KR20210020788A - Pharmaceutical compositions comprising hydroquinone derivatives and obeticholic acid for preventing or treating nonalcoholic steatohepatitis - Google Patents

Abstract

The present invention relates to a pharmaceutical composition containing: as a first active component, 2,3,5-trimethylhydroquinone-1-hexylether or 2,3,5-trimethylhydroquinone-1-hexylether 4-acetate; and obeticholic acid as a second active component. The pharmaceutical composition has an effect of preventing or treating nonalcoholic steatohepatitis by inhibiting steatosis in liver tissues and hepatic lobular inflammation.

Description

하이드로퀴논 유도체, 및 오베티콜릭산을 포함하는 비알콜성 지방간염의 예방 또는 치료용 약학조성물{Pharmaceutical compositions comprising hydroquinone derivatives and obeticholic acid for preventing or treating nonalcoholic steatohepatitis}Pharmaceutical compositions comprising hydroquinone derivatives and obeticholic acid for preventing or treating nonalcoholic steatohepatitis, including hydroquinone derivatives and obeticholic acid}

본 발명은 하이드로퀴논 유도체, 및 오베티콜릭산을 포함하는 비알콜성 지방간염의 예방 또는 치료용 약학조성물에 관한 것이다. The present invention relates to a hydroquinone derivative, and a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of non-alcoholic steatohepatitis comprising obeticholic acid.

최근 들어 비만 인구의 증가에 따른 대사증후군의 유병률 증가와 함께 비알콜성 지방간질환의 유병률도 증가 추세에 있다. 지방간은 비만의 합병증으로 유발되거나, 또는 기타 다양한 원인, 예컨대, 알코올, 당뇨, 영양불량증, 약물의 남용 등에 의해서 유발되는 것으로 보고되고 있는데, 조직검사에서 5% 이상의 간세포에 지방이 침착된 경우로 정의된다. 특히, 유의한 알콜 섭취, 지방간을 초래하는 약물의 복용, 동반된 다른 원인에 의한 간질환 등이 없으면서 영상검사나 조직검사에서 간 내 지방침착의 소견을 보이는 질환을 ‘비알콜성 지방간질환(non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD)’이라고 하는데, 여기에는 단순 지방간(simple steatosis)과 비알콜성 지방간염(nonalcoholic steatohepatitis, NASH)이 포함된다. 단순 지방간은 비교적 양호한 예후를 보이는 반면, 비알콜성 지방간염은 NAFLD 환자 중 10~20%에서 발병되는 질환으로서 간 내 지방침착과 함께 간세포 손상을 동반한 염증을 보이며 9~25%의 환자에서 간경변증이 진행되며 이중 30~40%는 간질환의 합병증으로 사망하는 치명적인 질병이다.Recently, the prevalence of non-alcoholic fatty liver disease has been increasing along with the increase in the prevalence of metabolic syndrome due to the increase in the obese population. Fatty liver is reported to be caused by complications of obesity or by various other causes, such as alcohol, diabetes, malnutrition, and drug abuse, and is defined as a case where fat is deposited in more than 5% of liver cells in biopsy. do. In particular, non-alcoholic fatty liver disease (non-alcoholic fatty liver disease) is a disease in which there is no significant alcohol intake, taking drugs that cause fatty liver, liver disease due to other causes, etc. -Alcoholic fatty liver disease (NAFLD)', which includes simple steatosis and nonalcoholic steatohepatitis (NAFLD). Simple fatty liver has a relatively good prognosis, whereas non-alcoholic steatohepatitis is a disease that occurs in 10-20% of NAFLD patients, showing inflammation accompanied by hepatocellular adhesion and hepatocellular damage, and cirrhosis in 9-25% of patients. This progresses, and 30-40% of them are fatal diseases that die from complications of liver disease.

비알콜성 지방간염은 비만, 인슐린내성 등 대사증후군과 밀접하게 연관이 되어 있으나, 아직까지 정확한 병리기전과 치료방법이 알려져 있지 않다. 비알콜성 지방간염의 확진은 주로 조직병리학적 검사를 통해 이루어지며, 비알콜성 지방간염 진단의 최소한의 필수 소견으로는 지방증, 간세포의 풍선변성, 간소엽 내 염증이 있다. 이와 같은 비알콜성 지방간염이 효과적으로 치료되기 위해서는 특히, 비알콜성 지방간이 지방간염으로 진행되는 것을 억제하면서 지방간염의 염증을 개선시킴으로써 다음 단계로의 진행을 억제하는 것이 중요하다. 나아가 비알콜성 지방간염과 관련한 인슐린 저항성 및 내장 지방 축적 등을 운동 요법 또는 약물 치료를 통해 감소시키는 것이 치료에 있어 매우 중요한 관리 항목이다.Non-alcoholic steatohepatitis is closely related to metabolic syndrome such as obesity and insulin resistance, but the exact pathologic mechanism and treatment method are not known yet. The diagnosis of non-alcoholic steatohepatitis is mainly performed through histopathological examination. The minimum essential findings for diagnosing non-alcoholic steatohepatitis include steatosis, balloon degeneration of hepatocytes, and inflammation in the liver lobules. In order to effectively treat such non-alcoholic steatohepatitis, it is particularly important to suppress progression to the next stage by improving inflammation of steatohepatitis while inhibiting the progression of non-alcoholic fatty liver to steatohepatitis. Furthermore, reducing insulin resistance and visceral fat accumulation related to nonalcoholic steatohepatitis through exercise therapy or drug treatment is a very important management item in treatment.

비알콜성 지방간염에 의한 사회적 비용이 증가함에 따라, 많은 연구자들이 치료제를 개발하려고 노력해왔으나, 현재까지 비알콜성 지방간질환에 대해 임상적 효과가 증명된 약물치료는 없으며 특히 비알콜성 지방간염의 발생이나 진행을 막을 수 있는 치료약제는 개발되지 않았다. 비알콜성 지방간염 치료제로서 전 세계적으로 아직까지 승인된 치료제가 전무하며, 현재 임상 개발 중인 약물이나 환자에게 안전성과 효능을 고려해 차선책으로 선택할 수 있는 오프라벨 약물만 존재한다.As the social cost of non-alcoholic steatohepatitis increases, many researchers have tried to develop treatments, but until now, there are no drugs that have proven clinically effective against non-alcoholic steatohepatitis. No therapeutic agents have been developed that can prevent the outbreak or progression. As a non-alcoholic steatohepatitis treatment, there are still no approved treatments worldwide, and only drugs currently in clinical development or off-label drugs that can be selected as the next best option for patients considering safety and efficacy.

