔버를 포함하고, A-200/F 및 A-200 원심분리 챔버 및 상기 시스템과 함께 사용하기 위한 다양한 키트를 포함한다. 예시적인 챔버, 시스템 및 공정 기기 및 캐비닛은 예를 들어 문헌[미국 특허 번호 6,123,655, 미국 특허 번호 6,733,433 및 미국 특허 출원 공개 번호 2008/0171951 및 국제 특허 출원 공개 번호 WO 00/38762]에 기재되어 있고, 각각의 내용은 본 명세서에 그 전체가 참조로 포함된다. 상기 시스템과 함께 사용하기 위한 예시적인 키트는 제품 이름 CS-430.1, CS-490.1, CS-600.1 또는 CS-900.2로 BioSafe SA에서 판매되는 일회용 키트를 포함하나 이에 한정되지 않는다.
일부 구현예에서, 접촉은 회전 접종(예를 들어 원심분리 접종)과 같은 원심분리로 달성될 수 있다. 일부 구현예에서, 세포, 벡터, 예를 들어 바이러스 입자 및 시약을 함유하는 조성물을 일반적으로 상대적으로 작은 힘 또는 낮은 속도, 예컨대 세포를 펠릿화하기 위해 사용되는 것보다 더 낮은 속도, 예컨대 (약) 600 rpm 내지 1700 rpm (예를 들어 약 또는 적어도 600 rpm, 1000 rpm 또는 1500 rpm 또는 1700 rpm 또는 600 rpm, 1000 rpm 또는 1500 rpm 또는 1700 rpm)으로 회전시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 회전은 예를 들어 챔버 또는 공동의 내벽 또는 외벽에서 측정된 바와 같은, (약) 100g 내지 3200g의 힘(예를 들어 약 또는 적어도 (약) 100g, 200g, 300g, 400g, 500g, 1000g, 1500g, 2000g, 2500g, 3000g 또는 3200g)으로, 예를 들어, 상대 원심력으로 수행된다. 용어 “상대 원심력” 또는 RCF는 일반적으로 회전축과 비교하여 공간의 특정 지점에서 지구의 중력에 대해 상대적인 물체 또는 물질(예컨대 세포, 샘플 또는 펠릿 및/또는 회전되는 챔버 또는 다른 용기의 지점)에 부여된 유효힘(effective force)으로 이해된다. 상기 값은 중력, 회전 속도 및 회전 반경(회전 축과 RCF를 측정하는 물체, 물질 또는 입자로부터의 거리)을 고려하여 잘 알려진 공식을 사용하여 결정될 수 있다.
일부 구현예에서, 시스템은 형질 도입 단계 및 시스템, 예를 들어 본 명세서 또는 문헌[국제 공개 번호 WO2016/073602]에 기재된 바와 같은 원심분리 챔버로 수행되거나 이와 관련하여 수행될 수 있는 하나 이상의 공정 단계에서 수행되는 하나 이상의 다양한 다른 공정 단계의 측면을 작동, 자동화, 제어 및/또는 모니터링하기 위한 기기를 포함하여 다른 기기와 공동으로 포함되고/거나 이와 공동으로 배치된다. 일부 구현예에서 상기 기기는 캐비닛 내에 포함되어 있다. 일부 구현예에서, 기기에는 제어 회로, 원심분리기, 커버, 모터, 펌프, 센서, 디스플레이 및 사용자 인터페이스를 수용한 하우징을 포함한 캐비닛이 포함된다. 예시적인 디바이스가 문헌[미국 특허 번호 6,123,655, 미국 특허 번호 6,733,433 및 US 2008/0171951]에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, 시스템은 일련의 용기, 예를 들어 백, 튜브, 스톱콕, 클램프, 커넥터 및 원심분리 챔버를 포함한다. 일부 구현예에서, 백과 같은 용기는 동일한 백 또는 별도의 백과 같은 동일한 용기 또는 별도의 용기에 형질도입될 세포 및 바이러스 벡터 입자를 함유하는 백과 같은 하나 이상의 용기를 포함한다. 일부 구현예에서, 시스템은 챔버 내로 들어오는 희석제 및/또는 세척 용액 및/또는 방법 중에 성분 및/또는 조성물을 희석, 재현탁 및/또는 세척하기 위한 기타 성분 같은 배지를 함유하는, 백 같은 하나 이상의 용기를 추가로 포함한다. 용기는 시스템의 하나 이상의 위치에, 예컨대 입력 라인, 희석 라인, 세척 라인, 폐기물 라인 및/또는 출력 라인에 대응하는 위치에 연결될 수 있다.
일부 구현예에서, 챔버는 예컨대 회전축 주위로 챔버를 회전시킬 수 있는 원심분리기와 결합되어 있다. 회전은 세포의 형질도입과 관련하여 및/또는 다른 공정 단계 중 하나 이상에서 인큐베이션 이전, 동중 및/또는 이후에 발생할 수 있다. 따라서, 일부 구현예에서, 하나 이상의 다양한 공정 단계는 예를 들어, 특정 힘으로 회전되면서 수행된다. 챔버는 챔버가 원심분리 중에 수직으로 위치하고 측면 벽과 축은 수직 또는 일반적으로 수직이며, 말단 벽은 수평 또는 일반적으로 수평이 되도록, 챔버는 전형적으로 수직 또는 일반적으로 수직 회전할 수 있다.
일부 구현예에서, 유전자 조작의 적어도 일부, 예를 들어 형질 도입 및/또는 후속적인 유전자 조작 중에, 세포는 세포의 배양 또는 증폭과 같은 유전자 조작된 세포의 배양을 위해 생물 반응기 백 어셈블리로 전달된다.
일부 구현예에서, 재조합 핵산은 예를 들어, 시미안 바이러스 40(SV40), 아데노바이러스, 아데노 연관 바이러스(adeno-associated virus, AAV)로부터 유래된 벡터와 같은 재조합 감염성 바이러스 입자를 사용하여 세포내로 전달된다. 일부 구현예에서, 재조합 핵산은 재조합 렌티바이러스 벡터 또는 레트로바이러스 벡터, 예컨대 감마-레트로바이러스 벡터를 사용하여 T 세포 내로 전달된다(예를 들어 문헌[Koste 등 (2014) Gene Therapy 2014 Apr 3. doi: 10.1038/gt.2014.25; Carlens 등 (2000) Exp Hematol 28(10): 1137-46; Alonso-Camino 등 (2013) Mol Ther Nucl Acids 2, e93; Park 등, Trends Biotechnol. 2011 November 29(11): 550-557] 참조한다.).
일부 구현예에서, 레트로바이러스 벡터는 긴 말단 반복 서열(long terminal repeat sequence, LTR)을 가지며, 예를 들어 몰로니 뮤린 백혈병 바이러스(MoMLV), 골수 증식육종 바이러스(myeloproliferative sarcoma virus, MPSV), 뮤린 배아 줄기 세포 바이러스(murine embryonic stem cell virus, MESV), 뮤린 줄기 세포 바이러스(murine stem cell virus, MSCV) 또는 비장 병소 형성 바이러스(spleen focus forming virus, SFFV)로부터 유래된 레트로바이러스 벡터를 갖는다. 대부분의 레트로바이러스 벡터는 뮤린 레트로바이러스로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 레트로바이러스는 임의의 조류 또는 포유류 세포 공급원으로부터 유래된 것을 포함한다. 레트로바이러스는 통상적으로 인간을 포함하여 몇몇 종의 숙주 세포를 감염시킬 수 있음을 의미하는, 암포트로픽(amphotropic)이다. 일 구현예에서, 발현될 유전자는 레트로바이러스의 gag(객), pol(폴) 및/또는 env(엔브) 서열을 대체한다. 다수의 예시적인 레트로바이러스 시스템이 문헌[예를 들어, 미국 특허 번호 5,219,740; 6,207,453; 5,219,740; Miller and Rosman (1989) BioTechniques 7:980-990; Miller, A. D. (1990) Human Gene Therapy 1:5-14; Scarpa 등 (1991) Virology 180:849-852; Burns 등 (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:8033-8037; 및 Boris-Lawrie and Temin (1993) Cur. Opin. Genet. Develop. 3:102-109]에 기재되어 있다.
렌티바이러스 형질도입 방법은 공지되어 있다. 예시적인 방법이 예를 들어, 문헌[Wang 등 (2012) J. Immunother. 35(9): 689-701; Cooper 등 (2003) Blood. 101:1637-1644; Verhoeyen 등 (2009) Methods Mol Biol. 506: 97-114; 및 Cavalieri 등 (2003) Blood. 102(2): 497-505]에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, 바이러스 벡터 입자는 렌티바이러스 게놈 기반 벡터로부터 유래된 것과 같은 레트로바이러스 게놈 기반 벡터로부터 유래된 게놈을 함유한다. 제공된 바이러스 벡터의 일부 측면에서, CAR과 같은 항원 수용체와 같은 재조합 수용체를 암호화하는 이종 핵산은 벡터 게놈의 5′ LTR 및 3′ LTR 서열 사이에 함유되고/거나 위치한다.
일부 구현예에서, 바이러스 벡터 게놈은 HIV-1 게놈 또는 SIV 게놈과 같은 렌티바이러스 게놈이다. 예를 들어, 렌티바이러스 벡터는 독성 유전자를 약화시켜 배가시킴으로써 생성되었으며, 예를 들어, 유전자 env, vif, vpu 및 nef는 결실되어 치료 목적으로 벡터를 더 안전하게 만들 수 있다. 렌티바이러스 벡터는 공지되어 있다. 문헌[Naldini 등, (1996 및 1998); Zufferey 등, (1997); Dull 등, 1998, 미국 특허 번호 6,013,516; 및 5,994,136]을 참조한다. 일부 구현예에서, 상기 바이러스 벡터는 플라스미드 기반 또는 바이러스 기반이며, 숙주 세포로 핵산을 전달하기 위한, 선택을 위한 및 외부 핵산을 통합하기 위한 필수 서열을 운반하도록 구성된다. 공지된 렌티바이러스는 미국형 배양 컬렉션("ATCC"; 10801 University Blvd., Manassas, Va. 20110-2209)과 같은 기탁 기관 또는 컬렉션으로부터 용이하게 수득될 수 있거나 일반적으로 이용 가능한 기술을 사용하여 공지된 출처로부터 단리될 수 있다.
렌티바이러스 벡터의 비제한적인 예로는 인간 면역결핍 바이러스 1(Human Immunodeficiency Virus 1, HIV-1), HIV-2, 시미안 면역결핍 바이러스(Simian Immunodeficiency Virus, SIV), 인간 T 림프성 바이러스 1(Human T-lymphotropic virus 1, HTLV-1), HTLV-2 또는 말 감염 빈혈 바이러스(equine infection anemia virus, E1AV)와 같은 렌티바이러스 유래 벡터가 포함된다. 예를 들어, 렌티바이러스 벡터는 HIV 독성 유전자를 약화시켜 배가시킴으로써 생성되었으며, 예를 들어, 유전자 env, vif, vpr, vpu 및 nef가 결실되어 치료 목적으로 벡터를 더 안전하게 만든다. 렌티바이러스 벡터는 당업계에 공지되어 있으며, 문헌[Naldini 등, (1996 및 1998); Zufferey 등, (1997); Dull 등, 1998, 미국 특허 번호 6,013,516; 및 5,994,136]을 참조한다. 일부 구현예에서, 상기 바이러스 벡터는 플라스미드 기반 또는 바이러스 기반이며, 숙주 세포로 핵산을 전달하기 위한, 선택을 위한 및 외부 핵산을 통합하기 위한 필수 서열을 운반하도록 구성된다. 공지된 렌티바이러스는 미국형 배양 컬렉션("ATCC"; 10801 University Blvd., Manassas, Va. 20110-2209)과 같은 기탁 기관 또는 컬렉션으로부터 용이하게 수득될 수 있거나 일반적으로 이용 가능한 기술을 사용하여 공지된 출처로부터 단리될 수 있다.
일부 구현예에서, 바이러스 게놈 벡터는 렌티바이러스와 같은 레트로바이러스의 5′ 및 3′ LTR 서열을 함유할 수 있다. 일부 측면에서, 바이러스 게놈 작제물은 렌티 바이러스의 5′ 및 3′ LTR로부터의 서열을 함유할 수 있고, 특히 렌티바이러스의 5′ LTR에서 R 및 U5 서열 및 렌티바이러스에서 비활성화되거나 자가 비활성화 3′ LTR을 함유할 수 있다. LTR 서열은 임의의 종으로부터 임의의 렌티바이러스로부터의 LTR 서열일 수 있다. 예를 들어, 이는 HIV, SIV, FIV 또는 BIV로부터의 LTR 서열일 수 있다. 전형적으로 LTR 서열은 HIV LTR 서열이다.
일부 구현예에서, HIV 바이러스 벡터와 같은 바이러스 벡터의 핵산은 추가 전사 단위가 결여된다. 벡터 게놈은 비활성화되거나 또는 자가 비활성화 3′ LTR을 함유할 수 있다(Zufferey 등 J Virol72: 9873, 1998; Miyoshi 등, J Virol 72: 8150, 72). 1998).　예를 들어, 바이러스 벡터 RNA를 생성하는데 사용되는 핵산의 3′ LTR의 U3 영역에서의 결실은 자가 비활성화(self-inactivating, SIN) 벡터를 생성하는데 사용될 수 있다. 이어서 상기 결실은 역전사 동안 프로바이러스(proviral) DNA의 5′ LTR로 전달될 수 있다. 자가 비활성화 벡터는 일반적으로 벡터 통합 중에 5′ LTR로 복사되는 3′ 긴 말단 반복(long terminal repeat, LTR)으로부터의 인핸서 및 프로모터 서열의 결실을 갖는다. 일부 구현예에서 충분한 서열이 LTR의 전사 활성을 폐지하기 위해 TATA 박스의 제거를 포함하여 제거될 수 있다. 이는 형질 도입된 세포에 있는 전체 길이 벡터 RNA의 생산을 방지할 수 있다. 일부 측면에서, 3′ LTR의 U3 요소는 인핸서 서열, TATA 박스, Sp1 및 NF-카파 B 부위의 결실을 함유한다. 자가 비활성화 3′ LTR의 결과로, 도입 및 역전사 후에 생성된 프로바이러스(provirus)는 불활성화된 5′ LTR을 함유한다. 이는 벡터 게놈의 이동 위험 및 근처 세포 프로모터에 대한 LTR의 영향을 감소시킴으로써 안전성을 개선할 수 있다. 자가 비활성화 3′ LTR은 당업계에 공지된 임의의 방법에 의해 작제될 수 있다. 일부 구현예에서, 이는 벡터 역가 또는 벡터의 시험관 내 또는 생체 내 특성에 영향을 미치지 않는다.
선택적으로, 렌티바이러스 5′ LTR로부터의 U3 서열은 이종 프로모터 서열과 같은 바이러스 작제물에서 프로모터 서열로 대체될 수 있다. 이는 패키징 세포주에서 회수되는 바이러스 역가를 증가시킬 수 있다. 인핸서 서열도 포함될 수 있다. 패키징 세포주에서 바이러스 RNA 게놈의 발현을 증가시키는 임의의 인핸서/프로모터 조합이 사용될 수 있다. 일 예로, CMV 인핸서/프로모터 서열이 사용된다(미국 특허 번호 5,385,839 및 미국 특허 번호 5,168,062).
특정 구현예에서, 삽입 돌연변이 발생의 위험은 렌티바이러스 벡터 게놈과 같은 레트로바이러스 벡터 게놈을 통합 결함이 있는 것으로 작제함으로써 최소화할 수 있다. 비통합 벡터 게놈을 생성하기 위해 다양한 접근법을 추구할 수 있다. 일부 구현예에서, 비활성 인테그라제인 단백질을 암호화하도록 pol 유전자의 인테그라제 효소 성분으로 돌연변이(들)가 조작될 수 있다. 일부 구현예에서, 벡터 게놈 자체는 예를 들어 하나 또는 둘 다의 부착 부위를 돌연변이 또는 결실시키거나 3′ LTR 근위 폴리푸린 트랙(polypurine tract, PPT)을 결실 또는 변경을 통해 비기능성으로 만들어 통합을 방지하도록 변경될 수 있다. 일부 구현예에서, 비유전적 접근법이 이용 가능하고; 이는 인테그라제의 하나 이상의 기능을 억제하는 약리학 제제를 포함한다. 상기 접근법은 상호 배타적이지 않다; 즉, 이 중 하나 이상을 한 번에 사용할 수 있다. 예를 들어, 인테그라제와 부착 부위 모두 비기능성일 수 있거나, 인테그라제와 PPT 부위가 비기능성일 수 있거나 또는 부착 부위와 PPT 부위가 비기능성일 수 있거나 또는 이들 모두가 비기능성일 수 있다. 상기 방법과 바이러스 벡터 게놈이 공지되어 있고 이용 가능하다(Philpott and Thrasher,　Human Gene Therapy　18:483, 2007; Engelman 등 J Virol 69:2729, 1995; Brown et al　J Virol　73:9011 (1999); WO 2009/076524; McWilliams 등,　J Virol　77:11150, 2003; Powell and Levin　J Virol　70:5288, 1996 참조한다.).
일부 구현예에서, 벡터는 원핵생물 숙주 세포와 같은 숙주 세포에서 번식을 위한 서열을 함유한다. 일부 구현예에서, 바이러스 벡터의 핵산은 세균 세포와 같은 원핵 세포에서 번식을 위한 하나 이상의 복제 기원을 함유한다. 일부 구현예에서, 원핵 생물 복제 기원을 포함하는 벡터는 또한 유전자 발현이 약물 내성과 같은 검출 가능하거나 선택 가능한 표지자를 부여하는 유전자를 함유할 수 있다.
바이러스 벡터 유전체는 전형적으로 패키징 또는 생산자 세포주로 형질주입될 수 있는 플라스미드 형태로 작제된다. 유전체가 바이러스 벡터 유전체의 RNA 카피를 함유하는 레트로바이러스 입자를 생성하기 위해 다양한 임의의 공지된 방법이 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 2개 이상의 성분이 바이러스 기반 유전자 전달 시스템을 만드는데 관여하는데, 첫째, 구조 단백질뿐만 아니라 바이러스 벡터 입자를 생성하는데 필요한 효소를 포함하는 패키징 플라스미드이고, 둘째, 바이러스 벡터 자체, 즉, 전달될 유전 물질이다. 생물학적 안전성 보호 장치를 상기 성분 중 하나 또는 둘 다의 설계에 도입할 수 있다.
일부 구현예에서, 패키징 플라스미드는 외피 단백질 이외의 HIV-1과 같은 모든 레트로바이러스 단백질을 함유할 수 있다(Naldini 등, 1998). 다른 구현예에서, 바이러스 벡터에는 독성과 관련된 유전자, 예를 들어 vpr, vif, vpu 및 nef 및/또는 Tat, HIV의 1차 전이 활성 인자(transactivator)와 같은 추가 바이러스 유전자가 결여될 수 있다. 일부 구현예에서, HIV 기반 렌티바이러스 벡터와 같은 렌티바이러스 벡터는 모 바이러스의 3가지 유전자: gag, pol 및 rev만을 포함하며, 이는 재조합을 통한 야생형 바이러스의 재구성 가능성을 감소 시키거나 제거한다.
일부 구현예에서, 바이러스 벡터 유전체는 바이러스 벡터 유전체로부터 전사된 바이러스 유전체 RNA를 바이러스 입자로 패키징하는 데 필요한 모든 성분을 함유하는 패키징 세포주에 도입된다. 대안적으로, 바이러스 벡터 게놈은 하나 이상의 서열, 예를 들어, 관심 재조합 핵산뿐만 아니라 바이러스 성분을 암호화하는 하나 이상의 유전자를 포함할 수 있다. 그러나, 일부 측면에서, 표적 세포에서 유전체의 복제를 방지하기 위하여, 복제에 필요한 내인성 바이러스 유전자는 제거되고 패키징 세포주에 별도로 제공된다.
일부 구현예에서, 패키징 세포주는 입자를 생성하는데 필요한 성분을 함유하는 하나 이상의 플라스미드 벡터로 형질주입된다. 일부 구현예에서, 패키징 세포주는 LTR, 시스-작용(cis-acting) 패키징 서열 및 관심 서열, 즉 CAR과 같은 항원 수용체를 암호화하는 핵산; 및 바이러스의 효소 성분 및/또는 구조 성분, 예컨대 Gag, pol 및/또는 rev를 암호화하는 하나 이상의 헬퍼 플라스미드를 포함한 바이러스 벡터 유전체를 함유하는 플라스미드로 형질주입된다. 일부 구현예에서, 레트로바이러스 벡터 입자를 생성하는 다양한 유전 성분을 분리하기 위해 다중 벡터가 이용된다. 상기 일부 구현예에서, 패키징 세포에 별도의 벡터를 제공하는 것은 달리 복제 가능 바이러스를 생성할 수 있는 재조합 사건의 기회를 감소시킨다. 일부 구현예에서, 모든 레트로바이러스 성분을 갖는 단일 플라스미드 벡터를 사용할 수 있다.
일부 구현예에서, 레트로바이러스 벡터 입자, 예컨대 렌티바이러스 벡터 입자는 숙주 세포의 형질도입 효율을 증가시키기 위한 유사형이다. 예를 들어, 일부 구현예에서 레트로바이러스 벡터 입자, 예컨대 렌티바이러스 벡터 입자는 VSV-G 당단백질을 갖는 유사형이고, 이는 형질도입될 수 있는 세포 유형을 확장하여 광범위한 세포 숙주 범위를 제공한다. 일부 구현예에서, 패키징 세포주는 예컨대 신드비스(Sindbis) 바이러스 외피, GALV 또는 VSV-G와 같은 이종향성(xenotropic), 다방성(polytropic) 또는 암포트로픽(amphotropic) 외피를 포함하는 비천연 외피 당단백질을 암호화하는 플라스미드 또는 폴리뉴클레오타이드로 형질주입된다.
일부 구현예에서, 패키징 세포주는 바이러스 유전체 RNA를 렌티바이러스 벡터 입자로 패키징하기 위해 트랜스에서 요구되는 바이러스 조절 및 구조 단백질을 포함한 성분을 제공한다. 일부 구현예에서, 패키징 세포주는 렌티바이러스 단백질을 발현하고 기능성 렌티바이러스 벡터 입자를 생성할 수 있는 임의의 세포주일 수 있다. 일부 측면에서, 적합한 패키징 세포주에는 293(ATCC CCL X), 293T, HeLA(ATCC CCL 2), D17(ATCC CCL 183), MDCK(ATCC CCL 34), BHK(ATCC CCL-10) 및 Cf2Th(ATCC CRL 1430) 세포가 포함된다.
일부 구현예에서, 패키징 세포주는 안정적으로 바이러스 단백질(들)을 발현한다. 예를 들어, 일부 측면에서, gag, pol, rev 및/또는 기타 구조 유전자를 함유하나 LTR 및 패키징 성분은 함유하지 않는 패키징 세포주가 작제될 수 있다. 일부 구현예에서, 패키징 세포주는 이종 단백질을 암호화하는 핵산 분자 및/또는 외피 당단백질을 암호화하는 핵산을 함유하는 바이러스 벡터 유전체와 함께 하나 이상의 바이러스 단백질을 암호화하는 핵산 분자로 일시적으로 형질주입될 수 있다.
일부 구현예에서, 바이러스 벡터 및 패키징 및/또는 헬퍼 플라스미드는 패키징 세포주 내로 형질주입 또는 감염을 통해 도입된다. 패키징 세포주는 바이러스 벡터 유전체를 함유하는 바이러스 벡터 입자를 생산한다. 형질주입 또는 감염을 위한 방법은 잘 알려져 있다. 비제한적인 예에는 인산 칼슘, DEAE-덱스트란 및 리포펙션(lipofection) 방법, 전기 천공법 및 미세주입이 포함된다.
재조합 플라스미드, 및 레트로바이러스 LTR 및 패키징 서열이 특수 세포주로(예를 들어, 인산 칼슘 침전에 의해) 도입될 때, 패키징 서열은 재조합 플라스미드의 RNA 전사물이 바이러스 입자로 패키징되도록 허용할 수 있으며, 이어서 이는 배양 배지로 분비될 수 있다. 이어서 일부 구현예에서 재조합 레트로바이러스를 함유하는 배지가 수집되고, 임의적으로 농축 및 유전자 전달을 위해 사용된다. 예를 들어, 일부 측면에서, 패키징 플라스미드 및 패키징 세포주로의 전달 벡터와의 공형질 감염 후, 바이러스 벡터 입자는 배양 배지로부터 회수되고 당업자들에 의해 사용되는 표준 방법에 의해 적정된다.
일부 구현예에서, 렌티바이러스 벡터와 같은 레트로바이러스 벡터는 렌티바이러스 입자의 생성을 허용하는 플라스미드의 도입에 의해 예시적인 HEK 293T 세포주와 같은 패키징 세포주에서 생성될 수 있다. 일부 구현예에서, 패키징 세포는 형질주입되고/거나 gag 및 pol을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 및 재조합 수용체, 예컨대 항원 수용체(예를 들어 CAR)를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 함유한다. 일부 구현예에서, 패키징 세포주는 rev 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드로 임의적 및/또는 추가적으로 형질주입되고/거나 이를 함유한다. 일부 구현예에서, 패키징 세포주는 VSV-G와 같은 비천연 외피 당단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드로 임의적 및/또는 추가적으로 형질주입되고/거나 이를 함유한다. 일부 상기 구현예에서, 세포(예를 들어, HEK 293T 세포)의 형질주입 후 대략 2일 후에, 세포 상청액은 재조합 렌티바이러스 벡터를 함유하고 이는 회수되어 적정될 수 있다.
회수 및/또는 생성된 레트로바이러스 벡터 입자는 기술된 바와 같은 방법을 사용하여 표적 세포를 형질도입하는 데 사용될 수 있다. 일단 표적 세포에서, 바이러스 RNA는 역전사되고, 핵으로 들어가서 안정적으로 숙주 유전체에 통합된다. 바이러스 RNA의 통합 후 1 또는 2일 후, 재조합 단백질(예를 들어, 항원 수용체, 예컨대 CAR)의 발현이 검출될 수 있다.
일부 구현예에서, 제공된 방법은 바이러스 입자와 복수의 세포를 포함하는 세포 조성물을 접촉, 예를 들어, 인큐베이션함으로써 세포를 형질 도입하는 방법을 포함한다. 일부 구현예에서, 형질 감염 또는 형질 도입될 세포는 대상체로부터 농축 및/또는 선택된 세포와 같은 대상체로부터 얻어진 1차 세포이거나 이를 포함한다.
일부 구현예에서, 조성물 중 형질 도입될 세포의 농도는 (약) 1.0 x 105 세포/mL 내지 1.0 x 108 세포/mL, 예컨대 적어도 (약) 또는 약 1.0 x 105 세포/mL, 5 x 105 세포/mL, 1 x 106 세포/mL, 5 x 106 세포/mL, 1 x 107 세포/mL, 5 x 107 세포/mL 또는 1 x 108 세포/mL이다.
일부 구현예에서, 바이러스 입자는 형질 도입될 세포의 총 수당 바이러스 벡터 입자의 특정 비율의 카피 또는 이의 감염 단위(IU)로 제공된다(IU/세포). 예를 들어, 일부 구현예에서, 바이러스 입자는 접촉하는 동안 하나의 세포 당 (약) 0.5, 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 30, 40, 50 또는 60 IU 또는 0.5, 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 30, 40, 50 또는 60 IU 이상 또는 약 0.5, 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 30, 40, 50 또는 60 IU의 바이러스 벡터 입자로 존재한다.
일부 구현예에서, 바이러스 벡터 입자의 역가는, (약) 1 x 106 IU/mL 내지 1 x 108 IU/mL, 예컨대 (약) 5 x 106 IU/mL 내지 5 x 107 IU/mL, 예컨대 적어도 6 x 106 IU/mL, 7 x 106 IU/mL, 8 x 106 IU/mL, 9 x 106 IU/mL, 1 x 107 IU/mL, 2 x 107 IU/mL, 3 x 107 IU/mL, 4 x 107 IU/mL, 또는 5 x107 IU/mL이다.
일부 구현예에서, 형질 도입은 100 미만, 예컨대 일반적으로 60, 50, 40, 30, 20, 10, 5 이하 미만의 감염 다중도(multiplicity of infection, MOI)를 달성할 수 있다.
*일부 구현예에서, 방법은 바이러스 입자와 세포를 접촉 또는 인큐베이션하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 접촉은 30 분 내지 72 시간, 예컨대 30 분 내지 48 시간, 30 분 내지 24 시간 또는 1 시간 내지 24 시간, 예컨대 30 분, 1 시간, 2 시간, 6 시간, 12 시간, 24 시간, 36 시간 이상 또는 약 30 분, 1 시간, 2 시간, 6 시간, 12 시간, 24 시간, 36 시간 이상 동안이다.
일부 구현예에서, 접촉은 용액에서 수행된다. 일부 구현예에서, 세포 및 바이러스 입자는 (약) 0.5 mL 내지 500 mL, 예컨대 (약) 0.5 mL 내지 200 mL, 0.5 mL 내지 100 mL, 0.5 mL 내지 50 mL, 0.5 mL 내지 10 mL, 0.5 mL 내지 5 mL, 5 mL 내지 500 mL, 5 mL 내지 200 mL, 5 mL 내지 100 mL, 5 mL 내지 50 mL, 5 mL 내지 10 mL, 10 mL 내지 500 mL, 10 mL 내지 200 mL, 10 mL 내지 100 mL, 10 mL 내지 50 mL, 50 mL 내지 500 mL, 50 mL 내지 200 mL, 50 mL 내지 100 mL, 100 mL 내지 500 mL, 100 mL 내지 200 mL 또는 200 mL 내지 500 mL의 부피에서 접촉된다.
특정 구현예에서, 입력 세포는 바이러스 DNA에 의해 암호화되는 재조합 수용체에 결합하거나 이를 인식하는 결합 분자를 포함하는 입자로 처리, 인큐베이션 또는 접촉된다.
일부 구현예에서, 바이러스 벡터 입자와 세포의 인큐베이션은 바이러스 벡터 입자로 형질 도입된 세포를 포함하는 출력 조성물을 초래하거나 생성한다.
일부 구현예에서, 재조합 핵산은 전기 천공법을 통해 T 세포로 전달된다(예를 들어, Chicaybam et al, (2013) PLoS ONE 8(3): e60298 및 Van Tedeloo 등 (2000) Gene Therapy 7(16): 1431-1437. 참조한다.). 일부 구현예에서, 재조합 핵산은 전위(transposition)를 통해 T 세포로 전달된다(예를 들어, Manuri 등 (2010) Hum Gene Ther 21(4): 427-437; Sharma 등 (2013) Molec Ther Nucl Acids 2, e74; 및 Huang 등 (2009) Methods Mol Biol 506: 115-126. 참조한다.). 면역 세포에서 유전 물질을 도입하고 발현시키는 다른 방법에는 인산칼슘 형질주입(예를 들어, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, New York. N.Y.에 기재된 바와 같음), 원형질체 융합, 양이온성 리포솜-매개 형질주입; 텅스텐 입자 촉진 미세 입자 충격(Johnston, Nature, 346: 776-777 (1990)); 및 인산스트론튬 DNA 공동 침전(Brash 등, Mol. Cell Biol., 7: 2031-2034 (1987))이 포함된다.
재조합 산물을 암호화하는 핵산 전달을 위한 다른 접근법 및 벡터는 예를 들어, 문헌[국제 특허 출원, 공개 번호: WO2014055668 및 미국 특허 번호 7,446,190]에 기재된 것이다.
일부 구현예에서, 세포, 예를 들어 T 세포는 예를 들어 키메라 항원 수용체(CAR)를 암호화하는 핵산으로 증폭 동안 또는 후에 형질감염되거나 형질도입될 수 있다. 원하는 수용체의 유전자 도입을 위한 상기 형질 감염은 예를 들어 임의의 적합한 레트로바이러스 벡터로 수행될 수 있다. 이어서 유전자 변형 세포의 집단은 초기 자극(예를 들어, 항-CD3/항-CD28 자극)으로부터 유리될 수 있으며, 후속적으로 제2 유형의 자극으로, 예를 들어 새로이 도입된 수용체를 통해 자극될 수 있다. 상기 제2 유형의 자극은 새로운 수용체의 프레임워크 내에서 직접 결합하는(예를 들어, 수용체 내의 불변 영역을 인지함으로써) 유전자 도입된 수용체의 펩타이드/MHC 분자, 즉 동종(교차 결합) 리간드(예를 들어, CAR의 천연 리간드) 또는 임의의 리간드(예컨대 항체) 형태의 항원 자극을 포함할 수 있다. 예를 들어, 문헌[Cheadle et al, “Chimeric antigen receptors for T-cell based therapy” Methods Mol Biol. 2012; 907:645-66 또는 Barrett 등, Chimeric Antigen Receptor Therapy for Cancer Annual Review of Medicine Vol. 65: 333-347 (2014)]을 참조한다.
일부 경우에, 세포, 예를 들어, T 세포가 활성화되는 것이 필요하지 않은 벡터를 사용할 수 있다. 일부 상기의 경우에, 세포는 활성화되기 전에 선택 및/또는 형질도입될 수 있다. 따라서, 세포는 세포 배양 이전에 또는 이후에 조작될 수 있고, 일부 경우에는 배양의 적어도 일부와 동시에 또는 그 동안에 조작될 수 있다.
추가 핵산 중에서, 예를 들어 도입을 위한 유전자는, 예컨대 전달된 세포의 생존력 및/또는 기능을 촉진함으로써 요법의 효능을 개선하기 위한 유전자; 예컨대 생체 내에서 생존 또는 국소화를 평가하기 위한 세포의 선택 및/또는 평가를 위한 유전자 표지자를 제공하기 위한 유전자; 문헌[Lupton S. D. 등, Mol. and Cell Biol., 11:6 (1991); and Riddell 등, Human Gene Therapy 3:319-338 (1992)]에 기재된 바와 같이 예를 들어 생체 내에서 음성 선택에 세포를 예민하게 만들어 안정성을 개선하기 위한 유전자가 있고; 또한 우성 양성 선택 가능한 표지자를 음성 선택 가능한 표지자와 융합시켜 유래된 2작용성 선택 가능한 융합 유전자의 용도를 기술하는 문헌[국제 출원 공보 PCT/US91/08442 및 PCT/US94/05601 by Lupton 등]을 참조한다. 예를 들어, 문헌[Riddell 등, 미국 특허 번호 6,040,177의 14-17열]을 참조한다.
4. 조작된 세포의 배양, 증폭 및 형성
일부 구현예에서, 예를 들어, 제공된 방법, 용도, 제조 물품 또는 조성물 중 임의의 것에 따른 세포 치료를 위한 조작된 세포를 생성하는 방법은 예를 들어, 증식 및/또는 증폭을 촉진하는 조건 하에 세포를 배양하는 것과 같은 세포 배양을 위한 하나 이상의 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포는 유전자 조작 단계 이후에, 예를 들어 형질도입 또는 형질주입에 의해 재조합 폴리펩타이드를 세포에 도입하는 단계 이후에 증식 및/또는 팽창을 촉진하는 조건 하에서 배양된다. 특정 구현예에서, 세포가 자극 조건 하에서 인큐베이션되고 재조합 폴리뉴클레오타이드(예를 들어, 재조합 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드)로 형질도입되거나 형질주입된 후, 세포가 배양된다. 일부 구현예에서, CAR을 암호화하는 재조합 폴리뉴클레오티드로 형질도입 또는 형질감염에 의해 조작된 CAR-양성 T 세포의 조성물은 증식 및/또는 증폭을 촉진하는 조건 하에 배양된다.
특정 구현예에서, 조작된 T 세포의 하나 이상의 조성물은 농축 T 세포, 예를 들어, 재조합 수용체, 예를 들어 CAR를 암호화하는 폴리뉴클레오티드로 조작된 농축 T 세포의 2개의 개별 조성물과 같이, 2개의 개별 조성물이거나 이를 포함한다. 특정 구현예에서, 농축 T 세포의 2개의 개별 조성물, 예를 들어 동일한 생물학적 샘플로부터 선택, 단리 및/또는 농축된 농축 T 세포의 2개의 개별 조성물은 예를 들어 형질도입 또는 형질감염에 의해 세포에 재조합 폴리펩티드를 도입하는 것과 같은 유전적 조작 단계 이후와 같이 자극 조건 하에 개별적으로 배양된다. 특정 구현예에서, 2개의 별개의 조성물은 농축 CD4+ T 세포의 조성물, 예를 들어, 재조합 수용체, 예를 들어, CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드로 조작된 농축 CD4+ T 세포의 조성물을 포함한다. 특정 구현예에서, 2개의 별개의 조성물은 농축 CD8+ T 세포의 조성물, 예를 들어, 재조합 수용체, 예를 들어, CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드로 조작된 농축 CD4+ T 세포의 조성물을 포함한다. 일부 구현예에서, 농축 CD4+ T 세포 및 농축 CD8+ T 세포의 2개의 개별 조성물, 예를 들어, 재조합 수용체, 예를들어 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드로 각각 개별적으로 조작된 농축 CD4+ T 세포의 조성물 및 농축 CD8+ T 세포의 조성물은, 예를 들어 증식 및/또는 증폭을 촉진하는 조건에서 별도로 배양된다.
일부 구현예에서, 배양은 증식 및/또는 증폭을 촉진하는 조건에서 수행된다. 일부 구현예에서, 이러한 조건은 집단에서 세포의 증식, 증폭, 활성화 및/또는 생존을 유도하도록 설계될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 자극 조건은 특정 배지, 온도, 산소 함량, 이산화탄소 함량, 시간, 제제(agents), 예를 들어 영양소, 아미노산, 항생제, 이온 및/또는 자극 인자, 예컨대 사이토카인, 케모카인(chemokines), 항원, 결합 파트너, 융합 단백질, 재조합 가용성 수용체 및 세포를 성장, 분열 및/또는 증폭을 촉진하도록 설계된 임의의 기타 제제 중 하나 이상을 포함할 수 있다.
특정 구현예에서, 세포는 하나 이상의 사이토카인의 존재 하에 배양된다. 특정 구현예에서, 하나 이상의 사이토카인은 재조합 사이토카인이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 사이토카인은 인간 재조합 사이토카인이다. 특정 구현예에서, 하나 이상의 사이토카인은 T 세포 대해 내인성이고/거나 T 세포에 의해 발현되는 수용체에 결합하고/거나 결합할 수 있다. 특정 구현예에서, 하나 이상의 사이토카인, 예를 들어 재조합 사이토카인은 사이토카인의 4-알파-헬릭스 번들 패밀리의 멤버이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 사이토카인의 4-알파-헬릭스 번들 패밀리의 멤버는 인터루킨-2(IL-2), 인터루킨-4(IL-4), 인터루킨-7(IL-7), 인터루킨-9 (IL-9), 인터루킨 12(IL-12), 인터루킨 15(IL-15), 과립구 콜로니 자극 인자(granulocyte colony-stimulating factor, G-CSF) 및 과립구 대식세포 콜로니 자극 인자(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor, GM-CSF)를 포함하되 이에 국한되지 않는다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 재조합 사이토카인은 IL-2, IL-7 및/또는 IL-15를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포, 예를 들어 조작된 세포는 1 IU/mL 내지 2,000 IU/mL, 10IU/mL 내지 100IU/mL, 50IU/mL 내지 200IU/mL, 100IU/mL 내지 500IU/mL, 100IU/mL 내지1,000IU/mL, 500IU/mL 내지 2,000IU/mL 또는 100IU/mL 내지1,500IU/mL의 농도에서 사이토카인, 예를 들어 재조합 인간 사이토카인의 존재 하에 배양된다.
일부 구현예에서, 조작된 CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포의 개별 조성물과 같은 농축 T 세포의 조성물은, 2 IU/ml 내지 500 IU/ml, 10 IU/ml 내지 250 IU/ml, 100 IU/ml 내지 500 IU/ml, 또는 100 IU/ml 내지 400 IU/ml 농도에서 재조합 IL-2, 예를 들어 인간 재조합 IL-2와 함께 배양된다. 특정 구현예에서, 농축 T세포의 조성물은(약) 50 IU/ml, 75 IU/ml, 100 IU/ml, 125 IU/ml, 150 IU/ml, 175 IU/ml, 200 IU/ml, 225 IU/ml, 250 IU/ml, 300 IU/ml 또는 400 IU/ml의 농도에서 IL-2와 배양된다. 일부 구현예에서, 농축 T 세포의 조성물은 200IU/ml 농도에서 재조합 IL-2와 함께 배양된다. 일부 구현예에서, 농축 T 세포의 조성물은 조작된 CD4+ T 세포의 조성과 같은 농축 CD4+ T 세포의 조성물이다. 특정 구현예에서, 농축 T 세포의 조성물은 조작된 CD8+ T 세포의 조성과 같은 농축 CD8+ T 세포의 조성물이다.
일부 구현예에서, 조작된 CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포의 개별 조성물과 같은 농축 T 세포의 조성물은, 10 IU/ml 내지 5,000 IU/ml, 500 IU/ml 내지 2,000 IU/ml, 600 IU/ml 내지 1,500 IU/ml, 500 Iu/ml 내지 2,500 IU/ml, 750 IU/ml 내지 1,500IU/ml 또는 1,000Iu/ml 내지 2,000IU/ml 농도에서 IL-7, 예를 들어 인간 재조합 IL-7와 함께 배양된다. 특정 구현예에서, 농축 T 세포의 조성물은 (약) 100Iu/ml, 200 IU/ml, 300 IU/ml, 400 IU/ml, 500 IU/ml, 600 IU/ml, 700 IU/ml, 800 IU/ml, 900 IU/ml, 1,000 IU/ml, 1,200 IU/ml, 1,400 IU/ml, 또는 1,600 Iu/ml농도에서 IL-7과 함께 배양된다. 일부 구현예에서, 세포는 (약) 1,200IU/ml 농도의 재조합 IL-7의 존재 하에 배양된다. 일부 구현예에서, 농축 T 세포의 조성물은 조작된 CD4+ T 세포와 같은 농축 CD4+ T 세포의 조성물이다.
