KR20210071987A

KR20210071987A - 항-cd79 항체 및 이들의 용도

Info

Publication number: KR20210071987A
Application number: KR1020217010355A
Authority: KR
Inventors: 제임스 래릭; 보 유; 앤드류 멘델손; 존 캠비어
Original assignee: 네펜쓰 바이오사이언스, 엘엘씨
Priority date: 2018-10-03
Filing date: 2019-10-03
Publication date: 2021-06-16
Also published as: US11078276B2; AU2019355115A1; JP2022513338A; WO2020072705A1; US20210355214A1; EP3829606A4; US20200109198A1; EP3829606A1; CN113194966A

Abstract

본 개시 내용은 높은 친화도(affinity)로 CD79에 특이적으로 결합하는 인간화되고(humanized) 친화도 성숙된(matured) 항체(mAb) 및 이의 단편을 제공한다. 항-CD79 mAb 및 이의 단편은, 자가면역질환(autoimmune diseases), 알레르기(allergies), 이식거부반응(transplant rejection) 또는 선택적으로 추가 치료제와 조합된 치료제(therapeutics)의 면역 매개 거부(immune-mediated rejection)를 포함하는 항체 관련 상태(antibody-associated conditions)를 치료하는데 사용될 수 있다. 또한, 항-CD79 mAb 및 이의 단편은 생물학적 샘플에서 CD79 세포를 검출하고 B 세포 관련 질환(disorders)을 진단하는 것을 포함하는 진단의(diagnostic) 목적으로 사용될 수 있다.

Description

항-CD79 항체 및 이들의 용도

연방 지원 연구에 관한 성명

이 발명은 정부 기관(government agency)인 국립 알레르기 및 전염병 연구소(National Institute of Allergy and Infectious Diseases, NIAID)가 수여하는 수여 번호 1R43AI120433-01에 따라 정부의 지원을 받아 만들어졌다. 정부는 발명에 대한 특정 권리를 가지고 있다.

서열목록, 테이블 또는 컴퓨터 프로그램에 대한 참조

서열목록의 공식적 사본은 EFS-Web을 통해 ASCII 형식의 텍스트 파일로 명세서(specification)와 동시에(concurrently) 제출되며 파일 이름은 "PRI011_ST25.txt"이고 생성 날짜는 2019년 9월 30일이며 크기는 73KB이다. EFS-Web을 통해 제출된 서열목록은 명세서의 일부이며 전체가 본원에 참조로 포함된다.

B 세포는 류마티스성 관절염(rheumatoid arthritis, RA), 전신 홍반성 루푸스(systemic lupus erythematosus, SLE), 다발성 경화증(multiple sclerosis) 및 1형 진성 당뇨병(type I diabetes mellitus, T1D)을 포함한 많은 자가면역(autoimmune) 질환의 병인(pathogenesis)에서 중요한 역할을 하며, 이러한 질병들에서 B 세포 표적화(B cell-targeted) 치료법(therapies), 예: 리툭시맙(rituximab)의 효능(efficacy)으로 표시된다. 불행히도 현재의 치료법은 B 세포 고갈(depletion)을 전제로 하고 있으며, 이는 안전성 관점(safety standpoint)에서 문제가 있다(problematic). 결과적인(consequent) 면역억제(immunosuppression)로 인해 기존(existing) 관리표준(standard-of-care) 치료법은, 악영향(adverse effects), 특히, 장기적(long-term)이고 심각한(sever) B 세포 고갈로 인한 잠복기(latency)에서 바이러스의 기회 감염(opportunistic infections) 및 활성화를 발생시킨다(generate).

CD79(분화클러스터 79(Cluster of Differentiation 79))는 B 세포 수용체 (B-cell receptor, BCR)와 복합체(complex)를 형성하고 BCR이 항원(antigen)을 인식한 후 신호(signal)를 생성하는 막 관통(transmembrane) 단백질이다. CD79는 CD79A 및 CD79B(이전에는 Ig-알파(Ig-alpha) 및 Ig-베타(Ig-beta)로 알려짐)라고하는 2개의 별개의(distinct) 사슬로 구성되고; 이들은 이황화결합(disulfide bonding)에 의해 안정화된 B 세포의 표면에 이종이량체(heterodimer)를 형성한다. CD79a 및 CD79b는 모두 면역글로불린 수퍼패밀리(immunoglobulin superfamily)의 구성원이다. CD79는 pan-B 세포 마커로 사용되어 왔으며 B 세포 신생물(neoplasms)의 검출(detection)에 사용될 수 있다.

항-CD20 mAb(anti-CD20 mAbs)와는 달리, CD79 표적화 mAb의 보호 효과는 세포 고갈을 필요로 하지 않고; 오히려 가역적(reversible) 무반응(unresponsive) 또는 마취(anergic) 상태(state)를 유도하여 작용하므로 면역반응 생성(generation)에 참여하지 않는다. 동물 모델에서 항-CD79 항체는 B 세포에서 무반응(anergy)을 유도하여 면역억제를 제공하고 염증(inflammation)을 감소시켰다.

본 개시 내용은 높은 친화도(affinity)로 CD79에 특이적으로 결합하는 항체의 단편을 포함하는 항체를 제공한다. 항체는 단일 클론(monoclonal) 항체일 수 있으며 키메라(chimeric) 또는 인간화(humanized) 항체일 수 있다. 키메라 항-CD79 항체의 단편을 포함하는 키메라 항-CD79(anti-CD79) 항체는 비-인간(예를 들어, 뮤린(murine)) 상보성 결정 영역(complementarity-determining regions, CDRs)) 및 비-인간 프레임워크 영역(들)(non-human framework region(s)), 및 선택적으로(optionally) 하나 이상의 인간 불변 도메인(human constant domains)을 가질 수 있다. 비-인간(non-human), 중쇄 및 경쇄 가변 영역(heavy and light chain variable regions)은 서열번호: 1-2를 포함한다. 인간화 항-CD79 항체의 단편을 포함하는 인간화 항-CD79 항체는 비-인간(예를 들어, 뮤린) CDR 및 인간 프레임워크 영역(들), 및 선택적으로 CDR에 인접한(adjacent) 비-인간 프레임워크 아미노산 잔기 및 선택적으로 하나 이상의 인간 불변 도메인을 가질 수 있다. 비-인간 CDR은, 예를 들어, 서열번호: 3-5의 VH CDR1-3 및 서열번호: 6-8의 VL-CDR1-3을 포함한다.

개시된 인간화 항체는 서열번호: 3-8의 CDR을 중쇄(heavy chain)에 대한 인간 프레임워크 및 경쇄(light chain)에 대한 인간 프레임워크에 이식하여(grafting) 얻어진 항-CD79 항체를, 마우스 항체로부터 선택된 수의 프레임워크 잔기와 함께 나타낸다. 인간화 중쇄에 대한 9개의 가변 영역(서열번호: 9-17) 및 인간화 경쇄에 대한 6개의 가변 영역(서열번호: 18-23)을 조합하여 항-CD79 인간화 항체를 만들 수 있다. 본원에 개시된 항-CD79 항체는 또한 인간화 항-CD79 항체로부터 제조된 친화도 성숙(maturation) 라이브러리로부터 수득된 것들을 포함한다. 항-CD79 항체는, 서열번호: 9-17, 24-27, 32-41, 71, 72 및 75-77으로부터 선택된 중쇄 가변 영역 및 서열번호: 18-23, 28-31, 42-56 및 73-74으로부터 선택된 경쇄 가변 영역으로 만들 수 있다. 항-CD79 항체는 또한 서열번호: 9-17, 24-27, 32-41, 71, 72 및 75-77 중 하나와 99%, 95%, 90%, 80% 또는 70% 서열 동일성(sequence identity)을 갖는 중쇄 가변 영역 및 서열번호: 18-23, 28-31, 42-56 및 73-74 중 하나와 99%, 95%, 90%, 80% 또는 70% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함할 수 있다. 항-CD79 항체는 2.0-5.1 nM, 또는 45 nM 내지 300 nM, 또는 2.0 내지 300 nM의 친화도로 CD79에 결합할 수 있다. 항-CD79 항체는 적어도 300 nM, 또는 적어도 140 nM, 또는 적어도 100 nM, 또는 적어도 5.1 nm, 적어도 3.8 nM, 또는 적어도 2.4 nM의 친화도로 결합할 수 있다.

본원에 기재된 항-CD79 항체는 항체에 원하는 특성을 제공하는 변형(modifications)을 포함할 수 있다. 예를 들어, 변형은 항체의 혈청 반감기(serum half-life)를 증가시킬 수 있거나 변형은 혈청 반감기를 감소시킬 수 있다. 변형은 또한 항체의 이펙터(effector) 기능을 증가 또는 감소시킬 수 있다. 변형은 면역원성(immunogenicity)을 감소시키거나 항-CD79 항체로 인한 기타 원치 않는 부작용(side effects) 또는 악영향을 감소시킬 수 있다.

본원에 기재된 항-CD79 항체는 대상체(subject)의 B 세포에서 마취 상태를 유도할 수 있으며, 따라서 특정 자가면역질환을 치료하는 데 사용될 수 있다. 예를 들어, 항-자기(anti-self) 항체 반응과 관련된 자가면역질환은 항-CD79 항체로 치료될 수 있는데, 유도된 마취 상태는 항-자기 항체가 생성되는 것을 예방할 것이다. 본원에 기재된 항-CD79 항체는 또한 바람직하지 않은 항체 반응을 갖는 임의의 건강상태(condition)에서 마취 상태를 유도하는 데 사용될 수 있다. 본원에 기재된 항-CD79 항체는 B 세포에서 마취 상태를 유도하는 데 사용될 수 있다. 본원에 기재된 항-CD79 항체는 B 세포의 증식(proliferation)을 억제하는 데 사용될 수 있다. 본원에 기재된 항-CD79 항체는 기존의 항-약물(anti-drug) 항체로 인한 주입(infusion) 반응을 예방하는데 사용될 수 있다. 본원에 기재된 항-CD79 항체는 생물학적 치료법(biologic therapy)의 주사(injection) 후 항-약물 항체의 형성(formation)을 예방하기 위해 사용될 수 있다. 바람직하지 않은 항체 관련 건강상태는, 예를 들어, 자가면역질환, 특정 알레르기(항체 관련 알레르기), 특정 종류의 I형 당뇨병(type I diabetes) 등을 포함할 수 있다. 항-CD79 항체로 치료할 수 있는 자가면역질환은, 예를 들어, 전신 홍반성 루푸스(SLE), 염증성 장 질환(inflammatory bowel disease) (예: 크론병(Crohn's disease) 및 궤양성 대장염(ulcerative colitis)), 류마티스성 관절염(rheumatoid arthritis), 다발성 경화증(multiple sclerosis), 그레이브병(Grave's disease), CREST 증후군(CREST syndrome), 전신 경화증(systemic sclerosis), 셀리악병(celiac disease) 등을 포함한다. 기타 자가면역질환은, 예를 들어, 이완불능증(Achalasia), 애디슨병(Addison's disease), 성인 스틸병(Adult Still's disease), 무감마글로불린혈증(Agammaglobulinemia), 원형 탈모증(Alopecia areata), 아밀로이드증(Amyloidosis), 강직성 척추염(Ankylosing spondylitis), 항-GBM/항-TBM 신장염(Anti-GBM/Anti-TBM nephritis), 항인지질증후군(Antiphospholipid syndrome), 자가면역 혈관부종(Autoimmune angioedema), 자가면역 자율신경기능이상(Autoimmune dysautonomia), 자가면역 뇌척수염(Autoimmune encephalomyelitis), 자가면역 간염(Autoimmune hepatitis), 자가면역 내이질환(Autoimmune inner ear disease, AIED), 자가면역 심근염(Autoimmune myocarditis), 자가면역 난소염(Autoimmune oophoritis), 자가면역성 고환염(Autoimmune orchitis), 자가면역 췌장염(Autoimmune pancreatitis), 자가면역 망막증(Autoimmune retinopathy), 자가면역 두드러기(Autoimmune urticaria), 축삭 및 신경 신경병증(Axonal & neuronal neuropathy, AMAN), 발로병(Balσ disease), 베체트병(Behcet's disease), 양성 점막유사천포창(Benign mucosal pemphigoid), 수포성 유사천포창(Bullous pemphigoid), 캐슬만병(Castleman disease, CD), 셀리악병, 샤가스병(Chagas disease), 만성 염증성 탈수초성 다발신경병증(Chronic inflammatory demyelinating polyneuropathy, CIDP), 만성 재발성 다초점 골수염(Chronic recurrent multifocal osteomyelitis, CRMO), 척-스트라우스증후군(Churg-Strauss Syndrome, CSS) 또는 호산구성 육아종증(Eosinophilic Granulomatosis, EGPA), 흉터유사천포창(Cicatricial pemphigoid), 코간 증후군(Cogan 's syndrome), 저온응집병(Cold agglutinin disease), 선천성 심장차단(Congenital heart block), 콕새키 심근염(Coxsackie myocarditis), CREST 증후군(CREST syndrome), 크론병(Crohn's disease), 포진형 피부염(Dermatitis herpetiformis), 피부근육염(Dermatomyositis), 데빅병(Devic 's disease)(시신경척수염(neuromyelitis optica)), 원판성 루푸스(Discoid lupus), 드레슬러 증후군(Dressler's syndrome), 자궁내막증(Endometriosis), 호산구성 식도염(Eosinophilic esophagitis, EoE), 호산성 근막염(Eosinophilic fasciitis), 결절성홍반(Erythema nodosum), 필수 혼합 한냉글로불린혈증(Essential mixed cryoglobulinemia), 에반스 증후군(Evans syndrome), 섬유근육통(Fibromyalgia), 섬유화 폐포염(Fibrosing alveolitis), 거대 세포 동맥염(Giant cell arteritis)(측두 동맥염(temporal arteritis)), 거대 세포 심근염(Giant cell myocarditis), 사구체 신염(Glomerulonephritis), 굿파스처증후군(Goodpasture's syndrome), 다발혈관염을 동반한 육아종증(Granulomatosis with Polyangiitis), 그레이브스병(Graves' disease), 길랭-바레 증후군(Guillain-Barre syndrome), 하시모토 갑상선염(Hashimoto's thyroiditis), 용혈성 빈혈(Hemolytic anemia), 헤노흐-쇤라인자색반(Henoch-Schonlein purpura, HSP), 임신포진(Herpes gestationis) 또는 천포창양 임신(pemphigoid gestationis, PG), 화농성한선염(Hidradenitis Suppurativa, HS)(전위 여드름(Acne Inversa)), 저감마글로불린혈증(Hypogammalglobulinemia), IgA 신장병증(IgA Nephropathy), IgG4-관련 경화성 질병(IgG4 related sclerosing disease), 특발성 혈소판 감소성 자반증(Immune thrombocytopenic purpura, ITP), 봉입체 근염(Inclusion body myositis, IBM), 간질성 방광염(Interstitial cystitis, IC), 청소년 관절염(Juvenile arthritis), 청소년 당뇨병(Juvenile diabetes)(1 형 당뇨병(Type 1 diabetes)), 청소년 근염(Juvenile myositis, JM), 가와사키병(Kawasaki disease), 램버트-이튼 증후군(Lambert-Eaton syndrome), 백혈구파괴맥관염(Leukocytoclastic vasculitis), 편평태선(Lichen planus), 태선경화증(Lichen sclerosis), 목질결막염(Ligneous conjunctivitis), 선형 IgA 질환(Linear IgA disease, LAD), 루푸스(Lupus), 라임병 만성(Lyme disease chronic), 메니에르병(Meniere's disease), 현미경 다발혈관염(Microscopic polyangiitis, MPA), 혼합결합조직병(Mixed connective tissue disease, MCTD), 무렌 각막궤양(Mooren's ulcer), 무하-하버만병(Mucha-Habermann disease), 다초점 운동 신경병증(Multifocal Motor Neuropathy, MMN) 또는 MMNCB, 다발성 경화증(Multiple sclerosis), 중증근무력증(Myasthenia gravis), 근염(Myositis), 기면증(Narcolepsy), 신생아 루푸스(Neonatal Lupus), 시신경척수염(Neuromyelitis optica), 호중구감소증(Neutropenia), 안 반흔성 유천포창(Ocular cicatricial pemphigoid), 시신경염(Optic neuritis), 회귀성류머티즘(Palindromic rheumatism, PR), 판다스병(PANDAS), 부종양성 소뇌변성(Paraneoplastic cerebellar degeneration, PCD), 발작성 야간혈색소 요증(Paroxysmal nocturnal hemoglobinuria, PNH), 패리-롬버그 증후군(Parry Romberg syndrome), 평면부염(Pars planitis) (말초 포도막염(peripheral uveitis)), 파르소니지-터너 증후군(Parsonage-Turner syndrome), 천포창(Pemphigus), 말초신경병증(Peripheral neuropathy), 악성 뇌척수염(Perivenous encephalomyelitis), 악성 빈혈(Pernicious anemia, PA), POEMS 증후군(POEMS syndrome), 결절성다발성동맥염(Polyarteritis nodosa), 다각형증후군 I형, II형, III형(Polyglandular syndromes type I, II, III), 류마티스성 다발근통(Polymyalgia rheumatica), 다발근염(Polymyositis), 심근경색후증후군(Postmyocardial infarction syndrome), 심막절개술후증후군(Postpericardiotomy syndrome), 원발성 담즙성 간경변(Primary biliary cirrhosis), 원발성 경화성 담관염(Primary sclerosing cholangitis), 프로게스테론 피부염(Progesterone dermatitis), 건선(Psoriasis), 건선성 관절염(Psoriatic arthriti), 순적혈구무형성증(Pure red cell aplasia, PRCA), 괴저성 농피증(Pyoderma gangrenosum), 레이노 증후군(Raynaud's phenomenon), 반응성 관절염(Reactive Arthritis), 복합부위 통증 증후군(Reflex sympathetic dystrophy), 재발성 다발연골염(Relapsing polychondritis), 하지 불안증후군(Restless legs syndrome, RLS), 후복막섬유증(Retroperitoneal fibrosis), 류마티스열(Rheumatic fever), 류마티스 관절염(Rheumatoid arthritis), 사르코이드증(Sarcoidosis), 슈미트 증후군(Schmidt syndrome), 공막염(Scleritis), 피부경화증(Scleroderma), 쇼그렌 증후군(Sjφgren's syndrome), 정자 및 고환 자가면역(Sperm & testicular autoimmunity), 강직인간증후군(Stiff person syndrome, SPS), 아급성세균심내막염(Subacute bacterial endocarditis, SBE), 수삭 증후군(Susac's syndrome), 교감성 안염(Sympathetic ophthalmia, SO), 타카야수 동맥염(Takayasu's arteritis), 측두동맥염/거대 세포 동맥염(Temporal arteritis/Giant cell arteritis), 혈소판 감소성 자반병(Thrombocytopenic purpura, TTP), 톨로사-헌트 증후군(Tolosa-Hunt syndrome, THS), 횡단척수염(Transverse myelitis), 1형 당뇨병(Type 1 diabetes), 궤양성 대장염(Ulcerative colitis, UC), 미분화 결합 조직 질환(Undifferentiated connective tissue disease, UCTD), 포도막염(Uveitis), 혈관염(Vasculitis), 백반증(Vitiligo), 보그트-고야나기 하라다병(Vogt-Koyanagi-Harada Disease)을 포함한다. 이러한 바람직하지 않은 항체 관련 건강상태는 본원에 기재된 하나 이상의 항-CD79 항체를 바람직하지 않은 항체 관련 건강상태로부터 고통받고 있는 대상체에게 투여함으로써 치료될 수 있다.

본원에 기재된 항-CD79 항체는 림프종(lymphomas) 및 백혈병(leukemias)과 같은 CD79 양성 조혈암(positive hematopoietic cancers)을 치료하는데 사용될 수 있다. 또한, 항-CD79 CAR로 면역 세포를 만들기 위해 키메라 항원 수용체(chimeric antigen receptors, CAR)에 사용될 수 있다. 이러한 항-CD79 CAR 면역 세포는, 예를 들어, 항-CD79 CAR을 갖는 T 세포 또는 자연 살해 세포(natural killer cells)를 포함한다. 항-CD79 CAR T 세포 및/또는 자연 살해 세포는 질병을 유발하는 세포가 CD79를 나타내는 질병을 치료하는 데 사용할 수 있다. 이러한 질병에는, 예를 들어, 림프종 및 백혈병과 같은 CD79 양성 조혈암이 포함된다.

본 개시 내용의 특징(features) 및 장점(advantages)에 대한 더 나은 이해는 본 개시 내용의 예시적인(illustrative) 실험예(embodiments)를 설명하는 다음의 상세한 설명(detailed description) 및 첨부 도면(accompanying drawings)을 참조함으로써 얻어질 것이다.

도 1은 시간에 따른 VH125NOD 마우스에서 1형 당뇨병(type 1 diabetes)의 발달(development)을 보여주는 그래프이다.
도 2는 항-CD79 CAR-T 구조물(construct)을 발현하는 세포에 대한 가용성(soluble) CD79 항원의 결합을 보여주는 그래프이다.
도 3a는 B 세포에 대한 결합에 대한 항체 LB517/LB519(hCur14 FALA) 및 Curly-14간의 경쟁 결합을 보여준다. 도 3b는 상이한 항-hCD79 항체로 처리된 B 세포에서의 PTEN을 보여준다. 도 3c는 상이한 항-hCD79 항체로 B 세포를 처리한 후 B 세포 수용체(B-cell receptor, BCR) 발현을 나타낸다.
도 4a는 상이한 항-hCD79 항체로 처리한 후 B 세포에서의 칼슘 유입(calcium influx)을 보여준다. 도 4b는 상이한 항-hCD79 항체로 B 세포를 처리한 후 B 세포 수용체의 탈감각(desensitization)을 보여준다.
도 5는 관절염 모델 시스템에서 관절염 발달에 대한 항-hCD79 항체 처리의 효과를 보여준다.
도 6은 루푸스 모델 시스템에서 루푸스 발달에 대한 항-hCD79 항체 치료의 효능을 보여준다.
도 7은 MS 모델 시스템에서 다발성 경화증 발달에 대한 항-hCD79 항체 치료의 효능을 보여준다.

본 개시 내용의 다양한 실험예가 본원에 기재되었지만, 이러한 실험예는 단지 실시예로서 제공된다는 것이 통상의 기술자에게 명백할 것이다. 본원에 기재된 실험예에 대한 다수의 변형(modifications) 및 변경(changes to), 및 변화(variations) 및 치환(substitutions)는 본 개시 내용으로부터 벗어나지 않고 통상의 기술자에게 명백할 것이다. 본원에 기재된 실험예에 대한 다양한 대안(alternatives)이 본 개시 내용을 실행하는데 적용될 수 있음이 이해된다. 또한, 본 개시 내용의 모든 실시예는 그 실시예와 일치하는 본원에 기재된 임의의 하나 이상의 다른 실험예와 선택적으로 조합될 수 있음이 이해된다.

성분(elements)이 목록 형식(list format)으로 표시되는 경우(예: 마쿠쉬(Markush) 군), 성분의 가능한 각 하위군도 공개되고 하나 이상의 성분이 목록 또는 군에서 제거될 수 있음이 이해된다.

반대로 명확하게 지시되지 않는 한, 하나 이상의 동작(act) 또는 단계를 포함하는 본원에 기재되거나 청구된 임의의 방법에서, 방법의 동작 또는 단계의 순서는 방법의 동작 또는 방법의 단계가 인용되는 순서로 반드시 제한되는 것은 아니지만, 본 개시 내용은 그 순서가 그렇게 제한되는 실험예를 아우른다(encompasses).

일반적으로, 설명 또는 청구범위의 실시예가 하나 이상의 특징을 포함하는 것으로 언급되는 경우, 본 개시 내용은 또한 그러한 특징(들)로 이루어지거나, 또는 본질적으로(essentially) 이루어지는, 실험예를 아우른다는 것이 이해된다.

본 개시 내용의 임의의 실시예, 예를 들어, 종래 기술 내에서 발견된 임의의 실시예는, 특정 배제(exclusion)가 명세서(specification)에서 인용되는지 여부에 관계없이, 청구범위로부터 명시적으로(explicitly) 배제될 수 있음이 또한 이해된다.

본원에서 펩티드(peptide), 폴리펩티드(polypeptide) 또는 단백질(protein), 예를 들어, 항체 또는 이의 단편에 대한 언급은 달리 구체적으로 언급되거나 문맥이 달리 명시하지 않는 한, 이의 약제학적으로(pharmaceutically) 허용되는(acceptable) 염(salts)을 포함하는 것으로 추가적으로 이해된다. 이러한 염은 양의 순 전하(net charge), 음의 순 전하를 가질 수 있거나 순 전하가 없을 수 있다.

표제(Headings)는 참조 및 특정 섹션을 찾는데 도움이 되도록 본원에 포함되어 있다. 표제는 그 표제 하의 섹션에서 기재된 실험예 및 개념(concepts)의 범위를 제한하려는 것이 아니며, 이러한 실험예 및 개념은 전체 개시 내용에 걸쳐 다른 섹션에서 적용될 수 있다.

본원에 인용된 모든 특허문헌 및 모든 비특허문헌은 각각의 특허문헌 또는 비특허문헌이 그 전체가 본원에 참조로 포함되는 것으로 구체적이고 개별적으로 표시된 것과 동일한 정도로 전체가 본원에 참고로 포함된다.

정의

달리 정의되거나 본원에서의 사용에 의해 달리 명확하게 표시되지 않는 한, 본원에서 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본 출원이 속하는 기술 분야의 통상의 기술자가 일반적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다.

명세서 및 첨부된 청구범위에서 사용된 바와 같이, 부정 관사 "a" 및 "an" 및 정관사 "the"는 달리 구체적으로 언급되거나 문맥상 명백하게 달리 나타내지 않는 한 단수형(singular) 지시 대상(referents)뿐만 아니라 복수형(plural) 지시 대상도 포함할 수 있다.