비알콜성 지방간염 치료제로서 임상 개발 중에 있는 오베티콜릭산은 파네소이드 X 수용체 작용제(Farnesoid X Receptor(FXR) agonist)이다. FXR은 케노데옥시콜릭산(chenodeoxycholic acid, CDCA), 콜릭산(cholic acid, CA)에 대한 핵수용체로 간, 신장, 장관, 결장, 난소, 및 부신을 포함하는 다양한 조직에서 발현된다. FXR에 의해 발현 유도되는 유전자들은 주로 담즙산을 분비하거나, 포스포리피드(phospholipid)를 담즙으로 배출하는 단백(bile salt efflux pump, multidrug-resistance protein 2, 3), 혈액 내 HDL에서 콜레스테롤을 간으로 운반하는 단백(phospholipid transfer protein)의 발현 등에 관여하는 것으로 알려져 있다.Obeticholic acid, which is under clinical development as a treatment for non-alcoholic steatohepatitis, is a Farnesoid X Receptor (FXR) agonist. FXR is a nuclear receptor for chenodeoxycholic acid (CDCA) and cholic acid (CA) and is expressed in various tissues including liver, kidney, intestine, colon, ovary, and adrenal gland. Genes induced by FXR expression are mainly proteins that secrete bile acids or excrete phospholipids into the bile (bile salt efflux pump, multidrug-resistance protein 2, 3), and transport cholesterol from HDL in the blood to the liver. It is known to be involved in the expression of a phospholipid transfer protein.

본 발명자들은 FXR 작용제인 오베티콜릭산을 특정 하이드로퀴논 유도체와 병용 사용하는 경우에 비알콜성 지방간염의 위험 인자에 대한 우수한 개선효과를 나타내는 것은 물론, 조직병리학적으로 간조직 내 지방의 축적 및 간소엽 염증에 대한 개선에 복합적으로 작용함으로써 비알콜성 지방간염의 예방 또는 치료에도 상승적인 효능을 갖는 것을 발견하고 본 발명을 완성하게 되었다.The present inventors show excellent improvement effect on risk factors of non-alcoholic steatohepatitis when using obeticholic acid, which is an FXR agonist, in combination with a specific hydroquinone derivative, as well as the accumulation of fat in liver tissue and histopathology. The present invention was completed by discovering that it has a synergistic effect in the prevention or treatment of non-alcoholic steatohepatitis by acting in combination in the improvement of liver lobular inflammation.

종래 하이드로퀴논 유도체가 사염화탄소(CCl4) 유도 간경변 모델에서 간 섬유화에 대해 억제작용을 나타내며, 아세트아미노펜 및 α-나프틸이소티오시아네이트(ANIT) 유발 급성 간손상 모델에서 간기능 개선 효과를 나타내는 것이 확인된 바 있었다(일본공개특허 제1994-206324호 및 한국등록특허 제10-1042697호). 그러나, 상기 선행문헌에 기재된 하이드로퀴논 유도체가 비알콜성 지방간 또는 비알콜성 지방간염에 대한 직접적인 효능을 나타내는지에 대해서 상기 선행문헌은 물론 어떤 문헌에도 공개된 바 없다.It was confirmed that conventional hydroquinone derivatives exhibit inhibitory effects on liver fibrosis in a carbon tetrachloride (CCl4) induced cirrhosis model, and improve liver function in acetaminophen and α-naphthylisothiocyanate (ANIT)-induced acute liver injury models. (Japanese Patent Publication No. 1994-206324 and Korean Patent Registration No. 10-1042697). However, whether the hydroquinone derivative described in the prior literature shows direct efficacy against non-alcoholic fatty liver or non-alcoholic steatohepatitis has not been disclosed in any literature as well as the prior literature.

또한, 한국공개특허 제2018-0124123호에는 비알콜성 지방간염의 치료제로서 파네소이드 X 수용체 효능제(FXR 효능제) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 및 안지오텐신 II 수용체 차단제(ARB) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 조합 약제에 대해 개시되어 있으며, 상기 FXR 효능제에 오베티콜산, 케노데옥시콜산 등이 포함되며, 상기 ARB에 로사르탄, 칸데사르탄, 텔미사르탄 등이 포함되는 점이 개시되어 있으나, 본 발명과 같이 오베티콜릭산을 하이드로퀴논 유도체와 병용함에 따른 치료 효과에 대해서는 전혀 개시된 바 없다.In addition, Korean Patent Application Publication No. 2018-0124123 discloses a panesoid X receptor agonist (FXR agonist) or a pharmaceutically acceptable salt thereof and angiotensin II receptor blocker (ARB) or a pharmaceutical thereof as a therapeutic agent for non-alcoholic steatohepatitis. It is disclosed for a combination drug containing a salt that is acceptable as an active ingredient, and the FXR agonist includes obeticholic acid, kenodeoxycholic acid, etc., and the ARB includes losartan, candesartan, telmisartan It has been disclosed that such as is included, but the therapeutic effect of using obeticholic acid in combination with a hydroquinone derivative as in the present invention is not disclosed at all.

일본공개특허 제1994-206324호(간질환 치료용 조성물, 1996.03.12. 공개)Japanese Patent Publication No. 1994-206324 (Composition for treatment of liver disease, published on March 12, 1996) 한국등록특허 제10-1042697호(간섬유화 억제제, 2011.06.13. 등록)Korean Patent Registration No. 10-1042697 (liver fibrosis inhibitor, registered on June 13, 2011) 한국공개특허 제2018-0124123호(FXR 효능제 및 ARB의 조합에 의해 얻어지는 의약, 2018.11.20. 공개)Korean Patent Publication No. 2018-0124123 (medicine obtained by a combination of FXR agonist and ARB, published on November 20, 2018)

본 발명의 목적은 제1 유효성분으로서 2,3,5-트리메틸하이드로퀴논-1-헥실에테르 또는 2,3,5-트리메틸하이드로퀴논-1-헥실에테르 4-아세테이트, 및 제2 유효성분으로서 오베티콜릭산을 포함하는 비알콜성 지방간염의 예방 또는 치료용 약학조성물을 제공하는 데에 있다.An object of the present invention is 2,3,5-trimethylhydroquinone-1-hexyl ether or 2,3,5-trimethylhydroquinone-1-hexyl ether 4-acetate as a first active ingredient, and five as a second active ingredient. It is to provide a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of non-alcoholic steatohepatitis containing beticholic acid.

본 발명은 제1 유효성분으로서 2,3,5-트리메틸하이드로퀴논-1-헥실에테르 또는 2,3,5-트리메틸하이드로퀴논-1-헥실에테르 4-아세테이트; 및 The present invention as a first active ingredient, 2,3,5-trimethylhydroquinone-1-hexyl ether or 2,3,5-trimethylhydroquinone-1-hexyl ether 4-acetate; And

제2 유효성분으로서 오베티콜릭산 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염;Obeticholic acid or a pharmaceutically acceptable salt thereof as a second active ingredient;

을 포함하는 비알콜성 지방간염의 예방 또는 치료용 약학조성물에 관한 것이다.It relates to a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of non-alcoholic steatohepatitis comprising a.

상기 약학조성물에 있어서, 상기 제1 유효성분 및 제2 유효성분의 중량비가 100:0.1 내지 100:30인 것이 바람직하다. In the pharmaceutical composition, it is preferable that the weight ratio of the first active ingredient and the second active ingredient is 100:0.1 to 100:30.

