KR20200013231A - 항암 조합 요법 - Google Patents

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KR20200013231A
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프랑크 힐버그
마르코 한스 호프만
마르쿠스 레슈케
플라비오 솔카
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베링거 인겔하임 인터내셔날 게엠베하
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Abstract

본 발명은 암 치료를 위한 특정 이중 특이적, VEGF 및 Ang2 결합 분자와 PD1 길항제의 조합 사용에 관한 것이다. 본 발명은 추가로 이러한 결합 분자 및 길항제를 포함하는 약학적 조성물 및 키트에 관한 것이다.

Description

항암 조합 요법
본 발명은 암 치료에서의 조합 요법 및 이러한 조합 요법에 사용하기 위한 화합물에 관한 것이다. 조합 화합물은 항체 유도체와 같은 이중 특이적 결합 분자 및 PD-1 길항제이다.
혈관신생은 고형 종양 성장 및 생존을 위한 필요 조건과 영양학적 혈액 공급을 제공하기 위한 새로운 혈관 발생이다. 암 요법에서 혈관신생 경로에 관여하는 주요 분자를 표적으로 하는 접근법이 이루어졌다. 이들은 혈관 내피 성장 인자 (VEGF)가 가장 강력한 혈관 형성 성장 인자로 간주되기 때문에 VEGF 신호 전달 경로의 억제 모드를 포함한다.
폐암은 암 관련 사망률의 주요 원인으로, 2012년 전 세계적으로 거의 160 만명이 사망했고 전체 암 사망률의 거의 20%를 차지한다 (Molina et al., Mayo Clin Proc. 2008;83(5):584-594; Chan et al., Transl Lung Cancer Res. 2014;4(1):36-54). 폐암의 가장 흔한 유형은 모든 폐암의 약 85%를 차지하는 비소세포 폐암 (NSCLC)이다 (Chen et al. Nat Rev Cancer 2014;14:535-546; Nawaz et al. Nat Rev Drug Discov. 2016;15:229-230). 현재 NSCLC는 다양한 병리생리학적 특성을 갖는 이종성 질환 세트를 포함하는 것으로 이해되는데, 그 중에서도 폐선암종, 편평세포 암종 (SCC) 및 대세포 암종이 가장 두드러진 하위 유형이다.
최근에, 암, 특히 NSCLC를 위해, 화학요법 및 방사선 요법 이외에 진단시 국소 진행성 또는 전이성 질환을 가진 환자를 위한 다양한 새로운 치료 옵션이 개발되었다. 이러한 새로운 치료 방법은 예를 들어 소분자 억제제 또는 수용체 모노클로날 항체 (mAb)를 포함하는 표적화 요법이며 폐암에서 빈번한, 표피 성장 인자 수용체 (EGFR)와 같은 수용체 티로신 키나제 (TK)의 변경 및 혈관신생 경로의 변경을 포함한 주요 세포 신호 전달 및 조절 경로의 변경을 기반으로 한다. 최근 연구의 대부분은 EGFR의 돌연변이 및 EGFR 티로신 키나제 억제제 및 크리조티닙에 의해 억제되는 역형성 림프종 키나제 (ALK)의 비정상적인 융합에 초점을 맞추고 있다. 또한 VEGF를 표적으로 하는 모노클로날 항체 베바시주맙의 투여를 화학요법과 조합하면 결장직장암 (Hurwitz et al. New Eng J Med 2004;350:2335-2342) 또는 진행성 비편평 NSCLC (Sandler et al. J Clin Oncol 2005　23(16s pt 1):2s) 환자의 생존율이 현저하게 개선되는 것으로 나타났다. VEGF 경로에 직접적으로 관련된 차단 성분의 치료 외에, 예를 들어 VEGF와 같은 다른 혈관신생 인자의 기능을 가능하게 함으로써 혈관 재형성을 제어하는 Tie2 수용체 티로신 키나제의 리간드인 안지오포이에틴2 (Ang2)가 암 치료에서 또 다른 매력적인 표적이 되어 왔다.
WO2010/040508 및 Kienast et al. (Clin Cancer Res; 19(24), 2013)은 이중 특이적 항-VEGF/항-Ang-2 항체인 바누시주맙 및 암 치료에서의 그의 용도를 개시한다.
EP2694546 B1 및 WO2012/131078 A1은 암 및 기타 질환의 치료에 사용되는, VEGF-결합 면역글로불린 단일 가변 도메인 및 Ang2-결합 면역글로불린 단일 가변 도메인, 및 추가로 혈청 알부민 결합 면역글로불린 단일 가변 도메인을 포함하는 이중 특이적 결합 분자에 관한 것이다.
WO2016/170039 A1은 안지오포이에틴 2에 특이적으로 결합하는 항체와 프로그램사 1 폴리펩티드 (PD-1)에 특이적으로 결합하는 항체와의 조합 요법에 관한 것이다.
WO2016/170040 A1은 안지오포이에틴 2에 특이적으로 결합하는 항체 및 VEGF에 특이적으로 결합하는 항체와 프로그램사 리간드 1 (PD-L1)에 특이적으로 결합하는 항체와의 조합 요법에 관한 것이다.
모든 접근법에도 불구하고, 암 환자를 위한 개선된 치료 옵션이 여전히 필요하다. 따라서, 본 발명의 목적은 개선된 치료 효능 및 적용성을 위해 암 요법에서의 약학적 조성물 및 방법을 제공하는 것이다.
발명의 간단한 요약
본 발명은 T 세포 수용체 신호를 음성적으로 조절하는 프로그램사 1 (PD-1)-면역 억제 단백질에 대한 길항제와 함께 이중 특이적 항-VEGF/항-Ang-2 항체로 환자를 치료하는 방법을 제공한다. 치료는 종양 성장의 현저한 감소 또는 심지어 종양 수축으로 이어진다 (도 1). 따라서, 본 발명은 이중 특이적 항-VEGF/항-Ang-2 항체 및 PD-1 길항제를 포함하는 조합 요법을 제공한다.
상세한 측면으로, 본 발명은 종양성 또는 과증식성 질환, 특히 암 또는 종양 질환을 치료 및/또는 예방하는 방법에 관한 것으로, 이를 필요로 하는 환자에게
a) 치료 유효량의 화합물 A, 및
b) 치료 유효량의 화합물 B
를 투여하는 것을 포함하고,
여기서
● 화합물 A는 다음을 포함하는 이중 특이적 결합 분자이고:
o VEGF-결합 면역글로불린 단일 가변 도메인,
o 혈청 알부민 결합 면역글로불린 단일 가변 도메인, 및
o Ang2-결합 면역글로불린 단일 가변 도메인,
여기서
o 상기 VEGF 결합 면역글로불린 단일 가변 도메인은 하기 CDR 서열을 갖고:
― CDR1: SYSMG (서열 번호 1)
― CDR2: AISKGGYKYDAVSLEG (서열 번호 2)
― CDR3: SRAYGSSRLRLADTYEY (서열 번호 3)
o 상기 혈청 알부민 결합 면역글로불린 단일 가변 도메인은 하기 CDR 서열을 가지며:
― CDR1: SFGMS (서열 번호 4)
― CDR2: SISGSGSDTLYADSVKG (서열 번호 5)
― CDR3: GGSLSR (서열 번호 6),
o 상기 Ang2-결합 면역글로불린 단일 가변 도메인은 하기 CDR 서열을 갖고:
― CDR1: DYAIG (서열 번호 7)
― CDR2: AIRSSGGSTYYADSVKG (서열 번호 8)
― CDR3: VPAGRLRYGEQWYPIYEYDA (서열 번호 9),
여기서
● 화합물 B는 PD-1 길항제이다.
관련 측면에서, 본 발명은 각각 종양성 또는 과증식성 질환을 치료 및/또는 예방하는 방법에 사용하기 위한 화합물 A 및 화합물 B를 제공하며, 상기 방법은 화합물 A 및 화합물 B를 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함한다.
본 발명은 또한 종양성 또는 과증식성 질환을 치료 및/또는 예방하기 위한 약학적 조성물을 제조하기 위한 화합물 A 및 화합물 B의 용도에 관한 것이며, 여기서 화합물 A 및 화합물 B는 화합물 A 및 화합물 B의 조합 투여를 위해 의도되거나 제공된다.
다른 측면에서, 본 발명은
a) 화합물 A, 및
b) 화합물 B,
를 약학적 조성물을 개시하며,
여기서
● 화합물 A는 다음을 포함하는 이중 특이적 결합 분자이고:
o VEGF-결합 면역글로불린 단일 가변 도메인,
o 혈청 알부민 결합 면역글로불린 단일 가변 도메인, 및
o Ang2-결합 면역글로불린 단일 가변 도메인,
여기서
o 상기 VEGF 결합 면역글로불린 단일 가변 도메인은 하기 CDR 서열을 갖고:
― CDR1: SYSMG (서열 번호 1)
― CDR2: AISKGGYKYDAVSLEG (서열 번호 2)
― CDR3: SRAYGSSRLRLADTYEY (서열 번호 3)
o 상기 혈청 알부민 결합 면역글로불린 단일 가변 도메인은 하기 CDR 서열을 가지며:
― CDR1: SFGMS (서열 번호 4)
― CDR2: SISGSGSDTLYADSVKG (서열 번호 5)
― CDR3: GGSLSR (서열 번호 6),
o 상기 Ang2-결합 면역글로불린 단일 가변 도메인은 하기 CDR 서열을 갖고:
― CDR1: DYAIG (서열 번호 7)
― CDR2: AIRSSGGSTYYADSVKG (서열 번호 8)
― CDR3: VPAGRLRYGEQWYPIYEYDA (서열 번호 9),
여기서
● 화합물 B는 PD-1 길항제이다.
추가의 측면에서, 본 발명은
a) 화합물 A를 포함하는 제1 약학적 조성물 및
b) 화합물 B를 포함하는 제2 약학적 조성물,
을 포함하는 키트에 관한 것으로서, 여기서 화합물 A 및 화합물 B는 상기와 같이 정의된다.
도 1은 이중 특이적 결합 분자 VEGFANGBII22 (화합물 A) (용량: 15 mg/kg; 스케줄: 3-4 일마다) (A-B) 및 WO2010/040508 또는 Kienast et al. (2013) (상동)에 정의된 CrossMab 항-VEGF/항-Ang-2 항체 (바누시주맙) (용량: 15 mg/kg; 스케줄: 3-4 일마다) (C-D)를 각각 랫트 IgG2a 항-뮤린 PD-1 항체 EX 101359 (클론 RMP1-14) (용량: 10 mg/kg; 스케줄: 3-4 일마다)와 조합하여 9 명의 시험 개체 (빈 삼각형, 하부 선)를 처리한 경우의 종양 성장 억제를, 처리하지 않은 9 명의 개체 (채워진 원, 상부 선)과 비교하여 나타낸 것이다. 처리된 개체는 마우스 모델에서 항-VEGF 활성을 모방하기 위해 소분자 티로신 키나제 억제제 바탈라닙 (EXBF003) (용량: 100 mg/kg; 스케줄; 하루에 한 번)이 추가로 투여되었다. 마우스 개체 당 5 × 104 LL/2 피하 종양 세포의 주사 후 5 일에 치료를 시작하였다. 실험 35 일까지 mm3의 종양 용적 (A, C) 및 상응하는 무작위 상대적 종양 용적 (B, D)이 각각 제시된다.
도 2는 대조군/이소타입 항체, 항-PD1 항체 (용량: 10 mg/kg; 스케줄: 3-4 일마다), VEGFANGBII22 (용량: 15 mg/kg; 스케줄: 3-4 일마다), 바탈라닙 (용량: 100 mg/kg; 스케줄; 하루에 한 번), 바탈라닙 + 항-PD1 항체, 바탈라닙 + 항-PD1 항체 + VEGFANGBII22 또는 항-PD1 항체 + VEGFANGBII22로 처리된 마우스의 평균 생존을 나타낸다. 각각의 처리 그룹은 10 마리의 개별 종양 보유 무작위 마우스로 구성되었다. 마우스 개체 당 5 × 104 LL/2 피하 종양 세포의 주사 후 3 일에 치료를 시작하였다.
발명의 상세한 설명
본 발명은 모두 화합물 A 및 화합물 B의 조합 요법 또는 조합 제공에 관한 방법, 사용을 위한 화합물, 화합물의 용도, 약학적 조성물 및 키트에 관한 것으로,
여기서
● 화합물 A는 다음을 포함하는 이중 특이적 결합 분자이고:
o VEGF-결합 면역글로불린 단일 가변 도메인,
o 혈청 알부민 결합 면역글로불린 단일 가변 도메인, 및
o Ang2-결합 면역글로불린 단일 가변 도메인,
여기서
o 상기 VEGF 결합 면역글로불린 단일 가변 도메인은 하기 CDR 서열을 갖고:
― CDR1: SYSMG (서열 번호 1)
― CDR2: AISKGGYKYDAVSLEG (서열 번호 2)
― CDR3: SRAYGSSRLRLADTYEY (서열 번호 3)
o 상기 혈청 알부민 결합 면역글로불린 단일 가변 도메인은 하기 CDR 서열을 가지며:
― CDR1: SFGMS (서열 번호 4)
― CDR2: SISGSGSDTLYADSVKG (서열 번호 5)
― CDR3: GGSLSR (서열 번호 6),
o 상기 Ang2-결합 면역글로불린 단일 가변 도메인은 하기 CDR 서열을 가지며:
― CDR1: DYAIG (서열 번호 7)
― CDR2: AIRSSGGSTYYADSVKG (서열 번호 8)
― CDR3: VPAGRLRYGEQWYPIYEYDA (서열 번호 9),
여기서
● 화합물 B는 PD-1 길항제이다.
본 발명자들은 놀랍게도 화합물 A와 화합물 B의 조합이 화합물 A 단독 또는 화합물 B 단독의 요법과 비교하여 종양 성장의 현저한 감소 또는 심지어 수축을 초래한다는 것을 발견하였다. 화합물 A 및 B는 상승적으로 함께 작용하여 암을 감소시킬 수 있다.
본 발명에 따른 화합물 A는 이중 특이적 항-VEGF/항-Ang-2 결합 분자이다. 항혈관신생 요법은 여러 유형의 종양에 중요한 치료 옵션이 되었다. 이들 요법은 VEGF 또는 이의 수용체를 중화시켜 VEGF 경로를 차단하는데 초점을 두었다 (Ferrara et al., Nat Rev Drug Discov. 2004;3(5):391-400). 마우스에서의 최근 연구는 Tie2 수용체의 리간드인 안지오포이에틴2 (Ang2)가 다른 혈관신생 인자, 예컨대 VEGF의 기능을 가능하게 함으로써 혈관 재형성을 제어한다는 것을 보여 주었다. Ang2는 주로 저산소증 및 기타 혈관신생 인자에 의해 강하게 유도되는 내피 세포에 의해 발현되고, 혈관이 VEGF 및 FGF2에 반응할 수 있도록 종양 혈관 가소성을 조절하는 것으로 입증되었다 (Augustin et al., Nat Rev Mol Cell Biol. 2009;10(3):165-77). 이러한 역할에 따라, Ang2의 결실 또는 억제는 혈관신생의 감소로 이어진다 (Gale et al., Dev Cell. 2002;3(3):302-4) (Falcon et al., Am J Pathol. 2009;175(5):2159-70). 결장직장암, NSCLC 및 흑색종 환자에서 상승된 Ang2 혈청 농도가 보고되었다 (Goede et al., Br J Cancer. 2010 Oct　26;103(9):1407-14), (Park et al., Chest. 2007;132(1): 200-6), (Helfrich et al., Clin Cancer Res. 2009 15;15(4):1384-92). CRC 암에서 Ang2 혈청 수준은 항-VEGF 요법에 대한 치료 반응과 상관 관계가 있다.
