KR20160106170A - 항체 및 항체-부하된 수지상 세포 매개된 요법을 위한 방법 및 조성물 - Google Patents

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야론 카미
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Abstract

특정 개체 (예를 들어, 암을 앓는 개체)에게서 면역 반응을 유도시키기 위한 방법, 조성물 및 키트가 제공된다. 이러한 방법의 측면은 동종이계 IgG 항체를 갖는 항체 조성물을 투여하는 단계; 및 항원 제시 세포를 활성화시키는 처치를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 경우에, 상기 항체 조성물은 복수 개의 결합 특이성을 지닌 폴리클로날 동종이계 IgG 항체를 포함한다. 일부 경우에, 폴리클로날 항체는 2명 이상의 개체로부터 풀링된 혈청으로부터 유래된다. 일부 경우에, 상기 방법은 항원 제시 세포 자극제를 투여하는 단계를 포함한다. 이러한 방법의 측면은 또한, 특정 개체로부터의 항원 제시 세포 [수지상 세포 (DC)]를 표적 항원; 및 동종이계 IgG 항체를 갖는 항체 조성물과 접촉시켜 부하된 APC를 생성시키는 단계를 포함하는데, 이러한 부하된 APC가 상기 개체에게서 면역 반응을 유도시키기 위해 사용될 수 있다. 상기 방법의 측면은 또한, 상기 개체의 T 세포를 상기 부하된 APC와 접촉시키는 단계를 포함한다.

Description

항체 및 항체-부하된 수지상 세포 매개된 요법을 위한 방법 및 조성물 {METHODS AND COMPOSITIONS FOR ANTIBODY AND ANTIBODY-LOADED DENDRITIC CELL MEDIATED THERAPY}
상호 참조
본 출원은 2014년 1월 22일에 출원된 미국 가출원 번호 61/930,386 및 2014년 10월 21일에 출원된 미국 가출원 번호 62/066,574를 우선권 주장하며, 이들 가출원 각각은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
정부 권리
본 발명은 국립 보건 연구소가 수주한 계약 CA141468 하의 정부 지원으로 만들어졌다. 정부가 본 발명에 대한 특정 권리를 갖고 있다.
면역계가 자기와 비-자기 간의 미묘한 차이를 구별할 수 있는 능력이 있음에도 불구하고, 암은 성장하고 확산되는 경향이 있어, 종종 그의 숙주를 사망에 이르게 한다. 종양 연관 항원 (TAA)에 대한 적응 T 세포 반응이 상기와 같은 환경에서 일어날 수 있으므로, 종양 퇴행이나 종양 성장의 정지가 가변적인 기간 동안 초래된다. 그러나, 대부분의 종양은 결국, 이펙터(effector) T 세포에 의해 인식된 항원을 적절하게 발현하지 않는 변이체의 선택을 통하여 종양 세포가 면역 검출을 회피할 수 있게 만드는 과정인 면역편집을 통하여 도피하게 된다.
자가 종양과는 달리, 유전적으로 별개의 개체 또는 마우스 계통으로부터 유래된 동종이계(allogeneic) 종양은 이식된 동종이계 기관과 매우 유사하게, 면역학적으로 무손상인 숙주로 전이될 때 확실히 거부된다. 놀랍게도, 이러한 현상은 종양과 숙주가, 오랫동안 이식조직 거부의 주요한 결정요인인 것으로 여겨져 왔었던 주요 조직적합성 복합체 (MHC) 항원의 동일한 대립 유전자를 공유하는 경우에도 발생한다.
이들 조건 하에서는, 각종의 작은 조직적합성 항원이 MHC 부류 I 또는 II 분자와 회합하여 프로세싱되고 제시되어, 항원 특이적 방식으로 종양을 공격하는 이펙터 T 세포가 발생한다. 이러한 항원은 종종, 통상적 단백질의 다형성 서열로 구성되지만, 펩티드의 세포내 프로세싱과 기타 세포내 기전에 있어서의 차이인 유전자 결실로부터 비롯될 수도 있다. 짐작건대, 동종이계 종양에 의해 발현된 독특한 단백질의 수와 다양성으로 인해, 이들 종양은 숙주 T 세포 반응으로부터 도피하지 못한다. 실제로, 공여자로부터 유래된 T 세포에 의한 작은 조직적합성 항원의 인식이, 동종이계 조혈 세포 이식조직이 특정의 암을 치유할 수 있는 주요 이유인 것으로 여겨진다.
종양 유형이나 환경에 상관없이, 항원 제시 세포 (APC)가 TAA를 T 세포로 프로세싱하고 제시하는 데에 책임이 있는 것으로 생각된다. APC 중에서, 고전적으로 활성화된 수지상 세포 (DC) 및 대식세포는 T 세포-매개된 면역 반응을 유발시킬 수 있는데, 이러한 반응은 종양 세포독성과 퇴행을 매개한다. 생체 외에서 TAA를 DC에 부하하고 이로 활성화시키면, 진행성 암 환자에게서 임상적으로 유의한 항-종양 면역 반응이 유도될 수 있다. 그럼에도 불구하고, 종양 연관 DC는 일반적으로, 자가 환경에서 유효한 반응을 유도시키지 못하고, 심지어 항-종양 면역을 억제할 수 있다.
종양을 면역 매개된 파괴로부터 도피시켜 줄 수 있는 광범위한 기전을 고려해 볼때, APC가 동종이계 종양에 대항하여 유효한 면역 반응을 생성시키는 기전은 여전히 설명되지 못하지만, 이들 과정은 임상적으로 중요한 의미를 갖는다. 유효한 항-종양 면역 반응을 유도하기 위한 조성물 및 방법이 관련 기술분야에 필요하다. 동종이계 환경에 유효한 항-종양 면역을 유도시키는 데에 책임이 있는 기전을 확인함으로써, 자가 종양을 치료하는 데 신규하고도 유효한 방법을 발견하고 이를 개발할 수 있게 되었다.
간행물
[Steinman et al., Nature. 2007 Sep 27;449(7161):419-26; Kurts et. al., Nat Rev Immunol. 2010 Jun;10(6):403-14; Trombetta et. al., Annu Rev Immunol. 2005;23:975-1028; Fong et. al., J Immunol. 2001 Mar 15;166(6):4254-9; Hsu et. al., Nat Med. 1996 Jan;2(1):52-8; Fong et. al., Annu Rev Immunol. 2000;18:245-73; Gilboa et. al., J Clin Invest. 2007 May;117(5):1195-203; Melief et. al., Immunity. 2008 Sep 19;29(3):372-83; Palucka et. al., Immunity. 2013 Jul 25;39(1):38-48; Tseng et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 2013 Jul 2;110(27):11103-8; Schuurhuis et al., J Immunol. 2006 Apr 15;176(8):4573-80; 미국 특허 출원 번호 US20020155108; 및 미국 특허 번호 8518405].
암을 앓는 개체를 치료하기 위한 방법이 제공된다. 이러한 방법의 측면은 상기 개체에게 (i) 이러한 개체의 암세포의 항원과 특이적으로 결합하는 동종이계 IgG 항체를 갖는 항체 조성물; 및 (ii) 상기 개체의 수지상 세포를 활성화시키는 처치를 투여하는 것을 포함한다. 일부 경우에, 상기 항체 조성물은 복수 개의 결합 특이성을 지닌 폴리클로날 동종이계 IgG 항체를 포함한다. 일부 경우에, 이러한 폴리클로날 동종이계 IgG 항체는 모노클로날 항체 (예를 들어, 규정된 표적 항원 특이성을 지님)의 군일 수 있다. 일부 경우에, 상기 폴리클로날 동종이계 IgG 항체는 1명 이상의 개체로부터의 혈청 (예를 들어, 1명의 개체로부터의 혈청, 2명 이상의 개체로부터 풀링된 혈청 등)으로부터 유래될 수 있다. 일부 경우에, 상기 항체 조성물은 정맥내 면역글로불린 (IVIG), 또는 IVIG로부터 정제되거나 또는 풍부해진 항체를 포함한다. 일부 경우에, 상기 개체의 수지상 세포를 활성화시키는 처치는 이러한 개체를 국부 조사에 노출시키는 것을 포함한다. 일부 경우에, 상기 개체의 수지상 세포를 활성화시키는 처치는 이러한 개체에게 수지상 세포 자극제를 갖는 자극성 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 일부 경우에, 수지상 세포 자극제는 동종이계 IgG 항체와 접합된다. 일부 경우에, 상기 자극성 조성물은 CD40 효능제 및 염증 유발성 시토카인 (예를 들어, TNFα, IFNγ 등)을 포함한다. 일부 경우에, 상기 자극성 조성물은 톨(Toll) 유사 수용체 (TLR) 효능제를 포함한다.
특정 개체에게서 면역 반응을 유도시키는 방법이 제공된다. 이러한 방법의 측면은 (a) 시험관 내에서 상기 개체로부터의 수지상 세포 (DC) (예를 들어, 상기 개체로부터의 수지상 세포의 집단)를, 이러한 DC에 의한 특정 표적 항원의 흡수에 유효한 용량 및 기간 동안, 상기 표적 항원 및 상기 표적 항원과 특이적으로 결합하는 동종이계 IgG 항체를 갖는 항체 조성물과 접촉시킴으로써, 부하된 DC (예를 들어, 부하된 DC의 집단)를 생성시키는 단계; 및 (b) 상기 개체의 T 세포 (예를 들어, 상기 개체의 T 세포의 집단)를 상기 부하된 DC와 접촉시키는 단계 (여기서, 부하된 DC는 항원을 T 세포에 제시하여 접촉된 T 세포를 생성시키고, 이와 같이 접촉된 T 세포는 상기 제시된 항원에 대해 특이적인 면역 반응을 발생시킨다)를 포함한다. 일부 경우에, 상기 DC는 암을 앓는 개체로부터 유래되고, 표적 항원은 암과 연관된다. 일부 경우에, 상기 DC는 상기 개체로부터의 암세포와 접촉된다. 일부 경우에, 상기 DC는 상기 개체의 암세포로부터의 용해물과 접촉된다. 일부 경우에, 상기 DC는 상기 개체의 암세포로부터의 1개 이상 (예를 들어, 2개 이상)의 혈장 막 단백질과 접촉된다. 일부 경우에, 상기 DC는 DC 자극제를 포함하는 자극성 조성물과 접촉된다. 일부 경우에, 상기 자극성 조성물은 CD40 효능제 및 염증 유발성 시토카인을 포함한다. 일부 경우에, 상기 자극성 조성물은 TLR 효능제를 포함한다. 일부 경우에, 상기 DC 자극제는 동종이계 IgG 항체와 접합된다. 일부 경우에, 상기 표적 항원 (예를 들어, 표적 세포, 암세포 용해물/추출물, 2종 이상의 혈장 막 단백질을 갖는 조성물)이 상기 항체 조성물과 접촉되어, DC와 접촉하기에 앞서 면역 복합체를 생성시킨다. 따라서, 일부 경우에, 상기 방법은 DC를 면역 복합체와 접촉시키는 단계를 포함한다. 일부 경우에, 상기 DC는 상기 표적 항원 및 항체 조성물과 동시에 접촉된다. 일부 경우에, T 세포를 접촉시키는 단계는 생체 내에서 수행되고, 상기 방법은 상기 부하된 DC를 상기 개체 내로 도입하는 단계를 포함한다. 일부 경우에, T 세포를 접촉시키는 단계는 시험관 내에서 수행되고, 상기 방법은 이와 같이 접촉된 T 세포를 상기 개체 내로 도입하는 단계를 포함한다.
본 개시내용의 방법을 실시하기 위한 조성물 및 키트가 또한 제공된다. 일부 경우에, 특정 대상 조성물은 복수 개의 결합 특이성을 지닌 폴리클로날 동종이계 IgG 항체; 및 적어도 하나의 DC 자극제를 포함한다. 일부 경우에, 특정 대상 조성물은 복수 개의 결합 특이성을 지닌 폴리클로날 동종이계 IgG 항체; CD40 효능제; 및 염증 유발성 시토카인 [예를 들어, TNFα, IL-1α, IL-1β, IL-19, 인터페론 감마 (IFNγ) 등]을 포함한다. 일부 경우에, DC 자극제가 상기 조성물의 동종이계 IgG 항체 중 적어도 하나와 접합된다. 일부 경우에, 특정 대상 조성물은 정맥내 면역글로불린 (IVIG) 또는 IVIG로부터 정제되거나 또는 풍부해진 항체를 포함한다. 일부 경우에, 특정 대상 조성물은 IVIG 또는 IVIG로부터 정제되거나 또는 풍부해진 항체를 포함하는데, 이러한 조성물에 존재하는 동종이계 IgG 항체 중 적어도 하나가 DC 자극제와 접합된다. 일부 경우에, 상기 조성물에 존재하는 동종이계 IgG 항체 중 적어도 하나가 CD40 효능제와 접합되고, 상기 조성물에 존재하는 동종이계 IgG 항체 중 적어도 하나가 염증 유발성 시토카인과 접합된다. 일부 경우에, 상기 조성물에 존재하는 동종이계 IgG 항체 중 적어도 하나가 CD40 효능제와 접합되거나; 상기 조성물에 존재하는 동종이계 IgG 항체 중 적어도 하나가 염증 유발성 시토카인과 접합되거나; 또는 상기 조성물에 존재하는 동종이계 IgG 항체 중 적어도 하나가 CpG 올리고데옥시뉴클레오티드 (CpG ODN)와 접합된다.
일부 실시양태에서, 동종이계 IgG 항체; 및 종양의 크기를 감소시키는 데 사용하기 위한 APC 자극성 조성물을 포함하는 조성물이 제공된다.
한 측면에서, 본 발명은 암을 앓는 개체에게 (i) 이러한 개체의 암세포의 항원과 결합하는 동종이계 IgG 항체를 포함하는 항체 조성물; 및 (ii) 상기 개체의 APC를 활성화시키는 처치 (여기서, APC는 수지상 세포, 대식세포, 또는 B-세포이다)를 투여함으로써, 암을 앓는 개체를 치료하는 단계를 포함하는, 상기 암을 앓는 개체의 치료 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 상기 동종이계 IgG 항체는 상기 개체 내의 암세포 상의 항원과 결합하여 면역복합체를 형성한다. 일부 경우에, APC의 활성화는 상기 개체에게서 APC에 의한 면역복합체의 흡수 및 T 세포에 대한 암세포의 다중 항원의 제시를 포함한다. 일부 경우에, T 세포에 제시된 다중 항원 중 적어도 하나는 면역복합체 내의 항원과 상이하다.
일부 경우에, 상기 방법은 상기 개체에게서 암세포의 수, 또는 하나 이상의 종양의 크기를 감소시킨다. 일부 경우에, 상기 암은 고형 종양이다. 일부 경우에, 이러한 고형 종양은 직경이 1 cm 미만이다. 일부 경우에, 상기 개체는 인간이다.
일부 경우에, 상기 동종이계 IgG 항체는 암세포의 표면 상에 적어도 10,00개 카피로 존재하는 항원과 결합한다. 일부 경우에, 동종이계 IgG 항체는 비-암세포 상의 항원보다 적어도 100배, 1,000배, 10,000배 더 높은 친화도 (100배, 1,000배, 10,000배 더 낮은 Kd)로 암세포 상의 항원과 결합하는데, 여기서 암세포 상의 항원은 비-암세포 상의 항원과 비교해서 하나 이상의 다형성을 갖는다. 일부 경우에, 동종이계 IgG 항체가 비-암세포와 결합하는 결합력보다 더 높은 결합력으로, 상기 동종이계 IgG 항체가 암세포와 결합한다.
일부 실시양태에서, 수지상 세포를 활성화시키는 처치는 수지상 세포 자극제를 포함하는 수지상 세포 자극성 조성물을 포함한다. 일부 경우에, 이러한 수지상 세포 자극성 조성물은 (i) 톨-유사 수용체 (TLR) 효능제; (ii) CD40 효능제; (iii) CD40 효능제와 염증 유발성 시토카인; (iv) 체크포인트(checkpoint) 분자 중화 화합물; (v) 인돌아민 2,3-디옥시게나제 (IDO) 억제제; (vi) NFkB 활성화제; (vii) 칼슘 채널을 개방시키는 화합물; 및 (viii) T 세포-관련 동시 자극성 분자로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 수지상 세포 자극제를 포함한다. 일부 경우에, 상기 수지상 세포 자극성 조성물은 CD40 효능제와 염증 유발성 시토카인을 포함한다. 일부 경우에, 상기 염증 유발성 시토카인은 종양 괴사 인자 알파 (TNFα) 및/또는 IFNγ이다. 일부 경우에, 수지상 세포 자극제가 동종이계 IgG 항체와 접합된다.
일부 실시양태에서, B-세포를 활성화시키는 처치는 B-세포 자극제를 함유하는 B-세포 자극성 조성물을 포함한다. 일부 경우에, 이러한 B-세포 자극성 조성물은 (i) 톨-유사 수용체 (TLR) 효능제; (ii) CD40 효능제; (iii) CD40 효능제와 염증 유발성 시토카인; (iv) B-세포 수용체와 결합하는 항원; (v) 항-이디오타입(idiotype) 항체; 및 (vi) 표면 면역글로불린과 가교 결합되는 작용제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 B-세포 자극제를 포함한다. 일부 경우에, 염증 유발성 시토카인은 IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-6, IL-7, IL-9, IL-10, IL-12, IL-15, IL-18, IL-21, IFN-α, IFN-β, IFN-γ, G-CSF, 또는 GM-CSF이다. 일부 경우에, TLR 효능제는 CpG ODN, 면역자극성 DNA, 면역자극성 RNA, 면역자극성 올리고뉴클레오티드, 이미퀴모드(Imiquimod), 레시퀴모드(Resiquimod), 록스리빈(Loxribine), 플라겔린(Flagellin), FSL-I 또는 LPS이다. 일부 경우에, 상기 항원은 자기 항원, 동종이계 항원, 펩티드 항원, 핵산 항원, 탄수화물 항원, 또는 종양 연관 항원이다. 일부 경우에, 표면 면역글로불린과 가교 결합되는 작용제는 항-Ig 항체, 항-이디오타입 항체, 또는 항-이소형 항체이다. 일부 경우에, B-세포 자극제가 동종이계 IgG 항체와 접합된다.
일부 실시양태에서, 대식세포를 활성화시키는 처치는 대식세포 자극제를 함유하는 대식세포 자극성 조성물을 포함한다. 일부 경우에, 이러한 대식세포 자극성 조성물은 (i) 톨-유사 수용체 (TLR) 효능제; (ii) 대식세포 활성화 시토카인; 및 (iii) 글루코코르티코이드 수용체 효능제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 대식세포 자극제를 포함한다. 일부 경우에, 대식세포 활성화 시토카인은 IL-1, IL-4, IL-6, IL-10; IL-13, TNF-α, TNF-β, G-CSF, GM-CSF, 또는 IFN-γ이다. 일부 경우에, TLR 효능제는 TLR4 효능제 또는 TLR2 효능제이다. 일부 경우에, TLR4 또는 TLR2 효능제는 리포폴리사카라이드, 뮤라밀 디펩티드, 리포테이코산(lipoteichoic acid), 또는 박테리아 열 쇼크 단백질이다. 일부 경우에, 대식세포 자극제가 동종이계 IgG 항체와 접합된다.
