KR20210071678A

KR20210071678A - 벌사상자 추출물을 포함하는 인지 기능 장애 또는 신경 염증의 예방 또는 치료용 조성물

Info

Publication number: KR20210071678A
Application number: KR1020190162093A
Authority: KR
Inventors: 김선여; 오명숙; 김영중; 김갑준; 최진규; 홍성민; 자라칸; 김재성
Original assignee: 가천대학교 산학협력단; 김영중; 김갑준; 경희대학교 산학협력단
Priority date: 2019-12-06
Filing date: 2019-12-06
Publication date: 2021-06-16
Also published as: KR102634246B1

Abstract

본 발명은 벌사상자 추출물(Cnidium monnieri) 및 이의 인지 기능 강화 효과에 관한 것이다. 구체적으로, 벌사상자 추출물은 우수한 인지 기능 강화 작용 또는 신경 염증 보호 효과를 나타내어, 인지 기능 장애 또는 신경 염증의 예방 또는 치료에 사용될 수 있다.

Description

벌사상자 추출물을 포함하는 인지 기능 장애 또는 신경 염증의 예방 또는 치료용 조성물{COMPOSITION FOR PREVENTING OR TREATING COGNITIVE DYSFUNCTION OR NEUROINFLAMMATION COMPRISING EXTRACTS OF CNIDIUM MONNIERI}

본 발명은 벌사상자(Cnidium monnieri)의 추출물을 유효성분으로 포함하는 인지 기능 장애 또는 신경 염증의 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다. 또한 본 발명은 상기 추출물을 유효성분으로 포함하는 인지 기능 장애 또는 신경 염증의 예방 또는 개선용 건강기능식품 및 사료 조성물에 관한 것이다.

현대 사회에 들어 인간의 수명이 증가함에 따라, 노인 인구가 급증하면서 노인성 질환의 예방 또는 치료제의 개발이 촉구되고 있다. 특히, 치매와 같은 질환은 진행이 심화되면 개인, 가족 및 사회에 많은 부담을 주며 삶의 질에 큰 악영향을 미치기 때문에 사회적으로 큰 관심을 받고 있다.

치매는 발병 원인에 따라 알츠하이머병(Alzheimer's disease), 파킨슨병(Parkinson's disease), 전측두엽 퇴화 등 여러가지로 구분될 수 있으며, 이 중 알츠하이머형 치매가 전체 치매의 50-60%를 차지한다. 알츠하이머형 치매는 기억력 감퇴, 언어 능력 저하, 시공간파악능력 저하 및 판단력의 저하와 같은 인지 기능 저하 증상을 유발하여 기본적인 일상생활에 지장이 생긴다. 그러나, 현재로서 치매를 근본적으로 치료하는 약은 개발되지 않았으며, 발병시 지속적으로 관리하여 증상을 완화하거나 질환의 진행을 지연시키는 것이 최선이다. 이에 환자와 가족들의 부담을 덜어줄 수 있으면서도 효과적인 새로운 치료 방법의 개발이 요구되고 있다.

치매 외에도 고혈압, 운동부족, 우울증 등 현대 생활에서 찾아오기 쉬운 질환 및 증상으로 인하여 인지 기능 장애가 나타날 수 있다. 특히 최근 들어 전 연령에서 환자가 빠르게 증가하고 있는 우울증의 경우 연관성이 가장 높은 것으로 알려져 있다. 따라서, 건강한 일상생활을 영위하기 위한 수단으로서 인지 기능 장애의 개선 및 뇌 보호를 위한 방법의 개발이 필요하다.

인지 기능 장애와 같이 약물을 장기복용하면서 지속적으로 관리해야 하는 질환의 경우에는 부작용을 줄이는 것이 중요한 과제 중 하나이다. 한 예로, 국내에서 치매 치료에 보편적으로 사용되고 있는 도네페질은 근육통, 식욕감퇴 외에 심할 경우에는 환각, 복부 장애 등의 부작용을 초래할 수 있어 새로운 치매치료제의 개발이 시급하다. 따라서, 인지 기능 장애 관련 질환에서 합성의약품보다 부작용이 적은 천연물 의약품의 개발은 환자들에게 큰 도움이 될 수 있다.