Ang2는 Tie2 수용체 티로신 키나제에 대한 분비된 66 kDa 리간드이다 (Augustin et al., Nat　Rev Mol Cell Biol. 2009;10(3):165-77). Ang2는 N-말단 코일된 코일 도메인 및 C-말단 피브리노겐-유사 도메인으로 구성되며, 후자는 Tie2 상호 작용에 필요하다. Ang2는 주로 내피 세포에 의해 발현되고 저산소증 및 VEGF를 비롯한 다른 혈관신생 인자에 의해 강하게 유도된다. Tie2는 내피 세포, 조혈 줄기 세포 및 종양 세포에서 발견된다. Ang2-Tie2는 종양 혈관 가소성을 조절하여 혈관이 VEGF 및 FGF2에 반응하도록 하는 것으로 입증되었다.
Ang-Tie 시스템은 2 개의 수용체 (Tie1 및 Tie2)와 3 개의 리간드 (Ang1, Ang2 및 Ang4)로 구성된다 (Augustin et al., Nat Rev Mol Cell Biol. 2009;10(3):165-77). Tie2, Ang1 및 Ang2는 이 패밀리에서 가장 많이 연구된 구성원이며, Tie1은 오펀 수용체이고 혈관 재형성에 대한 Ang4의 역할은 여전히 정의될 필요가 있다. Ang2 및 Ang1은 Tie2 결합 및 활성화시 반대 기능을 매개한다. Ang2- 매개 Tie2 활성화는 내피 세포 활성화, 혈관주위세포 해리, 혈관 누출 및 혈관 자람 유도를 일으킨다. Ang2와 대조적으로, Ang1 신호 전달은 혈관주위세포의 동원에 의해 혈관 온전성을 유지하여 내피 세포 정지를 유지한다.
본 발명에 따라 사용될 수 있는 이중 특이적 항-VEGF/항-Ang-2 결합 분자는 예컨대 본원에 참고로 포함된 WO2012/131078에 개시되어 있다.
본 발명에 따른 화합물 B는 PD-1 자체 또는 그의 리간드 중 하나인 PD-L1 또는 PD-L2와 같은 단백질 프로그램사 1 (PD-1) 패밀리의 구성원에 대한 길항제이다. PD-1은 TCR 신호를 음성적으로 조절하는 면역 억제 단백질로 알려져 있다 (Ishida, Y. et al. (1992) EMBO J. 11:3887-3895; Blank, C. et al. (2006) Immunol. Immunother. 56(6):739-745). PD-1과 PD-L1 사이의 상호 작용은 면역 체크포인트로서 작용할 수 있으며, 이는 예를 들어 종양 침윤 림프구의 감소, T-세포 수용체 매개성 증식의 감소 및/또는 암성 세포에 의한 면역 회피로 이어질 수 있다 (Dong et al. (2003) J. Mol. Med. 81:281-7; Blank et al. (2005) Cancer Immunol. Immunother. 54:307-314; Konishi et al. (2004) Clin. Cancer Res. 10:5094-100). 면역 억제는 PD-1과 PD-L1 또는 PD-L2의 국소적 상호 작용을 억제함으로써 역전될 수 있으며; PD-1과 PD-L2의 상호 작용이 또한 차단될 때 효과는 상가적이다 (Iwai et al. (2002) Proc. Nat'l. Acad. Sci USA 99:12293-7; Brown et al. (2003) J. Immunol. 170:1257-66).
PD-1은 T 세포 조절제의 확장된 CD28/CTLA-4 패밀리의 억제 구성원이다. CD28 패밀리의 다른 구성원으로는 CD28, CTLA-4, ICOS 및 BTLA가 포함된다. PD-1은 다른 CD28 패밀리 구성원의 특성인 비쌍 시스테인 잔기가 결여된 단량체로서 존재하는 것으로 제안되었다. PD-1은 활성화된 B 세포, T 세포 및 단핵구 상에서 발현된다 (Okazaki et al. (2002) Curr Opin Immunol 14:391779-82; Bennett et al. (2003) J. Immunol. 170:711-8). PD-1에 대한 2 개의 리간드인 PD-L1 (B7-H1) 및 PD-L2 (B7-DC)가 동정되었으며, PD-1에 결합시 T 세포 활성화를 하향 조절하는 것으로 나타났다 (Freeman et al. (2000) J. Exp. Med. 192:1027-34; Carter et al. (2002) Eur. J. Immunol. 32:634-43). PD-L1 및 PD-L2는 모두 PD-1에 결합하는 B7 상동체이다. PD-L1은 각종 인간 암에 풍부하다 (Dong et al. (2002) Nat. Med. 8:787-9).
PD-1 유전자는 Ig 유전자 수퍼패밀리의 일부인 55 kDa 타입 I 막관통 단백질을 코딩한다 (Agata et al. (1996) Int Immunol. 8:765-72). 완전한 PD-1 서열은 GenBank 접근 번호 U64863 하에 찾을 수 있다. CTLA-4와 구조적으로 유사하지만, PD-1에는 B7-1 및 B7-2 결합에 중요한 MYPPY 모티프 (서열 번호 10)가 없다.
상기를 고려하여, PD-1 길항제로서의 모노클로날 항체는 최근 치료제, 보다 정확하게는 암 및 감염성 질환을 비롯한 다양한 질환을 치료하는데 사용하기 위해 개발되었다 (예를 들어, WO2006/121168; WO2015/112900). 이 항체 중 어느 하나가 본 발명에 따라 사용될 수 있다.
본 발명자들은 놀랍게도 상기/아래에 정의된 바와 같은 화합물 A 및 화합물 B의 조합물로 개체를 처리하는 경우 화합물 A 단독 또는 화합물 B 단독으로 처리하는 것과 비교하여 종양 용적이 상당히 더 강력하게 감소 또는 심지어 수축된다는 것을 발견하였다. 또한, 바누시주맙 및 동일한 PD-1 길항제를 사용한 개체의 처리와 비교할 때, 상기/이하에 정의된 바와 같은 화합물 A 및 화합물 B를 포함하는 조성물로 치료하면 종양 수축이 일어났다 (실시예 1; 도 1). 화합물 A 및 화합물 B는 모두 본 발명에 따른 활성제이다.
본 발명의 의미 내에서 PD-1 길항제는 PD-1과 그의 수용체(들) 또는 리간드(들)와의 상호 작용을 억제하는 화합물이다.
바람직하게는, PD-1 길항제는 PD-1의 억제제 또는 PD-L1의 억제제이다. PD-1 길항제는 바람직하게는 항-PD-1-항체 또는 항-PD-L1-항체일 수 있으며, 보다 바람직하게는 인간화 또는 완전 인간 항-PD-1 항체 또는 인간화 또는 완전 인간 항-PD- L1 항체일 수 있다. 이들 항체 중 어느 하나는 재조합 인간 항체일 수 있다.
본원에서 용어 "항체"는 가장 넓은 의미로 사용되며, 목적하는 항원 결합 활성을 나타내기만 하면, 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 다중 특이적 항체 (예를 들어 이중 특이적 항체), 단일 쇄 항체, 단일 도메인 항체 및 단편화된 항체 (또한 항체 단편으로도 지칭됨), 예컨대 Fab, F(ab)2, F(ab')2, Fab', 단일 쇄 가변 단편 (scFv) 또는 항체의 항원 결합 도메인을 포함하나 이에 제한되지 않는 다양한 항체 구조를 포함한다.
항체는 일반적으로 항체의 Fc 부분 (항체 불변 영역)에 의해 매개되는 이펙터 기능, 예컨대 ADCC 또는 CDC를 가질 수 있거나, 또는 예를 들어 Fc 부분이 결여되거나 또는 차단되고 마스킹된 Fc 부분, 본질적으로 보체 시스템과 같은 면역 세포 또는 면역 시스템 성분에 의해 인식되지 않거나 불충분하게 인식되는 Fc 부분이 결연된 이펙터 기능을 갖지 않을 수 있다.
항체 또는 이의 단편은 임의의 유형, 예를 들어 IgA, IgD, IgE, IgG, IgM일 수 있다. IgG가 바람직하다.
본원에 사용된 용어 "모노클로날 항체" 또는 "모노클로날 항체 조성물"은 단일 아미노산 조성물의 항체 분자의 제조물을 지칭한다.
"재조합 항체"는 재조합적으로 조작된 숙주 세포에 의해 생성된 항체이다. 이는 임의로 단리되거나 정제된다.
"인간 항체"는 인간 세포에 의해 생성되거나 인간 항체 레퍼토리 또는 다른 인간 항체-인코딩 서열을 이용하는 비인간 공급원으로부터 유래된 항체의 것에 상응하는 아미노산 서열을 보유하는 것이다. 인간 항체의 이러한 정의는 비인간 항원 결합 잔기를 포함하는 인간화된 항체를 구체적으로 배제한다.
본원에 사용된 용어 "재조합 인간 항체"는 재조합 수단에 의해 제조, 발현, 생성 또는 단리된 모든 인간 항체, 예를 들어 NS0 또는 CHO 세포와 같은 숙주 세포 또는 숙주 세포 내로 형질 감염된 재조합 발현 벡터를 사용하여 발현된 인간 면역글로불린 유전자 또는 항체에 대해 트랜스제닉된 동물 (예를 들어 마우스)로부터 단리된 항체를 포함하도록 의도된다. 이러한 재조합 인간 항체는 재배열된 형태로 가변 및 불변 영역을 갖는다. 본 발명에 따른 재조합 인간 항체는 생체 내 체세포과돌연변이를 거쳤다. 따라서, 재조합 항체의 VH 및 VL 영역의 아미노산 서열은 인간 생식 계열 VH 및 VL 서열로부터 유래되고 이와 관련되어 있지만, 생체 내에서 인간 항체 생식 계열 레퍼토리 내에 자연적으로 존재하지 않을 수 있는 서열이다.
"인간화된" 항체는 비인간 초가변 영역 (HVR)으로부터의 아미노산 잔기 및 인간 FR로부터의 아미노산 잔기를 포함하는 키메라 항체를 지칭한다. 특정 구체예에서, 인간화 항체는 실질적으로 적어도 하나, 전형적으로는 2 개의 가변 도메인을 모두 포함할 것이며, 여기서 모든 또는 실질적으로 모든 HVR (예를 들어 상보성 결정 영역 (CDR))은 비인간 항체의 것에 상응하고, 모든 또는 실질적으로 전체 프레임워크 영역 (FR)은 인간 항체의 것에 상응한다. 인간화 항체는 임의로 인간 항체로부터 유래된 항체 불변 영역의 적어도 일부를 포함할 수 있다. "인간화된 형태"의 항체, 예를 들어 비인간 항체는 인간화를 거친 항체를 지칭한다.
폴리펩티드 (예를 들어, 면역글로불린, 항체, 본 발명의 면역글로불린 단일 가변 도메인, 또는 일반적으로 항원-결합 분자 또는 이의 단편)의 "결합"은 특정 에피토프, 항원 또는 단백질 (또는 이의 적어도 일부, 단편 또는 에피토프)에 대해 "친화성을 갖는 것" 또는 "특이성을 갖는 것"을 의미한다.
일반적으로, 용어 "특이성"은 특정 항원-결합 분자 또는 항원-결합 단백질 (예컨대 본 발명의 면역글로불린 단일 가변 도메인) 분자가 결합할 수 있는 상이한 유형의 항원 또는 에피토프의 수를 지칭한다. 항원-결합 분자의 특이성은 이의 친화성 및/또는 결합성에 기초하여 결정될 수 있다. 항원과 항원-결합 단백질의 해리에 대한 평형 상수 (KD)로 표시되는 친화성은 항원-결합 단백질상의 항원-결합 부위와 에피토프 사이의 결합 강도의 척도이다: KD의 값이 작을수록, 에피토프와 항원-결합 분자 사이의 결합 강도가 더 강하다 (대안적으로, 친화성은 또한 친화성 상수 (KA), 즉 1/KD로 표현될 수 있음). 당업자에게 명백한 바와 같이 (예를 들어, 본원의 추가의 개시 내용에 기초하여), 친화성은 관심있는 특정 항원에 따라 그 자체로 공지된 방식으로 결정될 수 있다. 결합성은 이를 포함하는 항원 결합 분자 (예를 들어, 면역글로불린, 항체, 면역글로불린 단일 가변 도메인 또는 폴리펩티드)와 관련 항원 사이의 결합 강도의 척도이다. 결합성은 항원-결합 분자상의 그의 항원 결합 부위와 에피토프 사이의 친화성과 항원-결합 분자 상에 존재하는 관련 결합 부위의 수 둘 다와 관련된다.
예를 들어, 천연 항체는 단일 특이적이다. 본원에 사용된 용어 "단일 특이적 항체"는 각각 동일한 항원의 동일한 에피토프에 결합하는 하나 이상의 결합 부위를 갖는 항체를 의미한다. "다중 특이적 항체"는 2 이상의 상이한 에피토프 (예를 들어, 2, 3, 4 또는 그 이상의 상이한 에피토프)에 결합한다. 에피토프는 동일하거나 상이한 항원 상에 있을 수 있다. 다중 특이적 항체의 예는 2 개의 상이한 에피토프에 결합하는 "이중 특이적 항체"이다. 항체가 복수의 특이성을 갖는 경우, 인식된 에피토프는 단일 항원 또는 복수의 항원과 관련될 수 있다.
에피토프는 항체 또는 항원 결합 모이어티에 의해 결합된 항원 영역이다. 용어 "에피토프"는 항체 또는 항원 결합 모이어티에 특이적으로 결합할 수 있는 임의의 폴리펩티드 결정 인자를 포함한다. 특정 구체예에서, 에피토프 결정 인자는 아미노산, 글리칸 측쇄, 포스포릴 또는 설포닐과 같은 분자의 화학적 활성 표면 그룹들을 포함하고, 특정 구체예에서 특정 3차원 구조적 특성 및/또는 특정 전하 특성을 가질 수 있다. 형태적 및 비형태적 에피토프는 변성 용매의 존재하에 전자에 결합하나 후자에 대한 결합이 상실된다는 점에서 구별된다. 본원에 사용된 용어 "결합" 및 "특이적 결합"은 정제된 야생형 항원을 사용한 시험관 내 검정, 바람직하게는 플라즈몬 공명 검정 (BIAcore®, GE Healthcare Uppsala, Sweden)에서 항원의 에피토프에 대한 항체 또는 항원 결합 모이어티의 결합을 지칭한다.
항원에 대한 화합물 A 또는 화합물 B의 항체를 포함한 본 발명에 따른 결합 분자 (예를 들어, 항체)의 결합 친화성은 용어 ka (항체/항원 복합체로부터 항체의 회합에 대한 속도 상수), kD (해리 상수) 및 KD (kD/ka)에 의해 정의된다. 일 구체예에서 결합 또는 특이적으로 결합하는 것은 10- 8 mol/l 이하의 결합 친화성 (KD), 일 구체예에서 10-8 M 내지 10- 13 mol/l를 의미한다. 따라서, 본 발명에 따른 다중 특이적 항체는 10- 8 mol/l 이하의 결합 친화성 (KD), 예를 들어 10-8 내지 10- 13 mol/l의 결합 친화성 (KD)으로 특이적인 각 항원에 특이적으로 결합한다. 일 구체예에서, 결합 친화성 (KD)은 10-9 내지 10- 13 mol/l이다.