일부 실시양태에서, 암세포의 항원은 암세포에 풍부한 항원이다. 일부 실시양태에서, 동종이계 IgG 항체는 모노클로날 항체이다. 일부 실시양태에서, 상기 항체 조성물은 2개 이상의 동종이계 IgG 항체를 포함하는데, 이러한 2개 이상의 동종이계 IgG 항체 중 적어도 2개는 상이한 항원과 특이적으로 결합한다. 일부 실시양태에서, 상기 항체 조성물은 2개 이상의 동종이계 IgG 항체를 포함하는데, 이러한 2개 이상의 동종이계 IgG 항체 중 적어도 2개는 동일한 항원의 상이한 에피토프와 특이적으로 결합한다. 일부 경우에, 상기 2개 이상의 동종이계 IgG 항체 중 적어도 2개는 모노클로날 항체이다.
일부 실시양태에서, (a) 상기 항체 조성물; 및 (b) 개체의 APC를 활성화시키는 상기 처치 중 적어도 하나가, (i) 종양; 및/또는 (ii) 종양 절제 부위 내로 또는 그 근처에 국소 주사됨으로써 투여된다. 일부 실시양태에서, (a) 상기 항체 조성물; 및 (b) 개체의 APC를 활성화시키는 상기 처치 중 적어도 하나가 리포솜, 마이크로입자, 또는 나노입자로 투여된다.
일부 실시양태에서, APC는 수지상 세포이다. 일부 실시양태에서, APC는 대식세포이다. 일부 실시양태에서, APC는 B-세포이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 암을 앓는 개체에게 (i) 암세포 상의 복수 개의 항원과 결합하는 폴리클로날 동종이계 IgG 항체를 포함하는 항체 조성물; 및 (ii) 상기 개체의 항원 제시 세포 (APC)를 활성화시키는 처치 (여기서, APC는 수지상 세포, 대식세포, 또는 B-세포이다)를 투여하는 단계를 포함하는, 상기 암을 앓는 개체를 치료하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 상기 폴리클로날 동종이계 IgG 항체는 제2의 개체로부터의 혈청으로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 상기 폴리클로날 동종이계 IgG 항체는 2명 이상의 개체로부터 풀링된다.
일부 실시양태에서, 상기 동종이계 IgG 항체 중 적어도 하나의 표적 항원은 미리 결정되지 않는다. 일부 실시양태에서, 수지상 세포를 활성화시키는 처치는 수지상 세포 자극제를 포함하는 수지상 세포 자극성 조성물을 포함한다.
일부 경우에, 상기 수지상 세포 자극성 조성물은 (i) 톨-유사 수용체 (TLR) 효능제; (ii) CD40 효능제; (iii) CD40 효능제와 염증 유발성 시토카인; (iv) 체크포인트 분자 중화 화합물; (v) 인돌아민 2,3-디옥시게나제 (IDO) 억제제; (vi) NFkB 활성화제; (vii) 칼슘 채널을 개방시키는 화합물; 및 (viii) T 세포-관련 동시 자극성 분자로부터 선택된 하나 이상의 수지상 세포 자극제를 포함한다. 일부 경우에, 상기 수지상 세포 자극성 조성물은 CD40 효능제와 염증 유발성 시토카인을 포함한다. 일부 경우에, 상기 염증 유발성 시토카인은 종양 괴사 인자 알파 (TNFα) 및/또는 IFNγ이다. 일부 경우에, 상기 수지상 세포 자극제가 동종이계 IgG 항체 중 적어도 하나와 접합된다.
일부 실시양태에서, B-세포를 활성화시키는 처치는 B-세포 자극제를 함유하는 B-세포 자극성 조성물을 포함한다. 일부 경우에, 이러한 B-세포 자극성 조성물은 (i) 톨-유사 수용체 (TLR) 효능제; (ii) CD40 효능제; (iii) CD40 효능제와 염증 유발성 시토카인; (iv) B-세포 수용체와 결합하는 항원; (v) 항-이디오타입 항체; 및 (vi) 표면 면역글로불린과 가교 결합되는 작용제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 B-세포 자극제를 포함한다. 일부 경우에, 염증 유발성 시토카인은 IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-6, IL-7, IL-9, IL-10, IL-12, IL-15, IL-18, IL-21, IFN-α, IFN-β, IFN-γ, G-CSF, 또는 GM-CSF이다. 일부 경우에, TLR 효능제는 CpG ODN, 면역자극성 DNA, 면역자극성 RNA, 면역자극성 올리고뉴클레오티드, 이미퀴모드, 레시퀴모드, 록스리빈, 플라겔린, FSL-I 또는 LPS이다. 일부 경우에, 상기 항원은 자기 항원, 동종이계 항원, 펩티드 항원, 핵산 항원, 탄수화물 항원, 또는 종양 연관 항원이다. 일부 경우에, 표면 면역글로불린과 가교 결합되는 작용제는 항-Ig 항체, 항-이디오타입 항체, 또는 항-이소형 항체이다. 일부 경우에, B-세포 자극제가 동종이계 IgG 항체와 접합된다.
일부 실시양태에서, 대식세포를 활성화시키는 처치는 대식세포 자극제를 함유하는 대식세포 자극성 조성물을 포함한다. 일부 경우에, 이러한 대식세포 자극성 조성물은 (i) 톨-유사 수용체 (TLR) 효능제; (ii) 대식세포 활성화 시토카인; 및 (iii) 글루코코르티코이드 수용체 효능제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 대식세포 자극제를 포함한다. 일부 경우에, 대식세포 활성화 시토카인은 IL-1, IL-4, IL-6, IL-10; IL-13, TNF-α, TNF-β, G-CSF, GM-CSF, 또는 IFN-γ이다. 일부 경우에, TLR 효능제는 TLR4 효능제 또는 TLR2 효능제이다. 일부 경우에, TLR4 또는 TLR2 효능제는 리포폴리사카라이드, 뮤라밀 디펩티드, 리포테이코산, 또는 박테리아 열 쇼크 단백질이다. 일부 경우에, 대식세포 자극제가 동종이계 IgG 항체와 접합된다.
일부 실시양태에서, (a) 상기 항체 조성물; 및 (b) 개체의 APC를 활성화시키는 상기 처치 중 적어도 하나가, (i) 종양; 및/또는 (ii) 종양 절제 부위 내로 또는 그 근처에 국소 주사됨으로써 투여된다. 일부 실시양태에서, (a) 상기 항체 조성물; 및 (b) 개체의 APC를 활성화시키는 상기 처치 중 적어도 하나가 리포솜, 마이크로입자, 또는 나노입자로 투여된다.
일부 실시양태에서, 상기 폴리클로날 동종이계 IgG 항체는 2개 이상의 모노클로날 항체이다. 일부 경우에, 2개 이상의 모노클로날 항체 중 적어도 2개는 암세포에 풍부한 항원과 특이적으로 결합한다. 일부 경우에, 2개 이상의 모노클로날 항체 중 적어도 2개는 상이한 항원과 특이적으로 결합한다. 일부 경우에, 2개 이상의 모노클로날 항체 중 적어도 2개는 동일한 항원 상의 2개의 상이한 에피토프와 특이적으로 결합한다.
일부 실시양태에서, 상기 폴리클로날 동종이계 IgG 항체는 상기 개체 내의 암세포 상의 항원과 결합하여 면역복합체를 형성한다. 일부 경우에, APC의 활성화는 상기 개체에게서 APC에 의한 면역복합체의 흡수 및 T 세포에 대한 암세포의 다중 항원의 제시를 포함한다. 일부 경우에, T 세포에 제시된 다중 항원 중 적어도 하나는 면역복합체 내의 항원 중 어떠한 것과도 상이하다.
일부 실시양태에서, 상기 방법은 상기 개체에게서 암세포의 수를 감소시키거나 또는 종양의 크기를 감소시킨다. 일부 경우에, 상기 암은 고형 종양이다. 일부 경우에, 이러한 고형 종양은 직경이 1 cm 미만이다. 일부 경우에, 상기 개체는 인간이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 (a) 시험관 내에서 특정 개체로부터의 항원 제시 세포 (APC)를, (i) 암세포 또는 그의 일부; 및 (ii) 암세포 상의 항원과 결합하는 동종이계 IgG 항체를 포함하는 항체 조성물과 접촉시키는 단계 (여기서, 암세포 상의 항원과 결합하는 동종이계 IgG 항체와 암세포는 면역복합체를 형성하고, 상기 접촉 단계로 인해, APC에 의해 상기 면역복합체의 흡수가 초래됨으로써, 부하된 APC가 생성되는데, 여기서 APC는 수지상 세포, 대식세포, 또는 B-세포이다); 및 (b) 상기 개체의 T 세포를 상기 부하된 APC와 접촉시키는 단계 (여기서, 부하된 APC는 암세포 항원을 T 세포에 제시하여 접촉된 T 세포를 생성시키고, 이와 같이 접촉된 T 세포는 상기 제시된 암세포 항원에 대해 특이적인 면역 반응을 발생시킨다)를 포함하는, 상기 개체에게서 면역 반응을 유도시키는 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, APC는 골수 유래 DC, 혈액 유래 DC, 비장 DC, 및 종양 연관 DC (TADC)로 이루어진 군으로부터 선택된 수지상 세포이다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 APC를, APC 자극제를 포함하는 APC 자극성 조성물과 접촉시키는 단계를 추가로 포함한다. 일부 경우에, 이러한 APC 자극성 조성물은 수지상 세포 자극제를 포함하는 수지상 세포 자극성 조성물이다.
일부 경우에, 상기 수지상 세포 자극성 조성물은 (i) 톨-유사 수용체 (TLR) 효능제; (ii) CD40 효능제; (iii) CD40 효능제와 염증 유발성 시토카인; (iv) 체크포인트 분자 중화 화합물; (v) 인돌아민 2,3-디옥시게나제 (IDO) 억제제; (vi) NFkB 활성화제; (vii) 칼슘 채널을 개방시키는 화합물; 및 (viii) T 세포-관련 동시 자극성 분자로부터 선택된 하나 이상의 수지상 세포 자극제를 포함한다. 일부 경우에, 상기 수지상 세포 자극성 조성물은 CD40 효능제와 염증 유발성 시토카인을 포함한다. 일부 경우에, 염증 유발성 시토카인은 종양 괴사 인자 알파 (TNFα) 및/또는 IFNγ이다. 일부 경우에, 수지상 세포 자극제가 동종이계 IgG 항체와 접합된다.
일부 실시양태에서, 상기 APC 자극성 조성물은 B-세포 자극제를 포함하는 B-세포 자극성 조성물이다. 일부 경우에, 이러한 B-세포 자극성 조성물은 (i) 톨-유사 수용체 (TLR) 효능제; (ii) CD40 효능제; (iii) CD40 효능제와 염증 유발성 시토카인; (iv) B-세포 수용체와 결합하는 항원; (v) 항-이디오타입 항체; 및 (vi) 표면 면역글로불린과 가교 결합되는 작용제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 B-세포 자극제를 포함한다. 일부 경우에, 염증 유발성 시토카인은 IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-6, IL-7, IL-9, IL-10, IL-12, IL-15, IL-18, IL-21, IFN-α, IFN-β, IFN-γ, G-CSF, 또는 GM-CSF이다. 일부 경우에, TLR 효능제는 CpG ODN, 면역자극성 DNA, 면역자극성 RNA, 면역자극성 올리고뉴클레오티드, 이미퀴모드, 레시퀴모드, 록스리빈, 플라겔린, FSL-I 또는 LPS이다. 일부 경우에, 상기 항원은 자기 항원, 동종이계 항원, 펩티드 항원, 핵산 항원, 탄수화물 항원, 또는 종양 연관 항원이다. 일부 경우에, 표면 면역글로불린과 가교 결합되는 작용제는 항-Ig 항체, 항-이디오타입 항체, 또는 항-이소형 항체이다. 일부 경우에, B-세포 자극제가 동종이계 IgG 항체와 접합된다.
일부 실시양태에서, 상기 APC 자극성 조성물은 대식세포 자극제를 포함하는 대식세포 자극성 조성물이다. 일부 경우에, 이러한 대식세포 자극성 조성물은 (i) 톨-유사 수용체 (TLR) 효능제; (ii) 대식세포 활성화 시토카인; 및 (iii) 글루코코르티코이드 수용체 효능제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 대식세포 자극제를 포함한다. 일부 경우에, 대식세포 활성화 시토카인은 IL-1, IL-4, IL-6, IL-10; IL-13, TNF-α, TNF-β, G-CSF, GM-CSF, 또는 IFN-γ이다. 일부 경우에, TLR 효능제는 TLR4 효능제 또는 TLR2 효능제이다. 일부 경우에, TLR4 또는 TLR2 효능제는 리포폴리사카라이드, 뮤라밀 디펩티드, 리포테이코산, 또는 박테리아 열 쇼크 단백질이다. 일부 경우에, 대식세포 자극제가 동종이계 IgG 항체와 접합된다.
일부 실시양태에서, 암세포는 APC와 접촉시키기 전에 상기 항체 조성물과 접촉시킨다. 일부 실시양태에서, APC는 암세포 및 항체 조성물과 동시에 접촉시킨다. 일부 실시양태에서, T 세포를 접촉시키는 단계는 생체 내에서 수행되고, 상기 방법은 상기 부하된 APC를 상기 개체 내로 도입하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, T 세포를 접촉시키는 단계는 시험관 내에서 수행되고, 상기 방법은 상기 접촉된 T 세포를 상기 개체 내로 도입하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 동종이계 IgG 항체는 모노클로날 항체이다. 일부 실시양태에서, 항체 조성물은 복수 개의 암세포 항원과 결합하는 폴리클로날 동종이계 IgG 항체를 포함한다. 일부 경우에, 이러한 폴리클로날 동종이계 IgG 항체는 2개 이상의 모노클로날 항체이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 (i) 암세포의 항원과 결합하는 동종이계 IgG 항체를 포함하는 항체 조성물; 및 (ii) APC 자극제 (여기서, APC 자극제는 수지상 세포 자극제, 대식세포 자극제, 또는 B-세포 자극제이다)를 포함하는, APC를 부하하기 위한 조성물을 제공한다. 일부 실시양태에서, 동종이계 IgG 항체는 모노클로날 항체이다.
일부 실시양태에서, 상기 항체 조성물은 복수 개의 암세포 항원과 결합하는 폴리클로날 동종이계 IgG 항체를 포함한다. 일부 경우에, 이러한 폴리클로날 동종이계 IgG 항체는 2개 이상의 모노클로날 항체를 포함한다. 일부 경우에, 2개 이상의 모노클로날 항체 중 적어도 2개는 암세포에 풍부한 항원과 특이적으로 결합한다. 일부 경우에, 2개 이상의 모노클로날 항체 중 적어도 2개는 상이한 항원과 특이적으로 결합한다. 일부 경우에, 2개 이상의 모노클로날 항체 중 적어도 2개는 동일한 항원의 상이한 에피토프와 특이적으로 결합한다.
일부 경우에, 상기 폴리클로날 동종이계 IgG 항체는 특정 개체로부터의 혈청으로부터 유래된다. 일부 경우에, 상기 폴리클로날 동종이계 IgG 항체는 2명 이상의 개체로부터 풀링된다. 일부 경우에, 상기 조성물은 정맥내 면역글로불린 (IVIG) 또는 IVIG로부터 정제되거나 또는 풍부해진 항체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 수지상 세포 자극제는 (i) 톨-유사 수용체 (TLR) 효능제; (ii) CD40 효능제; (iii) CD40 효능제와 염증 유발성 시토카인; (iv) 체크포인트 분자 중화 화합물; (v) 인돌아민 2,3-디옥시게나제 (IDO) 억제제; (vi) NFkB 활성화제; (vii) 칼슘 채널을 개방시키는 화합물; 및 (viii) T 세포-관련 동시 자극성 분자로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, B-세포 자극제는 (i) 톨-유사 수용체 (TLR) 효능제; (ii) CD40 효능제; (iii) CD40 효능제와 염증 유발성 시토카인; (iv) B-세포 수용체와 결합하는 항원; (v) 항-이디오타입 항체; 및 (vi) 표면 면역글로불린과 가교 결합되는 작용제로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 대식세포 자극제는 (i) 톨-유사 수용체 (TLR) 효능제; (ii) 대식세포 활성화 시토카인; 및 (iii) 글루코코르티코이드 수용체 효능제로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 항체 조성물의 적어도 하나의 동종이계 IgG 항체가 APC 자극제와 접합된다. 일부 경우에, 항체 조성물의 적어도 하나의 동종이계 IgG 항체가 CD40 효능제와 접합되고, 항체 조성물의 적어도 하나의 동종이계 IgG 항체가 염증 유발성 시토카인과 접합된다. 일부 경우에, 염증 유발성 시토카인은 TNFα 및/또는 IFNγ이다.
일부 실시양태에서, 항체 조성물의 적어도 하나의 동종이계 IgG 항체가 CD40 효능제와 접합되고; 항체 조성물의 적어도 하나의 동종이계 IgG 항체가 염증 유발성 시토카인과 접합되며; 항체 조성물의 적어도 하나의 동종이계 IgG 항체가 톨-유사 수용체 (TLR) 효능제와 접합된다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 전술된 방법 중 임의의 방법에 사용하기 위한 키트를 제공한다. 또 다른 측면에서, 본 발명은 (i) 암세포의 항원과 결합하는 동종이계 IgG 항체를 포함하는 항체 조성물을 포함하는 구획; 및 (ii) 적어도 하나의 APC 자극성 조성물을 포함하는 적어도 하나의 구획 (여기서, APC 자극성 조성물은 수지상 세포 자극성 조성물, 대식세포 자극성 조성물, 또는 B-세포 자극성 조성물이다)을 포함하는 키트를 제공한다.
일부 실시양태에서, APC 자극성 조성물은 (i) 톨-유사 수용체 (TLR) 효능제; (ii) CD40 효능제; (iii) CD40 효능제와 염증 유발성 시토카인; (iv) 체크포인트 분자 중화 화합물; (v) 인돌아민 2,3-디옥시게나제 (IDO) 억제제; (vi) NFkB 활성화제; (vii) 칼슘 채널을 개방시키는 화합물; 및 (viii) T 세포-관련 동시 자극성 분자로부터 선택된 하나 이상의 수지상 세포 자극제를 포함한다. 일부 경우에, CD40 효능제는 CD40L이고, 염증 유발성 시토카인은 TNFa 및/또는 IFNg이다. 일부 경우에, CD40 효능제와 염증 유발성 시토카인은 동일한 구획 내에 있다. 일부 경우에, CD40 효능제와 염증 유발성 시토카인은 별도의 구획 내에 있다.