따라서, 부작용을 최소화하기 위해 천연 물질을 이용한 치료제가 개발되고 있으며, 그 예로 자색당근 발효추출물을 유효성분으로 포함하는 인지 기능 장애의 예방 또는 치료용 조성물(한국 등록특허 제10-1495815호), 참빗살나무 추출물을 포함하는 인지 장애 관련 질환의 예방 또는 치료용 조성물(한국 등록특허 제10-1877860호) 등이 알려져 있다.

한편, 벌사상자(Cnidium monnieri)는 그 추출물이 면역증강 효과를 나타내어 항암 효과를 갖는다는 것이 공지된 바 있다(한국 등록특허 제10-1484709호). 그러나 현재까지 벌사상자 추출물이 인지 기능 장애 또는 신경 염증에 효과를 나타낸다는 것은 개시된 바 없다.

이러한 배경하에, 본 발명자들은 인지 기능 장애를 개선하고 뇌를 보호할 수 있는 방법을 개발하기 위하여 지속적인 연구를 거듭한 결과, 벌사상자 추출물을 사용하였을 때 우수한 인지 기능 강화 및 뇌 보호 효과가 있으며, 나아가 신경 염증에도 효과가 있는 것을 발견하여 본 발명을 완성하였다.

한국 등록특허 제10-1495815호 한국 등록특허 제10-1877860호 한국 등록특허 제10-1484709호

본 발명은 벌사상자(Cnidium monnieri) 추출물을 유효성분으로 포함하는 인지 기능 장애 또는 신경 염증의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하고자 한다.

본 발명은 또한 상기 추출물을 유효성분으로 포함하는 인지 기능 장애 또는 신경 염증의 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공하고자 한다.

본 발명은 또한 상기 추출물을 유효성분으로 포함하는 인지 기능 장애 또는 신경 염증의 예방 또는 개선용 사료 조성물을 제공하고자 한다.

본 발명은 벌사상자(Cnidium monnieri) 추출물을 유효성분으로 포함하는 인지 기능 장애 또는 신경 염증의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.

본 발명에서 "벌사상자(Cnidium monnieri)"는 산형과(Umbelliferae)의 일년생 초본으로 중국과 한국에 주로 분포하며, 화농성피부염 및 여성의 생식기 질환의 치료에 널리 사용되고 있다(Yang, L. L. et al., 2003. Cytotoxic activity of coumarins from the fruits of cnidium monnieri on Leukemia cell lines. Planta Med. 69, 1091-109).

본 발명은 벌사상자 추출물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하며, 상기 추출물을 사용한 경우, 기존의 공지된 물질과 비교하더라도, 인지 기능 장애 또는 신경 염증의 예방 또는 치료에 우수한 효과를 나타내는 것을 특징으로 한다.

본원에 사용된 용어, "추출물"은 목적하는 물질을 다양한 용매에 침지한 다음, 상온 또는 가온 상태에서 일정시간 동안 추출하여 수득한 액상성분, 상기 액상성분으로부터 용매를 제거하여 수득한 고형분 등의 결과물을 의미할 수 있다. 뿐만 아니라, 상기 결과물에 더하여, 상기 결과물의 희석액, 이들의 농축액, 이들의 crude 정제물, 정제물 등을 모두 포함하는 것으로 포괄적으로 해석될 수 있다. 본 발명의 상기 추출물은 추출 후 건조 분말 형태로 제조되어 사용될 수 있다.