상기 약학조성물은 희석제, 붕해제, 결합제 및 활택제로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 약제학적으로 허용 가능한 첨가제를 추가로 함유할 수 있다.The pharmaceutical composition may further contain one or more pharmaceutically acceptable additives selected from the group consisting of diluents, disintegrants, binders, and lubricants.

상기 약학조성물은 산제, 과립제, 정제, 경질 캡슐제, 연질 캡슐제 또는 주사제의 형태로 제조될 수 있다.The pharmaceutical composition may be prepared in the form of a powder, granule, tablet, hard capsule, soft capsule, or injection.

상기 약학조성물은 이중층 정제일 수 있다.The pharmaceutical composition may be a bilayer tablet.

본 발명은, 다른 양태에 따르면, 제1 유효성분으로서 2,3,5-트리메틸하이드로퀴논-1-헥실에테르 또는 2,3,5-트리메틸하이드로퀴논-1-헥실에테르 4-아세테이트를 포함하는 제1 조성물; 및According to another aspect of the present invention, as a first active ingredient, an agent comprising 2,3,5-trimethylhydroquinone-1-hexyl ether or 2,3,5-trimethylhydroquinone-1-hexyl ether 4-acetate 1 composition; And

제2 유효성분으로서 오베티콜릭산 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 제2 조성물;A second composition comprising obeticholic acid or a pharmaceutically acceptable salt thereof as a second active ingredient;

을 포함하는 비알콜성 지방간염의 예방 또는 치료용 키트에 관한 것이다.It relates to a kit for the prevention or treatment of non-alcoholic steatohepatitis comprising a.

상기 키트에 있어서 상기 제1 유효성분 및 제2 유효성분의 중량비가 100:0.1 내지 100:30인 것이 바람직하다.In the kit, it is preferable that the weight ratio of the first active ingredient and the second active ingredient is 100:0.1 to 100:30.

이하, 본 발명을 더 상세하게 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail.

본 발명은 제1 유효성분으로서 하이드로퀴논 유도체 화합물, 즉, 2,3,5-트리메틸하이드로퀴논-1-헥실에테르(이하, ‘화합물 1’이라고도 함) 또는 2,3,5-트리메틸하이드로퀴논-1-헥실에테르 4-아세테이트(이하, ‘화합물 2’라고도 함); 및 제2 유효성분으로서 오베티콜릭산 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염;을 포함하는 비알콜성 지방간염의 예방 또는 치료용 약학조성물에 관한 것이다.The present invention is a hydroquinone derivative compound as a first active ingredient, that is, 2,3,5-trimethylhydroquinone-1-hexyl ether (hereinafter, also referred to as'compound 1') or 2,3,5-trimethylhydroquinone- 1-hexyl ether 4-acetate (hereinafter also referred to as "compound 2"); And it relates to a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of non-alcoholic steatohepatitis comprising; obeticholic acid or a pharmaceutically acceptable salt thereof as a second active ingredient.

오베티콜릭산은 그 화합물명이 3α,7α-디하이드록시-6α-에틸-5β-콜란-24-오익산(3α,7α-dihydroxy-6α-ethyl-5β-cholan-24-oic acid)이다. Obeticholic acid has its compound name 3α,7α-dihydroxy-6α-ethyl-5β-cholan-24-oic acid (3α,7α-dihydroxy-6α-ethyl-5β-cholan-24-oic acid).

오베티콜릭산의 약학적으로 허용가능한 염으로는, 알루미늄, 칼슘, 리튬, 마그네슘, 나트륨, 아연 등과의 금속염, N, N'-디벤질에틸렌디아민, 클로로 프로카인, 콜린, 에탄올아민, 에틸렌디아민, 메글루민(N-메틸글루카민) 및 프로카인과의 유기염 등의 염기성염이 포함될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.Pharmaceutically acceptable salts of obeticholic acid include metal salts such as aluminum, calcium, lithium, magnesium, sodium, zinc, N, N'-dibenzylethylenediamine, chloroprocaine, choline, ethanolamine, ethylenediamine , Meglumine (N-methylglucamine) and basic salts such as organic salts with procaine may be included, but are not limited thereto.

본 발명에 따르면, 간조직 내 지방의 축적 및 간소엽 염증을 억제하고 섬유화를 억제하여, 비알콜성 지방간염을 예방, 개선 또는 치료할 수 있는 효과가 있다. 본 발명은 특히 제1 유효성분과 제2 유효성분을 병용하는 것에 의해 비알콜성 지방간염의 예방, 개선 또는 치료에 상승적 효과가 있는 것으로 확인되었다. 또한, 본 발명은 제1 유효성분과 제2 유효성분의 복합 구성에 의해 각 유효성분 단독 사용의 경우에 비해 낮은 용량으로 우수한 비알콜성 지방간염 치료 효과를 얻을 수 있어 부작용을 줄이고 환자의 복약순응도를 높일 수 있는 것으로 확인되었다. According to the present invention, there is an effect capable of preventing, improving or treating non-alcoholic steatohepatitis by inhibiting the accumulation of fat and inflammation of the liver lobules in liver tissue and suppressing fibrosis. In particular, it was confirmed that the present invention has a synergistic effect in the prevention, improvement or treatment of non-alcoholic steatohepatitis by using the first active ingredient and the second active ingredient together. In addition, the present invention can obtain an excellent non-alcoholic steatohepatitis treatment effect at a lower dose compared to the case of using each active ingredient alone due to the complex composition of the first active ingredient and the second active ingredient, reducing side effects and improving patient compliance. It was confirmed that it can be increased.

본 발명은 비알콜성 지방간염의 조직병리학적 특징, 즉, 지방증, 간세포의 풍선변성 및 간소엽 내 염증 등을 보이는 모든 비알콜성 지방간염의 치료에 적용될 수 있다.The present invention can be applied to the treatment of all non-alcoholic steatohepatitis showing histopathological features of non-alcoholic steatohepatitis, that is, steatosis, balloon degeneration of hepatocytes, and inflammation in hepatic lobules.

상기 약학조성물에 있어서, 제1 유효성분 및 제2 유효성분이 특정 중량비의 범위내에서 배합되는 경우, 지방증, 간세포의 풍선변성 및 간소엽 내 염증 억제 효과에 있어 최대의 상승 작용이 발휘될 수 있고 각 유효성분 단독 사용시와 대비하여 보다 더 낮은 용량이 사용될 수 있어 바람직하다. 이러한 측면에서 상기 제1 유효성분 및 제2 유효성분의 중량비가 100:0.1 내지 100:30인 것이 바람직하고, 100:0.1 내지 100:20인 것이 보다 바람직하고, 100:0.5 내지 100:15인 것이 가장 바람직하다.In the pharmaceutical composition, when the first active ingredient and the second active ingredient are blended within a specific weight ratio, the greatest synergistic effect can be exerted in the effect of inhibiting steatosis, balloon degeneration of hepatocytes, and inflammation in the liver lobules. Compared to the use of the active ingredient alone, a lower dose can be used, which is preferable. In this respect, the weight ratio of the first active ingredient and the second active ingredient is preferably 100:0.1 to 100:30, more preferably 100:0.1 to 100:20, and 100:0.5 to 100:15 Most preferred.

