KR20190057110A

KR20190057110A - 치료적 mots-c 관련 펩타이드

Info

Publication number: KR20190057110A
Application number: KR1020197012168A
Authority: KR
Inventors: 케네스 씨. 쿤디; 켄트 케이. 그린드스태프; 레미 맥난; 웬디 루오; 용진 야오; 리앙 쳉 얀
Original assignee: 코바, 인크.
Priority date: 2016-09-28
Filing date: 2017-09-27
Publication date: 2019-05-27
Also published as: JP7035033B2; MX2019003567A; US11332497B2; AU2017336440A1; US20200181197A1; US20210363187A1; IL265463A; CA3038292A1; WO2018064098A1; US11111271B2; CN110072883A; US20220242912A1; JP2020501514A; EP3519431A1; TW201819398A; AU2017336440B2; US11753445B2

Abstract

펩타이드 및 펩타이드 유사체 및 대사 질환, 예를 들어, 비만, 당뇨병을 치료하는 방법, 암을 치료하는 방법, 간 질환을 치료하는 방법, 및 지방산 대사를 조절하는 방법이 본 명세서에 제공된다.

Description

치료적 MOTS-C 관련 펩타이드

전자적으로 제출된 자료의 참고에 의한 편입

아래와 같이 함께 제출되고 확인된 컴퓨터-판독가능한 뉴클레오타이드/아미노산 서열목록이 그 전체가 참고로 편입되어 있다: "51155A_SeqListing.txt"(2017년 9월 21일 제작)로 명명된 124,437 바이트 ACII (텍스트) 파일.

미국에서 20세 이상 연령의 성인 중에서, 3분의 1 이상은 2011-2014 동안 비만이었다 (Ogden 등, Prevalence of Obesity Among Adults and Youth:United States, 2011-2014), NCHS Data Brief, No. 219 (November 2015). 미국에서 (2-19 연령) 소아 중에서 비만의 유병률은 이 기간 동안 17%이었다. (Ogden, 2015(상동)). 비만은, 대사 증후군, 인슐린 내성, 2형 당뇨병, 지방간 질환, 심혈관 질환, 폐쇄성 수면 무호흡증, 뇌졸중, 고혈압, 골관절염, 생식 문제, 및 암을 포함하는, 수많은 건강 문제의 발생에 대한 위험 인자이다 (National Heart, Lung, and Blood Institute article: http://www.nhlbi.nih.gov/health/health-topics/topics/obe/risks).

당뇨병, 비만-관련된 병태는 2010년에 미국에서 사망의 7번째 주된 원인이었다. 2012년에, 미국인 모집단 (또는 2천9백10 만명)의 9.3%는 당뇨병을 가졌고, 미국에서 대략 208,000 소아는 진단된 당뇨병을 갖는 것으로 추정되었다. 매년, 미국에서 1백40만명은 당뇨병으로 진단된다. 당뇨병은, 저혈당증, 고혈압, 이상지질혈증, 심혈관 질환, 뇌졸중, 시각상실, 당뇨 망막병증, 신장 질환, 및 절단술을 포함하는, 몇 개의 합병증 및 동반이환 병태와 관련된다. 미국 당뇨병 협회에 따르면, 2012년에 미국에서 진단된 당뇨병의 추정된 총 비용은 $2450억 (Diabetes Care 36: 1033-1046 (2013년 4월))이었다. 이러한 비용은 당뇨병이 미국 사회에서 부과하는 실질적인 부하를 강조한다.

2000-2015 동안 35 초과 약물의 미국 식품 의약국 승인에도 불구하고, 비만 및 당뇨병에 대한 더 나은 치료제가 여전히 필요하다.

비-알코올성 지방간 질환 (NAFLD)는 간에서 트리글리세라이드의 형태로 과도한 지방 축적의 병태 (지방증)이다. NAFLD는 8천만명만큼 많은 사람들, 특히 40대 및 50대에 영향을 미치는, 미국에서 가장 통상적인 형태의 만성 간질환이다. 간-관련된 이환율 및 사망률에 더하여, NAFLD가, 유형-2 진성 당뇨병, 심혈관 및 심장 질환, 암, 그리고 만성 신장 질환의 증가된 위험으로, 다발계통 질환이라는 증거가 증가하고 있다. NAFLD 환자 중에서 사망의 다수는 심혈관 질환에 기인하는 한편, 미국에서 1천5백만명만큼 많은 사람들이 또한 간세포 손상 및 염증, NASH (비-알코올성 지방 간염)이라고 불리는 병태를 갖는다. NASH는 중년 및 과체중 또는 비만인 사람들에서 가장 흔하게 발생하고, 미국에서 간경변의 주요 원인 중 하나로서 등급화하고, 2030년까지 간이식 가장 빈번한 적응증이 되는 것으로 예상된다. NASH의 치료에 대한 승인된 의약품은 현재 없다.

요약

본 개시내용은 펩타이드 및 펩타이드 유사체 및 그 NASH, 체중, 혈당 수준, 및 지방량, 예를 들어, 비만, 지방 간 질환 및 당뇨병을 포함하는 대사 질환과 관련된 질환을 치료하는 방법에서 그의 용도를 제공한다.

예시적인 구현예에서, 본 개시내용의 펩타이드는 식 I의 아미노산 서열을 포함한다:

X¹-Q-E-X²-X³-Y-I-X⁴-Y-X⁵-R-X⁶ (I) (서열번호: 1)

또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염;

식 중, X¹이, 부재이거나 존재하면, X⁷-RW-이고, 상기 X⁷이, 부재이거나 존재하면, 무극성 측쇄 또는 극성 측쇄를 가지고 있는 아미노산이고; X² 및 X³ 각각은 독립적으로 무극성 측쇄 또는 극성 측쇄를 가지고 있는 아미노산이고; X⁴ 및 X⁵ 각각은 독립적으로 무극성 측쇄를 가지고 있는 아미노산이고; X⁶이, 부재이거나 존재하면, -KL-X⁸ 또는 -X⁹-LR이고, 상기 X⁸이, 부재이거나 존재하면, 무극성 측쇄를 가지고 있는 아미노산이고, 그리고 X⁹는 무극성 측쇄를 가지고 있는 아미노산이고; 단, 상기 펩타이드는 하기 중 어떤 것도 아니다: MRWQEMGYIFYPRKLR (서열번호: 2); MRWQEMGYIFYFRKLR (서열번호: 316); MGWQEMGYIFYPRKLR (서열번호: 317); 및/또는 MGYIFYPRKLR (서열번호: 318).

일부 예시적인 구현예에서, 본 펩타이드는 상세한 설명에서 제시된 바와 같이 식 II 또는 식 III의 아미노산 서열을 포함한다.

예시적인 구현예에서, 식 I, 식 II, 및/또는 식 III의 펩타이드는 단리된다.

예시적인 구현예에서, 본 펩타이드는 하기로부터 선택된 펩타이드 서열의 변형을 포함한다:

MRWQEAGYIFYPRKLR (서열번호: 11);

MRWQEMGYIFYPR(dA)LR (서열번호: 149);

MRWQEMNYIFYPR (서열번호: 208);

MRWQEMGYIFYPRNLR (서열번호: 213);

MRWQEMQYIFYPRALR (서열번호: 219);

RWQEMNYIFYPR (서열번호: 248);

MRWQEMGYIFYPRALR (서열번호: 19);

MRWQEMGYIFYPRKLA (서열번호: 21);

MRWQEMGYIFYARKLR (서열번호: 17);

RWQEMGYIFYPRQLR (서열번호: 217);

MRWQEEGYIFYPRKLR (서열번호: 172);

MRWQEMGYIFYPRKL (서열번호: 45);

ERWQEAGYIAYPR (서열번호: 241);

RWQEMQYIFYPR (서열번호: 211); 및

MRWQEMGYIFYPAKLR (서열번호: 18);

상기 변형은 상기 펩타이드 중 적어도 하나의 아미노산을 with (i) D-배치형태를 가지고 있는 아미노산, 및 (ii) 비-자연 발생 아미노산 잔기로부터 선택된 또 다른 아미노산으로 치환하는 것을 포함하고; 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염.

예시적인 구현예에서, 본 펩타이드는 부형제와 함께 제형화되어 약제학적 조성물을 제공하고, 상기 조성물은 환자에서의 질환 또는 또 다른 의료 병태를 치료하기 위해 사용될 수 있다.

예시적인 구현예에서, 본 펩타이드는 식 I의 아미노산 서열을 포함하되, X¹이, 부재이거나 존재하면, X⁷-RW-이고, 상기 X⁷이, 부재이거나 존재하면, D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C, (dC), G, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고; X² 및 X³ 각각은 D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C, (dC), G, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P (dP), M 및 (dM)으로부터 독립적으로 선택되고; X⁴ 및 X⁵ 각각은 G, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P (dP), M 및 (dM)으로부터 독립적으로 선택되고; X⁶이, 부재이거나 존재하면, -KL-X⁸ 또는 -X⁹-LR이고, 상기 X⁸이, 부재이거나 존재하면, G, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고, 그리고 X⁹는 G, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고; 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염.

예시적인 구현예에서, 본 펩타이드는 식 I의 아미노산 서열을 포함하되, X¹이, 부재이거나 존재하면, X⁷-RW-이고, 상기 X⁷이, 부재이거나 존재하면, M 또는 E이고; X²는 M, 또는 E이고; X³는 G, N 또는 Q이고; X⁴는 F 또는 A이고; X⁵는 P 또는 A이고; X⁶이, 부재이거나 존재하면, -KL-X⁸ 또는 -X⁹-LR이고, 상기 X⁸이, 부재이거나 존재하면, R 또는 A이고, 그리고 X⁹는 K, (dA), N 및 Q로부터 선택되고; 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염.

예시적인 구현예에서, 본 펩타이드는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 서열을 포함한다: MRWQEAGYIFYPRKLR (서열번호: 11); MRWQEMGYIFYPR(dA)LR (서열번호: 149); MRWQEMNYIFYPR (서열번호: 208); MRWQEMGYIFYPRNLR (서열번호: 213); MRWQEMQYIFYPRALR (서열번호: 219); RWQEMNYIFYPR (서열번호: 210); MRWQEMGYIFYPRALR (서열번호: 19); MRWQEMGYIFYPRKLA (서열번호: 21); MRWQEMGYIFYARKLR (서열번호: 17); RWQEMGYIFYPRQLR (서열번호: 217); MRWQEEGYIFYPRKLR (서열번호: 172); MRWQEMGYIFYPRKL (서열번호: 45); ERWQEAGYIAYPR (서열번호: 241); RWQEMQYIFYPR (서열번호: 211); MRWQEMGYIFYPAKLR (서열번호: 18); 및 이의 약제학적으로 허용가능한 염.

예시적인 구현예에서, 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 하기를 포함한다: (A) RWQE (서열번호: 294), (b) YIFY (서열번호: 295), 또는 (c) RWQE (서열번호: 294)와 YIFY (서열번호: 295) 둘 모두를 포함하되, 상기 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 (i) 60분 동안 37 섭씨 온도에서 마우스 혈장에서 10% 안정성을 나타내고, (ii) 인간 일차 지방세포에서 유리 지방산 수준을 감소시키고, (iii) 또는 (i)과 (ii) 둘 모두이다. 예시적인 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 8 내지 20 개 길이의 아미노산이다.

예시적인 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 이의 C-말단 산 또는 아미드, 또는 N-아세틸 유도체이다.

예시적인 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유도체는 PEG, 아세틸, 바이오틴 또는 이의 지방산 유도체이다. 예시적인 구현예에서, 펩타이드 유도체는 PEG600, 아세틸, 바이오틴 또는 팔미틸을 포함한다.

예시적인 구현예에서, 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 하기를 포함한다: (A) RWQE (서열번호: 294)의 아미노산 서열 및 (B) 하나의 아미노산 치환을 갖는 YIFY (서열번호: 295)의 아미노산 서열. 예시적인 구현예에서, 하나의 아미노산 치환을 갖는 YIFY (서열번호: 295)의 아미노산 서열은 XIFY (서열번호: 300), YXFY (서열번호: 301), YIXY (서열번호: 302), 또는 YIFX (서열번호: 303)을 포함하되, X는 임의의 아미노산이다. 예시적인 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 8 내지 20 개 길이의 아미노산이다. 예시적인 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 일부 (A)와 일부 (B) 사이에 1, 2, 3 또는 그 초과 개의 아미노산을 포함한다. 예시적인 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 (i) 60분 동안 37 섭씨 온도에서 마우스 혈장에서 10% 안정성을 나타내고, (ii) 인간 일차 지방세포에서 유리 지방산 수준을 감소시키고, (iii) 또는 (i)과 (ii) 둘 모두이다.

예시적인 구현예에서, 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 (A) RWQE (서열번호: 294)의 아미노산 서열 및 (B) 2개의 아미노산 변형을 갖는 YIFY (서열번호: 295)의 아미노산 서열을 포함한다. 예시적인 구현예에서, 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 하기를 포함한다: (A) RWQE (서열번호: 294)의 아미노산 서열 및 (B) 2개의 아미노산 치환을 갖는 YIFY (서열번호: 295)의 아미노산 서열. 예시적인 구현예에서, 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 RWQE (서열번호: 294) 및 YIAE (서열번호: 308) 또는 EIFE (서열번호: 309)의 아미노산 서열을 포함한다. 예시적인 구현예에서, 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 하기를 포함한다: (A) RWQE (서열번호: 294)의 아미노산 서열 및 (B) 절단된 형태의 YIFY (서열번호: 295). 예시적인 구현예에서, 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 하기를 포함한다: (A) RWQE (서열번호: 294)의 아미노산 서열 및 (B) YI 또는 YIF. 예시적인 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 8 내지 20 개 길이의 아미노산이다. 예시적인 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 일부 (A)와 일부 (B) 사이에 1, 2, 3 또는 그 초과 개의 아미노산을 포함한다. 예시적인 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 (i) 60분 동안 37 섭씨 온도에서 마우스 혈장에서 10% 안정성을 나타내고, (ii) 인간 일차 지방세포에서 유리 지방산 수준을 감소시키고, (iii) 또는 (i)과 (ii) 둘 모두이다.

예시적인 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 하기를 포함한다: (A) YIFY (서열번호: 295)의 아미노산 서열 및 (B) 하나의 아미노산 치환을 갖는 RWQE (서열번호: 294)의 아미노산 서열. 예시적인 구현예에서, 하나의 아미노산 치환을 갖는 RWQE (서열번호: 294)의 아미노산 서열은 XWQE (서열번호: 304), RXQE (서열번호: 305), RWXE (서열번호: 306), 또는 RWQX (서열번호: 307)을 포함하되, X는 임의의 아미노산이다. 예시적인 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 8 내지 20 개 길이의 아미노산이다. 예시적인 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 일부 (A)와 일부 (B) 사이에 1, 2, 3 또는 그 초과 개의 아미노산을 포함한다. 예시적인 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 (i) 60분 동안 37 섭씨 온도에서 마우스 혈장에서 10% 안정성을 나타내고, (ii) 인간 일차 지방세포에서 유리 지방산 수준을 감소시키고, (iii) 또는 (i)과 (ii) 둘 모두이다.

예시적인 구현예에서, 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 RWQEX¹X²YIFY (서열번호: 319)의 아미노산 서열을 포함하되, 각각의 X¹ 및X²는 독립적으로 임의의 아미노산이다. 예시적인 구현예에서, 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 RWQEX¹X²X³IFY (서열번호: 320), RWQEX¹X²YX³FY (서열번호: 321), RWQEX¹X²YIX³Y (서열번호: 322) 또는 RWQEX¹X²YIFX³ (서열번호: 323)의 아미노산 서열을 포함하되, 각각의 X¹,X² 및 X³는 독립적으로 임의의 아미노산이다. 예시적인 구현예에서, 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 서열번호: 1, 3-41, 43-76, 및 79-293, 310-315, 319-323 및 354-377의 아미노산 서열을 포함한다. 예시적인 구현예에서, 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 표 1에서 제시된 구조 및/또는 아미노산 서열을 포함한다.

예시적인 구현예에서, 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 하기의 아미노산 서열로 구성된 펩타이드 중 임의의 것이 아니다: MRWQEMGYIFYPRKLR (서열번호: 2); MRWQEMGYIFYFRKLR (서열번호: 316); MGWQEMGYIFYPRKLR (서열번호: 317); 또는 MGYIFYPRKLR (서열번호: 318).

일부 구현예에서, 본 명세서에 개시된 펩타이드는 아미노산 서열 서열번호: 11, 17, 18, 19, 21, 45, 149, 172, 208, 210, 211, 213, 217, 219, 217 및 241 중 임의의 하나에 대해 적어도 66% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 특정 구현예에서, % 동일성은 예를 들어, 주어진 서열에 대해 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 또는 그 초과의 서열 동일성으로부서 선택된다. 특정 구현예에서, % 동일성은, 예를 들어, 하기의 범위이다: 약 65% 내지 약 70%, 약 70% 내지 약 80%, 약 80% 내지 약 85%, 약 85% 내지 약 90%, 또는 약 90% 내지 약 95%; %; 약 70% 내지 약 80%, 약 80% 내지 약 90% 및 약 90% 내지 약 99% 서열 동일성.

특정 구현예에서, 본 펩타이드는 아미노산 서열 서열번호: 11, 17, 18, 19, 21, 45, 149, 172, 208, 210, 211, 213, 217, 219, 217 및 241 중 임의의 하나에 대해 적어도 66% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 특정 구현예에서, % 동일성은 예를 들어, 주어진 서열에 대해 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%, 또는 그 초과의 서열 동일성으로부서 선택된다. 특정 구현예에서, % 동일성은, 예를 들어, 약 65% 내지 약 70%, 약 70% 내지 약 80%, 약 80% 내지 약 85%, 약 85% 내지 약 90%, 또는 약 90% 내지 약 95%; %; 약 70% 내지 약 80%, 약 80% 내지 약 90% 및 약 90% 내지 약 99% 서열 동일성의 범위이지만, 서열번호: 2, 42, 77-78, 316-318, 또는 328-349에서 제시된 서열을 포함하지 않는다.

본 개시내용은 추가로, 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체 및 이종성 모이어티 중 하나 이상을 포함하는 콘주게이트를 제공한다.

본 개시내용은 추가로, 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체 중 임의의 하나 이상을 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산을 제공한다. 또한, 본 개시내용의 핵산으르 포함하는 발현 벡터가 본 명세서에 제공된다. 핵산 또는 발현 벡터를 포함하는 숙주세포가 본 개시내용에 의해 제공된다.

추가로, 본 개시내용은 provide 펩타이드, 펩타이드 유사체, 콘주게이트, 핵산, 발현 벡터, 숙주세포, 또는 이들의 조합, 및 담체, 부형제, 또는 희석제를 포함하는 조성물을 제공한다. 예시적인 양태에서, 본 조성물은 약제학적 조성물이다. 예시적인 양태에서, 본 개시내용의 약제학적 조성물은 본 명세서에 기재된 서열번호: 1, 3-41, 43-76, 및 79-293, 310-315, 319-323 및 354-377의 아미노산 서열를 포함하는 식 I의 아미노산 서열, 이의 유사체 및 유도체 및 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함한다.

본 개시내용은 또한, 추가의 구현예로서, 본 명세서에 기재된 2 이상의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체 (또는 콘주게이트, 핵산, 발현 벡터, 등)의 혼합물을 포함하고, 선택적으로 부형제 또는 담체를 추가로 포함하는 조성물을 포함한다.

본 개시내용은 또한 펩타이드, 펩타이드 유사체, 콘주게이트, 핵산, 발현 벡터, 숙주세포, 또는 이들의 조합을 포함하는 관련된 키트를 제공한다.

펩타이드 또는 펩타이드 유사체를 생산하는 방법이 본 개시내용에 의해 제공된다. 예시적인 구현예에서, 상기 방법은 하기를 포함한다: (i) 제1 아미노산을 제2 아미노산과 접촉시켜 상기 제1 아미노산과 상기 제2 아미노산 사이의 공유결합을 형성하는 단계로서, 상기 제1 아미노산 또는 상기 제2 아미노산이 또 다른 아미노산에 선택적으로 부착되는 단계, 및 (ii) 상기 (i)의 반복 단계를 반복함으로써 상기 펩타이드 또는 펩타이드 유사체가 생산되는 단계.

특정 이론에 구속되지 않으면서, 본 개시내용의 펩타이드 및 펩타이드 유사체는 치료제에 잘 적용된다. 본 명세서에 제공된 데이터는 유리 지방산, 체중, 혈당 수준, 지질 분포, 및 지방량과 관련된 질환, 장애, 또는 의료 병태의 치료에서의, 그와 같은 펩타이드 및 펩타이드 유사체의 용도를 지지한다.

본 개시내용은 따라서 조절을 필요로 하는 대상체에서 지방산 대사를 조절하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 상기 대상체에게 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체, 콘주게이트, 핵산, 재조합 발현 벡터, 또는 숙주세포를, 지방산 대사를 조절하는데 효과적인 양으로 투여하는 것을 포함한다.

본 개시내용은 또한, provide 치료를 필요로 하는 대상체에서 대사 질환을 치료하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 상기 대상체에게 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체, 콘주게이트, 핵산, 재조합 발현 벡터, 또는 숙주세포를, 대사 질환을 치료하는데 효과적인 양으로 투여하는 것을 포함한다.

또한, 특정 이론에 구속되지 않으면서, 일부 대사 질환 상태가 간과 관련되거나 연관되면, 본 개시내용의 펩타이드 및 펩타이드 유사체는 NAFLD 및 NASH를 비제한적으로 포함하는 간 질환을 치료하는데 매우 적합하다. 따라서, 본 개시내용은 또한, provide 치료를 필요로 하는 대상체에서 간 질환을 치료하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 상기 대상체에게 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체, 콘주게이트, 핵산, 재조합 발현 벡터, 또는 숙주세포를, 간 질환을 치료하는데 효과적인 양으로 투여하는 것을 포함한다.

본 개시내용은 또한, provide 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 상기 대상체에게 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체, 콘주게이트, 핵산, 재조합 발현 벡터, 또는 숙주세포를, 암을 치료하는데 효과적인 양으로 투여하는 것을 포함한다.

본 개시내용은 또한, provide 치료를 필요로 하는 대상체에서 비만 또는 과도한 체중을 치료하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 상기 대상체에게 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체, 콘주게이트, 핵산, 재조합 발현 벡터, 또는 숙주세포를, 비만 또는 과도한 체중을 치료하는데 효과적인 양으로 투여하는 것을 포함한다 .

본 개시내용은 또한, 치료를 필요로 하는 대상체에서 뇌졸중을 치료하는 방법을 제공하고 상기 방법은 상기 대상체에게 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체, 콘주게이트, 핵산, 재조합 발현 벡터, 또는 숙주세포를, 뇌졸중을 치료하는데 효과적인 양으로 투여하는 것을 포함한다.

본 개시내용은 또한, 치료를 필요로 하는 대상체에서 심혈관 질환을 치료하는 방법을 제공하고 상기 방법은 상기 대상체에게 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체, 콘주게이트, 핵산, 재조합 발현 벡터, 또는 숙주세포를, 심혈관 질환을 치료하는데 효과적인 양으로 투여하는 것을 포함한다.

본 개시내용은 또한, provide 치료를 필요로 하는 대상체에서 폐쇄성 수면 무호흡증을 치료하는 방법을 제공하고 상기 방법은 상기 대상체에게 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체, 콘주게이트, 핵산, 재조합 발현 벡터, 또는 숙주세포를, 폐쇄성 수면 무호흡증을 치료하는데 효과적인 양으로 투여하는 것을 포함한다.

본 개시내용은 또한, provide 치료를 필요로 하는 대상체에서 고혈압을 치료하는 방법을 제공하고 상기 방법은 상기 대상체에게 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체, 콘주게이트, 핵산, 재조합 발현 벡터, 또는 숙주세포를, 고혈압을 치료하는데 효과적인 양으로 투여하는 것을 포함한다.

본 개시내용은 또한, provide 지방세포 또는 지방세포에서 지방산, 예컨대 유리 지방산의 수분을 감소시키는 것을 포함하여 조절하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 지방세포(들)을 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체, 콘주게이트, 핵산, 재조합 발현 벡터, 또는 숙주세포와, 상기 수준을 감소시키는데 효과적인 양으로 접촉시키는 것을 포함한다. 일부 변형에서, 본 방법은 시험관내, 예를 들어, 세포 배양에 수행된다. 일부 변형에서, 본 방법은 예를 들어, 상기 물질을 필요한 대상체에게 투여함으로써 생체내에서 수행된다.

본 개시내용은 또한, provide 대상체에서 혈액 또는 혈청 글루코스 및/또는 혈청 트리글리세라이드의 수준을 감소시키는 것을 포함하여, 조절하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 대상체에게 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체, 콘주게이트, 핵산, 재조합 발현 벡터, 또는 숙주세포를, 혈액/혈청 글루코스를 감소시키는데 효과적인 양으로 투여하는 것을 포함한다.

핵산 및 벡터의 사용에 관하여 본 명세서에서 기재된 구현예에 대해, 본 방법은 시험관내 또는 생체내 세포의 형질전환 또는 형질감염을 포함할 수 있다.

방법으로서 본 명세서에서 기재된 본 발명의 양태는 또한 "용도"로서 기재될 수 있고, 모든 그와 같은 용도는 본 발명의 양태로서 고려된다. 마찬가지로, "용도"를 갖는 것으로서 본 명세서에서 기재된 조성물은 대안적으로 사용 공정 또는 방법으로서 기재될 수 있고, 이는 본 발명의 양태로서 고려된다. 예를 들어, 질환 또는 병태의 치료 방법으로서 본 명세서에서 기재된 구현예는 또한 질환 또는 병태를 치료하기 위한 제제 또는 물질의 용도, 또는 질환 또는 병태를 치료하기 위한 약제의 제조에서 물질의 용도에 관한 구현예를 포함하도록 이해될 수 있다.

본 발명의 양태는 특정 목적을 위하여 2 이상의 제제의 조합으로 치료 방법 (또는 제제의 조합의 용도)로서 본 명세서에서 기재되어 있다. 본 발명의 관련된 양태는 2 이상의 제제가 혼합물인 물질의 조성물; 그리고 2 이상의 제제가, 예를 들어, 단위 용량 제형으로, 그러나 혼합물이 아닌 함께 패키징되는 키트를 포함한다.

본 명세서 내내 "하나의 구현예", "일부 구현예" 또는 "한 구현예" 참조는 구현예와 함께 기재된 특정 특성, 구조 또는 특징이 본 개시내용의 적어도 하나의 구현예에서 포함되는 것을 의미한다. 본 명세서에서 기재된 특정 특성, 구조, 또는 특징은 임의의 적합한 방식으로 조합될 수 있고, 모든 그와 같은 조합은 본 발명의 양태로서 고려된다.

달리 구체화되지 않는 한, 공통 목적어를 기재하기 위해, 일반적인 형용사, "제1", "제2", "제3", 등은 단지 비슷한 목적어의 상이한 사례가 지칭되고 있는 것을 단지 나타내고, 그렇게 기재된 목적어가, 어느 한쪽 일시적으로, 공간적으로, 등급으로, 또는 임의의 다른방식으로, 주어진 순서이어야 하는 것을 암시하는 것은 아니다.

본 발명은, 추가의 양태로서, 상기 특정 단락에 의해 또는 최초 청구항에 의해 정의된 변형보다 어떤 식으로든 범위에서 더 좁은 모든 본 발명의 구현예들을 포함한다. 예를 들어, 특정 본 발명의 양태가 속 또는 세트로서 기재되는 경우, 속 또는 세트의 모든 구성원이, 개별적으로, 본 발명의 양태인 것으로 이해될 수 있다. 마찬가지로, 모든 개별 서브셋은 본 발명의 양태로서 의도된다. 예로써, 본 발명의 양태가1, 2, 3, 및 4로 구성되는 군으로부터 선택된 구성원으로서 기재되면, 하위 그룹 (예를 들어, {1,2,3} 또는 {1,2,4} 또는 {2,3,4} 또는 {1,2} 또는 {1,3} 또는 {1,4} 또는 {2,3} 또는 {2,4} 또는 {3,4}로부터 선택된 구성원)은 고려되고 각각의 개별 종 {1} 또는 {2} 또는 {3} 또는 {4}는 본 발명의 양태 또는 변형으로서 고려된다. 마찬가지로, 본 발명의 양태가 범위를 특징으로 하거나, 또는 범위, 예컨대 온도 범위에 대해 실시가능하면, 정수 하위범위는 본 발명의 양태 또는 변형으로서 고려된다.

본 명세서에서 제목은 독자의 편리를 위한 것이고 제한되도록 의도되지 않는다. 본 발명의 추가의 양태, 구현예, 및 변형은 상세한 설명 및/또는도면 및/또는 최초 청구항으로부터 분명할 것이다. 최초 청구항은 여기에서 발명의 요약으로 참고로 편입된다.

출원인이 본 명세서에서 기재된 본 발명의 전체 범위를 발명하였어도, 출원인은 기타의 선행기술 작업에서 기재된 요지를 청구하지 않는다. 따라서, 청구범위 이내 법에 규정된 선행기술이 특허청, 심판원, 또는 다른 독립체 또는 개인에 의해 출원인의 주목을 받는 경우에, 출원인은 그와 같은 법에 규정된 선행기술을 구체적으로 배제하기 위해 그와 같은 청구항의 요지 또는 그와 같은 청구항의 범위로부터 법에 규정된 선행기술의 명백한 또는 비진보적 변형을 재정의하도록 적용가능한 특허법 하에 보정 권리를 실시할 권한을 보유한다. 그와 같은 보정된 청구항에 의해 정의된 본 발명의 변형은 본 발명의 양태로서 또한 의도된다.

정의

본 발명 기재 및 청구에서, 하기 용어는 아래에 제시된 정의에 따라 사용될 것이다.

용어들 "펩타이드"는 펩타이드 결합에 의해 서로 연결된 2 이상의 아미노산 잔기를 포함하는 분자를 지칭한다. 이들 용어들은, 예를 들어, 천연 및 인공 단백질, 단백질 서열의 단백질 단편 및 폴리펩타이드 유사체 (예컨대 뮤테인, 변이체, 및 융합 단백질) 뿐만 아니라 번역후에, 또는 달리 공유적으로 또는 비-공유적으로, 변형된 펩타이드를 포괄한다. 펩타이드는 단량체성 또는 중합체일 수 있다. 특정 구현예에서, "펩타이드"는, 알파 탄소가 펩타이드 결합을 통해 연결될 수 있는 아미노산의 사슬이다. 사슬의 하나의 말단 (아미노 말단)에서의 말단 아미노산은 따라서 유리 아미노기를 가지며, 한편 사슬의 다른 말단 (카복시 말단)에서의 말단 아미노산은 유리 카복실기를 갖는다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "아미노 말단" (단축된 N-말단)은 펩타이드의 아미노 말단에 있는 아미노산 상의 유리 β-아미노기 또는 펩타이드 내의 임의의 다른 위치에 있는 아미노산의 β-아미노기 (펩타이드 결합에 참여하는 아미노기)를 지칭한다. 유사하게, 용어 "카복시 말단"는 펩타이드의 카복시 말단 상의 유리 카복실기 또는 펩타이드 내의 임의의 다른 위치에 있는 아미노산의 카복실기를 지칭한다. 펩타이드는 또한 펩타이드 모방체 예컨대 아미드 결합과는 대조적으로 에테르에 의해 연결된 아미노산을 비제한적으로 포함하는 본질적으로 임의의 폴리아미노산을 포함한다.

용어 "치료적 펩타이드"는 하나 이상의 치료적 및/또는 생물학적 활성을 가지고 있는 펩타이드 또는 단편 또는 이의 변이체를 지칭한다.

본 명세서에서 사용된 바와 같은 용어 "유사체" 또는 "펩타이드 유사체"는 하나 이상의 아미노산 변형, 예컨대 비제한적으로 임의의 천연 또는 비천연 아미노산, 합성 아미노산 또는 펩타이드모사체를 갖는 아미노산 잔기 중 임의의 하나의 치환 및/또는 하나 이상의 결실(들) 및/또는 하나 이상의 첨가(들) 및/또는 치환체의, 임의의 이용가능한 위치에 있는 천연 또는 비천연 아미노산, 합성 아미노산 또는 펩타이드모사체 중 임의의 하나에의 부착을 포함하는 펩타이드를 기재한다. 아미노산 잔기의 첨가 또는 결실은 펩타이드의 N-말단에서 및/또는 펩타이드의 C-말단에서 일어날 수 있다.

일부 구현예에서, 유사체는 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 그와 같은 변형을 갖는다. 일부 구현예에서, 유사체는 최초 펩타이드의 생물학적 활성을 보유한다. 일부 구현예에서, 유사체는 최초 펩타이드의 경쟁적 또는 비-경쟁적 억제제 이다.

펩타이드 서열은 표준 1- 또는 3-문자 약어를 사용하여 나타낸다. 달리 나타내지 않는 한, 펩타이드 서열은 최즉에 있는 그것의 아미노 말단 및 우측에 있는 그것의 카복시 말단을 가지며, 펩타이드의 특정 부문은 아미노산 잔기 수 예컨대 아미노산 3 내지 6에 의해, 또는 그 부위에 있는 실제 잔기 예컨대 Met3 내지 Gly6에 의해 지정될 수 있다. 특정 펩타이드 서열은 또한 기준 서열과 어떻게 상이한 지를 설명함으로써 기재될 수 있다.

본 명세서에서 사용될 때, 용어 "천연 아미노산"은 하기로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 (괄호 내에 통상적인 3개의 문자 암호 & 1개의 문자 암호를 가짐)이다: 글리신 (Gly & G), 프롤린 (Pro & P), 알라닌 (Ala & A), 발린 (Val & V), 류신 (Leu & L), 이소류신 (Ile & I), 메티오닌 (Met & M), 시스테인 (Cys & C), 페닐알라닌 (Phe & F), 티로신 (Tyr & Y ), 트립토판 (Trp & W), 히스티딘 (His & H), 라이신 (Lys & K), 아르기닌 (Arg & R), 글루타민 (Gin & Q), 아스파라긴 (Asn & N), 글루탐산 (Glu & E), 아스파르트산 (Asp & D), 세린 (Ser & S) 및 트레오닌 (Thr & T). 본 명세서의 어디든지, 추가 지정되지 않으면서 G, P, A, V, L, I, M, C, F, Y, H, K, R, Q, N, E, D, S 또는 T를 포함하거나 포함하지 않는 펩타이드, 유사체 또는 유도체 또는 펩타이드들이 언급되면, 아미노산을 의미한다. 달리 지시되지 않으면, 대문자로 단일 문자 암호로 나타낸 아미노산은 L-동형체를 나타낸다. 그러나, 대문자로 단일 문자 암호로 지정된 아미노산이 소문자 "d" 및 괄호 내에, 예컨대 "(dD)" 및 "(dE)"에 의해 선행되면, 이러한 아미노산은 그것의 D-동형체로서 사용/적용된다. 예를 들어, "(dD)"는 D 또는 아스파르트산의 D-이성질체를 지칭하고, "(dA)"는 A 또는 알라닌의 D-이성질체를 지칭하고, "(dE)"는 E 또는 글루탐산의 D-이성질체를 지칭한다. 일부 사례에서, 아미노산의 D-이성질체는 "D-" 이어서 그것의 3-문자 암호로 지정된 아미노산으로 표시한다. 따라서, 예를 들어, "D-Ala"는 알라닌의 D-이성질체를 지칭하고, "D-Asp"는 아스파르트산의 D-이성질체를 지칭하고, "D-Glu"는 클로탐산의 D-이성질체를 지칭한다. 이전에 정의된 그와 같은 D-형태 및 다른 비-보존적 아미노산 치환은 비천연 아미노산의 정의 내에 포함된다.

타이핑 오류로 인해, 통상적으로 사용된 코드로부터 편차가 있다면, 통상적으로 사용된 코드는 적합하다. 펩타이드에서 존재하는 아미노산은, 바람직하게는, 핵산에 의해 코딩될 수 있는 아미노산이다. 상기 예로부터 분명한 바와 같이, 아미노산 잔기는 그것의 완전한 명칭, 그것의 1-문자 코드, 및/또는 그것의 3-문자 코드에 의해 확인될 수 있다. 이들 3개의 방식은 완전하게 등가이다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 "하전된 아미노산" 또는 "하전된 잔기"는 생리적 pH에 수용액에서 음성-하전되는 (즉, 탈-양성자화되는) 또는 양성-하전되는 (즉, 양성자화되는) 측쇄를 포함하는 아미노산을 지칭한다. 예를 들어, 음성-하전된 아미노산은 아스파르트산, 글루탐산, 시스테인산, 호모시스테인산, 및 호모글루탐산을 포함하고, 반면에 양성-하전된 아미노산은 아르기닌, 라이신 및 히스티딘을 포함한다. 하전된 아미노산은 20개의 코딩된 아미노산 중에서 하전된 아미노산, 뿐만 아니라 비정형 또는 비-자연 발생 또는 비-코딩된 아미노산을 포함한다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 "산성 아미노산"은, 예를 들어, 카복실산 또는 설폰산 기를 포함하는, (아미노산의 카복실산 이외) 제2 산성 모이어티를 포함하는 아미노산을 지칭한다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "아실화된 아미노산"은, 생산되는 수단 (예를 들어 아미노산의 펩타이드로의 편입에 앞서 아실화, 또는 펩타이드로의 편입후 아실화)와 무관하게, 자연 발생 아미노산에 대해 비-자연인 아실기를 포함하는 아미노산을 지칭한다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 "알킬화된 아미노산"은, 생산되는 수단과 무관하게, 자연 발생 아미노산에 대해 비-자연인 알킬기를 포함하는 아미노산을 지칭한다. 따라서, 본 개시내용의 아실화된 아미노산 및 알킬화된 아미노산은 비-코딩된 아미노산이다.

숙련가는, 지방산 대사, 및 다른 대사 검정을 포함하는, 본 명세서에서 기재된 물질 및 방법 (예컨대 합성 기술 및 활성 검정)을 사용하여 본 명세서에서 제시된 바와 같이 펩타이드의 활성 변이체를 결정할 수 있을 것이다. 참고, 실시예 섹션. 특정 구현예에서, 당해 분야의 숙련가는 활성에 중요한 것으로 여겨지는 표적화 영역에 의해 활성 파괴 없이 변화될 수 있는 분자의 적합한 구역을 식별할 수 있다. 다른 구현예에서, 숙련가는 유사한 펩타이드 (예컨대 유사한 조절 활성을 갖는 본 명세서에 기재된 펩타이드) 중에서 보존되는 분자의 잔기 및 부분을 식별할 수 있다. 추가 구현예에서, 생물학적 활성에 또는 구조에 중요할 수 있는 구역조차 생물학적 활성 파괴 없이 또는 펩타이드 구조에 부정적으로 영향화 없이 보존적 아미노산 치환을 거치게 될 수 있다.

추가로, 당해 분야의 숙련가는 활성 또는 구조에 중요한 유사한 펩타이드에서 잔기를 식별하는 구조-기능 연구를 검토할 수 있다. 그와 같은 비교의 관점에서, 숙련가는 유사한 펩타이드내 활성 또는 구조에 중요한 아미노산 잔기에 상응하는 펩타이드에서 아미노산 잔기의 중요성을 예상할 수 있다. 당해 분야의 숙련가는 그와 같은 예상된 중요한 아미노산 잔기에 대하여 화학적으로 유사한 아미노산 치환을 선택할 수 있다.

당해 분야의 숙련가는 또한 유사한 펩타이드내 그 구조에 관하여 3차원 구조 및 아미노산 서열을 분석할 수 있다. 그와 같은 정보의 관점에서, 당해 분야의 숙련가는 그것의 3차원 구조에 대하여 펩타이드의 아미노산 잔기의 정렬을 예상할 수 있다. 특정 구현예에서, 당해 분야의 숙련가가 펩타이드의 표면위에 있도록 예상된 아미노산 잔기에 라디칼 변화를 하지 못하도록 선택할 수 있는 것은, 그와 같은 잔기가 다른 분자와 중요한 상호작용에서 관여될 수 있기 때문이다. 또한, 당해 분야의 숙련가는 각각의 원하는 아미노산 잔기에서 단일 아미노산 치환을 함유하는 시험 변이체를 생성할 수 있다. 변이체는 그 다음 당해 분야의 숙련가에게 공지된 활성 검정을 사용하여 선별될 수 있다. 그와 같은 변이체는 적합한 변이체에 대한 정보를 수집하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 특정 아미노산 잔기에 대한 변화가 파괴된, 바람직하지 않게 감소된, 또는 부적합한 활성을 초래하였다는 것을 발견하였다면, 그와 같은 변화를 가진 변이체는 회피될 수 있다. 환언하면, 그와 같은 일상적인 실험으로부터 수집된 정보에 기반하여, 당해 분야의 숙련가는 추가 치환이 단독으로 또는 다른 돌연변이와 조합으로 회피될 수 있는 아미노산을 쉽게 결정할 수 있다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 "유도체"는 화학적으로 변형된 펩타이드를 의미하고, 여기에서 하나 이상의 치환체 또는 모이어티는 펩타이드에 공유결합되어 있다. 그와 같은 치환체 또는 모이어티를 포함하는 유도체는 따라서 "유도된" 펩타이드 또는 "유도된" 유사체일 것이다. 상기 용어는 또한 유리 카복시기의 에스테르 및 아미드, 유리 아미노기의 아실 및 알킬 유도체, 유리 하이드록시기의 포스포에스테르 및 에테르와 같은 정상적으로 펩타이드 분자의 일부가 아닌 하나 이상의 화학적 모이어티를 함유하는 펩타이드를 지칭할 수 있다. 그와 같은 변형은 선택된 측쇄 또는 말단 잔기와 반응할 수 있는 유기 유도화제와 펩타이드의 표적화된 아미노산 잔기를 반응시킴으로써 분자 속에 도입될 수 있다. 바람직한 화학 유도체는 인산화된, C-말단 아미드화된 또는 N-말단 아세틸화된 펩타이드를 포함한다. 상기 용어는 또한, 당업계에서 공지된 수단에 의해, 잔기 또는 N- 또는 C-말단 기에서 측쇄로서 발생하고, 이들이 약제학적으로 허용가능하게 남아있는 한, 즉 이들이 펩타이드의 활성을 파괴하지 않는 한, 그것을 함유하는 조성물에 독성 특성을 부여하지 않는 한 그리고 이의 항원성 특성에 부정적으로 영향을 주지 않는 한 본 명세서에서 포함되는 본 명세서에서 사용된 바와 같이 펩타이드를 지칭할 수 있다. 이들 유도체는, 예를 들어, 카복실기의 지방족 에스테르, 암모니아와 또는 1차 또는 2차 아민과 반응에 의해 생산된 카복실기의 아미드, 아실 모이어티 (예를 들어, 알카노일 또는 탄소환형 아로일 기)와 반응에 의해 형성된 아미노산 잔기의 유리 아미노기의 N-아실 유도체 또는 아실 모이어티와 반응에 의해 형성된 유리 하이드록실기의 O-아실 유도체 (예를 들어 세릴 또는 트레오닐 잔기의 것)을 포함할 수 있다.

변형된 아미노산 잔기는, 아미노산 잔기의 기능성이 보존되는 한 또는 기능성이 변화하였다면 (예를 들어 티로신의 치환된 페닐알라닌으로의 대체) 변형이 변형된 잔기를 함유하는 펩타이드의 활성을 손상시키지 않았던 한 임의의 그룹 또는 결합이 결실, 부가, 또는 상이한 그룹 또는 결합으로 대체에 의해 변형되었던 아미노산 잔기이다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 "치환체"는 아미노산 잔기에, 특히 아미노산 잔기에서 임의의 이용가능한 위치에 결합된, 특히 공유결합된 임의의 적합한 모이어티를 의미한다. 전형적으로, 적합한 모이어티는 화학적 모이어티이다.

용어 "지방산"은 4 내지 28 탄소 원자를 갖는 지방족 모노카복실산을 지칭하고, 바람직하게는 비-분지형이고, 포화 또는 불포화될 수 있다. 본 개시내용에서 10 내지 16 아미노산을 포함하는 지방산은 바람직하다.

용어 "지방2산"은 오메가 위치에서 추가의 카복실산 기를 갖지만 상기에서 정의된 바와 같은 지방산을 지칭한다. 따라서, 지방 2산은 디카복실산이다. 본 개시내용에서 14 내지 20아미노산을 포함하는 지방산은 바람직하다.

용어 "% 서열 동일성"은 용어 "% 동일성"과 본 명세서에서 상호교환적으로 사용되고, 서열 정렬 프로그램을 사용하여 정렬된 경우, 2 이상의 펩타이드 서열 사이 아미노산 서열 동일성의 수준 또는 2 이상의 뉴클레오타이드 서열 사이 뉴클레오타이드 서열 동일성의 수준을 지칭한다. 예를 들어, 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 80% 동일성은 정의된 알고리즘에 의해 결정된 80% 서열 동일성과 동일한 것을 의미하고, 주어진 서열이 또 다른 서열의 또 다른 길이와 적어도 80% 동일한 것을 의미한다.

용어 "% 서열 상동성"은 용어 "% 상동성"과 본 명세서에서 상호교환적으로 사용되고, 서열 정렬 프로그램을 사용하여 정렬된 경우, 2 이상의 펩타이드 서열 사이 아미노산 서열 상동성의 수준 또는2 이상의 뉴클레오타이드 서열 사이 뉴클레오타이드 서열 상동성의 수준을 지칭한다. 예를 들어, 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 80% 상동성은 정의된 알고리즘에 의해 결정된 80% 서열 상동성과 동일한 것을 의미하고, 따라서 주어진 서열의 동족체는 주어진 서열의 길이에 대해 80% 초과 서열 상동성을 갖는다.

2개의 서열 사이 동일성 또는 상동성의 정도를 결정하는데 사용될 수 있는 예시적인 컴퓨터 프로그램은, 비제한적으로, NCBI 웹사이트에서 인터넷으로 공공연하게 이용가능한, 한벌의 BLAST 프로그램, 예를 들어, BLASTN, BLASTX 및 TBLASTX, BLASTP 및 TBLASTN을 포함한다. 또한 하기를 참조한다: Altschul 등, 1990, J. Mol. Biol. 215:403-10 (공개된 디폴트 셋팅, 즉, 파라미터 w=4, t=17 특별 참조) 및 Altschul 등, 1997, Nucleic Acids Res., 25:3389-3402. 서열 검색은 유전자은행 단백질 서열 및 다른 공공 데이터베이스에서 아미노산 서열에 비해 주어진 아미노산 서열을 평가하는 경우 BLASTP 프로그램을 사용하여 전형적으로 수행된다. BLASTX 프로그램은 유전자은행 단백질 서열 및 다른 공공 데이터베이스에서 아미노산 서열에 대한 모든 해독틀에서 번역되고 있는 핵산 서열 검색에 바람직하다. 양쪽 BLASTP 및 BLASTX는 개방 갭 페널티 11.0, 및 연장된 갭 페널티 1.0의 디폴트 파라미터를 사용하여 운영되고, BLOSUM-62 매트릭스를 이용한다. (Id). 퍼센트 서열 동일성 계산에 더하여, BLAST 알고리즘은 또한 2개의 서열 사이 유사성의 통계적인 분석을 수행한다 (참고, 예를 들어, Karlin & Altschul, Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA, 90:5873-5787 (1993)). BLAST 알고리즘에 의해 제공된 유사성의 하나의 측정치는, 2개의 뉴클레오타이드 또는 아미노산 서열 사이 매치가 우연히 발생할 개연성의 적응증을 제공하는, 최소 합계 확률 (P(N))이다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이, 개시된 및 청구된 방법에 따라 대상체에 제공된 경우 펩타이드의 "치료적 유효량"은 생물학적 활성, 예컨대 유리 지방산 수준, 혈청 트리글리세라이드 수준, 혈당 수준, 체중, 지방량 감소, 또는 지방산 대사 조절에 영향을 준다,

용어들 "치료하다", "치료하는" 및 "치료"는 유익한 또는 원하는 임상 결과 수득을 위한 접근법을 지칭한다. 또한, 본 명세서에서 "치료" 지칭은 치유, 일시적 처방 및 예방적 처치를 포함한다. 용어 "치료하는"은 병리학 (질환, 장애 또는 병태)의 발달 또는 진행 억제, 예방 또는 중지 및 / 또는 병리학의 감소, 차도, 또는 퇴행을 지칭한다. 당해 분야의 숙련가는 다양한 방법론을 이해할 것이고 검정은 병리학의 발달을 사정하는데 사용될 수 있고, 유사하게, 다양한 방법론 및 검정은 병리학의 감소, 차도 또는 퇴행 사정에 사용될 수 있다.

용어 "세포 생존 향상"은, 대조군에 비교된 경우, 주어진 병태를 이겨내는 세포의 수, 예를 들어, 치료의 부재 하에서 동일한 병태를 이겨내는 세포의 수에서 증가를 지칭한다. 병태는 시험관내, 생체내, 생체외, 또는 원위치일 수 있다. 향상된 세포 생존은 세포 생존이 2-배 향상되면 많은 세포가 생존하는 경우 비교값, 예를 들어, 2배로서 표현될 수 있다. 향상된 세포 생존은 세포자멸사에서 감소, 세포의 수명에서 증가, 또는 세포 기능 및 상태의 향상에서 비롯할 수 있다.

명백하게 하기 위해, 용어 "지시사항"은 그것의 통상적으로 이해된 정의에 더하여, 관리 기관에 의해 승인된 표지에서 정보를 포함하는 의미이다.

본 명세서에서 그리고 첨부된 청구항들에서 사용된 바와 같이, 단수 형태 "한", "또는", 및 "그"는 문맥에서 달리 명확히 명시되지 않는 한 복수의 지시대상을 포함한다. 본 명세서에서 기재된 개시내용의 양태 및 변형이 양태 및 변형"으로 구성되는" 및 / 또는 "으로 본질적으로 구성되는"을 포함하는 것이 이해된다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 "약"은 10 퍼센트만큼 언급된 값의 범위 또는 그 값 초과 또는 미만을 의미하지만, 임의의 값 또는 값의 범위를 이러한 더 넓은 정의로만 지정하도록 의도되지 않는다. 용어 "약"에 의해 선행된 각각의 값 또는 값의 범위는 또한 언급된 절대값 또는 값의 범위의 구현예를 포괄하도록 의도된다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "예방하는"은 질환에 대하여 위험에 노출될 수 있는, 그러나 질환을 가진 것으로 아직 진단되어 있지 않은 대상체에서 질환, 장애 또는 병태를 발생으로부터 막는 것을 지칭한다. 예방하는 (그리고 예방하는데 효과적인 용량)은 모집단 연구에서 실증될 수 있다. 예를 들어, 주어진 질환 또는 의료 병태를 예방하는데 효과적인 양은, 미처리된 대조군 모집단에 비해, 처리된 모집단에서 발생을 감소시키는데 효과적인 양이다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "대상체"는 포유동물, 바람직하게는 병리학을 앓고 있는 임의의 연령에서 인간을 포함한다. 바람직하게는, 이러한 용어는 병리학을 발달시키는 위험에 처한 개체를 포괄한다.

펩타이드

본 개시내용은 지방세포에서 유리 지방산 수준을 감소시키는 펩타이드 및 펩타이드 유사체를 제공한다. 유익하게는, 본 개시내용의 펩타이드 및 펩타이드 유사체는 본 명세서에서 추가로 논의된 바와 같이 혈장에서 충분한 안정성을 입증한다.

예시적인 구현예에서, 본 개시내용의 펩타이드는 식 I의 아미노산 서열 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함한다:

X¹-Q-E-X²-X³-Y-I-X⁴-Y-X⁵-R-X⁶ (I) 서열번호: 1

예시적인 구현예에서, 본 개시내용의 펩타이드는 식 II의 아미노산 서열을 포함한다:

X¹⁷-X¹⁸-X¹⁹-Q-E-X²⁰-X²¹-Y-I-X²²-Y-X²³-X²⁴-X²⁵ (II) (서열번호: 378)

식 중, X¹⁷이, 부재이거나 존재하면, 무극성 측쇄 또는 극성 측쇄를 가지고 있는 아미노산이고; X¹⁸이, 부재이거나 존재하면, 무극성 측쇄 또는 극성 측쇄를 가지고 있는 아미노산이고; X¹⁹이, 부재이거나 존재하면, 무극성 측쇄 또는 극성 측쇄를 가지고 있는 아미노산이고; X²⁰는 무극성 측쇄 또는 극성 측쇄를 가지고 있는 아미노산이고; X²¹는 무극성 측쇄 또는 극성 측쇄를 가지고 있는 아미노산이고; X²²는 무극성 측쇄 또는 극성 측쇄를 가지고 있는 아미노산이고; X²³는 무극성 측쇄 또는 극성 측쇄를 가지고 있는 아미노산이고; X²⁴는 무극성 측쇄 또는 극성 측쇄를 가지고 있는 아미노산이고; 그리고 X²⁵이, 부재이거나 존재하면, 무극성 측쇄 또는 극성 측쇄, -LKR, -KLX²⁶, -X²⁷LR, -KX²⁸R, -RX²⁹R 및 -KRX³⁰를 갖는 아미노산으로부터 선택되되; X²⁶이, 부재이거나 존재하면, 무극성 측쇄 또는 극성 측쇄를 가지고 있는 아미노산으로부터 선택되고; X²⁷는 무극성 측쇄 또는 극성 측쇄를 가지고 있는 아미노산으로부터 선택되고; X²⁸는 무극성 측쇄 또는 극성 측쇄를 가지고 있는 아미노산으로부터 선택되고; X²⁹는 무극성 측쇄 또는 극성 측쇄를 가지고 있는 아미노산으로부터 선택되고; 그리고 X³⁰이, 부재이거나 존재하면, 무극성 측쇄를 가지고 있는 아미노산으로부터 선택되고; 단, 상기 펩타이드는 서열번호: 2, 42, 77, 78, 316-318, 및 328-349의 아미노산 서열 중 임의의 하나로 구성된 펩타이드가 아니고; 추가로 단, X¹⁷ 및 X¹⁸ 는, X¹⁹가 부재하면 부재하고; 그리고 추가로 단, X¹⁷은 X¹⁸이 부재하면, 부재하고; 그리고 또는 이의 C-말단 산 또는 아미드, 또는 N-아세틸 유도체; 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염.

예시적인 구현예에서, 본 펩타이드는 식 II의 아미노산 서열을 포함하되, X¹⁷이, 부재이거나 존재하면, D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C, (dC), G, (dA), V, (dV), L, (dL), Nle, I, (dI), F, (dF), W, (dW), P (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고; X¹⁸이, 부재이거나 존재하면, D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C, (dC), G, (dA), ib, V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고; X¹⁹이, 부재이거나 존재하면, D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C, (dC), G, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고; X²⁰는 D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C, (dC), G, (dA), ib, V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고; X²¹는 D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C, (dC), G, (dA), ib, V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고; X²²는 D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C, (dC), G, (dA), ib, V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고; X²³는 D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C, (dC), G, (dA), ib, V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고; X²⁴이, 부재이거나 존재하면, D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C, (dC), G, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고; 그리고 X²⁵이, 부재이거나 존재하면, D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C, (dC), G, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P (dP), M, (dM), -LKR, -KLX²⁶, -X²⁷LR, -KX²⁸R, -RX²⁹R 및 -KRX³⁰ 으로부터 선택되고; X²⁶이, 부재이거나 존재하면, -RE, D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C, (dC), G, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고; X²⁷는 D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C, (dC), G, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고; X²⁸는 D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C, (dC), G, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고; X²⁹는 D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C, (dC), G, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고; 그리고 X³⁰이, 부재이거나 존재하면, G, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고; 또는 이의 C-말단 산 또는 아미드, 또는 N-아세틸 유도체; 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염.

예시적인 구현예에서, 본 펩타이드는 식 II의 아미노산 서열을 포함하되, X¹⁷이, 부재이거나 존재하면, M, L, G, K, E, (dA) 또는 Nle이고; X¹⁸이, 부재이거나 존재하면, R, G, D, K, ib, (dA) 또는 E이고; X¹⁹이, 부재이거나 존재하면, W, (dA), G, 또는 E이고; X²⁰는 Nle, G, K, Ccyc, (dA), M 또는 A이고; X²¹는 G, N, Q, (dA) 또는 A이고; X²²는 F, G, E, (dA) 또는 A이고; X²³는 P, G, E, F, Ccyc, Kcyc, (dA) 또는 A이고; X²⁴이, 부재이거나 존재하면, R, G, D, L, K, E, (dA) 또는 A이고; 그리고 X²⁵이, 부재이거나 존재하면, -K, -R, N, Q, (dA), -KL, -KR, -R(Da), -KLR, -K(Ac)LR, -K(cyc)LR, -ALR, -(dA)LR, -GLR, -ELR, -NLR, -QLR, -KAR, -K(dA)R, -KGR, -KER, -KLA, -KL(dA), -KLD, -KLE, -KLG, -KLK, -RKR, -RLR, -LKR, -KRL, 및 -KLRE로부터 선택되고; 이의 C-말단 산 또는 아미드, 또는 N-아세틸 유도체; 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염.