상기 추출물을 수득하기 위한 방법에 있어서, 본 발명의 뇌 신경세포 보호를 기반으로 하는 인지 기능 장애 또는 신경 염증의 예방 또는 치료 효과를 갖는 추출물을 수득할 수 있는 한, 특별히 제한되지 않는다. 예를 들어, 벌사상자의 건조물 또는 가공물 등의 혼합물을 용매에 침지하고 10 내지 25의 상온에서 추출하는 냉침추출법, 40 내지 100로 가열하여 추출하는 가열추출법, 초음파를 가하여 추출하는 초음파추출법, 환류냉각기를 이용한 환류추출법 등의 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용하는 방법에 따라 추출할 수 있다. 상기 추출 용매의 비제한적인 예로는 물, 알코올, 에틸 아세테이트, 아세톤, 또는 이들의 혼합 용매 등을 들 수 있으며, 알코올을 용매로 사용하는 경우에는 일 예로서 C1 내지 C6의 알코올을 사용할 수 있다. 바람직하게는, 상기 추출물은 물 및/또는 에탄올 추출물일 수 있다. 일 실시예에서, 상기 물은 증류수일 수 있으며, 상기 에탄올로는 10 내지 80% 에탄올 수용액, 바람직하게는, 20% 에탄올 수용액 또는 70% 에탄올 수용액을 사용할 수 있다.

본원에 사용된 용어, "인지 기능"이란, 주의력, 지각력, 기억력, 언어능력, 집행능력등의 다양한 지적능력으로서, 본 발명의 목적상 용어 "인지 기능 장애"는 상기와 같은 인지 기능이 저하되어 생기는 상태, 그에 따른 질환, 그를 증상으로 하는 모든 질환을 포함할 수 있는 개념으로써, 구체적으로 뇌 신경세포의 손상으로 발생하는 장애를 의미할 수 있다. 예를 들어, 뇌질환, 뇌상해, 중독 등으로 인한 정신적, 행동적장애 및 내분비이상, 대사영양적 이상, 약물 등으로 인한 기억력 저하(memory decline) 및 기억력 장애(memory impairment)를 포함한다. 구체적으로는, 인지 기능 장애는 알츠하이머병, 헌팅턴 병, 혈관성 치매증, 파킨슨병, 루게릭 병, 크로이츠펠트-야코프병, 두부 손상에 의한 치매, 학습장애, 경도 인지 장애, 픽병, 실인증, 건망증, 실어증, 실행증, 섬망, 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본원에 사용된 용어, "신경 염증(neuroinflammation)"이란, 뇌에서 발생한 염증을 의미하며, 인지 기능 장애 관련 질환을 일으키는 중요한 요인이다. 뇌에서 염증세포가 과하게 활성화되면 염증 유발성 싸이토카인의 분비가 많아지고 이러한 뇌염증 반응의 과활성화에 의해 뇌세포 손상에 따라 인지 기능 장애가 유발되는 것으로 알려져 있다.

본 발명에서의 용어, "예방"이란 본 발명에 따른 약학 조성물의 투여에 의해 인지 기능 장애 또는 신경 염증의 발병을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 의미하고, "치료"란 상기 약학 조성물의 투여에 의해 인지 기능 장애 또는 신경 염증의 의심 및 발병 개체의 증상이 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.

일 실시태양에서, 본 발명에 따른 추출물은 동물 모델의 행동실험에서 기억력 및 인지 기능 개선 효과를 나타낸다.

일 실시태양에서, 본 발명에 따른 추출물은 뇌의 신경생성 또는 신경재생 효과를 나타낸다. 본 발명에서 용어 "신경생성 또는 신경재생(neurogenesis)"은 신경 줄기세포 또는 전구세포로부터 뉴런이 생성 또는 재생되는 과정을 의미한다. 이와 같은 신경 재생에는 DCX(Doublecortin), phospho-CREB, 또는 Synaptophysin와 같은 뇌 단백질이 관여하며, 이들 단백질의 발현 수준을 통하여 신경 재생 정도를 확인할 수 있다. 본 발명에 따른 추출물은 신경생성과 관련 있는 상기 뇌 단백질의 발현을 증가시킬 수 있다.

또한 본 발명에 따른 추출물은 신경돌기 성장(neurite outgrowth)를 유도할 수 있다. 뉴런은 dendrite로 불리는 세포체(cellular body)의 확장을 통해 연결되는데, 이러한 생물학적 현상을 neurite outgrowth로 지칭한다. 따라서 neurite outgrowth가 더 많이 관찰될수록 뇌에서 신경생성이 더 활발함을 의미한다.

또한 본 발명에 따른 추출물은 신경 성장 인자(Nerve Growth Factor, NGF)의 생성량을 증가시킬 수 있다.

