KR20210090203A - 또 다른 약리학적 활성제와 조합된 지속 작용성 인터류킨-15 수용체 효현제 - Google Patents

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다카히로 미야자키
루이 마다카무틸
사울 키비메
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넥타르 테라퓨틱스
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Abstract

본 개시내용은 (a) 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 및 (b) 종양 항원을 표적화하는 하나 이상의 항체(mAb)를 포함하는 조합 치료, 조성물 및 키트, 및 관련 제조 및 사용 방법, 예를 들어, 지속적인 면역 활성화 및/또는 항-종양 활성을 제공하기에 효과적인 요법에 반응하는 병태의 치료에서의 사용 방법을 제공한다.

Description

또 다른 약리학적 활성제와 조합된 지속 작용성 인터류킨-15 수용체 효현제
관련 출원의 상호 참조
본 출원은 미국 가특허출원 일련 번호 62/758,344(2018년 11월 9일 출원); 62/789,924(2019년 1월 8일 출원); 62/818,003(2019년 3월 13일 출원); 62/825,437(2019년 3월 28일 출원); 62/843,036(2019년 5월 3일 출원); 62/848,372(2019년 5월 15일 출원); 및 62/924,015(2019년 10월 21일 출원)에 대해 35 U.S.C. §119(e) 하에 우선권을 주장하며, 이들의 개시내용은 각각 본원에 참조로 포함된다.
분야
본 개시내용은 (특히) 지속 작용성 인터류킨-15("IL-15") 수용체 효현제 및 또 다른 약리학적 활성제, 즉, 항체, 예컨대, 모노클로날 항체를 포함하는 치료 조합물 및 조성물, 및 관련 사용 방법, 예를 들어, 지속적인 면역 활성화 및 항-종양 활성을 제공하기에 효과적인 요법에 반응하는 병태의 치료에서의 사용 방법에 관한 것이다.
인터루킨-15("IL-15")는 Grabstein 외 다수에 의해 처음 보고된 다면 발현성 사이토카인이다(Grabstein et al. (1994) Science 264:965-968). 162-아미노산 전구체로서 분비된 인간 IL-15는 29개 아미노산 리더 서열과 19개 아미노산 전서열을 함유하므로; 성숙한 단백질은 그 길이가 114개 아미노산이다. 사이토카인의 4개 α-나선체 다발군에 속하는 IL-15는 이형삼량체 수용체에 결합하는데, 여기서 독특한 α 서브유닛(IL-15Rα)은 IL-15에 수용체 특이성을 부여하고, 이 수용체의 β 및 γ 서브유닛은 기타 다른 사이토카인 수용체 1개 이상과 공통점을 공유한다. Giri et al. (1995) EMBO J. 14:3654-3663.
사이토카인으로서 IL-15는 선천적 면역계와 적응 면역계 둘 다에 영향을 준다(DiSabitino et al. (2011) Cytokine Growth Factor Rev. 22:19-33). (일반적으로 숙주를 외래 침입 물질로부터 방어하는) 선천적 면역계에 대하여, IL-15는, 다른 특성을 갖는 것 외에도, 자연 살해 세포("NK 세포") 및 자연 살해-T 세포("NK-T 세포")의 발달을 야기하고 이들 세포의 생존을 유지한다. 상기 IL-15의 선천적 면역계에서의 역할과 마찬가지로 NK 세포는 침입하는 병원체를 특이적으로 공격하지 않고; 상기 NK 세포는 오히려 면역 약화된 숙주 세포(예를 들어, 종양 세포 또는 바이러스 감염 세포)를 파괴한다. NK-T 세포는 면역 반응의 일반적인 활성화를 초래하는 면역 조절성 사이토카인, 특히 인터페론-γ를 생성한다.
(숙주가 특정 병원체와 처음 접촉하고 나서, 추후 이 숙주를 특이적 외래 침입 물질로부터 방어하는) 적응 면역계에 대하여, IL-15는 면역 조절성 사이토카인 생성 헬퍼 T 세포의 유지에 필요하다. 중요한 점은, IL-15는 또한 신속하게 증식하는 능력을 가지는,"항원 경험이 있는(antigen-experienced)" 기억 T 세포의 장기간 유지를 지지함으로 말미암아, 숙주를 침입한 특정 외래 병원체에 다시 노출되었을 때 더 신속하고 더 강력한 면역 반응을 일으킨다는 점이다.
마지막으로 선천적 및 적응 면역계 둘 모두 내에서의 IL-15의 특이적인 역할들에도 불구하고, 상기 IL-15는 상기 면역계 카테고리 둘 다에 걸쳐 상당하면서도 광범위한 효과들을 나타낸다. 특히 IL-15는 상기 면역계 카테고리 둘 다에 연관된 다수의 세포류(수지상 세포, 호중구, 호산구, 비만 세포, CD4+ T 세포 및 B 세포를 포함함)의 세포자살(또는 세포 사멸)을 억제 또는 감소시킨다. IL-15-매개 반응은 또한 CD8+ T 세포 및 장관 상피내 림프구의 발달, 기능, 및 생존에 역할을 하는 것으로 밝혀졌다.
IL-15는 숙주에 대해 외래의 것(또는 "비자기인 것")으로서 나타나는 세포들에 대항하여 싸울 수 있는 면역계에서 다수의 세포들의 증식 및 유지를 자극하므로, 상기 IL-15는 암을 앓고 있는 개체들의 치료에 사용될 것이 제안된 바 있다(Steel et al. (2012) Trends Pharmacol. Sci. 33(1):35-41). 예를 들어, IL-15 기반 작동제는 골수종을 치료하는 것으로 제안되었다(Wong et al. (2013) OncoImmunology 2(11), e26442:1-3). 덧붙여, IL-15 약물요법은 바이러스 감염이 발생한 개체들, 예를 들어 HIV 감염이 발생한 개체들을 치료하기 위한 것으로 제안된 바 있다.
IL-15 아미노 기에 안정하게 공유 결합된 적어도 하나의 수용성 중합체(예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜) 모이어티를 포함하는 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제는 IL-15 및 다른 IL-15 수용체 효현제와 비교하여, 여러 개선들 중에서도 특히, 예를 들어, 강력한 면역 자극 효과, 낮은 전신 독성, 안정성 및/또는 개선된 약동학, 개선된 치료 효과와 같은 개선된 특징 및 생체내 프로파일을 제공하는 것으로 기재되어 있다(그 전문이 본원에 참조로 포함되는 PCT 출원 번호 PCT/US2018/032817).
둘 모두의 혈액 악성종양뿐만 아니라 충실성 종양을 포함하여 특정 암을 치료하기 위한 모노클로날 항체(mAb)의 생성 및 사용은 확립되어 있다(Scott et al., 2012, Cancer Immunity, vol. 12, p. 14). 종양-관련 mAb의 작용 기전은 다음 중 하나 이상을 포함한다: 종양 세포에 대한 직접 작용, 면역-매개 작용, 및 맥관 및 기질 절삭. mAb에 의해 표적화된 종양-관련 항원은 분화 클러스터(CD) 항원(예를 들어, CD20, CD30, CD33, CD52), 당단백질(예를 들어, EpCAM, CEA, gpA33, 뮤신 등), 당지질(예를 들어, 강글리오시드, 예컨대, GD2, GD3 및 GM2), 맥관 표적(예를 들어, VEGF, VEGFR), 성장 인자(예를 들어, ErbB1/EGFR, ErbB2/HER2, ErbB3, c-MET, IGF1R), 및 기질 및 세포외 기질 항원(예를 들어, FAP, 테나신(tenascin))을 포함한다. 다수의 mAb가 종양학에서 사용하기 위해 미국 FDA의 승인을 받았지만(예를 들어, 리툭시맙(rituximab), 오파투무맙(ofatumumab), ZEVALIN®, BEXXAR®, 젬투주맙 오조가미신(gemtuzumab ozogamicin), 브렌툭시맙 베도틴(brentuximab vedotin), 세툭시맙(cetuximab), 및 파니투무맙(panitumumab)), 특정 유형의 암 세포는 모노클로날 항체-기반 요법에 다른 것들보다 더 취약하다.
그러나, 상기 접근법에도 불구하고, 개선된 항암 면역요법에 대한 필요성이 남아있다. 본 개시내용은 특히, 당업계에 의해 새롭고 전혀 제안된 바 없는 것으로 여겨지는, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 및 종양 항원에 대해 유도되는 적어도 하나의 mAb를 포함하는 조합 요법(하기에 보다 상세히 기재되는 많은 유리한 특징을 갖는 조합), 뿐만 아니라 이러한 조합을 포함하는 조성물 및 키트, 뿐만 아니라 관련된 제조 및 사용 방법을 제공함으로써 이들 및 다른 필요성을 해결한다.
제1 양태에서는, 암을 갖는 대상체를 치료하는 방법이 본원에서 제공된다. 특히, 방법은 대상체에게 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 및 (b) 모노클로날 항체, 예컨대, 종양 세포를 표적화하는, 즉, 종양 세포에 결합하는 모노클로날 항체를 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 단계 (a)와 단계 (b)는 동시에 또는 순차적으로 그리고 임의의 순서로 수행된다. 일부 구현예에서, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제는 하기 구조를 갖거나, 그의 약학적으로 허용 가능한 염 형태이고, 하기 구조는 또한 [CH3O(CH2CH2O)n(CH2)mC(O)NH]n'-IL-15로서 표시될 수 있다:
[화학식 I]
Figure pct00001
(여기서, IL-15는 인터류킨-15 모이어티이고, (n)은 약 150 내지 약 3,000의 정수이고, (m)은 2, 3, 4, 및 5로부터 선택된 정수이고, (n')는 1이고, ~NH~는 IL-15 모이어티의 아미노 기를 나타냄). 일부 특정 구현예에서, 화학식 I에서 (m)은 2 또는 3이다. 바람직한 구현예에서, 화학식 I에서 (m)은 3이다. 일부 특정 구현예에서, 화학식 I에서 (n)은 약 227의 평균 값, 또는 약 340의 평균 값, 또는 약 454의 평균 값, 또는 약 681의 평균 값, 또는 약 909의 평균 값을 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, (n)은 약 909의 값을 갖는다.
일부 구현예에서, 항체는 인단백질, 막관통 단백질, 당단백질, 당지질, 및 성장 인자로부터 선택된 종양 항원에 특이적으로 결합하는 항체이다.
방법의 추가의 구현예에서, 대상체는 충실성 암을 갖는다. 일부 구현예에서, 충실성 암은 유방암, 난소암, 결장암, 결장직장암, 위암, 악성 흑색종, 다발성 골수종, 간암, 림프종, 소세포 폐암, 비-소세포 폐암, 갑상선암, 신장암, 담관암, 뇌암, 자궁경부암, 상악동암, 방광암, 식도암, 호지킨병 및 부신피질암(임의의 이들의 전이성 형태 포함)으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 다른 구현예에서, 대상체는 림프종 또는 백혈병을 갖는다.
일부 추가의 구현예에서, 대상체는 다발성 골수종을 갖는다.
방법의 일부 구현예에서, 단계 (a)는 단계 (b) 전에 수행된다. 다른 구현예에서, 단계 (b)는 단계 (a) 전에 수행된다. 또 다른 추가의 구현예에서, 단계 (a)와 단계 (b)는 동시에 또는 실질적으로 동시에 수행된다. 방법은 추가로 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 및 모노클로날 항체 중 어느 하나 또는 둘 모두의 하나 이상의 추가 투여 사이클을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 투여는, 적합한 동물 모델에서 측정하는 경우, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제가 단일 작용제로서 투여될 때 관찰되는 정도보다 큰 정도로 NK 활성화 및 증식을 자극하는 데 효과적이다. 일부 추가적인 구현예에서, 투여는, 적합한 동물 모델에서 측정하는 경우, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제가 단일 작용제로서 투여될 때 관찰되는 정도보다 큰 정도로 CD8 T-세포 생존 및 기억 형성을 뒷받침하는 데 효과적이다. 일부 추가의 구현예에서, 투여는, 적합한 동물 모델(이의 예는 본원에 제공됨)에서 측정하는 경우, 단일 작용제로서(즉, 단일 요법으로서) 투여되는 지속 작용성 수용체 효현제의 투여 시 관찰되는 것보다 큰, 그리고 단일 작용제로서 모노클로날 항체의 투여 시 관찰되는 것보다 큰, 종양 세포 수의 감소를 야기하는 데 효과적이다. 일부 관련 구현예에서, 투여는 단일 작용제로서 등량의 지속 작용성 수용체 효현제 투여와 비교할 때 대상체에서 종양 세포 수의 3배 이상 감소, 또는 보다 바람직하게는 5배 이상 감소, 또는 보다 바람직하게는 7배 이상 감소를 야기한다. 일부 추가의 구현예에서, 투여는 NK 세포의 증식을 유도하고(즉, NK 세포의 수를 증가시키고), 예를 들어, 골수 조직에서 이들의 종양 세포 사멸 능력을 활성화시키는 데 효과적이다.
일부 구현예에서, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제는 피하 투여된다. 추가적인 구현예에서, 모노클로날 항체는 정맥내 투여된다.
하나 이상의 구현예에서, 항체는 항체-의존적 세포 독성(ADCC, 항체-의존적 세포-매개 세포독성으로도 지칭됨) 작용 기전을 이용하는 표적화된 모노클로날 항체이다.
일부 구현예에서, 모노클로날 항체는 항-CD19 항체, 항-CD20 항체, 및 항-CD38 항체로부터 선택된다. 추가의 구현예에서, 당단백질에 특이적으로 결합하는 모노클로날 항체는 항-SLAMF7 항체, 항-EpCAM 항체, 항-gpA3 항체 3, 및 항-FBP 항체로부터 선택된다. 추가적인 구현예에서, 성장 인자에 특이적으로 결합하는 모노클로날 항체는 항-VEGF 항체, 항-VEGFR 항체, 및 항-EGFR 항체로부터 선택된다. 또 다른 일부 추가적인 구현예에서, 항체는 항-BCMA 항체이다. 일부 추가적인 구현예에서, 항체는 다발성 골수종-표적화된 항체이다.
제2 양태에서는, 암과 같은 병태를 치료하는 데 사용하기 위한 치료 조합물이 본원에 제공된다. 조합물은 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 및 본원에 기재된 바와 같은 모노클로날 항체를 포함하나 이에 제한되지 않는, 종양 세포를 표적화하는, 즉, 종양 세포에 결합하는 모노클로날 항체와 같은 모노클로날 항체를 포함한다.
일부 관련 및 보다 구체적인 구현예에서, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제는 하기 구조; 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 형태를 갖는다:
[화학식 I]
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(여기서, IL-15는 인터류킨-15 모이어티이고, (n)은 약 150 내지 약 3,000의 정수이고; (m)은 2, 3, 4, 및 5로부터 선택된 정수이고, (n')은 1이고, ~NH~은 IL-15 모이어티의 아미노 기를 나타냄). 또 다른 일부 추가적인 구현예에서, 모노클로날 항체는 인단백질, 막관통 단백질, 당단백질, 당지질, 및 성장 인자로부터 선택된 종양 항원에 특이적으로 결합하는 항체이다. 일부 구현예에서, 화학식 I에서 (m)은 2 또는 3이다. 일부 특정 구현예에서, 화학식 I에서 (m)은 3이다. 일부 추가의 구현예에서, 화학식 I에서 (n)은 약 227, 또는 약 340, 또는 약 454, 또는 약 681, 또는 약 909의 값을 갖는다. 하나 이상의 구현예에서, (n)은 약 909의 값을 갖는다.
제3 양태에서는, 키트가 본원에 제공된다. 구현예들에서, 키트는 사용 설명서를 첨부하여 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 및 본원에 기재된 바와 같은 모노클로날 항체의 치료 조합물을 포함하고, 여기서 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 및 모노클로날 항체는 각각 하나 이상의 개별 단위 투여형에 함유된다. 키트 및 치료 조합물은, 예를 들어, 암이 있는 대상체를 치료하는 데 유용하다.
추가의 양태 및 구현예가 하기 설명 및 청구범위에 기재된다. 본원에 기재된 바와 같은 구현예는 본원에 기재된 각각의 양태에 동일하게 적용하고자 의도된 것이며, 다르게 지시되지 않는다면, 단일로 그리고 적용 가능한 조합 둘 모두로 간주되어야 한다.
도 1은, 12.9 kDa의 분자량을 갖는, 115개 아미노산을 함유하는 단일, 비-글리코실화된 폴리펩티드 사슬인, E. coli로부터의 예시적 재조합 인간 IL-15의 아미노산 서열(서열번호 1)을 제공한다.
도 2는, 실시예 1에 상세히 기재된 바와 같은, Daudi B 림프종 세포가 접종되고 다음으로 치료된 마우스의 생존 퍼센트를 나타내는 그래프이다: (i) 동형 대조, (ii) 40 mg/kg의 리툭시맙, (iii) 0.3 mg/kg의 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제, 또는 (iv) 40 mg/kg의 리툭시맙과 0.3 mg/kg의 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제의 조합.
도 3은, 실시예 2에 기재된 바와 같은, (iv) 비치료 대조군과 비교하여, Daudi B 세포가 접종된 마우스의 다음으로의 치료 후 골수 조직에서 NK 세포 수를 나타내는 그래프이다: (i) 다라투무맙(0.5 mg/kg IP, Daudi 세포 접종 후 14일차) 및 2회 용량의 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제, 즉, 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15(0.3 mg/kg SC, 접종 후 14일차 및 21일차에 각각 1회 용량), (ii) 단일 작용제 다라투무맙(0.5 mg/kg IP, Daudi 세포 접종 후 14일차), (iii) 단일 작용제 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15(0.3 mg/kg SC, 접종 후 14일차 및 21일차).
도 4는, 실시예 2에 기재된 바와 같은, (iv) 비치료 대조군과 비교하여, Daudi B 세포가 접종된 마우스의 다음으로의 치료 후 골수 조직에서 Daudi B 세포 수를 나타내는 그래프이다: (i) 다라투무맙(0.5 mg/kg IP, Daudi 세포 접종 후 14일차) 및 2회 용량의 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15(0.3 mg/kg SC, 접종 후 14일차 및 21일차에 각각 1회 용량), (ii) 단일 작용제 다라투무맙(0.5 mg/kg IP, Daudi 세포 접종 후 14일차), (iii) 단일 작용제 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15(0.3 mg/kg SC, 접종 후 14일차 및 21일차).
도 5는, 실시예 3에 상세히 기재된 바와 같은, Daudi B 세포 림프종 세포가 접종되고 이어서 다음으로 치료된 마우스의 생존 퍼센트를 나타내는 그래프이다: (i) 동형 대조, (ii) 0.5 mg/kg IP의 다라투무맙, (iii) 0.3 mg/kg SC로의 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제, 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15, 또는 (iv) 0.3 mg/kg의 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제와 0.5 mg/kg, SC로의 다라투무맙의 조합.
도 6은, 실시예 2에 상세히 기재된 바와 같은, (iv) 비치료 대조군과 비교하여, Daudi B 세포가 접종된 마우스의 다음으로의 치료 후 골수 NK 세포에서 그랜자임 B 유도를 나타내는 그래프이다: (i) 다라투무맙(0.5 mg/kg IP, Daudi 세포 접종 후 14일차) 및 2회 용량의 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15(0.3 mg/kg SC, 접종 후 14일차 및 21일차에 각각 1회 용량), (ii) 단일 작용제 다라투무맙(0.5 mg/kg IP, Daudi 세포 접종 후 14일차), (iii) 단일 작용제 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15(0.3 mg/kg SC, 접종 후 14일차 및 21일차).
도 7a 및 도 7b는 실시예 4에 상세히 기재된 바와 같은, (iv) 비치료 대조군 또는 (v) 동형 대조(0.5 mg/kg)와 비교하여, Daudi B 세포가 접종된 마우스의 다음으로의 치료 후 세포 표면에 대한 NKG2A(도 7a) 또는 NKG2D(도 7b)를 발현하는 골수 격실에서 NK 세포의 분획을 나타내는 그래프이다: (i) 다라투무맙(0.5 mg/kg IP, Daudi 세포 접종 후 14일차) 및 2회 용량의 컨쥬게이트 1(0.3 mg/kg 또는 0.03 mg/kg SC, 접종 후 14일차 및 21일차에 각각 1회 용량), (ii) 단일 작용제 다라투무맙(0.5 mg/kg IP, Daudi 세포 접종 후 14일차), (iii) 단일 작용제 화합물 1(0.3 mg/kg SC, 접종 후 14일차 및 21일차).
도 8a 내지 도 8d는, 실시예 5에 상세히 기재된 바와 같은, (i) 화합물 1 단독(도 8c), (ii) hIgG 단독(도 8b), (iii) 화합물 1 + hIgG(도 8d), 또는 (iv) 비치료 대조(도 8a)로의 인간 말초 혈액 단핵 세포(PBMC) 제조물 중의 인간 NK 세포의 %증식을 나타내는 히스토그램이다.
도 9a는, 실시예 6에 상세히 기재된 바와 같은, (i) hIgG 코팅 플레이트, (ii) 화합물 1(1 μg/ml), (iii) hIgG 코팅 플레이트 + 화합물 1(1 μg/ml), 또는 (ii) NK 세포 활성화를 나타내는 대조와 밤새 배양된 PBMC 제조물 중의 CD56+ NK 세포의 표면에서 CD69 검출 항체에 대한 평균 형광 강도(MFI) 신호를 나타내는 그래프이다.
도 9b는, 실시예 6에 상세히 기재된 바와 같은, (i) hIgG 코팅 플레이트, (ii) 화합물 1(1 μg/ml), (iii) hIgG 코팅 플레이트 + 화합물 1(1 μg/ml), 또는 (ii) NK 세포 활성화를 나타내는 대조와 밤새 배양된 PBMC 제조물 중의 CD56+ NK 세포의 표면에서 CD107a 검출 항체에 대한 평균 형광 강도(MFI) 신호를 나타내는 그래프이다.
도 9c는, 실시예 6에 상세히 기재된 바와 같은, (i) hIgG 코팅 플레이트, (ii) 화합물 1(1 μg/ml), hIgG 코팅 플레이트 + 화합물 1(1 μg/ml), 또는 (ii) 대조에 대한 노출 후 인간 PBMC에서 그랜자임 B 유도를 나타내는 그래프이다. 그래프는 각각 네 가지 처리에 대한 분비된 그랜자임 B 농도(pg/ml)를 나타낸 것이다.
도 10a는, 실시예 7에 상세히 기재된 바와 같은, IL-15 또는 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제(모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15)와의 인큐베이션 후 KHYG-1 세포 중의 pSTAT5 양성 퍼센트를 나타내는 그래프이다. 도 10b는, 실시예 7에 상세히 기재된 바와 같은, IL-15 또는 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제(모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15)와의 인큐베이션 후 KHYG-1 세포의 % 최대 증식의 그래프이다.
도 11은, 실시예 8에 상세히 기재된 바와 같은, IL-15 또는 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제(모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15)와의 인큐베이션 후 CD56+ 인간 NK 세포의 % 최대 증식을 나타내는 그래프이다.
도 12는, 실시예 9에 상세히 기재된 바와 같은, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제(모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15) (+)로의 자극 또는 비치료 (-) 후 다라투무맙 (+)로 예비-코팅된 인간 다발성 골수종 세포에 대한 %7-AAD+ 표적 세포를 나타내는 그래프이다.
도 13a는, 실시예 10에 상세히 기재된 바와 같은, (iv) 비치료 대조군 또는 (v) 동형 대조(0.5 mg/kg)와 비교하여, Daudi B 세포가 접종된 마우스의 다음으로의 치료 후 세포 표면에서 CD16(도 13a)을 발현하는 골수 격실에서 NK 세포의 분획(전체 NK 세포 중 CD16을 발현하는 세포의 %)을 나타내는 그래프이다: (i) 다라투무맙(0.5 mg/kg IP, Daudi 세포 접종 후 14일차) 및 2회 용량의 컨쥬게이트 1(0.3 mg/kg 또는 0.03 mg/kg SC, 접종 후 14일차 및 21일차에 각각 1회 용량), (ii) 단일 작용제 다라투무맙(0.5 mg/kg IP, Daudi 세포 접종 후 14일차), (iii) 단일 작용제 화합물 1(0.3 mg/kg SC, 접종 후 14일차 및 21일차).
도 13b는, 실시예 10에 상세히 기재된 바와 같은, (iv) 비치료 대조군 또는 (v) 동형 대조(0.5 mg/kg)와 비교하여, Daudi B 세포가 접종된 마우스의 다음으로의 치료 후 평균 형광 강도(MFI) 신호에 의해 측정된 바와 같은 CD16+ 골수 NK 세포에 대한 세포 당 기준으로 CD16 발현 변화(화합물 1 치료군에서 증가)를 나타내는 그래프이다: (i) 다라투무맙(0.5 mg/kg IP, Daudi 세포 접종 후 14일차) 및 2회 용량의 컨쥬게이트 1(0.3 mg/kg 또는 0.03 mg/kg SC, 접종 후 14일차 및 21일차에 각각 1회 용량), (ii) 단일 작용제 다라투무맙(0.5 mg/kg IP, Daudi 세포 접종 후 14일차), (iii) 단일 작용제 화합물 1(0.3 mg/kg SC, 접종 후 14일차 및 21일차).
도 14는, 실시예 11에 상세히 기재된 바와 같은, (iv) 비치료 대조군 또는 (v) 동형 대조(0.5 mg/kg)와 비교하여, Daudi B 세포가 접종된 마우스의 다음으로의 치료 후 평균 형광 강도(MFI) 신호에 의해 측정된 바와 같은 개별 골수 NK 세포에서 그랜자임 B 발현을 나타내는 그래프이다: (i) 다라투무맙(0.5 mg/kg IP, Daudi 세포 접종 후 14일차) 및 2회 용량의 화합물 1(0.3 mg/kg 또는 0.03 mg/kg SC, 접종 후 14일차 및 21일차에 각각 1회 용량), (ii) 단일 작용제 다라투무맙(0.5 mg/kg IP, Daudi 세포 접종 후 14일차), (iii) 단일 작용제 화합물 1(0.3 mg/kg SC, 접종 후 14일차 및 21일차).
도 15a 및 도 15b는, 실시예 12에 상세히 기재된 바와 같은, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제(모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15) (+)로의 자극 또는 비치료 (-) 후 다라투무맙 (+)(도 15a) 또는 리툭시맙 (+)(도 15b)로 예비-코팅된 인간 다발성 골수종 세포에 대한 %7-AAD+ 표적 세포를 나타내는 그래프이다.
도 16은, 실시예 13에 상세히 기재된 바와 같은, Daudi B 세포 림프종 세포가 접종되고 이어서 다음으로 치료된 SCID 또는 SCID 베이지 마우스의 생존 퍼센트를 나타내는 그래프이다: (i) SCID에 대한 비치료 대조(□), (ii) SCID 베이지 마우스에 대한 비치료 대조(○), (iii) SCID 마우스에 대한 0.3 mg/kg의 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제와 0.5 mg/kg, SC로의 다라투무맙의 조합(■); 및 (iv) SCID 베이지 마우스에 대한 0.3 mg/kg의 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제와 0.5 mg/kg, SC로의 다라투무맙의 조합(●).
도 17a는, 실시예 14에 상세히 기재된 바와 같은, (iv) 비치료 대조군(●)과 비교하여, Daudi B 세포가 접종된 마우스의 다음으로의 치료 후 골수 조직에서 Daudi 세포 수를 나타내는 그래프이다: (i) 고용량 다라투무맙(5 mg/kg IP, Daudi 세포 접종 후 14일차) 및 2회 저용량의 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제, 즉, 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15(화합물 1)(0.03 mg/kg IV, 접종 후 14일차 및 21일차 후 각각 1회)(◆), (ii) 단일 작용제 고용량 다라투무맙(5 mg/kg IP, Daudi 세포 접종 후 14일차)(▼), (iii) 단일 작용제 저용량 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15(화합물 1)(0.03 mg/kg IV, 접종 후 14일차 및 21일차)(▲). 도 17b는, 실시예 14에 상세히 기재된 바와 같은, (iv) 비치료 대조군(●)과 비교하여, Daudi B 세포가 접종된 마우스의 다음으로의 치료 후 골수 조직에서 Daudi 세포 수를 나타내는 그래프이다: (i) 저용량 다라투무맙(0.05 mg/kg IP, Daudi 세포 접종 후 14일차) 및 2회 고용량의 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제, 즉, 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15(화합물 1)(0.6 mg/kg IV, 접종 후 14일차 및 21일차 후 각각 1회)(◆), (ii) 단일 작용제 저용량 다라투무맙(0.05 mg/kg IP, Daudi 세포 접종 후 14일차)(▼), (iii) 단일 작용제 고용량 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15(화합물 1)(0.6 mg/kg IV, 접종 후 14일차 및 21일차)(▲).
도 18a는, 실시예 15에 상세히 기재된 바와 같은, 비히클 대조와 비교하여, 피하 HCT-116 결장 결장직장 세포 종양을 보유하는 마우스의 세툭시맙(20 mg/kg, IP) 및 컨쥬게이트 1(0.3 mg/kg IV)로의 치료 후 3일차 또는 5일차에 NK 세포의 종양내 분획을 나타내는 그래프이다.
도 18b는, 실시예 15에 상세히 기재된 바와 같은, 비히클 대조와 비교하여, 피하 HCT-116 종양을 보유하는 마우스의 세툭시맙(20 mg/kg, IP) 및 컨쥬게이트 1(0.3 mg/kg IV)로의 치료 후 3일차 또는 5일차에 종양내 NK 세포 수를 나타내는 그래프이다.
