KR20160125361A - Ｖａｒ２ｃｓａ－약물 접합체 - Google Patents

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제임스 알 리치
존 뱁쿡
알리 엘-사란티
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마델레이네 달바크
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자임워크스 인코포레이티드
자임워크스 바이오케미스트리 인코포레이티드
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Abstract

생물학적 활성을 가진 VAR2CSA-약물 접합체가 개시되어 있다. 이러한 접합체의 제조 및 이용과 관련된 방법뿐만 아니라 이러한 접합체를 포함하는 약제학적 조성물이 또한 개시되어 있다.

Description

ＶＡＲ２ＣＳＡ－약물 접합체{VAR2CSA-DRUG CONJUGATES}
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 미국 가출원 제61/921,242호(출원일: 2013년 12월 27일), 미국 가출원 제62/051,886호(출원일: 2014년 9월 17일) 및 미국 가출원 제62/051,899호(출원일: 2014년 9월 17일)의 35 U.S.C. § 119(e) 하의 유익을 주장하며, 이들 기초 출원은 참고로 그들의 전문이 본 명세서에 편입된다.
기술분야
본 발명은 약물 접합체, 이를 포함하는 조성물, 그리고 이러한 약물 접합체를 이용하는 방법 및 암 및 기타 질환의 치료를 위한 조성물에 관한 것이다.
VAR2CSA 단백질
프로테오글리칸은 글리코스아미노글리칸(glycosaminoglycan: GAG) 사슬에 접합된 단백질이다. 이들 단백질은 세포 내에, 세포막 상에 그리고 세포외 기질에 분포되어 다양한 기능(연골 기질 형성; 조직의 구조적 조직화; 기저막의 조직화; 분비소포 역할의 조절; 사이토카인, 케모카인, 성장인자 및 몰포겐의 결합; 프로테아제 수용체 및 프로테아제 저해제; 공수용체, 티로신-키나제-유형 성장 인자 수용체; 식균작용 수용체로서; 세포 부착, 세포-세포 상호작용 및 세포 운동뿐만 아니라 세포 이동을 용이하게 함)을 제공한다.
말라리아 기생충 플라스모듐 팔시파룸(Plasmodium falciparum)은 이의 복잡한 생활 주기의 거의 모든 단계에서 숙주 세포 프로테오글리칸을 이용한다. 포자소체는 고도로 황산화된 헤파란 황산 프로테오글리칸(heparan sulfate proteoglycan: HSPG)과 상호작용하는 표면-발현된 포자소체 단백질을 통해 간에서 간세포를 감염시킨다. 적혈구의 낭충 감염은 글리코포린 A 상에서 시알산에 대한 EBA-175 결합에 의해 매개된다. 추가로, 숙주 내피 부착을 매개하는 다수의 플라스모듐 팔시파룸 적혈구막 단백질 1(Plasmodium falciparum Erythrocyte Membrane Protein 1: PfEMP1) 단백질은 글리칸-결합으로서 기재되었다. 이들 중 하나는 VAR2CSA인데, 이는 PfEMP1 단백질 패밀리의 독특한 구성원이다. VAR2CSA는 태반의 융모간공에서 콘드로이틴 황산 프로테오글리칸(Chondroitin Sulfate Proteoglycan: CSPG)으로 불리는, 프로테오글리칸에 부착된 콘드로이틴 황산 A(chondroitin sulfate A: CSA)의 별도의 형태에 대해 높은 친화도로 결합한다. 이 유형의 CSA는 태반-유사 CSA(placental-like CSA: plCSA)로서 지칭된다. VAR2CSA는 플라스모듐 팔시파룸-감염 적혈구(infected erythrocyte: IE)의 표면 상에서 발현되는 거대 다중-도메인 단백질(350kDa)이며, VAR2CSA-plCSA 상호작용은 태반 말라리아(placental malaria: PM)에서 태반 특이적 격리를 초래한다. 중요하게는, FCR3 및 3D7 유형 기생충으로부터의 재조합 전장 VAR2CSA 엑토-도메인은 낮은 나노몰 범위에서 plCSA에 대해 친화도를 나타내었다.
CSA는 글리코스아미노글리칸(GAG)의 패밀리에 속하는데, 이는 프로테오글리칸에 부착된 교번의 아미노 당 및 헥수론산 잔기의 선형 중합체이다. 콘드로이틴 황산(CS), 데르마탄 황산(DS 또는 CSB), 헤파란 황산(HS) 및 헤파린을 포함하는 몇몇 유형의 GAG가 있다. 이들 GAG의 다당류 백본은 단순하지만, 황산화 및 우론산 에피머화와 같은 변형에서 상당한 다양성이 생긴다. 이는 도메인 구조의 큰 다양성 및 상이한 GAG의 생물학적 활성에 대한 기초이다.
CS는 성장 호르몬, 사이토카인, 케모카인, 및 부착 분자와 같은 다수의 중요한 인자와 상호작용하며, 구조적 안정화, 세포질분열, 세포 증식, 분화, 세포 이동, 조직 형태형성, 기관형성, 감염 및 상처 손상에 수반되는 것으로 생각된다. CS 사슬은 N-아세틸-D-갈락토사민(GalNAc) 및 글루쿠론산 잔기의 교번의 단위로 구성된다. 글루쿠론산은 이의 C2 위치에서 황산화될 수 있고, GalNAc은 C4 및/또는 C6에서 황산화되어 다양한 이당류 단위를 생기게 할 수 있다. 당 백본의 다양한 변형은 CS 사슬의 구조적 및 기능적 이질성을 허용한다.
고분자량-흑색종 관련 항원(HMW-MAA) 또는 흑색종-관련 콘드로이틴 황산 프로테오글리칸(MSCP)으로서도 알려진 콘드로이틴 황산 프로테오글리칸 4(CSPG4)는 흑색종 세포에 의해 발현되는 것으로 나타난 세포 표면 프로테오글리칸이다. CSPG4/MSCP/HMW-MAA는 단백질 백본 상에 CS 사슬을 갖는 것을 특징으로 하는 거대 프로테오글리칸이다.
VAR2CSA는 폴리펩타이드서열의 최소 구조적 구성요소를 지니는 특정 콘드로이틴 황산 프로테오글리칸에 대해 고친화도 및 특이성으로 결합하는 그것의 능력을 보유한다. 코어 plCSA-결합 부위는 측접하는 도메인간 영역의 작은 부분을 포함하는 DBL2X 도메인 내에 놓인다. 결합은 앞서 제시한 바와 같은 ID2b 영역에, 또는 DBL1X 또는 DBL3X 측접 도메인(flanking domain)에 의존하지 않는다. 최소 결합 영역은 ID1-DBL2Xb인데, 이는 전장 VAR2CSA의 특징과 비슷한 특징으로 CSPG에 결합한다. ID1-DBL2Xb 최소 결합 영역은 전장 VAR2CSA보다 훨씬 더 작으며, 분자량이 단지 62kDa이다. 이 VAR2CSA 단편 및 다른 VAR2CSA 폴리펩타이드는 암세포 및 조직에 대해 높은 그리고 특이적인 친화도로 결합하는데, 이 결합은 암세포의 표면 상에서 또는 주변의 세포외 기질에서 발현된 콘드로이틴 황산 프로테오글리칸과의 특이적 상호작용을 통한다는 것이 시사된다(Salanti et al., WO2013/117705). 따라서, 이 특이적이고 높은 친화도 결합은 이런 특정 유형의 콘드로이틴 황산 프로테오글리칸의 높은 또는 그 밖의 발현, 예컨대, 부적절한 발현을 지니는 암세포 또는 다른 조직 또는 세포의 표적화를 위해 사용될 수 있다.
의학 분야에서, 콘드로이틴 황산 프로테오글리칸의 높은 또는 그 밖의 부적절한 발현을 갖는 목적으로 하는 표적 위치에서 선택적으로 생물학적 활성 화합물을 방출시킬 수 있는 안정한 단백질-약물 접합체에 대한 필요가 있다. 본 발명은 이들 필요를 충족시키며 추가의 관련된 이점을 제공한다.
요약하면, 본 발명은 생물학적으로 활성인 단백질-약물 접합체 및 이러한 단백질-약물 접합체를 이용하는 방법에 관한 것이다. 하기 화학식 I의 화합물인 단백질-약물 접합체가 제공된다:
Figure pct00001
식 중:
T는 VAR2CSA 폴리펩타이드를 포함하는 표적화 모이어티이고;
L-P는 L1-P1 또는 L2-P2로부터 선택되며;
L1은 링커이거나, 또는 L1은 존재하지 않고;
P1는 하기 화학식 XIV의 화합물의 1가 라디칼이며:
Figure pct00002
식 중:
R16 및 R17은 독립적으로 H; 및 1 내지 10개의 탄소 원자를 함유하는 직쇄, 분지쇄 또는 비방향족 환식 골격을 가진 포화 또는 불포화 모이어티로부터 선택되고, 상기 탄소 원자는 -OH, -I, -Br, -Cl, -F, -CN, -CO2H, -CHO, -COSH 또는 -NO2;로 임의로 치환되거나; 또는 R17과 R20은 융합되어 고리를 형성하며;
R18 및 R19는 H, R25 및 ArR25-로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는 R18과 R19는 융합되어 고리를 형성하고;
R20은 H, R25, ArR25- 및 Ar로 이루어진 군으로부터 선택되거나; 또는 R20과 R17은 융합되어 고리를 형성하며;
R21은 H, R25 및 ArR25-로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R22 및 R23은 독립적으로 H, R25 및 ArR25-로 이루어진 군으로부터 선택되며;
R24는 -Y-(CO)NHSO2-R26이고;
R25는 1 내지 10개의 탄소 원자, 0 내지 4개의 질소 원자, 0 내지 4개의 산소 원자 및 0 내지 4개의 황 원자를 함유하는 직쇄, 분지쇄 또는 비방향족 환식 골격을 가진 포화 또는 불포화 모이어티로서 정의되며, 상기 탄소 원자는 =O, =S, OH, -OR28, -O2CR28, -SH, -SR28, -SOCR28, -NH2, -NHR28, -N(R28)2, -NHCOR28, -NR28COR28, -I, -Br, -Cl, -F, -CN, -CO2H, -CO2R28, -CHO, -COR28, -CONH2, -CONHR28, -CON(R28)2, -COSH, -COSR28, -NO2, -SO3H, -SOR28, -SO2R28로 임의로 치환되되, 여기서 R28은 직쇄, 분지쇄 또는 환식의 1 내지 10개의 탄소 포화 또는 불포화 알킬기이고;
R18과 R19를 연결함으로써 형성되는 고리는 R25의 정의 내의 3 내지 7원(member) 비방향족 환식 골격이고,
Y는, R25, ArR25- 또는 X로 임의로 치환된, 직쇄의 포화 또는 불포화 1 내지 6개의 탄소 알킬기로 이루어진 군으로부터 선택된 모이어티로서 정의되며; 그리고
X는 -OH, -OR25, =O, =S, -O2CR25, -SH, -SR25, -SOCR25, -NH2, -NHR25, -N(R25)2, -NHCOR25, -NRCOR25, -I, -Br, -Cl, -F, -CN, -CO2H, -CO2R25, -CHO, -COR25, -CONH2, -CONHR25, -CON(R25)2, -COSH, -COSR25, -NO2, -SO3H, -SOR25 및 -SO2R25로 이루어진 군으로부터 선택된 모이어티로서 정의되고;
R26은 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알킬아미노, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로사이클, 임의로 치환된 헤테로아릴, -COR27, -CSR27, -OR27 및 -NHR27로 이루어진 군으로부터 선택되되, 여기서 각각의 R27은, 독립적으로, 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알킬아미노, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴 또는 임의로 치환된 헤테로아릴이며; 그리고
L2는 링커이거나, 또는 L2는 존재하지 않고;
P2는 생물학적 활성 화합물이며; 그리고
L2-P2는 하기 구조 (III)을 갖는다:
Figure pct00003
식 중:
R은 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알킬아미노, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴, 임의로 치환된 헤테로아릴, -COR27, -CSR27, -OR27 및 -NHR27로 이루어진 군으로부터 선택되되, 여기서 각각의 R27은, 독립적으로, 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알킬아미노, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴 또는 임의로 치환된 헤테로아릴이거나, 또는 R은 존재하지 않으며;
P3은 화합물 P2의 나머지 부분이고; 그리고
L3은 L2가 존재할 경우 임의로 링커 L2의 나머지 부분이다.
바람직한 실시형태에 있어서, R은 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알킬아미노, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴 및 임의로 치환된 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는 R은 존재하지 않는다.
다른 실시형태에 있어서, 치료법에서 화학식 I의 화합물을 이용하는 방법이 제공된다. 특히 본 발명은 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 화학식 I의 화합물 및 약제학적으로 허용 가능한 담체 희석제 또는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물을 암의 치료를 필요로 하는 포유동물에게 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서 암을 치료하는 방법을 제공한다.
다른 실시형태에 있어서, 본 발명은 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 화학식 I의 화합물 및 약제학적으로 허용 가능한 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물을 종양 성장의 저해를 필요로 하는 포유동물에게 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서 종양 성장을 저해하는 방법을 제공한다.
다른 실시형태에 있어서, 본 발명은 작제물의 화합물을 이용해서 시험관내에서 암 세포를 사멸시키는 방법을 제공한다. 다른 실시형태에 있어서, 본 발명은, 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 화학식 I의 화합물 및 약제학적으로 허용 가능한 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물을 암 세포의 사멸을 필요로 하는 포유동물에게 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서 생체내 암 세포를 사멸시키는 방법을 제공한다.
본 발명의 이들 및 기타 양상들은 이하의 상세한 설명을 참조하면 명백해질 것이다.
도 1은 두 세포주(HCC1954 및 주르카트(Jurkat))에 대해서 화합물 A 내지 E의 각각에 대한 세포독성 데이터(EC50)의 요약을 나타낸 도면.
도 2는 두 세포주(HCC1954 및 주르카트)에 대한 화합물 A의 세포독성 데이터를 나타낸 도면.
도 3은 두 세포주(HCC1954 및 주르카트)에 대한 화합물 B의 세포독성 데이터를 나타낸 도면.
도 4는 두 세포주(HCC1954 및 주르카트)에 대한 화합물 C의 세포독성 데이터를 나타낸 도면.
도 5는 두 세포주(HCC1954 및 주르카트)에 대한 화합물 D의 세포독성 데이터를 나타낸 도면.
도 6은 두 세포주(HCC1954 및 주르카트에 대한 화합물 E의 세포독성 데이터를 나타낸 도면.
도 7은 확립된 종양을 보유하는 암컷 무흉선 누드 마우스에서 종양 용적에 대한 화합물 F, 화합물 14 또는 화합물 23의 투여의 생체내 결과를 나타낸 도면.
도 8은, VAR2-화합물 O의 SEC-UPLC-QTof-MS MaxEnt1 처리된 온전한 질량을 나타낸 도면. 115323 Da, 117662 Da 및 119999 Da에서의 MS 신호는, 단백질당 대략 4 독소의 평균 접합 수준으로, 1, 3 및 5 독소의 접합과 일치한다.
도 9는 VAR2-화합물 KK의 SEC-UPLC-QTof-MS MaxEnt1 처리된 온전한 질량을 나타낸 도면. 디콘볼류션된 MS 데이터의 프로파일이 5개까지의 독소(화합물 KK)의 접합과 일치하지만 평균 약물 부하는 대략 2.5 약물이다.
도 10은 VAR2CSA 약물 접합체 제제에서 접합되지 않은 유리 독소-링커의 합성을 나타낸다. X-축: 시간. Y-축: 강도. 라인(정점의 감소하는 높이에 기초)은 20nM 약물-링커, 10nM 약물-링커, 1nM 약물 링커, 0.5nM 약물 링커, 분석물에 대응한다.
도 11은 CSA(시그마(Sigma) C9819)의 존재 유무에서 Myla2059 세포주에 대한 비변형 DBL1-ID2a(MP1255) 결합의 특이성을 나타낸 도면.
도 12는 CSA(시그마 C9819)의 존재 유무에서 Myla2059 세포주에 대한 VAR2-화합물 O(시스테인 접합체) 결합의 특이성을 나타낸 도면.
도 13은 CSA(시그마 C9819)의 존재 유무에서 Myla2059 세포주에 대한 VAR2-화합물 KK (라이신 접합체) 결합의 특이성을 나타낸 도면.
도 14는 Colo205 세포에 대한 VAR2CSA 약물 접합체의 세포독성을 나타낸 도면. 이용된 VAR2 단백질은 DBL1-ID2a이었다. VAR2-화합물 O - 원형. CSA(시그마 C9819) 첨가된 VAR2-화합물 O - 다이아몬드 형상. CSA 단독 - 정사각형.
도 15는 Colo205 세포에 대한 VAR2CSA 약물 접합체의 세포독성을 나타낸 도면. 시스테인 접합에 의해 제조된 VAR2-화합물 O - 삼각형. 라이신 접합에 의해 제조된 VAR2-화합물 KK - 원형.
도 16은 Colo205 세포에 대한 VAR2CSA 약물 접합체의 세포독성을 나타낸 도면. VAR2-화합물 O - 원형. 독소-링커 단독 - 정사각형.
도 17은 UM-UC 3 세포에 대한 VAR2CSA 약물 접합체의 세포독성을 나타낸 도면. VAR2-화합물 O - 원형. VAR2CSA 단독 - 다이아몬드 형상.
도 18은 U138 MG 세포에 대한 VAR2CSA 약물 접합체의 세포독성을 나타낸 도면. VAR2-화합물 O - 원형. VAR2CSA 단독 - 다이아몬드 형상.
도 19는 OVCAR-3 세포에 대한 VAR2CSA 약물 접합체의 세포독성을 나타낸 도면. VAR2-화합물 O - 원형. VAR2CSA 단독 - 다이아몬드 형상.
도 20은 VAR2-화합물 O을 이용한 내약성 연구에서의 마우스의 체중을 나타낸 도면.
도 21은 시험 물품의 3회 IV 투약 후 카르파스(Karpas) 299 이종이식 효능 연구에서의 마우스의 체중을 나타낸 도면.
도 22는 시험 물품의 3회 IV 투약 후 카르파스 299 이종이식 효능 연구에서의 마우스의 종양 용적을 나타낸 도면.
도 23은 PC3 전립선암 효능 연구에서의 마우스의 체중을 나타낸 도면.
도 24는 PC3 전립선암 효능 연구에서의 마우스의 종양 용적을 나타낸 도면.
이하의 설명에서, 본 발명의 각종 실시형태의 철저한 이해를 제공하기 위하여 소정의 구체적인 상세가 기술된다. 그러나, 당업자라면 본 발명이 이들 상세 없이도 실시될 수 있다는 것을 이해할 것이다.
정의
달리 기술되지 않는 한, 본 명세서에서 사용되는 바와 같은 하기의 용어 및 문구들은 하기의 의미들을 가지는 것으로 의도된다. 본 명세서에서 상표명이 사용된 경우, 본 출원인은 독립적으로 해당 상표 제품의 상표명 상품 구성, 제네릭 약물, 및 유효 약제학적 성분(들)을 포함하는 것을 의도한다.
본문이 달리 요구하지 않는 한, 본 명세서 및 청구범위 전반에 걸쳐, 단어 "포함하다" 및 이의 변형어, 예컨대, "포함한다" 및 "포함하는"은 개방된, 포괄적인 의미로서, "포함하지만 이것으로 제한되는 것은 아님"으로서 해석되어야 한다.
본 명세서 전반에 걸쳐 "일 실시형태" 또는 "실시형태"에 대한 언급은 그 실시형태와 관련하여 기술된 특별한 특징, 구조 또는 성질이 본 발명의 적어도 하나의 실시형태에 포함됨을 의미한다. 따라서, 본 명세서 전반에 걸쳐 다양한 개소에서 문구 "일 실시형태에 있어서" 또는 "실시형태에 있어서"의 출현은 반드시 모두 동일한 실시형태를 지칭하는 것은 아니다. 개별의 실시형태의 맥락에서 기술된 명확을 기하기 위한 본 명세서에 기재된 소정의 특징은 또한 단일의 실시형태에서 조합하여 제공될 수도 있음을 알 수 있다. 역으로, 본 명세서에서 기술된 간략을 도모하기 위한 본 명세서의 각종 특징은 개별적으로 또는 임의의 적절한 하위조합으로 제공될 수도 있다.
화학 기
본 명세서에 기재된 일반적인 화학식(예컨대, II, XIV, XV 및 XX) 내에 포함된 변수(예컨대, R1-R50, Q, X, Y 및 Z)로 표시되는 화학 기들에 속하는 실시형태의 모든 조합은, 이러한 조합이 안정적인 화합물(즉, 생물학적 활성을 위하여 단리되고 특성 규명되며 시험될 수 있는 화합물)로 되는 화합물을 포괄하도록 하는 정도로 마치 각각의 모든 조합이 개별적으로 명확하게 언급된 것처럼 본 발명에 의해 구체적으로 포괄된다. 또한, 이러한 변수를 기술하는 실시형태에 나열된 화학 기의 모든 하위조합뿐만 아니라 본 명세서에 기재된 용도 및 의료 적응증(indication)의 하위조합도, 마치 이러한 화학 기들의 각각 모든 조합 및 용도 및 의료 적응증의 하위조합이 본 명세서에 개별적으로 명확하게 언급된 것처럼 본 발명에 의해 구체적으로 포괄된다. 더욱이, 치환기의 일람이 특정 실시형태 및/또는 청구범위에서 임의의 특정 변수(예컨대, R1-R50, Q, X, Y 및 Z)에 대해서 나열되는 경우에, 각 개별적인 치환기가 특정 실시형태 및/또는 청구범위로부터 삭제될 수 있고 치환기의 나머지 일람이 본 발명의 범위 내인 것으로 간주될 것으로 이해된다.
용어 "아실옥시"는, 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, -OC(O)-알킬을 포함하되, 여기서 알킬은 본 명세서에서 정의된 바와 같다. 아실옥시의 예는, 폼일옥시, 아세톡시, 프로피오닐옥시, 아이소뷰티릴옥시, 피발로일옥시 등을 포함하지만 이들로 제한되는 것은 아니다.
용어 "아실티오"는, 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, -SC(O)-알킬을 지칭하되, 여기서 알킬은 본 명세서에서 정의된 바와 같다. 아실티오의 예는, 폼일티오, 아세틸티오, 프로피오닐티오, 아이소뷰티릴티오, 피발로일티오 등을 포함하지만 이들로 제한되는 것은 아니다.
용어 "알콕시카보닐"은, 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, -C(O)O-알킬을 지칭한다. 알콕시카보닐의 예는, 메톡시카보닐, 에톡시카보닐, n-프로폭시카보닐, 아이소프로폭시카보닐, n-뷰톡시카보닐, sec-뷰톡시카보닐, 아이소뷰톡시카보닐, t-뷰톡시카보닐, 펜틸옥시카보닐, 아이소펜틸옥시카보닐, t-펜틸옥시카보닐, 네오-펜틸옥시카보닐, 1-메틸뷰톡시카보닐, 2-메틸뷰톡시카보닐, n-헥실옥시카보닐 등을 포함하지만 이들로 제한되는 것은 아니다.
"알킬"은, 오로지 탄소와 수소 원자만으로 이루어지고, 포화 또는 불포화(즉, 하나 이상의 이중 및/또는 삼중 결합을 함유함)되고 1 내지 12개의 탄소 원자(C1-C12 알킬), 바람직하게는 1 내지 8개의 탄소 원자(C1-C8 알킬) 또는 1 내지 6개의 탄소 원자(C1-C6 알킬)를 가지며 분자의 나머지 부분에 단일 결합에 의해 부착된 직쇄 또는 분지쇄의 탄화수소 사슬 치환기를 지칭하되, 그 예로는, 메틸, 에틸, n-프로필, 1-메틸에틸(아이소-프로필), n-뷰틸, n-펜틸, 1,1-다이메틸에틸(t-뷰틸), 3-메틸헥실, 2-메틸헥실, 에텐일, 프로프-1-엔일, 뷰트-1-엔일, 펜트-1-엔일, 펜타-1,4-다이엔일, 에틴일, 프로핀일, 뷰틴일, 펜틴일, 헥신일 등이 있다. 본 명세서에 달리 구체적으로 기술되지 않는 한, 알킬기는 임의로 치환될 수 있다.
"알킬렌" 또는 "알킬렌 사슬" 또는 "알킬다이일"은, 오로지 탄소와 수소 원자만으로 이루어지고, 포화 또는 불포화(즉, 하나 이상의 이중 및/또는 삼중 결합을 함유함)되고, 1 내지 12개의 탄소 원자를 가지며 분자의 나머지 부분을 치환기에 의해 연결하는 직쇄 또는 분지쇄의 2가 탄화수소 사슬을 지칭하며, 예컨대, 메틸렌, 에틸렌, 프로필렌, n-뷰틸렌, 에텐일렌, 프로펜일렌, n-뷰틸렌, 프로핀일렌, n-뷰틴일렌 등이 있다. 알킬렌 사슬은 단일 또는 이중 결합을 통해 분자의 나머지에 부착되며 단일 또는 이중 결합을 통해 치환기에 부착된다. 분자의 나머지 및 치환 기에 대한 알킬렌의 부착점은 사슬 내 하나의 탄소 또는 임의의 두 개의 탄소를 통할 수 있다. 명세서에서 달리 구체적으로 기술되지 않은 한, 알킬렌 사슬은 임의로 치환될 수 있다.
용어 "알켄일다이일"은, 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 특정 개수의 탄소 원자와 하나 이상의 탄소-탄소 이중 결합을 함유하는 직쇄 또는 분지쇄의 불포화 탄화수소 다이-라디칼, 예컨대, C2-C6 알켄일다이일, C2-C4 알켄일다이일 또는 C2 알켄일다이일을 지칭한다. 알켄일다이일의 예는, 에텐일다이일, n-프로펜일다이일, 아이소프로펜일다이일, n-뷰텐일다이일, sec-뷰텐일다이일, 아이소뷰텐일다이일, t-뷰텐일다이일, 펜텐일다이일, 아이소펜텐일다이일, t-펜텐일다이일, 네오-펜텐일다이일, 1-메틸뷰텐일다이일, 2-메틸뷰텐일다이일, n-헥센일다이일 등을 포함하지만 이들로 제한되는 것은 아니다.
"알콕시"는 식 -ORa의 치환기를 지칭하며, 여기서 Ra는 1 내지 12개의 탄소 원자를 함유하는 위에서 정의된 바와 같은 알킬 치환기이다. 본 명세서에 달리 구체적으로 기술되지 않는 한, 알콕시기는 임의로 치환될 수 있다.
"알킬아미노"는 식 -NHRa 또는 -NRaRa의 치환기를 지칭하며, 여기서 각각의 Ra는, 독립적으로, 1 내지 12개의 탄소 원자를 함유하는 위에서 정의된 바와 같은 알킬 치환기이다. 본 명세서에 달리 구체적으로 기술되지 않는 한, 알킬아미노기는 임의로 치환될 수 있다.
"아미노"는 -NH2 치환기를 지칭한다.
용어 "아미노-사이클로알킬"은, 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 하나의 아미노 치환기로 치환된 사이클로알킬기를 지칭하며, 이때 이들 용어는 본 명세서에서 정의되어 있다. 아미노-사이클로알킬의 예는 아미노사이클로프로필, 아미노사이클로뷰틸, 아미노사이클로펜틸, 아미노사이클로헥실 등을 포함하지만 이들로 제한되는 것은 아니다.
용어 "아미노-알킬"은, 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 하나의 아미노 치환기로 치환된 알킬기를 지칭하며, 이들 용어는 본 명세서에서 정의되어 있다. 아미노-알킬의 예는 아미노메틸, 아미노에틸, 아미노-n-프로필, 아미노-아이소프로필, 아미노-n-뷰틸, 아미노-sec-뷰틸, 아미노-아이소뷰틸, 아미노-t-뷰틸, 아미노-펜틸, 아미노-아이소펜틸, 아미노-t-펜틸, 아미노-네오-펜틸, 아미노-1-메틸뷰틸, 아미노-2-메틸뷰틸, 아미노-n-헥실 등을 포함하지만 이들로 제한되는 것은 아니다.
용어 "아미노-아릴"은, 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 하나의 아미노 치환기로 치환된 아릴기를 지칭하되, 이들 용어는 본 명세서에서 정의되어 있다. 아미노-아릴의 예는 아미노-페닐, 아미노-나프탈렌일 등을 포함하지만 이들로 제한되는 것은 아니다.
"아릴"은 수소, 6 내지 18개의 탄소 원자 및 적어도 하나의 방향족 고리를 포함하는 탄화수소 고리계 치환기를 지칭한다. 본 개시내용의 목적을 위하여, 아릴 치환기는 단환식, 2환식, 3환식 또는 4환식 고리계일 수 있고, 이것은 융합 또는 브리지 고리계를 포함할 수 있다. 아릴 치환기는 아세안트릴렌, 아세나프틸렌, 아세페난트릴렌, 안트라센, 아줄렌, 벤젠, 크리센, 플루오란텐, 플루오렌, as-인다센, s-인다센, 인단, 인덴, 나프탈렌, 페날렌, 페난트렌, 플레이아덴, 피렌 및 트라이페닐렌으로부터 유래된 아릴 치환기를 포함하지만 이들로 제한되는 것은 아니다. 본 명세서에 달리 구체적으로 기술되지 않는 한, 용어 "아릴" 또는 접두사 "아르-"(예컨대, "아르알킬")는 임의로 치환된 아릴 치환기를 포함하는 것을 의미한다.
"아르알킬"은 식 -Rb-Rc의 치환기를 지칭하되, 여기서 Rb는 위에서 정의된 바와 같은 알킬렌 사슬이고, Rc는 위에서 정의된 바와 같은 하나 이상의 아릴 치환기이며, 예를 들어, 벤질, 다이페닐메틸 등이다. 본 명세서에 달리 구체적으로 기술되지 않는 한, 아르알킬기는 임의로 치환될 수 있다.
용어 "카복스아마이드"는, 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, -C(O)NH2를 지칭한다.
용어 "카복실"은, 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, -C(O)OH를 지칭한다.
"사이아노"는 -CN 치환기를 지칭한다.
"사이클로알킬" 또는 "카복실릭 고리"는 탄소 및 수소 원자만으로 이루어진 안정적인 비방향족 단환식 또는 다환식 탄화수소 치환기를 지칭하되, 이것은 3 내지 15개의 탄소 원자를 가지며, 예를 들어, 바람직하게는 3 내지 10개의 탄소 원자를 갖는 융합 또는 브리지 고리계를 포함할 수 있고, 포화 또는 불포화이며 단일 결합에 의해 분자의 나머지에 부착된다. 단환식 치환기는, 예를 들어, 사이클로프로필, 사이클로뷰틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 사이클로헵틸 및 사이클로옥틸을 포함한다. 다환식 치환기는, 예를 들어, 아다만틸, 노보닐, 데칼린일, 7,7-다이메틸-바이사이클로[2.2.1]헵탄일 등을 포함한다. 본 명세서에서 달리 구체적으로 기술되지 않는 한, 사이클로알킬기는 임의로 치환될 수 있다.
"사이클로알킬알킬"은 식 -RbRd의 치환기를 지칭하되, 이때 Rd는 위에서 정의된 바와 같은 알킬렌 사슬이고, Rg는 위에서 정의된 바와 같은 사이클로알킬 치환기이다. 본 명세서에 달리 구체적으로 기술되지 않는 한, 사이클로알킬알킬기는 임의로 치환될 수 있다.
"융합된"은 본 발명의 화합물에서 기존의 고리 구조에 융합된 본 명세서에서 기재된 임의의 고리 구조를 지칭한다. 융합된 고리가 헤테로사이클 고리 또는 헤테로아릴 고리인 경우, 융합된 헤테로사이클릴 고리 또는 융합된 헤테로아릴 고리의 일부로 되는 기존의 고리 구조 상의 임의의 탄소 원자는 질소 원자로 대체될 수 있다.
"할로" 또는 "할로겐"은 브로모, 클로로, 플루오로 또는 아이오도를 지칭한다.
"할로알킬"은, 위에서 정의된 바와 같은 하나 이상의 할로 치환기로 치환된 위에서 정의된 바와 같은알킬 치환기, 예컨대, 트라이플루오로메틸, 다이플루오로메틸, 트라이클로로메틸, 2,2,2-트라이플루오로에틸, 1,2-다이플루오로에틸, 3-브로모-2-플루오로프로필, 1,2-다이브로모에틸 등을 지칭한다. 본 명세서에 달리 구체적으로 기술되지 않는 한, 할로알킬기는 임의로 치환될 수 있다.
용어 "할로알콕시"는, 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, -O-할로알킬을 지칭하되, 여기서 할로알킬은 본 명세서에 정의된 바와 같다. 할로알콕시의 예는 다이플루오로메톡시, 트라이플루오로메톡시, 2,2,2-트라이플루오로에톡시, 펜타플루오로에톡시 등을 포함하지만 이들로 제한되는 것은 아니다.
"헤테로아릴"은, 수소 원자, 1 내지 13개의 탄소 원자, 질소, 산소 및 황으로 이루어진 군으로부터 선택된 1 내지 6개의 헤테로원자, 및 적어도 하나의 방향족 고리를 포함하는 5- 내지 14-원 고리계 치환기를 지칭한다. 본 발명의 개시의 목적을 위하여, 헤테로아릴 치환기는 융합 또는 브리지된 고리계를 포함할 수 있는, 단환식, 2환식, 3환식 또는 4환식 고리계일 수 있고; 그리고 헤테로아릴 치환기 내의 질소, 탄소 또는 황 원자는 임의로 산화될 수 있고; 질소 원자는 4차화될 수 있다. 그 예는, 아제핀일, 아크리딘일, 벤즈이미다졸릴, 벤조티아졸릴, 벤즈인돌릴, 벤조다이옥솔릴, 벤조퓨란일, 벤조옥사졸릴, 벤조티아졸릴, 벤조티아다이아졸릴, 벤조[b][1,4]다이옥세핀일, 1,4-벤조다이옥산일, 벤조나프토퓨란일, 벤즈옥사졸릴, 벤조다이옥솔릴, 벤조다이옥신일, 벤조피란일, 벤조피라논일, 벤조퓨란일, 벤조퓨라논일, 벤조티엔일(벤조티오페닐), 벤조트라이아졸릴, 벤조[4,6]이미다조[1,2-a]피리딘일, 카바졸릴, 신놀린일, 다이벤조퓨란일, 다이벤조티오페닐, 퓨란일, 퓨라논일, 아이소티아졸릴, 이미다졸릴, 인다졸릴, 인돌릴, 인다졸릴, 아이소인돌릴, 인돌린일, 아이소인돌린일, 아이소퀴놀릴, 인돌리진일, 아이소옥사졸릴, 나프티리딘일, 옥사디아졸릴, 2-옥소아제핀일, 옥사졸릴, 옥시란일, 1-옥시도피리딘일, 1-옥시도피리딘일, 1-옥시도피라진일, 1-옥시도피리다진일, 1-페닐-1H-피롤릴, 페나진일, 페노티아진일, 페녹사진일, 프탈라진일, 프테리딘일, 푸리닐, 피롤릴, 피라졸릴, 피리딘일, 피라진일, 피리미딘일, 피리다진일, 퀴나졸리닐, 퀴녹살린일, 퀴놀린일, 퀴누클리딘일, 이소퀴놀린일, 테트라하이드로퀴놀린일, 티아졸릴, 티아디아졸릴, 트라이아졸릴, 테트라졸릴, 트리아진일 및 티오페닐(즉, 티엔일)을 포함하지만 이들로 제한되는 것은 아니다. 본 명세서에 달리 구체적으로 기술되지 않는 한, 헤테로아릴기는 임의로 치환될 수 있다.
"N-헤테로아릴"은 적어도 하나의 질소를 함유하는 위에서 정의된 바와 같은 헤테로아릴 치환기를 지칭하며 여기서 분자의 나머지에 대한 헤테로아릴 치환기의 부착점은 헤테로아릴 치환기 내 질소 원자를 통한다. 본 명세서에 달리 구체적으로 기술되지 않는 한, N-헤테로아릴기는 임의로 치환될 수 있다.
"헤테로아릴알킬"은 식 -RbRf의 치환기를 지칭하되, 여기서 Rb는 위에서 정의된 바와 같은 알킬렌 사슬이고 Rf는 위에서 정의된 바와 같은 헤테로아릴이다. 본 명세서에 달리 구체적으로 기술되지 않는 한, 헤테로아릴알킬기는 임의로 치환될 수 있다.
용어 "헤테로아릴다이일"은, 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 6- 내지 12-원 단환식- 또는 2환식 고리계로부터 유도된 2가 라디칼을 지칭하며, 여기서 적어도 하나의 고리 원자는 헤테로원자이고 그리고 적어도 하나의 고리는 방향족이다. 헤테로원자의 예는 O, S, N 등을 포함하지만 이들로 제한되는 것은 아니다. 헤테로아릴다이일의 예는 티아졸릴다이일, 2,4-티아졸릴다이일, 트라이아졸릴다이일, 1,2,3-트라이아졸릴-1,4-다이일, 피리딜다이일, 벤조퓨란일다이일, 피라진일다이일, 피리다진일다이일, 피리미딘일다이일, 트라이아진일다이일, 퀴놀린일다이일, 벤즈옥사졸릴다이일, 벤조티아졸릴다이일, 1H-벤즈이미다졸릴다이일, 아이소퀴놀린일다이일, 퀴나졸린일다이일, 퀸옥살린일다이일, 피롤릴다이일, 인돌릴다이일, 1H-벤조이미다졸-2-일다이일, 벤조[1,3]다이옥솔-5-일다이일, 3,4-다이하이드로-2H-벤조[1,4]옥사진-7-일다이일, 2,3-다이하이드로-벤조퓨란-7-일다이일, 2,3-다이하이드로-인돌-1-일다이일 등을 포함하지만 이들로 제한되는 것은 아니다. 그 예는 이들 등을 포함하지만 이들로 제한되는 것은 아니다.
"헤테로사이클릴" 또는 "헤테로사이클릭 고리"는 2 내지 12개의 탄소 원자 및 질소, 산소 및 황으로 이루어진 군으로부터 선택된 1 내지 6개의 헤테로원자로 이루어진 안정적인 3- 내지 18-원 비방향족 고리 치환기를 지칭한다. 본 명세서에 달리 구체적으로 기술되지 않는 한, 헤테로사이클릴 치환기는 단환식, 2환식, 3환식 또는 4환식 고리계일 수 있고, 이것은 융합 또는 브리지되 고리계일 수 있으며; 헤테로사이클릴 치환기 내의 질소, 탄소 또는 황 원자는 임의로 산화될 수 있고; 질소 원자는 임의로 4차화될 수 있으며; 그리고 헤테로사이클릴 치환기는 부분적으로 또는 완전히 포화될 수 있다. 이러한 헤테로사이클릴 치환기의 예는, 다이옥솔란일, 티엔일[1,3]다이티안일, 데카하이드로아이소퀴놀릴, 이미다졸린일, 이미다졸리딘일, 아이소티아졸리딘일, 아이소옥사졸린일, 몰폴린일, 옥타하이드로인돌릴, 옥타하이드로아이소인돌릴, 2-옥소피페라진일, 2-옥소피페리딘일, 2-옥소피롤리딘일, 옥사졸리딘일, 피페리딘일, 피페라진일, 4-피페리돈일, 피롤리딘일, 피라졸리딘일, 퀴누클리딘일, 티아졸리딘일, 테트라하이드로퓨릴, 트라이티안일, 테트라하이드로피란일, 티오몰폴린일, 티아몰폴린일, 1-옥소-티오몰폴린일 및 1,1-다이옥소-티오몰폴린일을 포함하지만 이들로 제한되는 것은 아니다. 본 명세서에 달리 구체적으로 기술되지 않는 한, 헤테로사이클릴기는 임의로 치환될 수 있다.
"N-헤테로사이클릴"은 적어도 질소를 함유하는 위에서 정의된 바와 같은 헤테로사이클릴 치환이며, 분자의 나머지 부분에 대한 헤테로사이클릴 치환기의 부착점은 헤테로사이클릴 치환기 내 질소 원자를 통한다. 본 명세서에 달리 구체적으로 기술되지 않는 한, N-헤테로사이클릴기는 임의로 치환될 수 있다.
"헤테로사이클릴알킬"은 식 -RbRe의 치환기를 지칭하되, 여기서 Rb는 위에서 정의된 바와 같은 알킬렌 사슬이고 Re는 위에서 정의된 바와 같은, 헤테로사이클릴 치환기이며, 해당 헤테로사이클릴이 질소-함유 헤테로사이클릴이면, 헤테로사이클릴은 질소 원자에서 알킬 치환기에 부착될 수 있다. 본 명세서에 달리 구체적으로 기술되지 않는 한, 헤테로사이클릴알킬기는 임의로 치환될 수 있다.
용어 "헤테로사이클릴다이일"은, 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 3- 내지 12-원 단환식- 또는 2환식 비방향족 고리계로부터 유래된 2가 라디칼을 지칭하며, 여기서 적어도 하나의 고리 원자는 헤테로원자이다. 헤테로원자의 예는, O, S, N 등을 포함하지만 이들로 제한되는 것은 아니다. 헤테로사이클릴다이일 치환기는 이의 이용 가능한 고리 원자, 예를 들어, 고리 탄소, 또는 고리 질소 중 임의의 2개를 통해서 부착될 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 헤테로사이클릴다이일은 3-, 4-, 5-, 6- 또는 7-원이다. 헤테로사이클릴다이일기의 예는 아지리딘-1-일다이일, 아지리딘-2-일다이일, 아제티딘-1-일다이일, 아제티딘-2-일다이일, 아제티딘-3-일다이일, 피리딘-1-일다이일, 피리딘-2-일다이일, 피리딘-3-일다이일, 피리딘-4-일다이일, 몰폴린-2-일다이일, 몰폴린-3-일다이일, 몰폴린-4-일다이일, 피페라진-1-일다이일, 피페라진-2-일다이일, 피페라진-3-일다이일, 피페라진-4-일다이일, 피롤리딘-1-일다이일, 피롤리딘-2-일다이일, 피롤리딘-3-일다이일, [1,3]-다이옥솔란-2-일다이일, 티오몰폴린-4-일다이일, [1,4]옥사제판-4-일다이일, 1,1-다이옥소-1λ6-티오몰폴린-4-일다이일, 아제판-1-일다이일, 아제판-2-일다이일, 아제판-3-일다이일, 아제판-4-일다이일, 옥타하이드로-퀴놀린-1-일다이일, 옥타하이드로-아이소퀴놀린-2-일다이일 등을 포함하지만 이들로 제한되는 것은 아니다.
"하이드록시" 또는 "하이드록실"은 -OH 치환기를 지칭한다.
용어 "하이드록시-알킬"은, 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 하나의 하이드록시 치환기로 치환된 알킬기를 지칭하되, 이들 용어는 하이드록시메틸, 하이드록시에틸, 하이드록시-n-프로필, 하이드록시-아이소프로필, 하이드록시-n-뷰틸, 하이드록시-sec-뷰틸, 하이드록시-아이소뷰틸, 하이드록시-t-뷰틸, 하이드록시-펜틸, 하이드록시-아이소펜틸, 하이드록시-t-펜틸, 하이드록시-네오-펜틸, 하이드록시-1-메틸뷰틸, 하이드록시-2-메틸뷰틸, 하이드록시-n-헥실 등을 포함하지만 이들로 제한되는 것은 아니다.
"이미노"는 =NH 치환기를 지칭한다.
"티오알킬"은 식 -SRa의 치환기를 지칭하되, 이때 Ra는 1 내지 12개의 탄소 원자를 함유하는 위에서 정의된 바와 같은 알킬 치환기이다. 본 명세서에 달리 구체적으로 기술되지 않는 한, 티오알킬기는 임의로 치환될 수 있다.
"나이트로"는 -NO2 치환기를 지칭한다.
"옥소"는 =O 치환기를 지칭한다.
"티올"은 -SH 치환기를 지칭한다.
"티옥소"는 =S 치환기를 지칭한다.
본 명세서에서 사용된 용어 "치환된"은 상기 기들(즉, 알킬, 알킬렌, 알콕시, 알킬아미노, 티오알킬, 아릴, 아르알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 할로알킬, 헤테로사이클릴, N-헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴알킬, 헤테로아릴, N-헤테로아릴 및/또는 헤테로아릴알킬) 중 어느 하나에서 적어도 하나의 수소 원자가 예컨대, 제한 없이, 하기와 같은 비-수소 원자에 대한 결합으로 대체된 것을 의미한다: 할로겐 원자, 예컨대, F, Cl, Br, 및 I; 기 내 산소 원자, 예컨대, 하이드록실기, 알콕시기 및 에스터기; 기 내 황 원자, 예컨대, 티올기, 티오알킬기, 설폰기, 설포닐기 및 설폭사이드기; 기 내 질소 원자, 예컨대, 아자이드, 아민, 아마이드, 알킬아민, 다이알킬아민, 아릴아민, 알킬아릴아민, 다이아릴아민, N-옥사이드, 이미드 및 엔아민; 기 내 규소 원자, 예컨대, 트라이알킬실릴기, 다이알킬아릴실릴기, 알킬디아릴실릴기 및 트라이아릴실릴기; 및 다양한 다른 기 내 다른 헤테로원자. "치환된"은 또한 상기 기들 중 어느 하나에서 하나 이상의 수소 원자가 더 고차수의 결합 (예컨대, 이중- 또는 삼중-결합)에 의해 헤테로원자, 예컨대, 옥소, 카보닐, 카복실 및 에스터 기 내 산소; 및 기 내 질소, 예컨대, 이민, 옥심, 하이드라존 및 나이트릴로 대체된 것을 의미한다. 예를 들어, "치환된"은 상기 기들 중 어느 하나에서 하나 이상의 수소 원자가 -NRgRh, -NRgC(=O)Rh, -NRgC(=O)NRgRh, -NRgC(=O)ORh, -NRgC(=NRg)NRgRh, -NRgSO2Rh, -OC(=O)NRgRh, -ORg, -SRg, -SORg, -SO2Rg, -OSO2Rg, -SO2ORg, =NSO2Rg 및 -SO2NRgRh로 대체된 것을 포함한다. "치환된은 또한 상기 기들 중 어느 하나에서 하나 이상의 수소 원자가 -C(=O)Rg, -C(=O)ORg, -C(=O)NRgRh, -CH2SO2Rg, -CH2SO2NRgRh로 대체된 것을 의미한다. 앞의 내용에서, Rg 및 Rh는 동일 또는 상이하고 그리고 독립적으로 수소, 알킬, 알콕시, 알킬아미노, 티오알킬, 아릴, 아르알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 할로알킬, 헤테로사이클릴, N-헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴알킬, 헤테로아릴, N-헤테로아릴 및/또는 헤테로아릴알킬이다. "치환된"은 또한 상기 기들 중 어느 하나에서 하나 이상의 수소 원자가 아미노, 사이아노, 하이드록실, 이미노, 나이트로, 옥소, 티옥소, 할로, 알킬, 알콕시, 알킬아미노, 티오알킬, 아릴, 아르알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 할로알킬, 헤테로사이클릴, N-헤테로사이클릴, 헤테로사이클릴알킬, 헤테로아릴, N-헤테로아릴 및/또는 헤테로아릴알킬기에 결합에 의해 대체된 것을 의미한다. 나아가, 상기 치환기의 각각은 상기 치환기의 하나 이상으로 임의로 치환될 수 있다.
본 발명은 또한 상이한 원자 질량 또는 질량수를 가지는 원자에 의해 대체됨으로써 동위원소-표지된 화학식 I의 모든 약제학적으로 허용 가능한 화합물을 포괄하는 것을 의미한다. 개시된 화합물 내로 혼입될 수 있는 동위원소의 예는 수소, 탄소, 질소, 산소, 인, 불소, 염소 및 요오드의 각각의 동위원소, 예컨대, 2H, 3H, 11C, 13C, 14C, 13N, 15N, 15O, 17O, 18O, 31P, 32P, 35S, 18F, 36Cl, 123I 및 125I를 포함한다. 이들 방사성표지된 화합물은 화합물의 효능, 예를 들어, 작용의 부위 또는 방식, 또는 약리학적으로 중요한 작용 부위에 대한 결합 친화성을 결정하거나 측정하는 것을 돕는데 유용할 수 있다. 본 명세서에 기재된 소정의 동위원소-표지된 화합물, 예를 들어, 방사성 동위원소를 포함하는 것들은 약물 및/또는 기질 조직 분포 연구에 유용하다. 방사성 동위원소인 트리튬, 즉, 3H 및 탄소-14, 즉, 14C는 이들의 혼입 용이성 및 쉬운 검출 수단을 고려할 때 이러한 목적에 있어서 특히 유용하다.
더 무거운 동위원소, 예컨대, 듀테륨, 즉, 2H로의 치환은 더 높은 대사 안정성으로 인한 소정의 치료 이점, 예를 들어, 증가된 생체 내 반감기 또는 감소된 투약량 요건을 제공할 수 있고, 따라서 일부 경우에 선호될 수 있다.
양전자 방출 동위원소, 예컨대, 11C, 18F, 15O 및 13N으로의 치환은 기질 수용체 점유율을 시험하기 위한 양전자 방출 단층촬영(Positron Emission Topography: PET)에서 유용할 수 있다. 본 명세서에 기술된 동위원소-표지된 화합물은 일반적으로 당해 분야의 숙련가(즉, 당업자)에게 공지된 통상적인 기술에 의해 또는 기존에 사용되던 비-표지된 시약 대신에 적절한 동위원소-표지된 시약을 사용하여 이하에 제시된 제조방법 및 실시예에 기술된 것과 유사한 과정에 의해 제조될 수 있다.
본 발명은 또한 개시된 화합물의 생체 내 대사 산물을 포괄하는 것으로 이해된다. 그러한 산물은, 예를 들어, 투여된 화합물의, 주로 효소적 과정으로 인한 산화, 환원, 가수분해, 아마이드화, 에스터화 등으로부터 산출될 수 있다. 따라서, 본 발명은 본 발명의 화합물을 이의 대사 산물이 산출되기에 충분한 기간 동안 포유동물에게 투여하는 것을 포함하는 과정에 의해 생성된 화합물을 포함한다. 그러한 산물은 전형적으로 방사성표지된 본 발명의 화합물을 검출 가능한 용량으로 동물, 예컨대, 래트, 마우스, 기니픽, 원숭이, 또는 인간에게 투여하여, 대사가 일어날 수 있도록 충분한 시간을 허용하고, 그리고 이의 전환 산물을 소변, 혈액 또는 다른 생물학적 샘플로부터 단리시킴으로써 확인된다.
본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 하나 이상의 비대칭 중심을 함유할 수 있고, 따라서 절대 입체화학의 측면에서, (R)- 또는 (S)-로서 또는, 아미노산에 대한 (D)- 또는 (L)-로서 정의될 수 있는 거울상이성질체, 부분입체이성질체, 및 다른 입체이성질체 형태를 제공할 수 있다. 본 발명은 라세미 및 광학적으로 순수한 형태를 비롯한 모든 그러한 가능한 이성질체를 포함하는 것을 의미한다. 광학적으로 활성인 (+)- 및 (-), (R)- 및 (S)-, 또는 (D)- 및 (L)-이성질체는 카이럴 신톤 또는 카이럴 시약을 이용하여 제조되거나, 통상적인 기술, 예를 들면, 크로마토그래피 및 분별결정화를 이용하여 분해될 수 있다. 개별적인 거울상이성질체의 제조/단리를 위한 통상적인 기술은 적절한 광학적으로 순수한 전구체 또는 라세미체(또는 염 또는 유도체의 라세미체)의 용액으로부터, 예를 들어, 카이럴 고압력 액체 크로마토그래피(HPLC)를 이용하는 카이럴 합성을 포함한다. 본 명세서에 기재된 화합물이 올레핀 이중 결합 또는 기하학적 비대칭의 다른 중심을 포함하는 경우에, 달리 명시되지 않은 한, 상기 화합물은 E 및 Z 기하이성질체를 둘 다 포함하는 것으로 의도된다. 유사하게, 모든 호변이성질체 형태가 또한 포함되는 것으로 의도된다.
기타 정의
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "아미노산" 또는 "아미노산 잔기"는 1 내지 20가지의 천연 유래 아미노산 중 임의의 것, 천연 유래 아미노산 중 임의의 것의 D-형태, 비-천연 유래 아미노산, 및 이의 유도체, 유사체 및 모방체를 포함한다. 천연 유래 아미노산을 포함하는 아미노산은, 상업적으로 구입할 수 있거나 또는 당업계에 공지된 방법에 의해 합성될 수 있다. 비-천연 유래 아미노산의 예는 시트룰린("Cit"), 노르류신("Nle"), 노르발린("Nva"), p-알라닌, L- 또는 D-나프탈라닌, 오르니틴("Orn"), 호모아르기닌(homoArg) 및 문헌[M. Bodanzsky, "Principles of Peptide Synthesis", 1st and 2nd revised ed., Springer-Verlag, New York, N.Y., 1984 and 1993, 및 Stewart and Young, "Solid Phase Peptide Synthesis", 2nd ed., Pierce Chemical Co., Rockford, Ill., 1984]에 기재된 것들을 비롯하여 펩타이드 분야에서 충분히 공지된 다른 것들을 포함한다. 통상의 아미노산들은 예를 들어 그들의 전체 명칭, 표준 1문자 표기 또는 표준 3분자 표기로 표시될 수 있다: A, Ala, 알라닌; C, Cys, 시스테인; D, Asp, 아스파르트산; E, Glu, 글루탐산; F, Phe, 페닐알라닌; G, Gly, 글리신; H, His, 히스티딘; I, Ile 아이소류신; K, Lys, 라이신; L, Leu, 류신; M, Met, 메티오닌; N, Asn, 아스파라긴; P, Pro, 프롤린; Q, Gln, 글루타민; R, Arg, 아르기닌; S, Ser, 세린; T, Thr, 트레오닌; V, Val, 발린; W, Trp, 트립토판; X, Hyp, 하이드록시프롤린; Y, Tyr, 티로신. 본 명세서에서 조성물 중 아미노산의 어느 하나 및 모두는 천연 유래, 합성 및 이의 유도체 또는 모방체일 수 있다. 아미노산 잔기가 하나 이상의 카이럴 중심을 함유할 경우, D, L, 메조, 트레오 또는 에리트로(필요한 경우) 라세미체의 어느 하나 또는 이들의 혼합물이 본 발명의 범위 내이다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "다른 아미노산"은 그 위치에 천연적으로 존재하는 그 아미노산과는 다른 하나의 아미노산을 의미한다. 이것은 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화될 수 있는 아미노산을 포함하지만 이것으로 제한되는 것은 아니다. 몇몇 실시형태에 있어서 상이한 아미노산은 천연 L-형태이고 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화될 수 있다.
용어 "작제물"은 관심 대상 폴리펩타이드를 암호화하는 완전 또는 부분 천연 유래 뉴클레오타이드 서열에 기초할 수 있는 폴리뉴클레오타이드 분절을 나타내는 것으로 의도된다. 작제물은 임의로 다른 폴리뉴클레오타이드 분절을 함유할 수 있다. 마찬가지 방식으로, 용어 "폴리뉴클레오타이드 작제물에 의해 암호화될 수 있는 아미노산"은 위에서 정의된 폴리뉴클레오타이드 작제물에 의해 암호화될 수 있는 아미노산, 즉, Ala, Val, Leu, Ile, Met, Phe, Trp, Pro, Gly, Ser, Thr, Cys, Tyr, Asn, Glu, Lys, Arg, His, Asp 및 Gln 등과 같은 아미노산을 포괄한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "DBL2Xb"는 서열번호 1의 153 내지 577번으로 확인된 아미노산 서열에 대해서 적어도 70%의 서열 동일성을 가진 아미노산 서열을 보유하는 것을 특징으로 하는 VAR2CSA의 도메인을 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "유도체"는, 서열번호 55 또는 서열번호 56으로 확인된 야생형 VAR2CSA 에 비해서 실질적으로 동일하거나 개선된 생물학적 활성을 나타내는 VAR2CSA 폴리펩타이드 또는 이의 단편을 지칭하도록 의도되며, 이때 모 펩타이드의 아미노산 중 하나 이상이 예컨대 알킬화, PEG화(즉, 페길화), 아실화, 에스터 형성 또는 아마이드 형성 등에 의해 화학적으로 변형되어 있다.
"관심 대상 질환 또는 병태"는 암, 관절염, 관절증, 다발성 경화증, 신경 손상 후 치유, 연골 손상, 상처 치유 및 건선에서 등과 같은 CSA의 부적절한 발현 등과 같은 발현을 포함하는 질환 및 병태를 포함한다.
"유효량" 또는 "치료적 유효량"은, 포유동물, 바람직하게는 인간에게 투여되었을 때, 하기에 정의된 바와 같이, 특정 징후(예컨대, 포유동물, 바람직하게는 인간에서의 암 또는 종양 세포)의 치료를 이끌어내기에 충분한 본 명세서에 기재된 화합물의 양을 지칭한다. "치료적 유효량"을 이루는 본 명세서에 기재된 화합물의 양은 화합물, 병태 및 이의 중증도, 투여 방식, 및 치료될 포유동물의 연령에 따라 달라질 것이지만, 당업자에 의해 그가 가진 지식과 본 개시를 참조하여 통상적으로 결정될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 문구 "기능성 변이체", "기능성 단편" 및 "기능성 유도체"는 서열번호 1, 3 내지 5, 10, 11, 29, 34, 36 내지 38, 41, 43 내지 45, 48, 53 내지 56 중 어느 하나 등과 같이, 서열번호 55 또는 서열번호 56의 유도체뿐만 아니라 변이체, 단편, 절단 버전을 지칭하며, 이때 폴리펩타이드는 서열번호 55 또는 서열번호 56의 주된 결합 서열 부분을 포함하고 plCSA에 결합하는 능력을 적어도 보유한다. 따라서, 이러한 폴리펩타이드는 본 명세서에서 사용되는 바와 같은 VAR2CSA 폴리펩타이드이다. VAR2CSA 기능성 변이체 또는 기능성 단편은 두 변이체 및/또는 단편 및/또는 유도체로부터 선택된 2 가지 또는 3 가지 특징을 가질 수 있는 것이 이해되어야 한다. VAR2CSA 폴리펩타이드의 기능성 변이체 또는 단편은, 본 명세서에 또는 WO 2013/117705에 기재된 바와 같은 검정에서 시험된 경우, 동일한 세포 유형에서 생성된 야생형 VAR2CSA 폴리펩타이드의 결합 친화도의 적어도 약 25%, 예컨대, 적어도 약 50%, 예컨대, 적어도 약 75%, 예컨대, 적어도 약 90%를 나타내는 것을 포괄한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "면역학적 단편"은 표적화 모이어티에 의해 인식되도록 본질적으로 동일한 기능적 활성 및 동일한 공간적 배향을 보유하는 아미노산 서열의 단편을 지칭한다. 따라서 특정 표적화 모이어티는 폴리펩타이드 및 이의 단편 둘 다에 결합할 것이다.
용어 "세포내 대사산물"은 본 명세서에 기재된 화합물(예컨대, VAR2CSA-약물 접합체)에 대한 세포 내 대사 과정 또는 반응에 기인하는 화합물을 지칭한다. 대사 과정 또는 반응은 효소적 과정, 예컨대, 주제 화합물의 펩타이드 링커의 단백질가수분해 절단, 또는 주제 조성물 내 작용기, 예컨대, 하이드라존, 에스터, 또는 아마이드의 가수분해일 수 있다. 접합체의 맥락에서, 세포내 대사산물은 (예컨대, 세포내 효소에 의한 접합체의 효소적 절단 또는 VAR2CSA 폴리펩타이드의 분해에 의해) 세포 내에서 분리된, 즉, 세포로의 진입, 확산, 흡수 또는 수송 후 분리된 VAR2CSA 폴리펩타이드 및 유리 약물을 포함하지만 이들로 제한되는 것은 아니다.
접합체의 맥락에서, 용어 "세포내에서 절단된" 및 "세포내 절단"은 본 명세서에 기재된 화합물에 대한 세포 내부에서의 대사 과정 또는 반응을 지칭하며, 여기서 공유 부착, 예컨대, 공유 부착, 예컨대, 페이로드와 표적화 모이어티 사이의 링커가 파괴되어, 세포 내부에서 표적화 모이어티로부터 해리된 유리 약물을 생성한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 주제의 화합물의 절단된 모이어티는 세포내 대사산물이다. 따라서, 일 실시형태에 있어서, 본 발명은 화학식 I의 화합물의 절단 산물인 화합물을 제공하며, 이 절단 산물은 화학식 II의 화합물을 포함한다. 대안적으로, 약물은 VAR2CSA 폴리펩타이드의 분해 또는 단백질 분해를 통해서 유리될 수 있다.
용어 "세포외 절단"은 본 명세서에 기재된 세포 외부에서의 대사 과정 또는 반응을 지칭하며, 따라서 공유 부착, 예컨대, 페이로드와 표적화 모이어티 사이의 링커가 파괴되어, 세포 외부에서 표적화 모이어티로부터 해리된 유리 약물을 생성한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 주제의 화합물의 절단된 모이어티는 처음에는 세포외 대사산물이고, 이는 확산 및 세포 투과 혹은 수송에 의해 세포 내로 이동할 수 있다.
용어 "단리된 폴리펩타이드"는 (1) (번역 후 변형을 포함하지 않는) 자연적으로 그와 연관된 적어도 약 50 퍼센트의 폴리뉴클레오타이드, 지질, 탄수화물 또는 기타 물질(즉, 오염물)로부터 분리된 본 명세서에 기재된 폴리펩타이드를 지칭한다. 바람직하게는, 단리된 폴리펩타이드는 이의 치료, 진단, 예방 또는 연구 용도를 간섭하지 않는 이의 자연 환경에서 발견되는 임의의 기타 오염 함유 폴리펩타이드 또는 기타 오염물이 없다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "ID1"은 서열번호 1의 1 내지 152번에 의해 확인되는 아미노산 서열에 대해서 적어도 70% 서열 동일성을 가진 아미노산 서열을 가진 것을 특징으로 하는 VAR2CSA의 도메인을 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "ID2a"는 서열번호 1의 아미노산 578 내지 640번의 N-말단으로부터 적어도 20, 적어도 21, 적어도 22, 적어도 23, 적어도 24, 적어도 25, 적어도 26, 적어도 27, 적어도 28, 적어도 29, 적어도 30, 적어도 31, 적어도 32, 적어도 33, 적어도 34, 적어도 35, 적어도 36, 적어도 37, 적어도 38, 적어도 39, 적어도 40, 적어도 41, 적어도 42, 적어도 43, 적어도 44, 적어도 45, 적어도 46, 적어도 47, 적어도 48, 적어도 49, 적어도 50, 적어도 51, 적어도 52, 적어도 53, 적어도 54, 적어도 55, 적어도 56, 적어도 57, 적어도 58, 적어도 59, 적어도 60, 적어도 61 또는 적어도 62개의 아미노산 서열, 예컨대, 63개의 연속적 아미노산을 갖고 연속적 아미노산의 이러한 서열에 대해서 적어도 70% 서열 동일성을 가진 것을 특징으로 하는 VAR2CSA의 도메인을 지칭한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 서열번호 1 내지 57로 확인되는 임의의 하나의 서열 또는 이의 단편의 적어도 70%라고 본 명세서에서 지칭되는 아미노산 서열 동일성은 이 서열에 대해서 적어도 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 8, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 또는 99% 서열 동일성을 가진 서열을 지칭한다.
"포유동물"은 인간 및 가축, 예컨대, 실험실 동물 및 애완동물(예컨대, 고양이, 개, 돼지, 소, 양, 염소, 말, 토끼)와 비-가축 동물, 예컨대, 야생동물 등을 모두 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "미생물"은, 박테리아, 진균, 고세균, 원생생물(예컨대, 녹조류 및 플랑크톤), 플라나리아 및 아메바를 지칭한다. 이 정의 내에 병원성 미생물이 포함된다.
"자연 서열" 폴리펩타이드는 자연에서 유래된 폴리펩타이드로서 동일한 아미노산 서열을 가지는 폴리펩타이드이다. 그러한 자연 서열 폴리펩타이드는 자연으로부터 단리될 수 있거나 재조합 또는 합성 수단에 의해 생산될 수 있다. 따라서, 자연 서열 폴리펩타이드는 천연 유래 인간 폴리펩타이드, 쥣과 폴리펩타이드, 또는 임의의 다른 포유동물 종으로부터의 폴리펩타이드의 아미노산 서열을 가질 수 있다.
"임의적" 또는 "임의로"는 후속적으로 기술되는 상황의 출현이 일어날 수 있거나 혹은 일어나지 않을 수 있고, 그러한 기술이 상기 출현 또는 상황이 일어나는 경우와 그렇지 않은 경우를 모두 포함함을 의미한다. 예를 들어, "임의로 치환된 아릴"은 아릴 치환기가 치환될 수 있거나 치환되지 않을 수 있고 그러한 기술이 치환된 아릴 치환기 및 치환되지 않은 아릴 치환기 둘 다를 포함하는 것을 의미한다.
"약제학적 조성물"은 본 발명의 화합물과 포유동물, 예컨대, 인간에게 생물학적 활성 화합물의 전달을 위하여 당업계에서 일반적으로 허용되는 매체의 제형을 지칭한다. 이러한 매체는 모든 이의 약제학적으로 허용 가능한 담체, 희석제 또는 부형제를 포함한다.
"약제학적으로 허용 가능한 담체, 희석제 또는 부형제"는 미국 식약청에 의해 인간 또는 가축에 사용해도 된다고 승인된 임의의 애주번트, 담체, 부형제, 활택제, 감미제, 희석제, 보존제, 염료/착색제, 풍미 촉진제, 계면활성제, 습윤제, 분산제, 현탁제, 안정화제, 등장화제, 용매 또는 유화제를 제한 없이 포함한다.
"약제학적으로 허용 가능한 염"은 산 및 염기 부가염 둘 다를 포함한다. "약제학적으로 허용 가능한 산 부가염"은 생물학적으로 또는 달리 바람직하지 않은 것이 아닌 유리 염기의 생물학적 효과 및 특성을 보유하는 염으로서, 무기산, 예컨대, 제한되지 않지만, 염화수소산, 브로민화수소산, 황산, 질산, 인산 등, 그리고 유기산, 예컨대, 제한되지 않지만, 아세트산, 2,2-다이클로로아세트산, 아디프산, 알긴산, 아스코르브산, 아스파르트산, 벤젠설폰산, 벤조산, 4-아세트아미도벤조산, 캄퍼산, 캄퍼-10-설폰산, 카프르산, 카프로산, 카프릴산, 탄산, 신남산, 시트르산, 시클람산, 도데실황산, 에탄-1,2-다이설폰산, 에탄설폰산, 2-하이드록시에탄설폰산, 폼산, 퓨마르산, 갈락타르산, 겐티스산, 글루코헵톤산, 글루콘산, 글루쿠론산, 글루탐산, 글루타르산, 2-옥소-글루타르산, 글리세로인산, 글리콜산, 히푸르산, 아이소뷰티르산, 락트산, 락토비온산, 라우르산, 말레산, 말산, 말론산, 만델산, 메탄설폰산, 점액산, 나프탈렌-1,5-다이설폰산, 나프탈렌-2-설폰산, 1-하이드록시-2-나프토산, 니코틴산, 올레산, 오쏘산, 옥살산, 팔미트산, 파모산, 프로피온산, 피로글루탐산, 피루브산, 살리실산, 4-아미노살리실산, 세바스산, 스테아르산, 석신산, 타르타르산, 티오사이안산, p-톨루엔설폰산, 트라이플루오로아세트산, 운데실렌산 등의 산으로 형성된 염을 지칭한다. "약제학적으로 허용 가능한 염기 부가염"은, 생물학적으로 또는 달리 바람직하지 않은 것이 아닌 유리 산의 생물학적 효과 및 특성을 보유하는 염을 지칭한다. 이들 염은 유리산에 무기 염기 또는 유기 염기를 부가하여 제조된다. 무기 염기로부터 유래된 염은 나트륨, 칼륨, 리튬, 암모늄, 칼슘, 마그네슘, 철, 아연, 구리, 망간, 알루미늄 염 등을 포함하지만 이들로 제한되는 것은 아니다. 바람직한 무기염은 암모늄, 나트륨, 칼륨, 칼슘 및 마그네슘 염이다. 유기 염기로부터 유래된 염은, 일차, 이차, 및 삼차 아민, 천연 유래 치환된 아민을 비롯한 치환된 아민, 사이클릭 아민 및 염기성 이온 교환 수지, 예컨대, 암모니아, 아이소프로필아민, 트라이메틸아민, 다이에틸아민, 트라이에틸아민, 트라이프로필아민, 다이에탄올아민, 에탄올아민, 데아놀(deanol), 2-다이메틸아미노에탄올, 2-다이에틸아미노에탄올, 다이사이클로헥실아민, 라이신, 아르기닌, 히스티딘, 카페인, 프로카인, 하이드라바민, 콜린, 베타인, 베네타민, 벤자틴, 에틸렌다이아민, 글루코사민, 메틸글루카민, 테오브로민, 트라이에탄올아민, 트로메타민, 퓨린, 피페라진, 피페리딘, N-에틸피페리딘, 폴리아민 수지 등의 염을 포함하지만 이들로 제한되는 것은 아니다. 특히 바람직한 유기 염기는 아이소프로필아민, 다이에틸아민, 에탄올아민, 트라이메틸아민, 다이사이클로헥실아민, 콜린 및 카페인이다.
"전구약물"은 가용매 분해에 의해 또는 생리적 조건 하에서 본 발명의 생물학적 활성 화합물로 전환될 수 있는 화합물을 나타내는 것을 의미한다. 이와 같이 해서, 용어 "전구약물"은 약제학적으로 허용 가능한 본 발명의 화합물의 대사 전구체를 지칭한다. 전구약물은 이를 필요로 하는 대상체에게 투여된 경우 비활성일 수 있지만, 생체 내에서 본 발명의 활성 화합물로 전환된다. 일 실시형태에 있어서, 전구약물은 생체 내에서, 혈액 내 가수분해에 의해 빠르게 변형되어 본 발명의 모 화합물로 전환된다. 전구약물 화합물은 흔히 포유동물의 유기체에서 가용성, 조직 적합성 또는 지연 방출의 이점을 제공한다(문헌[Bundgard, H., Design of Prodrugs (1985), pp. 7-9, 21-24 (Elsevier, Amsterdam)] 참조). 전구약물의 논의는 문헌[Higuchi, T., et al., A.C.S. Symposium Series, Vol. 14, 및 Bioreversible Prodrus in Drug Design, Ed. Edward B. Roche, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987]에서 제공된다. 본 발명의 화합물의 전구약물은 그 변형물이 일상적인 조작에 의해 또는 생체 내에서 절단되어 본 발명의 모 화합물로 전환되는 방식으로 본 발명의 화합물에 존재하는 작용기를 변형시킴으로써 제조될 수 있다. 전구약물은 하이드록시, 아미노 또는 머캅토기가 임의의 기에 결합된 본 발명의 화합물이, 본 발명의 화합물의 전구약물이 포유동물 개체에 투여되었을 때, 절단되어 각각 유리 하이드록시, 유리 아미노 또는 유리 머캅토기를 형성하는 것을 포함한다. 전구약물의 예는 본 발명의 화합물 내 알코올의 아세테이트, 폼에이트 및 벤조에이트 유도체 또는 아민 작용기의 아마이드 유도체 등을 포함하지만 이들로 제한되는 것은 아니다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "보호기"는, 합성 절차 도중, 하이드록실 및 아미노기를 포함하지만 이들로 제한되는 것은 아닌 반응성 기를, 원치 않는 반응으로부터 보호하기 위하여 당해 분야에 공지된 불안정한 화학 모이어티를 지칭한다. 보호기로 보호된 하이드록실기 및 아미노기는 본 명세서에서 각각 "보호된 하이드록실기" 및 "보호된 아미노기"로 지칭된다. 보호기는 전형적으로 다른 반응성 부위의 반응 도중 부위들을 선별적으로 그리고/또는 직교로 보호하도록 사용되며 이후 비보호된 기를 그대로 남기거나 또는 추가의 반응에서 사용할 수 있도록 제거될 수 있다. 당해 분야에 공지된 바와 같은 보호기는 일반적으로 문헌[Greene and Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd edition, John Wiley & Sons, New York (1999)]에 기술되어 있다. 기들은 본 발명의 화합물 내에 전구체로서 선택적으로 혼입될 수 있다. 예를 들어, 아미노기는 목적으로 하는 합성 지점에서 아미노기로 화학적으로 전환될 수 있는 아지도기로서 본 발명의 화합물 내에 배치될 수 있다. 일반적으로, 기는 적절한 시기에 최종적인 기로 전환되기 위해 보호되거나 모 분자의 다른 부분을 변형시키는 반응에는 불활성이게 될 전구체로서 존재한다. 추가로 대표적인 보호기 또는 전구체 집합은 문헌[Agrawal, et al., Protocols for Oligonucleotide Conjugatess, Eds, Humana Press; New Jersey, 1994; Vol. 26 pp. 1-72]에서 논의된다. "하이드록실 보호기"의 예는, t-뷰틸, t-뷰톡시메틸, 메톡시메틸, 테트라하이드로피란일, 1-에톡시에틸, 1-(2-클로로에톡시)에틸, 2-트라이메틸실릴에틸, p-클로로페닐, 2,4-다이나이트로페닐, 벤질, 2,6-다이클로로벤질, 다이페닐메틸, p-나이트로벤질, 트라이페닐메틸, 트라이메틸실릴, 트라이에틸실릴, t-뷰틸다이메틸실릴, t-뷰틸다이페닐실릴(TBDPS), 트라이페닐실릴, 벤조일폼에이트, 아세테이트, 클로로아세테이트, 트라이클로로아세테이트, 트라이플루오로아세테이트, 피발로에이트, 벤조에이트, p-페닐벤조에이트, 9-플루오렌일메틸 카보네이트, 메실레이트 및 토실레이트를 포함하지만 이들로 제한되는 것은 아니다. "아미노 보호기"의 예는 카바메이트-보호기, 예컨대, 2-트라이메틸실릴에톡시카보닐(Teoc), 1-메틸-1-(4-바이페닐릴)에톡시카보닐(Bpoc), t-뷰톡시카보닐 (BOC), 알릴옥시카보닐(Alloc), 9-플루오렌일메틸옥시카보닐(Fmoc) 및 벤질옥시카보닐(Cbz); 아마이드 보호기, 예컨대, 폼일, 아세틸, 트라이할로아세틸, 벤조일 및 나이트로페닐아세틸; 설폰아마이드-보호기, 예컨대, 2-나이트로벤젠설포닐; 및 이민 및 환식 이미드 보호기, 예컨대, 프탈로이미도 및 다이티아석시노일을 포함하지만 이들로 제한되는 것은 아니다.
흔히 결정화는 본 발명의 화합물의 용매화물을 생성한다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "용매화물"은 본 발명의 화합물의 하나 이상의 분자와 용매의 하나 이상의 분자의 응집물을 지칭한다. 용매는 물일 수 있고, 이러한 경우에 용매화물은 수화물일 수 있다. 대안적으로, 용매는 유기 용매일 수 있다. 따라서, 본 발명의 화합물은 1수화물, 2수화물, 반수화물, 일배반수화물, 3수화물, 4수화물 등을 비롯한 수화물뿐만 아니라, 상응하는 용매화된 형태로 존재할 수 있다. 본 발명의 화합물은 순수한 용매화물일 수 있으나, 다른 경우, 본 발명의 화합물은 단지 우연히 물을 보유하거나 물과 일부 우연한 용매의 혼합물일 수 있다.
"안정적인 화합물" 및 "안정적인 구조"는 반응 혼합물로부터 유용한 순도까지 단리를 견디고, 그리고 효력이 있는 치료제로 제형화될 수 있도록 충분히 강건한 화합물을 지칭하는 것을 의미한다.
당업계에 공지된 바와 같은 용어 "서열 동일성"은, 서열을 비교함으로써 결정되는 바와 같이, 2개 이상의 폴리펩타이드 분자 또는 2개 이상의 핵산 분자의 서열 간의 관계를 지칭한다. 당업계에서, "동일성"은 또한, 2개 이상의 뉴클레오타이드 잔기 또는 2개 이상의 아미노산 잔기의 열들(strings) 간의 정합의 수에 의해 결정되는 바와 같이, 핵산 분자 간 또는 폴리펩타이드 간의 서열 관계의 정도를 의미한다. "동일성"은 특정 수학적 모델 또는 컴퓨터 프로그램(즉, "알고리즘")에 의해 취급되는 (만약 있다면) 갭 정렬을 가진 둘 이상의 서열 중 보다 작은 쪽 사이의 동일한 정합 퍼센트를 측정하지만, "동일성"과 대조적으로, 동일한 정합 및 보존적 치환 정합 둘 다를 포함하는 서열 관계를 지칭한다. 따라서, 보존족 치환이 있는 경우에, 두 폴리펩타이드 간의 유사성의 정도는 이들 두 폴리펩타이드 간의 동일성 퍼센트보다 더 높을 것이다.
"입체이성질체"는 호환 가능하지 않은 상이한 3차원 구조를 갖지만 동일한 결합에 의해 결합된 동일한 원자로 구성된 화합물을 지칭한다. 본 발명은 각종 입체이성질체 및 이들의 혼합물을 상정하고, 이의 분자가 서로 중첩 불가능한 거울상인 두 입체이성질체를 지칭하는 "거울상이성질체"를 포함한다.
"호변이성질체"는 분자의 하나의 원자에서 동일한 분자의 다른 원자로의 양성자 이동을 지칭한다. 본 발명은 임의의 상기 화합물의 호변이성질체를 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 "치료하는" 또는 "치료하다"는 관심 대상 질환 또는 병태를 가지는 포유동물, 바람직하게는 인간에서, 관심 대상 질환 또는 병태를 치료하는 것을 포괄하며 다음을 포함한다:
(i) 포유동물에서 질환 또는 병태가 일어나는 것을 예방함, 특히 그러한 포유동물이 그러한 병태를 갖기 쉬우나 아직 발병했다고 진단되지 않은 경우;
(ii) 질환 또는 병태를 저해함, 즉, 이의 발달을 저지시킴;
(iii) 질환 또는 병태의 완화, 즉, 그러한 질환 또는 병태의 퇴행을 야기; 또는
(iv) 질환 또는 병태로부터 기인되는 증상을 완화시킴, 즉, 기저의 질환 또는 병태를 건드리지 않고 통증을 완화시킴.
일 실시형태에 있어서, 본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "VAR2CSA 폴리펩타이드"는 콘드로이틴 황산 프로테오글리칸(CSPG)과 상호작용하는 플라스모듐 팔시파룸으로 표현되고 프로테오글리칸(CSPG) 상에 제공될 수 있었던 plCSA에 결합하는 능력을 가진 서열번호 55 또는 서열번호 56의 서열, 또는 이들의 단편 또는 변이체 또는 유도체를 가진 것을 특징으로 하는 특정 적혈구막 단백질 1(PfEMP1) 단백질의 세포외 부분을 지칭한다. 몇몇 실시형태에 있어서, VAR2CSA 폴리펩타이드는 적어도 VAR2CSA의 단백질 단편을 포함하며, 이 단편은 a) ID1 및 b) DBL2Xb의 순차적 아미노산 서열로 이루어진다. 몇몇 실시형태에 있어서, VAR2CSA 폴리펩타이드는 적어도 VAR2CSA의 단백질 단편을 포함하며, 이 단편은 a) ID1, 및 b) DBL2Xb, 및 c) ID2a의 순차적 아미노산 서열로 이루어진다. 몇몇 실시형태에 있어서, VAR2CSA 폴리펩타이드는 a) ID1 및 b) DBL2Xb의 순차적 아미노산 서열로 이루어진 VAR2CSA 폴리펩타이드와 plCSA에 대한 결합을 경쟁한다. 몇몇 실시형태에 있어서, VAR2CSA 폴리펩타이드는 a) ID1, b) DBL2Xb 및 c) ID2a의 순차적 아미노산 서열로 이루어진 VAR2CSA 폴리펩타이드와 plCSA에 대한 결합을 경쟁한다. 몇몇 실시형태에 있어서, VAR2CSA 폴리펩타이드는 서열번호 55 또는 서열번호 56의 아미노산 서열을 포함하는 VAR2CSA 폴리펩타이드와 plCSA에 대한 결합을 경쟁한다. VAR2CSA 폴리펩타이드의 정의 내에 포함되는 것은 문헌[Salanti A. et al. Mol. Micro 2003 Jul;49(1):179-91; Khunrae P. et al., J Mol Biol. 2010 Apr 2;397(3):826-34, Srivastava A. et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 2010 Mar 16;107(11):4884-9,
Figure pct00004
M. et al, J Biol Chem. 2011 May 6;286(18):15908-17, 및 Srivastava A. et al., PLoS One. 2011;6(5):e20270]에 기재된 폴리펩타이드이다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "변이체" 또는 "변이체들"은, 서열번호 55 또는 서열번호 56의 아미노산 서열을 가진 VAR2CSA 폴리펩타이드 또는 서열번호 1 내지 54의 아미노산 서열을 포함하는 VAR2CSA 폴리펩타이드의 단편을 지칭하며, 이 단편 또는 변이체는 프로테오글리칸(CSPG) 상의 plCSA에 결합하는 능력을 보유하며, 여기서 하나 이상의 아미노산은 다른 아미노산에 의해 치환되었고/되었거나 하나 이상의 아미노산은 결실되었고/되었거나 하나 이상의 아미노산은 폴리펩타이드에 삽입되었고/되었거나 하나 이상의 아미노산은 폴리펩타이드에 부가되었다. 이러한 부가는 N-말단 단부에 또는 C-말단 단부에 또는 둘 다에서 일어날 수 있다. 여전히 이 정의 내의 "변이체" 또는 "변이체들"은 plCSA에 결합하는 능력의 관점에서 기능적 활성을 지닌다. 따라서, 이러한 폴리펩타이드는 본 명세서에서 사용되는 바와 같은 VAR2CSA 폴리펩타이드이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 변이체는 서열번호 1 내지 57의 서열, 예컨대, 서열번호 1, 3 내지 5, 10, 11, 29, 34, 36 내지 38, 41, 43 내지 45, 48, 53 내지 56, 60 내지 70, 72 내지 75 등의 서열과 적어도 70%, 예컨대, 적어도 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 8, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 또는 99% 서열 동일성을 지닌다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "벡터"는, 숙주 세포에서 증식 가능한 임의의 핵산 실체(entity)를 의미한다. 따라서, 벡터는 자가 복제 벡터, 즉, 염색체외 실체로서 존재하는 벡터일 수 있고, 그 복제는 염색체 복제, 예컨대, 플라스미드와는 독립적이다. 대안적으로, 벡터는, 숙주 세포 내로 도입될 경우, 숙주 세포 게놈 내로 통합되고, 그 내부에서 통합된 염색체(들)와 함께 복제되는 것일 수 있다. 벡터의 선택은 흔히 도입되는 숙주 세포에 좌우될 것이다. 벡터는, 플라스미드 벡터, 파지 벡터, 바이러스 또는 코스미드 벡터를 포함하지만 이들로 제한되는 것은 아니다. 벡터는 통상 복제 기원 및 적어도 하나의 선택 가능한 유전자, 즉. 세포 성장에 필수인 것의 존재 또는 용이하게 검출 가능한 산물을 암호화하는 유전자를 함유한다.
화합물
하기 화학식 I의 화합물인 단백질-약물 접합체가 제공된다:
Figure pct00005
식 중:
T는 VAR2CSA 폴리펩타이드를 포함하는 표적화 모이어티이고;
L-P는 L1-P1 또는 L2-P2로부터 선택되며;
L1은 링커이거나, 또는 L1은 존재하지 않고;
P1는 하기 화학식 XIV의 화합물의 1가 라디칼이며:
Figure pct00006
식 중:
R16 및 R17은 독립적으로 H; 및 1 내지 10개의 탄소 원자를 함유하는 직쇄, 분지쇄 또는 비방향족 환식 골격을 가진 포화 또는 불포화 모이어티로부터 선택되고, 상기 탄소 원자는 -OH, -I, -Br, -Cl, -F, -CN, -CO2H, -CHO, -COSH 또는 -NO2;로 임의로 치환되거나; 또는 R17과 R20은 융합되어 고리를 형성하며;
R18 및 R19는 H, R25 및 ArR25-로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는 R18과 R19는 융합되어 고리를 형성하고;
R20은 H, R25, ArR25- 및 Ar로 이루어진 군으로부터 선택되거나; 또는 R20과 R17은 융합되어 고리를 형성하며;
R21은 H, R25 및 ArR25-로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R22 및 R23은 독립적으로 H, R25 및 ArR25-로 이루어진 군으로부터 선택되며;
R24는 -Y-(CO)NHSO2-R26이고;
R25는 1 내지 10개의 탄소 원자, 0 내지 4개의 질소 원자, 0 내지 4개의 산소 원자 및 0 내지 4개의 황 원자를 함유하는 직쇄, 분지쇄 또는 비방향족 환식 골격을 가진 포화 또는 불포화 모이어티로서 정의되며, 상기 탄소 원자는 =O, =S, OH, -OR28, -O2CR28, -SH, -SR28, -SOCR28, -NH2, -NHR28, -N(R28)2, -NHCOR28, -NR28COR28, -I, -Br, -Cl, -F, -CN, -CO2H, -CO2R28, -CHO, -COR28, -CONH2, -CONHR28, -CON(R28)2, -COSH, -COSR28, -NO2, -SO3H, -SOR28, -SO2R28로 임의로 치환되되, 여기서 R28은 직쇄, 분지쇄 또는 환식의 1 내지 10개의 탄소 포화 또는 불포화 알킬기이고;
R18과 R19를 연결함으로써 형성되는 고리는 R25의 정의 내의 3 내지 7원 비방향족 환식 골격이고,
Y는, R25, ArR25- 또는 X로 임의로 치환된, 직쇄의 포화 또는 불포화 1 내지 6개의 탄소 알킬기로 이루어진 군으로부터 선택된 모이어티로서 정의되며; 그리고
X는 -OH, -OR25, =O, =S, -O2CR25, -SH, -SR25, -SOCR25, -NH2, -NHR25, -N(R25)2, -NHCOR25, -NRCOR25, -I, -Br, -Cl, -F, -CN, -CO2H, -CO2R25, -CHO, -COR25, -CONH2, -CONHR25, -CON(R25)2, -COSH, -COSR25, -NO2, -SO3H, -SOR25 및 -SO2R25로 이루어진 군으로부터 선택된 모이어티로서 정의되고;
R26은 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알킬아미노, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴, 임의로 치환된 헤테로아릴, -COR27, -CSR27, -OR27 및 -NHR27로 이루어진 군으로부터 선택되되, 여기서 각각의 R27은, 독립적으로, 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알킬아미노, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴 또는 임의로 치환된 헤테로아릴이며; 그리고
L2는 링커이거나, 또는 L2는 존재하지 않고;
P2는 생물학적 활성 화합물이며; 그리고
L2-P2는 하기 구조 (III)을 갖는다:
Figure pct00007
식 중:
R은 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알킬아미노, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴, 임의로 치환된 헤테로아릴, -COR27, -CSR27, -OR27 및 -NHR27로 이루어진 군으로부터 선택되되, 여기서 각각의 R27은, 독립적으로, 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알킬아미노, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴, 임의로 치환된 헤테로아릴이거나, 또는 R은 존재하지 않으며;
P3은 화합물 P2의 나머지 부분이고; 그리고
L3은 L2가 존재할 경우 임의로 링커 L2의 나머지 부분이다.
바람직한 실시형태에 있어서, R은 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알킬아미노, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴 및 임의로 치환된 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는 R은 존재하지 않는다.
몇몇 실시형태에 있어서, L2는 존재하고 T 및 L2 펩타이드 결합을 통해서 연결된다. 몇몇 실시형태에 있어서, R은 존재하고 L2는 존재하며 L2 및 P2는 펩타이드 결합을 통해서 연결된다. 몇몇 실시형태에 있어서, L2는 존재하지 않고 R은 존재하며 T 및 P2는 펩타이드 결합을 통해서 연결된다.
소정의 실시형태에 있어서, 하나의 페이로드 분자가 하나의 링커 분자에 연결된다. 소정의 실시형태에 있어서, 복수개의 페이로드 분자는 동일한 링커 분자에 연결된다. 소정의 실시형태에 있어서, 하나의 링커 분자는 하나의 표적화 모이어티에 연결된다. 소정의 실시형태에 있어서, 복수개의 링커 분자는 동일한 표적화 모이어티에 연결된다. "약물-항체 비" 또는 "DAR"은 표적화 모이어티(항체)에 접합된 약물 모이어티의 수를 나타내는 것을 의미한다.
표적화 모이어티 (T)
표적화 모이어티는 링커 단위(L) 또는 페이로드 화합물(P)에 대한 결합을 형성할 수 있다. 표적화 모이어티는 표적화 모이어티의 헤테로원자를 통해 링커 모이어티 또는 페이로드 화합물에 대한 결합을 형성할 수 있다. 표적화 모이어티에 존재할 수 있는 헤테로원자는 (일 실시형태에 있어서, T의 설피드릴기로부터의) 황, (일 실시형태에 있어서, T의 카보닐, 카복실 또는 하이드록실기로부터의) 산소 및 (일 실시형태에 있어서, T의 1차 또는 2차 아미노기로부터의) 질소를 포함한다. 이 헤테로원자는 표적화 모이어티의 천연 상태로 표적화 모이어티에 존재할 수 있거나, 예를 들어 화학 변형 또는 재조합 수단에 의해 표적화 모이어티로 도입될 수 있다.
몇몇 실시형태에 있어서, 표적화 모이어티는 설피드릴기를 가지고, 설피드릴기의 황 원자를 통해 링커 모이어티에 결합한다. 다른 실시형태에 있어서, 표적화 모이어티는 하나 이상의 설피드릴기를 도입하기 위해 화학적으로 변형될 수 있는 하나 이상의 라이신 잔기를 가진다. 표적화 모이어티는 설피드릴기를 통해 링커 모이어티에 결합한다. 라이신을 변형시키기 위해 사용될 수 있는 시약은 N-숙신이미딜 S-아세틸티오아세테이트(SATA) 및 2-이미노티올란 하이드로클로라이드(트라우트(Traut) 시약)를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다.
다른 실시형태에 있어서, 링커 모이어티는 하나 이상의 설피드릴기를 가지도록 화학적으로 변형될 수 있는 하나 이상의 카보하이드레이트기를 가질 수 있다. 표적화 모이어티는 설피드릴기의 황 원자를 통해 링커 모이어티에 결합한다. 또 다른 실시형태에서, 표적화 모이어티는 알데하이드(-CHO)기를 제공하도록 산화될 수 있는 하나 이상의 카보하이드레이트기를 가질 수 있다(예를 들어, 문헌[Laguzza et al., 1989, J. Med. Chem. 32(3):548-55] 참조). 상응하는 알데하이드는 링커 모이어티의 일부에서 반응성 부위와 결합을 형성할 수 있다. 표적화 모이어티에서 카보닐기와 반응할 수 있는 반응성 부위는 하이드라진 및 하이드록실아민을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 페이로드 화합물의 부착 또는 회합을 위한 단백질의 변형을 위한 다른 프로토콜은 문헌[Coligan et al., Current Protocols in Protein Science, vol. 2, John Wiley & Sons (2002)]에 기재되어 있다.
하기 화학식 I의 화합물이 제공된다:
Figure pct00008
식 중, T는 VAR2CSA 폴리펩타이드를 포함하는 표적화 모이어티이다.
본 명세서에 기재된 표적화 모이어티는 본 명세서에 정의된 바와 같은 VAR2CSA 폴리펩타이드를 포함하는 임의의 분자를 이의 범위 내에 포함한다. 바람직한 실시형태에 있어서, 표적화 모이어티는 VAR2CSA 폴리펩타이드를 포함하는 단백질이다. 또 다른 바람직한 실시형태에서, 표적화 모이어티는 본질적으로 VAR2CSA 폴리펩타이드로 이루어진다. 또 다른 바람직한 실시형태에서, 표적화 모이어티는 VAR2CSA 폴리펩타이드로 이루어진다. 바람직한 실시형태에 있어서, VAR2CSA 폴리펩타이드는 WO2013/117705에 개시된 VAR2CSA 폴리펩타이드이다.
VAR2CSA 단백질은 당해 분야의 합당한 기술의 당업자에 의해 인식되는 것처럼 임의의 수의 숙주 세포 유형으로부터 재조합으로 제조될 수 있다. 일 실시형태에 있어서, VAR2CSA 폴리펩타이드는 포유동물 세포 시스템을 사용하여 재조합으로 제조된다. 다른 실시형태에 있어서, VAR2CSA 폴리펩타이드는 비포유동물 세포 시스템을 사용하여 제조된다. 일 실시형태에 있어서, VAR2CSA 폴리펩타이드는 곤충 세포 시스템을 사용하여 제조된다. 합당한 기술의 당업자에 의해 이해되는 것처럼, 상이한 세포 유형에 의해 제조된 재조합 VAR2CSA 폴리펩타이드의 글리코실화 패턴이 변할 수 있다.
몇몇 실시형태에 있어서, VAR2CSA 폴리펩타이드는 최소 결합 단편이 아니다. 몇몇 실시형태에 있어서, VAR2CSA 폴리펩타이드는 최소 결합 단편이다. 몇몇 실시형태에 있어서, VAR2CSA 폴리펩타이드는 a) ID1, 및 b) DBL2Xb, 및 임의로 c) ID2a의 순차적인 아미노산 서열로 이루어진다. 몇몇 실시형태에 있어서, VAR2CSA 폴리펩타이드는 ID2a를 포함한다.
말라리아 단백질의 일부인 VAR2CSA는 매우 높은 특이성 및 매우 높은 결합 강도로 암 특이적 항원 및 세포외 CSPG에 결합할 수 있다. VAR2CSA는 임신한 여성의 태반에서 프로테오글리칸(CSPG)에 부착된 CSA에 배타적으로 기생충 감염 세포의 부착을 매개한다. 재조합 단백질은 plCSA에 대한 전례없는 높은 친화도 및 특이성으로 결합하는 것으로 나타났다. 이것은 하전된 황산염뿐만 아니라 CS 골격에 의존하는 plCSA와의 상호작용으로 인할 수 있다. 태반에 존재하는 CS는 암 줄기 세포를 포함하는 다양한 암 세포에 제시된 CS와 매우 유사한 것으로 생각된다(Salanti et al., WO2013/117705). 이것은 VAR2CSA 발현 기생충 감염된 세포가 C32 흑색종 세포에서 plCSA 및 인간 뇌 암 세포에 특이적으로 부착한다는 사실에 의해 입증된다. VAR2CSA를 세포사멸 또는 세포독성 페이로드에 커플링함으로써, 본 명세서에 기재된 화합물은 암 세포 및 암 줄기 세포를 특이적으로 표적화하고 제거하도록 사용될 수 있다. plCSA는 다수의 단백질 골격, 예를 들어 CSPG4, CD44, 바이글리칸, 데코린, 베르시칸, 아그레칸(연골에서의 주요 CSPG), 페르레칸, 신데칸, 및 표 1에 기재된 기타에 존재할 수 있다.
Figure pct00009
Figure pct00010
VAR2CSA는 10nM 미만의 친화도로 태반의 융모간극에서 plCSA에 결합한다. 전장 및 네이티브 VAR2CSA 단백질의 것과 유사한 특징으로 plCSA에 결합하는 VAR2CSA의 더 작은 재조합 부분이 제조된다. 표 2는 바이오센서 기술을 이용한 소정의 VAR2CSA 폴리펩타이드의 plCSA 친화도를 기재한다. 친화도는 석영 결정 미량저울 바이오센서(Attana A100)를 사용하여 동역학 실험에 의해 결정된 KD(nM) 값으로서 제공된다. N/A: plCSA에 대한 결합의 결여로 인해 KD 값이 결정될 수 없는 단백질.
Figure pct00011
재조합 VAR2CSA 단백질은 다른 CS, 예컨대 콘드로이틴 황산 C(C6S) 또는 매우 황산화된 GAG, 예컨대 헤파란 황산(HS)에 결합하지 않는다. BL21 및 서플(SHuffle)을 포함하는 다양한 발현 시스템, 예를 들어 S2 세포, 티. 니(T. ni) 세포, CHO 세포, 및 이. 콜라이(E. coli) 균주에서 plCSA에 대한 높은 친화도로 결합하는 재조합 단백질이 제조될 수 있다.
전장 VAR2CSA보다 작고 매우 높은 친화도(nM) 및 높은 특이성으로 plCSA에 결합하는 다수의 VAR2CSA 폴리펩타이드가 확인되었다(Salanti et al., WO2013/117705). 본 명세서에 기재된 바대로, 이러한 대표적인 VAR2CSA 폴리펩타이드(75kDa)는 피부 흑색종(C32, MeWo), 폐 암종(A549), 유방 암종(HCC1395), 골육종(U205, MNNG/HOS), 횡문근육종(RH30) 및 피부 T 세포 림프종(표 3 및 4)을 포함하는 넓은 범위의 암 세포주에 낮은 농도로 강하게 결합한다. 대조군 분자로서 또 다른 VAR2CSA 단백질이 사용되고, 이것은 분자의 C 말단 부분에서 151개의 아미노산 절두를 제외하고 최소 결합 VAR2CSA 작제물과 동일하다. 이 절두는 plCSA 결합을 제거한다. 재조합 VAR2CSA는 모든 CSPG4 발현 세포주 및 plCSA 사슬을 가지는 다른 CSPG 분자를 발현하는 암 세포주(예를 들어, T 세포 림프종)에 결합한다. 재조합 VAR2CSA 단백질은 인간 적혈구 및 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)와 상호작용하지 못한다(표 3).
Figure pct00012
Figure pct00013
말라리아 기생충에 의해 감염된 세포는 아마도 CSPG4와 VAR2CSA의 특이적 상호작용을 통해 C32 흑색종 세포에 부착한다. 따라서, 본 명세서에 기재된 화합물이 다양한 암 세포에서 plCSA를 표적화하는 치료적 화합물로서 사용될 수 있다는 것이 고안된다. 개발 중인 다른 현재의 치료제에 비해 VAR2CSA 폴리펩타이드에 의해 암 세포에서 plCSA를 표적화하는 것의 이점은 많다: 1) VAR2CSA와 plCSA 사이의 상호작용은 전례없는 높은 친화도 및 높은 특이성을 가진다; 2) VAR2CSA는 진화적으로 개선된 말라리아 단백질이고, 따라서 치료제가 관용성을 파괴하고 자가면역 반응을 발생시키지 않을 것이다; 3) VAR2CSA는 잘 규명된 안정한 단백질이고, 대규모 단백질 생성과 필적하는 유기체에서 고도로 발현될 수 있다; 4) VAR2CSA는 다수의 혈청변이체를 갖는 다형 단백질이다. 반복 치료는 중화 항체에 의한 문제를 피하기 위해 상이한 혈청변이체에 의해 제공될 수 있다; 5) VAR2CSA는 피. 팔시파룸(P. falciparum) 감염된 적혈구에서 세포외 천연에서 노출되고, 따라서 본래 인간 혈청에서 안정한 단백질이고, 매우 프로테아제 내성인 것으로 나타났다.
본 명세서에 기재된 화합물은 VAR2CSA 폴리펩타이드와 plCSA 사이의 상호작용을 이용한다. 이 상호작용은 고친화도 상호작용이고, 이러한 화합물의 하나의 사용은 암 세포 및 암 줄기 세포를 발현하는 plCSA를 표적화하는 것이다. 따라서, 본 명세서에 기재된 화합물은 plCSA 음성 조직에 최소의 불리한 독성으로 암 세포를 표적화하기 위해 사용될 수 있다.
plCSA는 예를 들어 관절염, 관절증, 다발성 경화증 및 신경 손상 후 치유, 연골 수복, 상처 치유 및 건선과 같은 다른 질환 및 병리학적 병태에 또한 관여한다. 따라서, 본 명세서에 기재된 화합물은 임의의 이러한 질환 또는 병태의 치료에 유용하다. 예를 들어, 본 명세서에 기재된 화합물은 관절염 및 관절증 동안 아그레칸의 프로테아제 매개 분해를 차단하는 약물을 표적화하는 데 유용하다. 본 명세서에 기재된 화합물은 또한 이환된 조직에 소염 약물을 표적화하고, 저해제, 예컨대 ADAMTS4 및 -5 저해제를 전달하기 위해 사용될 수 있다. 본 명세서에 기재된 화합물은 연골세포에 의해 아그레칸의 생성을 자극하는 약물을 표적화하기 위해 사용될 수 있다.
본 명세서에 기재된 화합물은 이환된 신경 조직에서 CSPG를 분해하거나 CSPG 생성을 저해하는 약물, 예컨대 CSPG 분자의 단백질 코어의 당 사슬을 절단하는 콘드로이틴분해효소 ABC; CSPG 생성을 감소시키는 자일로사이드; 및 CSPG 생성에 중요한 효소, 예컨대 콘드로이틴 생성효소 또는 콘드로이틴 중합 인자를 저해하는 약물을 표적화하기 위해 사용될 수 있다. 이러한 약물의 예는 4-플루오로-글루코사민, p-나이트로페닐-베타-D-자일록사이드, 및 4-메틸-움벨리페릴-베타-D-자일로피라노사이드를 포함한다.
본 명세서에 기재된 화합물은 사이토킨, 예컨대 IL1-알파를 표적화하고 유지시키기 위해 또한 사용될 수 있고, 이것은 ADAMTS4의 생성을 자극하고, 이것은 후속하여 CSPG를 절단한다.
몇몇 실시형태에 있어서, 본 명세서에 기재된 VAR2CSA 폴리펩타이드는 a) ID1, 및 b) DBL2Xb, 및 임의로 c) ID2a의 순차적인 아미노산 서열로 이루어진다.
몇몇 실시형태에 있어서, 본 명세서에 기재된 VAR2CSA 폴리펩타이드는 ID2a를 포함한다.
몇몇 실시형태에 있어서, 본 명세서에 기재된 VAR2CSA 폴리펩타이드는 ID2a를 포함하지 않는다.
몇몇 실시형태에 있어서, 본 명세서에 기재된 VAR2CSA 폴리펩타이드는 N 또는 C 말단에서의, 또는 ID1, DBL2Xb, 또는 ID2a의 일부가 아닌 본 명세서에 정의된 바와 같은 VAR2CSA 폴리펩타이드의 임의의 부분으로부터 유래한 100개 이하의 아미노산, 예컨대 90개 이하의 아미노산, 예컨대 80개 이하의 아미노산, 예컨대 70개 이하의 아미노산, 예컨대 60개 이하의 아미노산, 예컨대 50개 이하의 아미노산, 예컨대 40개 이하의 아미노산, 예컨대 30개 이하의 아미노산, 예컨대 20개 이하의 아미노산, 예컨대 18개 이하의 아미노산, 예컨대 16개 이하의 아미노산, 예컨대 14개 이하의 아미노산, 예컨대 12개 이하의 아미노산, 예컨대 10개 이하의 아미노산, 예컨대 8개 이하의 아미노산, 예컨대 6개 이하의 아미노산, 예컨대 4개 이하의 아미노산, 예컨대 2개 이하의 아미노산의 VAR2CSA의 단백질 단편의 서열 내에 아미노산 서열을 추가로 포함한다.
몇몇 실시형태에 있어서, 본 명세서에 기재된 VAR2CSA 폴리펩타이드는 N 또는 C 말단에서의, 또는 100개 이하의 아미노산, 예컨대 90개 이하의 아미노산, 예컨대 80개 이하의 아미노산, 예컨대 70개 이하의 아미노산, 예컨대 60개 이하의 아미노산, 예컨대 50개 이하의 아미노산, 예컨대 40개 이하의 아미노산, 예컨대 30개 이하의 아미노산, 예컨대 20개 이하의 아미노산, 예컨대 18개 이하의 아미노산, 예컨대 16개 이하의 아미노산, 예컨대 14개 이하의 아미노산, 예컨대 12개 이하의 아미노산, 예컨대 10개 이하의 아미노산, 예컨대 8개 이하의 아미노산, 예컨대 6개 이하의 아미노산, 예컨대 4개 이하의 아미노산, 예컨대 2개 이하의 아미노산의 VAR2CSA의 단백질 단편의 서열 내에 아미노산 서열을 추가로 포함하고, 아미노산 서열은 본 명세서에 정의된 바와 같은 VAR2CSA 폴리펩타이드의 임의의 부분으로부터 유래되지 않는다.
몇몇 실시형태에 있어서, 본 명세서에 기재된 VAR2CSA 폴리펩타이드는 100nM 미만, 예컨대 80nM 미만, 예컨대 70nM 미만, 예컨대 60nM 미만, 예컨대 50nM 미만, 예컨대 40nM 미만, 예컨대 30nM 미만, 예컨대 26nM 미만, 예컨대 24nM 미만, 예컨대 22nM 미만, 예컨대 20nM 미만, 예컨대 18nM 미만, 예컨대 16nM 미만, 예컨대 14nM 미만, 예컨대 12nM 미만, 예컨대 10nM 미만, 예컨대 9nM 미만, 예컨대 8nM 미만, 예컨대 7nM 미만, 예컨대 6nM 미만, 또는 4nM 미만의 KD에 의해 결정된 바와 같은 친화도로 프로테오글리칸(CSPG)에서 콘드로이틴 황산 A(CSA)에 결합한다.
몇몇 실시형태에 있어서, 본 명세서에 기재된 VAR2CSA 폴리펩타이드는 100nM 미만, 예컨대 80nM 미만, 예컨대 70nM 미만, 예컨대 60nM 미만, 예컨대 50nM 미만, 예컨대 40nM 미만, 예컨대 30nM 미만, 예컨대 26nM 미만, 예컨대 24nM 미만, 예컨대 22nM 미만, 예컨대 20nM 미만, 예컨대 18nM 미만, 예컨대 16nM 미만, 예컨대 14nM 미만, 예컨대 12nM 미만, 예컨대 10nM 미만, 예컨대 9nM 미만, 예컨대 8nM 미만, 예컨대 7nM 미만, 예컨대 6nM 미만, 또는 4nM 미만의 KD에 의해 결정된 바와 같은 친화도로 프로테오글리칸(CSPG)에서 plCSA에 결합한다.
몇몇 실시형태에 있어서, 본 명세서에 기재된 VAR2CSA 폴리펩타이드는 서열번호 1의 1 내지 577번, 서열번호 3의 1 내지 592번, 서열번호 4의 1 내지 579번, 서열번호 5의 1 내지 576번, 서열번호 10의 1 내지 586번, 서열번호 11의 1 내지 579번, 서열번호 29의 1 내지 565번, 서열번호 34의 1 내지 584번, 서열번호 36의 1 내지 569번, 서열번호 37의 1 내지 575번, 서열번호 38의 1 내지 592번, 서열번호 41의 1 내지 603번, 서열번호 43의 1 내지 588번, 서열번호 44의 1 내지 565번, 서열번호 45의 1 내지 589번, 서열번호 48의 1 내지 573번, 서열번호 53의 1 내지 583번, 또는 서열번호 54의 1 내지 569번의 임의의 하나의 아미노산 서열과 적어도 70%의 서열 동일성을 가지는 아미노산 서열을 포함한다.
몇몇 실시형태에 있어서, 본 명세서에 기재된 VAR2CSA 폴리펩타이드는 서열번호 1의 578 내지 640번, 서열번호 3의 593 내지 656번, 서열번호 4의 580 내지 643번, 서열번호 5의 577 내지 640번, 서열번호 10의 587 내지 650번, 서열번호 11의 580 내지 643번, 서열번호 29의 566 내지 628번, 서열번호 34의 585 내지 647번, 서열번호 36의 570 내지 632번, 서열번호 37의 576 내지 639번, 서열번호 38의 593 내지 655번, 서열번호 41의 604 내지 667번, 서열번호 43의 589 내지 652번, 서열번호 44의 566 내지 628번, 서열번호 45의 590 내지 653번, 서열번호 48의 574 내지 637번, 서열번호 53의 584 내지 646번, 또는 서열번호 54의 570 내지 632번의 임의의 하나의 아미노산 서열과 적어도 70%의 서열 동일성을 가지는 아미노산 서열을 포함한다.
몇몇 실시형태에 있어서 본 명세서에 기재된 VAR2CSA 폴리펩타이드는 서열번호 2, 6, 8, 9, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 30, 31, 32, 33, 35, 39, 40, 42, 46, 47, 49, 50, 51, 또는 52의 아미노산 서열과 적어도 70%의 서열 동일성을 가지는 아미노산 서열을 포함한다.
몇몇 실시형태에 있어서, 본 명세서에 기재된 VAR2CSA 폴리펩타이드는 서열번호 1의 1 내지 577번, 서열번호 3의 1 내지 592번, 서열번호 4의 1 내지 579번, 서열번호 5의 1 내지 576번, 서열번호 10의 1 내지 586번, 서열번호 11의 1 내지 579번, 서열번호 29의 1 내지 565번, 서열번호 34의 1 내지 584번, 서열번호 36의 1 내지 569번, 서열번호 37의 1 내지 575번, 서열번호 38의 1 내지 592번, 서열번호 41의 1 내지 603번, 서열번호 43의 1 내지 588번, 서열번호 44의 1 내지 565번, 서열번호 45의 1 내지 589번, 서열번호 48의 1 내지 573번, 서열번호 53의 1 내지 583번, 또는 서열번호 54의 1 내지 569번의 임의의 하나의 아미노산 서열과 적어도 70%의 서열 동일성을 가지는 30개의 아미노산 서열로 이루어진다.
몇몇 실시형태에 있어서, 본 명세서에 기재된 VAR2CSA 폴리펩타이드는 서열번호 1, 3 내지 5, 10, 11, 29, 34, 36 내지 38, 41, 43 내지 45, 48, 53, 및 54로 이루어진 목록으로부터 선택된 아미노산 서열로 이루어진다.
몇몇 실시형태에 있어서, 본 명세서에 기재된 VAR2CSA 폴리펩타이드는 700개 미만의 아미노산, 예컨대 690개 미만의 아미노산, 예컨대 680개 미만의 아미노산, 예컨대 670개 미만의 아미노산, 예컨대 660개 미만의 아미노산, 예컨대 650개 미만의 아미노산, 예컨대 640개 미만의 아미노산, 예컨대 630개 미만의 아미노산, 예컨대 620개 미만의 아미노산, 예컨대 610개 미만의 아미노산, 예컨대 600개 미만의 아미노산, 예컨대 590개 미만의 아미노산, 예컨대 580개 미만의 아미노산, 예컨대 570개 미만의 아미노산의 길이를 가지는 아미노산 서열로 이루어진다.
몇몇 실시형태에 있어서, 본 명세서에 기재된 VAR2CSA 폴리펩타이드는 SDS-PAGE에서 비환원 조건 하에 약 100kDa 미만의 분자 질량을 가진다.
몇몇 실시형태에 있어서, 본 명세서에 기재된 VAR2CSA 폴리펩타이드는 재조합 단백질이다.
몇몇 실시형태에 있어서, 본 명세서에 기재된 VAR2CSA 폴리펩타이드는 비글리코실화(non-glycosylated)된다.
몇몇 실시형태에 있어서, 본 명세서에 기재된 VAR2CSA 폴리펩타이드는 글리코실화된다.
본 발명의 몇몇 양상에서, 본 명세서에 기재된 VAR2CSA 폴리펩타이드는 서열 번호 57 또는 이의 기능성 변이체 또는 단편으로부터 선택된 하나 이상의 서열에 의해 한정된 바와 같은 서열을 포함한다.
몇몇 실시형태에 있어서, 본 명세서에 기재된 VAR2CSA 폴리펩타이드는 프로테아제 저해제, 예컨대 말단, 예컨대 단백질 서열의 N-말단에서 염기성 췌장 트립신 저해제(BPTI), 예컨대 서열번호 57에 의해 한정된 바와 같은 서열을 포함한다.
VAR2CSA 폴리펩타이드 변형
서열번호 1 내지 56의 아미노산 서열에 대한 보존적 변형(및 암호화 뉴클레오타이드에 대한 상응하는 변형)은 천연 유래 VAR2CSA 폴리펩타이드의 것과 유사한 기능적 및 화학적 특징을 가지는 VAR2CSA 폴리펩타이드를 생성할 것이다. 반대로, (a) 예를 들어 시트 또는 나선 형태로서 치환의 부위에서의 분자 골격의 구조, (b) 표적 부위에서의 분자의 전하 또는 소수화도, 또는 (c) 다수의 부사슬을 유지시키는 데 있어서의 이의 효과가 상당히 다른 서열번호 1 내지 56의 아미노산 서열에서의 치환을 선택함으로써 VAR2CSA 폴리펩타이드의 기능적 및/또는 화학적 특징에서의 실질적인 변형이 달성될 수 있다. 예를 들어, "보존적 아미노산 치환"은 비네이티브 잔기에 의한 네이티브 아미노산 잔기의 치환을 포함할 수 있어서, 그 위치에서의 아미노산 잔기의 극성 또는 전하에 대한 영향이 없거나 거의 없다. 더욱이, 폴리펩타이드에서의 임의의 네이티브 잔기는 "알라닌 스캐닝 돌연변이유발"에 대해 이전에 기재된 바대로 알라닌에 의해 또한 치환될 수 있다(예를 들어, 문헌[MacLennan et al., 1998, Acta Physiol. Scand. Suppl. 643:55-67; Sasaki et al., 1998, Adv. Biophys. 35:1-24(알라닌 스캐닝 돌연변이유발을 기술함) 참조). 원하는 아미노산 치환(보존적이든 또는 비보존적이든)은 이러한 치환이 원해지는 시간에 당해 분야의 당업자에 의해 결정될 수 있다. 예를 들어, 아미노산 치환은 VAR2CSA 폴리펩타이드의 중요한 잔기를 확인하기 위해, 또는 본 명세서에 기재된 VAR2CSA 폴리펩타이드의 친화도를 증가시키거나 감소시키기 위해 사용될 수 있다.
천연 유래 잔기는 공통 부사슬 특성에 기초하여 분할될 수 있다: 1) 소수성: 노르류신, Met, Ala, Val, Leu, Ile; 2) 중성 친수성: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln; 3) 산성: Asp, Glu; 4) 염기성: His, Lys, Arg; 5) 사슬 배향에 영향을 미치는 잔기: Gly, Pro; 및 6) 방향족: Trp, Tyr, Phe. 비보존적 치환은 예를 들어 또 다른 종류로부터의 구성원에 대한 이 종류 중 하나의 구성원의 교환을 포함할 수 있다. 이러한 치환된 잔기는 비플라스모듐 팔시파룸 VAR2CSA 폴리펩타이드와 상동성인 플라스모듐 팔시파룸 VAR2CSA 폴리펩타이드의 구역, 또는 분자의 비상동성 구역으로 도입될 수 있다. 이러한 변화를 만드는 데 있어서, 아미노산의 수치요법 지수(hydropathic index)가 고려될 수 있다.
각각의 아미노산은 이의 소수화도 및 전하 특징에 기초하여 수치요법 지수가 배정되고, 아이소류신(+4.5); 발린(+4.2); 류신(+3.8); 페닐알라닌(+2.8); 시스테인/시스틴(+2.5); 메티오닌(+1.9); 알라닌(+1.8); 글리신(-0.4); 트레오닌(-0.7); 세린(-0.8); 트립토판(-0.9); 티로신(-1.3); 프롤린(-1.6); 히스티딘(-3.2); 글루타메이트(-3.5); 글루타민(-3.5); 아스파르테이트(-3.5); 아스파라긴(-3.5); 라이신(-3.9); 및 아르기닌(-4.5)이 존재한다. 단백질에서 상호작용 생물학적 기능을 부여하는 데 있어서의 수치요법 아미노산 지수의 중요성이 당해 분야에서 이해된다. Kyte et al., J. Mol. Biol., 157:105-131 (1982). 소정의 아미노산이 유사한 수치요법 지수 또는 점수를 가지는 다른 아미노산에 의해 대체될 수 있고, 유사한 생물학적 활성을 여전히 보유하는 것으로 알려져 있다. 수치요법 지수에 기초하여 변화를 만드는 데 있어서, 수치요법 지수가 ± 2 내인 아미노산의 치환이 바람직하고, ± 1 내인 것이 특히 바람직하고, ± 0.5 내인 것이 훨씬 더 특히 바람직하다.
유사한 아미노산의 치환은, 특히 이에 의해 생성된 생물학적으로 기능상 동등한 단백질 또는 펩타이드가 면역학적 실시형태에서 사용에 의도되는 경우, 친수화도에 기초하여 효과적으로 만들어질 수 있는 것으로 당해 분야에서 또한 이해된다. 인접한 아미노산의 친수화도에 의해 지배되는 바와 같이, 단백질의 가장 큰 국소 평균 친수화도는 이의 면역원성 및 항원성, 즉 단백질의 생물학적 특성과 상관된다. 생성된 친수화도 값이 아미노산 잔기에 배정된다: 아르기닌(+3.0); 라이신(+3.0); 아스파르테이트(+3.0±1); 글루타메이트(+3.0±1); 세린(+0.3); 아스파라긴(+0.2); 글루타민(+0.2); 글리신(0); 트레오닌(-0.4); 프롤린(-0.5±1); 알라닌(-0.5); 히스티딘(-0.5); 시스테인(-1.0); 메티오닌(-1.3); 발린(-1.5); 류신(-1.8); 아이소류신(-1.8); 티로신(-2.3); 페닐알라닌(-2.5); 트립토판(-3.4). 유사한 친수화도 값에 기초하여 변화를 만드는 데 있어서, 친수화도 값이 ± 2 내인 아미노산의 치환이 바람직하고, ± 1 내인 것이 특히 바람직하고, ± 0.5 내인 것이 훨씬 더 특히 바람직하다. 친수화도에 기초하여 1차 아미노산 서열로부터의 에피토프를 또한 확인할 수 있다. 이 구역은 또한 "에피토프 코어 구역"이라 칭해진다.
당업자는 널리 공지된 기법을 이용하여 서열번호 1 내지 57에 기재된 폴리펩타이드의 적합한 변이체를 결정할 것이다. 활성을 파괴하지 않으면서 변할 수 있는 분자의 적합한 구역을 확인하기 위해, 당업자는 활성에 중요한 것으로 생각되지 않는 구역을 표적화할 수 있다. 예를 들어, 동일한 종 또는 다른 종으로부터의 유사한 활성을 가지는 유사한 폴리펩타이드가 공지될 때, 당업자는 VAR2CSA 폴리펩타이드의 아미노산 서열을 이러한 유사한 폴리펩타이드와 비교할 수 있다. 이러한 비교에 의해, 유사한 폴리펩타이드 중에 보존된 분자의 일부 및 잔기를 확인할 수 있다. 이러한 유사한 폴리펩타이드에 대해 보존되지 않은 VAR2CSA 폴리펩타이드의 구역에서의 변화가 VAR2CSA 폴리펩타이드의 생물학적 활성 및/또는 구조에 부정적으로 덜 영향을 미칠 것이라는 것이 이해될 것이다. 당업자는, 심지어 비교적 보존된 구역에서, 활성(보존적 아미노산 잔기 치환)을 보유하면서 천연 유래 잔기에 대해 화학적으로 유사한 아미노산을 치환할 수 있다는 것을 또한 알 것이다. 따라서, 심지어 생물학적 활성 또는 구조에 대해 중요할 수 있는 구역이 생물학적 활성을 파괴하지 않으면서 또는 폴리펩타이드 구조에 부정적으로 영향을 미치지 않으면서 보존적 아미노산 치환으로 처리될 수 있다.
부가적으로, 당업자는 활성 또는 구조에 중요한 유사한 폴리펩타이드에서 잔기를 확인하는 구조-기능 연구를 검토할 수 있다. 이러한 비교의 검토 시, 유사한 폴리펩타이드에서 활성 또는 구조에 중요한 아미노산 잔기에 상응하는 VAR2CSA 폴리펩타이드에서 아미노산 잔기의 중요성을 예측할 수 있다. 당업자는 본 명세서에 기재된 VAR2CSA 폴리펩타이드의 이러한 예측된 중요한 아미노산 잔기에 대해 화학적으로 유사한 아미노산 치환을 선택할 수 있다. 당업자는 유사한 폴리펩타이드에서 그 구조와 관련하여 3차원 구조 및 아미노산 서열을 또한 분석할 수 있다. 그 정보의 검토 시, 당업자는 이의 3차원 구조와 관련하여 VAR2CSA 폴리펩타이드의 아미노산 잔기의 정렬을 예측할 수 있다.
당업자는 단백질의 표면에 있는 것으로 예측된 아미노산 잔기에 대한 라디칼 변화를 만들지 않도록 선택할 수 있는데, 왜냐하면 이러한 잔기가 다른 분자와의 중요한 상호작용에 관여할 수 있기 때문이다. 더구나, 당업자는 각각의 원하는 아미노산 잔기에서 단일 아미노산 치환을 함유하는 시험 변이체를 생성할 수 있다. 변이체는 이후 본 명세서에 기재된 바와 같은 활성 검정을 이용하여 스크리닝될 수 있다. 이러한 변이체는 적합한 변이체에 대한 정보를 얻도록 사용될 수 있다. 예를 들어, 특정한 아미노산 잔기에 대한 변화가 파괴되거나, 원치 않게 감소하거나, 부적합한 활성을 발생시킨다는 것이 발견된 경우, 이러한 변화를 가지는 변이체가 회피될 것이다. 즉, 이러한 일상적 실험으로부터 얻은 정보에 기초하여, 당업자는 단독으로 또는 다른 돌연변이와 조합하여 추가의 치환의 회피되어야 하는 경우 아미노산을 용이하게 결정할 수 있다.
다수의 과학 간행물은 2차 구조의 예측에 전념한다. 문헌[Moult J., Curr. Op. Biotech., 7(4):422-427 (1996), Chou et al., Biochemistry, 13(2):222-245 (1974); Chou et al., Biochemistry, 113(2):211-222 (1974); Chou et al., Adv. Enzymol. Relat. Areas Mol. Biol, 47:45-148 (1978); Chou et al., Ann. Rev. Biochem., 47:251-276 및 Chou et al., Biophys. J., 26:367-384 (1979)]을 참조한다. 더구나, 컴퓨터 프로그램은 2차 구조를 예측하는 것을 돕는데 현재 이용 가능하다. 2차 구조를 예측하는 일 방법은 상동성 모델링에 기초한다. 예를 들어, 30% 초과의 서열 동일성, 또는 40% 초과의 유사성을 가지는 2개의 폴리펩타이드 또는 단백질은 대개 유사한 구조 위상기하학을 가진다. 단백질 구조 데이터베이스(PDB)의 최근의 성장은 폴리펩타이드 또는 단백질의 구조 내의 가능한 수의 폴드(fold)를 포함하는 2차 구조의 증대된 예측가능성을 제공하였다. 문헌[Holm et al., Nucl. Acid. Res., 27(1):244-247 (1999)]을 참조한다. 소정의 폴리펩타이드 또는 단백질에서의 제한된 수의 폴드가 존재하고, 중요한 수의 구조가 일단 해결되면, 구조 예측이 정확성을 극적으로 획득할 것이라는 것이 제안된다(Brenner et al., Curr. Op. Struct. Biol., 7(3):369-376 (1997)).
