KR20210002378A - 송화분 추출물을 유효성분으로 포함하는 간 보호용 조성물 - Google Patents

송화분 추출물을 유효성분으로 포함하는 간 보호용 조성물 Download PDF

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김옥주
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Abstract

본 발명은 송화분 추출물을 유효성분으로 포함하는 간 보호용 조성물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 송화분을 유효성분으로 포함하는 간 질환 치료 또는 예방용 조성물 또는 간 보호 및 간 기능 개선용 식품 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 송화분 추출물은 식용으로 사용되는 식물 유래 추출물로서 부작용이나 안전성에 대한 문제가 없고, 세포 실험 또는 간 독성 물질을 처리한 간독성 유도 실험 모델을 이용한 실험에서 간 보호, 간 손상 예방 및 간 기능 개선 효과가 있는 것으로 확인되었다. 따라서, 본 발명의 조성물은 간 질환 치료 또는 예방용 의약 조성물 또는 간 기능 개선 또는 간 보호용 식품 조성물 뿐만 아니라, 피로회복 또는 숙취해소와 관련된 다양한 용도로 응용될 수 있다.

Description

송화분 추출물을 유효성분으로 포함하는 간 보호용 조성물{HEPATOPROTECTIVE COMPOSITION CONTAINING PINI POLLEN EXTRACT AS EFFECTIVE COMPONENT}
본 발명은 간 보호 효과가 있는 식물 추출물, 구체적으로 송화분 추출물을 유효성분으로 포함하는 간 보호용 조성물에 관한 것이다.
간은 인간의 신체 장기 중 생체 내 대사가 가장 활발하게 일어나는 장기로 인체 내 장기 중 가장 큰 장기이기도 하다. 상기 간은 소화기계와 전신순환계 사이에 위치하면서 외부에서 들어온 생체 외 물질로부터 전신을 방어하는 기능을 수행하고 있다. 또한, 상기 간은 각종 대사작용, 해독, 분해, 합성 및 분비를 담당하는 매우 중요한 장기이다.
보다 구체적으로, 상기 간은 에너지 대사를 관리하는 기능이 있어, 음식물에서 흡수된 모든 영양소들이 간에서 에너지를 생산할 수 있는 물질로 대사되어 전신에 공급되거나 저장되며, 약 2,000 여종의 효소, 알부민, 응고인자들의 혈청단백, 담즙산, 인지질, 콜레스테롤 등의 지방 등이 간에서 합성되고 저장되며 분배된다. 또한 간은 각종 대사산물을 담관을 통해 십이지장으로 배설하는 기능 및 면역기능이 있어 우리의 생명유지에 중요한 역할을 하고 있다. 또한, 해독 및 분해 기능으로서 간에서 약물, 술, 독성물질 등을 해독시키므로, 간세포는 손상되기 쉽고 따라서 약물성, 독성, 알코올성 간질환 등이 흔히 발생할 수 있다. 또한, 생체 내로 들어온 생체 외 물질은 일단 간을 통과하게 되므로 간은 영양소 이외에도 많은 독성물질에 노출될 위험이 다른 장기 보다 많아 그 만큼 손상될 확률도 매우 높다.
간은 재생능력이 우수한 장기로 약간의 손상이 있을 경우에는 충분히 정상으로 회복되지만, 손상이 지속될 경우에는 간 조직의 일부가 완전히 파괴되고 간 기능도 저하되는 등 정상 간으로의 회복이 어려운 상태가 된다. 이러한 간 손상이 만성화되면 그 원인에 상관없이 간 섬유화 또는 간경화, 간암으로 진행된다. 간 섬유화, 간경화, 간암 등은 현재 뚜렷한 치료제 및 치료법이 없는 질환으로 그 사망률 또한 높은 질환이다. 그러므로, 간 손상이 만성화되기 전에 이러한 간 손상을 예방 및 치료하는 것이 간 섬유화, 간경화 또는 간암으로의 진행을 억제하는데 매우 중요하다.
상기 간 질환은 초기에 자각증상이 없고 간 손상 정도가 심한 정도에 이르러서야 자각증상이 나타남으로써 간 질환의 조기 발견은 그만큼 어렵다. 이러한 이유로, 상기 간 질환은 우리나라뿐만 아니라 세계적으로도 사망원인의 수위를 차지하고 있으나, 효과적인 치료제 및 진단방법이 없는 실정이다.
상기 간질환은 과도한 스트레스, 흡연, 음주 및 약물 복용 등 다양한 원인에 의해 다양한 연령 및 계층의 사람들에게 높은 발병률로 발병되어, 과도한 업무에 노출되어 있는 현대인에게 문제가 되는 현대 생활의 주요한 질병 중 하나이다. 따라서, 간 보호를 위한 방법 특히, 부작용이나 내성의 문제가 적은 천연물을 이용한 간 보호를 위한 방법의 개발이 요구된다.
뿐만 아니라, 다양한 질환의 치료제의 투약에 의해 발생되는 부작용 중 하나인 간 독성의 부작용과 관련해서도 간 보호를 위한 방법의 개발이 요구된다.
일 예로, 알츠하이머 증후군 치료제로 사용되고 있는 아세틸콜린에스테라아제(acetylcholinesterase) 저해제인 타크린(tacrine; 1,2,3,4,-tetrahydro-9-aminoacridine hydrochloride)의 경우, 간 독성의 부작용이 있는 것으로 보고되어 있고, 이 약물을 복용하는 환자의 30 내지 50%에서 가역성 간 손상이 유발되는 것으로 알려져, 알츠하이머 증후군 치료의 필요에도 불구하고, 투약량의 조절 또는 투약의 제한 등 신중한 처치가 요구된다
따라서, 치료 효과가 우수하면서도 부작용이나 내성과 같은 문제가 대두되어지지 아니한 천연물질 유래의 새로운 간 보호 조성물 또는 간 질환의 예방, 개선 또는 치료를 위한 치료제나 건간기능식품의 개발이 필요한 실정이다.
KR 10-1780975B KR 10-1139070B KR 10-1076185B KR 10-0953813B KR 10-0527602B KR 10-1596213B KR 10-2004-0018733A
본 발명은 상기와 같은 종래기술의 문제점을 개선하기 위한 것으로, 천연물질을 유효성분으로 포함하는 간 질환의 치료 또는 예방용 조성물 또는 간 질환의 개선 또는 예방 효과가 있는 기능성 식품 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 송화분 추출물을 유효성분으로 포함하는 간 보호용 조성물을 제공한다.
