KR20190135902A

KR20190135902A - 마늘 및 곤드레 유산균 발효물, 그의 제조방법 및 용도

Info

Publication number: KR20190135902A
Application number: KR1020180126805A
Authority: KR
Inventors: 김중학; 조혜영; 이순장; 오덕환; 이옥환; 달리리 에릭
Original assignee: 주식회사 이롬; 강원대학교산학협력단
Priority date: 2018-05-29
Filing date: 2018-10-23
Publication date: 2019-12-09
Also published as: KR102149139B1

Abstract

본 발명은 마늘 추출물 및 곤드레 효소처리 추출물의 혼합물을 유산균으로 발효시킨 마늘 및 곤드레 유산균 발효물, 그의 제조방법 및 이를 포함하는 항산화 및 면역개선용 조성물에 관한 것으로, 본 발명에 의한 상기 유산균 발효물은 음료 등과 같은 건강기능 식품의 소재로 활용할 수 있는 장점이 있다.

Description

마늘 및 곤드레 유산균 발효물, 그의 제조방법 및 용도{Fermented product of garlic and Cirsium setidens nakai by lactic acid bacteria, method of manufacturing the same, and use of the same}

본 발명은 마늘 및 곤드레 유산균 발효물, 그의 제조방법 및 용도에 관한 것으로, 보다 상세하게는 마늘 추출물 및 곤드레 효소처리 추출물의 혼합물을 유산균으로 발효시킨 마늘 및 곤드레 유산균 발효물, 그의 제조방법 및 이를 포함하는 항산화 및 면역개선용 조성물에 관한 것이다.

식품 첨가물, 농약, 화학비료, 의약품, 불규칙적인 식습관, 서구화된 식사 등으로 인해 면역력 감소로 인한 잦은 질병, 고혈압, 당뇨, 비만 등 성인병 환자가 계속 증가하고 있으며, 이에 따라 자연지향적인 삶이 강해짐과 동시에 건강 및 의료 정보 등 건강에 대한 관심이 계속적으로 증가하여 최근에는 기능성을 갖는 건강기능식품, 보조식품에 많은 관심이 증가하고 있다.

건강 식품의 기능적 활성은 카로티노이드, 식이 섬유, 폴리 불포화 지방산, 생체활성 펩타이드 및 페놀 화합물과 같은 수많은 생체활성 화합물에서 유래된다고 알려져 있다 (Trends in Food Science & Technology, 69, 214-219 (2017); Siscovick et al., Circulation, CIR (2017)).

마늘(Allium sativum L.)은 항산화, 항암, 항노화, 항균효과와 혈행개선, 심혈관계에 좋은 효과를 주는 것을 보고되어, 2002년 미국 시사주간지 타임이 선정한 10가지 건강식품에 포함되었고, 미국 국립암연구소는 항암작용이 있는 48개 식품 중 마늘을 첫 번째로 선정할 만큼 그 효능이 탁월하다고 알려져 있다.

곤드레(Cirsium setidens nakai)는 수세기 동안 전통 한의학으로 사용되어 왔는데, 국화과에 속하는 여러해 살이 풀로 주로 강원도에 분포한다. 상기 곤드레는 히스피둘린 7-O-네오헤스페리오사이드(hispidulin 7-O-neohesperidoside), 펙토리나린(pectolinarin), 루테오린(luteolin), 아피게닌(apigenin)과 같은 생리 활성 화합물을 포함하고 있기 때문에, 부종, 출혈 및 객혈 치료에 사용되었다 (Archives of pharmacal research, 34(3), 455 (2011)).

또한, 곤드레는 항산화 활성, 간 보호 활성, 비알콜성 지방간 질환에 대한 활성이 있다고 알려져 있다 (The American journal of Chinese medicine, 36(01), 107-114 (2008); Biological and Pharmaceutical Bulletin, 31(4), 760-764 (2008); Bioscience, biotechnology, and biochemistry, 77(7), 1424-1429 (2013)).

한편, 마늘을 활용한 종래기술로는 마늘 발효 추출물을 함유한 식품 첨가물(공개특허공보 제10-2018-0002046호), 마늘 발효 추출물을 함유한 화장품(공개특허공보 제2018-0001765호), 마늘 발효 추출물을 포함하는 면역증강용 조성물(공개특허공보 제10-2016-0060443호) 등이 개시되어 있다.

또한, 곤드레를 활용한 종래기술로는 생물전환을 통한 지방세포 분화 저해용 곤드레 발효물의 제조방법(공개특허공보 제10-2017-0079448호), 곤드레 추출물을 유효성분으로 하는 혈당강화용 조성물(공개특허공보 제10-2017-0058075호), 곤드레 추출물을 이용한 뇌신경세포 보호용 빵(공개특허공보 제10-2015-0092400호) 등이 개시되어 있다.

그러나, 항산화 활성 및 면역 활성이 우수한 곤드레는 채취 또는 재배하여 공급할 수 있는 양이 한정되어 있기 때문에, 마늘과 곤드레의 블렌딩을 통한 새로운 항산화 및 면역 강화용 조성물의 개발이 절실히 요구되고 있는 실정이다.

본 발명은 상기와 같은 종래기술의 문제점을 해결하기 위하여 안출된 것으로서, 본 발명의 목적은 마늘 및 곤드레 유산균 발효물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 상기 마늘 및 곤드레 유산균 발효물의 제조방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 마늘 및 곤드레 유산균 발효물을 포함함으로써, 항산화 활성 및 면역 활성이 강화된 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명은 상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 마늘 추출물 및 곤드레 효소처리 추출물의 혼합물을 유산균으로 발효시킨, 마늘 및 곤드레 유산균 발효물을 제공한다.

또한, 본 발명은 (a) 마늘 추출물 및 곤드레 효소처리 추출물을 혼합하는 단계, 및 (b) 상기 혼합된 마늘 추출물 및 곤드레 효소처리 추출물의 혼합물에 유산균을 접종하고, 발효시키는 단계를 포함하는 마늘 및 곤드레 유산균 발효물의 제조방법을 제공한다.

또한, 본 발명은 마늘 및 곤드레 유산균 발효물을 포함하는 항산화 및 면역개선용 조성물을 제공한다.