일 실시태양에서, 본 발명에 따른 추출물은 뇌 신경세포 보호를 통해 세포 생존율을 증가시킴으로써 기억력을 증진시킬 수 있다.

일 실시태양에서, 본 발명에 따른 추출물은 리포폴리사카라이드(LPS) 등으로 활성화된 미세아교세포(microglial cells), 예컨대 BV-2 세포에서의 염증반응을 억제한다. 구체적으로, 본 발명에 따른 추출물은 LPS 활성화된 세포에서 Nitric Oxide의 생성량을 감소시킬 수 있다.

일 실시태양에서, 본 발명에 따른 추출물은 Aβ_25-35 plaque의 신경 독성에 대해 세포 보호 효과를 나타낸다.

본 발명의 약학 조성물은, 약학 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 또는 희석제를 추가로 포함할 수 있다.

본 발명은 또한 벌사상자(Cnidium monnieri) 추출물을 유효성분으로 포함하는 인지 기능 장애 또는 신경 염증의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다. 일 실시태양에서, 상기 식품 조성물은 기억력 및 학습 능력 증진을 위해서도 사용될 수 있다.

본 발명의 식품 조성물은 일상적으로 섭취하는 것이 가능하기 때문에 인지 기능 장애, 신경 염증의 예방 또는 개선 효과를 기대할 수 있어 매우 유용하다.

본 발명의 용어, "개선"이란, 본 발명의 추출물을 포함하는 조성물의 투여로 치료되는 상태와 관련된 파라미터, 예를 들면 증상의 정도를 적어도 감소시키는 모든 행위를 의미한다.

본 발명의 식품 조성물은 환제, 분말, 과립, 침제, 정제, 캡슐 또는 액제 등의 형태를 포함하며, 본 발명의 조성물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 예를 들어, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강보조 식품류 등이 있다.

본 발명의 조성물이 식품 조성물인 경우, 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다.

본 발명의 식품 조성물은 건강기능식품 및 건강식품 등을 포함한다.

상기 건강 기능(성) 식품(functional food)이란, 특정보건용 식품(food for special health use, FoSHU)과 동일한 용어로, 영양 공급 외에도 생체조절기능이 효율적으로 나타나도록 가공된 의학, 의료효과가 높은 식품을 의미한다. 여기서 "기능(성)"이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건용도에 유용한 효과를 얻는 것을 의미한다. 본 발명의 식품은 당 업계에서 통상적으로 사용되는 방법에 의하여 제조가능하며, 상기 제조시에는 당 업계에서 통상적으로 첨가하는 원료 및 성분을 첨가하여 제조할수 있다. 또한 상기 식품의 제형 또한 식품으로 인정되는 제형이면 제한 없이 제조될 수 있다. 본 발명의 식품 조성물은 다양한 형태의 제형으로 제조될 수 있으며, 일반 약품과는 달리 식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있고, 휴대성이 뛰어나, 본 발명의 식품은 인지 기능 장애 또는 신경 염증의 예방 또는 개선의 효과를 증진시키기 위한 보조제로 섭취가 가능하다.

본 발명은 또한 벌사상자(Cnidium monnieri) 추출물을 유효성분으로 포함하는 인지 기능 장애 또는 신경 염증의 예방 또는 개선용 동물의 사료 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 벌사상자 추출물은 우수한 인지 기능 강화 및 뇌 보호 효과를 나타내어, 인지 기능 장애 또는 신경 염증의 예방, 개선, 또는 치료에 효과적으로 사용될 수 있다.

도 1은 실시예 1에 따라 C6 glioma 세포에서 NGF 생성량을 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 2는 실시예 2에 따라 C6 glioma 세포의 세포 생존율을 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 3은 실시예 3에 따라 LPS로 처리된 BV2 microglial 세포로부터 생성된 Nitrite 농도를 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 4는 실시예 4에 따라 LPS로 처리된 BV2 microglial 세포의 세포 생존율을 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 5는 실시예 5에 따라 HT22 cell에서 Aβ_25-35 plaque 신경독성에 대한 세포 보호 효능 정도를 측정하여 나타낸 그래프이다.