예시적인 구현예에서, 본 개시내용의 펩타이드는 식 III의 아미노산 서열을 포함한다:

X³¹-X³²-X³³-X³⁴-X³⁵-X³⁶-X³⁷-X³⁸-X³⁹-X⁴⁰-X⁴¹-X⁴²-X⁴³-X⁴⁴-X⁴⁵-X⁴⁶-X⁴⁷ (III) (서열번호: 379)

식 중, X³¹이, 부재이거나 존재하면, M, L, G, K, E, (dA) 또는 Nle이고; X³²이, 부재이거나 존재하면, R, G, D, K, ib, (dA) 또는 E이고; X³³이, 부재이거나 존재하면, W, (dA), G, 또는 E이고; X³⁴는 Q, G, (dA), Ecyc, N 또는 E이고; X³⁵는 E, Ecyc, D, G, (dA) 또는 A이고; X³⁶는 Nle, G, K, Ccyc, (dA), M 또는 A이고; X³⁷는 G, N, Q, (dA) 또는 A이고; X³⁸는 Y, G, E, (dA) 또는 A이고; X³⁹는 I, G, E, (dA) 또는 A이고; X⁴⁰는 F, G, E, (dA) 또는 A이고; X⁴¹는 Y, G, E, (dA) 또는 A이고; X⁴²이, 부재이거나 존재하면, P, G, E, F, Ccyc, Kcyc, (dA) 또는 A이고; X⁴³이, 부재이거나 존재하면, R, G, D, L, K, E, (dA) 또는 A이고; X⁴⁴이, 부재이거나 존재하면, K, K-Ac, G, R, L, Q, N, Kcyc, E, (dA) 또는 A이고; X⁴⁵이, 부재이거나 존재하면, L, G, R, K, Deg, E, (dA) 또는 A이고; X⁴⁶이, 부재이거나 존재하면, R, D, E, L, K, G, (dA) 또는 A이고; 그리고 X⁴⁷이, 부재이거나 존재하면, E이고; 단, 상기 펩타이드는 상기 펩타이드는 서열번호: 2, 42, 77, 78, 316-318, 및 328-349의 아미노산 서열 중 임의의 하나로 구성된 펩타이드가 아니고; 추가로 단, X³¹ 및 X³² 는, X³³가 부재하면 부재하고 추가로 단, X³¹은, X³²가 부재하면, 부재하고; 추가로 단, X⁴⁷, X⁴⁶, X⁴⁵, X⁴⁴, 및 X⁴³은, X³²가 부재하면 부재하고; 추가로 단, X⁴⁷, X⁴⁶, X⁴⁵, 및 X⁴⁴ 는, X⁴³이 부재하면 부재하고; 추가로 단, X⁴⁷, X⁴⁶, 및 X⁴⁵는, X⁴⁴가 부재하고 부재하고; 추가로 단, X⁴⁷ 및 X⁴⁶ 는, X⁴⁵가 부재하면, 부재하고; 그리고 추가로 단, X⁴⁷는, X⁴⁶이 부재하면 부재하고; 그리고 또는 이의 C-말단 산 또는 아미드, 또는 N-아세틸 유도체; 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염.

예시적인 구현예에서, 본 펩타이드는 식 III의 아미노산 서열을 포함하되, X³⁴는 Q이고; X³⁵는 E이고; X³⁶는 M이고; X³⁷는 G이고; X³⁸는 Y이고; X³⁹는 I이고; X⁴⁰는 F; X⁴¹는 Y이고; X⁴²는 P; X⁴³는 R이고; X⁴⁴이, 부재이거나 존재하면, K이고; X⁴⁵이, 부재이거나 존재하면, L이고; X⁴⁶이, 부재이거나 존재하면, R이고; 그리고 X⁴⁷는 부재하고; 이의 C-말단 산 또는 아미드, 또는 N-아세틸 유도체; 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염.

예시적인 구현예에서, 식 I-III의 펩타이드는 단리된다.

MRWQEAGYIFYPRKLR (서열번호: 11);

MRWQEMGYIFYPR(dA)LR (서열번호: 149);

MRWQEMNYIFYPR (서열번호: 208);

MRWQEMGYIFYPRNLR (서열번호: 213);

MRWQEMQYIFYPRALR (서열번호: 219);

RWQEMNYIFYPR (서열번호: 210);

MRWQEMGYIFYPRALR (서열번호: 19);

MRWQEMGYIFYPRKLA (서열번호: 21);

MRWQEMGYIFYARKLR (서열번호: 17);

RWQEMGYIFYPRQLR (서열번호: 217);

MRWQEEGYIFYPRKLR (서열번호: 172);

MRWQEMGYIFYPRKL (서열번호: 45);

ERWQEAGYIAYPR (서열번호: 241);

RWQEMQYIFYPR (서열번호: 211);

MRWQEMGYIFYPAKLR (서열번호: 18);

상기 변형은 상기 펩타이드 중 적어도 하나의 아미노산을 (i) D-배치형태를 가지고 있는 아미노산, 및 (ii) 비-자연 발생 아미노산 잔기로부터 선택된 또 다른 아미노산으로 치환하는 것을 포함하고; 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염.

예시적인 구현예에서, 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 (A) RWQE (서열번호: 294), (b) YIFY (서열번호: 295), 또는 (c) RWQE (서열번호: 294)와 YIFY (서열번호: 295) 둘 모두를 포함하되, 상기 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 (i) 60분 동안 37 섭씨 온도에서 마우스 혈장에서 10% 안정성을 나타내고, (ii) 인간 일차 지방세포에서 유리 지방산 수준을 감소시키고, (iii) 또는 (i)과 (ii) 둘 모두이다. 예시적인 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 8 내지 20 개 길이의 아미노산이다. 예시적인 구현예에서, 상기 펩타이드 또는 펩타이드 유사체의 일부 (A)는 0-10개의 개재 아미노산, 특히, 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 아미노산 개재 아미노산을 갖는 일부 (B)에 대해 N-말단이다. 예시적인 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 서열번호: 294의 Arg에 대해 바로 N-말단 또는 서열번호: 294의 Glu에 대해 바로 C-말단에 있는 Met를 포함한다. 예시적인 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 MRWQE (서열번호: 350), RWQEM (서열번호: 351), 또는 MRWQEM (서열번호: 352)을 포함한다. 예시적인 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 서열번호: 295의 제1 아미노산에 대해 즉시 N-말단에 있는 Gly, 서열번호: 295의 마지막 아미노산에 대해 바로 C-말단에 있는 Pro를 포함하거나, 또는 GYIFYP (서열번호: 353)를 포함한다. 예시적인 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 YIFYPR (서열번호: 296), YIFYPRK (서열번호: 297), YIFYPRKL (서열번호: 298), 또는 YIFYPRKLR (서열번호: 299)를 포함한다.

예시적인 구현예에서, 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 하기를 포함한다: (A) RWQE (서열번호: 294)의 아미노산 서열 및 (B) 하나의 아미노산 치환을 갖는 YIFY (서열번호: 295)의 아미노산 서열. 예시적인 구현예에서, 하나의 아미노산 치환을 갖는 YIFY (서열번호: 295)의 아미노산 서열은 XIFY (서열번호: 300), YXFY (서열번호: 301), YIXY (서열번호: 302), 또는 YIFX (서열번호: 303)을 포함하되, X는 임의의 아미노산이다. 예시적인 구현예에서, 서열번호: 300-303 중 임의의 하나의 X는 작은 지방족 아미노산 또는 산성 아미노산이다. 예시적인 구현예에서, 서열번호: 300-303 중 임의의 하나의 X는 하기: Ala, Gly, (dA), 및 Glu로 구성된 군으로부터 선택된다. 예시적인 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 8 내지 20 개 길이의 아미노산이다. 예시적인 구현예에서, 상기 펩타이드 또는 펩타이드 유사체의 일부 (A)는 0-10개의 개재 아미노산, 특히, 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 아미노산 개재 아미노산을 갖는 일부 (B)에 대해 N-말단이다. 예시적인 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 (i) 60분 동안 37 섭씨 온도에서 마우스 혈장에서 10% 안정성을 나타내고, (ii) 인간 일차 지방세포에서 유리 지방산 수준을 감소시키고, (iii) 또는 (i)과 (ii) 둘 모두이다.

예시적인 구현예에서, 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 (A) RWQE (서열번호: 294)의 아미노산 서열 및 (B) 2개의 아미노산 변형을 갖는 YIFY (서열번호: 295)의 아미노산 서열을 포함한다. 예시적인 구현예에서, 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 RWQE (서열번호: 294)의 아미노산 서열 및 (B) 2개의 아미노산 치환을 갖는 YIFY (서열번호: 295)의 아미노산 서열을 포함한다. 예시적인 구현예에서, 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 RWQE (서열번호: 294) 및 YIAE (서열번호: 308) 또는 EIFE (서열번호: 309)의 아미노산 서열을 포함한다. 예시적인 구현예에서, 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 RWQE (서열번호: 294)의 아미노산 서열 및 YI 또는 YIF를 포함한다. 예시적인 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 8 내지 20 개 길이의 아미노산이다. 예시적인 구현예에서, 상기 펩타이드 또는 펩타이드 유사체의 일부 (A)는 0-10개의 개재 아미노산, 특히, 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 아미노산 개재 아미노산을 갖는 일부 (B)에 대해 N-말단이다. 예시적인 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 (i) 60분 동안 37 섭씨 온도에서 마우스 혈장에서 10% 안정성을 나타내고, (ii) 인간 일차 지방세포에서 유리 지방산 수준을 감소시키고, (iii) 또는 (i)과 (ii) 둘 모두이다.

예시적인 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 하기를 포함한다: (A) YIFY (서열번호: 295)의 아미노산 서열 및 (B) 하나의 아미노산 치환을 갖는 RWQE (서열번호: 294)의 아미노산 서열. 예시적인 구현예에서, 하나의 아미노산 치환을 갖는 RWQE (서열번호: 294)의 아미노산 서열은 XWQE (서열번호: 304), RXQE (서열번호: 305), RWXE (서열번호: 306), 또는 RWQX (서열번호: 307)을 포함하되, X는 임의의 아미노산이다. 예시적인 구현예에서, X는 지방족 아미노산 또는 하전된 아미노산이다. 예시적인 양태에서, 상기 펩타이드 또는 펩타이드 유사체가 XWQE (서열번호: 304)을 포함할 때, X는 하기: Ala, Gly, Asp, Lys, ib, (dA), Glu로 구성된 군으로부터 선택된다. 예시적인 양태에서, 상기 펩타이드 또는 펩타이드 유사체가 RXQE (서열번호: 305)을 포함할 때, X는 하기: Ala, Gly, (dA), Glu로 구성된 군으로부터 선택된다. 예시적인 양태에서, 상기 펩타이드 또는 펩타이드 유사체가 RWXE (서열번호: 306)를 포함할 때, X는 하기: Gln, la, Glu, Gly, Asn, (dA)로 구성된 군으로부터 선택된다. 예시적인 양태에서, when 상기 펩타이드 또는 펩타이드 유사체가 RWQX (서열번호; 307)을 포함하되, X는 하기: Glu, la, Gly, Asp, (dA)로 구성된 군으로부터 선택된다. 예시적인 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 8 내지 20 개 길이의 아미노산이다. 예시적인 구현예에서, 상기 펩타이드 또는 펩타이드 유사체의 일부 (A)는 0-10개의 개재 아미노산, 특히, 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 아미노산 개재 아미노산을 갖는 일부 (B)에 대해 N-말단이다. 예시적인 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 (i) 60분 동안 37 섭씨 온도에서 마우스 혈장에서 10% 안정성을 나타내고, (ii) 인간 일차 지방세포에서 유리 지방산 수준을 감소시키고, (iii) 또는 (i)과 (ii) 둘 모두이다.

예시적인 구현예에서, 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 RWQEX¹X²YIFY (서열번호: 319)의 아미노산 서열을 포함하되, 각각의 X¹ 및 X²는 독립적으로 임의의 아미노산이다. 예시적인 양태에서, X¹는 하기: Met, la, Nle, Gly, (dA), Glu, Cys, 및 이들의 등가물로 구성된 군으로부터 선택된다. 예시적인 양태에서, X¹는 하기: Met, la, Nle, Gly, (dA), Glu, 및 Cys로 구성된 군으로부터 선택된다. 예시적인 양태에서, X²는 하기: Asn, Gln, Gly, (dA), Glu, 및 이들의 등가물로 구성된 군으로부터 선택된다. 예시적인 양태에서, X²는 하기: Asn, Gln, Gly, (dA), 및 Glu로 구성된 군으로부터 선택된다. 예시적인 양태에서, -X¹X²-는 Met-Asn, Met-Gln, la-Gly, Met-Ala, Nle-Gly, Gly-Gly, Met-(dA), (dA)-Gly, Glu-Gly, Met-Glu, Cys-Gly, Glu-Asn, 또는 Glu-Gln이다. 예시적인 양태에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 서열 서열번호: 2로 구성되지 않는다. 예시적인 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 8 내지 20 개 길이의 아미노산이다. 예시적인 구현예에서, 상기 펩타이드 또는 펩타이드 유사체의 일부 (A)는 0-10개의 개재 아미노산, 특히, 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 아미노산 개재 아미노산을 갖는 일부 (B)에 대해 N-말단이다. 예시적인 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 (i) 60분 동안 37 섭씨 온도에서 마우스 혈장에서 10% 안정성을 나타내고, (ii) 인간 일차 지방세포에서 유리 지방산 수준을 감소시키고, (iii) 또는 (i)과 (ii) 둘 모두이다.

예시적인 구현예에서, 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 RWQEX⁴⁸X⁴⁹X⁵⁰IFY (서열번호: 373)의 아미노산 서열을 포함하되, 각각의 X⁴⁸, X⁴⁹ 및 X⁵⁰는 독립적으로 임의의 아미노산이다. 예시적인 양태에서, X⁴⁸는 하기: Met, la, Nle, Gly, (dA), Glu, Cys, 및 이들의 등가물로 구성된 군으로부터 선택된다. 예시적인 양태에서, X⁴⁸는 하기: Met, la, Nle, Gly, (dA), Glu, 및 Cys로 구성된 군으로부터 선택된다. 예시적인 양태에서, X⁴⁹는 하기: Asn, Gln, Gly, (dA), Glu, 및 이들의 등가물로 구성된 군으로부터 선택된다. 예시적인 양태에서, X⁴⁹는 하기: Asn, Gln, Gly, (dA), 및 Glu로 구성된 군으로부터 선택된다. 예시적인 구현예에서, X⁵⁰는 하기: Ala, Gly, (dA), 및 Glu로 구성된 군으로부터 선택된다, 및 이들의 등가물. 예시적인 구현예에서, X⁵⁰는 하기: Ala, Gly, (dA), 및 Glu로 구성된 군으로부터 선택된다. 예시적인 양태에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 서열 서열번호: 2로 구성되지 않는다. 예시적인 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 8 내지 20 개 길이의 아미노산이다. 예시적인 구현예에서, 상기 펩타이드 또는 펩타이드 유사체의 일부 (A)는 0-10개의 개재 아미노산, 특히, 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 아미노산 개재 아미노산을 갖는 일부 (B)에 대해 N-말단이다. 예시적인 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 (i) 60분 동안 37 섭씨 온도에서 마우스 혈장에서 10% 안정성을 나타내고, (ii) 인간 일차 지방세포에서 유리 지방산 수준을 감소시키고, (iii) 또는 (i)과 (ii) 둘 모두이다.

예시적인 구현예에서, 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 RWQEX¹X²X³IFY (서열번호: 320), RWQEX¹X²YX³FY (서열번호: 321), RWQEX¹X²YIX³Y (서열번호: 322) 또는 RWQEX¹X²YIFX³ (서열번호: 323)의 아미노산 서열을 포함하되, 각각의 X는 독립적으로 임의의 아미노산이다. 예시적인 양태에서, X¹는 하기: Met, la, Nle, Gly, (dA), Glu, Cys, 및 이들의 등가물로 구성된 군으로부터 선택된다. 예시적인 양태에서, X¹는 하기: Met, la, Nle, Gly, (dA), Glu, 및 Cys로 구성된 군으로부터 선택된다. 예시적인 양태에서, X²는 하기: Asn, Gln, Gly, (dA), Glu, 및 이들의 등가물로 구성된 군으로부터 선택된다. 예시적인 양태에서, X²는 하기: Asn, Gln, Gly, (dA), 및 Glu로 구성된 군으로부터 선택된다. 예시적인 양태에서, X¹X²는 Met-Asn, Met-Gln, la-Gly, Met-Ala, Nle-Gly, Gly-Gly, Met-(dA), (dA)-Gly, Glu-Gly, Met-Glu, Cys-Gly, Glu-Asn, 또는 Glu-Gln이다. 예시적인 구현예에서, X³는 작은 지방족 아미노산 또는 산성 아미노산이다. 예시적인 구현예에서, X³는 하기: Ala, Gly, (dA), 및 Glu로 구성된 군으로부터 선택된다. 예시적인 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 8 내지 20 개 길이의 아미노산이다. 예시적인 구현예에서, 상기 펩타이드 또는 펩타이드 유사체의 일부 (A)는 0-10개의 개재 아미노산, 특히, 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 아미노산 개재 아미노산을 갖는 일부 (B)에 대해 N-말단이다. 예시적인 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 (i) 60분 동안 37 섭씨 온도에서 마우스 혈장에서 10% 안정성을 나타내고, (ii) 인간 일차 지방세포에서 유리 지방산 수준을 감소시키고, (iii) 또는 (i)과 (ii) 둘 모두이다.

예시적인 구현예에서, 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 RWQEX⁴⁸X⁴⁹X⁵⁰IFY (서열번호: 373), RWQEX⁴⁸X⁴⁹YX⁵¹FY (서열번호: 374), RWQEX⁴⁸X⁴⁹YIX⁵²Y (서열번호: 375) 또는 RWQEX⁴⁸X⁴⁹YIFX⁵³ (서열번호: 376)의 아미노산 서열을 포함하되, 각각의 X⁴⁸,X⁴⁹, X⁵⁰, X⁵¹, X⁵² 및 X⁵³는 독립적으로 임의의 아미노산이다. 예시적인 구현예에서, 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 서열번호: 1, 3-41, 43-76, 및 79-293, 310-315, 319-323 및 354-377의 아미노산 서열을 포함한다. 예시적인 구현예에서, 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 표 1에서 제시된 구조 및/또는 아미노산 서열을 포함한다. 예시적인 양태에서, X⁴⁸는 하기: Met, la, Nle, Gly, (dA), Glu, Cys, 및 이들의 등가물로 구성된 군으로부터 선택된다. 예시적인 양태에서, X⁴⁸는 하기: Met, la, Nle, Gly, (dA), Glu, 및 Cys로 구성된 군으로부터 선택된다. 예시적인 양태에서, X⁴⁹는 하기: Asn, Gln, Gly, (dA), Glu, 및 이들의 등가물로 구성된 군으로부터 선택된다. 예시적인 양태에서, X⁴⁹는 하기: Asn, Gln, Gly, (dA), 및 Glu로 구성된 군으로부터 선택된다. 예시적인 양태에서, -X⁴⁸X⁴⁹-는 Met-Asn, Met-Gln, la-Gly, Met-Ala, Nle-Gly, Gly-Gly, Met-(dA), (dA)-Gly, Glu-Gly, Met-Glu, Cys-Gly, Glu-Asn, 또는 Glu-Gln이다. 예시적인 구현예에서, 각각의 X⁵⁰, X⁵¹, X⁵² 및 X⁵³는 작은 지방족 아미노산 또는 산성 아미노산이다. 예시적인 구현예에서, 각각의 X⁵⁰, X⁵¹, X⁵² 및 X⁵³는 하기: Ala, Gly, (dA), 및 Glu로 구성된 군으로부터 선택된다. 예시적인 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 8 내지 20 개 길이의 아미노산이다. 예시적인 구현예에서, 상기 펩타이드 또는 펩타이드 유사체의 일부 (A)는 0-10개의 개재 아미노산, 특히, 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 아미노산 개재 아미노산을 갖는 일부 (B)에 대해 N-말단이다. 예시적인 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 (i) 60분 동안 37 섭씨 온도에서 마우스 혈장에서 10% 안정성을 나타내고, (ii) 인간 일차 지방세포에서 유리 지방산 수준을 감소시키고, (iii) 또는 (i)과 (ii) 둘 모두이다.

본 개시내용의 각 구현예에서, 펩타이드는 하기의 아미노산 서열로 구성된 펩타이드가 아니다: MRWQEMGYIFYPRKLR (서열번호: 2); MRWQEMGYIFYFRKLR (서열번호: 316); MGWQEMGYIFYPRKLR (서열번호: 317); 또는 MGYIFYPRKLR (서열번호: 318). 본 개시내용의 각 구현예에서, 펩타이드는 또한 서열번호: 42, 77, 78, 328-349의 아미노산 서열 중 임의의 하나로 구성된 펩타이드가 아니다. 예시적인 구현예에서, 본 개시내용의 펩타이드는 추가로 자연 발생 펩타이드가 아니다. 예시적인 양태에서, 본 펩타이드는 서열번호: 328-349의 아미노산 서열 중 임의의 하나로 구성된 펩타이드가 아니다. 다른 예시적인 구현예에서, 펩타이드는 상기 언급된 서열 중 임의의 것을 포함하지 않는다. 펩타이드 본 발명의 구현예들은 하기 문서에서 아미노산 서열에 의해 구체적으로 기재된 펩타이드를 포함하지 않는다: U.S. 특허 출원 공개 번호 2014/0296139, 국제공개 Number WO01/76532, 및 Lee 등, Cell Metabolism 21:443-454 (2015) (이들 각각은 펩타이드 및 펩타이드 서열의 개시내용에 대해 참고로 편입되어 있음).　

예시적인 구현예에서, 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 서열번호: 1, 3-41, 43-76, 및 79-293, 310-315, 319-323 및 354-377의 아미노산 서열을 포함한다. 예시적인 구현예에서, 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 표 1에서 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 예시적인 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 8 내지 20 개 길이의 아미노산이다. 예시적인 구현예에서, 상기 펩타이드 또는 펩타이드 유사체의 일부 (A)는 0-10개의 개재 아미노산, 특히, 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 아미노산 개재 아미노산을 갖는 일부 (B)에 대해 N-말단이다. 예시적인 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 (i) 60분 동안 37 섭씨 온도에서 마우스 혈장에서 10% 안정성을 나타내고, (ii) 인간 일차 지방세포에서 유리 지방산 수준을 감소시키고, (iii) 또는 (i)과 (ii) 둘 모두이다.

펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 서열번호: 1, 3-41, 43-76, 및 79-293, 310-315, 319-323 및 354-377 중 임의의 하나를 포함하고, 그것으로 본질적으로 구성되거나, 또는 구성되거나, 서열번호: 1, 3-41, 43-76, 및 79-293, 310-315, 319-323 및 354-377 중 하나에 대해 적어도 또는 약 75%, 적어도 또는 약 80%, 적어도 또는 약 85%, 적어도 또는 약 90%, 또는 적어도 또는 약 95% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하고, 그것으로 본질적으로 구성되거나, 또는 구성된다. 예시적인 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 8 내지 20 개 길이의 아미노산이다. 예시적인 양태에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 1, 2, 3, 또는 4개의 아미노산 치환을 갖는 서열번호: 1, 3-41, 43-76, 및 79-293, 310-315, 319-323 및 354-377 중 임의의 하나의 서열을 포함하고, 그것으로 본질적으로 구성되거나, 구성된다. 예시적인 양태에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 서열번호: 1, 3-41, 43-76, 및 79-293, 310-315, 319-323 및 354-377 중 임의의 하나의 서열을 포함하고, 그것으로 본질적으로 구성되거나, 구성된다. 예시적인 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 8 내지 20 개 길이의 아미노산이다. 예시적인 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 (i) 60분 동안 37 섭씨 온도에서 마우스 혈장에서 10% 안정성을 나타내고, (ii) 인간 일차 지방세포에서 유리 지방산 수준을 감소시키고, (iii) 또는 (i)과 (ii) 둘 모두이다. 예시적인 양태에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 서열번호: 11, 17-19, 21, 32, 45, 148, 172, 208, 210, 211, 213, 219, 및 241 중 하나을 포함하고, 그것으로 본질적으로 구성되거나, 구성되거나, 또는 서열번호: 11, 17-19, 21, 32, 45, 148, 172, 208, 210, 211, 213, 219, 및 241 중 하나에 대해 적어도 또는 약 75%, 적어도 또는 약 80%, 적어도 또는 약 85%, 적어도 또는 약 90%, 또는 적어도 또는 약 95% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하고, 그것으로 본질적으로 구성되거나, 구성. 예시적인 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 8 내지 20 개 길이의 아미노산이다. 예시적인 구현예에서, 상기 펩타이드 또는 펩타이드 유사체의 일부 (A)는 0-10개의 개재 아미노산, 특히, 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 아미노산 개재 아미노산을 갖는 일부 (B)에 대해 N-말단이다. 예시적인 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 (i) 60분 동안 37 섭씨 온도에서 마우스 혈장에서 10% 안정성을 나타내고, (ii) 인간 일차 지방세포에서 유리 지방산 수준을 감소시키고, (iii) 또는 (i)과 (ii) 둘 모두이다.

생물학적 활성

예시적인 양태에서, 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 decrease 지방세포, 예를 들어, 인간 일차 지방세포에서 유리 지방산 수준을 감소시킨다. 예시적인 양태에서, 유리 지방산 수준은 대조군에 비해 적어도 또는 약 5%까지 감소된다. 예시적인 양태에서, 유리 지방산 수준은 대조군에 비해 적어도 또는 약 10%, 적어도 또는 약 20%, 적어도 또는 약 30%, 적어도 또는 약 40%, 적어도 또는 약 50%, 적어도 또는 약 60%, 적어도 또는 약 70%, 적어도 또는 약 80%, 적어도 또는 약 90%까지 감소된다. 예시적인 양태에서, 유리 지방산 수준은 대조군에 비해 90% 초과까지 감소된다. 예시적인 양태에서, 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 MOTS-c 펩타이드 (예를 들어, 서열번호: 2로 구성된 펩타이드)에 의해 달성되거나, 그것과 관련 것보다 더 나은 정도로 지방세포, 예를 들어, 인간 일차 지방세포에서 유리 지방산 수준을 감소시킨다. 예시적인 양태에서, 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 MOTS-c 펩타이드 (예를 들어, 서열번호: 2로 구성된 펩타이드)에 의해 야기되거나 그것과 관련된 감소보다 적어도 또는 약 10%, 적어도 또는 약 20%, 적어도 또는 약 30%, 적어도 또는 약 40%, 적어도 또는 약 50%, 적어도 또는 약 60%, 적어도 또는 약 70%, 적어도 또는 약 80%, 적어도 또는 약 90% 더 적은 정도로 지방세포, 예를 들어, 인간 일차 지방세포에서 유리 지방산 수준을 감소시킨다. 지방세포에서 유리 지방산 수준을 검정하는 적합한 방법은 본 명세서의 실시예 2-5 및 17에서 기재된 공지된, 몇 개의 예시적인 방법이다. 예시적인 양태에서, 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 실시예 2-5 및 17 중 하나에 기재된 방법에 의해 분석된 바와 같이 지방세포, 예를 들어, 인간 일차 지방세포에서 유리 지방산 수준을 감소시킨다. 예시적인 양태에서, 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 실시예 2-5 및 17 중 하나에 기재된 단일 용량 검정에 의해 분석된 바와 같이 지방세포, 예를 들어, 인간 일차 지방세포에서 유리 지방산 수준을 감소시킨다.

예시적인 양태에서, 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 포유동물, 예를 들어, DIO 마우스, 인간에서 체중, 혈당 수준, 및/또는 지방량을 감소시킨다. 예시적인 양태에서, 체중, 혈당 수준, 및/또는 지방량은 포유동물에서의 대조군에 비해 적어도 또는 약 5%까지 감소된다. 예시적인 양태에서, 체중, 혈당 수준, 및/또는 지방량은 포유동물에서의 대조군에 비해 적어도 또는 약 10%, 적어도 또는 약 20%, 적어도 또는 약 30%, 적어도 또는 약 40%, 적어도 또는 약 50%, 적어도 또는 약 60%, 적어도 또는 약 70%, 적어도 또는 약 80% 까지 감소된다. 예시적인 양태에서, 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 MOTS-c 펩타이드 (예를 들어, 서열번호: 2로 구성된 펩타이드)에 의해 달성되거나, 그것과 관련 것보다 더 나은 정도로 포유동물, 예를 들어, DIO 마우스, 인간의 체중, 혈당 수준, 및/또는 지방량을 감소시킨다. 예시적인 양태에서, 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 MOTS-c 펩타이드 (예를 들어, 서열번호: 2로 구성된 펩타이드)에 의해 야기되거나 그것과 관련된 감소보다 적어도 또는 약 10%, 적어도 또는 약 20%, 적어도 또는 약 30%, 적어도 또는 약 40%, 적어도 또는 약 50%, 적어도 또는 약 60%, 적어도 또는 약 70%, 적어도 또는 약 80%, 적어도 또는 약 90% 더 적은 정도로 포유동물, 예를 들어, DIO 마우스, 인간의 체중, 혈당 수준, 및/또는 지방량을 감소시킨다. 예시적인 양태에서, 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 간 손상 (예를 들어, ST, LT)의 효소 마커의 혈청 트리글리세라이드 수준 및/또는 혈청 수준을 감소시킨다. 예시적인 양태에서, 간 손상 (예를 들어, ST, LT)의 효소 마커의 혈청 트리글리세라이드 수준 및/또는 혈청 수준은 포유동물에서의 대조군에 비해 적어도 또는 약 5%까지 감소된다. 예시적인 양태에서, 간 손상 (예를 들어, ST, LT)의 효소 마커의 혈청 트리글리세라이드 수준 및/또는 혈청 수준은 포유동물에서의 대조군에 비해 적어도 또는 약 10%, 적어도 또는 약 20%, 적어도 또는 약 30%, 적어도 또는 약 40%, 적어도 또는 약 50%, 적어도 또는 약 60%, 적어도 또는 약 70%, 적어도 또는 약 80%, 적어도 또는 약 90% 까지 감소된다. 예시적인 양태에서, 간 손상 (예를 들어, ST, LT)의 효소 마커의 혈청 트리글리세라이드 수준 및/또는 혈청 수준은 포유동물에서의 대조군에 비해 90% 초과까지 감소된다. 예시적인 양태에서, 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 MOTS-c 펩타이드 (예를 들어, 서열번호: 2로 구성된 펩타이드)에 의해 달성되거나, 그것과 관련 것보다 더 나은 정도로 간 손상 (예를 들어, ST, LT)의 효소 마커의 혈청 트리글리세라이드 수준 및/또는 혈청 수준을 감소시킨다. 예시적인 양태에서, 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 MOTS-c 펩타이드 (예를 들어, 서열번호: 2로 구성된 펩타이드)에 의해 야기되거나 그것과 관련된 감소보다 적어도 또는 약 10%, 적어도 또는 약 20%, 적어도 또는 약 30%, 적어도 또는 약 40%, 적어도 또는 약 50%, 적어도 또는 약 60%, 적어도 또는 약 70%, 적어도 또는 약 80%, 적어도 또는 약 90% 더 적은 정도로 간 손상 (예를 들어, ST, LT)의 효소 마커의 혈청 트리글리세라이드 수준 및/또는 혈청 수준을 감소시킨다. 포유동물의 간 손상의 효소 마커의 체중, 혈당 수준, 지방량, 혈청 트리글리세라이드 수준, 및 혈청 수준을 검정하는 적합한 방법은 당해 기술에 공지되어 있고, 이들 중 몇 개의 예시적인 방법은 본 명세서의 실시예 6-9 및 18-20에 기재되어 있다. 예시적인 양태에서, 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 실시예 6-9 및 18-20 중 하나에 기재된 방법, 예를 들어, 10일 동안 15 mg/kg/용량의 용량으로 피하 또는 복강내 주사에 의해 매일 1회 또는 2회 (실시예 6), 21일 동안 15 mg/kg/용량의 용량으로 적절한 경로에 의해 매일 2회 (실시예 7), 21일 동안 5 mg/kg/용량의 용량으로 적절한 경로에 의해 1일 1회 (실시예 8), 21일 동안 15 mg/kg/용량의 용량으로 적절한 경로에 의해 매일 2회 (실시예 9)에 의해 분석된 바와 같이 포유동물, 예를 들어, DIO 마우스, 인간의 체중, 혈당 수준, 및/또는 지방량을 감소시킨다.

예시적인 양태에서, 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 60분 동안 37 섭씨 온도에서 마우스 혈장에서의 적어도 10% 안정성을 나타낸다. 환언하면, 개시 검정 양의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체의 적어도 10%는 60분 동안 37 섭씨 온도에서 마우스 혈장에서 인큐베이션된 후 온전한 상태 (예를 들어, 분해되지 않고, 절단되지 않는 등)로 존재한다. 예시적인 양태에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 60분 동안 37 섭씨 온도에서 혈장에서 적어도 20% 안정성, 적어도 또는 약 30% 안정성, 적어도 또는 약 40% 안정성, 적어도 또는 약 50% 안정성, 적어도 또는 약 60% 안정성, 적어도 또는 약 70% 안정성, 적어도 또는 약 80% 안정성, 또는 적어도 또는 약 90% 안정성을 나타낸다. 혈장 (포함된 마우스 혈장)에서 펩타이드의 안전성을 검정하는 적합한 방법은 당해 기술에 공지되어 있고, 이들 중 몇 개의 예시적인 방법은 본 명세서의 실시예 14-16 에 기재되어 있다. 예시적인 양태에서, 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 실시예 14-16 중 하나에 기재된 방법에 의해 분석된 바와 같이, 60분 동안 37 섭씨 온도에서 마우스 혈장에서의 적어도 10% 안정성을 나타낸다. 예시적인 양태에서, 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 실시예 14에 기재딘 단일 펩타이드 용량/농도 검정에 의해 분석된 바와 같이, 60분 동안 37 섭씨 온도에서 마우스 혈장에서의 적어도 10% 안정성을 나타낸다.

펩타이드 길이

예시적인 구현예에서, 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 본 명세서에서 기재된 바와 같이 펩타이드 결합 또는 다른 공유결합을 통해 연결된 적어도 4개의 아미노산을 포함하는 펩타이드 또는 펩타이드 유사체이다. 예시적인 양태에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 약 4 내지 약 50 개 길이의 아미노산이다. 4 내지 50개의 아미노산의 모든 정수 하위범위는 본 명세서의 펩타이드에 대해 구체적으로 고려된다. 예시적인 양태에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 약 5 내지 약 35 개 길이의 아미노산, 약 5 내지 약 30 개 길이의 아미노산, 약 5 내지 약 25 개 길이의 아미노산, 또는 약 5 내지 약 20 개 길이의 아미노산이다. 예시적인 양태에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 약 6 내지 약 35 개 길이의 아미노산, 약 7 내지 약 30 개 길이의 아미노산, 약 6 내지 약 25 개 길이의 아미노산, 또는 약 6 내지 약 20 개 길이의 아미노산이다. 예시적인 양태에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 약 7 내지 약 35 개 길이의 아미노산, 약 7 내지 약 30 개 길이의 아미노산, 약 7 내지 약 25 개 길이의 아미노산, 또는 약 7 내지 약 20 개 길이의 아미노산이다. 예시적인 양태에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 약 8 내지 약 35 개 길이의 아미노산, 약 8 내지 약 30 개 길이의 아미노산, 약 8 내지 약 25 개 길이의 아미노산, 또는 약 8 내지 약 20 개 길이의 아미노산이다. 예시적인 양태에서, 본 펩타이드는 약 8 내지 약 17 또는 18 또는 약 9 내지 약 16 또는 17 개 길이의 아미노산이다. 예시적인 양태에서, 본 펩타이드는 약 10 내지 약 17 또는 약 12 내지 약 16 또는 17 또는 약 14 내지 약 16 개 길이의 아미노산이다. 일부 구현예에서, 본 펩타이드는 5-mer, 6-mer, 7-mer, 8-mer, 9-mer-10-mer, 11-mer, 12-mer, 13-mer, 14-mer, 15-mer, 16-mer, 17-mer, 18-mer, 19-mer, 또는 20-mer이다.

펩타이드 변형

본 개시내용의 펩타이드는 어떤 식으로든 그리고 임의의 이유로, 예를 들어, (1) 단백질분해에 대한 감수성을 감소시키고, (2) 결합 친화성을 변경시키고, 그리고 (3) 다른 물리화학 또는 기능적 특성을 부여 또는 변경시키기 위해 변형된 펩타이드를 포함한다. 예를 들어, 단일 또는 다중 아미노산 치환 (예를 들어, 동등한, 보존적 또는 비-보존적 치환, 결실 또는 첨가)는 서열에서 만들어질 수 있다. 예시적인 양태에서, 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 표 1에서 열거된 서열, 또는 이의 변형된 서열을 포함한다. 본 개시내용의 예시적인 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 지질화되고 (예를 들어, 미리토일화되고, 팔미토일화되고, C₇-C₂₀ 지질 모이어티에 연결되고), 당화되고, 아미드화되고, 카복실화되고, 인산화되고, 에스테르화되고, 아실화되고, 아세틸화되고, 고리화되고, 페길화되고 (예를 들어, 5-20 kDa PEG에 연결되고, 5 kDa PEG, 12 kDa PEG, 20 kDa PEG에 연결되고) 또는 산 부가 염으로 전환되고/거나 본 명세서에 추가로 기재된 바와 같이, 선택적으로 이량체화된 또는 중합된, 또는 접합된다. 200-4600 mol wt 크기의 PEG는 또한 본 발명의 펩타이드를 변형시키기 위해 사용된다. 선형, 분지형 및 성상 기하학적 구조인 PEG는 또한 본 발명의 펩타이드를 변형시키기 위해 사용된다. PEG600는 PEG12로도 공지된다. 본 개시내용의 예시적인 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 N-말단에서 아세틸화되고, C-말단에서 아미드화되고/거나 Tyr 잔기 상에서 인산화된다. 예시적인 양태에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 내부 잔기의 N-말단 또는 측쇄에서 지질 모이어티에 연결된다. 예시적인 양태에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 지질 모이어티에 직접 연결된다. 예시적인 양태에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 지질 모이어티에 간접 연결된다. 예를 들어, 지질 모이어티는 링커를 통해 펩타이드에 부착될 수 있다. 링커는 아미노산일 수 있다. 예시적인 양태에서, 지질 모이어티는 엡실론 아민을 통해 선택적으로 부착된 Glu 잔기를 통해 펩타이드 또는 펩타이드 유사체의 Lys 잔기에 부착된다. 본 발명의 변형된 펩타이드의 예는 표 1에서 발견된다.

일부 구현예의 펩타이드는 바람직하게는 선형 형태이지만, 고리화가 펩타이드 특성을 심하게 방해하지 않는 사례에서, 환형 형태의 펩타이드는 또한 이용될 수 있고, 본 개시내용의 구현예로서 고려됨이 일정될 것이다.

예시적인 양태에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 고리화된다. 예를 들어, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 2개의 Cys 잔기를 포함하고, 이들의 황 원자는 디설파이드 브릿지의 형성에 참여한다. 예시적인 양태에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 말단 잔기로서 Cys 잔기를 포함한다. 디설파이드 브릿지 또는 황-기반 고리화로 펩타이드를 변형시키는 적합한 방법은, 예를 들어 하기에 기재되어 있다: Jackson 등, J. Am. Chem. Soc. 113: 9391-9392 (1991) 및 Rudinger 및 Jost, Experientia 20: 570-571 (1964).

펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 대안적으로 펩타이드 고리화의 다른 수단을 통해 안정화될 수 있다, 상기 수단은 Davies, J. Peptide. Sci. 9: 471-501 (2003)에서 검토된다. 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 아미드 브릿지, 티오에테르 브릿지, 티오에스테르 브릿지, 우레아 브릿지, 카바메이트 브릿지, 설폰아미드 브릿지, 락탐 브릿지, 락톤 브릿지, 및 기타 동종의 형성을 통해 안정화될 수 있다. 예를 들어, 티오에스테르 브릿지는 Cys 잔기의 C-말단과 측쇄 사이에 형성될 수 있다. 대안적으로, 티오에스테르는 티올 (Cys) 및 카복실산 (예를 들어, Asp, Glu)을 갖는 아미노산의 측쇄를 통해 형성될 수 있다. 또 다른 방법에서, 가교결합제, 예컨대 디카복실산, 예를 들어, 수베르산 (옥탄이산), 등은 아미노산 측쇄의 2개의 작용기, 예컨대 유리 아미노, 하이드록실, 티올 기, 및 이들의 조합 사이의 연결을 도입할 수 있다. 예시적인 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 락탐 브릿지를 통해 고리화될 수 있다. 락탐 브릿지를 형성할 수 있는 아미노산 쌍의 예는, 비제한적으로, 오르니틴 (Orn) 및 Glu, Lys 및 Asp, Lys 및 Glu, 호모라이신 및 Asp, Orn 및 호모글루탐산, 4-아미노Phe 및 Asp, 호모라이신 및 Glu, Lys 및 호모글루탐산, 및 4-아미노Phe 및 Glu를 포함한다. 예시적인 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 락톤 브릿지를 통해 고리화될 수 있다. 락톤 브릿지를 형성할 수 있는 아미노산 쌍의 예는, 비제한적으로, Homoser-Homoglu, Tyr 및 Glu, 및 Tyr 및 Asp를 포함한다.

예시적인 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 표 1에서 제시된 서열을 포함하고, 그것으로 본질적으로 구성되거나, 구성된다. 본 개시내용의 대안적인 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 표 1에서 제시된 서열에 대한 변형 서열을 포함하고, 그것으로 본질적으로 구성되거나, 구성된다. 예시적인 구현예에서, 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 표 1의 아미노산 서열 중 임의의 하나 에 대해 적어도 50% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 예시적인 구현예에서, 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 표 1의 아미노산 서열 중 임의의 하나에 대해 적어도 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 90% 초과의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 예시적인 양태에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 표 1에서 제시된 서열에 대한 변형 서열을 포함하고, 그것으로 본질적으로 구성되거나, 구성되고, 상기 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 하나 이상 (예를 들어, 2, 3, 또는 4개의) 아미노산 치환을 가지고 있는 표 1에서 제시된 서열을 포함하고, 그것으로 본질적으로 구성되거나, 구성된다. 예시적인 양태에서, 아미노산 치환은 보존적 아미노산 치환 또는 동등한 아미노산 치환이다.

보존적 아미노산 치환은 유사한 특성, 예를 들어, 크기, 전하, 소수성, 친수성, 및/또는 방향족성을 갖는 기능적으로 유사한 아미노산에 의한, 아미노산의 펩타이드에서의 치환을 지칭한다. 하기 6개의 그룹 각각은 표 2에서 발견되는, 서로에 대해 보존적 치환인 아미노산을 함유한다.

추가로, 본 명세서에 적용된 용어 "동등한 아미노산 치환"의 의미 내에, 하나의 아미노산은, 일 구현예에서, 아래에서 지적된 아미노산의 그룹 내에 또 다른 것으로 치환될 수 있다:

극성 측쇄를 가지고 있는 아미노산 Asp, Glu, Lys, Arg, His, Asn, Gln, Ser, Thr, Tyr, 및 Cys

작은 무극성 또는 약간 극성 잔기를 가지고 있는 아미노산 Ala, Ser, Thr, Pro, Gly

무극성 측쇄를 가지고 있는 아미노산 Gly, la, Val, Leu, Ile, Phe, Trp, Pro, 및 Met

큰, 지방족, 무극성 잔기를 가지고 있는 아미노산 Met, Leu, Ile, Val, Cys, 노르류신 (Nle), 호모시스테인

지방족 측쇄를 가지고 있는 아미노산 Gly, la Val, Leu, Ile

환형 측쇄를 가지고 있는 아미노산 Phe, Tyr, Trp, His, Pro

방향족 측쇄를 가지고 있는 아미노산 Phe, Tyr, Trp

산성 측쇄를 가지고 있는 아미노산을 가지고 있는 아미노산 Asp, Glu

염기성 측쇄를 가지고 있는 아미노산 Lys, Arg, His

아미드 측쇄를 가지고 있는 아미노산 Asn, Gln

하이드록시 측쇄를 가지고 있는 아미노산 Ser, Thr

황-함유 측쇄를 가지고 있는 아미노산 Cys, Met

중성, 약소수성 아미노산 Pro, la, Gly, Ser, Thr

친수성, 산성 아미노산 Gln, Asn, Glu, sp

소수성 아미노산 Leu, Ile, Val

다른 아미노산 치환은 표 3에서 제시된다.

예시적인 구현예에서, 아미노산 치환은 보존적 아미노산 치환이 아니고, 예를 들어, 비-보존적 아미노산 치환이다. 이러한 부류는 일반적으로 상응하는 D-아미노산, 호모-아미노산, N-알킬 아미노산, 베타 아미노산 및 다른 비천연 아미노산을 포함한다. 비-보존적 아미노산 치환은 여전히 상기의 동등한 아미노산 치환에 대해 확인된 설명 내에 있다 [예를 들어 극성, 무극성, 등]. "비-보존적 아미노산 치환"은 또 다른 부류로부터의 구성원에 대한 이들 부류 중 하나의 구성원의 치환을 지칭한다. 그와 같은 변경을 할 때, 특정 구현예에 따르면, 아미노산의 소수성 지수가 고려될 수 있다. 각각의 아미노산은 그것의 소수성 및 전하 특성을 기준으로 한 소수성 지수가 부여되었다. 상기 아미노산은 하기이다: 이소류신 (+4.5); 발린 (+4.2); 류신 (+3.8); 페닐알라닌 (+2.8); 시스테인/시스틴 (+2.5); 메티오닌 (+1.9); 알라닌 (+1.8); 글리신 (-0.4); 트레오닌 (-0.7); 세린 (-0.8); 트립토판 (-0.9); 티로신 (-1.3); 프롤린 (-1.6); 히스티딘 (-3.2); 글루타메이트 (-3.5); 글루타민 (-3.5); 아스파르테이트 (-3.5); 아스파라긴 (-3.5); 라이신 (-3.9); 및 아르기닌 (-4.5). 단백질에 대한 상호작용 생물학적 기능을 부여하는데 수치요법 아미노산 지수의 중요성은 당업계에서 이해된다 (참고, 예를 들어, Kyte 등, 1982, J. Mol. Biol. 157:105-131). 특정 아미노산이 유사한 소수성 지수 또는 스코어를 가지고 있는 다른 아미노산에 지환될 수 있고 유사한 생물학적 활성을 보유하는 것은 공지되어 있다. 소수성 지수를 기반으로 변화를 만들 때, 특정 구현예에서, 수치요법 지수가 ±2 내인 아미노산의 치환이 포함된다. 특정 구현예에서, ±1 내인 것이 포함되고, 그리고 특정 구현예에서, ±0.5 내의 것이 포함된다. 예컨대 아미노산의 치환이, 특히 그렇게 만들어 진생물학적 기능성 단백질 또는 펩타이드가 본 명세서에서 개시된 바와 같은 면역학적 구현예에서 사용하기 위한 경우 친수성을 기반으로 효과적으로 행해질 수 있음은 당업계에서 또한 이해된다. 특정 구현예에서, 그것의 인접한 아미노산의 진수성에 의해 지배된 단백질의 최대 국소 평균 친수성은, 그것의 면역원성 및 항원성, 즉, 단백질의 생물학적 특성과 상관관계가 있다. 하기 친수성 값은 이들 아미노산 잔기로 배정되었다: 아르기닌 (+3.0); 라이신 (+3.0); 아스파르테이트 (+3.0.+-.1); 글루타메이트 (+3.0.+-.1); 세린 (+0.3); 아스파라긴 (+0.2); 글루타민 (+0.2); 글리신 (0); 트레오닌 (-0.4); 프롤린 (-0.5.+-.1); 알라닌 (-0.5); 히스티딘 (-0.5); 시스테인 (-1.0); 메티오닌 (-1.3); 발린 (-1.5); 류신 (-1.8); 이소류신 (-1.8); 티로신 (-2.3); 페닐알라닌 (-2.5) 및 트립토판 (-3.4). 유사한 친수성 값을 기반으로 변환를 만들 때, 특정 구현예에서, 친수성 값이 ±2 내인 아미노산의 치환이 포함되고, 특정 구현예에서, ±1 내의 것이 포함되고, 그리고 특정 구현예에서, ±0.5 내의 것이 포함된다.

비-보존적 아미노산의 예는 아래에 제공된다.

알라닌 비-보존적 아미노산에 대한 비제한적인 예는 하기이다: D-알라닌 [Dala, (dA), a], N-아세틸-3-(3,4-디메톡시페닐)-D-알라닌, N-Me-D-Ala-OH, N-Me-Ala-OH, H-β-Ala-β-나프탈렌, L-(-)-2-아미노-3-우레이도프로피온산, (R)-(+)-α-알릴알라닌, (S)-(-)-α-알릴알라닌, D-2-아미노부티르산, L-2-아미노부티르산, DL-2-아미노부티르산, 2-아미노이소부티르산, α-아미노이소부티르산, (S)-(+)-2-아미노-4-페닐부티르산 에틸 에스테르, 벤질 α-아미노이소부티레이트, bu-OH, ib-OH, β-(9-안트릴)-Ala-OH, β-(3-벤조티에닐)-Ala-OH, β-(3-벤조티에닐)-D-Ala-OH, Cha-OH, Cha-OMe, β-(2-퓨릴)-Ala-OH, β-(2-퓨릴)-D-Ala-OH, β-아이오도-Ala-OBzl, β-아이오도-D-Ala-OBzl, 3-아이오도-D-Ala-OMe, β-아이오도-Ala-OMe, 1-Nal-OH, D-1-Nal-OH, 2-Nal-OH, D-2-Nal-OH, (R)-3-(2-나프틸)-β-Ala-OH, (S)-3-(2-나프틸)-β-Ala-OH, β-페닐-Phe-OH, 3-(2-피리딜)-Ala-OH, 3-(3-피리딜)-Ala-OH, 3-(3-피리딜)-D-Ala-OH, (S)-3-(3-피리딜)-β-Ala-OH, 3-(4-피리딜)-Ala-OH, 3-(4-피리딜)-D-Ala-OH, β-(2-퀴놀릴)-Ala-OH, 3-(2-퀴놀릴)-DL-Ala-OH, 3-(3-퀴놀릴)-DL-Ala-OH, 3-(2-퀴녹살릴)-DL-Ala-OH, β-(4-티아졸릴)-Ala-OH, β-(2-티에닐)-Ala-OH, β-(2-티에닐)-D-Ala-OH, β-(3-티에닐)-Ala-OH, β-(3-티에닐)-D-Ala-OH, 3-클로로-D-알라닌 메틸 에스테르, N-[(4-클로로페닐)설포닐]-β-알라닌, 3-사이클로헥실-D-알라닌, 3-사이클로펜틸-DL-알라닌, (-)-3-(3,4-디하이드록시페닐)-2-메틸-L-알라닌, 3,3-디페닐-D-알라닌, 3,3-디페닐-L-알라닌, N-[(S)-(+)-1-(에톡시카보닐)-3-페닐프로필]-L-알라닌, N-[1-(S)-(+)-에톡시카보닐-3-페닐프로필]-L-알라닐 카복시무수물, N-(3-플루오로벤질)알라닌, N-(3-인돌릴아세틸)-L-알라닌, 메틸 (RS)-2-(아미노메틸)-3-페닐프로피오네이트, 3-(2-옥소-1,2-디하이드로-4-퀴놀리닐)알라닌, 3-(1-피라졸릴)-L-알라닌, 3-(2-피리딜)-D-알라닌, 3-(2-피리딜)-L-알라닌, 3-(3-피리딜)-L-알라닌, 3-(4-피리딜)-D-알라닌, 3-(4-피리딜)-L-알라닌, 3-(2-퀴놀릴)-DL-알라닌, 3-(4-퀴놀릴)-DL-알라닌, D-스티릴알라닌, L-스티릴알라닌, 3-(2-티에닐)-L-알라닌, 3-(2-티에닐)-DL-알라닌, 3-(2-티에닐)-DL-알라닌, 3,3,3-트리플루오로-DL-알라닌, N-메틸-L-알라닌, 3-우레이도프로피온산, ib-OH, Cha-OH, 데하이드로-Ala-OMe, 데하이드로-Ala-OH, D-2-Nal-OH, β-Ala-ONp, β-호모알라-OH, β-D-호모알라-OH, β-알라닌, β-알라닌 에틸 에스테르, β-알라닌 메틸 에스테르, (S)- 디페닐-β-호모알라-OH, (R)-4-(4-피리딜)-β-호모알라-OH, (S)-4-(4-피리딜)-β-호모알라-OH, β-Ala-OH, (S)-디페닐-β-호모알라-OH, L-β-호모알라닌, (R)-4-(3-피리딜)-β-호모알라-OH, α-메틸-α-나프틸알라닌 [Manap], N-메틸-사이클로헥실알라닌 [Nmchexa], 사이클로헥실알라닌 [Chexa], N-메틸-사이클로펜틸알라닌 [Nmcpen], 사이클로펜틸알라닌 [Cpen], N-메틸-α-나프틸알라닌 [Nmanap], α-나프틸알라닌 [Anap], L-N-메틸알라닌 [Nmala], D-N-메틸알라닌 [Dnmala], α-메틸-사이클로헥실알라닌 [Mchexa], α-메틸-사이클로펜틸알라닌 [Mcpen]. 각각의 가능성은 별개의 구현예를 나타낸다.

아르기닌 비-보존적 아미노산에 대한 비제한적인 예는 하기이다: 호모아르기닌 (hArg), N-메틸 아르기닌 (NMeArg), 시트룰린, 2-아미노-3-구아니디노프로피온산, N-이미노에틸-L-오르니틴, Nω-모노메틸-L-아르기닌, Nω-니트로-L-아르기닌, D-아르기닌, 2-아미노-3-우레이도프로피온산, Nω,ω-디메틸-L-아르기닌, Nω-니트로-D-아르기닌, L-α-메틸아르기닌 [Marg], D-α-메틸아르기닌 [Dmarg], L-N-메틸아르기닌 [Nmarg], D-N-메틸아르기닌 [Dnmarg], β-Homoarg-OH, L-호모아르기닌, N-(3-구아니디노프로필)글리신 [Narg], 및 D-아르기닌 [Darg, (dR), r]. 각각의 가능성은 별개의 구현예를 나타낸다.

아스파라긴 비-보존적 아미노산에 대한 비제한적인 예는 하기이다: L-α-메틸아스파라긴 [Masn], D-α-메틸아스파라긴 [Dmasn], L-N-메틸아스파라긴 [Nmasn], D-N-메틸아스파라긴 [Dnmasn], N-(카바밀메틸)글리신 [Nasn] 및 D-아스파라긴 [Dasn, (dN), n]. 각각의 가능성은 별개의 구현예를 나타낸다.

아스파르트산 비-보존적 아미노산에 대한 비제한적인 예는 하기이다: L-α-메틸아스파르테이트 [Masp], D-α-메틸아스파르테이트 [Dmasp], L-N-메틸아스파르트산 [Nmasp], D-N-메틸아스파르테이드 [Dnmasp], N-(카복시메틸)글리신 [Nasp] 및 D-아스파르트산 [Dasp, (dD), d]. 각각의 가능성은 별개의 구현예를 나타낸다.

시스테인 비-보존적 아미노산에 대한 비제한적인 예는 하기이다: L-시스테인산, L-시스테인설핀산, D-에티오닌, S-(2-티아졸릴)-L-시스테인, DL-호모시스테인, L-호모시스테인, L-호모시스틴, L-α-메틸시스테인 [Mcys], D-α-메틸시스테인 [Dmcys], L-N-메틸시스테인 [Nmcys], D-N-메틸시스테인 [Dnmcys], N-(티오메틸)글리신 [Ncys] 및 D-시스테인 [Dcys, (dC), c]. 각각의 가능성은 별개의 구현예를 나타낸다.

글루탐산 비-보존적 아미노산에 대한 비제한적인 예는 하기이다: γ-카복시-DL-글루탐산, 4-플루오로-DL-글루탐산, β-글루탐산, L-β-호모글루탐산, L-α-메틸글루타메이트 [Mglu], D-α-메틸 글루탐산 [Dmglu], L-N-메틸글루탐산 [Nmglu], D-N-메틸글루타메이트 [Dnmglu], N-(2-카복시에틸)글리신 [Nglu], 및 D-글루탐산 [Dglu, (dE), e]. 각각의 가능성은 별개의 구현예를 나타낸다.

