CN111135303A - 一种抑制血管生成素样蛋白8的物质的应用 - Google Patents

一种抑制血管生成素样蛋白8的物质的应用 Download PDF

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Abstract

本申请提供一种抑制血管生成素样蛋白8的物质的应用，包括：一种抑制血管生成素样蛋白8的物质在制备预防或治疗睡眠呼吸暂停诱导的血管重塑相关疾病的产品中的应用。本申请将抑制血管生成素样蛋白8的物质应用于预防或治疗睡眠呼吸暂停诱导的血管重塑的产品中，通过抑制睡眠呼吸暂停模式的慢性间歇性低氧诱导的血管管壁增厚、血管管壁细胞内的胶原沉积、血管管壁弹力纤维紊乱、血压升高等，进而有效预防或减缓睡眠呼吸暂停诱导的血管管壁发生的病理性变化，预防或治疗睡眠呼吸暂停诱导的血管重塑相关疾病，可以有效提高睡眠呼吸暂停诱导的血管重塑的治疗效果，应用前景好。

Description

一种抑制血管生成素样蛋白8的物质的应用
技术领域
本申请涉及生物医学技术领域，特别涉及一种抑制血管生成素样蛋白8的物质的应用。
背景技术
睡眠过程中反复发生的呼吸停止现象称为睡眠呼吸暂停(OSA)，睡眠呼吸暂停可以诱导慢性间歇性低氧，促进血管重塑。
相对于持续低氧而言，任何低氧与正常氧的交替出现，都被称为间歇低氧，其中，慢性间歇性低氧可以持续数天或数周，乃至数年。慢性间歇性低氧(CIH)是睡眠呼吸暂停的标志，是导致动脉硬化性血管重塑的主要因素。
血管重塑(vascular remodelin)是指血管内径或血管内径和血管壁厚度的适应性变化，其结构变化包括血管平滑肌细胞增殖、迁移及细胞外基质(ECM)合成增加；功能变化表现为顺应性降低及对血管活性物质的反应性发生改变等。
反应血管重塑的早期指标有颈动脉内膜厚度(IMT)，现有研究证明睡眠呼吸暂停患者的颈动脉内膜厚度显著增加，且呼吸暂停指数(AHI)与颈动脉内膜厚度独立相关。目前反映呼吸暂停指数的指标主要为慢性间歇性低氧，睡眠呼吸暂停可以诱导慢性间歇性低氧，睡眠呼吸暂停模式的慢性间歇性低氧可以显著促进血管重塑，睡眠呼吸暂停诱导的血管重塑的主要病理表现包括平滑肌细胞增殖和凋亡失衡、细胞外基质降解、弹力纤维断裂、胶原沉积等。
但是，目前对于睡眠呼吸暂停诱导的血管重塑治疗效果仍然不理想，成为亟待解决的问题。
发明内容
有鉴于此，本申请实施例提供了一种抑制血管生成素样蛋白8的物质的应用，以解决现有技术中存在的技术缺陷。
本申请公开了一种抑制血管生成素样蛋白8的物质在制备预防或治疗睡眠呼吸暂停诱导的血管重塑相关疾病的产品中的应用。。
进一步地，所述预防或治疗睡眠呼吸暂停诱导的血管重塑相关疾病的产品包括预防或治疗睡眠呼吸暂停模式的慢性间歇性低氧诱导的血管重塑相关疾病的产品。
进一步地，所述预防或治疗睡眠呼吸暂停诱导的血管重塑相关疾病包括抑制睡眠呼吸暂停模式的慢性间歇性低氧诱导的血管管壁增厚、血管管壁细胞内的胶原沉积、血管管壁弹力纤维紊乱、血压升高、血脂升高、人低氧诱导因子的表达、细胞增殖相关基因的表达、增殖细胞核抗原的表达、血管平滑肌细胞的增殖、及其任意组合。
进一步地，所述抑制血管生成素样蛋白8的物质与其他预防或治疗睡眠呼吸暂停诱导的血管重塑的药物在所述产品中联合使用。
进一步地，所述抑制血管生成素样蛋白8的物质包括血管生成素样蛋白8抑制剂。
进一步地，所述血管生成素样蛋白8抑制剂包括在体内或体外与血管生成素样蛋白8结合或相互作用以抑制血管生成素样蛋白8生物学功能的制剂。
进一步地，所述血管生成素样蛋白8抑制剂包括血管生成素样蛋白8抗体、小分子血管生成素样蛋白8拮抗剂、基于核酸的血管生成素样蛋白8表达或活性抑制剂、基于肽的与血管生成素样蛋白8特异性相互作用的分子、与血管生成素样蛋白8特异性相互作用的受体分子、包含低密度脂蛋白受体的配体结合部分的蛋白质、结合血管生成素样蛋白8的支架分子、基于纤连蛋白的支架构建体、其他基于天然存在性重复序列蛋白的支架分子和抗血管生成素样蛋白8适配体中的任意一种或几种的组合。
本申请还公开了一种敲低或敲除血管生成素样蛋白8表达基因的物质在制备抑制睡眠呼吸暂停诱导的血管重塑的产品中的应用。
本申请提供的抑制血管生成素样蛋白8的物质的应用，其中抑制血管生成素样蛋白8的物质，通过抑制睡眠呼吸暂停模式的慢性间歇性低氧诱导的血管管壁增厚、血管管壁细胞内的胶原沉积、血管管壁弹力纤维紊乱、血压升高、血脂升高、人低氧诱导因子的表达、细胞增殖相关基因的表达、增殖细胞核抗原的表达、血管平滑肌细胞的表达，进而可以有效预防或减缓睡眠呼吸暂停诱导的血管管壁发生的病理性变化，进而预防或治疗睡眠呼吸暂停诱导的血管重塑相关疾病，故将抑制血管生成素样蛋白8的物质应用于预防或治疗睡眠呼吸暂停诱导的血管重塑的产品中，可以有效提高睡眠呼吸暂停诱导的血管重塑的治疗效果，应用前景好。
附图说明
图1是本申请一实施例所述的小鼠血管生成素样蛋白8表达水平对比图；
图2是本申请一实施例所述的小鼠血管生成素样蛋白8共定位染色图；
图3是本申请一实施例所述的小鼠血管管壁厚度染色对比图；
图4是本申请一实施例所述的小鼠胶原沉积染色对比图；
图5是本申请一实施例所述的小鼠血管管壁弹力纤维染色对比图；
图6是本申请一实施例所述的小鼠血压情况折线对比图；
图7是本申请一实施例所述的小鼠血脂情况柱状对比图；
图8是本申请一实施例所述的小鼠HIF-1α染色对比图；
图9是本申请一实施例所述的小鼠细胞增殖相关基因水平对比图；
图10是本申请一实施例所述的小鼠增殖细胞核抗原、平滑肌细胞染色对比图。
具体实施方式
下面结合附图对本申请的具体实施方式进行描述。
在本发明中，除非另有说明，否则本文中使用的科学和技术名词具有本领域技术人员所通常理解的含义。并且，本文中所用的试剂、材料和操作步骤均为相应领域内广泛使用的试剂、材料和常规步骤。同时，为了更好地理解本发明，下面提供相关术语的定义和解释。
