KR20180096698A

KR20180096698A - 조합 요법

Info

Publication number: KR20180096698A
Application number: KR1020187020533A
Authority: KR
Inventors: 휴 그리피스
Original assignee: 뉴카나 피엘씨
Priority date: 2015-12-23
Filing date: 2016-12-21
Publication date: 2018-08-29
Also published as: IL260076A; SI3393478T1; LT3393478T; CA3008749C; EP3738595A1; MA51576A; EA201891473A1; AU2016375861B2; EP3393478A1; AU2016375861A1; JP2019509253A; US20230149436A1; CA3008749A1; WO2017109486A1; ME03677B; ES2778933T3; CY1122835T1; DK3393478T3; EA037459B1; MX2018007772A

Abstract

본 발명은 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염 (화학명:2'-데옥시-2',2'-디플루오로-D-시티딘-5'-O-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]인산염 (NUC-1031))과, 시스플라틴, 피코플라틴, 리포플라틴 및 트리플라틴에서 선택되는 백금계 항암제와의 조합에 대한 것이다. 상기 조합은 암, 특히 담도 및 방광암의 치료에 유용하다.

Description

조합 요법

본 발명은 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염 (화학명:2'-데옥시-2',2'-디플루오로-D-시티딘-5'-O-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]인산염 (NUC-1031))과, 시스플라틴, 피코플라틴, 리포플라틴 및 트리플라틴에서 선택되는 백금계 항암제와의 조합에 대한 것이다.

NUC-1031

젬시타빈(gemcitabine) (1; 상품명 Gemzar^®)은 유방암, 비-소세포 폐암, 난소암 및 췌장암을 치료하기 위해 현재 승인된 효과적인 뉴클레오시드(nucleoside) 유사체이며, 방광암, 담도암(biliary cancer), 결장직장암 및 림프종을 포함하여 다른 다양한 암의 치료에 널리 사용된다.

젬시타빈의 임상적 유용성은 다수의 선천성 및 후천성 저항 메커니즘(resistance mechanism)에 의해 제한된다. 세포 수준에서 저항성은 세 가지 파라미터에 의존한다: (i) 인산화된 모이티(phosphorylated moiety)로의 활성화에 필요한 데옥시시티딘 키나제(dexoycytidine kinase)의 하향 조절; (ii) 뉴클레오시드 전달체(transporter), 특히 암세포에 의한 섭취(uptake)에 필요한 hENT1의 발현 감소; 그리고, (iii) 촉매 효소, 특히 젬시타빈을 분해하는 시티딘 디아미나제(cytidine deaminase)의 상향 조절.

WO2005/012327은 젬시타빈 및 관련 뉴클레오시드 약물 분자에 대한 일련의 뉴클레오티드 유사체를 기술한다. 그 중 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염 (NUC-1031; 2)은 특히 효과적인 화합물로 확인되었다. 이러한 전구 약물은 젬시타빈의 유용성을 제한하는 선천성 및 후천성 저항 메커니즘을 피하는 것으로 보인다 ('Application of ProTide Technology to Gemcitabine : A Successful Approach to Overcome the Key Cancer Resistance Mechanisms Leads to a New Agent( NUC -1031) in Clinical Development'); Slusarczyk et al.; J. Med . Chem.; 2014, 57, 1531-1542).

NUC-1031 2는 분리되고 단일 에피머(epimer)로서 투여될 수 있는 인산염 중심에서 에피머(S-에피머 3 및 R-에피머 4)인 2개의 부분입체이성질체(diastereoisomer)의 혼합물로서 전형적으로 제조된다.

ProGem1은 NUC-1031의 안전성, 내약성, 임상 효능, 약동학(PK) 및 약력학(PD)을 조사하기 위한 사람에서 최초의(FTIH), 1단계(phase I), 공개 라벨, 2단계 연구였으며, 진행성 고체 악성 종양이 있는 피험자들에서 두 가지 병행 복용 일정으로 시행되었다(EudraCT 번호: 2011-005232-26). 피험자들은 연구 시작에서 다음과 같은 종양 유형을 보였다: 결장 직장암 (7명), 불명의 원발성 암(3명), 난소암(12명), 유방암(4명), 췌장암(9명), 담관암종(7명), 자궁 내막 암(3명), 자궁 경부암(2명), 폐암(7명), 중피종(3명), 식도암(3명), 나팔관암(1명), 세포영양막암(1명), 신장암(1명), 위암(1명), 항문암(1명), 갑상선암(1) 및 골육종(1명). 이 연구는 젬시타빈을 포함한 종래의 뉴클레오시드 유사체 치료법에 저항성이거나 내성이 있어 모든 표준 치료법을 다 써 버린 진전된 진행성 암 환자에서 NUC-1031의 항종양 활성을 확인했다. 특히, 약동학 데이터는 단일 제제로서 NUC-1031이, 등몰 용량(equimolar dose)에서 단일 제제 젬시타빈보다 활성 3인산염(triphosphate) 모이티(dFdCTP)의 세포 내 피크 농도(Cmax)가 대략 10배 이상을 생성함을 보였다. 더욱이, 다수의 발표된 연구에 나타난 젬시타빈에 대한 자료와 비교해서, dFdCTP의 내포내 노출 시간 (혈중농도)곡선하면적(AUC)이 27배나 높았다. 마지막으로, NUC-1031은 젬시타빈과 일반적으로 관련된 독성 대사 산물 2',2'-디플루오로-2'-데옥시우리딘(2',2'-difluoro-2'-deoxyuridine)(dFdU)을 절반 이하 수준으로 방출한다는 사실이 밝혀졌다.

담도암( Biliary Track Cancer)

담도암(Biliary tract cancer, BTC)은 높은 사망률과 관련이 있다 (인구 백만 명당 약 23명, 성인에서 0.7% 악성 종양 발생, 즉 1년당 영국과 웨일즈에 등록된 약 1200명의 신규 환자가 있다. 담도암은 발생 근원에 따라 다음과 같이 분류된다:

. 담낭암

. 말단 담관암

. 바터씨팽대부 종양(Ampullary tumours)

. 간내 담관암

. 간문부 담관암(Hilar (Klatskin) cholangiocarcinoma)

이들 암은 50-70세의 환자에서 더 많이 발생하며, 담관암 및 바터씨팽대부 암종의 경우 남성에서, 방광암의 경우 여성에서 더 많이 발생한다. BTC의 90% 이상이 선암이지만, 편평 세포종, 신경 내분비 종양, 림프종 또는 육종과 같은 다른 조직 학적 아형을 찾는 것도 가능하다. BTC에 대한 주요 병인학적 요인은 담석, 선천성 담관의 이상, 원발성 경화성 담관염, 만성 간 질환 및 유전성 용종증 증후군이다.

수술은 장기 치료의 유일한 기회를 제공한다; 그러나 BTC의 공격적인 특성 때문에 대부분의 환자 (> 65%)는 수술이 가능하지 않고 고식적인 화학요법만 사용할 수 있는 진전된 단계에서 진단된다. 진행성 (전이되거나 절제 불가능한 국소 진행성 질병) 담도암으로 진단받은 환자의 예후는 좋지 않다. III 기 및 IV 기의 5 년 전체 생존율은 각각 10%와 0%이다. 그럼에도, 일선의 이중 화학 요법은 단일 약제 요법에 비해 전반적인 생존율과 삶의 질이 향상되었음을 보여주었다.

BTC의 치료를 위한 가장 활성인 화학요법 약물은 젬시타빈, 플루오로피리미딘(fluoropyrimidine) 및 백금 제제이다. 영국 NCRN ABC-02 연구는 BTC 환자의 일선의 치료를 위한 기준 요법(reference regimen)으로 시스플라틴(cisplatin)과 젬시타빈(gemcitabine)을 확립했다. 젬시타빈 단일 요법 대비 시스플라틴/젬시타빈 이중 화학 요법을 비교한 410명의 환자를 대상으로 한 무작위 임상 3상 연구 결과는 전체 생존율(평균 11.7개월 vs. 8.1개월, p <0.001)과 무-진행 생존율(평균 8개월 vs. 5개월 p <0.001)에서 효과를 입증하였다. 시스플라틴/젬시타빈으로 11.2개월의 평균 생존율이 기록된 동일한 치료 요법 (BT-22 연구)을 사용한 일본에서의 무작위 임상 2상 연구에서도 매우 유사한 정도의 효과가 나타났다. 크기와 생존율을 고려한 ABC-02 연구의 견고함은 시스플라틴과 젬시타빈의 조합 요법을 표준으로 삼았으며 이후 영국 및 국제적으로 널리 채택되었다(예: 미국의 NCCN 지침).

본 발명의 목적은 암을 치료하기 위한 조합 요법(combination therapy)을 제공하는 것이다. 본 발명의 목적은 현존하는 치료법보다 더 효과적인 치료법을 제공하는 것이다.

본 발명의 어떤 실시 예들은 상기 목적 중 일부 또는 전부를 만족시킨다.

본 발명에 따르면, 시스플라틴(cisplatin), 피코플라틴(picoplatin), 리포플라틴(lipoplatin) 및 트리플라틴(triplatin)에서 선택되는 백금 계 항암제와 조합(combination)하여 암을 치료하는데 사용하기 위한 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염 (gemcibatine-[phenyl(benzoxy-L-alaninyl)]-phosphate), 또는 그것의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물(solvate)이 제공된다.

본 발명은 또한 시스플라틴, 피코플라틴, 리포플라틴 및 트리플라틴에서 선택되는 백금 계 항암제와 조합하여 사용되는 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염, 또는 그것의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물을 제공한다. 조합은 일반적으로 암 치료에 사용하기 위한 것이다.

본 발명은 또한 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염, 또는 그것의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화합물과 조합하여 암을 치료하는데 사용하기 위한, 시스플라틴, 피코플라틴, 리포플라틴 및 트리플라틴에서 선택되는 백금 계 항암제를 제공한다.

본 발명은 또한 암을 치료하는 방법을 제공하며, 이 방법은 대상에게 시스플라틴, 피코플라틴, 리포플라틴 및 트리플라틴에서 선택되는 백금 계 항암제와 조합하여, 약학적으로 유효량의 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염, 또는 그것의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물 투여함을 포함한다.

본 발명은 또한 암 치료용 의약의 제조에 사용하기 위한 시스플라틴, 피코플라틴, 리포플라틴 및 트리플라틴으로부터 선택되는 백금 계 항암제와 조합하는 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염, 또는 그것의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물을 제공한다.

본 발명은 또한 시스플라틴, 피코플라틴, 리포플라틴 및 트리플라틴으로부터 선택되는 백금 계 항암제와 조합하여 암 치료용 의약의 제조에 사용하기 위한 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염, 또는 그것의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물을 제공한다.

본 발명은 또한 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염, 또는 그것의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화합물과 조합하여 암 치료용 의약을 제조하는 데 사용하기 위한, 시스플라틴, 피코플라틴, 리포플라틴 및 트리플라틴에서 선택되는 백금 계 항암제를 제공한다.

본 발명은 또한 시스플라틴, 피코플라틴, 리포플라틴 및 트리플라틴에서 선택되는 백금 계 항암제와 조합되는 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염, 또는 그것의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물, 그리고 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약학적 제형을 제공한다.

상기 약학적 제형은 단위 투여량(unit dose)의 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염 및 단위 투여량의 백금 계 항암제를 함유할 수 있다. 상기 단위 투여량들은 동일할 수 있지만 일반적으로 다를 수 있다.

본 발명은 또한 함께 사용되는 두 개의 분리된 제형을 제공하며, 상기 제형은 다음과 같다:

젬시타빈-[페닐-(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물, 그리고 적어도 하나의 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 제1 제형;

시스플라틴, 피코플라틴, 리포플라틴 및 트리플라틴으로부터 선택되는 백금 계 항암제 그리고 적어도 하나의 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 제2 제형.

상기 제형은 키트 형태 일 수 있다. 상기 제형들(즉, 상기 제형들을 포함하는 키트)은 전형적으로 암을 치료하기 위한 것이다.

본 발명의 치료법은 두 가지 약제(즉, 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염과 백금 계 항암제)의 조합이 둘 중 하나가 단독으로 투여되는 경우보다 조합으로 투여될 때 훨씬 효과적이라는 것에 따른다. 본 발명의 문맥에서 '조합' 또는 '함께'라는 용어는 치료기간 동안 두 약제가 둘 다 동일한 환자에게 투여되는 것을 가리킨다. 투여는 별도의 용량으로 제공된다는 점에서 개별적으로 이루어질 수 있고 또는 동일한 용량으로 존재할 수 있다. 투여는 동시에 또는 순차적으로 이루어질 수 있고 순차적 투여는 즉각적으로 연달아 투여되거나 두 약제의 투여 사이에 간격을 두고 일어날 수 있다. 따라서, 이 논의의 맥락에서 '단독'이라는 용어는 치료기간 중에 다른 약제의 투여 없이 단지 하나의 활성 약제의 투여를 의미하고, 심지어 시간간격(time interval) 후에도 그러한 것을 의미한다.

본 발명에 따른 조합 요법은 전체 치료기간 동안 활성제들 중 하나의 단독 투여에 비해 전체 치료 결과를 향상시키는 방식으로의 두 활성제의 공동 투여 또는 순차 투여를 포함한다. 상기 목적을 위해 사용된 약학적 제형은 개별적, 즉 별개의 제형들이거나 단일 제형으로 제공될 수 있다. 상기 제형 또는 각각의 제형은 희석된 것이거나 희석될 준비가 된 액체 형태 일 수 있고 또는 고체 형태일 수 있다. 고체 형태는 적합한 용매 매질에 용해되도록 제공될 수 있다. 고체 형태는 또한 정제, 캡슐, 로장쥐 등과 같이 농축된 단위 투여형으로 제공될 수 있다.

