KR20190062985A

KR20190062985A - 케일 해수 추출물, 물냉이 해수 추출물 및 비트 뿌리 해수 추출물의 혼합물을 포함하는 피부 상태 개선용 화장료 조성물

Info

Publication number: KR20190062985A
Application number: KR1020170161705A
Authority: KR
Inventors: 신수정; 명길선; 신보현; 이은수; 진유진
Original assignee: (주)아모레퍼시픽
Priority date: 2017-11-29
Filing date: 2017-11-29
Publication date: 2019-06-07
Also published as: CN111465385A; WO2019107753A3; KR102463134B1; US20200368142A1; WO2019107753A2

Abstract

본 발명은 케일 해수 추출물, 물냉이 해수 추출물 및 비트 뿌리 해수 추출물의 혼합물을 포함하는 피부 상태 개선용 화장료 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 케일 해수 추출물, 물냉이 해수 추출물 및 비트 뿌리 해수 추출물의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 피부 장벽 기능 강화, 피부 보습력 개선 및 피부 턴오버 촉진용 화장료 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 케일 해수 추출물, 물냉이 해수 추출물 및 비트 뿌리 해수 추출물의 혼합물을 포함하는 피부 상태 개선용 화장료 조성물을 피부 장벽 기능 강화, 피부 보습력 개선 및 피부 턴오버 촉진 기능을 갖는 화장품 제조에 이용할 수 있다.

Description

케일 해수 추출물, 물냉이 해수 추출물 및 비트 뿌리 해수 추출물의 혼합물을 포함하는 피부 상태 개선용 화장료 조성물{Cosmetic Composition for Improving Skin Condition Containing the Mixture of Kale Seawater Extract, Watercress Seawater Extract and Beet Root Seawater Extract}

본 발명은 케일 해수 추출물, 물냉이 해수 추출물 및 비트 뿌리 해수 추출물의 혼합물을 포함하는 피부 상태 개선용 화장료 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 케일 해수 추출물, 물냉이 해수 추출물 및 비트 뿌리 해수 추출물의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 피부 장벽 기능 강화, 피부 보습력 개선 및 피부 턴오버 촉진용 화장료 조성물에 관한 것이다.

피부(skin) 중에서 최외각에 위치한 표피(epidermis)의 가장 중요한 기능은, 외부로부터의 다양한 자극(화학물질, 대기오염물질, 건조한 환경, 자외선 등의 물리 및 화학적 자극 인자)에 대한 방어와 피부를 통한 체내 수분의 과도한 발산을 막는 보호기능이며, 이러한 보호기능은 각질형성세포로 구성된 각질층이 정상적으로 형성되어 있을 때만 그 기능을 유지할 수 있다. 표피 중에서도 가장 바깥에 존재하는 각질층(stratum corneum, horney layer)은 각질형성세포로부터 형성되며, 분화가 완결된 각질 세포와 그를 둘러싼 지질층으로 구성되어 있다(Elias, J. Invest. Dermatol., 80:44s-49s, 1983). 각질세포는 표피 최하층에서 지속적으로 증식(proliferation)하는 기저세포(basal cell)가 단계적으로 형태 및 기능상의 변화를 거치며, 피부 표면까지 상승한 특징적인 세포이며, 일정 기간이 경과하면 오래된 각질세포는 피부에서 탈락되고 새로운 각질세포가 그 기능을 대신하게 되는데, 이러한 반복적인 일련의 변화 과정을 「표피 세포의 분화」 또는 「각화(keratinization)」라고 부른다. 각화과정 중에 각질형성세포는 천연보습인자(natural moisturizing factor; NMF)와 세포간 지방질(세라마이드, 콜레스테롤, 지방산)을 생성하면서 각질층을 형성하여, 각질층이 견고함과 유연성을 가지게 하여 피부장벽(skin barrier)으로서의 기능을 보유하게 한다.

그러나 이러한 각질층은 과도한 세안이나, 목욕 등의 생활 습관적 요인, 건조한 대기, 오염물질 등의 환경적인 요인 및 아토피성 피부나 노인성 피부 같은 내인성 질환 등으로 인해 쉽게 그 기능이 손실될 수 있으며, 실제적으로 현대에 들어서 더욱 늘어난 여러 요인들로 인해 최근에는 건조피부증상 및 이로 인한 제반 장해를 호소하는 사람들이 점점 증가하고 있는 추세이다. 따라서, 적절한 피부 수분을 유지하기 위하여 외부로부터 수분을 공급하거나, 체내로부터의 수분 손실을 방지하기 위한 연구가 많이 진행되어 왔으며, 실제로 수분보유능력이 있는 여러 종류의 보습제(moisturizer)가 개발되어 주로 화장품 영역에서 많이 사용되고 있다.

생활환경 중에 인간에 대한 위해 요인이 점점 증가하고, 노령인구가 급격히 늘어나면서, 각질층의 생성-탈락속도(turnover rate)가 늦어지고, 각질형성세포의 지질합성능력이 저하되거나, 표피에서 정상적인 세포의 분열, 성숙 및 분화가 원활하지 않음으로써, 각질층의 보습인자와 지질의 양이 감소되어 정상적인 각질층의 기능을 유지하지 못하는 상태, 즉 피부장벽기능이 와해된 상태의 피부를 갖고 있는 인간들이 점점 증가하는 추세에 있다.

이러한 비정상적인 표피세포의 분열, 분화로 인해 피부는 피부건조증, 아토피 및 건선 등의 다양한 피부 질환을 유발하게 되며, 이러한 제 질환들은 자체로 수분 보유 기능만을 갖는 통상적인 보습제만으로는 그 증상을 약간 완화시킬 수는 있으나, 근본적인 치유를 기대하기는 어려운 실정이다.

인간의 피부는 나이가 들어감에 따라 여러 가지 내적, 외적 요인에 의해 변화를 겪는다. 즉, 내적으로는 신진대사를 조절하는 각종 호르몬의 분비가 감소하고, 면역 세포의 기능과 세포들의 활성이 저하되어 생체에 필요한 면역 단백질 및 생체 구성 단백질들의 생합성이 줄어들게 되며, 외적으로는 오존층 파괴로 인하여 태양 광선 중 지표에 도달하는 자외선의 함량이 증가하고 환경오염이 더욱 심화됨에 따라 자유 라디칼 및 활성 유해산소 등이 증가함으로써, 피부의 두께가 감소하고, 주름이 증가하며, 탄력이 감소될 뿐 아니라 피부 혈색도 칙칙해지고, 피부 트러블이 자주 발생하며, 기미와 주근깨 및 검버섯 또한 증가하는 등 여러 가지 변화를 일으키게 된다.

노화가 진행될수록 피부를 구성하는 물질인 콜라겐, 엘라스틴, 히아루론산 및 당단백질의 함유량 및 배열이 변하거나 감소하는 증상들이 나타나게 되고, 자유 라디칼 및 활성 유해 산소에 의한 산화적 스트레스를 받게 된다. 또한, 노화가 진행되거나 자외선에 의해서, 피부를 구성하는 대부분의 세포에서는, 염증을 일으킨다고 알려져 있는 전염증성 사이토카인(proinflammatory cytokine)을 생성하는 효소인 사이클로옥시게나제-2(Cox-2, cyclooxygenase)의 생합성이 증가하고, 이들 염증성 인자에 의해 피부조직을 분해하는 효소인 매트릭스 메탈로프로테아제(MMP, matrix metalloproteinase)의 생합성이 증가하며, iNOS(inducible nitric oxide synthase)에 의한 NO(nitric oxide) 생성이 증가하는 것으로 알려져 있다.

