KR20180119910A - Composition for inhibiting or improving seborrhea or seborrheic eczema - Google Patents

Abstract

The present invention provides a cosmetic composition for inhibiting or improving seborrhea or seborrheic eczema, including bilobetin as an active ingredient; and a pharmaceutical composition for preventing and treating seborrheic dermatitis.

Description

피지 과다분비 또는 지루성 습진의 억제 또는 개선용 조성물{Composition for inhibiting or improving seborrhea or seborrheic eczema}TECHNICAL FIELD The present invention relates to a composition for inhibiting or ameliorating sebaceous hypertension or seborrheic eczema,

본 발명은 빌로베틴을 유효성분으로 포함하는 피지 과다분비 또는 지루성 습진의 억제 또는 개선용 화장료 조성물; 및 지루성 피부염의 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a cosmetic composition for inhibiting or improving sebaceous hyper-secretion or seborrheic eczema comprising bilobetin as an active ingredient; And a pharmaceutical composition for preventing or treating seborrheic dermatitis.

피지선(sebaceous gland)의 피지세포(sebocytes)에서 분비되는 피지는 피부 외부의 유해 물질의 침투를 막아주고 유수분을 조절하는 순기능을 한다. 그러나 사춘기 호르몬의 변화, 스트레스 등에 의해 피지(sebum)가 과잉으로 분비될 경우, 역기능을 초래하여 다양한 피부장애를 야기하게 된다. 피지 과다분비(seborrhea)는 피지의 과도한 분비를 특징으로 하는 피지선의 질환 또는 피부 트러블(skin troubles)로서, 피부 상에 번들거림(oily coating), 피딱지(crusts 혹은 scales) 등을 야기한다. 또한, 피지 과다분비는 지루성 피부염(seborrheic dermatitis)이나 지루성 습진(seborrheic eczema)을 야기한다. Sebaceous gland sebaceous glands (sebocytes) secreted from the sebaceous outer skin to prevent the penetration of harmful substances and has the ability to control the water content. However, when sebum is secreted excessively due to changes in pubertal hormones, stress, etc., it causes dysfunction and causes various skin disorders. Seborrhea is a sebaceous gland disease or skin troubles characterized by excessive secretion of sebum, which causes oily coating, crusts or scales on the skin. In addition, sebaceous hypertension causes seborrheic dermatitis or seborrheic eczema.

피지 과다분비의 억제 또는 개선은 주로 개인적인 비누 세안, 샴푸 사용 등의 위생적인(hygienic) 방법에 의해 이루어지고 있는 실정이다. 약물 치료법으로서 셀레늄 설파이드, 아졸계 화합물, 소듐 설파세트아마이드, 터비나핀 등의 항진균제, 스테로이드 등의 항염증제가 지루성 피부염 환자에게 사용되고 있으나, 이는 증상의 경감을 위한 것으로 피지 과다분비, 이로 인한 지루성 습진 혹은 지루성 피부염을 근본적으로 억제, 개선, 또는 치료할 수는 없다.The inhibition or improvement of sebaceous gland secretion is mainly performed by hygienic methods such as personal soap cleansing and shampooing. Anti-inflammatory drugs such as selenium sulfide, azole compounds, sodium sulfacetamide, terbinafine, and steroids are used for the treatment of seborrheic dermatitis. However, this is for alleviating symptoms of sebaceous hypertension, seborrheic eczema Seborrhoeic dermatitis can not be fundamentally restrained, improved, or treated.

따라서, 피지 과다분비, 지루성 습진, 및 지루성 피부염을 근본적으로 억제, 개선, 또는 치료할 수 있는 방법을 개발하는 것이 당업계에 요구된다.Accordingly, there is a need in the art to develop methods that can fundamentally inhibit, improve, or treat sebaceous hypertension, seborrhoeic eczema, and seborrheic dermatitis.