본 발명에 의하면, 마늘과 곤드레의 블렌딩 및 유산균 발효를 이용하여 항산화 활성 및 면역 활성이 증진된 마늘과 곤드레 유산균 발효물을 제공할 수 있다.

또한, 본 발명에 의하면 상기의 유산균 발효물을 음료 등과 같은 건강기능 식품의 소재로 활용할 수 있는 장점이 있다.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 마늘 및 곤드레 유산균 발효물의 제조 공정도를 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 곤드레 효소처리 추출물의 제조 공정도를 나타낸 것이다.
도 3은 2,2-디페닐-1-피크릴히드라질(DPPH) 자유 라디칼 소거능을 나타낸 것이다. 도 3에서 서로 다른 알파벳은 통계적 유의차를 나타내고(p<0.05), 이하의 도면에서도 이와 같다.
도 4는 FRAP(Fluorescence recovery after photobleaching) 활성을 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 5는 세포독성 평가 결과를 나타낸 것이다.
도 6은 곤드레 마늘 발효물의 DPPH 라디칼 소거능을 나타낸 것이다.
도 7은 곤드레 마늘 발효물의 FRAP 활성을 나타낸 것이다.
도 8은 곤드레 마늘 발효물의 세포 독성 결과를 나타낸 것이다.
도 9는 곤드레 마늘 발효물의 NO 생성능을 나타낸 것이다.
도 10은 곤드레 마늘 발효물의 TNF-α 생성능을 나타낸 것이다.
도 11은 곤드레 마늘 발효물의 IL-1β 생성능을 나타낸 것이다.
도 12는 곤드레 마늘 발효물의 IL-10 생성능을 나타낸 것이다.

본 발명은 마늘 추출물 및 곤드레 효소처리 추출물의 혼합물을 유산균으로 발효시킨, 마늘 및 곤드레 유산균 발효물에 관한 것이다.

본 발명에서, 용어 "추출물"은 당업계에서 조추출물(crude extract)로 통용되는 의미를 갖지만, 광의적으로는 추출물을 추가적으로 분획(fractionation)한 분획물도 포함한다.

즉, 상기 추출물은 추출 용매를 이용하여 얻은 것뿐만 아니라, 여기에 정제 과정을 추가적으로 적용하여 얻은 것도 포함한다. 예를 들어, 상기 추출물을 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막을 통과시켜 얻은 분획, 다양한 크로마토그래피(크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 분획도 상기 추출물에 포함되는 것이다.

상기 추출 용매로는 극성 용매를 이용할 수 있는데, 상기 극성 용매로서 적합한 것은, 정제수, 알코올(바람직하게는, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 노말-프로판올, 이소-프로판올, 노말-부탄올, 1-펜탄올, 2-부톡시에탄올 또는 에틸렌글리콜), 아세트산, DMFO(dimethyl-formamide) 및 DMSO(dimethyl sulfoxide)를 포함하고, 보다 바람직하게는, 정제수, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올 (메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올 등), 상기 저급 알코올과 정제수와의 혼합용매를 포함할 수 있으며, 가장 바람직하게는, 정제수, 메탄올, 에탄올 및 이의 혼합물일 수 있다.

본 발명에서, 용어 "발효물"은 유산균주를 이용하여 발효과정을 거친 산물을 칭하는 것으로서, 발효후 고형분이 제거 또는 제거되지 않은 것이 모두 포함된다.

본 발명의 상기 유산균 발효물에서, 상기 마늘 추출물 및 곤드레 효소처리 추출물의 혼합물은 상기 마늘 추출물 및 상기 곤드레 효소처리 추출물이 고형분 함량 기준으로 7:3~9:1의 부피비, 바람직하게는 7.5:2.5~8.5:1.5의 부피비, 보다 바람직하게는 8:2의 부피비로 혼합되어 있는 것일 수 있다.

본 발명의 상기 유산균 발효물에서, 상기 효소는 비스코자임(viscozyme)일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 상기 유산균 발효물에서, 상기 유산균은 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus), 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei), 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei), 락토바실러스 루테리(Lactobacillus reuteri), 락토바실러스 살리바리우스(Lactobacillus salivarius), 비피도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum), 비피도박테리움 브레브(Bifidobacterium breve), 비피도박테리움 락티스(Bifidobacterium lactis) 및 비피도박테리움 비피덤(Bifidobacterium bifidum)으로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 상기 유산균 발효물에서, 상기 유산균은 류코노스톡 메센테로이데스일 수 있고, 보다 바람직하게는 류코노스톡 메센테로이데스 KCTC 13302일 수 있다.

또한, 본 발명은 (a) 마늘 추출물 및 곤드레 효소처리 추출물을 혼합하는 단계, 및 (b) 상기 혼합된 마늘 추출물 및 곤드레 효소처리 추출물의 혼합물에 유산균을 접종하고, 발효시키는 단계를 포함하는 마늘 및 곤드레 유산균 발효물의 제조방법에 관한 것이다.

본 발명의 상기 유산균 발효물의 제조방법에서, 상기 마늘 추출물 및 곤드레 효소처리 추출물의 추출 용매로는 극성 용매를 이용할 수 있는데, 상기 극성 용매로서 적합한 것은, 정제수, 알코올(바람직하게는, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 노말-프로판올, 이소-프로판올, 노말-부탄올, 1-펜탄올, 2-부톡시에탄올 또는 에틸렌글리콜), 아세트산, DMFO(dimethyl-formamide) 및 DMSO(dimethyl sulfoxide)를 포함하고, 보다 바람직하게는, 정제수, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올 (메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올 등), 상기 저급 알코올과 정제수와의 혼합용매를 포함할 수 있으며, 가장 바람직하게는, 정제수, 메탄올, 에탄올 및 이의 혼합물일 수 있다.

본 발명의 상기 유산균 발효물의 제조방법에서, 상기 마늘 추출물은 마늘을 중량비로 2~3배, 바람직하게는 2.5배의 물에 침지시킨 후, 80~100℃, 바람직하게는 85~95℃의 열을 가하여 바람직하게는 3~5시간 동안 추출한 다음, 8~12 브릭스, 바람직하게는 9~11 브릭스로 농축시키는 단계를 포함하여 제조될 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 따른 마늘 추출물의 제조방법은 도 1에 나타낸 바와 같다.