즉, 자연적으로 진행되는 내인성 노화에 따른 세포활성의 감소 및 미세염증에 의해 기질물질의 생합성이 감소되고, 여러 가지 유해 환경에 의한 스트레스의 증가 및 태양 광선에 의한 활성 산소 종의 증가와 같은 외적 요인에 의해 분해 및 변성이 가속화되어 피부 기질이 파괴되고 얇아지면서 피부 노화의 제반 증상들이 나타나게 된다. 따라서, 이러한 노화의 현상들을 방지하고, 개선시킬 수 있는 활성성분에 대하여 많은 연구가 행해지고 있는 것이 현실이다.

피부 보습 등의 피부 상태 개선 효능을 갖는 다양한 화장품 원료들이 개발되고 있는데, 화학원료의 경우 피부 알러지나 피부 트러블 등의 부작용을 유발하는 등의 문제점이 있고, 동물성 원료의 경우, 소비자들의 선호도 하락과 광우병 등의 파문으로 동물성 원료에 대한 사용이 급격히 줄어들고 있어, 식물성 등 친환경 유래의 원료들이 각광받고 있는 실정이다.

식물성 원료의 일 예로서, 케일(Kale; Brassica oleracea; Brassica oleraceae L. var. acephala DC.)은 2년생 초본으로 종자로 번식한다. 케일의 어긋나는 잎은 ‘양배추’의 잎과 비슷하나 결구하지 않고 조직이 연하여 녹즙의 재료로 많이 이용한다. 케일은 월동 후 추대하여 5~6월에 개화하며 총상꽃차례로 피는 꽃은 황색이며, ‘양배추’나 ‘붉은양배추’보다 내한성이 강하여 우리나라 거의 전 지역에서 월동이 가능하다. 케일은 다양한 형태로 존재하며, 예컨대 스코치 케일과 부다 케일은 재배 채소작물 중 내한성이 강하며, 식물체에는 긴 잎자루를 가진 길쭉한 잎이 단단한 로제트를 이루는데, 잎가장자리가 물결 모양에서 주름진 것까지 있다. 케일은 오랜 기간 동안 생장 가능하여 주줄기가 50~100㎝ 또는 그 이상에 이른다. 케일은 비타민, 미네랄, 아미노산, 지방, 단백질, 효소, 섬유질 등을 매우 풍부하게 함유하고 있다. 특히, 케일은 비타민 A, B1, B2, C 와 Ca가 다른 과일이나 채소에 비해 최고 405배나 많으며, 베타카로틴 함유량이 높아 암을 예방하고 콜레스테롤을 저하시켜 동맥에 혈전이 형성되는 것을 방지한다. 또, 케일에 함유되어 있는 섬유소와 엽록소는 콜레스테롤을 감소시키며 혈압을 조절하는 효능을 가지고 있어, 조혈, 빈혈치료, 해독작용, 위장병 등의 성인병에 효능이 있으며, 간 기능 개선에도 도움을 주는 것으로 알려져 있다.

식물성 원료의 다른 예로서, 물냉이(Watercress; Nasturtium officinale)는 유럽중부, 중앙아시아 원산으로 여러해살이 풀이다. 중세 프랑스에서는 크레송의 정유를 발모제나 양모제로 이용하였다. 물냉이의 줄기를 물에 담그면 곧바로 뿌리가 생길 만큼 번식력이 강하고 각지의 물가나 습지에 군생한다. 물냉이는 톡 쏘는 매운맛이 있고 어린 경엽은 샐러드로, 종자는 향신료로 사용된다. 물냉이는 영양적으로는 칼슘, 인, 철분 등의 무기질이 많이 함유되어 있으며, 비타민 A나 C, 칼슘, 철분이 풍부하고 혈액의 산화를 방지하는 효과나 강장효과, 소화, 해열작용도 있으며, 빈혈증이나 임신중의 여성에 좋다고 알려져 있다.

식물성 원료의 또 다른 예로서, 비트(Beet; Beta vulgaris)는 쌍떡잎식물 중심자목 명아주과의 한해살이 또는 두해살이풀로, 다당류인 갈락탄(galactans), 펙틴(pectin) 및 아스파라긴(asparagine), 글루타민(glutamine) 등의 아미노산, 그 외의 유기산, 올리고당 등 여러 가지 성분을 함유하고 있다. 비트 뿌리의 당분 함량은 15~16%로 수크로오스(sucrose)가 주성분이며, 빨간 색소의 주요 공급원이다. 비트의 주요 색소는 베타레인(betalain) 성분으로 빨간색과 자주색을 띠는 베타시아닌(betacyanin)과 노란색을 띠는 베타크산틴(betaxanthin)을 함유한다. 상기 비트의 주요 효능으로는 혈당 강하 및 당뇨병에서 합병증의 예방 또는 완화효과, 통증과 염증 치료효과, 인플루엔자 감염에 대한 보호효과, 항암 효과, 헤르페스 바이러스에 대한 항-바이러스 효능이 있고, 우수한 항산화력을 지니는 것으로 알려져 있다.

해수는 96.5중량%의 순수한 물과 3.5중량%의 무기염류로 이루어져 있으며, 상기 무기염류를 구성하는 30여종의 주요 원소 중 약 99%가 Na+, K⁺, Ca² ⁺, Mg² ⁺, Cl^- 및 SO4^2-인 것으로 알려져 있다. 이러한 원소들은 대부분 하청 등을 흐르는 동안 암석 등에 포함된 성분에서 용해되어 바다로 운반된 것이며, 일부는 해저 화산 폭발에 의한 화산 가스가 해수에 녹아 공급된 것이다. 해수의 수온은 수역에 따라 다르며, 예컨대 우리나라 주변의 해수 수온은 북한 한류수의 경우 1~4℃이며, 동해 고유수의 경우 1℃ 내외이고, 쓰시마 난류수의 경우 20℃ 이상이며, 황해 저층냉수의 경우 약 10℃ 이하이고, 중국대륙 연안수의 경우 9.8~28.1℃이다. 전세계 해수의 평균 염분 농도는 약 35%(per mil)로 이는 해수 1kg 속에 약 35g의 염류가 녹아 있는 것을 의미한다. 다만, 해수의 염분의 농도는 일사량과 증발량, 강수량에 의한 담수유입, 조수간만의 차에 따른 해수유입 등에 의해 변할 수 있다. 예컨대, 홍해의 경우 평균 염분 농도가 37~41% 정도로 높은데 이는 아프리카 대륙과 아라비아 반도 사이 건조지대에 위치하고 있어 증발도가 높은 반면 하천이 없어 외부에서 유입되는 담수가 없어 높은 염도를 유지하고 있다. 반면, 아프리카-아시아 유럽의 3개 대륙에 둘러싸여 있는 유럽 지중해의 염분 농도는 약 38%이다. 우리나라 주변의 해수 염분은 북한 한류수 및 동해 고유수의 경우 34.0~34.1%이고, 쓰시마 난류수의 경우 30.0~34.0%이며, 황해 저층냉수의 경우 약 33.5%이고, 중국대륙 연안수의 경우 약 30.0%이다. 비록 해수에 포함된 염분 성분의 농도는 지역에 따라 다를 수 있지만, 해수에 포함된 무기염류의 주요 원소(Na+, K⁺, Ca² ⁺, Mg² ⁺, Cl^- 및 SO4^2-등) 간의 구성 비율은 비교적 일정하다. 한편, 해수의 물리적 특성을 살펴보면, 해수의 pH는 pH 8.1이고, 해수의 밀도는 1.02~1.04g/cm³이며, 해수의 TDS(total dissolved solids)는 35,000~45,000mg/L이고, 해수의 비열, 열용량 및 표면장력은 큰 편이다.

