KR20200029074A

KR20200029074A - 애기달맞이꽃 및 수국꽃 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 상태 개선용 조성물 및 이의 제조방법

Info

Publication number: KR20200029074A
Application number: KR1020180106860A
Authority: KR
Inventors: 김대웅; 현홍준; 정수훈; 김재원; 김경태; 김대진
Original assignee: 엠제이 주식회사
Priority date: 2018-09-07
Filing date: 2018-09-07
Publication date: 2020-03-18
Also published as: WO2020050703A1; KR102123806B1

Abstract

본 발명은 애기달맞이꽃 및 수국꽃 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 상태 개선용 조성물 및 상기 조성물의 제조방법에 관한 것이다.
본 발명의 일 실시예는 애기달맞이꽃 및 수국꽃 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 상태 개선용 조성물을 제공한다.

Description

애기달맞이꽃 및 수국꽃 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 상태 개선용 조성물 및 이의 제조방법 {COMPOSITION FOR IMPROVEMENT OF SKIN CONDITION CONTAINING EVENING PRIMROSE AND HYDRANGEA FLOWER AS ACTIVE INGREDIENT AND METHOD OF PREPARING THE SAME}

본 발명은 애기달맞이꽃 및 수국꽃 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 상태 개선용 조성물 및 상기 조성물의 제조방법에 관한 것이다.

최근 여성들의 활발한 사회참여와 화장품 산업의 발달로 인하여 여성 뿐만 아니라 남성도 젊고 아름다운 피부에 관심을 갖게 되었으며, 아름다운 피부의 상징은 맑고 깨끗한 피부로 인식되고 있다. 그러나, 많은 양의 자외선에 노출되면 항산화제가 감소되고, 피부에 활성 산소종(reactive oxygen species, ROS)이 생성되며, 활성산소종인 하이드록실 라디칼(hydroxyl radical), 초과산화물 라디칼(superoxide radical) 및 지질 퍼옥사이드 라디칼(lipid peroxide radical) 등은 반응성이 매우 높아 피부의 주요구성물질인 지질, 단백질, 다당류 및 핵산과 반응하여 세포에 손상을 주고 피부 노화를 발생시키는 원인이 된다. 또한, 피부에 효소적, 비효소적 항산화 방어체계의 균형을 무너뜨려 산화스트레스(oxidative stress) 상태를 초래하여 피부는 거칠고 윤기가 없어지며, 이러한 과정의 반복은 주름 유발을 발생시킨다. 한편, 멜라닌은 피부에 색소 침착을 일으키고 피부발암에 중요한 역할을 하며 비정상적인 멜라닌 색소 침착은 기미, 주근깨, 노인성 검버섯과 관련된 피부생리적인 무질서의 원인이 된다. 자외선 조사에 의해 노출된 피부에서 멜라닌 합성은 티로시나아제(tyrosinase) 효소를 통해 시작된다. 따라서, 티로시나아제 저해제는 멜라닌 색소 침착의 치료와 피부 미백과 탈색소에 사용된다. 그러나, 알부틴(Arbutin), 누룩산(kojic acid), 리놀레산(linoleic acid)을 포함하는 많은 티로시나아제 저해제가 피부 미백에 광범위하게 사용되고 있으나, 많은 부작용을 가지고 있다.

따라서, 피부노화 방지를 위해서는 과잉의 활성 산소종 생성을 억제하고 또한 생성된 활성산소를 효율적으로 제거할 수 있어야 한다. 이에, 본 발명자들은 상기 문제에 대하여 연구하던 중 피부의 주름을 일으키는 효소들의 억제, 색소 침착을 진행하는 효소의 활성억제의 도움을 주는 애기달맞이꽃 및 수국꽃 추출물의 최적 혼합비율을 확인하여 피부 상태 개선용 조성물을 제조함으로써, 상기 조성물이 단일 추출물보다 향상된 천연 항산화 기능 및 미백 기능을 나타냄을 발견하여 본 발명을 완성하게 되었다.