血管生成素样蛋白(Angiopoietin-like protein，ANGPTL)：是一族不仅与血管生成相关，且与脂类代谢、葡萄糖代谢、能量代谢和胰岛素敏感性等密切相关的分泌性蛋白因子。ANGPTLs家族包含8个成员，是一类分泌蛋白。除血管生成素样蛋白5(Angiopoietin-like protein5,ANGPTL5)只在人体表达，其他ANGPTLs成员在人体和小鼠中均有表达。
血管生成素样蛋白8(Angiopoietin-like protein8,ANGPTL8)：是ANGPTLs家族的成员之一。ANGPTL8又名GM6484、RIFL、Lipasin和Betatrophin，由198个氨基酸构成，分子量为22kDa，基因位于染色体19p13.2 a。生理情况下，在人体中，ANGPTL8由肝脏特异性表达分泌，而在小鼠中，ANGPTL8主要由肝脏和脂肪组织分泌。
小干扰RNA(Small interfering RNA，siRNA)：还可以称为短干扰RNA(shortinterfering RNA)或沉默RNA(silencing RNA)，是一个长20到25个核苷酸的双股RNA，在生物学上有许多不同的用途。
反义RNA：是指与mRNA互补后，能抑制与疾病发生直接相关基因的表达的RNA。反义RNA封闭基因表达，具有特异性强、操作简单的特点，可用来治疗由基因突变或过度表达导致的疾病和严重感染性疾病。
C57BL/6J小鼠：是小鼠品系中的一种。该品系的小鼠乳腺癌发病率较低，有眼睛缺损，***裂发生率达20％，淋巴细胞性白血病自发率为6％，对放射性损伤有抵抗力，对结核杆菌敏感，对鼠痘病毒有一定的抵抗力，干扰素产量高，对百日咳易感因子敏感，嗜酒精性高，常用于致癌研究，是肿瘤学、生理学、遗传学等方面研究常用的品系。
免疫组织化学技术(immunohistochemistry)：也可称为免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)或免疫组化染色，是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及相对定量的研究。
免疫荧光(immunofluorescence technic)：将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上，与其相应的抗原(或抗体)结合后，在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。
HIF-1：是具有转录活性的核蛋白,具有相当广泛的靶基因谱,其中包括与缺氧适应、炎症发展及肿瘤生长等相关的近100种靶基因，HIF-1α是其中的人低氧诱导因子。
Western免疫印迹(Western Blot)：是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测的方法。其中，对已知表达蛋白可以用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物可以通过融合部分的抗体检测。
苏木精—伊红染色法(hematoxylin-eosin staining)：简称HE染色法，石蜡切片技术里常用的染色法之一。苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核酸着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。
胶原纤维染色(Masson染色)：是指用两种或三种阴离子染料混合，胶原纤维呈蓝色，肌纤维呈红色，是用来显示组织中纤维以及炎性因子的染色方法之一。
弹力纤维染色：简称弹力染色。弹力纤维是***发生形成较晚的一种纤维，在创伤修复中一般在4—5周才有较明显的弹力纤维形成。弹力纤维坚固、较小而弹性较大，容易伸展，在***起弹性作用。弹力纤维由弹性蛋白组成，新鲜时呈黄色又称黄纤维。弹力纤维的纤维分枝连成网，折光性强，含量多时在HE染片上呈折光性强的粉红色，量少的不显色。故量多时与胶原纤维不易区别，量少则不能观察。弹力纤维染色主要用于观察弹力纤维有无增生、肿胀、断裂、破碎及萎缩或缺如等病变。
本实施例提供一种抑制血管生成素样蛋白8的物质在制备预防或治疗睡眠呼吸暂停诱导的血管重塑相关疾病的产品中的应用。
具体地，抑制血管生成素样蛋白8的物质为具有抑制血管生成素样蛋白8作用的抗体、病毒、化合物、组合物、制剂、试剂盒和/或仪器等物质，其中，制剂可以为口服制剂、注射制剂等，也可以为液体制剂、冻干粉制剂、片剂、颗粒剂等，本申请对此不做限制。
预防或治疗睡眠呼吸暂停诱导的血管重塑相关疾病的产品包括预防睡眠呼吸暂停诱导的血管重塑的产品、预防睡眠呼吸暂停诱导的血管重塑相关疾病的产品、治疗睡眠呼吸暂停诱导的血管重塑的产品、治疗睡眠呼吸暂停诱导的血管重塑相关疾病的产品中的一种或几种的任意组合。其中，相关疾病是睡眠呼吸暂停诱导的血管重塑形成过程中产生的疾病、或睡眠呼吸暂停诱导的血管重塑引起的并发症、后遗症等与睡眠呼吸暂停诱导的血管重塑具有一定相关性的疾病，本申请对此不做限制。产品是具有相关预防和/或治疗作用的药物、制剂、试剂盒和/或仪器等，药物可以是药物化合物、药物组合物、药物配方等，制剂可以是液体制剂、冻干粉制剂，也可以是口服制剂、注射制剂等，本申请对此不做限制。
进一步地，所述预防或治疗睡眠呼吸暂停诱导的血管重塑相关疾病的产品包括预防或治疗睡眠呼吸暂停模式的慢性间歇性低氧诱导的血管重塑相关疾病的产品。
睡眠呼吸暂停可以诱导慢性间歇性低氧，睡眠呼吸暂停模式的慢性间歇性低氧可以显著促进血管重塑，睡眠呼吸暂停模式的慢性间歇性低氧诱导的血管重塑的主要病理表现包括平滑肌细胞增殖和凋亡失衡、细胞外基质降解、弹力纤维断裂、胶原沉积、血压升高、血脂升高等。