제1 유효성분의 하이드로퀴논 유도체는 매우 안전성이 높은 화합물인 것으로 확인되었다. 특히 2,3,5-트리메틸하이드로퀴논-1-헥실에테르의 경우는 임상시험에서 단회 투여시 성인 1인당 2000mg 까지도 이상반응을 일으키지 않았다. 14일간 반복 투여를 하였을 경우에도 성인 1인당 1일 1000mg 용량에도 이상반응을 일으키지 않는 매우 안전성이 높은 화합물로 확인되었다. 따라서, 본 발명의 조성물은 만성적이고 장기간의 치료가 요구되는 비알콜성 지방간염의 치료에 효과적으로 사용될 수 있는 이점이 있다.The hydroquinone derivative of the first active ingredient was confirmed to be a highly safe compound. In particular, 2,3,5-trimethylhydroquinone-1-hexyl ether did not cause adverse reactions up to 2000 mg per adult in a single dose in clinical trials. Even when repeated administration for 14 days, it was confirmed to be a very safe compound that does not cause adverse reactions even at a dose of 1000 mg per adult per day. Therefore, the composition of the present invention has the advantage of being able to be effectively used in the treatment of non-alcoholic steatohepatitis requiring chronic and long-term treatment.

본 발명의 약학조성물은 경구 또는 비경구 투여할 수 있으며, 바람직하게는 경구 투여 방식으로 적용된다.The pharmaceutical composition of the present invention can be administered orally or parenterally, and is preferably applied by way of oral administration.

본 발명의 약학조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다. A suitable dosage of the pharmaceutical composition of the present invention can be variously prescribed depending on factors such as formulation method, mode of administration, age, weight, sex, pathological condition, food, administration time, route of administration, excretion rate and response sensitivity. I can.

상기 약학조성물에 있어서 제1 유효성분의 1일 경구 투여량은, 하이드로퀴논 유도체로서(화합물 1 또는 화합물 2) 0.1~500mg/kg체중이며, 바람직하게는 약 0.5~200mg/kg체중이다.In the pharmaceutical composition, the daily oral dosage of the first active ingredient is 0.1 to 500 mg/kg body weight, preferably about 0.5 to 200 mg/kg body weight, as a hydroquinone derivative (Compound 1 or Compound 2).

제2 유효성분의 1일 경구 투여량은, 오베티콜릭산 유리 형태 기준으로 0.01~50mg/kg체중, 바람직하게는 0.05~40mg/kg체중, 보다 바람직하게는 0.1~30mg/kg체중이다.The daily oral dosage of the second active ingredient is 0.01 to 50 mg/kg body weight, preferably 0.05 to 40 mg/kg body weight, and more preferably 0.1 to 30 mg/kg body weight, based on the free form of obeticholic acid.

투여 간격으로서 위에 언급된 투여량이 1일 1회 또는 1일 2회 내지 수회의 분할 용량으로 투여될 수 있다.The dosages mentioned above as an administration interval may be administered once a day or in divided doses from 2 to several times a day.

상기 제1 유효성분과 제2 유효성분은 단일 제형으로 함께 투여되거나, 분리된 제형으로 각각 제제화된 후 사용시에 혼합 또는 동시에 투여되거나, 적절한 시간 간격을 두고 별개로 투여될 수 있다. The first active ingredient and the second active ingredient may be administered together as a single formulation, formulated as separate formulations, and then mixed or administered simultaneously when used, or may be administered separately at appropriate time intervals.

일양태에 따르면, 본 발명은, 제1 유효성분으로서 2,3,5-트리메틸하이드로퀴논-1-헥실에테르 또는 2,3,5-트리메틸하이드로퀴논-1-헥실에테르 4-아세테이트를 포함하는 제1 조성물; 및 제2 유효성분으로서 오베티콜릭산 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 제2 조성물;을 포함하는 비알콜성 지방간염의 예방 또는 치료용 키트로 제공될 수 있다.According to one embodiment, the present invention is an agent comprising 2,3,5-trimethylhydroquinone-1-hexyl ether or 2,3,5-trimethylhydroquinone-1-hexyl ether 4-acetate as a first active ingredient 1 composition; And a second composition comprising obeticholic acid or a pharmaceutically acceptable salt thereof as a second active ingredient; it may be provided as a kit for the prevention or treatment of non-alcoholic steatohepatitis.

상기 키트는 그 종류가 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용되는 형태의 키트를 사용할 수 있다. 상기 제1 조성물 및 제2 조성물이 각각 개별 용기에 담긴 형태, 또는 하나 이상의 구획으로 나누어진 한 개의 용기 내에 담긴 형태로 포장되어 있을 수 있으며, 각각 1회 투여 용량의 단위 용량 형태로 포장되어 있을 수 있다. The kind of the kit is not particularly limited, and a kit in a form commonly used in the art may be used. The first composition and the second composition may be packaged in individual containers, or packaged in a single container divided into one or more compartments, and each may be packaged in a unit dosage form of a single dose. have.

상기 키트 내의 각 조성물은 투여 대상 개체의 건강 상태 등에 따라 적절한 시기에 개별적으로 병용 투여될 수 있고, 제1 유효성분 및 제2 유효성분의 1일 경구 투여 용량은 상기에서 설명한 바와 같다. Each composition in the kit may be separately administered in combination at an appropriate time according to the health status of the subject to be administered, and the daily oral administration doses of the first active ingredient and the second active ingredient are as described above.

상기 키트에 포함된 제1 유효성분과 제2 유효성분의 중량비는 100:0.1 내지 100:30인 것이 바람직하고, 100:0.1 내지 100:20인 것이 보다 바람직하고, 100:0.5 내지 100:15인 것이 가장 바람직하다. The weight ratio of the first active ingredient and the second active ingredient included in the kit is preferably 100:0.1 to 100:30, more preferably 100:0.1 to 100:20, and 100:0.5 to 100:15 Most preferred.

본 발명의 약학조성물, 제1 조성물 및 제2 조성물은 종래 관용되고 있는 방법에 의해 다양한 형태로 조제할 수 있다. 이 경우, 통상 제제용의 담체나 부형제 등 의약품의 첨가제로서 허용되고 있는 첨가제를 이용하여 제제화할 수 있다.The pharmaceutical composition, the first composition, and the second composition of the present invention can be prepared in various forms by conventionally used methods. In this case, it can be formulated using additives that are generally accepted as additives for pharmaceuticals, such as carriers for formulations and excipients.

