KR20180073670A - 암 줄기 세포를 표적화하여 공격성 암을 치료하기 위한 항체 - Google Patents

암 줄기 세포를 표적화하여 공격성 암을 치료하기 위한 항체 Download PDF

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존 엘. 마그나니
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글리코미메틱스, 인크.
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Abstract

본원에는 E-셀렉틴이 결합할 수 있는 암을 가진 환자를 확인하고 치료하는 방법 및 시스템이 개시된다. E-셀렉틴 결합 암은 이의 세포 표면 발현 시알릴 Lea 및 시알릴 Lex 탄수화물 에피토프에 의해 확인되고, 상기 암은 시알릴 Lea/x, 예컨대 HECA-452에 결합하는 항체에 의해 확인될 수 있다. 상기 암은, E-셀렉틴의 길항제, 예컨대 글리코모방체 화합물에 의해 그리고 E-셀렉틴의 결합을 차단 및/또는 파괴하는 시알릴 Lea/x 도메인을 함유하는 세포 표면 탄수화물을 표적으로 하는 면역요법에 의해 치료될 수 있다.

Description

암 줄기 세포를 표적화하여 공격성 암을 치료하기 위한 항체
본 출원은 35 U.S.C. § 119(e) 하에서 미국 가출원 번호 62/250,406(2015년 11월 3일 출원)에 대한 우선권을 주장하며, 이 출원은 그 전문이 본원에 참고 인용된다.
본 개시내용은 약물저항성 암, 재발 가능성이 높은 암, 질병 진행이 가속화된 암 및/또는 생존율을 감소시키는 암을 비롯한 공격성 암을 가진 환자를 치료하기 위한 방법 및 시스템을 제공한다. 본 개시내용은 또한 암 줄기 세포 및/또는 공격성 암 세포(예, 약물저항성이 있을 수 있는 암 세포, 환자에게 재발을 유도할 가능성이 높은 암, 질병 진행을 가속화시킬 수 있는 암 및/또는 생존율을 감소시키는 것과 관련된 암)를 확인하고, 특정 세포 표면 탄수화물(세포 표면 결합 부위)을 차단 및/또는 파괴함으로써 상기 암을 치료하기 위한 방법 및 조성물을 또한 제공한다. 혈액 분획 샘플(예, 혈장 또는 혈청 샘플)을 비롯한 혈액 샘플을 사용하여 상기 암을 확인하기 위한 방법 및 조성물이 또한 개시된다.
모든 암 세포가 동일한 것은 아니다. 관련 암 세포 군(예, 다발성 골수종 세포주 도는 전립성 암 종양) 내에서도, 유전자 발현 및 세포 표면 에피토프가 다양하다. 암 줄기 세포로도 지칭되는 특정 암 세포는 새로운 종양을 만들 수 있고, 환자에서 더 많은 수의 상기 줄기 세포의 존재는 좋지 않은 예후와 관련된다. 이러한 암 줄기 세포는 또한 더 많은 공격성 암 특성, 예컨대 약물 저항성, 질병 진행 가속화, 생존 기간 단축 및 재발 발생 증가를 나타낼 수 있다. 암 줄기 세포를 확인하고 환자로부터 이러한 세포를 제거하는 것은 도전 과제였다. 하기는 이러한 문제를 극복하는 수단을 제공할 수 있다.
암 줄기 세포는, E-셀렉틴에 결합할 수 있는 세포 표면 탄수화물을 발현한다는 것을 발견하였다. E-셀렉틴에 결합할 수 있는 세포 표면 탄수화물은 시알릴 Lea 및 시알릴 Lex 탄수화물로 공지된 탄수화물 에피토프를 함유한다. 이러한 시알릴 Lea 및 시알릴 Lex 탄수화물은 또한 단클론 항체 HECA-452에 결합한다는 것을 발견하였다. 즉, E-셀렉틴 및 HECA-452 항체와 모두 결합하는 시알릴 Lea 및 시알릴 Lex(시알릴 Lea/x)에 대해 공통인 삼당류 도메인이 존재한다. 문헌[Berg et al., "A Carbohydrate Domain Common to Both sialyl Lea and sialyl Lex Is Recognized by the Endothelial Cell Leukocyte Adhesion Molecule ELAM 1," J. Biol. Chem. (1991) 266:14869-72]을 참고하고, 이에 의해 참고 인용된다. E-셀렉틴에 결합할 수 있는 암 세포는 화학요법과 같은 암에 대한 특정한 표준 치료를 견딜 수 있다. 즉, 시알릴 Lea/x 도메인(이에 따라, E-셀렉틴과도 결합될 수 있음)에 결합할 수 있는 암 세포 집단은 약물 저항성, 질병 진행 가속화, 생존 기간 단축 및 재발 발생 증가가 서로 관련된다. 시알릴 Lea/x 결합 도메인과 항체를 결합시키는 탄수화물 에피토프를 발현하는 암 세포(예, HECA-452 항체와 결합할 수 있는 암 세포)는 또한 혈관 내피세포 상에 발현되는 E-셀렉틴에 결합할 수도 있기 때문에 화학요법 치료를 견뎌낼 수 있는 것으로 간주된다. 따라서, 예를 들면, 골수 내 보호성 적소에서 E-셀렉틴에 결합하였을 때, 이러한 암 세포는 화학요법과 같은 암 치료에서 살아남을 수 있다. 상기 암 세포는 직접적으로(예, 암 세포 자체에 결합함) 또는 간접적으로(예, 상기 암과 관련된 혈액에서 분자를 검출함) 검출될 수 있다.
이러한 개시내용에 따르면, 암 줄기 세포를 확인하는 데 사용될 수 있는 시알릴 Lea/x에 결합하는 항체의 발견 및 생성을 위한 방법 및 조성물이 제공된다. 이러한 방법 및 조성물을 이용하는 다수의 암 치료가 또한 본원에 제공된다. 특히, 본 개시내용에 제공된 항체는 E-셀렉틴에도 결합하는 세포 표면 탄수화물을 발현하는 암 세포 집단을 확인할 수 있다. 이러한 확인은 직접적(예, 세포 표면 탄수화물을 발현하는 세포의 검출) 또는 간접적(예, 혈액에서 분비되거나 그렇지 않은 경우 혈액에 존재하는 분자 상의 탄수화물 에피토프의 검출)일 수 있다. 시알릴 Lea/x에 결합하는 임의의 항체, 올리고뉴클레오티드 또는 펩티드 분자, 예컨대 압타머 또는 아피머는, E-셀렉틴에도 결합하는 세포 표면 탄수화물을 발현하는 암 세포 집단을 확인 (또는 혈액에 존재하는 탄수화물 에피토프를 확인)하는데 사용될 수 있다.
개시된 시알릴 Lea/x 결합 항체를 암 세포에 또는 혈액에 존재하는 분자 상의 탄수화물 에피토프에 대해 결합시키는 것을 기초로, 공격성 암을 가진 암 환자를 확인할 수 있다. 본 개시내용은, 세포 표면 탄수화물을 발현하거나 또는 혈액의 분자 상의 탄수화물 에피토프를 생성하는 암을 가진 환자를 세포 표면 탄수화물의 기능을 방해하는 요법에 의한 시알릴 Lea 및 시알릴 Lex에 공통인 에피토프로 치료하는 것을 고려한다. 특히, E-셀렉틴을 차단 또는 그렇지 않은 경우 억제함으로써, E-셀렉틴은 종양 세포 표면 탄수화물에 결합할 수 없는 것으로 생각된다. E-셀렉틴에 결합할 수 없다면, 암 줄기 세포는 화학내성(chemoresistant)이 되거나 골수 내 보호성 적소에 숨을 수 없고 화학요법 치료를 피할 수 없다. 예시는 화합물, 예컨대 글리코모방체(glycomimetic) 화합물, 또는 시알릴 Lea 및 시알릴 Lex에 공통되는 에피토프를 가진, 세포 표면 탄수화물의 기능을 방해하는 항체에 결합하는 세포 표면 탄수화물을 표적으로 하는 면역요법에 의한 치료를 포함한다. 이러한 치료에 적당한 글리코모방체 화합물은 하기 화학식 (I)을 포함할 수 있다:
[화학식 (I)]
Figure pct00001
상기 식에서,
R1은 C1-C8 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, C1-C8 할로알킬, C2-C8 할로알케닐 및 C2-C8 할로알키닐 기에서 선택되고; R2는 H, 비-글리코모방체 모이어티 및 링커-비-글리코모방체 모이어티에서 선택되고, 여기서 비-글리코모방체 모이어티는 폴리에틸렌 글리콜, N-연결된 시클람, 티아졸릴, 크로메닐, -C(=O)NH(CH2)1-4NH2, C1-C8 알킬 및 -C(=O)OY 기에서 선택되고, Y는 C1-C4 알킬, C2-C4 알케닐 및 C2-C4 알키닐 기에서 선택되고; R3은 C1-C8 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, C1-C8 할로알킬, C2-C8 할로알케닐 및 C2-C8 할로알키닐 기에서 선택되고; R4는 -OH 및 -NZ1Z2 기에서 선택되고, 여기서 동일하거나 상이할 수 있는 Z1 및 Z2는 각각 독립적으로 H, C1-C8 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, C1-C8 할로알킬, C2-C8 할로알케닐 및 C2-C8 할로알키닐 기에서 선택되고, Z1 및 Z2는 함께 연결되어 고리를 형성할 수 있고; R5는 C3-C8 시클로알킬 기에서 선택되고; R6은 -OH, C1-C8 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, C1-C8 할로알킬, C2-C8 할로알케닐 및 C2-C8 할로알키닐 기에서 선택되고; R7은 -CH2OH, C1-C8 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, C1-C8 할로알킬, C2-C8 할로알케닐 및 C2-C8 할로알키닐 기에서 선택되고; R8은 C1-C8 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, C1-C8 할로알킬, C2-C8 할로알케닐 및 C2-C8 할로알키닐 기에서 선택된다.