본원에 사용된 표현 "가변 도메인" 또는 "가변 영역" 또는 Fv는 항체를 항원에 결합시키는데 직접 관여하는 경쇄 및 중쇄의 각 쌍을 나타낸다. 경쇄의 가변 도메인은 "VL"로 약칭되고 중쇄의 가변 도메인은 "VH"로 약칭된다. 가변 경쇄 및 중쇄 도메인은 동일한 일반 구조를 가지며, 각 도메인은 3 개의 HVR (또는 CDR)에 의해 연결된 서열이 광범위하게 보존된 4 개의 프레임워크 (FR) 영역을 포함한다. 프레임워크 영역은 베타 시트 구조를 채택하고 CDR은 베타 시트 구조를 연결하는 루프를 형성할 수 있다. 각 쇄의 CDR은 프레임워크 영역에 의해 3차원 구조로 유지되고 다른 쇄로부터의 CDR과 함께 항원 결합 부위를 형성한다. 항체의 중쇄 및 경쇄 CDR3 영역은 본 발명에 따른 항체의 결합 특이성/친화성에서 특히 중요한 역할을 하므로 본 발명의 추가 목적을 제공한다.
본 출원 내에서 사용되는 용어 "불변 도메인" 또는 "불변 영역"은 가변 영역 이외의 항체의 도메인의 합을 나타낸다. 불변 영역은 항원의 결합에 직접 관여하지 않지만 다양한 이펙터 기능을 나타낸다.
본원에 개시된 항체에 사용된 "불변 도메인"은 바람직하게는 인간 기원이며, 이는 서브 클래스 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4의 인간 항체의 불변 중쇄 영역 및/또는 불변 경쇄 카파 또는 람다 영역 유래이다. 이러한 불변 도메인 및 영역은 현 기술 분야에 잘 알려져 있으며, 예를 들어 Kabat 등에 의해 기술되었다 ("Sequence of proteins of immunological interest", US Public Health Services, NIH Bethesda, MD, Publication No. 91).
항체의 "Fc 부분"은 항체와 항원의 결합에 직접 관여하지는 않지만 다양한 이펙터 기능을 나타낸다. "항체의 Fc 부분"은 당업자에게 널리 공지되어 있고 항체의 파파인 절단에 기초하여 정의된 용어이다. 중쇄의 불변 영역의 아미노산 서열에 따라, 항체 또는 면역글로불린은 IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM의 클래스로 분류되며, 이 중 일부는 서브 클래스 (이소타입), 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4, IgA1 및 IgA로 더 분류될 수 있다. 중쇄 불변 영역에 따라, 상이한 클래스의 면역글로불린은 각각 α, δ, ε, γ 및 μ로 칭해진다. 항체의 Fc 부분은 보체 활성화, C1q 결합 및 Fc 수용체 결합에 기초하여 ADCC (항체-의존적 세포-매개 세포 독성) 및 CDC (보체-의존적 세포 독성)에 직접 관여한다. 보체 인자 C1q가 대부분의 IgG 항체 서브 클래스의 Fc 부분에 결합함으로써 보체 활성화 (CDC)가 개시된다. 보체 시스템에 대한 항체의 영향은 특정 조건에 의존하지만, C1q에 대한 결합은 Fc 부분에서 정의된 결합 부위에 의해 야기된다. 이러한 결합 부위는 당 업계에 공지되어 있고 예를 들어 [Boackle, R.J., et al, Nature 282 (1979) 742-743; Lukas, T.J., et al, J. Immunol. 127 (1981) 2555-2560; Brunhouse, R., and Cebra, J.J., Mol. Immunol. 16 (1979) 907-917; Burton, D.R., et al, Nature 288 (1980) 338-344; Thommesen, J.E., et al, Mol. Immunol. 37 (2000) 995-1004; Idusogie, E.E., et al, J. Immunol.164 (2000) 4178-4184; Hezareh, M., et al, J. Virology 75 (2001) 12161-12168; Morgan, A., et al, Immunology 86 (1995) 319-324; EP 0 307 434]에서 기술되었다. 이러한 결합 부위는 예를 들면 L234, L235, D270, N297, E318, K320, K322, P331 및 P329이다 (Kabat, E.A.의 EU 인덱스에 따른 넘버링, 아래 참조). 서브 클래스 IgG1, IgG2 및 IgG3의 항체는 일반적으로 보체 활성화 및 Clq 및 C3 결합을 나타내는 반면, IgG4는 보체 시스템을 활성화하지 않으며 Clq 및 C3에 결합하지 않는다.
화합물 A와 관련하여, 용어 "이중 특이적 결합 분자"는 적어도 하나의 Ang2-결합 분자 (또는 "Ang2-결합 성분") 및 적어도 하나의 VEGF-결합 분자 (또는 "VEGF-결합 성분")를 포함하는 분자를 지칭한다. 이중 특이적 결합 분자는 복수의 Ang2-결합 분자 및/또는 복수의 VEGF 결합 분자를 함유할 수 있으며, 즉 이중 특이적 결합 분자가 바이파라토픽 (하기 정의된 바와 같은) Ang2-결합 분자 및/또는 바이파라토픽 VEG-결합 분자를 함유하는 경우, Ang2 또는 VEGF에 결합하는 분자의 일부, 즉 각각 그의 "Ang2-결합 성분" (또는 항-Ang2 성분) 또는 "VEGF-결합 성분" (또는 항-VEGF 성분)에 그럴 수 있다. 그러나, 이와 관련하여 단어 "이중 특이적"은 이중 특이적 결합 분자로부터 VEGF 및 Ang2 이외의 분자에 대한 결합 특이성을 갖는 추가의 결합 성분을 배제하는 것으로 해석되지 않아야 한다. 이러한 추가의 결합 성분의 비제한적인 예는 혈청 알부민에 결합하는 결합 성분이다.
달리 지시되지 않는 한, 용어 "VEGF-결합 분자" 또는 "Ang2-결합 분자"는 본원에 정의된 바와 같은 항-VEGF 또는 항-Ang2 항체, 항-VEGF 항체 또는 항-Ang2 항체 단편 ","항-VEGF 항체-유사 분자" 또는 "항-Ang2 항체-유사 분자", 및 이들 중 임의의 것과의 접합체를 포함한다. 항체는 모노클로날 및 키메라화된 모노클로날 항체를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 용어 "항체"는 단일 쇄 항체 및 선형 항체, 소위 예를 들어 WO2002/056910에 기술되어 있는 "SMIP" ("소형 모듈형 면역약제")를 포함하는 "항체-유사 분자" 또는 항체 단편뿐만 아니라 숙주 세포에서 재조합 발현에 의해 생성된 모노클로날 항체와 같은 완전한 면역글로불린을 포함하고; 항체-유사 분자는 본원에 정의된 바와 같은 면역글로불린 단일 가변 도메인을 포함한다. 항체-유사 분자의 다른 예는 면역글로불린 슈퍼 패밀리 항체 (IgSF) 또는 CDR-그라프팅된 분자이다.
"Ang2-결합 분자" 또는 "VEGF-결합 분자"는 각각 1가 표적 결합 분자 (즉, 각각의 표적의 하나의 에피토프에 결합하는 분자)뿐만 아니라 2가 또는 다가 결합 분자 (즉, 복수의 에피토프에 결합하는 분자, 예를 들어 하기 정의된 바와 같은 "바이파라토픽" 분자) 모두를 지칭한다. 복수의 Ang2 (또는 VEGF) 결합 면역글로불린 단일 가변 도메인을 함유하는 Ang2 (또는 VEGF) 결합 분자는 또한 "포맷된" 결합 분자로 지칭되며, 이들은 면역글로불린 단일 가변 도메인 외에도 표적 결합 성분 내에 이펙터 기능을 갖는 링커 및/또는 모이어티, 예를 들어 알부민 결합 면역글로불린 단일 가변 도메인과 같은 반감기 연장 모이어티, 및/또는 혈청 알부민과 같은 융합 파트너 및/또는 PEG와 같은 부착된 중합체를 포함할 수 있다
본원에 사용된 용어 "바이파라토픽 Ang2 (또는 VEGF)-결합 분자" 또는 "바이파라토픽 면역글로불린 단일 가변 도메인"은 본원에 정의된 제1 면역글로불린 단일 가변 도메인 및 제2 면역글로불린 단일 가변 도메인을 포함하는 결합 분자를 의미하고, 여기서 두 분자는 각각의 항원의 두 비중첩 에피토프에 결합한다. 바이파라토픽 결합 분자는 에피토프에 대해 상이한 특이성을 갖는 면역글로불린 단일 가변 도메인으로 구성된다.
덜 바람직하긴 하지만, 포맷된 결합 분자는 또한 동일하거나 중첩된 에피토프 또는 그들 각각의 항원을 인식하는 2 개의 동일한 면역글로불린 단일 가변 도메인 또는 2 개의 상이한 면역글로불린 단일 가변 도메인을 포함할 수 있다. 이 경우에, VEGF와 관련하여, 2 개의 면역글로불린 단일 가변 도메인은 VEGF 이량체를 형성하는 2 개의 단량체 각각에서 동일하거나 중첩되는 에피토프에 결합할 수 있다.
본 발명의 이중 특이적 결합 분자 및 이를 포함하는 조성물의 효능은 특정 질환 또는 관심 장애에 따라 임의의 적합한 시험관 내 검정, 세포-기반 검정, 생체 내 검정 및/또는 자체 공지된 동물 모델, 또는 이들의 임의의 조합을 사용하여 시험될 수 있다. 적합한 분석법 및 동물 모델은 당업자에게 명백할 것이며, 예를 들어 EP 2 694 546 B1에 기재된 분석법을 포함한다.
달리 지시되지 않는 한, 용어 "면역글로불린" 및 "면역글로불린 서열"은 - 본원에서 중쇄 항체를 지칭하거나 또는 통상적인 4-쇄 항체를 지칭하기 위해 사용되는지에 상관없이 - 전체 크기 항체, 이들의 개별 사슬뿐만 아니라 이의 모든 부분, 도메인 또는 단편 (각각 VHH 도메인 또는 VH/VL 도메인과 같은 항원-결합 도메인 또는 단편을 포함하나 이에 제한되지 않음)을 모두 포함하기 위해 일반적인 용어로 사용된다. 또한, 본원에 사용된 용어 "서열" (예를 들어, "면역글로불린 서열", "항체 서열", "(단일) 가변 도메인 서열", "VHH 서열" 또는 "단백질 서열"과 같은 용어)은 일반적으로 문맥이 보다 제한적인 해석을 요구하지 않는 한, 관련 아미노산 서열뿐만 아니라 이를 코딩하는 핵산 서열 또는 뉴클레오티드 서열 둘 다를 포함하도록 이해되어야 한다.
본원에 사용된 용어 "(폴리펩티드 또는 단백질)의 도메인"은 단백질의 나머지 부분과 독립적으로 3차 구조를 유지할 수 있는 능력을 가진 접힌 단백질 구조를 의미한다. 일반적으로, 도메인은 단백질의 개별 기능적 특성을 담당하며, 많은 경우에 단백질 및/또는 도메인의 나머지 기능의 손실없이 다른 단백질에 첨가, 제거 또는 전달될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "면역글로불린 도메인"은 항체 사슬 (예를 들어, 통상적인 4-쇄 항체 또는 중쇄 항체의 사슬)의 구형 영역 또는 기본적으로 이러한 구형 영역으로 구성된 폴리펩티드를 지칭한다. 면역글로불린 도메인은 면역글로불린이 항체 분자의 면역글로불린 접힘 특성을 보유하는 것을 특징으로 하며, 이는 임의로 보존된 디설파이드 결합에 의해 안정화된 두 베타 시트로 배열된 약 7 개의 역평행 베타 가닥의 2층 샌드위치로 구성된다. 면역글로불린 도메인은 (a) 가변 도메인(들), 즉 하나 이상의 면역글로불린 가변 도메인을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "면역글로불린 가변 도메인"은 당 업계에서 이하 "프레임워크 영역 1" 또는 "FR1"; "프레임워크 영역 2" 또는 "FR2"; "프레임워크 영역 3" 또는 "FR3"; 및 "프레임워크 영역 4" 또는 "FR4"로서 각각 지칭되는 4 개의 "프레임워크 영역"으로 본질적으로 이루어지며; 프레임워크 영역들이 각각 3 개의 "상보적 결정 영역" 또는 "CDR" (당 업계에서 이하 "상보적 결정 영역 1" 또는 "CDR1"; "상보적 결정 영역 2" 또는 "CDR2"; 및 "상보적 결정 영역 3" 또는 "CDR3"으로서 각각 지칭됨)에 의해 차단된 면역글로불린 도메인을 의미한다. 따라서, 면역글로불린 가변 도메인의 일반적인 구조 또는 서열은 다음과 같이 표시될 수 있다: FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4. 항원-결합 부위를 가짐으로써 항원에 대한 항체에 특이성을 부여하는 것은 면역글로불린 가변 도메인(들)이다. 본 발명의 분자는 VHH와 같은 면역글로불린 단일 가변 도메인을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "면역글로불린 단일 가변 도메인"은 추가의 가변 면역글로불린 도메인과 쌍을 이루지 않고 항원의 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있는 면역글로불린 가변 도메인을 의미한다. 본 발명의 의미에서 면역글로불린 단일 가변 도메인의 일례는 면역글로불린 단일 가변 도메인 VH 및 VL (VH 도메인 및 VL 도메인)과 같은 "도메인 항체"이다. 면역글로불린 단일 가변 도메인의 다른 예는 후술하는 바와 같이 낙타과에서 유래한 "VHH 도메인" (또는 "VHH"로 약칭)이다.
상기 정의를 고려하여, 통상적인 4-쇄 항체 (예를 들어, IgG, IgM, IgA, IgD 또는 IgE 분자; 당 업계에 공지됨) 또는 Fab 단편, F(ab')2 단편, 이황화 연결된 Fv 또는 scFv 단편과 같은 Fv 단편, 또는 이러한 통상적인 4-쇄 항체로부터 유래된 디아바디 (모두 당 업계에 공지됨)의 항원-결합 도메인은 일반적으로 면역글로불린 단일 가변 도메인으로 간주되지 않을 것인데, 왜냐하면, 이들 경우에, 항원의 각 에피토프에 대한 결합은 일반적으로 하나의 (단일) 면역글로불린 도메인에 의해서가 아니라 한쌍의 (조합) 면역글로불린 도메인, 예컨대 경쇄 및 중쇄 가변 도메인, 즉 VH-VL 쌍의 면역글로불린 도메인에 의해 발생하여 각각의 항원의 에피토프에 공동으로 결합하기 때문이다.
VHH, VHH 도메인, VHH 항체 단편 및 VHH 항체로도 알려진 "VHH 도메인"은 원래 "중쇄 항체" (즉, "경쇄가 없는 항체")의 항원 결합 면역글로불린 (가변) 도메인으로 기술되어 왔다 (Hamers-Casterman C, Atarhouch T, Muyldermans S, Robinson G, Hamers C, Songa EB, Bendahman N, Hamers R.: "Naturally occurring antibodies devoid of light chains"; Nature 363, 446-448 (1993)). 용어 "VHH 도메인"은 이들 가변 도메인을 통상적인 4-쇄 항체에 존재하는 중쇄 가변 도메인 (본원에서 "VH 도메인" 또는 "VH 도메인"으로 지칭됨) 및 통상적인 4-쇄 항체에 존재하는 경쇄 가변 도메인 (본원에서 "VL 도메인" 또는 "VL 도메인"으로 지칭됨)과 구별하기 위해 선택되었다. VHH 도메인은 추가 항원 결합 도메인없이 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있다 (통상적인 4-쇄 항체에서 VH 또는 VL 도메인과 대조적으로, 이 경우 에피토프는 VH 도메인과 함께 VL 도메인에 의해 인식된다). VHH 도메인은 단일 면역글로불린 도메인에 의해 형성된 작고 강력하고 효율적인 항원 인식 단위이다.