일부 구현예에서, 조작된 CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포의 별도 조성물과 같은 농축 T 세포의 조성물은 0.1 Iu/ml 내지 200 Iu/ml, 1 IU/ml 내지 50 IU/ml, 5 IU/ml 내지 25 IU/ml, 25 IU/ml 내지 50IU/ml, 5 IU/ml 내지 15 IU /ml, 또는 10 IU/ml 내지 00 IU/ml의 농도에서 IL-15, 예를 들어 인간 재조합 IL-15와 함께 배양된다. 특정 구현예에서, 농축 T 세포의 조성물은 (약) 1Iu/ml, 2 IU/ml, 3 IU/ml, 4 IU/ml, 5 IU/ml, 6 IU/ml, 7 IU/ml, 8 IU/ml, 9 IU/ml, 10 IU/ml, 11 IU/ml, 12 IU/ml, 13 IU/ml, 14 IU/ml, 15 IU/ml, 20 IU/ml, 25 IU/ml, 30 IU/ml, 40 IU/ml, 50 IU/ml, 100 IU/ml, 또는 200 IU/ml의 농도에서 IL-15와 함께 배양된다. 특정 구현예에서, 농축 T 세포의 조성물은 20IU/ml의 농도에서 재조합 IL-15와 함께 배양된다. 일부 구현예에서, 농축 T 세포의 조성물은 조작된 CD4+ T 세포와 같은 농축 CD4+ T 세포의 조성물이다. 특정 구현예에서, 농축 T 세포의 조성물은 조작된 CD8+ T 세포와 같은 농축 CD8+ T 세포의 조성물이다.
특정 구현예에서, 조작된 CD8+ T 세포와 같은 농축 CD8+ T 세포의 조성물은 IL-2 및/또는 IL-15의 존재 하에 기재된 양과 같은 양으로 배양된다. 특정 구현예에서, 조작된 CD4+ T 세포와 같은 농축 CD4+ T 세포의 조성물은 IL-2, IL-7 및/또는 IL-15의 존재 하에 기재된 양과 같은 양으로 배양된다. 일부 구현예에서, IL-2, IL-7 및/또는 IL-15는 재조합체이다. 특정 구현예에서, IL-2, IL-7 및/또는 IL-15는 인간이다. 특정 구현예에서, 하나 이상의 사이토카인은 인간 재조합 IL-2, IL-7 및/또는 IL-15이거나 이를 포함한다.
일부 구현예에서, 배양은 일반적으로, 인간 T 림프구와 같은 1차 면역 세포의 성장에 적합한 온도 (예를 들어, 적어도 약 25℃, 일반적으로 적어도 약 30℃, 및 일반적으로 (약) 37℃)를 포함하는 조건에서 수행된다. 일부 구현예에서, 농축 T 세포의 조성물은 25 내지 38°C, 예를 들어 30 내지 37°C, 예를 들어 (약) 37°C ± 2°C의 온도에서 인큐베이션된다. 일부 구현예에서, 인큐베이션은 배양(예를 들어, 육성 또는 팽창)이 원하는 또는 임계 밀도, 세포 수 또는 세포의 단위 용량으로 귀결될 때까지 기간 동안 수행된다. 일부 구현예에서, 인큐베이션은 24시간, 48시간, 72시간, 96시간, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일 또는 그 이상 초과 또는 약 24시간, 48시간, 72시간, 96시간, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일 또는 그 이상 초과 또는 약 24시간, 48시간, 72시간, 96시간, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일 또는 그 이상 동안 수행된다.
특정 구현예에서, 배양은 폐쇄된 시스템에서 수행된다. 특정 구현예에서, 배양은 멸균 조건 하에서 폐쇄된 시스템으로 수행된다. 특정 구현예에서, 배양은 제공된 시스템의 하나 이상의 단계와 동일한 폐쇄 시스템에서 수행된다. 일부 구현예에서 농축 T 세포 조성물은 폐쇄된 시스템에서 제거되어 배양을 위한 생물 반응기에 배치되고/거나 연결된다. 배양에 적합한 생물 반응기의 예에는 GE Xuri W25, GE Xuri W5, Sartorius BioSTAT RM 20 | 50, Finesse SmartRocker Bioreactor Systems 및 Pall XRS Bioreactor Systems이 포함되나 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, 생물 반응기는 배양 단계 중 적어도 일부 동안 세포를 관류 및/또는 혼합하는데 사용된다.
일부 구현예에서, 혼합은 흔들림 및/또는 움직임이거나 이를 포함한다. 일부 경우에, 생물 반응기는 움직임이나 흔들림에 노출될 수 있고, 이는 일부 측면에서, 산소 전달을 증가시킬 수 있다. 생체 반응기를 움직이는 것은 수평 축을 따라 회전하는 것, 수직 축을 따라 회전하는 것, 생물 반응기의 경사진 또는 기울어진 수평 축을 따라 흔들리는 움직임 또는 이의 임의의 조합을 포함할 수 있으나 이에 한정되지 않는다. 일부 구현예에서, 인큐베이션의 적어도 일부는 흔들리면서 수행된다. 흔들리는 속도 및 흔들리는 각도는 원하는 교반을 달성하기 위해 조정될 수 있다. 일부 구현예에서 흔들기 각도는 20°, 19°, 18°, 17°, 16°, 15°, 14°, 13°, 12°, 11°, 10°, 9°, 8°, 7°, 6°, 5°, 4°, 3°, 2° 또는 1°이다. 특정 구현예에서, 흔들기 각도는 6 내지 16°이다. 다른 구현예에서, 흔들기 각도는 7-16°이다. 다른 구현예에서, 흔들기 각도는 8-12°이다. 일부 구현예에서, 흔들기 속도는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40 rpm이다. 일부 구현예에서, 흔들기 속도는 4 내지 12rpm, 예컨대 4 내지 6rpm(수치 포함) 사이이다.
일부 구현예에서, 생물 반응기는 약 또는 적어도 0.01 L/min, 0.05 L/min, 0.1 L/min, 0.2 L/min, 0.3 L/min, 0.4 L/min, 0.5 L/min, 1.0 L/min, 1.5 L/min 또는 2.0 L/min 또는 2.0 L/min 초과의 안정적인 공기 흐름을 가지면서 37 °C 또는 근방의 온도 및 5% 또는 근방의 CO2 수준을 유지한다. 특정 구현예에서, 배양의 적어도 일부는 예를 들어, 배양 세포의 배양 개시 및/또는 밀도와 관련한 타이밍에 따라, 관류, 예컨대 290 ml/일, 580 ml/일 및/또는 1160 ml/일의 속도로 수행된다. 일부 구현예에서, 세포 배양 팽창의 적어도 일부는 흔들림 동작, 예컨대 5° 내지 10° 사이, 예컨대 6°의 각도에서, 일정한 흔들림 속도, 예컨대 5 내지 15RPM 사이, 예컨대 6RMP 또는 10RPM의 속도로 수행된다.
일부 구현예에서, 제공된 방법, 용도 또는 제조 물품에 따라, 세포 요법 및/또는 조작된 세포를 제조, 생성 또는 생산하는 방법은 기재된 바와 같은 인큐베이션, 조작 및 배양 및/또는 하나 이상의 다른 공정 단계 전 또는 후의 공정 단계에서 초래된 유전자 조작 세포의 제형과 같은 세포의 제형을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 세포의 제형을 포함하는 하나 이상의 공정 단계는 폐쇄 시스템에서 수행될 수 있다. 일부 경우에, 세포는 세포 요법 및/또는 조작된 세포를 제조, 생성 또는 생산하기 위한 하나 이상의 단계로 가공(예를 들어 원심분리 챔버 및/또는 폐쇄 시스템에서 수행)되고, 기재된 바와 같은 배양, 예를 들어 육성 및 증폭 및/또는 하나 이상의 다른 공정 단계 전 또는 후의 형질 도입 공정 단계에서 초래된 유전자 조작 세포의 제형과 같은 세포의 제형을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 유전자 조작된 세포는 주어진 용량 또는 이의 분획으로 투여하기 위한 세포의 수를 포함하는 단위 용량 형태 조성물로서 제형화된다.
일부 구현예에서, 재조합 항원 수용체, 예를 들어, CAR 또는 TCR로 조작된 세포를 포함하는 세포의 단위 용량은 약학 조성물 또는 제형와 같은 조성물 또는 제형으로 제공된다. 이러한 조성물은 제공된 방법, 예를 들어 질병, 상태 및 장애의 치료, 또는 검출, 진단 및 예후 방법, 용도 및 제조 물품에 따라 사용될 수 있다. 일부 경우에, 세포는 단일 단위 투여량 투여 또는 다중 투여량 투여를 위한 것과 같은 투여량 투여를 위한 양으로 제형화될 수 있다.
일부 구현예에서, 세포는 백 또는 바이알과 같은 용기로 제형화될 수 있다. 일부 구현예에서, 바이알은 주입 바이알일 수 있다. 일부 구현예에서, 바이알은 주어진 용량 또는 이의 분획에서 투여를 위한 세포의 수를 포함하는 것과 같이 조작된 세포의 단일 단위 용량으로 제형화된다.
일부 구현예에서, 세포는 약학적으로 허용 가능한 완충제로 제형화되며, 이는 일부 측면에서 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 공정은 약학적으로 허용 가능하거나 대상체에 투여하기에 바람직한 배지 또는 제형화 완충제로 배지의 교환을 포함한다. 일부 구현예에서, 공정 단계는 하나 이상의 선택적인 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 포함할 수 있는 약학적으로 허용 가능한 완충제에서 세포를 교체하기 위해 형질 도입 및/또는 증폭된 세포를 세척하는 것을 포함할 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 포함한 상기 약학적 형태의 예시는 대상체에게 세포 및 조성물을 투여하기 위해 허용 가능한 형태와 함께 하기에 기재된 임의의 것일 수 있다. 일부 구현예에서 약학 조성물은 치료적 유효량 또는 예방적 유효량과 같이 질병 또는 병태를 치료 또는 예방하기에 효과적인 양으로 세포를 함유한다.
일부 구현예에서, 제형화 완충제는 냉동 보존제를 함유한다. 일부 구현예에서, 세포는 1.0% 내지 30% DMSO 용액, 예컨대 5% 내지 20% DMSO 용액 또는 5% 내지 10% DMSO 용액을 함유하는 냉동 보존 용액으로 제형화된다. 일부 구현예에서, 냉동보존 용액은 예를 들어, 20% DMSO 및 8% 인간 혈청 알부민(HSA) 또는 기타 적합한 세포 동결 배지를 함유하는 PBS이거나 이를 함유한다. 일부 구현예에서, 냉동보존 용액은 예를 들어 7.5% DMSO 이상 또는 약 7.5% DMSO이거나 이를 함유한다. 일부 구현예에서, 공정 단계는 냉동보존 용액에서 세포를 교체하기 위해 형질 도입된 및/또는 증폭된 세포를 세척하는 것을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 세포는 최종농도가 (약) 12.5%, 12.0%, 11.5%, 11.0%, 10.5%, 10.0%, 9.5%, 9.0%, 8.5%, 8.0%, 7.5%, 7.0%, 6.5%, 6.0%, 5.5%, 또는 5.0% DMSO, 또는 1% 내지 15%, 6% 내지 12%, 5% 내지 10%, 또는 6% 내지 8% DMSO인 배지 및/또는 용액에서 동결, 예를 들어 동결보호 또는 동결보존된다. 특정 구현예에서, 세포는 최종 농도가 (약) 5.0%, 4.5%, 4.0%, 3.5%, 3.0%, 2.5%, 2.0%, 1.5%, 1.25%, 1.0%, 0.75%, 0.5%, 또는 0.25% HSA, 또는 0.1% 내지 5%, 0.25% 내지 4%, 0.5% 내지 2%, 또는 1% 내지 2% HSA인 배지 및/또는 용액에서 동결, 예를 들어 동결보호 또는 동결보존된다.
일부 구현예에서, 제형은 배양 또는 증폭된 세포와 같은 세포를 세척, 희석 또는 농축시키는 것을 포함하는 하나 이상의 공정 단계를 사용하여 수행된다. 일부 구현예에서, 공정은 주어진 단위 용량 또는 이의 분획으로 투여를 위한 세포의 수를 포함하는 단위 투여 용량 형태 조성물과 같은 원하는 농도 또는 수로 세포의 희석 또는 농축을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 공정 단계는 원하는 대로 세포의 농도를 증가시키기 위해 부피 감소를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 공정 단계는 원하는 대로 세포의 농도를 감소시키기 위해 부피 첨가를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 공정은 형질 도입 및/또는 증폭된 세포에 제형 완충액의 부피를 추가하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 제형 완충제의 부피는 (약) 10 mL 내지 1000 mL, 예컨대 적어도 (약) 또는 (약) 50 mL, 100 mL, 200 mL, 300 mL, 400 mL, 500 mL, 600 mL, 700 mL, 800 mL, 900 mL 또는 1000 mL이다.
일부 구현예에서, 세포 조성물을 제형화하기 위한 상기 공정 단계는 폐쇄된 시스템에서 수행된다. 예시적인 상기 공정 단계는 Sepax® 또는 Sepax 2® 세포 처리 시스템과 사용하기 위한 것을 포함하여 Biosafe SA에 의해 생산 및 판매되는 원심분리 챔버와 같은 세포 처리 시스템과 관련된 하나 이상의 시스템 또는 키트와 함께 원심분리 챔버를 사용하여 수행 될 수 있다. 예시적인 시스템 및 공정이 문헌[국제 공개 번호 WO2016/073602]에 기재되어 있다. 일부 구현예에서, 방법은 기재된 바와 같이, 상기 구현예 중 어느 하나에서 제형 완충제, 예컨대 약학적으로 허용 가능한 완충제에서 제형화된 세포의 생성된 조성물인 제형화된 조성물을 원심분리 챔버의 내부 공동에서 발현 을 달성하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 제형화된 조성물의 발현은 원심 분리 챔버를 가진 폐쇄 시스템의 일부로서 작동적으로 연결된 본 명세서에 기재된 생물 의학 재료 용기의 바이알과 같은 용기다. 일부 구현예에서, 생물 의학 재료 용기는 하나 이상의 공정 단계를 수행하는 폐쇄 시스템 또는 디바이스에 통합 및 작동 가능한 연결을 위해 구성되고/거나 이에 통합되거나 작동 가능하게 연결된다. 일부 구현예에서, 생물 의학 재료 용기는 출력 라인 또는 출력 위치에서 시스템에 연결된다. 일부 경우에, 폐쇄 시스템은 입구 튜브에서 생물 의학 재료 용기의 바이알에 연결된다. 본 명세서에 기재된 생물 의학 재료 용기와 함께 사용하기 위한 예시적인 폐쇄 시스템은 Sepax® 및 Sepax® 2 시스템을 포함한다.
일부 구현예에서, 원심 챔버 또는 세포 처리 시스템과 관련된 폐쇄 시스템은 제형화된 조성물의 발현을 위해 하나 또는 복수의 용기가 연결될 수 있는 포트가 있는 튜브 라인의 각 끝에 결합된 다방향 튜브 매니폴드를 포함하는 다중 포트 출력 키트를 포함한다. 일부 측면에서, 원하는 수 또는 다수의 바이알은 다중 포트 출력 중 하나 이상, 일반적으로 2 이상, 예컨대 적어도 3, 4, 5, 6, 7, 8 이상의 포트에 멸균적으로 연결될 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 하나 이상의 용기, 예를 들어 생물의학 재료 용기는 포트에 부착되거나 모든 포트보다 적은 수에 부착될 수 있다. 따라서, 일부 구현예에서, 시스템은 생물의학 재료 용기의 복수의 바이알 내로 출력 조성물의 발현에 영향을 미칠 수 있다.
일부 측면에서, 세포는 단일 단위 투여량 투여 또는 다중 투여량 투여와 같은 투여량 투여를 위한 양으로 복수의 출력 용기, 예를 들어 바이알 중 하나 이상에 발현될 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 바이알은 각각 주어진 용량 또는 이의 분획으로 투여하기 위한 세포의 수를 함유할 수 있다. 따라서, 일부 측면에서, 각각의 바이알은 투여를 위한 단일 단위 용량을 함유할 수 있거나, 복수의 바이알 중 하나 이상, 예를 들어 2개의 바이알 또는 3개의 바이알이, 함께 투여를 위한 용량을 구성하도록 원하는 용량의 일부를 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, 4개의 바이알이 함께 투여를 위한 용량을 구성한다.
따라서 용기, 예를 들어 백 또는 바이알은 일반적으로 투여될 세포, 예를 들어 이의 하나 이상의 단위 용량을 함유한다. 단위 용량은 대상체에게 투여될 세포의 양 또는 수 또는 투여될 세포의 수의 2배(또는 그 이상)일 수 있다. 이는 대상체에게 투여될 세포의 최저 용량 또는 가능한 최저 용량일 수 있다. 일부 측면에서, 제공된 제조 물품은 복수의 출력 용기 중 하나 이상을 포함한다.
일부 구현예에서, 각 용기, 예를 들어 백 또는 바이알은 개별적으로 단위 용량의 세포를 포함한다. 따라서, 일부 구현예에서, 각각의 용기는 동일하거나 대략적으로 또는 실질적으로 동일한 수의 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 각 단위 용량은 약 또는 적어도 (약) 1 x 106, 2 x 106, 5 x 106, 1 x 107, 5 x 107, 또는 1 x 108 의 조작된 세포, 총 세포, T 세포 또는 PBMC를 포함한다. 일부 구현예에서, 각 단위 용량은 CD3+인 약 또는 적어도 (약) 1 x 106, 2 x 106, 5 x 106, 1 x 107, 5 x 107, 또는 1 x 108 개의 CAR+ T 세포, 예를 들어 CD4+ 또는 CD8+, 또는 이의 실행 가능한 서브세트를 포함한다. 일부 구현예에서, 각 용기, 예를 들어 백 또는 바이알에서 제형화된 세포 조성물의 부피는 (약) 10 mL 내지 (약) 100 mL, 예컨대 적어도 (약) 또는 (약) 20 mL, 30 mL, 40 mL, 50 mL, 60 mL, 70 mL, 80 mL, 90 mL 또는 100 mL이다. 일부 구현예에서, 각 용기, 예를 들어 백 또는 바이알의 제형화된 세포 조성물의 부피는 약 1mL 내지 약 10mL, 예를 들어 약 1mL 내지 약 5mL이다. 일부 구현예에서, 각 용기, 예를 들어 백 또는 바이알의 제형화된 세포 조성물의 부피는 약 4mL 내지 약 5mL 이다. 일부 구현예에서, 각 용기, 예를 들어 백 또는 바이알의 제형화된 세포 조성물의 부피는 (약) 4.4 mL 이다. 일부 구현예에서, 각 용기, 예를 들어 백 또는 바이알의 제형화된 세포 조성물의 부피는 (약) 4.5 mL 이다. 일부 구현예에서, 각 용기, 예를 들어 백 또는 바이알의 제형화된 세포 조성물의 부피는 (약) 4.6 mL 이다. 일부 구현예에서, 각 용기, 예를 들어 백 또는 바이알의 제형화된 세포 조성물의 부피는 (약) 4.7 mL 이다. 일부 구현예에서, 각 용기, 예를 들어 백 또는 바이알의 제형화된 세포 조성물의 부피는 (약) 4.8 mL 이다. 일부 구현예에서, 각 용기, 예를 들어 백 또는 바이알의 제형화된 세포 조성물의 부피는 (약) 4.9 mL 이다. 일부 구현예에서, 각 용기, 예를 들어 백 또는 바이알의 제형화된 세포 조성물의 부피는 (약) 5.0 mL 이다.
일부 구현예에서, 제형화된 세포 조성물은, mL당 (약) 0.5 x 106 재조합 수용체-발현(예를 들어, CAR+)/CD3+ 세포 또는 이러한 생존 세포 이상, mL당 (약) 1.0 x 106 재조합 수용체-발현(예를 들어, CAR+)/CD3+ 세포 또는 이러한 생존 세포 이상, mL당 (약) 1.5 x 106 재조합 수용체-발현(예를 들어, CAR+)/CD3+ 세포 또는 이러한 생존 세포 이상, mL당 (약) 2.0 x 106 재조합 수용체-발현(예를 들어, CAR+)/CD3+ 세포 또는 이러한 생존 세포 이상, mL당 (약) 2.5 x 106 재조합 수용체-발현(예를 들어, CAR+)/CD3+ 세포 또는 이러한 생존 세포 이상, mL당 (약) 2.6 x 106 재조합 수용체-발현(예를 들어, CAR+)/CD3+ 세포 또는 이러한 생존 세포 이상, mL당 (약) 2.7 x 106 재조합 수용체-발현(예를 들어, CAR+)/CD3+ 세포 또는 이러한 생존 세포 이상, mL당 (약) 2.8 x 106 재조합 수용체-발현(예를 들어, CAR+)/CD3+ 세포 또는 이러한 생존 세포 이상, mL당 (약) 2.9 x 106 재조합 수용체-발현(예를 들어, CAR+)/CD3+ 세포 또는 이러한 생존 세포 이상, mL당 (약) 3.0 x 106 재조합 수용체-발현(예를 들어, CAR+)/CD3+ 세포 또는 이러한 생존 세포 이상, mL당 (약) 3.5 x 106 재조합 수용체-발현(예를 들어, CAR+)/CD3+ 세포 또는 이러한 생존 세포 이상, mL당 (약) 4.0 x 106 재조합 수용체-발현(예를 들어, CAR+)/CD3+ 세포 또는 이러한 생존 세포 이상, mL당 (약) 4.5 x 106 재조합 수용체-발현(예를 들어, CAR+)/CD3+ 세포 또는 이러한 생존 세포 이상, 또는 mL당 (약) 5 x 106 재조합 수용체-발현(예를 들어, CAR+)/CD3+ 세포 또는 이러한 생존 세포 이상의 농도를 갖는다. 일부 구현예에서, CD3+ 세포는 CD4+ T 세포이다. 일부 구현예에서, CD3+ 세포는 CD8+ T 세포이다. 일부 구현예에서, CD3+ T 세포는 CD4+ 및 CD8+ T 세포이다.
일부 구현예에서, 용기, 예를 들어 백 또는 바이알의 세포는 냉동 보존될 수 있다. 일부 구현예에서, 용기, 예를 들어 바이알은 나중에 사용할 때까지 액체 질소에 보관할 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 방법에 의해 생성된 이러한 세포, 또는 이러한 세포를 포함하는 조성물은, 예를 들어, 본원에 기재된 방법, 용도 및 제조 물품에 따라 질병 또는 상태를 치료하기 위해 대상체에게 투여된다.
Ⅲ. 조성물 및 제형
일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법 및 용도에 따라 대상체에 투여하기 위한 재조합 항원 수용체로 조작된 세포, 예를 들어 CAR이 약학적 조성물 또는 제형과 같은 조성물 또는 제형으로 제공된다. 이러한 조성물은 B 세포 악성 종양 또는 혈액성 악성 종양과 같은 질병, 병태, 및 장애의 예방 또는 치료에서, 또는 검출, 진단, 및 예후 방법에서와 같이 제공된 방법 또는 용도, 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 사용될 수 있다.
용어 “약학적 제형(pharmaceutical formulation)”은 그 안에 함유된 활성 성분의 생물학적 활성이 효과적일 수 있도록 하는 형태이고, 상기 제형이 투여되는 대상체에 허용 가능하지 않을 정도로 독성인 추가 성분을 함유하지 않는 제제(preparation)를 지칭한다.
“약학적으로 허용 가능한 담체(pharmaceutically acceptable carrier)”는 활성 성분 이외의 약학적 제형 안에 있는 성분을 지칭하고, 이는 대상체에 무독성이다. 약학적으로 허용 가능한 담체는 완충제, 부형제, 안정화제 또는 보존제를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
*일부 측면에서, 담체의 선택은 특정 세포 또는 제제 및/또는 투여 방법에 의해 부분적으로 결정된다. 따라서, 적합한 제형이 다양하게 존재한다. 예를 들어, 약학 조성물은 보존제를 함유할 수 있다. 적합한 보존제는, 예를 들어, 메틸파라벤, 프로필파라벤, 벤조산나트륨 및 염화벤잘코늄을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 2개 이상의 보존제의 혼합물이 사용된다. 보존제 또는 이의 혼합물은 통상적으로 전체 조성물의 약 0.0001% 내지 약 2 중량%의 양으로 존재한다.
담체는 예를 들어, 문헌[Remington’s Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)]에 기재되어 있다. 약학적으로 허용 가능한 담체는 일반적으로 사용되는 용량 및 농도에서 수용자에게 무독성이며, 인산염, 구연산염 및 기타 유기산과 같은 완충제; 아스코르브산 및 메티오닌을 포함하는 항산화제; 보존제(예컨대 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤잘코늄 클로라이드; 벤제토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알코올; 메틸 또는 프로필 파라벤과 같은 알킬 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 사이클로헥사놀; 3-펜탄올; 및 m-크레졸); 저분자량(약 10개 잔기 미만) 폴리펩타이드; 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린과 같은 단백질; 폴리비닐피롤리돈과 같은 친수성 중합체; 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 리신과 같은 아미노산; 글루코스, 만노스 또는 덱스트린을 포함하는 단당류, 이당류 및 다른 탄수화물; EDTA와 같은 킬레이트제; 수크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 솔비톨과 같은 당류; 나트륨과 같은 염 형성 반대 이온; 금속 복합체(예를 들어, Zn-단백질 복합체); 및/또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)과 같은 비이온 계면활성제를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
일부 측면에서 완충제가 조성물에 포함된다. 적합한 완충제는, 예를 들어, 구연산, 구연산 나트륨, 인산, 인산 칼륨 및 다양한 다른 산 및 염을 포함한다. 일부 측면에서, 2개 이상의 완충제 혼합물이 사용된다. 완충제 또는 이의 혼합물은 통상적으로 전체 조성물의 약 0.001 중량% 내지 약 4 중량%의 양으로 존재한다. 투여 가능한 약학 조성물의 제조 방법은 공지되어 있다. 예시적인 방법은, 예를 들어, 문헌[Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott Williams & Wilkins; 21st ed. (May 1, 2005)]에 자세히 기재되어 있다.
제형 또는 조성물은 또한 세포 또는 세포 조성물로 예방 또는 치료되는 특정 징후, 질병 또는 병태에 유용한 하나보다 많은 활성 성분을 함유할 수 있으며, 여기서 각각의 활성이 서로 악영향을 미치지 않는다. 그러한 활성 성분들은 의도된 목적에 효과적인 양으로 조합하여 적합하게 존재한다. 따라서, 일부 구현예에서, 약학 조성물은 본원, 예를 들어, 섹션 Ⅳ에 기재된 임의의 병용 요법제, 및 화학 요법제, 예를 들어 아스파라기나제, 부술판, 카보플라틴, 시스플라틴, 다우노루비신, 독소루비신, 플루오로우라실, 젬시타빈, 히드록시우레아, 메토트렉세이트, 파클리탁셀, 리툭시맙, 빈블라스틴, 빈크리스틴 등과 같은 다른 약학적 활성제 또는 약물을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 염의 형태, 예를 들어, 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 투여된다. 적합한 약학적으로 허용 가능한 산 부가 염은 염산, 브롬화 수소산, 인산, 메타인산, 질산 및 황산과 같은 무기산, 및 타르타르산, 아세트산, 시트르산, 말산, 락트산, 푸마르산, 벤조산, 글리콜산, 글루콘산, 숙신산 및 아릴술폰산, 예를 들어 p-톨루엔술폰산과 같은 유기산으로부터 유도된 것을 포함한다.
일부 구현예에서 약학 조성물은 치료적 유효량 또는 예방적 유효량과 같이 질병 또는 병태를 치료 또는 예방하기에 효과적인 양으로 제제 또는 세포를 함유한다. 일부 구현예에서 치료적 또는 예방적 효능은 치료된 대상체의 주기적인 평가에 의해 모니터링된다. 병태에 따라 며칠 또는 그 이상에 걸쳐 반복 투여되는 경우, 질병 증상의 바람직한 억제가 발생할 때까지 치료가 반복된다. 그러나, 다른 투여 요법이 유용할 수 있고, 결정될 수 있다. 바람직한 투여량이 조성물의 단일 볼루스 투여, 조성물의 다중 볼루스 투여 또는 조성물의 지속적인 주입 투여에 의해 전달될 수 있다.
세포 및/또는 추가 제제는, 임의의 적합한 수단, 예를 들어, 볼루스 주입, 주사, 예를 들어, 정맥내 또는 피하 주사, 안구내(intraocular) 주사, 안구주위(periocular) 주사, 망막하(subretinal) 주사, 유리체내(intravitreal) 주사, 중격-경유성(trans-septal) 주사, 공막하(subscleral) 주사, 맥락막내(intrachoroidal) 주사, 전방내(intracameral) 주사, 결막하 주사(subconjectval injection, subconjuntival injection), 테논낭하(sub-Tenon) 주사, 안구뒤(retrobulbar) 주사, 안구주위(peribulbar) 주사 또는 후방 공막옆(posterior juxtascleral) 전달에 의해 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 이는 비경구, 폐내, 및 비강내, 그리고 국소 치료가 바람직한 경우, 병변내 투여에 의해 투여된다. 비경구 주입은 근육내, 정맥내, 동맥내, 복강내 또는 피하 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 주어진 용량이 세포 또는 제제의 단일 볼루스 투여에 의해 투여된다. 일부 구현예에서, 예를 들어, 3일 이내의 기간에 걸쳐 세포 또는 제제의 다중 볼루스 투여에 의해, 또는 세포 또는 제제의 지속적인 주입 투여에 의해 투여된다.
질병의 예방 또는 치료를 위한, 적절한 투여량은 치료될 질병의 유형, 제제 또는 제제들의 유형, 세포 또는 재조합 수용체의 유형, 질병의 중증도 및 진행 경과, 제제 또는 세포가 예방 또는 치료 목적으로 투여되는지 여부, 선행 요법, 대상체의 임상 이력과 제제 또는 세포에 대한 반응, 및 주치의의 재량에 따라 달라질 수 있다. 일부 구현예에서 조성물은 한 번에 또는 일련의 치료에 걸쳐 대상체에 적합하게 투여된다.
세포 및/또는 추가 제제는 표준 투여 기술, 제형 및/또는 장치를 사용하여 투여될 수 있다. 조성물의 저장 및 투여를 위해 주사기 및 바이알과 같은 제형 및 장치가 제공된다. 일부 측면에서, 세포 및/또는 추가 제제는 작은 주사기를 이용하여 투여된다. 세포의 경우, 투여는 자가 또는 이종 기원일 수 있다. 예를 들어, 면역 반응성 세포 또는 전구체(progenitor)는 하나의 대상체로부터 수득될 수 있고, 동일한 대상체 또는 상이한, 거부 반응을 일으키지 않는 대상체에 투여될 수 있다.
말초 혈액 유래 면역 반응성 세포 또는 이의 자손(예를 들어, 생체 내(in vivo), 생체 외(ex vivo) 또는 시험관 내(in vitro) 유래)은 카테터 투여, 전신 주사, 국소 주사, 정맥 주사 또는 비경구 투여를 포함하는 국소 주사를 통해 투여될 수 있다. 치료학적 조성물(예를 들어, 유전자 변형 면역 반응성 세포 또는 신경독성의 증상을 치료하거나 개선하는 제제를 함유하는 약학 조성물)을 투여할 때, 일반적으로 단위 투여량의 주사가능한 형태(용액, 현탁액, 에멀전)로 제형화될 것이다.
제형에는 경구, 정맥내, 복강내, 피하, 폐, 경피, 근육내, 비강내, 입 안(buccal), 설하 또는 좌약 투여를 위한 것이 포함된다. 일부 구현예에서, 제제 또는 세포 집단은 비경구적으로 투여된다. 본원에서 사용된 바와 같은 용어 “비경구(parenteral)”는 정맥내, 근육내, 피하, 직장, 질 및 복강내 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 제제 또는 세포 집단은 정맥내, 복강내 또는 피하 주사에 의한 말초 전신 전달을 사용하여 대상체에 투여된다.
일부 구현예에서 조성물은 멸균 액체 제제로서, 예를 들어, 등장성 수용액, 현탁액, 에멀전, 분산액 또는 점성 조성물로 제공되며, 이는 일부 측면에서 선택된 pH로 완충될 수 있다. 액상 조제품은 일반적으로 겔, 다른 점성 조성물 및 고체 조성물보다 제조가 더욱 용이하다. 또한, 액상 조성물은 특히 주사에 의해 투여하기가 다소 더 편리하다. 반면에, 점성 조성물은 적절한 점도 범위 내에서 제형화되어 특정 조직과의 보다 긴 접촉 기간을 제공할 수 있다. 액상 또는 점성 조성물은, 예를 들어, 물, 식염수, 인산 완충 식염수, 폴리올(예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 액상 폴리에틸렌 글리콜) 및 이의 적합한 혼합물을 함유하는 용매 또는 분산 매체일 수 있는 담체를 포함할 수 있다.
멸균의 주사가능한 용액은 적합한 담체, 희석제, 또는 멸균수, 생리 식염수, 글루코스, 덱스트로스 등과 같은 부형제와의 혼합에서와 같은 용매에 제제 또는 세포를 통합함으로써 제조될 수 있다.
생체 내(in vivo) 투여에 사용되는 제형은 일반적으로 무균이다. 무균 상태는, 예를 들어, 멸균 여과막을 통한 여과에 의해 용이하게 달성될 수 있다.
Ⅳ. 병용 요법
상기 방법, 제조 물품(articles of manufacture), 용도 또는 조성물의 일부 구현예에서, 세포 요법, 예를 들어, T 세포(예를 들어, CAR+ T 세포)의 용량은 일반적으로 세포 요법 또는 예를 들어 CAR+ T 세포 요법 이외의 또 다른 세포 요법 이외의 추가 치료제 또는 요법과 조합하여 대상체에 투여된다. 일부 구현예에서, 제공된 방법 또는 용도에서, 그리고/또는 제조 물품 또는 조성물과 함께, 세포 요법, 예를 들어, CAR+ T 세포와 같은 유전적으로 조작된 T 세포의 용량은 예컨대 하나 이상의 추가 치료적 개입과 동시에, 순차적으로 또는 간헐적으로, 임의의 순서로 병용 치료 또는 병용 요법의 일부로 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 하나 이상의 추가 치료적 개입은, B 세포 악성 종양, 예를 들어, ALL 또는 NHL과 같은 질병 또는 병태를 치료 또는 예방하기 위한 임의의 제제 또는 치료, 및/또는 조작된 세포 요법의 효능, 지속성 및/또는 활성을 증가시키기 위한 임의의 제제 또는 치료를 포함한다.
일부 구현예에서, 추가 치료제 또는 요법은 불량한 반응자이거나, 불량한 반응자일 가능성이 있거나, 또는 불량한 가능자로 예상되는 대상체 및/또는 반응하지 않거나, 반응하지 않을 가능성이 있거나, 그리고/또는 반응하지 않을 것으로 예상되거나 특정 시간 내 및/또는 세포 요법, 예를 들어, T 세포(예를 들어, CAR+ T 세포)의 용량을 이용한 치료에 대해 어느 정도로 반응하지 않는 대상체에 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 추가 치료제는 예컨대 상기 세포 요법의 투여의 개시 후 1개월 이내, 2개월 이내 또는 3개월 이내에 완전한 반응 또는 전반적인 반응을 나타내지 않거나, 나타내지 않을 가능성이 있거나, 또는 나타내지 않을 것으로 예상되는 대상체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 추가 치료제는 예컨대 상기 세포 요법의 투여 후 1개월 이내, 2개월 이내 또는 3개월 이내에 진행성 질병(progressive disease, PD)을 나타내거나, 나타낼 가능성이 있거나, 또는 나타낼 것으로 예상되는 대상체에 투여된다. 일부 구현예에서, 대상체는 세포 요법으로 치료되었거나 또는 이전에 치료되어 유사한 상황에 있는 다수의 대상체에 기초한 반응 또는 특정 반응을 나타내지 않을 가능성이 있거나 또는 나타내지 않을 것으로 예상된다.
일부 구현예에서, 세포 요법, 예를 들어, T 세포(예를 들어, CAR+ T 세포)의 용량에 대해 불량한 반응을 나타낼 수 있거나, 나타낼 가능성이 더 높은 대상체는 이전 요법을 이용한 치료, 임의로 화학요법제로를 이용한 이전 요법 후 안정 또는 진행성 질환(SD/PD)을 가지는 것으로 확인되거나 확인된 적이 있는 ALL 또는 NHL을 나타내는 대상체를 포함하는 것으로 관찰된다. 일부 구현예에서, 추가 제제 또는 요법은 세포 요법, 예를 들어, T 세포(예를 들어, CAR+ T 세포)의 용량 개시 전에, 이를 수반하거나 동시에 및/또는 이후에 투여될 수 있다.
특정 구현예에서, 세포 요법 투여 후 대상체의 혈액에서 세포 요법의 약동학(pharmacokinetic, PK)은 세포 요법에 대해 반응하는(예를 들어, CR 또는 OR을 나타내는) 대상체 대 세포 요법에 반응하지 않는(예를 들어, PD를 나타내는) 대상체 간에 유사하거나 또는 실질적으로 다르지 않다. 일부 구현예에서, 이러한 관찰은 세포 요법이 대상체에서 확장되거나 확장되고 있지만, 최적의 효능을 나타내지 않을 수 있음을 나타낸다.
일부 맥락에서, 세포 요법의 최적의 효능은 투여된 세포가 표적, 예를 들어, 표적 항원을 인식하고 결합하여, 대상체, 종양 및 이의 환경 내에서 적절한 부위로 왕래(traffic), 국소화 및 성공적으로 진입하는 능력에 따라 달라질 수 있다. 일부 맥락에서, 최적의 효능은 투여된 세포가 활성화되고, 팽창되고, 세포 독성 사멸 및 사이토카인과 같은 다양한 인자의 분비를 포함한 다양한 효과기 기능을 발휘하고, 장기간을 포함하여 지속되고, 특정 표현형 상태(예컨대 장기 지속 기억의, 덜분화된, 효과기 상태)로의 분화, 이행 또는 재프로그래밍에 관여하고, 질병의 국소 미세 환경에서 면역 억제 상태를 피하거나 감소시키고, 표적 리간드 또는 항원에 대한 제거 및 재노출 후에 효과적이고 강력한 기억반응을 제공하고, 그리고 고갈(exhaustion), 면역성 결핍, 말초 내성, 말단 분화 및/또는 억제 상태로의 분화를 피하거나 감소시키는, 능력에 따라 달라질 수 있다.
일부 측면에서, 면역 요법, 예를 들어, T 세포 요법의 효능은 질병이나 장애, 예를 들어, TME의 국소 미세 환경에 존재하는 면역 억제 활성 또는 인자에 의해 제한될 수 있다. 일부 측면에서, TME는 T 세포 요법을 위해 투여된 T 세포의 활성, 기능, 증식, 생존 및/또는 지속성을 억제할 수 있는 인자 또는 조건을 함유하거나 생산한다.
일부 구현예에서, 세포 요법의 투여, 예를 들어, T 세포(예를 들어, CAR+ T 세포)의 용량 개시 전, 이를 수반하거나 동시에 및/또는 이후에 추가 제제 또는 요법의 투여는 세포 요법의 개선된 활성, 효능 및/또는 지속성을 초래하고/초래하거나 처리된 대상체의 반응을 개선할 수 있다. 일부 구현예에서, 병용 치료 또는 병용 요법을 위한 추가 제제는, 세포 요법, 예를 들어, CAR+ T 세포와 같은 조작된 T 세포 요법의 효능 및/또는 치료 효과의 안전성을 향상, 부양 및/또는 촉진한다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 투여된 세포, 예를 들어, 재조합 수용체, 예를 들어, CAR을 발현하는 세포의 효능, 생존 또는 지속성을 강화하거나 개선시킨다.
일부 구현예에서, 요법의 추가 제제는 항체 또는 세포독성제 또는 치료제, 예를 들어, 화학요법제이다. 일부 구현예에서, 치료 또는 요법을 위한 하나 이상의 추가 제제는 면역 조절제, 면역 관문 억제제, 아데노신 경로 또는 아데노신 수용체 길항제 또는 작용제 및 키나아제 억제제이다. 일부 구현예에서, 병용 치료 또는 병용 요법은 외과 치료, 이식 및/또는 방사선 요법과 같은 추가 치료를 포함한다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 단백질 포스파타아제 억제제, 키나아제 억제제, 사이토카인, 면역 조절제, 또는 조절 T(Treg) 세포의 수준 또는 활성을 감소시키는 제제 중에서 선택된다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 투여된 세포 요법의 유해 효과를 감소시키거나 개선시킴으로써 안전성을 향상시킨다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 동일한 질병, 병태 또는 동반질병을 치료할 수 있다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 상기 세포, 예를 들어, CAR-발현 세포의 투여와 관련된 하나 이상의 독성, 유해 효과 또는 부작용을 개선, 감소 또는 제거할 수 있다.