글루타민 비-보존적 아미노산에 대한 비제한적인 예는 하기이다: Cit-OH, D-시트룰린, 티오-L-시트룰린, β-Gln-OH, L-β-호모글루타민, L-α-메틸글루타민 [Mgln], D-α-메틸글루타민 [Dmgln], L-N-메틸글루타민 [Nmgln], D-N-메틸글루타민 [Dnmgln], N-(2-카바밀에틸)글리신 [Ngln], 및 D-글루타민 [Dgln, (dQ), q]. 각각의 가능성은 별개의 구현예를 나타낸다.

글리신 비-보존적 아미노산에 대한 비제한적인 예는 하기이다: tBu-Gly-OH,D-알릴글리신, N-[비스(메틸티오)메틸렌]글리신 메틸 에스테르, Chg-OH, D-Chg-OH, D-사이클로프로필글리신, L-사이클로프로필글리신, (R)-4-플루오로페닐글리신, (S)-4-플루오로페닐글리신, 이미노디아세트산, (2-인다닐)-Gly-OH, (±)-α-포스포노글리신 트리메틸 에스테르, D-프로파르길글리신, 프로파르길-Gly-OH, (R)-2-티에닐글리신, (S)-2-티에닐글리신, (R)-3-티에닐글리신, (S)-3-티에닐글리신, 2-(4-트리플루오로메틸-페닐)-DL-글리신, (2S,3R,4S)-α-(카복시사이클로프로필)글리신, N-(클로로아세틸)글리신 에틸 에스테르, (S)-(+)-2-클로로페닐글리신 메틸 에스테르, N-(2-클로로페닐)-N-(메틸설포닐)글리신, D-α-사이클로헥실글리신, L-α-사이클로프로필글리신, 디-tert-부틸-이미노디카복실레이트, 에틸 아세트아미도시아노아세테이트, N-(2-플루오로페닐)-N-(메틸설포닐) 글리신, N-(4-플루오로페닐)-N-(메틸설포닐)글리신, N-(2-푸르푸릴리덴아세틸)글리신 메틸 에스테르, N-(2-푸로일)글리신, N-(2-하이드록시에틸)이미노디아세트산, N-(4-하이드록시페닐)글리신, 이미노디아세트산, N-라우로일사르코신 나트륨 염, L-α-네오펜틸글리신, N-(포스포노메틸)글리신, D-프로파르길글리신, L-C-프로파르길글리신, 사르코신, N,N-디메틸글리신, N,N-디메틸글리신 에틸 에스테르, D-Chg-OH, α-포스포노글리신 트리메틸 에스테르, N-사이클로부틸글리신 [Ncbut], L-α-메틸에틸글리신 [Metg], N-사이클로헵틸글리신 [Nchep], L-α-메틸-i-부틸글리신 [Mtbug], N-메틸글리신 [Nmgly], L-N-메틸-에틸글리신 [Nmetg], L-에틸글리신 [Etg], α, α-디에틸글리신 [Deg], L-N-메틸-t-부틸글리신 [Nmtbug], L-t-부틸글리신 [Tbug], N-사이클로헥실글리신 [Nchex], N-사이클로데실글리신 [Ncdec], N-사이클로도데실글리신 [Ncdod], N-사이클로옥틸글리신 [Ncoct], N-사이클로프로필글리신 [Ncpro], N-사이클로운데실글리신 [Ncund], N-(2-아미노에틸)글리신 [Naeg], N-(N-(2,2-디페닐에틸) 디페닐에틸)글리신 [Nnbhm], N-(2,2- 카바밀메틸-글리신 [Nbhm], N-(N-(3,3-디페닐프로필) 디페닐프로필)글리신 [Nnbhe] 및 N-(3,3- 카바밀메틸-글리신 [Nbhe]. 각각의 가능성은 별개의 구현예를 나타낸다.

히스티딘 비-보존적 아미노산에 대한 비제한적인 예는 하기이다: L-α-메틸히스티딘 [Mhis], D-α-메틸히스티딘 [Dmhis], L-N-메틸히스티딘 [Nmhis], D-N-메틸히스티딘 [Dnmhis], N-(이미다졸릴에틸)글리신 [Nhis], 및 D-히스티딘 [Dhis, (dH), h]. 각각의 가능성은 별개의 구현예를 나타낸다.

이소류신 비-보존적 아미노산에 대한 비제한적인 예는 하기이다: N-메틸-L-이소류신 [Nmile], N-(3-인돌릴아세틸)-L-이소류신, 알로-이소류신, D-알로-이소류신, L-β-호모이소류신, L-α-메틸이소류신 [Mile], D-α-메틸이소류신 [Dmile], D-N-메틸이소류신 [Dnmile], N-(1 -메틸프로필)글리신 [Nile], 및 D-이소류신 [Dile, (dD), i]. 각각의 가능성은 별개의 구현예를 나타낸다.

류신 비-보존적 아미노산에 대한 비제한적인 예는 하기이다: D-류신 [Dleu, (dL), l]. 사이클로류신, DL-류신, N-포르밀-Leu-OH, D-tert-류신, L-tert-류신, DL-tert-류신, L-tert-류신 메틸 에스테르, 5,5,5-트리플루오로-DL-류신, D-β-Leu-OH, L-β-류신, DL-β-류신, L-β-호모류신, DL-β-호모류신, L-N-메틸-류신 [Nmleu], D-N-메틸-류신 [Dnmleu], L-α-메틸-류신 [Mleu], D-α-메틸-류신 [Dmleu], N-(2-메틸프로필)글리신 [Nleu], D-류신 [Dleu, l], D-노르류신, L-노르류신, DL-노르류신, L-N-메틸노르류신 [Nmnle] 및 L-노르류신 [Nle]. 각각의 가능성은 별개의 구현예를 나타낸다.

라이신 비-보존적 아미노산에 대한 비제한적인 예는 하기이다: DL-5-하이드록실라이신, (5R)-5-하이드록시-L-라이신, β-Lys-OH, L-β-호모라이신, L-α-메틸-라이신 [Mlys], D-α-메틸-라이신 [Dmlys], L-N-메틸-라이신 [Nmlys], D-N-메틸-라이신 [Dnmlys], N-(4-아미노부틸)글리신 [Nlys], 및 D-라이신 [Dlys, (dK), k]. 각각의 가능성은 별개의 구현예를 나타낸다.

메티오닌 비-보존적 아미노산에 대한 비제한적인 예는 하기이다: L-β-호모메티오닌, DL-β-호모메티오닌, L-α-메틸메티오닌 [Mmet], D-α-메틸메티오닌 [Dmmet], L-N-메틸메티오닌 [Nmmet], D-N-메틸메티오닌 [Dnmmet], N-(2-메틸티오에틸)글리신 [Nmet], 및 D-메티오닌 [Dmet, (dM), m]. 각각의 가능성은 별개의 구현예를 나타낸다.

페닐알라닌 비-보존적 아미노산에 대한 비제한적인 예는 하기이다: N-아세틸-2-플루오로-DL-페닐알라닌, N-아세틸-4-플루오로-DL-페닐알라닌, 4-아미노-L-페닐알라닌, 3-[3,4-비스(트리플루오로메틸)페닐]-L-알라닌, Bpa-OH, D-Bpa-OH, 4-tert-부틸-Phe-OH, 4-tert-부틸-D-Phe-OH, 4-(아미노)-L-페닐알라닌, rac-β²-호모페닐알라닌, 2-메톡시-L-페닐알라닌, (S)-4-메톡시-β-Phe-OH, 2-니트로-L-페닐알라닌, 펜타플루오로-D-페닐알라닌, 펜타플루오로-L-페닐알라닌, Phe(4-Br)-OH, D-Phe(4-Br)-OH, Phe(2-CF₃)-OH, D-Phe(2-CF₃)-OH, Phe(3-CF₃)-OH, D-Phe(3-CF₃)-OH, Phe(4-CF₃)-OH, D-Phe(4-CF₃)-OH, Phe(2-Cl)-OH, D-Phe(2-Cl)-OH, Phe(2,4-Cl₂)-OH, D-Phe(2,4-Cl₂)-OH, D-Phe(3-Cl)-OH, Phe(3,4-Cl₂)-OH, Phe(4-Cl)-OH, D-Phe(4-Cl)-OH, Phe(2-CN)-OH, D-Phe(2-CN)-OH, D-Phe(3-CN)-OH, Phe(4-CN)-OH, D-Phe(4-CN)-OH, Phe(2-Me)-OH, D-Phe(2-Me)-OH, Phe(3-Me)-OH, D-Phe(3-Me)-OH, Phe(4-Me)-OH, Phe(4-NH₂)-OH, Phe(4-NO₂)-OH, Phe(2-F)-OH, D-Phe(2-F)-OH, Phe(3-F)-OH, D-Phe(3-F)-OH, Phe(3,4-F₂)-OH, D-Phe(3,4-F₂)-OH, Phe(3,5-F₂)-OH, Phe(4-F)-OH, D-Phe(4-F)-OH, Phe(4-I)-OH, D-3,4,5-트리플루오로페닐알라닌, p-브로모-DL-페닐알라닌, 4-브로모-L-페닐알라닌, β-페닐-D-페닐알라닌, 4-클로로-L-페닐알라닌, DL-2,3-디플루오로페닐알라닌, DL-3,5-디플루오로페닐알라닌, 3,4-디하이드록시-L-페닐알라닌, 3-(3,4-디메톡시페닐)-L-알라닌, N-[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]-2-메톡시-L-페닐알라닌, o-플루오로-DL-페닐알라닌, m-플루오로-L-페닐알라닌, m-플루오로-DL-페닐알라닌, p-플루오로-L-페닐알라닌, p-플루오로-DL-페닐알라닌, 4-플루오로-D-페닐알라닌, 2-플루오로-L-페닐알라닌 메틸 에스테르, p-플루오로-DL-Phe-OMe, D-3-브로모페닐알라닌, D-4-브로모페닐알라닌, L-β-(6-클로로-4-피리디닐)알라닌, D-3,5-디플루오로페닐알라닌, L-3-플루오로페닐알라닌, L-4-플루오로페닐알라닌, L-β-(1H-5-인돌릴)알라닌, 2-니트로-L-페닐알라닌, 펜타플루오로-L-페닐알라닌, phe(3-br)-oh, Phe(4-Br)-OH, Phe(2-CF₃)-OH, D-Phe(2-CF₃)-OH, Phe(3-CF₃)-OH, D-Phe(3-CF₃)-OH, Phe(4-CF₃)-OH, D-Phe(4-CF₃)-OH, Phe(2-Cl)-OH, D-Phe(2-Cl)-OH, Phe(2,4-Cl₂)-OH, D-Phe(2,4-Cl₂)-OH, Phe(3,4-Cl₂)-OH, D-Phe(3,4-Cl₂)-OH, Phe(4-Cl)-OH, D-Phe(4-Cl)-OH, Phe(2-CN)-OH, D-Phe(2-CN)-OH, D-Phe(3-CN)-OH, Phe(4-CN)-OH, Phe(2-Me)-OH, Phe(3-Me)-OH, D-Phe(3-Me)-OH, Phe(4-NO₂)-OH, D-Phe(4-NO₂)-OH, D-Phe(2-F)-OH, Phe(3-F)-OH, D-Phe(3-F)-OH, Phe(3,4-F₂)-OH, Phe(3,5-F₂)-OH, D-Phe(4-F)-OH, Phe(4-I)-OH, D-Phe(4-I)-OH, 4-(포스포노메틸)-Phe-OH, L-4-트리플루오로메틸페닐알라닌, 3,4,5-트리플루오로-D-페닐알라닌, L-3,4,5-트리플루오로페닐알라닌, 6-하이드록시-DL-DOPA, 4-(하이드록시메틸)-D-페닐알라닌, N-(3-인돌릴아세틸)-L-페닐알라닌, p-아이오도-D-페닐알라닌, 4-아이오도-L-페닐알라닌, α-메틸-D-페닐알라닌, α-메틸-L-페닐알라닌, α-메틸-DL-페닐알라닌, α-메틸-DL-페닐알라닌 메틸 에스테르, 4-니트로-D-페닐알라닌, 4-니트로-L-페닐알라닌, 4-니트로-DL-페닐알라닌, (S)-(+)-4-니트로페닐알라닌 메틸 에스테르, 2-(트리플루오로메틸)-D-페닐알라닌, 2-(트리플루오로메틸)-L-페닐알라닌, 3-(트리플루오로메틸)-D-페닐알라닌, 3-(트리플루오로메틸)-L-페닐알라닌, 4-(트리플루오로메틸)-D-페닐알라닌, 3,3′,5-트리아이오도-L-티로닌, (R)-4-브로모--Phe-OH N-아세틸-DL-β-페닐알라닌, (S)-4-브로모-β-Phe-OH, (R)-4-클로로-β-Homophe-OH, (S)-4-클로로-β-Homophe-OH, (R)-4-클로로-β-Phe-OH, (S)-4-클로로-β-Phe-OH, (S)-2-시아노-β-Homophe-OH, (R)- 4-시아노-β-Homophe-OH, (S)-4-시아노-β-Homophe-OH, (R)-3-시아노-β-Phe-OH, (R)-4-시아노-β-Phe-OH, (S)-4-시아노-β-Phe-OH, (R)-3,4-디메톡시-β-Phe-OH, (S)-3,4-디메톡시-β-Phe-OH, (R)-4-플루오로-β-Phe-OH, (S)-4-플루오로-β-Phe-OH, (S)-4-아이오도-β-Homophe-OH, (S)-3-시아노-β-Homophe-OH, (S)-3,4-디플루오로-β-Homophe-OH, (R)-4-플루오로-β-Homophe-OH, (S)-β2-호모페닐알라닌, (R)-3-메톡시-β-Phe-OH, (S)-3-메톡시-β-Phe-OH, (R)-4-메톡시-β-Phe-OH, (S)-4-메틸-β-Homophe-OH, (R)-2-메틸-β-Phe-OH, (S)-2-메틸-β-Phe-OH, (R)-3-메틸-β-Phe-OH, (S)-3-메틸-β-Phe-OH, (R)-4-메틸-β-Phe-OH, (S)-4-메틸-β-Phe-OH, β-Phe-OH, D-β-Phe-OH, (S)-2-(트리플루오로메틸)-β-Homophe-OH, (S)-2-(트리플루오로메틸)-β-Homophe-OH, (S)-3-(트리플루오로메틸)-β-Homophe-OH, (R)-4-(트리플루오로메틸)-β-Homophe-OH, (S)-2-(트리플루오로메틸)-β-Phe-OH, (R)-3-(트리플루오로메틸)-β-Phe-OH, (S)-3-(트리플루오로메틸)-β-Phe-OH, (R)-4-(트리플루오로메틸)-β-Phe-OH, (S)-4-(트리플루오로메틸)-β-Phe-OH, β-Homophe-OH, D-β-Homophe-OH, (S)-2-메틸-β-Homophe-OH, (S)-3-메틸-β-Homophe-OH, β-Phe-OH, β-D-Phe-OH, (S)-3-(트리플루오로메틸)-β-Homophe-OH, L-β-호모페닐알라닌, DL-β-호모페닐알라닌, DL-β-페닐알라닌, DL-호모페닐알라닌 메틸 에스테르, D-호모페닐알라닌, L-호모페닐알라닌, DL-호모페닐알라닌, D-호모페닐알라닌 에틸 에스테르, (R)-β²-호모페닐알라닌, L-α-메틸- 호모페닐알라닌 [Mhphe], L-α-메틸페닐알라닌 [Mphe], D-a-메틸페닐알라닌 [Dmphe], L-N-메틸- 호모페닐알라닌 [Nm phe], L-호모페닐알라닌 [Hphe], L-N-메틸페닐알라닌 [Nmphe], D-N-메틸페닐알라닌 [Dnmphe], N-벤질글리신 [Nphe] 및 D-페닐알라닌 [Dphe, (dF), f]. 각각의 가능성은 별개의 구현예를 나타낸다.

프롤린 비-보존적 아미노산에 대한 비제한적인 예는 하기이다: 호모프폴린 (hPro), (4-하이드록시)Pro (4HyP), (3-하이드록시)Pro (3HyP), 감마-벤질-프롤린, 감마-(2-플루오로-벤질)-프롤린, 감마-(3-플루오로-벤질)-프롤린, 감마-(4-플루오로-벤질)-프롤린, 감마-(2-클로로-벤질)-프롤린, 감마-(3-클로로-벤질)-프롤린, 감마-(4-클로로-벤질)-프롤린, 감마-(2-브로모-벤질)-프롤린, 감마-(3-브로모-벤질)-프롤린, 감마-(4-브로모-벤질)-프롤린, 감마-(2-메틸-벤질)-프롤린, 감마-(3-메틸-벤질)-프롤린, 감마-(4-메틸-벤질)-프롤린, 감마-(2-니트로-벤질)-프롤린, 감마-(3-니트로-벤질)-프롤린, 감마-(4-니트로-벤질)-프롤린, 감마-(l-나프탈레닐메틸)-프롤린, 감마-(2-나프탈레닐메틸)-프롤린, 감마-(2,4-디클로로-벤질)-프롤린, 감마-(3,4-디클로로-벤질)-프롤린, 감마-(3,4-디플루오로-벤질)-프롤린, 감마-(2-트리플루오로-메틸-벤질)-프롤린, 감마-(3-트리플루오로-메틸-벤질)-프롤린, 감마-(4-트리플루오로-메틸-벤질)-프롤린, 감마-(2-시아노-벤질)-프롤린, 감마-(3-시아노-벤질)-프롤린, 감마-(4-시아노-벤질)-프롤린, 감마-(2-아이오도-벤질)-프롤린, 감마-(3-아이오도-벤질)-프롤린, 감마-(4-아이오도-벤질)-프롤린, 감마-(3-페닐-알릴-벤질)-프롤린, 감마-(3-페닐-프로필-벤질)-프롤린, 감마-(4-tert-부틸-벤질)-프롤린, 감마-벤즈하이드릴-프롤린, 감마-(4-바이페닐-메틸)-프롤린, 감마-(4-티아졸릴-메틸)-프롤린, 감마-(3-벤조티에닐-메틸)-프롤린, 감마-(2-티에닐-메틸)-프롤린, 감마-(3-티에닐-메틸)-프롤린, 감마-(2-푸라닐-메틸)-프롤린, 감마-(2-피리디닐-메틸)-프롤린, 감마-(3-피리디닐-메틸)-프롤린, 감마-(4-피리디닐-메틸)-프롤린, 감마-알릴-프롤린, 감마-프로피닐-프롤린, 알파-변형된-프롤린 잔기, 피페콜산, 아제티딘-3-카복실산, L-β-호모프폴린, L-β³-호모프폴린, L-β-호모하이드록시프롤린, 하이드록시프롤린 [Hyp], L-β-메틸프롤린 [Mpro], D-β-메틸프롤린 [Dmpro], L-N-메틸프롤린 [Nmpro], D-N-메틸프롤린 [Dnmpro], 및 D-프롤린 [Dpro, (dP), p]. 각각의 가능성은 별개의 구현예를 나타낸다.

세린 비-보존적 아미노산에 대한 비제한적인 예는 하기이다: (2R,3S)-3-페닐이소세린, D-사이클로세린, L-이소세린, DL-이소세린, DL-3-페닐세린, L-β-호모세린, D-호모세린, D-호모세린, L-3-호모세린, L-호모세린, L-α-메틸세린 [Mser], D-α-메틸세린 [Dmser], L-N-메틸세린 [Nmser], D-N-메틸세린 [Dnmser], D-세린 [Dser, (dS), s], N-(하이드록시메틸)글리신 [Nser] 및 포스포세린 [pSer]. 각각의 가능성은 별개의 구현예를 나타낸다.

트레오닌 비-보존적 아미노산에 대한 비제한적인 예는 하기이다: L-알로-트레오닌, D-티록신, L-β-Homo트레오닌, L-α-메틸트레오닌 [Mthr], D-α-메틸트레오닌 [Dmthr], L-N-메틸트레오닌 [Nmthr], D-N-메틸트레오닌 [Dnmthr], D-트레오닌 [Dthr, (dT), t], N-(1-하이드록시에틸)글리신 [Nthr] 및 포스포트레오닌 [pThr]. 각각의 가능성은 별개의 구현예를 나타낸다.

트립토판 비-보존적 아미노산에 대한 비제한적인 예는 하기이다: 5-플루오로-L-트립토판, 5-플루오로-DL-트립토판, 5-하이드록시-L-트립토판, 5-메톡시-DL-트립토판, L-abrine, 5-메틸-DL-트립토판, H-Tpi-OMe. β-Homotrp-OMe, L-β-Homo트립토판, L-α-메틸트립토판 [Mtrp], D-α-메틸트립토판 [Dmtrp], L-N-메틸트립토판 [Nmtrp], D-N-메틸트립토판 [Dnmtrp], N-(3-인돌릴에틸)글리신 [Nhtrp], D-트립토판 [Dtrp, (dW), w]. 각각의 가능성은 별개의 구현예를 나타낸다.

티로신 비-보존적 아미노산에 대한 비제한적인 예는 하기이다: 3,5 디아이오도티로신 (3,5-dITyr), 3,5 디브로모티로신 (3,5-dBTyr), 호모티로신, D-티로신, 3-아미노-L-티로신, 3-아미노-D-티로신, 3- 아이오도- L- 티로신, 3- 아이오도- D- 티로신, 3-메톡시-L-티로신, 3-메톡시-D-티로신, L-티록신, D-티록신, L-티로닌, D-티로닌, O-메틸-L-티로신, O-메틸-D-티로신, D-티로닌, O-에틸-L-티로신, O-에틸-D-티로신, 3,5,3'-트리아이오도-L-티로닌, 3,5,3'-트리아이오도-D-티로닌, 3,5-디아이오도-L-티로닌, 3,5-디아이오도-D-티로닌, D-메타-티로신, L-메타-티로신, D-오르토- 티로신, L-오르토-티로신, 페닐알라닌, 치환된 페닐알라닌, N-니트로 페닐알라닌, p-니트로 페닐알라닌, 3-클로로-Dtyr-oh, Tyr(3,5-diI), 3-클로로-L-티로신, Tyr(3-NO₂)-OH, Tyr(3,5-diI)-OH, N-Me-Tyr-OH, α-메틸-DL-티로신, 3-니트로-L-티로신, DL-o-티로신, β-Homotyr-OH, (R)-β-Tyr-OH, (S)-β-Tyr-OH, L-α-메틸티로신 [Mtyr], D-α-메틸티로신 [Dmtyr], L-N-메틸티로신 [Nmtyr], D-N-메틸티로신 [Dnmtyr], D-티로신 [Dtyr, (dY), y], O-메틸-티로신, 및 포스포티로신 [pTyr]. 각각의 가능성은 별개의 구현예를 나타낸다.

발린 비-보존적 아미노산에 대한 비제한적인 예는 하기이다: 3-플루오로-DL-발린, 4,4,4,4′,4′',4′'-헥사플루오로-DL-발린, D-발린 [Dval, (dV), v], N-Me-Val-OH [Nmval], N-Me-Val-OH, L-α-메틸발린 [Mval], D-α-메틸발린 [Dmval], (R)-(+)-α-메틸발린, (S)-(-)-α-메틸발린 및 D-N-메틸발린 [Dnmval]. 각각의 가능성은 별개의 구현예를 나타낸다.

비-보존적 대체로서 치환될 수 있는 다른 비-자연 아미노산은 하기를 포함한다: 오르니틴 및 그것의 변형 : D-오르니틴 [Dorn], L-오르니틴 [Orn], DL-오르니틴, L-α-메틸오르니틴 [Morn], D-α-메틸오르니틴 [Dmorn], L-N-메틸오르니틴 [Nmorn], D-N-메틸오르니틴 [Dnmorn] 및 N-(3-아미노프로필)글리신 [Norn]. 각각의 가능성은 별개의 구현예를 나타낸다.

지환족 아미노산 : L-2,4-디아미노부티르산, L-2,3-디아미노프로피온산, N-Me-Aib-OH, (R)-2-(아미노)-5-헥신산, 피페리딘-2-카복실산, 아미노노르보르닐- 카복실레이트 [Norb], 알파-아미노부티르산 [Abu], 아미노사이클로프로판-카복실레이트 [Cpro], (시스)-3-아미노바이사이클로[2.2.1]헵탄-2-카복실산, 엑소-시스-3-아미노바이사이클로[2.2.1]헵트-5-엔-2-카복실산, 1-아미노-1-사이클로부탄카복실산, 시스-2-아미노사이클로헵탄카복실산, 1-아미노사이클로헥산카복실산, 시스-2-아미노사이클로헥산카복실산, 트랜스-2-아미노사이클로헥산카복실산, 시스-6-아미노-3-사이클로헥센-1-카복실산, 2-(1-아미노사이클로헥실)아세트산, 시스-2-아미노-1-사이클로옥탄카복실산, 시스-2-아미노-3-사이클로옥텐-1-카복실산, (1R,2S)-(-)-2-아미노-1-사이클로펜탄카복실산, (1S,2R)-(+)-2-아미노-1-사이클로펜탄카복실산, 시스-2-아미노-1-사이클로펜탄카복실산, 2-(1-아미노사이클로펜틸)아세트산, 시스-2-아미노-2-메틸사이클로헥산카복실산, 시스-2-아미노-2-메틸사이클로펜탄카복실산, 3-아미노-3-(4-니트로페닐)프로피온산, 3-아제티딘카복실산, mchc-oh, 1-아미노사이클로부탄 카복실산, 1-(아미노)사이클로헥산카복실산, 시스-2-(아미노)-사이클로헥산카복실산, 트랜스-2-(아미노)-사이클로헥산카복실산, 시스-4-(아미노)사이클로헥산카복실산, 트랜스-4-(아미노)사이클로헥산카복실산, (±)-시스-2-(아미노)-3-사이클로헥센-1-카복실산, (±)-시스-6-(아미노)-3-사이클로헥센-1-카복실산, 2-(1-아미노사이클로헥실)아세트산, 시스-[4-(아미노)사이클로헥실]아세트산, 1-(아미노)사이클로펜탄카복실산, (±)-시스-2-(아미노)사이클로펜탄카복실산, (1R,4S)-(+)-4-(아미노)-2-사이클로펜텐-1-카복실산, (±)-시스-2-(아미노)-3-사이클로펜텐-1-카복실산, 2-(1-아미노사이클로펜틸)아세트산, 1-(아미노)사이클로프로판카복실산, 에틸 1-아미노사이클로프로판카복실레이트, 1,2-트랜스-achec-oh, 1-(아미노)사이클로부탄카복실산, 1-(아미노)사이클로헥산카복실산, 시스-2-(아미노)-사이클로헥산카복실산, 트랜스-2-(아미노)사이클로헥산카복실산, 시스-4-(아미노)사이클로헥산카복실산, 트랜스-4-(아미노)사이클로헥산카복실산, 시스-[4-(아미노)사이클로헥실]아세트산, 1-(아미노)사이클로펜탄카복실산, (1R,4S)-(+)-4-(아미노)-2-사이클로펜텐-1-카복실산, (1S,4R)-(-)-4-(아미노)-2-사이클로펜텐-1-카복실산, 1-(아미노)사이클로프로판카복실산, 트랜스-4-(아미노메틸)사이클로헥산카복실산, β-Dab-OH, 3-아미노-3-(3-브로모페닐)프로피온산, 3-아미노부탄산, 시스-2- 아미노-3-사이클로펜텐-1-카복실산, DL-3-아미노이소부티르산, (R)-3-아미노-2-페닐프로피온산, (±)-3-(아미노)-4-(4-바이페닐일)부티르산, 시스-3-(아미노)사이클로헥산카복실산, (1S,3R)-(+)-3-(아미노)사이클로펜탄카복실산, (2R,3R)-3-(아미노)-2-하이드록시-4-페닐부티르산, (2S,3R)-3-(아미노)-2-하이드록시-4-페닐부티르산, 2-(아미노메틸)페닐아세트산, (R)-3-( 아미노)-2-메틸프로피온산, (S)-3-(아미노)-2-메틸프로피온산, (R)-3-(아미노)-4-(2-나프틸)부티르산, (S)-3-(아미노)-4-(2-나프틸)부티르산, (R)-3-(아미노)-5-페닐펜탄산, (R)-3-(아미노)-2-페닐프로피온산, 에틸 3-(벤질아미노)프로피오네이트, 시스-3-(아미노)사이클로헥산카복실산, (S)-3-(아미노)-5-헥센산, (R)-3-(아미노)-2-메틸프로피온산, (S)-3-(아미노)-2-메틸프로피온산, (R)-3-(아미노)-4-(2-나프틸)부티르산, (S)-3-(아미노)-4-(2-나프틸)부티르산, (R)-(-)-피롤리딘-3-카복실산, (S)-(+)-피롤리딘-3-카복실산, N-메틸- γ -아미노부티레이트 [Nmgabu], γ-아미노부티르산 [Gabu], N-메틸- α-아미노- α- 메틸부티레이트 [Nmaabu], α-아미노- α-메틸부티레이트 [Aabu], N-메틸- α- 아미노이소부티레이트 [Nmaib], α-아미노이소부티르산 [Aib], α-메틸-y-아미노부티레이트 [Mgabu]. 각각의 가능성은 별개의 구현예를 나타낸다.

페닐 글리신 및 그것의 변형: Phg-OH, D-Phg-OH, 2-(피페라지노)-2-(3,4-디메톡시페닐)아세트산, 2-(피페라지노)-2-(2-플루오로페닐)아세트산, 2-(4-피페라지노)-2-(3-플루오로페닐)아세트산, 2-(4-피페라지노)-2-(4-메톡시페닐)아세트산, 2-(4-피페라지노)-2-(3-피리딜)아세트산, 2-(4-피페라지노)-2-[4-(트리플루오로메틸)페닐]아세트산, L-(+)-2-클로로페닐글리신, (±)-2-클로로페닐글리신, (±)-4-클로로페닐글리신, (R)-(-)-2-(2,5-디하이드로페닐)글리신, (R)-(-)-N-(3,5-디니트로벤조일)-α-페닐글리신, (S)-(+)-N-(3,5-디니트로벤조일)-α-페닐글리신, 2,2-디페닐글리신, 2-플루오로-DL-α-페닐글리신, 4-플루오로-D-α-페닐글리신, 4-하이드록시-D-페닐글리신, 4-하이드록시-L-페닐글리신, 2-페닐글리신, D-(-)-α-페닐글리신, D-(-)-α-페닐글리신, DL-α-페닐글리신, L-(+)-α-페닐글리신, N-페닐글리신, (R)-(-)-2-페닐글리신 메틸 에스테르, (S)-(+)-2-페닐글리신 메틸 에스테르, 2-페닐glycino니트릴 하이드로클로라이드, α-페닐glycino니트릴, 3-(트리플루오로메틸)-DL-페닐글리신, 및 4-(트리플루오로메틸)-L-페닐글리신. 각각의 가능성은 별개의 구현예를 나타낸다.

페니실아민 및 그것의 변형: N-아세틸-D-페니실아민, D-페니실아민, L-페니실아민 [Pen], DL-페니실아민. α -메틸페니실아민 [Mpen], N-메틸페니실아민 [Nmpen]. 각각의 가능성은 별개의 구현예를 나타낸다.

β-호모피롤리딘. 각각의 가능성은 별개의 구현예를 나타낸다.

방향족 아미노산: 3-아세트아미도벤조산, 4-아세트아미도벤조산, 4-아세트아미도-2-메틸벤조산, N-아세틸안트라닐산, 3-아미노벤조산, 3-아미노벤조산 하이드로클로라이드, 4-아미노벤조산, 4-아미노벤조산, 4-아미노벤조산, 4-아미노벤조산, 4-아미노벤조산, 4-아미노벤조산, 2-아미노벤조페논-2′'-카복실산, 2-아미노-4-브로모벤조산, 2-아미노-5-브로모벤조산, 3-아미노-2-브로모벤조산, 3-아미노-4-브로모벤조산, 3-아미노-5-브로모벤조산, 4-아미노-3-브로모벤조산, 5-아미노-2-브로모벤조산, 2-아미노-3-브로모-5-메틸벤조산, 2-아미노-3-클로로벤조산, 2-아미노-4-클로로벤조산, 2-아미노-5-클로로벤조산, 2-아미노-5-클로로벤조산, 2-아미노-6-클로로벤조산, 3-아미노-2-클로로벤조산, 3-아미노-4-클로로벤조산, 4-아미노-2-클로로벤조산, 4-아미노-3-클로로벤조산, 5-아미노-2-클로로벤조산, 5-아미노-2-클로로벤조산, 4-아미노-5-클로로-2-메톡시벤조산, 2-아미노-5-클로로-3-메틸벤조산, 3-아미노-2,5-디클로로벤조산, 4-아미노-3,5-디클로로벤조산, 2-아미노-4,5-디메톡시벤조산, 4-(2-아미노에틸)벤조산 하이드로클로라이드, 2-아미노-4-플루오로벤조산, 2-아미노-5-플루오로벤조산, 2-아미노-6-플루오로벤조산, 4-아미노-2-플루오로벤조산, 2-아미노-5-하이드록시벤조산, 3-아미노-4-하이드록시벤조산, 4-아미노-3-하이드록시벤조산, 2-아미노-5-아이오도벤조산, 5-아미노이소프탈산, 2-아미노-3-메톡시벤조산, 2-아미노-4-메톡시벤조산, 2-아미노-5-메톡시벤조산, 3-아미노-2-메톡시벤조산, 3-아미노-4-메톡시벤조산, 3-아미노-5-메톡시벤조산, 4-아미노-2-메톡시벤조산, 4-아미노-3-메톡시벤조산, 5-아미노-2-메톡시벤조산, 2-아미노-3-메틸벤조산, 2-아미노-5-메틸벤조산, 2-아미노-6-메틸벤조산, 3-(아미노메틸)벤조산, 3-아미노-2-메틸벤조산, 3-아미노-4-메틸벤조산, 4-(아미노메틸)벤조산, 4-아미노-2-메틸벤조산, 4-아미노-3-메틸벤조산, 5-아미노-2-메틸벤조산, 3-아미노-2-나프토산, 6-아미노-2-나프토산, 2-아미노-3-니트로벤조산, 2-아미노-5-니트로벤조산, 2-아미노-5-니트로벤조산, 4-아미노-3-니트로벤조산, 5-아미노-2-니트로벤조산, 3-(4-아미노페닐)프로피온산, 3-아미노프탈산, 4-아미노프탈산, 3-아미노살리실 산, 4-아미노살리실 산, 5-아미노살리실 산, 5-아미노살리실 산, 2-아미노테레프탈산, 2-아미노-3,4,5,6-테트라플루오로벤조산, 4-아미노-2,3,5,6-테트라플루오로벤조산, (R)-2-아미노-1,2,3,4-테트라하이드로나프탈렌-2-카복실산, (S)-2-아미노-1,2,3,4-테트라하이드로-2-나프탈렌카복실산, 2-아미노-3-(트리플루오로메틸)벤조산, 2-아미노-3-(트리플루오로메틸)벤조산, 3-아미노-5-(트리플루오로메틸)벤조산, 5-아미노-2,4,6-트리아이오도이소프탈산, 2-아미노-3,4,5-트리메톡시벤조산, 2-아닐리노페닐아세트산, 2-Abz-OH, 3-Abz-OH, 4-Abz-OH, 2-(아미노메틸)벤조산, 3-(아미노메틸)벤조산, 4-(아미노메틸)벤조산, tert-부틸 2-아미노벤조에이트, tert-부틸 3-아미노벤조에이트, tert-부틸 4-아미노벤조에이트, 4-(부틸아미노)벤조산, 2,3-디아미노벤조산, 3,4-디아미노벤조산, 3,5-디아미노벤조산, 3,5-디아미노벤조산, 3,5-디클로로안트라닐산, 4-(디에틸아미노)벤조산, 4,5-디플루오로안트라닐산, 4-(디메틸아미노)벤조산, 4-(디메틸아미노)벤조산, 3,5-디메틸안트라닐산, 5-플루오로-2-메톡시벤조산, 2-Abz-OH, 3-Abz-OH, 4-Abz-OH, 3-(아미노메틸)벤조산, 4-(아미노메틸)벤조산, 4-(2-히드라지노)벤조산, 3-하이드록시안트라닐산, 3-하이드록시안트라닐산, 메틸 3-아미노벤조에이트, 3-(메틸아미노)벤조산, 4-(메틸아미노)벤조산, 메틸 2-아미노-4-클로로벤조에이트, 메틸 2-아미노-4,5-디메톡시벤조에이트, 4-니트로안트라닐산, N-페닐안트라닐산, N-페닐안트라닐산, 및 나트륨 4-아미노살리실레이트. 각각의 가능성은 별개의 구현예를 나타낸다.

다른 아미노산: (S)-α-아미노-γ-부티로락톤, DL-2-아미노카프릴산, 7-아미노세팔로스포란산, 4-아미노신남ic 산, (S)-(+)-α-아미노사이클로헥산프로피온산, (R)-아미노-(4-하이드록시페닐)아세트산 메틸 에스테르, 5-아미노레벌린산, 4-아미노-니코틴산, 3-아미노페닐아세트산, 4-아미노페닐아세트산, 2-아미노-2-페닐부티르산, 4-(4-아미노페닐)부티르산, 2-(4-아미노페닐티오)아세트산, DL-α-아미노-2-티오펜아세트산, 5-아미노발레르산, 8-벤질 (S)-2-아미노옥탄디오에이트, 4-(아미노)-1-메틸피롤-2-카복실산, 4-(아미노)테트라하이드로티오피란-4-카복실산, (1R,3S,4S)-2-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-3-카복실산, L-아제티딘-2-카복실산, 아제티딘-3-카복실산, 4-(아미노)피페리딘-4-카복실산, 디아미노아세트산, Inp-OH, (R)-Nip-OH, (S)-4-옥소피페리딘-2-카복실산, 2-(4-피페라지노)-2-(4-플루오로페닐)아세트산, 2-(4-피페라지노)-2-페닐아세트산, 4-피페리딘아세트알데하이드, 4-피페리딜아세트산, (-)-L-thio프롤린, Tle-OH, 3-피페리딘카복실산, L-(+)-카나바닌, (±)-카르니틴, 클로르암부실, 2,6-디아미노피멜산, 메소-2,3-디아미노석신산, 4-(디메틸아미노)신남산, 4-(디메틸아미노)페닐아세트산, 에틸 (S)-N-Boc-피페리딘-3-카복실레이트, 에틸-피페라지노아세테이트, 4-[2-(아미노)에틸]피페라진-1-일아세트산, (R)-4-(아미노)-5-페닐펜탄산, (S)-아제티딘-2-카복실산, 아제티딘-3-카복실산, 구바신, Inp-OH, (R)-Nip-OH, DL-Nip-OH, 4-페닐-피페리딘-4-카복실산, 1-피페라진아세트산, 4-피페리딘아세트산, (R)-피페리딘-2-카복실산, (S)-피페리딘-2-카복실산, (S)-1,2,3,4-테트라하이드로노르하르만-3-카복실산, Tic-OH, D-Tic-OH, 이미노디아세트산, 인돌린-2-카복실산, DL-카이뉴레닌, L-아지리딘-2-카복실레이트, 메틸 4-아미노부티레이트, (S)-2-피페라진카복실산, 2-(1-피페라지닐)아세트산, (R)-(-)-3-피페리딘카복실산, 2-피롤리돈-5-카복실산, (R)-(+)-2-피롤리돈-5-카복실산, (R)-1,2,3,4-테트라하이드로-3-이소퀴놀린카복실산, (S)-1,2,3,4-테트라하이드로-3-이소퀴놀린카복실산, L-4-티오졸리딘카복실산, (4R)-(-)-2-티옥소-4-티오졸리딘카복실산, 히드라지노아세트산, 및 3,3′,5-트리아이오도-L-티로닌. 각각의 가능성은 별개의 구현예를 나타낸다.

일부 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 1 또는 2번 위치에서, 또는 1과 2번 위치 둘 모두에서, 펩티다아제 절단에 대한 펩타이드의 내성을 달성하는 아미노산을 포함한다. 일부 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 1번 위치에서 하기로 구성된 군으로부터 아미노산을 포함한다: D-히스티딘, 데스아미노히스티딘, 하이드록실-히스티딘, 아세틸-히스티딘, 호모-히스티딘, N-메틸 히스티딘, 알파-메틸 히스티딘, 이미다졸 아세트산, 또는 알파, 알파-디메틸 이미다졸 아세트산 (DMIA). 일부 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 2번 위치에서 하기로 구성된 군으로부터 아미노산을 포함한다: D-세린, D-알라닌, 발린, 글리신, N-메틸 세린, N-메틸 알라닌, 또는 알파, 아미노이소부티르산. 일부 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 펩티다아제에 대한 펩타이드 또는 펩타이드 유사체의 내성을 달성하는 아미노산을 2번 위치에서 포함하고, 펩티다아제에 대한 펩타이드 또는 펩타이드 유사체의 내성을 달성하는 아미노산은 D-세린이 아니다. 일부 구현예에서, 이러한 공유결합는 락탐 브릿지 이외의 분자내 브릿지이다. 예를 들어, 적합한 공유결합 방법은 올레핀 복분해, 란티오닌-기반 고리화, 디설파이드 브릿지 또는 변형된 황-함유 다리 형성, α,ω-디아미노알칸 테더의 사용, 금속-원자 브릿지의 형성, 및 펩타이드 고리화의 다른 수단 중 임의의 하나 이상을 포함한다.

일부 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 하전된 아미노산을 유사체의 C-말단부로 도입하는 아미노산 치환 및/또는 첨가에 의해 변형된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 변형은 enhance 안정성 및 용해도를 향상시킨다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 "하전된 아미노산" 또는 "하전된 잔기"는 수용액 생리적 pH에서 음성-하전된 (즉, 탈-양성자화된) 또는 양성-하전된 (즉, 양성자화된) 측쇄를 포함하는 아미노산을 지칭한다. 일부 양태에서, 하전된 아미노산 변형을 도입하는 이들 아미노산 치환 및/또는 첨가는 C-말단 위치에 있을 수 있다. 일부 구현예에서, 1, 2 또는 3 (및 일부 사례에서, 3개 초과) 하전된 아미노산은 C-말단 위치에서 도입될 수 있다. 예시적인 구현예에서, 1, 2개 또는 모든 하전된 아미노산은 음성-하전된일 수 있다. 음성-하전된 아미노산은 일부 구현예에서 아스파르트산, 글루탐산, 시스테인산, 호모시스테인산, 또는 호모글루탐산이다. 일부 양태에서, 이들 변형은 용해도를 증가시킨다.

일부 구현예에 따르면, 본 명세서에서 개시된 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 1 또는 2개의 아미노산 잔기에 의한 C-말단의 절단에 의해 변형될 수 있다. 이와 관련하여, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 예시적인 양태에서 본 명세서에 기재된 추가 변형 중 임의의 것을 선택적으로 갖는 1 또는 2개의 아미노산 잔기에 의해 C-말단에서 절단된 서열번호: 1, 3-41, 43-76, 및 79-293, 310-315, 319-323 및 354-377 중 임의의 하나의 서열을 포함한다.

일부 구현예에서, 본 펩타이드는 서열번호: 1, 3-41, 43-76, 및 79-293, 310-315, 319-323 및 354-377 중 임의의 하나의 변형된 서열을 포함하되, 상기 C-말단 아미노산의 카복실산은 전하-중성 그룹, 예컨대 아미드 또는 에스테르로 대체된다. 따라서, 일부 구현예에서, 본 펩타이드는 아미드화된 펩타이드이고, 이로써, C-말단 잔기는 아미노산의 알파 카복실레이트 대신에 아미드를 포함한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이 펩타이드 또는 유사체에 대한 일반적인 언급은 변형된 아미노 말단, 변형된 카복시 말단, 또는 아미노 및 카복시 말단 둘 모두의 변형을 갖는 펩타이드를 포괄하는 것으로 의도된다. 예를 들어, 말단 카복실산 대신에 아미드기로 구성된 아미노산 사슬은 표준 아미노산을 지정하는 아미노산 서열에 의해 포괄되는 것으로 의도된다.

일부 구현예에 따르면, 본 명세서에 개시된 펩타이드는 적어도 하나의 아미노산 잔기 상의 접합에 의해 변형될 수 있다. 이와 관련하여, 예시적인 양태에서의 펩타이드는 본 명세서에서 기재된 바와 같이, 이종성 모이어티에 접합된 서열번호: 1, 3-41, 43-76, 및 79-293, 310-315, 319-323 및 354-377 중 임의의 하나의 서열을 포함한다.

펩타이드 유사체

본 개시내용은 provide 펩타이드 유사체, 예컨대, 비제한적으로, 펩타이드모사체 화합물을 제공되고, 이는 향상된 안정성 및 세포 투과도 특성을 가질 수 있다. 예시적인 구현예에서, 펩타이드모사체 화합물은 서열번호: 1, 3-41, 43-76, 및 79-293, 310-315, 319-323 및 354-377 중 임의의 하나에 따른 서열을 포함하고, 펩타이드 내의 더 많은 펩타이드 결합 (-CO-NH-) 중 하나는, 예를 들어, N-메틸화된 아미드 결합 (-N(CH3)-CO-), 에스테르 결합 (-C(=0)-0-), 케토메틸렌 결합 (-CO-CH₂-), 설피닐메틸렌 결합 (-S(=0)-CH₂-), α-아자 결합 (-NH-N(R)-CO-) (여기서 R은 임의의 알킬 (예를 들어, 메틸), 아민 결합 (-CH₂-NH-), 설파이드 결합 (-CH₂-S-), 에틸렌 결합 (-CH₂-CH₂-), 하이드록시에틸렌 결합 (-CH(OH)-CH₂-), 티오아미드 결합 (-CS-NH-), 올레핀성 이중 결합 (-CH=CH-), 플루오르화된 올레핀성 이중 결합 (-CF=CH-), 또는 레트로 아미드 결합 (-NH-CO-)임), 펩타이드 유도체 (-N(R^x)-CH₂-CO-) (애기서 R^x는 탄소 원자 상에 천연적으로 존재하는 "노르말" 측쇄임)에 의해 치환된다. 이들 변형은 펩타이드 사슬을 따르느느 결합 중 임의의 것에서 그리고, 동시에 심지어 몇 개 (2-3개의) 결합에서 발생할 수 있다.

예시적인 양태에서, 펩타이드 유사체는 펩타이드모사체. 펩타이드모사체 뿐만 아니라 이를 제조하는 방법은 당해 기술에 공지되어 있다. 참고, 예를 들어, dvances in Amino Acid Mimetics and Peptidomimetics, Volumes 1 and 2, ed., bell, ., JAI Press Inc., Greenwich, CT, 2006. 예시적인 양태에서, 펩타이드모사체는 D-이성질체 아미노산을 포함하는 D-펩타이드 펩타이드모사체이다. 예시적인 양태에서, 펩타이드모사체는, 아미노산의 측쇄가 펩타이드 백본의 알파 질소 원자에 연결된 펩토이드이다. 펩토이드를 제조하는 방법은 당해 기술에 공지되어 있다. 참고, 예를 들어, Zuckermann 등, JACS 114(26): 10646-10647 (1992) and Design, Synthesis, nd Evaluation of Novel Peptoids, Fowler, Sarah, University of Wisconsin-Madison, 2008. 일부 양태에서, 펩타이드모사체는 알파 탄소보다는 오히려 β-탄소에 결합된 그것의 아미노기를 갖는 β 아미노산를 포함하는 β-펩타이드 이다. β-펩타이드를 제조하는 방법은 당해 기술에 공지되어 있다. 참고, 예를 들어, Seebach 등, Helvetica Chimica Acta 79(4): 913-941 (1996).

콘주게이트

본 개시내용은 추가로, 이종성 모이어티에 접합된, 연결된, 브릿징된, 인접된, 또는 결합된 본 명세서에 기재된 펩타이드 또는 펩타이드 유사체를 제공한다. 따라서, 본 개시내용은 본 명세서에 기재된 펩타이드 또는 펩타이드 유사체 및 이종성 모이어티 중 하나 이상을 포함하는 콘주게이트를 포함한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "이종성 모이어티"는 용어 "콘주게이트 모이어티"와 동의어이고 본 명세서에 기재된 펩타이드와 상이한 임의의 분자 (화학적 또는 생화학적, 자연 발생 또는 비-코딩된)를 지칭한다. 본 명세서에 기재된 펩타이드 또는 펩타이드 유사체 중 임의의 것에 연결될 수 있는 예시적인 콘주게이트 모이어티는, 비제한적으로 이종성 펩타이드 또는 폴리펩타이드 (예를 들어, 혈장 단백질 포함), 표적 치료제, 면역글로불린 또는 이의 부분 (예를 들어, 가변 영역, CDR, 또는 Fc 영역), 진단 표지 예컨대 방사선동위원소, 형광단 또는 효소적 표지, 수용성 폴리머를 포함하는 폴리머, 또는 다른 치료제 또는 진단제를 포함한다. 일부 구현예에서, 펩타이드 및 혈장 단백질을 포함하는 콘주게이트가 제공되고, 상기 혈장 단백질은 알부민, 트랜스페린, 피브리노겐 및 글로불린으로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 콘주게이트의 혈장 단백질 모이어티는 알부민 또는 트랜스페린이다.

콘주게이트는 일부 구현예에서 본 명세서에 기재된 펩타이드 또는 펩타이드 유사체 중 하나 이상 및 하기 중 하나 이상을 포함한다: 상이한 펩타이드 (이는 본 명세서에 기재된 펩타이드와 구별됨), 폴리펩타이드, 핵산 분자, 항체 또는 이의 단편, 폴리머, 양자점, 소분자, 독소, 진단제, 탄수화물, 또는 아미노산.

일부 구현예에서, 이종성 모이어티는 폴리머이다. 일부 구현예에서, 폴리머는 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: 폴리아미드, 폴리카보네이트, 폴리알킬렌 및 이의 유도체 (폴리알킬렌 글리콜, 폴리알킬렌 옥사이드, 폴리알킬렌 테레프탈레이트 포함), 아크릴과 메타크릴 에스테르의 폴리머 (폴리(메틸 메타크릴레이트), 폴리(에틸 메타크릴레이트), 폴리(부틸메타크릴레이트), 폴리(이소부틸 메타크릴레이트), 폴리(헥실메타크릴레이트), 폴리(이소데실 메타크릴레이트), 폴리(라우릴 메타크릴레이트), 폴리(페닐 메타크릴레이트), 폴리(메틸 아크릴레이트), 폴리(이소프로필 아크릴레이트), 폴리(이소부틸 아크릴레이트), 및 폴리(옥타데실 아크릴레이트) 포함), 폴리비닐 폴리머 (폴리비닐 알코올, 폴리비닐 에테르, 폴리비닐 에스테르, 폴리비닐 할라이드, 폴리(비닐 아세테이트), 및 폴리비닐피롤리돈, 폴리글라이콜라이드, 폴리실록산, 폴리우레탄 및 이의 공중합체), 셀룰로스 (알킬 셀룰로스, 하이드록시알킬 셀룰로스, 셀룰로스 에테르, 셀룰로스 에스테르, 니트로 셀룰로스, 메틸 셀룰로스, 에틸 셀룰로스, 하이드록시프로필 셀룰로스, 하이드록시-프로필 메틸 셀룰로스, 하이드록시부틸 메틸 셀룰로스, 셀룰로스 아세테이트, 셀룰로스 프로피오네이트, 셀룰로스 아세테이트 부티레이트, 셀룰로스 아세테이트 프탈레이트, 카복실에틸 셀룰로스, 셀룰로스 트리아세테이트, 및 셀룰로스 설페이트 나트륨 염 포함), 폴리프로필렌, 폴리(에틸렌 글리콜), 폴리(에틸렌 옥사이드), 및 폴리(에틸렌 테레프탈레이트)를 포함하는 폴리에틸렌, 및 폴리스티렌. 일부 양태에서, 폴리머는 합성 생분해성 폴리머 (예를 들어, 락트산과 글라이콜산의 폴리머, 폴리무수물, 폴리(오르토)에스테르, 폴리우레탄, 폴리(부트산), 폴리(발레르산), 및 폴리(락타이드-코카프로락톤)), 및 천연 생분해성 폴리머 (예를 들어, 알기네이트 및 덱스트란 및 셀룰로스를 포함하는 다른 다당류, 콜라겐, 그의 화학 유도체 (치환, 화학기, 예를 들어, 알킬, 알킬렌의 첨가, 하이드록실화, 산화, 및 당해 분야의 숙련가에 의해 일상적으로 행해진 다른 변형), 알부민 및 다른 친수성 단백질 (예를 들어, 제인 및 다른 프롤라민 및 소수성 단백질))을 포함하는 생분해성 폴리머, 뿐만 아니라 임의의 공중합체 또는 이들의 혼합물이다. 일반적으로, 이들 물질은 효소적 가수분해 또는 표면 또는 벌크 침식에 의한 생체내 물에 대한 노출에 의해 분해된다. 일부 양태에서, 폴리머는 셍체접착성 중합체, 예컨대 H. S. Sawhney, C. P. Pathak 및 J. A. Hubbell in Macromolecules, 1993, 26, 581-587(이의 교시는 본 명세서에 편입되어 있음)에 의해 기재된 생체붕괴성 하이드로겔, 폴리하이알루론산, 카세인, 젤라틴, 글루틴, 폴리무수물, 폴리아크릴산, 알기네이트, 키토산, 폴리(메틸 메타크릴레이트), 폴리(에틸 메타크릴레이트), 폴리(부틸메타크릴레이트), 폴리(이소부틸 메타크릴레이트), 폴리(헥실메타크릴레이트), 폴리(이소데실 메타크릴레이트), 폴리(라우릴 메타크릴레이트), 폴리(페닐 메타크릴레이트), 폴리(메틸 아크릴레이트), 폴리(이소프로필 아크릴레이트), 폴리(이소부틸 아크릴레이트), 및 폴리(옥타데실 아크릴레이트)이다.

일부 구현예에서, 폴리머는 수용성 폴리머 또는 친수성 폴리머이다. 친수성 폴리머는 "친수성 모이어티" 하에서 본 명세서에서 추가로 기재된다. 적합한 수용성 폴리머는 당해 기술에 공지되어 있고, 예를 들어, 하기를 포함한다: 폴리비닐피롤리돈, 하이드록시프로필 셀룰로스 (HPC; 클루셀), 하이드록시프로필 메틸셀룰로스 (HPMC; 메토셀), 니트로셀룰로스, 하이드록시프로필 에틸셀룰로스, 하이드록시프로필 부틸셀룰로스, 하이드록시프로필 펜틸셀룰로스, 메틸 셀룰로스, 에틸셀룰로스 (Ethocel), 하이드록시에틸 셀룰로스, 다양한 알킬 셀룰로스 및 하이드록시알킬 셀룰로스, 다양한 셀룰로스 에테르, 셀룰로스 아세테이트, 카복시메틸 셀룰로스, 나트륨 카복시메틸 셀룰로스, 칼슘 카복시메틸 셀룰로스, 비닐 아세테이트/크로톤산 공중합체, 폴리-하이드록시알킬 메타크릴레이트, 하이드록시메틸 메타크릴레이트, 메타크릴산 공중합체, 폴리메타크릴산, 폴리메틸메타크릴레이트, 말레산 무수물/메틸 비닐 에테르 공중합체, 폴리 비닐 알코올, 나트륨 및 칼슘 폴리아크릴산, 폴리아크릴산, 산성 카복시 폴리머, 카복시폴리메틸렌, 카복시비닐 폴리머, 폴리옥시에틸렌 폴리옥시프로필렌 공중합체, 폴리메틸비닐에테르 코-말레산 무수물, 카복시메틸아미드, 칼륨 메타크릴레이트 디비닐벤젠 공중합체, 폴리옥시에틸렌글리콜, 폴리에틸렌 옥사이드, 및 유도체, 염, 및 이들의 조합. 특정 구현예에서, 폴리머는, 예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)를 포함하는 폴리알킬렌 글리콜이다.

일부 구현예에서, 이종성 모이어티는 탄수화물. 일부 구현예에서, 탄수화물은 단당류 (예를 들어, 글루코스, 갈락토스, 푸룩토스), 이당류 (예를 들어, 수크로스, 락토스, 말토스), 올리고당 (예를 들어, 라피노오스, 스타키오스), 다당류 (a 전분, 아밀라아제, 아밀로펙틴, 셀룰로스, 키틴, 칼로스, 라미나린, 자일란, 만난, 푸코이단, 또는 갈락토만난이다.