2차 구조를 예측하는 추가의 방법은 "트레딩(threading)"(Jones, D., Curr. Opin. Struct. Biol., 7(3):377-87 (1997); Sippl et al., Structure, 4(1):15-9 (1996)), "프로파일 분석"(Bowie et al., Science, 253:164-170 (1991); Gribskov et al., Meth. Enzymol., 183:146-159 (1990); Gribskov et al., Proc. Nat. Acad. Sci., 84(13):4355-4358 (1987)) 및 "진화 연결(evolutionary linkage)"(상기 홈(Home) 및 상기 브레너(Brenner)의 문헌 참조)을 포함한다.
관련 폴리펩타이드의 동일성 및 유사성은 공지된 방법에 의해 용이하게 계산될 수 있다. 이러한 방법은 문헌[Computational Molecular Biology, Lesk, A. M., ed., Oxford University Press, New York, 1988; Biocomputing: Informatics and Genome Projects, Smith, D. W., ed., Academic Press, New York, 1993; Computer Analysis of Sequence Analysis, Part 1, Griffin, A. M., and Griffin, H. G., eds., Humana Press, New Jersey, 1994; Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G., Academic Press, 1987; Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. and Devereux, J., eds., M. Stockton Press, New York, 1991; 및 Carillo et al., SIAM J. Applied Math., 48:1073 (1988)]에 기재된 것을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다.
동일성 및/또는 유사성을 결정하는 바람직한 방법은 시험되는 서열 사이에 가장 큰 일치도를 제공하도록 설계된다. 동일성 및 유사성을 결정하는 방법은 공중에게 이용 가능한 컴퓨터 프로그램에 기재되어 있다. 2개의 서열 사이의 동일성 및 유사성을 결정하는 바람직한 컴퓨터 프로그램 방법은 GAP(Devereux et al., Nucl. Acid. Res., 12:387 (1984); Genetics Computer Group, University of Wisconsin, Madison, Wis.), BLASTP, BLASTN, 및 FASTA(Altschul et al., J. Mol. Biol., 215:403-410 (1990))를 포함하는, GCG 프로그램 패키지를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. BLASTX 프로그램은 미국 국립생물공학정보센터(National Center for Biotechnology Information: NCBI) 및 다른 출처(BLAST Manual, Altschul et al. NCB/NLM/NIH Bethesda, Md. 20894; 상기 Altschul 등의 문헌)로부터 공중에게 이용 가능하다. 동일성을 결정하기 위해 널리 공지된 스미스 워터만(Smith Waterman) 알고리즘을 또한 사용할 수 있다.
2개의 아미노산 서열을 정렬하기 위한 소정의 정렬 계획은 2개의 서열의 오직 짧은 구역을 일치시키는 것을 발생시킬 수 있고, 이 작은 정렬된 구역은 2개의 전장 서열 사이에 상당한 관련이 없더라도 매우 높은 서열 동일성을 가질 수 있다. 따라서, 바람직한 실시형태에 있어서, 선택된 정렬 방법(GAP 프로그램)은 표적 폴리펩타이드의 적어도 50개의 인접 아미노산에 걸친 정렬을 발생시킬 것이다.
예를 들어, 컴퓨터 알고리즘 GAP(Genetics Computer Group, 위스콘신대학교, 위, 위스콘신주의 매디슨시에 소재)를 이용하여, 서열 동일성의 백분율이 결정되는 2개의 폴리펩타이드는 이의 각각의 아미노산의 최적 일치(알고리즘에 의해 결정되는 바와 같은 "일치된 기간")에 배정된다. 갭 오프닝 패널티(gap opening penalty)(평균 대각선의 3배로서 계산됨; "평균 대각선"은 사용되는 비교 매트릭스의 대각선의 평균이고; "대각선"은 특정한 비교 매트릭스에 의한 각각의 완전한 아미노산 일치에 배정된 점수 또는 수임) 및 갭 연장 패널티(gap extension penalty)(보통 오프닝 패널티의 1/10임), 및 비교 매트릭스, 예컨대 PAM 250 또는 BLOSUM 62를 알고리즘과 함께 사용한다. 표준 비교 매트릭스(PAM 250 비교 매트릭스에 대해 문헌[Dayhoff et al., Atlas of Protein Sequence and Structure, vol. 5, supp.3 (1978)]; BLOSUM 62 비교 매트릭스에 대해 문헌[Henikoff et al., Proc. Natl. Acad. Sci USA, 89:10915-10919 (1992)] 참조)가 알고리즘에 의해 또한 사용된다.
폴리펩타이드 서열 비교에 바람직한 매개변수는 하기를 포함한다: 알고리즘: 문헌[Needleman et al., J. Mol. Biol, 48:443-453 (1970)]; 비교 매트릭스: 문헌[Henikoff et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:10915-10919 (1992)]으로부터의 BLOSUM 62; 갭 패널티: 12, 갭 길이 패널티: 4, 유사성의 한계치: 0. GAP 프로그램은 상기 매개변수에 의해 유용하다. 상기 언급된 매개변수는 GAP 알고리즘을 이용하여 (말단 갭에 대한 비 패널티와 함께) 폴리펩타이드 비교를 위한 디폴트 매개변수이다. 핵산 분자 서열 비교에 바람직한 매개변수는 하기를 포함한다: 알고리즘: 문헌[Needleman et al., J. Mol Biol., 48:443-453 (1970)]; 비교 매트릭스: 일치 = +10, 불일치 = 0, 갭 패널티: 50, 갭 길이 패널티: 3. GAP 프로그램은 상기 매개변수에 의해 또한 유용하다. 상기 언급된 매개변수는 핵산 분자 비교를 위한 디폴트 매개변수이다.
문헌[Program Manual, Wisconsin Package, Version 9, September, 1997]에 기재된 것을 포함하는, 다른 예시적인 알고리즘, 갭 오프닝 패널티, 갭 연장 패널티, 비교 매트릭스, 유사성의 한계치 등을 이용할 수 있다. 이루어져야 하는 특정한 선택은 당해 분야의 당업자에게 명확할 것이고, 이루어져야 하는 특정한 비교, 예컨대 DNA와 DNA의 비교, 단백질과 단백질의 비교, 단백질과 DNA의 비교; 및 부가적으로, (GAP 또는 BestFit가 일반적으로 바람직한 경우에) 제공된 한 쌍의 서열 사이에 또는 (FASTA 또는 BLASTA가 바람직한 경우에) 하나의 서열 및 서열의 큰 데이터베이스 사이에 비교되는지에 따라 달라질 것이다.
아미노산 서열 변경은 다양한 기법에 의해 달성될 수 있다. 핵산 서열의 변형은 부위 특이적 돌연변이유발에 의해 이루어질 수 있다. 부위 특이적 돌연변이유발에 대한 기법은 당해 분야에 널리 공지되어 있고, 예를 들어 문헌[Zoller and SmitH(DNA 3:479-488, 1984)] 또는 문헌["Splicing by extension overlap", Horton et al., Gene 77, 1989, pp. 61-68]에 기재되어 있다. 따라서, VAR2CSA의 뉴클레오타이드 및 아미노산 서열을 사용하여, 선택의 변경(들)을 도입할 수 있다. 마찬가지로, 특이적 프라이머를 사용하는 중합효소 사슬 반응을 사용하여 DNA 작제물을 제조하기 위한 절차는 당해 분야의 당업자에게 널리 공지되어 있다(문헌[PCR Protocols, 1990, Academic Press, San Diego, CA, USA] 참조).
본 명세서에 기재된 폴리펩타이드는 비천연 유래 아미노산 잔기를 또한 포함할 수 있다. 비천연 유래 아미노산은 제한 없이 베타-알라닌, 데스아미노히스티딘, 트랜스-3-메틸프롤린, 2,4-메타노프롤린, 시스-4-하이드록시프롤린, 트랜스-4-하이드록시프롤린, N-메틸글리신, 알로-트레오닌, 메틸트레오닌, 하이드록시에틸시스테인, 하이드록시에틸호모시스테인, 나이트로글루타민, 호모글루타민, 피페콜산, 티아졸리딘 카복실산, 데하이드로프롤린, 3- 및 4-메틸프롤린, 3,3-다이메틸프롤린, tert-류신, 노르-발린, 2-아자페닐알라닌, 3-아자페닐알라닌, 4-아자페닐알라닌 및 4-플루오로페닐알라닌을 포함한다. 비천연 유래 아미노산 잔기를 폴리펩타이드로 혼입하기 위한 몇몇 방법이 당해 분야에 공지되어 있다. 예를 들어, 실험실내 시스템을 이용할 수 있고, 여기서 넌센스 돌연변이는 화학적으로 아미노아실화된 저해제 tRNA를 사용하여 억제된다. 아미노산을 합성하고 tRNA를 아미노아실화하기 위한 방법은 당해 분야에 공지되어 있다. 넌센스 돌연변이를 함유하는 플라스미드의 전사 및 번역은 이. 콜라이 S30 추출물 및 상업적으로 입수 가능한 효소 및 다른 시약을 포함하는 무세포 시스템에서 수행된다. 폴리펩타이드는 크로마토그래피에 의해 정제된다. 예를 들어, 문헌[Robertson et al., J. Am. Chem. Soc. 113:2722, 1991; Ellman et al., Methods Enzymol. 202:301, 1991; Chung et al., Science 259:806-9, 1993; 및 Chung et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:10145-9, 1993)]을 참조한다. 제2 방법에서, 번역은 돌연변이된 mRNA 및 화학적으로 아미노아실화된 억제자 tRNA의 미량주사에 의해 제노푸스(Xenopus) 난모세포에서 수행된다(Turcatti et al., J. Biol. Chem. 271:19991-8, 1996). 제3 방법에서, 이. 콜라이 세포는 대체하고자 하는 천연 아미노산(예컨대, 페닐알라닌)의 부재 하에 및 원하는 비천연 유래 아미노산(들)(예컨대, 2-아자페닐알라닌, 3-아자페닐알라닌, 4-아자페닐알라닌 또는 4-플루오로페닐알라닌)의 존재 하에 배양된다. 비천연 유래 아미노산은 이의 천연 대응물질 대신에 폴리펩타이드로 혼입된다. 문헌[Koide et al., Biochem. 33:7470-6, 1994]을 참조한다. 천연 유래 아미노산 잔기는 실험실내 화학 변형에 의해 비천연 유래 종으로 전환될 수 있다. 화학 변형은 부위 지정 돌연변이유발과 조합되어 치환의 범위를 추가로 확장시킬 수 있다(Wynn and Richards, 단백질 Sci. 2:395-403, 1993).
VAR2CSA 핵산 작제물
본 명세서에 기재된 VAR2CSA 폴리펩타이드는 재조합 핵산 기법에 의해 제조될 수 있다. 일반적으로, 클로닝된 야생형 VAR2CSA 핵산 서열은 원하는 단백질을 암호화하도록 변형된다. 이 변형된 서열은 이후 발현 벡터로 삽입되고, 이것은 결국 숙주 세포로 형질전환 또는 형질감염된다. 더 고등의 진핵생물 세포, 특히 배양된 포유동물 세포는 숙주 세포로서 사용될 수 있다. 원핵생물 세포, 예컨대 락토코커스 락티스(Lactococcus lactis) 또는 이. 콜라이는, 이 원핵생물이 다이설파이드 결합을 생성할 수 있거나, 단백질이 정확하게 재폴딩되거나 될 수 있는 한, 폴리펩타이드를 발현하도록 또한 사용될 수 있다. 또한, 효모 균주는 사카로마이세스 세레비시아에(Saccharomyces cerevisiae) 및 피. 피치아(P. Pichia) 중에서 단백질을 발현하도록 또한 사용될 수 있다.
본 명세서에 기재된 VAR2CSA 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산 작제물은 적합하게, 예를 들어 게놈 또는 cDNA 라이브러리를 제조하고 표준 기법에 따라 합성 올리고뉴클레오타이드 프로브를 사용한 하이브리드화에 의해 폴리펩타이드의 전부 또는 일부를 암호화하는 DNA 서열을 스크리닝함으로써 얻은, 게놈 또는 cDNA 기원일 수 있다(문헌[Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd. Ed. Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York, 1989] 참조).
VAR2CSA 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산 작제물은 확립된 표준 방법, 예를 들어 문헌[Beaucage and Caruthers, Tetrahedron Letters 22 (1981), 1859-1869]에 기재된 포스포아미다이트 방법, 또는 문헌[Matthes et al., EMBO Journal 3 (1984), 801-805]에 기재된 방법에 의해 합성에 의해 또한 제조될 수 있다. 포스포아미다이트 방법에 따르면, 올리고뉴클레오타이드는 예를 들어 자동 DNA 합성장치에서 합성되고 정제되고 어닐링되고 결찰되고 적합한 벡터로 클로닝된다. 본 명세서에 기재된 플라스모듐 팔시파룸 VAR2CSA 폴리펩타이드를 암호화하는 DNA 서열은 미국 특허 제4,683,202호, 문헌[Saiki et al., Science 239 (1988), 487-491], 또는 상기 샘브룩(Sambrook) 등의 문헌에 기재된 특이적 프라이머를 사용하여 중합효소 사슬 반응에 의해 또한 제조될 수 있다.
더욱이, 핵산 작제물은 표준 기법에 따라 (적절한 바대로) 전체 핵산 작제물의 다양한 부분에 상응하는 단편인 합성, 게놈 또는 cDNA 기원의 단편을 결찰함으로써 제조된, 혼합 합성 및 게놈, 혼합 합성 및 cDNA 또는 혼합 게놈 및 cDNA 기원일 수 있다.
핵산 작제물은 바람직하게는 DNA 작제물이다. 본 명세서에 기재된 VAR2CSA 폴리펩타이드를 제조하기 위해 사용되는 DNA 서열은 적절한 번역 후 프로세싱 및 숙주 세포로부터의 분비를 얻기 위해 VAR2CSA의 아미노 말단에서 프레-프로 폴리펩타이드를 통상적으로 암호화할 것이다.
본 명세서에 기재된 플라스모듐 팔시파룸 VAR2CSA 폴리펩타이드를 암호화하는 DNA 서열은 편리하게는 재조합 DNA 절차로 처리될 수 있는 임의의 벡터일 수 있는 재조합 벡터로 보통 삽입되고, 벡터의 선택은 대개 이것이 도입되는 숙주 세포에 따라 달라질 것이다. 따라서, 벡터는 자체 복제 벡터, 즉 염색체외 집합체로서 존재하는 벡터(이의 복제는 염색체 복제와는 독립적임), 예를 들어 플라스미드일 수 있다. 대안적으로, 벡터는, 숙주 세포로 도입될 때, 숙주 세포 게놈으로 통합되고 이것이 통합된 염색체(들)와 함께 복제되는 것일 수 있다.
벡터는 바람직하게는 본 명세서에 기재된 플라스모듐 팔시파룸 VAR2CSA 폴리펩타이드를 암호화하는 DNA 서열이 DNA의 전사에 필요한 추가의 분절에 작동 가능하게 연결된 발현 벡터이다. 일반적으로, 발현 벡터는 플라스미드 또는 바이러스 DNA로부터 유래되거나, 둘 다의 요소를 함유할 수 있다. 용어, "작동 가능하게 연결된"은 분절이 이의 의도되는 목적과 일치하게 기능하도록 배열되고, 예를 들어 전사가 프로모터에서 개시하고 폴리펩타이드를 암호화하는 DNA 서열을 통해 진행한다는 것을 의미한다.
본 명세서에 기재된 VAR2CSA 폴리펩타이드를 발현하는 데 사용하기 위한 발현 벡터는 클로닝된 유전자 또는 cDNA의 전사를 지시할 수 있는 프로모터를 포함할 것이다. 프로모터는 선택된 숙주 세포에서 전사 활성을 나타내는 임의의 DNA 서열일 수 있고, 숙주 세포에 상동성 또는 비상동성으로 단백질을 암호화하는 유전자로부터 유래할 수 있다.
포유동물 세포에서 플라스모듐 팔시파룸 VAR2CSA 폴리펩타이드를 암호화하는 DNA의 전사를 지시하기에 적합한 프로모터의 예는 SV40 프로모터(Subramani et al., Mol. Cell Biol. 1 (1981), 854-864), MT-1(메탈로티오네인 유전자) 프로모터(Palmiter et al., Science 222 (1983), 809-814), CMV 프로모터(Boshart et al., Cell 41:521-530, 1985) 및 아데노바이러스 2 주요 후기 프로모터(Kaufman and Sharp, Mol. Cell. Biol, 2:1304-1319, 1982)를 포함한다.
곤충 세포에서 사용하기에 적합한 프로모터의 예는 폴리헤드린 프로모터(미국 특허 제4,745,051호; Vasuvedan et al., FEBS Lett. 311, (1992) 7-11), P10 프로모터(J.M. Vlak et al., J. Gen. Virology 69, 1988, pp. 765-776), 아우토그라파 칼리포니카(Autographa californica) 다각체병 바이러스 염기성 단백질 프로모터(EP 제397 485호), 바큘로바이러스 급속 초기 유전자 1 프로모터(미국 특허 제5,155,037호; 미국 특허 제5,162,222호), 및 바큘로바이러스 39K 지연 초기 유전자 프로모터(미국 특허 제5,155,037호; 미국 특허 제5,162,222호)를 포함한다.
효모 숙주 세포에서 사용하기에 적합한 프로모터의 예는 효모 해당 유전자(Hitzeman et al., J. Biol. Chem. 255 (1980), 12073-12080; Alber and Kawasaki, J. Mol. Appl. Gen. 1 (1982), 419-434) 및 알코올 탈수소효소 유전자(Young et al., Genetic Engineering of Microorganisms for Chemicals (Hollaender et al, eds.), Plenum Press, New York, 1982)로부터의 프로모터, 및 TPI1(미국 특허 제4,599,311호) 및 ADH2-4c(Russell et al., Nature 304 (1983), 652-654) 프로모터를 포함한다.
사상균류 숙주 세포에서 사용하기에 적합한 프로모터의 예는 예를 들어 ADH3 프로모터(McKnight et al., The EMBO J. 4 (1985), 2093-2099) 및 tpiA 프로모터를 포함한다. 다른 유용한 프로모터의 예는 에이. 오리자에(A. oryzae) TAKA 아밀라제, 리조무코르 미에헤이(Rhizomucor miehei) 아스파르트산 단백분해효소, 에이. 니게르(A. niger) 중성 알파-아밀라제, 에이. 니게르 산 안정한 알파-아밀라제, 에이. 니게르 또는 에이. 아와모리(A. awamori) 글루코아밀라제(gluA), 리조무코르 미에헤이 리파제, 에이. 오리자에 알칼리 프로테아제, 에이. 오리자에 트리오스 포스페이트 아이소머라제 또는 에이. 니둘란스(A. nidulans) 아세트아미다제를 암호화하는 유전자로부터 유래한 것이다. TAKA-아밀라제 및 gluA 프로모터가 바람직하다. 적합한 프로모터는 예를 들어 EP 238 023 및 EP 383 779에 언급되어 있다.
본 명세서에 기재된 플라스모듐 팔시파룸 VAR2CSA 폴리펩타이드를 암호화하는 DNA 서열은, 필요한 경우, 적합한 종결자, 예컨대 인간 성장 호르몬 종결자(Palmiter et al., Science 222, 1983, pp. 809-814) 또는 TPI1(Alber and Kawasaki, J. Mol. Appl. Gen. 1, 1982, pp. 419-434) 또는 ADH3(McKnight et al., The EMBO J. 4, 1985, pp. 2093-2099) 종결자에 또한 작동 가능하게 연결될 수 있다. 발현 벡터는 VAR2CSA 서열 그 자체에 대해 프로모터의 하류 및 삽입 부위의 하류에 위치한 일련의 RNA 스플라이스 부위를 또한 함유할 수 있다. 바람직한 RNA 스플라이스 부위는 아데노바이러스 및/또는 면역글로불린 유전자로부터 얻어질 수 있다. 삽입 부위의 하류에 위치한 폴리아데닐화 신호가 발현 벡터에 또한 함유된다. 특히 바람직한 폴리아데닐화 신호는 SV40으로부터의 초기 또는 후기 폴리아데닐화 신호(Kaufman and Sharp, 상기 참조), 인간 성장 호르몬 유전자 종결자인 아데노바이러스 Elb 구역으로부터의 폴리아데닐화 신호(DeNoto et al. Nucl. Acids Res. 9:3719-3730, 1981) 및 플라스모듐 팔시파룸, 인간 또는 소 유전자로부터의 폴리아데닐화 신호를 포함한다. 발현 벡터는 비암호화 바이러스 리더 서열, 예컨대 프로모터와 RNA 스플라이스 부위 사이에 위치한 아데노바이러스 2 삼중(tripartite) 리더; 및 인핸서 서열, 예컨대 SV40 인핸서를 또한 포함할 수 있다.
숙주 세포의 분비 경로 내로 본 명세서에 기재된 플라스모듐 팔시파룸 VAR2CSA 폴리펩타이드를 유도하기 위해, 분비 신호 서열(또한 리더 서열, 프레-프로 서열 또는 프레 서열로 공지됨)은 재조합 벡터에서 제공될 수 있다. 분비 신호 서열은 정확한 리딩 프레임에서 본 명세서에 기재된 플라스모듐 팔시파룸 VAR2CSA 폴리펩타이드를 암호화하는 DNA 서열에 연결된다. 분비 신호 서열은 펩타이드를 암호화하는 DNA 서열에 대해 5'에 보통 위치한다. 분비 신호 서열은 단백질과 보통 연관된 것일 수 있거나, 또 다른 분비된 단백질을 암호화하는 유전자 유래일 수 있다.
효모 세포로부터의 분비를 위해, 분비 신호 서열은 세포의 분비 경로 내로 본 명세서에 기재된 발현된 플라스모듐 팔시파룸 VAR2CSA 폴리펩타이드의 효과적인 방향을 보장하는 임의의 신호 펩타이드를 암호화할 수 있다. 신호 펩타이드는 천연 유래 신호 펩타이드, 또는 이의 기능적 부분일 수 있거나, 이것은 합성 펩타이드일 수 있다. 적합한 신호 펩타이드는 알파-인자 신호 펩타이드(미국 특허 제4,870,008호 참조), 마우스 침샘 아밀라제의 신호 펩타이드(문헌[O. Hagenbuchle et al., Nature 289, 1981, pp. 643-646] 참조), 변형된 카복시펩티다제 신호 펩타이드(문헌[L.A. Valls et al., Cell 48, 1987, pp. 887-897] 참조), 효모 BAR1 신호 펩타이드(WO 87/02670 참조), 또는 효모 아스파르트산 프로테아제 3(YAP3) 신호 펩타이드(문헌[M. Egel-Mitani et al., Yeast 6, 1990, pp. 127-137] 참조)인 것으로 밝혀졌다.
효모에서의 효과적인 분비를 위해, 리더 펩타이드를 암호화하는 서열은 신호 서열의 하류에 및 본 명세서에 기재된 플라스모듐 팔시파룸 VAR2CSA 폴리펩타이드를 암호화하는 DNA 서열의 상류에 또한 삽입될 수 있다. 리더 펩타이드의 기능은 배양 배지로의 분비(즉, 세포벽에 걸쳐 또는 적어도 세포막을 통해 효모 세포의 주변 세포질 공간으로의 본 명세서에 기재된 플라스모듐 팔시파룸 VAR2CSA 폴리펩타이드의 배출)를 위해 소포체로부터 골지체로 그리고 추가로 분비 소포로 발현된 펩타이드가 유도되게 허용하는 것이다. 리더 펩타이드는 효모 알파-인자 리더(이의 사용은 예를 들어 미국 특허 제4,546,082호, 미국 특허 제4,870,008호, EP 제16 201호, EP 제123 294호, EP 제123 544호 및 EP 제163 529호에 기재되어 있음)일 수 있다. 대안적으로, 리더 펩타이드는 합성 리더 펩타이드, 즉 자연에서 발견되지 않는 리더 펩타이드일 수 있다. 합성 리더 펩타이드는 예를 들어 WO 89/02463 또는 WO 92/11378에 기재된 바대로 작제될 수 있다.
사상균류에서의 사용을 위해, 신호 펩타이드는 편리하게는 아스퍼질러스 종(Aspergillus ap.) 아밀라제 또는 글루코아밀라제를 암호화하는 유전자, 리조무코르 미에헤이 리파제 또는 프로테아제 또는 휴미콜라 라누기노사(Humicola lanuginosa) 리파제를 암호화하는 유전자로부터 유래될 수 있다. 신호 펩타이드는 바람직하게는 에이. 오리자에 TAKA 아밀라제, 에이. 니게르 중성 알파-아밀라제, 에이. 니게르 산 안정한 아밀라제, 또는 에이. 니게르 글루코아밀라제를 암호화하는 유전자로부터 유래된다. 적합한 신호 펩타이드는 예를 들어 EP 제238 023호 및 EP 제215 594호에 개시되어 있다.
곤충 세포에서의 사용을 위해, 신호 펩타이드는 편리하게는 곤충 유전자(WO 90/05783 참조), 예컨대 인시목(lepidopteran) 만두카 섹스타(Manduca sexta) 지질동성 호르몬 전구체 신호 펩타이드(미국 특허 제5,023,328호 참조)로부터 유래할 수 있다.
각각 본 명세서에 기재된 플라스모듐 팔시파룸 VAR2CSA 폴리펩타이드를 암호화하는 DNA 서열, 프로모터 및 임의로 종결자 및/또는 분비 신호 서열을 결찰하고, 복제에 필요한 정보를 함유하는 적합한 벡터로 이를 삽입하기 위해 사용된 절차는 당해 분야의 당업자에게 널리 공지되어 있다(예를 들어, 문헌[Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, New York, 1989] 참조).
포유동물 세포를 형질감염시키고 세포에서 도입된 DNA 서열을 발현하기 위한 방법은 예를 들어 문헌[Kaufman and Sharp, J. Mol. Biol. 159 (1982), 601-621; Southern and Berg, J. Mol. Appl. Genet. 1 (1982), 327-341; Loyter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 79 (1982), 422-426; Wigler et al., Cell 14 (1978), 725; Corsaro and Pearson, Somatic Cell Genetics 7 (1981), 603, Graham and van der Eb, Virology 52 (1973), 456; 및 Neumann et al., EMBO J. 1 (1982), 841-845]에 기재되어 있다.
클로닝된 DNA 서열은 예를 들어, 인산칼슘 매개 형질감염(Wigler et al., Cell 14:725-732, 1978; Corsaro and Pearson, Somatic Cell Genetics 7:603-616, 1981; Graham and Van der Eb, Virology 52d:456-467, 1973) 또는 전기영동(Neumann et al., EMBO J. 1:841-845, 1982)에 의해 배양된 포유동물 세포로 도입된다. 외인성 DNA를 발현하는 세포를 확인하고 선택하기 위해, 선택 가능한 표현형(선택 가능한 마커)을 부여하는 유전자는 일반적으로 관심 대상 유전자 또는 cDNA와 함께 세포로 도입된다. 바람직한 선택 가능한 마커는 네오마이신, 하이그로마이신 및 메토트렉세이트와 같은 약물에 내성을 부여하는 유전자를 포함한다. 선택 가능한 마커는 증폭 가능한 선택 가능한 마커일 수 있다. 바람직한 증폭 가능한 선택 가능한 마커는 다이하이드로폴레이트 환원효소(DHFR) 서열이다. 선택 가능한 마커는 틸리(Thilly)에 의해 검토되었다(Mammalian Cell Technology, Butterworth Publishers, Stoneham, MA). 당해 분야의 당업자는 적합한 선택 가능한 마커를 용이하게 선택할 수 있을 것이다.
선택 가능한 마커는 관심 대상 유전자와 동시에 별개의 플라스미드에서 세포로 도입될 수 있거나, 이것은 동일한 플라스미드에서 도입될 수 있다. 동일한 플라스미드에 있는 경우, 선택 가능한 마커 및 관심 대상 유전자는 상이한 프로모터 또는 동일한 프로모터의 조절 하에 있을 수 있고, 후자의 배열은 디시스트론(dicistronic) 메시지를 생성한다. 이러한 유형의 작제물은 당해 분야에 공지되어 있다(예를 들어, 레비손(Levinson) 및 시몬센(Simonsen)의 미국 특허 제4,713,339호). 세포로 도입된 혼합물에 "운반 DNA"로 공지된 추가의 DNA를 첨가하는 것이 또한 유리할 수 있다.
세포가 DNA를 흡수한 후, 이것은 적절한 성장 배지에서 통상적으로 1 내지 2일 성장하여서, 관심 대상 유전자를 발현하기 시작한다. 이 맥락에서, "적절한 성장 배지"는 세포의 성장 및 관심 대상 플라스모듐 팔시파룸 VAR2CSA 폴리펩타이드의 발현에 필요한 영양소 및 다른 성분을 함유하는 배지를 의미한다. 배지는 일반적으로 탄소원, 질소원, 필수 아미노산, 필수 당, 비타민, 염, 인지질, 단백질 및 성장 인자를 포함한다. 약물 선택은 이후 안정한 방식으로 선택 가능한 마커를 발현하는 세포의 성장을 선택하도록 적용된다. 증폭 가능한 선택 가능한 마커에 의해 형질감염된 세포의 경우, 약물 농도는 클로닝된 서열의 증가한 카피수, 이로써 증가한 발현 수준을 선택하도록 증가할 수 있다. 관심 대상 플라스모듐 팔시파룸 VAR2CSA 폴리펩타이드의 발현을 위해 안정하게 형질감염된 세포의 클론을 이후 스크리닝한다.
본 명세서에 기재된 플라스모듐 팔시파룸 VAR2CSA 폴리펩타이드를 암호화하는 DNA 서열이 도입된 숙주 세포는 번역 후 변형된 폴리펩타이드를 생성할 수 있는 임의의 세포일 수 있고, 효모, 진균 및 더 고등의 진핵생물 세포를 포함한다.
본 발명에서 사용하기 위한 포유동물 세포주의 예는 COS-1(ATCC CRL 1650), 베이비 햄스터 신장(BHK) 및 293(ATCC CRL 1573; Graham et al., J. Gen. Virol. 36:59-72, 1977) 세포주이다. 바람직한 BHK 세포주는 이하 BHK 570 세포라 칭하는 tk-ts13 BHK 세포주(Waechter and Baserga, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 79:1106-1110, 1982)이다. BHK 570 세포주는 ATCC 수탁 번호 CRL 10314 하에 미국 균주보관기관(American Type Culture Collection)(12301 Parklawn Dr., Rockville, Md. 20852)에 기탁되었다. tk-ts13 BHK 세포주는 수탁 번호 CRL 1632 하에 ATCC로부터 또한 이용 가능하다. 또한, 래트 Hep I(래트 간세포종; ATCC CRL 1600), 래트 Hep II(래트 간세포종; ATCC CRL 1548), TCMK(ATCC CCL 139), 인간 폐(ATCC HB 8065), NCTC 1469(ATCC CCL 9.1), CHO(ATCC CCL 61) 및 DUKX 세포(Urlaub and Chasin, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216-4220, 1980)를 포함하는 다수의 다른 세포주가 본 발명 내에 사용될 수 있다.
적합한 효모 세포의 예는 사카로마이세스 종 또는 스키조사카로마이세스 종(Schizosaccharomyces spp.), 특히 사카로마이세스 세레비시아에 또는 사카로마이세스 클루베리(Saccharomyces kluyveri)의 균주의 세포를 포함한다. 효모 세포를 비상동성 DNA에 의해 형질전환하고 이로부터 비상동성 폴리-펩타이드를 제조하는 방법은 예를 들어 미국 특허 제4,599,311호, 미국 특허 제4,931,373호, 미국 특허 제4,870,008호, 제5,037,743호 및 미국 특허 제4,845,075호에 기재되어 있다. 형질전환된 세포는 선택 가능한 마커에 의해 결정된 표현형, 보통 약물 내성 또는 특정한 영양소, 예를 들어 류신의 부재 하에 성장하는 능력에 의해 선택된다. 효모에서의 사용에 바람직한 벡터는 미국 특허 제4,931,373호에 개시된 POT1 벡터이다. 본 명세서에 기재된 플라스모듐 팔시파룸 VAR2CSA 폴리펩타이드를 암호화하는 DNA 서열은 상기 기재된 바와 같은 신호 서열 및 임의로 리더 서열에 선행할 수 있다. 적합한 효모 세포의 추가의 예는 클루이베로마이세스, 예컨대 케이. 락티스, 한세눌라(Hansenula), 예를 들어 에이치. 폴리모르파(H. polymorpha), 또는 피치아, 예를 들어 피. 파스토리스의 균주이다(문헌[Gleeson et al., J. Gen. Microbiol. 132, 1986, pp. 3459-3465]; 미국 특허 제4,882,279호 참조).
다른 진균 세포의 예는 사상균류, 예를 들어 아스퍼질러스 종, 뉴로스포라 종(Neurospora spp.), 푸사리움 종(Fusarium spp.) 또는 트리코데르마 종(Trichoderma spp.), 특히 에이. 오리자에, 에이. 니둘란스 및 에이. 니게르의 균주의 세포이다. 단백질의 발현을 위한 아스퍼질러스 종의 사용은 예를 들어 EP 제272 277호, EP 제238 023호, EP 제184 438호에 기재되어 있다. 에프. 옥시스포룸(F. oxysporum)의 형질전환은 예를 들어 문헌[Malardier et al., 1989, Gene 78: 147-156]에 의해 기재된 바대로 수행될 수 있다. 트리코데르마 종의 형질전환은 예를 들어 EP 제244 234호에 기재된 바대로 수행될 수 있다.
사상균류가 숙주 세포로서 사용될 때, 이것은 재조합 숙주 세포를 얻기 위해 편리하게는 숙주 염색체에서 DNA 작제물을 통합함으로써 본 명세서에 기재된 DNA 작제물에 의해 형질전환될 수 있다. DNA 서열이 세포에서 안정하게 더욱 유지될 것이므로, 이 통합은 일반적으로 이점인 것으로 생각된다. 숙주 염색체로의 DNA 작제물의 통합은 편리한 방법에 따라, 예를 들어 상동성 또는 비상동성 재조합에 의해 수행될 수 있다.
곤충 세포의 형질전환 및 여기서의 비상동성 폴리펩타이드의 제조는 미국 특허 제4,745,051호; 미국 특허 제4,879,236호; 미국 특허 제5,155,037호; 미국 특허 제5,162,222호; 및 EP 제397,485호에 기재된 바대로 수행될 수 있다. 숙주로서 사용되는 곤충 세포주는 적합하게 인시목 세포주, 예컨대 스포돕테라 프루지페르다(Spodoptera frugiperda) 세포 또는 트리코플루시아 니(Trichoplusia ni) 세포(미국 특허 제5,077,214호 참조)일 수 있다. 배양 조건은 적합하게 예를 들어 WO 89/01029 또는 WO 89/01028, 또는 상기 언급된 임의의 문헌에 기재된 바와 같을 수 있다.
생성된 펩타이드의 전부 또는 일부가 배양물로부터 회수될 수 있은 후, 상기 기재된 형질전환된 또는 형질감염된 숙주 세포는 이후 플라스모듐 팔시파룸 VAR2CSA 폴리펩타이드의 발현을 허용하는 조건 하에 적합한 영양소 배지에서 배양된다. 세포를 배양하기 위해 사용되는 배지는 숙주 세포를 성장시키기에 적합한 임의의 편리한 배지, 예컨대 적절한 보충물질을 함유하는 최소 또는 복합 배지일 수 있다. 적합한 배지는 상업적 공급자로부터 얻어지거나, (예를 들어, 미국 균주보관기관의 카테고리에서) 공개 레시피에 따라 제조될 수 있다. 세포에 의해 제조된 플라스모듐 팔시파룸 VAR2CSA 폴리펩타이드는 이후 해당 폴리펩타이드의 유형에 따라 원심분리 또는 여과에 의해 배지로부터 숙주 세포를 분리하는 것, 예를 들어 황산암모늄과 같은 염에 의해 상청액 또는 여과액의 단백질 수성 성분을 침전시키는 것, 다양한 크로마토그래피 절차, 예를 들어 이온 교환 크로마토그래피, 겔 여과 크로마토그래피, 친화도 크로마토그래피 등에 의해 정제하는 것을 포함하는 종래의 절차에 의해 배양 배지로부터 회수될 수 있다.
형질전환 동물 기술은 본 명세서에 기재된 VAR2CSA 폴리펩타이드를 제조하기 위해 사용될 수 있다. 숙주 암컷 포유동물의 유선 내에 단백질을 생성하는 것이 바람직하다. 유선에서의 발현 및 후속하는 젖으로의 관심 대상 단백질의 분비는 다른 공급원으로부터 단백질을 분리하는 데 있어서 마주치는 많은 어려움을 극복한다. 젖은 용이하게 수집되고, 많은 분량으로 이용 가능하고, 생물화학적으로 잘 규명된다. 더욱이, 주요 젖 단백질은 고농도(통상적으로 약 1 내지 15g/ℓ)로 젖에 존재한다.
상업용 견지로부터, 숙주로서 많은 젖 수율을 가지는 종을 사용하는 것이 명확히 바람직하다. 더 작은 동물, 예컨대 마우스 및 래트가 사용될 수 있지만(그리고 원칙 단계의 입증에서 바람직함), 돼지, 염소, 양 및 소(이들로 제한되지는 않음)를 포함하는 가축 포유동물을 사용하는 것이 바람직하다. 양은 이 종에서의 유전자이식의 이전의 병력, 젖 수율, 비용 및 양 젖을 수집하기 위한 장비의 용이한 이용 가능성(숙주 종의 선택에 영향을 미치는 인자의 비교를 위해 예를 들어, WO 88/00239 참조)과 같은 인자로 인해 특히 바람직하다. 착유 용도를 위해 사육되는 숙주 동물, 예컨대 이스트 프리스랜드(East Friesland) 양의 새끼를 선택하거나, 차후 날짜에 형질전환 세포주의 사육에 의해 착유용 가축을 도입하는 것이 일반적으로 바람직하다. 임의의 경우에, 공지된 우수한 건강 상태의 동물을 사용해야 한다.
유선에서 발현을 얻기 위해, 젖 단백질 유전자로부터의 전사 프로모터를 사용한다. 젖 단백질 유전자는 카제인(미국 특허 제5,304,489호 참조), 베타 락토글로불린, 락트알부민 및 유청 산성 단백질을 암호화하는 유전자를 포함한다. 베타 락토글로불린(BLG) 프로모터가 바람직하다. 양 베타 락토글로불린 유전자의 경우에, 유전자의 5' 측접 서열(flanking sequence)의 적어도 근위 406bp의 구역이 일반적으로 사용될 것이지만, 약 5kbp까지의 5' 측접 서열의 더 큰 부분, 예컨대 베타 락토글로불린 유전자의 비암호화 부분 및 5' 측접 프로모터를 포함하는 약 4.25kbp DNA 분절이 바람직하다(문헌[Whitelaw et al., Biochem. J. 286: 31 39 (1992)] 참조). 다른 종으로부터의 프로모터 DNA의 유사한 단편이 또한 적합하다.
베타 락토글로불린 유전자의 다른 구역은 발현시키고자 하는 유전자의 게놈 구역일 수 있으면서 작제물에서 또한 혼입될 수 있다. 인트론이 결여된 작제물이 예를 들어 이러한 DNA 서열을 함유하는 것과 비교하여 빈약하게 발현된다는 것이 당해 분야에서 일반적으로 인정된다(문헌[Brinster et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 836 840 (1988); Palmiter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88: 478 482 (1991); Whitelaw et al., Transgenic Res. 1: 3 13 (1991)]; WO 89/01343; 및 WO 91/02318 참조). 이와 관련하여, 관심 대상 단백질 또는 폴리펩타이드를 암호화하는 유전자의 네이티브 인트론의 전부 또는 일부를 함유하는 게놈 서열을 사용하는 것이, 가능한 경우, 일반적으로 바람직하고, 따라서 예를 들어 베타 락토글로불린 유전자로부터의 적어도 일부 인트론의 추가의 포함이 바람직하다. 이러한 하나의 구역은 양 베타 락토글로불린 유전자의 3' 비암호화 구역으로부터 인트론 스프라이싱 및 RNA 폴리아데닐화를 제공하는 DNA 분절이다. 유전자의 천연 3' 비암호화 서열에 치환될 때, 이 양 베타 락토글로불린 분절은 관심 대상 단백질 또는 폴리펩타이드의 발현 수준을 증대시킬 뿐만 아니라 안정화시킬 수 있다. 다른 실시형태 내에, VAR2CSA 서열의 개시 ATG를 둘러싼 구역은 젖 특이적 단백질 유전자로부터의 상응하는 서열에 의해 대체된다. 이러한 대체는 발현을 증대시키는 추정상 조직 특이적 개시 환경을 제공한다. 전체 VAR2CSA 프레 프로 및 5' 비암호화 서열을 예를 들어 BLG 유전자의 것에 의해 대체하는 것이 편리하지만, 더 작은 구역이 대체될 수 있다.
형질전환 동물에서의 본 명세서에 기재된 VAR2CSA 폴리펩타이드의 발현을 위해, VAR2CSA를 암호화하는 DNA 분절은 발현 단위를 제조하기 위해 이의 발현에 필요한 추가의 DNA 분절에 작동 가능하게 연결된다. 이러한 추가의 분절은 상기 언급된 프로모터, 및 mRNA의 폴리아데닐화 및 전사의 종결을 제공하는 서열을 포함한다. 발현 단위는 변형된 VAR2CSA를 암호화하는 분절에 작동 가능하게 연결된 분비 신호 서열을 암호화하는 DNA 분절을 추가로 포함할 것이다. 분비 신호 서열은 네이티브 분비 신호 서열일 수 있거나, 또 다른 단백질, 예컨대 젖 단백질의 것일 수 있다(예를 들어, 문헌[von Heijne, Nucl. Acids Res. 14: 4683-90(1986)]; 및 미드(Meade) 등의 미국 특허 제4,873,316호 참조).
형질전환 동물에서의 사용을 위한 발현 단위의 작제는 추가의 DNA 분절을 함유하는 플라스미드 또는 파지 벡터로 VAR2CSA 서열을 삽입함으로써 편리하게 수행되지만, 발현 단위는 본질적으로 결찰의 임의의 서열에 의해 작제될 수 있다. 젖 단백질을 암호화하는 DNA 분절을 함유하는 벡터를 제공하고, 젖 단백질에 대한 암호화 서열을 VAR2CSA 변이체의 것과 대체하여서; 젖 단백질 유전자의 발현 조절 서열을 포함하는 유전자 융합을 생성하는 것이 특히 편리하다. 임의의 경우에, 플라스미드 또는 다른 벡터에서의 발현 단위의 클로닝은 VAR2CSA 서열의 증폭을 수월하게 한다. 증폭은 박테리아(예를 들어, 이. 콜라이) 숙주 세포에서 편리하게 수행되고, 따라서 벡터는 박테리아 숙주 세포에서 기능성인 선택 가능한 마커 및 복제 기원을 통상적으로 포함할 것이다. 발현 단위는 이후 선택된 숙주 종의 수정란(초기 단계 배아 포함)으로 도입된다. 비상동성 DNA의 도입은 미량주사(예를 들어, 미국 특허 제4,873,191호), 레트로바이러스 감염(Jaenisch, Science 240: 1468-74 (1988)) 또는 배아 줄기(embryonic stem: ES) 세포를 사용한 부위 지정 통합(문헌[Bradley et al., Biotechnology 10: 534-9(1992)]에 의해 검토됨)을 포함하는 여러 경로 중 하나에 의해 달성될 수 있다. 수정란은 이후 상상임신 암컷의 난관 또는 자궁으로 이식되고 만삭으로 진행되도록 허용된다. 생식 계열의 도입된 DNA를 보유하는 자손은 일반 멘델 방식으로 이의 자손에 DNA를 전달할 수 있어서, 형질전환 무리의 개발을 허용한다. 형질전환 동물을 생성하기 위한 일반적 절차는 당해 분야에 공지되어 있다(예를 들어, 문헌[Hogan et al., Manipulating the Mouse Embryo: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, 1986; Simons et al., Biotechnology 6: 179-83 (1988); Wall et al., Biol. Reprod. 32: 645 651 (1985); Buhler et al., Biotechnology 8: 140-3 (1990); Ebert et al., Biotechnology 9: 835-8 (1991); Krimpenfort et al., Biotechnology 9: 844-7 (1991); Wall et al., J. Cell. Biochem. 49: 113-20 (1992)]; 미국 특허 제4,873,191호; 미국 특허 제4,873,316호; WO 88/00239, WO 90/05188, WO 92/11757; 및 영국 특허 제87/00458호 참조). 외래 DNA 서열을 포유동물 및 이의 생식 세포로 도입하기 위한 기법은 원래 마우스에서 개발되었다(예를 들어, 문헌[Gordon et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77: 7380-84 (1980); Gordon and Ruddle, Science 214: 1244-46 (1981); Palmiter and Brinster, Cell 41: 343-5 (1985); Brinster et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82: 4438-42 (1985); 및 Hogan et al. (ibid.)] 참조). 이 기법은 가축 종을 포함하는 더 큰 동물에 의한 사용에 후속하여 채택되었다(예를 들어, WO 88/00239, WO 90/05188 및 WO 92/11757호 및 문헌[Simons et al., Biotechnology 6: 179-83 (1988)] 참조). 요약하면, 형질전환 마우스 또는 가축의 생성에서 현재까지 사용되는 가장 효율적인 경로에서, 관심 대상 DNA의 몇몇 수백 선형 분자가 확립된 기법에 따라 수정란의 프로 핵 중 하나에 주입된다. 접합자의 세포질로의 DNA의 주입이 또한 이용될 수 있다.
형질전환 식물에서의 생성이 또한 이용될 수 있다. 발현은 일반화되거나 특정한 기관, 예컨대 괴경에 지정될 수 있다(문헌[Hiatt, Nature 344:469 479 (1990); Edelbaum et al., J. Interferon Res. 12:449 453 (1992); Sijmons et al., Biotechnology 8:217-21 (1990)]; 및 EP 제0 255 378호 참조).
본 명세서에 기재된 VAR2CSA 폴리펩타이드는 세포 배양 배지 또는 젖으로부터 회수될 수 있다. 본 명세서에 기재된 VAR2CSA 폴리펩타이드는 크로마토그래피(예컨대, 이온 교환, 친화도, 소수성, 크로마토 초점 맞춤 및 크기 배제), 전기영동 절차(예컨대, 분취 등전 초점화(preparative isoelectric focusing: IEF), 시차 용해도(예컨대, 황산암모늄 침전), 또는 추출(예를 들어, 문헌[Protein Purification, J.-C. Janson and Lars Ryden, editors, VCH Publishers, New York, 1989] 참조)을 포함하는 당해 분야에 공지된 다양한 절차에 의해 정제될 수 있다. 바람직하게는, 이것은 항-VAR2CSA 항체 칼럼에서 친화도 크로마토그래피에 의해 정제될 수 있다. 추가의 정제는 종래의 화학 정제 수단, 예컨대 고성능 액체 크로마토그래피에 의해 달성될 수 있다. 시트르산바륨 침전을 포함하는 다른 정제 방법은 당해 분야에 공지되어 있고, 본 명세서에 기재된 VAR2CSA 폴리펩타이드의 정제에 적용될 수 있다(예를 들어, 문헌[Scopes, R., Protein Purification, Springer-Verlag, N.Y., 1982] 참조).
치료적 목적을 위해, 본 명세서에 기재된 VAR2CSA 폴리펩타이드가 실질적으로 순수한 것이 바람직하다. 따라서, 바람직한 실시형태에 있어서, 본 명세서에 기재된 VAR2CSA 폴리펩타이드는 적어도 약 90% 내지 95%의 동질성, 바람직하게는 적어도 약 98%의 동질성으로 정제된다. 순도는 예를 들어 겔 전기영동 및 아미노-말단 아미노산 서열분석에 의해 평가될 수 있다.
링커 모이어티 L 1
하기 화학식 IV의 화합물이 제공된다:
Figure pct00014
식 중:
T는 VAR2CSA 폴리펩타이드를 포함하는 표적화 모이어티이고;
L1은 링커이거나, 또는 L1은 존재하지 않으며; 그리고
P1는 하기 화학식 XIV의 화합물의 1가 라디칼이며:
Figure pct00015
식 중, R16, R17, R18, R19, R20, R21, R22, R23 및 R24는 본 명세서의 위에서 그리고 아래에서 정의된 바와 같다.
링커 모이어티 L1은 페이로드 P1과 표적화 모이어티 T를 연결하여 접합체 화합물 T-L1-P1을 형성하는데 이용될 수 있는 2작용성 화합물이다. 이러한 접합체는 표적 세포(예컨대, 종양 세포)에 약물의 선택적 전달을 허용한다. 링커 모이어티는 2가의 치환기, 예컨대, 알킬다이일, 아릴다이일, 헤테로아릴다이일 모이어티, 예컨대, -(CR2)nO(CR2)n-, 알킬옥시의 반복단위(예컨대, 폴리에틸렌옥시, PEG, poly메틸렌옥시) 및 알킬아미노(예컨대, 폴리에틸렌아미노, 제파민(Jeffamine)(등록상표); 및 석시네이트, 석신아마이드, 다이글리콜레이트, 말로네이트 및 카프로아마이드를 포함하는 이산 에스터 및 아마이드를 포함한다. 본 명세서에 기재된 화합물은 페이로드 및 표적화 모이어티에 결합하기 위한 반응성 부위를 가진 링커 모이어티를 이용해서 제조될 수 있다.
몇몇 실시형태에 있어서, L1은 T 상에 존재하는 친핵성 기에 반응성인 친전자성 기를 가진 반응성 부위를 갖는다. T 상의 유용한 친핵성 기는 설프하이드릴, 하이드록실 및 아미노기를 포함하지만 이들로 제한되는 것은 아니다. T의 친핵성 기의 헤테로원자는 L1 상의 친전자성 기에 반응성이고 L1에 대한 공유 결합을 형성한다. 유용한 친전자성 기는 말레이미드 및 할로아세트아마이드기를 포함하지만 이들로 제한되는 것은 아니다. T 상의 친핵성 기는 L1에 결합하기 편리한 부위를 제공한다.
몇몇 실시형태에 있어서, L1은 표적화 모이어티 상에 존재하는 친전자성 기와 반응성인 친핵성 기를 가진 반응성 부위를 갖는다. 표적화 모이어티 상의 유용한 친전자성 기는, 알데하이드 및 케톤 카보닐기를 포함하지만 이들로 제한되는 것은 아니다. L1의 친핵성 기의 헤테로원자는 표적화 모이어티 상의 친전자성 기와 반응하여 표적화 모이어티에 대한 공유 결합을 형성할 수 있다. L1 상의 유용한 친핵성 기는, 하이드라자이드, 옥심, 아미노, 하이드라진, 티오세미카바존, 하이드라진 카복실레이트 및 아릴하이드라자이드를 포함하지만 이들로 제한되는 것은 아니다. 표적화 모이어티 상의 친전자성 기는 L1에 결합하기 편리한 부위를 제공한다.
카복실산 작용기 및 클로로폼에이트 작용기는 또한, 이들이 예를 들어 P1의 아미노기와 반응하여 아마이드 연결을 형성하기 때문에 L1에 대한 유용한 반응성 부위이다. 또한 반응성 부위로서 유용한 것은, 예를 들어, P1의 아미노기와 반응하여 카바메이트 연결을 제공할 수 있는, p-나이트로페닐 카보네이트(이것으로 제한되지 않음)와 같은 L1 상의 카보네이트 작용기이다.
당업계에 교시된 임의의 링커 모이어티 및 약물 전달의 맥락에서 이용하기 위하여 교시된 것들이 본 발명에서 사용될 수 있는 것이 이해될 것이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 관심 대상 세포 내에서 효소적 절단 또는 화학적 절단에 대한 민감성 등과 같은 특정 용도에 충분히 적합한 특성을 가진 링커가 이용될 수 있다.
선행하는 기술의 범위를 제한하는 일 없이, 일 실시형태에 있어서, L1은 WO 2012/113847에 개시된 링커 모이어티를 포함한다. 다른 실시형태에 있어서, L1은 미국 특허 제8,288,352호에 개시된 링커 모이어티를 포함한다. 다른 실시형태에 있어서, L1은 미국 특허 제5,028,697호에 개시된 링커 모이어티를 포함한다. 다른 실시형태에 있어서, L1은 미국 특허 제5,006,652호에 개시된 링커 모이어티를 포함한다. 다른 실시형태에 있어서, L1은 미국 특허 제5,094,849호에 개시된 링커 모이어티를 포함한다. 다른 실시형태에 있어서, L1은 미국 특허 제5,053,394호에 개시된 링커 모이어티를 포함한다. 다른 실시형태에 있어서, L1은 미국 특허 제5,122,368호에 개시된 링커 모이어티를 포함한다. 다른 실시형태에 있어서, L1은 미국 특허 제5,387,578호에 개시된 링커 모이어티를 포함한다. 다른 실시형태에 있어서, L1은 미국 특허 제5,547,667호에 개시된 링커 모이어티를 포함한다. 다른 실시형태에 있어서, L1은 미국 특허 제5,622,929호에 개시된 링커 모이어티를 포함한다. 다른 실시형태에 있어서, L1은 미국 특허 제5,708,146호에 개시된 링커 모이어티를 포함한다. 다른 실시형태에 있어서, L1은 미국 특허 제6,468,522호에 개시된 링커 모이어티를 포함한다. 다른 실시형태에 있어서, L1은 미국 특허 제6,103,236호에 개시된 링커 모이어티를 포함한다. 다른 실시형태에 있어서, L1은 미국 특허 제6,638,509호에 개시된 링커 모이어티를 포함한다. 다른 실시형태에 있어서, L1은 미국 특허 제6,214,345호에 개시된 링커 모이어티를 포함한다. 다른 실시형태에 있어서, L1은 미국 특허 제6,759,509호에 개시된 링커 모이어티를 포함한다. 다른 실시형태에 있어서, L1은 WO 2007/103288에 개시된 링커 모이어티를 포함한다. 다른 실시형태에 있어서, L1은 WO 2008/083312에 개시된 링커 모이어티를 포함한다. 다른 실시형태에 있어서, L1은 WO 2003/068144에 개시된 링커 모이어티를 포함한다. 다른 실시형태에 있어서, L1은 WO 2004/016801에 개시된 링커 모이어티를 포함한다. 다른 실시형태에 있어서, L1은 WO 2009/134976에 개시된 링커 모이어티를 포함한다. 다른 실시형태에 있어서, L1은 WO 2009/134952에 개시된 링커 모이어티를 포함한다. 다른 실시형태에 있어서, L1은 WO 2009/134977에 개시된 링커 모이어티를 포함한다. 다른 실시형태에 있어서, L1은 WO 2002/08180에 개시된 링커 모이어티를 포함한다. 다른 실시형태에 있어서, L1은 WO 2004/043493에 개시된 링커 모이어티를 포함한다. 다른 실시형태에 있어서, L1은 WO 2007/018431에 개시된 링커 모이어티를 포함한다. 다른 실시형태에 있어서, L1은 WO 2003/026577에 개시된 링커 모이어티를 포함한다. 다른 실시형태에 있어서, L1은 WO 2005/077090에 개시된 링커 모이어티를 포함한다. 다른 실시형태에 있어서, L1은 WO 2005/082023에 개시된 링커 모이어티를 포함한다. 다른 실시형태에 있어서, L1은 WO 2007/011968에 개시된 링커 모이어티를 포함한다. 다른 실시형태에 있어서, L1은 WO 2007/038658에 개시된 링커 모이어티를 포함한다. 다른 실시형태에 있어서, L1은 WO 2007/059404에 개시된 링커 모이어티를 포함한다. 다른 실시형태에 있어서, L1은 WO 2006/110476에 개시된 링커 모이어티를 포함한다. 다른 실시형태에 있어서, L1은 WO 2005/112919에 개시된 링커 모이어티를 포함한다. 다른 실시형태에 있어서, L1은 WO 2008/103693에 개시된 링커 모이어티를 포함한다. 다른 실시형태에 있어서, L1은 미국 특허 제6,756,037호에 개시된 링커 모이어티를 포함한다. 다른 실시형태에 있어서, L1은 미국 특허 제7,087,229호에 개시된 링커 모이어티를 포함한다. 다른 실시형태에 있어서, L1은 미국 특허 제7,122,189에 개시된 링커 모이어티를 포함한다. 다른 실시형태에 있어서, L1은 미국 특허 제7,332,164에 개시된 링커 모이어티를 포함한다. 다른 실시형태에 있어서, L1은 미국 특허 제5,556,623에 개시된 링커 모이어티를 포함한다. 다른 실시형태에 있어서, L1은 미국 특허 제5,643,573호에 개시된 링커 모이어티를 포함한다. 다른 실시형태에 있어서, L1은 미국 특허 제5,665,358호에 개시된 링커 모이어티를 포함한다. 자기-희생 성분을 포함하는 링커 L1이 또한 이용될 수 있다(예를 들어, 미국 특허 제6,214,345호 참조). 자기-희생 성분의 일례는 p-아미노벤질카바모일(PABC)이다. 상업적으로 입수 가능한 링커가 본 발명에서 이용될 수 있다. 예를 들어, 상업적으로 입수 가능한 절단성 링커인 설포석신이미딜 6-[3'(2-피리딜다이티오)-프로피온아미도] 헥사노에이트(설포-LC-SPDP: 써모피어스사(Thermo Pierce) 카탈로그 번호 21650) 및 비-절단성 링커 석신이미딜 4-[N-말레이미도메틸]사이클로헥산-1-카복실레이트(SMCC: 써모피어스사 카탈로그 번호 22360)가 본 명세서에서 입증된 바와 같이 이용될 수 있다. 또한, WO2012171020, WO2010138719, 예를 들어, [Concortis http://www.concortis.com/home]로부터 상업적으로 입수 가능한 링커의 범위 참조. 또한 문헌[Kim et al., Bioconjugate Chemistry, 21 (8): 1513-1519 AUG 2010] 참조. 또한 EP2326349 참조. 또한 문헌[copper-free click chemistry linkers, Angew. Chem. Int. Ed., 2010, 49, p. 9422-9425, ChemBioChem, 2011, 12, p. 1309-1312, http://www.synaffix.com/technology/] 참조.
몇몇 실시형태에 있어서, L1은 SPDP, SMCC, vcPABC, MCvcPABC, MTvc, ADvc, 말레이미드, NHS, 바이오틴, 스트렙타비딘, 뉴트라비딘, 글리코사이드, 또는 이들의 조합물을 포함한다.
몇몇 실시형태에 있어서, L1은 SPDP를 포함한다.
몇몇 실시형태에 있어서, L1은 SMCC를 포함한다.
몇몇 실시형태에 있어서, L1은 vcPABC를 포함한다.
몇몇 실시형태에 있어서, L1은 MCvcPABC를 포함한다.
몇몇 실시형태에 있어서, L1은 MTvc를 포함한다.
몇몇 실시형태에 있어서, L1은 ADvc를 포함한다.
몇몇 실시형태에 있어서, L1은 말레이미드를 포함한다.
몇몇 실시형태에 있어서, L1은 NHS를 포함한다.
몇몇 실시형태에 있어서, L1은 바이오틴을 포함한다.
몇몇 실시형태에 있어서, L1은 스트렙타비딘을 포함한다.
몇몇 실시형태에 있어서, L1은 뉴트라비딘을 포함한다.
몇몇 실시형태에 있어서, L1은 글리코사이드를 포함한다.
몇몇 실시형태에 있어서, L1은 존재하지 않는다.
페이로드 모이어티 P 1
문헌[Talpir, R. et al. (1994) Tetrahedron Lett. 35:4453-6]은, 세포에서 미세소관 탈중합 및 유사분열 저지를 일으키는 해면 동물로부터 얻어지는 안정적인 트라이 펩타이드인 천연 유래 화합물 헤미아스테린(hemiasterlin)을 기술하고 있다. 헤미아스테린은, 이의 활성에 기여하는 것으로 여겨지는 특성인 드문 고도로 응집된 아미노산으로 이루어진다. 많은 기가 구조-활성 관계를 평가하고 헤미아스테린 유사체의 활성을 산정하기 위하여 헤미아스테린의 변형된 특수한 구조 요소를 구비한다. 예를 들어 문헌[Zask et al., Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 14:4353-4358, 2004; Zask et al., J Med Chem, 47:4774-4786, 2004; Yamashita et al., Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 14:5317-5322, 2004; PCT/GB96/00942; WO 2004/026293; WO96/33211]; 및 미국 특허 제7,579,323호 참조.
"A-분절" 또는 아미노 말단 분절의 변형을 가진 헤미아스테린의 유사체가 기술되어 있었다(예를 들어, 문헌[Zask et al., J Med Chem, 47:4774-4786, 2004; Yamashita et al., Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 14:5317-5322, 2004]; 미국 특허 제7,579,323호 참조). 미국 특허 제7,579,323호는 HTI-286이라고도 지칭되는 헤미아스테린의 유사체를 개시하되, 여기서 인돌 모이어티는 페닐기로 대체된다. HTI-286은 강력한 세포분열저지 활성을 나타내고 암의 치료를 위한 임상 시험에서 평가된 바 있다(Ratain et al., Proc Am Soc Clin Oncol, 22:129, 2003).
"D-분절", 또는 카복시 말단 분절에서 변형을 가진 헤미아스테린의 유사체가 또한 보고되어 있다(예를 들어, WO 2004/026293; 문헌[Zask et al., Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 14:4353-4358, 2004; Zask et al., J Med Chem, 47:4774-4786, 2004] 참조). 카복시 말단에서의 변형의 대부분은 모 카복실산에 비해서 실질적으로 감소된 역가를 가진 화합물을 초래한다. 예를 들어, WO 2004/026293, 특히 표 12. 자스크(Zask) 등(J Med Chem, 47:4774-4786, 2004)은 또한 간단한 환식 및 지환식 아민을 이용해서 제조된 아마이드 유사체가 유의하게 저감된 역가(1 내지 3자리수의 저감)를 나타내는 것을 보고하고 있다. 수개의 내성있는 변형 중에서, 자스크 등(Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 14:4353-4358, 2004)은 카복시-말단에서 에스터화 환식 아미노산의 부가가 프롤릴-유사 에스터-함유 말단을 가진 테트라펩타이드 유사체를 수득하고 이들 중 일부가 시험된 암 세포주에서 모 화합물과 견줄 만한 역가를 나타내는 것을 보고하고 있다.
광범위한 헤미아스테린 유사체가 생성되었지만, 카복시 말단에서 변형을 가진 광범위한 화합물을 포함하는 다수가 의학적 치료 방법에서 유용성을 제한하는 저감된 역가를 나타낸다. 그러나, 국제 출원 제PCT/US14/29463호 또는 미국 특허 출원 제14/213,504호에 개시된 것들과 같은 카복시 말단에서 N-아실 설폰아마이드 모이어티의 부가에 의해 변형된 소정의 헤미아스테린 유사체는, 광범위한 암 세포주에 걸쳐서 강력한 항암 활성을 입증하고 있다.
따라서, 화학식 IV의 화합물 또는 이의 입체이성질체, 전구약물 또는 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다:
Figure pct00016
식 중:
T는 VAR2CSA 폴리펩타이드를 포함하는 표적화 모이어티이고;
L1은 링커이거나, 또는 L은 존재하지 않으며; 그리고
P1는 하기 화학식 XIV의 화합물의 1가 라디칼이다:
Figure pct00017
식 중:
R16 및 R17은 독립적으로 H; 및 1 내지 10개의 탄소 원자를 함유하는 직쇄, 분지쇄 또는 비방향족 환식 골격을 가진 포화 또는 불포화 모이어티로부터 선택되고, 상기 탄소 원자는 -OH, -I, -Br, -Cl, -F, -CN, -CO2H, -CHO, -COSH 또는 -NO2;로 임의로 치환되거나; 또는 R17과 R20은 융합되어 고리를 형성하며;
R18 및 R19는 H, R25 및 ArR25-로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는 R18과 R19는 융합되어 고리를 형성하고;
R20은 H, R25, ArR25- 및 Ar로 이루어진 군으로부터 선택되거나; 또는 R20과 R17은 융합되어 고리를 형성하며;
R21은 H, R25 및 ArR25-로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R22 및 R23은 독립적으로 H, R25 및 ArR25-로 이루어진 군으로부터 선택되며;
R24는 -Y-(CO)NHSO2-R26이고;
R25는 1 내지 10개의 탄소 원자, 0 내지 4개의 질소 원자, 0 내지 4개의 산소 원자 및 0 내지 4개의 황 원자를 함유하는 직쇄, 분지쇄 또는 비방향족 환식 골격을 가진 포화 또는 불포화 모이어티로서 정의되며, 상기 탄소 원자는 =O, =S, OH, -OR28, -O2CR28, -SH, -SR28, -SOCR28, -NH2, -NHR28, -N(R28)2, -NHCOR28, -NR28COR28, -I, -Br, -Cl, -F, -CN, -CO2H, -CO2R28, -CHO, -COR28, -CONH2, -CONHR28, -CON(R28)2, -COSH, -COSR28, -NO2, -SO3H, -SOR28, -SO2R28로 임의로 치환되되, 여기서 R28은 직쇄, 분지쇄 또는 환식의 1 내지 10개의 탄소 포화 또는 불포화 알킬기이고;
R18과 R19를 연결함으로써 형성되는 고리는 R25의 정의 내의 3 내지 7원 비방향족 환식 골격이고,
Y는, R25, ArR25- 또는 X로 임의로 치환된, 직쇄의 포화 또는 불포화 1 내지 6개의 탄소 알킬기로 이루어진 군으로부터 선택된 모이어티로서 정의되며; 그리고
X는 -OH, -OR25, =O, =S, -O2CR25, -SH, -SR25, -SOCR25, -NH2, -NHR25, -N(R25)2, -NHCOR25, -NRCOR25, -I, -Br, -Cl, -F, -CN, -CO2H, -CO2R25, -CHO, -COR25, -CONH2, -CONHR25, -CON(R25)2, -COSH, -COSR25, -NO2, -SO3H, -SOR25 및 -SO2R25로 이루어진 군으로부터 선택된 모이어티로서 정의되고;
R26은 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알킬아미노, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴 및 임의로 치환된 헤테로아릴, -COR27, -CSR27, -OR27 및 -NHR27로 이루어진 군으로부터 선택되되, 여기서 각각의 R27은, 독립적으로, 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알킬아미노, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴 또는 임의로 치환된 헤테로아릴이다.
바람직한 실시형태에 있어서, R26은 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알킬아미노, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴 및 임의로 치환된 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일 실시형태에 있어서, Ar은 페닐, 나프틸, 안트라실, 피롤릴로 이루어진 군으로부터 선택된 방향족 고리이다.
몇몇 실시형태에 있어서, P1는 하기 화학식 XV의 화합물 또는 이의 입체이성질체, 전구약물 또는 약제학적으로 허용 가능한 염의 1가 라디칼이다:
Figure pct00018
식 중:
R26은 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알킬아미노, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴, 임의로 치환된 헤테로아릴, -COR27, -CSR27, -OR27 및 -NHR27로 이루어진 군으로부터 선택되되, 여기서 각각의 R27은, 독립적으로, 할로겐, -OH 또는 -SH로 임의로 치환된 알킬이고;
R29는 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알킬아미노, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴 및 임의로 치환된 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되며;
R30은 H 및 C1 -6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R31은 H 및 C1 -6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;
R32 및 R38은 독립적으로 H, C1 -6 알킬 및 -SH로 이루어진 군으로부터 선택되되, 단 R32와 R38은 둘 다 H가 아닐 수 있고;
R33 , R34, R35 및 R36은 독립적으로 H 및 C1 -6 알킬이되, R33 및 R34 중 적어도 한쪽은 H이거나; 또는 R34와 R35는 이중 결합을 형성하고, R33은 H이며, R36은 H 또는 C1 -6 알킬이고; 그리고
R37은 H 및 C1 -6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택된다.
바람직한 실시형태에 있어서, R26은 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알킬아미노, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴 및 임의로 치환된 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택된다.
추가의 실시형태에 있어서, 각각의 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알킬아미노, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴 및 임의로 치환된 헤테로아릴은, 독립적으로, =O, =S, -OH, -OR27, -O2CR27, -SH, -SR27, -SOCR27, -NH2, -N3, -NHR27, -N(R27)2, -NHCOR27, -NR27COR27, -I, -Br, -Cl, -F, -CN, -CO2H, -CO2R27, -CHO, -COR27, -CONH2, -CONHR27, -CON(R27)2, -COSH, -COSR27, -NO2, -SO3H, -SOR27 또는 -SO2R27로 임의로 치환되되, 여기서 각각의 R27은, 독립적으로, 할로겐, -OH 또는 -SH로 임의로 치환된 알킬이다.
다른 추가의 실시형태에 있어서, 각각의 임의로 치환된 아릴 및 임의로 치환된 헤테로아릴은, 독립적으로, 임의로 치환된 페닐, 임의로 치환된 나프틸, 임의로 치환된 안트라실, 임의로 치환된 페난트릴, 임의로 치환된 퓨릴, 임의로 치환된 피롤릴, 임의로 치환된 티오페닐, 임의로 치환된 벤조퓨릴, 임의로 치환된 벤조티오페닐, 임의로 치환된 퀴놀린일, 임의로 치환된 아이소퀴놀린일, 임의로 치환된 이미다졸릴, 임의로 치환된 티아졸릴, 임의로 치환된 옥사졸릴, 및 임의로 치환된 피리딘일로 이루어진 군으로부터 선택된다.
다른 추가의 실시형태에 있어서, R29는 하기 구조 XVI, XVII, XVIII 및 XIX 중 하나로부터 선택된다:
Figure pct00019
;
Figure pct00020
;
Figure pct00021
Figure pct00022
여기서:
Q는 CR39 또는 N이고;
Z는 C(R39)2, NR39, S 또는 O이며;
각각의 R39는, 독립적으로, H, -OH, -R27 , -OR27, -O2CR27, -SH, -SR27, -SOCR27, -NH2, -N3, -NHR27, -N(R27)2, -NHCOR27, -NR27COR27, -R27NH2, -I, -Br, -Cl, -F, -CN, -CO2H, -CO2R27, -CHO, -COR27, -CONH2, -CONHR27, -CON(R27)2, -COSH, -COSR27, -NO2, -SO3H, -SOR27 및 -SO2R27로 이루어진 군으로부터 선택되되, 여기서 각각의 R27은, 독립적으로, 할로겐, -OH 또는 -SH로 임의로 치환된 알킬이다.
다른 추가의 실시형태에 있어서, R29는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00023
여기서 각각의 R39는, 독립적으로, H, -OH, -R27 , -OR27, -O2CR27, -SH, -SR27, -SOCR27, -NH2, -N3, -NHR27, -N(R27)2, -NHCOR27, -NR27COR27, -R27NH2, -I, -Br, -Cl, -F, -CN, -CO2H, -CO2R27, -CHO, -COR27, -CONH2, -CONHR27, -CON(R27)2, -COSH, -COSR27, -NO2, -SO3H, -SOR27 및 -SO2R27로 이루어진 군으로부터 선택되되, 여기서 각각의 R27은, 독립적으로, 할로겐, -OH 또는 -SH로 임의로 치환된 알킬이다.
다른 추가의 실시형태에 있어서, R29는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00024
Figure pct00025
다른 추가의 실시형태에 있어서, R29는
Figure pct00026
이다.
다른 추가의 실시형태에 있어서, R30, R31, R32 및 R38은 각각 메틸이다.
다른 추가의 실시형태에 있어서, R30은 H이고, R31은 메틸이며, R32는 메틸이고, 그리고 R38는 메틸이다.
몇몇 실시형태에 있어서, P1는 하기 화학식 XX의 화합물 또는 이의 입체이성질체, 전구약물 또는 약제학적으로 허용 가능한 염의 1가 라디칼이다:
Figure pct00027
식 중:
R40은 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알킬아미노, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴, 임의로 치환된 헤테로아릴, -COR27, -CSR27, -OR27 및 -NHR27로 이루어진 군으로부터 선택되되, 여기서 각각의 R27은, 독립적으로, 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알킬아미노, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴, 임의로 치환된 헤테로아릴이고;
R41은 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알킬아미노, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴 및 임의로 치환된 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되며;
R30은 H 및 C1 -6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R31은 H 및 C1 -6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며; 그리고
R32는 C1 -6 알킬 및 -SH로 이루어진 군으로부터 선택된다.
바람직한 실시형태에 있어서, R40은 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알킬아미노, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴 및 임의로 치환된 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택된다.
추가의 실시형태에 있어서, 각각 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알킬아미노, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴 및 임의로 치환된 헤테로아릴은, 독립적으로, =O, =S, -OH, -OR42, -O2CR42, -SH, -SR42, -SOCR42, -NH2, -N3, -NHR42, -N(R42)2, -NHCOR42, -NR42COR42, -I, -Br, -Cl, -F, -CN, -CO2H, -CO2R42, -CHO, -COR42, -CONH2, -CONHR42, -CON(R42)2, -COSH, -COSR42, -NO2, -SO3H, -SOR42 또는 -SO2R42로 임의로 치환되고, 여기서 각각의 R42는, 독립적으로, 할로겐, -OH 또는 -SH로 임의로 치환된 알킬이다.
다른 추가의 실시형태에 있어서, 각각 임의로 치환된 아릴 및 임의로 치환된 헤테로아릴은, 독립적으로, 임의로 치환된 페닐, 임의로 치환된 나프틸, 임의로 치환된 안트라실, 임의로 치환된 페난트릴, 임의로 치환된 퓨릴, 임의로 치환된 피롤릴, 임의로 치환된 티오페닐, 임의로 치환된 벤조퓨릴, 임의로 치환된 벤조티오페닐, 임의로 치환된 퀴놀린일, 임의로 치환된 아이소퀴놀린일, 임의로 치환된 이미다졸릴, 임의로 치환된 티아졸릴, 임의로 치환된 옥사졸릴, 및 임의로 치환된 피리딘일로 이루어진 군으로부터 선택된다.
다른 추가의 실시형태에 있어서, R41은 하기 구조 XVI, XVII, XVIII 및 XIX 중 하나로부터 선택된다:
Figure pct00028
;
Figure pct00029
;
Figure pct00030
Figure pct00031
여기서:
Q는 CR43 또는 N이고;
Z는 C(R43)2, NR43, S 또는 O이며;
각각의 R43은, 독립적으로, H, -OH, -OR42, -O2CR42, -SH, -SR42, -SOCR42, -NH2, -N3, -NHR42, -N(R42)2, -NHCOR42, -NR42COR42, -I, -Br, -Cl, -F, -CN, -CO2H, -CO2R42, -CHO, -COR42, -CONH2, -CONHR42, -CON(R42)2, -COSH, -COSR42, -NO2, -SO3H, -SOR42및 -SO2R42로 이루어진 군으로부터 선택되되, 여기서 각각의 R42는, 독립적으로, 할로겐, -OH 또는 -SH로 임의로 치환된 알킬이다.
다른 추가의 실시형태에 있어서, R41은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00032
.
다른 추가의 실시형태에 있어서, R41은
Figure pct00033
이다.
다른 추가의 실시형태에 있어서, R30, R31 및 R32는 각각 메틸이다.
다른 추가의 실시형태에 있어서, R30은 H이고, R31은 메틸이며, 그리고 R32는 메틸이다.
몇몇 실시형태에 있어서, P1은 하기 화학식 II의 화합물의 1가 라디칼이다:
Figure pct00034
식 중:
R1은 아릴, C3-C7 사이클로알킬 및 헤테로아릴로부터 선택되되, 이들 각각은 C1-C4 아실티오, C2-C4 알켄일, C1-C4 알킬, C1-C4 알킬아미노, C1-C4 알콕시, 아미노, 아미노-C1-C4 알킬, 할로, C1-C4 할로알킬, 하이드록실, 하이드록시-C1-C4 알킬 및 티오로부터 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환되고, 여기서 C2-C4 알켄일, C1-C4 알킬아미노 및 C1-C4 알콕시는 C1-C4 알킬아릴, 하이드록실 및 티오로부터 선택된 하나 이상의 치환기로 추가로 임의로 치환되며;
R2 및 R3은 각각 독립적으로 H 및 C1-C6 알킬로부터 선택되고;
R4는 C1-C6 알킬 및 티오로 이루어진 군으로부터 선택되며; 그리고
R5는 C1-C6 알킬, 아릴, 아릴-C1-C6 알킬, C3-C7 사이클로알킬, 헤테로아릴 및 헤테로사이클릴로부터 선택되되, 이들 각각은 C1-C6 알콕시, C1-C6 알콕시카보닐, C1-C6 알킬, C1-C6 알킬아미노, 아미노, 아미노-C1-C6 알킬, 아미노-아릴, 아미노-C3-C7 사이클로알킬, 아릴, 카복스아마이드, 카복실, C3-C7 사이클로알킬, 사이아노, C1-C6 할로알킬, C1-C6 할로알콕시, 할로, 하이드록실, 나이트로, 티오, 및 티오-C1-C6 알킬로부터 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환되고; 그리고
몇몇 실시형태에 있어서, R1은 H, 아릴, C3-C7 사이클로알킬 및 헤테로아릴로부터 선택되되, 이들 각각은 C1-C4 아실티오, C2-C4 알켄일, C1-C4 알킬, C1-C4 알킬아미노, C1-C4 알콕시, 아미노, 아미노-C1-C4 알킬, 할로, C1-C4 할로알킬, 하이드록실, 하이드록시-C1-C4 알킬 및 티오로부터 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환되고, 여기서 C2-C4 알켄일, C1-C4 알킬아미노 및 C1-C4 알콕시는 p-톨릴, 하이드록실 및 티오로부터 선택된 하나 이상의 치환기로 추가로 임의로 치환된다.
몇몇 실시형태에 있어서, R1은 H, 아릴, C3-C7 사이클로알킬 및 헤테로아릴로부터 선택되되, 이들 각각은 (2-하이드록시에틸)아미노, (2-머캅토에틸)아미노, 2-(아세틸티오)에톡시, 2-아미노에톡시, 2-하이드록시에톡시, 2-머캅토에톡시, 3-메톡시, 4-메틸스타이릴, 아미노, 아미노메틸, 클로로, 플루오로, 하이드록실, 하이드록시메틸, 메틸, 티오, 트라이플루오로메틸로부터 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환된다.
몇몇 실시형태에 있어서, R1은 H, 사이클로헥실, 1H-인돌-3-일, 페닐 및 티엔-2-일로부터 선택되되, 이들 각각은 (2-하이드록시에틸)아미노, (2-머캅토에틸)아미노, 2-(아세틸티오)에톡시, 2-아미노에톡시, 2-하이드록시에톡시, 2-머캅토에톡시, 3-메톡시, 4-메틸스타이릴, 아미노, 아미노메틸, 클로로, 플루오로, 하이드록실, 하이드록시메틸, 메틸, 티오, 및 트라이플루오로메틸로부터 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환된다.
몇몇 실시형태에 있어서, R1은 H, 1H-인돌-3-일, 1-메틸-1H-인돌-3-일, 2-메톡시페닐, 3-((2-하이드록시에틸)아미노)페닐, 3-((2-머캅토에틸)아미노)페닐, 3-(2-(아세틸티오)에톡시)페닐, 3-(2-하이드록시에톡시)페닐, 3-(2-머캅토에톡시)페닐, 3-(4-메틸스타이릴)페닐, 3-(아미노메틸)페닐, 3-(하이드록시메틸)페닐, 3-하이드록시페닐, 3,5-다이플루오로페닐, 3,5-다이메틸페닐, 3-아미노페닐, 3-클로로페닐, 3-머캅토페닐, 3-메톡시페닐, 3-트라이플루오로메틸페닐, 4-((2-하이드록시에틸)아미노)페닐, 4-((2-머캅토에틸)아미노)페닐, 4-(2-(아세틸티오)에톡시)페닐, 4-(2-아미노에톡시)페닐, 4-(2-하이드록시에톡시)페닐, 4-(2-머캅토에톡시)페닐, 4-(아미노메틸)페닐, 4-(하이드록시메틸)페닐, 4-아미노페닐, 4-하이드록시페닐, 4-머캅토페닐, 4-메톡시페닐, 사이클로헥실, 티엔-2-일, m-톨릴 및 페닐로부터 선택된다.
몇몇 실시형태에 있어서, R1은 H, 1H-인돌-3-일, 1-메틸-1H-인돌-3-일, 2-메톡시페닐, 3-((2-하이드록시에틸)아미노)페닐, 3-((2-머캅토에틸)아미노)페닐, 3-(2-하이드록시에톡시)페닐, 3-(2-머캅토에톡시)페닐, 3,5-다이플루오로페닐, 3,5-다이메틸페닐, 3-클로로페닐, 3-머캅토페닐, 3-메톡시페닐, 3-트라이플루오로메틸페닐, 4-((2-하이드록시에틸)아미노)페닐, 4-((2-머캅토에틸)아미노)페닐, 4-4-(2-하이드록시에톡시)페닐, 4-(2-머캅토에톡시)페닐, 4-머캅토페닐, 4-메톡시페닐, 사이클로헥실, 티엔-2-일, m-톨릴 및 페닐로부터 선택된다.
몇몇 실시형태에 있어서, R1은 페닐이다.
몇몇 실시형태에 있어서, R2는 H이다.
몇몇 실시형태에 있어서, R2는 메틸이다.
몇몇 실시형태에 있어서, R3은 메틸이다.
몇몇 실시형태에 있어서, R4는 메틸이다.
몇몇 실시형태에 있어서, R5는 C1-C6 알킬, 아릴, 아릴-C1-C6 알킬, C3-C7 사이클로알킬, 헤테로아릴 및 헤테로사이클릴로부터 선택되되, 이들 각각은 1-아미노사이클로프로필, 4-아미노페닐, 아미노, 아미노메틸, 브로모, tert-뷰틸, 카복스아마이드, 카복실, 클로로, 사이아노, 사이클로펜틸, 에틸, 플루오로, 하이드록시, 아이소프로필, 메톡시, 메틸, 나이트로, 페닐, 피리딘-3-일, 티오, 티오메틸, 트라이플루오로메톡시 및 트라이플루오로메틸로부터 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환된다.
몇몇 실시형태에 있어서, R5는 5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-1-일, 벤질, 사이클로헥실, 에틸, 헥산-2-일, 메틸, 나프탈렌-2-일, 피리딘-1-일, 페닐, 프로필, 피리딘-3-일 및 티엔-2-일로부터 선택되되, 이들 각각은 1-아미노사이클로프로필, 4-아미노페닐, 아미노, 아미노메틸, 브로모, tert-뷰틸, 카복스아마이드, 카복실, 클로로, 사이아노, 사이클로펜틸, 에틸, 플루오로, 하이드록시, 아이소프로필, 메톡시, 메틸, 나이트로, 페닐, 피리딘-3-일, 티오, 티오메틸, 트라이플루오로메톡시 및 트라이플루오로메틸로부터 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환된다.
몇몇 실시형태에 있어서, R5는 4-아미노벤질, 4-(아미노메틸)벤질, 4-(아미노메틸)페닐, 4-아미노페닐, 벤질, 3-머캅토프로필, 2-머캅토에틸, 4-(머캅토메틸)페닐, p-톨릴, 메틸, 2,4,6-트라이메틸페닐, 4-(트라이플루오로메톡시)페닐, 2,4,6-트라이아이소프로필페닐, 4-tert-뷰틸페닐, 4-클로로페닐, 3-사이아노페닐, 2-나이트로페닐, 4-메톡시-2-나이트로페닐, 4-아미노카보닐-2-나이트로페닐, 4-메톡시페닐, 4-아미노페닐, 페닐, 2-플루오로벤질, 피리딘-1-일, o-톨릴, 4-브로모페닐, 나프탈렌-2-일, 4-메톡시카보닐페닐, 2-(트라이플루오로메틸)벤질, 헥산-2-일, 2-메톡시에틸, 사이클로펜틸메틸, 사이클로헥실, 피리딘-3-일메틸, 4-카복시페닐, 3-아미노페닐, 피리딘-3-일, 티엔-2-일, 4-하이드록시페닐, 4-(1-아미노사이클로프로필)벤질, 4-(1-아미노사이클로프로필)페닐, 2-메틸벤질, 4-나이트로벤질, 4-클로로벤질, 페네틸, 4-브로모벤질, 4-사이아노벤질, 3-나이트로벤질, 4-tert-뷰틸벤질, 2-나이트로벤질, 4-나이트로페네틸, 2-클로로-3-메톡시카보닐페닐, 2-아미노페닐, [1,1'-바이페닐]-4-일, 4'-아미노-[1,1'-바이페닐]-4-일, 4-플루오로벤질, 3-(트라이플루오로메틸)벤질, 3-(트라이플루오로메톡시)벤질, 3,4-다이클로로벤질, 2-사이아노벤질, 3-클로로벤질, 4-아미노-2-에틸페닐, 4-아미노-3-(트라이플루오로메톡시)페닐, 4-아미노-2,3-다이메틸페닐, 4-아미노-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-1-일, 4-아미노-3-메틸페닐, 4-아미노-3-플루오로페닐, 4-아미노-3-에틸페닐 및 4-아미노-3-(트라이플루오로메틸)페닐로부터 선택된다.
몇몇 실시형태에 있어서, R5는, 각각 아미노 및 아미노-C1-C6 알킬로부터 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환된, 아릴 및 아릴-C1-C6 알킬로부터 선택된다.
몇몇 실시형태에 있어서, R5는 4-아미노벤질, 4-(아미노메틸)벤질, 4-(아미노메틸)페닐, 4-아미노페닐 및 벤질로부터 선택된다.
몇몇 실시형태에 있어서, R5는 4-아미노벤질이다.
몇몇 실시형태에 있어서, R5는 4-(아미노메틸)벤질이다.
몇몇 실시형태에 있어서, R5는 4-(아미노메틸)페닐이다.
몇몇 실시형태에 있어서, R5는 4-아미노페닐이다.
몇몇 실시형태에 있어서, R5는 벤질이다.
몇몇 실시형태에 있어서 P1은 국제 출원 제PCT/US14/29463호 또는 미국 특허 출원 제14/213,504호에 개시된 화합물의 1가 라디칼이다.
당업자라면 화학식 XIV의 화합물이 L1과의 접합 반응을, 또는 L1이 존재하지 않는다면, T와 접합체 T-L1-P1 또는 T-P1의 형성을 용이하게 하도록 적절하게 변형될 수 있음을 인식할 것이다. P1 상의 임의의 부착점이 이용될 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, P1의 C-말단은 T-L1-P1 접합체에 부착점을 형성한다. 다른 실시형태에 있어서, P1의 N-말단은 T-L1-P1 접합체에 부착점을 형성한다. 다른 실시형태에 있어서, P1의 곁사슬은 T-L1-P1 접합체에 부착점을 형성한다.
몇몇 실시형태에 있어서, P1은 P1의 N-말단 아미노산의 곁사슬을 통해서 L1에 공유 결합된 미세소관 파괴 펩타이드 독소이거나 또는 L1이 존재하지 않는다면, P1은 해당 P1의 N-말단 아미노산의 곁사슬을 통해서 T에 공유 결합된다. 일 실시형태에 있어서, 미세소관 파괴 펩타이드 독소는 헤미아스테린 또는 이의 유사체이고, 그리고 독소는 독소 펩타이드의 N-말단 아미노산의 곁사슬 내에서 인돌 모이어티를 통해서 접합체에 공유 결합된다. 다른 실시형태에 있어서, 미세소관 파괴 펩타이드 독소는 HTI-286 또는 이의 유사체이고 그리고 독소는 독소 펩타이드의 N-말단 아미노산의 곁사슬 내에서 페닐기를 통해서 접합체에 공유 결합된다. 일 실시형태에 있어서, 미세소관 파괴 펩타이드 독소는 투불리신(tubulysin) 또는 이의 유사체이고 그리고 독소는 독소 펩타이드의 N-말단 아미노산의 곁사슬 내에서 인돌 모이어티를 통해서 접합체에 공유 결합된다. 일 실시형태에 있어서, 미세소관 파괴 펩타이드 독소는 아우리스타틴(auristatin) 또는 이의 유사체이고 그리고 독소는 독소 펩타이드의 N-말단 아미노산의 곁사슬 내에서 인돌 모이어티를 통해서 접합체에 공유 결합된다. 일 실시형태에 있어서, 미세소관 파괴 펩타이드 독소는 구조 XIV, XV 또는 XX를 가진 화합물이다.
몇몇 실시형태에 있어서, 화합물 T-L1-P1은 유사분열억제 활성 및 하기 구조 (XXI)을 갖는다:
여기서 T는 본 명세서에 기재된 바와 같은 표적화 모이어티이고, L은 본 명세서에 기재된 바와 같은 임의적 링커이며, PT는 해당 PT의 N-말단 아미노산의 곁사슬을 통해서 L1에 공유결합된 미세소관 파괴 펩타이드 독소이거나, 또는 L이 존재하지 않는다면, PT는 해당 PT의 N-말단 아미노산의 곁사슬을 통해서 T에 공유결합된다.
일 실시형태에 있어서, N-말단 아미노산의 곁사슬을 통해서 VAR2CSA-약물 접합체에 연결된 미세소관 파괴 펩타이드 독소를 포함하는 해당 접합체가 제공된다.
일 실시형태에 있어서, T-L1-PT는 하기 구조 (XXII)를 갖거나 또는 이의 입체이성질체, 전구약물 또는 약제학적으로 허용 가능한 염이다:
Figure pct00036
여기서,
R16 및 R17은 독립적으로 H; 및 1 내지 10개의 탄소 원자를 함유하는 직쇄, 분지쇄 또는 비방향족 환식 골격을 가진 포화 또는 불포화 모이어티로부터 선택되되, 상기 탄소 원자들은 -OH, -I, -Br, -Cl, -F, -CN, -CO2H, -CHO, -COSH 또는 -NO2로 임의로 치환되고;
R18 및 R19는 H, R, ArR25-로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는 R18 및 R19는 연결되어 고리를 형성하며;
R44는 H, R46, ArR25-, Ar-R25-Ar, R25-Ar-Ar, Ar-Ar-R25- 및 Ar로 이루어진 군으로부터 선택되되, 여기서 각각의 R25 및 각각의 Ar은 치환될 수 있고, 0 내지 10개의 헤테로원자가 사슬 내 탄소 원자를 대체할 수 있으며, 예를 들어 O 또는 S 또는 N이 탄소 사슬 내로 혼입될 수 있고; 그리고 R46은 -(CH2-CH2-O)m-이되, 여기서 m은 0 내지 15의 정수이며;
R21은 H, R25 및 ArR25-로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R22 및 R23은 독립적으로 H, R 및 ArR25-로 이루어진 군으로부터 선택되며; 그리고
R45는 Z-C(O)-Y-; -Z-C(O)NHS(O)2-R26; 또는 -Y-C(O)NHS(O)2-R26이고;
여기서,
Z는 -OH, -OR25; -SH; -SR25; -NH2; -NR25CH(R47)COOH; 및 -NHCH(R47)COOH로 이루어진 군으로부터 선택된 모이어티로서 정의되되, 이때 R47은 식: R25 또는 -(CH2)nNR48R49를 가진 모이어티이되, 여기서 n은 1 내지 4이고, R48 및 R49는 독립적으로 H; R25; 및 -C(NH)(NH2)로 이루어진 군으로부터 선택되며;
Y는, R25, ArR25- 또는 X로 임의로 치환된, 직쇄의 포화 또는 불포화 1 내지 6개의 탄소 알킬기로 이루어진 군으로부터 선택된 모이어티로서 정의되며; 그리고
X는 -OH, -OR25, =O, =S, -O2CR25, -SH, -SR25, -SOCR25, -NH2, -NHR25, -N(R25)2, -NHCOR25, -NRCOR25, -I, -Br, -Cl, -F, -CN, -CO2H, -CO2R25, -CHO, -COR25, -CONH2, -CONHR25, -CON(R25)2, -COSH, -COSR25, -NO2, -SO3H, -SOR25 및 -SO2R25로 이루어진 군으로부터 선택된 모이어티로서 정의되고;
R26은 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알킬아미노, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴 및 임의로 치환된 헤테로아릴, COR27, -CSR27, -OR27 및 -NHR27로 이루어진 군으로부터 선택되되, 여기서 각각의 R27은, 독립적으로, 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알킬아미노, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴 또는 임의로 치환된 헤테로아릴이다.
R25는 1 내지 10개의 탄소 원자, 0 내지 4개의 질소 원자, 0 내지 4개의 산소 원자 및 0 내지 4개의 황 원자를 함유하는 직쇄, 분지쇄 또는 비방향족 환식 골격을 가진 포화 또는 불포화 모이어티로서 정의되되, 상기 탄소 원자는 =O, =S, OH, -OR28, -O2CR28, -SH, -SR28, -SOCR28, -NH2, -NHR28, -N(R28)2, -NHCOR28, -NR28COR28, -I, -Br, -Cl, -F, -CN, -CO2H, -CO2R28, -CHO, -COR28, -CONH2, -CONHR28, -CON(R28)2, -COSH, -COSR28, -NO2, -SO3H, -SOR28, -SO2R28로 임의로 치환되되, 여기서 R28은 직쇄, 분지쇄 또는 환식의 1 내지 10개의 탄소 포화 또는 불포화 알킬기이고;
R18과 R19를 연결함으로써 형성되는 고리는 R25의 정의 내의 3 내지 7원 비방향족 환식 골격이며,
Y는, R, ArR25- 또는 X로 임의로 치환된, 직쇄의 포화 또는 불포화 1 내지 6개의 탄소 알킬기로 이루어진 군으로부터 선택된 모이어티로서 정의되고; 그리고
X는 -OH, -OR, =O, =S, -O2CR25, -SH, -SR25, -SOCR25, -NH2, -NHR25, -N(R25)2, -NHCOR25, -NRCOR25, -I, -Br, -Cl, -F, -CN, -CO2H, -CO2R25, -CHO, -COR25, -CONH2, -CONHR25, -CON(R25)2, -COSH, -COSR25, -NO2, -SO3H, -SOR25 및 -SO2R25로 이루어진 군으로부터 선택된 모이어티로서 정의된다.
바람직한 실시형태에 있어서, R26은 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알킬아미노, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴 및 임의로 치환된 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일 실시형태에 있어서, Ar은 페닐, 나프틸, 안트라실, 피롤릴로 이루어진 군으로부터 선택된 방향족 고리이다.
일 실시형태에 있어서, R45는 Z-C(O)-Y-이되, 여기서 Z 및 Y는 위에서 정의된 바와 같다.
일 실시형태에 있어서, R45는 -Z-C(O)NHS(O)2-R26이되, 여기서 Z 및 R26은 위에서 정의된 바와 같다.
일 실시형태에 있어서, R45는 -Y-C(O)NHS(O)2-R26이되, 여기서 Y 및 R26은 위에서 정의된 바와 같다.
다른 실시형태에 있어서, T-L1-PT는 하기 구조 (XXIII)을 갖거나, 또는 이의 입체이성질체, 전구약물 또는 약제학적으로 허용 가능한 염이다:
Figure pct00037
여기서,
R29는 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알킬아미노, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴 및 임의로 치환된 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R30은 H 및 C1 -6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;
R31은 H 및 C1 -6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R32 및 R38은 독립적으로 H, C1 -6 알킬 및 -SH로 이루어진 군으로부터 선택되되, 단 R32 및 R38 치환기는 둘 다 H가 아닐 수 있으며;
R45는 Z-C(O)-Y-; -Z-C(O)NHS(O)2-R26; 또는 -Y-C(O)NHS(O)2-R26이고; 단, Y 및 R26은 위에서 정의된 바와 같으며;
Z는 -OH, -OR; -SH; -SR25; -NH2; -NR25CH(R47)COOH; 및 -NHCH(R47)COOH이되, 여기서 R47은 식: R25, 또는 -(CH2)nNR48R49로 이루어진 군으로부터 선택된 모이어티로서 정의되되, 여기서 n은 1 내지 4이고, R48 및 R49는 독립적으로 H; R25; 및 -C(NH)(NH2)로 이루어진 군으로부터 선택된다,
R25는 1 내지 10개의 탄소 원자, 0 내지 4개의 질소 원자, 0 내지 4개의 산소 원자 및 0 내지 4개의 황 원자를 함유하는 직쇄, 분지쇄 또는 비방향족 환식 골격을 가진 포화 또는 불포화 모이어티로서 정의되며, 상기 탄소 원자는 =O, =S, OH, -OR28, -O2CR28, -SH, -SR28, -SOCR28, -NH2, -NHR28, -N(R28)2, -NHCOR28, -NR28COR28, -I, -Br, -Cl, -F, -CN, -CO2H, -CO2R28, -CHO, -COR28, -CONH2, -CONHR28, -CON(R28)2, -COSH, -COSR28, -NO2, -SO3H, -SOR28, -SO2R28로 임의로 치환되되, 여기서 R28은 직쇄, 분지쇄 또는 환식의 1 내지 10개의 탄소 포화 또는 불포화 알킬기이고;
Y는, R25, ArR25- 또는 X로 임의로 치환된, 직쇄의 포화 또는 불포화 1 내지 6개의 탄소 알킬기로 이루어진 군으로부터 선택된 모이어티로서 정의되며; 그리고
X는 -OH, -OR25, =O, =S, -O2CR25, -SH, -SR25, -SOCR25, -NH2, -NHR25, -N(R)2, -NHCOR25, -NRCOR25, -I, -Br, -Cl, -F, -CN, -CO2H, -CO2R25, -CHO, -COR25, -CONH2, -CONHR25, -CON(R25)2, -COSH, -COSR25, -NO2, -SO3H, -SOR25 및 -SO2R25로 이루어진 군으로부터 선택된 모이어티로서 정의된다.
다른 실시형태에 있어서, T-L1-PT는 하기 구조 (XXIV)를 갖거나, 또는 이의 입체이성질체, 전구약물 또는 약제학적으로 허용 가능한 염이다:
Figure pct00038
여기서,
R29는 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알킬아미노, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴 및 임의로 치환된 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R30은 H 및 C1 -6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;
R31은 H 및 C1 -6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R32 및 R38은 독립적으로 H, C1 -6 알킬 및 -SH로 이루어진 군으로부터 선택되되, 단, R32 및 R38 치환기는 둘 다 H가 아닐 수 있으며;
R50은 Z-C(O)-Y-이되, 여기서 Z는 위에서 정의된 바와 같고,
R25는 1 내지 10개의 탄소 원자, 0 내지 4개의 질소 원자, 0 내지 4개의 산소 원자 및 0 내지 4개의 황 원자를 함유하는 직쇄, 분지쇄 또는 비방향족 환식 골격을 가진 포화 또는 불포화 모이어티로서 정의되며, 상기 탄소 원자는 =O, =S, OH, -OR28, -O2CR28, -SH, -SR28, -SOCR28, -NH2, -NHR28, -N(R28)2, -NHCOR28, -NR28COR28, -I, -Br, -Cl, -F, -CN, -CO2H, -CO2R28, -CHO, -COR28, -CONH2, -CONHR28, -CON(R28)2, -COSH, -COSR28, -NO2, -SO3H, -SOR28, -SO2R28로 임의로 치환되되, 여기서 R28은 직쇄, 분지쇄 또는 환식의 1 내지 10개의 탄소 포화 또는 불포화 알킬기이고;
Y는, R25, ArR25- 또는 X로 임의로 치환된, 직쇄의 포화 또는 불포화 1 내지 6개의 탄소 알킬기로 이루어진 군으로부터 선택된 모이어티로서 정의되며; 그리고
X는 -OH, -OR25, =O, =S, -O2CR25, -SH, -SR25, -SOCR25, -NH2, -NHR25, -N(R25)2, -NHCOR25, -NRCOR25, -I, -Br, -Cl, -F, -CN, -CO2H, -CO2R25, -CHO, -COR25, -CONH2, -CONHR25, -CON(R25)2, -COSH, -COSR25, -NO2, -SO3H, -SOR25 및 -SO2R25로 이루어진 군으로부터 선택된 모이어티로서 정의된다.
다른 실시형태에 있어서, T-L1-PT는 하기 구조 (XXV)를 갖거나 또는 이의 입체이성질체, 전구약물 또는 약제학적으로 허용 가능한 염이다:
Figure pct00039
여기서,
R26은 H, 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알킬아미노, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴, 임의로 치환된 헤테로아릴, -COR27, -CSR27, -OR27, -SR27 및 -NHR27로 이루어진 군으로부터 선택되되, 여기서 각각의 R27은, 독립적으로, 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알킬아미노, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴 또는 임의로 치환된 헤테로아릴이고;
R29는 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알킬아미노, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴 및 임의로 치환된 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되며;
R30은 H 및 C1 -6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R31은 H 및 C1 -6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;
R32 및 R38은 독립적으로 H, C1 -6 알킬 및 -SH로 이루어진 군으로부터 선택되되, 단, R32 및 R38 치환기는 둘 다 H가 아닐 수 있다.
다른 실시형태에 있어서, T-L1-PT는 하기 구조 (XXVI)을 갖거나 또는 이의 입체이성질체, 전구약물 또는 약제학적으로 허용 가능한 염이다:
Figure pct00040
여기서,
R29는 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알킬아미노, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴 및 임의로 치환된 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R30은 H 및 C1 -6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;
R31은 H 및 C1 -6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R32 및 R38은 독립적으로 H, C1 -6 알킬 및 -SH로 이루어진 군으로부터 선택되되, 단 R32 및 R38 치환기는 둘 다 H가 아닐 수 있다.
다른 실시형태에 있어서, T-L1-PT는 하기 구조 (XXVII)을 갖거나 또는 이의 입체이성질체, 전구약물 또는 약제학적으로 허용 가능한 염이다:
Figure pct00041
여기서,
R29는 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알킬아미노, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴 및 임의로 치환된 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택된다.
다른 실시형태에 있어서, T-L1-PT는 하기 구조 (XXVIII)을 갖거나 또는 이의 입체이성질체, 전구약물 또는 약제학적으로 허용 가능한 염이다:
Figure pct00042
여기서,
R25는 1 내지 10개의 탄소 원자, 0 내지 4개의 질소 원자, 0 내지 4개의 산소 원자 및 0 내지 4개의 황 원자를 함유하는 직쇄, 분지쇄 또는 비방향족 환식 골격을 가진 포화 또는 불포화 모이어티로서 정의되며, 상기 탄소 원자는 =O, =S, OH, -OR28, -O2CR28, -SH, -SR28, -SOCR28, -NH2, -NHR28, -N(R28)2, -NHCOR28, -NR28COR28, -I, -Br, -Cl, -F, -CN, -CO2H, -CO2R28, -CHO, -COR28, -CONH2, -CONHR28, -CON(R28)2, -COSH, -COSR28, -NO2, -SO3H, -SOR28, -SO2R28로 임의로 치환되되, 여기서 R28은 직쇄, 분지쇄 또는 환식의, 1 내지 10개의 탄소 포화 또는 불포화 알킬기이다.
다른 실시형태에 있어서, T-L1-PT는 하기 구조 (XXIX)를 갖거나 또는 이의 입체이성질체, 전구약물 또는 약제학적으로 허용 가능한 염이다:
Figure pct00043
여기서,
R25는 1 내지 10개의 탄소 원자, 0 내지 4개의 질소 원자, 0 내지 4개의 산소 원자 및 0 내지 4개의 황 원자를 함유하는 직쇄, 분지쇄 또는 비방향족 환식 골격을 가진 포화 또는 불포화 모이어티로서 정의되며, 상기 탄소 원자는 =O, =S, OH, -OR28, -O2CR28, -SH, -SR28, -SOCR28, -NH2, -NHR28, -N(R28)2, -NHCOR28, -NR28COR28, -I, -Br, -Cl, -F, -CN, -CO2H, -CO2R28, -CHO, -COR28, -CONH2, -CONHR28, -CON(R28)2, -COSH, -COSR28, -NO2, -SO3H, -SOR28, -SO2R28로 임의로 치환되되, 여기서 R28은 직쇄, 분지쇄 또는 환식의 1 내지 10개의 탄소 포화 또는 불포화 알킬기이다.
본 발명의 추가의 실시형태에 있어서, (PT)는, 헤미아스테린 유사체, 예컨대, 미국 특허 제7,579,323호(모든 목적을 위하여 전문이 본 명세서에 참고로 편입됨)에 개시된 것들이다. 본 발명의 추가의 실시형태에 있어서, (PT)는 헤미아스테린 유사체, 예컨대, 미국 특허 출원 제10/666,722호 또는 미국 특허 출원 제10/911,300호(각각은 모든 목적을 위하여 그들의 전문이 본 명세서에 참고로 편입됨)에 개시된 것들이다.
링커 모이어티 L 2
하기 화학식 VII의 화합물이 제공된다:
Figure pct00044
식 중:
T는 VAR2CSA 폴리펩타이드를 포함하는 표적화 모이어티이고;
L2는 링커이거나, 또는 L2는 존재하지 않으며;
P2는 생물학적 활성 화합물이고; 그리고
L2-P2는 하기 구조 (III)을 갖는다:
Figure pct00045
식 중:
R은 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알킬아미노, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴, 임의로 치환된 헤테로아릴, -COR27, -CSR27, -OR27 및 -NHR27로 이루어진 군으로부터 선택되되, 여기서 각각의 R27은, 독립적으로, 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알킬아미노, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴, 임의로 치환된 헤테로아릴이거나, 또는 R은 존재하지 않으며;
P3은 화합물 P2의 나머지 부분이고; 그리고
L3은 L2가 존재할 경우 임의로 링커 L2의 나머지 부분이다.
바람직한 실시형태에 있어서, R은 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알킬아미노, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴 및 임의로 치환된 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는 R은 존재하지 않는다.
또한 효소에 의해 절단 가능하고 효소적 절단 시 표적화 모이어티로부터 페이로드 화합물을 방출 가능한 접합체 내에 VAR2CSA 폴리펩타이드를 포함하는 표적화 모이어티에 연결된 페이로드 화합물을 포함하는 화합물이 제공된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 페이로드 화합물은 생물학적 활성 화합물이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 페이로드 화합물은 세포독성 또는 세포증식억제 약물이다.
본 명세서에 개시된 바와 같이, N-아실 설폰아마이드-함유 절단성 접합체는, N-아실 설폰아마이드 모이어티가 JPB의 효소적 절단을 용이하게 하는 아미노산 서열의 일부를 형성하는 아미노산의 카보닐기와 효소적 절단성 펩타이드 결합(접합 펩타이드 결합(junction peptide bond: JPB))을 형성하는 질소 원자에 공유 결합되는 화학기(R)에 공유 연결되도록 합성될 수 있다. N-아실 설폰아마이드와 유사한 모이어티, 예컨대, N-아실 설파마이드가 또한 이용될 수 있다.
따라서, 일 실시형태에 있어서, 본 발명은 하기 화학식 VII의 화합물을 제공한다:
Figure pct00046
식 중, P2는 생물학적 활성 화합물이고, L2는 링커이며, 그리고 T는 VAR2CSA를 포함하는 표적화 모이어티이되, 여기서 P2는 하기 구조 (V)를 갖고:
Figure pct00047
그리고 L2-T는 하기 구조 (VI)을 가지며:
Figure pct00048
여기서 P4는 페이로드 화합물 P2의 나머지 부분이고, 이때 화학식 V 내 R에 결합된 -NH-기는 화학식 VI 내의 AA1과 펩타이드 결합(JPB)을 형성하며, 상기 JPB는 효소에 의해 절단 가능하고, R은 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알킬아미노, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴 및 임의로 치환된 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되며, 각 AA는 독립적으로 아미노산이고, n은 0 내지 25의 정수이며, L4는 임의로 링커 L2의 나머지 부분이고, T는 상기 표적화 모이어티이며, AA1-(AA)n은 함께 연결되어 상기 JPB의 효소적 절단을 용이하게 할 수 있는 아미노산 서열을 포함한다.
몇몇 실시형태에 있어서, R은 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알킬아미노, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴, 임의로 치환된 헤테로아릴, -COR27, -CSR27, -OR27 및 -NHR27로 이루어진 군으로부터 선택되되, 여기서 각각의 R27은, 독립적으로, 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알킬아미노, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴 및 임의로 치환된 헤테로아릴이다.
몇몇 실시형태에 있어서, R은 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알킬아미노, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴 및 임의로 치환된 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 화학식 V의 -R-NH-는 하기로부터 선택된다:
Figure pct00049
여기서 각각의 n은 독립적으로 0 내지 10의 정수이다.
몇몇 실시형태에 있어서, 화학식 V의 -R-NH-는 하기로부터 선택된다:
Figure pct00050