바람직하게, 본 발명의 조성물은 희석제, 결합제, 붕해제 또는 활택제 등의 첨가제를 추가로 포함할 수 있다. 상기 희석제는 유당, 셀룰로오스류, 미결정셀룰로오스, 전분, 만니톨 등을 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 결합제로는 폴리비닐알코올-폴리에틸렌글리콜 그라프트 공중합체, 폴리비닐피롤리돈 비닐아세테이트, 에틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 히드록시프로필메틸셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 폴리비닐알코올, 폴리비닐피롤리돈, 폴리아크릴산, 젤라틴, 프로필렌글리콜, 알긴산 나트륨 등을 들 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 붕해제로는 전분, 셀룰로스, 가교 중합체, 예를 들어 가교 폴리비닐피롤리돈 또는 크로스포비돈, 가교 나트륨 카르복시메틸셀룰로스 또는 크로스카멜로오스 나트륨, 및 가교 칼슘 카르복시메틸셀룰로오스 등을 들 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 활택제로는 스테아르산 마그네슘, 스테아릴푸마르산나트륨, 글리세릴베헤네이트 등을 들 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.Preferably, the composition of the present invention may further include additives such as a diluent, a binder, a disintegrant or a lubricant. The diluent may include lactose, cellulose, microcrystalline cellulose, starch, mannitol, and the like, but is not limited thereto. The binder is polyvinyl alcohol-polyethylene glycol graft copolymer, polyvinylpyrrolidone vinyl acetate, ethyl cellulose, hydroxypropyl cellulose, hydroxypropyl methyl cellulose, carboxymethyl cellulose, methyl cellulose, polyvinyl alcohol, polyvinyl Pyrrolidone, polyacrylic acid, gelatin, propylene glycol, sodium alginate, and the like, but are not limited thereto. Examples of the disintegrant include starch, cellulose, crosslinked polymers such as crosslinked polyvinylpyrrolidone or crospovidone, crosslinked sodium carboxymethylcellulose or croscarmellose sodium, and crosslinked calcium carboxymethylcellulose, but are limited thereto. It is not. Examples of the lubricant include magnesium stearate, sodium stearyl fumarate, and glyceryl behenate, but are not limited thereto.

또한, 본 발명의 생체이용률이나 안정성을 향상시키기 위하여, 마이크로 캡슐, 미분말화, 시클로덱스트린 등을 이용한 포접화 등의 제제 기술을 포함한 약물 전달 시스템을 이용할 수 있다.In addition, in order to improve the bioavailability or stability of the present invention, a drug delivery system including a formulation technology such as microcapsule, micropowder, and inclusion using cyclodextrin may be used.

상기 조성물을 경구 투여 제제로서 이용하는 경우에는, 정제, 과립제, 산제, 경질캡슐제, 연질캡슐제 또는 내복용 액제 등의 형태로 이용할 수 있지만, 소화관에서의 흡수에 적합한 형태로 이용하는 것이 바람직하다. 또한, 정제의 경우 제1 유효성분과 제2 유효성분이 분리된 이중층 형태의 단일 투여 제형으로로 제조될 수 있다. 아울러, 유통성, 보존성 등의 이유에 의해 원하는 형태로의 제제를 제공하는 경우에도 종래의 제제 기술을 이용할 수 있다. When the composition is used as an oral administration formulation, it can be used in the form of tablets, granules, powders, hard capsules, soft capsules, or liquids for oral administration, but it is preferably used in a form suitable for absorption in the digestive tract. In addition, in the case of a tablet, the first active ingredient and the second active ingredient may be prepared in a single dosage form in the form of separate layers. In addition, when a formulation in a desired form is provided for reasons such as distribution and storage properties, conventional formulation techniques can be used.

또한, 비경구 투여제로서 이용하는 경우에는 주사제, 좌제 및 테이프, 파프(습포제) 등의 경피 흡수제 등의 형태로 할 수 있지만, 유통성, 보존성 등의 이유에 의해 고형 제제를 사용 시에 적당한 용제로 용해하여 사용하는 것도 가능하며, 액제 및 반고형제의 형태로 제공하는 것도 종래의 제제 기술에 의해 가능하다.In addition, when used as a parenteral administration, it can be in the form of an injection, suppository, and transdermal absorbent such as tape, pape (poultry), etc., but it is dissolved in a suitable solvent when using a solid preparation due to reasons such as distribution and preservation. It is also possible to use it, and it is possible to provide in the form of a liquid or semi-solid preparation by conventional formulation techniques.

본 발명의 약학조성물 또는 키트는 제1 유효성분으로서 2,3,5-트리메틸하이드로퀴논-1-헥실에테르 또는 2,3,5-트리메틸하이드로퀴논-1-헥실에테르 4-아세테이트, 및 제2 유효성분으로서 오베티콜릭산을 복합적으로 포함함으로써, 간 조직내 지방증, 간소엽 염증 및 간 섬유증을 효과적으로 억제하여 비알콜성 지방간 또는 비알콜성 지방간염의 예방, 개선 또는 치료 효과를 상승시킬 수 있다.The pharmaceutical composition or kit of the present invention is 2,3,5-trimethylhydroquinone-1-hexyl ether or 2,3,5-trimethylhydroquinone-1-hexyl ether 4-acetate as the first active ingredient, and the second effective By including obeticholic acid as a component in combination, it is possible to effectively suppress steatosis, hepatic lobular inflammation, and liver fibrosis in liver tissue, thereby increasing the effect of preventing, improving or treating non-alcoholic fatty liver or non-alcoholic steatohepatitis.

도 1은 MCD 식이 12주 급이 모델에서의 ALT 및 AST 수치를 나타내는 도면이다.
도 2는 MCD 식이 12주 급이 모델에서의 콜라겐 수치를 나타내는 도면이다.
도 3은 MCD 식이 12주 급이 모델에서의 간소엽 염증 관련 시험결과를 나타내는 도면이다.
도 4는 MCD 식이 12주 급이 모델에서의 지방증 관련 시험결과를 나타내는 도면이다.
도 5는 MCD 식이 12주 급이 모델에서의 비알콜성 지방간질환 활성 지수를 나타내는 도면이다.
도 6은 HFD(High fat diet) 급이 모델에서의 ALT 및 AST 수치를 나타내는 도면이다.
도 7은 HFD 식이 급이 모델에서의 간소엽 염증 관련 시험결과를 나타내는 도면이다.
도 8은 HFD 식이 급이 모델에서의 지방증 관련 시험결과를 나타내는 도면이다.
도 9는 HFD 식이 급이 모델에서의 비알콜성 지방간질환 활성 지수를 나타내는 도면이다.1 is a diagram showing ALT and AST values in a 12-week feeding model of the MCD diet.
2 is a diagram showing collagen levels in a 12-week feeding model of MCD diet.
Fig. 3 is a diagram showing test results related to liver lobular inflammation in a 12-week MCD diet model.
Fig. 4 is a diagram showing test results related to steatosis in a 12-week MCD diet model.
Figure 5 is a diagram showing the non-alcoholic fatty liver disease activity index in the 12-week MCD diet model.
6 is a diagram showing ALT and AST values in a high fat diet (HFD) feeding model.
7 is a diagram showing test results related to liver lobular inflammation in an HFD diet feeding model.
8 is a diagram showing test results related to steatosis in an HFD diet feeding model.
9 is a diagram showing the non-alcoholic fatty liver disease activity index in the HFD diet feeding model.