도 18c는, 실시예 15에 상세히 기재된 바와 같은, 비히클 대조와 비교하여, 피하 HCT-116 종양을 보유하는 마우스의 세툭시맙(20 mg/kg, IP) 및 컨쥬게이트 1(0.3 mg/kg IV)로의 치료 후 혈액 또는 종양 세포에서 %Ki67 양성으로 나타낸 바와 같은 NK 세포 증식을 나타내는 그래프이다.
도 18d는, 실시예 15에 상세히 기재된 바와 같은, 비히클 대조와 비교하여, 피하 HCT-116 종양을 보유하는 마우스의 세툭시맙(20 mg/kg, IP) 및 컨쥬게이트 1(0.3 mg/kg IV)로의 치료 후 혈액 또는 종양 세포에서 그랜자임 B 발현(%GzmB+)을 나타내는 그래프이다.
도 18e는, 실시예 15에 상세히 기재된 바와 같은, 비히클 대조와 비교하여, 피하 HCT-116 종양을 보유하는 마우스의 세툭시맙(20 mg/kg, IP) 및 컨쥬게이트 1(0.3 mg/kg IV)로의 치료 후 평균 형광 강도(MFI) 신호에 의해 측정된 바와 같은 NK 세포에서 CD16 세포 표면 발현을 나타내는 그래프이다.
도 18f는, 실시예 15에 상세히 기재된 바와 같은, 비히클 대조와 비교하여, 피하 HCT-116 종양을 보유하는 마우스의 세툭시맙(20 mg/kg, IP) 및 컨쥬게이트 1(0.3 mg/kg IV)로의 치료 후 세포 표면에서 NKG2D를 발현하는 NK 세포의 종양내 분획(%NKG2D+)을 나타내는 그래프이다.
도 19a는, 실시예 16에 상세히 기재된 바와 같은, 비히클 대조와 비교하여, 피하 FaDu 편평 세포 암종 종양을 보유하는 마우스의 세툭시맙(20 mg/kg, IP) 및 컨쥬게이트 1(0.3 mg/kg IV)로의 치료 후 3일차 또는 5일차에 NK 세포의 종양내 분획을 나타내는 그래프이다.
도 19b는, 실시예 16에 상세히 기재된 바와 같은, 비히클 대조와 비교하여, 피하 FaDu 종양을 보유하는 마우스의 세툭시맙(20 mg/kg, IP) 및 컨쥬게이트 1(0.3 mg/kg IV)로의 치료 후 3일차 또는 5일차에 종양내 NK 세포 수를 나타내는 그래프이다.
도 19c는, 실시예 16에 상세히 기재된 바와 같은, 비히클 대조와 비교하여, 피하 FaDu 종양을 보유하는 마우스의 세툭시맙(20 mg/kg, IP) 및 컨쥬게이트 1(0.3 mg/kg IV)로의 치료 후 혈액 또는 종양 세포에서 %Ki67 양성으로 나타낸 바와 같은 NK 세포 증식을 나타내는 그래프이다.
도 19d는, 실시예 16에 상세히 기재된 바와 같은, 비히클 대조와 비교하여, 피하 FaDu 종양을 보유하는 마우스의 세툭시맙(20 mg/kg, IP) 및 컨쥬게이트 1(0.3 mg/kg IV)로의 치료 후 혈액 또는 종양 세포에서 그랜자임 B 발현(%GzmB+)을 나타내는 그래프이다.
도 19e는, 실시예 16에 상세히 기재된 바와 같은, 비히클 대조와 비교하여, 피하 FaDu 종양을 보유하는 마우스의 세툭시맙(20 mg/kg, IP) 및 컨쥬게이트 1(0.3 mg/kg IV)로의 치료 후 평균 형광 강도(MFI) 신호에 의해 측정된 바와 같은 NK 세포에서 CD16 세포 표면 발현을 나타내는 그래프이다.
도 19f는, 실시예 16에 상세히 기재된 바와 같은, 비히클 대조와 비교하여, 피하 FaDu 종양을 보유하는 마우스의 세툭시맙(20 mg/kg, IP) 및 컨쥬게이트 1(0.3 mg/kg IV)로의 치료 후 세포 표면에서 NKG2D를 발현하는 NK 세포의 종양내 분획(%NKG2D+)을 나타내는 그래프이다.
도 20은, 실시예 17에 상세히 기재된 바와 같은, 비히클 대조(●)와 비교하여, H1975 폐 암종 세포가 접종된 마우스의 다음으로의 치료 후 0일차 내지 27일차에 대한 상대 종양 부피를 나타내는 그래프이다: (i) 종양 접종 후 9일차, 12일차, 및 16일차에 세툭시맙(0.25 mg/kg, IP) 투여 및 접종 후 9일차, 16일차 및 23일차에 화합물 1(0.3 mg/kg, IV) 투여(△), (ii) 단일 작용제 세툭시맙(0.25 mg/kg, IP, BIWx3)(▲), (iii) 단일 작용제 화합물 1(0.3 mg/kg, IV, q7dx3)(▼).
도 21a는, 실시예 18에 상세히 기재된 바와 같은, 비히클 대조(●)와 비교하여, HT-29 결장직장 암종 세포가 접종된 마우스의 다음으로의 치료 후 0일차 내지 21일차에 대한 상대 종양 부피를 나타내는 그래프이다: (i) 세툭시맙(40 mg/kg, IP, BIWx3) 및 화합물 1(0.3 mg/kg, IV, q7dx3)(△), (ii) 단일 작용제 세툭시맙(40 mg/kg, IP, BIWx3)(▲), (iii) 단일 작용제 화합물 1(0.3 mg/kg, IV, q7dx3)(▼).
도 21b는, 실시예 18에 상세히 기재된 바와 같은, 치료 시작 후 0일차 내지 23일차에 비히클 대조(●)(약 150 mm3의 평균 종양 부피)와 비교한, HT-29 결장직장 암종 세포가 접종되고 다음으로 치료된 마우스의 생존 퍼센트로서 종양 성장 지연(TVQT)을 나타내는 그래프이다: (i) 세툭시맙(40 mg/kg, IP, BIWx3) 및 화합물 1(0.3 mg/kg, IV, q7dx3)(▼), (ii) 단일 작용제 세툭시맙(40 mg/kg, IP, BIWx3)(■), (iii) 단일 작용제 화합물 1(0.3 mg/kg, IV, q7dx3)(▲).
도 22a는, 실시예 19에 상세히 기재된 바와 같은, PBS 비히클 대조(OP, BIWx3)(●)와 비교하여, HCT-116 결장직장 암종 세포가 접종된 마우스의 다음으로의 치료 후 0일차 내지 19일차에 대한 상대 종양 부피를 나타내는 그래프이다: (i) 세툭시맙(40 mg/kg, IP, BIWx3) 및 화합물 1(0.3 mg/kg, IV, q7dx3)(△), (ii) 단일 작용제 세툭시맙(40 mg/kg, IP, BIWx3)(▲), (iii) 단일 작용제 화합물 1(0.3 mg/kg, IV, q7dx3)(▼).
도 22b는, 실시예 19에 상세히 기재된 바와 같은, PBS 비히클 대조(IP, BIWx3)(●)와 비교하여, HCT-116 결장직장 암종 세포가 접종되고 다음으로 치료된 마우스의 생존 퍼센트로서 종양 성장 지연(TVQT)을 나타내는 그래프이다: (i) 세툭시맙(40 mg/kg, IP, BIWx3) 및 화합물 1(0.3 mg/kg, IV, q7dx3)(△), (ii) 단일 작용제 세툭시맙(40 mg/kg, IP, BIWx3)(▲), (iii) 단일 작용제 화합물 1(0.3 mg/kg, IV, q7dx3)(▼).
도 23a는, 실시예 20에 상세히 기재된 바와 같은, 세툭시맙 (+) 단독으로 또는 화합물 1 (+)로, 동형 대조 (+)로의 자극, 또는 비치료 (-) 후 예비-코팅된 HCT-116 결장직장 암종 세포에서 %CD45-EpCAM+7-AAD+ 표적 세포를 나타내는 그래프이다.
도 23b는, 실시예 20에 상세히 기재된 바와 같은, 세툭시맙 (+) 단독으로 또는 화합물 1 (+)로, 동형 대조 (+)로의 자극 또는 비치료 (-) 후 예비-코팅된 FaDu 편평 세포 암종 세포(HNSCC)에 대한 %CD45- 7-AAD+ 표적 세포를 나타내는 그래프이다.
도 24는, 실시예 21에 상세히 기재된 바와 같은, 비히클 대조(●)와 비교하여, SKOV-3 난소 선암 세포가 접종된 마우스의 다음으로의 치료 후 0일차 내지 35일차에 대한 상대 종양 부피를 나타내는 그래프이다: (i) 트라스투주맙(13.5 mg/kg, IV, BIWx3) 및 화합물 1(0.3 mg/kg, IV, q7dx3)(△), (ii) 단일 작용제 트라스투주맙(13.5 mg/kg, IV, BIWx3)(▲), (iii) 단일 작용제 화합물 1(0.3 mg/kg, IV, q7dx3)(▼).
도 25는, 실시예 22에 상세히 기재된 바와 같은, 비히클 대조(●)와 비교하여, NCI-N87 위 암종 세포가 접종된 마우스의 다음으로의 치료 후 0일차 내지 35일차에 대한 상대 종양 부피를 나타내는 그래프이다: (i) 트라스투주맙(3/1/1 mg/kg, IV, q7dx3) 및 화합물 1(0.3 mg/kg, IV, q7dx3)(△), (ii) 단일 작용제 트라스투주맙(3/1/1 mg/kg, IV, q7dx3)(▲), (iii) 단일 작용제 화합물 1(0.3 mg/kg, IV, q7dx3)(▼).
본 개시내용의 하나 이상의 양태 또는 구현예를 상세히 기재하기 전에, 제시된 개시내용은 특정 합성 기술, IL-15 모이어티 등으로 제한하려는 것이 아니며, 이에 따라 당업자에 의해 이해되는 바와 같이 달라질 수 있음을 인지하여야 한다.
본 개시내용의 특정 특징을 기재하고 청구함에 있어, 하기 용어가 달리 지시되지 않는 한 하기에 기재된 정의에 따라 사용될 것이다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 단수형("a", "an" 및 "the")은 문맥상 분명하게 다르게 지시하지 않는다면 복수의 지시대상물을 포함한다.
"수용성, 비펩티드 중합체"는 실온에서 물 중에 적어도 35%(중량 기준) 가용성, 바람직하게는 70%(중량 기준) 초과, 및 보다 바람직하게는 95%(중량 기준) 초과 가용성인 중합체를 지칭한다. 전형적으로, "수용성" 중합체의 여과되지 않은 수성 제조물은 여과 후 동일한 용액에 의해 투과된 빛의 양의 적어도 75%, 보다 바람직하게는 적어도 95%를 투과한다. 그러나, 수용성 중합체는 물 중에 적어도 95%(중량 기준) 가용성이거나 물 중에 완전히 가용성인 것이 가장 바람직하다. "비-펩티드성"인 것과 관련하여, 중합체는 아미노산 잔기의 35%(중량 기준) 미만일 때 비-펩티드성이다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "PEG" 또는 "폴리에틸렌 글리콜"은 임의의 수용성 폴리(에틸렌 옥사이드)를 포함하는 것으로 의미한다. 다르게 지시되지 않는다면, "PEG 중합체" 또는 폴리에틸렌 글리콜은, 중합체가, 예를 들어, 컨쥬게이션을 위해 별개의 말단 캡핑 모이어티 또는 작용기를 함유할 수 있지만, 실질적으로 모든(바람직하게는 모든) 단량체 서브유닛이 에틸렌 옥사이드 서브유닛인 것이다. 본 개시에서 사용하기 위한 PEG 중합체는 말단의 산소(들)가, 예를 들어, 합성 변환 동안 대체되었는지의 여부에 좌우하여 두 가지 다음 구조 "-(CH2CH2O)n-" 또는 "-(CH2CH2O)n-1CH2CH2-" 중 하나를 포함할 것이다. 상기 명시된 바와 같이, PEG 중합체에 대해, 변수(n)는 약 3 내지 4000으로 다를 수 있고, 말단기 및 전반적인 PEG의 구조는 다를 수 있다. 그러나, 예시적인 또는 바람직한 PEG-포함 분자는 하나 이상의 특정 PEG 구조 및/또는 링커, 및/또는 분자량 범위를 포함할 수 있다.
PEG와 같은 수용성 중합체의 맥락에서 분자량은 수 평균 분자량 또는 중량 평균 분자량으로서 표현될 수 있다. 다르게 지시되지 않는다면, 본원에서 분자량에 대한 모든 언급은 중량 평균 분자량을 말한다. 수 평균 및 중량 평균의 두 가지 분자량 결정 모두 겔 투과 크로마토그래피 또는 기타 다른 액체 크로마토그래피 기법(예를 들어 겔 여과 크로마토그래피)을 사용하여 측정될 수 있다. 가장 통상적으로 사용되는 것은 겔 투과 크로마토그래피 및 겔 여과 크로마토그래피이다. 분자량을 결정하기 위한 다른 방법은 말단기(end-group) 분석법 또는 수 평균 분자량을 결정하는 총괄적 특성(예를 들어, 어는점 하락, 끓는점 상승, 또는 삼투압)의 측정, 또는 중량 평균 분자량을 결정하는 광 산란 기법, 초원심분리, MALDI TOF, 또는 점도계의 사용을 포함한다. PEG 중합체는 통상적으로 다분산이고(즉, 중합체의 수 평균 분자량 및 중량 평균 분자량은 동등하지 않음), 바람직하게는 약 1.2 미만, 보다 바람직하게는 약 1.15 미만, 보다 더 바람직하게는 약 1.10 미만, 훨씬 더 바람직하게는 약 1.05 미만, 및 가장 바람직하게는 약 1.03 미만의 낮은 다분산 값을 가진다.
"생리학적으로 절단 가능한" 또는 "가수분해 가능한" 또는 "분해 가능한" 결합은 생리학적 조건 하에 물과 반응하는(즉, 가수분해되는) 비교적 불안정한 결합이다. 결합이 물에서 가수분해되는 경향성은 주어진 분자 내의 두 원자를 연결하는 연결의 일반적 유형뿐만 아니라 이들 원자에 결합된 치환체에 따라 달라질 수 있다. 적절한 가수분해적으로 불안정적인 또는 약한 연결은 카르복실레이트 에스테르, 포스페이트 에스테르, 무수물, 아세탈, 케탈, 아실옥시알킬 에테르, 이민, 또는 오르토에스테르, 펩티드, 올리고뉴클레오티드, 티오에스테르, 및 카르보네이트를 포함할 수 있으나 이에 제한되지는 않는다.
공유 "이탈 가능" 연결은, 예를 들어, 인터류킨-15와 같은 활성 모이어티에 공유 결합할 수 있는 폴리에틸렌 글리콜의 맥락에서, 생리학적 조건 하에, 예를 들어 임의의 적합한 메커니즘에 의해, 임상적으로 유용한 속도로, 활성 모이어티로부터 폴리에틸렌 글리콜 중합체를 이탈 또는 탈착시키는 것이며, 이는, 예를 들어, 그리고 비제한적으로, 가수분해 가능한 결합 및 효소적으로 분해 가능한 연결을 포함한다.
"효소적으로 분해 가능한 연결"은 하나 이상의 효소에 의해 분해되는 연결을 의미한다.
"안정적" 연결 또는 결합은 물 중에서 실질적으로 안정적인, 다시 말해서, 생리학적 조건 하에 연장된 기간에 걸쳐 임의의 감지 가능한 정도로 가수분해에 놓이지 않는 화학 결합을 지칭한다. 가수분해적으로 안정적인 연결의 예는 일반적으로 하기를 포함하나 이에 제한되지는 않는다: 탄소-탄소 결합(예를 들어 지방족 사슬에서), 에테르, 아미드, 아민 등. 일반적으로, 안정적 연결은 생리학적 조건 하에 1일 당 약 1 내지 2% 미만의 가수분해 속도를 나타내는 것이다. 대표적 화학 결합의 가수분해 속도는 대부분의 표준 화학 교과서에서 찾아볼 수 있다.
"실질적으로" 또는 "본질적으로"는, 거의 전체적으로 또는 완전히, 예를 들어, 주어진 양의 95% 이상을 의미한다.
유사하게, 본원에서 사용되는 바와 같은 "약" 또는 "대략"은 주어진 양의 플러스 또는 마이너스 5% 이내를 의미한다.
"선택적인" 또는 "선택적으로"는, 후속 기재되는 상황이 일어날 수 있으나 반드시 일어나야 하는 것은 아님을 의미하며, 따라서 이 기재는 상황이 일어나는 경우 및 그렇지 않은 경우를 포함한다.
"약학적으로 허용 가능한 부형제" 또는 "약학적으로 허용 가능한 담체"는 본원에 기재된 바와 같은 조성물 중에 포함될 수 있으며 대상체에게 현저한 불리한 독성 효과를 일으키지 않는 성분을 지칭한다.
어구 "약학적 유효량" 및 "약리학상 유효량" 및 "치료 유효량" 및 "생리학상 유효량"은 본원에서 상호교환 가능하게 사용되며, 요망되는 생물학적 또는 의학적 반응을 생성하기 위한 혈류 또는 표적 세포 내의 물질의 요망되는 수준을 제공하기 위해 필요한 본원에서 제공되는 바와 같은 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제의 양 또는 본원에 기재된 바와 같은 모노클로날 항체의 양을 지칭한다. 예를 들어, 이러한 반응은 표적 암 세포를 파괴하고/하거나 대상체에서의 암의 진행을 지연 및/또는 저지시키고/시키거나 환자의 NK 세포의 수를 증가시키는 것일 수 있다. 이 용어는 또한 표적 세포에서의 특정 반응을 유도하는 용량에 적용된다. 정확한 양은, 예를 들어, 치료되는 특정 병태, 의도된 환자 집단, 개개의 환자 고려사항, 투여되는 치료 조성물 및 특정 조합물의 성분 및 물리적 특징 등과 같은 수많은 요인에 따라 달라질 것이고, 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "IL-15 모이어티"는 인간 IL-15 활성을 가지는 펩티드 또는 단백질 모이어티를 지칭한다. 덧붙여, 용어 "IL-15 모이어티"는 접합 이전의 IL-15 모이어티와 접합 후의 IL-15 모이어티 잔기 둘 다를 포함한다. 하기에서 보다 상세히 설명될 바와 같이, 당업자는 임의의 주어진 모이어티가 IL-15 활성을 가지는지 여부를 결정할 수 있다. 서열번호 1 내지 3 중 어느 하나에 상응하는 아미노산 서열을 포함하는 단백질은 IL-15 모이어티일 뿐만 아니라, 상기 서열들에 실질적으로 상동성인 임의의 단백질 또는 폴리펩티드이다. 본원에 사용된 바와 같이 용어 "IL-15 모이어티"는, 예를 들어 부위 지정 돌연변이 유발법 또는 우발적 통과 돌연변이(accidentally through mutation)에 의해 고의적으로 변형된 펩티드 및 단백질을 포함한다. 이러한 용어는 또한 1개 내지 6개의 부가 글리코실화 부위를 가지는 유사체, 펩티드 또는 단백질의 카복시 말단에 적어도 하나의 부가 아미노산(여기서, 부가 아미노산(들)은 적어도 하나의 글리코실화 부위를 포함함)을 가지는 유사체, 그리고 적어도 하나의 글리코실화 부위를 포함하는 아미노산 서열을 가지는 유사체를 포함한다. 상기 용어는 자연적으로, 재조합에 의해, 및 합성으로 생성되는 IL-15 모이어티를 포함한다. IL-15 모이어티는 당업계에 공지된 임의의 적합한 방법에 의해 생성될 수 있다. 구현예들에서, IL-15 모이어티는 E. coli 또는 중국 햄스터 난소(CHO) 발현 시스템에서 재조합에 의해 생성된다. 본원에 기재된 바와 같은 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제에 대한 언급은 그의 약제학적으로 허용 가능한 염 형태를 포함하는 것으로 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "항체"는 넓은 의미로 의미되며, 면역글로불린(Ig) 슈퍼패밀리에 속하는 당단백질을 포함한다. 항체는, 항원(예를 들어, 종양 항원)에 특이적으로 결합하는, 폴리클로날 항체, 모노클로날 항체(예를 들어, 뮤린, 인간, 인간-적합, 인간화 및 키메라), 항체 단편, 및 단쇄 항체를 포함하는 것으로 의도된다. 단편, 항원-결합(Fab) 영역은 각각의 중쇄 및 경쇄로부터 불변 도메인 및 적어도 하나의 가변 도메인을 포함한다. 본원에 기재된 바와 같은 항원은 적어도 작용 기전으로서 항체 의존적 세포 독성(ADCC)을 갖는다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "모노클로날 항체"(mAb)는, 항체 분자가, 소수량으로 존재할 수 있는 자연 발생 돌연변이를 제외하고, 본질적으로 동일한 1차 서열을 갖도록 실질적으로 균질한 분자의 집단으로부터 얻어진 비-자연 발생 항체 분자를 지칭한다. 모노클로날 항체는 단일 결합 부위 또는 특정 에피토프에 고도로 특이적이다. 모노클로날 항체는 단리된 항체의 일 예이다. 모노클로날 항체는, 이로 한정되지 않지만, 하이브리도마 배양 기술, 재조합 방법, 및 유전자이식 방법을 포함하는 당업계에 공지된 바와 같은 임의의 수단에 의해 생성될 수 있다.
항체의 표적 결합 서열은, 특히, 표적에 대한 친화성을 향상시키도록, 표적-결합 서열을 인간화시키도록, 세포 배양에서 이의 생성을 향상시키도록, 생체내에서 이의 면역원성을 감소시키도록, 다중특이적 항체를 형성시키도록 변경되거나 변형될 수 있다는 것이 이해되어야 한다. 이러한 변경된 항체가 특히 본원에서 고려된다.
"단리된" 항체는 이의 자연 환경의 구성요로로부터 확인되고 분리되고/분리되거나 회수된 것이다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "결합 친화성"은 항체의 항원 결합 부위와 이의 결합 파트너(예를 들어, 항원) 간의 상호작용의 강도를 지칭한다. 항체의 이의 항원에 대한 친화성은 일반적으로 친화성 상수(KA), 평형 시 항체-항원 복합체의 양, 또는 평형 해리 상수(KD)에 의해 표현될 수 있다. 친화성은 ELISA, 겔-이동 검정, 풀-다운 검정(pull-down assay), 평형 투석, 분석용 초원심분리, 표면 플라즈몬 공명(SPR), 등온 적정 열량계(ITC), 및 분광 검정을 포함하나 이에 제한되지 않는 당업계에 공지된 바와 같은 임의의 방법에 의해 측정될 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같은 용어 "환자", 또는 "대상체"는, 본원에서 제공되는 바와 같은 화합물 또는 조성물의 투여에 의해 예방되거나 치료될 수 있는 병태를 앓고 있는 또는 병태의 경향이 있는 살아있는 유기체를 지칭한다. 대상체는 포유류(예: 뮤린, 원숭이, 말, 소, 돼지, 개, 고양이 등)를 포함하나, 이에 제한되지는 않고, 바람직하게는 인간이다.
용어 "실질적으로 상동성인" 또는 "실질적으로 동일한"은 특정 주제 서열, 예를 들어 돌연변이 서열이 하나 이상의 치환, 결실 또는 부가에 의해 기준 서열과 차이가 나지만, 그 순 효과가 기준 서열과 주제 서열 간 비유사성의 기능적 불리함을 가져오지 않는 것을 의미한다. 본원의 목적상, 주어진 서열과 95% 초과의 상동성(동일성), 동등한 생물학적 활성(반드시 동등한 생물학적 활성의 강도는 아니더라도), 및 동등한 발현 특징을 갖는 서열은 실질적으로 상동성인(동일한) 것으로 고려된다. 상동성 결정을 위해, 성숙 서열의 절단은 무시되어야 한다. 본원에서의 사용을 위한 예시적 IL-15 폴리펩티드는 서열번호 1과 실질적으로 상동성인 서열을 포함한다. 서열번호 2는, 서열번호 2가 E. coli의 번역을 개시하기 위해 필요한 서열의 개시에서 메티오닌을 갖는 것을 제외하고는 서열번호 1과 거의 동일하다.
용어 "단편"은, 단백질 또는 폴리펩티드, 예를 들어, IL-15 모이어티의 부분 또는 단편의 아미노산 서열을 갖는, 그리고 단백질 또는 폴리펩티드, 예를 들어, IL-15의 생물학적 활성, 또는 실질적으로 생물학적 활성을 갖는 임의의 단백질 또는 폴리펩티드를 의미한다. 단편은 단백분해 분해에 의해 생성된 단백질 또는 폴리펩티드뿐만 아니라, 당업계에서 통상적인 방법에 의한 화학적 합성에 의해 생성된 단백질 또는 폴리펩티드를 포함한다.
펩티드 내의 아미노산 잔기는 다음과 같이 축약된다: 페닐알라닌은 Phe 또는 F이고; 류신은 Leu 또는 L이며; 이소류신은 Ile 또는 I이고; 메티오닌은 Met 또는 M이며; 발린은 Val 또는 V이고; 세린은 Ser 또는 S이며; 프롤린은 Pro 또는 P이고; 트레오닌은 Thr 또는 T이며; 알라닌은 Ala 또는 A이고; 티로신은 Tyr 또는 Y이며; 히스티딘은 His 또는 H이고; 글루타민은 Gln 또는 Q이며; 아스파라긴은 Asn 또는 N이고; 리신은 Lys 또는 K이며; 아스파르트산은 Asp 또는 D이고; 글루탐산은 Glu 또는 E이며; 시스테인은 Cys 또는 C이고; 트립토판은 Trp 또는 W이며; 아르기닌은 Arg 또는 R이고; 글리신은 Gly 또는 G이다.
개요
본 개시내용은, 특히, (a) 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제, 및 (b) 종양 항원에 대해 유도되는 항체를 포함하는, 암과 같은 병태의 치료와 관련된 조합물, 조성물, 방법 및 키트를 제공하는 것에 관한 것이고, 여기서 종양-유도 항체는 작용 기전으로서 항체-의존적 세포 독성(ADCC)을 포함한다. 이러한 조성물 및 방법은 이상적으로, 예를 들어, 하기 중 더 많이는 아니더라도 적어도 하나와 같은 여러 유리한 그리고 예측 불가능한 특징을 가질 것이다: 증가된 종양 청소; 환자의 증가된 및/또는 장기 생존; 특히 표적 조직 격실 내에서, 단일로 투여되는 어느 한 활성제에 비해 조합하여 투여되는 경우의 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 및 항체 중 하나 또는 둘 모두의 증가된 활성; NK 세포의 향상된 탈과립화; 증가된 NK 세포 증식; 증가된 NK 세포 생존력; 증가된 T 세포, 예를 들어, CD8+ T 세포, 증식 및/또는 증가된 T 세포, 예를 들어, CD8+ T 세포, 생존력. 놀랍게도, 본 출원인은, 하기에서 보다 상세히 기재되고 뒷받침하는 실시예에서 예시될, 유리한 특성의 독특한 조합을 갖는, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 및 종양 항원에 대해 유도되는 적어도 하나의 항체(예컨대, 모노클로날 항체)의 조합물에 도달하였다.
본원에 기재된 바와 같은 지속 작용성 IL-15R 효현제와 ADCC에 의해 종양 사멸을 매개하는 표적화된 항체의 조합물은 향상된 면역치료 효과를 나타내는 것으로 발견되었다. ADCC는 특정 종양-표적 항체에 의한 종양 고갈에 있어서 중요한 기전이며, 여기서 NK 세포에 대한 수용체는 종양 세포-결합 항체를 인식한다. 항체에 대한 NK 세포 수용체의 재결합은 세포독성 과립 및/또는 사이토카인의 방출을 촉발시켜 종양 세포를 사멸시킨다. 본원에 기재된 지속 작용성 IL-15R 효현제는 증가된 세포독성 및/또는 다른 기능적 활성화로 NK 세포를 확장함으로써 ADCC 작용 기전을 갖는 종양-표적화 항체 요법의 효능을 증가시키는 데 효과적인 것으로 발견되었다.
치료 조합물, 조성물 및 사용 방법
제1 양태에서는, 암 또는 종양으로 고통받는 대상체를 치료하기 위한 방법이 본원에 기재된다. 방법은 종양 항원에 특이적으로 결합하는 항체, 또는 이의 항원-결합 부분 및 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제를 함께 또는 개별적으로 투여하는 단계를 포함한다. NK 세포의 증식을 유도하고 이들의 종양-세포 사멸 기능을 활성화시키는 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제의 능력으로 인해, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제, 예컨대, 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15(모노(mPEG-부탄아미드)인터류킨-15, 모노(mPEG-부탄아미드)IL-15, 또는 모노-mPEG-SBA-IL15로도 지칭됨)가 종양-세포 인식 치료용 모노클로날 항체와 조합됨으로써, 항체 분자에 효과적으로 결합할 수도 있고 이후 향상된 상승작용적 종양 세포 사멸이 용이하도록 항체에 의해 종양 세포에 유도될 수 있는 세포-사멸 활성화 NK 세포의 수 증가를 야기하는, 조합 치료 접근법이 개발되었다. 예를 들어, 본원에 첨부된 실시예에 기재된 결과를 참조한다.
명확히 하기 위해, 투여 순서와 관련하여(용어 "투여하는"은 이러한 경우에 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 또는 종양-유도 항체의 전달을 말하는 데 사용됨), 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 및 종양-유도 항체는 동시에 또는 순차적으로 그리고 임의의 순서로 투여될 수 있다. 더욱이, 조합물의 어느 한 성분의 치료는 단일 치료 사이클을 포함할 수 있거나, 다중 사이클을 포함할 수 있다. 다시 말해서, 지속 작용성 IL-15 효현제의 투여 및 종양-유도 항체의 투여 후, 추가 라운드의 요법은 종양-유도 항체의 투여와 조합하여 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제의 투여, 종양-유도 항체의 추가 투여 없이 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제의 투여, 또는 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제의 추가 투여 없이 종양-유도 항체의 투여, 또는 상기 투여의 임의의 조합을 포함할 수 있다.
