KR20190028664A - Immune checkpoint inhibitors and cytotoxic T cells for the treatment of cancer - Google Patents

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코리 스미스
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더 카운실 오브 더 퀸즐랜드 인스티튜트 오브 메디컬 리서치
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Abstract

본 발명에서는 면역 체크포인트 억제제 및 세포독성 T 세포(CTL)를 포함하는 조성물의 합동 투여를 포함하는 암을 치료하는 방법을 제공한다.The present invention provides a method of treating cancer comprising the co-administration of a composition comprising an immuno checkpoint inhibitor and a cytotoxic T cell (CTL).

Description

암의 치료를 위한 면역 체크포인트 억제제와 세포독성 T 세포Immune checkpoint inhibitors and cytotoxic T cells for the treatment of cancer

본 발명은 2016년 5월 25일에 출원된 미국 가특허출원 제62/341,402호를 우선권으로 주장하며, 이들 내용 전체가 본 명세서에서 참고로서 포함된다.The present application claims priority from U.S. Provisional Patent Application No. 62 / 341,402, filed May 25, 2016, the entire contents of which are incorporated herein by reference.

비인두암은 비인두에서 시작되는 두경부암의 한 종류이다. 최근에, 엡스타인-바 바이러스(EBV)로의 노출이 비인두암의 병리학에 기여할 수 있음을 보여주는 새로운 증거가 있다. 엡스타인-바 바이러스 관련 비인두암(NPC)은 동남아시아 지역의 풍토병이며, 중국 남부에서 100,000명 당 25 내지 50건으로 높은 발생률을 보인다. 현재의 표준 요법은 I기 또는 II기 질환을 가진 부분 집합(subset)은 치유할 수 있지만, 고 비율의 환자가 재발되고, 많은 환자가 여전히 초기에 전반적으로 총 5년 생존률이 현저하게 감소되는 후기 III기 또는 IV기 질환으로 진단된다. 따라서, NPC에 대한 개선된 요법을 개발할 필요가 있다.Biannual cancer is a type of head and neck cancer that begins in the nasopharynx. Recently, there is new evidence that exposure to Epstein-Barr virus (EBV) can contribute to the pathology of benign tumors. Epstein-Barr virus-associated nasopharyngeal cancer (NPC) is an endemic disease in Southeast Asia, with 25 to 50 cases per 100,000 people in southern China. The current standard of care is that although a subset with stage I or II disease can be cured, a high proportion of patients are recurring, and many patients are still in the late 5-year overall survival rate significantly reduced III or IV disease. Thus, there is a need to develop improved therapies for NPCs.

발명의 요약SUMMARY OF THE INVENTION

특정 양태에서, 본원에서는 면역 체크포인트 억제제 및 MHC 클래스 I상에 제시된 암-관련 펩타이드에 특이적인 T 세포 수용체를 발현하는 세포독성 T 세포(CTL)를 포함하는 조성물을 대상체에 (예컨대, 합동으로) 투여함으로써 암(예컨대, NPC)을 치료하는 방법을 제공한다. In certain embodiments, herein, a composition comprising an immuno checkpoint inhibitor and a cytotoxic T cell (CTL) expressing a T cell receptor specific for a cancer-associated peptide presented on MHC class I is administered (e. G., Co-administered) (E. G., NPC) by administering to a mammal.

일부 실시양태에서, 면역 체크포인트 억제제는 CTLA4, PD-1, PD-L1, PD-L2, A2AR, B7-H3, B7-H4, BTLA, KIR, LAG-3, TIM-3, IDO, TDO 및 VISTA와 같은 면역 체크포인트 단백질에 결합하는, 단백질 또는 폴리펩타이드(예컨대, 항체 또는 이의 항원-결합 단편)이다. 일부 실시양태에서, 면역 체크포인트 단백질은 CTLA4, PD-1, PD-L1, TIM-3 또는 LAG-3이다. 일부 실시양태에서, 면역 체크포인트 억제제는 면역 체크포인트 단백질에 결합하여, 이의 활성을 억제한다. 일부 실시양태에서, 면역 체크포인트 억제제는 면역 체크포인트 단백질과 관련 수용체/리간드 사이의 상호작용을 억제한다. 일부 실시양태에서, 면역 체크포인트 억제제는 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 피딜리주맙, AMP-224, AMP-514, STI-A1110, TSR-042, RG-7446, BMS-936559, BMS-936558, MK-3475, CT Oll, MPDL3280A, MEDI-4736, MSB-0020718C, AUR-012 및 STI-A1010이다.In some embodiments, the immune checkpoint inhibitor is selected from the group consisting of CTLA4, PD-1, PD-L1, PD-L2, A2AR, B7-H3, B7-H4, BTLA, KIR, LAG-3, TIM- Proteins or polypeptides that bind to an immune checkpoint protein, such as VISTA (e. Antibody or antigen-binding fragment thereof). In some embodiments, the immuno checkpoint protein is CTLA4, PD-1, PD-L1, TIM-3 or LAG-3. In some embodiments, the immune checkpoint inhibitor binds to the immune checkpoint protein and inhibits its activity. In some embodiments, the immune checkpoint inhibitor inhibits the interaction between the immune checkpoint protein and the related receptor / ligand. In some embodiments, the immune checkpoint inhibitor is selected from the group consisting of: nobilulipat, fembrolysiem, pidilimumam, AMP-224, AMP-514, STI-A1110, TSR-042, RG-7446, BMS-936559, BMS- -3475, CT Oll, MPDL3280A, MEDI-4736, MSB-0020718C, AUR-012 and STI-A1010.

일부 실시양태에서, 조성물 내 세포독성 T 세포는 MHC 클래스 I 상에 제시된 임의의 암 관련 펩타이드(예컨대, 대상체의 종양 및/또는 암 세포에 의해 발현되는 암 관련 펩타이드)에 특이적일 수 있다. 일부 실시양태에서, 암 관련 펩타이드는 바이러스 펩타이드이다. 일부 실시양태에서(예컨대, 대상체가 EBV-관련 NPC 또는 다른 EBV-관련 암인 경우), 바이러스 펩타이드는 EBV 펩타이드이다. 일부 실시양태에서, EBV 펩타이드는 LMP1 펩타이드, LMP2A 펩타이드, 및/또는 EBNA1 펩타이드를 포함한다. In some embodiments, the cytotoxic T cells in the composition are any of the cancer-associated peptides presented on the MHC class I (e . G. , Those that are expressed by tumors of the subject and / Cancer-associated peptides). In some embodiments, the cancer-associated peptide is a viral peptide. In some embodiments (e.g., where the subject is an EBV-associated NPC or other EBV-associated cancer), the viral peptide is an EBV peptide. In some embodiments, the EBV peptide comprises an LMP1 peptide, an LMP2A peptide, and / or an EBNA1 peptide.

일부 실시양태에서, CTL은 (예컨대, 세포 은행(cell bank)에서 수득된) 대상체와 동종이계이다. 일부 실시양태에서, CTL은 대상체에서 자가 유래된다. CTL 및 면역 체크포인트 억제제는 공동 투여 또는 순차적으로 투여할 수도 있다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 대상체에 화학요법 약제를 투여하는 것을 추가로 포함한다. In some embodiments, the CTL is homologous to the subject (e.g., obtained from a cell bank). In some embodiments, the CTL is autologous to the subject. CTL and immuno checkpoint inhibitors may be administered co-administered or sequentially. In some embodiments, the method further comprises administering a chemotherapeutic agent to the subject.

일부 양태에서, 본원에서는 CTL을 포함하는 시료 및 CMV 펩타이드를 제시하는 항원-제시세포(APC)를 항온처리함(incubate)으로써 시료 내 펩타이드-특이적 CTL의 증식을 유도하는 단계, 및 펩타이드-특이적 CTL을 본원에 기재된 면역 체크포인트 억제제와 함께 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 대상체의 암(예컨대, 비인두암)을 치료하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, APC는, EBV 펩타이드를 코딩하는 핵산 구축물(예컨대, AdE1-LMPpoly)과 함께 항온처리함으로써 EBV 펩타이드를 제시하는 APC를 유도함으로써 EBV 펩타이드를 제시하도록 한다. 일부 실시양태에서, APC는 B 세포, 항원제시 T 세포, 수지상세포, 또는 인공적인 항원제시세포(예컨대, aK562 세포와 같이 CD80, CD83, 41BB-L 및/또는 CD86를 발현하는 세포주)일 수 있다. 일부 실시양태에서, EBV 펩타이드는 LMP1 펩타이드나 이의 단편, LMP2A 펩타이드나 이의 단편, 및/또는 EBNA1 펩타이드나 이의 단편을 포함한다. 일부 실시양태에서, EBV 펩타이드는 표 1에 표시된 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 면역 체크포인트 억제제가 투여된다. 면역 체크포인트 억제제는 당업계에 공지된 임의의 기술에 의해 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 면역 체크포인트 억제제는 종양 내로 투여된다. 일부 실시양태에서, 시료는 하나 이상의 사이토카인 또는 말초혈액 단핵세포(PBMC)를 포함한다.In some embodiments, provided herein are methods of inducing peptide-specific CTL proliferation in a sample by incubating an antigen-presenting cell (APC) presenting a sample comprising CTL and a CMV peptide, and a peptide- Comprising administering to a subject an immunological checkpoint inhibitor as described herein, for the treatment of cancer (e. G., Non-human cancers) of a subject. In some embodiments, the APCs induce EBV peptides by inducing APCs presenting EBV peptides by incubating with a nucleic acid construct (e. G., AdEl-LMPpoly) encoding an EBV peptide. In some embodiments, the APC can be a B cell, an antigen presenting T cell, a dendritic cell, or an artificial antigen presenting cell (e.g., a cell line expressing CD80, CD83, 41BB-L and / or CD86, such as aK562 cells) . In some embodiments, the EBV peptide comprises an LMP1 peptide or fragment thereof, an LMP2A peptide or fragment thereof, and / or an EBNA1 peptide or fragment thereof. In some embodiments, the EBV peptide comprises the sequence set forth in Table 1. In some embodiments, one or more immuno checkpoint inhibitors are administered. Immuno checkpoint inhibitors can be administered by any technique known in the art. In some embodiments, the immune checkpoint inhibitor is administered into a tumor. In some embodiments, the sample comprises one or more cytokines or peripheral blood mononuclear cells (PBMC).

도 1은 면역 체크포인트 분자(즉, LAG-3, TIM-3, CTLA4, 또는 PD-1)의 발현을 나타내는 2개의 패널이다. 패널 A는 PD-1, TIM-3, LAG-3 및 CTLA-4를 발현하는 HLA-다합체 양성 CD8-양성 림프구의 백분율을 도시한다. 패널 B는, 입양 T 세포 요법 이후에 비잔존/미세잔존 질환(N/MRD), 및 안정형 질환(SD) 또는 진행형 질환(PD) 둘 중 하나를 나타내는 활성-재발/전이성 질환(ARMD)을 갖는 NPC 환자에 투여되는 CTL 면역 요법에서, PD-1 양성, TIM-3 양성, LAG-3 양성 및 CTLA-4 양성 림프구의 백분율을 도시한다.Figure 1 is two panels showing the expression of immune checkpoint molecules (i.e., LAG-3, TIM-3, CTLA4, or PD-1). Panel A shows the percentage of HLA-multipositive CD8-positive lymphocytes expressing PD-1, TIM-3, LAG-3 and CTLA-4. Panel B demonstrates the presence of an active-recurrent / metastatic disease (ARMD) that exhibits either non-survival / retentive disease (N / MRD) after adoptive T cell therapy and stable disease (SD) or progressive disease TIM-3 positive, LAG-3 positive, and CTLA-4 positive lymphocytes in CTL immunotherapy administered to NPC patients.

일반적인 사항General information

특정 양태에서, 본원에서는 세포독성 T 세포(CTL) 면역 요법과 함께 하나 이상의 면역 체크포인트 억제제의 투여, 예컨대 합동 투여(conjoint administration)를 포함하는 병용 치료를 사용하여 대상체에서 암을 치료하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 암은 EBV-관련 NPC이고, 대상체에 투여된 CTL은 MHC 클래스 I 상에 제시된 EBV 에피토프를 발현하는 펩타이드에 결합 특이성을 갖는 T 세포 수용체를 발현한다.In certain embodiments, provided herein are methods of treating cancer in a subject using administration of one or more immuno checkpoint inhibitors in conjunction with cytotoxic T cell (CTL) immunotherapy, such as conjoint administration, including conjoint administration do. In some embodiments, the cancer is an EBV-associated NPC and the CTL administered to the subject expresses a T cell receptor having binding specificity to a peptide that expresses an EBV epitope presented on MHC class I.

정의Justice

편의상, 본 명세서, 실시예 및 첨부된 청구항에 사용된 특정 용어는 여기에 수집된다.For convenience, certain terms used in the specification, examples, and appended claims are collected herein.

본원에서 사용된 관사 "a" 및 "an"은 하나 또는 하나 이상의(즉, 하나 이상의) 문법적 대상을 지칭한다. 예로, "하나의 요소"는 하나의 요소 또는 하나 초과의 요소를 의미한다.As used herein, the terms " a " and " an " refer to one or more than one (i.e., one or more) grammatical objects. By way of example, " one element " means one element or more than one element.

본원에서 사용된 용어 "투여하는"은 약학 약제 또는 조성물을 대상체에 제공하는 것을 의미하고, 전문 의료진 및 자가투여에 의해 투여하는 것을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 이러한 약제는 예컨대, 본원에 기재된 펩타이드, 본원에 제공된 항원제시세포 및/또는 본원에 제공된 CTL을 함유할 수 있다.The term " administering " as used herein means providing a pharmaceutical agent or composition to a subject, including, but not limited to, administration by professional medical personnel and self-administration. Such agents may contain, for example, the peptides described herein, the antigen presenting cells provided herein and / or the CTL provided herein.

용어 "생물학적 시료", "조직 시료," 또는 단순히 "시료"는 각각 대상체의 조직으로부터 획득된 세포의 수집물을 지칭한다. 조직 시료의 공급원은 신선한, 동결된 및/또는 보존된 장기, 조직 시료, 생체 검사, 또는 흡입물로부터의 고형 조직; 혈액이나 임의의 혈액 성분, 혈청, 혈액; 뇌척수액, 양수, 복막액이나 간질액, 소변, 타액, 대변, 눈물과 같은 체액; 또는 대상체의 임신 또는 발달 중 임의의 시간의 세포일 수 있다.The term " biological sample ", " tissue sample, " or simply " sample " refers to a collection of cells obtained from tissue of a subject, respectively. The source of the tissue sample may be a solid tissue from fresh, frozen and / or preserved organs, tissue samples, biopsies, or inhalants; Blood or any blood component, serum, blood; Body fluids such as cerebrospinal fluid, amniotic fluid, peritoneal fluid or interstitial fluid, urine, saliva, feces, and tears; Or cells of any time during pregnancy or development of the subject.

용어 "결합하는" 또는 "상호작용하는"은 2개의 분자들 사이의, 예컨대, T 세포 수용체(TCR)와 펩타이드/MHC 사이의, 예컨대, 생리학적 조건 하에서 정전기, 소수성, 이온성 및/또는 수소결합 상호작용으로 인한 안정한 회합일 수 있는 회합을 지칭한다. The term " binding " or " interacting " refers to the interaction between two molecules, such as a T cell receptor (TCR) and a peptide / MHC, for example under static physiological conditions, Quot; refers to associations that can be stable associations due to binding interactions.

본원에서 사용된 용어 "암"은 고형 종양 및 혈액 매개 종양을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 용어 암은 피부, 조직, 장기, 뼈, 연골, 혈액 및 혈관의 질환을 포함한다. 용어 "암"은 초기 암 및 전이 암을 추가로 포함한다.The term " cancer " as used herein includes, but is not limited to, solid tumors and blood mediated tumors. The term cancer includes diseases of the skin, tissues, organs, bones, cartilage, blood and blood vessels. The term " cancer " further includes early cancer and metastatic cancer.

용어 "에피토프"는 항체에 특이적으로 결합할 수 있는 단백질 결정기를 의미한다. 에피토프는 일반적으로 아미노산 또는 당 측쇄와 같은 분자의 화학적 활성 표면 기로 구성된다. 특정 에피토프는 T 세포 수용체 또는 항체가 결합할 수 있는 아미노산의 특정 서열에 의해 정의될 수 있다. The term " epitope " refers to a protein determinant capable of specifically binding to an antibody. An epitope generally consists of a chemically active surface group of molecules such as amino acids or sugar chains. A particular epitope can be defined by a particular sequence of amino acids to which the T cell receptor or antibody can bind.