상기 송화분 추출물은 바람직하게는 송화분 초음파 추출물, 더욱 바람직하게는 송화분에 70% 에탄올 수용액을 첨가한 후, 초음파 처리하여 제조된 송화분 초음파 추출물일 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 목적을 달성하기 위하여, 송화분 추출물을 유효성분으로 포함하는 간 질환 치료 또는 예방용 조성물을 제공한다. 상기 간 질환 치료 또는 예방용 조성물은 간 질환 치료 또는 예방용 약학 조성물 또는 간 질환 치료 또는 예방용 의약 조성물일 수 있다.
상기 송화분 추출물은 바람직하게는 송화분 초음파 추출물, 더욱 바람직하게는 송화분에 70% 에탄올 수용액을 첨가한 후, 초음파 처리하여 제조된 송화분 초음파 추출물일 수 있다.
상기 간 질환은 간 독성 질환, 약물성 간 손상, 바이러스성 간 손상, 간염, 지방간, 간경화 및 간암으로 이루어진 군 중에서 선택된 어느 하나일 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 목적을 달성하기 위하여, 송화분 추출물을 유효성분으로 포함하는 간 보호 및 간 기능 개선용 식품 조성물을 제공한다.
상기 송화분 추출물은 바람직하게는 송화분 초음파 추출물, 더욱 바람직하게는 송화분에 70% 에탄올 수용액을 첨가한 후, 초음파 처리하여 제조된 송화분 초음파 추출물일 수 있다.
상기 식품 조성물은 건강기능성 식품 조성물인 간 보호 및 간 기능 개선용 식품 조성물일 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 목적을 달성하기 위하여, 송화분 추출물을 유효성분으로 포함하는 간 질환 갠선 또는 예방용 식품 조성물을 제공한다.
상기 송화분 추출물은 바람직하게는 송화분 초음파 추출물, 더욱 바람직하게는 송화분에 70% 에탄올 수용액을 첨가한 후, 초음파 처리하여 제조된 송화분 초음파 추출물일 수 있다.
상기 간 질환은 간 독성 질환, 약물성 간 손상, 바이러스성 간 손상, 간염, 지방간, 간경화 및 간암으로 이루어진 군 중에서 선택된 어느 하나일 수 있다.
상기 식품 조성물은 건강기능성 식품 조성물인 간 질환 개선 또는 예방용 식품 조성물일 수 있다
본 명세서에서 특별한 언급이 없는 한, 유효성분이란 간 보호용 조성물, 구체적으로 약학 조성물 또는 기능성 식품 조성물에 있어서 간 보호 효과를 제공하는 성분을 의미한다.
본 명세서에 있어서 특별한 언급이 없는 한, 예방이란 본 발명의 조성물의 투여로 특정 질환의 증상을 억제시키거나 진행을 지연시키는 모든 행위를 의미한다.
본 명세서에서 특별한 언급이 없는 한, 치료란 본 발명의 조성물의 투여로 특정 질환의 증상을 호전 또는 이롭게 변경시키는 모든 개선 행위를 의미한다.
본 명세서에서 특별한 언급이 없는 한, 개체란 본 발명의 조성물을 투여하여 통풍을 포함한 특정 질환의 증상이 호전될 수 있는 질환을 가진 인간, 원숭이, 개, 염소, 돼지 또는 쥐 등 모든 동물을 의미한다.
본 명세서에서 특별한 언급이 없는 한, 투여란 임의의 적절한 방법으로 개체에게 소정의 본 발명의 조성물을 제공하는 것을 의미한다.
본 명세서에서 특별한 언급이 없는 한, 약학적으로 허용되는 이란 생리학적으로 허용되고 동물, 바람직하게는 인간에게 투여될 때, 통상적으로 위장 장애, 현기증과 같은 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 것을 의미한다.
본 발명자들은 부작용이나 내성 등의 안정성에 대한 문제가 없는 천연물질 유래의 간 보호용 조성물을 연구하던 중, 식용으로 사용할 수 있어 그 안정성이 보장된 송화분 추출물을 이용하여 확인한 결과, 송화분 추출물이 간 보호능이 우수하다는 것을 확인하여, 본 발명을 완성하였다.
이하, 본 발명을 보다 상세하게 설명한다.
본 발명은 송화분 추출물을 유효성분으로 포함하는 간 보호용 조성물에 관한 것이다.
상기 간 보호용 조성물은 의약 조성물 또는 식품 조성물일 수 있다.
이러한 측면에서, 본 발명은 송화분 추출물을 유효성분으로 포함하는 간 질환 치료 또는 예방용 조성물에 관한 것이다.
다른 측면에서, 본 발명은 송화분 추출물을 유효성분으로 포함하는 간 보호, 간 기능 개선 및/또는 간 손상 예방용 기능성 식품 조성물에 관한 것이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 송화분 추출물을 유효성분으로 포함하는 간 질환 개선 또는 예방용 식품 조성물에 관한 것이다.
상기 송화분(Pini Pollen)은 소나무과의 소나무(Pinus densiflora Sieb. et Zucc.) 또는 기타 소마무과(Pinaceae)의 동속식물의 꽃가루로 만든 약재를 의미하며, 송황이라고도 한다. 송화분은 특이한 냄새가 있고 씹으면 기름기가 있으며 맛은 달고 성질은 따듯하다. 어지러운 증상, 비위허약으로 위가 아플 때, 오래된 이질, 악창, 습집 및 피부염이나 외상출혈 등에 사용하는 것으로 알려져 있다. 또한, 송화분은 본초강목이나 동의보감에서 맛이 달고 따뜻하며 정장 작용, 거풍작용, 항염증 작용 및 지혈작용 등의 효과가 있는 것으로 알려져 있으며, 감기, 두통이나 습진 등에 민간요법으로 사용되고 있다. 또한, 민간에서는 송화다식, 송화주, 송화 국수 등 다양한 식품 제조에 사용되기도 한다. 상기 송화분에는 각종 아미노산, 비타민, 당질, 식물성 스테롤(sterol)류, 무기질 등의 유효물질이 다량 함유되어 있다
상기 송화분 추출물은 통상의 식물 추출물의 제조방법에 따라 제조된 것일 수 있으며, 일 예로 송화분에 추출용매를 가하여 추출함으로써 제조하거나 추출용매로 추출하여 제조한 조추출물에 분획용매를 가하여 분획하여 제조된 것일 수 있다.
상기 추출용매는 물 및 유기용매로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다. 상기 유기용매는 탄소수 1 내지 5의 알코올, 상기 알코올 희석수, 에틸아세테이트 또는 아세톤 등의 극성용매와 에테르, 클로로포름, 벤젠, 헥산 또는 디클로로메탄의 비극성용매 또는 이들의 혼합용매일 수 있다. 상기 탄소수 1 내지 5의 알코올은 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 이소프로판올 등일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 알코올 희석수는 알코올을 50 내지 99.9%(v/v)로 물에 희석한 것일 수 있다.