제2 양태에서는, 종양 항원에 특이적으로 결합하는 항체, 또는 그의 항원-결합 부분 및 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제를 포함하는 조성물(또는 조성물들)이 본원에 기재된다.
일반적으로, 본원에 기재된 바와 같은 항체는 암 항원 또는 종양 항원으로 이하에서 지칭되는 암 또는 종양 세포의 세포 표면에서 발현되는 단백질에 대해 유도된다. 다수의 암 또는 종양 항원이 당업계에 공지되어 있다. 비-제한적 예는 인단백질, 막관통 단백질, 당단백질, 당지질, 및 성장 인자를 포함한다. 주어진 화합물이 본원에 기재된 바와 같은 임의의 항원 또는 표적에 대한 항체로서 작용할 수 있는지의 여부를 결정하기 위한 검정은 당업자에 의해 경로 실험을 통해 결정될 수 있다.
일부 구현예에서, 항체는 전형적으로 인간 혈액 순환에서 발견되는 면역글로불린 G(IgG) 유형의 항체이다.
일부 구현예에서, 항체는 항-CD16, 항-CD19, 항-CD20, 또는 항-CD38 항체, 즉, CD16, CD19, CD20, CD30, CD38, 또는 CD52에 특이적으로 결합하는 항체이다.
인간 CD19 항원은 면역글로불린(Ig) 슈퍼패밀리에 속하는 95 kDa의 당단백질이다. CD19는 정상 및 신생 B 세포뿐만 아니라 소포 수지상 세포에 대한 바이오마커이다. CD19는 말단 분화를 통해 예비-B 세포 발달의 초기 단계로부터 발현되어 B 림프구 발달 및 기능을 조절한다. CD19의 발현은 비호지킨 림프종과 같은 B 세포 림프종을 포함한 대부분의 B 세포 종양에서 고도로 보존된다. CD19는 또한 B 세포 백혈병, 급성 림프모구성 백혈병(ALL), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 및 발덴스트롬 마크로글로불린혈증(WM)을 포함한 대부분의 유형의 백혈병에서 발현된다. 대다수의 B 세포 악성종양(림프종 및 백혈병)은 CD19를 정상 내지 고수준으로 발현한다. 구현예들에서, 항체는 항-CD19 모노클로날 항체이다. 본원의 방법 및 조성물에서의 사용을 위해 고려되는 일부 예시적인 항-CD19 항체는, 예를 들어, 항-B4-bR, BiTE(이중특이성 T-세포 결합 항체), MEDI-551(MedImmune, LLC), MOR-208(MorphoSys AG), 블리나투모맙, 이중특이성 항-CD19/CD3 BiTE® 항체(Blincyto®, Amgen), 콜툭시맙 라브탄신(ImmunoGen Inc. 및 Sanofi), 데닌투주맙 마포도틴(Seattle Genetics), 타플리투모맙 팝톡스(National Cancer Institute), XmAb 5871(Amgen 및 Xencor Inc.), MDX-1342(Medarex), AFM11(Affimed Therapeutics), 및 미국 특허 번호 8,691,952(huB4, DI B4, Merck)에 기재된 항-CD19 항체를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 하나 이상의 구현예에서, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제와 항-CD19 항체의 조합물은, 이로 한정되지 않지만, 비호지킨 림프종, 급성 림프모구성 백혈병(ALL), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 및 발덴스트롬 마크로글로불린혈증(WM)을 포함하는 B 세포 악성종양의 치료에 사용된다.
CD20은 거의 모든 정상 및 악성 B 세포의 표면에서 발현되는 대략 33 kD 내지 37 kD의 비-글리코실화된 인단백질이다. CD20 mAb는 이펙터 활성화 기전을 수반하는 Fab-매개 효과를 통해 항-종양 효과를 발휘할 수 있다(Boross et al., Am J Cancer 2(6):676-690, 2012). 하나 이상의 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제와 투여되는 항체는 항-CD20 모노클로날 항체이다. 본원의 방법 및 조성물에서의 사용을 위해 고려되는 일부 예시적인 항-CD20 항체는 리툭시맙(Rituxan®, Genentech), 오파투무맙(Arzerra®, Genmab AC), 오크렐리주맙(Genentech), 벨투주맙(Immunomedics), AME-133V(Eli Lilly), PRO131921(Genentech), GA101(Glycart/Roche), 이브리투모맙 티욱세탄(Zevalin), 토시투모맙(Bexxar), 및 오비누투주맙(Gazyva®, Genentech)을 포함한다. 구현예들에서, 본원에 기재된 바와 같은 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제와 항-CD20 항체의 조합물은, 이로 한정되지 않지만, 비호지킨 림프종, CLL, 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), 및 소포성 림프종을 포함하는 B 세포 악성종양의 치료에 사용된다.
CD38은 수용체뿐만 아니라 효소 기능을 갖는 45 kDa의 II형 막관통 당단백질이다. CD38은 일반적으로 다양한 혈액 및 충실성 조직에서 저수준으로 발현되지만, 형질 세포에 의해 고수준으로 발현된다(특히 형질 세포 종양, 예컨대, 다발성 골수종(MM)에서 광범위하고 높은 발현 수준을 나타냄). CD38은 또한 혈액 종양의 서브세트에서 발현된다. 일부 추가의 구현예에서, 본 발명의 조합물은 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 및 항-CD38 모노클로날 항체의 투여를 포함한다. 본원에 제공된 방법 및 조성물에서의 사용을 위해 고려되는 일부 예시적인 항-CD38 항체는 다라투무맙(DARZALEX®, Janssen Biotech), 이사툭시맙(SAR650984, Sanofi Oncology), 및 MOR202(Morphosys)를 포함한다. 일부 추가의 구현예에서, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제와 항-CD38 항체의 조합물은 다발성 골수종, CD38+ 비호지킨 림프종, CDCLL, 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 원발성 전신 아밀로이드증, 맨틀 림프종, 급성 림프모구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, NK 세포 백혈병, NK/T-세포 림프종, 및 형질 세포 백혈병으로부터 선택된 병태의 치료에 사용된다.
일부 추가적인 구현예에서, 치료용 면역-종양 기반 조합물은 본원에 기재된 바와 같은 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제, 및, 이로 한정되지 않지만, SLAMF7, EpCAM, gpA3, 또는 엽산 결합 단백질(FBP)로부터 선택된 당단백질과 관련된 항체를 포함한다. 구현예들에서, 항체는 항-SLAMF7 항체, 항-EpCAM 항체, 항-gpA3 항체, 또는 항-FBP 항체이다.
신호전달 림프구 활성화 분자 패밀리 구성원 7(SLAMF7, 이전에는 CS1, CD319, CRACC로 알려짐)은 신호전달 림프구 활성화 분자 패밀리의 구성원이다. SLAMF7은 면역 세포, 예컨대, B 세포, T 세포, 수지상 세포, NK T 세포, 및 단핵구뿐만 아니라 다발성 골수종 세포에서 발현된다. 본 발명의 조합물의 구현예들에서, 항체는 항-SLAMF7 모노클로날 항체이다. 본원의 방법 및 조성물에서의 사용을 위해 고려되는 한 가지 예시적인 항-SLAMF7 항체는 엘로투주맙(Emplicity™, Bristol-Myers Squibb)이다. 구현예들에서, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제와 항-SLAMF7 항체의 조합물은 다발성 골수종의 치료에 사용된다.
상피 세포 부착 분자(EpCAM)는 위장 기원의 종양 및 비뇨생식관의 일부 암을 포함한 다수의 상피 암 세포에 의해 발현되는 막관통 당단백질이다. EpCAM은, 예를 들어, 인간 결장 암종, 전이성 유방암, 담낭암, 난소암, 및 췌장암에서 발현된다. 본원에 제공된 치료 조합물의 구현예들에서, 항체는 항-EpCAM 모노클로날 항체이다. 본원의 방법 및 조성물에서의 사용을 위해 고려되는 일부 예시적인 항-EpCAM 항체는 에드레콜로맙(Panorex, Creative Biolabs), ING-1(Xoma), 3622W94(Creative Biolabs), 및 아데카투무맙(Amgen)을 포함한다. 하나 이상의 구현예에서, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제와 항-EpCAM 항체의 조합물은 인간 결장 암종, 전이성 유방암, 담낭암, 난소암, 선암종, 및 췌장암의 치료에 사용된다.
일부 추가의 구현예에서, 항체는, 이로 한정되지 않지만, 예를 들어, 혈관 내피 성장 인자(VEGF), 혈관 내피 성장 인자 수용체(VEGFR), 및 상피 성장 인자 수용체(EGFR)로부터 선택된 성장 인자와 관련된다. 일부 구현예에서, 항체는 항-VEGF 항체, 항-VEGFR 항체, 및 항-EGFR 항체로부터 선택된다.
혈관 내피 성장 인자(VEGF)는 27 kDa의 혈관형성 신호전달 단백질이다. VEGF는 췌장암, 유방암, 난소암, 결장직장암, 및 폐암을 포함하는 대부분의 유형의 비소화 및 소화암에서 발현된다. 본원의 방법 및 조성물에서의 사용을 위해 고려되는 일부 예시적인 항-VEGF 항체는 베바시주맙(Avasatin®, Genentech, Inc.), 라니비주맙, 2C3 및 r84(AT001, Affitech AS), 및 VEGF-Trap(애플리버셉트, Regeneron Pharmaceuticals, Inc.)를 포함한다. 하나 이상의 구현예에서, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제와 항-VEGF 항체의 조합물은, 예를 들어, 췌장암, 유방암, 난소암, 결장직장암, 전이성 신장 세포 암종, 및 비-소세포 폐암과 같은 암의 치료에 사용된다.
혈관 내피 성장 인자 수용체(VEGFR)는, 혈관형성을 유도하고, 세포 성장 및 전이를 증가시키는 등을 할 수 있는 수용체 티로신 키나제(RTK)이다. VEGFR 패밀리는 다음 세 가지 주요 서브타입을 갖는다: VEGFR-1, VEGFR-2 및 VEGFR-3. 본원의 방법 및 조성물에서의 사용을 위해 고려되는 일부 예시적인 항-VEGFR 항체는 MF1/IMC-18F1(ImClone Systems); IMC-1121B(ImClone Systems), 및 DC101/IMC-1C11을 포함한다. 일부 추가의 구현예에서, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제와 항-VEGFR 항체의 조합물은, 예를 들어, 유방암 또는 비-소세포 폐암과 같은 암의 치료에 사용된다. 일부 구현예에서, 항-VEGFR 항체는 항-VEGF 항체에 대하여 상기 언급된 적응증을 위해 사용된다.
상피 성장 인자 수용체(EGFR)는 유방암, 폐암, 식도암, 전이성 결장직장암, 및 두경부암을 포함하는 여러 유형의 암에서 발현되는 큰 패밀리의 수용체 티로신 키나제이다. 본원의 방법 및 조성물에서의 사용을 위해 고려되는 일부 예시적인 항-EGFR 항체는 세툭시맙(Erbitux®, Lilly USA) 및 파니투무맙(Vectibix®, Amgen)을 포함한다. 하나 이상의 특정 구현예에서, 항체는 항-인간 상피 성장 인자 수용체 2 항체(항-HER2)이다. 본원의 방법 및 조성물에서의 사용을 위해 고려되는 일부 예시적인 항-HER2 항체는 인간화 모노클로날 항체 트라스투주맙(Herceptin®, Genentech, Inc.) 및/또는 퍼투주맙(Perjeta®, Genentech, Inc.)을 포함한다. 일부 관련된 구현예에서, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제와 항-EGFR 항체의 조합물은 유방암(예를 들어, 전이성 유방암), 폐암, 식도암, 전이성 결장직장암, 및 두경부암과 같은 암의 치료에 사용된다.
또한, 본원에 제공된 방법 및 조합물에 사용하기 위해 고려되는 것은 항-BCMA(B-세포 성숙 항원, CD269로도 지칭됨) 항체이다. BCMA는 종양 괴사 인자 수용체(TNFR) 슈퍼패밀리의 구성원이다. BCMA는 B-세포 활성화 인자(BAFF) 및 증식 유도 리간드(APRIL)에 결합한다. 비-악성 세포 중에서, BCMA는 형질 세포 및 성숙 B-세포의 서브세트에서 대부분 발현되는 것으로 보고되었다. BCMA RNA는 다발성 골수종 세포에서 검출되었고, BCMA 단백질은 다발성 골수종 환자로부터 형질 세포의 표면에서 검출되었다. BCMA는 다양한 인간 암에 의해 발현되거나 과발현된다. BCMA를 발현하거나 과발현하는 암의 예는 버킷 림프종, 미만성 거대 B-세포 림프종(DLBCL) 림프종, 급성 림프구성 백혈병(ALL) 림프종, 호지킨 림프종 및 다발성 골수종을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 예시적인 항-BCMA 항체는, 예를 들어, 미국 특허 공개 번호 20120082661, 20170051068, 및 20180318435(각각의 내용이 그 전체로서 본원에 참조로 포함됨)에 기재되어 있다. 예시적인 항-BCMA 항체는 문헌[Pillarisetti, K., et al., Blood, 2016, 128:2116]에 기재된 BCMAxXD3 및 항-BCMA 항체 약물 컨쥬게이트, GSK2857916의 인간화 항체 부분을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체는 하나보다 많은 특이성 항원을 동시에 결합할 수 있다(예를 들어, 이중특이성 항체).
일부 구현예에서, 항체는 전술한 바와 같은 임의의 항체와 결합을 위해 상호 경쟁하는 항체이다. 상기 언급된 항체 중 어느 하나와 상호 경쟁하는 항체는 유사하거나 동일한 기능적 특성을 갖는 것으로 예상된다.
일부 구현예에서, 본원에서 사용하기 위한 항체는 항체의 항원-결합 기능이 전장 항체의 단편에 의해 수행될 수 있는 것으로 당업계에 잘 알려져 있기 때문에 전술한 바와 같은 임의의 항체의 항원-결합 부분이다.
이제 지속 작용성 IL-15 수용체(IL-15R) 효현제로 돌아가서, 일반적으로, 바람직한 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 형태는 아미드 연결을 통해 IL-15 아미노 기에 안정적으로 공유 결합된 단일 선형 폴리알킬렌 옥사이드(예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜 또는 "PEG") 모이어티를 포함한다. IL-15 아미노 기에 대한 안정적 아미드 연결과 PEG 모이어티 사이에 2 내지 5개의 탄소 원자를 갖는 선형 비치환된 알킬렌 기(~CH2~)m(즉, m=2, 3, 4, 또는 5)가 개재된다. 하나 이상의 바람직한 구현예에서, m은 안정한 아미드 연결이 부탄아미드가 되도록 3이다.
하나 이상의 바람직한 구현예에서, 지속 작용성 IL-15R 효현제는 (메톡시PEG-N-부탄아미드)20-60kD인터류킨-15, 보다 바람직하게는 (메톡시PEG-N-부탄아미드)20-40kD인터류킨-15, 및 더욱 더 바람직하게는 (메톡시PEG-N-부탄아미드)40kD인터류킨-15이다. 하나 이상의 바람직한 구현예에서, 지속 작용성 IL-15R 효현제는 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)20-60kD인터류킨-15, 보다 바람직하게는 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)20-40kD인터류킨-15, 및 더욱 더 바람직하게는 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)40kD인터류킨-15이다. 한 가지 바람직한 구현예에서, 지속 작용성 IL-15R 효현제는 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)40kD인터류킨-15이다.
화학식 I으로 포괄되는 구조를 갖는 본원에 기재된 IL-15R 효현제, 및 특히 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)40kD인터류킨-15는 IL-15 수용체 알파(IL-15Rα) 서브유닛뿐만 아니라 베타(β) 및 감마(γ) 서브유닛에 대한 결합 친화성을 보유한다. 본원에 기재된 지속 작용성 IL-15R 효현제는 동일한(시스) 또는 인접한 세포(트랜스) 상에서 IL-2/IL-15Rβγ 복합체에 존재한다. 본원에 기재된 지속 작용성 IL-15R 효현제에 의한 IL-2/IL-15Rβγ 복합체의 결합은 T 세포 증식, 생존 및/또는 활성을 증가시키는, 야누스 키나제/신호 변환자 및 전사-5 활성자(JAK-STAT5) 경로를 유도할 수 있다. 지속 작용성 IL-15R 효현제는 추가로 CD8+ T 세포의 증식 및 활성화를 유의하게 향상시킨다. 지속 작용성 IL-15R 효현제는 바람직하게는 상응하는 비변형 IL-15R 효현제와 비교할 때 감소된 청소를 갖는다. 이론에 의해 국한되지 않지만, PEG의 부착은 IL-15 모이어티의 유체역학적 부피를 확대하여, 비컨쥬게이션된 rhIL-15에 비해 더 긴 유효 반감기, 더 낮은 최대 피크 농도(Cmax), 및/또는 감소된 청소를 야기하는 것으로 가정된다. 본원에 기재된 지속 작용성 IL-15R 효현제는 매일 투여할 필요 없이 지속적인 IL-15 생물학적 활성을 제공한다.
IL-15 모이어티를 고려할 때, 용어 "IL-15 모이어티"는 컨쥬게이션 전의 IL-15 모이어티뿐만 아니라 비-펩티드, 수용성 중합체, 예컨대, PEG에 대한 결합 후의 IL-15 모이어티를 지칭한다. 이하에서 비-펩티드 수용성 중합체로서 PEG를 구체적으로 언급하지만, 개시내용은 일반적으로 비-펩티드 수용성 중합체 또는 폴리(알킬렌 글리콜)에 관한 것임을 이해할 것이다. 그러나, 원래의 IL-15 모이어티가 폴리에틸렌 글리콜 모이어티에 결합된 경우, IL-15 모이어티는 중합체(들)에 대한 연결과 관련된 하나 이상의 공유 결합의 존재로 인해 약간 변경된다.
IL-15 모이어티는 비재조합 방법에서 및 재조합 방법에서 유래할 수 있고 본 개시내용은 이와 관련하여 한정되지 않는다. 덧붙여, IL-15 모이어티는 인간 출처, 동물 출처(곤충을 포함함), 진균 출처(효모를 포함함), 및 식물 출처로부터 유래할 수 있다.
IL-15 모이어티는, 예를 들어 Grabstein 외 다수에 의해 기술된 절차에 따라서 수득될 수 있다(Grabstein et al. (1994) Science 264:965-968). IL-15 모이어티는 또한, 예를 들어, EP 특허 번호 0 772 624 B2(Immunex Corporation)에 기재된 것들과 같은 재조합 방법을 사용하여 제조될 수 있다. 대안적으로, IL-15 모이어티는, 예를 들어 GenScript USA Inc.(Piscataway, NJ) 및 Peprotech(Rockyhill, NJ)로부터 상업적으로 구입될 수 있다.
IL-15 모이어티는 박테리아, 예를 들어 이.콜라이(E. coli)(예를 들어, 문헌[Fischer et al. (1995) Biotechnol. Appl. Biotechnol. 21(3):295-311] 참조), 포유류(예를 들어, 문헌[Kronman et al. (1992) Gene 121:295-304] 참조), 효모, 예를 들어 피치아 파스토리스(Pichia pastoris)(예를 들어, 문헌[Morel et al. (1997) Biochem. J. 328(1):121-129] 참조), 그리고 식물(예를 들어, 문헌[Mor et al. (2001) Biotechnol. Bioeng. 75(3):259-266] 참조) 발현 시스템 내에서 발현될 수 있다. 발현은 외부 발현(숙주 세포가 자연적으로 원하는 유전 암호를 포함할 때)을 통하거나 내부 발현을 통하여 일어날 수 있다.
IL-15 모이어티의 제조 및/또는 정제에 대한 추가 방법은 그 전문이 본원에 참조로 포함되는 PCT 출원 번호 PCT/US2018/032817에 기재되어 있다.
IL-15 활성을 가지는 단백질을 발현하는 데 사용되는 시스템에 따라서, IL-15 모이어티는 글리코실화되지 않을 수 있거나 글리코실화될 있고, 이 중 어느 하나가 사용될 수 있다. 하나 이상의 구현예에서, IL-15 모이어티는 글리코실화되지 않는다.
유리하게는, IL-15 모이어티는 아미노산 측쇄 내부 원자에의 중합체의 용이한 부착을 제공하기 위하여, 하나 이상의 아미노산 잔기, 예를 들어 리신, 시스테인 및/또는 아르기닌을 포함하고/포함하거나 치환하도록 변형될 수 있다. IL-15 모이어티의 치환에 관한 일 예가 미국 특허 번호 6,177,079에 기술되어 있다. 덧붙여, IL-15 모이어티는 자연적으로 생성되지 않는 아미노산 잔기를 포함하도록 변형될 수 있다. 아미노산 잔기 및 자연적으로 생성되지 않는 아미노산 잔기를 부가하는 기법은 당업자에게 널리 공지되어 있다. 문헌[J. March, Advanced Organic Chemistry: Reactions Mechanisms and Structure, 4th Ed. (New York: Wiley Interscience, 1992), and Bioinformatics for Geneticists (eds. Michael R. Barnes and Ian C Gray), 2003 John Wiley & Sons, Ltd, Chapter 14, Amino Acid Properties and Consequences of Substitutions, Betts, M.J., and Russell, R. B.]을 참조한다.
IL-15 모이어티의 추가의 적합한 변형 및 이러한 변형을 위한 방법은 그 전문이 본원에 참조로 포함되는 PCT 출원 번호 PCT/US2018/032817에 기재되어 있다. 예시적인 변형은, 예를 들어, 티올기, N-말단 알파 탄소, 하나 이상의 탄수화물 모이어티, 알데히드기 또는 케톤기 중 하나 이상의 포함과 같이, 작용기의 부착(작용기 포함 아미노산 잔기를 부가함으로 인하여 변형되는 경우 제외)을 포함한다. 일부 구현예에서, IL-15 모이어티는 티올기, N-말단 알파 탄소, 탄수화물, 알데히드기 및 케톤기 중 하나 이상을 포함하도록 변형되지 않는 것이 바람직하다.
예시적인 IL-15 모이어티들은 본원, 문헌, 그리고, 예를 들어 미국 특허 출원 공개 번호 US 2006/0104945, 문헌[Pettit et al. (1997) J. Biol. Chem. 272(4):2312-2318], [Wong et al. (2013) OncoImmunology 2(11), e26442:1-3], 및 PCT 출원 번호 PCT/US2018/032817(각각 그 전문이 본원에 참조로 포함됨)에 기술되어 있다. 바람직한 IL-15 모이어티들은 서열번호 1 내지 3으로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열들, 그리고 이 서열들과 실질적으로 상동성인 서열들을 포함하는 아미노산 서열을 가지는 것들을 포함한다(여기서 만일 서열번호 2 및 3, 그리고 이에 실질적으로 상동성인 서열들이 본원에 제공된 IL-15 모이어티의 시험관내 활성 기준을 충족하지 않으면, 본 개시내용을 위해서 상기 서열들은 또한 "IL-15 모이어티들"인 것으로 이해될 것임). 바람직한 IL-15 모이어티는 서열번호 1에 상응하는 아미노산 서열을 가진다. 일부 구현예에서, IL-15 모이어티는 서열번호 1 내지 3 중 어느 하나와 적어도 약 85% 또는 적어도 약 90% 동일성을 갖는 기능적 상동체이다. 일부 구현예에서, IL-15 모이어티는 서열번호 1 내지 3 중 어느 하나와 적어도 약 95%, 98% 또는 99% 동일성을 갖는 기능적 상동체이다.
몇몇 예에서, IL-15 모이어티는 "단량체" 형태를 가질 것인데, 여기서 상응하는 펩티드의 단일 발현은 불연속적 단위로 조직화된다. 다른 예에서, IL-15 모이어티는 단백질의 단량체 형태들 2개가 서로 결합되어 있는 "이량체"(예를 들어, 재조합 IL-15의 이량체)의 형태를 가질 것이다.
덧붙여, IL-15의 전구체 형태는 IL-15 모이어티로서 사용될 수 있다. IL-15의 예시적인 전구체 형태는 서열번호 3의 서열을 가진다.
일부 구현예에서, 지속 작용성 IL-15R 효현제는 미국 특허 출원 공개 번호 2018/0360977에 기재된 바와 같은 페길화된 IL-15분자, 및 특히 이에 기재된 바와 같은 다중-아암 PEG IL-15이다.
일부 구현예에서, IL-15 모이어티는 IL-15 뮤테인 또는 미국 특허 번호 10,350,270에 기재된 바와 같은 다른 IL-15 관련 분자이다.
전술한 서열들 중 임의의 것의 절단된 형태, 잡종 변이체, 그리고 펩티드 모의체도 또한 IL-15 모이어티로서 사용될 수 있다. IL-15 활성을 적어도 어느 정도 유지하는 전술한 서열들 중 임의의 것의 생물학적으로 활성인 단편, 결실 변이체, 치환 변이체 또는 부가 변이체도 또한 IL-15 모이어티로서 사용될 수 있다.
임의의 주어진 펩티드, 단백질 모이어티 또는 컨쥬게이트에 있어서, 해당 펩티드, 단백질 모이어티 또는 컨쥬게이트가 IL-15 활성을 가지는지 여부를 측정하는 것이 가능하다. 시험관 내 IL-15 활성을 측정하기 위한 다양한 방법들이 업계에 기술되어 있다. 예시적인 접근법은 pSTAT 분석법을 기반으로 한다. 요약하면, 만일 IL-15 의존적 CTLL-2 세포가 IL-15 활성을 가지는 시험 물질에 노출되면, 정량적으로 측정될 수 있는, 694번 티로신 잔기(Tyr694)에서의 STAT5 인산화를 포함하는 신호전달 캐스케이드가 개시된다. 분석법 프로토콜들과 키트들은 공지되어 있으며, 예를 들어 MSD Phospho(Tyr694)/Total STATa,b Whole Cell Lysate Kit(Meso Scal Diagnostics, LLC, 미국 메릴랜드주 게이더스버그 소재)를 포함한다. 예를 들어, 이 접근법이 사용되면, 약 300 ng/㎖ 이하(보다 바람직하게는 약 150 ng/㎖ 이하)에서 5분 또는 10분 중 적어도 하나의 시간에 pSTAT5 EC50값을 나타내는, 제안된 IL-15 모이어티는 본 개시내용과 연계되어 "IL-15 모이어티”로 간주된다. 그러나, (적어도 5분 또는 10분 중 하나의 시간에 pSTAT5 EC50값이 150 ng/㎖ 미만, 예를 들어 적어도 5분 또는 10분 중 하나의 시간에 pSTAT5 EC50값이 약 1 ng/㎖ 미만, 훨씬 더 바람직하게 0.5 ng/㎖ 미만인) 사용된 IL-15 모이어티가 더욱 강력한 것이 바람직하다.
전기 분석법, 분광분석법, 크로마토그래피 및 방사 측정 방법을 비롯하여 당업계에 공지된 기타 다른 방법들은 또한 IL-15 기능을 평가하는 데 사용될 수 있다. 예를 들어, 하나의 부가적 유형의 분석법에 대한 문헌[Ring et al. (2012) Nat. Immunol. 13(12):1187-1195]을 참조한다.
IL-15 모이어티의 활성 측정과 관련하여 사용하기 위한 검정을 사용하여 본원에 기재된 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제의 활성을 측정할 수도 있다. 예를 들어, 본원에서 제공되는 지지 실시예를 참조한다.
대상체에 투여 후, 효현제가 IL-15의 투여 경우에 비해 더 긴 시간 동안 생체내에서 IL-15R 아고니즘(agonism)을 나타내는 한, 화합물이 본 개시내용에 따른 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제인 것으로 고려된다. 화합물의 방사선표지, 화합물의 생체내 투여, 및 그의 청소를 결정하는 것들과 같은 종래의 접근법을 사용하여, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제로 제안된 화합물이 "지속 작용성"인지(즉, 동일한 생체내 시스템에서 투여된 IL-15의 경우에 비해 더 긴 청소를 갖는지)의 여부를 평가할 수 있다. 본원에서의 목적상, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제의 지속 작용성 성질은, 마우스에서 평가될 효현제의 투여 후 다양한 시점에 림프구에서의 STAT5 인산화를 측정하는 유동 세포계측법을 사용하여 결정될 수 있고, 통상적으로 유동 세포계측법을 사용하여 결정된다. 참조로서, IL-15에서는 약 24시간까지 신호가 사라지지만, 지속 작용성 IL-15 효현제에 대한 것보다 긴 기간 동안 지속적이다.
바람직한 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제는 일반적으로 아미드 연결을 통해 IL-15 아미노 기에 안정적으로 공유 결합된 단일 선형 PEG(폴리에틸렌 글리콜) 모이어티를 포함할 것이다. IL-15 아미노 기에 대한 안정적 아미드 연결과 PEG 모이어티 사이에 2 내지 5개의 탄소 원자를 갖는 선형 비치환된 알킬렌 기(~CH2~)m(즉, m=2, 3, 4, 또는 5)가 개재된다.
예를 들어, 일부 구현예에서, 비치환된 알킬렌 기는 (~CH2~)2이거나; 또는, 일부 추가의 구현예에서, 비치환된 알킬렌 기는 (~CH2~)3이고; 또한 일부 추가의 구현예에서, 비치환된 알킬렌 기는 (~CH2~)4이고; 또한 일부 추가의 구현예에서, 비치환된 알킬렌 기는 (~CH2~)5이다.