일부 구현예에서, 이종성 모이어티는 지질이다. 지질은, 일부 구현예에서, 지방산, 에이코사노이드, 프로스타글란딘, 류코트리엔, 트롬복산, N-아실 에탄올아민), 글리세롤지질 (예를 들어, 모노-, 디-, 3-치환된 글리세롤), 글리세로인지질 (예를 들어, 포스파티딜콜린, 포스파티딜이노시톨, 포스파티딜에탄올아민, 포스파티딜세린), 스핑고지질 (예를 들어, 스핑고신, 세라미드), 스테롤 지질 (예를 들어, 스테로이드, 콜레스테롤), 프레놀 지질, 사카로리피드, 또는 폴리케타이드, 오일, 왁스, 콜레스테롤, 스테롤, 지방-가용성 비타민, 모노글리세라이드, 디글리세라이드, 트리글리세라이드, 또는 인지질이다.

일부 구현예에서, 이종성 모이어티는 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체에 대한 비-공유 또는 공유결합을 통해 부착된다. 특정 양태에서, 이종성 모이어티는 링커를 통해 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체에 부착된다. 연결은 공유 화학 결합, 물리력 예컨대 정전, 수소, 이온성, 반데르발스, 또는 소수성 또는 친수성 상호작용에 의해 달성될 수 있다. 바이오틴-아비딘, 리간드/수용체, 효소/기질, 핵산/핵산 결합 단백질, 지질/지질 결합 단백질, 세포 접착 분자 파트너; 또는 서로에 대해 친화성을 갖는 임의의 결합 파트너 또는 이의 단편을 포함하는 다양한 비-공유결합 시스템이 사용될 수 있다. 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 일부 구현예에서, 유사체의 표적화된 아미노산 잔기를, 이들 표적화된 아미노산의 선택된 측쇄 또는 N- 또는 C-말단 잔기와 반응할 수 있는 유기 유도화제와 반응시킴으로써 직접적인 공유결합을 통해 모이어티를 접합시키기 위해 연결된다. 유사체 또는 콘주게이트 모이어티에 대한 반응성 기는, 예를 들어, 알데하이드, 아미노, 에스테르, 티올, α-할로아세틸, 말레이미도 또는 히드라지노 기를 포함한다. 유도화제는, 예를 들어, 말레이미도벤조일 설포석신이미드 에스테르 (시스테인 잔기를 통합 접합), N-하이드록시석신이미드 (라이신 잔기를 통해), 글루타르알데하이드, 석신산 무수물 또는 당업계에서 공지된 다른 제제를 포함한다. 대안적으로, 콘주게이트 모이어티는 중간체 캐리어, 예컨대 다당류 또는 폴리펩타이드 캐리어를 통해 간접적으로 유사체에 연결될 수 있다. 다당류 캐리어의 예는 아미노덱스트란을 포함한다. 적합한 폴리펩타이드 캐리어의 예는 수득한 장입된 담체에 대한 바람직한 용해도 특성을 부여하기 위해 폴리라이신, 폴리글루탐산, 폴리아스파르트산, 이의 공중합체, 및 이들 아미노산 및 기타, 예를 들어, 세린의 혼합된 폴리머를 포함한다. 시스테이닐 잔기는 가장 통상적으로 α-할로아세테이트 (및 상응하는 아민), 예컨대 클로로아세트산, 클로로아세트아미드와 반응하여 카복시메틸 또는 카복시아미도메틸 유도체를 얻는다. 시스테이닐 잔기는 또한 브로모트리플루오로아세톤, 알파-브로모-β-(5-이미도조일)프로피온산, 클로로아세틸 포스페이트, N-알킬말레이미드, 3-니트로-2-피리딜 디설파이드, 메틸 2-피리딜 디설파이드, p-클로로메르큐리벤조에이트, 2-클로로메르큐리-4-니트로페놀, 또는 클로로-7-니트로벤조-2-옥사-1,3-디아졸 과의 반응에 의해 유도될 수 있다. 히스티딜 잔기가 pH 5.5-7.0에서 디에틸파이로카보네이트와의 반응에 의해 유도될 수 있는 것은, 이러한 제제가 히스티딜 측쇄에 대해 상대적으로 특이적이기 때문이다. 파라-브로모펜아실브로마이드가 또한 유용하고; 상기 반응은 바람직하게는 pH 6.0에서 0.1 M 나트륨 카코딜레이트에서 수행된다. 라이시닐 및 아미노-말단 잔기는 석신산 또는 다른 카복실산 무수물과 반응될 수 있다. 이들 제제들에 의한 유도체화는 라이시닐 잔기의 전하를 역전시키는 효과를 갖는다. 알파-아미노-함유 잔기를 유도체화하기 위한 다른 적합한 시약은 이미도에스테르 예컨대 메틸 피콜린이미데이트, 피리독살 포스페이트, 피리독살, 클로로보로하이드라이드, 트리니트로벤젠설폰산, O-메틸이소우레아, 2,4-펜탄디온, 및 글리옥실레이트와의 아미노전이효소-촉매 반응을 포함한다. 아르기닐 잔기는 1개 또는 몇 개의 종래의 시약, 예컨대 페닐글리옥살, 2,3-부탄디온, 1,2-사이클로헥산디온, 및 닌히드린 과의 반응에 의해 변형될 수 있다. 아르기닌 잔기의 유도체화는, 반응이 구아니딘 작용기의 높은 pKa 때문에 알칼리성 조건에서 수행되는 것이 요구된다. 게다가, 이들 시약은 라이신의 기 뿐만 아니라 아르기닌 엡실론-아미노기와 반응될 수 있다. 티로실 잔기의 특정 변형은 방향족 디아조늄 화합물 또는 테트라니트로메탄과의 반응에 의해 스펙트럼 라벨을 티로실 잔기로 도입하는 특정 관심과 함께 행해질 수 있다. 가장 통상적으로, N-아세틸이미디졸 및 테트라니트로메탄이 사용되어 O-아세틸 티로실 종 및 3-니트로 유도체, 각각을 형성한다. 카복실 측면 기 (아스파르틸 또는 글루타밀)는 카보디이미드 (R―N〓C〓N―R′) (여기서 R 및 R′는 상이한 알킬기임), 예컨대 1-사이클로헥실-3-(2-모폴리닐-4-에틸) 카보디이미드 또는 1-에틸-3-(4-아조니아-4,4-디메틸펜틸) 카보디이미드와의 반응에 의해 선택적으로 변형될 수 있다. 게다가, 아스파르틸 및 글루타밀 잔기는 암모늄 이온과의 반응에 의해 아스파르기닐 및 글루타미닐 잔기로 전환될 수 있다. 다른 변형은 프롤린 및 라이신의 하이드록실화, 세릴 또는 트레오닐 잔기의 하이드록실기의 인산화, 라이신, 아르기닌, 및 히스티딘 측쇄의 알파-아미노기의 메틸화 (T. E. Creighton, Proteins: Structure and Molecular Properties, W.H. Freeman & Co., San Francisco, pp. 79-86 (1983)), 아스파라긴 또는 글루타민의 탈아미드화, N-말단 아민의 아세필화, 및/또는 C-말단 카복실산성 기의 아미드화 또는 에스테르화를 포함한다. 또 다른 유형의 공유 변형은 글리코사이드를 펩타이드 또는 펩타이드 유사체에 화학적으로 또는 효소적으로 커플링시키는 것을 수반한다. 당(들)는 하기에 부착될 수 있다: (a) 아르기닌 및 히스티딘, (b) 유리 카복실기, (c) 유리 설프하이드릴기 예컨대 시스테인의 것, (d) 유리 하이드록실기 예컨대 세린, 트레오닌, 또는 하이드록시프롤린의 것, (e) 방향성 잔기 예컨대 티로신, 또는 트립토판의 잔기, 또는 (f) 글루타민의 아미드기. 이들 방법은 하기에 기재되어 있다: WO87/05330 공개된 11 Sep. 1987, 및 Aplin and Wriston, CRC Crit. Rev. Biochem., pp. 259-306 (1981). 일부 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 펩타이드의 아미노산의 측쇄와 이종성 모이어티 사이의 공유결합을 통해 이종성 모이어티에 접합된다. 일부 양태에서, 이종성 모이어티에 공유결합된 아미노산 (예를 들어, 이종성 모이어티를 포함하는 아미노산)는 Cys, Lys, Orn, 호모-Cys, 또는 Ac-Phe이고, 그리고 아미노산의 측쇄는 이종성 모이어티에 공유결합된다. 일부 구현예에서, 콘주게이트는 펩타이드 또는 펩타이드 유사체를 이종성 모이어티에 연결하는 링커를 포함한다. 일부 양태에서, 링커는 원자 1 내지 약 60, 또는 1 내지 30 초과 개의 원자, 2 내지 5 원자, 2 내지 10개의 원자, 5 내지 10개의 원자, 또는 10 내지 20개의 원자의 길이의 사슬을 포함한다. 일부 구현예에서, 사슬 원자는 모든 탄소 원자일 수 있다. 일부 구현예에서, 링커의 백본 중 사슬 원자는 C, O, N, 및 S 로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다. 사슬 원자 및 링커는 더 많은 가용성 콘주게이트를 제공하도록 그것의 기대된 용해도 (친수성)에 따라 선택될 수 있다. 일부 구현예에서, 링커는 효소 또는 다른 촉매에 의한 절단 또는 상기 표적 조직 또는 장기 또는 세포에서 발견되는 가수분해 조건을 받은 작용기를 제공한다. 일부 구현예에서, 링커의 길이는 입체 장애에 대한 잠재력을 충분히 감소시킬 정도로 길다. 링커가 공유결합 또는 펩티딜 결합이고 콘주게이트가 폴리펩타이드이면, 전체 콘주게이트 융합 단백질일 수 있다. 그와 같은 펩티딜 링커는 임의의 길이일 수 있다. 예시적인 링커는 약 1 내지 50 개 길이의 아미노산, 5 내지 50, 3 내지 5, 5 내지 10, 5 내지 15, 또는 10 내지 30 개 길이의 아미노산일 수 있다. 그와 같은 융합 단백질은 당해 분야의 숙련가에게 공지된 재조합 유전공학 방법에 의해 대안적으로 생산될 수 있다.

예시적인 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 휴마닌의 비-자연 발생 유사체에 접합된다. 예시적인 양태에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 S화살포G 치환을 갖는 휴마닌의 17-mer 절단된 유사체인 휴마닌 유사체, HNG17에 N- 또는 C-말단에서 접합된다. 예시적인 양태에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 S화살포G 치환을 갖는 휴마닌의 24-mer 절단된 유사체인 휴마닌 유사체, HNG 에 N- 또는 C-말단에서 접합된다. 휴마닌 유사체에 연결된 펩타이드 또는 펩타이드 유사체를 포함하는 콘주게이트는 서열번호: 98-102 로서 본 개시내용에 의해 제공된다.

일부 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 면역글로불린 또는 이의 부분 (예를 들어, 가변 영역, CDR, 또는 Fc 영역) 에 접합, 예를 들어, 융합될 수 있다. 공지된 유형의 면역글로불린 (Ig)는 IgG, IgA, IgE, IgD 또는 IgM을 포함한다. Fc 영역은 Ig 중쇄의 C-말단 영역이되, 이 영역은 활성 예컨대 (지속된 반감기를 초래하는) 재순환을 수행하는 Fc 수용체 에 대한 결합, 항체 의존적 세포-매개된 세포독성 (ADCC), 및 보체 의존적 세포독성 (CDC)에 책임이 있다. 예를 들어, 일부 정의에 따르면, the 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 Cys226으로부터 중쇄의 C-말단으로 신장된다. "힌지 영역"은 일반적으로 인간 IgG1의 Glu216로부터 Pro230로 연장된다 (다른 IgG 아이소타입의 힌지 영역은 시스테인 결합에 관여된 시스테인을 정렬함으로써 IgG1 서열과 정렬될 수 있다). IgG의 Fc 영역은 2개의 불변 도메인, CH2 및 CH3을 포함한다. 인간 IgG Fc 영역의 CH2 도메인은 일반적으로 아미노산 231로부터 아미노산 341로 연장된다. 인간 IgG Fc 영역의 CH3 도메인은 일반적으로 아미노산 342로부터 447로 연장될 수 있다. 면역글로불린 또는 면역글로불린 단편, 또는 영역 모두의 아미노산 넘버링에 대한 언급은 하기를 기반으로 한다: Kabat 등 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Department of Public Health, Bethesda, Md. 관련 구현예에서, Fc 영역은 CH1 이외의, 면역글로불린 중쇄로부터의 하나 이상의 천연 또는 변형된 불변 영역, 예를 들어, IgG 및 IgA의 CH2 및 CH3 영역, 또는 IgE의 CH3 및 CH4 영역을 포함할 수 있다. 적합한 콘주게이트 모이어티는 FcRn 결합 부위를 포함하는 면역글로불린 서열의 부분을 포함한다. FcRn, 회수 수용체는, 재순환 면역글로불린을 재순환시키고 혈액의 순환으로 되돌리는데 책임이 있다. FcRn 수용체에 결합하는 IgG의 Fc 부분의 영역은 X-선 결정학을 기반으로 기재되었다 (Burmeister 등 1994, Nature 372:379). FcRn을 갖는 Fc의 주요 접촉 영역은 CH2 및 CH3 도메인의 접합부 근처에 있다. Fc-FcRn 접촉 모두는 단일 Ig 중쇄 내에 있다. 주요 접촉 부위는 CH2 도메인의 아미노산 잔기 248, 250-257, 272, 285, 288, 290-291, 308-311, 및 314 및 CH3 도메인의 아미노산 잔기 385-387, 428, 및 433-436을 포함한다. 일부 콘주게이트 모이어티는 FcγR 결합 부위(들)을 포함하거나 포함하지 않을 수 있다. FcγR는 ADCC 및 CDC 에 책임이 있다. FcγR과 직접 접촉하는 Fc 영역 내의 위치의 예는 아미노산 234-239 (하부 힌지 영역), 아미노산 265-269 (B/C 루프), 아미노산 297-299 (C′/E 루프), 및 아미노산 327-332 (F/G) 루프 (Sondermann 등, Nature 406: 267-273, 2000). IgE의 하부 힌지 영역은 또한 been FcRI 결합을 갖거나 그것과 연루되었다 (Henry, 등, Biochemistry 36, 15568-15578, 1997). IgA 수용체 결합에 관여된 잔기는 Lewis 등, (J Immunol. 175:6694-701, 2005)에 기재되어 있다. IgE 수용체 결합에 관여된 아미노산 잔기는 Sayers 등 (J Biol Chem. 279(34):35320-5, 2004)에 기재되어 있다. 아미노산 변형은 면역글로불린의 Fc 영역에 대해 행해질 수 있다. 그와 같은 변이체 Fc 영역은 Fc 영역 (잔기 342-447)의 CH3 도메인 에서의 적어도 하나의 아미노산 변형 및/또는 Fc 영역 (잔기 231-341)의 CH2 도메인 에서의 적어도 하나의 아미노산 변형을 포함한다. FcRn에 대한 증가된 친화성을 부여하는 것을 믿는 돌연변이는 T256A, T307A, E380A, 및 N434A를 포함한다 (Shields 등 2001, J. Biol. Chem. 276:6591). 다른 돌연변이는 FcRn에 대한 상당한 감소 친화성 없이 Fc 영역의 FcγRI, FcγRIIA, FcγRIIB, 및/또는 FcγRIIIA에의 결합을 감소시킬 수 있다. 예를 들어, Ala 또는 또 다른 아미노산에 의한 Fc 영역의 위치 297에 있는 Asn의 치환은 고도로 보존된 N-당화 부위를 제거하고 Fc 영역의 수반되는 지속된 반감기를 갖는 감소된 면역원성, 뿐만 아니라 FcγRs에 대한 감소된 결합을 초래할 수 있다 (Routledge 등 1995, Transplantation 60:847; Friend 등 1999, Transplantation 68:1632; Shields 등 1995, J. Biol. Chem. 276:6591). FcγRs에 대한 결합을 감소시키는, IgG1의 위치 233-236에서의 아미노산 변형이 행해졌다 (Ward 및 Ghetie 1995, Therapeutic Immunology 2:77 및 Armour 등 1999, Eur. J. Immunol. 29:2613). 일부 예시적인 아미노산 치환은 하기에서 기재되어 있다: U.S. 특허 번호 7,355,008 및 7,381,408(이들 각각은 전체적으로 본 명세서에 편입되어 있음). 특정 구현예에서, 본 명세서에 기재된 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 면역글로불린 분자 내의 루프 영역에 삽입된다. 다른 구현예에서, 본 명세서에 기재된 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 면역글로불린 분자 내의 루프 영역의 하나 이상의 아미노산을 대체한다.

본 명세서에 기재된 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 생리적 pH에서 수용액 중 그것의 용해도 및 안정성을 향상시키기 위해 추가로 변형될 수 있고, 한편 생물학적 활성을 유지한다. 친수성 모이어티 예컨대 PEG 기는 단백질을 활성화된 폴리머 분자와 반응시키기 위해 사용된 임의의 적당한 조건 하에서 유사체에 부착될 수 있다. 당업계에서 공지된 임의의 수단은 아실화, 환원 알킬화, 마이클 첨가, 티올 알킬화 또는 상기 표적 화합물에 대한 반응성 기 (예를 들어, 알데하이드, 아미노, 에스테르, 티올, α-할로아세틸, 말레이미도 또는 히드라지노 기)에 대한 PEG 모이어티에 대한 반응성 기 (예를 들어, 알데하이드, 아미노, 에스테르, 티올, α-할로아세틸, 말레이미도 또는 히드라지노 기)를 통한 다른 화학선택적 접합/결찰 방법을 통하는 것을 포함하여 사용될 수 있다. 수용성 폴리머를 하나 이상의 단백질에 연결하기 위해 사용될 수 있는 활성화 기는 비제한적으로 하기를 포함한다: 설폰, 말레이미드, 설프하이드릴, 티올, 트리플레이트, 트레실레이트, 아지디린, 옥시란, 5-피리딜, 및 알파-할로겐화된 아실 기 (예를 들어, 알파-아이오도 아세트산, 알파-브로모아세트산, 알파-클로로아세트산). 환원 알킬화에 의해 유사체에 부착되면, 선택된 폴리머는 단일 반응성 알데하이드를 가져야 함으로써, 중합도는 조절된다. 참고, 예를 들어, Kinstler 등, Adv. Drug. Delivery Rev.　54: 477-485 (2002); Roberts 등,　Adv. Drug Delivery Rev.　54: 459-476 (2002); 및 Zalipsky 등,　Adv. Drug Delivery Rev.16: 157-182 (1995). 특정 양태에서, 티올을 가지고 있는 펩타이드 또는 펩타이드 유사체의 아미노산 잔기는 친수성 모이어티 예컨대 PEG로 변형된다. 일부 구현예에서, 티올은 티오에테르 연결을 포함하는 페길화된 유사체를 얻기 위해 마이클 첨가 반응에서 말레이미드-활성화된 PEG로 변형된다. 일부 구현예에서, 티올은 티오에테르 연결을 포함하는 페길화된 유사체를 얻기 위해 친핵성 치환 반응에서 할로아세틸-활성화된 PEG 로 변형된다. 적합한 친수성 모이어티는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), 폴리프로필렌 글리콜, 폴리옥시에틸화된 폴리올 (예를 들어, POG), 폴리옥시에틸화된 소르비톨, 폴리옥시에틸화된 글루코스, 폴리옥시에틸화된 글리세롤 (POG), 폴리옥시알킬렌, 폴리에틸렌 글리콜 프로피온알데하이드, 에틸렌 글리콜/프로필렌 글리콜의 공중합체, 모노메톡시-폴리에틸렌 글리콜, 모노-(C1-C10) 알콕시- 또는 아릴옥시-폴리에틸렌 글리콜, 카복시메틸셀룰로스, 폴리아세탈, 폴리비닐 알코올 (PVA), 폴리비닐 피롤리돈, 폴리-1,3-디옥솔란, 폴리-1,3,6-트리옥산, 에틸렌/말레산 무수물 공중합체, 폴리 (.베타.-아미노산) (단일중합체 또는 랜덤 공중합체), 폴리(n-비닐 피롤리돈)폴리에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜 단일중합체 (PPG) 및 다른 폴리알킬렌 옥사이드, 폴리프로필렌 옥사이드/에틸렌 옥사이드 공중합체, 결장 산 또는 다른 다당류 폴리머, 피콜 또는 덱스트란 및 이들의 혼합물을 포함한다. 덱스트란은 α1-6 연결기에 의해 우세하기 연결된 글루코스 하위단위의 다당류 폴리머 이다. 덱스트란은 많은 분자량 범위, 예를 들어, 약 1 kD 내지 약 100 kD, 또는 약 5, 10, 15 또는 20 kD 내지 약 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80 또는 90 kD로 이용가능하다. 선형 또는 분지형 폴리머가 고려된다. 콘주게이트의 수득한 제제는 본질적으로 단분산 또는 다분산일 수 있는 유사체 당 약 0.5, 0.7, 1, 1.2, 1.5 또는 2개의 폴리머 모이어티를 가질 수 있다.

일부 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 펩타이드 또는 펩타이드 유사체의 아미노산의 측쇄와 친수성 모이어티 사이의 공유결합을 통해 친수성 모이어티에 접합된다. 일부 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 아미노산의 측쇄, C-말단 연장, 또는 C-말단 아미노산 내의 위치, 또는 이들 위치의 조합을 통해 친수성 모이어티에 접합된다. 일부 양태에서, 친수성 모이어티에 공유결합된 아미노산 (예를 들어, 친수성 모이어티를 포함하는 아미노산)는 Cys, Lys, Orn, 호모-Cys, 또는 Ac-Phe이고, 그리고 아미노산의 측쇄는 친수성 모이어티 (예를 들어, PEG) 에 공유결합된다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 콘주게이트는 c 화학적 PEG (예를 들어, 재조합 PEG (rPEG) 분자), 예컨대 국제 특허 출원 공개 번호 WO2009/023270 및 U.S. 특허 출원 공개 번호 US20080286808에 기재된 것들과 유사한 연장된 형태를 형성할 수 있는 부속 유사체에 융합된 펩타이드 또는 펩타이드 유사체를 포함한다. rPEG 분자는 일부 양태에서, 글리신, 세린, 글루탐산, 아스파르트산, 알라닌, 또는 프롤린 중 하나 이상을 포함하는 폴리펩타이드이다. 일부 양태에서, rPEG는 단일중합체, 예를 들어, 폴리-글리신, 폴리-세린, 폴리-글루탐산, 폴리-아스파르트산, 폴리-알라닌, 또는 폴리-프롤린이다. 다른 구현예에서, rPEG는 아미노산 반복된, 예를 들어, 폴리(Gly-Ser), 폴리(Gly-Glu), 폴리(Gly-Ala), 폴리(Gly-Asp), 폴리(Gly-Pro), 폴리(Ser-Glu), 등 중 2개의 유형을 포함한다. 일부 양태에서, rPEG는 3개의 상이한 유형의 아미노산, 예를 들어, 폴리(Gly-Ser-Glu)를 포함한다. 특정 양태에서, rPEG는 펩타이드 또는 펩타이드 유사체의 반감기를 증가시킨다. 일부 양태에서, rPEG는 순 양성 또는 순 음전하를 포함한다. rPEG는 일부 양태에서 2차 구조가 없다. 일부 구현예에서, rPEG는 10개 이상 길이의 아미노산이고, 일부 구현예에서 약 40 내지 약 50 개 길이의 아미노산이다. 부속 펩타이드는 일부 양태에서, 펩타이드 결합 또는 프로테이나제 절단 부위를 통해 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체의 N- 또는 C-말단에 융합되거나 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체의 루프에 삽입된다. rPEG는 일부 양태에서 친화성 tag를 포함하거나 또는 5 kDa 초과인 PEG에 연결된다. 일부 구현예에서, rPEG는 증가된 유체역학적 반경, 혈청 반감기, 프로테아제 내성, 또는 용해도를 갖는 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체를 부여하고 일부 양태에서 감소된 면역원성을 갖는 유사체를 부여한다.

본 명세서에 기재된 접합 중 임의의 것을 선택적으로 갖는, 표 1에서 제시된 서열 (서열번호: 3-293 및 354-377)을 포함하는 펩타이드 또는 펩타이드 유사체가 구현예로서 고려된다.

본 개시내용은 추가로, 호모- 또는 헤테로-다량체 또는 호모- 또는 헤테로-이량체를 포함하는 본 명세서에서 개시된 펩타이드 또는 펩타이드 유사체의 다량체 또는 이량체를 제공한다. 펩타이드 또는 펩타이드 유사체 중 2종 이상은 당해 분야의 숙련가에게 공지된 표준 결합제 및 절차를 사용하여 함께 연결될 수 있다. 예를 들어, 이량체는 특히 시스테인, 라이신 오르니틴, 호모시스테인 또는 아세틸 페닐알라닌 잔기로 치환된 유사체에 대해 이중작용성 티올 가교결합제 및 이작용성 아민 가교결합제의 사용을 통해2개의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체 사이에 형성될 수 있다. 이량체는 동종이량체일 수 잇거나 또는 대안적으로 이종이량체일 수 있다. 특정 구현예에서, 2개 (또는 그 초과 개의) 펩타이드 또는 펩타이드 유사체를 연결하는 링커는 PEG, 예를 들어, 5 kDa PEG, 20 kDa PEG이다. 일부 구현예에서, 링커는 디설파이드 결합이다. 예를 들어, 이량체의 각각의 단량체는 Cys 잔기 (예를 들어, 말단 또는 내부적으로 배치된 Cys)를 포함할 수 있고 각각의 Cys 잔기의 황 원자는 디설파이드 결합의 형성에 참여한다. 일부 양태에서, 단량체는 말단 아미노산 (예를 들어, N-말단 또는 C-말단)을 통해, 내부 아미노산을 통해, 또는 적어도 하나의 단량체의 말단 아미노산 및 적어도 하나의 다른 단량체의 내부 아미노산을 통해 연결될 수 있다. 특정 양태에서, 단량체는 N-말단 아미노산을 통해 연결되지 않는다. 일부 양태에서, 다량체의 단량체는, 각각의 단량체의 C-말단 아미노산이 부착될 수 있는"테일-투-테일" 배향에서 함께 부착될 수 있다.

일부 구현예에 따르면, 본 명세서에 기재된 펩타이드 또는 펩타이드 유사체 중 임의의 것을 포함하는 콘주게이트는 반감기를 연장시키거나 세포 침투를 증가시키기 위해 이종성 모이어티에 접합된다. 예를 들어, 반감기 연장 모이어티는 펩타이드 또는 단백질일 수 있고 콘주게이트는 융합 단백질 또는 키메라성 폴리펩타이드이다. 대안적으로, 반감기 연장 모이어티는 폴리머, 예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜일 수 있다. 본 개시내용은 추가로, 본 명셋에 기재된 펩타이드 및 유사체 중 임의의 것을 포함하는 이량체 및 다량체를 제공한다.

펩타이드의 세포로의 투과도를 활동적으로 또는 수동적으로 촉진하거나 향상시키기 위한 당업계에서 공지된 임의의 이종성 모이어티는 펩타이드 코어와의 접합을 위해 사용될 수 있다. 비제한적인 예는 하기를 포함한다: 소수성 모이어티 예컨대 지방산, 스테로이드 및 큰 부피의 방향족 또는 지방족 화합물; 세포-막 수용체 또는 캐리어를 가질 수 있는 모이어티, 예컨대 스테로이드, 비타민 및 당, 천연 및 비-자연 아미노산 및 수송체 펩타이드. 바람직한 구현예에 따르면, 소수성 모이어티는 지질 모이어티 또는 아미노산 모이어티. 투과도-향상 모이어티는 직접적으로 또는 스페이서 또는 링커를 통해 펩타이드 모이어티의 임의의 위치에, 바람직하게는 펩타이드 모이어티의 아미노 말단에 연결될 수 있다. 소수성 모이어티는 바람직하게는 지질 모이어티 또는 아미노산 모이어티를 포함할 수 있다. 특정 구현예에 따르면 소수성 모이어티는 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: 인지질, 스테로이드, 스핑고신, 세라미드, 옥틸-글리신, 2-사이클로헥실알라닌, 벤졸릴페닐알라닌, 프로피오노일 (C₃); 부타노일 (C₄); 펜타노일 (C₅); 카프로일 (C₆); 헵타노일 (C₇); 카프릴로일 (C₈); 노나노일 (C₉); 카프릴 (C₁₀); 운데카노일 (Cn); 라우로일 (C₁₂); 트리데카노일 (C₁₃); 미리스토일 (C₁₄); 펜타데카노일 (C₁₅); 팔미토일 (C₁₆); 프타노일 ((CH₃)₄); 헵타데카노일 (C₁₆); 스테아로일 (C₁₈); 노나데카노일 (C₁₉); 아라키도일 (C₂₀); 헤네이코사노일 (C₂₁); 베헤노일 (C₂₂); 트루시사노일 (C₂₃); 및 리그로세로일 (C₂₄); 상기 소수성 모이어티는 아미드 결합, 설프하이드릴, 아민, 알코올, 페놀계 기, 또는 탄소-탄소 결합을 갖는 상기 키메라성 폴리펩타이드에 부착된다. 사용될 수 있는 지질 모이어티의 다른 예는 하기를 포함한다: 리포펙타민, 트랜스펙타세, 트랜스펙탐, 사이코펙틴, DMRIE, DLRIE, GAP-DLRIE, DOTAP, DOPE, DMEAP, DODMP, DOPC, DDAB, DOSPA, EDLPC, EDMPC, DPH, TMADPH, CTAB, 라이실-PE, DC-Cho, -알라닐 콜레스테롤; DCGS, DPPES, DCPE, DMAP, DMPE, 개, DOHME, DPEPC, 플루론산, Tween, BRIJ, 플라즈말로겐, 포스파티딜에탄올아민, 포스파티딜콜린, 글리세롤-3-에틸포스파티딜콜린, 디메틸 암모늄 프로판, 트리메틸 암모늄 프로판, 디에틸암모늄 프로판, 트리에틸암모늄 프로판, 디메틸디옥타데실암모늄 브로마이드, 스핑고지질, 스핑고미엘린, 라이소지질, 당지질, 설파타이드, 글리코스핑고지질, 콜레스테롤, 콜레스테롤 에스테르, 콜레스테롤 염, 오일, N-석시닐디올레오일포스파티딜에탄올아민, 1,2-디올레오일-sn-글리세롤, 1,3-디팔미토일-2-석시닐글리세롤, 1,2-디팔미토일-sn-3-석시닐글리세롤, l-헥사데실-2-팔미토일글리세로포스파티딜에탄올아민, 팔미토일호모시스테인, N,N'-비스 (도데실아미노카보닐메틸렌)-N,N'-비스((-N,N,N-트리메틸암모늄에틸-아미노카보닐메틸렌)에틸렌디아민 테트라아이오다이드; N,N"-비스(헥사데실아미노카보닐메틸렌)-N,N', N"-트리스((-N,N,N-트리메틸암모늄-에틸아미노카보닐메틸렌디에틸렌트리 아민 헥사아이오다이드; N,N'- 비스(도데실아미노카보닐메틸렌)-N,N"-비스((-N,N,N-트리메틸암모늄 에틸아미노카보닐메틸렌)사이클로헥실렌-l,4-디아민 테트라아이오다이드; l,7,7-테트라-((-N,N,N,N-테트라메틸암모늄에틸아미노-카보닐메틸렌)-3-헥사데실아미노카보닐-메틸렌-l,3,7-트리아아자헵탄 헵타아이오다이드; N,N,N',N'-테트라((-N,N,N-트리메틸암모늄-에틸아미노카보닐메틸렌)-N'- (1,2-디올레오일글리세로-3-포스포에탄올아미노 카보닐메틸렌)디에틸렌트리아민 테트라아이오다이드; 디올레오일포스파티딜에탄올아민, 지방산, 라이소지질, 포스파티딜콜린, 포스파티딜에탄올아민, 포스파티딜세린, 포스파티딜글리세롤, 포스파티딜이노시톨, 스핑고지질, 당지질, 글루코리피드, 설파타이드, 글리코스핑고지질, 포스파티드산, 팔미트산, 스테아르산, 아라키돈산, 올레산, 폴리머를 보유하는 지질, 설폰화된 당류 보유 지질, 콜레스테롤, 토코페롤 헤미석시네이트, 에테르-연결된 지방산을 갖는 지질, 에스테르-연결된 지방산을 갖는 지질, 중합된 지질, 디아세틸 포스페이트, 스테아릴아민, 카디올리핀, 6-8개의 탄소 길이를 갖는 지방산을 갖는 인지질, 비대칭 아실 사슬을 갖는 인지질, 6-(5-콜레스텐-3b-일옥시)-l-티오-b-D-갈락토피라노시드, di갈락토실디글리세라이드, 6-(5-콜레스텐-3b-일옥시)헥실-6-아미노-6-데옥시-l-티오-b-D-갈락토피라노시드, 6-(5-콜레스텐-3b-일옥시)헥실-6-아미노-6-데옥실-l-티오-a-D-만노피라노시드, 12-(((7'-디에틸아미노-쿠마린-3-일)카보닐)메틸아미노)-옥타데칸산; N-[12-(((7'-디에틸아미노쿠마린-3-일)카보닐)메틸-아미노) 옥타데카노일]-2-아미노팔미트산; 콜레스테릴)4'-트리메틸-암모니오)부타노에이트; N-석시닐디올레오일-포스파티딜에탄올아민; 1,2-디올레오일-sn-글리세롤; 1,2-디팔미토일-3-석시닐-글리세롤; 1,3-디팔미토일-2-석시닐글리세롤, l-헥사데실-2-팔미토일글리세로-포스포에탄올아민, 및 팔미토일호모시스테인.

본 명세서에서 개시된 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 전구약물로서 기능하기 위해 접합을 야기하는 하나 이상의 이종성 모이어티에 접합될 수 있다. 예를 들어, US 특허 번호 8,969,288 및 US 특허 공보 2016/0058881에 기재된 N-아미노산 관련된 모이어티는 본 명세서에서 개시된 펩타이드 또는 펩타이드 유사체에 접합될 수 있고, 그와 같은 콘주게이트는 본 개시내용에 포함된다.

일부 구현예에 따르면 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 (공유적으로 또는 비-공유적으로) 침투제에 부착될 수 있다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이 어구 "침투제"는 세포막을 가로 질러 부착된 펩타이드 중 임의의 것의 전좌를 향상시키는 제제를 지칭한다. 전형적으로, 펩타이드 기반 침투제는 높은 상대 존재비의 양으로 하전된 아미노산 예컨대 라이신 또는 아르기닌을 함유하는 아미노산 조성물을 가지거나, 또는 극성/하전된 아미노산 및 무극성, 소수성 아미노산의 교대 패턴을 함유하는 서열을 갖는다. 비-제한적인 예에 의해, 세포 침투 펩타이드 (CPP) 서열은 세포내 침투를 향상시키기 위해 사용될 수 있다. CPP는 HIV TAT 단백질, 예컨대 예를 들어, YARAAARQARA (서열번호: 324), YGRKKRR (서열번호: 325), YGRKKRRQRRR (서열번호: 326), 또는 RRQRR (서열번호: 327)의 단백질 형질도입 도메인 (PTD)의 짧은 및 긴 버전을 포함할 수 있다. 그러나, 본 개시내용은 제한되지 않고, 임의의 적합한 침투제는 당해 분야의 숙련가에 의해 공지된 바와 같이 사용될 수 있다. 세포 침투를 향상시키는 또 다른 방법은 N-말단 미리스토일화를 통해서이다. 이러한 단백질 변형에서, (미리스트산으로부터 유래된) 미리스토일 기는 아미드 결합을 통해 N-말단 펩타이드 또는 펩타이드 유사체의 아미노산의 알파-아미노기에 공유결합된다.

일부 구현예에 따르면 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 기간 향상 모이어티를 포함하도록 변형된다. 기간 향상 모이어티는 수용성 폴리머, 또는 장쇄 지방족 기일 수 있다. 일부 구현예에서, 복수의 기간 향상 모이어티는 펩타이드 또는 펩타이드 유사체에 부착될 수 있고, 이 경우에 기간 향상 모이어티에 대한 각각의 링커는 본 명세서에 기재된 링커로부터 독립적으로 선택된다.

일부 구현예에 따르면 펩타이드 또는 펩타이드 유사체의 아미노 말단은 변형된다, 예를 들어 아실화된다. 추가의 구현예에 따르면, 카복시 말단는 변형되고, 예를 들어, 아실화, 아미드화, 환원 또는 에스테르화될 수 있다. 일부 구현예에 따르면, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 아실화된 아미노산 (예를 들어, 비-코딩된 아실화된 아미노산 (예를 들어, 자연 발생 아미노산에 대해 비-자연인 아실기를 포함하는 아미노산))을 포함한다. 일 구현예에 따르면, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 순환 중 반감기를 연장시키고/거나 작용의 개시를 지연하고/거나 작용의 기간을 연장하고/거나 프로테아제에 대한 내성을 개선하기 위해 에스테르, 티오에스테르, 또는 아미드 연결을 통해 펩타이드 또는 펩타이드 유사체에 부착된 아실 기를 포함한다. 아실화는 펩타이드 또는 펩타이드 유사체 (예를 들어, C-말단의 아미노산) 내의 임의의 위치에서 수행될 수 있고, 단, 활성은, 향상되지 않으면, 유지된다. 펩타이드는 일부 구현예에서 친수성 모이어티가 연결되는 동일한 아미노산 위치에서, 또는 상이한 아미노산 위치에서 아실화될 수 있다. 아실 기는 스페이서를 통해 펩타이드 또는 펩타이드 유사체의 아미노산에 직접적으로, 또는 펩타이드의 아미노산에 간접적으로 공유결합될 수 있고, 상기 스페이서는 펩타이드의 아미노산과 아실 기 사이에 배치된다.

특정 양태에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 펩타이드의 아미노산의 측쇄의 아민, 하이드록실, 또는 티올의 직접적인 아실화에 의해 아실 기를 포함하도록 변형된다. 이와 관련하여, 아실화된 펩타이드는 아실 기를 포함하도록 변형된 서열번호: 1, 3-41, 43-76, 79-293, 310-315, 319-323 및 354-377 중 임의의 것의 아미노산 서열을 포함할 수 있다.

일부 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 유사체와 아실 기 사이의 스페이서를 포함한다. 일부 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 아실 기에 공유결합되는 스페이서에 공유결합된다. 일부 구현예에서, 스페이서는 측쇄 아민, 하이드록실, 또는 티올을 포함하는 아미노산, 또는 측쇄 아민, 하이드록실, 또는 티올을 포함하는 아미노산을 포함하는 디펩타이드 또는 트리펩타이드이다. 스페이서가 부착된 아미노산은 스페이서에 대한 연결을 허용하는 모이어티를 포함하는 임의의 아미노산 (예를 들어, 단독으로 또는 이중으로 α-치환된 아미노산)일 수 있다. 예를 들어, 측쇄 NH₂, -OH, 또는 -COOH를 포함하는 아미노산 (예를 들어, Lys, Orn, Ser, Asp, 또는 Glu)이 적합하다. 일부 구현예에서, 스페이서는 측쇄 아민, 하이드록실, 또는 티올을 포함하는 아미노산, 또는 측쇄 아민, 하이드록실, 또는 티올을 포함하는 아미노산을 포함하는 디펩타이드 또는 트리펩타이드이다. 아실화가 스페이서의 아민 기를 통해 일어날 때, 아실화는 아미노산의 알파 아민 또는 측쇄 아민를 통해 발생할 수 있다. 알파 아민이 아실화되는 사례에서, 스페이서의 아미노산은 임의의 아미노산일 수 있다. 예를 들어, 스페이서의 아미노산은 소수성 아미노산, 예를 들어, Gly, la, Val, Leu, Ile, Trp, Met, Phe, Tyr, 6-아미노 헥산산, 5-아미노발레르산, 7-아미노헵탄산, 및 8-아미노옥탄산일 수 있다. 대안적으로, 스페이서의 아미노산은 산성 잔기, 예를 들어, Asp, Glu, 호모글루탐산, 호모시스테인산, 시스테인산, 감마-글루탐산일 수 있다. 스페이서의 아미노산의 측쇄 아민이 아실화되는 사례에서, 스페이서의 아미노산은 측쇄 아민을 포함하는 아미노산이다. 이러한 사례에서, 아실화될 스페이서의 아미노산의 알파 아민 및 측쇄 아민 둘 모두에 대해 가능하고, 이로써, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 디아실화된다. 구현예는 그와 같은 디아실화된 분자를 포함한다. 아실화가 스페이서의 하이드록실 기를 통해 일어날 때, 아미노산 또는 디펩타이드 또는 트리펩타이드의 아미노산 중 하나는 Ser일 수 있다. 아실화가 스페이서의 티올기를 통해 일어날 때, 아미노산 또는 디펩타이드 또는 트리펩타이드의 아미노산 중 하나는 Cys일 수 있다. 일부 구현예에서, 스페이서는 친수성 이중작용성 스페이서이다. 특정 구현예에서, 친수성 이중작용성 스페이서는 2 이상의 반응성 기, 예를 들어, 아민, 하이드록실, 티올, 및 카복실기 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 특정 구현예에서, 친수성 이중작용성 스페이서는 하이드록실 기 및 카복실레이트를 포함한다. 다른 구현예에서, 친수성 이중작용성 스페이서는 아민 기 및 카복실레이트를 포함한다. 다른 구현예에서, 친수성 이중작용성 스페이서는 티올 기 및 카복실레이트를 포함한다.

특정 구현예에서, 스페이서는 아미노 폴리(알킬옥시)카복실레이트를 포함한다. 이와 관련하여, 스페이서는, 예를 들어, NH₂(CH₂CH₂O)_n(CH₂)_mCOOH (상기m은 1 내지 6의 임의의 정수이고, n은 2 내지 12의 임의의 정수임), 예를 들어, 8-아미노-3,6-디옥사옥탄산을 포함할 수 있는, 이는 Peptides International, Inc. (Louisville, Ky.)로부터 상업적으로 입수가능하다. 일부 구현예에서, 스페이서는 소수성 이중작용성 스페이서이다. 소수성 이중작용성 스페이서는 당해 기술에 공지되어 있다. 참고, 예를 들어, Bioconjugate Techniques, G. T. Hermanson (Academic Press, San Diego, Calif., 1996) (이는 전체적으로 참고로 편입됨). 특정 구현예에서, 소수성 이중작용성 스페이서는 2 이상의 반응성 기, 예를 들어, 아민, 하이드록실, 티올, 및 카복실기 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 특정 구현예에서, 소수성 이중작용성 스페이서는 하이드록실 기 및 카복실레이트를 포함한다. 다른 구현예에서, 소수성 이중작용성 스페이서는 아민 기 및 카복실레이트를 포함한다. 다른 구현예에서, 소수성 이중작용성 스페이서는 티올 기 및 카복실레이트를 포함한다. 카복실레이트 및 하이드록실 기 또는 티올 기를 포함하는 적합한 소수성 이중작용성 스페이서는 당해 기술에 공지되어 있고, 예를 들어, 8-하이드록시옥탄산 및 8-머캅토옥탄산을 포함한다. 일부 구현예에서, 이중작용성 스페이서는 카복실레이트 기들 사이의 1-7개의 탄소 원자의 비분지형 메틸렌을 포함하는 디카복실산이 아니다. 일부 구현예에서, 이중작용성 스페이서는 카복실레이트 기들 사이의 1-7개의 탄소 원자의 비분지형 메틸렌을 포함하는 디카복실산이다. 스페이서 (예를 들어, 아미노산, 디펩타이드, 트리펩타이드, 친수성 이중작용성 스페이서, 또는 소수성 이중작용성 스페이서)는 특정 구현예에서 3 내지 10개의 원자 (예를 들어, 6 내지 10개의 원자, (예를 들어, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 원자)의 길이이다. 더 많은 특정 구현예에서, 스페이서는 약 3 내지 10개의 원자 (예를 들어, 6 내지 10개의 원자)의 길이이고, 아실 기는 C₁₂ 내지 C₁₈ 지방 아실 기, 예를 들어, C₁₄ 지방 아실 기, C₁₆ 지방 아실 기이고, 이로써, 총 스페이서 및 아실 기의 길이는 14 내지 28개의 원자이고, 예를 들어, 약 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 또는 28개의 원자이다. 일부 구현예에서, 스페이서 및 아실 기의 길이는 17 내지 28 (예를 들어, 19 내지 26, 19 내지 21개의) 원자이다. 전술한 특정 구현예에 따르면, 이중작용성 스페이서는 3 내지 10개의 원자의 길이인 아미노산 백본을 포함하는 합성 또는 자연 발생 아미노산 (본 명세서에서 기재된 것들 중 임의의 것을 비제한적으로 포함함) 일 수 있다 (예를 들어, 6-아미노 헥산산, 5-아미노발레르산, 7-아미노헵탄산, 및 8-아미노옥탄산). 대안적으로, 스페이서는 펩타이드 백본 that는 3 내지 10개의 원자 (예를 들어, 6 내지 10개의 원자)의 길이인 펩타이드 백본을 갖는 디펩타이드 또는 트리펩타이드 스페이서일 수 있다. 각각의 디펩타이드 또는 트리펩타이드의 아미노산 스페이서는 디펩타이드 또는 트리펩타이드의 다른 아미노산(들)과 동일 또는 상이할 수 있고 예를 들어, 자연 발생 아미노산 (Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, Tyr)의 D 또는 L 이성질체, 또는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 비-자연 발생 또는 비-코딩된 아미노산의 임의의 D 또는 L 이성질체 중 임의의 것을 포함하는 자연 발생 또는 코딩된 및/또는 비-코딩된 또는 비-자연 발생 아미노산으로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택될 수 있다: β-알라닌 (β-Ala), N-α-메틸-알라닌 (Me-Ala), 아미노부티르산 (Abu), γ-아미노부티르산 (7-Abu), 아미노헥산산 (ε-Ahx), 아미노이소부티르산 (Aib), 아미노메틸피롤 카복실산, 아미노피페리딘카복실산, 아미노세린 (Ams), 아미노테트라하이드로피란-4-카복실산, 아르기닌 N-메톡시-N-메틸 아미드, β-아스파르트산 (β-Asp), 아제티딘 카복실산, 3-(2-벤조티아졸릴)알라닌, α-tert-부틸글리신, 2-아미노-5-우레이도-n-발레르산 (시트룰린, Cit), β-사이클로헥실알라닌 (Cha), 아세트아미도메틸-시스테인, 디아미노부탄산 (Dab), 디아미노프로피온산 (Dpr), 디하이드록시페닐알라닌 (DOPA), 디메틸티오졸리딘 (DMTA), γ-글루탐산 (γ-Glu), 호모세린 (Hse), 하이드록시프롤린 (Hyp), 이소류신 N-메톡시-N-메틸 아미드, 메틸-이소류신 (MeIle), 이소니페코트산 (Isn), 메틸-류신 (MeLeu), 메틸-라이신, 디메틸-라이신, 트리메틸-라이신, 메타노프롤린, 메티오닌-설폭사이드 (Met(O)), 메티오닌-설폰 (Met(O₂)), 노르류신 (Nle), 메틸-노르류신 (Me-Nle), 노르발린 (Nva), 오르니틴 (Orn), 파라-아미노벤조산 (PABA), 페니실아민 (Pen), 메틸페닐알라닌 (MePhe), 4-클로로페닐알라닌 (Phe(4-Cl)), 4-플루오로페닐알라닌 (Phe(4-F)), 4-니트로페닐알라닌 (Phe(4-NO₂)), 4-시아노페닐알라닌 ((Phe(4-CN)), 페닐글리신 (Phg), 피페리디닐알라닌, 피페리디닐글리신, 3,4-데하이드로프롤린, 피롤리디닐알라닌, 사르코신 (Sar), 셀레시노시스테인 (Sec), O-벤질-포스포세린, 4-아미노-3-하이드록시-6-메틸헵탄산 (Sta), 4-아미노-5-사이클로헥실-3-하이드록시펜탄산 (ACHPA), 4-아미노-3-하이드록시-5-페닐펜탄산 (AHPPA), 1,2,3,4,-테트라하이드로-이소퀴놀린-3-카복실산 (Tic), 테트라하이드로피란글리신, 티에닐알라닌 (Thi), O-벤질-포스포티로신, O-포스포티로신, 메톡시티로신, 에톡시티로신, O-(비스-디메틸아미노-포스포노)-티로신, 티로신 설페이트 테트라부틸아민, 메틸-발린 (MeVal), 및 알킬화된 3-머캅토프로피온산. 일부 구현예에서, 스페이서는 전체적인 음전하를 포함하고, 예를 들어, 1 또는 2개의 음성-하전된 아미노산을 포함한다. 일부 구현예에서, 디펩타이드는 일반적인 구조 A-B의 디펩타이트 중 임의의 것이 아니되, A는 Gly, Gln, la, Arg, Asp, Asn, Ile, Leu, Val, Phe, 및 Pro로 구성된 군으로부터 선택되고, B는 Lys, His, Trp 로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 디펩타이드 스페이서는 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: Ala-Ala, β-Ala-β-Ala, Leu-Leu, Pro-Pro, γ-아미노부티르산-γ-아미노부티르산, Glu-Glu, 및 γ-Glu-γ-Glu.

아민, 하이드록실, 및 티올을 통한 펩타이드 아실화의 적합한 방법은 당해 기술에 공지되어 있다. 참고, 예를 들어, 밀러, Biochem Biophys Res Commun 218: 377-382 (1996); Shimohigashi 및 Stammer, Int J Pept Protein Res 19: 54-62 (1982); 및 Previero 등, Biochim Biophys Acta 263: 7-13 (1972) (하이드록실을 통한 아실화의 방법에 대해); 및 San 및 Silvius, J Pept Res 66: 169-180 (2005) (티올을 통한 아실화 방법에 대해); Bioconjugate Chem. "Chemical Modifications of Proteins: History and Applications" pages 1, 2-12 (1990); Hashimoto 등, Pharmaceutical Res. "Synthesis of Palmitoyl Derivatives of Insulin and their Biological Activity" Vol. 6, No: 2 pp. 171-176 (1989). 아실화된 아미노산의 아실 기는 임의의 크기, 예를 들어, 임의의 길이의 탄소 사슬일 수 있고, 선형 또는 분지형일 수 있다. 일부 특정 구현예에서, 아실 기는 C₄ 내지 C₃₀ 지방산. 예를 들어, 아실 기는 C₄ 지방산, C₆ 지방산, C₈ 지방산, C₁₀ 지방산, C₁₂ 지방산, C₁₄ 지방산, C₁₆ 지방산, C₁₈ 지방산, C₂₀ 지방산, C₂₂ 지방산, C₂₄ 지방산, C₂₆ 지방산, C₂₈ 지방산, 또는 C₃₀ 지방산 중 임의의 것일 수 있다. 일부 구현예에서, 아실 기는 C₈ 내지 C₂₀ 지방산, 예를 들어, C₁₄ 지방산 또는 C₁₆ 지방산이다. 대안적인 구현예에서, 아실 기는 담즙산이다. 담즙산은 콜산, 케노데옥시콜산, 데옥시콜산, 리토콜산, 타우로콜산, 글리코콜산, 및 콜레스테롤 산을 비제한적으로 포함하는 임의의 적합한 담즙산일 수 있다. 일부 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 펩타이드 또는 펩타이드 유사체에 대한 장쇄 알칸의 아실화에 의해 아실화된 아미노산을 포함한다. 특정 양태에서, 장쇄 알칸은 펩타이드 또는 펩타이드 유사체의 카복실기, 또는 이의 활성화된 형태와 반응하는 아민, 하이드록실, 또는 티올 기 (예를 들어, 옥타데실아민, 테트라데칸올, 및 헥사데칸티올)를 포함한다. 펩타이드 또는 펩타이드 유사체의 카복실기, 또는 이의 활성화된 형태는 펩타이드의 아미노산 (예를 들어, 글루탐산, 아스파르트산)의 측쇄의 일부일 수 있거나 또는 유사체 백본의 일부일 수 있다. 특정 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 펩타이드 또는 펩타이드 유사체에 부착된 펩타이드에 의한 장쇄 알칸의 아실화에 의해 아실기를 포함하도록 변형된다. 특정 양태에서, 장쇄 알칸은 스페이서의 카복실기, 또는 이의 활성화된 형태 와 반응하는 아민, 하이드록실, 또는 티올 기를 포함한다. 카복실기, 또는 이의 활성화된 형태를 포함하는 적합한 스페이서는, 본 명세서에 기재되어 있고 예를 들어, 이중작용성 스페이서, 예를 들어, 아미노산, 디펩타이드, 트리펩타이드, 친수성 이중작용성 스페이서 및 소수성 이중작용성 스페이서를 포함한다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이, 카복실기의 용어 "활성화된 형태"는 일반 식 R(C=O)X^a (여기서 X^a는 이탈기이고, 그리고 R은 펩타이드 또는 스페이서임)을 갖는 카복실기를 지칭한다. 예를 들어, 활성화된 형태의 카복실기는, 비제한적으로, 아실 염화물, 무수물, 및 에스테르를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 활성화된 카복실기는 N-하이드록시석신이미드 에스테르 (NHS) 이탈기를 갖는 에스테르이다.

장쇄 알칸이 펩타이드 또는 스페이서에 의해 아실화되는 이들 양태에 관해서, 장쇄 알칸은 임의의 크기일 수 있고, 탄소 사슬의 임의의 길이를 포함할 수 있다. 장쇄 알칸은 선형 또는 분지형일 수 있다. 특정 양태에서, 장쇄 알칸은 C₄ 내지 C₃₀ 알칸이다. 예를 들어, 장쇄 알칸은 C₄ 알칸, C₆ 알칸, C₈ 알칸, C₁₀ 알칸, C₁₂ 알칸, C₁₄ 알칸, C₁₆ 알칸, C₁₈ 알칸, C₂₀ 알칸, C₂₂ 알칸, C₂₄ 알칸, C₂₆ 알칸, C₂₈ 알칸, 또는 C₃₀ 알칸 중 임의의 것일 수 있다. 일부 구현예에서, 장쇄 알칸은 C₈ 내지 C₂₀ 알칸, 예를 들어, C₁₄ 알칸, C₁₆ 알칸, 또는 C₁₈ 알칸을 포함한다.

또한, 일부 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체의 아민, 하이드록실, 또는 티올 기는 콜레스테롤 산으로 아실화된다. 특정 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 알킬화된 데스-아미노 Cys 스페이서, 즉, 알킬화된 3-머캅토프로피온산 스페이서를 통해 콜레스테롤산에 연결된다. 알킬화된 데스-아미노 Cys 스페이서는 be, 예를 들어, 도데카에틸렌 글리콜 모이어티를 포함하는 데스-아미노-Cys 스페이서일 수 있다.

본 명세서에 기재된 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 추가로 친수성 모이어티를 포함하도록 변형될 수 있다. 일부 특정 구현예에서, 친수성 모이어티는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 사슬을 포함할 수 있다. 친수성 모이어티의 편입은 임의의 적당한 수단, 예컨대 본 명세서에서 기재된 방법 중 임의의 것을 통해 달성될 수 있다. 이와 관련하여, 아실화된 펩타이드는 본 명세서에 기재된 변형 중 임의의 것을 포함하는 서열번호: 1, 3-41, 43-76, 및 79-293, 310-315, 319-323 및 354-377 중 임의의 것일 수 있고, 상기 아미노산 중 적어도 하나는 아실 기를 포함하고 아미노산 중 적어도 하나는 친수성 모이어티 (예를 들어, PEG) 에 공유결합된다. 일부 구현예에서, 아실 기는 Cys, Lys, Orn, 호모-Cys, 또는 Ac-Phe를 포함하는 스페이서를 통해 부착되고, 그리고 친수성 모이어티는 Cys 잔기에서 편입된다.

대안적으로, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 스페이서르르 포함할 수 있고, 상기 스페이서는 친수성 모이어티를 포함하도록 아실화 및 변형 둘 모두가 된다. 적합한 스페이서의 비제한적인 예는 Cys, Lys, Orn, 호모-Cys, 및 Ac-Phe 로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산을 포함하는 스페이서를 포함한다.