본 발명의 송화분 추출물의 추출용매는 바람직하게는 물, 탄소수 1 내지 5의 알코올, 알코올 희석수 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있고, 더욱 바람직하게는 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나일 수 있으며, 더 더욱 바람직하게는 에탄올 수용액일 수 있다. 상기 추출과정은 일 예로, 10℃ 내지 100℃, 또는 15℃ 내지 90℃, 또는 20℃ 내지 50℃에서 수행될 수 있으나, 이에 한정되지는 않는다. 또한, 상기 추출시간은 특별히 한정되지는 않으나, 1분 내지 12시간, 또는 10분 내지 6시간, 또는 20분 내지 2시간일 수 있으나, 이에 한정되지는 않는다.
본 발명의 송화분 추출물은 통상의 식물 추출물의 제조방법에 따라 제조된 것일 수 있고, 구체적으로는 초음파 추출법, 열수추출법을 포함한 열 추출법, 냉침추출법 또는 온침추출법 등일 수 있으며, 바람직하게는 초음파 추출법으로 제조된 것일 수 있고, 통상의 추출기기, 초음파분쇄 추출기 또는 분획기를 이용할 수 있다.
또한, 상기 용매로 추출한 추출물은 이후, 부탄올, 헥산, 메틸렌클로라이드, 아세톤, 에틸아세테이트, 에틸에테르, 클로로포름, 물 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 용매, 바람직하게는 부탄올로 분획과정을 더욱 실시할 수 있다. 상기 분획 시 용매는 2종 이상 사용할 수 있으며, 용매의 극성에 따라 순차적으로 사용하거나 혼합하여 사용하여, 각 용매 추출물을 제조할 수 있다
상기 제조된 추출물 또는 상기 분획과정을 수행하여 수득한 분획물은 이후 여과하거나 농축 또는 건조과정을 수행하여 용매를 제거할 수 있으며, 여과, 농축 및 건조를 모두 수행할 수 있다. 구체적으로, 상기 여과는 여과지를 이용하거나 감압여과기를 이용할 수 있으며, 상기 농축은 감압 농축기, 일 예로 회전 증발기를 이용하여 감압 농축할 수 있으며, 상기 건조는 일 예로 동결건조법으로 수행할 수 있다.
상기 송화분 추출물은 바람직하게는 초음파 추출법에 의해 추출된 것일 수 있다.
상기 송화분 추출물의 추출용매는 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나, 바람직하게는 에탄올 수용액, 더욱 바람직하게는 70%(v/v) 에탄올 수용액일 수 있다.
상기 송화분 초음파 추출은 1) 송화분 중량을 기준으로, 5배 내지 30배, 바람직하게는 9배 내지 11배의 60%(v/v) 내지 80%(v/v), 바람직하게는 70%(v/v) 에탄올 수용액을 첨가하는 단계; 2) 400W 내지 500W, 바람직하게는 450W의 조건에서 10분 내지 1시간, 바람직하게는 30분 동안 초음파 추출기를 이용하여 초음파 추출하는 단계; 및 3) 상기 초음파 추출물을 여과하는 단계;를 거쳐 수행할 수 있다. 상기 초음파 추출은 일 예로, 10분씩 3회, 총 30분 동안 추출하는 방법으로 수행할 수 있다.
또한, 상기 송화분 추출물은 추출처리에 의해 얻어지는 추출액, 추출액의 희석액 또는 농축액, 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 또는 조정제물 또는 정제물 중 어느 하나를 포함하는 것으로 한다.
본 발명의 송화분 추출물은 세포 실험 또는 간 세포에 간 독성 물질을 처리한 간독성 유도 실험 모델에서 유의적으로 우수한 간 보호 효과를 갖는 것으로 확인되었다.
따라서 상기 송화분 추출물 및 상기 송화분 추출물을 유효성분으로 포함하는 간 보호용 조성물은 간 질환의 치료, 개선 또는 예방이나 간 보호, 간 기능 개선 및 간 손상 예방을 위하여 사용될 수 있다.
상기 간 질환은 일반적인 간 질환을 포함하는 개념이며, 일 예로 간 독성 질환, 약물성 간 손상, 바이러스성 간 손상, 간염, 간경화, 간암 및 간성 혼수로 이루어진 군 중에서 선택된 1종 이상일 수 있다. 또한, 상기 간 보호, 간 기능 개선 또는 간 손상 예방 효과는 피로회복 효과 또는 숙취해소 효과로 응용될 수 있다.
따라서, 본 발명의 간 보호용 조성물은 간 질환의 치료 또는 예방용 의약 또는 약학 조성물로 응용되거나, 상기 간 보호용, 간 질환의 개선 또는 예방용, 간 기능 개선용, 간 손상 예방용, 피로회복용 및/또는 숙취해소용 기능성 식품 조성물로 응용될 수 있다. 상기 식품조성물은 일 예로 상기 간 보호 및 간 기능 개선을 위한 건강기능성 식품 조성물, 간 질환 개선 또는 예방용 건강기능성 식품 조성물, 피로회복을 위한 건강기능성 식품 조성물 또는 숙취해소를 위한 건강기능성 식품 조성물일 수 있다.
상기 건강기능식품은 식품에 물리적, 생화학적, 생물공학적 수법 등을 이용하여 해당 식품의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 식품군이나 식품 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병방지와 회복 등에 관한 체조절 기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계하여 가공한 식품을 의미한다. 상기 건강기능식품에는 식품학적으로 허용 가능한 식품 보조 첨가제를 포함할 수 있으며, 건강기능식품의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더욱 포함할 수 있다.
본 발명의 간 보호용 조성물은 상기 송화분 추출물을 전체 조성물 중량의 0.001 중량% 내지 99.9 중량% 또는 0.01 중량% 내지 50 중량% 또는 0.1 중량% 내지 30 중량% 또는 0.1 중량% 내지 15 중량% 포함될 수 있다.
상기 송화분 추출물을 유효성분으로 포함하는 간 보호용 조성물은 인간을 포함한 동물에 직접 적용될 수 있다. 상기 동물은 식물에 대응하는 생물군으로 주로 유기물을 영양분으로 섭취하고, 소화기관, 배설기관 및 호흡기관이 분화되어 있는 것을 말하며, 바람직하게는 포유류, 더욱 바람직하게는 인간일 수 있다.
상기 송화분 추출물은 상기 간 보호용 조성물 내에 단독으로 사용될 수 있으며, 그 외 약리학적으로 허용가능한 담체, 부형제, 희석제 또는 부성분을 추가로 포함할 수 있다. 보다 상세하게는, 상기 송화분 추출물을 포함하는 조성물이 약제로 사용되거나, 의약 또는 약학적 용도로 사용되는 경우, 상기 송화분 추출물은 통상적인 방법에 따라 약학적으로 허용되는 담체 또는 부형제와 혼합하거나 희석제로 희석하여 사용될 수 있다.