특히, 본 발명자들은 시스플라틴이 암 세포주(cancer cell line), 예를 들어 방광암 세포주 HT1376를 강한 상승효과로 NUC -1031에 감작되게 한다(sensitized) 것을 발견하였다. 또한, 본 발명자들은 생체 내에서 NUC -1031과 시스플라틴의 조합이 dFdCTP의 세포 내 t _1/2 의 증가를 유도하고,이 조합이 담관암의 치료에 효과적 일 수 있다는 것을 밝혀냈다.

젬시타빈 및 백금의 조합 사용에 대해 관찰된 상승작용은 젬시타빈 및 NUC-1031 모두의 활성 대사물인 dFdCTP(젬시타빈 삼인산염)의 수준이 1.5배 증가한 것에 기인하며 (van Moorsel et al., British Journal of Cancer, 1999, 80(7), 981- 990), 이는 향상된 데옥시시티딘 키나제(dCK) 활성의 결과로 설명된다. 젬시타빈과 조합할 때 dCK-매개 dFdCTP 수준을 증가시키는 두 가지 백금 기반 메커니즘이 제안되었다. 첫 번째 세포 메커니즘은 dCK를 억제하는 것으로 알려진, 데옥시시티딘 삼인산염(dCTP) 합성에 관여하는 효소인 리보뉴클레오티드 리덕타제(ribonucleotide reductase) 억제를 포함한다 (Bajetta et al., Annals of Oncology, 2003, 14, 242-247). 두 번째 분자 메커니즘에서 백금에 의해 유도된 DNA 손상이 디옥시리보뉴클레오티드(dNTP)를 필요로 하는 뉴클레오티드 제거 복구 과정을 활성화 시킨다. 이어서 dNTPs 합성에 관여하는 여러 효소가 dCK를 포함하여 상향 조절된다 (van Moorsel et al., 1999). NUC-1031은 dCK-의존성 dFdCTP 형성을 우회하는 단일 인산염(monophosphate) 형태의 뉴클레오티드 유사체로서 합성되며, 따라서 NUC-1031 및 시스플라틴의 조합에 대해 관찰된 상승작용은 다르지만 아직 알려지지 않은 경로에서 유래한 것으로 보인다.

어떤 바람직한 실시 예들에서, 백금 계 항암제는 시스플라틴이다.

젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인삼염은 인산염 부분입체이성질체(phosphate diastereoisomer)들의 혼합물 일 수 있거나 실질적으로 부분입체 이성질체적으로 순수한 형태의 (S)-에피머 또는 (R)-에피머일 수 있다. '실질적으로 부분 입체이성질체적으로 순수한'은 본 발명의 목적상 약 90% 초과의 부분입체이성질체 순도로 정의된다. 실질적으로 부분입체이성질체적으로 순수한 형태로 존재한다면, 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염은 95%, 98%, 99% 또는 99.5% 초과의 순도를 가질 수 있다.

암은 췌장암, 유방암, 난소암, 방광암, 결장직장암, 폐암, 담도암(예를 들어 담낭암, 말단 담관암, 바터씨팽대부 종양(Ampullary tumours), 간내 담관암, 간문부 담관암(Hilar (Klatskin) cholangiocarcinoma)으로 부터 선택되는 암), 전립선암, 신장암, 림프종, 백혈병, 자궁경부암, 흉선암, 원발부위를 모르는 암, 식도암, 중피종, 부신암, 자궁암, 나팔관암, 자궁내막암, 고환암, 두경부암, 중추신경계암 및 생식세포종양에서 선택될 수 있다.

어떤 바람직한 실시 예들에서, 암은 방광암, 난소암, 비-소세포 폐암 및 담도암(예를 들어 담낭암, 말단 담관암, 바터씨팽대부 종양, 간내 담관암, 간문부 담관암으로 부터 선택되는 암)에서 선택된다. 어떤 바람직한 실시 예들에서, 암은 담도암이다. 다른 바람직한 실시 예들에서 암은 방광암이다. 백금 계 항암제가 시스플라틴인 조합 요법이 특히 이들 특정 암들을 치료하는데 바람직하다. 어떤 바람직한 실시 예들에서, 암은 난소암, 비-소세포 폐암 및 담도암(예를 들어 담낭암, 말단 담관암, 바터씨팽대부 종양, 간내 담관암, 간문부 담관암으로 부터 선택되는 암)에서 선택되고, 백금 계 항암제는 시스플라틴이다. 따라서, 암은 담도암이고, 백금 계 항암제는 시스플라틴이다. 마찬가지로, 암은 방광임일 수 있고, 백금 계 항암제는 시스플라틴이다.

암은 화학요법으로 이전에 치료되지 않은 것일 수 있다. 이와 달리, 암(담도암 또는 방광암)은 재발(relapse)될 수 있다. 따라서, 암은 하나 이상의 화학요법(이는 시스플라틴, 젬시타빈 또는 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인삼염에서 선택되는 약물을 포함했을 수도 포함하지 않았을 수도 있다) 코스 후에 재발하거나 진행한 것일 수 있다. 암(예를 들어 담도암 또는 방광암)은 백금 계 항암제(예를 들어, 시스플라틴)에 대해 불응성(refractory), 저항성(내성)(resistant) 또는 부분적으로 저항성일 수 있다. 이와 달리 암(예: 담도암 또는 방광암)은 백금 계 항암제(예: 시스플라틴)에 감수성(sensitive)일 수 있다.

용매화물(solvate)은 전형적으로 수화물이다. 따라서, 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염은 염 또는 수화물, 또는 용매화물(예를 들어, 염의 수화물)의 형태 일 수 있다. 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염은 염의 형태가 아니며 용매화물 또는 수화물의 형태로 존재하지 않을 수도 있다. 바람직하게는, 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염은 유리 염기(free base) 형태이다.

약제의 조합 투여가 1 시간 이상의 dFdCTP의 세포 내 t_1/2를 제공할 수 있다. 약제의 조합을 투여하면 dFdCTP의 세포 내 t_1/2가 15시간 이상이 될 수 있다. 약제의 조합의 투여가 18시간 이상의 dFdCTP의 세포 내 t_1/2를 제공할 수 있다. 약제의 조합의 투여가 20시간 이상의 dFdCTP의 세포 내 t_1/2를 제공할 수 있다.

젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염과 백금 계 항암제는 동시에 투여될 수 있거나, 순차적으로 투여될 수 있다. 이들이 동시에 투여되는 경우, 이들은 단일 제형으로 투여될 수 있거나 또는 별개의 제형들로 투여될 수 있다. 순차적으로 투여되는 경우, 같은 날에 투여되거나 치료기간 동안 별개의 날에 투여될 수 있다. 치료기간 중 특정 날들에 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염과 백금 계 항암제를 동시에 또는 같은 날과 특정 다른 요일들에 치료 프로그램에서 약제들 중 한 약제가 투여될 수 있다.

NUC -1031 제형( NUC -1031 formulations)

젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염은 비경구로 투여될 수 있다. 예를 들어 정맥 내, 피하 내 또는 근육 내로 투여될 수 있다. 바람직하게는, 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염을 정맥 내 투여한다.

젬시타빈-[페닐-(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염은 선택사항으로서(optionally) 극성 유기 용매, 예를 들어, DMA를 포함하는 수성 제형으로 비경구로 투여될 수 있다. 비경구(예: 정맥 내) 투여의 경우, 제형은 바람직하게는 극성 비양자성 유기 용매, 예를 들면, DMA를 포함할 수 있다.

젬시타빈-[페닐-(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염은 제형에 포함될 수 있다. 상기 제형은 투여 직전에 즉 투여 전 48시간 (예를 들어, 24시간, 12시간 또는 2시간)까지 소정량으로 희석될 수 있다.

상기 제형은 또한 하나 이상의 약학적으로 허용되는 가용화제(solubilizer), 예를 들어 약학적으로 허용되는 비-이온성(non-ionic) 가용화제를 포함할 수 있다. 가용화제는 계면 활성제 또는 유화제(emulsifier)로 언급될 수 있다. 예시적인 가용화제는 폴리에톡시화(polyethoxylated) 지방산 및 지방산 에스테르 및 이들의 혼합물을 포함한다. 적합한 가용화제는 폴리에톡시화 피마자 오일(예: Kolliphor^®ELP라는 상품명으로 시판되는 것)이거나 이를 포함할 수 있다; 또는 폴리에톡시화 히드록시-스테아르산(예를 들어, 상품명 Solutol® 또는 Kolliphor^® HS15하에 시판되는 것)이거나 이를 포함할 수 있다; 또는 폴리에톡시화(예를 들어, 폴리옥시에틸렌(20)) 소르비탄 모노올레산염(sorbitan monooleate)(예를 들어 상표명 Tween^®80으로 시판되는 것)이거나 이를 포함할 수 있다.

어떤 바람직한 실시 예들에서, 상기 제형은 하나 이상의 약학적으로 허용되는 가용화제를 포함한다.

상기 제형은 또한 수성 운반체(vehicle)를 포함할 수 있다. 제형은 투여할 준비가 되어있을 수 있으며, 이 경우에는 통상적으로 수성 운반체를 포함할 것이다.

상기 제형은 비경구용, 예를 들어 정맥 내, 피하 또는 근육 내 투여용일 수 있다. 어떤 실시 예에서 상기 제형은 경구로 투여될 수 있다. 바람직하게는, 제형은 정맥 투여용이다. 투여는 중심정맥투여장치(CVAD, Central Venous Administration Device)을 통해 이루어질 수도 있고 말초 정맥을 통해 이루어질 수도 있다.

투여에 적합한 제형 중의 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염의 총 용량(dose)은 전형적으로 250mg 내지 3g, 예를 들어 1g 내지 2g, 예를 들어 약 1.5g이다.

원액 제형(Stock solution formulations)

극성 비양자성 용매(예를 들어, DMA)는 제형 부피 기준 30%(30부피%) 이상을 나타낼 수 있다. 따라서, 극성 비양자성 용매(예: DMA)가 50부피% 이상, 예를 들어 60부피% 이상일 수 있다. 극성 비양자성 용매(예 : DMA)는 95부피% 이하를 나타낼 수 있다. 예를 들어 90부피% 이하를 나타낼 수 있다. 제형은 또한 수성 운반체(예: 식염수(saline))를 포함할 수 있다. 수성 운반체는 제형의 50부피% 이하로 존재할 수 있으며 예를 들어 제형의 30부피% 이하로 존재할 수 있다. 전형적으로, 수성 운반체(예를 들어, 식염수)는 제형의 부피에 대해 5% 이상, 예를 들어 10% 이상을 나타낼 수 있다.

제형 용매 중의 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일]-인산염의 농도는 mL 당 500mg 이하일 수 있다. mL 당 100mg 이상의 농도 일 수도 있다. 바람직하게는, 농도는 mL 당 200mg 내지 300mg, 예를 들어 225㎎ 내지 275㎎, 예를 들어, mL 당 약 250mg일 수 있다.

어떤 바람직한 제형들은:

30부피% 내지 95부피%의 DMA;

5부피% 내지 50부피%의 수성 운반체; 그리고

mL 당 100mg 내지 400mg (예를 들어 mL 당 100mg 내지 300mg)의 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염

을 포함한다.

더욱 바람직한 제형들은:

70부피% 내지 90부피%의 DMA;

10부피% 내지 30부피%의 수성 운반체(예를 들어 식염수); 그리고

mL 당 200mg 내지 300mg의 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염

을 포함한다.

극성 비양자성 용매(예 : DMA)가 주성분(major component)으로서 존재하는 이전의 네 단락에 기재된 제형들은 예를 들어 투여(예를 들어 주입 또는 주사) 전에 희석되지 않은 채로 투여되는 제형들일 수 있다. 제형들이 중심정맥장치를 통해 투여될 때, 제형들은 전형적으로 희석되지 않는다.

대안적으로, 이들 제형은 사용 전에, 투여에 예를 들어 말초 정맥을 통한 투여에 적합한 제형을 형성하도록 희석되는 원액일 수 있다.

계면 활성제 용액 제형(Surfactant solution formulations)

극성 비양자성 용매(예: DMA)는 제형 부피 기준 10%(10부피%) 이상, 예를 들면, 20% 이상이다. 따라서, 극성 비양자성 용매(예 : DMA)가 80부피% 이하, 예를 들면, 70부피% 이하일 수 있다. 극성 비양자성 용매(예 : DMA)는 55부피% 이하를 나타낼 수 있다. 제형은 또한 하나 이상의 가용화제(예를 들어, 하나 이상의 폴리에톡시화 지방산)를 포함할 수 있다. 하나 이상의 가용화제는 제형 부피 기준 70%(70부피%) 이하를 나타낼 수 있고 예를 들어 60부피% 이하를 나타낼 수 있다. 전형적으로, 하나 이상의 가용화제는 20부피% 이상을 예를 들어 35부피% 이상을 나타낼 것이다. 제형은 또한 수성 운반체를 예를 들어 제형 부피 기준 1% 내지 15% 또는 5% 내지 12%로 포함할 수 있다.

제형 용매 중의 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염의 농도는 mL 당 200㎎ 이하, 예를 들면, 150mg 이하 또는 130mg 이하일 수 있다. 농도는 mL 당 40mg 이상, 예를 들어 60mg 이상일 수 있다. 바람직하게는, 농도는 70mg/mL 내지 120mg/mL, 예를 들어 약 100㎎/mL이다.

어떤 바람직한 제형들은:

20부피% 내지 70부피%의 DMA;

20부피% 내지 70부피%의 가용화제 또는 가용화제들; 그리고

50mg/mL 내지 150mg/mL의 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염

을 포함한다. 상기 제형은 또한 수성 운반체를 예를 들어 1부피% 내지 15부피%의 수성 운반체를 포함할 수 있다.

더욱 바람직한 제형들은:

30부피% 내지 60부피%의 DMA;

10부피% 내지 35부피%의 제1 가용화제;

10부피% 내지 35부피%의 제2 가용화제;

2부피% 내지 12부피%의 수성 운반체; 그리고,

을 포함한다. 제1 가용화제 폴리에톡시화 피마자 오일(예: 상품명 Kolliphor^® ELP로 판매되는 것)일 수 있다. 제2 가용화제는 폴리에톡시화 소르비탄 모노올레산염 (예를 들어 상표명 Tween^®80하에 판매되는 것) 일 수 있다.