일부 구현예에서, 추가 요법, 치료 또는 제제는 화학 요법, 방사선 요법, 수술, 이식, 입양 세포 요법, 항체, 세포 독성제, 화학 요법제, 사이토카인, 성장 억제제, 항 호르몬제, 키나아제 억제제, 항 혈관 형성제, 심장 보호제, 면역 자극제, 면역 억제제, 면역 관문 억제제, 항생제, 혈관 형성 억제제, 대사 조절제 또는 다른 치료제 또는 이들의 임의의 조합물을 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 단백질, 펩타이드, 핵산, 소분자 제제, 세포, 독소, 지질, 탄수화물 또는 이들의 조합물, 또는 임의의 다른 유형의 치료제, 예를 들어 방사선이다. 일부 구현예에서, 추가 요법, 제제 또는 치료는 수술, 화학 요법, 방사선 요법, 이식, 재조합 수용체, 예를 들어 CAR을 발현하는 세포의 투여, 키나아제 억제제, 면역 관문 억제제, mTOR 경로 억제제, 면역 억제제, 면역 조절제, 항체, 면역 제거제(immunoablative agents), 항체 및/또는 이의 항원 결합 단편, 항체 접합체, 기타 항체 요법, 세포 독소, 스테로이드, 사이토카인, 펩타이드 백신, 호르몬 요법, 항대사제, 대사 조절제, 칼슘 의존성 포스파타제 칼시뉴린 또는 p70S6 키나아제 FK506을 억제하거나 또는 p70S6 키나아제를 억제하는 약물, 알킬화제, 안트라사이클린, 빈카 알칼로이드, 프로테아좀 억제제, GITR 작용제, 단백질 티로신 포스파타제 억제제, 단백질 키나아제 억제제, 종양 용해 바이러스 및/또는 다른 유형의 면역 요법을 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 제제 또는 치료는 골수 이식, 플루다라빈과 같은 화학 요법제를 이용한 T 세포 제거 요법, 외부 빔 방사선 요법(external-beam radiation therapy, XRT), 사이클로포스파마이드 및/또는 항체 요법이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 키나아제 억제제, 예를 들어 브루톤 티로신 키나아제(Bruton’s tyrosine kinase, Btk)의 억제제, 예를 들어 이브루티닙이다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 아데노신 경로 또는 아데노신 수용체 길항제 또는 작용제이다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 탈리도마이드 또는 탈리도마이드 유도체(예를 들어, 레날리도마이드)와 같은 면역 조절제이다. 일부 구현예에서, 추가 요법, 제제 또는 치료는 세포 독성제 또는 화학 요법제, 생물학적 요법(예를 들어, 항체, 예를 들어, 단클론 항체 또는 세포 요법) 또는 억제제(예를 들어, 키나아제 억제제)이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 화학 요법제이다. 예시적인 화학 요법제는 안트라사이클린(예를 들어, 리포솜 독소루비신과 같은 독소루비신); 빈카 알칼로이드(예를 들어, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신, 비노렐빈); 알킬화제(예를 들어, 사이클로포스파마이드, 데카르바진, 멜팔란, 이포스파마이드, 테모졸로마이드); 면역 세포 항체(예를 들어, 알렘투주맙, 겜투주맙, 리툭시맙, 토시투모맙); 항대사제(예를 들어, 엽산 길항제, 피리미딘 유사체, 퓨린 유사체 및 플루다라빈과 같은 아데노신 디아미나제 억제제 포함); TNFR 글루코코르티코이드 유도 TNFR 관련 단백질(glucocorticoid induced TNFR related protein, GITR) 작용제; 프로테아좀 억제제(예를 들어, 아클라시노마이신 A, 글리오톡신 또는 보르테조밉); 탈리도마이드 또는 탈리도마이드 유도체(예를 들어, 레날리도마이드)와 같은 면역 조절제를 포함한다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 면역 조절제이다. 일부 구현예에서, 병용 요법은 항종양 면역 반응, 예를 들어, 투여된 조작된 세포로부터의 항종양 면역 반응을, 예컨대 면역 억제 신호 전달을 억제하거나 면역 자극 신호 전달을 강화함으로써 자극, 증폭 및/또는 다르게는 강화할 수 있는 면역 조절제를 포함한다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 펩타이드, 단백질이거나 소분자이다. 일부 구현예에서, 단백질은 융합 단백질 또는 재조합 단백질일 수 있다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 면역 세포, 예컨대 T 세포, B 세포 또는 항원-제시 세포 상에서 발현된 세포 표면 수용체와 같은 면역학적 표적에 결합한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 면역 조절제는 항체 또는 항원 결합 항체 단편, 융합 단백질, 소분자 또는 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, 결합 분자, 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물은, 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 예컨대 단클론 항체인 추가 제제와 조합하여 투여된다.
일부 구현예에서, 면역 조절제는 면역 관문 경로의 구성요소를 차단, 억제 또는 방해한다. 면역 체계에는 자체 내성을 유지하는데 관여하고 면역 반응을 조절하기 위한 다중 억제 경로가 있다. 종양은 특히 종양 항원에 특이적인 T 세포, 예를 들어, CAR-발현 세포와 같은 조작된 세포에 대한 면역 내성의 주요 메커니즘으로 특정 면역 관문 경로를 사용할 수 있다(Pardoll (2012) Nature Reviews Cancer 12:252-264). 많은 상기 면역 관문은 리간드-수용체 상호 작용에 의해 개시되기 때문에, 리간드 및/또는 이들의 수용체에 대한 항체에 의해 쉽게 차단될 수 있다. 대다수의 항암제와 대조적으로, 관문 억제제는 반드시 종양 세포를 직접 표적화하는 것이 아니라, 면역 체계의 내인성 항종양 활성을 향상시키기 위해 림프구 수용체 또는 이의 리간드를 표적화한다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 길항 분자인 면역조절제이거나 분자의 기능, 또는 면역 관문 분자를 포함하는 신호전달 경로를 억제 또는 차단할 수 있는 면역관문 억제제이다. 일부 구현예에서, 면역 관문 분자 또는 경로는 PD-1, PD-L1, PD-L2, CTLA-4, LAG-3, TIM3, VISTA, 아데노신 2A 수용체(Adenosine 2A Receptor, A2AR), 또는 아데노신 또는 전술한 것 중 임의의 것을 포함하는 경로이다. 특정 구현예에서, 소분자, 핵산 억제제(예를 들어, RNAi) 또는 항체 분자와 같은 면역 관문 경로를 차단하는 길항 분자는 암 및 다른 질병에 대한 면역 요법의 유망한 수단이 되고 있다.
일부 구현예에서, 면역 관문 억제제는 하나 이상의 관문 단백질을 전체적으로 또는 부분적으로 감소, 억제, 방해 또는 조절하는 분자이다. 관문 단백질은 T-세포 활성화 또는 기능을 조절한다. 이러한 단백질은 T-세포 반응의 공자극 또는 억제성 상호 작용에 원인이 된다. 면역 관문 단백질은 생리적 면역 반응의 자체 내성 및 지속 및 크기(amplitude)를 조절하고 유지한다.
면역 관문 억제제에는 면역 체계의 억제 경로를 통계적으로 유의한 방식으로 차단 또는 억제하는 임의의 제제가 포함된다. 이러한 억제제에는 소분자 억제제가 포함될 수 있거나, 면역 관문 수용체, 리간드 및/또는 수용체-리간드 상호 작용에 결합하고 이를 차단하거나 억제하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 포함될 수 있다. 일부 구현예에서, 특정 수용체의 조절, 향상 및/또는 자극은 면역 관문 경로 구성요소를 극복할 수 있다. 차단, 억제, 조절, 향상 및/또는 자극에 대해 표적화될 수 있는 예시적인 면역 관문 분자에는 PD-1(CD279), PD-L1(CD274, B7-H1), PDL2(CD273, B7-DC), CTLA-4, LAG-3(CD223), TIM-3, 4-1BB(CD137), 4-1BBL(CD137L), GITR(TNFRSF18, AITR), CD40, OX40(CD134, TNFRSF4), CXCR2, 종양 관련 항원(tumor associated antigens, TAA), B7-H3, B7-H4, BTLA, HVEM, GAL9, B7H3, B7H4, VISTA, KIR, 2B4(분자의 CD2 패밀리에 속하고 모든 NK, γδ 및 기억 CD8+(αβ) T 세포 상에서 발현됨), CD160(BY55로도 지칭됨), CGEN-15049, CEACAM(예를 들어, CEACAM-1, CEACAM-3 및/또는 CEACAM-5), TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4, CD80, CD86, B7-H3(CD276), B7-H4(VTCN1), HVEM(TNFRSF14 또는 CD270), KIR, A2aR, MHC 클래스 I, MHC 클래스 II, GAL9, 아데노신 및 형질 전환 성장 인자 수용체(transforming growth factor receptor, TGFR; 예를 들어, TGFR 베타)가 포함되나, 이에 제한되지 않는다. 면역 관문 억제제에는, 임의의 상기 분자 중 하나 이상의 활성에 결합하고 이를 차단 또는 억제 및/또는 향상 또는 자극하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 다른 결합 단백질이 포함된다. 예시적인 면역 관문 억제제에는 트레멜리무맙(CTLA-4 차단 항체; 티실리무맙, CP-675,206으로도 공지), 항-OX40, PD-L1 단클론 항체(항-B7-H1; MEDI4736), MK-3475(PD-1 차단제), 니볼루맙(항-PD-1 항체), CT-011(항-PD-1 항체), BY55 단클론 항체, AMP224(항-PD-L1 항체), BMS-936559(항-PD-L1 항체), MPLDL3280A(항-PD-L1 항체), MSB0010718C(항-PD-L1 항체) 및 이필리무맙(항-CTLA-4 항체; Yervoy®, MDX-010 및 MDX-101로도 공지)이 포함된다. 예시적인 면역 조절 항체에는 다클리주맙(Zenapax), 베바시주맙(Avastin®), 바실리시맙(Basiliximab), 이필리무맙(Ipilimumab), 니볼루맙(Nivolumab), 펨브롤리주맙(pembrolizumab), MPDL3280A, 피딜리주맙(CT-011), MK-3475, BMS-936559, MPDL3280A(아테졸리주맙(Atezolizumab)), 트레멜리무맙(tremelimumab), IMP321, BMS-986016, LAG525, 우렐루맙(urelumab), PF-05082566, TRX518, MK-4166, 다세투주맙(SGN-40), 루카투무맙(HCD122), SEA-CD40, CP-870, CP-893, MEDI6469, MEDI6383, MOXR0916, AMP-224, MSB0010718C(아벨루맙(Avelumab)), MEDI4736, PDR001, rHIgM12B7, 울로쿠플루맙(Ulocuplumab), BKT140, 발리루맙(CDX-1127), ARGX-110, MGA271, 릴리루맙(BMS-986015, IPH2101), IPH2201, ARGX-115, 에막투주맙(Emactuzumab), CC-90002 및 MNRP1685A 또는 이의 항체-결합 단편이 포함되나, 이에 제한되지 않는다. 다른 예시적인 면역조절제에는, 예를 들어, 아푸투주맙(Roche®로부터 이용 가능); 페그필그라스팀(Neulasta®); 레날리도마이드(CC-5013, Revlimid®); 탈리도마이드(Thalomid®), 액티미드(CC4047); 및 IRX-2(인터루킨 1, 인터루킨 2 및 인터페론 감마를 포함하는 인간 사이토카인의 혼합물, IRX Therapeutics으로부터 이용 가능한 CAS 951209-71-5)가 포함된다.
일부 구현예에서, 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 투여되는 추가 제제는 예정된 세포 사멸 1(Programmed cell death 1, PD-1)에 결합 및/또는 억제하는 제제이다. PD-1은 B 세포, NK 세포 및 T 세포에서 발현되는 면역 관문 단백질이다(Shinohara 등, 1995, Genomics 23:704-6; Blank 등, 2007, Cancer Immunol Immunother 56:739-45; Finger 등, 1997, Gene 197:177-87; Pardoll (2012) Nature Reviews Cancer 12:252-264). PD-1의 주요 역할은 감염에 대한 반응으로 염증 중에 말초 조직에서 T 세포의 활성을 제한하는 것뿐만 아니라 자가 면역을 제한하는 것이다. PD-1 발현은 활성화된 T 세포에서 유도되고, 이의 내인성 리간드 중 하나에 대한 PD-1의 결합은 자극성 키나아제를 억제함으로써 T-세포 활성화를 억제하는 작용을 한다. PD-1은 또한 TCR “정지 신호(stop signal)”를 억제하는 작용을 한다. PD-1은 Treg 세포 상에서 높게 발현되고 리간드의 존재 하에서 이의 증식을 증가시킬 수 있다(Pardoll (2012) Nature Reviews Cancer 12:252-264). 항-PD 1 항체는 흑색종, 비-소세포폐암, 방광암, 전립선암, 대장암, 두경부암, 삼중-음성 유방암, 백혈병, 림프종 및 신장 세포암의 치료에 사용되어 왔다(Topalian 등, 2012, N Engl J Med 366:2443-54; Lipson 등, 2013, Clin Cancer Res 19:462-8; Berger 등, 2008, Clin Cancer Res 14:3044-51; Gildener-Leapman 등, 2013, Oral Oncol 49:1089-96; Menzies & Long, 2013, Ther Adv Med Oncol 5:278-85). 예시적인 항 PD-1 항체에는 니볼루맙(BMS를 통한 Opdivo), 펨브롤리주맙(Merck를 통한 Keytruda), 피딜리주맙(Cure Tech를 통한 CT-011), 람브롤리주맙(Merck를 통한 MK-3475) 및 AMP-224(Merck)가 포함되고, 니볼루맙(Opdivo, BMS-936558 또는 MDX1106으로도 지칭; Bristol-Myers Squibb)은 PD-1을 특이적으로 차단하는 완전한 인간 IgG4 단클론 항체이다. PD-1에 특이적으로 결합하는 니볼루맙(클론 5C4) 및 다른 인간 단클론 항체는 문헌[미국 특허 US 8,008,449 및 국제 출원 WO2006/121168]에 기재되어 있다. 피딜리주맙(CT-011; Cure Tech)은 PD-1에 결합하는 인간화된 IgG1k 단클론 항체이다. 피딜리주맙(Pidilizumab) 및 다른 인간화된 항 PD-1 단클론 항체는 문헌[국제 출원 WO2009/101611]에 기술되어 있다. 펨브롤리주맙(이전에 람브롤리주맙(lambrolizumab)으로 공지되었고, 키트루다(Keytruda), MK03475로도 지칭됨; Merck)은 PD-1에 결합하는 인간화된 IgG4 단클론 항체이다. 펨브롤리주맙(Pembrolizumab) 및 다른 인간화된 항-PD-1 항체는 문헌[미국 특허 US 8,354,509 및 국제 출원 WO2009/114335]에 기술되어 있다. 다른 항-PD-1 항체는 다른 것들, 예를 들어, 문헌[미국 특허 US 8,609,089, US 2010028330, US 20120114649 및/또는 US 20150210769]에 기술된 항-PD-1 항체들 중에서 AMP 514(Amplimmune)를 포함한다. AMP-224(B7-DCIg; Amplimmune; 예를 들어, 문헌[국제 출원 WO2010/027827 및 WO2011/066342]에 기술됨)는 PD-1과 B7-H1 사이의 상호 작용을 차단하는 PD-L2 Fc 융합 가용성 수용체이다.
일부 구현예에서, 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 투여되는 추가 제제는 PD-L1(CD274 및 B7-H1로도 공지) 및/또는 PD-L2(CD273 및 B7-DC로도 공지)에 결합하거나 억제하는 제제이다. PD-L1 및 PD-L2는 활성화된 T 세포, B 세포, 골수 세포, 대식세포 및 일부 유형의 종양 세포에서 발견되는 PD-1에 대한 리간드이다. 항 종양 요법은 항-PD-L1 항체에 중점을 두었다. PD-1 및 PD-L1의 복합체는 CD8+ T 세포의 증식을 억제하고 면역 반응을 감소시킨다(Topalian 등, 2012, N Engl J Med 366:2443-54; Brahmer 등, 2012, N Eng J Med 366:2455-65). 항-PD-L1 항체는 비-소세포폐암, 흑색종, 대장암(colorectal cancer), 신장 세포암, 췌장암, 위암, 난소암, 유방암 및 혈액 악성 종양의 치료에 사용되어 왔다(Brahmer 등, 2012, N Eng J Med 366:2455-65; Ott 등, 2013, Clin Cancer Res 19:5300-9; Radvanyi 등, 2013, Clin Cancer Res 19:5541; Menzies & Long, 2013, Ther Adv Med Oncol 5:278-85; Berger 등, 2008, Clin Cancer Res 14:13044-51). 예시적인 항-PD-L1 항체에는 MDX-1105(Medarex), MEDI4736(Medimmune), MPDL3280A(Genentech), BMS-935559(Bristol-Myers Squibb) 및 MSB0010718C가 포함된다. MEDI4736(Medimmune)은 PD-L1에 결합하고 PD-1과 리간드의 상호 작용을 억제하는 인간 단클론 항체이다. MDPL3280A(Genentech/Roche)는 PD-L1에 결합하는 인간 Fc 최적화된 IgG1 단클론 항체이다. PD-L1에 대한 MDPL3280A 및 다른 인간 단클론 항체는 문헌[미국 특허 번호 7,943,743 및 미국 공개 번호 20120039906]에 기술되어 있다. 다른 항-PD-L1 결합제에는 YW243.55.S70(국제 출원 WO2010/077634 참조한다.) 및 MDX-1105(BMS-936559로도 지칭됨, 그리고 예를 들어, 국제 출원 WO2007/005874에 기재된 항-PD-L1 결합제)가 포함된다.
일부 구현예에서, 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 투여되는 추가 제제는 CD152로도 공지된, 세포독성 T-림프구 관련 항원(CTLA-4)의 억제제이거나, CTLA-4에 결합하는 제제이다. CTLA-4는 T 세포 활성화를 조절하는 기능을 하는 공동 억제(co-inhibitory) 분자이다. CTLA-4는 T-세포 상에서 독점적으로 발현되는 면역글로불린 상과(superfamily)의 멤버이다. CTLA-4는 T-세포 활성화를 억제하는 작용을 하며, 헬퍼 T-세포 활성을 억제하고 조절 T-세포 면역 억제 활성을 향상시키는 것으로 보고되어 있다. CTLA-4의 정확한 작용 기전은 여전히 연구 중이지만, CD80 및 CD86에 결합하는데 있어서 CD28을 능가할 뿐만 아니라 T 세포에 억제제 신호를 능동적으로 전달함으로써 T 세포 활성화를 억제하는 것으로 제안되었다(Pardoll (2012) Nature Reviews Cancer 12:252-264). 항-CTLA-4 항체는 흑색종, 전립선암, 소세포폐암, 비-소세포폐암의 치료를 위한 임상 시험에서 사용되어 왔다(Robert & Ghiringhelli, 2009, Oncologist 14:848-61; Ott 등, 2013, Clin Cancer Res 19:5300; Weber, 2007, Oncologist 12:864-72; Wada 등, 2013, J Transl Med 11:89). 항-CTLA-4의 중요한 특징은 항 종양 효과의 동역학이며, 생리적 반응에 필요한 초기 치료 후 최대 6개월의 지연 기간이 있다. 일부 경우에, 치료 개시 후 감소가 보이기 전에 종양 크기가 실제로 증가할 수 있다(Pardoll (2012) Nature Reviews Cancer 12:252-264). 예시적인 항-CTLA-4 항체에는 이필리무맙(Bristol-Myers Squibb) 및 트레멜리무맙(Pfizer)이 포함된다. 이필리무맙(ipilimumab)은 최근 전이성 흑색종 치료에 대한 FDA 승인을 받았다(Wada 등, 2013, J Transl Med 11:89).
일부 구현예에서, 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 투여되는 추가 제제는 CD223으로도 공지된, 림프구 활성화 유전자-3(Lymphocyte activation gene-3, LAG-3)에 결합 및/또는 억제하는 제제이다. LAG-3은 또 다른 면역 관문 단백질이다. LAG-3은 림프구 활성의 억제 및 일부 경우에 림프구 면역성 결핍의 유도와 관련되어 있다. LAG-3은 B 세포, NK 세포 및 수지상 세포를 포함한 면역 체계의 다양한 세포 상에서 발현된다. LAG-3은 MHC 클래스 II 수용체에 대한 천연 리간드이며, 이는 강력한 면역 억제 활성이 부여된 세포를 포함하여 흑색종 침윤성 T 세포 상에서 실질적으로 발현된다. 예시적인 항-LAG-3 항체에는 LAG-3을 표적화하는 단클론 항체인 BMS-986016(Bristol-Myers Squib)이 포함된다. IMP701(Immutep)은 길항제 LAG-3 항체이고 IMP731(Immutep 및 GlaxoSmithKline)은 고갈 LAG-3 항체이다. 다른 LAG-3 억제제에는 LAG-3의 가용성 부분 및 MHC 클래스 II 분자에 결합하고 항원 제시 세포(antigen presenting cell, APC)를 활성화시키는 Ig의 재조합 융합 단백질인 IMP321(Immutep)이 포함된다. 다른 항체는 예를 들어, 문헌[국제 출원 WO2010/019570 및 미국 출원 US 2015/0259420]에 기술되어 있다.
일부 구현예에서, 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 투여되는 추가 제제는 T 세포 면역글로불린 도메인 및 뮤신 도메인-3(T-cell immunoglobulin domain and mucin domain-3, TIM-3)에 결합 및/또는 억제하는 제제이다. TIM-3은 활성화된 Th1 세포 상에서 처음 확인되었으며, 면역 반응의 음성 조절자인 것으로 나타났다. TIM-3의 차단은 T-세포 매개 항 종양 면역을 촉진하고 다양한 마우스 종양 모델에서 항종양 활성을 갖는다. 다른 면역 치료제, 예컨대 TSR-042, 항-CD137 항체 및 기타 다른 것과 TIM-3 차단의 조합은 항종양 효과를 증가시키는데 상가적이거나 상승적일 수 있다. TIM-3 발현은 흑색종, NSCLC 및 신장암을 포함하는 다수의 상이한 종양 유형과 관련이 있으며, 또한 종양내 TIM-3의 발현은 NSCLC, 자궁경부암 및 위암을 포함하는 다양한 종양 유형에 걸친 불량한 예후와 상관 관계가 있는 것으로 나타났다. TIM-3의 차단은 또한, 다수의 만성 바이러스성 질병에 대한 면역 증가를 촉진시키는데 관심이 있다. TIM-3은 또한 갈렉틴-9(galectin-9), 포스파티딜세린(phosphatidylserine) 및 HMGB1을 포함하는 다수의 리간드와 상호 작용하는 것으로 나타났지만, 있다면, 이들 중 어느 것이 항종양 반응의 조절과 관련이 있는지는 현재 명확하지 않다. 일부 구현예에서, TIM-3을 표적화하는 항체, 항체 단편, 소분자 또는 펩타이드 억제제는 TIM-3의 IgV 도메인에 결합하여 이의 리간드와의 상호 작용을 억제할 수 있다. TIM-3을 억제하는 예시적인 항체 및 펩타이드는 문헌[미국 출원 US 2015/0218274, 국제 출원 WO2013/006490 및 미국 출원 US 2010/0247521]에 기술되어 있다. 다른 항-TIM-3 항체에는 RMT3-23의 인간화된 버전(Ngiow 등, 2011, Cancer Res, 71:3540-3551) 및 클론 8B.2C12(Monney 등, 2002, Nature, 415:536-541)가 포함된다. TIM-3 및 PD-1을 억제하는 이중 특이적 항체는 문헌[미국 출원 US 2013/0156774]에 기술되어 있다.
일부 구현예에서, 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 투여되는 추가 제제는 CEACAM 억제제(예를 들어, CEACAM-1, CEACAM-3 및/또는 CEACAM-5 억제제)인 제제이다. 일부 구현예에서, CEACAM의 억제제는 항-CEACAM 항체 분자이다. 예시적인 항-CEACAM-1 항체, 예를 들어 단클론 항체 34B1, 26H7 및 5F4는 문헌[국제 출원 WO 2010/125571, WO 2013/082366, WO 2014/059251 및 WO 2014/022332]에 기술되어 있으며; 또는 이의 재조합 형태는 예를 들어 문헌[미국 출원 US 2004/0047858, US 7,132,255 및 국제 출원 WO 99/052552]에 기술된 바와 같다. 일부 구현예에서, 항-CEACAM 항체는 예를 들어, 문헌[Zheng 등 PLoS One. (2011) 6(6): e21146)]에 기재된 바와 같이 CEACAM-5에 결합하거나, 또는 예를 들어, 문헌[국제 출원 WO 2013/054331 및 미국 출원 US 2014/0271618]에 기재된 바와 같이 CEACAM-1 및 CEACAM-5와 교차반응한다.
일부 구현예에서, 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 투여되는 추가 제제는 CD137로도 공지된, 4-1BB에 결합 및/또는 억제하는 제제이다. 4-1BB는 TNFR 상과에 속하는 막관통 당단백질이다. 4-1BB 수용체는 활성화된 T 세포 및 B 세포 및 단핵구 상에 존재한다. 예시적인 항-4-1BB 항체는 잠재적 면역자극 및 항종양 활성을 가지는 우렐루맙(BMS-663513)이다.
일부 구현예에서, 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 투여되는 추가 제제는 OX40 및 CD134로도 공지된, 종양 괴사 인자 수용체 상과, 멤버 4(TNFRSF4)에 결합 및/또는 억제하는 제제이다. TNFRSF4는 TNFR 상과의 또 다른 멤버이다. OX40은 휴지기 나이브 T 세포(naive T cell)에서 본질적으로 발현되지 않으며, 2차 공자극 면역 관문 분자로서 작용한다. 예시적인 항-OX40 항체는 MEDI6469 및 MOXR0916(RG7888, Genentech)이다.
일부 구현예에서, 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 투여되는 추가 제제는 조절 T 세포(Treg) 집단을 감소시키는 제제 또는 분자이다. Treg 세포의 수를 감소(예를 들어, 고갈)시키는 방법은 공지되어 있으며, 예를 들어, CD25 고갈, 사이클로포스파마이드 투여 및 글루코코르티코이드-유도 TNFR 패밀리 관련 유전자(Glucocorticoid-induced TNFR family related gene, GITR) 기능의 조절을 포함한다. GITR은 면역 체계를 강화시키는 활성화된 T 세포 상에서 상향 조절되는 TNFR 상과(superfamily)의 멤버이다. 성분채집술 전 또는 조작된 세포, 예를 들어, CAR-발현 세포의 투여 전에, 대상체에서 Treg 세포의 수를 감소시키는 것은, 종양 미세 환경에서 원치 않는 면역 세포(예를 들어, Treg)의 수를 감소시키고, 대상체의 재발 위험을 감소시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 GITR 작용제 및/또는 조절 T 세포(Treg)를 고갈시키는 GITR 항체와 같은, GITR을 표적화하고/거나 GITR 기능을 조절하는 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 사이클로포스파마이드를 포함한다. 일부 구현예에서, GITR 결합 분자 및/또는 GITR 기능을 조절하는 분자(예를 들어, GITR 작용제 및/또는 Treg 고갈 GITR 항체)는 조작된 세포, 예를 들어 CAR-발현 세포 전에 투여된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, GITR 작용제는 세포의 성분채집술 전에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 사이클로포스파마이드는 조작된 세포, 예를 들어 CAR-발현 세포의 투여(예를 들어, 주입 또는 재주입) 전 또는 세포의 성분채집술 전에 대상체에 투여된다. 일부 구현예에서, 사이클로포스파마이드 및 항-GITR 항체는 조작된 세포, 예를 들어 CAR-발현 세포의 투여(예를 들어, 주입 또는 재주입) 전에 또는 세포의 성분채집술 전에 대상체에 투여된다.
일부 구현예에서, 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 투여되는 추가 제제는 GITR 작용제인 제제이다. 예시적인 GITR 작용제에는, 예를 들어, GITR 융합 단백질 및 항-GITR 항체(예를 들어, 2가 항-GITR 항체), 예컨대 예를 들어 미국 특허 번호 6,111,090, 유럽 특허 번호 090505B1, 미국 특허 번호 8,586,023, PCT 공개 번호 WO 2010/003118 및 2011/090754에 기술된 GITR 융합 단백질 또는 예를 들어, 미국 특허 번호 7,025,962, 유럽 특허 번호 1947183B1, 미국 특허 번호 7,812,135, 미국 특허 번호 8,388,967, 미국 특허 번호 8,591,886, 유럽 특허 번호 EP1866339, PCT 공개 번호 WO 2011/028683, PCT 공개 번호 WO 2013/039954, PCT 공개 번호 WO2005/007190, PCT 공개 번호 WO 2007/133822, PCT 공개 번호 WO2005/055808, PCT 공개 번호 WO 99/40196, PCT 공개 번호 WO 2001/03720, PCT 공개 번호 WO99/20758, PCT 공개 번호 WO2006/083289, PCT 공개 번호 WO 2005/115451, 미국 특허 번호 7,618,632 및 PCT 공개 번호 WO 2011/051726에 기술된 항-GITR 항체를 포함한다. 예시적인 항-GITR 항체는 TRX518이다.
일부 구현예에서, 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 투여되는 추가 제제는 투여된 세포, 예를 들어, CAR-발현 세포의 종양 침투 또는 이동을 향상시킨다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 추가 제제는 CD40, 예컨대 CD40L, 예를 들어 재조합 인간 CD40L을 자극한다. 분화 클러스터 40(CD40)은 또한 TNFR 상과(superfamily)의 멤버이다. CD40은 항원-제시 세포에서 발견되는 공자극 단백질이며 광범위한 면역 및 염증 반응을 매개한다. CD40은 또한 일부 악성 종양에서 발현되어 증식을 촉진한다. 예시적인 항-CD40 항체는 다세투주맙(SGN-40), 루카투무맙(Novartis, 길항제), SEA-CD40(Seattle Genetics) 및 CP-870,893이다. 일부 구현예에서, 종양 침투를 향상시키는 추가 제제는 티로신 키나아제 억제제인, 수니티닙(sunitnib), 헤파라나제(heparanase) 및/또는 케모카인 수용체, 예컨대 CCR2, CCR4 및 CCR7을 포함한다.
일부 구현예에서, 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 투여되는 추가 제제는 탈리도마이드의 구조적 또는 기능적 유사체 또는 유도체 및/또는 E3 유비퀴틴 연결효소의 억제제인 면역조절제이다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 세레블론(Cereblon, CRBN)에 결합한다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 CRBN E3 유비퀴틴 연결효소 복합체에 결합한다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 CRBN 및 CRBN E3 유비퀴틴 연결효소 복합체에 결합한다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 CRBN의 단백질 또는 유전자 발현을 상향조절한다. 일부 측면에서, CRBN은 CRL4CRBN E3 유비퀴틴 연결효소에 대한 기질 어댑터이고, 이 효소의 특이성을 조절한다. 일부 구현예에서, CRBN 또는 CRBN E3 유비퀴틴 연결효소 복합체에 대한 결합은 E3 유비퀴틴 연결효소 활성을 억제한다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 KZF1(이카로스) 및 IKZF3(아이올로스)의 유비퀴틴화를 유도하고/유도하거나 KZF1(이카로스) 및 IKZF3(아이올로스)의 분해를 유도한다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 CRL4CRBN E3 유비퀴틴 연결효소에 의해 카세인 키나아제 1A1 (CK1α)의 유비퀴틴화를 유도한다. 일부 구현예에서, CK1α의 유비퀴틴화는 CK1α 분해를 초래한다.
일부 구현예에서, 면역 조절제는 이카로스(IKZF1) 전사인자의 억제제이다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 이카로스의 유비퀴틴화를 증진한다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 이카로스의 분해를 증진한다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 이카로스의 단백질 또는 유전자 발현을 하향조절한다. 일부 구현예에서, 면역 조절제의 투여는 이카로스 단백질 수준의 감소를 일으킨다.
일부 구현예에서, 면역 조절제는 아이올로스(IKZF3) 전사인자의 억제제이다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 아이올로스의 유비퀴틴화를 증진한다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 아이올로스의 분해를 증진한다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 아이올로스의 단백질 또는 유전자 발현을 하향조절한다. 일부 구현예에서, 면역 조절제의 투여는 아이올로스 단백질 수준의 감소를 일으킨다.
일부 구현예에서, 면역 조절제는 이카로스(IKZF1) 및 아이올로스(IKZF3) 전사인자 모두의 억제제이다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 이카로스 및 아이올로스 모두의 유비퀴틴화를 증진한다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 이카로스 및 아이올로스 모두의 분해를 증진한다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 이카로스 및 아이올로스 모두의 유비퀴틴화 및 분해를 증진한다. 일부 구현예에서, 면역 조절제의 투여는 아이올로스 단백질 수준 및 이카로스 단백질 수준 모두의 감소를 일으킨다.
일부 구현예에서, 면역 조절제는 선택적 사이토카인 억제 약물(SelCID)이다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 포스포디에스터라제-4(PDE4)의 활성을 억제한다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 CDC25 포스파타아제의 효소 활성을 억제한다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 CDC25 포스파타아제의 세포내 교환을 바꾼다.
일부 구현예에서, 면역 조절제는 탈리도마이드(2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1H-이소인돌-l,3(2H)-디온) 또는 탈리도마이드의 유사체 또는 유도체이다. 특정 구현예에서, 탈리도마이드 유도체는 유사한 생물학적 활성을 가진 탈리도마이드의 구조적 변이체를 포함한다. 예시적인 탈리도마이드 유도체에는 레날리도마이드(REVLIMMUNOMODULATORY COMPOUND™; Celgene Corporation), 포말리도마이드(ACTIMMUNOMODULATORY COMPOUND™ 또는 POMALYST™으로도 공지(Celgene Corporation)), CC-1088, CDC-501, 및 CDC- 801, 및 문헌[미국 특허 번호 5,712,291; 7,320,991; 및 8,716,315; 미국 출원 번호 2016/0313300; 및 PCT 공개 번호 WO 2002/068414 및 WO 2008/154252]에 기재된 화합물이 포함되나, 이에 제한되지 않는다.
일부 구현예에서, 면역 조절제는 본원에 참조로 포함된 문헌[미국 특허 번호 5,635,517]에 기술된 바와 같은 벤조 고리(benzo ring)에서 아미노로 치환된 1-옥소- 및 1,3 디옥소-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린이다.
일부 구현예에서, 면역 조절제는 다음의 구조식의 화합물이다:
Figure pct00003
여기서, X와 Y 중 하나는 -C(O)-이고 X와 Y 중 다른 하나는 -C(O)- 또는 -CH2-이고, R5는 수소 또는 저급 알킬이거나, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이다. 일부 구현예에서, X는 -C(O)-이고 Y는 -CH2-이다. 일부 구현예에서, X와 Y는 모두 -C(O)-이다. 일부 구현예에서, R5는 수소이다. 다른 구현예에서, R5는 메틸이다.
일부 구현예에서, 면역 조절 화합물은 치환된 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)프탈 면역 조절 화합물(phthalimmunomodulatory compounds) 및 치환된 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소아이소인돌의 클래스에 속하는 화합물, 예컨대 본원에 각각 참조로 포함된 문헌[미국 특허 번호 6,281,230; 6,316,471; 6,335,349; 및 6,476,052, 및 국제 특허 출원 번호 PCT/US97/13375(국제 공개 번호 WO 98/03502)]에 기재된 것이다.
일부 구현예에서, 면역 조절제는 다음의 구조식의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이다:
Figure pct00004
여기서
X와 Y 중 하나는 -C(O)- 이고 X와 Y 중 다른 하나는 -C(O)- 또는 -CH2- 이고;
(1) R1, R2, R3, 및 R4 각각은 독립적으로 할로(halo), 1 내지 4개의 탄소 원자의 알킬 또는 1 내지 4개의 탄소 원자의 알콕시이거나, 또는
(2) R1, R3 , R4, 및 R5 중 하나는 -NHRa이고 R1, R2, R3, 및 R4 중 나머지는 수소이고, Ra는 수소 또는 1 내지 8개의 탄소 원자의 알킬이고;
R5는 수소 또는 1 내지 8개의 탄소 원자의 알킬, 벤질, 또는 할로이고;
단, X와 Y가 -C(O)-이고 (i) R1, R2, R3, 및 R4 각각이 플루오로(fluoro)이거나; 또는 (ii) R1, R2, R3, 및 R4 중 하나가 아미노(amino)인 경우, R5는 수소 이외의 것이다.
일부 구현예에서, 면역 조절제는, 본원에 각각 참조로 포함된, 문헌[미국 특허 번호 7,091,353, 미국 특허 공개 번호 2003/0045552, 및 국제 출원 번호 PCT/USOI/50401(국제 공개 번호 WO02/059106)]에 기재된 아이소인돌 면역 조절 화합물의 클래스에 속하는 화합물이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 면역 조절제는 [2-(2,6-디옥소-피페리딘-3-일)-1,3-디옥소-2,3-디하이드로-1H-아이소인돌-4-일메틸]-아마이드; (2-(2,6-디옥소-피페리딘-3-일)-1,3-디옥소-2,3-디하이드로-1H-아이소인돌-4-일메틸)-카르밤산 tert-부틸 에스테르; 4-(아미노메틸)-2-(2,6-디옥소(3-피페리딜))-아이소인돌린-1,3-디온; N-(2-(2,6-디옥소-피페리딘-3-일)-1,3-디옥소-2,3-디하이드로-1H-아이소인돌-4-일메틸)-아세트아마이드; N-{(2-(2,6-디옥소(3-피페리딜)-1,3-디옥소아이소인돌린-4-일)메틸}사이클로프로필-카르복사마이드; 2-클로로-N-{(2-(2,6-디옥소(3-피페리딜))-1,3-디옥소아이소인돌린-4-일)메틸}아세트아마이드; N-(2-(2,6-디옥소(3-피페리딜))-1,3-디옥소아이소인돌린-4-일)-3-피리딜카르복사마이드; 3-{1-옥소-4-(벤질아미노)아이소인돌린-2-일}피페리딘-2,6-디온; 2-(2,6-디옥소(3-피페리딜))-4-(벤질아미노)아이소인돌린-1,3-디온; N-{(2-(2,6-디옥소(3-피페리딜))-1,3-디옥소아이소인돌린-4-일)메틸}프로판아마이드; N-{(2-(2,6-디옥소(3-피페리딜))-1,3-디옥소아이소인돌린-4-일)메틸}-3-피리딜카르복사마이드; N-{(2-(2,6-디옥소(3-피페리딜))-1,3-디옥소아이소인돌린-4-일)메틸}헵탄아마이드; N-{(2-(2,6-디옥소(3-피페리딜))-1,3-디옥소아이소인돌린-4-일)메틸}-2-퓨릴카르복사마이드; {N-(2-(2,6-디옥소(3-피페리딜))-1,3-디옥소아이소인돌린-4-일)카바모일}메틸 아세테이트; N-(2-(2,6-디옥소(3-피페리딜))-1,3-디옥소아이소인돌린-4-일)펜탄아마이드; N-(2-(2,6-디옥소(3-피페리딜))-1,3-디옥소아이소인돌린-4-일)-2-티에닐카르복사마이드; N-{[2-(2,6-디옥소(3-피페리딜))-1,3-디옥소아이소인돌린-4-일]메틸}(부틸아미노)카르복사마이드; N-{[2-(2,6-디옥소(3-피페리딜))-1,3-디옥소아이소인돌린-4-일]메틸}(옥틸아미노)카르복사마이드; 또는 N-{[2-(2,6-디옥소(3-피페리딜))-1,3-디옥소아이소인돌린-4-일]메틸}(벤질아미노)카르복사마이드이다.
일부 구현예에서, 면역 조절제는, 본원에 각각 참조로 포함된 문헌[미국 특허 출원 공개 번호 2002/0045643, 국제 공개 번호 WO 98/54170, 및 미국 특허 번호 6,395,754]에 기재된 아이소인돌-면역 조절 화합물의 클래스에 속하는 화합물이다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는, 본원에 참조로 포함된 문헌[미국 특허 번호 5,798,368]에 기술된 4 치환된 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소아이소인돌린이다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 본원에 참조로 포함된 문헌[미국 특허 번호 6,403,613]에 기재된 1-옥소 및 1,3-디옥소-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)아이소인돌린이다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는, 본원에 둘 다 참조로 포함된 문헌[미국 특허 번호 6,380,239 및 미국 특허 번호 7,244,759]에 기재된 바와 같은 인돌린 고리의 4- 또는 5-위치에 치환된 1-옥소 또는 1,3-디옥소아이소인돌린이다.
일부 구현예에서, 면역 조절제는 2-(4-아미노-1-옥소-1,3-디하이드로-아이소인돌-2-일)-4-카바모일-부티르산 또는 4-(4-아미노-1-옥소-1,3-디하이드로-아이소인돌-2-일)-4-카바모일-부티르산이다. 일부 구현예에서, 면역 조절 화합물은 4-카바모일-4-{4-[(퓨란-2-일-메틸)-아미노]-1,3-디옥소-1,3-디하이드로-아이소인돌-2-일}-부티르산, 4-카바모일-2-{4-[(퓨란-2-일-메틸)-아미노]-1,3-디옥소-1,3-디하이드로-아이소인돌-2-일}-부티르산, 2-{4-[(퓨란-2-일-메틸)-아미노]-1,3-디옥소-1,3-디하이드로-아이소인돌-2-일}-4-페닐카바모일-부티르산 또는 2-{4-[(퓨란-2-일-메틸)-아미노]-1,3-디옥소-1,3-디하이드로-아이소인돌-2-일}-펜탄디온산이다.
일부 구현예에서, 면역 조절제는 본원에 참조로 포함된 문헌[미국 특허 번호 6,458,810]에 기재된 바와 같은 2,6-디옥소-3-하이드록시피페리딘-5-일로 2-위치에서 치환된 아이소인돌린-1-온 또는 아이소인돌린-1,3-디온이다. 일부 구현예에서, 면역 조절 화합물은 3-(5-아미노-2-메틸-4-옥소-4H-퀴나졸린-3-일)-피페리딘-2,6-디온 또는 이의 거울상 이성질체 또는 이의 거울상 이성질체 혼합물; 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물, 공결정, 클라스레이트(clathrate), 또는 다형체이다. 일부 구현예에서, 면역 조절 화합물은 3-[4-(4-모르폴린-4-일메틸-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-아이소인돌-2-일]-피페리딘-2,6-디온이다.