본 발명자들은 피지분비 세포로부터 피지분비를 억제할 수 있는 물질을 개발하기 위하여 안전성이 우수한 천연식물 유래의 화합물을 다양하게 검색하였다. 놀랍게도, 은행잎(Ginkgo biloba)으로부터 유래된 빌로베틴이 피지세포에서의 피지 합성을 효과적으로 억제함으로써 피지 분비를 억제하며, 따라서 피지 과다분비 및 지루성 습진/지루성 피부염의 억제, 개선, 예방, 및 치료에 유용하게 사용될 수 있다는 것을 발견하였다.The present inventors variously searched for a compound derived from a natural plant having excellent safety in order to develop a substance capable of inhibiting sebum secretion from sebaceous glands. Surprisingly, bilobectin derived from Ginkgo biloba effectively inhibits sebaceous gland production in sebaceous glands, thereby inhibiting sebaceous gland secretion and thus inhibiting, improving, preventing and treating sebaceous hypertension and seborrhoeic eczema / seborrheic dermatitis Can be usefully used.

따라서, 본 발명은 빌로베틴을 유효성분으로 포함하는 피지 과다분비 또는 지루성 습진의 억제 또는 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.Accordingly, it is an object of the present invention to provide a cosmetic composition for inhibiting or improving sebaceous hyper-secretion or seborrheic eczema comprising bilobetin as an active ingredient.

또한, 본 발명은 빌로베틴을 유효성분으로 포함하는 지루성 피부염의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.It is another object of the present invention to provide a pharmaceutical composition for preventing or treating seborrheic dermatitis comprising bilobetin as an active ingredient.

본 발명의 일 태양에 따라, 빌로베틴을 유효성분으로 포함하는 피지 과다분비 또는 지루성 습진의 억제 또는 개선용 화장료 조성물이 제공된다.According to one aspect of the present invention, there is provided a cosmetic composition for inhibiting or improving sebaceous hyper-secretion or seborrheic eczema comprising bilobetin as an active ingredient.

본 발명의 다른 태양에 따라, 빌로베틴을 유효성분으로 포함하는 지루성 피부염의 예방 또는 치료용 약학 조성물이 제공된다.According to another aspect of the present invention, there is provided a pharmaceutical composition for preventing or treating seborrheic dermatitis comprising bilobetin as an active ingredient.

은행잎(Ginkgo biloba)으로부터 유래된 빌로베틴이 피지세포 분열 및 피지세포에서의 피지 합성을 효과적으로 억제함으로써 피지 분비를 억제한다는 것이 본 발명에 의해 밝혀졌다. 따라서, 상기 빌로베틴은 피지 과다분비 및 지루성 습진/지루성 피부염의 억제, 개선, 예방, 및 치료에 유용하게 사용될 수 있다.It has been found by the present invention that bilobetin derived from Ginkgo biloba effectively inhibits sebaceous gland cell division and sebaceous gland synthesis in sebaceous cells. Therefore, the bilobectin can be usefully used for inhibiting, improving, preventing, and treating sebaceous hypertension and seborrhoeic eczema / seborrheic dermatitis.

도 1은 빌로베틴의 세포 독성을 평가한 결과이다.
도 2는 IGF-1에 의한 세포내 지질 방울 형성에 미치는 빌로베틴의 영향을 평가한 결과이다.
도 3은 IGF-1에 의한 피지 합성에 미치는 빌로베틴의 영향을 평가한 결과이다.
도 4는 IGF-1에 의한 스쿠알렌 신테이즈 프로모터 활성에 미치는 빌로베틴의 영향을 평가한 결과이다.Fig. 1 shows the results of evaluating cytotoxicity of bilobectin.
Fig. 2 shows the results of evaluating the effect of bilobetin on the formation of intracellular lipid droplets by IGF-1.
FIG. 3 shows the results of evaluating the effect of bilobetin on sebum production by IGF-1.
Figure 4 shows the results of evaluation of the effect of bilobetin on squalene synthase promoter activity by IGF-1.

본 발명은 빌로베틴을 유효성분으로 포함하는 피지 과다분비 또는 지루성 습진의 억제 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 빌로베틴을 유효성분으로 포함하는 지루성 피부염의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.The present invention provides a cosmetic composition for inhibiting or improving sebaceous hyper-secretion or seborrheic eczema comprising bilobetin as an active ingredient. The present invention also provides a pharmaceutical composition for preventing or treating seborrheic dermatitis comprising bilobetin as an active ingredient.