이하, 첨부한 도면을 참조하여 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 본원의 실시태양 및 실시예를 상세히 설명한다. 그러나 본원은 여러 가지 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시태양 및 실시예에 한정되지 않는다.

[제조예 1]

추출물의 제조

벌사상자 600g을 10 x 20% EtOH로, 상온에서 24시간 추출하였다. 상기 추출 과정을 2회 더 반복하여 총 12.27g의 벌사상자 추출물을 2.05%의 수율로 수득하였다.

또한, 상기와 동일한 방법으로 증류수, 70% EtOH, 에틸 아세테이트, 아세톤 또는 헥산을 사용하여 추출물을 제조하였다.

[실시예 1]

Nerve Growth Factor (NGF) 분비량 평가

C6 glioma 세포를 1 x 10⁵ cell/well로 24 well plate에 분주하고, 상기 세포를 증류수(DW), 20% 에탄올(20%), 또는 70% 에탄올(70%)을 용매로 사용하여 추출된 각 물질 25 또는 50 μg/ml, 6-shogaol(6-sho; 양성 대조군) 20 μM으로 처리한 후, 24시간 동안 배양하였다. 배양 배지를 모으고 원심분리하였다. 효소면역측정법인 Competitive Enzyme-Linked Immuno Assay (ELISA) kit (R&D systems, Minneapolis, MN, USA)를 통해 C6 glioma 배양 supernatant에 생성된 Nerve Growth Factor (NGF) 분비량을 정량하였다. 아무것도 처리하지 않은 정상 대조군(Ctl)의 NGF 생성량을 100%로 하여 각 처리군에서의 NGF 생성량(%)을 계산하였다. 그 결과를 도 1에 나타내었다.

도 1로부터 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 증류수(DW), 20% 에탄올(20%), 또는 70% 에탄올(70%) 추출물로 처리시, NGF 생성량이 증가하였으며, 특히 양성 대조군과 유사하거나 또는 이에 비해서도 NGF 생성량이 더 많이 증가한 경우도 확인되었다.

위 결과로부터, 본 발명에 따른 추출물은 우수한 뇌 신경생성 효과를 나타냄을 알 수 있다.

[실시예 2]

세포 독성 평가

C6 glioma 세포를 1 x 10⁵cell/well로 24-well plate에 분주하고 24시간 동안 안정화시켰다. 안정화 후 세포를 증류수(DW), 20% 에탄올(20%), 70% 에탄올(70%) 또는 헥산(H)을 용매로 사용하여 추출된 각 물질 25 또는 50 μg/ml, 6-shogaol(6-sho; 양성 대조군) 20 μM으로 처리한 후, 24시간 동안 배양하였다.

배지를 제거한 후 0.5 mg/ml 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) 용액을 1시간 처리하고, 환원된 formazan을 150 μl의 DMSO에 녹여 570 nm 파장에서 미세분광광도계(microspectrophotometer)로 세포 생존율(cell viability)을 측정하였다. 아무것도 처리하지 않은 정상 대조군(Ctl)의 세포 생존율을 100%로 하여, 각 물질을 처리한 경우의 세포 생존율을 평가하였다. 그 결과를 도 2에 나타내었다.

도 2로부터 알 수 있는 바와 같이, 증류수(DW), 20% 에탄올(20%), 또는 70% 에탄올(70%) 추출물 처리군에서의 세포 생존율은 정상 대조군(Ctl)과 동일하거나 거의 유사하였음이 확인되었다. 이에 반해, 헥산(H) 추출물을 50 μg/ml로 처리한 경우에는 세포 생존율이 약 75%까지 감소하였고, 6-shogaol(6-sho; 양성 대조군)의 경우에도 세포 생존율이 80%까지 감소하였다.

위 결과로부터 본 발명에 따른 추출물은 세포 독성이 나타나지 않아서, 안전하게 사용할 수 있음이 확인되었다.