몇몇 실시형태에 있어서, 화학식 V의 -R-NH-는 하기로부터 선택된다:
Figure pct00051
일 실시형태에 있어서, JPB의 절단에 의해 하기 화학식 VIII의 화합물이 생성된다:
Figure pct00052
식 중 P4는 화학식 V에서의 P4에 대응한다.
일 실시형태에 있어서, JPB의 절단에 의해 하기 화학식 XXIX의 화합물이 생성된다:
Figure pct00053
식 중 P4는 화학식 V에서의 P4에 대응한다.
일 실시형태에 있어서, JPB의 절단에 의해 하기 화학식 IX의 화합물이 생성된다:
Figure pct00054
식 중 P4는 화학식 V에서의 P4에 대응한다.
몇몇 실시형태에 있어서, P2는 하기 구조 (X):
Figure pct00055
을 갖거나 또는 이의 입체이성질체, 전구약물 또는 약제학적으로 허용 가능한 염이고, L2-T는 하기 구조 (IV)를 갖는다:
Figure pct00056
식 중:
R6은 아릴, C3-C7 사이클로알킬 및 헤테로아릴로부터 선택되되, 이들 각각은 C1-C4 아실티오, C2-C4 알켄일, C1-C4 알킬, C1-C4 알킬아미노, C1-C4 알콕시, 아미노, 아미노-C1-C4 알킬, 할로, C1-C4 할로알킬, 하이드록실, 하이드록시-C1-C4 알킬 및 티오로부터 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환되며, 여기서 C2-C4 알켄일, C1-C4 알킬아미노 및 C1-C4 알콕시는 C1-C4 알킬아릴, 하이드록실 및 티오로부터 선택된 하나 이상의 치환기로 추가로 임의로 치환되고;
R7 및 R8은 각각 독립적으로 H 및 C1-C6 알킬로부터 선택되며;
R9는 C1-C6 알킬 및 티오로 이루어진 군으로부터 선택되고; 그리고
화학식 X에서 R10에 결합된 -NH-기는 화학식 IV 내 AA1과 접합 펩타이드 결합(JPB)을 형성하되, 여기서 JPB는 효소에 의해 절단 가능하며, 각각의 AA는 독립적으로 아미노산이고, n은 0 내지 25의 정수이며, L3은 링커 L2의 나머지 부분(만약 존재할 경우)이고, T는 표적화 모이어티이고, AA1-(AA)n는 함께 연결되어 상기 JPB의 효소적 절단을 용이하게 할 수 있는 아미노산 서열을 포함한다.
몇몇 실시형태에 있어서, R10은 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알킬아미노, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴, 임의로 치환된 헤테로아릴, -COR27, -CSR27, -OR27 및 -NHR27로 이루어진 군으로부터 선택되되, 여기서 각각의 R27은, 독립적으로, 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알킬아미노, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴, 및 임의로 치환된 헤테로아릴이다.
몇몇 실시형태에 있어서, R10은 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알킬아미노, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴, 및 임의로 치환된 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 화학식 X 중의 -R10-NH-는 하기로부터 선택된다:
Figure pct00057
여기서 각각의 n은 독립적으로 0 내지 10의 정수이다.
몇몇 실시형태에 있어서, X 중의 -R10-NH-는 하기로부터 선택된다:
Figure pct00058
몇몇 실시형태에 있어서, X 중의 -R10-NH-는 하기로부터 선택된다:
Figure pct00059
일 실시형태에 있어서, JPB의 절단은 하기 화학식 VIII의 화합물을 생성한다:
Figure pct00060
여기서 P4는 화학식 V의 P4에 대응한다.
일 실시형태에 있어서, JPB의 절단은 하기 화학식 XXIX의 화합물을 생성한다:
Figure pct00061
여기서 P4는 화학식 V의 P4에 대응한다.
일 실시형태에 있어서, JPB의 절단은 하기 화학식 IX의 화합물을 생성한다:
Figure pct00062
여기서 P4는 화학식 V의 P4에 대응한다.
링커 모이어티 L2는 본 명세서에 기재된 조립된 접합체의 관점으로부터 특성 규명된다. 따라서, 여기서 특성규명된 바와 같은 L2는 반드시는 아니지만 접합체의 합성에서 사용되는 특정 반응물에 대응할 수 있다. L2의 성분은 많은 반응물에 의해 제공될 수 있다. 따라서, L2는 페이로드 화합물(P2)을 표적화 모이어티(T)에 연결하여 접합체 화합물 T-L2-P2를 형성하는 2작용성 단위이고, 상기 접합체 화합물은 P2와 L2 사이의 접합 펩타이드 결합(JPB)에서 효소에 의해 절단되어 P2를 유리시킬 수 있다. 이러한 접합체는 표적 세포(예컨대, 종양 세포)에의 페이로드 P2의 선택적 전달을 허용한다.
링커 L2와 표적화 모이어티 T는 함께 연결되어 하기 구조 (VI)을 갖는다:
Figure pct00063
여기서 AA1의 카보닐은 화학식 V 내 R에 결합된 -NH-기를 지니는 접합 펩타이드 결합(JPB)으로서 여기서 지칭되는 펩타이드 결합을 형성하며, 이때 JPB는 효소에 의해 절단 가능하며, 각각의 AA는 독립적으로 아미노산이고, x는 0 내지 25의 정수이며, L3은 링커 L2의 나머지 부분(만약 존재할 경우)이고, T는 표적화 모이어티이며, AA1-(AA)n은 JPB의 효소적 절단을 용이하게 할 수 있는 아미노산 서열을 포함한다.
아미노산 단위 AA1-(AA)n은 표적화 모이어티 T로부터 페이로드 P2를 유리시키기 위하여 접합 펩타이드 결합(JPB)의 절단을 제공하는 인지 서열을 포함한다. 이러한 효소적 절단을 제공할 수 있는 임의의 서열이 사용될 수 있다. 이러한 서열은 미국 특허 제6,214,345호에 기재된 적당한 서열을 포함하지만 이들로 제한되는 것은 아니다. 예를 들어, PABC 자기-희생 단위를 아미노산 서열에 직접 연결하는 펩타이드 결합의 절단을 유도하는 당업계에 공지된 아미노산 서열이 본 발명에서 사용될 수 있다. 본 발명에 유용한 추가의 아미노산 서열은 당업자에 의해 경험적으로 용이하게 결정될 수 있다. 소정의 실시형태에 있어서, 아미노산 단위 AA1-(AA)n은 프로테아제에 의해 (JPB)의 절단을 허용함으로써, 이러한 프로테아제에 노출 시 접합체로부터 페이로드 P2의 유리를 용이하게 한다. 소정의 실시형태에 있어서, 이들은 세포내 프로테아제, 예컨대, 라이소솜 효소를 포함한다. 더욱 추가의 실시형태에 있어서, 이들은 세포외 프로테아제를 포함한다.
예시적인 아미노산 단위 (AA)1-(AA)x는 다이펩타이드, 트라이펩타이드, 테트라펩타이드 및/또는 펜타펩타이드를 포함하지만 이들로 제한되는 것은 아니다. 예시적인 다이펩타이드는 Val-Cit, Ala-Phe, Phe-Lys, Val-Ala, Val-Lys(Ac), Phe-Lys(Ac), 또는 Me-Val-Cit를 포함한다. 펩타이드 및 단백질에 대한 명명 규칙이 N-말단에서부터 C-말단으로 아미노산 서열을 나열하는 것이지만, JPB의 배치형태는 (AA)1이 (AA)1-(AA)x 아미노산 서열에서 C-말단 아미노산이 되도록 하는 것에 유의해야 한다. 따라서, JPB의 효소적 절단을 용이하게 하는 아미노산 서열이 발린-시투룰린이었던 실시형태에 있어서, 화학식 (III) 내의 (AA)1은 시투룰린일 것이고, 시투룰린의 카보닐기는 구조 (II) 내의 (R)에 결합된 -NH-기를 가진 JPB를 형성할 것이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 추가의 아미노산이 발린의 N-말단을 통해서 발린-시투룰린에 연결되고, 따라서, (AA)x 중 "x"는 1보다 큰 정수이다.
예시적인 트라이펩타이드는 Gly-Val-Cit, Pro-Pro-Pro, D-Ala-Phe-Lys, (D)-Val-Leu-Lys, Gly-Gly-Arg 및 Ala-Ala-Asn을 포함한다. 예시 및 명확을 기하기 위하여, 트라이펩타이드가 (gly-val-cit)인 경우, 화학식 (III)의 (AA)1은 시투룰린이다. 아미노산 단위는 천연 유래 아미노산 잔기뿐만 아니라 소량의 아미노산 및 비천연 유래 아미노산 유사체, 예컨대, 시투룰린을 포함할 수 있다. D-아미노산이 본 발명에서 이용하기 위하여 포함된다. 아미노산 단위는 특정 효소, 예를 들어, 종양-연관 프로테아제, 카텝신 B, C 및 D, 또는 플라스민 프로테아제에 의해 효소적 절단을 위하여 그들의 선택성이 설계되고 최적화될 수 있다.
예시적인 테트라펩타이드는 Lys-Ser-Gly-Arg, Gly-Phe-Leu-Gly, Leu-Ser-Gly-Arg, Ala-Leu-Ala-Leu, Gly-Gly-Gly-Arg-Arg, Gly-Lys-Ala-Phe-Arg-Arg 및 호모Gly-Arg-Ser-Arg-Gly를 포함한다.
본 발명의 링커에 이용하기 위한 예시적인 아미노산 서열은 Phe-Lys, Val-Lys, Ala-Lys, Val-Cit, Phe-Cit, Leu-Cit, Ile-Cit, Trp-Cit, Phe-Arg 내의 아미노산 서열을 포함한다. 이들 서열은 독소루비신의 유리를 위하여 이용되었다. 예를 들어, 표 1, 문헌[Dubowchik, Firestone et al. Bioconjugate Chem. 2002, 13, 855-869] 및 그 내에 포함된 문헌 참조. 본 발명의 링커에 이용하기 위한 다른 예시적인 아미노산 서열은 Pro-Pro이다(예를 들어, 문헌[Gianolio et al. Cancer Chemother Pharmacol 2012 70, 439-449] 참조). 또한 본 발명에서 유용한 아미노산 서열에 대해서 화이어스톤(Firestone) 등의 미국 특허 제6,214,345호 참조. 또한, 비천연 아미노산을 포함하는 아미노산 서열을 포함하지만 이들로 제한되는 것은 아닌 본 발명에서 유용한 아미노산 서열에 대해서 미아오(Miao) 등의 WO 2013/173392 참조. 또한 문헌[Dubowchik et al., Bioorganic & Med. Chem. Letters 8:3341-3346, 1998] 참조. 또한 문헌[Burke et al., Bioorganic & Med. Chem. Letters 19:2650-2653, 2009] 참조. 또한 문헌[Jeffrey et al., Bioorganic & Med. Chem. Letters 16:358-362, 2006] 참조. 당업자라면, 추가의 아미노산이 JPB의 효소적 절단을 용이하게 하는 아미노산 서열의 N-말단 측에 대해서 링커(L)에 포함될 수 있는 것을 이해할 것이다.
일례에 있어서, JPB는 질환과 연관된 프로테아제에 의해 절단 가능하다. 다른 예에서, JPB는 일반적으로 암과 연관되거나 상향 조절된 프로테아제에 의해 절단 가능하다. 또 다른 예에서, JPB는 연관된 세포에 의해 분비된 프로테아제에 의해 절단 가능하다.
다른 예에서, JPB는 특정 암과 연관되거나 상향 조절되는 효소에 의해 절단 가능하다.
소정의 실시형태에 있어서, 링커 (L3)의 나머지 부분은 아미노산 단위 AA1-(AA)n과 하기 구조 (XIa) 및 (XIb)에 나타낸 바와 같은 표적화 모이어티 사이에 스트레처 모이어티(stretcher moiety)(S)를 포함한다:
Figure pct00064
Figure pct00065
여기서 AA1의 카보닐은 화학식 V 내 R에 결합된 -NH-기를 지니는 접합 펩타이드 결합(JPB)으로서 여기서 지칭되는 펩타이드 결합을 형성하며, 이때 JPB는 효소에 의해 절단 가능하며, 각각의 AA는 독립적으로 아미노산이고, x는 0 내지 25의 정수이며, L4는 링커 L3의 나머지 부분(만약 존재할 경우)이고, S는 스트레처 단위이며, T는 표적화 모이어티이고, AA1-(AA)n은 JPB의 효소적 절단을 용이하게 할 수 있는 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시형태에 있어서, 이 스트레처는 미국 특허 제7,964,566호 및 미국 특허 제6,214,345호에 기재된 바와 같다.
페이로드 모이어티 ( P 2 )
하기 화학식 VII의 화합물이 제공된다:
Figure pct00066
식 중:
T는 VAR2CSA 폴리펩타이드를 포함하는 표적화 모이어티이고;
L2는 링커이거나, 또는 L2는 존재하지 않으며;
P2는 생물학적 활성 화합물이고; 그리고
L2-P2는 하기 구조 (III)을 갖는다:
Figure pct00067
식 중:
R은 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알킬아미노, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴 및 임의로 치환된 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는 R은 존재하지 않으며;
P3은 화합물 P2의 나머지 부분이고; 그리고
L3은 L2가 존재할 경우 임의로 링커 L2의 나머지 부분이다.
링커 모이어티 L2와 같이, 페이로드 P2는 본 명세서에 기재된 조립된 접합체의 관점으로부터 특성 규명된다. 따라서, 여기서 특성규명된 바와 같은 페이로드 P2는 반드시는 아니지만 접합체의 합성에서 사용되는 특정 반응물에 대응할 수 있다. 페이로드 P2의 성분은 많은 반응물에 의해 제공될 수 있다. P2의 범위 내에는 생체내에서 생물학적 활성 화합물로 전환될 수 있는 생물학적 활성 화합물의 전구체가 포함된다.
광범위한 화합물이 본 명세서에 기재된 접합체의 바람직한 페이로드 성분을 조립하는데 이용될 수 있다. 화학식 VIII에서와 같은 아마이드로서 또는 화학식 IX에서와 같이 N-아실 설폰아마이드-R-NH2 기를 함유하는 화합물로서 작용하는 임의의 화합물이 본 발명의 접합체 기술을 이용해서 표적 세포 또는 조직에 전달될 수 있었다. 화학식 VIII의 아마이드 또는 화학식 IX의 N-아실 설폰아마이드-R-NH2 화합물을 생산하기 위하여 (직접 또는 이하의 적절한 변형을 통해) 이용될 수 있는 임의의 전구체 화합물이 본 발명에서 그 용도를 발견한다. 특히 바람직한 것은 아마이드 함유 약물, 활성 아마이드 유도체를 가진 카복실산 함유 약물, 카복실산 함유 약물 및 화학식 IX를 가진 약물이다. 화학식 VII의 화합물을 생산하는 데 이용되는 합성 경로 및 특정 반응물은 제한되지 않는다. "R"기와 조합하여, 화학식 IX의 화합물이 N-아실 설폰아마이드(예컨대, 설파마이드)와 유사할 수 있는 것이 이해될 것이다.
몇몇 실시형태에 있어서, 화학식 VII의 화합물은 화학식 VIII 또는 IX의 생물학적 활성 화합물을 전달하는데 이용될 수 있다. 표적화된 개소에 본 명세서에 기재된 조성물에 의해서 유리하게 전달될 수 있는 적절한 페이로드 화합물 P2는, 예컨대, 항염증제, 세포독성제 및 항암제를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 화학식 VIII 및 IX의 화합물은 세포독성 또는 세포증식억제 활성을 나타낸다.
본 명세서에 기재된 VAR2CSA 폴리펩타이드를 포함하는 표적화 모이어티에 융합 또는 접합될 수 있는 세포독성 페이로드의 비제한적인 예는, 칼리케아마이신, 시스플라틴, 아드리아마이신, 아우리스타틴, 독소루비신, 마이탄시노이드, 탁솔, 엑테인아시딘, 겔다나마이신, 메토트렉세이트 및 이들의 유도체 및 이들의 조합물, 및 암치료에 적합한 기타 등등으로부터 선택된 화학치료제이다. VAR2CSA 폴리펩타이드을 포함하는 표적화 모이어티에 융합된 세포독성 단백질의 예는 슈도모나스 외독소 A, 디프테리아 독소, 리신 독소, 미국자리공 항바이러스성 단백질(pokeweed antiviral protein), 사포린, 겔로닌 및 이들의 변이체이다.
페이로드 분자는, 바람직하게는, 세포로 선택적으로 안내되어 plCSA를 발현하고, 항암제, 방사성 동위원소, 독소, 세포증식억제 또는 세포용해 약물 등을 포함한다. 항암제는, 예를 들어, 안트라사이클린류(독소루비신, 다우노루비신, 에피루비신, 이다루비신, 발루비신, 미톡산트론), 백금 및 비백금 기반 알킬화제(시스플라틴, 카보플라틴, 옥살리플라틴, 메클로르에타민, 사이클로포스파마이드, 클로람부실, 이포스파마이드, 부설판, 카무스틴, 다카바진, 로무스틴, 프로카바진), 빈카 알칼로이드류(빈크리스틴, 빈블라스틴, 비노렐빈, 빈데신), 탁센류(탁솔 및 데세탁셀), 토포아이소머라제 I 저해제(캄프토테신, 이리노테칸, 토포테칸), 토포아이소머라제 II 저해제(암사크린, 에토포사이드, 에토포사이드 포스페이트, 테니포사이드 및 아메리칸 메이애플(American Mayapple)(포도필룸 펠타툼(Podophyllum peltatum))의 뿌리에서 천연적으로 유래하는 기타 알칼로이드-유도체, 논-안트라사이클린 세포독성 항생제(닥티노마이신, 블레오마이신, 플리카마이신 및 미토마이신), 항스테로이드류(예컨대, 아미노글루테티마이드), 뉴클레오사이드 유사체(시타라비딘, 플루오로유라실 및 머캅토퓨린), 항대사물질(메토트렉세이트 및 티오구아닌), 다이클로로다이페닐트라이클로로에탄 유사체(예컨대 미토탄), 및 반응성 산소종(ROS)-유도 화합물(피퍼론구민(piperlongumine) 및 베타-페닐에틸 아이소티오사이아네이트를 포함하지만 이들로 제한되는 것은 아님)을 포함한다. 기타 항암제는, 예를 들어, 문헌[Goodman and Gilman, "The Pharmacological Basis of Therapeutics", 8th Edition, 1990, McGraw-Hill, Inc., 특히, Chapter 52 (Antineoplastic Agents (Paul Calabresi and Bruce A. Chabner))]에 기재되어 있다. 독소는 단백질, 예컨대, 미국자리공 항바이러스성 단백질, 콜레라 독소, 백일해 독소, 리신, 겔로닌, 아브린, 디프테리아 외독소 또는 슈도모나스 외독소일 수 있다. 독소 잔기는 또한 코발트-60과 같은 고에너지-방출 방사성 핵종일 수도 있다. VAR2CSA 폴리펩타이드 접합체는 세포-침투 펩타이드(CPP)와 함께 이용되어 세포 원형질 막을 가로질러 접합체의 수송을 용이하게 한다. 세포-침투 펩타이드는 암 및 바이러스 저해제를 포함하는 상이한 질환의 치료에서 약물 전달제로서의 약제에서 많은 용도를 발견하였다. CPP 상의 예는, 인간 면역결핍 바이러스로부터 Tat(trans-activating transcriptional activator); pep-1(ChariotTM); R8, 아조-R8; SMoC를 포함하지만 이들로 제한되는 것은 아니다(Okuyama M et al. Nat Methods. 2007 Feb;4(2):153-9M; Soane L and Fiskum GJ Neurochem. 2005 Oct;95(1):230-43; Loudet A et al. Org Biomol Chem. 2008 Dec 21;6(24):4516-22).
몇몇 실시형태에 있어서, VAR2CSA 폴리펩타이드를 포함하는 표적화 모이어티는 스테로이드 호르몬을 포함하는 항염증제와 접합된다. 연골 및 반흔 조직은 높은 양의 CSPG를 함유하는 것으로 알려져 있다. 따라서, 항염증제, 예컨대, 비스테로이드 항염증성 화합물, 질환 조절 항류마티스 약물(예컨대, 메토트렉세이트, 아자티오프린, 설파살라진, 시클로스포린, 페니실라민, 레플루노마이드 또는 금), 생물학적 항류마티스 약물(예컨대, 종양 괴사 인자 저해제, 인터류킨-1-수용체 길항제, CD20-항체, 인슐린 성장 인자 1) 및 이러한 조직에 대한 스테로이드 호르몬 또는 대안적인 화합물을 겨냥하는 것이 유용하다.
몇몇 실시형태에 있어서, P2는 세포독성 화합물이다.
몇몇 실시형태에 있어서, P2는 세포독성 화합물, 예를 들어, 미국 특허 제7,579,323호; WO 2004/026293; 미국 특허 제8,129,407호; 미국 특허 공개 제2014/0227295호; WO 2013/068874; 미국 특허 공개 제2013/0095123호; 미국 특허 공개 제2013/0190243호; WO 2014/126198; EP 2740493; WO 2014086942; WO 2013072813; WO 2012166559; WO 2012166560; WO 2012123423; WO 2011154359; WO 2006063707; WO 2003008378; WO 2002000263; 미국 특허 공개 제2013/224,228호; WO 2013/085925; WO 2014/009774; 미국 특허 제8,476,451호; 미국 특허 공개 제2011/0027274호; 또는 관련된 출원 또는 특허, 또는 문헌[Lundquist et al., Organic Letters, (3), pp. 781-783, 2001; Domling et al., Angew. Chem. Int. Ed. 2006, 45, 7235-7239; Kaur et al., Biochem J., (2006), 396:235-242; Steinmetz et al., Angew. Chem. Int. Ed. 2004, 43, 4888-4892; Khalil et al., ChemBioChem 2006, 7, 678 - 683; Peltier et al., J. Am. Chem. Soc. 2006, 128, 16018-16019]에 개시된 화합물이다.
몇몇 실시형태에 있어서, P2는 미세소관 파괴 펩타이드 독소이다.
몇몇 실시형태에 있어서, P2는 헤미아스테린 또는 이의 유사체이다.
몇몇 실시형태에 있어서, P2는 투불리신 또는 이의 유사체이다.
몇몇 실시형태에 있어서, P2는 아우리스타틴 또는 이의 유사체이다.
몇몇 실시형태에 있어서, 세포독성 화합물은 칼리케아마이신, 아우리스타틴, 독소루비신, 마이탄시노이드, 탁솔, 엑테인아시딘, 겔다나마이신, 메토트렉세이트 슈도모나스 외독소 A, 디프테리아 독소, 리신 독소, 미국자리공 항바이러스성단백질, 사포린, 겔로닌, 피롤로벤조다이아제핀(PBD) 및 이들의 기능성 변이체, 단편 및 조합물로부터 선택된다.
몇몇 실시형태에 있어서, 세포독성 화합물은 리토플로카미아 리티스토이데스(Lithoplocamia lithistoides)로부터의 폴리케타이드이다. 리토플로카미아 리티스토이데스로부터의 폴리케타이드의 예는 [
Figure pct00068
et al., J. Am. Chem. Soc. 2013, 135, 10164-10171]에 개시된 것을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 리토플로카미아 리티스토이데스로부터의 폴리케타이드는 PM050489 및 PM060184로부터 선택된다.
몇몇 실시형태에 있어서, 세포독성 화합물은 천연 유래 화합물로부터 전달되지 않은 합성 화학독소이다.
몇몇 실시형태에 있어서, P2는 항염증성 화합물이다.
몇몇 실시형태에 있어서, P2는 미세소관 파괴 펩타이드 독소이다. 일 실시형태에 있어서, 미세소관 파괴 펩타이드 독소는 헤미아스테린 또는 이의 유사체이다. 다른 실시형태에 있어서, 미세소관 파괴 펩타이드 독소는 HTI-286 또는 이의 유사체이다. 일 실시형태에 있어서, 미세소관 파괴 펩타이드 독소는 아우리스타틴 또는 이의 유사체이다. 일 실시형태에 있어서, 미세소관 파괴 펩타이드 독소는 구조 XIII, XIV 또는 XIX를 가진 화합물이다.
몇몇 실시형태에 있어서, P2는 하기 화학식 XIII의 화합물 또는 이의 입체이성질체, 전구약물 또는 약제학적으로 허용 가능한 염이다:
Figure pct00069
식 중:
R11은 아릴, C3-C7 사이클로알킬 및 헤테로아릴로부터 선택되되, 이들 각각은 C1-C4 아실티오, C2-C4 알켄일, C1-C4 알킬, C1-C4 알킬아미노, C1-C4 알콕시, 아미노, 아미노-C1-C4 알킬, 할로, C1-C4 할로알킬, 하이드록실, 하이드록시-C1-C4 알킬 및 티오로부터 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환되고, 여기서 C2-C4 알켄일, C1-C4 알킬아미노 및 C1-C4 알콕시는 C1-C4 알킬아릴, 하이드록실 및 티오로부터 선택된 하나 이상의 치환기로 더욱 임의로 치환되며;
R12 및 R13은 각각 독립적으로 H 및 C1-C6 알킬로부터 선택되고;
R14는 C1-C6 알킬 및 티오로 이루어진 군으로부터 선택되며; 그리고
R15는 화학식 X에서 R10과 같은 정의를 지닌다.
일 실시형태에 있어서 R11은 페닐, 1H-인돌-3-일, 1-메틸-1H-인돌-3-일, 사이클로헥실, 4-메톡시페닐, 2-메톡시페닐, 3,5-다이메틸페닐 및 m-톨릴로부터 선택된다.
다른 추가의 실시형태에 있어서, R12, R13 및 R14는 각각 메틸이다.
다른 추가의 실시형태에 있어서, R12는 H이고, R13은 메틸이며, 그리고 R14는 메틸이다.
VAR2CSA -약물 접합체의 제조방법
화학식 I의 화합물의 제조방법이 제공된다. 당업자가 인식하게 되는 바와 같이, T-L-P를 공유적으로 연결하기 위해 매우 다양한 수단을 이용가능하다. 접합체 성분을 연결하기 위해 임의의 공지된 방법이 이용될 수 있다. T를 P에 연결하기 위해 임의의 공지된 링커 기법이 사용될 수 있다. 추가로, T, L 및 P는 접합체 형성을 용이하게 하기 위해 합리적인 기술의 당업자에 의해 인식되는 바와 같은 임의의 적합한 방식으로 변형될 수 있다.
화학식 I의 화합물은 넓은 범위의 합성 경로 및 넓은 범위의 반응물을 이용하여 생성될 수 있다. 예를 들어, N-아실 설폰아마이드 모이어티 및 화학식 III의 R기는 동일한 반응물 또는 상이한 반응물에 존재할 수 있다. N-아실 설폰아마이드 모이어티는 단일 반응물 상에 존재할 수 있거나 또는 접합 반응 단계에서 2개의 반응물에 의해 형성될 수 있다. JPB는 반응물 내에서 상호작용할 수 있거나 또는 접합 반응 단계에서 두 반응물에 의해 형성될 수 있다. JPB는 JPB의 효소적 절단을 용이하게 하는 아미노산 서열을 또한 함유하는 단일 반응물 내에서 완전할 수 있거나, 효소적 절단을 용이하게 하는 아미노산 서열은 형성되며 접합 반응 단계에서 다수의 반응물에 의해 JPB와 함께 제공될 수 있다.
몇몇 실시형태에 있어서, 화학식 I의 화합물은 하기 화학식 XII의 L-P의 전구체와 T의 접합에 의해 제조된다:
Figure pct00070
식 중, FG는 표적화 모이어티의 하나 이상의 원자와 공유 결합을 형성하는 작용기이다. 추가의 실시형태에서, FG는 표적화 모이어티의 헤테로원자와의 결합을 형성한다. 특정 실시형태에서, FG기는 말레이미드를 포함한다. 당업자가 인식하게 되는 바와 같이, 트랜스글루타미나제 서열, 2-브로모아세트아마이드 화학, 글리코실화 화학, 및 기타를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 추가적인 모이어티 및 결합 기법이 사용될 수 있다. 예를 들어, WO2013173391, WO2013173392, WO2013173393 및 미국 특허 제7,964,566호에 개시된 결합 화학 참조.
적응증
본 명세서에 기재된 화합물은 발현과 관련된 넓은 범위의 적응증, 예컨대, plCSA의 부적절한 발현, 예컨대, 다양한 암 암, 예컨대, 흑색종, 육종, 희돌기교세포종, 뇌종양, 백혈병, 림프종 및 폐, 유방, 요로상피, 결장, 췌장 및 간의 암종을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 전이성 암에서 사용될 수 있다. 본 명세서에 기재된 화합물은 또한 암 줄기 세포에 대해 사용될 수 있고, 따라서 암으로 진행되기 전에 세포를 표적화할 수 있다. 발현과 관련된 다른 병태, 예컨대, plCSA의 부적절한 발현은 연골의 병태 및/또는 흉터 조직의 발생이다.
따라서, 발현과 관련된 임의의 적응증, 예컨대, plCSA의 부적절한 발현, 예컨대, 암, 관절염, 관절증, 다발성 경화증, 신경 손상에 의해 야기되는 병리학적 병태, 연골 및 흉터 조직의 병태에서, 예컨대, 류머티즘, 연골 손상 또는 상처 치유에서 또는 건선에서, 발현과 관련된 임의의 적응증, 예컨대, plCSA의 부적절한 발현의 치료를 위한 방법이 제공되며; 상기 방법은 치료적 또는 예방적 유효량의 본 명세서에 기재된 화합물을 치료 또는 예방이 필요한 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
또한 발현, 예컨대, plCSA의 부적절한 발현을 수반하는 병태, 예컨대, 암, 관절염, 관절증, 다발성 경화증, 신경 손상에 의해 야기되는 병리학적 병태, 연골 및 흉터 조직의 병태에서, 예컨대, 류머티즘, 연골 손상 또는 상처 치유, 또는 건선과 관련된 임의의 적응증의 치료를 위한 화합물이 제공된다.
본 명세서에 기재된 화합물은 생체내에서 멀리 떨어진 마이크로-전이를 동정, 추적 및 표적화하는데 사용될 수 있다. 조혈계의 암을 포함하는 사실상 모든 원발성 종양은 전이성 질환으로 발생될 가능성을 가지는데, 이는 환자의 불량한 치료 결과와 크게 관련된다.
몇몇 실시형태에 있어서, 본 명세서에 기재된 화합물은 흑색종 세포의 표면 상에 plCSA 사슬과 함께 CSPG4를 갖는 피부, 눈 및 결막 흑색종을 포함하는 악성 흑색종 암의 치료에서 유용하다. 이 GAG 사슬은 유사분열 및 전이에 연루되는 것으로 믿어진다. 그러나, CSPG4는 흑색종에 대해서만 특이적이지 않다. 인간 조직 및 세포주의 거대 패널로부터의 데이터에 대해 수행된 마이크로- 및 조직 배열 분석은 CSPG4 및 다른 유형의 plCSA-함유 프로테오글리칸이 모두 3개의 세포 배아층으로부터 유래된 넓은 범위의 암 유형 상에 존재할 수 있다는 것을 시사한다. 이들 암 유형은 암종(유방 암종, 췌장 암종, 난소 암종, 자궁내막 암종, 간세포 암종, 폐 암종, 결장 암종, 전립선 암종, 자궁경부 암종, 고환 암종, 기저 세포 피부 암종, 투명 세포 신세포 암종, 각질화된 두경부 편평세포 암종, 피부 편평세포 암종, 외음부 각질화된 편평세포 암종 및 외음부 기저세포 암종), 육종(유방 지방육종, 섬유육종, 탈분화된 연골육종 및 지방육종, 평활근육종, 지방육종, 점액 지방육종, 자궁 체부 평활근육종, 골육종, 유잉 육종 및 횡문근육종), 조혈암(만성 림프성 백혈병(CLL), 급성 림프성 백혈병(ALL), 급성 골수성 백혈병(AML), B-세포, T-세포 및 거대 과립 림프종), 신경상피 조직의 종양, 예컨대, 성상 세포종 (다형성 황색성상세포종, 섬유성 성상 세포종, 미분화성 성상세포종, 다형성 교모세포종), 핍지교종, 상의세포종, 맥락총 종양, 핍지성상 세포종, 신경교육종, 신경절교세포종, 망막아세포종, 신경세포종, 신경아세포종(감각신경모세포종 및 신경절아세포종), 수모세포종, 비정형 유기형 간상종양 종양 및 모든 유형의 신경내분비 암을 포함한다.
콘드로이틴 황산 프로테오글리칸(CSPG)은 또한 눈을 포함하는 중추 신경계(CNS)의 그리고 관절연골의 중요한 성분을 구성한다. 세포외 CSPG는 관절염의 발병 및 신경 손상 후 재생의 결여에 중요하게 연루된다. 세포외 CSPG의 손실은 관절염 및 관절증의 발생에 중요하며, 세포외 CSPG의 높은 국소 농도는 신경 손상 후 신경의 자라남을 방지한다. 따라서, 본 명세서에 기재된 화합물은 암에서와 같은 악성 성장과 관련된 적응증의 치료에서뿐만 아니라 관절염, 관절증을 치료하기 위해 그리고 다발성 경화증을 포함하는 신경 돌기 손상 후에 신경 회복을 향상시키기 위해 세포외 환경에서 CSPG 존재를 증가 또는 감소시키는데 사용될 수 있다.
본 명세서에 기재된 화합물은 연골 조직, 관절 및 신경 조직에 대한 세포외 CSPG의 분해를 방지하거나 또는 수선하는 표적 화합물, 예컨대, 성장 호르몬, 항염증 화합물 또는 단백질 저해제를 표적화하기 위해 사용될 수 있다.
본 명세서에 기재된 화합물은 CSPG 분자의 단백질 코어의 당 사슬을 절단하는 콘드로이티나제 ABC와 같은 세포외 CSPG의 분해를 향상시키거나 또는 생성을 방지하는 화합물을 표적화하기 위해 사용될 수 있다. CSPG 생성을 감소시키는 자일로사이드, 또는 손상된 신경 조직에 대해 CSPG 생성을 위한 중요한 효소, 예컨대, 콘드로이틴 신타제 또는 콘드로이틴 중합 인자(예컨대, 4-플루오로-글루코사민, p-나이트로페닐-베타-D-자일로사이드, 4-메틸-움벨리페릴-베타-D-자일로피라노사이드)를 저해하는 약물.
몇몇 실시형태에 있어서, 암은 피부, 눈 또는 결막 흑색종; 암종(삼중음성- 및 화생성 유방 암종, 췌장 암종, 난소 암종, 자궁내막 암종, 간세포 암종, 폐 암종, 결장 암종, 전립선 암종, 자궁경부 암종, 고환 암종, 기저 세포 피부 암종, 투명 세포 신세포 암종, 각질화된 두경부 편평세포 암종, 피부 편평세포 암종, 외음부 각질화된 편평세포 암종 및 외음부 기저세포 암종); 육종(유방 지방육종, 섬유육종, 탈분화된 연골육종 및 지방육종, 평활근육종, 지방육종, 점액 지방육종, 자궁 체부 평활근육종, 골육종, 유잉 육종 및 횡문근육종); 조혈암(만성 림프성 백혈병(CLL), 급성 림프성 백혈병(ALL), 급성 골수성 백혈병(AML), B-세포, T-세포 및 거대 과립 림프종); 신경상피 조직의 종양, 예컨대, 성상 세포종(다형성 황색성상세포종, 섬유성 성상 세포종, 미분화성 성상세포종, 다형성 교모세포종), 핍지교종, 상의세포종, 맥락총 종양, 핍지성상 세포종, 신경교육종, 신경절교세포종, 망막아세포종, 신경세포종, 신경아세포종 (감각신경모세포종 및 신경절아세포종), 수모세포종, 및 비정형 유기형 간상종양 종양; 및 임의의 다른 plCSA-발현 암 아형으로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 암은 암종(유방 암종, 췌장 암종, 난소 암종, 자궁내막 암종, 간세포 암종, 폐 암종, 결장 암종, 전립선 암종, 자궁경부 암종, 고환 암종, 기저 세포 피부 암종, 투명 세포 신세포 암종, 두경부 편평세포 암종, 피부 편평세포 암종, 외음부 각질화된 편평세포 암종 및 외음부 기저세포 암종을 포함하지만, 이들로 제한되지 않음); 육종(섬유육종, 탈분화된 연골육종 및 지방육종, 평활근육종, 지방육종, 점액 지방육종, 자궁 체부 평활근육종, 골육종, 유잉 육종 및 횡문근육종, 활막육종, 고립 섬유성 종양을 포함하지만, 이들로 제한되지 않음), 조혈암(만성 림프성 백혈병(CLL), 급성 림프성 백혈병(ALL), 급성 골수성 백혈병(AML), b-세포, t-세포 및 거대 과립 림프종을 포함하지만, 이들로 제한되지 않음); 신경상피 조직의 종양, 예컨대, 이하로 제한되는 것은 아니지만, 성상 세포종(다형성 황색성상세포종, 섬유성 성상 세포종, 미분화성 성상세포종, 다형성 교모세포종), 핍지교종, 상의세포종, 맥락총 종양, 핍지성상 세포종, 신경교육종, 신경절교세포종, 망막아세포종, 신경세포종, 신경아세포종(감각신경모세포종 및 신경절아세포종), 수모세포종, 비정형 유기형 간상종양 종양; 및 모든 유형의 신경내분비 암을 포함하는, 모든 plCSA-발현 악성종양으로부터 선택된다.
현재 개시된 화합물을 이용하는 치료를 위해 상정된 고형 종양은 육종, 섬유육종, 점액육종, 지방육종, 연골육종, 골원성 육종, 척색종, 혈관육종, 내피육종, 림프혈관육종, 림프관내피육종, 윤활막종, 중피종, 유잉 종양, 평활근육종, 횡문근육종, 결장 암, 결장직장 암, 신장암, 췌장암, 골암, 유방암, 난소암, 전립선암, 식도암, 위암(예컨대, 위장암), 경구암, 비강암, 인후암, 편평세포 암종(예컨대, 폐의 편평세포 암종), 기저세포 암종, 선암종(예컨대, 폐의 선암종), 땀샘 암종, 피지선 암종, 유두 암종, 유두 선암종, 낭샘암종, 수질 암종, 기관지 암종, 신세포 암종, 간세포 담관 암종, 융모막 암종, 정상피종, 배아 암종, 윌름 종양, 자궁경부 암, 자궁암, 고환암, 소세포 폐 암종, 방광 암종, 폐 암, 비-소세포 폐 암, 상피 암종, 신경교종, 교모세포종, 다형성 성상세포종, 수모세포종, 두개인두종, 상의세포종, 송과체종, 혈관아세포종, 청신경종, 핍돌기신경교종, 뇌수막종, 피부암, 흑색종, 신경아세포종 및 망막아세포종을 포함하지만, 이들로 제한되는 것은 아니다. 현재 개시된 화합물을 이용하는 치료를 위해 상정되는 혈액매개 암은 급성 림프구성 백혈병 "ALL", 급성 림프구성 B-세포 백혈병, 급성 림프구성 T-세포 백혈병, 급성 골수아구성 백혈병 "AML", 급성 전골수성 백혈병 "APL", 급성 단아구성 백혈병, 급성 적백혈병 백혈병, 급성 거핵아구 백혈병, 급성 골수 단핵구 백혈병, 급성 비림프구성 백혈병, 급성 미분화 백혈병, 만성 골수성 백혈병 "CML", 만성 림프구성 백혈병 "CLL", 모발세포 백혈병, 및 다발성 골수종을 포함하지만, 이들로 제한되는 것은 아니다. 현재 개시된 화합물을 이용하는 치료를 위해 상정된 급성 및 만성 백혈병은 림프구성, 골수성, 림프구성, 및 골수성 백혈병을 포함하지만, 이들로 제한되는 것은 아니다. 현재 개시된 화합물을 이용하는 치료를 위해 상정되는 림프종은 호지킨병, 비호지킨 림프종, 다발성 골수종, 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 중쇄 질환 및 진정 적혈구 증가증을 포함하지만, 이들로 제한되는 것은 아니다. 현재 개시된 화합물을 이용하는 치료를 위해 상정되는 다른 암은 복막 암, 간세포 암, 간세포암, 침샘 암, 음문 암, 갑상선, 음경 암, 항문 암, 두경부 암, 신세포 암종, 급성 역형성 대세포 암종, 및 피부 역형성 대세포 암종을 포함하지만, 이들로 제한되는 것은 아니다.
본 명세서에서 치료될 장애의 비제한적 예는 양성 및 악성 종양; 백혈병 및 림프 악성종양, 특히 유방, 난소, 위, 자궁내막, 침샘, 폐, 신장, 결장, 갑상선, 췌장, 전립선 또는 방광 암; 뉴런, 신경교, 성상세포, 시상하부 및 기타 선상, 대식세포, 상피, 기질 및 배반포 장애, 자가면역 질환, 염증성 질환, 섬유증, 및 감염성 질환을 포함한다. 대상 화합물의 특징 및 특히 효능을 고려하면, 본 명세서에 기재된 화합물은 표적 세포에 대한 세포 독성의 발휘 또는 세포 독성 효과가 바람직한 임의의 질환을 치료하기 위한 용도로 표시될 수 있다는 것은 당업자에게 명확할 것이다. 제어되지 않는 또는 요망되지 않는 세포 성장을 특징으로 하는 종양, 전이 또는 기타 질환 또는 장애를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 암은 현재 개시된 화합물의 투여에 의해 치료 또는 예방될 수 있다.
암 치료에 관해 치료적 유효량의 화합물은 암세포 수를 감소시키고; 종양 크기를 감소시키며; 주위 기관으로의 암세포 침윤을 저해하고(즉, 일정 정도로 늦추고 바람직하게는 중단시키고); 종양 전이를 저해하고(즉, 일정 정도로 늦추고 바람직하게는 중단시키고); 일정 정도로 종양 성장을 저해하며; 생존 시간을 증가시키고/시키거나; 암과 관련된 증상 중 하나 이상을 일정 정도로 완화시킬 수 있다. 존재하는 암세포의 성장을 약물이 방지하고/하거나 사멸시킬 수 있는 정도로, 세포증식억제 및/또는 세포독성일 수 있다. 본 발명의 화합물은 바람직하게는 세포독성이다. 암치료에 대해, 효능은, 예를 들어, 시간 대 질환 진행(time to disease progression: TTP)을 평가하고/하거나 반응속도(response rate: RR)를 결정함으로써 평가될 수 있다.
본 명세서에 기재된 화합물은, 예컨대, 백혈병 및 림프종을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 특정 암의 치료를 위해 시험관내 또는 생체내 방식으로 사용될 수 있고, 이러한 치료는 자가 줄기 세포 이식을 수반한다. 이는 동물의 자가 조혈줄기세포가 채취되고 모든 암세포가 제거되는 다단계 과정을 수반할 수 있으며, 이어서, 동물의 남아있는 골수 세포 집단은 수반하는 고용량 방사선 요법과 함께 또는 고용량 방사선 요법 없이 본 명세서에 기재된 고용량의 화합물의 투여를 통해 근절되며, 줄기 세포 이식편은 동물에게 다시 주입된다. 이어서, 지지적 치료가 제공되는 한편, 골수 기능은 복원되고, 동물은 회복된다.
병용 요법
다른 실시형태에서, 치료 또는 예방이 필요한 환자에게 추가적인 치료방법과 병용하여 본 명세서에 개시된 유효량의 화합물을 투여하는 단계를 포함하는, 암을 치료 또는 예방하는 방법이 제공된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 추가적인 치료방법은 화학치료제를 이용하는 치료를 포함한다. 일 실시형태에서, 화학치료제는 이를 이용한 암 치료가 난치성인 것으로 발견되지 않은 것이다. 다른 실시형태에 있어서, 화학치료제는 이를 이용한 암 치료가 난치성인 것으로 발견된 것이다. 본 명세서에 기재된 화합물은 화학치료제 전에, 후에 또는 동시에 투여될 수 있다.
적합한 항암제는 메토트렉세이트, 탁솔, L-아스파라기나제, 머캅토퓨린, 티오구아닌, 하이드록시유레아, 사이타라빈, 사이클로포스파마이드, 이포스파마이드, 나이트로소유레아, 시스플라틴, 카보플라틴, 미토마이신, 다카바진, 프로카르비진, 토포테칸, 질소 머스타드, 사이톡산, 에토포사이드, 5-플루오로유라실, BCNU, 이리노테칸, 캄프토테신, 블레오마이신, 독소루비신, 이다루비신, 다우노루비신, 악티노마이신 D, 닥티노마이신, 플리카마이신, 미톡산트론, 아스파라기나제, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신, 비노렐빈, 파클리탁셀 및 도세탁셀을 포함하지만, 이들로 제한되는 것은 아니다.
화학치료제의 다른 예는 알킬화제, 예컨대, 티오테파 및 사이톡산(CYTOXAN)(등록상표) 사이클로포스파마이드; 알킬 설포네이트, 예컨대, 부설판, 트레오설판, 임프로설판 및 피포설판; 아지리딘, 예컨대, 벤조도파, 카보쿠온, 메투레도파, 및 유레도파; 에틸렌이민 및 메틸아멜라민(알트레타민, 트라이에틸렌멜라민, 트라이에틸렌포스포르아마이드, 트라이에틸렌티오포스포르아마이드 및 트라이메틸롤로멜라민을 포함함); TLK 286(텔사이타(TELCYTA)(상표명); 아세토게닌(특히 불라타신 및 불라타신온); 델타-9-테트라하이드로칸나빈올(드로나빈올, 마린올(MARINOL)(등록상표)); 베타-라파콘; 라파콜; 콜히친; 베툴린산; 캄프토테신(합성 유사체 토포테칸(하이캄틴(HYCAMTIN)(등록상표)을 포함), CPT-11(이리노테칸, 캄토사르(CAMPTOSAR)(등록상표)), 아세틸캄프토테신, 스코폴렉틴, 및 9-아미노캄프토테신); 브리요스타틴; 칼리스타틴; CC-1065(이의 아도젤레신, 카르젤레신 및 비젤레신 합성 유사체를 포함함); 포도필로독소; 포도필린산; 테니포사이드; 크립토피신(특히 크립토피신 1 및 크립토피신 8); 돌라스타틴; 듀오카르마이신(합성 유사체, KW-2189 및 CB1-TM1을 포함함); 엘레우테로빈; 판크라티스타틴; 사르코딕틴; 스폰기스타틴; 질소 머스타드, 예컨대, 클로람부실, 클로르나파진, 클로로포스파마이드, 에스트라무스틴, 이포스파마이드, 메클로르에타민, 메클로르에타민 옥사이드 하이드로클로라이드, 멜팔란, 노벰비킨, 펜에스터린, 프레드니무스틴, 트로포스파마이드 및 유라실 머스타드; 트라이아진, 예컨대, 데카르바진; 나이트로소유레아, 예컨대, 카무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴 및 라님누스틴; 에피포도필린, 예컨대, 에토포사이드, 테니포사이드, 토포테칸, 9-아미노캄프토테신, 캄프토테신 오르크리스나톨; 비스포스포네이트, 예컨대, 클로드로네이트; 항생제, 예컨대, 엔다이인 항생제(예컨대, 칼리케아미신, 특히 칼리케아미신 감마1I 및 칼리케아미신 오메가1(예를 들어, 문헌[Agnew, Chem. Intl. Ed. Engl., 33:183-186 (1994)] 참조) 및 안트라사이클린, 예컨대, 안나마이신, AD 32, 알카루비신, 다우노루비신, 덱스라족산, DX-52-1, 에피루비신, GPX-100, 이다루비신, KRN5500, 메노가릴, 다이네미신(다이네미신 A를 포함), 에스페라미신, 네오카르지노스타틴 발색단 및 관련된 색소 단백질 엔다이인 항생제 발색단, 아클라시노마이신, 악티노마이신, 아우트라마이신, 아자세린, 블레오마이신(예컨대, A2 및 B2), 칵티노마이신, 카라비신, 카미노마이신, 카르지노필린, 크로모마이시니스, 닥티노마이신, 데토루비신, 6-다이아조-5-옥소-L-노르류신, 아드리아마이신(ADRIAMYCIN)(등록상표) 독소루비신(몰폴리노-독소루비신, 사이아노몰폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신, 리포좀 독소루비신, 및 데옥시독소루비신을 포함함), 에소루비신, 마르셀로마이신, 미토마이신, 예컨대, 미토마이신 C, 마이코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포트피로마이신, 퓨로마이신, 쿠엘라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투베르시딘, 유베니멕스, 지노스타틴 및 조루비신; 광역동치료, 예컨대, 베르토포르핀(BPD-MA), 프탈로시아닌, 광감작제 Pc4, 및 데메톡시-하이포크렐린 A(2BA-2-DMHA); 폴산 유사체, 예컨대, 데노프테린, 프테로프테린 및 트라이메트렉세이트; d퓨린 유사체, 예컨대, 플루다라빈, 6-머캅토퓨린, 티아미프린 및 티오구아닌; 피리미딘 유사체, 예컨대, 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자유리딘, 카모풀, 사이타라빈, 사이토신 아라비노사이드, 다이데옥시유리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈 및 플록수리딘; 안드로겐, 예컨대, 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스탄올, 메피티오스탄 및 테스토락톤; 항부신제, 예컨대, 아미노글루테티마이드, 미토탄 및 트라이로스탄; 폴산 보충제, 예컨대, 폴린산(류코보린); 아세글락톤; 항-폴산염 항-신생물제, 예컨대, 알림타(ALIMTA)(등록상표), LY231514 페메트렉세드, 다이하이드로폴레이트 환원효소 저해제, 예컨대, 메토트렉세이트 및 트라이메트렉세이트; 항대사물질, 예컨대, 5-플루오로유라실(5-FU) 및 이의 전구약물, 예컨대, UFT, S-1 및 카페시타빈, 플록수리딘, 독시플루리딘 및 라티트렉세드; 및 티미딜레이트 신타제 저해제 및 글리신아마이드 리보뉴클레오타이드 포밀트랜스퍼라제 저해제, 예컨대, 랄티트렉세드(토무덱스(TOMUDEX)(등록상표) TDX); 다이하이드로피리미딘 탈수소효소의 저해제, 예컨대, 에닐유라실; 알도포스파마이드 글리코사이드; 아미노레불린산; 암사크린; 베스트라뷰실; 비산트렌; 데다트렉세이트; 데포파민; 데메콜신; 다이아지쿠온; 엘포르미틴; 엘립티늄 아세테이트; 에포틸론; 에토글루시드; 갈륨 나이트레이트; 하이드록시유레아; 렌티난; 로니다이닌; 마이탄시노이드, 예컨대, 메이탄신 및 안사미토신; 미토구아존; 미톡산트론; 모피단몰; 니트라에린; 펜토스타틴; 페나메트; 피라루비신; 로속산트론; 2-에틸하이드라자이드; 프로카바진; PSK(등록상표) 다당류 복합체(오리건주 유진에 소재한 JHS 내추럴 프로덕츠사(JHS Natural Products)); 라족산; 리족신; 시조피란; 스피로게르마늄; 테뉴아존산; 트라이아지쿠온; 2,2',2"-트라이클로로트라이에틸아민; 트라이코테센(특히 T-2 독소, 베라쿠린 A, 로리딘 A 및 안구이딘); 유레탄; 빈데신(엘디신(ELDISINE)(등록상표) 필데신(FILDESIN)(등록상표)); 다카바진; 만노무스틴; 미토브로니톨; 미토락톨; 피포브로만; 가사이토신; 아라비노사이드("Ara-C"); 사이클로포스파마이드; 티오테파; 탁소이드 및 탁산, 예를 들어, 탁솔(TAXOL)(등록상표) 파클리탁셀(뉴저지주 프린스턴에 소재한 브리스톨-마이어스 스큅 옹콜로지사(Bristol-Myers Squibb Oncology)), 아브락산(ABRAXANE)(상표명) 무 크레모포(Cremophor-free), 파클리탁셀의 알부민-공학처리된 나노입자 제형(일리노이주 샤움베르크에 소재한 아메리칸 파마슈티칼 파트너스사(American Pharmaceutical Partners)), 및 탁소테레(TAXOTERE)(등록상표) 도세탁셀(프랑스 안토니에 소재한 롱-프랑로라 로어사사(Rhone-Poulenc Rorer)); 클로람부실; 겜시타빈(겜자르(GEMZAR)(등록상표)); 6-티오구아닌; 머캅토퓨린; 백금; 백금 유사체 또는 백금계 유사체, 예컨대, 시스플라틴, 옥살리플라틴 및 카보플라틴; 빈블라스틴(벨반(VELBAN)(등록상표)); 에토포사이드(VP-16); 이포스파마이드; 미톡산트론; 빈크리스틴(온코빈(ONCOVIN)(등록상표)); 빈카 알칼로이드; 비노렐빈(나벨빈(NAVELBINE)(등록상표)); 벨케이트; 레블리미드; 탈리도마이드; IMiD3; 로바스타틴; 베라파밀; 탑시가르긴; 1-메틸-4-페닐피리디늄; 세포 주기 저해제, 예컨대, 스타우로스포린; 노반트론; 에다트렉세이트; 다우노마이신; 미톡산트론; 아미노프테린; 젤로다; 이반드로네이트; 토포아이소머라제 저해제 RFS 2000; 다이플루오로메틸오르니틴(DMFO); 비타민 D3 유사체, 예컨대, EB 1089, CB 1093 및 KH 1060; 레티노이드, 예컨대, 레티노산; 상기 중 임의의 약제학적으로 허용 가능한 염, 산 또는 유도체;뿐만 아니라 상기 중 2 이상의 조합물, 예컨대, CHOP(사이클로포스파마이드, 독소루비신, 빈크리스틴, 및 프레드니솔론의 병용요법에 대한 약어), 및 폴폭스(FOLFOX)(5-FU 및 류코보린과 조합한 옥살리플라틴(엘록산틴(ELOXATIN)(상표명))을 이용한 치료 요법에 대한 약어)를 포함한다.
종양에 대한 호르몬 작용을 조절 또는 저해하는 작용을 하는 항호르몬제, 예컨대, 항에스트로겐 및 선택적 에스트로겐 수용체 조절제(SERM)는, 예를 들어, 타목시펜(놀바덱스(NOLVADEX)(등록상표) 타목시펜, 랄록시펜, 메가스트롤, 드롤록시펜, 4-하이드록시타목시펜, 트라이옥시펜, 케옥시펜, LYL17018, 오나프리스톤 및 파레스톤(FARESTON)(등록상표) 토레미펜을 포함함); 부신에서 에스트로겐 생성을 조절하는 방향화효소를 저해하는 방향화효소 저해제, 예를 들어, 4(5)-이미다졸, 아미노글루테티마이드, 메가제(MEGASE)(등록상표) 메게스트롤 아세테이트, 아로마신(AROMASIN)(등록상표) 엑세메스탄, 포르메스타닌, 파드로졸, 리비솔(RIVISOR)(등록상표) 보로졸, 페마라(FEMARA)(등록상표) 레트로졸 및 아리미덱스(ARIMIDEX(등록상표) 아나스트로졸; 및 항안드로겐, 예컨대, 플루타마이드, 비칼루타마이드, 닐루타마이드, 비칼루타마이드, 류프롤라이드 및 고세렐린;뿐만 아니라 트록사시타빈(1,3-다이옥솔란 뉴클레오사이드 사이토신 유사체); 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 특히, 부착 세포 증식에 연루된 신호전달 경로에서 유전자 발현을 저해하는 것, 예를 들어, PKC-알파, Raf, H-Ras 및 표피성장인자 수용체(EGF-R); 백신, 예컨대, 유전자 요법 백신, 예를 들어, 알로벡틴(ALLOVECTIN)(등록상표) 백신, 류벡틴(LEUVECTIN)(등록상표) 백신, 및 백시드(VAXID)(등록상표) 백신; 프로류킨(PROLEUKIN)(등록상표) rIL-2; 루프로테칸(LURTOTECAN)(등록상표) 토포아이소머라제 1 저해제; 아바렐릭스(ABARELIX)(등록상표) rmRH; 및 상기 중 임의의 약제학적으로 허용 가능한 염, 산 또는 유도체를 포함한다.
몇몇 실시형태에 있어서, 추가적인 치료방법은 방사선 요법이다. 본 명세서에 기재된 화합물은 방사선 전에, 후에 또는 동시에 투여될 수 있다.
본 명세서에 기재된 화합물은 또한 암에 대한 치료로서 수술을 받았거나 받을 환자에게 투여될 수 있다.
구체적인 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 화합물은 화학치료제와 또는 방사선 요법과 동시에 투여된다. 다른 구체적 실시형태에서, 화학치료제 또는 방사선 요법은 본 명세서에 기재된 화합물의 투여 전에 또는 후속하여 투여되며, 일 양상에서 본 명세서에 기재된 화합물의 투여 전에 또는 후속하여 적어도 1시간, 5시간, 12시간, 1일, 1주, 1개월, 추가의 양상에서 수개월(예컨대, 3개월까지)에 투여된다.
화학치료제는 일련의 기간에 걸쳐 투여될 수 있다. 본 명세서에 열거된 또는 당업계에 달리 공지된 화학치료제의 임의의 하나 또는 조합물이 투여될 수 있다. 방사선에 대해, 임의의 방사선 요법 프로토콜은 치료될 암의 유형에 따라서 사용될 수 있다. 예를 들어, 이하에 제한되는 것은 아니지만, x-선 방사선이 투여될 수 있으며; 특히, 고에너지 메가볼티지(1MeV 에너지 초과의 방사선)는 깊은 종양에 대해 사용될 수 있고, 전자빔 및 상용전압 x-선 방사선은 피부암에 대해 사용될 수 있다. 감마선 방출 방사성동위원소, 예컨대, 라듐, 코발트 및 다른 원소의 방사성 동위원소가 또한 투여될 수 있다.
추가적으로, 본 명세서에 기재된 화합물에 의한 암의 치료방법은 화학요법 또는 방사선 요법에 대한 대안으로서 제공되며, 여기서 화학요법 또는 방사선 요법은 너무 독성으로 증명되었거나 또는 증명될 수 있고, 예를 들어 치료 중인 대상체에 대해 허용가능하지 않은 또는 참을 수 없는 부작용을 초래한다. 추가적으로, 본 명세서에 기재된 화합물에 의한 암 치료방법은 수술에 대한 대안으로서 제공되며, 여기서 수술은 치료 중인 대상체에 대해 허용가능하지 않은 또는 참을 수 없는 것으로 증명되었거나 증명될 수 있다.
치료가 필요한 포유동물에게 본 명세서에 기재된 유효량의 화합물 또는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 포유동물에서 암을 치료하는 방법이 제공된다.
또 생존의 증가가 필요한 포유동물에게 본 명세서에 기재된 유효량의 화합물 또는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 암을 지닌 포유동물의 생존을 증가시키는 방법이 제공된다.
또한 종양 성장의 저해가 필요한 포유동물에게 본 명세서에 기재된 유효량의 화합물 또는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 암을 지닌 포유동물의 종양 성장을 저해하는 방법이 제공된다.
또 요법에 의해 인간 또는 동물 신체의 치료방법에서 사용하기 위한 본 명세서에 기재된 화합물 및 약제학적 조성물이 제공된다.
또한 포유동물에서 암을 치료하는데 사용하기 위한 본 명세서에 기재된 화합물 및 약제학적 조성물이 제공된다.
또 암을 지닌 포유동물의 생존을 증가시킴에 있어서 사용하기 위한 본 명세서에 기재된 화합물 및 약제학적 조성물이 제공된다.
또한 포유동물에서 종양 성장을 저해하는데 사용하기 위한 본 명세서에 기재된 화합물 및 약제학적 조성물이 제공된다.
또 포유동물에서 암을 치료하기 위한 약제의 제조에서의 본 명세서에 기재된 화합물의 용도가 제공된다.
또한 암을 지닌 포유동물의 생존을 증가시키기 위한 약제의 제조에서의 본 명세서에 기재된 화합물의 용도가 제공된다.
또 포유동물에서 종양 성장을 저해하기 위한 약제의 제조에서의 본 명세서에 기재된 화합물의 용도가 제공된다.
몇몇 실시형태에 있어서, 암은 신경상피 조직의 암종, 육종, 조혈암 및 종양으로부터 선택된다.
또 치료가 필요한 포유동물에게 본 명세서에 기재된 유효량의 화합물 또는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 포유동물에서 암, 관절염, 관절증, 다발성 경화증, 신경 손상, 연골 손상 및 건선으로부터 선택된 적응증을 치료하는 방법이 제공된다.
또한 암, 관절염, 관절증, 다발성 경화증, 신경 손상, 연골 손상 및 건선으로부터 선택된 적응증의 치료방법에서 사용하기 위한 본 명세서에 기재된 화합물 및 약제학적 조성물이 제공된다.
또 암, 관절염, 관절증, 다발성 경화증, 신경 손상, 연골 손상 및 건선으로부터 선택된 적응증을 치료하기 위한 약제의 제조에서의 본 명세서에 기재된 화합물의 용도가 제공된다.
또한 치료가 필요한 포유동물에게 본 명세서에 기재된 유효량의 화합물 또는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 포유동물에서 관절염, 다발성 경화증 및 건선으로부터 선택된 적응증을 치료하는 방법이 제공된다.
또 관절염, 다발성 경화증 및 건선으로부터 선택된 적응증의 치료방법에서 사용하기 위한 본 명세서에 기재된 화합물 및 약제학적 조성물이 제공된다.
또한 관절염, 다발성 경화증 및 건선으로부터 선택된 적응증을 치료하기 위한 약제의 제조에서의 본 명세서에 기재된 화합물의 용도가 제공된다.
투여
본 명세서에 기재된 화합물, 및 약제학적으로 허용 가능한 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다.
투여의 목적을 위해, 본 발명의 화합물은 원 화학물질로서 투여될 수 있거나 또는 약제학적 조성물로서 제형화될 수 있다. 본 발명의 약제학적 조성물은 본 명세서에 기재된 화합물 및 약제학적으로 허용 가능한 담체, 희석제 또는 부형제를 포함한다. 본 명세서에 기재된 화합물은 관심대상의 특정 질환 또는 병태를 치료하는데 유효한 양으로, 예를 들어, 암 또는 종양 세포 성장을 치료하기에 충분한 양으로 조성물 중에 존재하며, 바람직하게는 환자에 대해 허용가능한 독성을 지닌다. 본 명세서에 기재된 화합물의 활성은, 예를 들어, 이하의 실시예에 기재된 바와 같이 당업자에 의해 결정될 수 있다. 적절한 농도 및 투약량은 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
순수한 형태로 또는 적절한 약제학적 조성물로 본 명세서에 기재된 화합물, 또는 그들의 약제학적으로 허용 가능한 염의 투여는 유사한 효용을 제공하기 위한 제제의 임의의 허용되는 투여방식을 통해 수행될 수 있다. 본 개시내용의 약제학적 조성물은 본 명세서에 기재된 화합물을 적절한 약제학적으로 허용 가능한 담체, 희석제 또는 부형제와 조합함으로써 제조될 수 있고, 고체, 반고체, 액체 또는 기체 형태의 제제, 예컨대, 정제, 캡슐, 분말, 과립, 연고, 용액, 좌약, 주사, 흡입제, 겔, 마이크로스피어 및 에어로졸로 제형화될 수 있다. 이러한 약제학적 조성물의 전형적인 투여 경로는 경구, 국소, 경피, 흡입, 비경구, 설파, 협측, 직장, 질 및 비강내를 포함하지만, 이들로 제한되는 것은 아니다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 비경구는 피하 주사, 정맥내, 근육내, 흉골내 주사 또는 주입 기법을 포함한다. 개시내용의 약제학적 조성물은 환자에게 조성물의 투여 시 그 안에 함유된 활성 성분이 생체이용 가능하게 되도록 제형화된다. 대상체 또는 환자에게 투여될 조성물은 하나 이상의 제형 형태를 취하며, 여기서, 예를 들어, 정제는 단일 투약 단위일 수 있고, 에어로졸 형태로 본 명세서에 기재된 화합물의 용기는 복수개의 투약량 단위를 보유할 수 있다. 이러한 제형을 제조하는 실제 방법은 공지되어 있거나, 또는 당업자에게 명백할 것이다; 예를 들어, 문헌[Remington: The Science and Practice of Pharmacy (22nd ed.) eds. Loyd V. Allen, Jr., et al., Pharmaceutical Press, 2012] 참조. 투여될 조성물은, 아무튼 본 개시내용의 교시에 따라 관심 대상의 질환 또는 병태의 치료를 위해 치료적 유효량의 본 명세서에 기재된 화합물을 함유할 것이다.
본 명세서에 기재된 약제학적 조성물은 고체 또는 액체 형태일 수 있다. 일 양상에서, 담체(들)는 미립자이고, 따라서 조성물은, 예를 들어, 정제 또는 분말 형태이다. 담체(들)는 액체이며, 조성물은, 예를 들어, 흡입 투여에서 유용한, 예를 들어 경구 시럽, 주사용 액체 또는 에어로졸이다.
경구 투여용으로 의도될 때, 본 발명의 약제학적 조성물은 전형적으로 고체 또는 액체 형태이며, 반고체, 반액체, 현탁액 및 겔 형태가 고체 또는 액체로서 본 명세서에서 고려된 형태 내에 포함된다.
경구 투여용 고체 조성물로서, 약제학적 조성물은 분말, 과립, 압축 정제, 알약, 캡슐, 츄잉검, 웨이퍼 등의 형태로 제형화될 수 있다. 이러한 고체 조성물은 전형적으로 하나 이상의 비활성 희석제 또는 식용 담체를 함유할 것이다. 추가로, 다음 중 하나 이상이 존재할 수 있다: 결합제, 예컨대, 카복시메틸셀룰로스, 에틸 셀룰로스, 미정질 셀룰로스, 트래거캔트검 또는 젤라틴; 부형제, 예컨대, 전분, 락토스 또는 덱스트린, 붕해제, 예컨대, 알긴산, 알긴산나트륨, 프리모겔, 옥수수 전분 등; 윤활제, 예컨대, 스테아르산마그네슘 또는 스테로텍스(Sterotex); 활택제, 예컨대, 콜로이드 이산화규소; 감미제, 예컨대, 수크로스 또는 사카린; 향미제, 예컨대, 페퍼민트, 메틸 살리실레이트 또는 오렌지향; 및 착색제.
약제학적 조성물이 캡슐 형태, 예를 들어, 젤라틴 캡슐일 때, 상기 유형의 물질에 추가로 액체 담체, 예컨대, 폴리에틸렌글리콜 또는 오일을 함유할 수 있다.
본 명세서에 기재된 약제학적 조성물은 액체 형태, 예를 들어, 엘릭시르, 시럽, 용액, 에멀전 또는 현탁액일 수 있다. 액체는 두 가지 예로서 경구 투여용 또는 주사에 의한 전달용일 수 있다. 경구 투여용으로 의도될 때, 본 명세서에 기재된 약제학적 조성물은 전형적으로 본 화합물에 추가로 감미제, 보존제, 염료/착색제 및 향미 증강제 중 하나 이상을 함유한다. 주사에 의해 투여될 것으로 의도된 조성물에서, 계면활성제, 보존제, 습윤제, 분산제, 현탁제, 완충제, 안정제 및 등장제 중 하나 이상이 포함될 수 있다.
본 명세서에 기재된 액체 약제학적 조성물들은, 그들이 용액, 현탁액 또는 기타 유사한 형태이든 아니든, 다음의 애주번트 중 하나 이상을 포함할 수 있다: 멸균 희석제, 예컨대, 주사용수, 식염수, 바람직하게는 생리 식염수, 링거 용액, 등장성 염화나트륨, 고정유(예컨대, 용매 또는 현탁 매질로서 작용할 수 있는 합성 모노 또는 다이글리세라이드), 폴리에틸렌 글리콜, 글리세린, 프로필렌 글리콜 또는 다른 용매; 항균제, 예컨대, 벤질 알코올 또는 메틸 파라벤; 항산화제, 예컨대, 아스코르브산 또는 아황산수소나트륨; 킬레이트제, 예컨대, 에틸렌다이아민테트라아세트산; 완충제, 예컨대, 아세트산염, 시트르산염 또는 인산염 및 등장성 조절을 위한 제제, 예컨대, 염화나트륨 또는 덱스트로스. 비경구 제제는 앰플, 일회용 주사기 또는 유리 또는 플라스틱으로 이루어진 다회 용량 바이알에 동봉될 수 있다. 생리 식염수는 바람직한 애주번트이다. 주사용 약제학적 조성물은 바람직하게는 멸균이다.
비경구 또는 경구 투여 중 하나를 위해 의도된 본 명세서에 기재된 액체 약제학적 조성물은 적합한 투약량이 얻어지도록 본 명세서에 기재된 화합물의 양을 함유하여야 한다.
본 명세서에 기재된 약제학적 조성물은 국소 투여용으로 의도될 수 있으며, 이 경우에 담체는 적합하게는 용액, 에멀전, 연고 또는 겔 베이스를 포함할 수 있다. 베이스는, 예를 들어, 다음 중 하나 이상을 포함할 수 있다: 페트롤라텀, 라놀린, 폴리에틸렌 글리콜, 밀랍, 광유, 희석제, 예컨대, 물 및 알코올, 및 유화제 및 안정제. 증점제는 국소 투여를 위해 약제학적 조성물 중에 존재할 수 있다. 경피 투여용으로 의도된다면, 조성물은 경피 패치 또는 이온도입법 장치를 포함할 수 있다.
본 명세서에 기재된 약제학적 조성물은, 예를 들어 직장 내에서 용융되고 약물을 방출하는 좌약의 형태로 직장 투여용으로 의도될 수 있다. 직장 투여용 조성물은 적합한 비자극성 부형제로서 유지성 베이스를 함유할 수 있다. 이러한 베이스는 라놀린, 코코아 버터 및 폴리에틸렌 글리콜을 포함하지만, 이들로 제한되는 것은 아니다.
본 명세서에 기재된 약제학적 조성물은 고체 또는 액체 제형의 물리적 형태를 변형시키는 다양한 물질을 포함할 수 있다. 예를 들어, 조성물은 활성 성분 주위의 코팅 껍질을 형성하는 물질을 포함할 수 있다. 코팅 껍질을 형성하는 물질은 전형적으로 비활성이며, 예를 들어, 당, 셸락 및 다른 장용 코팅제로부터 선택될 수 있다. 대안적으로, 활성 성분은 젤라틴 캡슐로 감싸질 수 있다.
본 명세서에 기재된 약제학적 조성물은 에어로졸로서 투여될 수 있는 제형으로 제조될 수 있다. 용어 에어로졸은 콜로이드 특성의 시스템으로부터 압축 패키지로 이루어진 시스템까지의 범위에 있는 다양한 시스템을 나타내기 위해 사용된다. 전달은 액화 또는 압축 가스에 의해 또는 활성 성분을 제공하는 적합한 펌프 시스템에 의할 수 있다. 본 명세서에 기재된 화합물의 에어로졸은 활성 성분(들)을 전달하기 위해 단일상, 이중상 또는 삼중상 시스템으로 전달될 수 있다. 에어로졸의 전달은 필요한 용기, 활성제, 밸브, 내부 용기 등을 포함하는데, 이들은 함께 키트를 형성할 수 있다. 당업자는 과도한 실험 없이 바람직한 에어로졸을 결정할 수 있다.
본 명세서에 기재된 약제학적 조성물은 약제학적 분야에서 잘 공지된 방법에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 주사에 의해 투여되는 것으로 의도된 약제학적 조성물은 용액을 형성하기 위해 본 명세서에 기재된 화합물을 멸균, 증류수와 합함으로써 제조될 수 있다. 계면활성제는 균질한 용액 또는 현탁액의 형성을 용이하게 하기 위해 첨가될 수 있다. 계면활성제는 수성 전달 시스템에서 화합물의 용해 또는 균질한 현탁을 용이하게 하기 위해 본 명세서에 기재된 화합물과 비공유적으로 상호작용하는 화합물이다.
본 명세서에 기재된 화합물, 또는 그들의 약제학적으로 허용 가능한 염은 치료적 유효량으로 투여되는데, 이는 사용될 구체적 화합물의 활성; 화합물의 대사 안정성 및 작용 길이; 환자의 연령, 체중, 일반적 건강상태, 성별 및 식이요법; 투여 방식 및 시간; 배설 속도; 약물 조합; 특정 장애 또는 병태의 중증도; 및 요법을 받는 대상체를 포함하는 다양한 인자에 따라서 다를 것이다.
본 명세서에 기재된 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 유도체는 또한 하나 이상의 다른 치료제와 동시에, 전에 또는 후에 투여될 수 있다. 이러한 병용요법은 본 명세서에 기재된 화합물 및 하나 이상의 추가적인 활성제를 함유하는 단일 약제학적 투약 제형의 투여뿐만 아니라 본 명세서에 기재된 화합물 및 각각의 활성제의 그 자체의 별도의 약제학적 투약 제형의 투여를 포함한다. 예를 들어, 본 명세서에 기재된 화합물 및 다른 활성제는 환자에게 단일 경구 투약 조성물, 예컨대, 정제 또는 캡슐로 함께 투여될 수 있거나, 또는 각각의 제제가 별도의 경구 투약 제형으로 투여될 수 있다. 별도의 투약 제형이 사용될 경우, 본 명세서에 기재된 화합물 및 하나 이상의 추가적인 활성제는 본질적으로 동일한 시간에, 즉, 동시에 또는 별도로 엇갈린 시간에, 즉, 순차적으로 투여될 수 있고; 병용요법은 모든 이들 요법을 포함하는 것으로 이해된다.
실시예
이하의 실시예는 본 명세서에 기재된 화합물, 즉, 화학식 I 및 관련된 화학식의 화합물을 제조하는 다양한 방법을 예시한다. 당업자라면 유사한 방법에 의해 또는 당업자에게 공지된 다른 방법을 조합함으로써 이들 화합물을 제조할 수도 있는 것이 이해된다. 또한 당업자라면 이하에 기술된 것과 유사한 방식으로, 적절한 출발 성분을 이용하고 필요에 따라서 합성의 변수들을 변형함으로써 하기에 구체적으로 예시되지 않은 화학식 I의 기타 화합물을 제조할 수도 있는 것이 이해된다. 일반적으로, 출발 성분은, 예컨대, 시그마 알드리치사(Sigma Aldrich), 랭커스터 신세시스사(Lancaster Synthesis, Inc.), 메이브리지사(Maybridge), 매트릭스 사이언티픽사(Matrix Scientific), TCI사 및 플루오로켐 유에스에이사(Fluorochem USA) 등으로부터 입수되거나 당업자에게 공지된 출처(예를 들어, 문헌[Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure, 5판 (Wiley, December 2000] 참조))에 따라 합성될 수 있거나 또는 본 명세서에 기술된 바와 같이 제조될 수 있다.
하기 실시예는 예시의 목적으로 제공되며, 제한을 위한 것은 아니다.
실시예 1: 절단된 재조합 VAR2CSA 단백질의 생산.
모든 단백질 절단은 미리 규정된 도메인 경계(border)에 따라서 생성된다(
Figure pct00071
et al. J Biol Chem 286: 15908-17). CIDRPAM 도메인은 두 도메인 ID2a 및 ID2b로 나뉘고, 여기서 ID2a는 CIDR-유사 서열을 함유하지 않는 CIDRPAM의 N-말단 부분이고, ID2b는 CIDR-유사 서열에 대응한다. 2 가지 DBL2X 경계 - DBL2Xa 및 DBL2Xb가 있다. DBL2Xb는 ID2a의 93개 아미노산을 혼입한다. 클로닝에 이용된 프라이머는 표 5에 일람되어 있다. 단편은 방법 1 및 2에 기재된 바와 같은 수용성 단백질로서 바큘로바이러스-감염된 곤충 세포 또는 C3029H 이.콜라이 세포에서 발현된다. 대부분의 단백질은 FCR3 유전형에 기반하여 생산된다. 일부 FCR3 단편은 발현하지 않고, 대신에 3D7 유전형에 기반하여 이루어진다. 두 유전형으로부터의 VAR2CSA 폴리펩타이드는 plCSA와 동등하게 결합한다.
Figure pct00072
Figure pct00073
Figure pct00074
방법 1: 곤충 세포에서의 클로닝 및 단백질 발현.
VAR2CSA 서열 단편을 코돈 최적화된 FCR3(젠뱅크(GenBank) 수탁번호 GU249598) 또는 3D7(젠뱅크 수탁번호 3Q247428) VAR2CSA 유전자로부터 특정 프라이머(표 5)를 이용해서 증폭시킨다. 간단한 단편을 1-단계 PCR에 증폭시킨다. 아미노산 치환 작제물은 2-단계 PCR에서 제작된다. 첫 번째 PCR은, 중첩하는 상보적 단부를 함유하는, 코돈 최적화된 FCR3 주형으로부터 2개의 단편을 증폭시킨다. 두 번째 PCR은 외부 경계에 대해 특정된 프라이머를 가진 주형으로 두 중첩하는 단편을 이용해서 전체 작제물을 증폭시킨다. 모든 단편은 검증을 위하여 서열분석된다. 단편은 C-말단에서 V5 및 His 태그를 함유하도록 변형된 바큘로바이러스 벡터 pAcGP67-A(BD 바이오사이언시스사(BD Biosciences))로 클로닝된다. 단백질은 세포 배양 보충물로 분비된 가용성 단백질로서 바큘로바이러스-감염 공충에서 발현된다. 간단히, 선형화된 Bakpak6 바큘로바이러스 DNA(BD 바이오사이언시스사)는 재조합 바이러스 입자의 생성을 위하여 Sf9 곤충 내로 pAcGP67-A 플라스미드로 공동-형질전환시켰다. 10㎖의 두 번째 증폭은 1 × 106 세포/㎖의 밀도로 무혈청 배지(10486, 깁코사(GIBCO)) 400㎖에 하이-파이브 세포(High-Five cell)를 감염시키는데 이용된다. 분비된 재조합 단백질을 초기 감염 후 3일에 상청액으로부터 수거하였다. 상청액을 여과하고(0.2㎛), 투석시키고 나서 농축 후 단백질 정제를 실시하였다. 분비된 재조합 단백질을 함유하는 여과된 상청액을 AKTA 크로스-플로(cross-flow)(GE 헬스케어사(GE Healthcare))를 이용해서 투석한다. 투석은 10mM NaH2PO4(pH 7.4, 시그마-알드리치사) 및 500mM NaCl에서 수행한다. 얻어진 용액을 여과(0.2㎛)하고 이미다졸을 15mM의 최종 농도로 첨가한다. 이어서 단백질을 1-㎖ 히스셀렉트 칼럼(HisSelect 칼럼)(H8286, 시그마-알드리치사) 상에서 정제시킨다. 결합된 단백질은 10mM NaH2PO4(pH 7.4), 500mM NaCl 및 500mM 이미다졸로 용리시킨다. 단백질의 순도 및 구조 온전성은 SDS-PAGE에 의해 검증되었다.
방법 2: 이. 콜라이 세포에서의 단백질 발현
재조합 VAR2CSA 단백질은 C3029H 또는 C3030 이.콜라이 서플 세포(SHuffle cell)에서 발현되었다. 20㎖의 따뜻한 2xYT [+AMP] 배지를 적절한 플라스미드를 보유하는 이.콜라이 클론에 접종하고, 진탕(150 rpm)하면서 37℃에서 하룻밤 배양하였다. 5ℓ 플라스크 내 800㎖의 미리 가온된 2xYT [+AMP]를 이어서 개시자 배양액 16㎖에 접종하고 OD600가 0.5 내지 0.8에 도달할 때까지 진탕(100 내지 150 rpm)하면서 37℃에서 배양하고, 그 후 온도를 20℃로 조정하였다. 20분 후, 배양액을 80㎕의 1M IPTG에 유도하고 추가로 18 내지 20시간 동안 진탕(100 내지 150 rpm)하면서 배양하였다. 세포를 원심분리(10000 ×g, 10분)에 의해 수거하고 팰릿을 40㎖의 용해 완충액(20㎖의 완충액 당 EDTA 없이 10mM NaPO4(pH 7.2), 0.5M NaCl, 60mM 이미다졸 + CMPIT 프로테아제 저해제 정제)에 재현탁시키고, 50㎖ 원심관에 동등하게 분리하였다. 세포를 얼음 상에서 초음파(2 × 5분)에 의해 용해시키고, 잔사를 원심분리(40000 ×g, 30분, 4℃)에 의해 제거하였다. 상청액을 얼음 상의 관 내로 여과(0.2㎛)시키고 직접 정제시키거나 또는 -20℃에서 동결시켰다.
실시예 2: T- L 2 - P 2 의 제조.
반응식 1
Figure pct00075
반응식 1은 L2-P2의 합성을 위한 일반적 반응식의 특정 실시형태를 예시한다. 추가의 실시형태에 있어서, 보호기(PG1)는 아미노산(예컨대, AA1-AA2) 첨가 전에 독소(P2)로부터 제거한다. 소정의 실시형태에 있어서, 앵커(Anchor)는 표적 모이어티(T)와 공유 결합을 형성할 수 있는 작용기를 포함한다. 다른 실시형태에 있어서, 앵커는 스트레처(Stretcher)를 포함한다.
반응식 2
Figure pct00076
반응식 2는 P-L 복합체의 집중 합성을 위한 일반적 반응식의 특정 실시형태를 예시하며, 상기 복합체에서 페이로드와 AA 서열 사이의 JPB는 앵커 및 스트레처의 배치 전에 조립된다. 이 합성 접근법은 이하의 화합물을 생성하는데 사용되었다: 화합물 G, 화합물 H, 화합물 I, 화합물 J, 화합물 K, 화합물 L, 화합물 M, 화합물 N, 화합물 O, 화합물 P, 화합물 Q, 화합물 R, 화합물 U, 화합물 EE, 화합물 FF, 화합물 GG, 화합물 HH, 화합물 II 및 화합물 JJ.
반응식 3
Figure pct00077
반응식 3은 P-L 복합체의 집중 합성을 위한 일반적 반응식의 특정 실시형태를 예시하며, 상기 복합체에서 JPB는 이미 스트레처와 앵커 작용성을 함유하는 페이로드와 단백질가수분해 서열 사이에 확립되어 있다. 이 합성 접근법은 이하의 화합물을 생성하는데 이용되었다: 화합물 S, 화합물 T, 화합물 W, 화합물 X, 화합물 Y, 화합물 Z, 화합물 AA, 화합물 BB, 화합물 CC 화합물 DD.
소정의 실시형태에 있어서, 일반적 반응식은 이하에 논의되는 바와 같은 절차를 포함한다. 당업자라면 용이하게 이해하는 바와 같이, 이들 절차는 소정의 실시형태의 예시이며 당업계에서 적절한 것으로 공지된 대안적인 용매, 시약 및 보호기로 수행될 수 있었다.
실시예 2.1: 일반적 절차 1 - 트라이플루오로아세트아마이드 배치.
1,4-다이옥산 내 아민의 교반된 현탁액에 트라이플루오로아세트산 무수물(1.1 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물이 현탁액에서 용액으로 전환되었고 다시 현탁액이 되었다. 반응의 진행을 완료에 대하여 TLC 및/또는 HPLC-MS로 모니터링하였다. 일단 출발 물질이 전부 소비되면, 반응물을 헥산 또는 다이에틸 에터로 희석하고, 부흐너 깔대기에서 여과하고 얻어진 고체를 감압 하에 건조시켜 순수한 트라이플루오로아세트아마이드를 얻었다.
실시예 2.2: 일반적 절차 2 - DCC/ DMAP 매개 N -아실 설폰아마이드 형성.
다이클로로메탄 중 산의 교반된 용액에 설폰아미드의 용액(1.3당량, 필요한 경우 다이클로로메탄, N,N-다이메틸폼아마이드 또는 이들의 혼합물 중)을 첨가하였다. 다이사이클로헥실카보다이이미드(1.2 당량)를 첨가하고 이후 N,N-다이메틸아미노피리딘(1.2 당량)을 첨가하였다. 반응 과정을 HPLC-MS에 의해 모니터링하고(전형적으로 16시간) 그리고 과량의 부산물은 다이에틸 에터의 첨가에 의해 석출시킬 수 있었다. 고체를 여과에 의해 제거하고 1:1 다이에틸 에터/다이클로로메탄으로 세척하였다. 유기층을 합하여 농축시키고, 잔사를 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제시켜 목적으로 하는 N-아실 설폰아마이드를 얻었다.
실시예 2.3: 일반적 절차 3 - 트라이플루오로아세트아마이드 비누화 .
1,4-다이옥산 또는 메탄올 중에 트라이플루오로아세트아미드 함유-작제물의 용액에 수산화리튬(10 당량) 및 물(10% v/v)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 교반시키거나 또는 임의로 50℃까지 가열하였다. 반응 과정은 HPLC-MS에 의해 모니터링하였다. 완결 시, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 수성층을 5% w/v 시트르산 또는 1M 염산의 수용액으로 반응중지시켰다. 얻어진 수용액을 다이클로로메탄 또는 에틸 아세테이트로 순차 세척하고, 유기 상을 수집하여, MgSO4 상에서 건조시키고 여과 후 농축시켰다. 반응 생성물은 "그대로" 사용하거나 필요한 경우 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제시켰다.
실시예 2.4: 일반적 절차 4 - HATU 매개 펩타이드 결합 형성.
0℃에서 최소량의 다이클로로메탄 또는 N,N-다이메틸폼아마이드 또는 이들의 혼합물 중 카르복실산의 교반된 용액에, HATU(1.05 내지 1.2당량) 및 N,N-다이아이소프로필에틸아민(2 내지 4 당량) 또는 2,4,6-콜리딘(2 내지 4 당량)을 첨가하였다. 짧은 유도 기간(5 내지 20분) 동안 교반을 지속하고 이때 반응물에 다이클로로메탄 중 아민의 용액을 투입하였다. 반응물을 실온까지 가온시키고 진행을 HPLC-MS에 의해 모니터링하였다. 완결 시, 휘발물을 감압 하에 제거하고 잔류 물질을 실리카겔 크로마토그래피 또는 역상 HPLC에 의해 정제시켜 적절한 순도의 아마이드를 얻었다.
실시예 2.5: 일반적 절차 5 - Fmoc 기 제거.
Fmoc-보호된 화합물을 N,N-다이메틸폼아마이드 중 20% 피페리딘 중에 용해시켰다. 이 반응 과정은 HPLC-MS에 의해 모니터링하였다. 완결 시, 모든 휘발물을 감압 하에 제거하여 잔사를 수득하였으며, 이것을 다음 단계에서 직접 사용하거나 또는 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제시켰다.
실시예 2.6: 일반적 절차 6 - NHS -활성화 에스터를 사용한 아민의 N - 아실화 .
최소량의 N,N-다이메틸폼아마이드 중 아민의 용액에 대응하는 N-하이드록시 석신이미드 함유 에스터(1.5 당량)를 첨가하였다. 반응의 진행은 HPLC-MS(전형적으로 대략 16시간)에 의해 모니터링하였고, 이 시점에서 모든 휘발물을 감압 하에 제거하였다. 잔사를 이어서 실리카겔 크로마토그래피 또는 역상 HPLC에 의해 정제시켜 목적으로 하는 아마이드 생성물을 얻었다.
실시예 2.7: 일반적 절차 7 - Boc 기 제거.
다이클로로메탄 중 Boc-보호된 화합물의 용액에 10% v/v 트라이플루오로아세트산을 첨가하였다. 반응 과정은 HPLC-MS에 의해 모니터링하였다. 완결 시, 모든 휘발물을 감압 하에 제거하였다. 잔류 물질을 역상 HPLC, 실리카겔 크로마토그래피에 의해 또는 냉 메탄올/다이클로로메탄/다이에틸 에터의 혼합물로부터의 석출에 의해 정제시켰다.
실시예 2.7.1: 일반적 절차 8 - 4- 아닐리노 설폰아마이드 합성.
CH2Cl2(0.1M) 중 출발 아닐린의 교반된 현탁액 또는 용액에 트라이플루오로아세트산 무수물(1.1 당량)을 첨가하였다. 이 반응물을 대략 1시간 동안 교반하고 이 시점에서 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 CHCl3 중에 2회 용해시키고 농축시켜 목적으로 하는 트라이플루오로아세트아닐라이드를 예상되는 분석 결과를 가진 정량적 수율로 제공하였다.
트라이플루오로아세트아닐라이드(대략 8m㏖)를 CHCl3(10㎖)에 용해시켰다. 클로로설폰산(3 당량)을 교반 하에 첨가하였다. 얻어진 용액을 70℃까지 1시간 동안 가열하고 나서, 실온으로 냉각시키고 이 시점에서 염화티오닐(2 당량)을 교반 하에 첨가하였다. 얻어진 2상 혼합물을 70℃까지 15분 동안 재가열하였다. 이 반응 혼합물을 이어서 CHCl3로 2회 희석시키고 진공 중 농축시켜 과량의 산을 제거하였다.
얻어진 페닐클로로설폰산을 1,4-다이옥산(대략 10㎖)에 용해시키고, 얻어진 용액을 암모니아수의 진한 용액(10㎖)에 0℃에서 격렬하게 교반하면서 적가하였다. 이 반응물을 1M 시트르산의 첨가에 의해 반응중지시키고 pH = 3으로 조절하였다. 대부분의 경우에 설폰아마이드가 석출되었고, 이것을 수성 상으로부터 직접 여과하였으며; 생성물이 석출되지 않은 경우, 이 반응물을 에틸 아세테이트(대략 100㎖)로 희석시키고, 분액 깔때기로 옮기고, 유기 상을 염수로 세척하고 나서 MgSO4 상에서 건조시키고 농축시켜 목적으로 하는 4-트라이플루오로아세트아닐라이드 치환된 설폰아마이드를 얻었다.
실시예 2.7.2: 일반적 절차 9 - 대안적인 아실 벤조트라이아졸 매개 N -아실 설폰아마이드 형성.
이 절차는 ARKIVOC 2004 (xii), 14-22에 기재된 것으로부터 적응시켰다.
실시예 2.7.3: 일반적 절차 10 - EDCI /Cu(II) 매개 펩타이드 결합 형성.
다이클로로메탄 중 최소량의 30% N,N-다이메틸폼아마이드 중 카복실산의 교반된 용액에 각 추가 시약 사이의 잠깐의 휴지 시간에 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필)카보다이이미드(0.95 당량), 1-하이드록시-7-아자벤조트라이아졸(1.0 당량), 아민(0.33 당량) 및 무수 염화구리(II)(1.0 당량) 순으로 첨가하였다. 실온에서 교반을 지속하고 이 반응의 진행을 HPLC-MS에 의해 모니터링하였다. 완결 시, 휘발물을 감압 하에 제거하고, 잔류 물질을 실리카겔 크로마토그래피 또는 역상 HPLC에 의해 정제시켜 적절한 순도의 목적으로 하는 아마이드를 얻었다.
실시예 2.7.4: 일반적 절차 11 - 에스터 비누화.
1,4-다이옥산 또는 메탄올 중 에스터 함유 화합물의 용액에 수산화리튬(10 당량) 및 물(10% v/v)을 첨가하였다. 이 반응물을 실온에서 교반하거나 또는 임의로 50℃까지 가열하였다. 반응 과정은 HPLC-MS에 의해 모니터링하였다. 완결 시, 휘발물을 감압 하에 제거하고, 수성 층을 필요한 경우 pH 조절하고 다이클로로메탄 또는 에틸 아세테이트로 순차 세척하였다. 유기상을 수집하고, MgSO4 상에서 건조시키고 여과 후 농축시켰다. 반응 생성물은 "그대로" 사용하거나 필요한 경우 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제시켰다.
실시예 2.8.1: Fmoc -Val- Cit -OH: ( R )-2-(( R )-2-(((9 H - 플루오렌 -9-일- 메톡시 ) 카보닐아미노 )-3- 메틸부탄아미도 )-5- 유레이도펜탄산 , Fmoc -발린-시투룰린-OH.
표제의 화합물은 문헌[Dubowchik et al., Bioconjugate Chem., 2002, 13, 855-869]에 따라서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.56 (s, 1H), 8.21 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.90 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.76 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 7.49-7.39 (m, 3H), 7.38-7.23 (m, 2H), 5.96 (t, J = 5.9 Hz, 1H), 5.40 (s, 2H), 4.34-4.09 (m, 4H), 3.93 (dd, J = 9.1, 7.1 Hz, 1H), 3.39 (q, J = 7.0 Hz, 3H), 2.96 (q, J = 6.5 Hz, 2H), 1.97 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 1.86-1.63 (m, 1H), 1.57 (dtd, J = 13.9, 9.0, 5.4 Hz, 1H), 1.41 (dhept, J = 13.2, 6.9 Hz, 2H), 0.88 (dd, J = 13.3, 6.7 Hz, 6H). C26H32N4O6 계산치 [M+H]+ 497.23. 확인치 [M+H]+ 497.19.
실시예 2.8.2: Fmoc -Val- Cit -OH: ( S )-2-(( S )-2-(((9 H - 플루오렌 -9-일- 메톡시 ) 카보닐아미노 )-3- 메틸부탄아미도 )-5- 유레이도펜탄산 , Fmoc -발린-시투룰린-OH.
표제의 화합물은 문헌[Dubowchik et al., Bioconjugate Chem., 2002, 13, 855-869]에 따라서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.56 (s, 1H), 8.21 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.90 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.76 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 7.49-7.39 (m, 3H), 7.38-7.23 (m, 2H), 5.96 (t, J = 5.9 Hz, 1H), 5.40 (s, 2H), 4.34-4.09 (m, 4H), 3.93 (dd, J = 9.1, 7.1 Hz, 1H), 3.39 (q, J = 7.0 Hz, 3H), 2.96 (q, J = 6.5 Hz, 2H), 1.97 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 1.86-1.63 (m, 1H), 1.57 (dtd, J = 13.9, 9.0, 5.4 Hz, 1H), 1.41 (dhept, J = 13.2, 6.9 Hz, 2H), 0.88 (dd, J = 13.3, 6.7 Hz, 6H). ). C26H32N4O6 계산치 [M+H]+ 497.23. 확인치 [M+H]+ 497.19.
실시예 2.9: MC- NHS : 2,5- 다이옥소피롤리딘 -1-일 6-(2,5- 다이옥소 -2,5- 다이하이드로 -1 H -피롤-l-일)헥사노에이트.
아세트산(75㎖) 중 6-아미노카프로산(10.0g, 76.2 m㏖, 1.0당량)의 교반된 용액에, 말레산 무수물(7.85g, 80.0 m㏖, 1.05당량)을 첨가하였다. 이 고체를 취하여 수분 동안 용해시키고 나서, 대략 5분 후에 백색 고체가 부서지기 시작하였다. 1시간 후에, 이 현탁액이 백색 케이크로 농후화되었다. 이 물질을 프릿 깔때기에 퍼넣고 톨루엔으로 세척 후 가열하면서 진공 중 농축시켜 모든 흔적량의 아세트산을 제거하였다. 중간체 분말을 톨루엔(250㎖)에 장입하고, 트라이에틸아민(21.3㎖, 152 m㏖, 2.0당량)을 첨가하고, 이 혼합물을 딘스타크 트랩에서 가열 환류시켰다. 환류 5시간 후, 이 혼합물을 냉각시키고, 맑은 톨루엔층을 플라스크 내의 점성 잔사의 나머지로부터 따라내었다. 톨루엔을 진공 중 제거하여 6-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노에이트의 트라이에틸아민염을 수득하였다. 이 염을 톨루엔에 재용해시키고, 소량의 아세트산을 첨가하고 나서 농축시켰다. 이어서, 혼합물을 50% 포화 중탄산나트륨에 장입하고, 1M HCl을 첨가하여 pH를 3으로 조절하고, 우윳빛 석출물을 형성시켰다. 이것을 EtOAc로 3회 추출하고, 유기물을 합하여 황산나트륨 위에서 건조시키고, 여과시키고, 진공 중 농축시켜 순수한 6-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노에이트(3.08g, 19%)를 수득하였다. EtOAc(30㎖) 중 6-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)헥사노에이트(3.08g, 14.6 m㏖, 1.0당량) 및 N-하이드록시석신이미드(1.76g, 15.3 m㏖, 1.05당량)의 교반된 용액에 0℃에서 다이사이클로헥실카보다이이미드(3.16g, 15.3 m㏖, 1.05당량)를 첨가하였다. 이 반응물을 이어서 실온까지 가온되게 하였다. 20시간 후에, 이 반응물을 여과시키고 EtOAc로 세척하고 나서 여과액을 농축시켰다. 잔사를 플래시 크로마토그래피에 의해 정제시켜 표제의 화합물(2.16g, 48%)을 맑은 오일로서 수득하였고, 이것은 서서히 왁스 형태의 백색 고체로 고형화되었다. 1H NMR (400 MHz, 클로로폼-d) δ 6.71 (s, 2H), 3.56 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.86 (s, 4H), 2.63 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 1.80 (p, J = 7.4 Hz, 2H), 1.73-1.57 (m, 2H), 1.50-1.35 (m, 2H). C14H16N2O6 계산치 m/z = 308.10. 확인치 [M+H]+ = 309.13. Rf = 0.28 (50% EtOAc/Hex).
실시예 2.10: Fmoc - Phe - Lys ( Boc )-OH: ( R )-2(( R )-2(((9 H - 플루오렌 -9-일-메톡시) 카보닐아미노 )-3- 페닐프로판아미도 )-6-( tert - 뷰톡시카보닐아미노 ) 헥산산 ; Fmoc -페닐알라닌-라이신( Boc )-OH.
표제의 화합물은 문헌[Walker et al., Bioorganic Med Chem Lett, 2004, 14, 4323-4327]에 따라서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.28 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.89 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.71-7.57 (m, 2H), 7.41 (td, J = 7.6, 3.8 Hz, 2H), 7.33 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 7.30-7.23 (m, 4H), 7.19 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 6.79 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 4.37-4.24 (m, 1H), 4.24-4.07 (m, 5H), 3.02 (dd, J = 13.8, 3.5 Hz, 1H), 2.95-2.83 (m, 2H), 2.83-2.71 (m, 1H), 1.82-1.68 (m, 1H), 1.68-1.51 (m, 1H), 1.46-1.22 (m, 13H). C35H41N3O7 계산치 m/z = 615.29. 확인치 [M+H]+ = 616.27, [M-Boc+2H]+ = 516.16.
실시예 2.11: MT-OH: 3-(2-(2-(2-(2,5- 다이옥소 -2,5- 다이하이드로 -1 H -피롤-1-일) 에톡시 ) 에톡시 ) 에톡시 )프로판산.
표제의 화합물은 문헌[Warnecke, A., Kratz, F. Bioconjugate Chemistry 2003, 14, 377-387]에 따라서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로폼-d) δ 6.74 (s, 2H), 3.87-3.72 (m, 4H), 3.72-3.62 (m, 10H), 2.73-2.64 (m, 2H). C13H29NO7 계산치 m/z = 301.12. 확인치 [M+H]+ = 302.14.
실시예 2.12: MT- NHS : 2,5- 다이옥소피롤리딘 -1-일 3-(2-(2-(2-(2,5- 다이옥소 -2,5-다 이하이 드로-1H-피롤-1-일) 에톡시 ) 에톡시 ) 에톡시 ) 프로파노에이트 .
MT-OH(2.6g, 8.6 m㏖, 1.0당량)를 30㎖의 5:1 EtOAc/다이옥산 중 다이사이클로헥실카보다이이미드(1.87g, 9.06 m㏖, 1.05당량) 및 N-하이드록시석신이미드(1.04g, 6.06 m㏖, 1.05당량)로 실온에서 처리하였다. 36시간 후, 이 혼합물을 여과시키고, EtOAc로 세척하고, 잔사를 플래시 크로마토그래피에 의해 정제시켜 표제의 화합물(309㎎, 9.0%)을 맑은 오일로서 출발 물질(1.31g, 50% 회수됨)과 함께 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로폼-d) δ 6.72 (s, 2H), 3.87 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.74 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.70-3.58 (m, 10H), 2.93 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.86 (s, 4H), 1.32-1.19 (m, 2H). C17H22N2O9 계산치 m/z = 398.13. 확인치 [M+H]+ = 399.15, [M+Na]+ = 421.14. Rf = 0.59 (10% (5% AcOH/MeOH)/10% Hex/CH2Cl2).
실시예 2.13: Boc - HTI -286-OH: (6 S ,9 S ,12 S , E )-9- tert - 뷰틸 -12- 아이소프로필 -2,2,5,11,14- 펜타메틸 -4,7,10- 트라이옥소 -6-(2- 페닐프로판 -2-일)-3-옥사-5,8,11- 트라이아자펜타데크 -13-엔-15-오익산.
표제의 화합물은 문헌[Nieman et al. J. Nat. Prod. 2003, 66, 183-199]에 따라서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.57 (d, J = 7.3 Hz, 2H), 7.48 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 7.38 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 6.80 (dq, J = 9.8, 1.6 Hz, 1H), 5.08 (t, J = 10.2 Hz, 1H), 4.95 (s, 1H), 4.37 (s, 1H), 3.17 (s, 3H), 2.53 (s, 3H), 2.15-2.02 (m, 1H), 1.94 (d, J = 1.5 Hz, 3H), 1.50 (s, 3H), 1.41 (s, 3H), 1.10 (s, 9H), 0.93 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 0.92 (d, J = 6.6 Hz, 3H). C32H51N3O6 계산치 [M+H]+ 574.38. 확인치 [M+Na]+ 586.42, [M+H]+ 574.46, [M-Boc+2H]+ 474.39.
실시예 2.14: ( S , E )- N -(4-((( S )-2-(( S )-2-(6-(2,5- 다이옥소 -2,5- 다이하이드로 -1 H -피롤-1-일) 헥산아미도 )-3- 메틸부탄아미도 )-5- 유레이도펜탄아미도 ) 메틸 ) 페닐설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-(메 틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 (화합물 G)의 제조.
단계 1: 4-( 아지도메틸 ) 벤젠설폰아마이드 .
N,N-다이메틸폼아마이드(1㎖) 중 4-(브로모메틸)벤젠설폰아마이드(0.50g)의 교반된 용액에 아자이드화나트륨(0.20g)을 첨가하였다. 이 현탁액을 50℃로 3시간 동안 가열하고, 이 시점에서 용매를 감압 하에 제거하였다. 잔사를 에틸 아세테이트와 물 사이에 분배시켰다. 유기 상을 염수로 세척하고 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과 후 건조 상태로 농축시켜 표제의 화합물을 정치 시 고형화되는 시럽으로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, 클로로폼-d) δ 8.06-7.91 (m, 2H), 7.58-7.44 (m, 2H), 4.96 (s, 2H), 4.48 (s, 2H).
단계 2: 4-( 아미노메틸 ) 벤젠설폰아마이드 .
자석 교반기가 장착된 둥근 바닥 플라스크에 메탄올(10㎖) 중 4-(아지도메틸)벤젠설폰아마이드(0.354g)의 용액에 10% Pd/C(0.05g)를 첨가하였다. 이 플라스크를 감압에서 가스의 배기를 행하고 수소를 주입하였다. 이 배기 및 주입은 현탁액이 남은 시점에서 3회 반복하고 하룻밤 교반하였다. 16시간 후, TLC 분석은 출발 물질의 완전한 소비를 나타내었다. 이 반응물을 메탄올(40㎖)로 희석시키고, 셀라이트(Celite)(등록상표)를 첨가하고, 이 혼합물을 프릿 유리 깔때기를 통해 여과시켰다. 얻어진 용액을 건조 상태로 농축시켰다. 1H NMR은 물질이 정제 없이 추가의 사용을 위하여 이 단계에서 충분히 깨꿋한 것을 시사하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 7.77 (m, 2H), 7.53 (m, 2H), 5.76 (s, 2H), 3.76 (d, J = 11.9 Hz, 2H).
단계 3: 2,2,2- 트라이플루오로 - N -(4- 설파모일벤질 ) 아세트아마이드 .
표제의 화합물은 일반적 절차 1에 따라서 4-(아미노메틸)벤젠설폰아마이드와 TFAA의 반응에 의해 합성하였으며, 1H NMR 스펙트럼은 회전이성질체들에 의해 복잡하게 되었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 7.91-7.75 (m, 2H), 7.55-7.31 (m, 4H), 4.72 (m, 2H), 4.47 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 3.18 (s, 2H).
단계 4: tert - 뷰틸 ( S )-1-(( S )-1-((( S , E )-2,5- 다이메틸 -6-옥소-6-(4-((2,2,2- 트라이플루오로아세트아미도 ) 메틸 ) 페닐설폰아미도 ) 헥스 -4-엔-3-일)( 메틸 )아미노)-3,3- 다이메틸 -1- 옥소부탄 -2- 일아미노 )-3- 메틸 -1-옥소-3- 페닐부탄 -2- 일(메틸)카바메이트 ).
표제의 화합물은 Boc-HTI-286-OH로부터 일반적 절차 2에 따라서 합성하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ 8.11-7.99 (m, 2H), 7.50 (dd, J = 18.3, 7.9 Hz, 4H), 7.39-7.07 (m, 7H), 6.43 (d, = 9.0 Hz, 1H), 5.17 (s, 1H), 4.68 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 4.56 (s, 2H), 3.00 (d, J = 33.9 Hz, 3H), 2.88 (d, J = 7.6 Hz, 3H), 2.34 (s, 2H), 2.00 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 1.81 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.43 (s, 13H), 0.98-0.68 (m, 14H). C41H58F3N5O8S 계산치 [M+H]+ 838.40; 확인치 [M+Na]+ 860.48; [M+H]+ 838.46; [M-Boc+2H]+ 738.33.
단계 5: ( S , E )- N -(4-( 아미노메틸 ) 페닐설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3-트라이메틸-2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 tert-뷰틸 (S)-1-((S)-1-((S,E)-2,5-다이메틸-6-옥소-6-(4-((2,2,2-트라이플루오로아세트아미도)메틸)페닐설폰아미도)헥스-4-엔-3-일)(메틸)아미노)-3,3-다이메틸-1-옥소부탄-2-일아미노)-3-메틸-1-옥소-3-페닐부탄-2-일(메틸)카바메이트)로부터 일반적 절차 3 및 7에 따라서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ 8.13 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.68 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.59-7.41 (m, 4H), 7.37 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 6.51 (dd, J = 9.4, 1.7 Hz, 1H), 5.01 (t, J = 9.9 Hz, 1H), 4.37 (s, 1H), 4.24 (s, 2H), 3.17 (s, 3H), 2.51 (s, 3H), 2.12-1.96 (m, 1H), 1.84 (d, J = 1.5 Hz, 3H), 1.47 (s, 3H), 1.37 (s, 3H), 1.07 (s, 9H), 0.91 (m, 6H). C34H51N5O5S 계산치 [M+H]+ 642.38; 확인치 [M+H]+ 642.40.
단계 6: (9 H - 플루오렌 -9-일) 메틸 ( S )-1-(( S )-1-(4-( N -( S , E )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔오일 ) 설파모일 ) 벤질아미노 )-1-옥소-5- 유레이도펜탄 -2- 일아미노 )-3- 메틸 -1- 옥소부탄 -2- 일카바메이트 .
(S,E)-N-(4-(아미노메틸)페닐설포닐)-2,5-다이메틸-4-((S)-N,3,3-트라이메틸-2-((S)-3-메틸-2-(메틸아미노)-3-페닐부탄아미도)부탄아미도)헥스-2-엔아마이드 및 Fmoc-Val-Cit-OH로부터 DIPEA 및 AcOH에 의한 적은 오염과 함께 일반적 절차 4에 따라서 합성하였다. 재료는 후속 단계에서 "그대로" 사용되었다. C60H81N9O10S 계산치 [M+H]+ 1120.58; 확인치 [M+H]+ 1120.68.
단계 7: ( S , E )- N -(4-((( S )-2-(( S )-2-아미노-3- 메틸부탄아미도 )-5- 유레이도펜탄아미도 ) 메틸 ) 페닐설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 (9H-플루오렌-9-일)메틸 (S)-1-((S)-1-(4-(N-(S,E)-2,5-다이메틸-4-((S)-N,3,3-트라이메틸-2-((S)-3-메틸-2-(메틸아미노)-3-페닐부탄아미도)부탄아미도)헥스-2-엔오일)설파모일)벤질아미노)-1-옥소-5-유레이도펜탄-2-일아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일카바메이트에서 시작하여 일반적 절차 5에 따라서 합성하였다.
단계 8: ( S , E )- N -(4-((( S )-2-(( S )-2-(6-(2,5- 다이옥소 -2,5- 다이하이드로 -1 H -피롤-1-일) 헥산아미도 )-3- 메틸부탄아미도 )-5- 유레이도펜탄아미도 ) 메틸 ) 페닐설포닐 )-2,5-다이메틸-4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 (S,E)-N-(4-(((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-유레이도펜탄아미도)메틸)페닐설포닐)-2,5-다이메틸-4-((S)-N,3,3-트라이메틸-2-((S)-3-메틸-2-(메틸아미노)-3-페닐부탄아미도)부탄아미도)헥스-2-엔아마이드 및 MC-NHS로부터 일반적 절차 6에 따라서 합성하였다. 1H NMR (600 MHz, 메탄올-d4) δ 7.89 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.53-7.47 (m, 2H), 7.39 (t, J = 7.5 Hz, 4H), 7.28 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 6.82 (s, 2H), 6.67 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 5.03 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 4.51-4.35 (m, 3H), 4.18 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 3.65 (s, 1H), 3.50 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 3.31 (s, 3H), 3.20-3.01 (m, 5H), 2.35-2.18 (m, 5H), 2.08 (dq, J = 13.9, 6.9 Hz, 1H), 2.02-1.91 (m, 6H), 1.91-1.77 (m, 4H), 1.72 (dtd, J = 14.0, 9.3, 5.2 Hz, 1H), 1.66-1.40 (m, 10H), 1.37 (s, 3H), 1.34-1.24 (m, 3H), 1.03 (s, 9H), 0.96 (dd, J = 6.8, 4.0 Hz, 6H), 0.91-0.86 (m, 3H), 0.84 (d, J = 6.6 Hz, 3H). C55H82N10O11S 계산치 [M+H]+ 1091.59; 확인치 [M+H]+ 1091.67.
실시예 2.15: ( S , E )- N -(4-((( R )-6-아미노-2-(( R )-2-(6-(2,5- 다이옥소 -2,5- 다이하이드로 -1 H -피롤-1-일) 헥산아미도 )-3- 페닐프로판아미도 ) 헥산아미도 ) 메틸 ) 페닐설 포닐)-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 (화합물 H)의 제조.
단계 1: tert - 뷰틸 ( S )-1-(( S )-1-((( S , E )-6-(4-( 아미노메틸 ) 페닐설폰아미도 )-2,5-다이메틸-6- 옥소헥스 -4-엔-3-일)( 메틸 )아미노)-3,3- 다이메틸 -1- 옥소부탄 -2- 일아미노 )-3-메틸-1-옥소-3- 페닐부탄 -2- 일(메틸)카바메이트 .
표제의 화합물은 tert-뷰틸 (S)-1-((S)-1-((S,E)-2,5-다이메틸-6-옥소-6-(4-((2,2,2-트라이플루오로아세트아미도)메틸)페닐설폰아미도)헥스-4-엔-3-일)(메틸)아미노)-3,3-다이메틸-1-옥소부탄-2-일아미노)-3-메틸-1-옥소-3-페닐부탄-2-일(메틸)카바메이트)로부터 일반적 절차 3에 따라서 제조되었다. 특성 규명에 대해서 상기 참조.
단계 2: tert - 뷰틸 ( S )-1-((( S )-1-((( S , E )-6-(4-((5 R ,8 R )-5-벤질-8-(4-(( tert -뷰 톡시 카보닐)아미노) 뷰틸 )-1-(9 H - 플루오렌 -9-일)-3,6,9- 트라이옥소 -2-옥사-4,7,10-트 라이아 자운데칸-11-일) 페닐설폰아미도 )-2,5- 다이메틸 -6- 옥소헥스 -4-엔-3-일)( 메틸 )아미노)-3,3- 다이메틸 -1- 옥소부탄 -2-일)아미노)-3- 메틸 -1-옥소-3- 페닐부탄 -2- 일(메틸)카바메이트 (화합물 H-1)
표제의 화합물은 tert-뷰틸 (S)-1-(((S)-1-(((S,E)-6-(4-(아미노메틸)페닐설폰아미도)-2,5-다이메틸-6-옥소헥스-4-엔-3-일)(메틸)아미노)-3,3-다이메틸-1-옥소부탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소-3-페닐부탄-2-일(메틸)카바메이트 및 Fmoc-Phe-Lys(Boc)-OH로부터 일반적 절차 4에 따라서 제조하였다. C74H98N8O13S 계산치 m/z = 1338.70 amu; 확인치 [M+H]+ = 1339.86, [M+Na]+ = 1361.88, [M+K]+ = 1377.95, [M-Boc+2H]+ = 1239.83, [M-2Boc+3H]+ = 1139.72.
단계 3: tert - 뷰틸 ( S )-1-((( S )-1-((( S , E )-6-(4-((( R )-2-(( R )-2-아미노-3-페닐프로판아미도)-6-(( tert - 뷰톡시카보닐 )아미노) 헥산아미도 ) 메틸 ) 페닐설폰아미도 )-2,5-다이메틸-6- 옥소헥스 -4-엔-3-일)( 메틸 )아미노)-3,3- 다이메틸 -1- 옥소부탄 -2-일)아미노)-3- 메틸 -1-옥소-3- 페닐부탄 -2- 일(메틸)카바메이트(화합 물 H-2).
표제의 화합물은 화합물 H-1로부터 일반적 절차 5에 따라서 제조하였다. C59H88N8O11S 계산치 m/z = 1116.63 amu; 확인치 [M+H]+ = 1117.78, [M+Na]+ = 1139.80, [M-Boc+2H]+ = 1017.72, [M-2Boc+3H]+ = 917.64.
단계 4: tert - 뷰틸 ( S )-1-((( S )-1-((( S , E )-6-(4-((( R )-6-(( tert -뷰톡시카보닐)아미노)-2-(( R )-2-(6-(2,5- 다이옥소 -2,5- 다이하이드로 -1 H -피롤-1-일) 헥산아미도 )-3- 페닐프로판아미도 ) 헥산아미도 ) 메틸 ) 페닐설폰아미도 )-2,5- 다이메틸 -6- 옥소헥스 -4-엔-3-일)( 메틸 )아미노)-3,3- 다이메틸 -1- 옥소부탄 -2-일)아미노)-3- 메틸 -1-옥소-3- 페닐부탄 -2-일( 메틸)카바메이트(화합 물 H-3).
표제의 화합물은 화합물 H-2 및 MC-NHS로부터 일반적 절차 6에 따라서 제조하였다. C69H99N9O14S 계산치 m/z = 1309.70 amu; 확인치 [M+H]+ = 1310.89, [M+Na]+ = 1332.91, [M-Boc+2H]+ = 1210.86, [M-2Boc+3H]+ = 1110.77.
단계 5: ( S , E )- N -(4-((( R )-6-아미노-2-(( R )-2-(6-(2,5- 다이옥소 -2,5- 다이하이드로 -1 H -피롤-1-일) 헥산아미도 )-3- 페닐프로판아미도 ) 헥산아미도 ) 메틸 ) 페닐설포닐 )-2,5-다이메틸-4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 화합물 H-3으로부터 일반적 절차 7에 따라서 제조하였다. C59H83N9O10S 계산치 m/z = 1109.60 amu; 확인치 [M+H]+ = 1110.76, [M+Na]+ = 1132.75, [(M+2H)/2]2+ = 556.11.
실시예 2.16: ( S , E )- N -(4-((( S )-2-(( S )-2-(6-(2,5- 다이옥소 -2,5- 다이하이드로 -1 H -피롤-1-일) 헥산아미도 )-3- 메틸부탄아미도 )-5- 유레이도펜탄아미도 ) 메틸벤질 ) 설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-(메 틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 (화합물 I)의 제조.
단계 1: 2,2,2- 트라이플루오로 - N -(4-( 설파모일메틸 )벤질) 아세트아마이드 .
표제의 화합물은 상업적으로 입수 가능한 (4-(아미노메틸)페닐)메탄설폰아마이드 및 TFAA로부터 일반적 절차 1을 이용해서 합성하였다. 1H NMR (400 MHz, 아세톤-d 6) δ 9.05 (s, 1H), 7.48-7.40 (m, 2H), 7.40-7.32 (m, 2H), 6.17 (s, 1H), 4.56 (d, J = 6.1 Hz, 2H), 4.35 (s, 2H).
단계 2: ( S , E )-2,5- 다이메틸 - N -((4-((2,2,2- 트라이플루오로아세트아미도 ) 메틸 )벤질) 설포닐 )-4-(( S )-N,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-(( tert - 뷰톡시카보닐 )( 메틸 )아미노)-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드( 화합물 I-1).