이하 본 발명의 바람직한 실시예를 상세히 설명한다. 하지만 본 발명은 여기서 설명되는 실시예에 한정되지 않으며, 다른 형태로 구체화될 수도 있다. 오히려, 여기서 소개되는 내용이 철저하고 완전해지며, 당업자에게 본 발명의 사상을 충분히 전달하기 위해 제공하는 것이다.Hereinafter, preferred embodiments of the present invention will be described in detail. However, the present invention is not limited to the embodiments described herein, and may be embodied in other forms. Rather, the content introduced herein is provided to be thorough and complete, and to sufficiently convey the spirit of the present invention to those skilled in the art.

[[ 시험예Test example 1] One] MCDMCD 식이( Diet ( MethionineMethionine and and cholinecholine deficient diet) 12주 급이 deficient diet) 12 weeks 비알콜성Non-alcoholic 지방간염Steatohepatitis 모델에서의 효능 평가 Efficacy evaluation in model

MCD 식이(메티오닌-콜린 결핍 식이, Methionine and choline deficient diet) 모델은 베타-산화와 VLDL(Very low-density lipoprotein, 초저밀도 지질단백)합성에 중요한 역할을 하는 메티오닌 및 콜린이 없는 식이를 공급함으로써 지방간을 유발하는 시험 모델로서, 조직병리학적으로 간소엽 내 염증이 심하게 유발되기 때문에 비알콜성 지방간염의 개선 효과를 관찰하기 위한 모델로 널리 사용되고 있다.The MCD diet (methionine and choline deficient diet) model provides a diet free of methionine and choline, which plays an important role in beta-oxidation and very low-density lipoprotein (VLDL) synthesis. As a test model that induces, it is widely used as a model for observing the improvement effect of non-alcoholic steatohepatitis because inflammation in the liver lobules is severely induced histopathologically.

(1) 시험방법(1) Test method

① ① MCDMCD 식이 12주 12 weeks of diet 급이시험Feeding test

7 주령의 수컷 C57BL/6 마우스에 MCD 식이(RESEARCH DIETS, Product No: A02082002B)를 4주간 급이하여 비알콜성 지방간을 유발한 후, 8주간 더 MCD 식이를 급이해서 총 12주 동안 하기 표 1의 G5 및 G6 시험군 구성에서와 같이, 본 발명의 2,3,5-트리메틸하이드로퀴논-1-헥실에테르(화합물 1 또는 Compound 1) 및 오베티콜릭산(Obeticholic acid, OCA)의 병용투여군(G5 및 G6)에 대해, 각 약물의 단독투여군 및 대조군과 함께 특정 투여용량으로 4주간 반복 경구 투여하여 비알콜성 지방간염에 대한 개선효능을 임상병리학적 검사 및 조직병리학적 검사를 통해 평가하였다. 7-week-old male C57BL/6 mice were fed with MCD diet (RESEARCH DIETS, Product No: A02082002B) for 4 weeks to induce non-alcoholic fatty liver, and then fed the MCD diet for 8 weeks for a total of 12 weeks. As in the composition of the G5 and G6 test groups of 1, the combined administration group of 2,3,5-trimethylhydroquinone-1-hexyl ether (Compound 1 or Compound 1) and obeticholic acid (OCA) of the present invention For (G5 and G6), the improvement efficacy against non-alcoholic steatohepatitis was evaluated through clinical pathological and histopathological tests by repeating oral administration for 4 weeks at a specific dose with each drug alone and control group. .

MCD 식이 급이 비알콜성 지방간염 모델에서의 시험군 구성 및 투여 용량 Test group composition and dosage in the MCD diet-fed non-alcoholic steatohepatitis model 시험군 Test group 1일 투여용량 Daily dosage
(mg/kg) (mg/kg) G1G1 정상대조군(Normal)Normal control 00 G2G2 음성대조군(MCD control)Negative control (MCD control) 00 G3G3 단일투여군Single dose group 화합물 1
(2,3,5-트리메틸하이드로퀴논-1-헥실에테르, Compound 1)Compound 1
(2,3,5-trimethylhydroquinone-1-hexyl ether, Compound 1) 200200 G4G4 오베티콜릭산(Obeticholic acid, OCA)Obeticholic acid (OCA) 3030 G5G5 병용투여군Combined administration group 화합물 1, OCACompound 1, OCA 200, 30200, 30 G6G6 100, 10100, 10

정상대조군은 MCD 식이가 아닌 정상 식이를 급이(RESEARCH DIETS, Product No: A02082003B) 한 경우이며, 음성대조군은 MCD 식이를 급이한 후 부형제인 0.5% MC(Methyl cellulose) 수용액만을 투여한 경우이다. 표 1에서와 같이 단일투여군으로서, 화합물 1 및 오베티콜릭산(OCA)을 각각 단독으로 사용하여 효능 대비 실험을 하였다. 이때, 오베티콜릭산의 1일 투여 용량은 FDA 및 EMA 제출 허가자료를 통해 보고된 독성 용량과, 논문 등에 보고된 유효 용량 및 부작용 용량을 참고하여 각각 30 및 10 mg/kg/day로 위 표 1과 같이 설정하였다.The normal control group was a case of feeding a normal diet (RESEARCH DIETS, Product No: A02082003B), not an MCD diet, and the negative control group was a case where only 0.5% MC (methyl cellulose) aqueous solution was administered as an excipient after feeding the MCD diet. . As shown in Table 1, as a single administration group, an experiment was performed on the efficacy of Compound 1 and obeticholic acid (OCA), respectively, alone. At this time, the daily dose of obeticholic acid is 30 and 10 mg/kg/day, respectively, referring to the toxic dose reported through the approval data submitted by the FDA and EMA, and the effective dose and side effect dose reported in the paper. It was set as in 1.

오베티콜릭산의 경우, CD-1(ICR) 마우스를 이용한 7일 반복투여 독성시험 (3, 50, 175, 300 mg/kg 농도)시, 175 mg/kg 농도에서 동물의 사망과 같은 심각한 부작용이 나타난다고 보고된 바가 있다(FDA obeticholic acid (INT-747) NDA package pharmacology reviews; Application number:207999Orig1s000). 또한 western diet NASH 마우스 모델에서의 효능 시험시, 40mg/kg 이상의 용량에서는 오히려 비알콜성 지방간질환의 경과를 악화(간섬유화 심화, ALT 수치 상승)시키는 것으로 보고된 바가 있다(Front Pharmacol. 2018 May 1;9:410). 따라서 많은 마우스 비알콜성 지방간 연구 논문에서 사용된 20~30mg/kg 용량 범위 중, 최고 용량인 30 mg/kg로 시험용량을 설정하였다.In the case of obeticholic acid, serious side effects such as death of animals at the concentration of 175 mg/kg in the 7-day repeated dose toxicity test (3, 50, 175, 300 mg/kg concentration) using CD-1 (ICR) mice. Has been reported to appear (FDA obeticholic acid (INT-747) NDA package pharmacology reviews; Application number: 207999Orig1s000). In addition, when testing the efficacy in a western diet NASH mouse model, it has been reported that a dose of 40 mg/kg or more worsens the course of non-alcoholic fatty liver disease (intensifies liver fibrosis, increases ALT levels) (Front Pharmacol. 2018 May 1 ;9:410). Therefore, the test dose was set to 30 mg/kg, the highest dose, out of the 20-30 mg/kg dose range used in many mouse non-alcoholic fatty liver research papers.