상기 제형은:

35부피% 내지 50부피%의 DMA;

15부피% 내지 30부피%의 제1 가용화제;

15부피% 내지 30부피%의 제2 가용화제;

5부피% 내지 12부피%의 수성 운반체; 그리고,

을 포함할 수 있다.

극성 비양자성 용매(예 : DMA)가 주성분으로서 존재하는 이전 다섯 개 단락에 기재된 계면 활성제 용액 제형들은 투여 전에 수성 운반체로 전형적으로 희석된다. 이들 제형들은, 투여를 위해 추가로 희석되기 전에, 전술한 원액으로부터 전형적으로 제조된다. 희석된 후에는, 이들 제형은 말초 정맥을 통해 투여될 수 있다.

이들 제형은 임의의 가용화제들을 함유하지 않는 원액 제형을 가용화제들을 함유하는 용액으로 희석함으로써 제조할 수 있다.

주입 용액 제형(Infusion solution formulation)

극성 비양자성 용매(예: DMA)는 제형 부피 기준 0.1%(0.1부피%) 이상, 예를 들면, 0.5% 이상 또는 1% 이상일 수 있다. 따라서, DMA가 12부피% 이하를, 예를 들어 10부피% 이하 또는 8부피% 이하를 나타낼 수 있다. 제형은 또한 수성 운반체(예: 식염수 또는 WFI)를 포함할 수 있다. 수성 운반체는 제형 부피에 대해 예를 들면 99.5%(95부피%) 이하로 존재할 수 있으며 예를 들어 99% 이하 또는 98% 이하로 존재할 수 있다. 전형적으로, 수성 운반체는 80부피% 이상을 예를 들어 95부피% 이상을 나타낼 수 있다. 제형은 또한 하나 이상의 가용화제(예를 들어, 하나 이상의 폴리에톡시화 지방산)를 포함할 수 있다. 하나 이상의 가용화제는 제형 부피의 12% 이하를, 예를 들어, 10% 이하 또는 8% 이하를 나타낼 수 있다. 전형적으로, 하나 이상의 가용화제는 0.1부피% 이상을, 예를 들어 0.5부피% 이상 또는 1부피% 이상을 나타낼 수 있다.

제형 용매 중의 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염의 농도는 15.0㎎/mL 이하 또는 12.0㎎/mL 이하를 예를 들어 10.0mg/mL 이하 또는 8mg/mL 이하일 수 있다. 농도는 1.0mg/mL 이상 예를 들어 2.0mg/mL 이상일 수 있다. 바람직하게는, 농도는 2.5mg/mL 내지 12mg/mL, 예를 들어 3㎎/mL 내지 11㎎/mL일 수 있다.

어떤 바람직한 제형들은:

0.1부피% 내지 10부피%의 DMA;

0.1부피% 내지 10부피%의 가용화제 또는 가용화제들;

85부피% 내지 99부피%의 수성 운반체; 그리고

2.0mg/mL 내지 12mg/mL의 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염

을 포함한다.

더욱 바람직한 제형들은:

1부피% 내지 8부피%의 DMA;

0.5부피% 내지 4부피%의 제1 가용화제;

0.5부피% 내지 4부피%의 제2 가용화제;

85부피% 내지 99부피%의 수성 운반체; 그리고,

2.0mg/mL 내지 12.0mg/mL의 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염을 포함한다. 제1 가용화제 폴리에톡시화 피마자 오일(예: 상품명 Kolliphor^® ELP로 판매되는 것)일 수 있다. 제2 가용화제는 폴리에톡시화 소르비탄 모노올레산염 (예를 들어 상표명 Tween^®80하에 판매되는 것) 일 수 있다.

극성 비양자성 용매(예 : DMA)가 주성분으로서 존재하는 이전 네 단락에 기재된 주입 용액 제형들은 전형적으로 투여 전 최대 48시간까지 수성 운반체를 사용하여 농축된 젬시타빈-[페닐-(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염 용액을 희석함으로써, 준비된다. 상기 농축된 용액은 극성 비양자성 용매 중의 젬시타빈-[페닐-(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염이거나 (위에서 살펴본 '원액 제형' 표제 하의 내용 참조), 극성 비양자성 용매 및 가용화제의 혼합물 중의 젬시타빈-[페닐-(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염일 수 있다(위에서 살펴본 '계면 활성제 용액 제형' 표제 하의 내용 참조). 극성 비양자성 용매(예를 들어 DMA)가 주성분으로 존재하는 이들 제형은 말초 정맥을 통해 투여될 수 있다. 상기 제형들 중의 극성 비양자성 용매(예를 들어 DMA)의 농도가 낮다는 것은 말초 투여시 통증을 야기하지 않을 경향이 높다는 것을 의미한다.

키트 (Kits)

본 발명은 암을 치료하기 위한 키트를 제공하며, 이 키트는:

젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물 그리고 적어도 하나의 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 제1 제형; 그리고

백금 계 항암제 및 하나 이상의 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 제2 제형을 포함한다.

어떤 특정 실시 예들에서, 상기 키트는:

30부피% 내지 95부피%의 DMA, 5부피% 내지 50부피%의 수성 운반체 및 100mg/mL 내지 400mg/mL(예를 들어 100mg/mL 내지 300mg/mL)의 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염을 포함하는 제1 제형;

백금 계 항암제 및 하나 이상의 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 제2 제형; 그리고,

30부피% 내지 95부피%의 DMA와 5부피% 내지 50부피%의 수성 운반체를 포함하는 제3 제형을 포함할 수 있다.

제3 제형은 전형적으로 활성제를 포함하지 않을 것이다. 따라서, 제3 제형은 일반적으로 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염 또는 백금 계 항암제를 포함하지 않는다. 제3 제형은 2개의 개별 용기 또는 단일 용기에 제공될 수 있다.

상기 두 단락에서 언급된 키트는 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염이 중심정맥투여장치를 통해 정맥 내 투여되는 경우에 유용하다. 중심정맥투여장치는 제1 제형의 투여 전에 제3 제형으로 세척된다(flushed). 이는, 활성 제형과 수성 매질(예를 들어 식염수 세척 용액)의 직접 접촉을 피함으로써, 정맥 내 투여 장치 즉 중심정맥투여장치 내에 또는 입구에서 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염의 침전의 위험을 완화 시킨다. 중심정맥투여장치는 또한 제1 제형의 투여 후에 제3 제형으로 세척될 수 있다. 이것은 또한 침전을 더욱 방지한다.

어떤 특정 실시 예들에서 상기 키트는:

10부피% 내지 50부피%의 DMA, 20부피% 내지 60부피%의 제1 가용화제, 그리고 20부피% 내지 60부피%의 제2 가용화제를 포함하는 제3 제형을 포함할 수 있다.

전형적으로, 제3 제형은 어떠한 활성 성분도 함유하지 않을 것이다. 따라서, 제3 제형은 일반적으로 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염 또는 백금 계 항암제를 포함하지 않을 것이다.

상기 두 단락에서 언급된 키트는 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염이 말초 정맥을 통해 정맥 내 투여되는 경우에 유용하다. 투여 전 최대 48시간까지 예를 들어 투여 전 24시간까지, 제3 제형으로 제1 제형을 희석하여 제4 제형을 형성한다. 상기 제4 제형은 환자에게 주입 또는 주사용으로 적합하도록 투여 전에 원하는 농도로 수성 운반체로 추가 희석된다. 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염의 침전에 대해 보다 안정적인 말초 투여를 위한 제형을 얻기 위해, 일반적으로 가용화제를 포함하는 것이 바람직하다. 그러나 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염은 그러한 가용화제의 존재하에서 분해되기 쉽다. 따라서, 2단계 희석 방법은, 본 발명의 어떤 실시 예들에서, 말초 투여를 위한 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염의 제형이 달성되는 바람직한 수단이다.

예시적인 젬시타빈 -[페닐( 벤즈옥시 -L-알라닌일)]-인산염의 투여 방법

예시적인 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염의 투여 방법은 아래와 같다:

젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염 250mg/mL 용액(S-에피머, R-에피머 또는 이들의 혼합물)을 DMA 및 0.9 % 식염수의 80:20 (부피 기준) 혼합물 중에서 형성시켰다. 이 원액 제형은 전형적으로 프로타이드(protide)의 장기 저장 및 수송을 위해 충분히 안정하다. 이 원액 제형은 CVAD (예: 히크만(Hickman) 라인, PICC 라인, Portacath)를 통해 환자에게 정맥 내에 예를 들어 20ml/hour의 속도로 투여될 수 있다. 정맥 내 투여 장치는 전형적으로 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염(프로타이드)를 포함하는 제형의 투여 전후 모두에서 DMA 및 0.9% 식염수의 80:20 (부피 기준) 혼합물(아래 실시 예 4에서 언급되는 세척 용액)로 세척(flush) 될 것이다. 이것은 식염수 세척액과 접촉하여 정맥 내 투여 장치에서 잠재적인 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염의 침전 위험을 완화 시키는데 도움을 준다. 대안적으로, 정맥 내 투여가 바람직한 투여 방법인 경우, 원액 제형을 20%:40%:40%의 DMA:Tween® 80:Kolliphor®의 혼합물인 희석제 용액으로 100mg으로 희석한다 (예를 들어 80:20의 DMA:0.9% 식염수 중의 250mg/ml 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염 6.7mL를 DMA:Tween® 80:Kolliphor® ELP 희석액 10mL에 첨가한다). 생성된 (계면 활성제 용액) 제형은 전형적으로 5일까지 안정하다. 이어 이 계면 활성제 용액 제형을 0.9% 식염수로 원하는 농도로 희석하여 주입 용액 제형을 제조한다.

실시 예들에 기재된 ABC-08 연구에서 투여된 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인삼염은, 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인삼염의 S-에피머를 CVAD를 통해 투여함으로써, 상기 투여 방법을 사용하여 수행되었다.

백금 계 항암제의 제형(Formulations of the platinum-based anticancer agent)

백금 계 항암제는 비경구 투여될 수 있다. 예를 들어 정맥 내, 복강 내, 피하 또는 근육 내 투여될 수 있다. 백금 계 항암제는 정맥 내 투여하는 것이 바람직하다.

백금 계 항암제는 전형적으로 수성 용액으로, 예를 들어 무균의 1mg/mL 수성 용액으로 투여될 것이다. 수성 용액은 전형적으로 식염수 용액(예를 들어 0.9% 식염수 용액)일 것이다. 수성 용액은 또한 만니톨(예를 들어 10mg/mL)을 포함할 수 있다.

백금 계 항암제(예를 들어 시스플라틴)가 50mg/mL 보다 낮은 복용량으로 투여될 때, 15-60분에 걸쳐 100-250mL 백(bag)으로부터의 주입(infusion)으로 투여된다. 백금 계 항암제(예를 들어 시스플라틴)가 50mg/mL 이상의 복용량으로 투여될 때, 15-60분에 걸쳐 250-500mL 백(bag)으로부터의 주입(infusion)으로 투여된다.

시스플라틴의 투여에 관한 더 자세한 정보는 예를 들어 US FDA가 Platinol^®에 대해 승인한 라벨에 나와 있다.

복용 방법 ( Dosage Regimens)

NUC-1031은 21일 사이클(21 day cycle)에서 2회 투여될 수 있다. 백금 계 항암제(예: 시스플라틴)는 21일 사이클에서 2회 투여될 수 있다. 바람직한 복용 방법에서, 21일 사이클의 1일 및 8일째에 NUC-1031이 투여되고, 21일 사이클의 1일 및 8일째에 백금 계 항암제(예: 시스플라틴)가 투여된다. NUC-1031 및 백금 계 항암제(예: 시스플라틴)가 21일 사이클의 1일 및 8일에 동시에 투여될 수 있다.

각각의 투여에서 투여되는 NUC-1031의 투여량은 바람직하게는 250mg/m² 내지 1250mg/m²이다. 각 투여에서 투여되는 NUC-1031의 투여량은 300mg/m² 내지 1000mg/m² 일 수 있다. 각 투여에서 투여되는 NUC-1031의 투여량은 400mg/m² 내지 900mg/m²일 수 있으며 예를 들어 600mg/m² 내지 800mg/m² 또는 300mg/m² 내지 750mg/m²일 수 있다. 각 투여에서 투여되는 NUC-1031의 투여량은 약 750mg/m² 일 수 있다.

각각의 투여에서 투여되는 백금 계 항암제(예: 시스플라틴)의 투여량은 10mg/m² 내지 200mg/m²일 수 있다. 각각의 투여에서 투여되는 백금 계 항암제(예: 시스플라틴)의 투여량은 20mg/m² 내지 100mg/m²일 수 있다. 각각의 투여에서 투여되는 백금 계 항암제(예: 시스플라틴)의 투여량은 20mg/m² 내지 60mg/m²일 수 있다. 각각의 투여에서 투여되는 백금 계 항암제(예: 시스플라틴)의 투여량은 30mg/m² 내지 90mg/m²일 수 있다.

NUC-1031의 투여량 또는 백금 계 항암제(예: 시스플라틴)의 투여량 또는 두 화합물의 투여량이 각각의 처치(treatment) 사이클에서 실질적으로 동일하게 유지되도록 할 수 있다. 예를 들어, 투여 당 약 750mg/m²의 NUC-1031 투여량 및 약 50mg/m² 의 시스플라틴 투여량이 다중 처치 사이클에서 사용될 수 있다.

대안적으로, NUC-1031의 투여량 또는 백금 계 항암제(예: 시스플라틴)의 투여량 또는 두 화합물 모두의 투여량이 제1 처치 사이클에서 제2 처치(후속 처치) 사이클로 가면서 감소 될 수 있다. 예를 들어, 각 투여에서 투여되는 NUC-1031의 투여량은 제1 처치 사이클에서의 약 750mg/m²가 제2 처치(또는 후속 처치) 사이클에서 약 625mg/m²로 감소할 수 있다. 백금 계 항암제(예: 시스플라틴)의 투여량은 제1 처치 사이클에서의 약 90mg/m²가 제2 처치(또는 후속 처치) 사이클에서 약 60mg/m² 또는 약 50mg/m²로 감소할 수 있다.