예를 들어, 일부 구현예에서, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제는 하기 구조를 갖는다:
[화학식 I]
Figure pct00003
(여기서, IL-15는 인터류킨-15 모이어티이고, n은 약 150 내지 약 3,000의 정수이고; m은 2~5의 정수(예: 2, 3, 4, 또는 5)이고, n'는 1임). 화학식 I에서(그리고 본원에서 제공되는 유사한 화학식에서), 구조 내의 ~NH~는 IL-15 모이어티의 아미노 기를 나타낸다. 화학식 I은 또한 하기와 같이 도시될 수 있고, 여기서 괄호는 말단 PEG 메톡시 기를 반영하기 위해 이동되어 있고:
Figure pct00004
, 두 화학식은 상호교환 가능하게 사용될 수 있다. 예시적 화합물의 예는 화학식 I에 포함되는 하기의 것들을 포함한다:
[화학식 Ia]
Figure pct00005
[화학식 Ib]
Figure pct00006
[화학식 Ic]
Figure pct00007
[화학식 Id]
Figure pct00008
.
일부 바람직한 구현예에서, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제는 화학식 Ia 또는 화학식 Ib에 상응한다. 일부 특히 바람직한 구현예에서, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제는 화학식 Ib에 상응한다.
일부 추가의 구현예에서, 본원에 기재된 구조 및 화학식과 관련하여, n은 약 200 내지 약 2000, 또는 약 400 내지 약 1300, 또는 약 450 내지 약 1200의 정수이다. 다시 말해서, 일부 구현예에서, n은 약 200 내지 약 2000의 정수이다. 또한 일부 추가의 구현예에서, n은 약 400 내지 약 1300의 정수이다. 또한 일부 추가의 구현예에서, n은 약 450 내지 약 1200의 정수이다.
n 값의 상기 범위 중 어느 하나에 상응하는 분자량을 갖는 PEG가 일반적으로 바람직하다.
하나 이상의 추가적인 구현예에서, n은, 약 10,000 달톤(여기서, n은 약 227), 또는 약 15,000 달톤(여기서, n은 약 340), 또는 약 20,000 달톤(여기서, n은 약 454), 또는 약 25,000 달톤(여기서, n은 약 568), 또는 약 30,000 달톤(여기서, n은 약 681), 또는 약 40,000 달톤(여기서, n은 약 907 내지 909, 예를 들어, 약 909), 또는 약 50,000 달톤(여기서, n은 약 1136) 또는 심지어 약 60,000 달톤(여기서, n은 약 1364) 또는 그 초과로 구성된 군으로부터 선택된 중량 평균 분자량을 갖는 폴리에틸렌 글리콜 중합체에 상응하는 값을 갖는 정수이다.
상기에 추가로, 화합물의 폴리에틸렌 글리콜 부분에 대한 추가의 예시적 중량-평균 분자량은, 약 11,000 달톤, 약 12,000 달톤, 약 13,000 달톤, 약 14,000 달톤, 약 22,500 달톤, 약 35,000 달톤, 약 40,000 달톤, 약 45,000 달톤, 약 55,000 달톤, 약 65,000 달톤, 약 70,000 달톤, 및 약 75,000 달톤을 포함한다. 일부 구현예에서, IL-15 컨쥬게이트의 폴리에틸렌 글리콜 부분의 중량-평균 분자량은 약 37,000 달톤 내지 약 45,000 달톤이다.
일부 바람직한 구현예에서, IL-15 컨쥬게이트의 폴리에틸렌 글리콜 중합체 부분의 중량 평균 분자량은 약 40,000 달톤이다. 본원에 기재된 각각의 화학식 I 및 II(이에 대한 임의의 하위-화학식 포함)와 관련하여, 40,000 달톤의 PEG의 중량 평균 분자량이 바람직하다.
PEG 모이어티가 바람직하게는 메톡시 기로 상기 화학식 I에 나타낸 바와 같이 말단-캡핑되지만, PEG 모이어티는 그의 말단에서 임의의 저급 C1-6 알콕시 기로 캡핑될 수 있거나, 또는 히드록실 기, 또는 다른 적합한 말단-캡핑 기로 종결될 수 있다.
일부 구현예에서, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제는, 총체적으로 고려할 때, 하기 화학식에 포함되는 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제를 (조성물 중의 IL-15 함유 분자에 대하여) 약 20 몰 퍼센트(mol%) 이하로 포함한다:
[화학식 II]
Figure pct00009
(여기서, n 및 m의 값은 상기 화학식 I에 대해 제공된 바와 같음). 다시 말해서, 예를 들어, 임의의 화학식 I, 화학식 Ia, 화학식 Ib, 화학식 Ic, 및 화학식 Id, 예를 들어, 화학식 Ib의 모노페길화된 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제는, 예를 들어, 동일한 화학식이지만 인터류킨-15 모이어티에 공유 결합된 상이한 수의 PEG 모이어티(예를 들어, 2-mer, 3-mer 등)를 갖는, 예를 들어, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 화합물의 조성에 포함될 때, 화학식 II의 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제를 약 20 몰 퍼센트 이하로 포함한다.
일부 추가의 구현예에서, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 조성물은, 총체적으로 고려할 때, 하기 화학식에 포함되는 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제를 (조성물 중의 IL-15 함유 분자에 대하여) 약 15 몰 퍼센트(mol%) 이하로 포함한다:
[화학식 II]
Figure pct00010
,
(여기서, n 및 m의 값은 상기 화학식 I에 대해 제공된 바와 같음). 다시 말해서, 이러한 조성물의 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 성분과 관련하여, 조성물 중에 포함되는 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제의 약 15 mol% 이하가 화학식 II를 갖는다. 일부 구현예에서, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 조성물은 약 0.1 내지 20 mol% 이하의 화학식 II의 화합물을 포함한다. 구현예에서, 조성물은 약 0.1 내지 15, 0.1 내지 10, 0.1 내지 5, 0.1 내지 1, 1 내지 20, 1 내지 15, 1 내지 10, 1 내지 5, 5 내지 20, 5 내지 15, 5 내지 10, 10 내지 20, 10 내지 15, 또는 15 내지 20 mol% 이하의 화학식 II의 화합물을 포함한다. 바람직한 구현예는 화학식 II에서 "m"이 3인 것들이다.
상기와 관련된 일부 특정 구현예에서, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 조성물은, 화학식 Ia와 관련하여, 총체적으로 고려할 때, 하기 화학식에 포함되는 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제를 (조성물 중의 IL-15 함유 분자에 대하여) 약 15 몰 퍼센트(mol%) 이하로 포함한다:
[화학식 IIa]
Figure pct00011
,
(여기서, n 및 m의 값은 상기 화학식 Ia에 대해 제공된 바와 같음).
일부 특히 바람직한 구현예에서, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 조성물은, 화학식 Ib와 관련하여, 총체적으로 고려할 때, 하기 화학식에 포함되는 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제를 (조성물 중의 IL-15 함유 분자에 대하여) 약 15 몰 퍼센트(mol%) 이하로 포함한다:
[화학식 IIb]
Figure pct00012
,
(여기서, n 및 m의 값은 상기 화학식 Ib에 대해 제공된 바와 같음).
일부 다른 구현예에서, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 조성물은, 화학식 Ic와 관련하여, 총체적으로 고려할 때, 하기 화학식에 포함되는 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제를 (조성물 중의 IL-15 함유 분자에 대하여) 약 15 몰 퍼센트(mol%) 이하로 포함한다:
[화학식 IIc]
Figure pct00013
,
(여기서, n 및 m의 값은 상기 화학식 Ic에 대해 제공된 바와 같음).
일부 다른 구현예에서, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 조성물은, 화학식 Id와 관련하여, 총체적으로 고려할 때, 하기 화학식에 포함되는 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제를 (조성물 중의 IL-15 함유 분자에 대하여) 약 15 몰 퍼센트(mol%) 이하로 포함한다:
[화학식 IId]
Figure pct00014
,
(여기서, n 및 m의 값은 상기 화학식 Id에 대해 제공된 바와 같음).
일부 구현예에서, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 조성물은 약 0.1~20 mol% 이하의 화학식 II의 화합물(화학식 IIa, IIb, IIc, 및 IId의 화합물 포함)을 포함한다. 일부 추가의 구현예에서, 조성물은 약 0.1 내지 15, 0.1 내지 10, 0.1 내지 5, 0.1 내지 1, 1 내지 20, 1 내지 15, 1 내지 10, 1 내지 5, 5 내지 20, 5 내지 15, 5 내지 10, 10 내지 20, 10 내지 15, 또는 15 내지 20 mol% 이하의 화학식 II의 화합물(화학식 IIa, IIb, IIc, 및 IId의 화합물 포함)을 포함한다. 일부 구현예에서, 조성물은 약 0.1, 1, 5, 10, 15, 또는 20 mol% 이하의 화학식 II의 화합물(화학식 IIa, IIb, IIc, 및 IId의 화합물 포함)을 포함한다. 조성물은, 화학식 II의 화합물이 조성물 중에 존재하지 않거나, 미량 존재하거나, 또는 실질적으로 존재하지 않게 하는 화학식 I의 화합물에 대하여 당업계에 알려진 방법에 의해 정제될 수 있음을 인지할 것이다.
예를 들어, 일부 구현예에서, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 조성물은, 총체적으로 고려할 때, 화학식 II에 포함되는 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제(화학식 IIa, IIb, IIc, 및 IId의 화합물 포함)를 약 12 몰 퍼센트 이하, 또는 약 10 몰 퍼센트 이하로 포함한다.
상기한 것 중 일부 추가의 구현예에서, 조성물은 n'가 2, 3, 또는 3 초과인 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제(즉, 고급 PEGmer)를 약 7 mol% 이하로 포함한다. 또한 일부 다른 구현예에서, 조성물은 n'가 2, 3, 또는 3 초과(즉, 2 이상)인 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제를 약 5 mol% 이하로 포함한다.
일부 추가의 구현예에서, 조성물은 하기 화학식 I에 따른 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제를 포함한다:
Figure pct00015
,
(여기서, n 및 m은 상기에 기재된 바와 같고, n'는 (조성물에 대하여) IL-15 아미노 기에 공유 결합된 폴리에틸렌 글리콜 모이어티의 평균 수를 나타내고, 조성물에 대하여 n'는 1.0 내지 약 1.3의 범위임). 예를 들어, IL-15 모이어티 당 폴리에틸렌 글리콜 모이어티의 평균 수는 약 1.0, 1.1, 1.2 및 약 1.3으로부터 선택된다. 다시 말해서, 화학식 I에 따른 바람직한 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제는 본원에서 "모노페길화된" 것으로 언급될 수 있고, 여기서는 상기에 기재된 바와 같은 페길화 정도와 관련하여 일부 가변성이 존재함을 이해하여야 한다. 본원에 기재된 화학식과 관련하여 일부 바람직한 구현예에서, "m"은 3이다.
지속 작용성 IL-15 수용체 효현제의 조성물은 n'가 약 1인 단일 종을 포함할 수 있고, PEG 모이어티는 조성물 중의 실질적으로 모든 IL-15 컨쥬게이트에 대하여 동일한 위치에서 결합되거나, 또는 대안적으로, 선형 폴리에틸렌 글리콜 모이어티의 결합이 인터류킨-15 모이어티 상의 상이한 자리에서 나타나는, 다시 말해서, 특정 결합 자리가 조성물 중에 포함된 모든 모노페길화된 IL-15 종에 대해 동일하지 않은 모노페길화된 컨쥬게이트 종의 혼합물을 포함할 수 있다. 따라서, 이러한 조성물은 IL-15에 결합된 PEG 모이어티의 수와 관련하여 실질적으로 균질하지만(예: 1-mer), IL-15분이자 상의 아미노 기 결합 위치와 관련하여서는 불균질하다.
지속 작용성 IL-15 수용체 효현제에 도달하기 위해 추가의 PEG 아키텍쳐 및 연결 화학이 사용될 수 있지만, 앞서 기재된 것과 같은 화합물이 하나 이상의 구현예에서 바람직하며, 이는 지지 실시예에 비추어 고려할 때 명백해질 것이다. 그러나, 본원에서 제공되는 바와 같은 구조를 갖는 추가의 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제가 또한 고려된다.
일부 구현예에서, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 조성물은, 총체적으로 고려할 때, 화학식 I(화학식 Ia 내지 Id 포함)에 포함되는 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제를 (조성물 중의 IL-15 함유 분자에 대하여) 적어도 약 80 mol%로 포함한다. 하나 이상의 구현예에서, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 조성물은 적어도 약 85 mol%, 90 mol%, 95 mol%, 98 mol% 또는 99 mol%의 화학식 I의 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제를 포함하고, 여기서 특히 바람직한 화학식은 화학식 Ib이다.
지속 작용성 IL-15 수용체 효현제를 포함한 본원에 기재된 바와 같은 모든 화합물은 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 그러한 화합물을 분명히 포함하는 것으로 의미한다. 통상적으로, 이러한 염(예를 들어, 염기성 화합물의)은 약학적으로 허용 가능한 산 또는 산 등가물과의 반응에 의해 형성된다. 이와 관련하여 용어 "약학적으로 허용 가능한 염"은, 일반적으로 비교적 비-독성, 무기 또는 유기 산 부가 염을 지칭할 것이다. 이들 염은 투여 비히클 또는 투여 형태 제조 공정에서 원위치에서(in situ) 제조될 수 있거나, 또는 별도로 본원에 기재된 바와 같은 지속 작용성 인터류킨-15 수용체 효현제를 적합한 유기 또는 무기 산과 반응시키고, 이렇게 형성된 염을 단리함으로써 제조될 수 있다. 대표적 염은, 이로 한정되지 않지만, 히드로브로마이드, 히드로클로라이드, 술페이트, 비술페이트, 포스페이트, 니트레이트, 아세테이트, 발레레이트, 올레에이트, 팔미테이트, 스테아레이트, 라우레이트, 벤조에이트, 락테이트, 포스페이트, 토실레이트, 시트레이트, 말레에이트, 푸마레이트, 숙시네이트, 타르트레이트, 나프틸레이트, 옥실레이트, 메실레이트, 글루코헵토네이트, 락토비오네이트, 및 라우릴술포네이트 염 등을 포함한다. (예를 들어, 문헌[Berge et al.(1977) "Pharmaceutical Salts", J. Pharm. Sci. 66:1-19] 참조). 따라서, 기재된 바와 같은 염은 무기 산, 예컨대 염산, 브롬화수소산, 황산, 술팜산, 인산, 질산 등으로부터 유래될 수 있거나; 또는 유기 산, 예컨대 아세트산, 프로피온산, 숙신산, 글리콜산, 스테아르산, 락트산, 말산, 타르타르산, 시트르산, 아스코르브산, 팔미트산, 말레산, 히드록시말레산, 페닐아세트산, 글루탐산, 벤조산, 살리실산, 술파닐산, 2-아세톡시벤조산, 푸마르산, 톨루엔술폰산, 메탄술폰산, 에탄 디술폰산, 옥살산, 이소티온산 등으로부터 제조될 수 있다.
일부 구현예에서, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 조성물은, 총체적으로 고려할 때, (조성물 중의 IL-15 함유 분자에 대하여) 약 1 내지 5 mol% 이하의 유리 IL-15 단백질을 포함한다. 일부 추가의 구현예에서, 지속 작용성 IL-15 효현제 조성물은 약 0.5 mol%, 1 mol%, 2 mol%, 3 mol%, 4 mol%, 또는 5 mol% 이하의 유리(즉, 비컨쥬게이션된) IL-15를 포함한다.
지속 작용성 IL-15 수용체 효현제를 제조하기 위해, IL-15 모이어티를, 예를 들어, 그의 아미노 기(예: 리신 또는 N-말단)에서 숙신이미딜 기(또는 다른 활성화된 에스테르 기)로 관능화된 PEG 시약에 컨쥬게이션시킬 수 있다. 이 접근법을 사용하여, 숙신이미딜 활성화된 PEG를 약 7.0 내지 9.0의 pH의 수성 매질 중에서 IL-15 모이어티 상의 아미노 기에 결합시킬 수 있지만, 상이한 반응 조건(예: 보다 낮은 pH, 예컨대 6 내지 7 또는 7 내지 8, 또는 상이한 온도 및/또는 15℃ 미만)을 사용하여 IL-15 모이어티 상의 상이한 위치에 PEG 모이어티를 결합시킬 수 있다.
지속 작용성 IL-15 수용체 효현제를 제조하기 위한 예시적인 방법은 그 전문이 본원에 참조로 포함되는 PCT 출원 번호 PCT/US2018/032817, 예를 들어, 실시예 1 내지 실시예 2에 기재되어 있다. 한 가지 예시적인 구현예에서, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제는 일반적으로, 인터류킨-15, 예를 들어, 정제된 IL-15, 예컨대 재조합 IL-15를, 활성화된 PEG 시약, 예컨대 활성화된 에스테르, 메톡시PEG-숙신이미딜 부타노에이트, mPEG-SBA와 반응시킴으로써 제조될 수 있다. 다른 적합한 활성화된 PEG 시약은 메톡시PEG-숙신이미딜 프로피오네이트, 메톡시PEG-숙신이미딜 펜타노에이트, 및 메톡시PEG-숙신이미딜 헥사노에이트를 포함한다. 숙신이미딜 활성화 기가 통상적으로 사용되지만, 임의의 적합한 활성 에스테르 또는 활성화 기가 사용될 수 있고, 여기서 이러한 반응 기는 요망되는 안정적 아미드 연결을 형성하기에 적합하다. 페길화된 IL-15 반응 생성물을, 일반적으로 예를 들어, 이온 교환 크로마토그래피와 같은 임의의 적합한 방법에 의해 정제하여 요망되는 생성물을 얻을 수 있다. 예를 들어, 음이온 교환 크로마토그래피가 사용될 수 있다. 이어서, 크로마토그래피 생성물 풀(pool)을 농축시키고, 예를 들어, 접선 유동 여과(TFF)를 사용하여, 적합한 제제 완충제(예를 들어, 수크로스와 아세트산나트륨 완충제)로 정용여과(diafiltering)할 수 있다. 분석은, 예를 들어, SDS-PAGE, 역상 HPLC 또는 임의의 다른 적합한 분석 방법과 같은 임의의 적합한 방법에 의해 수행될 수 있다.
앞서 기재된 바와 같이, IL-15 모이어티 상의 아미노 기는, 화학식 I에 포함되는 것과 같은 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제를 제공하는 IL-15 모이어티와 폴리에틸렌 글리콜 모이어티 사이의 결합 자리를 제공한다. 본원에서 제공되는 예시적 IL-15 아미노 산 서열을 고려하면, 적어도 서열번호 1 및 서열번호 2에 대한 컨쥬게이션을 위해 이용가능할 수 있는 ε-아미노 산을 각각 갖는 7개의 리신 잔기가 존재함이 명백하다. 또한, 메티오닌의 N-말단 아민이 PEG 모이어티에 대한 결합점으로서 제공될 수 있다. 폴리에틸렌 글리콜 모이어티는 리신 또는 N-말단 아민 위치 중 임의의 하나 이상에서 결합될 수 있음을 인지할 것이다. 일부 구현예에서, 폴리에틸렌 글리콜 모이어티 결합 자리는 하나 이상의 Lys10 및 Lys11(일 예로서 서열번호 2에 나타낸 바와 같은 넘버링 사용 또는 서열번호 1 사용시 Lys11 및 Lys12)에 있다. 일부 구현예에서, 폴리에틸렌 글리콜 모이어티는 N-말단 아민에서 결합된다. 임의의 리신 자리가 PEG 모이어티에 대한 결합 자리로서 적합할 수 있음(예: 서열번호 1의 Lys37 또는 Lys42)을 인지할 것이다. 일부 구현예에서, 지속 작용성 인터류킨-15 수용체 효현제는 위치 이성질체의 혼합물을 포함하며, 여기서 폴리에틸렌 글리콜 모이어티의 공유 결합은 주로 N-말단에 있다(다시 말해서, 위치 이성질체에서 총체적으로, N-말단에서 결합된 PEG 모이어티를 갖는 이성질체가 다른 위치 이성질체와 비교시 가장 높은 양으로 존재함).
요망되는 경우, 생성물 풀을 추가로, 적합한 컬럼(예: Amersham Biosciences 등의 회사로부터 구매가능한 C18 컬럼 또는 C3 컬럼 또는 Vydac)을 사용하여 역상-고성능 액체 크로마토그래피(RP-HPLC)에 의해 또는 이온 교환 컬럼, 예를 들어 Amersham Biosciences로부터 입수가능한 Sepharose™ 이온 교환 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피에 의해 위치 이성질체로 분리할 수 있다. 두 접근법 모두 동일한 분자량을 갖는 PEG-인터류킨-15 위치 이성질체(즉, 위치 이소형)를 분리하는 데 사용될 수 있다.
본 발명의 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제는 특정 주목할 만한 유리한 특징을 갖는 것으로 발견되었다. 하기에 기재되는 특징이 본원에서 제공되는 바와 같은, 또한 화학식 I에 포함되는 화합물에 일반적으로 적용되는 것으로 믿어지지만, 하기 하나 이상의 특징은 특히 화학식 Ib, 또한 더 나아가 화학식 IIb에 따른 화합물에 의해 나타날 수 있다. 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제는 하기 특징 중 하나 이상을 가질 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제는, 비개질된 IL-15와 비교시, 약 7배 이하의 EC50 값(ng/mL, CTLL-2 pSTAT5)의 감소를 나타낸다. 예를 들어, 하나 이상의 관련 구현예에서, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제는, IL-15와 비교시, 약 6.5배 이하의 EC50 값(ng/mL, CTLL-2 pSTAT5)의 감소, 또는 약 6배 이하의 EC50 값(ng/mL, CTLL-2 pSTAT5)의 감소, 또는 약 5.5배 이하의 EC50 값(ng/mL, CTLL-2 pSTAT5)의 감소, 또는 약 5배 이하의 EC50 값(ng/mL, CTLL-2 pSTAT5)의 감소, 또는 약 4.5배 이하의 EC50 값(ng/mL, CTLL-2 pSTAT5)의 감소, 또는 약 4배 이하의 EC50 값(ng/mL, CTLL-2 pSTAT5)의 감소, 또는 약 3.5배 이하의 EC50 값(ng/mL, CTLL-2 pSTAT5)의 감소, 또는 심지어 약 3배 이하의 EC50 값(ng/mL, CTLL-2 pSTAT5)의 감소를 나타낸다. 상기 특징에 따른 예시적 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제가 본원에서, 그리고 그 전문이 참조로 본원에 포함되는 PCT 출원 번호 PCT/US2018/032817에서 기재된다.
상기 조성물 내에 포함되는 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제의 양은 다수의 인자에 따라 다양할 것이지만, 최적으로는 조성물이 단위 투약 용기(unit dose container)(예를 들어, 바이알) 내에 저장될 때 치료상으로 효과적인 용량일 것이다. 덧붙여, 약학적 제조물은 주사기 내에 수용될 수 있다. 치료상으로 효과적인 용량은 본원에 기재된 바와 같이 임상적으로 원하는 종점을 제공하는 양을 결정하기 위하여 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제의 양을 증가시키면서 반복된 투여에 의해 실험적으로 결정할 수 있다. 상기 조성물 내에서 임의의 개별적인 부형제의 양은 부형제의 활성 및 조성물의 특정 수요에 따라 다를 것이다. 통상적으로, 임의의 개별적인 부형제의 최적양은 통상적인 실험을 통해, 즉 (낮은 양에서 높은 양의 범위로) 부형제의 양을 달리하면서 포함하는 조성물을 제조, 안정성 및 기타 다른 파라미터를 시험, 및 그 다음 유의한 부작용이 없는 최적의 성능을 이루는 범위를 결정함으로써 결정된다.
방법의 각 약리학적 성분은 개별적으로 투여될 수 있다. 대안적으로, 두 개의 약리학적 성분의 투여가 동시에 요망되는 경우, 및 두 개의 약리학적 성분이 함께 주어진 제제에서 상용성인 경우, 동시 투여는 단일 투여형/제제의 투여(예를 들어, 약리학적 활성제 둘 모두를 함유하는 정맥내 제제의 정맥내 투여)를 통해 달성될 수 있다. 당업자는 두 개의 주어진 약리학적 성분이 주어진 제제에서 함께 상용성인지의 여부를 경로 시험을 통해 결정할 수 있다. 항체 및 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제는 임의의 순서로 투여될 수 있음을 인지할 것이다. 추가로, 항체 및 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제의 투여는 필요에 따라 수분, 수시간, 또는 수일 간격일 수 있다.
지속 작용성 IL-15 수용체 효현제를 투여하는 빈도와 관련하여, 당업자는 적절한 빈도를 결정할 수 있을 것이다. 예를 들어, 임상의는 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제를 비교적 드물게(예를 들어, 2주 또는 3주 마다 1회) 투여하고, 환자의 허용에 따라 투여 사이의 기간을 점진적으로 단축하는 것을 정할 수 있다. 항체를 투여하는 빈도와 관련하여, 이들 작용제에 대한 빈도는 유사한 방식으로 결정될 수 있다. 또한, 본원에 기재된 바와 같은 일부 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 및 항체는 임상 시험 진행 중이거나 상업적으로 입수 가능하기 때문에, 적절한 투여 빈도를 얻기 위해 문헌을 참조하는 것도 가능하다(치료 계획의 조합 효과의 관점에서 일부 조절이 필요할 수 있음을 염두하여).
일부 치료 계획에서, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제는 치료 시작 시 단일 용량으로 투여된다. 항체는 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제와 동시에, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제의 투여 전에, 또는 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제의 투여 후에 투여된다. 예를 들어, 일부 치료 기법에서, 항체는 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 투여(전 또는 후)의 7일 내지 14일 이내에(예를 들어, 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 또는 14일 중 어느 하나에) 투여되고, 여기서 1일은 치료의 시작을 의미한다. 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제의 지속 작용성 성질을 기준으로, 이러한 화합물은 비교적 드물게(예를 들어, 3주마다 1회, 2주마다 1회, 8일 내지 10일마다 1회, 주 1회, 3일마다 1회 등) 투여될 수 있다. 추가로, 항체는 승인된 스케줄(예를 들어, 매일, 주 2회 또는 3회, 매주, 주 2회마다 등)에 따라 투여될 수 있다. 한 가지 예시적인 스케줄에서, 지속 작용성 IL-15R 효현제는 1일에 및 그 후 21일마다 투여된다. 항체는 지속 작용성 IL-15R 효현제의 투여 후 7일 내지 14일에 시작하여 매주, 2주마다 또는 매달 투여된다. 지속 작용성 IL-15R 효현제 및 항체 중 하나 또는 둘 모두에 대한 투약 스케줄은 치료 기간 중에 조절될 수 있음을 인지할 것이다. 일 예로서, 지속 작용성 IL-15R 효현제 및/또는 항체는 소정 기간(예를 들어, 4주 내지 8주) 동안 매주, 및 이어서 그 이후에 소정 기간 동안 2주마다 또는 매달 투여될 수 있다.
본원에 기재된 치료 방법은 환자의 치료를 감독하는 임상의가 치료 방법이 효과적이라고 판단하는 한 계속될 수 있다. 치료 방법이 효과적임을 지시하는 비-제한적 파라미터는 다음을 포함한다: 종양 수축(중량 및/또는 부피 측면에서); 개별 종양 콜로니 수의 감소; 종양 제거; 및 무진행 생존.
본원에 기재된 바와 같은 요법의 과정과 관련된 예시적인 기간은 다음을 포함한다: 약 1주; 2주; 약 3주; 약 4주; 약 5주; 약 6주; 약 7주; 약 8주; 약 9주; 약 10주; 약 11주; 약 12주; 약 13주; 약 14주; 약 15주; 약 16주; 약 17주; 약 18주; 약 19주; 약 20주; 약 21주; 약 22주; 약 23주; 약 24주; 약 7개월; 약 8개월; 약 9개월; 약 10개월; 약 11개월; 약 12개월; 약 13개월; 약 14개월; 약 15개월; 약 16개월; 약 17개월; 약 18개월; 약 19개월; 약 20개월; 약 21개월; 약 22개월; 약 23개월; 약 24개월; 약 30개월; 약 3년; 약 4년 및 약 5년. 항체 및 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제에 대한 투여 빈도는 동일하거나 상이할 수 있음을 인지할 것이다. 추가로, 항체 및/또는 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제의 투여 빈도 또는 스케줄은, 적절한 경우, 수용체의 지속적인 점유/항원에 대한 지속적인 결합을 달성하도록 설계될 수 있다.
선택적으로, 항체 및/또는 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제는 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 부형제를 또한 포함하는 조성물에 포함된다. 예시적인 부형제는 이에 한정되지 않지만, 탄수화물, 무기염, 항균제, 항산화제, 계면활성제, 완충액, 산, 염기, 아미노산, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것들을 포함한다.
당과 같은 탄수화물, 알디톨, 알돈산, 에스테르화된 당 및/또는 당 중합체와 같은 유도체화 당은 부형제로서 존재할 수 있다. 구체적인 탄수화물 부형제로서는 예를 들어 프럭토스, 말토스, 갈락토스, 글루코스, D-만노스, 소르보스 등과 같은 단당류; 락토스, 수크로스, 트레할로스, 셀로비오스 등과 같은 이당류; 라피노스, 멜레지토스, 말토덱스트린, 덱스트란, 전분 등과 같은 다당류; 만니톨, 자일리톨, 말티톨, 락티톨, 자일리톨, 소르비톨(글루시톨), 피라노실 소르비톨, 미오이노시톨, 사이클로덱스트린 등과 같은 알디톨을 포함한다.
또한 부형제로서는 시트르산, 염화나트륨, 염화칼륨, 인산칼륨, 황산나트륨, 질산칼륨, 제1인산나트륨, 제2인산나트륨, 및 이의 조합과 같은 무기염 또는 완충액을 포함할 수 있다.