이와 관련하여, 대한민국 등록특허 제10-0964723호는 야생화 추출물을 함유하는 화장료 조성물에 대하여 개시하고 있다.

본 발명은 전술한 문제를 해결하고자 안출된 것으로서, 본 발명의 일 실시예는 애기달맞이꽃 및 수국꽃 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 상태 개선용 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명의 다른 일 실시예는 상기 피부 상태 개선용 조성물의 제조방법을 제공한다.

본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 기술적 과제로 한정되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 기술적 과제들은 아래의 기재로부터 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.

전술한 기술적 과제를 달성하기 위한 기술적 수단으로서, 본 발명의 일 측면은,

애기달맞이꽃(Oenothera laciniata Hill) 및 수국꽃(Hydrangea macrophylla) 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 상태 개선용 조성물을 제공한다.

상기 애기달맞이꽃 및 수국꽃 추출물은 애기달맞이꽃 및 수국꽃의 건조 분쇄물을 혼합하여 물, C1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올, 아세톤, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로로메탄, 클로로포름, 헥산, 1,3-부틸렌글리콜 및 이들의 조합들로 이루어진 군으로부터 선택되는 용매로 추출한 것일 수 있다.

상기 분쇄된 애기달맞이꽃 및 수국꽃의 혼합 비율은 애기달맞이꽃 100 중량부 대비 수국꽃 50 중량부 내지 200 중량부인 것일 수 있다.

상기 애기달맞이꽃 및 수국꽃 추출물은 애기달맞이꽃 및 수국꽃 추출물을 감압농축한 후 용매 용해시킨 것일 수 있다.

상기 감압농축한 후 용매 용매시킨 추출물의 농도는 1 μg/mL 내지 150 μg/mL인 것일 수 있다.

상기 피부 상태 개선은 피부 주름 개선, 피부 노화 개선 또는 피부 미백인 것일 수 있다.

상기 피부 상태 개선용 조성물은 엘라스타아제(elastase) 및 티로시나아제(tyrosinase)를 저해하는 것을 특징으로 하는 것일 수 있다.

또한, 본 발명의 다른 일 측면은,

애기달맞이꽃 및 수국꽃을 열풍건조한 후 분쇄시키는 단계; 상기 분쇄된 애기달맞이꽃 및 수국꽃을 혼합시키는 단계; 상기 혼합된 애기달맞이꽃 및 수국꽃에 용매를 첨가하여 추출시키는 단계; 및 상기 추출된 애기달맞이꽃 및 수국꽃 추출물을 감압농축시키는 단계;를 포함하는 피부 상태 개선용 조성물의 제조방법을 제공한다.

상기 열풍건조는 50℃ 내지 80℃의 온도에서 12 시간 내지 30 시간 동안 수행되는 것일 수 있다.

상기 애기달맞이꽃 및 수국꽃의 혼합 비율은 애기달맞이꽃 100 중량부 대비 수국꽃 50 중량부 내지 200 중량부인 것일 수 있다.

상기 추출은 초음파를 가하여 수행되는 것일 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 따르면 상기 피부 상태 개선용 조성물은 애기달맞이꽃 및 수국꽃을 혼합한 추출물을 함유함으로써 단일 성분에 비하여 개선된 주름개선 효과, 피부미백 효과 및 항산화 효과를 가질 수 있다.

본 발명의 효과는 상기한 효과로 한정되는 것은 아니며, 본 발명의 상세한 설명 또는 특허청구범위에 기재된 발명의 구성으로부터 추론 가능한 모든 효과를 포함하는 것으로 이해되어야 한다.

도 1은 본 발명의 일 구현예에 따른 피부 상태 개선용 조성물의 제조방법을 나타낸 개략도이다.

이하, 본 발명을 더욱 상세하게 설명한다. 그러나 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 의해 본 발명이 한정되지 않으며 본 발명은 후술할 청구범위의 의해 정의될 뿐이다.

