KR20180021396A - 락토바실러스 플란타룸으로 발효시킨 홍화자 배양액의 리스테리아 항균조성물 - Google Patents

락토바실러스 플란타룸으로 발효시킨 홍화자 배양액의 리스테리아 항균조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 홍화자 배양액을 유효성분으로 포함하는 리스테리아(Listeria)에 대한 항균활성을 갖는 항균조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 홍화자 배양액은 유산균으로 발효시킨 것을 특징으로 하며, 상기 유산균은 락토바실러스 플란타룸(Lactobacilus plantarum)인 것을 특징으로 하는 항균조성물을 제공하는 것이다.

Description

락토바실러스 플란타룸으로 발효시킨 홍화자 배양액의 리스테리아 항균조성물{ANTIBACTERIAL-LISTERIA COMPOSITION OF CULTURE MEDIUM CONTAINING SAFFLOWER BERRIES BERRIES FERMENTED WITH LACTOBACILLUS PLANTARUM}
본 발명은 홍화자 배양액을 유효성분으로 포함하는 리스테리아(Listeria)에 대한 항균활성을 갖는 항균조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 홍화자 배양액을 유산균으로 발효시키고, 상기 유산균은 락토바실러스 플란타룸(Lactobacilus plantarum)인 것을 특징으로 하는 항균조성물에 관한 것이다.
흙, 먼지, 동물성 식품류(각종 육류), 물, 조류, 물고기 등에서 분리되는 리스테리아 모노사이토젠스 균은 인수공통 감염을 일으키는 식중독균으로서 리스테리아속에 속하는 비아포성의 통성혐기성 간균이다. 분류학적 특징으로는 그람양성, 카탈라제(catalase) 양성, 산화효소(oxidase) 음성, VP와 메틸레드(methyl red) 양성, 에스큘린(esculin) 가수분해 양성, 요소 및 젤라틴 가수분해 음성으로서 격자로 연결된 펩티도글라이칸(peptidoglycan)을 가지고 있다. 현재 13가지 혈청형이 알려져 있는데 대다수가 식품 등에서 발견된다. 특히 이 균은 냉장온도에도 성장이 가능하기 때문에 가끔 냉장 및 냉동식품을 섭취하여 감염되면 빈도는 낮지만 사망하는 사례도 보고되었다.
이 중에서 3 가지 혈청형(1/2a, 1/2b, 4b)이 인체감염과 관련되고, 감염될 경우 일차적으로 뇌염, 뇌수막염, 뇌농양과 같은 중추신경계 증상을 일으킨다. 건강한 사람이 이 균에 감염되면 증상이 없거나 가벼운 열, 복통, 설사, 구토, 두통 등을 일으키지만, 임신부, 신생아(태반을 통한 감염), 노인과 면역능력이 저하된 환자들이 감염되면 질병을 일으킬 수 있다. 리스테리아 감염의 심각한 증상으로는 균혈증, 중앙신경계 감염 및 유산 등이 알려져 있다.
이에, 식품 등에서 주로 발견되는 리스테리아 모노사이토젠스 균을 억제하기 위하여 본 발명은 홍화자 배양액을 유효성분으로 포함하는 리스테리아(Listeria)에 대한 항균활성을 갖는 항균효과를 나타냄을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 하나의 목적은 홍화자 배양액을 유효성분으로 포함하는 리스테리아(Listeria)에 대한 항균활성을 갖는 항균조성물에 관한 것이다.
본 발명의 다른 목적은 홍화자 배양액을 유산균으로 발효시키고, 상기 유산균은 락토바실러스 플란타룸(Lactobacilus plantarum)인 것을 특징으로 하는 항균조성물에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 유산균을 배양하는 준비단계; 홍화자를 세척 및 건조시키고 분말화하여 배양액을 제조하는 단계; 상기 제조한 배양액을 유산균에 접종하여 발효하는 단계 및 상기 발효한 홍화자 배양액을 수득하는 단계;를 포함하는 항균조성물의 제조방법을 제공하는 것이다.
상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명의 목적은 홍화자 배양액을 유효성분으로 포함하는 리스테리아(Listeria)에 대한 항균활성을 갖는 항균조성물을 제공한다.
본 발명은 또한, 홍화자 배양액을 유산균으로 발효시키고, 상기 유산균은 락토바실러스 플란타룸(Lactobacilus plantarum)인 것을 특징으로 한다.
본 발명은 또한, 유산균을 배양하는 준비단계; 홍화자를 세척 및 건조시키고 분말화하여 배양액을 제조하는 단계; 상기 제조한 배양액을 유산균에 접종하여 발효하는 단계 및 상기 발효한 홍화자 배양액을 수득하는 단계;를 포함하는 항균조성물의 제조방법을 제공한다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 홍화자 배양액을 함유하는 리스테리아증에 대한 약학적 조성물; 식품 보존제 조성물, 식품 조성물 및 의약외품 조성물을 제공하는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 따른 홍화자 배양액은 리스테리아 모노사이토젠스를 억제함으로써 유효한 효과를 갖는 항균성 발효액을 제공하는 효과가 있으며, 이를 이용한 항균조성물, 약학적 조성물, 식품 보존제 조성물, 식품 조성물 및 의약외품 조성물로서 사용할 수 있다.
도 1은 본 발명의 일 구현예에 따른 리스테리아균에 대한 홍화자 배양액의 항균 효과를 확인한 사진이다.
도 2는 본 발명의 일 구현예에 따른 리스테리아균의 증식을 억제하는 홍화자 배양액의 최소억제농도(MIC)를 확인한 사진이다.