본 발명의 상기 유산균 발효물의 제조방법에서, 상기 곤드레 효소처리 추출물은 건조시킨 곤드레를 중량비로 5~15배, 바람직하게는 8~12배, 보다 바람직하게는 9~11배의 물에 침지시킨 후, 80~100℃, 바람직하게는 85~95℃의 열을 가하여 바람직하게는 3~5시간 동안 추출한 다음 여과하는 단계; 및 상기 여과한 추출물을 8~12 브릭스로, 바람직하게는 9~11 브릭스 농축시킨 후, 40~55℃, 바람직하게는 45~55℃에서 5~8시간, 바람직하게는 5~7시간 동안 효소, 바람직하게는 비스코자임(viscozyme)을 처리하는 단계를 포함하여 제조될 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 따른 곤드레 효소처리 추출물의 제조방법은 도 2에 나타낸 바와 같다.

본 발명의 상기 유산균 발효물의 제조방법에서, 상기 (a) 단계는 상기 마늘 추출물 및 상기 곤드레 효소처리 추출물을 고형분 함량 기준으로 7:3~9:1, 바람직하게는 7.5:2.5~8.5:1.5의 부피비, 보다 바람직하게는 8:2의 부피비로 혼합할 수 있다.

본 발명의 상기 유산균 발효물의 제조방법에서, 상기 유산균은 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus), 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei), 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei), 락토바실러스 루테리(Lactobacillus reuteri), 락토바실러스 살리바리우스(Lactobacillus salivarius), 비피도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum), 비피도박테리움 브레브(Bifidobacterium breve), 비피도박테리움 락티스(Bifidobacterium lactis) 및 비피도박테리움 비피덤(Bifidobacterium bifidum)으로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 상기 유산균 발효물의 제조방법에서, 상기 유산균은 류코노스톡 메센테로이데스일 수 있고, 보다 바람직하게는 류코노스톡 메센테로이데스 KCTC 13302일 수 있다.

본 발명의 상기 유산균 발효물의 제조방법에서, 상기 발효는 36~38℃, 바람직하게는 37℃에서 36~60시간, 바람직하게는 46~50시간, 보다 바람직하게는 48시간 동안 침지 발효할 수 있다.

본 발명의 상기 유산균 발효물의 제조방법은 상기 (b) 단계 후에 멸균하고, 여과한 다음 농축하는 단계를 더 포함할 수 있다. 상기 멸균은 바람직하게는 100℃에서 1시간 동안 수행할 수 있고, 상기 농축은 25~35 브릭스, 바람직하게는 30 브릭스로 농축시킬 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

또한, 본 발명은 마늘 및 곤드레 유산균 발효물을 포함하는 항산화 및 면역개선용 조성물에 관한 것이다.

본 발명에서, 용어 "항산화(antioxidation)"는 산화를 억제하는 작용을 의미하고, 용어 "면역개선(immune improvement)"은 생체내 면역 시스템의 면역 반응 또는 활성을 증가시키는 것을 의미한다.

본 발명에서, 용어 "건강기능식품(health functional food)"은 인체에 유용한 기능을 갖는 원료를 사용하여 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상, 환 등의 형태로 가공된 보조 식품을 의미한다.

본 발명의 상기 항산화 및 면역개선용 조성물에서, 상기 조성물은 건강기능식품일 수 있다.

본 발명의 상기 항산화 및 면역개선용 조성물에서, 상기 조성물은 음료일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 건강기능식품으로는 본 발명의 마늘 및 곤드레 유산균 발효물을 차, 쥬스 및 드링크의 형태로 제조하여 음용하도록 하거나, 과립화, 캡슐화 및 분말화하여 섭취할 수 있다.

또한, 본 발명의 유산균 발효물과 항산화 및 면역기능 증진효과가 있다고 알려진 공지의 물질 또는 활성 성분과 함께 혼합하여 조성물의 형태로 제조할 수 있다.

본 발명의 상기 건강기능식품은 유효성분으로서 상기 유산균 발효물 뿐만 아니라, 식품 제조시에 통상적으로 첨가되는 성분을 포함하며, 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소, 조미제 및 향미제를 포함한다.

상기 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스, 올리고당 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 사이클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜을 들 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 향미제로는 천연 향미제(타우마틴; 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등과 같은 스테비아 추출물) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 사용할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

예를 들어, 본 발명의 상기 건강기능식품 조성물이 음료 조성물인 경우에는 본 발명의 상기 유산균 발효물 이외에 구연산, 액상과당, 설탕, 포도당, 초산, 사과산, 사과농축액, 배농축액, 당귀농축액, 대추농축액, 감초농축액, 오미자농축액, 복합황금추출물 등을 추가로 포함시킬 수 있다.

본 발명의 상기 항산화 및 면역개선용 조성물에서, 상기 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체를 더 포함하는 약학 조성물일 수 있다.

본 발명의 상기 항산화 및 면역개선용 조성물에서, 상기 약학 조성물은 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 상기 항산화 및 면역개선용 조성물에서, 상기 조성물은 화장료 조성물일 수 있다.

본 발명의 상기 항산화 및 면역개선용 조성물에서, 상기 화장료 조성물은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있는데, 예를 들어 크림, 로션, 스킨, 유연화장수, 수렴화장수, 파운데이션, 클린징, 세안제, 비누, 미용액 등의 제형으로 제제화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 상기 항산화 및 면역개선용 조성물 중 상기 유산균 발효물의 바람직한 함량은 0.01 내지 50 중량%이지만, 이에 한정되는 것은 아니다.

이하, 본 발명을 실시예를 통하여 상세히 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 구체적으로 설명하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.

<실시예 1> (마늘 및 곤드레 원료의 최적조건 확립)

1. 실험 방법

1-1. 시료

마늘(Allium sativum)과 효소처리된 곤드레는 ㈜이롬(Erom company Limited, Korea)에서 구입하였다. 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides) KCTC 13302는 강원대학교 식품생명공학과에서 입수하였다. 상기 균주는 이전 실험에서 생물학적으로 가장 강한 활성을 갖는 마늘 제품을 생산했기 때문에 선택되었다.