이러한 치료에 적당한 화합물은 또한 화학식 (I)의 프로드러그 및 임의의 상기의 약학적으로 허용가능한 염을 포함할 수 있다. 본 개시내용은 이의 범위 내에서 모든 가능한 호변이성질체를 포함한다. 더하여, 본 개시내용은 이의 범위에서 개별 호변이성질체 및 이의 혼합물을 모두 포함한다.
일부 구체예에서, R1, R3, R4, R5, R6, R7 및 R8은 상기 정의된 바와 같고, R2는 링커-비-글리코모방체 모이어티이고, 여기서 비-글리코모방체 모이어티는 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 글리코모방체 E-셀렉틴 길항제, 예컨대 참고인용되는 미국 특허 번호 9,109,002에 개시된 글리코모방체 E-셀렉틴 길항제 등은 이러한 치료에 사용하기에 적당할 수 있다. 이러한 한 글리코모방체 화합물은 GMI-1271이다.
일부 구체예에서, R1, R3, R4, R5, R6, R7 및 R8은 상기 정의된 바와 같고, R2는 링커-비-글리코모방체 모이어티이고, 여기서 비-글리코모방체 모이어티는 N-연결된 시클람을 포함한다. E-셀렉틴 및 CXCR4의 길항제인 글리코모방체 헤테로이작용성 화합물, 예컨대 참고인용되는 미국 특허 번호 8,410,066에 개시된 것 등은 이러한 치료에 사용하기에 적당할 수 있다. 이러한 한 글리코모방체 화합물은 GMI-1359이다. 예를 들면, 문헌 [Steele, Maria M. et al., "A small molecule glycomimetic antagonist of E-selectin and CXCR4 (GMI-1359) prevents pancreatic tumor metastasis and improves chemotherapy [abstract]," Proceedings of the 106th Annual Meeting of the American Association for Cancer Research, 2015 Apr 18-22, Philadelphia, PA; Philadelphia (PA): AACR, Cancer Res 2015, 75(15 Suppl):Abstract nr 425. doi:10.1158/1538-7445.AM2015-425]; [Gravina, Giovanni L. et al., "Dual E-selectin and CXCR4 inhibition reduces tumor growth and increases the sensitivity to docetaxel in experimental bone metastases of prostate cancer [abstract]," Proceedings of the 106th Annual Meeting of the American Association for Cancer Research, 2015 Apr 18-22, Philadelphia, PA; Philadelphia (PA): AACR, Cancer Res 2015, 75(15 Suppl):Abstract nr 428. doi:10.1158/1538-7445.AM2015-428]을 참조하고, 이들 모두 참고 인용된다.
도 1a는 MM1S모세포 세포 집단의 그래프이며, MM1S모세포 세포의 골수종 세포에 대한 CD138 마커는 Y 축 상에 나타내고 HECA-452에 양성인 MM1S모세포 세포는 X 축 상에 나타낸다.
도 1b는 MM1SHECA452 세포 집단의 그래프이며, MM1SHECA452 세포의 골수종 세포에 대한 CD138 마커는 Y 축 상에 나타내고 HECA-452에 대해 양성인 MM1SHECA452 세포는 X 축 상에 나타낸다.
도 2는 MM1S모세포 세포를 주사한 암컷 SCID 마우스 및 MM1SHECA452 세포를 주사한 암컷 SCID 마우스의 생존율의 그래프이다.
도 3은 MM1S모세포 세포를 주사하고, GMI-1271, 보르테조밉(BTZ), 및 GMI-1271과 보르테조밉, 그리고 대조군으로서의 식염수를 처리한 마우스의 생존 비율의 그래프이다.
도 4는 MM1SHECA452 세포를 주사하고, GMI-1271, 보르테조밉, 및 GMI-1271과 보르테조밉, 그리고 대조군으로서의 식염수를 처리한 마우스의 생존 비율의 그래프이다.
도 5는 GMI-1271의 1회 투약 후 경시적으로 MM1SHECA452 접목된 마우스에서의 혈류 내로 이동된 인간 CD138+ MM 세포의 갯수의 그래프이다.
도 6은 재발 환자의 AML 아세포와 비교하여 새롭게 진단된 환자로부터 수득된 AML 아세포에 의한 mAb HECA-452에 의해 검출된 E-셀렉틴 리간드의 발현의 그래프이다.
도 7은 혈청에서, 암 줄기 세포 및/또는 공격성 암 세포에 대한 마커를 비롯한 암 마커를 검출하기 위한 HECA-452 포획/CD-B 어세이의 개념적 묘사를 제공한다.
도 8은 혈청에서, 암 줄기 세포 및/또는 공격성 암 세포에 대한 마커를 비롯한 암 마커를 검출하기 위한 CD-B 포획/HECA-452 어세이의 개념적 묘사를 제공한다.
도 9에는 유동세포 분석에 의해 검출된, HECA-452를 발현하는 (즉, HECA-452 양성인) KG1 및 KG1a 세포의 비율이 도시된다.
도 10a에는 HECA-452/CD62L 샌드위치 ELISA 어세이를 사용한, HECA-452 항체 및 CD62L 항체 모두에 결합하는 KG1 컨디셔닝된 배지에서의 리간드의 양이 도시된다.
도 10b에는 HECA-452/HECA-452 샌드위치 ELISA 어세이를 사용한, HECA-452 항체에 결합하는 KG1 컨디셔닝된 배지에서의 리간드의 양이 도시된다.
도 11에는 HECA-452/검출 항체 샌드위치 ELISA 어세이를 사용한, HECA-452 항체 및 다양한 검출 항체(CD33, CD62L, CD123, CD43, CD44 및 CD147 검출 항체) 모두에 결합하는 KG1a 컨디셔닝된 배지에서의 다양한 리간드의 양이 도시된다.
도 12a에는 CDL62L 포획/HECA-452 검출 ELISA 어세이를 사용한, CD62L 항체 및 HECA-452 항체 모두에 결합하는, KG1 컨디셔닝된 배지에서의 리간드의 양 및 KG1a 컨디셔닝된 배지에서의 리간드의 양이 도시된다.
도 12b에는 HECA-452 포획/CD62L 검출 ELISA 어세이를 사용한, HECA-452 항체 및 CD62L 항체 모두에 결합하는, KG1 컨디셔닝된 배지에서의 리간드의 양 및 KG1a 컨디셔닝된 배지에서의 리간드의 양을 나타내는 결과(450 nM에서의 흡광도)가 도시된다.
이하, 첨부된 도면을 참조하여 본 개시내용의 구체예(예시적 구체예)에 대하여 상세하게 설명한다. 가능하다면, 도면 전체에 걸쳐 동일하거나 유사한 부분을 나타내기 위해 동일한 참조 번호가 사용된다.
본원에 사용된 약어는 일반적으로 화학 및 생물학 분야에서 통상적 의미를 갖는다.
용어 "항체", "항체들", "ab" 또는 "면역글로불린"은 광의에서 상호혼용되며, 단리된, 조작된, 화학 합성된 또는 재조합 항체(예, 전장 또는 비손상 단클론 항체), 및 또한 원하는 생물학적 활성을 나타내는 한 항체 단편, 올리고뉴클레오티드 또는 펩티드 분자(예, 압타머 또는 아피머)를 포함한 단클론 항체를 포함한다. 일 구체예에서, 본 개시내용은 단클론 항체에 관한 것이다.
항체 분자는 이황화 결합에 의해 상호연결된 적어도 2개의 중쇄(H) 및 2개의 경쇄(L)를 포함하는 당단백질로 이루어진다. 각 중쇄는 중쇄 가변 영역 (또는 도메인) (본원에서 약어로 HCVR 또는 VH) 및 중쇄 불변 영역을 포함한다. 중쇄 불변 영역은 3개 또는 4개의 도메인, CH1, CH2, CH3 및 CH4를 포함한다. 각 경쇄는 경쇄 가변 영역(본원에서 약어로 LCVR 또는 VL) 및 경쇄 불변 영역을 포함한다. 경쇄 불변 영역은 1개의 도메인, CL을 포함한다. VH 및 VL 영역은 추가적으로 극가변 영역, 즉 상보성 결정 영역(CDR)으로 세분되고, 더욱 보존되는 영역, 즉 골격 영역(FR)으로 개재될 수 있다. 각 VH 및 VL은 3개의 CDR 및 4개의 FR로 구성되며, 하기 순서로 아미노 말단에서 카르복시 말단으로 배열된다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 항원과 상호작용하는 결합 도메인을 함유한다. 항체의 불변 영역은 면역계의 다양한 세포(예, 이펙터 세포) 및 고전 보체계의 제1 성분(Clq)을 포함하는 호스트 조직 또는 인자에 대한 면역글로불린의 결합을 매개할 수 있다.