용어 "약(about)" 또는 "대략(approximately)"은 값이 측정되거나 결정되는 방법에 부분적으로 의존하는 통상의 기술자에 의해 결정된 특정 값에 대한 허용되는 오차(error)를 의미한다. 특정 실험예에서, 용어 "약" 또는 "대략"은 1 표준편차(standard deviation) 이내를 의미한다. 일부 실험예에서, 특정 오차범위(margin of error)(예: 차트 또는 데이터 표에 제공된 평균 값(mean value)에 대한 표준편차)가 언급되지 않은 경우, 용어 "약" 또는 "대략"은 언급된 값을 포함하는 범위와, 유효 숫자(significant figures)를 고려하여 인용된 값으로 반올림(rounding up) 또는 버림(rounding down)하여 포함되는 범위를 의미한다. 특정 실험예에서, 용어 "약" 또는 "대략"은 명시된 값의 ± 10%, 5%, 4%, 3%, 2% 또는 1% 이내를 의미한다. 용어 "약" 또는 "대략"이 일련의 둘 이상의 숫자 값(numerical values) 또는 일련의 둘 이상의 숫자 값 범위에서 첫 번째 숫자 값 앞에 올 때마다, 용어 "약" 또는 "대략"은 일련의 숫자 값 또는 일련의 숫자 값의 범위에 있는 각각의 숫자 값에 적용된다.

용어 "항체"는, 결합 단백질로서 기능적으로(functionally) 정의되고, 면역글로불린 암호화된(encoding) 유전자의 프레임워크 영역으로부터 유래된 것으로 인식되는 아미노산 서열을 포함하는 것으로 구조적으로(structurally) 정의된, 단백질을 지칭한다. 항체는 면역글로불린 유전자 또는 면역글로불린 유전자의 단편에 의해 실질적으로 암호화된 하나 이상의 폴리펩티드로 이루어질 수 있다. 인식된 면역글로불린 유전자에는 카파(kappa), 람다(lambda), 알파(alpha), 감마(gamma), 델타(delta), 엡실론(epsilon) 및 뮤(mu) 불변 영역(constant region) 유전자뿐만 아니라 무수한(myriad) 면역글로불린 가변 영역(variable region) 유전자가 포함된다. 경쇄는 카파 또는 람다로 분류된다. 중쇄는 감마, 뮤, 알파, 델타 또는 엡실론으로 분류되며, 차례로 면역글로불린 클래스인 IgG, IgM, IgA, IgD 및 IgE를 각각 정의한다.

전형적인 감마 면역글로불린 (항체) 구조적 단위는 사량체(tetramer)를 포함하는 것으로 알려져 있다. 각 사량체는 2개의 동일한 폴리펩티드 사슬쌍으로 구성되며, 각 쌍은 하나의 "경"쇄(약 25kD) 및 하나의 "중"쇄(약 50-70kD)을 가진다. 각각의 사슬(chain)의 N-말단은 주로 항원 인식을 담당하는 약 100 내지 110 개 이상의 아미노산의 가변 영역을 정의한다. 용어 가변 경쇄(variable light chain, V_L) 및 가변 중쇄(variable heavy chain, V_H)는 각각 이러한 경쇄 및 중쇄를 지칭한다.

항체는 온전한(intact) 면역글로불린 또는 여러 잘 특성화된 단편으로 존재한다. 따라서, 예를 들어, 펩신(pepsin)은 힌지 영역(hinge region)에서 이황화 연결(disulfide linkages) 아래의 항체를 분해하여(digests) 자연적으로 이황화 결합에 의해 VH-CH1-힌지(VH-CH1-Hinge)에 연결된(joined to) 경쇄인 Fab'의 이량체인 F(ab)'₂를 생산한다. F(ab)'₂는 온화한 조건(mild conditions) 하에서 환원되어(reduced) 힌지 영역에서 이황화 연결/들을 파괴하여 F(ab)'₂이량 체(dimer)를 Fab'단량체(monomer)로 전환할 수 있다. Fab'단량체는 본질적으로 힌지 영역의 일부를 가진 Fab이다(다른 항체 단편에 대한 자세한 설명은 Fundamental Immunology, W. E. Paul, ed., Raven Press, N.Y. (1993) 참조). 다양한 항체 단편이 온전한 항체의 분해(digestion)와 관련하여 정의되지만, 통상의 기술자는 단편이 화학적으로 또는 재조합(recombinant) DNA 방법을 사용함으로써 새로운 방식으로(de novo) 합성될 수 있음을 인식할 것이다. 따라서, 본원에서 사용되는 용어 항체는, 또한 전체 항체의 변형에 의해 생산되거나 재조합 DNA 방법론(methodologies)을 사용하여 합성된 항체 단편을 포함한다. 바람직한 항체는 단일 사슬 항체(단일 폴리펩티드 사슬로 존재하는 항체)를 포함하는 V_H-V_L 이량체, 예를 들어, 가변 중쇄 및 가변 경쇄 영역이 함께 연결된 단일 사슬 Fv 항체(sFv 또는 scFv) (직접 또는 펩티드 링커(peptide linker)를 통해) 연속적 폴리펩티드(polypeptide)를 형성한다. 단일 사슬 Fv 항체는, 직접 연결되거나 펩티드 암호화 링커에 의해 연결된 V_H- 및 V_L- 암호화 서열을 포함하는 핵산(nucleic acid)으로부터 발현될 수 있는 공유 결합으로(covalently) 연결된 V_H-V_L 이종이량체이다(예를 들어, Huston, et al. Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 85 : 5879-5883, 1988, 이는 그 전체가 본원에 참조로 포함됨). V_H 및 V_L은 각각 단일 폴리펩티드 사슬로 연결되지만 V_H 및 V_L 도메인은 비공유적으로 결합한다. 대안적으로, 항체는 또 다른 단편일 수 있다. 재조합 기술을 사용하는 것을 포함하여 다른 단편도 생성될 수 있다. 예를 들어, 사슬 중 하나 (중쇄 또는 경쇄)가 g3 캡시드(capsid) 단백질에 융합되고(fused to) 상보적 사슬이 가용성 분자로서 주변 세포질(periplasm)로 내보내진 경우 Fab 분자가 파지(phage)에 표시될 수 있다. 두 사슬은 동일하거나 상이한 레플리콘(replicons)에서 암호화될 수 있다; 각 Fab 분자의 2개의 항체 사슬은 번역 후(post-translationally) 조립되고(assemble), 이량체는 g3p의 사슬 중 하나에 대한 연결을 통해 파지 입자에 통합된다(예: 미국 특허 번호: 5,733,743 참조, 이는 본원에 참조로 포함됨). 전체). scFv 항체와, 자연적으로 응집되었지만(aggregated) 항체 V 영역으로부터 화학적으로 분리된(separated) 경쇄 및 중쇄 폴리펩티드 사슬을 항원 결합 부위(antigen-binding site)의 구조와 실질적으로 유사한 3차원 구조로 접히는 분자로 전환시키는(converting) 다수의 다른 구조(structures)가 기술분야에서 알려져 있다(예: 미국 특허 번호 5,091,513, 5,132,405 및 4,956,778 참조, 이들 모두는 그 전체가 본원에 참조로 포함됨). 특히, 바람직한 항체는 파지에 표시되거나 사슬이 가용성 단백질로 분비되는 벡터를 사용하여 재조합 기술에 의해 생성된 모든 항체, 예를 들어 scFv, Fv, Fab, (Fab')₂를 포함한다. 항체는 또한 디아바디(diabodies) 및 미니바디(minibodies)를 포함할 수 있다.

항체에는 낙타류(camelids)의 항체와 같은 중쇄 이량체도 포함된다. 낙타류의 중쇄 이량체 IgG의 V_H 영역은 경쇄와 소수성 상호 작용(hydrophobic interactions)을 할 필요가 없기 때문에, 일반적으로 경쇄와 접촉하는 중쇄의 영역은 낙타류의 친수성(hydrophilic) 아미노산 잔기로 변경된다. 중쇄 이량체 IgG의 V_H 도메인을 V_HH 도메인이라고 한다.

낙타류에서 항체 레퍼토리(repertoire)의 다양성은 V_H 또는 V_HH 영역의 상보적 결정 영역(CDR) 1, 2 및 3에 의해 결정된다. 낙타 V_HH 영역의 CDR3은 평균 16개 아미노산의 상대적으로 긴 길이를 특징으로 한다(Muyldermans et al., 1994, Protein Engineering 7 (9) : 1129, 이는 전체가 본원에 참조로 포함됨). 이것은 다른 많은 종의 항체의 CDR3 영역과 대조된다. 예를 들어, 마우스 V_H의 CDR3에는 평균 9개의 아미노산이 있다.

낙타류 가변 영역의 생체내(in vivo) 다양성(diversity)을 유지하는 낙타 류 유래 항체 가변 영역의 라이브러리는, 예를 들어, 2005 년 2 월 17 일에 공개된 미국 특허 출원 공개 번호 US20050037421에 개시된 방법에 의해 제조될 수 있다. 이는 그 전체가 참조로 여기에 통합된다.

본원에서 사용되는 용어 항체의 "결합 특이성(binding specificity)"은 항체가 결합하는 항원의 동일성(identity), 바람직하게는 항체가 결합하는 에피토프(epitope)의 동일성을 지칭한다.

본원에 사용된 용어 "키메라 폴리뉴클레오티드(chimeric polynucleotide)"는 폴리뉴클레오티드가 야생형(wild-type) 영역 및 돌연변이된 영역을 포함함을 의미한다. 이는 또한 폴리뉴클레오티드가 하나의 폴리뉴클레오티드로부터의 야생형 영역 및 다른 관련 폴리뉴클레오티드로부터의 야생형 영역을 포함함을 의미할 수 있다.

본원에 사용된 용어 "상보성 결정 영역(complementarity-determining region)"또는 "CDR"은 Kabat 및 Chothia에 의해 예시된 바와 같이 당업계에서 인정된 용어를 지칭한다. CDR은 일반적으로 초가변 영역(hypervariable regions) 또는 초가변 루프로(hypervariable loops)도 알려져 있다(Chothia and Lesk (1987) J Mol. Biol. 196 : 901; Chothia et al. (1989) Nature 342 : 877; EA Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Md.) (1987); Tramontano et al. (1990) J Mol. Biol. 215 : 175, 이들 모두는 여기에 전체가 참조로 포함된다). "프레임워크 영역(Framework region)"또는 "FR"은 CDR 옆에 있는 V 도메인의 영역을 의미한다. CDR 및 프레임워크 영역의 위치는 당업계에 잘 알려진 다양한 정의, 예를 들어, Kabat, Chothia, 국제 ImMunoGeneTics 데이터베이스(international ImMunoGeneTics database, IMGT) 및 AbM을 사용하여 결정될 수 있다(예를 들어, Johnson et al., supra; Chothia & Lesk, 1987, Canonical structures for the hypervariable regions of immunoglobulins. J. Mol. Biol. 196, 901-917; Chothia C. et al., 1989, Conformations of immunoglobulin hypervariable regions. Nature 342, 877-883; Chothia C. et al., 1992, structural repertoire of the human VH segments J. Mol. Biol. 227, 799-817; Al-Lazikani et al., J. Mol. Biol 1997, 273(4) 참조). 항원 결합 부위의 정의는 다음에도 설명되어 있다: Ruiz et al., IMGT, the international ImMunoGeneTics database. Nucleic Acids Res., 28, 219-221 (2000); and Lefranc, M.-P. IMGT, the international ImMunoGeneTics database. Nucleic Acids Res. Jan 1;29(1):207-9 (2001); MacCallum et al, Antibody-antigen interactions: Contact analysis and binding site topography, J. Mol. Biol., 262 (5), 732-745 (1996); and Martin et al, Proc. Natl Acad. Sci. USA, 86, 9268-9272 (1989); Martin, et al, Methods Enzymol., 203, 121-153, (1991); Pedersen et al, Immunomethods, 1, 126, (1992); and Rees et al, In Sternberg M. J. E. (ed.), Protein Structure Prediction. Oxford University Press, Oxford, 141-172 1996, 이들 모두는 본 명세서에 전체가 참조로 포함된다.

일련의 2개 이상의 숫자 값에서 "적어도(at least)" 또는 "초과(greater than) "이라는 용어가 첫 번째 숫자 값 앞에 올 때마다, 상기 "적어도" 또는 "초과"이라는 용어는 해당 일련의 숫자 값에서 각 숫자 값에 적용된다.

용어 "이종(heterologous)"은 결합된 아미노산 또는 뉴클레오티드 서열과 결합하여 자연적으로 발견되지 않는 아미노산 또는 뉴클레오티드 서열을 의미한다.

일련의 2개 이상의 숫자 값에서 "이하(no more than)" 또는 "미만(less than)"이라는 용어가 첫 번째 숫자 값 앞에 올 때마다, 상기 "이내" 또는 "미만"이라는 용어는 해당 일련의 숫자 값에서 각 숫자 값에 적용된다.

용어 "폴리뉴클레오티드"는 뉴클레오티드 단위로 구성된 중합체(polymer)를 지칭한다. 폴리뉴클레오티드에는 데옥시리보핵산(deoxyribonucleic acid)("DNA") 및 리보핵산(ribonucleic acid)("RNA")과 같은 천연적 발생(naturally occurring) 핵산과 핵산 유사체(analogs)가 포함된다. 핵산 유사체는 비천연적(non-naturally) 발생 염기, 천연적 발생 포스포디에스테르 결합(phosphodiester bond), 또는/및 포스포디에스테르 결합 이외의 연결을 통해 부착된 염기 이외의 다른 뉴클레오티드와의 연결에 관여하는 뉴클레오티드를 함유하는 것을 포함한다. 뉴클레오티드 유사체의 비제한적인 예는 포스포로티오에이트(phosphorothioates), 포스포로디티오에이트(phosphorodithioates), 포스포트리스터(phosphorotriesters), 포스포라미데이트(phosphoramidates), 보라노포스페이트(boranophosphates), 메틸포스포네이트(methylphosphonates), 키랄-메틸 포스포네이트(chiral-methyl phosphonates), 2-O-메틸 리보뉴클레오티드(2-O-methyl ribonucleotides), 펩티드-핵산(peptide-nucleic acids, PNA) 등을 포함한다. 이러한 폴리뉴클레오티드는, 예를 들어, 자동화된 DNA 합성기(automated DNA synthesizer)를 사용하여 합성될 수 있다. 용어 "핵산 분자(nucleic acid molecule)"는 전형적으로 더 큰 폴리뉴클레오티드를 지칭한다. 용어 "올리고뉴클레오티드(oligonucleotide)"는 전형적으로 더 짧은 폴리뉴클레오티드를 지칭한다. 특정 실험예에서, 올리고뉴클레오티드는 약 50개 이하의 뉴클레오티드를 함유한다. 뉴클레오티드 서열이 DNA 서열(즉, A, T, G, C)로 표현될 때, 이것은 또한 "U"가 "T"를 대체하는 RNA 서열(즉, A, U, G, C)을 함유한다"는 것이 이해된다.

용어 "폴리펩티드"는, 펩티드 결합을 통해 연결된, 천연(natural) 또는/및 비천연(unnatural) 아미노산 잔기, 이의 천연적 발생 구조 변이체(variants), 또는/및 합성 비천연적 발생 유사체로 구성된 중합체를 지칭한다. 합성 폴리펩티드는, 예를 들어, 자동화된 폴리펩티드 합성기를 사용하여 합성될 수있다. 폴리펩티드는 또한 폴리펩티드를 암호화하는 핵산 서열을 발현하는 세포에서 재조합적으로 생산될 수 있다. 용어 "단백질"은 일반적으로 더 큰 폴리펩티드를 지칭한다. 용어 "펩티드"는 일반적으로 더 짧은 폴리펩티드를 지칭한다. 특정 실험예에서, 펩티드는 약 50, 40 또는 30개 이하의 아미노산 잔기를 함유한다. 폴리펩티드는 항체(antibodies) 및 이의 단편을 포함한다. 통상적인(Conventional) 표기법(notation)은 폴리펩티드 서열을 묘사하기(portray) 위해 본원에서 사용된다: 폴리펩티드 서열의 좌측 끝(left-hand end)은 아미노(N)-말단(amino (N)-terminus)이고; 폴리펩티드 서열의 우측 끝(right-hand end)은 카르복실(C)-말단(carboxyl (C)-terminus)이다.

폴리펩티드는, 하나 이상의 변형이 의도적이든(deliberate) 아니든, 하나 이상의 번역 후(post-translational) 변형과 같이 폴리펩티드의 합성(synthetic) 또는 세포 생산(cellular production) 과정 동안 만들어질 수 있는 하나 이상의 변형을 포함할 수 있다. 변형은, 글리코실화(glycosylation)(예: N- 연결 글리코실화 및 O-연결 글리코실화), 지질화(lipidation), 인산화(phosphorylation), 황화(sulfation), 아세틸화(acetylation)(예: N-말단의 아세틸화), 아미드화(amidation)(예: C- 말단의 아미드화(amidation)), 하이드록실화(hydroxylation), 메틸화(methylation), 분자내(intramolecular) 또는 분자간(intermolecular) 이황화 결합(disulfide bond)의 형성(formation), 두 측쇄(side chains) 사이의 락탐(lactam) 형성, 피로글루타메이트(pyroglutamate) 형성 및 유비퀴틴화(ubiquitination)를 포함할 수 있지만, 이에 제한되지 않는다. 또 다른 예로서, 폴리펩티드는 천연 중합체(예: 다당류(polysaccharide)) 또는 합성 중합체(synthetic polymer)(예: 폴리에틸렌 글리콜(polyethylene glycol)[PEG])에 부착되거나, 지질화(lapidated)(예: C₈-C₂₀ 아실그룹(acyl group)으로 아실화(acylated))되거나, 검출 가능한 제제(detectable agent)(예: 방사성 핵종(radionuclide), 형광(fluorescent) 염료(dye) 또는 효소(enzyme))로 라벨링된다(labeled). PEG화(PEGylation)는 단백질 분해효소(protease) 저항성(resistance), 안정성(stability) 및 반감기(half-life)를 증가시킬 수 있고, 용해도(solubility)를 증가시킬 수 있고, 폴리펩티드의 응집(aggregation)을 감소시킬 수 있다.

용어 "보존적 치환(conservative substitution)"은 기능적으로, 구조적으로 또는 화학적으로 유사한 천연 또는 비천연 아미노산으로 폴리펩티드 내의 아미노산의 치환을 지칭한다. 특정 실험예에서, 다음 그룹은 각각 서로에 대한 보존적 치환인 천연 아미노산을 함유한다:

1) 글리신(Glycine)(Gly/G), 알라닌(Alanine)(Ala/A);

2) 이소류신(Isoleucine)(Ile/I), 류신(Leucine)(Leu/L), 메티오닌(Methionine)(Met/M), 발린(Valine)(Val/V);

3) 페닐알라닌(Phenylalanine)(Phe/F), 티로신(Tyrosine)(Tyr/Y), 트립토판(Tryptophan)(Trp/W);

4) 세린(Serine)(Ser/S), 트레오닌(Threonine)(Thr/T), 시스테인(Cysteine)(Cys/C);

5) 아스파라긴(Asparagine)(Asn/N), 글루타민(Glutamine)(Gln/Q);

6) 아스파르트산(Aspartic acid)(Asp/D), 글루탐산(Glutamic acid)(Glu/E); 및

7) 아르기닌(Arginine)(Arg/R), 라이신(Lysine)(Lys/K), 히스티딘(Histidine)(His/H).

추가적 실험예에서, 다음 그룹은 각각 서로에 대한 보존적 치환인 천연 아미노산을 함유한다:

1) 비극성(non-polar): Ala, Val, Leu, Ile, Met, Pro (프롤린(proline)/P), Phe, Trp;

2) 소수성(hydrophobic): Val, Leu, Ile, Phe, Tyr, Trp;

3) 지방족(aliphatic): Ala, Val, Leu, Ile;

4) 방향족(aromatic): Phe, Tyr, Trp, His;

5) 비하전 극성(uncharged polar) 또는 친수성(hydrophilic): Gly, Ala, Pro, Ser, Thr, Cys, Asn, Gln, Tyr (티로신은 극성 측그룹을 가진 소수성 아미노산으로 간주될 수 있음);

6) 지방족 하이드록실(hydroxyl)- 또는 설프하이드릴(sulfhydryl)- 함유: Ser, Thr, Cys;

7) 아미드-함유(amide-containing): Asn, Gln;

8) 산성(acidic): Asp, Glu;

9) 기본(basic): Lys, Arg, His; 과

10) 소형(small): Gly, Ala, Ser, Cys.

다른 실험예에서, 아미노산은 아래에 제시된 바와 같이 그룹화될 수 있다:

1) 소수성: Val, Leu, Ile, Met, Phe, Trp, Tyr;

2) 방향족: Phe, Tyr, Trp, His;

3) 중성(neutral) 친수성: Gly, Ala, Pro, Ser, Thr, Cys, Asn, Gln;

4) 산성: Asp, Glu;

5) 기본: Lys, Arg, His; 과

6) 백본(backbone) 배향(orientation)에 영향을 미치는 잔기: Pro, Gly.

부모 폴리펩티드에 비해 하나 이상의 변형을 갖는 폴리펩티드는 적절하게 부모 폴리펩티드의 "유사체(analog)", "유도체(derivative)" 또는 "변이체(variant)"로 불릴 수 있다.

본 개시 내용은 양의 순 전하(net charge)를 갖는 것들, 음의 순 전하를 갖는 것들, 및 순 전하가 없는 것들을 포함하는 폴리펩티드의 약제학적으로 허용되는 염을 아우른다.

용어 "약제학적으로 허용되는(pharmaceutically acceptable)"은 과도한(excessive) 자극(irritation), 알레르기 반응(allergic response), 면역원성(immunogenicity) 및 독성(toxicity) 없이 대상체의 조직(tissues) 및 기관(organs)과 접촉시켜 사용하기에 적합한 물질(예: 활성 성분(active ingredient) 또는 부형제(excipient))을 지칭하며, 합리적인(reasonable) 이익/위험 비율에 상응하며(commensurate) 의도된 용도에 효과적이다. 약제학적 조성물의 "약제 학적으로 허용되는" 부형제 또는 담체(carrier)는 또한 조성물의 다른 성분(ingredients)과 양립할 수 있다(compatible).

용어 "엄격한(stringent) 혼성화(hybridization) 조건"은 42 ℃의 온도에서 5XSSC에서 50 % 포름아미드(formamide)로 혼성화하고 60 ℃에서 0.2XSSC에서 필터를 세척하는 것을 의미한다. (1XSSC는 0.15M NaCl, 0.015M 구연산 나트륨(sodium citrate)이다.) 엄격한 혼성화 조건은 또한 세척을 위한 낮은 이온 강도(ionic strength) 및 고온, 예를 들어, 50 ℃에서 0.015 M 염화나트륨(sodium chloride)/0.0015 M 구연산 나트륨(sodium citrate)/0.1% 황산 도데실 나트륨(sodium dodecyl sulfate); 포름아미드와 같은 변성제(denaturing agent)로 혼성화, 예를 들어, 50 %(v/v) 포름아미드와 0.1 % 소 혈청 알부민(bovine serum albumin)/0.1% Ficoll/0.1 % 폴리비닐피롤리돈(polyvinylpyrrolidone)/pH 6.5에서 750mM 염화나트륨과 50mM 인산 나트륨(sodium phosphate) 완충액(buffer), 42 ℃에서 75 mM 구연산 나트륨; 또는 50 % 포름아미드, 5XSSC(0.75M NaCl, 0.075M 구연산 나트륨), 50mM 인산 나트륨(pH 6.8), 0.1 % 피로인산나트륨(sodium pyrophosphate), 5X 덴하르트 용액(Denhardt's solution), 초음파 처리 된 연어 정자 DNA(sonicated salmon sperm DNA)(50 μg/ml), 0.1 % SDS, 및 42 ℃에서 10 % 덱스트란 황산(dextran sulfate), 0.2XSSC(염화나트륨/구연산 나트륨)에서 42 ℃, 55 ℃에서 50 % 포름아미드로 세척 한 후, 55 ℃에서 EDTA를 함유하는 0.1XSSC로 이루어진 고강도 세척을 아우른다.

용어 "대상체"는, 예컨대 영장류(primate)(예: 인간, 침팬지(chimpanzee) 또는 원숭이), 설치류(rodent)(예: 랫트(rat), 마우스(mouse), 기니피그(guinea pig), 저빌(gerbil) 또는 햄스터(hamster)), 토끼목(lagomorph)(예: 토끼(rabbit)), 스윈(swine)(예: 돼지(pig)), 이퀸(equine)(예: 말(horse)), 캐닌(canine)(예: 개(dog)) 또는 펠린(feline)(예: 고양이(cat))과 같은 포유 동물(mammal)을 포함하지만 이에 제한되지 않는, 동물을 지칭한다.

2 개의 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드와 관련하여 용어 "실질적으로 상동성(substantially homologous)" 또는 "실질적으로 동일한(substantially identical)"은, 서열 비교 알고리즘(sequence comparison algorithm)을 사용하여 측정하거나 육안 검사(visual inspection)로 측정했을 때 최대 대응(maximum correspondence)을 위해 비교 및 정렬될 때, 적어도 약 50 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % 또는 99 % 아미노산 또는 핵산 잔기 동일성(identity)을 갖는 둘 이상의 서열 또는 서브서열(subsequences)을 지칭한다. 용어 "실질적으로 상동성" 또는 "실질적으로 동일한"은 약 70 % 이상의 아미노산 또는 핵산 잔기 동일성을 의미할 수 있다. 용어 "실질적으로 상동성" 또는 "실질적으로 동일한"은 약 85 % 이상의 아미노산 또는 핵산 잔기 동일성을 의미할 수 있다. 실질적인 상동성 또는 동일성은 적어도 약 20, 30, 40, 50, 100, 150 또는 200 개의 잔기 길이인 서열의 영역에 걸쳐 존재할 수 있다. 서열은 비교 바이오폴리머(biopolymers) 중 하나 또는 둘 모두의 전체 길이에 걸쳐 실질적으로 상동이거나 동일할 수 있다.