해양심층수(Deep Ocean Water)는 광합성에 의한 유기물 생성이 일어나지 않으며 수심 200m 이하인 해수를 말한다. 표층수는 광합성작용을 하므로 물속의 질소, 인, 질산 등이 소모되나, 수심 200m 이하의 심층지역은 태양광이 도달하지 않기 때문에 영양물질을 소비하는 식물성 플랑크톤이 없고, 광합성이 거의 일어나지 않는다. 이로 인해 광합성에 의해 소비되는 질소, 인, 질산 등의 무기영양염류가 심층수속에 그대로 남아있다. 해양심층수의 연중 수온은 약 2℃ 이하로 안정되어 있기는 하나, 수온은 수역과 수심에 따라 다르며, 예컨대 한국 동해안의 200m 수심에서 취수한 해양심층수는 1.5∼1.9℃이고, 일본 고치현의 320m 수심에서 취수한 해양심층수는 8.1∼9.8℃이며, 미국 하와이의 600m 수심에서 취수한 해양심층수는 6.0∼8.0℃이다. 해양심층수는 인체에 필요한 미네랄이나 필수 미량원소를 많이 함유하고 있어 부족되기 쉬운 미네랄 보충에 도움을 줄 수 있으므로 화장료 조성물 제조에 유용하게 이용될 수 있다.

용암해수(Magma Seawater)란 바닷물이 현무암층과 사니질층에 자연 여과되어 안으로 흘러들어 오랜기간 숙성되어진 물로서, 담수지하수와 염수가 만나는 즉, 담염수 혼합대(점이대)에 존재하는 해수로 우리나라에서는 제주특별자치도 조천읍에서 남원읍 지역과 성산읍 지역 등에 분포하고 있으며, 해안으로부터 육지로 갈수록 적어진다. 용암해수의 수질은 물리적 특성 변화가 적고, 수온은 16∼18℃로 변함이 없으며, pH(수소 이온농도)는 평균 7.5 범위를 나타내는 특징을 가진다. 또한, 용암해수에는 일반 해수 및 심층수보다 나트륨, 마그네슘, 칼슘 및 칼륨 등의 필수미네랄 뿐만 아니라, 일반 유용미네랄 성분들(철, 망간, 아연, 몰리브덴 등)도 심층수와 삼다수보다 많은 양이 포함되어 있다. 특징적으로, 용암해수는 유용성분을 대량으로 포함하고 있으므로 산업적 활용가치가 매우 높다. 또한, 용암해수에는 대장균, 질산성질소, 인산염인, 페놀류 등이 검출되지 않은 청정한 지하수 자원이며, 비소, 수은, 카드늄 등 유해성분이 검출되지 않거나 납이 극히 미량이 검출되기 때문에 화장료 조성물 제조에 유용하게 이용될 수 있다.

케일 추출물, 물냉이 추출물 및 비트 뿌리 추출물로 구성된 혼합물에 관한 선행 연구를 살펴보면, 케일을 포함하는 식물성 혼합물의 발효 추출물이 피부 보습 효과가 있고, 물냉이 추출물을 포함하는 식물성 혼합물이 발모 촉진 효과가 있으며, 비트 뿌리 추출물이 피부 보습 효과가 있음을 보고한 선행문헌은 있으나(하기 특허문헌 1-3 참조), 해수를 이용하여 제조한 케일 해수 추출물, 물냉이 해수 추출물 및 비트 뿌리 해수 추출물로 구성된 혼합물이 피부 상태 개선 효과, 특히 피부의 보습력 개선 효과 및 피부의 장벽 기능 강화 효과를 입증한 선행연구는 아직까지 이루어지지 않은 실정이다.

이러한 기술적 배경하에서, 본 발명자들은 식물성 추출물(들)을 유효성분으로 포함하는 피부 상태 개선용 화장료 조성물을 개발하고자 예의 노력한 결과, 정제수를 이용하여 제조한 케일 수 추출물, 물냉이 수 추출물 및 비트 뿌리 수 추출물의 혼합물을 포함하는 조성물보다 해수를 이용하여 제조한 케일 해수 추출물, 물냉이 해수 추출물 및 비트 뿌리 해수 추출물의 혼합물을 포함하는 조성물이 피부의 장벽 기능을 강화하고, 피부 보습 효능을 현저하게 증가시키는 효능이 있음을 확인하고, 본 발명을 완성하게 되었다.

한국 등록특허 제10-0687468호(2007년 2월 21일 등록) 한국 등록특허 제10-1580283호(2015년 12월 18일 등록) 일본 공개특허 특개2000-290162(2000년 10월 17일 공개)

본 발명의 목적은, 본 발명에 따른 케일 해수 추출물, 물냉이 해수 추출물 및 비트 뿌리 해수 추출물의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 피부 상태 개선용 화장료 조성물을 제공하는 데 있다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 케일 해수 추출물, 물냉이 해수 추출물 및 비트 뿌리 해수 추출물의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 피부 상태 개선용 화장료 조성물, 바람직하게는 상기 혼합물을 유효성분으로 포함하는 피부 장벽 기능 강화, 피부 보습력 개선 또는 피부 턴오버 촉진용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 케일 해수 추출물, 물냉이 해수 추출물 및 비트 뿌리 해수 추출물의 혼합물을 포함하는 피부 상태 개선용 화장료 조성물을 피부 장벽 기능 강화, 피부 보습력 개선 및 피부 턴오버 촉진 기능을 갖는 화장품 제조에 이용할 수 있다.

도 1은 해수 또는 정제수를 이용하여 추출한 케일 추출물, 물냉이 추출물 및 비트 뿌리 추출물의 혼합물 처리에 의한 각질세포의 히알루로난 합성효소 2(hyaluronan synthase 2, HAS2) 및 필라그린(Filaggrin) 각각의 mRNA 발현 수준을 나타낸 것이다.
도 2는 해수 또는 정제수를 이용하여 추출한 케일 추출물, 물냉이 추출물 및 비트 뿌리 추출물의 혼합물 처리에 의한 각질세포의 오클루딘(Occludin, OCLN) mRNA 발현 수준을 나타낸 것이다.

다른 식으로 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 기술분야에서 숙련된 전문가에 의해서 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 일반적으로 본 명세서에서 사용된 명명법은 본 기술분야에서 잘 알려져 있고 통상적으로 사용되는 것이다.

이하, 본 발명에 대하여 보다 구체적으로 설명한다.