적절한 처치 방법은 NUC-1031의 투여량 및 백금 계 항암제(예: 시스플라틴)의 투여량 모두를 제1 처치 사이클에서 제2 처치 사이클(또는 후속 처치)로 가면서 감소(이전 단락에서 설명한 것 같이)할 수 있다. 예를 들어, 각 투여에서 투여되는 NUC-1031의 투여량은 제1 처치 사이클에서의 약 750mg/m²가 제2 처치(또는 후속 처치) 사이클에서 약 625mg/m²로 감소할 수 있고, 백금 계 항암제(예: 시스플라틴)의 투여량은 제1 처치 사이클에서의 약 90mg/m²가 제2 처치(또는 후속 처치) 사이클에서 약 60mg/m² 또는 약 50mg/m²로 감소할 수 있다.

NUC-1031의 투여량이 제1 처치 사이클에서 제2 처치 또는 후속 처치 사이클로 가면서 감소하는 경우(예를 들어 제1 처치 사이클에서의 약 750mg/m²가 제2 처치 사이클에서 약 625mg/m²로 감소할 경우), 백금 계 항암제(예: 시스플라틴)의 투여량은 제1 처치 사이클과 제2 처치 사이클(또는 후속 처치 사이클) 사이에서 동일하게 (예를 들어 각 처치 사이클에서 약 50mg/m²) 유지될 수 있다.

NUC-1031의 투여량이 제1 처치 사이클과 제2 처치 사이클(또는 후속 처치 사이클)에서 동일하게 유지될 경우(예를 들어 예를 들어 제1 처치 사이클과 제2 처치 사이클에서 각각 625mg/m²를 유지), 백금 계 항암제(예: 시스플라틴)의 투여량은 제1 처치 사이클에서 제2 처치 또는 후속 처치 사이클로 가면서 감소할 수 있다(예를 들어, 제1 처치 사이클에서의 약 90mg/m²가 제2 처치 또는 후속 처치 사이클에서 약 60mg/m² 또는 약 50mg/m²로 감소).

상기 언급된 투여 요법은 조합의 각 성분의 독성이 허용되는 수준에 이르지 만 여전히 조합으로부터의 치료 효과가 관찰되는 균형을 제공할 것으로 기대된다.

상기 언급된 복용 방법은 환자에서 증가한 생존율을 제공할 수 있다. 환자의 50% 이상에서 안정된 질병(stable disease)을 제공할 수 있다. 상기 복용 방법은 허용되는 수준의 부작용으로 위의 이점 중 하나 이상을 제공할 수 있다. 복용량은 dFdCTP의 AUC가 단일 약제로 투여된 NUC-1031보다 조합의 경우 더 높도록 결정될 수 있다. dFdCTP의 AUC 대 Cmax의 비율이 단일 약제로 투여된 NUC-1031보다 조합에 대해 더 높도록 복용량이 결정될 수 있다.

본 발명의 실시 예들은 첨부 된 도면을 참조하여 이하에서 더 설명된다.
도 1은 Chiralpak AD 컬럼 및 n-헵탄/IPA 구배 용제 시스템(gradient solvent system)을 사용하여 HPLC에 의한 화합물 3 및 4의 분리를 위한 크로마토 그래피를 도시한다.
도 2는 방광암 세포주 HT1376에서의 시스플라틴/NUC-1031에 대한 곡선 이동 방법을 사용하여 나타낸 시너지 효과를 나타낸다.

'동시'는 "실질적으로 동시"를 의미하며, 예를 들어, 30분 미만 간격의 투여를 의미한다. '순차'는 30분 이상 간격으로 투여하는 것을 의미한다.

본 명세서에서, S-에피머(S-epimer) 또는 S-부분입체이성질체(S-diastereoisomer)는 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-(S)-인산염 (gemcitabine-[phenyl(benzoxy-L-alaninyl)]-(S)-phosphate)을 의미한다. 마찬가지로, 본 명세서에서, 용어 R-에피머 또는 R-부분입체이성질체는 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-(R)-인산염을 나타낸다.

본 발명의 화합물은 약학적으로 허용되는 염의 형태로 수득, 저장 그리고/또는 투여될 수 있다. 적합한 약학적으로 허용되는 염은 여기에 한정된 것은 아니며, 염산, 황산, 인산, 질산, 탄산, 붕산, 술팜산 및 브롬산과 같은 약학적으로 허용되는 무기산의 염, 또는 아세트산, 프로피온산, 부티르산, 타르타르산, 말레산, 수산화 말레산, 푸마르산, 말산, 시트르산, 젖산, 글루콘산, 벤조산, 숙신산, 옥살산, 페닐 아세트산, 메탄술폰산, 톨루엔술폰산, 벤젠 술폰산, 살리실산, 술파닐산(sulphanilic acid), 아스파르트산, 글루탐산, 에데트산, 스테아르산, 팔미트산, 올레산, 라우르산, 판토텐산, 탄닌산, 아스코르브산 및 발레르산 같은 약학적으로 허용되는 유기산의 염을 포함한다. 적합한 염기 염(base salt)은 무독성 염을 형성하는 염기(base)로부터 형성된다. 염기 염의 예로는 알루미늄 염, 아르기닌 염, 벤자틴 염, 칼슘 염, 콜린 염, 디에틸아민 염, 디올아민 염, 글리신 염, 리신 염, 마그네슘 염, 메글루민 염, 올아민 염, 칼륨 염, 나트륨 염, 트로메타민 염 및 아연 염을 포함한다. 산 및 염기의 헤미-염(hemisalt)은 예를 들어 헤미-황산염(hemisulfate), 헤미-옥살산염(hemioxalate) 및 헤미-칼슘염(hemicalcium salt)으로 형성될 수도 있다. 어떤 실시 예들에서, 특히 S-에피머에 적용되는 실시 예들에서 화합물은 황산 염의 형태 또는 헤미-옥살산염의 형태이다.

본 발명의 화합물은 단결정 형태 또는 결정 형태들의 혼합물로 존재하거나 비결정질 형태 일 수 있다. 따라서, 약학적 용도로 의도된 본 발명의 화합물은 결정질 또는 비정질 생성물(product)로서 투여될 수 있다. 이들은 예를 들어 침전, 결정화, 동결 건조 또는 분무 건조 또는 증발 건조와 같은 방법에 의해 고체 플러그, 분말 또는 필름으로서 수득 될 수 있다. 마이크로파 또는 무선 주파수 건조가 이 목적으로 사용될 수 있다.

상기 언급된 본 발명의 화합물에 대해, 투여되는 투여량은 물론 사용된 화합물, 투여 방식, 목적하는 치료 및 언급된 질환(disorder indicated)에 따라 달라질 것이다. 예를 들어, 본 발명의 화합물이 비경구로 투여되는 경우, 본 발명의 화합물의 투여량은 0.1 내지 5g/m², 예를 들어 0.5 내지 2g/m²일 수 있다. 본 발명의 화합물의 치료 목적을 위한 투여량의 크기는, 의학의 공지된 원리에 따라, 증상(condition)의 성질 및 정도, 동물 또는 환자의 연령 및 성별 그리고 투여 경로에 따라 자연적으로 달라질 것이다.

본 발명의 화합물의 투여량 수준, 투여 빈도 및 치료기간은 제형 및 환자의 임상 증상, 연령 및 동반하는 병적 증상(co-morbid medical condition)에 따라 달라질 것으로 예상된다.

본 발명의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용되는 염은 그 자체로 사용될 수 있지만, 일반적으로 본 발명의 화합물 또는 약학적으로 허용되는 염이 약학적으로 허용되는 보조제, 희석제 또는 담체(carrier)와 함께 약학적 조성물 형태로 투여될 수 있다. 적합한 약학적 제형의 선택 및 제조에 대한 통상적인 절차는 예를 들어, "Pharmaceuticals - The Science of Dosage Form Designs", M. E. Aulton, Churchill Livingstone, 1988에 기재되어있다.

본 발명의 화합물의 투여 방식에 따라, 본 발명의 화합물을 투여하기 위해 사용되는 약학적 조성물은, 바람직하게는 본 발명의 화합물 0.05 내지 99중량%, 더 바람직하게는 본 발명의 화합물 0.05 내지 80중량%, 더욱 바람직하게는 0.10 내지 70중량%, 더더욱 바람직하게는 본 발명의 화합물 0.10 내지 50중량%를 포함하며, 모든 중량%는 전체 조성물을 기준으로 한 것이다.

경구 투여를 위해, 본 발명의 화합물은 보조제 또는 담체, 예를 들어 락토오스, 사카로스, 소르비톨, 만니톨; 전분, 예를 들어 감자 전분, 옥수수 전분 또는 아밀로펙틴; 셀룰로오스 유도체; 결합제(binder), 예를 들어 젤라틴 또는 폴리비닐 피롤리돈; 그리고/또는 윤활제, 예를 들어 스테아린산 마그네슘(magnesium stearate), 스테아린산 칼슘(calcium stearate), 폴리에틸렌 글리콜, 왁스, 파라핀 등과 혼합될 수 있고 이후 압축하여 정제로 만들 수 있다. 코팅된 정제가 필요한 경우, 상기한 바와 같이 제조된 코어(core)는 예를 들어, 아라비아고무, 젤라틴, 활석 및 티타늄 산화물을 함유할 수 있는 농축된 설탕 용액으로 코팅될 수 있다. 다르게는, 정제는 용이하게 휘발가능한 유기 용매에 용해된 적합한 중합체로 코팅될 수 있다.

연질 젤라틴 캡슐의 제조를 위해, 본 발명의 화합물은 예를 들어, 식물성 오일 또는 폴리에틸렌 글리콜과 혼합될 수 있다. 경질 젤라틴 캡슐은 전술한 정제용 부형제를 사용하여 화합물의 과립을 함유할 수 있다. 또한, 본 발명의 화합물의 액체 또는 반고체 제형은 경질 젤라틴 캡슐에 충전될 수 있다.

경구 투여를 위한 액체 제제는 시럽 또는 현탁액, 예를 들어 본 발명의 화합물을 함유하는 용액 일 수 있으며, 나머지는 설탕과, 에탄올, 물, 글리세롤 및 프로필렌 글리콜의 혼합물이다. 선택사항으로, 그러한 액체 제제는 증점제(thickening agent)로서 또는 통상의 기술자에게 잘 알려진 다른 부형제로서, 착색제, 향료, 감미제(예:사카린), 방부제 및/또는 카르복시메틸셀룰로오스를 함유할 수 있다.

비경구(예: 정맥 내) 투여의 경우, 화합물은 멸균 수성 또는 유성 용액으로서 투여될 수 있다. 본 발명의 화합물은 매우 친유성이다. 따라서, 수성 제형은 전형적으로 약학적으로 허용되는 극성 유기 용매를 또한 함유할 것이다.

본 발명의 화합물의 치료 목적을 위한 투여량의 크기는 본질적으로 증상의 성질 및 중증도, 동물 또는 환자의 연령 및 성별 그리고 투여 경로에 따라 공지된 의학 원리에 따라 변화할 것이다.

본 발명의 화합물의 투여량 수준, 투여 빈도 및 치료 지속 기간은 제형 및 임상 증상, 환자의 연령 및 공병(co-morbid) 병적 상태에 따라 달라질 것으로 예상된다.

본 발명은 또한 상기 화합물 2, 3 또는 4의 모든 약학적으로 허용되는 동위원소-표지된 형태를 포함하는데, 하나 이상의 원자가 동일한 원자 번호를 가지나 자연 상태에서 통상적으로 발견되는 주요 동위원소의 원자 질량 또는 질량수와 다른 원자 질량 또는 질량수를 갖는 원자들로 치환된다.

본 발명의 화합물에 포함시키기에 적합한 동위원소의 예로는 ²H 및 ³H와 같은 수소 동위원소, ¹¹C, ¹³C 및 ¹⁴C와 같은 탄소 동위원소, ³⁶Cl 같은 염소 동위원소, ¹⁸F와 같은 불소 동위원소, ¹²³I 및 ¹²⁵I와 같은 요오드 동위원소, ¹³N 및 ¹⁵N와 같은 질소 동위원소, ¹⁵O, ¹⁷O 및 ¹⁸O와 같은 산소 동위원소, ³²P와 같은 인 동위원소 및 ³⁵S와 같은 황 동위원소를 포함한다.

어떤 동위원소-표지된 화합물들, 예를 들어, 방사성 동위원소를 포함하는 화합물들은 약물 및/또는 기질 조직 분포 연구에 유용하다. 방사성 동위원소인 삼중 수소, 즉 ³H 및 탄소-14, 즉 ¹⁴C는 이들의 혼입의 용이성 및 검출의 신속성으로 인해 이 목적에 특히 유용하다.

중수소, 즉 ²H와 같은 더 무거운 동위원소로 치환은 보다 큰 대사 안정성, 예를 들어 증가한 생체 내 반감기 또는 감소한 투여량 요건들로 인해 특정 치료 이점을 제공할 수 있으며, 따라서 일부 상황에서는 바람직할 수 있다.

¹¹C, ¹⁸F, ¹⁵O 및 ¹³N과 같은 양전자 방출 동위원소로 치환은 기질 수용체 점유를 검사하기 위한 양전자 단층촬영(Positron Emission Topography, PET) 연구에 유용할 수 있다.

동위원소-표지된 화합물들은 일반적으로 당업계의 통상의 기술자에게 공지 된 통상적인 기술에 의해 또는 이전에 사용된 비표지된 시약 대신에 적절한 동위원소-표지된 시약을 사용하여 기술된 것과 유사한 방법에 의해 제조 될 수 있다.