이 경우 상기 조성물 내 송화분 추출물의 함량은 0.001 중량 % 내지 99.9 중량 %, 0.1 중량% 내지 99 중량% 또는 1 중량% 내지 50 중량%일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니며, 조성물의 사용태양 및 사용방법에 따라 상기 화합물의 함량은 바람직한 함량으로 적절히 조절하여 사용될 수 있다.
상기 약학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제의 예로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로즈, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유, 덱스트린, 칼슘카보네이트, 프로필렌글리콜, 리퀴드 파라핀 및 생리식염수로 이루어진 군에서 선택된 1 이상을 들 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니며 통상의 담체, 부형제 또는 희석제 모두 사용가능하다. 또한, 상기 약학 조성물은 통상의 충진제, 증량제, 결합제, 붕해제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, pH 조절제, 영양제, 비타민, 전해질, 알긴산 및 그의 염, 펙트산 및 그의 염, 보호성 콜로라이드, 글리세린, 향료, 유화제 또는 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다. 상기 성분들은 상기 유효성분인 송화분 추출물에 독립적으로 또는 조합하여 추가될 수 있다.
또한, 본 발명의 조성물은 상기 유효성분 이외에 공지의 간 질환 치료 효과, 간 보호 효과, 간 기능 개선 효과 등이 있는 것으로 인정된 물질, 일 예로 간세포 보호용 물질, 간 질환 치료제 또는 간 기능 개선제 등으로 사용되는 물질을 더욱 포함할 수 있다.
상기 조성물이 약제로 사용하는 경우 투여방법은 경구 또는 비경구 모두 가능하며, 일 예로는 경구, 경피, 피하, 정맥 또는 근육을 포함한 여러 경로를 통해 투여될 수 있다.
또한, 상기 조성물의 제형은 사용방법에 따라 달라질 수 있으며, 포유동물에 투여된 후 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 본 발명이 속하는 기술분야에 잘 알려진 방법을 사용하여 제형화될 수 있다. 일반적으로는, 경구 투여를 위한 고형제제에는 정제(TABLETS), 알약, 연질 또는 경질 캅셀제(CAPSULES), 환제(PILLS), 산제(POWDERS) 및 과립제(GRANULES) 등이 포함되고, 이러한 제제는 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제(SUSTESIONS), 내용액제, 유제(EMULSIONS) 및 시럽제(SYRUPS) 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제 예를 들면, 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.
비경구투여를 위한 형태는 크림(CREAM), 로션제(LOTIONS), 연고제(ONITMENTS), 경고제(PLASTERS), 액제(LIQUIDS AND SOULTIONS), 에어로솔제(AEROSOLS), 유동엑스제(FRUIDEXTRACTS), 엘릭서(ELIXIR), 침제(INFUSIONS), 향낭(SACHET), 패취제(PATCH) 또는 주사제(INJECTIONS) 등의 형태일 수 있다.
더 나아가, 본 발명의 조성물은 당해 기술 분야의 공지된 적절한 방법을 사용하여 또는 레밍턴의 문헌(Remington's Pharmaceutical Science(최근판), Mack Publishing Company, Easton PA)에 개시되어 있는 방법을 이용하여 제형화될 수 있다.
상기 조성물의 투여량은 투여방법, 복용자의 연령, 성별, 환자의 중증도, 상태, 체내에서 활성 성분의 흡수도, 불활성률 및 병용되는 약물을 고려하여 결정할 수 있으며, 일 예로 1일 유효성분을 기준으로 하였을 때 0.1 mg/kg(체중) 내지 500 mg/kg(체중), 0.1 mg/kg(체중) 내지 400 mg/kg(체중) 또는 1 mg/kg(체중) 내지 300 mg/kg(체중)으로 투여할 수 있으며, 1회 또는 수회로 나누어 투여할 수 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명은 또한, 상기 송화분 추출물을 유효성분으로 포함하는 간 보호용 조성물 또는 송화분 추출물을 유효성분으로 포함하는 간 질환 치료 또는 예방용 조성물을 제공한다. 상기 간 질환 치료 또는 예방용 조성물은 의약 조성물 또는 약학 조성물일 수 있다.
상기 간 질환은 일반적인 간 질환을 포함하는 개념이며, 일 예로 간 독성 질환, 약물성 간 손상, 바이러스성 간 손상, 간염, 간경화, 간암 및 간성 혼수로 이루어진 군 중에서 선택된 1종 이상일 수 있다.
상기 간 질환 치료 또는 예방용 조성물은 간 보호, 일 예로 독성 손상 등 외부 요건 또는 체내의 내부 요건에 의한 간 손상으로부터 간 또는 간 세포를 보호할 수 있으므로, 상기 간 질환의 예방 및 치료의 목적으로 사용가능하다.
상기 간 질환 치료 또는 예방용 조성물은 상기 유효성분을 단독으로 포함할 수 있으며, 이외 제형, 사용방법 및 사용목적에 따라 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제를 더욱 포함할 수 있다. 혼합물로 제공되는 경우, 상기 유효성분은 상기 조성물 전체에 대해 0.1 내지 99.9 중량%로 포함될 수 있으나, 통상 0.001 내지 50 중량%의 함량으로 포함되는 것이 일반적이다.
상기 담체 또는 부형제의 일예로는 물, 덱스트린, 칼슘카보네이드, 락토스, 프로필렌글리콜, 리퀴드 파라핀, 생리식염수, 덱스트로스, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자이리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 폴리비닐피롤리돈, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유가 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 담체 또는 부형제는 2종 이상 사용될 수 있다.
또한, 상기 간 질환 치료 또는 예방용 조성물을 약제화하는 경우, 통상의 충진제, 증량제, 결합제, 붕해제, 계면활성제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제 또는 방부제 등을 더욱 포함할 수 있다.
또한 본 발명의 간 질환 치료 또는 예방용 조성물은, 상기 유효성분 이외에 공지의 간 질환 예방 또는 치료 활성을 갖거나 간 보호활성을 갖는 화합물 또는 식물 추출물을 포함한 물질을 더욱 포함할 수 있으며, 상기 유효성분 100 중량부에 대하여 각각 5 내지 20 중량부로 포함될 수 있다.
상기 간 질환 치료 또는 예방용 조성물의 제형은 사용방법에 따라 바람직한 형태일 수 있으며, 특히 포유동물에 투여된 후 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 당업계에 공지된 방법을 채택하여 제형화할 수 있다. 구체적인 제형의 예로는 경고제, 과립제, 로션제, 리니멘트제, 리모나데제, 산제, 시럽제, 안연고제, 액제, 에어로솔제, 엑스제(EXTRACTS), 엘릭실제, 연고제, 유동엑스제, 유제, 현탁제, 전제, 침제, 점안제, 정제, 좌제, 주사제, 주정제, 캅셀제, 크림제, 환제, 연질 또는 경질 젤라틴 캅셀 등이 있다.