덧붙여, 본 발명에서 사용한 용어는 단지 특정한 실시예를 설명하기 위해 사용된 것으로, 본 발명을 한정하려는 의도가 아니다. 단수의 표현은 문맥상 명백하게 다르게 뜻하지 않는 한, 복수의 표현을 포함한다. 본 발명의 명세서 전체에서 어떤 구성요소를 '포함'한다는 것은 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성요소를 더 포함할 수 있다는 것을 의미한다.

본원의 제 1 측면은,

이하, 본원의 제 1 측면에 따른 상기 피부 상태 개선용 조성물을 상세히 설명한다.

본원의 일 구현예에 있어서, 상기 애기달맞이꽃은 바늘꽃과에 속하는 식물로서, 콜레스테롤 저하에 도움을 주고, 통증을 완화시키며 피부병이나 염증완화, 당뇨, 고혈압, 만성질환 등에 효과를 가지고 있으며, 인체에 독성이 거의 없는 것으로 알려져 있다. 또한, 상기 수국은 범의귀과(Saxifragaceae)에 속하는 관상용 관목으로 꽃 색이 토양에 따라 중성이면 흰색, 산성이면 청색, 알칼리성이면 분홍색으로 변하여 칠면조처럼 변한다고 해서 칠변화라고 하기도 한다. 전초를 팔선화(八仙花)라고 하며 약용으로 하고, 학질, 심열량계(心熱悸), 신낭풍(腎囊風) 및 번조(煩燥)를 치료하는 효과가 알려져 있다. 잎과 꽃에 항말라리아 작용을 하는 알칼로이드가 있으며, 꽃에 루틴(rutin), 뿌리에 다프네틴(daphnetin)과 움벨리페론(umbelliferone), 히드란게놀(hydrangenol), 히드란그산(hydrangenic acid), 루눌라르산(lunularic acid), 잎에는 스킴민(skimmin) 등이 함유되어 있다.

본원의 일 구현예에 있어서, 상기 애기달맞이꽃 및 수국꽃 추출물은 천연물로부터 추출물을 추출하는 당업계에 공지된 통상적인 방법에 따라, 즉, 통상적인 온도, 압력의 조건 하에서 통상적인 용매를 사용하여 분리할 수 있다. 또한, 상기 애기달맞이꽃 및 수국꽃 추출물은 애기달맞이꽃 및 수국꽃의 추출 부위가 제한되지 않으나, 바람직하게는 애기달맞이꽃 및 수국꽃의 잎, 줄기, 뿌리, 또는 꽃으로부터 얻은 추출물을 의미하며, 보다 바람직하게는 잎, 줄기 및 뿌리로 이루어지는 전초 또는 잎, 줄기, 뿌리 및 꽃으로 이루어지는 전초로부터 얻은 추출물을 의미하는 것일 수 있다. 더불어, 상기 애기달맞이꽃 및 수국꽃은 바람직하게 제주산 원료를 사용하는 것일 수 있다.

본원의 일 구현예에 있어서, 상기 애기달맞이꽃 및 수국꽃 추출물은 애기달맞이꽃 및 수국꽃의 건조 분쇄물을 혼합하여 물, C1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올, 아세톤, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로로메탄, 클로로포름, 헥산, 1,3-부틸렌글리콜 및 이들의 조합들로 이루어진 군으로부터 선택되는 용매로 추출한 것일 수 있다. 본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 추출 용매는 에탄올일 수 있으며, 이때 상기 에탄올의 농도는 50% 내지 90%일 수 있고, 보다 바람직하게 상기 농도는 70%일 수 있다.

본원의 일 구현예에 있어서, 상기 분쇄된 애기달맞이꽃 및 수국꽃의 혼합 비율은 애기달맞이꽃 100 중량부 대비 수국꽃 50 중량부 내지 200 중량부인 것일 수 있으며, 바람직하게 상기 혼합 비율은 애기달맞이꽃 100 중량부 대비 수국꽃 50 중량부일 수 있다. 상기 혼합 비율이 상기 범위를 벗어날 경우 상기 피부 상태 개선용 조성물의 항산화 활성 및 엘라스타아제 및 티로시나아제 효소 저해 활성이 저하될 수 있다.