1-2. 화학약품 및 시약

삼염화 초산(TCA), 갈산 및 Folin-Ciocalteau's 시약은 Sigma-Aldrich, Inc.(한국)에서 조달하였다. 디니트로페닐 하이드라진(DNPH)은 ACROS Organics (New Jersey, USA)에서, 과산화수소, 메탄올 및 FeCl₃는 BDH Chemicals Ltd. (Poole, England)에서 구입하였고, 티오우레아(thiourea), CuSO₄·5H2O, H₂SO₄, 탄산나트륨, AlCl₃, 칼륨 아세테이트, 트리스 염산 완충액, FeSO₄, 페리시안화 칼륨 및 염화제2철은 분석 등급이었고, 물은 유리 증류(glass distillation)되었다.

1-3. 균주 배양

류코노스톡 메센테로이데스 KCTC 13302를 MRS 브로쓰 배지에서 37℃에서 36시간 동안 생장시켰다. 배양물을 원심분리하여 세포 펠릿을 얻은 다음, 재증류수(double distilled water)로 2회 세척하였다. 그런 다음 세포를 증류수로 희석하고 사용할 때까지 4℃에서 보관하였다.

1-4. 마늘과 곤드레의 준비

마늘을 껍질을 벗기고, 세척한 후, 믹서기를 사용하여 층류 후드(laminar flow hood)에서 건조시키고, 블렌더를 사용하여 갈았다. 마늘 100g을 전자저울로 칭량하고 증류수 250mL와 혼합하였다.

상기에서 얻은 혼합물을 100℃에서 1시간 동안 쪄서 50℃로 냉각시켰다. 0.5mL의 셀룰라아제를 30분 동안 첨가한 후, 0.75 mL의 프로테아제를 1시간 동안 첨가하였다. 1.25mL의 아밀라아제를 첨가하고, 70℃에서 1시간 동안 가열하였다.

그 후 효소를 90℃에서 30분 동안 온도를 증가시켜 비활성화시키고, 혼합물을 농축하여 7 브릭스를 얻었다. 시료를 17%로 농축시켜 10 브릭스로 조정한 후, 동결건조시켰다.

곤드레를 제조하기 위하여, 곤드레 원물을 90℃에서 2회 물로 추출하고 여과하였다. 그 후 시료를 10 브릭스로 농축하고, 50℃에서 6시간 동안 0.5% viscozyme(v/v)로 처리하였다. 그 후 시료를 냉각하고 동결 건조시켜, 사용할 때까지 영하 20℃에서 보관하였다 (도 2 참조).

마늘과 곤드레의 비율을 각각 90:10, 80:20, 50:50, 100 :0 및 0:100의 부피비로 혼합하고, 고압증기 멸균하였다.

1-5. 곤드레 마늘 발효물의 제조

다양한 비율의 마늘과 곤드레(90:10, 80:20, 50:50의 부피비)에 0.1% Leuconostoc mesenteroides KCTC 13302(v/v)를 증류수로 접종하였다. 시료를 37℃ 에서 48시간 동안 배양하였다. 그 후 시료를 100℃에서 1시간 동안 가열하여 멸균시키고, 30 브릭스로 농축시켰다. 최종 pH는 5.4~5.7이었다.

1-6. 생리활성 평가를 위한 시료

생곤드레(S1), 효소처리 곤드레(S2), 생마늘(S3), 발효마늘(S4), 효소처리 곤드레 10%(0.1g)와 발효마늘 90%(0.9g) 혼합물(S5), 효소처리 곤드레 20%(0.2g)와 발효마늘 80%(0.8g) 혼합물(S6), 마늘 90%와 효소처리 곤드레 10% 혼합물의 발효물(S7), 마늘 80%와 효소처리 곤드레 20% 혼합물의 발효물(S8), 효소처리 곤드레 50%와 발효마늘 50%의 혼합물(S9) 및 마늘 50%와 효소처리 곤드레 50% 혼합물의 발효물(S10)을 대상으로 하여 이하의 생리활성 평가를 하였다.

1-7. 총 페놀 함량의 측정

총 페놀 함량은 약간의 수정을 가한 Singleton, Orthofer, & Lamuela-Raventos, 1999(Methods in enzymology, Vol. 299, pp. 152-178)의 방법에 따라 결정되었다. 수성 추출물 중에서 시료(시료:물=1:100)를 채취하여 여과하고 100㎕를 10% Folin-Ciocalteau's 시약(v/v) 2.5mL로 시험관 내에서 산화시킨 후, 7.5% 소디움카보네이트 2.0mL를 첨가하여 중화시켰다.

반응 혼합물을 45℃에서 40분간 배양하고, 바이오스펙트로미터(Eppendorf Biospectrometer^® fluorescence, Eppendorf Korea, Korea)을 이용하여 765nm에서 흡광도를 측정하였다. 이어서, 총페놀 함량은 갈산 흡광도의 표준곡선으로부터 계산하여 갈산 당량(gallic acid equivalent)으로 나타내었다.

1-8. 총 플라보노이드 함량

조 추출물의 총 플라보노이드 함량은 염화알루미늄 비색법(Chang, Yang, Wen, & Chern, 2002, Journal of food and drug analysis, 10(3))에 의해 결정되었다.

간단히 말하면, 50μL의 시료(1 mg/mL 에탄올)를 메탄올로 1 mL까지 만들고, 4 mL의 증류수와 섞은 다음 0.3 mL의 5% NaNO₂ 용액과 혼합하였다. 10% AlCl₃ 용액 0.3 mL를 5분간 배양한 후 첨가하고, 혼합물을 6분간 방치하였다.

그런 다음, 1 mol/L NaOH 용액 2 mL를 첨가하고 혼합물의 최종 부피를 재증류수로 10 mL가 되게 한 후, 혼합물을 15분간 방치하고 510nm에서 흡광도를 측정 하였다.

총 플라보노이드 함량은 검량선으로부터 계산하였고, 그 결과는 건조 중량 (g) 당 mg 루틴 당량으로 나타내었다.

1-9. 항산화 활성

1-9-1. 2,2-디페닐-1- 피크릴하이드라질 자유 라디칼 소거능 ( DPPH )

시료의 수소 원자 또는 전자 공여능은 보라색의 DPPH 메탄올 용액의 표백(bleaching)으로부터 측정되었다. DPPH(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) 유리 라디칼에 대한 추출물의 자유 라디칼 소거능은 Gyamfi, Yonamine, & Aniya의 방법(The Vascular System, 32(6), 661-667 (1999))으로 평가하였다.