본원에서 사용된 어구 "약학적으로 허용가능한"은, 합리적인 유익/유해 비율(benefit/risk ratio)에 비례하여, 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응 또는 다른 문제 또는 합병증 없이, 타당한 의학적 판단의 범위 내에서 인간 및 동물의 조직과 접촉하여 사용하기에 적합한 그의 약제, 화합물, 물질, 조성물 및/또는 투여 형태를 지칭한다. The phrase " pharmaceutically acceptable ", as used herein, refers to any compound or mixture of compounds, within the scope of sound medical judgment, without undue toxicity, irritation, allergic response or other problem or complication, in proportion to a reasonable benefit / risk ratio. Refers to any agent, compound, material, composition and / or dosage form suitable for use in contact with the tissues of humans and animals.

본원에서 사용된 어구 "약학적으로 허용가능한 담체"는 하나의 장기나 신체의 일부로부터 다른 장기나 신체의 일부로 약제를 이동하거나 수송하는 것과 관련된, 액체나 고체 충전제, 희석제, 부형제, 또는 용매 캡슐화 물질과 같은 약학적으로 허용가능한 물질, 조성물 또는 비히클을 의미한다. 각각의 담체는 제형의 다른 성분과 상용성이고 환자에게 유해하지 않다는 의미에서 "허용가능한"이어야 한다. 약학적으로 허용가능한 담체로 작용할 수 있는 물질의 일부 예는 다음을 포함한다: (1) 락토스, 글루코스 및 수크로스와 같은 당; (2) 옥수수 전분 및 감자 전분과 같은 전분; (3) 소듐 카복시메틸 셀룰로스, 에틸 셀룰로오스 및 셀룰로스 아세테이트와 같은 셀룰로스 및 이의 유도체; (4) 분말화된 트라가칸트; (5) 맥아; (6) 젤라틴; (7) 활석; (8) 코코아 버터 및 좌약 왁스와 같은 부형제; (9) 땅콩유, 면실유, 홍화유, 참기름, 올리브유, 옥수수유 및 콩기름과 같은 오일; (10) 프로필렌 글리콜과 같은 글리콜; (11) 글리세린, 소르비톨, 만니톨 및 폴리에틸렌 글리콜과 같은 폴리올; (12) 에틸 올리에이트 및 에틸 라우레이트와 같은 에스테르; (13) 한천; (14) 수산화마그네슘 및 수산화알루미늄과 같은 완충제; (15) 알긴산; (16) 발열원이 없는 물; (17) 등장성 식염수; (18) 링거액; (19) 에틸 알콜; (20) pH 완충액; (21) 폴리에스테르, 폴리카보네이트 및/또는 폴리무수물; 및 (22) 약학 제형에 사용되는 다른 비독성 상용 물질.As used herein, the phrase " pharmaceutically acceptable carrier " refers to a liquid or solid filler, diluent, excipient, or solvent encapsulating material associated with transporting or transporting a drug from one organ or part of the body to another organ or body part , ≪ / RTI > or a pharmaceutically acceptable material, composition or vehicle. Each carrier should be " acceptable " in the sense of being compatible with the other ingredients of the formulation and not deleterious to the patient. Some examples of materials that can act as pharmaceutically acceptable carriers include: (1) sugars such as lactose, glucose and sucrose; (2) starches such as corn starch and potato starch; (3) Cellulose and derivatives thereof such as sodium carboxymethyl cellulose, ethyl cellulose and cellulose acetate; (4) powdered tragacanth; (5) malt; (6) gelatin; (7) talc; (8) excipients such as cocoa butter and suppository wax; (9) oils such as peanut oil, cottonseed oil, safflower oil, sesame oil, olive oil, corn oil and soybean oil; (10) glycols such as propylene glycol; (11) polyols such as glycerin, sorbitol, mannitol, and polyethylene glycol; (12) esters such as ethyl oleate and ethyl laurate; (13) agar; (14) buffering agents such as magnesium hydroxide and aluminum hydroxide; (15) alginic acid; (16) water without a heat source; (17) isotonic saline solution; (18) Ringer's solution; (19) ethyl alcohol; (20) pH buffer; (21) polyesters, polycarbonates and / or polyanhydrides; And (22) other non-toxic commercial materials used in pharmaceutical formulations.

본원에서 사용된, 증상을 "예방하다"라는 치료법은, 화합물이 질병 또는 증상이 발병하기 전에 통계 표본에 투여될 때 처리되지 않은 대조군 표본에 비해 처리된 표본에서 질병이나 증상의 발생을 감소시키는, 또는 처리되지 않은 대조군 표본에 비해 질병이나 증상의 하나 이상의 징후의 발병을 지연시키거나 중증도를 감소시키는 것을 지칭한다. As used herein, a treatment of " preventing " a condition is one in which the compound is administered to a statistical sample prior to the onset of the disease or condition, which reduces the incidence of the disease or symptom in the treated sample relative to the untreated control sample, Refers to delaying the onset of at least one symptom of the disease or condition or reducing the severity of the disease or symptom compared to the untreated control sample.

본원에 사용된 용어 "대상체"는 치료 또는 요법을 위해 선택된 인간 또는 인간 이외의 동물을 의미한다.The term " subject " as used herein refers to a human or non-human animal selected for treatment or therapy.

본원에 사용된 어구 "치료적 유효량(therapeutically effective amount)" 및 "유효량(effective amount)"은 임의의 의학적 치료에 적용가능한 합리적인 유익/유해 비율로 대상체의 세포의 적어도 부분 모집단에서 원하는 치료 효과를 생성시키는데 효과적인 약제량을 의미한다. The terms " therapeutically effective amount " and " effective amount ", as used herein, refer to the generation of a desired therapeutic effect at least in a population of cells of a subject with a reasonable benefit / risk ratio applicable to any medical treatment Which is the effective amount of the drug.

대상체의 질환을 "치료하는" 또는 질환을 갖는 대상체를 "치료하는"은 대상체를 약학 치료하여, 예컨대 약물의 투여, 질환의 하나 이상의 징후가 악화되는 것으로부터 감소되거나, 또는 방지되는 것을 지칭한다. "Treating" or "treating" a subject having a disease refers to pharmacological treatment of a subject, eg, reduction of, or prevention of, the administration of the drug, one or more symptoms of the disease, from worsening.

본원에서 사용된 용어 "합동 투여(conjoint administration)"는 단일 치료법 방식의 일부로서 관심 대상체에 2개 이상의 약제의 투여를 의미한다. 투여(들)은 약제가 치료될 대상체에 공존하게 투여하는 한, 또는 표적 조직이 여전히 다른 약제의 영향 하에 있는 동안, 하나 이상의 약제가 다른 약제와 동일한 표적 조직에 작용하는 기회를 가지는 한, 동시에 또는 순차적 즉, 하나의 약제를 투여한 이후 나중에 제2의(및/또는 제3의 약제 등) 것을 투여할 수 있다. 특정 실시양태에서, 투여될 약제는 단일 약학 조성물에 포함될 수 있고, 함께 투여될 수 있다. 특정 실시양태에서, 약제는 별도의 경로를 통하는 것을 포함하여 동시에 투여된다. 특정 실시양태에서, 하나 이상의 약제가 연속적으로 투여되는 반면, 다른 약제는 예정된 간격(예컨대, 단일 많은 투여량 또는 보다 작은 투여량으로 일주일에 2번 등)으로만 투여된다.The term " conjoint administration " as used herein means administration of two or more agents to a subject as part of a single therapeutic regimen. The administration (s) may be administered concurrently or simultaneously, as long as the drug is co-administered to the subject to be treated, or while the target tissue is still under the influence of another agent, as long as one or more agents have the opportunity to act on the same target tissue Sequential, that is, a second (and / or third agent, etc.) may be administered later after administering one agent. In certain embodiments, the agent to be administered may be included in a single pharmaceutical composition and administered together. In certain embodiments, the medicament is administered concurrently, including through a separate route. In certain embodiments, one or more agents are administered sequentially, while the other agents are administered only at predetermined intervals (e.g., a single large dose or a smaller dose, such as twice a week).

면역 체크포인트 억제제Immune checkpoint inhibitor

특정 양태에서, 본원에서는, 면역 체크포인트 억제제 및 MHC 클래스 I 상에 제시된 암-관련 펩타이드에 특이적인 T 세포 수용체를 발현하는 세포독성 T 세포(CTL)를 포함하는 조성물 둘 다를 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 병용 요법(combination therapy)을 대상체에 투여함으로써 대상체의 암(예컨대, 비인두암)을 치료하는 것과 관련된 방법을 제공한다.In a particular embodiment, the invention includes administering to a subject both a composition comprising an immuno checkpoint inhibitor and a cytotoxic T cell (CTL) that expresses a T cell receptor specific for a cancer-associated peptide presented on MHC class I A method of treating cancer in a subject (e. G., Non-human cancer) by administering a combination therapy to the subject.

면역 체크포인트 억제제 및 CTL 조성물은 함께 또는 개별적으로 투여될 수 있다. 이들은 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다. 순차적으로 투여될 때, 일부 실시양태에서 면역 체크포인트 억제제는 CTL 조성물 이전에 투여될 것이다(예컨대, 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 또는 24시간 전에, 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30일 전에). 순차적으로 투여될 때, 일부 실시양태에서 CTL 조성물은 면역 체크포인트 억제제 이전에 투여될 것이다(예컨대, 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 또는 24시간 전에, 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30일 전에). Immuno checkpoint inhibitors and CTL compositions may be administered together or separately. These can be administered simultaneously or sequentially. When administered sequentially, in some embodiments, the immuno checkpoint inhibitor will be administered prior to the CTL composition (e.g., At least 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, At least 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 25, 26, 27, 28, 29 or 30 days before). When administered sequentially, in some embodiments, the CTL composition will be administered prior to the immuno checkpoint inhibitor (e.g., at least 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, At least 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, , 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 or 30 days before).

면역 체크포인트 억제제는 면역 반응을 예방하거나 또는 하향조절하는 체크포인트 역할을 하는 생물학적 경로를 억제하는 것을 광범위하게 지칭한다. 이러한 경로는 항암 면역 반응을 피하기 위해 암 세포에 의해 종종 사용된다. 특정 실시양태에서, 상기 방법은 면역 체크포인트 단백질을 표적하는 하나 이상의 면역 체크포인트 억제제를 대상체에 투여하는 것을 포함한다. 면역 체크포인트 단백질은 CTLA4, PD-1, PD-L1, PD-L2, A2AR, B7-H3, B7-H4, BTLA, KIR, LAG-3, TIM-3, IDO, TDO, 및 VISTA를 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 면역 체크포인트 억제제는 하나 이상의 면역 체크포인트 단백질을 표적할 수 있다. Immune checkpoint inhibitors are broadly referred to as inhibiting biological pathways that serve as checkpoints to prevent or downregulate the immune response. This pathway is often used by cancer cells to avoid an anti-cancer immune response. In certain embodiments, the methods comprise administering to the subject one or more immuno checkpoint inhibitors that target the immune checkpoint protein. Immune checkpoint proteins include CTLA4, PD-1, PD-L1, PD-L2, A2AR, B7-H3, B7-H4, BTLA, KIR, LAG-3, TIM-3, IDO, TDO and VISTA , But is not limited thereto. In some embodiments, the one or more immune checkpoint inhibitors can target one or more immune checkpoint proteins.

일부 실시양태에서, 면역 체크포인트 억제제는 가용성 융합 단백질과 같은 단백질이다. 일부 실시양태에서, 이러한 단백질은 CTLA4, PD-1, PD-L1, PD-L2, A2AR, B7-H3, B7-H4, BTLA, KIR, LAG-3, TIM-3, IDO, TDO, 또는 VISTA의 수용체/리간드 결합 도메인(예컨대, 세포 외 도메인)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 수용체/리간드 결합 도메인은 면역글로불린 Fc 도메인에 융합될 수 있다. 이러한 융합 단백질은 표준 재조합 DNA 기술에 의해 제조될 수 있다. 예컨대, 상이한 펩타이드 서열을 코딩하는 DNA 단편은, 종래의 기술에 따라, 예컨대 결찰(ligation)을 위한 블런트-단부(blunt-end) 또는 스태거-단부(stagger-end) 말단(termini), 적절한 말단을 제공하기 위한 제한효소 절단(digestion), 적절하게 접착성 단부의 필링-인(filling-in), 바람직하지 않은 연결을 피하기 위한 알칼라인 포스파타아제 처리, 및 효소적 결찰을 사용함으로써, 프레임 내에서 함께 결찰될 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 융합 유전자는 자동화된 DNA 합성기를 포함하는 종래의 기술에 의해 합성될 수 있다. 대안으로, 유전자 단편의 PCR 증폭은 후속적으로 어닐링되고 재증폭되어 키메라 유전자 서열을 생성할 수 있는 2개의 연속적인 유전자 단편 사이에 상보적인 오버행(overhang)을 유발하는 앵커 프라이머를 사용하여 수행될 수 있다(예컨대, Current Protocols in Molecular Biology, Ausubel et al., eds., John Wiley & Sons: 1992 참조). 게다가, 이미 융합 모이어티를 코딩하는 많은 발현 벡터가 상업적으로 이용가능하다.In some embodiments, the immune checkpoint inhibitor is a protein such as a soluble fusion protein. In some embodiments, the protein is selected from the group consisting of CTLA4, PD-1, PD-L1, PD-L2, A2AR, B7-H3, B7-H4, BTLA, KIR, LAG-3, TIM-3, IDO, TDO, Ligand binding domain (e. G., An extracellular domain) of the < / RTI > In some embodiments, the receptor / ligand binding domain can be fused to an immunoglobulin Fc domain. Such fusion proteins can be prepared by standard recombinant DNA techniques. For example, DNA fragments encoding different peptide sequences may be cloned in accordance with conventional techniques, for example blunt-end or stagger-end termini for ligation, By using digestion of restriction enzymes to provide an appropriate amount of polymeric material, suitably filling-in of the adhesive end, alkaline phosphatase treatment to avoid undesirable connection, and enzymatic ligation, Can be ligated together. In another embodiment, the fusion gene can be synthesized by conventional techniques, including automated DNA synthesizers. Alternatively, PCR amplification of the gene fragment can be performed using an anchor primer that causes complementary overhang between two consecutive gene fragments that can subsequently be annealed and reamplified to generate a chimeric gene sequence (See, for example, Current Protocols in Molecular Biology, Ausubel et al., Eds., John Wiley & Sons: 1992). In addition, many expression vectors already encoding fusion motifs are commercially available.

특정 실시양태에서, 면역 체크포인트 억제제는, 면역 체크포인트 단백질(예컨대, CTLA4, PD-1, PD-L1, PD-L2, A2AR, B7-H3, B7-H4, BTLA, KIR, LAG-3, TIM-3, IDO, TDO, 또는 VISTA)에 결합하고 억제하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다. 본원에서 사용된 용어 "항체"는 온전한 항체 및 이의 항원 결합 단편 둘 다를 지칭할 수 있다. 용어 "항체"는 예컨대, 단일클론 항체, 다중클론 항체, 키메라 항체, 인간화 항체, 인간 항체, 다중 특이성 항체(예컨대, 이중 특이성 항체), 단쇄(single-chain) 항체 및 항원-결합 항체 단편을 포함한다. 항체의 항원-결합 단편은 항원에 결합하는 능력을 보유하는 항체의 하나 이상의 단편을 지칭한다. 결합 단편의 예는 Fab, Fab', F(ab')2, Fv, scFv, 디설파이드 결합된 Fv, Fd, 디아바디(diabodies), 단쇄 항체, 낙타 항체(camelid antibody), 분리된 CDRH3, 및 온전한 항체의 가변 영역의 적어도 일부를 보유하는 다른 항체 단편을 포함한다. 이러한 항체 단편은 종래의 재조합 및/또는 효소 기술을 사용하여 수득될 수 있고, 온전한 항체와 동일한 방식으로 항원-결합에 대해 스크리닝될 수 있다.In certain embodiments, the immune checkpoint inhibitor is selected from the group consisting of an immune checkpoint protein (e.g., CTLA4, PD-1, PD-L1, PD-L2, A2AR, B7-H3, B7-H4, BTLA, KIR, LAG- TIM-3, IDO, TDO, or VISTA) or an antigen-binding fragment thereof. The term " antibody " as used herein may refer to both intact antibodies and antigen-binding fragments thereof. The term "antibody" includes, for example, monoclonal antibodies, polyclonal antibodies, chimeric antibodies, humanized antibodies, human antibodies, multispecific antibodies (eg, bispecific antibodies), single-chain antibodies and antigen- do. An antigen-binding fragment of an antibody refers to one or more fragments of an antibody that retain the ability to bind the antigen. Examples of binding fragments include Fab, Fab ', F (ab') 2 , Fv, scFv, disulfide linked Fv, Fd, diabodies, single chain antibodies, camelid antibodies, isolated CDRH3, And other antibody fragments that retain at least a portion of the variable region of the antibody. Such antibody fragments can be obtained using conventional recombinant and / or enzymatic techniques and can be screened for antigen-binding in the same manner as intact antibodies.