본 발명의 맥락에서, 용어 VHH 도메인, VHH, VHH 도메인, VHH 항체 단편, VHH 항체는 상호 교환적으로 사용되며 면역글로불린 단일 가변 도메인 (구조 FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4를 갖고 제2 면역글로불린 가변 도메인의 존재를 요구하지 않고 에피토프에 특이적으로 결합함)을 나타내며, 예를 들어, WO2009/109635, 도 1에 정의된 바와 같은 소위 "홀마크 잔기"로 불리는 VH 도메인과 구별된다.
면역글로불린 단일 가변 도메인의 아미노산 잔기, 예를 들어 VHH는 예를 들어, [Riechmann and Muyldermans, J. Immunol. Methods 231, 25-38 (1999)]의 도 2에 나타낸 바와 같이, 낙타과 유래의 VHH 도메인에 적용되는 Kabat 등에 의해 주어진 VH 도메인에 대한 일반적인 넘버링에 따라 번호가 매겨진다 ("Sequence of proteins of immunological interest", US Public Health Services, NIH Bethesda, MD, Publication No. 91). 이 넘버링에 따라,
- FR1은 위치 1-30에서의 아미노산 잔기를 포함하고,
- CDR1은 위치 31-35의 아미노산 잔기를 포함하고,
- FR2는 위치 36-49에서의 아미노산을 포함하고,
- CDR2는 위치 50-65에서의 아미노산 잔기를 포함하고,
- FR3은 위치 66-94에서의 아미노산 잔기를 포함하고,
- CDR3은 위치 95-102에서의 아미노산 잔기를 포함하고,
- FR4는 위치 103-113에서의 아미노산 잔기를 포함한다.
그러나, VH 도메인 및 VHH 도메인에 대해 당 업계에 공지된 바와 같이, 각각의 CDR에서 아미노산 잔기의 총 수는 다양할 수 있고 Kabat 넘버링에 의해 제시된 아미노산 잔기의 총 수에 상응하지 않을 수 있음에 유의해야 한다 (즉, Kabat 넘버링에 따른 하나 이상의 위치는 실제 서열에서 점유되지 않을 수 있거나, 실제 서열은 Kabat 넘버링에 의해 허용된 수보다 하나 이상의 아미노산 잔기를 함유할 수 있다). 이는 일반적으로 Kabat에 따른 넘버링이 실제 서열에서 아미노산 잔기의 실제 넘버링에 상응하거나 상응하지 않을 수 있음을 의미한다.
VHH 도메인과 유사한 방식으로 적용될 수 있는 VH 도메인의 아미노산 잔기를 넘버링하기 위한 대안적인 방법은 당 업계에 공지되어 있다. 그러나, 본 설명, 청구범위 및 도면에서는, 달리 지시되지 않는 한, 전술한 바와 같이 Kabat에 따라 VHH 도메인에 적용되는 넘버링이 이어질 것이다.
VHH 도메인에서 아미노산 잔기의 총 수는 일반적으로 110 내지 120, 보통 112 내지 115의 범위일 것이다. 그러나 더 작고 더 긴 서열이 또한 본원에 기술된 목적에 적합할 수 있음에 유의해야 한다.
면역글로불린 단일 가변 도메인, 예를 들어 본 발명의 바람직한 구체예에 따른 VHH 및 도메인 항체는 기능적 항원-결합 분자로서 치료에 사용하기에 매우 유리한 다수의 독특한 구조적 특징 및 기능적 특성을 갖는다. 특히, 이에 제한되지 않고, VHH 도메인 ("경쇄 가변 도메인과 쌍을 이루지 않고 기능적으로 항원에 결합하도록 설계된")은 단일의 비교적 작은 기능성 항원 결합 구조 단위로서 기능할 수 있다.
면역글로불린 단일 가변 도메인의 이점 및 VHH 획득에 관한 추가 세부 사항 및 정보는 EP 2 694 546 B1에 상세하게 개시되어 있다.
본 발명의 면역글로불린 단일 가변 도메인은 이들이 수득된 특정 생물학적 공급원 또는 특정 제조 방법에 제한되지 않는다. 특정 항원 또는 에피토프에 결합하는 VHH 도메인을 얻기 위한 적합한 방법 및 기술은 WO2006/040153 및 WO2006/122786에 기재되어 있다.
특정 구체예에 따르면, 본 발명의 면역글로불린 단일 가변 도메인은 본질적으로 자연 발생 VHH 도메인의 아미노산 서열에 상응하지만 요컨대 상기 자연 발생 VHH 서열의 아미노산 서열에서 하나 이상의 아미노산 잔기를 인간으로부터의 통상적인 4-쇄 항체의 가변 중쇄 도메인의 상응하는 위치(들)에서 발생하는 하나 이상의 아미노산 잔기로 대체함으로써 "인간화" 또는 "서열 최적화된" (임의로 친화성-성숙 후) 아미노산 서열을 갖는 VHH 도메인이다. 이는 당업자에게 일상적으로 사용될 수 있는 당 업계에 공지된 방법을 사용하여 수행될 수 있다.
인간화된 VHH 도메인은 하나 이상의 완전한 인간 프레임워크 영역 서열을 함유할 수 있고, 보다 특정한 구체예에서 인간 생식 계열 Vh3 서열 DP-29, DP-47, DP-51로부터 유래된 인간 프레임워크 영역 서열 또는 이들의 일부를 함유할 수 있거나 그에 고도의 상동성일 수 있다 (JH5와 같은 JH 서열과 임의로 조합됨). 따라서, 인간화 프로토콜은 생식 계열 VH 유전자, 예를 들어 DP 47, DP 29 및 DP 51의 상응하는 프레임워크 1, 2 및 3 (FR1, FR2 및 FR3) 잔기 단독으로 또는 조합으로 임의의 VHH 잔기의 대체를 포함할 수 있다. 본 발명의 면역글로불린 단일 가변 도메인의 적합한 프레임워크 영역 (FR)은 예를 들어 WO2006/004678에 기재된 것들로부터 선택될 수 있으며, 구체적으로 소위 "KERE" 및 "GLEW" 클래스를 포함한다. 예로서는 대략 위치 44 내지 47에 아미노산 서열 G-L-E-W를 갖는 면역글로불린 단일 가변 도메인 및 이들 각각의 인간화된 대응물이다. 인간화된 VHH 도메인은 하나 이상의 완전한 인간 프레임워크 영역 서열을 함유할 수 있다.
예로서, 103 P,R,S-그룹 및/또는 GLEW-그룹 (하기 정의된 바와 같은)에 속하는 VHH에 대한 인간화 치환은 108Q - 108L이다. 면역글로불린 단일 가변 도메인을 인간화하는 방법은 당 업계에 공지되어 있다.
치료적 적용 측면에서 개선된 특성을 갖는 면역글로불린 단일 가변 도메인의 결합, 예를 들어 향상된 친화성 또는 감소된 면역원성은 친화성 성숙 (예를 들어, 합성, 랜덤 또는 자연 발생 면역글로불린 서열로부터 출발), CDR 그라프팅, 인간화, 상이한 면역글로불린 서열 유래의 단편 조합, 중첩 프라이머를 사용한 PCR 어셈블리, 및 당업자에게 잘 알려진 면역글로불린 서열을 조작하기 위한 유사한 기술; 또는 본원에 기술된 바와 같이 "서열 최적화"로도 지칭되는 임의의 전술한 것의 임의의 적절한 조합과 같이 당 업계에 공지된 기술에 의해 개별 결합 분자로부터 수득될 수 있다. 예를 들어 표준 핸드북, 추가 설명 및 실시예를 참조한다.
상기에 따르면, 바람직한 구체예에서, 화합물 A의 면역글로불린 단일 가변 도메인은 VHH 도메인이다. 보다 바람직하게는, 화합물 A는 하기 아미노산 서열을 갖는 화합물로부터 선택된다:
DVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSSYSMGWFRQAPGKEREFVVAISKGGYKYDAVSLEGRFTISRDNAKNTVYLQINSLRPEDTAVYYCASSRAYGSSRLRLADTYEYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGSEVQLVESGGGLVQPGNSLRLSCAASGFTFSSFGMSWVRQAPGKGLEWVSSISGSGSDTLYADSVKGRFTISRDNAKTTLYLQMNSLRPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTLVTVSSGGGGSGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGITLDDYAIGWFRQAPGKEREGVSAIRSSGGSTYYADSVKGRFTISSDNSKNTVYLQMNSLRPEDTAVYYCAAVPAGRLRYGEQWYPIYEYDAWGQGTLVTVSS
(서열 번호 11);
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSSYSMGWFRQAPGKEREFVVAISKGGYKYDAVSLEGRFTISRDNAKNTVYLQINSLRPEDTAVYYCASSRAYGSSRLRLADTYEYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGSEVQLVESGGGLVQPGNSLRLSCAASGFTFSSFGMSWVRQAPGKGLEWVSSISGSGSDTLYADSVKGRFTISRDNAKTTLYLQMNSLRPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTLVTVSSGGGGSGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGITLDDYAIGWFRQAPGKEREGVSAIRSSGGSTYYADSVKGRFTISSDNSKNTVYLQMNSLRPEDTAVYYCAAVPAGRLRYGEQWYPIYEYDAWGQGTLVTVSS
(서열 번호 12); 및
VQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFSSYSMGWFRQAPGKEREFVVAISKGGYKYDAVSLEGRFTISRDNAKNTVYLQINSLRPEDTAVYYCASSRAYGSSRLRLADTYEYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGSEVQLVESGGGLVQPGNSLRLSCAASGFTFSSFGMSWVRQAPGKGLEWVSSISGSGSDTLYADSVKGRFTISRDNAKTTLYLQMNSLRPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTLVTVSSGGGGSGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGITLDDYAIGWFRQAPGKEREGVSAIRSSGGSTYYADSVKGRFTISSDNSKNTVYLQMNSLRPEDTAVYYCAAVPAGRLRYGEQWYPIYEYDAWGQGTLVTVSS
(서열 번호 13).
서열을 선택된 발현 시스템 (발현 벡터, 숙주 세포)에 최적으로 적용시키거나 다른 요구 때문에 변경되거나 변형될 수 있는 N-말단 서열을 제외하고, 상기 나타낸 3 개의 서열은 거의 동일하다. 따라서, 본질적으로 상기 서열을 포함하지만 예를 들어 생성된 폴리펩티드의 결합 친화성를 변화시키지 않는 아미노산 교환, 결실 또는 첨가에 의해 약간 변형된 추가 폴리펩티드 또한 본 발명에 따른 약학적 조합물의 "화합물 A"로서 유용할 것임이 명백하다.
또 다른 구체예에서, 본 발명의 VEGF- 및/또는 Ang2-결합 면역글로불린 단일 가변 도메인 클래스의 대표적인 것은 요컨대 통상적인 4-쇄 항체로부터의 자연 발생 가변 중쇄의 아미노산 서열에서 하나 이상의 아미노산 잔기를 중쇄 항체의 VHH 도메인에서 상응하는 위치(들)에서 발생하는 하나 이상의 아미노산 잔기로 대체함으로써 "카멜화"된 자연 발생 VH 도메인의 아미노산 서열에 상응하는 아미노산 서열을 가진다. 이것은 당업자에게 명백한 그 자체로 공지된 방식으로 수행될 수 있으며, WO1994/04678을 추가로 참조한다. 이러한 카멜화는 우선적으로 VH-VL 계면 및 소위 낙타과 홀마크 잔기에 존재하는 아미노산 위치에서 발생할 수 있다 (예를 들어 WO1994/04678 참조). 이러한 "인간화" 및 "카멜화" 기술 및 이와 일치하는 바람직한 프레임워크 영역 서열에 대한 상세한 설명은 예를 들어 WO2006/040153의 98 페이지 및 WO2006/122786의 107 페이지에서 추가로 확인할 수 있다.
본 발명의 의미 및 그의 모든 구체예에서 PD-1 길항제는 PD-1과 그의 수용체(들)의 상호 작용을 억제하는 화합물이다. PD-1 길항제는 당 업계에 잘 알려져 있으며, 예를 들어 본원에 참고로 포함되는 [Li et al., Int. J. Mol. Sci. 2016, 17, 1151]에서 검토되었다. 임의의 PD-1 길항제, 특히 예컨대 Li et al에 의해 개시된 항체뿐만 아니라 이하에 개시된 추가의 항체가 본 발명에 따라 사용될 수 있다. 바람직하게는, 본 발명의 PD-1 길항제 및 그의 모든 구체예는 다음의 항체로 구성된 군으로부터 선택된다:
- 펨브롤리주맙 (항-PD-1 항체);
- 니볼루맙 (항-PD-1 항체);
- 피딜리주맙 (항-PD-1 항체);
- PDR-001 (항-PD-1 항체);
- 이하에 개시된 PD1-1, PD1-2, PD1-3, PD1-4 및 PD1-5 (항-PD-1 항체)
- 아테졸리주맙 (항-PD-L1 항체);
- 아벨루맙 (항-PD-L1 항체);
- 더발루맙 (항-PD-L1 항체).
예를 들어, [Hamid, O. et al. (2013) New England Journal of Medicine 369(2):134-44]에 기술된 펨브롤리주맙 (이전에 람브롤리주맙으로도 알려졌음; 상품명 Keytruda; 또한 MK-3475로도 알려져 있음)은 PD-1에 결합하는 인간화된 IgG4 모노클로날 항체이며; 그것은 Fc-매개 세포 독성을 방지하도록 설계된 C228P에서 돌연변이를 함유한다. 펨브롤리주맙은 예를 들어 US 8,354,509 및 WO2009/114335에 개시되어 있다. 이것은 절제가 불가능하거나 전이성 흑색종을 앓고있는 환자와 전이성 NSCLC를 가진 환자의 치료에 대해 FDA로부터 승인을 받았다.
니볼루맙 (CAS 등록 번호: 946414-94-4; BMS-936558 또는 MDX1106b)은 검출 가능한 항체-의존적 세포 독성 (ADCC)이 없는 PD-1을 특이적으로 차단하는 완전 인간 IgG4 모노클로날 항체이다. 니볼루맙은 예를 들어 US 8,008,449 및 WO2006/121168에 개시되어 있다. 이것은 절제가 불가능하거나 전이성 흑색종, 전이성 NSCLC 및 진행성 신장 세포 암종으로 고통받는 환자의 치료에 대해 FDA로부터 승인을 받았다.
피딜리주맙 (CT-011; Cure Tech)은 PD-1에 결합하는 인간화된 IgG1k 모노클로날 항체이다. 피딜리주맙은 예를 들어 WO2009/101611에 개시되어 있다.
PDR-001 또는 PDR001은 PD-L1 및 PD-L2의 PD-1에 대한 결합을 차단하는 고친화도, 리간드 차단, 인간화 항-PD-1 IgG4 항체이다. PDR-001은 WO2015/112900 및 WO2017/019896에 개시되어 있다.