또한 조성물 또는 조성물들은 미생물 성장을 방지 또는 막기 위한 항균제를 포함할 수 있다. 본 개시내용의 하나 이상의 구현예에 적합한 항균제의 제한적이지 않는 예는 염화벤잘코늄, 염화벤제토늄, 벤질 알코올, 염화세틸피리디늄, 클로로부탄올, 페놀, 페닐에틸 알코올, 질산 페닐수은, 타이메로솔(thimersol), 및 이의 조합을 포함한다.
항산화제도 또한 상기 조성물 내에 존재할 수 있다. 항산화제는 산화를 방지하는 데 사용되어, 컨쥬게이트 또는 제조물의 기타 다른 성분의 악화를 방지한다. 본 개시내용의 하나 이상의 구현예에서의 사용에 적합한 항산화제로서는 예를 들어 팔미트산아스코빌, 부틸 하이드록시아니솔, 부틸 하이드록시톨루엔, 차아인산(hypophosphorous acid), 모노티오글리세롤, 갈산프로필(propyl gallate), 아황산수소나트륨(sodium bisulfite), 소듐 포름알데히드 설폭실레이트(sodium formaldehyde sulfoxylate), 메타중아황산나트륨(sodium metabisulfite), 및 이의 조합을 포함한다.
계면활성제는 부형제로서 존재할 수 있다. 예시적인 계면활성제는 "트윈 20" 및 "트윈 80"과 같은 폴리소르베이트, F68 및 F88(둘 다 BASF(미국 뉴저지주 마운트 올리브 소재)에서 시판 중임)과 같은 플루로닉(pluronic); 소르비탄 에스테르; 레시틴 및 기타 다른 포스파티딜콜린, 포스파티딜에탄올아민(바람직하게는 리포좀 형태로 있지 않음)과 같은 인지질, 지방산 및 지방 에스테르와 같은 지질; 콜레스테롤과 같은 스테로이드; 및 EDTA, 아연 및 기타 다른 적합한 양이온과 같은 IL-15 킬레이트화제를 포함한다.
산 또는 염기는 상기 조성물 내에 부형제로서 존재할 수 있다. 사용할 수 있는 산의 제한적이지 않는 예로서는 염산, 아세트산, 인산, 시트르산, 말산, 락트산, 포름산, 트리클로로아세트산, 질산, 과염소산(perchloric acid), 인산, 황산, 푸마르산, 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 산들을 포함한다. 적합한 염기의 예로서는 이에 한정되지 않지만, 수산화나트륨, 아세트산나트륨, 수산화암모늄, 수산화칼륨, 아세트산암모늄, 아세트산칼륨, 인산나트륨, 인산칼륨, 시트르산나트륨, 포름산나트륨, 황산나트륨, 황산칼륨, 푸마르산칼륨(potassium fumerate), 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 염기들을 포함한다.
하나 이상의 아미노산은 본원에 기술된 조성물 중 부형제로서 존재할 수 있다. 이와 관련하여, 예시적인 아미노산으로서는 아르기닌, 리신 및 글리신을 포함한다. 추가의 적합한 약학적으로 허용 가능한 부형제는, 예를 들어, 문헌[Handbook of Pharmaceutical Excipients, 7th ed., Rowe, R.C., Ed., Pharmaceutical Press, 2012]에 기재된 것들을 포함한다.
일부 구현예에서, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제는 포타슘 포스페이트 및 트레할로스를 포함하는 조성물에 포함된다. 일부 구현예에서, 조성물은 주사용 멸균수를 포함하는 액체 제제이다. 일부 다른 구현예에서, 조성물은 재구성에 적합한 동결건조 분말이다.
본원에 기재된 방법에 따르면, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 및 항체는 치료 유효량으로 환자에게 투여된다. 당업자는 임상적으로 관련된 양(예를 들어, 각각, IL-15 수용체 또는 요망되는 수용체/항원에 결합하는 항체에서 효현제 활성)을 제공하는 데 있어서 어느 정도의 주어진 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 및/또는 항체가 충분한지를 결정할 수 있다. 예를 들어, 당업자는 문헌을 참조하고/참조하거나 일련의 증가량의 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제를 투여하고, IL-15의 임상적 효현제 활성을 제공하는 양 또는 양들을 결정할 수 있다. 치료량의 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 및 항체 중 하나 또는 둘 모두는 단독으로 투여될 때의 어느 한 성분의 치료 유효량보다 낮을 수 있음을 인지할 것이다. 본원에 기재된 바와 같은 항체와 조합하여 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제를 투여하는 상승작용은 더 낮은 용량이 투여되는 것을 가능하게 하거나(조합물의 성분 중 하나 또는 둘 모두에 대해), 별개로 투여되는 것으로 결정된 어느 한 성분에 대한 용량에서 더 큰 효능을 가능하게 한다. 일반적으로, 항체의 치료 유효량은 약 0.01 mg/kg 내지 약 100 mg/kg(포함)의 범위일 것이다. 제한적인 것은 아니지만 일부 특정 구현예에서, 항체는 약 0.01 mg/kg 내지 50 mg/kg, 약 0.05 mg/kg 내지 50 mg/kg, 약 0.1 mg/kg 내지 50 mg/kg, 약 0.5 mg/kg 내지 50 mg/kg, 약 1 mg/kg 내지 50 mg/kg, 약 5 mg/kg 내지 50 mg/kg, 약 10 mg/kg 내지 50 mg/kg, 약 15 mg/kg 내지 50 mg/kg, 약 20 mg/kg 내지 50 mg/kg, 약 30 mg/kg 내지 50 mg/kg, 약 40 mg/kg 내지 50 mg/kg, 약 0.01 mg/kg 내지 40 mg/kg, 약 0.05 mg/kg 내지 40 mg/kg, 약 0.1 mg/kg 내지 40 mg/kg, 약 0.5 mg/kg 내지 40 mg/kg, 약 1 mg/kg 내지 40 mg/kg, 약 5 mg/kg 내지 40 mg/kg, 약 10 mg/kg 내지 40 mg/kg, 약 15 mg/kg 내지 40 mg/kg, 약 20 mg/kg 내지 40 mg/kg, 약 30 mg/kg 내지 40 mg/kg, 약 0.01 mg/kg 내지 30 mg/kg, 약 0.05 mg/kg 내지 30 mg/kg, 약 0.1 mg/kg 내지 30 mg/kg, 약 0.5 mg/kg 내지 30 mg/kg, 약 1 mg/kg 내지 30 mg/kg, 약 5 mg/kg 내지 30 mg/kg, 약 10 mg/kg 내지 30 mg/kg, 약 15 mg/kg 내지 30 mg/kg, 약 20 mg/kg 내지 30 mg/kg, 약 0.05 mg/kg 내지 25 mg/kg, 약 0.1 mg/kg 내지 25 mg/kg, 약 0.5 mg/kg 내지 25 mg/kg, 약 1 mg/kg 내지 25 mg/kg, 약 5 mg/kg 내지 25 mg/kg, 약 10 mg/kg 내지 25 mg/kg, 약 15 mg/kg 내지 25 mg/kg, 약 20 mg/kg 내지 25 mg/kg, 약 0.01 mg/kg 내지 20 mg/kg, 약 0.05 mg/kg 내지 20 mg/kg, 약 0.1 mg/kg 내지 20 mg/kg, 약 0.5 mg/kg 내지 20 mg/kg, 약 1 mg/kg 내지 20 mg/kg, 약 5 mg/kg 내지 20 mg/kg, 약 10 mg/kg 내지 20 mg/kg, 약 15 mg/kg 내지 20 mg/kg, 약 0.01 mg/kg 내지 15 mg/kg, 약 0.05 mg/kg 내지 15 mg/kg, 약 0.1 mg/kg 내지 15 mg/kg, 약 0.5 mg/kg 내지 15 mg/kg, 약 1 mg/kg 내지 15 mg/kg, 약 5 mg/kg 내지 15 mg/kg, 약 10 mg/kg 내지 15 mg/kg, 약 0.01 mg/kg 내지 10 mg/kg, 약 0.05 mg/kg 내지 10 mg/kg, 약 0.1 mg/kg 내지 10 mg/kg, 약 0.5 mg/kg 내지 10 mg/kg, 약 1 mg/kg 내지 10 mg/kg, 약 5 mg/kg 내지 10 mg/kg, 약 0.1 mg/kg 내지 5 mg/kg, 약 0.5 mg/kg 내지 5 mg/kg, 약 1 mg/kg 내지 5 mg/kg, 약 0.1 mg/kg 내지 1 mg/kg, 약 0.5 mg/kg 내지 1 mg/kg, 또는 약 0.1 mg/kg 내지 0.05 mg/kg의 용량으로 투여되거나 조성물에 포함된다. 일부 구현예에서, 항체는 약 0.01 mg/kg, 약 0.05 mg/kg, 약 0.1 mg/kg, 약 0.5 mg/kg, 약 1 mg/kg, 약 1.5 mg/kg, 약 5 mg/kg, 약 10 mg/kg, 약 15 mg/kg, 약 16 mg/kg, 약 20 mg/kg, 약 25 mg/kg, 약 30 mg/kg, 약 40 mg/kg 또는 약 50 mg/kg의 용량으로 투여된다. 항체의 치료 유효량은 정부 규제 기관의 승인에 따른 임의의 용량일 수 있음을 인지할 것이다.
일부 구현예에서, 항체는 리툭시맙이고, 치료 유효량은 투여 당 약 100 mg/m2 내지 750 mg/m2(포함)의 범위이다. 구현예들에서, 치료 유효량은 투여 당 약 100 mg/m2 내지 500 mg/m2, 약 150 mg/m2 내지 500 mg/m2, 약 200 mg/m2 내지 500 mg/m2, 약 375 mg/m2 내지 500 mg/m2, 또는 약 400 mg/m2 내지 500 mg/m2의 범위이다. 일부 구현예에서, 항체는 약 100 mg/m2, 약 150 mg/m2, 약 200 mg/m2, 약 250 mg/m2, 약 375 mg/m2, 약 400 mg/m2, 약 500 mg/m2, 또는 약 750 mg/m2의 용량으로 투여된다.
일부 구현예에서, 항체는 다라투무맙이고, 치료 유효량은 투여 당 약 10 mg/kg 내지 50 mg/kg(포함)의 범위이다. 구현예들에서, 치료 유효량은 투여 당 약 10 mg/kg 내지 25 mg/kg, 약 10 mg/kg 내지 20 mg/kg, 약 10 mg/kg 내지 16 mg/kg, 약 10 mg/kg 내지 15 mg/kg, 약 15 mg/kg 내지 50 mg/kg, 약 15 mg/kg 내지 25 mg/kg, 약 15 mg/kg 내지 20 mg/kg, 약 16 mg/kg 내지 50 mg/kg, 약 16 mg/kg 내지 25 mg/kg, 또는 약 16 mg/kg 내지 20 mg/kg의 범위이다. 일부 구현예에서, 항체는 투여 당 약 10 mg/kg, 약 15 mg/kg, 약 16 mg/kg, 약 20 mg/kg, 약 25 mg/kg 또는 약 50 mg/kg의 용량으로 투여된다.
일부 구현예에서, 항체는 세툭시맙이고, 치료 유효량은 투여 당 약 100 mg/m2 내지 750 mg/m2(포함)의 범위이다. 구현예들에서, 치료 유효량은 투여 당 약 100 mg/m2 내지 500 mg/m2, 약 150 mg/m2 내지 500 mg/m2, 약 200 mg/m2 내지 500 mg/m2, 약 250 mg/m2 내지 500 mg/m2, 약 400 mg/m2 내지 500 mg/m2, 약 200 mg/m2 내지 400 mg/m2, 약 250 mg/m2 내지 400 mg/m2, 또는 약 300 mg/m2 내지 400 mg/m2의 범위이다. 일부 구현예에서, 항체는 약 100 mg/m2, 약 150 mg/m2, 약 200 mg/m2, 약 250 mg/m2, 약 400 mg/m2, 약 500 mg/m2, 또는 약 750 mg/m2의 용량으로 투여된다.
일부 구현예에서, 항체는 트라스투주맙이고, 치료 유효량은 투여 당 약 1 mg/kg 내지 20 mg/kg의 범위이다. 구현예들에서, 치료 유효량은 약 2 mg/kg 내지 20 mg/kg, 약 2 mg/kg 내지 15 mg/kg, 약 2 mg/kg 내지 10 mg/kg, 약 2 mg/kg 내지 8 mg/kg, 약 2 mg/kg 내지 6 mg/kg, 약 2 mg/kg 내지 4 mg/kg, 약 4 mg/kg 내지 10 mg/kg, 약 4 mg/kg 내지 8 mg/kg, 약 4 mg/kg 내지 6 mg/kg, 약 6 mg/kg 내지 10 mg/kg, 약 6 mg/kg 내지 8 mg/kg, 또는 약 8 mg/kg 내지 10 mg/kg의 범위이다. 일부 구현예에서, 항체는 약 1 mg/kg, 약 2 mg/kg, 약 3 mg/kg, 약 4 mg/kg, 약 5 mg/kg, 약 6 mg/kg, 약 7 mg/kg, 약 8 mg/kg, 약 9 mg/kg, 약 10 mg/kg, 약 15 mg/kg 또는 약 20 mg/kg의 용량으로 투여된다.
용량은 당업계에 공지된 방법에 의해 결정될 수 있고, 특정 용량은 규제 기관에 의해 설정될 수 있음을 인지할 것이다. 주어진 용량은, 예를 들어 임상의가 적절한 종점에 이르렀다고(예를 들어 치료, 퇴행, 부분 퇴행 등이 이루어졌다고) 결정할 때까지 주기적으로 투여될 수 있다.
일반적으로, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제의 치료 유효량은 약 0.0001 mg 내지 약 100 mg, 또는 약 0.001 mg 내지 약 100 mg, 바람직하게는 약 0.01 mg/일 내지 약 75 mg/일의 용량, 및 보다 바람직하게는 약 0.10 mg/일 내지 약 50 mg/일의 용량의 범위일 것이다. 주어진 용량은, 예를 들어 임상의가 적절한 종점에 이르렀다고(예를 들어 치료, 퇴행, 부분 퇴행 등이 이루어졌다고) 결정할 때까지 주기적으로 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 지속 작용성 IL-15R 효현제의 치료 유효량은 약 0.25 μg/kg 내지 25 μg/kg의 범위이다. 다른 구현예에서, 치료 유효 용량은 일 당 약 0.25 μg/kg 내지 약 0.1 mg/kg, 약 0.375 μg/kg 내지 약 20 μg/kg, 약 0.375 μg/kg 내지 약 15 μg/kg, 약 0.375 μg/kg 내지 약 10 μg/kg, 약 0.375 μg/kg 내지 약 5.0 μg/kg, 약 0.375 μg/kg 내지 약 1.5 μg/kg, 약 1.0 μg/kg 내지 약 20 μg/kg, 약 1.0 μg/kg 내지 약 15 μg/kg, 약 1.0 μg/kg 내지 약 10 μg/kg, 약 1.0 μg/kg 내지 약 5.0 μg/kg, 약 1 μg/kg 내지 약 1.5 μg/kg, 약 1.5 μg/kg 내지 약 20 μg/kg, 약 1.5 μg/kg 내지 약 15 μg/kg, 약 1.5 μg/kg 내지 약 10 μg/kg, 약 1.5 μg/kg 내지 약 5.0 μg/kg, 약 5.0 μg/kg 내지 약 20 μg/kg, 약 5.0 μg/kg 내지 약 15 μg/kg, 약 5.0 μg/kg 내지 약 10 μg/kg, 약 10 약 1.5 μg/kg 내지 약 20 μg/kg, 약 10 μg/kg 내지 약 20 μg/kg, 약 10 μg/kg 내지 약 15 μg/kg, 약 15 μg/kg 내지 약 20 μg/kg, 약 0.01 mg/kg 내지 약 0.1 mg/kg 또는 일 당 약 0.03 mg/kg 내지 약 0.1 mg/kg의 범위이다(예를 들어, 일 당). 다른 구현예에서, 치료 유효 용량은 약 1 μg/kg 내지 10 μg/kg, 약 0.03 mg/kg 내지 약 0.1 mg/kg의 범위이다. 제한하는 것은 아니지만 일부 특정 구현예에서, 치료 유효 용량은 일당 약 0.25 μg/kg, 약 0.3 μg/kg, 약 0.375 μg/kg, 약 0.5 μg/kg, 약 0.75 μg/kg, 약 1 μg/kg, 약 1.5 μg/kg, 약 2 μg/kg, 약 3 μg/kg, 약 4 μg/kg, 약 4.5 μg/kg, 약 5 μg/kg, 약 6 μg/kg, 약 7 μg/kg, 약 8 μg/kg, 약 9 μg/kg, 약 10 μg/kg, 약 15 μg/kg, 약 20 μg/kg, 약 25 μg/kg, 약 0.01 mg/kg, 약 0.03 mg/kg, 약 0.05 mg/kg, 또는 약 0.1 mg/kg이다.
전술된 바와 같은 지속 작용성 IL-15R 효현제에 대한 용량은 컨쥬게이트 또는 단백질 당량 중 어느 하나를 지칭할 수 있음을 인지할 것이다. 일부 바람직한 구현예에서, 용량은 단백질 당량이다.
구현예들에서, 항체 및/또는 지속 작용성 IL-15R 효현제의 용량 수준은 각각 항체 또는 지속 작용성 IL-15R 효현제의 증가된 용량과 동반될 때 감소될 수 있다. 실시예 14에 나타낸 바와 같이, 항체 치료 또는 지속 작용성 IL-15R 효현제에 대한 용량 수준의 감소는 각각 마우스 종양 모델에서 IL-15R 효현제 또는 항체의 용량 수준의 관련된 증가에 의해 보상되었다. 따라서, 고용량의 지속 작용성 IL-15R 효현제와 조합한 저용량의 항체의 투여뿐만 아니라, 저용량의 지속 작용성 IL-15R 효현제와 조합한 고용량의 항체의 투여는 둘 모두 마우스 종양 모델의 골수에서 Daudi 세포 수를 감소시키는 데 효과적이었다.
본원 실시예에서 참조된 용량과 관련하여, 당업자는 당업계에 알려진 바와 같은 환산(예: Nair et al., J. Basic and Clin. Pharmacy (2016) 7:27-31)을 사용하여 동물 용량(예: 마우스)을 인간에서의 상응하는 용량으로 환산할 수 있다.
임의의 주어진 항체 및/또는 컨쥬게이트(또한, 바람직하게는 약학적 제조물의 부분으로서 제공됨)의 단위 복용량은 임상의의 판단, 환자의 수요 등에 따라 다양한 투여 스케줄로 투여될 수 있다. 구체적인 투여 스케줄은 당업자에게 공지되어 있거나 또는 통상적인 방법을 사용하여 실험적으로 결정될 수 있다. 예시적인 투여 스케줄은 이에 한정되지 않지만, 하루에 1번, 일주일에 3번, 일주일에 2번, 일주일에 1번, 한달에 2번(예를 들어, q/14일), 한달에 1번(예를 들어 q/30 또는 31일, q/28일 또는 q/21일) 투여 및 이의 임의의 조합을 포함한다. 투여 스케줄은 필요에 따라, 예를 들어, 소정 기간 동안 주 1회 투여로 조절될 수 있고, 이후 필요에 따라 더 짧거나 더 길게 조절될 수 있음을 인지해야 한다. 일단 원하는 임상 종점을 성취하면, 조성물의 투여는 중단 또는 감소시킨다. 일부 구현예에서, 임의의 주어진 컨쥬게이트의 단위 용량은 지속적인 효과를 제공하도록 1회 투여될 수 있다.
투여될 항체 및/또는 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제의 실제 용량은 대상체의 연령, 체중 및 전체적인 상태뿐만 아니라, 치료중인 병태의 심각성, 건강 관리 전문가의 판단, 그리고 투여되는 컨쥬게이트에 따라서 달라질 것이다. 치료 유효량은 당업자들에게 공지되어 있으며/있거나 관련된 참조 문서 및 문헌에 기술되어 있다.
항체와 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제의 조합물은 암 또는 종양을 앓고 있는 환자에게 투여하기에 적합하다. 방법은, 환자에게, 종양 항원에 대해 유도된 치료 유효량의 항체, 및, 일반적으로 비경구로, 치료 유효량의 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제(바람직하게는 동일하거나 상이한 약학적 조성물의 부분으로 제공됨)를 투여하는 것을 포함한다.
항체 및/또는 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제는 당업계에 공지된 바와 같은 임의의 적합한 수단에 의해 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 항체 및 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 중 하나 또는 둘 모두는 피하, 정맥내, 동맥내, 복강내, 심장내, 척수강내, 및 근육내 주사, 뿐만 아니라 주입 주사를 포함하여 비경구 투여될 수 있다. 추가적인 구현예에서, 항체 및 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 중 하나 또는 둘 모두는 종양내 투여된다. 폐, 비강, 협측, 직장, 설하 및 경피와 같은 다른 투여 방식이 또한 고려된다. 비경구 투여를 위해 적합한 제제 유형은, 특히, 주사-준비 용액, 사용 전에 용매와 조합되는 건조 분말, 주사 준비 현탁액, 사용 전에 비히클과 조합되는 건조 불용성 조성물, 및 에멀젼 및 투여 전에 희석되는 액체 농축물을 포함한다. 일부 특정 구현예에서, 항체 및/또는 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제는 정맥내 투여에 적합한 제제 중에 제공되고, 정맥내로 투여된다. 일부 다른 구현예에서, 항체 및/또는 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제는 피하 투여에 적합한 제제 중에 제공되고, 피하로 투여된다. 일부 추가적인 구현예에서, 항체 및 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 중 하나 또는 둘 모두는 종양내 투여된다. 폐, 비강, 협측, 직장, 설하 및 경피와 같은 다른 투여 방식이 또한 고려된다.
지속 작용성 IL-15 수용체 효현제(예: 약학적 조성물의 부분으로서 제공됨)의 투여 방법은 선택적으로, 효현제를 특정 영역에 국소화시키도록 수행될 수 있다. 예를 들어, 효현제를 포함하는 액체, 겔 및 고체 제제는 또한 질환을 갖는 영역에(예컨대 종양 내에, 종양 근처에, 염증이 생긴 영역 내에, 그리고 염증이 생긴 영역 근처에) 외과적으로 이식될 수 있다. 편리하게는, 요망되는 위치가 컨쥬게이트에 더 잘 노출되도록 보장하기 위해 기관 및 조직을 이미지화할 수도 있다.
본원에 기재된 바와 같이, 본 개시내용의 일 양태는 (특히) 화합물 중 어느 하나 또는 둘 모두로의 치료에 반응하는 병태를 앓고 있는 환자를 치료하는 데 유용한 방법을 제공한다. 예를 들어, 환자는 개별 작용제에 단독으로뿐만 아니라 조합하여 반응할 수 있지만, 조합에 더 반응한다. 추가 예로서, 환자는 개별 작용제 중 하나에 반응하지 않을 수 있지만, 조합에는 반응한다. 또 다른 추가 예로서, 환자는 단독의 개별 작용제 중 어느 하나에 반응하지 않을 수 있지만, 조합에는 반응한다.
본원에서 사용되는 바와 같이 암을 갖는 대상체의 치료와 관련하여, 용어 "치료", "치료하다", 및 "치료하는"은, 암의 하나 이상의 증상을 경감, 둔화, 중단, 또는 역전시키기 위한 또는 암이 실제로 제거되지 않더라도 암의 진행을 지연시키기 위한, 조합 투여와 같은, 대상체가 앓고 있는 암에 대한 모든 개입 스펙트럼을 포함하고자 한다. 치료는, 예를 들어, 증상의 중증도, 증상의 수, 또는 재발 빈도수의 감소, 예를 들어 종양 성장의 억제, 종양 성장의 저지, 또는 이미 존재하는 종양의 퇴행을 포함할 수 있다. 추가로, 용어 "암을 치료하는"은 절대적인 용어로 의도된 것이 아니며, 예를 들어, 종양의 크기 또는 암 세포의 수를 감소시키거나, 암이 완화되게 하거나, 암 세포의 크기 또는 수의 증가를 예방하는 등을 포함할 수 있다. 일부 상황에서, 본 개시내용에 따른 치료는 개선된 예후로 이어진다.
예를 들어, 암 또는 암-관련 질환에서의 개선은 완전한 또는 부분적 반응으로서 특성화될 수 있다. "완전한 반응"은, 임의의 이전의 비정상적 방사선사진 연구, 골수, 및 뇌척수액(CSF) 또는 비정상적 모노클로날 단백질 측정의 정규화와 함께 임상적으로 검출가능한 질환의 부재를 지칭한다. "부분적 반응"은 새로운 병소의 부재 하에 모든 측정가능한 종양 존재량(즉, 대상체 내에 존재하는 악성 세포의 수, 또는 종양 덩어리의 측정된 벌크 또는 비정상적 모노클로날 단백질의 양)의 적어도 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 또는 90% 감소를 지칭한다. 용어 "치료"는 완전한 및 부분적 반응 둘 다를 고려한다.
용어 "암" 및 "암성"은, 통상적으로 비조절된 세포 성장에 의해 특성화되는 포유류에서의 생리학적 병태를 지칭하거나 나타낸다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "종양" 및 "충실성 종양"은, 악성이든 양성이든 모든 병소 및 신생물 세포 성장 및 증식, 및 모든 전-암성 및 암성 세포 및 조직을 지칭한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "향상된" 또는 "향상시키는"은, 예를 들어, 향상된 반응의 맥락에서, 예를 들어, 주어진 기준 또는 참조 요법과 비교할 때, 본원에 개시된 바와 같은 치료에 반응하는 대상체 또는 종양 세포의 능력의 개선을 말한다. 예를 들어, 향상된 반응은 치료에 대한 반응성의 임의의 하나 이상의 지표를 기준으로, 적어도 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 98% 이상의 반응성의 증가를 포함할 수 있다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "향상된" 또는 "향상시키는"은 또한, 예를 들어, 그러한 비교를 위한 주어진 기준과 비교할 때, 치료에 유리하게 반응하는 대상체의 수를 향상시키는 것을 말할 수 있다.
예시적 병태는, 예를 들어, 섬유 육종, 근육 육종, 지방 육종, 연골 육종, 골육종, 척색종, 혈관 육종, 내피 육종, 림프관 육종, 림프혈관내피육종, 활막종, 중피종, 유윙 종양(Ewing's tumor), 평활근육종, 횡문근육종, 결장 암종, 췌장암, 유방암, 난소암, 결장암, 전립선암, 편평세포암, 기저세포암, 두경부암, 선암, 땀샘암, 피지샘암, 유두암, 유두모양샘암종, 낭샘암종, 골수암, 기관지암, 신장세포암, 간암, 담관암, 융모암종, 정상피종, 배아암, 빌름스 종양(Wilms' tumor), 자궁경부암, 고환암, 폐암, 소세포 폐암, 비-소세포 폐암, 방광암, 결장직장암, 상피암, 신경교종, 성상세포종, 수모세포종, 두개인두종, 뇌실막종, 송과체종, 혈관모세포종, 청신경종, 희소돌기아교세포종, 수막종, 흑색종(예를 들어, 포도막 흑색종, 점막 흑색종, 및 연수막 흑색종), 신경모세포종, 망막모세포종, 두경부의 편평 세포 암종, 백혈병, 및 림프종과 같은 암이다. 추가의 예시적인 병태는, 이에 한정되지 않지만, 비호지킨 림프종 및 다발성 골수종을 포함하여 혈액 악성종양이다.
하나의 특정 방법에서, 모노클로날 항체 및 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제는 혈액 악성종양, 예컨대 백혈병 또는 림프종의 치료에 사용된다. 또한 또 다른 방법에서, 모노클로날 항체 및 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제는 충실성 암의 치료에 사용된다. 일부 구현예에서, 충실성 암은, 이로 한정되지 않지만, 결장암, 결장직장암, 췌장암, 유방암, 난소암, 전립선암, 두경부암, 신장 세포암, 자궁경부암, 및 소세포 폐암, 비-소세포 폐암으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 항체와 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제(또는 관련 조성물)의 조합물은, 대상체에 치료 유효 용량으로 투여되는 경우, 예를 들어, 적합한 동물 모델에서 단일로 그리고 등가 용량으로 투여되는 어느 한 작용제에 대하여 관찰되는 것보다 큰 정도로 NK 활성화 및/또는 증식을 자극하는 데 효과적이다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 모노클로날 항체와 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 또는 조성물의 조합물은, 대상체에 치료 유효 용량으로 투여되는 경우, 예를 들어, 적합한 동물 모델에서 평가될 때, 단일로 그리고 등가 용량으로 투여되는 어느 한 작용제에 대하여 관찰되는 것보다 증가된 종양 청소를 제공하는 데 효과적이다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 모노클로날 항체와 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 또는 조성물의 조합물은, 대상체에 치료 유효 용량으로 투여되는 경우, 예를 들어, 적합한 동물 모델에서 평가될 때, 단일로 그리고 등가 용량으로 투여되는 어느 한 작용제에 대하여 관찰되는 것보다 대상체의 증가된 및/또는 장기간 생존, 예를 들어, 생존의 증가, 또는 더 큰 정도의 종양 퇴행을 제공하는 데 효과적이다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 항체와 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 또는 조성물의 조합물은, 대상체에 치료 유효 용량으로 투여되는 경우, 특히, 예를 들어, 골수와 같은 조직 격실 내에서, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 및 항체 중 하나 또는 둘 모두의 활성의 증가를 제공하는 데 효과적이다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 항체와 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 또는 조성물의 조합물은 대상체에 치료 유효 용량으로 투여될 때 NK 세포의 향상된 탈과립화 및/또는 증가된 NK 세포 생존력을 제공하는 데 효과적이다. 구현예들에서, 본원에 기재된 바와 같은 항체와 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 또는 조성물의 투여는 대상체에 치료 유효 용량으로 투여될 때 모노클로날 항체 단독에 의한 치료에 저항성인 암을 치료하는 데 효과적이다.