본원의 일 구현예에 있어서, 상기 애기달맞이꽃 및 수국꽃 추출물은 애기달맞이꽃 및 수국꽃 추출물을 감압농축한 후 용매 용해시킨 것일 수 있다.

본원의 일 구현예에 있어서, 상기 감압농축한 후 용매 용매시킨 추출물의 농도는 1 μg/mL 내지 150 μg/mL인 것일 수 있으며, 바람직하게 상기 농도는 1 μg/mL 내지 100 μg/mL일 수 있다. 상기 농도가 1 μg/mL 미만일 경우 상기 피부 상태 개선용 조성물의 항산화 활성 및 엘라스타아제 및 티로시나아제 효소 저해 활성이 저하될 수 있다.

본원의 일 구현예에 있어서, 상기 피부 상태 개선은 피부 주름 개선, 피부 노화 개선 또는 피부 미백인 것일 수 있다.

본원의 일 구현예에 있어서, 상기 피부 상태 개선용 조성물은 엘라스타아제(elastase) 및 티로시나아제(tyrosinase)를 저해하는 것을 특징으로 하는 것일 수 있다. 보다 구체적으로, 상기 엘라스타아제를 저해함으로써 주름 개선 효과를 나타낼 수 있으며, 상기 티로시나아제를 저해함으로써 피부 미백 효과를 나타낼 수 있다.

본원의 일 구현예에 있어서, 상기 피부 상태 개선용 조성물은 화장료 조성물의 형태로 사용될 수 있으며, 이 경우 상기 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 로션, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다. 또한, 화장품학적 조성물로서 사용될 경우 상기 피부 상태 개선용 조성물과 담체 성분 이외에, 화장품학적 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예를 들어, 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제를 포함하는 것일 수 있다.

본원의 일 구현예에 있어서, 상기 피부 상태 개선용 조성물은 멜라닌 색소 과다 침착 질환 질환의 치료 또는 예방 용도의 약제학적 조성물의 활성성분으로 사용될 수 있으며, 이 경우 상기 약제학적 조성물은 상기 피부 상태 개선용 조성물 이외에 약제학적으로 허용되는 담체를 포함할 수 있다. 상기 담체는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 예를 들어, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘, 미네랄오일 및 이들의 조합들로 이루어진 군으로부터 선택되는 물질을 포함하는 것일 수 있다. 또한, 상기 약제학적 조성물은 상기 물질들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제 및 보존제 등을 추가로 포함하는 것일 수 있다.

본원의 제 2 측면은,

본원의 제 1 측면과 중복되는 부분들에 대해서는 상세한 설명을 생략하였으나, 본원의 제 1 측면에 대해 설명한 내용은 제 2 측면에서 그 설명이 생략되었더라도 동일하게 적용될 수 있다.

이하, 본원의 제 2 측면에 따른 피부 상태 개선용 조성물의 제조방법을 도 1을 참조하여 상세히 설명한다.

우선, 본원의 일 구현예에 있어서, 상기 피부 상태 개선용 조성물의 제조방법은 애기달맞이꽃 및 수국꽃을 열풍건조한 후 분쇄시키는 단계(S100)를 포함한다.

본원의 일 구현예에 있어서, 상기 열풍건조는 50℃ 내지 80℃의 온도에서 12 시간 내지 30 시간 동안 수행되는 것일 수 있으며, 바람직하게 60℃ 내지 70℃의 온도에서 20 시간 내지 25 시간 동안 수행되는 것일 수 있다. 또한, 상기 분쇄는 통상의 분쇄방법을 사용하는 것이면 제한이 없다.

다음으로, 본원의 일 구현예에 있어서, 상기 피부 상태 개선용 조성물의 제조방법은 상기 분쇄된 애기달맞이꽃 및 수국꽃을 혼합시키는 단계(S200)를 포함한다.

본원의 일 구현예에 있어서, 상기 애기달맞이꽃 및 수국꽃의 혼합 비율은 애기달맞이꽃 100 중량부 대비 수국꽃 50 중량부 내지 200 중량부인 것일 수 있다. 상기 혼합 비율이 상기 범위를 벗어날 경우 상기 피부 상태 개선용 조성물의 항산화 활성 및 엘라스타아제 및 티로시나아제 효소 저해 활성이 저하될 수 있다.