일부 구현예에서, 면역 조절제는 문헌[Oshima, K. 등, Nihon Rinsho., 72(6):1130-5 (2014); Millrine, D. 등, Trends Mol Med., 23(4):348-364 (2017); 및 Collins, 등, Biochem J., 474(7):1127-1147 (2017)]에 기술된 바와 같다.
일부 구현예에서, 면역 조절제는 레날리도마이드, 포말리도마이드, 아바도마이드, 레날리도마이드, 포말리도마이드, 아바도마이드의 입체이성질체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물, 공결정, 클라스레이트, 또는 다형체이다. 일부 구현예에서, 면역 조절 화합물은 레날리도마이드, 레날리도마이드의 입체이성질체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물, 공결정, 클라스레이트, 또는 다형체이다. 일부 구현예에서, 면역 조절 화합물은 레날리도마이드, 또는 ((RS)-3-(4-아미노-1-옥소-1,3-디하이드로-2H-아이소인돌-2-일)피페리딘-2,6-디온)이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 탈리도마이드 약물 또는 이의 유사체 및/또는 이의 유도체, 예컨대 레날리도마이드, 포말리도마이드 또는 아프레밀라스트(apremilast)를 포함한다. 예를 들어, 문헌[Bertilaccio 등, Blood (2013) 122:4171, Otahal 등, Oncoimmunology (2016) 5(4):e1115940; Fecteau 등, Blood (2014) 124(10):1637-1644 및 Kuramitsu 등, Cancer Gene Therapy (2015) 22:487-495]를 참조한다. 레날리도마이드((RS)-3-(4-아미노-1-옥소-1,3-디하이드로-2H-아이소인돌-2-일)피페리딘-2,6-디온; 레블리미드(Revlimid)로도 공지)는 탈리도마이드의 합성 유도체이고, T 세포와 항원 제시 세포(antigen presenting cell, APC) 사이의 면역 시냅스 형성의 시행을 포함하여 다수의 면역 조절 효과를 갖는다. 예를 들어, 일부 경우에, 레날리도마이드는 T 세포 반응을 조절하고, CD4+ 및 CD8+ T 세포에서 인터루킨(IL)-2 생산의 증가를 초래하고, Th2에서 Th1로 T 헬퍼(Th) 반응의 이동을 유도하고, T 세포의 조절(Treg) 서브세트의 팽창을 억제하고, 여포성 림프종(FL) 및 만성 림프구성 백혈병(CLL)에서 면역 시냅스의 기능을 향상시킨다(Otahal 등, Oncoimmunology (2016) 5(4):e1115940). 레날리도마이드는 또한, 다발성 골수종(MM) 환자에게서 직접적인 종양파괴 활성을 가지며, 림프 조직의 미세 환경에서 발견되는 영양 유사 세포(nurse-like cell)와 같은 지지 세포에 영향을 미침으로써 CLL 종양 세포의 생존을 직접 및 간접적으로 조절한다. 레날리도마이드는 또한 CD3 결찰 또는 수지상 세포-매개 활성화를 통한 T 세포의 활성화에 반응하여 T-세포 증식 및 인터페론-γ 생산을 강화할 수 있다. 레날리도마이드는 또한, 악성 B 세포가 CD80, CD86, HLA-DR, CD95 및 CD40과 같은 더 높은 수준의 면역 자극 분자를 발현하도록 유도할 수 있다(Fecteau 등, Blood (2014) 124(10):1637-1644). 일부 구현예에서, 레날리도마이드는 약 1mg 내지 약 20mg, 예를 들어, 약 1mg 내지 약 10mg, 약 2.5mg 내지 약 7.5mg, 약 5mg 내지 약 15mg, 예컨대 약 5mg, 10mg, 15mg 또는 20mg의 투여량으로 매일 투여된다. 일부 구현예에서, 레날리도마이드는 약 10μg/kg 내지 5mg/kg, 예를 들어, 약 100μg/kg 내지 약 2mg/kg, 약 200μg/kg 내지 약 1mg/kg, 약 400μg/kg 내지 약 600μg/kg, 예컨대 약 500μg/kg의 용량으로 투여된다.
일부 구현예에서, 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 투여되는 추가 제제는 B 세포 억제제이다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 CD10, CD19, CD20, CD22, CD34, CD123, CD79a, CD79b, CD179b, FLT-3 또는 ROR1의 억제제 또는 이들의 조합물 중에서 선택된 하나 이상의 B 세포 억제제이다. 일부 구현예에서, B-세포 억제제는 항체(예를 들어, 단일- 또는 이중 특이적 항체) 또는 이의 항원 결합 단편이다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 B-세포 표적, 예를 들어, CD10, CD19, CD20, CD22, CD34, CD123, CD79a, CD79b, CD179b, FLT-3 또는 ROR1을 표적으로 하는 재조합 수용체를 발현하는 조작된 세포이다.
일부 구현예에서, 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 투여되는 추가 제제는 CD20 억제제, 예를 들어, 항-CD20 항체(예를 들어, 항-CD20 단일- 또는 이중-특이적 항체) 또는 이의 단편이다. 예시적인 항-CD20 항체에는 리툭시맙(rituximab), 오파투무맙(ofatumumab), 옥렐리주맙(ocrelizumab; GA101 또는 RO5072759로도 공지), 벨투주맙(veltuzumab), 오비누투주맙(obinutuzumab), TRU-015(Trubion Pharmaceuticals), 오카라투주맙(ocaratuzumab; AME-133v로도 공지) 및 Pro131921(Genentech)이 포함되지만, 이에 제한되지 않는다. 예를 들어, 문헌[Lim 등 Haematologica. (2010) 95(1):135-43]을 참조한다. 일부 구현예에서, 항-CD20 항체는 리툭시맙을 포함한다. 리툭시맙은 CD20에 결합하고 CD20 발현 세포의 세포 용해를 유발하는 키메라 마우스/인간 단클론 항체 IgG1 카파이다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 리툭시맙을 포함한다. 일부 구현예에서, CD20 억제제는 소분자이다.
일부 구현예에서, 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 투여되는 추가 제제는 CD22 억제제, 예를 들어, 항-CD22 항체(예를 들어, 항-CD22 단일- 또는 이중-특이적 항체) 또는 이의 단편이다. 예시적인 항-CD22 항체는 에프라투주맙 및 RFB4를 포함한다. 일부 구현예에서, CD22 억제제는 소분자이다. 일부 구현예에서, 항체는 선택적으로 화학 요법제와 같은 제2 제제에 접합된 단일 특이적 항체이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 항체는 항-CD22 단클론 항체-MMAE 접합체(예를 들어, DCDT2980S)이다. 일부 구현예에서, 항체는 항-CD22 항체의 scFv, 예를 들어, 항체 RFB4의 scFv이다. 일부 구현예에서, scFv는 슈도모나스 외독소-A(Pseudomonas exotoxin-A)(예를 들어, BL22)의 전부 또는 단편에 융합된다. 일부 구현예에서, scFv는 슈도모나스 외독소-A(예를 들어, 목세투모맙 파수도톡스(moxetumomab pasudotox))의 전부 또는 단편(예를 들어, 38 kDa 단편)에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-CD22 항체는 선택적으로 독소에 접합된, 항-CD19/CD22 이중 특이적 항체이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 항-CD22 항체는 디프테리아 독소(diphtheria toxin, DT)의 전부 또는 일부, 예를 들어, 디프테리아 독소(DT)의 처음 389개 아미노산, DT 390, 예를 들어 리간드-지향 독소(ligand-directed toxin), 예컨대 DT2219ARL에 선택적으로 연결된 항-CD19/CD22 이중 특이적 부분(예를 들어, 인간 CD19 및 CD22를 인식하는 2개의 scFv 리간드)을 포함한다. 일부 구현예에서, 이중 특이적 부분(예를 들어, 항-CD 19/항-CD22)은 독소, 예컨대 탈당화된 리신 A 사슬(예를 들어, 콤보톡스)에 연결된다.
일부 구현예에서, 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 투여되는 추가 제제는 사이토카인이거나 또는 종양 미세환경에서 사이토카인의 증가된 발현을 유도하는 제제이다. 사이토카인은 T 세포 팽창, 분화, 생존 및 항상성과 관련된 중요한 기능을 한다. 제공된 방법 또는 용도, 본원에 제공된 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물에서 병용 요법을 받는 대상체에 투여될 수 있는 사이토카인에는 IL-2, IL-4, IL-7, IL-9, IL-15, IL-18 및 IL-21 중 하나 이상이 포함된다. 일부 구현예에서, 투여되는 사이토카인은 IL-7, IL-15 또는 IL-21, 또는 이들의 조합물이다. 일부 구현예에서, 조작된 세포, 예를 들어 CAR-발현 세포의 투여에 대해 차선적 반응을 갖는 대상체에 사이토카인의 투여는 투여된 세포, 예를 들어 CAR-발현 세포의 효능 및/또는 항-종양 활성을 개선시킨다.
일부 구현예에서, 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 투여되는 추가 제제는 세포 간 매개체로서 다른 세포에 작용하는 단백질과 같은 사이토카인이다. 이러한 사이토카인의 예는 림포카인, 모노카인 및 전통적인 폴리펩타이드 호르몬이다. 사이토카인 중에는 성장 호르몬, 예컨대 인간 성장 호르몬, N-메티오닐 인간 성장 호르몬 및 소 성장 호르몬(bovine growth hormone); 부갑상선 호르몬(parathyroid hormone); 티록신(thyroxine); 인슐린; 프로인슐린(proinsulin); 릴랙신(relaxin); 프로릴랙신(prorelaxin); 당단백질 호르몬(glycoprotein hormones), 예컨대 여포 자극 호르몬(FSH), 갑상선 자극 호르몬(TSH) 및 황체 형성 호르몬(LH); 간 성장 인자(hepatic growth factor); 섬유아세포 성장 인자(fibroblast growth factor); 프로락틴(prolactin); 태반성 락토겐(placental lactogen); 종양 괴사 인자-알파 및 -베타(tumor necrosis factor-alpha and -beta); 뮬러관 억제 물질(mullerian-inhibiting substance); 마우스 성선자극호르몬 관련 펩타이드(mouse gonadotropin-associated peptide); 인히빈(inhibin); 액티빈(activin); 혈관 내피 성장 인자; 인테그린(integrin); 트롬보포이에틴(TPO); 신경 성장 인자, 예컨대 NGF-베타; 혈소판 성장 인자; TGF-알파 및 TGF-베타와 같은 형질전환 성장 인자(TGF); 인슐린 유사 성장 인자-I 및 -II; 에리트로포이에틴(EPO); 골 유도성 인자(osteoinductive factor); 인터페론-알파, 베타 및 -감마와 같은 인터페론; 대식세포-CSF(M-CSF)와 같은 집락 자극 인자(colony stimulating factor, CSF); 과립구-대식세포-CSF(GM-CSF); 및 과립구-CSF(G-CSF); 인터루킨(IL), 예컨대 IL-1, IL-1알파, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12; TNF-알파 또는 TNF-베타와 같은 종양 괴사 인자인 IL-15; 및 LIF 및 키트 리간드(kit ligand, KL)를 포함한 다른 폴리펩타이드 인자가 포함된다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 사이토카인은 천연 공급원 또는 재조합 세포 배양물로부터의 단백질, 및 천연(native) 서열 사이토카인의 생물학적 활성 등가물을 포함한다. 예를 들어, 면역 조절제는 사이토카인이고 상기 사이토카인은 IL-4, TNF-α, GM-CSF 또는 IL-2이다.
일부 구현예에서, 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 투여되는 추가 제제는 인터루킨-15 (IL-15) 폴리펩타이드, 인터루킨-15 수용체 알파 (IL-15Rα) 폴리펩타이드 또는 이의 조합물, 예를 들어, hetIL-15 (Admune Therapeutics, LLC)를 포함한다. hetIL-15는 IL-15 및 IL-15Rα의 이종이량체성(heterodimeric) 비공유 복합체이다. hetIL-15는 예를 들어, 문헌[U.S. 8,124,084, U.S. 2012/0177598, U.S. 2009/0082299, U.S. 2012/0141413 및 U.S. 2011/0081311]에 기재되어 있다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 하나 이상의 사이토카인을 함유할 수 있다. 예를 들어, 인터루킨은 천연 사이토카인의 조합물인 백혈구 인터루킨 주사(Multikine)를 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 투여되는 추가 제제는 아데노신 수준의 조절제 및/또는 아데노신 경로 구성요소이다. 아데노신은 신체에 면역 조절제로서 기능할 수 있다. 예를 들어, 아데노신 수용체 아형을 비선택적으로 활성화하는 아데노신 및 일부 아데노신 유사체는 염증성 산화 생성물의 호중구 생성을 감소시킨다(Cronstein 등, Ann. N.Y. Acad. Sci. 451:291, 1985; Roberts 등, Biochem. J., 227:669, 1985; Schrier 등, J. Immunol. 137:3284, 1986; Cronstein 등, Clinical Immunol. Immunopath. 42:76, 1987). 일부 경우에, 세포외 아데노신 또는 아데노신 유사체의 농도는 특정 환경, 예를 들어, 종양 미세 환경(tumor microenvironment, TME)에서 증가할 수 있다. 일부 경우에, 아데노신 또는 아데노신 유사체 신호 전달은 저산소증(hypoxia) 또는 저산소증과 관련된 인자 또는 이의 조절, 예를 들어 저산소증 유도성 인자(hypoxia inducible factor, HIF)에 의존한다. 일부 구현예에서, 아데노신 신호 전달의 증가는 세포내 cAMP 및 cAMP-의존성 단백질 키나아제를 증가시켜, 전염증성 사이토카인 생성의 억제를 초래할 수 있고, 면역 억제 분자의 합성 및 Treg의 발달로 이어질 수 있다(Sitkovsky 등, Cancer Immunol Res (2014) 2(7):598-605). 일부 구현예에서, 추가 제제는 아데노신, 아데노신 유사체 및/또는 아데노신 신호 전달의 면역 억제 효과를 감소시키거나 역전시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 저산소증 유도 A2-아데노시너지성 T 세포(hypoxia-driven A2-adenosinergic T cell) 면역 억제를 감소시키거나 역전시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 아데노신 수용체의 길항제, 세포외 아데노신-분해제, CD39/CD73 체외 효소에 의한 아데노신 생성 억제제 및 저산소증-HIF-1α 신호 전달 억제제 중에서 선택된다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 아데노신 수용체 길항제 또는 작용제이다.
일부 구현예에서, 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 투여되는 추가 제제는 아데노신 수용체의 활성 및/또는 양을 억제하는 제제이다. 특정 구현예는 세포외 아데노신의 억제제(예컨대, 세포외 아데노신의 형성을 방지, 아데노신을 분해, 불활성화로 만들고/만들거나 감소시키는 제제) 및/또는 아데노신 수용체 억제제(예컨대, 아데노신 수용체 길항제)에 의한 세포외 아데노신 또는 아데노신 수용체의 억제 또는 감소가 대식세포, 호중구, 과립구, 수지상 세포, T- 및/또는 B 세포-매개 반응과 같은 면역 반응을 강화할 수 있다는 것을 고려한다. 또한, Gs 단백질 매개 cAMP 의존성 세포내 경로의 억제제 및 아데노신 수용체-촉발 Gi 단백질 매개 세포내 경로의 억제제는 또한 급성 및 만성 염증을 증가시킬 수 있다.
일부 구현예에서, 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 투여되는 추가 제제는 아데노신 수용체 길항제 또는 작용제, 예를 들어, 아데노신 수용체 A2a, A2b, A1 및 A3 중 하나 이상의 길항제 또는 작용제이다. 아데닐레이트 사이클라아제(adenylate cyclase) 활성을 A1 및 A3은 각각 억제하고, A2a 및 A2b는 각각 자극한다. A2a, A2b 및 A3과 같은 특정 아데노신 수용체는 염증 중에 면역 반응을 억제하거나 감소시킬 수 있다.
따라서, 면역 억제 아데노신 수용체를 길항화하면 면역 반응, 예를 들어, 투여된 세포, 예를 들어 CAR- 발현 T 세포로부터의 면역 반응을 증강, 증진 또는 향상시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 세포외 아데노신 및 아데노신 수용체를 통한 아데노신-촉발 신호 전달의 생성을 억제한다. 예를 들어, 면역 반응의 강화, 국소 조직 염증 및 표적화된 조직 파괴는, 아데노신 생성 국소 조직 저산소증을 억제 또는 감소시킴으로써; 축적된 세포외 아데노신을 분해(또는 불활성화)함으로써; 면역 세포 상에서 아데노신 수용체의 발현을 방지하거나 감소시킴으로써; 및/또는 아데노신 수용체를 통해 아데노신 리간드에 의한 신호 전달을 억제/길항함으로써, 향상될 수 있다.
일부 구현예에서, 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 투여되는 추가 제제는 아데노신 수용체 길항제이다. 일부 구현예에서, 길항제는 아데노신 수용체, 예컨대 A2a, A2b 또는 A3 수용체의 소분자 또는 화학적 화합물이다. 일부 구현예에서, 길항제는 아데노신 수용체에 결합하지만 Gi 단백질 의존성 세포내 경로를 촉발하지 않는, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체(pepidomimetic)이다. 이러한 길항체의 예는 미국 특허 번호 5,565,566; 5,545, 627, 5,981,524; 5,861,405; 6,066,642; 6,326,390; 5,670,501; 6,117,998; 6,232,297; 5,786,360; 5,424,297; 6,313,131, 5,504,090; 및 6,322,771에 기술되어 있다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 A2a 길항제와 같은 A2 수용체(A2R) 길항제이다. 예시적인 A2R 길항제에는 KW6002(이스트라데필린(istradefyline)), SCH58261, 카페인(caffeine), 파라잔틴(paraxanthine), 3,7-디메틸-1-프로파르길잔틴(DMPX), 8-(m-클로로스티릴) 카페인(CSC), MSX-2, MSX-3, MSX-4, CGS-15943, ZM-241385, SCH-442416, 프렐라데난트(preladenant), 비파데난트(vipadenant, BII014), V2006, ST-1535, SYN-115, PSB-1115, ZM241365, FSPTP, 및 A2R 발현을 표적화하는 억제성 핵산, 예를 들어, siRNA 또는 shRNA, 또는 A2R을 표적화하는 임의의 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 포함되나, 이에 한정되지 않는다. 일부 구현예에서, 추가 제제는, 예를 들어, 문헌 [Ohta 등, Proc Natl Acad Sci U S A (2006) 103:13132-13137; Jin 등, Cancer Res. (2010) 70(6):2245-2255; Leone 등, Computational and Structural Biotechnology Journal (2015) 13:265-272; Beavis 등, Proc Natl Acad Sci U S A (2013) 110:14711-14716; 및 Pinna, A., Expert Opin Investig Drugs (2009) 18:1619-1631; Sitkovsky 등, Cancer Immunol Res (2014) 2(7):598-605]; US 8,080,554; US 8,716,301; US 20140056922; WO2008/147482; US 8,883,500; US 20140377240; WO02/055083; US 7,141,575; US 7,405,219; US 8,883,500; US 8,450,329 및 US 8,987,279]에 기재된 A2R 길항제이다.
일부 구현예에서, 아데노신 수용체를 암호화하는 mRNA에 특이적으로 결합하는 안티센스 분자, 억제성 핵산 분자(예를 들어, 소형 억제성 RNA(small inhibitory RNA, siRNA)) 또는 촉매 핵산 분자(예를 들어, 리보자임)인 아데노신 수용체 길항제이다. 일부 구현예에서, 안티센스 분자, 억제성 핵산 분자 또는 촉매성 핵산 분자는 A2a, A2b 또는 A3을 암호화하는 핵산에 결합한다. 일부 구현예에서, 안티센스 분자, 억제성 핵산 분자 또는 촉매성 핵산은 아데노신 수용체의 생화학적 경로 하류를 표적화한다. 예를 들어, 안티센스 분자 또는 촉매성 핵산은 Gs 단백질- 또는 Gi 단백질-의존성 세포내 경로에 관여하는 효소를 억제할 수 있다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 아데노신 수용체, 예컨대 A2a, A2b 또는 A3의 우성 음성 돌연변이체 형태를 포함한다.
일부 구현예에서, 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 투여되는 추가 제제는 세포외 아데노신을 억제하는 제제이다. 세포외 아데노신을 억제하는 제제는, 세포외 아데노신을 비기능성으로 만드는(또는 상기 기능을 감소시키는) 제제, 예컨대, 아데노신의 구조를 변형시켜 아데노신 수용체를 통해 신호를 전달하는 아데노신의 능력을 억제하는 물질을 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 세포외 아데노신 생성 또는 아데노신 분해 효소, 이의 변형된 형태 또는 이의 조절제이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 추가 제제는 아데노신에 선택적으로 결합하고 파괴하여, 내생적으로 형성된 아데노신의 아데노신 수용체를 통한 신호 전달 및 염증을 종결시키는 능력을 파과하거나 또는 현저히 감소시키는 효소(예를 들어, 아데노신 탈아미노효소) 또는 다른 촉매 분자이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 아데노신 탈아미노효소(ADA) 또는 이의 변형된 형태, 예를 들어 재조합 ADA 및/또는 폴리에틸렌 글리콜-변형 ADA(ADA-PEG)이며, 이는 세포외 아데노신의 국소 조직 축적을 억제할 수 있다. ADA-PEG는 ADA SCID 환자의 치료에 사용되어 왔다(Hershfield (1995) Hum Mutat. 5:107). 일부 구현예에서, 세포외 아데노신을 억제하는 제제는 세포외 아데노신의 형성을 방지 또는 감소시키고/거나 세포외 아데노신의 축적을 방지 또는 감소시켜 아데노신의 면역 억제 효과를 파괴하거나 실질적으로 감소시키는 제제를 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 핵 전사 인자의 조절제를 포함하여, 전-염증성 분자의 합성 및/또는 분비 조절에 관여하는 효소 및 단백질을 특이적으로 억제한다. 아데노신 수용체 발현 또는 Gs 단백질- 또는 Gi 단백질-의존성 세포내 경로, 또는 cAMP 의존성 세포내 경로 발현의 억제는 면역 반응의 증가/향상을 초래할 수 있다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 세포외 아데노신을 생성 또는 생산하는 체외 효소(ectoenzyme)를 표적화할 수 있다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 CD39 및 CD73 체외 효소를 표적화하며, 이는 함께 작용하여 세포외 아데노신을 생성한다. CD39(엑토뉴클레오사이드 트리포스페이트 디포스포하이드로라제로도 불림)는 세포외 ATP(또는 ADP)를 5’AMP로 전환시킨다. 이어서, CD73(5’뉴클레오티다제로도 불림)은 5’AMP를 아데노신으로 전환시킨다. CD39의 활성은 NDP 키나아제 및 아데닐레이트 키나아제의 작용에 의해 가역적이지만, CD73의 활성은 비가역적이다. CD39 및 CD73은 내피 세포 및 Treg를 포함하는 종양 간질 세포(tumor stromal cell) 및 다수의 암 세포 상에서도 발현된다. 예를 들어, 내피 세포에서 CD39 및 CD73의 발현은 종양 미세 환경의 저산소 조건 하에서 증가된다. 종양 저산소증은 산소 전달을 약화시키는 불충분한 혈액 공급 및 조직화되지 않은 종양 혈관 구조로부터 생길 수 있다(Carroll and Ashcroft (2005), Expert. Rev. Mol. Med. 7(6):1-16). 저산소증은 또한 아데노신을 AMP로 전환시키는 아데닐레이트 키나아제(adenylate kinase, AK)를 억제하여 매우 높은 세포외 아데노신 농도를 야기한다. 따라서, 아데노신은 고형 종양에서 또는 주위에서, 종양 미세 환경(tumor microenvironment, TME)을 빈번하게 발생시키는 상태인 저산소증에 반응하여 고농도로 방출된다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 하나 이상의 항-CD39 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 항-CD73 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 예를 들어, MEDI9447 또는 TY/23, α-β-메틸렌-아데노신 디포스페이트(ADP), ARL 67156, POM-3, IPH52이다 (예를 들어, 문헌[Allard 등 Clin Cancer Res (2013) 19(20):5626-5635; Hausler 등, Am J Transl Res (2014) 6(2):129-139; Zhang, B., Cancer Res. (2010) 70(16):6407-6411)]을 참고한다).
일부 구현예에서, 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 투여되는 추가 제제는 화학 요법제(때때로 세포독성제로 지칭됨)이다. 특정 구현예에서, 화학 요법제는 암과 같은 과증식성 장애의 치료, 예방 또는 개선에 효과적인 것으로 알려진 임의의 제제이다. 화학 요법제는, 소분자, 합성 약물, 펩타이드, 폴리펩타이드, 단백질, 핵산 (예를 들어, 안티센스 뉴클레오타이드 서열, 삼중 나선, 및 생물학적 활성 단백질, 폴리펩타이드 또는 펩타이드를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하지만, 이에 제한되지 않는 DNA 및 RNA 폴리뉴클레오타이드), 항체, 합성 또는 천연 무기 분자, 유사 제제(mimetic agents), 및 합성 또는 천연 유기 분자를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 특정 구현예에서, 화학요법 약물은 알킬화제, 안트라사이클린, 세포골격 파괴제(탁산), 에포틸론, 히스톤 디아세틸라제 억제제, 토포아이소머라제 억제제, 토포아이소머라제 Ⅱ 억제제, 키나아제 억제제, 뉴클레오타이드 유사체 및 전구체 유사체, 펩타이드 항생제, 백금 기반 제제, 및 빈카 알칼로이드 및 유도체를 포함한다.
화학 요법제는 아바렐릭스(abarelix), 알데스류킨(aldesleukin), 알렘투주맙(alemtuzumab), 알리트레티노인(alitretinoin), 알로푸리놀(allopurinol), 알트레타민(altretamine), 아미포스틴(amifostine), 아나스트로졸(anastrozole), 삼산화비소(arsenic trioxide), 아스파라기나제(asparaginase), BCG 라이브(BCG live), 베바시주맙(bevaceizumab), 벡사로텐(bexarotene), 블레오마이신(bleomycin), 보르테조밉(bortezomib), 부설판(busulfan), 칼루스테론(calusterone), 캄토테신(camptothecin), 카페시타빈(capecitabine), 카보플라틴(carboplatin), 카르무스틴(carmustine), 셀레콕시브(celecoxib), 세툭시맙(cetuximab), 클로람부실(chlorambucil), 시나칼셋(cinacalcet), 시스플라틴(cisplatin), 클라드리빈(cladribine), 사이클로포스파마이드(cyclophosphamide), 시타라빈(cytarabine), 다카바진(dacarbazine), 닥티노마이신(dactinomycin), 다베포에틴 알파(darbepoetin alfa), 다우노루비신(daunorubicin), 데닐류킨 디프티톡스(denileukin diftitox), 덱스라족산(dexrazoxane), 도세탁셀(docetaxel), 독소루비신(doxorubicin), 드로모스타놀론(dromostanolone), 엘리엇 B 용액(Elliott's B solution), 에피루비신(epirubicin), 에포에틴 알파(epoetin alfa), 에스트라무스틴(estramustine), 에토포사이드(etoposide), 엑세메스탄(exemestane), 필그라스팀(filgrastim), 플록수리딘(floxuridine), 플루다라빈(fludarabine), 플루오로우라실(fluorouracil), 풀베스트란트(fulvestrant), 젬시타빈(gemcitabine), 젬투주맙 오조가미신(gemtuzumab ozogamicin), 제피티닙(gefitinib), 고세렐린(goserelin), 하이드록시우레아(hydroxyurea), 이브리투모맙 티욱세탄(ibritumomab tiuxetan), 이다루비신(idarubicin), 이포스파마이드(ifosfamide), 이마티닙(imatinib), 인터페론 알파-2a(interferon alfa-2a), 인터페론 알파-2b(interferon alfa-2b), 이리노테칸(irinotecan), 레트로졸(letrozole), 류코보린(leucovorin), 레바미솔(levamisole), 로무스틴(lomustine), 메클로레타민(meclorethamine), 메게스트롤(megestrol), 멜팔란(melphalan), 머캅토퓨린(mercaptopurine), 메스나(mesna), 메토트렉세이트(methotrexate), 메톡살렌(methoxsalen), 메틸프레드니솔론(methylprednisolone), 미토마이신 C(mitomycin C), 미토탄(mitotane), 미톡산트론(mitoxantrone), 난드롤론(nandrolone), 노페투모맙(nofetumomab), 오블리머센(oblimersen), 오프렐베킨(oprelvekin), 옥살리플라틴(oxaliplatin), 파클리탁셀(paclitaxel), 파미드로네이트(pamidronate), 페가데마제(pegademase), 페가스파가제(pegaspargase), 페그필그라스팀(pegfilgrastim), 페메트렉시드(pemetrexed), 펜토스타틴(pentostatin), 피포브로만(pipobroman), 플리카마이신(plicamycin), 폴리페프로산(polifeprosan), 포르피머(porfimer), 프로카바진(procarbazine), 퀴나크린(quinacrine), 라스부리카제(rasburicase), 리툭시맙(rituximab), 사그라모스팀(sargramostim), 스트렙토조신(streptozocin), 탈크(talc), 타목시펜(tamoxifen), 타세바(tarceva), 테모졸로마이드(temozolomide), 테니포사이드(teniposide), 테스토락톤(testolactone), 티오구아닌(thioguanine), 티오테파(thiotepa), 토포테칸(topotecan), 토레미펜(toremifene), 토시투모맙(tositumomab), 트라스투주맙(trastuzumab), 트레티노인(tretinoin), 우라실 머스타드(uracil mustard), 발루비신(valrubicin), 빈블라스틴(vinblastine), 빈크리스틴(vincristine), 비노렐빈(vinorelbine) 및 졸레드로네이트(zoledronate)를 포함하나, 이로 제한되지 않는다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 저산소증 유도성 인자 1 알파(hypoxia inducible factor 1 alpha, HIF-1α) 신호 전달의 억제제이다. HIF-1α의 예시적인 억제제는 디곡신(digoxin), 아크리플라빈(acriflavine), 시르투인-7(sirtuin-7) 및 가네테스핍(ganetespib)을 포함한다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 단백질 티로신 포스파타아제 억제제, 예를 들어 본원에 기재된 단백질 티로신 포스파타아제 억제제를 포함한다. 일부 구현예에서, 단백질 티로신 포스파타아제 억제제는, 예를 들어, 본원에 기재된 SHP-1 억제제, 예를 들어, 스티보글루코네이트 나트륨(sodium stibogluconate)과 같은 SHP-1 억제제이다. 일부 구현예에서, 단백질 티로신 포스파타아제 억제제는 SHP-2 억제제, 예를 들어 본원에 기재된 SHP-2 억제제이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 키나아제 억제제이다. CDK4 키나아제 억제제, BTK 키나아제 억제제, MNK 키나아제 억제제 또는 DGK 키나아제 억제제와 같은 키나아제 억제제는 종양 세포에 존재하는 구성적으로 활성인 생존 경로를 조절하고/거나 면역 세포의 기능을 조절할 수 있다. 일부 구현예에서, 키나아제 억제제는 브루톤 티로신 키나아제(Bruton’s tyrosine kinase, BTK) 억제제, 예를 들어, 이브루티닙이다. 일부 구현예에서, 키나아제 억제제는 포스파티딜이노시톨-4,5-비스포스페이트 3-키나아제(PI3K) 억제제이다. 일부 구현예에서, 키나아제 억제제는 CDK4 억제제, 예를 들어 CDK4/6 억제제이다. 일부 구현예에서, 키나아제 억제제는 예를 들어 라파마이신, 라파마이신 유사체, OSI-027과 같은 mTOR 억제제이다. mTOR 억제제는 예를 들어 mTORC1 억제제 및/또는 mTORC2 억제제, 예를 들어 mTORC1 억제제 및/또는 mTORC2 억제제일 수 있다. 일부 구현예에서, 키나아제 억제제는 MNK 억제제, 또는 이중 PI3K/mTOR 억제제이다. 일부 구현예에서, 다른 예시적인 키나아제 억제제는 AKT 억제제 페리포신(perifosine), mTOR 억제제 템시로리무스(temsirolimus), Src 키나아제 억제제 다사티닙(dasatinib) 및 포스타마티닙(fostamatinib), JAK2 억제제 파크리티닙(pacritinib) 및 룩솔리티닙(ruxolitinib), PKCβ억제제 엔자스타우린(enzastaurin) 및 브리오스타틴(bryostatin) 및 AAK 억제제 알리세르팁(alisertib)을 포함한다.
일부 구현예에서, 키나아제 억제제는 이브루티닙(PCI- 32765); GDC-0834; RN-486; CGI-560; CGI-1764; HM-71224; CC-292; ONO-4059; CNX-774; 및 LFM-A13 중에서 선택된 BTK 억제제이다. 일부 구현예에서, BTK 억제제는 인터루킨-2-유도성 키나아제(ITK)의 키나아제 활성을 감소시키거나 억제하지 않으며, GDC-0834; RN-486; CGI-560; CGI-1764; HM-71224; CC-292; ONO-4059; CNX-774; 및 LFM-A13 중에서 선택된다.
일부 구현예에서, 키나아제 억제제는 BTK 억제제, 예를 들어 이브루티닙(1-[(3R)-3-[4-아미노-3-(4-페녹시페닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일]피페리딘-1-일]프로-2-엔-1-온; PCI-32765로도 공지)이다. 일부 구현예에서, 키나아제 억제제는 BTK 억제제, 예를 들어 이브루티닙(PCI-32765)이고, 이브루티닙은 어떤 시간의 기간 동안 매일, 예를 들어 21일 주기 동안 매일 또는 28일 주기 동안 매일, 약 250mg, 300mg, 350mg, 400mg, 420mg, 440mg, 460mg, 480mg, 500mg, 520mg, 540mg, 560mg, 580mg, 600mg(예를 들어, 250mg, 420mg 또는 560mg)의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 그 이상의 주기로 이브루티닙이 투여된다. 일부 구현예에서, BTK 억제제는 문헌[국제 출원 WO 2015/079417]에 기재된 BTK 억제제이다.
일부 구현예에서, 키나아제 억제제는 PI3K 억제제이다. PI3K는 세포 주기 조절 및 림프종 생존과 관련된 PI3K/Akt/mTOR 경로의 중심이다. 예시적인 PI3K 억제제는 이델라리십(idelalisib, PI3Kδ 억제제)을 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 이델라리십 및 리툭시맙이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 라파마이신(mTOR)의 포유류 표적의 억제제이다. 일부 구현예에서, 키나아제 억제제는 템시로리무스(temsirolimus); 리다포로리무스(ridaforolimus, AP23573 및 MK8669로도 공지); 에버로리무스(everolimus, RAD001); 라파마이신(AY22989); 시마피모드(simapimod); AZD8055; PF04691502; SF1126; 및 XL765 중에서 선택된 mTOR 억제제이다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 베무라페닙(vemurafenib), 다브라페닙(dabrafenib) 및 트라메티닙(trametinib)과 같은 미토겐-활성화 단백질 키나아제(mitogen-activated protein kinase, MA링커)의 억제제이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 전- 또는 항-세포자연사(apoptotic) 단백질을 조절하는 제제이다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 B-세포 림프종 2(B-cell lymphoma 2, BCL-2) 억제제(예를 들어, ABT-199 또는 GDC-0199로도 명명되는 베네토클락스(venetoclax); 또는 ABT-737)를 포함한다. 베네토클락스는 항-세포자연사 단백질인 BCL-2를 억제하는, 소분자(4-(4-{[2-(4-클로로페닐)-4,4-디메틸-1-사이클로헥센-1-일]메틸}-1-피페라지닐)-N-({3-니트로-4-[(테트라하이드로-2H-피란-4-일메틸)아미노]페닐}설포닐)-2-(1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-일옥시)벤즈아마이드)이다. 전- 또는 항-세포자연사 단백질을 조절하는 다른 제제는 최대 효능을 위해 BCL-2 억제제 ABT-737, 나비토클락스(navitoclax, ABT-263); Mcl-1 siRNA 또는 Mcl-1 억제제 레티노이드 N-(4-하이드록시페닐) 레틴아마이드(4-HPR)를 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 재조합 종양 괴사 인자-관련 세포자연사 유도 리간드(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand, TRAIL)와 같은 전-세포자연사 자극을 제공하며, 이는 종양 세포 표면의 TRAIL 사멸 수용체 DR-4 및 DR-5, 또는 TRAIL-R2 작용제 항체에 결합함으로써 세포자연사 경로를 활성화할 수 있다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 세포 독성제, 예를 들어 CPX-351(Celator Pharmaceuticals), 시타라빈(cytarabine), 다우노루비신(daunorubicin), 보사록신(vosaroxin, Sunesis Pharmaceuticals), 사파시타빈(sapacitabine, Cyclacel Pharmaceuticals), 이다루비신(idarubicin), 또는 미토산트론(mitoxantrone)을 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 저메틸화제(hypomethylating agent), 예를 들어 DNA 메틸전달효소(DNA methyltransferase) 억제제, 예를 들어 아자시티딘(azacytidine) 또는 데시타빈(decitabine)을 포함한다.
다른 구현예에서, 추가 요법은 이식, 예를 들어, 동종이계(allogeneic) 줄기세포 이식이다.
일부 구현예에서, 추가 요법은 림프구 고갈 요법(lymphodepleting therapy)이다. 일부 구현예에서, 림프구 고갈은 예를 들어, 조작된 세포 예를 들어, CAR-발현 세포를 투여하기 전에 대상체에서 수행된다. 일부 구현예에서, 림프구 고갈은 멜팔란(melphalan), 사이톡산(Cytoxan), 시클로포스파미드 및/또는 플루다라빈 중 하나 이상을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 림프구 고갈 화학 요법은 조작된 세포, 예를 들어 CAR-발현 세포의 투여(예를 들어, 주입) 전, 투여와 동시 또는 투여 후에 대상체에 투여된다. 일 예에서, 림프구 고갈 화학 요법은 조작된 세포, 예를 들어 CAR-발현 세포의 투여 전에 대상체에 투여된다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 종양 용해 바이러스이다. 일부 구현예에서, 종양 용해 바이러스는 암세포에서 선택적으로 복제하고 암세포의 사멸을 촉발하거나 암세포의 성장을 늦출 수 있다. 일부 경우에, 종양 용해 바이러스는 비-암세포에 효과가 없거나 최소한의 효과를 보인다. 종양 용해 바이러스에는 종양 용해성 아데노바이러스, 종양 용해성 단순 헤르페스 바이러스, 종양 용해성 레트로바이러스, 종양 용해성 파보바이러스, 종양 용해성 백시니아 바이러스, 종양 용해성 신비스(Sinbis) 바이러스, 종양 용해성 인플루엔자 바이러스 또는 종양 용해성 RNA 바이러스(예를 들어, 종양 용해성 레오바이러스, 종양 용해성 뉴캐슬병 바이러스(Newcastle Disease Virus, NDV), 종양 용해성 홍역 바이러스, 또는 종양 용해성 수포성 구내염 바이러스(vesicular stomatitis virus, VSV))가 포함되나, 이에 제한되지 않는다.
기타 예시적인 병용 요법, 치료 및/또는 제제는 항 알레르기성 제제, 항구토제, 진통제 및 보조 요법(adjunct therapies)을 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 신경보호제, 자유라디칼 제거제, 심장보호제, 안트라사이클린 혈관외유출 중화제 및 영양소와 같은 세포보호제를 포함한다.
일부 구현예에서, 추가 제제로서 사용되는 항체는 치료제, 예를 들어, 화학 요법제(예를 들어, 사이톡산(Cytoxan), 플루다라빈, 히스톤 탈아세틸효소 억제제, 탈메틸화제, 펩타이드 백신, 항종양 항생제, 티로신 키나아제 억제제, 알킬화제, 항-미세소관제 또는 항-유사분열제), 항-알레르기제, 항-구역질제(또는 항구토제), 진통제 또는 본원에 기재된 세포 보호제에 접합되거나 다르게는 결합된다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 항체 약물 접합체이다.
본원에 기재된 임의의 추가 제제는 제공된 방법, 용도, 제조 물품 또는 조성물, 예를 들어 병용 요법의 하나 이상의 제제 및 약학적으로 허용 가능한 담체, 예컨대 본원에 기재된 임의의 것을 포함하는 약학적 조성물에 기재된 병용 요법으로서 제조되고 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 제공된 방법, 용도, 제조 물품 또는 조성물에서 병용 요법은 추가 제제, 요법 또는 치료와 임의의 순서로 동시에, 함께 또는 순차적으로 투여될 수 있고, 여기서 이러한 투여는 대상체의 신체 내에서 치료적으로 유효한 수준으로 각 제제를 제공한다. 일부 구현예에서, 추가 제제는, 예를 들어 동일한 약학 조성물의 일부로서 또는 동일한 전달 방법을 사용하여 제공된 방법, 용도, 제조 물품 또는 조성물에서 병용 요법과 공동-투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 세포 요법, 예를 들어 조작된 T 세포(예를 들어, CAR+ T 세포)의 용량과 동시에 투여되지만, 별도의 조성물로 투여된다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 세포의 투여 전에, 조작된 세포, 예를 들어 CAR-발현 세포와 배양된다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 추가 제제는 세포 요법, 예를 들어 조작된 T 세포(예를 들어, CAR+ T 세포)의 용량 이후에 또는 전에 선택된 기간으로 분리되어 투여된다. 일부 예에서, 상기 기간은 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 1주, 2주, 3주, 1개월, 2개월 또는 3개월이다. 일부 예에서, 하나 이상의 추가 제제는 다중 투여된다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 세포 요법, 예를 들어 제공된 방법, 용도, 제조 물품 또는 조성물에서 조작된 T 세포 (CAR+ T 세포)의 용량 전에, 예를 들어 투여 전 2주, 12일, 10일, 8일, 1주, 6일, 5일, 4일, 3일, 2일 또는 1일에 투여된다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 세포 요법, 예를 들어 제공된 방법, 용도, 제조 물품 또는 조성물에서 조작된 T 세포(CAR+ T 세포)의 용량 후에, 예를 들어 투여 후 2주, 12일, 10일, 8일, 1주, 6일, 5일, 4일, 3일, 2일 또는 1일에 투여된다.