비교를 위한 서열의 최적(Optimal) 정렬(alignment)은, 예를 들어 Smith 과 Waterman의 로컬 상동성 알고리즘에 의해, Adv. Appl. Math., 2:482 (1981); Needleman과 Wunsch의 동일성 정렬 알고리즘에 의해, J. Mol. Biol., 48:443 (1970) Biol., 48 : 443 (1970); Pearson과 Lipman의 유사성 방법 검색에 의해, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85:2444 (1988); 이러한 알고리즘의 컴퓨터화된 구현에 의해(예: Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group, Madison, Wisconsin의 GAP, BESTFIT, FASTA 및 TFASTA) 또는 육안 검사로 수행될 수 있다.

유용한 알고리즘(algorithm)의 한 예는 PILEUP이다. PILEUP은 관련성(relationship) 및 서열 동일성 백분율(percent sequence identity)을 표시하기 위해 점진적(progressive) 쌍(pairwise) 정렬을 사용하여 관련된 서열 그룹으로부터 다중 서열 정렬을 만들어낸다. 또한, 정렬을 만드는데 사용된 클러스터(clustering) 관련성을 보여주는 트리 또는 댄도그램(dendogram)을 표시한다(plots). PILEUP은 Feng과 Doolittle, J. Mol. Evol., 35:351-360 (1987)의 점진적 정렬 방법의 단순화를 사용한다. 사용된 방법은 Higgins와 Sharp, CABIOS, 5:151-153 (1989)에 설명된 방법과 유사하다. 프로그램은 각각 최대 길이가 약 5,000개 뉴클레오티드 또는 아미노산인 약 300 개까지의 서열을 정렬할 수 있다. 다중 정렬 절차는 가장 유사한 두 개의 서열의 쌍 정렬로 시작하여 두 개의 정렬된 서열의 클러스터를 생성한다. 이 클러스터는 다음으로 가장 관련된 서열 또는 정렬된 서열의 클러스터에 정렬된다. 두 개의 서열 클러스터는 두 개의 개별 서열의 쌍 정렬의 단순한 확장에 의해 정렬된다. 최종 정렬은 일련의 점진적 쌍 정렬로 획득된진다. 프로그램은 서열 비교의 영역에 대한 특정 서열과 그들의 아미노산 또는 뉴클레오티드 좌표(coordinate)를 지정하고 프로그램 매개 변수(parameters)를 지정하여 실행된다. 예를 들어, 참조 서열은 기본 갭 가중치(default gap weight)(3.00), 기본 갭 길이 가중치(default gap length weight)(0.10) 및 가중치가 부여된 끝 갭과 같은 매개 변수를 사용하여 서열 동일성 관계 백분율을 결정하기 위해 다른 테스트 서열과 비교될 수 있다. 서열의 다중 정렬을 발생시키데 유용한 또 다른 알고리즘은 Clustal W이다(예: Thompson et al., Nucleic Acids Research, 22:4673-4680 [1994] 참조).

서열 동일성 및 서열 유사성 백분율을 결정하는데 적합한 알고리즘의 또 다른 예는, Altschul et al., J. Mol. Biol., 215:403-410 (1990)에 기재된 BLAST 알고리즘이다. BLAST 분석을 수행하기 위한 소프트웨어는 National Center for Biotechnology Information을 통해 공개적으로 제공된다. 이 알고리즘은 먼저 쿼리 서열(query sequence)에서 길이 W의 짧은 단어를 식별하여 높은 점수 서열 쌍(high scoring sequence pairs, HSP)을 식별하는 것을 포함하며, 이는 데이터베이스 서열에서 동일한 길이의 단어와 정렬될 때 양으로 평가된 임계 값 점수 T(positive-valued threshold score T)와 일치하거나 충족한다. T는 인접 단어 점수 임계값(neighborhood word score threshold)이라고 한다(Altschul 1990). 이러한 초기 인접 단어 히트는 검색을 시작하여 더 긴 HSP를 함유하는 시드(seeds) 역할을 한다. 그런 다음 누적(cumulative) 정렬 점수가 증가할 수있는 한 단어 히트는 각 서열을 따라 양방향으로 확장된다. 누적 점수는 뉴클레오티드 서열의 경우 매개 변수 M(일치하는 한 쌍의 잔기에 대한 보상 점수, 항상> 0) 및 N(불일치하는 잔기에 대한 벌점 점수, 항상 <0)을 사용하여 계산된다. 아미노산 서열의 경우 점수 매트릭스를 사용하여 누적 점수를 계산한다. 다음과 같은 경우 각 방향으로 단어 히트의 확장이 중단된다(halted): 누적 정렬 점수가 최대 달성 값(maximum achieved value)에서 수량 X(quantity X)만큼 떨어질 때; 누적 점수는 하나 이상의 네거티브 스코어링 잔기 정렬(negative-scoring residue alignments)의 축적(accumulation)으로 인해 0 이하가 될 때; 또는 두 서열의 끝에 도달할 때. BLAST 알고리즘 매개 변수 W, T 및 X는 정렬의 감도(sensitivity)와 속도를 결정한다. BLASTN 프로그램(뉴클레오티드 서열용)은 기본값으로, 예를 들어, 단어 길이(wordlength, W) 11, 기대값(expectation, E) 10, M = 5, N = -4 및 두 가닥의 비교를 사용한다. 아미노산 서열의 경우, BLASTP 프로그램은 기본값으로, 예를 들어, 단어 길이 (W) 3, 기대값 (E) 10, BLOSUM62 점수 매트릭스를 사용한다(Henikoff 및 Henikoff, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:10915 [1989]).

서열 동일성 백분율을 계산하는 것 외에도, BLAST 알고리즘은 두 서열 간의 유사성(similarity)에 대한 통계 분석도 수행한다(예: Karlin and Altschul, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:5873-5787 [1993] 참조). BLAST 알고리즘에 의해 제공되는 유사성의 한 가지 척도(measure)는 최소 합계 확률(smallest sum probability)[P (N)]으로, 두 뉴클레오티드 또는 아미노산 서열 간의 일치가 우연히 발생할 확률 표시를 제공한다. 특정 실험예에서, 시험 폴리뉴클레오티드와 참조 폴리 뉴클레오티드의 비교에서 최소 합 확률이 약 0.1, 0.01 또는 0.001 미만인(less than) 경우 폴리뉴클레오티드는 참조 서열과 유사한 것으로 간주된다.

2 개의 폴리펩티드가 보존적 아미노산 치환에 의해서만 다른 경우, 폴리펩티드는 제2폴리펩티드와 실질적으로 상동성이거나 동일할 수 있다. 2 개의 폴리뉴클레오티드가 본원에 기재된 바와 같이 엄격한 조건 하에서 또는 매우 엄격한 조건 하에서 서로 혼성화하는(hybridize) 경우 2 개의 핵산 서열은 실질적으로 상동이거나 동일할 수 있다.

용어 "치료적 유효량(therapeutically effective amount)"은 대상체에게 투여될 때, 예방(prevent), 발병의 위험 감소(reduce the risk of developing), 발병 지연(delay the onset of), 진행 속도 저하(slow the progression) 또는 치료중인 의학적 상태(medical condition)의 퇴행(regression)을 유발하거나 또는 의학적 상태 또는 해당 상태의 하나 이상의 증상(symptoms) 또는 합병증(complications)을 어느 정도 완화하기에 충분한 화합물(compound)의 양을 의미한다. 용어 "치료적 유효량"은 또한 연구자, 수의사, 의사(medical doctor) 또는 임상의(clinician)가 추구하는 세포, 조직, 기관, 시스템, 동물 또는 인간의 생물학적 또는 의학적 반응을 유도하기에 충분한 화합물의 양을 의미한다.

용어 "치료하다(treat)", "치료하는(treating)" 및 "치료(treatment)"는 의학적 상태 또는 상태와 관련된 하나 이상의 증상 또는 합병증을 완화(alleviating), 개선(ameliorating) 또는 근절(abrogating)하는 것을 포함하고, 상태의 하나 이상의 원인을 완화, 개선 또는 근절하는 것을 포함한다. 의학적 상태의 "치료"에 대한 언급은 상태의 예방을 포함한다. 용어 "예방하다(prevent)", "예방하는(preventing)"및 "예방(prevention)"은 의학적 상태 또는 그 상태와 관련된 하나 이상의 증상 또는 합병증의 발병을 배제(precluding), 감소(reducing)시키고 발병을 지연시키는 것(delaying)을 포함한다.

항-CD79 항체

본원에 기재된 항체는 CD79에 대한 특이성을 가지며 상기 기재된 모든 형태를 포함한다. 항체는 특정 유기체에서 사용하도록 조작될 수 있다. 유기체는 인간, 캐닌(canine), 또는 예를 들어 돼지, 말, 개, 고양이, 닭 또는 기타 새와 같은 상업적으로 귀중한 가축(commercially valuable livestock)일 수 있다. 항체의 이러한 조작(engineering)은, 예를 들어, CDR 스플라이싱(CDR splicing), 인간화(humanization), 휴머니어링(humaneering), 키메라화(chimerization) 또는 당업계에 공지된 임의의 레퍼토리 기술 또는 단일 클론 기술을 사용하여 인간 (또는 다른 유기체) 항체를 분리하는 것을 포함한다.

항-CD79 항체는 서열번호: 9-17, 24-27 및 32-41에서 선택된 중쇄 가변 영역 및 서열번호: 18-23, 28-31 및 42-56에서 선택된 경쇄 가변 영역을 포함할 수 있다. 예를 들어, 서열번호: 9의 가변 영역을 갖는 중쇄는, 서열번호: 18, 19, 20, 21, 22, 23, 28, 29, 30, 31, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 71, 72, 75, 76 또는 77의 가변 영역을 갖는 경쇄와 조합될 수 있다. 서열 번호: 10의 가변 영역을 갖는 중쇄는, 서열 번호: 18, 19, 20, 21, 22, 23, 28, 29, 30, 31, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 73, 또는 74의 가변 영역을 갖는 경쇄와 조합될 수 있다. 서열번호: 11의 가변 영역을 갖는 중쇄는, 서열번호: 18, 19, 20, 21, 22, 23, 28, 29, 30, 31, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 73, 또는 74의 가변 영역을 갖는 경쇄와 조합될 수 있다. 서열번호: 12의 가변 영역을 갖는 중쇄는, 서열번호: 18, 19, 20, 21, 22, 23, 28, 29, 30, 31, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 73 또는 74의 가변 영역을 갖는 경쇄와 조합될 수 있다. 서열번호: 13의 가변 영역을 갖는 중쇄는, 서열번호: 18, 19, 20, 21, 22, 23, 28, 29, 30, 31, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 73, 또는 74의 가변 영역을 갖는 경쇄와 조합될 수 있다. 서열번호: 14의 가변 영역을 갖는 중쇄는, 서열번호: 18, 19, 20, 21, 22, 23, 28, 29, 30, 31, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 73, 또는 74의 가변 영역을 갖는 경쇄와 조합될 수 있다. 서열번호: 15의 가변 영역을 갖는 중쇄는 서열번호: 18, 19, 20, 21, 22, 23, 28, 29, 30, 31, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 73, 또는 74의 가변 영역을 갖는 경쇄와 조합될 수 있다. 서열번호: 16의 가변 영역을 갖는 중쇄는, 서열번호: 18, 19, 20, 21, 22, 23, 28, 29, 30, 31, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 73 또는 74의 가변 영역을 갖는 경쇄와 조합될 수 있다. 서열번호: 17의 가변 영역을 가진 중쇄는, 서열번호: 18, 19, 20, 21, 22, 23, 28, 29, 30, 31, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 73, 또는 74의 가변 영역을 갖는 경쇄와 조합될 수 있다. 서열번호: 24의 가변 영역을 갖는 중쇄는, 서열번호: 18, 19, 20, 21, 22, 23, 28, 29, 30, 31, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 73, 또는 74의 가변 영역을 갖는 경쇄와 조합될 수 있다. 서열번호: 25의 가변 영역을 갖는 중쇄는, 서열번호: 18, 19, 20, 21, 22, 23, 28, 29, 30, 31, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 73 또는 74의 가변 영역을 갖는 경쇄와 조합될 수 있다. 서열번호: 26의 가변 영역을 갖는 중쇄는, 서열번호: 18, 19, 20, 21, 22, 23, 28, 29, 30, 31, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 73, 또는 74의 가변 영역을 갖는 경쇄와 조합될 수 있다. 서열번호: 27의 가변 영역을 갖는 중쇄는, 서열번호: 18, 19, 20, 21, 22, 23, 28, 29, 30, 31, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 73, 또는 74의 가변 영역을 갖는 경쇄와 조합될 수 있다. 서열번호: 28의 가변 영역을 갖는 중쇄는, 서열번호: 18, 19, 20, 21, 22, 23, 28, 29, 30, 31, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 73 또는 74의 가변 영역을 갖는 경쇄와 조합될 수 있다. 서열번호: 33의 가변 영역을 갖는 중쇄는, 서열번호: 18, 19, 20, 21, 22, 23, 28, 29, 30, 31, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 73, 또는 74의 가변 영역을 갖는 경쇄와 조합될 수 있다. 서열번호: 34의 가변 영역을 갖는 중쇄는, 서열번호: 18, 19, 20, 21, 22, 23, 28, 29, 30, 31, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 73, 또는 74의 가변 영역을 갖는 경쇄와 조합될 수 있다. 서열번호: 35의 가변 영역을 갖는 중쇄는, 서열번호: 18, 19, 20, 21, 22, 23, 28, 29, 30, 31, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 73 또는 74의 가변 영역을 갖는 경쇄와 조합될 수 있다. 서열번호: 36의 가변 영역을 갖는 중쇄는, 서열번호: 18, 19, 20, 21, 22, 23, 28, 29, 30, 31, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 73, 또는 74의 가변 영역을 갖는 경쇄와 조합될 수 있다. 서열번호: 37의 가변 영역을 갖는 중쇄는, 서열번호: 18, 19, 20, 21, 22, 23, 28, 29, 30, 31, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 73, 또는 74의 가변 영역을 갖는 경쇄와 조합될 수 있다. 서열번호: 38의 가변 영역을 갖는 중쇄는, 서열번호: 18, 19, 20, 21, 22, 23, 28, 29, 30, 31, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 73 또는 74의 가변 영역을 갖는 경쇄와 조합될 수 있다. 서열번호: 39의 가변 영역을 갖는 중쇄는, 서열번호: 18, 19, 20, 21, 22, 23, 28, 29, 30, 31, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 73, 또는 74의 가변 영역을 갖는 경쇄와 조합될 수 있다. 서열번호: 40의 가변 영역을 갖는 중쇄는, 서열번호: 18, 19, 20, 21, 22, 23, 28, 29, 30, 31, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 73 또는 74의 가변 영역을 갖는 경쇄와 조합될 수 있다. 서열번호: 41의 가변 영역을 갖는 중쇄는, 서열번호: 18, 19, 20, 21, 22, 23, 28, 29, 30, 31, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 73, 또는 74의 가변 영역을 갖는 경쇄와 조합될 수 있다. 서열번호: 71의 가변 영역을 갖는 중쇄는, 서열번호: 18, 19, 20, 21, 22, 23, 28, 29, 30, 31, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 73 또는 74의 가변 영역을 갖는 경쇄와 조합될 수 있다. 서열 번호: 72의 가변 영역을 갖는 중쇄는, 서열 번호: 18, 19, 20, 21, 22, 23, 28, 29, 30, 31, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 73, 또는 74의 가변 영역을 갖는 경쇄와 조합될 수 있다. 서열번호: 75의 가변 영역을 갖는 중쇄는, 서열번호: 18, 19, 20, 21, 22, 23, 28, 29, 30, 31, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 73, 또는 74의 가변 영역을 갖는 경쇄와 조합될 수 있다. 서열번호: 76의 가변 영역을 갖는 중쇄는, 서열번호: 18, 19, 20, 21, 22, 23, 28, 29, 30, 31, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 73, 또는 74의 가변 영역을 갖는 경쇄와 조합될 수 있다. 서열번호: 77의 가변 영역을 갖는 중쇄는, 서열번호: 18, 19, 20, 21, 22, 23, 28, 29, 30, 31, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 73 또는 74의 가변 영역을 갖는 경쇄와 조합될 수 있다.

항-CD79 항체는 또한 서열번호: 9-17, 24-27, 32-41 71, 72 및 75-77 중 하나와 99 %, 95 %, 90 %, 80 % 또는 70 % 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호: 18-23, 28-31, 42-56 및 73-74에서 선택되는 경쇄 가변을 포함 할 수 있다. 항-CD79 항체는 또한 서열번호: 9-17, 24-28 및 33-43 중 하나와 99 %, 95 %, 90 %, 80 % 또는 70 % 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 18-23, 28-31, 42-56 및 73-74 중 하나와 99 %, 95 %, 90 %, 80 % 또는 70 % 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함할 수 있다. 항-CD79 항체는 또한 서열 번호: 9-17, 24-27, 32-41, 71, 72 및 75-77에서 선택된 중쇄 가변 영역 및 서열번호: 18-23, 28-31, 42-56 및 73-74 중 하나와 99 %, 95 %, 90 %, 80 % 또는 70 % 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함할 수 있다. 항-CD79 항체는 2.0-5.1 nM, 또는 45 nM 내지 300 nM, 또는 2.0 내지 300 nM의 친화도로 CD79에 결합할 수 있다. 항-CD79 항체는 적어도 300 nM, 또는 적어도 140 nM, 또는 적어도 100 nM, 또는 적어도 5.1 nm, 적어도 3.8 nM, 또는 적어도 2.4 nM의 친화도로 결합할 수 있다.

친화도 성숙은 원하는 친화도의 항-CD79 항체를 얻기 위해, 본원에 개시된 항체와 함께 사용될 수 있다. 항-CD79 항체가 동물(예: 인간 항체 레퍼토리를 보유한 트랜스제닉 동물)로부터 얻어질 때, 트랜스제닉 동물에서 만들어진 항체는 친화도 성숙을 겪을 수 있다. 대안적으로, 트렌스제닉 동물로부터의 항체 또는 다른 기술(예: 디스플레이 기술)로부터의 항체는 사슬 셔플링 접근법 및/또는 VH 및 VL을 암호화하는 핵산의 돌연변이를 사용하여 친화도가 성숙된 다음 더 큰 친화도를 갖는 항체를 선별 및/또는 선택할 수 있다.

특이성과 친화도를 유지하면서 비인간 항체의 면역원성을 최소화하기 위해 가장 널리 사용되는 방법은, 비인간 프레임워크에 대한 그들의 구조적 상동성을 위해 일반적으로 선택된 인간 프레임워크에 비인간 항체의 CDR을 이식하는 것을 포함한다(Jones et al., 1986, Nature 321:522-5; U.S. Pat. No. 5,225,539,둘 다 그 전체가 본원에 참고로 포함됨). 프레임워크의 주요 위치에 일부 비인간 잔기를 포함하면 CDR 이식 항체의 친화도를 향상시킬 수 있다(Bajorath et al., 1995, J Biol Chem 270:22081-4; Martin et al., 1991, Methods Enzymol. 203:121-53; Al-Lazikani, 1997, J Mol Biol 273:927-48, 이들 모두는 그 전체가 본원에 참조로 포함됨). CDR 이식에 의한 항체의 인간화를 위한 예시적인 방법은 예를 들어, U.S. Pat. No. 6,180,370(이는 그 전체가 참조로 여기에 포함됨)에 개시되어 있다.

전통적인 CDR-이식 접근법에 대한 개선은 다양한 하이브리드 선택 접근법을 사용하는데, 여기서 비-인간 항체의 일부가, 항원 결합을 위한 연속적인 선택 라운드에서 상보적 인간 항체 서열의 라이브러리와 결합되었으며, 그 과정에서 대부분의 비인간 서열은 점차 인간 서열로 대체된다. 예를 들어, 체인 셔플링 기술(chain-shuffling technique)( Marks, et al., 1992, Biotechnology 10:779-83, 이는 그 전체가 여기에 참조로 포함됨)에서 비인간 항체의 한 사슬이, 비-인간 사슬의 친화도가 항원상의 동일한 에피토프에 대한 인간 파트너의 선택을 제한하기에(constrain) 충분할 것이라는 이유(rationale)에 근거하여 다른 사슬의 천연의(naive) 인간 레퍼토리와 결합된다. 그런 다음 선택된 인간 파트너를 사용하여 나머지 비인간 사슬에 대한 인간 대응 파트너를 선택한다.

다른 방법론에는 비인간 CDR3이 유지되고 프레임워크와 CDR 1 및 2를 포함한 나머지 V- 영역만 순차적으로 수행되는 단계에서 개별적으로 교체된 사슬 교체 기술이 포함된다(예: U.S. Patent Application No. 20030166871; Rader, et al., Proc Natl Acad Sci USA 95:8910-15, 1998; Steinberger, et al., J. Biol. Chem. 275:36073-36078, 2000; Rader, et al., J. Biol. Chem. 275:13668-13676, 2000, 이들 모두는 그 전체가 본원에 참고로 포함됨).

이들 기술은 인간에서 사용하기 위한 항체 제조에 사용되는 CDR 이식 방법에 대한 유사한 접근법을 사용하여, CDR을 대상체 종의 프레임워크 영역으로 조작함으로써 비-인간 대상체에서 사용하기에 적합한 항체를 제조하는데 사용될 수 있다.

항-CD79 항체는 출발 항-CD79 항체를 사용하고 출발 항-CD79 항체의 가변 영역(예: CDR)의 일부를 원하는 가변 도메인 프레임워크에 이식하여 만들어질 수 있다. 마우스 가변 영역은 다음과 같다:

QVQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYAFSYSWMNWVKQRPGKGLEWIGRIYPENGDTNYNGKFKGKVTLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYFCARWVYGYPHFDYWGQGTTLTVSS (중쇄 가변 영역, 서열번호: 1)

DVVMTQTPLTLSVTIGQPASISCKSSQSLLDSDGKTYLNWLLQRPGQSPKRLIYLVSKLDSGVPDRFTGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCWQGTHFPFTFGSGTKLEIK (경쇄 가변 영역, 서열번호: 2)

항-CD79, 인간화 항체는 예를 들어 CDR을 사용하여 만들어졌다:

V_H CDR1: YSWMN (서열번호: 3)

V_H CDR2: RIYPENGDTNYNGKFKG (서열번호: 4)

V_H CDR3: WVYGYPHFDY (서열번호: 5)

V_L CDR1: KSSQSLLDSDGKTYLN (서열번호: 6)

V_L CDR2: LVSKLDS (서열번호: 7)

V_L CDR3: WQGTHFPFT (서열번호: 8)

VH 사슬을 생성하기 위해 3 개의 VH CDR을 중쇄에 대한 인간 가변 영역의 프레임워크 서열에 배치하였다:

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFSYSWMNWVRQAPGQGLEWMGRIYPENGDTNYNGKFKGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARWVYGYPHFDYWGQGTLVTVSS (서열번호: 9)

이 VH는 H1로 지정되었다. 2 개의 추가 VH 사슬을 만들기 위해 서열번호: 9의 프레임워크 영역에 치환이 도입되었다:

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFSYSWMNWVRQAPGQGLEWMGRIYPENGDTNYNGKFKGRVTMTADTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARWVYGYPHFDYWGQGTLVTVSS (서열번호: 10)

서열번호: 10은 H2으로 지정되었다.

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFSYSWMNWVRQAPGQGLEWIGRIYPENGDTNYNGKFKGRVTLTADKSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARWVYGYPHFDYWGQGTLVTVSS (서열번호: 11)

서열 번호 11는 H3로 지정되었다. 친화도를 증가시키고/시키거나, 예를 들어, 산화, 탈아미노화 및/또는 프로테아제 절단에 대하여 항체를 안정화하기 위해 프레임워크 영역 및 CDR2에서 서열번호: 9에 추가 변화를 도입할 수 있다. 이러한 중쇄 서열의 예는 다음과 같다:

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFSYSWMNWVRQAPGQGLEWMGRIYPENGDTNYAGKFKGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARWVYGYPHFDYWGQGTLVTVSS (서열번호: 12)

서열번호: 12는 H4 으로 지정된다.

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFSYSWMNWVRQAPGQGLEWMGRIYPENGDTNYAGKFKGRVTMTADTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARWVYGYPHFDYWGQGTLVTVSS (서열번호: 13)

서열번호: 13은 H5 으로 지정된다.

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFSYSWMNWVRQAPGQGLEWIGRIYPENGDTNYAGKFKGRVTLTADKSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARWVYGYPHFDYWGQGTLVTVSS (서열번호: 14)

서열번호: 14는 H6 으로 지정된다.

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFSYSWMNWVRQAPGQGLEWMGRIYPESGDTNYAGKFKGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARWVYGYPHFDYWGQGTLVTVSS (서열번호: 15)

서열번호: 15는 H7 으로 지정된다.

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFSYSWMNWVRQAPGQGLEWMGRIYPESGDTNYAGKFKGRVTMTADTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARWVYGYPHFDYWGQGTLVTVSS (서열번호: 16)

서열번호: 16는 H8 으로 지정된다.

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFSYSWMNWVRQAPGQGLEWIGRIYPESGDTNYAGKFKGRVTLTADKSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARWVYGYPHFDYWGQGTLVTVSS (서열번호: 17)

서열번호: 17는 H9 으로 지정된다.

VL 사슬을 생성하기 위해 3 개의 VL CDR을 경쇄로부터 인간 가변 영역에 대한 프레임워크 서열에 배치하였다:

DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLLDSDGKTYLNWFQQRPGQSPRRLIYLVSKLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCWQGTHFPFTFGGGTKVEIK (서열번호: 18)

서열번호: 18는 L1 으로 지정되었다. 추가 VL 사슬을 만들기 위해 서열번호: 18의 프레임워크 영역에 치환이 도입되었다:

DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLLDSDGKTYLNWLQQRPGQSPRRLIYLVSKLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCWQGTHFPFTFGGGTKVEIK (서열번호: 19)

서열번호: 19는 L2 으로 지정되었다.

DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLLDSDGKTYLNWLQQRPGQSPKRLIYLVSKLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCWQGTHFPFTFGGGTKVEIK (서열번호: 20)

서열번호: 20은 L3 으로 지정되었다. 친화도를 증가시키고/시키거나, 예를 들어, 산화, 탈아미노화 및/또는 프로테아제 절단에 대하여 항체를 안정화하기 위해 프레임워크 영역 및 CDR1에서 서열번호: 18에 추가 변화를 도입할 수 있다. 이러한 경쇄 서열의 예는 다음과 같다:

DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLLDSSGKTYLNWFQQRPGQSPRRLIYLVSKLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCWQGTHFPFTFGGGTKVEIK (서열번호: 21)

서열번호: 21은 L4 으로 지정되었다.

DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLLDSSGKTYLNWLQQRPGQSPRRLIYLVSKLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCWQGTHFPFTFGGGTKVEIK (서열번호: 22)

서열번호: 22는 L5 으로 지정되었다.

DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLLDSSGKTYLNWLQQRPGQSPKRLIYLVSKLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCWQGTHFPFTFGGGTKVEIK (서열번호: 23)

서열번호: 23은 L6 으로 지정되었다.

3 개의 VH 사슬 (H1-H3)은 3 개의 VL 사슬 (L1-L3)과 결합에 관하여(combinatorially) 조합되고, 각 항체는 재조합적으로 발현되고 분리되었다. H1-H3 및 L1-L3 항체 사슬은 친화도를 향상시킬 수 있는 몇몇 위치에서 다른 관련 프레임워크 영역을 가지고 있다. 이러한 후보는 CD79에 대한 친화도에 대해 테스트되었다. 후보는 45 nM에서 300 nM 범위의 K_ds 로 CD79에 결합되었다. H1L2 (LB495/PRI47, 서열 번호: 9 및 19)가 이들 결과로부터 선택되었다.

본 개시 내용은 양의 순 전하를 갖는 것들, 음의 순 전하를 갖는 것들, 및 순 전하가 없는 것들을 포함하는, 항-CD79 항체의 약제학적 허용되는 염을 아우르고, 화합물로서, 약제학적 조성물에서, 치료적 및 진단적 용도 및 생산에서 그의 단편을 포함하는 항-CD79 항체의 염을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

친화도 성숙

인간화 항체 H1L2(서열 번호: 9 및 19)는 친화도가 성숙되었다. 4 개의 파지 디스플레이 라이브러리가 만들어졌으며, 2 개는 중쇄 H1(LB495)에서, 2 개는 경쇄 L2(PRI47)에서 생성되었다. 중쇄(H1) 및 경쇄(L2)의 CDR3에 대해 포화 돌연변이 유발이 수행되었고, 돌연변이화된 중쇄는 L2와 결합되었고, 돌연변이화된 경쇄는 H1과 결합되었다. 오류가 발생하기 쉬운 PCR을 사용하여 중쇄(H1) 및 경쇄(L2)를 무작위로 돌연변이시키고 돌연변이화된 중쇄를 L2와 결합시키고, 돌연변이화된 경쇄를 H1과 결합시켰다. 이 4 개의 라이브러리는 추가 스크리닝을 위해 파지 디스플레이 형식으로 제작되었다.

각 라이브러리는 인간화 항체 H1L2를 포함하는 경쟁 결합에서 CD79에 대해 패닝되었다. 라이브러리의 클론은 인간화 H1L2 항체가 추가된 경쟁 패닝에서 선택되었고, 기질의 CD79에 부착하기 위해 클론은 인간화 H1L2 항체와 경쟁해야했다. 37 개의 클론을 4 개의 라이브러리(CDR3 중쇄 라이브러리에서 5 개, CDR3 경쇄 라이브러리에서 4 개, 중쇄 라이브러리에서 11 개, 경쇄 라이브러리에서 17 개)의 경쟁 패닝으로부터 얻어졌다. CDR3 중쇄 라이브러리의 5 개 클론의 서열은 다음과 같다:

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFSYSWMNWVRQAPGQGLEWMGRIYPENGDTNYNGKFKGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARPVYGYPHFDYWGQGTLVTVSS (서열번호: 24)

서열번호: 24는 LB509-A7으로 지정되었다.

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFSYSWMNWVRQAPGQGLEWMGRIYPENGDTNYNGKFKGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARWVYGLPHFDYWGQGTLVTVSS (서열번호: 25)

서열번호: 25는 LB509-C2 으로 지정되었다.

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFSYSWMNWVRQAPGQGLEWMGRIYPENGDTNYNGKFKGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARWVWGYPHFDYWGQGTLVTVSS (서열번호: 26)

서열번호: 26은 LB509-C10 으로 지정되었다.

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFSYSWMNWVRQAPGQGLEWMGRIYPENGDTNYNGKFKGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARWVYGYPHLDYWGQGTLVTVSS (서열번호: 27)

서열번호: 27은 LB509-G2 으로 지정되었다.

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFSYSWMNWVRQAPGQGLEWMGRIYPENGDTNYNGKFKGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARWVYGYPHLDYWGQGTLVTVSS (서열번호: 71)

서열번호: 71은 또한 LB509-H1 으로 지정되었다.

CDR3 경쇄 라이브러리의 4 개 클론의 서열은 다음과 같다:

DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLLDSDGKTYLNWLQQRPGQSPRRLIYLVSKLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCWQGTHIPFTFGGGTKVEIK (서열번호: 28)

서열번호: 28은 LB511-A9 으로 지정되었다.

DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLLDSDGKTYLNWLQQRPGQSPRRLIYLVSKLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCWQGTHVPFTFGGGTKVEIK (서열번호: 29)

서열번호: 29는 LB511-B6 으로 지정되었다.

DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLLDSDGKTYLNWLQQRPGQSPRRLIYLVSKLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCWQGTHLPFTFGGGTKVEIK (서열번호: 30)

서열번호: 30은 LB511-F6 으로 지정되었다.

DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLLDSDGKTYLNWLQQRPGQSPRRLIYLVSKLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCWQGTHRPFTFGGGTKVEIK (서열번호: 31)

서열번호: 31은 LB511-F11 으로 지정되었다.

중쇄 라이브러리의 11개 클론의 서열은 다음과 같다:

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFSYSWINWVRQAPGQGLEWMGRIYPENGDTNYNGKFKGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARWVYGYPHFDYWGQGTLVTVSS (서열번호: 32)

서열번호: 32는 LB510-B5 으로 지정되었다.

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFGYSWMNWVRQAPGQGLEWMGRIYPENGDTNYNGKFKGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARWVYGYPHFDYWGQGTLVTVSS (서열번호: 33)

서열번호: 33은 LB510-C7 으로 지정되었다.

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFSYSWMNWVRQAPGQGLEWMGRIYPENGDTNYNGKFKGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRPDDTAVYYCARWVYGYPHFDYWGQGTLVTVSS (서열번호: 34)

서열번호: 34는 LB510-C8 으로 지정되었다.

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFNYSWMNWVRQVPGQGLEWMGRIYPENGDTNYNGKFKGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARWVYGYPHFDYWGQGTLVTVSS (서열번호: 35)

서열번호: 35는 LB510-F10 으로 지정되었다.

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFSYSWMNWVRQAPGQGLEWMGRIYPENGDTNYNGKFKGRVTMTRDTSINTAYMELSRLRSDDTAVYYCARWVYGYPHFDYWGQGTLVTVSS (서열번호: 36)

서열번호: 36은 LB510-G4 으로 지정되었다.

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFSYSWVNWVRQAPGQGLEWMGRIYPENGDTNYNGKFKGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARWVYGYPHFDYWGQGTLVTVSS (서열번호: 37)

서열번호: 37은 LB510-G5 으로 지정되었다.

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFSYSWMNWVRQAPGQGLEWMGRIYPENGDTNYNGKFKGRVTMTRDTSISTAYMELSGLRSDDTAVYYCARWVYGYPHFDYWGQGTLVTVSS (서열번호: 38)

서열번호: 38은 LB510-G6 으로 지정되었다.

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFSYSWMNWVRQAPGQGLEWMGRIYPENGDTNYNGKFKGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARWVYGYPHLDYWGQGTLVTVSS (서열번호: 39)

서열번호: 39는 LB510-G7 으로 지정되었다.

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFNYSWVNWVRQAPGQGFEWMGRIYPENGDTNYNGKFKGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARWVYGYPHFDYWGQGTLVTVSS (서열번호: 72)

서열번호: 72는 또한 LB510-H4 으로 지정되었다.

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFRYSWMNWVRQAPGQGLEWMGRIYPENGGTNYNGKFKGRVTMTMDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARWVYGYPHFDYWGQGTLVTVSS (서열번호: 40)

서열번호: 40은 LB510-H7 으로 지정되었다.

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFSYSWMNWVRQAPGQGLEWMGRIYPENGDTNYNGKFRGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARWVYGYPHFDYWGQGTLVTVSS (서열번호: 41)

서열번호: 41은 LB510-H11 으로 지정되었다.

경쇄 라이브러리의 17 개 클론의 서열은 다음과 같다:

DVVMTQSPLSLPVTLGLPASISCKSSQSLLDSDGKTYLNWLQQRPGQSPRRLIYLVSKLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCWQGTHFPFTFGGGTKVEIK (서열번호: 42)

서열번호: 42는 LB512-A7 으로 지정되었다.

DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSKSLLDSDGKTYLNWLQQRPGQSPRRLIYLVSKLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCWQGTHFPFTFGGGTKVEIK (서열번호: 43)

서열번호: 43은 LB512-A10 으로 지정되었다.

DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLLDSDGKTYLNWLQQRPGQSPRRIIYLVSKLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCWQGTHFPFTFGGGTKVEIK (서열번호: 44)

서열번호: 44는 LB512-B8 으로 지정되었다.

DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLLDSDGKTYLNWLQQRPGQSPRRLIYLVSKLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEADDVGVYYCWQGTHLPFTFGGGTKVEIK (서열번호: 45)

서열번호: 45는 LB512-B10 으로 지정되었다.

DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLLDSDGKTYLNWLQQRPGQSPRRLIYLVSKLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGFYYCWQGTHLPFTFGGGTKVEIK (서열번호: 46)

서열번호: 46은 LB512-C2 으로 지정되었다.

DVVMTQSPLSLPVTLGQTASISCKSSQSLLDSDGKTYLNWLQQRPGQSPRRLIYLVSKLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCWQGTHLPFTFGGGTKVEIK (서열번호: 47)

서열번호: 47은 LB512-E2 으로 지정되었다.

DVVMTQSPLSLPVTLGRPASISCKSSQSLLDSGGKTYLNWLQQRPGQSPRRLIYLVSKLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCWQGTHFPFTFGGGTKVEIK (서열번호: 48)

서열번호: 48은 LB512-E5 으로 지정되었다.

DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSRSLLDSDGKTYLNWLQQRPGQSPRRLIYLVSKLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCWQGTHFPFTFGGGTKVEIK (서열번호: 49)

서열번호: 49는 LB512-E8 으로 지정되었다.

DVVMTQSPLSLPVTLGLPASISCKSSQSLLDTDGKTYLNWLQQRPGQSPRRLIYLVSKLDSGVPDRFIGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCWQGTHFPFTFGGGTKVEIK (서열번호: 50)

서열번호: 50은 LB512-E10 으로 지정되었다.

DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLLDSDGKTYLNWLQQRPGQSPRRLIYLVSKLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCWQGTHLPFTFGGGTKVEIK (서열번호: 73)

서열번호: 73은 또한 LB512-F7 으로 지정되었다.

DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLLDSDGKTYLNWLQQRPGQPPRRLIYLVSKLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCWQGTHFPFTFGGGTKVEIK (서열번호: 51)

서열번호: 51은 LB512-F11 으로 지정되었다.

DVVMTQSPLSLPVTLGQPASITCKSSQSLLDSDGKTYLNWLQQRPGQSPRRLIYLVSKPDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCWQGTHFPFTFGGGTKVEIK (서열번호: 52)

서열번호: 52는 LB512-G2 으로 지정되었다.

DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLLDSDGKTYLNWLQQRPGQSPRRLIYLVSKLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCWQGTHLPFTFGGGTKVEIK (서열번호: 74)

서열번호: 74는 또한 LB512-G5 으로 지정되었다.

DVVMTQSPPSLPVTLGQPASISCKSSQSLLDSDGKTYLNWLQQRPGQSPRRLIYLVSKLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCWQGTHVPFTFGGGTKVEIK (서열번호: 53)

서열번호: 53은 LB512-H5 으로 지정되었다.

DVVMTQSPLSLPVTLGQTASISCKSSQSLLDRDGKTYLNWLQQRPGQSPRRIIYLVSKLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCWQGTHFPFTFGGGTKVEIK (서열번호: 54)

서열번호: 54는 LB512-H7 으로 지정되었다.

DVVMTQSPLSMPVTLGLPASISCKSSQSLLDSHGKTYLNWLQQRPGQSPRRLIYLVSKLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCWQGTHFPFTFGGGTKVEIK (서열번호: 55)

서열번호: 55는 LB512-H8 으로 지정되었다.

DVVMTQSPLSLPVTLGLPASISCKSSQSLLDSDGKTYLNWLQQRPGQSPRRLIYLVSKLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCWQGTHIPFTFSGGTKVEIK (서열번호: 56)

서열번호: 56은 LB512-H11 으로 지정되었다.

이 37 개의 클론은 경쟁 ELISA(competition ELISA)에서 스크리닝되었다. 특허 항체(H1L2)보다 결합력이 더 좋은 클론이 선택되었다. 더 나은 친화도를 갖는 경쟁 ELISA로부터 9 개의 클론이 얻어졌다. 중쇄 CDR3 라이브러리(LB509-C2, 서열번호: 25; 및 LB509-G2, 서열번호: 27)에서 2 개, 경쇄 CDR3 라이브러리 (LB511-A9, 서열번호: 28; LB511-B6, 서열번호: 29; LB511-F6, 서열번호: 30; LB511-F11, 서열번호: 31))에서 4 개, 중쇄 라이브러리(LB510-C7, 서열번호: 33; LB510-G5, 서열번호: 37)에서 2 개, 그리고 경쇄 라이브러리(A7, 서열번호: 42)에서 1개. 이들 클론은 확인 희석 ELISA(confirmatory dilution ELISA)에 적용되었고 더 나은 결합을 나타내는 5 개의 클론이 선택되었다(중쇄 CDR 클론 LB509-C2, 서열번호 25; 경쇄 CDR 클론 LB511-A9, 서열번호 28, LB511-B6, 서열번호: 29, LB511-F6, 서열번호: 30, 및 LB511-F11, 서열번호: 31). 중쇄 CDR 클론 C2는 CDR3에서 Y에서 L 로의 변화를 가졌고, 경쇄 클론 A9, B6, F6 및 F11은 동일한 위치에서 아미노산 변경이 있었는데, CDR3에서 F를 L, V, I 또는 R로 변경했다. H1 서열을 갖는 2개의 중쇄(서열번호: 10), 지정된 LB495, 또는 Y에서 L 로의 변경(서열번호: 25), 지정된 LB517로 만들어졌고, L2 서열을 갖는 다섯개의 경쇄(서열번호: 19), 지정된 PRI47, 또는 L2의 CDR3에서 F에서 I로(서열 번호 28), 지정된 LB518, L2의 CDR3에서 F에서 L로(서열 번호 30), 지정된 LB519, L2의 CDR3에서 F에서 R로(서열번호: 31), 지정된 LB520, 또는 L2의 CDR3에서 F에서 V로(서열번호: 29), 지정된 LB521, 변화가 만들어졌다. 2 개의 중쇄를 각각 5 개의 경쇄와 개별적으로 조합하여 결합하고, 이들 항체는 결합 동역학에 대해 테스트되었다.

모든 친화도 성숙된 항체 조합은 부모 항체 H1L2보다 CD79에 대한 결합에 대해 더 높은 친화도를 가졌다. 부모 항체는 CD79에 대해 5.1 nM의 K_d를 갖고, 친화도 성숙된 항체는 CD79에 대해 3.6 nM에서 2.0 nM의 K_d를 가졌다.

항-CD79 항체 변형

항-CD79 항체는 반감기(half-life)(T_1/2) 또는/및 항체의 작용(action)의 기간을 연장하는(extends) 모이어티(moiety)를 포함할 수 있다. 모이어티는 항체의 순환(circulation) T_1/2, 혈액 T_1/2, 혈장(plasma) T_1/2, 혈청(serum) T_1/2, 말단(terminal) T_1/2, 생물학적(biological) T_1/2, 제거(elimination) T_1/2 또는 기능적(functional) T_1/2, 또는 이들의 임의 조합을 연장할 수 있다.

항-CD79 항체는 단일 모이어티에 의해 변형될 수 있다. 대안적으로, 항-CD79 항체는 둘 이상의 실질적으로 유사하거나 동일한 모이어티 또는 동일한 유형의 둘 이상의 모이어티에 의해 변형될 수 있다. 항-CD79 항체는 상이한 유형의 2개 이상의 모이어티(two or more moieties of different types) 또는 2개 이상의 상이한 유형의 모이어티(two or more different types of moieties)를 포함할 수 있다. 2개 이상의 항-CD79 항체가 또한 하나의 모이어티에 부착될 수 있다. 항-CD79 항체와 모이어티 사이의 부착은 공유 또는 비공유일 수 있다.

폴리펩티드 모이어티는, 선택적으로 링커를 통해 항-CD79 항체의 중쇄 또는 경쇄의 N-말단 또는 C-말단에 재조합적으로(recombinantly) 융합될 수 있다. 링커는 약 4-30개의 아미노산 잔기를 함유할 수 있다. 링커는 약 6개 또는 8개의 아미노산 잔기 내지 약 20개의 아미노산 잔기, 또는 약 6개 또는 8개의 아미노산 잔기 내지 약 15개의 아미노산 잔기를 함유할 수 있다.

연장(protracting) 모이어티는 인간 혈청 알부민(HSA) 또는 신생아(neonatal) Fc 수용체(FcRn)에 결합하는 이의 일부(예: 도메인 III)일 수 있다. HSA 또는 이의 FcRn-결합 부분은 유익한 특성(property) 또는 효과를 부여하는(confer) 하나 이상의 돌연변이를 선택적으로 가질 수 있다. 일부 실험예에서, HSA 또는 이의 FcRn-결합 부분은, FcRn에 대한 pH-의존성 HSA 결합을 향상시키거나 또는/및 HSA 반감기를 증가시키는 하나 이상의 돌연변이(mutations), 예컨대 K573P 또는/및 E505G/V547A를 갖는다. 연장 모이어티는 구조화되지 않은 폴리펩티드일 수 있다.

연장 모이어티는 인간 융모 성선 자극호르몬(human chorionic gonadotropin, hCG)의 β-서브유닛(subunit)으로부터 유래된 카르복시-말단 펩티드(CTP)일 수 있다. 인체에서, hCG-β의 34-aa CTP의 네번째, 다섯번째, 일곱번째 및 여덟개의 세린 잔기는 일반적으로 시알산(sialic acid) 잔기로 끝나는 O-글리칸(O-glycans)에 부착된다.

연장 모이어티는 합성 중합체의 1, 2, 3, 4, 5 또는 그 이상의 모이어티일 수 있다. 합성 중합체는 생분해성(biodegradable) 또는 비생분해성(non-biodegradable)일 수 있다. 연장 모이어티로서 유용한 생분해성 중합체는, 폴리 (2-메타크릴로일옥시에틸포스포릴콜린)(poly(2-methacryloyloxyethyl phosphorylcholine, PMPC) 및 폴리[올리고(에틸렌글리콜)메틸에테르메타크릴레이트](poly[oligo(ethylene glycol) methyl ether methacrylate], POEGMA)를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 연장 모이어티로서 유용한 비생분해성 중합체는, 폴리(에틸렌글리콜)(poly(ethylene glycol), PEG), 폴리글리세롤(polyglycerol), 폴리(N-(2-히드록시프로필)메타크릴아미드)(poly(N-(2-hydroxypropyl)methacrylamide), PHPMA), 폴리옥사졸린(polyoxazolines) 및 폴리 (N-비닐피롤리돈)(poly(N-vinylpyrrolidone), PVP)를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 합성 중합체는 폴리에틸렌글리콜(polyethylene glycol, PEG)일 수 있다. 페길레이션(PEGylation)은 화학적 또는 효소적(enzymatic), 부위별(site-specific) 커플링(coupling) 또는 무작위 커플링에 의해 수행될 수 있다.

하나 이상의 합성 중합체 모이어티의 개별 질량(예: 평균 분자량(average molecular weight)) 또는 총 질량은 약 10-50, 10-20, 20-30, 30-40 또는 40-50 kDa, 또는 약 10, 20, 30, 40 또는 50 kDa일 수 있다. 하나 이상의 합성 중합체 모이어티의 개별 질량(예: 평균 MW) 또는 총 질량은, 또한 약 50kDa 초과, 예를 들어, 약 50-100, 50-60, 60-70, 70-80, 80-90 또는 90-100 kDa, 또는 약 60, 70, 80, 90 또는 100 kDa 일 수 있다. 더욱이, 개별 합성 중합체 모이어티의 질량 (예: 평균 MW)은 약 10 kDa 미만, 예를 들어, 약 1-5 또는 5-10 kDa, 또는 약 5 kDa 일 수 있다. 하나 이상의 합성 중합체(예: PEG) 모이어티의 개별 질량(예: 평균 MW) 또는 총 질량은, 약 20 또는 40 kDa 일 수 있다.

약제학적 조성물(Pharmaceutical compositions)

본 개시 내용의 추가 실험예는 항-CD79 항체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물(solvate) 또는 수화물(hydrate), 및 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 부형제(excipients) 또는 담체(carriers)를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다. 조성물은 선택적으로 추가 치료제(therapeutic agent)를 함유할 수 있다. 일반적으로, 약제학적 조성물은 치료적 유효량의 항-CD79 항체 또는 이의 단편, 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 부형제 또는 담체 및 선택적으로 치료적 유효량의 추가 치료제를 함유하고, 치료용(therapeutic use)으로 대상체에게 투여하기 위해 제형화된다(formulated).

약제학적 조성물은 일반적으로, 예를 들어, 연방 식품, 의약품 및 화장품법 §501 (a)(2)(B) 및 국제 의약품 규제조화 위원회의 Q7 지침(International Conference on Harmonisation Q7 Guideline)에서 권장하거나 요구하는 현행 우수의약품제조관리기준(good manufacturing practice, GMP)에 따라 제조된다.

약제학적 조성물/제형(formulations)은 무균(sterile) 형태로 제조될 수 있다. 예를 들어, 주사(injection) 또는 주입(infusion)에 의한 비경구(parenteral) 투여(administration)를 위한 약제학적 조성물/제형은 일반적으로 무균이다. 무균 약제학적 조성물/제형은 미국 약전 챕터(United States Pharmacopeia Chapters) 797, 1072 및 1211 및 21 연방 규정 코드 211(Code of Federal Regulations 211)에 개시되거나 요구되는 것과 같이 통상의 기술자에게 알려진 제약 등급 살균 표준(pharmaceutical-grade sterilization standards)에 따라 배합되거나(compounded) 제조된다(manufactured).

약제학적으로 허용되는 부형제 및 담체에는, 약제학적으로 허용되는 물질(substances), 재료(materials) 및 비히클(vehicles)이 포함된다. 부형제의 유형의 비제한적인 예는, 액체 및 고체 충전제(fillers), 희석제(diluents), 결합제(binders), 윤활제(lubricants), 활택제(glidants), 계면활성제(surfactants), 분산제(dispersing agents), 붕해제(disintegration agents), 유화제(emulsifying agents), 습윤제(wetting agents), 현탁제(suspending agents), 증점제(thickeners), 용매(solvents), 등장제(isotonic agents), 완충제(buffers), pH 조절제(pH adjusters), 흡수 지연제(absorption-delaying agents), 안정제(stabilizers), 항산화제(antioxidants), 방부제(preservatives), 항미생물제(antimicrobial agents), 항세균제(antibacterial agents), 항진균제(antifungal agents), 킬레이트제(chelating agents), 보조제(adjuvants), 감미제(sweetening agents), 착향료(flavoring agents), 착색제(coloring agents), 캡슐화 물질(encapsulating materials) 및 코팅 재료(coating materials)를 포함한다. 약제학적 제형에서 이러한 부형제의 사용은 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 통상적인 비히클 및 담체는, 오일(oils)(예: 올리브 오일(olive oil) 및 참기름(sesame oil)과 같은 식물성 오일(vegetable oils)), 수성 용매(aqueous solvents){(예: 식염수(saline), 완충 식염수(buffered saline)(예: 인산염 완충 식염수(phosphate-buffered saline)[PBS])) 및 등장성 용액(isotonic solutions)(예: Ringer의 용액)}, 및 유기 용매(organic solvents)(예: 디메틸 설폭사이드(dimethyl sulfoxide)[DMSO] 및 알코올[예: 에탄올, 글리세롤 및 프로필렌글리콜(propylene glycol)])을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 임의의 통상적인 부형제 또는 담체가 항-CD79 항체 또는 이의 단편과 양립할 수 없는 경우를 제외하고, 본 개시 내용은 항-CD79 항체 또는 이의 단편을 함유하는 제형에서 통상적인 부형제 및 담체의 사용을 아우른다. 예를 들어, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Ed., Lippincott Williams & Wilkins (Philadelphia, Pennsylvania) (2005); Handbook of Pharmaceutical Excipients, 5th Ed., Rowe et al., Eds., The Pharmaceutical Press and the American Pharmaceutical Association (2005); Handbook of Pharmaceutical Additives, 3rd Ed., Ash and Ash, Eds., Gower Publishing Co. (2007); and Pharmaceutical Pre-formulation and Formulation, Gibson, Ed., CRC Press (Boca Raton, Florida) (2004)를 참조.

적절한 제형은 선택된 투여의 경로와 같은 다양한 요인에 따라 달라질 수 있다. 항-CD79 항체 또는 이의 단편을 포함하는 약제학적 조성물의 잠재적 투여 경로는, 경구(oral), 비경구(parenteral)(피내(intradermal), 피하(subcutaneous), 근육 내(intramuscular), 혈관 내(intravascular), 정맥 내(intravenous), 동맥 내(intraarterial), 복강 내(intraperitoneal), 골수 내(intramedullary), 척수강 내(intrathecal) 및 국소(topical) 포함), 강 내(intracavitary), 및 국소(피부(dermal)/표피(epicutaneous), 경피(transdermal), 점막(mucosal), 점막경유(transmucosal), 비강 내(intranasal)[예: 비강 스프레이(nasal spray) 또는 점적(drop)], 안구 내(intraocular)[예: 점안액(eye drop)에 의해], 폐(pulmonary)[예: 구강 또는 비강(nasal) 흡입(inhalation)에 의해], 협강(buccal), 설하(sublingual), 직장(rectal)[예: 좌약(suppository)에 의해], 질(vaginal)[예: 좌약에 의해] 포함)를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 국소 제형은 일부의(local) 또는 전체의(systemic) 치료적 효과를 생산하도록 설계될 수 있다. 특정 실험예에서, 항-CD79 항체 또는 이의 단편은 주사(injection)에 의해(예: 약의 한 회 분(bolus)으로서) 비경구적으로(parenterally)(예: 정맥 내로(intravenously), 피하로(subcutaneously), 근육 내로(intramuscularly) 또는 복강 내로(intraperitoneally)) 또는 일정 기간에 걸친 주입에 의해 투여된다.