표제의 화합물은 Boc-HTI-286-OH 및 2,2,2-트라이플루오로-N-(4-(설파모일메틸)벤질)아세트아마이드로부터 일반적 절차 2에 따라서 합성하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.49 (d, J = 7.7 Hz, 2H), 7.41-7.27 (m, 5H), 7.21 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 6.36 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 5.18 (s, 1H), 4.99 (s, 2H), 4.69 (s, 3H), 4.46 (s, 3H), 3.06-2.91 (m, 3H), 2.88 (d, J = 4.7 Hz, 3H), 2.04 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 1.88 (d, J = 13.5 Hz, 3H), 1.79-1.69 (m, 1H), 1.68-1.57 (m, 1H), 1.52 (d, J = 8.2 Hz, 3H), 1.44 (s, 9H), 1.23-1.12 (m, 1H), 0.97 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 0.90 (d, J = 6.0 Hz, 9H), 0.80 (d, J = 6.8 Hz, 3H). C42H60F3N5O8S 계산치 m/z = 851.41 amu; 확인치 [M+H]+ = 852.47, [M+Na]+ = 874.47, [M-Boc+2H]+ = 752.38.
단계 3: ( S , E )- N -((4-( 아미노메틸 )벤질) 설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3-트라이메틸-2-(( S )-3- 메틸 -2-(( tert - 뷰톡시카보닐 )( 메틸 )아미노)-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 (화합물 I-2).
표제의 화합물은 화합물 I-1로부터 일반적 절차 3에 따라서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.49 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 7.40-7.30 (m, 4H), 7.28 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.22 (q, J = 7.9 Hz, 1H), 6.48 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 5.19 (s, 1H), 5.07-4.94 (m, 2H), 4.72 (s, 1H), 4.48 (s, 2H), 3.77 (s, 2H), 3.05-2.82 (m, 3H), 1.92-1.82 (m, 4H), 1.58-1.32 (m, 16H), 0.97-0.85 (m, 12H), 0.85-0.74 (m, 4H). C40H61N5O7S 계산치 m/z = 755.43 amu; 확인치 [M+H]+ = 756.46, [M+Na]+ = 778.48, [M-Boc+2H]+ = 656.39.
단계 4: ( S , E )-N-((4-((( S )-2-(( S )-2-(((9 H - 플루오렌 -9-일) 메톡시 ) 카보닐 )아미노-3- 메틸부탄아미도 )-5- 유레이도펜탄아미도 ) 메틸 )벤질) 설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3-트라이메틸-2-(( S )-3- 메틸 -2-(( tert - 뷰톡시카보닐 )( 메틸 )아미노)-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드( 화합물 I-3).
표제의 화합물은 화합물 I-2 및 Fmoc-Val-Cit-OH로부터 일반적 절차 4에 따라서 제조하였다. C66H91N9O12S 계산치 m/z = 1233.65 amu; 확인치 [M+H]+ = 1234.82, [M+Na]+ = 1256.80, [M-Boc+2H]+ = 1134.73.
단계 5: ( S , E )- N -((4-((( S )-2-(( S )-2-아미노-3- 메틸부탄아미도 )-5- 유레이도펜탄아미도 )메틸)벤질) 설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-(( tert -뷰톡시카보닐)( 메틸 )아미노)-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드( 화합물 I-4).
표제의 화합물은 화합물 I-3으로부터 일반적 절차 5에 따라서 제조하였다. C51H81N9O10S 계산치 m/z = 1011.58 amu; 확인치 [M+H]+ = 1012.72, [M+Na]+ = 1034.68, [M-Boc+2H]+ = 912.66.
단계 6: ( S , E )- N -((4-((( S )-2-(( S )-2-((5-(2,5- 다이옥소 -2,5- 다이하이드로 -1 H -피롤-1-일) 펜틸 )아미노)-3- 메틸부탄아미도 )-5- 유레이도펜탄아미도 ) 메틸 )벤질) 설포닐 )-2,5-다이메틸-4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-(( tert - 뷰톡시카보닐 )( 메틸 )아미노)-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드( 화합물 I-5).
표제의 화합물은 화합물 I-4 및 MC-NHS로부터 일반적 절차 6에 따라서 제조하였다. C61H92N10O13S 계산치 m/z = 1204.66 amu; 확인치 [M+H]+ = 1205.84, [M+Na]+ 1227.82, [M-Boc+2H]+ = 1105.75.
단계 7: ( S , E )- N -(4-((( S )-2-(( S )-2-(6-(2,5- 다이옥소 -2,5- 다이하이드로 -1 H -피롤-1-일) 헥산아미도 )-3- 메틸부탄아미도 )-5- 유레이도펜탄아미도 ) 메틸벤질 ) 설포닐 )-2,5-다이메틸-4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 화합물 I-5로부터 일반적 절차 7에 따라서 제조하였다. C56H84N10O11S 계산치 m/z = 1104.60 amu; 확인치 [M+H]+ = 1105.78, [M+Na]+ =1127.76, [(M+2H)/2]2+ = 553.60.
실시예 2.17: ( S , E )- N -(4-((( R )-6-아미노-2-(( R )-2-(6-(2,5- 다이옥소 -2,5- 다이하이드로 -1 H -피롤-1-일) 헥산아미도 )-3- 페닐프로판아미도 ) 헥산아미도 ) 메틸 ) 벤질설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-(메 틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 (화합물 J)의 제조.
단계 1: ( S , E )- N -((4-((( R )-6-(( tert - 뷰톡시카보닐 )아미노)-2-(( R )-2-((((9 H - 플루오렌 -9-일)메톡시) 카보닐 )아미노)-3- 페닐프로판아미도 ) 헥산아미도 ) 메틸 )벤질) 설포닐 )-2,5-다이메틸-4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-(( tert - 뷰톡시카보닐 )( 메틸 )아미노)-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드( 화합물 J-1).
표제의 화합물은 화합물 I-2 및 Fmoc-Phe-Lys(Boc)-OH로부터 일반적 절차 4에 따라서 제조하였다. C75H100N8O13S 계산치 m/z = 1352.71 amu; 확인치 [M+H]+ = 1353.96, [M+Na]+ = 1375.83, [M-Boc+2H]+ = 1253.78, [M-2Boc+H]+ = 1153.70.
단계 2: ( S , E )- N -((4-((( R )-6-(( tert - 뷰톡시카보닐 )아미노)-2-(( R )-2-아미노-3- 페닐프로판아미도 ) 헥산아미도 ) 메틸 )벤질) 설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3-메틸-2-(( tert - 뷰톡시카보닐 )( 메틸 )아미노)-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드( 화합물 J-2).
표제의 화합물은 화합물 J-1로부터 일반적 절차 5에 따라서 제조하였다. C60H90N8O11S 계산치 m/z = 1130.64 amu; 확인치 [M+H]+ = 1131.75, [M+Na]+ = 1153.75, [M-Boc+2H]+ = 1031.68, [M-2Boc+3H]+ = 931.61.
단계 3: ( S , E )- N -(4-((( R )-6-(( tert - 뷰톡시카보닐 )아미노)-2-(( R )-2-(6-(2,5- 다이옥소 -2,5- 다이하이드로 -1 H -피롤-1-일) 헥산아미도 )-3-페닐프로판아미도) 헥산아미도 ) 메틸 ) 벤질설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3-트라이메틸-2-(( S )-3- 메틸 -2-(( tert - 뷰톡시카보닐 )( 메틸 )아미노)-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드( 화합물 J-3).
표제의 화합물은 화합물 J-2 및 MC-NHS로부터 일반적 절차 6에 따라서 제조하였다. C70H101N9O14S 계산치 m/z = 1323.72 amu; 확인치 [M+H]+ = 1324.96, [M+Na]+ = 1346.94, [M-Boc+2H]+ = 1224.87, [M-2Boc+3H]+ = 1124.79.
단계 4: ( S , E )- N -(4-((( R )-6-아미노-2-(( R )-2-(6-(2,5- 다이옥소 -2,5- 다이하이드로 -1 H -피롤-1-일) 헥산아미도 )-3- 페닐프로판아미도 ) 헥산아미도 ) 메틸 ) 벤질설포닐 )-2,5-다이메틸-4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드( 화합물 J).
표제의 화합물은 화합물 J-3으로부터 일반적 절차 7에 따라서 제조하였다. C60H85N9O10S 계산치 m/z = 1123.61 amu; 확인치 [M+H]+ = 1124.75, [M+Na]+ = 1146.77, [(M+2H)/2]2+ = 563.09.
실시예 2.18: ( S , E )- N -(4-(( R )-2-(( R )-2-(6-(2,5- 다이옥소 -2,5- 다이하이드로 -1 H -피롤-1-일) 헥산아미도 )-3- 메틸부탄아미도 )-5- 유레이도펜탄아미도 ) 벤질설포닐 )-2,5-다이메틸-4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아 미노)-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 (화합물 K)의 제조.
단계 1: 2,2,2- 트라이플루오로 - N -(4-( 설파모일메틸페닐 ) 아세트아마이드 .
표제의 화합물은 상업적으로 입수 가능한 (4-아미노페닐)메탄설폰아마이드 및 TFAA로부터 일반적 절차 1을 이용해서 합성하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.31 (s, 1H), 7.79-7.51 (m, 2H), 7.51-7.23 (m, 2H), 6.85 (s, 2H), 4.27 (s, 2H).
단계 2: ( S , E )-2,5- 다이메틸 - N -((4-(2,2,2-트라이플루오로아세트아미도)벤질) 설포닐 )-4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-(( tert -뷰톡시카보닐)( 메틸 )아미노)-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드( 화합물 K-1).
표제의 화합물은 Boc-HTI-286-OH 및 2,2,2-트라이플루오로-N-(4-(설파모일메틸)페닐)아세트아마이드로부터 일반적 절차 2에 따라서 합성하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로폼-d) δ 8.81 (s, 1H), 7.66-7.50 (m, 3H), 7.50-7.31 (m, 5H), 7.23 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 6.35 (dd, J = 9.2, 1.6 Hz, 1H), 6.22 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 5.34 (s, 1H), 5.05-4.80 (m, 3H), 4.72-4.40 (m, 2H), 2.97-2.74 (m, 3H), 2.60 (s, 3H), 1.95 (m, 4H), 1.68-1.35 (m, 15H), 1.02-0.63 (m, 15H). C41H58F3N5O8S 계산치 [M+H]+ 838.40; 확인치 [M+Na]+ 860.48; [M+H]+ 838.52; [M-Boc+2H]+ 738.39.
단계 3: ( S , E )-N-((4- 아미노벤질 ) 설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3-트라이메틸-2-(( S )-3- 메틸 -2-(( tert - 뷰톡시카보닐 )( 메틸 )아미노)-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드( 화합물 K-2).
표제의 화합물은 화합물 K-2로부터 일반적 절차 3에 따라서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로폼-d) δ 7.63-7.39 (m, 2H), 7.35 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 7.22 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 7.16-7.03 (m, 2H), 6.73-6.54 (m, 2H), 6.36 (dd, J = 9.2, 1.6 Hz, 1H), 6.07 (s, 1H), 5.00 (m, 2H), 4.60 (s, 3H), 2.98-2.75 (m, 6H), 1.97-1.71 (m, 4H), 1.68-1.34 (m, 15H), 0.97-0.63 (m, 15H). C39H59N5O7S 계산치 [M+H]+ 742.41; 확인치 [M+H]+ 742.47; [M-Boc+2H]+ 642.40.
단계 4: ( S , E )- N -((4-(( R )-2-(( R )-2-((((9 H - 플루오렌 -9-일) 메톡시 ) 카보닐 )아미노)-3- 메틸부탄아미도 )-5- 유레이도펜탄아미도 )벤질) 설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3-트라이메틸-2-(( S )-3- 메틸 -2-(( tert - 뷰톡시카보닐 )( 메틸 )아미노)-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드( 화합물 K-3).
표제의 화합물은 화합물 K-2 및 Fmoc-Val-Cit-OH로부터 일반적 절차 4에 따라서 제조하였다. C65H89N9O12S 계산치 [M+H]+ 1220.64; 확인치 [M+H]+ 1 220.97; [M-Boc+2H]+ 1120.87.
단계 5: ( S , E )- N -((4-(( R )-2-(( R )-2-아미노-3- 메틸부탄아미도 )-5- 유레이도펜탄아미도 )벤질) 설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-(( tert - 뷰톡시카보닐 )( 메틸 )아미노)-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드(화합물 K-4).
표제의 화합물은 화합물 K-3 일반적 절차 5에 따라서 제조하였다. C50H79N9O10S 계산치 [M+Na]+ 998.57; 확인치 [M+14]+ 998.75; [M-Boc+H]+ 898.69.
단계 6: ( S , E )- N -(4-(( R )-2-(( R )-2-(6-(2,5- 다이옥소 -2,5- 다이하이드로 -1 H -피롤-1-일) 헥산아미도 )-3- 메틸부탄아미도 )-5- 유레이도펜탄아미도 ) 벤질설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3-트라이메틸-2-(( S )-3- 메틸 -2-(( tert - 뷰톡시카보닐 )( 메틸 )아미노)-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 (화합물 K-5).
표제의 화합물은 일반적 절차 6에 따라서 화합물 K-4와 MC-NHS의 반응에 의해 제조하였다. C60H90N10O13S 계산치 [M+H]+ 1191.64; 확인치 [M+H]+ 1191.74; [M-Boc+2H]+ 1091.67.
단계 7: ( S , E )- N -(4-(( R )-2-(( R )-2-(6-(2,5- 다이옥소 -2,5- 다이하이드로 -1 H -피롤-1-일) 헥산아미도 )-3- 메틸부탄아미도 )-5- 유레이도펜탄아미도 ) 벤질설포닐 )-2,5-다이메틸-4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 화합물 K-5로부터 일반적 절차 7에 따라서 제조하였다. C55H82N10O11S 계산치 [M+H]+ 1091.59; 확인치 [M+H]+ 1091.67.
실시예 2.19: ( S , E )- N -((4-((14 R ,17 R )-1-(2,5- 다이옥소 -2,5- 다이하이드로 -1 H -피롤-1-일)-14- 아이소프로필 -12,15- 다이옥소 -17-(3- 유레이도프로필 )-3,6,9-트라 이옥사 -13,16-다이아자옥타데칸아미도)벤질) 설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3-메틸-2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아 미도) 헥스 -2- 엔아마이드 (화합물 L)의 제조.
단계 1: ( S , E )- N -((4-((14 R ,17 R )-1-(2,5- 다이옥소 -2,5- 다이하이드로 -1 H -피롤-1-일)-14- 아이소프로필 -12,15- 다이옥소 -17-(3- 유레이도프로필 )-3,6,9- 트라이옥사 -13,16- 다이아자옥타데칸아미도 )벤질) 설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-(( tert - 뷰톡시카보닐 )( 메틸 )아미노)-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드( 화합물 L-1).
CH2Cl2(0.5㎖) 중 화합물 K-4(40.0㎎, 0.040 m㏖, 1.0당량)의 교반된 용액에 MT-OH(18.1㎎, 0.060 m㏖, 1.5당량)를 첨가하였다. 다음에, 트라이에틸아민(0.017㎖, 0.120 m㏖, 3.0당량)에 이어서 무키야마 시약(Mukiyama's reagent)(15.4㎎, 0.060 m㏖, 1.5당량)을 첨가하였다. 3시간 후, 대략 1 당량의 산, 트라이에틸아민, 및 무키아먀 시약을 첨가하고, 30분 후에, HPLC은 출발 물질 화합물 K-4의 소진을 나타내었다. 이 반응 혼합물을 0.25㎖의 헥산으로 희석시키고, 플래시 크로마토그래피 상에 직접 장입하여 표제의 화합물(29.3㎎, 57%)을 맑은 황색 필름으로서 수득하였다. C63H96N10O16S 계산치 m/z = 1280.67. 확인치 [M+H]+ = 1281.94, [M+Na]+ = 1303.91, [M-Boc+2H]+ = 1181.86. Rf = 0.45 (10% (5% AcOH/MeOH)/10% Hex/CH2Cl2)
단계 2: ( S , E )- N -((4-((14 R ,17 R )-1-(2,5- 다이옥소 -2,5- 다이하이드로 -1 H -피롤-1-일)-14- 아이소프로필 -12,15- 다이옥소 -17-(3- 유레이도프로필 )-3,6,9- 트라이옥사 -13,16- 다이아자옥타데칸아미도 )벤질) 설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-(메틸아미노)-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드.
표제의 화합물은 일반적 절차 7에 따라서 화합물 L-1로부터 제조하였다. C58H88N10O14S 계산치 m/z for = 1180.62. 확인치 [M+H]+ = 1181.82, [(M+2H)/2]2+ = 591.60.
실시예 2.20: ( S , E )- N -(4-(( R )-6-아미노-2-(( R )-2-(6-(2,5- 다이옥소 -2,5- 다이하이드로 -1 H -피롤-1-일) 헥산아미도 )-3- 페닐프로판아미도 ) 헥산아미도 ) 벤질설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드( 화합물 M).
단계 1: ( S , E )- N -((4-(( R )-6-(( tert - 뷰톡시카보닐 )( 메틸 )아미노)-2-(( R )-2-((((9 H -플루오렌-9-일) 메톡시 ) 카보닐 )아미노)-3- 페닐프로판아미도 ) 헥산아미도 )벤질) 설포닐 )-2,5-다이메틸-4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-(( tert - 뷰톡시 카보닐)( 메틸 )아미노)-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 (화합물 M-1).
표제의 화합물은 화합물 K-2 및 Fmoc-Phe-Lys(Boc)-OH로부터 일반적 절차 4에 따라서 제조하였다. C74H98N8O13S 계산치 m/z = 1338.70 amu; 확인치 [M+H]+ = 1339.96, [M+Na]+ = 1361.92, [M-Boc+2H]+ = 1239.85, [M-2Boc+H]+ = 1139.77.
단계 2: ( S , E )- N -((4-(( R )-6-(( tert - 뷰톡시카보닐 )( 메틸 )아미노)-2-(( R )-2-아미노-3- 페닐프로판아미도 ) 헥산아미도 )벤질) 설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3-메틸-2-(( tert - 뷰톡시카보닐 )( 메틸 )아미노)-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드( 화합물 M-2).
표제의 화합물은 화합물 M-1로부터 일반적 절차 5에 따라서 제조하였다. C59H88N8O11S 계산치 m/z = 1116.63 amu; 확인치 [M+H]+ = 1117.78, [M+Na]+ = 1139.80, [M-Boc+H]+ = 1017.72, [M-2Boc+3H]+ = 917.64.
단계 3: ( S , E )- N -(4-(( R )-6-(( tert - 뷰톡시카보닐 )( 메틸 )아미노)-2-(( R )-2-(6-(2,5-다이옥소-2,5- 다이하이드로 -1 H -피롤-1-일) 헥산아미도 )-3- 페닐프로판아미도 ) 헥산아미도 )벤질설포닐)-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-(( tert - 뷰톡시카보닐 )(메틸)아미노)-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드( 화합물 M-3).
표제의 화합물은 화합물 M-2 및 MC-NHS로부터 일반적 절차 6에 따라서 제조하였다. C69H99N9O14S 계산치 m/z = 1309.70 amu; 확인치 [M+H]+ = 1310.93, [M+Na]+ = 1332.89, [M-Boc+2H]+ = 1210.84, [M-2Boc+3H]+ = 1110.76.
단계 4: ( S , E )- N -(4-(( R )-6-아미노-2-(( R )-2-(6-(2,5- 다이옥소 -2,5- 다이하이드로 -1 H -피롤-1-일) 헥산아미도 )-3- 페닐프로판아미도 ) 헥산아미도 ) 벤질설포닐 )-2,5-다이메틸-4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 화합물 M-3으로부터 일반적 절차 7에 따라서 제조하였다. C59H83N9O10S 계산치 m/z = 1109.60 amu; 확인치 [M+H]+ = 1110.71, [M+Na]+ = 1132.74, [(M+2H)/2]2+ = 556.18.
실시예 2.21: ( S , E )- N -(4-(( S )-2-(( S )-2-(6-(2,5- 다이옥소 -2,5- 다이하이드로 -1 H -피롤-1-일) 헥산아미도 )-3- 메틸부탄아미도 )-5- 유레이도펜탄아미도 ) 페닐설포닐 )-2,5-다이메틸-4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아 미노)-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 (화합물 N)의 제조.
단계 1: 2,2,2- 트라이플루오로 - N -(4- 설파모일페닐 ) 아세트아마이드 .
표제의 화합물은 상업적으로 입수 가능한 설파닐아마이드 및 TFAA로부터 일반적 절차 1을 이용해서 합성하였다.
단계 2: tert - 뷰틸 ( S )-1-(( S )-1-((( S , E )-2,5- 다이메틸 -6-옥소-6-(4-(2,2,2-트라이플루오로아세트아미도) 페닐설폰아미도 ) 헥스 -4-엔-3-일)( 메틸 )아미노)-3,3-다 이메틸 -1- 옥소부탄 -2- 일아미노 )-3- 메틸 -1-옥소-3- 페닐부탄 -2- 일(메틸)카바메이트 .
표제의 화합물은 Boc-HTI-286-OH 및 2,2,2-트라이플루오로-N-(4-설파모일페닐)아세트아마이드로부터 일반적 절차 2에 따라서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 8.14-8.03 (m, 2H), 7.98-7.83 (m, 3H), 7.47 (d, J = 7.6 Hz, 21-I), 7.32 (d, J = 7.6, 2H), 7.20 (q, J = 7.4, 6.2 Hz, 2H), 6.44 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 5.16 (s, 1H), 4.68 (d, J = 9.0 Hz, I H), 3.08-2.95 (m, 3H), 2.87 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 2.01 (m, 6H), 1.80 (d, J = 11.7 Hz, 3H), 1.62 (d, J = 6.4 Hz, 114), 1.52-1.36 (m, 14H), 1.26 (m, 1H), 0.98-0.72 (m, 15H). C40H56F3N5O8S 계산치 [M+H]+ 824.38; 확인치 [M+Na]+ 846.43; [M+H]+ 824.40; [M-Boc+2H]+ 724.34.
단계 3: tert - 뷰틸 ( S )-1-(( S )-1-((( S , E )-6-(4- 아미노페닐설폰아미도 )-2,5- 다이메틸 -6- 옥소헥스 -4-엔-3-일)( 메틸 )아미노)-3,3- 다이메틸 -1- 옥소부탄 -2- 일아미노 )-3- 메틸 -1-옥소-3- 페닐부탄 -2- 일(메틸)카바메이트(화합 물 N-1c).
표제의 화합물은 tert-뷰틸 (S)-1-((S)-1-(((S,E)-2,5-다이메틸-6-옥소-6-(4-(2,2,2-트라이플루오로아세트아미도)페닐설폰아미도)헥스-4-엔-3-일)(메틸)아미노)-3,3-다이메틸-1-옥소부탄-2-일아미노)-3-메틸-1-옥소-3-페닐부탄-2-일(메틸)카바메이트로부터 일반적 절차 3에 따라서 제조하였다.
단계 4: tert - 뷰틸 (( S )-1-((( S )-1-((( S , E )-6-(4-(( S )-2-(( S )-2-((((9 H - 플루오렌 -9-일) 메톡시 ) 카보닐 )아미노)-3- 메틸부탄아미도 )-5- 유레이도펜탄아미도 ) 페닐설폰아미도 )-2,5- 다이메틸 -6-옥소헥스-4-엔-3-일)( 메틸 )아미노)-3,3- 다이메틸 -1- 옥소부탄 -2-일)아미노)-3- 메틸 -1-옥소-3-페닐부탄-2-일)( 메틸 ) 카바메이트(화합 물 N-1).
tert-뷰틸 (S)-1-((S)-1-(((S,E)-6-(4-아미노페닐설폰아미도)-2,5-다이메틸-6-옥소헥스-4-엔-3-일)(메틸)아미노)-3,3-다이메틸-1-옥소부탄-2-일아미노)-3-메틸-1-옥소-3-페닐부탄-2-일(메틸)카바메이트 및 Fmoc-Val-Cit-OH로부터 일반적 절차 4에 따라서 합성하였다. C64H87N9O12S 계산치 [M+H]+ 1206.62; 확인치 [M+Na]+ 1230.81; [M+H]+ 1206.73; [M-Boc+2H]+ 1106.63.
단계 5: tert - 뷰틸 ( S )-1-(( S )-1-((( S , E )-6-(4-(( S )-2-(( S )-2-아미노-3- 메틸부탄아미도 )-5- 유레이도펜탄아미도 ) 페닐설폰아미도 )-2,5- 다이메틸 -6- 옥소헥스 -4-엔-3-일)( 메틸 )아미노)-3,3-다이메틸-1- 옥소부탄 -2- 일아미노 )-3- 메틸 -1-옥소-3- 페닐부탄 -2- 일(메틸)카바메이트 .
표제의 화합물은 화합물 N-1로부터 일반적 절차 5에 따라서 제조하였다. C49H77N9O10S 계산치 [M+H]+ 984.55; 확인치 [M+H]+ 984.63; [M-Boc+2H]+ 884.57.
단계 6: tert - 뷰틸 ( S )-1-(( S )-1-((( S , E )-6-(4-(( S )-2-(( S )-2-(6-(2,5- 다이옥소 -2,5- 다이하이드로 -1 H -피롤-1-일) 헥산아미도 )-3- 메틸부탄아미도 )-5-유레이도펜탄아미도) 페닐설폰아미도 )-2,5- 다이메틸 -6- 옥소헥스 -4-엔-3-일)(메틸)아미노)-3,3- 다이메틸 -1- 옥소부탄 -2- 일아미노 )-3- 메틸 -1-옥소-3- 페닐부탄 -2- 일(메틸)카바메이트 .
표제의 화합물은 tert-뷰틸 (S)-1-((S)-1-(((S,E)-6-(4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-유레이도펜탄아미도)페닐설폰아미도)-2,5-다이메틸-6-옥소헥스-4-엔-3-일)(메틸)아미노)-3,3-다이메틸-1-옥소부탄-2-일아미노)-3-메틸-1-옥소-3-페닐부탄-2-일(메틸)카바메이트 및 MC-NHS로부터 일반적 절차 6에 따라서 제조하였다. C59H88N10O13S 계산치 [M+H]+ 1177.63; 확인치 [M+Na]+ 1199.74; [M+H]+ 1177.85; [M-Boc+2H]+ 1077.68.
단계 7: ( S , E )- N -(4-(( S )-2-(( S )-2-(6-(2,5- 다이옥소 -2,5- 다이하이드로 -1 H -피롤-1-일) 헥산아미도 )-3- 메틸부탄아미도 )-5- 유레이도펜탄아미도 ) 페닐설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3-트라이메틸-2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 tert-뷰틸 (S)-1-((S)-1-(((S,E)-6-(4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-유레이도펜탄아미도)페닐설폰아미도)-2,5-다이메틸-6-옥소헥스-4-엔-3-일)(메틸)아미노)-3,3-다이메틸-1-옥소부탄-2-일아미노)-3-메틸-1-옥소-3-페닐부탄-2-일(메틸)카바메이트로부터 일반적 절차 7에 따라서 제조하였다. C54H80N10O11S 계산치 [M+H]+ 1077.63; 확인치 [M+H]+ 1077.68.
실시예 2.22: ( S , E )- N -((4-((14 R ,17 R )-1-(2,5- 다이옥소 -2,5- 다이하이드로 -1 H -피롤-1-일)-14- 아이소프로필 -12,15- 다이옥소 -17-(3- 유레이도프로필 )-3,6,9-트라 이옥사 -13,16-다이아자옥타데칸아미도) 페닐 ) 설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3-메틸-2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아 미도) 헥스 -2- 엔아마이드 (화합물 O)의 제조.
단계 1: tert - 뷰틸 (( S )-1-((( S )-1-((( S , E )-6-(4-((14 R ,17 R )-1-(2,5- 다이옥소 -2,5- 다이하이드로 -1 H -피롤-1-일)-14- 아이소프로필 -12,15- 다이옥소 -17-(3- 유레이도프로필 )-3,6,9-트라이옥사-13,16- 다이아자옥타데칸아미도 ) 페닐설폰아미도 )-2,5- 다이메틸 -6- 옥소헥스 -4-엔-3-일)( 메틸 )아미노)-3,3- 다이메틸 -1- 옥소부탄 -2-일)아미노)-3- 메틸 -1-옥소-3- 페닐부탄 -2-일)( 메틸 ) 카바메이트 .
표제의 화합물은 일반적 절차 6에 따라서 tert-뷰틸 (S)-1-((S)-1-(((S,E)-6-(4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-유레이도펜탄아미도)페닐설폰아미도)-2,5-다이메틸-6-옥소헥스-4-엔-3-일)(메틸)아미노)-3,3-다이메틸-1-옥소부탄-2-일아미노)-3-메틸-1-옥소-3-페닐부탄-2-일(메틸)카바메이트 및 MT-NHS로부터 제조하였다. C62H94N10O16S 계산치 m/z = 1266.66. 확인치 [M+H]+ = 1267.87 [M+Na]+ = 1289.86, [M-Boc+2H]+ = 1167.82. Rf = 0.49 (10% (5% AcOH/MeOH)/CH2Cl2).
단계 2: ( S , E )- N -((4-((14 R ,17 R )-1-(2,5- 다이옥소 -2,5- 다이하이드로 -1 H -피롤-1-일)-14- 아이소프로필 -12,15- 다이옥소 -17-(3- 유레이도프로필 )-3,6,9- 트라이옥사 -13,16- 다이아자옥타데칸아미도 ) 페닐 ) 설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-(메틸아미노)-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 일반적 절차 7에 따라서 tert-뷰틸 ((S)-1-(((S)-1-(((S,E)-6-(4-((14R,17R)-1-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)-14-아이소프로필-12,15-다이옥소-17-(3-유레이도프로필)-3,6,9-트라이옥사-13,16-다이아자옥타데칸아미도)페닐설폰아미도)-2,5-다이메틸-6-옥소헥스-4-엔-3-일)(메틸)아미노)-3,3-다이메틸-1-옥소부탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소-3-페닐부탄-2-일)(메틸)카바메이트로부터 제조하였다. C57H86N10O14S 계산치 m/z = 1166.60. 확인치 [M+H]+ = 1167.67, [(M+2H)/2]2+ = 584.57.
실시예 2.23: ( S , E )- N -(4-(1-(( R )-2-(( R )-2-(6-(2,5- 다이옥소 -2,5- 다이하이드로 -1 H -피롤-1-일) 헥산아미도 )-3- 메틸부탄아미도 )-5- 유레이도펜탄아미도 )사이클로 프로필 ) 벤질설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 )부탄아미도) 헥스 -2- 엔아마이드( 화합물 P)의 제조.
단계 1:4-( 트리틸티오메틸 ) 벤조나이트릴 .
THF(5㎖) 중 트리틸머캅탄(1.48g, 5.36 m㏖, 1.05당량)을 THF(5㎖) 중 수소화나트륨(광유 중 60% 분산액, 214㎎, 5.36 m㏖, 1.05당량)의 교반된 현탁액에 N2 하에 0℃에서 적가하였다. 15분 후, THF(5㎖) 중 4-(브로모메틸)벤조나이트릴(1.00g, 5.10 m㏖, 1.0당량)을 첨가하고, 이 반응물을 실온까지 정지시켰다. 1시간 후, TLC는 출발 물질의 완전한 전환을 나타내었다. 이 반응물을 포화 염화암모늄에 이어서, 일부 dH2O의 첨가에 의해 반응중지시켰다. 이 혼합물을 에터로 3회 추출하고, 포화 염수로 세척하고, 황산나트륨 위에서 건조시키고, 점성의 황색 오일로 농축시켰다. 플래시 크로마토그래피에 의한 정제에 의해 표제의 화합물(1.76g, 88%)을 밝은 백색 분말로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로폼-d) δ 7.52 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.47 (d, J = 7.1 Hz, 6H), 7.33 (t, J = 7.5 Hz, 6H), 7.26 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 7.19 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 3.40 (s, 2H). C27H21NS 계산치 m/z = 391.14. 확인치 [M+Na]+ = 414.13. Rf = 0.32 (10% EtOAc/Hex).
단계 2: 1-(4-( 트리틸티오메틸 ) 페닐 )사이클로 프로판아민 .
4-(트리틸티오메틸)벤조나이트릴(1.47g, 3.75 m㏖, 1.0당량)을 N2 분위기 하에 40㎖의 THF 중에 장입하고 나서, -78℃로 냉각시켰다. 이 용액에 Ti(O-iPr)4(1.21㎖, 4.13 m㏖, 1.1당량)를 첨가하고, 이어서 에틸마그네슘 브로마이드(3M, 2.75㎖, 8.26 m㏖, 2.2당량)를 5분에 걸쳐서 적가하였다. 건조-빙욕을 제거하고, 이 용액을 실온에 이르게 하였다. 실온에서 45분 후, BF3·Et2O(0.93㎖, 7.51 m㏖, 2.0당량)를 이제 매우 검은 반응 혼합물에 첨가하였다. 추가로 2.5시간 동안 교반 후, 이 반응물을 5㎖의 2M HCl에 의해 반응중지시키고 나서, 약 15㎖의 2M NaOH에 의해 강염기로 pH 조절을 행하였다. 약간의 물을 이 혼합물에 첨가하고 나서, 75㎖ EtOAc로 3회 추출하고, dH2O로 1회, 포화 염수로 1회 세척하고, 황산나트륨 위에서 건조시키고, 맑은 오일로 농축시켰다. 이 물질을 플래시 크로마토그래피에 의해 정제시켜 표제의 화합물(680㎎, 36%)을 맑은 오일로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로폼-d) δ 7.49 (d, J = 7.8 Hz, 6H), 7.33 (t, J = 7.7 Hz, 6H), 7.26 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 7.20 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.11 (d, J= 8.2 Hz, 2H), 3.32 (s, 2H), 1.06 (dd, J= 7.9, 5.0 Hz, 2H), 0.95 (dd, J = 7.9, 4.7 Hz, 2H). C29H27NS 계산치 m/z = 421.19. 확인치 [M+H]+ = 422.19. Rf = 0.21 (50% EtOAc/Hex).
단계 3: 2,2,2- 트라이플루오로 - N -(1-(4-(트리틸 티오메틸 ) 페닐 ) 사이클로프로필 ) 아세트아마이드 .
CH2Cl2 중 1-(4-(트리틸티오메틸)페닐)사이클로프로판아민(680㎎, 1.61 m㏖, 1.0당량)의 교반된 용액에 트라이플루오로아세트산 무수물(0.448㎖, 3.22 m㏖, 2.0당량) 및 트라이에틸아민(0.45㎖, 3.22 m㏖, 2.0당량)을 첨가하였다. 2시간 후, TLC 및 HPLC은 출발 물질의 완전한 전환을 나타내었다. 이 반응물을 3㎖의 NaHCO3의 첨가에 의해 반응중지시키고 나서 약간의 dH2O를 첨가하고, 이 혼합물을 CH2Cl2로 3회 추출하였다. 유기물을 합하여 포화 염수로 세척하고, 황산나트륨 위에서 건조시키고, 황색 발포물로 농축시켜, 표제의 화합물(715㎎, 86%)을 충분한 순도로 얻었으며, 이것은 다음 단계로 옮겼다. 1H NMR (400 MHz, 클로로폼-d) δ 7.48 (d, J = 7.7 Hz, 6H), 7.32 (t, J= 7.6 Hz, 6H), 7.25 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 7.19 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.10 (d, J= 8.3 Hz, 2H), 6.83 (s, 1H), 3.31 (s, 2H), 1.40-1.24 (m, 4H). C31H26F3NOS계산치 m/z = 517.17. 확인치 [M+Na]+ = 540.25. Rf = 0.71 (50% EtOAc/Hex).
단계 4: 2,2,2- 트라이플루오로 - N -(1-(4-( 머캅토메틸 ) 페닐 ) 사이클로프로필 ) 아세트아마이드 .
5㎖의 CH2Cl2 중 2,2,2-트라이플루오로-N-(1-(4-(트리틸티오메틸)페닐)사이클로프로필)아세트아마이드(715㎎, 1.38 m㏖, 1.0당량)를 2.5㎖의 TFA로 처리하였다. 1분 후, TIPSH(0.42㎖, 2.1 m㏖, 1.5당량)를 첨가하자, 황색이 흐려졌다. 30분 후, TLC는 반응이 완결된 것을 나타내었다. 이 혼합물을 농축시키고 나서, CH2Cl2로 1회 그리고 톨루엔으로 2회 공증발시켰다. 잔사를 플래시 크로마토그래피에 의해 정제시켜 표제의 화합물(261㎎, 69%)을 백색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로폼-d) δ 7.35 - 7.23 (m, 4H), 6.87 (s, 1H), 3.74 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 1.77 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 1.36 (s, 4H). Rf = 0.47 (20% EtOAc/Hex).
단계 5: 2,2,2- 트라이플루오로 - N -(1-(4-( 설파모일메틸 ) 페닐 ) 사이클로프로필 ) 아세트아마이드 .
아세토나이트릴 중 2,2,2-트라이플루오로-N-(1-(4-(머캅토메틸)페닐)사이클로프로필)아세트아마이드(220㎎, 0.799 m㏖, 1.0당량)의 교반된 용액에 dH2O(0.029㎖, 1.6 m㏖, 2.0당량), 테트라뷰틸염화암모늄(110㎎, 0.40 m㏖, 0.5당량), 이어서 N-클로로석신이미드(320㎎, 2.40 m㏖, 3.0당량)를 첨가하였다. 20분 후, TLC에 의해 출발 물질은 전혀 볼 수 없었다. 90분 후, 진한 NH4OH(0.18㎖, 3.2 m㏖, 4.0당량)를 첨가하였다. 10분 후, 1㎖의 NH4Cl을 첨가하고, 이 혼합물을 EtOAc로 3회 추출하였다. 유기물을 합하여 dH2O로 2회, 포화 염수로 1회 세척하고, 황산나트륨 위에서 건조시키고, 맑은 오일로 농축시켰다. 잔사를 플래시 크로마토그래피에 의해 정제시켜 표제의 화합물(192㎎, 74%)을 백색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 10.21 (s, 1H), 7.31 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.16 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 6.85 (s, 2H), 4.23 (s, 2H), 1.27 (dt, J = 6.1, 2.3 Hz, 4H). Rf = 0.26 (50% EtOAc/Hex).
단계 6: ( S , E )-2,5- 다이메틸 - N -((4-(1-(2,2,2- 트라이플루오로아세트아미도 ) 사이클로프로필 )벤질) 설포닐 )-4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-(( tert - 뷰톡시카보닐 )( 메틸 )아미노)-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드( 화합물 P-1).
표제의 화합물은 일반적 절차 2에 따라서 2,2,2-트라이플루오로-N-(1-(4-(설파모일메틸)페닐)사이클로프로필)아세트아마이드 및 Boc-HTI-286-OH로부터 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로폼-d) δ 8.54 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.36 (d, J = 7.1 Hz, 2H), 7.31-7.23 (m, 2H), 7.23-7.11 (m, 5H), 6.33 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 6.28-6.14 (m, 1H), 5.35 (s, 1H), 4.97 (t, J = 10.3 Hz, 1H), 4.84 (d, J = 13.7 Hz, 1H), 4.70-4.56 (m, 1H), 4.50 (d, = 8.9 Hz, 1H), 2.90 (s, 3H), 2.59 (s, 3H), 1.90 (s, 3H), 1.82-1.72 (m, 1H), 1.62-1.57 (m, 3H), 1.55 (s, 3H), 1.47 (s, 9H), 1.45-1.34 (m, 4H), 0.85 (d, J = 6.5 Hz, 2H), 0.82-0.67 (m, 12H). C44H62F3N5O8S 계산치 m/z = 877.43. 확인치 [M+Na]+ = 900.67. Rf = 0.34 (50% (2% AcOH/EtOAc)/Hex).
단계 7: ( S , E )- N -((4-(1- 아미노사이클로프로필 )벤질) 설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3-트라이메틸-2-(( S )-3- 메틸 -2-(( tert - 뷰톡시카보닐 )( 메틸 )아미노)-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드( 화합물 P-2).
표제의 화합물은 일반적 절차 3에 따라서 화합물 P-1로부터 MeOH/H2O 중에서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로폼-d) δ 7.62 -7.48 (m, 4H), 7.35 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.31-7.12 (m, 3H), 6.51 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 6.36-6.18 (m, 1H), 5.29 (s, 1H), 5.00-4.86 (m, 1H), 4.67 (s, 2H), 4.60 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 3.07-2.73 (m, 6H), 2.02-1.84 (m, 4H), 1.68-1.51 (m, 6H), 1.47 (s, 9H), 1.45-1.38 (m, 2H), 1.16 (s, 2H), 0.89-0.81 (m, 1211), 0.80 (d, J = 6.7 Hz, 3H). C42H63N5O7S 계산치 m/z = 781.44. 확인치 [M+H]+ = 782.63.
단계 8: ( S , E )- N -((4-(1-(( R )-2-(( R )-2-((((9 H - 플루오렌 -9-일) 메톡시 ) 카보닐 )아미노)-3- 메틸부탄아미도 )-5- 유레이도펜탄아미도 ) 사이클로프로필 )벤질) 설포닐 )-2,5-다이메틸-4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-(( tert - 뷰톡시카보닐 )( 메틸 )아미노)-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드( 화합물 P-3).
표제의 화합물은 일반적 절차 4에 따라서 화합물 P-2 및 Fmoc-Val-Cit-OH로부터 제조하였다. C68H93N9O12S 계산치 m/z = 1259.67. 확인치 [M+H]+ = 1261.11, [M+Na]+ = 1283.06, [M-Boc+2H]+ = 1160.97. Rf = 0.54 (5% MeOH/(2% AcOH/EtOAc)).
단계 9: ( S , E )- N -((4-(1-(( R )-2-(( R )-2-아미노-3- 메틸부탄아미도 )-5-유레이도펜탄아미도) 사이클로프로필 )벤질) 설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3-트라이메틸-2-(( S )-3- 메틸 -2-(( tert - 뷰톡시카보닐 )( 메틸 )아미노)-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드( 화합물 P-4).
표제의 화합물은 일반적 절차 5에 따라서 화합물 P-3로부터 제조하였다. C53H83N9O10S 계산치 m/z = 1037.60. 확인치 [M+H]+ = 1038.90, [M-Boc+2H]+ = 938.78. Rf ~ 0.1 (25% MeOH/CH2Cl2).
단계 10: ( S , E )- N -(4-(1-(( R )-2-(( R )-2-(6-(2,5- 다이옥소 -2,5- 다이하이드로 -1 H -피롤-1-일)헥산아미도)-3- 메틸부탄아미도 )-5- 유레이도펜탄아미도 ) 사이클로프로필 ) 벤질설포닐 )-2,5-다이메틸-4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-(( tert - 뷰톡시카보닐 )( 메틸 )아미노)-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드( 화합물 P-5).
표제의 화합물은 일반적 절차 6에 따라서 화합물 P-4 및 MC-NHS로부터 제조하였다. C63H94N10O13S 계산치 m/z = 1230.67. 확인치 [M+H]+ =1232.11, [M+Na]+ = 1254.09, [M-Boc+2H]+ = 1132.01. Rf= 0.44 (10% (5% AcOH/MeOH)/CH2Cl2).
단계 11: ( S , E )- N -(4-(1-(( R )-2-(( R )-2-(6-(2,5- 다이옥소 -2,5- 다이하이드로 -1 H -피롤-1-일)헥산아미도)-3- 메틸부탄아미도 )-5- 유레이도펜탄아미도 ) 사이클로프로필 ) 벤질설포닐 )-2,5-다이메틸-4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 일반적 절차 7에 따라서 화합물 P-5로부터 제조하였다. C58H86N10O11S 계산치 m/z = 1130.62. 확인치 [M+H]+ =1131.95, [(M+2H)/2]2+ = 566.69.
실시예 2.24: ( S , E )- N -(4-(1-(( R )-2-(( R )-2-(6-(2,5- 다이옥소 -2,5- 다이하이드로 -1 H -피롤-1-일) 헥산아미도 )-3- 메틸부탄아미도 )-5- 유레이도펜탄아미도 )사이클로 프로필 ) 페닐설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3-트라이메틸-2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드( 화합물 Q).
단계 1: 1- 페닐사이클로프로판아민 .
표제의 화합물은 문헌[Bertus, P., Szymoniak, J. J. Org. Chem., 2003, 68, 7133-7136]에 기재된 바와 같이 벤조나이트릴(1.0㎖, 9.7 m㏖)로부터 제조하여 270㎎(21%)을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로폼-d) δ 7.44-7.28 (m, 4H), 7.27-7.15 (m, 1H), 1.18-1.06 (m, 2H), 1.07-0.95 (m, 2H). Rf = 0.28 (5% (5% NH4OH/MeOH)/CH2Cl2).
단계 2: 2,2,2- 트라이플루오로 - N -(1- 페닐사이클로프로필 ) 아세트아마이드 .
다이옥산(5㎖) 중 1-페닐사이클로프로판아민(270㎎, 2.03 m㏖, 1.0당량)의 교반된 용액에 트라이플루오로아세트산 무수물(0.310㎖, 2.23 m㏖, 1.1당량)을 첨가하였다. 5분 후, TLC는 출발 물질의 완전한 전환을 나타내었다. 이 혼합물을 농축시키고 나서, CH2Cl2로 1회 그리고 톨루엔으로 1회 공증발시켜 표제의 화합물(453㎎, 97%)을 인편상(flaky) 백색 분말로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로폼-d) δ 7.47-7.15 (m, 5H), 6.88 (s, 1H), 1.65 (s, 4H). C11H10F3NO 계산치 m/z = 229.07. 확인치 [M+H]+ = 230.14. Rf = 0.82 (5% (5% NH4OH/MeOH)/CH2Cl2).
단계 3: 2,2,2- 트라이플루오로 - N -(1-(4- 설파모일페닐 ) 사이클로프로필 ) 아세트아마이드 .
교반된 클로로설폰산(0.78㎖, 11.8 m㏖, 6.0당량)에 0℃에서, 고체 2,2,2-트라이플루오로-N-(1-페닐사이클로프로필)아세트아마이드(450㎎, 1.96 m㏖, 1.0당량)를, 온도를 낮게 유지하면서 나누어서 첨가하였다. 첨가 완료 후, 이 혼합물을 50℃까지 가열하였다. 1분 후, 가스 방출이 정지되었고, 이 반응물을 냉각시켰다. 이 혼합물을 튀는 것을 염두에 두고 얼음의 비이커에 서서히 가하였다. 얼음에 남은 고체를 여과 제거하였다. 이 고체를 진공 중 건조시키고 나서 THF(4㎖) 중에 장입시켰다. 진한 NH4OH(0.44㎖, 7.85 m㏖, 4.0당량)를 첨가하자, 용액이 녹색-흑색으로 변하였다. 2분 후, TLC는 설포닐클로라이드 중간체의 완전한 소진을 나타내었다. 색이 흐려질 때까지 2M HCl을 첨가하고, 이어서 이 혼합물을 EtOAc로 3회 추출하고, 포화 NaHCO3로 1회, 포화 염수로 1회 세척하고, 황산나트륨 위에서 건조시키고, 인편상 고체로 농축시켰다. 조질의 물질을 플래시 크로마토그래피에 의해 정제시켜 표제의 화합물(235㎎, 39%)을 백색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 10.28 (s, 1H), 7.76 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.32 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.31 (s, 2H), 1.42-1.35 (m, 2H), 1.35-1.27 (m, 2H). C11H11F3N2O3S 계산치 m/z = 308.04. 확인치 [M+H]+ = 309.07. Rf = 0.27 (50% EtOAc/Hex).
단계 4: tert - 뷰틸 ( S )-1-(( S )-1-((( S , E )-2,5- 다이메틸 -6-옥소-6-(4-(1-(2,2,2- 트라이플루오로아세트아미도 ) 사이클로프로필 ) 페닐설폰아미도 ) 헥스 -4-엔-3-일)( 메틸 )아미노)-3,3- 다이메틸 -1- 옥소부탄 -2- 일아미노 )-3- 메틸 -1-옥소-3- 페닐부탄 -2- 일(메틸)카바메이트 .
표제의 화합물은 일반적 절차 2에 따라서 2,2,2-트라이플루오로-N-(1-(4-설파모일페닐)사이클로프로필)아세트아마이드 및 Boc-HTI-286-OH로부터 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로폼-d) δ 8.51 (s, 1H), 8.08 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.42-7.32 (m, 2H), 7.32-7.23 (m, 2H), 7.23-7.10 (m, 3H), 6.46 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 6.17-6.08 (m, 1H), 5.29 (s, 1H), 4.97-4.76 (m, 1H), 4.56 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 2.90 (d, J = 10.4 Hz, 6H), 2.01-1.79 (m, 4H), 1.62 (s, 3H), 1.53 (s, 3H), 1.49 (s, 4H), 1.46 (s, 9H), 0.86 (t, J = 6.9 Hz, 3H), 0.81 (d, = 6.8 Hz, 3H), 0.77 (s, 9H). C43H60F3N5O8S 계산치 m/z = 863.41. 확인치 [M+H]+ = 864.56, [M+Na]+ = 886.52, [M-Boc+2H]+ = 764.44. Rf = 0.34 (50% (2% AcOH/EtOAc)/Hex).
단계 5: tert - 뷰틸 ( S )-1-(( S )-1-((( S , E )-6-(4-(1-아미노사이클로프로필) 페닐설폰아미도 )-2,5- 다이메틸 -6- 옥소헥스 -4-엔-3-일)(메틸)아미노)-3,3- 다이메틸 -1- 옥소부탄 -2- 일아미노 )-3- 메틸 -1-옥소-3- 페닐부탄 -2- 일(메틸)카바메이트 .
표제의 화합물은 일반적 절차 3에 따라서 화합물 tert-뷰틸 (S)-1-((S)-1-(((S,E)-2,5-다이메틸-6-옥소-6-(4-(1-(2,2,2-트라이플루오로아세트아미도)사이클로프로필)페닐설폰아미도)헥스-4-엔-3-일)(메틸)아미노)-3,3-다이메틸-1-옥소부탄-2-일아미노)-3-메틸-1-옥소-3-페닐부탄-2-일(메틸)카바메이트로부터 다이옥산 중에서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ 7.97 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.52 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.51-7.43 (m, 2H), 7.32 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 7.20 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 6.55 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 5.17 (s, 1H), 5.03-4.94 (m, 1H), 4.70 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 2.94 (s, 3H), 2.88 (s, 3H), 1.94-1.89 (m, 1H), 1.80 (s, 3H), 1.53 (s, 3H), 1.51 (s, 3H), 1.43 (s, 9H), 1.40-1.37 (m, 2H), 1.36-1.32 (m, 2H), 0.87 (d, J = 6.0 Hz, 12H), 0.82-0.76 (m, 3H). C41H61N5O7S 계산치 m/z = 767.43. 확인치 [M+H]+ = 768.51 [M-Boc+2H]+ = 668.38. Rf = 0.32 (10% EtOAc/Hex).
단계 6: tert - 뷰틸 (( S )-1-((( S )-1-((( S , E )-6-(4-(1-(( R )-2-(( R )-2-((((9 H - 플루오렌 -9-일) 메톡시 ) 카보닐 )아미노)-3- 메틸부탄아미도 )-5- 유레이도펜탄아미도 ) 사이클로프로필 ) 페닐설폰아미도 )-2,5- 다이메틸 -6- 옥소헥스 -4-엔-3-일)( 메틸 )아미노)-3,3- 다이메틸 -1-옥소부탄-2-일)아미노)-3- 메틸 -1-옥소-3- 페닐부탄 -2-일)( 메틸 ) 카바메이트(화합 물 Q-1).
표제의 화합물은 일반적 절차 4에 따라서 tert-뷰틸 (S)-1-((S)-1-(((S,E)-6-(4-(1-아미노사이클로프로필)페닐설폰아미도)-2,5-다이메틸-6-옥소헥스-4-엔-3-일)(메틸)아미노)-3,3-다이메틸-1-옥소부탄-2-일아미노)-3-메틸-1-옥소-3-페닐부탄-2-일(메틸)카바메이트 및 Fmoc-Val-Cit-OH로부터 제조하였다. C67H91N9O12S 계산치 m/z = 1245.65. 확인치 [M+H]+ = 1246.89, [M+Na]+ = 1268.88, [M-Boc+2H]+ = 1146.82. Rf = 0.52 (5% MeOH/(2%AcOH/EtOAc)).
단계 7: tert - 뷰틸 ( S )-1-(( S )-1-((( S , E )-6-(4-(1-(( R )-2-(( R )-2-아미노-3- 메틸부탄아미도 )-5-유레이도펜탄아미도) 사이클로프로필 ) 페닐설폰아미도 )-2,5- 다이메틸 -6- 옥소헥스 -4-엔-3-일)( 메틸 )아미노)-3,3- 다이메틸 -1- 옥소부탄 -2- 일아미노 )-3- 메틸 -1-옥소-3- 페닐부탄 -2-일( 메틸 ) 카바메이트(화합 물 Q-2).
표제의 화합물은 일반적 절차 5에 따라서 화합물 Q-1로부터 제조하였다. C52H81N9O10S 계산치 m/z = 1023.58. 확인치 [M+H]+ = 1024.72, [M-Boc+2H]+ = 924.66.
단계 8: tert - 뷰틸 ( S )-1-(( S )-1-((( S , E )-6-(4-(1-(( R )-2-(( R )-2-(6-(2,5- 다이옥소 -2,5- 다이하이드로 -1 H -피롤-1-일) 헥산아미도 )-3- 메틸부탄아미도 )-5- 유레이도펜탄아미도 ) 사이클로프로필 ) 페닐설폰아미도 )-2,5- 다이메틸 -6- 옥소헥스 -4-엔-3-일)( 메틸 )아미노)-3,3- 다이메틸 -1- 옥소부탄 -2- 일아미노 )-3- 메틸 -1-옥소-3- 페닐부탄 -2- 일(메틸)카바메이트 .
표제의 화합물은 일반적 절차 6에 따라서 tert-뷰틸 (S)-1-((S)-1-(((S,E)-6-(4-(1-((R)-2-((R)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-유레이도펜탄아미도)사이클로프로필)페닐설폰아미도)-2,5-다이메틸-6-옥소헥스-4-엔-3-일)(메틸)아미노)-3,3-다이메틸-1-옥소부탄-2-일아미노)-3-메틸-1-옥소-3-페닐부탄-2-일(메틸)카바메이트 및 MC-NHS로부터 제조하였다. C62H92N10O13S 계산치 m/z = 1216.66. 확인치 [M+H]+ = 1217.89, [M+Na]+ = 1239.94, [M-Boc+2H]+ = 1117.82. Rf = 0.39 (10% (5% AcOH/MeOH)/CH2Cl2).
단계 9: ( S , E )- N -(4-(1-(( R )-2-(( R )-2-(6-(2,5- 다이옥소 -2,5- 다이하이드로 -1 H -피롤-1-일) 헥산아미도 )-3- 메틸부탄아미도 )-5- 유레이도펜탄아미도 ) 사이클로프로필 ) 페닐설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3-페닐부탄아미도) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 일반적 절차 7에 따라서 화합물 tert-뷰틸 (S)-1-((S)-1-(((S,E)-6-(4-(1-((R)-2-((R)-2-(6-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-유레이도펜탄아미도)사이클로프로필)페닐설폰아미도)-2,5-다이메틸-6-옥소헥스-4-엔-3-일)(메틸)아미노)-3,3-다이메틸-1-옥소부탄-2-일아미노)-3-메틸-1-옥소-3-페닐부탄-2-일(메틸)카바메이트로부터 제조하였다. C57H84N10O11S 계산치 m/z = 1116.60. 확인치 [M+H]+ = 1117.77, [(M+2H)/2]2+ = 559.56.
실시예 2.25: 2,5- 다이옥소피롤리딘 -1-일 6-(( R )-1-(( R )-1-(4-( N -(( S , E )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3-트라이메틸-2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔오일 ) 설파모일 ) 페닐아미노 )-1-옥소-5- 유레이도펜탄 -2- 일아미노 )-3- 메틸 -1- 옥소부탄 -2- 일아미노 )-6-옥소헥사노에이트(화합물 KK ).
단계 1: 2,2,2- 트라이플루오로 - N -(4- 설파모일페닐 ) 아세트아마이드.
표제의 화합물은 상업적으로 입수 가능한 설파닐아마이드 및 TFAA로부터 일반적 절차 1을 이용해서 합성하였다.
단계 2: tert - 뷰틸 ( S )-1-(( S )-1-((( S , E )-2,5- 다이메틸 -6-옥소-6-(4-(2,2,2- 트라이플루오로아세트아미도 ) 페닐설폰아미도 ) 헥스 -4-엔-3-일)( 메틸 )아미노)-3,3- 다이메틸 -1- 옥소부탄 -2- 일아미노 )-3- 메틸 -1-옥소-3- 페닐부탄 -2- 일(메틸)카바메이트 .
표제의 화합물은 Boc-HTI-286-OH 및 2,2,2-트라이플루오로-N-(4-설파모일페닐)아세트아마이드로부터 일반적 절차 2에 따라서 합성하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 8.14 - 8.03 (m, 2H), 7.98 - 7.83 (m, 3H), 7.47 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.32 (d, J = 7.6, 2H), 7.20 (q, J = 7.4, 6.2 Hz, 2H), 6.44 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 5.16 (s, 1H), 4.68 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 3.08 - 2.95 (m, 3H), 2.87 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 2.01 (m, 6H), 1.80 (d, J = 11.7 Hz, 3H), 1.62 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 1.52 - 1.36 (m, 14H), 1.26 (m, 1H), 0.98 - 0.72 (m, 15H). C40H56F3N5O8S 계산치 [M+H]+ 824.38; 확인치 [M+Na]+ 846.43; [M+H]+ 824.40; [M-Boc+H]+ 724.34. MS 확인치; 846.43 [M+Na]+; 824.40 [M+H]+; 724.34 [M-Boc+H]+.
단계 3: tert - 뷰틸 (( S )-1-((( S )-1-((( S , E )-6-(4-(( R )-2-(( R )-2-(( tert - 뷰톡시카보닐 )아미노)-3-메틸부탄아미도)-5- 유레이도펜탄아미도 ) 페닐설폰아미도 )-2,5- 다이메틸 -6- 옥소헥스 -4-엔-3-일)( 메틸 )아미노)-3,3- 다이메틸 -1- 옥소부탄 -2-일)아미노)-3- 메틸 -1-옥소-3- 페닐부탄 -2-일)( 메틸 ) 카바메이트 .
표제의 화합물은 tert-뷰틸 (S)-1-((S)-1-(((S,E)-2,5-다이메틸-6-옥소-6-(4-(2,2,2-트라이플루오로아세트아미도)페닐설폰아미도)헥스-4-엔-3-일)(메틸)아미노)-3,3-다이메틸-1-옥소부탄-2-일아미노)-3-메틸-1-옥소-3-페닐부탄-2-일(메틸)카바메이트로부터 합성되었는데 먼저 일반적 절차 4에 따라서 트라이플루오로아세트아닐라이드로부터 아닐린의 유리에 이어서, 일반적 절차 5에 따라서 Boc-Val-Cit-OH(미국 특허 공개 제2010/0233190호에 따라서 합성됨)와 커플링시켰다. 작은 샘플을 일반적 절차 9에 따라서 탈보호시켜 회전이성질체들을 분리하여 NMR 분석을 용이하게 하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 8.00 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 7.83 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 7.55 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.47 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 7.38 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 6.51 - 6.44 (m, 1H), 5.05 - 4.97 (m, 1H), 4.64 (dd, J = 9.3, 4.7 Hz, 1H), 4.35 (s, 1H), 3.77 - 3.70 (m, 1H), 3.30 - 3.20 (m, 1H), 3.21 - 3.08 (m, 4H), 2.51 (s, 3H), 2.30 - 2.20 (m, 1H), 2.13 - 1.99 (m, 1H), 1.99 - 1.71 (m, 4H), 1.72 - 1.54 (m, 2H), 1.47 (s, 3H), 1.37 (s, 3H), 1.16 - 0.99 (m, 15H), 0.91 (t, J = 6.2 Hz, 6H). C54H85N9O12S 계산치 [M+H]+ 1083.60; 확인치 [M+Na]+ 1106.8.
단계 4: 2,5- 다이옥소피롤리딘 -1-일 6-(( R )-1-(( R )-1-(4-( N -(( S , E )-2,5-다이메틸-4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부 탄아미도) 헥스 -2- 엔오일 ) 설파모일 ) 페닐아미노 )-1-옥소-5- 유레이도펜탄 -2- 일아미노 )-3-메틸-1- 옥소부탄 -2- 일아미노 )-6- 옥소헥사노에이트 .
다이클로로메탄(2㎖) 중 tert-뷰틸 ((S)-1-(((S)-1-(((S,E)-6-(4-((R)-2-((R)-2-((tert-뷰톡시카보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)-5-유레이도펜탄아미도)페닐설폰아미도)-2,5-다이메틸-6-옥소헥스-4-엔-3-일)(메틸)아미노)-3,3-다이메틸-1-옥소부탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소-3-페닐부탄-2-일)(메틸)카바메이트(0.05g, 0.046 m㏖)의 용액에 트라이플루오로아세트산(1㎖)을 첨가하였다. 이 반응을 HPLC-MS에 의해 모니터링하고, 완결 시, 감압 하에 증발시키고 톨루엔으로부터 2회 농축시켜 과잉의 TFA를 제거하였다. 얻어진 잔사를 N,N-다이메틸폼아마이드(2㎖)에 용해시켰다. 이 용액을 교반하고, 0℃로 냉각시키고 다이-아이소프로필에틸아민(0.008㎖, 1 당량) 및 비스-N-하이드록시석신이미딜 아디페이트(문헌[Mishra et al., Molecular Pharmaceutics, 10, (10), 3903-3912, 2013, 0.062g]에 따라 제조됨, 4 당량)를 첨가하였다. 이 반응물을 하룻밤 교반하고, 이 시점에서 HPLC-MS는 출발 펩타이드가 새로운 생성물로 전환된 것을 나타내었다. 이 반응물을 감압 하에 농축시키고, 아세톤에 용해시키고 나서, 얻어진 용액을 분취-규모 HPLC에 의해 정제시켜 동결건조 후 표제의 화합물(0.0145g)을 백색 분말로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, D2O 교환된 DMSO-d 6) δ 8.68 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.92 - 7.83 (m, 2H), 7.80 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.47 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.41 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.31 (dd, J = 8.3, 6.1 Hz, 1H), 6.49 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 4.86 (t, J = 9.9 Hz, 1H), 4.75 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 4.37 (d, J = 7.3 Hz, 2H), 4.17 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 3.10 - 2.87 (m, 5H), 2.80 (s, 4H), 2.71 - 2.60 (m, 2H), 2.37 - 2.11 (m, 5H), 2.01-1.92 (m, 2H), 1.69 (s, 3H), 1.64 - 1.58 (m, 5H), 1.36 (s, 5H), 1.22 (s, 3H), 0.95 (s, 9H), 0.81 (m, 12H). C54H80N10O13S 계산치 m/z = 1108.56 확인치 [M+H]+ = 1109.54.
실시예 3: T- L 1 - P 1 의 제조.
실시예 3.1: 일반적 절차 8 - 트라이플루오로아세트아마이드 배치.
1,4-다이옥산 중 아민의 교반된 용액에 트라이플루오로아세트산 무수물(1.1 당량)을 첨가하였다. 이 반응 혼합물을 현탁액으로부터 용액으로 전이시키고 재차 도로 현탁액이 되게 하였다. 반응의 진행은 완결에 대해서 TLC 및/또는 HPLC-MS에 의해 모니터링하였다. 일단 출발 물질이 완전히 소진되면, 이 반응물을 헥산 또는 다이에틸 에터로 희석시키고, 여과 후 브흐너 깔때기 상에서 여과시키고, 얻어진 고체를 감압 하에 건조시켜 순수한 트라이플루오로아세트아마이드를 제공하였다.
실시예 3.2: 일반적 절차 9 - DCC/ DMAP 매개 N -아실 설폰아마이드 형성.
다이클로로메탄 중 산의 교반된 용액에 설폰아마이드(1.3 당량, 필요에 따라 다이클로로메탄, N,N-다이메틸폼아마이드, 또는 이들의 혼합물 중)의 용액을 첨가하였다. 다이사이클로헥실카보다이이미드(1.2 당량)를 첨가하고 나서 N,N-다이메틸아미노피리딘(1.2 당량)을 첨가하였다. 반응 과정은 HPLC-MS에 의해 모니터링되었고(전형적으로 16시간), 과잉의 부산물이 다이에틸 에터의 첨가에 의해 석출될 수 있었다. 고체를 여과에 의해 제거하고, 1:1 다이에틸 에터/다이클로로메탄으로 세척하였다. 유기 층을 합하여 농축시키고, 잔사를 실리카겔 크로마토그래피 또는 임의로 분취-HPLC에 의해 정제시켜 목적으로 하는 N-아실 설폰아마이드를 제공하였다.
실시예 3.3: 일반적 절차 10 - 일반적 비누화 .
1,4-다이옥산 또는 메탄올 중 트라이플루오로아세트아마이드 또는 에스터 함유 작제물의 용액에 수산화리튬(10 당량) 및 물(10% v/v)를 첨가하였다. 이 반응물을 실온에서 교반하거나 또는 임의로 50℃까지 가열하였다. 반응 과정은 HPLC-MS에 의해 모니터링하였다. 완결 시, 휘발물을 감압 하에 제거하고 수성 층은 필요한 경우 다이클로로메탄 또는 에틸 아세테이트로 순차 세척하였다. 유기상을 수집하여, MgSO4 상에서 건조시키고 여과 후 농축시켰다. 반응 생성물은 "그대로" 사용하거나 필요한 경우 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제시켰다.
실시예 3.4: 일반적 절차 11 - HATU 매개 펩타이드 결합 형성.
최소량의 다이클로로메탄 또는 N,N-다이메틸폼아마이드 또는 이들의 혼합물 중 카복실산의 교반된 용액에 0℃에서 HATU(당량) 및 N,N-다이아이소프로필에틸아민(4 당량)을 첨가하였다. 교반을 짧은 유도 기간(5 내지 20분) 동안 지속하고, 이때 이 반응물에 다이클로로메탄 중 아민의 용액을 주입하였다. 이 반응물을 실온까지 가온시키고 HPLC-MS에 의해 진행을 모니터링하였다. 완결 시, 휘발물을 감압 하에 제거하고, 잔류 물질을 실리카겔 크로마토그래피 또는 역상 HPLC에 의해 정제시켜 적절한 순도의 아마이드를 제공하였다.
실시예 3.5: 일반적 절차 12 - Boc 기 제거.
다이클로로메탄 중 Boc-보호된 작제물의 용액에 10% v/v 트라이플루오로아세트산을 첨가하였다. 반응 과정은 HPLC-MS에 의해 모니터링하였다. 완결 시, 모든 휘발물을 감압 하에 제거하였다. 잔류 물질을 역상 HPLC, 실리카겔 크로마토그래피 또는 냉 메탄올/다이클로로메탄/다이에틸 에터의 혼합물로부터의 석출에 의해 정제시켰다.
실시예 3.6: 일반적 절차 13 - Pd- 촉매화 스즈키 크로스 커플링.
THF 중 아릴 브로마이드, 아릴(또는 알켄일) 보론산(1.5당량), Pd(OAc)2(10 ㏖%), 2-(다이-tert-뷰틸포스피노)바이페닐(20 ㏖%) 및 K3PO4(3당량)의 현탁액을 N2 하에 주위 온도에서 16시간 동안(또는 50℃에서 2시간 동안) 교반하였다. 얻어진 갈색 반응 혼합물을 에터로 희석시키고 1M NaOH(3×)로 세척하였다. 수성 세척액을 합하여 에터(2×)로 추출하였다. 유기물을 합하여, MgSO4 상에서 건조시키고 여과 후, 진공 중 농축시키고 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(MeOH/CH2Cl2 혼합물로 용리)를 통해 정제시켜 크로스-커플링 생성물을 제공하였다.
실시예 3.7: 일반적 절차 14 - Cu- 촉매화 울만 크로스 커플링( Ullman Cross Coupling)(메톡시 배치).
아릴 브로마이드, CuBr(20 ㏖%), NaOMe(20당량, MeOH 중 4.9M) 및 EtOAc(1.5당량)의 혼합물을 N2 하에 95℃에서 16시간 교반하였다. 얻어진 혼합물을 H2O로 희석시키고 냉(0℃) 교반 1M 시트르산에 부었다. 10분 동안 교반 후, 이 혼합물을 EtOAc(4×)로 추출하였다. 유기물을 합하고, H2O(2×) 및 염수(1×)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고 여과 후 진공 중 농축시켰다. 생성물은 추가의 정제 없이 다음 단계에서 사용되었다.
실시예 3.8: 일반적 절차 15 - 비닐족체 ( Vinylogous ) 아미노 에스터 합성.
문헌[Nieman J. A. et al. J. Nat. Prod. 2003, 66, 183-199]에 기재된 바와 같이 웨인레브(Weinreb) 아마이드 합성, 환원 및 이의 후속의 올레핀화를 위한 절차를 목적으로 하는 상업적으로 입수 가능한 아미노산에 대해서 변형 없이 이용하였다.
실시예 3.9: 일반적 절차 16 - Boc - t -류신-(Me)- 비닐족체 ) 아미노산의 확립.
비닐족체 아미노 에스터를 문헌[Nieman J. A. et al. J. Nat. Prod. 2003, 66, 183-199]에 기재된 절차에 따라서 변형 없이 탈보호시키고 Boc-t-류신에 커플링시켰다.
실시예 3.10: 일반적 절차 17 - 알킬 할라이드로부터 설폰아마이드 형성.
2:1 H2O/EtOH 중 목적으로 하는 알킬 할라이드의 현탁액에 아황산나트륨(1.2 당량)을 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 6 내지 24시간 동안 가열 환류시켰다. 이 반응물을 이어서 실온까지 냉각시키고, 용매를 감압에서 제거하여 에탄올을 제거하고, 생성물을 석출시켰다. 나트륨 알킬설포네이트를 여과시키고, 수집하여 진공 중 건조시켰다. 이들 고체를 이어서 다이클로로메탄 중에 현탁시키고, 교반하면서 오염화인(2 당량)을 첨가하였다. 얻어진 현탁액을 2시간 동안 가열 환류시키고 실온까지 냉각시켰다. 이 반응물을 이어서 0℃로 냉각시키고, 물을 적가 첨가하여 과잉의 오염화인을 소진시켰다. 이 혼합물을 분액 깔때기로 옮기고, 유기 상을 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고 여과 후 농축시켜 목적으로 하는 설포닐 클로라이드를 제공하였다. 이와 같이 해서 유도된 클로라이드를 이어서 THF 중에 용해시키고, 진한 수산화암모늄의 교반된 수용액에 0℃에서 적가하였다. 첨가 완료 후, 이 반응물을 감압 하에 농축시키고 물 및 에틸 아세테이트로 희석시켰다. 유기 상을 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고 여과 후 농축시켜 목적으로 하는 설폰아마이드를 추가의 사용을 위하여 충분한 순도로 제공하였다.
실시예 3.11: 일반적 절차 18 - 치환된 아릴 화합물로부터의 설폰아마이드 형성.
클로로폼 중 목적으로 하는 아릴 치환된 화합물의 교반된 혼합물에 클로로설폰산(4 당량)을 첨가하였다. 이 반응물을 70℃에서 1시간 동안 가열하고, 실온까지 냉각시켰다. 염화티오닐(2 당량)을 첨가하고, 이 반응물을 재차 70℃로 1시간 동안 가열하였다. 반응 용기 속의 내용물을 감압 하에 농축시켜 오일을 얻었고, 이것을 이어서 톨루엔에 2회 용해시키고 감압 하에 농축시켜 잔류 산을 제공하였다. 잔류 물질을 THF에 용해시키고, 농축되고 교반된 수산화암모늄의 용액에 0℃에서 적가하였다. 일단 첨가가 완료되면, 이 반응물을 감압 하에 농축시키고, 잔사를 에틸 아세테이트와 물 간에 분배시켰다. 유기 상을 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고 여과 후 농축시켜 목적으로 하는 페닐설폰아마이드를 추가의 사용을 위하여 충분한 순도로 제공하였다.
실시예 3.12: 일반적 절차 19 - 설파마 이드 형성.
목적으로 하는 설파마이드를 생성하기 위하여 이용된 절차는 문헌[Winum, J.-Y. et al., Org Lett, 2001, 3(14), 2241-2243]으로부터 적응시켰다.
실시예 3.13: 일반적 절차 20 - MC-VC- PABC -독소( L 1 - P 1 )의 제조
적절한 중간체 아민 또는 아닐린을 DMF(대략 90 mg/㎖)에 장입하고, 이것에 1-하이드록시벤조트라이아졸 수화물(0.3당량)을 첨가하고 나서, Firestone 등에 의한 미국 특허 제6214345호에 기재된 바와 같이 상업적으로 얻어진 MC-VC-PABC-PNP(4-((R)-2-((R)-2-(6-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-유레이도펜탄아미도)벤질 4-나이트로페닐 카보네이트)(1.3당량)를 첨가하고 나서 피리딘(25당량)을 첨가하였다. 이 반응물을 빛으로부터 보호하기 위하여 덮고, 주위 온도에서 24시간 내지 48시간 동안 교반하였다. 이 반응 혼합물을 농축시키고 조질물 상에 직접 플래시 크로마토그래피를 수행함으로써 이 혼합물을 정제시킬 수 있거나, 또는 대안적으로, DMSO를 이용해서 적절한 용적으로 희석시키고 분취 HPLC 상에 직접 주입하여 순수한 MC-VC-PABC-R 작제물을 제공할 수 있었다.
이하의 절차에서 사용되는 물질에 대한 모든 설폰아마이드 및 설파마이드 또는 전구체는 상업적으로 구입하고, 필요에 따라서, 이들이 사용하기에 적합하도록 조작하였다. 구체적으로, 일반적 절차 8, 17, 18 및 19는 이하에 달리 언급되지 않는 한 상업적으로 입수 가능한 출발 물질을 조작하는데 이용되었다. 본 명세서에 개시된 화합물을 함유하는 N-아실 설폰아마이드의 설파마이드 유사체는 본 명세서에서의 교시 및 당업계에서의 지식에 기초하여 당업자에 의해 합성될 수 있고, 본 발명의 범위 내에 포함된다.
실시예 3.14: 3- 브로모프로판 -1- 설폰아마이드 .
물(2.8㎖) 중 브로민화칼륨(1.904g)의 교반된 슬러리에 1,3-프로판설톤에 첨가하였다. 이 반응물을 1시간 동안 교반하면서 60℃로 가열하고, 실온까지 냉각시켰다. 에탄올(대략 45㎖)을 교반 하에 첨가하여, 석출물이 형성되었다. 이 현탁액을 부흐너 깔때기 상에서 여과시키고, 고체를 수집하여 고진공에서 밤새 건조시켜 칼륨 3-브로모프로판-1-설포네이트(2.90g, 12.0 m㏖)를 백색 고체로서 제공하였다. 상기 고체를 교반막대가 장비된 둥근 바닥 플라스크에 첨가하였다. 오염화인(3.22g, 1.3 당량)을 단일 주입으로 첨가하고, 플라스크를 온화하게 진탕시켜 고체를 혼합하였다. 가스가 형성된 것이 관찰되었고, 고체가 약간 용융되었다. 물 1점적을 이 혼합물에 첨가하자, 반응 혼합물의 더욱 상당한 용융에 따라서 격렬한 가스 방출이 관찰되었다. 이 플라스크를 70℃에서 오일욕에 침지시키고, 용융된 혼합물을 가능한 한 균일하게 되도록 조작하였다. 가열 10분 후, 플라스크를 실온까지 냉각시키고, 얼음(대략 60㎖) 및 다이에틸 에터(대략 80㎖)를 주입하고, 격렬하게 교반하였다. 2상 혼합물을 분액 깔때기로 옮기고, 유기 층을 염수로 세척하고, 이어서 MgSO4 상에서 건조시키고 여과 후 총 대략 25㎖의 용적으로 농축시켰다. 에터계 층을 100㎖ 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고 교반막대를 가하고 이 플라스크를 빙욕에서 0℃로 냉각시켰다. 암모니아(NH4OH, 28% 수성, 5㎖)를 격렬하게 교반하면서 첨가하고, 에멀전이 형성되었다. 에멀전이 침강된 후에, 염수(대략 20㎖) 및 다이에틸 에터(대략 20㎖)를 첨가하고, 이 혼합물을 분액 깔때기로 옮겼다. 유기 상을 분액시켜, MgSO4 상에서 건조시키고 농축시켜서 표제의 화합물을 뻑뻑한 시럽으로서 얻었으며, 이것은 정치 시 고형화되었다(0.782g). 1H NMR (400MHz, DMSO-d 6) δ (ppm) = 2.24 (p, 2H, J = 6.5 Hz), 3.12 (t, 2H, J = 6.5 Hz), 3.66 (t, 2H, J = 6.5 Hz), 6.91 (s, 2H).
실시예 3.15: 3-( 트리틸티오 )프로판-1- 설폰아마이드 .
N,N-다이메틸 폼아마이드 중 트라이페닐메탄티올(0.276g)의 교반된 용액에 0℃에서 수소화나트륨(0.04g, 1 당량)을 첨가하였다. 거품일기가 정지된 후, 3-브로모프로판-1-설폰아마이드(0.100g, 0.5 당량)를 고체로서 한번에 첨가하고, 이 반응물을 실온으로 가온시켰다. 반응의 진행은 HPLC-MS 및 TLC(헥산 중 40% EtOAc)에 의해 모니터링하였다. 2시간 후, 이 반응물을 물(대략 0.5㎖)로 반응중지시키고, 고진공에서 회전증발기 상에서 농축시켰다. 얻어진 오일을 에틸 아세테이트와 염수 간에 분배시키고, 분액 깔때기로 옮기고, 유기 상을 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고 농축 후, 플래시 크로마토그래피(헥산 중 5-50% EtOAc)에 의해 정제시켜 표제의 화합물(0.135g)을 백색 결정 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400MHz, CD3OD) δ (ppm) = 1.77-1.85 (m, 2H), 2.35 (t, 2H, J = 6.5 Hz), 2.95-2.99 (t, 2H, J = 6.5 Hz), 7.22-7.33 (m, 9H), 7.40-7.45 (m, 6H).
실시예 3.16: (6 S ,9 S ,12 S , E )-9- tert - 뷰틸 -12- 아이소프로필 -2,2,5,11,14- 펜타메틸 -4,7,10- 트라이옥소 -6-(2- 페닐프로판 -2-일)-3-옥사-5,8,11- 트라이아자펜타데크 -13-엔-15-오익산.
문헌[Nieman J. A. et al. J. Nat. Prod. 2003, 66, 183-199]에 기재된 바와 같이 합성하였다.
실시예 3.17 ( S , E )- N -(3- 머캅토프로필설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3-메틸-2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드( 화합물 A).
실시예 3.17은 절차 14에 트라이-아이소프로필실란(2 당량)의 혼입과 함께 일반적 절차 9 및 12에 따라서 실시예 3.15 및 3.16로부터 합성하였다. 1H NMR (400MHz, CD3OD) δ (ppm) = 0.88 (3H, d, J = 6.2 Hz), 0.94 (3H, d, J = 6.2 Hz), 1.08 (s, 9H), 1.40 (s, 3H), 1.48 (s, 3H), 1.94 (d, 3H, J = 1.29 Hz), 2.03-2.16 (m, 3H), 2.41 (s, 3H), 2.67 (t, 2H, J = 9.76 Hz), 3.16 (s, 3H), 3.46-3.50 (m, 2H), 4.08 (br s, 1H), 4.94 (s, 1H), 5.07 (t, 1H, J = 10.0 Hz), 6.59 (d, 1H, J = 9.5 Hz), 7.32-7.37 (m, 1H), 7.41-7.48 (m, 2H), 7.50-7.57 (m, 2H).
위에서 기재된 방법을 이용해서 이하의 유사한 화합물을 생성하였다.
실시예 3.18: 2,2'-다이설판 다이일다이에탄설폰아마이드 .
문헌[Lemaire, H. and Rieger, M, J. Org. Chem., 1961, 1330-1331]에 기재된 바와 같이 합성하였다.
실시예 3.19 ( S , E )- N -(2- 머캅토에틸설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드( 화합물 B).
다이클로로메탄(4㎖) 중 (6S,9S,12S,E)-9-tert-뷰틸-12-아이소프로필-2,2,5,11,14-펜타메틸-4,7,10-트라이옥소-6-(2-페닐프로판-2-일)-3-옥사-5,8,11-트라이아자펜타데크-13-엔-15-오익산(0.138g, 2.4 당량)의 용액에 2,2'-다이설판다이일다이에탄설폰아마이드(0.028g), 다이-아이소프로필카보다이이미드(0.044㎖, 2.4 당량) 및 N,N-다이메틸피리딘(0.034g, 2.8 당량)을 첨가하였다. 16시간 동안 교반을 지속하고, 이 시점에서 TLC 분석(70/30 CH2Cl2/헥산 중 5% MeOH(5% AcOH 함유))은 다이설판다이설폰아마이드의 완전한 소진을 나타내었다. 이 반응물을 헥산(대략 5㎖)으로 희석시키고, 여과시켜 고체를 제거하고, 농축시키고, 얻어진 오일을 플래시 크로마토그래피에 의해 정제시켰다. 크로마토그래로 정제된 물질을 이어서 다이클로로메탄(3㎖) 중에 용해시키고, 교반막대를 첨가하고 나서, 트라이플루오로아세트산(0.60㎖) 및 트라이-아이소프로필실란(0.20㎖)을 첨가하였다. 이 혼합물은 즉시 황색으로 되었고, 색이 5분에 걸쳐서 희미해졌으며, 물질의 목적으로 하는 생성물로의 전환은 HPLC-MS에 의해 모니터링하였다. 완전한 전환 시, 이 반응물을 건조 상태로 농축시키고, 잔사를 플래시 크로마토그래피(80/20 CH2Cl2/헥산 중 0-15% MeOH(5% AcOH 함유))에 의해 정제시켰다. HPLC-MS는 이 단리체가 유리 티올과 다이설파이드의 혼합물인 것을 나타내었다. 1H NMR (400MHz, CD3OD) δ (ppm) = 0.88 (3H, d, J = 6.2 Hz), 0.93 (3H, d, J = 6.2 Hz), 1.07 (s, 9H), 1.40 (s, 3H), 1.47 (s, 3H), 1.91-2.05 (m, 5H), 2.32 (s, 3H), 2.67 (t, 2H, J = 9.76 Hz), 3.07-3.18 (m, 5H), 3.52-3.59 (m, 2H), 3.85 (s, 1H), HH 4.08 (br s, 1H), 4.93 (s, 1H), 5.09 (t, 1H, J = 10.0 Hz), 6.76 (d, 1H, J = 9.5 Hz), 7.29-7.35 (m, 1H), 7.39-7.46 (m, 2H), 7.49-7.55 (m, 2H). C29H48N4O5S2 계산치 [M+H]+ = 598.15 amu; 확인치 m/z = 598.16.
실시예 3.20: 4-(트리틸 티오메틸 ) 벤젠설폰아마이드 .
N,N-다이메틸폼아마이드(3㎖) 중 트라이페닐메탄티올(0.276g, 2 당량)의 교반된 용액에 0℃에서 수소화나트륨(광유 중 60% w/w 분산액, 0.04g, 2 당량)을 첨가하였다. 기포 일기가 정지된 경우, 4-(브로모메틸)벤젠설폰아마이드(0.125g, 1 당량)를 한번에 첨가하고, 이 반응물을 실온으로 가온시켰다. 20분에 HPLC-MS는 전환이 완결된 것을 나타내었다. 이 반응물을 아세트산(대략 0.2㎖)으로 반응중지시키고, 진공 중 건조 상태로 농축시키고, 후속의 잔사를 에틸 아세테이트와 염수 간에 분배하였다. 유기 상을 분액시키고, MgSO4 상에서 건조시키고 여과 후 농축시키고 플래시 크로마토그래피(헥산 중 0-50% 에틸 아세테이트)에 의해 정제시켰다. 목적으로 하는 물질을 함유하는 분획을 건조 상태로 농축시켜 목적으로 하는 화합물을 무색 고체로서 얻었다(0.200g). 1H NMR (400MHz, DMSO-d 6) δ (ppm) = 3.38 (s, 2H), 7.24-7.35 (m, 7H), 7.36-7.44 (m, 12H), 7.67-7.73 (m, 2H).
실시예 3.21 ( S , E )- N -(4-( 머캅토메틸 ) 페닐설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3-트라이메틸-2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드( 화합물 C).
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 3.20으로부터 일반적 절차 9 및 12에 따라서 제조하였다. 1H NMR (400MHz, CD3OD) δ (ppm) = 0.88 (d, 3H, J = 6.2 Hz), 0.91 (d, 3H, J = 6.2 Hz), 1.06 (s, 9H), 1.38 (s, 3H), 1.47 (s, 3H), 1.86 (s, 3H), 1.99-2.05 (m, 1H), 2.41 (s, 3H), 2.67 (t, 2H, J = 9.76 Hz), 3.14 (s, 3H), 3.80 (s, 2H), HH 4.10 (br s, 1H), 4.93 (s, 1H), 5.00 (t, 1H, J = 10.0 Hz), 6.54 (d, 1H, J = 9.5 Hz), 7.30-7.51 (m, 5H), 7.52-7.58 (m, 2H), 7.90-7.97 (m, 2H). C34H50N4O5S2 계산치 [M+H]+ = 659.25 amu; 확인치 m/z = 659.37.
실시예 3.22 ( S , E )-2,5- 다이메틸 - N -토실-4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3-메틸-2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 (화합물 D).
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 토실설폰아마이드로부터 일반적 절차 9 및 12를 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400MHz, CD3OD) δ (ppm) = 0.88-0.94 (m, 6H), 1.06 (s, 9H), 1.35 (s, 3H), 1.45 (s, 3H), 1.86 (s, 3H), 2.02-2.11 (m, 1H), 2.44 (s, 3H), 2.51 (s, 3H), 3.17 (s, 3H), HH 4.35 (s, 1H), 4.89-4.99 (m, 2H), 6.48 (d, 1H, J = 9.5 Hz), 7.30-7.43 (m, 4H), 7.43-7.50 (m, 2H), 7.51-7.57 (m, 2H). C34H50N4O5S 계산치 [M+H]+ = 627.15 amu; 확인치 m/z = 627.31.
실시예 3.23 ( S , E )-2,5- 다이메틸 - N -( 메틸설포닐 )-4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드( 화합물 E).
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 메탄설폰아마이드로부터 일반적 절차 9 및 12를 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400MHz, CD3OD) δ (ppm) = 0.87-0.98 (m, 6H), 1.09 (s, 9H), 1.40 (s, 3H), 1.49 (s, 3H), 1.97 (s, 3H), 2.03-2.13 (m, 1H), 2.52 (s, 3H), 2.67 (t, 2H, J = 9.76 Hz), 3.18 (s, 3H), 3.31 (s, 3H), 4.38 (s, 1H), 4.94 (d, 1H, J = 8.2 Hz), 5.07 (t, 1H, J = 10.0 Hz), 6.54 (d, 1H, J = 9.5 Hz), 7.30-7.40 (m, 1H), 7.40-7.51 (m, 2H), 7.51-7.59 (m, 2H). C28H46N4O5S 계산치 [M+H]+ = 551.30 amu; 확인치 m/z = 551.34.
실시예 3.24 ( S , E )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔산 (화합물 F).
표제의 화합물은 문헌[Nieman et al., J. Nat. Prod. 2003, 66, 183-199]에 기재된 바와 같은 방법을 이용해서 합성하였다.
실시예 3.25: ( S , E )- N -( 메시틸설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-(메틸아미노)-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 메시틸설폰아마이드로부터 일반적 절차 9 및 12를 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.60-7.55 (m, 2H), 7.47 (m, 2H), 7.37 (m, 1H), 7.03 (s, 2H), 6.50 (d, J = 6 Hz, 1H), 5.06-4.91 (m, 3H), 4.34 (s, 1H), 3.17 (s, 3H), 2.68 (s, 6H), 2.51 (s, 3H), 2.31 (s, 3H), 2.07 (m, 6.6 Hz, 2H), 1.87 (s, 3H), 1.48 (s, 3H), 1.36 (s, 3H), 1.09-1.04 (m, J = 16.8 Hz, 10H), 0.92 (t, J = 6.3 Hz, 6H). C36H54N4O5S 계산치 m/z = 654.38 확인치 [M+H]+ = 655.03.
실시예 3.26: ( S , E )-2,5- 다이메틸 - N -(4-( 트라이플루오로메톡시 ) 페닐설포닐 )-4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 4-트라이플루오로메톡시페닐설폰아마이드로부터 일반적 절차 9 및 12를 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 8.16 (dd, J = 8.7, 1.4 Hz, 1H), 7.69-7.28 (m, 4H), 6.52 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 5.02-4.95 (m, 1H), 4.92 (s, 0H), 4.35 (s, 1H), 3.17 (s, 1H), 2.51 (s, 1H), 2.05 (ddd, J = 15.9, 10.9, 3.7 Hz, 1H), 1.87 (s, 1H), 1.47 (s, 1H), 1.36 (s, 1H), 1.07 (s, 4H), 0.91 (t, J = 6.1 Hz, 3H). C34H47F3N4O6S 계산치 m/z = 696.32 확인치 [M+H]+ = 697.26.
실시예 3.27: ( S , E )- N -( 벤질설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드( 도 7, 화합물 14).
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 벤질설폰아마이드로부터 일반적 절차 9 및 12를 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.56 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.47 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 7.38 (brs, 6H), 6.39 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 5.06 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 4.93 (s, 1H), 4.75 (s, 2H), 4.36 (s, 1H), 3.13 (s, 3H), 2.51 (s, 3H), 2.06-1.95 (m, 4H), 1.48 (s, 3H), 1.39 (s, 3H), 1.09 (s, 9H), 0.90 (t, J = 6.2 Hz, 6H). C34H47F3N4O6S 계산치 m/z = 626.35 확인치 [M+H]+ = 626.99.
실시예 3.28: ( S , E )-2,5- 다이메틸 - N -(2,4,6- 트라이아이소프로필페닐설포닐 )-4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 2,4,6-트라이-아이소프로필페닐설폰아마이드로부터 일반적 절차 9 및 12를 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.61-7.53 (m, 2H), 7.47 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 7.41-7.33 (m, 1H), 7.27 (s, 2H), 6.50 (dd, J = 9.6, 1.8 Hz, 1H), 5.05 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 4.92 (s, 1H), 4.43-4.26 (m, 3H), 3.16 (s, 3H), 2.94 (dd, J = 14.3, 7.4 Hz, 1H), 2.51 (s, 3H), 2.07-1.99 (m, 2H), 1.90 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.48 (s, 4H), 1.39 (s, 3H), 1.33-1.22 (m, 18H), 1.11 (s, 2H), 1.06 (s, 9H), 0.91 (t, J = 6.0 Hz, 7H). C42H66N4O5S 계산치 m/z = 738.48 확인치 [M+H]+ = 738.10.
실시예 3.29: ( S , E )- N -(4- tert - 뷰틸페닐설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3-메틸-2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 4-tert-뷰틸페닐설폰아마이드로부터 일반적 절차 9 및 12를 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.98 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.64 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.55 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.47 (t, J = 7.7 Hz, 3H), 7.37 (t, J = 7.1 Hz, 1H), 6.48 (dd, J = 9.6, 1.8 Hz, 1H), 4.99 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 4.92 (s, 1H), 4.35 (s, 1H), 3.16 (s, 3H), 2.51 (s, 3H), 1.87 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.47 (s, 3H), 1.38 (s, 10H), 1.06 (s, 9H), 0.91 (t, J = 6.2 Hz, 7H). C42H66N4O5S 계산치 m/z = 668.40 확인치 [M+H]+ = 669.28.
실시예 3.30: ( S , E )- N -(4- 클로로페닐설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 4-클로로페닐설폰아마이드로부터 일반적 절차 9 및 12를 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 8.03 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.60 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.57-7.51 (m, 2H), 7.47 (dd, J = 8.6, 6.9 Hz, 2H), 7.42-7.32 (m, 1H), 6.50 (dd, J = 9.2, 1.7 Hz, 1H), 4.96 (dd, J = 10.9, 9.1 Hz, 2H), 4.92 (s, 1H), 4.35 (s, 1H), 3.17 (s, 3H), 2.51 (s, 3H), 2.14-2.03 (m, 1H), 2.01 (s, 1H), 1.87 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.46 (s, 3H), 1.36 (s, 3H), 1.07 (s, 9H), 0.91 (dd, J = 6.5, 4.6 Hz, 7H). C33H47ClN4O5S 계산치 m/z = 646.30 확인치 [M+H]+ = 647.20.
실시예 3.31: ( S , E )- N -(3- 사이아노페닐설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3-트라이메틸-2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2-엔 아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 3-사이아노페닐설폰아마이드로부터 일반적 절차 9 및 12를 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 8.38 (s, 1H), 8.31 (dt, J = 8.0, 1.5 Hz, 1H), 8.02-7.92 (m, 1H), 7.75 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.48 (dd, J = 8.6, 6.9 Hz, 2H), 7.43-7.33 (m, 1H), 6.55 (dd, J = 9.3, 1.7 Hz, 1H), 4.93 (d, J = 5.4 Hz, 2H), 4.35 (s, 1H), 3.18 (s, 3H), 2.51 (s, 3H), 2.15-1.98 (m, 2H), 1.87 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.45 (s, 3H), 1.32 (s, 3H), 1.07 (s, 9H), 0.92 (dd, J = 6.6, 3.9 Hz, 7H). C34H47N5O5S 계산치 m/z = 637.33 확인치 [M+H]+ = 638.00
실시예 3.32: ( S , E )-2,5- 다이메틸 - N -(2- 나이트로페닐설포닐 )-4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3-메틸-2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 2-나이트로페닐설폰아마이드로부터 일반적 절차 9 및 12를 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 8.36-8.27 (m, 1H), 7.82 (dd, J = 5.9, 3.8 Hz, 3H), 7.61-7.51 (m, 2H), 7.47 (dd, J = 8.6, 6.9 Hz, 2H), 7.42-7.31 (m, 1H), 6.63 (dd, J = 9.5, 1.7 Hz, 1H), 5.03 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 4.93 (s, 1H), 4.36 (s, 1H), 3.18 (s, 3H), 2.51 (s, 3H), 2.12-2.01 (m, 1H), 1.88 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.48 (s, 3H), 1.37 (s, 3H), 1.06 (s, 9H), 0.97-0.86 (m, 6H). C34H47N5O5S 계산치 m/z = 657.32 확인치 [M+H]+ = 658.21.
실시예 3.33: ( S , E )- N -(4- 메톡시 -2- 나이트로페닐설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 2-나이트로-4-메톡시페닐설폰아마이드로부터 일반적 절차 9 및 12를 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 8.24 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 7.59-7.51 (m, 2H), 7.47 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.44-7.25 (m, 4H), 6.60 (dd, J = 9.2, 1.7 Hz, 1H), 5.03 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 4.93 (s, 1H), 4.36 (s, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.18 (s, 3H), 2.51 (s, 3H), 2.13-2.02 (m, 1H), 1.89 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.48 (s, 3H), 1.38 (s, 3H), 1.11 (s, 2H), 1.06 (s, 9H), 0.99-0.88 (m, 6H). C34H49N5O8S 계산치 m/z = 687.33 확인치 [M+H]+ = 689.23.
실시예 3.34: 4-( N -(( S , E )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-(메틸아미노)-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔오일 ) 설파모일 )-3- 나이트로벤즈아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 3-나이트로-4-설파모일벤즈아마이드로부터 일반적 절차 9 및 12를 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 8.35 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.22 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.59-7.51 (m, 2H), 7.47 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.37 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 6.70-6.57 (m, 1H), 5.04 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 4.94 (s, 1H), 4.37 (s, 1H), 3.17 (s, 3H), 2.52 (s, 3H), 2.05 (ddd, J = 10.3, 7.4, 5.5 Hz, 1H), 1.87 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.48 (s, 3H), 1.38 (s, 3H), 1.06 (s, 9H), 0.92 (dd, J = 14.7, 6.8 Hz, 6H). C34H48N6O8S 계산치 m/z = 700.33 확인치 [M+H]+ = 701.28.
실시예 3.35: ( S , E )- N -(4- 메톡시페닐설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드.
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 4-메톡시페닐설폰아마이드로부터 일반적 절차 9 및 12를 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.97 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 7.54 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.46 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.36 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.06 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 6.48 (dd, J = 9.3, 1.9 Hz, 1H), 4.97 (t, J = 9.9 Hz, 1H), 4.92 (s, 1H), 4.22 (s, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.15 (s, 3H), 2.46 (s, 3H), 2.10-1.99 (m, 2H), 1.86 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.46 (s, 3H), 1.36 (s, 3H), 1.06 (s, 9H), 0.94-0.84 (m, 6H). C34H50N4O6S 계산치 m/z = 642.35 확인치 [M+H]+ = 643.31.
실시예 3.36: ( S , E )-2,5- 다이메틸 - N -(4-(2,2,2-트라이플루오로아세트아미도) 페닐설포닐 )-4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드( 도 7, 화합물 23).
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 2,2,2-트라이플루오로-N-(4-설파모일페닐)아세트아마이드로부터 일반적 절차 9 및 12를 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 8.06 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 7.88 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 7.52 (d, J = 7.1 Hz, 2H), 7.49-7.40 (m, 3H), 7.35 (dd, J = 8.1, 6.1 Hz, 1H), 6.47 (dd, J = 9.2, 1.8 Hz, 1H), 4.33 (s, 1H), 3.15 (s, 3H), 2.48 (s, 3H), 2.13-1.96 (m, 2H), 1.85 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.43 (s, 3H), 1.33 (s, 3H), 1.04 (s, 9H), 0.89 (dd, J = 6.8, 4.7 Hz, 6H). C35H48F3N5O6S 계산치 m/z = 723.33 확인치 [M+H]+ = 724.08.