본 발명은 홍화자 배양액을 유효성분으로 포함하는 리스테리아(Listeria)에 대한 항균활성을 갖는 항균조성물을 제공하고, 발효물은 홍화자 배양액을 유산균으로 발효시킨 것을 특징으로 하며, 상기 유산균은 락토바실러스 플란타룸(Lactobacilus plantarum)인 것을 특징으로 한다.
본 발명의 발명자들은 홍화(safflower, Carthamus timctorius L.)의 씨인 홍화자를 이용하여 미생물에 대하여 항균활성을 가지고, 항산화 활성을 가짐으로써 식품 보존 효과가 뛰어나고, 식중독 등의 질병의 예방, 개선 및 치료 효과를 갖는 물질을 발굴하기 위하여 연구하던 중, 식중독 등의 질병의 원인이 되는 리스테리아 모노시토게네스(Listeria monocytogenes)에 대하여 우수한 항균활성을 가지고, 합성 산화제와 동등한 또는 이보다 우수한 항산화 활성을 가진다는 것을 확인하여, 이를 토대로 본 발명을 완성하였다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명에 있어서, 홍화(Safflower)는 일년생 초본식물로 원산지는 이집트, 남아시아로 추정되며 우리나라에서는 붉은색의 염료재와 약용식물로 많이 재배되고 있다. 현재는 의성에서 많이 재배되고 있으며 김천, 함양, 강화에서도 재배되고 있다. 홍화의 특징으로 줄기는 직립하고 기부는 목질화되며 윗부분에서 가지가 많이 발생하면서 가늘어진다. 부드러우며 털이 없고, 흰녹색으로 가느다란 세로의 홈이 있으며 성숙했을때 부러지기 쉽다. 잎은 어긋나고 넓은 피침모양으로 길이는 3. 5~9cm 폭은 1~3. 5cm이며, 단단하고 잎자루가 거의 없이 줄기를 싸고 있는데 가장자리는 예리한 톱니모양이다. 꽃은 7~8월에 피고 엉겅퀴같이 생겼으며 붉은빛이 도는 노란색이고 가지 끝에 1개씩 핀다. 또한, 홍화는 골절, 골다공증 등의 골질환 치료제로 쓰여 오면서 경험적으로 그 효능을 입증받았으며 그 외에도 고혈압, 동맥경화증, 척추디스크, 신경통, 혈액순환 촉진에도 효과적이라 한다.
본 발명은 홍화자 배양액의 제조방법에서 배양액 형성 단계에 있어서, 유산균을 MRS 배지에 과포화 배양하는 단계; 홍화자를 세척 및 건조시켜 분말로 만드는 단계; 상기 분말로 만든 홍화자를 배양된 MRS 배지에 첨가하는 단계; 및 여과지로 여과한 후 동결건조하는 단계;를 포함한다.
본 발명의 바람직한 양태에 따르면, 상기 식물은 꽃, 잎, 줄기, 열매, 종자, 뿌리 및 전초를 포함하는 군으로부터 선택될 수 있으나, 보다 바람직하게는 열매를 사용하는 것을 특징으로 한다.
본 발명의 홍화자 배양액은 25~50 ㎎/㎖의 농도를 갖는 것을 특징으로 한다.
본 발명의 상기 발효 단계는 25 내지 37℃의 온도에서 6 내지 72시간 동안 이루어지는 것을 특징으로 하며, 상기 제조과정을 수행하여 수득한 발효물은 이후 여과하거나 농축 또는 건조과정을 수행하여 용매를 제거할 수 있으며, 여과, 농축 및 건조를 모두 수행할 수 있다. 구체적으로 상기 여과는 여과지를 이용하거나 감압여과기를 이용할 수 있으며, 상기 농축은 감압 농축기, 일례로 회전 증발기를 이용하여 감압농축할 수 있으며, 상기 건조는 일례로 동결건조법으로 수행할 수 있다. 또한, 상기 홍화자 배양액은 수득된 발효물을 농축 및 동결건조하여 수분을 완전히 제거시킨 것일 수 있으며, 상기 수분을 완전히 제거시킨 홍화자 배양액은 분말형태로 사용하거나 상기 분말을 증류수 또는 통상의 용매에 녹여 사용할 수 있다.
본 발명은 홍화자 배양액을 유효성분으로 포함하는 위해 미생물에 대한 항균조성물을 제공한다.
본 발명에 있어서, "항균(antibacterial)"이란 세균(bacteria) 등의 병원성 미생물 또는 위해 미생물의 성장을 저해하는 것뿐만 아니라 이의 생존을 저해하여 살균하는 것을 포함한다. 또한, 본 발명에 있어서, "항균조성물"이란 항미생물제를 총칭하는 의미인 항생제와 같은 의미일 수 있고, 항균제, 살균제, 방부제, 보존제 또는 제균제와 같은 의미일 수 있으며, 바람직하게는 그람 양성균 및 그람 음성균의 발육과 생활 기능을 저해하고 이의 생존을 저해할 수 있는 물질을 의미한다.
본 발명의 항균조성물은, 조성물 총 중량에 대하여 상기 홍화자 배양액을 0.01 내지 99.99 중량%, 바람직하게는 0.1 내지 99 중량%로 포함할 수 있으며, 상기 항균조성물의 사용방법 및 사용목적에 따라 유효성분의 함량을 적절히 조절할 수 있다.
상기 향균조성물은 위해 미생물 또는 병원성 미생물, 구체적으로는 그람 양성균 또는 그람 음성균에 대한 항균 활성을 갖는 항균조성물일 수 있고, 보다 상세하게는 리스테리아균(Listeria sp .)에 대해 항균활성을 갖는 항균조성물이다.