항체 PD1-1 내지 PD1-5는 표 1에 나타낸 서열에 의해 정의된 항체 분자이며, 여기서 HC는 (전장) 중쇄를 나타내고 LC는 (전장) 경쇄를 나타낸다:
서열 번호 서열명 아미노산 서열
14 PD1-1의 HC EVMLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFTFSASAMSWVRQAPGKGLEWVAYISGGGGDTYYSSSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARHSNVNYYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG
15 PD1-1의 LC EIVLTQSPATLSLSPGERATMSCRASENIDTSGISFMNWYQQKPGQAPKLLIYVASNQGSGIPARFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQSKEVPWTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
16 PD1-2의 HC EVMLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFTFSASAMSWVRQAPGKGLEWVAYISGGGGDTYYSSSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARHSNPNYYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG
17 PD1-2의 LC EIVLTQSPATLSLSPGERATMSCRASENIDTSGISFMNWYQQKPGQAPKLLIYVASNQGSGIPARFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQSKEVPWTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
18 PD1-3의 HC EVMLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFTFSKSAMSWVRQAPGKGLEWVAYISGGGGDTYYSSSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARHSNVNYYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG
19 PD1-3의 LC EIVLTQSPATLSLSPGERATMSCRASENIDVSGISFMNWYQQKPGQAPKLLIYVASNQGSGIPARFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQSKEVPWTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
20 PD1-4의 HC EVMLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFTFSKSAMSWVRQAPGKGLEWVAYISGGGGDTYYSSSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARHSNVNYYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG
21 PD1-4의 LC EIVLTQSPATLSLSPGERATMSCRASENIDVSGISFMNWYQQKPGQAPKLLIYVASNQGSGIPARFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQSKEVPWTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
22 PD1-5의 HC EVMLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFTFSKSAMSWVRQAPGKGLEWVAYISGGGGDTYYSSSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARHSNVNYYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG
23 PD1-5의 LC EIVLTQSPATLSLSPGERATMSCRASENIDVSGISFMNWYQQKPGQAPKLLIYVASNQGSGIPARFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQSKEVPWTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
구체적으로, 본원에 기재된 항-PD-1 항체 분자는 다음을 가진다:
(PD1-1:) 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
(PD1-2:) 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
(PD1-3:) 서열 번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
(PD1-4:) 서열 번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
(PD1-5:) 서열 22의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 23의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄.
아테졸리주맙 (Tecentriq, MPDL3280A로도 알려져 있음)은 PD-L1을 표적으로 하는 파지 유래 인간 IgG1k 모노클로날 항체이며, [Deng et al. mAbs 2016;8:593-603]에 기술되었다. 이것은 요로상피세포 암종으로 고통받는 환자의 치료를 위해 FDA로부터 승인을 받았다.
아벨루맙은 완전 인간 항-PD-L1 IgG1 모노클로날 항체이고, 예를 들어 [Boyerinas et al. Cancer Immunol. Res. 2015;3:1148-1157]에 기술되었다.
더발루맙 (MEDI4736)은 PD-L1에 대해 높은 특이성을 갖는 인간 IgG1k 모노클로날 항체이며, 예를 들어 [Stewart et al. Cancer Immunol. Res. 2015;3:1052-1062 or in Ibrahim et al. Semin. Oncol. 2015;42:474-483]에 기술되었다.
Li 등 (상기 참조)에 의해 공개되었거나 임상 시험으로 알려진 추가의 PD-1 길항제, 예컨대 AMP-224, MEDI0680 (AMP-514), REGN2810, BMS-936559, JS001-PD-1, SHR-1210, BMS-936559, TSR-042, JNJ-63723283, MEDI4736, MPDL3280A, 및 MSB0010718C가 상기 언급된 길항제에 대안적으로 또는 추가하여 사용될 수 있다.
본원에 사용된 INN은 또한 기원자 항체와 동일하거나 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 모든 바이오시밀러 항체를 포함하는 것을 의미하며, 미국 및 기타 관할 지역의 해당 규정의 42 USC §262 하위 섹션 (k)에 기재된 바이오시밀러 항체를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
상기 열거된 PD-1 길항제는 그의 각각의 제조, 치료 용도 및 특성에 대해서 당 업계에 공지되어 있다.
하나의 구체예에서 PD-1 길항제는 펨브롤리주맙이다.
다른 구체예에서, PD-1 길항제는 니볼루맙이다.
다른 구체예에서, PD-1 길항제는 피딜리주맙이다.
다른 구체예에서, PD-1 길항제는 아테졸리주맙이다.
다른 구체예에서, PD-1 길항제는 아벨루맙이다.
다른 구체예에서, PD-1 길항제는 더발루맙이다.
다른 구체예에서, PD-1 길항제는 PDR-001이다.
다른 구체예에서, PD-1 길항제는 PD1-1이다.
다른 구체예에서, PD-1 길항제는 PD1-2이다.
다른 구체예에서, PD-1 길항제는 PD1-3이다.
다른 구체예에서, PD-1 길항제는 PD1-4이다.
다른 구체예에서, PD-1 길항제는 PD1-5이다.
본 발명 내에서, 본 발명에 따라 사용하기 위한 조합, 조성물, 키트, 방법, 용도 또는 화합물은 활성제 또는 성분의 동시, 동반, 순차적, 연속, 교대 또는 별도의 투여를 고려할 수 있음을 이해해야 한다. 이중 특이적 결합 분자 및 PD-1 길항제는 의존적으로 또는 독입적으로 제형화될 수 있으며, 예를 들어, 이중 특이적 결합 분자 및 PD-1 길항제는 동일한 약학적 조성물/투약 형태의 일부로서 또는 바람직하게는 별도의 약학적 조성물/투여 형태로 투여될 수 있다.
이와 관련하여, 본 발명의 의미 내에서 "조합" 또는 "조합된"은 복수 활성제의 혼합 또는 조합으로 생성되고 고정 및 비고정 (예: 유리) 조합 (키트 포함) 및 용도, 예를 들면, 성분 또는 약제의 동시, 동반, 순차적, 연속, 교대 또는 별도 사용을 모두 포함하는 생성물을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 용어 "고정 조합"은 활성제가 둘 다 단일 독립체 또는 투여량의 형태로 환자에게 동시에 투여됨을 의미한다. 용어 "비고정 조합"은 활성제가 둘 다 개별 독립체로서 특정 시간 제한없이 동시에, 동반하여 또는 순차적으로 환자에게 투여되는 것을 의미하며, 이러한 투여는 환자의 체내에서 두 화합물의 치료적 유효 수준을 제공한다. 후자는 또한 칵테일 요법, 예를 들면 3 종 이상의 활성제의 투여에도 적용된다.
이중 특이적 결합 분자/화합물 A 및 PD-1 길항제/화합물 B의 투여는 예를 들어 활성 성분 또는 약제를 공-투여함으로써, 예를 들면 이들을 하나의 단일 또는 2 개의 분리된 제형 또는 투여 형태로 동시에 또는 동반 투여함으로써 이루어질 수 있다. 대안적으로, 이중 특이적 결합 분자 및 PD-1 길항제의 투여는 활성 성분 또는 약제를 예를 들어 2 개의 분리된 제형 또는 투여 형태로 순차적으로 또는 교대로 투여함으로써 이루어질 수 있다.
예를 들어, 동시 투여는 실질적으로 동일 시간에 투여하는 것을 포함한다. 이러한 형태의 투여는 또한 "동반" 투여로 지칭될 수 있다. 동반 투여는 동일한 일반적인 기간 내에, 예를 들어 같은 날(들)에 활성 약제를 투여하지만 반드시 동시에 투여되는 것은 아닌 투여를 포함한다. 교대 투여는 하나의 약제를 한 기간에, 예를 들어 수 일 또는 일주일에 걸쳐 투여하고 다른 약제를 후속 기간 동안, 예를 들어 수 일 또는 일주일에 걸쳐 투여하고 이 패턴을 1회 이상 반복하는는 것을 포함한다. 순차 또는 연속 투여는 하나 이상의 용량을 사용하여 제1 기간 동안 (예를 들어 수 일 또는 일주일 동안) 한 약제를 투여 한 후, 하나 이상의 용량을 사용하여 제2 기간 동안 다른 약제를 투여하는 것을 포함한다 (예를 들어, 수 일 또는 일주일의 과정). 반드시 규칙적인 순서에 따르지 않고, 치료 기간 동안 상이한 날에 활성제의 투여를 포함하는 중첩 스케줄이 또한 사용될 수 있다. 이러한 일반적인 지침은 사용된 제제 및 대상의 상태에 따라 변형되어 이용될 수 있다.
따라서, 바람직한 구체예에서, 본 발명에 따른 방법에서, 본원에 기재된 바와 같은 화합물 A는 본원에 기재된 바와 같은 화합물 B와 동시에, 동반하여, 순차적으로, 연속적으로, 교대로 또는 별도로 투여된다. 유사한 바람직한 구체예에서, 본 발명에 따른 방법에 사용하기 위한 본원에 기재된 바와 같은 화합물 A는 본원에 기재된 바와 같은 화합물 B와 동시에, 동반하여, 순차적으로, 연속적으로, 교대로 또는 별도로 투여된다. 관련된 바람직한 구체예에서, 본 발명에 따른 방법에 사용하기 위해 본원에 기재된 바와 같은 화합물 B는 본원에 기재된 바와 같은 화합물 A와 동시에, 동반하여, 순차적으로, 연속적으로, 교대로 또는 별도로 투여된다. 추가의 바람직한 구체예에서, 화합물 A가 화합물 B와 동시에, 동반하여, 순차적으로, 연속적으로, 교대로 또는 별도로 투여되는 본원에 기재된 바와 같은 화합물 A의 용도가 제공된다. 추가의 관련된 바람직한 구체예에서, 화합물 B가 화합물 A와 동시에, 동반하여, 순차적으로, 연속적으로, 교대로 또는 별도로 투여되는 본원에 기술된 바와 같은 화합물 B의 용도가 제공된다. 다른 구체예에서, 본 발명에 따른 키트는 제1 약학적 조성물이 제2 약학적 조성물과 동시에, 동반하여, 순차적으로, 연속적으로, 교대로 또는 별도로 투여되도록 제공된다.
분리하여 또는 동시에 투여되는 화합물 A, 화합물 B 또는 둘 다의 투여에 대한 바람직한 투여 경로는 경구, 장내, 비경구 (예를 들어, 근육 내, 복강 내, 정맥 내, 경피 또는 피하 주사 또는 임플란트), 비강, 질, 직장 또는 국소 투여를 포함하지만 이로 제한되지 않는다. 바람직한 구체예에서, 투여 경로는 정맥 내 투여, 특히 정맥 내 주입 또는 주사이다. 본 발명의 화합물은 각각의 투여 경로에 적합한 통상적인 약학적으로 허용되는 비독성 담체, 부형제 및/또는 비히클을 함유하는 적합한 투여 단위 제형으로 단독으로 또는 함께 제형화될 수 있다. 더욱 바람직하게는, 제형은 동결 건조, 액체 용액 (예: 주사 및 주입용 용액), 분산액 또는 현탁액, 리포좀 및 좌제와 같은 고체, 반고체 또는 액체 투여 형태를 포함한다. 바람직한 방식은 의도된 투여 방식 및 치료적 적용에 좌우된다. 특히 바람직한 구체예는 액체 제형 및 동결 건조를 포함한다. 동결 건조의 경우, 동결 건조물은 액체, 바람직하게는 물에서 재구성될 수 있다.
본원에 기재된 바와 같은 화합물은 매일, 주 5회, 주 3회, 주 2회, 주 1회, 2주에 1회, 3주에 1회, 4주에 1회 투여될 수 있다. 바람직한 투여 간격은 일주일에 1회 및 2주에 1회이다.
바람직하게는, 화합물 A 및 B는 1주 1회 i.v. 주입으로 투여된다.
투여 요법은 장기 치료를 포함할 수 있다. "장기"는 적어도 2주, 바람직하게는 수 주, 수 개월 또는 수 년의 기간을 의미한다. 이 투여 요법에서 필요한 변형은 본원의 교시가 주어지면 일상적인 실험만을 사용하여 당업자에 의해 결정될 수 있다. [Remington's Pharmaceutical Sciences (Martin, E.W., ed. 4), Mack Publishing Co., Easton, PA]가 참조된다. 복용량은 또한 합병증이 발생할 경우 개인 의사가 조정할 수 있다. 투여는 매일, 2일마다, 3일마다, 4일 마다, 주당 1일, 주당 2일, 2주당 1일, 3주당 1일 등일 수 있다.
본원에 기재된 바와 같은 화합물은 적절한 시간 간격으로 투여되는 단일 또는 분할 용량으로 치료 유효량으로 투여될 수 있다. 치료 유효량은 원하는 치료 결과를 달성하는데 필요한 투여량과 시간 동안에 효과적인 양을 말하며, 질환 또는 장애를 예방, 개선 또는 치료하는데 필요한 최소량이다. 본 발명에 따른 화합물의 치료 유효량은 개체의 질환 상태, 연령, 성별 및 체중, 및 개체에서 원하는 반응을 이끌어내는 화합물의 능력에 따라 달라질 수 있다. 치료 유효량은 또한 화합물의 임의의 독성 또는 유해 효과가 치료적으로 유리한 효과보다 더 작은 양이다. 치료 유효 용량은 바람직하게는 치료되지 않은 대상 또는 치료된 동일한 대상의 선행 비치료 기간에 비해 측정 가능한 파라미터, 예를 들어 종양 성장률을 적어도 약 20%, 더욱 바람직하게는 적어도 약 40%, 더욱 바람직하게는 적어도 약 60%, 보다 더 바람직하게는 적어도 약 80% 억제한다.
활성 화합물은 단일 요법에서 치료적으로 효과적인 용량으로, 또는 단일 요법에서 사용된 용량보다 낮거나 높지만, 조합으로 원하는 (합하여) 치료적 유효량을 제공할 수 있는 용량으로 투여될 수 있다. 치료에 사용하기 위해 필요한 본 발명의 이중 특이적 결합 분자의 양은 선택된 특정 결합 분자, 투여 경로, 치료되는 상태의 성질 및 환자의 연령 및 상태에 적합할 수 있고 궁극적으로 담당 의사 또는 임상의의 재량에 따를 것이다. 또한, 본 발명의 결합 분자의 용량은 표적 세포, 종양, 조직, 이식편 또는 기관에 따라 조정될 수 있다.
화합물 A 또는 화합물 B의 원하는 용량은 환자에서 정해진 혈액 농도에 도달하기 위해 투여 당 고정된 양으로 또는 볼루스로서 투여될 수 있다.
본원에 기재된 바와 같은 PD-1 길항제인 화합물 B의 투여는 예를 들어 약 0.1 내지 30 mg/환자 체중 kg, 예를 들어 약 0.5 내지 25 mg/환자 체중 kg, 약 1 내지 20 mg/환자 체중 kg, 약 2 내지 5 mg/환자 체중 kg, 또는 약 3 mg/환자 체중 kg의 용량으로 주사 (예를 들어, 피하 또는 정맥 내)될 수 있다.