본 발명에 따른 상기 간 질환 치료 또는 예방용 조성물은 경구 또는 비경구로 사용될 수 있으며, 예컨대 진피내, 근육내, 복막내, 정맥내, 피하내, 코안, 경막외 및 구강경로를 통하여 사용될 수 있으며, 이의 투여량은, 투여방법, 복용자의 연령, 성별 및 체중, 및 질환의 중증도 등을 고려하여 결정하는 것이 좋다. 일예로, 본 발명의 상기 간 질환 치료 또는 예방용 조성물은 유효성분을 기준으로 하였을 때 1일 0.1 내지 100 ㎎/㎏(체중)으로 1회 이상 투여가능하다. 그러나, 상기한 투여량은 예시하기 위한 일 예에 불과하며 상기 범위에 한정되지는 않는다.
본 발명은 또한, 상기 송화분 추출물을 유효성분으로 포함하는 간 보호용 조성물 또는 송화분 추출물을 유효성분으로 포함하는 간 보호 및 간 기능 개선용 식품 조성물을 제공한다.
상기 식품 조성물은 기능성 식품 조성물 또는 건강기능식품일 수 있으며, 상기 식품 조성물은 간 보호 및 간 기능 개선을 위한 건강기능성 식품 조성물, 피로회복을 위한 건강기능성 식품 조성물 또는 숙취해소를 위한 건강기능성 식품 조성물로 응용될 수 있다.
본 명세서에서 식품 조성물이란 함은 영양소를 한 가지 또는 그 이상 함유하고 있는 천연물 또는 가공품을 의미하며, 일 예로 어느 정도의 가공 공정을 거쳐 직접 먹을 수 있는 상태가 된 것을 의미할 수 있고, 통상적인 의미로서, 식품, 식품 첨가제, 건강 기능성 식품 및 음료를 모두 포함하는 의도이다.
본 발명의 유효성분을 첨가할 수 있는 식품으로는 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 기능성 식품 등이 있다. 추가로, 본 발명에서 식품은 특수영양식품(예, 조제유류, 영,유아식 등), 식육가공품, 어육제품, 두부류, 묵류, 면류(예, 라면류, 국수류 등), 건강보조식품, 조미식품(예, 간장, 된장, 고추장, 혼합장 등), 소스류, 과자류(예, 스넥류), 유가공품(예, 발효유, 치즈 등), 기타 가공식품, 김치, 절임식품(각종 김치류, 장아찌 등), 음료(예, 과실,채소류 음료, 두유류, 발효음료류 등), 천연조미료(예, 라면 스프 등)을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 상기 식품, 음료 또는 식품첨가제는 통상의 제조방법으로 제조될 수 있다.
본 발명에서 기능성 식품이란 식품에 물리적, 생화학적, 생물공학적 수법 등을 이용하여 해당 식품의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 식품군이나 식품 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병방지와 회복 등에 관한 체조절기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계하여 가공한 식품을 의미한다. 상기 기능성 식품에는 식품학적으로 허용 가능한 식품 보조 첨가제를 포함할 수 있으며, 기능성 식품의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더욱 포함할 수 있다.
본 발명에서 음료란 갈증을 해소하거나 맛을 즐기기 위하여 마시는 것의 총칭을 의미하며 기능성 음료를 포함하는 의도이다. 상기 음료는 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 송화분 추출물 또는 간 보호용 조성물을 유효성분으로 포함하는 것 외에 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며, 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상기의 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 수크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상기한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖ 당 일반적으로 약 1 g 내지 20 g 또는 5 g내지 12 g이다. 그 밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일 주스, 과일 쥬스 음료, 야채 음료의 제조를 위한 과육을 추가로 함유할 수 있다.
상기 외에 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 이러한 성분을 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하지 않지만, 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0 중량부 내지 200,000 중량부 범위에서 선택될 수 있다.
본 발명에서 기능성 음료란 음료에 물리적, 생화학적, 생물공학적 수법 등을 이용하여 해당 음료의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 음료 군이나 음료 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병방지와 회복 등에 관한 체조절기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계하여 가공한 음료를 의미한다.
상기 기능성 음료는 지시된 비율로 필수 성분으로서 본 발명 조성물의 유효성분을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며, 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 수크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상기한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100㎖ 당 일반적으로 약 1 g 내지 20 g 또는 5 g 내지 12 g일 수 있다.
또한, 상기 간 보호 및 간 기능 개선용 식품 조성물에 있어서, 상기 유효성분의 함량은 전체 식품 중량의 0.0001 중량% 내지 99 중량% 또는 0.001 중량% 내지 50 중량% 또는 0.01 중량% 내지 30 중량% 또는 0.1 중량% 내지 15 중량%로 포함할 수 있으며, 음료 조성물은 100 ㎖를 기준으로 0.0002 g 내지 5 g 또는 0.03 g 내지 1g의 비율로 포함할 수 있다.
또한, 상기 간 보호 및 간 기능 개선용 식품 조성물의 섭취량은 섭취하고자 하는 개체의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 일 예로, 본 발명의 식품 조성물은 유효성분을 기준으로 1일 0.0001 g/kg(유효성분의 양/체중) 내지 12 g/kg(유효성분의 양/체중) 또는 0.01 g/kg 내지 9 g/kg으로 투여될 수 있다. 투여방법은 하루에 한번 투여할 수 있고, 수회 나누어 투여할 수 있으며, 상기 투여량 및 투여방법은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
또한, 본 발명은 간 보호 효과가 우수한 송화분 추출물 제조방법에 관한 것이다.
상기 간 보호 효과가 우수한 송화분 추출물 제조방법은 송화분 중량을 기준으로, 5배 내지 30배, 바람직하게는 9배 내지 11배의 60%(v/v) 내지 80%(v/v), 바람직하게는 70%(v/v) 에탄올 수용액을 첨가하는 단계; 400W 내지 500W, 바람직하게는 450W의 조건에서 10분 내지 1시간, 바람직하게는 30분 동안 초음파 추출기를 이용하여 초음파 추출하는 단계; 및 상기 초음파 추출물을 여과하는 단계를 포함하는 것일 수 있다.
본 발명의 유효성분인 송화분 추출물 식용으로 사용되는 식물 유래 추출물로서 부작용이나 안전성에 대한 문제가 없고, 상기 송화분 추출물을 이용하여 실험한 결과, 간보호능 및 간질환의 치료, 예방 또는 개선 효과가 뛰어날 것으로 평가되었다.