본원에 기재된 바와 같은 조합 요법과 관련된 주목할 만한 발견은 하기에서 강조되고, 본원에 포함되는 예시적인 실시예에서 더욱 상세하게 설명된다. 실시예 1에 기재된 바와 같은 예시적인 Daudi B 세포 림프종 마우스 모델에서, 예시적인 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 및 항-CD20 모노클로날 항체 리툭시맙의 투여는 단독의 어느 한 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 또는 항체의 투여와 비교할 때 생존을 연장하는 데 효과적이었다. 도 1에 나타낸 바와 같이, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 및 항-CD20 항체, 리툭시맙으로 치료된 마우스는 약 45일 후 100% 생존율을 가졌다. 동형 대조 또는 리툭시맙 단독으로 치료된 마우스는 약 30일 후 0% 생존율을 가졌다. 동형 대조 및 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제로 치료된 마우스는 약 35일 후 0% 생존율을 가졌다. 실시예 2에 기재된 바와 같은 추가의 예시적인 마우스 모델에서, 지속 작용성 IL-15R 효현제(예: 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15) 및 항-CD38 모노클로날 항체, 다라투무맙의 투여는 단독의 어느 한 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 또는 항체의 투여와 비교할 때 생존을 연장하는 데 효과적이었다. 도 5에 나타낸 바와 같이, 예시적인 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제(모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15) 및 항-CD38 항체, 다라투무맙으로 치료된 마우스는, 항체 단일 작용제의 경우 28.5일과 비교하여, 55일의 평균 생존(종양 주사 후)을 가졌다. 실시예 13에 기재된 바와 같이, SCID 마우스에 대한 지속 작용성 IL-15R 효현제(예를 들어, 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15) 및 항-CD38 모노클로날 항체 다라투무맙의 투여는 생존의 두 배 넘는 증가를 야기하였다. 대조적으로, NK 세포 기능을 감소시킨 SCID 베이지 마우스에 대한 지속 작용성 IL-15R 효현제 및 항-CD38 모노클로날 항체 다라투무맙의 투여는 생존 증가를 감소시켰다. 이들 결과는 지속 작용성 IL-15R 효현제 및 항-CD38 모노클로날 항체 다라투무맙의 투여를 통한 NK 세포 기능에 대한 효과가 더 긴 생존을 야기한다는 것을 지시한다. 실시예 18 및 실시예 19는 두 가지 예시적인 결장직장 암종 마우스 모델(HT-29 결장직장 암종 세포 모델 및 HCT-116 결장직장 암종 이종이식편 모델)에서 지속 작용성 IL-15R 효현제(예를 들어, 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15) 및 항-EGFR 모노클로날 항체, 세툭시맙의 투여에 의한 증가된 생존을 나타낸다.
일부 구현예에서, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 및 본원에 기재된 바와 같은 항체의 투여는 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 및/또는 항체 단독의 치료에 비해 대상체의 생존 기간의 증가를 제공하는 데 효과적이다. 일부 다른 구현예에서, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 및 본원에 기재된 바와 같은 항체의 투여는 통상적인 치료에 비해 대상체의 생존 기간의 증가를 제공하는 데 효과적이다. 하나 이상의 구현예에서, 생존 기간은 본원에 기재된 조합물의 성분 중 단지 하나 또는 동일한 적응증에 대한 통상적인 요법으로 치료된 대상체와 비교할 때 적어도 약 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 7개월, 8개월, 9개월, 10개월, 11개월, 12개월, 18개월, 24개월 이상 증가된다. 일부 구현예에서, 생존 기간은 적어도 약 1년, 2년, 3년, 4년, 5년 이상이다.
일부 구현예에서, 본 발명의 조합 치료는 대상체의 무진행 생존(치료되는 질환의 실질적인 진행 없이 생존)을 증가시키는 데 효과적이다. 구현예들에서, 무진행 생존은 본원에 기재된 조합물의 성분 중 단지 하나 또는 동일한 적응증에 대한 통상적인 요법으로 치료된 대상체와 비교할 때 적어도 약 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 7개월, 8개월, 9개월, 10개월, 11개월, 12개월, 18개월, 24개월 이상 증가된다. 일부 구현예에서, 무진행 생존은 적어도 약 1년, 2년, 3년, 4년, 5년 이상이다.
특정 구현예에서, 본 발명의 조합 치료는 조합물로 치료된 대상체의 반응률을 증가시키는 데 효과적이다. 구현예들에서, 본 발명의 조합물은 치료된 대상체의 반응을 본원에 기재된 조합물의 성분 중 단지 하나 또는 동일한 적응증에 대한 통상적인 요법으로 치료된 대상체와 비교할 때 적어도 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 90% 또는 100% 증가시키는 데 효과적이다.
조합 요법은 또한 단일로 투여된 작용제 또는 비치료된 대상체에 비해 주목할 만하게 향상된 정도로 대상체에서 NK 세포 확장을 증진시키는 데 효과적이다. 실시예 2에 기재된 바와 같은 예시적인 Daudi B 세포 림프종 이종이식편 마우스 모델에서, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제, 보다 구체적으로 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15, 및 항-CD38 모노클로날 항체, 다라투무맙의 투여는 치료된 마우스의 골수 중 NK 세포에서 유의한 확장을 야기하였다. 도 3에서 알 수 있는 바와 같이, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 및 항-CD38 항체 다라투무맙으로 치료된 마우스는 비치료된 마우스 또는 단독의 어느 한 작용제로 치료된 마우스와 비교할 때 골수에서 NK 세포 증식(세포 수)의 유의한 증가를 나타냈다. 도 4에서 알 수 있는 바와 같이, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 및 항-CD38 항체 다라투무맙으로 치료된 마우스는 비치료된 마우스 또는 단독의 어느 한 작용제로 치료된 마우스와 비교할 때 골수에서 유의하게 감소된 B 세포 림프종 세포 수를 가졌다. 실시예 16은 인간 두경부 편평 세포 암종에 대한 예시적인 FaDu 마우스 모델에서 예시적인 지속 작용성 IL-15R 효현제(예를 들어, 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15) 및 항-EGFR 모노클로날 항체, 세툭시맙의 투여 후 종양 조직에서 NK 세포의 증식 증가를 나타낸다.
일부 구현예에서, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 및 본원에 기재된 바와 같은 항체의 투여는 NK 세포 확장 및 증식의 증가를 제공하는 데 효과적이다. 일부 추가의 구현예에서, 본 발명의 조합물은 치료된 대상체의 NK 세포의 증식 또는 확장을 본원에 기재된 조합물의 성분 중 단지 하나 또는 동일한 적응증에 대한 통상적인 요법으로 치료된 대상체와 비교할 때 적어도 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 90% 또는 100% 증가시키는 데 효과적이다. 구현예들에서, 본 발명의 조합물은 치료된 대상체의 NK 세포의 증식 또는 확장을 본원에 기재된 조합물의 성분 중 단지 하나 또는 동일한 적응증에 대한 통상적인 요법으로 치료된 대상체와 비교할 때 적어도 약 5배, 10배, 15배, 20배, 25배 이상 증가시키는 데 효과적이다.
일부 구현예에서, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 및 본원에 기재된 바와 같은 항체의 투여는 암 세포 고갈의 증가/암 세포 수의 감소를 제공하는 데 효과적이다. 일부 구현예에서, 본 발명의 조합물은 치료된 대상체의 암 세포의 고갈을 본원에 기재된 조합물의 성분 중 단지 하나 또는 동일한 적응증에 대한 통상적인 요법으로 치료된 대상체와 비교할 때 적어도 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 90% 또는 100% 증가시키는 데 효과적이다. 구현예들에서, 본 발명의 조합물은 치료된 대상체의 암 세포의 고갈을 본원에 기재된 조합물의 성분 중 단지 하나 또는 동일한 적응증에 대한 통상적인 요법으로 치료된 대상체와 비교할 때 적어도 약 5배, 10배, 15배, 20배, 25배 이상 증가시키는 데 효과적이다.
실시예 2에 기재된 바와 같은 예시적인 Daudi B 세포 림프종 이종이식편 마우스 모델에서, 예시적인 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제(예를 들어, 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15) 및 항-CD38 모노클로날 항체, 다라투무맙의 투여는 치료된 마우스의 골수 NK 세포에서 그랜자임 B 발현의 유의한 증가를 야기하였다. 도 6에서 알 수 있는 바와 같이, 예시적인 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제(예를 들어, 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15) 및 항-CD38 항체, 다라투무맙으로 치료된 대다수의 마우스는 비치료된 마우스 또는 항체 단독으로 치료된 마우스와 비교할 때 골수 중 NK 세포에서 그랜자임 B 발현의 증가를 나타냈다. 도 6에서 추가로 알 수 있는 바와 같이, 조합 치료는 그랜자임 B(세포독성 프로테아제) 마커의 증가로 나타나 있는 바와 같이 대다수의 NK 세포에서 기능을 활성화시켰다. 도 14에 나타나 있는 바와 같이 그리고 실시예 11에 기재된 바와 같이, 예시적인 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제(예를 들어, 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15) 및 항-CD38 모노클로날 항체, 다라투무맙의 투여는 비치료된 마우스 또는 항체 단독으로의 치료와 비교할 때 세포 당 기준으로 골수에서 NK 세포에 대한 그랜자임 B 발현을 증가시키는 데 효과적이었다. 실시예 16에 기재된 바와 같은 예시적인 FaDu 인간 두경부 편평 세포 암종 마우스 모델에서, 예시적인 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제(예를 들어, 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15) 및 항-EGFR 모노클로날 항체, 세툭시맙의 투여는 비치료된 마우스와 비교할 때 혈액 및 종양 샘플에 존재하는 NK 세포에서 그랜자임 B 발현을 증가시키는 데 효과적이었다.
일부 구현예에서, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 및 본원에 기재된 바와 같은 항체의 투여는 NK 세포에서 그랜자임 B 발현의 증가를 제공하는 데 효과적이다. 하나 이상의 구현예에서, 본 발명의 조합물은 치료된 대상체의 NK 세포에서 그랜자임 B 발현을 본원에 기재된 조합물의 성분 중 단지 하나 또는 동일한 적응증에 대한 통상적인 요법으로 치료된 대상체와 비교할 때 적어도 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 90% 또는 100% 증가시키는 데 효과적이다. 구현예들에서, 본 발명의 조합물은 치료된 대상체의 NK 세포에서 그랜자임 B 발현을 본원에 기재된 조합물의 성분 중 단지 하나 또는 동일한 적응증에 대한 통상적인 요법으로 치료된 대상체와 비교할 때 적어도 약 5배, 10배, 15배, 20배, 25배 이상 증가시키는 데 효과적이다.
실시예 10에 기재된 바와 같은 예시적인 마우스 모델에서, 예시적인 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제(모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15) 및 항-CD38 모노클로날 항체, 다라투무맙의 투여는 단독의 어느 한 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 또는 항체의 투여와 비교할 때 세포 표면 CD16 수용체를 발현하는 NK 세포의 분획을 증가시키는 데 효과적이었다. 실시예 15에 기재된 바와 같은 추가의 예시적인 결장직장 암종 마우스 모델에서, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 및 항-EGFR 모노클로날 항체 세툭시맙의 투여는 비치료된 마우스와 비교할 때 혈액 및 종양 샘플에서 CD16 세포 표면 발현을 증가시키는 데 효과적이었다. 일부 구현예에서, 지속 작용성 IL-15R 효현제는 CD16에 대해 유도되고 ADCC 작용 기전을 갖는 항체와 조합하여 사용될 때 저 친화성 Fc 수용체 CD16의 향상된 표면 발현을 제공하여 추가의 면역치료 효과를 제공한다.
제3 양태에서는, 전술된 바와 같은 항체 및 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제를 포함하는 키트가 본원에 제공된다. 키트는 항체 및 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제의 투여를 위해 사용 설명서뿐만 아니라, 선택적으로, 필요에 따라 임의의 의료용품 또는 장치를 추가로 포함할 수 있다.
방법, 조합물, 키트 등이 이의 바람직한 특이적 구현예와 함께 기술되어 있고, 상기한 기술뿐만 아니라 후술하는 실시예는 개시된 방법, 조합물, 키트 등을 예시하는 것이고 이들의 범주를 제한하는 것이 아닌 것으로 의도됨을 이해해야 한다. 본 개시내용의 범주 내에서의 다른 양태, 이점 및 변형은 관련된 기술 분야의 숙련된 자들에게 명백할 것이다.
본원에서 참조한 모든 논문, 서적, 특허 및 기타 다른 간행물은 참조로서 전체가 포함된다. 본 명세서와 참조로 포함된 문헌의 교시내용 사이에 모순이 있을 경우, 본 명세서에서의 교시내용 및 정의의 의미가 (특히 본원에 첨부된 청구범위에서 사용된 용어와 관련하여) 우선할 것이다. 예를 들어, 본 출원 및 참조로 포함된 공개문헌이 동일한 용어를 상이하게 정의하는 경우, 용어의 정의는 정의가 위치하는 문서의 교시내용 내에서 보존될 것이다.
실시예
상기 설명뿐만 아니라 하기 실시예는 본원에서 제공되는 방법, 조합물, 키트 등의 범위를 예시하며 제한하지 않고자 함을 이해하여야 한다. 다른 양태, 이점 및 변형은 당업자에게 명백할 것이다.
다음의 실시예에서, 사용된 숫자(예를 들어, 양, 온도 등)에 대하여 정확성을 확보하기 위하여 노력하였으나, 몇몇 실험적 오차 및 편차를 고려하여야 한다. 다르게 지시되지 않는다면, 온도는 섭씨이고 압력은 해수면에서의 대기압 또는 대기압 근처이다. 하기 실시예의 각각은 본원에 기술된 하나 이상의 구현예를 수행하는 데 당업자에게 도움이 될 것으로 고려된다.
재료 및 방법
하기 실시예에서 사용되는 예시적인 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제는, 다르게 지시되지 않는다면, 일반적으로 다음 구조
Figure pct00016
(여기서, n은 약 909의 값을 가짐(분자의 폴리에틸렌 글리콜 부분이 약 40 킬로달톤의 중량 평균 분자량을 갖도록))로 기재되고 [mPEG40kD-CH2CH2CH2C(O)NH]-IL-15로도 지칭되는 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)40kD인터류킨-15이다. 이러한 예시적인 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제는 본원에 컨쥬게이트 1 또는 화합물 1로 기재되며, 이 용어는 하기 실시예에서 상호교환 가능하게 사용된다. 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15의 제조는 PCT 출원 번호 PCT/US2018/032817(국제 공개 번호 WO 2018/213341)의 실시예 1에 기재되어 있다. 이들 실시예에서 용량 및 농도는 IL-15 단백질 함량을 기준으로 한다.
SDS-PAGE 분석
시료는 Invitrogen 겔 전기 영동 시스템(XCell SureLock Mini-Cell)을 사용하는 소듐 도데실 설페이트-폴리아크릴아미드 겔 전기 영동(SDS-PAGE)에 의해 분석될 수 있다. 시료는 시료 완충액과 혼합되고, 제조된 시료들은 NuPAGE Novex 예비 주조 겔 상에 로딩된 후, 약 30분 동안 전개된다.
RP-HPLC 분석
역상 크로마토그래피(RP-HPLC) 분석은 Agilent 1200 HPLC 시스템(Agilent) 상에서 수행될 수 있다. 샘플은 60℃에서 Poroshell 300SB-C3 컬럼(2.1 x 75 mm, Agilent)을 사용하여 분석될 수 있다. 이동 상은 0.1%TFA/H2O(A) 및 0.1%TFA/CH3CN(B)일 수 있다. 컬럼에 대한 유량은 0.5 ml/분일 수 있다. 용리된 단백질 및 PEG-단백질 컨쥬게이트는 280 nm에서 UV를 사용하여 검출된다.
생물검정
CTLL-2 세포에서의 STAT5 인산화에 기초한 효능 검정(마우스 T 세포)
수용체 결합에 따른 포스포-STAT5 검정에서, 하류 세포 신호전달은 이후에 인산화를 통해 STAT5(Signal Transducer and Activator of Transcription 5)를 활성화시켜 세포 증식을 유도하는 유전자 발현을 촉진시킬 수 있다. 포스포-STAT5의 활성화는, 약 10분 동안 샘플 및 참조 처리에 반응하는, 포스포-STAT5/총 STAT5 다중화된 검정(Meso Scale Discovery, 미국 메릴랜드주 소재)을 사용하여 적절한 세포주에서 그리고 본원에 참조로 포함되는 PCT 출원 번호 PCT/US2018/032817에 기재된 바와 같이 측정된다.
HuPBMC-pStat5 검정
다양한 세포에 대한 IL-15 또는 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제의 효능은 PCT 출원 번호 PCT/US2018/032817에 추가로 기재된 바와 같이 포스포-STAT5(Y694) 용량 반응 검정에 의해 측정될 수 있다.
실시예 1
지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 및 예시적인 항-CD-20 모노클로날 항체, 리툭시맙의 투여 후 DAUDI B 세포 림프종 이종이식편 모델에서 생존의 평가
0일차에, SCID 마우스에 1×107 Daudi 세포를 정맥내로 주사하였다. 마우스를 4개 그룹으로 분할하였다. Daudi 세포 주사 후 14일차 및 17일차에, 그룹을 다음과 같은 주사로 치료하였다: 그룹 1: 동형 대조 항체, 그룹 2: 40 mg/kg IP 리툭시맙, 그룹 3: 0.3 mg/kg 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)40kD인터류킨-15(지속 작용성 IL-15 수용체 효현제), 그룹 4: 40 mg/kg IP 리툭시맙 및 0.3 mg/kg SC 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)40kD인터류킨-15(조합).
생존율을 대리 파라미터로서 뒷다리 마비의 징후를 측정함으로써 결정하였다. 결과는 도 2에서 예시된다.
도 2에서 알 수 있는 바와 같이, 리툭시맙 및 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15(도 2에서 "IL-15 수용체 효현제"로 나타냄)의 조합 투여는 단일 작용제 요법으로 투여될 때의 어느 한 성분의 투여와 비교하여 장기간 생존의 유의한 증가를 제공하였다("조합"으로 표시된 수평선 참조). 이러한 결과는, 생체내 림프종 모델에서 평가하는 경우, 예시적인 항-CD-20 모노클로날 항체, 예컨대, 리툭시맙과 조합하여 투여될 때, 마우스의 생존 시간을 유의하게 향상시키는 지속 작용성 수용체 효현제, mPEG-BA-IL-15의 능력을 입증한다.
실시예 2
지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 및 예시적인 항-CD38 모노클로날 항체, 다라투무맙의 투여 후 DAUDI B 세포 림프종 이종이식편 모델에서 골수에서의 세포 수 및 그랜자임 B 발현의 평가
SCID 마우스(N=6/그룹)에 1×107 Daudi 세포를 0일차에 정맥내로 접종하고, 단일 용량의 항-인간 CD38 항체, 다라투무맙(0.5 mg/kg IP, Daudi 세포 접종 후 14일차) 및 2회 용량의 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15(0.3 mg/kg SC, 접종 후 14일차 및 21일차에 각각 1회)로 치료하였다. 마우스를 또한 단일 작용제 요법으로 치료하였다: 다라투무맙(0.5 mg/kg IP, Daudi 세포 접종 후 14일차) 또는 2회 용량의 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)40kD인터류킨-15(0.3 mg/kg SC, 접종 후 14일차 및 21일차).
각각 도 3 및 도 4에 나타낸 바와 같이 골수에서 NK 세포 확장 및 활성화 및 림프종 고갈을 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)40kD인터류킨-15의 두 번째 투여(24일차) 후 3일차에 유동 세포계측법에 의해 평가하였다. 도 3에 나타낸 바와 같이, 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15와 다라투무맙의 조합은 단일 작용제 요법으로서 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)40kD인터류킨-15 및 다라투무맙(각각, p=0.0026 및 p<0.0001)으로 치료된 마우스에 비해 그리고 비치료 대조(p<0.0001)에 비해 치료된 마우스의 골수에서 NK 세포의 유의한 확장을 야기하였다. (일원분산분석 ANOVA, 터키의 다중 비교 검정). 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)40kD인터류킨-15 단일 요법의 경우 10배 증가에 비해 조합 요법의 경우 NK 세포 수의 19배 증가가 관찰되었는데, 이는 골수 조직 내에서 예시적인 모노클로날 항체와 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15 간의 상승작용을 입증하는 것이다.
도 4에 예시된 바와 같이, 다라투무맙과 조합된 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15는 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15 및 다라투무맙 단일 작용제 치료(각각 p=0.02 및 p=0.001)에 비해 그리고 비치료 대조(p<0.0001)에 비해 B 세포 림프종 고갈을 유의하게 향상시켰다. (일원분산분석 ANOVA, 터키의 다중 비교 검정).
도 6에 나타낸 바와 같이 골수 NK 세포에서 그랜자임 B 발현을 측정하였다. 도 6에 예시된 바와 같이, 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15는 고도 특수화 면역 격실에서도 NK 세포 역학을 제어하는 데 효과적이고, 단독으로 또는 모노클로날 항체, 예컨대, 다라투무맙과 조합하여 치료된 마우스의 골수에서 그랜자임 B 발현를 증가시키는 데 효과적이다. 따라서, 종양 결합 항체, 예컨대, 다라투무맙과 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15의 조합은, 도 6에서 그랜자임 B(세포독성 프로테아제) 마커에 의해 나타낸 바와 같이, 골수에서 NK 세포 수를 유의하게 확장시킬 뿐만 아니라 이들 NK 세포의 대다수(>70%)에서 사멸 기능을 활성화시키는 데 효과적이다.
이들 결과는 추가로 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15가 항-종양 항체로 투여되는 경우 NK-세포 매개 ADCC를 실질적으로 향상시키는 데 효과적이라는 것을 예시한다.
실시예 3
지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 및 항-CD38 모노클로날 항체, 다라투무맙의 투여 후 DAUDI B 세포 림프종 이종이식편 모델에서 생존의 평가
1×107 Daudi B 세포 림프종 세포가 정맥내로 접종된 SCID 마우스(N=8/그룹)를 단일 용량의 다라투무맙(0.5 mg/kg, IP, 접종 후 14일차) 및 총 3회 용량의 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)40kD인터류킨-15(0.3 mg/kg, SC, 종양 접종 후 14일차, 21일차 및 28일차에 투여)로 치료하였다. 또한, 단일 작용제 요법으로서 다라투무맙으로 치료된 마우스 및 대조로서의 비치료된 마우스를 평가하였다. 종양-접종 마우스의 생존을 종점 마커로서 신체 조건 스코어링에 의해 측정하였다. 결과는 도 5에 그래프로 제공되어 있다.
도 5에 나타낸 바와 같이, 다라투무맙과의 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15 조합은 다라투무맙 단일 작용제 치료에 비해 평균 생존을 유의하게 증가시킨다(p<0.05, 로그-순위 검정). 조합 요법에 의해 치료된 그룹에 대한 평균 생존은 종양 주사 후 55일인 반면, 다라투무맙 단일 작용제 치료 그룹에 대한 평균 생존은 28.5일이었다.
실시예 4
종양 표적화 치료용 항체 및 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제로의 치료 후 NK 세포 활성화 및 억제성 수용체 세포 표면 발현 조절
골수에서 Daudi B 세포 림프종 종양을 보유하는 Balb/c 마우스(n=6/그룹)에게 Daudi 세포 정맥내 접종 후 14일차에 단일 0.5 mg/kg 용량의 인간 CD38 단백질 표적화 임상 항체 다라투무맙(DARZALEX®, Janssen Biotech) 또는 매칭하는 동형을 갖는 비특이성 대조 항체를 복강내 투여하였다. 추가 그룹에 Daudi 세포 접종 후 14일차 및 21일차에 단일 작용제로서 0.3 mg/kg의 용량으로의 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)40kD인터류킨-15(컨쥬게이트 1)를 피하 투여하거나, Daudi 세포 접종 후 14일차 및 21일차에 0.03 mg/kg 또는 0.3 mg/kg의 용량으로의 컨쥬게이트 1의 조합 치료제를 피하 투여하고, Daudi 세포 접종 후 14일차에 0.5 mg/kg의 용량으로의 다라투무맙을 복강내 투여하였다.
제2 컨쥬게이트 1 투여(Daudi 접종 후 24일차) 후 3일에, 골수를 수집하고, NK 세포 분획을 전체 골수에서 유동 세포계측법에 의해 측정하였다. 세포 표면 활성화 수용체 NKG2D 및 억제성 관문 수용체 NKG2A의 발현은 각각 도 7a 및 도 7b에 나타나 있다.
결과는 표 1 및 도 7a 내지 도 7b에 제공되어 있다. 단일 작용제로서 또는 다라투무맙과 조합하여 치료 용량의 컨쥬게이트 1을 받은 모든 그룹은, 컨쥬게이트 1을 포함하지 않는 모든 치료와 비교할 때, 세포 표면에서 NKG2A를 발현한 NK 세포의 분획 증가(도 7a) 및 세포 표면 상에서 NKG2D를 발현한 NK 세포의 분획 감소(도 7b)를 나타냈다. 억제성 관문 수용체 활성화의 증가 및 수용체 발현 NK 세포의 활성화 감소 각각은 이 실시예에서 다라투무맙으로 예시된 바와 같은 치료용 종양 표적화 항체의 존재에서 컨쥬게이트 1에 의해 NK 세포 활성화를 나타냈다.
Figure pct00017
실시예 5
지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 및 면역글로불린으로의 치료 후 인간 NK 세포 증식의 유도
CFSE 제조물로 표지된 인간 말초 혈액 단핵 세포(PBMC) 내의 NK 세포 증식을 시험관내에서 유도하였다. CFSE 표지 PBMC를 (i) 100 ng/ml 농도의 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)40kD인터류킨-15(컨쥬게이트 1)의 존재에서; (ii) 0.1 mg/ml 농도의 인간 총 면역글로불린 G(hIgG) 용액으로 밤새 예비 코팅된 세포 배양 플라스틱 상에서; (iii) 0.1 mg/ml 농도의 인간 총 면역글로불린 G(hIgG) 용액으로 밤새 예비 코팅된 세포 배양 플라스틱 상에서 및 100 ng/ml 농도의 컨쥬게이트 1의 존재에서; 또는 (iv) 일반 세포 배양 플라스틱 상에서 시험관내로 5일 동안 인큐베이션시켰다. 인큐베이션 기간 후, 세포 배가를 거친 세포에서 CFSE의 감소에 의해 지시된 바와 같은 세포 증식을 각각의 네 가지 인큐베이션 조건에서 PBMC 제조물 중에서 CD56+ 인간 NK 세포 중 CFSE 수준을 측정하여 유동 세포계측법으로 측정하였다(도 8a 내지 도 8d).
결과는 표 2 및 도 8a 내지 도 8d에 제공되어 있다. 데이터는 컨쥬게이트 1과 hIgG 둘 다 PBMC에 노출되지 않은 경우 NK 세포의 2.25%만이 증식하였음을 보여준다. hIgG 단독의 존재에서 NK 세포의 3.92%가 증식되었다. 컨쥬게이트 1 노출은 NK 세포의 49.7% 증식을 야기하였다. 그러나, PBMC가 hIgG와 컨쥬게이트 1 둘 모두에 노출되는 경우, NK 세포의 72%가 증식되었는데, 이는 hIgG 및 컨쥬게이트 1 조합 치료가 hIgG 및 컨쥬게이트 1 단일 작용제 치료 단독의 합보다 유의하게 더 많은 세포를 증식시켰다는 것을 지시한다.
Figure pct00018
실시예 6
지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 및 면역글로불린의 투여 후 인간 NK 세포의 기능적 활성화
인간 말초 혈액 단핵 세포(PBMC) 제조물 중에서 인간 NK 세포의 기능적 활성화를 시험관내에서 유도하였다. 두 공여체로부터의 PBMC를 (i) 1 μg/ml 농도의 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)40kD인터류킨-15(컨쥬게이트 1)의 존재에서; (ii) 0.1 mg/ml 농도의 인간 총 면역글로불린 G(hIgG) 용액으로 밤새 예비 코팅된 세포 배양 플라스틱 상에서; (iii) 0.1 mg/ml 농도의 인간 총 면역글로불린 G(hIgG) 용액으로 밤새 예비 코팅된 세포 배양 플라스틱 상에서 및 1 μg/ml 농도의 컨쥬게이트 1의 존재에서; 또는 (iv) 일반 세포 배양 플라스틱 상에서 밤새 인큐베이션시켰다.
인큐베이션 기간 후, PBMC 중에서 CD56+ 인간 NK 세포의 표면에서 CD69(도 9a) 및 CD107a(도 9b) 검출 항체의 평균 형광 강도(MFI) 신호의 증가를 측정함으로써 유동 세포계측법으로 NK 세포 활성화를 측정하였다. hIgG와 컨쥬게이션 1 중 어느 것에도 세포를 노출시키지 않은 대조 조건을 비교하는 경우 MFI에서의 배수-변화를 계산함으로써 NK 세포의 기능적 활성화를 평가하였다. 활성화 마커 MFI에서의 배수-변화 증가는 개별 NK 세포에서 이들 마커 단백질의 증가를 지시하였는데, 이는 NK 세포의 기능적 활성화를 지시하는 것이다. 실험의 말미에 배양 배지에서 NK 세포 활성화를 또한 나타낸 분비된 그랜자임 B 농도를 또한 ELISA에 의해 측정하였다(도 9c).