암 치료에 사용되는 치료 방법 또는 화합물은 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염 및 백금 계 항암 화합물 이외에, 통상적인 수술 또는 방사선 요법 또는 화학요법을 수반할 수 있다. 이러한 화학요법은 하나 이상의 다른 활성제의 투여를 포함할 수 있다.

따라서, 본 발명의 약제학적 제형은 또 다른 활성제를 포함할 수 있다.

하나 이상의 다른 활성제는 하기 카테고리의 항종양제 중 하나 이상일 수 있다:

(i) 항증식/항종양 약물들 및 그 조합, 예를 들어 알킬화제(예를 들면, 시클로포스파미드(cyclophosphamide), 질소 겨자, 벤다무스틴(bendamustin), 멜팔란(mephalan), 클로람부실(chlorambucil), 부술판(busulphan), 테모졸아미드(temozolamide) 및 니트로소우레아스(nitrosoureas)); 항대사물질들(예를 들어, 젬시타빈 및 항엽산제들 예컨대 5-플루오로우라실 및 테가푸르(tegafur)와 같은 플루오로피리미딘들, 랄티트렉세드(raltitrexed), 메토트렉세이트(methotrexate), 페메트렉세트(pemetrexed), 시토신 아라비노시드(cytosine arabinoside) 및 히드록시우레아); 항생제들(예: 아드라아마이신(adriamycin), 블레오마이신(bleomycin), 독소루비신(doxorubicin), 다우노마이신(daunomycin), 에피루비신(epirubicin), 이다루비신(idarubicin), 미토마이신-C(mitomycin-C), 닥티노마이신(dactinomycin) 및 미트라마이신(mithramycin)과 같은 안트라시클린(anthracycline); 유사분열억제제(antimitotic agent)들(예컨대 빈크리스틴(vincristine), 빈블라스틴(vinblastine), 빈데신(vindesine) 및 빈오렐빈(vinorelbine)과 같은 빈카 알칼로이드(vinca alkaloid), 탁솔(taxol), 탁소테레(taxotere)와 같은 탁소이드(taxoid) 그리고 폴로키나제 억제제(polokinase inhibitor)); 프로테아좀 억제제(proteasome inhibitor)들 예를 들어 카르필조밉(carfilzomib) 및 보르테조밉(bortezomib); 인터페론 요법; 그리고 국소이성화제 억제제(topoisomerase inhibitor)들(예를 들어 에톱시드(etopside) 및 테니포시드(teniposide)와 같은 에피포도필로톡신(epipodophyllotoxin), 암사크린(amsacrine), 토포테칸(topotecan), 미톡산트론(motoxantrone) 및 캄프토테신(camptothecin));

(ii) 세포성장억제제(cytostatic agent)들 예를 들어 항에스트로겐(예: 타목시펜(tamoxfen), 풀베스트란트(fulvestrant), 토레미펜(toremifene), 랄록시펜(raloxifene), 드롤록시펜(droloxifene) 및 이오독시펜(iodoxyfene)), 항안드로겐(예: 비칼루타미드(bicalutamide), 플루타미드(flutamide), 닐루타미드(nilutamide) 및 시프로테론 아세테이트(cyproterone acetate)), LHRH 길항제 또는 LHRH 작용제(예: 고세렐린(goserelin), 루프로렐린(leuprorelin), 및 부세렐린(buserelin), 프로게스토겐(예: 메게스트롤 아세테이트(megestrol acetate)), 아로마타제 억제제(aromatase inhibitor)(예: 아나스트로졸(anastrozole), 레트로졸(letrozole), 보라졸(vorazole) 및 엑세메스탄(exemestane)), 그리고 피나스테리드(finasteride) 같은 5α-환원효소의 억제제;

(iii) 다사티닙(dasatinib) 및 보수티닙(SKI-606)(bosutinib(SKI-606))와 같은 항침윤제(anti-invasion agent) 및 금속단백질분해효소(metalloproteinase) 억제제, 우로키나제 플라스미노겐 활성제 수용체 기능(urokinase plasminogen activator receptor function)의 억제제 또는 헤파라나제(Heparanase)에 대한 항체;

(iv) 성장인자 기능의 억제제: 예를 들어, 이러한 억제제는 성장인자 항체 및 성장인자 수용체 항체, 예를 들어 항-erbB2 항체 트라스투주맙(trastuzumab)[Herceptin^TM], 항-EGFL 항체 파니투무맙(panitumumab), 항-erbB1 항체 세툭시맙(cetuximab), 티로신 키나제(tyrosine kinase) 저해제, 예를 들어 표피 성장인자 군(family)의 억제제(예를 들어 EGFR 군 티로신 키나제 억제제 예를 들어 게피티닙(gefitinib), 얼로티닙(erlotinib) 및 6-아크릴아미도-N-(3-클로로-4-플루오로페닐)-7-3-(모르폴리노프로폭시)-퀴바졸린-4-아민(CI 1033), erbB2 티로신 키나제 억제제 예를 들어 라파티닙(lapatinib)); 간세포 성장인자 군의 억제제; 인슐린 성장인자 군의 억제제; 세포사멸의 단백질 규제자에 대한 조절제(예: Bcl-2 억제제); 이마티닙(imatinib) 및/또는 닐로티닙(nilotinib)(AMN107)와 같은 혈소판 유래 성장인자 군의 억제제; 세린/트레오닌 키나제 억제제(예를 들어, 파르네실 전달효소(farnesyl transferase)와 같은 Ras/Raf 신호전달(signaling) 억제제, 예를 들어 소라페닙(sorafenib), 티피파르닙(tipifarnib) 및 로나파르닙(lonafarnib)), MEK 및/또는 AKT 키나제를 통한 세포 신호전달 억제제, c-kit 억제제, abl 키나제 억제제, Pl3 키나제 억제제, Plt3 키나제 억제제, CSF-1R 키나제 억제제, IGF 수용체, 키나제 억제제; 오로라(aurora) 키나제 억제제 및 CDK2 및/또는 CDK4 억제제와 같은 시클린 의존성 키나제 억제제;

(v) 혈관 내피 성장인자의 효과를 억제하는 것과 같은 항혈관형성제 [예를 들어 항혈관 내피세포 성장인자 항체 베바시주맙(bevacizumab)(Avastin™); 탈리도미드(thalidomide); 레날리도미드(lenalidomide); 그리고, VEGF 수용체 티로신 키나제 억제제 예컨대 반데타닙(vandetanib), 바탈라닙(vatalanib), 수니티닙(sunitinib), 악시티닙(axitinib) 및 파조파닙(pazopanib);

(vi) 예를 들어 편위(aberrant) p53 또는 편위 BRCA1 또는 BRCA2와 같은 편위 유전자(aberrant gene)를 대체하는 접근법을 포함하는 유전자치료 접근법;

(vii) 예를 들어 알렙투주맙(alemtuzumab), 리툭시맙(rituximab), 이브리투모맙 티우세탄(ibritumomab tiuxetan)(Zevalin®) 및 오파투무맙(ofatumumab)을 포함한 항체요법; 인터페론 α와 같은 인터페론; 예컨대 IL-2(알데스루킨(aldesleukin)) 같은 인터루킨; 인터루킨 억제제, 예를 들어 IRAK4 억제제; HPV 백신(예:가르다실(Gardasil), 서바릭스(Cervarix), 온코파지(Oncophage) 및 시푸루셀-T(프로펜지)(Sipuleucel-T(Provenge))과 같은 예방 및 치료 백신을 포함한 암 백신; 그리고, 예를 들어 TLR-7 또는 TLR-9 작용제와 같은 수용체 조절제를 포함하는 면역요법 접근법; 그리고,

(viii) 플루다리빈(fludaribine)(플루다라), 클라드리빈(cladribine), 펜토스타틴(pentostatin)(Nipent^TM)과 같은 세포독성제(cytotoxic agent);

(ix) 글루코코르티코이드 및 미네랄로코르티코이드를 포함하는 코르티코스테로이드와 같은 스테로이드, 예를 들어 아클로메타손(aclometasone), 아클로메타손 디프로피오네이트(aclometasone dipropionate), 알도스테론(aldosterone), 암시노니드(amcinonide), 베클로메타손(beclomethasone), 베클로메타손 디프로피오네이트(beclomethasone dipropionate), 베타메타손(betamethasone), 베타메타손 디프로피오네이트(betamethasone dipropionate), 베타메타손 소듐 포스페이트(betamethasone sodium phosphate), 베타메타손 발레레이트(betamethasone valerate), 부데소니드(budesonide), 크로베타손(clobetasone), 클로베타손 부티레이트(clobetasone butyrate), 클로베타솔 프로피오네이트(clobetasol propionate),클로프레드놀(cloprednol), 코르티손(cortisone), 코르티손 아세테이트(cortisone acetate), 코르티바졸(cortivazol), 데옥시코르톤(deoxycortone), 데소니드(desonide), 데톡시메타손(desoximetasone), 텍사메타손(dexamethasone), 덱사메타손 소듐 포스페이트(dexamethasone sodium phosphate), 텍사메타손 이소니코티네이트(dexamethasone isonicotinate), 디플루오로코르톨론(difluorocortolone), 플루클로론(fluclorolone), 플루메타손(flumethasone), 플루니솔리드(flunisolide), 플루오시놀론(fluocinolone), 플루오시놀론 아세토니드(fluocinolone acetonide), 플루오시노니드(fluocinonide), 플루오코르틴 부틸(fluocortin butyl), 플루오코르티손(fluorocortisone), 플루오로코르톨론(fluorocortolone), 플루오코르톨론 카프로에이트(fluocortolone caproate), 플루오코르톨론 피발레이트(fluocortolone pivalate), 플루오로메톨론(fluorometholone), 플루프레드니덴(fluprednidene), 플루프레드니덴 아세테이트(fluprednidene acetate), 플루란드레놀론(flurandrenolone), 플루티카손(fluticasone), 플루티카손 프로피오네이트(fluticasone propionate), 할치노니드(halcinonide), 히드로코르티손(hydrocortisone), 히드로코르티손 아세테이트(hydrocortisone acetate), 히드로코르티손 부티레이트(hydrocortisone butyrate), 히드로코르티손 아세포네이트(hydrocortisone aceponate), 히드로코르티손 부테프레이트(hydrocortisone buteprate), 히드로코르티손 발레레이트(hydrocortisone valerate), 이코메타손(icomethasone), 이코메타손 엔부테이트(icomethasone enbutate), 메프레드니손(meprednisone), 메틸프레드니솔론(methylprednisolone), 모메타손(mometasone) 파라메타손(paramethasone), 모메타손 푸로에이트 모노히드레이트(mometasone furoate monohydrate), 프레드니카르베이트(prednicarbate), 프레드니솔론(prednisolone), 프레드니손(prednisone), 티소코르톨(tixocortol), 티소코르톨 피발레이트(tixocortol pivalate), 트리암시놀론(triamcinolone), 트리암시놀론 아세토니드(triamcinolone acetonide), 트리암시놀론 알코올(triamcinolone alcohol) 및 이들 각각의 약학적으로 허요 가능한 유도체들을 포함하는 스테로이드. 스테로이드들의 조합이 사용될 수 있으며 예를 들어 본 단락에 언급된 둘 이상의 스테로이드의 조합;

(x) 표적 치료제(targeted theraphy), 예를 들어 PI3Kd 억제제, 예를 들어, 이델라리십(idelalisib) 및 페리포신(perifosine); 또는 PD-1, PD-L1 및 CAR T를 억제하는 화합물.

상기 하나 이상의 다른 활성제는 또한 항생제(안트라사이클린 예를 들어 아드리아마이신, 블레오마이신, 독소루비신, 다우노마이신, 에피루비신, 이다루비신, 미토마이신-C, 닥티노마이신, 미트라마이신)일 수 있다.

본 명세서의 발명의 설명 및 청구범위 전반에 걸쳐, "포함한다" 및 "함유한다" 라는 단어 및 그 변형은 "포함하지만 이에 한정되지는 않는다" 를 의미하며, 다른 모이티(moiety), 첨가제, 성분, 정수 또는 단계를 배제하는 것이 아니다. 본 명세서의 발명의 설명 및 청구범위 전반에 걸쳐, 단수는 문맥상 달리 요구되지 않는 한 복수를 포함한다. 특히, 단복수 표현이 없는 경우 문맥상 달리 요구하지 않는 한, 단수형 뿐만 아니라 복수형을 고려하는 것으로 이해되어야 한다.

본 발명의 특정 양태, 실시 형태 또는 실시 예와 관련하여 기술된 특징, 정수, 특성, 화합물, 화학적 모이티 또는 화학적 기는 이들과 양립 불가능하지 않는 한 본 명세서에 기재된 임의의 다른 양태, 실시 형태 또는 실시 예에 적용 가능한 것으로 이해되어야 한다. 첨부된 청구범위, 요약서 및 도면을 포함하여, 본 명세서에 개시된 모든 특징 그리고/또는 개시된 임의의 방법 또는 프로세스의 모든 단계는, 그러한 특징 그리고/또는 단계 중 적어도 일부의 특징 그리고/또는 단계는 상호 배타적인 경우를 제외하고는, 임의의 조합으로 조합될 수 있다. 본 발명은 임의의 전술 한 실시 예들의 세부 사항으로 제한되지 않는다. 본 발명은 본 명세서(청구범위, 요약 및 도면을 포함)에 기재된 특징들의 또는 임의의 방법 또는 프로세스의 단계들의 임의의 신규한 특징 또는 임의의 새로운 조합으로 또는 임의의 신규한 단계 또는 임의의 새로운 조합으로 확장된다.

이 출원과 관련하여 이 명세서와 동시에 또는 이전에 제출되고 이 명세서와 함께 공중의 심사에 공개된 모든 논문 및 문서를 주목하고 그러한 모든 논문 및 문서의 내용은 원용하는 것으로써 본 명세서에 포함된다.