본 발명의 리스테리아 균은 주로 유산을 일으키는 병원균으로, 병해부의 기관, 혈액 및 뇌척수액 등에서 분리되고, 포유류와 조류에 감염될 수 있다. 상기 리스테리아균 중 학계에 보고되어 있는 리스테리아병을 유발하는 리스테리아 모노시토게네스는 리스테리아 병을 일으키며, 그람양성으로 호기성 세균이다.
본 발명의 항균조성물은 인간을 포함한 동물에 직접 적용되어 항균 활성을 나타낼 수 있으며, 어류 또는 어패류 등의 해양 생물에 적용되어 어류 또는 어패류 등의 폐사율을 낮추고 생산성을 증가할 뿐만 아니라 인간 등의 해양 생물을 섭취하는 타 동물의 2차 감염을 예방할 수 있다. 상기 동물은 식물에 대응하는 생물군으로 주로 유기물을 영양분으로 섭취하며, 소화나 배성 및 호흡기관이 분화되어 있는 것을 말한다.
본 발명의 항균조성물은 홍화자 배양액 외에 당질, 단백질, 지질, 비타민류 및 미네랄류를 포함할 수 있다.
상기 당질은 그 사용 목적 및 용도에 따라 적의 선택될 수 있으며, 일례로 벌꿀, 덱스트린, 수크로오스, 팔라티노스, 포도당, 과당, 물엿, 당알콜(sugar alcohol), 소르비톨, 크실리톨, 말티톨일 수 있으나, 특별히 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 단백질은 그 사용 목적 및 용도에 따라 적의 선택될 수 있으며, 일례로, 카제인(casein), 유청 단백질(whey protein) 등의 우유 유래 단백질, 대두 단백질, 이들 단백질의 트립신, 펩신 등의 동물 유래 효소 및 뉴트라아제(neutrase), 알칼라아제(alkilase)에 의한 가수분해물일 수 있으나, 특별히 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 지질은 그 사용 목적 및 용도에 따라 적의 선택될 수 있으며, 일례로, 제1가 포화지방산, 다가 불포화지방산을 포함하는 해바라기유, 채종유(rapeseed oil), 올리브유, 홍화유(safflower oil), 옥수수유, 대두유, 팜유(palm oil), 야자유 등의 각종 식물 유래 유지, 중쇄 지방산(middle-chain fatty acid), EPA, DHA, 대두유래 인지질, 우유 유래 인지질일 수 있으나, 특별히 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 비타민류는 특별한 제한은 없으며, 상기 미네랄류는 그 사용 목적 및 용도에 따라 적의 선택될 수 있으며, 일례로, 인산칼륨, 탄산칼륨, 염화칼륨, 염화나트륨, 유산칼슘, 글루콘산칼슘, 판토텐산칼슘, 카제인칼슘, 염화마그네슘, 황산제1철, 탄산수소나트륨일 수 있으나, 특별히 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 당질, 단백질, 지질, 비타민류 및 미네랄류 중 어느 것에 대해서도, 조성물의 항균성이 유지되는 한 상기 구체예에 한정되지 않고 다른 성분을 포함할 수 있으며, 각각의 함량은 항균성이 유지되는 한 제한되지 아니하고, 바람직하게는 전체 조성물 대비 0.1 내지 15 중량%, 바람직하게는 0.5 내지 10 중량%일 수 있다.
또한, 상기 항균조성물은 다양한 형태로 제형화될 수 있으며, 일례로 분말, 과립, 정제, 환제, 당의정제, 캡슐제, 액제, 겔제, 시럽제, 슬러리제, 현탁액 또는 주사제 등의 제형으로 제조될 수 있으나, 이에 한정되지 아니하고 본 발명이 속하는 기술분야에서 공지된 다양한 방법을 통하여 제형화 될 수 있다.
본 발명의 상기 항균조성물은 항균 활성이 요구되는 다양한 목적 및 용도로 사용될 수 있으며, 구체적으로는 병원성 미생물 감염에 의한 질병의 예방 또는 치료 효과가 있는 약학적 조성물, 식품 보존제 조성물 및 식품 조성물의 용도로 사용될 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 항균조성물을 유효성분으로 포함하는 식중독 치료 또는 예방용 약학적 조성물을 제공한다.
상기 식중독이란 자연독이나 유해물질이 함유된 음식물을 섭취함으로써 생기는 급성 또는 만성적인 질환으로, 주로 발열, 구토, 설사 및 복통 등의 증세를 수반한다. 상기 식중독은 원인물질에 따라 세균성 식중독, 화학성 식중독, 자연독 식중독 및 미생물 독성대사물질에 의한 식중독으로 구분할 수 있으며, 상기 세균성 식중독은 감염성 식중독 및 독소형 식중독으로 구분할 수도 있다.
식중독의 대부분은 세균에 의하여 생기는 세균성 식중독으로서, 살모넬라균, 장염 비브리오균 또는 병원성 대장균 등에 의한 감염성 식중독과 황색포도상구균 또는 보둘리누스균 등이 생성한 독소에 의한 독소형 식중독이 가장 일반적이다.
본 발명의 식중독 치료 또는 예방용 약학적 조성물은 홍화자 배양액 이외에 제형 및 사용방법에 따라 약리학적으로 사용가능한 담체나 부형제를 부가로 포함할 수 있으며, 본 발명의 조성물 단독으로 또는 식중독 원인균에 의한 감염의 치료제로서의 효능 증진을 위해 다른 약학적 활성성분과 조합하여 투여될 수 있다. 이 경우 식중독의 예방 또는 치료용 조성물 내 홍화자 배양액의 함량은 0.001 내지 99 중량%일 수 있고, 조성물 내 유효성분의 함량이 0.001 중량% 미만인 경우 효과적인 효능을 위해선 다량의 투여가 필요할 수 있으며, 99 중량% 초과하는 경우 사용량에 비해 효능이 일정할 수 있어 비경제적일 수 있다. 또한, 사용방법 및 사용목적에 따라 식중독에 의한 질병의 예방 또는 치료용 약학적 조성물은 홍화자 배양액의 함량을 적절히 조절할 수 있다.