[실시예 3]

Nitric Oxide 생성량 평가

Lipopolysaccharide (LPS)와 같은 독소는 미세아교세포(microglial cells)를 과다하게 활성화시켜 신경독소, 염증매개인자, 및 염증성 사이토카인들의 분비를 증가시킨다. 또한 Nitric Oxide (NO)는 전염증성 사이토카인과 더불어, 신경계 만성 염증 등의 주요 매개 인자이다. 따라서 본 실시예에서는 세포를 LPS로 활성화시켜 인위적으로 NO를 분비시킨 후, 본 발명의 추출물에 따른 NO의 생성량 감소 효과를 평가함으로써, 본 발명의 추출물이 미세아교세포에서 염증반응을 억제하는지를 조사하였다.

BV2 microglial 세포를 4 x 10⁴ cell/well로 96 well plate에 분주한 다음, 37℃에서 밤새 인큐베이션시켰다. 다음날 세포를 70% 에탄올(70%) 또는 헥산(H)을 용매로 사용하여 추출된 각 물질 25 또는 50 μg/ml, L-NMMA (양성 대조군) 5 또는 20 μM으로 처리한 후, LPS (100 ng/ml)로 처리하고, 37℃에서 24시간 동안 인큐베이션시켰다. 그 후 배양 배지를 모아 Griess reagent 용액 (1% sulfanilamide and 0.1% N-1-naphthyl ethylenediamine dihydrochloride in 5% phosphoric acid)을 사용하여 NO 생성량을 평가하였다. 구체적으로, 총 50 μL의 supernatant를 새로운 96 well plate로 이동시키고, 동일 부피의 Griess reagent 용액과 혼합하여, 570 nm에서 OD를 측정하였다. 그 결과를 도 3에 나타내었다.

도 3으로부터 알 수 있는 바와 같이, LPS로 처리시 Nitrite 농도가 60 μM 이상으로 증가하여 NO 생성량이 매우 증가하였으나, 본 발명의 70% 에탄올(70%) 추출물을 사용한 경우, Nitrite 농도가 30 μM 이하로 감소하여 NO 생성량이 매우 감소하였음을 확인하였다. 특히 본 발명의 70% 에탄올(70%) 추출물을 사용한 경우의 NO 생성량은 양성 대조군인 L-NMMA 또는 헥산(H) 추출물을 사용한 경우보다 더 낮았다.

이로부터 본 발명의 추출물은 미세아교세포(microglial cells)에서 염증반응을 억제할 수 있음이 확인되었다.

[실시예 4]

세포 독성 회복 평가

본 실험에서는 LPS로 처리하여 세포 독성을 유발한 세포에 본 발명의 추출물 사용시, 세포 독성 회복 정도를 평가하였다.

실시예 3과 동일한 방식으로 BV2 microglial 세포를 본 발명의 추출물 및 LPS로 처리하여 인큐베이션시켰고, 이 때 추출물로는 구체적으로 증류수(DW), 20% 에탄올(20%), 70% 에탄올(70%) 또는 헥산(H) 추출물을 사용하였다.

배양 배지를 제거한 후 0.5 mg/ml 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) 용액을 1시간 처리하고, 반응 혼합물을 조심스럽게 제거하였다. 200 μL의 디메틸 술폭시드 용액을 플레이트에 첨가하였다. 570 nm 파장에서 plate reader를 이용하여 OD를 측정하였다. 생존한 세포는 노란색의 MTT를 보라색의 formazan으로 환원시키는데, 이러한 환원 정도를 관찰하여 세포 생존율을 측정하였다. LPS만을 처리한 대조군의 세포 생존율을 100%로 하여, 각 물질로 처리한 경우의 세포 생존율을 평가하였다. 그 결과를 도 4에 나타내었다.

도 4로부터 알 수 있는 바와 같이, LPS로 처리시의 세포 생존율(100%)은, 아무것도 처리하지 않은 정상 대조군의 세포 생존율 약 140%와 비교하여 감소하였고, 특히 헥산(H) 추출물 50 μg/ml로 처리한 경우에는 세포 생존율이 약 70%까지 감소하였다. 이에 반해 본 발명의 증류수(DW) 추출물, 20% 에탄올 추출물, 또는 70% 에탄올 추출물을 사용한 경우, 세포 생존율이 매우 증가하여 정상 대조군 또는 양성 대조군과 유사하거나 더 높은 세포 생존율을 나타내었다.