본 명세서에서 부피, 시간(기간), 농도, 함량, 면적, 온도 등을 표현하는데 사용된 용어 "약"은 해당 수치 또는 수치 범위에서 최대 10%의 허용오차가 존재한다는 것을 의미한다.

본 발명의 일 실시예에서는, 케일 해수 추출물, 물냉이 해수 추출물 및 비트 뿌리 해수 추출물로 구성된 혼합물의 피부 보습 기능 강화 효과를 피부의 주요 보습인자인 히알루론산을 생성하는 히알루로난 합성효소 2(hyaluronan synthase 2, HAS2) 및 각질형성세포의 천연보습인자(natural moisturizing factor) 합성에 관여하는 필라그린(Filaggrin)의 mRNA 발현 수준으로 확인하였다. 그 결과, 하기 도 1에 나타낸 바와 같이, 비교예 1(케일 수 추출물, 물냉이 수 추출물 및 비트 뿌리 수 추출물로 구성된 혼합물)보다는 실시예 1(케일 해수 추출물, 물냉이 해수 추출물 및 비트 뿌리 해수 추출물로 구성된 혼합물)의 HAS2 및 Filaggrin의 mRNA 발현량의 수준이 현저하게 높게 나타나는 것을 확인하였다(시험예 1 참조).

본 발명의 다른 실시예에서는, 케일 해수 추출물, 물냉이 해수 추출물 및 비트 뿌리 해수 추출물로 구성된 혼합물의 피부 장벽 기능 강화 효과를 밀착연접(폐쇄연접, Tight Junction, TJ) 형성에 관여하는 오클루딘(Occludin, OCLN)의 mRNA 발현 수준으로 확인하였다. 그 결과, 하기 도 2에 나타낸 바와 같이, (i) 비교예 1(케일 수 추출물, 물냉이 수 추출물 및 비트 뿌리 수 추출물로 구성된 혼합물)보다는 실시예 1(케일 해수 추출물, 물냉이 해수 추출물 및 비트 뿌리 해수 추출물로 구성된 혼합물)의 OCLN의 mRNA 발현량의 수준이 현저하게 높게 나타났고, (ii) 실시예 1의 경우, 0.15%(v/v) 처리농도보다 0.3%(v/v) 처리 농도에서 OCLN의 mRNA 발현량의 수준이 현저하게 높게 나타나는 것을 확인하였다(시험예 2 참조).

따라서, 본 발명은 일 관점에서, 케일 해수 추출물, 물냉이 해수 추출물 및 비트 뿌리 해수 추출물의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 피부 상태 개선용 화장료 조성물, 바람직하게는 상기 혼합물을 유효성분으로 포함하는 피부 장벽 기능 강화, 피부 보습력 개선 또는 피부 턴오버 촉진용 화장료 조성물에 관한 것이다.

본 발명에 있어서, 상기 케일 해수 추출물, 물냉이 해수 추출물 및 비트 뿌리 해수 추출물의 혼합물은 케일, 물냉이 및 비트 뿌리로부터 각각의 해수 추출물을 수득한 후 혼합한 혼합물이거나, 케일, 물냉이 및 비트 뿌리를 혼합한 후 해수로 추출한 혼합물인 것을 특징으로 할 수 있으며, 바람직하게는 케일, 물냉이 및 비트 뿌리로부터 각각의 해수 추출물을 수득한 후 혼합한 혼합물이다.

상기 케일, 물냉이 및 비트 뿌리는 공지의 천연물 추출방법에 의하여 추출될 수 있고, 추출 시 이용되는 용매는 해수인 것을 특징으로 할 수 있으며, 상기 용매의 양은 추출하는 케일 해수 추출물, 물냉이 해수 추출물 및 비트 뿌리 해수 추출물의 양에 따라 달라질 수 있으며, 바람직하게는 100ml의 해수에 0.1~20.0g, 바람직하게는 1.0~10.0g, 더욱 바람직하게는 2.0~6.0g, 가장 바람직하게는 3.5~4.5g의 케일, 물냉이 또는 비트 뿌리 각각의 식물체를 첨가한 후 침지시켜 각각의 추출물을 제조할 수 있다.

상기 케일 해수 추출물, 물냉이 해수 추출물 및 비트 뿌리 해수 추출물의 제조시 침지 온도는 5~60℃, 바람직하게는 12~30℃, 가장 바람직하게는 10~20℃이다.

상기 케일 해수 추출물, 물냉이 해수 추출물 및 비트 뿌리 해수 추출물의 제조시 침지 시간은 특별히 제한되지 아니하며, 예컨대 1~24시간, 바람직하게는 2~12시간, 가장 바람직하게는 4~6시간이다.

상기 케일 해수 추출물, 물냉이 해수 추출물 및 비트 뿌리 해수 추출물은 필요에 따라 공지의 천연물 추출법으로 제조될 수 있다. 예를 들어 냉침추출, 열수추출, 초음파 추출, 환류냉각 추출, 가열 추출법으로 추출할 수 있으며, 바람직하게는 열수추출 또는 환류 냉각 추출법으로 추출할 수 있으며, 1회 내지 10회, 바람직하게는 2회 내지 7회 반복 추출할 수 있다.

상기 케일 해수 추출물, 물냉이 해수 추출물 및 비트 뿌리 해수 추출물은 여과하여 액상으로 사용할 수 있으며, 바람직하게는 분무건조 또는 동결건조의 건조 공정을 통하여 고형화하여 사용할 수 있다. 더욱 바람직하게는 분무건조 또는 동결건조 전 덱스트린을 혼합하여 건조할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 케일 해수 추출물, 물냉이 해수 추출물 및 비트 뿌리 해수 추출물의 혼합물은 케일 해수 추출물, 물냉이 해수 추출물 및 비트 뿌리 해수 추출물을 중량기준으로, 1 : 1 : 3~50, 더욱 바람직하게는 1 : 1 : 4~20, 가장 바람직하게는 1 : 1: 5~15의 조합비로 혼합한 것임을 특징으로 할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 조성물은 케일 해수 추출물, 물냉이 해수 추출물 및 비트 뿌리 해수 추출물의 혼합물을 조성물의 총 중량을 기준으로 0.001~40중량%, 더욱 바람직하게는 0.01~30중량%, 가장 바람직하게는 0.1~10중량% 포함하는 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 조성물은 제형 안정성과, 화장품의 안전에 관한 규칙에 의거한 사용 제한량을 고려하여, 상기 조성물 중 케일 해수 추출물, 물냉이 해수 추출물 및 비트 뿌리 해수 추출물의 혼합물의 총 함량이 조성물의 총 중량을 기준으로 0.001중량% 미만일 경우 화장료로서 효능을 갖기에 지나치게 낮은 수준이며, 상기 조성물 중 케일 해수 추출물, 물냉이 해수 추출물 및 비트 뿌리 해수 추출물의 혼합물의 함량이 조성물의 총 중량을 기준으로 40중량%을 초과할 경우 화장료 조성물에 사용하기에 피부 안전성의 우려가 있고 용해시킬 수 없어 제형 중 배합이 불가능하다.

본 발명에 있어서, 상기 해수는 일반 해수, 해양심층수, 용암해수 등일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니며, 바람직하게는 제주도 동부지역 북제주군 구좌읍 한동리에서 지하 100 내지 200m, 더욱 바람직하게는 150m를 굴착하여 지하(평균 해수면 기준) 30 내지 150m, 가장 바람직하게는 44.35m, 86.35m 또는 126.35m에서 취수한 용암해수이다.