본 개시내용에 따라 항체의 "항원 결합 단편"이란, 임의의 펩티드, 폴리펩티드 또는 항체의 표적에 결합하는 능력을 보유한 단백질을 가리키는 것으로 의도된다. 일 구체예에서, 표적은 시알릴 Lea, 시알릴 Lex, 시알릴 Lea/x, 및/또는 E-셀렉틴 리간드에서 선택된다. 특정 구체예에서, 항원 결합 단편은 재조합 DNA 기법에 의해 제조된다. 추가 구체예에서, 결합 단편은 비손상 항체의 효소 또는 화학 절단에 의해 제조된다. 결합 단편은, 비제한적으로 Fab, Fab', F(ab')2, Fv 및 단쇄 항체를 포함한다.
본원에 사용된 용어 "단클론 항체" 또는 "Mab"는 실질적인 동종성 항체 집단으로부터 수득한 항체를 나타내고, 즉 집단의 개별 항체는 소량으로 존재할 수 있는 천연 발생 가능 돌연변이를 제외하고는 동일하다. 통상, 단클론 항체는 고도로 특이적이며, 단일 에피토프에 대해 작용한다. 이러한 단클론 항체는 B 세포 또는 하이브리도마의 단일 클론에 의해 제조될 수 있다. 단클론 항체는 또한 재조합, 즉 단백질 조작에 의해 제조될 수 있다. 단클론 항체는 또한 파지 항체 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 또한, 통상 다양한 결정자 또는 에피토프에 대해 작용하는 다양한 항체를 포함하는 다클론 항체의 제조와 대조적으로, 각 단클론 항체는 항원의 단일 에피토프에 대해 작용한다. 본 개시내용은 세포로부터 정제에 의해 단리 또는 수득되거나 혹은 유전자 재조합 또는 화학 합성에 의해 수득되는 항체에 관한 것이다.
용어 "항원"은, 선택적 결합 물질, 예컨대 항체에 의해 결합될 수 있고, 추가적으로 그 항원의 에피토프에 결합할 수 있는 항체를 생성하는 동물에 사용될 수 있는 분자 또는 분자 부분을 나타낸다. 항원은 하나 이상의 에피토프를 가질 수 있다.
용어 "에피토프"는 면역글로불린 또는 T 세포 수용체에 특이적으로 결합할 수 있는 임의의 결정자, 예컨대 폴리펩티드 결정자 또는 탄수화물 결정자 등을 포함한다. 특정 구체예에서, 에피토프 결정자는 아미노산, 당 측쇄, 포스포릴 또는 설포닐과 같은 분자의 화학적 활성 표면 그룹화를 포함하고, 특정 구체예에서, 특이적 3차원적 구조 특성, 및/또는 특이적 전하 특성을 가질 수 있다. 에피토프는 항체에 의해 결합되는 항원의 영역이다. 특정 구체예에서, 항체는 단백질 및/또는 거대분자의 복합 혼합물에서 표적 항원을 우선적으로 인식하였을 때 항원에 특이적으로 결합하는 것으로 알려져 있다. 일 구체예에서, 항체는 해리 상수가 약 1 μM 이하인 경우, 예를 들어 해리 상수가 약 100 nM 이하인 경우, 예를 들어 해리 상수가 약 1 nM 이하인 경우, 추가적으로 예를 들어, 해리 상수가 약 100 pM 이하인 경우 항원에 특이적으로 결합하는 것으로 알려져 있다. 본원에 사용된 용어 "특이적인" 및 "특이적 결합"은 상호혼용되며, 소정의 항원, 예컨대 시알릴 Lea, 시알릴 Lex 및 시알릴 Lea/x에 공통인 에피토프에 결합하는 항체를 나타낸다. 통상, 항체는 10-6 M 이하의 해리 상수(KD)로 결합하고, 소정의 항원 이외에 비특이적 항원(예, BSA, 카세인 또는 임의의 다른 특이적 폴리펩티드)에 결합하기 위한 KD보다 적어도 2배 미만인 KD를 가진 소정의 항원에 결합한다. 용어 "항원을 인식하는 항체" 및 "항원에 특이적인 항체"는 본원에서 용어 "항원에 특이적으로 결합하는 항체와" 상호혼용된다.
본원에 사용되는 바와 같이, "확장"은 세포 수의 임의의 증가를 포함한다. 확장은, 예를 들면 배양을 개시하는데 사용되는 세포 집단에 존재하는 HSC의 수에 비해 조혈모세포의 수의 증가를 포함한다.
시알릴 Lea 또는 시알릴 Lex 에피토프에 E-셀렉틴이 결합하는 것을 방해하는 약물의 처리는 화학요법과 같은 다른 암 치료의 효능을 향상시키는 데 사용될 수 있다. 특히, 액형 암, 예컨대 다발성 골수종 및 고형 암, 예컨대 전립선 암은 시알릴 Lea-결합 및 시알릴 Lex-결합 암 세포의 공격성 아집단의 확인 및 시알릴 Lea 및 시알릴 Lex 에피토프를 함유하는 세포 표면 탄수화물을 방해하고 이에 의해 E-셀렉틴에의 세포 결합을 방해하는 약물에 의한 처리를 위한 후보자이다.
다발성 골수종은 B 세포 계통의 완전 분화된 세포 유형인 혈장 세포의 형질전환으로부터 기인된다. 다른 혈액 암은 초기 및 전-B 세포와 같은 정상 B 세포의 분화시 초기에 세포로부터 기인된다. 초기 B 세포 계통으로부터의 이러한 형질전환된 세포는 급성 림프성 백혈병(ALL)으로 공지된다. 혈장 세포 및 다발성 골수종과 대조적으로, 전-B 세포 및 ALL 세포는 HECA-452에 대한 항원(즉, 시알릴 Lea/x)에 의해 심하게 글리코실화되고 이는 상기 항원이 상기 B 세포 계통에서 발달상 조절된다는 것을 시사한다. 사실상, 참고 인용되는 문헌[Sipkins et al., Nature 435: 969-973 (2005)]은 ALL 세포주 NALM-6이 골수 혈관구조의 마이크로도메인에서 발현되는 E-셀렉틴에 세포가 결합할 수 있도록 하는 상기 탄수화물 에피토프에 의해 글리코실화된다는 것을 입증하였다.
B 세포 계통의 시알릴 Lex 및 이의 형질전환된 림프종에 의한 발달상 조절된 글리코실화는, 참고 인용되는 문헌[Kikuchi et al., Glycobiology 15: 271-280 (2005)]에 의해 평가되었다. 기쿠치(Kikuchi) 등은 시알릴 Lex가 B 세포 계통의 초기 발달 단계에서 세포 상에 발현되고 분화시 사라진다는 것을 확인하였다. 이러한 글리코실화 패턴은 발달 단계로부터 기인된 림프종에 의해 반영된다. 따라서, 클론원성 초기 단계 B 세포가 다발성 골수종 줄기 세포를 나타내는 경우, 이는 시알릴 Lea 및 시알릴 Lex에 공통인 에피토프를 발현한다. 이러한 MM 줄기 세포는 또한 E-셀렉틴에 기능적으로 결합한다.
하기 실시예 1-4에서 확인되는 바와 같이, 본 개시내용은, MM 세포의 특정 아집단이 기능적 E-셀렉틴 리간드를 발현한다는 것을 확인한다. 즉, 약 5% 내지 약 10%의 MM 세포는 E-셀렉틴 리간드 시알릴 Lea 및 시알릴 Lex를 발현한다. E-셀렉틴 리간드를 발현하는 MM 세포의 비율은 골수에서의 저산소 조건과 유사하게 저산소 조건 하에서 증가될 수 있다.
더하여, 하기 실시예 5-8에서 확인되는 바와 같이, 본 개시내용은 E-셀렉틴 리간드가 검출가능한 수준에서 분비된다는 것을 추가로 확인한다.
실시예
실시예 1: MM 세포에서의 E-셀렉틴 리간드 발현
본 개시내용은 다발성 골수종 세포주 MM1S 상의 세포 표면 탄수화물 발현에 대한 정보를 제공한다. 세포 표면 탄수화물 발현은 항-탄수화물 항체에 결합된 후 형광 활성세포 분류기(FACS) 분석에 의해 측정되었다. 하기 표 1에서 확인되는 바와 같이, MM1S 세포의 대부분은 Lex 탄수화물 에피토프를 발현하는 반면(예, 90% 이상), 훨씬 작은 아집단(약 5-10%)은 항체 HECA-452, E-셀렉틴/hIg 키메라 및 다른 항-탄수화물 항체에 결합함으로써 측정되는 시알릴화된 Lea/x 에피토프를 발현하였다. 이러한 방식으로, E-셀렉틴 리간드를 발현하는 MM1S 세포는 HECA-452 항체에의 결합에 의해 확인되었다.