进一步地，所述预防或治疗睡眠呼吸暂停诱导的血管重塑相关疾病包括抑制睡眠呼吸暂停模式的慢性间歇性低氧诱导的血管管壁增厚、血管管壁细胞内的胶原沉积、血管管壁弹力纤维紊乱、血压升高、血脂升高、人低氧诱导因子的表达、细胞增殖相关基因的表达、增殖细胞核抗原的表达、血管平滑肌细胞的增殖、及其任意组合。
换而言之，可以通过抑制睡眠呼吸暂停模式的慢性间歇性低氧诱导的血管管壁增厚、抑制睡眠呼吸暂停模式的慢性间歇性低氧诱导的血管管壁细胞内的胶原沉积、抑制睡眠呼吸暂停模式的慢性间歇性低氧诱导的血管管壁弹力纤维紊乱、抑制睡眠呼吸暂停模式的慢性间歇性低氧诱导的血压升高、抑制睡眠呼吸暂停模式的慢性间歇性低氧诱导的血脂升高、抑制睡眠呼吸暂停模式的慢性间歇性低氧诱导的人低氧诱导因子的表达、抑制睡眠呼吸暂停模式的慢性间歇性低氧诱导的细胞增殖相关基因的表达、抑制睡眠呼吸暂停模式的慢性间歇性低氧诱导的增殖细胞核抗原的表达、抑制睡眠呼吸暂停模式的慢性间歇性低氧诱导的血管平滑肌细胞的增殖中的任意一种或几种来预防或治疗睡眠呼吸暂停诱导的血管重塑。
进一步地，所述抑制血管生成素样蛋白8的物质与其他预防或治疗睡眠呼吸暂停诱导的血管重塑的药物在所述产品中联合使用。
本实施例中所述的其他预防或治疗睡眠呼吸暂停诱导的血管重塑的药物可以为阿司匹林、血栓素A2等，本申请对此不做限制。
进一步地，所述抑制血管生成素样蛋白8的物质包括血管生成素样蛋白8抑制剂。
具体地，血管生成素样蛋白8抑制剂是特异性结合血管生成素样蛋白8抗体或其抗原结合片段。血管生成素样蛋白8可以通过口服、静脉、肌肉注射或皮下内施用于患者。
进一步地，所述血管生成素样蛋白8抑制剂包括在体内或体外与血管生成素样蛋白8结合或相互作用，以抑制血管生成素样蛋白8生物学功能的制剂。
进一步地，所述血管生成素样蛋白8抑制剂包括血管生成素样蛋白8抗体、小分子血管生成素样蛋白8拮抗剂、基于核酸的血管生成素样蛋白8表达或活性抑制剂、基于肽的与血管生成素样蛋白8特异性相互作用的分子、与血管生成素样蛋白8特异性相互作用的受体分子、包含低密度脂蛋白受体的配体结合部分的蛋白质、结合血管生成素样蛋白8的支架分子、基于纤连蛋白的支架构建体、其他基于天然存在性重复序列蛋白的支架分子和抗血管生成素样蛋白8适配体中的任意一种或几种的组合。
具体地，所述血管生成素样蛋白8抗体包括血管生成素样蛋白8中和抗体，基于核酸的血管生成素样蛋白8表达或活性抑制剂包括小干扰RNA(siRNA)、反义RNA等，基于肽的与血管生成素样蛋白8特异性相互作用的分子包括肽体(peptibody)等，结合血管生成素样蛋白8的支架分子包括锚蛋白重复蛋白(DARPin)、HEAT重复序列蛋白，ARM重复序列蛋白、三角形四肽重复序列蛋白(tetratricopeptiderepeat proteins)等。
本实施例还提供一种抑制血管生成素样蛋白8的物质在制备抑制睡眠呼吸暂停诱导的血管重塑形成的产品中的应用。
具体地，抑制睡眠呼吸暂停诱导的血管重塑形成的产品是抑制睡眠呼吸暂停诱导的血管重塑的发生或发展的药物、制剂、试剂盒和/或仪器等。
本实施例还提供一种抑制血管生成素样蛋白8表达的物质在制备抑制睡眠呼吸暂停诱导的血管重塑形成的产品中的应用。
具体地，抑制血管生成素样蛋白8表达的物质为具有抑制血管生成素样蛋白8表达作用的抗体、病毒、化合物、组合物、制剂、试剂盒和/或仪器等物质。
本实施例还提供一种敲低或敲除血管生成素样蛋白8表达基因的物质在制备抑制睡眠呼吸暂停诱导的血管重塑形成的产品中的应用。
具体地，敲低血管生成素样蛋白8和敲除血管生成素样蛋白8均为抑制血管生成素样蛋白8的方式，敲低或敲除血管生成素样蛋白8表达基因的物质为具有敲低或敲除血管生成素样蛋白8表达基因作用的抗体、病毒、化合物、组合物、制剂、试剂盒和/或仪器等物质。
本实施例还提供一种用于预防和/或治疗疾病或病症的方法，其中，所述疾病或病症通常且优选地选自睡眠呼吸暂停诱导的血管重塑及相关疾病，优选地选自睡眠呼吸暂停诱导的血管重塑及相关疾病的其他症状，其中所述方法包括施用本实施例所述的抑制血管生成素样蛋白8的物质和/或预防或治疗睡眠呼吸暂停诱导的血管重塑相关疾病的产品，优选为抑制血管生成素样蛋白8的药物或药物组合物，上述药物组合物可以通过与适当选择的和药学上可接受的赋形剂、媒介物、佐剂、添加剂、表面活性剂、干燥剂或稀释剂混合来制备，这些是本领域技术人员已知的并且可以适合于口服、肠胃外或局部给药。通常且优选地，本发明的药物组合物以片剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、小丸剂、口服或肠胃外溶液剂、混悬剂、栓剂、软膏剂、乳膏剂、洗剂、凝胶剂、糊剂和/或包含脂质体、胶束和/或微球等的形式给药。
一方面，可以将治疗有效量的抑制血管生成素样蛋白8的物质和/或预防或治疗睡眠呼吸暂停诱导的血管重塑相关疾病的产品施用于有此需要的动物，优选人。另一方面，可以将治疗有效量的抑制血管生成素样蛋白8的物质和/或预防或治疗睡眠呼吸暂停诱导的血管重塑相关疾病的产品施用于合理预期有此需要的动物，优选人。
其中“治疗有效量”在此是指足以调节所述睡眠呼吸暂停诱导的血管重塑及相关疾病的一种或多种症状的量，优选每次皮下注射10mg/kg，每日一次至三次。抑制血管生成素样蛋白8的物质和/或预防或治疗睡眠呼吸暂停诱导的血管重塑相关疾病的产品可以通过任何途径施用，包括口服、肌内、皮下、局部、透皮、鼻内、静脉内、舌下或直肠内施用，还可以与其他药物联合使用，剂量取决于给药途径、疾病的严重程度、患者或受试者的年龄和体重以及主治医生通常考虑的其他因素。
本实施例还提供一种制品，包含上述预防或治疗睡眠呼吸暂停诱导的血管重塑相关疾病的产品的容器或包装，以及诸如包装***物的书面说明和给药说明书。
下面结合具体的实验对上述实施例进行进一步说明。
选取6周龄的C57BL小鼠40只，分为空白对照组、ANGPTL8抑制组、CIH组和CIH+ANGPTL8抑制组，每组各选取10只小鼠。