결과는 표 3 및 도 9a 내지 도 9c에 제공되어 있다. 데이터는 NK 세포에서 CD69 MFI가 hIgG의 존재에서 1.4배 증가되었음을 보여준다. 컨쥬게이트 1 노출은 1.8배의 CD69 MFI 증가를 야기하였다. 그러나, PBMC가 hIgG와 컨쥬게이트 1 둘 모두에 노출될 때, CD69 MFI는 NK 세포에서 개별적인 각각의 치료보다 3.2배 더 증가하였다. NK 세포에서 CD107a MFI는 hIgG의 존재에서 1.8배 증가되었다. 컨쥬게이트 1 노출은 2.6배의 CD107a MFI 증가를 야기하였다. 그러나, PBMC가 hIgG와 컨쥬게이트 1 둘 모두에 노출될 때, CD107a MFI는 NK 세포에서 각각의 개별 치료보다 4.3배 더 증가하였다. 분비된 그랜자임 B 농도는 대조 조건에 비해 hIgG의 존재에서 증가되지 않았다. 컨쥬게이트 1 노출은 4.1배의 배양 배지에서 그랜자임 B 농도의 증가를 야기하였다. 그러나, PBMC가 hIgG와 컨쥬게이트 1 둘 모두에 노출될 때, 그랜자임 B 농도는 배양 배지에서 개별적인 각각의 치료보다 유의하게 18.7배 더 증가하였다.
Figure pct00019
실시예 7
지속 작용성 IL-15 수용체 효현제의 시험관내 신호전달 및 증식에 대한 효과
KHYG-1 세포를 37℃ 및 5% CO2에서 습윤화된 인큐베이터 안에 20% FBS, 2 mM L-글루타민, 및 20 ng/mL IL-2(완전 성장 배지)로 보충된 RPMI-1640 배지에서 배양하였다.
시험 화합물로 치료하기 1일 전, 세포를 완전 성장 배지에서 500,000 생존 세포/ml의 밀도로 시딩하고, 정상 성장 조건 하에 밤새 인큐베이션하였다. 검정 당일, KHYG-1 세포를 DPBS로 3회 세척하고, 검정 배지(20% FBS, 2 mM L-글루타민으로 보충된 RPMI-1640 배지)에 재현탁시키고, 37℃, 5% CO2에서 4시간 내지 5시간 동안 인큐베이션하였다. 세포를 검정 배지에서 적절한 밀도(8×105 세포/mL)로 조절하고, 50,000 세포/웰을 96-웰 플레이트(View-Plate 96, Perkin-Elmer)의 웰에 분취했다.
STAT5의 인산화 평가
KHYG-1 세포를 IL-15 또는 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제(모노(mPEG-부탄아미드)IL-15)로 자극하고, 이어서 37℃, 5% CO2에서 10분 동안 인큐베이션하였다. 치료된 세포를 얼음 위에 용해시켰다.
Phospho(Tyr694)/Total STAT5a,b Assay Whole Cell Lysate kit(MSD 제품# K15163D)를 사용하여 세포 용해물 중 포스포-STAT5 단백질 수준의 검출을 실행하였다. 포스포-STAT5에 상응하는 상대 광 단위(RLU) 신호를 Sector® Imager 2400 플레이트 리더(MSD)를 사용하여 수집하였고, 결과는 10a에 제공되어 있다. IL-15와 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 둘 모두가 인간 NK 세포주 KHYG-1에서 STAT5의 용량-의존적 인산화를 야기하였는데, 이는 화합물이 시험관내 신호전달에 효과적임을 보여주는 것이다. 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제는 STAT5의 인산화를 유도하여, 약 3배 덜 강력하지만 IL-15와 유사한 STAT5의 최대 인산화 퍼센트를 야기하였다. 이러한 데이터는 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제가 KHYG-1 세포주에서 하류 신호전달을 효과적으로 관여하고 활성화시킬 수 있다는 것을 시사한다.
세포 증식의 평가
세포를 함유하는 이중 웰에 IL-15 또는 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제(모노(mPEG-부탄아미드)IL-15)를 전달하고, 이어서 37℃, 5% CO2에서 48시간 인큐베이션을 수행함으로써 KHYG-1 세포의 자극을 개시하였다.
제조업체의 지시에 따라 CellTiter-Glo 2.0을 사용하여 ATP 수준을 모니터링함으로써 각 웰에서 세포 성장을 측정하였다. KHYG-1 세포 증식에 대한 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제의 효과를 CellTiter-Glo 2.0을 이용하여 48시간 치료 후 IL-15와 비교하였고, 결과는 도 10b에 나타나 있다. 도면에서 알 수 있는 바와 같이, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제에 대한 최대 증식 반응은 IL-15에 의해 야기된 반응과 비슷했다.
실시예 8
지속 작용성 IL-15 수용체 효현제로의 치료 후 인간 NK 세포 증식의 시험관내 유도
CFSE 제조물로 표지된 인간 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)를 증가 용량의 rhIL-15(용량 범위 1 ng/ml 내지 100 ng/ml, 5점, 3배 희석) 또는 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제(모노(mPEG-부탄아미드)IL-15)(용량 범위 10 ng/ml 내지 1000 ng/ml, 5점, 3배 희석)의 존재 하에 시험관내에서 5일 동안 인큐베이션하였다. 인큐베이션 기간 후, 세포 배가가 일어난 세포에서 CFSE의 감소에 의해 지시된 바와 같은 세포 증식을 PBMC 제조물 중에서 CD56+ 인간 NK 세포 중 CFSE 수준을 측정하여 유동 세포계측법으로 측정하였다. 결과는 도 11 및 하기 표 4에 제공되어 있다.
Figure pct00020
rhIL-15와 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 둘 모두는 인간 NK 세포 증식을 용량-의존적으로 유도하였다. 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제는 인간 NK 세포 증식을 유도하는 데 있어서 rhIL-15보다 대략 17배 덜 강력했다. 그러나, rhIL-15 및 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제에 의해 야기된 최대 증식 반응은 비슷했다.
실시예 9
지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 및 면역글로불린으로의 치료 후 NK 세포세포독성의 평가
인간 NK 세포를 음성 선택을 이용하여 정상 공여체 PBMC로부터 자성으로 분류하였다. NK 세포를 400,000 세포/웰의 밀도로 96-웰 U-바닥 플레이트에 시딩하였다. NK 세포를 5% CO2 중 37℃에서 밤새 10% 소태아혈청(FBS) 및 1% 항생제/항진균제로 보충된 완전 RPMI-1640 배지에서 1000 ng/mL의 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제(모노(mPEG-부탄아미드)IL-15) (+)로 자극하거나 비자극 (-) 상태로 두었다.
인간 다발성 골수종 RPMI-8226 세포(ATCC #CCL-155)를 PBS에서 세척하고, 37℃에서 5분 동안 0.15 μM의 CFSE로 염색하였다. 종양 세포를 지시된 곳에서 37℃로 1시간 동안 100 ng/mL 다라투무맙 (+)으로 예비-코팅하였다. 자극된 NK 세포(이펙터 세포) 및 예비-코팅된 CFSE-표지 종양 세포(표적 세포)를 5% CO2 중 37℃에서 3시간 동안 10:1의 E:T 비로 공동 배양하였다. 인큐베이션 후, 세포를 유동 염색 완충액에서 세척하고, 4℃에서 15분 동안 Fc-블록킹하고, 표면-염색하였다(CD45, CD56, CD3-형광 컨쥬게이션된 항체). 세포를 PBS에서 세척하고, 4℃에서 30분 동안 7-아미노액티노마이신(7-AAD) 생존력 염색제에서 인큐베이션한 후, Fortessa(BD)를 사용하여 유동 세포계측 분석을 얻었다. 전체 세포 집단으로부터 7-AAD+ CFSE+ 표적 세포의 백분율은 사망 종양 세포에 대한 백분율이다.
결과는 도 12에 제공되어 있다. 데이터는 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제-프라이밍 인간 NK 세포가 다라투무맙 예비-코팅된 다발성 골수종 세포의 ADCC를 향상시켰다는 것을 보여준다. 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제로 프라이밍된 NK 세포는 비치료 NK 세포 또는 다라투무맙 단독으로 치료된 NK 세포보다 표적 세포에 더 세포독성이었다.
실시예 10
종양 표적화 치료용 항체 및 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제로의 치료 후 NK 세포 저 친화성 면역글로불린 수용체(CD16) 세포 표면 발현 조절
골수에서 Daudi B 세포 림프종 종양을 보유하는 Balb/c 마우스(n=6/그룹)에 Daudi 세포 정맥내 접종 후 14일차에 단일 0.5 mg/kg 용량의 인간 CD38 단백질 표적화 임상 항체 다라투무맙(DARZALEX®, Janssen Biotech) 또는 매칭하는 동형을 갖는 비특이성 대조 항체를 복강내 투여하였다. 추가 그룹을 (i) Daudi 세포 접종 후 14일차 및 21차에 단일 작용제로서 0.3 mg/kg의 용량으로의 모노(mPEG-N-부탄아미드)40kD인터류킨-15(컨쥬게이트 1) 피하 투여, 또는 (ii) Daudi 세포 접종 후 14일차 및 21일차에 0.03 mg/kg 또는 0.3 mg/kg의 용량으로의 컨쥬게이트 1의 조합 치료제 피하 투여 및 Daudi 세포 접종 후 14일차에 0.5 mg/kg의 용량으로의 다라투무맙 복강내 투여로 치료하였다.
제2 컨쥬게이트 1 투여(Daudi 접종 후 24일차) 후 3일차에, 골수를 수집하고, NK 세포 분획을 전체 골수에서 유동 세포계측법에 의해 측정하였다. 종양 표적화 항체의 존재에서 항체 의존적 세포 독성 기전을 매개하는 것으로 알려진 세포 표면 CD16 수용체를 발현하는 NK 세포의 분획, 및 NK 세포에서 세포 당 기준으로 CD16 발현의 변화는 각각 도 13a 및 도 13b에 나타나 있다.
결과는 표 5 및 표 6 및 도 13a 내지 도 13b에 제공되어 있다. 단일 작용제로서 또는 다라투무맙과 조합하여 치료 용량의 컨쥬게이트 1을 받은 모든 그룹은 세포 표면에서 CD16을 발현한 NK 세포 분획의 증가를 나타냈고(도 13a), CD16 발현은 또한 컨쥬게이트 1을 포함하지 않은 모든 치료와 비교할 때 세포 당 기준으로 NK 세포에서 증가했다(도 13b). NK 세포를 발현한 CD16 수용체에서의 증가뿐만 아니라 개별 NK 세포에서 CD16 발현의 증가 각각은 이 실시예에서 다라투무맙으로 예시된 바와 같은 치료용 종양 표적화 항체의 존재에서 컨쥬게이트 1에 의해 NK 세포 활성화를 나타냈다.
Figure pct00021
Figure pct00022
실시예 11
종양 표적화 치료용 항체 및 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제로의 치료 후 NK 세포 세포독성 단백질 그랜자임 B 발현 조절
골수에서 Daudi B 세포 림프종 종양을 보유하는 Balb/c 마우스(n=6/그룹)에 Daudi 세포 정맥내 접종 후 14일차에 단일 0.5 mg/kg 용량의 인간 CD38 단백질 표적화 임상 항체 다라투무맙(DARZALEX®, Janssen Biotech) 또는 매칭하는 동형을 갖는 비특이성 대조 항체를 복강내 투여하였다. 추가 그룹을 (i) Daudi 세포 접종 후 14일차 및 21차에 단일 작용제로서 0.3 mg/kg의 용량으로의 모노(mPEG-N-부탄아미드)40kD인터류킨-15(컨쥬게이트 1) 피하 투여, 또는 (ii) Daudi 세포 접종 후 14일차 및 21일차에 0.03 mg/kg 또는 0.3 mg/kg의 용량으로의 컨쥬게이트 1의 조합 치료제 피하 투여 및 Daudi 세포 접종 후 14일차에 0.5 mg/kg의 용량으로의 다라투무맙 복강내 투여로 치료하였다.
제2 컨쥬게이트 1 투여(Daudi 접종 후 24일차) 후 3일차에, 골수를 수집하고, NK 세포 분획을 전체 골수에서 유동 세포계측법에 의해 측정하였다. NK 세포에 대한 세포 당 기준으로 세포내 그랜자임 B 발현의 변화는 도 14에 나타나 있다.
결과는 표 7 및 도 14에 제공되어 있다. 단일 작용제로서 또는 다라투무맙과 조합하여 치료 용량의 컨쥬게이트 1을 받은 그룹은 컨쥬게이트 1을 포함하지 않은 모든 치료와 비교할 때 NK 세포에서 세포 당 기준으로 그랜자임 B 발현의 증가를 나타냈다(도 14). 개별 NK 세포에서 그랜자임 B 발현의 각 증가는 이 실시예에서 다라투무맙으로 예시된 바와 같은 치료용 종양 표적화 항체의 존재에서 컨쥬게이트 1에 의해 NK 세포 활성화를 나타냈다.
Figure pct00023
실시예 12
지속 작용성 IL-15 수용체 효현제로의 치료 후 시험관내에서 B 세포 림프종 세포에 대한 항체-매개 항체-의존적 세포 독성(ADCC)의 평가
인간 NK 세포를 음성 선택을 이용하여 정상 공여체 PBMC로부터 자성으로 분류하였다. NK 세포를 80,000 세포/웰(도 15a) 또는 400,000 세포/웰(도 15b)의 밀도로 96-웰 U-바닥 플레이트에 시딩하였다. NK 세포를 5% CO2 중 37℃에서 밤새 10% 소태아혈청(FBS) 및 1% 항생제/항진균제로 보충된 완전 RPMI-1640 배지에서 300 ng/mL의 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제(모노(mPEG-부탄아미드)IL-15) (+)로 자극하거나 비자극 (-) 상태로 두었다.
인간 다발성 골수종 RPMI-8226 세포(ATCC #CCL-155)를 PBS에서 세척하고, 37℃에서 5분 동안 0.15 μM의 CFSE로 염색하였다. 자극된 NK 세포(이펙터 세포) 및 다라투무맙-코팅(+ 1 μg/mL) CFSE-표지 종양 세포(표적 세포)를 5% CO2 중 37℃에서 3시간 동안 10:1의 E:T 비로 동시에 공동 배양하였다. 인큐베이션 후, 세포를 유동 염색 완충액에서 세척하고, 4℃에서 15분 동안 Fc-블록킹하고, 표면-염색하였다(CD45, CD56, CD3-형광 컨쥬게이션된 항체). 세포를 PBS에서 세척하고, 4℃에서 30분 동안 7-아미노액티노마이신(7-AAD) 생존력 염색제에서 인큐베이션한 후, Fortessa(BD)를 사용하여 유동 세포계측 분석을 얻었다. 전체 세포 집단으로부터 7-AAD+ CFSE+ 표적 세포의 백분율은 사망 종양 세포에 대한 백분율이다. 결과는 도 15a에 제공되어 있다.
대안적으로, 인간 B 세포 림프종(Daudi) 세포를 PBS에서 세척하고, 37℃에서 5분 동안 0.3 μM의 CFSE로 염색하였다. 리툭시맙-코팅(+ 10 ng/mL) CFSE-표지 종양(표적 세포) 세포를 5% CO2 중 37℃에서 3시간 동안 2:1의 E:T 비로 NK 세포(이펙터 세포)와 동시에 공동 배양하였다. 인큐베이션 후, 세포를 유동 염색 완충액에서 세척하고, 4℃에서 15분 동안 Fc-블록킹하고, 표면-염색하였다(CD45, CD56, CD3-형광 컨쥬게이션된 항체). 세포를 PBS에서 세척하고, 4℃에서 30분 동안 7-아미노액티노마이신(7-AAD) 생존력 염색제에서 인큐베이션한 후, Fortessa(BD)를 사용하여 유동 세포계측 분석을 얻었다. 전체 세포 집단으로부터 7-AAD+ CFSE+ 표적 세포의 백분율은 사망 종양 세포에 대한 백분율이다. 결과는 도 15b에 제공되어 있다.
데이터는 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제-프라이밍 인간 NK 세포가 다라투무맙-코팅 및 리툭시맙-코팅 B 세포 림프종 세포의 ADCC를 향상시킨다는 것을 보여준다. 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제-프라이밍 NK 세포는 비치료 NK 세포보다 표적 세포에 더 세포독성이다.
실시예 13
지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 및 항-CD38 모노클로날 항체, 다라투무맙의 투여 후 DAUDI B 세포 림프종 이종이식편 모델에서 생존의 평가
1×107 Daudi B 세포 림프종 세포가 정맥내로 접종된 SCID 또는 SCID 베이지 마우스(N=8/그룹)를 단일 용량의 다라투무맙(0.5 mg/kg, IP, 접종 후 14일차) 및 총 3회 용량의 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)40kD인터류킨-15(화합물 1)(0.3 mg/kg, 정맥내, 종양 접종 후 14일차, 21일차 및 28일차에 투여)로 치료하였다. 또한, 대조로서 비치료 SCID/베이지 또는 CB17 SCID 마우스를 평가하였다. 종양-접종 마우스의 생존을 종점 마커로서 신체 조건 스코어링 및 뒷다리 마비 징후에 의해 측정하였다. 결과는 도 16에 그래프로 제공되어 있다.
도 16에 나타낸 바와 같이, 다라투무맙과의 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15 조합 치료는 비치료 대조 SCID 마우스에서 27일의 평균 생존에서 조합 치료 마우스에서 60일로 생존율의 두 배보다 많은 증가(33일)를 야기하였다. 대조적으로, NK 세포 기능을 감소시킨 베이지 돌연변이를 갖는 SCID 마우스(SCID 베이지)에서 다라투무맙과의 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15 조합 치료는 단지 생존율의 7일 증가를 야기하였다(비치료 SCID 베이지 마우스의 23일에서 조합 치료 SCID 베이지 마우스의 30일로). 이들 결과는 다라투무맙과의 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15 조합 치료의 충분한 치료 효과를 위해서는 NK 세포 활성이 필요하다는 것을 지시한다.
실시예 14
지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 및 예시적인 항-CD38 모노클로날 항체, 다라투무맙의 투여 후 DAUDI B 세포 림프종 이종이식편 모델에서 세포 수의 평가
SCID 마우스(N=6/그룹)에 1×107 Daudi 세포를 0일차에 정맥내로 접종하고, 단일 용량의 더 낮거나 더 큰 용량의 다라투무맙(0.05 mg/kg 또는 5 mg/kg IP, Daudi 세포 접종 후 14일차) 및 2회 용량의 더 낮거나 더 높은 용량의 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15(화합물 1)(0.03 mg/kg 또는 0.6 mg/kg 정맥내, 접종 후 14일차 및 21일차에 각각 1회)로 치료하였다. 마우스를 또한 단일 작용제 요법으로 치료하였다: 다라투무맙(0.05 mg/kg 또는 5 mg/kg IP, Daudi 세포 접종 후 14일차) 또는 2회 용량의 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)40kD인터류킨-15(화합물 1)(0.03 mg/kg 또는 0.6 mg/kg 정맥내, 접종 후 14일차 및 21일차). 각각 도 17a 및 도 17b에 나타낸 바와 같이, 골수에서 Daudi 세포 수를 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)40kD인터류킨-15의 두 번째 투여(24일차) 후 3일차에 유동 세포계측법에 의해 평가하였다.
도 17a 내지 도 17b에 나타낸 바와 같이, 종양 세포의 92% 고갈인 저용량 다라투무맙(0.05 mg/kg)이 고용량 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15(0.6 mg/kg)와 조합되는 경우와 비교하여(도 17b), 다라투무맙과의 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15(화합물 1) 조합은 다라투무맙 고용량 수준(5 mg/kg)이 저용량 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15(0.03 mg/kg)와 조합되는 경우 종양 세포의 96% 고갈로 비슷한 효능으로 골수내 종양 세포를 고갈시켰다(도 17a). 단일 작용제 치료로서, 저용량 다라투무맙 및 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15는 각각 종양 세포의 단지 30% 및 42%를 고갈시켰다. 단일 작용제 치료로서, 고용량 다라투무맙 및 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15는 각각 종양 세포의 단지 58% 및 69%를 고갈시켰다. 이들 결과는 다라투무맙 치료에서 용량 수준 또는 조직 농도의 감소가 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15 용량 수준 또는 조직 농도의 증가로 보상되어 조합 치료에 의해 종양 세포 사멸의 높은 효능을 유지할 수 있다는 것을 지시한다.
실시예 15
지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 및 예시적인 항-EGFR 모노클로날 항체, 세툭시맙의 투여 후 HCT-116 결장직장 암종 세포 모델의 평가
HCT-116 세포를 접종 전 2주 동안 5% FBS를 갖는 RPMI1640에서 배양하였다. Balb/c SCID 마우스(N=4/그룹)에 HCT-116 세포를 5×106 세포로 피하로 접종하였다. 약 150 mm3(0일차) 평균 종양 부피로 종양 세포를 접종한 지 7일 후, 마우스를 단일 용량의 항-인간 EGFR 항체, 세툭시맙(20 mg/kg IP), 및 단일 용량의 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15(화합물 1)(0.3 mg/kg IV)로 치료하였다.
치료 후 3일차 및 5일차에, 혈액 및 종양 조직을 수집하고, NK 세포 분획을 도 18a에 나타낸 바와 같이 유동 세포계측법에 의해 측정하였다. 도 18a에서 알 수 있는 바와 같이, 종양에서 총 생존 세포 중 NK 세포 분획의 증가가 치료에 의해 유도되었다. 치료 후 3일차 및 5일차에, 혈액 및 종양 조직을 수집하고, NK 세포 수를 도 18b에 나타낸 바와 같이 유동 세포계측법에 의해 측정하였다. 도 18b에 나타낸 바와 같이, 종양 조직에서 NK 세포 수의 증가가 치료에 의해 유도되었다.
샘플을 치료 후 3일차에 유동 세포계측법에 의해 %Ki-67에 대한 면역표현형검사로 처리하였다(도 18c 참조). 도 18c는 시간 경과에 따른, 세포 증식에 대한 마커로서 사용되는, %Ki-67 양성에 의해 측정된 NK 세포 증식의 플롯이다. *Ki67 마커 유도는 대다수의 NK 세포에서 관찰되었는데, 이는 치료 후 효과적인 증식 반응을 지시하는 것이다.
도 18d에 나타낸 바와 같이 치료 후 유동 세포계측법에 의해 3일차에 혈액 또는 종양 NK 세포에서 그랜자임 B 발현을 측정하였다. 도 18d에 예시된 바와 같이, GzmB 발현의 증가는 치료 후 혈액 및 종양 NK 세포 둘 모두에서 관찰되었는데, 이는 치료에 의한 NK 세포의 세포독성 활성화를 지시하는 것이다.
도 18e에 나타낸 바와 같이 CD16의 평균 형광 강도(MFI) 신호의 증가를 측정함으로써 유동 세포계측법으로 세포 표면 CD16 수용체를 발현하는 혈액 또는 종양 NK 세포의 분획을 측정하였다. 도 18e에 예시된 바와 같이, 세포 표면 CD16 발현의 증가가 치료에 의해 유도되었는데, 이는 NK 세포 활성화를 지시하는 것이다.
치료 후 3일차에, 혈액 및 종양 세포를 수집하고, 세포 표면 활성화 수용체 NKG2D의 발현을 유동 세포계측법에 의해 측정하였고, 결과는 도 18f에 나타나 있다. 도 18f에 예시된 바와 같이, NKG2D 표면 발현은 치료에 의해 NK 세포의 기능적 활성화와 일치하여 감소하였다.
이들 결과는 추가로 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15가 항-종양 항체가 투여되는 경우 NK-세포 매개 ADCC를 실질적으로 향상시키는 데 효과적이라는 것을 시사한다.
실시예 16
지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 및 예시적인 항-EGFR 모노클로날 항체, 세툭시맙의 투여 후 FaDu 인간 두경부 편평 세포 암종 모델의 평가
Balb/c SCID 마우스(N=4/그룹)에 3×106 FaDu 세포를 정맥내로 접종하였다. 평균 종양 부피 약 150 mm3(0일차)로 종양 세포를 접종한 지 7일 후, 마우스를 단일 용량의 항-인간 EGFR 항체, 세툭시맙(20 mg/kg IP), 및 단일 용량의 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15(화합물 1)(0.3 mg/kg IV) 대략 150 mm3로 치료하였다.
치료 후 3일차 및 5일차에, 혈액 및 종양 조직을 수집하고, NK 세포 분획을 도 19a에 나타낸 바와 같이 유동 세포계측법에 의해 측정하였다. 도 19a에 나타낸 바와 같이, 종양에서 총 생존 세포 중 NK 세포 분획의 증가가 치료에 의해 유도되었다. 치료 후 3일차 및 5일차에, 혈액 및 종양 조직을 수집하고, NK 세포 수를 도 19b에 나타낸 바와 같이 유동 세포계측법에 의해 측정하였다. 도 19b에 나타낸 바와 같이, 종양 조직에서 NK 세포 수의 증가가 치료에 의해 유도되었다.
샘플을 치료 후 3일차에 %Ki-67에 대한 면역표현형검사로 처리하였다(도 19c 참조). 도 19c는 시간 경과에 따른, 세포 증식에 대한 마커로서 사용되는, %Ki-67 양성에 의해 측정된 NK 세포 증식의 플롯이다. Ki67 마커 유도는 대다수의 NK 세포에서 관찰되었는데, 이는 치료 후 효과적인 증식 반응을 지시하는 것이다.
도 19d에 나타낸 바와 같이 치료 후 유동 세포계측법에 의해 3일차에 혈액 또는 종양 NK 세포에서 그랜자임 B 발현을 측정하였다. 도 19d에 예시된 바와 같이, GzmB 발현의 증가가 치료 후 혈액 및 종양 NK 세포 둘 모두에서 관찰되었는데, 이는 치료에 의한 NK 세포의 세포독성 활성화를 지시하는 것이다.
도 19e에 나타낸 바와 같이 CD16의 평균 형광 강도(MFI) 신호의 증가를 측정함으로써 유동 세포계측법으로 세포 표면 CD16 수용체를 발현하는 혈액 또는 종양 NK 세포의 분획을 측정하였다. 도 19e에 예시된 바와 같이, 세포 표면 CD16 발현의 증가가 치료에 의해 유도되었는데, 이는 NK 세포 활성화를 지시하는 것이다.
치료 후 3일차에, 혈액 및 종양 세포를 수집하고, 세포 표면 활성화 수용체 NKG2D의 발현을 유동 세포계측법에 의해 측정하였고, 결과는 도 19f에 나타나 있다. 도 19f에 예시된 바와 같이, NKG2D 표면 발현은 치료에 의해 NK 세포의 기능적 활성화와 일치하여 감소하였다.
이들 결과는 추가로 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15가 항-종양 항체가 투여되는 경우 NK-세포 매개 ADCC를 실질적으로 향상시키는 데 효과적이라는 것을 시사한다.
실시예 17
지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 및 예시적인 항-EGFR 모노클로날 항체, 세툭시맙의 투여 후 H1975 폐 종양 모델에서 종양 성장 억제의 평가
5×106 H1975 세포가 옆구리에 피하로 접종된 Balb/c 누드 마우스(N=10/그룹)를 총 3회 용량의 세툭시맙(0.25 mg/kg, IP, 접종 후 9일차, 12일차 및 16일차에 투여) 및 총 3회 용량의 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)40kD인터류킨-15(화합물 1)(0.3 mg/kg, 정맥내, 종양 접종 후 9일차, 16일차 및 23일차에 투여)로 치료하였다. 종양 성장 대조의 손실 지연을 치료 개시 후 27일차에 평가하였다. 결과는 도 20에 그래프로 제공되어 있다.
도 20에 나타낸 바와 같이, 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15 치료는 치료 마우스에서 종양 성장 억제를 야기하지 않았다. 세툭시맙 치료 마우스는 세툭시맙 치료 스케쥴이 완료된 후 종양 성장의 재개를 나타냈다. 대조적으로, 세툭시맙과의 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15 조합 치료는 치료 개시 후 27일차까지 종양 성장 재발의 지연을 야기하였는데, 이는 세툭시맙 단일 작용제 치료에 비해 세툭시맙과 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15 조합 치료에서 유의하게 더 느린 종양 성장(p=0.02, 맨-휘트니 검정)을 보여주는 것이다. 이들 데이터는 세툭시맙과의 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15 조합이 이러한 종양 모델에서 세툭시맙 단일 작용제 치료에 비해 더 우수한 종양 성장 대조를 야기한다는 것을 지시한다.
실시예 18
지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 및 예시적인 항-EGFR 모노클로날 항체, 세툭시맙의 투여 후 HT-29 결장직장 암종 세포 모델에서 종양 성장 억제 및 지연의 평가
5×106 HT-29 세포가 옆구리에 피하로 접종된 SCID 마우스(N=8/그룹)를 총 6회 용량의 세툭시맙(40 mg/kg, IP, 접종 후 7일차, 11일차, 14일차, 18일차, 21일차, 25일차에 투여) 및 총 3회 용량의 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)40kD인터류킨-15(화합물 1)(0.3 mg/kg, 정맥내, 종양 접종 후 7일차, 14일차 및 21일차에 투여)로 치료하였다. 종양 성장 억제를 치료 개시 후 21일차에 평가하였다. 결과는 도 21a에 그래프로 제공되어 있다.
도 21a에 나타낸 바와 같이, 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15 또는 세툭시맙 단일 작용제 치료는 치료 마우스에서 종양 성장 억제를 야기하지 않았다. 대조적으로, 세툭시맙과의 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15 조합 치료는 유의한 종양 성장 억제를 야기하였다. 이들 데이터는 세툭시맙과의 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15 조합이 세툭시맙 저항성 종양 모델에서 종양 성장 억제를 야기한다는 것을 지시한다.
종양 성장 지연(TVQT)을 기준선으로부터 400% 종양 성장으로 설정된 종점으로 평가하였다. 도 21b는 치료 개시일에 기준선 종양 부피로부터 종양 부피 4 배 시간(TVQT)을 측정함으로써 38% 종양 성장 지연이 유도되었음을 보여준다.