추출물(1 mL)의 희석액을 DPPH 라디칼을 함유하는 0.4 mM 메탄올 용액 1 mL과 혼합하고, 혼합물을 어두운 곳에서 30분간 방치한 후, 바이오스펙트로미터(Eppendorf Biospectrometer^® fluorescence, Eppendorf Korea)를 이용하여 516nm에서 흡광도를 측정하였다.

시료의 라디칼 소거능(A₁)은 사용된 음성 대조군인 물에서의 라디칼 저해(A₀)와 비교하여, 시료에 의해 저해된 DPPH 자유 라디칼의 백분율로 계산하였다. DPPH 저해는 다음 식으로 계산하였다.

DPPH 소거 효과(% 저해) = ((A₀-A₁) / A₀) × 100

1-9-2. 환원성의 결정

추출물의 환원성은 FeCl₃ 용액을 환원시키는 추출물의 능력을 평가하여 결정하였다(Zhao et al., 2008, Food Chemistry, 107(1), 296-304). 분액 추출물 2.5 mL를 200 mM 인산나트륨 완충액(pH 6.6) 2.5 mL 및 1% 페리시안화 칼륨 2.5 mL와 혼합하였다.

혼합물을 50℃에서 20분 동안 배양한 후, 2.5 mL의 10% 트리클로로아세트산을 첨가하였다. 이 혼합물을 45 x g에서 10분간 원심분리하고, 5 mL의 상층액을 같은 부피의 물과 혼합한 후 0.1% 염화제이철 1 mL를 첨가하였다.

흡광도는 바이오스펙트로미터(Eppendorf Biospectrometer^® fluorescence, Eppendorf Korea, Korea)으로 700nm에서 측정하였다. 이때 아스코르브산을 양성 대조군으로 사용하였다. 이어서 철분 환원 항산화(frttic reducing antioxidation) 특성을 계산하였다.

1-10. 세포독성 평가

곤드레와 마늘을 이용하여 조제한 상기 시료 10종에 대하여 세포독성 여부를 확인하기 위하여, 시험관 내(in vitro)에서 세포생존능 어세이(XTT assay)를 수행하였다.

상기 XTT 어세이는 포식세포를 1X10⁴ 세포/웰의 밀도로 96-웰 플레이트에 첨가하고 상기 시료의 에탄올 추출물dmf 첨가하여 3일간 배양한 후, XTT 용액 50㎕를 각각의 웰에 첨가하고 4시간 배양 후 ELISA reader(Molecular Devices, CA, USA)를 이용하여 450nm에서 흡광도를 확인하는 방법으로 수행하였다.

1-11. NO 생성능 측정

곤드레와 마늘을 이용하여 조제한 상기 시료 10종에 대하여, 시료가 대식세포를 활성화시켜 NO 생성에 미치는 영향을 보기 위하여, Raw 264.7 세포에 각각의 시료를 50, 100, 200 μg/mL 농도로 처리하여 NO(nitric oxide) 생성능을 측정하였다.

2. 실험 결과

2-1. 총 페놀 및 총 플라보노이드 화합물 분석

곤드레와 마늘을 이용하여 조제한 상기 시료 10종, 즉 생곤드레(S1), 효소처리 곤드레(S2), 생마늘(S3), 발효마늘(S4), 효소처리 곤드레 10%(0.1g)와 발효마늘 90%(0.9g) 혼합물(S5), 효소처리 곤드레 20%(0.2g)와 발효마늘 80%(0.8g) 혼합물(S6), 마늘 90%와 효소처리 곤드레 10% 혼합물의 발효물(S7), 마늘 80%와 효소처리 곤드레 20% 혼합물의 발효물(S8), 효소처리 곤드레 50%와 발효마늘 50%의 혼합물(S9) 및 마늘 50%와 효소처리 곤드레 50% 혼합물의 발효물(S10)을 대상으로 하여 총 페놀 및 총 플라보노이드 화합물을 분석한 결과를 하기 표 1에 나타내었다.

상기 표 1에서 보는 바와 같이, 총 페놀의 함량은 시료별로 S1, S2, S9, S8, S5의 순으로 함량이 높은 것으로 나타났으며, 총 플라보노이드 함량은 시료별로 S2, S9, S5, S6, S8의 순으로 높은 것으로 나타 났다.

마늘 발효물의 개별 원료 보다 곤드레 효소처리 원료와 마늘 발효물의 혼합물이 총 페놀의 함량이 보다 증가한 것으로 확인되었으며, 곤드레 효소처리 원료의 함량비가 증가할수록 보다 증가하는 것으로 나타났다.

2-2. 항산화 활성

2-2-1 2,2-디페닐-1- 피크릴하이드라질 ( DPPH ) 자유 라디칼 소거능

각 시료의 라디칼 소거능을 확인하기 위하여 L-아스코르브산(AsA)을 표준물지로 대조하여 10, 50, 100 ㎍/㎖ 농도로 조제하여 DPPH 라디칼 소거능을 비교한 결과를 도 3에 나타내었다.

도 3에서 보는 바와 같이, 모든 시료가 전반적으로 항산화 활성이 우수한 것으로 평가 되었으며, 특히 S1, S2, S9, S6, 및 S8 시료가 DPPH 라디칼 소거능이 우수한 것으로 나타났다.

2-2-2. 환원성의 결정

FRAP 활성을 측정하여 각 샘플의 항산화 능력을 평가하였는데, FRAP 활성을 측정한 결과를 도 4에 나타내었다.

도 4에서 보는 바와 같이, S1, S9, S2, S8 순으로 항산화능이 높은 것으로 나타났다. 또한 마늘 발효물 보다 마늘 발효물과 곤드레를 혼합한 경우 항산화력이 더욱 높아지는 것을 확인하였으며, 곤드레 함량이 높을수록 항산화능이 더 높게 증가하는 것으로 나타났다.

총 페놀 화합물과 플라보노이드의 함량 분석 결과와 DPPH 라디칼 소거능 및 FRAP 분석을 통한 항산화 활성과 비교해 보면, 항산화력은 플라보노이드의 함량 보다 총 페놀 화합물의 함량에 더 높은 상관관계가 있는 것으로 보여진다.