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실시예 2: 쥐과동물 이식 모델 - 다발성 골수종
GMI-1271, 즉 E-셀렉틴에 대한 소분자 글리코모방체 길항제를, HECA-452에 결합하는, MM1S 세포주로부터의 MM 세포에 미리 투여하였다. GMI-1271의 적용은 E-셀렉틴 상의 MM1S 세포의 롤링을 차단하였다. GMI-1271 투여는 또한 생채내 쥐과동물 이식 모델에서 보르테조밉(항-골수종 약물)의 활성을 증진시키는 것으로 밝혀졌다(참고 인용된 문헌[Natoni et al., Blood, 2014] 참조).
이종성 부모 MM 세포주 MM1S 및 RPMI8226(각각 MM1S모세포, RPMI8226모세포)을 순차적으로 분류하여 HECA-452에 의해 결합된 세포 표면 탄수화물의 발현에 대해 상당히 농축된(>85%) 세포주를 수득하였다(각각 MM1SHECA452, RPMI8226HECA452). 도 1a 및 1b는 MM1SHECA452 세포주를 확장시키는 데 사용되는 HECA-452-양성 세포를 수득하기 위해 MM1S 세포를 분류하는 것을 지지하는 데이타를 제공한다. 예를 들면, 도 1a에는 HECA-452에 양성인 대략 5%의 세포를 가진 모 MM1S 집단이 도시된다. MM1sHECA-452 세포는, 도 1b에 도시된 바와 같이, HECA-452에 양성인 대략 85%이다. 도 1a 및 1b는 생존 골수종 세포에 대한 마커로서 CD138을 포함한다.
유도된 세포주는 시험관내 계대배양될 수 있고, 항체 HECA-452에 의해 확인되는 농축된 E-셀렉틴 리간드 발현에 안정적이었다. MM1SHECA452 및 RPMI8226HECA452는 모두 최소의 부착력을 보여주는 모 세포와 대조적으로 정적 부착력 어세이에서 E-셀렉틴에 대해 강한 결합을 보여주었다. MM1SHECA452 세포는 비부착성, 원형 및 굴절성을 유지하는 모 세포와 대조적으로 E-셀렉틴에 대한 결합에 있어서의 명백한 형태학적 변화, 전개 및 적은 굴절성을 보여주었다. MM1SHECA452 및 RPMI8226HECA452는 모두 전단 응력 하에서의 E-셀렉틴 상의 강한 롤링, 생리적 혈류 모방을 제시하였다. MM1S모세포 또는 RPMI8226모세포는 E-셀렉틴 상에서 잘 롤링되는 것에 실패하였다. 배양 조건 중에 GMI-1271의 포함은 MM1SHECA452의 부착에 있어 현저한 감소를 유도하고, HECA-452 농후 및 모 MM 세포주 둘다의 E-셀렉틴 상에서의 롤링을 심각하게 억제하였다.
이러한 시험관 내 발견의 유의성은 생체 내에서 연구되었다. 암컷 SCID 베이지색 마우스에 MM1S모세포 또는 MM1SHECA452를 i.v. 주사(5x105 세포, n=8/군)하고 생존을 위해 계속하였다(예, 도 2 참조). 별도의 코호트에서, 식염수 대조군, GMI-1271, 보르테조밉(BTZ) 또는 둘다의 조합에 의한 처리 효과를, MM1S모세포 또는 MM1SHECA452 세포를 이식한 마우스에서 측정하였다. 도 2에 도시된 바와 같이, MM1SHECA452를 이식한 마우스는 MM1S모세포를 이식한 마우스와 비교하여 유의적으로 더 짧은 생존율을 가진 더욱 공격적인 질병을 가졌다. 모 세포주와 대조적으로(도 3 참조), MM1SHECA452가 접목된 마우스는 BTZ 처리에 대해 현저한 저항성을 입증하였다(예, 도 4). 도 3에 도시된 바와 같이, GMI-1271 단독 처리가 생존율에 영향을 미치지 않은 반면, GMI-1271 및 BTZ의 조합은 MM1S모세포 접목된 마우스의 생존율에 있어서 고도의 유의적 향상을 유도하였다(P=0.0363). 중요하게도, 도 4에 도시된 바와 같이, GMI-1271 및 BTZ의 조합은 저항성을 파괴하고, MM1SHECA452 접목된 마우스에서 BTZ의 항-골수종 활성을 복구하였다(P=0.0028).
인간 CD138+ MM 세포의 수는 GMI-1271의 단일 주사 후 60분 내에 MM1SHECA452 종양을 가진 마우스의 혈류로 이동되었고(예, 도 5 참조) 적어도 24시간 동안 지속되었다(2.37% v. 0.03%, p <0.001). 이러한 효과는 종양 미세환경을 파괴하고 MM1SHECA-452 세포를 BM 적소에서 말초 혈액 내로 이동시키는 GMI-1271과 일치하였다.
실시예 3: 인간 다발성 골수종 및 E-셀렉틴 리간드 발현
이러한 발견을 감안하여, 인간 환자로부터 수득된 MM 세포의 샘플로부터의 E-셀렉틴 리간드의 발현을 연구하였고, E-셀렉틴 발현의 수준과 질병 진행 사이의 상관관계를 결정하였다. MM을 가진 환자로부터 고지에 입각한 동의 후 골수(BM) 및/또는 말초 혈액(PB)을 수득하였다. HECA-452 항체를 사용하여 유동세포 분석에 의해 E-셀렉틴 리간드 발현에 대한 혈장 세포(CD38+/CD138+)를 분석하였다. 모든 기본 MM 샘플(n=25)은 HECA-452-반응성 세포 집단을 함유하였다(중앙값 22%). PB 환자로부터 단리된 순환 MM 세포의 지속적으로 높은 비율은, 쌍을 이룬 BM 샘플(n=14)과 비교하였을 때, 33%의 중앙값 차이(윌콕슨 순위 합계 테스트, p=0.02)로, HECA-452를 발현한다. PB에서의 MM의 HECA-452 발현은, 진단 환자에 대해 재발 환자에서 취한 샘플에서 유의적으로 더 높았다(평균 40% 이상)(쌍을 이루지 않은 t 테스트, p = 0.0008)
이러한 연구는 E-셀렉틴 리간드-보유 세포가 MM과 같은 암에서의 보급, 질병 진행, 및/또는 약물 저항성에서 중요한 역할을 할 수 있다는 것을 나타낸다. 따라서, 본원에 참고 인용된 U.S. 9,109,002에 개시된 것과 같은 글리코모방체 화합물을 포함한 임상 전략은 환자 결과를 향상시킬 수 있다.
실시예 4: 급성 골수성 백혈병(AML) 세포에서의 E-셀렉틴 리간드 발현
AML 환자에서의 재발은 추측컨대 E-셀렉틴에 결합에 의해 골수 내 보호성 적소에서 화학요법 치료를 피한 백혈병 줄기 세포로부터 기인된 것으로 여겨진다. 이러한 메카니즘에 따라, 생존 재발 세포는 시알릴 Lea 및 시알릴 Lex에 결합한 항체, 예컨대 HECA-452 항체에 의해 검출가능한 E-셀렉틴 리간드의 발현에 선택되어야 한다. 환자로부터의 AML 아세포가 HECA-452 에피토프의 세포 표면 발현에 대해 어세이되었을 때, AML 암의 재발을 겪은 환자로부터의 세포는 새롭게 진단된 AML 환자로부터 수득된 AML 아세포보다 세포 표면 상에 유의적으로 더 많은 HECA-452 항원을 발현하였다. 이러한 연구의 결과는 도 6의 그래프에 제공된다.
실시예 5: ELISA 혈청 어세이 - 실험 절차
본 개시내용은 또한 암성 세포 상에 발현된 시알릴 Lex 또는 시알릴 Lea 에피토프를 함유하는 탄수화물, 혈장 또는 혈청과 같은 혈액 분획을 포함한 혈액 내로 분자 상의 발현된 탄수화물 에피토프의 분비 또는 방출, 및 암 줄기 세포 및/또는 공격성 암을 비롯한 암을 검출하기 위한 혈액 내 분자 상의 분비된 탄수화물 에피토프의 검출에 대한 정보를 제공한다. ELISA 샌드위치 HECA-452 포획/CD-B 검출 어세이 절차의 개요는 하기 제공된다. HECA-452 포획 항체를 CD-B 포획 항체로 (그리고 그 반대로도) 대체한 CD-B 포획/HECA-452 검출 어세이를 위한 유사한 과정을 수행하였다.
탄산염 버퍼와 HECA-452 포획 항체로 밤새 마이크로플레이트를 코팅하였다. 이후 코팅 버퍼를 버리고, ELISA 세척 버퍼로 웰을 세척하고, 3분 동안 인큐베이션한 후, 다시 세척하였다. 이후 ELISA 차단 버퍼를 첨가하고, 마이크로플레이트를 느린 진탕 하에 상온에서 1시간 인큐베이션하였다. 이후 혈청 테스트 샘플을 샘플 희석 버퍼로 희석시켰다. 차단 버퍼를 버리고, 테스트 샘플을 세척 없이 차단된 웰에 즉시 첨가하였다. 이후 마이크로플레이트를 느린 진탕 하에 2시간 동안 인큐베이션하였다. 테스트 샘플을 버리고, ELISA 세척 버퍼로 웰을 세척하고, 진탕 하에 3분 동안 인큐베이션하였다(이 단계를 3회 반복).