실시 예 1 - NUC-1031의 단일 부분입체이성질체

(R) 및 (S) 이성질체는 하기 조건하에 HPLC에 의해 분리될 수 있다:

장비: DAD 검출기가 있는 Agilent 1200^TM 시리즈

유속: 1.0mL/min

칼럼: Chiralpak AD^TM; 250 x 4.6 mm ID (정상 상)

온도: 주위온도(ambient)

입자 크기: 20㎛

공급(feed): MeOH에 용해; 10g/L

용매: n-헵탄/IPA 10 -> 50% 이소프로필 알코올

크로마토그램이 도 1에 나타나 있다. (S)-에피머는 8.6분에서 용리되었고 (R)-에피머는 10.3분에서 용리되었다.

특성화 방법 및 재료( Characterisation Methods and Materials): 25℃에서 Bruker Avance 500분광계로 양성자(¹H), 탄소(¹³C), 인(³¹P) 및 불소(¹⁹F) NMR 스펙트럼을 기록하였다. 스펙트럼을 중수소화된 용매 피크에 대해 자동 보정하였고, 모든 ¹³C NMR 및 ³¹P NMR을 양성자-디커플링 시켰다. 최종 화합물의 순도는 Varian Polaris C18-A(10μM)를 35분 동안 100/0에서 0/100으로 H₂O/MeOH의 농도구배 용출(gradient elution)를 갖는 분석 컬럼으로 사용하는 HPLC 분석에 의해 확인될 수 있다. HPLC 분석은 Varian Prostar(LC Workstation-Varian prostar 335 LC 검출기)에 의해 수행되었다.

2'- 데옥시 -2',2'- 디플루오로 -D-시티딘-5'-O-[페닐( 벤질옥시 -L-알라닌일)]-(S)-인산염 3(2'- Deoxy -2',2'- difluoro -D- cytidine -5'-O-[phenyl(benzyloxy-L-alaninyl)]-( S )-phosphate 3)

(ES+) m/z, found: (M + Na+) 603.14. C₂₅H₂₇F₂N₄O₈NaP required: (M+) 580.47.

³¹P NMR (202 MHz, MeOD): δ_P 3.66

¹H NMR (500 MHz, MeOD): δ_H 7.58 (d, J = 7.5Hz, 1H, H-6), 7.38-7.32(m, 7H, ArH), 7.26-7.20(m, 3H, ArH), 6.24(t, J=7.5Hz, 1H, H-1'), 5.84(d, J=7.5Hz, 1H, H-5), 5.20(AB 시스템, J_AB=12.0Hz, 2H, OCH ₂Ph), 4.46-4.43(m, 1H, H-5'), 4.36-4.31(m, 1H, H-5'), 4.25-4.19(m, 1H, H-3'), 4.07-4.00(m, 2H, H-4', CHCH ₃), 1.38 (d, J=7.2Hz, 3H, CHCH ₃).

¹⁹F NMR(470 MHz, MeOD): δ_F-118.0(d, J=241 Hz, F), - 120.24 (broad d, J=241 Hz, F).

¹³C NMR(125MHz, MeOD): δ_C 174.61(d, ³J_C _-P=5.0Hz, C=O, 에스테르), 167.63(C-NH₂), 157.74 (C=O 염기(base)), 152.10 (d, ²J_C _-P=7.0 Hz, C-Ar), 142.40(CH-염기), 137.22(C-Ar), 130.90, 129.63, 129.39, 129.32, 126.32(CH-Ar), 124.51 (d, ¹ J _C _-F=257Hz,CF₂),121.47,121.43(CH-Ar), 96.67(CH-염기), 85.92(broad signal, C-1'), 80.31(C-4'), 71.27(apparent t, ² J _C _-F=23.7Hz,C-3'), 68.03(OCH₂Ph), 65.73(d,² J _C _-P=5.30Hz,C-5'), 51.66 (CHCH₃), 20.42(d,³ J _C-P=6.25Hz,CHCH₃).

역 HPLC, 35분 동안 100/0 내지 0/100의 H₂O/MeOH로 용출에서 t_R=22.53분을 갖는 부분입체이성질체의 피크 하나를 나타냈다.

2'- 데옥시 -2',2'- 디플루오로 -D-시티딘-5'-O-[페닐( 벤질옥시 -L-알라닌일)]-(R)-인산염 4(2'- deoxy -2',2'- difluoro -D- cytidine -5'-O-[phenyl(benzyloxy-L-alaninyl)]-( R )-phosphate 4).

(ES+) m/z, found: (M + Na⁺) 603.14. C₂₅H₂₇F₂N₄O₈NaP required: (M⁺) 580.47.

³¹P NMR(202MHz, MeOD): δ_P 3.83

¹H NMR(500MHz, MeOD): δ_H 7.56(d, J = 7.5Hz, 1H, H-6), 7.38 - 7.31(m, 7H, ArH), 7.23 - 7.19(m, 3H, ArH), 6.26 (t, J=7.5Hz, 1H, H-1'), 5.88 (d, J=7.5Hz, 1H, H-5), 5.20(s, 2H, OCH ₂Ph),4.49-4.46(m,1H,H -5'), 4.38 - 4.34 (m, 1H, H-5'), 4.23 - 4.17 (m, 1H, H-3'), 4.07 - 4.01 (m, 2H, H-4', CHCH₃), 1.38(d,J=7.2Hz, 3H, CHCH ₃).

¹⁹F NMR(470MHz, MeOD): δ_F - 118.3 (d, J=241 Hz, F), - 120.38(broad d, J=241 Hz, F).

¹³C NMR(125MHz, MeOD): δ_C 174.65 (d, ³ J _C _-P=5.0Hz, C=O, 에스테르), 167.65(C-NH₂),157.75(C=O 염기), 152.10(d, ² J _C _-P=7.0Hz, C-Ar), 142.28(CH-염기), 137.50(C-Ar), 130.86, 129.63, 129.40, 129.32, 126.31(CH-Ar), 124.50(d, ¹ J _C-F=257Hz, CF₂), 121.44, 121.40(CH-Ar), 96.67(CH-염기), 85.90(broad signal, C-1'), 80.27(C-4'), 71.30(apparent t, ² J _C _-F=23.7Hz, C-3'), 68.02(OCH₂Ph), 65.50(C-5'), 51.83(CHCH₃), 20.22(d, ³ J _C _-P=7.5Hz,CHCH₃).

역 HPLC, 35분 동안 100/0 내지 0/100의 H₂O/MeOH로 용출에서 t_R=21.87분을 갖는 부분입체이성질체의 피크 하나를 나타냈다.

실시 예 2 - 시험 관내에서의 NUC -1031 및 시스플라틴 조합 연구.

2.1 재료 및 방법

세포 배양 및 시약

A2780, SK-OV-3, OVCAR-3, NCI-H460, NCI-H1975, NCI-H2122, 5637 및 HT1376을 10% 소 태아 혈청(FBS; Invitrogen-10099141)을 보충한 RPMI Medium 1640 (Invitrogen-22400105)에서 배양하였다. 모든 세포주는 5% CO₂로 37℃에서 가습 된 배양기에서 유지시켰다. 세포 배양 배지와 보충제는 Invitrogen에서 구입하였으며 조직 배양 플라스크는 Corning에서 구입하였고, 96-웰 플레이트(96-well plates) 및 384-웰 플레이트는 Greiner에서 구입했다. CellTiter-Glo 발광 세포 생존능 분석 키트(Cell Viability Assay kit)는 Promega (Promega-G7573)에서 구입하였고, 세포 카운터 Vi-Cell은 Beckman에서 구입하였고, 검출 장비 Envision은 PerkinElmer에서 구입했다.

파클리탁셀(Paclitaxcel) (참조용으로 사용)과 시스플라틴은 SELLECK에서 구입했으며, 구입 가능한 것 중에서 순도가 가장 높았다. 모든 화합물은 DMSO에서 그리고 배양 배지(culture media)에 희석되었을 때 용해도를 달성했다(용해되었다). DMSO, 화합물 용액 및 배양 배지는 용액 준비 및 희석을 위해 37℃로 가온되었다.

세포 독성 분석

8개의 세포주를 밤새 (100μL/웰) 96-웰 플레이트에 부착시키고, 3.16배 희석, 9회 투여 포인트(9 dose points), 3중(triplicate) 또는 운반체 제어의 약물 처치를 위해서, 화합물 원액을 DMSO에서 제조하고 웰에 첨가하여 지시된 최종 약물 농도를 얻었다. 최종 DMSO 농도는 0.5%이었다. 세포 ATP 농도는 약물 첨가 후 72 시간 동안 제조사의 지침에 따라 CellTiter-Glo Cell Viability Assay를 사용하여 평가 하였다.

조합 분석(Combination analyses)

조합 연구를 위해 8개의 세포주를 384 웰 플레이트(60μL/웰)에 밤새 부착시켰고, 두 화합물의 4가지 조합을 두 번 조사하였으며 이때 한 화합물의 농도를 고정하면서 두 번째 화합물의 농도(10배 희석, 5 투여 포인트)를 증가시켰으며, 화합물 원액을 DMSO에서 제조하였고 D300e 디지털 디스펜서(digital dispenser)에 의해 지시된 최종 약물 농도를 제공하기 위해 웰에 첨가하였다. 최종 DMSO 농도는 0.5%이었다.

세포 ATP 농도는 약물 첨가 72시간 후에 제조사의 지시에 따라 CellTiter-Glo 세포 생존력 분석을 사용하여 평가하였다.

따라서, 이 연구는 두 단계로 이루어져 있다:

1 단계: 단일 화합물 IC₅₀ 결정

1 단계에서 관련 세포주에서 각각의 개별 화합물(시스플라틴, 카보플라틴, 젬시타빈 및 NUC-1031)의 IC₅₀ (5 가지 이상의 농도 사용)을 결정했다.

9개 포인트에서 일련의 3.16배 희석되고 3중 테스트 된 단일 약제의 최고 농도.

최고 농도 ( uM )
세포 명	시스플라틴	젬시타빈	NUC -1031	파클리탁셀
A2780	198	1.98	1.98	1.98
SK-OV-3	198	1.98	1.98	1.98
OVCAR-3	198	1.98	1.98	1.98
NCl-H460	198	1.98	1.98	1.98
NCl-H1975	198	1.98	1.98	1.98
5673	198	1.98	1.98	1.98
HT1376	198	1.98	1.98	1.98

2 단계: 조합 치료

2 단계는 암세포 성장에 대한 화합물의 선택된 조합의 상호 작용을 판단했다. 총 8가지 조건을 관련 세포주에서 시험하였다. 이것은 2가지 화합물의 4가지 조합을 두 번 조사한 것을 의미하며, 이때 하나의 화합물의 농도를 고정하면서 다른 화합물의 농도를 증가시켰다.

조합 치료 계획이 4회, 10배 희석 5개 포인트로 수행되었다.

종양유형	세포주 특성	세포주	젬시타빈 + 시스플라틴	NUC -1031+ 시스플라틴
난소 난소 난소	백금 감수성 세포주 백금 보통 감수성 시스플라틴 보통 저항성	A2780 SK-OV3 OVCAR-3	X X X	X X X
NSCLC NSCLC	백금 감수성 세포주 백금 보통 감수성	NCl-460 NCl-1975	X X	X X
방광 방광	시스플라틴 감수성 시스플라틴 보통 감수성	5637 HT-1376	X X	X X

2.2 분석 방법(Analytical methods)

다음 용어는 화합물 조합의 효과를 특성화하기 위해 활용된다:

. "상승효과"(synergy): 단일 화합물 효과에서 예측된 것보다 조합된 화합물에서 관찰된 효과가 강함.

. "상가효과"(additive): 조합된 화합물에서 관찰된 효과는 단일 화합물의 효과의 합으로부터 예측한 효과와 동일.

. "길항작용"(antagonism): 단일 화합물 효과에서 예측된 것보다 조합된 화합물에서 효과가 유의하게 약함.

처우- 탈랄레이 방법( Chou - Talalay Method)

약물 조합에 대한 Chou-Talalay 방법은 질량 작용 법칙으로부터 유도된 메디안 효과 방정식(median-effect equation)을 기반으로 하며, 얻어지는 Chou-Talalay의 조합 지수(CI)는 약물 조합에서 상가효과 (CI = 1), 상승효과(CI＜1)에 대한 정량적 정의를 제공한다.

블리스 독립 모델 ( Bliss independence model)

이 방법은 약물-약물 상호 작용에 영향이 없다는 가정에 기초하여 얻어진 예측된 조합 반응(YP)과 관찰된 조합 반응(YO)을 비교한다.

두 약물 A와 B가 모두 종양 성장을 억제한다고 가정한다. 복용량 a에서 약물 A는 종양 성장의 Y^a%를 억제하고 약물 B는 용량 b에서 종양 성장의 Y^b%를 억제한다. 두 가지 약제가 독립적으로 작용할 경우, 조합된 억제 퍼센트 Y^ab, P는 확률 이론의 완전한 가산을 사용하여 예측 될 수 있다: Y^ab, P = Y^a + Y^b- Y^aY^b

곡선 이동 분석(Curve shift analysis)

두 약물이 독립적으로 작용하고 약물 A의 농도를 고정하고 약물 B의 농도를 변경하고, 약물 A의 고정된 농도를 기준으로 조합 효과를 정규화(normalize)하고, 약물 B로부터 얻은 용량 효과 곡선들을 비교하고, 조합-효과 곡선들의 좌측 이동은 상승 효과와 관련되고, 우측 이동은 길항작용을 나타내며 중첩은 상가효과를 가리킨다.

2.3 결과

1 단계: 단일 약제로 세포 독성 분석

이 연구의 1 단계에서 2 단계의 조합 작업에 가장 적절한 농도를 알아내기 위해 단일 약제 시스플라틴, NUC-1031 및 젬시타빈의 세포 독성이 조사되었다.