실시예 3.37: ( S , E )- N -(4- 아미노페닐설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드( 화합물 886).
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 2,2,2-트라이플루오로-N-(4-설파모일페닐)아세트아마이드로부터 일반적 절차 2, 3 및 7을 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.71 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.55 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.47 (d, J = 6.9 Hz, 2H), 7.37 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 6.67 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.44 (dd, J = 9.2, 1.6 Hz, 1H), 4.97 (t, J = 9.7 Hz, 1H), 4.92 (s, 1H), 4.36 (s, 1H), 3.16 (s, 3H), 2.51 (s, 3H), 2.16-2.00 (m, 1H), 1.87 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.46 (s, 3H), 1.37 (s, 3H), 1.07 (s, 9H), 0.92 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.91 (d, J = 6.3 Hz, 3H). C33H49N5O5S 계산치 m/z = 627.35 확인치 [M+H]+ = 628.35.
실시예 3.38: ( S , E )-2,5- 다이메틸 - N -( 페닐설포닐 )-4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 페닐설폰아마이드로부터 일반적 절차 2 및 7을 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 8.06-7.95 (m, 2H), 7.63-7.40 (m, 8H), 7.40-7.30 (m, 1H), 6.53 (dd, J = 9.3, 1.6 Hz, 1H), 5.05-4.95 (m, 1H), 4.22 (s, 1H), 3.14 (s, 3H), 2.45 (s, 3H), 2.09-1.95 (m, 1H), 1.85 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.46 (s, 3H), 1.36 (s, 3H), 1.06 (s, 9H), 0.89 (dd, J = 11.9, 6.5 Hz, 7H). C33H48N4O5S 계산치 m/z = 612.33 확인치 [M+H]+ = 613.06.
실시예 3.39: ( S , E )- N -( N -(2- 플루오로벤질 ) 설파모일 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3-트라이메틸-2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
2-플루오로벤질설파마이드는 2-플루오로벤질아민으로부터 일반적 절차 14에 따라서 제조하였고; 표제의 화합물은 실시예 3.16 및 2-플루오로벤질설파마이드로부터 일반적 절차 9 및 12를 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.63-7.41 (m, 6H), 7.41-7.26 (m, 3H), 7.14 (td, J = 7.5, 1.2 Hz, 1H), 7.07 (ddd, J = 9.5, 8.2, 1.1 Hz, 1H), 6.37 (dd, J = 9.4, 1.7 Hz, 1H), 5.07-4.97 (m, 1H), 4.37 (s, 1H), 4.33 (s, 2H), 3.15 (s, 3H), 2.51 (s, 3H), 2.10-1.97 (m, 1H), 1.83 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.49 (s, 3H), 1.39 (s, 3H), 1.09 (s, 9H), 0.97-0.84 (m, 6H). C34H50FN5O5S 계산치 m/z = 659.35 확인치 [M+H]+ = 660.28.
실시예 3.40: ( S , E )-2,5- 다이메틸 - N -(피리딘-1- 일설포닐 )-4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3-메틸-2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
피페리딘-1-설폰아마이드는 피페리딘 일반적 절차 14에 따라서 합성되었고; 표제의 화합물은 실시예 3.16 및 피페리딘-1-설폰아마이드로부터 일반적 절차 9 및 12를 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.55 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.47 (t, J = 7.6 Hz, 3H), 7.42-7.29 (m, 1H), 6.48 (dd, J = 9.7, 1.8 Hz, 1H), 5.05 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 4.39 (s, 1H), 3.18 (s, 3H), 2.52 (s, 3H), 2.07 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 1.96 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.61 (ddd, J = 20.0, 10.3, 5.4 Hz, 9H), 1.49 (s, 4H), 1.39 (s, 3H), 1.09 (s, 9H), 0.99-0.84 (m, 9H). C32H53N5O5S 계산치 m/z = 619.38 확인치 [M+H]+ = 620.38.
실시예 3.41: ( S , E )-2,5- 다이메틸 - N -(o- 톨릴설포닐 )-4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-(메틸아미노)-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 2-톨루엔설폰아마이드로부터 일반적 절차 9 및 12를 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 8.10 (dd, J = 8.0, 1.4 Hz, 1H), 7.60-7.33 (m, 11H), 6.52 (dd, J = 9.6, 1.7 Hz, 1H), 5.04-4.90 (m, 2H), 4.35 (s, 1H), 3.18 (s, 3H), 2.67 (s, 3H), 2.51 (s, 3H), 2.15-2.03 (m, 2H), 2.01 (s, 1H), 1.87 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.46 (s, 3H), 1.35 (s, 3H), 1.07 (s, 9H), 0.92 (t, J = 6.3 Hz, 6H). C34H50N4O5S 계산치 m/z = 626.35 확인치 [M+H]+ = 627.05.
실시예 3.42: ( S , E )- N -(4- 브로모페닐설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 4-브로모페닐설폰아마이드로부터 일반적 절차 9 및 12를 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.95 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.76 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.55 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.47 (dd, J = 8.6, 6.9 Hz, 2H), 7.41-7.29 (m, 1H), 6.51 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 4.35 (s, 1H), 3.16 (s, 3H), 2.50 (s, 3H), 2.06 (dt, J = 10.7, 6.3 Hz, 1H), 1.87 (s, 3H), 1.46 (s, 3H), 1.36 (s, 3H), 1.07 (s, 9H), 0.91 (dd, J = 6.9, 4.9 Hz, 8H). C33H47BrN4O5S 계산치 m/z = 690.25 확인치 [M+H]+ = 691.17, 693.18.
실시예 3.43: ( S , E )-2,5- 다이메틸 - N -(나프탈렌-2- 일설포닐 )-4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 2-나프틸설폰아마이드로부터 일반적 절차 9 및 12를 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 8.69-8.62 (m, 1H), 8.47 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 8.14-7.95 (m, 5H), 7.71 (dddd, J = 18.4, 8.2, 6.9, 1.4 Hz, 2H), 7.57-7.50 (m, 2H), 7.46 (dd, J = 8.6, 6.9 Hz, 2H), 7.42-7.33 (m, 1H), 6.50 (dd, J = 9.3, 1.5 Hz, 1H), 4.92-4.87 (m, 1H), 4.34 (s, 1H), 3.16 (s, 3H), 2.50 (s, 3H), 2.13-1.99 (m, 1H), 1.85 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.44 (s, 3H), 1.34 (s, 3H), 1.04 (s, 9H), 0.90 (dd, J = 6.6, 4.0 Hz, 6H). C37H50N4O5S 계산치 m/z = 662.35 확인치 [M+H]+ = 663.32.
실시예 3.44: 메틸 4-( N -(( S , E )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔오일 ) 설파모일 ) 벤조에이트 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 4-카복시메틸페닐설폰아마이드로부터 일반적 절차 9 및 12를 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 8.24-8.10 (m, 4H), 7.58-7.50 (m, 2H), 7.47 (dd, J = 8.6, 6.9 Hz, 2H), 7.41-7.33 (m, 1H), 6.52 (dd, J = 9.2, 1.6 Hz, 1H), 4.35 (s, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.18 (s, 3H), 2.50 (s, 3H), 2.15-2.00 (m, 1H), 1.86 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.45 (s, 3H), 1.35 (s, 3H), 1.07 (s, 9H), 0.91 (dd, J = 6.7, 3.8 Hz, 6H). C35H50N4O7S 계산치 m/z = 670.34 확인치 [M+H]+ = 671.10.
실시예 3.45: ( S , E )-2,5- 다이메틸 - N -( N -(2-( 트라이플루오로메틸 )벤질) 설파모일 )-4-(( S )- N ,3,3-트라이메틸-2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 2-트라이플루오로메틸벤질설폰아마이드로부터 일반적 절차 9 및 12를 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.78 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.74-7.67 (m, 1H), 7.64 (dd, J = 8.1, 6.7 Hz, 1H), 7.60-7.52 (m, 2H), 7.48 (dd, J = 8.5, 6.8 Hz, 4H), 7.42-7.33 (m, 1H), 6.48-6.40 (m, 1H), 5.11-5.02 (m, 1H), 4.45 (s, 2H), 4.37 (s, 1H), 3.17 (s, 3H), 2.52 (s, 3H), 2.11-1.99 (m, 2H), 1.92 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.49 (s, 3H), 1.40 (s, 3H), 1.09 (s, 9H), 0.92 (dd, J = 9.3, 6.7 Hz, 6H). C35H50F3N5O5S 계산치 m/z = 709.35 확인치 [M+H]+ = 710.02.
실시예 3.46: (4 S , E )- N -( 헥산 -2- 일설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3-메틸-2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 헥산-2-설폰아마이드로부터 일반적 절차 9 및 12를 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.56-7.48 (m, 2H), 7.42 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 7.31 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 6.58-6.50 (m, 1H), 5.05 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 4.92 (s, 1H), 3.84 (s, 1H), 3.65 (dt, J = 10.8, 4.3 Hz, 1H), 3.14 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.09-1.96 (m, 2H), 1.93 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.61-1.27 (m, 3H), 1.06 (s, 9H), 0.98-0.90 (m, 6H), 0.87 (d, J = 6.5 Hz, 3H). C33H56N4O5S 계산치 m/z = 620.40 확인치 [M+H]+ = 621.55.
실시예 3.47: ( S , E )- N -(2- 메톡시에틸설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 2-메톡시에탄설폰아마이드로부터 일반적 절차 9 및 12를 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.56 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.47 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.37 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 6.51 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 5.07 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 4.95 (s, 1H), 4.33 (s, 1H), 3.82 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 3.70 (q, J = 5.2 Hz, 2H), 3.18 (s, 3H), 2.50 (s, 3H), 2.18-2.00 (m, 1H), 1.95 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.49 (s, 3H), 1.39 (s, 3H), 1.09 (s, 9H), 0.93 (dd, J = 14.8, 6.6 Hz, 6H). C30H50N4O6S 계산치 m/z = 594.35 확인치 [M+H]+ = 595.44.
실시예 3.48: ( S , E )- N -( 사이클로펜틸메틸설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3-트라이메틸-2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 사이클로펜틸메탄설폰아마이드로부터 일반적 절차 9 및 12를 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.61-7.52 (m, 2H), 7.48 (dd, J = 8.6, 6.9 Hz, 2H), 7.38 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 6.54 (dd, J = 9.4, 1.7 Hz, 1H), 5.06 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 4.94 (s, 1H), 4.37 (s, 1H), 3.52 (dd, J = 7.0, 5.4 Hz, 3H), 3.18 (s, 3H), 2.52 (s, 3H), 2.35 (p, J = 8.1 Hz, 1H), 2.16-1.89 (m, 6H), 1.77-1.53 (m, 4H), 1.49 (s, 3H), 1.45-1.26 (m, 5H), 1.09 (s, 9H), 0.93 (dd, J = 11.3, 6.7 Hz, 6H). C33H54N4O5S 계산치 m/z = 618.38 확인치 [M+H]+ = 619.54.
실시예 3.49: ( S )- 메틸 2-( tert - 뷰톡시카보닐(메틸)아미노 )-3-(4- 사이아노페닐 )-3- 메틸뷰타노에이트 .
질소 욕 하에 실시예 3.51의 메틸 에스터(0.06g, 0.15m㏖), 트리스(다이벤질리덴아세톤)다이팔라듐(0)(0.014g, 0.015m㏖), 1,1'-비스(다이페닐포스피노)페로센(0.02g, 0.25 당량), 아세트산마그네슘(0.013g, 0.06m㏖), 아연가루(0.004g, 0.06m㏖) 및 사이안화아연(0.0264g, 0.225m㏖)의 혼합물에 N,N-다이메틸폼아마이드/물(0.8/0.08㎖)을 첨가하였다. 이 반응물에 질소 가스를 살포하고 나서, 바이알을 밀봉하고 105℃의 오일욕에 침지시켰다. 이 반응물을 하룻밤 교반하고, 실온까지 냉각시켰다. HPLC-MS 분석은 목적으로 하는 생성물로의 양호한 전환을 나타내었다. 이 반응물을 감압에서 농축시키고, CH2Cl2 중에 현탁시키고, 얻어진 현탁액을 실리카겔 크로마토그래피(헥산 중 15-25% EtOAc)에 의해 정제시켜 최종 화합물을 무색 오일로서 제공하였다(0.036g, 69%). 1H NMR (400 MHz, 클로로폼-d) δ 7.69-7.35 (m, 4H), 5.24 (s, 1H), 3.54 (s, 3H), 2.74 (s, 3H), 1.51 (s, 3H), 1.45-1.25 (m, 12H).
실시예 3.50: ( S )- 메틸 2-( tert - 뷰톡시카보닐(메틸)아미노 )-3-(4-(( tert - 뷰톡시카보닐아미노 ) 메틸 ) 페닐 )-3- 메틸뷰타노에이트 .
진탕기 용기 속에서 메탄올/아세트산(10:1, 9㎖) 중 벤조나이트릴(0.300g, 0.87m㏖)의 용액에 팔라듐 블랙을 첨가하였다. 플라스크에 수소 가스를 60psi에서 주입하고 상기 진탕기를 24시간 동안 온 상태로 전환시켰다. 그 시점에서, 용기를 H2 감압 하에 퍼지시켰다. 이 반응물을 메탄올로 희석시키고, 현탁액을 셀라이트(Celite)(등록상표) 패드를 통해서 여과시켰다. 여과액을 약간 황색 오일로 농축시키고 다이클로로메탄(5㎖)에 재용해시켰다. t-뷰틸 다이카보네이트(0.524g, 2.0 당량) 및 트라이에틸아민(0.846㎖, 5 당량)을 이 용액에 0℃에서 교반하면서 첨가하였다. 이 반응물을 3시간 동안 교반하고, 이때 HPLC-MS는 아민의 완전한 소진을 나타내었다. 이 반응물을 감압 하에 농축시키고, 실리카겔 크로마토그래피(헥산 중 다이에틸 에터, 15-30%)에 의해 정제시켜 표제의 화합물을 무색 오일로서 얻었다(0.232g, 60%). 1H NMR (400 MHz, 클로로폼-d) δ 7.38 (dd, J = 16.6, 8.0 Hz, 2H), 7.23 (d, J = 7.7 Hz, 2H), 5.27 (s, 1H), 4.31 (s, 2H), 3.61 (s, 3H), 2.78 (s, 3H), 1.50-1.61 (m, 6H), 1.47 (d, J = 15.2 Hz, 18H).
실시예 3.51: ( S )-3-(4- 브로모페닐 )-2-( tert - 뷰톡시카보닐(메틸)아미노 )-3- 메틸부탄산 .
1,4 다이옥산(4㎖) 중 (S)-메틸 3-(4-브로모페닐)-2-(tert-뷰톡시카보닐(메틸)아미노)-3-메틸뷰타노에이트(0.710g, 1.77m㏖)의 교반된 용액에 물(1㎖)(2㎖) 및 수산화리튬 1수화물(0.367g, 8.9m㏖)을 첨가하였다. 이 반응물을 50℃로 가열하고, 완결에 대해서 HPLC에 의해 모니터링하였다. 이 반응물을 실온까지 냉각시키고, 1M 시트르산으로 pH 3으로 산성화시키고, 감압 하에 거의 건조 상태로 농축시켰다. 잔사를 대략 20㎖의 에틸 아세테이트에 장입하고, 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고 여과 후 농축시켜 분석상 순수한 물질을 얻었으며, 이것은 추가의 조작 없이 사용되었다. 1H NMR (400 MHz, 클로로폼-d) δ 7.44 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.33 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 5.18 (s, 1H), 2.71 (s, 3H), 1.60-1.42 (m, 15H).
실시예 3.52: ( S )-3-(4- 아지도페닐 )-2-( tert - 뷰톡시카보닐(메틸)아미노 )-3- 메틸부탄산 .
자성 교반막대를 수용하고 있는 개방 압력 관에 실시예 3.51(0.690g, 1.8m㏖), 요오드화구리(I)(0.034g, 0.18m㏖), 아자이드화나트륨(0.350g, 5.4m㏖), N 1,N 2-다이메틸에탄-1,2-다이아민(0.029㎖, 0.27m㏖), 아스코르브산나트륨(0.036g, 0.18m㏖), 수산화나트륨(0.072g, 1.8m㏖), 에탄올(6㎖) 및 물(1㎖)을 첨가하였다. 이 현탁액에 질소 가스를 살포하고, 용개를 밀봉하고 나서 105℃에서 격렬하게 교반하면서 오일욕에 침지시켰다. 반응과정은 24시간에 걸쳐서 HPLC-MS에 의해 모니터링하였고, 이 시점에서 적은 출발 물질이 남아 있었다. 이 반응물을 에틸 아세테이트(대략 20㎖)로 희석시키고, 염수로 세척하였다. 수성 층을 대략 20㎖의 에틸 아세테이트로 2회 추출하였다. 유기 층을 합하여, MgSO4 상에서 건조시키고 여과 후 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카겔 크로마토그래피(헥산 중 20-65% EtOAc(2%v/v AcOH 함유))에 의해 정제시켜 표제의 화합물을 무색 오일로서 제공하였다(0.475g, 75%). 1H NMR (400 MHz, 클로로폼-d) δ 7.44 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.99 (dd, J = 9.0, 3.4 Hz, 2H), 5.24 (s, 1H), 2.71 (s, 3H), 1.63-1.38 (m, 18H).
실시예 3.53: ( S , E )- N -( 벤질설포닐 )-4-(( S )-2-(( S )-3-(4- 사이아노페닐 )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 ) 부탄아미도 )- N ,3,3- 트라이메틸부탄아미도 )-2,5- 다이메틸헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.49 및 (S,E)-4-((S)-2-아미노-N,3,3-트라이메틸부탄아미도)-N-(벤질설포닐)-2,5-다이메틸헥스-2-엔아마이드를 일반적 절차 10, 11 및 12를 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.83 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.73 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.38 (d, J = 2.6 Hz, 5H), 6.39 (dd, J = 9.2, 1.8 Hz, 1H), 5.04 (t, J = 10.1 Hz, 1H), 4.91 (s, 1H), 4.75 (s, 2H), 4.34 (s, 1H), 3.12 (s, 3H), 2.54 (s, 3H), 2.05-1.97 (m, 2H), 1.95 (d, J = 1.5 Hz, 3H), 1.52 (s, 3H), 1.41 (s, 3H), 1.09 (s, 9H), 0.91 (dd, J = 11.2, 4.8 Hz, 6H). C35H49N5O5S 계산치 m/z = 651.35 확인치 [M+H]+ = 652.4.
실시예 3.54: ( S , E )-4-(( S )-2-(( S )-3-(4-( 아미노메틸 ) 페닐 )-3- 메틸 -2-(메틸아미노) 부탄아미도 )- N ,3,3- 트라이메틸부탄아미도 )- N -( 벤질설포닐 )-2,5-다이메틸헥스-2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.50 및 (S,E)-4-((S)-2-아미노-N,3,3-트라이메틸부탄아미도)-N-(벤질설포닐)-2,5-다이메틸헥스-2-엔아마이드로부터 일반적 절차 10, 11 및 12를 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.63 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 7.54 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.49-7.43 (m, 3H), 7.39 (m, 2H), 6.39 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 5.05-4.97 (m, 1H), 4.75 (s, 2H), 4.35 (s, 3H), 4.16 (s, 2H), 3.14 (s, 3H), 2.54 (s, 3H), 2.03 (m, 1H), 1.95 (s, 3H), 1.51 (s, 3H), 1.39 (s, 3H), 1.31 (s, 3H), 1.09 (s, 9H), 0.98-0.81 (m, 6H).
실시예 3.55: ( S , E )-4-(( S )-2-(( S )-3-(4- 아지도페닐 )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 ) 부탄아미도 )- N ,3,3- 트라이메틸부탄아미도 )- N -( 벤질설포닐 )-2,5- 다이메틸헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.52 및 (S,E)-4-((S)-2-아미노-N,3,3-트라이메틸부탄아미도)-N-(벤질설포닐)-2,5-다이메틸헥스-2-엔아마이드로부터 일반적 절차 11 및 12를 이용해서 제조하였다. C34H49N7O5S 계산치 m/z = 667.35 amu; 확인치 [M+H]+ = 668.4.
실시예 3.56: ( S , E )-4-(( S )-2-(( S )-3-(4- 아미노페닐 )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 ) 부탄아미도 )- N ,3,3- 트라이메틸부탄아미도 )- N -( 벤질설포닐 )-2,5- 다이메틸헥스 -2- 엔아마이드 .
에탄올(1.6㎖) 및 물(0.5㎖) 중 Boc 보호된 실시예 3.55(0.035g, 0.046m㏖)의 교반된 용액에 아연가루(0.015g, 0.23 m㏖) 및 염화암모늄(0.025g, 0.46m㏖)을 첨가하였다. 1시간 후, HPLC-MS는 출발 물질의 완전한 소진을 나타내었다. 이 반응물을 수산화암모늄(대략 0.1㎖)으로 반응중지시키고, 에틸 아세테이트(5㎖)로 희석시켰다. 이 반응물을 여과시키고, 고체를 에틸 아세테이트(5㎖)로 세척하고, 2상 여과액을 분액 깔때기로 옮겼다. 수성 상을 에틸 아세테이트(5㎖)로 2회 세척하고, 유기 상을 합하여, 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고 여과 후 농축시켰다. 이 반응 생성물을 실리카겔 크로마토그래피(CH2Cl2 중 5-15% MeOH)에 의해 정제시켜 Boc 보호된 중간체를 무색 유리로서 제공하였다(0.027g, 66%). 중간체를 일반적 절차 12에 따라서 탈보호시켜 표제의 화합물을 제공하였다. C34H51N5O5S 계산치 m/z = 641.36 amu; 확인치 [M+H]+ = 642.4.
실시예 3.57: ( S , E )- N -( 사이클로헥실설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 사이클로헥실설폰아마이드로부터 일반적 절차 9 및 12를 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.61-7.52 (m, 2H), 7.47 (dd, J = 8.6, 6.9 Hz, 2H), 7.36 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 6.61-6.50 (m, 1H), 5.11-4.99 (m, 1H), 4.94 (s, 1H), 4.28 (s, 1H), 3.59-3.51 (m, 1H), 3.18 (s, 3H), 2.48 (s, 3H), 2.20-2.00 (m, 4H), 1.97-1.87 (m, 6H), 1.78-1.69 (m, 1H), 1.60 (td, J = 14.2, 10.9 Hz, 2H), 1.48 (s, 3H), 1.44-1.23 (m, 6H), 1.09 (s, 9H), 0.93 (dd, J = 13.7, 6.6 Hz, 7H). C33H54N4O5S 계산치 m/z = 618.38 확인치 [M+H]+ = 619.47.
실시예 3.58: ( S , E )-2,5- 다이메틸 - N -(피리딘-3- 일메틸설포닐 )-4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3-메틸-2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 피리딘-3-일메탄설폰아마이드로부터 일반적 절차 9 및 12를 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 8.55 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 8.48 (dd, J = 5.0, 1.6 Hz, 1H), 7.89 (d, J = 8.0 Hz, 0H), 7.55 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.50-7.39 (m, 2H), 7.35 (s, 1H), 6.52 (dd, J = 9.6, 2.0 Hz, 1H), 5.05 (s, 0H), 4.94 (s, 1H), 4.64 (s, 2H), 4.19 (s, 1H), 3.11 (s, 3H), 2.45 (s, 3H), 1.91 (d, J = 1.5 Hz, 3H), 1.48 (s, 3H), 1.39 (s, 3H), 1.07 (s, 8H), 0.89 (dd, J = 15.1, 6.5 Hz, 6H). C33H54N4O5S 계산치 m/z = 627.35 확인치 [M+H]+ = 628.35.
실시예 3.59: 4-( N -(( S , E )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-(메틸아미노)-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔오일 ) 설파모일 ) 벤조산 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 메틸 4-설파모일벤조에이트로부터 일반적 절차 9, 10 및 12를 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 8.25-8.07 (m, 4H), 7.54 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.47 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.37 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 6.55 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 4.98 (t, J = 9.9 Hz, 1H), 4.92 (s, 1H), 4.36 (s, 1H), 3.16 (s, 3H), 2.51 (s, 3H), 2.06 (q, J = 9.0, 7.7 Hz, 1H), 1.88 (s, 3H), 1.46 (s, 3H), 1.36 (s, 3H), 1.06 (s, 9H), 0.91 (t, J = 6.0 Hz, 6H).
실시예 3.60: ( S , E )-2,5- 다이메틸 - N -(3-(2,2,2-트라이플루오로아세트아미도) 페닐설포닐 )-4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 2,2,2-트라이플루오로-N-(3-설파모일페닐)아세트아마이드로부터 일반적 절차 9 및 12를 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 8.49 (p, J = 2.2 Hz, 1H), 7.90 (dtd, J = 6.0, 4.8, 2.9 Hz, 2H), 7.64-7.56 (m, 1H), 7.53 (tt, J = 5.4, 4.3, 1.8 Hz, 2H), 7.51-7.42 (m, 2H), 7.41-7.28 (m, 1H), 6.56-6.38 (m, 1H), 4.97 (s, 1H), 4.90 (d, J = 3.3 Hz, 1H), 4.35 (s, 1H), 3.16 (d, J = 15.5 Hz, 3H), 2.49 (d, J = 14.2 Hz, 3H), 2.14-2.01 (m, 1H), 1.89-1.83 (m, 3H), 1.57-1.28 (m, 6H), 1.14-0.94 (m, 9H), 0.95-0.85 (m, 6H). 13C NMR (101 MHz, 메탄올-d 4) δ 172.26, 168.81, 167.10, 167.00, 144.95, 141.82, 138.82, 138.47, 135.31, 130.71, 130.38, 128.91, 127.36, 126.65, 126.32, 121.39, 71.20, 66.92, 57.87, 57.78, 42.05, 35.83, 34.15, 32.66, 30.84, 29.79, 26.95, 21.39, 19.84, 19.82, 15.45, 14.03. 19F NMR (377 MHz, 메탄올-d 4) δ-76.96,-77.07. C35H48F3N5O6S 계산치 m/z = 723.33 amu; 확인치 [M+H]+ = 724.30, [M+Na]+ = 746.30.
실시예 3.61: ( S , E )- N -(3- 아미노페닐설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 2,2,2-트라이플루오로-N-(3-설파모일페닐)아세트아마이드로부터 일반적 절차 9, 10 및 12를 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.55 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.51-7.45 (m, 2H), 7.43-7.20 (m, 4H), 6.97 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.48 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 5.02-4.89 (m, 2H), 4.36 (s, 1H), 3.17 (s, 3H), 2.50 (s, 3H), 2.14-2.00 (m, 1H), 1.88 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.46 (s, 3H), 1.35 (s, 3H), 1.07 (s, 9H), 0.92 (d, J = 6.3 Hz, 3H), 0.90 (s, 3H). C33H49N5O5S 계산치 m/z = 627.35 확인치 [M+H]+ = 628.36.
실시예 3.62: ( S , E )-2,5- 다이메틸 - N -(피리딘-3- 일설포닐 )-4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3-메틸-2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 피리딘-3-설폰아마이드로부터 일반적 절차 2 및 7을 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 9.18 (s, 1H), 8.80 (s, 1H), 8.46 (dt, J = 8.2, 1.8 Hz, 1H), 7.65 (dd, J = 8.1, 4.9 Hz, 1H), 7.54 (d, J = 7.3 Hz, 2H), 7.47 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 7.37 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 6.54 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 5.01-4.88 (m, 2H), 4.36 (s, 1H), 3.18 (s, 3H), 2.51 (s, 3H), 2.15-2.01 (m, 1H), 1.86 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.46 (s, 3H), 1.33 (s, 3H), 1.07 (s, 9H), 0.92 (d, J = 3.3 Hz, 3H), 0.91 (d, J = 3.5 Hz, 3H). C32H47N5O5S 계산치 m/z =613.33 확인치 [M+H]+ = 614.23.
실시예 3.63: ( S , E )-2,5- 다이메틸 - N -(티오펜-2- 일설포닐 )-4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 티오펜-2-설폰아마이드로부터 일반적 절차 9 및 12를 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.93-7.82 (m, 2H), 7.55 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.48 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 7.37 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.15 (dd, J = 5.0, 3.8 Hz, 1H), 6.51 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 5.02-4.93 (m, 2H), 4.36 (s, 1H), 3.18 (s, 3H), 2.51 (s, 3H), 2.15-2.01 (m, 1H), 1.89 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.46 (s, 3H), 1.34 (s, 3H), 1.08 (s, 9H), 0.93 (d, J = 4.8 Hz, 3H), 0.91 (d, J = 4.7 Hz, 3H). C31H46N4O5S2 계산치 m/z = 618.29 확인치 [M+H]+ = 619.24.
실시예 3.64: ( S , E )- N -(4- 하이드록시페닐설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3-트라이메틸-2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 4-(tert-뷰틸다이메틸실릴옥시)벤젠설폰아마이드로부터 일반적 절차 9 및 12를 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.89 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.55 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.47 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.37 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 6.91 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 6.46 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 4.97 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 4.92 (s, 1H), 4.33 (s, 1H), 3.16 (s, 3H), 2.50 (s, 3H), 2.11-2.00 (m, 1H), 1.87 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.46 (s, 3H), 1.36 (s, 3H), 1.07 (s, 9H), 0.92 (d, J = 6.5 Hz, 4H), 0.89 (d, J = 6.7 Hz, 3H). C33H48N4O6S 계산치 m/z = 628.33 확인치 [M+H]+ = 629.38.
실시예 3.65: 4-( 트리틸티오메틸 ) 벤조나이트릴
THF(5㎖) 중 트리틸머캅탄(1.48g, 5.36 m㏖, 1.05당량)을 THF(5㎖) 중 수소화나트륨(광유 중 60% 분산액, 214㎎, 5.36 m㏖, 1.05당량)의 교반 현탁액에 N2 하에 0℃에서 적가하였다. 15분 후, THF(5㎖) 중 4-(브로모메틸)벤조나이트릴(1.00g, 5.10 m㏖, 1.0당량)을 첨가하고 이 반응물을 실온이 되도록 하였다. 1시간 후, TLC는 출발 물질의 완전한 전환을 나타내었다. 이 반응물을 포화 염화암모늄에 이어서 약간의 dH2O의 첨가에 의해 반응중지시켰다. 이 혼합물을 에터로 3회 추출하고, 포화 염수로 세척 후, 황산나트륨 위에서 건조시키고 점성의 황색 오일로 농축시켰다. 플래시 크로마토그래피에 의한 정제에 의해 표제의 화합물(1.76g, 88%)을 밝은 백색 분말로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로폼-d) δ 7.52 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.47 (d, J = 7.1 Hz, 6H), 7.33 (t, J = 7.5 Hz, 6H), 7.26 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 7.19 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 3.40 (s, 2H). C27H21NS 계산치 m/z = 391.14. 확인치 [M+Na]+ = 414.13. Rf = 0.32 (10% EtOAc/Hex).
실시예 3.66: 1-(4-( 트리틸티오메틸 ) 페닐 ) 사이클로프로판아민 .
4-(트리틸티오메틸)벤조나이트릴(1.47g, 3.75 m㏖, 1.0당량)을 N2 분위기 하에 40㎖의 THF에 장입하고 나서 -78℃로 냉각시켰다. 이 용액에 Ti(O-iPr)4(1.21㎖, 4.13 m㏖, 1.1당량)를 첨가하고 나서, 에틸마그네슘 브로마이드(3M, 2.75㎖, 8.26 m㏖, 2.2당량)를 5분에 걸쳐서 적가하였다. 건조-빙욕을 제거하고, 이 용액을 실온에 이르게 하였다. 실온에서 45분 후, BF3·Et2O(0.93㎖, 7.51 m㏖, 2.0당량)를 이제 매우 검은 반응 혼합물에 첨가하였다. 추가로 2.5시간 동안 교반 후, 이 반응물을 5㎖의 2M HCl로 반응중지시키고 나서, 약 15㎖의 2M NaOH로 강염기로 pH 조절하였다. 약간의 물을 이 혼합물에 첨가하고 나서, 75㎖ EtOAc로 3회 추출하고, dH2O로 1회, 포화 염수로 1회 세척하고, 황산나트륨 위에서 건조시키고, 맑은 오일로 농축시켰다. 이 물질을 플래시 크로마토그래피에 의해 정제시켜 표제의 화합물(680㎎, 36%)을 맑은 오일로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로폼-d) δ 7.49 (d, J = 7.8 Hz, 6H), 7.33 (t, J = 7.7 Hz, 6H), 7.26 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 7.20 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.11 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 3.32 (s, 2H), 1.06 (dd, J = 7.9, 5.0 Hz, 2H), 0.95 (dd, J = 7.9, 4.7 Hz, 2H). C29H27NS 계산치 m/z = 421.19. 확인치 [M+H]+ = 422.19. Rf = 0.21 (50% EtOAc/Hex).
실시예 3.67: 2,2,2- 트라이플루오로 - N -(1-(4-(트리틸 티오메틸 ) 페닐 ) 사이클로프로필 ) 아세트아마이드 .
CH2Cl2 중 1-(4-(트리틸티오메틸)페닐)사이클로프로판아민(680㎎, 1.61 m㏖, 1.0당량)의 교반된 용액에 트라이플루오로아세트산 무수물(0.448㎖, 3.22 m㏖, 2.0당량) 및 트라이에틸아민(0.45㎖, 3.22 m㏖, 2.0당량)을 첨가하였다. 2시간 후, TLC 및 HPLC은 출발 물질의 완전한 전환을 나타내었다. 이 반응물을 3㎖의 NaHCO3의 첨가에 의해 반응중지시키고 나서, 약간의 dH2O를 첨가하고, 이 혼합물을 CH2Cl2로 3회 추출하였다. 유기물을 합하여 포화 염수로 세척하고, 황산나트륨 위에서 건조시키고, 황색 발포물로 농축시켜, 충분한 순도의 표제의 화합물(715㎎, 86%)을 얻고 다음 단계로 옮겼다. 1H NMR (400 MHz, 클로로폼-d) δ 7.48 (d, J = 7.7 Hz, 6H), 7.32 (t, J = 7.6 Hz, 6H), 7.25 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 7.19 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.10 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 6.83 (s, 1H), 3.31 (s, 2H), 1.40-1.24 (m, 4H). C31H26F3NOS 계산치 m/z = 517.17. 확인치 [M+Na]+ = 540.25. Rf = 0.71 (50% EtOAc/Hex).
실시예 3.68: 2,2,2- 트라이플루오로 - N -(1-(4-( 머캅토메틸 ) 페닐 ) 사이클로프로필 ) 아세트아마이드 .
5㎖의 CH2Cl2 중 2,2,2-트라이플루오로-N-(1-(4-(트리틸티오메틸)페닐)사이클로프로필)아세트아마이드(715㎎, 1.38 m㏖, 1.0당량)를 2.5㎖의 TFA로 처리하였다. 1분 후, TIPSH(0.42㎖, 2.1 m㏖, 1.5당량)를 첨가하자, 황색이 희미하게 되었다. 30분 후, TLC반응이 완결된 것을 나타내었다. 이 혼합물을 농축시키고 나서 CH2Cl2로 1회 그리고 톨루엔으로 2회 공증발시켰다. 잔사를 플래시 크로마토그래피에 의해 정제시켜 표제의 화합물(261㎎, 69%)을 백색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로폼-d) δ 7.35-7.23 (m, 4H), 6.87 (s, 1H), 3.74 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 1.77 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 1.36 (s, 4H). Rf = 0.47 (20% EtOAc/Hex).
실시예 3.69: 2,2,2- 트라이플루오로 - N -(1-(4-( 설파모일메틸 ) 페닐 ) 사이클로프로필 ) 아세트아마이드 .
아세토나이트릴 중 2,2,2-트라이플루오로-N-(1-(4-(머캅토메틸)페닐)사이클로프로필)아세트아마이드(220㎎, 0.799 m㏖, 1.0당량)의 교반된 용액에 dH2O(0.029㎖, 1.6 m㏖, 2.0당량), 테트라뷰틸염화암모늄(110㎎, 0.40 m㏖, 0.5당량), 이어서 N-클로로석신이미드(320㎎, 2.40 m㏖, 3.0당량)를 첨가하였다. 20분 후, 출발 물질이 TLC에 의해 더 이상 보이지 않았다. 90분 후, 진한 NH4OH(0.18㎖, 3.2 m㏖, 4.0당량)를 첨가하였다. 10분 후, 1㎖의 NH4Cl을 첨가하고, 이 혼합물을 EtOAc로 3회 추출하였다. 유기물을 합하여 dH2O로 2회, 포화 염수로 1회 세척하고, 황산나트륨 위에서 건조시키고, 맑은 오일로 농축시켰다. 잔사를 플래시 크로마토그래피에 의해 정제시켜 표제의 화합물(192㎎, 74%)을 백색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 10.21 (s, 1H), 7.31 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.16 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 6.85 (s, 2H), 4.23 (s, 2H), 1.27 (dt, J = 6.1, 2.3 Hz, 4H). Rf = 0.26 (50% EtOAc/Hex).
실시예 3.70: ( S , E )-2,5- 다이메틸 - N -(4-(1-(2,2,2- 트라이플루오로아세트아미도 ) 사이클로프로필 ) 벤질설포닐 )-4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 실시예 3.69로부터 일반적 절차 9 및 12를 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.56 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.48 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 7.37 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.32 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.28 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.37 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 5.07 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 4.94 (s, 1H), 4.72 (s, 2H), 4.37 (s, 1H), 3.13 (s, 3H), 2.52 (s, 3H), 2.08-1.96 (m, 1H), 1.96 (d, J = 1.5 Hz, 3H), 1.49 (s, 3H), 1.40 (s, 3H), 1.35-1.27 (m, 4H), 1.10 (s, 9H), 0.92 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 0.89 (d, J = 6.8 Hz, 3H). 13C NMR (101 MHz, MeOD) δ 170.93, 168.81, 165.64, 143.58, 142.24, 136.87, 134.19, 130.64, 129.00, 127.63, 127.53, 125.95, 125.61, 69.90, 57.10, 57.02, 56.39, 40.73, 34.55, 34.25, 32.80, 30.60, 29.33, 28.39, 25.57, 20.11, 18.38, 18.34, 16.21, 16.15, 14.04, 12.85. C39H54F3N5O6S 계산치 m/z = 777.37 확인치 [M+H]+ = 778.55.
실시예 3.71: ( S , E )- N -(4-(1- 아미노사이클로프로필 ) 벤질설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 실시예 3.69로부터 일반적 절차 9, 10 및 12를 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.56 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.51 (s, 4H), 7.47 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.37 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 6.49 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 5.07 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 4.94 (s, 1H), 4.81 (d, J = 14.0 Hz, 1H), 4.77 (d, J = 13.8 Hz, 1H), 4.39 (s, 1H), 3.16 (s, 3H), 2.52 (s, 3H), 2.11-1.99 (m, 1H), 1.97 (d, J = 1.5 Hz, 3H), 1.49 (s, 8H), 1.45-1.41 (m, 2H), 1.40 (s, 3H), 1.34-1.26 (m, 2H), 1.10 (s, 9H), 0.93 (d, J = 6.2 Hz, 3H), 0.90 (d, J = 6.3 Hz, 3H). 13C NMR (101 MHz, MeOD) δ 170.94, 169.00, 165.69, 143.57, 137.54, 137.12, 134.38, 131.43, 129.66, 128.98, 127.51, 125.98, 69.85, 65.51, 57.68, 57.15, 56.39, 40.72, 36.16, 34.51, 32.80, 30.68, 29.42, 28.40, 25.61, 20.14, 18.42, 18.39, 14.05, 12.86, 11.80. C37H55N5O5S 계산치 m/z = 681.39 확인치 [M+H]+ = 682.49.
실시예 3.72: 1- 페닐사이클로프로판아민 .
표제의 화합물은 문헌[Bertus, P., Szymoniak, J. J. Org. Chem., 2003, 68, 7133-7136]에 기재된 바와 같이 벤조나이트릴(1.0㎖, 9.7 m㏖)로부터 제조하여 270㎎(21%)을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로폼-d) δ 7.44-7.28 (m, 4H), 7.27-7.15 (m, 1H), 1.18-1.06 (m, 2H), 1.07-0.95 (m, 2H). Rf = 0.28 (5% (5% NH4OH/MeOH)/CH2Cl2).
실시예 3.73: 2,2,2- 트라이플루오로 - N -(1- 페닐사이클로프로필 ) 아세트아마이드 .
다이옥산(5㎖) 중 1-페닐사이클로프로판아민(270㎎, 2.03 m㏖, 1.0당량)의 교반된 용액에 트라이플루오로아세트산 무수물(0.310㎖, 2.23 m㏖, 1.1당량)을 첨가하였다. 5분 후, TLC는 출발 물질의 완전한 전환을 나타내었다. 이 혼합물을 농축시키고 나서, CH2Cl2로 1회 그리고 톨루엔으로 1회 공증발시켜 표제의 화합물(453㎎, 97%)을 인편상 백색 분말로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로폼-d) δ 7.47-7.15 (m, 5H), 6.88 (s, 1H), 1.65 (s, 4H). C11H10F3NO 계산치 m/z = 229.07. 확인치 [M+H]+ = 230.14. Rf = 0.82 (5% (5% NH4OH/MeOH)/CH2Cl2).
실시예 3.74: 2,2,2- 트라이플루오로 - N -(1-(4- 설파모일페닐 ) 사이클로프로필 ) 아세트아마이드 .
교반된 클로로설폰산(0.78㎖, 11.8 m㏖, 6.0당량)에 0℃에서, 고체 2,2,2-트라이플루오로-N-(1-페닐사이클로프로필)아세트아마이드(450㎎, 1.96 m㏖, 1.0당량)를 온도를 낮게 유지하면서 나누어서 첨가하였다. 첨가 완료 후, 이 혼합물을 50℃까지 가열하였다. 10분 후, 가스 방출이 정지되었고, 이 반응물을 냉각시켰다. 이 혼합물을 튀는 것을 염두에 두고 얼음의 비이커에 서서히 첨가하였다. 얼음에 남은 고체를 여과 제거하였다. 이 고체를 진공 중 건조시키고 나서 THF(4㎖) 중에 장입시켰다. 진한 NH4OH(0.44㎖, 7.85 m㏖, 4.0당량)를 첨가하자, 용액이 녹색-흑색으로 변하였다. 2분 후, TLC는 설포닐클로라이드 중간체의 완전한 소진을 나타내었다. 색이 흐려질 때까지 2M HCl을 첨가하고, 이어서 이 혼합물을 EtOAc로 3회 추출하고, 포화 NaHCO3로 1회, 포화 염수로 1회 세척하고, 황산나트륨 위에서 건조시키고, 인편상 고체로 농축시켰다. 조질의 물질을 플래시 크로마토그래피에 의해 정제시켜 표제의 화합물(235㎎, 39%)을 백색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.28 (s, 1H), 7.76 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.32 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.31 (s, 2H), 1.42-1.35 (m, 2H), 1.35-1.27 (m, 2H). C11H11F3N2O3S 계산치 m/z = 308.04. 확인치 [M+H]+ = 309.07. Rf = 0.27 (50% EtOAc/Hex).
실시예 3.75: ( S , E )-2,5- 다이메틸 - N -(4-(1-(2,2,2- 트라이플루오로아세트아미도 ) 사이클로프로필 ) 페닐설포닐 )-4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 실시예 3.3.74로부터 일반적 절차 9 및 12를 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 8.00 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.55 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.48 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 7.48-7.33 (m, 4H), 6.47 (dd, J = 9.4, 1.6 Hz, 1H), 5.00 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 4.92 (s, 1H), 4.35 (s, 1H), 3.15 (s, 3H), 2.51 (s, 3H), 2.11-2.00 (m, 1H), 1.86 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.47 (d, J = 6.2 Hz, 3H), 1.45 (s, 2H), 1.43 (s, 2H), 1.38 (s, 3H), 1.06 (s, 9H), 0.91 (d, J = 6.1 Hz, 3H), 0.89 (d, J = 6.2 Hz, 3H). C37H50F3N5O6S 계산치 m/z = 763.36 확인치 [M+H]+ = 764.45.
실시예 3.76: ( S , E )- N -(4-(1- 아미노사이클로프로필 ) 페닐설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 2,2,2-트라이플루오로-N-(1-(4-설파모일페닐)사이클로프로필)아세트아마이드로부터 일반적 절차 9, 10 및 12를 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 8.13 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.66 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.55 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 7.47 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.37 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 6.50 (dd, J = 9.4, 1.7 Hz, 1H), 5.02 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 4.93 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 4.38 (s, 1H), 3.16 (s, 3H), 2.51 (s, 3H), 2.12-1.99 (m, 1H), 1.84 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.51-1.46 (m, 5H), 1.46-1.42 (m, 2H), 1.38 (s, 3H), 1.07 (s, 9H), 0.91 (dd, J = 6.7, 1.7 Hz, 6H). C36H53N5O5S 계산치 m/z = 667.38 확인치 [M+H]+ = 668.40.
실시예 3.77: ( S , E )-2,5- 다이메틸 - N -(2- 메틸벤질설포닐 )-4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3-메틸-2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 2-메틸벤질설폰아마이드로부터 일반적 절차 9 및 12를 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.61-7.52 (m, 2H), 7.48 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.37 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 7.30-7.23 (m, 3H), 7.22-7.14 (m, 1H), 6.48 (dd, J = 9.3, 1.7 Hz, 1H), 5.08 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 4.94 (s, 1H), 4.81 (s, 2H), 4.34 (s, 1H), 3.15 (s, 3H), 2.51 (s, 3H), 2.48 (s, 3H), 2.08-2.00 (m, 1H), 1.98 (d, J = 1.1 Hz, 3H), 1.49 (s, 3H), 1.40 (s, 3H), 1.10 (s, 9H), 0.93 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 0.91 (d, J = 6.6 Hz, 3H). C35H52N4O5S 계산치 m/z = 640.37 확인치 [M+H]+ = 641.41.
실시예 3.78: ( S , E )-2,5- 다이메틸 - N -(4- 나이트로벤질설포닐 )-4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3-메틸-2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 4-나이트로벤질설폰아마이드로부터 일반적 절차 9 및 12를 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 8.18 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.64 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.52 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.42 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 7.31 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 6.55 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 5.04 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 4.92 (s, 1H), 4.63 (s, 2H), 3.08 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 1.95 (dt, J = 11.4, 6.6 Hz, 4H), 1.89 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.46 (s, 3H), 1.38 (s, 3H), 1.05 (s, 9H), 0.89 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 0.85 (d, J = 6.5 Hz, 3H). C34H49N5O7S 계산치 m/z = 671.34 확인치 [M+H]+ = 672.36.
실시예 3.79: ( S , E )- N -(4- 클로로벤질설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 4-클로로벤질설폰아마이드로부터 일반적 절차 9 및 12를 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.56 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.48 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.44-7.34 (m, 5H), 6.39 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 5.06 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 4.94 (s, 1H), 4.75 (s, 2H), 4.35 (s, 1H), 3.13 (s, 3H), 2.51 (s, 3H), 2.06-1.95 (m, 1H), 1.95 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.49 (s, 3H), 1.39 (s, 3H), 1.09 (s, 9H), 0.91 (d, J = 6.1 Hz, 3H), 0.89 (d, J = 5.9 Hz, 3H). C34H49ClN4O5S 계산치 m/z = 660.31 확인치 [M+H]+ = 661.32.
실시예 3.80: ( S , E )-2,5- 다이메틸 - N -( 페네틸설포닐 )-4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-(메틸아미노)-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 호모벤질설폰아마이드로부터 일반적 절차 9 및 12를 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.56 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.48 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 7.38 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.34-7.28 (m, 2H), 7.28-7.20 (m, 3H), 6.47 (dd, J = 9.2, 1.7 Hz, 1H), 5.03 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 4.94 (s, 1H), 4.36 (d, J = 2.3 Hz, 2H), 3.78 (td, J = 7.5, 4.1 Hz, 2H), 3.17 (s, 3H), 3.12 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 2.51 (s, 3H), 2.14-2.01 (m, 1H), 1.89 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.49 (s, 3H), 1.39 (s, 3H), 1.09 (s, 9H), 0.94 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 0.91 (d, J = 6.6 Hz, 3H). C35H52N4O5S 계산치 m/z = 640.37 확인치 [M+H]+ = 641.36.
실시예 3.81: ( S , E )- N -(4- 브로모벤질설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 4-브로모벤질설폰아마이드로부터 일반적 절차 9 및 12를 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.60-7.51 (m, 4H), 7.48 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 7.39 (s, 1H), 7.31 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 6.38 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 5.06 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 4.93 (s, 1H), 4.74 (s, 2H), 4.36 (s, 1H), 3.13 (s, 3H), 2.52 (s, 3H), 2.03-1.98 (m, 1H), 1.95 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.49 (s, 3H), 1.39 (s, 3H), 1.09 (s, 9H), 0.91 (d, J = 6.1 Hz, 3H), 0.89 (d, J = 6.3 Hz, 3H) C34H49BrN4O5S 계산치 m/z = 704.26 확인치 [M+H]+ = 705.23.
실시예 3.82: ( S , E )- N -(4- 사이아노벤질설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3-트라이메틸-2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2-엔 아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 4-사이아노벤질설폰아마이드로부터 일반적 절차 9 및 12를 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.77 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.64-7.53 (m, 4H), 7.48 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 7.38 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 6.41 (dd, J = 9.3, 1.7 Hz, 1H), 5.05 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 4.94 (s, 1H), 4.87 (s, 2H), 4.36 (s, 1H), 3.14 (s, 3H), 2.52 (s, 3H), 2.06-1.98 (m, 1H), 1.95 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.49 (s, 3H), 1.39 (s, 3H), 1.09 (s, 9H), 0.91 (d, J = 4.0 Hz, 3H), 0.90 (d, J = 4.0 Hz, 3H). C35H49N5O5S 계산치 m/z = 651.35 확인치 [M+H]+ = 652.38.
실시예 3.83: ( S , E )-2,5- 다이메틸 - N -(3- 나이트로벤질설포닐 )-4-(( S )- N ,3,3-트라이메틸-2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2-엔 아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 3-나이트로벤질설폰아마이드로부터 일반적 절차 9 및 12를 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 8.29 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.83 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.67 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.56 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 7.48 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 7.38 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 6.43 (dd, J = 9.4, 1.7 Hz, 1H), 5.05 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 4.93 (s, 2H), 4.93 (s, 1H), 4.36 (s, 1H), 3.13 (s, 3H), 2.52 (s, 3H), 2.08-1.98 (m, 1H), 1.96 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.48 (s, 3H), 1.39 (s, 3H), 1.07 (s, 9H), 0.89 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 0.88 (d, J = 6.6 Hz, 3H). C34H49N5O7S 계산치 m/z = 671.34 확인치 [M+H]+ = 672.39.
실시예 3.84: ( S , E )- N -(4- tert - 뷰틸벤질설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3-트라이메틸-2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 4-t-뷰틸벤질설폰아마이드로부터 일반적 절차 9 및 12를 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.56 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.48 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 7.43 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.38 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 7.30 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 6.39 (dd, J = 9.4, 1.6 Hz, 1H), 5.07 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 4.93 (s, 1H), 4.72 (s, 2H), 4.37 (s, 1H), 3.13 (s, 3H), 2.52 (s, 3H), 2.06-1.98 (m, 1H), 1.96 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.49 (s, 3H), 1.39 (s, 3H), 1.33 (s, 9H), 1.10 (s, 9H), 0.92 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 0.89 (d, J = 6.5 Hz, 3H). C38H58N4O5S 계산치 m/z = 682.41 확인치 [M+H]+ = 683.47.
실시예 3.85: ( S , E )-2,5- 다이메틸 - N -(2- 나이트로벤질설포닐 )-4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3-메틸-2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 2-나이트로벤질설폰아마이드로부터 일반적 절차 9 및 12를 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 8.03 (dd, J = 8.0, 1.4 Hz, 1H), 7.72 (td, J = 7.5, 1.5 Hz, 1H), 7.65 (td, J = 7.7, 1.6 Hz, 1H), 7.60 (dd, J = 7.6, 1.6 Hz, 1H), 7.56 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 7.48 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 7.38 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 6.43 (dd, J = 9.4, 1.6 Hz, 1H), 5.31 (d, J = 14.2 Hz, 1H), 5.26 (d, J = 15.3 Hz, 1H), 5.06 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 4.94 (s, 1H), 4.37 (s, 1H), 3.15 (s, 3H), 2.52 (s, 3H), 2.08-1.98 (m, 1H), 1.96 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.49 (s, 3H), 1.39 (s, 3H), 1.10 (s, 9H), 0.92 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 0.90 (d, J = 6.6 Hz, 3H). C34H49N5O7S 계산치 m/z = 671.34 확인치 [M+H]+ = 672.39.
실시예 3.86: ( S , E )-2,5- 다이메틸 - N -(4- 나이트로페네틸설포닐 )-4-(( S )- N ,3,3-트 라 이메틸-2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 4-나이트로-호모벤질설폰아마이드로부터 일반적 절차 9 및 12를 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 8.19 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.58-7.51 (m, 4H), 7.47 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.37 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 6.47 (dd, J = 9.5, 1.7 Hz, 1H), 5.00 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 4.93 (s, 1H), 4.36 (s, 1H), 3.91 (dd, J = 14.9, 8.5 Hz, 1H), 3.84 (dd, J = 12.9, 8.5 Hz, 1H), 3.28 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 3.16 (s, 3H), 2.51 (s, 3H), 2.12-1.98 (m, 1H), 1.87 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.48 (s, 3H), 1.39 (s, 3H), 1.08 (s, 9H), 0.91 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 0.91 (d, J = 6.6 Hz, 3H). C35H51N5O7S 계산치 m/z = 685.35 확인치 [M+H]+ = 686.38.
실시예 3.87: 메틸 4- 클로로 -3-( N -(( S , E )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3-메틸-2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔오일 ) 설파모일 ) 벤조에이트 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 메틸 4-클로로-3-설파모일벤조에이트로부터 일반적 절차 9 및 12를 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 8.80 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.20 (dd, J = 8.3, 2.1 Hz, 1H), 7.71 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.59-7.52 (m, 2H), 7.47 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 7.40-7.32 (m, 1H), 6.63-6.56 (m, 1H), 5.02 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 4.37 (s, 1H), 3.98 (s, 3H), 3.18 (s, 3H), 2.51 (s, 3H), 2.13-2.00 (m, 1H), 1.86 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.47 (s, 3H), 1.37 (s, 3H), 1.06 (s, 9H), 0.96-0.87 (m, 6H). 13C NMR (101 MHz, 메탄올-d 4) δ 170.87, 165.65, 164.87, 143.61, 137.01, 136.04, 134.29, 133.23, 131.81, 129.16, 128.98, 128.88, 127.50, 125.98, 69.81, 65.53, 57.39, 56.35, 56.15, 55.37, 51.86, 40.70, 34.51, 32.77, 30.80, 29.39, 28.44, 26.18, 25.56, 20.06, 18.40, 14.06, 12.74. C35H49ClN4O7S 계산치 m/z = 704.30 amu; 확인치 [M+H]+ = 705.25, [M+Na]+ = 727.25.
실시예 3.88: 2,2,2- 트라이플루오로 - N -(4-( 설파모일메틸 )벤질) 아세트아마이드 .
표제의 화합물은 상업적으로 입수 가능한 (4-(아미노메틸)페닐)메탄설폰아마이드 및 TFAA로부터 일반적 절차 8을 이용해서 합성하였다. 1H NMR (400 MHz, 아세톤-d 6) δ 9.05 (s, 1H), 7.48-7.40 (m, 2H), 7.40-7.32 (m, 2H), 6.17 (s, 1H), 4.56 (d, J = 6.1 Hz, 2H), 4.35 (s, 2H).
실시예 3.89: ( S , E )-2,5- 다이메틸 - N -(4-((2,2,2- 트라이플루오로아세트아미도 ) 메틸 ) 벤질설포닐 )-4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3-페 닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 실시예 3.88로부터 일반적 절차 9 및 12를 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.57-7.49 (m, 2H), 7.45 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 7.33 (p, J = 8.8, 7.9 Hz, 5H), 6.37 (d, J = 9.7 Hz, 1H), 5.09-5.00 (m, 1H), 4.69 (s, 2H), 4.44 (s, 2H), 4.30 (s, 1H), 3.10 (s, 3H), 2.45 (d, J = 17.5 Hz, 3H), 2.02-1.87 (m, 4H), 1.46 (s, 3H), 1.37 (s, 3H), 1.07 (s, 9H), 0.95-0.81 (m, 6H). 19F NMR (377 MHz, 메탄올-d 4) δ-76.94,-77.24. C37H52F3N5O6S 계산치 m/z = 751.36 amu; 확인치 [M+H]+ = 752.46, [M+Na]+ = 774.38.
실시예 3.90: ( S , E )- N -(4-( 아미노메틸 ) 벤질설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3-트 라 이메틸-2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 )헥 스 -2- 엔아마이드.
실시예 3.16 및 실시예 3.88로부터 일반적 절차 9, 10 및 12를 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.60-7.54 (m, 2H), 7.54-7.50 (m, 4H), 7.47 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.37 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 6.49 (dd, J = 9.5, 1.5 Hz, 1H), 5.07 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 4.94 (s, 1H), 4.83 (d, J = 14.3 Hz, 1H), 4.79 (d, J = 13.9 Hz, 1H), 4.38 (s, 1H), 4.16 (s, 2H), 3.16 (s, 3H), 2.52 (s, 3H), 2.10-2.00 (m, 1H), 1.97 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.49 (s, 3H), 1.40 (s, 3H), 1.10 (s, 9H), 0.93 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 0.91 (d, J = 7.0 Hz, 3H). C35H53N5O5S 계산치 m/z = 655.4; 확인치 [M+H]+ = 656.3, [M+2H]2+ = 328.8.
실시예 3.91: 2,2,2- 트라이플루오로 - N -(4-( 설파모일메틸 ) 페닐 ) 아세트아마이드 .
표제의 화합물은 상업적으로 입수 가능한 (4-아미노페닐)메탄설폰아마이드 및 TFAA로부터 일반적 절차 8을 이용해서 합성하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.31 (s, 1H), 7.79-7.51 (m, 2H), 7.51-7.23 (m, 2H), 6.85 (s, 2H), 4.27 (s, 2H).
실시예 3.92: ( S , E )-2,5- 다이메틸 - N -(4-(2,2,2-트라이플루오로아세트아미도) 벤질설포닐 )-4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 실시예 3.91로부터 일반적 절차 9 및 12를 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.68 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.54 (d, J = 7.1 Hz, 2H), 7.45 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.37 (dd, J = 10.6, 5.0 Hz, 3H), 6.34 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 5.04 (t, J = 10.1 Hz, 2H), 4.74 (s, 2H), 4.35 (s, 1H), 3.10 (s, 3H), 2.49 (s, 3H), 2.02-1.94 (m, 1H), 1.93 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.46 (s, 3H), 1.37 (s, 3H), 1.06 (s, 9H), 0.88 (d, J = 6.3 Hz, 3H), 0.86 (s, 3H). 19F NMR (377 MHz, 메탄올-d 4) δ-76.97,-77.05. C36H50F3N5O6S 계산치 m/z = 737.34 amu; 확인치 [M+H]+ = 738.38, [M+Na]+ = 760.35.
실시예 3.93: ( S , E )- N -(4- 아미노벤질설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 실시예 3.91로부터 일반적 절차 9, 10 및 12를 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.56 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.48 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 7.37 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 7.20 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.87 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.39 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 5.07 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 4.95 (s, 1H), 4.64 (s, 2H), 4.38 (s, 1H), 3.14 (s, 3H), 2.52 (s, 3H), 2.07-1.98 (m, 1H), 1.96 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.49 (s, 3H), 1.39 (s, 3H), 1.10 (s, 9H), 0.92 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 0.90 (d, J = 6.4 Hz, 3H). C34H51N5O5S 계산치 m/z = 641.4; 확인치 [M+H]+ = 642.3.
실시예 3.94: 4-( 아지도메틸 ) 벤젠설폰아마이드 .
N,N-다이메틸폼아마이드(1㎖) 중 4-(브로모메틸)벤젠설폰아마이드(0.50g)의 교반된 용액에 아자이드화나트륨(0.20g)을 첨가하였다. 이 현탁액을 50℃에서 3시간 동안 가열하고 이 시점에서 용매를 감압 하에 제거하였다. 잔사를 에틸 아세테이트와 물 간에 분배시켰다. 유기 상을 염수로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고 여과 후 건조 상태로 농축시켜 표제의 화합물을 정치시 고형화되는 시럽으로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로폼-d) δ 8.06-7.91 (m, 2H), 7.58-7.44 (m, 2H), 4.96 (s, 2H), 4.48 (s, 2H).
실시예 3.95: 4-( 아미노메틸 ) 벤젠설폰아마이드
자석 교반기가 장착된 둥근 바닥 플라스크에 메탄올(10㎖) 중 4-(아지도메틸)벤젠설폰아마이드(0.354g)의 용액에 10% Pd/C(대략 0.05g)를 첨가하였다. 플라스크를 감압에서 기체를 배기시키고 수소를 주입하였다. 이 배기 및 주입을 3회 반복하고, 이 시점에서 현탁액을 하룻밤 교반하였다. 16시간 후, TLC 분석은 출발 물질의 완전한 소비를 나타내었다. 이 반응물을 메탄올(40㎖)로 희석시키고, 셀라이트를 첨가하고, 이 혼합물을 프릿 유리 깔때기를 통해 여과시켰다. 얻어진 용액을 건조 상태로 농축시켰다. 1H NMR은 물질이 정제 없이 추가의 사용을 위하여 이 단계에서 충분히 깨끗한 것을 시사하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.77 (m, 2H), 7.53 (m, 2H), 5.76 (s, 2H), 3.76 (d, J = 11.9 Hz, 2H).
실시예 3.96: 2,2,2- 트라이플루오로 - N -(4- 설파모일벤질 ) 아세트아마이드 .
표제의 화합물은 일반적 절차 8에 따라서 4-(아미노메틸)벤젠설폰아마이드와 TFAA의 반응에 의해 합성하였고, 1H NMR 스펙트럼은 회전이성질체들에 의해 복잡하게 되어 있었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.91-7.75 (m, 2H), 7.55-7.31 (m, 4H), 4.72 (m, 2H), 4.47 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 3.18 (s, 2H).
실시예 3.97: ( S , E )-2,5- 다이메틸 - N -(4-((2,2,2- 트라이플루오로아세트아미도 ) 메틸 )페닐설포닐)-4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 실시예 3.96으로부터 일반적 절차 9 및 12를 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 8.02 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.58-7.42 (m, 7H), 7.35 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 6.46 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 4.97 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 4.54 (s, 2H), 4.33 (s, 1H), 3.14 (s, 3H), 2.48 (s, 3H), 2.11-1.97 (m, 1H), 1.83 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.53 (s, 1H), 1.44 (s, 3H), 1.34 (s, 3H), 1.04 (s, 9H), 0.89 (d, J = 3.9 Hz, 3H), 0.88 (d, J = 4.1 Hz, 3H). 19F NMR (377 MHz, 메탄올-d 4) δ-76.94,-77.26. C36H50F3N5O6S 계산치 m/z = 737.34 amu; 확인치 [M+H]+ = 738.39, [M+Na]+ = 760.41
실시예 3.98: ( S , E )- N -(4-( 아미노메틸 ) 페닐설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3-트라이메틸-2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
실시예 3.16 및 실시예 3.96으로부터 일반적 절차 9, 10 및 12를 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 8.13 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.68 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.55 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.47 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 7.37 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 6.51 (dd, J = 9.2, 1.8 Hz, 1H), 5.01 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 4.37 (s, 1H), 4.24 (s, 2H), 3.17 (s, 3H), 2.51 (s, 3H), 2.13-1.97 (m, 1H), 1.84 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.47 (s, 3H), 1.37 (s, 3H), 1.07 (s, 9H), 0.91 (dd, J = 6.7, 2.0 Hz, 7H). C34H51N5OS 계산치 m/z = 641.36 amu; 확인치 [M+H]+ = 642.4.
실시예 3.99: ( S , E )- N -( 벤질설포닐 )-4-(( S )-2-(( S )-3-(4- 브로모페닐 )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 ) 부탄아미도 )- N ,3,3- 트라이메틸부탄아미도 )-2,5- 다이메틸헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.51 및 (S,E)-4-((S)-2-아미노-N,3,3-트라이메틸부탄아미도)-N-(벤질설포닐)-2,5-다이메틸헥스-2-엔아마이드로부터 일반적 절차 11 및 12를 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.62 (t, J = 9.2 Hz, 2H), 7.50-7.43 (m, 2H), 7.38 (d, J = 2.2 Hz, 5H), 6.38 (dd, J = 9.5, 1.8 Hz, 1H), 5.05 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 4.92 (s, 1H), 4.75 (d, J = 2.2 Hz, 2H), 4.30 (s, 1H), 3.12 (s, 3H), 2.53 (s, 3H), 2.06-1.97 (m, 1H), 1.95 (d, J = 1.5 Hz, 3H), 1.47 (s, 3H), 1.39 (s, 3H), 1.09 (s, 9H), 0.94-0.86 (m, 6H). C34H49BrN4O5S 계산치 m/z = 704.26 amu; 확인치 [M+H]+ = 705.29, [M+Na]+ = 727.36.
실시예 3.100: ( S , E )-4-(( S )-2-(( S )-3-(4'- 아세틸바이페닐 -4-일)-3- 메틸 -2-(메 틸아미노 ) 부탄아미도 )- N ,3,3- 트라이메틸부탄아미도 )- N -( 벤질설포닐 )-2,5- 다이메틸헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 일반적 절차 13에 따라서 Boc 보호된 실시예 3.99 및 4-아세틸페닐보론산으로부터 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 8.15-8.08 (m, 2H), 7.86-7.76 (m, 4H), 7.66 (dd, J = 14.7, 8.4 Hz, 2H), 7.38 (d, J = 4.9 Hz, 5H), 6.39 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 5.05 (t, J = 10.1 Hz, 1H), 4.94 (s, 1H), 4.75 (d, J = 4.1 Hz, 2H), 4.37 (d, J = 16.1 Hz, 1H), 3.13 (d, J = 3.4 Hz, 3H), 2.67 (s, 3H), 2.53 (d, J = 11.6 Hz, 3H), 2.01 (s, 1H), 1.96 (d, J = 1.5 Hz, 3H), 1.54 (d, J = 3.7 Hz, 3H), 1.44 (s, 3H), 1.09 (d, J = 2.7 Hz, 9H), 0.96-0.83 (m, 6H). C42H56N4O6S 계산치 m/z = 744.39 amu; 확인치 [M+H]+ = 745.42, [M+Na]+ = 767.36.
실시예 3.101: ( S , E )- N -( 벤질설포닐 )-4-(( S )-2-(( S )-3-(4'- 메톡시바이페닐 -4-일)-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 ) 부탄아미도 )- N ,3,3- 트라이메틸부탄아미도 )-2,5- 다이메틸헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 일반적 절차 13에 따라서 Boc 보호된 실시예 3.99 및 4-메톡시페닐보론산으로부터 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.74-7.53 (m, 6H), 7.38 (d, J = 4.7 Hz, 5H), 7.08-6.99 (m, 2H), 6.43-6.35 (m, 1H), 5.06 (s, 1H), 4.94 (s, 1H), 4.75 (d, J = 4.1 Hz, 2H), 4.38 (s, 1H), 3.86 (s, 3H), 3.13 (s, 3H), 2.54 (s, 3H), 1.99 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 1.96 (d, J = 1.5 Hz, 3H), 1.51 (s, 3H), 1.43 (s, 3H), 1.09 (s, 9H), 0.96-0.85 (m, J = 6.0, 5.1 Hz, 6H). C41H56N4O6S 계산치 m/z = 732.39 amu; 확인치 [M+H]+ = 733.41, [M+Na]+ = 755.40.
실시예 3.102: ( S , E )- N -( 벤질설포닐 )-4-(( S )-2-(( S )-3-( 바이페닐 -4-일)-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 ) 부탄아미도 )- N ,3,3- 트라이메틸부탄아미도 )-2,5- 다이메틸헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 일반적 절차 13에 따라서 Boc 보호된 실시예 3.99 및 페닐보론산으로부터 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.86-7.51 (m, 6H), 7.48 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.43-7.33 (m, 6H), 6.39 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 5.06 (t, J = 10.1 Hz, 1H), 4.94 (s, 1H), 4.75 (d, J = 3.3 Hz, 2H), 4.37 (d, J = 14.4 Hz, 1H), 3.13 (d, J = 3.7 Hz, 3H), 2.55 (d, J = 4.5 Hz, 3H), 2.06-1.97 (m, 1H), 1.96 (d, J = 1.5 Hz, 3H), 1.52 (s, 3H), 1.44 (d, J = 4.5 Hz, 3H), 1.09 (d, J = 5.6 Hz, 9H), 0.96-0.83 (m, 6H). C40H54N4O5S 계산치 m/z = 702.38 amu; 확인치 [M+H]+ = 703.40, [M+Na]+ = 725.45.
실시예 3.103: ( S , E )- N -( 벤질설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3-(4-(4- 메틸스타이릴 ) 페닐 ) 부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 일반적 절차 13에 따라서 Boc 보호된 실시예 3.99 및 (E)-4-메틸스타이릴보론산으로부터 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.65 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.54 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.47 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.38 (s, 5H), 7.26-7.11 (m, 4H), 6.39 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 5.06 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 4.97-4.91 (m, 1H), 4.76 (s, 2H), 4.36 (s, 1H), 3.12 (d, J = 8.9 Hz, 3H), 2.54 (s, 3H), 2.37 (s, 3H), 2.05-1.97 (m, 1H), 1.97-1.93 (m, 3H), 1.49 (s, 3H), 1.41 (s, 3H), 1.09 (d, J = 3.5 Hz, 9H), 0.91 (tq, J = 10.8, 4.9 Hz, 6H). C43H58N4O5S 계산치 m/z = 742.41 amu; 확인치 [M+H]+ = 743.44, [M+Na]+ = 765.41.
실시예 3.104: ( S , E )- N -( 벤질설포닐 )-4-(( S )-2-(( S )-3-(4- 메톡시페닐 )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 ) 부탄아미도 )- N ,3,3- 트라이메틸부탄아미도 )-2,5- 다이메틸헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 일반적 절차 14에 따라서 Boc 보호된 실시예 3.99로부터 제조하였다. 주(major) 부분입체이성질체: 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.44 (dd, J = 12.9, 8.6 Hz, 2H), 7.40-7.34 (m, 5H), 7.00 (t, J = 8.4 Hz, 2H), 6.38 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 5.05 (t, J = 9.9 Hz, 1H), 4.93 (s, 1H), 4.75 (d, J = 1.8 Hz, 2H), 4.29 (s, 1H), 3.84 (s, 3H), 3.12 (s, 3H), 2.51 (s, 3H), 2.04-1.98 (m, 1H), 1.95 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.45 (s, 3H), 1.37 (s, 3H), 1.09 (s, 9H), 0.92-0.86 (m, 6H). 부(minor) 부분입체이성질체: 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.44 (dd, J = 12.9, 8.6 Hz, 2H), 7.40-7.34 (m, 5H), 7.00 (t, J = 8.4 Hz, 2H), 6.38 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 4.99 (t, J = 10.1 Hz, 1H), 4.93 (s, 1H), 4.75 (d, J = 1.8 Hz, 2H), 4.26 (s, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.11 (s, 3H), 2.47 (s, 3H), 2.04-1.98 (m, 1H), 1.92 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.53 (s, 3H), 1.48 (s, 3H), 0.94 (s, 9H), 0.92-0.86 (m, 6H). C35H52N4O6S 계산치 m/z = 656.36 amu; 확인치 [M+H]+ = 657.35, [M+Na]+ = 679.25.
실시예 3.105: ( S , E )- N -( 벤질설포닐 )-4-(( S )-2-((R)-3-(3- 메톡시페닐 )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 ) 부탄아미도 )- N ,3,3- 트라이메틸부탄아미도 )-2,5- 다이메틸헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 일반적 절차 14에 따라서 Boc 보호된 (S,E)-N-(벤질설포닐)-4-((S)-2-((S)-3-(3-브로모페닐)-3-메틸-2-(메틸아미노)부탄아미도)-N,3,3-트라이메틸부탄아미도)-2,5-다이메틸헥스-2-엔아마이드로부터 제조하였다. 부분입체이성질체적으로 불순한 출발 물질로부터 얻어진 두 분입체이성질체 생성물을 분취-규모 HPLC에 의해 분리시켰다. 주 부분입체이성질체: 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.51-7.32 (m, 6H), 7.14-7.07 (m, 1H), 7.06 (t, J = 2.2 Hz, 1H), 6.98-6.90 (m, 1H), 6.38 (dd, J = 9.6, 1.7 Hz, 1H), 4.99 (t, J = 10.3 Hz, 1H), 4.93 (s, 1H), 4.75 (d, J = 1.8 Hz, 2H), 4.32 (s, 1H), 3.85 (s, 3H), 3.11 (s, 3H), 2.47 (s, 3H), 2.04-1.96 (m, 1H), 1.93 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.54 (s, 3H), 1.47 (s, 3H), 0.96 (s, 9H), 0.89 (dd, J = 6.6, 3.4 Hz, 6H). 부 부분입체이성질체: 1H NMR 분광 데이터에 대해서 실시예 3.106(바로 직후) 참조 C35H52N4O6S 계산치 m/z = 656.36 amu; 확인치 [M+H]+ = 657.36, [M+Na]+ = 679.29.
실시예 3.106: ( S , E )- N -( 벤질설포닐 )-4-(( S )-2-(( S )-3-(3- 메톡시페닐 )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 ) 부탄아미도 )- N ,3,3- 트라이메틸부탄아미도 )-2,5- 다이메틸헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.105에 따라서 제조하였다. 부분입체이성질체적으로 불순한 출발 물질로부터 얻어진 두 분입체이성질체 생성물은 분취-규모 HPLC에 의해 분리 가능하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.39 (d, J = 5.5 Hz, 6H), 7.11 (dd, J = 4.9, 2.8 Hz, 3H), 6.38 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 5.06 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 4.93 (s, 1H), 4.76 (s, 2H), 4.35 (s, 1H), 3.86 (s, 3H), 3.13 (s, 3H), 2.52 (s, 3H), 2.05-1.97 (m, 1H), 1.95 (d, J = 1.6 Hz, 3H), 1.46 (s, 3H), 1.38 (s, 3H), 1.09 (s, 9H), 0.90 (t, J = 6.6 Hz, 6H). C35H52N4O6S 계산치 m/z = 656.36 amu; 확인치 [M+H]+ = 657.36, [M+Na]+ = 679.32.
실시예 3.107: ( S , E )- N -( 벤질설포닐 )-4-(( S )-2-(( S )-3-(4-(2- 하이드록시에톡시 ) 페닐 )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 ) 부탄아미도 )- N ,3,3- 트라이메틸부탄아미도 )-2,5-다 이메틸헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 다음과 같이 제조하였다: Boc 보호된 실시예 3.99, CuI(10 ㏖%), 3,4,7,8-테트라메틸-1,10-페난트롤린(20 ㏖%), Cs2CO3(2.5당량) 및 에틸렌 글리콜(90당량)의 혼합물을 N2 하에 130℃에서 20시간 동안 교반하였다. 얻어진 혼합물을 H2O로 희석시키고, 1M 시트르산으로 주의해서 산성화시키고 CH2Cl2(5×))로 추출하였다. 유기물을 합하여, 염수(1×)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고 여과 후 농축시키고 나서 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(AcOH/EtOAc/헥산 혼합물로 용리)를 통해서 정제시켜 크로스-커플링된 생성물을 제공하였고, 이것을 이어서 일반적 절차 12에 따라서 탈보호시키고 정제시켰다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.46 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.38 (d, J = 2.5 Hz, 5H), 7.05 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.38 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 5.05 (t, J = 10.1 Hz, 1H), 4.93 (s, 1H), 4.76 (s, 2H), 4.28 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 4.13-4.04 (m, 2H), 3.90 (t, J = 4.6 Hz, 2H), 3.12 (d, J = 6.2 Hz, 3H), 2.50 (d, J = 16.9 Hz, 3H), 2.05-1.97 (m, 1H), 1.94 (d, J = 11.0 Hz, 3H), 1.56-1.34 (m, 6H), 1.09 (s, 9H), 0.90 (t, J = 6.4 Hz, 6H). C36H54N4O7S 계산치 m/z = 686.37 amu; 확인치 [M+H]+ = 687.42, [M+Na]+ = 709.37.
실시예 3.108: S -2-(4-(( S )-4-(( S )-1-((( S , E )-2,5- 다이메틸 -6-옥소-6-( 벤질 설폰아미도) 헥스 -4-엔-3-일)( 메틸 )아미노)-3,3- 다이메틸 -1- 옥소부탄 -2- 일아미노 )-2-메틸-3-( 메틸아미노 )-4- 옥소부탄 -2-일) 페녹시 )에틸 에탄티오에이트 .