일부 실시양태에서, APC 자극성 조성물은 (i) 톨-유사 수용체 (TLR) 효능제; (ii) 대식세포 활성화 시토카인; 및 (iii) 글루코코르티코이드 수용체 효능제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 대식세포 자극제를 포함한다. 일부 실시양태에서, APC 자극성 조성물은 (i) 톨-유사 수용체 (TLR) 효능제; (ii) CD40 효능제; (iii) CD40 효능제와 염증 유발성 시토카인; (iv) B-세포 수용체와 결합하는 항원; (v) 항-이디오타입 항체; 및 (vi) 표면 면역글로불린과 가교 결합되는 작용제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 B-세포 자극제를 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 종양을 (i) 종양 세포의 항원과 특이적으로 결합하는 동종이계 IgG 항체를 포함하는 항체 조성물, 및 (ii) APC 자극성 조성물 (여기서, APC는 수지상 세포, 대식세포, 또는 B-세포이다)과 접촉시킴으로써, 종양의 크기 또는 종양 내의 세포의 수를 감소시키는 단계를 포함하는, 종양의 크기 또는 종양 내의 세포의 수를 감소시키는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 상기와 같이 종양을 접촉시키는 단계는 상기 항체 조성물 및 APC 자극성 조성물을 종양 부위 내로 또는 그 근처에 동시에 또는 순차적으로 직접 주사하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, APC는 수지상 세포이고, APC 자극성 조성물은 수지상 세포 자극제를 포함한다. 일부 실시양태에서, APC는 대식세포이고, APC 자극성 조성물은 대식세포 자극제를 포함한다. 일부 실시양태에서, APC는 B-세포이고, APC 자극성 조성물은 B-세포 자극제를 포함한다.
일부 경우에, APC 자극성 조성물은 (i) 톨-유사 수용체 (TLR) 효능제; (ii) CD40 효능제; (iii) CD40 효능제와 염증 유발성 시토카인; (iv) 체크포인트 분자 중화 화합물; (v) 인돌아민 2,3-디옥시게나제 (IDO) 억제제; (vi) NFkB 활성화제; (vii) 칼슘 채널을 개방시키는 화합물; 및 (viii) T 세포-관련 동시 자극성 분자로부터 선택된 하나 이상의 수지상 세포 자극제를 포함한다.
일부 경우에, APC 자극성 조성물은 (i) 톨-유사 수용체 (TLR) 효능제; (ii) 대식세포 활성화 시토카인; 및 (iii) 글루코코르티코이드 수용체 효능제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 대식세포 자극제를 포함한다.
일부 경우에, APC 자극성 조성물은 (i) 톨-유사 수용체 (TLR) 효능제; (ii) CD40 효능제; (iii) CD40 효능제와 염증 유발성 시토카인; (iv) B-세포 수용체와 결합하는 항원; (v) 항-이디오타입 항체; 및 (vi) 표면 면역글로불린과 가교 결합되는 작용제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 B-세포 자극제를 포함한다.
본 발명은 첨부되는 도면과 연계해서 판독할 때 다음의 상세한 설명으로부터 가장 잘 이해된다. 통상적 실시에 따라서, 그 도면의 각종 특색은 일정한 비율이 아닌 것으로 강조된다. 그 반대로, 각종 특색의 치수는 명확하게 하기 위해 임의로 확대되거나 축소된다. 본 도면에는 다음 도가 포함된다.
도 1a- k. 종양-결합성 항체는 동종이계 종양의 거부를 개시한다. a . 실험 설계: LMP 세포를 129S1 동계(syngeneic) 숙주와 C57Bl/6 동종이계 숙주 내로 피하 (s.c.) 주사한다. B16F10 세포를 C57Bl/6 동계 숙주와 129S1 동종이계 숙주 내로 피하 주사한다. b . LMP 및 B16 종양을 C57Bl/6 (■), 129S1 (▲), CD4+ 세포-고갈된 동종이계 마우스 (◇) 또는 CD8+ 세포-고갈된 동종이계 마우스 (○)에서 성장시킨다 (n=16). c . 129S1 마우스 (□) 및 C57Bl/6 마우스 (■)에서 CD45+ 세포들 중에 LMP-침윤성 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 비율 (%) (n=8). d . 129S1 마우스 (□) 및 C57Bl/6 마우스 (■)에서 LMP-침윤성 미숙한 골수성 세포 (iMC) 및 성숙한 DC의 비율 (%) (n=8). e . 3일 전에 CFSE-표지된 LMP 세포가 접종된 129S1 또는 C57Bl/6 마우스의 배출 림프절 내의 골수성 세포 (n=6). f . CFSE-표지된 LMP 세포와 함께 밤새 인큐베이션된 동계 BMDC (□) 및 혈액 단구 (Mo)-DC (
Figure pct00001
), 및 동종이계 BMDC (■) 및 Mo-DC (
Figure pct00002
)에 의한 종양 흡수, MHCII 및 CD86 발현 (n=10). g . 129S1 또는 C57Bl/6 마우스 내로 종양 접종한 지 48 h 후에 생체 내에서 CFSE-표지된 LMP 세포와 결합된 IgG 및 IgM (n=5). h . 및 i. CFSE-표지된 LMP 세포를 129S1 및 C57Bl/6 마우스 내로 접종한 지 24 h 후에 IgM (h) 및 IgG (i)에 대한 종양 박편의 염색 (n=5). j . 129S1 (□), C57Bl/6 (■) 및 B 세포-고갈된 동종이계 숙주 (◆)에서의 종양 성장 (n=6). k . 좌측: 나이브(naive) C57Bl/6 마우스 (○)에서, 또는 -1일 및 0일째에 동계-IgG (■), 동계-IgM (▲), 동종이계-IgG (□), 또는 동종이계-IgM (Δ)이 정맥내 주사된 마우스에서의 B16 종양 크기 (n=6). 우측: 동종이계-IgG (□) 또는 동종이계-IgM (Δ)이 2회 주사된 나이브 C57Bl/6 마우스 (○)에서, 또는 동종이계-IgG (■) 또는 동종이계-IgM (▲)이 주사된 FcγR KO 마우스 (C57Bl/6 배경)에서의 B16 종양 크기 (n=6). 별표 (*)는 p<0.05를 의미하고 2개의 별표 (**)는 p<0.01을 의미한다.
도 2a-h. AlloIgG-IC는 BMDC에 도입되고 제시되며, 생체 내에서 보호 면역을 구동시킨다. a . 실험 설계: 종양 용해물을 동계 또는 동종이계 IgG 또는 IgM과 함께 인큐베이션하였고, 이를 동계 BMDC와 함께 밤새 배양하였다. b . 항체 및 종양 용해물 (□) 또는 무손상 종양 세포 (■)과 함께 배양된 DC 상에서 CD86 및 MHCII의 발현 (n=16). c . LMP 용해물 (□) 또는 무손상 LMP 세포 (■) Ig-IC와 함께 밤새 배양된 BMDC의 상등액 중의 IL-12 및 TNFα (n=16). d . CFSE-표지된 종양 용해물 (□) 또는 CFSE-표지된 무손상 세포 (■)로부터 형성된 IC와 함께 밤새 인큐베이션된 BMDC (n=8). e . CFSE-표지된 LMP 세포 및 동종이계 항체와 함께 밤새 배양된 BMDC에서의 MHCII 발현 (x400). f . 종양 용해물 (□) 또는 무손상 세포 (■)로부터 형성된 IC가 부하된 DC와 함께 배양된 CD4+ T 세포의 증식 (n=8). g. 실험 설계: 종양을 마우스로부터 꺼내고, 항체로 코팅한 다음, 동계 DC와 함께 24 h 동안 인큐베이션하였다. DC를 세척하고, 이를 상응하는 종양-절제된 마우스 내로 피하 주사하였다. h . PBS (●), 또는 종양 용해물 (○), C57Bl/6 IgG-IC (▲), C57Bl/6 IgM-IC (Δ), 129S1 IgG-IC (■) 또는 129S1 IgM-IC (□)가 부하된 DC의 종양 재발에 대한 효과 (n=16).
도 3a-g. 종양-관련 수지상 세포 (TADC)는 alloIgG-IC에 반응하기 위해 자극을 필요로 하지만, 골수-유래 수지상 세포 (BMDC)는 그렇지 않다. a . PBS (○), 129S1 IgG (◇) 또는 C57Bl/6 IgG (◆)의 종양내 주사 후 종양 성장 (n=12). b . PBS (각 조건에 대한 좌측 막대), 종양 용해물 (각 조건에 대한 중간 막대) 또는 alloIgG-IC (각 조건에 대한 우측 막대)와 함께 인큐베이션된 DC 상에서의 CD86 및 MHCII 발현 (n=9). c . 단독으로 배양되거나 (각 조건에 대한 좌측 막대), LMP 용해물과 함께 배양되거나 (각 조건에 대한 중간 막대) 또는 alloIgG-IC와 함께 배양된 (각 조건에 대한 우측 막대) DC의 상등액 중의 TNFα 및 IL-12 (n=12). d . DC와 함께 배양되거나 (각 조건에 대한 좌측 막대), 종양 용해물이 부하된 DC와 함께 배양되거나 (각 조건에 대한 중간 막대) 또는 alloIgG-IC가 부하된 DC와 함께 배양된 (각 조건에 대한 우측 막대) CD4+ T 세포의 증식 (n=12). e . 처리되지 않은 마우스 (○), 또는 alloIgG-IC 활성화된 BMDC (■) 또는 TADC (▲)로 처리된 마우스에서 절제된 LMP 및 B16 종양의 재발 (n=12). f . 처리되지 않은 DC (레드), 또는 alloIgG-IC와 함께 인큐베이션된 DC 중의 p-P38, pERK1/2 및 pJNK. 그래프는 LMP 용해물 (각 조건에 대한 좌측 막대) 또는 alloIgG-IC (각 조건에 대한 우측 막대)와 함께 15분 동안 인큐베이션된 DC 중에서 p-P38, pERK1/2 및 pJNK 수준의 arcsinh 비를 나타낸다 (n=8). g . CFSE-표지된 alloIgG-IC와 함께 밤새 배양된 후 TADC의 CFSE 수준 또는 MHCII+ 및 CD86+ 발현 (n=12). PBS (각 조건에 대한 좌측 막대); IgG129IC (각 조건에 대한 우측 막대).
도 4a-i. 동종항체를 CD40L 및 TNFα와 조합하여 계내에서 종양에 주사하면, 전신 DC-매개된 항-종양 면역이 유도된다. a . 처리되지 않은 마우스 (○), 또는 alloIgG (●), TNFα+CD40L (□), 폴리 I:C (Δ), alloIgG+TNFα+CD40L (■) 또는 폴리 I:C+alloIgG (▲)가 주사된 마우스에서의 종양 성장 (n=12). b . PBS (하부), PE-표지된 IgG (중간), 또는 TNFα+CD40L을 수반한 PE-표지된 IgG (상부)를 주사한 지 2시간 후에 B16-보유 마우스로부터의 골수성 세포에서 PE의 평균 형광 수준. c. 처리한 지 5일 후 B16 종양으로부터의 DC 상에서의 CD40 및 CD86 발현 (n=6). d. 처리되지 않거나 (○), 또는 alloIgG (●), TNFα+CD40L (□), 폴리 I:C (Δ), TNFα+CD40L+alloIgG (■) 또는 폴리 I:C+alloIgG (▲)가 주사된 B16 종양으로부터의 2x106개 DC로 예방접종된 마우스에서의 B16 성장 (n=6). e . 처리되지 않거나 (○) 또는 alloIgG (□), TNFα+CD40L (Δ), 또는 TNFα+CD40L+alloIgG (■)로 처리된 Tyr:CreER;BrafV600E/Ptenlox /lox 마우스에서의 종양 수. 사진은 처리 당일 및 처리한 지 24일 후 대표적인 마우스를 나타낸다 (n=8). f . 처리되지 않은 마우스 (○), 또는 alloIgG (□), TNFα+CD40L (Δ), 또는 TNFα+CD40L+alloIgG (◆)로 처리된 마우스에서의 4T1 원발성 종양 크기 (n=7). g . 30일째 가시적 폐 전이의 평균 계수치. 30일째 폐 전이의 사진 및 조직학 (광도 x10, n=7). h . selfIgG 또는 alloIgG로 코팅된 CFSE-염색된 자가 종양 세포와 함께 밤새 배양된, 폐암 환자로부터의 TADC 상에서의 항원 흡수 및 CD40/CD86 공동-발현 (n=2). i . selfIgG- 또는 alloIgG-코팅된 자가 종양 세포와의 자가 BMDC 배양 후 중피종 (MSTO) 환자로부터의 CD4+ T 세포의 증식 반응 및 DC HLA-DR 상향 조절 (n=2).
도 5a-f. a. 129S1 (□), C57Bl/6 (■), 또는 항-아시알로-GM1 (Δ) 또는 항-NK1.1 항체 (◇)로 미리 처리된 동종이계 숙주에서의 LMP (우측) 및 B16 (좌측) 성장 (n=5). b . 129S1 (□) 및 C57Bl/6 (■) LMP-보유 마우스의 림프계 기관 내에서 CD4+ T 세포 (상부 그래프) 및 CD8+ T 세포 (하부 그래프)에 의한 BrdU 흡수. c. LMP-보유 마우스 (좌측 패널) 및 B16-보유 마우스 (우측 패널)로부터의 Gr-1neg/CD11c+/MHCII+ 세포의 유동 세포계수 분석. 히스토그램은 C57Bl/6 마우스 (블루) 및 129S1 마우스 (레드)로부터의 DC 상에서 동시 자극성 분자의 대표적인 발현 수준을 나타낸다. d . LMP 세포와 함께 밤새 인큐베이션된 동계 BMDC (□), 동계 혈액 단구 (Mo)-DC (
Figure pct00003
), 동종이계 BMDC (■) 또는 Mo-DC (
Figure pct00004
)의 상등액 중의 IL-12 및 TNFα. e . LMP 및 B16 세포에 대한 C57Bl/6으로부터의 IgG (□), C57Bl/6으로부터의 IgM (Δ), 129S1로부터의 IgG (■) 및 129S1로부터의 IgM (▲)의 각종 농도의 결합성의 유동 세포계수 분석. 하부 패널은 1 ㎍의 C57Bl/6 (레드) 또는 129S1 (그린) 항체를 1x105개 LMP (상부) 또는 B16 (하부) 세포와 함께 인큐베이션한 후 IgG (좌측) 또는 IgM (우측)의 MFI의 대표적인 히스토그램을 나타낸다. f. 동종이계 IgG (■), 동종이계 IgM (▲), 동계 IgG (□) 또는 동계 IgM (Δ)이 주사된 나이브 129S1 마우스에서의 LMP 종양 크기 (n=6). 별표 (*)는 p<0.05를 의미하고 2개의 별표 (**)는 p<0.01을 의미한다.
도 6a-j. a. 밤새 IgG-IC로 활성화된 C57Bl/6 마우스 (□) 및 FcγR KO 마우스 (■)로부터의 BMDC 중에서 CD40 및 CD86 발현 (좌측) 및 IL-12 분비 (우측)의 평균 수준 (n=5). b . IgG-IC가 부하된 C57Bl/6 마우스 (□) 및 FcγR KO 마우스 (■)로부터의 BMDC와 함께 배양된 CD4+ T 세포의 증식 (n=4). c . 처리되지 않은 마우스 (○), IgG-IC가 부하된 WT BMDC로 처리된 마우스 (■), 또는 IgG-IC가 부하된 FcγR KO BMDC로 처리된 마우스 (◇)에서의 종양 재발 (n=4). d . 및 e. 나이브 마우스 (●)로부터, 또는 DC+IgGC57 IC (▲), DC+IgMC57 IC (Δ), DC+IgG129 IC (■), 또는 DC+IgM129 IC (□)로 처리된 다음, LMP (a) 또는 B16 (b)로 후속 시험감염된 LMP (a)- 또는 B16 (b)-절제된 마우스로부터의 5x106개의 비장 CD4+ T 세포 (좌측 그래프) 또는 CD8+ T 세포 (우측 그래프)의 적응 전이 후 종양-없는 마우스의 비율 (%) (n=6). f . 좌측: 처리되지 않은 마우스 (○), 또는 alloIgG 및 시토졸 종양 단백질 (◇), 핵 종양 단백질 (Δ) 또는 막 종양 단백질 (■)과 함께 형성된 IC가 부하된 DC로 처리된 마우스에서의 종양 빈도. 우측: 처리되지 않은 마우스 (○), 또는 alloIgG 및 막 단백질 (□), O- 및 N-글리칸을 수반하지 않는 막 단백질 (Δ) 또는 열-변성된 막 단백질 (◆)로부터 형성된 IC가 부하된 DC로 처리된 마우스에서의 종양 빈도 (n=5). g . 처리되지 않거나 (○), 또는 TNFα+CD40L (Δ), TNFα+CD40L+alloIgG (■), 또는 IgG-공여자 배경의 정상 세포 상에서 흡수된 TNFα+CD40L 및 alloIgG (◆) 또는 종양 배경의 정상 세포 상에서 흡수된 TNFα+CD40L 및 alloIgG (■)이 주사된 C57Bl/6 마우스에서의 B16 종양 성장 (n=6). h . 처리되지 않은 채로 있는 마우스 (○), 통상적으로 유발된 C57Bl/6 마우스로부터의 IgG-IC가 부하된 2x106개 DC로 처리된 마우스 (◇), 또는 무균 C57Bl/6 마우스로부터의 IgG-IC가 부하된 2x106개 DC로 처리된 마우스 (■)에서 절제 후 종양 재발 비율 (n=4). i . 처리되지 않은 마우스 (○), 또는 alloIgG로 코팅된 무손상 B16 세포가 부하된 BMDC로 처리된 마우스 (□) 또는 동계 IgG와 가교 결합된 무손상 B16 세포로 처리된 마우스 (▲)에서의 B16 빈도 (n=4). j . 처리되지 않은 마우스 (○), 또는 alloIgG로 코팅된 무손상 B16 세포가 부하된 BMDC로 처리된 마우스 (□) 또는 MHC-I에 대항한 모노클로날 IgG로 코팅된 무손상 B16으로 처리된 마우스 (▲)에서의 B16 종양 빈도.
도 7a-d. a. BM 및 종양으로부터의 DC의 분류 및 배양 도식. b . 배지 단독에서 (오픈 막대), B16 용해물을 수반한 배지 (회색 막대), 또는 alloIgG-IC를 수반한 배지 (솔리드 막대)에서 밤새 배양된 DC의 상등액 중에서의 IL-12 (좌측 그래프) 및 TNFα (우측 그래프)의 평균 수준. c . 자극성 분자를 수반하거나 수반하지 않으면서 PBS (각 조건에 대한 좌측 막대) 또는 CFSE-표지된 alloIgG-IC (각 조건에 대한 우측 막대)로 밤새 활성화시킨 후 종양-관련 DC에서의 MHCII+/CD86+ 세포의 비율 (%) (좌측 패널) 또는 CFSE 수준 (우측 패널). d . CFSE-표지되고 고정된 B16 세포와 함께 밤새 배양된 B16-유래 DC의 유동 세포계수 분석 및 공초점 영상. 그 결과는 적어도 4가지 실험으로부터의 평균 값 ± SEM을 나타낸다. 별표 (*)는 p<0.05를 의미하고 2개의 별표 (**)는 p<0.01을 의미한다.