추가 제제의 용량은 임의의 치료적 유효량, 예를 들어 본원에 기재된 임의의 용량일 수 있고, 추가 제제의 적절한 투여량은 치료될 B 세포 악성 종양 또는 혈액 악성 종양의 유형, 투여된 세포 및/또는 조성물의 유형, 용량 및/또는 빈도, 대상체의 나이, 대상체의 체중, 질병의 중증도 및 경과, 이전 요법, 환자의 임상 병력 및 세포 요법에 대한 반응, 예를 들어 조작된 T세포 (CAR+ T 세포)의 용량, 및 주치의의 재량에 따라 달라질 수 있다.
Ⅴ. 제조 물품 및 키트
또한, 제공된 방법 및 용도에 따라 재조합 수용체(예를 들어, CAR)를 발현하는 조작된 세포 또는 이러한 세포를 함유하는 조성물을 함유하는 제조 물품 및 키트, 그리고 임의적으로 사용 지침서, 예를 들어, 투여 지침서가 제공된다.
일부 구현예에서, 치료적 유효량의 본원에 기재된 조작된 세포를 포함하는 조성물, 및 B 세포 악성 종양 또는 혈액 악성 종양을 치료하기 위해 대상체에게, 투여를 위한 지침서를 포함하는 제조 물품 및/또는 키트가 제공된다. 일부 구현예에서, 지침서는 본원에 제공된 방법 및 용도의 구성 요소의 일부 또는 전부를 명시할 수 있다. 일부 구현예에서, 지침서는 세포 요법을 위한 세포의 투여에 대한 특정 지침, 예를 들어, 용량, 시기, 선택 및/또는 투여를 위한 대상체의 식별 및 투여에 대한 조건을 명시한다. 일부 구현예에서, 제조 물품 및/또는 키트는 요법, 예를 들어 림프구 고갈 요법 및/또는 병용 요법, 예컨대 본원에 기재된 임의의 것을 위한 하나 이상의 추가 제제를 더 포함하고 요법을 위한 추가 제제를 투여하기 위한 지침서를 임의로 더 포함한다. 일부 구현예에서, 제조 물품 및/또는 키트는 림프구 고갈 요법을 위한 제제를 더 포함하고, 임의로 림프구 고갈 요법을 투여하기 위한 지침서를 임의로 더 포함한다. 일부 구현예에서, 지침서는 투여용 조성물을 수반하는 라벨 또는 패키지 삽입물로서 포함될 수 있다.
일부 구현예에서, 지침서는 요법을 위한 대상체의 선택 또는 식별을 위한 기준을 명시한다. 일부 구현예에서, 대상체는 본원의 섹션 I.A에 기재된 것과 같은 요법을 투여하기 위해 본원에 기재된 임의의 대상체를 포함한다. 일부 구현예에서, 이러한 기준은 B 세포 악성 종양 또는 혈액 악성 종양을 가지는 대상체를 포함한다. 일부 구현예에서, 이러한 기준은 B-세포 급성 림프모구 백혈병(B-cell acute lymphoblastic leukemia, B-ALL)을 포함한다. 일부 구현예에서, 이러한 기준은 B-세포 비호지킨 림프종(B-cell non-Hodgkin lymphoma, B-NHL) 및/또는 미만성 거대 B-세포 림프종(diffuse large B-cell lymphoma, DLBCL), 버킷 림프종(Burkitt lymphoma, BL) 또는 원발성 종격 거대 B-세포 림프종(primary mediastinal large B-cell lymphoma, PMBCL)을 포함하는, 이의 임의의 하위유형을 가지는 대상체를 포함한다.
일부 구현예에서, 지침서는 세포, 예를 들어 CAR-발현 세포의 투여를 위한 대상체의 나이를 명시한다. 일부 구현예에서, 지침서는 25세 이하인 대상체에 대한 투여를 명시한다. 일부 구현예에서, 지침서는 18세 미만인 대상체에 대한 투여를 명시한다. 일부 구현예에서, 지침서는 소아 대상체 또는 청소년(young adult) 대상체에 대한 투여를 명시한다.
일부 구현예에서, 지침서는 하나 이상의 선행 요법으로 치료 후 완화 후에 재발했거나 하나 이상의 선행 요법에 불응성이 된 대상체; 또는 하나 이상의 선행 요법, 예를 들어 하나 이상의 표준 요법 방식에 대해 재발하였거나 불응성(R/R)인 대상체;를 치료하는 것을 명시한다. 일부 구현예에서, 지침서는 표준 요법에 대해 R/R인 B 세포 악성 종양을 갖는 것으로 확인된 소아 대상체와 같은 대상체의 특정 그룹 또는 서브세트를 치료하는 것을 명시한다. 일부 구현예에서, 대상체는 공격성이고/이거나 불량한 예후를 갖거나 표준 요법에 대해 R/R인 B 세포 악성 종양과 같은 고위험 질병을 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 지침서는 미세 잔존 질병을 나타내는 R/R B-ALL, R/R B-NHL, 또는 B-ALL (MRD+ B-ALL)을 갖는 대상체를 치료하는 것을 명시한다. 일부 구현예에서, 대상체는 R/R DLBCL, R/R BL 또는 R/R PMBCL을 갖는다. 일부 구현예에서, 치료되는 대상체 또는 집단은 불량한 수행도를 갖는 대상체를 포함한다. 일부 측면에서, 치료되는 집단은, 예를 들어, 0-2인 ECOG(Eastern Cooperative Oncology Group Performance Status)를 갖는 대상체를 포함한다. 임의의 구현예 중 다른 측면에서, 치료되는 대상체는 ECOG 0-1을 포함하거나 ECOG 2 대상체를 포함하지 않는다. 임의의 구현예 중 일부 구현예에서, 치료되는 대상체는 하나 이상, 또는 둘 이상의 선행 요법에 실패하였다.
일부 구현예에서, 지침서는 투여되는 세포의 양, 수 또는 용량, 또는 투여되는 조작된 세포를 함유하는 조성물의 양 또는 부피를 명시한다. 일부 측면에서, 지침서는 본원에 제공된, 예를 들어 본원 섹션 I.B에 기재된 바와 같은 방법 및 용도에 따른 용량을 명시한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 지침서에 명시된 용량은 대상체의 체중을 기준으로 하는 용량을 포함한다. 일부 구현예에서, 지침서에 명시된 용량은 고정된 용량 또는 균일 용량인 용량을 포함한다. 일부 구현예에서, 지침서는 다중 용량의 투여를 명시한다.
일부 구현예에서, 제조 물품 또는 키트는 용기, 임의로 복수의 CD4+ CAR+ T 세포를 포함하는 바이알, 및 용기, 임의로 복수의 CD8+ CAR+ T 세포를 포함하는 바이알을 포함한다. 일부 구현예에서, 제조 물품 또는 키트는 용기, 임의로 복수의 CD4+ CAR+ T 세포를 포함하는 바이알을 포함하고, 동일한 용기에 복수의 CD8+ CAR+ T 세포를 더 포함한다. 일부 구현예에서, 동결보호제가 세포와 함께 포함된다. 일부 측면에서, 용기는 백(bag)이다.
일부 구현예에서, 바이알과 같은 용기는 충분한 CAR-발현 T 세포(예를 들어, CD4+ CAR+ T 세포 또는 CD8+CAR+T 세포 또는 둘 모두)와 같은, 본원에 제공된, 예를 들어 본원 섹션 I.B에 기재된 바와 같은 방법 및 용도에 따른 투여의 용량에 대한 충분한 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 바이알과 같은 용기는 약 10 x 106개 초과의 T 세포 또는 CAR+ T 세포, 약 15 x 106개 초과의 T 세포 또는 CAR+ T 세포, 약 25 x 106개 초과의 T 세포 또는 CAR+ T 세포를 포함한다.
일부 측면에서, 바이알은 약 10 x 106개 세포/mL 내지 약 70 x 106개 세포/mL, 약 10 x 106개 세포/mL 내지 약 50 x 106개 세포/mL, 약 10 x 106개 세포/mL 내지 약 25 x 106개 세포/mL, 약 10 x 106개 세포/mL 내지 약 15 x 106개 세포/mL, 15 x 106개 세포/mL 내지 약 70 x 106개 세포/mL, 약 15 x 106개 세포/mL 내지 약 50 x 106개 세포/mL, 약 15 x 106개 세포/mL 내지 약 25 x 106개 세포/mL, 약 25 x 106개 세포/mL 내지 약 70 x 106개 세포/mL, 약 25 x 106개 세포/mL 내지 약 50 x 106개 세포/mL, 및 약 50 x 106개 세포/mL 내지 약 70 x 106개 세포/mL를 포함한다. 일부 구현예에서, 용기 내 T 세포 조성물의 농도는 약 5 x 106개 세포/mL 이상이거나 약 5 x 106개 세포/mL이다. 일부 구현예에서, 용기 내 T 세포 조성물의 농도는 약 10 x 106개 세포/mL 이상이거나 약 10 x 106개 세포/mL이다. 일부 구현예에서, 용기 내 T 세포 조성물의 농도는 약 15 x 106개 세포/mL 초과 또는 약 15 x 106개 세포/mL이다. 일부 측면에서, 용기 내 세포의 농도는 용기 내 생존 세포의 농도이다.
일부 구현예에서, 복수의 바이알 또는 복수의 세포 또는 투여를 위해 명시된 세포의 단위 용량은 집합적으로 본원에 제공된, 예를 들어 본원 섹션 I.B에 기재된 바와 같은 방법 및 용도에 따른 임의의 용량과 같은, 세포의 명시된 양, 수 또는 용량을 포함한다. 일부 측면에서, 물품은 CD4+ 및/또는 CD8+ 세포 또는 CD4+수용체+ 세포 및/또는 CD8+수용체+ 세포(예를 들어, CD4+ CAR+ 세포 및/또는 CD8+CAR+ 세포)의 하나 이상의 단위 용량을 포함한다. 일부 구현예에서, 단위 용량은 약 1 x 107개 내지 약 2 x 108개의 CAR+ T 세포, 약 5 x 107개 내지 약 1.5 x 108개의 CAR+ T 세포, 약 5 x 107개의 CAR+ T 세포, 약 1 x 108개의 CAR+ T 세포, 또는 약 1.5 x 108개의 CAR+ T 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 물품의 정보는 하나 또는 복수의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 또는 복수의 단위 용량에 상응하는 부피의 투여를 명시한다. 일부 구현예에서, 각 바이알 또는 복수의 바이알 또는 복수의 세포 또는 투여를 위해 명시된 세포의 단위 용량은 집합적으로 세포의 최대 (또는 상한) 수 또는 양까지, 대상체의 체중을 기준으로 결정된 세포의 양, 수 또는 용량을 포함한다. 일부 구현예에서, 각 바이알 또는 복수의 바이알 또는 복수의 세포 또는 투여를 위해 명시된 세포의 단위 용량은 집합적으로 세포의 용량이 대상체의 체표면적 또는 체중에 결부되지 않거나 이를 기초로 하지 않도록, 세포의 균일한 수, 양 또는 용량 또는 세포의 고정된 수, 양 또는 용량을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포의 단위 용량은 단일 용량으로 대상체 또는 환자에게 투여될 수 있는, 조작된 T 세포와 같은 세포의 수 또는 양이거나 이를 포함한다.
일부 구현예에서, 지침서는 투여 섭생법 및 투여 시기를 명시할 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 지침은 세포의 다중 용량, 예를 들어, 2회 이상의 용량을 대상체에게 투여하는 것을 명시할 수 있다. 일부 구현예에서, 지침서는 다중 용량의 시기, 예를 들어, 제1 용량 후 대략 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 또는 21일에 투여되는 제2 용량; 및/또는 각 용량에서 투여량을 명시한다.
일부 구현예에서, 제조 물품 또는 키트는 복수의 CD4+ CAR+ T 세포, 및 질병 또는 병태를 가지는 대상체에게 복수의 CD4+ T 세포의 전부 또는 일부를 투여하고 CD8+ CAR+ T 세포를 더 투여하기 위한 지침서를 포함한다. 일부 구현예에서, 지침서는 CD8+ 세포를 투여하기 전에 CD4+ T 세포를 투여하는 것을 명시한다. 일부 경우에, 지침서는 CD4+ 세포를 투여하기 전에 CD8+ T 세포를 투여하는 것을 명시한다. 일부 구현예에서, 제조 물품 또는 키트는 복수의 CD8+ CAR+ T 세포, 및 질병 또는 병태를 가지는 대상체에게 복수의 CD8+ T 세포 및 CD4+ CAR+ T 세포의 전부 또는 일부를 투여하기 위한 지침서를 포함한다. 일부 구현예에서, 지침서는 투여 섭생법 및 세포 투여 시기를 명시한다.
일부 측면에서, 지침서는 CD4+ T 세포의 전부 또는 일부 및 CD8+ T 세포의 전부 또는 일부를 0 내지 12시간 간격, 0 내지 6시간 간격 또는 0 내지 2시간 간격으로 투여하는 것을 명시한다. 일부 경우에, 지침서는 CD4+ T 세포와 CD8+ T 세포를 2시간 이하, 1시간 이하, 30분 이하, 15분 이하, 10분 이하 또는 5분 이하 간격으로 투여하는 것을 명시한다.
일부 구현예에서, 지침서는 세포 또는 세포 유형(들)의 용량 또는 수 및/또는 세포 유형의 비율, 예를 들어 CD4+ 대 CD8+ 비율과 같은 개별 집단 또는 하위 유형을 명시한다. 일부 구현예에서, CD8+ 및 CD4+ T 세포와 같은 세포의 집단 또는 하위 유형이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 지침서는 세포가 다중 세포 집단 또는 하위 유형의 생산량 비율의 허용 범위에서 또는 허용 범위 내에서, 예컨대 약 5:1 내지 약 5:1 (또는 약 1:5 초과 약 5:1 미만), 또는 약 1:3 내지 약 3:1 (또는 약 1:3 초과 약 3:1 미만), 예컨대 약 2:1 내지 약 1:5 (또는 약 1:5 초과 약 2:1 미만), 예컨대 약 5:1, 4.5:1, 4:1, 3.5:1, 3:1, 2.5:1, 2:1, 1.9:1, 1.8:1, 1.7:1, 1.6:1, 1.5:1, 1.4:1, 1.3:1, 1.2:1, 1.1:1, 1:1, 1:1.1, 1:1.2, 1:1.3, 1:1.4, 1:1.5, 1:1.6, 1:1.7, 1:1.8, 1:1.9: 1:2, 1:2.5, 1:3, 1:3.5, 1:4, 1:4.5, 또는 1:5의 CD4+ 및 CD8+ 세포 또는 하위 유형과 같이 투여되는 것을 명시한다. 일부 측면에서, 허용된 차이는 이러한 범위 사이 내의 임의의 값을 포함하는, 바람직한 비율의 약 1%, 약 2%, 약 3%, 약 4% 약 5%, 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50% 내에 있다.
일부 구현예에서, 제조 물품 및/또는 키트는 본원에 기재된 바와 같이, 요법을 위한 하나 이상의 추가 제제, 예를 들어, 림프구 고갈 요법 및/또는 병용 요법, 및 임의로 추가 제제를 투여하기 위한 지침서를 더 포함한다. 일부 예시에서, 제조 물품은 하나 이상의 치료제를 더 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, 치료제는 면역조절제, 세포독성제, 항암제 또는 방사선치료제이다.
제조 물품 및/또는 키트는 용기 및 용기 상에 또는 용기와 관련된 라벨 또는 패키지 삽입물을 포함할 수 있다. 적합한 용기에는 예를 들어 병, 바이알, 주사기, IV 용액 백(bag) 등이 포함된다. 용기는 유리 또는 플라스틱과 같은 다양한 재료로 형성될 수 있다. 일부 구현예에서, 용기는 조성물 그 자체로 또는 병태를 치료, 예방 및/또는 진단하는데 효과적인 다른 조성물과 조합된 조성물을 보유한다. 일부 구현예에서, 용기는 멸균 접근 포트를 갖는다. 예시적인 용기는 정맥내 용액 백, 주사용 바늘에 의해 관통될 수 있는 마개를 가지는 것을 포함하는 바이알, 또는 경구 투여 제제용 병 또는 바이알을 포함한다. 라벨 또는 패키지 삽입물은 조성물이 질병 또는 병태를 치료하기 위해 사용되는 것을 나타낼 수 있다. 제조 물품은 (a) 재조합 수용체를 발현하는 조작된 세포를 포함하는 조성물이 내부에 함유된 제1 용기; 및 (b) 제2 제제를 포함하는 조성물이 내부에 함유된 제2 용기를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 제조 물품은 (a) 재조합 수용체를 발현하는 조작된 세포의 하위유형을 포함하는 제1 조성물이 내부에 함유된 제1 용기; 및 (b) 재조합 수용체를 발현하는 조작된 세포의 상이한 서브타입을 포함하는 조성물이 내부에 함유된 제2 용기를 포함할 수 있다. 제조 물품은 조성물이 특정 병태를 치료하기 위해 사용될 수 있다는 것을 나타내는 패키지 삽입물을 더 포함할 수 있다. 대안적으로, 또는 추가적으로, 제조 물품은 약학적으로 허용 가능한 완충제를 포함하는 또 다른 또는 동일한 용기를 더 포함할 수 있다. 다른 완충제, 희석제, 필터, 바늘 및/또는 주사기와 같은 다른 재료를 더 포함할 수 있다.
Ⅵ. 정의
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 용어, 표기법 및 다른 기술 및 과학 용어 또는 전문 용어는 청구된 내용이 속하는 기술 분야의 당업자에 의해 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가지는 것으로 의도된다. 일부 경우에, 일반적으로 이해되는 의미를 갖는 용어는 명확성 및/또는 용이한 참조를 위해 본원에서 정의되며, 본원에서 상기 정의를 포함하는 것이 당업계에서 일반적으로 이해되는 것과 실질적인 차이를 나타내는 것으로 반드시 해석되는 것은 아니다.
용어 “폴리펩타이드(polypeptide)” 및 “단백질(protein)”은 아미노산 잔기의 중합체를 지칭하기 위해 상호 교환적으로 사용되며, 최소 길이로 제한되지 않는다. 제공된 수용체 및 다른 폴리펩타이드, 예를 들어 링커 또는 펩타이드를 포함하는 폴리펩타이드는 천연 및/또는 비천연 아미노산 잔기를 포함하는 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 상기 용어들은 또한 폴리펩타이드의 발현 후 변형, 예를 들어 글리코실화, 시알릴화, 아세틸화, 및 인산화를 포함한다. 일부 측면에서, 폴리펩타이드는 단백질이 원하는 활성을 유지하는 한 천연 또는 자연 서열에 대한 변형을 함유할 수 있다. 이러한 변형은 부위-지정 돌연변이 유발을 통한 것과 같이 의도적일 수 있거나, 단백질을 생성하는 숙주의 돌연변이 또는 PCR 증폭으로 인한 오류를 통한 것과 같이 우발적일 수 있다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, “대상체(subject)”는 인간 또는 다른 동물과 같은 포유동물이며, 통상적으로 인간이다. 일부 구현예에서, 세포, 세포 집단 또는 조성물이 투여되는 대상체, 예를 들어 환자는 포유동물, 통상적으로 인간과 같은 영장류이다. 일부 구현예에서, 영장류는 원숭이 또는 유인원이다. 대상체는 수컷 또는 암컷일 수 있으며, 유아, 소아, 청소년, 성인 및 노인 대상체를 포함한 임의의 적합한 연령일 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 설치류와 같은 비영장류 포유 동물이다.
본원에서 사용된 바와 같은 “치료(treatment)”(및 "치료하다(treat)" 또는 "치료하는(treating)"과 같은 이의 문법적 변형)는 질병 또는 병태 또는 장애, 또는 이와 관련된 증상, 역효과 또는 결과 또는 표현형의 완전한 또는 부분적인 개선 또는 감소를 지칭한다. 치료의 바람직한 효과는 질병의 발생 또는 재발의 예방, 증상의 완화, 질병의 임의의 직접적 또는 간접적인 병리적 결과의 감소, 전이 방지, 질병 진행의 속도 감소, 질병 상태의 개선 또는 일시적 완화 및 경감 또는 향상된 예후를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 상기 용어는 질병의 완전한 치료 또는 모든 증상이나 결과에 있어 임의의 증상이나 영향(들)의 완전한 제거를 의미하지 않는다.
본원에서 사용된 바와 같은 “질병의 발병 지연(delaying development of a disease)”은 질병(예컨대 암)의 발병을 미룸, 방해, 늦춤, 지연, 안정화, 억제 및/또는 연기하는 것을 의미한다. 상기 지연은 질병의 이력 및/또는 치료 중인 개인에 따라 다양한 시간의 길이일 수 있다. 일부 구현예에서, 충분하거나 유의미한 지연은 상기 개인에 질병이 발병하지 않는다는 점에서 사실상 예방을 포함할 수 있다. 예를 들면, 전이의 발병과 같이 말기 암이 지연될 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같은 “예방(preventing)”은 질병에 걸릴 성향을 가질 수 있으나 아직 질병으로 진단되지 않은 대상체에서 질병의 발생 또는 재발과 관련하여 예방을 제공하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 제공된 세포 및 조성물은 질병의 발병을 지연시키거나 질병의 진행을 늦추는 데 사용된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 기능 또는 활성을 “억제(suppress)”한다는 것은 관심 조건 또는 매개변수를 제외하고는 달리 동일한 조건과 비교하거나, 또는 대안적으로 또 다른 조건과 비교할 때 기능 또는 활성을 감소시키는 것이다. 예를 들어, 종양 성장을 억제하는 세포는 상기 세포의 부재 시에 종양의 성장 속도에 비해 종양의 성장 속도를 감소시킨다.
제제, 예를 들어 약학적 제형, 세포 또는 조성물의 “유효량(effective amount)”은 투여의 맥락에서, 치료적 또는 예방적 결과와 같은 원하는 결과를 달성하기 위해 투여량/양에서와 필요한 기간 동안의 효과적인 양을 지칭한다.
제제, 예를 들어 약학적 제형 또는 세포의 “치료적 유효량(therapeutically effective amount)”은 예컨대 질병, 병태 또는 장애의 치료 및/또는 치료의 약동학적 또는 약력학적 효과를 위해 원하는 치료적 결과를 달성하기 위한 투여량에서와 필요한 기간 동안의 효과적인 양을 지칭한다. 치료적 유효량은 대상체의 질병 상태, 연령, 성별 및 체중, 및 투여되는 세포의 집단과 같은 인자에 따라 달라질 수 있다. 일부 구현예에서, 제공된 방법 및 용도는 세포 및/또는 유효량, 예를 들어 치료적 유효량의 조성물을 투여하는 것을 포함한다.
“예방적 유효량(prophylactically effective amount)”은 원하는 예방적 결과를 달성하기 위해 필요한 투여량에서와 시간 동안의 효과적인 양을 지칭한다. 반드시는 아니나 통상적으로, 예방적 용량이 질병 이전 또는 초기 단계의 대상체에서 사용되기 때문에, 예방적 유효량은 치료적 유효량보다 적을 것이다. 더 낮은 종양 부담의 맥락에서, 예방적 유효량은, 일부 측면에서 치료적 유효량보다 높을 것이다.
본원에 사용된 용어 “약(about)”은 본 기술 분야의 당업자에게 용이하게 알려진 각각의 값에 대한 일반적인 오차 범위를 지칭한다. 본원에서 “약(about)”의 값 또는 매개변수에 대한 언급은 상기 값 또는 매개변수 자체에 관한 구현예를 포함(기술)한다.
본원에 사용된 바와 같이, 단수 형태(“a”, “an” 및 “the”)는 문맥상 명백하게 다르게 지시하지 않는 한 복수의 지시 대상을 포함한다. 예를 들어, 단수 형태(“a” 또는 “an”)는 “적어도 하나(at least one)” 또는 “하나 이상(one or more)”을 의미한다.
*본 개시 전체에서, 청구된 내용의 다양한 측면이 범위 형식으로 제시된다. 범위 형식의 기재는 단지 편의 및 간결성을 위한 것이며 청구된 내용의 범위에 대한 융통성 없는 제한으로 해석되어서는 안된다는 것을 이해해야 한다. 따라서, 범위의 기재는 모든 가능한 하위 범위 및 상기 범위 내의 개별 수치를 구체적으로 개시한 것으로 간주되어야 한다. 예를 들어, 값의 범위가 제공되는 경우, 상기 범위의 상한 내지 하한 사이의 각 중간값과 상기 언급된 범위에서 임의의 다르게 언급된 또는 중간값은 청구된 내용 내에 포함되는 것으로 이해된다. 이들의 더 작은 범위의 상한 및 하한은 독립적으로 더 작은 범위에 포함될 수 있고, 또한 언급된 범위에서 임의의 구체적으로 배제된 제한을 조건으로 청구된 내용 내에 포함된다. 언급된 범위가 제한 중 하나 또는 둘 모두를 포함하는 경우, 그러한 포함된 제한 중 하나 또는 둘 모두를 제외한 범위도 청구된 내용에 포함된다. 이는 범위의 폭에 관계없이 적용된다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 조성물은 세포를 포함하여 둘 이상의 산물, 물질 또는 화합물의 임의의 혼합물을 지칭한다. 이는 용액, 현탁액, 액체, 분말, 페이스트, 수성, 비수성 또는 이들의 임의의 조합물일 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 하나 이상의 특정 세포 유형 또는 세포 집단을 지칭할 때 "농축화(enriching)"는, 예를 들어 조성물 내의 총 세포 수 또는 조성물의 부피와 비교하여, 또는 다른 세포 유형에 비해, 예컨대 집단 또는 세포에 의해 발현되는 표지자를 기초로 한 양성 선별에 의해, 또는 고갈되는 세포 집단 또는 세포 상에 존재하지 않는 표지자를 기초로 한 음성 선별에 의해 세포 유형 또는 집단의 수 또는 백분율을 증가시키는 것을 지칭한다. 상기 용어는 조성물로부터 다른 세포, 세포 유형 또는 집단의 완전한 제거를 요구하지 않으며, 그렇게 농축된 세포가 농축 조성물에 100% 또는 거의 100%로 존재하는 것을 요구하지 않는다.
본원에 사용된 바와 같이, 세포 또는 세포의 집단이 특정 표지자에 대해 “양성(positive)”이라는 표현은 특정 표지자, 통상적으로 표면 표지자가 세포 상에 또는 세포 내에 검출 가능하게 존재함을 지칭한다. 표면 표지자를 언급할 때, 상기 용어는 유세포 분석에 의해, 예를 들어, 이 표지자에 특이적으로 결합하는 항체로 염색하고 상기 항체를 검출함으로써 검출된 바와 같은 표면 발현의 존재를 지칭하며, 이 염색은 달리 동일한 조건 하에서 동종형-매칭된 대조군 또는 형광 마이너스 원 (fluorescence minus one, FMO) 게이팅(gating) 대조군으로 같은 절차를 수행하여 검출된 염색보다 실질적으로 상위 수준에서 및/또는 표지자에 대해 양성인 것으로 공지된 세포에 대한 것과 실질적으로 유사한 수준에서 및/또는 표지자에 대해 음성인 것으로 공지된 세포에 대한 것보다 실질적으로 더 높은 수준에서 유세포 분석에 의해 검출 가능하다.
본원에 사용된 바와 같이, 세포 또는 세포의 집단이 특정 표지자에 대해 “음성(negative)”이라는 표현은 특정 표지자, 통상적으로 표면 표지자가 세포 상에 또는 세포 내에 실질적으로 검출 가능하게 존재하지 않음을 지칭한다. 표면 표지자를 언급할 때, 상기 용어는 유세포 분석에 의해, 예를 들어, 이 표지자에 특이적으로 결합하는 항체로 염색하고 상기 항체를 검출함으로써 검출된 바와 같은 표면 발현의 부재를 지칭하며, 이 염색은 달리 동일한 조건 하에서 동종형-매칭된 대조군 또는 형광 마이너스 원 (fluorescence minus one, FMO) 게이팅 대조군으로 같은 절차를 수행하여 검출된 염색보다 실질적으로 상위 수준에서 및/또는 표지자에 대해 양성인 것으로 공지된 세포에 대한 것보다 실질적으로 더 낮은 수준에서 및/또는 표지자에 대해 음성인 것으로 공지된 세포에 대한 것과 비교하여 실질적으로 유사한 수준에서 유세포 분석에 의해 검출되지 않는다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 “벡터(vector)”는 이에 연결된 다른 핵산을 증식시킬 수 있는 핵산 분자를 지칭한다. 상기 용어는 자가-복제 핵산 구조로서의 벡터 및 이것이 도입된 숙주 세포의 유전체에 편입된 벡터를 포함한다. 특정 벡터는 이것이 작동 가능하게 연결된 핵산의 발현을 지시할 수 있다. 이러한 벡터는 본원에서 “발현 벡터(expression vector)”로 지칭된다.
Ⅶ. 예시적인 구현예
제공된 구현예 중에는 하기가 있다:
1. B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법으로,
상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25세 이하인 대상체에게 투여하는 것을 포함하고,
여기서 상기 조성물은:
(i) 상기 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 미만이고 18세 미만인 경우, 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 0.05 x 106개의 CAR+ T 세포 내지 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 1.5 x 106개의 CAR+ T 세포; 및
(ii) 상기 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 이상이거나 18세부터 25세까지인 경우(수치 포함), (약) 0.05 x 108개의 CAR+ T 세포 내지 (약) 1.5 x 108개의 CAR+ T 세포;
로부터 선택되는 양으로 투여되는, 방법.
2. 제1 구현예에 있어서,
(i) 상기 대상체가 18세부터 25세까지인 경우(수치 포함), 상기 T 세포 조성물은 (약) 0.05 x 108개의 CAR+ T 세포 내지 (약) 1.5 x 108개의 CAR+ T 세포 양으로 투여되는, 방법.
3. B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법으로,
상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25세 이하인 대상체에게 투여하는 것을 포함하고,
여기서 상기 조성물은:
(i) 상기 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 미만이고 18세 미만인 경우, 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 0.5 x 106개의 CAR+ T 세포 내지 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 1.5 x 106개의 CAR+ T 세포; 및
(ii) 상기 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 이상이거나 18세부터 25세까지인 경우(수치 포함), (약) 0.5 x 108개의 CAR+ T 세포 내지 (약) 1.5 x 108개의 CAR+ T 세포;
로부터 선택되는 양으로 투여되는, 방법.
4. 제1 구현예 내지 제3 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서,
상기 대상체가 18세부터 25세까지인 경우(수치 포함), 상기 T 세포 조성물은 (약) 0.5 x 108개의 CAR+ T 세포 내지 (약) 1.5 x 108개의 CAR+ T 세포 양으로 투여되는, 방법.
5. B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법으로,
상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 18세 미만인 대상체에게 투여하는 것을 포함하고,
여기서 상기 T 세포 조성물은:
(i) 상기 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 미만인 경우, 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 0.05 x 106개의 CAR+ T 세포 내지 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 1.5 x 106개의 CAR+ T 세포; 및
(ii) 상기 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 이상인 경우, (약) 0.05 x 108개의 CAR+ T 세포 내지 (약) 1.5 x 108개의 CAR+ T 세포;
로부터 선택되는 양으로 투여되는, 방법.
6. B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법으로,
상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 18세 미만인 대상체에게 투여하는 것을 포함하고,
여기서 상기 T 세포 조성물:
(i) 상기 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 미만인 경우, 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 0.5 x 106개의 CAR+ T 세포 내지 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 1.5 x 106개의 CAR+ T 세포; 및
(ii) 상기 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 이상인 경우, (약) 0.5 x 108개의 CAR+ T 세포 내지 (약) 1.5 x 108개의 CAR+ T 세포;
로부터 선택되는 양으로 투여되는, 방법.
7. 제1, 2 및 5 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서,
상기 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 미만인 경우, 상기 T 세포 조성물은 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 0.05 x 106개의 CAR+ T 세포 내지 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 1 x 106개의 CAR+ T 세포 양으로 투여되는, 방법.
8. 제1 내지 제7 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서,
상기 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 미만인 경우, 상기 T 세포 조성물은 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 0.5 x 106개의 CAR+ T 세포 내지 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 1 x 106개의 CAR+ T 세포 양으로 투여되는, 방법.
9. 제1, 2 및 5 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서,
상기 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 이상인 경우, 상기 T 세포 조성물은 (약) 0.05 x 108개의 CAR+ T 세포 내지 (약) 1.5 x 108개의 CAR+ T 세포 양으로 투여되는, 방법.
10. 제1 내지 제6 및 제9 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서,
상기 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 이상인 경우, 상기 T 세포 조성물은 (약) 0.5 x 108개의 CAR+ T 세포 내지 (약) 1.5 x 108개의 CAR+ T 세포 양으로 투여되는, 방법.
11. B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법으로,
상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25세 이하인 대상체에게 투여하는 것을 포함하고,
여기서 상기 조성물은:
(i) 상기 대상체가 18세 미만인 경우, 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 0.05 x 106개의 CAR+ T 세포 내지 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 1.5 x 106개의 CAR+ T 세포이지만, (약) 1.5 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않음; 또는
(ii) 상기 대상체가 18세부터 25세까지인 경우(수치 포함), (약) 0.05 x 108개의 CAR+ T 세포 내지 (약) 1.5 x 108개의 CAR+ T 세포;
로부터 선택되는 양으로 투여되는, 방법.
12. B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법으로,
상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25세 이하인 대상체에게 투여하는 것을 포함하고,
여기서 상기 조성물은:
(i) 상기 대상체가 18세 미만인 경우, 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 0.5 x 106개의 CAR+ T 세포 내지 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 1.5 x 106개의 CAR+ T 세포이지만, (약) 1.5 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않음; 또는
(ii) 상기 대상체가 18세부터 25세까지인 경우(수치 포함), (약) 0.5 x 108개의 CAR+ T 세포 내지 (약) 1.5 x 108개의 CAR+ T 세포;
로부터 선택되는 양으로 투여되는, 방법.
*13. 제11 구현예에 있어서,
상기 대상체가 18세 미만인 경우, 상기 T 세포 조성물은 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 0.05 x 106개의 CAR+ T 세포 내지 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 1.0 x 106개의 CAR+ T 세포 양으로 투여되지만, 1.0 x 108개의 총 CAR+ T 세포 또는 (약) 1.0 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는 양으로 투여되는, 방법.
14. 제11 내지 제13 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서,
상기 대상체가 18세 미만인 경우, 상기 T 세포 조성물은 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 0.5 x 106개의 CAR+ T 세포 내지 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 1.0 x 106개의 CAR+ T 세포 양으로 투여되지만, (약) 1.0 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는 양으로 투여되는, 방법.
15. 제1, 2, 5, 7, 9, 11 및 13 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서,
상기 대상체가 18세 미만인 경우, 상기 T 세포 조성물은 상기 대상체의 체중 kg 당 적어도 (약) 0.05 x 106개의 CAR+ T 세포인 양으로 투여되지만, (약) 0.05 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는 양으로 투여되는, 방법.
16. 제1, 2, 5, 7, 9, 11 및 13 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서,
상기 대상체가 18세 미만인 경우, 상기 T 세포 조성물은 상기 대상체의 체중 kg 당 적어도 (약) 0.15 x 106개의 CAR+ T 세포인 양으로 투여되지만, (약) 0.15 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는 양으로 투여되는, 방법.
17. 제1, 2, 5, 7, 9, 11 및 13 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서,
상기 대상체가 18세 미만인 경우, 상기 T 세포 조성물은 상기 대상체의 체중 kg 당 적어도 (약) 0.3 x 106개의 CAR+ T 세포인 양으로 투여되지만, (약) 0.3 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는 양으로 투여되는, 방법.
18. 제1 내지 제14 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서,
상기 대상체가 18세 미만인 경우, 상기 T 세포 조성물은 상기 대상체의 체중 kg 당 적어도 (약) 0.5 x 106개의 CAR+ T 세포인 양으로 투여되지만, (약) 0.5 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는 양으로 투여되는, 방법.
19. 제1 내지 제14 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서,
상기 대상체가 18세 미만인 경우, 상기 T 세포 조성물은 상기 대상체의 체중 kg 당 적어도 (약) 0.75 x 106개의 CAR+ T 세포인 양으로 투여되지만, (약) 0.75 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는 양으로 투여되는, 방법.
20. 제1 내지 제14 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서,
상기 대상체가 18세 미만인 경우, 상기 T 세포 조성물은 상기 대상체의 체중 kg 당 적어도 (약) 1.0 x 106개의 CAR+ T 세포인 양으로 투여되지만, (약) 1.0 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는 양으로 투여되는, 방법.
21. 제1, 2, 5, 7, 9, 11 및 13 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서,
상기 대상체가 18세부터 25세까지인 경우(수치 포함), 상기 T 세포 조성물은 (약) 0.05 x 108개의 CAR+ T 세포 내지 (약) 1.0 x 108개의 CAR+ T 세포 양으로 투여되는, 방법.
22. 제1 내지 제14 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서,
상기 대상체가 18세부터 25세까지인 경우(수치 포함), 상기 T 세포 조성물은 (약) 0.5 x 108개의 CAR+ T 세포 내지 (약) 1.0 x 108개의 CAR+ T 세포 양으로 투여되는, 방법.
23. 제1, 2, 5, 7, 9, 11, 13 및 21 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서,
상기 대상체가 18세부터 25세까지인 경우(수치 포함), 상기 T 세포 조성물은 (약) 0.05 x 108개의 CAR+ T 세포인 양으로 투여되는, 방법.
24. 제1, 2, 5, 7, 9, 11, 13 및 21 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서,
상기 대상체가 18세부터 25세까지인 경우(수치 포함), 상기 T 세포 조성물은 (약) 0.15 x 108개의 CAR+ T 세포인 양으로 투여되는, 방법.
25. 제1, 2, 5, 7, 9, 11, 13 및 21 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서,
상기 대상체가 18세부터 25세까지인 경우(수치 포함), 상기 T 세포 조성물은 (약) 0.3 x 108개의 CAR+ T 세포인 양으로 투여되는, 방법.
26. 제1 내지 제14, 제21 및 제22 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서,
상기 대상체가 18세부터 25세까지인 경우(수치 포함), 상기 T 세포 조성물은 (약) 0.5 x 108개의 CAR+ T 세포인 양으로 투여되는, 방법.
27. 제1 내지 제14, 제21 및 제22 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서,
상기 대상체가 18세부터 25세까지인 경우(수치 포함), 상기 T 세포 조성물은 (약) 0.75 x 108개의 CAR+ T 세포인 양으로 투여되는, 방법.
28. 제1 내지 제14, 제21 및 제22 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서,
상기 대상체가 18세부터 25세까지인 경우(수치 포함), 상기 T 세포 조성물은 (약) 1.0 x 108개의 CAR+ T 세포인 양으로 투여되는, 방법.
29. 제1 내지 제28 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서,
상기 대상체는 체중이 적어도 (약) 6 kg인, 방법.
30. 제1 내지 제28 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서,
상기 대상체는 체중이 적어도 (약) 12 kg인, 방법.
31. B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법으로,
상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25세 이하이고 체중 12kg 이상인 대상체에게 투여하는 것을 포함하고,
여기서 상기 T 세포 조성물은:
(i) 상기 대상체가 18세 미만인 경우, 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 0.05 x 106개의 CAR+ T 세포이지만, (약) 0.05 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않음; 및
(ii) 상기 대상체가 18세부터 25세까지인 경우(수치 포함), (약) 0.05 x 108개의 CAR+ T 세포;
로부터 선택되는 양으로 투여되는, 방법.
32. B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법으로,
상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25세 이하이고 체중 12kg 이상인 대상체에게 투여하는 것을 포함하고,
여기서 상기 T 세포 조성물은:
(i) 상기 대상체가 18세 미만인 경우, 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 0.15 x 106개의 CAR+ T 세포이지만, (약) 0.15 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않음; 및
(ii) 상기 대상체가 18세부터 25세까지인 경우(수치 포함), (약) 0.15 x 108개의 CAR+ T 세포;
로부터 선택되는 양으로 투여되는, 방법.
33. B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법으로,
상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25세 이하이고 체중 12kg 이상인 대상체에게 투여하는 것을 포함하고,
여기서 상기 T 세포 조성물은:
(i) 상기 대상체가 18세 미만인 경우, 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 0.3 x 106개의 CAR+ T 세포이지만, (약) 0.3 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않음; 및
(ii) 상기 대상체가 18세부터 25세까지인 경우(수치 포함), (약) 0.3 x 108개의 CAR+ T 세포;
로부터 선택되는 양으로 투여되는, 방법.
34. B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법으로,
상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25세 이하이고 체중 12kg 이상인 대상체에게 투여하는 것을 포함하고,
여기서 상기 T 세포 조성물은:
(i) 상기 대상체가 18세 미만인 경우, 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 0.5 x 106개의 CAR+ T 세포이지만, (약) 0.5 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않음; 및
(ii) 상기 대상체가 18세부터 25세까지인 경우(수치 포함), (약) 0.5 x 108개의 CAR+ T 세포;
로부터 선택되는 양으로 투여되는, 방법.