其中，空白对照组的小鼠采用普通饲料喂养6周，不做任何处理。
ANGPTL8抑制组的小鼠采用普通饲料喂养6周，采用无菌磷酸盐缓冲溶液稀释人源血管生成素样蛋白8中和抗体(REGN3776)至浓度为10mg/kg，每周对该组小鼠皮下注射一次上述人源血管生成素样蛋白8中和抗体。
其中，血管生成素样蛋白8中和抗体REGN3776是由Regeneron公司的VelocImmune技术平台开发的。REGN3776有一个人免疫球蛋白G(IgG)4恒定区，在铰链区有一个稳定突变(在Genbank no.108位置丝氨酸到脯氨酸)。
CIH组的小鼠采用普通饲料喂养6周，在6周内持续进行睡眠呼吸暂停模式的慢性间歇性低氧处理(设备:OxyCyclerA84,BioSpherix,Redfield,NY,USA，)，氧气浓度由5％-21％-5％循环，每180秒循环一次，其中氧气浓度5％持续60s，氧气浓度21％持续60s，氧气浓度5％再持续60s，每天循环处理8小时。
CIH+ANGPTL8抑制组的小鼠采用普通饲料喂养6周，在6周内持续进行睡眠呼吸暂停模式的慢性间歇性低氧处理(设备:OxyCyclerA84,BioSpherix,Redfield,NY,USA，)，氧气浓度由5％-21％-5％循环，每180秒循环一次，其中氧气浓度5％持续60s，氧气浓度21％持续60s，氧气浓度5％再持续60s，每天循环处理8小时，另外采用无菌磷酸盐缓冲溶液稀释人源血管生成素样蛋白8中和抗体(REGN3776)至浓度为10mg/kg，每周对该组小鼠皮下注射一次上述人源血管生成素样蛋白8中和抗体。
在喂养上述四组小鼠六周后，分别收取上述四组小鼠的血管组织，将小鼠麻醉后，开胸心尖取血，剪去右心耳，向左心室灌注生理盐水，取出小鼠胸主动脉，采用多聚甲醛固定，次日石蜡包埋并切片，小鼠胸主动脉切片厚度为7μm。
取空白对照组和CIH组小鼠胸主动脉切片进行免疫组化染色，即取出每组小鼠的胸主动脉血管组织切片，室温晾10min后，4％多聚甲醛固定30min，磷酸缓冲盐溶液(Phosphate Buffer Saline，PBS)洗3遍，每遍5min，内源性过氧化物酶抑制剂孵育20min，PBS洗3遍，每遍5min，血清封闭30min，吸干血清后，一抗(ANGPTL8，Ab180915,100μl，购自Abcam)4℃过夜。第二天，室温晾30min后，二抗(与一抗对应的兔抗或鼠抗，ZM0003，100μl，购自中杉金桥)孵育2小时，二氨基联苯胺(3，3’-diaminobenzidine，DAB)显色液染色后(棕色为阳性)，苏木素复染30s-1min左右，水洗后用1％的盐酸酒精分化，再用自来水水洗返蓝。将切片置于水中冲洗后，将切片依次放入70％酒精-80％酒精-90％酒精-95％酒精-无水乙醇I-无水乙醇II-二甲苯I-二甲苯II中脱水透明，每个试剂中放置2min，最后在通风橱中风干切片后中性树胶封片，用直立显微镜(Nikon,Tokyo,Japan)观察并采集图像，得到图1。
如图1所示，图1-A是空白对照组小鼠胸主动脉切片免疫组化染色图，图1-B是CIH组小鼠胸主动脉切片免疫组化染色图，图1-C是上述两组小鼠胸主动脉中血管生成素样蛋白8表达水平对比图，其中，横轴表示组别，纵轴表示血管生成素样蛋白8表达水平(％)，柱形顶端的横线表示血管生成素样蛋白8活性水平的标准差。
从图1中可以看出，CIH组小鼠胸主动脉中血管生成素样蛋白8的活性水平远大于空白对照组，所以，血管生成素样蛋白8在睡眠呼吸暂停模式的慢性间歇性低氧诱导的血管重塑中表达增加。
取空白对照组和CIH组小鼠的胸主动脉切片进行共定位染色，即取出上述切片，室温晾10min后，采用4％多聚甲醛固定30min，磷酸缓冲盐溶液(phosphate buffer saline，PBS)清洗3遍，每遍清洗5min，内源性过氧化物酶抑制剂孵育20min，PBS清洗3遍，每遍清洗5min，血清封闭30min，吸干血清后一抗4℃过夜(血管生成素样蛋白8一抗与α-SMA一抗1：1混匀，PBS1：200稀释，ANGPTL8一抗，Ab180915，0.5ml，购自美国Abcam公司，α-SMA一抗，ZM0003，0.5ml购自购自中杉金桥)。第二天，室温晾30min后，对应的二抗孵育一小时后，DIPA封片，4℃保存1h后，通过直立显微镜(Nikon,Tokyo,Japan)观察并采集图像，得到图2。
如图2所示，图2-A是空白对照组和CIH组小鼠内皮细胞、血管生成素样蛋白8、细胞核的共定位染色图，第一列自上而下依次为空白对照组、CIH组小鼠胸主动脉切片中内皮细胞CD31染色图，其中红色点状部分表示内皮细胞，第二列自上而下依次为空白对照组、CIH组小鼠胸主动脉切片中血管生成素样蛋白8染色图，其中绿色点状部分表示血管生成素样蛋白8，第三列自上而下依次为空白对照组、CIH组小鼠胸主动脉切片中细胞核DAPI染色图，其中蓝色点状部分表示细胞核，第四列自上而下依次为空白对照组、CIH组小鼠的内皮细胞、血管生成素样蛋白8、细胞核的共定位染色图，可以看出血管生成素样蛋白8在内皮细胞中几乎无表达。
图2-B是空白对照组和CIH组小鼠血管平滑肌细胞、血管生成素样蛋白8、细胞核的共定位染色图，第一列自上而下依次为空白对照组、CIH组小鼠胸主动脉切片中血管平滑肌细胞VSMC染色图，其中红色点状部分表示血管平滑肌细胞，第二列自上而下依次为空白对照组、CIH组小鼠胸主动脉切片中血管生成素样蛋白8染色图，其中绿色点状部分表示血管生成素样蛋白8，第三列自上而下依次为空白对照组、CIH组小鼠胸主动脉切片中细胞核DAPI染色图，其中蓝色点状部分表示细胞核，第四列自上而下依次为空白对照组、CIH组小鼠的血管平滑肌细胞、血管生成素样蛋白8、细胞核的共定位染色图，可以看出相对于空白对照组，经过睡眠呼吸暂停模式的慢性间歇性低氧处理的小鼠血管生成素样蛋白8在血管平滑肌细胞中的表达明显增加。