도 8a-h. a. 처리되지 않은 채로 있거나 (○), 또는 129S1 alloIgG (◇), LPS (□), TNFα+CD28 (Δ), LPS+alloIgG (■) 또는 TNFα+CD28+alloIgG (▲)가 종양 내로 주사된 C57Bl/6 마우스에서의 B16 종양 크기. b . 처리되지 않은 채로 있거나 (○), 또는 129S1 alloIgG (●), TNFα (□), CD28 (Δ), CD40L이 종양 내로 주사된 C57Bl/6 마우스에서의 B16 종양 크기. c . 처리되지 않은 채로 있거나 (○), 또는 129S1 alloIgG (●), TNFα+CD40L (□), TNFα+CD28 (Δ), 129S1 alloIgG+TNFα+CD40L (■) 또는 TNFα+CD28+129S1 IgG (▲)가 종양 내로 주사된 C57Bl/6 마우스에서의 LL/2 종양 크기. d . PBS 또는 5 ㎍의 PE-표지된 alloIgG를 종양내 주사한 지 3시간 후 B16 종양-보유 마우스에서 IgG 결합성 전체 골수성 세포의 대표적인 유동 세포계수 분석 (n=6). e . 처리한 지 4일 후 B16 종양-보유 마우스의 배출 림프절 내의 CD11c+ 세포의 총 수 (n=6). f . 처리되지 않거나 (○), 또는 alloIgG (□) 또는 alloIgG+TNFα+CD40L (◇)이 주사된 B16 종양으로부터의 2x106개 B 세포, NK 세포, 비만 세포 또는 대식세포로 예방접종된 마우스에서의 B16 성장 (n=5). g . 30일째 폐 전이의 H&E 박편 (광도 x10, n=7). h . 50 ng/mL TNFα 및 1 ㎍/mL CD40L의 존재하에 및 10명의 공여자로부터의 풀 (1 ㎍/2x105개 세포)로부터 유래된 selfIgG 또는 alloIgG로 코팅된 자가 종양 세포 (그린)와 함께 밤새 인큐베이션된 폐 암종 환자로부터의 TADC의 광 시야 현미경.
도 9a-b. a. CD115+ 단구를 마우스의 말초혈로부터 단리하고, 이를 GM-CSF와 함께 5일 내지 7일 동안 배양하여 DC를 수득하였다. 이어서, DC를 B16 종양 세포와 함께 배양하거나, 또는 동종이계 IgG로 미리 코팅된 B16 종양 세포와 함께 배양하였다. 일부 경우에, 10 ng/mL TLR3 효능제 [폴리이노신산:폴리시티딜산 (폴리 I:C)] 또는 20 ng/mL TLR-9 효능제 (CpG ODN)가 또한 존재하였다. CD40과 CD86 둘 다를 발현하는 DC의 평균 비율이 제시된다. b . CD14+ 인간 단구를 3명의 건강한 공여자의 말초혈로부터 단리하고, 이를 GM-CSF 및 IL-4와 함께 5일 내지 7일 동안 배양하여 DC를 수득하였다. 이어서, DC를 PANC-1 종양 세포와 함께 배양하거나, 또는 동종이계 IgG로 미리 코팅된 PANC-1 종양 세포와 함께 배양하였다. 일부 경우에, 10 ng/mL TLR3 효능제 [폴리이노신산:폴리시티딜산 (폴리 I:C)] 또는 1.5 μM 칼슘 채널 오프너 (이오노마이신)가 또한 존재하였다. CD40과 CD86 둘 다를 발현하는 DC의 평균 비율이 제시된다.
도 10. 모노클로날 동종이계 항-MHC I 항체는 DC 자극과 조합하여, 완전한 종양 퇴행을 유도시킨다. 4x106개 CT26 결장암 세포를 Balb/c 마우스의 우측 옆구리 위로 피하 주사하였다. 일단 종양 크기가 25 mm2에 도달하면, 이를 처리하지 않은 채로 두거나 (오픈 원), TNFa+aCD40 효능제 + 동종이계 IgG를 종양 내로 주사하거나 (오픈 사각형), 또는 TNFa+aCD40 효능제 + aH-2Kd IgG (항-MHC 부류 I 항체)를 종양 내로 주사하였다 (솔리드 사각형).
도 11a-c. 요법 후 종양 내의 면역 세포 침윤물. 종양이 25 mm2에 도달할 때까지 성장시켰던 2x105개의 B16 흑색종 세포를 마우스에게 피하 주사하였다. 이어서, 마우스에게 PBS를 종양내 주사하거나 (처리되지 않음), TNFa+aCD40 단독을 종양내 주사하거나, 또는 TNFa+aCD40 +동종이계 IgG (129S1 마우스로부터 유래됨)의 조합물, 또는 TNFa+aCD40 +막횡단 당단백질-NMB (TG-NMB, GPNMB)에 대한 항체의 조합물을 종양내 주사하였다. 일부 경우에, 기능성 Fcg 수용체 시그널링이 결여된 마우스에게 TNFa+aCD40 +동종이계 IgG를 주사하였다. 6일 후, 종양을 절개하고, 종양 세포를 포함한 전체 세포성 조성물을 유동 세포계수법에 의해 시험하였다 (n=8). a. Y 축은 총 종양 세포 중의 % CD45 세포이다. b . Y 축은 CD45+ 세포 중의 % INFg+ CD44+ 세포 (CD8 T 세포 및 CD4 T 세포에 대해 정량화됨)이다. c. Y 축은 gp100 사량체를 발현하는 CD8+ 세포의 % 및 Trp2 사량체를 발현하는 CD8+ 세포의 %이다.
도 12. 나이브 마우스에서 종양 발생에 대한, 처리된 마우스로부터의 T 세포의 적응 전이의 효과. 비장 T 세포를, PBS로 처리하거나 (처리되지 않음), TNFa+aCD40으로 처리하거나, 또는 TNFa+aCD40을 동종이계 IgG (alloIgG)와 조합하여 처리하거나 또는 막횡단 당단백질-NMB (TG-NMB; GPNMB)에 대한 항체와 조합하여 처리한 지 6일 후에, B16-보유 마우스로부터 정제하였다. 5x106개의 CD4+ 세포 (상단) 또는 CD8+ 세포 (하단)를 나이브 마우스 내로 정맥내 주사한 다음, 1시간 후에 2.5x105개의 B16 세포를 피하 주사하였다.
도 13. 처리한 지 6일 후 B16 종양으로부터의 대표적인 FACS 플롯. 숫자는 양성 세포의 %를 나타낸다.
도 14. 처리한 지 6일 후 B16 종양으로부터의 대표적인 FACS 플롯.
도 15a-b. a. B6 세포를 고정시키고, 이를 상이한 동종이계 IgG 하위부류와 함께 1시간 동안 인큐베이션하여 면역 복합체 (IC)를 형성하였다. IC를 야생형 (WT) 및 FCγR 녹아웃 (KO) 마우스로부터의 BMDC 배양물에 부가하였고, MHCII 및 CD86의 DC 발현을 시험하였다. b . C57Bl/6 마우스에게 B16 흑색종 종양 세포를 피하 주사하였다. 상기 종양을 16일째에 절제하였고, 이를 사용하여 상이한 alloIgG 하위부류 항체와 함께 alloIgG-IC를 형성하였다. 상기 IC를 동계 BMDC와 함께 밤새 배양한 다음, 종양을 꺼냈던 상응하는 마우스 내로 주사하였다.
I. 도입
본원에는 암을 치료하기 위한 방법, 조성물 및 키트가 기재되어 있다. 이러한 방법, 조성물 및 키트 중 일부는 암세포 브리징 작용제(bridging agent)와 항원 제시 세포 (APC) 자극의 조합이 놀랍게도, 암을 치료하는 데 유효하다는 사실이 본 발명자들에 의해 밝혀진 것에 근거한다. 일부 실시양태에서, APC는 수지상 세포이다.
상기 암세포 브리징 작용제는 암세포 상의 항원과 항원 제시 세포 상의 하나 이상의 수용체 간을 브리징하는 작용제이다. 일반적으로, 상기 브리징 작용제는 항체이다. 일부 경우에, 브리징 작용제는 암세포의 표면 상의 하나 이상의 항원을 인식하는 항체이다. 전형적으로, 이러한 항체는 암세포와 결합할 수 있거나 또는 종양 덩어리와 회합될 수 있고, APC 상의 Fc 수용체에 의해 인식될 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 항체는 동종이계 항체 (동종항체)이다. 한 실시양태에서, 상기 항체는 IgG 항체, 예를 들어 동종이계 IgG 항체이다.
APC가 종양과 관련하여 종종 억제되긴 하지만, APC 자극제를 사용하는 것이 종양-유도된 억제를 극복할 수 있다. 부가적으로, 또는 그 대안으로, APC 자극제는 그렇지 않았다면 일어날 수 있는 것보다 더 큰 정도로 APC를 활성화시킬 수 있다. 따라서, 이와 같이 활성화된 APC는 암 항원과 결합된 브리징 작용제를 인식할 수 있고, 암세포 또는 그의 일부를 내재화할 수 있다. 이어서, APC는 암세포로부터 수많은 항원을 생성시키고, 이를 CD4 및 CD8 T-세포에 제시할 수 있으므로, 상기 암세포에 의해 발현된 수많은 항원에 대항하여 T-세포를 활성화시킬 수 있다. 놀랍게도, 이와 같이 다중 종양 항원 (이들 항원은 처리 이전에 미리 결정되지 않아야 한다)에 대항한 T-세포의 강력한 활성화로 인해, 종양이 면역계에 의한 인식 또는 파괴로부터 도피할 수 있는 가능성은 현저하게 줄어든다.
항-종양 항체는 종양 성장 또는 진행을 증진시킬 수 있거나 또는 종양에 대한 T-세포 면역관용을 유도시킬 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Cancer Cell 2005 v7 p411]; [Cancer Cell 2010 v17 p121]; [J Exp Med. 2008 Jul 7;205(7):1687-700]); 및 그 안에 인용된 참고문헌 참조). 항-종양 IgG 항체를 정맥내 적용하는 것은 일반적으로 유효한 암 치료가 아니다 (예를 들어, 문헌 [Ann. NY Acad Sci 2007 v1110 p305-314] 참조). 유사하게, 항원 제시 세포를 자극하는 것이 종양 성장 또는 진행을 증진시키는 것으로 밝혀졌다 (예를 들어, 문헌 [Oncotarget. 2014 Dec 15;5(23):12027-42]; [Cancer Biol Ther. 2014 Jan;15(1):99-107] 참조). 따라서, 브리징 작용제 (예를 들어, 항체 또는 동종항체, 예컨대 동종이계 IgG)와 APC 자극 (예를 들어, 수지상 세포 자극)의 조합에 의해 유도된 강력한 항-종양 반응은 놀랍고도 예상치 못한 결과이다. 더욱이, 다른 성공적인 항체-기반 암 치료와는 달리, 상기 효과는 암세포 시그널링에 의한 항체 매개된 간섭 또는 항체 의존성 세포성 세포독성으로부터 주로 비롯되지 않거나 또는 이를 필요로 하지 않는다.
상기 방법의 측면은 특정 개체 (예를 들어, 암을 앓는 개체)에게 (i) 이러한 개체의 암세포의 항원과 특이적으로 결합하는 동종이계 IgG 항체를 갖는 항체 조성물; 및 (ii) 상기 개체의 APC를 활성화시키는 처치 (여기서, APC는 수지상 세포, 대식세포, 또는 B-세포이다)를 투여하는 단계를 포함한다. 다른 실시양태는 (i) 특정 개체의 암세포의 항원과 특이적으로 결합하는 동종이계 IgG 항체를 갖는 항체 조성물; 및 (ii) 상기 개체의 APC를 활성화시키는 처치 (여기서, APC는 수지상 세포, 대식세포, 또는 B-세포이다)의 존재하에 종양 항원에 노출된 APC의 집단을 상기 개체에게 투여하는 것을 포함한다. 일부 경우에, 상기 항체 조성물은 복수 개의 결합 특이성을 지닌 폴리클로날 동종이계 IgG 항체를 포함한다.
일부 경우에, 상기 개체의 APC, 예를 들어, 수지상 세포 (DC)를 활성화시키는 처치는 상기 개체에게 APC 자극제 (예를 들어, DC 자극제)를 갖는 자극성 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 일부 경우에, APC 자극제 (예를 들어, DC 자극제)가 동종이계 IgG 항체와 접합된다. 예를 들어, APC 자극제가 동종이계 항체와 접합될 수 있으므로, 이는 불안정한 것으로 예상된다. 일부 경우에, 이러한 접합은 APC에 의한 내재화 후에 불안정하다. 예를 들어, APC 자극제는 APC에 의해 내재화된 동종이계 항체와 접합될 수 있고, APC 자극제가 상기 항체로부터 방출됨으로써, APC를 자극할 수 있다. 일부 경우에, 상기 접합은 종양 세포에서 또는 그 근처에서 직면할 것으로 예상되는 조건하에 또는 APC의 표면에 결합된 경우에 불안정하다. 예를 들어, 상기 자극제는 하나 이상의 세포 표면 프로테아제 또는 에스테라제에 의해 절단될 수 있는 에스테르 또는 펩티드 연쇄를 통하여 접합될 수 있다. 일부 경우에, 단독으로 존재하거나 또는 동종이계 항체와 접합된 상기 자극제는 APC의 표면 상의 수용체와 결합한다. 일부 경우에, 상기 자극성 조성물은 CD40 리간드 (CD40L) 및 염증 유발성 시토카인을 포함한다.
특정 개체에게서 면역 반응을 유도시키는 방법이 제공된다. 이러한 방법의 측면은 (a) 시험관 내에서 상기 개체로부터의 APC, 예를 들어, DC를, 이러한 APC, 예를 들어, DC에 의한 특정 표적 항원의 흡수에 유효한 용량 및 기간 동안, 상기 표적 항원 및 상기 표적 항원과 특이적으로 결합하는 동종이계 IgG 항체를 갖는 항체 조성물과 접촉시킴으로써, 부하된 APC, 예를 들어, DC를 생성시키는 단계; 및 (b) 상기 개체의 T 세포를 상기 부하된 APC, 예를 들어, DC와 접촉시키는 단계 (여기서, 부하된 APC, 예를 들어, DC는 항원을 T 세포에 제시하여 접촉된 T 세포를 생성시키고, 이와 같이 접촉된 T 세포는 상기 제시된 항원에 대해 특이적인 면역 반응을 발생시킨다)를 포함한다. 일부 경우에, 상기 APC, 예를 들어, DC는 암을 앓는 개체로부터 유래되고, 표적 항원은 암과 연관된다. 일부 경우에, 상기 APC, 예를 들어, DC는 상기 개체로부터의 암세포와 접촉된다. 일부 경우에, 상기 APC, 예를 들어, DC는 상기 개체의 암세포로부터의 용해물과 접촉된다. 일부 경우에, 상기 APC, 예를 들어, DC는 상기 개체의 암세포로부터의 2개 이상의 혈장 막 단백질 (용해물의 일부일 수 있다)과 접촉된다. 일부 경우에, 상기 APC, 예를 들어, DC는 APC 자극제 (예를 들어, 수지상 세포 자극제)를 포함하는 자극성 조성물과 접촉된다. 일부 경우에, 상기 자극성 조성물은 CD40L 및 염증 유발성 시토카인을 포함한다. 일부 경우에, 수지상 세포 자극제는 동종이계 IgG 항체와 접합된다. 일부 경우에, 상기 표적 항원은 APC, 예를 들어, DC와 접촉하기에 앞서, 상기 항체 조성물과 접촉된다. 일부 경우에, APC, 예를 들어, DC는 상기 표적 항원 및 항체 조성물과 동시에 접촉된다. 일부 경우에, T 세포를 접촉시키는 단계는 생체 내에서 수행되고, 상기 방법은 상기 부하된 APC, 예를 들어, DC를 상기 개체 내로 도입하는 단계를 포함한다. 일부 경우에, T 세포를 접촉시키는 단계는 시험관 내에서 수행되고, 상기 방법은 이와 같이 접촉된 T 세포를 상기 개체 내로 도입하는 단계를 포함한다.
본 개시내용의 방법을 실시하기 위한 조성물 및 키트가 또한 제공된다. 일부 경우에, 특정 대상 조성물은 복수 개의 결합 특이성을 지닌 폴리클로날 동종이계 IgG 항체; 및 적어도 하나의 APC 자극제 (예를 들어, 수지상 세포 자극제)를 포함한다. 일부 경우에, 특정 대상 조성물은 복수 개의 결합 특이성을 지닌 폴리클로날 동종이계 IgG 항체; CD40L; 및 염증 유발성 시토카인 [예를 들어, TNFα, IL-1α, IL-1β, IL-19, 인터페론 감마 (IFNγ) 등]을 포함한다. 일부 경우에, APC 자극제 (예를 들어, 수지상 세포 자극제)는 상기 조성물의 동종이계 IgG 항체 중 적어도 하나와 접합된다. 일부 경우에, 특정 대상 조성물은 정맥내 면역글로불린 (IVIG) 또는 IVIG로부터 정제되거나 또는 풍부해진 항체를 포함한다.
본 발명의 방법 및 조성물을 기재하기 전에, 본 발명이 본원에 기재된 특별한 방법 또는 조성물로 제한되지 않고, 물론 그 자체로 다양할 수 있는 것으로 이해되어야 한다. 본원에 사용된 전문 용어는 단지 특별한 실시양태를 설명할 목적이고, 이로써 제한되지 않아야 하는데, 이는 본 발명의 범위가 첨부된 청구범위에 의해서만 제한될 것이란 사실을 또한 이해해야 한다.
특정 범위의 값이 제공되는 경우, 문맥상 달리 명백히 지시되지 않는 한 하한치의 단위의 1/10로, 그 범위의 상한치와 하한치 사이의 각 개재 값이 또한 구체적으로 개시되는 것으로 이해된다. 언급된 임의의 값 또는 언급된 범위 내의 개재 값과, 언급된 임의의 다른 값 또는 그러한 언급된 범위 내의 개재 값 사이의 보다 작은 각 범위가 본 발명 내에 포괄된다. 더 작은 이들 범위의 상한치와 하한치가 독립적으로 그 범위 내에 포함되거나 배제될 수 있고, 이들 상한치와 하한치 중 어느 하나 또는 둘 다가 더 작은 범위 내에 포함되거나 둘 중 어느 것도 포함되지 않는 경우의 각 범위가 또한 본 발명 내에 포괄되는데, 언급된 범위 내의 구체적으로 배제된 임의의 제한치를 조건으로 한다. 언급된 범위가 상기 제한치 중 하나 또는 둘 다를 포함하는 경우, 포함된 이들 제한치 중 어느 하나 또는 둘 다를 배제하는 범위가 또한, 본 발명에 포함된다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어는 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 기술자에 의해 통상적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 본원에 기재된 것과 유사하거나 등가의 임의의 방법 및 물질이 본 발명의 실시 또는 시험에 사용될 수 있긴 하지만, 일부 잠재적 및 바람직한 방법 및 물질이 본원에 기재되어 있다. 본원에 언급된 모든 공보는 이러한 공보가 인용하는 것과 연계해서 상기 방법 및/또는 물질을 개시하고 기재하기 위해 본원에 참조로 포함된다. 본 개시내용은 모순이 존재하는 정도로 혼입된 공보의 임의의 개시내용을 대신하는 것으로 이해된다.
본 개시내용의 판독시 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 명백해지는 바와 같이, 본원에 기재되고 예시된 개별 실시양태 각각은 본 발명의 범위 또는 요지를 벗어나지 않고서도 다른 몇 가지 실시양태 중 임의의 특색들으로부터 용이하게 분리될 수 있거나 또는 이러한 특색들과 조합될 수 있는 별개의 구성분과 특색을 갖는다. 나열된 임의의 방법은 나열된 사건의 순서로 수행될 수 있거나 또는 논리적으로 가능한 임의의 다른 순서로 수행될 수 있다.