본 발명에 있어서, 상기 해수의 밀도는 해수의 온도, 압력 및 염도(salinity)에 따라 다를 수 있으나, 보통 1000~2000g/L, 바람직하게는 1002~1100g/L, 가장 바람직하게는 1005~1045g/L이다.

본 발명에 있어서, 상기 해수는 멸균 필터, 바람직하게는 0.2μm의 필터를 이용하여 취수한 해수의 미생물 등의 불순물을 제거한 후 종래 알려진 탈염 방법, 예컨대, 플래시증발법, 해수동결법, 역삼투압법, 이온교환수지법, 전기투석법(electrodialysis; ED) 또는 시중에 유통되는 전기투석기나 탈염기를 사용하여 탈염된 것일 수 있으며, 바람직하게는 전기투석법으로 탈염된 것이 전기전도도 값을 달리하여 탈염 해수의 미네랄 농도 및 경도를 조절할 수 있으므로 바람직하다. 예컨대, 전기전도도 값을 8mS/㎝, 10mS/㎝, 12mS/㎝, 15mS/㎝ 등으로 조절하여 1가 양이온 및 2가 음이온을 제거하는 탈염 과정을 거쳐 탈염 해수를 준비할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 조성물은 피부 세포의 히알루로난 합성효소 2(hyaluronan synthase 2, HAS2)를 코딩하는 유전자의 발현 수준을 증가시키는 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 조성물은 피부 세포의 필라그린(Filaggrin)을 코딩하는 유전자의 발현 수준을 증가시키는 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 조성물은 피부 세포의 오클루딘(Occludin, OCLN)을 코딩하는 유전자의 발현 수준을 증가시키는 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명에 있어서, 케일 해수 추출물, 물냉이 해수 추출물 및 비트 뿌리 해수 추출물의 혼합물을 포함하는 화장료 조성물은 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 로션, 아이 크림, 영양 크림, 마사지 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 파우더, 에센스, 및 팩으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나로 제형화되는 것을 특징으로 할 수 있다.

또한, 상기 조성물은 보습제(폴리올 등), 점도 조절제, 점증제, pH 조정제, 지방, 유기용매, 용해제, 농축제, 겔화제, 연화제, 피부 보습제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 유화제, 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 습윤화제, 오일, 염료, 안료, 친수성 활성제, 친유성 활성제, 지질 소낭, 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 상기 보조제는 화장품학 또는 피부과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입된다. 또한, 본 발명의 조성물은 피부 상태 개선 효과를 증가시키기 위하여 피부 흡수 촉진 물질을 함유할 수 있다.

상기 조성물에 포함되는 '폴리올(polyol)'은 다가(多價) 알코올, 즉 2개 이상의 수산기(-OH)를 가진 지방족 화합물을 의미할 수 있다. 수산기를 2개 가진 것을 글리콜 또는 디올(diol)이라고 하고, 수산기를 3개 가진 것을 글리세롤이라 하며, 수산기를 4개 가진 것을 펜타에리트리톨이라 한다.

본 발명의 바람직한 양태에 따르면, 상기 폴리올은 솔비톨(sorbitol), 폴리에틸렌글리콜(polyethylene glycol), 폴리프로필렌글리콜(polypropylene glycol), 디프로필렌글리콜(dipropylene glycol), 프로필렌글리콜(propylene glycol), 1,3-부틸렌글리콜(1,3-butylene glycol), 글리세린(glycerin, glycerol), 프로판디올(propanediol), 에틸헥산디올(ethyl hexanediol), 1,2-헥산디올(1,2-hexanediol), 피이지/피피지/폴리부틸렌글리콜-8/5/3글리세린(peg/ppg/polybutylene glycol-8/5/3 glycerin) 및 펜틸렌글리콜(pentylene glycol)을 포함하는 군으로부터 선택되고, 보다 바람직하게는 글리세린, 프로필렌글리콜, 에틸헥산디올, 프로판디올, 1,3-부틸렌글리콜, 솔비톨 및 폴리에틸렌글리콜을 포함하는 군으로부터 선택되며, 가장 바람직하게는 글리세린, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 디프로필렌글리콜 및 폴리에틸렌글리콜을 포함하는 군으로부터 선택될 수 있다.

상기 폴리올은 1~20중량%의 양으로 포함되며, 상기 폴리올 성분의 함량이 1중량% 미만인 경우 유화력 및 보습력이 떨어지고, 상기 폴리올 성분의 함량이 20중량%를 초과하는 경우 사용감이 떨어질 수 있다.

상기 조성물에 포함되는 오일은 탄화수소계 오일, 고급 지방산계 오일, 에스테르계 오일 및 글리세라이드계 오일로 구성되는 군에서 선택되는 하나 이상일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 오일은 예컨대, 스쿠알란(squalane), 폴리부텐(polybutene), 폴리이소부텐(polyisobutene), 폴리데센(polydecene) 및 하이드로제네이티드 폴리데센(hydrogenated polydecene) 등에서 선택되는 탄화수소계 오일; 세틸알코올, 스테아릴알코올, 베헤닐알코올, 2-옥틸도데칸올 및 이소세틸알코올 등에서 선택되는 고급 지방산계 오일; 이소프로필팔미테이트, 2-옥틸도데실미리스테이트, 이소프로필미리스테리트, 부틸옥틸살리실레이트, 세틸옥타노에이트, 세틸옥틸 헥사노에이트, 코코카프릴레이트/카프레이트, 데실코코에이트, 이소스테아릴이소스테아레이트, 펜타에리스리틸테트라에칠헥사노에이트, 및 디카프릴릴카보네이트 등에서 선택되는 에스테르계 오일; 및 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드(caprylic/capric triglyceride) 등에서 선택되는 글리세라이드계 오일; 등에서 선택되는 하나 이상일 수 있다.

상기 오일은 조성물의 총 중량을 기준으로 5~10중량% 함유되며, 만약 그 함량이 상기 범위 미만이거나 초과하면 조성물의 안정성이 저하되어 각종 화장품 제품의 제조가 어렵다

본 발명에 있어서, 상기 점도 조절제는 피부에서의 긴장감, 밀착감 및 팽팽한 느낌의 효과를 더욱 높이는 작용으로 화장료의 점도를 높여 도포하기 용이하도록 하는 작용을 한다.