따라서, 송화분 추출물을 유효성분으로 포함하는 본 발명의 간 보호 조성물은 간 질환 치료 또는 예방용 의약 조성물 또는 간 기능 개선 또는 간 보호용 식품 조성물 등 간 보호 및 간 기능과 관련된 다양한 용도 및 피로회복 또는 숙취해소와 관련된 용도로 응용될 수 있다. 그러므로, 본 발명은 간 보호, 간 기능 개선 및 간 질환 치료 또는 예방과 관련된 의료산업 및 식품산업의 분야에서 널리 사용될 수 있다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른, 송화분 추출물의 추출용매 및 추출방법에 따른 제조방법을 나타낸 개락도이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른, 송화분 추출물의 세포독성을 확인한 것으로, 도 2a는 송화분 추출물의 용매에 따른 세포독성을 RAW264.7 세포를 이용하여 MTT assay를 실시한 결과를 나타낸 그래프이고, 도 2b는 송화분 추출물의 용매에 따른 세포독성을 HepG2 세포를 이용하여 MTT assay를 실시한 결과를 나타낸 그래프로, 각 그래프의 세로축은 아무런 시료를 처리하지 않은 대조군 대비 세포 생존율을 나타낸 것이고, 가로축은 송화분 추출물의 추출용매 및 처리량을 구분하여 나타낸 것이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른, 송화분 추출물의 간세포 보호능을 확인한 것으로, 간세포주인 HepG2 세포에 아무런 시료를 처리하지 않은 경우(Control), 간 세포 독성을 가진 타크린을 첨가한 음성대조군(NC, Negative Control), 간 보호능이 확인된 실리마린(silymarin)을 처리한 후, 타크린을 처리한 양성대조군(PC, Positive Control) 및 송화분 추출물을 함량 별로 처리한 후, 타크린을 처리한 실험군(100,200, 500)의 각각의 간 세포 생존율을 MTT assay를 실시하여 확인한 그래프로, 각 그래프의 세로축은 아무런 시료를 처리하지 않은 대조군(Control) 대비 세포 생존율을 나타낸 것이고, 가로축은 대조군 및 송화분 초음파 추출물의 처리량을 구분하여 나타낸 것이며, 도 3a는 수용매를 이용한 송화분 초음파 추출물의 처리 결과를 나타낸 것이고(T + water), 도 3b는 70& 에탄올을 이용한 송화분 초음파 추출물의 처리 결과를 나타낸 것이고(T + 70% Ethanol)이며, 도 3c는 에탄올을 이용한 송화분 초음파 추출물의 처리 결과를 나타낸 것(T + Ethanol)이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른, 송화분 추출물의 간세포 보호능을 혈청학적 지표로 확인한 것으로, 간세포주인 HepG2 세포에 아무런 시료를 처리하지 않은 경우(Control), 간 세포 독성을 가진 타크린을 첨가한 음성대조군(NC, Negative Control), 간 보호능이 확인된 실리마린(silymarin)을 처리한 후, 타크린을 처리한 양성대조군(PC, Positive Control) 및 송화분 초음파 추출물을 용매 별로 처리한 후, 타크린을 처리한 실험군(T + water, T + 70% Ethanol, T + 70% Ethanol)의 각각의 GOT 생성 정도를 측정한 그래프(도 4a) 및 LDH 생성 정도를 측정한 그래프(도 4b)로, 각 그래프의 세로축은 각 성분의 함량을 측정하여 나타낸 것이고, 각 그래프의 가로축은 대조군 및 송화분 초음파 추출물의 추출용매를 구분하여 나타낸 것이다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 구체적인 실시예 및 비교예를 통하여 본 발명의 구성 및 효과를 보다 상세히 설명하기로 한다. 그러나 하기 실시예는 본 발명을 보다 명확하기 이해시키기 위한 것일 뿐이며, 본 발명의 하기 실시예에 한정되는 것은 아니며, 본 발명의 보호 범위는 특허청구범위에 의하여 해석되어야 하고, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 기술 사상은 본 발명의 권리범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.
모든 실험결과는 최소한 3회 이상 반복하여 평균치로 표시하였고, 각 군과의 비교는 SPSS 20(SPSS Inc, Chicago, IL, USA) 프로그램을 사용하여 one-way ANOVA 분석 후, 각각 p < 0.05수준에서 Duncan’s multiple test를 실시하여, p < 0.05인 경우를 유의성 있는 것으로 판정하였다.
[실시예. 송화분 추출물의 최적 간 보호능 조건 확인]
실시예 1. 송화분 추출물의 제조
본 실험에서 사용된 송화분 추출물은 다음과 같은 방법으로 제조하였다.
송화분 시료는 동광한방몰에서 파우더 형태로 구매하여 사용하였다. 송화분 초음파 추출물은 도 1에 나타낸 방법으로 제조하였다. 구체적으로, 송화분의 10배에 해당하는 물(water), 70% 에탄올(70% ethanol) 또는 에탄올(ethanol)을 첨가한 후, 초음파 추출기(probe sonicator(PS), sonicdismembrator model 500, fisher scientific, 일본)를 이용하여 450W의 파쇄율로 10분씩 3번 총 30분간 처리하여 제조하였다. 상기 제조된 송화분 초음파 추출물은 용매에 따른 각 추출물을 3,000 rpm에서 15분 동안 원심분리하여 Whatman NO. 2 (Whatman, Lawrence, KS, USA) 여과지로 여과시킨 후 감압 농축(Rotary Evaporator N-1000, Rikakikai Co., 일본)하여 동결건조기로 건조하여 얻은 분말을 본 실험의 시료로 사용하였다. 상기 동결건조하여 최종 수득한 각각의 시료는 -20℃ 보관하며 실험에 사용하였다.
실시예 2. 송화분 추출물의 세포독성 확인
상기 실시예 1에서 제조된 각각의 추출물의 세포독성을 확인하기 위하여, RAW264.7 세포와 HepG2 세포를 이용하여 MTT assay를 수행하였다.
본 실험에 사용된 세포주인 대식 세포주(RAW264.7, KCLB, 40071)와 간 세포주(Human hepatocellular carcinoma, HepG2, KCLB, 88065)는 모두 한국세포주은행에서 분양받아 사용하였다.
구체적으로, RAW264.7세포와 HepG2 세포를 각각 10% fetal bovine serum(FBS)와 1% penicillin-streptomycin을 함유한 Dulbecco’s modified Eagles’s medium(DMEM)을 사용하여 37℃ 및 5% CO2 조건의 배양기를 이용하여 배양하였다.