일부 실시양태에서, 면역 체크포인트 억제제는 면역 체크포인트 억제제(예컨대, CTLA4, PD-1, PD-L1, PD-L2, A2AR, B7-H3, B7-H4, BTLA, KIR, LAG-3, TIM-3, IDO, TDO, 또는 VISTA)를 코딩하는 mRNA에 특이적으로 결합하는, 억제 핵산(예컨대, siRNA 분자, shRNA 분자, 안티센스 RNA)이다. 억제 핵산 분자는 화학적 합성, 인 비트로(in vitro) 전사, 또는 Rnase III 또는 다이서(Dicer)에 의한 긴 dsRNA의 절단에 의해 제조될 수 있다. 억제 핵산 분자는 인 비트로에서 세포로 또는 인 비보에서, 예컨대, 포유동물의 종양 또는 저산소 조직으로 전달될 수 있다. 당업계에 공지된 전형적인 전달 수단이 사용될 수 있다. 예를 들어, 간섭 RNA는, 예컨대, 각각이 그 전체가 참고로 인용되는 PCT 출원 제PCT/US09/036223호, 제PCT/US09/061381호, 제PCT/US09/063927호, 제PCT/US09/063931호 및 제PCT/US09/063933호에 기재된 방법 및 조성물을 사용하여 전신계에 전달될 수 있다. 특정 실시양태에서 억제 핵산은 국소적으로 전달된다. 예를 들어, 본원에 기재된 억제 핵산이 암을 치료하기 위해 사용될 때, 종양으로의 전달은 예컨대, 각각이 그 전체가 참고로 인용되는 Takahashi et al., Journal of Controlled Release 116:90-95 (2006) 및 Kim et al., Journal of Controlled Release 129:107-116 (2008)에 기재된 바와 같은 종양 내 주사에 의해 수행될 수 있다.In some embodiments, the immune checkpoint inhibitor is an immune < RTI ID = 0.0 > checkpoint inhibitor (e. G., CTLA4, PD-1, PD-L1, PD-L2, A2AR, B7-H3, B7-H4, BTLA, KIR, LAG- (E.g., siRNA molecule, shRNA molecule, antisense RNA) that specifically binds to an mRNA that encodes a protein (e.g., SEQ ID NO: 3, IDO, TDO, or VISTA) Inhibitory nucleic acid molecules can be produced by chemical synthesis, in vitro transcription, or by cleavage of long dsRNA by Rnase III or Dicer. Inhibitory nucleic acid molecules may be delivered from in vitro to cells or in vivo, for example, to mammalian tumors or hypoxic tissues. Exemplary delivery means known in the art can be used. For example, the interfering RNA can be introduced into a host cell, for example, as described in PCT / US09 / 036223, PCT / US09 / 061381, PCT / US09 / 063927, PCT / US09 / 063931 and PCT / US09 / 063933, which are incorporated herein by reference in their entirety. In certain embodiments, the inhibitory nucleic acid is delivered locally. For example, when the inhibitory nucleic acids described herein are used to treat cancer, the delivery to the tumor can be carried out, for example, as described in Takahashi et al., Journal of Controlled Release 116: 90-95 (2006 ) And Kim et al., Journal of Controlled Release 129: 107-116 (2008).

또 다른 실시양태에서, 면역 체크포인트 억제제는 소(small) 유기 분자, 예를 들어 약 5kD 미만, 바람직하게는 약 2kD 미만의 분자량을 갖는 분자이고, 전형적으로 올리고뉴클레오타이드와 올리고펩타이드를 제외한다. 소분자는 예컨대, 펩티도미메틱(peptidomimetic), 올리고당, 스테로이드 등을 포함한다. 대표적인 소분자 체크포인트 억제제는 WO 2016/041511, WO 2015/034820, WO 2010/005958, WO 2014/159248, US Published Application 2011/0318373, 및 Weinmann, H., Chem. Med. Chem. 2016, 11, 450-466 (및 여기에 인용된 참고문헌)에 기재되어 있다. In another embodiment, the immune checkpoint inhibitor is a small organic molecule, such as a molecule having a molecular weight of less than about 5 kD, preferably less than about 2 kD, and typically excludes oligonucleotides and oligopeptides. Small molecules include, for example, peptidomimetic, oligosaccharides, steroids, and the like. Representative small molecule checkpoint inhibitors are described in WO 2016/041511, WO 2015/034820 , WO 2010/005958, WO 2014/159248, US Published Application 2011/0318373, and Weinmann, H., Chem. Med. Chem. 2016 , 11 , 450-466 (and references cited therein).

다양한 면역 체크포인트 억제제가 당업계에 공지되어 있다. 일부 실시양태에서, 면역 체크포인트 억제제는 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 피딜리주맙, AMP-224, AMP-514, STI-A1110, TSR-042, RG-7446, BMS-936559, BMS-936558, MK-3475, CT Oll, MPDL3280A, MEDI-4736, MSB-0020718C, AUR-012 및 STI-A1010이다.A variety of immune checkpoint inhibitors are known in the art. In some embodiments, the immune checkpoint inhibitor is selected from the group consisting of: nobilulipat, fembrolysiem, pidilimumam, AMP-224, AMP-514, STI-A1110, TSR-042, RG-7446, BMS-936559, BMS- -3475, CT Oll, MPDL3280A, MEDI-4736, MSB-0020718C, AUR-012 and STI-A1010.

세포독성 T 림프구Cytotoxic T lymphocyte

일부 실시양태에서, 대상체에 투여된 CTL 조성물 내 CTL은 MHC 클래스 I 상에 제시된 펩타이드(예컨대, 암-관련 에피토프를 포함하는 펩타이드)에 특이적으로 결합하는 T 세포 수용체를 발현한다. 일부 실시양태에서, MHC 클래스 I는 α쇄 폴리펩타이드 즉, HLA-A, HLA-B, HLA-C, HLA-E, HLA-F, HLA-g, HLA-K 또는 HLA-L을 갖는다. 일부 실시양태에서, 펩타이드는 본원에 기재된 펩타이드이다. 일부 실시양태에서, 시료 내 CTL은 MHC 클래스 I 상에 제시된 엡스타인-바 바이러스(EBV) 펩타이드(예컨대, LMP1 펩타이드, LMP2A 펩타이드 또는 EBNA1 펩타이드)에 특이적인 TCR을 발현한다.In some embodiments, CTLs in a CTL composition administered to a subject express a T cell receptor that specifically binds to a peptide presented on MHC class I (e.g., a peptide comprising a cancer-associated epitope). In some embodiments, MHC class I has an alpha chain polypeptide, i.e., HLA-A, HLA-B, HLA-C, HLA-E, HLA-F, HLA-g, HLA-K or HLA-L. In some embodiments, the peptide is the peptide described herein. In some embodiments, the CTL in the sample expresses a TCR that is specific for Epstein-Barr virus (EBV) peptide (eg, LMP1 peptide, LMP2A peptide or EBNA1 peptide) presented on MHC class I.

본원에 기재된 CTL 조성물 내 CTL은 항원-제시세포(APC)와 함께 CTL을 포함하는 시료를 항온처리하여, CTL이 증식하도록 유도함으로써 생성될 수 있다. 일부 실시양태에서, APC는 본원에 기재된 펩타이드(예컨대, LMP1, LMP2A, 또는 EBNA1 에피토프 서열을 포함하는 펩타이드)를 제시한다. 일부 실시양태에서 APC는 B 세포, 항원-제시 T 세포, 수지상세포, 또는 인공적인 항원 제시 세포(예컨대, aK562 세포)이다.CTLs in the CTL compositions described herein can be generated by incubating a sample containing CTL with an antigen-presenting cell (APC) to induce the CTL to proliferate. In some embodiments, the APCs exhibit the peptides described herein (e. G., Peptides comprising the LMP1, LMP2A, or EBNAl epitope sequences). In some embodiments, the APC is a B cell, an antigen-presenting T cell, a dendritic cell, or an artificial antigen presenting cell (e.g., aK562 cell).

공정에 사용되는 수지상세포는 환자 시료로부터 말초혈액 단핵세포(PBMCs)를 획득하여 이를 플라스틱에 부착시킴으로써 제조될 수 있다. 일반적으로 단핵구 집단은 달라붙고, 모든 다른 세포는 씻겨져 나갈 수 있다. 이후, 부착 집단은 IL-4 및 GM-CSF에 의해 분화되어, 단핵구 유래 수지상세포를 생성한다. 이 세포는 IL-1β, IL-6, PGE-1 및 TNF-α(이들은 수지상세포의 표면에서 중요한 공동-자극 분자를 상향 조절함)의 첨가에 의해 성숙될 수 있고, 이후, 본원에 제공된 하나 이상의 펩타이드에 의해 형질 도입된다.The dendritic cells used in the process can be prepared by obtaining peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) from patient samples and attaching them to plastic. In general, monocyte populations cling to and all other cells can be washed away. The adherent population is then differentiated by IL-4 and GM-CSF to produce monocyte-derived dendritic cells. These cells can be matured by the addition of IL-1β, IL-6, PGE-1 and TNF-α, which upregulate important co-stimulatory molecules on the surface of dendritic cells, Or more of the peptide.

본원에 기재된 하나 이상의 펩타이드를 제시하는 APC는, APC를 CTL 에피토프를 포함하는 펩타이드 및/또는 CTL 에피토프를 포함하는 펩타이드를 코딩하는 핵산에 접촉시킴으로써 생성될 수 있다. 일부 실시양태에서, APC는 광조사된다. 일부 실시양태에서, APC는 본원에 기재된 펩타이드(예컨대, LMP1, LMP2A, 또는 EBNA1 에피토프 서열을 포함하는 펩타이드)를 제시한다. 본원에 기재된 펩타이드를 제시하는 세포는 당업계에 공지된 표준 기술에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 세포는 펩타이드 흡수를 촉진하도록 펄스화될 수 있다. 일부 실시양태에서, 세포는 본원에 제공된 펩타이드를 코딩하는 핵산에 의해 형질감염된다. 본원에서는 본원에 기재된 펩타이드와 함께 세포를 펄스화(pulsing)하는 단계를 포함하는, 항원 제시 세포(APC)를 생성하는 방법을 제공한다. 항원 제시 세포를 생성하는 예시적인 예는 WO2013088114에서 찾아볼 수 있으며, 이의 전체가 본원에 인용된다.APCs presenting one or more peptides described herein can be generated by contacting the APC with a peptide comprising a CTL epitope and / or a nucleic acid encoding a peptide comprising a CTL epitope. In some embodiments, the APC is irradiated. In some embodiments, the APCs exhibit the peptides described herein (e. G., Peptides comprising the LMP1, LMP2A, or EBNAl epitope sequences). Cells presenting the peptides described herein can be prepared by standard techniques known in the art. For example, the cell can be pulsed to promote peptide uptake. In some embodiments, the cell is transfected with a nucleic acid encoding a peptide provided herein. Provided herein are methods of generating antigen presenting cells (APCs) comprising pulsing cells with the peptides described herein. Exemplary examples of generating antigen presenting cells can be found in WO2013088114, the entirety of which is incorporated herein by reference.

일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은, 본원에 기재된 하나 이상의 CTL 에피토프를 인식하는 T 세포(예컨대, CTL)를 생성, 활성화 및/또는 그의 증식을 유도하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, CTL을 포함하는 시료(즉, PBMC 시료)는 본원에 제공된 APC(예컨대, MHC 클래스 I 복합체 상에 CTL 에피토프(예컨대, EBV 에피토프)를 포함하는 펩타이드를 제시하는 APC)와의 배양 하에 항온처리된다. 일부 실시양태에서, APC는 T 세포가 수득된 대상체에서 자가 유래된다. 일부 실시양태에서, APC는 T 세포가 수득된 대상체에서 자가 유래되지 않는다(즉 동종이계). 일부 실시양태에서, T 세포를 함유하는 시료는 본원에 제공된 APC와 2회 이상 항온처리된다. 일부 실시양태에서, T 세포는 하나 이상의 사이토카인의 존재 하에 APC와 함께 항온처리된다. 일부 실시양태에서, 사이토카인은 IL-4, IL-7 및/또는 IL-15이다. APC를 사용하여 T 세포의 증식을 유도하는 예시적인 방법은 예컨대, 미국특허 공개공보 제2015/0017723호에서 제공되며, 이는 본원에 참고로 인용된다.In some embodiments, the methods provided herein comprise the step of generating, activating and / or inducing proliferation of T cells (e. G., CTL) that recognize one or more CTL epitopes as described herein. In some embodiments, a sample comprising CTL (i. E., A PBMC sample) is incubated with the APC provided herein (e. G., APC presenting a peptide comprising a CTL epitope (e. G., An EBV epitope) on an MHC class I complex) Lt; / RTI > In some embodiments, the APC is autologous to the subject in which the T cell is obtained. In some embodiments, the APC is not autologically derived (i.e., homologous) in the subject from which the T cell is obtained. In some embodiments, a sample containing T cells is incubated with the APC provided herein more than once. In some embodiments, the T cell is incubated with the APC in the presence of one or more cytokines. In some embodiments, the cytokine is IL-4, IL-7 and / or IL-15. Exemplary methods for inducing proliferation of T cells using APC are provided, for example, in U.S. Patent Publication No. 2015/0017723, which is incorporated herein by reference.

일부 양태에서, 본원에서는 암을 치료 및/또는 예방하기 위해 대상체에 면역 체크포인트 억제제 및 CTL을 포함하는 시료의 투여를 포함하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 본원에 제공된 CTL 및 하나 이상의 면역 체크포인트 억제제를 포함하는 조성물을 유효량으로 대상체에 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 조성물은 본원에 제공된 다수의(예컨대, 2개 이상의) CTL 및/또는 면역 체크포인트 억제제의 조합을 포함한다. 일부 실시양태에서, T 세포는 대상체에서 자가 유래된다. 일부 실시양태에서, T 세포는 대상체와 동종이계이다. 일부 실시양태에서, CTL은 대상체에 투여되기 전에 세포 은행에 저장된다.In some embodiments, methods are provided herein for administering a sample comprising an immuno checkpoint inhibitor and a CTL to a subject to treat and / or prevent cancer. In some embodiments, the method comprises administering to the subject an effective amount of a composition comprising a CTL provided herein and one or more immuno checkpoint inhibitors. In some embodiments, the composition comprises a combination of multiple (e.g., two or more) CTLs and / or immuno checkpoint inhibitors provided herein. In some embodiments, the T cell is autologous to the subject. In some embodiments, the T cell is homologous to the subject. In some embodiments, the CTL is stored in a cell bank prior to administration to the subject.