샘플 희석 버퍼에서 희석에 의해 바이오틴-표지된 검출 항체를 제조하였다. E-셀렉틴 리간드 검출 항체는 CD43(클론 MEM-59; Novus, 0.5 μg/mL 최종 농도), CD44(클론 F10-44-2; Novus, 0.25 μg/mL 최종 농도), CD62L(양 pAb ; R&D Systems, 0.25 μg/mL 최종 농도) 및 CD147(클론 MEM-M6/1; Thermo Fisher, 0.5 μg/mL 최종 농도)이었다. AML 마커 검출 항체는 CD 33(클론 HIM3-4; Novus, 1 μg/mL 최종 농도) 및 CD 123(클론 6H6; Novus, 0.5 μg/mL 최종 농도)이었다.
이후, 테스트되는 각 검출 항체의 경우, 검출 항체 용액을 각 웰에 첨가하고, 느린 진탕 하에 상온에서 1.5-2시간 동안 인큐베이션하였다. 검출 항체 용액을 버리고, ELISA 세척 버퍼로 웰을 세척하고, 진탕 하에 3분 동안 인큐베이션하였다(이 단계를 3회 반복). 샘플 희석 버퍼에서 효소 접합체를 희석시키고, 각 웰에 첨가하고, 느린 진탕 하에 상온에서 45분 동안 각 인큐베이션하였다. 효소 접합체를 버렸다. ELISA 세척 버퍼로 웰을 세척하고, 진탕 하에 3분 인큐베이션하였다(이 단계를 3회 반복). TMB 기질을 각 웰에 첨가하고, 느린 진탕 하에 상온에서 15-20분 인큐베이션하였다. 10% 인산 용액을 첨가함으로써 반응을 중단하였다. 이후, 마이크로플레이트 판독기를 사용하여 흡광도를 측정하였다.
도 7은 (CD-B에 의해 표시되고 CD-B에 대하여 항체에 의해 검출된) 분자 상에서 (HECA-452 mAb를 사용하여) 탄수화물 에피토프를 검출하는 데 사용되는, 상기 제공된 개요와 일치하는 검출/포획 어세이의 개념적 묘사를 제공한다. 어세이에서, 시알릴 Lea 또는 시알릴 Lex 에피토프를 발현하는 모든 혈청 분자는 고형상 상에서 포획되고, 특이적으로 글리코실화된 관심 분자(즉 CD-B)는 적절한 항체(즉, 항-CD-B)에 의해 검출된다. 대안적으로, 탄수화물 에피토프 시알릴 Lea 또는 시알릴 Lex를 발현하는 모든 분자는, 혈청에서, AML 줄기 세포 또는 공격성 AML 세포를 포함한 AML의 마커를 검출하기 위한 포획 및 검출용 항체 HECA-452를 사용하여 측정될 수 있다. 또한, 도 8은 혈청에서, AML 줄기 세포 또는 공격성 AML 세포를 포함한 AML의 마커를 검출하기 위한 CD-B 포획/HECA-452 검출 어세이의 개념적 묘사를 제공한다.
실험에 사용하기 위해 AML 세포 컨디셔닝된 상청액/배지도 제조하였다. 특히, KG1 및 KG1a 세포주를 사용하였다. KG1 세포주는 AML 환자로부터 발달하였고 골수아세포 및 전골수세포 발달 단계에서의 형태학적인 세포이다. KG1a 세포주는 KG1 세포주의 서브클론이다. 이는 미분화된 아세포 단계에서의 형태학적 및 조직화학적 세포로 이루어진다. 유동세포 분석을 사용하여, 각각의 상기 세포주에서 HECA-452 발현을 검출하였다. 도 9에 도시된 바와 같이, KG1 세포의 40% 이상이 HECA-452에 대해 양성이고, KG1a 세포의 거의 70%가 HECA-452를 발현하였다. KG1a 세포 상의 항체 HECA-452에 의해 검출되는 E-셀렉틴 탄수화물 리간드의 증가된 글리코실화는 모 KG1 주에 비해 상기 서브클론의 성질과 유사한 더 많은 암 줄기 세포와 일치한다.
실시예 6: 포획/검출 샌드위치 ELISA 어세이에 의한 KG1 테스트 샘플에서의 CD62L 및 HECA-452 항원의 동시발현의 검출
상기 실시예 5에서 ELISA 샌드위치 어세이에 대해 설명된 일반 절차를 사용하되, 포획 항체로서 HECA-452 포획 항체를 사용하고, 검출 항체로서 바이오틴-표지된 CD62L 항체 또는 바이오틴-표지된 HECA-452 항체를 사용하였다.
도 10a에 도시된 바와 같이, 마이크로플레이트 판독기를 사용하여 비희석된("단독") KG1 배지 용액, 1:16 희석의 KG1 배지 용액, 및 샘플 버퍼 용액을 판독하고, 450 nM에서 흡광도를 관찰하여 각각의 용액에서 HECA-452 항체 및 CD62L 둘다에 결합된 HECA-452 글리코폼의 양을 측정하였다.
도 10b에 도시된 바와 같이, 마이크로플레이트 판독기를 사용하여 비희석된("단독") KG1 배지 용액, 1:16 희석의 KG1 배지 용액, 및 샘플 버퍼 용액을 판독하고, 450 nM에서 흡광도를 관찰하여 각각의 용액에서 HECA-452 및 CD62L 둘다에 결합된 HECA-452 글리코폼의 양을 측정하였다.
그 결과는 HECA-452 항체(도 10b)보다 CD62L에 대한 항체(도 10a)에 의해 HECA-452 포획 분자의 더 큰 검출 특이성 및 감도를 나타낸다.
실시예 7: ELISA 어세이에서 HECA-452 포획을 사용한 KG1a 테스트 샘플에서의 다양한 HECA-452 글리코폼 마커의 검출
상기 실시예 5에서 ELISA 샌드위치 어세이에 대해 설명된 일반 절차를 사용하되, 포획 항체로서 HECA-452 포획 항체를 사용하고, 검출 항체로서 X 축 위에 나열된 각종 마커에 대한 바이오틴-표지된 항체를 사용하였다.
도 11에서 도시된 바와 같이, 마이크로플레이트 판독기를 사용하여 비희석된("단독") KG1a 배지 용액, 1:16 희석의 KG1a 배지 용액, 및 샘플 버퍼 용액을 판독하고, 450 nM에서 흡광도를 관찰하여 각각의 용액에서 HECA-452 및 각 리간드 항체 둘다에 결합하는 HECA-452 글리코폼의 양을 측정하였다. 음성 대조군으로서 래트 IgM에 의한 포획을 사용하였다.
그 결과는 HECA-452 mAb와의 항원을 포획하고 CD62L에 대한 항체에 의해 검출하여 CD62L의 HECA-452 글리코폼을 검출함으로써 가장 큰 감도를 수득하였다는 것이 입증된다. 또한, AML 마커 CD33 및 CD123의 HECA-452 글리코폼은 상청액에서 검출되지 않는다.
실시예 8: KG1 및 KG1a 상청액의 희석액에서의 CD62L의 HECA-452 글리코폼의 비교
상기 실시예 5에서 ELISA 샌드위치 어세이에 대해 설명된 일반 절차를 사용하되, 포획 항체로서 CD62L 포획 항체를 사용하고, 검출 항체로서 바이오틴-표지된 HECA-452 항체를 사용하였다. 도 12a에 도시된 바와 같이, 마이크로플레이트 판독기를 사용하여 각종 희석액의 KG1 및 KG1a 배지를 판독하고, 450 nM에서 흡광도를 관찰하여 각각의 용액에서 HECA-452 항체 및 CD62L 둘다에 결합하는 HECA-452 글리코폼의 양을 측정하였다. 그 결과는 KG1 세포와 비교하여 KG1a 세포의 상청액에서 발견된 더 많은 양의 CD62L의 HECA-452 글리코폼을 보여주었고, 이는 도 9에 제시된 KG1 세포와 비교하여 KG1a 세포의 표면 상에서 증가된 HECA-452 글리코실화(E-셀렉틴 리간드)와 일치한다.
도 12a에 도시된 결과의 경우, 상기 실시예 5에서 ELISA 샌드위치 어세이에 대해 설명된 일반 절차를 사용하되, 포획 항체로서 HECA-452 포획 항체를 사용하고, 검출 항체로서 바이오틴-표지된 CD62L 항체를 사용하였다. 도 12b에 도시된 바와 같이, 마이크로플레이트 판독기를 사용하여 다양한 희석액의 KG1 및 KG1a 배지를 판독하고, 450 nM에서 흡광도를 관찰하연 각각의 용액에서 HECA-452 항체 및 CD62L 둘다에 결합하는 HECA-452 글리코폼의 양을 측정하였다. 그 결과는 항체 HECA-452에 의해 항원을 포획하고 CD62L에 대한 항체로 검출하는 포멧이 CD62L에 대한 항체로 항원을 포획하고 HECA-452에 대한 항체로 검출하는 것보다 더 큰 감도를 보여준다는 것이 확인된다.