비경구 제형을 제조하기 위해 사용될 수 있는 부형제 및 담체는, 용매(예: 물, 식염수, 생리 식염수(physiological saline), 완충 식염수(buffered saline)[예: 인산염 완충 식염수(phosphate-buffered saline)], 균형 염 용액(balanced salt solutions)[예: Ringer 's BSS] 및 수성 덱스트로스 용액(aqueous dextrose solutions)), 등장성/등삼투성 제제(isotonic/iso-osmotic agents)(예: 염[예: NaCl, KCl 및 CaCl₂] 및 당(sugars)[예: 수크로스(sucrose)]), 완충제(buffering agents) 및 pH 조절제(pH adjusters)(예: 인산 이수소 나트륨(sodium dihydrogen phosphate)[제1인산나트륨(monobasic sodium phosphate)]/인산 수소 이나트륨(disodium hydrogen phosphate)[제2인산나트륨(dibasic sodium phosphate)], 시트르산(citric acid)/시트르산 나트륨(sodium citrate) 및 L- 히스티딘(L-histidine)/L- 히스티딘 HCl) 및 유화제(emulsifiers)(예: 폴리소르베이트(polysorbates)[예: 폴리소르베이트 20 및 80] 및 폴록사머(poloxamers)[예: 폴록사머 188]와 같은 비이온성 계면 활성제(non-ionic surfactants))를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 단백질 제형 및 전달 시스템은, 예를 들어 A. J. Banga, Therapeutic Peptides and Proteins: Formulation, Processing, and Delivery Systems, 3rd Ed., CRC Press (Boca Raton, Florida) (2015)에서 논의된다.

부형제는, 단백질 안정성을 증가시키고, 단백질 용해도를 증가시키고, 단백질 응집을 억제하거나 용액 점도(viscosity)를 감소시키는 하나 이상의 물질, 또는 이들의 임의의 조합 또는 전부를 선택적으로 포함할 수 있다. 이러한 물질의 예는, 친수성 아미노산(hydrophilic amino acids)(예: 아르기닌 및 히스티딘), 폴리올(polyols)(예: 미오-이노시톨(myo-inositol), 만니톨(mannitol) 및 소르비톨(sorbitol)), 당류(saccharides){예: 포도당(glucose)(D-글루코스(D-glucose)[덱스트로스(dextrose)] 포함), 락토스(lactose), 수크로스(sucrose) 및 트레할로오스(trehalose)}, 삼투질물(osmolytes)(예: 트레할로오스, 타우린, 아미노산[예: 글리신, 사르코신(sarcosine), 알라닌(alanine), 프롤린(proline), 세린(serine), β-알라닌(β-alanine) 및 γ-아미노 부티르산(γ-aminobutyric acid)] 및 베타인(betaines)[예: 트리메틸글리신(trimethylglycine) 및 트리메틸 아민 N-옥사이드(trimethylamine N-oxide)]), 및 비이온성 계면 활성제(non-ionic surfactants){예: 알킬 폴리글리코시드(alkyl polyglycosides), ProTek^® 알킬사카라이드(alkylsaccarides)(예: 장쇄 지방산(long-chain fatty acid) 또는 상응하는 장쇄 알코올(long-chain alcohol)에 커플링된 단당류(monosaccharide)[예: 글루코스] 또는 이당류(disaccharide)[예: 말토오스(maltose) 또는 수크로스]) 및 폴리프로필렌 글리콜(polypropylene glycol)/폴리에틸렌 글리콜(polyethylene glycol) 블록 공중합체(block co-polymers)(예: 폴록사머 [예: Pluronic^TM F-68] 및 Genapol^® PF-10 및 이의 변종(variants))}을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 이러한 물질은 단백질 용해도를 증가시키기 때문에, 제형에서 단백질 농도를 증가시키는 데 사용할 수 있다. 제형에서 더 높은 단백질 농도는 제한된 부피의 약의 한 회분(bolus) 투여(예: ≤약 1.5 mL)를 갖는 피하 투여에 특히 유리하다. 또한, 이러한 물질은 동결 건조된(lyophilized) 단백질의 제조(preparation), 저장(storage) 및 재구성(reconstitution) 과정에서 단백질을 안정화하는 데 사용할 수 있다.

비경구(예: 정맥 내, 피하 또는 근육 내) 투여의 경우, 하나 이상의 부형제를 함유하는 수성 용매에 항-CD79 항체의 멸균 용액 또는 현탁액(suspension)을 미리 제조할 수 있으며, 예를 들어, 미리 충전된 주사기(pre-filled syringe)에 제공할 수 있다. 대안적으로, 항-CD79 항체는 동결 건조(lyophilization)(냉동 건조(freeze-drying)) 전에 하나 이상의 부형제를 선택적으로 함유할 수 있는 수성 용매에 용해되거나 현탁될 수 있다. 비경구 투여 직전에, 적합한 용기(containers)(예: 바이알(vial))에 저장된 동결 건조된 항-CD79 항체는, 예를 들어, 하나 이상의 부형제를 선택적으로 함유할 수 있는 멸균수로 재구성될 수 있다. 항-CD79 항체가 주입(예: 정맥 내)에 의해 투여되는 경우, 재구성된 항-CD79 항체의 용액 또는 현탁액은, 예를 들어, 멸균 식염수(예: 약 0.9% NaCl)를 함유하는 주입 백에 첨가되고 희석될 수 있다.

더 작은 단백질의 점막경유(transmucosal) 침투(penetration)를 향상시키는 부형제는, 시클로덱스트린(cyclodextrins), 알킬 사카라이드(alky saccharides)(예: 알킬 글리코시드(alkyl glycosides) 및 알킬 말토시드(alkyl maltosides)[예: 테트라데실말토시드(tetradecylmaltoside)]) 및 담즙산(bile acids)(예: 콜산(cholic acid), 글리코콜산(glycocholic acid), 타우로콜산(taurocholic acid), 데옥시콜산(deoxycholic acid), 글리코데옥시콜산(glycodeoxycholic acid), 케노데옥시콜산(chenodeoxycholic acid) 및 데히드로 콜산(dehydrocholic acid))을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

더 작은 단백질의 점막경유 또는 경피 침투를 향상시키는 부형제는, 화학적 침투 향상제(chemical penetration enhancers)(지방산(fatty acids)[예: 올레산(oleic acid)]을 포함하는 CPEs), 세포 침투 펩티드(cell-penetrating peptides){아르기닌이 풍부한 CPP를 포함한 CPPs[예: R₆-R₁₁ (예: R₆및 R₉)과 같은 폴리아르기닌 및 TAT(49-57)와 같은 TAT 관련 CPP] 및 양친매성(amphipathic) CPP[예: Pep-1 및 penetratin]} 및 피부 침투 펩티드(skin-penetrating peptides)(SPP, 피부 침투 및 세포 진입(cell-entering) [SPACE] 펩티드)를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 더 작은 단백질의 경피 침투는, 이온도입법(iontophoresis), 캐비테이션(cavitational) 또는 비캐비테이션(non-cavitational) 초음파(ultrasound), 전기 천공(electroporation), 열 제거(thermal ablation), 무선 주파수(radio frequency), 마이크로 박피술(microdermabrasion), 마이크로 바늘(microneedles) 또는 제트 주입(jet injection)과 같은 물리적 향상 기술(physical enhancement technique)을 사용하여 추가로 향상시킬 수 있다. US 2007/0269379는 광범위한 CPE 목록을 제공한다. F. Milletti, Drug Discov. Today, 17:850-860 (2012)은 CPP에 대한 검토이다. R. Ruan et al., Ther. Deliv., 7:89-100 (2016)은 거대 분자(macromolecules)의 경피 전달을 위한 CPP 및 SPP에 대해 논의하고, M. Prausnitz and R. Langer, Nat. Biotechnol., 26:1261-1268 (2008) 은 다양한 경피 약물 전달 방법을 논의한다.

항-CD79 항체는 서방성 조성물((sustained-release composition)로부터 전달될 수 있다. 본원에 사용된, 용어 "서방성 조성물"은 서방성(sustained-release), 오래 계속되는 방출(prolonged-release), 연장 방출(extended-release), 점진적 감소 방출(slow-release) 및 제어 방출(controlled-release) 조성물, 시스템 및 장치를 포함한다. 단백질 전달 시스템은, 예를 들어, Banga (supra)에서 논의된다. 서방성 조성물은 오래 계속되는 기간에 걸쳐 치료적 유효량의 항-CD79 항체를 전달할 수 있다. 일부 실험예에서, 서방성 조성물은 적어도 약 3 일, 1 주, 2 주, 3 주, 1 개월(4 주), 6 주, 2 개월, 3 개월 또는 더 긴 기간에 걸쳐 항-CD79 항체를 전달한다. 서방성 조성물은, 예를 들어, 비경 구적으로(예를 들어, 정맥 내, 피하 또는 근육 내) 투여될 수 있다. 단백질의 서방성 조성물은, 예를 들어, 미립자 시스템(particulate system), 지질 또는 유성 조성물(oily composition), 또는 임플란트(implant)의 형태 일 수 있다. 미립자 시스템은, 나노 입자(nanoparticles), 나노 스피어(nanospheres), 나노 캡슐(nanocapsules), 마이크로 입자(microparticles), 마이크로 스피어(microspheres) 및 마이크로 캡슐(microcapsules)을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 나노 미립자 시스템(Nanoparticulate systems)은, 일반적으로 약 1 μm 보다 작은 직경 또는 동등한 치수(dimension)를 가지고 있다. 특정 실험예에서, 나노 입자, 나노 스피어 또는 나노 캡슐은 약 500, 400 또는 300 nm 이하, 또는 약 200, 150 또는 100 nm 이하의 직경 또는 동등한 치수를 갖는다. 일부 실험예에서, 마이크로 입자, 마이크로 스피어 또는 마이크로 캡슐은 약 1-200, 100-200 또는 50-150 μm, 또는 약 1-100, 1-50 또는 50-100 μm의 직경 또는 동등한 치수를 갖는다. 나노- 또는 마이크로 캡슐은 일반적으로 중앙 코어(central core)에 치료제를 포함하는 반면, 치료제는 일반적으로 나노- 또는 마이크로 입자 또는 스피어 전체에 분산되어 있다.

특정 실험예에서, 나노 미립자 시스템은 정맥 내로 투여되는 반면, 마이크로 미립자 시스템은 피하 또는 근육 내로 투여된다. 일부 실험예에서, 서방 성 미립자 시스템 또는 임플란트는 생분해성 중합체 또는/및 하이드로겔로 만들어진다. 특정 실험예에서, 생분해성 중합체는 락트산(lactic acid) 또는/및 글리콜산(glycolic acid)[예: 폴리(L-락티드-co-글리콜라이드)(poly(L-lactide-co-glycolide)) 또는 폴리(L-락트산-co-D, L-2-하이드록시옥탄산)(poly(L-lactic acid-co-D, L-2-hydroxyoctanoic acid)과 같은 L-락트산 기반 공중합체(L-lactic acid-based copolymer)]를 포함한다. 하이드로겔이 구성될 수 있는 중합체의 비 제한적인 예는, 폴리비닐 알코올(polyvinyl alcohol), 아크릴레이트 중합체(acrylate polymers)(예: 폴리아크릴레이트 나트륨(sodium polyacrylate)), 및 상대적으로 많은 수의 친수성 그룹(예: 하이드록실 또는/및 카복실레이트 그룹)을 갖는 다른 호모중합체(homopolymers) 및 공중합체(copolymers)를 포함한다. 미립자 시스템 또는 임플란트의 생분해성 중합체는 처리 기간이 종료될 것으로 예상되는 시간 즈음에 중합체가 실질적으로 완전히 분해되고(degrades), 중합체와 같은 중합체 분해의 부산물(byproducts)이 생체 적합성(biocompatible)이 되도록 선택될 수 있다.

대안적으로, 단백질의 서방성 조성물은 비생분해성 중합체로 구성될 수 있다. 비생분해성 중합체의 예는, 폴록사머(예: 폴록사머 407)를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 단백질의 서방성 조성물은, 수산화인회석과 같은 다른 천연 또는 합성 물질 또는 재료로 구성될 수 있다.

단백질의 서방성 지질 또는 유성 조성물은, 예를 들어, 리포좀, 미셀(예: 락토좀과 같은 생분해성 천연 또는/및 합성 중합체로 구성된 것들) 및 오일에서의 에멀젼의 형태 일 수 있다.

서방성 조성물은, 예를 들어, 피하 또는 근육 내로 주사 또는 이식될 수있는 저장소(depot)로 제형화되거나 설계될 수 있다. 저장소는, 예를 들어, 중합체 미립자 시스템(polymeric particulate system), 중합체 임플란트(polymeric implant) 또는 지질 또는 유성 조성물의 형태 일 수 있다. 저장소 제형은, 단백질 및 예를 들어, 생분해성 폴리머[예: 폴리(락타이드-코-글리콜라이드)(poly(lactide-co-glycolide))] 또는 반생분해성 폴리머(semi-biodegradable polymer)(예: 락트산과 PEG의 블록 공중합체)의 혼합물을, 생체 적합성 용매 시스템에서, 이러한 혼합물이 미립자 시스템 또는 임플란트를 형성하는지 여부에 관계없이 포함할 수 있다.

약제학적 조성물은 단일 용량(single dose)으로 단위 투여 형태(unit dosage form)로 제공될 수 있으며, 여기서 모든 활성 및 비활성 성분은 적합한 시스템에서 조합되고, 성분은 투여될 조성물을 형성하기 위해 혼합될 필요가 없다. 단위 투여 형태는 일반적으로 유효량의 치료제를 함유한다. 단위 투여 형태의 대표적인 예는 치료제의 비경구(예: 정맥 내, 피하 또는 근육 내) 주사를 위한 미리 충전된 주사기, 바늘 및 바늘 커버를 포함하는 일회용 펜(single-use pen)이다.

대안적으로, 약제학적 조성물은, 치료제, 부형제 및 담체(예: 용매)가 2 개 이상의 개별(separate) 용기(예: 앰플(ampules), 바이알, 튜브(tubes), 병(bottles) 또는 주사기(syringes))에 제공되고, 조합되어 투여될 조성물을 형성하는 키트로 존재할 수 있다. 상기 키트는 조성물(예: 정맥 내 또는 피하로 주사할 용액)을 저장, 제조 및 투여하기 위한 지침서를 함유할 수 있다.

키트는 단위 투여 형태의 모든 활성 및 비활성 성분 또는 두 개 이상의 별도 용기에 활성 성분 및 비활성 성분을 포함할 수 있으며, 의학적 상태(medical condition)를 치료하기 위해 약제학적 조성물을 투여하거나 사용하기 위한 지침서를 함유할 수 있다.

일부 실험예에서, 키트는 항-CD79 항체 또는 이를 포함하는 약제학적 조성물, 및 항체-관련 상태(antibody-associated condition)를 치료하기 위해 항-CD79 항체 또는 이를 포함하는 약제학적 조성물을 투여 또는 사용하기 위한 지침서를 함유한다.

항-CD79 항체의 용도

상기 기재된 항-CD79 항체는 항체 관련 상태(예: 질병(diseases), 질환(disorders) 및/또는 증후군(syndromes))를 앓고 있는 대상체에게 투여될 수 있다. 대상체가 인간인 경우, 항-CD79 항체는 키메라 마우스-인간 항체 또는 인간화 항체일 수 있다. 이러한 키메라 또는 인간화 항체는 위에 기재되어 있다. 항체 관련 상태에는, 예를 들어, 자가면역질환, 특정 알레르기(항체 관련 알레르기), 특정 종류의 I형 당뇨병 등이 포함된다.

항-CD79 항체로 치료할 수 있는 자가면역질환에는, 예를 들어, 전신 홍 반성 루푸스(SLE), 염증성 장 질환(예: 크론병 및 궤양성 대장염), 류마티스성 관절염, 다발성 경화증, 그레이브병, CREST 증후군, 전신 경화증, 셀리악병, 이완불능증, 애디슨병, 성인 스틸병, 무감마글로불린혈증, 원형 탈모증, 아밀로이드증, 강직성 척추염, 항-GBM/항-TBM 신장염, 항인지질증후군, 자가면역 혈관부종, 자율신경기능이상, 자가면역 뇌척수염, 자가면역 간염, 자가면역 내이질환 (AIED), 자가면역 심근염, 자가면역 난소염, 자가면역성 고환염, 자가면역 췌장염, 자가면역 망막증, 자가면역 두드러기, 축삭 및 신경 신경병증(AMAN), 발로 병, 베체트병, 양성점막유사천포창, 수포성 유사천포창, 캐슬만병(CD), 셀리악병, 샤가스병, 만성 염증성 탈수초성 다발 신경병증(CIDP), 만성 재발성 다초점 골수염(CRMO), 척-스트라우스증후군(CSS) 또는 호산구성 육아종증(EGPA), 흉터유사천포창, 코간 증후군, 저온응집병, 선천성 심장차단, 콕새키 심근염, CREST 증후군, 크론병, 포진형 피부염, 데빅병(시신경척수염), 원판성 루푸스, 드레슬러 증후군, 자궁내막증, 호산구성 식도염(EoE), 호산성 근막염, 결절성홍반, 필수 혼합 한랭 글로불린혈증, 에반스 증후군, 섬유근육통, 섬유화 폐포염, 거대 세포 동맥염 (측두 동맥염), 거대 세포 심근염, 사구체 신염, 굿파스처증후군, 다발혈관염을 동반한 육아종증, 그레이브스병, 길랭-바레 증후군, 하시모토 갑상선염, 용혈성 빈혈, 헤노흐-쇤라인자색반(HSP), 임신포진(HS) 또는 천포창양 임신(PG), 화농성한선염(전위 여드름), 저감마글로불린혈증, IgA 신장병증, IgG4-관련 경화성 질병, 특발성 혈소판 감소성 자반증(ITP), 봉입체 근염(IBM), 간질성 방광염 (IC), 청소년 관절염, 청소년 당뇨병 (1 형 당뇨병), 청소년 근염(JM), 가와사키병, 램버트-이튼 증후군, 백혈구파괴맥관염, 편평태선, 태선경화증, 목질결막염, 선형 IgA 질환(LAD), 루푸스, 라임병 만성, 메니에르병, 현미경 다발혈관염(MPA), 혼합결합조직병(MCTD), 무렌 각막궤양, 무하-하버만병, 다초점 운동 신경병증(MMN) 또는 MMNCB, 다발성 경화증, 중증근무력증, 근염, 기면증, 신생아 루푸스, 시신경척수염, 호중구감소증, 안 반흔성 유천포창, 시신경염, 회귀성류머티즘(PR), 판다스병, 부종양성 소뇌변성(PCD), 발작성 야간혈색소 요증(PNH), 패리-롬버그 증후군, 평면부염(말초 포도막염), 파르소니지-터너 증후군, 천포창, 말초신경 병증, 악성 뇌척수염, 악성 빈혈(PA), POEMS 증후군, 결절성다발성동맥염, 다각형증후군 I형, II형, III형, 류마티스성 다발근통, 다발근염, 심근경색증증후군, 심막절개후증후군, 원발성 담즙성 간경변, 원발성 경화성 담관염, 프로게스테론 피부염, 건선, 건선성 관절염, 순적혈구무형성증(PRCA), 괴저성 농피증, 레이노 증후군, 반응성 관절염, 복합부위 통증 증후군, 재발성 다발연골염,하지 불안증후군(RLS), 후복막섬유증, 류마티스열, 류마티스 관절염, 사르코이드증, 슈미트 증후군, 공막염, 피부경화증, 쇼그렌 증후군, 정자 및 고환 자가면역, 강직인간증후군(SPS), 아급성세균심내막염(SBE), 수삭 증후군, 교감성 안염(SO), 타카야 수 동맥염, 측두동맥염/거대 세포 동맥염, 혈소판 감소성 자반병(TTP), 톨로사- 헌트 증후군(THS), 횡단척수염, 1형 당뇨병, 궤양성 대장염(UC), 미분화 결합 조직 질환(UCTD), 포도막염, 혈관염, 백반증, 보그트-고야나기 하라다병 등을 포함한다. 항-CD79 항체로 치료할 수 있는 다른 항체 관련 상태에는, 예를 들어, 알레르기(항체 관련 알레르기), 아밀로이드증, 특정 형태의 이식 거부 반응 등을 포함한다. 이들 및 다른 바람직하지 않은 항체-관련 상태는 본원에 기재된 하나 이상의 항-CD79 항체를 바람직하지 않은 항체-관련 상태를 앓고 있는 대상체에게 투여함으로써 치료될 수 있다.

본원에 기재된 항-CD79 항체는 대상체의 B 세포에서 마취 상태를 유도할 수 있으며, 따라서 특정 자가면역질환을 치료하는 데 사용될 수 있다. 예를 들어, 항-자기 항체 반응(anti-self antibody reactions)과 관련된 자가면역질환은 항-CD79 항체로 치료될 수 있는데, 유도된 마취 상태가 항-자기 항체가 생성되는 것을 예방하기 때문이다. 본원에 기재된 항-CD79 항체는 또한 바람직하지 않은 항체 반응을 갖는 임의의 건강상태에서 마취 상태를 유도하는 데 사용될 수 있다. 본원에 기재된 항-CD79 항체는 B 세포에서 마취 상태를 유도하는 데 사용될 수 있다. 본원에 기재된 항-CD79 항체는 B 세포의 증식을 억제하는 데 사용될 수 있다.

본원에 기재된 항-CD79 항체는 샘플 및/또는 대상체에서 B 세포를 확인 및/또는 분리하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 본원에 기재된 항-CD79 항체는 B 세포 악성 종양(malignancies) 또는 기타 림프구증식성(lymphoproliferative) 질환을 진단하는데 사용될 수 있고/있거나 B 세포 악성 종양으로 제제(agents)를 선택적으로 수송하기 위한 비히클로서 사용될 수 있다.

본원에 기재된 항-CD79 항체는 B 세포 악성 종양을 직접 치료하는데 사용될 수 있고/있거나 CD79 양성 B 세포 악성 종양의 치료를 위해 키메라 T 세포 수용체(chimeric T cell receptors, CAR-T)를 발현하는 세포 독성 T 세포를 구축하는데 사용될 수 있다. 키메라 항원 수용체(CAR)는 CAR의 항원 결합 도메인/부분으로서 본원에 기재된 항-CD79 항체의 항원 결합 부분을 사용하여 제조될 수 있다. 이러한 항-CD79 CAR은 T-세포 또는 자연 살해 세포와 같은 면역 세포에 배치될 수 있으며, 항-CD79 면역 세포는 CD79를 발현하는 세포로 인한 질병을 치료하는데 사용될 수 있다. 이러한 질병에는, 예를 들어, CD79 양성 조혈암(예: 림프종, 백혈병, 골수종(myelomas))이 포함된다.

항체 관련 건강상태 치료하기 위해 본원에 개시된 항-CD79 항체의 치료적(therapeutically) 유효량(effective amount) 및 투여 빈도(frequency of administration of) 및 치료 기간(length of treatment with)은, 상태(condition)의 성질(nature) 및 중증도(severity), 항체의 효능(potency), 투여 방법(mode), 대상체의 연령, 체중, 일반적인 건강(general health), 성별 및 식이 요법과 치료에 대한 대상체의 반응을 포함한 다양한 요인에 따라 달라질 수 있고, 치료 의사에 의해 결정될 수 있다. 항체 관련 건강상태의 치료를 위한, 단일 용량 또는 분할 용량(divided doses)으로 투여될 수 있는, 항체(예: 항-CD79 항체 LB517/LB519)의 치료적 유효량은 약 1, 5 또는 10 mg 내지 약 200 mg, 약 1, 5 또는 10 mg 내지 약 150 mg, 약 1, 5 또는 10 mg 내지 약 100 mg, 또는 약 1, 5 또는 10 mg 내지 약 50 mg 또는 치료 의사가 적절하다고 판단되는 경우일 수 있다. 항체의 치료적 유효량은 약 1-5 mg, 5-10 mg, 10-20 mg, 20-30 mg, 30-40 mg, 40-50 mg, 50-100 mg, 100-150 mg 또는 150-200 mg 일 수 있다. 항체의 치료적 유효량은 약 1, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150 또는 200mg 일 수 있다. 항체의 치료적 유효량은 약 1-5 mg, 5-10 mg 또는 10-50 mg 일 수 있다. 항체 관련 건강상태의 치료를 위한 항체(예: 항-CD79 항체 LB517/LB519)의 치료적 유효량은 약 0.01-0.1 mg/kg, 0.1-0.5 mg/kg, 0.5-1 mg/kg, 1-2 mg/kg 또는 2-3 mg/kg 체중, 또는 치료 의사가 적절하다고 판단하는 경우일 수 있다. 항체의 치료적 유효량은 약 0.01-0.1 mg/kg, 0.1-0.5 mg/kg 또는 0.5-1 mg/kg 체중일 수 있다.

항-CD79 항체는 항체 관련 건강상태를 치료하기 위해 임의의 적절한 빈도로 투여될 수 있다. 항체(예: 항-CD79 항체 LB517/LB519)는 1 일 1 회, 2 일에 1 회, 3 일에 1 회, 매주 2 회, 매주 1 회, 2 주에 1 회, 3 주에 1 회, 매월 1 회, 6 주에 1 회, 2 개월에 1 회 또는 3 개월에 1 회 또는 치료 의사가 적절하다고 판단하는 경우로 투여될 수 있다. 항체는 매주 1 회 또는 2 주에 1 회 투여될 수 있다.