所以，睡眠呼吸暂停模式的慢性间歇性低氧诱导的血管重塑会导致血管生成素样蛋白8的表达明显增加，且血管生成素样蛋白8主要表达在血管平滑肌细胞中。
分别对每一组小鼠的胸主动脉切片进行HE染色，即电吹风吹切片或烤切片至溶蜡；入二甲苯I中脱蜡15min，用吸水纸吸干液体；入二甲苯II中脱蜡15min，用吸水纸吸干液体；入二甲苯III中脱蜡15min，用吸水纸吸干液体；入100％酒精洗二甲苯5min，用吸水纸吸干液体；入95％酒精洗二甲苯5min，用吸水纸吸干液体；入80％酒精洗二甲苯5min，用吸水纸吸干液体；自来水冲洗2min，洗去酒精；苏木素(200ml苏木素+1.5ml冰醋酸)染色3-5min，自来水冲洗1min；盐酸分化液(400ml 75％酒精+3ml浓盐酸)分化2s(切片由蓝变红)，自来水冲洗(返蓝)5min；伊红染色2-3min，自来水冲洗30s；入80％酒精30s，用吸水纸吸干液体；入95％酒精3min，用吸水纸吸干液体；入100％酒精3min，用吸水纸吸干液体；入二甲苯I中5min，用吸水纸吸干液体；入二甲苯II中5min，用吸水纸吸干液体；中性树胶封片，通过直立显微镜(Nikon,Tokyo,Japan)观察并采集图像，得到图3。
如图3所示，图3-A是空白对照组小鼠胸主动脉切片的HE染色图，图3-B是ANGPTL8抑制组小鼠胸主动脉切片的HE染色图，图3-C是CIH组小鼠胸主动脉切片的HE染色图，图3-D是CIH+ANGPTL8抑制组小鼠胸主动脉切片的HE染色图，上述图中的“400×”表示放大倍数为400倍，图3-E是上述四组小鼠血管管壁厚度柱形对比图，其中，横轴表示组别，纵轴表示小鼠血管管壁厚度(μm)，柱形顶端的横线表示小鼠血管管壁厚度的标准差，横线上方的星号表示具有统计学意义。
从图3中可以看出，相对于空白对照组而言，ANGPTL8抑制组小鼠血管管壁厚度无较大差别，故相对于正常小鼠，抑制ANGPTL8不会对血管管壁厚度产生较大影响，CIH组小鼠血管管壁厚度相对于空白对照组增厚了约正常厚度的二分之一，可见睡眠呼吸暂停模式的慢性间歇性低氧会导致小鼠血管管壁厚度显著增厚，而CIH+ANGPTL8抑制组小鼠由于血管生成素样蛋白8抑制剂的作用，使接受过睡眠呼吸暂停模式的慢性间歇性低氧处理的小鼠血管管壁厚度仍然维持在正常水平。所以，抑制血管生成素样蛋白8可以显著抑制睡眠呼吸暂停模式的慢性间歇性低氧诱导的血管管壁增厚。
分别对每一组小鼠的胸主动脉切片分别进行胶原纤维染色和天狼星红染色，得到图4。
其中，胶原纤维染色的步骤包括：将每一组小鼠的胸主动脉切片脱蜡水洗；采用重铬酸钾染色液染色40min；水洗去浮色，酸性复红与丽春红(2：1)处理15min；磷钼酸5min，1％～％醋酸冲洗2～3次；亮绿复染8min，磷钼酸冲洗2s，1％醋酸冲洗2～3次；无水酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封固，通过直立显微镜(Nikon,Tokyo,Japan)进行观察并采集图像，得到图4-A至图4-E。
如图4所示，图4-A为空白对照组胶原纤维染色图，图4-B为ANGPTL8抑制组胶原纤维染色图，图4-C为CIH组胶原纤维染色图，图4-D为CIH+ANGPTL8抑制组胶原纤维染色图，其中胶原纤维、网状纤维呈绿色点状或条形状；肌纤维、纤维素、神经胶质纤维、粘液、红细胞等呈深浅不同的鲜粉红色点状或条形状，上述图中的“400×”表示放大倍数为400倍。图4-E为上述四组小鼠胶原沉积水平的柱形对比示意图，其中，横轴表示组别，纵轴表示胶原沉积水平(％)，柱形顶端的横线表示小鼠胶原沉积水平的标准差，横线上方的星号表示具有统计学意义。
从图4-A至图4-E中可以看出，相对于空白对照组而言、ANGPTL8抑制组小鼠的胶原沉积水平与其无明显差别，而CIH组小鼠的胶原沉积水平远远高于空白对照组，故可以说明睡眠呼吸暂停模式的慢性间歇性低氧可以诱导小鼠血管内的胶原沉积，但是CIH+ANGPTL8抑制组小鼠的胶原沉积水平与空白对照组亦无明显差别，所以抑制血管生成素样蛋白8可以抑制睡眠呼吸暂停模式的慢性间歇性低氧诱导的小鼠血管内的胶原沉积。
天狼星红染色的步骤包括：将每一组小鼠的胸主动脉切片脱蜡置水，苦味酸染色15s，使背景变成黄色；采用1质量份数的猩红和9质量份数的苦味酸滴染切片3min左右，直至切片颜色呈鲜亮状态；无水乙醇处理10s；二甲苯处理3min；采用干净树胶置于切片上，不封片，偏光镜下400倍照相，得到图4-F至图4-J。
如图4所示，图4-F为空白对照组天狼星红染色图，图4-G为ANGPTL8抑制组天狼星红染色图，图4-H为CIH组天狼星红染色图，图4-I为CIH+ANGPTL8抑制组天狼星红染色图，上述图中的“400×”表示放大倍数为400倍，图4-J为上述四组小鼠胶原沉积水平的柱形对比示意图，其中，横轴表示组别，纵轴表示胶原沉积活性水平(％)，柱形顶端的横线表示小鼠胶原沉积水平的标准差，横线上方的星号表示具有统计学意义。
从图4-F至图4-J中可以看出，相对于空白对照组而言、ANGPTL8抑制组小鼠的胶原沉积水平与其无明显差别，而CIH组小鼠的胶原沉积水平远远高于空白对照组，故可以说明睡眠呼吸暂停模式的慢性间歇性低氧可以诱导小鼠血管内的胶原沉积，但是CIH+ANGPTL8抑制组小鼠的胶原沉积水平与空白对照组亦无明显差别，所以抑制血管生成素样蛋白8可以抑制睡眠呼吸暂停模式的慢性间歇性低氧诱导的血管内的胶原沉积。
分别将每一组小鼠的胸主动脉切片进行弹力纤维染色，即电吹风吹切片或烤切片至溶蜡；入二甲苯I中脱蜡15min，用吸水纸吸干液体；入二甲苯II中脱蜡15min，用吸水纸吸干液体；入二甲苯III中脱蜡15min，用吸水纸吸干液体；入100％酒精洗二甲苯5min，用吸水纸吸干液体；入95％酒精洗二甲苯5min，用吸水纸吸干液体；入80％酒精洗二甲苯5min，用吸水纸吸干液体；自来水冲洗2min，洗去酒精；入碘液5min，自来水清洗3遍；入硫代硫酸钠5min，自来水清洗3遍；入70％酒精2s；入醛品红20s，70％酒精清洗30s；入橙黄G染液染色1s，无水乙醇清洗3min；入二甲苯5min；中性树胶封片。通过直立显微镜(Nikon,Tokyo,Japan)观察并采集图像，得到图5。