본 발명의 식중독의 예방 또는 치료용 조성물은 경구 또는 비경구로 투여될 수 있으며, 바람직하게는 경구로 투여될 수 있으나, 이의 제형은 사용방법에 따라 달라질 수 있으므로 하기 기술한 바에 한정되는 것은 아니다.
제형의 예로는 경고제(PLASTERS), 과립제(GRANULES), 로션제(LOTIONS), 산제(POWDERS), 시럽제(SYRUPS), 액제 (LIQUIDS AND SOLUTIONS), 에어로솔제(AEROSOLS), 연고제(OINTMENTS), 유동엑스제(FLUIDEXTRACTS), 유제(EMULSIONS), 현탁제(SUSPESIONS), 침제(INFUSIONS), 정제(TABLETS), 주사제(INJECTIONS), 캅셀제(CAPSULES) 및 환제(PILLS) 등이 있다.
더 나아가 본 발명의 식중독의 예방 또는 치료용 약학적 조성물은 당해 기술 분야의 공지된 적절한 방법을 사용하여 또는 레밍턴의 문헌(Remington's Pharmaceutical Science(최근판), Mack Publishing Company, Easton PA)에 개시되어 있는 방법을 이용하여 바람직하게 제형화될 수 있다.
상기 약리학적으로 허용가능한 담체, 또는 희석제, 보존제, 안정화제, 습윤제, 유화제, 용해제, 감미제, 착색제, 삼투압 조절제, 산화방지제 등의 부형제는 제형에 따라 통상의 물질을 사용할 수 있으며, 제제화하는 경우 충진제, 증량제, 습윤제, 붕해제 또는 계면활성제를 사용할 수 있다. 대표적인 희석제 또는 부형제로는 물, 덱스트린, 칼슘카보네이드, 락토스, 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르, 리퀴드 파라틴 및 생리식염수가 있다.
구체적으로는 제형에 따라 경구투여의 경우, 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용할 수 있고, 비경구투여의 경우, 멸균된 수용액, 비수성용제 또는 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제 등을 사용할 수 있다. 상기 비수성용제 또는 현탁제는 일례로 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등 일 수 있으며, 상기 좌제는 일례로 위텝솔, 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지 또는 글리세로제라틴 등일 수 있다. 또한, 추가로 본원발명의 식중독의 예방 또는 치료용 조성물은 생리식염수 또는 유기용매와 같이 약제로 허용된 여러 담체와 혼합하여 사용될 수 있고, 안정성이나 흡수성을 증가시키기 위하여 글루코스, 수크로스 또는 덱스트란과 같은 카보하이드레이트, 아스코르브산(ascorbic acid) 또는 글루타치온과 같은 항산화제(antioxidants), 킬레이팅 물질(chelating agents), 저분자 단백질 또는 다른 안정화제(stabilizers)들과 함께 사용될 수 있다.
본 발명의 식중독의 예방 또는 치료용 약학적 조성물의 투여량 또는 사용량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설률 및 질환의 중증도 등을 고려하여 결정하는 것이 바람직하며, 예컨대 1일 유효 투여량은 통상적으로 성인(70 kg)의 경우, 10 내지 5000 mg/kg이며 바람직하게는 100 내지 3000 mg/kg이고, 하루 1 내지 수회 투여될 수 있으며, 바람직하게는 하루 1 내지 3회 투여될 수 있다.
투여량은 여러 가지 조건에 따라 변동가능하기 때문에, 상기 투여량에 가감이 있을 수 있다는 사실은 당업자에게 자명하며, 따라서 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다. 투여횟수는 원하는 범위 내에서 하루에 1회, 또는 수회로 나누어 투여할 수 있으며, 투여 기간도 특별히 한정되지 않는다.
또한, 본 발명은 상기 항균조성물을 유효성분으로 포함하는 보존제에 관한 것이다. 상기 항균조성물의 유효성분인 홍화자 배양액은 식품의 부패의 원인이 되는 위해 미생물 또는 식품에서 번식하여 식중독을 일으키는 세균에 대한 항균력을 가질 뿐만 아니라, 합성 항산화제와 유사한 라디칼 소거능을 가지고 있으므로, 식품의 산화방지 효과가 있으므로 보존제 조성물 특히, 건강기능식품의 유효성분으로 현저하게 우수한 식품 보존 효과를 갖는다.
상기 보존제는 세균, 곰팡이 및 효모 등의 위해 미생물 또는 부패 미생물의 증식을 억제하거나 살균하여, 위해 미생물 또는 부패 미생물에 의해 감염되거나 부패될 수 있는 보존대상의 변질, 산패 또는 부패를 방지하고 보존대상의 상태를 유지하기 위하여 사용되는 물질을 의미하며, 바람직하게는 식품, 사료, 화장품 및 의약품으로 이루어진 군중에서 선택된 1종 이상에 사용될 수 있는 것을 의미한다. 상기 보존제 중, 식품에 사용되는 조성물을 식품 보존제 조성물이라 한다. 상기 식품 보존제 조성물은 식품의 변질, 산패 또는 부패를 방지하기 위하여 첨가되는 물질을 의미하며, 식품 보존제 조성물은 미생물의 성장을 억제함과 동시에 식품의 맛, 향 등 경시변화를 제어할 수 있을 것이 요구된다.
상기 보존제 조성물은 전체 조성물 100 중량부에 대하여 상기 항균조성물을 0.01 내지 99.9 중량부 또는 0.1 내지 50 중량부 포함하는 것일 수 있다.