PD-1 길항제의 투여량 및 치료 요법은 당업자에 의해 결정될 수 있다. 본 발명의 PD-1 길항제에 대한 바람직한 투여 요법은 정맥 내 투여를 통해 1 mg/kg의 숙주 체중 또는 3 mg/kg의 숙주 체중을 포함하며, 항체는 하기 투여 스케줄 중 하나를 사용하여 제공된다: (i) 6회 투여량에 대해 4주마다, 이어서 3개월마다; (ii) 3주마다; (iii) 1회 3 mg/kg의 호스트 체중에 이어 3주마다 1mg/kg의 호스트 체중. 특정 구체예에서, PD-1 길항제는 약 1 내지 40 mg/kg의 숙주 체중, 예를 들어, 1 내지 30 mg/kg의 숙주 체중, 예를 들어, 약 5 내지 25 mg/kg의 숙주 체중, 약 10 내지 20 mg/kg의 숙주 체중, 약 1 내지 5 mg/kg의 숙주 체중, 1 내지 10 mg/kg의 숙주 체중, 5 내지 15 mg/kg의 숙주 체중, 10 내지 20 mg/kg의 숙주 체중, 15 내지 25 mg/kg의 숙주 체중, 또는 약 3 mg/kg의 숙주 체중의 용량으로 주사 (예를 들어, 피하 또는 정맥 내)로 투여된다. 투약 스케줄은 예를 들어 일주일에 한 번에서 2, 3 또는 4주에 한 번씩 다양할 수 있다. 일 구체예에서, PD-1 길항제는 격주로 약 10 내지 20 mg/kg의 숙주 체중으로 투여된다. 항체 분자는 약 35 내지 440 mg/㎡, 전형적으로 약 70 내지 310 mg/㎡, 보다 전형적으로, 약 110 내지 130 mg/㎡의 용량에 도달하기 위해 20 mg/분 초과, 예를 들어 20-40 mg/분, 및 전형적으로 40 mg/분 이상의 속도로 정맥 내 주입에 의해 투여될 수 있다. 구체예에서, 약 110 내지 130 mg/㎡의 주입 속도는 약 3 mg/kg의 숙주 체중의 수준을 달성한다. 다른 구체예에서, 항체 분자는 약 1 내지 100 mg/㎡, 예를 들어, 약 5 내지 50 mg/㎡, 약 7 내지 25 mg/㎡, 또는 약 10 mg/㎡의 용량에 도달하기 위해 10 mg/분 미만, 예를 들어 5 mg/분 이하의 속도로 정맥 내 주입에 의해 투여될 수 있다. 일부 구체예에서, 항체는 약 30분의 기간에 걸쳐 주입된다. 투여량 값은 완화될 상태의 유형 및 중증도에 따라 달라질 수 있음에 유의해야 한다. 임의의 특정 대상에 대해, 조성물의 투여를 개인적 필요 및 관리 또는 감독하는 사람의 전문적 판단에 따라 특정 투여량 요법이 시간에 따라 조정되어야 하고, 본원에 제시된 투여량 범위는 예시적이며, 청구된 조성물의 범위 또는 실시를 제한하고자 하는 것은 아니라는 것이 추가로 이해될 것이다.
화합물 A 및 화합물 B의 투여 스케줄은 개별적으로 또는 함께, 예를 들어, 1주일에 한 번에서 2주, 3주 또는 4주에 한 번으로 다양할 수 있다. 특정 구체예에서, 화합물 A, 화합물 B 또는 둘 다의 투여량 또는 용량은 더 낮다 (예를 들어, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40% 또는 적어도 50% 더 낮음). 다른 구체예에서, 원하는 효과 (예를 들어, 과증식성 또는 종양성 질환의 치료)로 이어지는 화합물 A, 화합물 B 또는 둘 다의 양 또는 용량은 더 낮다 (예를 들어, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40% 또는 적어도 50% 더 낮음).
본 발명에 따른 방법, 화합물, 사용 화합물, 화합물의 용도, 약학적 조성물 및 키트는 본원에 기재된 바와 같은 이중 특이적 항체 분자 및 항-PD-1 항체 분자의 조합을 대상에게 투여하는 것을 포함한다.
치료될 암성 질환에 따라, 본원에 정의된 바와 같은 조합 요법은 단독으로 또는 하나 이상의 추가 치료제, 특히 암 세포에서 혈관신생, 신호 전달 경로 또는 의 유사 분열 체크 포인트를 억제하는 치료학적 활성 화합물로부터 선택된 하나 이상의 추가 치료제와 추가로 조합하여 사용될 수 있다.
추가의 치료제는 임의로 동일한 약학적 제제의 성분과 동시에, 또는 결합 분자 및/또는 PD1 길항제의 투여 전 또는 후에 투여될 수 있다.
화학요법제는 호르몬, 호르몬 유사체 및 항호르몬제 (예를 들어, 타목시펜, 토레미펜, 랄록시펜, 풀베스트란트, 메게스트롤 아세테이트, 플루타미드, 닐루타미드, 비칼루타미드, 사이프로테론 아세테이트, 피나스테리드, 부세렐린 아세테이트, 플루드로코르티손, 플루옥시메스테론, 메드록시프로게스테론, 옥트레오티드, 아르족시펜, 파시레오티드, 바프레오티드), 아로마타제 억제제 (예를 들어, 아나스트로졸, 레트로졸, 리아로졸, 엑세메스탄, 아타메스탄, 포르메스탄), LHRH 작용제 및 길항제 (예를 들어, 고세렐린 아세테이트, 류프롤리드, 아바렐릭스, 세트로렐릭스, 데슬로렐린, 히스트렐린, 트립토렐린), 항대사제 (예를 들어, 메토트렉세이트, 페메트렉시드 등의 항엽산제, 5 플루오로우라실, 카페시타빈, 데시타빈, 넬라라빈 및 겜시타빈 등의 피리미딘 유사체, 머캅토퓨린 티오구아닌, 클라드리빈 및 펜토스타틴, 시타라빈, 플루다라빈과 같은 퓨린 및 아데노신 유사체); 항종양 항생제 (예를 들어, 독소루비신, 다우노루비신, 에피루비신 및 이다루비신과 같은 안트라사이클린, 미토마이신-C, 블레오마이신, 닥티노마이신, 플리카마이신, 미톡산트론, 픽산트론, 스트렙토조신); 백금 유도체 (예를 들어, 시스플라틴, 옥살리플라틴, 카보플라틴, 로바플라틴, 사트라플라틴); 알킬화제 (예를 들어, 에스트라무스틴, 메클로레타민, 멜팔란, 클로람부실, 부설판, 다카바진, 사이클로포스파미드, 이포스파미드, 하이드록시우레아, 테모졸로미드, 니트로소우레아, 예컨대 카르무스틴 및 로무스틴, 티오테파); 항분열제 (예를 들어, 빈블라스틴, 빈덴신, 비노렐빈, 빈플루닌 및 빈크리스틴 등의 빈카 알칼로이드류; 및 파클리탁셀, 도세탁셀 및 이들의 제제, 라로탁셀 등의 탁산류; 익사베필론, 파투필론, ZK-EPO 등의 에포틸론류); 토포이소머라제 억제제 (예를 들어, 에토포포스, 테니포시드, 암사크린, 토포테칸, 이리노테칸 등의 에피도필로톡신류); 및 아미포스틴, 아나그렐리드, 인터페론 알파, 프로카바진, 미토탄, 및 포르피머, 벡사로텐, 셀레콕시브와 같은 기타 화학요법제 중에서 선택될 수 있다.
바람직한 구체예에서, 화합물 A 및 화합물 B를 포함하는 치료는 "백금 이중" 요법, 즉 (i) 시스플라틴 또는 카보플라틴과 같은 백금 화합물과, (ii) 도세탁셀, 파클리탁셀, 비노렐빈 또는 겜시타빈과 같은 3세대 화학요법제를 사용한 요법을 추가로 포함한다.
다른 바람직한 구체예에서, 화합물 A 및 화합물 B를 포함하는 치료는 암 세포 표적 요법과 조합된다.
특정 구체예에서, 본원에 개시된 바와 같은 조합 요법으로 치료되는 종양성 또는 과증식성 질환, 특히 암 또는 종양 질환은 고형 종양, 혈액암 (예를 들어, 백혈병, 림프종, 골수종, 다발성 골수종) 및 전이성 병변을 포함하지만 이에만 한정되지 않는다. 일 구체예에서, 암은 고형 종양이다. 고형 종양의 예는 악성 종양, 예를 들어 육종 및 암종, 예를 들면 폐, 유방, 난소, 림프, 위장관 (예: 결장), 항문, 생식기 및 비뇨 생식관 (예: 신장, 요로, 방광 세포, 전립선), 인두, CNS (예: 뇌, 신경 또는 신경 아교 세포), 두경부, 피부 (예: 흑색종) 및 췌장에 영향을 미치는 것과 같은 다양한 기관계의 선암뿐만 아니라, 결장암, 직장암, 신장 세포 암종, 간암, 비소세포 폐암, 소장암 및 식도암과 같은 악성 종양을 포함하는 선암을 포함한다. 암은 초기, 중간, 후기 또는 전이성 암일 수 있다.
본원에 사용된 "과증식성 질환"은 정상 수준에 비해 세포 성장이 증가하는 상태를 지칭한다. 예를 들어, 과증식성 질환 또는 장애에는 악성 질환 (예: 식도암, 결장암, 담도암) 및 비악성 질환 (예: 죽상동맥경화증, 양성 과형성증, 양성 전립선 비대증)이 포함된다.
일 구체예에서, 암은 폐암 (예를 들어, NSCLC (예를 들어 편평 및/또는 비편평 조직학을 갖는 NSCLC, 또는 NSCLC 선암종)), 흑색종 (예를 들어 진행성 흑색종), 신장암 (예를 들어 신세포 암종), 간암, 골수종 (예: 다발성 골수종), 전립선암, 유방암 (예: 에스트로겐 수용체, 프로게스테론 수용체 또는 Her2/ney 중 하나, 둘 또는 모두를 발현하지 않는 유방암, 예를 들어 삼중 음성 유방암), 결장직장암, 췌장암, 두경부암 (예: 두경부 편평 상피 암종 (HNSCC), 항문암, 위식도암, 갑상선암, 자궁경부암, 림프증식성 질환 (예를 들어, 이식 후 림프 증식성 질환) 또는 혈액암, T-세포 림프종, B-세포 림프종, 비호지킨 림프종 또는 백혈병 (예: 골수성 백혈병 또는 림프성 백혈병)으로부터 선택된다.
다른 구체예에서, 암은 암종 (예를 들어 진행성 또는 전이성 암종), 흑색종 또는 폐암종, 예를 들어 NSCLC부터 선택된다.
일 구체예에서, 암은 폐암, 예를 들어 NSCLC 또는 소세포 폐암이다. 바람직한 구체예에서, 암은 NSCLC이다.
본 발명의 임의의 측면 및 구체예와 조합될 수 있는 특히 바람직한 구체예에서, 본 발명에 따른 조합 요법은 EGFR 돌연변이 또는 ALK 전위없이 국소 진행성 또는 전이성 비편평 NSCLC로 고통받는 환자를 치료하기 위한 것이다. 여기서, 임의로, 환자는 그의 PD-L1 발현 상태, 예컨대 고 또는 저 PD-L1 발현 상태에 따라 선택된다. 치료는 1차 치료, 즉 질환에 대해 주어진 첫 치료 (NSCLC)일 수 있다. 따라서, 환자는, 특히 본 발명에 따라 치료될 때 NSCLC의 치료를 위한 화학요법 또는 방사선 요법을 받지 않았을 수 있다. 환자의 임의의 암 치료 전에 PD-L1 발현 상태를 결정함으로써, 신뢰할 수 있는 결과가 달성될 수 있다.
PD-L1 발현 상태는 Han et al. (Journal of Pathology and Translational Medicine 2017; 51: 40-48) 또는 Wang et al. (OncoTargets and Therapy 2016:9 5023-5039)에 의해 기술된 바와 같이 예를 들어 면역조직화학을 사용하여 결정될 수 있다. 치료될 환자의 종양의 생검 샘플이 PD-L1 발현 상태 결정을 위해 사용될 수 있다. 복수의 생검이 사용되는 경우, 개별 환자로부터의 단일 종양 생검 또는 다수의 생검이 사용될 수 있으며, 바람직하게는 가장 높은 PD-L1 발현을 갖는 생검이 본 발명에 따른 PD-L1 발현 상태를 결정하는데 사용된다. PD-L1은 세포 표면 (막) 또는 세포질 발현, 종양 세포 단독 및/또는 종양 환경의 다른 세포 (예를 들어 면역 세포)에 의한 발현에 의해 결정될 수 있다. PD-L1 양성 발현을 고려하기 위한 역치는 예를 들어, 세포, 예를 들어 종양 및/또는 면역 세포에서 적어도 1%, 적어도 5% 또는 적어도 10%의 PD-L1 발현이며, 예를 들어 면역조직화학에 의해 결정된 바와 같이 세포에서 ≥1%, ≥5% 또는 ≥10% PD-L1 발현을 갖는 샘플이 PD-L1 "양성"으로 간주될 수 있다. 바람직한 구체예에서, PD-L1 발현 상태는 종양 세포 또는 면역 세포, 보다 바람직하게는 종양 세포에서 결정되며, 여기서 바람직하게는 Han et al. 또는 Wang et al.에 의해 기술된 바와 같은 면역조직화학에 의해 결정된 바와 같이 세포의 1% 내지 5%의 PD-L1 발현은 낮은 PD-L1 발현으로 간주되고, 세포의 >5%, 예를 들어 세포의 >5% 내지 40%의 PD-L1 발현은 높은 PD-L1 발현으로 간주된다. 치료될 환자는 저 PD-L1 발현 환자, 고 PD-L1 발현 환자, 고 PD-L1 발현환자를 제외한 저 PD-L1 발현 환자, 저 PD-L1 발현환자를 제외한 고 PD-L1 발현 환자일 수 있다.
일 구체예에서, 암은 흑색종, 예를 들어 진행성 흑색종이다. 일 구체예에서, 암은 다른 요법에 반응하지 않는 진행성 또는 절제 불가능한 흑색종이다. 다른 구체예에서, 암은 BRAF 돌연변이 (예를 들어, BRAF V600 돌연변이)를 갖는 흑색종이다.
다른 구체예에서, 암은 간암종, 예를 들어 바이러스성 감염이 있거나 없는 진행성 간암종, 예를 들어 만성 바이러스성 간염이다.
다른 실시 형태에서, 암은 전립선암, 예를 들어 진행성 전립선암이다.
또 다른 구체예에서, 암은 골수종, 예를 들어 다발성 골수종이다.
또 다른 구체예에서, 암은 신장암, 예를 들어 신세포 암종 (RCC) (예를 들어, 전이성 RCC 또는 투명 신장 세포 암종 (CCRCC))이다.
상술한 바와 같이, 본 발명은 본원에 정의된 바와 같은 화합물 A 및 화합물 B를 포함하는 약학적 조성물 및 본원에 정의된 바와 같은 화합물 A를 포함하는 제1 약학적 조성물 및 본원에 정의된 바와 같은 화합물 B를 포함하는 제2 약학적 조성물을 포함하는 키트에 관한 것이다.
본원에 정의된 용어 "약학적 조성물"은 그 안에 함유된 활성 성분의 생물학적 활성이 효과적이도록 하는 형태이고 조성물이 투여될 대상에 허용할 수 없는 독성을 갖는 추가 성분을 함유하지 않는 제제를 지칭한다. 본 발명의 약학적 조성물은 당 업계에 공지된 다양한 방법으로 투여될 수 있다. 당업자가 알 수 있는 바와 같이, 투여 경로 및/또는 방식은 원하는 결과에 따라 달라질 것이다.
선택된 투여 경로에 관계없이, 본 발명의 조합 요법 및/또는 약학적 조성물, 본 발명의 제1 약학적 조성물 및 제2 약학적 조성물에 사용되는 화합물은 당업자에게 공지된 통상적인 방법에 의해 약학적으로 허용되는 투여 형태로 제형화된다.
본원에 정의된 키트는 제1 약학적 조성물 및/또는 제2 약학적 조성물을 포함하는 적합한 용기 또는 다수의 적합한 용기를 포함할 수 있으며, 여기서 제1 및 제2 약학적 조성물은 동일한 용기 또는 상이한 용기에 포함될 수 있다. 키트는 본 발명의 임의의 방법 또는 임의의 용도에 사용될 수 있다.
바람직하게는, 본 발명에 따른 키트는 이를 필요로 하는 환자에서 종양성 또는 과증식성 질환, 바람직하게는 암 또는 종양 질환, 특히 NSCLC의 치료 및/또는 예방에 화합물 A 및/또는 화합물 B를 사용하기 위한 읽을 수 있는 설명서를 포함하는 패키지 삽입물을 추가로 포함한다. 설명서는 본 발명의 방법 및 그의 임의의 바람직한 구체예와 관련하여 전술한 바와 같이 추가로 상세하게 제공할 수 있다.