일부 구현예에 따르면, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 알킬화된 아미노산 (예를 들어, 비-코딩된 알킬화된 아미노산 (예를 들어, 자연 발생 아미노산에 대해 비-자연인 알킬기를 포함하는 아미노산))을 포함한다. 알킬화는 아미노산 위치 중 임의의 것을 비제한적으로 포함하는 아실화의 부위로서 본 명세서에 기재된 위치 중 임의의 것을 포함하는 펩타이드 또는 펩타이드 유사체 내의 임의의 위치에서, C-말단 연장 내의 위치, 또는 C-말단에서 수행될 수 있고, 단, 생물학적 활성은 유지된. 알킬 기는 스페이서를 통해 펩타이드 또는 펩타이드 유사체의 아미노산에 직접적으로, 또는 펩타이드 또는 펩타이드 유사체의 아미노산에 간접적으로 공유결합될 수 있다, 상기 스페이서는 펩타이드의 아미노산 및 알킬 기 사이에 배치된다. 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 친수성 모이어티가 연결되는 동일한 아미노산 위치에서, 또는 상이한 아미노산 위치에서 알킬화될 수 있다. 특정 양태에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 펩타이드의 아미노산의 측쇄의 아민, 하이드록실, 또는 티올의 직접적인 알킬화에 의해 알킬 기르르 포함하도록 변형될 수 있다. 이와 관련하여, 알킬화된 펩타이드는 측쇄 아민, 하이드록실, 또는 티올을 포함하는 임의의 아미노산으로 변형된 아미노산 중 적어도 하나을 갖는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 또 다른 구현예에서, 측쇄 아민, 하이드록실, 또는 티올을 포함하는 아미노산은 이치환된 아미노산이다. 일부 구현예에서, 알킬화된 펩타이드는 펩타이드와 알킬 기 사이의 스페이서를 포함한다. 일부 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는, 알킬 기에 공유결합되는 스페이서에 공유결합된다. 일부 예시적인 구현예에서, 본 펩타이드는, 스페이서가 아미노산의 측쇄에 부착되는 스페이서의 아민, 하이드록실, 또는 티올의 알킬화에 의해 알킬 기를 포함하드록 변형된다. 스페이서가 부착된 아미노산은 스페이서에 대한 연결을 허용하는 모이어티를 포함하는 임의의 아미노산일 수 있다. 예를 들어, 측쇄 NH₂, -OH, 또는 -COOH (예를 들어, Lys, Orn, Ser, Asp, 또는 Glu)를 포함하는 아미노산이 적합하다. 일부 구현예에서, 스페이서는 측쇄 아민, 하이드록실, 또는 티올을 포함하는 아미노산 또는 측쇄 아민, 하이드록실, 또는 티올을 포함하는 아미노산을 포함하는 디펩타이드 또는 트리펩타이드이다. 알킬화가 스페이서의 아민 기를 통해 일어날 때, 알킬화는 아미노산의 알파 아민 또는 측쇄 아민을 통해 일어날 수 있다. 알파 아민이 알킬화된 사례에서, 스페이서의 아미노산은 임의의 아미노산일 수 있다. 예를 들어, 스페이서의 아미노산은 소수성 아미노산, 예를 들어, Gly, la, Val, Leu, Ile, Trp, Met, Phe, Tyr, 6-아미노 헥산산, 5-아미노발레르산, 7-아미노헵탄산, 및 8-아미노옥탄산일 수 있다. 대안적으로, 스페이서의 아미노산은 산성 잔기, 예를 들어, sp 및 Glu일 수 있고, 단, 알킬화는 산성 잔기의 알파 아민 상에서 일어난다. 스페이서의 아미노산의 측쇄 아민이 알킬화되는 사례에서, 스페이서의 아미노산은 측쇄 아민을 포함하는 아미노산, 예를 들어, 식 I의 아미노산 (예를 들어, Lys 또는 Orn)이다. 이러한 사례에서, 스페이서의 아미노산의 알파 아민 및 측쇄 아민 둘 모두는 알킬화될 수 있고, 이로써, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 디알킬화된다. 구현예는 그와 같은 디알킬화된 분자를 포함한다. 알킬화가 스페이서의 하이드록실 기를 통해 일어날 때, 아미노산은 Ser일 수 있다. 알킬화가 스페이서의 티올 기를 통해 일어날 때, 아미노산은 Cys일 수 있다. 일부 구현예에서, 스페이서는 친수성 이중작용성 스페이서이다. 특정 구현예에서, 친수성 이중작용성 스페이서는 2 이상의 반응성 기, 예를 들어, 아민, 하이드록실, 티올, 및 카복실기 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 특정 구현예에서, 친수성 이중작용성 스페이서는 하이드록실 기 및 카복실레이트를 포함한다. 다른 구현예에서, 친수성 이중작용성 스페이서는 아민 기 및 카복실레이트를 포함한다. 다른 구현예에서, 친수성 이중작용성 스페이서는 티올 기 및 카복실레이트를 포함한다. 특정 구현예에서, 스페이서는 아미노 폴리(알킬옥시)카복실레이트를 포함한다. 이와 관련하여, 스페이서는, 예를 들어, NH₂(CH₂CH₂O)_n(CH₂)_mCOOH(여기서 m은 1 내지 6의 임의의 정수이고, n은 2 내지 12의 임의의 정수임), 예를 들어, 8-아미노-3,6-디옥사옥탄산 (이는 Peptides International, Inc. (Louisville, Ky.)로부터 상업적으로 입수가능함)을 포함할 수 있다. 카복실레이트 및 하이드록실 기 또는 티올 기를 포함하는 적합한 소수성 이중작용성 스페이서는 당해 기술에 공지되어 있고, 예를 들어, 8-하이드록시옥탄산 및 8-머캅토옥탄산으르 포함한다. 스페이서 (예를 들어, 아미노산, 디펩타이드, 트리펩타이드, 친수성 이중작용성 스페이서, 또는 소수성 이중작용성 스페이서)는 특정 구현예에서 3 내지 10개의 원자 (예를 들어, 6 내지 10개의 원자, (예를 들어, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 원자))의 길이이다. 더 많은 특정 구현예에서, 스페이서는 약 3 내지 10개의 원자 (예를 들어, 6 내지 10개의 원자)의 길이이고, 알킬은 C₁₂ 내지 C₁₈ 알킬 기, 예를 들어, C₁₄ 알킬 기, C₁₆ 알킬 기이고, 이로써, 총 스페이서 및 알킬의 길이 기는 14 내지 28개의 원자이고, 예를 들어, 약 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 또는 28개의 원자이다. 일부 구현예에서, 스페이서 및 알킬의 길이는 17 내지 28 (예를 들어, 19 내지 26, 19 내지 21)개의 원자이다. 전술한 특정 구현예에 따르면, 이중작용성 스페이서는 3 내지 10개의 원자의 길이를 갖는 아미노산 백본을 포함하는 합성 또는 비-자연 발생 또는 비-코딩된 아미노산 (예를 들어, 6-아미노 헥산산, 5-아미노발레르산, 7-아미노헵탄산, 및 8-아미노옥탄산)일 수 있다. 대안적으로, 스페이서는 3 내지 10개의 원자 (예를 들어, 6 내지 10개의 원자)의 길이인 펩타이드 백본을 갖는 디펩타이드 또는 트리펩타이드 스페이서 일 수 있다. 디펩타이드 또는 트리펩타이드 스페이서는 예를 들어, 본 명세서에 교시된 아미노산 중 임의의 것을 포함하는 자연 발생 또는 코딩된 및/또는 비-코딩된 또는 비-자연 발생 아미노산으로 구성될 수 있다. 일부 구현예에서, 스페이서는 전체 음전하를 포함한다, 예를 들어, 1 또는 2개의 음성-하전된 아미노산을 포함한다. 일부 구현예에서, 디펩타이드 스페이서는 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: Ala-Ala, β-Ala-β-Ala, Leu-Leu, Pro-Pro, γ-아미노부티르산-γ-아미노부티르산, 및 γ-Glu-γ-Glu. 아민, 하이드록실, 및 티올을 통한 펩타이드 알킬화의 적합한 방법은 당해 기술에 공지되어 있다. 예를 들어, 윌리암슨 에테르 합성는 사용되어 펩타이드의 하이드록실 기와 알킬 기 사이의 에스테르 연결을 형성할 수 있다. 또한, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체와 알킬 할라이드와의 친핵성 치환 반응은 에테르, 티오에테르, 또는 아미노 연결 중 임의의 것을 초래할 수 있다. 알킬화된 펩타이드 또는 펩타이드 유사체의 알킬 기는 임의의 크기, 예를 들어, 임의의 길이의 탄소 사슬일 수 있고, 선형 또는 분지형일 수 있다. 일부 구현예에서, 알킬 기는 C₄ 내지 C₃₀ 알킬이다. 예를 들어, 알킬 기는 C₄ 알킬, C₆ 알킬, C₈ 알킬, C₁₀ 알킬, C₁₂ 알킬, C₁₄ 알킬, C₁₆ 알킬, C₁₈ 알킬, C₂₀ 알킬, C₂₂ 알킬, C₂₄ 알킬, C₂₆ 알킬, C₂₈ 알킬, 또는 C₃₀ 알킬 중 임의의 것일 수 있다. 일부 구현예에서, 알킬 기는 C₈ 내지 C₂₀ 알킬, 예를 들어, C₁₄ 알킬 또는 C₁₆ 알킬. 본 개시내용의 일부 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 친핵성, 장쇄 알칸을 펩타이드 또는 펩타이드 유사체와 반응시킴으로써 알킬화된 아미노산을 포함하되, 상기 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 친핵성 치환에 적합한 이탈기를 포함한다. 특정 양태에서, 장쇄 알칼의 친핵성 기는 아민, 하이드록실, 또는 티올 기 (예를 들어, 옥타데실아민, 테트라데칸올, 및 헥사데칸티올)를 포함한다. 펩타이드 또는 펩타이드 유사체의 이탈기는 아미노산의 측쇄의 일부일 수 있거나 또는 펩타이드 백본의 일부일 수 있다. 적합한 이탈기는, 예를 들어, N-하이드록시석신이미드, 할로겐, 및 설포네이트 에스테르를 포함한다. 특정 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 친핵성, 장쇄 알칸을 펩타이드 또는 펩타이드 유사체에 부착된 펩타이드와 반응시킴으로써 알킬 기를 포함하도록 변형되고, 상기 스페이서는 이탈기를 포함한다. 특정 양태에서, 장쇄 알칸은 아민, 하이드록실, 또는 티올 기을 포함한다. 특정 구현예에서, 이탈기를 포함하는 스페이서는 본 명세서에 논의된 임의의 스페이서, 예를 들어, 아미노산, 디펩타이드, 트리펩타이드, 친수성 이중작용성 스페이서 및 소수성 이중작용성 스페이서 (이는 적합한 이탈기를 추가로 포함함)일 수 있다. 장쇄 알칸이 펩타이드 또는 스페이서에 의해 알킬화되는 본 개시내용의 이들 양태에 관해서, 장쇄 알칸은 임의의 크기일 수 있고, 탄소 사슬의 임의의 길이를 포함할 수 있다. 장쇄 알칸은 선형 또는 분지형일 수 있다. 특정 양태에서, 장쇄 알칸은 C₄ 내지 C₃₀ 알칸. 예를 들어, 장쇄 알칸은 C₄ 알칸, C₆ 알칸, C₈ 알칸, C₁₀ 알칸, C₁₂ 알칸, C₁₄ 알칸, C₁₆ 알칸, C₁₈ 알칸, C₂₀ 알칸, C₂₂ 알칸, C₂₄ 알칸, C₂₆ 알칸, C₂₈ 알칸, 또는 C₃₀ 알칸 중 임의의 것일 수 있다. 일부 구현예에서, 장쇄 알칸은 C₈ 내지 C₂₀ 알칸, 예를 들어, C₁₄ 알칸, C₁₆ 알칸, 또는 C₁₈ 알칸을 포함한다. 또한, 일부 구현예에서, 알킬화는 펩타이드와 콜레스테롤 모이어티 사이에서 발생할 수 있다. 예를 들어, 콜레스테롤의 하이드록실 기는 장쇄 알칸에 대한 이탈기를 대체하여 콜레스테롤- 펩타이드 생성물을 형성할 수 있다. 본 명세서에 기재된 알킬화된 펩타이드는 추가로 친수성 모이어티를 포함하도록 변형될 수 있다. 일부 특정 구현예에서, 친수성 모이어티는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 사슬을 포함할 수 있다. 친수성 모이어티의 편입은 임의의 적당한 수단, 예컨대 본 명세서에서 기재된 방법 중 임의의 것을 통해 달성될 수 있다. 대안적으로, 알킬화된 펩타이드는 스페이서를 포함할 수 있되, 상기 스페이서는 친수성 모이어티를 포함하도록 알킬화 및 변형 둘 모두를 행한다. 적합한 스페이서의 비제한적인 예는 Cys, Lys, Orn, 호모-Cys, 및 Ac-Phe 로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산을 포함하는 스페이서를 포함한다.

펩타이드 및 펩타이드 유사체를 제조하는 방법

본 명세서에 개시된 펩타이드 및 펩타이드 유사체는 실시예 1에서 기재된 것들 중 임의의 것을 비제한적으로 포함하는다양한 방식으로 만들어진다. 펩타이드를 드노보(de novo) 합성하는 적합한 방법은, 예를 들어 하기에 기재되어 있다: N. Leo Benoiton, Chemistry of Peptide Synthesis CRC Press, Boca Raton, FL, 2006; Merrifield, J. Am. Chem. Soc, 85, 2149 (1963); Davis 등, Biochem. Intl., 10, 394-414 (1985); Larsen 등, J. Am. Chem. Soc, 115, 6247 (1993); Smith 등, J. Peptide Protein Res., 44, 183 (1994); O'Donnell 등, J. Am. Chem. Soc, 118, 6070 (1996); Stewart and Young, Solid Phase Peptide Synthesis, Freeman (1969); Finn 등, The Proteins, 3 ed., vol. 2, pp. 105-253 (1976); Erickson 등, The Proteins, 3^rd　ed., vol. 2, pp. 257-527 (1976); 및 Chan 등, Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis, Oxford University Press, Oxford, United Kingdom, 2005. 본 개시내용은 합성 펩타이드를 고려한다. 펩타이드를 제조하는 방법은 자체 본 발명의 구현예들이다. 따라서, 본 개시내용은 provide 펩타이드 또는 펩타이드 유사체를 생산하는 방법을 제공한다. 예시적인 구현예에서, 상기 방법은 하기를 포함한다: (i) 제1 아미노산을 제2 아미노산과 접촉시켜 상기 제1 아미노산과 상기 제2 아미노산 사이의 공유결합을 형성하는 단계로서, 상기 제1 아미노산 또는 상기 제2 아미노산이 또 다른 아미노산에 선택적으로 부착되는 단계, 및 (ii) 상기 (i)의 반복 단계를 반복함으로써 상기 펩타이드 또는 펩타이드 유사체가 생산되는 단계. 예시적인 양태에서, 상기 방법은 고체상 합성 단계 중 하나 이상을 포함한다. 예시적인 양태에서, 상기 방법은 실시예 1에 기재된 하나 이상의 단계를 포함한다.

대안적으로, 펩타이드는 펩타이드를 인코딩하는 핵산을 숙주세포에 도입함으로써, 재조합으로 발현될 수 있고, 이는 표준 재조합 방법을 사용하여 펩타이드를 발현시키도록 배양될 수 있다. 참고, 예를 들어, Sambrook 등, Molecular Cloning: A Laboratory Manual. 3rd ed., Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, N.Y. 2001; 및 Ausubel 등, Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates and John Wiley & Sons, N.Y., 1994. 그와 같은 펩타이드는 배양 배지 또는 세포 펠릿으로부터 정제될 수 있다.

일부 구현예에서, 본 개시내용의 펩타이드는 단리될 수 있다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 펩타이드는 정제될 수 있다. "순도"는 상대적인 용어이고 반드시 절대적인 순도 또는 절대적인 강화 또는 절대적인 선택으로 해석되지 않는 것으로 인식된다. 일부 양태에서, 순도는 적어도 또는 약 50%이고, 적어도 또는 약 60%, 적어도 또는 약 70%, 적어도 또는 약 80%, 또는 적어도 또는 약 90% (예를 들어, 적어도 또는 약 91%, 적어도 또는 약 92%, 적어도 또는 약 93%, 적어도 또는 약 94%, 적어도 또는 약 95%, 적어도 또는 약 96%, 적어도 또는 약 97%, 적어도 또는 약 98%, 적어도 또는 약 99%이거나, 대략 100%이다.

일부 구현예에서, 본 명세서에 기재된 펩타이드는 회사, 예컨대 Genscript (Piscataway, NJ), New England Peptide (Gardner, MA), 및 CPC Scientific (Sunnyvale, CA), Peptide Technologies Corp. (Gaithersburg, Md.), 및 다중 펩타이드 시스템 (San Diego, Calif.)에 의해 상업적으로 합성될 수 있다. 이런 점에서, 펩타이드는 합성, 재조합, 단리, 및/또는 정제될 수 있다.

핵산

본 명세서에 기재된 펩타이드 또는 콘주게이트 중 임의의 것 (펩타이드 그것의 유사체 포함)을 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산이 본 명세서에 제공된다. 핵산은 펩타이드, 또는 그것의 유사체, 또는 콘주게이트 중 임의의 것을 인코딩하는 임의의 뉴클레오타이드 서열을 포함할 수 있다.

본 명세서에서 사용된 바와 같은 "핵산"이란, "폴리뉴클레오타이드", "올리고뉴클레오타이드" 및 "핵산 분자"을 포함하고, 그리고 일반적으로 DNA 또는 RNA의 폴리머를 의미하되, 이는 단일가닥 또는 이중-가닥일 수 있고, 천연 공급원으로부터 합성되거나 수득될 수 있고 (예를 들어, 단리되고/거나 정제될 수 있고), 천연, 비-자연 또는 변경된 인터-뉴클레오타이드 연결, 예컨대 포스포로아미데이트 연결 또는 포스포로티오에이트 연결을, 비변형된 올리고뉴클레오타이드의 뉴클레오타이드 사이에 발견되는 포스포디에스테르 대신에 함유할 수 있는 천연, 비-자연 또는 변경된 뉴클레오타이드를 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, 핵산은 임의의 삽입, 결실, 역전, 및/또는 치환을 포함하지 않는다. 다른 구현예에서, 핵산은 하나 이상의 삽입, 결실, 역전, 및/또는 치환을 포함한다.

일부 양태에서, 본 개시내용의 핵산은 재조합이다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "재조합"은 하기를 지칭한다: (i) 천연 또는 합성 핵산 분절을, 살아 있는 세포에서 복제될 수 있는 핵산 분자로 연결함으로써 살아 있는 세포 외부에서 작제되는 분자, 또는 (ii) 상기 (i)에서 기재된 것들의 복제로 인한 분자. 본 명세서의 목적을 위해, 복제는 시험관내 복제 또는 생체내 복제일 수 있다.

핵산은 일부 양태에서, 당업계에서 공지된 절차를 사용하여 화학적 합성 및/또는 효소적 결찰 반응을 기반으로 작제된다. 참고, 예를 들어, Sambrook 등(상동); 및 Ausubel 등(상동). 예를 들어, 핵산은 자연 발생 뉴클레오타이드, 또는 하이브리드화를 기반으로 형성된 듀플렉스 (예를 들어, 포스포로티오에이트 유도체 및 아크리딘 치환된 뉴클레오타이드)의 물리적 안정성을 증가시키기 위해 설계된 다양하게 변형된 뉴클레오타이드를 사용하여 화학적으로 합성될 수 있다. 핵산을 생성하기 위해 사용될 수 있는 변형된 뉴클레오타이드의 예, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 5-플루오로우라실, 5-브로모우라실, 5-클로로 우라실, 5-아이오도우라실, 하이포잔틴, 잔틴, 4-아세틸시토신, 5-(카복시하이드록시메틸) 우라실, 5- 카복시메틸아미노메틸-2-티오우리듬, 5-카복시메틸아미노메틸우라실, 디하이드로우라실, 베타-D-갈락토실퀘우오신, 이노신, N⁶-이소펜테닐아데닌, 1-메틸구아닌, 1-메틸이노신, 2,2-디메틸구아닌, 2-메틸아데닌, 2-메틸구아닌, 3-메틸시토신, 5-메틸시토신, N -치환된 아데닌, 7-메틸구아닌, 5-메틸아미노메틸우라실, 5- 메톡시아미노메틸-2-티오우라실, 베타-D-만노실퀘우오신, 5'- 메톡시카복시메틸우라실, 5-메톡시우라실, 2-메틸티오-N⁶-이소펜테닐아데닌, 우라실- 5-옥시아세트산 (v), 와이부톡소신, 슈도우라실, 퀘우오신, 2-티오시토신, 5-메틸-2- 티오우라실, 2-티오우라실, 4-티오우라실, 5-메틸우라실, 우라실-5-옥시아세트산 메틸에스테르, 3- (3-아미노-3-N-2-카복시프로필) 우라실, 및 2,6-디아미노퓨린. 대안적으로, 본 발명의 핵산 중 하나 이상은 회사, 예컨대 Macromolecular Resources (Fort Collins, CO) 및 Synthegen (Houston, TX)으로부터 구매할 수 있다.

발현 벡터

본 개시내용의 핵산은 일부 양태에서, 발현 벡터에 편입된다. 이와 관련하여, 본 개시내용은 현재 개시된 핵산 중 임의의 것을 포함하는 발현 벡터를 제공한다. 본 명세서의 목적을 위해, 용어 "발현 벡터"는, 작제물이 mRNA, 단백질, 폴리펩타이드, 또는 펩타이드를 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하고, 벡터는 세포 내에서 발현된 mRNA, 단백질, 폴리펩타이드, 또는 펩타이드를 갖는데 충분한 조건 하에서 세포와 접촉된다 숙주세포에 의해 mRNA, 단백질, 폴리펩타이드, 또는 펩타이드의 발현을 허용하는 유전자적으로-변형된 올리고뉴클레오타이드 또는 폴리뉴클레오타이드 작제물을 의미한다. 본 개시내용의 벡터는 전체적으로 자연 발생이 아니다. 그러나, 벡터의 일부는 자연 발생일 수 있다. 현재 개시된 발현 벡터는 단일-가닥 또는 이중-가닥일 수 있고, 합성되거나 천연 공급원으로부터 부분적으로 수득될 수 있고, 천연, 비-자연 또는 변경된 뉴클레오타이드를 함유할 수 있는 DNA 및 RNA를 비제한적으로 포함하는 임의의 유형의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 발현 벡터는 자연 발생 또는 비-자연 발생 뉴클레오타이드간 연결기, 또는 둘 모두 유형의 연결기를 포함할 수 있다. 일부 양태에서, 변경된 뉴클레오타이드 또는 비-자연 발생 뉴클레오타이드간 연결기는 벡터의 전사 또는 복제를 방해하지 않는다.

본 개시내용의 발현 벡터는 임의의 적합한 발현 벡터일 수 있고, 임의의 적합한 숙주를 형질전환 또는 형질감염시키기 위해 사용될 수 있다. 적합한 벡터는 번식 및 팽창을 위해 또는 발현을 위해 또는 둘 모두를 위해 설계될 것을 포함하고, 그 예는 플라스미드 및 바이러스이다. 벡터는 pUC 시리즈 (Fermentas Life Sciences), pBluescript 시리즈 (Stratagene, LaJoIIa, CA), pET 시리즈 (Novagen, Madison, WI), pGEX 시리즈 (Pharmacia Biotech, Uppsala, Sweden), 및 pEX 시리즈 (Clontech, Palo Alto, CA) 로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다. 박테리오파아지 벡터, 예컨대 λGTIO, λGTl 1, λZapII (스트라타진), λEMBL4, 및 λNMl 149가, 또한 사용될 수 있다. 식물 발현 벡터의 예는 pBIOl, pBI101.2, pBI101.3, pBI121 및 pBIN19 (Clontech)를 포함한다. 동물 발현 벡터의 예는 pEUK-Cl, pMAM 및 pMAMneo (Clontech)를 포함한다. 일부 양태에서, 재조합 발현 벡터는 바이러스 벡터, 예를 들어, 레트로바이러스 벡터이다.

본 개시내용의 발현 벡터는, 예를 들어, Sambrook 등(상동), 및 Ausubel 등(상동)에서 기재된 표준 재조합 DNA 기법을 사용하여 제조될 수 있다. 원형 또는 선형인, 발현 벡터의 작제물은 원핵 또는 진핵 생물 숙주 세포에서 기능적인 복제 시스템을 함유하도록 제조될 수 있다. 복제 시스템은, 예를 들어, CoIEl, 2 μ 플라스미드, λ, SV40, 소과 유두종 바이러스, 및 기타 동종의 것으로부터 유래될 수 있다.

일부 양태에서, 발현 벡터는, 벡터가 DNA- 또는 RNA-기반되는지를 고려하여 그리고 적절한 경우, 벡터가 도입되는 것에 숙주의 유형 (예를 들어, 박테리움, 진균, 식물, 또는 동물)에 특이적인, 조절 서열, 예컨대 전사 및 번역 개시 및 종료 코돈을 포함한다.

발현 벡터는, 형질전환된 또는 형질감염된 숙주를 선택하는, 하나 이상의 마커 유전자를 포함할 수 있다. 마커 유전자는, 원영양, 및 기타 동종의 것을 제공하기 위해 영양요구성 숙주에서 상보성인, 살생물제 내성, 예를 들어, 항생제, 중금속, 등에 내성을 포함한다. 현재 개시된 발현 벡터에 적합한 마커 유전자는, 예를 들어, 네오마이신/G418 내성 유전자, 하이그로마이신 내성 유전자, 히스티디놀 내성 유전자, 테트라사이클린 내성 유전자, 및 암피실린 내성 유전자를 포함한다.

발현 벡터는 펩타이드를 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열에, 또는 펩타이드를 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열에 하이브리드화하는 또는 상기에 상보적인 뉴클레오타이드 서열에 작동가능하게 연결된 천연 또는 규범적 프로모터를 포함할 수 있다. 예를 들어, 강한, 약한, 유도성, 조직-특이적 및 발달-특이적 프로모터의 선택은 숙련가의 통상적인 기술 내이다. 유사하게, 뉴클레오타이드 서열의 프로모터와의 조합은 또한 숙련가의 기술 내이다. 프로모터는 비-바이러스성 프로모터 또는 바이러스성 프로모터, 예를 들어, 사이토메갈로바이러스 (CMV) 프로모터, SV40 프로모터, RSV 프로모터, 및 쥣과 줄기 세포 바이러스의 긴-말단 반복에서 발견된 프로모터일 수 있다.

현재 개시된 발현 벡터는 어느 한쪽 일시적 발현, 안정한 발현, 또는 양쪽을 위하여 설계될 수 있다. 또한, 발현 벡터는 구성적 발현을 위하여 또는 유도성 발현을 위하여 제조될 수 있다. 또한, 발현 벡터는 자살 유전자를 포함하도록 제조될 수 있다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "자살 유전자"는 자살 유전자를 발현시키는 세포를 죽게 하는 유전자를 지칭한다. 일부 양태에서 자살 유전자는 유전자가 발현되는 세포에서 제제, 예를 들어, 약물에 감수성을 부여하는, 그리고 세포가 제제와 접촉되거나 상기에 노출되는 경우 세포를 사망시키는 유전자이다. 자살 유전자는 당해기술에 공지되어 있고 (참고, 예를 들어, Suicide Gene Therapy: Methods and Reviews. Springer, Caroline J. (Cancer Research UK Centre for Cancer Therapeutics at the Institute of Cancer Research, Sutton, Surrey, UK), Humana Press, 2004), 예를 들어, 단순포진 바이러스 (HSV) 티미딘키나제 (TK) 유전자, 시토신다미나제, 퓨린 뉴클레오사이드 포스포릴라제, 및 니트로리덕타제를 포함한다.

숙주세포

본 개시내용은 본 명세서에 기재된 핵산 또는 발현 벡터를 포함하는 숙주세포를 제공한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "숙주세포"는 현재 개시된 발현 벡터를 함유하는 임의의 유형의 세포를 지칭한다. 숙주세포는 일부 양태에서, 진핵 세포, 예를 들어, 식물, 동물, 진균, 또는 조류이거나, 또는 원핵 세포, 예를 들어, 박테리아 또는 원생동물일 수 있다. 숙주세포는 일부 양태에서, 배양 세포 또는 일차 세포이고, 즉, 유기체, 예를 들어, 인간으로부터 직접 단리된다. 숙주세포는 일부 양태에서, 부착 세포 또는 현탁된 세포, 즉, 현탁액에서 성장하는 세포이다. 적합한 숙주세포는 당해 기술에 공지되어 있고, 예를 들어, DH5α E. 콜리 세포, 차이니즈 햄스터 난소 세포, 원숭이 VERO 세포, COS 세포, HEK293 세포, 및 기타 동종의 것을 포함한다. 발현 벡터를 증폭시키거나 복제하기 위해, 숙주세포는 일부 양태에서, 원핵 세포, 예를 들어, DH5α 세포이다. 펩타이드를 생산하기 위해, 숙주세포는 일부 양태에서 포유동물 세포, 예를 들어, 인간 세포이다. 숙주세포는 임의의 세포 유형일 수 있고, 임의의 유형의 조직으로부터 유래할 수 있고 임의의 발달 단계일 수 있다.

본 명세서에 기재된 적어도 하나의 숙주세포를 포함하는 세포의 모집단이 본 발명에 의해 또한 제공된다. 세포의 모집단은 일부 양태에서, 적어도 하나의 다른 세포 외에, 핵산 또는 발현 벡터 중 임의의 것을 포함하지 않는 본 명세서에 기재된 핵산 또는 발현 벡터 중 임의의 것을 포함하는 숙주세포를 포함하는 불균질 모집단이다. 대안적으로, 일부 양태에서, 세포의 모집단은 실질적으로 균질한 모집단이고, 상기 모집단은 발현 벡터를 포함하고 (예를 들면, 그것으로 구성되는) 숙주세포르르 주로 포함한다. 모집단은 일부 양태에서, 세포의 클론 모집단이되, 상기 모집단의 모든 세포는 발현 벡터를 포함하는 단일 숙주세포의 클론이고, 이로써 모집단의 모든 세포는 발현 벡터를 포함한다. 본 발명의 일 구현예에서, 세포의 모집단은 본 명세서에서 기재된 바와 같은 핵산 또는 발현 벡터를 포함하는 숙주세포를 포함하는 클론 모집단이다.

약제학적 조성물 및 제형

펩타이드, 펩타이드 유사체, 콘주게이트, 핵산, 발현 벡터, 숙주세포 또는 이들의 조합, 및 담체, 부형제, 또는 희석제를 포함하는 조성물에 본 명세서에 제공된다. 예시적인 양태에서, 본 조성물은 약제학적 조성물이다. "약제학적 조성물"는 동물 또는 인간에서 약제학적 용도에 적합한 조성물을 지칭한다. 약제학적 조성물은 약리적으로 및/또는 치료적 유효량의 활성제 및 약제학적으로 허용가능한 부형제 또는 담체를 포함한다. 약제학적 조성물 및 이의 제조 방법은 당해 분야의 숙련가에게 쉽게 분명할 것이다. 그와 같은 조성물 및 이의 제조 방법은, 예를 들어, 하기에서 발견될 수 있다: Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th Edition (Mack Publishing Company, 1995). 약제학적 조성물은 일반적으로 멸균, 실질적으로 등장성이고, U.S. 식품 의약품국의 모든 GMP 규정을 완전히 준수하여 제형화된다. 용어는 또한 인간을 포함하는 동물에서 사용하기 위해 US Pharmacopeia 에서 열거된 제제 중 임의의 것을 포괄한다. 적합한 약제학적 담체 및 제형는 하기에 기재되어 있다: Remington's Pharmaceutical Sciences, 21st Ed. 2005, Mack Publishing Co, Easton. "약제학적으로 허용가능한 담체" 또는 "약제학적으로 허용가능한 부형제"는, 동물 또는 인간에 투여될 때 부정적인, 알러지성, 또는 다른 유해한 반응을 생성하지 않는 조성물을 지칭한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, "약제학적으로 허용가능한 담체" 또는 "약제학적으로 허용가능한 부형제"는 임의의 및 모든 용매, 분산매, 코팅물, 항균 및 항진균제, 등장성 및 흡수 지연제, 및 생리적으로 양립가능한 기타 동종의 것을 포함한다. 약제학적으로 허용가능한 부형제의 일부 예는 물, 염수, 포스페이트 완충 식염수, 덱스트로스, 글리세롤, 에탄올 및 등, 뿐만 아니라 이들의 조합이다. 많은 사례에서, 부형제는 상기 조성물 중 등장제, 예를 들어, 당, 폴리알코올 예컨대 만니톨, 소르비톨, 또는 염화나트륨을 포함할 것이다. 약제학적으로 허용가능한 부형제의 추가 예는 습윤제 또는 소량의 보조 물질 예컨대 습윤 또는 유화제, 보존제 또는 완충액인데, 이들은 펩타이드의 유통 기한 또는 유효성을 향상시킨다.

약제학적 조성물은 예시적인 양태에서 하기 예를 포함하는 임의의 약제학적으로 허용가능한 성분을 포함한다: 산성화제, 첨가제, 흡착제, 에어로졸 추진제, 공기 변위제, 알칼리화제, 고결방지제, 항응고제, 항미생물 보존제, 산화방지제, 방부제, 염기, 결합제, 완충제, 킬레이트제, 코팅제, 착색제, 건조제, 세제, 희석제, 소독제, 붕해제, 분산제, 용해 향상제, 염료, 완화제, 유화제, 에멀션 안정화제, 충전제, 막형성제, 풍미 증강제, 풍미제, 유동 향상제, 겔화제, 과립화제, 휴멕턴트, 윤활제, 점막접착제, 연고 염기, 연고, 지질생산성 비히클, 유기 염기, 사탕형 알약 염기, 안료, 가소제, 광택제, 보존제, 격리제, 피부 침투제, 가용화제, 용매, 안정화제, 좌약 염기, 계면 활성제, 계면활성제, 현탁화제, 감미제, 치료제, 증점제, 긴장제, 독성 제제, 점도-증가제, 수분 흡수제, 수-혼화성 보조용매, 물 연화제, 또는 습윤제.

일부 구현예에서, 전술한 성분(들)는 임의의 농도, 예를 들어, 적어도 A로 약제학적 조성물 내에 존재할 수 있고, 상기 A는 0.0001% w/v, 0.001% w/v, 0.01% w/v, 0.1% w/v, 1% w/v, 2% w/v, 5% w/v, 10% w/v, 20% w/v, 30% w/v, 40% w/v, 50% w/v, 60% w/v, 70% w/v, 80% w/v, 또는 90% w/v이다. 일부 구현예에서, 전술한 성분(들)는 임의의 농도, 예를 들어, 최대 B로 약제학적 조성물 내에 존재할 수 있고, B는 90% w/v, 80% w/v, 70% w/v, 60% w/v, 50% w/v, 40% w/v, 30% w/v, 20% w/v, 10% w/v, 5% w/v, 2% w/v, 1% w/v, 0.1% w/v, 0.001% w/v, 또는 0.0001%이다. 다른 구현예에서, 전술한 성분(들)는 임의의 농도 범위, 예를 들어 약 A 내지 약 B로 약제학적 조성물 내에 존재할 수 있다. 일부 구현예에서, A는 0.0001%이고 B는 90%이다.

일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 본 명세서에서 개시된 펩타이드 또는 펩타이드 유사체 중 임의의 것을 환자에의 투여에 적합한 순도 수준으로 포함한다. 일부 구현예에서, 유사체는 적어도 약 90%, 바람직하게는 약 95% 초과의 순도, 더 바람직하게는 약 99% 초과, 및 약제학적으로 허용가능한 희석제, 담체 또는 부형제를 갖는다. 예시적인 양태에서, 약제학적 조성물은 멸균되어 있다.

약제학적 조성물은 생리적으로 양립가능한 pH를 달성하도록 제형화될 수 있다. 일부 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 제형 및 투여 경로에 따라 적어도 2 또는 적어도 3 또는 적어도 4 또는 적어도 5, 또는 적어도 6, 또는 적어도 7, 또는 적어도 8일 수 있다. 일부 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 3 내지 9일 수 있다.

일 구현예에서, 펩타이드는 유전자 요법 방법을 통해 그것의 뉴클레오타이드 등가물로서 투여될 수 있다. 일 구현예에서, 펩타이드-관련된 폴리뉴클레오타이드는 아데노-관련된 바이러스 (AAV)로부터 유래될 수 있는 플라스미드 또는 벡터에서 인코딩된다. AAV는 재조합 AAV 바이러스일 수 있고 예컨대, 하기의 캡시드 혈청형을 비제한적으로 포함할 수 있다: AAV1, AV2, AV3, AV4, AV5, AV6, AV7, AV8, AV9, AV9.47, AV9(hu14), AV10, AV11, AV12, AVrh8, AVrh10, AV-DJ, 및 AAV-DJ8. 비제한적인 예로서, 재조합 AAV 바이러스의 캡시드는 AAV2이다. 비제한적인 예로서, 재조합 AAV 바이러스의 캡시드는 AAVrh10이다. 비제한적인 예로서, 재조합 AAV 바이러스의 캡시드는 AAV9(hu14)이다. 비제한적인 예로서, 재조합 AAV 바이러스의 캡시드는 AAV-DJ이다. 비제한적인 예로서, 재조합 AAV 바이러스의 캡시드는 AAV9.47이다. 비제한적인 예로서, 재조합 AAV 바이러스의 캡시드는 AAV-DJ8이다. 구현예는 서열번호: 1, 3-41, 43-76, 79-293, 310-315, 319-323 및 354-377의 펩타이드 서열의 뉴클레오타이드 등가물을 포함한다.

당해 분야의 숙련가는, 표적 세포가 종 특이적, 유도성, 조직- 특정, 또는 세포 주기-특이적인 프로모터를 비제한적으로 포함하는 특이적 프로모터를 필요로 할 수 있음을 인식할 수 있다: Parr 등, Nat. Med. 3:1145-9 (1997) (이들의 내용은 전체적으로 참고로 본 명세서에 편입되어 있음).

본 명세서에서 사용된 바와 같이, "벡터"는 본 발명의 폴리뉴클레오타이드와 같은 이종성 분자의 담체로서 수송되고, 형질도입 또는 달리 작용하는 임의의 분자 또는 모이어티이다. "바이러스 벡터"는 관심 적재물 분자를 인코딩하거나 포함하는 하나 이상의 폴리뉴클레오타이드 영역, 예를 들어, 이식유전자, 폴리펩타이드 또는 다중-폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터이다. 본 발명의 바이러스 벡터는 재조합으로 생산될 수 있고 아데노-관련된 바이러스 (AAV) 모체 또는 기준 서열을 기반으로 할 수 있다. 본 발명에서 유용할 수 있는 혈청형은 AAV1, AV2, AV3, AV4, AV5, AV6, AV7, AV8, AV9, AV9.47, AV9(hul4), AV10, AV11, AV 12, AVrh8, AVrhlO, AV-DJ, 및 AAV-DJ8로부터 발생하는 것들 중 임의의 것을 포함한다.

일 구현예에서, 본 발명에서 유용할 수 있는 혈청형은 AAV-DJ8일 수 있다. AAV-DJ8의 아미노산 서열은 헤파린 결합 도메인 (HBD)를 제거하기 위해 2 이상의 돌연변이를 포함할 수 있다. 비제한적인 예로서, US 특허 번호 7,588,772 (이들의 내용은 본 명세서에 전체적으로 참고로 편입되어 있음)에서 서열번호: 1로서 기재된 AV-DJ 서열은, 2개의 돌연변이를 포함할 수 있다: (1) 아미노산 587에서의 아르기닌 (R; arg)이 글루타민 (Q; gln)로 변화되는 R587Q 및 (2) 아미노산 590에서의 아르기닌 (R; arg)이 트레오닌 (T; thr)로 변화되는 R590T. 또 다른 비-제한적인 예로서 3개의 돌연변이를 포함할 수 있다: (1) where 아미노산 406에서의 라이신 (K; lys)이 아르기닌 (R; arg) 로 변화되는 K406R, (2) 아미노산 587에서의 아르기닌 (R; arg)이 글루타민 (Q; gln) 로 변화되는 R587Q 및 (3) 아미노산 590에서의 아르기닌 (R; arg)이 트레오닌 (T; thr) 로 변화되는 R590T.

AAV 벡터는 또한, 자기-상보적 AAV 벡터 (scAAVs)를 포함할 수 있다. scAAV 벡터는 함께 어닐링되어 이중가닥 DNA를 형성하는 DNA 가닥 둘 모두를 함유한다. 제2 가닥 합성을 스킵함으로써, scAAVs는 세포에서 신속 발현을 허용한다.

일 구현예에서, 약제학적 조성물은 AAV 캡시드 및 AAV 벡터 게놈을 포함하는 재조합 아데노-관련된 바이러스 (AAV) 벡터를 포함한다. AAV 벡터 게놈은 본 명세서에 기재된 적어도 하나의 펩타이드 관련된 폴리뉴클레오타이드, 예컨대, 비제한적으로, 서열번호 1, 3-41, 43-76, 79-293, 310-315, 319-323 및 354-377 또는 이에 대해 적어도 95% 동일성을 갖는 변이체를 포함할 수 있다. 약제학적 조성물 중 재조합 AAV 벡터는 AAV 벡터 게놈을 함유하는 적어도 70%를 가질 수 있다.

일 구현예에서, 약제학적 조성물은 AAV 캡시드 및 AAV 벡터 게놈을 포함하는 재조합 아데노-관련된 바이러스 (AAV) 벡터를 포함한다. AAV 벡터 게놈은 본 명세서에 기재된 적어도 하나의 펩타이드 관련된 폴리뉴클레오타이드, 예컨대, 비제한적으로, 서열번호 1, 3-41, 43-76, 79-293, 310-315, 319-323 및 354-377 또는 이에 대해 적어도 95% 동일성을 갖는 변이체, 플러스 추가의 N-말단 프롤린을 포함할 수 있다. 약제학적 조성물 중 재조합 AAV 벡터는 AAV 벡터 게놈을 함유하는 적어도 70%를 가질 수 있다.

일 구현예에서, 펩타이드-관련된 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 바이러스 벡터는 하기에 기재된 바와 같이 AAV 비리온의 전달 방법을 사용하여 투여 또는 전달될 수 있다: 유럽 특허 출원 번호 EP1857552 (이들의 내용은 본 명세서에 전체적으로 참고로 편입되어 있음).

일 구현예에서, 펩타이드-관련된 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 바이러스 벡터는 하기에 기재된 바와 같이 AAV 벡터를 사용하여 단백질을 전달하는 방법을 사용하여 투여 또는 전달될 수 있다: 유럽 특허 출원 번호 EP2678433 (이들의 내용은 본 명세서에 전체적으로 참고로 편입되어 있음).

일 구현예에서, 펩타이드-관련된 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 바이러스 벡터는 하기에 기재된 바와 같이 AAV 벡터를 사용하여 DNA 분자을 전달하는 방법을 사용하여 투여 또는 전달될 수 있다: US 특허 번호 US 5858351 (이들의 내용은 본 명세서에 전체적으로 참고로 편입되어 있음).

일 구현예에서, 펩타이드-관련된 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 바이러스 벡터는 하기에 기재된 바와 같이 DNA를 혈류로 전달하는 방법을 사용하여 투여 또는 전달될 수 있다: US 특허 번호 US 6211 163 (이들의 내용은 본 명세서에 전체적으로 참고로 편입되어 있음).

일 구현예에서, 펩타이드-관련된 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 바이러스 벡터는 하기에 기재된 바와 같이 AAV 비리온을 전달하는 방법을 사용하여 투여 또는 전달될 수 있다: US 특허 번호 US 6325998 (이들의 내용은 본 명세서에 전체적으로 참고로 편입되어 있음).

일 구현예에서, 펩타이드-관련된 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 바이러스 벡터는 하기에 기재된 바와 같이 적재물을 중추신견계에 전달하는 방법을 사용하여 투여 또는 전달될 수 있다: US 특허 번호 US 7588757 (이들의 내용은 본 명세서에 전체적으로 참고로 편입되어 있음).

일 구현예에서, 펩타이드-관련된 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 바이러스 벡터는 하기에 기재된 바와 같이 적재물을 전달하는 방법을 사용하여 투여 또는 전달될 수 있다: US 특허 번호 US 8283151 (이들의 내용은 본 명세서에 전체적으로 참고로 편입되어 있음).

일 구현예에서, 펩타이드-관련된 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 바이러스 벡터는 하기에 기재된 바와 같이 글루탐산 탈탄산효소 (GAD) 전달 벡터를 사용하여 적재물을 전달하는 방법을 사용하여 투여 또는 전달도리 수 있다: 국제 특허 공보 번호 WO2001089583 (이들의 내용은 본 명세서에 전체적으로 참고로 편입되어 있음).

일 구현예에서, 펩타이드-관련된 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 바이러스 벡터는 하기에 기재된 바와 같이 적재물을 신경 세포에 전달하는 방법을 사용하여 투여 또는 전달될 수 있다: 국제 특허 공보 번호 WO2012057363 (이들의 내용은 본 명세서에 전체적으로 참고로 편입되어 있음).

일 구현예에서, 펩타이드-관련된 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 바이러스 벡터는 하기에 기재된 바와 같이 적재물을 세포에 전달하는 방법을 사용하여 투여 또는 전달될 수 있다: US Patnet Number 9585971 (이들의 내용은 본 명세서에 전체적으로 참고로 편입되어 있음).

일 구현예에서, 펩타이드-관련된 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 바이러스 벡터는 하기에 기재된 바와 같이 적재물을 세포에 전달하는 방법을 사용하여 투여 또는 전달될 수 있다: Deverman 등 Nature Biotechnology, 34, 204-09 (2016).

일 구현예에서, 펩타이드-관련된 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 바이러스 벡터는 하기에 기재된 바와 같이 AAV 비리온의 전달 방법을 사용하여 투여 또는 전달될 수 있다: US7198951 [아데노-연관된 바이러스 (AAV) 혈청형 9 서열, 이를 함유하는 벡터, 및 그의 용도], US 9217155 [신규한 AAV'의 단리 및 이의 용도], WO2011126808 [약리적으로 유도된 이식유전자 절제 시스템], US6015709 [전사 활성제, 및 조성물 및 이와 관련된 용도], US7094604 [모조타이핑된 재조합 AAV 비리온의 생산], WO2016126993 [항-타우 작제물], US7094604 [재조합 AAV 캡시드 단백질], US8,292,769 [조류 아데노 연관련 비루 (aaav) 및 이의 용도], US9102949 [CNS 표적화 aav 벡터 및 이의 사용 사용 방법], US20160120960 [중추신경계에 대한 아데노-관련된 바이러스 매개된 유전자 전달], WO2016073693 [파킨슨병의 치료를 위한 AADC 폴리뉴클레오타이드], WO2015168666 [망막 및 CNS 유전자 요법용 AAV 벡터], US20090117156 [니만-피크병 유형 A를 위한 유전자 요법] 또는 WO2005120581 [신경대사 장애를 위한 유전자 요법].

본 명세서에 기재된 바이러스 벡터의 약제학적 조성물은 생체이용률, 적정 약물 농도 및/또는 분포의 용적 중 하나 이상을 특징으로 할 수 있다.

일부 구현예에서, 본 발명의 펩타이드-관련된 뉴클레오타이드 및/또는 펩타이드-관련된 뉴클레오타이드 조성물은 디바이스와 조합되고, 그것 상에 코팅되거나 그것 내에 포매될 수 있다. 디바이스는, 비제한적으로 스텐트, 펌프, 및/또는 다른 이식가능 치료적 디바이스를 포함할 수 있다. 추가로, 펩타이드-관련된 뉴클레오타이드 및/또는 펩타이드-관련된 뉴클레오타이드 조성물은 대상체에게 전달될 수 있고, 한편 상기 대상체는 대상체에서 심부 정맥 혈전증 (DVT)의 기회를 감소시키기 위해 압축 디바이스 예컨대, 비제한적으로, 압축 디바이스를 사용하는 것이다. 본 발명은 하나 이상의 펩타이드-관련된 폴리뉴클레오타이드 적재물 분자를 인코딩하는 바이러스 벡터를 편입할 수 있는 디바이스를 제공한다. 이들 디바이스는 그것을 필요로 하는 대상체, 예컨대 인간 환자에게 즉시 전달될 수 있는 바이러스 벡터를 안정한 제형 내에 함유한다.

투여용 디바이스는 본 명세서에 교시된 단일, 다중- 또는 분할-투약 레지멘에 따라 본 발명의 펩타이드-관련된 뉴클레오타이드를 포함하는 바이러스 벡터를 전달하기 위해 이용될 수 있다 .

뇌 투여

본 발명의 펩타이드 또는 조성물의 CNS으로의 전달은 본 발명의 일부 구현예에서, 전신 투여, CSF 경로로의 주사, 또는 뇌로의 직접적인 주사에 의할 수 있고, 그리고 일부 구현예에서, 본 발명의 조성물은 이들 경로 중 임의의 것을 위해 제형화된다. 일 구현예에서, 본 발명의 조성물은 CNS에서 표적화된 작용을 위한 CNS로의 전신 또는 직접적인 투여에 의해 투여되고, 그리고 일부 구현예에서, 본 발명의 조성물은 이들 경로 중 임의의 것을 위해 제형화된다. 일 구현예에서, 본 명세서에 제시된 조성물은 뇌-특이적 전달을 위해 제형화되고, 그리고 일부 구현예에서, 본 발명의 조성물은 이들 경로 중 임의의 것을 위해 제형화된다. 일 구현예에서, 약물 전달을 뇌로 전달하는 전략은 혈액-뇌 장벽 (BBB)의 삼투 및 화학 개방, 뿐만 아니라 혈액-뇌 장벽 내피에서 분자를 침투를 조절하는 수송 또는 담체 시스템, 효소, 및 수용체의 사용을 포함하고, 그리고 일부 구현예에서, 본 발명의 조성물은 이들 경로 중 임의의 것을 위해 제형화된다. 또 다른 구현예에서, 수용체-매개된 통과세포외배출은 BBB를 가로질러 펩타이드 및 단백질을 수송할 수 있고, 그리고 일부 구현예에서, 본 발명의 조성물은 이들 경로 중 임의의 것을 위해 제형화된다. 다른 구현예에서, 뇌로의 약물 전달의 전략은 BBB를 우회하는 것을 수반하고, 그리고 일부 구현예에서, 본 발명의 조성물은 이들 경로 중 임의의 것을 위해 제형화된다. 일부 구현예에서, 다양한 약리적 제제는 BBB를 개방하기 위해 사용되고, 그리고 일부 구현예에서, 본 발명의 조성물은 이들 경로 중 임의의 것을 위해 제형화된다. 또 다른 구현예에서, 투여 경로는 신경퇴행성 병태에 의해 영향을 받은 것보다 상이한 장기 또는 시스템으로 지향될 수 있다. 예를 들어, 본 화합물은 신경퇴행성 병태를 치료하기 위해 비경구로 투여될 수 있다. 따라서, 본 발명은 본 명세서에 열거된 경로 중 임의의 것, 및 당해 분야의 숙련가에 의해 인정되는 바와 같은 그와 같은 물질의 CNS를 이용하는 임의의 경로를 사용하여 투여에 적합한 다양한 투약 형태의 사용을 제공한다.

약제학적으로 허용가능한 염

본 개시내용은 추가로, provide 본 명세서에 기재된 펩타이드 또는 펩타이드 유사체의 약제학적으로 허용가능한 염을 제공한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 "약제학적으로 허용가능한 염"은 모 펩타이드의 생물학적 활성을 보유하고 생물학적으로 또는 달리 바람직하지 않은 것이 아닌 펩타이드의 염을 지칭한다. 많은 본 명세서에 개시된 펩타이드는 아미노 및/또는 카복실기 또는 이와 유사한 기들의 존재 덕분에 산 및/또는 염기성 염을 형성할 수 있다. 약제학적으로 허용가능한 염기 부가 염은 무기 및 유기 염기 으로부터 제조될 수 있다. 무기 염기로부터 유래된 염은, 단지 예로써, 나트륨, 칼륨, 리튬, 암모늄, 칼슘 및 마그네슘 염을 포함한다. 유기 염기로부터 유래된 염은 비제한적으로 일차, 2차 및 3차 아민의 염을 포함한다.

약제학적으로 허용가능한 산 부가 염은 으로부터 제조될 수 있다 무기 및 유기 산. 대표적인 산 부가 염은 비제한적으로 하기를 포함한다: 아세테이트, 아디페이트, 알기네이트, 시트레이트, 아스파르테이트, 벤조에이트, 벤젠설포네이트, 바이설페이트, 부티레이트, 캄포레이트, 캄포르 설포네이트, 디글루코네이트, 글리세로포스페이트, 헤미설페이트, 헵타노에이트, 헥사노에이트, 푸마레이트, 하이드로클로라이드, 하이드로브로마이드, 하이드로아이오다이드, 2-하이드록시에탄설포네이트 (이소티오네이트), 락테이트, 말레에이트, 메탄 설포네이트, 니코티네이트, 2-나프탈렌 설포네이트, 옥살레이트, 팔미토에이트, 펙티네이트, 퍼설페이트, 3-페닐프로피오네이트, 피크레이트, 피발레이트, 프로피오네이트, 석시네이트, 타르트레이트, 티오시아네이트, 포스페이트, 글루타메이트, 바이카보네이트, p-톨루엔설포네이트, 및 운데카노에이트. 무기 산으로부터 유래된 염은 염산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 인산, 및 기타 동종의 것을 포함한다. 유기 산으로부터 유래된 염은 아세트산, 프로피온산, 글라이콜산, 피루브산, 옥살산, 말산, 말론산, 석신산, 말레산, 푸마르산, 타르타르산, 시트르산, 벤조산, 신남산, 만델산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, p-톨루엔-설폰산, 살리실산, 및 기타 동종의 것을 포함한다. 약제학적으로 허용가능한 산 부가 염을 형성하기 위해 이용될 수 있는 산의 예는, 예를 들어, 무기 산, 예를 들어, 염산, 브롬화수소산, 황산, 및 인산, 및 유기 산, 예를 들어, 옥살산, 말레산, 석신산, 및 시트르산을 포함한다.

염기성 부가 염은 또한 살리실산의 공급원의 최종 단리 및 정제 동안에, 또는 카복실산-함유 모이어티를 적합한 염기 예컨대 약제학적으로 허용가능한 금속 양이온의 하이드록사이드, 카보네이트, 또는 바이카보네이트와 또는 암모니아 또는 유기 일차, 2차, 또는 3차 아민과 반응시킴으로써 원위치에서 제조될 수 있다. 약제학적으로 허용가능한 염은 비제한적으로 하기를 포함한다: 알칼리 금속 또는 알칼리토 금속 예컨대 리튬, 나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그네슘, 및 알루미늄 염을 기반으로 하는 양이온, 등, 및 다른 것 중에서 암모늄, 테트라메틸암모늄, 테트라에틸암모늄, 메틸암모늄, 디메틸암모늄, 트리메틸암모늄, 트리에틸암모늄, 디에틸암모늄, 및 에틸암모늄을 포함하는 비독성 4차 암모니아 및 아민 양이온. 염기 부가 염의 형성에 유용한 다른 대표적인 유기 아민은, 예를 들어, 에틸렌디아민, 에탄올아민, 디에탄올아민, 피페리딘, 피페라진, 및 기타 동종의 것을 포함한다. 유기 염기로부터 유래된 염은 비제한적으로 일차, 2차 및 3차 아민의 염을 포함한다.

또한, 염기성 질소-함유 기는 저급 알킬 할라이드 예컨대 메틸, 에틸, 프로필, 및 부틸 염화물, 브로마이드, 및 아이오다이드; 장쇄 할라이드 예컨대 데실, 라우릴, 미리스틸, 및 스테아릴 염화물, 브로마이드, 및 아이오다이드; 아릴알킬 할라이드 예컨대 벤질 및 펜에틸 브로마이드 및 기타로서 본 개시내용의 유사체로 사원화될 수 있다. 물 또는 오일용해성 또는 분산성 생성물은 그것에 의해 수득된다.

펩타이드의 상응하는 용매화물을 제조, 정제 및/또는 취급하는 것이 편리하거나 바람직할 수 있다. 용어 "용매화물"는 용질 (예를 들어, 펩타이드, 펩타이드의 염) 및 용매의 복합체를 지칭하기 위한 종래의 의미로 본 명세서에 사용된다. 용매가 물이면, 용매화물은 편리하게 수화물, 예를 들어, 일-수화물, 이-수화물, 삼-수화물, 등로 칭할 수 있다. 달리 구체화되지 않는 한, 특정 펩타이드에 대한 언급은 또한 그의 용매화물 및 수화물 형태를 포함한다.

본 명세서에서 사용된 바와 같은 "공-결정" 또는 "공-결정 염"은 실온에서 2 이상의 고유의 고체로 구성된 결정성 물질을 의미하고, 상기 각각은 고유의 물리적 특성 예컨대 구조, 용융점, 및 융합열, 흡습성, 용해도, 및 안정성을 갖는다. 공-결정 또는 공-결정 염은 자체 공지된 공-결정화 방법에 따라 생산될 수 있다. 용어들 공-결정 (또는 공결정) 또는 공-결정 염은 또한, 숙주 API (활성 약제학적 성분) 분자 또는 분자, 예컨대 식 I의 펩타이드, 및 게스트 (또는 공-형성체) 분자 또는 분자가 존재하는 다성분 시스템을 지칭한다.