빌로베틴(bilobetin)은 은행잎(Ginkgo biloba)으로부터 유래된 화합물로서 하기 화학식 1의 구조를 갖는다. 빌로베틴은 공지의 방법에 따라 은행잎(Ginkgo biloba)으로부터 추출하거나 혹은 예를 들어 미국 Chromadex사 등으로부터 상업적으로 구입할 수 있다.Bilobetin is a compound derived from Ginkgo biloba and has a structure represented by the following formula (1). Bilobectin can be extracted from ginkgo biloba according to known methods, or commercially available, for example, from Chromadex, USA.

<화학식 1>&Lt; Formula 1 >

본 발명자들은 사람의 두피로부터 얻어진 피지분비 세포를 사용하여, 천연식물 유래의 추출물 혹은 분획물을 대상으로 세포 독성 및 피지분비 억제 효능을 평가하였으며, 상기 화학식 1의 화학구조를 갖는 빌로베틴이 피지세포 분열 및 피지세포에서의 피지 합성을 효과적으로 억제함으로써 피지 분비를 억제한다는 것을 밝혀냈다. 따라서, 상기 빌로베틴은 피지 과다분비 또는 지루성 습진의 억제 및 개선에 유용하게 사용될 수 있으며, 또한 지루성 피부염의 예방 및 치료에 유용하게 사용될 수 있다.The present inventors evaluated the cytotoxicity and inhibitory effect of sebum secretion on extracts or fractions derived from natural plants using sebum-secreting cells obtained from human scalp, and found that bilirubetin having the chemical structure of the above formula (1) And suppress sebaceous gland production by effectively inhibiting sebaceous gland synthesis and production of sebum in sebum cells. Therefore, the bilobetin can be usefully used for inhibiting and improving sebaceous hypertrophy or seborrhoeic eczema, and can also be useful for prevention and treatment of seborrheic dermatitis.

본 발명은 따른 화장료 조성물은 예를 들어 기능성 화장료 조성물의 형태로 제조될 수 있다. 상기 화장료 조성물은 통상의 화장료 제조방법에 따라, 다양한 형태로 제조될 수 있다. 예를 들어, 상기 화장료 조성물은 빌로베틴을 함유하는 향장 제품, 화장수, 크림, 로오숀 등의 형태로 제조될 수 있으며, 이는 통상의 클렌징액, 수렴액 및 보습액으로 희석하여 사용될 수 있다. 또한, 상기 화장료 조성물은 화장료 조성물 분야에서 통상적으로 사용되는 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료, 및 향료와 같은 통상적인 보조제를 포함할 수 있다. 상기 화장료 조성물에 있어서, 빌로베틴의 함량은 피지 과다분비 또는 지루성 습진의 억제 또는 개선 효과를 달성하기에 유효한 양, 예를 들면 조성물 총 중량에 대하여 약 0.00001 ∼ 1 중량%의 함량으로 함유될 수 있고, 바람직하게는 약 0.001 ∼ 0.1 중량%의 함량으로 함유될 수 있다.The cosmetic composition according to the present invention can be produced, for example, in the form of a functional cosmetic composition. The cosmetic composition may be manufactured in various forms according to a conventional cosmetic preparation method. For example, the cosmetic composition may be prepared in the form of a perfumed product containing bilobetin, a lotion, a cream, a lotion or the like, which may be diluted with a conventional cleansing solution, a converging solution and a moisturizing solution. The cosmetic composition may also contain conventional adjuvants such as stabilizers, solubilizers, vitamins, pigments, and flavorings commonly used in the cosmetic composition arts. In the cosmetic composition, the content of bilobectin may be an amount effective to achieve the inhibitory or improving effect of sebum hypersecretion or seborrhoeic eczema, for example, an amount of about 0.00001 to 1% by weight based on the total weight of the composition By weight, and preferably about 0.001 to 0.1% by weight.