표제의 화합물은 다음과 같이 제조하였다: 트라이뷰틸포스핀(6당량)을 THF 중 다이-tert-뷰틸 아조다이카복실레이트(6당량)의 냉(0℃) 교반 용액에 첨가하였다. 0.5시간 후, THF 중 Boc 보호된 실시예 3.107(1당량)의 용액을 첨가하고 나서 THF 중 AcSH(4.5당량)의 용액을 첨가하였다. 담황색 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 이어서 주위 온도에서 23시간 동안 교반하였다. 얻어진 혼합물을 진공 중 농축시키고, EtOAc에 용해시키고, 1M HCl (2×), 포화 NH4Cl(1×) 및 염수(1×)로 순차 세척하였다. 유기물을 MgSO4 상에서 건조시키고 여과 후 진공 중 농축시키고 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(AcOH/EtOAc/헥산 혼합물로 용리됨)를 통해 정제시켜 Boc-보호된 티오아세테이트 생성물(HPLC/MS-[M+Na]+ = 867.47)를 제공하였다. 티오아세테이트를 CH2Cl2 중에 용해시키고, TFA로 처리하였다. 1시간 교반 후, 이 반응 혼합물을 진공 중 농축시켰다. 황색/갈색 잔사를 최소량의 CH2Cl2에 용해시키고, 0℃로 냉각 후 에터로 처리하여 목적으로 하는 아미노티오아세테이트를 회백색 고체로서 석출시켜 2회 합성 단계에 걸쳐서 10% 수율로 얻었다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.46 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.38 (d, J = 2.4 Hz, 5H), 7.03 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.38 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 5.05 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 4.93 (s, 1H), 4.75 (s, 2H), 4.27 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 4.14 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 3.28 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 3.11 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 2.49 (d, J = 15.5 Hz, 3H), 2.38 (s, 3H), 2.05-1.97 (m, 1H), 1.95 (s, 3H), 1.45 (s, 3H), 1.37 (s, 3H), 1.08 (s, 9H), 0.96-0.85 (m, 6H). C38H56N4O7S2 계산치 m/z = 744.36 amu; 확인치 [M+H]+ = 745.39, [M+Na]+ = 777.32.
실시예 3.109: ( S , E )-4-(( S )-2-(( S )-3-(4-(2- 아미노에톡시 ) 페닐 )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 ) 부탄아미도 )- N ,3,3- 트라이메틸부탄아미도 )- N -( 벤질설포닐 )-2,5- 다이메틸헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 다음과 같이 제조하였다: Et3N(4당량)을 CH2Cl2 중 MsCl(3.7당량)의 냉각(0℃) 교반 용액에 첨가하였다. 2분 후, CH2Cl2 중 Boc 보호된 실시예 3.107의 용액을 첨가하였다. 담황색 혼합물을 5분 동안 냉각 교반하고 나서 주위 온도에서 72시간 동안 교반하였다. 얻어진 혼합물을 EtOAc로 희석시키고 1M 시트르산(1×), 1M NaHCO3(1×) 및 염수(1×)로 순차로 세척하였다. 유기물을 MgSO4 상에서 건조시키고 여과 후 진공 중 농축시켜 메실레이트화-알코올(HPLC/MS-[M+Na]+ = 887.42)을 제공하였고, 이것은 추가의 정제 없이 다음 단계에서 사용되었다.
메실레이트를 DMF에 용해시키고 NaN3(7당량)로 처리하였다. 얻어진 현탁액을 주위 온도에서 18시간 동안 이어서 60℃에서 5시간 동안 교반하였다. 이 반응 혼합물을 H2O로 희석시키고, 1M HCl로 산성화시키고 나서 CH2Cl2(4×)로 추출하였다. 유기물을 합하여 MgSO4 상에서 건조시키고 여과 후 진공 중 농축시켜 아지도 생성물(HPLC/MS-[M+Na]+ = 834.44)를 제공하였고, 이것은 추가의 정제 없이 다음 단계에서 사용되었다.
아자이드를 THF/H2O(10:1)에 용해시키고, 트라이뷰틸포스핀(3.5당량)으로 처리하였다. 이 혼합물을 주위 온도에서 21시간 동안 교반하고 나서 진공 중 농축시켰다. 얻어진 잔사를 EtOAc에 용해시키고, 이어서 1M HCl(3×), 1M NaHCO3(3×), H2O(2×) 및 염수(2×)로 순차 세척하였다. 유기물을 MgSO4 상에서 건조시키고 여과 후 진공 중 농축시키고 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(MeOH/CH2Cl2 혼합물로 용리됨)를 통해서 정제시켜 1급 아민을 백색 고체로서 제공하였다(HPLC/MS-[M+H]+ = 786.45).
아민을 CH2Cl2에 용해시키고, TFA로 처리하였다. 1시간 동안 교반 후, 이 반응 혼합물을 진공 중 농축시켰다. 회백색 고체 잔사를 최소량의 MeOH에 용해시키고, 0℃로 냉각시키고 나서 에터로 처리하여 목적으로 하는 다이아민 생성물을 회백색 고체로서 4 합성 단계에 걸쳐서 6% 수율로 석출시켰다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.50 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.37 (s, 5H), 7.09 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.41 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 5.02 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 4.91 (s, 1H), 4.70 (s, 2H), 4.27 (t, J = 5.0 Hz, 2H), 3.40 (t, J = 5.0 Hz, 2H), 3.37 (s, 1H), 3.12 (s, 3H), 2.47 (s, 3H), 2.06-1.95 (m, 1H), 1.94 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.45 (s, 3H), 1.37 (s, 3H), 1.08 (s, 9H), 0.89 (dd, J = 9.7, 6.6 Hz, 6H). C38H55N5O6S 계산치 m/z = 685.39 amu; 확인치 [M+H]+ = 686.32, [M+Na]+ = 708.27, [(M+2H)/2]2+ = 343.77.
실시예 3.110: ( S , E )-2,5- 다이메틸 - N -(2-(2,2,2- 트라이플루오로아세트아미도 ) 페닐설포닐 )-4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 2,2,2-트라이플루오로-N-(2-설파모일페닐)아세트아마이드로부터 일반적 절차 9 및 12에 따라서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 8.27 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.05 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.67 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.54 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.48 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 7.40 (dt, J = 13.3, 7.4 Hz, 2H), 6.57 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 4.92 (s, 2H), 4.34 (s, 1H), 3.17 (s, 3H), 2.50 (s, 3H), 2.06 (m, 1H), 1.87 (d, J = 1.3 Hz, 3H), 1.45 (s, 3H), 1.33 (s, 3H), 1.07 (s, 9H), 0.91 (dd, J = 6.6, 3.5 Hz, 6H). 19F NMR (377 MHz, 메탄올-d 4) δ-76.96,-77.73. C35H48F3N5O6S 계산치 m/z = 723.33 amu; 확인치 [M+H]+ = 723.34, [M+Na]+ = 746.23.
실시예 3.111: ( S , E )- N -(2- 아미노페닐설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3-메틸-2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 2,2,2-트라이플루오로-N-(2-설파모일페닐)아세트아마이드로부터 일반적 절차 9, 10 및 12에 따라서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.75 (dd, J = 8.2, 1.5 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.48 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 7.38 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.33-7.27 (m, 1H), 6.81 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.69 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 6.49 (dd, J = 9.1, 1.5 Hz, 1H), 4.97 (t, J = 10.1 Hz, 1H), 4.92 (s, 1H), 4.35 (s, 1H), 3.17 (s, 3H), 2.51 (s, 3H), 2.07 (m, 1H), 1.88 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.46 (s, 3H), 1.36 (s, 3H), 1.06 (s, 9H), 0.92 (t, J = 6.8 Hz, 6H). C33H49N5O5S 계산치 m/z = 627.35 amu; 확인치 [M+H]+ = 628.36, [M+Na]+ = 650.37, [(M+2H)/2]2+ = 314.76.
실시예 3.112: ( S , E )- N -( 바이페닐 -4- 일설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3-메틸-2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 일반적 절차 13 및 12에 따라서 페닐보론산과 함께 Boc 보호된 실시예 3.69로부터 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 8.12 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.83 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.71 (d, J = 7.7 Hz, 2H), 7.52 (dd, J = 11.6, 7.6 Hz, 4H), 7.45 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 7.36 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 6.52 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 4.96 (t, J = 9.5 Hz, 1H), 4.92 (s, 1H), 4.33 (s, 1H), 3.18 (s, 3H), 2.50 (s, 3H), 2.14-2.03 (m, 1H), 1.88 (s, 3H), 1.45 (s, 3H), 1.35 (s, 3H), 1.07 (s, 9H), 0.92 (t, J = 6.9 Hz, 6H). C39H52N4O5S 계산치 m/z = 688.37 amu; 확인치 [M+H]+ = 689.10, [M+Na]+ = 711.32.
실시예 3.113: ( S , E )- N -(4'- 아미노바이페닐 -4- 일설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3-트라이메틸-2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 일반적 절차 13 및 12에 따라서 4-(tert-뷰톡시카보닐아미노)페닐보론산과 함께 Boc 보호된 실시예 3.81로부터 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 8.05 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.75 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.59-7.51 (m, 4H), 7.45 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 7.36 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 6.91 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 6.50 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 4.98-4.92 (m, 1H), 4.91 (s, 1H), 4.34 (s, 1H), 3.18 (s, 3H), 2.50 (s, 3H), 2.13-2.03 (m, 1H), 1.88 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.45 (s, 3H), 1.35 (s, 3H), 1.06 (s, 9H), 0.92 (t, J = 6.2 Hz, 6H). C39H53N5O5S 계산치 m/z = 703.38 amu; 확인치 [M+H]+ = 704.26, [M+Na]+ = 726.41, [(M+2H)/2]2+ = 352.77.
실시예 3.114: ( S , E )- N -(4- 플루오로벤질설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3-트라이메틸-2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 4-플루오로벤질설폰아마이드로부터 일반적 절차 9 및 12에 따라서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.60-7.52 (m, 2H), 7.48 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 7.44-7.34 (m, 3H), 7.18-7.05 (m, 2H), 6.41 (dd, J = 9.5, 1.7 Hz, 1H), 5.06 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 4.94 (s, 1H), 4.74 (s, 2H), 4.35 (s, 1H), 3.13 (s, 3H), 2.51 (s, 3H), 2.07-1.97 (m, 1H), 1.95 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.48 (s, 3H), 1.39 (s, 3H), 1.09 (s, 9H), 0.90 (t, J = 6.3 Hz, 6H). C34H49FN4O5S 계산치 m/z= 644.34 확인치 [M+H]+ = 645.32.
실시예 3.115: ( S , E )-2,5- 다이메틸 - N -(3-( 트라이플루오로메틸 ) 벤질설포닐 )-4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 3-트라이플루오로벤질설폰아마이드로부터 일반적 절차 9 및 12에 따라서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.74-7.64 (m, 3H), 7.61 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.60-7.54 (m, 2H), 7.48 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 7.38 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 6.42 (dd, J = 9.4, 1.7 Hz, 1H), 5.06 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 4.93 (s, 1H), 4.36 (s, 1H), 3.13 (s, 3H), 2.51 (s, 3H), 2.07-1.97 (m, 1H), 1.95 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.48 (s, 3H), 1.39 (s, 3H), 1.08 (s, 9H), 0.89 (d, J = 6.5 Hz, 6H). C35H49F3N4O5S 계산치 m/z = 694.34 확인치 [M+H]+ = 695.38.
실시예 3.116: ( S , E )-2,5- 다이메틸 - N -(3-( 트라이플루오로메톡시 ) 벤질설포닐 )-4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 3-트라이플루오로메톡시벤질설폰아마이드로부터 일반적 절차 9 및 12에 따라서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.56 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.48 (t, J = 7.9 Hz, 3H), 7.43-7.36 (m, 2H), 7.32 (d, J = 9.3 Hz, 2H), 6.43 (dd, J = 9.4, 1.7 Hz, 1H), 5.06 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 4.93 (s, 1H), 4.82 (s, 2H), 4.35 (s, 1H), 3.13 (s, 3H), 2.51 (s, 3H), 2.07-1.97 (m, 1H), 1.95 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.48 (s, 3H), 1.39 (s, 3H), 1.08 (s, 9H), 0.90 (dd, J = 6.6, 4.3 Hz, 6H). C35H49F3N4O6S 계산치 m/z = 710.33 확인치 [M+H]+ = 711.38.
실시예 3.117: ( S , E )- N -(3,4- 다이클로로벤질설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3-트 라 이메틸-2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 3,4-다이클로로벤질설폰아마이드로부터 일반적절차 9 및 12에 따라서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.56 (td, J = 5.2, 4.5, 1.9 Hz, 4H), 7.48 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 7.38 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 7.33 (dd, J = 8.4, 2.1 Hz, 1H), 6.41 (dd, J = 9.5, 1.8 Hz, 1H), 5.06 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 4.93 (s, 1H), 4.77 (s, 2H), 4.36 (s, 1H), 3.14 (s, 3H), 2.52 (s, 3H), 2.07-1.97 (m, 1H), 1.95 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.49 (s, 3H), 1.39 (s, 3H), 1.08 (s, 9H), 0.90 (dd, J = 6.6, 4.9 Hz, 6H). C34H48Cl2N4O5S 계산치 m/z = 694.27 확인치 [M+H]+ = 695.32.
실시예 3.118: ( S , E )- N -(2- 사이아노벤질설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3-트라이메틸-2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 2-사이아노벤질설폰아마이드로부터 일반적 절차 9 및 12에 따라서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.81 (dd, J = 7.7, 1.3 Hz, 1H), 7.72 (td, J = 7.7, 1.3 Hz, 1H), 7.66 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.62-7.59 (m, 1H), 7.58-7.53 (m, 2H), 7.48 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 7.38 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 6.50 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 5.08 (dd, J = 10.6, 9.3 Hz, 1H), 4.99 (s, 2H), 4.95 (s, 1H), 4.36 (s, 1H), 3.16 (s, 3H), 2.52 (s, 3H), 2.09-1.99 (m, 1H), 1.98 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.49 (s, 3H), 1.39 (s, 3H), 1.10 (s, 9H), 0.94 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 0.91 (d, J = 6.6 Hz, 3H). C35H49N5O5S 계산치 m/z = 651.35 확인치 [M+H]+ = 652.38.
실시예 3.119: ( S , E )- N -(3- 클로로벤질설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3-메틸-2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 3-클로로벤질설폰아마이드로부터 일반적 절차 9 및 12에 따라서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.58-7.53 (m, 2H), 7.48 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.43-7.34 (m, 4H), 7.32 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 6.42 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 5.06 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 4.94 (s, 1H), 4.74 (s, 2H), 4.33 (s, 1H), 3.13 (s, 3H), 2.50 (s, 3H), 2.07-1.97 (m, 1H), 1.95 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.48 (s, 3H), 1.39 (s, 3H), 1.08 (s, 9H), 0.90 (t, J = 7.2 Hz, 6H). C34H49ClN4O5S 계산치 m/z = 660.31 확인치 [M+H]+ = 661.32.
실시예 3.120: (107) ( S , E )- N -(4-아미노-2- 에틸페닐설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 2-에틸벤질설폰아마이드로부터 일반적 절차 9 및 12에 따라서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.79 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.48 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.37 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 6.57 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 6.54 (dd, J = 8.8, 2.4 Hz, 1H), 6.46 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 5.01 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 4.92 (s, 1H), 4.34 (s, 1H), 3.16 (s, 3H), 2.99-2.90 (m, 2H), 2.50 (s, 3H), 2.11-2.00 (m, 1H), 1.87 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.47 (s, 3H), 1.38 (s, 3H), 1.22 (t, J = 7.5 Hz, 3H), 1.06 (s, 9H), 0.91 (dd, J = 6.6 Hz, 6H). C35H53N5O5S 계산치 m/z = 655.38 확인치 [M+H]+ = 656.4.
실시예 3.121: ( S , E )- N -(4-아미노-3-( 트라이플루오로메톡시 ) 페닐설포닐 )-2,5-다이메틸-4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 2,2,2-트라이플루오로-N-(4-설파모일-2-(트라이플루오로메톡시)페닐)아세트아마이드로부터 일반적 절차 9, 10 및 12에 따라서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.81-7.75 (m, 1H), 7.71 (dd, J = 8.7, 2.1 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.47 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.37 (t, J = 7.1 Hz, 1H), 6.89 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 6.51-6.42 (m, 1H), 4.98 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 4.92 (t, J = 4.1 Hz, 1H), 4.37 (s, 1H), 3.16 (s, 3H), 2.51 (s, 3H), 2.12-2.01 (m, 1H), 1.88 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.47 (s, 3H), 1.37 (s, 3H), 1.07 (s, 9H), 0.92 (dd, J = 6.6 Hz, 6H). C34H48F3N5O6S 계산치 m/z = 711.33 확인치 [M+H]+ = 712.4.
실시예 3.122: ( S , E )- N -(4-아미노-2,3- 다이메틸페닐설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 2,2,2-트라이플루오로-N-(4-설파모일-2,3-다이메틸페닐)아세트아마이드로부터 일반적 절차 9, 10 및 12에 따라서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.75 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.47 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 7.37 (t, J = 6.9 Hz, 1H), 6.63 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.46 (d, J = 9.7 Hz, 1H), 5.00 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 4.93 (s, 1H), 4.32 (s, 1H), 3.17 (s, 3H), 2.54 (s, 3H), 2.49 (s, 3H), 2.09 (s, 3H), 2.08-2.02 (m, 1H), 1.87 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.47 (s, 3H), 1.37 (s, 3H), 1.07 (s, 9H), 0.92 (dd, J = 6.8, 6.5 Hz, 6H). C35H53N5O5S 계산치 m/z = 655.38 확인치 [M+H]+ = 656.4.
실시예 3.123: ( S , E )- N -(4-아미노-5,6,7,8- 테트라하이드로나프탈렌 -1- 일설포닐 )-2,5-다이메틸-4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 2,2,2-트라이플루오로-N-(4-설파모일-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-1-일)아세트아마이드로부터 일반적 절차 9, 10 및 12에 따라서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.74 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.48 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.38 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 6.60 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 6.46 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 5.00 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 4.95-4.91 (m, 1H), 4.36 (s, 1H), 3.17 (s, 3H), 3.10-3.05 (m, 2H), 2.51 (s, 3H), 2.46 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.10-2.02 (m, 1H), 1.88 (s, 3H), 1.87-1.75 (m, 4H), 1.47 (s, 3H), 1.38 (s, 3H), 1.07 (s, 9H), 0.92 (dd, J = 7.1 Hz, 6H). C37H55N5O5S 계산치 m/z = 681.39 확인치 [M+H]+ = 682.4.
실시예 3.124: ( S , E )- N -(4-아미노-3- 메틸페닐설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3-트라이메틸-2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 2,2,2-트라이플루오로-N-(2-메틸-4-설파모일페닐)아세트아마이드로부터 일반적 절차 9, 10 및 12에 따라서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.64 (s, 1H), 7.61 (dd, J = 8.5, 2.3 Hz, 1H), 7.57-7.51 (m, 2H), 7.48 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 7.41-7.35 (m, 1H), 6.71 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.43 (dd, J = 9.3, 1.6 Hz, 1H), 4.96 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 4.92 (s, 1H), 4.35 (s, 1H), 3.16 (s, 3H), 2.51 (s, 3H), 2.17 (s, 3H), 2.10-2.01 (m, 1H), 1.87 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.46 (s, 3H), 1.36 (s, 3H), 1.07 (s, 9H), 0.91 (dd, J = 6.3 Hz, 6H). C34H51N5O5S 계산치 m/z = 641.36 확인치 [M+H]+ = 642.4.
실시예 3.125: ( S , E )- N -(4-아미노-3- 플루오로페닐설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 2,2,2-트라이플루오로-N-(2-플루오로-4-설파모일페닐)아세트아마이드로부터 일반적 절차 9, 10 및 12에 따라서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.62-7.55 (m, 3H), 7.54 (s, 1H), 7.48 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 7.37 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 6.85 (t, J = 8.6 Hz, 1H), 6.45 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 4.98 (t, J = 9.9 Hz, 1H), 4.92 (s, 1H), 4.34 (s, 1H), 3.16 (s, 3H), 2.50 (s, 3H), 2.12-2.00 (m, 1H), 1.88 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.46 (s, 3H), 1.37 (s, 3H), 1.07 (s, 9H), 0.91 (dd, J = 6.8 Hz, 6H). C33H48FN5O5S 계산치 m/z = 645.34 확인치 [M+H]+ = 646.4.
실시예 3.126: ( S , E )- N -(4-아미노-3- 에틸페닐설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3-트라이메틸-2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 2,2,2-트라이플루오로-N-(2-에틸-4-설파모일페닐)아세트아마이드로부터 일반적 절차 9, 10 및 12에 따라서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.66 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.61 (dd, J = 8.6, 2.3 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.48 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 7.37 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 6.71 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.43 (dd, J = 9.3, 1.7 Hz, 1H), 4.96 (t, J = 9.9 Hz, 1H), 4.92 (s, 1H), 4.35 (s, 1H), 3.16 (s, 3H), 2.54 (dd, J = 7.4, 2.2 Hz, 2H), 2.51 (s, 3H), 2.12-1.99 (m, 1H), 1.87 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.46 (s, 3H), 1.36 (s, 3H), 1.27 (t, J = 7.5 Hz, 3H), 1.07 (s, 9H), 0.91 (dd, J = 6.4 Hz, 6H) C35H53N5O5S 계산치 m/z = 655.38 확인치 [M+H]+ = 656.5.
실시예 3.127: ( S , E )- N -(4-아미노-3-( 트라이플루오로메틸 ) 페닐설포닐 )-2,5-다이메틸-4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 실시예 3.16 및 2,2,2-트라이플루오로-N-(2-트라이플루오로메틸-4-설파모일페닐)아세트아마이드로부터 일반적 절차 9, 10 및 12에 따라서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 8.04 (s, 1H), 7.87 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.48 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 7.36 (dd, J = 14.5, 7.4 Hz, 1H), 6.89 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 6.47 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 4.99 (t, J = 10.2 Hz, 1H), 4.92 (s, 1H), 4.33 (s, 1H), 3.16 (s, 3H), 2.50 (s, 3H), 2.11-2.00 (m, 1H), 1.88 (s, 3H), 1.47 (s, 3H), 1.37 (s, 3H), 1.07 (s, 9H), 0.91 (dd, J = 7.0 Hz, 6H). C34H48F3N5O5S 계산치 m/z = 695.33 확인치 [M+H]+ = 696.4.
실시예 3.128: ( S )-1- 아이소프로필 - N -(( S )-1-((( S , E )-6-(3- 머캅토프로필설폰아미도 )-2,5- 다이메틸 -6- 옥소헥스 -4-엔-3-일)( 메틸 )아미노)-3,3- 다이메틸 -1- 옥소부탄 -2-일)피페리딘-2- 카복스아마이드 .
CH2Cl2(5㎖) 중 (S,E)-에틸 4-((S)-2-(tert-뷰톡시카보닐아미노)-N,3,3-트라이메틸부탄아미도)-2,5-다이메틸헥스-2-에노에이트(0.373g, 0.905m㏖)의 용액에 트라이플루오로아세트산(2㎖)을 첨가하였다. 이 반응물을 HPLC에 의해 모니터링하였으며, 출발 물질의 완전한 전환 시 감압 하에 농축시켰다. N-아이소프로필-피페콜산(0.200g, 1.3 당량)을 CH2Cl2(5㎖)에 용해시키고, 0℃에서 교반하고, 이것에 HBTU(0.450g, 1.3 당량) 및 N,N-다이-아이소프로필에틸아민(0.400㎕, 2.5 당량)을 첨가하였다. 10분 후, 상기 탈보호된 다이펩타이드를 CH2Cl2(대략 1㎖) 중 용액으로서 첨가하였다. 반응은 다이펩타이드의 완전한 소진에 대해서 HPLC에 의해 모니터링하였으며, 이 시점에서 전체 반응물을 감압 하에 농축시켰다. 조질의 반응 혼합물을 CH2Cl2에 용해시키고 실리카겔 크로마토그래피(CH2Cl2 중 1-20% MeOH(5% NH4OH))에 의해 정제시켰다.
얻어진 에스터를 1,4-다이옥산 중 LiOH에 비누화시켰다. 얻어진 카복실산(0.128g, 0.29m㏖)을 CH2Cl2(5㎖)에 용해시키고, 이 교반된 용액에 다이사이클로헥실카보다이이미드(0.084g, 1.4 당량), N,N-다이메틸아미노피리딘(0.05g, 1.4 당량) 및 3-(트리틸티오)프로판-1-설폰아마이드(0.174g, 1.5 당량)를 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 하룻밤 교반하고 HPLC-MS에 의해 반응 진행을 모니터링하였다. 반응이 완결된 경우에, 이 혼합물을 감압 하에 농축시키고 잔사를 실리카겔 크로마토그래피(CH2Cl2 중 5-30% MeOH)에 의해 정제시켜 모 화합물의 S-트리틸 유도체를 무색 오일로서 제공하였다(0.056g).1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.44-7.35 (m, 6H), 7.36-7.15 (m, 9H), 6.56 (dd, J = 9.1, 1.7 Hz, 1H), 5.03 (dd, J = 10.6, 9.3 Hz, 1H), 4.73 (s, 1H), 4.05 (dd, J = 11.5, 3.3 Hz, 1H), 3.51-3.37 (m, 2H), 3.25-3.15 (m, 2H), 3.09 (s, 3H), 2.92 (td, J = 12.5, 2.9 Hz, 1H), 2.31 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.18-1.70 (m, 15H), 1.61 (ddt, J = 12.8, 8.4, 4.9 Hz, 1H), 1.28 (dd, J = 30.1, 6.7 Hz, 7H), 1.04 (s, 9H), 0.88 (dd, J = 37.3, 6.5 Hz, 6H).
최종적으로, 트리틸 보호된 티올을 CH2Cl2(3㎖) 중에 용해시키고, 트라이플루오로아세트산(0.6㎖)을 트라이아이소프로필 염수(0.1㎖)와 함께 첨가하였다. 이 반응은 HPLC-MS에 의해 모니터링하였고, 완결 시, 감압 하에 건조상태로 농축시켰다. 잔사를 2점적의 에탄올과 함께 CH2Cl2(대략 0.8㎖)에 장입하고, 빙욕 중에서 0℃로 냉각시켰다. 냉 다이에틸 에터(대략 3㎖)를 격렬하게 교반하여 백색 석출물을 생성시켰고, 이것을 부흐너 깔때기 상에서 여과에 의해 수집하고 고진공 하에 건조시켜 모 화합물을 비정질 백색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 6.52 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 5.06 (dd, J = 10.7, 8.8 Hz, 1H), 4.73 (s, 1H), 4.16-4.04 (m, 1H), 3.69-3.56 (m, 2H), 3.48 (dd, J = 13.3, 7.2 Hz, 2H), 3.15 (s, 3H), 3.03-2.94 (m, 1H), 2.68 (t, J = 6.9 Hz, 1H), 2.24-1.77 (m, 11H), 1.61 (s, 1H), 1.31 (dd, J = 27.2, 6.7 Hz, 6H), 1.06 (s, 9H), 0.91 (dd, J = 34.1, 6.6 Hz, 6H).
실시예 3.129: (S)- N -(( S )-1-(( S )-2-(( E )-3-(3- 머캅토프로필설폰아미도 )-2- 메틸 -3-옥소프로프-1- 엔일 ) 피롤리딘 -1-일)-3,3- 다이메틸 -1- 옥소부탄 -2-일)-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아마이드 .
표제의 화합물은 일반적 절차 15, 16, 9, 10, 12에 따라서 Boc-호모프롤린 및 실시예 3.15로부터 그리고 문헌[Nieman J. A. et al. J. Nat. Prod. 2003, 66, 183-199]으로부터의 다른 것들로부터 합성하였다. 화합물은 대략 1:1 비의 두 부분입체이성질체로서 단리되었다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.57-7.12 (m, 5H), 6.39 (dd, J = 9.4, 1.6 Hz, 0.5H), 6.31 (dd, J = 8.2, 1.5 Hz, 0.5H), 4.72 (q, J = 7.5 Hz, 0.5H), 4.66-4.56 (m, 0.5H), 4.40 (s, 0.5H), 4.28 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 3.81 (m, 0.5H), 3.76-3.56 (m, 3H), 2.77-2.64 (m, 2H), 2.59 (m, 3H), 2.39-2.22 (m, 1H), 2.18-1.72 (m, 7H), 1.61-1.33 (m, 6H), 1.15-0.85 (m, 11H). C29H46N4O5S2 계산치 m/z = 594.35 확인치 [M+H]+ = 595.3.
실시예 3.130: ( S )- N -(( S )-1-(2-(3-(3- 머캅토프로필설폰아미도 )-2- 메틸 -3-옥소프로프-1- 엔일 )피리딘-1-일)-3,3- 다이메틸 -1- 옥소부탄 -2-일)-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아마이드 .
표제의 화합물은 일반적 절차 15, 16, 9, 10, 12에 따라서 Boc-호모프롤린 및 실시예 3.15로부터 그리고 문헌[Nieman J. A. et al. J. Nat. Prod. 2003, 66, 183-199]으로부터의 다른 것들로부터 합성하였다. 화합물은 대략 2:3 비의 두 부분입체이성질체로서 단리되었다. 1H NMR (600 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.55 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.46 (m, 3H), 7.38 (m, 1H), 6.81 (d, J = 8.3 Hz, 0.6H), 6.79 (d, J = 7.8 Hz, 0.4H), 5.66 (m, 0.6H), 5.12 (m, 0.4H), 5.05 (s, 0.6H), 4.86 (s, 0.4H), 4.42 (d, J = 14.9 Hz, 0.4H), 4.35 (s, 0.6H), 4.26 (s, 0.4H), 4.12 (d, J = 13.8 Hz, 0.6H), 3.64 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 3.63 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 3.39 (m, 0.6H), 2.94 (td, J = 13.8, 2.6 Hz, 0.4H), 2.68 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 2.56 (m, 3H), 2.10 (m, 3.5H), 1.97 (s, 1.5H), 1.90 - 1.70 (m, 7H), 1.65 - 1.29 (m, 6H), 1.07 (s, 3.5H), 1.04 (s, 4.5H) ppm. C30H47N4O5S2 계산치 m/z = 608.31; 확인치 [M+H]+ = 609.32.
실시예 3.131: ( S )- N -(( S )-1-(2-(3-(4-( 머캅토메틸 ) 페닐설폰아미도 )-2- 메틸 -3-옥소프로프-1- 엔일 )피리딘-1-일)-3,3- 다이메틸 -1- 옥소부탄 -2-일)-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아마이드 .
표제의 화합물은 일반적 절차 15, 16, 9, 10, 12에 따라서 Boc-호모프롤린 및 실시예 3.20으로부터 그리고 문헌[Nieman J. A. et al. J. Nat. Prod. 2003, 66, 183-199]으로부터의 다른 것들로부터 합성하였다. 화합물은 대략 2:3 비의 두 부분입체이성질체로서 단리되었다. 1H NMR (600 MHz, 메탄올-d 4) δ 8.02 (d, J = 8.4 Hz, 0.8H), 8.00 (d, J = 8.5 Hz, 1.2H), 7.58 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.54 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.45 (t, J = 8.2 Hz, 2H), 7.40 (d, J = 7.2 Hz, 0.6H), 7.36 (m, 1H), 7.31 (t, J = 7.1 Hz, 0.4H), 6.74 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 5.59 (m, 0.6H), 5.06 (m, 0.4H), 5.02 (s, 0.6H), 4.84 (s, 0.4H), 4.39 (d, J = 12.5 Hz, 0.4H), 4.34 (s, 0.6H), 4.20 (s, 0.4H), 4.08 (d, J = 12.0 Hz, 0.6H), 3.83 (s, 1.2H), 3.73 (s, 0.8H), 3.35 (m, 0.6H), 2.93 (td, J = 13.6, 3.0 Hz, 0.4H), 2.55 (m, 3H), 2.00 (s, 1H), 1.90 - 1.51 (m, 7H), 1.51 - 1.30 (m, 4H), 1.30 (s, 1H), 1.15 (s, 1H), 1.04 (s, 3.5H), 1.01 (s, 4.5H) ppm. C34H47N4O5S2 계산치 m/z = 656.31; 확인치 [M+H]+ = 657.30.
실시예 3.132: MC-VC- PABC -3.90.
표제의 화합물은 Boc 보호된 실시예 3.90으로부터 일반적 절차 20 및 12를 적용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.58 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.49 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.38 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 7.36-7.24 (m, 6H), 7.22 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 6.81 (s, 2H), 6.57 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 5.08 (s, 2H), 5.04 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 4.91 (s, 1H), 4.53 (dd, J = 9.0, 5.1 Hz, 1H), 4.40 (s, 2H), 4.28 (s, 2H), 4.19 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 3.49 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 3.26-3.11 (m, 2H), 3.07-2.93 (m, 3H), 2.30 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.18 (s, 3H), 2.15-2.05 (m, 1H), 1.99-1.91 (m, 1H), 1.89 (s, 3H), 1.83-1.72 (m, 1H), 1.72-1.53 (m, 7H), 1.44 (s, 3H), 1.37 (s, 3H), 1.35-1.27 (m, 2H), 1.03 (s, 9H), 1.00 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.99 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 0.88 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 0.82 (d, J = 6.6 Hz, 3H). C64H91N11O13S 계산치 m/z = 1253.7; 확인치 [M+H]+ = 1254.8.
실시예 3.133: 4-(( R )-2-(( R )-2-(6-(2,5- 다이옥소 -2,5- 다이하이드로 -1 H -피롤-1-일) 헥산아미도 )-3- 메틸부탄아미도 )-5- 유레이도펜탄아미도 )벤질 4-( N -(( S , E )-2,5-다이메틸-4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔오일 ) 설파모일 ) 벤질카바메이트( MC-VC- PABC -3.98).
표제의 화합물은 Boc 보호된 실시예 3.98에 일반적 절차 20 및 12를 적용해서 제조하였다. C63H89N11O13S 계산치 m/z = 1239.6; 확인치 [M+H]+ = 1240.9.
실시예 3.134: MC-VC- PABC -3.93.
표제의 화합물은 Boc 보호된 실시예 3.93에 일반적 절차 20 및 12를 적용해서 제조하였다. C63H89N11O13S 계산치 m/z = 1239.6; 확인치 [M+H]+ = 1240.9.
실시예 3.135: MC-VC- PABC -3.54.
표제의 화합물은 실시예 3.54에 일반적 절차 20을 적용해서 제조하였다. C64H91N11O13S 계산치 m/z = 1253.65; 확인치 [M+H]+ = 1254.75, [M+2H]2+ = 628.20.
실시예 3.136: ( R )- N -( 벤질설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥산아마이드 .
빙초산 중 실시예 3.27 및 탄소 상의 10% 팔라듐(25 ㏖% Pd)의 현탁액을 H2 분위기(1기압) 하에 주위 온도에서 교반하였다. 142시간 후, 이 반응 현탁액을 셀라이트 층을 통과시키고 MeOH(5×)로 헹구고, 진공 중 농축시켰다. 잔류 밝은 갈색 조질 필름을 용해시키고, 분취 HPLC(0.1% TFA와 함께 30-70% MeCN/H2O) 상에서 정제시키고 동결건조시켜 환원된 생성물의 하나의 부분입체이성질체를 담황색 고체로서 15% 수율로 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.55 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 7.46 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 7.43-7.31 (m, 6H), 5.01 (s, 1H), 4.79 (d, J = 14.1 Hz, 1H), 4.65 (d, J = 14.1 Hz, 1H), 4.35 (s, 1H), 4.24 (s, 1H), 3.07 (s, 3H), 2.52 (s, 3H), 2.27 (m, J = 10.3, 7.0, 3.2 Hz, 1H), 2.14 (ddd, J = 13.5, 10.6, 2.7 Hz, 2H), 1.78 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 1.47 (s, 3H), 1.34 (s, 3H), 1.15 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 1.14 (s, 9H), 1.04 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 0.82 (d, J = 6.6 Hz, 3H). C34H52N4O5S 계산치 m/z = 628.37 amu; 확인치 [M+H]+ = 629.6, [M+Na]+ = 651.
실시예 3.137: 3- 메틸 -3-(4- 브로모페닐 )-부탄산.
NH4Cl(수성)/빙욕 속에서 10℃로 냉각된 20㎖의 CH2Cl2 중 브로모벤젠(4.70g, 30.0 m㏖) 및 3,3-다이메틸아크릴산(1.00g, 10.0 m㏖)의 격렬하게 교반된 용액에, 고체 AlCl3를, -5℃ 이하의 내부 온도를 유지하면서 나누어서 첨가하였다. 용액이 첨가 후 황색으로, 이어서 갈색으로 변하였다. 1시간 후, LC 및 TLC에 의한 분석은 제한 시약의 완전한 소진을 나타내었다. 이 반응물을 이어서 1M 시트르산의 첨가에 의해 반응중지시켜서, 갈색이 황색으로 흐려졌다. 얻어진 엉성한 현탁액을 20㎖ Et2O로 4회 추출하고, 유기물을 합하여 NaCl(포화)로 세척하고, Na2SO4(고체) 상에서 건조시키고, 진공 중 45℃로 가열하면서 농축시켜 용매 및 잔류 브로모벤젠을 제거하였다. 얻어진 오일은 서서히 고형화되었다. 헥산 중 조질의 고체의 재결정화에 의해 표제의 화합물(1.29g, 50%)을 백색 각기둥의 무리로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로폼-d) δ (ppm) 7.42 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.23 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 2.63 (s, 2H), 1.43 (s, 6H). C11H13BrO2 계산치 [M+H]+ = 257.02 amu; 확인치 m/z = 257.03. Rf = 0.21 (20% (2% AcOH/EtOAc)/Hex).
실시예 3.138: 3- 메틸 -3-(3- 브로모페닐 )-부탄산.
표제의 화합물은, 문헌[Nieman J. A., et al. J. Nat. Prod. 2003, 66, 183-199]에서의 3-메틸-3-페닐부탄산과 같은 방식으로, 용매로서 벤젠 대신에 브로모벤젠을 이용하고 산-염기 후처리를 1M 시트르산으로부터 반응 혼합물의 간단한 추출과 3회의 후속의 헥산으로부터의 재결정화로 치환하여 제조하였다. 2:1 혼합물로서 목적으로 하는 메타 이성질체 중에 풍부한 조질의 생성물로부터, 표제의 화합물은 95% 순도보다 많게 백색의 뭉뚝한 바늘 형상으로서 얻어졌다. 1H NMR (400 MHz, 클로로폼-d) δ (ppm) 7.49 (t, J = 1.9 Hz, 1H), 7.34 (ddd, J = 7.9, 1.9, 1.0 Hz, 1H), 7.29 (ddd, J = 7.9, 1.9, 1.0 Hz, 1H), 7.18 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 2.64 (s, 2H), 1.44 (s, 6H). C11H13BrO2 계산치 [M+H]+ = 257.02 amu; 확인치 m/z = 257.01. Rf = 0.21 (20% (2% AcOH/EtOAc)/Hex).
실시예 3.139: ( S )- 메틸 3-(4- 브로모페닐 )-2-( tert - 뷰톡시카보닐(메틸)아미노 )-3- 메틸뷰타노에이트 .
표제의 화합물은 (S)-메틸 2-(tert-뷰톡시카보닐(메틸)아미노)-3-메틸-3-페닐뷰타노에이트의 합성을 위하여 니만(Nieman) 등에 의해 기재된 절차의 순서에 따라서 실시예 3.137로부터 합성하였다.
실시예 3.140: ( S )-2-(( tert - 뷰톡시카보닐 )( 메틸 )아미노)-3-(4-((14- 하이드록시 -3,6,9,12- 테트라옥사테트라데실 ) 옥시 ) 페닐 )-3- 메틸부탄산 .
펜타에틸렌 글리콜(1.5㎖) 중 실시예 3.81(157㎎, 0.405 m㏖)의 교반된 용액에 CsCO3(330㎎, 1.01 m㏖), 3,4,7,8-테트라메틸-1,10-페난트롤린(57㎎, 0.24 m㏖) 및 CuI(23㎎, 0.12 m㏖)를 첨가하였다. 질소를 플라스크에 불어넣고 나서, 밀봉하고, 130℃까지 가열하자, 용액은 신속하게 적색에서 갈색을 거쳐 흑색으로 변하였다. 40시간 후, 반응물은 HPLC 분석에 의해 거의 완전하게 된 것으로 보였다. 이와 같이 해서, 이 혼합물은 주위 온도로 냉각시키고, H2O로 희석시키고, 교반막대를 구비한 보다 큰 엘렌메이어 플라스크에 옮겼다. 이 혼합물을 1M 시트르산으로 pH 대략 3으로 주의해서 산성화시키고, 발포 혼합물이 흘러넘치지 않도록 주의를 기울였다. 혼합물을 이어서 CH2Cl2로 5회 추출하고, 유기 추출물을 합하여 NaCl(포화)로 세척하고 Na2SO4(고체) 위에서 건조시키고, 진공 중 농축시켜 약 300㎎의 조질의 오일을 수득하였다. 플래시 크로마토그래피(1-10% MeOH/(2% AcOH/EtOAc))에 의한 정제에 의해 표제의 화합물(66㎎, 30%)을 대략 2:1 비의 N-Boc 회전이성질체로서 존재하는 투명한 필름으로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로폼-d) δ (ppm) 7.35 (d, J = 7.8 Hz, 1.3H), 7.30 (d, J = 7.6 Hz, 0.7H), 6.87 (d, J = 7.1 Hz, 2H), 5.07 (s, 0.7H), 4.93 (s, 0.3H), 4.14 (m, 2H), 3.86 (m, 2H), 3.70 (m, 16H), 2.83 (s, 1H), 2.72 (s, 2H), 1.54 (s, 3H), 1.49 (s, 3H), 1.45 (s, 9H). C27H45NO10 계산치 [M+H]+ = 544.31 amu; 확인치 m/z = 544.36. Rf = 0.36 (5% MeOH/(2% AcOH/EtOAc)).
실시예 3.141: ( S )-2-(( tert - 뷰톡시카보닐 )( 메틸 )아미노)-3-(4-(2-(2-(2-(2- 하이드록시에톡시 ) 에톡시 ) 에톡시 ) 에톡시 ) 페닐 )-3- 메틸부탄산 .
표제의 화합물은 상기 방법에 따라서 실시예 3.81(132㎎, 0.341 m㏖), CsCO3(278㎎, 0.853 m㏖), 3,4,7,8-테트라메틸-1,10-페난트롤린(24㎎, 0.10 m㏖) 및 CuI(10㎎, 0.051 m㏖)로부터 제조하였다. 플래시 크로마토그래피(1-10% MeOH/(2% AcOH/EtOAc))에 의해 표제의 화합물(66㎎, 38%)을 N-Boc 회전이성질체들의 대략 2:1 비로 맑은 오일로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로폼-d) δ (ppm) 7.34 (d, J = 8.4 Hz, 1.3H), 7.29 (d, J = 8.1 Hz, 0.7H), 6.85 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 5.05 (s, 0.7H), 4.91 (s, 0.3H), 4.13 (t, J = 4.6 Hz, 2H), 3.87-3.79 (m, 2H), 3.76-3.60 (m, 10H), 3.59 (t, J = 4.1 Hz, 2H), 2.80 (s, 1H), 2.69 (s, 2H), 1.53 (s, 3H), 1.48 (s, 3H), 1.44 (s, 9H). C25H41NO9 계산치 [M+H]+ = 500.29 amu; 확인치 m/z = 500.36. Rf = 0.46 (5% MeOH/(2% AcOH/EtOAc)).
실시예 3.142: ( S )-3-(3-((14- 하이드록시 -3,6,9,12- 테트라옥사테트라데실 ) 옥시 ) 페닐 )-3- 메틸 -2-(메틸아미노)부탄산.
표제의 화합물인 (S)-3-(3-브로모페닐)-2-((tert-뷰톡시카보닐)(메틸)아미노)-3-메틸부탄산에 대한 전구체는 실시예 3.138로부터 제조하고 나서 니만 등의 절차를 수행하였다. 따라서, 상기 절차 후에, 1.5㎖ 펜타에틸렌 글리콜 중 (S)-3-(3-브로모페닐)-2-((tert-뷰톡시카보닐)(메틸)아미노)-3-메틸부탄산(166㎎, 0.43 m㏖), CsCO3(330㎎, 1.01 m㏖), 3,4,7,8-테트라메틸-1,10-페난트롤린(31㎎, 0.13 m㏖) 및 CuI(12.3, 0.060 m㏖)로부터 2일 동안 130℃까지 가열하고, 플래시 크로마토그래피(1-10% MeOH/(2% AcOH/EtOAc)) 후에 표제의 화합물(73㎎, 31%)을 N-Boc 회전이성질체들의 대략 2:1 비로 맑은 오일로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, 클로로폼-d) δ (ppm) 7.17 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.14-7.07 (m, 1H), 7.07-6.93 (m, 2H), 6.74 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.11 (s, 0.7H), 4.93 (s, 0.3H), 4.25-4.03 (m, 2H), 3.91-3.77 (m, 2H), 3.78-3.66 (m, 2H), 3.69-3.43 (s, 14H), 2.72 (s, 1H), 2.65 (s, 1H), 1.51 (s, 3H), 1.49 (s, 3H), 1.45 (s, 9H). C27H45NO10 계산치 [M+H]+ = 544.31 amu; 확인치 m/z = 544.34.
실시예 3.143: ( 6 S ,9 S ,12 S , E )-에틸 9-( tert -뷰틸)-12-아이소프로필-2,2,5,11,14-펜타메틸-4,7,10-트라이옥소-6-(2-(4-((16-옥소-3,6,9,12-테트라옥사-15- 티아펩타데실 ) 옥시 ) 페닐 )프로판-2-일)-3-옥사-5,8,11- 트라이아자펜타데크 -13-엔-15- 오에이트 .
(S)-2-((tert-뷰톡시카보닐)(메틸)아미노)-3-(4-((14-하이드록시-3,6,9,12-테트라옥사테트라데실)옥시)페닐)-3-메틸부탄산(65㎎, 0.120 m㏖)를 (S,E)-에틸 4-((S)-2-아미노-N,3,3-트라이메틸부탄아미도)-2,5-다이메틸헥스-2-에노에이트에 HATU 및 DIPEA와 함께 커플링시키고 나서, 니만 등에서의 일반적인 커플링 절차에 기재된 동일한 화학량론 및 절차를 수행하여 플래시 크로마토그래피(1-10% MeOH/(2% AcOH/EtOAc))에 의한 정제 후 중간체 유리 알코올을 제공하였다. 이어서, 0.75㎖의 THF 중 트라이페닐포스핀(40㎎, 0.15 m㏖)에 N2 하에 0℃에서, 다이-tert-뷰틸아조다이카복실레이트(35㎎, 0.15 m㏖)를 한번에 첨가하였다. 35분 후, 백색 석출물이 부서져서 반응물은 교반하기 어려워졌다. 이 현탁액에 0.75㎖의 THF 중 상기 중간체 알코올(42㎎, 0.050 m㏖)의 용액을 첨가하여 교반을 회복하기에 충분하게 석출물을 희석시켰다. 5분 후, 0.05㎖의 THF 중 티오아세트산(5.7㎎, 0.075 m㏖)을 첨가하여, 이 혼합물로부터 모든 황색이 희미하게 되었다. 30분 후, 이 반응물을 주위 온도로 가온되도록 하였다. 석출물은 더욱 15분 후 사라졌으며, TLC 및 LCMS에 의한 분석은 거의 완전한 전환을 나타내었다 더욱 40분 후, 반응 혼합물을 진공 중 농축시키고 나서, 플래시 크로마토그래피(40-100% EtOAc/Hex에 이어서 10% MeOH/EtOAc로)에 직접 적용하여 표제의 화합물(26㎎, 57%)을 맑은 필름으로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로폼-d) δ (ppm) 7.43 (d, J = 8.4 Hz, 1.3H), 7.31 (d, J = 8.3 Hz, 0.7H), 6.97-6.72 (m, 2H), 6.62 (dd, J = 9.3, 1.6 Hz, 1H), 6.14 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 5.22 (s, 0.7H), 5.12-4.99 (m, 1H), 4.84 (s, 0.3H), 4.69 (d, J = 9.3 Hz, 0.3H), 4.60 (d, J = 8.9 Hz, 0.7H), 4.19 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 4.09 (td, J = 4.6, 2.3 Hz, 2H), 3.84 (t, J = 4.9 Hz, 2H), 3.77-3.70 (m, 2H), 3.70-3.61 (m, 10H), 3.59 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.07 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.97-2.91 (m, 3H), 2.84 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 1.87 (s, 3H), 1.49 (s, 3H), 1.43 (s, 9H), 1.35 (s, 3H), 1.30 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.87 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 0.80 (d, J = 16.6 Hz, 3H), 0.77 (s, 9H). C46H77N3O12S 계산치 [M+H]+ = 896.53 amu; 확인치 m/z = 896.77. Rf = 0.56 (80% EtOAc/Hex).
실시예 3.144: (6 S ,9 S ,12 S , E )-에틸 9-( tert - 뷰틸 )-12- 아이소프로필 -2,2,5,11,14- 펜타메틸 -4,7,10- 트라이옥소 -6-(2-(4-((13-옥소-3,6,9- 트라이옥사 -12- 티아테트라데실 ) 옥시 ) 페닐 )프로판-2-일)-3-옥사-5,8,11- 트라이아자펜타데크 -13-엔-15- 오에이트 .
표제의 화합물은 (S)-2-((tert-뷰톡시카보닐)(메틸)아미노)-3-(4-(2-(2-(2-(2-하이드록시에톡시)에톡시)에톡시) 에톡시)페닐)-3-메틸부탄산(66㎎, 0.065 m㏖)으로부터 위에서 기재된 동일한 절차에 따라서 제조하여 플래시 크로마토그래피(20-100% EtOAc/Hex) 후에 32㎎(57%)을 투명한 필름으로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로폼-d) δ (ppm) 7.44 (d, J = 8.5 Hz, 1.3H), 7.32 (d, J = 8.5 Hz, 0.7H), 6.95-6.77 (m, 2H), 6.62 (dd, J = 9.2, 1.7 Hz, 1H), 6.09 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 5.24 (s, 0.7H), 5.13-4.95 (m, 1H), 4.84 (s, 0.3H), 4.69 (d, J = 9.6 Hz, 0.3H), 4.60 (d, J = 9.0 Hz, 0.7H), 4.19 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.09 (td, J = 4.7, 2.4 Hz, 2H), 3.84 (t, J = 4.9 Hz, 2H), 3.72 (dd, J = 5.7, 3.2 Hz, 2H), 3.70-3.65 (m, 2H), 3.66-3.62 (m, 4H), 3.60 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 3.09 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.96-2.88 (m, 3H), 2.84 (s, 3H), 2.33 (s, 3H), 1.88 (d, J = 3.5 Hz, 3H), 1.49 (s, 2H), 1.43 (d, J = 5.5 Hz, 11H), 1.35 (s, 2H), 1.30 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 0.87 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 0.80 (d, J = 15.9 Hz, 3H), 0.76 (s, 9H). C44H73N3O11S 계산치 [M+H]+ = 852.51 amu; 확인치 m/z = 852.79. Rf = 0.60 (60% EtOAc/Hex).
실시예 3.145: (6 S ,9 S ,12 S , E )-에틸 9-( tert - 뷰틸 )-12- 아이소프로필 -2,2,5,11,14- 펜타메틸 -4,7,10- 트라이옥소 -6-(2-(3-((16-옥소-3,6,9- 트라이옥사 -12- 티아테트라데실 ) 옥시 ) 페닐 )프로판-2-일)-3-옥사-5,8,11- 트라이아자펜타데크 -13-엔-15- 오에이트 .
표제의 화합물은 (S)-3-(3-((14-하이드록시-3,6,9,12-테트라옥사테트라데실)옥시)페닐)-3-메틸-2-(메틸아미노)부탄산(73㎎, 0.080 m㏖)으로부터 위에서 기재된 동일한 절차에 따라서 제조하여 플래시 크로마토그래피(20-100% EtOAc/Hex) 후에 66㎎(47%)을 투명한 필름으로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로폼-d) δ (ppm) 7.25-6.92 (m, 3H), 6.78-6.70 (m, 1H), 6.62 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 6.12 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 5.26 (s, 0.7H), 5.12-4.99 (m, 1H), 4.89 (s, 0.3H), 4.74-4.56 (m, 1H), 4.19 (q, J = 7.2 Hz, 1H), 4.16-4.03 (m, 2H), 3.84 (td, J = 5.0, 3.2 Hz, 2H), 3.77-3.61 (m, 14H), 3.60 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.09 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.97-2.75 (m, 6H), 2.33 (s, 3H), 1.91-1.83 (m, 3H), 1.52-1.35 (m, 16H), 1.26 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.87 (d, J = 6.0 Hz, 3H), 0.81 (d, J = 12.9 Hz, 3H), 0.77 (s, 9H). C46H77N3O12S 계산치 [M+H]+ = 896.53 amu; 확인치 m/z = 896.68. Rf = 0.61 (75% EtOAc/Hex).
실시예 3.146: ( S , E )-4-(( S )-2-(( S )-3-(4-((14- 머캅토 -3,6,9,12-테트라옥사테트라데실) 옥시 ) 페닐 )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 ) 부탄아미도 )- N ,3,3- 트라이메틸부탄아미도 )-2,5- 다이메틸헥스 -2- 엔산다이설파이드 .
표제의 화합물은 니만 등에 기재된 정확한 방법에 따라서 (6S,9S,12S,E)-에틸 9-(tert-뷰틸)-12-아이소프로필-2,2,5,11,14-펜타메틸-4,7,10-트라이옥소-6-(2-(4-((16-옥소-3,6,9,12-테트라옥사-15-티아펩타데실)옥시)페닐)프로판-2-일)-3-옥사-5,8,11-트라이아자펜타데크-13-엔-15-오에이트(26㎎, 0.029 m㏖)로부터 비누화에 이어서, TFA 촉진된 Boc 제거에 의해 제조하여 과잉의 TFA의 완전한 제거 후 표제의 화합물(16㎎, 90%)을 맑은 유리로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ (ppm) 8.43 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.47 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.08-6.94 (m, 2H), 6.80 (dq, J = 9.9, 1.5 Hz, 1H), 5.08 (t, J = 10.1 Hz, 1H), 4.94 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 4.32 (s, 1H), 4.21-4.12 (m, 2H), 3.93-3.81 (m, 3H), 3.76 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.76-3.72 (m, 2H), 3.72-3.62 (m, 10H), 3.17 (s, 3H), 2.92 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.61-2.47 (m, 3H), 2.14-2.00 (m, 1H), 1.94 (d, J = 1.5 Hz, 3H), 1.46 (s, 3H), 1.40 (d, J = 7.7 Hz, 3H), 1.09 (s, 9H), 0.94 (d, J = 5.0 Hz, 3H), 0.92 (d, J = 4.8 Hz, 3H). C74H124N6O18S2 계산치 [M+H]+ = 1449.85 amu; 확인치 m/z = 1450.49.
실시예 3.147: ( S , E )-4-(( S )-2-((S)-3-(4-((14- 머캅토 -3,6,9,12-테트라옥사테트라데실) 옥시 ) 페닐 )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 ) 부탄아미도 )- N ,3,3- 트라이메틸부탄아미도 )-2,5- 다이메틸헥스 -2- 엔산 .
실시예 3.146의 화합물을 이하의 방법에 따라서 환원시켜 주제의 화합물을 생성하였다.
실시예 3.148: ( S , E )-4-(( S )-2-(( S )-3-(4-(2-(2-(2-(2- 머캅토에톡시 ) 에톡시 ) 에톡시 ) 에톡시 ) 페닐 )-3-메틸-2-( 메틸아미노 ) 부탄아미도 )- N ,3,3- 트라이메틸부탄아미도 )-2,5- 다이메틸헥스 -2- 엔산다이설파이드 .
표제의 화합물은 니만 등에 기재된 정확한 방법에 따라서 (6S,9S,12S,E)-에틸 9-(tert-뷰틸)-12-아이소프로필-2,2,5,11,14-펜타메틸-4,7,10-트라이옥소-6-(2-(4-((13-옥소-3,6,9-트라이옥사-12-티아테트라데실)옥시)페닐)프로판-2-일)-3-옥사-5,8,11-트라이아자펜타데크-13-엔-15-오에이트(32㎎, 0.037 m㏖)로부터 비누화에 이어서, TFA 촉진된 Boc 제거에 의해 제조하여 과잉의 TFA의 완전한 제거 후 표제의 화합물(29㎎, 86%)을 맑은 유리로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ (ppm) 8.39 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.44 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 7.01 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.77 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 5.05 (t, J = 10.1 Hz, 1H), 4.92 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 4.28 (s, 1H), 4.15 (dd, J = 5.8, 3.4 Hz, 2H), 3.89-3.80 (m, 2H), 3.73 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.72-3.69 (m, 2H), 3.69-3.60 (m, 6H), 3.14 (s, 3H), 2.89 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.50 (s, 3H), 2.11-1.97 (m, 1H), 1.91 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.43 (s, 3H), 1.36 (s, 3H), 1.06 (s, 9H), 0.92-0.87 (m, 6H). C70H118N6O16S2 계산치 [M+H]+ = 1361.80 amu; 확인치 m/z = 1362.26.
실시예 3.149: ( S , E )-4-(( S )-2-((S)-3-(4-(2-(2-(2-(2- 머캅토에톡시 ) 에톡시 ) 에톡시 ) 에톡시 ) 페닐 )-3-메틸-2-( 메틸아미노 ) 부탄아미도 )- N ,3,3- 트라이메틸부탄아미도 )-2,5- 다이메틸헥스 -2- 엔산 .
실시예 3.148의 화합물을 이하의 방법에 따라서 환원시켜 주제의 화합물을 생성하였다.
실시예 3.150: ( S , E )-4-(( S )-2-(( S )-3-(3-((14- 머캅토 -3,6,9,12-테트라옥사테트라데실) 옥시 ) 페닐 )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 ) 부탄아미도 )- N ,3,3- 트라이메틸부탄아미도 )-2,5- 다이메틸헥스 -2- 엔산 .
표제의 화합물은 니만 등에 기재된 정확한 방법에 따라서 (6S,9S,12S,E)-에틸 9-(tert-뷰틸)-12-아이소프로필-2,2,5,11,14-펜타메틸-4,7,10-트라이옥소-6-(2-(3-((16-옥소-3,6,9,12-테트라옥사-15-티아펩타데실)옥시)페닐)프로판-2-일)-3-옥사-5,8,11-트라이아자펜타데크-13-엔-15-오에이트(56㎎, 0.029 m㏖)로부터 비누화에 이어서, TFA 촉진된 Boc 제거에 의해 제조하여 과잉의 TFA의 완전한 제거 후 표제의 화합물(43㎎, 82%)을 회백색 발포물로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ (ppm) 8.48 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.47-7.29 (m, 1H), 7.21-7.04 (m, 1H), 6.95 (t, J = 9.4 Hz, 1H), 6.80 (d, J = 9.7 Hz, 1H), 5.08 (t, J = 10.1 Hz, 1H), 4.97-4.94 (m, 1H), 4.38 (s, 1H), 4.24-4.13 (m, 2H), 3.95-3.82 (m, 2H), 3.80-3.58 (m, 14H), 3.17 (s, 3H), 2.92 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.53 (s, 3H), 2.11-2.03 (m, 1H), 1.94 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.47 (s, 3H), 1.40 (s, 3H), 1.09 (s, 9H), 0.93 (dt, J = 11.2, 3.4 Hz, 15H). C74H124N6O18S2 계산치 [M+H]+ = 1449.85 amu; 확인치 m/z = 1450.06.
실시예 3.151: ( S , E )-4-(( S )-2-(( S )-3-(3-((14- 머캅토 -3,6,9,12-테트라옥사테트라데실) 옥시 ) 페닐 )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 ) 부탄아미도 )- N ,3,3- 트라이메틸부탄아미도 )-2,5- 다이메틸헥스 -2- 엔산
실시예 3.150의 화합물을 이하의 방법에 따라서 환원시켜 주제의 화합물을 생성하였다.
실시예 3.152: ( S , E )- N -( 벤질설포닐 )-4-(( S )-2-(( S )-3- 사이클로헥실 -3- 메틸 -2-( 메틸아미노 ) 부탄아미도 )- N ,3,3- 트라이메틸부탄아미도 )-2,5- 다이메틸헥스 -2- 엔아마이드 .
표제의 화합물은 문헌[Zask et al., J. Med. Chem. 2004, 47, (19), 4774-4786]에 의해 제조된 바와 같은 (S)-2-(tert-뷰톡시카보닐(메틸)아미노)-3-사이클로헥실-3-메틸부탄산 및 일반적 절차 15, 16, 10 및 9를 이용해서 제조된 (S,E)-4-((S)-2-아미노-N,3,3-트라이메틸부탄아미도)-N-(벤질설포닐)-2,5-다이메틸헥스-2-엔아마이드로부터 일반적 절차 11 및 12의 적용에 의해 합성하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.38 (s, 5H), 6.37 (dd, J = 9.4, 1.7 Hz, 1H), 5.01 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 4.91 (s, 1H), 4.75 (s, 2H), 4.01 (s, 1H), 3.10 (s, 3H), 2.66 (s, 3H), 2.05-1.91 (m, 4H), 1.91-1.67 (m, 6H), 1.45-1.28 (m, 3H), 1.29-1.01 (m, 17H), 0.95-0.75 (m, 9H). C34H56N4O5S 계산치 m/z = 632.40 확인치 [M+H]+ = 633.35.
실시예 3.153: MC-VC- PABC -3.71.
표제의 화합물은 Boc 보호된 실시예 3.58에 일반적 절차 20 및 12를 적용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.60 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.56 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.47 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.37 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 7.33 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.26 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.22 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 6.81 (s, 2H), 6.37 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 5.13-5.01 (m, 3H), 4.96 (s, 1H), 4.70 (s, 2H), 4.56-4.51 (m, 1H), 4.38 (s, 1H), 4.23-4.16 (m, 1H), 3.50 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 3.27-3.19 (m, 1H), 3.18-3.04 (m, 4H), 2.52 (s, 3H), 2.30 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.15-2.05 (m, 1H), 1.96 (s, 3H), 1.98-1.88 (m, 1H), 1.83-1.73 (m, 1H), 1.64 (dq, J = 23.1, 7.3 Hz, 7H), 1.48 (s, 3H), 1.39 (s, 3H), 1.37-1.30 (m, 2H), 1.27 (s, 2H), 1.21 (s, 2H), 1.08 (s, 9H), 1.00 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 0.99 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.91 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 0.88 (d, J = 6.5 Hz, 3H). C66H93N11O13S 계산치 m/z = 1279.7 확인치 [M+H]+ = 1281.0.
실시예 3.154: MC-VC- PABC -3.76.
표제의 화합물은 Boc 보호된 실시예 3.76에 일반적 절차 20 및 12를 적용해서 제조하였다. C65H91N11O13S 계산치 m/z = 1265.7 확인치 [M+H]+ = 1266.7
당업자라면 하나 이상의 파라미터의 변형에 의해 상기 반응식에 표시된 화학적 전환을 수행하는 것이 가능하다는 것을 알 수 있다. 예로서, THF, DMF, 톨루엔 등과 같은 대안적인 비-친핵성 용매가 이 화학에 적용될 수 있다. 반응 온도는 변화될 수 있다. 펜타플루오로페닐 에스터, NHS 에스터, EDAC, HBTU, HOBT 등과 같은 대안적인 시약이, 아마이드 형성 반응에 통상적으로 이용되는 탈수 또는 산-활성제로서 작용하도록 적합화될 수 있다.
실시예 3.155: Fmoc -Val- Lys ( Boc )-OH: (S)-2-((S)-2-(((9H- 플루오렌 -9-일) 메톡시 ) 카보닐아미노 )-3- 메틸부탄아미도 )-6-( tert - 뷰톡시카보닐아미노 ) 헥산산 .
표제의 화합물은 (S)-2,5-다이옥소피롤리딘-1-일 2-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐아미노)-3-메틸뷰타노에이트에서 시작하여 문헌[M. A. Walker, et al. Bio. Org . Med . Chem . Lett . 2004, 14, 4323-4327]으로부터의 절차에 기초하여 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 8.28 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.82 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.69 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 7.41 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 7.33 (td, J = 7.5, 1.2 Hz, 2H), 7.20 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 4.49 - 4.36 (m, 3H), 4.26 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 3.97 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 3.05 - 2.97 (m, 2H), 2.08 (dq, J = 13.3, 6.6 Hz, 1H), 1.93 - 1.84 (m, 1H), 1.81 - 1.66 (m, 1H), 1.54 - 1.43 (m, 4H), 1.40 (s, 9H), 1.01 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.98 (d, J = 6.8 Hz, 3H). C31H41N3O7 계산치 m/z = 567.3 확인치 [M-Boc+H+]+ = 468.8.
실시예 3.156: Boc -Val- Cit -OH: ( S )-2-(( S )-2-( tert - 뷰톡시카보닐아미노 )-3- 메틸부탄아미도 )-5-유레이도펜탄산.
표제의 화합물은 미국 특허 공개 제2010/0233190 A1호에 따라서 합성하였고 이는 분광 데이터와 일치하였다.
실시예 3.157: H-Val- Cit -OH: ( S )-2-(( S )-2-아미노-3- 메틸부탄아미도 )-5- 유레이도펜탄산 .
표제의 화합물은 일반적 절차 7에 따라서 Boc-VC-OH로부터 제조되었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.69 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 8.21 - 7.97 (m, 3H), 4.24 (td, J = 8.2, 4.9 Hz, 1H), 3.97 (s, 0H), 3.63 (dd, J = 9.2, 4.0 Hz, 1H), 2.98 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.60 (s, 1H), 2.10 (h, J = 6.8 Hz, 1H), 1.85 - 1.69 (m, 1H), 1.61 (dtd, J = 14.1, 9.0, 5.6 Hz, 1H), 1.45 (dtd, J = 14.7, 8.2, 7.3, 3.7 Hz, 2H), 0.97 (dd, J = 6.9, 5.0 Hz, 6H).
실시예 3.158: Fmoc -Ala(D)- Phe - Lys ( Boc )-OH: (5 R ,8 S ,11 S )-8-벤질-11-(4-( tert - 뷰톡시카보닐아미노 ) 뷰틸 )-1-(9H- 플루오렌 -9-일)-5- 메틸 -3,6,9- 트라이옥소 -2-옥사-4,7,10-트라이아자도데칸-12-오익산.
표제의 화합물은 일반적 절차 5에 의해 실시예 2.10으로부터 제조하고 나서, 일반적 절차 9에 따라서 H(R)-2,5-다이옥소피롤리딘-1-일 2-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐아미노)프로파노에이트로 처리하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.57 (s, 1H), 8.20 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.12 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.89 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.71 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 7.48 - 7.37 (m, 3H), 7.33 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 7.30 - 7.13 (m, 5H), 6.77 (t, J = 5.1 Hz, 1H), 4.59 (td, J = 10.8, 10.3, 3.5 Hz, 1H), 4.33 - 4.10 (m, 4H), 4.02 (q, J = 7.1 Hz, 1H), 3.10 (dd, J = 13.8, 2.8 Hz, 1H), 2.94 - 2.87 (m, 2H), 2.79 - 2.67 (m, 1H), 1.75 - 1.70 (m, 1H), 1.62 (s, 1H), 1.37 (s, 4H), 1.36 (s, 9H), 0.96 (d, J = 7.1 Hz, 3H). C31H41N3O7 계산치 m/z = 686.3 확인치 [M+Na+]+ = 709.9.
실시예 3.159: Fmoc - Phe (D)- Phe - Lys -OH: (5 R ,8 S ,11 S )-5,8- 다이벤질 -11-(4-( tert - 뷰톡시카보닐아미노 ) 뷰틸 )-1-(9H- 플루오렌 -9-일)-3,6,9- 트라이옥소 -2-옥사-4,7,10- 트라이아자도데칸 -12-오익산.
표제의 화합물은 실시예 2.10으로부터 일반적 절차 5에 의해 제조하고 나서, 일반적 절차 9에 따라서 H(R)-2,5-다이옥소피롤리딘-1-일 2-(((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카보닐아미노)-3-페닐프로파노에이트로 처리하였다.1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.59 (s, 1H), 8.39 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 8.31 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.88 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.62 (t, J = 8.2 Hz, 2H), 7.47 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.41 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 7.35 - 7.10 (m, 12H), 6.77 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 4.73 - 4.62 (m, 1H), 4.28 - 4.03 (m, 5H), 3.09 (dd, J = 13.7, 3.8 Hz, 1H), 2.93 - 2.87 (m, 2H), 2.74 (dd, J = 13.7, 10.4 Hz, 1H), 2.58 (dd, J = 13.8, 3.4 Hz, 1H), 2.48 - 2.35 (m, 1H), 1.84 - 1.68 (m, 1H), 1.68 - 1.55 (m, 1H), 1.40 - 1.33 (m, 13H). C31H41N3O7 계산치 m/z = 762.4 확인치 [M+Na+]+ = 785.9.
실시예 3.160: ( S , E )-N-(4-(1-((14 S ,17 S )-1-(2,5- 다이옥소 -2,5- 다이하이드로 -1 H -피롤-1-일)-14- 아이소프로필 -12,15- 다이옥소 -17-(3- 유레이도프로필 )-3,6,9- 트라이옥사 -13,16- 다이아자옥타데칸아미도 ) 사이클로프로필 ) 페닐설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3-메틸-2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드( 화합물 R)
단계 1: (S,E)-N-(4-(1-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-유레이도펜탄아미도)사이클로프로필)페닐설포닐)-2,5-다이메틸-4-((S)-N,3,3-트라이메틸-2-((S)-3-메틸-2-(메틸아미노)-3-페닐부탄아미도)부탄아미도)헥스-2-엔아마이드(R-1)는 화합물 Q-2로부터 일반적 절차 7에 따라서 합성하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.97 - 7.90 (m, 2H), 7.59 - 7.51 (m, 2H), 7.47 (dd, J = 8.5, 6.9 Hz, 2H), 7.44 - 7.34 (m, 3H), 6.46 (dd, J = 9.4, 1.7 Hz, 1H), 5.02 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 4.93 (s, 1H), 4.43 (dd, J = 8.6, 5.8 Hz, 1H), 4.35 (s, 1H), 3.71 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 3.23 - 3.09 (m, 5H), 2.51 (s, 3H), 2.22 (dt, J = 13.4, 6.7 Hz, 1H), 2.04 (q, J = 8.8, 7.8 Hz, 1H), 1.89 - 1.68 (m, 4H), 1.58 (dq, J = 14.5, 8.7, 8.3 Hz, 2H), 1.48 (s, 4H), 1.36 (d, J = 14.3 Hz, 5H), 1.15 - 0.99 (m, 16H), 0.90 (dd, J = 6.6, 3.4 Hz, 6H). C47H73N9O8S 계산치 m/z = 923.53. 확인치 [M+H]+ = 924.8.
단계 2: (S,E)-N-(4-(1-((14S,17S)-1-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)-14-아이소프로필-12,15-다이옥소-17-(3-유레이도프로필)-3,6,9-트라이옥사-13,16-다이아자옥타데칸아미도)사이클로프로필)페닐설포닐)-2,5-다이메틸-4-((S)-N,3,3-트라이메틸-2-((S)-3-메틸-2-(메틸아미노)-3-페닐부탄아미도)부탄아미도)헥스-2-엔아마이드는 R-1 및 MT-NHS로부터 일반적 절차 6에 따라서 분취 HPLC-MS에 의한 정제 전에 합성하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.99 - 7.91 (m, 2H), 7.60 - 7.52 (m, 2H), 7.48 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 7.44 - 7.31 (m, 3H), 6.84 (s, 2H), 6.45 (dd, J = 9.3, 1.7 Hz, 1H), 5.00 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 4.94 (s, 1H), 4.35 (d, J = 5.3 Hz, 2H), 4.21 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 3.81 - 3.67 (m, 4H), 3.67 - 3.54 (m, 10H), 3.25 - 3.05 (m, 5H), 2.64 - 2.47 (m, 5H), 2.20 - 1.99 (m, 2H), 1.85 (d, J = 1.3 Hz, 4H), 1.73 (dq, J = 9.5, 4.5 Hz, 1H), 1.66 - 1.28 (m, 11H), 1.12 - 0.94 (m, 16H), 0.90 (dd, J = 6.6, 4.9 Hz, 6H). C60H90N10O14S 계산치 m/z = 1206.64. 확인치 [M+H]+ = 1207.9.
실시예 3.161: ( R )- N -((2 S ,3 S )-1-((( S , E )-6-(4-((14 S ,17 S )-1-(2,5- 다이옥소 -2,5- 다이하이드로 -1 H -피롤-1-일)-14- 아이소프로필 -12,15- 다이옥소 -17-(3- 유레이도프로필 )-3,6,9- 트라이옥사 -13,16- 다이아자옥타데칸아미도 ) 페닐설폰아미도 )-2,5- 다이메틸 -6- 옥소헥스 -4-엔-3-일)(메틸)아미노)-3- 메틸 -1- 옥소펜탄 -2-일)-1- 메틸피페리딘 -2- 카복스아마이드( 화합물 S).
단계 1: (S,E)-에틸 4-(tert-뷰톡시카보닐(메틸)아미노)-2,5-다이메틸헥스-2-에노에이트, Boc-ICD-OEt(S-1)는 (S,E)-에틸 2,5-다이메틸-4-(메틸아미노)헥스-2-에노에이트(미국 특허 제7,579,323 B1호에 따라서 합성됨) 및 Boc-아이소류신-OH로부터 일반적 절차 4를 이용해서 합성하였다. NMR은 Boc기를 제거하고 스펙트럼 내 회전이성질체들을 분리하기 위하여 TFA로 처리된 샘플에 대해서 제공되었다. 1H NMR (400 MHz, 클로로폼-d) δ 6.68 (dd, J = 9.5, 1.8 Hz, 1H), 5.33 (s, 0H), 4.97 (t, J = 9.9 Hz, 1H), 4.36 (d, J = 4.1 Hz, 1H), 4.25 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.56 (s, 1H), 2.96 (s, 3H), 2.07 - 1.83 (m, 5H), 1.53 (s, 1H), 1.34 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.12 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.00 - 0.83 (m, 9H).
단계 2: (S,E)-4-((2S,3R)-2-(tert-뷰톡시카보닐아미노)-N,3-다이메틸펜탄아미도)-2,5-다이메틸헥스-2-엔산(S-2)은 Boc-ICD-OEt로부터 일반적 절차 11을 이용해서 생성하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로폼-d) δ 6.79 (dd, J = 9.3, 1.7 Hz, 1H), 5.28 (d, J = 9.7 Hz, 1H), 5.11 (dd, J = 10.6, 9.2 Hz, 1H), 4.46 - 4.34 (m, 1H), 3.01 (s, 3H), 1.94 (s, J = 1.5 Hz, 4H), 1.77 - 1.54 (m, 2H), 1.44 (s, 9H), 1.14 (dt, J = 15.8, 8.0 Hz, 1H), 0.97 - 0.81 (m, 12H).
단계 3: (S,E)-4-((2S,3S)-N,3-다이메틸-2-((R)-1-메틸피페리딘-2-카복스아미도)펜탄아미도)-2,5-다이메틸헥스-2-엔산(S-3)은 화합물 S-1로부터 일반적 절차 7에 따라서 합성하고 일반적 절차 4를 이용해서 D-(N-메틸)-피페콜산과 유리된 아민을 반응시켰다. 최종적으로, C-말단 카복실레이트를, 분취 규모 HPLC에 의한 정제 전에 일반적 절차 11을 이용해서 유리시켰다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 6.77 (dd, J = 9.5, 1.4 Hz, 1H), 5.04 (t, J = 10.1 Hz, 1H), 4.65 - 4.56 (m, 1H), 3.79 - 3.69 (m, 1H), 3.54 - 3.45 (m, 1H), 3.12 (s, 3H), 3.10 - 3.06 (m, 1H), 2.76 (s, 3H), 2.21 - 2.10 (m, 1H), 2.08 - 2.00 (m, 1H), 2.01 - 1.92 (m, 2H), 1.90 (d, J = 1.5 Hz, 3H), 1.88 - 1.72 (m, 3H), 1.69 - 1.52 (m, 2H), 1.31 - 1.16 (m, 1H), 0.98 - 0.86 (m, 12H). C22H39N3O4 계산치 m/z = 409.29 확인치 [M+H]+ =410.91
단계 4: (S,E)-4-((2S,3S)-2-아미노-N,3-다이메틸펜탄아미도)-2,5-다이메틸-N-(4-(2,2,2-트라이플루오로아세트아미도)페닐설포닐)헥스-2-엔아마이드(S-4)는 화합물 S-2로부터 일반적 절차 11에 따라서 제조하고 나서, 일반적 절차 1에 따라서 2,2,2-트라이플루오로-N-(4-설파모일페닐)아세트아마이드에 의한 N-아실 설폰아마이드 생성에 이어서 일반적 절차 7을 수행하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로폼-d) δ 8.00 - 7.85 (m, 2H), 7.76 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.39 (dd, J = 9.2, 1.8 Hz, 1H), 4.45 - 4.30 (m, 1H), 4.14 (d, J = 4.1 Hz, 1H), 2.82 (s, 3H), 2.08 - 1.91 (m, 1H), 1.67 (s, J = 1.5 Hz, 3H), 1.41-1.35 (m, J = 13.3, 7.6, 3.2 Hz, 1H), 1.10 - 0.88 (m, 4H), 0.77 (ddd, J = 17.2, 9.0, 5.4 Hz, 9H).
단계 5: (R)-N-((2S,3S)-1-(((S,E)-2,5-다이메틸-6-옥소-6-(4-(2,2,2-트라이플루오로아세트아미도)페닐설폰아미도)헥스-4-엔-3-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소펜탄-2-일)-1-메틸피페리딘-2-카복스아마이드(S-5)는 화합물 S-4 및 N-메틸-D-피페콜산으로부터 일반적 절차 4에 따라서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.97 (d, 2H), 7.77 (d, 2H), 7.67 (d, J = 8.6 Hz, 0H), 6.60 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 4.96 (t, J = 9.9 Hz, 1H), 4.61 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 3.75 (hept, J = 6.6 Hz, 1H), 3.19-3.10 (m, 1H), 3.06 (s, 3H), 2.45 (s, 2H), 2.39 (s, 3H), 2.01-1.88 (m, 3H), 1.84 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.78-1.54 (m, 5H), 1.25-1.13 (m, 1H), 0.92 (s, 1H), 0.91-0.86 (m, 8H), 0.83 (d, J = 6.6 Hz, 3H). C30H44F3N5O6S 계산치 m/z = 659.30 확인치 [M+H]+ = 660.88
단계 6: (R)-N-((2S,3S)-1-(((S,E)-6-(4-아미노페닐설폰아미도)-2,5-다이메틸-6-옥소헥스-4-엔-3-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소펜탄-2-일)-1-메틸피페리딘-2-카복스아마이드(L-6)는 화합물 S-5로부터 일반적 절차 3에 따라서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.72 (d, 2H), 6.69 (d, 2H), 6.42 (dd, J = 9.2, 1.7 Hz, 1H), 4.61-4.55 (m, 1H), 3.72 (dd, J = 12.2, 3.2 Hz, 1H), 3.52-3.44 (m, 1H), 3.37 (s, 3H), 3.12 (s, 3H), 3.09-3.03 (m, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.20-1.92 (m, 3H), 1.84 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.80-1.72 (m, 2H), 1.67-1.53 (m, 2H), 1.29-1.16 (m, 1H), 0.96-0.85 (m, 12H). C28H45N5O5S 계산치 m/z = 563.31 확인치 [M+H]+ = 564.93.
단계 7: (R)-N-((2S,3S)-1-(((S,E)-6-(4-((14S,17S)-1-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)-14-아이소프로필-12,15-다이옥소-17-(3-유레이도프로필)-3,6,9-트라이옥사-13,16-다이아자옥타데칸아미도)페닐설폰아미도)-2,5-다이메틸-6-옥소헥스-4-엔-3-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소펜탄-2-일)-1-메틸피페리딘-2-카복스아마이드는 화합물 S-6 및 MT-Val-Cit-OH로부터 일반적 절차 10에 따라서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 8.00 (d, 2H), 7.88 (d, 2H), 6.83 (s, 2H), 6.46 (dd, J = 9.1, 1.6 Hz, 1H), 4.57 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 4.55-4.52 (m, 1H), 4.22 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 3.80-3.73 (m, 3H), 3.73-3.66 (m, 2H), 3.66-3.60 (m, 2H), 3.58 (d, J = 2.2 Hz, 8H), 3.52-3.43 (m, 1H), 3.26-3.19 (m, 1H), 3.17-3.13 (m, 2H), 3.12 (s, 4H), 2.71 (s, 3H), 2.61-2.55 (m, 2H), 2.21-2.01 (m, 3H), 2.00-1.88 (m, 3H), 1.83 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.81-1.71 (m, 4H), 1.68-1.52 (m, 4H), 1.29-1.14 (m, 1H), 1.01 (t, J = 6.8 Hz, 6H), 0.94-0.86 (m, 12H). C52H82N10O14S 계산치 m/z =1102.57 확인치 [M+H]+ = 1104.22
실시예 3.162: ( R )- N -(( S )-1-((( S , E )-6-(4-((14 S ,17 S )-1-(2,5- 다이옥소 -2,5- 다이하이드로 -1 H -피롤-1-일)-14- 아이소프로필 -12,15- 다이옥소 -17-(3- 유레이도프로필 )-3,6,9- 트라이옥사 -13,16-다이아자옥타데칸아미도) 페닐설폰아미도 )-2,5- 다이메틸 -6- 옥소헥스 -4-엔-3-일)( 메틸 )아미노)-3,3- 다이메틸 -1- 옥소부탄 -2-일)-1- 메틸피페리딘 -2- 카복스아마이드( 화합물 T).
단계 1: (S,E)-2,5-다이메틸-4-((S)-N,3,3-트라이메틸-2-((R)-1-메틸피페리딘-2-카복스아미도)부탄아미도)헥스-2-엔산(T-1)은 (S,E)-에틸 4-((S)-2-아미노-N,3,3-트라이메틸부탄아미도)-2,5-다이메틸헥스-2-에노에이트(미국 특허 제7,579,323 B1호에 따라서 합성됨) 및 D-N-메틸-피페콜산으로부터 일반적 절차 4 및 11에 따라서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 6.60 (dd, J = 9.4, 1.7 Hz, 1H), 5.04 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 4.77 (s, 1H), 4.62 (s, 1H), 3.30-3.23 (m, 1H), 3.10 (s, 3H), 2.68 (t, J = 12.2 Hz, 1H), 2.52 (s, 3H), 2.04 (s, 1H), 2.02-1.93 (m, 2H), 1.90 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.88-1.79 (m, 1H), 1.77-1.62 (m, 2H), 1.56-1.43 (m, 1H), 1.04 (s, 9H), 0.92 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 0.85 (d, J = 6.6 Hz, 3H). C22H39N3O4 계산치 m/z = 409.29 확인치 [M+H]+ = 410.92
단계 2: (R)-N-((S)-1-(((S,E)-2,5-다이메틸-6-옥소-6-(4-(2,2,2-트라이플루오로아세트아미도)페닐설폰아미도)헥스-4-엔-3-일)(메틸)아미노)-3,3-다이메틸-1-옥소부탄-2-일)-1-메틸피페리딘-2-카복스아마이드(T-2)는 화합물 T-1 및 2,2,2-트라이플루오로-N-(4-설파모일페닐)아세트아마이드로부터 일반적 절차 2를 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 8.08 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.92 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 6.47 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 5.01-4.92 (m, 1H), 4.70 (s, 1H), 3.82 (d, J = 12.3 Hz, 1H), 3.53-3.43 (m, 1H), 3.13 (s, 3H), 2.72 (s, 3H), 2.22-1.90 (m, 4H), 1.85 (d, J = 1.4 Hz, 5H), 1.60 (m, 1H), 1.40-1.22 (m, 4H), 1.03 (s, 9H), 0.89 (dd, J = 17.1, 6.5 Hz, 6H). C30H44F3N5O6S 계산치 m/z = 659.76 확인치 [M+H]+ = 660.95
단계 3: (R)-N-((S)-1-(((S,E)-6-(4-아미노페닐설폰아미도)-2,5-다이메틸-6-옥소헥스-4-엔-3-일)(메틸)아미노)-3,3-다이메틸-1-옥소부탄-2-일)-1-메틸피페리딘-2-카복스아마이드(T-3)는 화합물 T-2로부터 일반적 절차 3에 따라서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.76-7.66 (m, 2H), 6.74-6.64 (m, 2H), 6.42 (dd, J = 8.9, 1.7 Hz, 1H), 4.94 (m, 1H), 4.70 (s, 1H), 3.82 (dd, J = 12.2, 3.1 Hz, 1H), 3.54-3.42 (m, 1H), 3.13 (s, 4H), 2.70 (s, 3H), 2.16 (d, J = 14.6 Hz, 1H), 2.11-2.01 (m, 1H), 1.96 (d, J = 12.9 Hz, 2H), 1.89-1.51 (m, 6H), 1.03 (s, 9H), 0.89 (dd, J = 16.3, 6.5 Hz, 6H). C28H45N5O5S 계산치 m/z = 563.31 확인치 [M+H]+ = 564.93.