또한, 상기 항균조성물을 포함하는 상기 항균조성물 외에 보존제 조성물에 포함되는 통상의 물질을 추가로 포함할 수 있다. 또한, 상기 보존제 조성물은 보존제 조성물은 본 발명의 효과를 제한하지 않는 범위 내에서, 종래의 합성 보존제 또는 유기산 혼합물을 함께 사용할 수 있다. 또한, 상기 보존제 조성물이 식품 보존제 조성물인 경우, 식품류의 보존성을 증가시키기 위한 목적으로 식품학적으로 허용되는 용매 또는 희석제를 추가로 첨가될 수 있다.
상기 보존제 조성물이 식품 보존제 조성물인 경우, 상기 유기산은 식품에 사용가능한 산인 젖산, 초산, 시트르산, 사과산 등을 사용할 수 있으며, 일 예로, 항균력이 크고 자극적인 맛이나 냄새를 갖지 않는 젖산일 수 있다. 또한, 상기 유기산의 염류가 사용될 수 있으며, 상기 유기산의 염류의 경우, 상기 유기산의 짝염기를 갖고 있어 완충 효과를 가지므로 항균제 조성물의 외부환경에 의한 pH 변화를 줄일 수 있다.
상기 식품 보존제 조성물은 다양한 식품에 사용될 수 있다. 상기 식품 보존제 조성물은 어류, 육류 및 야채류 등과 같은 천연 식품이나 생면 등을 포함한 면, 호빵 등을 포함한 빵, 떡, 즉석 스프 등의 가공 식품이나 포장 식품 등에 사용될 수 있으며, 일 예로 수산가공품, 식품가공품, 어육제품, 두부류, 묵류, 건강보조식품, 조미식품, 제빵 및 제과류, 유가공품, 절임식품, 발효식품 또는 음료 등에 사용될 수 있으나, 이의 종류에 한정되는 것은 아니다.
상기 식품 보존제 조성물은 식품의 제조과정에 직접 첨가될 수 있으며, 첨가되는 방법으로는 일 예로 상기 조성물에 식품을 침지하거나, 상기 조성물을 식품에 분무하는 방법일 수 있다. 상기 식품을 침지시켜 식품 보존제 조성물을 처리하는 방법은 홍화자 배양액의 농도를 기준으로 0.5 내지 10.0 중량%, 바람직하게는 1 내지 7.5 중량%, 더욱 바람직하게는 2 내지 5 중량%가 되도록 제조한 상기 식품 보존제 조성물을 포함하는 침지액에서 세척하거나, 30초 내지 30분 동안 침지하는 단계를 포함할 수 있으나, 상기 침지액의 농도 및 침지 시간은 식품의 종류에 따라 적절히 조절될 수 있다. 또한, 가공육이나 가공식품의 경우에는 본 발명의 식품 보존제 조성물 적량을 가공초기에 식품에 첨가하는 방법으로 식품 보존제 조성물을 처리할 수 있으며, 포장육과 같은 미가공 식품의 경우에는 식품의 외표면에 도포하는 방법으로 식품 보존제 조성물을 처리할 수 있다.
상기 식품 보존제 조성물의 처리량은 처리 대상 식품의 특성에 따라 조절할 수 있으며, 일 예로 과자 등과 같은 지방질이 적은 식품의 경우는 소량의 첨가만으로 보존효과를 높일 수 있으므로, 소량만을 처리할 수 있다. 따라서, 구체적으로 식품에 대하여 첨가하는 비율은 제한이 없으며, 식품의 특성이나 맛을 유지하는 범위 내에서 적절한 양을 선택할 수 있으며, 수산가공품, 식품가공품, 어육제품, 조미식품, 제빵 및 제과 식품, 유가공품 또는 발효식품 등을 포함하는 모든 종류의 제품에 대하여 상기 식품 보존제 조성물을 적정량으로 사용함으로써 식품의 보존성을 향상시킬 수 있을 뿐만 아니라, 식품 고유의 맛 등을 유지시킬 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 항균조성물을 유효성분으로 포함하는 식중독 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다. 상기 식품 조성물은 바람직하게는 기능성 식품 조성물일 수 있다.
본 명세서에서 식품이란 함은 영양소를 한 가지 또는 그 이상 함유하고 있는 천연물 또는 가공품을 의미하며, 바람직하게는 어느 정도의 가공 공정을 거쳐 직접 먹을 수 있는 상태가 된 것을 의미하며, 통상적인 의미로서, 식품, 식품 첨가제, 기능성 식품 및 음료를 모두 포함하는 의도이다.
본 발명의 항균조성물을 첨가할 수 있는 식품으로는 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 기능성 식품 등이 있다. 추가로, 본 발명에서 식품에는 특수영양식품(예, 조제유류, 영,유아식 등), 식육가공품, 어육제품, 두부류, 묵류, 면류(예, 라면류, 국수류 등), 건강보조식품, 조미식품(예, 간장, 된장, 고추장, 혼합장 등), 소스류, 과자류(예, 스넥류), 유가공품(예, 발효유, 치즈 등), 기타 가공식품, 김치, 절임식품(각종 김치류, 장아찌 등), 음료(예, 과실,채소류 음료, 두유류, 발효음료류 등), 천연조미료(예, 라면스프 등)을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 상기 식품, 음료 또는 식품첨가제는 통상의 제조방법으로 제조될수 있다.
본 발명에서 건강기능식품이란 식품에 물리적, 생화학적, 생물공학적 수법 등을 이용하여 해당 식품의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 식품군이나 식품 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병방지와 회복 등에 관한 체조절기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계하여 가공한 식품을 의미한다. 상기 건강기능식품에는 식품학적으로 허용 가능한 식품 보조 첨가제를 포함할 수 있으며, 기능성 식품의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더욱 포함할 수 있다.