시험된 관련 암 세포주에서의 단일 약제 처리에 대한 절대 IC₅₀, 상대 IC₅₀ 및 최대 억제 결과 요약

번호	세포주	CTG 분석
		시스플라틴			젬시타빈			NUC-1031
		Ab IC50 (uM)	IC50 (uM)	최대 억제_%	Ab IC50 (uM)	IC50 (uM)	최대 억제_%	Ab IC50 (uM)	IC50 (uM)	최대 억제_%
1	A2780	10.96	10.07	99.05	0.01	0.01	81.15	0.025	0.016	79.15
2	SK-OV3	45.61	33.73	86.42	0.02	0.02	65.74	0.07	0.06	61.59
3	OVCAR-3	28.32	23.46	79.59	>1.98	0.02	6.95	>1.98	0.20	11.76
4	NCl- H460	2.59	2.57	97.56	0.01	0.01	96.28	0.04	0.04	91.98
5	NCl- H1975	69.55	69.23	103.60	0.08	0.02	62.12	>1.98	0.37	37.91
6	5637	13.70	13.21	101.74	0.01	0.01	84.49	0.20	0.12	77.88
7	HT1376	20.51	18.36	71.90	>1.98	>1.98	9.60	>1.98	>1.98	-2.54

데이터 개요-세 가지 분석 방법의 결과 요약

하기 표 4는 조합된 화합물 NUC-1031 및 시스플라틴의 효과를 특성화하기 위해 3가지 방법론 (Chou-Talalay, Bliss Independence 및 Curve Shift)을 이용하는 분석의 결과를 나타낸다.

암세포 성장에 대한 조합 화합물 효과를 평가하기 위해 이용된 3가지 분석 방법의 결과

세포주	고정 농도	방법
		Chou-Talalay	Bliss independence	Curve shift
A2780(난소)	아셀라린 0.025μM	상가효과	상가효과	상가효과
	시스플라틴 11μM
SK-OV3(난소)	아셀라린 0.072μM	측정불능	상가효과	상가효과
	시스플라틴 45.6μM
OVCAR-3(난소)	아셀라린 1.98μM	측정불능	상가효과	상가효과
	시스플라틴 28.3μM
NCl-H460(폐)	아셀라린 0.04μM	길항효과	길항효과	상가효과
	시스플라틴 2.6μM		시스플라틴 2.6μM +아셀라린0.0198μM
NCl-H1975(폐)	아셀라린 1.98μM	상가효과	상가효과	상가효과
	시스플라틴 70μM
5637(방광)	아셀라린 0.199μM	상승효과	상가효과	길항효과
	시스플라틴 13.7μM
HT-1376(방광)	아셀라린 1.98μM	상승효과	상승효과	상승효과
	시스플라틴 20.51μM

세 가지 분석 방법 모두에서 일치된 결과는 HT1376 암 세포주에 대한 두 가지 화합물 조합으로 상승효과가 관찰되었고, 이는 표 5에 요약되어 있다.

3가지 방법에 걸쳐 관찰된 조합 치료의 상승효과

세포주	고정 농도	일련의 용량-효과(serial dose-effect)
HT1376(방광)	젬시타빈 1.98μM	시스플라틴
HT1376(방광)	NUC-1031 1.98μM	시스플라틴

개별 방법론 결과

. Chou - Talalay 방법을 사용하여 분석된 데이터

CI <1, 상승효과를 암시

Cis: 시스플라틴, Ace: 아셀라린, Gem: 젬시타빈

CI> 1, 길항작용을 암시

. 곡선 이동 방법을 사용하여 분석된 데이터

방광암 세포주 HT1376에서 아래에 나타낸 상승효과가 도 2에 도시되어 있다.

	젬시타빈(1.98uM)+시스플라틴	시스플라틴	아셀라린(1.98uM)+시스플라틴	시스플라틴 2
IC50	30.30	64.45	36.27	57.98

. Bliss Independence 방법을 사용하여 분석한 데이터

세포주	고정 농도	일련의 용량-효과(Serial dose- effect)
상승효과
HT1376	젬시타빈 1.98uM	시스플라틴
HT1376	시스플라틴 20.51uM	젬시타빈
HT1376	NUC-1031 1.98uM	시스플라틴
HT1376	시스플라틴 20.51uM	NUC-1031

실시 예 3- NUC -1031 및 시스플라틴 조합에 대한 추가 시험관 내 연구

세포 배양 및 시약

SKOV3 세포들은 미국형 배양 수집(American Type Culture Collection, ATCC)으로부터 구입하였다. SKOV3 세포들은 세포 배양 플라스크에서, 완전한 배지로 알려진, 10% Gibco^TM FBS (Life Technologies; 10270-106) 및 1% Gibco^TM Penicillin-Streptomycin (Life Technologies; 15140122)와 함께 GibcoTM RMPI Medium 1640 + GlutaMAXTM-I (Life Technologies; 61870-010)에서 37℃ 및 5% CO₂ 에서 배양되었다. 시스플라틴은 TEVA UK Limited (PL 00289/1146)로부터 구입하였다. 플루바스타틴(Fluvastatin)과 술포라판(Sulforaphane)은 모두 Merck Millipore Corporation에서 구입했다(카탈로그 번호 344096 및 574215). (S)-NUC-1031은 NuCana® Ltd.에서 제공되었다.

약물 적용 세포 배양( Cell Culture with Drug Applications )

SKOV3 세포들을 Costar® 3596 96-웰 플레이트의 중간 60 웰에 웰당 200㎕로 250 세포들로 접종(plate)하였고 외부 36 웰에는 각각 200㎕의 PBS가 채워졌다. 세포들을 다른 약물 화합물을 첨가하기 전에 48시간 동안 완전한 배지에서 성장시켰다. 단일 약제의 경우, 10개의 상이한 농도의 완전한 배지에서 시스플라틴, (S)-NUC-1031, 플루바스타틴 및 설포라판을 중간 60 웰에 첨가하였다(0 일째). 각 농도는 6중(sextuplicate) 적재되었다. 세포들을 화합물들에 24시간 노출 시켰고 화합물들은 순수한 완전한 배지로 대체되었다. 플루바스타틴 실험을 24시간이 아닌 4일 노출로 반복했다. 술포호다민 B(Sulforhodamine B) 분석을 위해 약물 화합물을 첨가 한 후 4일째에 플레이트를 50㎕ 25% TCA 용액으로 4℃에서 60분 동안 고정시켰다(하기 참조).

두 약제의 조합을 위해, 다른 농도의 시스플라틴 및 플루바스타틴, 그리고 다양한 농도의 플루바스타틴과 조합되는 2종의 고정된 농도의 시스플라틴을 Costar® 3596 96-웰 플레이트의 중간 60개의 웰에 3중 접종하였다. 외부 36개의 웰을 각각 200㎕의 PBS로 채웠다(0 일째). 세포들을 약물 화합물에 24시간 노출시키고, 화합물을 흡인하고 1일째(Day 1) 완전한 순수 배지로 대체 하였다. 동일한 실험이, 설포라판과 시스플라틴의 조합 및 (S)-NUC-1031과 시스플라틴의 조합에 대해서 반복하였고 각 농도는 3중 적재됐다. 술포호다민 B(Sulforhodamine B) 분석을 위해 4일째에 플레이트를 50㎕ 25% TCA 용액으로 4℃에서 60분 동안 고정시켰다(하기 참조).

술포호다민 B ( SRB ) 비색 분석( Sulforhodamine B ( SRB ) colorimetric assay )

TCA 용액을 첨가한 후, 플레이트를 흐르는 수돗물로 10회 세척하고 오븐 내에서 50℃에서 건조시켰다. 그 다음, 세포를 SRB 염료 50μl로 염색하고 SRB 첨가 후 염료를 1% 빙초산(glacial acid)으로 4회 30분 동안 세척하였다. 이어서 플레이트를 오븐에서 건조시켰다. SRB 염료를 로커(rocker)에서 60분간 10mM 트리스(Tris) 완충 용액 150㎕에 용해시켰다. 플레이트를 Biohit BP800 Microplate Reader(Biohit Healthcare)에서 판독하고 흡광도를 540nm에서 측정하였다. 단일 약제 및 조합 약제 실험의 결과를 사용하여 50% 억제를 유발하는 약물의 농도인 약물 화합물의 IC⁵⁰을 Prism Software (GraphPad)를 사용하여 계산하였다. 두 가지 약제의 조합 결과는 CalcuSyn Software (Biosoft)를 사용하여 화합물의 조합 지수 (CI)를 계산하는 데 사용되었다.

결과:

시스플라틴 및 술포라판의 IC₅₀은 각각 2.436μM 및 7.002μM이었다. 관찰 불가능한 억제 효과로 인해 플루바스타틴 및 NUC-1031의 IC₅₀을 계산할 수 없었다. 플루바스타틴과 조합한 시스플라틴의 CI 값은 0.355에서 0.557로서 상승효과 보였다. 술포라판과 조합한 시스플라틴의 CI 값은 0.891에서 1.474로서 길항작용을 보였다. SKOV3 세포에서 0.1 ~ 0.5μM 및 1 ~ 2μM에서의 NUC-1031와 조합한 시스플라틴의 CI 값은 각각 0.871 ~ 0.957 및 1.067 ~ 1.756이다.

결론

상승효과 저해는 SKOV3 세포에서 시스플라틴과 함께 사용한 NUC-1031 (0.1 내지 0.5μM)의 저농도에서 발견되었는데, 보다 낮은 농도의 약물이 일반적으로 보다 낮은 독성을 제공하는바, 이 같은 낮은 농도로 인해 임상에 사용하기가 쉽다. 이 결과는 유효성과 안전성을 보장하기 위해 환자를 테스트하기 전에 정확한 최적의 조합 투여량에 대한 추가 조사의 기초가 될 수 있다. 개인들에서 조합의 세포 독성 및 부작용을 평가함으로써 개인화된 치료법은, 유전적 프로파일과 약물 반응의 다양성으로 인해 최적화되고, 각 환자는 최적의 용량으로 약물을 투여받을 수 있다.

실시 예 4-ABC-008 임상 연구 ( 시스플라틴과 조합한 NUC - 1031)로부터의 dFdCTP 농도의 약물동력학적 분석 및 ProGem1 임상 연구 (NUC-1031 단독)로부터의 결과와의 비교.

초기 약물동력학적 분석이 ABC-008 임상 연구에서 처음 3명의 환자에게서 얻은 샘플에 대해 수행되었다.

환자 세부 정보는 다음과 같다.

환자 1: 71세 - 전이성 담도암(biliary track carcinoma) - 시작 용량: 625mg/m₂ (S)-NUC-1031 + 25mg/m²시스플라틴

환자 2 : 78세 - 전이성 담도암 - 시작 복용량: 625mg/m₂ (S)-NUC-1031 + 25mg/m²시스플라틴

환자 3 : 75세 - 전이성 담도암 - 시작 복용량: 625mg/m₂ (S)-NUC-1031 + 25mg/m²시스플라틴

NUC-1031과 시스플라틴 모두 21일 사이클의 1일과 8일에 투여되었다.

루어록(Luerlock) 주사기에 적절한 용량의 NUC-1031 625mg/m²가 준비되었다. 주어진 복용량은 표준 신체 표면적(BSA) 계산을 사용하여 피험자의 신장과 체중을 기준으로 했다. NUC-1031이 들어있는 주사기를 연장선(extension line)에 연결하기 전에 폴리에틸렌 연장선을 세척 용액 1.5ml로 채웠다.

연장선이 환자의 중심정맥접근장치(CVAD)에 연결하고 NUC-1031을 주사기 펌프를 사용하여 20ml/시간의 속도로 주입했다.

주입이 완료되면 NUC-1031 주사기를 연장선에서 분리한 다음 연장선을 세척 용액 3ml로 세척하였다.

재료 및 방법

1. 재료

dFdCTP 기준 화합물은 영국 Biorbyt에서 입수했다. 림포프렙(Lymphoprep)은 영국 Technologies Inc.에서 입수하였다. 과염소산(PCA), 초산 암모늄(NH₄Ac) 및 암모니아는 모두 영국 Sigma Aldrich로부터 입수하였다. LC-MS 등급 물, 메탄올, 아세토니트릴 및 포름산은 모두 영국 Fisher Scientific에서 입수했다.

2. 방법

A. 혈액 수집 및 PBMCs 준비: 헤파린 처리된 혈액 수집 튜브를 사용하여 6ml의 혈액을 수집하였다. 원심 분리 및 혈장 분리 후 버피코트(buffycoat)를 수집하여 3ml의 림포프렙 밀도 구배가 들어있는 새로운 시험관으로 옮겼다. 원심 분리 후, PBMC 층을 함유하는 상부 계면을 새로운 시험관으로 옮겼다. 인산 완충 식염수 (PBS)로 세척한 후, PBMC를 100㎕ PBS에 재현탁 시켰다. 그런 다음 0.8M PCA 100μl를 추가하고 혼합물을 vortex 혼합하고 원심 분리 한 다음 상층액 100μl를 새 시험관으로 옮겼다. PCA 추출물은 분석 시점까지 -80℃에서 보관했다.

B. 샘플 추출(PBMC): 50μl의 1M NH4Ac를 사용하여 PCA 추출물을 완충시킨 다음 10% 암모니아 용액 20μl를 사용하여 중화시켰다. 마지막으로, 5μl 함유 내부 표준 8-ChloroATP 및 5㎕ 탈이온수를 첨가하였다. 추출물을 LC-MS 바이알에 옮기고 10㎕를 UPLC-MS/MS 시스템에 주입하였다.

3. 크로마토그래피 방법 및 시료 분석

분석물 10mg/mL 원액을 준비하고 사용할 때까지 -80℃에서 일정 분량 동결했다. 분석물을 Biobasic AX, 5 μm, 50 x 2.1 mm 컬럼(Thermo Electron Corporation, Murrieta, CA, USA)과, ACN/H₂O (30:70 v/v), pH 6.0 중의 10mM NH₄Ac (A)와 ACN/H₂O (30:70 v/v), pH 10.5 중의 1mM NH₄Ac (B)의 혼합물로 이루어진 이동상이 장착된 초-고성능 액체 크로마토그래피 시스템(Accela UPLC, Thermo Scientific, UK)을 사용하여 분석했다. 완충액 A = 95%, 0 내지 0.5분, 1.25분 동안 95 내지 0%, 1.75분 동안 0%에서 유지, 0.1분 동안 0 내지 95%, 2.9분 동안 95%로 종결, 유속은 모두 500㎕/분인 이동상 농도 구배를 사용하였다.