일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 CTL 집단에서 바이오마커의 발현수준을 측정함으로써 입양 면역 요법을 위한, 세포 은행(예컨대, 에피토프 특이적 CTL의 미리-발생된 제3자 기증자 유래 은행)으로부터 동종이계 CTL을 선택하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 2개 이상의 바이오마커의 발현 수준이 측정된다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 대상체에 존재하는 HLA 대립 유전자에 의해 코딩되는 MHC 클래스 I로 제한된 TCR을 발현하기 때문에, 상기 방법은 동종이계 CTL을 선택하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, CTL 및 대상체가 2개 이상(예컨대, 3개 이상, 4개 이상, 5개 이상, 6개 이상)의 HLA 대립유전자를 공유하고, CTL이 공유된 HLA 대립 유전자를 통해 제한되는 경우, 상기 CTL이 선택된다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 미리-발생된 제3자-기증자-유래된 에피토프 특이적 T 세포(즉, 동종이계 T 세포)의 TCR 레파토리(repertoire)를 유세포 분석기로 테스트하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서 에피토프-특이적 T 세포는 테트라머 어세이(tetramer assay), ELISA 어세이, 웨스턴 블랏 어세이, 형광 현미경 어세이, 에드만 분해 어세이 및/또는 질량 분광 어세이(예컨대, 단백질 시퀀싱)을 사용하여 검출된다. 일부 실시양태에서, TCR 레퍼토리는 핵산 프로브, 핵산 증폭 어세이 및/또는 시퀀싱 어세이를 사용하여 분석된다.In some embodiments, the methods provided herein can be used to determine the level of expression of a biomarker in a population of CTLs, from a cell bank (e.g., a pre-generated third-party donor-derived bank of epitope-specific CTLs) for adoptive immunotherapy, And selecting the second CTL. In some embodiments, the level of expression of two or more biomarkers is measured. In some embodiments, the method further comprises selecting a homologous CTL, since the method expresses a TCR restricted to MHC class I that is encoded by an HLA allele present in the subject. In some embodiments, the CTL and the subject share an HLA allele of two or more (e.g., three or more, four or more, five or more, six or more), and the CTL is restricted through a shared HLA allele , The CTL is selected. In some embodiments, the method comprises testing a TCR repertoire of a pre-generated third-donor-derived epitope-specific T cell (i. E., Allogeneic T cells) with a flow cytometer. In some embodiments, the epitope-specific T cell is selected from the group consisting of a tetramer assay, an ELISA assay, a Western blot assay, a fluorescence microscopy assay, an Edman degradation assay and / or a mass spectroscopy assay Sequencing). In some embodiments, the TCR repertoire is analyzed using a nucleic acid probe, a nucleic acid amplification assay and / or a sequencing assay.

펩타이드Peptides

일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법 및 조성물은 펩타이드 특이적 CTL와 관련된다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 예컨대, 본원에 기재된 하나 이상의 CTL 에피토프를 제시하는 항원-제시 세포(APC)(예컨대, MHC 클래스 I 복합체 상에 CTL 에피토프를 포함하는 본원에 기재된 펩타이드를 제시하는 APC)와 함께 CTL을 포함하는 시료(즉, PBMC 시료)를 항온처리함으로써, 이러한 CTL의 생성을 포함한다.In some embodiments, the methods and compositions provided herein are associated with peptide-specific CTLs. In some embodiments, the methods comprise, for example, antigen-presenting cells (APCs) that exhibit one or more CTL epitopes as described herein (e. G., APCs that present peptides as described herein that include CTL epitopes on MHC class I complexes) (I. E., A PBMC sample) containing the CTL together with < / RTI >

일부 실시양태에서, 본원에 제공된 펩타이드는 임의의 EBV 바이러스 단백질의 서열(예컨대, 임의의 EBV 단백질의 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개 이상의 인접 아미노산의 서열)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 펩타이드는 25, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11 또는 10개 이하의 EBV 바이러스 단백질의 인접 아미노산을 포함한다.In some embodiments, the peptides provided herein comprise a sequence of any EBV viral protein (e. G., 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 , 18, 19 or more than 20 contiguous amino acid sequences). In some embodiments, the peptides provided herein comprise adjacent amino acids of 25, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11 or 10 or fewer EBV viral proteins.

일부 실시양태에서, 본원에 제공된 펩타이드는 LMP1의 서열(예컨대, LMP1의 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개 이상의 인접 아미노산 서열)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 펩타이드는 LMP1의 25, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11 또는 10개 이하의 인접 아미노산을 포함한다. 예시적인 LMP1 아미노산 서열은 하기에 제공된다(서열 번호 1):In some embodiments, the peptides provided herein comprise a sequence of LMPl (e.g., 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 or 20 Or more adjacent amino acid sequences). In some embodiments, the peptides provided herein comprise 25, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11 or 10 contiguous amino acids of LMP1. An exemplary LMP1 amino acid sequence is provided below (SEQ ID NO: 1):

Figure pct00001
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일부 실시양태에서, 본원에 제공된 펩타이드는 LMP2A의 서열(예컨대, LMP2A의 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개 이상의 인접 아미노산의 서열)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 펩타이드는 LMP2A의 25, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11 또는 10개 이하의 인접 아미노산을 포함한다. 예시적인 LMP2A 아미노산 서열은 하기에 제공된다(서열 번호 2):In some embodiments, the peptides provided herein comprise a sequence of LMP2A (e.g., 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 or 20 Or more of the adjacent amino acids). In some embodiments, the peptides provided herein comprise 25, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11 or 10 contiguous amino acids of LMP2A. An exemplary LMP2A amino acid sequence is provided below (SEQ ID NO: 2):

Figure pct00002
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일부 실시양태에서, 본원에 제공된 펩타이드는 EBNA1의 서열(예컨대, EBNA1의 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개 이상의 인접 아미노산의 서열)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 펩타이드는 EBNA1의 25, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11 또는 10개 이하의 인접 아미노산을 포함한다. 예시적인 EBNA1 아미노산 서열은 하기에 제공된다(서열 번호 3):In some embodiments, the peptides provided herein have a sequence of EBNAl (e. G., 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 or 20 Or more of the adjacent amino acids). In some embodiments, the peptides provided herein comprise 25, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11 or 10 contiguous amino acids of EBNA1. An exemplary EBNA1 amino acid sequence is provided below (SEQ ID NO: 3):

Figure pct00003
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일부 실시양태에서, 펩타이드는 표 1에 표시된 에피토프 서열을 포함한다.In some embodiments, the peptides comprise the epitope sequences shown in Table 1.

[표 1] 예시적인 EBV 바이러스 단백질 에피토프Table 1 Exemplary EBV virus protein epitopes < RTI ID = 0.0 >

Figure pct00004
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일부 실시양태에서, 본원에 제공된 펩타이드는 2개 이상의 CTL 에피토프(예컨대, 바이러스 에피토프)를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 펩타이드는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개 이상의 CTL 에피토프를 포함한다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 펩타이드는 링커(예컨대, 폴리펩타이드 링커)에 의해 연결된 2개 이상의 CTL 에피토프를 포함한다.In some embodiments, the peptides provided herein comprise two or more CTL epitopes (e. G., Viral epitopes). In some embodiments, the peptides provided herein can be 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, Epitope < / RTI > For example, in some embodiments, the peptides provided herein comprise two or more CTL epitopes linked by a linker (e. G., A polypeptide linker).

일부 실시양태에서, 펩타이드 서열은 1개 이상의(예컨대, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 또는 그 초과의) 보존적 서열 변형을 제외한 바이러스 단백질 서열을 포함한다. 본원에서 사용된 용어 "보존적 서열 변형(conservative sequence modifications)"은 T 세포 수용체(TCR)와 MHC 상에 제시된 아미노산 서열을 함유하는 펩타이드 사이의 상호 작용에 유의적인 영향을 미치지 않거나 상기 상호작용을 바꾸지 않는 아미노산 변형을 지칭하는 것이다. 이러한 보존적 변형은 아미노산 치환, 첨가(예컨대, 펩타이드의 N 또는 C 말단에 아미노산의 첨가) 및 결실(예컨대, 펩타이드의 N 또는 C 말단으로부터 아미노산의 결실)을 포함한다. 보존적 아미노산 치환은 아미노산 잔기가 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 대체된 것이다. 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 부류는 당업계에 정의되어 있다. 이들 부류는 염기성 측쇄(예컨대, 라이신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄(예컨대, 아스파르트산, 글루탐산), 비전하 극성 측쇄(예컨대, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인, 트립토판), 비극성 측쇄(예컨대, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌), 베타-분지된 측쇄(예컨대, 트레오닌, 발린, 이소류신) 및 방향족 측쇄(예컨대, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)를 갖는 아미노산을 포함한다. 따라서, 본원에 기재된 펩타이드의 하나 이상의 아미노산 잔기는 동일한 측쇄 부류로부터의 다른 아미노산 잔기로 대체될 수 있고, 바뀐 펩타이드는 당업계에 공지된 방법을 사용하여 TCR 결합의 보존에 대해 시험될 수 있다. 변형은 부위-특이적 변이 및 PCR-매개 변이와 같은 당업계에 공지된 표준 기술에 의해 항체로 도입될 수 있다.In some embodiments, the peptide sequence comprises a viral protein sequence except for one or more conservative sequence modifications (e.g., 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 or more) . As used herein, the term " conservative sequence modifications " does not significantly affect or alter the interaction between the T cell receptor (TCR) and the peptide containing the amino acid sequence presented on the MHC Gt; amino acid < / RTI > Such conservative modifications include amino acid substitutions, additions (e. G. Addition of an amino acid at the N or C terminus of the peptide) and deletion (e. G. Deletion of amino acids from the N or C terminus of the peptide). Conservative amino acid substitutions are those in which the amino acid residue is replaced by an amino acid residue having a similar side chain. A class of amino acid residues having similar side chains is defined in the art. These classes include basic side chains such as lysine, arginine, histidine, acidic side chains such as aspartic acid, glutamic acid, non-negatively charged side chains such as glycine, asparagine, glutamine, serine, threonine, tyrosine, cysteine, tryptophan, (Such as threonine, phenylalanine, tryptophan, histidine), which have nonpolar side chains (such as alanine, valine, leucine, isoleucine, proline, phenylalanine, methionine), beta-branched side chains (e.g. threonine, valine, isoleucine) Amino acids. Thus, one or more amino acid residues of the peptides described herein can be replaced with other amino acid residues from the same side chain class, and the altered peptides can be tested for conservation of TCR binding using methods known in the art. Modifications may be introduced into the antibody by standard techniques known in the art, such as site-specific mutations and PCR-mediated mutations.

일부 실시양태에서, 본원에 제공된 펩타이드는 단백질 서열(예컨대, 바이러스 단백질 단편의 서열)과 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 서열을 포함한다. 두 아미노산 서열의 동일성 백분율을 측정하기 위해, 서열은 최적의 비교 목적을 위해 정렬된다(예컨대, 간격(gap)이 최적 정렬을 위해 제1 및 제2 아미노산 서열 중 하나 또는 둘 다에 도입될 수 있고, 비-동일 서열은 비교 목적으로 무시될 수 있다). 이후, 상응하는 아미노산 위치의 아미노산 잔기를 비교하였다. 제1 서열의 위치가 제2 서열의 상응하는 위치와 동일한 아미노산 잔기로 점유될 때, 분자들은 그 위치에서 동일하다. 두 서열 간의 동일성 백분율은 두 서열들의 최적 정렬을 위해 도입될 필요가 있는 각 간격의 갯수 및 각 간격의 길이를 고려하여, 서열에 의해 공유되는 동일한 위치의 수의 함수이다.In some embodiments, the peptides provided herein comprise sequences that are at least 80%, 85%, 90%, 95%, or 100% identical to a protein sequence (e.g., a sequence of a viral protein fragment). In order to determine the percent identity of two amino acid sequences, the sequences are aligned for optimal comparison purposes (e.g., a gap may be introduced into one or both of the first and second amino acid sequences for optimal alignment , Non-identical sequences can be ignored for comparison purposes). The amino acid residues at the corresponding amino acid positions were then compared. When the position of the first sequence is occupied by the same amino acid residue as the corresponding position of the second sequence, the molecules are the same at that position. The percent identity between two sequences is a function of the number of identical positions shared by the sequences, taking into account the number of each interval and the length of each interval that need to be introduced for optimal alignment of the two sequences.

본원에 제공된 펩타이드는 표준 단백질 정제 기술을 사용하여 적절한 정제 방식에 의해 세포 또는 조직 공급원으로부터 분리될 수 있고, 재조합 DNA 기술에 의해 제조될 수 있고/있거나, 표준 펩타이드 합성 기술을 사용하여 화학적으로 합성 될 수 있다. 본원에 기재된 펩타이드는 본 발명의 펩타이드(들)을 코딩하는 뉴클레오타이드의 발현에 의해 원핵 또는 진핵 숙주 세포에서 생산될 수 있다. 대안으로, 이러한 펩타이드는 화학적 방법에 의해 합성될 수 있다. 재조합 숙주 내 펩타이드의 이형 발현(heterologous expression), 펩타이드의 화학적 합성, 및 인 비트로 번역(translation)의 방법이 당업계에 공지되어 있으며, 추가로 Maniatis et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (1989), 2nd Ed., Cold Spring Harbor, N. Y.; Berger and Kimmel, Methods in Enzymology, Volume 152, Guide to Molecular Cloning Techniques (1987), Academic Press, Inc., San Diego, Calif.; Merrifield, J. (1969) J. Am. Chem. Soc. 91:501; Chaiken I. M. (1981) CRC Crit. Rev. Biochem. 11:255; Kaiser et al. (1989) Science 243:187; Merrifield, B. (1986) Science 232:342; Kent, S. B. H. (1988) Annu. Rev. Biochem. 57:957; 및 Offord, R. E. (1980) Semisynthetic Proteins, Wiley Publishing에 기재되어 있으며, 이들은 본원에 참고로 인용된다.The peptides provided herein may be separated from the cell or tissue source by appropriate purification methods using standard protein purification techniques and may be prepared by recombinant DNA technology and / or may be chemically synthesized using standard peptide synthesis techniques . The peptides described herein can be produced in prokaryotic or eukaryotic host cells by expression of the nucleotide (s) encoding the peptide (s) of the present invention. Alternatively, such peptides may be synthesized by chemical methods. Methods for the heterologous expression of peptides in recombinant hosts, chemical synthesis of peptides, and in vitro translation are known in the art and further described in Maniatis et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (1989) , ≪ / RTI > 2nd Ed., Cold Spring Harbor, NY; Berger and Kimmel, Methods in Enzymology, Volume 152, Guide to Molecular Cloning Techniques (1987), Academic Press, Inc., San Diego, Calif .; Merrifield, J. (1969) J. Am. Chem. Soc. 91: 501; Chaiken I. M. (1981) CRC Crit. Rev. Biochem. 11: 255; Kaiser et al. (1989) Science 243: 187; Merrifield, B. (1986) Science 232: 342; Kent, S. B. H. (1988) Annu. Rev. Biochem. 57: 957; And Offord, R. E. (1980) Semisynthetic Proteins, Wiley Publishing, which are incorporated herein by reference.

특정 양태에서, 본원에서는 본원에 기재된 펩타이드를 코딩하는 핵산 분자를 제공한다. 일부 실시양태에서, 핵산 분자는 벡터이다. 일부 실시양태에서, 핵산 분자는 본원에 기재된 핵산 분자를 포함하는 아데노 바이러스 기반 발현 벡터와 같은 바이러스 벡터이다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 벡터는 본원에 제공된 다수의 에피토프(예컨대, 폴리에피토프로서)를 코딩한다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 벡터는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개 이상의 본원에 제공된 에피토프(예컨대, 표 1에 제공된 에피토프)를 코딩한다.In certain embodiments, provided herein are nucleic acid molecules that encode the peptides described herein. In some embodiments, the nucleic acid molecule is a vector. In some embodiments, the nucleic acid molecule is a viral vector, such as an adenovirus-based expression vector comprising the nucleic acid molecule described herein. In some embodiments, the vectors provided herein encode a plurality of epitopes (e. G., As a polyepitope) provided herein. In some embodiments, the vectors provided herein are administered at a dose of 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, (E. G., The epitope provided in Table 1).

일부 실시양태에서, 벡터는 AdE1-LMPpoly이다. AdE1-LMPpoly 벡터는 Gly-Ala 반복-결실된 EBNA1 서열에 접합된 LMP1 및 LMP2로부터 한정된 CTL 에피토프의 폴리에피토프를 코딩한다. AdE1-LMPpoly 벡터는 예컨대, Smith et al., Cancer Research 72:1116 (2012); Duraiswamy et al., Cancer Research 64:1483-9 (2004); 및 Smith et al., J. Immunol 117:4897-906에 기재되어 있으며, 이들 각각은 본원에 참고로 인용된다.In some embodiments, the vector is AdEl-LMPpoly. The AdE1-LMPpoly vector codes for a poly epitope of the CTL epitope defined from LMP1 and LMP2 conjugated to the Gly-Ala repeat-deleted EBNA1 sequence. AdE1-LMPpoly vectors are described, for example, in Smith et al., Cancer Research 72: 1116 (2012); Duraiswamy et al., Cancer Research 64: 1483-9 (2004); And Smith et al., J. Immunol 117: 4897-906, each of which is incorporated herein by reference.