다음으로, 본원의 일 구현예에 있어서, 상기 피부 상태 개선용 조성물의 제조방법은 상기 혼합된 애기달맞이꽃 및 수국꽃에 용매를 첨가하여 추출시키는 단계(S300)를 포함한다.

본원의 일 구현예에 있어서, 상기 추출은 초음파를 가하여 수행되는 것일 수 있으며, 이때 가해지는 초음파의 세기는 10 kHz 내지 100 kHz일 수 있다.

본원의 일 구현예에 있어서, 상기 용매는 물, C1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올, 아세톤, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로로메탄, 클로로포름, 헥산, 1,3-부틸렌글리콜 및 이들의 조합들로 이루어진 군으로부터 선택되는 용매를 사용한 것일 수 있다. 또한, 상기 용매의 함량은 상기 혼합된 애기달맞이꽃 및 수국꽃 100 g 대비 8 배 내지 12 배 부피의 용매를 첨가하여 수행되는 것일 수 있으며, 바람직하게 10 배 부피의 용매를 첨가하여 수행되는 것일 수 있다.

본원의 일 구현예에 있어서, 상기 추출은 30℃ 내지 50℃의 온도에서 30 분 내지 150 분 동안 추출되는 것일 수 있으며, 바람직하게 40℃의 온도에서 1 시간 동안 추출되는 것일 수 있다. 또한, 상기 추출은 상기와 동일한 조건에서 3 회 내지 5 회 반복되어 수행되는 것일 수 있다.

다음으로, 본원의 일 구현예에 있어서, 상기 피부 상태 개선용 조성물의 제조방법은 상기 추출된 애기달맞이꽃 및 수국꽃 추출물을 감압농축시키는 단계(S400)를 포함한다.

본원의 일 구현예에 있어서, 상기 감압농축은 통상적으로 사용되는 방법에 따라 수행될 수 있으며, 예를 들어, 감압농축기를 사용하여 수행되는 것일 수 있다. 또한, 상기 감압농축은 상기 애기달맞이꽃 및 수국꽃 추출물을 여과지에 통과시켜 불순물을 제거한 후 감압농축기를 이용하여 40℃ 내지 45℃에서 6 시간 내지 8 시간 동안 수행되는 것일 수 있다.

이하, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 본 발명의 실시예에 대하여 상세히 설명한다. 그러나 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 한정되지 않는다.

실시예 1. 피부 상태 개선용 조성물의 제조

애기달맞이꽃 및 수국꽃을 65℃에서 24 시간 동안 열풍 건조한 후 분쇄하였다. 상기 건조 분쇄한 애기달맞이꽃 및 수국꽃을 중량비 1:1로 혼합한 후, 혼합물 100 g에 대하여 10 배(w/v)의 70% 에탄올을 첨가하고, 40℃에서 초음파 분산기(sonics vc750, USA)를 이용하여 40 kHz의 초음파로 1 시간 동안 추출한 후 상기 추출을 1 시간 간격으로 3 회 반복하였다. 상기에서 수득한 추출액을 감압농축기를 사용하여 농축한 후 용매에 농도별로 희석시켜 시료로서 사용하였다.

실시예 2. 피부 상태 개선용 조성물의 제조

애기달맞이꽃 및 수국꽃을 중량비 2:1로 혼합한 것을 제외하고는 상기 실시예 1과 동일하게 제조하였다.

실시예 3. 피부 상태 개선용 조성물의 제조

애기달맞이꽃 및 수국꽃을 중량비 1:2로 혼합한 것을 제외하고는 상기 실시예 1과 동일하게 제조하였다.

비교예 1. 피부 상태 개선용 조성물의 제조 (수국꽃 추출물 미포함)

애기달맞이꽃만을 이용하여 상기 실시예 1과 동일하게 제조하였다.