35. B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법으로,
상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25세 이하이고 체중 12kg 이상인 대상체에게 투여하는 것을 포함하고,
여기서 상기 T 세포 조성물은:
(i) 상기 대상체가 18세 미만인 경우, 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 0.75 x 106개의 CAR+ T 세포이지만, (약) 0.75 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않음; 및
(ii) 상기 대상체가 18세부터 25세까지인 경우(수치 포함), (약) 0.75 x 108개의 CAR+ T 세포;
로부터 선택되는 양으로 투여되는, 방법.
36. B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법으로,
상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25세 이하이고 체중 12kg 이상인 대상체에게 투여하는 것을 포함하고,
여기서 상기 T 세포 조성물은:
(i) 상기 대상체가 18세 미만인 경우, 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 1 x 106개의 CAR+ T 세포이지만, (약) 1 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않음; 및
(ii) 상기 대상체가 18세부터 25세까지인 경우(수치 포함), (약) 1 x 108개의 CAR+ T 세포;
로부터 선택되는 양으로 투여되는, 방법.
37. B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법으로,
상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25세 이하이고 체중 6kg 이상인 대상체에게 투여하는 것을 포함하고,
여기서 상기 T 세포 조성물은:
(i) 상기 대상체가 18세 미만인 경우, 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 1 x 106개의 CAR+ T 세포이지만, (약) 1 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않음; 및
(ii) 상기 대상체가 18세부터 25세까지인 경우(수치 포함), (약) 1.0 x 108개의 CAR+ T 세포;
로부터 선택되는 양으로 투여되는, 방법.
38. B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법으로,
상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 조성물을 18세 미만이고 체중 12kg 이상인 대상체에게 투여하는 것을 포함하고,
여기서 상기 조성물은 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 0.05 x 106개의 CAR+ T 세포 내지 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 1.5 x 106개의 CAR+ T 세포인 양으로 투여되지만, (약) 1.5 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는 양으로 투여되는, 방법.
39. 제38 구현예에 있어서,
상기 조성물은 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 0.5 x 106개의 CAR+ T 세포 내지 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 1.0 x 106개의 CAR+ T 세포 양으로 투여되지만, (약) 1.0 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는 양으로 투여되는, 방법.
40. B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법으로,
상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 조성물을 18세 미만이고 체중 12kg 이상인 대상체에게 투여하는 것을 포함하고,
여기서 상기 조성물은 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 0.5 x 106개의 CAR+ T 세포 내지 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 1.5 x 106개의 CAR+ T 세포인 양으로 투여되지만, (약) 1.5 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는 양으로 투여되는, 방법.
41. 제38 내지 제40 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서,
상기 조성물은 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 0.5 x 106개의 CAR+ T 세포 내지 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 1.0 x 106개의 CAR+ T 세포인 양으로 투여되지만, (약) 1.0 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는 양으로 투여되는, 방법.
42. 제38 구현예 또는 제39 구현예에 있어서,
상기 조성물은 상기 대상체의 체중 kg 당 적어도 (약) 0.05 x 106개의 CAR+ T 세포인 양으로 투여되지만, (약) 0.05 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는 양으로 투여되는, 방법.
43. 제38 구현예 또는 제39 구현예에 있어서,
상기 조성물은 상기 대상체의 체중 kg 당 적어도 (약) 0.15 x 106개의 CAR+ T 세포인 양으로 투여되지만, (약) 0.15 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는 양으로 투여되는, 방법.
44. 제38 구현예 또는 제39 구현예에 있어서,
상기 조성물은 상기 대상체의 체중 kg 당 적어도 (약) 0.3 x 106개의 CAR+ T 세포인 양으로 투여되지만, (약) 0.3 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는 양으로 투여되는, 방법.
45. 제38 내지 제41 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서,
상기 조성물은 상기 대상체의 체중 kg 당 적어도 (약) 0.5 x 106개의 CAR+ T 세포인 양으로 투여되지만, (약) 0.5 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는 양으로 투여되는, 방법.
46. 제38 내지 제41 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서,
상기 조성물은 상기 대상체의 체중 kg 당 적어도 (약) 0.75 x 106개의 CAR+ T 세포인 양으로 투여되지만, (약) 0.75 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는 양으로 투여되는, 방법.
47. 제38 내지 제41 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서,
상기 조성물은 상기 대상체의 체중 kg 당 적어도 (약) 1.0 x 106개의 CAR+ T 세포인 양으로 투여되지만, (약) 1.0 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는 양으로 투여되는, 방법.
48. 제1 내지 제47 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서,
상기 T 세포 조성물의 2.5 x 106개의 세포/mL 이상의 농도로 적어도 0.05 mL의 총 부피가 투여되는, 방법.
49. 제1 내지 제48 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서,
상기 T 세포 조성물의 2.5 x 106개의 세포/mL 이상의 농도로 적어도 0.5 mL의 총 부피가 투여되는, 방법.
50. B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법으로,
상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 2.5 x 106개의 세포/mL 이상의 농도로 25세 이하인 대상체에게 투여하는 것을 포함하고,
여기서 상기 T 세포 조성물은:
(i) 상기 대상체가 18세 미만인 경우, 적어도 0.5 mL의 부피에서 (약) 0.5 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는 양; 및
(ii) 상기 대상체가 18세부터 25세까지인 경우(수치 포함), (약) 0.5 x 108개의 CAR+ T 세포;
로부터 선택되는 양으로 투여되는, 방법.
51. B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법으로,
상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 2.5 x 106 개의 세포/mL 이상의 농도로 25세 이하의 대상체에게 투여하는 것을 포함하고,
여기서 상기 T 세포 조성물은:
(i) 상기 대상체가 18세 미만인 경우, 적어도 0.5 mL의 부피에서 (약) 1 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는 양; 및
(ii) 상기 대상체가 18세부터 25세까지인 경우(수치 포함), (약) 1.0 x 108개의 CAR+ T 세포;
로부터 선택되는 양으로 투여되는, 방법.
52. 제48 구현예에 있어서,
투여된 상기 T 세포 조성물의 총 부피는 적어도 0.05 mL인, 방법.
53. 제48 구현예 또는 제52 구현예에 있어서,
투여된 상기 T 세포 조성물의 총 부피는 적어도 0.1 mL인, 방법.
54. 제48 내지 제53 구현예에 있어서,
투여된 상기 T 세포 조성물의 총 부피는 적어도 1.0 mL인, 방법.
55. 제48 내지 제54 구현예에 있어서,
상기 T 세포 조성물의 농도는 (약) 5 x 106개의 세포/mL 이상이거나 (약) 5 x 106개의 세포/mL인, 방법.
56. 제48 내지 제55 구현예에 있어서,
상기 T 세포 조성물의 농도는 (약) 5 x 106개의 세포/mL 이상이거나 (약) 10 x 106개의 세포/mL인, 방법.
57. 제48 내지 제56 구현예에 있어서,
상기 T 세포 조성물의 농도는 (약) 15 x 106개의 세포/mL 초과이거나 (약) 15 x 106개의 세포/mL인, 방법.
58. 제1 내지 제57 구현예에 있어서,
상기 T 세포 조성물은 CD4+ 및 CD8+ CAR+ T 세포를 포함하는, 방법.
59. 제58 구현예에 있어서,
상기 조성물은 상기 CD4+ T 세포 및 상기 CD8+ T 세포 중 하나를 포함하는 제1 조성물 및 상기 CD4+ T 세포 및 상기 CD8+ T 세포 중 다른 하나를 포함하는 제2 조성물을 포함하는, 방법.
60. 제59 구현예에 있어서,
상기 제1 조성물 및 제2 조성물은 별도로 투여되는, 방법.
61. 제 59 구현예 또는 제60 구현예에 있어서,
상기 제1 조성물 및 제2 조성물은 동시에 투여되는, 방법.
62. 제 59 구현예 또는 제60 구현예에 있어서,
상기 제1 조성물 및 제2 조성물은 어느 순서로든 순차적으로 투여되는, 방법.
63. 제59 내지 제62 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서,
상기 제1 조성물은 CD4+ CAR+ T 세포를 포함하고 상기 제2 조성물은 CD8+ T 세포를 포함하는, 방법.
64. 제59 내지 제63 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서,
상기 제1 조성물은 CD8+ CAR+ T 세포를 포함하고 상기 제2 조성물은 CD4+ CAR+ T 세포를 포함하는, 방법.
65. 제1 내지 제64 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서,
투여되는 상기 T 세포 조성물의 양은 CD4+ CAR+ T 세포 대 CD8+ CAR+ T 세포의 정의된 비율 및/또는 CD4+ T 세포 대 CD8+ T 세포의 정의된 비율을 포함하고, 이는 (대략) 1:1이거나 (대략) 1:3 내지 (대략) 3:1인, 방법.
66. 제59 내지 제65 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서, 여기서:
상기 제1 및 제2 조성물 중 하나에 상기 CD4+ CAR+ T 세포, 및 상기 제1 및 제2 조성물 중 다른 하나에 상기 CD8+ CAR+ T 세포가 (대략) 1:1이거나 대략 1:3 내지 대략 3:1인 정의된 비율로 존재하고; 그리고/또는
상기 제1 및 제2 조성물에서 투여되는 상기 CD4+ CAR+ T 세포 및 CD8+ CAR+ T 세포가 정의된 비율로 존재하고, 이는 (대략) 1:1이거나 대략 1:3 내지 대략 3:1인, 방법.
67. 제65 구현예 또는 제66 구현예에 있어서,
상기 정의된 비율은 (대략) 1:1인, 방법.
68. 제1 내지 제67 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서,
상기 B 세포 악성 종양은 림프종 또는 백혈구인, 방법.
69. 제1 내지 제68 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서,
상기 B 세포 악성 종양은 B-세포 급성 림프모구 백혈병 (B-cell acute lymphoblastic leukemia, B-ALL)인, 방법.
70. 제69 구현예에 있어서,
상기 B-ALL은 미세 잔존 질병 양성(MRD+)인, 방법.
71. 제1 내지 제70 구현예에 있어서,
상기 B 세포 악성 종양은 B-세포 비호지킨 림프종(B-cell non-Hodgkin lymphoma, B-NHL)인, 방법.
72. 제71 구현예에 있어서,
상기 B-NHL은 미만성 거대 B 세포 림프종(diffuse large B cell lymphoma, DLBCL), 원발성 종격 거대 B 세포 림프종(primary mediastinal large B cell lymphoma, PMBCL), 또는 버킷 림프종(Burkitt lymphoma, BL)인, 방법.
73. 제1 내지 제72 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서,
상기 B 세포 악성 종양은 재발성 및/또는 불응성인, 방법.
74. 제1 내지 제73 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서,
상기 투여 전에, 상기 대상체는 플루다라빈 및/또는 사이클로포스파마이드의 투여를 포함하는 림프구 고갈 요법으로 사전처리된, 방법.
75. 제1 내지 제74 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서,
상기 투여 직전에, 플루다라빈 및/또는 사이클로포스파마이드의 투여를 포함하는 림프구 고갈 요법을 상기 대상체에게 투여하는 것을 더 포함하는, 방법.
76. 제74 구현예 또는 제75 구현예에 있어서,
상기 림프구 고갈 요법은 2 내지 4일 동안, 임의로 3일 동안 매일, 약 200 내지 400 mg/m2, 임의로 (약) 300 mg/m2(수치 포함)를 포함하는 사이클로포스파마이드 및/또는 약 20 내지 40 mg/m2, 임의로 30 mg/m2의 플루다라빈의 투여를 포함하는, 방법.
77. 제74 내지 제76 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서,
상기 림프구 고갈 요법은 3일 동안 매일 약 300 mg/m2의 사이클로포스파마이드 및 3일 동안 매일 약 30 mg/m2의 플루다라빈의 투여를 포함하는, 방법.
78. 제74 내지 제77 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서,
상기 사이클로포스파마이드 및 플루다라빈은 동시에 투여되는, 방법.
79. 제74 내지 제78 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서,
상기 사이클로포스파마이드 및 플루다라빈은 정맥으로 투여되는, 방법.
80. 제74 내지 제79 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서,
상기 림프구 고갈 요법은 T 세포 조성물의 투여 상기 7일 전에 투여되는, 방법.
81. 제1 내지 제80 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서,
상기 대상체는 인간인, 방법.
82. 제1 내지 제81 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서,
상기 CAR은 인간 CD19에 특이적인 scFv, 막관통 도메인, 임의로 인간 4-1BB 이거나 이를 포함하는, 공동자극 분자로부터 유래된 세포질 신호전달 도메인, 및 임의로 인간 CD3제타 신호전달 도메인이거나 이를 포함하는, 1차 신호전달 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 신호전달 도메인을 포함하고, 여기서 상기 CAR은 임의로 상기 막관통 도메인과 상기 scFv 사이에 스페이서를 더 포함하는, 방법.
83. 제1 내지 제82 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서,
상기 CAR은 순서대로 인간 CD19에 특이적인 scFv, 막관통 도메인, 임의로 인간 4-1BB 신호 전달 도메인이거나 이를 포함하는, 공동자극 분자로부터 유래된 세포질 신호전달 도메인, 및 임의로 인간 CD3제타 신호전달 도메인이거나 이를 포함하는, 1차 신호전달 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 신호전달 도메인을 포함하는, 방법.
84. 제1 내지 제83 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서,
상기 CAR은 순서대로 인간 CD19에 특이적인 scFv, 스페이서, 막관통 도메인,
임의로 인간 4-1BB 신호 전달 도메인인, 공동자극 분자로부터 유래된 세포질 신호전달 도메인, 및 임의로 인간 CD3제타 신호전달 도메인이거나 이를 포함하는, 1차 신호전달 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 신호전달 도메인을 포함하는, 방법.
85. 제82 내지 제84 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서,
상기 스페이서는 면역글로불린 힌지 또는 이의 변형된 버전, 임의로 IgG4 힌지 또는 이의 변형된 버전의 전부 또는 일부를 포함하거나 이로 이루어진 폴리펩타이드 스페이서인, 방법.
86. 제85 구현예에 있어서,
상기 스페이서는 약 15개 이하의 아미노산이고, CD28 세포외 영역 또는 CD8 세포외 영역을 포함하지 않는, 방법.
87. 제85 구현예 또는 제86 구현예에 있어서,
*상기 스페이서는 길이가 (약) 12개의 아미노산인, 방법.
88. 제82 내지 제87 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서, 여기서:
상기 스페이서는 서열번호 1의 서열, 서열번호 2, 서열번호 30, 서열번호 31, 서열번호 32, 서열번호 33, 서열번호 34로 암호화되는 서열, 또는 이에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 갖는 전술한 것 중 임의의 것의 변이체를 가지거나 이로 이루어지고; 그리고/또는
상기 스페이서는 식 X1PPX2P를 포함하거나 이로 이루어지고, 여기서 X1은 글리신, 시스테인 또는 아르기닌이고 X2는 시스테인 또는 트레오닌인, 방법.
89. 제82 내지 제88 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서,
상기 공동자극 도메인은 서열번호 12 또는 이에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 가지는 이의 변이체를 포함하는, 방법.
90. 제82 내지 제89 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서,
상기 1차 신호전달 도메인은 서열번호 13, 14 또는 15, 이에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 가지는 것을 포함하는, 방법.
91. 제82 내지 제90 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서, 여기서:
상기 scFv는 RASQDISKYLN (서열번호 35)의 CDRL1 서열, SRLHSGV (서열번호 36)의 CDRL2 서열 및 GNTLPYTFG (서열번호 37)의 CDRL3 서열을 포함하는 가변 경쇄 (VL), 및 DYGVS (서열번호 38)의 CDRH1 서열, VIWGSETTYYNSALKS (서열번호 39)의 CDRH2 서열 및 YAMDYWG (서열번호 40)의 CDRH3 서열을 포함하는 가변 중쇄 (VH)를 포함하거나; 또는
상기 scFv는 FMC63의 CDRL1 서열, FMC63의 CDRL2 서열, FMC63의 CDRL3 서열을 포함하는 VL, 및 FMC63의 CDRH1 서열, FMC63의 CDRH2 서열 및 FMC63의 CDRH3 서열을 포함하는 VH 를 포함하는, 방법
92. 제82 내지 제91 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서,
상기 scFv는 서열번호 41에 기재된 VH 및 서열번호 42에 기재된 VL을 포함하는, 방법.
93. 제91 구현예 또는 제92 구현예에 있어서,
상기 VH 및 VL은 가요성 링커(flexible linker)에 의해 분리되고, 임의로 여기서 상기 가요성 링커는 서열번호 24에 기재된 서열이거나 이를 포함하는, 방법.
94. 제82 내지 제93 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서,
상기 scFv는 서열번호 43에 기재된 서열이거나 이를 포함하는, 방법.
95. 제1 내지 제94 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서,
상기 T 세포는 대상체로부터 수득되는 1차 T 세포인, 방법.
96. 제1 내지 제95 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서,
상기 T 세포는 상기 대상체에 대해 자가인, 방법.
97. 제1 내지 제96 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서,
상기 조성물을 투여하기 전, 상기 대상체는 CD19를 발현하는 세포를 가지는 것으로 확인되거나 확인된 적이 있는, 방법.
98. 제97 구현예에 있어서,
상기 CD19의 발현은 말초혈액 또는 골수에서 유세포 분석에 의해, 및/또는 골수 생검의 면역조직화학염색법에 의해 검출되는, 방법.
99. 제69, 70 및 73 내지 98 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서,
상기 대상체는:
동종이계 조혈 줄기 세포 이식(hematopoietic stem cell transplantation, HSCT) 후 첫 번째 또는 그 이상의 골수 재발, 임의의 골수 재발; 임의로 2개 이상의 개별 유도 섭생법 후, 임의로 완전 반응(complete response, CR)을 달성하지 못하거나 또는 불완전 혈구 수 회복을 나타내는 완전 반응(complete response with incomplete blood count recovery, CRi)의 1차 불응성; 임의로 재발성 백혈병에 대한 화학 요법 1 주기(cycle) 후, 임의로 CR/Cri을 달성하지 못하는, 화학-불응성;
중 임의의 것을 포함하는 B-ALL을 가지거나,
동종 HSCT에 대해 부적격인, 방법.
*101. 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는, 세포 요법의 조성물 또는 세포 요법의 복수의 조성물 중 하나, 및
상기 세포 요법을 투여하기 위한 지침서,
를 포함하는 제조 물품으로서,
상기 지침서는 제1 내지 제100 구현예 중 어느 한 구현예의 방법에 따른 T 세포 조성물의 투여를 것을 명시한, 제조 물품.
Ⅷ. 실시예
다음의 실시예는 예시의 목적으로만 포함되며 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 의도되지 않는다.
재발성 및 불응성 B-세포 급성 림프모구 백혈병(B-ALL) 및 B-세포 비호지킨 림프종(NHL)을 나타내는 소아 대상체에 대한 항-CD19 CAR-발현 세포의 투여
항-CD19 CAR-발현 T 세포를 함유하는 T 세포 조성물은 25세 이하, 일부 경우에는 18세 미만, 재발성 또는 불응성(r/r) B-세포 급성 림프모구 백혈병(B-ALL) 또는 재발성 또는 불응성(r/r) B-세포 비호지킨 림프종(NHL)을 나타내는, 치료될 대상체로부터 생성된다.
r/r B-ALL을 나타내는 상기 대상체는 골수 질환의 형태학적 증거를 가지고(형태학적으로 5% 이상의 림프아구), 다음: 첫 번째 또는 그 이상의 골수 재발; 동종이계 조혈 줄기 세포 이식(HSCT) 후 임의의 골수 재발; 예를 들어, 둘(2) 이상의 개별 유도 섭생법 후 완전 반응(CR) 또는 불완전 혈구 수 회복을 나타내는 완전 반응(CRi)을 달성하지 못한 1차 불응성(또는 재발성 백혈병에 대한 표준 화학 요법 1 주기(cycle) 후, CR/CRi을 달성하지 못한 것과 같은 화학-불응성); 또는 동종 HSCT에 대해 부적격인 것 중 임의의 것을 갖는다.
한 코호트에서, B-ALL을 나타내는 대상체는 형태학적으로 5% 미만의 림프아구 및/또는 2개의 요법 방식 후 골수 세포에서 1 x10-4개 이상의 빈도로 검증된 분석방법에 의해 검출된 바와 같은 미세 잔존 질병 양성(MRD+) 질병을 갖는다.
필라델피아 염색체 양성 ALL을 나타내는 대상체는, 이들이 하나 이상의 방식의 티로신-키나아제 억제제 (tyrosine-kinase inhibitor, TKI) 요법의에 내성이 있거나 실패하였거나, TKI 요법이 금기인 경우, 적격이다.
한 코호트에서, r/r B-ALL을 나타내는 대상체는 하나 이상의 방식의 화학 요법 후 측정 가능한 질병을 가지고/거나 HSCT에 실패하였거나 HSCT에 대해 부적격이다. r/r B-ALL을 나타내는 대상체는 미만성 거대 B-세포 림프종(DLBCL); 버킷 림프종BL); 또는 원발성 종격 거대 B-세포 림프종(PMBCL)을 나타내는 대상체를 포함한다.
치료된 대상체는 유세포 분석(말초 혈액 또는 골수에서) 또는 면역조직화학염색법(골수 생검)에 의해 결정된 바와 같이 CD19 발현의 증거를 가지고; 선행 CAR T 세포 또는 다른 유전적으로 변형된 T 세포 요법을 받은 적이 없고; 그리고/또는 만약, 이전에 CD19-표적화 요법을 받은 후면, 선행 CD19-표적화 요법을 완료한 후 확인된 CD19 양성 질병을 갖는다.
T 세포 조성물은 각각 CD8+ 및 CD4+ 세포의 면역친화성 기반 농축을 포함하는 과정에 의해 대상체로부터 수득되는 백혈구성분채집 샘플로부터 생성된다. 농축된 조성물의 세포는 별도로 활성화되고 항-CD19 CAR를 암호화하는 벡터로 렌티바이러스 형질도입된다. 항-CD19 CAR은 뮤린 항체로부터 유래된 항-CD19 scFv(FMC63로부터 유래된 가변 영역), 면역글로불린 유래 스페이서, CD28로부터 유래된 막관통 도메인, 4-1BB로부터 유래된 공동자극 영역 및 CD3-제타 세포내 신호전달 도메인을 함유한다. 형질도입된 집단은 세포 확장을 위한 자극 시약의 존재 하에 별도로 배양된다. 확장된 CD8+ 및 CD4+ 세포는 제형화되고 별도로 동결보존되어 저장된다.
CAR-발현 T 세포의 투여 전에(d=0), 대상체는 3일 동안 매일 30 mg/m2 플루다라빈 및 3일 동안 매일 300 mg/m2 사이클로포스파마이드로 처리된다. 동결보존된 T 세포 조성물은 정맥 내 투여 전에 해동된다. 자가성 항-CD19 CAR-발현 T 세포는 정의된 세포 조성물로서 림프구 고갈 2일 내지 7일 후 별도로 CD4+ CAR-발현 세포 T 세포 조성물 및 CD8+ CAR-발현 T 세포 조성물을 대상체에 대해 1:1의 표적 비율로 투여함으로써 투여된다.
하나의 대상체 그룹에서, 대상체는 열여덟살(18세) 이하이고 체중이 십이(12) 킬로그램 이상이다. 대상체는 대상체의 체중 킬로그램 당 0.5 x 106개의 CAR-발현 T 세포의 표적 용량에서, 0.5 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포의 최대 표적 용량으로 T 세포 조성물을(CAR-발현 CD4+ 및 CAR-발현 CD8+ T 세포 조성물의 개별 투여에 의해) 투여 받는다.
일부 대상체 그룹에서, 대상체는 열여덟살(18세) 이하이고 체중이 육(6) 킬로그램 이상이다. 하나의 그룹에서, 이러한 대상체는 킬로그램 당 1.0 x 106개의 CAR-발현 T 세포의 표적 용량에서, 1.0 x 106개의 총 CAR-발현 T 세포의 최대 용량으로, T 세포 조성물을(CAR-발현 CD4+ 및 CAR-발현 CD8+ T 세포 조성물의 개별 투여에 의해) 투여받는다.
열여덟살(18세)부터 스물다섯살(25세)까지의 대상체 그룹에서, 대상체는 0.5 x 108개 또는 1.0 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포의 용량으로 T 세포 조성물을(CAR-발현 CD4+ 및 CAR-발현 CD8+ T 세포 조성물의 개별 투여에 의해) 투여받는다.
하나의 코호트에서, 대상체는 0.05 x 106개의 CAR+ T 세포/kg의 표적 용량에서, 5 x 106개의 CAR+ T 세포의 최대 용량으로, T 세포 조성물을 투여받는다. 일부 경우에, 이들 대상체에서 용량은 대상체가 CAR+ T 세포 투여 후 대략 28일에 반응 및 독성을 나타내지 않고 림프구 고갈 화학요법(Lymphodepleting chemotherapy, LDC)이 선행되는 경우, 0.1 x 106개의 CAR+ T 세포/kg으로 증가될 수 있다. 하나의 코호트에서, 대상체는 0.15 x 106개의 CAR+ T 세포/kg의 표적 용량에서, 15 x 106 CAR+ T 세포의 최대 용량으로 T 세포 조성물을 투여받는다. 하나의 코호트에서, 대상체는 0.3 x 106개의 CAR+ T 세포/kg의 표적 용량에서, 30 x 106 CAR+ T 세포의 최대 용량으로 T 세포 조성물을 투여받는다. 하나의 코호트에서, 대상체는 0.50 x 106개의 CAR+ T 세포/kg의 표적 용량에서, 50 x 106 CAR+ T 세포의 최대 용량으로 T 세포 조성물을 투여받는다. 하나의 코호트에서, 대상체는 0.75 x 106개의 CAR+ T 세포/kg의 표적 용량에서, 75 x 106 CAR+ T 세포의 최대 용량으로 T 세포 조성물을 투여받는다.
다양한 실험실 평가와 함께 골수 및 혈액 형태학적 기준, 신체 검사 소견을 기반으로 치료에 대한 반응을 평가한다. 일부 코호트에서 용량 제한 독성(Dose-limiting toxicity, DLT)은 CAR-발현 T 세포 투여 후 대략 28일에 평가된다. 치료 후 치료-응급 부작용 사건(TEAE)의 존재 또는 부재도 또한 평가된다. 결과는 또한 전체 반응률(Overall response rate, ORR); 미세 잔존 질병(Minimum residual disease, MRD) 음성 반응 비율; 응답 기간(Duration of response, DOR); 재발 없는 생존(Relapse free-survival, RFS); 무진행 생존(Progression free-survival, PFS); 무사건 생존(Event-free survival, EFS); 전체 생존(Overall survival, OS); MRD 반응 비율; 및 CAR T 세포 주입에 대한 반응 후 조혈 줄기 세포 이식(Hematopoietic stem cell transplant, HSCT)의 비율을 평가하는 것과 같이 평가된다. 대상체는 또한 최대 농도(Cmax); 피크 농도까지의 시간(Tmax); 및 예를 들어, 치료 후 다양한 시점에서 취한 대상체 유래 샘플(예컨대 혈액 또는 종양 샘플)에서 CAR+ T 세포의 곡선 아래 면적(Area under the curve, AUC)을 포함한, 항-CD19 CAR T 세포의 약동학(PK)에 대해서도 평가된다. 일부 코호트에서, 완전 반응(CR) 또는 불완전 혈구 수 회복을 나타내는 완전 반응(CRi)을 달성한 대상체를 포함하는, 전체 반응률(ORR)은 CAR-발현 T 세포의 투여 후 대략 28일에 평가되고, CAR-발현 T 세포의 투여 후 대략 56일에 확인된다. 일부 코호트에서, 미세 잔존 질병 (MRD) 음성 반응의 비율은 CAR-발현 T 세포의 투여 후 대략 28일에 평가되고, CAR-발현 T 세포의 투여 후 대략 56일에 확인된다. 일부 경우에, MRD 반응률은 골수에서 MRD가 검출되지 않는 CR 또는 CRi를 달성한 대상체의 비율로부터 결정될 수 있다 (예를 들어, 검증된 분석방법에 의해 <0.01%).
항-CD19 CAR을 발현하는 CD4+ 및 CD8+ 세포의 치료 조성물을 생성하기 위한 공정.
항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 조작된 CD4+ T 세포 및 조작된 CD8+ T 세포를 18세 미만의 소아 대상체 유래 T 세포로부터 생산하였다. 항-CD19 CAR 조작된 T 세포 조성물을 실시예 1에 기재된 투여 방법에 따라 대상체에게 투여하였다.
A. 치료 세포 조성물 생성을 위한 공정
동일한 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 조작된 CD4+ T 세포 및 조작된 CD8+ T 세포 각각은 농축된 CD4+ 및 농축된 CD8+ 세포 집단을 별도로 처리 단계에 적용하는 것을 포함하는 공정에 의해 생산되었다. CD4+ 및 CD8+ 세포는 18세 미만의 두(2) 명의 인간 대상체로부터 백혈구 성분채집술에 의해 수득되었던 인간 말초혈액 단핵 세포(PBMC)로부터 별도로 선별되어, 별도의 농축 CD4+ 및 농축 CD8+ 세포 조성물을 생성한 후 동결 보존되었다. 이후 CD4+ 및 CD8+ 조성물은 해동되었고 별도로 자극, 형질도입 및 확장 단계를 거쳤다.
해동된 CD4+ 및 CD8+ 세포를 1:1 비드 대 세포 비율로 항-CD3 및 항-CD28 항체에 결합된 상자성 폴리스티렌-코팅된 비드의 존재 하에 별도로 자극하였다. 인간 재조합 IL-2, 인간 재조합 IL-15 및 N-아세틸 시스테인(NAC)을 함유하는 배지에서 자극을 수행하였다. CD4+ 세포 배지에는 또한 인간 재조합 IL-7도 포함되었다.
항-CD3/항-CD28 자극제로 자극한 후, CD4+ 및 CD8+ 세포를 동일한 항-CD19 CAR을 암호화하는 렌티바이러스 벡터로 별도로 형질도입하였다. CAR은 뮤린 항체(FMC63로부터 유래된 가변 영역)로부터 유래된 항-CD19 scFv, 면역글로불린 스페이서, CD28로부터 유래된 막관통 도메인, 4-1BB로부터 유래된 공동자극 영역 및 CD3-제타 세포내 신호전달 도메인을 함유하였다. 벡터는 또한 T2A 서열에 의해 CAR 컨스트럭트에 연결된 CAR-발현에 대한 대리 표지자 역할을 하는 절단된 EGFR(EGFRt)을 암호화하였다. 세포를 10μg/ml 프로타민 설페이트의 존재 하에 형질입하였다.
형질도입 후, 자기장에 노출시켜 세포 조성물로부터 비드를 제거하였다. 이어서, CD4+ 및 CD8+ 세포 조성물을 생물반응기(Xuri W25 생물반응기)에 의한 연속 혼합 및 산소 전달과 함께 확장을 위해 별도로 배양하였다. 폴록사머가 배지에 첨가되었다. 두 세포 조성물 모두 IL-2 및 IL-15의 존재 하에 배양되었다. CD4+ 세포 배지에는 IL-7도 포함되었다. CD4+ 및 CD8+ 세포는 수확 전에 각각 4배 확장까지 배양되었다. 임계값에 도달한지 하루 후, 각 조성물의 세포를 별도로 수확하고, 제형화하고, 동결보존하였다. 예시적인 공정은 표 7에 요약되었다.
단계 CD4+ 세포 CD8+ 세포
자극(1-2일차) ·항-CD3/CD28 항체 접합 비드
·1:1 비드 대 세포 비율
·배지: IL-2, IL-7, IL-15 및 NAC 		·항-CD3/CD28 항체 접합 비드
·1:1 비드 대 세포 비율
·배지: IL-2, IL-15 및 NAC
형질도입(2-5일차) ·형질도입 아쥬번트(예를 들어, 10 μg/ml 프로타민 설페이트) ·형질도입 아쥬번트(예를 들어, 10 μg/ml 프로타민 설페이트)
비드 제거(5일차*) ·자성 비드 제거 ·자성 비드 제거
확장(5일차*-수확) ·흔들림 동작 생물반응기 및/또는 연속 혼합
·배지: IL-2, IL-7, IL-15 및 폴록사머		 · 흔들림 동작 생물반응기 및/또는 연속 혼합
·배지: IL-2, IL-15 및 폴록사머
*대략B. 생성된 치료 세포 조성물의 세포 표현형 특성
18세 미만의 대상체로부터 상기 기재된 바와 같이 생성된 두(2)개의 치료 세포 조성물에서 C-C 케모카인 수용체 유형 7(CCR7), CD27 및 CD45RA를 포함하는, 특정 T 세포 하위유형과 관련된 세포 표면 표지자의 발현을 유세포 분석에 의해 평가하였다. CD3, CD4, CD8, CD28의 표면 발현 수준, 및 CAR의 발현에 대한 대리 표지자로서 사용되는 절단된 수용체 또한 평가되었고; 활성화된 카스파제 3의 존재는 세포사멸성 세포의 측정으로 평가되었다.
생성된 세포 조성물에서 CD8+ CAR+ 세포 중, 90% 초과의 세포가 CCR7+였고, 85% 초과의 세포가 CD27+였고, 55% 초과의 세포가 CCR7+CD45RA+였고, 그리고 75% 초과의 세포가 CD28+CD27+였으며, CD8+CAR+ 조작된 세포 조성물에서 덜 분화된, 나이브-유사 세포의 높은 백분율의 관찰과 일치한다. 생성된 세포 조성물에서 CD4+ CAR+ 세포 중, 75% 초과의 세포가 CCR7+였고, 75% 초과의 세포가 CD27+였고, 40% 초과의 세포가 CCR7+CD45RA+였고, 그리고 70% 초과의 세포가 CD28+CD27+였으며, 세포는 CD28+CD27+였고, 이는 CD4+CAR+ 조작된 세포 조성에서 덜 분화된 나이브 유사 세포의 높은 백분율의 관찰과 일치한다. 상기 조성물에서 CD3+CD8+ T 세포 중, 10% 미만의 세포가 활성 카스파제 3-양성(세포사멸성 세포를 나타냄)이었고, 상기 조성물에서 CD3+CD4+ T 세포 중, 25% 미만의 세포가 활성 카스파제 3-양성이었다.
결과는 상기 기재된 공정을 사용하여 소아 대상체로부터 생성된 치료 세포 조성물이 덜 분화된, 나이브-유사 세포 하위유형 및 낮은 백분율의 세포사멸성 세포와 관련된 표현형 표지자를 나타냈다는 관찰과 일치한다. 이론에 얽매이지 않고, 조작된 CD4+ CAR+ 및 CD8+CAR+ T 세포 조성물에서 덜 분화된 나이브-유사 T 세포의 높은 백분율은 낮은 투여량, 예컨대 0.05 x 106개의 CAR+ T 세포/kg만큼 낮은 용량의 세포의 투여를 뒷받침한다.
재발성 및 불응성 B-세포 급성 림프모구 백혈병(B-ALL) 및 B-세포 비호지킨 림프종(NHL)을 나타내는 소아 대상체에 다양한 용량의 항-CD19 CAR-발현 세포 투여
항-CD19 CAR-발현 T 세포를 함유하는 T 세포 조성물은 재발성 또는 불응성(r/r) B-세포 급성 림프모구 백혈병(B-ALL), 또는 재발성 또는 불응성(r/r) B-세포 비호지킨 림프종(NHL)을 나타내는 소아 대상체로부터, 실시예 2에 기재된 공정을 이용하여 생성된다. 대상체는 CD19-양성 재발성/불응성(r/r) B-세포 급성 림프모구 백혈병(B-ALL) 및 B-세포 비호지킨 림프종(NHL) (소아 대상체에서 미만성 거대 B-세포 림프종(DLBCL), 버킷 림프종(BL) 또는 원발성 종격 거대 B-세포 림프종(PMBCL)을 포함함)을 나타내는 소아 대상체를 포함한다.
대상체의 하나의 코호트는 18세 미만의 CD19+ B-ALL을 나타내는 사람들을 포함하며, 이들은 1개 이상의 방식의 화학 요법 후에 재발성/불응성이거나, 조혈 줄기 세포 이식(HSCT) 후에 재발하거나, 다르게는 HSCT에 대해 부적격이다.
대상체의 하나의 코호트는 25세 이하의 CD19+ B-ALL 또는 B-NHL을 나타내는 사람들을 포함하며, 이들은 1개 이상의 방식의 화학 요법 후에 r/r이거나, HSCT 후에 재발하거나, 다르게는 HSCT에 대해 부적격이다. 18세 미만의 대상체의 경우, 대상체는 r/r B-ALL; 최소 잔류 질병 양성(MRD+) B-ALL; 및 r/r B-NHL(DLBCL, BL 또는 PMBCL)을 갖는 사람들을 포함한다. 18세 내지 25세 또는 그 미만인 대상체의 경우, B-ALL을 나타내는 대상체가 포함된다. 대상체는 체중이 6kg 이상이어야 한다. 이차 중추 신경계(CNS) 관련이 있는 B-NHL을 나타내는 대상체가 포함된다.
하나의 코호트에서, 대상체는 골수에서 질병의 형태학적 증거(형태학적으로 5% 이상의 림프아구)를 나타내는, r/r B-ALL을 가지며, 다음: 첫 번째 또는 그 이상의 골수 재발; 동종이계 조혈 줄기 세포 이식(HSCT) 후 임의의 골수 재발; 예를 들어, 둘(2) 이상의 개별 유도 섭생법 후, 완전 반응(CR) 또는 불완전 혈구 수 회복을 나타내는 완전 반응(CRi)을 달성하지 못한 1차 불응성(또는 재발성 백혈병에 대한 표준 화학 요법 1 주기(cycle) 후, CR/CRi을 달성하지 못한 것과 같은 화학-불응성)이거나; 동종이계 HSCT에 대해 부적격인 것 중 임의의 것을 갖는다. 대상체는 이 코호트에서 MRD에 관계없이 적격이다.
하나의 코호트에서, 대상체는 2개의 방식의 요법 후에, 골수 세포에서 1 x 10-4개 이상의 빈도로 검증된 분석방법에 의해 검출된 형태학 및/또는 최소 잔류 질병 양성(MRD+)에 의해 5% 미만의 림프아구를 나타내는 MRD+ B-ALL을 갖는다. 일부의 경우에, 선택적 가교 화학요법(bridging chemotherapy)이 r/r B-ALL을 MRD+ 또는 MRD-B-ALL로 전환할 수 있다.
하나의 코호트에서, 대상체는 하나 이상의 방식의 화학요법 후에 측정 가능한 질병을 나타내는, r/r B-NHL을 가지고/거나 HSCT에 실패했거나 HSCT에 대해 부적격이다. r/r B-NHL을 나타내는 대상체에는 미만성 거대 B-세포 림프종(DLBCL); 버킷 림프종(BL); 또는 원발성 종격 거대 B-세포 림프종(PMBCL)을 나타내는 대상체가 포함된다.
필라델피아 염색체 양성 ALL을 나타내는 대상체는, 이들이 하나 이상의 방식의 티로신-키나아제 억제제(TKI) 요법에 내성이 있거나 실패하였거나 또는 TKI 요법이 금기인 경우, 적격이다.
치료된 대상체는 유세포 분석(말초 혈액 또는 골수에서) 또는 면역조직화학염색법(골수 생검)에 의해 결정된 바와 같이 CD19 발현의 증거를 갖는다. 대상체가 이전에 CAR 표적화 요법을 받은 경우, 상기 대상체는 선행 CD19 표적화 요법을 완료한 후 확인된 CD19 양성 질병을 가져야 한다.
대상체는 선행 CAR T 세포 또는 다른 유전적으로 변형된 T 세포 요법, 또는 활성 CNS 질환 및 상당한 신경학적 악화를 받지 않았다.
CAR-발현 T 세포(d=0)의 투여 전에, 대상체를 3일 동안 매일 30 mg/m2 플루다라빈 및 3일 동안 매일 300 mg/m2 사이클로포스파마이드로 처리한다. 동결보존된 T 세포 조성물은 정맥내 투여 전에 해동된다. 자가 항-CD19 CAR-발현 T 세포는 1:1의 표적 비율로 투여되는 CD4+ CAR-발현 세포 T 세포 조성물 및 CD8+ CAR-발현 T 세포 조성물을 별도로 상기 대상체에게 투여함으로써, 정의된 세포 조성물로서 림프고갈 후 2일 내지 7일에 투여된다.
T 세포 조성물은 일반적으로 실시예 2에 기재된 바와 같이, CD8+ 및 CD4+ 세포의 면역친화성 기반 농축을 포함하는 공정에 의해 대상체로부터 수득되는 백혈구 성분채집 샘플로부터 생성되고 항-CD19 CAR을 발현하도록 조작된다. 조작된 CD8+ 및 CD4+ 세포를 별도로 제형화하고 동결보존하여 저장한다.
하나의 코호트에서, 대상체는 0.05 x 106개의 CAR+ T 세포/kg의 표적 용량에서, 5 x 106개의 CAR+ T 세포의 최대 용량으로, T 세포 조성물을 투여받는다. 일부 경우에, 이들 대상체는, 상기 대상체가 CAR+ T 세포의 투여 후 대략 28일에 무반응 및 무독성을 나타내는 경우, 림프구 고갈 화학 요법(LDC)에 이어 0.1 x 106개의 CAR+ T 세포/kg의 추가 용량를 받을 수 있다. 하나의 코호트에서, 대상체는 0.15 x 106개의 CAR+ T 세포/kg의 표적 용량에서, 15 x 106개의 CAR+ T 세포의 최대 용량으로, T 세포 조성물을 투여받는다. 하나의 코호트에서, 대상체는 0.3 x 106개의 CAR+ T 세포/kg의 표적 용량에서, 30 x 106개의 CAR+ T 세포의 최대 용량으로, T 세포 조성물을 투여받는다. 하나의 코호트에서, 0.50 x 106개의 CAR+ T 세포/kg의 표적 용량에서, 50 x 106개의 CAR+ T 세포의 최대 용량으로, T 세포 조성물을 투여받는다. 하나의 코호트에서, 대상체는 0.75 x 106개의 CAR+ T 세포/kg의 표적 용량에서, 75 x 106개의 CAR+ T 세포의 최대 용량으로, T 세포 조성물을 투여받는다. 각각의 경우에서 최대 용량은 체중 100 kg에 상당한다.