본원 및 첨부된 청구범위에 사용된 바와 같이, 단수 형태는 문맥상 달리 명백히 지시하지 않는 한은 복수의 언급 대상을 포함한다는 것에 주목해야만 한다. 따라서, 예를 들어 "세포"에 대한 언급은 복수 개의 상기 세포를 포함하고, "펩티드"에 대한 언급은 하나 이상의 펩티드 및 그의 등가물, 예를 들어 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 폴리펩티드 등에 대한 언급을 포함한다.
본원에 논의된 공보는 본 출원의 출원일 이전에 그들의 개시내용에 대해서만 제공된다. 본원의 어떠한 것도, 본 발명이 선행 발명에 의해서 상기 공보에 선행할 자격이 없다는 것을 인정하는 것으로 해석되지 않아야 한다. 추가로, 제공된 공개일은, 독립적으로 확증할 필요가 있을 수 있는 실제적 공개일과 상이할 수 있다.
II. 정의
용어 "특이적 결합", "특이적으로 결합하는" 등은 용액 또는 반응 혼합물 중의 다른 분자 또는 모이어티(moiety)와 비교해서 특정 분자에 대한 비-공유적 또는 공유적 우선 결합을 지칭한다 (예를 들어, 항체는 이용 가능한 다른 폴리펩티드와 비교해서 특별한 폴리펩티드 또는 에피토프와 특이적으로 결합한다). 예를 들어, 암세포의 항원 (표적 항원)과 특이적으로 결합하는 특정 대상 동종이계 IgG 항체는 이용 가능한 다른 항원과 비교해서 상기 특별한 항원과 우선적으로 결합한다. 그러나, 그러한 표적 항원이 다른 세포와 비교해서 암세포에 대해 특이적일 필요가 없거나 또는 심지어 암세포에 풍부할 필요가 없다 (예를 들어, 표적 항원은 다른 세포에 의해 발현될 수 있다). 따라서, "암세포의 항원과 특이적으로 결합하는 동종이계 항체"란 표현에서, 용어 "특이적으로"는 이러한 항체의 특이성을 지칭하고, 특별한 세포 유형 내의 항원의 독특함을 지칭하는 것은 아니다. 일부 실시양태에서, 하나의 분자가, 이와 특이적으로 결합하는 또 다른 분자에 대한 친화도는 10-5 M 이하 (예를 들어, 10-6 M 이하, 10-7 M 이하, 10-8 M 이하, 10-9 M 이하, 10-10 M 이하, 10-11 M 이하, 10-12 M 이하, 10-13 M 이하, 10-14 M 이하, 10-15 M 이하, 또는 10-16 M 이하)의 KD (해리 상수)를 특징으로 한다. "친화도"는 결합 강도를 지칭한다. 예를 들어, 증가된 결합 친화도는 보다 낮은 KD로써 표시될 수 있다. 일부 경우에, 증가된 결합 친화도는 보다 낮은 KD와 상관이 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "특이적 결합 구성원"은 특이적 결합 쌍의 구성원을 지칭한다 (즉, 2개의 분자, 통상적으로 2개의 상이한 분자인데, 이러한 분자 중 하나, 예를 들어 제1의 특이적 결합 구성원이 비-공유적 수단을 통하여, 다른 분자, 예를 들어 제2의 특이적 결합 구성원과 특이적으로 결합한다).
본원에 사용된 바와 같은 용어 "특이적 결합제"는 특정 바이오분자 (예를 들어, 마커, 예컨대 핵산 마커 분자, 단백질 마커 분자 등)와 특이적으로 결합하는 임의의 작용제를 지칭한다. 일부 경우에, 마커 분자 (예를 들어, 수지상 세포 마커 분자)에 대한 "특이적 결합제"가 사용된다. 특이적 결합제는 임의의 유형의 분자일 수 있다. 일부 경우에, 특이적 결합제는 항체 또는 그의 단편이다. 일부 경우에, 특이적 결합제는 핵산 프로브 (예를 들어, RNA 프로브; DNA 프로브; RNA/DNA 프로브; 변형된 핵산 프로브, 예를 들어, 고정 핵산 (LNA) 프로브, 모르폴리노 프로브 등)이다.
본원에 사용된 바와 같은, "마커 분자"는 확정적일 필요가 없다 (즉, 마커는 세포를 특별한 유형의 것으로 확정적으로 표시할 필요가 없다). 예를 들어, 특정 세포에 의한 마커 분자의 발현은 이러한 세포가 특별한 세포 유형의 것이란 사실을 시사 (즉, 암시)할 수 있다. 예를 들어, 3가지 세포 유형 (유형 A, 유형 B, 및 유형 C)이 특별한 마커 분자 (예를 들어, 특별한 mRNA, 특별한 단백질 등)를 발현하는 경우, 특정 세포가 유형 A 세포라는 사실을 확정적으로 결정하기 위해서는, 이러한 세포에 의한 상기 마커 분자의 발현 그것만으로는 사용될 수 없다. 그러나, 이러한 마커의 발현은 상기 세포가 유형 A 세포라는 사실을 암시할 수 있다. 일부 경우에, 다른 증거와 조합하여, 상기 마커의 발현은 상기 세포가 유형 A 세포라는 사실을 확정적으로 보여줄 수 있다. 또 다른 예시 예로서, 특별한 세포 유형이 2개 이상의 특별한 마커 분자 (예를 들어, mRNA, 단백질, 그의 조합물 등)를 발현하는 것으로 공지되는 경우, 그러한 2개 이상의 특별한 마커 분자 중 하나의 세포에 의한 발현은 상기 세포가 해당 특별한 유형의 것이란 사실을 암시할 수 있지만, 확정적이진 않다. 이러한 경우, 상기 마커는 여전히 마커 분자로서 간주된다.
"항체"는 항원과 특이적으로 결합하고 이를 인식하는 면역글로불린 유전자 또는 그의 단편으로부터의 항원 결합성 영역 [상보성 결정 영역 (CDR) 포함]을 포함하는 폴리펩티드를 지칭한다. 이와 같이 인식된 면역글로불린 유전자는 카파, 람다, 알파, 감마, 델타, 엡실론, 및 뮤 불변 영역 유전자뿐만 아니라 무수한 면역글로불린 가변 영역 유전자를 포함한다. 경쇄는 카파 또는 람다로서 분류된다. 중쇄는 감마, 뮤, 알파, 델타 또는 엡실론으로서 분류되는데, 이는 결국, 면역글로불린 부류인 IgG, IgM, IgA, IgD 및 IgE 각각을 규정한다. IgG 항체는 4개의 펩티드 쇄로 구성된 약 150 kDa의 큰 분자이다. IgG 항체는 약 50 kDa의 2개의 동일한 부류 γ 중쇄와 약 25 kDa의 2개의 동일한 경쇄를 함유하므로, 사량체성 4차 구조를 함유한다. 2개의 중쇄는 디술피드 결합에 의해 서로 연결되고 각 경쇄와 연결된다. 이로써 생성되는 사량체는 2개의 동일한 절반을 가지는데, 이들은 함께, Y자형 외형을 형성한다. 이러한 2차점(fork)의 각 말단은 동일한 항원 결합 부위를 함유한다. 인간에게는 4가지 IgG 하위부류 (IgG1, 2, 3, 및 4)가 있는데, 혈청 내에서의 그의 존재량의 순서로 명명된다 (IgG1이 가장 풍부한다). 전형적으로, 항체의 항원-결합성 영역은 결합의 특이성과 친화도에 있어서 가장 중요할 것이다.
예시되는 면역글로불린 (항체) 구조 단위는 사량체를 포함한다. 각 사량체는 폴리펩티드 쇄의 2개의 동일한 쌍으로 구성되는데, 각 쌍은 1개의 "경쇄" (약 25 kD)와 1개의 "중쇄" (약 50 내지 70 kD)를 갖는다. 각 쇄의 N-말단은 주로 항원 인식에 대해 책임이 있는 약 100개 내지 110개 이상의 아미노산의 가변 영역을 규정한다. 용어 가변 경쇄 (VL) 및 가변 중쇄 (VH)는 이들 경쇄 및 중쇄를 각각 지칭한다.
항체는, 예를 들어 무손상 면역글로불린으로서 존재하거나 또는 각종 펩티다제를 이용한 소화에 의해 생성된 수많은 널리 명확히 규명된 단편으로서 존재한다. 따라서, 예를 들어 펩신은 힌지(hinge) 영역 내의 디술피드 연쇄 아래의 항체를 소화하여 F(ab)'2 (그 자체가 디술피드 결합에 의해 VH-CH1과 연결된 경쇄인 Fab의 이량체이다)를 생성한다. 이러한 F(ab)'2는 순한 조건하에 환원되어 힌지 영역 내의 디술피드 연쇄를 절단함으로써, F(ab)'2 이량체가 Fab' 단량체로 전환될 수 있다. 이러한 Fab' 단량체는 본질적으로, 힌지 영역의 부분을 갖는 Fab이다 (문헌 [Fundamental Immunology (Paul ed., 3d ed. 1993)] 참조). 각종 항체 단편이 무손상 항체의 소화에 관해서 정의되긴 하지만, 통상의 기술자는 이러한 단편이 화학적으로 또는 재조합 DNA 방법론을 사용함으로써, 새롭게 합성될 수 있다는 사실을 인지할 것이다. 따라서, 본원에 사용된 바와 같은 용어 항체는 또한, 전체 항체의 변형에 의해 생성된 항체 단편, 또는 재조합 DNA 방법론을 이용하여 새로이 합성된 항체 단편 (예를 들어, 단일 쇄 Fv) 또는 파지 디스플레이 라이브러리를 이용하여 확인된 항체 단편을 포함한다 (예를 들어, 문헌 [McCafferty et al., Nature 348:552-554 (1990)] 참조).
용어 "항체"는 가장 광범위한 의미로 사용되고, 구체적으로 모노클로날 항체 (완전한 길이의 모노클로날 항체 포함), 폴리클로날 항체, 다중특이적 항체 (예를 들어, 이중특이적 항체), 및 항체 단편 (이는 목적하는 생물학적 활성을 나타내야 한다)을 포괄한다. 본원에 사용된 바와 같은 "항체 단편", 및 그의 모든 문법적 변이체는 무손상 항체의 항원 결합 부위 또는 가변 영역을 포함하는 무손상 항체의 특정 부분으로서 정의되는데, 여기서 이러한 부분은 무손상 항체의 Fc 영역의 불변 중쇄 도메인 (즉, 항체 이소형에 따라서 CH2, CH3, 및 CH4)이 없다. 항체 단편의 예는 Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, 및 Fv 단편; 디아보디; 연속되는 아미노산 잔기의 하나의 연속된 서열로 이루어진 1차 구조를 갖는 폴리펩티드인 임의의 항체 단편 (본원에서 "단일-쇄 항체 단편" 또는 "단일 쇄 폴리펩티드"로서 지칭됨), 제한없이 예를 들어 (1) 단일-쇄 Fv (scFv) 분자; (2) 중쇄 모이어티가 회합되지 않은, 1개의 경쇄 가변 도메인만을 함유하는 단일 쇄 폴리펩티드, 또는 이러한 경쇄 가변 도메인의 3개의 CDR을 함유하는 그의 단편; (3) 경쇄 모이어티가 회합되지 않은, 1개의 중쇄 가변 영역만을 함유하는 단일 쇄 폴리펩티드, 또는 이러한 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR을 함유하는 그의 단편; (4) 비-인간 종으로부터의 단일 Ig 도메인 또는 기타 특이적 단일-도메인 결합성 모듈을 포함하는 나노바디; 및 (5) 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 또는 다가 구조물을 포함한다. 하나 이상의 중쇄를 포함하는 항체 단편에서, 이러한 중쇄(들)는 무손상 항체의 비-Fc 영역에서 발견된 임의의 불변 도메인 서열 (예를 들어, IgG 이소형 내의 CH1)을 함유할 수 있고/있거나, 무손상 항체에서 발견된 임의의 힌지 영역 서열을 함유할 수 있고/있거나, 상기 중쇄(들)의 불변 도메인 서열 또는 힌지 영역 서열과 융합되거나 또는 이에 위치된 류신 지퍼 서열을 함유할 수 있다.
본 개시내용에 사용된 바와 같은 용어 "에피토프"는 항체의 파라토프(paratope)가 결합하는 항원 상의 임의의 항원 결정기를 의미한다. 에피토프성 결정기는 통상적으로, 분자, 예컨대 아미노산 또는 당 측쇄의 화학적 활성 표면 집단으로 이루어지고, 통상적으로 특이적인 3차원적 구조 특징뿐만 아니라 특이적 전하 특징을 갖는다.
용어 "폴리펩티드", "펩티드" 및 "단백질"은 아미노산 잔기의 중합체를 지칭하기 위해 본원에서 상호 교환적으로 사용된다. 상기 용어는 또한, 하나 이상의 아미노산 잔기가 상응하는 자연 발생적 아미노산의 인공 화학적 모방체인 아미노산 중합체에 적용될 뿐만 아니라 자연 발생적 아미노산 중합체 및 비-자연 발생적 아미노산 중합체에도 적용된다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "APC" 또는 "항원 제시 세포"는 그의 세포 막 표면 상에 주요 조직적합성 복합체 부류 II (MHC 부류 II) 단백질을 발현하고, MHC 부류 II와 복합체를 형성하여 항원을 T-세포에 제시함으로써, 이와 같이 제시된 항원에 대한 T-세포를 활성화시킬 수 있는 세포를 지칭한다. 일부 실시양태에서, APC는 수지상 세포이다. 일부 실시양태에서, APC는 대식세포이다. 일부 실시양태에서, APC는 B-세포이다. 일부 실시양태에서, APC는 수지상 세포, 대식세포, 또는 B-세포이다. 일부 실시양태에서, APC는 수지상 세포 또는 대식세포이다. 일부 실시양태에서, APC는 수지상 세포 또는 B-세포이다. 일부 경우에, APC는 대식세포가 아니다. 일부 경우에, APC는 B-세포가 아니다.
세포 배양과 관련하여 용어 "계대접종하는" 또는 "계대접종" (즉, 분할하는 또는 분할)은 관련 기술분야에 공지되어 있고, 소수의 세포를 새로운 용기 내로 전이시키는 것을 지칭한다. 고 세포 밀도와 연관된 노화를 회피하기 때문에 세포가 규칙적으로 분할된다면 세포를 배양할 수 있다. 부착성 세포의 경우에는, 세포를 계대접종 프로토콜의 일부로서 성장 표면으로부터 분리시킨다. 분리는 효소 트립신 및/또는 기타 시판용 시약 [예를 들어, TrypLE, EDTA (에틸렌디아민테트라아세트산), 표면으로부터 세포를 물리적으로 긁어내기 위한 폴리스멘 (예를 들어, 고무 폴리스멘) 등]을 이용하여 통상적으로 수행된다. 이어서, 소수의 분리된 세포 (예를 들어, 겨우 1개의 세포)를 사용하여, 예를 들어 부가의 배지로 희석시킨 후에 새로운 세포 집단을 시딩할 수 있다. 따라서, 특정 세포 집단을 계대접종하는 것은 이러한 세포 집단의 세포의 적어도 일부를 해리시키고, 이와 같이 해리된 세포를 희석시키며, 상기 해리되고 희석된 세포를 플레이팅하는 (즉, 새로운 세포 집단을 시딩하는) 것을 의미한다.
용어 "배지들" 및 "배지"는 본원에서 상호 교환적으로 사용된다. 세포 배양 배지는 시험관내 배양 동안 세포를 담가두는 액상 혼합물이다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "집단", 예를 들어, "세포 집단" 또는 "세포의 집단"은 다른 세포 및/또는 세포 그룹으로부터 분리되는 (즉, 단리되는) 2개 이상의 세포의 그룹 (즉, 집단)을 의미한다. 예를 들어, 6-웰 배양 디쉬(dish)는 6개의 세포 집단을 함유할 수 있는데, 각 집단은 개개의 웰에 있다. 세포 집단의 세포들은 서로의 클로날 유도체일 수 있지만, 반드시 그렇지는 않다. 세포 집단은 1개의 개별 세포로부터 유래될 수 있다. 예를 들어, 개개의 세포가 각각 6-웰 배양 디쉬의 단일 웰에 놓여지고 각 세포가 한번에 분열되는 경우에는, 상기 디쉬가 6개의 세포 집단을 함유할 것이다. 세포 집단은 목적하는 어떠한 크기일 수도 있고, 1개 세포보다 많은 어떠한 수의 세포도 함유할 수 있다. 예를 들어, 세포 집단은 2개 이상, 10개 이상, 100개 이상, 1,000개 이상, 5,000개 이상, 104개 이상, 105개 이상, 106개 이상, 107개 이상, 108개 이상, 109개 이상, 1010개 이상, 1011개 이상, 1012개 이상, 1013개 이상, 1014개 이상, 1015개 이상, 1016개 이상, 1017개 이상, 1018개 이상, 1019개 이상, 또는 1020개 이상 세포일 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "복수 개"는 1개 초과를 의미한다. 예를 들어, 복수 개는 2개 이상, 5개 이상, 10개 이상, 25개 이상, 50개 이상, 100개 이상, 500개 이상, 1,000개 이상, 2,000개 이상, 5,000개 이상, 104개 이상, 105개 이상, 106개 이상, 107개 이상 등일 수 있다. 예를 들어, 복수 개의 결합 특이성을 지닌 폴리클로날 동종이계 IgG 항체를 갖는 항체 조성물은 2개 이상 (예를 들어, 5개 이상, 10개 이상, 25개 이상, 50개 이상, 100개 이상, 500개 이상, 1,000개 이상, 2,000개 이상, 5,000개 이상, 104개 이상, 105개 이상, 106개 이상, 107개 이상)의 항체가 상이한 결합 특이성을 갖는 (예를 들어, 동일한 항원의 상이한 에피토프와 특이적으로 결합하거나, 상이한 항원과 특이적으로 결합하는) 동종이계 IgG 항체의 조성물이다.
III. 방법 및 조성물
본 개시내용의 측면은 특정 개체에게서 면역 반응을 유도시키기 위한 방법 및 조성물을 포함한다. 이러한 방법을 사용하여 특정 개체를 치료할 수 있기 때문에, 상기 방법은 또한, 특정 개체를 치료하는 방법으로서 지칭될 수 있다.
일부 실시양태에서, 암을 앓는 개체를 치료하는 방법은 이러한 개체에게 (i) 상기 개체의 암세포의 항원과 특이적으로 결합하는 동종이계 IgG 항체를 포함하는 항체 조성물 (상기 상세히 기재된 바와 같음); 및 (ii) 상기 개체의 항원 제시 세포 (APC), 예를 들어, 수지상 세포 (DC)를 활성화시키는 처치를 투여하는 단계를 포함한다. 이러한 경우에, 상기 개체의 내인성 APC, 예를 들어, 수지상 세포에 의한 표적 항원 (예를 들어, 암세포, 암세포 부스러기, 분비된 암세포 항원 등)의 흡수가 유도된다.