단계 4: (R)-N-((S)-1-(((S,E)-6-(4-((14S,17S)-1-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)-14-아이소프로필-12,15-다이옥소-17-(3-유레이도프로필)-3,6,9-트라이옥사-13,16-다이아자옥타데칸아미도)페닐설폰아미도)-2,5-다이메틸-6-옥소헥스-4-엔-3-일)(메틸)아미노)-3,3-다이메틸-1-옥소부탄-2-일)-1-메틸피페리딘-2-카복스아마이드는 화합물 T-3 및 MT-Val-Cit-OH로부터 일반적 절차 10에 따라서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 8.00 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 7.88 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 6.83 (s, 2H), 6.46 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 4.96-4.91 (m, 1H), 4.72-4.68 (m, 1H), 4.58-4.51 (m, 1H), 4.22 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 3.83-3.73 (m, 3H), 3.72-3.67 (m, 2H), 3.65-3.61 (m, 2H), 3.61-3.55 (m, 8H), 3.52-3.46 (m, 1H), 3.27-3.19 (m, 1H), 3.13 (s, 3H), 3.09-3.03 (m, 1H), 2.69 (s, 3H), 2.58 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.19-2.01 (m, 4H), 2.00-1.90 (m, 3H), 1.84 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.83-1.72 (m, 3H), 1.61 (d, J = 9.0 Hz, 3H), 1.03 (s, 11H), 1.00 (d, J = 6.8 Hz, 4H), 0.91 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 0.87 (d, J = 6.6 Hz, 3H). C52H82N10O14S 계산치 m/z = 1102.57 확인치 [M+H]+ = 1104.30
실시예 3.163: ( R )- N -(( S )-1-((( S , E )-6-(4-((14 S ,17 S )-1-(2,5- 다이옥소 -2,5- 다이하이드로 -1 H -피롤-1-일)-14- 아이소프로필 -12,15- 다이옥소 -17-(3- 유레이도프로필 )-3,6,9- 트라이옥사 -13,16-다이아자옥타데칸아미도) 페닐설폰아미도 )-2,5- 다이메틸 -6- 옥소헥스 -4-엔-3-일)( 메틸 )아미노)-3,3- 다이메틸 -1- 옥소부탄 -2-일)-1- 아이소프로필피페리딘 -2- 카복스아마이드( 화합물 U).
단계 1: (R)-N-((S)-1-(((S,E)-2,5-다이메틸-6-옥소-6-(4-(2,2,2-트라이플루오로아세트아미도)페닐설폰아미도)헥스-4-엔-3-일)(메틸)아미노)-3,3-다이메틸-1-옥소부탄-2-일)-1-아이소프로필피페리딘-2-카복스아마이드(U-1)는 (S,E)-4-((S)-2-((R)-1-아이소프로필피페리딘-2-카복스아미도)-N,3,3-트라이메틸부탄아미도)-2,5-다이메틸헥스-2-엔산(미국 특허 공개 제2012/0309938 A1호에 따라서 제조됨) 및 2,2,2-트라이플루오로-N-(4-설파모일페닐)아세트아마이드로부터 일반적 절차 3을 이용해서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 8.00 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.83 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.56 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 4.69 (s, 1H), 4.12 (dd, J = 11.6, 3.3 Hz, 1H), 3.95 (hept, J = 6.2 Hz, 1H), 3.54-3.41 (m, 2H), 3.37 (s, 3H), 3.08 (s, 3H), 3.04-2.89 (m, 1H), 2.13 (dd, J = 17.2, 6.4 Hz, 1H), 2.00-1.88 (m, 4H), 1.84 (d, J = 1.5 Hz, 4H), 1.71-1.52 (m, 1H), 1.29 (dd, J = 28.0, 6.7 Hz, 8H), 1.17 (d, J = 6.1 Hz, 6H), 1.01 (s, 10H), 0.86 (dd, J = 28.2, 6.5 Hz, 7H). C32H48F3N5O6S 계산치 m/z = 687.33 확인치 [M+H]+ = 688.9.
단계 2: (R)-N-((S)-1-(((S,E)-6-(4-아미노페닐설폰아미도)-2,5-다이메틸-6-옥소헥스-4-엔-3-일)(메틸)아미노)-3,3-다이메틸-1-옥소부탄-2-일)-1-아이소프로필피페리딘-2-카복스아마이드(U-2)는 화합물 U-1로부터 일반적 절차 3에 따라서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.75-7.62 (m, 2H), 6.74-6.62 (m, 2H), 6.59-6.35 (m, 1H), 4.70 (s, 1H), 4.09 (dd, J = 11.7, 3.3 Hz, 1H), 3.52-3.38 (m, 2H), 3.10 (s, 3H), 3.02-2.87 (m, 1H), 2.12 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 2.06-1.73 (m, 11H), 1.70-1.50 (m, 1H), 1.28 (dd, J = 28.8, 6.7 Hz, 6H), 1.02 (s, 9H), 0.87 (dd, J = 27.7, 6.5 Hz, 6H). C30H49N5O5S 계산치 m/z = 591.35 확인치 [M+H]+ = 593.0.
단계 3: tert-뷰틸 (S)-1-((S)-1-(4-(N-((S,E)-4-((S)-2-((R)-1-아이소프로필피페리딘-2-카복스아미도)-N,3,3-트라이메틸부탄아미도)-2,5-다이메틸헥스-2-엔오일)설파모일)페닐아미노)-1-옥소-5-유레이도펜탄-2-일아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일카바메이트(U-3)는 화합물 U-2 및 Boc-Val-Cit-OH로부터 일반적 절차 10에 따라서 합성하였다. C46H77N9O10S 계산치 m/z = 947.55 확인치 [M+H]+ = 949.2.
단계 4: (R)-N-((S)-1-(((S,E)-6-(4-((14S,17S)-1-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)-14-아이소프로필-12,15-다이옥소-17-(3-유레이도프로필)-3,6,9-트라이옥사-13,16-다이아자옥타데칸아미도)페닐설폰아미도)-2,5-다이메틸-6-옥소헥스-4-엔-3-일)(메틸)아미노)-3,3-다이메틸-1-옥소부탄-2-일)-1-아이소프로필피페리딘-2-카복스아마이드는 화합물 U-3 및 MT-NHS로부터 일반적 절차 7 및 6에 따라서 제조하고 분취 HPLC-MS에 의해 정제시켰다. C54H86N10O14S 계산치 m/z = 1130.60 확인치 [M+H]+ = 1132.5.
실시예 3.164: ( S )- N -(4-(( N -((2 R ,3 R )-3-(( S )-1-((3 R ,4 S ,5 R )-4-(( S )-2-(( S )-2-( 다이메틸아미노 )-3- 메틸부탄아미도 )- N ,3- 다이메틸부탄아미도 )-3- 메톡시 -5- 메틸헵타노일 ) 피롤리딘 -2-일)-3- 메톡시 -2- 메틸프로파노일 ) 설파모일 ) 메틸 ) 페닐 )-2-(( S )-1-(2,5- 다이옥소 -2,5- 다이하이드로 -1 H -피롤-1-일)-14- 아이소프로필 -12-옥소-3,6,9- 트라이옥사 -13- 아자펜타데칸아미도 )-5- 유레이도펜탄아마이드( 화합물 W).
단계 1: tert-뷰틸 (S)-1-(((3R,4S,5R)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-((4-(2,2,2-트라이플루오로아세트아미도)페닐)메틸설폰아미도)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일카바메이트(W-1)는 상업적으로 입수 가능한 Boc-Val-Dil-Dap-OH 및 2,2,2-트라이플루오로-N-(4-(설파모일메틸)페닐)아세트아마이드로부터 일반적 절차 2를 통해서 제조하였다. C38H60F3N5O10S 계산치 m/z = 835.40 확인치 [M+H]+ = 836.7.
단계 2: (S)-2-((S)-2-(다이메틸아미노)-3-메틸부탄아미도)-N-((3R,4S,5R)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-((4-(2,2,2-트라이플루오로아세트아미도)페닐)메틸설폰아미도)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)-N,3-다이메틸부탄아마이드(W-2)는 화합물 W-1 및 N,N-다이메틸발린으로부터 일반적 절차 4에 따라서 제조하였다. C40H65F3N6O9S 계산치 m/z = 862.45 확인치 [M+H]+ = 863.2.
단계 3: (S)-N-((3R,4S,5R)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-((4-아미노페닐)메틸설폰아미도)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)-2-((S)-2-(다이메틸아미노)-3-메틸부탄아미도)-N,3-다이메틸부탄아마이드(W-3)는 화합물 W-2로부터 이하의 일반적 절차 3에 따라서 제조하였다. C38H66N6O8S 계산치 m/z = 766.47 확인치 [M-C7H8O2S+H]+ = 599.0 (퀴논 메타이드 단편화 및 4-아미노벤질설포네이트의 손실).
단계 4: (S)-N-(4-((N-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5R)-4-((S)-2-((S)-2-(다이메틸아미노)-3-메틸부탄아미도)-N,3-다이메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로파노일)설파모일)메틸)페닐)-2-((S)-1-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)-14-아이소프로필-12-옥소-3,6,9-트라이옥사-13-아자펜타데칸아미도)-5-유레이도펜탄아마이드는 일반적 절차 10을 이용해서 MT-VAL-CIT-OH 및 화합물 W-3로부터 합성하고 분취 HPLC 크로마토그래피에 의해 정제시켰다. C61H101N11O17S 계산치 m/z = 1305.73 확인치 [M+H]+ = 1306.9.
실시예 3.165: ( S )- N -(4-( N -(( S )-2-((2 R ,3 R )-3-(( S )-1-((3 R ,4 S ,5 R )-4-(( S )-2-(( S )-2-(다이메틸아미노)-3- 메틸부탄아미도 )- N ,3- 다이메틸부탄아미도 )-3- 메톡시 -5- 메틸헵타노일 )피롤리딘-2-일)-3- 메톡시 -2- 메틸프로판아미도 )-3-페닐프로파노일) 설파모일 ) 페닐 )-2-(( S )-1-(2,5- 다이옥소 -2,5- 다이하이드로 -1 H -피롤-1-일)-14-아이소프로필-12-옥소-3,6,9- 트라이옥사 -13- 아자펜타데칸아미도 )-5- 유레이도펜탄아마이드( 화합물 X).
단계 1: (S)-2-아미노-3-페닐-N-(4-(2,2,2-트라이플루오로아세트아미도)페닐설포닐)프로판아마이드(X-1)는 Boc-페닐알라닌 및 2,2,2-트라이플루오로-N-(4-설파모일페닐)아세트아마이드로부터 일반적 절차 2 및 7에 따라서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.42 (s, 1H), 7.84 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.73-7.64 (m, 1H), 7.69 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.24-7.14 (m, 3H), 7.13-7.06 (m, 2H), 3.65-3.60 (m, 1H), 3.06 (dd, J = 14.2, 5.1 Hz, 1H), 2.91 (dd, J = 14.1, 7.1 Hz, 1H). C17H16F3N3O4S 계산치 m/z = 415.08 확인치 [M+H]+ = 416.5.
단계 2: tert-뷰틸 (S)-1-(((3R,4S,5R)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-((S)-1-옥소-3-페닐-1-(4-(2,2,2-트라이플루오로아세트아미도)페닐설폰아미도)프로판-2-일아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일카바메이트(X-2)는 상업적으로 입수 가능한 Boc-Val-Dip-Dap-OH(0.07g) 및 화합물 X-1로부터 일반적 절차 4를 이용해서 합성하였다. C46H67F3N6O11S 계산치 m/z = 968.45 확인치 [M+Na]+ = 992.1.
단계 3: (S)-2-((S)-2-(다이메틸아미노)-3-메틸부탄아미도)-N-((3R,4S,5R)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-((S)-1-옥소-3-페닐-1-(4-(2,2,2-트라이플루오로아세트아미도)페닐설폰아미도)프로판-2-일아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)-N,3-다이메틸부탄아마이드(X-3)는 화합물 X-2(110㎎) 및 N,N-다이메틸 발린으로부터 일반적 절차 7 및 4를 이용해서 제조하였다. C48H72F3N7O10S 계산치 m/z = 995.50 확인치 [M+H]+ 997.3.
단계 4: (S)-N-((3R,4S,5R)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-((S)-1-(4-아미노페닐설폰아미도)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)-2-((S)-2-(다이메틸아미노)-3-메틸부탄아미도)-N,3-다이메틸부탄아마이드(X-4)는 화합물 X-3(100㎎)으로부터 일반적 절차 3을 이용해서 제조하였다. C46H73N7O9S 계산치 m/z = 899.52 확인치 [M+H]+ 901.3.
단계 5: (S)-N-(4-(N-((S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5R)-4-((S)-2-((S)-2-(다이메틸아미노)-3-메틸부탄아미도)-N,3-다이메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로파노일)설파모일)페닐)-2-((S)-1-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)-14-아이소프로필-12-옥소-3,6,9-트라이옥사-13-아자펜타데칸아미도)-5-유레이도펜탄아마이드는 화합물 X-4(25㎎) 및 MT-Val-Cit-OH(63㎎)로부터 일반적 절차 10에 따라서 제조하였다. C70H110N12O18S 계산치 m/z = 1438.8 amu; 확인치 [M+H]+ = 1440.2, [(M+2H)/2]2+ = 720.5.
실시예 3.166: ( S )- N -((3 R ,4 S ,5 R )-1-(( S )-2-((1 R ,2 R )-3-(( S )-1-(4-아미노 페닐메틸설폰아미도 )-1-옥소-3- 페닐프로판 -2- 일아미노 )-1- 메톡시 -2- 메틸 -3- 옥소프로필 ) 피롤리딘 -1-일)-3- 메톡시 -5- 메틸 -1- 옥소헵탄 -4-일)-2-(( S )-2-( 다이메틸아미노 )-3- 메틸부탄아미도 )- N ,3- 다이메틸부탄아마이드( 화합물 Y)
단계 1: (S)-2-아미노-3-페닐-N-(4-(2,2,2-트라이플루오로아세트아미도)벤질설포닐)프로판아마이드(Y-1)는 Boc-페닐알라닌 및 2,2,2-트라이플루오로-N-(4-설파모일페닐)아세트아마이드로부터 일반적 절차 9 및 7 (S)-tert-뷰틸 1-옥소-3-페닐-1-(페닐메틸설폰아미도)프로판-2-일카바메이트에 따라서 제조되었다 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 7.76-7.71 (m, 2H), 7.58 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.36-7.21 (m, 8H), 4.34 (d, J = 13.1 Hz, 1H), 4.30 (d, J = 13.1 Hz, 1H), 3.62 (dd, J = 8.2, 4.6 Hz, 1H), 3.21-3.09 (m, 1H), 2.89 (dd, J = 14.3, 8.3 Hz, 1H). C18H18F3N3O4S 계산치 m/z = 429.10 확인치 [M+H]+ = 430.7.
단계 2: tert-뷰틸 (S)-1-(((3R,4S,5R)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-((S)-1-옥소-3-페닐-1-(4-(2,2,2-트라이플루오로아세트아미도)페닐메틸설폰아미도)프로판-2-일아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일카바메이트(Y-2)는 상업적으로 입수 가능한 Boc-Val-Dil-Dap-OH 및 화합물 Y-1로부터 일반적 절차 4를 수행함으로써 얻었다. C47H69F3N6O11S 계산치 m/z =982.47 확인치 [M+Na]+ = 1006.2.
단계 3: (S)-2-((S)-2-(다이메틸아미노)-3-메틸부탄아미도)-N-((3R,4S,5R)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-((S)-1-옥소-3-페닐-1-(4-(2,2,2-트라이플루오로아세트아미도)페닐메틸설폰아미도)프로판-2-일아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)-N,3-다이메틸부탄아마이드(Y-3)는 화합물 Y-2 및 N,N-다이메틸발린으로부터 일반적 절차 7 및 4에 따라서 제조하였다. C49H74F3N7O10S 계산치 m/z =1009.52 확인치 [M+H]+ = 1011.0.
단계 4: (S)-N-((3R,4S,5R)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-((S)-1-(4-아미노페닐메틸설폰아미도)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)-2-((S)-2-(다이메틸아미노)-3-메틸부탄아미도)-N,3-다이메틸부탄아마이드(Y-4)는 일반적 절차 3에 따라서 화합물 Y-3으로부터 제조되었다. C47H75N7O9S 계산치 m/z = 913.53 확인치 [M-C7H8O2S+Na]+ = 768.1 (퀴논 메타이드 단편화 및 4-아미노벤질설포네이트의 손실).
단계 5: (S)-N-((3R,4S,5R)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-((S)-1-(4-아미노 페닐메틸설폰아미도)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)-2-((S)-2-(다이메틸아미노)-3-메틸부탄아미도)-N,3-다이메틸부탄아마이드는 화합물 Y-4 및 MT-Val-Cit-OH로부터 일반적 절차 10에 따라서 제조하고, 이어서 분취 HPLC에 의해 정제시켰다. C71H112N12O18S 계산치 m/z = 1452.8 확인치 [M+H+]+ = 1454.6.
실시예 3.167: ( S , E )- N -(4-((14 R ,17 R )-1-(2,5- 다이옥소 -2,5- 다이하이드로 -1 H -피롤-1-일)-14- 아이소프로필 -12,15- 다이옥소 -17-(3- 유레이도프로필 )-3,6,9- 트라이옥사 -13,16- 다이아자옥타데칸아미도 )-2,3- 다이메틸페닐설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드( 화합물 Z)
단계 1: N-(2,3-다이메틸-4-설파모일페닐)-2,2,2-트라이플루오로아세트아마이드(Z-1)는 2,3-다이메틸아닐린으로부터 일반적 절차 8에 따라서 합성하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.25 (s, 1H), 7.79 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.48 (s, 2H), 7.29 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 2.55 (s, 3H), 2.14 (s, 3H).
단계 2: (S,E)-N-(4-아미노-2,3-다이메틸페닐설포닐)-2,5-다이메틸-4-((S)-N,3,3-트라이메틸-2-((S)-3-메틸-2-(메틸아미노)-3-페닐부탄아미도)부탄아미도)헥스-2-엔아마이드(Z-2)는 Boc-HTI-286-OH 및 화합물 Z-1로부터 일반적 절차 2, 3 및 7을 이용해서 합성하였다.
1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.75 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.47 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 7.37 (t, J = 6.9 Hz, 1H), 6.63 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.46 (d, J = 9.7 Hz, 1H), 5.00 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 4.93 (s, 1H), 4.32 (s, 1H), 3.17 (s, 3H), 2.54 (s, 3H), 2.49 (s, 3H), 2.09 (s, 3H), 2.08-2.02 (m, 1H), 1.87 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.47 (s, 3H), 1.37 (s, 3H), 1.07 (s, 9H), 0.92 (dd, J = 6.8, 6.5 Hz, 6H). C35H53N5O5S 계산치 m/z = 655.38 확인치 [M+H]+ = 656.4.
단계 3: (S,E)-N-(4-((14R,17R)-1-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)-14-아이소프로필-12,15-다이옥소-17-(3-유레이도프로필)-3,6,9-트라이옥사-13,16-다이아자옥타데칸아미도)-2,3-다이메틸페닐설포닐)-2,5-다이메틸-4-((S)-N,3,3-트라이메틸-2-((S)-3-메틸-2-(메틸아미노)-3-페닐부탄아미도)부탄아미도)헥스-2-엔아마이드는 화합물 Z-2 및 MT-NHS로부터 일반적 절차 6에 따라서 합성하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 8.01 (dd, J = 11.0, 8.2 Hz, 2H), 7.60-7.51 (m, 2H), 7.47 (dd, J = 8.5, 6.8 Hz, 3H), 7.41-7.31 (m, 1H), 6.83 (s, 2H), 6.50 (dd, J = 9.5, 1.8 Hz, 1H), 5.01 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 4.93 (t, J = 4.1 Hz, 1H), 4.60 (m, 1H), 4.36 (s, 1H), 4.30-4.17 (m, 1H), 3.80-3.67 (m, 4H), 3.64 (td, J = 5.5, 1.2 Hz, 2H), 3.60 (d, J = 3.2 Hz, 7H), 3.29-3.13 (m, 5H), 2.67-2.46 (m, 9H), 2.24 (s, 3H), 2.20-1.92 (m, 4H), 1.93-1.75 (m, 3H), 1.65 (dp, J = 16.0, 7.8 Hz, 2H), 1.43 (d, J = 38.9 Hz, 6H), 1.14-0.96 (m, 16H), 0.92 (t, J = 6.8 Hz, 6H). C59H90N10O14S 계산치 m/z = 1194.64 확인치 [M+H]+ 1195.51; [M+2H/2]+ 599.09.
실시예 3.168: ( S , E )- N -(4-((14 R ,17 R )-1-(2,5- 다이옥소 -2,5- 다이하이드로 -1 H -피롤-1-일)-14- 아이소프로필 -12,15- 다이옥소 -17-(3- 유레이도프로필 )-3,6,9- 트라이옥사 -13,16- 다이아자옥타데칸아미도 )-5,6,7,8- 테트라하이드로나프탈렌 -1- 일설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3-트라이메틸-2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드( 화합물 AA).
단계 1: 2,2,2-트라이플루오로-N-(4-설파모일-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-1-일)아세트아마이드(AA-1)는 5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-1-아민으로부터 일반적 절차 8에 따라서 합성하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.04 (s, 1H), 7.79 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.46 (s, 2H), 7.30 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.14 (s, 1H), 2.77 (d, J = 15.4 Hz, 1H), 2.72-2.57 (m, 4H), 1.73 (p, J = 3.3 Hz, 4H).
단계 2: (S,E)-N-(4-아미노-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-1-일설포닐)-2,5-다이메틸-4-((S)-N,3,3-트라이메틸-2-((S)-3-메틸-2-(메틸아미노)-3-페닐부탄아미도)부탄아미도)헥스-2-엔아마이드(AA-2)는 Boc-HTI-286-OH 및 화합물 AA-1로부터 일반적 절차 2, 3 및 7을 이용해서 합성하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.74 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.48 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.38 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 6.60 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 6.46 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 5.00 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 4.95-4.91 (m, 1H), 4.36 (s, 1H), 3.17 (s, 3H), 3.10-3.05 (m, 2H), 2.51 (s, 3H), 2.46 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.10-2.02 (m, 1H), 1.88 (s, 3H), 1.87-1.75 (m, 4H), 1.47 (s, 3H), 1.38 (s, 3H), 1.07 (s, 9H), 0.92 (dd, J = 7.1 Hz, 6H). C37H55N5O5S 계산치 m/z = 681.39 확인치 [M+H]+ = 682.4.
단계 3: (S,E)-N-(4-((14R,17R)-1-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)-14-아이소프로필-12,15-다이옥소-17-(3-유레이도프로필)-3,6,9-트라이옥사-13,16-다이아자옥타데칸아미도)-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-1-일설포닐)-2,5-다이메틸-4-((S)-N,3,3-트라이메틸-2-((S)-3-메틸-2-(메틸아미노)-3-페닐부탄아미도)부탄아미도)헥스-2-엔아마이드는 화합물 AA-2 및 MT-NHS로부터 일반적 절차 6에 따라서 합성하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.98 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.59-7.51 (m, 2H), 7.47 (dd, J = 8.5, 6.8 Hz, 2H), 7.42-7.30 (m, 1H), 6.83 (s, 2H), 6.50 (dd, J = 9.5, 1.8 Hz, 1H), 5.01 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 4.93 (t, J = 4.1 Hz, 1H), 4.62 (td, J = 8.1, 7.5, 5.0 Hz, 1H), 4.37 (s, 1H), 4.29-4.18 (m, 1H), 3.75 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.72-3.67 (m, 2H), 3.64 (td, J = 5.9, 1.5 Hz, 2H), 3.29-3.08 (m, 7H), 2.74 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 2.62-2.46 (m, 5H), 2.20-1.94 (m, 4H), 1.91-1.75 (m, 7H), 1.70-1.58 (m, 2H), 1.48 (s, 3H), 1.38 (s, 3H), 1.07 (s, 9H), 1.00 (dd, J = 6.8, 3.4 Hz, 6H), 0.92 (t, J = 6.6 Hz, 6H). C61H92N10O14S 계산치 m/z = 1220.65 확인치 [M+H]+ 1221.48; [(M+2H)/2]+ 611.39.
실시예 3.169: ( S , E )- N -(4-((14 R ,17 R )-1-(2,5- 다이옥소 -2,5- 다이하이드로 -1 H -피롤-1-일)-14- 아이소프로필 -12,15- 다이옥소 -17-(3- 유레이도프로필 )-3,6,9- 트라이옥사 -13,16- 다이아자옥타데칸아미도 )-3- 플루오로페닐설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드( 화합물 BB).
단계 1: 2,2,2-트라이플루오로-N-(2-플루오로-4-설파모일페닐)아세트아마이드(BB-1)는 2-플루오로아닐린으로부터 일반적 절차 8에 따라서 합성하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.58 (s, 1H), 7.85-7.66 (m, 3H), 7.56 (s, 2H).
단계 2: (S,E)-N-(4-아미노-3-플루오로페닐설포닐)-2,5-다이메틸-4-((S)-N,3,3-트라이메틸-2-((S)-3-메틸-2-(메틸아미노)-3-페닐부탄아미도)부탄아미도)헥스-2-엔아마이드(BB-2)는 Boc-HTI-286-OH 및 화합물 BB-1로부터 일반적 절차 2, 3 및 7을 이용해서 합성하였다.
1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.62-7.55 (m, 3H), 7.54 (s, 1H), 7.48 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 7.37 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 6.85 (t, J = 8.6 Hz, 1H), 6.45 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 4.98 (t, J = 9.9 Hz, 1H), 4.92 (s, 1H), 4.34 (s, 1H), 3.16 (s, 3H), 2.50 (s, 3H), 2.12-2.00 (m, 1H), 1.88 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.46 (s, 3H), 1.37 (s, 3H), 1.07 (s, 9H), 0.91 (dd, J = 6.8 Hz, 6H).
C33H48FN5O5S 계산치 m/z = 645.34 [M+H]+ = 646.4
단계 3: (S,E)-N-(4-((14R,17R)-1-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)-14-아이소프로필-12,15-다이옥소-17-(3-유레이도프로필)-3,6,9-트라이옥사-13,16-다이아자옥타데칸아미도)-3-플루오로페닐설포닐)-2,5-다이메틸-4-((S)-N,3,3-트라이메틸-2-((S)-3-메틸-2-(메틸아미노)-3-페닐부탄아미도)부탄아미도)헥스-2-엔아마이드는 화합물 BB-2 및 MT-NHS로부터 일반적 절차 6에 따라서 합성하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 8.42-8.28 (m, 1H), 7.91-7.77 (m, 2H), 7.58-7.51 (m, 2H), 7.47 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 7.42-7.32 (m, 1H), 6.84 (s, 2H), 6.50 (dd, J = 9.3, 1.8 Hz, 1H), 5.02-4.90 (m, 2H), 4.67 (td, J = 7.9, 7.2, 4.8 Hz, 1H), 4.35 (s, 1H), 4.26 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 3.76 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 3.70 (td, J = 5.5, 1.2 Hz, 2H), 3.67-3.53 (m, 10H), 3.28-3.06 (m, 5H), 2.61-2.47 (m, 5H), 2.19-2.01 (m, 2H), 2.01-1.71 (m, 4H), 1.61 (dt, J = 15.2, 7.1 Hz, 2H), 1.46 (s, 3H), 1.36 (s, 3H), 1.13-0.95 (m, 16H), 0.91 (dd, J = 6.6, 4.9 Hz, 6H).
C57H85FN10O14S 계산치 m/z = 1184.60 확인치 [M+H]+ 1185.47; [(M+2H)/2]+ 593.41.
실시예 3.170: ( S , E )- N -(4-((14 R ,17 R )-1-(2,5- 다이옥소 -2,5- 다이하이드로 -1 H -피롤-1-일)-14- 아이소프로필 -12,15- 다이옥소 -17-(3- 유레이도프로필 )-3,6,9- 트라이옥사 -13,16- 다이아자옥타데칸아미도 )-2- 에틸페닐설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드( 화합물 CC)
단계 1: N-(3-에틸-4-설파모일페닐)-2,2,2-트라이플루오로아세트아마이드(CC-1)는 3-에틸아닐린으로부터 일반적 절차 8에 따라서 합성하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.48 (s, 1H), 7.89 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.75-7.63 (m, 2H), 7.45 (s, 2H), 3.02 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 1.24 (t, J = 7.4 Hz, 3H).
단계 2: (S,E)-N-(4-아미노-2-에틸페닐설포닐)-2,5-다이메틸-4-((S)-N,3,3-트라이메틸-2-((S)-3-메틸-2-(메틸아미노)-3-페닐부탄아미도)부탄아미도)헥스-2-엔아마이드(CC-2)는 Boc-HTI-286-OH 및 화합물 CC-1로부터 일반적 절차 2, 3 및 7을 이용해서 합성하였다.
1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.79 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.48 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.37 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 6.57 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 6.54 (dd, J = 8.8, 2.4 Hz, 1H), 6.46 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 5.01 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 4.92 (s, 1H), 4.34 (s, 1H), 3.16 (s, 3H), 2.99-2.90 (m, 2H), 2.50 (s, 3H), 2.11-2.00 (m, 1H), 1.87 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.47 (s, 3H), 1.38 (s, 3H), 1.22 (t, J = 7.5 Hz, 3H), 1.06 (s, 9H), 0.91 (dd, J = 6.6 Hz, 6H).
C35H53N5O5S 계산치 m/z = 655.38 [M+H]+ = 656.4.
단계 3: (S,E)-N-(4-((14R,17R)-1-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)-14-아이소프로필-12,15-다이옥소-17-(3-유레이도프로필)-3,6,9-트라이옥사-13,16-다이아자옥타데칸아미도)-2-에틸페닐설포닐)-2,5-다이메틸-4-((S)-N,3,3-트라이메틸-2-((S)-3-메틸-2-(메틸아미노)-3-페닐부탄아미도)부탄아미도)헥스-2-엔아마이드는 화합물 CC-2 및 MT-NHS로부터 일반적 절차 6에 따라서 합성하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 8.04 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.77 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.67 (dd, J = 8.8, 2.2 Hz, 1H), 7.54 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.46 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 7.36 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 6.83 (s, 2H), 6.51 (dd, J = 9.5, 1.9 Hz, 1H), 5.01 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 4.92 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 4.60-4.47 (m, 1H), 4.37 (s, 1H), 4.23 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 3.82-3.72 (m, 2H), 3.69 (dd, J = 6.0, 4.5 Hz, 2H), 3.66-3.52 (m, 10H), 3.28-3.10 (m, 5H), 3.06 (q, J = 7.4 Hz, 2H), 2.58 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.52 (s, 3H), 2.20-1.90 (m, 3H), 1.87 (s, 3H), 1.84-1.72 (m, 1H), 1.64-1.55 (m, 2H), 1.47 (s, 3H), 1.37 (s, 3H), 1.26 (t, J = 7.5 Hz, 3H), 1.10-0.96 (m, 15H), 0.91 (dd, J = 6.6, 4.0 Hz, 6H). C59H90N10O14S 계산치 m/z = 1194.64 확인치 [M+H]+ 1195.57; [(M+2H)/2]+ 599.12
실시예 3.171: ( S , E )- N -(4-((14 R ,17 R )-1-(2,5- 다이옥소 -2,5- 다이하이드로 -1 H -피롤-1-일)-14- 아이소프로필 -12,15- 다이옥소 -17-(3- 유레이도프로필 )-3,6,9- 트라이옥사 -13,16- 다이아자옥타데칸아미도 )-3- 에틸페닐설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드( 화합물 DD ).
단계 1: N-(2-에틸-4-설파모일페닐)-2,2,2-트라이플루오로아세트아마이드(DD-1)는 2-에틸아닐린으로부터 일반적 절차 1에 따라서 합성하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.21 (s, 1H), 7.80 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.72 (dd, J = 8.2, 2.2 Hz, 1H), 7.48 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.41 (s, 2H), 2.64 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 1.16 (t, J = 7.5 Hz, 3H).
단계 2: (S,E)-N-(4-아미노-3-에틸페닐설포닐)-2,5-다이메틸-4-((S)-N,3,3-트라이메틸-2-((S)-3-메틸-2-(메틸아미노)-3-페닐부탄아미도)부탄아미도)헥스-2-엔아마이드(DD-2)는 Boc-HTI-286-OH 및 화합물 DD-1로부터 일반적 절차 2, 3 및 7을 이용해서 합성하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.66 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.61 (dd, J = 8.6, 2.3 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.48 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 7.37 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 6.71 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.43 (dd, J = 9.3, 1.7 Hz, 1H), 4.96 (t, J = 9.9 Hz, 1H), 4.92 (s, 1H), 4.35 (s, 1H), 3.16 (s, 3H), 2.54 (dd, J = 7.4, 2.2 Hz, 2H), 2.51 (s, 3H), 2.12-1.99 (m, 1H), 1.87 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.46 (s, 3H), 1.36 (s, 3H), 1.27 (t, J = 7.5 Hz, 3H), 1.07 (s, 9H), 0.91 (dd, J = 6.4 Hz, 6H). C35H53N5O5S 계산치 m/z = 655.38 [M+H]+ = 656.5.
단계 3: (S,E)-N-(4-((14R,17R)-1-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)-14-아이소프로필-12,15-다이옥소-17-(3-유레이도프로필)-3,6,9-트라이옥사-13,16-다이아자옥타데칸아미도)-3-에틸페닐설포닐)-2,5-다이메틸-4-((S)-N,3,3-트라이메틸-2-((S)-3-메틸-2-(메틸아미노)-3-페닐부탄아미도)부탄아미도)헥스-2-엔아마이드는 화합물 DD-2 및 MT-NHS로부터 일반적 절차 6에 따라서 합성하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.97 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.87 (dd, J = 8.5, 2.3 Hz, 1H), 7.77 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.59-7.51 (m, 2H), 7.51-7.42 (m, 2H), 7.41-7.34 (m, 1H), 6.84 (s, 2H), 6.48 (dd, J = 9.4, 1.8 Hz, 1H), 4.98 (t, J = 9.9 Hz, 1H), 4.92 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.64 (td, J = 8.4, 7.6, 3.7 Hz, 1H), 4.36 (s, 1H), 4.25 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 3.82-3.67 (m, 4H), 3.67-3.53 (m, 10H), 3.29-3.09 (m, 5H), 2.77 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 2.62-2.46 (m, 5H), 2.20-1.95 (m, 4H), 1.91-1.74 (m, 4H), 1.72-1.60 (m, 2H), 1.47 (s, 3H), 1.37 (s, 3H), 1.27 (t, J = 7.5 Hz, 3H), 1.12-0.95 (m, 16H), 0.91 (dd, J = 6.6, 4.6 Hz, 6H). C59H90N10O14S 계산치 m/z = 1194.64 확인치 [M+H]+ 1195.54; [(M+2H)/2]+ 599.09.
실시예 3.172: ( S )- N -(4-( N -(( S , E )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔오일 ) 설파모일 ) 페닐 )-1-(( S )-1-(2,5-다이옥소-2,5- 다이하이드로 -1 H -피롤-1-일)-14- 메틸 -12-옥소-3,6,9- 트라이옥사 -13- 아자펜타데칸 ) 피롤리딘 -2- 카복스아마이드 (화합물 EE ).
일반적 절차 10에 따라서 화합물 N-1c 및 Boc-Ala-Pro-OH로부터 합성하고, 이어서 일반적 절차 7에 따라서 Boc-제거 및 분취 HPLC에 의한 정제 전에 일반적 절차 6에 따라서 MT-NHS 배치를 실시하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.99 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 7.81 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.55 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.48 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 7.38 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 6.84 (s, 2H), 6.54-6.42 (m, 1H), 5.07-4.95 (m, 2H), 4.67 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 4.57 (dd, J = 8.4, 4.6 Hz, 1H), 4.35 (s, 1H), 3.95-3.83 (m, 1H), 3.80-3.66 (m, 5H), 3.61 (dd, J = 18.6, 4.6 Hz, 10H), 3.16 (s, 3H), 2.58-2.42 (m, 5H), 2.36 (d, J = 18.0 Hz, 1H), 2.23-1.98 (m, 4H), 1.86 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.46 (s, 3H), 1.43-1.31 (m, 6H), 1.07 (s, 10H), 0.91 (t, J = 6.3 Hz, 6H). C59H90N10O14S 계산치 m/z = 1078.54 확인치 [M+H]+ 1079.48; [(M+2H)/2]+ 540.27.
실시예 3.173: ( S , E )- N -(4-(( S )-6-아미노-2-(( S )-2-(3-(2-(2,5- 다이옥소 -2,5- 다이하이드로 -1 H -피롤-1-일) 에톡시 ) 프로판아미도 )-3- 페닐프로판아미도 ) 헥산아미도 ) 페닐설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드( 화합물 FF).
표제의 화합물은 일반적 절차 10에 따라서 화합물 N-1c 및 Fmoc-Phe-Lys(Boc)-OH로부터 제조하고, 이어서 일반적 절차 5에 따라서 Fmoc 제거, 일반적 절차 6에 따라서 MT-NHS에 의한 아실화 그리고 분취 HPLC에 의한 정제 전에 일반적 절차 7에 따라서 탈보호를 실시하였다. C61H87N9O13S 계산치 m/z = 1185.6 확인치 [M+H+]+ = 1186.6 및 [(M+2H+)/2]2+ = 593.9.
실시예 3.174: ( S , E )- N -((4-((14 S ,17 S )-17-(4- 아미노뷰틸 )-1-(2,5- 다이옥소 -2,5- 다이하이드로 -1 H -피롤-1-일)-14- 아이소프로필 -12,15- 다이옥소 -3,6,9- 트라이옥사 -13,16- 다이아자옥타데칸아미도 ) 페닐 ) 설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드( 화합물 GG ).
표제의 화합물은 일반적 절차 10에 따라서 화합물 N-1c 및 Fmoc-Val-Lys(Boc)-OH로부터 제조하고, 이어서 일반적 절차 5에 따라서 Fmoc 제거, 일반적 절차 6에 따라서 MT-NHS에 의한 아실화 그리고 분취 HPLC에 의한 정제 전에 일반적 절차 7에 따라서 탈보호를 실시하였다. C57H87N9O13S 계산치 m/z = 1137.6 확인치 [M+H+]+ = 1138.5 및 [(M+2H+)/2]2+ = 569.8.
실시예 3.175: ( S , E )- N -(4-((2 S ,5 S ,8 R )-2-(4- 아미노뷰틸 )-5-벤질-15-(2,5- 다이옥소 -2,5- 다이하이드로 -1 H -피롤-1-일)-8- 메틸 -4,7,10- 트라이옥소 -13-옥사-3,6,9- 트라이아자펜타데칸아미도 ) 페닐설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드( 화합물 HH ).
표제의 화합물은 화합물 N-1c 및 Fmoc-Ala-Phe(D)-Lys(Boc)-OH로부터 일반적 절차 10에 따라서 제조하였다. 플래시 크로마토그래피에 의해 정제된 얻어진 물질에 이어서 일반적 절차 5를 실시하여 Fmoc 보호기를 제거하고 나서, 일반적 절차 6에 따라서 MT-NHS에 의한 처리를, 그리고 분취 HPLC에 의한 정제 전에 일반적 절차 7에 따라서 탈보호를 실시하였다. C64H92N10O14S 계산치 m/z = 1256.7 확인치 [M+H+]+ = 1258.3 및 [(M+2H+)/2]2+ = 630.2.
실시예 3.176: ( S , E )- N -(4-((2 S ,5 S ,8 R )-2-(4- 아미노뷰틸 )-5,8- 다이벤질 -15-(2,5- 다이옥소 -2,5- 다이하이드로 -1 H -피롤-1-일)-4,7,10- 트라이옥소 -13-옥사-3,6,9- 트라이아자펜타데칸아미도 ) 페닐설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드( 화합물 II).
표제의 화합물은 화합물 N-1c 및 Fmoc-Phe-Phe(D)-Lys(Boc)-OH로부터 일반적 절차 10에 따라서 제조하고, 일반적 절차 5를 통해서 Fmoc-제거를, 일반적 절차 6에 따라서 MT-NHS와의 반응을 그리고 일반적 절차 7에 따라서 탈보호를 행하고 나서 분취 HPLC 정제를 행하였다. C69H94N10O14S 계산치 m/z = 1332.7 확인치 [M+H+]+ = 1334.3 및 [(M+2H+)/2]2+ = 668.2.
실시예 3.177: ( S , E )- N -(2-((14 S ,17 S )-1-(2,5- 다이옥소 -2,5- 다이하이드로 -1 H -피롤-1-일)-14- 아이소프로필 -12,15- 다이옥소 -17-(3- 유레이도프로필 )-3,6,9- 트라이옥사 -13,16- 다이아자옥타데칸아미도 ) 페닐설포닐 )-2,5- 다이메틸 -4-(( S )- N ,3,3- 트라이메틸 -2-(( S )-3- 메틸 -2-( 메틸아미노 )-3- 페닐부탄아미도 ) 부탄아미도 ) 헥스 -2- 엔아마이드( 화합물 JJ ).
단계 1: 2,2,2-트라이플루오로-N-(2-설파모일페닐)아세트아마이드(JJ-1)는 2-아미노벤젠설폰아마이드로부터 일반적 절차 1에 따라서 제조하였다.
단계 2: (S,E)-N-(2-아미노페닐설포닐)-2,5-다이메틸-4-((S)-N,3,3-트라이메틸-2-((S)-3-메틸-2-(메틸아미노)-3-페닐부탄아미도)부탄아미도)헥스-2-엔아마이드(JJ-2)는 화합물 JJ-1 및 Boc-HTI-286-OH로부터 일반적 절차 2 및 3에 따라서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 7.75 (dd, J = 8.2, 1.5 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.48 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 7.38 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.33-7.27 (m, 1H), 6.81 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.69 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 6.49 (dd, J = 9.1, 1.5 Hz, 1H), 4.97 (t, J = 10.1 Hz, 1H), 4.92 (s, 1H), 4.35 (s, 1H), 3.17 (s, 3H), 2.51 (s, 3H), 2.07 (m, 1H), 1.88 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.46 (s, 3H), 1.36 (s, 3H), 1.06 (s, 9H), 0.92 (t, J = 6.8 Hz, 6H).C33H49N5O5S 계산치 m/z = 627.35 amu; 확인치 [M+H]+ = 628.36, [M+Na]+ = 650.37, [(M+2H)/2]2+ = 314.76.
단계 3: tert-뷰틸 ((S)-1-(((S)-1-((2-(N-((S,E)-2,5-다이메틸-4-((S)-N,3,3-트라이메틸-2-((S)-3-메틸-2-((tert-뷰톡시카보닐)메틸아미노)-3-페닐부탄아미도)부탄아미도)헥스-2-엔오일)설파모일)페닐)아미노)-1-옥소-5-유레이도펜탄-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카바메이트(JJ-3)는 화합물 JJ-2 및 Boc-Val-Cit-OH로부터 일반적 절차 10에 따라서 생성하였다. C54H85N9O12S 계산치 m/z = 1083.60 amu; 확인치 [M+H]+ = 1084.8, [M+Na]+ = 1106.7.
단계 4: (S,E)-N-(2-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)-5-유레이도펜탄아미도)페닐설포닐)-2,5-다이메틸-4-((S)-N,3,3-트라이메틸-2-((S)-3-메틸-2-(메틸아미노)-3-페닐부탄아미도)부탄아미도)헥스-2-엔아마이드(JJ-4)는 화합물 JJ-3으로부터 일반적 절차 7에 따라서 생성하였다. C44H69N9O8S 계산치 m/z = 883.50 amu; 확인치 [M+H]+ = 884.6, [M+Na]+ = 906.6, [(M+2H)/2]2+ = 442.8.
단계 5: (S,E)-N-(2-((14S,17S)-1-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)-14-아이소프로필-12,15-다이옥소-17-(3-유레이도프로필)-3,6,9-트라이옥사-13,16-다이아자옥타데칸아미도)페닐설포닐)-2,5-다이메틸-4-((S)-N,3,3-트라이메틸-2-((S)-3-메틸-2-(메틸아미노)-3-페닐부탄아미도)부탄아미도)헥스-2-엔아마이드는 분취 HPLC-MS에 의한 정제 전에 화합물 JJ-4 및 MT-NHS로부터 일반적 절차 6에 따라서 생성하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d 4) δ 8.16 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.95 (dd, J = 8.0, 1.6 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.42 (dt, J = 15.5, 7.8 Hz, 3H), 7.29 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 7.19 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 6.85 (s, 2H), 6.62 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 4.66 (s, 1H), 4.61 (dd, J = 9.1, 4.5 Hz, 1H), 4.37 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 3.76 (dd, J = 7.5, 5.7 Hz, 2H), 3.73-3.67 (m, 2H), 3.67-3.56 (m, 10H), 3.29-3.13 (m, 4H), 3.11 (s, 3H), 2.70 (s, 6H), 2.65-2.49 (m, 2H), 2.22 (s, 3H), 2.11 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 2.00 (dt, J = 17.2, 6.2 Hz, 2H), 1.86 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.66 (dt, J = 14.5, 7.8 Hz, 2H), 1.01 (d, J = 13.3 Hz, 15H), 0.87 (dd, J = 21.4, 6.6 Hz, 6H). C57H86N10O14S 계산치 m/z = 1166.60 amu; 확인치 [M+H]+ = 1167.8, [M+Na]+ = 1189.9, [(M+2H)/2]2+ = 584.4.
실시예 3.178: MT-Val- Cit -OH: (14 R ,17 R )-1-(2,5- 다이옥소 -2,5- 다이하이드로 -1 H -피롤-1-일)-14- 아이소프로필 -12,15- 다이옥소 -17-(3- 유레이도프로필 )-3,6,9- 트라이옥사 -13,16- 다이아자옥타데칸 -18- 오익산 .
표제의 화합물은 다이옥산(0.50㎖) 중 N,N-다이-아이소프로필에틸아민(0.448㎖, 2 당량)과 함께 H-VC-OH(0.50g, 1.287 m㏖) 및 MT-NHS (0.512g, 1.287 m㏖)로부터 제조하였다. 출발 물질의 소진 시(대략 16시간, HPLC-MS에 의해 평가됨), 이 반응물을 진공 중 농축시키고 얻어진 오일을 분취 HPLC-MS에 의해 정제시켰다. 목적으로 하는 분획들의 동결건조에 의해 표제의 화합물을 백색 분말로서 제공하였다(0.351g, 63%). 1H NMR (400 MHz, 클로로폼-d) δ 6.76 (s, 2H), 4.54-4.59 (m, 1H), 4.33 - 4.38 (m, J = 7.6 Hz, 1H), 3.85 - 3.70 (m, 5H), 3.60-3.68 (m, 10H), 3.18-3.22 (m, 2H), 2.55-2.62 (m, 2H), 2.10-2.18 (m, 1H), 1.90-2.05 (m, 1H), 1.72-1.85 (m, 1H), 1.54-1.65 (m, 2H), 0.98 (t, J = 6.6 Hz, 6H).
실시예 3.179: 기타 대표적인 화합물( P 1 ).
이하의 대표적인 화합물은 상기 절차에 따라서 제조될 수 있다. 당업자가 인식하고 있는 바와 같이, 이하의 화합물은 전구체 반응물을 얻기 위하여 WO 2004/026293의 개시를 이용해서 적절한 설폰아마이드를 일반적 절차에 적용함으로써 합성적으로 접근 가능하다.
Figure pct00078
Figure pct00079
Figure pct00080
Figure pct00081
Figure pct00082
실시예 4: 화학식 I의 소정의 화합물의 제조.
단백질:
절단된(truncated) 재조합 VAR2CSA 단백질(도메인 경계에 대하여 문헌 [Dahlback et al., J. Biol. Chem. 286: 15908-15917] 참조)이 이.콜라이 또는 진핵 발현 시스템에서 발현되었고, 이를 하기 일반적인 방법에 따라 정제하였다.
재조합 VAR2CSA 단백질을 위한 일반적인 정제 방법
재조합 DBL1-ID2a 및 ID1-ID2a를 안정한 형질감염된 초파리 슈나이더(Drosophila Schneider)-2(S2) 세포 또는 바큘로바이러스 형질감염된 곤충 세포에서 생성하였다. 수확된 배양 상청액을 악타 크로스플로우(Acta Crossflow)를 사용하여 정용여과하였다. 두 단백질의 HIS 태깅(tagging)된 버전을 Ni++ 5㎖ HisTrap HP 칼럼에서 정제하고, 350mM 이미다졸로 용리시켰다. 용리된 분획을 수퍼덱스200(Superdex200) GF 칼럼(1×PBS, 0.5M NaCl, pH 7.2, 버퍼 300㎖당 CMPIT 프로테아제 저해제 1정)에서 추가로 정제하고, 추가로 분석 및 독소 커플링을 위하여 단량체 분획을 선택하였다. 폴리히스티딘 태그를 갖거나 갖지 않는 VAR2CSA 재조합 단백질을 또한 표준 이온 교환 칼럼(음성 및 양성 선택)을 사용하여 정제하고, 추가로 소수성 상호작용뿐만 아니라 이온성 상호작용을 이용하여 칼럼에서 정제하였다. 단백질을 또한 VAR2CSA 특이적 항체 시약과 VAR2CSA 단백질 사이의 특이적인 상호작용을 기반으로 하여, VAR2CSA에 특이적인 결합된 나노체 또는 항체로 칼럼에서 정제하였다. 단백질을 NaCl 구배 또는 7.4에서 2로 떨어지는 pH 구배로 용리한 후, 염기성 버퍼 중에서 즉시 중화시켰다. 정제 동안 단백질을 안정화시키기 위하여, 하기 화합물을 (각각 단독으로 또는 조합하여) 사용하였다: 하이드록시엑토인, 슈크로스, EDTA, D-솔비톨, 자일리톨, D-(+)-트레할로스 데하이드레이트, 베타인 1수화물, 트립톤, Gly-gly-gly, Gly-gly, 6-아미노헥산산, L-세린, β-알라닌, L-히스티딘, 글리신, L-아르기닌, L-아르기닌+L-글루탐산, 타우린, 비세제(Non Detergent) 설포베타인 211(NDSB-211).
C3029H 또는 C3030H 이.콜라이 세포에서 발현된 재조합 VAR2CSA 단백질을 초음파처리에 의해 생성된 세포 용해물로부터 정제하였다. 폴리히스티딘 태깅된 단백질을 Ni++ 5㎖ HisTrap HP 칼럼에서 정제하고, 350mM 이미다졸로 용리시켰다. 용리된 분획을 추가로 수퍼덱스200 GF 칼럼(1×PBS, 0.5M NaCl, pH 7.2, 버퍼 300㎖당 CMPIT 프로테아제 저해제 1정)에서 정제하고, 추가로 분석 및 독소 커플링을 위하여 단량체 분획을 선택하였다.
세포 결합 패널:
많은 암 세포주를 FACS에 의한 VAR2CSA에의 결합에 대하여 스크리닝하였다. 표 6은 암 세포주의 패널에 대한 재조합 DBL1-ID2a의 결합을 요약한다. VAR2CSA 염색으로부터의 신호(mIgG2ak 항-V5-FITC에 의해 검출된 결합된 V5-태깅된 VAR2CSA의 평균 형광 강도)를 배경(mIgG2a-FITC 동형 대조군 항체에 의해 검출된 결합된 V5-태깅된 VAR2CSA의 평균 형광 강도)과 비교한다.
일반적인 방법: FACS에 의한 암 세포에 대한 재조합 VAR2CSA의 결합
세포를 검정 전에 이들의 각각의 성장 배지에서 대수 성장으로 확립하였다. 염색을 수행하는 날, 배양 배지를 흡인하고 제거하였다. PBS 5㎖를 배양 용기에 가하여 세포를 헹군 다음, PBS를 흡인으로 제거하였다. 이 시점에서, 세포 해리 버퍼(3㎖; Sigma C5914)를 부착 세포주에 가하고, 현미경으로 분리가 관찰될 때까지 세포를 배양하였다. 세포 해리 시약을 혈청 함유 배양 배지 7㎖로 중화시키고, 트립판 블루 배제 검정을 사용하여 세포 생존능을 측정하였다. 대안적으로, PBS로 세척 직후 현탁액 세포를 생존능에 대하여 검정하였다. 세포를 96 웰 V자 바닥형 플레이트(50,000 세포/웰)의 바닥에 가하고, 원심분리(400×g, 3 분)로 펠릿화시켰다. 상청액 제거 후, 15㎕의 V5-태깅된 재조합 VAR2CSA(400 nM) 또는 FACS 버퍼(PBS + 1% FBS)를 재현탁된 세포 펠릿에 가하였다. 1시간의 기간 동안 얼음 위에서 배양 후, 플레이트를 FACS 버퍼 200㎕의 첨가, 원심분리(400×g, 3 분), 상청액 제거, 펠릿 붕괴와 함께 FACS 버퍼 200㎕ 중에 세포 펠릿의 재현탁, 원심분리(400×g, 3 분), 및 최종적인 상청액 제거로 세척하였다. 세포 펠릿을 25㎕의 mIgG2ak 항-V5-FITC(1:100 희석), 또는 mIgG2a-FITC(2 ㎍/㎖ 희석) 및 7A.A.D(2.5 ㎍/㎖) 중에 재현탁시켰다. 플레이트를 상기 기재된 바와 같이 세포 세척 전에 0.5시간 동안 얼음 위에서 배양하였다. 그 다음, 세포 펠릿을 FACS 버퍼 75㎕ 중에 재현탁시키고, 유세포 분석으로 분석하였다. 데이터는 FITC 채널에서 생세포(7-AAD 음성 개체수) 기하 평균 형광으로서 표시된다.
표 6. FACS에 의해 평가된 바와 같은 재조합 VAR2CSA에 의한 세포주 결합.
Figure pct00083
Figure pct00084
예시적인 접합 조건:
일반적인 방법: 말레이미드 작용화된 독소와 시스테인 잔기에서의 커플링
절단된 재조합 VAR2CSA 단백질 DBL1-ID2a의 분취액(로트 MP1255; 197㎕; 181㎍)을 얼음 위에서 해동하고, 얼음 위에서 취급하였다. 완전하고 즉시적인 혼합하에 단백질 용액에 말레이미드 작용화된 독소(10mM DMSO 스톡 용액 2.4㎕; 단백질에 대하여 15.0 당량)를 가하였다. 90 분의 기간 동안 반응이 진행되도록 허용하고, 그 시간 후, 용액을 PBS로 전처리된 제바(Zeba) 스핀 탈염 칼럼(피어스사, 제품 #87766, 로트 #198863)에 적용하였다. 회수된 용리액을 분취하고, 사용 전에 -80℃에서 냉동시켰다.
말레이미드 작용화된 독소의 예
화합물 O
Figure pct00085
MCvcPABC-3.90
Figure pct00086
일반적인 방법: NHS-에스터 작용화된 독소와 라이신 잔기에서의 커플링
절단된 재조합 VAR2CSA 단백질 DBL1-ID2a의 분취액(197㎕; 181㎍)을 얼음 위에서 해동하고, 그 후, 얼음 위에서 취급하였다. 완전하고 즉시적인 혼합하에 단백질 용액에 NHS 에스터 작용화된 독소(5mM DMSO 스톡 용액 3.2㎕; 단백질에 대하여 10.0 당량)을 가하였다. 90 분의 기간 동안 반응이 진행되도록 허용하고, 그 시간 후, 용액을 PBS로 전처리된 제바 스핀 탈염 칼럼(피어스사, 제품 #87766, 로트 #198863)에 적용하였다. 회수된 용리액을 분취하고, 사용 전에 -80℃에서 냉동시켰다.
N-하이드록시석신이미딜 에스터 작용화된 독소의 예
화합물 KK
Figure pct00087
표준 특성화 과정:
1. 정제된 약물 접합체를 총 단백질 함량에 대하여 평가하였다(BCA 검정, 피어스 마이크로BCA 프로토콜(Pierce microBCA protocol)).
2. VAR2CSA 접합체를 변형되지 않은 VAR2CSA와 함께, 쿠마시 블루 염색 및 적절한 단백질 표준을 사용하여, 환원 및 비환원 조건하에 SDS-PAGE를 통해 분해 및/또는 올리고머화에 대하여 평가하였다.
3. 정제된 VAR2CSA 약물 접합체를 (변형되지 않은 VAR2CSA와 함께) 크기 배제 초고성능 액체 크로마토그래피-질량 분석계(SEC-UPLC-QTof-MS)로 평가하여 약물 로딩을 평가하였다. 평균 약물 대 VAR2CSA 비율(DVR)을 VAR2CSA + 1 약물, 2 약물, 3 약물 등에 해당하는 피크 강도의 평가를 통해 디콘볼루션(deconvolution)된 질량 스펙트럼으로부터 측정하였다.
일반적인 방법: DVR 측정을 위한 VAR2CSA 접합체의 SEC-UPLC-ESI-ToF-MS 분석
VAR2CSA 접합체의 냉동된 분취액을 SEC-EsiTofMS 분석 전에 해동하였다. SEC 분석을 워터스 액쿼티(WATERS Acquity) UPLC BEH200 SEC 1.7㎛ 4.6×150㎜ 칼럼 및 아세토나이트릴/물/트라이플루오로아세트산/포름산(30/70/0.1/0.1, v/v/v/v% - 일부 예에서 트라이플루오로아세트산은 생략됨)으로 구성된 이동상, 및 30℃의 칼럼 온도로 수행하였다. 샘플 10㎕를 SEC 칼럼에 주입하였다. 용리 시간은 11.0 분이었다. VAR2CSA 및 VAR2CSA 접합체는 대략 3.4분에 용리되었다. MassLynx 데이터 획득 소프트웨어(워터스사(Waters Corporation))를 사용하여 500 내지 4500 m/z 범위에서 전기분무 이온원(워터스 20사(WATERS 20 Corporation))을 갖는 콰트로-프레미어(Quatro-Premier) QToF 질량 분석계에서 MS 총 이온 전류(TIC) 데이터를 획득하였다. 샘플 성분 질량 데이터를 양성 이온 V-모드에서 획득하고, Esi 공급원을 공급원 온도: 150℃, 탈용매화 온도: 350℃, 탈용매화 기체: 800 ℓ/시간, 샘플 콘 전압: 60 V, 모세관 전압: 3.0 kV, 탈용매화 기체: 질소, 및 충돌 기체: 아르곤으로 작동시켰다. 샘플 피크의 총합 TIC 질량 스펙트럼을 MaxEnt1 알고리즘으로 디콘볼루션시켜 샘플 성분의 중성 질량 데이터를 생성하였다.
평균 약물 대 VAR2CSA 비율 측정을 위한 예시적인 데이터:
말레이미드 작용화된 독소(화합물 O) 또는 NHS 작용화된 독소(화합물 KK)를 갖는 시스테인 및 라이신 잔기의 변형에 의하여 제조된 VAR2CSA(DBL1-ID2a) 접합체를 일반적인 방법에서 기재된 바와 같은 SEC-MS에 의하여 독소 로딩에 대하여 평가하였다. 미변형된 전구체 단백질에 대하여 수득된 추정된 질량은 114162 Da이었다.
도 8은 SEC-UPLC-QTof-MS MaxEnt1이 VAR2-화합물 O의 온전한 질량으로 진행되었음을 나타낸다. 115323 Da, 117662 Da 및 119999 Da에서 MS 신호는 1, 3 및 5 독소의 접합, 대략 4 독소의 단백질당 평균 접합 레벨과 일치한다.
도 9는 SEC-UPLC-QTof-MS MaxEnt1이 VAR2-화합물 KK의 온전한 질량으로 진행되었음을 나타낸다. 디콘볼루션된 MS 데이터의 프로파일은 5 이하의 독소(화합물 KK) 접합, 대략 2.5 약물의 평균 약물 로딩과 일치한다.
4. 접합체를 UPLC-ESI-트리플(Triple) 사중극자 질량 분석계에 의하여 미접합 링커-독소 또는 유리 독소의 존재에 대하여 평가하였다. 정제된 생성물 중의 임의의 미접합-약물을 아세토나이트릴 중의 0.1% 포름산의 단백질 침전으로 추출하였다. 추출물을 3 KDa 분자량 컷오프 필터(Amicon)를 통해 여과하였다. 수득된 여과액을 RP-UPLC-MSMS로 분석하여 미접합-약물의 양을 정량하였다. 미접합-약물의 양을 유리 약물(및 유리 약물-링커) 보정 곡선에 대하여 정량하였다. 사용된 UPLC-MSMS 장치는 탠덤 워터스 액쿼티(상표명) PDA 및 TQD 검출기가 있는 초성능 액체 크로마토그래프(워터스 액쿼티(상표명) UPLC)로 구성된다. 장치의 제어 및 데이터 획득은 PC 컴퓨터 및 워터스 임파워-2(Waters Empower-2)(상표명) 크로마토그래피 소프트웨어로 수행하였다.
상기 일반적인 접합 방법에 의해 제조된 VAR2-화합물 O 샘플에서 화합물 O의 검출.
유리 약물 분석을 기반으로 한 유리 ESI-MS를 위한 예시적인 데이터는 도 10에 도시된다. 유사한 결과를 유리 약물 화합물 886 단독에 있어서 수득하였다.
5. 결합의 특이성을 추정하기 위하여 "벤치마크(benchmark)" Myla 2059 피부 T 세포 림프종 세포주에 대한 결합에 대하여 유세포 분석 +/- CSA(시그마 C9819)로 VAR2CSA 약물 접합체를 평가하였다. 종양-세포 plCSA의 결합은 과량의 가용성 CSA와 VAR2CSA의 배양에 의하여 억제될 수 있다. 이는 용액 중의 VAR2CSA를 격리시키고 세포-표면에서 plCSA-결합을 억제시킨다. 과량의 가용성 CSA의 존재하에 관찰된 세포 표면 염색은 세포에 대한 VAR2CSA의 비특이적 결합을 지시하는 것으로 추정된다.
일반적인 방법: VAR2CSA-약물 접합체 결합 특이성의 측정을 기반으로 한 유세포 분석
검정 전에 이들 각각의 성장 배지에서 대수 성장으로 세포를 확립하였다. 접종(seeding)일에, 세포를 흡입하고, PBS+2%FBS 중에 재현탁시키고, 계수하고, 세포 생존능을 트립판 블루 배제 검정으로 측정하였다. 세포를 96 웰 V자형 바닥 플레이트(50,000 세포/웰) 바닥에 가하고, 원심분리(400×g, 3 분)로 펠릿화시켰다. 상청액 제거 후, 62.5㎕의 VAR2CSA 또는 VAR2CSA 접합체(+/- 400 ㎍/㎖ CSA) 또는 FACS 버퍼를 1 이상의 농도로 가하고(포화된 결합을 얻기 위하여 400nM; 대략 1nM로 적정), 세포 펠릿을 재현탁시켰다. 0.5시간의 기간 동안 얼음 위에 배양 후, 플레이트를 FACS 버퍼 200㎕의 첨가, 원심분리(400×g, 3분), 상청액 제거, 펠릿 붕괴와 함께 FACS 버퍼 200㎕ 중에 세포 펠릿의 재현탁, 원심분리(400×g, 3분), 및 최종적인 상청액 제거로 세척하였다. 세포 펠릿을 25㎕의 mIgG2ak 항-V5-FITC(1:100 희석), 또는 mIgG2a-FITC(2 ㎍/㎖ 희석) 및 7A.A.D(2.5 ㎍/㎖) 중에 재현탁시켰다. 플레이트를 상기 기재된 바와 같이 세포 세척 전에 0.5시간 동안 얼음 위에서 배양하였다. 그 다음, 세포 펠릿을 FACS 버퍼 50㎕ 중에 재현탁시키고, 유세포 분석으로 분석하였다. 데이터는 FITC 채널에서 생세포(7-AAD 음성 개체수) 기하 평균 형광으로서 표시된다.
도 11 내지 도 13은 Myla2059 세포주에 결합하는 화학식 I의 특정한 화합물의 특이성을 나타낸다.
6. VAR2CSA 약물 접합체를 넓은 범위의 암 세포주에 대항하는 시험관내 효능에 대하여 평가하였다. 다양한 농도의 각각의 접합체와 함께 세포를 배양하고, 성장 조건하에 배양하고, 미리 결정된 시간점에서 세포 생존능을 평가하였다. 표 7은 34개의 인간 암 세포주에 대항하는 대표적인 약물 접합체의 세포독성 활성을 요약한다. 음성 대조군으로서, CSA "넉아웃(knockout)" 세포주 K562 #14(또는 K562 #16)를 또한 VAR2CSA 약물 접합체로 처리할 수 있다. K562 #14 및 #16은 FACS에 의한 VAR2CSA에 대한 낮은 결합을 나타냈고, 이는 따라서 당해 세포주에 대한 접합체의 유의한 세포독성 효과는 과량의 유리 독소의 존재하에서만 발생할 수 있다는 것을 제시한다.
일반적인 방법: VAR2CSA-약물 접합체의 세포성 세포독성 검정
시험 물질을 첨가하기 전 날, 부착 세포를 2500 세포/배지 100 마이크로리터(㎕) 밀도로 완전 성장 배지를 사용하여 불투명벽 96-웰 조직 배양-처리된 마이크로타이터 플레이트에 가하였다(Colo205 세포를 5000 세포/배지 100㎕의 밀도로 가하였다). 세포를 37℃/5% CO2에서 하룻밤 동안 배양하여 세포가 마이크로타이터 플레이트 표면에 부착되도록 하였다. 시험 물질을 첨가하는 날, 현탁액 세포주를 분리된 96-웰 마이크로타이터 플레이트에 권고된 성장 배지를 사용하여 2500 세포/100㎕로 가하였다. 약물 접합체를 목적하는 최종 농도의 5배로 성장 배지 중에서 직접적으로 희석한 다음, 1:3으로 8 단계로 적정하였다. 시험 물질이 존재하지 않는 대조군(성장 배지 단독)을 6중으로 각각의 마이크로타이터 플레이트에서 배양하였다. 제조된 화합물/단백질-약물 접합체 적정물을 세포에 3중으로 가하였다(25㎕/웰). 세포 및 적정물을 37℃/5% CO2에서 5일 밤 동안 배양하였다. 배양 후, 제조된 셀티터-글로(CellTiter-Glo)(등록상표) 30㎕를 각각의 검정 웰에 가함으로써 세포 생존능을 셀티터-글로(등록상표) 시약을 사용하여 측정하였다. 마이크로플레이트 루미노미터(통합 시간 500 ㎳)를 사용하여 방출된 발광을 측정하기 전에 암실에서 검정을 적어도 20분 동안 배양하였다. 수집된 상대적인 발광 단위(RLU)를 상기 언급된 성장 배지 단독 대조군을 사용하여 세포독성%로 변환한다(세포독성% = 1 - [웰 RLU/평균 배지 단독 대조군 RLU]).
예시적인 세포독성 데이터는 도 14 내지 도 19에 도시된다.
Figure pct00088
실시예 5: 내약성 연구
연구 요약
암컷 CD-1 마우스(Harlan Laboratories)에 시험 물질 VAR2-화합물 O을 1.0 mg/kg 용량으로 q2dx3으로 주사하였다. 내약성 평가에 따른 용량 증가 또는 감소를 표 8의 연구 그룹화에 요약된 바와 같이 수행하였다. 마우스의 중량은 12일 동안 매주 3회 측정하였다.
Figure pct00089
* 그룹 1의 내약성을 측정한 후, 결정되는 용량. 3회 투여 후 1 mg/kg을 잘 견디는 경우, 3 mg/kg을 시험할 것이다. 1 mg/kg을 잘 견디지 못하는 경우, 0.3 mg/kg을 시험할 것이다.
** 그룹 1 및 그룹 2의 내약성을 측정한 후, 결정되는 용량. 그룹 1 및 2가 3회 투여 후 견디는 경우, 9 mg/kg을 시험할 것이다. 그룹 1 및 2가 3회 투여 후 잘 견디지 못하는 경우, 0.1 mg/kg을 시험한다. 그렇지 않은 경우, 당해 그룹은 폐기하거나, 대안적인 용량이 선택될 것이다.
*** 9 mg/kg에서 그룹 3의 내약성을 측정한 후, 결정되는 용량. 그룹 3이 3회 투여 후 견디는 경우, 15 mg/kg을 시험할 것이다. 그룹 3이 3회 투여를 잘 견디지 못하는 경우, 6 mg/kg을 시험한다.
결과
처치
모든 동물에게 주사 기록에 지시된 바와 같은 용량을 제공하였다.
체중
어떠한 그룹에서도 유의한 체중 손실이 관찰되지 않았다. 체중(평균 ± S.D.)은 도 20에 도시된다.
결론
VAR2-화합물 O 실험에서, 어떠한 마우스도 예정된 희생 12일 전에 종료되지 않았고, 이는 시험된 용량(15 mg/kg 이하)이 내약성이 있음을 지시하였다.
실시예 6: 카르파스 299 이종이식 효능 연구
연구 개요
암컷 C.B-17/IcrHsd-Prkdcscid 마우스(Harlan Laboratories)에 카르파스 299 인간 T 세포 림프종 종양 세포주를 등에 피하 이식하였다. 카르파스 299는 1986년에 T 세포 비호지킨 림프종을 지닌 25세 남자의 말초 혈액으로부터 확립되었고; 이는 현재 CD30+ 역성형 대세포 림프종(ALCL)으로 분류된다. 실험실 스톡은 마이코플라스마 음성이었다. 종양을 19일의 기간에 걸쳐 확립한 다음, 각각의 그룹(n=7)에 동일한 종양 용적이 분배되도록 시험 대상들을 종양 용적에 따라 그룹으로 나누었다. 처리일(21일)에 평균 종양 용적은 150㎣보다 컸다. 시험 물질을 연구 그룹화 표에 지시된 용량으로 1, 3, 및 6일(총 3회 주사)에 정맥내 투여하였다. 체중 및 종양 용적을 월요일, 수요일 및 금요일마다 측정하였다. 종양의 크기가 800㎣에 도달할 때까지 동물들을 연구에 남겨놓거나, 그렇지 않은 경우, 이들은 인도적인 종점에 도달했기 때문에 안락사가 필요하였다.
Figure pct00090
결과
시험 물질의 3회 IV 용량에 따른 연구 마우스의 체중을 도 21에 도시된다. 시험 물질의 3회 IV 용량에 따른 연구 마우스의 종양 용적은 도 22에 도시된다. 양방향 ANOVA 본페로니(Bonferroni) 사후시험에 의한 종양 용적의 통계학적 분석은 표 10에 나타낸다.
Figure pct00091
결론
결론적으로, VAR2-화합물 O는 카르파스 299 종양 성장을 억제하였다.
실시예 7: PC3 전립선암 효능 연구
연구 개요
숫컷 누드 nu/nu 마우스(Harlan Laboratories)에 마트리겔(Matrigel)(등록상표) 100㎕ 중의 PC3 전립선암 세포주를 등에 좌측 및 우측 모두에 피하 이식하였다. 실험실 스톡은 마이코플라스마 음성이었다. 종양을 28일의 기간에 걸쳐 확립한 다음, 각각의 그룹에 동일한 종양 용적이 분배되도록 시험 대상들을 종양 용적에 따라 그룹으로 나누었다. 처리일에 평균 종양 용적은 200 ㎣보다 컸다. 시험 물질을 연구 그룹화 표에 지시된 용량으로 1, 3, 및 6일(총 3회 주사)에 정맥내 투여하였다. 체중 및 종양 용적을 월요일, 수요일 및 금요일마다 측정하였다. 종양의 크기가 1000 ㎣에 도달할 때까지 동물들을 연구에 남겨놓거나, 그렇지 않은 경우, 이들은 인도적인 종점에 도달했기 때문에 안락사가 필요하였다.
Figure pct00092
결과
체중
연구 마우스의 체중은 도 23에 도시된다. 처치, 즉, 치료 시 다른 암(arm) 간의 체중 손실 차이는 없다. 관찰된 체중 손실은 종양 용적 증가로 인한 것이다. 임상학적 독성 징후는 관찰되지 않았다.
종양 용적
연구 마우스의 종양 용적은 도 24에 도시된다. 데이터는 평균 종양 용적 및 SEM을 나타낸다(종양 용적은 화학식 V = 0.5×W×L×l을 사용하여 계산하였다). T-시험을 사용하여 수행된 통계학적 평가는 표 12에 나타낸다.
Figure pct00093
부검
총 종양 용적이 1000㎣에 도달하는 경우 또는 임상학적 징후가 체중 손실로서 관찰되는 경우, 마우스를 희생시켰다. 부검은 어떠한 독성 또는 이상 징후를 보이지 않았다. 종점에 도달한 마우스의 수는 표 13에 나타낸다.
Figure pct00094
결론
결론적으로, VAR2-화합물 O는 PC3 종양 성장을 억제하였다. 마지막 처치 후 20일에, VAR2-화합물 O 부문에서 종양 용적 평균은 여전히 안정적이고, 비히클, VAR2 및 화합물 886 부문보다 유의하게 낮았다.
본 명세서에 언급된 모든 미국 특허, 미국 특허 출원 공개, 미국 특허 출원, 외국 특허, 외국 특허 출원 및 비특허 문헌은 이들의 전문이 본 발명의 설명과 상반되지 않는 정도까지 본원에 참조로서 인용된다. 이상으로부터, 본원에 기재된 특정한 실시형태가 예시의 목적으로 본원에 기재되었지만, 본원에 기재된 취지 및 범위를 벗어나지 않고 다양한 변형이 만들어질 수 있다는 것이 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 기재내용은 첨부된 청구항에 의한 바를 제외하고는 한정되지 않는다.
본 발명의 설명의 상이한 부분은 임의의 적합한 방식으로 조합될 수 있음이 고려된다. 예를 들면, 본 발명의 예시, 방법, 양태, 실시형태 등은 적합하게 시행되거나 본 발명의 임의의 다른 실시형태, 방법, 예시 또는 양태와 조합될 수 있다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어는 본 발명이 속한 분야의 숙련가에 의해 일반적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다.
용어의 예시를 포함하여 명세서의 예시의 사용은 오직 예시적인 목적을 위한 것이고, 본원에서 본 발명의 실시형태의 범위 및 의미를 한정함을 의도하지 않는다. 수치 범위는 범위를 정의하는 숫자들을 포함한다. 명세서에서, "포함하는"이라는 단어는 확장 가능한 용어로서 사용되며, "포함하지만 이에 한정되지 않는"이라는 어구와 실질적으로 동등하고, "포함하다"라는 단어는 해당 의미를 갖는다.
Figure pct00095
Figure pct00096
Figure pct00097
Figure pct00098
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Figure pct00100
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Figure pct00111
Figure pct00112
Figure pct00113
Figure pct00114
Figure pct00115
Figure pct00116
SEQUENCE LISTING <110> Zymeworks Inc.; Zymeworks Biochemistry Inc.; VAR2 Pharmaceuticals APS <120> VAR2CSA-DRUG CONJUGATES <130> WO/2015/095952 <140> PCT/CA2014/000919 <141> 2014-12-29 <150> US 62/051,886 <151> 2014-09-17 <150> US 61/921,242 <151> 2013-12-27 <150> US 62/051,899 <151> 2014-09-17 <160> 127 <170> PatentIn version 2.0 <210> 1 <211> 640 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> ID1 domain of FCR3, DBL2Xb domain of FCR3 and ID2a <400> 1 Asn Tyr Ile Lys Gly Asp Pro Tyr Phe Ala Glu Tyr Ala Thr Lys Leu 1 5 10 15 Ser Phe Ile Leu Asn Pro Ser Asp Ala Asn Asn Pro Ser Gly Glu Thr 20 25 30 Ala Asn His Asn Asp Glu Ala Cys Asn Cys Asn Glu Ser Gly Ile Ser 35 40 45 Ser Val Gly Gln Ala Gln Thr Ser Gly Pro Ser Ser Asn Lys Thr Cys 50 55 60 Ile Thr His Ser Ser Ile Lys Thr Asn Lys Lys Lys Glu Cys Lys Asp 65 70 75 80 Val Lys Leu Gly Val Arg Glu Asn Asp Lys Asp Leu Lys Ile Cys Val 85 90 95 Ile Glu Asp Thr Ser Leu Ser Gly Val Asp Asn Cys Cys Cys Gln Asp 100 105 110 Leu Leu Gly Ile Leu Gln Glu Asn Cys Ser Asp Asn Lys Arg Gly Ser 115 120 125 Ser Ser Asn Asp Ser Cys Asp Asn Lys Asn Gln Asp Glu Cys Gln Lys 130 135 140 Lys Leu Glu Lys Val Phe Ala Ser Leu Thr Asn Gly Tyr Lys Cys Asp 145 150 155 160 Lys Cys Lys Ser Gly Thr Ser Arg Ser Lys Lys Lys Trp Ile Trp Lys 165 170 175 Lys Ser Ser Gly Asn Glu Glu Gly Leu Gln Glu Glu Tyr Ala Asn Thr 180 185 190 Ile Gly Leu Pro Pro Arg Thr Gln Ser Leu Tyr Leu Gly Asn Leu Pro 195 200 205 Lys Leu Glu Asn Val Cys Glu Asp Val Lys Asp Ile Asn Phe Asp Thr 210 215 220 Lys Glu Lys Phe Leu Ala Gly Cys Leu Ile Val Ser Phe His Glu Gly 225 230 235 240 Lys Asn Leu Lys Lys Arg Tyr Pro Gln Asn Lys Asn Ser Gly Asn Lys 245 250 255 Glu Asn Leu Cys Lys Ala Leu Glu Tyr Ser Phe Ala Asp Tyr Gly Asp 260 265 270 Leu Ile Lys Gly Thr Ser Ile Trp Asp Asn Glu Tyr Thr Lys Asp Leu 275 280 285 Glu Leu Asn Leu Gln Asn Asn Phe Gly Lys Leu Phe Gly Lys Tyr Ile 290 295 300 Lys Lys Asn Asn Thr Ala Glu Gln Asp Thr Ser Tyr Ser Ser Leu Asp 305 310 315 320 Glu Leu Arg Glu Ser Trp Trp Asn Thr Asn Lys Lys Tyr Ile Trp Thr 325 330 335 Ala Met Lys His Gly Ala Glu Met Asn Ile Thr Thr Cys Asn Ala Asp 340 345 350 Gly Ser Val Thr Gly Ser Gly Ser Ser Cys Asp Asp Ile Pro Thr Ile 355 360 365 Asp Leu Ile Pro Gln Tyr Leu Arg Phe Leu Gln Glu Trp Val Glu Asn 370 375 380 Phe Cys Glu Gln Arg Gln Ala Lys Val Lys Asp Val Ile Thr Asn Cys 385 390 395 400 Lys Ser Cys Lys Glu Ser Gly Asn Lys Cys Lys Thr Glu Cys Lys Thr 405 410 415 Lys Cys Lys Asp Glu Cys Glu Lys Tyr Lys Lys Phe Ile Glu Ala Cys 420 425 430 Gly Thr Ala Gly Gly Gly Ile Gly Thr Ala Gly Ser Pro Trp Ser Lys 435 440 445 Arg Trp Asp Gln Ile Tyr Lys Arg Tyr Ser Lys His Ile Glu Asp Ala 450 455 460 Lys Arg Asn Arg Lys Ala Gly Thr Lys Asn Cys Gly Thr Ser Ser Thr 465 470 475 480 Thr Asn Ala Ala Ala Ser Thr Asp Glu Asn Lys Cys Val Gln Ser Asp 485 490 495 Ile Asp Ser Phe Phe Lys His Leu Ile Asp Ile Gly Leu Thr Thr Pro 500 505 510 Ser Ser Tyr Leu Ser Asn Val Leu Asp Asp Asn Ile Cys Gly Ala Asp 515 520 525 Lys Ala Pro Trp Thr Thr Tyr 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Lys Gly 85 90 95 Asp Asn Asn Ser Lys Leu Cys Lys Asp Leu Lys Tyr Ser Phe Ala Asp 100 105 110 Tyr Gly Asp Leu Ile Lys Gly Thr Ser Ile Trp Asp Asn Asp Phe Thr 115 120 125 Lys Asp Leu Glu Leu Asn Leu Gln Gln Ile Phe Gly Lys Leu Phe Arg 130 135 140 Lys Tyr Ile Lys Lys Lys Asn Ile Ser Thr Glu Gln Asp Thr Ser Tyr 145 150 155 160 Ser Ser Leu Asp Glu Leu Arg Glu Ser Trp Trp Asn Thr Asn Lys Lys 165 170 175 Tyr Ile Trp Leu Ala Met Lys His Gly Ala Gly Met Asn Ser Thr Thr 180 185 190 Cys Ser Cys Ser Gly Asp Ser Ser Ser Gly Glu Asn Gln Thr Asn Ser 195 200 205 Cys Asp Asp Ile Pro Thr Ile Asp Leu Ile Pro Gln Tyr Leu Arg Phe 210 215 220 Leu Gln Glu Trp Val Glu His Phe Cys Glu Gln Arg Gln Ala Lys Val 225 230 235 240 Lys Asp Val Ile Thr Asn Cys Asn Ser Cys Lys Glu Ser Gly Gly Thr 245 250 255 Cys Asn Ser Asp Cys Glu Lys Lys Cys Lys Asn Lys Cys Asp Ala Tyr 260 265 270 Lys Thr Phe Ile Glu Asp Cys Lys Gly Val Gly Gly Thr Gly Thr Ala 275 280 285 Gly Ser Ser Trp Val Lys Arg Trp Tyr Gln Ile Tyr Met Arg Tyr Ser 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Asp Ile Pro Thr Ile 355 360 365 Asp Leu Ile Pro Gln Tyr Leu Arg Phe Leu Gln Glu Trp Val Glu His 370 375 380 Phe Cys Lys Gln Arg Gln Glu Lys Val Lys Asp Val Ile Asn Ser Cys 385 390 395 400 Asn Ser Cys Lys Asn Thr Ser Ser Lys Thr Lys Leu Gly Asp Thr Cys 405 410 415 Asn Ser Asp Cys Glu Lys Lys Cys Lys Ile Glu Cys Glu Lys Tyr Lys 420 425 430 Lys Phe Ile Glu Glu Cys Arg Thr Ala Val Gly Gly Thr Ala Gly Ser 435 440 445 Ser Trp Ser Lys Arg Trp Asp Gln Ile Tyr Lys Met Tyr Ser Lys His 450 455 460 Ile Glu Asp Ala Lys Arg Asn Arg Lys Ala Gly Thr Lys Asn Cys Gly 465 470 475 480 Ile Thr Thr Gly Thr Ile Ser Gly Glu Ser Ser Gly Ala Asn Ser Gly 485 490 495 Val Thr Thr Thr Glu Asn Lys Cys Val Gln Ser Asp Ile Asp Ser Phe 500 505 510 Phe Lys His Leu Ile Asp Ile Gly Leu Thr Thr Pro Ser Ser Tyr Leu 515 520 525 Ser Ile Val Leu Asp Asp Asn Ile Cys Gly Asp Asp Lys Ala Pro Trp 530 535 540 Thr Thr Tyr Thr Thr Tyr Thr Thr Tyr Thr Thr Thr Glu Lys Cys Asn 545 550 555 560 Lys Glu Arg Asp Lys Ser Lys Ser Gln Gln Ser 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Arg Arg 2030 2035 2040 Arg Gln Leu Cys Phe Ser Arg Ile Val Arg Gly Pro Ala Asn Leu 2045 2050 2055 Arg Ser Leu Asn Glu Phe Lys Glu Glu Ile Leu Lys Gly Ala Gln 2060 2065 2070 Ser Glu Gly Lys Phe Leu Gly Asn Tyr Tyr Lys Glu His Lys Asp 2075 2080 2085 Lys Glu Lys Ala Leu Glu Ala Met Lys Asn Ser Phe Tyr Asp Tyr 2090 2095 2100 Glu Asp Ile Ile Lys Gly Thr Asp Met Leu Thr Asn Ile Glu Phe 2105 2110 2115 Lys Asp Ile Lys Ile Lys Leu Asp Arg Leu Leu Glu Lys Glu Thr 2120 2125 2130 Asn Asn Thr Lys Lys Ala Glu Asp Trp Trp Lys Thr Asn Lys Lys 2135 2140 2145 Ser Ile Trp Asn Ala Met Leu Cys Gly Tyr Lys Lys Ser Gly Asn 2150 2155 2160 Lys Ile Ile Asp Pro Ser Trp Cys Thr Ile Pro Thr Thr Glu Thr 2165 2170 2175 Pro Pro Gln Phe Leu Arg Trp Ile Lys Glu Trp Gly Thr Asn Val 2180 2185 2190 Cys Ile Gln Lys Gln Glu His Lys Glu Tyr Val Lys Ser Lys Cys 2195 2200 2205 Ser Asn Val Thr Asn Leu Gly Ala Gln Ala Ser Glu Ser Asn Asn 2210 2215 2220 Cys Thr Ser Glu Ile Lys Lys Tyr Gln Glu Trp Ser Arg Lys Arg 2225 2230 2235 Ser Ile Arg Trp Glu Thr Ile Ser Lys Arg Tyr Lys Lys Tyr Lys 2240 2245 2250 Arg Met Asp Ile Leu Lys Asp Val Lys Glu Pro Asp Ala Asn Thr 2255 2260 2265 Tyr Leu Arg Glu His Cys Ser Lys Cys Pro Cys Gly Phe Asn Asp 2270 2275 2280 Met Glu Glu Met Asn Asn Asn Glu Asp Asn Glu Lys Glu Ala Phe 2285 2290 2295 Lys Gln Ile Lys Glu Gln Val Lys Ile Pro Ala Glu Leu Glu Asp 2300 2305 2310 Val Ile Tyr Arg Ile Lys His His Glu Tyr Asp Lys Gly Asn Asp 2315 2320 2325 Tyr Ile Cys Asn Lys Tyr Lys Asn Ile His Asp Arg Met Lys Lys 2330 2335 2340 Asn Asn Gly Asn Phe Val Thr Asp Asn Phe Val Lys Lys Ser Trp 2345 2350 2355 Glu Ile Ser Asn Gly Val Leu Ile Pro Pro Arg Arg Lys Asn Leu 2360 2365 2370 Phe Leu Tyr Ile Asp Pro Ser Lys Ile Cys Glu Tyr Lys Lys Asp 2375 2380 2385 Pro Lys Leu Phe Lys Asp Phe Ile Tyr Trp Ser Ala Phe Thr Glu 2390 2395 2400 Val Glu Arg Leu Lys Lys Ala Tyr Gly Gly Ala Arg Ala Lys Val 2405 2410 2415 Val His Ala Met Lys Tyr Ser Phe Thr Asp Ile Gly Ser Ile Ile 2420 2425 2430 Lys Gly Asp Asp Met Met Glu Lys Asn Ser Ser Asp Lys Ile Gly 2435 2440 2445 Lys Ile Leu Gly Asp Thr Asp Gly Gln Asn Glu Lys Arg Lys Lys 2450 2455 2460 Trp Trp Asp Met Asn Lys Tyr His Ile Trp Glu Ser Met Leu Cys 2465 2470 2475 Gly Tyr Arg Glu Ala Glu Gly Asp Thr Glu Thr Asn Glu Asn Cys 2480 2485 2490 Arg Phe Pro Asp Ile Glu Ser Val Pro Gln Phe Leu Arg Trp Phe 2495 2500 2505 Gln Glu Trp Ser Glu Asn Phe Cys Asp Arg Arg Gln Lys Leu Tyr 2510 2515 2520 Asp Lys Leu Asn Ser Glu Cys Ile Ser Ala Glu Cys Thr Asn Gly 2525 2530 2535 Ser Val Asp Asn Ser Lys Cys Thr His Ala Cys Val Asn Tyr Lys 2540 2545 2550 Asn Tyr Ile Leu Thr Lys Lys Thr Glu Tyr Glu Ile Gln Thr Asn 2555 2560 2565 Lys Tyr Asp Asn Glu Phe Lys Asn Lys Asn Ser Asn Asp Lys Asp 2570 2575 2580 Ala Pro Asp Tyr Leu Lys Glu Lys Cys Asn Asp Asn Lys Cys Glu 2585 2590 2595 Cys Leu Asn Lys His Ile Asp Asp Lys Asn Lys Thr Trp Lys Asn 2600 2605 2610 Pro Tyr Glu Thr Leu Glu Asp Thr Phe Lys Ser Lys Cys Asp Cys 2615 2620 2625 Pro Lys Pro Leu Pro Ser Pro Ile Lys Pro Asp Asp Leu Pro Pro 2630 2635 2640 Gln Ala Asp Glu Pro Phe Asp Pro Thr Ile Leu Gln Thr Thr Ile 2645 2650 2655 Pro Phe Gly Ile Ala Leu Ala Leu Gly Ser Ile Ala Phe Leu Phe 2660 2665 2670 Met Lys Val Ile Tyr Ile Tyr Ile Tyr Val Cys Cys Ile Cys Met 2675 2680 2685 Tyr Val Cys Met Tyr Val Cys Met Tyr Val Cys Met Tyr Val Cys 2690 2695 2700 Met Tyr Val Cys Met His Val Cys Met Leu Cys Val Tyr Val Ile 2705 2710 2715 Tyr Val Phe Lys Ile Cys Ile Tyr Ile Glu Lys Glu Lys Arg Lys 2720 2725 2730 Lys <210> 57 <211> 58 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> BPTI, protease inhibitor <400> 57 Arg Pro Asp Phe Cys Leu Glu Pro Pro Tyr Thr Gly Pro Cys Lys Ala 1 5 10 15 Arg Ile Ile Arg Tyr Phe Tyr Asn Ala Lys Ala Gly Leu Cys Gln Thr 20 25 30 Phe Val Tyr Gly Gly Cys Arg Ala Lys Arg Asn Asn Phe Lys Ser Ala 35 40 45 Glu Asp Cys Met Arg Thr Cys Gly Gly Ala 50 55 <210> 58 <400> 58 000 <210> 59 <400> 59 000 <210> 60 <400> 60 000 <210> 61 <400> 61 000 <210> 62 <400> 62 000 <210> 63 <400> 63 000 <210> 64 <400> 64 000 <210> 65 <400> 65 000 <210> 66 <400> 66 000 <210> 67 <400> 67 000 <210> 68 <400> 68 000 <210> 69 <400> 69 000 <210> 70 <400> 70 000 <210> 71 <400> 71 000 <210> 72 <400> 72 000 <210> 73 <400> 73 000 <210> 74 <400> 74 000 <210> 75 <400> 75 000 <210> 76 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 76 aactacatca agggcgac 18 <210> 77 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 77 cttgttgata ttggtgtcgg t 21 <210> 78 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 78 cacagcgata gcggcaag 18 <210> 79 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 79 gtccagcttg ctggagtt 18 <210> 80 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 80 aactacatca agggcgac 18 <210> 81 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 81 gtccagcttg ctggagtt 18 <210> 82 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 82 aactacatca agggcgac 18 <210> 83 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 83 agcggcgttg gtggtgga 18 <210> 84 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 84 aactacatca agggcgac 18 <210> 85 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 85 gtacttgtac cggtaggg 18 <210> 86 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 86 cacagcgata gcggcaag 18 <210> 87 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 87 gtacttgtac cggtaggg 18 <210> 88 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 88 ctgaccaact gctacaag 18 <210> 89 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 89 ggtccagagg gtacagctt 19 <210> 90 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 90 ctgtccttca tcctgaac 18 <210> 91 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 91 ttcagcgttg ttgtactcgt a 21 <210> 92 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 92 ctgtccttca tcctgaac 18 <210> 93 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 93 gtccagaggg tacagctt 18 <210> 94 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 94 cactctgact ctggcacc 18 <210> 95 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 95 agaggacttc atcttgttgt tggt 24 <210> 96 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 96 ctgtccttca tcctgaac 18 <210> 97 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 97 agaggacttc atcttgttgt tggt 24 <210> 98 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 98 cactctgact ctggcacc 18 <210> 99 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 99 gtccagctta gaggagtt 18 <210> 100 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 100 ctgtccttca tcctgaac 18 <210> 101 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 101 gtccagctta gaggagtt 18 <210> 102 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 102 cactctgact ctggcacc 18 <210> 103 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 103 ggcggcgttg gtggtaga 18 <210> 104 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 104 ctgtccttca tcctgaac 18 <210> 105 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 105 ggcggcgttg gtggtaga 18 <210> 106 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 106 cactctgact ctggcacc 18 <210> 107 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 107 gtacttgtat ccgtgggg 18 <210> 108 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 108 ctgtccttca tcctgaac 18 <210> 109 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 109 gtacttgtat ccgtgggg 18 <210> 110 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 110 cacagcgata gcggcaag 18 <210> 111 <211> 36 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 111 ggtgtcgaag ttgatgtcgg gcagattgcc caggta 36 <210> 112 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 112 cacagcgata gcggcaag 18 <210> 113 <211> 36 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 113 agctgcggcc agattagcgc cctcgtggaa ggacac 36 <210> 114 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 114 cacagcgata gcggcaag 18 <210> 115 <211> 36 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 115 agcgcattca gctgcggcgt tggtcttgat ggagct 36 <210> 116 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 116 cacagcgata gcggcaag 18 <210> 117 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 117 gtccagcttg ctggagtt 18 <210> 118 <211> 36 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 118 gctaatctgg ccgcagctta cccccagaat aagaac 36 <210> 119 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 119 gtccagcttg ctggagtt 18 <210> 120 <211> 36 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 120 gccgcagctg aatgcgctga cgtgaagctg ggcgtg 36 <210> 121 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 121 gtccagcttg ctggagtt 18 <210> 122 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 122 cacagcgata gcggcaag 18 <210> 123 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 123 gtccagcttg ctggagtt 18 <210> 124 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 124 cacagcgata gcggcaag 18 <210> 125 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 125 gtccagcttg ctggagtt 18 <210> 126 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 126 cacagcgata gcggcaag 18 <210> 127 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 127 gtccagcttg ctggagtt 18