마찬가지로, 항-CD79 항체는 항체 관련 건강상태를 치료하기 위해, 임의의 적절한 시간 동안 또는 임의의 적절한 총 용량으로 투여될 수 있다. 항체(예: 항-CD79 항체 LB517/LB519)는 적어도 약 1 주, 2 주, 1 개월(4 주), 6 주, 2 개월, 3 개월, 6 개월, 1 년, 2 년, 3 년 이상, 또는 치료 의사가 적절하다고 판단하는 경우의 일정 기간동안 투여될 수 있다. 항체 관련 건강상태는 만성(chronic) 상태 일 수 있다. 만성 상태는, 예를 들어, 적어도 약 6 주 또는 2 개월 이상 동안 존재할 수 있다. 항체는 적어도 약 6 주, 2 개월, 3 개월 또는 6 개월의 일정 기간동안 투여될 수 있다. 1, 2, 3, 4, 5 또는 6 회 용량의 항체(예: 항-CD79 항체 LB517/LB519)가 전체 치료 요법(regimen)에 대해 투여 될수있다. 전체 치료 요법을 위해 1, 2 또는 3 회 용량의 항체가 투여될 수 있다.

항-CD79 항체(예: 항-CD79 항체 LB517/LB519)는 또한 항체 관련 건강상태를 치료하기 위해 불규칙한 방식으로 투여될 수 있다. 예를 들어, 항체 또는 이의 단편은 1 주, 2 주, 3 주, 1 개월, 2 개월 또는 3 개월의 일정 기간에 1, 2, 3, 4, 5 회 이상 불규칙적한 방식으로 투여될 수 있다. 더욱이, 항-CD79 항체(예: 항-CD79 항체 LB517/LB519)는 항체 관련 건강상태의 치료를 위해 프로 레나 타(필요에 따라)(pro re nata (as needed)) 로 취할 수 있다. 예를 들어, 항체는 혈압이 특정 수준으로 낮아질 때까지 고혈압(hypertension) 치료를 위해 규칙적인 방식이든 불규칙한 방식이든 관계없이 1, 2, 3, 4, 5 회 이상 투여될 수 있다. 혈압이 특정 수준으로 떨어지면, 항체 투여는 선택적으로 중단될 수 있다. 혈압이 특정 수준에 도달하거나 초과하면, 규칙적인 방식이든 불규칙한 방식이든 관계없이 항체 투여가 재개될 수 있다. 항체의 적절한 투여량, 투여 빈도 및 치료 기간은 치료 의사에 의해 결정될 수 있다.

항-CD79 항체의 치료 수준의 보다 신속한 확립을 위해, 항체 또는 이의 단편의 적어도 하나의 로딩 용량은 유지(maintenance) 용량 전에 투여될 수 있다. 항체의 로딩 용량(예: 항-CD79 항체 LB517/LB519)이 투여될 수 있고, (i) 하나 이상의 추가적 로딩 용량 및 이어서 하나 이상의 치료적 유효 유지 용량(effective maintenance doses), 또는 (ii) 치료 의사가 적절하다고 판단하는, 추가 로딩 용량 없는 하나 이상의 치료적 유효 유지 용량이 이어진다. 약물의 로딩 용량은 후속 유지 용량보다 더 클 수 있으며(예: 약 1.5, 2, 3, 4 또는 5 배 더 클 수 있음), 약물의 치료 수준을 더 빠르게 설정하도록 설계되었다. 하나 이상의 치료적 유효 유지 용량은 본원에 기재된 임의의 치료적 유효량일 수 있다. 로딩 용량은 유지 용량보다 약 2 배 또는 3 배 더 클 수 있다. 항체의 로딩 용량은 1 일에 투여될 수 있고, 항체의 유지 용량은, 예를 들어, 매주 1 회 또는 2 주에 1 회 그 후 치료의 기간 동안 투여될 수 있다. 항체(예: 항-CD79 항체 LB517/LB519)는 약 2-10 mg, 10-20 mg 또는 20-100 mg, 또는 약 3-15 mg, 15-30 mg, 30-150 mg, 또는 1 일째에(on day 1)의 로딩 용량으로 투여될 수 있고, 치료의 기간 동안 매주 1 회 또는 2 주에 1회, 약 1-5 mg, 5-10 mg 또는 10-50 mg의 유지 용량이 이어지며(예: 적어도 약 2, 3 또는 6 개월), 여기서 로딩 용량은 유지 용량보다 약 2 또는 3 배 더 크고, 항체 또는 이의 단편은 비경 구로(예: 정맥 내, 피하 또는 근육 내) 투여된다.

유지 용량 전에 2 회 (또는 그 이상) 로딩 용량의 항체가 투여될 수 있다. 항체 또는 이의 단편의 첫 번째 로딩 용량은, 1 일째에 투여될 수 있고, 두 번째 로딩 용량은, 예를 들어, 약 1 또는 2 주 후에 투여될 수 있으며, 그리고 유지 용량은, 예를 들어, 매주 1 회 또는 그 후 2 주에 1 회 그 후 치료 기간 동안 투여될 수 있다. 여기서 첫 번째 로딩 용량은 유지 용량보다 약 3 배 또는 4 배 더 클 수 있고, 두 번째 로딩 용량은 유지 용량보다 약 2 배 더 클 수 있다. 항체(예: 항-CD79 항체 LB517/LB519)는 약 3-15 mg, 15-30 mg 또는 30-150 mg, 또는 약 4-20 mg, 20-40 mg 또는 40-200 mg의 첫 번째 로딩 용량으로 1 일째에, 약 2-10 mg, 10-20 mg 또는 20-100 mg의 두 번째 로딩 용량으로 약 1 또는 2 주 후에 투여될 수 있고, 약 1-5 mg, 5-10 mg 또는 10-50 mg의 유지 용량으로 치료 기간 동안 매주 1 회 또는 2 주에 1 회(예: 적어도 약 2, 3 또는 6 개월 동안)가 이어진다. 여기서 첫 번째 로딩 용량은 유지 용량보다 약 3 또는 4 배 더 클 수 있고, 두 번째 로딩 용량은 유지 용량보다 약 2 배 더 클 수 있고, 항체 또는 이의 단편은 비경구로(예: 정맥 내, 피하 또는 근육 내로) 투여될 수 있다.

추가 치료제(Therapeutic Agents) 와 병용 요법(Combination Therapies)

본 개시 내용은, 치료를 필요로 하는 대상체에게 치료적 유효량의 본원에 기재된 항-CD79 항체를 선택적으로 추가 치료제와 조합하여 투여하는 단계를 포함하는, 항체 관련 건강상태를 치료하는 방법을 제공한다. 본 개시 내용은, 선택적으로 추가 치료제와 조합하여 약제(medicament)로서 사용하기 위한 본원에 기재된 항-CD79 항체 또는 본원에 기재된 항-CD79 항체를 포함하는 조성물을 추가로 제공한다. 또한, 본 개시 내용은 선택적으로 추가 치료제와 조합된 약제의 제조에서 본원에 기재된 항-CD79 항체의 용도를 제공한다. 일부 실험에서, 약제는 항체 관련 건강상태의 치료에 사용된다.

항체 관련 건강상태를 치료하기 위해, 항-CD79 항체(예: 항-CD79 항체 LB517/LB519)와 조합하여 하나 이상의 추가 치료제가 선택적으로 사용될 수 있다. 선택적 추가 치료제(들)는 항체의 투여와 동시에(concurrently with)(예: 항체 또는 이의 단편과 동일한 조성물로 또는 별개의 조성물로) 또는 항체의 투여에 순차적으로(sequentially)(전 또는 후에) 대상체에게 투여될 수 있다.

선택적 추가 치료제(들)는 면역억제제(immunosuppressive agents), 항염증제(anti-inflammatory agents), 알레르기 약물(allergy drugs) 및 이들의 조합으로부터 선택될 수 있다. 항체 관련 건강상태를 치료하기 위해, 하나 이상의 면역억제제가 항 -CD769 항체(예: 항-CD79 항체 LB517/LB519)와 조합하여 사용될 수 있다. 이러한 면역억제제는 예를 들어, 항-CD20 항체(예: 리툭시맙(rituximab)), 칼시뉴린 억제제(calcineurin inhibitors)(예: 타크로리무스(tacrolimus), 사이클로스포린(cyclosporine) 등), 항증식제(antiproliferative agents) 또는 IDMH 억제제(IDMH inhibitors)(예: 마이코페놀레이트 모페틸(mycophenolate mofetil), 마이코페놀레이트 나트륨(mycophenolate sodium), 아자티오프린(azathioprine), 레플루노마이드(leflunomide) 등), mTOR 억제제(mTOR inhibitors)(예:시롤리무스(Sirolimus), 에베로리무스(everolimus) 등), 스테로이드(steroids)(예: 프레드니손(prednisone), 부데소니드(budesonide), 프레드니솔론(prednisolone) 등의 코르티코스테로이드(corticosteroids)) 및 생물학적 제제(biologics)(예: 아바타셉트(abatacept), 아달리무맙(adalimumab), 아나킨라(anakinra), 세르톨리주맙(certolizumab), 에타너셉트(etanercept), 인플릭시맙(infliximab) , 익제키주맙(ixekizumab), 나탈리주맙(natalizumab), 리툭시주맙(rituximab), 세쿠키누맙(secukinumab), 토실리주맙(tocilizumab), 우스테키누맙(uestekinumab), 베돌리주맙(vedolizumab), 바실릭시맙(basiliximab), 다클리주맙(daclizumab), 무로모납(muromonab))를 포함할 수 있다. 생물학적 제제는 또한, 예를 들어, CTLA 4 융합 단백질(CTLA 4 fusion proteins), 항-TNFα 항체, IL-1 수용체 길항제 단백질(IL-1 receptor antagonist protein), TNF 수용체 융합 단백질(TNF receptor fusion proteins), 항-IL17A 항체, 항-α4 인테그린 항체(anti-α4 integrin antibodies), 항-IL6 수용체 항체(anti-IL6 receptor antibodies), IL12/IL23 항체의 항-p40 서브유닛(subunit), 항-α₄β₇ 인테그린 항체(anti-α₄β₇ integrin antibodies), 항-CD25 항체 및 항-CD3 항체를 포함할 수 있다.

항-CD79 항체(예: 항-CD79 항체 LB517/LB519)와 조합하여 하나 이상의 항염증제(anti-inflammatory agents)를 사용하여 염증 성분을 갖는 항체 관련 건강상태를 치료할 수 있다. 하나 이상의 항염증제는, 예를 들어, 전 염증성 사이토 카인의 억제제 또는 그에 대한 수용체 또는 이의 생성(예: TNF-α 또는/및 IL-6 또는 IL-6R)을 포함할 수 있다. 다른 항염증제는, 예를 들어: 비스테로이드성(non-steroidal) 항염증제(NSAID), 면역조절제(immunomodulators), 면역억제제(immunosuppressants), 항염증성 사이토카인(anti-inflammatory cytokines) 및 이들의 생산을 증가시키는 화합물, 전 염증성 사이토카인 또는 그에 대한 수용체의 억제제, 전 염증성 사이토카인 또는 그에 대한 수용체의 생산의 억제제, 전 염증성 전사인자 또는 그의 활성화 또는 발현의 억제제, 전 염증성 프로스타글란딘(prostaglandins)(예: 프로스타글란딘 E₂ [PGE₂]) 또는 그에 대한 수용체(예: EP3) 또는 그의 생산의 억제제, 류코트리엔(leukotrienes) 또는 그에 대한 수용체의 또는 그의 생산의 억제제, 포스포리파제 A2(phospholipase A2) 억제제(예: 분비된 및 사이토솔의(cytosolic) PLA2), C-반응성 단백질(C-reactive protein, CRP) 활성 또는 수준 억제인자(suppressors), 비만 세포(mast cell) 안정화제(stabilizers), 포스포디에스테라제(phosphodiesterase) 억제제, 전문 분해능 매개체(specialized pro-resolving mediators, SPMs), 다른 종류의 항염증제 및 이의 유사체, 유도체, 단편 및 염을 포함한다.

비스테로이드성 항염증제(NSAID)는, 아세트산 유도체(acetic acid derivatives), 안트라닐산 유도체(anthranilic acid derivatives)(페나메이트(fenamates)),에놀산 유도체(enolic acid derivatives)(옥시캄(oxicams)), 프로피온산 유도체(propionic acid derivatives), 살리실레이트(salicylates), COX-2-선택적 억제제(COX-2-selective inhibitors), 기타 종류의 NSAID, 예를 들어, 모노테르페노이드(monoterpenoids)(예: 유칼립톨(eucalyptol) 및 페놀(phenols)[예: 카바크롤(carvacrol)]), 아닐리노피리딘카복실산(anilinopyridinecarboxylic acids)(예: 클로니신(clonixin)), 설포나닐리드(sulfonanilides)(예: 니메술리드(nimesulide)), 및 리포옥시게나제(lipooxygenase)(예: 5-LOX) 및 사이클로옥시게나제(cyclooxygenase)(예: COX-2) (예: 케불라그산(chebulagic acid), 리코펠론(licofelone), 2-(3,4,5-트리메톡시페닐)-4-(N-메틸인돌 -3- 일)티오펜(2-(3,4,5-trimethoxyphenyl)-4-(N-methylindol-3-yl)thiophene)의 이중 억제제(dual inhibitors), 및 디-3급-부틸페놀 기반 화합물(di-tert-butylphenol-based compounds)[예: DTPBHZ, DTPINH , DTPNHZ 및 DTPSAL]); 및 이의 유사체, 유도체 및 염을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

글루코코르티코이드(glucocorticoid) 부류의 코르티코스테로이드(corticosteroids)는 항염증 및 면역억제 특성을 가지고 있다. 글루코코르티코이드는, 하이드로코르티손 유형(hydrocortisone types), 할로겐화 스테로이드(halogenated steroids), 탄산염(carbonates) 및 이들의 유사체, 유도체 및 염을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

선택적 추가 치료제(들)는 독립적으로 임의의 적합한 방법으로 투여될 수 있다. 잠재적인 투여 방법은, 경구, 비경구(피내, 피하, 근육 내, 혈관 내, 정맥 내, 동맥 내, 복강 내, 골수 내, 척수강 내 및 국소 포함), 강내 및 국소(피부/상피, 경피, 점막, 점막경유, 비강 내[예: 비강 스프레이 또는 점적], 안구 내[예: 점안액에 의해], 폐[예: 구강 또는 비강 흡입에 의해], 협강, 설하, 직장 [예: 좌약에 의해] 및 직장[예: 좌약에 의해]) 및 질[예: 좌약에 의해])를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 일부 실험예에서, 임의의 추가 치료제 (들)는 독립적으로 경구 또는 비경 구 (예를 들어, 정맥 내, 피하 또는 근육 내)로 투여된다.

하나 이상의 항알레르기제(anti-allergy agents)를 항-CD79 항체(예: 항-CD79 항체 LB517/LB519)와 조합하여 항체 관련 건강상태를 치료할 수 있다. 이러한 항알레르기제는, 예를 들어, 항히스타민제(antihistamines)(예: 세티리진(cetirizine), 펙소페나딘(fexofenadine), 레보세티리진(levocetirizine), 로라티딘(loratidine), 보름페니라민(bormpheniramine), 클로르페니라민(chlorpheniramine), 셀마스틴(celmastine), 디펜히드라민(diphenhydramine), 케토티펜(ketotifen), 나파졸린(naphazoline), 페니라민(pheniramine), 데슬로라타딘(desloratadine), 아젤라스틴(azelastine), 에피나스틴(epinastine), 올로파타딘(olopatadine)), 충혈제거약(decongestants)(예: 슈도에페드린(pseudoephedrine), 페닐에프린(phenylephrine), 옥시메타졸린(oxymetazoline)), 스테로이드(steroids)(예: 베클로메타손(beclomethasone), 시클레소니드(ciclesonide), 플루티카손 푸로에이트(fluticasone furoate), 모메타손(mometasone), 부데소니드(budesonide), 트리암시놀론(triamcinolone), 덱사메타손(dexamethasone), 로테프레드놀(loteprednol), 프레드니손 에포크레이트(prednisone epocrates)), 비만 세포 안정화제(예: 크로몰린 나트륨(cromolyn sodium), 로독사미드-트로메타민(lodoxamide-tromethamine), 네도크로밀(nedocromil), 페미로라스트(pemirolast)), 및 류코트리엔 개질제(leukotriene modifiers)(예: 몬테루카스트(monteleukast))를 포함할 수 있다.

이식(transplant)을 위한 하나 이상의 항-거부 약물(anti-rejection drugs)은 이식 절차 후 대상체를 치료하기 위해 항-CD79 항체(예: 항-CD79 항체 LB517/LB519)와 조합하여 사용될 수 있다. 이러한 항-방지 약물은, 예를 들어, 칼시뉴린 억제제, 항증식제 또는 IDMH 억제제, mTOR 억제제 및 스테로이드를 포함할 수 있다.

선택적 추가 치료제(들)는 제한없이 매일(하루에 1 회, 2 회 이상), 2 일 또는 3 일마다, 매주 2 회, 매주 1 회, 2 주마다, 3 주마다, 매월, 2 개월 또는 3 개월마다 또는 불규칙한 방식으로 또는 필요에 따라를 포함한 임의의 적합한 빈도로 독립적으로 투여될 수 있다. 투여 빈도는, 예를 들어, 선택된 투여의 방법에 따라 달라질 수 있다. 선택적 추가 치료제(들)를 사용한 치료의 기간은 치료 의사에 의해 결정될 수 있으며, 독립적으로, 예를 들어, 적어도 약 1 일, 2 일, 3 일, 4 일, 1 주, 2 주, 3 주, 4 주 (1 개월), 6 주, 2 개월, 3 개월, 6 개월, 1 년, 2 년, 3 년 이상일 수 있다.

항-CD79 항체의 진단 용도

본원에 기재된 항-CD79 항체는 또한 B 세포 관련 질환의 진단 및 예후 평가에 유용하다. 또한, 이러한 항체는 치료 결정을 용이하게 하는 데 사용될 수 있다.

대상체로부터 얻은 오리지널 또는 처리된(processed) 샘플에서 B 세포 계통 세포(B-cell lineage cells)의 존재를 검출하기 위해, 항-CD79 항체가 적용될 수 있다. 생물학적 샘플은, 예를 들어, 혈액, 혈장, 혈청(serum), 소변(urine), 뇌척수액(cerebrospinal fluid, CSF), 세포 또는 조직을 포함할 수 있다. 샘플은 직접 분석되거나, 분석 전에 추출되거나, 적합한 용매를 추가하여 부피가 확장될 수 있다.

생물학적 샘플은 항-CD79 항체와 접촉될 수 있으며, 샘플은 B 세포에 대한 항체 또는 이의 단편의 결합을 검출하기 위해 스크리닝된다(screened). 이러한 결합의 검출은 샘플에 B 세포의 존재를 나타낸다. 항-CD79 항체는 검출 가능한 제제(예: 형광 염료)로 표지 될 수 있으므로, 항체가 B 세포에 결합하면 신호가 발생한다(evokes). 생물학적 샘플의 B 세포는 라벨링된 항-CD79 항체(직접 분석(a direct assay))를 도입하기 전에 표면에 고정될 수 있으며, B 세포에 결합된 라벨링된 항체 또는 이의 단편의 양에 해당하는 신호의 양은, 샘플의 B 세포 양과 관련이 있다. 생물학적 샘플의 B 세포는 표면에 고정된 라벨링 되지 않은 첫 번째 항체에 의해 포착된 다음, 포착된 B 세포에 결합하고 포착된 B 세포의 양에 비례하여 신호를 생성하는 라벨링된 두 번째 항체에 의해 검출될 수 있으며(샌드위치 분석(a sandwich assay)), 여기서 라벨링되지 않은 첫 번째 항체 및 라벨링된 두 번째 항체는 B 세포상의 상이한 에피토프에 결합하고, 라벨링되지 않은 첫 번째 항체 또는/및 라벨링된 두 번째 항체는 독립적으로 본원에 개시된 항-CD79 항체일 수 있다.

생물학적 샘플의 B 세포는 경쟁 분석(a competitive assay)에서 검출될 수 있다. 샘플(선택적으로 버퍼에 현탁)은 라벨링된 anti-CD79와 혼합될 수 있다. 생성된 혼합물은 B 세포 마커 코팅된 기질과 접촉될 수 있다. 샘플에 B 세포 수가 많을수록, 더 많은 항체/B 세포 복합체가 형성되고 결합되지 않은(유리(free)) 항체가 기질상의 B 세포 마커에 결합할 수 있으므로("경쟁(competition)"), 따라서 생성되는 신호가 낮다.

위에서 기재된, 직접, 샌드위치 및 경쟁 분석에서 1 차(primary) 항-CD79 항체는 검출 가능한 제제로 표지 될 수 있다. 대안적으로, 직접, 샌드위치 및 경쟁 분석에서 1 차 항-CD79 항체는 라벨링되지 않을 수 있고, B 세포에 1 차 항체의 결합 후에 라벨링된 2 차 항체(예: 1 차 항체의 Fc 영역에 결합하는 항체)에 의해 결합될 수 있다. 2 차 항체가 효소에 접합된 경우, 효소의 기질을 추가하면 신호(예: 발색의(chromogenic), 형광의(fluorescent) 또는 전기화학적(electrochemical) 신호)를 생성하는 효소/기질 반응이 발생한다. 고체 지지체(solid support)(예: 플레이트 웰 또는 비드(bead))의 흡광도(absorbance), 형광(fluorescence) 또는 전기화학적 신호(예: 전류(current))가 측정되어, 샘플에서 B 세포의 존재와 수를 결정한다. 서양고추냉이 퍼옥시다아제(horseradish peroxidase, HRP)의 기질의 비제한적인 예는, 3-아미노-9-에틸카르바졸(3-amino-9-ethylcarbazole, AEC), 3,3'-디아미노벤지딘(3,3'-diaminobenzidine, DAB) 및 3,3', 5,5'-테트라메틸벤지딘(3,3',5,5'-tetramethylbenzidine, TMB)를 포함하고, 알칼리성 포스파타제(alkaline phosphatase)에는 5-브로모-4-클로로-3-인돌릴포스페이트(5-bromo-4-chloro-3-indolyl phosphate, BCIP)가 포함되고, β-글루쿠로니다제(β-glucuronidase)는 5-브로모-4-클로로-3-인돌릴-β-D-글루쿠로나이드(5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-glucuronide, X-Gluc)가 포함된다. 이러한 분석을 효소 결합 면역 흡착 분석(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)이라고 한다.

검출 가능한 제제에는, 발색단(chromophores){예: 염료(dyes), 염색(stains), 안료(pigments) 및 발색체(chromogens)(예: 3-아미노-9-에틸카르바졸 [AEC], 5-브로모-4-클로로-3-인돌릴포스페이트[BCIP], 3,3'-디아미노벤지딘[DAB] 및 3,3', 5,5'-테트라메틸벤지딘[TMB])}, 형광단(fluorophores)/형광 색소(fluorochromes)(예: 형광 염료, 예를 들어 플루오레세인(fluorescein), 플루오레세인 이소티오시아네이트(fluorescein isothiocyanate) 및 로다민(rhodamine)), 화학 발광 화합물(chemiluminescent compounds)(예: 루시페린(luciferin) 및 루미놀(luminol)) , 방사성 동위 원소(radioisotopes)(예: ³H, ¹⁴C, ³²P, ³⁵S 및 ¹²⁵I), 방사성 성분(radioactive element)(예: 테크네튬(technetium)), 전자 밀도 화합물(electron-dense compounds), 자성 물질(magnetic substances) 및 입자(particles)(예: 상자성(paramagnetic) 및 초상자성(superparamagnetic) 물질), 자기 공명 영상(magnetic resonance imaging, MRI) 조영제(contrast agents)(예: 가돌리늄(gadolinium) 함유), 효소 (예: 서양고추냉이 퍼옥시다아제 [HRP], 알칼리성 포스파타제, 루시페라제, β-글루쿠로니다제 및 β-갈락토시다제(β-galactosidase)), 합텐(haptens) 및 독소를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

본원에 기재된 항-CD79 항체는 다양한 면역 측정 분석(immunometric assays)에 적용될 수 있다. 이러한 분석은 발색, 형광, 화학 발광(chemiluminescence), 광 산란(light scattering), 방사성 표지(radiolabeled), 전기 화학적(electrochemical), 효소, 침전(precipitation), 응집(agglutination), 응고(coagulation), 웨스턴 블롯(Western blot), 그리드 블롯(grid blot), 조직 블롯(tissue blot), 도트 블롯(dot blot), 딥 스틱(dip stick) 및 바이오센서 분석을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 예를 들어, Principles and Practice of Immunoassays, C. Price and D. Newman (Eds.), Stockton Press (1997); and The Immunoassay Handbook, 2^ndEd., D. Wild (Ed.), Nature Publishing Group (2001) 참조. 또한, 항-CD79 항체는 MRI와 같은 영상 촬영에 활용될 수 있다.

생물학적 샘플에서 B 세포의 양을 검출하고 측정하면 B 세포 관련 질환의 진단, 예후(prognosis) 및 치료를 용이하게 할 수 있다. 일부 실험예에서, 질환은 B 세포의 상승된(elevated) 수준과 관련이 있으며, 및 질환이 없는 다른 대상체(들)의 해당 샘플에서 B 세포의 수준과 비교하여 대상체로부터의 샘플에서 B 세포의 상승된 수준은 대상체의 질환의 진단을 나타낸다. 질환의 진단을 위한 참조 B 세포 수준(reference B-cell level)은 예를 들어, 질환이 없는 대상체의 통계적으로(statistically) 또는 역학적으로(epidemiologically) 유의미한 수로부터 얻은 해당 샘플의 B 세포 수준을, 질환을 가진 대상체의 통계적으로 또는 역학적으로 유의미한 수로부터 얻은 해당 샘플의 B 세포 수준과의 비교에 기초하여 결정될 수 있다. 유사하게, 치료 및 예후 목적을 위해, 대상체로부터의 샘플에서 B 세포의 수준은, 예를 들어, B 세포 관련 질환의 중증도와 상관 관계가 있는 B 세포 수준의 척도와 비교하여 질환의 현재의 중증도를 결정할 수 있고, 가능한 과정 또는 결과(예: 진행(progression) 또는 퇴행(regression))를 예측할 수 있다.