투여 경로, 용량, 및 투약 레지멘

약제학적 조성물은 전형적으로 비경구 투여용에 적합하다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 약제학적 조성물의 "비경구 투여"는 대상체의 조직의 물리적 파열 및 조직에서의 파열을 통한 약제학적 조성물의 투여를 특징으로 하는 임의의 투여 경로를 포함하고, 따라서 일반적으로 혈류로, 근육으로, 또는 내부 장기로 직접 투여하게 된다. 비경구 투여는 따라서, 비제한적으로, 조성물의 주사에 의한, 외과적 절개를 통한 조성물의 적용에 의한, 조직-투과 비-외과적 상처를 통한 조성물의 적용에 의한, 그리고 기타 동종의 것에 의한 약제학적 조성물의 투여를 포함한다. 특히, 비경구 투여는, 피하 주사, 복강내 주사, 근육내 주사, 흉골내 주사, 정맥내 주사, 동맥내 주사, 척추강내 주사, 심실내 주사, 요도내 주사, 두개내 주사, 활막내 주사 또는 주입; 또는 신장 투석 주입 기술을 비제한적으로 포함하는 것으로 고려된다.

다양한 구현예에서, 본 펩타이드는 약제학적으로 허용가능한 부형제와 혼합되어 경구로 또는 정맥내 주사, 근육내 주사, 피하 주사, 복강내 주사, 경피 주사, 동맥내 주사, 흉골내 주사, 척추강내 주사, 심실내 주사, 요도내 주사, 두개내 주사, 활막내 주사를 통해 또는 주입을 통해 상기 대상체에게 전신으로 투여될 수 있는 약제학적 조성물을 형성한다. 약제학적 조성물은 바람직하게는 자연에서 발견되는 않는 적어도 하나의 성분을 함유한다.

비경구 투여에 적한한 약제학적 조성물의 제형은 전형적으로 일반적으로 약제학적으로 허용가능한 부형제, 예컨대 멸균수 또는 멸균 등장성 염수와 조합된 활성 성분을 포함한다. 그와 같은 제형은 볼러스 투여 또는 연속적 투여에 적합한 형태로 제조, 포장 또는 시판될 수 있다. 주사가능 제형은 단위 투약 형태로, 예컨대 보존제를 함유하고 있는 앰풀에서 또는 다중-용량 용기에서 제조, 포장 또는 시판될 수 있다. 비경구 투여용 제형은, 비제한적으로, 현탁-액, 용액, 유성 또는 수성 비히클 중 에멀션, 페이스트, 및 기타 동종의 것을 포함한다. 그와 같은 제형은 추가로 현탁화제, 안정화제, 또는 분산제를 비제한적으로 포함하는 하나 이상의 추가 성분을 포함할 수 있다. 비경구 투여를 위한 제형의 일 구현예에서, 활성 성분은 재구성된 조성물의 비경구 투여 전에 적합한 비히클 (예를 들어 멸균 무발열원 물)과의 재구성을 위해 건조 (즉 분말 또는 과립) 형태로 제공된다. 비경구 제형은 또한 캐리어 예컨대 염, 탄수화물 및 완충제 (바람직하게는 3 내지 9의 pH)를 함유하는 수용액을 포함하지만, 일부 적용에 대해, 적합한 비히클 예컨대 멸균, 무발열원 물과 공조하여 사용되도록 멸균 비-수용액으로서 또는 건조된 형태로서 더 적합하게 제형화될 수 있다. 예시적인 비경구 투여 형태는 멸균 수용액, 예를 들어, 수성 프로필렌 글리콜 또는 덱스트로스 용액 중 용액 또는 현탁액을 포함한다. 그와 같은 투약 형태는 요망하는 경우 적합하게 완충될 수 있다. 유용한 다른 비경구-투여가능한 제형은 미세결정형, 또는 리포좀 제제 중 활성 성분을 포함하는 것들을 포함한다. 비경구 투여용 제형은 즉각적인 및/또는 변형 방출이 되도록 제형화될 수 있다. 변형 방출 제형은 지연된-, 지속된-, 펄스형-, 제어된-, 표적화된 및 프로그래밍된 방출을 포함한다.

본 개시내용은 도포 지점에서 국소적으로 작용하거나, 또는 신체의 혈액 순환에 일단 들어가서 전신으로 작용하기 위한, 경피 또는 국소 전달용 조성물 및 방법을 포함한다. 이들 시스템에서, 전달은 기술 예컨대 연고 등의 형태로, 또는 약물 (또는 다른 물질)을 보유하고 시간-제어된 방식으로 피부에 방출하는 저장소 등을 가지고 있는 패치의 접착에 의해 물질 또는 약물의 직접 구소 도포에 의해 달성될 수 있다. 국소 투여에 대해, 조성물은 에멀션, 로션, 겔, 크림, 젤리, 용액, 현탁액, 연고, 그리고 경피 패치의 형태일 수 있다. 일부 국소 전달 조성물은 폴리에닐포스파티딜콜린 (본 명세서에 약칭 "PPC")을 함유할 수 있다. 일부 경우에, PPC는 표피 침투를 향상시키기 위해 사용될 수 있다. 용어 본 명세서에서 사용된 바와 같은 "폴리에닐포스파티딜콜린"은, 2개의 지방산 모이어티를 보유하고 있는 임의의 포스파티딜콜린을 의미하고, 2개의 지방산 중 적어도 하나는 그것의 구조 내에 적어도 2개의 이중 결합을 가지고 있는 불포화된 지방산, 예컨대 리놀레산이다. 그와 같은 국소 제형은 하나 이상의 유화제, 하나 이상의 계면활성제, 하나 이상의 폴리글리콜, 하나 이상의 레시틴, 하나 이상의 지방산 에스테르, 또는 하나 이상의 경피 침투 증강제를 포함할 수 있다. 제제는 특정 구현예에서 상기 대상체의 혈액과 등장성일 수 있는 멸균 수성 또는 비수용액, 현탁액 및 에멀션을 포함할 수 있다. 비수성 용매의 예는 폴리프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 식물성 오일 예컨대 올리브 오일, 참께 오일, 코코넛 오일, 낙화생 오일, 땅콩 오일, 광유, 유기 에스테르 예컨대 에틸 올레에이트, 또는 합성 모노 또는 디-글리세라이드를 포함하는 고정유이다. 수성 용매는 물, 알코올성/수용액, 염수 및 완충된 매질을 포함하는 에멀션 또는 현탁액을 포함한다. 비경구 비히클은 염화나트륨 용액, 1,3-부탄디올, 링거 덱스트로스, 덱스트로스 및 염화나트륨, 락테이트화된 링거 또는 고정유를 포함한다. 정맥내 비히클은 유체 및 영양소 보충물, 전해질 보충물 (예컨대 링거 덱스트로스를 기반으로 하는 것들), 및 기타 동종의 것을 포함한다. 보존제 및 다른 첨가제, 예를 들어, 항미생물제, 산화방지제, 킬레이트제 및 불활성 가스 및 기타 동종의 것이 존재할 수 있다.

예를 들어, 일 양태에서, 멸균 주사가능 용액은 요구되는 바와 같이 상기 열거된 성분 중 하나 또는 조합하여 적절한 용매에서 요구된 양의 펩타이를 편입시키고, 이어서 여과된 멸균을 수행하여 제조될 수 있다. 일반적으로, 분산물은 활성 펩타이드를, 기본 분산매 및 상기 열거된 것으로부터 요구된 다른 성분을 함유하는 멸균 비이클로 편입시켜서 제조된다. 멸균 주사가능 용액의 제조를 위한 멸균 분말의 경우에, 제조 방법 예컨대 진공 건조 및 냉동-건조로, 활성 성분의 분말 플러스 임의의 추가의 원하는 성분을, 그의 이전에 멸균-여과된 용액으로부터 얻는다. 용액의 적절한 유체성은, 예를 들어, 코팅물 예컨대 레시틴의 사용에 의해, 분산물의 경우에 요구된 입자 크기의 유지에 의해 및 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다. 주사가능 조성물의 지속된 흡수는 흡수를 지연시키는 조성물 제제, 예를 들어, 모노스테아레이트 염 및 젤라틴을 포함함으로써 초래될 수 있다. 다양한 구현예에서, 주사가능 조성물은 상업적으로 입수가능한 일회용 주사가능 디바이스를 사용하여 투여될 것이다.

비경구 제형은 단위-용량 또는 다중-용량 밀봉된 용기, 예컨대 앰풀 및 바이알로서 제공될 수 있고, 및 사용 직전에 멸균 액체 부형제, 예를 들어, 물의 첨가만을 필요로 하는 냉동건조된 (동결건조된) 조건에서 저장될 수 있다. 즉석 주사 용액 및 현탁액은 당업계에서 공지된 종류의 멸균 분말, 과립, 및 정제로부터 제조될 수 있다. 주사가능 제형은 개시내용을 따른다. 주사가능 조성물을 위한 효과적인 약제학적 부형제의 요건은 당해 분야의 숙련가에게 공지되어 있다 (참고, 예를 들어, Pharmaceutics and Pharmacy Practice, J. B. Lippincott Company, Philadelphia, Pa., Banker and Chalmers, eds., pages 238-250 (1982), and ASHP Handbook on Injectable Drugs, Toissel, 4th ed., 페이지 622-630 (1986)).

추가로, 본 개시내용의 펩타이드는 다양한 염기와의 혼합으로, 예컨대 염기 또는 수용성 염기를 에멀션화하여 직장 투여용 좌약으로서 만들어질 수 있다. 질 투여에 적합한 제형은, 활성 성분 외에, 적절한 것으로 당해기술에 공지된 담체를 함유하는 페서리, 탐폰, 크림, 겔, 페이스트, 포옴, 또는 분무 식으로서 제공될 수 있다.

상기-기재된 약제학적 조성물 외에, 본 개시내용의 펩타이드가 봉입 복합체, 예컨대 사이클로덱스트린 봉입 복합체, 또는 리포좀으로 제형화될 수 있음이 당해 분야의 숙련가 에 의해 인정될 것이다.

펩타이드는 비강내로 또는 흡입에 의해, 전형적으로 건조 분말 흡입기로부터 건조 분말의 형태로 (예를 들어, 적합한 약제학적으로 허용가능한 담체와 혼합된 단독으로, 혼합물로서, 또는 혼합된 성분 입자로서), 적합한 추진제의 사용과 함께 또는 사용 없이, 가압된 용기, 펌프, 스프레이, 아토마이저 (바람직하게는 미세 미스트를 생산하기 위해 전기유체역학을 사용하는 아토마이저), 또는 분무기로부터 에어로졸 분무로서, 또는 점비액으로서 투여될 수 있다. 가압된 용기, 펌프, 스프레이, 아토마이져, 또는 분무기는 일반적으로, 용매로서 활성, 추진제(들)의 방출 분산, 가용화, 또는 확장에, 예를 들어, 적합한 제제를 포함하는 펩타이드의 용액 또는 현탁액을 함유한다. 건조 분말 또는 현탁액 제형에서 사용에 앞서, 의약품은 흡입에 의한 전달에 적합한 크기 (전형적으로 5 마이크론 미만)으로 일반적으로 미분화된다. 이것은 임의의 적절한 대체 방법, 예컨대 나선형 제트 밀링, 유동층 제트 밀링, 나노입자를 형성하기 위한 초임계 유체 가공, 고압 균질화, 또는 분무 건조에 의해 달성될 수 있다. 흡입기 또는 취입기에서 사용을 위한 캡슐, 블리스터 및 카트리지는 펩타이드, 적합한 분말 베이스 및 성능 변형제의 분말 믹스를 함유하도록 제형화될 수 있다. 적합한 풍미제, 예컨대 멘톨 및 레보멘톨, 또는 감미제, 예컨대 사카린 또는 사카린나트륨은 흡입된/비강내 투여를 위하여 의도된 그들 제형에 첨가될 수 있다. 흡입된/비강내 투여용 제형은 즉각적인 및 / 또는 변형된 방출이 되도록 제형화될 수 있다. 변형된 방출 제형은 지연된-, 지속된-, 펄스형-, 제어된-, 표적화된 및 프로그래밍된 방출을 포함한다. 건조 분말 흡입기 및 에어로졸의 경우에, 투약량 단위는 계량된 양을 전달하는 밸브에 의해 결정된다. 단위는 펩타이드의 정량 또는 "퍼프"를 투여하기 위해 전형적으로 배열된다. 전체적인 1일 용량은 전형적으로 단일 용량으로, 또는 더 일반적으로, 온종일 분할 용량으로서 투여될 것이다.

투약량

따라서, 숙련가는, 본 명세서에서 제공된 본 개시내용에 기반하여, 용량 및 투약 레지멘이 치료기술 분야에서 공지된 방법에 따라 조정되는 것을 인정할 것이다. 즉, 최대 내성있는 용량은 쉽게 확립될 수 있고, 대상체에 검출가능한 치료적 이점을 제공하는 유효량은 또한, 상기 대상체에게 검출가능한 치료적 이점을 제공하기 위해 각각의 제제 투여용 일시적 요건이 할 수 있는 바와 같이, 결정될 수 있다. 따라서, 특정 용량 및 투여 레지멘이 본 명세서에서 예시되는 한편, 이들 실시예는 본 개시내용 실시에서 대상체에 제공될 수 있는 용량 및 투여 레지멘을 결코 제한하지 않는다.

투약량 값이 완화되는 병태의 유형 및 중증도에 따라 다양할 수 있고, 단일 또는 다중 용량을 포함할 수 있다는 것이 주목되어야 한다. 임의의 특정 대상체에 대하여, 특정 투약 요법이 사람 투여의 개별 필요성 및 전문 판단 또는 조성물의 투여 감독에 따라 경시적으로 조정될 수 있다는 것, 그리고 본 명세서에서 제시된 투약 범위가 단지 예시적인 것이고 청구된 조성물의 범위 또는 실시를 한정하도록 의도되지 않는 것이 추가로 이해된다. 또한, 본 개시내용의 조성물로 투약 요법은, 질환의 유형, 연령, 체중, 성별, 대상체의 의료 병태, 병태의 중증도, 투여 경로, 및 이용된 특정한 펩타이드를 포함하는, 다양한 인자에 기반될 수 있다. 따라서, 투약 요법은 널리 다양할 수 있지만, 표준 방법을 사용하여 일상적으로 결정될 수 있다. 예를 들어, 용량은, 임상 효과 예컨대 독성 효과 및 / 또는 실험실 값을 포함할 수 있는, 약동학적 또는 약력학적 파라미터에 기반하여 조정될 수 있다. 따라서, 본 개시내용은 숙련가에 의해 결정된 경우 대상체내 용량-단계적 확대를 포괄한다. 적절한 투약량 및 레지멘 결정은 관련된 기술분야에서 널리 공지되고 본 명세서에서 개시된 교시가 일단 제공되면 숙련가에 의해 포괄되도록 이해될 것이다.

본 개시내용의 펩타이드의 용량은 또한 본 개시내용의 특정 펩타이드의 투여를 수반할 수 있는 임의의 유해한 부작용의 존재, 성질 및 정도에 의해 결정될 것이다. 전형적으로, 주치의는, 다양한 인자, 예컨대 연령, 체중, 일반적인 건강, 다이어트, 성별, 투여되는 본 개시내용의 펩타이드, 투여 경로, 및 치료되는 병태의 중증도를 고려하여, 각각의 개별 환자를 치료하기 위한 것으로 본 개시내용의 펩타이드의 투약량을 결정할 것이다. 예로써 그리고 제한되지 않을 의도로, 본 개시내용의 펩타이드의 용량은 약 0.0001 내지 약 100 mg/kg 치료될 대상체의 체중 /1일, 약 0.001 내지 약 10 mg/kg 체중/1일, 또는 약 0.01 mg 내지 약 1 mg/kg 체중/1일일 수 있다. 펩타이드는 하나 이상의 용량, 예컨대 1 내지 3 용량으로 투여될 수 있다.

다양한 구현예에서, 약제학적 조성물의 단일 또는 다중 투여는 대상체에 의해 요구된 또는 용인된 경우 투약량 및 빈도에 의존하여 투여된다. 임의의 경우에, 조성물은 대상체를 효과적으로 치료하기 위해 본 명세서에 개시된 펩타이드중 적어도 하나의 충분한 양을 제공할 수 있다. 투약량은 1회 투여될 수 있지만 치료적 결과가 달성되는 때까지 또는 부작용이 요법의 중단을 보장하는 때까지 주기적으로 적용될 수 있다.

펩타이드 약제학적 조성물의 투여의 투약 빈도는 요법의 본성 및 치료되고 있는 특정 질환에 좌우된다. 투여는 펩타이드에 대해 1회, 2회, 3회 또는 4회일 수 있다. 펩타이드의 치료적 유효량에 의한 대상체의 치료는, 단일 치료를 포함할 수 잇거나, 또는 바람직하게는, 일련의 치료를 포함할 수 있다. 바람직한 예에서, 대상체는 펩타이드로 매일, 주당 1회 또는 격주로 치료된다.

병용 요법

또 다른 구현예에 따르면, 펩타이드는 다른 공지된 치료제와 공-투여 또는 공-제형화된다. 본 개시내용의 추가 양태에 따르면, 하기로부터 선택된 제제 중 하나 이상의 동시, 순차적인 또는 별개의 투여와 함께, 선택적으로 약제학적으로 허용가능한 희석제 또는 담체와 함께 본 개시내용에 따른 펩타이드 또는 펩타이드 유사체, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염의 약리적 유효량의 투여를 포함하는 병용 치료가 본 명세서에 제공된다: (1) 인슐린 및 인슐린 유사체; (2) 하기를 포함하는 인슐린 분비촉진제: 설포닐우레아 (예를 들어 글리피자이드) 및 식사 글루코스 조절인자 (때때로 소위 "단기 작용 분비촉진제"), 예컨대 메글리티나이드 (예를 들어 레파글리나이드 및 나테글리나이드); (3) 인크레틴 작용을 향상시키는 제제, 예를 들어 디펩티딜 펩티다아제 IV (DPP-4) 억제제 (예를 들어 빌다글립틴, 삭사글립틴, 및 시타글립핀), 및 글루카곤-유사 펩타이드- 1 (GLP-1 ) 효능제 (예를 들어 엑세나타이드); (4) 페록시솜 증식체 활성화된 수용체 감마 (PPARy) 효능제, 예컨대 티오졸리딘디온 (예를 들어 피오글리타존 및 로시글리타존), 및 PPAR 알파, 감마 및 델타 활성의 임의의 조합을 갖는 제제를 포함하는 인슐린 감작제; (5) 간 글루코스 밸런스를 조절하는 제제, 예를 들어 바이구아나이드 (예를 들어 메트포르민), 푸룩토스 1,6- 비스포스파타제 억제제, 글리코겐 포스포릴라제 억제제, 글리코겐 합성효소 키나제 억제제, 및 글루코키나제 활성제; (6) 장으로부터 글루코스의 흡수를 감소하고/느리게 하도록 설계되니 제제, 예컨대 알파-글루코시다제 억제제 (예를 들어 미글리톨 및 아카르보스); 및 (7 글루카곤의 작용에 반대로 작용하거나 그 분비를 감소시키는 제제, 예컨대 아밀린 유사체 (예를 들어 프람린타이드); (7) 신장에 의한 글루코스의 재흡수를 예방하는 제제, 예컨대 나트륨-의존적 글루코스 수송체 2 (SGLT-2) 억제제 (예를 들어 다파글리플로진); (8) 지속된 고혈당증의 합병증을 치료하도록 설계된 제제, 예컨대 알도오스 환원효소 억제제 (예를 들어 에팔레스타트 및 라니레스타트); 및 미세혈관병증과 관련된 합병증을 치료하기 위해 사용된 제제; (9) 항-이상지질혈증 제제, 예컨대 HMG-CoA 환원효소 억제제 (스타틴, 예를 들어 로수바스타틴) 및 다른 콜레스테롤-저하제; PPARa 효능제 (피브레이트, 예를 들어 젬피브로질 및 페노파이브레이트); 담즙산 격리제 (예를 들어 콜레스티라민); (10) 콜레스테롤 흡수 억제제 (예를 들어 식물 스테롤 (즉 파이토스테롤), 합성 억제제); 콜레스테릴 에스테르 운반 단백질 (CETP) 억제제; 회장 담즙산 운반계의 억제제 (I BAT 억제제); 담즙산 결합 수지; 니코틴산 (니아신) 및 이의 유사체; 산화방지제, 예컨대 프로부콜; 및 오메가-3 지방산; (11) 하기를 포함하는 혈압강하 제제: 아드레날린 수용체 길항제, 예컨대 베타 차단제 (예를 들어 아테놀롤), 알파 차단제 (예를 들어 독사조신), 및 혼합된 알파/베타 차단제 (예를 들어 라베탈롤); 알파-2 효능제 (예를 들어 클로니딘)를 포함하는 아드레날린 수용체 효능제; 안지오텐신 전환효소 (ACE) 억제제 (예를 들어 리시노프릴), 칼슘 채널 차단제, 예컨대 디하이드로피리딘 (예를 들어 니페디핀), 페닐알킬아민 (예를 들어 베라파밀), 및 벤조티아제핀 (예를 들어 딜티아젬); 안지오텐신 II 수용체 길항제 (예를 들어 칸데사르탄); 알도스테론 수용체 길항제 (예를 들어 에플레레논); 중추적으로 작용하는 아드레날린 약물, 예컨대 중심 알파 효능제 (예를 들어 클로니딘); 및 이뇨제 (예를 들어 푸로세마이드); (12) 하기를 포함하는 지혈 조절제: 항혈전제, 예컨대 섬유소용해의 활성제; 트롬빈 길항제; 인자 VIIa 억제제; 항응고제, 예컨대 비타민 K 길항제 (예를 들어 와파린), 헤파린 및 이의 저분자량 유사체, 인자 Xa 억제제, 및 직접적인 트롬빈 억제제 (예를 들어 아르가트로반); 항콜혈소판제, 예컨대 사이클로옥시게나제 억제제 (예를 들어 아스피린), 아데노신 디포스페이트 (ADP) 수용체 억제제 (예를 들어 클로피도그렐), 포스포디에스테라제 억제제 (예를 들어 클리오스타졸), 당단백질 I IB/I I A 억제제 (예를 들어 티로피반), 및 아데노신 재흡수 억제제 (예를 들어 디파이리다몰); (14) 항-비만제, 예컨대 하기를 포함하는 식욕 억제제 (예를 들어 에페드린): 노르아드레날린제 (예를 들어 펜테르민) 및 세로토닌성 제제 (예를 들어 시부트라민), 췌장 리파제 억제제 (예를 들어 오를리스타트), 마이크로솜 운반 단백질 (MTP) 조절제, 디아실 글리세롤아실전달효소 (DGAT) 억제제, 및 칸나비노이드 (CB1 ) 수용체 길항제 (예를 들어 리모나반트); (15) 섭식 행동 개질제, 예컨대 오렉신 수용체 조절물질 및 멜라닌-농축 호르몬 (MCH) 조절제; (16) 글루카곤 예컨대 펩타이드- 1 (GLP-1 ) 수용체 조절물질; (17) 뉴로펩타이드Y (NPY)/NPY 수용체 조절물질; (18) 피루베이트 탈수소효소 키나제 (PDK) 조절제; (19) 세로토닌 수용체 조절물질; (20) 렙틴/렙틴 수용체 조절물질; (21 ) 그렐린/그렐린 수용체 조절물질; 또는 (22) 모노아민 전파-조절제, 예컨대 선택적 세로토닌 재흡수 억제제 (SSRI) (예를 들어 플루옥세틴), 노르아드레날린 재흡수 억제제 (NARI), 노르아드레날린- 세로토닌 재흡수 억제제 (SNRI), 삼중 모노아민 재흡수 차단제 (예를 들어 테소펜신), 및 모노아민 옥시다제 억제제 (MAOI) (예를 들어 톨록사톤 및 아미플라 민), 또는 약제학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 그와 같은 염의 용매화물 또는 이의 전구약물, 선택적으로 포유동물, 예컨대 그와 같은 치료적 처치가 필요한 남성에게 약제학적으로 허용가능한 담체와 함께.

또 다른 구현예에 따르면, 펩타이드는 NASH를 치료하기 위해 다른 공지된 치료제와 공-투여 또는 공-제형화된다. 본 개시내용의 추가 양태에 따르면, 하기로부터 선택된 제제 중 하나 이상의 동시, 순차적인 또는 별개의 투여와 함께, 선택적으로 약제학적으로 허용가능한 희석제 또는 담체와 함께 본 개시내용에 따른 펩타이드 또는 펩타이드 유사체, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염의 약리적 유효량의 투여를 포함하는 병용 치료가 본 명세서에 제공된다: (miR-103/107 길항제, FXR 효능제, 갈렉틴-1/3 효능제, CC 억제제, CB-1 억제제, 케토헥사키나제 억제제, PDE4 억제제, PPARγ 효능제, 3AR 효능제, PDE 억제제, 플루오로케톨라이드, mTOT 인슐린 감작제, 카스파제 억제제, 렙틴 유사체, 갈렉틴-1/3 효능제, SCD1 억제제, PPARαδ 효능제, LOXL2 항체, SK1 억제제, 11β-HSD1 억제제, PPARαδγ 효능제, THR-β 효능제, 알도스테론 억제제, FGF-19 유사체, SBAT 억제제, CCR2/CCR5 억제제, GLP-1 효능제, 및 PPARαγ 효능제). 하기 화합물과의 조합은 또한 본 발명의 구현예로서 또한 고려된다: Astra ZenecA AZD4076, Enanta EDP-305, Galectin Therapeutics GR-MD-02, 젬카벤, Gilead GS-0976, Gilead GS-9674, Merck MK-4074, 피오글리타존, Pfizer PF-06835919, Pfizer CP-945598, stellas ASP9831, Boehringer Ingelheim BI 1467335, Bristol Myers Squibb BMS-986036, 반디아, 메트포르민, 로사르탄, Can-Fite CF102, 펜톡시파일린, 솔리트로마이신, Cirius MSDC-0602K, 엠리카산, Conatus IDN-6556, 메트렐렙틴, 아람콜, Genfit GFT505, 심투주맙, Gilead GS-4997, Gilead GS-9450, Roche TRO19622, Roche RO5093151, Immuron IMM-124E, 오베티콜산, Inventiva IVA337, Madrigal MGL-3196, MN-001, Mitsubishi Tanabe MT-3995, Mochida EPA-E, NGM Biopharma NGM282, Novartis LMB763, Novartis LJN452, Shire SHP626, 세니크리비록, 리라글루타이드, 및 사로글리타자르.

비만과 관련된 동반이환 - 단일요법 또는 조합

예를 들어, 과체중 또는 비만 외에, 대상체 또는 환자는 과체중- 또는 비만-관련된 동반이환, 즉, 질환 및 과체중 또는 비만과 관련되고, 그것에 의해 악화되거나 침범된 다른 부정적인 건강 상태를 추가로 가질 수 있다. 이들 과체중- 또는 비만-관련된 병태를 치료하기 위해 이전에 밝혀진 적어도 하나의 다른 제제와 함께 단독 투여된 본 발명의 개시된 펩타이드가 본 명세서에서 고려된다.

예를 들어, II형 당뇨병은 비만과 관련되었다. II형 당뇨병의 특정 합병증, 예를 들어, 장애 및 조기 사망은 지속된 체중 감소에 의해 예방, 완화 또는 제거될 수 있다 (Astrup, A. Pub Health Nutr (2001) 4:499-5 15). II형 당뇨병을 치료하기 위해 투여된 제제는 하기를 포함한다: 설포닐우레아 (예를 들어, 클로르프로파마이드, 글리피자이드, 글리부라이드, 글리메피라이드); 메글리티나이드 (예를 들어, 레파글리나이드 및 나테글리나이드); 바이구아나이드 (예를 들어, 메트포르민); 티오졸리딘디온 (로시글리타존, 트로글리타존, 및 피오글리타존); 디펩티딜펩티다아제-4 억제제 (예를 들어, 시타글립핀, 빌다글립틴, 및 삭사글립틴); 글루카곤-유사 펩타이드-1 모방체 (예를 들어, 엑세나타이드 및 리라글루타이드); 및 알파-글루코시다제 억제제 (예를 들어, 아카르보스 및 미글리톨.

심장 장애 및 병태, 예를 들어 고혈압, 이상지질혈증, 허혈성 심장병, 심근병증, 심근경색, 뇌졸중, 정맥 혈전색전성 질환 및 폐 고혈압은, 과체중 또는 비만과 관련되었다. 예를 들어, 고혈압이 비만과 관련된 것은, 과잉의 지방 조직이 신장 상에 작용하는 물질을 분비하여 고혈압을 초래하기 때문이다. 추가로, 비만으로 인해 (과잉의 지방 조직 때문에) 생산된 일반적으로 더 높은 양의 인슐린이 있고, 이러한 과잉의 인슐린은 또한 혈압을 상승시킨다. 고혈압의 주요 치료 선택은 체중 감소이다. 고혈압을 치료하기 위해 투여된 제제는 하기를 포함한다: 클로르탈리돈; 하이드로클로로티아자이드; 인다파마이드, 메톨라존; 루프 이뇨제 (예를 들어, 부메타나이드, 에타크린산, 푸로세마이드, 라식스, 토르세마이드); 칼륨- 결핍작용제 (예를 들어, 아밀로라이드 하이드로클로라이드, 벤자밀, 스피로노락톤, 및 트리암테렌); 말초 제제 (예를 들어, 레세르핀); 중심 알파-효능제 (예를 들어, 클로니딘 하이드로클로라이드, 구아나벤즈 아세테이트, 구안파신 하이드로클로라이드, 및 메틸도파); 알파-차단제 (예를 들어, 독사조신 메실레이트, 프라조신 하이드로클로라이드, 및 테라조신 하이드로클로라이드); 베타-차단제 (예를 들어, 아세부톨롤, 아테놀롤, 베탁솔롤, 바이소프롤롤 푸마레이트, 카르테올롤 하이드로클로라이드, 메토프롤롤 타르트레이트, 메토프롤롤 석시네이트, 나돌롤, 펜부톨롤 설페이트, 핀돌롤, 프로프라놀롤 하이드로클로라이드, 및 티몰롤 말레에이트); 조합된 알파- 및 베타-차단제 (예를 들어, 카르베딜롤 및 라베탈롤 하이드로클로라이드); 직접적인 혈관확장제 (예를 들어, 하이드랄라진 하이드로클로라이드 및 미녹시딜); 칼슘 길항제 (예를 들어, 딜티아젬 하이드로클로라이드 및 베라파밀 하이드로클로라이드); 디하이드로피리딘 (예를 들어, 암로디핀 베실레이트, 펠로디핀, 이스라디핀, 니카르디핀, 니페디핀, 및 디솔디핀); ACE 억제제 (벤나제프릴 하이드로클로라이드, 카프토프릴, 에날라프릴 말레에이트, 포시노프릴 나트륨, 리시노프릴, 모엑시프릴, 퀴나프릴 하이드로클로라이드, 라미프릴, 트란돌라프릴); 안지오텐신 II 수용체 차단제 (예를 들어, 로사르탄 칼륨, 발사르탄, 및 이르베사르탄); 레닌 억제제 (예를 들어, 알리스키렌); 및 이들의 조합. 이들 화합물은 당업계에서 공지된 레지멘 및 투약량으로 투여된다.

Carr 등 (The Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism (2004) Vol. 89, No. 6 2601-2607)는 과체중 또는 비만 및 이상지질혈증 사이의 관련을 논의한다. 이상지질혈증은 전형적으로 스타틴으로 치료된다. 스타틴, HMG-CoA 환원효소 억제제는, 대상체에서 콜레스테롤의 생선을 느리게하고/거나 동맥으로부터 콜레스테롤 증강을 제거한다. 스타틴은 메바스타틴, 로바스타틴, 프라바스타틴, 심바스타틴, 벨로스타틴, 디하이드로캄팩틴, 플루바스타틴, 아토바스타틴, 달바스타틴, 카르바스타틴, 크릴바스타틴, 베바스타틴, 세프바스타틴, 로수바스타틴, 피타바스타틴, 및 글렌바스타틴을 포함한다. 이들 화합물은 당업계에서 공지된 레지멘 및 투약량으로 투여된다. Eckel (Circulation (1997) 96:3248-3250)는 과체중 또는 비만 및 허혈성 심장병 사이의 관련을 논의한다. 허혈성 심장병을 치료하기 위해 투여된 제제는 하기를 포함한다: 스타틴, 니트레이트 (예를 들어, 이소소르바이드 디니트레이트 및 이소소르바이드 모노니트레이트), 베타-차단제, 및 칼슘 채널 길항제. 이들 화합물은 당업계에서 공지된 레지멘 및 투약량으로 투여된다.

Wong 등 (Nature Clinical Practice Cardiovascular Medicine (2007) 4:436-443)는 과체중 또는 비만 및 심근병증 사이의 관련을 논의한다.을 심근병증 치료하기 위해 투여된 제제는 하기를 포함한다: 수축제 (예를 들어, 디곡신),. 이뇨제 (예를 들어, 푸로세마이드), CE 억제제, 칼슘 길항제, 항- 부정맥제 (예를 들어, 소톨롤, 아미오다론 및 디소피라마이드), 및 베타-차단제. 이들 화합물은 당업계에서 공지된 레지멘 및 투약량으로 투여된다. Yusef 등 (Lancet (2005) 366(9497): 1640-1649)는 과체중 또는 비만 및 심근경색 사이의 관련을 논의한다. 심근경색을 치료하기 위해 투여된 제제는 하기를 포함한다: ACE 억제제, 안지오텐신 II 수용체 차단제, 직접적인 혈관확장제, 베타 차단제, 항- 부정맥제 및 혈전용해제 (예를 들어, 알테플라제, 레타플라제, 테넥테플라제, 아니스트레플라제, 및 우로키나제). 이들 화합물은 당업계에서 공지된 레지멘 및 투약량으로 투여된다.

Suk 등 (Stroke (2003) 34: 1586- 1592)는 과체중 또는 비만 및 발작 사이의 관련을 논의한다. 발작을 치료하기 위해 투여된 제제는 하기를 포함한다: 항-항혈소판제 (예를 들어, 아스피린, 클로피도그렐, 디파이리다몰, 및 티클로피딘), 항응고제 제제 (예를 들어, 헤파린), 및 혈전용해제. Stein 등 (The American Journal of Medicine (2005) 18(9):978-980)는 과체중 또는 비만 및 정맥 혈전색전성 질환 사이의 관련을 논의한다. 정맥 혈전색전성 질환을 치료하기 위해 투여된 제제는 하기를 포함한다: 항-항혈소판제, 항응고제 제제, 및 혈전용해제. Sztrymf 등 (Rev Pneumol Clin (2002) 58(2): 104-10)는 과체중 또는 비만 및 폐 고혈압 사이의 관련을 논의한다. 폐 고혈압을 치료하기 위해 투여된 제제는 하기를 포함한다: 수축제, 항응고제 제제, 이뇨제, 칼륨 (예를 들어, K-dur), 혈관확장제 (예를 들어, 니페디핀 및 딜티아젬), 보센탄, 에포프로스테놀, 및 실데나필. 호흡 장애 및 병태 예컨대 비만-저환기 증후군, 천식, 및 폐쇄성 수면 무호흡증은, 과체중 또는 비만과 관련되었다. Elamin (Chest (2004) 125: 1972-1974)는 과체중 또는 비만 및 천식 사이의 관련을 논의한다. 천식을 치료하기 위해 투여된 제제는 하기를 포함한다: 기관지확장제, 항-염증제, 류코트리엔 차단제, 및 항-Ige 제제. 특정 천식제는 자피를루카스트, 플루니솔라이드, 트리암시놀론, 베클로메타손, 테르부탈린, 플루티카손, 포르모테롤, 베클로메타손, 살메테롤, 테오필린, 및 크소페넥스를 포함한다.

Kessler 등 (Eur Respir J (1996) 9:787-794)는 과체중 또는 비만 및 폐쇄성 수면 무호흡증 사이의 관련을 논의한다. 수면 무호흡을 치료하기 위해 투여된 제제는 모다피닐 및 암페타민을 포함한다.

간 장애 및 병태, 예컨대 비알코올성 지방 간 질환은, 과체중 또는 비만과 관련되었다. Tolman 등 (Ther Clin Risk Manag (2007) 6: 1153- 1163)는 사 과체중 또는 비만 및 비알코올성 지방 간 질환이의 관련을 논의한다. 비알코올성 지방 간 질환을 치료하기 위해 투여된 제제는 하기를 포함한다: 산화방지제 (예를 들어, 비타민 E 및 C), 인슐린 감작제 (메트포르민, 피오글리타존, 로시글리타존, 및 베타인), 간 보호제, 및 지질-저하제.

골격 장애 및 병태, 예컨대, 요통 및 체중 지지 관절의 골관절염는 과체중 또는 비만과 관련되었고, van Saase (J Rheumatol (1988) 15(7): 1152- 1158)는 과체중 또는 비만 및 체중 지지 관절의 골관절염 사이의 관련을 논의한다. 체중 지지 관절의 골관절염을 치료하기 위해 투여된 제제는 하기를 포함한다: 아세트아미노펜, 비-스테로이드 항-염증제 (예를 들어, 이부프로펜, 에토돌락, 옥사프로진, 나프록센, 디클로페낙, 및 나부메톤), COX-2 억제제 (예를 들어, 셀레콕십), 스테로이드, 보충물 (예를 들어 글루코사민 및 콘드로이틴 설페이트), 및 인공 관절 유체.

대사 장애 및 병태, 예를 들어, 프라다-윌리 증후군 및 다낭성 난소 증후군은, 과체중 또는 비만과 관련되었다. Cassidy (Journal of Medical Genetics (1997) 34:917-923)는 과체중 또는 비만 및 프라다-윌리 증후군 사이의 관련을 논의한다. 프라다-윌리 증후군을 치료하기 위해 투여된 제제는 하기를 포함한다: 인간 성장 호르몬 (HGH), 소마트로핀, 및 체중 감량제 (예를 들어, 오를리스타트, 시부트라민, 메트암페타민, 이노민, 펜테르민, 부프로피온, 디에틸프로피온, 펜디메트라진, 벤즈페테르민, 및 토파맥스).

Hoeger (Obstetrics and Gynecology Clinics of North America (2001) 28(1):85-97)는 과체중 또는 비만 및 다낭성 난소 증후군 사이의 관련을 논의한다. 다낭성 난소 증후군을 치료하기 위해 투여된 제제는 하기를 포함한다: 인슐린-감작제, 합성 에스트로겐 및 프로게스테론의 조합물, 스피로노락톤, 에플로니틴, 및 클로미펜. 생식 장애 및 병태 예컨대 성적 기능이상, 발기 부전, 불임, 분만 합병증, 및 태아 비정상은, 과체중 또는 비만과 관련되었다. 라슨 등 (Int J Obes (Lond) (2007) 8: 1189-1198)는 과체중 또는 비만 및 성적 기능이상 사이의 관련을 논의한다. Chung 등 (Eur Urol (1999) 36(l):68-70)는 과체중 또는 비만 및 발기 부전 사이의 관련을 논의한다. 발기 부전을 치료하기 위해 투여된 제제는 하기를 포함한다: 포스포디에스테라제 억제제 (예를 들어, 타달라필, 실데나필 시트레이트, 및 바르데나필), 프로스타글란딘 E 유사체 (예를 들어, 알프로스타딜), 알칼로이드 (예를 들어, 요힘빈), 및 테스토스테론. Pasquali 등 (Hum Reprod (1997) 1:82-87)는 과체중 또는 비만 및 불임 사이의 관련을 논의한다. 불임을 치료하기 위해 투여된 제제는 하기를 포함한다: 클로미펜, 클로미펜 시트레이트, 브로모크립틴, 성선자극호르몬- 방출 호르몬 (GnRH), GnRH 효능제, GnRH 길항제, 타목시펜/놀바덱스, 성선자극호르몬, 인간 융모성 성선자극호르몬 (HCG), 인간 폐경 성선자극호르몬 (HmG), 프로게스테론, 재조합 여포자극 호르몬 (FSH), UrofoUitropin, 헤파린, 폴리트로핀 알파, 및 폴리트로핀 베타.

Weiss 등 (American Journal of Obstetrics and Gynecology (2004) 190(4): 1091-1097)는 과체중 또는 비만 및 분만 합병증 사이의 관련을 논의한다. 분만 합병증을 치료하기 위해 투여된 제제는 하기를 포함한다: 부피바카인 하이드로클로라이드, 디노프로스톤 PGE2, 메페리딘 HC1, 페로-폴릭-500/이베레트-폴릭-500, 메페리딘, 메틸에르고노빈 말레에이트, 로피바카인 HC1, 날부핀 HC1, 옥시모르폰 HC1, 옥시토신, 디노프로스톤, 리토드린, 스코폴라민 하이드로브로마이드, 수펜타닐 시트레이트, 및 옥시토식.

정신과 장애 및 병태, 예를 들어, 중량-관련된 우울증 및 불안은 과체중 또는 비만과 관련이 있었다. Dixson 등 (Arch Intern Med (2003) 163:2058-2065)은 과체중 또는 비만 및 우울증 사이의 관련을 논의한다. 우울증을 치료하기 위해 투여된 제제는 하기를 포함한다: 세로토닌 재흡수 억제제 (예를 들어, 플루옥세틴, 에스시탈로프람, 시탈로프람, 파록세틴, 세르트알린, 및 벤라팍신); 삼환형 항우울제 (예를 들어, 아미트립틸린, 암목사핀, 클로미프라민, 데시프라민, 도설레핀 하이드로클로라이드, 독세핀, 이미프라민, 입린돌, 로페프라민, 노르트립틸린, 오피프라몰, 프로트립틸린, 및 트리미프라민); 모노아민 옥시다제 억제제 (예를 들어, 이소카복사지드, 모클로베마이드, 페넬진, 트라닐사이프로민, 셀레길린, 라사길린, 니알아미드, 이프로니아지드, 이프로클로지드, 톨록사톤, 리네졸라이드, 디에놀라이드 카바파이론 데스메톡시양고닌, 및 덱스트로암페타민); 정신자극제 (예를 들어, 암페타민, 메트암페타민, 메틸페니데이트, 및 아레콜린); 항정신병 (예를 들어, 부티로페논, 페노티아진, 티오크산텐, 클로자핀, 올란자핀, 리스페리돈, 쿠에티아핀, 지프라시돈, 아미설프라이드, 팔리페리돈, 심바이악스, 테트라베나진, 및 칸나비디올); 및 기분 안정화제 (예를 들어, 리튬 카보네이트, 발프로산, 디발프로엑스 나트륨, 나트륨 발프로에이트, 라모트리진, 카밤아제핀, 가바펜틴, 옥스카르브아제핀, 및 토피라메이트).

Simon 등 (Archives of General Psychiatry (2006) 63(7):824-830)는 과체중 또는 비만 및 불안 사이의 관련을 논의한다. 불안을 치료하기 위해 투여된 제제는 하기를 포함한다: 세로토닌 재흡수 억제제, 기분 안정화제, 벤조디아제핀 (예를 들어, 알프라졸람, 클로나제팜, 디아제팜, 및 로라제팜), 삼환형 항우울제, 모노아민 옥시다제 억제제, 및 베타-차단제.

또 다른 본 발명의 양태는 provide 대상체에서 체중 감소를 촉진하고 유지하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 상기 대상체에게 상기 대상체에서 체중 감소를 초래하는데 효과적인 개시된 화합물의 양을 투여하고; 그리고 치료적 유효량의 상이한 체중 감량제를 투여하여 대상체에서 감소된 체중을 유지하는 것을 수반한다. 체중 감량제는 세로토닌 및 노르아드레날린성 재-흡수 억제제; 노르아드레날린성 재-흡수 억제제; 선택적 세로토닌 재-흡수 억제제; 및 장내 리파제 억제제를 포함한다. 특정 체중 감량제는 리라글루타이드, 오를리스타트, 시부트라민, 메트암페타민, 이노민, 펜테르민, 부프로피온, 디에틸프로피온, 펜디메트라진, 벤즈페테르민, 브로모크립틴, 로카세린, 토피라메이트, 또는 그렐린 작용을 차단하고, 디아실글리세롤 아실전달효소 1 (DGATl) 활성을 억제하고, 스테아로일 Co A 데사투라제 1 (SCD1) 활성을 억제하고, 뉴로펩타이드 Y 수용체 1 기능을 억제하고, 뉴로펩타이드 Y 수용체 2 또는 4 기능을 활성화하거나, 또는 나트륨-글루코스 공수송체 1 또는 2의 활성을 억제하여 음식 섭취를 조절하도록 작용하는 제제를 포함한다. 이들 화합물은 당업계에서 공지된 레지멘 및 투약량으로 투여된다.

치료 방법

본 명세서에 제공된 데이터는 지방세포에서 유리 지방산 수준을 감소시키기 위해 현재 개시된 펩타이드의 능력을 입증하고감소가 필요한 포유동물에서 체중, 혈당 수준, 및/또는 지방량을 감소시키기 위해 그와 같은 펩타이드의 사용을 지지한다. 본 명세서에 제공된 데이터는 또한 혈장에서 그와 같은 펩타이드의 안정성을 입증하고 포유동물에 투여하는데 적합한 치료적 펩타이드로서 그의 용도를 지지한다. 따라서, 본 개시내용은 체중, 혈당 수준, 및 지방량과 관련된 질환, 예를 들어, 비만, 지방 간 질환, 및 당뇨병을 포함하는 대사 질환을 치료하는 방법을 제공한다.

특정 이론에 구속됨 없이, 지방세포를 펩타이드로 처리한 후의 세포 배양 배지에서의 유리 지방산 (FFA)은 지질 또는 지방산 수준의 세포 조절에 관련된 경로의 조절을 나타낸다. 배지 중 지방산 수준의 감소는 신호전달 경로의 억제, 세포 지질생성의 감소, 지방분해의 감소, 또는 지방산 산화의 증가를 비제한적으로 포함하는 수많은 과정으로에서 기인할 수 있다. 순 농도의 유리 지방산에 대한 효과를 갖는 펩타이드는 대사 장애의 치료에 대한 잠재적이 유용성을 갖는다. 본 개시내용은 따라서 조절을 필요로 하는 대상체에서 지방산 대사를 조절하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 상기 대상체에게 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체, 콘주게이트, 핵산, 재조합 발현 벡터, 또는 숙주세포를, 지방산 대사를 조절하는데 효과적인 양으로 투여하는 것을 포함한다. 예시적인 양태에서, 본 방법은 그것을 필요로 하는 대상체에서 지방산 대사를 증가시키는 방법이다. 본 개시내용은 또한, provide 세포에서 지방산 대사를 조절하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 세포를, 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체, 콘주게이트, 핵산, 재조합 발현 벡터, 또는 숙주세포와, 지방산 대사를 조절하는데 효과적인 양으로 접촉시키는 것을 포함한다. 예시적인 양태에서, 본 방법은 세포에서 지방산 대사를 증가시키는 방법이다.

지방이상증은 다양한 신체 영역으로부터의 지방 조직 (체지방)의 선택적 손실 및/또는 다른 영역에서 과잉 지방의 축적을 특징으로 하는 장애에 애한 일반 명칭이다. 하나의 영역, 예컨대 얼굴로부터의 국소화된 지방 손실은 지방위축증이라 한다. 지방 손실의 정도는 신체의 하나의 일부 상의 매우 작은 용역으로부터 전신으로부터의 지방 조직의 거의 완전한 부재의 범위일 수 있다. 또한, 환자는 중증 대사 합병증 또는 단순 성형상의 문제를 가질 수 있다. 중증 지방 손실과 관련된 지방이상증은 인슐린 내성과 관련된 대사 합병증, 예컨대 진성 당뇨병, 높은 수준의 혈청 트리글리세라이드 및 지방간 (간 지방증)에 기여할 수 있다. 지방이상증은 선천성 (예컨대 가족성 부분적인　지방이상증 또는 베라르디넬리-세이프 증후군) 또는 후천성 (예를 들어 다양한 유형의 병 또는 약물과 관련됨)일 수 있다. 후천성 지방이영양증은 약물, 자가면역 기전에 의해 야기되거나 특발성일 수 있다. 후천성 지방이영양증은 고활성 항레트로바이러스 요법 (HAART), 후천성 일반화된 지방이상증 (AGL), 후천성 부분적인 지방이상증 (APL) 및 국소화된 지방이상증에 의해 유도될 수 있는 HIV-감염된 환자 (LD-HIV)에서의 지방이상증을 포함한다. 후천성 지방이영양증은 직접적인 유전적 기초를 갖지 않는다. 일부 구현예에 따르면, 본 발명은 지방이상증을 감소, 완화 또는 예방하는 방법을 제공한다.

펩타이드는 비정상 혈중 농도의 글루코스, 반응성 산소 종 (ROS) 및/또는 유리 지방산 (FFA)에 의해 명시된 비균형 대사 상태와 관련된 병태의 치료에 유용하다. 양호한 대사 상태는 (건강한 모집단에 대한 평균 수준의 범위 내에) 건강한 대상체의 농도와 같은 글루코스, ROS 및 FFA의 혈중 농도를 특징으로 하는 균형을 이룬 에너지 항상성으로서 정의된다. 따라서, 본 명세서에서 사용된 바와 같은 이롭지 않은 대사 상태는, 비정상인, 즉 (예를 들어 의사 또는 숙련가에 의해 평가되는 바와 같이) 건강한 대조군 대상체에서 그것의 각각의 수준과 비교하여 상당히 변경된 글루코스, ROS 및/또는 FFA의 혈중 농도를 지칭한다. 용어 이롭지 않은 대사 상태는, 일부 구현예에서 (예를 들어 의사 또는 숙련가에 의해 평가되는 바와 같이) 건강한 대조군 대상체에서 그것의 각각의 수준과 비교하여 상당히 향상된 글루코스, ROS 및/또는 FFA의 혈중 농도를 지칭한다. 이롭지 않은 대사 상태는 글루코스 (탄수화물) 및/또는 지방산 산화 경로를 수반할 수 있는 비정상 대사로부터 생길 수 있다. 지방산 산화 경로에서의 수차가 관여될 때, 이롭지 않은 대사 상태는 건강한 대조군 대상체와 비교하여 상당히 향상된 ROS 혈중 농도 및/또는 비정상 FFA 혈중 농도에 의해 전형적으로 명시된다. 이들 수차는 또한, 상승된 혈중 농도의 산화된 저밀도 지질단백질 (LDL)에 의해 명시될 수 있다. 글루코스 대사의 수차가 관여될 때, 글루코스 혈중 농도는 전형적으로 건강한 대조군 대상체과 비교하여 상당히 향상된다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 비균형 혈당 대조군에 대한 역치를 초과하지 않는 상당히 향상된 혈당 수준을 갖는 환자는 이롭지 않은 대사 상태를 갖는 것으로 정의될 것이고, 단, 상기 향상은 본 명세서에서 기재된 바와 같이 비정상 혈액 ROS 및/또는 FFA 값에 의해 동반된다. 비균형 대사 상태는 또한, 당해 분야에서 공지된 바와 같이 에너지 섭취 및 다양한 에너지 소비 및 이용 파라미터를 고려하여 상기 의사 또는 숙련가에 의해 평가될 수 있다. 예를 들어, 비제한적으로, 세포 수준에서의 파라미터 예컨대 세포 (예를 들어 혈소판) ATP 생산 및 세포 산화, 및 전신 수준에서의 파라미터 예컨대 호흡률 (RQ)는 대상체의 대사 상태를 결정하기 위해 평가될 수 있다. 예를 들어, 건강한 환자와 아픈 환자 사이의 그와 같은 파라미터의 상대적인 비를 비교하여 숙련가는 건강한 대조군과 비교하여 상기 대상체의 대사 상태를 평가할 수 있다. 이롭지 않은 대사 상태는 적합한 치료 레지멘에 의해 적절하게 치료되지 않거나 균형을 이루지 않는 만성 대사 및/또는 염증성 장애로 시달리는 환자에서 발견될 수 있다.

본 개시내용은 따라서 provide 치료를 필요로 하는 대상체에서 대사 질환을 치료하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 상기 대상체에게 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체, 콘주게이트, 핵산, 재조합 발현 벡터, 또는 숙주세포를, 대사 질환을 치료하는데 효과적인 양으로 투여하는 것을 포함한다.

용어 "대사 질환" 또는 "대사 장애"는, 글루코스 (탄수화물), 지방산 및/또는 단백질 산화 경로를 수반할 수 있는 대상의 오류, 대사의 불균형, 또는 준최적 대사가 일어나는 확인된 장애의 그룹을 지칭한다. 따라서, 비균형일 때, 이들 장애는 전형적으로, 본 명세서에서 기재된 바와 같이 건강한 대조군 대상체에서 그것의 각각의 수준과 비교하여 글루코스, ROS 및/또는 FFA의 비정상 혈중 농도를 특징으로 하는 이롭지 않은 대사 상태에 의해 명시된다. 그와 같은 장애는 비제한적으로 영양 또는 내분비 불균형과 관련된 당뇨병 및 장애를 포함한다.

이롭지 않은 대사 상태는 또한, 만성 염증성 장애의 결과로서 일어날 수 잇고, 비-결정성, 비균형 염증 과정은 건강한 대조군 대상체에서 그것의 각각의 수준과 비교하여 글루코스, ROS 및/또는 FFA의 비정상 혈중 농도에 의해 명시된 2차 대상 합병증에 의해 동반된다. 그와 같은 장애의 비제한적인 예는 패혈증 및 자가면역 질환이다.

증후군 X (또는 대사 증후군)은 복부에서의 지방 축적과 관련된 징후 및 증상의 세트를 나타낸다. 이러한 형태의 지방 분포는 중년 남성에게서 일반적이고, 배불뚝이 또는 살찐 배로서 종종 눈에 보인다. 증후군 X는 통풍, 손상된 글루코스 대사 (당뇨병에 대한 민간성을 증가시킴), 상승된 혈압, 및 상승된 혈액 콜레스테롤 수준을 포함하는 수많은 장애를 특징으로 한다. 증후군 X를 가지고 있는 사람은 고위험의 심장병을 가지고 있다. 증후군 X는 American Association of Clinical Endocrinologists에 의해 혈청 또는 혈장 인슐린/글루코스 수준 비의 대사 비정상, 지질, 요산 수준, 혈관 생리학, 및 응고 인자 불균형의 무리로서 정의된다. 본 명세서에서 사용된 바와 같은 용어 "증후군 X"는 따라서 하기 중 적어도 2종의 양성 진단을 특징으롤 하는 병태를 지칭한다: 비-인슐린-의존적 당뇨병, 정상 초과 수준의 혈압, 정상 초과 수준의 인슐린 수준, 이상지질혈증, 및 비만.

펩타이드는 하기 대사 질환에서 유용할 수 있다.

모든 형태의 당뇨병, 예컨대 고혈당증, 2형 당뇨병, 손상된 글루코스 부하, 1형 당뇨병, 비-인슐린 의존적 당뇨병, MODY (청소년의 성숙기 당뇨병), 임신성 당뇨병의 예방 및/또는 치료, 및/또는 HbAlC의 감소;

당뇨병성 질환 진행, 예컨대 2형 당뇨병의 진행의 지연 또는 예방, 손상된 글루코스 부하 (IGT)의 인슐린 요구 2형 당뇨병으로의 진행의 지연, 인슐린 내성이 지연 또는 예방, 및/또는 비-인슐린 요구 2형 당뇨병의 인슐린 요구 2형 당뇨병으로의 진행의 지연;

β-세포 기능의 개선, 예컨대 β-세포 세포자멸사의 감소, β-세포 기능 및/또는 β-세포 덩어리의 증가, 및/또는 β-세포에 대한 민감한 글루코스 감수성 회복;

인지 장애 및/또는 신경퇴행성 장애, 예컨대 알츠하이머병, 파킨슨병, 및/또는 다발성 경화증의 예방 및/또는 치료;

섭식 장애, 예를 들어 음식 섭취의 증가, 체중 감소, 식욕 억제, 포만 유도에 의한 비만의 예방 및/또는 치료; 폭식 장애, 신경성 거식증, 및/또는 항정신병약 또는 스테로이드의 투여에 의해 유도된 비만; 위 운동성의 감소; 위 배출의 지연; 물리적 이동도의 증가의 치료 또는 예방; 및/또는 비만에 대한 동반이환, 예컨대 골관절염 및/또는 요실금의 예방 및/또는 치료;

당뇨병성 합병증, 예컨대 혈관병증; 말초 신경병증을 포함하는 신경병증; 신병증; 및/또는 망막증의 예방 및/또는 치료;

지질 파라미터의 개선, 예컨대 이상지질혈증, 총 혈청 지질의 저하; HDL의 증가; 작은, 치밀한 LDL의 저하; VLDL의 저하; 트리글리세라이드의 저하; 콜레스테롤의 저하; 인간에서 지질단백질 a (Lp(a))의 혈장 수준의 저하; 시험관내 및/또는 생체내 아포지질단백질 a (apo(a))의 생성의 억제의 예방 및/또는 치료;

심혈관 질환, 예컨대 증후군 X, 죽상경화증, 심근경색증, 관상동맥 심장병, 재관류 손상, 뇌졸중, 저산소증, 뇌 허혈, 조기 심장 또는 조기 심혈관 질환, 좌심실 비대, 관상동맥 질환, 고혈압, 필수적인 고혈압, 급성 고혈압 비상, 심근병증, 심장 결핍, 운동 불내성, 급성 및/또는 만성 심부전, 부정맥, 심장 율동부정, 실신, 협심증, 심장 바이패스 및/또는 스텐트 재폐색, 간헐적 파행 (죽상경화증 폐색성), 이완기 기능이상, 및/또는 수축 기능이상; 및/또는 혈압의 감소, 예컨대 수축기 혈압의 감소의 예방 및/또는 치료;

위장 질환, 예컨대 염증성 장 질환, 단장 증후군, 또는 크론병 또는 결장염; 소화불량, 및/또는 위궤양; 및/또는 염증, 예컨대 건선, 건선성 관절염, 류마티스성 관절염, 및/또는 전신 홍반성 낭창의 예방 및/또는 치료;

중대 질병의 예방 및/또는 치료, 예컨대 중환자, 중대 질병 폴리-신병증 (CIPNP) 환자, 및/또는 잠재적인 CIPNP 환자의 치료; 중대 질병 또는 CIPNP의 발달의 예방; 환자에서 전신 염증 반응 증후군 (SIRS)의 예방, 치료 및/또는 치유; 입원 동안 균혈증, 패혈증, 및/또는 패혈성 쇼크을 겪고 있는 환자의 가능성의 예방 또는 감소; 및/또는 급성 병을 가지고 있는 중환자실 환자에서 혈당, 인슐린 밸런스 및 선택적으로 대사의 안정화;

다낭성 난소 증후군 (PCOS)의 예방 및/또는 치료;

뇌 질환, 예컨대 뇌 허혈, 뇌 출혈, 및/또는 외상성 뇌 손상의 예방 및/또는 치료;

수면 무호흡의 예방 및/또는 치료;

남용, 예컨대 알코올 남용 및/또는 약물 남용의 예방 및/또는 치료;

지방 간 질환 (FLD), 비알코올성 지방 간 질환 (NAFLD), 및 비알코올성 지방간염 (NASH)을 비제한적으로 포함하는 지방 간 병태의 예방 또는 치료; 및/또는

반응성 산소 종 (ROS)의 세포내 생산의 처리.