如图5所示，图5-A为空白对照组弹力纤维染色示意图，图5-B为ANGPTL8抑制组弹力纤维染色示意图，图5-C为CIH组弹力纤维染色示意图，图5-D为CIH+ANGPTL8抑制组弹力纤维染色示意图，上述图中的“400×”表示放大倍数为400倍，图5-E为上述四组小鼠胸主动脉切片弹性蛋白降解水平柱形对比示意图，其中以空白对照组小鼠胸主动脉切片的弹性蛋白降解水平作为1，横轴表示组别，纵轴表示弹性蛋白降解水平，柱形顶端的横线表示小鼠弹性蛋白降解水平的标准差，横线上方的星号表示具有统计学意义。
从图5中可以看出，CIH组小鼠的弹性蛋白降解水平远高于其他三组，可以说明相对于空白对照组的正常小鼠而言，睡眠呼吸暂停模式的慢性间歇性低氧可以诱导小鼠血管管壁的弹力纤维紊乱，而CIH+ANGPTL8抑制组小鼠的弹性蛋白降解水平远小于CIH组，与空白对照组、ANGPTL8抑制组相差无几，可以说明，抑制血管生成素样蛋白8可以显著抑制睡眠呼吸暂停模式的慢性间歇性低氧诱导的血管管壁弹力纤维紊乱。
采用无创尾动脉血压测量仪通过尾套法测量每一组小鼠的动脉血压，并采用prism5.0(GraphPad Software,San Diego,CA)进行统计学分析，得到图6。
如图6所示，图6为各组小鼠不同周龄阶段收缩压(SBP，mmHg)的变化示意图，其中横轴表示小鼠的周龄数，纵轴表示小鼠的收缩压，可以看出自6周龄后，即开始对CIH组小鼠进行睡眠呼吸暂停模式的慢性间歇性低氧处理后，CIH组小鼠的收缩压远高于其他三组小鼠的收缩压，故可以说明睡眠呼吸暂停模式的慢性间歇性低氧可以诱导小鼠血压升高，而对于CIH+ANGPTL8抑制组小鼠由于注射了血管生成素样蛋白8中和抗体抑制血管生成素样蛋白8，其收缩压水平与空白对照组无明显差别，所以，抑制血管生成素样蛋白8可以显著减轻睡眠呼吸暂停模式的慢性间歇性低氧诱导的血压升高。
分别对每一组小鼠进行血清脂质检测，即分别采取每一组小鼠的血清样品，在96孔板的空白孔中加入蒸馏水2.5μl，校准孔加入标准品2.5μl、血清样品2.5μl；每孔加入R1180μl，混匀，37℃环境下孵育5min，并在546nm波长下采用酶标仪测定各吸光度值A1；每孔加入R260μl，混匀，37℃环境下孵育5min，并在546nm波长下采用酶标仪测定各吸光度值A2；采用酶标仪比色，得到图7，其中脂质浓度(mmol/L)＝(样本A2-样本A1)-(空白A2-空白A1)/(标准A2-标准A1)-(空白A2-空白A1)×标准品浓度(mmol/L)。
如图7所示，图7-A为空白对照组、ANGPTL8抑制组、CIH组、CIH+ANGPTL8抑制组小鼠血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)浓度柱形对比示意图，图7-B为空白对照组、ANGPTL8抑制组、CIH组、CIH+ANGPTL8抑制组小鼠血清总胆固醇(TC)浓度柱形对比示意图，在上述两幅图中，横轴表示组别，纵轴表示血清中不同脂质的浓度，每一个柱形顶端的横线表示其浓度的方差，图中最上方的横线及星号表示将横线所覆盖的两组进行比较，具有统计学意义。
从图7中可以看出，空白对照组、CIH组小鼠血清中的低密度脂蛋白胆固醇、总胆固醇水平明显高于正常值，而ANGPTL8抑制组、CIH+ANGPTL8抑制组小鼠血清中的低密度脂蛋白胆固醇、总胆固醇水平明显降低，说明抑制血管生成素样蛋白8可以显著减轻睡眠呼吸暂停模式的慢性间歇性低氧诱导的血脂升高。
分别对每一组小鼠进行免疫组化处理和蛋白质印记检测处理，得到图8。
其中，免疫组化处理步骤包括：取出每组小鼠的胸主动脉血管组织切片，室温晾10min后，4％多聚甲醛固定30min，PBS洗3遍，每遍5min，内源性过氧化物酶抑制剂孵育20min，PBS洗3遍，每遍5min，血清封闭30min，吸干血清后，一抗(HIF-1α，ab16066，100μl，购自Abcam)4℃过夜。第二天，室温晾30min后，二抗(与一抗对应的兔抗或鼠抗)孵育2小时，DAB显色液染色后(棕色为阳性)，苏木素复染30s-1min左右，水洗后用1％的盐酸酒精分化，再用自来水水洗返蓝。将切片置于水中冲洗后，将切片依次放入70％酒精-80％酒精-90％酒精-95％酒精-无水乙醇I-无水乙醇II-二甲苯I-二甲苯II中脱水透明，每个试剂中放置2min，最后在通风橱中风干切片后中性树胶封片，用直立显微镜(Nikon,Tokyo,Japan)观察并采集图像，得到图8-A至图8-E。
如图8所示，图8-A为空白对照组小鼠的免疫组化染色图，图8-B为ANGPTL8抑制组小鼠的免疫组化染色图，图8-C为CIH组小鼠的免疫组化染色图，图8-D为CIH+ANGPTL8抑制组小鼠的免疫组化染色图，上述图中的“400×”表示放大倍数为400倍，图8-E为上述每一组小鼠的HIF-1α表达水平柱形对比图，其中横轴表示组别，纵轴表示HIF-1α表达水平，柱形顶端的横线表示HIF-1α表达水平的标准差，图中顶端的横线及横线上方的型号表示将横线所覆盖的两组进行比较，具有统计学意义。
从图8-A至图8-E可以看出，CIH组小鼠的HIF-1α表达水平明显高于其他三组，说明CIH可以显著促进HIF-1α的表达，而CIH+ANGPTL8抑制组小鼠HIF-1α的表达与空白对照组无明显差别，说明抑制血管生成素样蛋白8可以显著减轻睡眠呼吸暂停模式的慢性间歇性低氧诱导的HIF-1α表达增加。