Claims (50)

  1. 하기 화학식 I의 화합물:
    Figure pct00117

    식 중:
    T는 VAR2CSA 폴리펩타이드를 포함하는 표적화 모이어티이고;
    L-P는 L1-P1 또는 L2-P2로부터 선택되며;
    L1은 링커이거나, 또는 L1은 존재하지 않고;
    P1는 하기 화학식 XIV의 화합물의 1가 라디칼이며:
    Figure pct00118

    식 중:
    R16 및 R17은 독립적으로 H; 및 1 내지 10개의 탄소 원자를 함유하는 직쇄, 분지쇄 또는 비방향족 환식 골격을 가진 포화 또는 불포화 모이어티로부터 선택되고, 상기 탄소 원자는 -OH, -I, -Br, -Cl, -F, -CN, -CO2H, -CHO, -COSH 또는 -NO2;로 임의로 치환되거나; 또는 R17과 R20은 융합되어 고리를 형성하며;
    R18 및 R19는 H, R25 및 ArR25-로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는 R18과 R19는 융합되어 고리를 형성하고;
    R20은 H, R25, ArR25- 및 Ar로 이루어진 군으로부터 선택되거나; 또는 R20과 R17은 융합되어 고리를 형성하며;
    R21은 H, R25 및 ArR25-로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R22 및 R23은 독립적으로 H, R25 및 ArR25-로 이루어진 군으로부터 선택되며;
    R24는 -Y-(CO)NHSO2-R26이고;
    R25는 1 내지 10개의 탄소 원자, 0 내지 4개의 질소 원자, 0 내지 4개의 산소 원자 및 0 내지 4개의 황 원자를 함유하는 직쇄, 분지쇄 또는 비방향족 환식 골격을 가진 포화 또는 불포화 모이어티로서 정의되며, 상기 탄소 원자는 =O, =S, OH, -OR28, -O2CR28, -SH, -SR28, -SOCR28, -NH2, -NHR28, -N(R28)2, -NHCOR28, -NR28COR28, -I, -Br, -Cl, -F, -CN, -CO2H, -CO2R28, -CHO, -COR28, -CONH2, -CONHR28, -CON(R28)2, -COSH, -COSR28, -NO2, -SO3H, -SOR28, -SO2R28로 임의로 치환되되, R28은 직쇄, 분지쇄 또는 환식의 1 내지 10개의 탄소 포화 또는 불포화 알킬기이고;
    R18과 R19를 연결함으로써 형성되는 고리는 R25의 정의 내의 3 내지 7원(member) 비방향족 환식 골격이며,
    Y는, R25, ArR25- 또는 X로 임의로 치환된, 직쇄의 포화 또는 불포화 1 내지 6개의 탄소 알킬기로 이루어진 군으로부터 선택된 모이어티로서 정의되고; 그리고
    X는 -OH, -OR25, =O, =S, -O2CR25, -SH, -SR25, -SOCR25, -NH2, -NHR25, -N(R25)2, -NHCOR25, -NRCOR25, -I, -Br, -Cl, -F, -CN, -CO2H, -CO2R25, -CHO, -COR25, -CONH2, -CONHR25, -CON(R25)2, -COSH, -COSR25, -NO2, -SO3H, -SOR25 및 -SO2R25;으로 이루어진 군으로부터 선택된 모이어티로서 정의되며;
    R26은 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알킬아미노, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴 및 임의로 치환된 헤테로아릴, -COR27, -CSR27, -OR27 및 -NHR27로 이루어진 군으로부터 선택되되, 각각의 R27은, 독립적으로, 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알킬아미노, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴 및 임의로 치환된 헤테로아릴이고; 그리고
    L2는 링커이며;
    P2는 생물학적 활성 화합물이며; 그리고
    L2-P2는 하기 구조 (III)을 갖는다:
    Figure pct00119

    식 중:
    R은 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알킬아미노, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴, 임의로 치환된 헤테로아릴, -COR27, -CSR27, -OR27 및 -NHR27로 이루어진 군으로부터 선택되되, 각각의 R27은, 독립적으로, 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알킬아미노, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴 및 임의로 치환된 헤테로아릴이거나, 또는 R은 존재하지 않으며;
    P3은 화합물 P2의 나머지 부분이고; 그리고
    L3은 임의로 링커 L2의 나머지 부분이다.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 VAR2CSA 폴리펩타이드는 하기의 순차적인 아미노산 서열로 이루어진 화합물:
    a. ID1;
    b. DBL2Xb; 및 임의로
    c. ID2a.
  3. 청구항 1에 있어서, 상기 VAR2CSA 폴리펩타이드는 100nM 미만, 50nM 미만, 10nM 미만 또는 5nM 미만의 KD에 의해 측정된 바와 같은 친화도로 프로테오글리칸(CSPG) 상에 콘드로이틴 황산 A(chondroitin sulfate A: CSA)에 결합하는, 화합물.
  4. 청구항 1 내지 청구항 3 중 어느 한 항에 있어서, 상기 VAR2CSA 폴리펩타이드는 서열번호 1의 1 내지 577번; 서열번호 3의 1 내지 592번; 서열번호 4의 1 내지 579번; 서열번호 5의 1 내지 576번; 서열번호 10의 1 내지 586번; 서열번호 11의 1 내지 579번; 서열번호 29의 1 내지 565번; 서열번호 34의 1 내지 584번; 서열번호 36의 1 내지 569번; 서열번호 37의 1 내지 575번; 서열번호 38의 1 내지 592번; 서열번호 41의 1 내지 603번; 서열번호 43의 1 내지 588번; 서열번호 44의 1 내지 565번; 서열번호 45의 1 내지 589번; 서열번호 48의 1 내지 573번; 서열번호 53의 1 내지 583번; 서열번호 54의 1 내지 569번; 서열번호 1의 578 내지 640번; 서열번호 3의 593 내지 656번; 서열번호 4의 580 내지 643번; 서열번호 5의 577 내지 640번 ; 서열번호 10의 587 내지 650번; 서열번호 11의 580 내지 643번; 서열번호 29의 566 내지 628번; 서열번호 34의 585 내지 647번; 서열번호 36의 570 내지 632번; 서열번호 37의 576 내지 639번; 서열번호 38의 593 내지 655번; 서열번호 41의 604 내지 667번; 서열번호 43의 589 내지 652번; 서열번호 44의 30 566 내지 628번; 서열번호 45의 590 내지 653번; 서열번호 48의 574 내지 637번; 서열번호 53의 584 내지 646번; 서열번호 54의 570 내지 632번; 서열번호 2; 서열번호 6; 서열번호 8; 서열번호 9; 서열번호 12; 서열번호 13; 서열번호 14; 서열번호 15; 서열번호 16; 서열번호 17; 서열번호 18; 서열번호 19; 서열번호 20; 서열번호 21; 서열번호 22; 서열번호 23; 서열번호 24; 서열번호 25; 서열번호 26; 서열번호 27; 서열번호 28; 서열번호 30; 서열번호 31; 서열번호 32; 서열번호 33; 서열번호 35; 서열번호 39; 서열번호 40; 서열번호 42; 서열번호 46; 서열번호 47; 서열번호 49; 서열번호 50; 서열번호 51; 및 서열번호 52로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 70% 서열 동일성을 가지는 아미노산을 서열을 포함하는, 화합물.
  5. 청구항 1 내지 청구항 4 중 어느 한 항에 있어서, 상기 VAR2CSA 폴리펩타이드는 서열번호 1의 1 내지 577번; 서열번호 3의 1 내지 592번; 서열번호 4의 1 내지 579번; 서열번호 5의 1 내지 576번; 서열번호 10의 1 내지 586번; 서열번호 11의 1 내지 579번; 서열번호 29의 1 내지 565번; 서열번호 34의 1 내지 584번; 서열번호 36의 1 내지 569번; 서열번호 37의 1 내지 575번; 서열번호 38의 1 내지 592번; 서열번호 41의 1 내지 603번; 서열번호 43의 1 내지 588번; 서열번호 44의 1 내지 565번; 서열번호 45의 1 내지 589번; 서열번호 48의 1 내지 573번; 서열번호 53의 1 내지 583; 서열번호 54의 1 내지 569번; 서열번호 1; 서열번호 3; 서열번호 4; 서열번호 5; 서열번호 10; 서열번호 11; 서열번호 29; 서열번호 34; 서열번호 36; 서열번호 37; 서열번호 38; 서열번호 41; 서열번호 43; 서열번호 44; 서열번호 45; 서열번호 48; 서열번호 53; 및 서열번호 54로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 70% 서열 동일성을 가지는 아미노산로 이루어진, 화합물.
  6. 청구항 1 내지 청구항 4 중 어느 한 항에 있어서, 상기 VAR2CSA 폴리펩타이드는 700개 미만의 아미노산, 650개 미만의 아미노산, 600개 미만의 아미노산 또는 570개 미만의 아미노산의 길이를 가진 아미노산 서열로 이루어진, 화합물.
  7. 청구항 1 내지 청구항 6 중 어느 한 항에 있어서, 상기 VAR2CSA 폴리펩타이드는 SDS-PAGE에서 비환원 조건 하에 약 100kDa 미만의 분자 질량을 갖고/갖거나, 상기 VAR2CSA 폴리펩타이드는 재조합 단백질이고/이거나, 상기 VAR2CSA 폴리펩타이드는 비글리코실화(non-glycosylated)되는, 화합물.
  8. 청구항 1 내지 청구항 7 중 어느 한 항에 있어서, L-P는 L2-P2인, 화합물.
  9. 청구항 8에 있어서,
    P2는 하기 화학식 V의 화합물이고:
    Figure pct00120

    L2-T는 하기 구조 (VI)을 갖는, 화합물:
    Figure pct00121

    식 중,
    P4는 화합물 P2의 나머지 부분이고, 화학식 V 내 R에 결합된 -NH-기는 화학식 VI 내의 AA1과 펩타이드 결합(JPB)을 형성하며, 상기 JPB는 효소에 의해 절단 가능하고, R은 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알킬아미노, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴, 임의로 치환된 헤테로아릴, -COR27, -CSR27, -OR27 및 -NHR27로 이루어진 군으로부터 선택되며, 각각의 R27은, 독립적으로, 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알킬아미노, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴 및 임의로 치환된 헤테로아릴이고, 각 AA는 독립적으로 아미노산이고, n은 0 내지 25의 정수이며, L4는 임의로 링커 L2의 나머지 부분이고, T는 상기 표적화 모이어티이며, AA1-(AA)n은 함께 연결되어 상기 JPB의 효소적 절단을 용이하게 할 수 있는 아미노산 서열을 포함한다.
  10. 청구항 9항에 있어서, AA1-(AA)n은 Phe-Lys, Val-Lys, Ala-Lys, Val-Cit, Phe-Cit, Leu-Cit, Ile-Cit, Trp-Cit 및 Phe-Arg로부터 선택되는, 화합물.
  11. 청구항 8 내지 청구항 10 중 어느 한 항에 있어서, P2는 세포독성 화합물인, 화합물.
  12. 청구항 11항에 있어서, 상기 세포독성 화합물은 미세소관 파괴 펩타이드 독소인, 화합물.
  13. 청구항 11항에 있어서, 상기 세포독성 화합물은 헤미아스테린(hemiasterlin) 또는 이의 유사체; 투불리신(tubulysin) 또는 이의 유사체; 및 아우리스타틴(auristatin) 또는 이의 유사체로부터 선택되는, 화합물.
  14. 청구항 11항에 있어서, 상기 세포독성 화합물은 칼리케아마이신, 아우리스타틴, 독소루비신, 마이탄시노이드, 탁솔, 엑테인아시딘, 겔다나마이신, 메토트렉세이트 슈도모나스 외독소 A, 디프테리아 독소, 리신 독소, 미국자리공 항바이러스성단백질(pokeweed antiviral protein), 사포린, 겔로닌, 피롤로벤조다이아제핀(PBD) 및 이들의 기능성 변이체, 단편 및 조합물로부터 선택되는, 화합물.
  15. 청구항 11항에 있어서, 상기 세포독성 페이로드는 천연 유래 화합물로부터 유도되지 않은 합성 화학독소인, 화합물.
  16. 청구항 1 내지 청구항 7 중 어느 한 항에 있어서, L-P는 L1-P1인, 화합물.
  17. 청구항 16항에 있어서, L1은 SPDP, SMCC, vcPABC, MCvcPABC, MTvc, ADvc, 말레이미드, NHS, 바이오틴, 스트렙타비딘, 뉴트라비딘, 글리코사이드, 또는 이들의 조합물을 포함하는, 화합물.
  18. 청구항 16항에 있어서, L1은 MTvc 및 ADvc로부터 선택되거나; 또는 L1은 존재하지 않는, 화합물.
  19. 청구항 16 내지 청구항 18 중 어느 한 항에 있어서, P1은 하기 화학식 XV의 화합물 또는 이의 입체이성질체, 전구약물 또는 약제학적으로 허용 가능한 염의 1가 라디칼인, 화합물:
    Figure pct00122

    식 중:
    R26은 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알킬아미노, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴, 임의로 치환된 헤테로아릴, -COR27, -CSR27, -OR27 및 -NHR27로 이루어진 군으로부터 선택되되, 각각의 R27은, 독립적으로, 할로겐, -OH 또는 -SH로 임의로 치환된 알킬이고;
    R29는 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알킬아미노, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴 및 임의로 치환된 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되며;
    R30은 H 및 C1 -6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R31은 H 및 C1 -6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;
    R32 및 R38은 독립적으로 H, C1 -6 알킬 및 -SH로 이루어진 군으로부터 선택되되, 단 -SH로 이루어진 군으로부터 선택되되, 단 R32와 R38은 둘 다 H가 아닐 수 있고;
    R33 , R34, R35 및 R36은 독립적으로 H 및 C1 -6 알킬이되, R33 및 R34 중 적어도 한쪽은 H이거나; 또는 R34와 R35는 이중 결합을 형성하고, R33은 H이며, R36은 H 또는 C1-6 알킬이고; 그리고
    R37은 H 및 C1 -6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;
    각각의 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알킬아미노, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴 및 임의로 치환된 헤테로아릴은, 독립적으로, =O, =S, -OH, -OR27, -O2CR27, -SH, -SR27, -SOCR27, -NH2, -N3, -NHR27, -N(R27)2, -NHCOR27, -NR27COR27, -I, -Br, -Cl, -F, -CN, -CO2H, -CO2R27, -CHO, -COR27, -CONH2, -CONHR27, -CON(R27)2, -COSH, -COSR27, -NO2, -SO3H, -SOR27 또는 -SO2R27로 임의로 치환되되, 각각의 R27은, 독립적으로, 할로겐, -OH 또는 -SH로 임의로 치환된 알킬이다.
  20. 청구항 19에 있어서, 각각의 임의로 치환된 아릴 및 임의로 치환된 헤테로아릴은, 독립적으로, 임의로 치환된 페닐, 임의로 치환된 나프틸, 임의로 치환된 안트라실, 임의로 치환된 페난트릴, 임의로 치환된 퓨릴, 임의로 치환된 피롤릴, 임의로 치환된 티오페닐, 임의로 치환된 벤조퓨릴, 임의로 치환된 벤조티오페닐, 임의로 치환된 퀴놀린일, 임의로 치환된 아이소퀴놀린일, 임의로 치환된 이미다졸릴, 임의로 치환된 티아졸릴, 임의로 치환된 옥사졸릴, 및 임의로 치환된 피리딘일로 이루어진 군으로부터 선택되는, 화합물.
  21. 청구항 19에 있어서, R29는 하기 구조 XVI, XVII, XVIII 및 XIX 중 하나로부터 선택되는, 화합물:
    Figure pct00123
    ;
    Figure pct00124
    ;
    Figure pct00125

    Figure pct00126

    식 중:
    Q는 CR39 또는 N이고;
    Z는 C(R39)2, NR39, S 또는 O이며;
    각각의 R39는, 독립적으로, H, -OH, -R27 , -OR27, -O2CR27, -SH, -SR27, -SOCR27, -NH2, -N3, -NHR27, -N(R27)2, -NHCOR27, -NR27COR27, -R27NH2, -I, -Br, -Cl, -F, -CN, -CO2H, -CO2R27, -CHO, -COR27, -CONH2, -CONHR27, -CON(R27)2, -COSH, -COSR27, -NO2, -SO3H, -SOR27 및 -SO2R27로 이루어진 군으로부터 선택되되, 각각의 R27은, 독립적으로, 할로겐, -OH 또는 -SH로 임의로 치환된 알킬이다.
  22. 청구항 19에 있어서, R29는 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 화합물:
    Figure pct00127

    각각의 R39는, 독립적으로, H, -OH, -R27 , -OR27, -O2CR27, -SH, -SR27, -SOCR27, -NH2, -N3, -NHR27, -N(R27)2, -NHCOR27, -NR27COR27, -R27NH2, -I, -Br, -Cl, -F, -CN, -CO2H, -CO2R27, -CHO, -COR27, -CONH2, -CONHR27, -CON(R27)2, -COSH, -COSR27, -NO2, -SO3H, -SOR27 및 -SO2R27로 이루어진 군으로부터 선택되되, 각각의 R27은, 독립적으로, 할로겐, -OH 또는 -SH로 임의로 치환된 알킬이다.
  23. 청구항 19에 있어서, R29는 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 화합물:
    Figure pct00128

    Figure pct00129
  24. 청구항 19 내지 청구항 23 중 어느 한 항에 있어서, R30은 H 또는 메틸이고, 그리고 R31, R32 및 R38은 각각 메틸인, 화합물.
  25. 청구항 16 내지 청구항 18 중 어느 한 항에 있어서, P1은 하기 화학식 XX의 화합물 또는 이의 입체이성질체, 전구약물 또는 약제학적으로 허용 가능한 염의 1가 라디칼인, 화합물:
    Figure pct00130

    식 중:
    R40은 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알킬아미노, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴 및 임의로 치환된 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R41은 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알킬아미노, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴 및 임의로 치환된 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되며;
    R30은 H 및 C1 -6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R31은 H 및 C1 -6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며; 그리고
    R32는 C1 -6 알킬 및 -SH로 이루어진 군으로부터 선택되되;
    각각의 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알킬아미노, 임의로 치환된 사이클로알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴 및 임의로 치환된 헤테로아릴은, 독립적으로, =O, =S, -OH, -OR42, -O2CR42, -SH, -SR42, -SOCR42, -NH2, -N3, -NHR42, -N(R42)2, -NHCOR42, -NR42COR42, -I, -Br, -Cl, -F, -CN, -CO2H, -CO2R42, -CHO, -COR42, -CONH2, -CONHR42, -CON(R42)2, -COSH, -COSR42, -NO2, -SO3H, -SOR42 또는 -SO2R42로 임의의 치환되되, 각각의 R42는, 독립적으로, 할로겐, -OH 또는 -SH로 임의로 치환된 알킬이다.
  26. 청구항 25에 있어서, 각각의 임의로 치환된 아릴 및 임의로 치환된 헤테로아릴은, 독립적으로, 임의로 치환된 페닐, 임의로 치환된 나프틸, 임의로 치환된 안트라실, 임의로 치환된 페난트릴, 임의로 치환된 퓨릴, 임의로 치환된 피롤릴, 임의로 치환된 티오페닐, 임의로 치환된 벤조퓨릴, 임의로 치환된 벤조티오페닐, 임의로 치환된 퀴놀린일, 임의로 치환된 아이소퀴놀린일, 임의로 치환된 이미다졸릴, 임의로 치환된 티아졸릴, 임의로 치환된 옥사졸릴, 및 임의로 치환된 피리딘일로 이루어진 군으로부터 선택되는, 화합물.
  27. 청구항 25에 있어서, R41은 하기 구조 XVI, XVII, XVIII 및 XIX로 이루어진 군으로부터 선택되는, 화합물:
    Figure pct00131
    ;
    Figure pct00132
    ;
    Figure pct00133

    Figure pct00134

    식 중:
    Q는 CR43 또는 N이고;
    Z는 C(R43)2, NR43, S 또는 O이며;
    각각의 R43은, 독립적으로, H, -OH, -OR42, -O2CR42, -SH, -SR42, -SOCR42, -NH2, -N3, -NHR42, -N(R42)2, -NHCOR42, -NR42COR42, -I, -Br, -Cl, -F, -CN, -CO2H, -CO2R42, -CHO, -COR42, -CONH2, -CONHR42, -CON(R42)2, -COSH, -COSR42, -NO2, -SO3H, -SOR42및 -SO2R42로 이루어진 군으로부터 선택되되, 각각의 R42는, 독립적으로, 할로겐, -OH 또는 -SH로 임의로 치환된 알킬이다.
  28. 청구항 25에 있어서, R41은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물:
    Figure pct00135
  29. 청구항 25에 있어서, R30은 H 또는 메틸이고, R31 및 R32는 각각 메틸인, 화합물.
  30. 청구항 16 내지 청구항 18 중 어느 한 항에 있어서, P1은 하기 화학식 II의 화합물의 1가 라디칼인, 화합물:
    Figure pct00136

    식 중:
    R1은, 각각 C1-C4 아실티오, C2-C4 알켄일, C1-C4 알킬, C1-C4 알킬아미노, C1-C4 알콕시, 아미노, 아미노-C1-C4 알킬, 할로, C1-C4 할로알킬, 하이드록실, 하이드록시-C1-C4 알킬 및 티오로부터 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환된, 아릴, C3-C7 사이클로알킬 및 헤테로아릴로부터 선택되되, C2-C4 알켄일, C1-C4 알킬아미노 및 C1-C4 알콕시는 C1-C4 알킬아릴, 하이드록실 및 티오로부터 선택된 하나 이상의 치환기로 추가로 임의로 치환되며;
    R2 및 R3은 각각 독립적으로 H 및 C1-C6 알킬로부터 선택되고;
    R4는 C1-C6 알킬 및 티오로 이루어진 군으로부터 선택되며; 그리고
    R5는, 각각 C1-C6 알콕시, C1-C6 알콕시카보닐, C1-C6 알킬, C1-C6 알킬아미노, 아미노, 아미노-C1-C6 알킬, 아미노-아릴, 아미노-C3-C7 사이클로알킬, 아릴, 카복스아마이드, 카복실, C3-C7 사이클로알킬, 사이아노, C1-C6 할로알킬, C1-C6 할로알콕시, 할로, 하이드록실, 나이트로, 티오, 및 티오-C1-C6 알킬로부터 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환된, C1-C6 알킬, 아릴, 아릴-C1-C6 알킬, C3-C7 사이클로알킬, 헤테로아릴 및 헤테로사이클릴로부터 선택된다.
  31. 청구항 30에 있어서, R1은, H, 아릴, C3-C7 사이클로알킬 및 헤테로아릴로부터 선택되되, 이들은 각각 C1-C4 아실티오, C2-C4 알켄일, C1-C4 알킬, C1-C4 알킬아미노, C1-C4 알콕시, 아미노, 아미노-C1-C4 알킬, 할로, C1-C4 할로알킬, 하이드록실, 하이드록시-C1-C4 알킬 및 티오로부터 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환되되, C2-C4 알켄일, C1-C4 알킬아미노 및 C1-C4 알콕시는 p-톨릴, 하이드록실 및 티오로로부터 선택된 하나 이상의 치환기로 추가로 임의로 치환되는, 화합물.
  32. 청구항 30에 있어서, R1은 H, 1H-인돌-3-일, 1-메틸-1H-인돌-3-일, 2-메톡시페닐, 3-((2-하이드록시에틸)아미노)페닐, 3-((2-머캅토에틸)아미노)페닐, 3-(2-(아세틸티오)에톡시)페닐, 3-(2-하이드록시에톡시)페닐, 3-(2-머캅토에톡시)페닐, 3-(4-메틸스타이릴)페닐, 3-(아미노메틸)페닐, 3-(하이드록시메틸)페닐, 3-하이드록시페닐, 3,5-다이플루오로페닐, 3,5-다이메틸페닐, 3-아미노페닐, 3-클로로페닐, 3-머캅토페닐, 3-메톡시페닐, 3-트라이플루오로메틸페닐, 4-((2-하이드록시에틸)아미노)페닐, 4-((2-머캅토에틸)아미노)페닐, 4-(2-(아세틸티오)에톡시)페닐, 4-(2-아미노에톡시)페닐, 4-(2-하이드록시에톡시)페닐, 4-(2-머캅토에톡시)페닐, 4-(아미노메틸)페닐, 4-(하이드록시메틸)페닐, 4-아미노페닐, 4-하이드록시페닐, 4-머캅토페닐, 4-메톡시페닐, 사이클로헥실, 티엔-2-일, m-톨릴 및 페닐로 이루어진 군으로부터 선택된, 화합물.
  33. 청구항 30 내지 청구항 32 중 어느 한 항에 있어서, R2는 H 또는 메틸인, 화합물.
  34. 청구항 30 내지 청구항 33 중 어느 한 항에 있어서, R3은 메틸인, 화합물.
  35. 청구항 30 내지 청구항 34 중 어느 한 항에 있어서, R4는 메틸인, 화합물.
  36. 청구항 30 내지 청구항 35 중 어느 한 항에 있어서, R5는, 각각 1-아미노사이클로프로필, 4-아미노페닐, 아미노, 아미노메틸, 브로모, tert-뷰틸, 카복스아마이드, 카복실, 클로로, 사이아노, 사이클로펜틸, 에틸, 플루오로, 하이드록시, 아이소프로필, 메톡시, 메틸, 나이트로, 페닐, 피리딘-3-일, 티오, 티오메틸, 트라이플루오로메톡시 및 트라이플루오로메틸로부터 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환된, C1-C6 알킬, 아릴, 아릴-C1-C6 알킬, C3-C7 사이클로알킬, 헤테로아릴 및 헤테로사이클릴로부터 선택되는, 화합물.
  37. 청구항 30 내지 청구항 35 중 어느 한 항에 있어서, R5는 4-아미노벤질, 4-(아미노메틸)벤질, 4-(아미노메틸)페닐, 4-아미노페닐, 벤질, 3-머캅토프로필, 2-머캅토에틸, 4-(머캅토메틸)페닐, p-톨릴, 메틸, 2,4,6-트라이메틸페닐, 4-(트라이플루오로메톡시)페닐, 2,4,6-트라이아이소프로필페닐, 4-tert-뷰틸페닐, 4-클로로페닐, 3-사이아노페닐, 2-나이트로페닐, 4-메톡시-2-나이트로페닐, 4-아미노카보닐-2-나이트로페닐, 4-메톡시페닐, 4-아미노페닐, 페닐, 2-플루오로벤질, 피리딘-1-일, o-톨릴, 4-브로모페닐, 나프탈렌-2-일, 4-메톡시카보닐페닐, 2-(트라이플루오로메틸)벤질, 헥산-2-일, 2-메톡시에틸, 사이클로펜틸메틸, 사이클로헥실, 피리딘-3-일메틸, 4-카복시페닐, 3-아미노페닐, 피리딘-3-일, 티엔-2-일, 4-하이드록시페닐, 4-(1-아미노사이클로프로필)벤질, 4-(1-아미노사이클로프로필)페닐, 2-메틸벤질, 4-나이트로벤질, 4-클로로벤질, 페네틸, 4-브로모벤질, 4-사이아노벤질, 3-나이트로벤질, 4-tert-뷰틸벤질, 2-나이트로벤질, 4-나이트로페네틸, 2-클로로-3-메톡시카보닐페닐, 2-아미노페닐, [1,1'-바이페닐]-4-일, 4'-아미노-[1,1'-바이페닐]-4-일, 4-플루오로벤질, 3-(트라이플루오로메틸)벤질, 3-(트라이플루오로메톡시)벤질, 3,4-다이클로로벤질, 2-사이아노벤질, 3-클로로벤질, 4-아미노-2-에틸페닐, 4-아미노-3-(트라이플루오로메톡시)페닐, 4-아미노-2,3-다이메틸페닐, 4-아미노-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-1-일, 4-아미노-3-메틸페닐, 4-아미노-3-플루오로페닐, 4-아미노-3-에틸페닐 및 4-아미노-3-(트라이플루오로메틸)페닐로부터 선택되는, 화합물.
  38. 청구항 1 내지 청구항 37 중 어느 한 항의 화합물, 및 약제학적으로 허용 가능한 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물.
  39. 포유동물에서 암을 치료하거나, 암을 지닌 포유동물의 생존을 증가시키거나, 또는 포유동물에서 종양 성장을 저해하는 방법으로서, 암의 치료, 암을 지닌 포유동물의 생존의 증가, 또는 종양 성장의 저해를 필요로 하는 포유동물에게 유효량의 청구항 1 내지 청구항 37 중 어느 한 항의 화합물 또는 청구항 38의 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 포유동물에서 암을 치료하거나, 암을 지닌 포유동물의 생존을 증가시키거나, 또는 포유동물에서 종양 성장을 저해하는 방법.
  40. 청구항 39에 있어서, 상기 암은 암종, 육종, 조혈암 및 신경상피 조직의 종양으로부터 선택되는, 포유동물에서 암을 치료하거나, 암을 지닌 포유동물의 생존을 증가시키거나, 또는 포유동물에서 종양 성장을 저해하는 방법.
  41. 치료법에 의해 인간 또는 동물 신체의 치료 방법에서 이용하기 위한, 청구항 1 내지 청구항 37 중 어느 한 항의 화합물 또는 청구항 38의 약제학적 조성물의 용도.
  42. 포유동물에서 암의 치료에 이용하기 위한, 또는 암을 지닌 포유동물의 생존의 증가에 이용하기 위한, 또는 포유동물에서 종양 성장의 저해에 이용하기 위한, 청구항 1 내지 청구항 37 중 어느 한 항의 화합물 또는 청구항 38의 약제학적 조성물.
  43. 청구항 42에 있어서, 상기 암은 암종, 육종, 조혈암 및 신경상피 조직의 종양으로부터 선택되는, 화합물 또는 약제학적 조성물.
  44. 포유동물에서 암의 치료를 위한, 또는 암을 지닌 포유동물의 생존의 증가를 위한, 또는 포유동물에서 종양 성장의 저해를 위한 약제의 제조에서의, 청구항 1 내지 청구항 37 중 어느 한 항의 화합물의 용도.
  45. 청구항 44에 있어서, 상기 암은 암종, 육종, 조혈암 및 신경상피 조직의 종양으로부터 선택되는, 용도.
  46. 청구항 8 내지 청구항 10 중 어느 한 항의 화합물, 및 약제학적으로 허용 가능한 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물.
  47. 포유동물에서 암, 관절염, 관절증, 다발성 경화증, 신경 손상, 연골 손상 및 건선으로부터 선택된 적응증(indication)을 치료하기 위한 방법으로서, 상기 적응증의 치료를 필요로 하는 포유동물에게 유효량의 청구항 8 내지 청구항 10 중 어느 한 항의 화합물 또는 청구항 46의 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 적응증을 치료하기 위한 방법.
  48. 치료법에 의해 인간 또는 동물 신체의 치료 방법에서 이용하기 위한, 청구항 8 내지 청구항 10 중 어느 한 항의 화합물 또는 청구항 46의 약제학적 조성물.
  49. 암, 관절염, 관절증, 다발성 경화증, 신경 손상, 연골 손상 및 건선으로부터 선택된 적응증의 치료 방법에서 이용하기 위한, 청구항 8 내지 청구항 10 중 어느 한 항의 화합물 또는 청구항 46의 약제학적 조성물.
  50. 암, 관절염, 관절증, 다발성 경화증, 신경 손상, 연골 손상 및 건선으로부터 선택된 적응증을 치료하기 위한 약제의 제조에서의, 청구항 8 내지 청구항 10 중 어느 한 항의 화합물의 용도.
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Families Citing this family (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX368258B (es) 2013-03-15 2019-09-25 Zymeworks Inc Compuestos citotoxicos y antimitoticos y metodos de uso de los mismos.
MX2016008444A (es) 2013-12-27 2017-01-11 Zymeworks Inc Sistemas de enlace que contienen sulfonamida para conjugados de farmacos.
JP6615115B2 (ja) 2013-12-27 2019-12-04 ザイムワークス インコーポレイティド Ｖａｒ２ｃｓａ−薬物コンジュゲート
EP3194421B1 (en) * 2014-09-17 2021-11-03 Zymeworks Inc. Cytotoxic and anti-mitotic compounds, and methods of using the same
PT3250237T (pt) 2015-01-30 2021-06-30 Sutro Biopharma Inc Derivados de hemiasterlina para conjugação e terapêutica
US10874746B2 (en) * 2016-02-08 2020-12-29 Synaffix B.V. Sulfamide linkers for use in bioconjugates
US11951175B2 (en) 2016-02-08 2024-04-09 Synaffix B.V. Bioconjugates containing sulfamide linkers for use in treatment
US11590239B2 (en) 2016-02-08 2023-02-28 Synaffix B.V. Antibody-conjugates with improved therapeutic index for targeting CD30 tumours and method for improving therapeutic index of antibody-conjugates
MD3433234T2 (ro) 2016-03-22 2022-02-28 Merck Sharp & Dohme Modulatori alosterici ai receptorilor nicotinici de acetilcolină
US10517958B2 (en) 2016-10-04 2019-12-31 Zymeworks Inc. Compositions and methods for the treatment of platinum-drug resistant cancer
CN106512022B (zh) * 2016-10-12 2019-09-27 广东艾时代生物科技有限责任公司 羟基红花黄色素a-红细胞黏附硫酸软骨素a受体蛋白多肽复合物在制备抗肿瘤药物的应用
FI3666787T3 (fi) 2017-08-10 2024-03-15 Sumitomo Pharma Co Ltd Hemiasterliinijohdannaisen sisältäviä vasta-aine-lääkekonjugaatteja
CN111051329A (zh) 2017-08-10 2020-04-21 大日本住友制药株式会社 哈米特林衍生物及它们的抗体药物复合物
CN108570118B (zh) * 2017-10-17 2020-07-03 中国科学院深圳先进技术研究院 一种胎盘样硫酸软骨素a或其衍生物的亲和层析纯化方法
CA3098330C (en) * 2017-11-29 2024-01-02 Guangzhou Cas Lamvac Biotech Co., Ltd Chimeric antigen receptor and application thereof
EP3925668A4 (en) 2019-02-13 2022-11-09 Sumitomo Pharma Co., Ltd. HEMIASTERLINE DERIVATIVE WITH CYSTEINE RESIDUES
CN110124045A (zh) * 2019-04-30 2019-08-16 云南大学 疟原虫var2csa蛋白在抗肿瘤药物中的应用
CN113952467A (zh) * 2020-07-21 2022-01-21 深圳先进技术研究院 一种子宫内膜异位症分子诊疗制剂及其制备方法和应用
WO2023118150A1 (en) 2021-12-22 2023-06-29 Royal College Of Surgeons In Ireland A conjugate for use in localising a molecule to the vascular endothelium.

Family Cites Families (69)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5137877B1 (en) 1990-05-14 1996-01-30 Bristol Myers Squibb Co Bifunctional linking compounds conjugates and methods for their production
US6569834B1 (en) 1992-12-03 2003-05-27 George R. Pettit Elucidation and synthesis of antineoplastic tetrapeptide w-aminoalkyl-amides
US5635483A (en) 1992-12-03 1997-06-03 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Tumor inhibiting tetrapeptide bearing modified phenethyl amides
JPH08504415A (ja) 1992-12-16 1996-05-14 ビーエーエスエフ アクチエンゲゼルシャフト 新規のペプチド、該ペプチドの製造及び使用
US5780588A (en) 1993-01-26 1998-07-14 Arizona Board Of Regents Elucidation and synthesis of selected pentapeptides
JP3469580B2 (ja) 1993-10-01 2003-11-25 帝国臓器製薬株式会社 新規なペプチド誘導体
US5599902A (en) 1994-11-10 1997-02-04 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Cancer inhibitory peptides
US5663149A (en) 1994-12-13 1997-09-02 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide heterocyclic and halophenyl amides
GB9508195D0 (en) 1995-04-20 1995-06-07 Univ British Columbia Novel biologically active compounds and compositions,their use and derivation
CA2225325A1 (en) 1997-12-19 1999-06-19 The University Of British Columbia Hemiasterlin analogs
US8097648B2 (en) 1998-06-17 2012-01-17 Eisai R&D Management Co., Ltd. Methods and compositions for use in treating cancer
US6323315B1 (en) 1999-09-10 2001-11-27 Basf Aktiengesellschaft Dolastatin peptides
US7256257B2 (en) 2001-04-30 2007-08-14 Seattle Genetics, Inc. Pentapeptide compounds and uses related thereto
US6884869B2 (en) 2001-04-30 2005-04-26 Seattle Genetics, Inc. Pentapeptide compounds and uses related thereto
WO2003072754A2 (en) 2002-02-27 2003-09-04 The Government Of The United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Conjugates of ligand, linker and cytotoxic agent and related compositions and methods of use
WO2003082268A2 (en) 2002-03-22 2003-10-09 Eisai Co. Ltd Hemiasterlin derivatives and uses thereof in the treatment of cancer
US7064211B2 (en) 2002-03-22 2006-06-20 Eisai Co., Ltd. Hemiasterlin derivatives and uses thereof
WO2003090678A2 (en) 2002-04-23 2003-11-06 Ohio State University Antileishmanial dinitroaniline sulfonamides with activity against parasite tubulin
ITMI20021391A1 (it) 2002-06-25 2003-12-29 Nicox Sa Nitroderivati di inibitori della cicloossigenasi-2
EP2357006B1 (en) 2002-07-31 2015-09-16 Seattle Genetics, Inc. Drug conjugates and their use for treating cancer, an autoimmune disease or an infectious disease
BR0314128A (pt) 2002-09-20 2005-06-28 Wyeth Corp Processo para o preparo de intermediários uteis para a sìntese de inibidores de tubulina
WO2004026293A2 (en) * 2002-09-20 2004-04-01 Wyeth Holdings Corporation Hemiasterlin derivatives for treating resistant tumors
US20070026478A1 (en) 2002-11-21 2007-02-01 Wyeth Hemiasterlin affinity probes and their uses
US7390910B2 (en) 2003-08-08 2008-06-24 Wyeth Compounds for treating tumors
US7576206B2 (en) 2003-08-14 2009-08-18 Cephalon, Inc. Proteasome inhibitors and methods of using the same
WO2005026169A1 (en) 2003-09-15 2005-03-24 The University Of British Columbia Ceratamines a and b, and analogues, syntheses and pharmaceutical compositions thereof
EP1675465B1 (en) 2003-10-22 2010-03-03 The Johns Hopkins University Improved combination bacteriolytic therapy for the treatment of tumors
EP3120861B1 (en) 2003-11-06 2018-08-15 Seattle Genetics, Inc. Intermediate for conjugate preparation comprising auristatin derivatives and a linker
US7078562B2 (en) 2004-01-19 2006-07-18 Mitsubishi Gas Chemical Company, Inc. Adamantane derivatives and resin compositions using the same as raw material
BRPI0515218A (pt) * 2004-08-26 2008-07-08 Nicholas Piramal India Ltd composto, composição farmacêutica, método para o tratamento de um mamìfero ou ser humano, método de uso do composto, novos intermediários, uso dos novos intermediários, processo para a preparação de um composto
US20090130136A1 (en) 2004-09-30 2009-05-21 Miller Louis H Chondroitin Sulphate a Binding Domains
ES2715776T3 (es) 2004-11-12 2019-06-06 Seattle Genetics Inc Auristatinas que tienen una unidad de ácido aminobenzoico en el extremo N
EP1817341A2 (en) 2004-11-29 2007-08-15 Seattle Genetics, Inc. Engineered antibodies and immunoconjugates
US8871720B2 (en) 2005-07-07 2014-10-28 Seattle Genetics, Inc. Monomethylvaline compounds having phenylalanine carboxy modifications at the C-terminus
WO2007008603A1 (en) 2005-07-07 2007-01-18 Seattle Genetics, Inc. Monomethylvaline compounds having phenylalanine side-chain modifications at the c-terminus
CN104016970A (zh) 2007-10-10 2014-09-03 诺华股份有限公司 螺环吡咯烷类与其对抗hcv和hiv感染的应用
WO2009059309A2 (en) 2007-11-01 2009-05-07 Panacea Pharmaceuticals, Inc. Furin-cleavable peptide linkers for drug-ligand conjugates
RU2515063C9 (ru) 2008-01-30 2014-08-10 Пиерис АГ Мутеины липокалина слезной жидкости, обладающие аффинностью к с-мет рецепторной тирозинкиназе человека, и способы их получения
ES2647927T3 (es) 2008-03-18 2017-12-27 Seattle Genetics, Inc. Conjugados enlazadores del fármaco auriestatina
DK2865387T3 (da) * 2008-11-21 2019-08-26 Univ Copenhagen Forberedelse af en immunreaktion
US20110182850A1 (en) 2009-04-10 2011-07-28 Trixi Brandl Organic compounds and their uses
US8394922B2 (en) 2009-08-03 2013-03-12 Medarex, Inc. Antiproliferative compounds, conjugates thereof, methods therefor, and uses thereof
JP5708936B2 (ja) 2009-09-25 2015-04-30 アステラス製薬株式会社 置換アミド化合物
EP2579887B1 (de) 2010-06-10 2014-11-12 Seattle Genetics, Inc. Neue auristatin-derivate und ihre verwendung
FR2963241B1 (fr) 2010-07-30 2014-10-24 Inst Rech Developpement Ird Vaccin contre le paludisme gestationnel
CA2810706C (en) 2010-09-24 2018-06-12 Astellas Pharma Inc. Substituted amide compound
DK2678037T3 (en) 2011-02-25 2015-03-09 Lonza Ag Branched linker for protein pharmaceutical conjugates
WO2012123957A1 (en) 2011-03-16 2012-09-20 Council Of Scientific & Industrial Research Oligopeptides and process for preparation thereof
JP6161592B2 (ja) 2011-03-30 2017-07-12 アリゾナ・ボード・オブ・リージェンツ, フォー・アンド・オン・ビハーフ・オブ・アリゾナ・ステート・ユニバーシティArizona Board Of Regents, For And On Behalf Of Arizona State University オーリスタチンチラミンリン酸塩およびオーリスタチンアミノキノリン誘導体ならびにそのプロドラッグ
KR20140122649A (ko) 2011-04-21 2014-10-20 시애틀 지네틱스, 인크. 신규 결합제-약물 콘주게이트 (ADCs) 및 그의 용도
US20130190248A1 (en) 2011-07-26 2013-07-25 Agensys, Inc. Substituted peptide analogs
WO2013068874A1 (en) 2011-11-11 2013-05-16 Pfizer Inc. Antibody-drug conjugates
PL3327027T3 (pl) 2011-11-17 2021-06-28 Pfizer Inc. Cytotoksyczne peptydy i ich koniugaty przeciwciało lek
BR112014018630A2 (pt) * 2012-02-09 2017-07-04 Var2 Pharmaceuticals Aps alvejamento de glicanos de sulfato de condroitina
CN107982545B (zh) 2012-05-15 2021-04-09 联宁（苏州）生物制药有限公司 药物偶联物，偶联方法，及其用途
JP6425650B2 (ja) 2012-06-07 2018-11-21 アンブルックス, インコーポレイテッドAmbrx, Inc. 前立腺特異的膜抗原抗体薬物複合体
ES2712648T3 (es) 2012-06-19 2019-05-14 Ambrx Inc Conjugados de fármaco de anticuerpo anti-CD70
CN104797267A (zh) 2012-06-26 2015-07-22 德玛医药 使用卫康醇、二乙酰二脱水卫矛醇、二溴卫矛醇或类似物或其衍生物治疗具有基因多型性或ahi1失调或突变患者的抗酪氨酸激酶抑制剂的恶性肿瘤的方法
AU2012395148B2 (en) 2012-11-24 2016-10-27 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd. Hydrophilic linkers and their uses for conjugation of drugs to cell binding molecules
WO2014100762A1 (en) 2012-12-21 2014-06-26 Biolliance C.V. Hydrophilic self-immolative linkers and conjugates thereof
RS56169B1 (sr) 2013-02-14 2017-11-30 Bristol Myers Squibb Co Jedinjenja tubulisina, metode pripreme i primena
MX368258B (es) 2013-03-15 2019-09-25 Zymeworks Inc Compuestos citotoxicos y antimitoticos y metodos de uso de los mismos.
WO2015057876A1 (en) 2013-10-15 2015-04-23 Sorrento Therapeutics Inc. Drug-conjugates with a targeting molecule and two different drugs
MX2016007865A (es) 2013-12-17 2017-01-11 Novartis Ag Peptidos citotoxicos y conjugados de los mismos.
JP6615115B2 (ja) 2013-12-27 2019-12-04 ザイムワークス インコーポレイティド Ｖａｒ２ｃｓａ−薬物コンジュゲート
MX2016008444A (es) 2013-12-27 2017-01-11 Zymeworks Inc Sistemas de enlace que contienen sulfonamida para conjugados de farmacos.
EP3194421B1 (en) 2014-09-17 2021-11-03 Zymeworks Inc. Cytotoxic and anti-mitotic compounds, and methods of using the same
US10077287B2 (en) 2014-11-10 2018-09-18 Bristol-Myers Squibb Company Tubulysin analogs and methods of making and use
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