고형 종양에서의 E-셀렉틴 리간드 발현
참고 인용되는 문헌[S. Yasmin-Karin et al., Oncotarget Oct. 6, 2014]에서는 시험관 내 유동 조건 하에서 E-셀렉틴에 결합하는 능력을 기초로 전립선 암 세포를 분리하였다. E-셀렉틴에 결합하는 능력을 기초로, 상기 세포는 또한 세포 표면 상에 HECA-452 항원을 발현한다. E-셀렉틴에 결합하는 데 선택되는 상기 전립선 암 세포는 E-셀렉틴에 결합하지 않은 전립선 암 세포와 비교하여 종양 세포 엄격성(sternness)의 특성을 제시하였다. 이러한 특성은 (1) 연질 한천에서의 콜로니 형성; (2) 시험관 내 종양 편구 형성; (3) 매트리겔 내로의 침투; 및 (4) 생체 내 전이성 양상 및 종양 성장과 공격성을 포함하였다. 이러한 전립성 암 종양 세포와, E-셀렉틴 리간드를 발현하는 다른 고형 종양 세포는 또한 시알릴 Lea 및 시알릴 Lex에 결합하는 항체에 의한 확인 및 환자 양상을 향상시키기 위해 GMI-1271과 같은 글리코모방체 화합물에 의한 치료를 위한 후보자이다.
상기 실시예 1-4에 제시된 바와 같이, 고형 종양의 암성 세포의 직접 검출은 본원에 개시된 방법 및 조성물을 사용하여 달성될 수 있다. 그리고, 상기 실시예 5-9에 제시된 바와 같이, 혈액에서 분비된 글리코폼을 검출함으로써 상기 암의 간접 검출 또한 본원에 개시된 방법 및 조성물을 사용하여 달성될 수 있다.
항체
본 개시내용은 세포 상에서 세포-표면 탄수화물을 직접 검출함으로써, 또는 분비되거나 그렇지 않은 경우 혈액에 존재하는 글리코폼을 검출함으로써 암 줄기 세포 및/또는 공격성 암 세포를 확인하는 데 사용될 수 있는 항체의 발견 및 제조를 위한 방법 및 조성물에 관한 것이다.
일 구체예에서, 본원에 개시된 기술은 공격성 암의 검출을 위한 진단 및 치료 항체의 신속한 발달을 위한 신규 전략을 제공한다. 일 구체예에서, 본원에 개시된 기술은 E-셀렉틴에 결합하는 암 세포의 세포 표면 탄수화물을 방해하는 화합물에 의한 검출된 공격성 암의 치료를 위한 신규 전략을 제공한다. 일 구체예에서, 검출된 암 세포는 액형 암으로부터의 것이다. 일 구체예에서, 검출된 암 세포는 고형 종양으로부터의 것이다. 일 구체예에서, 암은 혈액에 존재하는 탄수화물을 검출함으로써 검출된다. 일 구체예에서, 검출된 암은 MM, ALL, AML 또는 전립선 암이다. 일 구체예에서, 암은, 진단 항체에 의해 검출된 후, 글리코모방체 화합물로 처리된다.
일 구체예에서, 본 개시내용은 E-셀렉틴 리간드를 발현하는 암 세포를 확인하는 데 사용될 수 있는 항체에 관한 것이다. 일 구체예에서, 본 개시내용은 혈액에 존재하는 암 리간드를 확인하는 데 사용될 수 있는 항체에 관한 것이다. 일 구체예에서, 항체는 시알릴 Lea 및 시알릴 Lex 둘다에 특이적이다. 일 구체예에서, 항체는 CD62L의 HECA-452 글리코폼을 검출한다.
일 구체예에서, 세포 집단은, 공격성 암 세포를 확인하는 데 사용될 수 있는 항체의 발견 및 제조에 제공된다.
일 구체예에서, 본 개시내용은 시알릴 Lea 및 시알릴 Lex 둘다에 특이적인 항체를 제공하되, 이 항체는 호스트에 암 세포를 주사하는 단계, 및 멀티웰 플레이트 상에 코팅된 시알릴 Lea 및 시알릴 Lex에 결합하는 것을 위한 생성 항체를 스크리닝하는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조된다. 일 구체예에서, 본 개시내용은 시알릴 Lea 및 시알릴 Lex 둘다에 특이적인 항체를 제공하되, 이 항체는 호스트에 공격성 암 세포(예, 재발 환자로부터의 암 세포, 화학요법에 반응하지 않는 환자로부터의 암 세포, 또는 그렇지 않은 경우 확인된 공격성 암 세포)를 주사하는 단계, 및 멀티웰 플레이트 상에 코팅된 시알릴 Lea 및 시알릴 Lex에 결합하는 것을 위한 생성 항체를 스크리닝하는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조된다.
일 구체예에서, 본 개시내용은, 예를 들어 본원에 기술된 어세이 방법에 기술된 바와 같이, HECA-452에 특이적인 항체, 및 CD62L의 HECA-452 글리코폼을 검출하는 데 함께 사용될 수 있는 CD62L에 특이적인 항체를 제공한다. HECA-452 항체는 마우스에 공격성 암 세포(예, 재발 환자로부터의 암 세포, 화학요법에 반응하지 않는 환자로부터의 암 세포, 또는 그렇지 않은 경우 확인된 공격성 암 세포)를 주사하는 단계, 및 멀티웰 플레이트 상에 코팅된 HECA-452에 결합된 것을 위한 생성 항체를 스크리닝하는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조될 수 있다. CD62L 항체는 마우스에 공격성 암 세포(예, 재발 환자로부터의 암 세포, 화학요법에 반응하지 않는 환자로부터의 암 세포, 또는 그렇지 않은 경우 확인된 공격성 암 세포)를 주사하는 단계, 및 멀티웰 플레이트 상에 코팅된 CD62L에 결합하는 것을 위한 생성 항체를 스크리닝하는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조될 수 있다.
일 구체예에서, 본 개시내용은 HECA-452 및 CD62L 둘다에 특이적인, CD62L의 HECA-452 글리코폼을 검출할 수 있는 항체를 제공하고, 이 항체는 마우스에 암 세포를 주사하는 단계, 및 멀티웰 플레이트 상에 코팅된 HECA-452 및 CD62L에 결합하는 것을 위한 생성 항체를 스크리닝하는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조된다. 일 구체예에서, 본 개시내용은 HECA-452 및 CD62L 둘다에 특이적인 항체를 제공하고, 이 항체는 마우스에 공격성 암 세포(예, 재발 환자로부터의 암 세포, 화학요법에 반응하지 않는 환자로부터의 암 세포, 또는 그렇지 않은 경우 확인된 공격성 암 세포)를 주사하는 단계, 및 멀티웰 플레이트 상에 코팅된 HECA-452 및 CD62L 둘다에 결합하는 것을 위한 생성 항체를 스크리닝하는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조된다.
본 개시내용의 단클론 항체(MAb)는 통상의 단클론 항체 방법론, 예컨대 참고 인용된 문헌[Kohler and Milstein, 1975, Nature 256:495]의 표준 체세포 혼성화 기법을 포함한 각종 기법에 의해 제조될 수 있다. 체세포 혼성화 절차가 사용될 수 있거나 또는 B-림프구의 바이러스성 또는 종양원성 형질전환 등을 포함한 단클론 항체의 다른 제조 기법이 사용될 수 있다.
당업자는 인간 Ig 유전자좌의 큰 단편으로 마우스 항체 생성이 결핍된 마우스 균주를 조작하여 이러한 마우스가 마우스 항체의 부재 하에 인간 항체를 생성하도록 할 수 있다. 큰 인간 Ig 단편은 상당히 다양한 유전자 다양성과 또한 항체 생성 및 발현의 적절한 조절을 보존할 수 있다. 항체 다양화 및 선택 그리고 인간 단백질에 대한 면역학적 저항성의 결핍에 대한 마우스 기작을 이용함으로써, 마우스 균주에서의 재현된 인간 항체 레파토리는 인간 항원을 포함한 임의의 관심 항원에 대한 높은 친화도의 항체를 형성한다. 하이브리도마 기술을 사용하여, 원하는 특이성을 가진 항원 특이적 인간 MAb를 제조하고 선택할 수 있다.
일 구체예에서, 본 개시내용의 항체는 하이브리도마 세포주 이외의 세포주에서 발현될 수 있다. 일 구체예에서, 적당한 포유동물 호스트 세포의 형질전환을 위해 특정 항체를 코딩하는 서열이 사용될 수 있다. 일 구체예에서, 형질전환은, 예를 들어 바이러스 (또는 바이러스 벡터) 내 폴리뉴클레오티드를 패키징하고 호스트 세포를 바이러스 (또는 벡터)에 형질도입하는 것을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 호스트 세포에 도입하는 임의의 공지된 방법을 사용하여 또는 당업계에 공지된 형질감염 절차에 의해 실현될 수 있다. 상기 절차는 참고 인용되는 미국 특허 번호 4,399,216, 4,912,040, 4,740,461 및 4,959,455에 의해 예시된다. 일반적으로, 형질전환 절차는 형질전환시키고자 하는 호스트에 따라 달라질 수 있다. 이종성 폴리뉴클레오티드를 포유동물 세포 내로 도입하는 방법은 당업계에 잘 공지되어 있고, 비제한적으로 덱스트란-매개 형질감염, 인산칼슘 침전, 폴리브렌 매개 형질감염, 원형질 융합법, 전기천공법, 리포솜 내 폴리뉴클레오티드(들)의 캡슐화, 및 DNA의 핵 내 직접 미세주사를 포함한다.