2-3. 세포독성

XTT 어세이를 이용한 세포독성 측정 결과를 도 5에 나타내었다.

도 5에서 보는 바와 같이, 상기 시료 10종은 50, 100, 200 μg/mL 농도에서 모두 90% 이상의 세포 생존율을 나타내어, 세포독성에 영향을 미치지 않는 것으로 평가되었다.

2-4. NO 생성능

실험 결과, 각각의 시료 처치에 따라 농도 의존적으로 NO 생성능이 증가하는 경향을 나타내었다. 특히 시료 중 S8이 5.35, 6.43, 8.23 μM의 농도로 NO를 생성한 것으로 나타나, 다른 시료 보다 유의하게 면역활성이 높은 것으로 평가되었다.

3. 고찰

상기와 같이, 총 페놀 화합물 및 총 플라보노이드의 함량, DPPH 라디칼 소거능 및 FRAP 분석을 통한 항산화 활성 평가와 대식세포의 NO 생성능을 지표로 하여 면역활성을 평가하였는 바, S1에서 S10의 각각의 시료에 대하여 모든 시료는 처치 농도가 증가할수록 항산화 활성 및 면역증진 효능이 증가하는 것으로 나타났으며, 특히 마늘 발효물 또는 곤드레 효소처리물의 단독 원료 보다는 두 원료를 혼합한 경우 활성이 더욱 높은 것으로 나타났다.

곤드레의 경우 효소처치를 하지 않은 것보다 효소처치를 한 경우 활성이 보다 높은 것으로 나타났으며, 곤드레의 함량이 증가함에 따라 항산화 및 면역활성이 유의하게 증가하는 경향을 나타났다.

본 연구의 결과로부터 마늘과 곤드레의 최적 공정은, 곤드레 효소처리물과 마늘 발효물의 혼합 공정인 것으로 확인되었다.

한편, 곤드레는 원료의 단가가 매우 고가로서, 상기의 연구 결과를 고려하여 50%까지 혼합할 경우(S9) 경제성이 떨어지는 문제가 있고, 곤드레 발효물을 20%로 혼합한 시료(S8)의 경우 S9보다 항산화 및 면역활성이 크게 감소하지 않는 것으로 나타났다.

따라서, 원료의 생리활성 기능과 경제성을 고려하여, 본 연구의 마늘과 곤드레의 생물전환을 위한 최적 원료 혼합비는 마늘 80%와 곤드레 20%를 혼합하는 비율로 확정하였다.

<실시예 2> (곤드레 마늘 발효물의 인비트로 기능성 평가)

1. 기능성 성분 분석

(1). DPPH 라디칼 소거능

상기 실시예 1의 최적화된 공정을 적용하여 시생산한 곤드레 마늘 발효물 원료(FCG)의 항산화능을 평가하기 위하여, 상기 실시예 1과 같이 DPPH 라디칼 소거능을 측정한 결과를 도 6에 나타내었다.

도 6에서 보는 바와 같이, 곤드레 마늘 발효물의 DPPH 라디칼 소거능을 측정한 결과, 원료를 0.1, 0.5, 1 mg/mL로 세포에 처리하였을 때 농도 의존적으로 DPPH 라디칼 소거능이 증가하였다.

또한, 500 μg/mL의 농도로 처리하였을 때, 10 μg/mL 농도의 L-ascorbic acid(AsA)에 상응하는 DPPH 라디칼 소거능을 나타내었다.

(2). FRAP 분석

상기 실시예 1과 같이 곤드레 마늘 발효물의 FRAP 활성을 분석한 결과를 도 7에 나타내었다.

도 7에서 보는 바와 같이, 로트(Lot) 혼합물을 농도별로 처리하였을 때 유의적으로 FRAP 활성이 증가하였고, 500μg/mL 농도로 처리한 경우 대조구 L-ascorbic acid(AsA) 10 μg/mL 보다 높은 FRAP 활성을 보였다.

2. 곤드레 마늘 발효물의 인비트로 면역 활성 평가

(1). 세포독성

선정된 원료가 적용된 곤드레 마늘 발효물(FCG)의 세포독성 여부를 확인하기 위해 XTT 어세이를 이용하여 세포 독성능을 측정한 결과를 도 8에 나타내었다.

도 8에서 보는 바와 같이, 곤드레 마늘 발효물을 50, 100, 200 μg/mL 농도로 처리한 경우 모두 90% 이상의 세포 생존율을 나타내어, 세포독성에 큰 영향을 미치지 않는 것으로 나타났다.

(2). NO 생성능

상기 실시예 1과 같은 방법으로 곤드레 마늘 발효물을 50, 100, 200 μg/mL 농도로 처리한 결과를 도 9에 나타내었다.

도 9에서 보는 바와 같이, 곤드레 마늘 발효물의 경우 4.83, 4.71, 5.14 μM의 NO를 생성하여, 비처리군과 비교하였을 때 유의적으로 높은 NO를 생성하였다.

(3). TNF-α 생성능

TNF-α는 활성화된 대식세포 또는 비장세포에서 분비되는 염증성 사이토카인(Cytokine)으로서, 인체에 침입한 병원체 및 종양세포들에 대한 제거 활성을 증진시키며, 림프구와 상호작용하여 림프구의 활성과 성장 등을 조절한다.

따라서, 면역 증진 효과를 평가하기 위해 대식세포에 시험물질을 가하여 배양하면서 TNF-α생성에 미치는 영향을 관찰한 결과를 도 10에 나타내었다.

도 10에서 보는 바와 같이, 곤드레 마늘 발효물을 처리하여 배양한 세포 배양액의 TNF-α 생성이 모두 증가한 결과를 보였으며, 곤드레 마늘 발효물이 대식세포를 활성화시키고 TNF-α생성을 촉진하여, 면역력을 증진시키는데 효과적임을 확인하였다.

(4). 인터류킨(Interleukine) 생성능

IL-1β는 단핵 백혈구와 대식세포계 세포에 의해 생성되는 사이토카인으로 T 세포를 활성화시키고, T 세포에서 분비되는 IL-2와 같은 사이토카인의 활성을 증진시키는 등 사이토카인 네트워크에 중요한 역할을 한다.