일부 실시양태에서, 특정 개체 (예를 들어, 암을 앓는 개체)를 치료하는 방법은 이러한 개체에게 (i) 복수 개의 결합 특이성을 지닌 폴리클로날 동종이계 IgG 항체를 포함하는 항체 조성물; 및 (ii) 상기 개체의 항원 제시 세포 (APC), 예를 들어, 수지상 세포 (DC)를 활성화시키는 처치를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 특정 개체 (예를 들어, 암을 앓는 개체)를 치료하는 방법은 이러한 개체에게 (i) 상기 개체의 암세포의 항원과 특이적으로 결합하는 동종이계 IgG 항체를 포함하는 항체 조성물; (ii) CD40 리간드 (CD40L); 및 (iii) 염증 유발성 시토카인을 투여하는 단계를 포함한다.
일부 실시양태에서, 특정 개체에게서 면역 반응을 유도시키는 방법은 (a) 시험관 내에서 상기 개체로부터의 APC, 예를 들어, DC를, 이러한 APC, 예를 들어, DC에 의한 특정 표적 항원의 흡수에 유효한 용량 및 기간 동안, (i) 상기 표적 항원; 및 (ii) 상기 표적 항원과 특이적으로 결합하는 동종이계 IgG 항체를 포함하는 항체 조성물과 접촉시킴으로써, 부하된 APC, 예를 들어, DC를 생성시키는 단계; 및 (b) 상기 개체의 T 세포를 상기 부하된 APC, 예를 들어, DC와 접촉시키는 단계 (여기서, 부하된 APC, 예를 들어, DC는 항원을 T 세포에 제시하여 접촉된 T 세포를 생성시키고, 이와 같이 접촉된 T 세포는 상기 제시된 항원에 대해 특이적인 면역 반응을 발생시킨다)를 포함한다. 일부 경우에, 상기 표적 항원 (예를 들어, 표적 세포)을 APC, 예를 들어, DC와 접촉시키기에 앞서, 상기 항체 조성물과 접촉시켜 면역 복합체를 생성시킨다. 따라서, 일부 경우에, 상기 방법은 APC, 예를 들어, DC를 면역 복합체와 접촉시키는 단계를 포함한다. 일부 경우에, 상기 개체의 T 세포를 접촉시키는 단계는 생체 내에서이다. 일부 경우에, 상기 개체의 T 세포를 접촉시키는 단계는 시험관 내에서이다.
일부 실시양태에서, 특정 개체에게서 면역 반응을 유도시키는 방법은 (a) 시험관 내에서 상기 개체로부터의 APC, 예를 들어, DC를, 이러한 APC, 예를 들어, DC에 의한 특정 표적 항원의 흡수에 유효한 용량, 조건하에 및 기간 동안, (i) 상기 표적 항원; 및 (ii) 상기 표적 항원과 특이적으로 결합하는 동종이계 IgG 항체를 포함하는 항체 조성물과 접촉시킴으로써, 부하된 APC, 예를 들어, DC를 생성시키는 단계; 및 (b) 상기 개체의 T 세포를 상기 부하된 APC, 예를 들어, DC와 접촉시키는 단계 (여기서, 부하된 APC, 예를 들어, DC는 항원을 T 세포에 제시하여 접촉된 T 세포를 생성시키고, 이와 같이 접촉된 T 세포는 상기 제시된 항원에 대해 특이적인 면역 반응을 발생시킨다)를 포함한다. 일부 경우에, 상기 표적 항원 (예를 들어, 표적 세포)을 APC, 예를 들어, DC와 접촉시키기에 앞서, 상기 항체 조성물과 접촉시켜 면역 복합체를 생성시킨다. 따라서, 일부 경우에, 상기 방법은 APC, 예를 들어, DC를 면역 복합체와 접촉시키는 단계를 포함한다. 일부 경우에, 상기 개체의 T 세포를 접촉시키는 단계는 생체 내에서이다. 일부 경우에, 상기 개체의 T 세포를 접촉시키는 단계는 시험관 내에서이다.
용어 "치료", "치료하는", "치료하다" 등은 일반적으로, 목적하는 약리학적 및/또는 생리학적 효과를 획득하는 것을 지칭하기 위해 본원에 사용된다. 이러한 효과는 특정 질환 또는 그의 증상(들)을 완전히 또는 부분적으로 예방하는 것에 관해서는 예방적일 수 있고/있거나 특정 질환 및/또는 이러한 질환에 기인하는 부작용에 대한 부분적 또는 완전한 안정화 또는 치유에 관해서는 치료적일 수 있다. 용어 "치료"는 포유류, 특히 인간에게서 특정 질환의 임의의 치료를 포괄하고, 다음을 포함한다: (a) 상기 질환 또는 증상(들)에 걸리기 쉬울 수 있지만, 아직까지는 이러한 질환이 있는 것으로 진단된 적이 없는 대상체에게서 이러한 질환 및/또는 증상(들)이 발생하지 못하게 하거나; (b) 상기 질환 및/또는 증상(들)을 억제하거나, 즉 질환 및/또는 관련 증상의 발생을 저지하거나; 또는 (c) 질환 및 관련 증상(들)을 경감시키는데, 즉 질환 및/또는 증상(들)의 퇴행을 유발시킨다. 치료를 필요로 하는 대상체는 이미 병에 걸린 대상체 (예를 들어, 암이 있는 대상체, 예를 들어 종양이 있는 대상체)뿐만 아니라 예방이 요망되는 대상체 (예를 들어, 암에 대한 감수성이 증가된 대상체; 전암성 종양, 병변이 있는 대상체; 암이 있는 것으로 의심되는 대상체 등)를 포함할 수 있다.
용어 "수용자", "개체", "대상체", "숙주" 및 "환자"는 본원에서 상호 교환적으로 사용되고, 진단, 치료 또는 요법이 요망되는 임의의 포유류 대상체, 특히 인간을 지칭한다. 치료 목적상 "포유류"는 포유류로서 분류된 임의의 동물을 지칭하는데, 이는 인간, 가축 및 농장 동물, 및 동물원, 스포츠 또는 애완용 동물, 예컨대 개, 말, 고양이, 암소, 양, 염소, 돼지, 낙타 등을 포함한다. 일부 실시양태에서, 포유류는 인간이다.
치료적 처치는 투여에 앞서 대상체가 병에 걸린 경우이고, 예방적 처치는 투여에 앞서 대상체가 병에 걸리지 않은 경우이다. 일부 실시양태에서, 대상체가 병에 걸릴 가능성이 증가되거나 또는 병에 걸릴 가능성이 증가된 것으로 의심되면 (예를 들어, 표준과 비교해서, 예를 들어 평균 개체와 비교해서, 예를 들어 특정 대상체는 암에 걸릴 위험이 증가된다는 것을 표시하는 가족력 및/또는 암에 대한 유전적 소인을 가질 수 있다), 이러한 경우에 처치는 예방적 처치일 수 있다. 일부 경우에, 용어 "예방접종"은 예방적 처치를 설명하기 위해 사용된다. 예를 들어, 처치받는 대상체가 암이 있는 것으로 진단된 적이 없었던 일부 경우에 (예를 들어, 이러한 대상체는 병에 걸릴 가능성이 증가되거나 또는 병에 걸릴 가능성이 증가된 것으로 의심된다) (예를 들어, 특정 대상체는 암에 걸릴 위험이 증가된다는 것을 표시하는 가족력 및/또는 암에 대한 유전적 소인을 가질 수 있다), 상기 대상 방법 중 한 가지 이상을 수행함으로써 [예를 들어, (i) 복수 개의 결합 특이성을 지닌 폴리클로날 동종이계 IgG 항체를 포함하는 항체 조성물; 및 (ii) 상기 개체의 APC, 예를 들어, DC를 활성화시키는 처치 (예를 들어, 상기 개체에게 APC 자극제, 예를 들어, 수지상 세포 자극제를 갖는 APC 자극성 조성물, 예를 들어 수지상 세포 자극성 조성물을 투여한다)를 투여함으로써], 상기 대상체에게 예방접종할 수 있다 (상기 처치가 예방적 처치가 되도록 처리한다).
APC 자극제는 수지상 세포 자극제, 대식세포 자극제, 또는 B-세포 자극제를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 일부 경우에, APC 자극제는 수지상 세포 자극제이다. 일부 경우에, APC 자극제는 대식세포 자극제이다. 일부 경우에, APC 자극제는 B-세포 자극제이다. 일부 경우에, APC 자극제는 대식세포 자극제가 아니다.
일부 경우에, APC 자극성 조성물은 수지상 세포 자극제 및 B-세포 자극제를 포함한다. 일부 경우에, APC 자극성 조성물은 수지상 세포 자극제를 포함하지만, 대식세포 자극제는 포함하지 않는다. 일부 경우에, APC 자극성 조성물은 적어도 2개의 수지상 세포 자극제를 포함한다.
수지상 세포 자극성 조성물은 (i) 톨-유사 수용체 (TLR) 효능제; (ii) CD40 효능제와 염증 유발성 시토카인; (iii) 체크포인트 분자 중화 화합물; (iv) 인돌아민 2,3-디옥시게나제 (IDO) 억제제; (v) NFkB 활성화제; (vi) 칼슘 채널을 개방시키는 화합물; (vii) T 세포-관련 동시 자극성 분자; 또는 (viii) 그의 조합물을 함유하는 조성물을 포함할 수 있지만, 이에 제한되지 않는다.
B-세포 자극성 조성물은 (i) 톨-유사 수용체 (TLR) 효능제; (ii) CD40 효능제; (iii) CD40 효능제와 염증 유발성 시토카인; (iv) B-세포 수용체와 결합하는 항원; (v) 항-이디오타입 항체; 또는 (vi) 표면 면역글로불린과 가교 결합되는 작용제를 함유하는 조성물을 포함할 수 있지만, 이에 제한되지 않는다. 일부 경우에, 염증 유발성 시토카인은 IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-6, IL-7, IL-9, IL-10, IL-12, IL-15, IL-18, IL-21, IFN-α, IFN-β, IFN-γ, G-CSF, 또는 GM-CSF이다. 일부 경우에, TLR 효능제는 CpG ODN, 면역자극성 DNA, 면역자극성 RNA, 면역자극성 올리고뉴클레오티드, 이미퀴모드, 레시퀴모드, 록스리빈, 플라겔린, FSL-I 또는 LPS이다. 일부 경우에, 항원은 자기 항원, 동종이계 항원, 펩티드 항원, 핵산 항원, 탄수화물 항원, 또는 종양 연관 항원이다. 일부 경우에, 표면 면역글로불린과 가교 결합되는 작용제는 항-Ig 항체, 항-이디오타입 항체, 또는 항-이소형 항체이다.
처치받는 대상체가 암이 있는 것으로 진단된 적이 없었던 일부 경우에 (예를 들어, 이러한 대상체는 병에 걸릴 가능성이 증가되거나 또는 병에 걸릴 가능성이 증가된 것으로 의심된다) (예를 들어, 특정 대상체는 암에 걸릴 위험이 증가된다는 것을 표시하는 가족력 및/또는 암에 대한 유전적 소인을 가질 수 있다), 상기 대상 방법 중 한 가지 이상을 수행함으로써 [예를 들어, (i) 복수 개의 결합 특이성을 지닌 폴리클로날 동종이계 IgG 항체를 포함하는 항체 조성물; 및 (ii) 상기 개체의 APC, 예를 들어, DC를 활성화시키는 처치 (예를 들어, 상기 개체에게 APC 자극제, 예를 들어, 수지상 세포 자극제를 갖는 APC 자극성 조성물, 예를 들어, 수지상 세포 자극성 조성물, 예컨대 예를 들어, (i) 톨-유사 수용체 (TLR) 효능제; (ii) CD40 효능제와 염증 유발성 시토카인; (iii) 체크포인트 분자 중화 화합물; (iv) 인돌아민 2,3-디옥시게나제 (IDO) 억제제; (v) NFkB 활성화제; (vi) 칼슘 채널을 개방시키는 화합물; (vii) T 세포-관련 동시 자극성 분자; 또는 (viii) 그의 조합물을 포함하는 수지상 세포 자극성 조성물을 투여한다)를 투여함으로써], 상기 대상체에게 예방접종할 수 있다 (상기 처치가 예방적 처치가 되도록 처리한다).
용어 "공동-투여" 및 "조합하여"는 2가지 이상의 치료제를 구체적인 시간 제한없이 동시에, 공동으로 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 한 실시양태에서, 상기 작용제들은 세포 또는 대상체의 신체 내에 동시에 존재하거나 또는 그들의 생물학적 또는 치료 효과를 동시에 발휘한다. 한 실시양태에서, 상기 치료제들은 동일한 조성물 또는 단위 투여 형태 내에 있다. 다른 실시양태에서, 상기 치료제들은 별도의 조성물 또는 단위 투여 형태 내에 있다. 특정 실시양태에서, 제1 작용제는 제2 치료제의 투여 이전 (예를 들어, 5분, 15분, 30분, 45분, 1시간, 2시간, 4시간, 6시간, 12시간, 24시간, 48시간, 72시간, 96시간, 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 8주, 또는 12주 전), 투여와 동시에, 또는 투여 이후 (예를 들어, 5분, 15분, 30분, 45분, 1시간, 2시간, 4시간, 6시간, 12시간, 24시간, 48시간, 72시간, 96시간, 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 8주, 또는 12주 후)에 투여할 수 있다.
일부 실시양태에서, 치료하고자 하는 개체는 암을 앓는 개체이다. 본원에 사용된 바와 같은 "암"은 원발성 종양과 전이성 종양 둘 다를 포함한, 임의의 형태의 암 [예를 들어, 백혈병; 급성 골수성 백혈병 (AML); 급성 림프모구성 백혈병 (ALL); 림프종; 중피종 (MSTO); 최소 잔존 질환; 고형 종양 암, 예를 들어, 폐, 전립선, 유방, 방광, 결장, 난소, 췌장, 신장, 교모세포종, 수모세포종, 평활근육종, 및 두경부 편평 세포 암종, 흑색종 등] 등을 포함한다. 일부 경우에, 상기 개체는 최근에 암에 대한 치료 (예를 들어, 방사선 요법, 화학요법, 외과적 절제 등)를 받은 적이 있으므로, 재발 위험이 있다. 임의의 및 모든 암이 상기 대상 방법, 조성물 및 키트에 의해 치료되기에 적합한 암이다.
용어 "암", "신생물" 및 "종양"은 조절되지 않는 자율적 성장을 나타내는 세포를 지칭하기 위해 본원에서 상호 교환적으로 사용되므로, 이러한 세포는 세포 증식 이상의 상당한 제어 상실을 특징으로 하는 이상한 성장 표현형을 나타낸다. 본 출원에서 검출, 분석 및/또는 치료하기 위한 관심 세포는 전암성 (예를 들어, 양성), 악성, 전-전이성, 전이성, 및 비-전이성 세포를 포함한다. 사실상 모든 조직의 암이 공지되어 있다. "암 존재량"은 대상체 내의 암세포의 양 또는 암 용적을 지칭한다. 따라서, 암 존재량을 감소시키는 것은 대상체 내의 암세포의 수 또는 암 용적을 감소시키는 것을 지칭한다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "암세포"는 암세포이거나 또는 암세포, 예를 들어 암세포의 클론으로부터 유래되는 임의의 세포를 지칭한다. 상기 용어는 또한, 암세포의 특정 부분, 예컨대 세포하 부분, 세포막 부분, 또는 암세포의 세포 용해물을 포함한다. 많은 유형의 암이 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지되어 있는데, 이는 고형 종양, 예컨대 암종, 육종, 교모세포종, 흑색종, 림프종, 골수종 등, 및 순환성 암, 예컨대 백혈병을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은 "암"은 최소 잔존 질환을 포함하고 원발성 종양과 전이성 종양 둘 다를 포함한, 임의의 형태의 암을 포함하는데, 이는 고형 종양 암 (예를 들어, 폐, 전립선, 유방, 방광, 결장, 난소, 췌장, 신장, 간, 교모세포종, 수모세포종, 평활근육종, 두경부 편평 세포 암종, 흑색종, 신경내분비 등) 및 액상 암 (예를 들어, 혈액암); 암종; 연질 조직 종양; 육종; 기형종; 흑색종; 백혈병; 림프종; 및 뇌암을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 어떠한 암도 상기 대상 방법 및 조성물에 의해 치료되기에 적합한 암이다. 일부 경우에, 암세포는 PD-L1을 발현한다. 일부 경우에, 암세포는 PD-L1를 발현하지 않는다 (예를 들어, 이러한 경우, 치료받는 개체의 면역계의 세포는 PD-L1을 발현한다).
암종은 상피 조직에서 비롯되는 악성 종양이다. 상피 세포는 신체의 외부 표면을 덮고 있고, 내부 구멍을 막처럼 싸고 있으며, 선상 조직의 내층을 형성한다. 암종의 예는 다음을 포함하지만, 그에 제한되지 않는다: 선암종 [선상 (분비) 세포에서 시작되는 암] (예를 들어, 유방, 췌장, 폐, 전립선, 및 결장의 암이 선암종일 수 있다); 부신피질 암종; 간세포 암종; 신장 세포 암종; 난소 암종; 계내 암종; 관 암종; 유방의 암종; 기저 세포 암종; 편평 세포 암종; 이행 세포 암종; 결장 암종; 비인두 암종; 다방성 낭성 신장 세포 암종; 귀리 세포 암종; 대세포 폐 암종; 소세포 폐 암종; 비-소세포 폐 암종 등. 암종은 전립선, 췌장, 결장, 뇌 (통상적으로 이차 전이로서), 폐, 유방, 피부 등에서 발견될 수 있다.
연질 조직 종양은 연결 조직으로부터 유래되는 희귀 종양의 고도로 다양한 군이다. 연질 조직 종양의 예는 다음을 포함하지만, 그에 제한되지 않는다: 포상 연부 육종; 혈관종양 섬유성 조직구종; 연골점액양 섬유종; 골격 연골육종; 골외 점액양 연골육종; 투명 세포 육종; 결합조직성 소 원형-세포 종양; 융기성 피부섬유육종; 자궁내막 간질성 종양; 유윙(Ewing) 육종; 섬유종증 [데스모이드(Desmoid)]; 영아 섬유육종; 위장 간질성 종양; 골 거대 세포 종양; 건활막 거대 세포 종양; 염증성 근섬유모세포 종양; 자궁 평활근종; 평활근육종; 지방모세포종; 전형적 지방종; 방추 세포 또는 다형성 지방종; 비정형적 지방종; 연골양 지방종; 고분화 지방육종; 점액양/원형 세포 지방육종; 다형성 지방육종; 점액양 악성 섬유성 조직구종; 고악성도 악성 섬유성 조직구종; 점액섬유육종; 악성 말초 신경초 종양; 중피종; 신경모세포종; 골연골종; 골육종; 원시 신경외배엽 종양; 포상 횡문근육종; 배아성 횡문근육종; 양성 또는 악성 신경초종; 활막 육종; 에반스(Evan's) 종양; 결절성 근막염; 데스모이드-유형 섬유종증; 고립성 섬유성 종양; 융기성 피부섬유육종 (DFSP); 혈관육종; 상피양 혈관내피종; 건활막 거대 세포 종양 (TGCT); 색소성 융모결절성 활막염 (PVNS); 섬유성 형성이상; 점액섬유육종; 섬유육종; 활막 육종; 악성 말초 신경초 종양; 신경섬유종; 및 연질 조직의 다형성 선종; 및 섬유모세포, 근섬유모세포, 조직구, 혈관 세포/내피 세포 및 신경초 세포로부터 유래된 신생물.