일 구체예에서, 본 개시내용은 E-셀렉틴에 결합할 수 있는 항체를 제공한다. 일 구체예에서, 항체는 HECA-452 항체이다.
일 구체예에서, 본 개시내용은 암 세포 상에 발현되거나 제시된 E-셀렉틴 리간드에 특이적으로 결합할 수 있는 항체를 제공한다. 일 구체예에서, 본 개시내용은 혈액에 발현되거나 제시된 E-셀렉틴 리간드에 특이적으로 결합할 수 있는 항체를 제공한다.
시알릴 Lea 및 시알릴 Lex에 특이적으로 및/또는 E-셀렉틴 리간드(예, 암 세포에 의해 발현된 E-셀렉틴 리간드)에 특이적으로 결합할 수 있는 하이브리도마/항체에 대한 스크리닝은 당업자에게 이용가능한 임의의 복수의 기법에 의해 실현될 수 있다.
진단
일 구체예에서, 본 항체는 또한 생체내 또는 생체외 공격성 암 및/또는 공격성 암 세포를 검출하는 데 사용될 수 있다. 일 구체예에서, 암 세포를 환자로부터 수득하고, 형광 표지된 항체와의 결합 세포에 의해 생체외 분석하고, 형광 활성화된 세포 분류에 의해 분석할 수 있다. 일 구체예에서, 혈액을 환자로부터 수득하고, 형광 표지된 항체와의 결합 세포에 의해 생체외 분석하고, ELISA 어세이에 의해 분석할 수 있다. 일 구체예에서, 항체는 HECA-452 및 CD62L에 결합하여, 이들이 CD62L의 HECA-452 글리코폼을 검출하도록 한다. 일부 구체예에서, 검출에 복수의 항체를 사용한다.
생체 내 검출은 본원에 기술된 항체를 표지하고, 표지된 항체를 피험자에게 투여하고, 이후 피험자를 이미지화함으로써 실현된다. 본 개시내용에 따라 진단 이미지화에 유용한 표지의 예는, 방사성표지, 예컨대 I123, I131, I111, Tc99m, P32, I125, H3, C14 및 Rh188, 형광 표지, 예컨대 플루오레세인 및 로다민, 핵자기공명 활성 표지, 양전자 방출 단층촬영("PET") 스캐너에 의해 검출가능한 양전자 방출 동위원소, 화학발광, 예컨대 루시페린, 및 효소 마커, 예컨대 퍼옥시다아제 또는 포스파타아제이다. 단범위 방사성 이미터, 예컨대 경직장 프로브와 같은 단범위 검출기 프로브에 의해 검출가능한 동위원소가 또한 사용될 수 있다. 항체는 당업계에 공지된 기법을 사용하여 그러한 시약과 표지될 수 있다. 예를 들면, 항체의 방사성표지와 관련된 기법을 위한, 참고 인용된 문헌[Wensel and Meares, Radioimmunoimaging and Radioimmunotherapy, Elsevier, N.Y. (1983)] 참조. 또한, 참고 인용된 문헌[D. Colcher et al., "Use of Monoclonal Antibodies as Radiopharmaceuticals for the Localization of Human Carcinoma Xenografts in Athymic Mice," Meth. Enzymol. 121: 802-816 (1986)] 참조.
본 개시내용에 따른 표지된 항체는 혈류 내에 진입된 암 항원을 검출하기 위해 시험관 내 진단 테스트에 사용될 수 있다(예, 상기 기술된 실시예 5-8 참조). 항체, 이의 결합 부분, 프로브 또는 리간드의 특이적 활성은, 반감기, 방사성 표지의 동위원소 순도, 및 표지가 생물학적 물질에 혼입되는 방법에 따라 달라진다. 면역어세이 테스트에서, 특이적 활성이 더 높을수록, 일반적으로, 감도가 더욱 우수하다. 방사성 동위원소에 의한 항체 표지 절차는 일반적으로 당업계에 공지되어 있다.
방사성표지된 항체는 항체가 반응하는 항원을 보유하는 암 세포가 국소화되고, 감마 카메라 또는 방출 단층촬영 등을 사용한 방사성핵 스캐닝과 같은 공지된 기법을 사용하여 생체 내 검출 또는 "이미지화"된 환자에 투여될 수 있다. 예를 들어, 참고 인용된 문헌[A. R. Bradwell et al., "Developments in Antibody Imaging," Monoclonal Antibodies for Cancer Detection and Therapy, R. W. Baldwin et al. (eds.), pp. 65-85 (Academic Press 1985)] 참조. 대안적으로, 방사성표지가 양전자(예, C11, F18, O15 및 N13)를 방출시키는 양전자 방출 경축 단층촬영 스캐너, 예컨대 국립 브룩헤이븐 연구소에 위치한 지정된 Pet VI가 사용될 수 있다.
형광물질 및 발색단으로 표지된 생물학적 물질은 당업계에 공지된 표준 모이어티로부터 제조될 수 있다. 항체 및 다른 단백질이 약 310 nm 이하의 파장을 갖는 광을 흡수하기 때문에, 형광 모이어티는 310 nm를 넘는, 예컨대 400 nm를 넘는 파장에서 실질적 흡수를 갖도록 선택되어야 한다. 적당한 다양한 형광 및 발색단은 참고 인용된 문헌[Stryer, Science, 162:526 (1968)] 및 [Brand, L. et al., Annual Review of Biochemistry, 41:843-868 (1972)]에 의해 기술된다. 항체는 참고 인용된 미국 특허 번호 3,940,475, 4,289,747 및 4,376,110에 개시된 것과 같은 통상의 절차에 의해 형광 발색단 기로 표지될 수 있다.
치료법
본 개시내용에 따른 일 구체예에서, 처리, 진척 모니터링, 및/또는 치료적 처리의 효과를 위한 방법이 제공된다.
본원에 기술된 각각의 치료 방법의 일 구체예에서, 피험자는 먼저 암으로 진단된다. 일 구체예에서, 피험자는 먼저 공격성 암으로 진단된다. 또다른 구체예에서, 피험자는 액형 암(예, MM, ALL, 및 AML) 및 고형 암(예, 전립선 암)에서 선택된 질병을 갖는다. 일 구체예에서, 암 환자는 재발로 진단된다. 일 구체예에서, 본원에서 항체는 암 환자를 진단 및/또는 처리에 사용된다. 일 구체예에서, 하나 이상의 글리코모방체 화합물은 암 환자를 처리하는 데 사용된다. 일 구체예에서, 환자는 본원에 개시된 항체를 사용하여 공격성 암을 갖는 것으로 진단된다. 일 구체예에서, 환자는 본원에 개시된 항체를 사용하여 공격성 암을 갖는 것으로 진단된 후 하나 이상의 글리코모방체 화합물로 처리된다.
본원에 개시된 특정 방법은, 예를 들어 임상 연구 또는 약물 발견에 E-셀렉틴 리간드의 확인이 바람직하다는 임의의 상황에 적용가능하다.
일 구체예에서, 본원에는 하나 이상의 글리코모방체 화합물 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학 조성물이 기술된다. 일 구체예에서, 약학 조성물은 GMI-1271 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함한다. 일 구체예에서, 약학 조성물은 GMI-1359 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함한다.
특정 구체예에 따라, 본원에 기술된 약학 조성물은, 예를 들면 공격성 암 세포의 세포 표면 탄수화물의 기능을 방해하여 세포가 E-셀렉틴에 결합할 수 없도록 하는 물질을 포함할 수 있다.
약학 조성물의 투여 경로는, 비제한적으로, 피내, 근육내, 복강내, 정맥내 및 피하 경로를 포함한다.
또다른 구체예에서, 치료될 피험자는 개시된 구체예예 따라 약학 조성물의 투여에 대한 보조로서 (이전에, 동시에 또는 이후에) 화학요법을 받는다. 일 구체예에서, 치료될 피험자는 GMI-1271을 포함하는 약학 조성물의 투여에 대한 보조로서 (이전에, 동시에 또는 이후에) 화학요법을 받는다. 일 구체예에서, 치료된 피험자는 GMI-1359를 포함하는 약학 조성물의 투여에 대한 보조로서 (이전에, 동시에 또는 이후에) 화학요법을 받는다. 일 구체예에서, 보조 화학요법 처리는 보르테조밉의 투여를 포함한다.
본 개시내용의 다른 구체예는 명세서의 고려 및 본원에 개시된 개시내용의 실시로부터 당업자에게 명백하다.

Claims (22)

  1. 암 환자를 치료하는 방법으로서,
    환자로부터 암 세포, 혈액 또는 혈액 분획 샘플을 수득하는 단계;
    시알릴 Lea 및 시알릴 Lex 결합 도메인을 가진 항체가 암 세포에 결합하는지 여부를 결정하는 단계; 및
    항체가 암 세포에 결합하는 경우 적어도 하나의 글리코모방체(glycomimetic) 화합물의 유효량을, 그러한 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계
    를 포함하는 방법.