본 발명의 약학 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체를 포함할 수 있으며, 예를 들어, 락토즈, 옥수수전분 등의 부형제, 마그네슘 스테아레이트 등의 윤활제, 공지되어 사용가능한 유화제, 현탁제, 완충제, 등장화제 등을 포함할 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 경구 또는 비경구 투여 형태, 바람직하게는 국소 피부적용 제제와 같은 비경구 투여형태로 제제화될 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 다양한 지루성 피부염을 앓고 있는 환자에게 1일 약 0.001 mg/kg ∼ 0.1 g/kg의 용량으로 투여될 수 있다. 적절한 투여량은 환자의 연령, 체중 및 증상에 따라 일반적으로 변경될 수 있다.The pharmaceutical composition of the present invention may contain a pharmaceutically acceptable carrier, for example, an excipient such as lactose, corn starch, a lubricant such as magnesium stearate, a known emulsifying agent, a suspending agent, a buffering agent, Topics, and the like. The pharmaceutical compositions of the present invention may be formulated for oral or parenteral administration, preferably parenteral administration, such as topical application. The pharmaceutical composition of the present invention may be administered at a dose of about 0.001 mg / kg to 0.1 g / kg per day to patients suffering from various seborrheic dermatitis. Appropriate dosages can generally vary depending on the age, weight and symptoms of the patient.

이하, 본 발명을 실시예를 통하여 더욱 상세히 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명이 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to examples. However, these examples are for illustrating the present invention, and the present invention is not limited to these examples.

실시예Example

하기 실시예에서 사용한 피지분비 세포는 사람의 두피로부터 분리해 일차배양(primary culture)하여 사용하였다. 두피조직을 70% 에탄올에 약 1분간 침적시켜 멸균한 후 인산완충식염수(phosphate-buffered saline, PBS)로 3회 세척하여 조직 내에 잔류하는 에탄올을 제거하였다. 조직을 PBS가 담긴 페트리 디쉬로 옮기고 입체현미경 하에서 피지선을 날카로운 핀셋 및 수술용 칼로 적출하였다. 이를 새로운 페트리 디쉬에 옮긴 후 피지세포 배양액을 가했다. 이때 사용한 세포배양액은 Sebomed^TM(Biochrom사, 독일)에 10% 우태아혈청(fetal bovine serum, FBS), 5 ng/ml 재조합 인간표피성장인자(recombinant human epidermal growth factor, rhEGF), 및 항생제를 첨가한 것을 사용하였다. 피지세포는 피지선 조직으로부터 약 1주일 이내에 뻗어나와 자랐으며, 약 2-3 주 정도 키운 후 트립신을 이용하여 배양 접시에서 떼어내고 새로운 배양 접시에 옮겨 계대배양을 실시하였다. 하기 실시예에서 사용한 피지세포는 3-7 계대의 세포를 사용하였다.The sebaceous glands used in the following examples were isolated from human scalp and used as primary cultures. The scalp tissue was sterilized by immersing it in 70% ethanol for about 1 minute, and then washed three times with phosphate-buffered saline (PBS) to remove the ethanol remaining in the tissue. The tissues were transferred to a petri dish containing PBS, and sebaceous glands were excised with a sharp tweezers and a surgical knife under a stereoscopic microscope. This was transferred to a new petri dish and then the sebum cell culture was added. The cell culture medium used was supplemented with 10% fetal bovine serum (FBS), 5 ng / ml recombinant human epidermal growth factor (rhEGF), and antibiotics in Sebomed ^™ (Biochrom, Germany) Were used. The sebaceous cells grew and grew within about one week from the sebaceous gland. After about 2-3 weeks of incubation, the sebaceous cells were detached from the culture dish using trypsin, transferred to a new culture dish, and subcultured. The sebum cells used in the following examples used 3-7 passages.

실시예 1. 세포 독성 Example 1. Cytotoxicity

빌로베틴이 세포에 미치는 독성을 평가하기 위해 MTT 시험법을 이용하였다. 피지세포를 6-웰 플레이트에 2 x 10⁵ cells 농도로 접종하여 하루 동안 배양하고, 빌로베틴을 0, 0.25, 0.5, 및 1 ppm 의 농도로 가한 후 48 시간 추가 배양하였다. 여기에 MTT(3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-2,5-디페닐테트라졸리움 브로마이드)를 2 mg/ml의 농도로 첨가하여 4 시간 반응시킨 후, 상층액을 버리고 살아 있는 세포에 의해 형성된 포르마잔 결정(formazan crystal)을 디메틸술폭사이드(DMSO)에 녹인 후 540 nm에서 흡광도를 측정하여 세포 생존율을 계산하였다. 그 결과는 도 1과 같다. 도 1의 결과로부터, 빌로베틴은 1 ppm 까지 세포독성이 없음을 알 수 있다.MTT assay was used to assess the toxicity of bilobectin to cells. The sebaceous cells were inoculated into 6-well plates at a concentration of 2 × 10 ⁵ cells, cultured for one day, and bilobetin was added at a concentration of 0, 0.25, 0.5, and 1 ppm, followed by further incubation for 48 hours. After adding MTT (3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetrazolium bromide) at a concentration of 2 mg / ml for 4 hours, the supernatant was discarded The formazan crystal formed by living cells was dissolved in dimethylsulfoxide (DMSO), and the cell viability was calculated by measuring the absorbance at 540 nm. The results are shown in Fig. From the results shown in Fig. 1, it can be seen that bilobetin is not cytotoxic up to 1 ppm.