다양한 실험실 평가와 함께 골수 및 혈액 형태학적 기준, 신체 검사 소견을 기반으로 치료에 대한 반응을 평가한다. 일부 코호트에서, 용량 제한 독성(DLT)은 CAR-발현 T 세포 투여 후 대략 28일에 평가된다. 일부 코호트에서, 완전 반응(CR) 또는 불완전 혈구 수 회복을 나타내는 완전 반응(CRi)을 달성한 개체를 포함하는, 전체 반응률(ORR)은 CAR-발현 T 세포의 투여 후 대략 28일에 평가되고, CAR-발현 T 세포의 투여 후 대략 56일에 확인된다. 일부 코호트에서, 미세 잔존 질병(Minimum residual disease, MRD) 음성 반응 비율은 CAR-발현 T 세포의 투여 후 대략 28일에 평가되고, CAR-발현 T 세포의 투여 후 대략 56일에 확인된다. 일부 경우에, MRD 음성 비율은 MRD- 반응 대상체의 비율로부터 결정될 수 있다. 일부 코호트에서, 완전 반응(CR) 또는 부분 반응(PR)을 달성한 개체를 포함하는, 전체 반응 비율(ORR)은 CAR-발현 T 세포의 투여 후 대략 28일에 평가된다.
치료 후 치료-응급 부작용 사건(TEAE)의 존재 또는 부재도 또한 평가된다. 결과는 또한 예컨대 전체 반응률(ORR); 미세 잔존 질병(MRD) 음성 반응 비율; 응답 기간(DOR); 재발 없는 생존(RFS); 무진행 생존(PFS); 무사건 생존(EFS); 전체 생존(OS); MRD 반응률; 및 CAR-발현 T 세포 주입에 대한 반응 후 조혈 줄기 세포 이식(HSCT)의 비율을 평가함으로써 평가된다. 일부 경우에, 골수(BM)에서 MRD가 검출되지 않는(검증된 분석방법에 의해 <0.01%), CR 또는 CRi를 달성한 r/r B-ALL 개체의 백분율은 CAR-발현 세포의 투여 후 24개월 동안 평가된다. 대상체는 또한 최대 농도(Cmax); 피크 농도까지의 시간(Tmax); 및 예를 들어, 치료 후 다양한 시점에서 취한 대상체 유래 샘플(예컨대 혈액 또는 종양 샘플)에서 CAR+ T 세포의 곡선 아래 면적(AUC)을 포함한, 항-CD19 CAR T 세포의 약동학(PK)에 대해서도 평가된다.
본 발명은, 예를 들어, 본 발명의 다양한 측면을 예시하기 위해 제공되는 특정 개시된 구현예로 범위를 제한하도록 의도되지 않는다. 기재된 조성물 및 방법에 대한 다양한 변형은 본원의 설명 및 교시로부터 명백해질 것이다. 이러한 변형은 본 개시의 진정한 범위 및 정신을 벗어나지 않고 실시될 수 있고 본 개시의 범위 내에 속하는 것으로 의도된다.
서열
# 서열 주석
1 ESKYGPPCPPCP 스페이서 (IgG4힌지) (aa)
2 GAATCTAAGTACGGACCGCCCTGCCCCCCTTGCCCT 스페이서 (IgG4힌지) (nt)
3 ESKYGPPCPPCPGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK 힌지-CH3 스페이서
4 ESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK 힌지-CH2-CH3 스페이서
5 RWPESPKAQASSVPTAQPQAEGSLAKATTAPATTRNTGRGGEEKKKEKEKEEQEERETKTPECPSHTQPLGVYLLTPAVQDLWLRDKATFTCFVVGSDLKDAHLTWEVAGKVPTGGVEEGLLERHSNGSQSQHSRLTLPRSLWNAGTSVTCTLNHPSLPPQRLMALREPAAQAPVKLSLNLLASSDPPEAASWLLCEVSGFSPPNILLMWLEDQREVNTSGFAPARPPPQPGSTTFWAWSVLRVPAPPSPQPATYTCVVSHEDSRTLLNASRSLEVSYVTDH IgD-힌지-Fc
6 LEGGGEGRGSLLTCGDVEENPGPR T2A인공
7 MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIPRKVCNGIGIGEFKDSLSINATNIKHFKNCTSISGDLHILPVAFRGDSFTHTPPLDPQELDILKTVKEITGFLLIQAWPENRTDLHAFENLEIIRGRTKQHGQFSLAVVSLNITSLGLRSLKEISDGDVIISGNKNLCYANTINWKKLFGTSGQKTKIISNRGENSCKATGQVCHALCSPEGCWGPEPRDCVSCRNVSRGRECVDKCNLLEGEPREFVENSECIQCHPECLPQAMNITCTGRGPDNCIQCAHYIDGPHCVKTCPAGVMGENNTLVWKYADAGHVCHLCHPNCTYGCTGPGLEGCPTNGPKIPSIATGMVGALLLLLVVALGIGLFM tEGFR인공
8 FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV CD28 (Accession No. P10747의 아미노산 153-179)호모 사피엔스
9 IEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV CD28 (Accession No. P10747의 아미노산 114-179)호모 사피엔스
10 RSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS CD28 (P10747의 아미노산 180-220 )호모 사피엔스
11 RSKRSRGGHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS CD28 (LL 내지 GG)호모 사피엔스
12 KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL 4-1BB (Q07011.1의 아미노산 214-255)호모 사피엔스
13 RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CD3 제타호모 사피엔스
14 RVKFSRSAEPPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CD3 제타호모 사피엔스
15 RVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CD3 제타호모 사피엔스
16 RKVCNGIGIGEFKDSLSINATNIKHFKNCTSISGDLHILPVAFRGDSFTHTPPLDPQELDILKTVKEITGFLLIQAWPENRTDLHAFENLEIIRGRTKQHGQFSLAVVSLNITSLGLRSLKEISDGDVIISGNKNLCYANTINWKKLFGTSGQKTKIISNRGENSCKATGQVCHALCSPEGCWGPEPRDCVSCRNVSRGRECVDKCNLLEGEPREFVENSECIQCHPECLPQAMNITCTGRGPDNCIQCAHYIDGPHCVKTCPAGVMGENNTLVWKYADAGHVCHLCHPNCTYGCTGPGLEGCPTNGPKIPSIATGMVGALLLLLVVALGIGLFM tEGFR인공
17 EGRGSLLTCGDVEENPGP T2A 인공
18 GSGATNFSLLKQAGDVEENPGP P2A
19 ATNFSLLKQAGDVEENPGP P2A
20 QCTNYALLKLAGDVESNPGP E2A
21 VKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP F2A
22 PGGG-(SGGGG)5-P- wherein P is proline, G is glycine and S is serine 링커
23 GSADDAKKDAAKKDGKS 링커
24 GSTSGSGKPGSGEGSTKG 링커
25 gacatccagatgacccagaccacctccagcctgagcgccagcctgggcgaccgggtgaccatcagctgccgggccagccaggacatcagcaagtacctgaactggtatcagcagaagcccgacggcaccgtcaagctgctgatctaccacaccagccggctgcacagcggcgtgcccagccggtttagcggcagcggctccggcaccgactacagcctgaccatctccaacctggaacaggaagatatcgccacctacttttgccagcagggcaacacactgccctacacctttggcggcggaacaaagctggaaatcaccggcagcacctccggcagcggcaagcctggcagcggcgagggcagcaccaagggcgaggtgaagctgcaggaaagcggccctggcctggtggcccccagccagagcctgagcgtgacctgcaccgtgagcggcgtgagcctgcccgactacggcgtgagctggatccggcagccccccaggaagggcctggaatggctgggcgtgatctggggcagcgagaccacctactacaacagcgccctgaagagccggctgaccatcatcaaggacaacagcaagagccaggtgttcctgaagatgaacagcctgcagaccgacgacaccgccatctactactgcgccaagcactactactacggcggcagctacgccatggactactggggccagggcaccagcgtgaccgtgagcagc scFv를 암호화하는 서열
26 X1PPX2PX1 is glycine, cysteine or arginine X2 is cysteine or threonine 힌지
27 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 힌지
28 Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro 힌지
29 ELKTPLGDTHTCPRCPEPKSCDTPPPCPRCPEPKSCDTPPPCPRCPEPKSCDTPPPCPRCP 힌지
30 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro 힌지
31 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 힌지
32 Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 힌지
33 Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 힌지
34 Glu Val Val Val Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 힌지
35 RASQDISKYLN CDR L1
36 SRLHSGV CDR L2
37 GNTLPYTFG CDR L3
38 DYGVS CDR H1
39 VIWGSETTYYNSALKS CDR H2
40 YAMDYWG CDR H3
41 EVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSS VH
42 DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEIT VL
43 DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEITGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSS scFv
44 KASQNVGTNVA CDR L1
45 SATYRNS CDR L2
46 QQYNRYPYT CDR L3
47 SYWMN CDR H1
48 QIYPGDGDTNYNGKFKG CDR H2
49 KTISSVVDFYFDY CDR H3
50 EVKLQQSGAELVRPGSSVKISCKASGYAFSSYWMNWVKQRPGQGLEWIGQIYPGDGDTNYNGKFKGQATLTADKSSSTAYMQLSGLTSEDSAVYFCARKTISSVVDFYFDYWGQGTTVTVSS VH
51 DIELTQSPKFMSTSVGDRVSVTCKASQNVGTNVAWYQQKPGQSPKPLIYSATYRNSGVPDRFTGSGSGTDFTLTITNVQSKDLADYFCQQYNRYPYTSGGGTKLEIKR VL
52 GGGGSGGGGSGGGGS 링커
53 EVKLQQSGAELVRPGSSVKISCKASGYAFSSYWMNWVKQRPGQGLEWIGQIYPGDGDTNYNGKFKGQATLTADKSSSTAYMQLSGLTSEDSAVYFCARKTISSVVDFYFDYWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIELTQSPKFMSTSVGDRVSVTCKASQNVGTNVAWYQQKPGQSPKPLIYSATYRNSGVPDRFTGSGSGTDFTLTITNVQSKDLADYFCQQYNRYPYTSGGGTKLEIKR scFv
54 HYYYGGSYAMDY CDR H3
55 HTSRLHS CDR L2
56 QQGNTLPYT CDR L3
57 ACACGGCCTCGTGTATTACTGT IGH 프라이머
58 ACCTGAGGAGACGGTGACC IGH 프라이머
SEQUENCE LISTING <110> JUNO THERAPEUTICS, INC. TREDE, Nikolaus Sebastian <120> METHODS FOR DOSING AND ENGINEERED T CELLS FOR THE TREATMENT OF B CELL MALIGNANCIES <130> 735042019540 <140> Not Yet Assigned <141> Concurrently Herewith <150> 62/786,844 <151> 2018-11-16 <150> 62/914,303 <151> 2019-10-11 <160> 58 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Spacer (IgG4hinge) <400> 1 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 2 <211> 36 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <223> Spacer (IgG4hinge) <400> 2 gaatctaagt acggaccgcc ctgcccccct tgccct 36 <210> 3 <211> 119 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Hinge-CH3 spacer <400> 3 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Gly Gln Pro Arg 1 5 10 15 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 20 25 30 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 35 40 45 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 50 55 60 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 65 70 75 80 Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser 85 90 95 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 100 105 110 Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 115 <210> 4 <211> 229 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Hinge-CH2-CH3 spacer <400> 4 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe 1 5 10 15 Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 20 25 30 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 35 40 45 Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 50 55 60 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser 65 70 75 80 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 85 90 95 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser 100 105 110 Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 115 120 125 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln 130 135 140 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 145 150 155 160 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 165 170 175 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu 180 185 190 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 195 200 205 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 210 215 220 Leu Ser Leu Gly Lys 225 <210> 5 <211> 282 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> IgD-hinge-Fc <400> 5 Arg Trp Pro Glu Ser Pro Lys Ala Gln Ala Ser Ser Val Pro Thr Ala 1 5 10 15 Gln Pro Gln Ala Glu Gly Ser Leu Ala Lys Ala Thr Thr Ala Pro Ala 20 25 30 Thr Thr Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys 35 40 45 Glu Lys Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro 50 55 60 Ser His Thr Gln Pro Leu Gly Val Tyr Leu Leu Thr Pro Ala Val Gln 65 70 75 80 Asp Leu Trp Leu Arg Asp Lys Ala Thr Phe Thr Cys Phe Val Val Gly 85 90 95 Ser Asp Leu Lys Asp Ala His Leu Thr Trp Glu Val Ala Gly Lys Val 100 105 110 Pro Thr Gly Gly Val Glu Glu Gly Leu Leu Glu Arg His Ser Asn Gly 115 120 125 Ser Gln Ser Gln His Ser Arg Leu Thr Leu Pro Arg Ser Leu Trp Asn 130 135 140 Ala Gly Thr Ser Val Thr Cys Thr Leu Asn His Pro Ser Leu Pro Pro 145 150 155 160 Gln Arg Leu Met Ala Leu Arg Glu Pro Ala Ala Gln Ala Pro Val Lys 165 170 175 Leu Ser Leu Asn Leu Leu Ala Ser Ser Asp Pro Pro Glu Ala Ala Ser 180 185 190 Trp Leu Leu Cys Glu Val Ser Gly Phe Ser Pro Pro Asn Ile Leu Leu 195 200 205 Met Trp Leu Glu Asp Gln Arg Glu Val Asn Thr Ser Gly Phe Ala Pro 210 215 220 Ala Arg Pro Pro Pro Gln Pro Gly Ser Thr Thr Phe Trp Ala Trp Ser 225 230 235 240 Val Leu Arg Val Pro Ala Pro Pro Ser Pro Gln Pro Ala Thr Tyr Thr 245 250 255 Cys Val Val Ser His Glu Asp Ser Arg Thr Leu Leu Asn Ala Ser Arg 260 265 270 Ser Leu Glu Val Ser Tyr Val Thr Asp His 275 280 <210> 6 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> T2A <400> 6 Leu Glu Gly Gly Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp 1 5 10 15 Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Arg 20 <210> 7 <211> 357 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> tEGFR <400> 7 Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro 1 5 10 15 Ala Phe Leu Leu Ile Pro Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly 20 25 30 Glu Phe Lys Asp Ser Leu Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe 35 40 45 Lys Asn Cys Thr Ser Ile Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala 50 55 60 Phe Arg Gly Asp Ser Phe Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu 65 70 75 80 Leu Asp Ile Leu Lys Thr Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile 85 90 95 Gln Ala Trp Pro Glu Asn Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu 100 105 110 Glu Ile Ile Arg Gly Arg Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala 115 120 125 Val Val Ser Leu Asn Ile Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu 130 135 140 Ile Ser Asp Gly Asp Val Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr 145 150 155 160 Ala Asn Thr Ile Asn Trp Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys 165 170 175 Thr Lys Ile Ile Ser Asn Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly 180 185 190 Gln Val Cys His Ala Leu Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu 195 200 205 Pro Arg Asp Cys Val Ser Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys 210 215 220 Val Asp Lys Cys Asn Leu Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu 225 230 235 240 Asn Ser Glu Cys Ile Gln Cys His Pro Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met 245 250 255 Asn Ile Thr Cys Thr Gly Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala 260 265 270 His Tyr Ile Asp Gly Pro His Cys Val Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val 275 280 285 Met Gly Glu Asn Asn Thr Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His 290 295 300 Val Cys His Leu Cys His Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro 305 310 315 320 Gly Leu Glu Gly Cys Pro Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala 325 330 335 Thr Gly Met Val Gly Ala Leu Leu Leu Leu Leu Val Val Ala Leu Gly 340 345 350 Ile Gly Leu Phe Met 355 <210> 8 <211> 27 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CD28 <300> <308> UniProt P10747 <309> 1989-07-01 <400> 8 Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu 1 5 10 15 Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val 20 25 <210> 9 <211> 66 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CD28 <300> <308> UniProt P10747 <309> 1989-07-01 <400> 9 Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn 1 5 10 15 Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu 20 25 30 Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly 35 40 45 Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe 50 55 60 Trp Val 65 <210> 10 <211> 41 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CD28 <300> <308> UniProt P10747 <309> 1989-07-01 <400> 10 Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr 1 5 10 15 Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro 20 25 30 Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser 35 40 <210> 11 <211> 41 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CD28 <400> 11 Arg Ser Lys Arg Ser Arg Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr 1 5 10 15 Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro 20 25 30 Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser 35 40 <210> 12 <211> 42 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> 4-1BB <300> <308> UniProt Q07011.1 <309> 1995-02-01 <400> 12 Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met 1 5 10 15 Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe 20 25 30 Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu 35 40 <210> 13 <211> 112 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CD3 zeta <400> 13 Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly 1 5 10 15 Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr 20 25 30 Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys 35 40 45 Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys 50 55 60 Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg 65 70 75 80 Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala 85 90 95 Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 100 105 110 <210> 14 <211> 112 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CD3 zeta <400> 14 Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Glu Pro Pro Ala Tyr Gln Gln Gly 1 5 10 15 Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr 20 25 30 Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys 35 40 45 Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys 50 55 60 Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg 65 70 75 80 Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala 85 90 95 Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 100 105 110 <210> 15 <211> 112 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CD3 zeta <400> 15 Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly 1 5 10 15 Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr 20 25 30 Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys 35 40 45 Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys 50 55 60 Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg 65 70 75 80 Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala 85 90 95 Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 100 105 110 <210> 16 <211> 335 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> tEGFR <400> 16 Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp Ser Leu 1 5 10 15 Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn Cys Thr Ser Ile 20 25 30 Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp Ser Phe 35 40 45 Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu Lys Thr 50 55 60 Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro Glu Asn 65 70 75 80 Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg Gly Arg 85 90 95 Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val Ser Leu Asn Ile 100 105 110 Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly Asp Val 115 120 125 Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile Asn Trp 130 135 140 Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr Lys Ile Ile Ser Asn 145 150 155 160 Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln Val Cys His Ala Leu 165 170 175 Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro Arg Asp Cys Val Ser 180 185 190 Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys Val Asp Lys Cys Asn Leu 195 200 205 Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu Asn Ser Glu Cys Ile Gln 210 215 220 Cys His Pro Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met Asn Ile Thr Cys Thr Gly 225 230 235 240 Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala His Tyr Ile Asp Gly Pro 245 250 255 His Cys Val Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val Met Gly Glu Asn Asn Thr 260 265 270 Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His Val Cys His Leu Cys His 275 280 285 Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro Gly Leu Glu Gly Cys Pro 290 295 300 Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala Thr Gly Met Val Gly Ala 305 310 315 320 Leu Leu Leu Leu Leu Val Val Ala Leu Gly Ile Gly Leu Phe Met 325 330 335 <210> 17 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> T2A <400> 17 Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro 1 5 10 15 Gly Pro <210> 18 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2A <400> 18 Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val 1 5 10 15 Glu Glu Asn Pro Gly Pro 20 <210> 19 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2A <400> 19 Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn 1 5 10 15 Pro Gly Pro <210> 20 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> E2A <400> 20 Gln Cys Thr Asn Tyr Ala Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val Glu Ser 1 5 10 15 Asn Pro Gly Pro 20 <210> 21 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> F2A <400> 21 Val Lys Gln Thr Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val 1 5 10 15 Glu Ser Asn Pro Gly Pro 20 <210> 22 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker <220> <221> REPEAT <222> (5)...(9) <223> SGGGG is repeated 5 times <400> 22 Pro Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 1 5 <210> 23 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker <400> 23 Gly Ser Ala Asp Asp Ala Lys Lys Asp Ala Ala Lys Lys Asp Gly Lys 1 5 10 15 Ser <210> 24 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker <400> 24 Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr 1 5 10 15 Lys Gly <210> 25 <211> 735 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> scFv <400> 25 gacatccaga tgacccagac cacctccagc ctgagcgcca gcctgggcga ccgggtgacc 60 atcagctgcc gggccagcca ggacatcagc aagtacctga actggtatca gcagaagccc 120 gacggcaccg tcaagctgct gatctaccac accagccggc tgcacagcgg cgtgcccagc 180 cggtttagcg gcagcggctc cggcaccgac tacagcctga ccatctccaa cctggaacag 240 gaagatatcg ccacctactt ttgccagcag ggcaacacac tgccctacac ctttggcggc 300 ggaacaaagc tggaaatcac cggcagcacc tccggcagcg gcaagcctgg cagcggcgag 360 ggcagcacca agggcgaggt gaagctgcag gaaagcggcc ctggcctggt ggcccccagc 420 cagagcctga gcgtgacctg caccgtgagc ggcgtgagcc tgcccgacta cggcgtgagc 480 tggatccggc agccccccag gaagggcctg gaatggctgg gcgtgatctg gggcagcgag 540 accacctact acaacagcgc cctgaagagc cggctgacca tcatcaagga caacagcaag 600 agccaggtgt tcctgaagat gaacagcctg cagaccgacg acaccgccat ctactactgc 660 gccaagcact actactacgg cggcagctac gccatggact actggggcca gggcaccagc 720 gtgaccgtga gcagc 735 <210> 26 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hinge <220> <221> VARIANT <222> (1)...(1) <223> Xaa = glycine, cysteine or arginine <220> <221> VARIANT <222> (4)...(4) <223> Xaa = cysteine or threonine <400> 26 Xaa Pro Pro Xaa Pro 1 5 <210> 27 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hinge <400> 27 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 15 <210> 28 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hinge <400> 28 Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 29 <211> 61 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hinge <400> 29 Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr His Thr Cys Pro Arg Cys Pro 1 5 10 15 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro Glu 20 25 30 Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro Glu Pro 35 40 45 Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro 50 55 60 <210> 30 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hinge <400> 30 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro 1 5 10 <210> 31 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hinge <400> 31 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 32 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hinge <400> 32 Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 <210> 33 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hinge <400> 33 Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 34 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hinge <400> 34 Glu Val Val Val Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 35 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR L1 <400> 35 Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 36 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR L2 <400> 36 Ser Arg Leu His Ser Gly Val 1 5 <210> 37 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR L3 <400> 37 Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly 1 5 <210> 38 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR H1 <400> 38 Asp Tyr Gly Val Ser 1 5 <210> 39 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR H2 <400> 39 Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 40 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR H3 <400> 40 Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly 1 5 <210> 41 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH <400> 41 Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr 20 25 30 Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu 65 70 75 80 Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 42 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL <400> 42 Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr 100 105 <210> 43 <211> 245 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> scFv <400> 43 Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr Gly Ser Thr Ser Gly 100 105 110 Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Val Lys 115 120 125 Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln Ser Leu Ser 130 135 140 Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly Val Ser 145 150 155 160 Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Val Ile 165 170 175 Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser Arg Leu 180 185 190 Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu Lys Met Asn 195 200 205 Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Lys His Tyr 210 215 220 Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser 225 230 235 240 Val Thr Val Ser Ser 245 <210> 44 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR L1 <400> 44 Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn Val Ala 1 5 10 <210> 45 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR L2 <400> 45 Ser Ala Thr Tyr Arg Asn Ser 1 5 <210> 46 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR L3 <400> 46 Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Tyr Thr 1 5 <210> 47 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR H1 <400> 47 Ser Tyr Trp Met Asn 1 5 <210> 48 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR H2 <400> 48 Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 49 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR H3 <400> 49 Lys Thr Ile Ser Ser Val Val Asp Phe Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 50 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH <400> 50 Glu Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Gln Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Gly Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Lys Thr Ile Ser Ser Val Val Asp Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 51 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL <400> 51 Asp Ile Glu Leu Thr Gln Ser Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Pro Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Thr Tyr Arg Asn Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Asn Val Gln Ser 65 70 75 80 Lys Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Tyr 85 90 95 Thr Ser Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 52 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker <400> 52 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15 <210> 53 <211> 245 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> scFv <400> 53 Glu Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Gln Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Gly Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Lys Thr Ile Ser Ser Val Val Asp Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 115 120 125 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Glu Leu Thr Gln Ser 130 135 140 Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly Asp Arg Val Ser Val Thr Cys 145 150 155 160 Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys 165 170 175 Pro Gly Gln Ser Pro Lys Pro Leu Ile Tyr Ser Ala Thr Tyr Arg Asn 180 185 190 Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 195 200 205 Thr Leu Thr Ile Thr Asn Val Gln Ser Lys Asp Leu Ala Asp Tyr Phe 210 215 220 Cys Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Tyr Thr Ser Gly Gly Gly Thr Lys 225 230 235 240 Leu Glu Ile Lys Arg 245 <210> 54 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR H3 <400> 54 His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 55 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR L2 <400> 55 His Thr Ser Arg Leu His Ser 1 5 <210> 56 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR L3 <400> 56 Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr 1 5 <210> 57 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IGH primer <400> 57 acacggcctc gtgtattact gt 22 <210> 58 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IGH primer <400> 58 acctgaggag acggtgacc 19

Claims (108)

  1. B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법으로,
    상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25세 이하의 대상체에게 투여하는 것을 포함하고,
    여기서 상기 조성물은:
    (i) 상기 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 미만이고 18세 미만인 경우, 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 0.05 x 106개의 CAR+ T 세포 내지 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 1.5 x 106개의 CAR+ T 세포; 및
    (ii) 상기 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 이상이거나 18세부터 25세까지인 경우(수치 포함), (약) 0.05 x 108개의 CAR+ T 세포 내지 (약) 1.5 x 108개의 CAR+ T 세포;
    로부터 선택되는 양으로 투여되는, 방법.
  2. 제1항에 있어서, 여기서:
    (i) 상기 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 미만이고 18세 미만인 경우, 상기 T 세포 조성물은 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 0.5 x 106개의 CAR+ T 세포 내지 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 1.5 x 106개의 CAR+ T 세포 양으로 투여되고; 그리고
    (ii) 상기 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 이상이거나 18세부터 25세까지인 경우(수치 포함), 상기 T 세포 조성물은 (약) 0.5 x 108개의 CAR+ T 세포 내지 (약) 1.5 x 108개의 CAR+ T 세포 양으로 투여되는, 방법.
  3. 제1항에 있어서, 여기서:
    (i) 상기 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 미만이고 18세 미만인 경우, 상기 T 세포 조성물은 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 0.05 x 106개의 CAR+ T 세포 내지 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 0.75 x 106개의 CAR+ T 세포 양으로 투여되고; 그리고
    (ii) 상기 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 이상이거나 18세부터 25세까지인 경우(수치 포함), 상기 T 세포 조성물은 (약) 0.05 x 108개의 CAR+ T 세포 내지 (약) 0.75 x 108개의 CAR+ T 세포 양으로 투여되는, 방법.
  4. B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법으로,
    상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 18세 미만의 대상체에게 투여하는 것을 포함하고,
    여기서 상기 T 세포 조성물은:
    (i) 상기 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 미만인 경우, 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 0.05 x 106개의 CAR+ T 세포 내지 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 1.5 x 106개의 CAR+ T 세포; 및
    (ii) 상기 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 이상인 경우, (약) 0.05 x 108개의 CAR+ T 세포 내지 (약) 1.5 x 108개의 CAR+ T 세포;
    로부터 선택되는 양으로 투여되는, 방법.
  5. 제4항에 있어서, 여기서:
    (i) 상기 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 미만인 경우, 상기 T 세포 조성물은 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 0.5 x 106개의 CAR+ T 세포 내지 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 1.5 x 106개의 CAR+ T 세포 양으로 투여되고; 그리고
    (ii) 상기 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 이상인 경우, 상기 T 세포 조성물은 (약) 0.5 x 108개의 CAR+ T 세포 내지 (약) 1.5 x 108개의 CAR+ T 세포 양으로 투여되는, 방법.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 여기서:
    (i) 상기 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 미만인 경우, 상기 T 세포 조성물은 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 0.05 x 106개의 CAR+ T 세포 내지 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 0.75 x 106개의 CAR+ T 세포 양으로 투여되고; 그리고
    (ii) 상기 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 이상인 경우, 상기 T 세포 조성물은 (약) 0.05 x 108개의 CAR+ T 세포 내지 (약) 0.75 x 108개의 CAR+ T 세포 양으로 투여되는, 방법.
  7. B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법으로,
    상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 18세 미만의 대상체에게 투여하는 것을 포함하고,
    여기서 상기 T 세포 조성물은:
    (i) 상기 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 미만인 경우, 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 0.05 x 106개의 CAR+ T 세포; 및
    (ii) 상기 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 이상인 경우, (약) 0.05 x 108개의 CAR+ T 세포;
    로부터 선택되는 양으로 투여되는, 방법.
  8. 제7항에 있어서, 상기 대상체가 상기 T 세포 조성물의 투여 후 (약) 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 또는 35일에 반응을 나타내지 않고 독성이 발생하지 않는 경우; 상기 T 세포 조성물의 추가 용량을 상기 대상체에게 투여하는 것을 더 포함하며, 여기서 상기 T 세포 조성물의 추가 용량은:
    (i) 상기 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 미만인 경우, 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 0.1 x 106개의 CAR+ T 세포; 및
    (ii) 상기 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 이상인 경우, (약) 0.1 x 108개의 CAR+ T 세포;
    로부터 선택되는 양인, 방법.
  9. B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법으로,
    상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 18세 미만의 대상체에게 투여하는 것을 포함하고,
    여기서 상기 T 세포 조성물은:
    (i) 상기 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 미만인 경우, 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 0.15 x 106개의 CAR+ T 세포; 및
    (ii) 상기 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 이상인 경우, (약) 0.15 x 108개의 CAR+ T 세포;
    로부터 선택되는 양으로 투여되는, 방법.
  10. B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법으로,
    상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 18세 미만의 대상체에게 투여하는 것을 포함하고,
    여기서 상기 T 세포 조성물은:
    (i) 상기 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 미만인 경우, 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 0.3 x 106개의 CAR+ T 세포; 및
    (ii) 상기 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 이상인 경우, (약) 0.3 x 108개의 CAR+ T 세포;
    로부터 선택되는 양으로 투여되는, 방법.
  11. B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법으로,
    상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 18세 미만인 대상체에게 투여하는 것을 포함하고,
    여기서 상기 T 세포 조성물은:
    (i) 상기 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 미만인 경우, 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 0.5 x 106개의 CAR+ T 세포; 및
    (ii) 상기 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 이상인 경우, (약) 0.5 x 108개의 CAR+ T 세포;
    로부터 선택되는 양으로 투여되는, 방법.
  12. B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법으로,
    상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 18세 미만인 대상체에게 투여하는 것을 포함하고,
    여기서 상기 T 세포 조성물은:
    (i) 상기 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 미만인 경우, 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 0.75 x 106개의 CAR+ T 세포; 및
    (ii) 상기 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 이상인 경우, (약) 0.75 x 108개의 CAR+ T 세포;
    로부터 선택되는 양으로 투여되는, 방법.
  13. B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법으로,
    상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 18세 미만인 대상체에게 투여하는 것을 포함하고,
    여기서 상기 T 세포 조성물은:
    (i) 상기 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 미만인 경우, 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 1.0 x 106개의 CAR+ T 세포; 및
    (ii) 상기 대상체가 체중 100 킬로그램(kg) 이상인 경우, (약) 1.0 x 108개의 CAR+ T 세포;
    로부터 선택되는 양으로 투여되는, 방법.
  14. B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법으로,
    상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25세 이하인 대상체에게 투여하는 것을 포함하고,
    여기서 상기 조성물은:
    (i) 상기 대상체가 18세 미만인 경우, 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 0.05 x 106개의 CAR+ T 세포 내지 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 1.5 x 106개의 CAR+ T 세포이지만, (약) 1.5 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않음; 및
    (ii) 상기 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, (약) 0.05 x 108개의 CAR+ T 세포 내지 (약) 1.5 x 108개의 CAR+ T 세포;
    로부터 선택되는 양으로 투여되는, 방법.
  15. 제14항에 있어서, 여기서:
    (i) 상기 대상체가 18세 미만인 경우, 상기 T 세포 조성물은 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 0.5 x 106개의 CAR+ T 세포 내지 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 1.5 x 106개의 CAR+ T 세포 양으로 투여되지만, (약) 1.5 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는 양으로 투여되고; 그리고
    (ii) 상기 대상체가 18세부터 25세까지인 경우(수치 포함), 상기 T 세포 조성물은 (약) 0.5 x 108개의 CAR+ T 세포 내지 (약) 1.5 x 108개의 CAR+ T 세포 양으로 투여되는, 방법.
  16. 제14항에 있어서, 여기서:
    (i) 상기 대상체가 18세 미만인 경우, 상기 T 세포 조성물은 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 0.05 x 106개의 CAR+ T 세포 내지 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 0.75 x 106개의 CAR+ T 세포 양으로 투여되지만, (약) 0.75 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는 양으로 투여되고; 그리고
    (ii) 상기 대상체가 18세부터 25세까지인 경우(수치 포함), 상기 T 세포 조성물은 (약) 0.05 x 108개의 CAR+ T 세포 내지 (약) 0.75 x 108개의 CAR+ T 세포 양으로 투여되는, 방법.
  17. B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법으로,
    상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25세 이하인 대상체에게 투여하는 것을 포함하고,
    여기서 상기 조성물은 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 0.05 x 106개의 CAR+ T 세포 내지 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 1.5 x 106개의 CAR+ T 세포 양으로 투여되지만, (약) 1.5 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는 양으로 투여되는, 방법.
  18. B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법으로,
    상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25세 이하이고 체중 12kg 이상인 대상체에게 투여하는 것을 포함하고,
    여기서 상기 T 세포 조성물:
    (i) 상기 대상체가 18세 미만인 경우, 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 0.5 x 106개의 CAR+ T 세포이지만, (약) 0.5 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않음; 및
    (ii) 상기 대상체가 18세부터 25세까지인 경우(수치 포함), (약) 0.5 x 108개의 CAR+ T 세포;
    로부터 선택되는 양으로 투여되는, 방법.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 대상체가 18세부터 25세까지인 경우, 상기 T 세포 조성물은 (약) 0.05 x 108개의 CAR+ T 세포 내지 (약) 0.75 x 108개의 CAR+ T 세포 양으로 투여되는, 방법.
  20. B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법으로,
    상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 조성물을 18세 미만이고 체중 6kg 이상인 대상체에게 투여하는 것을 포함하고,
    여기서 상기 조성물은 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 0.05 x 106개의 CAR+ T 세포 내지 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 1.5 x 106개의 CAR+ T 세포인 양으로 투여되지만, (약) 1.5 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는 양으로 투여되는, 방법.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 대상체가 18세 미만인 경우, 상기 T 세포 조성물은 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 0.05 x 106개의 CAR+ T 세포 내지 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 0.75 x 106개의 CAR+ T 세포 양으로 투여되지만, (약) 0.75 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는 양으로 투여되는, 방법.
  22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 대상체가 18세 미만인 경우, 상기 T 세포 조성물은 상기 대상체의 체중 kg 당 적어도 (약) 0.05 x 106개의 CAR+ T 세포인 양으로 투여되지만, (약) 0.05 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는 양으로 투여되는, 방법.
  23. 제22항에 있어서,
    상기 대상체가 T 세포 조성물의 투여 후 (약) 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 또는 35일에 반응을 나타내지 않고 독성이 발생하지 않는 경우; 상기 T 세포 조성물의 추가 용량을 상기 대상체에게 투여하는 것을 더 포함하고,
    여기서 상기 대상체가 18세 미만인 경우, 상기 T 세포 조성물의 추가 용량은 상기 대상체의 체중 kg 당 적어도 (약) 0.1 x 106개의 CAR+ T 세포인 양으로 투여되지만, (약) 0.1 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는 양으로 투여되는, 방법.
  24. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 대상체가 18세 미만인 경우, 상기 T 세포 조성물은 상기 대상체의 체중 kg 당 적어도 (약) 0.15 x 106개의 CAR+ T 세포인 양으로 투여되지만, (약) 0.15 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는 양으로 투여되는, 방법.
  25. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 대상체가 18세 미만인 경우, 상기 T 세포 조성물은 상기 대상체의 체중 kg 당 적어도 (약) 0.3 x 106개의 CAR+ T 세포인 양으로 투여되지만, (약) 0.3 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는 양으로 투여되는, 방법.
  26. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 대상체가 18세 미만인 경우, 상기 T 세포 조성물은 상기 대상체의 체중 kg 당 적어도 (약) 0.5 x 106개의 CAR+ T 세포인 양으로 투여되지만, (약) 0.5 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는 양으로 투여되는, 방법.
  27. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 대상체가 18세 미만인 경우, 상기 T 세포 조성물은 상기 대상체의 체중 kg 당 적어도 (약) 0.75 x 106개의 CAR+ T 세포인 양으로 투여되지만, (약) 0.75 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는 양으로 투여되는, 방법.
  28. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 대상체가 18세 미만인 경우, 상기 T 세포 조성물은 상기 대상체의 체중 kg 당 적어도 (약) 1.0 x 106개의 CAR+ T 세포인 양으로 투여되지만, (약) 1.0 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는 양으로 투여되는, 방법.
  29. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 0.5 x 106개의 CAR+ T 세포 내지 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 1.5 x 106개의 CAR+ T 세포인 양으로 투여되지만, (약) 1.5 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는 양으로 투여되는, 방법.
  30. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 0.05 x 106개의 CAR+ T 세포 내지 상기 대상체의 체중 kg 당 (약) 0.75 x 106개의 CAR+ T 세포인 양으로 투여되지만, (약) 0.75 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는 양으로 투여되는, 방법.
  31. 제1항 내지 제21항 및 제30항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 상기 대상체의 체중 kg 당 적어도 (약) 0.05 x 106개의 CAR+ T 세포인 양으로 투여되지만, (약) 0.05 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는 양으로 투여되는, 방법.
  32. 제31항에 있어서,
    상기 대상체가 T 세포 조성물의 투여 후 (약) 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 또는 35일에 반응을 나타내지 않고 독성이 발생하지 않는 경우; 상기 T 세포 조성물의 추가 용량을 상기 대상체에게 투여하는 것을 더 포함하고,
    여기서 상기 T 세포 조성물의 추가 용량은 상기 대상체의 체중 kg 당 적어도 (약) 0.1 x 106개의 CAR+ T 세포인 양으로 투여되지만, (약) 0.1 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는 양으로 투여되는, 방법.
  33. 제1항 내지 제21항 및 제30항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 상기 대상체의 체중 kg 당 적어도 (약) 0.15 x 106개의 CAR+ T 세포인 양으로 투여되지만, (약) 0.15 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는 양으로 투여되는, 방법.
  34. 제1항 내지 제21항 및 제30항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 상기 대상체의 체중 kg 당 적어도 (약) 0.3 x 106개의 CAR+ T 세포인 양으로 투여되지만, (약) 0.3 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는 양으로 투여되는, 방법.
  35. 제1항 내지 제21항 및 제30항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 상기 대상체의 체중 kg 당 적어도 (약) 0.5 x 106개의 CAR+ T 세포인 양으로 투여되지만, (약) 0.5 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는 양으로 투여되는, 방법.
  36. 제1항 내지 제21항 및 제30항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 상기 대상체의 체중 kg 당 적어도 (약) 0.75 x 106개의 CAR+ T 세포인 양으로 투여되지만, (약) 0.75 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는 양으로 투여되는, 방법.
  37. 제1항 내지 제21항 및 제30항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 상기 대상체의 체중 kg 당 적어도 (약) 1.0 x 106개의 CAR+ T 세포인 양으로 투여되지만, (약) 1.0 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는 양으로 투여되는, 방법.
  38. 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 대상체는 체중이 적어도 (약) 6 kg인, 방법.
  39. B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법으로,
    상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25세 이하의 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 상기 T 세포 조성물은:
    (i) 상기 대상체가 18세 미만인 경우, 적어도 0.1 mL의 부피에서 (약) 1.5 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는 양; 및
    (ii) 상기 대상체가 18세부터 25세까지인 경우(수치 포함), (약) 1.5 x 108개의 CAR+ T 세포 미만;
    으로부터 선택되는 양으로 투여되는, 방법.
  40. B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법으로,
    상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25세 이하의 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 상기 T 세포 조성물은:
    (i) 상기 대상체가 18세 미만인 경우, 적어도 0.1 mL의 부피에서 (약) 0.05 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는 양; 및
    (ii) 상기 대상체가 18세부터 25세까지인 경우(수치 포함), (약) 0.05 x 108개의 CAR+ T 세포;
    로부터 선택되는 양으로 투여되는, 방법.
  41. B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법으로,
    상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25세 이하의 대상체에게 투여하는 것을 포함하고,
    여기서 상기 T 세포 조성물은:
    (i) 상기 대상체가 18세 미만인 경우, 적어도 0.1 mL의 부피에서 (약) 0.15 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는 양; 및
    (ii) 상기 대상체가 18세부터 25세까지인 경우(수치 포함), (약) 0.15 x 108개의 CAR+ T 세포;
    로부터 선택되는 양으로 투여되는, 방법.
  42. B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법으로,
    상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25세 이하의 대상체에게 투여하는 것을 포함하고,
    여기서 상기 T 세포 조성물은:
    (i) 상기 대상체가 18세 미만인 경우, 적어도 0.1 mL의 부피에서 (약) 0.3 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는 양; 및
    (ii) 상기 대상체가 18세부터 25세까지인 경우(수치 포함), (약) 0.3 x 108개의 CAR+ T 세포;
    로부터 선택되는 양으로 투여되는, 방법.