  2. 제1항에 있어서, 환자에게 화학요법 및/또는 방사선 요법을 실시하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  3. 제1항에 있어서, 환자에게 보르테조밉을 투여하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 하나의 항에 있어서, 적어도 하나의 글리코모방체 화합물은 하기 화학식 (I)의 글리코모방체, 하기 화학식 (I)의 프로드러그 및 이들 중 임의 것의 약학적으로 허용가능한 염에서 선택되는 것인 방법:
    [화학식 (I)]
    Figure pct00003

    상기 식에서,
    R1은 C1-C8 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, C1-C8 할로알킬, C2-C8 할로알케닐 및 C2-C8 할로알키닐 기에서 선택되고;
    R2는 H, 비-글리코모방체 모이어티 및 링커-비-글리코모방체 모이어티에서 선택되고, 여기서 비-글리코모방체 모이어티는 폴리에틸렌 글리콜, N-연결된 시클람, 티아졸릴, 크로메닐, -C(=O)NH(CH2)1-4NH2, C1-C8 알킬 및 -C(=O)OY 기에서 선택되고, Y는 C1-C4 알킬, C2-C4 알케닐 및 C2-C4 알키닐 기에서 선택되고;
    R3은 C1-C8 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, C1-C8 할로알킬, C2-C8 할로알케닐 및 C2-C8 할로알키닐 기에서 선택되고;
    R4는 -OH 및 -NZ1Z2 기에서 선택되고, 여기서 동일하거나 상이할 수 있는 Z1 및 Z2는 각각 독립적으로 H, C1-C8 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, C1-C8 할로알킬, C2-C8 할로알케닐 및 C2-C8 할로알키닐 기에서 선택되고, Z1 및 Z2는 함께 연결되어 고리를 형성할 수 있고;
    R5는 C3-C8 시클로알킬 기에서 선택되고;
    R6은 -OH, C1-C8 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, C1-C8 할로알킬, C2-C8 할로알케닐 및 C2-C8 할로알키닐 기에서 선택되고;
    R7은 -CH2OH, C1-C8 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, C1-C8 할로알킬, C2-C8 할로알케닐 및 C2-C8 할로알키닐 기에서 선택되고;
    R8은 C1-C8 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, C1-C8 할로알킬, C2-C8 할로알케닐 및 C2-C8 할로알키닐 기에서 선택된다.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 하나의 항에 있어서, 암은 백혈병, 림프종 또는 골수종인 방법.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 하나의 항에 있어서, 암은 고형 종양을 특징으로 하는 것인 방법.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 하나의 항에 있어서, 항체는 HECA-452인 방법.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 하나의 항에 있어서, 적어도 하나의 글리코모방체 화합물은 E-셀렉틴 및 CXCR4의 길항제인 헤테로이작용성 화합물에서 선택되는 것인 방법.
  9. 제1항 내지 제7항 중 어느 하나의 항에 있어서, 적어도 하나의 글리코모방체 화합물은 GMI-1271 또는 GMI-1359인 방법.
  10. 암 줄기 세포를 확인하기 위한 항체를 제조하는 방법으로서, 암 세포를 호스트에게 투여하는 단계, 및 시알릴 Lea 및 시알릴 Lex에 결합하는 항체에 대하여 생성 항체 집단을 스크리닝하는 단계를 포함하는 방법.
  11. 시알릴 Lea 및 시알릴 Lex를 발현하는 암 세포를 검출하는 방법으로서,
    환자로부터 암 세포 샘플을 수득하는 단계; 및
    샘플과, 시알릴 Lea 및 시알릴 Lex에 결합하는 항체를 접촉시키고, 시알릴 Lea 및 시알릴 Lex와 항체 사이의 결합을 검출함으로써, 시알릴 Lea 및 시알릴 Lex가 샘플 내에 존재하는지 여부를 검출하는 단계
    를 포함하는 방법.
  12. 암 환자를 진단하는 방법으로서,
    환자로부터 암 세포, 혈액 또는 혈액 분획 샘플을 수득하는 단계;
    샘플과, HECA-452 항체 및 CD62L 항체를 접촉시키고, CD62L의 HECA-452 글리코폼, HECA-452 항체 및 CD62L 항체 사이의 결합을 검출함으로써, CD62L의 HECA-452 글리코폼이 샘플 내에 존재하는지 여부를 검출하는 단계; 및
    샘플 내 CD62L의 HECA-452 글리코폼의 존재가 검출되는 경우 공격성 암을 지닌 환자로 진단하는 단계
    를 포함하는 방법.
  13. 암 환자를 진단하는 방법으로서,
    환자로부터 암 세포, 혈액 또는 혈액 분획 샘플을 수득하는 단계;
    샘플과, 시알릴 Lea 및 시알릴 Lex에 결합하는 항체를 접촉시키고, 시알릴 Lea 및 시알릴 Lex와 항체 사이의 결합을 검출함으로써, 시알릴 Lea 및 시알릴 Lex가 샘플 내에 존재하는지 여부를 검출하는 단계; 및
    샘플 내 시알릴 Lea 및 시알릴 Lex의 존재가 검출되는 경우 공격성 암을 지닌 환자로 진단하는 단계
    를 포함하는 방법.
  14. 암 환자를 진단 및 치료하는 방법으로서, 제12항 또는 제13항의 방법에 따라 환자를 진단하는 단계, 및 적어도 하나의 글리코모방체 화합물의 유효량을, 그러한 진단 및 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.
  15. 제14항에 있어서, 환자에게 화학요법 및/또는 방사선 요법을 실시하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  16. 제14항에 있어서, 환자에게 보르테조밉을 투여하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  17. 제16항에 있어서, 적어도 하나의 글리코모방체 화합물은 하기 화학식 (I)의 글리코모방체, 하기 화학식 (I)의 프로드러그 및 이들 중 임의 것의 약학적으로 허용가능한 염에서 선택되는 것인 방법:
    [화학식 (I)]
    Figure pct00004

    상기 식에서,
    R1은 C1-C8 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, C1-C8 할로알킬, C2-C8 할로알케닐 및 C2-C8 할로알키닐 기에서 선택되고;
    R2는 H, 비-글리코모방체 모이어티 및 링커-비-글리코모방체 모이어티에서 선택되고, 여기서 비-글리코모방체 모이어티는 폴리에틸렌 글리콜, N-연결된 시클람, 티아졸릴, 크로메닐, -C(=O)NH(CH2)1-4NH2, C1-C8 알킬 및 -C(=O)OY 기에서 선택되고, Y는 C1-C4 알킬, C2-C4 알케닐 및 C2-C4 알키닐 기에서 선택되고;
    R3은 C1-C8 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, C1-C8 할로알킬, C2-C8 할로알케닐 및 C2-C8 할로알키닐 기에서 선택되고;
    R4는 -OH 및 -NZ1Z2 기에서 선택되고, 여기서 동일하거나 상이할 수 있는 Z1 및 Z2는 각각 독립적으로 H, C1-C8 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, C1-C8 할로알킬, C2-C8 할로알케닐 및 C2-C8 할로알키닐 기에서 선택되고, Z1 및 Z2는 함께 연결되어 고리를 형성할 수 있고;
    R5는 C3-C8 시클로알킬 기에서 선택되고;
    R6은 -OH, C1-C8 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, C1-C8 할로알킬, C2-C8 할로알케닐 및 C2-C8 할로알키닐 기에서 선택되고;
    R7은 -CH2OH, C1-C8 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, C1-C8 할로알킬, C2-C8 할로알케닐 및 C2-C8 할로알키닐 기에서 선택되고;
    R8은 C1-C8 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, C1-C8 할로알킬, C2-C8 할로알케닐 및 C2-C8 할로알키닐 기에서 선택된다.
  18. 제14항 내지 제17항 중 어느 하나의 항에 있어서, 적어도 하나의 글리코모방체 화합물은 E-셀렉틴 및 CXCR4의 길항제인 헤테로이작용성 화합물에서 선택되는 것인 방법.
  19. 제14항 내지 제17항 중 어느 하나의 항에 있어서, 적어도 하나의 글리코모방체 화합물은 GMI-1271 또는 GMI-1359인 방법.
  20. 제10항 내지 제19항 중 어느 하나의 항에 있어서, 암은 백혈병, 림프종 또는 골수종인 방법.
  21. 제10항 내지 제20항 중 어느 하나의 항에 있어서, 암은 고형 종양을 특징으로 하는 것인 방법.
  22. 제11항, 제13항 내지 제21항 중 어느 하나의 항에 있어서, 항체는 HECA-452인 방법.
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US4289747A (en) 1978-12-26 1981-09-15 E-Y Laboratories, Inc. Immunological determination using lectin
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US4740461A (en) 1983-12-27 1988-04-26 Genetics Institute, Inc. Vectors and methods for transformation of eucaryotic cells
US4959455A (en) 1986-07-14 1990-09-25 Genetics Institute, Inc. Primate hematopoietic growth factors IL-3 and pharmaceutical compositions
US4912040A (en) 1986-11-14 1990-03-27 Genetics Institute, Inc. Eucaryotic expression system
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EP3052510A4 (en) * 2013-09-30 2017-03-29 GlycoMimetics, Inc. Methods and compositions for treating and/or preventing mucositis

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