실시예 2. 피지분비 억제 효능 평가 Example 2 Evaluation of sebum secretion inhibition efficacy

IGF-1(insulin-like growth factor-1)은 피지선에서 피지세포의 분열 및 피지의 과잉생산에 관여하는 것으로 알려져 있다(Exp Dermatol 2009;18:833-841). 피지분비 세포에 IGF-1을 가해 피지의 과잉 생산을 유도한 후, 빌로베틴에 의해 피지 분비가 억제되는지의 여부를 평가하였다.IGF-1 (insulin-like growth factor-1) is known to be involved in sebaceous cell division and sebaceous hyperplasia in the sebaceous gland (Exp Dermatol 2009; 18: 833-841). IGF-1 was added to sebaceous glands to induce excessive production of sebum, and then whether or not sebum secretion was inhibited by bilobotine was evaluated.

(1) 오일 레드 염색(Oil red staining)(1) Oil red staining

피지세포에서의 지질합성을 확인하기 위해 오일염색(Oil red staining)을 통해 세포내 지질 방울 형성(intracellular lipid droplet formation)을 평가하였다. 피지세포를 세포배양용 커버 글라스 위에 24시간 배양한 후, 피지 합성을 유도하기 위하여 재조합 IGF-1을 50 ng/ml의 농도로 가하고 24시간 추가 배양하였다. 빌로베틴의 효능 평가를 위하여 빌로베틴을 30분간 전 처리한 후 IGF-1을 가하고 24시간 추가 배양하였다. 세포를 10% 포르말린으로 5 분간 고정하고, 오일 레드 용액을 첨가하여 15 분간 염색시키고, PBS로 약 10회 세척한 후, 형광현미경 하에서 관찰하였으며, 그 결과는 도 2와 같다. 도 2의 결과로부터 알 수 있는 바와 같이, IGF-1을 처리한 피지세포는 IGF-1을 처리하지 않은 피지세포에 비해 세포내 지질 방울 형성이 증가하였다. 빌로베틴을 IGF-1 처리 30 분전에 전처리한 경우 세포내 지질 방울 형성은 IGF-1만 처리한 세포에 비해 농도의존적으로 감소하였다.To confirm lipid synthesis in sebum cells, intracellular lipid droplet formation was evaluated through oil red staining. After culturing the sebaceous cells on a cover glass for cell culture for 24 hours, recombinant IGF-1 was added at a concentration of 50 ng / ml for induction of sebum production and further cultured for 24 hours. To evaluate the efficacy of bilobotetin, bilobectin was pretreated for 30 minutes, then IGF-1 was added and further cultured for 24 hours. Cells were fixed with 10% formalin for 5 minutes, stained with an oil red solution for 15 minutes, washed with PBS about 10 times, and observed under a fluorescence microscope. The results are shown in Fig. As can be seen from the results of FIG. 2, sebaceous cells treated with IGF-1 showed an increase in intracellular lipid droplets compared with sebaceous cells not treated with IGF-1. In the case of pretreatment of bilobectin 30 minutes before IGF-1 treatment, intracellular lipid droplet formation was decreased in a concentration-dependent manner compared with cells treated with IGF-1 alone.