상기 조성물에 포함되는 점도 조절제는, 예를 들면, 폴리비닐 알코올, 하이드록시에틸 아크릴레이트-소듐 아크릴로일디메틸타우레이트 공중합체, 카르복시 비닐 폴리머, 펙틴, 알긴산 나트륨, 카르복시메틸 셀룰로오스, 히드록시 에틸 셀룰로오스, 폴리 아크릴산, 알킬 아크릴산-아크릴산 공중합체 및 잔탄검으로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 화합물이나, 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 조성물에 포함되는 점증제는 점도를 증가시키는 물질을 의미하며, 그 중에서도 오일 점증제는 오일을 주성분으로 하는 점증제를 의미한다. 상기 오일 점증제는 수크로오스 에스터류, 알킬 로지네이트류, 덱스트린 에스터, 또는 폴리글리세릴 에스터류를 포함한다. 더욱 구체적으로 상기 오일 점증제는 다이머 디리노레일 하이드로게네이티드 로지네이트(dimer dilinoleyl hydrogenated rosinate), 피토스테릴/이소스테릴/세틸/스테아릴/벤힐 다이머 디리놀레이트(pytosteryl/isosteary/cetyl/stearyl/behenyl dimer dilinoleate), 폴리글리세릴-10-도데카베헤네이트(polyglyceryl-10-dodecabehenate), 수크로오스 올레이트(sucrose oleate), 수크로오스 테트라스테아레이트 트리아세테이트(sucrose tetrastearate triacetate), 글리세릴/폴리글리세릴-6-이소스테아레이트/베헤네이트 에스터(glyceryl/polyglyceryl-6-isostearate/behenate esters), 덱스트린 팔미테이트/에틸헥사노에이트(dextrin palmitate/ethylhexanoate), 덱스트린 미리스테이트(dextrin myristate), 글리세릴 베헤네이트/에이코사디오에이트(glyceryl behenate/eicosadioate), 및 하이드로게네이티드 로진(hydrogenated rosine)으로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상을 포함한다.

상기 조성물에 포함되는 킬레이트화제 중 디소듐이디티에이(disodium EDTA)는 금속이온과 결합하여 이들이 촉매작용을 하지 못하도록 방지하는 역할로서, 화장품 제조 시 사용되는 성분과 제조공정에서 혼입될 가능성이 높은 금속 이온의 활성을 차단하여 화장품의 품질저하, 산패 등을 방지하는 역할을 한다. 또한, 유효 성분들의 효과적인 피부 흡수를 돕는 촉진제의 역할을 한다. 상기 디소듐이디티에이는 화장료 조성물 내 0.01~0.5중량%의 범위로 포함됨이 바람직하다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.

< 케일 해수 추출물, 물냉이 해수 추출물 및 비트 뿌리 해수 추출물의 혼합물 제조 >

원료 : 케일, 물냉이 및 비트 뿌리는 소매상에서 입수하였고, 해수는 (주)두래에서 공급받아 케일, 물냉이 및 비트 뿌리 각각의 추출물 제조에 이용하였다.

[해수의 조성]

제주도 동부지역 북제주군 구좌읍 한동리에서 지하 150m를 굴착하여 지하(평균 해수면 기준), 44.35m, 86.35m 및 126.35m에서 용암해수를 취수하고 한국화학시험연구원에 성분 분석을 의뢰하여 얻은 제주 용암해수의 수심별 미네랄 함량(ppm)은 아래의 표 1과 같다.

시험항목	용암해수 44.35m	용암해수 86.35m	용암해수 126.35m	담수 1m
Na	11400	11400	10700	146
Mg	1510	1520	1390	0.49
Ca	460	490	431	9.20
K	643	540	621	38.5
Cu	0.00157	0.00113	0.00080	0.00069
Co	-	-	-	-
Sn	-	-	-	-
Mo	0.011	0.012	0.011	0.0014
V	3.28	3.53	0.01	0.013
Ge	0.0032	0.003	0.0025	0.00019
Br	-	-	-	-
Sr	1.18	1.31	1.30	0.05
Ti	-	-	-	-
Ni	-	-	-	-
Si(SiO2)	7.23	6.19	1.21	1.21
Zn	0.0045	0.0039	0.0019	0.001
Fe	0.21	0.26	0.04	0.082
Mn	19.51	20.7	18.9	0.01
Cl	16629	18500	19900	262
B	3.35	3.73	0.15	0.15
Li	0.37	0.41	0.09	0.09
Ba	0.032	0.019	0.015	0.015
Pb	0.004	0.0013	0.00065	0.00091
F	-	-	-	-
As	0.01	-	-	-
Se	0.00005	0.00124	0.00086	0.000049
Hg	-	-	-	-
CN	-	-	-	-
Cr	-	-	-	-
Cd	-	-	-	-
Al	0.63	0.49	0.47	0.14

상기 표 1로부터 용암해수는 칼슘, 마그네슘 등의 항목에서는 담수와 유사한 점을 나타내지만, 바나듐, 게르마늄, 셀레늄 등의 미량원소 항목에서는 뚜렷한 차이를 보이고 있다.

상기 케일, 물냉이 및 비트 뿌리 각각의 추출물 제조시 사용한 해수는 제주도 동부지역 북제주군 구좌읍 한동리에서 지하 86.35m에서 취수한 용암해수를 0.2μm의 필터로 불순물을 걸러낸 후, 전기투석법(electrodialysis; ED)으로 탈염 과정을 거친 해수이다.

[ 제조예 1] 케일 해수 추출물의 제조

케일을 적당한 크기로 절단한 후, 분쇄기를 이용하여 케일 분쇄물을 준비한 다음, 상기 분쇄물 20g에 약 0.5L의 해수를 첨가한 후 약 15℃에서 약 5시간 동안 침지시킨 다음, 여과하여 케일 해수 추출물(여과액)을 수득하였다.

[ 제조예 2] 물냉이 해수 추출물의 제조

물냉이를 적당한 크기로 절단한 후, 분쇄기를 이용하여 케일 분쇄물을 준비한 다음, 상기 분쇄물 20g에 약 0.5L의 해수를 첨가한 후 약 15℃에서 약 5시간 동안 침지시킨 다음, 여과하여 물냉이 해수 추출물(여과액)을 수득하였다.

[ 제조예 3] 비트 뿌리 해수 추출물의 제조

비트 뿌리를 적당한 크기로 절단한 후, 분쇄기를 이용하여 케일 분쇄물을 준비한 다음, 상기 분쇄물 20g에 약 0.5L의 해수를 첨가한 후 약 15℃에서 약 5시간 동안 침지시킨 다음, 여과하여 비트 뿌리 해수 추출물(여과액)을 수득하였다.

[ 비교제조예 1] 케일 수 추출물의 제조

케일을 적당한 크기로 절단한 후, 분쇄기를 이용하여 케일 분쇄물을 준비한 다음, 상기 분쇄물 20g에 약 0.5L의 정제수를 첨가한 후 약 15℃에서 약 5시간 동안 침지시킨 다음, 여과하여 케일 수 추출물(여과액)을 수득하였다.

[ 비교제조예 2] 물냉이 수 추출물의 제조

물냉이를 적당한 크기로 절단한 후, 분쇄기를 이용하여 케일 분쇄물을 준비한 다음, 상기 분쇄물 20g에 약 0.5L의 정제수를 첨가한 후 약 15℃에서 약 5시간 동안 침지시킨 다음, 여과하여 물냉이 수 추출물(여과액)을 수득하였다.

[ 비교제조예 3] 비트 뿌리 수 추출물의 제조

비트 뿌리를 적당한 크기로 절단한 후, 분쇄기를 이용하여 케일 분쇄물을 준비한 다음, 상기 분쇄물 20g에 약 0.5L의 정제수를 첨가한 후 약 15℃에서 약 5시간 동안 침지시킨 다음, 여과하여 비트 뿌리 수 추출물(여과액)을 수득하였다.

[ 실시예 1] 케일 해수 추출물, 물냉이 해수 추출물 및 비트 뿌리 해수 추출물의 혼합물

제조예 1~3을 이용하여 케일 해수 추출물, 물냉이 해수 추출물 및 비트 뿌리 해수 추출물을 1 : 1 : 10의 중량비로 혼합한 혼합물을 제조하였다.