비교예 2. 피부 상태 개선용 조성물의 제조 (애기달맞이꽃 추출물 미포함)

수국꽃만을 이용하여 상기 실시예 1과 동일하게 제조하였다.

실험예 1. 항산화 활성 평가

(1) DPPH Radical-Scavenging Activity assay

DPPH 측정 방법은 변형된 Blois 등의 방법을 이용하였다. DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) 자유 라디칼(free radical)에 대한 전자공여능(Electron donating ability, EDA)을 측정하는 방법으로, DPPH가 항산화 활성이 있는 물질과 만나면 전자 혹은 수소를 제공 받아 라디칼이 소거되면서 처음의 보라색에서 노란색으로 탈색되는 정도 즉, 라디칼이 소거되는 정도를 마이크로 플레이트 리더(Microplate reader)로 측정하여 시료의 항산화 능력을 평가 하였다.

구체적으로, 상기 실시예 1 내지 3 및 비교예 1 및 2 20 μL에 농도별로 0.2 mM DPPH(1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) 용액 180 μL를 넣고 10 분간 암 반응시킨 후 마이크로 플레이트 리더 (모델명: Tecan AT/sunrise TW)를 통해 잔존하는 DPPH 자유 라디칼(free radical) 을 515 nm에서 측정하였다. 기준값(control)의 흡광도 값은 0.94 내지 0.97 범위가 되게 하였으며, DPPH 라디칼(radical) 소거활성은 시료 용액의 첨가구와 무 첨가구 사이의 흡광도 차이를 백분율로 나타내었다. 대조군으로는 아스코르브산(Ascorbic acid, Vitamin C)을 사용하였다.

<식 1>

상기 결과를 하기 표 1에 나타내었다.

[표 1]

상기 표 1에 나타낸 바와 같이 실시예 및 비교예 각각의 시료 농도에 따른 라디칼(radical) 소거율을 확인한 결과, 혼합 추출물(실시예 1 내지 3)의 경우 각각의 단독 추출물(비교예 1 및 2) 보다 높은 항산화 활성이 나타났으며, 실시예 2(애기달맞이꽃 추출물 및 수국꽃 추출물, 2:1) 100 μg/mL에서 52.71%의 가장 높은 라디칼(radical) 소거율을 나타내었다.

(2) ABTS Radical Scavenging Activity assay

ABTS+ 라디칼(radical) 소거 활성은 Re 등의 방법을 이용하여 측정하였다. ABTS [2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid) diammonium salt] 7.0 mM을 2.45 mM 포타슘 퍼설페이트(Potassium persulfate) 와 25℃에서 16 시간 동안 암반응 시켜 ABTS+ 를 제조한 후 사용하며, 상기 ABTS 자유 라디칼이 항산화 활성이 있는 물질과 만나면, 라디칼이 소거되면서 짙은 청록색에서 투명한색으로 탈색되는데 탈색되는 정도 즉, 라디칼이 소거되는 정도를 마이크로 플레이트 리더(Microplate reader)로 측정하여 시료의 항산화 능력을 평가하였다.

구체적으로, 상기 실시예 1 내지 3 및 비교예 1 및 2 20 μL에 농도별로 라디칼이 형성된 ABTS 용액 180 μL을 가하여 실온에서 15분 동안 암반응 시킨 후 700 nm에서 흡광도를 측정하였다. 기준값(control)의 흡광도는 700 nm에서 흡광도 값이 0.70±0.02가 되도록 희석하였다. 대조군으로는 아스코르브산(Ascorbic acid, Vitamin C)을 사용하였다.

<식 2>

상기 결과를 하기 표 2에 나타내었다.

[표 2]

상기 표 2에 나타낸 바와 같이 실시예 및 비교예 각각의 시료 농도에 대하여 ABTS Radical Scavenging Activity assay를 이용해 항산화 효과에 관한 실험을 진행하였다. 각각 시료 농도에 따른 라디칼(radical) 소거율을 확인한 결과, 혼합 추출물(실시예 1 내지 3)의 경우 각각의 단독 추출물(비교예 1 및 2) 보다 높게 항산화 활성이 나타났으며, 실시예 2(애기달맞이꽃 추출물 및 수국꽃 추출물, 2:1) 100 μg/mL에서 74.07%의 가장 높은 라디칼(radical) 소거율을 나타내었다.