(2) 박층 크로마토그래피(Thin layer chromatography, TLC)(2) Thin layer chromatography (TLC)

오일 레드 염색은 피지세포 특이적 지질만을 대상으로 하지 않기 때문에 피지 특이적인 효과를 확인하기 위하여 TLC를 이용하여 지질 분석을 수행하였다. 피지세포에서 생성 분비되는 지질 중 스쿠알렌(squalene)은 다른 피부 부위에서는 합성되지 않고 오직 피지세포에서만 합성 분비되는 것으로 알려져 있다(Picardo et al, Dermatoendocrinol 2009;1:68-71). 따라서 피지세포에서 스쿠알렌 합성 정도는 피지분비 조절의 지표로 유용하게 활용되고 있다. 따라서, 스쿠알렌을 지표로 빌로베틴의 피지분비 조절 효능을 평가하였다.Lipid analysis was performed using TLC to identify sebum - specific effects, since oil - red staining is not limited to sebum cell - specific lipids. Squalene, a lipid produced in sebaceous cells, is not synthesized in other skin areas but is synthesized exclusively in sebaceous cells (Picardo et al, Dermatoendocrinol 2009; 1: 68-71). Therefore, the degree of squalene synthesis in sebaceous glands is useful as an indicator of sebum secretion regulation. Therefore, squalene was used as an index to evaluate the sebum secretion regulating effect of bilobetaine.

피지세포에서 피지 생성을 확인하기 위해 ¹⁴C-acetate incorporation assay (J Invest Dermatol., 2008)를 이용해 평가를 실시하였다. 즉, 피지세포를 100 mm 배양접시에 약 70% 콘플루언시까지 배양하고, 배지를 제거하고 FBS와 EGF가 첨가되지 않은 세포배양액에 희석한 시험물질을 가하여 48 시간을 배양하였다. 배지를 제거하고 FBS가 포함되지 않은 배지에 2 μCi/ml ¹⁴C-아세트산 나트륨염(미국 PerkinElmer사)을 첨가한 배양액을 가하여 6 시간 배양한 후, PBS로 2회 세척하고, 세포용해제(클로로포름 : 메탄올 = 2 : 1)를 가하여 세포를 용해시켰다. 흄 후드(Fume hood)에서 세포용해제를 날리고 남아있는 지질을 소량의 클로로포름으로 다시 녹인 후 Merck사의 TLC silica gel 60 F₂₅₄를 이용해 TLC를 수행한 후, 방사선자동사진법(autoradiography)을 이용하여 측정하였으며, 그 결과는 도 3과 같다. 도 3의 결과로부터 알 수 있는 바와 같이, IGF-1은 콜레스테롤과 같이 모든 세포에서 합성되는 지질 이외에 스쿠알렌, 왁스 이스터(wax ester) 등과 같이 피지세포 특이적 지질의 합성을 현저히 증가시켰으며, 빌로베틴은 IGF-1에 의해 증가되는 스쿠알렌의 합성을 현저하게 억제하였다.To determine sebum production in sebaceous cells, ¹⁴ C-acetate incorporation assays (J Invest Dermatol., 2008) were performed. Namely, sebum cells were cultured in a 100 mm culture dish to about 70% confluence, and the medium was removed and the test substance diluted in the cell culture without FBS and EGF was added and cultured for 48 hours. After the medium was removed, the culture medium in which 2 μCi / ml of ¹⁴ C-acetic acid sodium salt (PerkinElmer, USA) was added to the medium without FBS was added for 6 hours, washed twice with PBS, Methanol = 2: 1) was added to dissolve the cells. After removing the cell lysate from the fume hood, the remaining lipid was redissolved in a small amount of chloroform and TLC was performed using Merck TLC silica gel 60 F ₂₅₄ , followed by autoradiography , And the result is shown in Fig. As can be seen from the results of FIG. 3, IGF-1 significantly increased the synthesis of sebaceous gland-specific lipids such as squalene, wax ester and the like in addition to lipids synthesized in all cells such as cholesterol, Tin significantly inhibited the synthesis of squalene, which is increased by IGF-1.

(3) 스쿠알렌 신테이즈 프로모터 에세이(squalene synthase promoter assay)(3) squalene synthase promoter assay.