또한, 상기 항균조성물을 유효성분으로 포함하는 식중독의 예방 또는 개선용 식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 충진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 이러한 성분을 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하지 않지만, 홍화자 배양액 100 중량부 당 0.01 내지 20 중량부 범위에서 선택될 수 있다.
또한, 상기 항균조성물을 유효성분으로 포함하는 식중독의 예방 또는 개선용 식품 조성물에 있어서, 상기 홍화자 배양액의 양은 전체 식품 중량의 0.01 내지 15 중량%로 포함할 수 있으며, 음료 조성물은 100 ㎖를 기준으로 0.02 내지 5 g, 바람직하게는 0.3 내지 1g의 비율로 포함할 수 있다.
또 하나의 양태로서, 본 발명은 본 발명에 따른 향료조성물을 포함하는 의약외품 조성물을 제공할 수 있다.
즉, 본 발명의 향료조성물은 홍화자를 발향시키기 위한 목적으로 의약외품 조성물에 첨가될 수 있다.
본 발명의 향료조성물을 의약외품 첨가물로 사용할 경우, 상기 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 의약외품 또는 의약외품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다.
향료조성물의 함유량은 의약외품의 사용 목적에 따라 적합하게 결정될 수 있으나, 전체 조성물의 중량 중 0.001 내지 30 중량%, 바람직하게는 1 내지 30 중량%, 보다 바람직하게는 1 중량% 내지 10 중량%의 향료조성물을 포함할 수 있다. 향료조성물이 전체 조성물 중 0.001 중량% 미만으로 첨가되면, 발향성이 매우 낮아 향을 음미하기 힘들며, 30 중량% 초과로 첨가하면 의약외품으로 사용하기에는 향이 너무 강하게 된다.
바람직하게는, 상기 의약외품 조성물은 소독청결제, 샤워폼, 세정제, 주방식기 세정제, 치약, 가그린, 물티슈, 세제비누, 핸드워시, 샴푸, 가습기 충진제, 마스크, 연고제 또는 필터충진제일 수 있다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.
실시예 : 홍화자 발효 배양액의 제조
유산균류인 락토바실러스 플란타룸을 MRS 배지 37℃, 72시간 과포화 배양하고, 세척 및 건조시켜 분말로 만든 홍화자 20g을 10배 중량의 락토바실러스 플란타룸이 배양된 배지에 첨가한 후 37℃, 72시간 발효시켰다. 발효물을 와트만 종이여과지(Whatman No. 2)로 여과한 후 그 여액을 60±2℃ 감압 농축하여 초저온냉동고에 동결한 후 냉동기(freeze dryer)로 동결건조하여 최종발효물을 수득하였다.
비교예 : 홍화자 추출물의 제조
1. 열수추출물의 제조
세척 및 건조시켜 만든 홍화자 분말 50g을 10배 중량의 열수를 가하고 100℃에서 2시간 동안 추출하였다. 추출물을 와트만 종이 여과지(Whatman No. 2)로 여과하고 그 여액을 60±2℃ 감압 농축하여 초저온냉동고에서 동결한 후 냉동건조기(freeze dryer)로 동결건조하여 최종 추출물을 수득하였다.
2. 냉수추출물의 제조
세척 및 건조시켜 만든 홍화자 분말 50g을 10배 중량의 냉수를 가하고 48 시간 동안 추출하였다. 추출물을 와트만 종이 여과지(Whatman No. 2)로 여과하고 그 여액을 60±2℃ 감압 농축하여 초저온냉동고에서 동결한 후 냉동건조기(freeze dryer)로 동결건조하여 최종 추출물을 수득하였다.
실험예 : 항균 활성 실험
리스테리아 모노사이토젠스에 대한 항균 활성 측정은 원판 확산법(paper disk diffusion method)과 최소억제농도(Minimum inhibitoryconcentration : MIC)를 사용하여 평가하였다.
1. 대상 균주 및 배양조건
본 발명에 사용된 그람 양성균은 리스테리아 모노사이토젠스(L. monocytogenes)로서 BHI(brain heart infusion) broth 배지에 접종하고 37℃, 200 rpm 조건에서 철야(overnight) 진탕배양하였다. 리스테리아균의 성장과 용균은 제품사 Biochrom Libra S22의 분광광도계(spectrophotometer)를 이용하여 O.D. 600nm에서 측정하였다.
2. 원판 확산법(paper disk diffusion method)
배양한 균주를 일정한 농도(optical density 600 nm에서 흡광값 0.5)로 조절한 것을 멸균된 면봉을 이용하여 BHI 한천플레이트(agar plate)에 균일하게 도말하였다. 플레이트를 건조시킨 후, paper disk(10 mm, Adventec. USA)를 균주를 접종한 플레이트 표면 위에 올려놓고 발효 배양액, 열수추출물 또는 냉수추출물을 물로 희석하여 10 mg/20 ㎕/disk씩 흡수시켰다.
시료가 처리된 플레이트를 16 시간 동안 37℃ 조건에서 배양한 후 디스크 주위의 생육 억제환(inhibition zone)의 크기로 항균 활성을 측정하였다. 이때 대조군으로는 항생제로 많이 사용되고 있는 가나마이신(Kanamycin)을 20 ㎍/20 ㎕/disk씩 흡수시켰다.
실험결과, 열수추출물 및 냉수추출물에서는 항균활성이 관찰되지 않았으나 발효 배양액에서는 우수한 항균활성이 확인되었다. 10 mg/20 ㎕/disc의 농도에서 15.5 ± 0.2 mm의 생육저해환을 형성하였다 (도 1 참고).