상기 배양된 세포를 RAW264.7세포는 96 well plate에 6 x 103 cells/well이 되도록 분주하고, HepG2 세포는 96 well plate에 2.5 x 105 cells/well이 되도록 분주한 다음, 24시간 동안 배양한 후, 상기 각각의 송화분 초음파 추출물 시료를 농도(62.5, 125, 250, 500, 1000 μg/mL) 별로 처리한 후, 24시간 동안 더 배양하였다. 상기 배양 후, 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide(MTT, Sigma, USA)를 5 mg/mL 농도로 PBS에 용해한 MTT 용액을 세포 배양액에 10%(v/v) 비율로 첨가하고 4시간 배양한 다음, 배양액을 제거하고 각 well당 dimethyl sulfoxide(DMSO, Sigma, USA)를 0.2mL씩 넣고 30분 동안 방치하여 formazan crystal 생성물을 용해시킨 후, microplate reader(Multiskan, Thermo Scientific, 대한민국)를 사용하여 540 nm 파장에서 흡광도를 측정하여, 세포 생장율을 측정하였다. 세포 생존율은 아무런 시료를 처리하지 않은 대조군(0)의 흡광도 값을 기준으로 비교하였다. 상기 측정결과를 도 2a(RAW264.7) 및 도 2b(HepG2)에 나타내었다.
상기 도 2a 및 도 2b에 나타낸 바와 같이, 송화분 초음파 추출물은 모든 용매에서 500 μg/mL의 농도까지는 80% 이상의 생존율을 나타내어, RAW264.7 및 간 세포주인 HepG2에서 세포독성이 없는 것 즉, 모두 안전한 것으로 확인되었고, 이후의 간 보호능을 확인하기 위한 실험에서 시료를 500 μg/mL 이하의 농도에서 처리하여 수행하였다.
실시예 3. 송화분 초음파 추출물의 간보호능의 측정
상기 실시예 1에서 제조된 각각의 추출물을 HepG2 세포를 이용하여 상기 실시예 2에서 세포독성이 없는 것으로 확인된 500 μg/mL의 농도로 처리하여 간보호능을 확인하였다. 구체적으로, 간 독성이 있는 것으로 보고된 타크린을 처리한 후, 타크린 유발 독성에 대한 간세포 보호능을 확인하였다.
우선, 각 용매별 송화분 초음파 추출물의 타크린 유발 독성에 대한 간세포 보호 활성을 확인하기 위해, HpeG2 세포를 2.5 × 105 cells/well의 농도로 96-well plate에 분주한 후 24시간 동안 배양하였다. 이후, 각 시료를 농도별(100, 200 및 500 μg/mL)로 처리하고, 24시간 동안 배양한 후, 1.2 mM 타크린을 처리하고, 2시간 더 배양한 후, MTT assay룰 실시하였다. 양성대조군으로는 간 보호 기능이 밝혀진 실리마린(silymarin, 200 μg/mL)을 사용하였다. 상기 측정결과는 아무런 처리를 하지 않은 대조군(Control)의 세포 생존율을 100%로 하여, 비교 생존율로 나타내었다(도 3).
상기 도 3에 나타낸 바와 같이, 타크린만 처리한 음성 대조군(NC, negative control)의 경우, 세포 생존율이 25.27 ± 1.57%로 현저하게 감소하는 것이 확인된 반면, 간 보호 효과가 알려진 실리마린을 처리한 양성 대조군(PC, positive control)의 세포 생존율은 59.53 ± 2.81%으로 상당히 개선되는 것으로 확인되었다. 이때 모든 시료 군들에서 농도 의존적으로 간 보호 활성을 나타내는 것을 확인하였다. 한편, 도 3에 나타낸 바와 같이, 모든 용매에서 농도 의존적으로 간 보호 활성이 개선되는 것으로 확인되었다. 또한, 가장 효과가 우수한 것으로 확인된 70% 에탄올 수용액을 용매로 이용한 송화분 초음파 추출물을 500 μg/Ml 처리한 경우, 36.85 ± 1.70%의 세포 생존율이 측정되어, 다른 용매에 비해 유의적으로 간 보호 효능이 우수한 것이 확인되었다.
상기 세포 생존율을 이용하여 확인한 간 보호능의 결과를 재확인하기 위하여, 간세포 손상 시 혈액에 유리되어 나오는 것으로 알려진 혈청학적 지표 즉, GOT(glutamic oxaloacetic transaminase)와 LDH(lactate dehydrogenase)의 세포 배양액 내 함량을 측정하였다.
상기 GOT 함량 측정은 다음과 같은 방법으로 수행하였다. 상기 HpeG2 세포를 5 × 105 cells/ml의 농도로 6-well plate에 3 ml분주한 후 24시간 동안 배양하였다. 이후, 각 시료를 용배별로 500 μg/mL로 처리하고, 37℃의 온도 조건 및 5% CO2, 95% O2의 조건이 유지되는 CO2 배양기(incubator)를 이용하여 24시간 동안 배양한 다음, 1.2 mM 타크린을 처리하고, 5시간 더 배양한 후, 각각의 세포 배양액을 회수하였다. 상기 회수한 각각의 세포 배양액을 1,200 rpm에서 2분간 원심분리(Model SUPRA 21K, Hanil science Industrial, 대한민국)한 후 그 상등액을 수득하였다. 상기 수득한 상등액에 대해 GOT assay kit(아산제약, 대한민국)를 이용하여 GOT 활성을 측정하였다. 상기 GOT 측정용 기질액인 L-aspartic acid 및 α- ketoglutaric acid 1 mL을 37℃에서 5분간 방치한 다음 상기 수득한 상등액 0.2 mL과 잘 혼합하여 37℃에서 60분간 방치하였다. 이 후, 정색시액인 2,4-dinitrophenyl hydrazine을 1 mL 첨가하고, 실온에서 20분 방치한 다음, 0.4 N NaOH용액 10 ml와 혼합하고, 실온에서 10분간 방치 후 505 nm에서 증류수를 대조구로 하여 UV 측정기(UV/Vis spectrophotometer)를 사용하여 흡광도를 측정하였다. 양성대조군으로는 송화분 초음파 추출물 대신 실리마린(silymarin)을 사용하였다. 상기 측정결과를 도 4a에 나타내었다.
상기 도4a에 나타낸 바와 같이, 아무런 처리를 하지 않은 대조군(Control) 대비 타크린 처리를 통해 간 세포에 손상을 준 음성 대조군(NC)의 경우, GOT 함량이 85.08 ± 0.45 Kamen/mL로 나타나 현저하게 증가하는 것이 확인되었고, 간 보호제인 실리마린을 처리한 양성 대조군(PC)의 경우, GOT 함량이 55.08 ± 0.61 Kamen/Ml으로 음성 대조군 대비 약 35.26%의 GOT 함량이 감소되는 것으로 확인되었다. GOT는 간세포 안에 존재하며 간 손상에 의해 세포막이 파괴되면 세포 외로 유출되어 수치가 상승하며, 간세포 보호 작용이 있는 약물은 유리된 이들 효소의 양을 감소시키는 것으로 알려져 있어, 간 보호제인 실리마린의 간 세포 보호능이 확인되었다. 시료 군에서는 음성 대조군에 대비 28.36%의 GOT 함량을 감소시켜 다른 용매에 비해 약 140%를 상회하는 세포 보호능을 나타낸 70% 에탄올 수용액을 이용하여 제조된 송화분 초음파 추출물(70% ethanol-PS)이 간 세포 보호능이 가장 우수한 것으로 확인되어, 세포 생존율을 통해 확인한 결과와 일치하는 것으로 확인되었다.