(2) 조직병리학적 검사 방법(2) Histopathological examination method

조직병리학적 검사를 위해, 마우스를 희생하여, 간조직을 분리하여 헤마톡실린-에오신(Hematoxylin-Eosin, H&E) 염색 슬라이드를 제작하였다. 즉, 분리된 간조직을, 4% 파라포름알데하이드(paraformaldehyde)로 4℃에서 24시간 고정시킨 후, 유수에 수세하고 파라핀으로 포매하여 조직을 3~4μm 두께로 박절하였다. 박절한 조직을 코팅 슬라이드 위에 붙인 후, 자일렌(xylene)으로 파라핀을 제거하고, 계열 알코올 순(99%, 95%, 90%, 80% 및 70% 에탄올(EtOH))으로 함수 과정을 거친 후 조직학적 염색을 수행하였다. 박절한 조직을 헤마톡실린 염색액으로 5분간 염색 후, 유수에 5분간 수세하고 1% HCl 알코올 및 암모니아로 탈염색하였다. 이후 유수에 10분간 수세한 후, 다시 에오신 염색액으로 1분간 대조염색하고, 함수의 역방향으로 탈수 과정을 거친 후 봉입하였다.For histopathological examination, mice were sacrificed, liver tissue was separated, and hematoxylin-Eosin (H&E) stained slides were prepared. That is, the separated liver tissue was fixed with 4% paraformaldehyde at 4° C. for 24 hours, washed with running water, and embedded with paraffin to cut the tissue to a thickness of 3 to 4 μm. After attaching the cut tissue on the coated slide, paraffin was removed with xylene, followed by a hydration process with alcohol based (99%, 95%, 90%, 80% and 70% ethanol (EtOH)). Histological staining was performed. The cut tissue was stained with hematoxylin staining solution for 5 minutes, washed with running water for 5 minutes, and destained with 1% HCl alcohol and ammonia. After washing with running water for 10 minutes, counter-staining with eosin staining solution for 1 minute, dehydration in the reverse direction of the water content, and then sealing.

H&E 염색된 슬라이드를 현미경 하에서 검경하여 조직병리학적 평가를 진행하고, 표 2의 기준에 근거하여 비알콜성 지방간질환 활성 지수(NAFLD activity score: NAS)를 수치화하여 기록하였다. 비알콜성 지방간질환 활성지수는 1) 지방증(steatosis), 2) 간소엽 내 염증 등의 병변(lobular inflammation), 3) 간세포의 풍선변성(ballooning)의 변화에 대한 평가 점수를 합산하여 산출되며, 비알콜성 지방간염의 중증도 평가에 널리 이용되고 있다.H&E stained slides were subjected to histopathological evaluation under a microscope, and the NAFLD activity score (NAFLD activity score: NAS) was numerically recorded based on the criteria in Table 2. The non-alcoholic fatty liver disease activity index is calculated by summing the evaluation scores for changes in 1) steatosis, 2) lobular inflammation, 3) ballooning of hepatocytes, and It is widely used to evaluate the severity of non-alcoholic steatohepatitis.

(3) 조직병리학적 및 임상병리학적 평가 결과(3) Histopathological and clinical pathological evaluation results

간기능 임상병리수치인 ALT 및 AST 수치에 대한, 병용투여군, 단독투여군 및 대조군의 시험결과를 도 1에 나타내었다. 병용투여군의 경우 ALT 및 AST 수치가 단독 약물 대조군에 비해 정상 수준으로 현저히 감소하였다.The test results of the combination administration group, the single administration group, and the control group for the ALT and AST values, which are the clinical pathology values of liver function, are shown in FIG. 1. In the case of the co-administration group, ALT and AST levels were significantly reduced to normal levels compared to the control group alone.

도 2는 MCD 식이 12주 급이 모델에서의 콜라겐(collagen) 수치를 나타내었다. 간 섬유증이 진행되면서 콜라겐이 침착되는데, 병용투여군에서의 콜라겐 농도가 단독투여군에 비해서 현저히 감소하는 것으로 확인되었다.Figure 2 shows the collagen (collagen) level in the MCD diet 12 weeks feeding model. As liver fibrosis progresses, collagen is deposited, and it was confirmed that the collagen concentration in the combined administration group was significantly reduced compared to the single administration group.

MCD 식이 12주 급이시험한 마우스 간조직의 간소엽 염증성 세포 침윤, 지방증에 대한 개선 효과, 및 비알콜성 지방간질환 활성 지수는 도 3 내지 도 5에 나타내었다.The effect of improving liver lobular inflammatory cell infiltration, steatosis, and non-alcoholic fatty liver disease activity index of mouse liver tissues tested for 12 weeks of MCD diet are shown in FIGS. 3 to 5.

도 3 내지 도 5에 나타난 바와 같이 병용투여군의 경우 음성대조군(MCD control), 및 단독투여군에 비해 간소엽 염증성 세포 침윤 및 지방증에 대한 개선 효과가 우수하였고, 비알콜성 지방간질환 활성 지수가 낮아졌다.As shown in Figs. 3 to 5, the combination administration group showed superior improvement in hepatic lobular inflammatory cell infiltration and steatosis compared to the negative control group (MCD control) and the single administration group, and the non-alcoholic fatty liver disease activity index was lowered.

또한, MCD 식이 12주 급이 모델에서 간 섬유증의 진행단계를 stage 0에서 stage 4로 구분하여 평가한 결과는 다음과 같다. In addition, the results of evaluating the progression of liver fibrosis from stage 0 to stage 4 in the 12-week MCD diet model are as follows.

위 표에서와 같이, 화합물 1과 오베티콜릭산의 병용투여군에서 간 섬유증에 대한 억제효과가 우수한 것으로 확인되었다.As shown in the table above, it was confirmed that the inhibitory effect on liver fibrosis was excellent in the group administered with compound 1 and obeticholic acid.

[[ 시험예Test example 2] 고지방 식이(High-fat diet, 2] High-fat diet (High-fat diet, HFDHFD ) 급이 ) Feeding 비알콜성Non-alcoholic 지방간염Steatohepatitis 모델에서의 효능 평가 Efficacy evaluation in model

(1) 시험 방법(1) Test method

60 kcal% 고지방 식이(RESEARCH DIETS, Product No: D12492)를 7주령의 수컷 C57BL/6 마우스에 16주간 식이하여 비알콜성 지방간을 유발하고, 고지방식이 17주차부터 25주차까지 시험물질을 9주간 반복 경구 투여하여 비알콜성 지방간염에 대한 개선효능을 임상병리학적 검사 및 조직병리학적 검사를 통해 평가하였다.A 60 kcal% high-fat diet (RESEARCH DIETS, Product No: D12492) was fed to 7-week-old male C57BL/6 mice for 16 weeks to induce non-alcoholic fatty liver, and the high-fat diet was used for 9 weeks from week 17 to week 25. The efficacy of improvement against non-alcoholic steatohepatitis by repeated oral administration was evaluated through clinical and histopathological tests.