[ 비교예 1] 케일 수 추출물, 물냉이 수 추출물 및 비트 뿌리 수 추출물의 혼합물

비교제조예 1~3을 이용하여 케일 수 추출물, 물냉이 수 추출물 및 비트 뿌리 수 추출물을 1 : 1 : 10의 중량비로 혼합한 혼합물을 제조하였다.

< 시험예 1: 케일 해수 추출물, 물냉이 해수 추출물 및 비트 뿌리 해수 추출물로 구성된 혼합물의 피부 보습 기능 강화 효능 평가 >

실시예 1의 케일 해수 추출물, 물냉이 해수 추출물 및 비트 뿌리 해수 추출물의 혼합물 시료에 의한 피부 보습 기능 강화 효과를 평가하기 위해, 피부의 주요 보습인자인 히알루론산을 생성하는 히알루로난 합성효소 2(hyaluronan synthase 2, HAS2) 및 각질형성세포의 천연보습인자(natural moisturizing factor) 합성에 관여하는 필라그린(Filaggrin)의 mRNA 발현 수준을 확인하였다(Papakonstantinou et al., Dermatoendocrinol ., 4(3):253-8, 2012; 및 Rawlings et al., Dermatol Ther., 17, Suppl 1:43-8, 2004 참조).

구체적으로, 실시예 1의 케일 해수 추출물, 물냉이 해수 추출물 및 비트 뿌리 해수 추출물로 구성된 혼합물 시료, 또는 비교예 1의 케일 수 추출물, 물냉이 수 추출물 및 비트 뿌리 수 추출물로 구성된 혼합물 시료를 부피 기준으로, 0.15% 또는 0.3% 처리농도로 희석하여 각질형성세포에 처리한 다음, 각질형성세포의 HAS2 및 Filaggrin의 mRNA 발현 수준을 측정하여 실시예 1과 비교예 1의 피부 보습 기능 강화 효과를 비교하였다.

HAS2 및 Filaggrin의 발현량 측정방법: 각질형성세포인 HEKn 세포(human epidermal keratinocyte, neonatal)를 세포 배양용 배지(KGM-Gold Keratinocyte Growth Medium SingleQuot(Lonza #192152)가 첨가된 KBM-Gold Keratinocyte Basal Medium(Lonza #192151))를 이용하여 60mm 세포 배양 접시(cell culture dish)에 2×10⁵cells/dish의 밀도로 분주한 후 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 80% 정도 컨플루언시(confluency)를 이룰 때까지 약 24시간 동안 배양한 다음, 상기 HEKn 세포에 실시예 1의 시료, 또는 비교예 1의 시료를 0.3%(v/v)의 처리농도(즉, 2910μL의 세포 배양용 배지가 담긴 60mm 세포 배양 접시에 실시예 1 또는 비교예 1의 시료를 90μL 첨가하는 것)로 처리한 후, 약 24시간 동안 배양하였다. 그다음, 상기 HEKn 세포 배양에 사용된 배지를 제거하고 트리졸(Trizol, Invitrogen) 1ml를 첨가하여 Invitrogen社의 RNA 분리법에 따라 RNA를 분리하였다. 상기 분리한 RNA는 자외선 검출기(Hewlett Packard)를 이용하여 260nm에서 RNA를 정량한 후, 역전사(Reverse Transcription)를 실시하여 cDNA를 합성하고, 실시간(Real-Time Polymerase Chain Reaction)을 수행하여 각질형성세포의 TJ 형성에 관여하는 HAS2 및 Filaggrin의 mRNA 발현 수준을 측정하였다. 여기서, 각 시료에 대한 상대적 발현양상의 분석을 위해 RPL13A(Ribosomal Protein L13a)의 mRNA의 발현량을 기준으로 보정하였다.

그 결과, 하기 도 1에 나타낸 바와 같이, 비교예 1(케일 수 추출물, 물냉이 수 추출물 및 비트 뿌리 수 추출물로 구성된 혼합물)보다는 실시예 1(케일 해수 추출물, 물냉이 해수 추출물 및 비트 뿌리 해수 추출물로 구성된 혼합물)의 HAS2 및 Filaggrin의 mRNA 발현량의 수준이 현저하게 높게 나타나는 것을 확인하였다.

< 시험예 2: 케일 해수 추출물, 물냉이 해수 추출물 및 비트 뿌리 해수 추출물로 구성된 혼합물의 피부 장벽 기능 강화 효능 평가 >

실시예 1의 케일 해수 추출물, 물냉이 해수 추출물 및 비트 뿌리 해수 추출물의 혼합물 시료에 의한 피부 장벽 기능 강화 효과를 평가하기 위해, 각질형성세포의 밀착연접(폐쇄연접, tight junction, TJ) 형성에 관여하는 오클루딘(Occludin, OCLN)의 mRNA 발현 수준을 확인하였다.

구체적으로, 실시예 1의 케일 해수 추출물, 물냉이 해수 추출물 및 비트 뿌리 해수 추출물로 구성된 혼합물 시료, 또는 비교예 1의 케일 수 추출물, 물냉이 수 추출물 및 비트 뿌리 수 추출물로 구성된 혼합물 시료를 부피 기준으로, 0.15% 또는 0.3% 처리농도로 희석하여 각질형성세포에 처리한 다음, 각질형성세포의 HAS2 및 OCLN의 mRNA 발현 수준을 측정하여 실시예 1과 비교예 1의 피부 장벽 기능 강화 효과를 비교하였다.

OCLN의 발현량 측정방법: 각질형성세포인 HEKn 세포(human epidermal keratinocyte, neonatal)를 세포 배양용 배지(KGM-Gold Keratinocyte Growth Medium SingleQuot(Lonza #192152)가 첨가된 KBM-Gold Keratinocyte Basal Medium(Lonza #192151))를 이용하여 60mm 세포 배양 접시(cell culture dish)에 2×10⁵cells/dish의 밀도로 분주한 후 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 80% 정도 컨플루언시(confluency)를 이룰 때까지 약 24시간 동안 배양한 다음, 상기 HEKn 세포에 실시예 1의 시료, 또는 비교예 1의 시료를 0.15%(v/v) 또는 0.3%(v/v)의 처리농도로 처리한 후, 약 24시간 동안 배양하였다. 그다음, 상기 HEKn 세포 배양에 사용된 배지를 제거하고 트리졸(Trizol, Invitrogen) 1ml를 첨가하여 Invitrogen社의 RNA 분리법에 따라 RNA를 분리하였다. 상기 분리한 RNA는 자외선 검출기(Hewlett Packard)를 이용하여 260nm에서 RNA를 정량한 후, 역전사(Reverse Transcription)를 실시하여 cDNA를 합성하고, 실시간(Real-Time Polymerase Chain Reaction)을 수행하여 각질형성세포의 TJ 형성에 관여하는 OCLN의 mRNA 발현 수준을 측정하였다. 여기서, 각 시료에 대한 상대적 발현양상의 분석을 위해 RPL13A(Ribosomal Protein L13a)의 mRNA의 발현량을 기준으로 보정하였다.