육종은 중간엽 기원의 세포, 예를 들어 뼈, 또는 신체의 연질 조직 (연골, 지방, 근육, 혈관, 섬유성 조직 또는 기타 연결 또는 지지 조직 포함)에서 발생되는 희귀한 유형의 암이다. 상이한 유형의 육종은 암이 형성되는 곳에 근거한다. 예를 들어, 골육종은 뼈에서 형성되고, 지방육종은 지방에서 형성되며, 횡문근육종은 근육에서 형성된다. 육종의 예는 다음을 포함하지만, 그에 제한되지 않는다: 피부의 종양; 포도상 육종; 연골육종; 유윙 육종; 악성 혈관내피종; 악성 신경초종; 골육종; 및 연질 조직 육종 [예를 들어, 포상 연부 육종; 혈관육종; 엽상 낭육종, 융기성 피부섬유육종 (DFSP); 데스모이드 종양; 결합조직성 소 원형 세포 종양; 상피양 육종; 골외 연골육종; 골외 골육종; 섬유육종; 위장 간질성 종양 (GIST); 혈관주위세포종; 혈관육종 (보다 통상적으로는 "혈관육종"으로서 지칭됨); 카포시(kaposi) 육종; 평활근육종; 지방육종; 림프관육종; 악성 말초 신경초 종양 (MPNST); 신경섬유육종; 활막 육종; 미분화 다형성 육종 등].
기형종은, 예를 들어 모발, 근육 및 뼈를 포함한 조직의 몇 가지 상이한 유형 (예를 들어, 3가지 생식 층인 내배엽, 중배엽 및 외배엽 중 임의의 것 및/또는 모든 것으로부터 유래된 조직을 포함할 수 있다)을 함유할 수 있는 특정 유형의 생식 세포 종양이다. 기형종은 여성의 난소, 남성의 고환, 및 어린이의 꼬리뼈에서 가장 자주 발생된다.
흑색종은 멜라닌 세포 (멜라닌 색소를 만드는 세포)에서 시작되는 특정 형태의 암이다. 이는 검은점에서 시작될 수 있지만 (피부 흑색종), 다른 색소 조직, 예컨대 눈 또는 장에서 시작할 수도 있다.
백혈병은 혈액 형성 조직, 예컨대 골수에서 시작되고, 비정상적인 다수의 혈액 세포가 생성될 수 있게 하며, 혈류에 유입되는 암이다. 예를 들어, 백혈병은 정상적으로는 혈류 내에서 성숙되는 골수-유래 세포에서 비롯될 수 있다. 백혈병은 질환이 얼마나 신속하게 발생되고 진행되는지에 따라서 (예를 들어, 급성 대 만성), 그리고 병에 걸린 백혈구의 유형에 따라서 (예를 들어, 골수성 대 림프성) 그 이름이 결정된다. 골수성 백혈병은 또한, 골수성 또는 골수모구성 백혈병으로 불리운다. 림프성 백혈병은 또한, 림프모구성 또는 림프구성 백혈병으로 불리운다. 림프성 백혈병 세포는 팽윤될 수 있는 림프절에서 수집될 수 있다. 백혈병의 예는 다음을 포함하지만, 그에 제한되지 않는다: 급성 골수성 백혈병 (AML), 급성 림프모구성 백혈병 (ALL), 만성 골수성 백혈병 (CML), 및 만성 림프구성 백혈병 (CLL).
림프종은 면역계의 세포에서 시작되는 암이다. 예를 들어, 림프종은 정상적으로 림프계에서 성숙되는 골수-유래 세포에서 비롯될 수 있다. 2가지 기본 범주의 림프종이 있다. 한 가지 종류는 호지킨(Hodgkin) 림프종 (HL)인데, 이는 리드-스턴버그(Reed-Sternberg) 세포로 불리우는 특정 유형의 세포의 존재가 특징이다. 현재에는 6가지로 인정된 유형의 HL이 있다. 호지킨 림프종의 예는 다음을 포함한다: 결절성 경화증, 고전적 호지킨 림프종 (CHL), 혼합 세포질 CHL, 림프구-고갈 CHL, 림프구-풍부한 CHL, 및 결절성 림프구 우세 HL.
다른 범주의 림프종은 비-호지킨 림프종 (NHL)인데, 이는 면역계 세포의 암의 큰 다양한 군을 포함한다. 비-호지킨 림프종은 무통성 (느리게 성장함) 과정을 거치는 암, 및 공격적 (신속히 성장함) 과정을 거치는 암으로 추가로 나눌 수 있다. 현재에는 61가지로 인정된 유형의 NHL이 있다. 비-호지킨 림프종의 예는 다음을 포함하지만, 그에 제한되지 않는다: AIDS-관련 림프종, 악성 대세포 림프종, 혈관면역모세포성 림프종, 모세포성 NK-세포 림프종, 버킷(Burkitt) 림프종, 버킷-유사 림프종 (비-절단된 소세포 림프종), 만성 림프구성 백혈병/소 림프구성 림프종, 피부 T-세포 림프종, 확산성 대 B-세포 림프종, 장병증-유형 T-세포 림프종, 여포성 림프종, 간비장 감마-델타 T-세포 림프종, T-세포 백혈병, 림프모구성 림프종, 외투 세포 림프종, 연변층 림프종, 비(nasal) T-세포 림프종, 소아 림프종, 말초 T-세포 림프종, 원발성 중추 신경계 림프종, 변환 림프종, 치료-관련 T-세포 림프종, 및 발덴스트롬(Waldenstrom) 마크로글로불린혈증.
뇌암은 뇌 조직의 임의의 암을 포함한다. 뇌암의 예는 다음을 포함하지만, 그에 제한되지 않는다: 신경교종 (예를 들어, 교모세포종, 성상세포종, 희돌기교종, 뇌실막세포종 등), 수막종, 뇌하수체 선종, 전정 신경초종, 원시 신경외배엽 종양 (수모세포종) 등.
암의 "병리학"은 환자의 심신 안정감을 손상시키는 모든 현상을 포함한다. 이는 비정상적이거나 비제어되는 세포 성장, 전이, 이웃하는 세포의 정상적 기능의 방해, 시토카인 또는 기타 분비 생성물을 비정상적인 수준으로 방출, 염증성 또는 면역학적 반응의 억제 또는 악화, 신생물, 전악성종양, 악성종양, 주변 또는 원거리 조직 또는 기관, 예컨대 림프절의 침습 등을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "암 재발" 및 "종양 재발" 및 그의 문법적 변종은 암 진단 후 신생물성 또는 암성 세포의 추가 성장을 지칭한다. 특히, 추가의 암성 세포 성장이 암성 조직에서 일어나는 경우에 재발이 발생할 수 있다. "종양 확산"은 유사하게, 종양의 세포가 국소 또는 원거리 조직 및 기관 내로 전파되는 경우에 일어나므로, 종양 확산은 종양 전이를 포괄한다. "종양 침습"은 종양 성장이 국소적으로 확산되어, 정상 기관의 기능을 압축, 파괴 또는 방지함으로써 관련 조직의 기능을 손상시킬 때 일어난다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "전이"는 본래의 암성 종양의 기관과 직접적으로 연결되지 않은 기관 또는 신체 부분 내에 암성 종양이 성장하는 것을 지칭한다. 전이는 본래의 암성 종양의 기관과 직접적으로 연결되지 않은 기관 또는 신체 부분 내에, 검출가능하지 않은 양의 암성 세포가 존재하는 미소전이를 포함하는 것으로 이해될 것이다. 전이는 또한, 특정 과정의 몇 가지 단계로서 규정될 수 있는데, 예컨대 암세포가 본래의 종양 부위로부터 이탈하는 단계, 및 암세포가 신체의 다른 부분으로 이동하고/하거나 침습하는 단계로서 규정될 수 있다.
일부 실시양태에서, 특정 개체에게서 면역 반응을 유도시키는 방법 (일부 경우에 특정 개체의 치료 방법으로서 지칭됨)은 (a) 시험관 내에서 상기 개체로부터의 수지상 세포 (DC)를 표적 항원 및 항체 조성물과 접촉시킴으로써, 부하된 DC를 생성시키는 단계; 및 (b) 상기 개체의 T 세포를 상기 부하된 DC와 접촉시키는 단계를 포함한다. 상기 부하된 DC는 항원을 상기 T 세포에 제시하여 접촉된 T 세포를 생성시키고, 이와 같이 접촉된 T 세포는 상기 제시된 항원에 대해 특이적인 면역 반응을 발생시킨다.
수지상 세포. 수지상 세포 (DC)는 포유류 면역계의 특정 유형의 항원-제시 세포이다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "수지상 세포"는 림프성 또는 비-림프성 조직에서 발견된 형태학적으로 유사한 세포 유형의 다양한 집단의 임의의 구성원을 지칭한다. 이들 세포는 그들의 독특한 형태와 고 수준의 표면 MHC-부류 II 발현을 특징으로 한다 (Steinman, et al., Ann. Rev. Immunol. 9:271 (1991); 상기 세포에 관한 설명을 위해 본원에 참조로 포함된다).
수지상 세포는 거의 모든 조직, 예컨대 피부, 및 코, 폐, 간, 위 및 장의 내층 뿐만 아니라 골수, 혈액, 비장 및 림프절에 존재한다. 일단 활성화되면, DC는 림프절로 이동하고, 여기서 이는 T 세포 및 B 세포와 상호 작용하여 적응 면역 반응을 개시하고 형성한다. 특정의 발생 단계에서는, DC가 분지된 돌기들 (수상 돌기)로 성장하므로, 그 세포에 자신의 이름을 붙였다. 수지상 세포의 예는 골수-유래 수지상 세포 (BMDC), 형질세포성 수지상 세포, 랑게르한스(Langerhans) 세포, 수지양(interdigitating) 세포, 베일을 쓴 세포, 및 피부 수지상 세포를 포함한다. 일부 경우에, DC는 CD11 (예를 들어, CD11a 및/또는 CD11c), MHC-부류 II (예를 들어, 인간의 경우에, HLA-DR, HLA-DP 및 HLA-DQ), CD40, CD80 및 CD86으로부터 선택된 적어도 하나의 마커를 발현한다. 일부 경우에, DC는 HLA-DR 및 CD83에 대해 양성이고, CD14에 대해 음성이다. 일반적으로 DC는 다음 마커 중 임의의 것 또는 모두에 근거하여 확인될 수 있다 (예를 들어, DC의 존재를 검증할 수 있다): CD11c+; CD14-/저; CD80+; CD86++; MHC 부류 I++, MHC 부류 II+++; CD40++; CD83+/-; CCR7+/-. 일부 경우에, DC는 CD11b+/Gr1neg/CD11c+/MHCII+/CD64dull이다. 일부 경우에, DC는 CD11bneg/CD11chi/MHCII+이다.
일부 경우에, 수지상 세포는 특이적 Ig Fc 수용체를 발현한다. 예를 들어, 수지상 세포는 IgG 항체, 또는 IgG의 Fc 영역을 함유하는 항체를 인식하는 Fc-γ 수용체를 발현할 수 있다. 또 다른 예로서, 수지상 세포는 IgA 항체, 또는 IgA의 Fc 영역을 함유하는 항체를 인식하는 Fc-α 수용체를 발현할 수 있다. 또한 또 다른 예로서, 수지상 세포는 IgE 항체, 또는 IgE의 Fc 영역을 함유하는 항체를 인식하는 Fc-ε 수용체를 발현할 수 있다. 일부 경우에, 특이적 Fc 수용체를 발현하는 수지상 세포는 적당한 브리징 분자 (예를 들어, 수지상 세포 Fc 수용체에 의해 인식된 특정 부류의 동종이계 Ig)를 이용하여 수득하고 부하된다.
일부 실시양태에서, 대상 방법은 DC를 수득하거나 또는 단리하는 단계 (예를 들어, DC의 풍부해진 집단을 단리하는 단계)를 포함한다. DC의 단리, 생성 및 배양을 위한 기술은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지될 것이고, 임의의 편리한 기술을 사용할 수 있다. 일부 경우에, DC는 치료받는 개체에 대해 자가이다 (즉, 상기 개체로부터 단리된 세포이거나, 또는 상기 개체의 세포로부터 유래된 세포이다).
일부 경우에, CD34(+) 전구 세포 [예를 들어, 골수 (BM) 전구 세포]가 DC를 생성시키기 위한 공급원으로서 사용되므로 (예를 들어, CD34+ 세포는, 예를 들어 항체-결합된 자기 비드를 이용하여 풍부하게 할 수 있다), 이는 골수 (BM) 유래 수지상 세포 (BMDC)로서 지칭된다. 예를 들어, BMDC는 백혈구 성장 인자 [예를 들어, 과립구-대식세포-집락 자극 인자 (GM-CSF), 예를 들어 50 ng/ml]로서 기능하는 시토카인, 및 시토카인 [예를 들어, 인터루킨 4 (IL-4), 예를 들어 20 ng/ml]의 존재하에 비부착성 세포 (CD34+ 세포)를 배양함으로써 생성될 수 있다. 일부 경우에, CD34+ 세포는 4일 내지 18일의 범위 (예를 들어, 5일 내지 17일, 7일 내지 16일, 8일 내지 13일, 9일 내지 12일, 6일 내지 15일, 8일 내지 15일, 10일 내지 15일, 12일 내지 15일, 13일 내지 15일, 5일 내지 14일, 5일 내지 12일, 5일 내지 10일, 5일 내지 9일, 6일 내지 8일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 12일, 또는 14일)의 기간 동안 GM-CSF 및/또는 IL-4의 존재하에 배양한다. CD34+ 세포를 GM-CSF 및/또는 IL-4의 존재하에 배양하는 경우, GM-CSF는 35 ng/ml 내지 65 ng/ml의 범위 (35 ng/ml 내지 65 ng/ml, 40 ng/ml 내지 60 ng/ml, 45 ng/ml 내지 50 ng/ml, 또는 50 ng/ml)의 농도일 수 있고, IL-4는 5 ng/ml 내지 35 ng/ml의 범위 (10 ng/ml 내지 30 ng/ml, 15 ng/ml 내지 25 ng/ml, 17.5 ng/ml 내지 22.5 ng/ml, 또는 20 ng/ml)의 농도일 수 있다. 예시되는 예로서, 뼈를 식염수 용액 [예를 들어, 인산염 완충 식염수 (PBS)]으로 수세할 수 있고, 단핵 세포를 피콜(Ficoll) 구배 상에서 골수로부터 분리시킬 수 있다. 이어서, CD34+ 세포를 단리하고/풍부하게 한 다음 (예를 들어, 항체-접합된 자기 비드를 이용함), GM-CSF 및 IL-4의 존재하에 배양할 수 있다 (상기 언급된 바와 같음). 일부 경우 (예를 들어, 세포가 마우스 세포인 경우)에, DC는 이러한 세포를 GM-CSF에서 배양함으로써 유래될 수 있다. 일부 경우 (예를 들어, 세포가 인간 세포인 경우)에, DC는 이러한 세포를 GM-CSF및 IL-4에서 배양함으로써 유래될 수 있다.
일부 경우에, 단구가 DC를 생성시키기 위한 공급원으로서 사용된다 (종종, 혈액 유래 DC, 혈액 Mo-DC, 단구 DC 등으로서 지칭됨). 예를 들어, DC는 3일 내지 9일의 범위 (예를 들어, 4일 내지 8일, 5일 내지 7일, 3일 내지 6일, 4일 내지 5일, 6일 내지 8일, 또는 7일)의 기간 동안 GM-CSF (예를 들어, BMDC에 대해 상기 언급된 바와 같은 범위의 농도) 및/또는 IL-4 (예를 들어, BMDC에 대해 상기 언급된 바와 같은 범위의 농도)의 존재하에 부착성 세포 (단구, 예를 들어, 골수 단구, 혈액 단구 등)(예를 들어, CD14+ 혈액 단구)를 배양함으로써 생성시킬 수 있다. 예를 들어, 일부 경우에, 단핵 세포는 혈액으로부터 단리되고 CD11b+ 세포에 풍부해진다 (예를 들어, 자기 비드를 이용함), 상기 세포를 "염증성 단구" (FSClo/SSClo/Gr1hi/CD115hi) 및/또는 "정찰(patrolling) 단구" (FSClo/SSClo/Gr1neg/CD115hi)에 대하여 분류할 수 있다. 이어서, 상기 단구를 GM-CSF의 존재하에 [예를 들어, 3일 내지 6일의 범위 (예를 들어, 4일 내지 5일)의 기간 동안] 배양함으로써 각종 유형의 단구로부터 DC를 생성시킬 수 있다. 일부 경우 (예를 들어, 세포가 마우스 세포인 경우)에, DC는 이러한 세포를 GM-CSF에서 배양함으로써 유래된다. 일부 경우 (예를 들어, 세포가 인간 세포인 경우)에, DC는 이러한 세포를 GM-CSF및 IL-4에서 배양함으로써 유래된다. 비장으로부터 DC를 수득하기 위하여 (비장 DC), 비장 세포에 CD11c+ 세포를 풍부하게 할 수 있고 (예를 들어, 항체-커플링된 자기 비드를 이용함), 유동 세포계수법 (예를 들어, FACS)을 이용하여 CD11chi/MHCIIhi 세포를 분류하고/풍부하게 할 수 있다.
일부 경우에, DC는 종양 연관 DC (TADC)이다. TADC는 임의의 편리한 방법에 의해 수득될 수 있다. 예를 들어, 종양으로부터 DC를 수득하기 위하여 (종양 연관 DC, TADC), 종양을 소화시킬 수 있고 (예를 들어, 콜라게나제 및 뉴클레아제를 이용함), CD11c+ 세포를 풍부하게 할 수 있으며 (예를 들어, 항체-접합된 자기 비드를 이용함), 유동 세포계수법 (예를 들어, FACS)을 이용하여 Gr1neg/CD11chi/MHCIIhi 세포를 분류하고/풍부하게 할 수 있다.
단리되고/되거나 유래된 DC (예를 들어, 상기 언급된 바와 같음)는 TNFα (예를 들어, 50 ng/ml) 및 CD40 리간드 (예를 들어, CD40L) (예를 들어, 500 ng/ml) (하기 추가의 내역에 기재됨)를 포함하지만 이에 제한되지 않는 각종 인자를 이용하여 활성화시킬 수 있다.
수지상 세포, 및 DC의 단리, 생성 및/또는 배양 방법에 관한 더 많은 정보에 대해서는, 문헌 ([Vassalli, J Transplant. 2013; 2013: 761429: "Dendritic Cell-Based Approaches for Therapeutic Immune Regulation in Solid-Organ Transplantation"]; [Syme et al., Stem Cells. 2005;23(1):74-81: "Comparison of CD34 and monocyte-derived dendritic cells from mobilized peripheral blood from cancer patients"]; [Banchereau et al., Annu Rev Immunol. 2000;18:767-811: "Immunobiology of dendritic cells"]; 및 미국 특허 출원 번호 20130330822; 20130273654; 20130130380; 20120251561; 및 20120244620; 이들 모두는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다)을 참조할 수 있다.