실험예 2. 효소 저해 활성 평가

(1) Elastase inhibition assay

엘라스티아제(Elastase) 저해능 측정은 James 등의 방법을 응용하여 사용하였다. 기질 [N-succinyl-(L-Ala)3-p-nitroanilide]을 DMSO에 녹여 6.25 mM 용액 제조한 후, 0.15 M Tris-HCl 버퍼(buffer, pH 8.0)와 1:12의 비율로 섞어주었다. 그 후, 96 웰 플레이트(well plate)에 실시예 1 내지 3 및 비교예 1, 2의 농도별 샘플(sample) 20 μL와 버퍼(buffer)를 혼합한 기질 130 μL을 넣고, 405 nm 에서 흡광도 측정(Blank)한 후, 버퍼(buffer)와 혼합한 엘라스티아제(Elastase, Porcine pancreas elastase, PPE) 50 μL을 넣고 25℃에서 15 분간 반응시킨 후 마이크로 플레이트 리더(Microplate reader) 를 통해 405 nm에서 흡광도를 측정하였다. 저해활성 정도는 퍼센트(%)단위로 표기하며, 퍼센트 값은 하기 식 3과 같은 방법으로 계산하였다. 엘라스티아제(Elastase)의 대조군으로는 올레아놀산(oleanolic acid)을 사용하였다.

<식 3>

상기 식 3에서 S는 샘플(sample) 흡광도이고, SB는 효소를 넣기 전 샘플(sample) 흡광도이고, C는 기준값(control)의 흡광도이고, CB는 효소를 넣기 전 기준값(control) 흡광도이다.

상기 결과를 하기 표 3에 나타내었다.

[표 3]

상기 표 3에 나타낸 바와 같이 실시예 및 비교예 각각의 시료 농도에 대하여 Elastase inhibition assay를 이용하여 주름생성 관련 효소 저해 활성 실험을 진행하였다. 각각 시료 농도에 따른 효소 저해활성을 확인한 결과, 혼합 추출물(실시예 1 내지 3)의 경우 각각의 단독 추출물(비교예 1 및 2) 보다 높게 효소 저해 활성이 나타났으며, 실시예 2(애기달맞이꽃 추출물 및 수국꽃 추출물, 2:1) 100 μg/mL에서 66.24%의 가장 높은 엘라스티아제(Elastase) 저해 활성을 나타내었다.

(2) Tyrosinase inhibition assay

티로시나아제(Tyrosinase) 저해능 측정은 Ishihara 등의 방법을 응용하여 사용하였다. 티로시나아제(Tyrosinase, Mushroom tyrosinase) 효소에 0.1 M 포타슘 포스페이트(potassium phosphate) 완충용액 (pH 6.8)을 가하여 250 unit/mL로 효소용액을 제조하였다. 그 후, 96 웰 플레이트(well plate) 안에 실시예 1 내지 3 및 비교예 1, 2의 농도별 샘플(sample) 20 μL, 2 mM의 L-tyrosin 130 μL 을 각각 혼합하여 480 nm에서 측정(Blank)한 후, 250 unit/mL 티로시나아제(Tyrosinase) 효소 용액 50 μL를 가하고 35℃에서 10 내지 15분 정도 반응시키고 480 nm에서 측정(Data)하였다. 기준값(control)의 흡광도는 0.3 내지 0.4범위가 되게 하였다. 저해활성 정도는 퍼센트(%)단위로 표기하며, 퍼센트 값은 하기 식 4와 같은 방법으로 계산하였다. 티로시나아제(Tyrosinase)의 대조군으로는 알부틴(Arbutin)을 사용하였다.

<식 4>

상기 식 4에서 S는 샘플(sample) 흡광도이고, SB는 효소를 넣기 전 샘플(sample) 흡광도이고, C는 기준값(control)의 흡광도이고, CB는 효소를 넣기 전 기준값(control) 흡광도이다.