蛋白质印记检测处理的步骤包括：收集每一组小鼠胸主动脉区域，在液氮中冷冻，并在-80℃的环境下储存。总蛋白提取实验试剂及组织裂解液的配置均现用现配，计算所用体积，在组织蛋白提取试剂中加入蛋白酶抑制剂(100×)、磷酸酶抑制剂(100×)和EDTA(100X)，混匀器混匀，至于冰上备用，即1ml裂解液中分别加入10μl蛋白酶抑制剂、10μl磷酸酶抑制剂和10μl乙二胺四乙酸(EDTA)。
采用匀浆法提取每一组小鼠胸主动脉区域的血管蛋白，即取胸主动脉组织，用生理盐水洗净血液，称重，置于冰上。剪碎组织，按0.5ml组织裂解液/100mg组织加入配置好的裂解液，用匀浆器研磨至组织无肉眼可见碎片；研磨过程需要将匀浆器***冰上操作，并且尽量减少气泡的产生；吸取组织悬液至1.5mlEP管中，用混匀器混匀15秒，置于冰上10分钟，如此重复3次；在4℃的环境下，以13000rpm的转速离心15分钟，取上清液至一个新的离心管中，即完成总蛋白提取。
使用BCA蛋白浓度测定试剂盒(Pierce BCA Protein Assay Kit)测定每个蛋白样品的蛋白浓度。试剂盒(Thermo Scientific，Prod 23228)包括:BCA试剂A，BCA试剂B和白蛋白标准试剂。
通过10％SDS-PAGE凝胶分离等量的蛋白质(40分离等泳道)，使用抗GAPDH(购自Abcam；1：1000稀释)、抗ANGPTL8(购自Abcam；1:1000稀释)、抗HIF-1α(购自Abcam；1:1000稀释)在4℃下探测印迹过夜，采用含有吐温20的Tris缓冲盐水洗涤，并与二抗(ZSGB-)一起孵育BIO，中国北京；1：10000)室温下1小时。然后洗涤印迹，并使用ChemiDoc TM TouchImaging System(Bio-Rad)进行分析，得到图8-F和图8-G。
如图8所示，图8-F为空白对照组、ANGPTL8抑制组、CIH组和CIH+ANGPTL8抑制组小鼠血管中相关HIF-1α水平的western-blot图，GAPDH为甘油醛-3-磷酸脱氢酶即内部参照，黑色面积表示每组中HIF-1α和甘油醛-3-磷酸脱氢酶的含量，黑色面积越大，则HIF-1α及甘油醛-3-磷酸脱氢酶的含量越多，图8-G为空白对照组、ANGPTL8抑制组、CIH组和CIH+ANGPTL8抑制组小鼠血管中相关HIF-1α水平的柱形对比图，横轴表示组别，纵轴表示以甘油醛-3-磷酸脱氢酶为内部参照的相关HIF-1α水平，柱形顶端的横线表示相关HIF-1α水平的标准差，图中顶端的横线及星号表示将横线所覆盖的两组进行比较，具有统计学意义。
从图8-F和图8-G中可以看出，CIH组小鼠的相关HIF-1α水平明显高于其他三组，说明CIH可以显著促进HIF-1α的表达，而CIH+ANGPTL8抑制组小鼠HIF-1α的表达与空白对照组无明显差别，说明抑制血管生成素样蛋白8可以显著减轻睡眠呼吸暂停模式的慢性间歇性低氧诱导的HIF-1α表达增加。
分别对每一组小鼠再次进行蛋白质印记检测处理，即通过10％SDS-PAGE凝胶分离等量的蛋白质(40分离等泳道)，使用抗β-actin(购自Abcam；1：1000稀释)、抗ANGPTL8(购自Abcam；1:1000稀释)、抗Bcl2(购自Cell signal；1:1000稀释)、抗Bax(购自Cell signal；1:1000稀释)在4℃下探测印迹过夜，采用含有吐温20的Tris缓冲盐水洗涤，并与二抗(ZSGB-)一起孵育BIO，中国北京；1：10000)室温下1小时。然后洗涤印迹，并使用ChemiDoc TM TouchImaging System(Bio-Rad)进行分析，得到图9。
如图9所示，图9-A为空白对照组、ANGPTL8抑制组、CIH组和CIH+ANGPTL8抑制组小鼠血管中Bcl2水平、Bax水平的western-blot图，其中，Bcl2、Bax均为细胞增殖相关基因，β-actin为内部参照，黑色面积表示每组中Bcl2水平、Bax水平以及β-actin水平，Bcl2水平、Bax水平、β-actin水平越高，黑色面积越大；图9-B为上述四组小鼠血管中Bcl2水平/Bax水平的柱形对比图，其中，横轴表示组别，纵轴表示相关Bcl2水平/Bax水平，柱形顶端的横线表示相关Bcl2水平/Bax水平的标准差，图中顶端的横线及横线上方的星号表示将横线所覆盖的两组进行比较，具有统计学意义。
从图9中可以看出，CIH组小鼠的Bcl2水平/Bax水平明显高于其他三组，说明睡眠呼吸暂停模式的慢性间歇性低氧可以显著促进Bcl2、Bax的表达，而CIH+ANGPTL8抑制组小鼠HIF-1α的表达与空白对照组无明显差别，说明抑制血管生成素样蛋白8可以显著抑制睡眠呼吸暂停模式的慢性间歇性低氧诱导的Bcl2水平、Bax水平表达增加，即抑制血管生成素样蛋白8可以显著抑制睡眠呼吸暂停模式的慢性间歇性低氧诱导的细胞增殖相关基因的表达增加。
分别对每一组小鼠进行增殖细胞核抗原(PCNA)免疫荧光染色处理和平滑肌细胞染色处理，得到图10。
免疫荧光染色处理的步骤包括：将各组小鼠胸主动脉切片脱蜡置水，1％柠檬酸抗原修复，10％过氧化物酶处理10min，血清封闭20min，一抗PCNA(ab29，购自Abcam，1:200稀释)孵育过夜，次日晾片30min，荧光二抗(与一抗对应鼠抗，A0460,1:200稀释，555红色，购自beyotime)孵育60min，DAPI封片，Ni-UNikon Upright Microscope equipped with aDS-Ri2 color CCD(Nikon,Tokyo,Japan)采图，得到图10-A至图10-D。
如图10所示，图10-A为空白对照组小鼠增殖细胞核抗原荧光染色图，图10-B为ANGPTL8抑制组增殖细胞核抗原荧光染色图，图10-C为CIH组小鼠增殖细胞核抗原荧光染色图，图10-D为CIH+ANGPTL8抑制组小鼠增殖细胞核抗原荧光染色图，其中蓝色点块状部分即为增殖细胞核抗原，上述图中的“400×”表示放大倍数为400倍。