위 결과로부터 본 발명의 추출물은 세포에 독성이 나타난 경우에도, 세포 독성을 회복시켜 생존율을 증가시키는 효과를 나타냄을 확인할 수 있었다.

[실시예 5]

신경 보호 효능 평가

본 실시예에서는 HT22 cell에서 Aβ_25-35 plaque 신경독성에 대한 벌사상자 추출물의 세포 보호 효능을 MTT assay로 평가하였다.

HT22 세포를 4 x 10⁴ cell/ml로 분주한 다음, 37℃에서 18시간 인큐베이션시켰다. 그 후 세포를 증류수(DW) 또는 20% 에탄올(20%)을 용매로 사용하여 추출된 각 물질 50 μg/ml, 또는 헥산 추출물(H1, H2) 50 μg/ml로 처리한 후, 37℃에서 3시간 동안 인큐베이션시켰다.

그 후 Aβ_25-35(3 μM)로 처리하고, 37℃에서 23시간 동안 인큐베이션시켰다. 이어서 MTT 용액을 처리하고 37℃에서 6시간 동안 인큐베이션시켜 세포 생존율(cell viability)을 측정하였다. 아무것도 처리하지 않은 정상 대조군(Ctl)의 세포 생존율을 100%로 하여, 각 물질을 처리한 경우의 세포 생존율을 평가하였다. 그 결과를 도 5에 나타내었다.

도 5로부터 알 수 있는 바와 같이, 증류수(DW) 또는 20% 에탄올(20%) 출물 처리군에서의 세포 생존율은 아무것도 처리하지 않은 정상 대조군(Ctl)과 동일하거나 거의 유사하였음이 확인되었다. 이에 반해, 헥산 추출물로 처리한 경우에는 세포 생존율이 Aβ_25-35만을 처리한 음성 대조군에 비해서도 훨씬 감소하였다.

위 결과로부터 본 발명의 추출물은 신경 보호 효능을 나타냄을 확인할 수 있었다.

Claims

벌사상자(Cnidium monnieri) 추출물을 유효성분으로 포함하는 인지 기능 장애 또는 신경 염증의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
제1항에 있어서, 상기 추출물은 물, C1 내지 C6의 알코올, 에틸 아세테이트, 아세톤 및 이들의 혼합 용매로 이루어지는 군으로부터 선택되는 용매로 추출된 것을 특징으로 하는, 약학 조성물.
제2항에 있어서, 상기 용매는 증류수 또는 10 내지 90% 에탄올 수용액인 것을 특징으로 하는, 약학 조성물.
제3항에 있어서, 상기 용매는 20% 에탄올 수용액 또는 70% 에탄올 수용액인 것을 특징으로 하는, 약학 조성물.
제1항에 있어서, 상기 인지 기능 장애는 알츠하이머병, 헌팅턴 병, 혈관성 치매증, 파킨슨병, 루게릭 병, 크로이츠펠트-야코프병, 두부 손상에 의한 치매, 학습장애, 경도 인지 장애, 픽병, 실인증, 건망증, 실어증, 실행증, 및 섬망으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는, 약학 조성물.
제1항에 있어서, 상기 약학 조성물은 인지 능력 또는 기억력을 개선하는 것을 특징으로 하는, 약학 조성물.
제1항에 있어서, 상기 약학 조성물은 뇌신경을 생성하는 것을 특징으로 하는, 약학 조성물.
제1항에 있어서, 상기 약학 조성물은 뇌 신경세포의 생존율을 증가시키는 것을 특징으로 하는, 약학 조성물.
제1항에 있어서, 상기 약학 조성물은 일산화질소(NO)의 생성을 억제하는 것을 특징으로 하는, 약학 조성물.
제1항에 있어서, 상기 약학 조성물은 신경 보호 효과를 나타내는 것을 특징으로 하는, 약학 조성물.
벌사상자 추출물(Cnidium monnieri)을 유효성분으로 인지 기능 장애 또는 신경 염증의 예방 또는 개선용 식품 조성물.
벌사상자 추출물(Cnidium monnieri)을 유효성분으로 인지 기능 장애 또는 신경 염증의 예방 또는 개선용 사료 조성물.