상기 LDH 함량 측정은 다음과 같은 방법으로 수행하였다. 상기 HpeG2 세포를 5 × 105 cells/ml의 농도로 6-well plate에 3 ml분주한 후 24시간 동안 배양하였다. 이후, 각 시료를 용배별로 500 μg/mL로 처리하고, 37℃의 온도 조건 및 5% CO2, 95% O2의 조건이 유지되는 CO2 배양기(incubator)를 이용하여 24시간 동안 배양한 다음, 1.2 mM 타크린을 처리하고, 5시간 더 배양한 후, 각각의 세포 배양액을 회수하였다. 상기 회수한 각각의 세포 배양액을 1,200 rpm에서 2분간 원심분리(Model SUPRA 21K, Hanil science Industrial, 대한민국)한 후 그 상등액을 수득하였다. 상기 수득한 상등액에 대해 LDH assay kit(아산제약, 대한민국)를 이용하고, 340 nm에서 UV 측정기(UV/Vis spectrophotometer)를 사용하여 흡광도를 측정하여 LDH 활성을 측정하였다. 양성대조군으로는 송화분 초음파 추출물 대신 실리마린(silymarin)을 사용하였다. 상기 측정결과를 도 4b에 나타내었다.
상기 도4b에 나타낸 바와 같이, 아무런 처리를 하지 않은 대조군(Control) 대비 타크린 처리를 통해 간 세포에 손상을 준 음성 대조군(NC)의 경우, LDH 함량이 207.83% 로 현저하게 증가하는 것이 확인되었고, 간 보호제인 실리마린을 처리한 양성 대조군(PC)의 경우, LDH 함량이 대조군 대비 168.49%만이 증가되어, 음성 대조군에 비해 LDH 함량이 현저하게 감소되어 36.48%의 LDH 증가 저해 효과가 확인되었다. LDH는 간세포 안에서 젖산(lactate)을 피루빈산(pyruvate)로 전환시키는 효소로, 세포에 손상이 있는 경우 세포외로 유리되므로, 간 세포에 손상이 있는 경우, 세포 외로 유출되어 수치가 상승하고 간세포 보호 작용이 있는 약물은 이들 효소의 배지로 유리되는 양을 감소시키는 것으로 알려져 있어, 간 보호제인 실리마린의 간 세포 보호능이 확인되었다. 시료 군에서는 음성 대조군에 대비 25.97%의 LDH 함량을 감소시켜 다른 용매에 비해 우수한 세포 보호능을 나타낸 70% 에탄올 수용액을 이용하여 제조된 송화분 초음파 추출물(70% ethanol-PS)이 간 세포 보호능이 가장 우수한 것으로 확인되어, 세포 생존율과 GOT 감소량을 통해 확인한 결과와 일치하는 것으로 확인되었다.
제조예: 송화분 추출물을 이용한 제제
제조예 1. 산제의 제조
송화분 추출물 2 mg
유당 100 mg
탈크 10 mg
상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
제조예 2. 정제의 제조
송화분 추출물 2 mg
옥수수전분 100 mg
유당 100 mg
스테아린산 마그네슘 2 mg
상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
제조예 3. 캡슐제의 제조
송화분 추출물 2 mg
결정성 셀룰로오스 3 mg
락토오스 14.8 mg
마그네슘 스테아레이트 0.2 mg
통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
제조예 4. 액제의 제조
송화분 추출물 2 mg
이성화당 10 g
만니톨 5 g
정제수 적량
통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 정제수를 가하여 전체 100㎖로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조하였다.
제조예 5. 건강기능식품의 제조
송화분 추출물 2 mg
비타민 혼합물 적량
비타민 A 아세테이트 70 ㎍
비타민 E 1.0 ㎎
비타민 B1 0.13 ㎎
비타민 B2 0.15 ㎎
비타민 B6 0.5 ㎎
비타민 B12 0.2 ㎍
비타민 C 10 ㎎
비오틴 10 ㎍
니코틴산아미드 1.7 ㎎
엽산 50 ㎍
판토텐산 칼슘 0.5 ㎎
무기질 혼합물 적량
황산제1철 1.75 ㎎
산화아연 0.82 ㎎
탄산마그네슘 25.3 ㎎
제1인산칼륨 15 ㎎
제2인산칼슘 55 ㎎
구연산칼륨 90 ㎎
탄산칼슘 100 ㎎
염화마그네슘 24.8 ㎎
상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강기능식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강기능식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강기능식품 제조에 사용할 수 있다.

Claims (11)

  1. 송화분 추출물을 유효성분으로 포함하는 간 보호용 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 송화분 추출물은 송화분 초음파 추출물인 것을 특징으로 하는 간 보호용 조성물.
  3. 제2항에 있어서,
    상기 송화분 초음파 추출물은 송화분에 70% 에탄올 수용액을 첨가한 후, 초음파 처리하여 제조된 것임을 특징으로 하는 간 보호용 조성물.
  4. 송화분 추출물을 유효성분으로 포함하는 간 질환 치료 또는 예방용 약학 조성물.
  5. 제4항에 있어서,
    상기 간 질환은 간 독성 질환, 약물성 간 손상, 바이러스성 간 손상, 간염, 지방간, 간경화 및 간암으로 이루어진 군 중에서 선택된 어느 하나인 간 질환 치료 또는 예방용 약학 조성물.
  6. 송화분 추출물을 유효성분으로 포함하는 간 보호 및 간 기능 개선용 식품 조성물.
  7. 제6항에 있어서,
    상기 송화분 추출물은 송화분 초음파 추출물인 것을 특징으로 하는 간 보호 및 간 기능 개선용 식품 조성물.
  8. 제7항에 있어서,
    상기 송화분 초음파 추출물은 송화분에 70% 에탄올 수용액을 첨가한 후, 초음파 처리하여 제조된 것임을 특징으로 하는 간 보호 및 간 기능 개선용 식품 조성물.
  9. 제8항에 있어서,
    상기 식품 조성물은 건강기능성 식품 조성물인 간 보호 및 간 기능 개선용 식품 조성물.
  10. 송화분 추출물을 유효성분으로 포함하는 간 질환 개선 또는 예방용 식품 조성물.
  11. 제10항에 있어서,
    상기 간 질환은 간 독성 질환, 약물성 간 손상, 바이러스성 간 손상, 간염, 지방간, 간경화 및 간암으로 이루어진 군 중에서 선택된 어느 하나인 간 질환 개선 또는 예방용 식품 조성물.
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