从图10-A至图10-D中可以看出，CIH组中增殖细胞核抗原相较于其他三组表达明显增多，说明睡眠呼吸暂停模式的慢性间歇性低氧可以显著促进增殖细胞核抗原在血管管壁中的表达，而CIH+ANGPTL8抑制组增殖细胞核抗原与空白对照组增殖细胞核抗原表达无明显差别，说明抑制血管生成素样蛋白8可以显著抑制睡眠呼吸暂停模式的慢性间歇性低氧诱导的增殖细胞核抗原表达增加。
平滑肌细胞染色处理的步骤包括：将各组小鼠胸主动脉切片脱蜡置水，1％柠檬酸抗原修复，10％过氧化物酶10min，血清封闭20min，一抗α-SMA(ZM0003，购自中杉金桥，1:200稀释)孵育过夜，次日晾片30min，二抗(与一抗对应的鼠抗，PV-9000，购自中杉金桥，1：200稀释)孵育60min，DAB(DAB-0031，购自迈新)显色，中性树胶封片，Ni-UNikon UprightMicroscope equipped with a DS-Ri2 color CCD(Nikon,Tokyo,Japan)采图，得到图10-E至图10-H。
如图10所示，图10-E为空白对照组小鼠平滑肌细胞染色图，图10-F为ANGPTL8抑制组小鼠平滑肌细胞染色图，图10-G为CIH组小鼠平滑肌细胞染色图，图10-H为CIH+ANGPTL8抑制组小鼠平滑肌细胞染色图，上述图中的“400×”表示放大倍数为400倍，图10-I为上述四组小鼠血管平滑肌细胞的表达水平柱形对比图，其中横轴表示组别，纵轴表示血管平滑肌细胞表达水平(％)，柱形顶端的横线表示血管平滑肌细胞表达水平的标准差，横线上方的型号表示具有统计学意义。
从图10-E至图10-I可以看出，CIH组中血管平滑肌细胞相较于其他三组表达明显增多，说明睡眠呼吸暂停模式的慢性间歇性低氧可以显著促进血管平滑肌细胞在血管管壁中的表达，而CIH+ANGPTL8抑制组血管平滑肌细胞与空白对照组血管平滑肌细胞表达无明显差别，说明抑制血管生成素样蛋白8可以显著抑制睡眠呼吸暂停模式的慢性间歇性低氧诱导的血管平滑肌细胞表达增加，即抑制血管生成素样蛋白8可以显著抑制睡眠呼吸暂停模式的慢性间歇性低氧诱导的血管平滑肌细胞增殖。
综上所述，本申请提供的抑制血管生成素样蛋白8的物质的应用，其中抑制血管生成素样蛋白8的物质，通过抑制睡眠呼吸暂停模式的慢性间歇性低氧诱导的血管管壁增厚、血管管壁细胞内的胶原沉积、血管管壁弹力纤维紊乱、血压升高、血脂升高、人低氧诱导因子的表达、细胞增殖相关基因的表达、增殖细胞核抗原的表达、血管平滑肌细胞的表达，进而可以有效预防或减缓睡眠呼吸暂停诱导的血管管壁发生的病理性变化，进而预防或治疗睡眠呼吸暂停诱导的血管重塑相关疾病，故将抑制血管生成素样蛋白8的物质应用于预防或治疗睡眠呼吸暂停诱导的血管重塑的产品中，可以有效提高睡眠呼吸暂停诱导的血管重塑及相关疾病的治疗效果，应用前景好。
在本文中，“上”、“下”、“前”、“后”、“左”、“右”等仅用于表示相关部分之间的相对位置关系，而非限定这些相关部分的绝对位置。
在本文中，“第一”、“第二”等仅用于彼此的区分，而非表示重要程度及顺序、以及互为存在的前提等。
在本文中，“相等”、“相同”等并非严格的数学和/或几何学意义上的限制，还包含本领域技术人员可以理解的且制造或使用等允许的误差。
除非另有说明，本文中的数值范围不仅包括其两个端点内的整个范围，也包括含于其中的若干子范围。
上面结合附图对本申请优选的具体实施方式和实施例作了详细说明，但是本申请并不限于上述实施方式和实施例，在本领域技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本申请构思的前提下做出各种变化。

Claims (8)

1.一种抑制血管生成素样蛋白8的物质在制备预防或治疗睡眠呼吸暂停诱导的血管重塑相关疾病的产品中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其中所述预防或治疗睡眠呼吸暂停诱导的血管重塑相关疾病的产品包括预防或治疗睡眠呼吸暂停模式的慢性间歇性低氧诱导的血管重塑相关疾病的产品。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其中所述预防或治疗睡眠呼吸暂停诱导的血管重塑相关疾病包括抑制睡眠呼吸暂停模式的慢性间歇性低氧诱导的血管管壁增厚、血管管壁细胞内的胶原沉积、血管管壁弹力纤维紊乱、血压升高、血脂升高、人低氧诱导因子的表达、细胞增殖相关基因的表达、增殖细胞核抗原的表达、血管平滑肌细胞的增殖、及其任意组合。
4.根据权利要求1-3中任意一项所述的应用，其中所述抑制血管生成素样蛋白8的物质与其他预防或治疗睡眠呼吸暂停诱导的血管重塑的药物在所述产品中联合使用。
5.根据权利要求1-4中任意一项所述的应用，其中所述抑制血管生成素样蛋白8的物质包括血管生成素样蛋白8抑制剂。
6.根据权利要求5所述的应用，其中所述血管生成素样蛋白8抑制剂包括在体内或体外与血管生成素样蛋白8结合或相互作用以抑制血管生成素样蛋白8生物学功能的制剂。
7.根据权利要求6所述的应用，其中所述血管生成素样蛋白8抑制剂包括血管生成素样蛋白8抗体、小分子血管生成素样蛋白8拮抗剂、基于核酸的血管生成素样蛋白8表达或活性抑制剂、基于肽的与血管生成素样蛋白8特异性相互作用的分子、与血管生成素样蛋白8特异性相互作用的受体分子、包含低密度脂蛋白受体的配体结合部分的蛋白质、结合血管生成素样蛋白8的支架分子、基于纤连蛋白的支架构建体、其他基于天然存在性重复序列蛋白的支架分子和抗血管生成素样蛋白8适配体中的任意一种或几种的组合。
8.一种敲低或敲除血管生成素样蛋白8表达基因的物质在制备抑制睡眠呼吸暂停诱导的血管重塑诱导的血管重塑的产品中的应用。
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