4. 질량 분석법

관심 있는 화합물의 용출을 전기분사 이온소스가 장착된 삼중 단 4중 밴티지(Vantage) 질량 분석 시스템 (Thermo Scientific, UK)을 사용하여 검출하였다. 시료는 MRM (Multiple Reaction Monitoring), 양극 (+ ve) 및 음극 (-ve) 이온 모드에서 3500V 및 3000V의 분사 전압에서 각각 분석되었다. 질소는 쉬스(sheath) 및 보조 기체로서 각각 임의 유닛의 50 및 20의 유속으로 사용되었다. 아르곤은 충돌 가스로서 1.5 mTorr 압력으로 사용되었다.

결과

초기 결과는 아래 표 10 및 표 11에 제시되어있다.

ProGem1와 ABC-008 연구의 평균 PK 파라미터 비교

NUC-1031에 대한 평균 플라즈마 PK 파라미터 (정규화 없음)
	ProGem1 (n=67) (NUC-1031 단독 약제)	ABC-008 (n=3) (NUC-1031와 시스플라틴 조합)
Mean C_max (μg/ml)	66.5	124.6
Median T_max (hr)	0.5	0.5
Mean AUC_0-24(μg/ml.hr)	66.5	142.8
Mean terminal t_1/2(hr)	0.9	0.5
Mean clearance (L/hr)	5.2	8.3

ProGem1와 ABC-008 연구의 평균 PK 파라미터 비교

dFdCTP에 대한 평균 플라즈마 PK 파라미터 (정규화 없음)
	ProGem1 (n=67) (NUC-1031 단독 약제)	ABC-008 (n=3) (NUC-1031와 시스플라틴 조합)
Mean C_max (pmol/million cells)	391.8	350.4
Median T_max (hr)	0.5	1
Mean AUC₀ _-24(pmol/million cells.hr)	1379.0	1130.0
Mean terminal t_1/2(hr)	5.7	20.6
Mean clearance (L/hr)	0.2	0.3

토론

NUC-1031 혈장 PK 파라미터는 ProGem1 (단일 약제 NUc-1031을 사용한 First-In-Human Phase I 연구)과 비교하여 2.1배의 AUC 증가와 1.9배의 Cmax 증가를 나타냈다. NUC-1031 혈장 PK 파라미터는 또한 단일 약제 NUC-1031에 비해 반감기가 3.6배 증가한 것으로 나타났다.

세포 내 dFdCTP(활성 항-암 모이티) 파라미터는 눈에띄는 더 긴 t_1/2를 제외하고는 ProGem1과 매우 유사하였다. 이 같은 긴 t_1/2는 PK 샘플링 4시간에 걸쳐 더 높은 수준의 세포 내 dFdCTP를 유지하기 때문일 수 있다. 시스플라틴과 조합한 NUC-1031 치료 이후의 dFdCTP 수준에서 관찰된 상승효과는, 높은 수준의 dFdCTP가 긴 시간 동안 종양 성장을 차단하는데 요구되고 단일 약제를 투여한 후 재발하는 암을 치료하는데 요구되는 것 같은 암 치료와 같은 광범위한 임상 효용을 포함하여, 상당하고 강력한 임상적 의의를 가진다.

본 명세서에 개시된, 백금 계 항암제와 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물과의 조합을 사용한 치료에서 관찰되는 dFdCTP의 반감기 증가는, 여러 상황에서 암 치료에 이점을 제공한다. 주요한 이점은 증가한 반감기에 따른 복용 방법 유연성(dosing flexibility)에서 찾을 수 있다. 예를 들어 예를 들어, 이러한 의학적 용도는 활성제를 사용하는 치료의 발생 빈도가 현재 사용되는 것보다 낮은 효과적인 치료 요법을 가능하게 한다. 단지 예시로서, 본 발명의 치료는 하루의 과정(the course of day) 동안 다중 투여를 요구하기보다는 치료의 당일 1회로 제공될 수 있다. 적절하게는, 치료의 발생(incidences of treatment), 예를 들어, 이러한 단일 치료의 발생은,장기 투여보다는 예를 들어 주입에 의한 활성 약제의 비교적 신속한 제공만을 필요로 할 수 있다. 사용되는 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염 및 백금 계 항암제는 환자에게 1일 1회 투여용 약제로서 (조합 또는 개별적으로) 제형화 될 수 있다. 이러한 1일 1회 투여를 위한 이 같은 약제는 재발 암의 치료에 유용할 수 있다.

함께 혹은 순차적으로 백금 계 항암제와 함께 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염을 사용하는 본 발명에 따른 치료는 2일마다, 3일마다, 4일마다, 5일마다, 6일마다, 매주 제공되는 치료에 사용될 수 있다. 실제로, 본 발명에 따른 치료는 서로 1, 2 또는 3주 간격으로 제공된 치료에 사용될 수 있다.

실시 예 5 - ABC-08 연구에서 현재까지 얻은 주요 무 진행(progression free) 생존 시점(survival time points)과, 젬시타빈 단일 약제 및 젬시타빈 / 시스 플라틴 조합 요법에서 ABC-02 연구에서의 무 진행 생존에서 확립된 중앙 시점(median time points)의 비교(Comparison of key progression free survival time points obtained to date in the ABC-08 study and associated radiological responses, versus median time points established for progression free survival in the ABC-02 study in single agent Gemcitabine and Gemcitabine/Cisplatin combination therapy)

ABC-02 연구 배경:

ABC-02 연구는 젬시타빈/시스플라틴 조합 요법을 전이성 담도암 환자에서 젬시타빈 단독 요법과 비교하여, 우수한 표준 치료 요법으로 확립하였다. 젬시타빈/시스플라틴을 투여받은 환자의 무 진행 생존율은 8개월이었다. 단일 약제 요법으로 젬시타빈을 투여받은 환자의 무 진행 생존율은 5개월이었다.

(Valle J, Wasan H, 2010 년 Palmer DH 외)

ABC-08 비교 :

ABC-08 연구에서 지금까지 얻은 무 진행 생존 시점은 단일 약제 젬시타빈과 젬시타빈/시스플라틴 병용 요법 모두에 대해 확립된 중앙값(median)을 초과했다. 구체적인 사례는 다음과 같다.

환자 02 : - NUC-1031 투여량이 375mg/m²로 60% 감소하고 시스플라틴 25% 감소가 뒤따랐다. 그럼에도, 아래에 상세히 설명된 바와 같이, 이 환자는 종양 부피에서 일련의 지속적인 감소(sustained reductions)를 보였다.

이 환자는 9개월의 무 진행 생존 시점을 달성했으며 현재 진행 중입니다. 이것은 ABC-08 연구에서 관찰된 가장 긴 무 진행 생존 시점이며 현재 ABC-02 연구에 의해 설정된 중앙값을 초과한다.

이 같은 환자는 여러 방사선 검사에서 종양의 양이 지속적으로 줄었다.

. 3월 스캔: 17% 감소 - 안정적인 질병(Stable Disease)

. 6월 스캔: 24% 감소 - 안정적인 질병

. 9월 스캔: 41% 감소 - 부분 응답(Partial response)

환자 05 - 55세 - 전이성 담도 암종 - 시작 복용량 : 625mg/m² (S) -NUC-1031 + 25mg/m² 시스플라틴

이 환자는 5.5 개월의 무 진행 생존 시점을 달성했으며 현재 진행 중이며 젬시타빈 단일 약제를 투여받는 환자의 무 진행 생존 시점 5개월을 초과한다.

이 환자는 첫 번째 방사선 평가에서 종양 부피가 현저하게 감소한 것으로 나타났다.

. 3월 스캔: 54% 감소 - 부분 응답.

이러한 결과들은 개별 환자의 것이지만, 본 발명의 조합 요법에 대한 유망한 임상 결과를 대변한다.

Claims

시스플라틴, 피코플라틴, 리포플라틴 및 트리플라틴에서 선택되는 백금 계 항암제와 조합하여 암을 치료하는데 사용하기 위한 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염(NUC-1031), 또는 그것의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물.
청구항 1에 있어서,
상기 백금 계 항암제는 시스플라틴인 것을 특징으로 하는 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염, 또는 그것의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물.
청구항 1 또는 청구항 2에 있어서,
상기 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염은 부분입체이성질체적으로 순수한 형태인 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-(S)-인산염인 것을 특징으로 하는 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염, 또는 그것의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물.
청구항 1 또는 청구항 2에 있어서,
상기 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염은 인산염 부분입체이성질체들의 혼합물인 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염, 또는 그것의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물.
청구항 1 내지 청구항 4 중 어느 한 청구항에 있어서,
상기 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염은 유리 염기의 형태인 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염, 또는 그것의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물.
청구항 1 내지 청구항 5 중 어느 한 청구항에 있어서,
상기 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염은 정맥 내 투여되는 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염, 또는 그것의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물.
청구항 1 내지 청구항 6 중 어느 한 청구항에 있어서,
상기 암은 난소암, 방광암, 비-소세포 폐암 및 담도암 중에서 선택되는 고형 종양인 것을 특징으로 하는, 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염, 또는 그것의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물.
청구항 7에 있어서,
상기 담도암은 담낭암, 말단 담관암, 바터씨팽대부 종양, 간내 담관암, 간문부 담관암으로 부터 선택되는 것을 특징으로 하는 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염, 또는 그것의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물.
청구항 1 내지 청구항 8 중 어느 한 청구항에 있어서,
상기 암은 재발암인 것을 특징으로 하는 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염, 또는 그것의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물.
청구항 1 내지 청구항 8 중 어느 한 청구항에 있어서,
상기 암은 전이암인 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염, 또는 그것의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물.
청구항 1 내지 청구항 10 중 어느 한 청구항에 있어서,
상기 암은 상기 백금 계 항암제에 대해 불응성, 저항성 또는 부분적 저항성인 것을 특징으로 하는 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염, 또는 그것의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물.
청구항 1 내지 청구항 9 중 어느 한 청구항에 있어서,
상기 암은 상기 백금 계 항암제에 감수성인 것을 특징으로 하는, 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염, 또는 그것의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물.
청구항 1 내지 청구항 11 중 어느 한 청구항에 있어서,
각 투여에서 상기 NUC-1031의 투여량은 250mg/m² 내지 1250mg/m²이고,
각 투여에서 상기 백금 계 항암제 투여량은 10mg/m² 내지 200mg/m²인 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염, 또는 그것의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물.
대상에게 시스플라틴, 피코플라틴, 리포플라틴 및 트리플라틴에서 선택되는 백금 계 항암제와 조합하여, 약학적으로 유효량의 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염(NUC-1031), 또는 그것의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물 투여함을 포함하는, 방법.
청구항 14에 있어서,
상기 백금 계 항암제는 시스플라틴 인 방법.
청구항 14 또는 청구항 15에 있어서,
상기 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염은 부분입체이성질체적으로 순수한 형태인 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-(S)-인산염인 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 14 또는 청구항 15에 있어서,
상기 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염은 인산염 부분입체이성질체들의 혼합물인 방법.
청구항 14 내지 청구항 17 중 어느 한 청구항에 있어서,
상기 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염은 유리 염기의 형태인 방법.
청구항 14 내지 청구항 18 중 어느 한 청구항에 있어서,
상기 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염은 정맥 내 투여되는 것을 특징으로 하는 방법
청구항 14 내지 청구항 18 중 어느 한 청구항에 있어서,
상기 암은 난소암, 방광암, 비-소세포 폐암 및 담도암 중에서 선택되는 고형 종양인 것을 특징으로하는 방법.
청구항 20에 있어서,
상기 담도암은 담낭암, 말단 담관암, 바터씨팽대부 종양, 간내 담관암, 간문부 담관암으로 부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 14 내지 청구항 21 중 어느 한 청구항에 있어서,
상기 암은 재발암인 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 14 내지 청구항 22 중 어느 한 청구항에 있어서,
상기 암은 전이성 암인 방법.
청구항 14 내지 청구항 23 중 어느 한 청구항에 있어서,
상기 암은 상기 백금 계 항암제에 대해 불응성, 저항성 또는 부분적 저항성인 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 14 내지 청구항 23 중 어느 한 청구항에 있어서,
상기 암은 상기 백금 계 항암제에 감수성인 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 14 내지 청구항 25 중 어느 한 청구항에 있어서,
각 투여에서 상기 NUC-1031의 투여량은 250mg/m² 내지 1250mg/m²이고,
각 투여에서 상기 백금 계 항암제 투여량은 10mg/m² 내지 200mg/m²인 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 14 내지 청구항 26 중 어느 한 청구항에 있어서,
상기 조합에 의한 투여는 10시간 이상의 dFdCTP의 세포 내 t_1/ ₂ 를 제공하는 방법.
청구항 14 내지 청구항 27 중 어느 한 청구항에 있어서,
상기 조합에 의한 투여는 18시간 이상의 dFdCTP의 세포 내 t_1/ ₂ 를 제공하는 방법.
시스플라틴, 피코플라틴, 리포플라틴 및 트리플라틴에서 선택되는 백금 계 항암제와 조합되는 젬시타빈-[페닐(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염, 또는 그것의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물, 그리고 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약학적 제형.
함께 사용되는 두 개의 분리된 제형으로서,
상기 제형은:
젬시타빈-[페닐-(벤즈옥시-L-알라닌일)]-인산염 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물, 그리고 적어도 하나의 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 제1 제형; 그리고,
시스플라틴, 피코플라틴, 리포플라틴 및 트리플라틴으로부터 선택되는 백금 계 항암제 그리고 적어도 하나의 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 제2 제형을 포함하는, 키트.