본원에 사용된 용어 "벡터"는 이것이 연결되는 또 다른 핵산을 수송할 수 있는 핵산 분자를 지칭한다. 벡터의 하나의 유형은 "플라스미드"인데, 이는 추가 DNA 절편이 결찰될 수 있는 원형 이중-가닥 DNA 루프를 지칭한다. 벡터의 또 다른 유형은 바이러스 벡터인데, 여기서 추가 DNA 절편은 바이러스 게놈에 결찰될 수 있다. 특정 벡터(예컨대, 박테리아 복제 원점을 갖는 박테리아 벡터, 에피솜 포유류 벡터)는 그들이 도입되는 숙주 세포에서 자가 복제(autonomous replication)가능하다. 다른 벡터(예컨대, 비-에피솜 포유류 벡터)는 숙주 세포 내로 도입시 숙주 세포의 게놈에 통합되어 숙주 게놈과 함께 복제될 수 있다. 또한, 특정 벡터는 유전자의 발현을 지시할 수 있다. 이러한 벡터는 본원에서 "재조합 발현 벡터"(또는 단순히, "발현 벡터")로 지칭된다. 일부 실시양태에서, 본원에서는 발현 벡터에 하나 이상의 조절 서열(예컨대, 프로모터)에 작동 가능하게 연결된 핵산을 제공한다. 일부 실시양태에서, 세포는 본원에 제공된 핵산을 전사하여, 본원에 기재된 펩타이드를 발현한다. 핵산 분자는 세포 게놈에 통합될 수 있거나, 염색체 외부에 있을 수 있다.The term " vector " as used herein refers to a nucleic acid molecule capable of transporting another nucleic acid to which it is linked. One type of vector is a " plasmid ", which refers to a circular double-stranded DNA loop to which additional DNA segments can be ligated. Another type of vector is a viral vector, where additional DNA fragments can be ligated to the viral genome. Certain vectors (e. G., Bacterial vectors having an origin of bacterial replication, episomal mammalian vectors) are capable of autonomous replication in host cells into which they are introduced. Other vectors (e. G., Non-episomal mammalian vectors) may be integrated into the genome of the host cell upon introduction into the host cell and replicated with the host genome. In addition, a particular vector may direct expression of the gene. Such vectors are referred to herein as " recombinant expression vectors " (or simply, " expression vectors "). In some embodiments, the present invention provides a nucleic acid operatively linked to one or more regulatory sequences (e. G., A promoter) in an expression vector. In some embodiments, the cell transcribes the nucleic acid provided herein to express the peptide described herein. The nucleic acid molecule may be integrated into the cell genome, or may be outside the chromosome.

일부 실시양태에서, 본원에서는 본원에 기재된 핵산(예컨대, 본원에 기재된 펩타이드를 코딩하는 핵산)을 함유하는 세포를 제공한다. 세포는 예컨대, 원핵 생물, 진핵 생물, 포유류, 조류, 쥐 및/또는 인간일 수 있다. 일부 실시양태에서, 세포는 포유류 세포이다. 일부 실시양태에서, 세포는 APC(예컨대, 항원-제시 T 세포, 수지상세포, B 세포 또는 aK562 세포)이다. 본 발명의 방법에서, 본원에 기재된 핵산은 예컨대, 전달 비히클 없이 핵산으로서, 전달 시약과 함께, 세포에 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 당업계에 공지된 임의의 핵산 전달 방법은 본원에 기재된 방법에 사용될 수 있다. 적합한 전달 시약은 예컨대, Mirus Transit TKO 친유성 시약; 리포펙틴(lipofectin); 리포펙타민(lipofectamine); 셀펙틴(cellfectin); 폴리양이온(예컨대, 폴리라이신), 아테로콜라겐, 나노플렉스(nanoplexes) 및 리포좀을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 본원에 기재된 방법의 일부 실시양태에서, 리포좀은 세포 또는 대상체에 핵산을 전달하기 위해 사용된다. 본원에 기재된 방법에서 사용하기에 적합한 리포좀은 일반적으로 중성 또는 음으로 하전된 인지질 및 콜레스테롤과 같은 스테롤을 포함하는 표준 비히클-형성 지질로부터 형성될 수 있다. 지질의 선택은 일반적으로 원하는 리포솜 크기 및 혈류 내 리포좀의 반감기와 같은 인자의 고려에 의해 좌우된다. 예컨대, 다양한 방법이 Szoka et al. (1980), Ann. Rev. Biophys. Bioeng. 9:467; 및 미국특허 제4,235,871호, 제4,501,728호, 제4,837,028호, 및 제5,019,369호에 개시된 것과 같은 리포좀 제조에 대해 공지되어 있으며, 이들의 전체 개시 내용은 본원에 참고로 인용된다.In some embodiments, provided herein are cells containing a nucleic acid as described herein (e. G., A nucleic acid encoding a peptide as described herein). The cells may be, for example, prokaryotes, eukaryotes, mammals, birds, mice and / or humans. In some embodiments, the cell is a mammalian cell. In some embodiments, the cell is an APC (e.g., antigen-presenting T cell, dendritic cell, B cell or aK562 cell). In the method of the present invention, the nucleic acid described herein can be administered to a cell, for example, as a nucleic acid without a delivery vehicle, together with a delivery reagent. In some embodiments, any nucleic acid delivery method known in the art can be used in the methods described herein. Suitable delivery reagents include, for example, the Mirus Transit TKO lipophilic reagent; Lipofectin; Lipofectamine; Cellfectin; But are not limited to, polycations (e.g., polylysine), atherocollagen, nanoplexes, and liposomes. In some embodiments of the methods described herein, the liposomes are used to deliver nucleic acids to a cell or a subject. Liposomes suitable for use in the methods described herein may be formed from standard vehicle-forming lipids, which generally comprise sterols such as neutral or negatively charged phospholipids and cholesterol. The choice of lipid generally depends on factors such as the size of the liposome desired and the half-life of the liposomes in the blood stream. For example, various methods have been described by Szoka et al. (1980), Ann. Rev. Biophys. Bioeng. 9: 467; And U.S. Patent Nos. 4,235,871, 4,501,728, 4,837,028, and 5,019,369, the entire disclosures of which are incorporated herein by reference.

치료 방법Treatment method

일부 실시양태에서, 본원에서는 본원에 기재된 병용 요법을 대상체에 투여함으로써 대상체의 암을 치료하는 방법을 제공한다.In some embodiments, provided herein are methods of treating cancer in a subject by administering to the subject a combination therapy as described herein.

일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 임의의 암을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 방법 및 CTL은 임의의 암성 또는 전-암성 종양을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 암은 고형 종양을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법 및 조성물에 의해 치료될 수 있는 암은 방광, 혈액, 뼈, 골수, 뇌, 유방, 대장, 식도, 위장관, 잇몸, 머리, 신장, 간, 폐, 비인두, 목, 난소, 전립선, 피부, 위, 고환, 혀 또는 자궁의 암세포를 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 또한, 암은 구체적으로 다음의 조직학적 유형일 수 있으나, 이들에 제한되지는 않는다: 악성 신생물; 암종; 미분화된 암종; 거대 및 방추형 세포 암종; 소세포 암종; 유두상암; 편평세포 암종; 림프상피 암종; 기저세포암; 섬모기질암; 이행상피암; 유두상 이행상피암; 선암; 악성 가스트린종; 담관암; 간세포 암종; 조합된 간세포 암종 및 담관암; 섬유주 선암; 샘낭 암종; 샘종성 폴립에서의 선암; 가족성 대장 폴립증 선암; 고형 암종; 악성 유암종; 세기관지-폐포 선암; 유두상 선암종; 색소혐성 암종; 호산성 암종; 호산성 선암; 호염기성 암종; 투명세포 선암종; 과립세포 암종; 여포 선암종; 유두상 및 여포 선암종; 비피막 경화성 암종; 부신피질 암종; 자궁내막 암종; 피부부속물 암종; 아포크린 선암종; 피지선암; 귀지선암; 점액표피양 암종; 낭선암종; 유두상 낭선암종; 유두상 장액성 낭선암종; 점액성 낭선암종; 점액성 선암; 반지 세포 암종; 침윤성 관 암종; 수질암종; 소엽암; 염증성 암종; 유방 파제트병(paget's disease); 선방세포 암종; 선편평세포 암종; 선암 w/편평상피화생; 악성 흉선종; 악성 난소 기질 종양; 악성 난포막종; 악성 과립막 세포종; 악성 남성모세포종; 세르톨리세포 암종; 악성 간질세포종; 악성 지질세포종; 악성 부신경절종; 악성 유방외 부신경절종; 갈색세포종; 글로만지오사르코마(glomangiosarcoma); 악성 흑색종; 멜라닌결핍 흑색종; 표재 확산 흑색종; 거대색소 모반에서의 악성 흑색종; 유상피세포 흑색종; 악성 청색모반; 육종; 섬유육종; 악성 섬유조직구종; 점액육종; 지방육종; 평활근육종; 횡문근육종; 배아형 횡문근육종; 포상 횡문근육종; 기질육종; 악성 혼합 종양; 뮐로(mullerian) 혼합 종양; 신아세포종; 간모세포종; 암육종; 악성 간엽종; 악성 브레너 종양(brenner tumor); 악성 엽상종; 활막육종; 악성 중피종; 미분화배세포종; 태생기암; 악성 기형종; 악성 난소갑상선종; 융모막암종; 악성 중신종; 혈관 육종; 악성 혈관내피종; 카포시 육종(kaposi's sarcoma); 악성 혈관주위세포종; 림프관육종; 골육종; 골막 골육종; 연골육종; 악성 연골모세포종; 간엽 연골육종; 뼈의 거대 세포 종양; 유잉 육종(ewing's sarcoma); 악성 치성 종양; 사기질모세포 치육종(ameloblastic odontosarcoma); 악성 법랑모세포종; 사기질모세포 섬유육종; 악성 송과체종; 척삭종; 악성 신경교종; 상의세포종; 성상세포종; 원형질 성상세포종; 원섬유성 성상세포종; 성상아세포종; 교모세포종; 핍지교종; 핍지모세포종; 원시신경외배엽; 소뇌 육종; 신경절아세포종; 신경모세포종; 망막모세포종; 후각 신경성 종양; 악성 뇌수막종; 신경섬유육종; 악성 신경초종; 악성 과립 세포 종양; 악성 림프종; 호지킨병; 호지킨 림프종; 파라육아종; 소형 림프구성 악성 림프종; 광범위 큰 세포 악성 림프종; 난포 악성 림프종; 균상 식육종; 다른 명시된 비-호지킨 림프종; 악성 조직구증; 다발성 골수종; 비만세포 육종; 면역증식 소장 질환; 백혈병; 림프성 백혈병; 형질세포성 백혈병; 적백혈병; 림프육종 세포 백혈병; 골수성 백혈병; 호염기성 백혈병; 호산구성 백혈병; 단구성 백혈병; 비만세포성 백혈병; 거핵아구 백혈병(megakaryoblastic leukemia); 골수성 육종; 및 모양 세포 백혈병.In some embodiments, the methods provided herein can be used to treat any cancer. For example, in some embodiments, the methods and CTLs described herein can be used to treat any cancerous or pre-cancerous tumor. In some embodiments, the cancer comprises a solid tumor. In some embodiments, the cancer that may be treated by the methods and compositions provided herein is administered to a subject in need thereof, such as a bladder, blood, bone, bone marrow, brain, breast, colon, esophagus, gastrointestinal tract, gums, But are not limited to, cancer cells of the head, neck, ovary, prostate, skin, stomach, testicle, tongue, or uterus. In addition, the cancer may specifically be, but is not limited to, the following histological types: malignant neoplasm; carcinoma; Undifferentiated carcinoma; Giant and fusiform cell carcinoma; Small cell carcinoma; Papillary carcinoma; Squamous cell carcinoma; Lymphocytic carcinoma; Basal cell carcinoma; Ciliary cancer; Metastatic carcinoma; Papillary epithelial carcinoma; Adenosine; Malignant gastrin; Cholangiocarcinoma; Hepatocellular carcinoma; Combined hepatocellular carcinoma and cholangiocarcinoma; Adenocarcinoma; Adenocarcinoma; Adenocarcinoma in polyp; Familial bowel polyposis adenocarcinoma; Solid carcinoma; Malignant carcinoid; Bronchiectasis - alveolar adenocarcinoma; Papillary adenocarcinoma; Pigmented carcinoma; Anorexic carcinoma; Adenosic adenocarcinoma; Basophilic carcinoma; Clear cell adenocarcinoma; Granulocytic carcinoma; Follicular adenocarcinoma; Papillary and follicular adenocarcinoma; Non-film-hardening carcinoma; Adrenocortical carcinoma; Endometrial carcinoma; Skin appendages carcinoma; Apocrine adenocarcinoma; Sebaceous adenocarcinoma; Warty adenocarcinoma; Mucoepidermoid carcinoma; Cystadenocarcinoma; Papillary cystadenocarcinoma; Papillary serous cystadenocarcinoma; Mucinous adenocarcinoma; Mucinous adenocarcinoma; Ring cell carcinoma; Invasive duct carcinoma; Watery carcinoma; Lobular cancer; Inflammatory carcinoma; Paget's disease; Precursor cell carcinoma; Squamous cell carcinoma; Adenocarcinoma w / squamous epithelium; Malignant thymoma; Malignant ovarian metastatic tumor; Malignant ovarian carcinoma; Malignant granulosa cell tumor; Malignant male blastoma; Sertoli cell carcinoma; Malignant interstitial cell tumor; Malignant lipolyticoma; Malignant cranial necrosis; Malignant extramural extramedullary nodule; Pheochromocytoma; Glomangiosarcoma; Malignant melanoma; Melanin deficient melanoma; Superficial diffuse melanoma; Malignant melanoma in giant pigmentary nevus; Amyotrophic melanoma; Malignant blue birth; sarcoma; Fibrosarcoma; Malignant fibrous histiocytoma; Mucosal sarcoma; Liposuction; Leiomyosarcoma; Rhabdomyosarcoma; Embryonal rhabdomyosarcoma; Reward rhabdomyosarcoma; Stromal sarcoma; Malignant mixed tumor; Mullerian mixed tumor; Neoplasm; Hepatoblastoma; Carcinosarcoma; Malignant mesenchymal species; Malignant Brenner tumor; Malignant sporoma; Synovial sarcoma; Malignant mesothelioma; Undifferentiated germ cell tumor; Born cancer; Malignant teratoma; Malignant ovarian thyroid gland; Chorionic villus carcinoma; Malignant mesothelioma; Angiosarcoma; Malignant vascular endothelial; Kaposi's sarcoma; Malignant pericytes; Lymphatic sarcoma; Osteosarcoma; Periosteal osteosarcoma; Chondrosarcoma; Malignant chondroblastoma; Mesenchymal chondrosarcoma; Giant cell tumor of bone; Ewing's sarcoma; Malignant dental tumor; Ameloblastic odontosarcoma; Malignant enameloblastoma; Encephaloblast fibrosarcoma; Malignant pineal species; Chordoma; Malignant glioma; Cell tumor on the stomach; Astrocytoma; Protoplasmic astrocytoma; Fibrillar astrocytoma; Astrocytoma; Glioblastoma; Hypochondria; Papillary blastoma; Circular optic nerve; Cerebellar sarcoma; Ganglionic neoplasm; Neuroblastoma; Retinoblastoma; Olfactory neurotic tumors; Malignant meningioma; Nerve fiber sarcoma; Malignant schwannoma; Malignant granular cell tumor; Malignant lymphoma; Hodgkin's disease; Hodgkin's lymphoma; Para granuloma; Small lymphoid malignant lymphoma; Extensive large cell malignant lymphoma; Follicular malignant lymphoma; Fungal sarcoma; Other specified non-Hodgkin's lymphoma; Malignant histiocytosis; Multiple myeloma; Mast cell sarcoma; Immune-proliferative bowel disease; leukemia; Lymphocytic leukemia; Plasma cell leukemia; Leukemia; Lymphoma sarcoma cell leukemia; Myeloid leukemia; Basophilic leukemia; Eosinophilic leukemia; Monocytic leukemia; Mast cell leukemia; Megakaryoblastic leukemia; Myeloid sarcoma; And shape cell leukemia.