3. 최소억제농도(Minimum inhibitory concentration, MIC)
배양한 균주를 일정한 농도(optical density 600 nm에서 흡광값 0.5)로 조절한 것에 실시예에서의 각 발효물을 2배 연속 희석법(two-fold dilution)으로 희석하여 시험관에 첨가하였다. 균희석액 및 시료를 접종한 시험관에서 16 시간 배양한 후 균의 생육이 나타나지 않는 최소 농도를 MIC로 결정하였다. 이때, 대조군으로 가나마이신(Kanamycin)을 사용하였다.
번호 홍화자 발효물 OD 600 nm
1 50 mg/ml 0.032
2 25 mg/ml 0.057
3 12.5 mg/ml 0.487
4 6.25 mg/ml 1.390
5 3.125 mg/ml 3.288
음성 대조군 3.184
양성 대조군 0.026
그 결과, 하기 [표 1] 및 도 2에서 나타난 바와 같이 O.D. 측정값은 항상 0.1 내지 0.6 nm 이내여야하므로, 홍화자 발효물 25 mg/ml의 농도를 최소억제농도로 결정하였다.
이상의 설명으로부터, 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이와 관련하여, 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로서 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.
하기에 본 발명의 조성물을 위한 제조예를 예시한다.
제조예 1: 약학적 제제의 제조
1-1. 산제의 제조
실시예의 화합물 10 mg
유당 1 g
상기의 성분을 혼합하고, 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
1-2. 정제의 제조
실시예의 화합물 10 mg
옥수수전분 100 ㎎
유 당 100 ㎎
스테아린산 마그네슘 2 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
1-3. 캡슐제의 제조
실시예의 화합물 10 mg
옥수수전분 100 ㎎
유 당 100 ㎎
스테아린산 마그네슘 2 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
1-4. 환의 제조
실시예의 화합물 10 mg
유당 1.5 g
글리세린 1 g
자일리톨 0.5 g
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 방법에 따라 1 환 당 3 g이 되도록 제조하였다.
1-5. 과립의 제조
실시예의 화합물 10 mg
대두 추출물 50 ㎎
포도당 200 ㎎
전분 600 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 30% 에탄올 100 ㎎을 첨가하여 섭씨 60℃에서 건조하여 과립을 형성한 후 포에 충진하였다.
제조예 2: 식품의 제조
본 발명의 홍화자 발효물, 이의 분획물 및 이로부터 분리한 페닐에스터계 화합물을 포함하는 식품들을 다음과 같이 제조하였다.
2-1. 밀가루 식품의 제조
본 발명의 실시예의 화합물 1 mg을 밀가루에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하여 건강 증진용 식품을 제조하였다.
2-2. 유제품(dairy products)의 제조
본 발명의 실시예의 화합물 1 mg을 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.
2-3. 선식의 제조
현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전한 후, 분쇄기로 입도 60메쉬의 분말로 제조하였다. 검정콩, 검정깨, 들깨도 공지의 방법으로 쪄서 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60메쉬의 분말로 제조하였다.
상기에서 제조한 곡물류, 종실류 및 실시예의 화합물을 다음의 비율로 배합하여 제조하였다.
곡물류(현미 30중량%, 율무 15중량%, 보리 20중량%),
종실류(들깨 7중량%, 검정콩 8중량%, 검정깨 7중량%),
실시예의 화합물 (2중량%),
영지(0.5중량%),
지황(0.5중량%)
제조예 3: 약학적 제제의 제조
3-1. 건강음료의 제조
실시예의 화합물 1 mg
구연산 1000 ㎎
올리고당 100 g
매실농축액 2 g
타우린 1 g
정제수를 가하여 전체 900 ㎖
통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2ℓ용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물제조에 사용한다.
상기 조성비는 비교적 기호 음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 수요계층, 수요국가, 사용 용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.
3-2. 야채쥬스의 제조
본 발명의 실시예의 화합물 1 mg을 토마토 또는 당근 쥬스 1,000㎖에 가하여 건강 증진용 야채 쥬스를 제조하였다.
3-3. 과일 쥬스의 제조
본 발명의 실시예의 화합물 1 mg을 사과 또는 포도 쥬스 1,000㎖에 가하여 건강 증진용 과일 쥬스를 제조하였다.
제조예 4: 의약외품 제제의 제조
<1-1> 유연화장수( 스킨 )
본 발명의 홍화자를 포함하는 유연화장수를 제조하기 위해 하기 [표 2]에 기재된 것처럼 배합하여 통상적인 의약외품 분야에서의 제조 방법에 따라 제조할 수 있다.
성분 함량(중량%)
본 발명의 홍화자 0.1 ~ 30 %
1,3-부틸렌글리콜 3.0
글리세린 5.0
폴리옥시에틸렌(60) 경화피마자유 0.2
에탄올 8.0
구연산 0.02
구연산나트륨 0.06
방부제 미량
향료 미량
정제수 To 100
<1-2> 영양화장수(로션)
본 발명의 홍화자를 포함하는 영양화장수를 제조하기 위해 하기 [표 3]에 기재된 것처럼 배합하여 통상적인 의약외품 분야에서의 제조 방법에 따라 제조할 수 있다.
성분 함량(중량%)
본 발명의 홍화자 0.1 ~ 30 %
1,3-부틸렌글리콜 8.0
글리세린 5.0
스쿠알란 10.0
모노올레인산폴리옥시에틸렌소르비탄 2.0
유창목오일 0.1 ~ 30 %
1,3-부틸렌글리콜 3.0
글리세린 5.0
폴리옥시에틸렌(60) 경화피마자유 0.2
에탄올 8.0
구연산 0.02
구연산나트륨 0.06
방부제 미량
향료 미량
정제수 To 100
<1-3> 에센스
본 발명의 홍화자를 포함하는 에센스를 제조하기 위해 하기 [표 4]에 기재된 것처럼 배합하여 통상적인 의약외품 분야에서의 제조 방법에 따라 제조할 수 있다.