시험군으로서 HFD 식이가 아닌 정상 식이(10 kcal% 지방 식이, RESEARCH DIETS, Product No: D12450B)를 급이한 정상대조군과, HFD 식이를 급이한 후 부형제인 0.5% MC(Methyl cellulose) 수용액만을 투여한 음성대조군, 병용투여군 및 단독투여군을 다음과 같이 설정하였다.As a test group, only the normal control group fed a normal diet (10 kcal% fat diet, RESEARCH DIETS, Product No: D12450B), not the HFD diet, and only 0.5% MC (methyl cellulose) aqueous solution as an excipient after feeding the HFD diet. The administered negative control group, combined administration group and single administration group were set as follows.

HFDHFD 식이 급이 Dietary feeding 비알콜성Non-alcoholic 지방간염Steatohepatitis 모델에서의 In the model 시험군Test group 구성 및 투여 용량 Composition and dosage 시험군Test group 1일 투여용량 Daily dosage
(mg/kg) (mg/kg) G1G1 정상대조군(Normal)Normal control 00 G2G2 음성대조군(HFD control)Negative control (HFD control) 00 G3G3 단일투여군Single dose group 화합물 1
(2,3,5-트리메틸하이드로퀴논-1-헥실에테르, Compound 1)Compound 1
(2,3,5-trimethylhydroquinone-1-hexyl ether, Compound 1) 200200 G4G4 오베티콜릭산(Obeticholic acid, OCA)Obeticholic acid (OCA) 3030 G5G5 병용투여군Combined administration group 화합물 1, OCACompound 1, OCA 200, 30200, 30 G6G6 100, 10100, 10

(2) 조직병리학적 및 임상병리학적 평가 결과(2) Histopathological and clinical pathological evaluation results

임상병리학적인 평가에서 병용투여군의 경우 간기능 및 간손상 지표인 ALT 및 AST 수치가 정상 수준으로 회복 되었다는 것을 확인하였다. 특히 단독 약물 대조군에 비해 ALT 및 AST 수치가 현저히 감소하였다(도 6).In the clinical pathological evaluation, it was confirmed that the ALT and AST levels, which are indicators of liver function and liver damage, were restored to normal levels in the case of the combination administration group. In particular, ALT and AST levels were significantly reduced compared to the single drug control group (Fig. 6).

시험예 1의 조직병리학적 검사 방법과 마찬가지로 조직병리학적 변화를 분석하고 평가 점수를 합산하여 비알콜성 지방간질환 활성 지수를 산출하였으며, 이를 통해 비알콜성 지방간염의 치료 효과를 평가하였다.As in the histopathological examination method of Test Example 1, the histopathological changes were analyzed and the evaluation scores were summed to calculate the non-alcoholic fatty liver disease activity index, through which the therapeutic effect of non-alcoholic steatohepatitis was evaluated.

병용투여군은, 도 7 및 8에서와 같이 단독투여군에 비해 현저한 간소엽 염증성 세포 침윤 및 지방증 개선 효과를 나타냈고, 도 9에서와 같이 비알콜성 지방간질환 활성 지수가 감소하였다.The combined administration group showed a remarkable effect of improving hepatic lobular inflammatory cell infiltration and steatosis compared to the single administration group as shown in FIGS. 7 and 8, and the activity index of non-alcoholic fatty liver disease decreased as shown in FIG. 9.

또한, HFD 식이 급이 모델에서 간 섬유증의 진행단계를 stage 0에서 stage 4로 구분하여 평가한 결과는 다음과 같다. In addition, the results of evaluating the progression stages of liver fibrosis from stage 0 to stage 4 in the HFD feeding model are as follows.

위 표에서와 같이, 화합물 1과 오베티콜릭산의 병용투여군 모두에서 간 섬유증에 대한 억제효과가 단독투여군 대비 우수한 점이 확인되었다. As shown in the table above, it was confirmed that the inhibitory effect on liver fibrosis was superior to the single administration group in both the compound 1 and the combined administration group of obeticholic acid.

Claims (7)

제1 유효성분으로서 2,3,5-트리메틸하이드로퀴논-1-헥실에테르 또는 2,3,5-트리메틸하이드로퀴논-1-헥실에테르 4-아세테이트; 및
제2 유효성분으로서 오베티콜릭산 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염;
을 포함하는 비알콜성 지방간염의 예방 또는 치료용 약학조성물. 2,3,5-trimethylhydroquinone-1-hexyl ether or 2,3,5-trimethylhydroquinone-1-hexyl ether 4-acetate as the first active ingredient; And
Obeticholic acid or a pharmaceutically acceptable salt thereof as a second active ingredient;
A pharmaceutical composition for the prevention or treatment of non-alcoholic steatohepatitis comprising a. 제1항에 있어서,
제1 유효성분 및 제2 유효성분의 중량비가 100:0.1 내지 100:30인 것을 특징으로 하는 약학조성물. The method of claim 1,
A pharmaceutical composition, characterized in that the weight ratio of the first active ingredient and the second active ingredient is 100:0.1 to 100:30. 제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 약학조성물이 희석제, 붕해제, 결합제 및 활택제로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 약제학적으로 허용 가능한 첨가제를 추가로 함유하는 것을 특징으로 하는 약학조성물. The method according to claim 1 or 2,
The pharmaceutical composition, characterized in that the pharmaceutical composition further contains one or more pharmaceutically acceptable additives selected from the group consisting of diluents, disintegrants, binders and lubricants. 제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 약학조성물이 정제, 과립제, 산제, 경질 캡슐제, 또는 연질 캡슐제의 형태로 제조되는 것을 특징으로 하는 약학조성물. The method according to claim 1 or 2,
A pharmaceutical composition, characterized in that the pharmaceutical composition is prepared in the form of a tablet, granule, powder, hard capsule, or soft capsule. 제4항에 있어서,
상기 약학조성물은 이중층 정제인 것을 특징으로 하는 약학조성물. The method of claim 4,
The pharmaceutical composition is a pharmaceutical composition, characterized in that the double-layer tablet. 제1 유효성분으로서 2,3,5-트리메틸하이드로퀴논-1-헥실에테르 또는 2,3,5-트리메틸하이드로퀴논-1-헥실에테르 4-아세테이트를 포함하는 제1 조성물; 및
제2 유효성분으로서 오베티콜릭산 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 제2 조성물;
을 포함하는 비알콜성 지방간염의 예방 또는 치료용 키트. A first composition comprising 2,3,5-trimethylhydroquinone-1-hexyl ether or 2,3,5-trimethylhydroquinone-1-hexyl ether 4-acetate as a first active ingredient; And
A second composition comprising obeticholic acid or a pharmaceutically acceptable salt thereof as a second active ingredient;
Kit for the prevention or treatment of non-alcoholic steatohepatitis comprising a. 제6항에 있어서,
제1 유효성분 및 제2 유효성분의 중량비가 100:0.1 내지 100:30인 것을 특징으로 하는 키트.The method of claim 6,
A kit, characterized in that the weight ratio of the first active ingredient and the second active ingredient is 100:0.1 to 100:30.

Images