일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 EBV 관련 암을 치료하기 위해 사용된다. 일부 실시양태에서, EBV-관련 암은 EBV-관련 NPC이다. 일부 실시양태에서, EBV 관련 암은 장기이식-후 림프증식성 질병(post-transplant lymphoproliferative disorder, PTLD), NK/T 세포 림프종, EBV+ 위암 또는 EBV+ 평활근육종이다.In some embodiments, the methods provided herein are used to treat EBV-related cancers. In some embodiments, the EBV-associated cancer is an EBV-associated NPC. In some embodiments, the EBV-related cancer is a post-transplant lymphoproliferative disorder (PTLD), NK / T cell lymphoma, EBV + gastric cancer or EBV + leiomyosarcoma.

일부 실시양태에서, 병용 요법은 화학요법 약제(예컨대, 사이클로포스파마이드(CTX, 예컨대, CYTOXANφ), 클로람부실(CHL; 예컨대, LEUKERAN®), 시스플라틴(Cis P; 예컨대, PLATINOL®) 부설판(예컨대, MYLERAN®), 멜팔란, 카르무스틴(BCNU), 스트렙토조토신, 트리에틸렌멜라민(TEM), 마이토마이신 C 등과 같은 알킬화제 또는 알킬화 작용을 하는 약제; 메토트렉세이트(MTX), 에토포사이드(VP16; 예컨대, VEPESID®), 6-머캅토퓨린(6MP), 6-티오구아닌(6TG), 시타라빈(Ara-C), 5-플루오로우라실(5-FU), 카페시타빈(예컨대, XELODA®), 다카르바진(DTIC) 등과 같은 항대사물질; 악티노마이신 D, 독소루비신(DXR; 예컨대, ADRIAMYCIN®), 다우노루비신(다우노마이신), 블레오마이신, 미트라마이신 등과 같은 항생제; 알칼로이드, 예컨대 빈크리스틴(Vincristine(VCR)), 빈블라스틴(vinblastine) 등과 같은 빈카 알카로이드; 및 기타 항암제, 예컨대 파클리탁셀(예컨대, TAXOL®)과 파클리탁셀 유도체, 세포 증식 억제제, 덱사메타손(DEX; 예컨대, DECADRON®)과 같은 글루코코르티코이드와 프레드니손과 같은 코르티코스테로이드, 하이드록시우레아와 같은 뉴클레오시드 효소 억제제, 아스파라기나제, 류코보린 및 다른 엽산 유도체와 같은 아미노산 결핍 효소, 및 유사한 다양한 항암제를 추가로 포함한다. 다음 약제는 추가 약제로 사용될 수 있다: 아르니포스틴(arnifostine)(예컨대, ETHYOL®), 탁시노마이신(dactinomycin), 메클로르에타민(질소 머스터드), 스트렙토조신, 사이클로포스파마이드, 로무스틴(CCNU), 독소루비딘 리포(예컨대, DOXIL®), 젬시타빈(예컨대, GEMZAR®), 다우노루비신 리포(예컨대, DAUNOXOME®), 프로카바진, 미토마이신, 도세탁셀(예컨대, TAXOTERE®), 알데스루킨, 카보플라틴, 옥살리플라틴, 클라드리빈, 캄토테신, CPT 11(이리노테칸), 10-하이드록시 7-에틸-캄토테신(SN38), 플록슈리딘, 플루다라빈, 이포스파마이드, 아이다루비신, 메스나, 인터페론 베타, 인터페론 알파, 미톡산트론, 토포테칸, 류프롤리드, 메제스트롤, 멜팔란, 메르캅토퓨린, 플리카마이신, 미토테인, 페가스파가제, 펜토스타틴, 피포브로만, 플리카마이신, 타목시펜, 테니포사이드, 테스톨락톤, 티오구아닌, 티오테파, 우라실 머스타드, 비노렐빈, 클로람부실)를 추가로 포함한다. In some embodiments, the combination therapy of chemotherapy drugs (e.g., cyclophosphamide (CTX, for example, CYTOXANφ), chlorambucil (CHL; e. G., LEUKERAN ®), cisplatin (Cis P; e. G., PLATINOL ®) laying plate (e. g., MYLERAN ®), melphalan, carboxylic estramustine (BCNU), streptozotocin, triethylene melamine (TEM), mitomycin medicament for the alkylating or alkylating action such as C; methotrexate (MTX), etoposide ( VP16; e. g., VEPESID ®), 6- mercapto-purine (6MP), 6- thioguanine (6TG), cytarabine (Ara-C), 5-fluorouracil (5-FU), capecitabine (e.g., XELODA ®), anti-metabolites, such as dacarbazine (DTIC); dactinomycin D, doxorubicin (DXR; antibiotics, such as e. g., ADRIAMYCIN ®), daunorubicin (daunomycin), bleomycin, Mitra azithromycin; alkaloids, Such as vincristine (VCR), vinblastine, Alkaloids; and other anticancer agents, such as paclitaxel (e. G., TAXOL ®) and paclitaxel derivatives, cell proliferation inhibitors, dexamethasone; nucleoside, such as corticosteroids, hydroxy-urea, such as glucocorticoids and prednisone such as (DEX e.g., DECADRON ®) An enzyme inhibitor, an amino acid depletion enzyme such as asparaginase, leucovorin and other folate derivatives, and a variety of similar anti-cancer agents. The following agents may be used as further agents: arnifostine (e.g., ETHYOL ®), suspended Sino azithromycin (dactinomycin), methoxy chlor the vitamin (nitrogen mustard), streptomycin terazosin, cyclophosphamide, Romuald sustaining (CCNU), toxin ruby Dean reports (e.g., DOXIL ®), gemcitabine (e.g., GEMZAR ®), daunorubicin reports (e.g., DAUNOXOME ®), Pro Gin cover, mitomycin, docetaxel (e. g., TAXOTERE ®), aldehyde-through , Carboplatin, oxaliplatin, cladribine, camptothecin, CPT 11 (irinotecan), 10-hydroxy 7-ethyl-camptothecin (SN38), fluoxuridine, fludarabine, ifosfamide, But are not limited to, mesna, interferon beta, interferon alpha, mitoxantrone, topotecan, leuprolide, megestrel, melphalan, mercaptopurine, flicamycin, mitotane, , Plicamycin, tamoxifen, tenifoside, testolactone, thioguanine, thiotepa, uracil mustard, vinorelbine, chlorambucil).

본원에 제공된 약학 조성물 내의 활성 성분의 실제 투여량 수준은, 환자에게 유독하지 않으면서, 특정 환자에 대해 소망하는 치료 반응, 조성물 및 투여 방식을 달성하기에 효과적인 활성 성분의 양을 얻기 위해 다양화할 수 있다.The actual dosage level of the active ingredient in the pharmaceutical compositions provided herein may be varied to obtain the amount of active ingredient effective to achieve the desired therapeutic response, composition, and mode of administration for a particular patient, without toxicity to the patient have.

선택된 투여량 수준은 사용된 특정 약제의 활성, 투여 경로, 투여 시간, 사용된 특정 화합물의 배출이나 대사 속도, 치료 기간, 사용된 특정 화합물과 조합하여 사용되는 다른 약물, 화합물 및/또는 물질, 치료받는 환자의 나이, 성별, 체중, 병태, 일반적인 건강 및 이전 병력, 및 의학 분야에서 잘 알려진 유사한 요인을 포함하는 다양한 요인에 좌우될 것이다. 본원에 기재된 CTL 및 면역 체크포인트 억제제는 공동-투여되거나, 순차적으로 투여될 수 있다. 면역 체크포인트 억제제는 당업계에 공지된 임의의 기술에 의해 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 면역 체크포인트 억제제는 종양 내로 투여된다. 일부 실시양태에서, 면역 체크포인트 억제제는 정맥 내로 투여된다. 일부 실시양태에서, 면역 체크포인트 억제제는 비경구적으로 투여된다.The selected dosage level will depend upon a variety of factors including the activity of the particular agent employed, the route of administration, the time of administration, the rate of excretion or metabolism of the particular compound employed, the duration of the treatment, other drugs, compounds and / The age, sex, weight and condition of the recipient, general health and prior medical history, and similar factors well known in the medical arts. The CTLs and immuno checkpoint inhibitors described herein may be co-administered or sequentially administered. Immuno checkpoint inhibitors can be administered by any technique known in the art. In some embodiments, the immune checkpoint inhibitor is administered into a tumor. In some embodiments, the immuno checkpoint inhibitor is administered intravenously. In some embodiments, the immune checkpoint inhibitor is administered parenterally.

일부 실시양태에서, 대상체는 바이러스(예컨대, EBV)에 노출되어, 바이러스 입자가 대상체의 혈액에서 검출가능하다. 일부 실시양태에서, 방법은 (예컨대, 대상체에 펩타이드 특이적 CTL을 투여하기 전 또는 후에) 대상체 내 바이러스 수치(load)를 측정하는 단계를 추가로 포함한다. 대상체 내 바이러스 수치를 측정하는 것이 면역 요법의 효과에 대한 양호한 예상 마커일 수 있다. 일부 실시양태에서, CTL을 선택하는 단계는 대상체(예컨대, 조직 또는 혈액 시료)에서 바이러스 DNA 카피의 수를 측정하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 바이러스 수치는 2회 이상 측정된다.In some embodiments, the subject is exposed to a virus (e. G., EBV) such that viral particles are detectable in the blood of the subject. In some embodiments, the method further comprises measuring a virus load in the subject (e.g., before or after administering the peptide-specific CTL to the subject). Measuring the viral load in the subject may be a good predictor of the effect of the immunotherapy. In some embodiments, the step of selecting a CTL further comprises measuring the number of viral DNA copies in a subject (e.g., tissue or blood sample). In some embodiments, the virus level is measured more than once.

일부 실시양태에서, 상기 방법은 대상에 존재하는 HLA 대립 유전자에 의해 코딩되는 MHC 클래스 I로 제한된 TCR을 발현하기 때문에, 병용 요법을 위한 동종이계 CTL을 선택하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, CTL 및 대상체가 2개 이상(예컨대, 3개 이상, 4개 이상, 5개 이상, 6개 이상)의 HLA 대립 유전자를 공유하고, CTL이 공유된 HLA 대립 유전자로 제한되는 경우, CTL이 선택된다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 미리-발생된 제3자-기증자-유래된 에피토프-특이적 T 세포(즉, 동종이계 T 세포)의 TCR 레파토리를 유세포 분석기로 테스트하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 에피토프-특이적 T 세포는 테트라머 어세이, ELISA 어세이, 웨스턴 블랏 어세이, 형광 현미경 어세이, 에드만 분해 어세이 및/또는 질량 분석법(예컨대, 단백질 시퀀싱)을 사용하여 검출된다. 일부 실시양태에서, TCR 레퍼토리는 핵산 프로브, 핵산 증폭 어세이 및/또는 시퀀싱 어세이를 사용하여 분석된다. 일부 실시양태에서, 동종이계 CTL은 세포 은행으로부터 수득된다.In some embodiments, the method further comprises selecting a homologous CTL for combination therapy because the method expresses a TCR restricted to MHC class I that is encoded by an HLA allele present in the subject. In some embodiments, when the CTL and the subject share two or more (eg, three or more, four or more, five or more, six or more) HLA alleles and the CTL is restricted to a shared HLA allele , And CTL are selected. In some embodiments, the method comprises testing a TCR repertoire of pre-generated third-person donor-derived epitope-specific T cells (i.e., allogeneic T cells) with a flow cytometry analyzer. In some embodiments, the epitope-specific T cells are generated using a tetramer assay, ELISA assay, Western blot assay, fluorescence microscopy assay, Edman degradation assay and / or mass spectrometry (e.g., protein sequencing) . In some embodiments, the TCR repertoire is analyzed using a nucleic acid probe, a nucleic acid amplification assay and / or a sequencing assay. In some embodiments, the allogeneic CTL is obtained from a cell bank.

실시예Example

실시예 1: NPC 환자의 면역 체크포인트 단백질 발현Example 1 Immune Checkpoint Protein Expression in NPC Patients

고식적 화학요법(pallatative chemotherapy) 이후 급성 진행성 질환이 있는 41명 및 표준 방사선/화학요법 치료 이후 미세잔존 또는 비잔존 질환(N/MRD)이 있는 11명을 포함하는 52명의 환자가 EBV-관련 NPC의 치료를 위한 LMP1&2 및 EBNA1-특이적 CTL 면역요법을 적용하는 연구에 등록하였다. Forty-two patients, including palliative chemotherapy with acute-progressive disease and 11 patients with microresult or non-residual disease (N / MRD) after standard radiotherapy / chemotherapy, received EBV-related NPC Were enrolled in a study that applied LMP1 & 2 and EBNA1-specific CTL immunotherapy for treatment.

20명의 급성 질환 환자와 9명의 N/MRD 환자는 최소 2회 투여량(2 내지 8회 투여량) 및 중앙 합계 1.1x108(범위: 5.7x107 내지 2.4x108)의 세포를 받았다. 입양 T 세포 요법을 받은 환자의 임상 특징은 표 1 및 표 2에 제시되어 있다. 나머지 23명 중, 1명은 1회 투여량의 투여 후 사망하였고, T 세포 요법은 5명의 환자를 위해 제조되었으나 질병으로 인해 투여되지 않았고, 12명은 낮은 특이성 및 세포 수율로 인해 배출 기준을 충족시키지 못했으며, 5명은 T 세포 제조의 시작 이전에 중단하였다 .20 acute disease patients and 9 N / MRD patients received at least two doses (2 to 8 doses) and a central total of 1.1 × 10 8 (range: 5.7 × 10 7 to 2.4 × 10 8 ). The clinical characteristics of patients receiving adoptive T cell therapy are presented in Table 1 and Table 2. One of the remaining 23 patients died after the administration of a single dose, T cell therapy was made for 5 patients but not due to disease, and 12 patients did not meet the emission criteria due to low specificity and cell yield , And five patients stopped before the start of T cell production.

LMP/EBNA1 특이적 T 세포를 생성하기 위해 100 내지 300mL의 말초 혈액을 채취하여 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)를 생성하는데 사용하였다. 그 다음, AdE1-LMPpoly 벡터는 30%의 PBMC(10:1의 MOI)를 감염시키기 위해 사용되고, 이후, 광조사되고, 나머지 PBMC와 함께 2주 동안 공동-배양되었다. 배양액에 3 내지 4일마다 신선한 성장 배지와 120IU/mL의 재조합 IL-2(Komtur Pharmaceuticals, Frieburg, 독일)를 공급하였다. 배양된 T 세포는 주입을 위해 배출하기 전에 세포 내 사이토카인 분석을 사용하는 항원 특이성 및 미생물 오염에 대해 테스트되었다.100-300 mL of peripheral blood was collected and used to generate peripheral blood mononuclear cells (PBMC) to generate LMP / EBNA1 specific T cells. The AdE1-LMPpoly vector was then used to infect 30% PBMC (10: 1 MOI), then irradiated and co-cultured with the remaining PBMC for 2 weeks. Fresh growth media and 120 IU / mL of recombinant IL-2 (Komtur Pharmaceuticals, Frieburg, Germany) were fed to the culture medium every 3 to 4 days. Cultured T cells were tested for antigen specificity and microbial contamination using intracellular cytokine assay prior to release for injection.

FACS 프로파일링은, 대상체에 투여된 T 세포에 의한 면역 체크포인트 단백질의 발현을 특성화하기 위해 수행되었다. MHC 테트라머는 기관에서 생성되었다. T 세포는, HLA A11-제한된 에피토프 SSCSSCPLSKI(LMP2A), HLA A24 제한된 에피토프 TYGPVFMCL(LMP2A) 및 HLA Cw03 제한된 에피토프 FVYGGSKTSL(EBNA1)에 특이적인 APC-표지된 MHC 클래스 I 테트라머와 함께 4℃에서 20분 동안 항온처리하였다. 이후, 세포는 하나 이상의 다음 항체와 함께 추가로 30분 동안 항온처리하였다: PE-접합된 항-TIM-3, FITC 접합된 항-LAG-3, BV786-접합된 항-PD-1 및 BV421-접합된 항-CTLA4. 세포는 FACSDiva 소프트웨어(BD 바이오사이언스)를 갖는 BD LSR Fortessa를 사용하여 획득되였고, 후-획득 분석은 FlowJo 소프트웨어(TreeStar)를 사용하여 수행되었다.FACS profiling was performed to characterize the expression of immune checkpoint proteins by T cells administered to a subject. MHC tetramers were produced in the organs. T cells were incubated with APC-labeled MHC class I tetramers specific for the HLA A11-restricted epitope SSCSSCPLSKI (LMP2A), the HLA A24 restricted epitope TYGPVFMCL (LMP2A) and the HLA Cw03 restricted epitope FVYGGSKTSL (EBNA1) Lt; / RTI > The cells were then incubated with one or more of the following antibodies for an additional 30 minutes: PE-conjugated anti-TIM-3, FITC conjugated anti-LAG-3, BV786-conjugated anti- The conjugated anti-CTLA4. Cells were obtained using BD LSR Fortessa with FACSDiva software (BD Bioscience), and post-acquisition analysis was performed using FlowJo software (TreeStar).