피지세포에서 스쿠알렌의 유전자 발현을 평가하기 위한 방법으로 스쿠알렌 신테이즈 프로모터 에세이를 확립하였다. 스쿠알렌 신테이즈 유전자의 프로모터 부위를 중합효소연쇄반응(PCR)으로 클로닝하였다. 이때 사용한 프라이머 세트는 센스: 5'-GGTACCGAGCCCTGTGGCAGTTAGAG-3'(서열번호 1), 안티센스:5'-AAGCTTCGACTTTCACCTCTGCGGTG-3'(서열번호 2)이었다. 클로닝된 스쿠알렌 신테이즈 유전자의 프로모터 부위를 pGL3 벡터(미국 Promega사)에 서브클로닝하고, 이를 다시 pENTR 벡터(미국 Life Tehcnologies Corporation사)로 서브클로닝한 후, Virapower adenoviral gateway 발현 키트(미국 Life Tehcnologies Corporation社)를 이용하여 재조합 아데노바이러스를 제조하였다. 이 재조합 아데노바이러스를 피지세포에 감염시킬 경우 스쿠알렌 신테이즈 유전자의 프로모터가 활성화되면서 루시퍼레이즈 효소가 증가하여 루미노미터를 이용하여 유전자 프로모터 활성정도를 평가할 수 있다. The squalene synthase promoter assay was established as a method for evaluating gene expression of squalene in sebum cells. The promoter region of the squalene synthase gene was cloned by polymerase chain reaction (PCR). The primer set used was the sense: 5'-GGTACCGAGCCCTGTGGCAGTTAGAG-3 '(SEQ ID NO: 1), and the antisense: 5'-AAGCTTCGACTTTCACCTCTGCGGTG-3' (SEQ ID NO: 2). The promoter region of the cloned squalene synthase gene was subcloned into a pGL3 vector (Promega, USA), subcloned with pENTR vector (Life Technologies Corporation, USA), and then transferred to a Virapower adenoviral gateway expression kit (manufactured by LifeTehcnologies Corporation ) Were used to prepare recombinant adenoviruses. When the recombinant adenovirus is infected with sebum cells, the promoter of the squalene synthase gene is activated and the luciferase enzyme is increased to evaluate the degree of gene promoter activity using a luminometer.

피지세포를 6-웰 플레이트에서 배양한 후, 재조합 아데노바이러스를 10 감염다중도(multiplicity of infection, MOI) 양 만큼 처리하여 6 시간 배양하였다. 기존 배지를 제거하고, 새로운 배지와 빌로베틴을 처리하고 48 시간 더 배양 한 후, 미국 Promega사의 루시퍼레이즈 키트를 이용해 루시퍼레이즈 활성을 측정하였으며, 그 결과는 도 4와 같다. 도 4의 결과로부터 알 수 있는 바와 같이, 빌로베틴은 IGF-1에 의해 증가하는 스쿠알렌 신테이즈 프로모터 활성을 농도 의존적으로 억제하였다.The sebaceous cells were cultured on a 6-well plate, and the recombinant adenovirus was treated for 10 times multiplicity of infection (MOI) and cultured for 6 hours. The existing medium was removed, the new medium and bilobetin were treated, and further cultured for 48 hours. Luciferase activity was measured using a Luciferase kit from Promega, USA. The results are shown in FIG. As can be seen from the results in Fig. 4, bilobetin suppressed the squalene synthase promoter activity increased by IGF-1 in a concentration-dependent manner.

<110> Picostech Co., Ltd. <120> Composition for inhibiting or improving seborrhea or seborrheic eczema <130> PN0787 <160> 2 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 1 ggtaccgagc cctgtggcag ttagag 26 <210> 2 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 2 aagcttcgac tttcacctct gcggtg 26 <110> Picostech Co., Ltd. <120> Composition for inhibiting or improving seborrhea or seborrheic          eczema <130> PN0787 <160> 2 <170> Kopatentin 2.0 <210> 1 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 1 ggtaccgagc cctgtggcag ttagag 26 <210> 2 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 2 aagcttcgac tttcacctct gcggtg 26

Claims (2)

하기 화학식 1의 화합물을 유효성분으로 포함하는 피지 과다분비 또는 지루성 습진의 억제 또는 개선용 화장료 조성물.
<화학식 1>

A cosmetic composition for inhibiting or improving sebaceous hypertension or seborrhoeic eczema comprising the compound of formula (1) as an active ingredient.
&Lt; Formula 1 >

하기 화학식 1의 화합물을 유효성분으로 포함하는 지루성 피부염의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
<화학식 1>

A pharmaceutical composition for preventing or treating seborrheic dermatitis, which comprises the compound of formula (1) as an active ingredient.
&Lt; Formula 1 >

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