그 결과, 하기 도 2에 나타낸 바와 같이, (i) 비교예 1(케일 수 추출물, 물냉이 수 추출물 및 비트 뿌리 수 추출물로 구성된 혼합물)보다는 실시예 1(케일 해수 추출물, 물냉이 해수 추출물 및 비트 뿌리 해수 추출물로 구성된 혼합물)의 OCLN의 mRNA 발현량의 수준이 현저하게 높게 나타났고, (ii) 실시예 1의 경우, 0.15% 처리농도보다 0.3% 처리 농도에서 OCLN의 mRNA 발현량의 수준이 현저하게 높게 나타나는 것을 확인하였다.

결국, 본 발명에 따른 케일 해수 추출물, 물냉이 해수 추출물 및 비트 뿌리 해수 추출물의 혼합물은 각질형성세포의 HAS2, Filaggrin 및 OCLN의 발현량을 현저하게 증가시켜 피부 보습 기능을 강화하고, 밀착연접(TJ) 형성을 촉진함으로써 피부 장벽 기능을 강화하는 효과를 발휘하며, 특히 상기 피부 장벽 기능의 강화는 피부의 수분 손실을 감소시켜 피부의 보습력을 증가시키는 효과가 있음을 확인하였다.

한편, 피부 노화는 피부 내 존재하는 콜라겐, 엘라스틴, 히아루론산 등의 세포외기질(extracellular matrix) 성분의 함량 감소로 인해 발생하는 것으로 알려져 있기는 하나, 피부 수분량의 감소가 동반되는 경우 피부 노화가 촉진(피부 탄력 감소 등)되는 것으로 보고된 바 있고, 밀착연접(TJ)을 형성하는데 관여하는 CLDN(Claudin) 계열의 단백질과 OCLN은 피부 재생에도 관여하는 것으로 밝혀져 있으므로, 본 발명에 따른 케일 해수 추출물, 물냉이 해수 추출물 및 비트 뿌리 해수 추출물의 혼합물은 이와 같은 피부 장벽 기능 강화, 피부 수분 손실 방지 및 피부 턴오버 촉진(피부 재생, 상처 치유 등)에 의한 피부 항노화 효과를 발휘하는 효과도 있을 것으로 판단하였다(Bazzoni et al., J Cell Biol ., 156(6):947-9. 2002; Furuse et al., J Cell Biol ., 156(6):1099-111, 2002; Nakajima et al., J Pharmacol Exp Ther ., 354(3):440-7., 2015; Volksdorf et al., Am J Pathol ., 187(6):1301-1312, 2017; Papakonstantinou et al., Dermatoendocrinol ., 4(3):253-8, 2012 참조).

본 발명에 따른 케일 해수 추출물, 물냉이 해수 추출물 및 비트 뿌리 해수 추출물의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물은 다양한 제형으로 제품화(화장품 등)될 수 있으며, 구현하고자 하는 제품의 기능성, 비용 및 기타 조건을 고려하여 적정 함량 비율로 제어할 수 있다.

[ 제형예 1] 연고의 제조

유상성분과 수상성분을 포함하는 표 2의 성분들을 혼합하여 본 발명에 따른 케일 해수 추출물, 물냉이 해수 추출물 및 비트 뿌리 해수 추출물의 혼합물을 포함하는 연고를 제조하였다.

배합성분	함량(중량%)
정제수	잔량
케일 해수 추출물, 물냉이 해수 추출물 및 비트 뿌리 해수 추출물의 혼합물	10.0
카프린/카프릴트리글릭세리드	10.0
액상파라핀	10.0
솔비탄세스퀴올리에이트	6.0
옥틸도데세스-25	9.0
세틸에틸헥사노에이트	10.0
스쿠알란	1.0
살리실산	1.0
글리세린	15.0
솔비톨	10.0

[ 제형예 2] 영양화장수( 밀크로션 )의 제조

유상성분과 수상성분을 포함하는 표 3의 성분들을 혼합하여 본 발명에 따른 케일 해수 추출물, 물냉이 해수 추출물 및 비트 뿌리 해수 추출물의 혼합물을 포함하는 영양화장수를 제조하였다.

배합성분	함량(중량%)
정제수	잔량
케일 해수 추출물, 물냉이 해수 추출물 및 비트 뿌리 해수 추출물의 혼합물	0.1
밀납	4.0
폴리솔베이트 60	1.5
솔비탄세스퀴올레이트	1.5
유동파라핀	0.5
Montana 202 (제조사:Seppic)	5.0
글리세린	3.0
부틸렌글리콜	3.0
프로필렌글리콜	3.0
카르복시비닐폴리머	0.1
트리에탄올아민	0.2
방부제, 색소, 향료	적량

[ 제형예 3] 마사지크림의 제조

유상성분과 수상성분을 포함하는 표 4의 성분들을 혼합하여 본 발명에 따른 케일 해수 추출물, 물냉이 해수 추출물 및 비트 뿌리 해수 추출물의 혼합물을 포함하는 마사지크림을 제조하였다.

배합성분	함량(중량%)
정제수	잔량
케일 해수 추출물, 물냉이 해수 추출물 및 비트 뿌리 해수 추출물의 혼합물	0.1
밀납	10.0
폴리솔베이트 60	1.5
피이지 60 경화피마자유	2.0
솔비탄세스퀴올레이트	0.8
유동파라핀	40.0
스쿠알란	5.0
Montana 202 (제조사: Seppic)	4.0
글리세린	5.0
부틸렌글리콜	3.0
프로필렌글리콜	3.0
트리에탄올아민	0.2
방부제, 색소, 향료	적량

[ 제형예 4] 팩의 제조

유상성분과 수상성분을 포함하는 표 5의 성분들을 혼합하여 본 발명에 따른 케일 해수 추출물, 물냉이 해수 추출물 및 비트 뿌리 해수 추출물의 혼합물을 포함하는 팩을 제조하였다.

배합성분	함량(중량%)
정제수	잔량
케일 해수 추출물, 물냉이 해수 추출물 및 비트 뿌리 해수 추출물의 혼합물	0.1
폴리비닐알콜	13.0
소듐카르복시메틸셀룰로오스	0.2
글리세린	5.0
알란토인	0.1
에탄올	6.0
핑이지-12 노닐페닐에테르	0.3
폴리솔베이트 60	0.3
방부제, 색소, 향료	적량

이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims

케일 해수 추출물, 물냉이 해수 추출물 및 비트 뿌리 해수 추출물의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 피부 상태 개선용 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 혼합물은 케일 해수 추출물, 물냉이 해수 추출물 및 비트 뿌리 해수 추출물을 중량기준으로, 1 : 1 : 3~50의 혼합비로 혼합한 것임을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물은 피부 세포의 히알루로난 합성효소 2(Hyaluronan Synthase 2, HAS2)를 코딩하는 유전자의 발현 수준을 증가시키는 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물은 피부 세포의 필라그린(Filaggrin)을 코딩하는 유전자의 발현 수준을 증가시키는 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물은 피부 세포의 오클루딘(Occludin, OCLN)을 코딩하는 유전자의 발현 수준을 증가시키는 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 혼합물의 함량은 조성물의 총 중량을 기준으로, 0.001~40중량%인 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물은 피부 장벽 기능 강화용임을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물은 피부 보습력 개선용임을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물은 피부 턴오버 촉진용임을 특징으로 하는, 화장료 조성물.