도 1은 면역 체크포인트 분자(즉, LAG-3, TIM-3, CTLA4, 또는 PD-1)의 발현을 나타낸다. 패널 A는 PD-1, TIM-3, LAG-3 및 CTLA-4를 발현하는 HLA-다합체 양성 CD8-양성 림프구의 백분율을 도시한다. 패널 B는, 입양 T 세포 요법 이후에 안정형 질환(SD) 또는 진행형 질환(PD) 둘 중 하나를 나타내는 활성-재발/전이성 질환(ARMD)을 갖는 NPC 환자 및 비잔존/미세잔존 질환(N/MRD)을 갖는 환자에 투여되는 CTL 면역 요법에서, PD-1 양성, TIM-3 양성, LAG-3 양성 및 CTLA-4 양성 림프구의 백분율을 도시한다.Figure 1 shows the expression of immune checkpoint molecules (i.e., LAG-3, TIM-3, CTLA4, or PD-1). Panel A shows the percentage of HLA-multipositive CD8-positive lymphocytes expressing PD-1, TIM-3, LAG-3 and CTLA-4. Panel B demonstrates that NPC patients with active-recurrent / metastatic disease (ARMD) exhibiting either stable disease (SD) or progressive disease (PD) after adoptive T cell therapy and non-surviving / TIM-3 positive, LAG-3 positive, and CTLA-4 positive lymphocytes in CTL immunotherapy administered to a patient with a disease-free survival of 50%.

실시예 2: NPC 환자의 EBV-CTL 및 체크포인트 억제제 요법의 입양 전달Example 2: Adoptive delivery of EBV-CTL and checkpoint inhibitor therapy in NPC patients

백금 내성 또는 재발성의 EBV-관련 비인두암종(NPC)을 갖는 환자는 체크포인트 억제제(펨브롤리주맙)와 병용하여 동종이계 엡스타인-바 바이러스 세포독성 T 림프구(EBV-CTL)의 입양 전달로 치료한다. 전이성, 백금-내성 또는 재발성의 EBV-관련 NPC를 갖는 총 48명의 대상체가 연구에 등록된다.Patients with platinum-resistant or recurrent EBV-associated nasopharyngeal carcinoma (NPC) are treated with adoptive delivery of a homologous Epstein-Barr virus cytotoxic T lymphocyte (EBV-CTL) in combination with a checkpoint inhibitor (pembrolizumab) . A total of 48 subjects with metastatic, platinum-resistant or recurrent EBV-associated NPCs were enrolled in the study.

연구 프로토콜 및 투여량Study protocol and dose

이 연구는 두 부분으로 구성된다: 코호트 1은 2상 투여량을 결정하기 위해 연구의 1B상 부분으로 등록된다; 코호트 2는 NPC에 대한 병용된 입양 세포 및 체크포인트 억제제 요법의 임상적 이점을 평가하기 위해 연구의 2상 부분으로 등록된다. 프로토콜은 총 48명의 대상체를 등록한 것이다. 1B상(코호트 1)는 이전의 PD1 억제제 요법에도 불구하고 질병이 진행된 12명의 대상체를 등록한 것이고, 2상(코호트 2)는 PD1 억제제 요법 경험이 없는(naive) 36명의 대상체를 등록한 것이다.This study consists of two parts: Cohort 1 is registered as part 1B of the study to determine the two-phase dose; Cohort 2 is registered as a two-phase part of the study to assess the clinical benefit of co-administered adoptive cells and checkpoint inhibitor therapy for NPCs. The protocol registers a total of 48 objects. 1B (cohort 1) enrolled 12 subjects with disease progression despite previous PD1 inhibitor therapy, and 2 phase (cohort 2) enrolled 36 subjects with naive PD1 inhibitor therapy.

동종이계 제3자 EBV-CTL은 2개 이상의 HLA 대립 유전자 매칭에 기반하여 각 대상체를 위해 이용가능한 EBV-CTL의 은행으로부터 선택되며, 이들 중 하나 이상은 EBV-CTLS 공급원 물질(기증자)과 대상체 사이에 공유된, 제한 HLA 대립 유전자다. EBV-CTLS 세포 제품의 선택을 용이하게 하기 위해 스크리닝하는 동안에, 고-해상도 HLA 형결정(typing)이 수행된다. 고 해상도에서 수행하는 경우(DNA 기반 대 혈청 평가) 조직학적 HLA 형결정이 허용가능하다.An allogeneic third-party EBV-CTL is selected from a bank of EBV-CTLs available for each subject based on at least two HLA allele matching, one or more of which is between the EBV-CTLS source material (the donor) Lt; RTI ID = 0.0 > HLA < / RTI > During screening to facilitate selection of EBV-CTLS cell products, high-resolution HLA typing is performed. Histologic HLA-type determination is acceptable when performed at high resolution (DNA-based versus serum assessment).

1B상(코호트 1)에서, 진행된 NPC를 앓는 6명 대상체에 21일 주기의 1일, 8일, 및 15일째에 정맥 주사로 주입 당 500,000 내지 200,000,000개의 T 세포 범위의 투여량으로 EBV-CTL이 투여되었다. 대상체 집단은, 진행된 NPC 환자에서 적절한 EBV CTL 확장 및 항종양 활성을 나타내었던, 이전의 1상의 안전성 및 효능 데이터를 기반으로 선택된다. 마찬가지로, 펨브롤리주맙은 성인(성인은 18세 이상)에게 3주에 1회 200mg IV의 투여량으로, 및 소아 대상체(18세 미만)에게는 3주에 1회 2mg/kg IV로 코호트 1 대상체에 투여된다.EBV-CTL was injected intravenously at doses ranging from 500,000 to 200,000,000 T cells per injection on Day 1, Day 8, and Day 15 of the 21-day cycle to 6 subjects with advanced NPCs in Phase 1B (Cohort 1) . The subject population is selected based on previous safety and efficacy data from previous trials that showed appropriate EBV CTL expansion and antitumor activity in advanced NPC patients. Likewise, fembrolizumab is administered at a dose of 200 mg IV once every three weeks for adults (adults 18 years of age and older), and 2 mg / kg IV once every three weeks for pediatric subjects .

초기 6명의 1B상 코호트 1 대상자 중 2명 미만이 첫 21일 안에 투여량 제한 독성(dose limiting toxicity)을 겪는다면, EBV-CTLS의 투여량 감소가 발생하고, 그 다음의 6명의 대상체는 권장 투여량 수준의 펨브롤리주맙과 함께 EBV-CTLS로 치료된다.If less than 2 out of 6 subjects in the initial phase 1B cohort 1 were experiencing dose limiting toxicity within the first 21 days, a dose reduction of EBV-CTLS occurred and the next 6 subjects received the recommended dose Lt; RTI ID = 0.0 > EBV-CTLS < / RTI >

스크리닝은 투여 28일 전(사이클 1, 1일차)부터 시작된다. 질환 진행 또는 허용되지 않는 독성이 관찰될 때까지 대상체는 피브롤리쥬맙과 함께 EBV-CTLS로 치료된다.Screening begins 28 days prior to administration (cycle 1, day 1). Until disease progression or unacceptable toxicity is observed, the subject is treated with EBV-CTLS with fibrillaryum.

연구 참가자Research participants

대상체 등록 기준 요약은 다음과 같다:A summary of object registration criteria is as follows:

포함 기준 : 다음의 모든 포함 기준이 충족되면 환자는 이 연구에 참여할 자격이 있다고 간주될 것이다. Inclusion criteria : If all of the following inclusion criteria are met, the patient will be considered eligible to participate in this study.

1. 2세 이상의 남성 및 여성1. Men and women over 2 years

2. 1회 이상의 이전의 백금-기반 화학치료 요법을 받았고 이후에 12개월 미만의 백금-휴지기 간격을 갖거나, 백금-기반 요법 동안에 진행성을 갖거나, 백금-기반 요법 이후에 지속적 질환을 갖는 것으로 정의된, 백금 치료저항성(refractory)/내성인 것으로 간주되는 진행성 또는 전이성 NPC 환자가 자격이 있다. 2. Having received at least one previous platinum-based chemotherapy followed by a platinum-pause interval of less than 12 months, progressive during platinum-based therapy, or having persistent disease after platinum-based therapy Patients with advanced or metastatic NPC who are deemed to be refractory / resistant to platinum therapy are eligible.

3. EBV-게놈 또는 항원이 조직 생검 시료로 입증된 NPC 환자. 3. NPC patients who have proven EBV-genomic or antigenic biopsy samples.

4. 조직학적으로 또는 세포학적으로-확인된 EBV-관련 국소적 재발성, 전이성 또는 지속적 NPC(WHO 타입 II/III), 및 등록될 연구의 코호트에 대한 다음 대응하는 요구 사항을 충족시킴:4. Meet the following corresponding requirements for a histologically or cytologically-confirmed EBV-associated local recurrent, metastatic or persistent NPC (WHO Type II / III), and a cohort of studies to be enrolled:

a. 1B상(코호트 1): 이전에 펨브롤리주맙 항-PD1로 치료를 받고, 이전에 항-PD-L1, 항-PD-L2, 항-CD137, 항-OX-40 또는 항-CTLA-4 항체로는 치료를 받지 않은 환자a. PD-L1, anti-PD-L2, anti-CD137, anti-OX-40 or anti-CTLA-4 antibodies, previously treated with pembrolliimumab anti- Patients who were not treated

b. 2상(코호트 2): 이전에 펨브롤리주맙 또는 다른 항-PD1, 항-PD-L1, 항-PD-L2, 항-CD137, 항-OX40이나 항-CTLA4 항체로 치료를 받지 않은 환자b. Phase 2 (Cohort 2): Patients previously untreated with pembrolizumab or other anti-PD1, anti-PD-L1, anti-PD-L2, anti-CD137, anti-Ox40 or anti-

5. 스크리닝 시에 기대 수명이 4개월 이상.5. Life expectancy is 4 months or more when screening.

6. RECIST 1.1을 사용하여 측정가능한 질환. 이전에 광조사된 영역에 위치한 종양 병변은, 진행성이 이러한 병변에서 입증되면 측정가능한 것으로 간주된다.6. Measurable disease using RECIST 1.1. Tumor lesions located in previously illuminated areas are considered measurable if progression is evidenced in these lesions.

7. 1B상의 환자는 기준선에서 및 (조사자의 판단에 따라) 허용가능한 임상적 위험을 가진 채 생검할 수 있는 전이성 변병의 치료 시에 생검해야만 하며, 생검을 받는데에 동의해야 한다.7. Patients on 1B must be biopsied at baseline and at the time of treatment of a metastatic disease that can be biopsied with acceptable clinical risk (at the discretion of the investigator) and agree to be biopsied.

8. 환자는 바이오마커 평가를 위해 이전의 생검 물질을 제출하는 데 동의해야한다.8. The patient must agree to submit the previous biopsy material for biomarker evaluation.

9. 16세 이상의 환자에 대한 동부 종양학 협회(ECOG)의 기능 상태는 1 이하; 16세 이하의 환자에 대한 Lansky 점수는 70 이상.9. Functional status of the Eastern Oncology Association (ECOG) for patients 16 years of age or older is 1 or less; The Lansky score for patients younger than 16 years is over 70.

10. 다음에 대한 적절한 장기 기능(EBV-CTL이 치료하고자 하는 근본적인 EBV-유도 공정 또는 또는 이의 이전 요법에 의해 유발된 것으로 간주하지 않는 한):10. Appropriate long-term function (unless EBV-CTL is deemed to have been caused by the underlying EBV-induced process or the previous therapy for which it is being treated):

Figure pct00005
Figure pct00005

11. 서면 동의를 제공하겠다는 의지와 능력11. Will and ability to provide written consent

제외 기준: 임의의 다음 기준이 충족되면 환자는 연구에 참여할 자격이 없다: Exclusion criteria : Patients are not eligible to participate in the study if any of the following criteria are met:

1. 치유 의도로 투여되는 국소 요법에 적합한 질병을 갖는다.1. Have a disease appropriate for topical therapy administered by a healing intent.

2. 메토트렉세이트(methotrexate) 또는 체외 광분리 반출법(extracorporeal photopheresis)의 필요2. The need for methotrexate or extracorporeal photopheresis

3. 혈관수축제 또는 인공 호흡기 지원의 필요3. Need for vascular support or ventilator support

4. 사이클 1, 1일차 이전에 4주 이내의 항흉선세포 글로불린(antithymocyte globulin) 또는 유사한 항-T 세포 항체 요법 4. Cycle 1, antithymocyte globulin or similar anti-T cell antibody therapy within 4 weeks prior to day 1

5. 시험 치료(trial treatment)의 제1 투여 이전의 7일 이내에, 면역결핍 진단을 받거나 전신 스테로이드 요법 또는 다른 형태의 면역억제 요법을 받았다. 생리학적 투여량의 코르티코스테로이드의 사용은 스폰서와 협의한 후에 승인될 수 있다.5. Within 7 days prior to the first administration of trial treatment, he was diagnosed with immunodeficiency, or received systemic steroid therapy or other forms of immunosuppressive therapy. The use of physiological doses of corticosteroids may be approved after consultation with the sponsor.

6. 간질성 폐 질환의 병력 또는 증거가 있는 환자6. Patients with history or evidence of interstitial lung disease

7. 전신 요법이 필요하는 급성 감염 환자7. Patients with acute infection who need systemic therapy

8. 스테로이드가 필요한 폐렴(비-전염성) 병력이 있거나 현재 폐렴인 환자8. Patients with a history of pneumonia (non-infectious) that require steroids or who are currently pneumonia

9. 연구 1일차 이전 4주 이내에 혈액 제품(혈소판 또는 적혈구 포함)의 수혈 또는 콜로니 자극 인자(G-CSF, GM-CSF 또는 재조합 에리스로포이에틴 포함)를 투여받은 환자.9. Patients receiving transfusions of blood products (including platelets or red blood cells) or colony-stimulating factors (including G-CSF, GM-CSF or recombinant erythropoietin) within 4 weeks prior to study 1.

10. 임신 또는 모유 수유; 가임기 여성은 소변 또는 혈청 임신 테스트에서 음성이어야 한다. 소변 테스트가 양성이거나 음성으로 확인되지 않으면, 혈청 임신 테스트가 요구될 것이다. 혈청 임신은 자격이 있는 환자의 제1 투여의 72시간 이내에 음성으로 확인되어야 한다.10. Pregnancy or Breastfeeding; Women in fertility should be negative in urine or serum pregnancy tests. If the urine test is positive or negative, a serum pregnancy test will be required. Serum pregnancy should be confirmed by voice within 72 hours of the first dose of the eligible patient.

11. 면역요법과 관련된 부작용(adverse effect)을 완전히 해결하고 등록 이전의 4주 이상 동안 이러한 이상 반응(AE)에 대해 치료하지 않음11. Completely resolve the adverse effects associated with immunotherapy and do not treat these adverse events (AE) for more than 4 weeks prior to enrollment

12. 중증 면역 요법과 관련된 부작용의 병력이 없음(CTCAE 등급 4; 4주 초과의 치료를 필요로 하는 CTCAE 등급 3)12. No history of adverse events associated with severe immunotherapy (CTCAE grade 4; CTCAE grade 3 requiring more than 4 weeks of treatment)

13. 등록 이전의 30일 이하 동안에 감염성 질환의 예방을 위해 사용되는 임의의 비-종양학 백신 요법을 받은 환자. 예로는 조치(measures), 유행성이하선염, 풍진, 수두, 황열병, 광견병, BCG 및 장티푸스 백신을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 살아있는 바이러스를 함유하지 않은 계절 독감 백신은 허용가능하다.13. Patients who have received any of the non-oncology vaccines used for the prevention of infectious diseases for up to 30 days prior to registration. Examples include, but are not limited to measures, mumps, rubella, chickenpox, yellow fever, rabies, BCG and typhoid vaccines. Seasonal flu vaccines that do not contain live viruses are acceptable.