또한, 생물학적 샘플에서 B 세포의 양의 검출 및 측정은 치료 결정을 용이하게 할 수 있다. 일부 실험예에서, 대상체에게 투여되는 항-CD79 항체의 양 또는/및 대상체에 대한 항체의 투여 빈도는, 유지 또는 조절(증가 또는 감소)되거나, 대상체에 항체 또는 이의 단편의 투여는, 대상체로부터의 샘플의 B 세포의 존재, 부재, 양 또는 수준에 기초하여 중단된다.

일부 실험예에서, 키트는 검출 가능한 제제로 선택적으로 라벨링될 수 있는 항-CD79 항체 및 선택적으로 진단의 적용(예: 면역 분석에서)을 위한 항-CD79 항체 사용에 대한 지침을 함유한다.

항-CD79 항체의 생산

본 개시 내용은 본원에 기재된 항-CD79 항체를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다. 폴리뉴클레오타이드는 항-CD79 mAb의 V_H 도메인 또는/및 V_L 도메인을 암호화하는 핵산 서열을 포함할 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 항-CD79 mAb의 중쇄 또는/및 경쇄를 암호화하는 핵산 서열을 포함할 수 있다.

본 개시 내용은 본원에 기재된 항-Cd79 항체를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 구조물(발현 또는 클로닝 구조물로도 지칭될 수 있음)을 추가로 제공한다. 적합한 구조물은 플라스미드, 코스미드(cosmids), 박테리아 인공 염색체(bacterial artificial chromosomes), 효모 인공 염색체(yeast artificial chromosomes), 람다 파지(lambda phages)(예: 리소겐(lysogeny) 유전자가 결실 된 것) 및 바이러스를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 구조물은 세포에 에피솜으로(episomally) 존재하거나 염색체(chromosome)에 통합될 수 있다(어떤 방식으로든 구조물이 남아 있고 여전히 구조물, 플라스미드 및 벡터이다).

다양한 구조 시스템이 적용될 수 있다. 한 종류의 구조물은 아데노바이러스(adenovirus), 배큘로바이러스(baculovirus), 소 유두종 바이러스(bovine papilloma virus), 폴리오마 바이러스(polyoma virus), SV40 바이러스(SV40 virus), 우두 바이러스(vaccinia virus) 및 레트로 바이러스(retroviruses)(예: MMTV, MOMLV 및 라우스육종바이러스(rous sarcoma virus))와 같은 동물 바이러스에서 유래된 DNA 성분을 활용한다. 또 다른 부류의 구조물은 동부 말 뇌염 바이러스(eastern equine encephalitis virus), 플라비바이러스(flaviviruses) 및 셈 리키 포레스트 바이러스(Semliki Forest virus)와 같은 RNA 바이러스에서 유래된 RNA 성분을 활용한다.

구조물은, 예를 들어, 항-Cd79 mAb의 V_H 도메인 또는/및 V_L 도메인, 또는 중쇄 또는/및 경쇄를 암호화하는 핵산 서열에 추가하여 mRNA의 최적 발현을 위한 다양한 다른 요소를 포함할 수 있다. 예를 들어, 구조물은 전사 프로모터(transcriptional promoter), 프로모터와 오퍼레이터(operator), 인핸서(enhancer), 인트론(들)(intron(s)) 또는/및 엑손(들)(exon(s))이 있거나 없는 오픈 리딩 프레임(open reading frame), 종료 신호(termination signal), 스플라이스 신호(splice signal), 분비 신호(secretion signal) 서열 또는 선택 가능한 마커(예: 항생제 또는 세포독성제(cytotoxic agent)에 대한 내성(resistance)을 부여하는 유전자), 또는 이들의 임의의 조합 또는 모두를 함유할 수 있다.

본 개시 내용은 또한 본원에 기재된 항-CD79 항체를 암호화하는 구조물을 포함하거나 발현하는 숙주 세포를 제공한다. 적합한 숙주 세포는 진핵 세포(eukaryotic cells), 포유 동물 세포(mammalian cells)(예: BHK, CHO, COS, HEK293, HeLa, MDCKII 및 Vero 세포), 곤충 세포(insect cells)(예: Sf9 세포), 효모 세포 및 박테리아 세포(예: 대장균(E coli) 세포)를 포함할 수 있지만, 이에 제한되지는 않는다. 숙주 세포는 포유 동물 세포(예: CHO 세포 또는 HEK293 세포)일 수 있다.

숙주 세포는 항-CD79 mAb의 V_H 도메인 또는 V_L 도메인, 또는 중쇄 또는 경쇄를 암호화하는 구조물을 포함하거나 발현할 수 있다. 숙주 세포는 항-CD79 mAb의 V_H 도메인 또는 V_L 도메인, 또는 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 단일 구조물을 포함하거나 발현할 수 있다. 동일한 숙주 세포 또는 별개의 숙주 세포는 항-CD79 mAb의 V_H 도메인 또는 중쇄를 암호화하는 구조물 및 mAb의 V_L 도메인 또는 경쇄를 암호화하는 별개의 구조물을 포함하거나 발현할 수 있다.

구조물은 당업계에 공지된 임의의 방법에 의해 형질주입되거나 숙주 세포로 도입될 수 있다. 형질주입제 및 방법은 인산 칼슘(calcium phosphate), 양이온성 중합체(cationic polymers)(예: DEAE-덱스트란(DEAE-dextran) 및 폴리에틸렌이민(polyethylenimine)), 덴드리머(dendrimers), 푸진(fugene), 양이온성 리포좀(cationic liposomes), 전기 천공(electroporation), 소노포레이션(sonoporation), 세포 압착(cell squeezing), 유전자 총(gene gun), 바이러스 형질주입(viral transfection) 및 레트로 바이러스 형질도입(retroviral transduction)을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.

형질주입된 숙주 세포를 배양하고 재조합적으로 생성된 항-CD79 항체를 회수하기 위한 방법 및 조건은 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들어, 적용되는 특정 발현 벡터 또는/및 숙주 세포에 따라 다양하거나 최적화될 수 있다. 항-CD79 mAb의 V_H 도메인 또는/및 V_L 도메인, 또는 중쇄 또는/및 경쇄는 재조합 적으로 생성될 수 있다. 항-CD79 전체 IgG1, IgG2 또는 IgG4의 중쇄 및 경쇄, 또는 연장 모이어티와 선택적으로 융합된 항-CD79 Fab 단편의 중쇄 및 경쇄가 재조합적으로 생성된다.

본 명세서에서 인용된 모든 간행물 및 특허는 각각의 개별 간행물 또는 특허가 참조로 포함되는 것으로 구체적이고 개별적으로 지시된 것처럼 본원에 참조로 포함되며, 인용된 간행물과 관련된 방법 및/또는 물질을 개시하고 설명하기 위해 참조로 본원에 포함된다.

다음 실시예는 본 개시 내용을 설명하기 위한 것일 뿐이다. 다른 분석, 연구, 프로세스, 프로토콜, 절차, 방법론, 시약 및 조건이 적절하게 대안적으로 사용될 수 있다.

실시예

실시예 1. 키메라 항-CD79 항체의 생성(Creation of Chimeric Anti-CD79 Antibodies)

키메라 항체 HcLc는 높은 특이성과 높은 친화도로 CD79에 결합하는 마우스 항체로부터 생성되었다. 마우스 항체의 V_H 도메인 및 V_L도메인(서열번호: 1 및 2)을 각각 인간 IgG2 C_H1, C_H2 및 C_H3 도메인 또는 인간 카파 C_L 도메인에 융합시켰다.

실시예 2. 인간화 항-CD79 항체의 생성

CD79에 결합하는 마우스 항체도 인간화 되었다. 중쇄(IgG1) 및 경쇄(카파) 서열번호: 3-8의 CDR은 수용체(acceptor) 인간 프레임워크 서열에 이식되었다(grafted). 이들 CDR 중 3개(CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-H2)는 바람직하지 않을 수 있는 아미노산 모티프(motifs)(DG, DS 및 NG)를 포함한다. 다른 CDR-L1은 KSSQSLLDS S GKTYLN (서열번호: 57)과 함께 사용되고, 2개의 다른 CDR-H2는 RIYPENGDTNYAGKFKG (서열번호: 58) 또는 RIYPESGDTNYAGKFKG (서열번호: 59)와 함께 사용된다. 또한, CDR 서열 방식(CDR sequence-wise)에 바로 인접하거나 3D 면역글로불린 모델에서 CDR의 약 3Å 내에 있을 것으로 예측되고 항원과 접촉할 수 있고 항원에 대한 CDR의 결합을 지원하는 아미노산을 포함하는 마우스 항체의 특정 프레임워크 아미노산 잔기가 유지되었다. CDR에 인접한 대략 약 3개의 마우스 프레임워크 아미노산 잔기가 유지되었다.

인간 프레임워크 서열은 마우스 프레임워크 서열을 인간 프레임워크 서열의 데이터베이스와 정렬하여(aligning), 각 사슬에 대해 가장 가까운 인간 상동체(homologs)(일반적으로 약 65-70% 서열 동일성)를 찾아 선택되었다. 인간 VH1-2 프레임워크는 중쇄에 대한 마우스 프레임워크 서열과 가장 상동성인 인간 수용체 프레임워크로 사용되었고, VK2-30은 경쇄에 대한 마우스 프레임워크 서열과 가장 상동성인 인간 수용체 프레임워크로 사용되었다. 3개의 상이한 VL-FR2가 WFQQRPGQSPRRLIY (서열번호: 60), WLQQRPGQSPRRLIY (서열번호: 61) 또는 WLQQRPGQSPKRLIY (서열번호: 62)를 사용했다. VH-FR1 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFS (서열번호: 63)에서 2개의 아미노산 변화가 이루어졌다. VH-FR2와 VH-FR3의 3개의 다른 조합은 VH-FR2 WVRQAPGQGLEWMG (서열번호: 64) and VH-FR3 RVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCAR (서열번호: 65), VH-FR2 WVRQAPGQGLEWMG (서열번호: 64) and VH-FR3 RVTMTADTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCAR (서열번호: 66), and VH-FR2 WVRQAPGQGLEWIG (서열번호: 67) and VH-FR3 RVTLTADKSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCAR (서열번호: 68)를 사용했다.

인간화 중쇄 H1-H3(서열번호: 9-11) 및 L1-L3(서열번호: 18-20)을 만들고 조합하여 혼합하고 일치시켜 인간화 클론(clones)의 라이브러리(L1-L3과 조합적으로(combinatorially) 혼합된 H1-H3)를 만든다. 개별 구성원은 분리되고(isolated) CD79에 대한 친화도 결합에 대해 테스트되었다. 얻어진 결합 데이터는 아래 표 1에 나열되어 있다:

표 1. 인간화 항체에 대한 결합 친화도(Binding Affinity)

리드(lead) 항체 H1L2 (LB495/PRI47, 서열번호: 9 및 19)가 선택되었다.

실시예 3. 인간화 항체 H1L2(LB495/PRI47, 서열번호: 9 및 19)의 친화도 성숙

인간화 항체 H1L2 (서열번호: 9 및 19)는 친화도가 성숙되었다. 4개의 파지 디스플레이 라이브러리가 만들어졌는데, 2개는 중쇄 H1(서열번호: 10)에서, 2개는 경쇄 L2(서열번호: 20)에서 만들어졌다. CDR3에 대해 포화(saturation) 돌연변이(mutagenesis) 유발이 수행되어 CDR3 중쇄 및 CDR3 경쇄 라이브러리를 만들고, 오류가 발생하기 쉬운(error prone) PCR을 사용하여 H1 중쇄 및 L2 경쇄 각각을 무작위로 돌연변이화하여(mutagenize) 중쇄 라이브러리 및 경쇄 라이브러리를 만들었다. 각 중쇄 라이브러리를 부모(parent) 경쇄 L2(서열번호: 19)와 결합시키고 각 경쇄 라이브러리를 부모 중쇄 H1(서열번호: 9)과 쌍을 이루어 친화도 성숙 후보의 파지 디스플레이 라이브러리를 만들었다. 부모 H1L2 항체와의 경쟁 분석 시험(competition assay)에서 각 라이브러리를 CD79에 대해 패닝하고(panned) 패닝에서 얻어진 결합 클론(binding clones)을 ELISA에서 친화도에 대해 테스트했다. CDR3(서열번호: 25)에 돌연변이가 있는 VH 클론이 선택되었고, CDR3(서열번호: 28-31)과 동일한 위치에 돌연변이가 있는 VL 클론이 선택되었다. 이러한 중쇄 및 경쇄는 전장 IgG(full length IgG)로 재포맷되었고(reformatted) 293 세포에서 생산된 다음 정제되었고 다음 결합이 테스트되었다. 이러한 전장 IgG에 대한 결합 데이터는 아래 표 2에 제시되어 있다:

표 2. 친화도 성숙된 항체에 대한 결합 친화도

PRI 47은 경쇄 L2(서열번호: 19), PRI 43 및 LB495는 중쇄 H1(서열번호: 9), LB517은 중쇄 LB509-C2(서열번호: 25), LB518은 경쇄 LB511-A9(서열번호 28), LB519는 경쇄 LB511-F6(서열번호 30), LB520은 경쇄 LB511-F11(서열번호 31), LB521은 경쇄 LB511-B6(서열번호: 29)이다. 친화도 성숙 항체는 부모 인간화 항체보다 높은 친화도를 나타냈다.

실시예 4. 항체 세포주의 발달

CHO 세포(Invitrogen)를 무 혈청 배지(serum-free medium)(CD FortiCHO, Invitrogen)에서 배양하고 Freestyle Max 형질주입(transfection) 시약(reagent) (Invitrogen)을 사용하여 항-CD79 항체의 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 별도의 플라스미드로 공동 형질주입시켰다(co-transfected). 항체 발현 플라스미드는 형질주입 전에 Sca I에 의한 제한 분해(restriction digestion)로 선형화되었다(linearized). 조절된(conditioned) 배지에서 항체 발현은 ELISA로 측정되었다.

형질주입된 세포를 2주 동안 10 μg/ml의 퓨로마이신(puromycin) 및 500 μg/ml의 G418로 안정하게 선별하였다. 단일 세포 클로닝 후, 고 생산(high production) CHO 세포 클론을 스크리닝하고 분리했다. 항체 생산성은 진탕 플라스크 배양물(shake flask cultures)에서 > 500 mg/L로 평가되었다.

실시예 5. 인간화 항-CD79 항체의 재조합 생산

HEK293F 세포(Invitrogen)를 무 혈청 배지에서 배양하고 LB517을 암호화하는 플라스미드 및 LB519를 암호화하는 플라스미드 또는 다른 항체 변이체(variants)를 발현하는 플라스미드로 공동 형질주입시켰다. 형질주입 후 5일에, 세포 배양 상청액(supernatants)을 수확하고 항체 정제를 위해 단백질 A 크로마토그래피에 적용하였다.

실시예 6. 인간 CD79a/79b 녹인(Knock-In) 마우스

C57BL/6 배아 줄기 세포(embryonic stem cells)는 마우스 CD79a 및 CD79b 유전자좌(loci)를 인간 CD79a 및 인간 CD79b를 암호화하는 핵산(nucleic acids)으로 대체하도록 조작되었다(engineered). 조작된 C57BL/6 ES 세포는 암컷 C57BL/6 마우스에 이식되었고(implanted) 인간 CD79a/b 양성인 C57BL/6 자손(offspring)을 얻었다. B 세포에서 인간 CD79a 및 CD79b의 발현은 항-인간 CD79 항체와 함께 FACS를 사용하여 확인되었다.

실시예 7. 인간 CD79 C57BL/6 마우스에서 B 세포의 항-CD79 항체 유도된 무반응(anergy)

인간 CD79 녹인 마우스는 분석 시험(assays) 전 18 시간 동안 인간화된 항-CD79 항체 LB517/LB519로 처리되었다. 생체 외(Ex vivo), RBC-용해된(RBC-lysed) 비장세포(splenocytes)(1E6/100 μL)를 항-B220으로 염색하고 형광 표지된 항-hCD79 또는 PTEN 또는 B 세포 수용체를 사용했다. LB517/LB519(hCur14 FALA)는 B 세포에 결합하여 Curly-14와 경쟁할 수 있었다(그림 3a). PTEN 및 세포 표면 BCR의 세포 내(intracellular) 수준은 또한 적절한 항체로 염색하여 특성화되었다. LB517/LB519는 PTEN 발현을 유도하고(그림 3b) BCR 발현을 하향 조절(down-regulate)할 수 있었다(그림 3c).

이들 마우스의 B 세포는 B 세포 수용체를 통한 활성화시 칼슘 플럭스(calcium flux)에 대해 테스트되었다. RBC-용해된 비장세포 (1E7/mL)를 항-B220 (B 세포)으로 염색하고 칼슘 감지 염료(sensing dye)(Indo-1 AM)로 1 시간 동안로딩한 후 흐름 분석(flow analysis)을 수행했다. 세포 내 Ca²⁺ 수준의 변화는 Flow-Jo 소프트웨어(Tree Star)를 실행하는 FORTESSA(BD Bioscience)의 405nm 및 485nm 측정에서 형광 방출(fluorescent emissions) 비율로 기록되었다. 100 μL 배지에 자극을 추가하기 전에 기준(baseline) 칼슘을 30 초 동안 획득했다. 급성 자극 정량화(acute stimulation quantification)를 생성하기 위해 기초(Basal) 칼슘 측정값(measurements)은 자극 후(post-stim) A.U.C.s로부터 차감되었다(subtracted). LB517/LB519는 칼슘 유입을 자극하고(그림 4a) B 세포 수용체를 둔감하게 만들었다(desensitized)(그림 4b).

C57BL/6 마우스의 B 세포는 또한 B 세포 수용체 자극시 티로신(tyrosine) 인산화(phosphorylation)에 대해 테스트되었다. 이들 연구는 인간화 항-CD79 항체 LB517/LB519로 B 세포의 전처리(pretreatment)가 항-CD79 항체 처리된 B 세포에서 티로신 인산화가 억제됨에 따라 B 세포 수용체를 통한 활성화에 대해 B 세포를 둔감하게 만들었음을 보여주었다.

실시예 8. I형 당뇨병(Type-I Diabetes)의 치료

NOD 및 C57BL/6 배경에서 IgM 중쇄 이식유전자(transgenes) VH125 및 VH281을 발현하는 마우스를 얻었다. VH125.C57BL/6 마우스는 C57BL/6-H2g7(JAX)에 역교배되어(backcrossed) VH125.C57BL/6.H2g7을 생성했다. >250mg/dL(One Touch)에서 두 번의 연속(consecutive) 혈당(blood glucose) 판독값(readings)은 VH125.C57BL/6.H2g7 마우스를 당뇨병으로 식별했다.

당뇨병 전단계(pre-diabetic)(>150 - <200 mg/dL의 연속 혈당 판독값)였던 VH125NOD 마우스를 항-CD79 항체 또는 식염수(saline)로 처리했다. [도 1]은 식염수 처리된 마우스가 I형 당뇨병(5주까지 80%)에 걸렸음을 보여준다. [도 1]은 또한 항-CD79 항체로 처리된 마우스가 I형 당뇨병이 덜 발생했음을 보여준다 (5주까지 25-30%).

실시예 9. 인간화 항-CD79 항체 LB517/LB519를 사용한 I형 당뇨병의 치료

B 세포에서 인간 CD79a/b를 발현하는 C57BL/6 마우스를 실시예 6에 따라 제조하였다. hCD79a/b C57BL/6 마우스는 개재하는(intervening) 플록싱(floxed) 정지 카세트(stop cassette)를 사용하여 ROSA26 유전자좌(locus)로 주입된(knocked into) PTPn22 R620W를 가졌다. 질병은 췌장(pancreatic) β 세포를 손상시키기 위해 스트렙토조토신(streptozotocin, STZ) 처리와 결합하여(in conjunction with) PTPn22 R620W 자가면역 위험 대립 유전자(autoimmunity risk allele)의 타목시펜 유도 크레탐(tamoxifen-induced cretam) 유도 발현(driven expression)에 의해 성인(adult) 마우스에서 활성화된다.

6-8주령 마우스에게 4일 연속 40 mg/kg의 STZ(Sigma-Aldrich)가 주사되었다(i.p.). 혈당 수치(Blood glucose levels)는 최종 STZ 주사 2주 후부터 Bayer Contour Meter (Bayer)를 사용하여 매주 두번 측정된다. 당뇨병은 2회 연속 검사(tests)에서 당 수치(glucose levels) >500 mg/dL 상승(elevation)으로 정의된다.

PTPn22 R620W hCD79a/b C57BL/6 마우스는 인간화 항-CD79 항체 LB517/LB519 또는 마우스를 STZ로 처리하기 전(prior)/중(during)/후(after)에 식염수로 처리된다. 마우스는 매주 2회 혈당 수치로 모니터링된다. 당뇨병은 2회 연속 검사에서 당 수치의 >500 mg/dL 상승으로 정의된다.

실시예 10. 관절염 치료

C57BL/6 마우스는 0일에 완전 프로인트항원보강제(Complete Freund Adjuvant, CFA))에서 유화된(emulsified) 소(bovine) 또는 닭(chicken 콜라겐 유형 II(Collagen Type II)(CII)로 면역화되었다. 21일 후, 마우스는 불완전 프로인트항원보강제(Incomplete Freund Adjuvant, IFA)에서 유화된 CII로 2차 면역조치(immunization)를 받았다. 1 mg의 항-CD79 또는 아이소타입(isotype) 대조군 면역글로불린을 0일에 피하(subcutaneously)(s.c.)로 투여되었다. mAb 주사 2시간 후 마우스는 콜라겐으로 면역화되었다. 임상 점수(Clinical scores)는 이전에 설명된대로, 0~4 범위의 척도(scale)를 적용하여 개별 발(paws)에 대한 2차 면역 조치 후 평가된다(Hardy, 2014). 항-CD79는 관절염의 발병을 상당히 억제했다(그림 5).

B 세포에서 인간 CD79a/b를 발현하는 hCD79a/b C57BL/6 마우스는 실시예 6에 따라 제조되었다. hCD79a/b C57BL/6 마우스는 완전 프로인트항원보강제(CFA)에서 유화된 소 또는 닭 콜라겐 유형 II(CII)로 면역화되었다. 21일 후, 마우스는 불완전 프로인트항원보강제(IFA)에서 유화된 CII로 2 차 면역조치를 받았다.

항-마우스 CD79 D265A, 항-인간 CD79(인간화 항-CD79 항체 LB517/LB519), 항-CD20(18B12) 또는 아이소타입 대조군 면역글로불린은 0일에 피하(sc) 투여될 것이다. mAb 주사 2시간 후에 마우스는 콜라겐으로 면역화되었다.

임상 점수는 이전에 설명된대로 0~4 범위의 척도를 적용하여 개별 발에 대한 2차 면역조치 후 평가된다(Hardy, 2014).

실시예 11. 전신성(Systemic) 루푸스의 치료

MRL/lpr, MRL/lpr-Thy1.1 마우스에 6~17주 동안 0.5 mg의 항-CD79가 매주 주사되었다. 항-CD79는 신장(kidney)과 턱밑 타액선(submandibular salivary glands)의 염증을 감소시키고 17주 qwk에서 생존(survival)을 향상시켰다(그림 6).

B 세포에서 인간 CD79a/b를 발현하는 hCD79a/b C57BL/6 마우스가 실시예 6에 따라 제조되었다. hCD79a/b C57BL/6 마우스는 급성 타목시펜(tamoxifen)으로 처리되어, B 세포에서 SH2 함유(SH2-containing) 이노시톨(inositol) 지질 포스파타제(lipid phosphatase)(SHIP-1) 및/또는 이노시톨 지질 포스파타제 PTEN을 제거한다. Getahun et al., J Exp Med. 2016 May 2; 213 (5) : 751-69, 이는 모든 목적을 위해 그 전체가 참조로 포함된다.

인간화 항-CD79 항체 LB517/LB519, 항-CD20(18B12) 또는 아이소타입 대조군 면역글로불린은 타목시펜 처리된 인간 CD79 C57BL6 마우스에서 8주령(자가 항체 출현(appearance) 후)부터 매주 피하 투여된다. 항 크로마틴(anti-chromatin)자가 항체의 생산, 사구체(glomerular) 침착(deposition) 및 마우스 건강이 모니터링된다.

실시예 12. 인간화 항-CD79 항체의 에피토프 매핑

항-CD79 항체의 결합 에피토프는 CD79 항원의 다양한 단편의 경쟁 및 구조 분석에 의해 매핑된다.