성분 함량(중량%)
본 발명의 홍화자 0.1 ~ 30 %
시토스테롤 1.7
플리글리세릴2-올레이트 1.5
세라마이드 0.7
세테아레스-4 1.2
콜레스테롤 1.5
디세틸포스페이트 0.4
농글리세린 5.0
카르복시비닐폴리머 0.2
산탄검 0.2
방부제 미량
향료 미량
정제수 To 100
<1-4> 세안제( 클렌징폼 )
본 발명의 홍화자를 포함하는 세안제(클렌징폼)를 제조하기 위해 하기 [표 5]에 기재된 것처럼 배합하여 통상적인 의약외품 분야에서의 제조방법에 따라 제조할 수 있다.
성분 함량(중량%)
본 발명의 홍화자 0.1 ~ 30 %
N-아실글루타민산나트륨 20.0
글리세린 10.0
PEG-400 15.0
프로필렌글리콜 10.0
POE(15) 올레일알코올에테르 3.0
라우린유도체 2.0
메틸파라벤 0.2
EDTA-4Na 0.03
향료 0.2
정제수 To 100
<1-5> 영양크림
본 발명의 홍화자를 포함하는 영양크림을 제조하기 위해 하기 [표 6]에 기재된 것처럼 통상적인 의약외품 분야에서의 제조 방법에 따라 제조한다.
배합성분 함량(중량%)
본 발명의 홍화자 0.1 ~ 30 %
바셀린 7.0
유동파라핀 10.0
밀납 2.0
폴리솔베이트60 2.5
솔비탄세스퀴올레이트 1.5
스쿠알란 3.0
프로필렌글리콜 6.0
글리세린 4.0
트리에탄올아민 0.5
산탄검 0.5
토코페닐아세테이트 0.1
향, 방부제 미량
정제수 To 100
<1-6> 마사지크림
본 발명의 홍화자를 포함하는 마사지크림을 제조하기 위해 하기 [표 7]에 기재된 것처럼 통상적인 의약외품 분야에서의 제조방법에 따라 제조한다.
배합성분 함량(중량%)
본 발명의 홍화자 0.1 ~ 30 %
프로필렌글리콜 6.0
글리세린 4.0
트리에탄올아민 0.5
밀납 2.0
토코페닐아세테이트 0.1
폴리솔베이트60 3.0
솔비탄세스퀴올레이트 2.5
세테아릴알코올 2.0
유동파라핀 30.0
산탄검 0.5
향, 방부제 미량
정제수 To 100
<1-7> 팩
본 발명의 홍화자를 포함하는 팩을 제조하기 위해 하기 [표 8]에 기재된 것처럼 통상적인 의약외품 분야에서의 제조 방법에 따라 제조한다.
배합성분 함량(중량%)
본 발명의 홍화자 0.1 ~ 30 %
프로필렌글리콜 2.0
글리세린 4.0
폴리비닐알코올 10.0
에탄올 7.0
파이지-40 히드로게비이티드캐스터오일 0.8
트리에탄올아민 0.3
향, 방부제 미량
정제수 To 100
이상의 본 발명은 상기에 기술된 실시예 및 제조예들에 의해 한정되지 않고, 통상의 기술자들에 의해 다양한 변형 및 변경을 가져올 수 있으며, 그외의 색채 의약외품을 포함하는 다양한 용도의 의약외품에 적용될 수 있는 것이고, 그 효능에 따라 인체에 얇게 도포하여 바를 수 있는 약제 즉, 연고로 제조에 이용될 수 있고, 이는 첨부된 청구항에서 정의되는 본 발명의 취지와 범위에 포함된다.

Claims (11)

  1. 홍화자 배양액을 유효성분으로 포함하는 항균활성을 갖는 항균조성물.
  2. 제 1항에 있어서,
    상기 발효물은 홍화자 배양액을 유산균으로 발효시킨 것을 특징으로 하는 항균조성물.
  3. 제 1항에 있어서,
    상기 유산균은 락토바실러스 플란타룸(Lactobacilus plantarum)인 것을 특징으로 하는 항균조성물.
  4. 제 1항에 있어서,
    상기 홍화자 발효물은 25~50 ㎎/㎖의 농도를 갖는 것을 특징으로 하는 항균조성물.
  5. 유산균을 배양하는 준비단계;
    홍화자를 세척 및 건조시키고 분말화하여 배양액을 제조하는 단계;
    상기 제조한 배양액을 유산균에 접종하여 발효하는 단계; 및
    상기 발효한 홍화자 발효물을 수득하는 단계;를 포함하는 항균조성물의 제조방법.
  6. 제 5항에 있어서,
    상기 유산균은 락토바실러스 플란타룸(Lactobacilus plantarum)인 것을 특징으로 하는 항균조성물의 제조방법.
  7. 제 5항에 있어서,
    상기 홍화자 발효물은 25~50 ㎎/㎖의 농도를 갖는 것을 특징으로 하는 항균조성물의 제조방법.
  8. 제 1항 내지 제 7항 중 어느 한 항에 따른 홍화자 발효물을 함유하는 리스테리아 모노사이토젠스 억제용 약학적 조성물.
  9. 제 1항 내지 제 7항 중 어느 한 항에 따른 홍화자 발효물을 함유하는 식품 보존제 조성물.
  10. 제 1항 내지 제 7항 중 어느 한 항에 따른 홍화자 발효물을 함유하는 식품 조성물.
  11. 제 1항 내지 제 7항 중 어느 한 항에 따른 홍화자 발효물을 함유하는 의약외품 조성물.
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