청구 범위 및/또는 명세서에서 "포함하는"이라는 용어와 함께 사용될 때 "a" 또는 "an"이라는 단어의 사용은 "하나"를 의미할 수도 있지만, "하나 이상", "적어도 하나" 및 "하나 또는 복수"의 의미와도 일치한다.
본 명세서에서 사용된 "약"은 측정 정밀도의 특성으로 인해 측정된 양에 대해 허용 가능한 오차 정도를 의미한다. 예시적인 오차 정도는 주어진 값 또는 값 범위의 20% 이내, 전형적으로 10% 이내, 더욱 전형적으로 5% 이내이다.
본원에 사용된 용어 "치료하는" 또는 "치료"는 이미 존재하는 질환 상태 또는 병태를 치유하거나, 질환 상태 또는 병태로부터 회복될 가능성을 증가시키는 것을 의미한다. 치료는 또한 질환 상태 또는 병태의 발달을 억제하는 것, 및 질환의 개선, 즉 퇴행 또는 진행을 지연시키는 것을 포함할 수 있다. 치료는 환자의 치유없이 질환 증상을 개선하는 것일 수 있다.
본원에 사용된 용어 "예방하는" 또는 "예방"은 환자 또는 대상에서 질환 상태 또는 병태가 발생하는 것을 완전히 정지시키는 것을 의미하는 것이 아니라 질환 상태 또는 병태가 발생할 위험을 감소시키는 것을 의미할 수도 있다.
본 발명이 하기 실시예에 의해 추가로 설명되나, 본 발명이 이들 구체예로 반드시 제한되는 것은 아니다. 화합물, 용량 및 투여 경로뿐만 아니라 치료 조합을 포함하는 실시예 또는 그 일부는 각각 그 자체로 또는 상기 상세한 설명과 함께 본 발명의 일부를 형성한다.
실시예
두문자어 및 약어
CD 분화 클러스터
DMEM 듈베코 변형 이글 배지
FCS 송아지 태아 혈청
ID 식별자
i.p. 복강 내
LAG-3 림프구 활성화 유전자 3
M 몰
MEM 최소 필수 배지
PBS 인산염 완충 식염수
PD-1 프로그램 세포사 1
PD-L1 프로그램 세포사 리간드 1
PD-L2 프로그램 세포사 리간드 2
q3or4d 3일 또는 4일마다 (주 2회)
R 반응
TGI 종양 성장 억제는 다음 공식으로 계산된다:
TGI=100×{1-[(처리최종일-처리1일)/(대조최종일-대조1일)]}
TIL 종양 침윤 림프구
실시예 1
시험 화합물
래트 IgG2a 항-뮤린 PD-1 항체 EX101359 (클론 RMP1-14) (10 mg/kg), 이중 특이적, VEGF 및 Ang2 결합 단백질 VEGFANGBII22 (상기 정의되고 서열 번호 11, 12 및 13에서의 구조/서열을 가짐), 소분자 TKI 바탈라닙 및 CrossMab 항체 바누시주맙 (항-인간 VEGF-A 및 항-인간/뮤린 Ang 2)을 이들 실험에 사용하였다. 대조군으로는, PD-1 항체 랫트 IgG2a (EX101362)에 상응하는 이소타입 (10 mg/kg), 즉 서열이 유사하지만 PD-1에 결합하지 않는 항체가 사용되었다. 모든 항체는 1x PBS로 희석되었고 BioXcell (West Lebanon, NH, USA)에서 주문했다.
세포
LL/2 (LLC1)는 뮤린 폐 암종 세포주이며, 미국 ATCC (American Type Culture Collection) (CRL-1642)에서 입수하였다. 세포를 37 ℃ 및 5% CO2에서 T175 조직 배양 플라스크에서 배양하였다. 사용된 배지는 10% FCS (HyClone® 소 태아 혈청 특성화; Cat No SH30071.03; Thermo Scientific제)가 보충된 DMEM이었다. 배양물을 2-3 일마다 1:4/1:6의 비율로 분할하였다.
마우스
C57BL/6NTac는 Taconic Denmark에서 공급한 완전 면역 적격 마우스 균주이다. 암컷 마우스를 7주령에 Taconic에서 지역 동물 시설로 운송했다. 동물 시설에 도착한 후, 마우스를 실험에 사용하기 전에 적어도 5일 동안 조건에 순응시켰다. 이들을 21.5±1.5 ℃ 온도 및 55±10% 습도에서 표준화된 조건하에서 10개 군에 수용하였다. 표준화된 식이 (PROVIMI KLIBA) 및 오토클레이브 수돗물을 임의로 제공하였다. 이소플루란 마취하에 이식된 피하 마이크로칩을 사용하여 각 마우스를 식별하였다. 연구 번호, 동물 식별 번호, 항체 및 화합물 및 용량 수준, 투여 경로 및 스케줄을 보여주는 케이지 카드를 연구 기간 내내 동물에 유지시켰다.
종양 확립, 무작위화
동물들을 컴퓨터 프로그램 SEPIA에 의해 무작위로 상이한 그룹으로 배치하였다. 피하 종양 모델을 확립하기 위해, LL/2 세포를 수확하고, PBS/5% FCS에 재현탁시키고, 5 x 105/ml로 Matrigel Matrix (성장 인자없음, Corning, Tewksbury, MA, USA)와 1:2 혼합하였다. 마우스 당 5 x 104 세포를 포함하는 세포 현탁액 100 ㎕를 주사하였다 (-5일).
시험 화합물의 투여
항체를 PBS에서 1 mg/mL로 희석하고 10 ml/kg의 부피로 복강 내로 주사하였다. 희석액을 4 ℃에서 최대 5일 동안 유지시켰다. 세포 주사 3 일 후가 치료 시작일 (1 일)이었다. 바탈라닙을 5% Natrosol 용액 (하이드록시에틸셀룰로즈)에 현탁시키고 위관영양용 바늘 (gabage needle) (Infusionskanuele Olive A, Acufirm, No. 14 64 ll-1)에 의해 위 내로 투여하였다. 투여 부피는 체중 kg 당 10 ml였다. 24시간마다 1회 투여하였다. 현탁액을 제조하기 위해, 화합물을 Natrosol 용액에 첨가하고 혼합물을 밤새 교반하였다. 때때로 초음파 처리가 필요했다. 용액을 최대 1주일 동안 암소에서 실온으로 유지시켰다.
처리군
그룹 마우스 마리수 처리 화합물(들) 용량
[mg/kg]		 스케줄 경로
1 10 - 이소타입 PD-1 항체 (EX101362) 10 mg/kg q3or4d i.p.
2 10 - 항-뮤린 PD-1 항체 (EX101359) 10 mg/kg q3or4d i.p.
3 10 - VEGFANGBII22 15 mg/kg q3or4d i.p.
4 10 - 바탈라닙 (EXBF003) 100mg/kg qd po
5 10 - 항-뮤린 PD-1 항체 (EX101359);
- VEGFANGBII22;
- 바탈라닙 (EXBF003)		 10 mg/kg,
15 mg/kg,
100mg/kg		 q3or4d,
qd		 i.p., p.o.
6 10 - 항-VEGF/Ang2 항체 (바누시주맙); 15 mg/kg q3or4d i.p.
7 10 - 항-뮤린 PD-1 항체 (EX101359);
- 항-VEGF/Ang2 항체 (바누시주맙);
- 바탈라닙 (EXBF003)		 10 mg/kg,
15 mg/kg,
100mg/kg		 q3or4d,
qd		 i.p., p.o.
종양 성장 및 질환 진행 모니터링
종양 직경은 캘리퍼로 주 3회 (월요일, 수요일 및 금요일) 측정하였다. 치료 시작 후 14일부터 28일까지 모든 종양을 매일 측정하였다. 각 종양의 용적 (mm3 단위)은 공식 "종양 용적 = 길이 * 직경2 * pi/6"에 따라 계산되었다. 치료 부작용을 모니터링하기 위해, 마우스에 이상이 있는지 매일 검사하고 체중을 일주일에 적어도 3회 측정하였다. 종양이 1500 mm3의 크기에 도달하거나 종양 괴사가 종양 표면의 1/3보다 클 때 동물을 희생시켰다. 또한, 체중 감소가 18%를 초과한 동물을 윤리적인 이유로 안락사시켰다. 종양 성장 억제 (TGI) 값은 다음과 같이 계산되었다:
TGI=100×{1-[(처리최종일-처리1일)/(대조최종일-대조1일)]}
통계 분석 - 항종양 효능
종양 억제의 통계적 유의성을 평가하기 위해, 한 방향으로만 효과를 측정할 수 있다는 가설 (즉, 종양 자극이 아닌 종양 억제 기대)에 근거하여 단측 비모수적 Mann-Whitney-Wilcoxon U-검정을 수행하였다. 이 경우 U-검정은 특정 날짜에 대한 절대 용적에 따라 두 그룹의 개별 종양의 순위를 비교한다 (그룹 간 쌍별 비교). 실험 17일에 분석을 수행하였다. U-검정으로부터 얻은 p-값을 Bonferroni-Holm 보정을 사용하여 조정하였다. 일반적으로 p-값 ≤0.05가 유의적인 차이를 나타낸다.
결과
이소타입 대조군의 마우스에 EX101362를 매주 2회 복강 내 처리하였다. 처리 기간 동안 종양은 41 mm3의 중간 용적에서 1275 mm3의 용적으로 성장했다. 항-뮤린 PD-1 항체인 10 mg/kg EX101359로의 처리를 매주 2회 복강 내로 투여하였다. EX101359-처리는 이소타입 대조군과 비교하여 종양 성장을 감소시켰다 (중간 TGI = 51%).
VEGFANGBII22 단독 처리로 TGI는 49%이었다. 바탈라닙 단독 처리로 TGI는 54%였다. 바탈라닙, VEGFANGBII22 및 항-PD1의 조합 처리로 TGI는 79%였다.
바누시주맙 단독 처리로 TGI는 64%였다. 바탈라닙, 바누시주맙 및 항-PD1의 조합 처리로 TGI는 81%였다.
조합물의 추가 결과 및 비교 화합물의 결과가 도 1에 도시되어 있다.
결론
본 연구에서 항-PD1, 바탈라닙 (VEGFR 표적), VEGFANGBII22 및 바누시주맙의 단일 요법은 각각 51%, 54%, 49% 및 64%의 TGI 값으로 최소 내지 중간 항종양 반응을 나타내었다. 항-PD1 + 바탈라닙 + VEGFANGBII22 또는 항-PD1 + 바탈라닙 + 바누시주맙의 삼중 약물 조합은 TGI 값이 79% 및 81%로 분명히 더 효과적이었다. 개별 종양의 반응 곡선을 분석함으로써, 항-PD1 + 바탈라닙 + VEGFANGBII22의 삼중 약물 조합은 처리된 종양 중 하나에서만 수축을 나타낸 반면, 항-PD1 + 바탈라닙 + 바누시주맙으로 처리된 그룹에서는 모든 종양이 감소된 종양 성장을 나타내었다.
삼중 약물 조합은 이소타입 대조군 및 단일 요법에 비해 더 우수한 항종양 효과를 나타낸다. 항-PD1 + 바탈라닙 + VEGFANGBII22의 삼중 약물 조합은 심지어 한명의 처리된 개인에서 종양 수축을 유도하였다. 이 실험에서 모든 처리는 잘 견뎌졌다.
상기 결과를 인간에서의 요법으로 전환시키는 경우, 화합물 VEGFANGBII22는 이 화합물이 인간 VEGF에 결합하기 때문에 항-Ang2뿐만 아니라 항-VEGF 활성을 포함할 것임을 인정해야 한다. 따라서, 상기 실험에서 바탈라닙과 같은 항-VEGF 제를 추가로 사용할 필요가 없다. 이에 따라, 상기 데이터는 VEGFANGBII22를 항-PD1 항체와 같은 PD1 길항제와 함께 사용하여 인간을 치료하면 인간 환자에게 유용한 치료 효과를 가져올 것임을 제시한다.
실시예 2
단일 요법을 삼중 약물 조합 VEGFANGBII22 + 항-PD1 항체 + 바탈라닙과 비교하기 위해 본질적으로 실시예 1에 기재된 바와 같이 추가의 실험을 설정하였다 (바탈라닙은 또다시 마우스에서 항-VEGF 활성을 모방하고 그 화합물의 VEGF 결합 성분은 마우스 VEGF에 결합하지 않기 때문에 VEGFANGBII22로부터 활성을 예상할 수 없었다).
다시, TGI 값을 결정하였고, 삼중 조합의 투여시 80%가 달성되었다. 이와 대조적으로, 단일 요법에 의해 22% (항-PD-1 항체), 27% (VEGFANGBII22의 항-Ang2 활성) 및 43% (바탈라닙)의 TGI 값이 달성되었다.
또한, 각각의 처리 그룹 내에서 마우스의 생존을 결정하였다. 도 2에서 알 수 있는 바와 같이, VEGFANGBII22, 바탈라닙 및 PD1 길항제로의 처리만으로 30일 한계를 상당히 초과하는 생존이 제공되었다. 이 또한 제안된 치료가 인간에서도 우수한 효과가 달성될 것으로 예상될 수 있음을 제시한다 (이번에도, VEGFANGBII22 성분에 의해 항-VEGF 활성이 이미 제공될 것이므로 바탈라닙의 첨가는 필요치 않을 것으로 이해된다).
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Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly 435 440 445 <210> 15 <211> 218 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LC of PD1-1 <400> 15 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Met Ser Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Asp Thr Ser 20 25 30 Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Tyr Val Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Ile Pro Ala 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys 85 90 95 Glu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 110 Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 115 120 125 Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 130 135 140 Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 145 150 155 160 Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 165 170 175 Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 180 185 190 His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 195 200 205 Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 16 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HC of PD1-2 <400> 16 Glu Val Met Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ala Ser 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser Gly Gly Gly Gly Asp Thr Tyr Tyr Ser Ser Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Ser Asn Pro Asn Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro 210 215 220 Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly 435 440 445 <210> 17 <211> 218 <212> PRT 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Gln Gly Leu Ser Ser Pro 195 200 205 Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 18 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HC of PD1-3 <400> 18 Glu Val Met Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Lys Ser 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser Gly Gly Gly Gly Asp Thr Tyr Tyr Ser Ser Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Ser Asn Val Asn Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 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Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly 435 440 445 <210> 19 <211> 218 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LC of PD1-3 <400> 19 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Met Ser Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Asp Val Ser 20 25 30 Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Tyr Val Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Ile Pro Ala 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys 85 90 95 Glu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 110 Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 115 120 125 Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 130 135 140 Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 145 150 155 160 Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 165 170 175 Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 180 185 190 His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 195 200 205 Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 20 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HC of PD1-4 <400> 20 Glu Val Met Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Lys Ser 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser Gly Gly Gly Gly Asp Thr Tyr Tyr Ser Ser Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Ser Asn Val Asn Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro 210 215 220 Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly 435 440 445 <210> 21 <211> 218 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LC of PD1-4 <400> 21 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Met Ser Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Asp Val Ser 20 25 30 Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Tyr Val Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Ile Pro Ala 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys 85 90 95 Glu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 110 Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 115 120 125 Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 130 135 140 Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 145 150 155 160 Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 165 170 175 Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 180 185 190 His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 195 200 205 Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 22 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HC of PD1-5 <400> 22 Glu Val Met Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Lys Ser 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser Gly Gly Gly Gly Asp Thr Tyr Tyr Ser Ser Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Ser Asn Val Asn Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro 210 215 220 Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly 435 440 445 <210> 23 <211> 218 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LC of PD1-5 <400> 23 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Met Ser Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Asp Val Ser 20 25 30 Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Tyr Val Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Ile Pro Ala 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 80 Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys 85 90 95 Glu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 110 Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 115 120 125 Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 130 135 140 Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 145 150 155 160 Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 165 170 175 Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 180 185 190 His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 195 200 205 Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215

Claims (32)

  1. 종양성 또는 과증식성 질환을 치료 또는 예방하는 방법으로서, 종양성 또는 과증식성 질환의 치료 또는 예방을 필요로 하는 환자에게
    a) 치료 유효량의 화합물 A 및
    b) 치료 유효량의 화합물 B
    를 투여하는 것을 포함하고,
    여기서,
    화합물 A는 다음을 포함하는 이중 특이적 결합 분자이고:
    VEGF-결합 면역글로불린 단일 가변 도메인,
    혈청 알부민 결합 면역글로불린 단일 가변 도메인, 및
    Ang2-결합 면역글로불린 단일 가변 도메인;
    상기 VEGF 결합 면역글로불린 단일 가변 도메인은 하기 CDR 서열을 갖고:
    CDR1: SYSMG (서열 번호 1),
    CDR2: AISKGGYKYDAVSLEG (서열 번호 2),
    CDR3: SRAYGSSRLRLADTYEY (서열 번호 3);
    상기 혈청 알부민 결합 면역글로불린 단일 가변 도메인은 하기 CDR 서열을 가지며:
    CDR1: SFGMS (서열 번호 4),
    CDR2: SISGSGSDTLYADSVKG (서열 번호 5),
    CDR3: GGSLSR (서열 번호 6);
    상기 Ang2-결합 면역글로불린 단일 가변 도메인은 하기 CDR 서열을 갖고:
    CDR1: DYAIG (서열 번호 7),
    CDR2: AIRSSGGSTYYADSVKG (서열 번호 8),
    CDR3: VPAGRLRYGEQWYPIYEYDA (서열 번호 9);
    화합물 B는 PD-1 길항제인,
    방법.