실시예 13. 암 치료를 위한 항-CD79 CAR-T의 구축(Construction)

항-CD79 항체 L1H2는 scFv 항체로 전환되고 벡터 LB586에서 막관통성(transmembrane) 도메인, 4-1BB 및 CD3 제타(zeta) 세포 내 도메인에 융합시켰다. 플라스미드 LB586을 CHO 세포에 형질주입시키고 2주 동안 적절한 항생제(antibiotics)로 선택되었다. 안정한 세포는 가용성 비오틴화된(biotinylated) CD79 항원에 이어 스트렙타비딘(streptavidin) PE 접합체(conjugate)로 염색되었다. CD79 항원의 결합은 유세포(cytometry) 분석으로 확인되였다(도 2). 항-CD79 키메라 항원 수용체의 핵산 서열은 다음과 같았다:

GATGTTGTGATGACTCAGTCTCCACTCTCCCTGCCCGTCACCCTTGGACAGCCGGCCTCCATCTCCTGCAAGTCAAGTCAGAGCCTCTTAGATAGTGATGGAAAGACATATTTGAATTGGTTACAGCAGAGGCCAGGCCAATCTCCAAGGCGCCTAATTTATCTGGTGTCTAAACTGGACTCTGGGGTCCCAGACAGATTCAGCGGCAGTGGGTCAGGCACTGATTTCACACTGAAAATCAGCAGGGTGGAAGCTGAGGATGTTGGGGTTTATTACTGCTGGCAAGGTACACATCTGCCATTCACGTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAAGGTGGCGGTGGCTCGGGCGGTGGTGGGTCGGGTGGCGGCGGATCTCAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGATACGCATTCAGTTACTCCTGGATGAACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGACGGATTTATCCTGAAAATGGAGATACTAACTACAATGGGAAGTTCAAGGGCAGGGTCACCATGACCAGGGACACGTCCATCAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGGCTGAGATCTGACGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGATGGGTCTATGGTCTTCCCCACTTTGACTACTGGGGCCAAGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCTAGCACCACGACGCCAGCGCCGCGACCACCAACACCGGCGCCCACCATCGCGTCGCAGCCCCTGTCCCTGCGCCCAGAGGCGTGCCGGCCAGCGGCGGGGGGCGCAGTGCACACGAGGGGGCTGGACTTCGCCTGTGATATCTACATCTGGGCGCCCTTGGCCGGGACTTGTGGGGTCCTTCTCCTGTCACTGGTTATCACCCTTTACTGCAAACGGGGCAGAAAGAAACTCCTGTATATATTCAAACAACCATTTATGAGACCAGTACAAACTACTCAAGAGGAAGATGGCTGTAGCTGCCGATTTCCAGAAGAAGAAGAAGGAGGATGTGAACTGAGAGTGAAGTTCAGCAGGAGCGCAGACGCCCCGCGTACAAGCAGGGCCAGAACCAGCTCTATAACGAGCTCAATCTAGGACGAAGAGAGGAGTACGATGTTTTGGACAAGAGACGTGGCCGGGACCCTGAGATGGGGGGAAAGCCGAGAAGGAAGAACCCCCAGGAAGGCCTGTACAATGAACTGCAGAAAGATAAGATGGCGGAGGCCTACAGTGAGATTGGGATGAAAGGCGAGCGCCGGAGGGGCAAGGGGCACGATGGCCTTTACCAGGGTCTCAGTACAGCCACCAAGGACACCTACGACGCCCTTCACATGCAGGCCCTGCCCCCTCGCTGA (서열번호: 69)

항-CD79 키메라 항원 수용체의 아미노산 서열은 다음과 같았다:

DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCKSSQSLLDSDGKTYLNWLQQRPGQSPRRLIYLVSKLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKSRVEAEDVGVYYCWQGTHLPFTFGGGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFSYSWMNWVRQAPGQGLEWMGRIYPENGDTNYNGKFKGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARWVYGLPHFDYWGQGTLVTVSSASTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (서열번호: 70)

항-CD79 CAR-T 벡터는 CD79 양성 암을 치료하기 위해 세포독성(cytotoxic) T 세포를 만드는 데 사용된다.

실시예 14. 다발성 경화증(multiple sclerosis)의 치료

C57BL6/J 마우스는 200 μL 완전 프로인트항원보강제(CFA)에 유화된 200 μg 희소돌기아교세포 미엘린 당단백(myelin oligodendrocyte glycoprotein, MOG) 35-55를 사용하여 표준 프로토콜에 따라 면역화되었다. 에멀젼(emulsion)을 두 부위에 피하 주사한 다음, 인산염 완충 식염수(phosphate buffered saline, PBS)에 200ng 백일해균 독소(pertussis toxin, PTX)를 두 번 복강내(intraperitoneal, i.p.) 주사하고, MOG35-55 후 첫 1~2 시간, 그 후 24 시간에 두 번째 주사를 맞았다. 항-CD79 1mg을 19일부터 매주 투여했다. 질병의 중증도(severity)와 단계(stage)의 수치를 구하기 위해(evaluate) EAE 점수와 체중이 매일 평가되었다. 항-CD79의 치료는 질병 모델의 진행(progression)을 약화시켰다(attenuated)(그림 7).

실시예 15. 친화도 성숙된 인간화 항체 LB517/519의 조작(Engineering)

VH CDR2(서열번호: 4)에는 2개의 "NG" 모티프가 있으며, 이는 생산 합병증(complication)을 유발하는(leading to) 높은 Asn 탈아미드화(deamidation) 성향(propensity)과 관련있다(correlates). Asn 잔기는 돌연변이(mutation)가 항원 상호작용에 부정적인(negatively) 영향을 미치지 않는 경우, 탈아미드화 위험(risk)을 제거하기 위해 돌연변이 될 수 있다. 첫 번째 NG 모티프를 NS(서열번호: 75)로 조작하고, 발현 벡터 LB630에 클로닝했다. 두 번째 NG 모티프를 NA(서열번호: 76)로 조작하고, 발현 벡터 LB631에 클로닝했다. 두 NG 모티프를 모두 조작하고(서열번호: 77), 발현 벡터 LB632로 클로닝했다.

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFSYSWMNWVRQAPGQGLEWMGRIYPESGDTNYNGKFKGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARWVYGLPHFDYWGQGTLVTVSS (서열번호: 75)

서열 번호: 75는 LB630으로 지정되었다(designated).

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFSYSWMNWVRQAPGQGLEWMGRIYPENGDTNYAGKFKGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARWVYGLPHFDYWGQGTLVTVSS (서열번호: 76)

서열 번호: 76은 LB631로 지정되었다.

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYAFSYSWMNWVRQAPGQGLEWMGRIYPESGDTNYAGKFKGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARWVYGLPHFDYWGQGTLVTVSS (서열번호: 77)

서열 번호 77은 LB632로 지정되었다.

경쇄 발현 벡터 LB519와 쌍을 이룬 후, 조작된 항체가 일시적인(transient) 형질주입에 의해 293 세포로부터 생산되고 정제되었다. 항원 결합 동역학(kinetics)을 특성화되었고, 하기 표 3에 제시하였다:

표 3. 친화도 성숙된 항체에 대한 결합 친화도

3개의 조작된 항체 중에서 LB631/519 및 LB632/519는 LB517/519에 비해 약간 덜 강력한(potent) 결합을 보인 반면, LB630/519는 훨씬 향상된 항원 결합을 가졌다. 이들 조작된 항체의 생물활성(bioactivities)은 실시예 7에서와 유사하게 특성화되었다. 조작된 항체는 LB517/519와 비교하여 유사한 B 세포 탈감각 활성을 나타냈다(도 3 및 4).

특정 실험예가 예시되고(illustrated) 기재되었지만(described), 여기에 다양한 변형이 이루어질 수 있고 본원에서 고려된다는 것이 이해된다. 또한, 본 개시 내용은 본원에 제공된 특정 실험예에 의해 제한되지 않음이 이해된다. 본 명세서의 실험예들 및 실시예들의 설명 및 예시는 제한적인 의미로 해석되도록(construed) 의도되지 않는다. 본 개시 내용의 모든 측면이 다양한 상태 및 변수(variables)에 의존할 수 있는 본원에 기재된 특정 묘사(depictions), 구성(configurations) 또는 상대적 비율(relative proportions)에 제한되지 않는다는 것이 또한 이해된다. 본 개시 내용의 실험예 및 실시예의 형태 및 세부 사항의 다양한 변형 및 변화는 통상의 기술자에게 명백 할 것이다. 따라서, 본 개시는 또한 임의의 그리고 모든 이러한 변형, 변화 및 등가물(equivalents)을 포함하는 것으로 이해된다.

<110> Panorama Research Institute <120> Anti-CD79 Antibodies and Their Uses <130> PRI.0004 <160> 77 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 119 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 1 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Arg Ile Tyr Pro Glu Asn Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Val Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Val Tyr Gly Tyr Pro His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 115 <210> 2 <211> 112 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 2 Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Thr Leu Ser Val Thr Ile Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Phe Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 3 <211> 5 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 3 Tyr Ser Trp Met Asn 1 5 <210> 4 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 4 Arg Ile Tyr Pro Glu Asn Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 5 <211> 10 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 5 Trp Val Tyr Gly Tyr Pro His Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 6 <211> 16 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 6 Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn 1 5 10 15 <210> 7 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 7 Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser 1 5 <210> 8 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 8 Trp Gln Gly Thr His Phe Pro Phe Thr 1 5 <210> 9 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized anitbody heavy chain <400> 9 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Tyr Pro Glu Asn Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Val Tyr Gly Tyr Pro His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 10 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized antibody heavy chain <400> 10 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Tyr Pro Glu Asn Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Val Tyr Gly Tyr Pro His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 11 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized antibody heavy chain <400> 11 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Arg Ile Tyr Pro Glu Asn Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Val Tyr Gly Tyr Pro His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 12 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized antibody heavy chain <400> 12 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Tyr Pro Glu Asn Gly Asp Thr Asn Tyr Ala Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Val Tyr Gly Tyr Pro His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 13 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized antibody heavy chain <400> 13 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Tyr Pro Glu Asn Gly Asp Thr Asn Tyr Ala Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Val Tyr Gly Tyr Pro His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 14 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized antibody heavy chain <400> 14 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Arg Ile Tyr Pro Glu Asn Gly Asp Thr Asn Tyr Ala Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Val Tyr Gly Tyr Pro His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 15 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized antibody heavy chain <400> 15 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Tyr Pro Glu Ser Gly Asp Thr Asn Tyr Ala Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Val Tyr Gly Tyr Pro His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 16 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized antibody heavy chain <400> 16 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Tyr Pro Glu Ser Gly Asp Thr Asn Tyr Ala Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Val Tyr Gly Tyr Pro His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 17 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized antibody heavy chain <400> 17 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Arg Ile Tyr Pro Glu Ser Gly Asp Thr Asn Tyr Ala Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Val Tyr Gly Tyr Pro His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 18 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized antibody light chain <400> 18 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Phe Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 19 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized antibody light chain <400> 19 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Phe Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 20 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized antibody light chain <400> 20 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Phe Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 21 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized anitbody light chain <400> 21 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser 20 25 30 Ser Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Phe Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 22 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized antibody light chain <400> 22 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser 20 25 30 Ser Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Phe Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 23 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized antibody light chain <400> 23 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser 20 25 30 Ser Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Phe Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 24 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Affinity matured antibody heavy chain <400> 24 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Tyr Pro Glu Asn Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Pro Val Tyr Gly Tyr Pro His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 25 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Affinity matured antibody heavy chain <400> 25 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Tyr Pro Glu Asn Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Val Tyr Gly Leu Pro His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 26 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Affinity matured antibody heavy chain <400> 26 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Tyr Pro Glu Asn Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Val Trp Gly Tyr Pro His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 27 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Affinity matured antibody heavy chain <400> 27 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Tyr Pro Glu Asn Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Val Tyr Gly Tyr Pro His Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 28 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Affinity matured antibody light chain <400> 28 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Ile Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 29 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Affinity matured antibody light chain <400> 29 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Val Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 30 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Affinity matured antibody light chain <400> 30 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Leu Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 31 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Affinity matured antibody light chain <400> 31 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Arg Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 32 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Affinity matured antibody heavy chain <400> 32 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Tyr Pro Glu Asn Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Val Tyr Gly Tyr Pro His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 33 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Affinity matured antibody heavy chain <400> 33 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Gly Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Tyr Pro Glu Asn Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Val Tyr Gly Tyr Pro His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 34 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Affinity matured antibody heavy chain <400> 34 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Tyr Pro Glu Asn Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Pro Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Val Tyr Gly Tyr Pro His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 35 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Affinity matured antibody heavy chain <400> 35 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Asn Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Val Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Tyr Pro Glu Asn Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Val Tyr Gly Tyr Pro His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 36 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Affinity matured antibody heavy chain <400> 36 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Tyr Pro Glu Asn Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Val Tyr Gly Tyr Pro His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 37 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Affinity matured antibody heavy chain <400> 37 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Val Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Tyr Pro Glu Asn Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Val Tyr Gly Tyr Pro His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 38 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Affinity matured antibody heavy chain <400> 38 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Tyr Pro Glu Asn Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Gly Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Val Tyr Gly Tyr Pro His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 39 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Affinity matured antibody heavy chain <400> 39 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Asn Tyr Ser 20 25 30 Trp Val Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Phe Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Tyr Pro Glu Asn Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Val Tyr Gly Tyr Pro His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 40 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Affinity matured antibody heavy chain <400> 40 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Arg Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Tyr Pro Glu Asn Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Met Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Val Tyr Gly Tyr Pro His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 41 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Affinity matured antibody heavy chain <400> 41 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Tyr Pro Glu Asn Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Arg Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Val Tyr Gly Tyr Pro His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 42 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Affinity matured antibody light chain <400> 42 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Leu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Phe Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 43 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Affinity matured antibody light chain <400> 43 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Lys Ser Leu Leu Asp Ser 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Phe Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 44 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Affinity matured antibody light chain <400> 44 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Ile Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Phe Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 45 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Affinity matured antibody light chain <400> 45 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Asp Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Leu Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 46 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Affinity matured antibody light chain <400> 46 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Phe Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Leu Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 47 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Affinity matured antibody light chain <400> 47 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Thr Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Leu Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 48 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Affinity matured antibody light chain <400> 48 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Arg Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser 20 25 30 Gly Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Phe Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 49 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Affinity matured antibody light chain <400> 49 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Arg Ser Leu Leu Asp Ser 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Phe Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 50 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Affinity matured antibody light chain <400> 50 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Leu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Thr 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ile Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Phe Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 51 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Affinity matured antibody light chain <400> 51 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Pro 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Phe Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 52 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Affinity matured antibody light chain <400> 52 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Pro Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Phe Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 53 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Affinity matured antibody light chain <400> 53 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Val Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 54 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Affinity matured antibody light chain <400> 54 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Thr Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Arg 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Ile Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Phe Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 55 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Affinity matured antibody light chain <400> 55 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Met Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Leu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser 20 25 30 His Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Phe Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 56 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Affinity matured antibody light chain <400> 56 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Leu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Ile Pro Phe Thr Phe Ser Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 57 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Antibody light chain CDR1 <400> 57 Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser Ser Gly Lys Thr Tyr Leu Asn 1 5 10 15 <210> 58 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Antibody heavy chain CDR2 <400> 58 Arg Ile Tyr Pro Glu Asn Gly Asp Thr Asn Tyr Ala Gly Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 59 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Antibody heavy chain CDR2 <400> 59 Arg Ile Tyr Pro Glu Ser Gly Asp Thr Asn Tyr Ala Gly Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 60 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Antibody light chain FR2 <400> 60 Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser Pro Arg Arg Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 61 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Antibody light chain FR2 <400> 61 Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser Pro Arg Arg Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 62 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Antibody light chain FR2 <400> 62 Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser Pro Lys Arg Leu Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 63 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Antibody heavy chain FR1 <400> 63 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser 20 25 30 <210> 64 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Antibody heavy chain FR2 <400> 64 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly 1 5 10 <210> 65 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Antibody heavy chain FR3 <400> 65 Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Met Glu 1 5 10 15 Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 66 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Antibody heavy chain FR3 <400> 66 Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Met Glu 1 5 10 15 Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 67 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Antibody heavy chain FR2 <400> 67 Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly 1 5 10 <210> 68 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Antibody heavy chain FR3 <400> 68 Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Met Glu 1 5 10 15 Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 69 <211> 1415 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Chimeric antigen receptor <400> 69 gatgttgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccttggaca gccggcctcc 60 atctcctgca agtcaagtca gagcctctta gatagtgatg gaaagacata tttgaattgg 120 ttacagcaga ggccaggcca atctccaagg cgcctaattt atctggtgtc taaactggac 180 tctggggtcc cagacagatt cagcggcagt gggtcaggca ctgatttcac actgaaaatc 240 agcagggtgg aagctgagga tgttggggtt tattactgct ggcaaggtac acatctgcca 300 ttcacgttcg gcggagggac caaggtggag atcaaaggtg gcggtggctc gggcggtggt 360 gggtcgggtg gcggcggatc tcaggtgcag ctggtgcagt ctggggctga ggtgaagaag 420 cctggggcct cagtgaaggt ctcctgcaag gcttctggat acgcattcag ttactcctgg 480 atgaactggg tgcgacaggc ccctggacaa gggcttgagt ggatgggacg gatttatcct 540 gaaaatggag atactaacta caatgggaag ttcaagggca gggtcaccat gaccagggac 600 acgtccatca gcacagccta catggagctg agcaggctga gatctgacga cacggccgtg 660 tattactgtg cgagatgggt ctatggtctt ccccactttg actactgggg ccaaggaacc 720 ctggtcaccg tctcctcagc tagcaccacg acgccagcgc cgcgaccacc aacaccggcg 780 cccaccatcg cgtcgcagcc cctgtccctg cgcccagagg cgtgccggcc agcggcgggg 840 ggcgcagtgc acacgagggg gctggacttc gcctgtgata tctacatctg ggcgcccttg 900 gccgggactt gtggggtcct tctcctgtca ctggttatca ccctttactg caaacggggc 960 agaaagaaac tcctgtatat attcaaacaa ccatttatga gaccagtaca aactactcaa 1020 gaggaagatg gctgtagctg ccgatttcca gaagaagaag aaggaggatg tgaactgaga 1080 gtgaagttca gcaggagcgc agacgccccg cgtacaagca gggccagaac cagctctata 1140 acgagctcaa tctaggacga agagaggagt acgatgtttt ggacaagaga cgtggccggg 1200 accctgagat ggggggaaag ccgagaagga agaaccccca ggaaggcctg tacaatgaac 1260 tgcagaaaga taagatggcg gaggcctaca gtgagattgg gatgaaaggc gagcgccgga 1320 ggggcaaggg gcacgatggc ctttaccagg gtctcagtac agccaccaag gacacctacg 1380 acgcccttca catgcaggcc ctgccccctc gctga 1415 <210> 70 <211> 470 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Chimeric antigen receptor <400> 70 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ser 65 70 75 80 Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly Thr 85 90 95 His Leu Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly 100 105 110 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val 115 120 125 Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val 130 135 140 Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser Trp Met 145 150 155 160 Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Arg 165 170 175 Ile Tyr Pro Glu Asn Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Lys Gly 180 185 190 Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Met Glu 195 200 205 Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 210 215 220 Trp Val Tyr Gly Leu Pro His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 225 230 235 240 Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro 245 250 255 Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu 260 265 270 Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp 275 280 285 Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly 290 295 300 Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg 305 310 315 320 Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln 325 330 335 Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu 340 345 350 Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala 355 360 365 Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu 370 375 380 Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp 385 390 395 400 Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu 405 410 415 Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile 420 425 430 Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr 435 440 445 Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met 450 455 460 Gln Ala Leu Pro Pro Arg 465 470 <210> 71 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Affinity matured antibody heavy chain <400> 71 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Asn Tyr Ser 20 25 30 Trp Val Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Phe Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Tyr Pro Glu Asn Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Val Tyr Gly Tyr Pro His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 72 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Affinity matured antibody heavy chain <400> 72 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Asn Tyr Ser 20 25 30 Trp Val Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Phe Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Tyr Pro Glu Asn Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Val Tyr Gly Tyr Pro His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 73 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Affinity matured antibody light chain <400> 73 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Leu Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 74 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Affinity matured antibody light chain <400> 74 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly 85 90 95 Thr His Leu Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 75 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Affinity matured antibody heavy chain <400> 75 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Tyr Pro Glu Ser Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Val Tyr Gly Leu Pro His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 76 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Antibody heavy chain <400> 76 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Tyr Pro Glu Asn Gly Asp Thr Asn Tyr Ala Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Val Tyr Gly Leu Pro His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 77 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Antibody heavy chain <400> 77 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Tyr Pro Glu Ser Gly Asp Thr Asn Tyr Ala Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Val Tyr Gly Leu Pro His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115

Claims

서열번호: 9-17, 24-27, 32-41, 71, 72 및 75-77로 이루어진 군에서 선택된 가변 영역을 갖는 중쇄, 및 서열번호: 18-23, 28-31, 42-56 및 73-74로 이루어진 군에서 선택된 가변 영역을 갖는 경쇄를 포함하는, 항-CD79 항체.
제1항에 있어서,
상기 중쇄의 가변 영역은 서열번호: 24-27 및 75-77로 이루어진 군으로부터 선택되고, 상기 경쇄의 가변 영역은 서열번호: 28-31로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 항-CD79 항체.
제2항에 있어서,
상기 중쇄의 가변 영역은 서열번호: 25이고 상기 경쇄의 가변 영역은 서열번호: 30인 것인, 항체.
제2항에 있어서,
상기 중쇄의 가변 영역은 서열번호: 75이고 상기 경쇄의 가변 영역은 서열번호: 30인 것인, 항체.
제2항에 있어서,
상기 중쇄의 가변 영역은 서열번호: 76이고 상기 경쇄의 가변 영역은 서열번호: 30인 것인, 항체.
제2항에 있어서,
상기 중쇄의 가변 영역은 서열번호: 77이고 상기 경쇄의 가변 영역은 서열번호: 30인 것인, 항체.
서열번호: 9-17로 이루어진 군으로부터 선택된 가변 영역 사슬을 갖는 중쇄 및 서열번호: 18-23으로 이루어진 군으로부터 선택된 가변 영역을 갖는 경쇄를 포함하는, 항-CD79 항체.
관절염(arthritis) 치료방법에 있어서, 상기 관절염을 갖는 포유동물을 제공하는 단계, 및 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항의 항-CD79 항체를 상기 포유동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 관절염 치료방법.
제8항에 있어서,
상기 중쇄의 가변 영역은 서열번호: 25이고 상기 경쇄의 가변 영역은 서열번호: 30인 것인, 방법.
제8항에 있어서,
상기 중쇄의 가변 영역은 서열번호: 75이고 상기 경쇄의 가변 영역은 서열번호: 30인 것인, 방법.
제8항에 있어서, 상기 중쇄의 가변 영역은 서열번호: 76이고 상기 경쇄의 가변 영역은 서열번호: 30인 것인, 방법.
제8항에 있어서,
상기 중쇄의 가변 영역은 서열번호: 77이고 상기 경쇄의 가변 영역은 서열번호:30 인 것인, 방법.
전신 홍반성 루푸스(systemic lupus) 치료방법에 있어서, 상기 전신 홍반성 루푸스를 갖는 포유동물을 제공하는 단계, 및 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항의 항-CD79 항체를 상기 포유동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 전신 홍반성 루푸스 치료방법.
제13항에 있어서,
상기 중쇄의 가변 영역은 서열번호: 25이고 상기 경쇄의 가변 영역은 서열번호: 30인 것인, 방법.
제13항에 있어서,
상기 중쇄의 가변 영역은 서열번호: 75이고 상기 경쇄의 가변 영역은 서열번호: 30인 것인, 방법.
제13항에 있어서,
상기 중쇄의 가변 영역은 서열번호: 76이고 상기 경쇄의 가변 영역은 서열번호: 30인 것인, 방법.
제13항에 있어서,
상기 중쇄의 가변 영역은 서열번호: 77이고 상기 경쇄의 가변 영역은 서열번호: 30인 것인, 방법.
1형 당뇨병 치료방법에 있어서, 상기 1형 당뇨병(type 1 diabetes)을 갖는 포유동물을 제공하는 단계, 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항의 항-CD79 항체를 상기 포유동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 1형 당뇨병 치료방법.
제18항에 있어서,
상기 중쇄의 가변 영역은 서열번호: 25이고 상기 경쇄의 가변 영역은 서열번호: 30인 것인, 방법.
제18항에 있어서,
상기 중쇄의 가변 영역은 서열번호: 75이고 상기 경쇄의 가변 영역은 서열번호: 30인 것인, 방법.
제18항에 있어서,
상기 중쇄의 가변 영역은 서열번호: 76이고 상기 경쇄의 가변 영역은 서열번호: 30인 것인, 방법.
제18항에 있어서,
상기 중쇄의 가변 영역은 서열번호: 77이고 상기 경쇄의 가변 영역은 서열번호: 30인 것인, 방법.
다발성 경화증(multiple sclerosis) 치료방법에 있어서, 상기 다발성 경화증을 갖는 포유동물을 제공하는 단계, 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항의 항-CD79 항체를 상기 포유동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 다발성 경화증을 치료하는 방법.
제23항에 있어서,
상기 중쇄의 상기 가변 영역은 서열번호: 25이고 상기 경쇄의 상기 가변 영역은 서열번호: 30인 것인, 방법.
제23항에 있어서,
상기 중쇄의 가변 영역은 서열번호: 75이고 상기 경쇄의 가변 영역은 서열번호: 30인 것인, 방법.
제23항에 있어서,
상기 중쇄의 가변 영역은 서열번호: 76이고 상기 경쇄의 가변 영역은 서열번호: 30인 것인, 방법.
제23항에 있어서,
상기 중쇄의 가변 영역은 서열번호: 77이고 상기 경쇄의 가변 영역은 서열번호: 30인 것인, 방법.
자가면역질환(autoimmune disease) 치료방법에 있어서, 상기 자가면역질환을 갖는 포유동물을 제공하는 단계, 및 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항의 항-CD79 항체를 상기 포유동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 자가면역질환 치료방법.
제28항에 있어서,
상기 자가면역질환은 B 세포를 수반하는(involves) 것인, 방법.
알레르기(allergies)를 치료하기 위한 방법에 있어서, 알레르기를 갖는 포유동물을 제공하는 단계, 및 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항의 항-CD79 항체를 상기 포유동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 알레르기를 치료하기 위한 방법.
이식거부반응(transplant rejection)을 예방하기 위한 방법에 있어서, 이식된 장기를 받은 포유동물을 제공하는 단계, 및 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항의 항-CD79 항체를 상기 포유동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 이식거부반응을 예방하기 위한 방법.
치료제(therapeutic)에 대한 면역반응(immune response)을 예방하기 위한 방법에 있어서, 치료제(therapeutic)를 받은 포유동물을 제공하는 단계, 및 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항의 항-CD79 항체를 상기 포유동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 치료제에 대한 면역반응을 예방하기 위한 방법.
T 세포에 있어서, 서열번호: 9-17, 24-27, 32-41, 71, 72 및 75-77로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 가변 영역 및 서열번호: 18-23, 28-31, 42-56 및 73-74로 이루어진 군으로부터 선택된 가변 영역으로 구성된 항원 결합 부분을 갖는 키메라 항원 수용체 포함하는, T 세포.
제33항에 있어서,
상기 키메라 항원 수용체는 서열번호: 70인 것인, T 세포.
CD79 양성 암에 걸린 대상체(subject) 치료방법에 있어서, 제33항의 T 세포를 대상체에게 투여하여 CD79 양성 암을 치료하는 단계를 포함하는, CD79 양성 암에 걸린 대상체 치료방법.
제35항에 있어서,
상기 T 세포에서 키메라 항원 수용체는 서열번호: 70인 것인, 방법.