추가 양태에서, 본 방법이 펩타이드의 유효량을 치료가 필요한 환자에게 투여함으로써 당뇨병 및/또는 당뇨병 관련된 합병증을 치료하기 의해 본 명세서에 제공된다. 유익하게는, 본 명세서에 제공된 방법에 따라 당뇨병 및/또는 관련된 합병증을 치료하기 위해 사용된 펩타이드는 췌장 β 세포에 대항하는 항-세포자멸적 활성을 가지며/거나 그것의 증식을 자극함으로써, 펩타이드의 투여는 β 세포를 생산하는 인슐인의 수 및 환자에 의해 생산된 인슐린의 수준을 증가시킨다.

간 질환

본 개시내용은 또한, provide 치료를 필요로 하는 대상체에서 간 질환을 치료하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 상기 대상체에게 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체, 콘주게이트, 핵산, 재조합 발현 벡터, 또는 숙주세포를, 간 질환을 치료하는데 효과적인 양으로 투여하는 것을 포함한다.

일부 구현예에서, 질환 또는 의료 병태는 비알코올성 지방 간 질환 (NAFLD). NAFLD는 단순 지방간 (지방증)으로부터, 비알코올성 지방간염 (NASH)으로, 간경변 (비가역적, 간의 진전된 흉터)로의 범위한 넓은 스펙트럼의 간 질환을 지칭한다. NAFLD의 모든 단계는 일반적으로 간 세포 (간세포)에서의 지방 (지방 침윤)의 축적을 갖는다. 단순 지방간은 염증 또는 흉터를 가지고 있지 않은 간 세포에서 특정 유형의 지방, 트리글리세라이드의 비정상 축적이다. NASH에서, 지방 축적은 가변 정도의 간의 염증 (간염) 및 흉터 (섬유증)과 관련된다. 염증 세포는 간 세포 (간세포 괴사)를 파괴할 수 있다. 용어들 "지방간염" 및 "지방괴사"에서, 지방(steato)은 지방 침윤을 지칭하고, 간염은 간에서의 염증을 지칭하고, 그리고 괴사는 파괴된 간 세포를 지칭한다. NASH는 궁극적으로 간의 흉터 (섬유증) 및 그 다음 비가역적, 진전된 흉터 (간경변)으로 이어질 수 있다. NASH에 의해 야기된 간경병은 NAFLD 스펙트럼에서 마지막 및 대부분의 중증 단계이다. (Mendler, Michel, "Fatty Liver: Nonalcoholic Fatty Liver Disease (NAFLD) and Nonalcoholic Steatohepatitis (NASH)", ed. Schoenfield, Leslie J., MedicineNet.com, August 29, 2005).

알코올성 간 질환, 또는 알코올-유도된 간 질환은, 과도한 소비의 알코올과 관련되거나 그것에 의해 야기된3개의 병리적으로 구별되는 간 질환을 포괄한다: 지방간 (지방증), 만성 또는 급성 간염, 및 간경변. 알코올성 간염은 비정상 실험실 시험이 질환의 유일한 조짐이면서 경미한 간염으로부터, 하기와 같은 합병증을 가지고 중증 간 기능이상의 범위일 수 있다: 황달 (빌리루빈 체류에 의해 야기된 황색 피부), 간 뇌병증 (간부전에 의해 야기된 신경적 기능이상), 복수 (복부에서의 유체 축적), 출혈 식도 정맥류 (식도에서의 하지정맥류), 비정상 응혈 및 코마. 조직학적으로, 알코올성 간염은 간세포의 풍선화 변성을 갖는 특징적인 외관, 중성구를 갖는 염증 및 때때로 말로리 소체 (세포 중간 필라멘트 단백질의 비정상 응집)를 갖는다. 간경변 섬유증과 조합된 간에서 널리 퍼진 결절에 의해 해부상으로 특성규명된다. (Worman, Howard J., "Alcoholic Liver Disease", Columbia University Medical Center website).

임의의 특정 이론에 의한 구속됨 없이, 본 명세서에 기재된 펩타이드 및 펩타이드 유사체는, 예를 들어, 지방증, 지방간염, 간염, 간 염증, NASH, 간경변, 또는 이의 합병증을 포함하는 알코올성 간 질환, NAFLD, 또는 이의 임의의 단계의 치료에 유용하다. 따라서, 본 개시내용은 provide 대상체에서 알코올성 간 질환, NAFLD, 또는 이의 임의의 단계를 예방 치료하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 상기 대상체에게 본 명세서에 기재된 펩타이드 또는 펩타이드 유사체를 알코올성 간 질환, NAFLD, 또는 이의 단계을 예방 또는 치료하는데 효과적인 양으로 제공하는 것을 포함한다. 그와 같은 치료 방법은 하기 중 1, 2, 3 또는 그 초과 개의 감소를 포함한다: 간 지방 함량, 간경변의 발병률 또는 진행, 간세포암종의 발병률, 염증의 징후, 예를 들어, 비정상 간 효소 수준 (예를 들어, 아스파르테이트 아미노기전달효소 AST 및/또는 알라닌 아미노기전달효소 ALT, 또는 LDH), 상승된 혈청 페리딘, 상승된 혈청 빌리루빈, 및/또는 섬유증의 징수, 예를 들어, 상승된 TGF-베타 수준. 예시적인 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 단순 지방간 (지방증) 이상으로 질환된 환자를 치료하하고 염증 또는 간염의 징후를 나타내기 위해 사용된다. 그와 같은 방법은 예를 들어, AST 및/또는 ALT 수준의 감소를 초래할 수 있다.

암 치료

일부 구현예에서, 본 펩타이드는 항암 활성을 가지고 있다. 예를 들어, 일부 양태에서, 본 펩타이드는 암 세포, 예컨대 비제한적으로, 전립선암 세포 및/또는 유방암 세포에 대항하는 세포자멸유도 활성을 갖는다. 추가 양태에서, 본 펩타이드는 암 세포, 예컨대 비제한적으로, 전립선암 세포 및/또는 유방암 세포에 대항하는 항-증식성 활성을 가지고 있다.

본 개시내용은 또한, 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 상기 대상체에게 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체, 콘주게이트, 핵산, 재조합 발현 벡터, 또는 숙주세포를, 암을 치료하는데 효과적인 양으로 투여하는 것을 포함한다. 본 개시내용은 또한, 암을 치료하는 방법을 포함하고, 상기 방법은 펩타이드 또는 이의 변이체의 유효량을 치료가 필요한 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 본 명세서에 제공된 펩타이드는 다양한 항암 효과를 발휘하고 광범위한 암 및 다른 증식성 장애를 치료하기 위해 사용될 수 있다. 본 명세서에 제공된 펩타이드는 암성 세포에서 세포자멸사를 유도하고, 종양 혈관신생을 억제하고, 종양 전이를 억제하고, 세포 주기를 조절하고, 암 세포 증식을 억제하고, 암 세포 분화를 촉진하고, 반응성 산소 종의 생선을 억제하고/거나 그것에 대해 보호하고, 그리고 스트레스 내성을 향상시키는 것을 비제한적으로 포함하는 다양한 항암 활성을 가질 수 있다. "암"은 일반적으로 조절되지 않는, 비정상 세포 성장 및 증식을 특징으로 하는 질환을 지칭한다. "종양" 또는 "신생물"는 과도한, 조절되지 않는, 진행성 세포 분열로부터 유래하는 조직의 비정상 질량이다. 본 명세서에서 기재된 방법는 암종, 육종, 연조직 육종, 림프종, 혈액 암, 백혈병, 생식세포 종양, 및 고형 종양 없는 암 (예를 들어, 조혈 암)을 비제한적으로 포함하는 임의의 유형의 암 및 증식성 장애를 치료하는데 유용하다. 다양한 양태에서, 펩타이드는 폐, 유방, 상피, 대장, 직장, 고환, 방광, 갑상선, 담낭, 담관, 담관, 전립선, 결장, 위, 식도, 췌장, 간, 신장, 자궁, 자궁경부, 난소, 및 뇌 조직을 비제한적으로 포함하는 임의의 조직으로부터 유래하고/거나 그것에 영향을 주는 암 및/또는 종양을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 펩타이드로 치료가능한 특정 암의 비-제한적인 예는, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 급성 림프아구성 백혈병, 급성 골수 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 부신피질 암종, IDS-관련된 림프종, 항문암, 별아교세포종, 뇌 기저 세포 암종, 담도암, 간외 방광암, 방광암, 골암, 골육종/악성 섬유질 조직구종, 뇌간 신경아교종, 뇌종양, 뇌간 신경아교종, 뇌 별아교세포종/악성 신경아교종, 뇌실막세포종, 수모세포종, 천막상 원시 신경외배엽 종양, 시각적 경로 및 시상하부 신경아교종, 유방암, 수컷 기관지 선종/암양종, 버킷 림프종, 유암종, 미공지된 일차 중추신경계 림프종의 위장 암종, 자궁경부암, 만성 림프구성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 만성 골수증식성 장애, 결장암, 결장직장암, 피부 T-세포 림프종, 균상식육종 및 세자리 증후군, 자궁내막 암, 뇌실막세포종, 식도암, 유잉 계열 종양, 생식세포 종양, 간외 담도암, 안암, 안구내 흑색종, 망막모세포종, 담낭암, 위암, 위장 유암종, 난소 임신성, 융모성 종양, 신경아교종, 시상하부 피부암 (흑색종), 피부암 (비-흑색종), 피부 암종, 소세포 폐암, 소장 암, 연조직 육종, 편평상피 세포 암종, 잠복 원발을 가지고 있는 편평상피 목 암, 전이성 위암, 위암, T-세포 림프종, 고환암, 흉선종, 흉선 암종, 갑상선암, 신우의 이행 세포 암, 요관 융모성 종양, 이행 세포 암, 요도 암, 자궁암, 자궁 육종, 질암, 시상하부 신경아교종, 외음부암, 발덴스트롬's 거대글로불린혈증, 윌름스 종양, 모발 세포 백혈병, 두경부 암, 간세포 (간) 암, 호지킨 림프종, 하인두 암, 소도세포 암종 (내분비 췌장), 카포시 육종, 신장 (신장 세포) 암, 신장암, 후두 암, 모발 세포 입술 및 구강 암, 간암, 폐암, 비-소세포 폐암, 소세포 림프종, 버킷 림프종, 피부 T-세포, 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종, 뼈/골육종 수모세포종의 발덴스트롬 악성 섬유질 조직구종, 안구내 (눈) 머켈 세포 암종, 중피종, 악성 중피종, 잠복 원발 다중 내분비 신조직형성 증후군을 가지고 있는 전이성 편평상피 목 암, 다발성 골수종/형질 세포 신생물, 균상식육종 골수이형성 증후군, 골수이형성/골수증식성 질환, 골수성 백혈병, 다중 골수증식성 장애, 만성 비강 및 부비동 암, 비인두 암, 흉막폐 모세포종, 뼈의 골육종/악성 섬유질 조직구종, 크롬친화세포종, 송과체아세포종, 및 천막상 원시 신경외배엽 종양. 일부 바람직한 양태에서, 상기 암은 유방암이다. 일부 바람직한 양태에서, 상기 암은 전립선암이다.

일부 양태에서, 본 명세서에 제공된 방법에 따른 펩타이드의 투여 확립된 암 요법의 효능을 향상시킨다. 추가 양태에서, 본 명세서에 제공된 방법에 따른 펩타이드의 투여는 또 다른 암 요법, 예컨대 방사선 또는 화학요법의 항암 활성을 향상시킨다. 일부 양태에서, 본 방법은 암 세포 및/또는 종양 세포에서 세포사를 유도하기 위해 본 명세서에 제공되고, 상기 방법은 본 명세서에 기재된 펩타이드를 암 세포사 및/또는 종양 세포사를 유도하는데 충분한 양으로 투여하는 것을 포함한다.

일부 구현예에서, 본 펩타이드는 하나 이상의 세포 보호성 또는 세포보호성 활성을 갖는다. 예를 들어, 일부 양태에서, 본 펩타이드는 세포 손상을 예방하고, 세포 생존을 개선하고/거나 환경 스트레스, 예컨대 비제한적으로, 열충격, 혈청 회수, 화학요법, 및/또는 방사선에 대한 내성을 향상시킬 수 있다.

일부 양태에서, 본 명세서에 제공된 방법에 따른 펩타이드의 투여는 확립된 암 요법의 역효과를 감소시킨다.

추가 바람직한 의료 용도는 하기의 치료 또는 예방을 포함한다: 퇴행성 장애, 특히 신경퇴행성 장애 예컨대 알츠하이머병, 파킨슨병, 헌팅턴병, 운동실조증, 예를 들어 척수소뇌 운동실조증, 케네디병, 근긴장성 이상증, 루이체 치매, 다중-전신 위축증, 근위축 측삭 경화증, 일차 측삭 경화증, 척수성 근육 위축증, 프리온-관련된 질환, 예를 들어 크로이펠츠-야콥병, 다발성 경화증, 모세혈관확장증, 바텐병, 피질기저 퇴행증, 피질기저 퇴행증, 척수의 아급성 연합 변성, 척수매독, 테이-삭스 질환, 독성 뇌병증, 유아의 레프섬 질환, 레프섬 질환, 신경유극적혈구증가증, 니만-피크병, 라임병, 마카도-조셉병, 샌드호프병, 샤이-드레이가 증후군, 비틀거리를 고슴도치 증후군, 단백질병증, 뇌 β-아밀로이드 혈관병증, 녹내장에서의 망막 신경절 세포 퇴행, 시누클레인병증, 타우병증, 전두측두엽 퇴행 (FTLD), 치매, 카디실 증후군, 아밀로이드증을 갖는 선천성 뇌 출혈, 알렉산더 질환, 세이피노병증, 가족성 아밀로이드 신경병증, 노인성 전신 아밀로이드증, 세르핀병증, L (경쇄) 아밀로이드증 (일차 전신 아밀로이드증), H (중쇄) 아밀로이드증, A (2차) 아밀로이드증, 대동맥 내측 아밀로이드증, poAI 아밀로이드증, poAII 아밀로이드증, poAIV 아밀로이드증, 핀란드형 가족성 아밀로이드증 (FAF), 리소자임 아밀로이드증, 피브리노겐 아밀로이드증, 투석 아밀로이드증, 봉입체 근염/근병증, 백내장, 로돕신 돌연변이를 가지고 있는 색소성 망막염, 수질 갑상선 암종, 심장 심방 아밀로이드증, 뇌하수체 프롤락틴샘종, 선천성 격자 각막 이상증, 피부 태선 아밀로이드증, 말로리 소체, 각막 락토페린 아밀로이드증, 폐 폐포 단백질증, 치원성 (핀드버그) 종양 아밀로이드, 낭포성 섬유증, 겸상 적혈구 질환 또는 중대 질병 근병증 (CIM). 특정한 이론에 의한 제한됨 없이, 본 명세서에 제공된 펩타이드가 신경 세포 및/또는 다른 세포 유형의 신경퇴행성 손상을 보수 및/또는 예방할 수 있는 하나 이상의 활성을 갖는 것으로 믿는다. 본 명세서에 제공된 방법에 따라 치료가능한"신경퇴행성 질환"은 예를 들어 뉴런의 세포사 (세포자멸사)로 인해 뉴런의 퇴행 및/또는 손실을 초래하는 진행성 질환이다. 신경퇴행성 질환의 예는, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 뇌 퇴행성 질환 (예를 들어, 알츠하이머병 (AD), 파킨슨병, 진행성 핵상 마비, 및 헌팅턴병 (HD)), 및 척추 퇴행성 질환/운동 뉴런 퇴행성 질환 (예를 들어, 근위축 측삭 경화증 (ALS), (SMA: 베르드니히-호프만 질환 또는 쿠겔버그-벨란더증후군), 척수소뇌 운동실조증, 구척추 근육 위축증 (BSMA; 케네지-알터-송 증후군)). "운동 뉴런 퇴행성 질환"는 신체의 운동을 조절하는 상부 및 하부 운동 뉴런의 진행성, 역행성 장애를 특징으로 하는 신경퇴행성 질환이다. 추가 양태에서, 펩타이드 및 이의 조성물은 또한 운동 뉴런 퇴행성 질환, 예컨대 근육 위축증, 근육 약화, 연수 마비 (얼굴, 인두, 및 혀의 근육 위축증 또는 약화, 및 언어상실증 또는 연하곤란 야기된 그것에 의해), 근육 근다발수축, 및 호흡 장애로부터 생긴 병태를 완화하는데 효과적이다.

추가 용도는 미토콘드리아 기능이상과 관련된 질환 또는 병태의 예방 및 치료를 포함한다. 대사과정의 중심인 미토콘드리아는, 에너지 생산, 프로그래밍된 세포사, 및 반응성 산소 종 (ROS) 생성에 관여한다. 종래에, 미토콘드리아는 에너지 생산 및 세포사를 조절하기 위해 세포 신호의 거대 양을 수령 및 가공하는, "최종-기능" 소기관으로서 간주되어야 한다. 펩타이드 및 펩타이드 유사체 그리고 이의 약제학적 제형은 미토콘드리아 기능이상과 관련된 다양한 연령 관련 질환을 치료하는데 사용될 수 있다. 또한 이들은 대사과정 예컨대 미토콘드리아 호흡, 글루코스 수송, 글루코스 이용, 당분해, 인슐린 조절 및 세포증식/생존에 영향을 주기 위해 시험관내 및 생체내 다양한 방식으로 밝혀졌다. 미토콘드리아 기능이상은 비제한적으로 대사 장애, 신경퇴행성 질환, 만성 염증성 질환, 및 노화의 질환과 관련된다. 일부 미토콘드리아 질환은 미토콘드리아 게놈에서 돌연변이 또는 결실에 기인한다. 미토콘드리아는 그들의 숙주 세포보다 더 빠른 턴오버 속도로 분할 및 증식하고, 그들의 복제는 핵 게놈의 제어 하에 있다. 세포에서 미토콘드리아의 역치 분율이 결함있다면, 그리고 조직 내에서 그와 같은 세포의 역치 분율이 결함있는 미토콘드리아를 갖는다면, 조직 또는 장기 기능이상의 증상은 생길 수 있다. 실제로 임의의 조직은 감염될 수 있고 아주 다양한 증상은, 상이한 조직이 관여되는 정도에 의존하여 존재할 수 있다. 선천적 결함있는 미토콘드리아를 포함하는 선천성 장애에 더하여, 획득된 미토콘드리아 기능이상은 질환, 특히 노화와 관련된 신경퇴행성 장애 예컨대 파킨슨, 알츠하이머, 및 헌팅턴 병에 기여한다. 미토콘드리아 DNA에서 체세포 돌연변이의 발병률은 나이와 함께 기하급수적으로 상승하고; 줄어든 호흡 사슬 활성은 노령 인구에서 보편적으로 발견된다. 미토콘드리아 기능이상은 또한 흥분성 독 뉴런의 손상, 예컨대 발작 또는 허혈과 관련된 것에 연루된다. 미토콘드리아 기능이상과 관련된 다른 장애는 만성 염증성 장애 및 대사 장애를 포함한다.

세포보호성인 펩타이드는 자연에서 세포의 생존력을 연장시키기 위한 잠재적인 유용성을 갖는다. 펩타이드는, 단백질, 항체 및 기타 동종의 것을 포함하는, 생물학적 생성물의 제조에 유용하다. 본 개시내용은 일반적으로, 포유동물 세포 배양물 예컨대 CHO 세포 배양물, 또는 E. 콜리 세포 배양물을 포함하는, 세포 배양물의 하나 이상의 특성 조절 방법 그리고 펩타이드에 관한 것이다. 일 구현예에서, 배양 배지에서 포유동물 세포 배양물을 확립하는 단계; 세포 배양물을 펩타이드를 포함하는 배양 배지와 접촉시킴으로써 세포 성장 생존력을 증가시키는 단계; 그리고 상기 배양물을 펩타이드를 포함하는 배양 배지와 접촉시킴으로써 세포 배양물을 유지시키는 단계를 포함하는 재조합 단백질을 발현시키는 포유동물 세포 배양물에서 특정 생산성의 증가 방법이 제공된다.

키트

본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는, 일 구현예에 따르면 키트의 일부로서 제공될 수 있다. 따라서, 일부 구현예에서, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체를, 그것이 필요한 환자에게 투여하기 위한 키트가 제공되고, 상기 키트는 본 명세서에서 기재된 바와 같은 펩타이드를 포함한다.

일 구현예에서 키트에는 조성물을 환자에게 투여하기 위한 디바이스가 제공되고, 상기 디사이스의 예는 주사기 바늘, 펜 기기, 제트 인젝터 또는 또 다른 무바늘 주사기이다. 본 키트는 대안적으로 또는 추가로 하나 이상의 용기, 예를 들어, 바이알, 튜브, 병, 단일 또는 다중-챔버 미리 충전된 주사기, 카트리지, 주사 펌프 (외부 또는 이식가능), 제트 인젝터, 미리 충전된 펜 기기 및 등을 포함할 수 있고, 선택적으로 펩타이드 동결건조된 형태로 또는 수용액에서 펩타이드를 함유한다. 키트는 일부 구현예에서 사용 지침을 포함한다. 일 구현예에 따르면 키트의 디바이스는 에어로졸 분배 장치이되, 본 조성물은 에어로졸 디바이스 내에 미리 포장된다. 또 다른 구현예에서 본 키트는 주사기 및 바늘을 포함하고, 일 구현예에서, 멸균 조성물은 주사기 내에 미리 포장된다.

하기 예는 단지 본 발명을 설명하기 위해 주어지고 어떤 식으로든 그것의 범위를 제한하지 않는다.

실시예

하기 실시예에서, 시험 펩타이드는 표 1 (부록 참고)에 열거된 고유의 서열번호 및 함께 제출된 서열목록에 의해 언급된다.

실시예 1

본 실시예는 본 개시내용의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체를 합성하는 예시적인 방법을 입증한다.

펩타이드는 달리 구체화되지 않는 한 아래에 기재된 방과 유사한 방법에 의해, t-Boc 또는 Fmoc 화학 또는 다른 잘 확립된 기술을 사용하여 적합한 수지에 대한 고상 합성을 통해 제조된다 (참고 예를 들어: Stewart and Young, Solid Phase Peptide Synthesis, Pierce Chemical Co., Rockford, III., 1984; E. Atherton and R. C. Sheppard, Solid Phase Peptide Synthesis. A Practical Approach, Oxford-IRL Press, New York, 1989; Greene and Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis", John Wiley & Sons, 1999, Florencio Zaragoza Dorwald, "Organic Synthesis on solid Phase", Wiley-VCH Verlag GmbH, 2000, and "Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis", Edited by W.C. Chan and P.D. White, Oxford University Press, 2000)).

고상 합성은 카복시 말단을 가지고 있는 N-말단 보호된 아미노산를 절단가능 링커를 보유하고 있는 불활성 고체 지지체에 부착함으로써 개시된다. 이러한 고형 지지체는 초기 아미노산의 커플링을 허용하는 임의의 폴리머, 예를 들어 팜(Pam) 수지, 트리틸 수지, 클로로트리틸 수지, 왕(Wang) 수지 또는 링크(Rink) 수지일 수 있고, 상기 카복시 그룹 (또는 링크(Rink) 수지에 대해서는 카복사미드)의 수지에의 연결이 산에 민감하다 (Fmoc 전략이 사용될 때). 폴리머 지지체는 펩타이드 합성 동안에 β-아미노기를 보호하기 위해 사용된 조건 하에서 안정하다. 제1 아미노산이 고형 지지체에 커플링된 후, 이러한 아미노산의 α-아미노 보호기는 제거된다. 그 다음 나머지 보호된 아미노산은 적절한 아미드 커플링 시약, 예를 들어 BOP (벤조트리아졸-l -일-옥시-트리스-(디메틸아미노)-포스포늄), HBTU (2-(1 H-벤조트리아졸-1 -일)-1,1,3,3-테트라메틸-우로늄), HATU (O-(7-아자벤즈트리아졸-1 -일-옥시-트리스-(디메틸아미노)-포스포늄) 또는 DIC (N,N'-디이소프로필카보디이미드) / HOBt (1 -하이드록시벤조트리아졸)을 사용하여 펩타이드 서열에 의해 표시되는 순서로 교대로 커플링되고, 상기 BOP, HBTU 및 HATU는 3차 아민 염기와 함께 사용된다. 대안적으로, 해방된 N-말단은 아미노산 이외의 기, 예를 들어 카복실산, 등으로 작용화될 수 있다. 일반적으로, 아미노산의 반응성 측쇄 기는 적합한 차단 기로 보호된다. 이들 보호기는, 원하는 펩타이드가 조립된 후에 제거된다. 동일한 조건 하에서 수지로부터 원하는 생성물의 절단과 동시에 제거된다. 보호기 및 보호기를 도입하는 절차는 아래에 발견될 수 있다: Protective Groups in Organic Synthesis, 3d ed., Greene, T. W. 및 Wuts, P. G. M., Wiley & Sons (New York: 1999). 일부 경우에, 선택적으로 제거될 수 있는 측쇄 보호기를 갖는 것이 바람직할 수 있고, 한편 다른 측쇄 보호기는 온전한 채로 있다. 이 경우에 해방된 작용기는 선택적으로 작용화될 수 있다. 예를 들어, 라이신은 고친핵성 염기, 예를 들어 DMF (디메틸 포름아미드) 중 4% 하이드라진에 대해 불안정한 ivDde 보호기 (S.R. Chhabra 등, Tetrahedron Lett. 39, (1998), 1603)로 보호될 수 있다. 따라서, N-말단 아미노기 및 모든 측쇄 작용기가 산 불안정성 보호기로 보호되면, ivDde ([1-(4,4-디메틸-2,6-디옥소사이클로헥스-1-일리덴)-3-메틸부틸) 기는 DMF 중 4% 하이드라진을 사용하여 선택적으로 제거될 수 있고, 그 다음 상응하는 유리 아미노기는 예를 들면 아실화에 의해 추가로 변형될 수 있다. 라이신은 보호된 아미노산에 대안적으로 커플링될 수 있고 그 다음 이러한 아미노산의 아미노기는 탈보호되어, 또 다른 유리 아미노기를 얻을 수 있고, 이는 아실화되거나 추가 아미노산에 부착될 수 있다. 마지막으로, 펩타이드는 수지로부터 절단된다. 이것은 HF 또는 킹스 칵테일을 사용하여 달성될 수 있다 (D. S. King, C. G. Fields, G. B. Fields, Int. J. Peptide Protein Res. 36, 1990, 255-266). 그 다음 원료는 크로마토그래피, 예를 들어 필요하면 분취 RP-HPLC에 의해 정제될 수 있다.

비-자연 아미노산 및/또는 공유결합된 N-말단 모노- 또는 디펩타이드 모방체를 포함하는 펩타이드들, 유사체들 또는 유도체들은 실험 일부에서 기재된 바와 같이 생산될 수 있거나, 하기를 참고한다: 예를 들어, Hodgson et al: "The synthesis of peptides and proteins containing 비-natural amino acids", and Chemical Society Reviews, vol. 33, no. 7 (2004), p. 422-430.

펩타이드는 아래에 언급된 펩타이드 합성에 따라 준비되고 표 1에서 제시된 서열은 달리 구체화되지 않는 한, 아래에 언급된 합성과 유사하게 준비될 수 있다.

펩타이드 합성의 하나의 방법은 마이크로웨이브-기반 Liberty 펩타이드 합성기 (CEM Corp., North Carolina)상에서Fmoc 화학에 의한다. 수지는 약 0.25 mmol/g의 장입을 가진 Tentagel S RAM 또는 약 0.43 mmol/g의 장입을 가진 PAL-Chem매트릭스 또는 0.5-0.75 mmol/g의 장입을 가진 PAL AM 매트릭스이다. 커플링 화학은 0.3 M의 아미노산 용액 및 6-8배의 몰 과잉을 사용하는 NMP 또는 DMF내 DIC/HOAt 또는 DIC/Oxyma이다. 커플링 조건은 최대 70°C에서 5 분이다. 탈보호는 최대 70°C에서 NMP내 10% 피페리딘으로 한다. 사용된 보호된 아미노산은 (예를 들면 Anaspec 또는 Novabiochem 또는 Protein Technologies로부터 공급된) 표준 Fmoc-아미노산이다.

펩타이드 합성의 또 다른 방법은 Prelude 펩타이드 합성기 (Protein Technologies, rizona)에서 Fmoc 화학에 의한 것이다. 수지는 약 0.25 mmol/g의 장입을 가진 Tentagel S RAM 또는 약 0.43 mmol/g의 장입을 가진 PAL-Chem매트릭스 또는0.5-0.75 mmol/g의 장입을 가진 PAL AM이다. 커플링 화학은 0.3 M의 아미노산 용액 및 6-8배의 몰 과잉을 사용하는 NMP 또는 DMF내 DIC/HOAt 또는 DIC/Oxyma이다. 커플링 조건은 실온에서 1 또는 2 시간 동안 단일 또는 이중 커플링이다. 탈보호는 NMP내 20% 피페리딘으로 한다. 사용된 보호된 아미노산은 (예를 들어 Anaspec 또는 Novabiochem 또는 Protein Technologies로부터 공급된) 표준 Fmoc-아미노산이다. 미정제 펩타이드는 예컨대 어느 한쪽 5um 또는 7um C-18 실리카로 패키징된 20 mm x 250 mm 칼럼에서 절반분취 HPLC에 의해 정제된다. 펩타이드 용액은 HPLC 칼럼에서 펌핑되고 침전된 펩타이드는5 ml 50% 아세트산 H₂O에 용해되고 H₂O로 20 ml로 희석되고 칼럼상에 주사되어 그 다음 40°C에서 50 분 동안 0.1% TFA 10 ml/분으로 40-60 % CH₃CN의 구배로 용출된다. 펩타이드 함유 분획은 수집된다. 정제된 펩타이드는 물로 용출액의 희석 후 동결건조된다.

본 명세서에서 기재된 C 말단 아미드를 가진 모든 펩타이드는 달리 구체화되지 않는 한 아래 기재된 것과 유사한 방법에 의해 제조된다. MBHA 수지 (4-메틸벤즈하이드릴아민 폴리스티렌 수지는 펩타이드 합성 동안 사용된다. MBHA 수지, 100-180 메쉬, 1% DVB 가교결합된 폴리스티렌; 0.7-1.0 mmol/g의 장입), Boc-보호된 및 Fmoc 보호된 아미노산은 Midwest Biotech로부터 구매될 수 있다. Boc-보호된 아미노산을 사용하는 고상 펩타이드 합성은 Applied Biosystem 430A 펩타이드 합성기에서 수행된다. Fmoc 보호된 아미노산 합성은 Applied Biosystems 모델 433 펩타이드 합성기를 사용하여 수행된다.

펩타이드의 합성은 Applied Biosystem 모델 430A 펩타이드 합성기에서 수행된다. 합성 펩타이드는2 mmol의 Boc 보호된 아미노산을 함유하는 카트리지에 아미노산의 순차적 첨가에 의해 작제된다. 구체적으로, 합성은Boc DEPBT-활성화된 단일 커플링을 사용하여 수행된다. 커플링 단계의 마지막에, 펩티딜-수지는 TFA로 처리되어 N-말단 Boc 보호기를 제거한다. DMF로 반복적으로 세정되고 이러한 반복적인 사이클은 커플링 단계의 원하는 수동안 반복된다. 어셈블리 후, 측쇄보호, Fmoc는 20% 피페리딘 처리에 의해 제거되고 아실화는 DIC를 이용하여 수행되었다. 전체 합성의 마지막에 펩티딜-수지는 DCM을 사용함으로써 건조되고, 펩타이드는 무수 HF로 수지로부터 절단된다. 펩티딜-수지는 무수 HF로 처리되고, 이것은 전형적으로 대략 350 mg (~50% 수율)의 미정제 탈보호된-펩타이드를 산출하였다. 구체적으로, 펩티딜-수지 (30 mg 내지 200 mg)은 절단용 불소화수소 (HF) 반응 용기에서 배치된다. 500 μL의 p-크레졸은 카보늄 이온 포착제로서 용기에 첨가되었다. 용기는 HF 시스템에 부착되고 메탄올/드라이 아이스 혼합물에서 침지된다. 용기는 진공 펌프로 진공처리되고 10 mL의 HF는 반응 용기로 증류된다. 펩티딜-수지 및 HF의 이러한 반응 혼합물은 1시간 동안 0° C에서 교반되고, 그후 진공은 확립되고 HF는 빠르게 진공처리된다 (10-15 분). 용기는 주의하여 제거되고 대략 35 mL의 에테르로 채워져서 펩타이드를 침전시키고 HF 처리에서 비롯하는 소분자 유기 보호기 및 p-크레졸을 추출시킨다. 이러한 혼합물은 테플론 필터를 이용하여 여과되고 2회 반복되어 모든 과잉의 크레졸을 제거한다. 이러한 여과물은 폐기된다. 침전된 펩타이드는 대략 20 mL의 10% 아세트산 (aq)으로 용해한다. 원하는 펩타이드를 함유하였던, 이러한 여과물은 수집되고 동결건조된다.

실시예 2

본 실시예는 배양된 마우스 지방세포에서의 유리 지방산 수준에 대한 예시적인 펩타이드의 효과를 입증한다.

마우스 3T3-L1 세포를 지방전구세포 배지 (Zen-Bio, Durham, NC)에서의 96-웰, 48-웰, 또는 24-웰 플레이트 상의 1,000 내지20,000 세포/웰의 밀도에서 씨딩히고 37 ℃에서 5% CO2/95% 공기의 가습 분위기에서 합류되도록 성장시켰다. 합류 2일 후, 세포를 지방세포 분화 배지 (Zen-Bio, Durham, NC)에 배치하고 추가 3일 동안 37 ℃에서 5% CO2/95% 공기의 가습 분위기에서 배양했다. 그 다음 배양 배지를 지방세포 유지 배지 (Zen-Bio)로 대체하고 세포를 추가의 9-14일 동안 37 ℃에서 5% CO2/95% 공기의 가습 분위기에서 부분적인 배지 대체로 격일로 유지했다. 분화 12-17 일 다음에, 시험 펩타이드를 25 μM의 최종 농도로 첨가하고 37 ℃의 지방세포 유지 배지에서 5% CO2/95%의 가습 분위기에서 18-20 시간 동안 인큐베이션했다. 18-20 시간 후, 배지를 시험 펩타이드를 수용하는 있는 신선한 지방세포 유지 배지로 교환하고 1시간 동안 37 ℃에서 5% CO2/95%의 가습 분위기에서 인큐베이션했다. 1시간 후, 배지를, 이소프로테레놀 (1nM) (미처리된 대조군을 제외한 모든 샘플에 첨가됨) 및 시험 펩타이드를 함유하고 있는 검정 완충액 (Zen-Bio)로 교환했다. 세포를 인큐베이션된 추가 3시간 동안 37 ℃에서 5% CO2/95%의 가습 분위기에서 인큐베이션했다. 배지 중 유리 지방산 농도를, 플레이트 리더 (540 nm)를 사용하는 제조자의 지침에 따라 유리 지방산 검정 키트 (Zen-Bio)를 사용하여 결정했다.

흡광도 값을 미처리 배경에 대해 정정하고 이소프로테레놀 처리된 세포에 대해 표현했다. 이소프로테레놀 (1 nM) 단독에 의한 처리를 유리 지방산 수준 자극 대조군으로서 사용했다. 이소프로테레놀 대조군의 상대 표준 편차는 <10%. 인슐린을 유리 지방산 수준을 감소시키기 위해 매우 강력한 양성 대조군로서 사용했다. 인슐린 (100 nM) 처리에 대한 유리 지방산 수준은 이소프로테레놀 대조군 값의 <5%였다. 결과는 표 4 에서 보고된다.

실시예 3

마우스 3T3-L1 세포를 지방전구세포 배지 (Zen-Bio, Durham, NC)에서 96-웰, 48-웰, 또는 24-웰 플레이트 상의 1,000-20,000 세포/웰에서 씨딩하고 37 ℃에서 5% CO2/95% 공기의 가습 분위기에서 합류되도록 성장시켰다. 합류 2일 후, 세포를 지방세포 분화 배지 (Zen-Bio, Durham, NC)에 배치하고 추가 3일 동안 37 ℃에서 5% CO2/95% 공기의 가습 분위기에서 배양했다. 그 다음 배양 배지를 지방세포 유지 배지 (Zen-Bio)로 대체하고 세포를 추가의 9-14일 동안 37 ℃에서 5% CO2/95% 공기의 가습 분위기에서 부분적인 배지 대체로 격일로 유지했다. 분화 12-17 일 다음에, 시험 펩타이드를 25 μM의 최종 농도로 첨가하고 37 ℃의 지방세포 유지 배지에서 5% CO2/95%의 가습 분위기에서 18-20 시간 동안 인큐베이션했다. 18-20 시간 후, 배지를 시험 펩타이드를 수용하는 있는 신선한 지방세포 유지 배지로 교환하고 1시간 동안 37 ℃에서 5% CO2/95%의 가습 분위기에서 인큐베이션했다. 1시간 후, 배지를, 포르스콜린 (1 μM) (미처리된 대조군을 제외한 모든 샘플에 첨가됨) 및 시험 펩타이드를 함유하는 검정 완충액 (Zen-Bio)로 교환했다. 세포를 인큐베이션된 추가 3시간 동안 37 ℃에서 5% CO2/95%의 가습 분위기에서 인큐베이션했다. 배지 중 유리 지방산 농도를, 플레이트 리더 (540 nm)를 사용하는 제조자의 지침에 따라 유리 지방산 검정 키트 (Zen-Bio)를 사용하여 결정했다. 흡광도 값을 미처리 배경에 대해 정정하고 포르스콜린 처리된 세포에 대해 나타내었다. 포르스콜린 (1 μM) 단독에 의한 처리를 유리 지방산 수준 자극 대조군으로서 사용했다. 포르스콜린 대조군의 상대 표준 편차는 <10%였다. 인슐린을 유리 지방산 수준을 감소시키기 위해 매우 강력한 양성 대조군로서 사용했다. 인슐린 (100 nM) 처리에 대한 유리 지방산 수준은 포르스콜린 대조군 값의 <9%였다. 결과는 표 5 에서 보고된다.

실시예 4

본 실시예는 배양된 인간 일차 지방세포에서의 유리 지방산 수준에 대한 예시적인 펩타이드의 효과를 입증한다. 인간 일차 지방세포를 지방전구세포 배지 (Zen-Bio, Durham, NC)에서의 96-웰, 48-웰, 또는 24-웰 플레이트 상의 5,000-100,000 세포/웰에서 씨딩하고 37 ℃에서 5% CO2/95% 공기의 가습 분위기에서 합류되도록 성장시켰다. 합류 2일 후, 세포를 지방세포 분화 배지 (Zen-Bio, Durham, NC)에 배치하고 추가 3일 동안 37 ℃에서 5% CO2/95% 공기의 가습 분위기에서 배양했다. 그 다음 배양 배지를 지방세포 유지 배지 (Zen-Bio)로 대체하고 세포를 추가 11-21일 동안 37 ℃에서 5% CO2/95% 공기의 가습 분위기에서 부분적인 배지 대체로 격일로 유지했다. 분화 14-24 일 다음에, 시험 펩타이드를 25 μM의 최종 농도로 첨가하고 37 ℃의 지방세포 유지 배지에서 5% CO2/95%의 가습 분위기에서 18-20 시간 동안 인큐베이션했다. 18-20 시간 후, 배지를 시험 펩타이드를 수용하는 있는 신선한 지방세포 유지 배지로 교환하고 1시간 동안 37 ℃에서 5% CO2/95%의 가습 분위기에서 인큐베이션했다. 1시간 후, 배지를, 이소프로테레놀 (1nM) (미처리된 대조군을 제외한 모든 샘플에 첨가됨) 및 시험 펩타이드를 함유하고 있는 검정 완충액 (Zen-Bio)로 교환했다. 세포를 인큐베이션된 추가 3시간 동안 37 ℃에서 5% CO2/95%의 가습 분위기에서 인큐베이션했다. 배지 중 유리 지방산 농도를, 플레이트 리더 (540 nm)를 사용하는 제조자의 지침에 따라 유리 지방산 검정 키트 (Zen-Bio)를 사용하여 결정했다. 흡광도 값을 미처리 배경에 대해 정정하고 이소프로테레놀 처리된 세포에 대해 표현했다. 이소프로테레놀 (1 nM) 단독에 의한 처리를 유리 지방산 수준 자극 대조군으로서 사용했다. 이소프로테레놀 대조군의 상대 표준 편차는 <14%였다. 인슐린을 유리 지방산 수준을 감소시키기 위해 매우 강력한 양성 대조군로서 사용했다. 인슐린 (100 nM) 처리에 대한 유리 지방산 수준은 이소프로테레놀 대조군 값의 <5%였다. 결과는 표 6 에서 보고된다.

실시예 5

본 실시예는 배양된 인간 일차 지방세포에서의 유리 지방산 수준에 대한 예시적인 펩타이드의 효과를 입증한다. 인간 일차 지방세포를 지방전구세포 배지 (Zen-Bio, Durham, NC)에서의 96-웰, 48-웰, 또는 24-웰 플레이트 상의 5,000-100,000 세포/웰에서 씨딩하고 37 ℃에서 5% CO2/95% 공기의 가습 분위기에서 합류되도록 성장시켰다. 합류 2일 후, 세포를 지방세포 분화 배지 (Zen-Bio, Durham, NC)에 배치하고 추가 3일 동안 37 ℃에서 5% CO2/95% 공기의 가습 분위기에서 배양했다. 그 다음 배양 배지를 지방세포 유지 배지 (Zen-Bio)로 대체하고 세포를 추가 11-21일 동안 37 ℃에서 5% CO2/95% 공기의 가습 분위기에서 부분적인 배지 대체로 격일로 유지했다. 분화 14-24 일 다음에, 시험 펩타이드를 25 μM의 최종 농도로 첨가하고 37 ℃의 지방세포 유지 배지에서 5% CO2/95%의 가습 분위기에서 18-20 시간 동안 인큐베이션했다. 18-20 시간 후, 배지를 시험 펩타이드를 수용하는 있는 신선한 지방세포 유지 배지로 교환하고 1시간 동안 37 ℃에서 5% CO2/95%의 가습 분위기에서 인큐베이션했다. 1시간 후, 배지를, 포르스콜린 (1 μM) (미처리된 대조군을 제외한 모든 샘플에 첨가됨) 및 시험 펩타이드를 함유하는 검정 완충액 (Zen-Bio)로 교환했다. 세포를 인큐베이션된 추가 3시간 동안 37 ℃에서 5% CO2/95%의 가습 분위기에서 인큐베이션했다. 배지 중 유리 지방산 농도를, 플레이트 리더 (540 nm)를 사용하는 제조자의 지침에 따라 유리 지방산 검정 키트 (Zen-Bio)를 사용하여 결정했다. 흡광도 값을 미처리 배경에 대해 정정하고 포르스콜린 처리된 세포에 대해 나타내었다. 포르스콜린 (1 μM) 단독에 의한 처리를 유리 지방산 수준 자극 대조군으로서 사용했다. 포르스콜린 대조군의 상대 표준 편차는 <20%였다. 인슐린을 유리 지방산 수준을 감소시키기 위해 매우 강력한 양성 대조군로서 사용했다. 인슐린 (100 nM) 처리에 대한 유리 지방산 수준은 포르스콜린 대조군 값의 <8%였다. 결과는 표 7 에서 보고된다.

실시예 6

본 실시예는 다이어트 유도 비만 (DIO) 마우스에서의 체중, 혈당 수준, 및 지방량에 대한 예시적인 펩타이드의 효과를 입증한다. 수컷 C57BL/6 마우스를 18주 동안 고지방 다이어트에 유지시켜 다이어트 유도 비만을 발달시켰다. 동물을, 혈당 수준 및 체중을 기반으로 한 처리 그룹으로 무작위 추출했다. 본 발명의 펩타이드를 10일 동안 15 mg/kg/용량의 용량으로 피하 또는 복강내 주사에 의해 매일 1회 또는 2회 수컷 DIO 마우스의 2개의 그룹에 투여했다 (처리 그룹당 N = 8 동물). 수컷 DIO 마우스 (n = 8)의 추가 그룹은 비히클 (물 또는 염수) 단독을 수용했다. 체중, 혈당 수준 및 음식 섭취를 모니터링했다. 체질량 분포 (지방 대 제지방)을 투약 전에 그리고 투약의 끝에 정량적 전신 NMR로 결정했다. 본 발명의 펩타이드의 투여는 비히클 단독으로 치료된 동물과 비교할 때 기준선 값으로부터 더 큰 체중 감소, 더 큰 혈당 감소, 및 더 큰 지방량의 감소를 나타낸다 (표 8).

실시예 7

본 실시예는 다이어트 유도 비만 (DIO) 마우스에서 체중 및 지방량에 대한 예시적인 펩타이드의 효과를 결정하기 위한 21-일 연구를 입증한다. 수컷 C57BL/6 마우스를 12 내지 22주 동안 고지방 다이어트를 유지하여 다이어트 유도 비만을 발달시켰다. 동물을, 혈당 수준 및 체중을 기반으로 한 처리 그룹으로 무작위 추출했다. 펩타이드 (서열번호: 208 및 서열번호: 210) 각각을 21일 동안 15 mg/kg/용량의 용량으로 적절한 경로에 의해 매일 2회 수컷 DIO 마우스의 그룹에 투여했다 (N = 8 내지 12 동물/치료 그룹). 수컷 DIO 마우스의 추가 그룹 (n = 8/그룹)은 대조군 시험품 (리라글루타이드 또는 피오글리타존) 또는 비히클 (물 또는 염수) 단독을 수용했다. 체중, 혈당 수준 및 음식 섭취를 포함하는 대사 파라미터를 모니터링했다. 체질량 분포 (지방 대 제지방)을 투약 전 그리고 투약의 끝에 정량적 전신 NMR로 적절한 경우 결정했다. 펩타이드의 투여는 서열번호: 2의 펩타이드, 대조군 시험품 (피오글리타존 또는 리라글루타이드) 또는 비히클 단독으로 치료된 동물과 비교할 때 기준선 값으로부터 더 큰 체중 감소, 더 큰 혈당 감소, 및/또는 더 큰 지방량의 감소를 나타내었다 (표 9).

실시예 8

본 실시예는 다이어트 유도 비만 (DIO) 마우스의 체중 및 지방량에 대한 본 개시내용의 예시적인 펩타이드 및 상업적으로-이용가능한 항-당뇨병 치료제를 포함하는 병용 요법의 효과를 결정하기 위해 21-일 연구를 입증한다.

수컷 C57BL/6 마우스를 12 내지 22주 동안 고지방 다이어트를 유지하여 다이어트 유도 비만을 발달시켰다. 동물을, 혈당 수준 및 체중을 기반으로 한 처리 그룹으로 무작위 추출했다. 펩타이드 (서열번호: 208 및 서열번호: 210) 각각을 리라글루타이드의 복강내 투여 (10 nmol/kg/일)과 공조하여 21일 동안 5 mg/kg/용량의 용량으로 적절한 경로에 의해 1일 1회 수컷 DIO 마우스의 그룹에 투여했다 (처리 그룹당 N = 8 동물). 수컷 DIO 마우스의 추가 그룹 (n = 8/그룹)은 대조군 시험품 (리라글루타이드 단독) 또는 비히클 (물 또는 염수) 단독을 수용했다. 체중, 혈당 수준 및 음식 섭취를 포함하는 대사 파라미터를 모니터링했다. 체질량 분포 (지방 대 제지방)을 투약 전 그리고 투약의 끝에 정량적 전신 NMR로 적절한 경우 결정했다. 리라글루타이드와 공조한 펩타이드의 투여는 리라글루타이드 단독 또는 비히클 단독으로 치료된 동물과 비교할 때 기준선 값으로부터 더 큰 체중 감소, 더 큰 혈당 감소, 및/또는 더 큰 지방량의 감소를 나타내었다 (표 10).

실시예 9

본 실시예는 간 손상의 트리글리세라이드 수준 및 마커 에 대한 예시적인 펩타이드의 효과를 입증한다.

수컷 C57BL/6 마우스를 12 내지 22주 동안 고지방 다이어트를 유지하여 다이어트 유도 비만을 발달시켰다. 동물을, 혈당 수준 및 체중을 기반으로 한 처리 그룹으로 무작위 추출했다. 펩타이드 (서열번호: 208, 및 서열번호: 210) 각각을 21일 동안 15 mg/kg/용량의 용량으로 적절한 경로에 의해 매일 2회 수컷 DIO 마우스의 그룹에 투여했다 (N = 8 내지 12 동물/치료 그룹). 수컷 DIO 마우스의 추가 그룹 (n = 8/그룹)은 대조군 시험품 (리라글루타이드) 또는 비히클 (물 또는 염수) 단독을 수용했다. 혈청 샘플을 21일 째의 첫 번째 용량 2시간 후 종료시에 수득했다. 샘플을 당해 분야에서 잘 알려진 방법에 의해 표준 임상 화학 파라미터에 의해 분석했다. 서열번호: 208 및 서열번호: 210의 펩타이드의 투여는 대조군 시험품 (리라글루타이드), 또는 비히클 단독으로 치료된 동물과 비교할 때 혈청 트리글리세라이드, LT 및 AST의 더 큰 감소를 나타내었다 (표 11).

실시예 10

본 실시예는 사이노몰구스 원숭이에서 본 개시내용의 예시적인 펩타이드의 약동학을 입증한다.

수컷 사이노몰구스 원숭이 (2 내지 6 kg)는 투약 전 8시간 동안 절식시킨다. 동물은 시험 펩타이드 (0.1 내지 15 mg/kg)의 단일 정맥내 또는 피하 볼러스 용량이 주사된다. 정맥내 주사는 복재 또는 또 다른 적합한 정맥을 통해 주사된다. 피하 주사는 견갑골 영역에서 투여된다. 혈액 샘플는 24시간의 간격으로 회수되고 혈장용으로 가공된다. 음식는 주사후 4시간에 반환된다. 혈장 샘플 중 펩타이드 및/또는 대사물의 농도는 적합한 분석 방법 (예를 들어, LCMS)에 의해 결정되고 약동학적 파라미터는 비-구획 방법에 의해 계산된다. 본 발명의 펩타이드는 서열번호: 2에 비해 증가된 노출 (예를 들어, 증가된 C_max, UC, 및/또는 반감기)를 나타낸다.

실시예 11

본 실시예는 비만 비-인간 영장류 모델 에서의 본 개시내용의 예시적인 펩타이드의 효능을 입증한다.

자발적으로 비만 수컷 사이노몰구스 원숭이는 적어도 3주 동안 투약 및 취급에 익숙해져 있다. 기준선 동물 특성이 결정되고 동물은 체중 및 기준선 대사 파라미터 예컨대 트리글리세라이드 수준을 기반으로 처리 그룹으로 무작위화된다. 무작위화 다음에, 원숭이의 그룹은 적합한 경로에 의해 투여된 본 발명의 펩타이드의 매일 1회 또는 매일 2회 용량을 4주 이상 동안 수용한다. 원숭이의 대조군 그룹은 1일 용량의 비히클 또는 양성 대조군을 수용한다. 음식 소비 및 체중는 연구 동안 간격으로 측정된다. 체중, 음식 섭취, BMI 및/또는 대사 파라미터에 대한 투여된 펩타이드의 효과는 비히클로 처리된 대조군 동물과 비교된다.

실시예 12

본 실시예는 비-알코올성 지방간염 (NASH)의 STAM® 마우스 모델 에서의 본 개시내용의 예시적인 펩타이드의 효능을 입증한다.

NASH의 STAM 모델에서, C57/bl6는 출생 3일 후 췌장 β-세포를 파괴하기 위해 단일 피하 용량의 스트렙토톡신이 주사된다. 4주령에서, 동물은 고지방 다이어트에 둔다. 이러한 병용 치료는 고혈당증 및 중간 정도 고지혈증와 함께 지방증, 섬유증, 간경변 및 마지막으로 간세포암종 (HCC)의 발달을 초래하고, 따라서 이는 인간 NASH와 매유 유사하다. 5 주령에서 시작하여, STAM 동물의 그룹 (그룹 당 8마리 동물)는 연구 종결까지 적절한 경로에 의해 매일 또는 매일 2회 투여된 본 발명의 펩타이드로 처리된다. 동물의 대조군 그룹은 적합한 양성 대조군 화합물 (예를 들어 텔미사르탄)의 매일 투여를 수용한다. 대략 10 주령에서, 대사 파라미터는 결정되고 동물은 희생된다. 간 샘플은 수득하여 고정하고, 파라핀에서 포매시키고, 헤마톡실린 및 에오신으로 염색하고 또는 메이슨 트리크롬, 및 광학 현미경검사로 검사했다. 지방증 및 비-알코올성 지방 간 질환 (NAFLD) 활성 스코어 (NAS)의 정도는 당해 분야에서 공지된 방법에 따라 조직병리적으로 결정된다.

실시예 13

본 실시예는 종양 보유 마우스 이종이식 모델에서의 종양 성장에 대한 본 개시내용의 예시적인 펩타이드의 효능을 입증한다.

마우스 이종이식 모델은 당해 분야에서 잘 알려진 방법에 의해 준비된다. 예를 들어, SCID 마우스에 인간 종양 세포 (예를 들어, MCF-7, MDA-MB-231, PC-3, 등)를 주가하고 종양 성장는 모니터링했다. 종양이 충분한 크기일 때, 동물은 처리 그룹으로 무작위화되고 본 발명의 펩타이드, 비히클 대조군, 양성 대조군 (예를 들어, 젬시타빈 또는 파클리탁셀) 또는 본 발명의 펩타이드 + 양성 대조군의 조합이 매일, 격일로, 또는 매주 투약된다. 종양 성장, 체중, 및 생존은 14 내지 28 일에 걸쳐 모니텅링된다. 본 발명의 펩타이드 단독 및/또는 양성 대조군 병용 투여는 비히클 대조군으로 처리된 동물과 비교할 때 감소된 종양 성장 및/또는 생존의 연장에 대해 검사된다.

실시예 14

본 실시예는 마우스 혈장에서의 본 개시내용의 예시적인 펩타이드의 안정성을 입증한다.

펩타이드 (100 uM)을 풀링된 마우스 혈장에서 37 ℃에서 인큐베이션하고 샘플을 제거하고 3시간의 과정에 걸쳐 LC/MS/MS에 의해 온전한 펩타이드의 농도에 대해 즉시 분석했다. 각 시점에서의 혈장 중 펩타이드 나머지의 퍼센트를 초기 피크 면적에 대해 계산했다 (표 12).