  2. 제1항에 있어서, 종양성 또는 과증식성 질환이 암 또는 종양 질환인 방법.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 종양성 또는 과증식성 질환이 비소세포 폐암 (NSCLC)인 방법.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 화합물 A의 면역글로불린 단일 가변 도메인이 VHH 도메인인 방법.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 화합물 A가 서열 번호 11, 서열 번호 12 또는 서열 번호 13에 따른 아미노산 서열을 갖는 방법.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, PD-1 길항제가 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체인 방법.
  7. 제6항에 있어서, 항-PD-1 항체가 펨브롤리주맙, 니볼루맙, 피딜리주맙, PD1-1, PD1-2, PD1-3, PD1-4 및 PD1-5로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
  8. 제6항에 있어서, 항-PD-L1 항체가 아테졸리주맙, 아벨루맙 및 더발루맙으로 이루어진 군에서 선택되는 방법.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 화합물 A가 화합물 B와 동시에, 동반하여, 순차적으로, 연속적으로, 교대로 또는 별도로 투여되는 방법.
  10. 화합물 A를 제1항 및 제6항 내지 제8항 중 어느 한 항에서 정의된 바와 같은 화합물 B와 조합하여 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하여 종양성 또는 과증식성 질환, 바람직하게는 암 또는 종양 질환, 특히 바람직하게는 NSCLC를 치료 또는 예방하는 방법에 사용하기 위한, 제1항, 제4항 또는 제5항 중 어느 한 항에 정의된 화합물 A.
  11. 제10항에 있어서, 화합물 B와 동시에, 동반하여, 순차적으로, 연속적으로, 교대로 또는 별도로 투여되는 화합물 A.
  12. 화합물 B를 제1항, 제4항 또는 제5항 중 어느 한 항에서 정의된 바와 같은 화합물 A와 조합하여 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하여 종양성 또는 과증식성 질환, 바람직하게는 암 또는 종양 질환, 특히 바람직하게는 NSCLC를 치료 또는 예방하는 방법에 사용하기 위한, 제1항 및 제6항 내지 제8항 중 어느 한 항에 정의된 화합물 B.
  13. 제12항에 있어서, 화합물 A와 동시에, 동반하여, 순차적으로, 연속적으로, 교대로 또는 별도로 투여되는 화합물 B.
  14. 종양성 또는 과증식성 질환, 바람직하게는 암 또는 종양 질환, 특히 바람직하게는 NSCLC를 치료 또는 예방하기 위한 약학적 조성물의 제조를 위한, 제1항 및 제6항 내지 제8항 중 어느 한 항에서 정의된 바와 같은 화합물 B와 조합하여 사용되는 제1항, 제4항 또는 제5항 중 어느 한 항에 정의된 화합물 A의 용도.
  15. 제14항에 있어서, 화합물 A가 화합물 B와 동시에, 동반하여, 순차적으로, 연속적으로, 교대로 또는 별도로 투여되는 화합물 A의 용도.
  16. 종양성 또는 과증식성 질환, 바람직하게는 암 또는 종양 질환, 특히 바람직하게는 NSCLC를 치료 또는 예방하기 위한 약학적 조성물의 제조를 위한, 제1항, 제4항 또는 제5항 중 어느 한 항에서 정의된 바와 같은 화합물 A와 조합하여 사용되는 제1항 및 제6항 내지 제8항 중 어느 한 항에 정의된 화합물 B의 용도.
  17. 제16항에 있어서, 화합물 B가 화합물 A와 동시에, 동반하여, 순차적으로, 연속적으로, 교대로 또는 별도로 투여되는 화합물 B의 용도.
  18. a) 화합물 A 및
    b) 화합물 B를 포함하고,
    여기서,
    화합물 A는 다음을 포함하는 이중 특이적 결합 분자이고:
    VEGF-결합 면역글로불린 단일 가변 도메인,
    혈청 알부민 결합 면역글로불린 단일 가변 도메인, 및
    Ang2-결합 면역글로불린 단일 가변 도메인;
    상기 VEGF 결합 면역글로불린 단일 가변 도메인은 하기 CDR 서열을 갖고:
    CDR1: SYSMG (서열 번호 1),
    CDR2: AISKGGYKYDAVSLEG (서열 번호 2),
    CDR3: SRAYGSSRLRLADTYEY (서열 번호 3);
    상기 혈청 알부민 결합 면역글로불린 단일 가변 도메인은 하기 CDR 서열을 가지며:
    CDR1: SFGMS (서열 번호 4),
    CDR2: SISGSGSDTLYADSVKG (서열 번호 5),
    CDR3: GGSLSR (서열 번호 6);
    상기 Ang2-결합 면역글로불린 단일 가변 도메인은 하기 CDR 서열을 갖고:
    CDR1: DYAIG (서열 번호 7),
    CDR2: AIRSSGGSTYYADSVKG (서열 번호 8),
    CDR3: VPAGRLRYGEQWYPIYEYDA (서열 번호 9);
    화합물 B는 PD-1 길항제인,
    약학적 조성물.
  19. 제18항에 있어서, 화합물 A의 면역글로불린 단일 가변 도메인이 VHH 도메인인 약학적 조성물.
  20. 제18항 또는 제19항에 있어서, 화합물 A가 서열 번호 11, 서열 번호 12 또는 서열 번호 13에 따른 아미노산 서열을 갖는 약학적 조성물.
  21. 제18항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, PD-1 길항제가 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체인 약학적 조성물.
  22. 제21항에 있어서, 항-PD-1 항체가 펨브롤리주맙, 니볼루맙, 피딜리주맙, PD1-1, PD1-2, PD1-3, PD1-4 및 PD1-5로 이루어진 군으로부터 선택되는 약학적 조성물.
  23. 제22항에 있어서, 항-PD-L1 항체가 아테졸리주맙, 아벨루맙 및 더발루맙으로 이루어진 군에서 선택되는 약학적 조성물.
  24. 제18항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체, 부형제 및/또는 비히클을 추가로 포함하는 약학적 조성물.
  25. 제18항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 종양성 또는 과증식성 질환, 바람직하게는 암 또는 종양 질환, 보다 바람직하게는 NSCLC를 치료 및 예방하는 방법에 사용하기 위한 약학적 조성물.
  26. a) 화합물 A를 포함하는 제1 약학적 조성물 및
    b) 화합물 B를 포함하는 제2 약학적 조성물을 포함하고,
    여기서,
    화합물 A는 다음을 포함하는 이중 특이적 결합 분자이고:
    VEGF-결합 면역글로불린 단일 가변 도메인,
    혈청 알부민 결합 면역글로불린 단일 가변 도메인, 및
    Ang2-결합 면역글로불린 단일 가변 도메인;
    상기 VEGF 결합 면역글로불린 단일 가변 도메인은 하기 CDR 서열을 갖고:
    CDR1: SYSMG (서열 번호 1),
    CDR2: AISKGGYKYDAVSLEG (서열 번호 2),
    CDR3: SRAYGSSRLRLADTYEY (서열 번호 3);
    상기 혈청 알부민 결합 면역글로불린 단일 가변 도메인은 하기 CDR 서열을 가지며:
    CDR1: SFGMS (서열 번호 4),
    CDR2: SISGSGSDTLYADSVKG (서열 번호 5),
    CDR3: GGSLSR (서열 번호 6);
    상기 Ang2-결합 면역글로불린 단일 가변 도메인은 하기 CDR 서열을 갖고:
    CDR1: DYAIG (서열 번호 7),
    CDR2: AIRSSGGSTYYADSVKG (서열 번호 8),
    CDR3: VPAGRLRYGEQWYPIYEYDA (서열 번호 9);
    화합물 B는 PD-1 길항제인,
    키트.
  27. 제26항에 있어서, 화합물 A의 면역글로불린 단일 가변 도메인이 VHH 도메인인 키트.
  28. 제26항 또는 제27항에 있어서, 화합물 A가 서열 번호 11, 서열 번호 12 또는 서열 번호 13에 따른 아미노산 서열을 갖는 키트.
  29. 제26항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, PD-1 길항제가 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체인 키트.
  30. 제29항에 있어서, 항-PD-1 항체가 펨브롤리주맙, 니볼루맙, 피딜리주맙, PD1-1, PD1-2, PD1-3, PD1-4 및 PD1-5로 이루어진 군으로부터 선택되는 키트.
  31. 제29항에 있어서, 항-PD-L1 항체가 아테졸리주맙, 아벨루맙 및 더발루맙으로 이루어진 군에서 선택되는 키트.
  32. 제26항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 종양성 또는 과증식성 질환, 바람직하게는 암 또는 종양 질환, 특히 바람직하게는 NSCLC의 치료 또는 예방을 필요로 하는 환자에서 종양성 또는 과증식성 질환, 바람직하게는 암 또는 종양 질환, 특히 바람직한 NSCLC의 치료 또는 예방을 위해 상기 환자에게 동시, 동반, 순차적, 연속적, 교대 또는 별도의 투여에 대한 읽을 수 있는 지시 사항을 포함하는 패키지 삽입물을 추가로 포함하는 키트.
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Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2017120358A (ru) 2014-11-10 2018-12-13 Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг Анти-il-1-бета антитела и способы их применения
CA2963606A1 (en) * 2014-11-10 2016-05-19 F.Hoffmann-La Roche Ag Anti-ang2 antibodies and methods of use
JP2017537896A (ja) 2014-11-10 2017-12-21 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ 二重特異性抗体及び眼科に使用する方法
US11198726B2 (en) * 2017-06-02 2021-12-14 Boerhinger Ingelheim International Gmbh Anti-cancer combination therapy
WO2021209458A1 (en) 2020-04-14 2021-10-21 Ares Trading S.A. Combination treatment of cancer
US20220133734A1 (en) 2020-11-02 2022-05-05 Boehringer Ingelheim International Gmbh Substituted 1h-pyrazolo[4,3-c]pyridines and derivatives as egfr inhibitors
JP2023548522A (ja) 2020-11-04 2023-11-17 ハイデルベルク ファルマ リサーチ ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 免疫チェックポイント阻害剤と抗体－アマトキシンコンジュゲートの組合せを含む癌治療に使用するための組成物
CA3208117A1 (en) 2021-03-19 2022-09-22 Torsten HECHLER B-lymphocyte specific amatoxin antibody conjugates

Family Cites Families (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3883899T3 (de) 1987-03-18 1999-04-22 Sb2 Inc Geänderte antikörper.
ES2162823T5 (es) 1992-08-21 2010-08-09 Vrije Universiteit Brussel Inmunoglobulinas desprovistas de cadenas ligeras.
IL156955A0 (en) 2001-01-17 2004-02-08 Genecraft Inc Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
US20050284249A1 (en) 2004-06-29 2005-12-29 Arnone David F Worm type gear mover assembly
AU2005293752A1 (en) 2004-10-13 2006-04-20 Ablynx N.V. Single domain camelide anti-amyloid beta antibodies and polypeptides comprising the same for the treatment and diagnosis of degenarative neural diseases such as Alzheimer's disease
CA2607147C (en) 2005-05-09 2018-07-17 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Human monoclonal antibodies to programmed death 1 (pd-1) and methods for treating cancer using anti-pd-1 antibodies alone or in combination with other immunotherapeutics
PL1888640T3 (pl) 2005-05-18 2012-08-31 Ablynx Nv Ulepszone nanociała skierowane przeciwko czynnikowi martwicy nowotworów typu alfa
CN104945508B (zh) 2007-06-18 2019-02-22 默沙东有限责任公司 针对人程序性死亡受体pd-1的抗体
CN104548091A (zh) 2008-02-11 2015-04-29 治疗科技公司 用于肿瘤治疗的单克隆抗体
CN101965362A (zh) 2008-03-05 2011-02-02 埃博灵克斯股份有限公司 新型抗原结合二聚体-复合物及其制备方法和应用
US8168757B2 (en) 2008-03-12 2012-05-01 Merck Sharp & Dohme Corp. PD-1 binding proteins
US8268314B2 (en) 2008-10-08 2012-09-18 Hoffmann-La Roche Inc. Bispecific anti-VEGF/anti-ANG-2 antibodies
US9527925B2 (en) * 2011-04-01 2016-12-27 Boehringer Ingelheim International Gmbh Bispecific binding molecules binding to VEGF and ANG2
AU2013241769B2 (en) * 2012-03-30 2017-05-11 Boehringer Ingelheim International Gmbh Ang2-binding molecules
AU2013322564A1 (en) * 2012-09-28 2015-03-12 Boehringer Ingelheim International Gmbh Pharmaceutical combinations comprising dual Angiopoietin-2 / Dll4 binders and anti-VEGF agents
BR112015006363A2 (pt) * 2012-09-28 2017-08-08 Boehringer Ingelheim Int combinações farmacêuticas compreendendo ligantes angiopoietina-2/dll4 duplos e agentes anti-vegf-r
JOP20200094A1 (ar) 2014-01-24 2017-06-16 Dana Farber Cancer Inst Inc جزيئات جسم مضاد لـ pd-1 واستخداماتها
CN107406502A (zh) * 2015-04-23 2017-11-28 豪夫迈·罗氏有限公司 结合血管生成素2的抗体与结合编程性死亡配体1的抗体的组合疗法
WO2016170039A1 (en) * 2015-04-23 2016-10-27 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy of antibody binding to angiopoietin 2 with antibody binding to programmed death 1 polypeptide
CN114272371A (zh) 2015-07-29 2022-04-05 诺华股份有限公司 包含抗pd-1抗体分子的联合疗法
EP3432927A4 (en) * 2016-03-24 2019-11-20 Gensun Biopharma Inc. TRIPLE-SPECIFIC INHIBITORS FOR CANCER TREATMENT
IL262892B2 (en) * 2016-05-18 2024-04-01 Boehringer Ingelheim Int Anti-PD-1 and anti-LAG3 antibodies for cancer treatment
US11198726B2 (en) * 2017-06-02 2021-12-14 Boerhinger Ingelheim International Gmbh Anti-cancer combination therapy
US10793634B2 (en) * 2017-06-09 2020-10-06 Boehringer Ingelheim International Gmbh Anti-TrkB antibodies

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