또한, IL-10은 B 세포의 증식을 유도하여 lgM, lgG, lgA 항체의 생산을 증가시키며, T 세포에 대한 사이토카인 합성 억제 역할을 하는 등 생체 내에서 면역 억제 역할과 부분적으로 림프구의 성장 촉진의 역할을 동시에 수행한다.

따라서, 원료의 면역 증강 효과를 평가하기 위해 대식세포에 첨가하여 배양하여 IL-1β 및 IL-10 생성에 미치는 영향을 관찰한 결과를 도 11 및 도 12에 나타내었다.

도 11에서 보는 바와 같이, 곤드레 마늘 발효물을 대식세포에 농도별로 처리 하였을 때, 대조군에 비해 유의적으로 높은 IL-1β 생성능을 보였다.

또한, 도 12에서 보는 바와 같이, IL-10 생성능 또한 비처리구보다 유의적으로 증가하여 면역 증강 효능이 있음을 확인하였다.

<실시예 3> (곤드레 마늘 발효물을 포함하는 건강음료의 제조)

주원료로는 마늘과 곤드레를 생물전환 공정을 통하여 생산한 마늘 곤드레 발효물(마늘:곤드레=80:20)을 주성분으로 하였으며, 부원료로는 다양한 식물유래 천연농축액을 단가, 맛, 향 및 원료의 이미지를 고려하여 배농축액, 사과농축액, 유자농축액 등 과일 종류와 오미자농축액, 생강농축액, 당귀농축액, 대추농축액, 감초농축액 등의 한방원료 들을 선정하였다.

1. 곤드레 마늘 발효물의 순수한 발효농축 컨셉

순수한 마늘과 곤드레 발효 농축액의 이미지를 부각시켜 관능을 위한 원료만을 최소한으로 사용하여 하기 표 2와 같은 레시피를 제조하였다(A 그룹). 하기 표 2에서, 원재료 이외의 성분은 정제수이다.

2. 과즙 타입의 상큼하고 맛있는 발효음료 컨셉

최근 젊은 층의 트랜드에 맞추어, 마늘이 주는 스테미너의 이미지와 젊은 층이 선호하는 과즙향과 맛을 가미하여, 무탄산 또는 탄산음료 타입의 에너지드링크 컨셉의 하기 표 3과 같은 레시피를 제조하였다(B 그룹). 하기 표 3에서, 원재료 이외의 성분은 정제수이다.

3. 한방 발효음료 컨셉

한방 관능 컨셉의 제품은 다양한 계층에서 선호도가 높은 관능으로, 최근 액상 파우치 또는 스틱제품에서 시장이 크게 성장하는 추세로 마늘 곤드레 발효물을 한방 원료들과 혼합한 하기 표 4와 같은 레시피를 제조하였다(C 그룹). 하기 표 4에서, 원재료 이외의 성분은 정제수이다.

<실시예 4> (관능 평가)

1. 평가 방법

곤드레 마늘 발효물 및 부원료를 다양한 비율로 혼합하여 상기 실시예 3과 같이 제조한 곤드레 마늘 발효 음료 9종에 대해 훈련된 관능검사 패널 15명을 대상으로 관능 평가를 실시하였다.

시료는 세자리 숫자로 표시하였으며 각각의 시료를 시음한 후에는 입을 헹굴 수 있도록 상온의 물을 제공하였고, 평가는 7가지 평가항목 (전체적 느낌, 외관, 향, 맛, 입안느낌, 뒷맛, 만족도)으로 진행하였으며, 평가 척도는 7점 척도(1: 대단히 싫다, 7: 대단히 좋다)가 사용되었다.

음료 9종의 관능적 특성, 기호도 검사 결과에 대해 시료 간의 유의적 차이를 검증하기 위해 분산분석(analysis of variance, ANOVA)을 수행하였으며, 그 결과에 따라 Duncan’s multiple range test를 수행하였다(α=0.05). 통계 분석에는 SPSS statics 17.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA)을 사용하였다.

2. 평가 결과

곤드레 마늘 발효 음료 9종은 컨셉별 세 그룹으로 나누어 기호도 분석 및 그룹별 순위를 확인하였다.

원료 집중 컨셉인 A 그룹의 음료 3종의 종합 기호도 분석 결과를 하기 표 5에 나타내었는데, 전체 종합 기호, 종합 선호 및 만족도에서 A1이 A2, A3 보다 높은 것으로 평가되었다.

세부 기호도 결과는 하기 표 6에 나타내었는데, 맛, 뒷맛에서 A1이 A2, A3 보다 좋은 것으로 평가되었고, 외관, 향, 입안 느낌에서는 시료 간 차이가 뚜렷하지 않은 것으로 확인되었다.

과일 첨가 컨셉인 B 그룹 음료 3종의 종합 기호도 분석 결과는 하기 표 7에 나타네었는데, 전체 종합 기호도 및 만족도 항목에서는 시료간 차이가 없었고, 종합 선호도에서는 B3이 B1, B2보다 높은 것으로 확인되었다.

세부 기호도 결과는 하기 표 8에 나타내었는데, 외관, 향, 맛, 입안 느낌은 시료간 유의적인 차이가 없었고, 뒷맛 항목에서는 B3가 B1, B2보다 기호도가 높은 것으로 평가되었다.

한방 컨셉인 C 그룹 음료 3종의 종합 기호도 분석 결과는 하기 표 9에 나타내었는데, 전체 종합 기호도 및 종합 선호도에서 C2가 나머지 시료보다 높게 평가되었고, 만족도에서는 유의적인 차이가 없었다. 만족도 항목에서는 시료간 차이가 없었고, 종합 선호도에서는 B3이 B1, B2보다 높은 것으로 확인되었다.

세부 기호도 결과는 하기 표 10에 나타내었는데, 외관, 향, 입안 느낌, 뒷맛에서는 시료간 차이가 없었고, 맛 항목에서는 C2가 C1, C3보다 높은 것으로 평가되었다.

또한, 각 그룹별로 기호도가 높았던 A1, B3, C2의 만족도 및 종합 기호도를 하기 표 11에 나타내었는데, 종합 기호도와 종합 선호도에서 C2가 A1, B3보다 높은 것으로 평가되었고, 만족도에서는 시료간 유의적 차이가 없었다.