실시예 15

펩타이드 (10 uM)을 풀링된 마우스 혈장에서 37 ℃에서 인큐베이션하고 샘플을 제거하고 3시간의 과정에 걸쳐 LC/MS/MS에 의해 온전한 펩타이드의 농도에 대해 즉시 분석했다. 각 시점에서의 혈장 중 펩타이드 나머지의 퍼센트를 초기 피크 면적에 대해 계산했다 (표 13).

실시예 16

본 실시예는 원숭이 및 인간 혈장에서 본 개시내용의 예시적인 펩타이드의 안정성을 입증한다. 펩타이드 (10 uM)을 풀링된 마우스 또는 인간 혈장에서 37 ℃에서 인큐베이션하고 샘플을 제거하고 3시간의 과정에 걸쳐 LC/MS/MS에 의해 온전한 펩타이드의 농도에 대해 즉시 분석했다. 각 시점에서의 혈장 중 펩타이드 나머지의 퍼센트를 초기 피크 면적에 대해 계산했다 (표 14).

실시예 17

본 실시예는 배양된 마우스 지방세포에서의 유리 지방산 수준에 대한 예시적인 펩타이드의 효과를 입증한다. 마우스 3T3-L1 세포를 지방전구세포 배지 (Zen-Bio, Durham, NC)에서의 96-웰, 48-웰, 또는 24-웰 플레이트 상의 1,000내지 20,000 세포/웰의 밀도에서 씨딩하고 37 ℃에서 5% CO2/95% 공기의 가습 분위기에서 합류되도록 성장시켰다. 합류 2일 후, 세포를 지방세포 분화 배지 (Zen-Bio, Durham, NC)에 배치하고 추가 3일 동안 37 ℃에서 5% CO2/95% 공기의 가습 분위기에서 배양했다. 그 다음 배양 배지를 지방세포 유지 배지 (Zen-Bio)로 대체하고 세포를 추가의 9-14일 동안 37 ℃에서 5% CO2/95% 공기의 가습 분위기에서 부분적인 배지 대체로 격일로 유지했다. 분화 12-17 일 다음에, 시험 펩타이드를 25-50 μM의 최종 농도에서 첨가하고 37 ℃의 지방세포 유지 배지에서 5% CO2/95%의 가습 분위기에서 18-20 시간 동안 인큐베이션했다. 배지 인큐베이션 후, 배지를 제거하고 이소프로테레놀 (1nM) (미처리된 대조군을 제외한 모든 샘플에 첨가됨) 및 시험 펩타이드를 함유하고 있는 검정 완충액 (Zen-Bio) 과 교환했다. 세포를 인큐베이션된 추가 3시간 동안 37 ℃에서 5% CO2/95%의 가습 분위기에서 인큐베이션했다. 배지 중 유리 지방산 농도를, 플레이트 리더 (540 nm)를 사용하는 제조자의 지침에 따라 유리 지방산 검정 키트 (Zen-Bio)를 사용하여 결정했다.

흡광도 값을 미처리 배경에 대해 정정하고 이소프로테레놀 처리된 세포에 대해 표현했다. 이소프로테레놀 (1 nM) 단독에 의한 처리를 유리 지방산 수준 자극 대조군으로서 사용했다. 이소프로테레놀 대조군의 상대 표준 편차는 <10%였다. 인슐린을 유리 지방산 수준을 감소시키기 위해 매우 강력한 양성 대조군로서 사용했다. 인슐린 (100 nM) 처리에 대한 유리 지방산 수준은 이소프로테레놀 대조군 값의 <5%였다. 결과는 표 15 에서 보고된다.

실시예 18

본 실시예는 비-알코올성 지방간염 (NASH)의 STAM® 마우스 모델 에서의 본 개시내용의 예시적인 펩타이드의 효능을 입증한다. NASH의 STAM® 모델에서, 췌장 β-세포를 파괴하기 위해 출생 2일 후, C57/BL6 마우스에게 200 μg 스트렙토톡신의 단일 피하 용량을 주사했다. 4주령에서, 동물를 고지방 다이어트 (지방으로부터 57% kcal)에 두었고 연구 전반에 걸쳐 동일한 다이어트를 유지했다. 이러한 병용 치료로 고혈당증 및 중간 정도 고지혈증과 함께 지방증, 섬유증, 간경변 및 마지막으로 간세포암종 (HCC)이 발생했고, 따라서 인간 NASH와 아주 닮았다. 6주령에서 시작하여, STAM 동물의 그룹 (그룹 당 8마리 동물)을 연구 종결까지 매일 2회 복강내 주사로 투여된 본 발명의 펩타이드로 처리했다. STAM 동물의 대조군 그룹 (n = 8)은 1일 용량의 텔미사르탄 대조군 화합물 (10 mg/kg)을 수용했다. 정상 마우스 (n = 8)의 추가 그룹은 처리를 받지 않았다. 투약 21일 후, 9 주령에서, 대사 파라미터를 결정하고, 동물을 희생시켰다. 간 샘플을 수득하여 고정하고, 파라핀에서 포매시키고, 헤마톡실린 및 에오신으로 염색하고, 그리고 광학 현미경검사로 검사했다. 지방증 및 비-알코올성 지방 간 질환 (NAFLD) 활성 스코어 (NAS)의 정도를 당해 분야에서 공지된 방법에 따라 조직병리적으로 결정된다. 수득한 NAS 스코어는 표 16에 나타나 있다.

실시예 19

본 실시예는 비-알코올성 지방간염 (NASH)의 STAM® 마우스 모델에서의 간 트리글리세라이드 수준 및 혈장 ALT 수준을 감소시키는데 있어서 본 개시내용의 예시적인 펩타이드의 효능을 입증한다. NASH의 STAM® 모델에서, 췌장 β-세포를 파괴하기 위해 출생 2일 후, C57/BL6 마우스에게 200 μg 스트렙토톡신의 단일 피하 용량을 주사했다. 4주령에서, 동물를 고지방 다이어트 (지방으로부터 57% kcal)에 두었고 연구 전반에 걸쳐 동일한 다이어트를 유지했다. 이러한 병용 치료로 고혈당증 및 중간 정도 고지혈증과 함께 지방증, 섬유증, 간경변 및 마지막으로 간세포암종 (HCC)이 발생했고, 따라서 인간 NASH와 아주 닮았다. 6주령에서 시작하여, STAM 동물의 그룹 (그룹 당 8마리 동물)을 연구 종결까지 매일 2회 복강내 주사로 투여된 본 발명의 펩타이드로 처리했다. STAM 동물의 대조군 그룹 (n = 8)은 1일 용량의 텔미사르탄 대조군 화합물 (10 mg/kg)을 수용했다. 정상 마우스 (n = 8)의 추가 그룹은 처리를 받지 않았다. 투약 21일 후, 9 주령에서, 대사 파라미터를 결정하고, 동물을 희생시켰다. 간 트리글리세라이드 클로로포름-메탄올에서 균질화로 결정하고 밤새 실온에서 인큐베이션했다. 클로로포름-메탄올-물로 세정한 후, 추출물을 증발 건조되고 이소프로판올에 용해시켰다. 그 다음 간 트리글리세라이드 함량을 트리글리세라이드 E-시험 (Wako, Japan) 로 측정했다. 혈장 ALT 수준을 Fuji Dri-Chem 7000 (Fujifilm, Japan)을 사용하여 결정했다. 결과는 표 17 에 나타나 있다.

실시예 20

본 실시예는 다이어트 유도 비만 (DIO) 마우스에서의 체중, 혈당 수준, 및 지방량에 대한 예시적인 펩타이드의 효과를 입증한다.

수컷 C57BL/6 마우스를 18주 동안 고지방 다이어트에 유지시켜 다이어트 유도 비만을 발달시켰다. 동물을, 혈당 수준 및 체중을 기반으로 한 처리 그룹으로 무작위 추출했다. 본 발명의 펩타이드를 매일 1회 또는 2회 복강내 또는 피하 주사로 5 내지 15 mg/kg/용량의 용량으로 10일 동안 수컷 DIO 마우스의 2개의 그룹에 투여했다 (처리 그룹당 N = 8 동물). 수컷 DIO 마우스 (n = 8)의 추가 그룹은 비히클 (물 또는 염수) 단독을 수용했다. 체중, 혈당 수준 및 음식 섭취를 모니터링했다. 체질량 분포 (지방 대 제지방)을 투약 전에 그리고 투약의 끝에 정량적 전신 NMR로 결정했다. 본 발명의 펩타이드의 투여는 기준선 값으로부터 체중 감소 및/또는 지방량의 감소를 생성했다 (표 18).

실시예 21. - 글루코스 이용

글루코스 대사에 대한 펩타이드의 효과는 배양된 배양 세포 예컨대 마우스 근아세포에서 글루코스 이용의 검정을 사용하여 평가될 수 있다. 펩타이드는 DMSO 중 10 mM 스톡으로서 초기에 제조되고 10 μM (0.1% DMSO)의 최종 농도에서 사용된다. C2C12 마우스 근아세포주는 미국 종균 협회 (Manassas, VA)로부터 구매된다. C2C12 배양물은 격일로 배지 변화와 함께 37 ℃에서 5% CO2/95% 공기의 가습 분위기에서 유지된다. C2C12 세포는 100 IU/ml 페니실린 및 100 μg/ml 스트렙토마이신을 갖는 10% FBS 가 보충된 DMEM (1 g/L 글루코스)에서 성장된다. C2C12 세포는 96-웰 플레이트 상의 7,000 세포/웰에서 씨딩되고 합류하도록 배양된다. 세포가 합류점에 도달한 후, 배지는 100 IU/ml 페니실린 및 100 μg/ml 스트렙토마이신을 갖는 2% HS 가 보충된 DMEM (1 g/L 글루코스)로 변화되고 37 ℃에서 5% CO2/95% 공기의 가습 분위기에서 유지된다. 분화의 유도 5일 후 100 IU/ml 페니실린 및 100 μg/ml 스트렙토마이신을 갖는 2% HS가 보충된 신선한 DMEM (1 g/L 글루코스)는 배양에 첨가된다. 세포는 유지된 37 ℃에서 5% CO₂ 및 95% 공기의 가습된 분위기에서 5시간 동안. 5 시간 시험 후 신선한 분화 배지에서 준비된 10μM의 펩타이드 또는 대조군 (1% DMSO 중 0.5 mM 또는 1 mM 메트포르민)는 세포에 첨가되고 배양물은 37 ℃에서 5% CO2/95% 공기의 가습 분위기에서 18-22시간 동안 유지된다. 인큐베이션의 끝에서 배양 배지는 세포로부터 제거되고 나머지 글루코스 농도는570nm에서 Cytation 3 플레이트 리더 (BioTek, Winooski, VT)를 사용하여 제조자의 지침에 따라 글루코스 검정 키트 (Abcam)을 사용하여 측정된다. 배지에서의 글루코스 농도는 0.1% DMSO 처리된 대조군 세포에 대해 계산된다. 메트포르민은 글루코스 수준의 감소를 위한 양성 대조군으로서 사용된다. 본 발명의 펩타이드 단독 및/또는 양성 대조군 병용 투여는 비히클 대조군으로 처리된 것들보다 C2C12 마우스 근아세포에서 증가된 또는 감소된 글루코스 이용을 초래한다.

실시예 22 - 스타우로스포린에 노출된 세포에서의 ATP 수준

펩타이드의 세포 생존력에서 잠재적인 세포보호 효과 또는 잠재적인 상승작용 효과는 적합한 스트레스 예컨대 스타우로스포린 노출에 노출된 배양 세포 예컨대 인간 신경교세포종 세포에서 ATP 수준의 검정을 사용하여 평가될 수 있다. 펩타이드는 DMSO 중 10 mM 스톡으로서 초기에 제조되고 10 μM (0.1% DMSO)의 최종 농도에서 시험된다. 스타우로스포린은 세포 ATP 수준을 감소시키는 세포자멸사/세포사의 고도로 강력한 유발제로서 사용된다. 스타우로스포린은 10 nM 내지 1 μM 범위의 농도에서 사용된다. CellTiter-Glo® 검정 키트는 Promega로부터 구매된다. SH-SY5Y 인간 신경교세포종 세포주는 미국종균협회 (Manassas, VA)로부터 구매되고 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center (New York, NY)로부터 인가된다. SH-SY5Y 세포는 100 IU/ml 페니실린 및 100 μg/ml 스트렙토마이신을 갖는 10% FBS로 보충된 DMEM/F12 배지에서 성장된다. 배양물은 37 ℃에서 5% CO2/95% 공기의 가습 분위기에서 유지된다. SH-SY5Y 세포는 96-웰 플레이트에서 30,000 세포/웰로 씨딩된다. 다음 날 세포는 0.1% DMSO내 10 μM로 시험 펩타이드 및 스타우로스포린 (40 μM)로 인큐베이션되고 37 ℃에서 5% CO2/95% 공기의 가습 분위기에서 18-20 시간 동안 유지된다. ATP 수준은 제조자의 지침에 따라 CellTiter-Glo 검정 키트 (Promega)를 사용하여 결정된다. 플레이트에서 각각의 샘플 웰에 대한 발광은 Cytation 3 플레이트 리더 (BioTek, Winooski, VT)를 사용하여 측정된다. 활성은 40 μM 스타우로스포린으로 처리에 의해 ATP내 감소에 비해 계산된다. 100% 미만 값은 세포보호성 효과를 나타내고, 100% 초과 값은 생존력에서 상승작용 효과를 나타낸다. 40 μM 스타우로스포린 처리된 대조군 세포에 대한 결과의 상대 표준 편차는 <5%이다. 단독으로 및 / 또는 양성 대조군과 조합으로 본 발명의 펩타이드의 투여는 비히클 대조군으로 처리된 것들보다 스타우로스포린에 노출된 배양된 SH-SY5Y 신경모세포종 세포에서 증가된 또는 감소된 ATP 수준을 초래한다.

본 명세서에서 개시된 및 청구된 물품 및 방법의 모두는 본 개시내용에 비추어 과도한 실험과정 없이 제조 및 실행될 수 있다. 본 개시내용의 물품 및 방법이 바람직한 구현예의 관점에서 기재되고 있는 한편, 변형이 본 개시내용의 사상 및 범위로부터 이탈 없이 물품 및 방법에 적용될 수 있다는 것이 당해 분야의 숙련가에 분명할 것이다. 당해 분야의 숙련가에 분명한 모든 그와 같은 변형 및 등가물은, 현재 실재하는 또는 나중에 개발되든 아니든, 첨부된 청구항들에 의해 정의된 바와 같이 본 개시내용의 사상 및 범위 이내인 것으로 간주된다. 예를 들어, 사용 방법으로서 본 명세서에서 기재된 모든 양태 및 / 또는 구현예는 또한 기재된 경우 사용을 위한 조성물, 또는 명시된 용도용 약제에서 사용을 위한 조성물로서 고려된다. 명세서에서 언급된 모든 특허, 특허 출원, 및 공개는 본 개시내용이 속하는 당해 분야의 숙련가의 수준을 나타낸다. 적합하게 본 명세서에서 실례로 기재된 본 개시내용은 본 명세서에서 구체적으로 개시되지 않은 임의의 요소(들)의 부재 하에서 실시될 수 있다. 따라서, 예를 들어, 본 명세서에서 각각의 사례에서 임의의 용어들 "포함하는", "으로 본질적으로 구성되는", 및 "으로 구성되는"은 다른 2개의 용어들의 어느 하나로 대체될 수 있다. 이용되고 있는 용어들 및 표현들은 제한이 아닌 설명의 용어들로서 사용되고, 나타난 및 기재된 특징의 임의의 등가물 또는 이의 부분을 배제하는 그와 같은 용어들 및 표현들의 사용에서 의도는 없지만, 다양한 변형이 청구된 본 개시내용의 범위 이내 가능하다는 것이 인식된다. 따라서, 본 개시내용이 바람직한 구현예 및 선택적인 특징에 의해 구체적으로 개시되어 있어도 본 명세서에서 개시된 개념의 변형 및 변이가 당해 분야의 숙련가에 의해 재분류될 수 있다는 것, 그리고 그와 같은 변형 및 변이가 첨부된 청구항들에 의해 정의된 바와 같이 본 개시내용의 범위 이내인 것으로 간주되는 것이 이해될 수 있다.

본 명세서에서 인용된, 공개, 특허 출원, 및 특허를 포함하는, 모든 참고문헌은 이로써 참고로 전체적으로 그리고 각각의 참고문헌이 참고로 편입되는 것으로 개별적으로 및 구체적으로 명시된 그리고 (법에 의해 허용된 최대 정도로) 본 명세서에서 전체적으로 제시된 것처럼 동일한 정도로 편입된다. 모든 제목 및 하위-제목은 본 명세서에서 단지 편의상 사용되고 어떤 식으로든 제한되는 것으로서 해석되지 않아야 한다. 본 명세서에서 제공된 임의의 및 모든 예, 또는 예시적인 언어 (예를 들어, "예컨대")의 사용은 본 개시내용을 더 양호하게 예시하기 위해 단지 의도되고 달리 청구되지 않는 한 본 개시내용의 범위에서 제한을 두지 않는다. 명세서에서 언어가 본 개시내용의 실시에 필수로서 임의의 비-청구된 요소를 나타내는 것으로서 해석되지 않아야 한다. 본 명세서에서 특허 문서의 인용 및 편입은 단지 편의상 실시되고 그와 같은 특허 문서의 유효성, 특허성, 및 / 또는 실시가능성의 임의의 관점을 반영하지 않는다.

본 개시내용은 적용가능한 법에 의해 허용된 경우 여기에 부가된 양태에서 인용된 요지의 모든 변형 및 등가물을 포함한다.

SEQUENCE LISTING <110> CohBar Inc. <120> THERAPEUTIC PEPTIDES <130> 32701/51155A <150> US 62/401,123 <151> 2016-09-28 <160> 380 <170> KoPatentIn version 3.0 <210> 1 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa is an amino acid with a non-polar side chain or a polar side chain or is absent <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Arg may be absent when Xaa at position 1 is absent <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> Trp is absent when Xaa at position 2 is absent <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> Xaa is an amino acid with a non-polar side chain or a polar side chain <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> Xaa is an amino acid with a non-polar side chain or a polar side chain <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Xaa is an amino acid with a non-polar side chain <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> Xaa is an amino acid with a non-polar side chain <220> <221> 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(1)..(1) <223> N-terminal PEG600 <400> 357 Lys Arg Trp Gln Glu Met Asn Tyr Ile Phe Tyr Pro Arg 1 5 10 <210> 358 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> N-terminal biotin <400> 358 Arg Trp Gln Glu Met Asn Tyr Ile Phe Tyr Pro Arg 1 5 10 <210> 359 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(13) <223> C-terminal biotin <400> 359 Arg Trp Gln Glu Met Asn Tyr Ile Phe Tyr Pro Arg Lys 1 5 10 <210> 360 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 360 Ile Phe Tyr Pro Arg 1 5 <210> 361 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 361 Asn Tyr Ile Phe Tyr Pro Arg 1 5 <210> 362 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 362 Glu Met Asn Tyr Ile Phe Tyr Pro 1 5 <210> 363 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 363 Gln Glu Met Asn Tyr Ile Phe Tyr Pro 1 5 <210> 364 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 364 Glu Met Asn Tyr Ile Phe Tyr Pro Arg 1 5 <210> 365 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 365 Trp Gln Glu Met Asn Tyr Ile Phe Tyr 1 5 <210> 366 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 366 Gln Glu Met Asn Tyr Ile Phe Tyr Pro Arg 1 5 10 <210> 367 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> N-terminal biotin <400> 367 Lys Arg Trp Gln Glu Met Asn Tyr Ile Phe Tyr Pro Arg 1 5 10 <210> 368 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> N-terminal PEG600 <400> 368 Lys Asn Tyr Ile Phe Tyr Pro Arg 1 5 <210> 369 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> N-terminal PEG600 <400> 369 Lys Glu Met Asn Tyr Ile Phe Tyr Pro Arg 1 5 10 <210> 370 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> N-terminal PEG600 <400> 370 Lys Trp Gln Glu Met Asn Tyr Ile Phe Tyr Pro Arg 1 5 10 <210> 371 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> N-terminal PEG600 <400> 371 Lys Arg Trp Gln Glu Met Asn Tyr Ile Phe Tyr Pro 1 5 10 <210> 372 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> N-terminal PEG600 <400> 372 Lys Trp Gln Glu Met Asn Tyr Ile Phe Tyr Pro 1 5 10 <210> 373 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> Xaa is any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> Xaa is any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> Xaa is any amino acid <400> 373 Arg Trp Gln Glu Xaa Xaa Xaa Ile Phe Tyr 1 5 10 <210> 374 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> Xaa is any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> Xaa is any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> Xaa is any amino acid <400> 374 Arg Trp Gln Glu Xaa Xaa Tyr Xaa Phe Tyr 1 5 10 <210> 375 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> Xaa is any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> Xaa is any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..(9) <223> Xaa is any amino acid <400> 375 Arg Trp Gln Glu Xaa Xaa Tyr Ile Xaa Tyr 1 5 10 <210> 376 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> Xaa is any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> Xaa is any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Xaa is any amino acid <400> 376 Arg Trp Gln Glu Xaa Xaa Tyr Ile Phe Xaa 1 5 10 <210> 377 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(13) <223> C-terminal PEG600 <400> 377 Arg Trp Gln Glu Met Asn Tyr Ile Phe Tyr Pro Arg Lys 1 5 10 <210> 378 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa is an amino acid with a non-polar side chain or a polar side chain or is absent when Xaa at position 2 is absent <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa is an amino acid with a non-polar side chain or a polar side chain or is absent when Xaa at position 3 is absent <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> Xaa is an amino acid with a non-polar side chain or a polar side chain or is absent <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> Xaa is an amino acid with a non-polar side chain or a polar side chain <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> Xaa is an amino acid with a non-polar side chain or a polar side chain <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Xaa is an amino acid with a non-polar side chain or a polar side chain <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> Xaa is an amino acid with a non-polar side chain or a polar side chain <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(13) <223> Xaa is an amino acid with a non-polar side chain or a polar side chain <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14)..(14) <223> Xaa is Leu, Lys, Arg or is selected from an amino acid with a non-polar side chain or a polar side chain or is absent <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(15) <223> Xaa is Leu, Lys, Arg or is selected from an amino acid with a non-polar side chain or a polar side chain or is absent when Xaa at position 14 is absent <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> Xaa is Arg or is selected from an amino acid with a non-polar side chain or a polar side chain or is absent when Xaa at position 15 is absent <400> 378 Xaa Xaa Xaa Gln Glu Xaa Xaa Tyr Ile Xaa Tyr Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 <210> 379 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa is Met, Leu, Gly, Lys, Glu, Ala, D-Ala or Nle or is absent when Xaa at position 2 is absent <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa is Arg, Ala, Gly, Asp, Lys, Aib, D-Ala or Glu or is absent when Xaa at position 3 is absent <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> Xaa is Trp, Ala, D-Ala, Gly, or Glu or is absent <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is Gln, Gly, Ala, D-Ala, Ecyc, Asn or Glu <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> Xaa is Glu, Ecyc, Asp, Gly, D-Ala or Ala <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> Xaa is Nle, Gly, Lys, Ccyc, D-Ala, Met or Ala <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> Xaa is Gly, Asn, Gln, D-Ala or Ala <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> Xaa is Tyr, Gly, Glu, D-Ala or Ala <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..(9) <223> Xaa is Ile, Gly, Glu, D-Ala or Ala <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Xaa is Phe, Gly, Glu, D-Ala or Ala <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> Xaa is Tyr, Gly, Glu, D-Ala or Ala <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> Xaa is Pro, Gly, Glu, Phe, Ccyc, Kcyc, D-Ala or Ala or is absent <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(13) <223> Xaa is Arg, Gly, Asp, Leu, Lys, Glu, D-Ala or Ala or is absent when Xaa at position 12 is absent <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14)..(14) <223> Xaa is Lys, K-Ac, Gly, Arg, Leu, Gln, Asn, Kcyc, Glu, D-Ala or Ala or is absent when Xaa at position 13 is absent <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(15) <223> Xaa is Leu, Gly, Arg, Lys, Deg, Glu, D-Ala or Ala or is absent when Xaa at position 14 is absent <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> Xaa is Arg, Asp, Glu, Leu, Lys, Gly, D-Ala or Ala or is absent when Xaa at position 15 is absent <220> <221> MISC_FEATURE <222> (17)..(17) <223> Xaa is Glu or is absent when Xaa at position 16 is absent <400> 379 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 Xaa <210> 380 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa is Arg or an amino acid with a non-polar side chain or a polar side chain or is absent <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa is Trp or an amino acid with a non-polar side chain or a polar side chain or is absent <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> Xaa is an amino acid with a non-polar side chain or a polar side chain <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> Xaa is an amino acid with a non-polar side chain or a polar side chain <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..(9) <223> Xaa is an amino acid with a non-polar side chain <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> Xaa is an amino acid with a non-polar side chain <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(14) <223> Xaa is Lys-Leu, Leu-Arg, amino acids with a non-polar side chains or are absent <400> 380 Xaa Xaa Gln Glu Xaa Xaa Tyr Ile Xaa Tyr Xaa Arg Xaa Xaa 1 5 10

Claims

식 I의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드 또는 이의 C-말단 산 또는 아미드, 또는 N-아세틸 유도체; 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염:
X¹-QE-X²-X³-YI-X⁴-Y-X⁵-R-X⁶ (I) (서열번호: 1)
식 중, X¹이, 부재이거나 존재하면, X⁷-RW이고, 상기 X⁷이, 부재이거나 존재하면, 무극성 측쇄 또는 극성 측쇄를 가지고 있는 아미노산이고; X² 및 X³ 각각은 독립적으로 무극성 측쇄 또는 극성 측쇄를 가지고 있는 아미노산이고; X⁴ 및 X⁵ 각각은 독립적으로 무극성 측쇄를 가지고 있는 아미노산이고; X⁶이, 부재이거나 존재하면, KL-X⁸ 또는 X⁹-LR이고, 상기 X⁸이, 부재이거나 존재하면, 무극성 측쇄를 가지고 있는 아미노산이고, 그리고 X⁹는 무극성 측쇄를 가지고 있는 아미노산이고;
상기 펩타이드는 서열번호: 2, 42, 77, 78, 316-318, 및 328-349의 아미노산 서열 중 임의의 하나로 구성된 펩타이드가 아니다.
청구항 1에 있어서, X¹이, 부재이거나 존재하면, X⁷-RW이고, 상기 X⁷이, 부재이거나 존재하면, D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C, (dC), G, A, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고; X² 및 X³ 각각은 D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C, (dC), G, A, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P (dP), M 및 (dM)으로부터 독립적으로 선택되고; X⁴ 및 X⁵ 각각은 G, A, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P (dP), M 및 (dM)으로부터 독립적으로 선택되고; X⁶이, 부재이거나 존재하면, KL-X⁸ 또는 X⁹-LR이고, 상기 X⁸이, 부재이거나 존재하면, G, A, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고, 그리고 X⁹는 G, A, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되는, 펩타이드 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염.
청구항 1에 있어서, X¹이, 부재이거나 존재하면, X⁷-RW이고, 상기 X⁷이, 부재이거나 존재하면, M 또는 E이고; X²는 M, 또는 E이고; X³는 G, N 또는 Q이고; X⁴는 F 또는 A이고; X⁵는 P 또는 A이고; X⁶이, 부재이거나 존재하면, KL-X⁸ 또는 X⁹-LR이고, 상기 X⁸이, 부재이거나 존재하면, R 또는 A이고, 그리고 X⁹는 K, A, (dA), N 및 Q로부터 선택되는, 펩타이드 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염.
청구항 1에 있어서, 하기로 구성된 군으로부터 선택되는 펩타이드 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염:
식 I의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 펩타이드 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염:
X¹-QE-X²-X³-YI-X⁴-Y-X⁵-R-X⁶ (I)
식 중, X¹이, 부재이거나 존재하면, X⁷-RW이고, 상기 X⁷이, 부재이거나 존재하면, 무극성 측쇄 또는 극성 측쇄를 가지고 있는 아미노산이고; X² 및 X³ 각각은 독립적으로 무극성 측쇄 또는 극성 측쇄를 가지고 있는 아미노산이고; X⁴ 및 X⁵ 각각은 독립적으로 무극성 측쇄를 가지고 있는 아미노산이고; X⁶이, 부재이거나 존재하면, KL-X⁸ 또는 X⁹-LR이고, 상기 X⁸이, 부재이거나 존재하면, 무극성 측쇄를 가지고 있는 아미노산이고, 그리고 X⁹는 무극성 측쇄를 가지고 있는 아미노산이고;
상기 펩타이드는 서열번호: 2, 42, 77, 78, 316-318, 및 328-349의 아미노산 서열 중 임의의 하나로 구성된 펩타이드가 아니다.
청구항 5에 있어서, X¹이, 부재이거나 존재하면, X⁷-RW이고, 상기 X⁷이, 부재이거나 존재하면, D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C, 및 (dC), G, A, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고; X² 및 X³ 각각은 D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C, 및 (dC), G, A, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P (dP), M 및 (dM)로부터 독립적으로 선택되고; X⁴ 및 X⁵ 각각은 G, A, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P (dP), M 및 (dM)으로부터 독립적으로 선택되고; X⁶이, 부재이거나 존재하면, KL-X⁸ 또는 X⁹-LR이고, 상기 X⁸이, 부재이거나 존재하면, G, A, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고, 그리고 X⁹는 G, A, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되는, 단리된 펩타이드 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염.
청구항 5에 있어서, X¹이, 부재이거나 존재하면, X⁷-RW이고, 상기 X⁷이, 부재이거나 존재하면, M 또는 E이고; X²는 M, 또는 E이고; X³는 G, N 또는 Q이고; X⁴는 F 또는 A이고; X⁵는 P 또는 A이고; X⁶이, 부재이거나 존재하면, KL-X⁸ 또는 X⁹-LR이고, 상기 X⁸이, 부재이거나 존재하면, R 또는 A이고, 그리고 X⁹는 K, A, (dA), N 및 Q로부터 선택되는, 단리된 펩타이드 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염.
청구항 5에 있어서, 하기로부터 선택되는 단리된 펩타이드 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염:
하기로부터 선택된 펩타이드를 포함하는 변형된 펩타이드 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염:
MRWQEMNYIFYPR (서열번호: 208);
MRWQEAGYIFYPRKLR (서열번호: 11);
MRWQEMGYIFYPR(dA)LR (서열번호: 149);
MRWQEMGYIFYPRNLR (서열번호: 213);
MRWQEMQYIFYPRALR (서열번호: 219);
RWQEMNYIFYPR (서열번호: 248);
MRWQEMGYIFYPRALR (서열번호: 19);
MRWQEMGYIFYPRKLA (서열번호: 21);
MRWQEMGYIFYARKLR (서열번호: 17);
RWQEMGYIFYPRQLR (서열번호: 217);
MRWQEEGYIFYPRKLR (서열번호: 172);
MRWQEMGYIFYPRKL (서열번호: 45);
ERWQEAGYIAYPR (서열번호: 241);
RWQEMQYIFYPR (서열번호: 211);
MRWQEMGYIFYPAKLR (서열번호: 18);
상기 펩타이드는 (i) D-배치형태를 가지고 있는 아미노산, 및 (ii) 비-자연 발생 아미노산 잔기로부터 선택된 적어도 하나의 아미노산에 의한 치환을 포함한다.
청구항 1 내지 9 중 어느 한 항에 있어서, 기간 증진 모이어티를 추가로 포함하고, 대사성 절단가능 링커를 갖는 상기 펩타이드를 기간 증진 모이어티에 선택적으로 커플링시키는, 펩타이드.
(a) RWQE (서열번호: 294), (b) YIFY (서열번호: 295), 또는 (c) RWQE (서열번호: 294)와 YIFY (서열번호: 295) 둘 모두를 포함하는 펩타이드 또는 펩타이드 유사체로서, 상기 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 8 내지 20 개 길이의 아미노산, 상기 펩타이드 또는 펩타이드 유사체 (i)는 60분 동안 37 섭씨 온도에서 마우스 혈장에서 10% 안정성을 나타내고, (ii) 인간 일차 지방세포에서 유리 지방산 수준을 감소시키고, (iii) 또는 (i)과 (ii) 둘 모두인, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체.
청구항 11에 있어서, (a) 및 (b)를 포함하되, 상기 펩타이드 또는 펩타이드 유사체의 일부 (a)는 0-10개의 개재 아미노산을 갖는 일부 (B)에 대해 N-말단인, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체.
청구항 12에 있어서, 상기 펩타이드 또는 펩타이드 유사체의 일부 (a)는 1, 2, 또는 3개의 개재 아미노산을 갖는 일부 (B)에 대해 N-말단인, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체.
청구항 11 내지 13 중 어느 한 항에 있어서, 상기 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 서열번호: 294의 Arg에 대해 바로 N-말단 또는 서열번호: 294의 Glu에 대해 바로 C-말단에 있는 Met를 포함하는, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체.
청구항 14에 있어서, MRWQE (서열번호: 350), RWQEM (서열번호: 351) 또는 MRWQEM (서열번호: 352)을 포함하는, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체.
청구항 11 내지 15 중 어느 한 항에 있어서, 서열번호: 295의 제1 아미노산에 대해 즉시 N-말단에 있는 Gly, 서열번호: 295의 마지막 아미노산에 대해 바로 C-말단에 있는 Pro, 또는 GYIFYP (서열번호: 353)을 포함하는, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체.
청구항 11 내지 16 중 어느 한 항에 있어서, YIFYPR (서열번호: 296), YIFYPRK (서열번호: 297), YIFYPRKL (서열번호: 298), 또는 YIFYPRKLR (서열번호: 299)을 포함하는, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체.
청구항 11 내지 17 중 어느 한 항에 있어서, 하기를 포함하는, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체:
(A) RWQE (서열번호: 294)의 아미노산 서열, 및
(B) 하나의 아미노산 치환을 갖는 YIFY (서열번호: 295)의 아미노산 서열.
청구항 18에 있어서, 상기 하나의 아미노산 치환을 갖는 YIFY (서열번호: 295)의 아미노산 서열은 XIFY (서열번호: 300), YXFY (서열번호: 301), YIXY (서열번호: 302), 또는 YIFX (서열번호: 303)을 포함하되, X는 임의의 아미노산인, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체.
청구항 19에 있어서, 서열번호: 300-303 중 임의의 하나의 X는 작은 지방족 아미노산 또는 산성 아미노산인, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체.
청구항 19 또는 20에 있어서, 서열번호: 300-303 중 임의의 하나의 X는 하기: Ala, Gly, (dA), 및 Glu로 구성된 군으로부터 선택되는, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체.
청구항 11 내지 21 중 어느 한 항에 있어서, 하기를 포함하는, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체:
(A) RWQE (서열번호: 294)의 아미노산 서열 및
(B) 2개의 아미노산 변형을 갖는 YIFY (서열번호: 295)의 아미노산 서열.
청구항 22에 있어서, 하기를 포함하는, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체:
(A) RWQE (서열번호: 294)의 아미노산 서열 및
(B) 2개의 아미노산 치환을 갖는 YIFY (서열번호: 295)의 아미노산 서열.
청구항 23에 있어서, RWQE (서열번호: 294) 및 YIAE (서열번호: 308) 또는 EIFE (서열번호: 309)의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드 또는 펩타이드 유사체.
청구항 11 내지 24 중 어느 한 항에 있어서, RWQE (서열번호: 294) 및 YI 또는 YIF의 아미노산 서열을 포함하는, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체.
청구항 1 내지 25 중 어느 한 항에 있어서, 하기를 포함하는 펩타이드 또는 펩타이드 유사체:
(A) YIFY (서열번호: 295)의 아미노산 서열 및
(B) 하나의 아미노산 치환을 갖는 RWQE (서열번호: 294)의 아미노산 서열.
청구항 26에 있어서, 하나의 아미노산 치환을 갖는 RWQE (서열번호: 294)의 아미노산 서열은 XWQE (서열번호: 304), RXQE (서열번호: 305), RWXE (서열번호: 306), 또는 RWQX (서열번호: 307)을 포함하되, X는 임의의 아미노산인, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체.
청구항 26에 있어서, X는 지방족 아미노산 또는 하전된 아미노산인, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체.
청구항 27에 있어서, 상기 펩타이드 또는 펩타이드 유사체가 XWQE (서열번호: 304)을 포함할 때, X는 하기: Ala, Gly, Asp, Lys, Aib, (dA), Glu로 구성된 군으로부터 선택되는, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체.
청구항 27에 있어서, 상기 펩타이드 또는 펩타이드 유사체가 RXQE (서열번호: 305)을 포함할 때, X는 하기: Ala, Gly, (dA), Glu로 구성된 군으로부터 선택되는, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체.
청구항 27에 있어서, 상기 펩타이드 또는 펩타이드 유사체가 RWXE (서열번호: 306)를 포함할 때, X는 하기: Gln, Ala, Glu, Gly, Asn, (dA)로 구성된 군으로부터 선택되는, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체.
청구항 27에 있어서, 상기 펩타이드 또는 펩타이드 유사체가 RWQX (서열번호: 307)을 포함할 때, X는 하기: Glu, Ala, Gly, Asp, (dA)로 구성된 군으로부터 선택되는, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체.
청구항 14 내지 32 중 어느 한 항에 있어서, 상기 펩타이드 또는 펩타이드 유사체의 일부 (A)는 0-10개의 개재 아미노산을 갖는 일부 (B)에 대해 N-말단인, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체.
청구항 33에 있어서, 상기 펩타이드 또는 펩타이드 유사체의 일부 (A)는 1, 2, 또는 3개의 개재 아미노산을 갖는 일부 (B)에 대해 N-말단인, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체.
청구항 11 내지 34 중 어느 한 항에 있어서, RWQEX¹X²YIFY (서열번호: 319)의 아미노산 서열을 포함하되, 각각의 X¹ 및 X²는 독립적으로 임의의 아미노산인, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체.
청구항 35에 있어서, X¹는 하기: Met, Ala, Nle, Gly, (dA), Glu, Cys, 및 이들의 등가물로 구성된 군으로부터 선택되는, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체.
청구항 36에 있어서, X¹는 하기: Met, Ala, Nle, Gly, (dA), Glu, 및 Cys로 구성된 군으로부터 선택되는, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체.
청구항 35 내지 37 중 어느 한 항에 있어서, X²는 하기: Asn, Gln, Gly, (dA), Glu, 및 이들의 등가물로 구성된 군으로부터 선택되는, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체.
청구항 35에 있어서, X²는 하기: Asn, Gln, Gly, (dA), 및 Glu로 구성된 군으로부터 선택되는, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체.
청구항 35 내지 39 중 어느 한 항에 있어서, X¹X²는 Met-Asn, Met-Gln, Ala-Gly, Met-Ala, Nle-Gly, Gly-Gly, Met-(dA), (dA)-Gly, Glu-Gly, Met-Glu, Cys-Gly, Glu-Asn, 또는 Glu-Gln인, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체.
청구항 11 내지 41 중 어느 한 항에 있어서, RWQEX¹X²X³IFY (서열번호: 320), RWQEX¹X²YX³FY (서열번호: 321), RWQEX¹X²YIX³Y (서열번호: 322) 또는 RWQEX¹X²YIFX³ (서열번호: 323)의 아미노산 서열을 포함하되, 각각의 X¹, X² 또는 X³는 독립적으로 임의의 아미노산인, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체.
청구항 42에 있어서, X¹는 하기: Met, Ala, Nle, Gly, (dA), Glu, Cys, 및 이들의 등가물로 구성된 군으로부터 선택되는, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체.
청구항 42에 있어서, X¹는 하기: Met, Ala, Nle, Gly, (dA), Glu, 및 Cys로 구성된 군으로부터 선택되는, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체.
청구항 41 내지 43 중 어느 한 항에 있어서, X²는 하기: Asn, Gln, Gly, (dA), Glu, 및 이들의 등가물로 구성된 군으로부터 선택되는, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체.
청구항 44에 있어서, X²는 하기: Asn, Gln, Gly, (dA), 및 Glu로 구성된 군으로부터 선택되는, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체.
청구항 44에 있어서, X¹X²는 Met-Asn, Met-Gln, Ala-Gly, Met-Ala, Nle-Gly, Gly-Gly, Met-(dA), (dA)-Gly, Glu-Gly, Met-Glu, Cys-Gly, Glu-Asn, 또는 Glu-Gln인, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체.
청구항 41 내지 45 중 어느 한 항에 있어서, X³는 작은 지방족 아미노산 또는 산성 아미노산인, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체.
청구항 46에 있어서, X³는 하기: Ala, Gly, (dA), 및 Glu로 구성된 군으로부터 선택되는, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체.
청구항 35 내지 47 중 어느 한 항에 있어서, 상기 펩타이드 또는 펩타이드 유사체의 일부 (A)는 0-10개의 개재 아미노산을 갖는 일부 (B)에 대해 N-말단인, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체.
청구항 48에 있어서, 상기 펩타이드 또는 펩타이드 유사체의 일부 (A)는 1, 2, 또는 3개의 개재 아미노산을 갖는 일부 (B)에 대해 N-말단인, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체.
청구항 11 내지 49 중 어느 한 항에 있어서, 상기 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 서열 서열번호: 2, 42, 77, 78, 316-318, 및 328-349로 구성되지 않는, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체.
서열번호: 1, 3-41, 43-76, 및 79-293, 310-315, 319-323 및 354-377 중 임의의 하나를 포함하는 펩타이드 또는 펩타이드 유사체.
서열번호: 1, 3-41, 43-76, 및 79-293, 310-315, 319-323 및 354-377 중 임의의 하나를 포함하고, 그것으로 본질적으로 구성되거나, 또는 구성되거나, 또는 서열번호: 1, 3-41, 43-76, 및 79-293, 310-315, 319-323 및 354-377 중 하나에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하고, 그것으로 본질적으로 구성되거나 구성되는, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체.
청구항 52에 있어서, 8 내지 20 개 길이의 아미노산인, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체.
청구항 52 또는 53 중 어느 한 항에 있어서, (i)는 60분 동안 37 섭씨 온도에서 마우스 혈장에서 10% 안정성을 나타내고, (ii) 인간 일차 지방세포에서 유리 지방산 수준을 감소시키고, (iii) 또는 (i)과 (ii) 둘 모두인, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체.
청구항 52 내지 54 중 어느 한 항에 있어서, 서열번호: 11, 17-19, 21, 32, 45, 148, 172, 208, 210, 211, 213, 219, 및 241 중 임의의 하나를 포함하고, 그것으로 본질적으로 구성되거나, 또는 구성되는, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체.
식 II의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드 또는 이의 C-말단 산 또는 아미드, 또는 N-아세틸 유도체; 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염:
X¹⁷-X¹⁸-X¹⁹-Q-E-X²⁰-X²¹-Y-I-X²²-Y-X²³-X²⁴-X²⁵ (II) (서열번호: 378)
식 중, X¹⁷이, 부재이거나 존재하면, 무극성 측쇄 또는 극성 측쇄를 가지고 있는 아미노산이고; X¹⁸이, 부재이거나 존재하면, 무극성 측쇄 또는 극성 측쇄를 가지고 있는 아미노산이고; X¹⁹이, 부재이거나 존재하면, 무극성 측쇄 또는 극성 측쇄를 가지고 있는 아미노산이고; X²⁰는 무극성 측쇄 또는 극성 측쇄를 가지고 있는 아미노산이고; X²¹는 무극성 측쇄 또는 극성 측쇄를 가지고 있는 아미노산이고; X²²는 무극성 측쇄 또는 극성 측쇄를 가지고 있는 아미노산이고; X²³는 무극성 측쇄 또는 극성 측쇄를 가지고 있는 아미노산이고; X²⁴는 무극성 측쇄 또는 극성 측쇄를 가지고 있는 아미노산이고; 그리고 X²⁵이, 부재이거나 존재하면, 무극성 측쇄 또는 극성 측쇄, -LKR, -KLX²⁶, -X²⁷LR, -KX²⁸R, -RX²⁹R 및 -KRX³⁰을 갖는 아미노산으로부터 선택되고; X²⁶이, 부재이거나 존재하면, 무극성 측쇄 또는 극성 측쇄를 가지고 있는 아미노산으로부터 선택되고; X²⁷는 무극성 측쇄 또는 극성 측쇄를 가지고 있는 아미노산으로부터 선택되고; X²⁸는 무극성 측쇄 또는 극성 측쇄를 가지고 있는 아미노산으로부터 선택되고; X²⁹는 무극성 측쇄 또는 극성 측쇄를 가지고 있는 아미노산으로부터 선택되고; 그리고 X³⁰이, 부재이거나 존재하면, 무극성 측쇄를 가지고 있는 아미노산으로부터 선택되고; 추가로 단, X¹⁷ 및 X¹⁸는, X¹⁹가 부재하면 부재하고; 그리고 추가로 단, X¹⁷ 은 X¹⁸이 부재하면, 부재하고; 그리고; 단, 상기 펩타이드는 서열번호: 2, 42, 77, 78, 316-318, 및 328-349의 아미노산 서열 중 임의의 하나로 구성된 펩타이드가 아니다.
청구항 57에 있어서, X¹⁷이, 부재이거나 존재하면, D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C, (dC), G, A, (dA), V, (dV), L, (dL), Nle, I, (dI), F, (dF), W, (dW), P (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고; X¹⁸이, 부재이거나 존재하면, D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C, (dC), G, A, (dA), Aib, V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고; X¹⁹이, 부재이거나 존재하면, D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C, (dC), G, A, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고; X²⁰는 D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C, (dC), G, A, (dA), Aib, V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고; X²¹는 D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C, (dC), G, A, (dA), Aib, V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고; X²²는 D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C, (dC), G, A, (dA), Aib, V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고; X²³는 D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C, (dC), G, A, (dA), Aib, V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고; X²⁴이, 부재이거나 존재하면, D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C, (dC), G, A, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고; 그리고 X²⁵이, 부재이거나 존재하면, D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C, (dC), G, A, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P (dP), M, (dM), -LKR, -KLX²⁶, -X²⁷LR, -KX²⁸R, -RX²⁹R 및 -KRX³⁰으로부터 선택되고; X²⁶이, 부재이거나 존재하면, -RE, D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C, (dC), G, A, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고; X²⁷는 D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C, (dC), G, A, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고; X²⁸는 D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C, (dC), G, A, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고; X²⁹는 D, (dD), E, (dE), K, (dK), R, (dR), H, (dH), N, (dN), Q, (dQ), S, (dS), T, (dT), Y, (dY), C, (dC), G, A, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고; 그리고 X³⁰이, 부재이거나 존재하면, G, A, (dA), V, (dV), L, (dL), I, (dI), F, (dF), W, (dW), P (dP), M 및 (dM)으로부터 선택되고; 또는 이의 C-말단 산 또는 아미드, 또는 N-아세틸 유도체; 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염.
청구항 57에 있어서, X¹⁷이, 부재이거나 존재하면, M, L, G, K, E, A, (dA) 또는 Nle이고; X¹⁸이, 부재이거나 존재하면, R, A, G, D, K, Aib, (dA) 또는 E이고; X¹⁹이, 부재이거나 존재하면, W, A, (dA), G, 또는 E이고; X²⁰는 Nle, G, K, Ccyc, (dA), M 또는 A이고; X²¹는 G, N, Q, (dA) 또는 A이고; X²²는 F, G, E, (dA) 또는 A이고; X²³는 P, G, E, F, Ccyc, Kcyc, (dA) 또는 A이고; X²⁴이, 부재이거나 존재하면, R, G, D, L, K, E, (dA) 또는 A이고; 그리고 X²⁵이, 부재이거나 존재하면, -K, -R, N, Q, (dA), -KL, -KR, -R(Da), -KLR, -K(Ac)LR, -K(cyc)LR, -ALR, -(dA)LR, -GLR, -ELR, -NLR, -QLR, -KAR, -K(dA)R, -KGR, -KER, -KLA, -KL(dA), -KLD, -KLE, -KLG, -KLK, -RKR, -RLR, -LKR, -KRL, 및 -KLRE으로부터 선택되고; 이의 C-말단 산 또는 아미드, 또는 N-아세틸 유도체; 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염.
식 III의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드 또는 이의 C-말단 산 또는 아미드, 또는 N-아세틸 유도체; 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염:
X³¹-X³²-X³³-X³⁴-X³⁵-X³⁶-X³⁷-X³⁸-X³⁹-X⁴⁰-X⁴¹-X⁴²-X⁴³-X⁴⁴-X⁴⁵-X⁴⁶-X⁴⁷ (III) (서열번호: 379)
식 중, X³¹이, 부재이거나 존재하면, M, L, G, K, E, A, (dA) 또는 Nle이고; X³²이, 부재이거나 존재하면, R, A, G, D, K, Aib, (dA) 또는 E이고; X³³이, 부재이거나 존재하면, W, A, (dA), G, 또는 E이고; X³⁴는 Q, G, A, (dA), Ecyc, N 또는 E이고; X³⁵는 E, Ecyc, D, G, (dA) 또는 A이고; X³⁶는 Nle, G, K, Ccyc, (dA), M 또는 A이고; X³⁷는 G, N, Q, (dA) 또는 A이고; X³⁸는 Y, G, E, (dA) 또는 A이고; X³⁹는 I, G, E, (dA) 또는 A이고; X⁴⁰는 F, G, E, (dA) 또는 A이고; X⁴¹는 Y, G, E, (dA) 또는 A이고; X⁴²이, 부재이거나 존재하면, P, G, E, F, Ccyc, Kcyc, (dA) 또는 A이고; X⁴³이, 부재이거나 존재하면, R, G, D, L, K, E, (dA) 또는 A이고; X⁴⁴이, 부재이거나 존재하면, K, K-Ac, G, R, L, Q, N, Kcyc, E, (dA) 또는 A이고; X⁴⁵이, 부재이거나 존재하면, L, G, R, K, Deg, E, (dA) 또는 A이고; X⁴⁶이, 부재이거나 존재하면, R, D, E, L, K, G, (dA) 또는 A이고; 그리고 X⁴⁷이, 부재이거나 존재하면, E이고; 추가로 단, X³¹ 및 X³²는, X³³가 부재하면 부재하고; 추가로 단, X³¹은, X³²가 부재하면 부재하고; 추가로 단, X⁴⁷, X⁴⁶, X⁴⁵, X⁴⁴, 및 X⁴³은, X³²가 부재하면 부재하고; 추가로 단, X⁴⁷, X⁴⁶, X⁴⁵, 및 X⁴⁴는, X⁴³이 부재하면 부재하고; 추가로 단, X⁴⁷, X⁴⁶, 및 X⁴⁵ 는, X⁴⁴가 부재하고 부재하고; 추가로 단, X⁴⁷ 및 X⁴⁶는, X⁴⁵가 부재하면, 부재하고; 그리고 추가로 단, X⁴⁷ 는, X⁴⁶이 부재하면 부재하고; 그리고; 단, 상기 펩타이드는 서열번호: 2, 42, 77, 78, 316-318, 및 328-349의 아미노산 서열 중 임의의 하나로 구성된 펩타이드가 아니다.
청구항 1 내지 60 중 어느 한 항에 있어서, 상기 펩타이드가 유도되는, 펩타이드.
청구항 61에 있어서, 상기 유도체는 아세틸화, 페길화, 바이오티닐화 또는 아실화를 통해 제조되는, 펩타이드.
청구항 62에 있어서, 상기 유도체는 PEG600, 아세틸, 바이오틴 또는 팔미틸인, 펩타이드.
본 명세서에서 기재된 바와 같은 펩타이드 또는 펩타이드 유사체.
청구항 1 내지 64 중 어느 한 항의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체 및 이종성 모이어티를 포함하는 콘주게이트.
청구항 1 내지 65 중 어느 한 항의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체 또는 콘주게이트를 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산.
청구항 66의 핵산을 포함하는 발현 벡터.
청구항 66의 핵산 또는 청구항 67의 발현 벡터를 포함하는 숙주세포.
청구항 1 내지 68 중 어느 한 항의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체, 콘주게이트, 핵산, 발현 벡터, 또는 숙주세포, 및 담체, 부형제, 또는 희석제를 포함하는 조성물.
청구항 1 내지 69 중 어느 한 항의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체, 콘주게이트, 핵산, 발현 벡터, 또는 숙주세포를 용기 또는 패키지에 포함하는 키트.
펩타이드 또는 펩타이드 유사체를 생산하는 방법으로서, 하기의 아미노산 서열:
a. RWQE (서열번호: 294),
b. YIFY (서열번호: 295), 또는
c. RWQE (서열번호: 294)와 YIFY (서열번호: 295) 둘 모두를 포함하되,
상기 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 8 내지 20개 길이의 아미노산이고;
상기 펩타이드 또는 펩타이드 유사체 (i)는 60분 동안 37 섭씨 온도에서 마우스 혈장에서 10% 안정성을 나타내고, (ii) 인간 일차 지방세포에서 유리 지방산 수준을 감소시키고, (iii) 또는 둘 모두 (i) 및 (ii)이고,
상기 방법은 (i) 제1 아미노산을 제2 아미노산과 접촉시켜 상기 제1 아미노산과 상기 제2 아미노산 사이의 공유결합을 형성하는 단계로서, 상기 제1 아미노산 또는 상기 제2 아미노산이 또 다른 아미노산에 선택적으로 부착되는 단계, 및 (ii) 상기 (i)의 반복 단계를 반복함으로써 상기 펩타이드 또는 펩타이드 유사체가 생산되는 단계를 포함하는, 방법.
청구항 71에 있어서, 실시예 1에 기재된 하나 이상의 단계를 포함하는, 방법.
치료를 필요로 하는 대상체에서 대사 질환을 치료하는 방법으로서, 상기 대상체에게 청구항 1 내지 중 어느 한 항의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체, 콘주게이트, 핵산, 발현 벡터, 또는 숙주세포를, 대사 질환을 치료하는데 효과적인 양으로 투여하는 것을 포함하는, 방법.
대사 질환의 치료를 위한, 청구항 1 내지 중 어느 한 항의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체, 콘주게이트, 핵산, 발현 벡터, 또는 숙주세포의 용도.
청구항 73 또는 74에 있어서, 상기 대사 질환은 비만, 당뇨병 (예를 들어, 2형 당뇨병), 인지 장애 및/또는 신경퇴행성 장애, 심혈관 질환, 지방 간 질환, 및 위장 질환으로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법 또는 용도.
치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법으로서, 상기 대상체에게 청구항 1 내지 75 중 어느 한 항의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체, 콘주게이트, 핵산, 발현 벡터, 또는 숙주세포를, 암을 치료하는데 효과적인 양으로 투여하는 것을 포함하는, 방법.
청구항 75에 있어서, 상기 암은 폐암, 췌장암, 유방암, 전립선암, 난소암, 또는 간세포암인, 방법.
치료를 필요로 하는 대상체에서 간 질환을 치료하는 방법으로서, 상기 대상체에게 청구항 1 내지 77 중 어느 한 항의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체, 콘주게이트, 핵산, 발현 벡터, 또는 숙주세포를, 간 질환을 치료하는데 효과적인 양으로 투여하는 것을 포함하는, 방법.
청구항 77에 있어서, 상기 간 질환은 지방 간 질환인, 방법.
청구항 78에 있어서, 상기 지방 간 질환은 NAFLD 또는 NASH인, 방법.
조절을 필요로 하는 대상체에서 지방산 대사를 조절하는 방법으로서, 상기 대상체에게 청구항 1 내지 80 중 어느 한 항의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체, 콘주게이트, 핵산, 발현 벡터, 또는 숙주세포를, 지방산 대사를 조절하는데 효과적인 양으로 투여하는 것을 포함하는, 방법.
청구항 80에 있어서, 지방산 대사는, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체, 콘주게이트, 핵산, 발현 벡터, 또는 숙주세포가 상기 대상체에게 투여된 후에 대상체에서 증가되는, 방법.
감소를 필요로 하는 대상체 체중을 감소시키는 방법으로서, 상기 대상체에게 청구항 1 내지 82 중 어느 한 항의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체, 콘주게이트, 핵산, 발현 벡터, 또는 숙주세포를 대상체에서 체중을 감소시키는데 효과적인 양으로 투여하는 것을 포함하는, 방법.
본 명세서에 기재된 대사 질환, 암, 간 질환, 또는 임의의 질환, 장애, 또는 의료 병태의 치료적 처지에서의, 청구항 1 내지 83 중 어느 한 항의 펩타이드, 펩타이드 유사체, 콘주게이트, 핵산, 발현 벡터, 또는 숙주세포 중 임의의 하나의 용도.
본 명세서에 기재된 대사 질환, 암, 간 질환, 또는 임의의 질환, 장애, 또는 의료 병태를 치료하기 위한 약제의 제조에서의, 청구항 1 내지 84 중 어느 한 항의 펩타이드, 펩타이드 유사체, 콘주게이트, 핵산, 발현 벡터, 또는 숙주세포 중 임의의 하나의 용도.