실시예 19
지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 및 예시적인 항-EGFR 모노클로날 항체, 세툭시맙의 투여 후 HCT-116 결장직장 암종 이종이식편 모델에서 종양 성장 억제 및 지연의 평가
5×106 HCT-116 세포가 옆구리에 피하로 접종된 SCID 마우스(N=8/그룹)를 총 6회 용량의 세툭시맙(40 mg/kg, IP, 접종 후 7일차, 11일차, 14일차, 18일차, 21일차, 25일차에 투여) 및 총 3회 용량의 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)40kD인터류킨-15(화합물 1)(0.3 mg/kg, 정맥내, 종양 접종 후 7일차, 14일차 및 21일차에 투여)로 치료하였다. 종양 성장 억제를 치료 개시 후 19일차에 평가하였다. 결과는 도 22a에 그래프로 제공되어 있다.
도 22a에 나타낸 바와 같이, 세툭시맙 단일 작용제 치료는 치료 마우스에서 종양 성장 억제를 야기하지 않았다. 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15 단일 작용제 치료는 31% 종양 성장 억제를 야기하였다. 대조적으로, 세툭시맙과의 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15 조합 치료는 42% 종양 성장 억제를 야기하였다. 이들 데이터는 세툭시맙과의 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15 조합이 세툭시맙 저항성 종양 모델에서 종양 성장 억제를 야기한다는 것을 지시한다.
치료 개시일에 기준선 종양 부피로부터 종양 부피 4 배 시간(TVQT)을 측정함으로써 종양 성장 지연을 평가하였다. 도 22b는 조합 치료에 의해 42% 종양 성장 지연이 유도되었고, 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)40kD인터류킨-15(화합물 1) 단일 작용제 치료에 의해 26% 종양 성장 지연이 유도되었고, 반면에 세툭시맙 단일 작용제 치료가 종양 성장 지연을 야기하지 않았다는 것을 보여준다.
실시예 20
지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 및 예시적인 항-EGFR 모노클로날 항체, 세툭시맙의 투여 후 시험관내 모델에서 HCT-116 결장직장 암종에서의 항체-매개 세포 독성(ADCC)의 평가
인간 NK 세포를 음성 선택을 이용하여 정상 공여체 PBMC로부터 자성으로 분류하였다. NK 세포를 400,000 세포/웰의 밀도로 96-웰 U-바닥 플레이트에 시딩하였다. NK 세포를 5% CO2 중 37℃에서 밤새 10% 소태아혈청(FBS) 및 1% 항생제/항진균제로 보충된 완전 RPMI-1640 배지에서 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)40kD인터류킨-15(화합물 1)(300 ng/mL) (+)로 자극하거나 비자극 (-) 상태로 두었다.
5% CO2 중 37℃에서 10% 소태아혈청(FBS) 및 1% 항생제/항진균제로 보충된 McCoy 5A 배지(ATCC+ 30-2007)에 결장 인간 HCT-116 세포(ATCC # CCL-247)를 배양하였다. HCT-116 세포를 37℃에서 5분 동안 0.25% 트립신-0.53 mM EDTA에 인큐베이션함으로써 계대배양하고, 멸균 PBS에서 세척하고, 배양 배지에 재현탁시키고, 계수하고, 10:1의 이펙터:표적(E:T)을 이용하여 NK 세포와 공동 배양하였다. 동시에, 세툭시맙(McKesson Medical Surgical #66733-948-23 로트# C1800115) 및 IgG1 동형(Biolegend; LEAF 정제된 IgG1)을 30 ug/mL의 농도로 상응하는 웰에 첨가한 후(+), 5% CO2 중 37℃에서 3시간 동안 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후, 세포를 유동 염색 완충액에서 세척하고, 4℃에서 15분 동안 Fc-블록킹하고, 암소에서 4℃에서 20분 동안 표면-염색하였다(EpCAM, CD45, CD56, CD3-형광 컨쥬게이션된 항체). 세포를 PBS에서 세척하고, 4℃에서 30분 동안 7-아미노액티노마이신(7-AAD) 생존력 염색제에서 인큐베이션한 후, Fortessa(BD)를 사용하여 유동 세포계측 분석을 얻었다. 전체 세포 집단으로부터 7-AAD+ CD45- EpCAM+ 표적 세포의 백분율은 사망 종양 세포에 대한 백분율이다. 결과는 도 23a에 제공되어 있다.
5% CO2 중 37℃에서 10% 소태아혈청(FBS) 및 1% 항생제/항진균제로 보충된 최소 이글 필수 배지(EMEM; ATCC+ 30-2003)에서 상피/인두 두경부 인간 FaDu 세포(ATCC # HTB-43)를 배양하였다. FaDu 세포를 37℃에서 5분 동안 0.25% 트립신-0.53 mM EDTA에서 인큐베이션함으로써 계대배양하고, 멸균 PBS에서 세척하고, 배양 배지에 재현탁시키고, 계수하고, 10:1의 이펙터:표적(E:T)을 이용하여 NK 세포와 공동 배양하였다. 동시에, 세툭시맙(McKesson Medical Surgical #66733-948-23 로트# C1800115) 및 IgG1 동형(Biolegend; LEAF 정제된 IgG1)을 300 ng/mL의 농도로 상응하는 웰에 첨가한 후(+), 5% CO2 중 37℃에서 3시간 동안 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후, 세포를 유동 염색 완충액에서 세척하고, 4℃에서 15분 동안 Fc-블록킹하고, 암소에서 4℃에서 20분 동안 표면-염색하였다(CD45, CD56, CD3-형광 컨쥬게이션된 항체). 세포를 PBS에서 세척하고, 4℃에서 30분 동안 7-아미노액티노마이신(7-AAD) 생존력 염색제에서 인큐베이션한 후, Fortessa(BD)를 사용하여 유동 세포계측 분석을 얻었다. 전체 세포 집단으로부터 7-AAD+ CD45-표적 세포의 백분율은 사망 종양 세포에 대한 백분율이다. 결과는 도 23b에 제공되어 있다.
도 23a 및 도 23b에서 알 수 있는 바와 같이, 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)40kD인터류킨-15-프라이밍 인간 NK 세포는 세툭시맙-코팅 인간 충실성 종양 세포의 ADCC를 향상시킨다.
실시예 21
지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 및 예시적인 항-HER 모노클로날 항체, 트라스투주맙의 투여 후 SKOV-3 난소 암종 세포 모델에서 종양 성장 억제의 평가
1:1 비로 매트리겔과 혼합된 1×107 SKOV-3 세포가 옆구리에 피하로 접종된 Balb/c 누드 마우스(N=10/그룹)를 총 6회 용량의 트라스투주맙(13.5 mg/kg, IV, 접종 후 6일차에 시작하여 3주 동안 주 2회 투여) 및 총 3회 용량의 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)40kD인터류킨-15(화합물 1)(0.3 mg/kg, 정맥내, 종양 접종 후 6일차, 13일차 및 20일차에 투여)로 치료하였다. 접종된 마우스에서 종양 성장 억제를 치료 개시 후 35일차에 측정하였다. 결과는 도 24에 그래프로 제공되어 있다.
도 24에 나타낸 바와 같이, 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15 조합 치료는 치료 마우스에서 종양 성장 억제를 야기하지 않았다. 트라스투주맙 치료 마우스는 61%의 종양 성장 억제를 나타냈지만, 종양이 없는 동물은 트라스투주맙 치료에 의해 야기되지 않았다. 대조적으로, 트라스투주맙과의 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15 조합 치료는 모든 치료 동물에서 종양의 완전 손실을 야기하고, 동물은 종양이 없는 상태로 유지되었다. 이들 데이터는 트라스투주맙과의 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15 조합이 이러한 종양 모델에서 트라스투주맙 단일 작용제 치료에 비해 더 우수한 종양 성장 억제를 야기한다는 것을 지시한다.
실시예 22
지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 및 예시적인 항-HER 모노클로날 항체, 트라스투주맙의 투여 후 NCI-N87 위암종 세포 모델에서 종양 성장 억제의 평가
1:1 비로 매트리겔과 혼합된 1×107 NCI-N87 세포가 옆구리에 피하로 접종된 Balb/c 누드 마우스(N=10/그룹)를 총 3회 용량의 트라스투주맙(제1 용량 3 mg/kg 및 후속하는 2회 용량 1 mg/kg, IV, 접종 후 5일차, 12일차 및 20일차에 투여) 및 총 3회 용량의 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)40kD인터류킨-15(화합물 1)(0.3 mg/kg, 정맥내, 종양 접종 후 5일차, 12일차 및 19일차에 투여)로 치료하였다. 접종된 마우스에서 종양 성장 억제를 치료 개시 후 25일차에 측정하였다. 결과는 도 25에 그래프로 제공되어 있다.
도 25에 나타낸 바와 같이, 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15 치료는 치료 마우스에서 종양 성장 억제를 야기하지 않았다. 트라스투주맙 치료 마우스는 29% 종양 성장 억제를 나타냈다. 대조적으로, 트라스투주맙과의 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15 조합 치료는 치료 마우스에서 더 높은 41% 종양 성장 억제를 야기하였다. 이들 데이터는 트라스투주맙과의 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)인터류킨-15 조합이 이러한 종양 모델에서 트라스투주맙 단일 작용제 치료에 비해 더 우수한 종양 성장 억제를 야기한다는 것을 지시한다.
본 발명의 방법, 치료 조합물 및 키트의 구현예들은 하기를 포함하나 이에 제한되지 않는다:
구현예 1. 암을 갖는 대상체를 치료하는 방법으로서, 상기 방법은
(a) 하기 구조를 갖는 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제:
[화학식 I]
Figure pct00024
(여기서, IL-15는 인터류킨-15 모이어티이고, n은 약 150 내지 약 3,000의 정수이고; m은 2, 3, 4, 및 5로부터 선택된 정수이고, n'은 1이고, ~NH~은 IL-15 모이어티의 아미노 기를 나타냄); 및
(b) 인단백질, 막관통 단백질, 당단백질, 당지질, 및 성장 인자로부터 선택된 종양 항원에 특이적으로 결합하는, 종양-유도 항체로서, 항체는 작용 기전으로서 항체 의존적 세포 독성(ADCC)을 갖는, 종양-유도 항체를 대상체에 투여하는 단계를 포함하고,
단계 (a)와 단계 (b)는 동시에 또는 순차적으로 그리고 임의의 순서로 수행되는, 방법.
구현예 2. 구현예 1에 있어서, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제는 약학적으로 허용 가능한 염인, 방법.
구현예 3. 조합된 또는 개별적인 구현예 1 내지 구현예 2에 있어서, 화학식 I에서 m은 2 또는 3인, 방법.
구현예 4. 조합된 또는 개별적인 구현예 1 내지 구현예 3에 있어서, 화학식 I에서 m은 3인, 방법.
구현예 5. 조합된 또는 개별적인 구현예 1 내지 구현예 4에 있어서, 화학식 I에서 n은 약 909의 값을 갖는, 방법.
구현예 6. 조합된 또는 개별적인 구현예 1 내지 구현예 5에 있어서, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제는 (메톡시PEG-N-부탄아미드)20-60kD인터류킨-15, (메톡시PEG-N-부탄아미드)20-40kD인터류킨-15, (메톡시PEG-N-부탄아미드)40kD인터류킨-15, 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)20-60kD인터류킨-15, 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)20-40kD인터류킨-15, 및 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)40kD인터류킨-15로부터 선택되는, 방법.
구현예 7. 조합된 또는 개별적인 구현예 1 내지 구현예 6에 있어서, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제는 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)40kD인터류킨-15인, 방법.
구현예 8. 조합된 또는 개별적인 구현예 1 내지 구현예 7에 있어서, 암은 충실성 암인, 방법.
구현예 9. 조합된 또는 개별적인 구현예 1 내지 구현예 8에 있어서, 충실성 암은 유방암, 난소암, 결장암, 결장직장암, 위암, 악성 흑색종, 간암, 소세포 폐암, 비-소세포 폐암, 갑상선암, 신장암, 담관암, 뇌암, 자궁경부암, 상악동암, 방광암, 식도암, 호지킨병 및 부신피질암(임의의 이들의 전이성 형태 포함)으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
구현예 10. 조합된 또는 개별적인 구현예 1 내지 구현예 7에 있어서, 암은 혈액 악성종양인, 방법.
구현예 11. 조합된 또는 개별적인 구현예 1 내지 구현예 7 및 구현예 10에 있어서, 혈액 악성종양은 다발성 골수종, 비호지킨 림프종, 백혈병 및 림프종으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
구현예 12. 조합된 또는 개별적인 구현예 1 내지 구현예 7 및 구현예 10 내지 구현예 11에 있어서, 암은 B 세포 악성종양인, 방법.
구현예 13. 조합된 또는 개별적인 구현예 1 내지 구현예 12에 있어서, 단계 (a)는 단계 (b) 전에 수행되는, 방법.
구현예 14. 조합된 또는 개별적인 구현예 1 내지 구현예 12에 있어서, 단계 (b)는 단계 (a) 전에 수행되는, 방법.
구현예 15. 조합된 또는 개별적인 구현예 1 내지 구현예 12에 있어서, 단계 (a)와 단계 (b)는 동시에 또는 실질적으로 동시에 수행되는, 방법.
구현예 16. 조합된 또는 개별적인 구현예 1 내지 구현예 15에 있어서, 상기 투여는, 적합한 동물 모델에서 측정하는 경우, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 또는 종양-유도 항체 중 어느 하나가 단일 작용제로서 투여될 때 관찰되는 정도보다 큰 정도로 NK 활성화를 자극하는 데 효과적인, 방법.
구현예 17. 조합된 또는 개별적인 구현예 1 내지 구현예 16에 있어서, 상기 투여는, 적합한 동물 모델에서 측정하는 경우, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 또는 종양-유도 항체 중 어느 하나가 단일 작용제로서 투여될 때 관찰되는 정도보다 큰 정도로 NK 증식을 자극하는 데 효과적인, 방법.
구현예 18. 조합된 또는 개별적인 구현예 1 내지 구현예 17에 있어서, 상기 투여는, 적합한 동물 모델에서 측정하는 경우, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 또는 종양-유도 항체 중 어느 하나가 단일 작용제로서 투여될 때 관찰되는 정도보다 큰 정도로 CD8+ T-세포 생존 및 기억 형성을 뒷받침하는 데 효과적인, 방법.
구현예 19. 조합된 또는 개별적인 구현예 1 내지 구현예 18에 있어서, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제는 정맥내 또는 피하 투여되는, 방법.
구현예 20. 조합된 또는 개별적인 구현예 1 내지 구현예 19에 있어서, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제는 q7d, q14d, q21d, 또는 매달, 또는 이들의 임의의 조합으로 투여되는, 방법.
구현예 21. 조합된 또는 개별적인 구현예 1 내지 구현예 20에 있어서, 종양-유도 항체는 정맥내 또는 복강내 투여되는, 방법.
구현예 22. 조합된 또는 개별적인 구현예 1 내지 구현예 21에 있어서, 종양-유도 항체는 q7d, q14d, q21d, 또는 매달, 또는 이들의 임의의 조합으로 투여되는, 방법.
구현예 23. 조합된 또는 개별적인 구현예 1 내지 구현예 22에 있어서, 종양-유도 항체는 모노클로날 항체인, 방법.
구현예 24. 조합된 또는 개별적인 구현예 1 내지 구현예 23에 있어서, 종양-유도 항체는 항-CD19 항체, 항-CD20 항체, 및 항-CD38 항체로부터 선택되는, 방법.
구현예 25. 조합된 또는 개별적인 구현예 1 내지 구현예 23에 있어서, 당단백질에 특이적으로 결합하는 종양-유도 항체는 항-SLAMF7 항체, 항-EpCAM 항체, 항-gpA3 항체 3, 및 항-FBP 항체로부터 선택되는, 방법.
구현예 26. 조합된 또는 개별적인 구현예 1 내지 구현예 23에 있어서, 성장 인자에 특이적으로 결합하는 종양-유도 항체는 항-VEGF 항체, 항-VEGFR 항체, 및 항-EGFR 항체로부터 선택되는, 방법.
구현예 27. 조합된 또는 개별적인 구현예 1 내지 구현예 23에 있어서, 종양-유도 항체는 IgG 항체인, 방법.
구현예 28. 조합된 또는 개별적인 구현예 1 내지 구현예 23에 있어서, 종양-유도 항체는 다라투무맙, 리툭시맙, 세툭시맙 및 트라스투주맙으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
구현예 29. 암을 치료하는 데 사용하기 위한 치료 조합물로서,
(a) 하기 구조를 갖는 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제:
[화학식 I]
Figure pct00025
(여기서, IL-15는 인터류킨-15 모이어티이고, n은 약 150 내지 약 3,000의 정수이고; m은 2, 3, 4, 및 5로부터 선택된 정수이고, n'은 1이고, ~NH~은 IL-15 모이어티의 아미노 기를 나타냄); 및
(b) 인단백질, 막관통 단백질, 당단백질, 당지질, 및 성장 인자로부터 선택된 종양 항원에 특이적으로 결합하는, 종양-유도 항체로서, 작용 기전으로서 항체 의존적 세포 독성(ADCC)을 포함하는, 종양-유도 항체를 포함하는, 치료 조합물.
구현예 30. 구현예 29에 있어서, 지속 작용성 수용체 효현제는 약학적으로 허용 가능한 염인, 치료 조합물.
구현예 31. 조합된 또는 개별적인 구현예 29 내지 구현예 30에 있어서, 화학식 I에서 m은 2 또는 3인, 치료 조합물.
구현예 32. 조합된 또는 개별적인 구현예 29 내지 구현예 31에 있어서, 화학식 I에서 m은 3인, 치료 조합물.
구현예 33. 조합된 또는 개별적인 구현예 29 내지 구현예 32에 있어서, 화학식 I에서 n은 약 909의 값을 갖는, 치료 조합물.
구현예 34. 조합된 또는 개별적인 구현예 29 내지 구현예 33에 있어서, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제는 (메톡시PEG-N-부탄아미드)20-60kD인터류킨-15, (메톡시PEG-N-부탄아미드)20-40kD인터류킨-15, (메톡시PEG-N-부탄아미드)40kD인터류킨-15, 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)20-60kD인터류킨-15, 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)20-40kD인터류킨-15, 및 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)40kD인터류킨-15로부터 선택되는, 치료 조합물.
구현예 35. 조합된 또는 개별적인 구현예 29 내지 구현예 34에 있어서, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제는 모노(메톡시PEG-N-부탄아미드)40kD인터류킨-15인, 치료 조합물.
구현예 36. 조합된 또는 개별적인 구현예 29 내지 구현예 35에 있어서, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제는 정맥내 또는 피하 투여용으로 제형화되는, 치료 조합물.
구현예 37. 조합된 또는 개별적인 구현예 29 내지 구현예 36에 있어서, 종양-유도 항체는 정맥내 또는 복강내 투여용으로 제형화되는, 치료 조합물.
구현예 38. 조합된 또는 개별적인 구현예 29 내지 구현예 37에 있어서, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제는 정맥내 또는 피하 투여용으로 제형화되는, 치료 조합물.
구현예 39. 조합된 또는 개별적인 구현예 29 내지 구현예 38에 있어서, 종양-유도 항체는 정맥내 또는 복강내 투여용으로 제형화되는, 치료 조합물.
구현예 40. 조합된 또는 개별적인 구현예 29 내지 구현예 39에 있어서, 종양-유도 항체는 모노클로날 항체인, 치료 조합물.
구현예 41. 조합된 또는 개별적인 구현예 29 내지 구현예 40에 있어서, 종양-유도 항체는 항-CD19 항체, 항-CD20 항체, 및 항-CD38 항체로부터 선택되는, 치료 조합물.
구현예 42. 조합된 또는 개별적인 구현예 29 내지 구현예 40에 있어서, 당단백질에 특이적으로 결합하는 종양 유도 항체는 항-SLAMF7 항체, 항-EpCAM 항체, 항-gpA3 항체 3, 및 항-FBP 항체로부터 선택되는, 치료 조합물.
구현예 43. 조합된 또는 개별적인 구현예 29 내지 구현예 40에 있어서, 성장 인자에 특이적으로 결합하는 종양-유도 항체는 항-VEGF 항체, 항-VEGFR 항체, 및 항-EGFR 항체로부터 선택되는, 치료 조합물.
구현예 44. 조합된 또는 개별적인 구현예 29 내지 구현예 40에 있어서, 종양-유도 항체는 IgG 항체인, 치료 조합물.
구현예 45. 조합된 또는 개별적인 구현예 29 내지 구현예 40에 있어서, 종양-유도 항체는 다라투무맙, 리툭시맙, 세툭시맙 및 트라스투주맙으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 치료 조합물.
구현예 46. 조합된 또는 개별적인 구현예 29 내지 구현예 45에 있어서, 암은 충실성 암인, 치료 조합물.
구현예 47. 조합된 또는 개별적인 구현예 29 내지 구현예 46에 있어서, 충실성 암은 유방암, 난소암, 결장암, 결장직장암, 위암, 악성 흑색종, 간암, 소세포 폐암, 비-소세포 폐암, 갑상선암, 신장암, 담관암, 뇌암, 자궁경부암, 상악동암, 방광암, 식도암, 호지킨병 및 부신피질암(임의의 이들의 전이성 형태 포함)으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 치료 조합물.
구현예 48. 조합된 또는 개별적인 구현예 29 내지 구현예 45에 있어서, 암은 혈액 악성종양인, 치료 조합물.
구현예 49. 조합된 또는 개별적인 구현예 29 내지 구현예 45 및 구현예 48에 있어서, 혈액 악성종양은 다발성 골수종, 비호지킨 림프종, 백혈병 및 림프종으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 치료 조합물.
구현예 50. 조합된 또는 개별적인 구현예 29 내지 구현예 45 및 구현예 48 내지 구현예 49에 있어서, 암은 B 세포 악성종양인, 치료 조합물.
구현예 51. 사용 설명서가 첨부된, 조합된 또는 개별적인 구현예 29 내지 구현예 50의 치료 조합물을 포함하는, 키트.
구현예 52. 구현예 51에 있어서, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 및 모노클로날 항체는 각각 하나 이상의 개별 단위 투여형에 함유되는, 키트.
구현예 53. 구현예 51에 있어서, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 및 모노클로날 항체는 각각 동일한 단위 투여형에 함유되는, 키트.
서열 목록
Figure pct00026
SEQUENCE LISTING <110> Nektar Therapeutics Miyazaki, Takahiro Madakamutil, Loui Kivimae, Saul <120> LONG-ACTING INTERLEUKIN-15 RECEPTOR AGONIST IN COMBINATION WITH ANOTHER PHARMACOLOGICALLY ACTIVE AGENT <130> SHE0566.PCT <140> Not Yet Assigned <141> Filed Herewith <150> US 62/758,344 <151> 2018-11-09 <150> US 62/789,924 <151> 2019-01-08 <150> US 62/818,003 <151> 2019-03-13 <150> US 62/828,437 <151> 2019-03-28 <150> US 62/843,036 <151> 2019-05-03 <150> US 62/848,372 <151> 2019-05-15 <150> US 62/924,015 <151> 2019-10-21 <160> 3 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 114 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic protein <400> 1 Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile 1 5 10 15 Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His 20 25 30 Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln 35 40 45 Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu 50 55 60 Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val 65 70 75 80 Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile 85 90 95 Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn 100 105 110 Thr Ser <210> 2 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic protein <400> 2 Met Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu 1 5 10 15 Ile Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val 20 25 30 His Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu 35 40 45 Gln Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val 50 55 60 Glu Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn 65 70 75 80 Val Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn 85 90 95 Ile Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile 100 105 110 Asn Thr Ser 115 <210> 3 <211> 162 <212> PRT <213> Artificial Seqeunce <220> <223> Synthetic protein <400> 3 Met Arg Ile Ser Lys Pro His Leu Arg Ser Ile Ser Ile Gln Cys Tyr 1 5 10 15 Leu Cys Leu Leu Leu Asn Ser His Phe Leu Thr Glu Ala Gly Ile His 20 25 30 Val Phe Ile Leu Gly Cys Phe Ser Ala Gly Leu Pro Lys Thr Glu Ala 35 40 45 Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile 50 55 60 Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His 65 70 75 80 Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln 85 90 95 Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu 100 105 110 Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val 115 120 125 Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile 130 135 140 Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn 145 150 155 160 Thr Ser

Claims (27)

  1. 암을 갖는 대상체를 치료하는 방법으로서, 상기 방법은
    (a) 하기 구조를 갖는 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제:
    [화학식 I]
    Figure pct00027

    (여기서, IL-15는 인터류킨-15 모이어티이고, n은 약 150 내지 약 3,000의 정수이고; m은 2, 3, 4, 및 5로부터 선택된 정수이고, n'은 1이고, ~NH~은 IL-15 모이어티의 아미노 기를 나타냄); 및
    (b) 인단백질, 막관통 단백질, 당단백질, 당지질, 및 성장 인자로부터 선택된 종양 항원에 특이적으로 결합하는, 모노클로날 항체로서, 작용 기전으로서 항체 의존적 세포 독성(ADCC)을 갖는, 모노클로날 항체를 대상체에 투여하는 단계를 포함하고,
    단계 (a)와 단계 (b)는 동시에 또는 순차적으로 그리고 임의의 순서로 수행되는, 방법.
  2. 제1항에 있어서, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제는 약학적으로 허용 가능한 염인, 방법.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 화학식 I에서 (m)은 2 또는 3인, 방법.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 I에서 (m)은 3인, 방법.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 I에서 (n)은 약 909의 값을 갖는, 방법.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 암은 충실성 암인, 방법.
  7. 제6항에 있어서, 충실성 암은 유방암, 난소암, 결장암, 결장직장암, 위암, 악성 흑색종, 간암, 소세포 폐암, 비-소세포 폐암, 갑상선암, 신장암, 담관암, 뇌암, 자궁경부암, 상악동암, 방광암, 식도암, 호지킨병 및 부신피질암(임의의 이들의 전이성 형태 포함)으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  8. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 암은 혈액 악성종양인, 방법.
  9. 제8항에 있어서, 혈액 악성종양은 다발성 골수종, 비호지킨 림프종, 백혈병 및 림프종으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 단계 (a)는 단계 (b) 전에 수행되는, 방법.
  11. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 단계 (b)는 단계 (a) 전에 수행되는, 방법.
  12. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 단계 (a)와 단계 (b)는 동시에 또는 실질적으로 동시에 수행되는, 방법.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여는, 적합한 동물 모델에서 측정하는 경우, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제가 단일 작용제로서 투여될 때 관찰되는 정도보다 큰 정도로 NK 활성화를 자극하는 데 효과적인, 방법.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여는, 적합한 동물 모델에서 측정하는 경우, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제가 단일 작용제로서 투여될 때 관찰되는 정도보다 큰 정도로 NK 증식을 자극하는 데 효과적인, 방법.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여는, 적합한 동물 모델에서 측정하는 경우, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제가 단일 작용제로서 투여될 때 관찰되는 정도보다 큰 정도로 CD8+ T-세포 생존 및 기억 형성을 뒷받침하는 데 효과적인, 방법.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제는 피하 투여되는, 방법.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 모노클로날 항체는 정맥내 투여되는, 방법.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 모노클로날 항체는 항-CD19 항체, 항-CD20 항체, 및 항-CD38 항체로부터 선택되는, 방법.
  19. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 당단백질에 특이적으로 결합하는 모노클로날 항체는 항-SLAMF7 항체, 항-EpCAM 항체, 항-gpA3 항체 3, 및 항-FBP 항체로부터 선택되는, 방법.
  20. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 성장 인자에 특이적으로 결합하는 모노클로날 항체는 항-VEGF 항체, 항-VEGFR 항체, 및 항-EGFR 항체로부터 선택되는, 방법.
  21. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 모노클로날 항체는 IgG 항체인, 방법.
  22. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 모노클로날 항체는 다라투무맙(daratumumab), 리툭시맙(rituximab), 세툭시맙(cetuximab) 및 트라스투주맙(trastuzumab)으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  23. 암을 치료하는 데 사용하기 위한 치료 조합물로서,
    (a) 하기 구조를 갖는 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제:
    [화학식 I]
    Figure pct00028

    (여기서, IL-15는 인터류킨-15 모이어티이고, n은 약 150 내지 약 3,000의 정수이고; m은 2, 3, 4, 및 5로부터 선택된 정수이고, n'은 1이고, ~NH~은 IL-15 모이어티의 아미노 기를 나타냄); 및
    (b) 인단백질, 막관통 단백질, 당단백질, 당지질, 및 성장 인자로부터 선택된 종양 항원에 특이적으로 결합하는, 모노클로날 항체로서, 작용 기전으로서 항체 의존적 세포 독성(ADCC)을 포함하는, 모노클로날 항체를 포함하는, 치료 조합물.
  24. 제23항에 있어서, 지속 작용성 수용체 효현제는 약학적으로 허용 가능한 염인, 치료 조합물.
  25. 제23항 또는 제24항에 있어서, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제는 제3항, 제4항, 또는 제5항 중 어느 한 항에 기재된 바와 같은 구조를 갖는, 치료 조합물.
  26. 사용 설명서가 첨부된, 제23항 내지 제25항 중 어느 한 항의 치료 조합물을 포함하는 키트로서, 지속 작용성 IL-15 수용체 효현제 및 모노클로날 항체는 각각 하나 이상의 개별 단위 투여형에 함유되는, 키트.
  27. 항-종양 항체와 투여될 때 NK-세포 매개 항체-의존적 세포 독성을 향상시키기 위한 지속 작용성 수용체 효현제의 용도.
KR1020217016812A 2018-11-09 2019-11-08 또 다른 약리학적 활성제와 조합된 지속 작용성 인터류킨-15 수용체 효현제 KR20210090203A (ko)

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