  43. B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법으로,
    상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25세 이하의 대상체에게 투여하는 것을 포함하고,
    여기서 상기 T 세포 조성물은:
    (i) 상기 대상체가 18세 미만인 경우, 적어도 0.1 mL의 부피에서 (약) 0.5 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는 양; 및
    (ii) 상기 대상체가 18세부터 25세까지인 경우(수치 포함), (약) 0.5 x 108개의 CAR+ T 세포;
    로부터 선택되는 양으로 투여되는, 방법.
  44. B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법으로,
    상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 25세 이하의 대상체에게 투여하는 것을 포함하고,
    여기서 상기 T 세포 조성물은:
    (i) 상기 대상체가 18세 미만인 경우, 적어도 0.1 mL의 부피에서 (약) 0.75 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는 양; 및
    (ii) 상기 대상체가 18세부터 25세까지인 경우(수치 포함), (약) 0.75 x 108개의 CAR+ T 세포;
    로부터 선택되는 양으로 투여되는, 방법.
  45. B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법으로,
    상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 2.5 x 106 개의 세포/mL 이상의 농도로 25세 이하의 대상체에게 투여하는 것을 포함하고,
    여기서 상기 T 세포 조성물은:
    (i) 상기 대상체가 18세 미만인 경우, 적어도 0.5 mL의 부피에서 (약) 0.5 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는 양; 및
    (ii) 상기 대상체가 18세부터 25세까지인 경우(수치 포함), (약) 0.5 x 108개의 CAR+ T 세포;
    로부터 선택되는 양으로 투여되는, 방법.
  46. B 세포 악성 종양을 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체를 치료하는 방법으로,
    상기 방법은 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물을 2.5 x 106 개의 세포/mL 이상의 농도로 25세 이하의 대상체에게 투여하는 것을 포함하고,
    여기서 상기 T 세포 조성물은:
    (i) 상기 대상체가 18세 미만인 경우, 적어도 0.5 mL의 부피에서 (약) 1 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 초과하지 않는 양; 및
    (ii) 상기 대상체가 18세부터 25세까지인 경우(수치 포함), (약) 1.0 x 108개의 CAR+ T 세포;
    로부터 선택되는 양으로 투여되는, 방법.
  47. 제1항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 T 세포 조성물의 적어도 (약) 0.05 mL의 총 부피가 투여되는, 방법.
  48. 제1항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 T 세포 조성물의 적어도 (약) 0.1 mL의 총 부피가 투여되는, 방법.
  49. 제1항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 T 세포 조성물의 적어도 (약) 0.5 mL의 총 부피가 투여되는, 방법.
  50. 제1항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 T 세포 조성물의 적어도 (약) 1 mL의 총 부피가 투여되는, 방법.
  51. 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 T 세포의 농도는 2.5 x 106개의 세포/mL 이상인, 방법.
  52. 제1항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 T 세포 조성물의 2.5 x 106 개의 세포/mL 이상의 농도로 적어도 (약) 0.1 mL의 총 부피가 투여되는, 방법.
  53. 제1항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 T 세포 조성물의 2.5 x 106 개의 세포/mL 이상의 농도로 적어도 (약) 0.5 mL의 총 부피가 투여되는, 방법.
  54. 제1항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 T 세포 조성물의 2.5 x 106 개의 세포/mL 이상의 농도로 적어도 (약) 1 mL의 총 부피가 투여되는, 방법.
  55. 제1항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 T 세포 조성물은 CD4+ 및 CD8+ CAR+ T 세포를 포함하는, 방법.
  56. 제55항에 있어서,
    상기 조성물은 상기 CD4+ T 세포 및 상기 CD8+ T 세포 중 하나를 포함하는 제1 조성물 및 상기 CD4+ T 세포 및 상기 CD8+ T 세포 중 다른 하나를 포함하는 제2 조성물을 포함하는, 방법.
  57. 제56항에 있어서,
    상기 제1 조성물 및 제2 조성물은 별도로 투여되는, 방법.
  58. 제56항 또는 제57항에 있어서,
    상기 제1 조성물 및 제2 조성물은 동시에 투여되는, 방법.
  59. 제56항 또는 제57항에 있어서,
    상기 제1 조성물 및 제2 조성물은 어느 순서로든 순차적으로 투여되는, 방법.
  60. 제56항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 제1 조성물은 CD4+ CAR+ T 세포를 포함하고 상기 제2 조성물은 CD8+ CAR+ T 세포를 포함하는, 방법.
  61. 제56항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 제1 조성물은 CD8+ CAR+ T 세포를 포함하고 상기 제2 조성물은 CD4+ CAR+ T 세포를 포함하는, 방법.
  62. 제56항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서,
    투여되는 상기 T 세포 조성물의 양은 CD4+ CAR+ T 세포 대 CD8+ CAR+ T 세포의 정의된 비율 및/또는 CD4+ T 세포 대 CD8+ T 세포의 정의된 비율을 포함하고, 이는 (대략) 1:1이거나 (대략) 1:3 내지 (대략) 3:1인, 방법.
  63. 제62항에 있어서,
    상기 정의된 비율은 (대략) 1:1인, 방법.
  64. 제1항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 B 세포 악성 종양은 림프종 또는 백혈병인, 방법.
  65. 제1항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 B 세포 악성 종양은 재발성 및/또는 불응성인, 방법.
  66. 제1항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 B 세포 악성 종양은 B-세포 급성 림프모구 백혈병 (B-cell acute lymphoblastic leukemia, B-ALL), 임의로 CD19+ B-ALL인, 방법.
  67. 제1항 내지 제66항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 B 세포 악성 종양은 재발성 또는 불응성(r/r) B-세포 급성 림프모구 백혈병(B-ALL)인, 방법.
  68. 제67항에 있어서,
    r/r B-ALL을 나타내는 대상체는 골수 질환의 형태학적 증거를 가지고, 임의로 상기 대상체는 형태학적으로 5% 이상의 림프아구를 가지는, 방법.
  69. 제66항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 대상체는: 동종이계 조혈 줄기 세포 이식(hematopoietic stem cell transplantation, HSCT) 후 첫 번째 또는 그 이상의 골수 재발, 임의의 골수 재발; 임의로 2개 이상의 개별 유도 섭생법 후, 임의로 완전 반응(complete response, CR)을 달성하지 못하거나 또는 불완전 혈구 수 회복을 나타내는 완전 반응(complete response with incomplete blood count recovery, CRi)의 1차 불응성; 임의로 재발성 백혈병에 대한 화학 요법 1 주기(cycle) 후, 임의로 CR/Cri을 달성하지 못하는, 화학-불응성
    중 임의의 것을 포함하는 B-ALL을 가지거나,
    동종 HSCT에 대해 부적격인, 방법.
  70. 제66항 또는 제69항에 있어서,
    상기 B-ALL은 미세 잔존 질병 양성 (MRD+)인, 방법.
  71. 제66항, 제69항 또는 제70항 중 어느 한 항에 있어서,
    2개의 방식의 요법 후 B-ALL을 나타내는 대상체는 형태학적으로 5% 미만의 림프아구 및/또는 골수 세포에서 1 x10-4개 이상의 빈도로 검증된 분석방법에 의해 검출된 바와 같은 미세 잔존 질병 양성(MRD+) 질병을 가지는, 방법.
  72. 제1항 내지 제71항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 대상체는 필라델피아 염색체 양성 ALL을 가지고, 하나 이상의 방식의 티로신-키나아제 억제제 (tyrosine-kinase inhibitor, TKI) 요법에 내성이 있거나 실패하였고, 또는 TKI 요법이 금기인, 방법.
  73. 제1항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 B 세포 악성 종양은 B-세포 비호지킨 림프종(B-cell non-Hodgkin lymphoma, B-NHL), 임의로 CD19+ B-NHL인, 방법.
  74. 제73항에 있어서,
    상기 B 세포 악성 종양은 재발성 또는 불응성(r/r) B-세포 비호지킨 림프종(B-NHL)인, 방법.
  75. 제73항 또는 제74항에 있어서,
    상기 대상체는 하나 이상의 방식의 화학 요법 후 측정 가능한 질병이 있는 B-NHL을 가지거나, HSCT에 실패하였거나, 또는 HSCT에 대해 부적격인, 방법.
  76. 제73항 내지 제75항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 B-NHL은 미만성 거대 B 세포 림프종(diffuse large B cell lymphoma, DLBCL), 원발성 종격 거대 B 세포 림프종(primary mediastinal large B cell lymphoma, PMBCL), 또는 버킷 림프종(Burkitt lymphoma, BL)인, 방법.
  77. 제1항 내지 제76항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물을 투여 하기 전에, 상기 대상체는 CD19를 발현하는 세포를 가지는 것으로 확인되거나 확인된 적이 있는, 방법.
  78. 제77항에 있어서,
    상기 CD19의 발현은 임의로 말초혈액 또는 골수에서 유세포 분석에 의해 및/또는 임의로 골수 생검의 면역조직화학염색법에 의해 검출되는, 방법.
  79. 제1항 내지 제78항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 대상체는 CAR을 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물의 투여를 포함하는 선행 세포 요법을 받지 않은, 방법.
  80. 제1항 내지 제78항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 대상체는 CAR을 발현하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물의 투여를 포함하는 선행 세포 요법을 받은, 방법.
  81. 제1항 내지 제80항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 대상체는 CD19를 표적화하는 선행 요법을 받았고, 임의로 상기 대상체는, CD19를 표적화하는 선행 요법의 완료 후 CD19를 발현하는 세포를 가지는 것으로 확인되거나 확인된 적이 있거나 또는 CD19-양성 질병을 가지는 것으로 확인되거나 확인된 적이 있는, 방법.
  82. 제1항 내지 제81항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 투여 전에, 상기 대상체는 플루다라빈 및/또는 사이클로포스파마이드의 투여를 포함하는 림프구 고갈 요법으로 사전처리된, 방법.
  83. 제1항 내지 제82항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 투여 직전에, 플루다라빈 및/또는 사이클로포스파마이드의 투여를 포함하는 림프구 고갈 요법을 상기 대상체에게 투여하는 것을 더 포함하는, 방법.
  84. 제82항 또는 제83항에 있어서,
    상기 림프구 고갈 요법은 2 내지 4일 동안, 임의로 3일 동안 매일, 약 200 내지 400 mg/m2, 임의로 (약) 300 mg/m2(수치 포함)의 사이클로포스파마이드 및/또는 약 20 내지 40 mg/m2, 임의로 30 mg/m2의 플루다라빈의 투여를 포함하는, 방법.
  85. 제82항 내지 제84항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 림프구 고갈 요법은 3일 동안 매일 약 300 mg/m2의 사이클로포스파마이드 및 3일 동안 매일 약 30 mg/m2의 플루다라빈의 투여를 포함하는, 방법.
  86. 제82항 내지 제85항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 사이클로포스파마이드 및 플루다라빈은 동시에 투여되는, 방법.
  87. 제82항 내지 제86항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 림프구 고갈 요법은 상기 T 세포 조성물의 투여 2일 내지 7일 전에 투여되는, 방법.
  88. 제1항 내지 제87항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 대상체는 인간인, 방법.
  89. 제1항 내지 제88항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 CAR은 인간 CD19에 특이적인 scFv, 막관통 도메인, 임의로 인간 4-1BB 이거나 이를 포함하는, 공동자극 분자로부터 유래된 세포질 신호전달 도메인, 및 임의로 인간 CD3제타 신호전달 도메인이거나 이를 포함하는, 1차 신호전달 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 신호전달 도메인을 포함하고, 여기서 상기 CAR은 임의로 상기 막관통 도메인과 상기 scFv 사이에 스페이서를 더 포함하는, 방법.
  90. 제1항 내지 제89항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 CAR은 순서대로 인간 CD19에 특이적인 scFv, 막관통 도메인, 임의로 인간 4-1BB 신호 전달 도메인이거나 이를 포함하는, 공동자극 분자로부터 유래된 세포질 신호전달 도메인, 및 임의로 인간 CD3제타 신호전달 도메인이거나 이를 포함하는, 1차 신호전달 ITAM-함유 분자로부터 유래된 세포질 신호전달 도메인을 포함하는, 방법.
  91. 제89항 또는 제90항에 있어서,
    상기 스페이서는 면역글로불린 힌지 또는 이의 변형된 버전, 임의로 IgG4 힌지 또는 이의 변형된 버전의 전부 또는 일부를 포함하거나 이로 이루어진 폴리펩타이드 스페이서인, 방법.
  92. 제89항 내지 제91항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 스페이서는 약 15개 이하의 아미노산, 임의로 길이가 (약) 12개의 아미노산인, 방법.
  93. 제89항 내지 제92항 중 어느 한 항에 있어서, 여기서:
    상기 스페이서는 서열번호 1의 서열, 서열번호 2, 서열번호 30, 서열번호 31, 서열번호 32, 서열번호 33, 서열번호 34로 암호화되는 서열, 또는 이에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 가지는 전술한 것 중 임의의 것의 변이체를 포함하거나 이로 이루어지고; 및/또는
    상기 스페이서는 식 X1PPX2P를 포함하고, 여기서 X1은 글리신, 시스테인 또는 아르기닌이고, X2는 시스테인 또는 트레오닌인, 방법.
  94. 제89항 내지 제93항 중 어느 한 항에 있어서,
    공동자극 분자로부터 유래된 상기 세포질 신호전달 도메인은 서열번호 12 또는 이에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 가지는 이의 변이체를 포함하는, 방법.
  95. 제89항 내지 제94항 중 어느 한 항에 있어서,
    1차 신호전달 ITAM-함유 분자로부터 유래된 상기 세포질 신호전달 도메인은 서열번호 13, 14 또는 15, 이에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 가지는 것을 포함하는, 방법.
  96. 제89항 내지 제95항 중 어느 한 항에 있어서, 여기서:
    상기 scFv는 RASQDISKYLN (서열번호 35)의 CDRL1 서열, SRLHSGV (서열번호 36)의 CDRL2 서열 및 GNTLPYTFG (서열번호 37)의 CDRL3 서열을 포함하는 가변 경쇄 (VL), 및 DYGVS (서열번호 38)의 CDRH1 서열, VIWGSETTYYNSALKS (서열번호 39)의 CDRH2 서열 및 YAMDYWG (서열번호 40)의 CDRH3 서열을 포함하는 가변 중쇄 (VH)를 포함하거나; 또는
    상기 scFv는 FMC63의 CDRL1 서열, FMC63의 CDRL2 서열, FMC63의 CDRL3 서열을 포함하는 VL, 및 FMC63의 CDRH1 서열, FMC63의 CDRH2 서열 및 FMC63의 CDRH3 서열을 포함하는 VH 를 포함하는, 방법.
  97. 제89항 내지 제96항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 scFv는 서열번호 41에 기재된 VH 및 서열번호 42에 기재된 VL을 포함하는, 방법.
  98. 제96항 또는 제97항에 있어서,
    상기 VH 및 VL은 가요성 링커(flexible linker)에 의해 분리되고, 임의로 여기서 상기 가요성 링커는 서열번호 24에 기재된 서열이거나 이를 포함하는, 방법.
  99. 제89항 내지 제98항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 scFv는 서열번호 43에 기재된 서열이거나 이를 포함하는, 방법.
  100. 제1항 내지 제99항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물 내 CAR-발현 T 세포, CAR-발현 CD4+ T 세포 또는 CAR-발현 CD8+ T 세포의 적어도 (약) 35%, 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상은 CCR7, CD27, CD45RA 및/또는 CD28에 대해 양성 표면인, 방법.
  101. 제1항 내지 제100항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물 내 CAR-발현 T 세포, CAR-발현 CD4+ T 세포 또는 CAR-발현 CD8+ T 세포의 적어도 (약) 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상은 CCR7에 대해 양성 표면인, 방법.
  102. 제1항 내지 제101항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물 내 CAR-발현 T 세포, CAR-발현 CD4+ T 세포 또는 CAR-발현 CD8+ T 세포의 적어도 (약) 35%, 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상은 CCR7 및 CD45RA에 대해 양성 표면인, 방법.
  103. 제1항 내지 제102항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물 내 CAR-발현 T 세포, CAR-발현 CD4+ T 세포 또는 CAR-발현 CD8+ T 세포의 적어도 (약) 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상은 CD27에 대해 양성 표면인, 방법.
  104. 제1항 내지 제103항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물 내 CAR-발현 T 세포, CAR-발현 CD4+ T 세포 또는 CAR-발현 CD8+ T 세포의 적어도 (약) 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상은 CD27 및 CD28에 대해 양성 표면인, 방법.
  105. 제1항 내지 제104항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물 내 CAR-발현 T 세포, CAR-발현 CD4+ T 세포 또는 CAR-발현 CD8+ T 세포의 적어도 (약) 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상은 활성 카스파제 3에 대해 음성인, 방법.
  106. 제1항 내지 제105항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 T 세포는 대상체로부터 수득된 1차 T 세포인, 방법.
  107. 제1항 내지 제106항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 T 세포는 상기 대상체에 대해 자가인, 방법.
  108. 항-CD19 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는, 세포 요법의 조성물 또는 세포 요법의 복수의 조성물 중 하나, 및
    상기 세포 요법을 투여하기 위한 지침서,
    를 포함하는 제조 물품으로서,
    상기 지침서는 제1항 내지 제107항 중 어느 한 항의 방법에 따른 T 세포 조성물의 투여를 명시한, 제조 물품.
KR1020217018399A 2018-11-16 2019-11-15 Ｂ 세포 악성 종양 치료를 위한 조작된 ｔ 세포 투약 방법 KR20210104713A (ko)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201862768844P 2018-11-16 2018-11-16
US62/768,844 2018-11-16
US201962914303P 2019-10-11 2019-10-11
US62/914,303 2019-10-11
PCT/US2019/061876 WO2020102770A1 (en) 2018-11-16 2019-11-15 Methods of dosing engineered t cells for the treatment of b cell malignancies

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20210104713A true KR20210104713A (ko) 2021-08-25

Family

ID=69106166

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020217018399A KR20210104713A (ko) 2018-11-16 2019-11-15 Ｂ 세포 악성 종양 치료를 위한 조작된 ｔ 세포 투약 방법

Country Status (12)

Country Link
US (1) US20220008465A1 (ko)
EP (1) EP3880238A1 (ko)
JP (1) JP2022513062A (ko)
KR (1) KR20210104713A (ko)
CN (1) CN113271963A (ko)
AU (1) AU2019381827A1 (ko)
BR (1) BR112021009420A2 (ko)
CA (1) CA3120118A1 (ko)
IL (1) IL283218A (ko)
MX (1) MX2021005734A (ko)
SG (1) SG11202105084VA (ko)
WO (1) WO2020102770A1 (ko)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117396607A (zh) 2020-12-30 2024-01-12 阿劳诺斯治疗公司 包含多顺反子表达盒的重组载体及其使用方法

Family Cites Families (140)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3381783D1 (de) 1982-03-03 1990-09-13 Genentech Inc Menschliches antithrombin iii, dns sequenzen dafuer, expressions- und klonierungsvektoren die solche sequenzen enthalten und damit transformierte zellkulturen, verfahren zur expression von menschlichem antithrombin iii und diese enthaltende pharmazeutische zusammensetzungen.
US4452773A (en) 1982-04-05 1984-06-05 Canadian Patents And Development Limited Magnetic iron-dextran microspheres
US5168062A (en) 1985-01-30 1992-12-01 University Of Iowa Research Foundation Transfer vectors and microorganisms containing human cytomegalovirus immediate-early promoter-regulatory DNA sequence
US4690915A (en) 1985-08-08 1987-09-01 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Adoptive immunotherapy as a treatment modality in humans
US4795698A (en) 1985-10-04 1989-01-03 Immunicon Corporation Magnetic-polymer particles
IN165717B (ko) 1986-08-07 1989-12-23 Battelle Memorial Institute
US5219740A (en) 1987-02-13 1993-06-15 Fred Hutchinson Cancer Research Center Retroviral gene transfer into diploid fibroblasts for gene therapy
US5565566A (en) 1987-04-24 1996-10-15 Discovery Therapeutics, Inc. N6 -substituted 9-methyladenines: a new class of adenosine receptor antagonists
US5298508A (en) 1988-07-19 1994-03-29 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Irreversible inhibitors of adenosine receptors
ES2067018T3 (es) 1988-12-28 1995-03-16 Stefan Miltenyi Procedimiento y materiales para la separacion en alto gradiente magnetico de materiales biologicos.
US5200084A (en) 1990-09-26 1993-04-06 Immunicon Corporation Apparatus and methods for magnetic separation
US5424297A (en) 1992-04-27 1995-06-13 University Of Virginia Alumni Patents Foundation Adenosine dextran conjugates
US5629327A (en) 1993-03-01 1997-05-13 Childrens Hospital Medical Center Corp. Methods and compositions for inhibition of angiogenesis
WO1994025462A1 (en) 1993-05-03 1994-11-10 The United States Of America, Represented By The 8-substituted 1,3,7-trialkyl-xanthine derivatives as a2-selective adenosine receptor antagonists
US5504090A (en) 1994-03-30 1996-04-02 Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for the prevention and treatment of ischemia-reperfusion organ injury
US5827642A (en) 1994-08-31 1998-10-27 Fred Hutchinson Cancer Research Center Rapid expansion method ("REM") for in vitro propagation of T lymphocytes
US5670501A (en) 1994-09-01 1997-09-23 Discovery Therapeutics, Inc. N-substituted 9-alkyladenines
US6013516A (en) 1995-10-06 2000-01-11 The Salk Institute For Biological Studies Vector and method of use for nucleic acid delivery to non-dividing cells
JP4431638B2 (ja) 1996-01-29 2010-03-17 アメリカ合衆国 ジヒドロピリジン―、ピリジン―、ベンゾピラン―オン―およびトリアゾロキナゾリン誘導体、それらの製造およびそれらのアデノシン受容体アンタゴニストとしての用途
DE19608753C1 (de) 1996-03-06 1997-06-26 Medigene Gmbh Transduktionssystem und seine Verwendung
US6451995B1 (en) 1996-03-20 2002-09-17 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Single chain FV polynucleotide or peptide constructs of anti-ganglioside GD2 antibodies, cells expressing same and related methods
DE69605062T2 (de) 1996-04-24 2000-07-13 Claude Fell Zelltrennungsvorrichtung für biologische flüssigkeiten wie blut
US5635517B1 (en) 1996-07-24 1999-06-29 Celgene Corp Method of reducing TNFalpha levels with amino substituted 2-(2,6-dioxopiperidin-3-YL)-1-oxo-and 1,3-dioxoisoindolines
HU228769B1 (en) 1996-07-24 2013-05-28 Celgene Corp Substituted 2(2,6-dioxopiperidin-3-yl)phthalimides and -1-oxoisoindolines and their use for production of pharmaceutical compositions for mammals to reduce the level of tnf-alpha
US5798368A (en) 1996-08-22 1998-08-25 Celgene Corporation Tetrasubstituted 2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1-oxoisoindolines and method of reducing TNFα levels
CA2261762C (en) 1996-07-24 2008-06-17 Celgene Corporation Substituted 2(2,6-dioxopiperidin-3-yl)phthalimides and -1-oxoisoindolines and method of reducing tnf-alpha levels
US6281230B1 (en) 1996-07-24 2001-08-28 Celgene Corporation Isoindolines, method of use, and pharmaceutical compositions
DK0920505T3 (da) 1996-08-16 2008-09-08 Schering Corp Pattedyrcelleoverfladeantigener og tilhörende reagenser
US6111090A (en) 1996-08-16 2000-08-29 Schering Corporation Mammalian cell surface antigens; related reagents
US5786360A (en) 1996-11-19 1998-07-28 Link Technology Incorporated A1 adenosine receptor antagonists
EP1025228A4 (en) 1997-10-21 2002-09-18 Human Genome Sciences Inc HUMAN PROTEIN TR11, TR11SV1 AND TR11SV2 SIMILAR TO THE TUMOR NECROSIS FACTOR RECEPTOR
US5994136A (en) 1997-12-12 1999-11-30 Cell Genesys, Inc. Method and means for producing high titer, safe, recombinant lentivirus vectors
EP1053321A1 (en) 1998-02-09 2000-11-22 Genentech, Inc. Novel tumor necrosis factor receptor homolog and nucleic acids encoding the same
KR20070040423A (ko) 1998-03-16 2007-04-16 셀진 코포레이션 염증성 사이토카인 억제제용2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린 유도체, 그제조방법 및 그 용도
WO1999052552A1 (en) 1998-04-15 1999-10-21 Brigham & Women's Hospital, Inc. T cell inhibitory receptor compositions and uses thereof
US6326390B1 (en) 1998-08-25 2001-12-04 King Pharmaceuticals Reseach And Development, Inc. Use of adenosine A3 receptor antagonists to inhibit tumor growth
WO2000014257A1 (en) 1998-09-04 2000-03-16 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Fusion receptors specific for prostate-specific membrane antigen and uses thereof
WO2000023573A2 (en) 1998-10-20 2000-04-27 City Of Hope Cd20-specific redirected t cells and their use in cellular immunotherapy of cd20+ malignancies
US6733433B1 (en) 1998-12-24 2004-05-11 Biosafe S.A. Blood separation system particularly for concentrating hematopoietic stem cells
US6232297B1 (en) 1999-02-01 2001-05-15 University Of Virginia Patent Foundation Methods and compositions for treating inflammatory response
US6313131B1 (en) 1999-02-16 2001-11-06 Upsher-Smith Laboratories, Inc. Method of kidney treatment
AU771015B2 (en) 1999-03-18 2004-03-11 Celgene Corporation Substituted 1-oxo- and 1,3-dioxoisoindolines and their use in pharmaceutical compositions for reducing inflammatory cytokine levels
US6322771B1 (en) 1999-06-18 2001-11-27 University Of Virginia Patent Foundation Induction of pharmacological stress with adenosine receptor agonists
IL147442A0 (en) 1999-07-12 2002-08-14 Genentech Inc Promotion or inhibition of angiogenesis and cardiovscularization by tumor necrosis factor ligand/receptor homologs
US20020131960A1 (en) 2000-06-02 2002-09-19 Michel Sadelain Artificial antigen presenting cells and methods of use thereof
WO2002077029A2 (en) 2000-11-07 2002-10-03 City Of Hope Cd19-specific redirected immune cells
US6458810B1 (en) 2000-11-14 2002-10-01 George Muller Pharmaceutically active isoindoline derivatives
US20030045552A1 (en) 2000-12-27 2003-03-06 Robarge Michael J. Isoindole-imide compounds, compositions, and uses thereof
US7091353B2 (en) 2000-12-27 2006-08-15 Celgene Corporation Isoindole-imide compounds, compositions, and uses thereof
GB0100624D0 (en) 2001-01-10 2001-02-21 Vernalis Res Ltd Chemical compounds VII
DE60234585D1 (ko) 2001-02-27 2010-01-14 Us Government
US7070995B2 (en) 2001-04-11 2006-07-04 City Of Hope CE7-specific redirected immune cells
US20090257994A1 (en) 2001-04-30 2009-10-15 City Of Hope Chimeric immunoreceptor useful in treating human cancers
US7939059B2 (en) 2001-12-10 2011-05-10 California Institute Of Technology Method for the generation of antigen-specific lymphocytes
CA2470104C (en) 2001-12-12 2015-01-27 The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Methods for using extracellular adenosine inhibitors and adenosine receptor inhibitors to enhance immune response and inflammation
US20030170238A1 (en) 2002-03-07 2003-09-11 Gruenberg Micheal L. Re-activated T-cells for adoptive immunotherapy
US7446190B2 (en) 2002-05-28 2008-11-04 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Nucleic acids encoding chimeric T cell receptors
US20040047858A1 (en) 2002-09-11 2004-03-11 Blumberg Richard S. Therapeutic anti-BGP(C-CAM1) antibodies and uses thereof
WO2004056875A1 (en) 2002-12-23 2004-07-08 Wyeth Antibodies against pd-1 and uses therefor
US20050129671A1 (en) 2003-03-11 2005-06-16 City Of Hope Mammalian antigen-presenting T cells and bi-specific T cells
US7618632B2 (en) 2003-05-23 2009-11-17 Wyeth Method of treating or ameliorating an immune cell associated pathology using GITR ligand antibodies
WO2005007190A1 (en) 2003-07-11 2005-01-27 Schering Corporation Agonists or antagonists of the clucocorticoid-induced tumour necrosis factor receptor (gitr) or its ligand for the treatment of immune disorders, infections and cancer
EP1692318A4 (en) 2003-12-02 2008-04-02 Genzyme Corp COMPOSITIONS AND METHODS FOR DIAGNOSIS AND TREATMENT OF LUNG CANCER
GB0409799D0 (en) 2004-04-30 2004-06-09 Isis Innovation Method of generating improved immune response
EP1765402A2 (en) 2004-06-04 2007-03-28 Duke University Methods and compositions for enhancement of immunity by in vivo depletion of immunosuppressive cell activity
US7244759B2 (en) 2004-07-28 2007-07-17 Celgene Corporation Isoindoline compounds and methods of making and using the same
JP4846782B2 (ja) 2005-03-23 2011-12-28 ビオセフ エス・アー 再生医療のための、成人幹細胞を含む細胞サブセットを採集、加工及び移植するための統合システム
DK1866339T3 (da) 2005-03-25 2013-09-02 Gitr Inc GTR-bindende molekyler og anvendelser heraf
CA2607147C (en) 2005-05-09 2018-07-17 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Human monoclonal antibodies to programmed death 1 (pd-1) and methods for treating cancer using anti-pd-1 antibodies alone or in combination with other immunotherapeutics
PT1899364T (pt) 2005-05-17 2020-05-20 Univ Connecticut Composições e métodos para imunomodulação num organismo
JP5252635B2 (ja) 2005-07-01 2013-07-31 メダレックス インコーポレーティッド プログラム死リガンド１（ｐｄ−ｌ１）に対するヒトモノクローナル抗体
CA2636111C (en) 2006-01-13 2018-04-03 The Government Of The United States, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services, National Institutes Of Health Codon optimized il-15 and il-15r-alpha genes for expression in mammalian cells
US20110212086A1 (en) 2006-01-19 2011-09-01 Genzyme Corporation GITR Antibodies For The Treatment of Cancer
US20100178299A1 (en) 2007-02-13 2010-07-15 Northeastern University Methods and compositions for improving immune responses
HUE038506T2 (hu) 2007-03-30 2018-10-29 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Kostimuláló ligand konstitutív expressziója adoptív módon átvitt T-limfocitákon
US7615883B2 (en) 2007-06-06 2009-11-10 Meheen H Joe Wind driven venturi turbine
CN104945508B (zh) 2007-06-18 2019-02-22 默沙东有限责任公司 针对人程序性死亡受体pd-1的抗体
NZ703668A (en) 2007-06-27 2016-07-29 Us Sec Dep Of Health And Human Services Complexes of il-15 and il-15ralpha and uses thereof
CA2693677C (en) 2007-07-12 2018-02-13 Tolerx, Inc. Combination therapies employing gitr binding molecules
JP2011500730A (ja) 2007-10-26 2011-01-06 ガバニング カウンセル オブ ザ ユニバーシティ オブ トロント Ｔｉｍ−３を用いた治療および診断方法
EP2433713B1 (en) 2007-12-07 2017-07-26 Miltenyi Biotec GmbH Cell processing systems and methods
US8479118B2 (en) 2007-12-10 2013-07-02 Microsoft Corporation Switching search providers within a browser search box
TR201802323T4 (tr) 2007-12-11 2018-03-21 Univ North Carolina Chapel Hill Polipürin yolu modifiye edilmiş retroviral vektörler.
CN104548091A (zh) 2008-02-11 2015-04-29 治疗科技公司 用于肿瘤治疗的单克隆抗体
US8168757B2 (en) 2008-03-12 2012-05-01 Merck Sharp & Dohme Corp. PD-1 binding proteins
US20120164718A1 (en) 2008-05-06 2012-06-28 Innovative Micro Technology Removable/disposable apparatus for MEMS particle sorting device
JP5173594B2 (ja) 2008-05-27 2013-04-03 キヤノン株式会社 管理装置、画像形成装置及びそれらの処理方法
GB0906579D0 (en) 2009-04-16 2009-05-20 Vernalis R&D Ltd Pharmaceuticals, compositions and methods of making and using the same
NZ590667A (en) 2008-07-02 2013-01-25 Emergent Product Dev Seattle Tgf-b antagonist multi-target binding proteins
AR072999A1 (es) 2008-08-11 2010-10-06 Medarex Inc Anticuerpos humanos que se unen al gen 3 de activacion linfocitaria (lag-3) y los usos de estos
BRPI0917891A2 (pt) 2008-08-25 2015-11-24 Amplimmune Inc antagonistas de pd-1 e métodos de utilização dos mesmos
EP2350129B1 (en) 2008-08-25 2015-06-10 Amplimmune, Inc. Compositions of pd-1 antagonists and methods of use
EP4032552B1 (en) 2008-08-26 2023-10-04 City of Hope Method and compositions for enhanced anti-tumor effector functioning of t cells
WO2010030002A1 (ja) 2008-09-12 2010-03-18 国立大学法人三重大学 外来性ｇｉｔｒリガンド発現細胞
US8883500B2 (en) 2008-12-05 2014-11-11 Northeastern University Method of preparing adenosine-resistant anti-tumor T lymphocytes for adoptive immunotherapy
LT4209510T (lt) 2008-12-09 2024-03-12 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-pd-l1 antikūnai ir jų panaudojimas t ląstelių funkcijos pagerinimui
EP2393835B1 (en) 2009-02-09 2017-04-05 Université d'Aix-Marseille Pd-1 antibodies and pd-l1 antibodies and uses thereof
ES2668874T3 (es) 2009-04-30 2018-05-22 Tel Hashomer Medical Research Infrastructure And Services Ltd. Anticuerpos anti-CEACAM1 y métodos de uso de los mismos
EP3135294B1 (en) 2009-08-14 2020-06-03 The Government of the United States of America as represented by the Secretary of the Department of Health and Human Services Use of il-15-il-15 receptor heterodimers to treat lymphopenia
CN102574924A (zh) 2009-09-03 2012-07-11 先灵公司 抗-gitr抗体
GB0919054D0 (en) 2009-10-30 2009-12-16 Isis Innovation Treatment of obesity
SI2496698T1 (sl) 2009-11-03 2019-07-31 City Of Hope Skrajšan epiderimalni receptor faktorja rasti (EGFRt) za selekcijo transduciranih T celic
EP2504028A4 (en) 2009-11-24 2014-04-09 Amplimmune Inc SIMULTANEOUS INHIBITION OF PD-L1 / PD-L2
WO2011090762A1 (en) 2009-12-29 2011-07-28 Emergent Product Development Seattle, Llc Heterodimer binding proteins and uses thereof
CA2802344C (en) 2010-06-18 2023-06-13 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Bi-specific antibodies against tim-3 and pd-1 for immunotherapy in chronic immune conditions
JP5947311B2 (ja) 2010-12-09 2016-07-06 ザ トラスティーズ オブ ザ ユニバーシティ オブ ペンシルバニア 癌を治療するためのキメラ抗原受容体改変ｔ細胞の使用
MX359513B (es) 2011-03-23 2018-10-01 Hutchinson Fred Cancer Res Metodo y composiciones para inmunoterapia celular.
US8398282B2 (en) 2011-05-12 2013-03-19 Delphi Technologies, Inc. Vehicle front lighting assembly and systems having a variable tint electrowetting element
WO2013006490A2 (en) 2011-07-01 2013-01-10 Cellerant Therapeutics, Inc. Antibodies that specifically bind to tim3
US20130108641A1 (en) 2011-09-14 2013-05-02 Sanofi Anti-gitr antibodies
WO2013054320A1 (en) 2011-10-11 2013-04-18 Tel Hashomer Medical Research Infrastructure And Services Ltd. Antibodies to carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule (ceacam)
CN107011426B (zh) 2011-11-11 2021-05-14 弗雷德哈钦森癌症研究中心 针对癌症的靶向细胞周期蛋白a1的t细胞免疫疗法
CA2892371C (en) 2011-12-01 2021-01-19 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Anti-ceacam1 recombinant antibodies for cancer therapy
EP2804625A4 (en) 2012-01-17 2015-10-28 Univ Northeastern METHODS AND COMPOSITIONS FOR IN VITRO DEVELOPMENT OF IMMUNOSUPPRESSANT REGULATORS AND USES THEREOF
EP2814846B1 (en) 2012-02-13 2020-01-08 Seattle Children's Hospital d/b/a Seattle Children's Research Institute Bispecific chimeric antigen receptors and therapeutic uses thereof
WO2013126726A1 (en) 2012-02-22 2013-08-29 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Double transgenic t cells comprising a car and a tcr and their methods of use
NZ702108A (en) 2012-05-03 2016-09-30 Hutchinson Fred Cancer Res Enhanced affinity t cell receptors and methods for making the same
HUE053556T2 (hu) * 2012-07-13 2021-07-28 Univ Pennsylvania CAR-ok tumorellenes hatásának toxicitás-menedzsmentje
EP2879709B1 (en) 2012-07-31 2020-01-08 The Brigham and Women's Hospital, Inc. Modulation of the immune response
RU2700765C2 (ru) 2012-08-20 2019-09-19 Фред Хатчинсон Кансэр Рисёч Сентер Способ и композиции для клеточной иммунотерапии
EP3597215A1 (en) 2012-10-02 2020-01-22 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Compositions and methods for immunotherapy
CA2887528C (en) 2012-10-12 2023-08-29 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Enhancement of the immune response
DE112012007250T5 (de) 2012-12-20 2015-10-08 Mitsubishi Electric Corp. Fahrzeuginterne Vorrichtung und Programm
TWI654206B (zh) 2013-03-16 2019-03-21 諾華公司 使用人類化抗－ｃｄ１９嵌合抗原受體治療癌症
US9701758B2 (en) 2013-05-24 2017-07-11 Board Of Regents, The University Of Texas System Anti-CD19 scFv (FMC63) polypeptide
US9108442B2 (en) 2013-08-20 2015-08-18 Ricoh Company, Ltd. Image forming apparatus
US9512084B2 (en) 2013-11-29 2016-12-06 Novartis Ag Amino pyrimidine derivatives
MX2016007239A (es) 2013-12-06 2017-01-05 Celgene Corp Metodos para determinar la eficacia del farmaco para el tratamiento de linfoma difuso de celulas b grandes, mieloma multiple, y canceres mieloides.
CN113354744A (zh) 2013-12-20 2021-09-07 弗雷德哈钦森癌症研究中心 带标签的嵌合效应分子及其受体
JOP20200094A1 (ar) 2014-01-24 2017-06-16 Dana Farber Cancer Inst Inc جزيئات جسم مضاد لـ pd-1 واستخداماتها
JOP20200096A1 (ar) 2014-01-31 2017-06-16 Children’S Medical Center Corp جزيئات جسم مضاد لـ tim-3 واستخداماتها
BR112016018408A2 (pt) 2014-03-14 2017-12-26 Immutep Sas moléculas de anticorpo à lag-3 e usos das mesmas
US10865242B2 (en) * 2014-04-10 2020-12-15 Seattle Children's Hospital Method and compositions for cellular immunotherapy
US11400115B2 (en) 2014-04-23 2022-08-02 Juno Therapeutics, Inc. Methods for isolating, culturing, and genetically engineering immune cell populations for adoptive therapy
WO2015168613A2 (en) 2014-05-02 2015-11-05 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods of chimeric autoantibody receptor t cells
TWI751102B (zh) 2014-08-28 2022-01-01 美商奇諾治療有限公司 對ｃｄ１９具專一性之抗體及嵌合抗原受體
IL292450A (en) 2014-11-05 2022-06-01 Juno Therapeutics Inc Transduction methods and cellular processing
US9713375B1 (en) 2015-02-26 2017-07-25 Brett Einar Rahm Collapsible portable table
BR112019017767A2 (pt) * 2017-02-27 2020-04-07 Juno Therapeutics Inc composições, artigos de fabricação e métodos relacionados à dosagem em terapia celular
BR112020008340A2 (pt) 2017-11-01 2020-11-17 Juno Therapeutics Inc processo para gerar composições terapêuticas de células modificadas

Also Published As

Publication number Publication date
CA3120118A1 (en) 2020-05-22
EP3880238A1 (en) 2021-09-22
JP2022513062A (ja) 2022-02-07
US20220008465A1 (en) 2022-01-13
WO2020102770A1 (en) 2020-05-22
CN113271963A (zh) 2021-08-17
AU2019381827A1 (en) 2021-06-10
IL283218A (en) 2021-06-30
BR112021009420A2 (pt) 2021-11-23
MX2021005734A (es) 2021-09-10
SG11202105084VA (en) 2021-06-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11944647B2 (en) Articles of manufacture and methods for treatment using adoptive cell therapy
US20220096651A1 (en) Antibodies and chimeric antigen receptors specific for receptor tyrosine kinase like orphan receptor 1 (ror1)
EP3886875B1 (en) Methods for treatment using adoptive cell therapy
US20210393689A1 (en) Chimeric antigen receptors specific for g protein-coupled receptor class c group 5 member d (gprc5d)
JP6765966B2 (ja) 抗ｃｄ１９キメラ抗原受容体を使用する癌の処置
JP2022512917A (ja) Ｂ細胞成熟抗原に特異的なキメラ抗原受容体を使用する処置方法
WO2019152743A1 (en) Combination therapy using adoptive cell therapy and checkpoint inhibitor
KR20210104713A (ko) Ｂ 세포 악성 종양 치료를 위한 조작된 ｔ 세포 투약 방법
RU2795984C2 (ru) Изделия и способы для лечения с использованием адоптивной клеточной терапии
US20230149462A1 (en) Methods and uses related to cell therapy engineered with a chimeric antigen receptor targeting b-cell maturation antigen
WO2023250400A1 (en) Treatment methods for second line therapy of cd19-targeted car t cells