14. 진행 중이거나 급성 치료가 필요한 알려진 추가의 악성 종양을 갖는다. 예외로는 피부의 기저세포암, 잠재적 치유 요법을 받은 피부의 편평세포암, 또는 원위치(in situ) 자궁 경부암을 포함한다.14. Have additional known malignant tumors that are ongoing or require acute treatment. Exceptions include basal cell carcinoma of the skin, squamous cell carcinoma of the skin that has undergone potent healing therapy, or in situ cervical cancer.

15. 가임기 여성 또는 마지막 연구 투여 후 120일 동안의 연구 과정동안 매우 효과적인 피임 방법(금욕 허용가능)을 사용하는 것을 꺼리는 가임기 여성 파트너가 있는 남자.15. A man with a fertile female partner reluctant to use a very effective contraceptive method (an abstinence acceptable) during the 120-day study period after fertility or the last study.

16. 연구 절차를 준수하기 불가능함16. Impossible to observe research procedures

17. 사이클 1의 1일차의 2주 이내에 화학요법, 표적화된 소분자 요법, 호르몬 요법 또는 방사선 요법, 또는 이전에 투여된 약제로 인한 부반응으로부터 회복되지 않은 사람(즉, 1등급 또는 기준선 이하). 2등급 이하의 신경병증 또는 2등급의 이하의 탈모증이 있는 대상체는 이 기준의 예외이며, 연구의 자격이 있을 수 있다.17. Persons who have not recovered from chemotherapy, targeted small molecule therapy, hormone therapy or radiotherapy, or side reactions due to previously administered drugs within two weeks of Day 1 of cycle 1 (ie, below grade 1 or below the baseline). Subjects with a grade 2 or less neuropathy or a grade 2 or lower alopecia are eligible for study, with the exception of this standard.

18. 사이클 1의 1일차의 5번의 반감기 또는 4주 이내의 항체/생물학적 요법, 또는 4주 초과 이전에 투여된 약제로 인한 부반응으로부터 회복되지 않은 사람(즉, 1등급 이하 또는 기준선).18. Persons who have not recovered from cycle 1, 5 half-lives on Day 1 or within 4 weeks on antibody / biological therapy, or side-effects due to drugs administered prior to 4 weeks (ie below 1 or below baseline).

19. 전이가 치료되고 안정되고 및 환자가 전신 스테로이드를 필요로 하지 않는 경우 이외에, 암종수막염(carcinomatous meningitis) 및/또는 급성 CNS 전이가있는 환자. 주의: 안정하고(실험 치료 제1 투여 이전에 4주 이상 동안 영상(각 평가를 위해 동일한 영상 기법을 사용, MRI 또는 CT 스캔 둘 중 하나)에 의한 진행의 증거가 없고, 임의의 신경학적 징후가 기준선으로 돌아오고), 새로운 또는 확대된 뇌 전이의 임의의 증거도 없고, 시험 치료 이전의 7일 이상 동안에 스테로이드를 사용하지 않았다면, 이전에 뇌 전이를 치료한 대상체도 참여할 수 있다. 이 예외는 임상적 안정성에 관계없이 제외된 암종수막염을 포함하지 않는다.19. Patients with carcinomatous meningitis and / or acute CNS metastasis, other than when the metastasis is cured and stabilized and the patient does not require systemic steroids. Note: There is no evidence of progression by imaging (using the same imaging technique for each assessment, MRI or CT scan) for more than 4 weeks prior to the first dose of experimental therapy, and any neurological signs If there is no evidence of new or enlarged brain metastasis, and steroids have not been used for more than seven days prior to the trial treatment, subjects who previously treated the brain metastases may also participate. This exception does not include excluded carcinomatous meningitis regardless of clinical stability.

20. 치료 조사자의 견해로, 시험의 결과를 혼란스럽게 하거나, 모든 시험 기간 동안에 대상체의 참여를 방해하거나, 또는 참여하는 대상체가 최대 관심은 쏠리지 않은, 임의의 병태, 요법, 또는 실험실 이상의 병력이나 현재 증거가 있는 환자.20. In the opinion of the therapist, the results of the examination may be confusing, interfere with the participation of the subject during the entire examination period, or the participating entity may be subjected to any condition, therapy, Patient with evidence.

21. 시험의 요구 사항과의 협력을 방해하는 알려진 정신의학적 또는 물질남용 질병이 있다.21. There is a known psychiatric or substance abuse disease that interferes with the requirements of the test.

22. 알려진 HIV의 병력, 알려진 급성 B형 간염(예컨대, HBsAg 반응성), C형 간염(예컨대, HCV RNA)가 검출됨.22. Known history of HIV, known acute hepatitis B (eg, HBsAg responsiveness), hepatitis C (eg, HCV RNA) was detected.

23. 사이클 1의 1일차의 4주 이내에 임의의 조사 결과(investigational product)를 사용한 이전 치료.23. Prior treatment using an investigational product within 4 weeks of Day 1 of cycle 1.

24. 연구 1일차 이전의 4주 이내에 이전의 항암 단일클론 항체(mAb)를 갖고있거나 4주 이상 이전에 투여된 약제로 인한 이상 반응으로부터 회복되지 않은 사람(즉, 등급 1 이하 또는 기준선).24. People who have previous anticancer monoclonal antibodies (mAbs) within 4 weeks prior to study 1 or who have not recovered from adverse events due to a drug administered more than 4 weeks ago (ie, below grade 1 or baseline).

25. EBV T 세포에 의한 이전의 치료25. Previous treatment with EBV T cells

다음은 치료 효능의 지표이다:The following are indicators of therapeutic efficacy:

1) 완전한 반응(CR) 속도, 반응 지속 시간(DOR), 무진행 생존(PFS) 및 총 생존(OS)으로 측정되는, NPC 질환 진행 및 기타 임상 관련 결과의 변화.1) Changes in NPC disease progression and other clinically relevant outcomes, as measured by complete response (CR) rate, duration of response (DOR), progression-free survival (PFS) and total survival (OS).

2) 면역 반응 속도(irRR = irCR + irPR) 및/또는 반응 지속 시간(DOirR)의 증가.2) Increased immune response rate (irRR = irCR + irPR) and / or response duration (DOirR).

본원에 언급된 모든 간행물, 특허, 특허 출원 및 서열 부여 번호는, 각각의 개별적인 간행물, 특허 또는 특허 출원이 구체적으로 및 개별적으로 참고로 인용되도록 지시된 것과 같이, 그 전체가 본원에 참고로 인용된다. 모순이 있는 경우, 본원에 임의의 정의를 포함하는 본 명세서가 우선한다.All publications, patents, patent applications, and sequencing numbers mentioned herein are incorporated by reference in their entirety, such that each individual publication, patent or patent application is specifically and individually indicated to be incorporated by reference . Where there is a contradiction, the present specification, including any definitions herein, shall prevail.

당업자는 일상적인 실험만을 사용하여 본원에 기재된 본 발명의 특정 실시양태에 대한 많은 등가물을 인식할 수 있거나 또는 확인할 수 있다. 이러한 등가물은 하기 청구 범위에 포함되는 것으로 의도된다.Those skilled in the art will recognize, or be able to ascertain using no more than routine experimentation, many equivalents to the specific embodiments of the invention described herein. Such equivalents are intended to be encompassed by the following claims.

Claims (34)

면역 체크포인트 억제제, 및 MHC 클래스 I 상에 제시된 암-관련 펩타이드에 특이적인 T 세포 수용체를 발현하는 세포독성 T 세포를 포함하는 조성물을, 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 대상체의 암을 치료하는 방법. A method of treating cancer in a subject, comprising administering to the subject a composition comprising an immune checkpoint inhibitor and a cytotoxic T cell that expresses a T cell receptor specific for a cancer-associated peptide presented on MHC class I . 제1항에 있어서, 면역 체크포인트 억제제가 면역 체크포인트 단백질에 결합하는 단백질 또는 폴리펩타이드인 방법.2. The method of claim 1, wherein the immune checkpoint inhibitor is a protein or polypeptide that binds to an immunocompromised protein. 제2항에 있어서, 면역 체크포인트 단백질이 CTLA4, PD-1, PD-L1, PD-L2, A2AR, B7-H3, B7-H4, BTLA, KIR, LAG-3, TIM-3, IDO, TDO, 또는 VISTA인 방법.3. The method of claim 2, wherein the immune checkpoint protein is selected from the group consisting of CTLA4, PD-1, PD-L1, PD-L2, A2AR, B7-H3, B7-H4, BTLA, KIR, LAG-3, TIM- , Or VISTA. 제3항에 있어서, 면역 체크포인트 단백질이 PD-1, PD-L1, TIM-3, LAG-3 또는 CTLA4인 방법.4. The method of claim 3, wherein the immune checkpoint protein is PD-1, PD-L1, TIM-3, LAG-3 or CTLA4. 제1항에 있어서, 면역 체크포인트 억제제가 면역 체크포인트 단백질에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편인 방법.2. The method of claim 1, wherein the immune checkpoint inhibitor is an antibody or antigen-binding fragment thereof that binds to an immune checkpoint protein. 제5항에 있어서, 면역 체크포인트 단백질이 CTLA4, PD-1, PD-L1, PD-L2, A2AR, B7-H3, B7-H4, BTLA, KIR, LAG-3, TIM-3, IDO, TDO, 또는 VISTA인 방법.The method of claim 5, wherein the immune checkpoint protein is selected from the group consisting of CTLA4, PD-1, PD-L1, PD-L2, A2AR, B7-H3, B7-H4, BTLA, KIR, LAG-3, TIM- , Or VISTA. 제6항에 있어서, 면역 체크포인트 단백질이 PD-1, PD-L1, TIM-3, LAG-3 또는 CTLA4인 방법.7. The method of claim 6, wherein the immune checkpoint protein is PD-1, PD-L1, TIM-3, LAG-3 or CTLA4. 제1항에 있어서, 면역 체크포인트 억제제가 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 피딜리주맙, AMP-224, AMP-514, STI-A1110, TSR-042, RG-7446, BMS-936559, BMS-936558, MK-3475, CT O11, MPDL3280A, MEDI-4736, MSB-0020718C, AUR-012 및 STI-A1010인 방법.The method of claim 1, wherein the immune checkpoint inhibitor is selected from the group consisting of: nobilulip, fembrolizumab, pidilizumab, AMP-224, AMP-514, STI-A1110, TSR-042, RG-7446, BMS-936559, BMS- MK-3475, CT O11, MPDL3280A, MEDI-4736, MSB-0020718C, AUR-012 and STI-A1010. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 암-관련 펩타이드가 바이러스 펩타이드인 방법.9. The method according to any one of claims 1 to 8, wherein the cancer-associated peptide is a viral peptide. 제9항에 있어서, 바이러스 펩타이드가 엡스타인-바 바이러스(EBV) 펩타이드인 방법.10. The method of claim 9, wherein the viral peptide is an Epstein-Barr virus (EBV) peptide. 제10항에 있어서, EBV 펩타이드가 LMP1 펩타이드를 포함하는 방법.11. The method of claim 10, wherein the EBV peptide comprises an LMP1 peptide. 제10항에 있어서, EBV 펩타이드가 LMP2A 펩타이드를 포함하는 방법.11. The method of claim 10, wherein the EBV peptide comprises an LMP2A peptide. 제10항에 있어서, EBV 펩타이드가 EBNA1 펩타이드를 포함하는 방법.11. The method of claim 10, wherein the EBV peptide comprises an EBNA1 peptide. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 암이 비인두암(NPC)인 방법.14. The method according to any one of claims 1 to 13, wherein the cancer is non-cancerous carcinoma (NPC). 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, CTL이 대상체에서 자가 유래되는 방법.15. The method according to any one of claims 1 to 14, wherein the CTL is autologous to the subject. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, CTL이 대상체와 동종이계인 방법.15. The method according to any one of claims 1 to 14, wherein the CTL is homologous to the subject. 제16항에 있어서, CTL이 세포 은행에서 수득된 방법.17. The method of claim 16, wherein the CTL is obtained in a cell bank. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, CTL 및 면역 체크포인트 억제제가 공동-투여되는 방법.18. The method according to any one of claims 1 to 17, wherein the CTL and the immuno checkpoint inhibitor are co-administered. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, CTL 및 면역 체크포인트 억제제가 순차적으로 투여되는 방법.19. The method according to any one of claims 1 to 18, wherein the CTL and the immuno checkpoint inhibitor are administered sequentially. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체에 화학요법 약제를 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.20. The method of any one of claims 1 to 19, further comprising administering a chemotherapeutic agent to the subject. (a) CTL를 포함하는 시료 및 CMV 펩타이드를 제시하는 항원-제시 세포(APC)를 항온처리함으로써, 시료 내 펩타이드-특이적 CTL의 증식을 유도하는 단계, 및
(b) 상기 펩타이드 특이적 CTL을 면역 체크포인트 억제제와 함께 대상체에 투여하는 단계
를 포함하는, 대상체의 암을 치료 또는 예방하는 방법.(a) inducing the proliferation of peptide-specific CTLs in a sample by incubating an antigen-presenting cell (APC) presenting a sample comprising CTL and a CMV peptide, and
(b) administering the peptide-specific CTL to a subject together with an immune checkpoint inhibitor
≪ RTI ID = 0.0 > a < / RTI > cancer of a subject. 제21항에 있어서, 핵산 구축물이 바이러스 벡터인 방법.22. The method of claim 21, wherein the nucleic acid construct is a viral vector. 제22항에 있어서, 바이러스 벡터가 AdE1-LMPpoly인 방법.23. The method of claim 22, wherein the viral vector is AdEl-LMPpoly. 제21항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 암이 비인두암(NPC)인 방법.24. The method according to any one of claims 21 to 23, wherein the cancer is non-cancerous carcinoma (NPC). 제21항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 면역 체크포인트 단백질이 CTLA4, PD-1, PD-L1, PD-L2, A2AR, B7-H3, B7-H4, BTLA, KIR, LAG-3, TIM-3, IDO, TDO, 또는 VISTA인 방법.24. The method of any one of claims 21 to 24 wherein the immune checkpoint protein is selected from the group consisting of CTLA4, PD-I, PD-L1, PD-L2, A2AR, B7-H3, B7-H4, BTLA, KIR, , TIM-3, IDO, TDO, or VISTA. 제25항에 있어서, 면역 체크포인트 단백질이 PD-1, PD-L1, TIM-3, LAG-3 또는 CTLA4인 방법.26. The method of claim 25, wherein the immune checkpoint protein is PD-I, PD-L1, TIM-3, LAG-3 or CTLA4. 제21항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 면역 체크포인트 억제제가 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 피딜리주맙, AMP-224, AMP-514, STI-A1110, TSR-042, RG-7446, BMS-936559, BMS-936558, MK-3475, CT Oll, MPDL3280A, MEDI-4736, MSB-0020718C, AUR-012 및 STI-A1010인 방법.26. The method of any one of claims 21-26, wherein the immune checkpoint inhibitor is selected from the group consisting of nobilulip, fembrolizumab, pidilizumab, AMP-224, AMP-514, STI-A1110, TSR- BMS-936559, BMS-936558, MK-3475, CT Oll, MPDL3280A, MEDI-4736, MSB-0020718C, AUR-012 and STI-A1010. 제21항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, CTL 및 면역 체크포인트 억제제가 공동-투여되는 방법.28. The method according to any one of claims 21-27, wherein the CTL and the immuno checkpoint inhibitor are co-administered. 제21항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, CTL 및 면역 체크포인트 억제제가 순차적으로 투여되는 방법.28. The method according to any one of claims 21-27, wherein the CTL and the immuno checkpoint inhibitor are administered sequentially. 제21항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, APC가 B 세포인 방법.30. The method according to any one of claims 21 to 29, wherein the APC is a B cell. 제21항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, APC가 항원제시 T 세포(antigen-presenting T-cell)인 방법.30. The method according to any one of claims 21 to 29, wherein the APC is an antigen-presenting T-cell. 제21항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, APC가 수지상세포인 방법.30. The method according to any one of claims 21 to 29, wherein the APC is a dendritic cell. 제21항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, APC가 aK562 세포인 방법.30. The method according to any one of claims 21 to 29, wherein the APC is aK562 cells. 제21항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 시료가 말초혈액 단핵세포(PBMC)를 포함하는 방법.34. The method according to any one of claims 21 to 33, wherein the sample comprises peripheral blood mononuclear cells (PBMC).
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