A1, B3, C2의 세부 기호도를 하기 표 12에 나타내었는데, 맛, 입안 느낌 항목에서 C2가 다른 시료보다 기호도가 높은 것으로 평가되었고, 외관, 향, 뒷맛 항목에서는 유의적 차이가 없었다.

3. 결론 및 고찰

곤드레 마늘 발효음료 9종의 관능평가를 진행한 결과, 각 그룹별로는 A1, B3, C2가 종합 선호도 및 기호도가 높은 것으로 확인되었으며, 3종류의 시료(A1, B3, C2)의 기호도를 비교한 결과, C2가 가장 관능적으로 선호도가 높은 것으로 확인되었다.

<실시예 5> (곤드레 마늘 발효물을 포함하는 건강음료의 제조)

상기 실시예 1의 1-5에서 제조한 마늘 및 곤드레 발효물(마늘:곤드레=80:20) .......................... 1 g

비타민 C..............................15 g

비타민 E (분말)......................100 g

젖산철 ...............................19.75 g

산화아연...............................3.5 g

니코틴산아미드.........................3.5 g

비타민 A...............................0.2 g

비타민 B1..............................0.25 g

비타민 B2 .............................0.3g

물 ................................... 1 L

통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 1시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2 L 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관하여 건강음료 조성물을 제조하였다.

상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 수요 계층, 수요 국가, 사용 용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

상술한 바와 같이 본 발명의 바람직한 실시예를 참조하여 설명하였지만, 본 발명의 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 통상의 기술자라면 하기의 청구범위에 기재된 본 발명의 사상 및 영역으로부터 벗어나지 않는 범위 내에서 본 발명을 다양하게 수정 및 변경시킬 수 있음을 이해할 수 있을 것이다.

본 발명에 의하면, 마늘과 곤드레의 블렌딩 및 유산균 발효를 이용하여 항산화 활성 및 면역 활성이 증진된 마늘과 곤드레 유산균 발효물을 제공할 수 있고, 상기의 유산균 발효물을 음료 등과 같은 건강기능 식품의 소재로 활용할 수 있는 장점이 있기 때문에, 본 발명이 속하는 기술분야에 유용하게 적용될 수 있다.

Claims

마늘 추출물 및 곤드레 효소처리 추출물의 혼합물을 유산균으로 발효시킨, 마늘 및 곤드레 유산균 발효물.
제1항에 있어서, 상기 혼합물은 상기 마늘 추출물 및 상기 곤드레 효소처리 추출물이 고형분 함량 기준으로 7:3~9:1의 부피비로 혼합되어 있는 것을 특징으로 하는 마늘 및 곤드레 유산균 발효물.
제1항에 있어서, 상기 효소는 비스코자임(viscozyme)인 것을 특징으로 하는 마늘 및 곤드레 유산균 발효물.
제1항에 있어서, 상기 유산균은 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus), 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei), 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei), 락토바실러스 루테리(Lactobacillus reuteri), 락토바실러스 살리바리우스(Lactobacillus salivarius), 비피도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum), 비피도박테리움 브레브(Bifidobacterium breve), 비피도박테리움 락티스(Bifidobacterium lactis) 및 비피도박테리움 비피덤(Bifidobacterium bifidum)으로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상인 것을 특징으로 하는 마늘 및 곤드레 유산균 발효물.
(a). 마늘 추출물 및 곤드레 효소처리 추출물을 혼합하는 단계; 및
(b). 상기 혼합된 마늘 추출물 및 곤드레 효소처리 추출물의 혼합물에 유산
균을 접종하고, 발효시키는 단계를 포함하는, 마늘 및 곤드레 유산균 발효물의 제조방법.
제5항에 있어서, 상기 마늘 추출물은, 마늘을 중량비로 2~3배의 물에 침지시킨 후, 80~100℃의 열을 가하여 3~5시간 동안 추출한 다음, 8~12 브릭스로 농축시키는 단계를 포함하여 제조되는 것을 특징으로 하는 마늘 및 곤드레 유산균 발효물의 제조방법.
제5항에 있어서, 상기 곤드레 효소처리 추출물은, 건조시킨 곤드레를 중량비로 5~15배의 물에 침지시킨 후, 80~100℃의 열을 가하여 3~5시간 동안 추출한 다음 여과하는 단계; 및
상기 여과한 추출물을 8~12 브릭스로 농축시킨 후, 40~55℃에서 5~8시간 동안 비스코자임(viscozyme)을 처리하는 단계를 포함하여 제조되는 것을 특징으로 하는 마늘 및 곤드레 유산균 발효물의 제조방법.
제5항에 있어서, 상기 (a) 단계는 상기 마늘 추출물 및 상기 곤드레 효소처리 추출물을 고형분 함량 기준으로 7:3~9:1의 부피비로 혼합하는 것을 특징으로 하는 마늘 및 곤드레 유산균 발효물의 제조방법.
제5항에 있어서, 상기 유산균은 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus), 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei), 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei), 락토바실러스 루테리(Lactobacillus reuteri), 락토바실러스 살리바리우스(Lactobacillus salivarius), 비피도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum), 비피도박테리움 브레브(Bifidobacterium breve), 비피도박테리움 락티스(Bifidobacterium lactis) 및 비피도박테리움 비피덤(Bifidobacterium bifidum)으로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상인 것을 특징으로 하는 마늘 및 곤드레 유산균 발효물의 제조방법.
제5항에 있어서, 상기 발효는 36~38℃에서 36~60시간 동안 침지 발효하는 것을 특징으로 하는 마늘 및 곤드레 유산균 발효물의 제조방법.
제5항에 있어서, 상기 (b) 단계 후에 멸균하고, 여과한 다음 농축하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 마늘 및 곤드레 유산균 발효물의 제조방법.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 마늘 및 곤드레 유산균 발효물을 포함하는 항산화 및 면역개선용 조성물.
제12항에 있어서, 상기 조성물이 건강기능식품인 것을 특징으로 하는 마늘 및 곤드레 유산균 발효물을 포함하는 항산화 및 면역개선용 조성물.
제12항에 있어서, 상기 조성물이 음료인 것을 특징으로 하는 마늘 및 곤드레 유산균 발효물을 포함하는 항산화 및 면역개선용 조성물.