상기 결과를 하기 표 4에 나타내었다.

[표 4]

상기 표 4에 나타낸 바와 같이 실시예 및 비교예 각각의 시료 농도에 대하여 Tyrosinase inhibition assay를 이용하여 멜라닌 생성 관련 효소 저해 활성 실험을 진행하였다. 각각 시료 농도에 따른 효소 저해활성을 확인한 결과, 혼합 추출물(실시예 1 내지 3)의 경우 각각의 단독 추출물(비교예 1 및 2) 보다 높게 효소 저해 활성이 나타났으며, 실시예 2(애기달맞이꽃 추출물 및 수국꽃 추출물, 2:1) 100 μg/mL에서 23.79%의 가장 높은 티로시나아제(Tyrosinase) 저해 활성을 나타내었다.

전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 예를 들어, 단일형으로 설명되어 있는 각 구성 요소는 분산되어 실시될 수도 있으며, 마찬가지로 분산된 것으로 설명되어 있는 구성 요소들도 결합된 형태로 실시될 수 있다.

본 발명의 범위는 후술하는 특허청구범위에 의하여 나타내어지며, 특허청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 균등 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims

애기달맞이꽃(Oenothera laciniata Hill) 및 수국꽃(Hydrangea macrophylla) 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 상태 개선용 조성물.
제1항에 있어서,
상기 애기달맞이꽃 및 수국꽃 추출물은 애기달맞이꽃 및 수국꽃의 건조 분쇄물을 혼합하여 물, C1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올, 아세톤, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로로메탄, 클로로포름, 헥산, 1,3-부틸렌글리콜 및 이들의 조합들로 이루어진 군으로부터 선택되는 용매로 추출한 것인 피부 상태 개선용 조성물.
제2항에 있어서,
상기 분쇄된 애기달맞이꽃 및 수국꽃의 혼합 비율은 애기달맞이꽃 100 중량부 대비 수국꽃 50 중량부 내지 200 중량부인 것인 피부 상태 개선용 조성물.
제1항에 있어서,
상기 애기달맞이꽃 및 수국꽃 추출물은 애기달맞이꽃 및 수국꽃 추출물을 감압농축한 후 용매 용해시킨 것인 피부 상태 개선용 조성물.
제4항에 있어서,
상기 감압농축한 후 용매 용매시킨 추출물의 농도는 1 μg/mL 내지 150 μg/mL인 것인 피부 상태 개선용 조성물.
제1항에 있어서,
상기 피부 상태 개선은 피부 주름 개선, 피부 노화 개선 또는 피부 미백인 것인 피부 상태 개선용 조성물.
제1항에 있어서,
상기 피부 상태 개선용 조성물은 엘라스타아제(elastase) 및 티로시나아제(tyrosinase)를 저해하는 것을 특징으로 하는 피부상태 개선용 조성물.
애기달맞이꽃 및 수국꽃을 열풍건조한 후 분쇄시키는 단계;
상기 분쇄된 애기달맞이꽃 및 수국꽃을 혼합시키는 단계;
상기 혼합된 애기달맞이꽃 및 수국꽃에 용매를 첨가하여 추출시키는 단계; 및
상기 추출된 애기달맞이꽃 및 수국꽃 추출물을 감압농축시키는 단계;
를 포함하는 피부 상태 개선용 조성물의 제조방법.
제8항에 있어서,
상기 열풍건조는 50℃ 내지 80℃의 온도에서 12 시간 내지 30 시간 동안 수행되는 것인 피부 상태 개선용 조성물의 제조방법.
제8항에 있어서,
상기 애기달맞이꽃 및 수국꽃의 혼합 비율은 애기달맞이꽃 100 중량부 대비 수국꽃 50 중량부 내지 200 중량부인 것인 피부 상태 개선용 조성물의 제조방법.
제8항에 있어서,
상기 추출은 초음파를 가하여 수행되는 것인 피부 상태 개선용 조성물의 제조방법.