일부 경우 (예를 들어, 상기 방법이 개체에게 항체 조성물을 투여하는 것을 포함하는 경우)에, 내인성 DC (상기 개체에 존재하는 DC)를 생체 내에서, 상기 투여된 항체 조성물과 접촉시킨다. 따라서, 상기 방법은 암을 앓는 개체를 치료하는 생체내 방법인 것으로 간주될 수 있다. 예를 들어, 항체 조성물 및/또는 수지상 세포 자극성 조성물을 특정 개체에게 투여 (예를 들어, 개체 내로 주사)할 수 있고 (예를 들어, 종양 내로 또는 그 근처에 주사하거나, 종양 절제 부위 내로 또는 그 근처에 주사한다), 이로써 내인성 DC는 상기 항체 조성물 및/또는 수지상 세포 자극성 조성물과 접촉된다. 이어서, 상기 부하된 DC를 생체 내에서 내인성 T 세포와 접촉시킬 수 있다 (부가의 내역이 생체내 방법에 관해 다음에 제공된다; "T 세포를 부하된 DC와 접촉시킨다"라는 표제의 섹션 참조). 일부 경우 (예를 들어, DC가 BMDC인 경우)에, 수지상 세포 자극성 조성물이 사용되지 않는다.
대식세포. 대식세포는 포유류 면역계의 특정 유형의 항원-제시 세포이다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "대식세포"는 림프성 또는 비-림프성 조직에서 발견된 형태학적으로 유사한 세포 유형의 다양한 집단의 임의의 구성원을 지칭한다. 이들 세포는 그들의 독특한 형태와 고 수준의 표면 MHC-부류 II 발현을 특징으로 한다. 대식세포는 수지상 세포가 아닌 단구-유래 포식세포이거나, 또는 국소 증식에 의해 조직 대식세포로부터 유래되는 세포이다. 신체에서는, 이들 세포가 조직 특이적이고, 예를 들어 간에서의 쿠퍼(Kupffer) 세포, 폐에서의 포상 대식세포, 뇌에서의 미세신경교 세포, 뼈에서의 파골세포 등을 지칭한다. 통상의 기술자는 대식세포를 확인하는 방법, 인간 또는 동물의 신체로부터 대식세포를 단리하는 방법, 및 그의 하위부류 및 부분모집단을 기준으로 하여 대식세포를 명확히 규명하는 방법을 알고 있다 (Kruisbeek, 2001; Davies and Gordon 2005 a and b; Zhang et al., 2008; Mosser and Zhang, 2008; Weischenfeldt and Porse, 2008; Ray and Dittel, 2010; Martinez et al., 2008; Jenkins et al., 2011).
대식세포는 상이한 기전에 의해, M1, M2, M2a, M2b, 및 M2c 하위부류를 포함하지만, 이에 제한되지 않는 상이한 하위부류가 되도록 활성화시킬 수 있다. 용어 M1은 손상 또는 박테리아성 감염과 IFN-y 활성화로 인해 비롯되는, 고전적으로 활성화된 대식세포를 설명하기 위해 사용되는 반면, M2는 M1과 상이하게 활성화된 대식세포의 수많은 형태에 대한 일반적 용어이다. M2 분류는 부분모집단으로 추가로 나눠졌다 (Mantovani et al., 2004). 가장 대표적인 형태가 M2a 대식세포인데, 이는 기생충 유도된 Th2 시토카인 IL-4 및 IL-13에 대한 노출에 의한 장내 기생충 감염에서 통상적으로 존재한다. M2a 대식세포는 특히, 숙주가 재감염되지 못하게 하는데 본질적으로 관여하거나 (문헌 [Anthony et al., 2006]) 또는 상처 치유와 조직 재형성에 기여하는 데 본질적으로 관여하는 것으로 밝혀졌다 (Gordon, 2003). 또 다른 부분모집단은 고 수준의 IL-10과 저 수준의 IL-12를 생성시키지만 그 자체가 소염성은 아닌 M2b 대식세포이다 (Anderson and Mosser, 2002; Edwards et al., 2006). M2b 대식세포는 TLR 리간드와 조합하여 Fc-γ 수용체와 결합하는 면역 복합체에 의해 유도된다. 최종적으로, M2c 대식세포는 IL-10, TGF-β 또는 글루코코르티코이드에 의해 유도된 아형(subtype)을 나타낸다 (Martinez et al., 2008).
따라서, "M2a 대식세포"는 Th2 조건하의 환경에 노출되어 왔던 (예를 들어, Th2 시토카인 IL-4 및 IL-13에 대한 노출) 대식세포를 지칭하고, 이는 유전자 Ym1 및/또는 유전자 CD206 및/또는 유전자 RELM-α 및/또는 유전자 아르기나제-1의 보다 높은 발현에 의한 특이적 표현형을 나타낸다. 유사하게, "M2b 대식세포"는 TLR 또는 TNF-알파 자극과 조합하여 면역 복합체의 환경에 노출되어 왔던 대식세포를 지칭한다. 상기 세포는 유전자 SPHK-1 및/또는 유전자 LIGHT 및/또는 유전자 IL-10의 보다 높은 발현을 통하여 명확히 규명된다.
일부 경우에, 본 출원은 "환자의 신체로부터 유래된" 대식세포를 지칭한다. 이는 대식세포가 상기 환자의 신체로부터 수득되거나, 또는 대식세포 전구 세포가 상기 환자의 신체로부터 수득된 다음, 문헌 (Wahl et al. 2006; Davis and Gordon 2005; Smythies et al., 2006; Zhang et al., 2008; Mosser and Zhang, 2008)에 기재된 바와 같이 시험관 내에서 대식세포로 분화되는 것을 지정한다는 것을 의미한다.
B-세포. B-세포는 포유류 면역계의 특정 유형의 항원-제시 세포이다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "B-세포"는 임의의 발생 단계로부터의 B-세포 (예를 들어, B-줄기 세포, 전구 B-세포, 분화 B-세포, 혈장 세포) 및 임의의 공급원 (말초혈; 종양에, 종양 내에 또는 종양 근처의 영역; 림프절; 골수; 제대혈; 또는 비장 세포를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다)으로부터의 B-세포를 지칭한다.
B-세포 전구체는 미숙한 B-세포가 생성되는 골수에 있다. B-세포 발생은 몇 가지 단계를 통하여 일어나는데, 각 단계는 항체 유전자 자리에서의 게놈 함량 상의 변화를 나타낸다. 게놈 중쇄 가변 영역에는, 3개의 절편, 즉 V, D, 및 J가 있는데, 이들은 각 B-세포의 면역글로불린 내의 독특한 가변 영역을 생성하기 위한 VDJ 재배열로 불리우는 과정에서 무작위로 재조합된다. 유사한 재배열이 경쇄 가변 영역에 대해서도 일어나는데, 단 2개의 절편, 즉 V 및 J 만이 관여한다. 완전히 재배열된 후, B-세포는 골수에서 IgM+ 미숙 단계에 도달한다. 이들 미숙한 B-세포는 그의 표면 상에 막 결합된 IgM, 즉 BCR을 제시하고, 비장으로 이동하는데, 여기서 이들은 이행 B 세포로 불리운다. 이들 세포 중 일부는 성숙한 B 림프구로 분화된다. 그의 표면 상에 BCR을 발현하는 성숙한 B-세포는 혈액과 림프계를 순환하여 면역 감시의 역할을 수행한다. 이들 세포가 완전히 활성화될 때까지는 가용성 항체를 생성하지 않는다. 각 B-세포는 하나의 특별한 항원과 결합할 독특한 수용체 단백질을 갖는다. 일단 B-세포가 그의 항원과 접하고 T 헬퍼 세포로부터의 부가의 시그널을 받게 되면, 이는 가용성 항체를 발현 및 분비하는 혈장 B-세포 또는 기억 B-세포로 추가로 분화될 수 있다.
본 개시내용의 맥락에서, 용어 "B-세포"는 완전히 재배열된, 즉 성숙한 BCR을 그의 표면 상에 제시하는 임의의 B 림프구를 지칭한다. 예를 들어, 본 발명의 맥락에서 B-세포는 미숙하거나 성숙한 B-세포일 수 있다. 일부 경우에, B-세포는 나이브 B-세포, 즉 상기 B-세포의 표면 상에 BCR에 의해 특이적으로 인식된 항원에 노출된 적이 없는 B-세포이다. 일부 실시양태에서, B-세포는 CD19+ B-세포인데, 즉 그의 표면 상에 CD19를 발현한다. 일부 경우에, 본 발명의 맥락에서 B-세포는 CD19+ B-세포이고, 그의 표면 상에 완전히 재배열된 BCR을 발현한다. 이러한 B-세포는 CD20+ 또는 CD21+ B-세포일 수도 있다. 일부 경우에, CD20+ 또는 CD21+ B-세포는 그의 표면 상에 BCR을 수반한다. 일부 실시양태에서, B-세포는 기억 B-세포, 예컨대 IgG+ 기억 B 세포이다.
항원 제시 세포 (APC), 예를 들어, 수지상 세포 (DC)를 활성화시키는 처치. 일부 실시양태에서, 특정 대상 방법은 특정 개체에게, 이러한 개체의 APC, 예를 들어, DC를 활성화시키는 처치를 투여하는 단계를 포함한다. 이러한 단계는 생체내 또는 시험관 내에서 수행될 수 있고, 항체 조성물을 투여하는 단계 이전, 이후, 또는 동시에 수행될 수 있다. APC, 예를 들어, DC를 활성화시키는 임의의 편리한 처치가 수행될 수 있다. 예를 들어, 일부 경우에, APC, 예를 들어, DC를 활성화시키는 (자극하는) 처치는 내인성 APC, 예를 들어, DC를 활성화시키는 임의의 형태의 암 요법 (예를 들어, 개체의 국부 조사, 예를 들어 이온화 방사선의 200 내지 4,000 rad; 화학요법 등)을 포함할 수 있다. 일부 경우에, APC를 활성화시키는 처치는 국부 조사를 포함하지 않는다. 일부 경우에, APC, 예를 들어, DC를 활성화시키는 (예를 들어, 수지상 세포를 활성화시키는) 처치는 APC, 예를 들어, DC [예를 들어, 내인성 DC (즉, 생체내 DC, 예를 들어, 생체내 TADC), BMDC가 아닌 DC, BMDC인 DC, TADC, 대식세포, B-세포 등]를 APC 자극성 조성물, 예를 들어, 수지상 세포 자극성 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다. 일부 경우에, APC, 예를 들어, DC는 생체 내에서 활성화된다. 일부 경우에, APC, 예를 들어, DC는 생체 외에서 활성화된다 (예를 들어, DC, 예를 들어, TADC는 특정 개체로부터 단리될 수 있고, 이어서 TADC는 활성화될 수 있는데, 예를 들어, 수지상 세포 자극성 조성물과 접촉될 수 있다).
수지상 세포 자극성 조성물. 일부 경우에, 수지상 세포를 활성화시키는 (예를 들어, 수지상 세포들을 활성화시키는) 처치는 DC (예를 들어, 내인성 DC, BMDC가 아닌 DC, BMDC인 DC, TADC 등)를 수지상 세포 자극성 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다. 본원에 사용된 바와 같은 "수지상 세포 자극성 조성물"은 적어도 하나의 수지상 세포 자극제를 포함한다.
수지상 세포 자극제는 DC를 활성화시키고/시키거나, 항원의 흡수를 자극하고/하거나 (예를 들어, 종양 세포의 흡수, 예를 들어 포식작용을 자극한다), DC의 성숙화를 자극하고/하거나, T 세포에 대한 항원의 제시를 자극하는 작용제이다. 적합한 수지상 세포 자극제는 다음을 포함하지만, 그에 제한되지 않는다: CD40 효능제, 염증 유발성 시토카인, 톨-유사 수용체 효능제 [예를 들어, CpG ODN, 폴리이노신산:폴리시티딜산 ("폴리 I:C", TLR-3 효능제) 등], 인돌아민 2,3-디옥시게나제 (IDO) 억제제, 체크포인트 분자 중화 화합물 [예를 들어, 체크포인트 분자를 중화시키는 항체, 예를 들어, 항-CTLA-4 항체, 예를 들어, 이필리무맙(Ipilimumab)], NFkB 활성화제 (예를 들어, 포르볼 에스테르), 칼슘 채널을 개방시키는 화합물 (예를 들어, 이오노마이신), T 세포-관련 동시 자극성 분자 (예를 들어, CD27, CD28, 4-BBL 등), 및 그의 임의의 조합물.
예를 들어, 일부 경우에, 특정 대상 수지상 세포 자극성 조성물은 CD40 효능제 (예를 들어, CD40L 및/또는 효능작용 항-CD40 항체) 및 염증 유발성 시토카인 [예를 들어, TNFα, IL-1α, IL-1β, IL-19, 인터페론 감마 (IFNγ) 등]을 포함한다. 일부 경우에, 특정 대상 수지상 세포 자극성 조성물은 CD40 효능제 (예를 들어, CD40L 및/또는 효능작용 항-CD40 항체), 염증 유발성 시토카인 [예를 들어, TNFα, IL-1α, IL-1β, IL-19, 인터페론 감마 (IFNγ) 등], 및 톨-유사 수용체 효능제 [예를 들어, CpG ODN, 폴리이노신산:폴리시티딜산 ("폴리 I:C", TLR-3 효능제) 등]를 포함한다. 일부 경우에, 특정 대상 수지상 세포 자극성 조성물은 톨-유사 수용체 효능제 [예를 들어, CpG ODN, 폴리이노신산:폴리시티딜산 ("폴리 I:C", TLR-3 효능제) 등]를 포함한다. 일부 경우에, 특정 대상 수지상 세포 자극성 조성물은 IDO 억제제를 포함한다. 일부 경우에, 특정 대상 수지상 세포 자극성 조성물은 체크포인트 분자를 중화시키는 항체 (예를 들어, 항-CTLA-4 항체, 예를 들어, 이필리무맙)를 포함한다. 일부 경우에 특정 대상 수지상 세포 자극성 조성물은 T 세포-관련 동시 자극성 분자 (예를 들어, CD27, CD28, 4-BBL 등)를 포함한다. 일부 경우에 특정 대상 수지상 세포 자극성 조성물은 T 세포-관련 동시 자극성 분자 (예를 들어, CD27, CD28, 4-BBL 등) 및 염증 유발성 시토카인 [예를 들어, TNFα, IL-1α, IL-1β, IL-19, 인터페론 감마 (IFNγ) 등]을 포함한다. 일부 경우에 특정 대상 수지상 세포 자극성 조성물은 T 세포-관련 동시 자극성 분자 (예를 들어, CD27, CD28, 4-BBL 등), 염증 유발성 시토카인 [예를 들어, TNFα, IL-1α, IL-1β, IL-19, 인터페론 감마 (IFNγ) 등], 및 톨-유사 수용체 효능제 [예를 들어, CpG ODN, 폴리이노신산:폴리시티딜산 ("폴리 I:C", TLR-3 효능제) 등]를 포함한다.
B-세포 자극성 조성물. 일부 경우에, B-세포를 활성화시키는 (예를 들어, B-세포들을 활성화시키는) 처치는 B-세포를 B-세포 자극성 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다. 본원에 사용된 바와 같은, "B-세포 자극성 조성물"은 적어도 하나의 B-세포 자극제를 포함한다.
B-세포 자극제는 B-세포를 활성화시키고/시키거나, 항원의 흡수를 자극하고/하거나 (예를 들어, 종양 세포의 흡수, 예를 들어 포식작용을 자극한다), B-세포의 성숙화를 자극하고/하거나, T 세포에 대한 항원의 제시를 자극하는 작용제이다. 적합한 B-세포 자극제는 다음을 포함하지만, 그에 제한되지 않는다: (i) 톨-유사 수용체 (TLR) 효능제; (ii) CD40 효능제; (iii) CD40 효능제와 염증 유발성 시토카인; (iv) B-세포 수용체와 결합하는 항원; (v) 항-이디오타입 항체; (vi) 표면 면역글로불린과 가교 결합되는 작용제; 및 그의 임의의 조합물.
대식세포 자극성 조성물. 일부 경우에, 대식세포를 활성화시키는 (예를 들어, 대식세포들을 활성화시키는) 처치는 대식세포를 대식세포 자극성 조성물과 접촉시키는 것을 포함한다. 본원에 사용된 바와 같은, "대식세포 자극성 조성물"은 적어도 하나의 대식세포 자극제를 포함한다.
대식세포 자극제는 대식세포를 활성화시키고/시키거나, 항원의 흡수를 자극하고/하거나 (예를 들어, 종양 세포의 흡수, 예를 들어 포식작용을 자극한다), 대식세포의 성숙화를 자극하고/하거나, T 세포에 대한 항원의 제시를 자극하는 작용제이다. 적합한 대식세포 자극제는 다음을 포함하지만, 그에 제한되지 않는다: (i) 톨-유사 수용체 (TLR) 효능제; (ii) 대식세포 활성화 시토카인; (iii) 글루코코르티코이드 수용체 효능제; 및 그의 임의의 조합물.
임의의 편리한 CD40 효능제를 사용할 수 있다. 적합한 CD40 효능제의 예는 다음을 포함하지만, 그에 제한되지 않는다: 효능작용 항-CD40 항체, CD40 리간드 (CD40L, 또한 CD40LG로서 공지됨) 등. 임의의 편리한 효능작용 항-CD40 항체를 사용할 수 있고, 효능작용 항-CD40 항체는 관련 기술분야에 공지되어 있다. 임의의 편리한 CD40L (또는 그의 기능적 단편)을 사용할 수 있다. 예를 들어, 인간 CD40L은 단백질 서열:
MIETYNQTSPRSAATGLPISMKIFMYLLTVFLITQMIGSALFAVYLHRRLDKIEDERNLHEDFVFMKTIQRCNTGERSLSLLNCEEIKSQFEGFVKDIMLNKEETKKENSFEMQKGDQNPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKL [SEQ ID NO: 1]을 갖는 폴리펩티드인데, 상기 단백질 서열은 다음 cDNA 서열의 상응하는 mRNA에 의해 코딩된다 (개방 판독 프레임에 밑줄이 그어져 있다):
Figure pct00005
적합한 CD40L은 또한, CD40L의 기능적 단편일 수 있다 (즉, CD40L이 완전한 길이의 폴리펩티드일 필요는 없다). 막-고정된 CD40-리간드는 CD4+ T 림프구 상에서 발현된다. CD40L의 가용성 형태는 CD40L의 전체 TNF 상동 영역을 포함하는 단백질이고, 완전한 길이의 CD40L의 세포내 단백질 분해적 프로세싱에 의해 생체 내에서 생성된다. 예를 들어, 재조합 뮤린 CD40L은 CD40L의 수용체 결합성 TNF-유사 도메인을 갖는 149개 아미노산 잔기를 함유하는 가용성 16.4 kDa 단백질일 수 있다:
Figure pct00006
또 다른 예로서, 재조합 인간 가용성 CD40 리간드 (CD40L)는 CD40L의 수용체 결합성 TNF-유사 도메인을 갖는 149개 아미노산 잔기를 함유하는 16.3 kDa 단백질일 수 있다:
Figure pct00007
적합한 CD40L (기능적 단편 포함)은 또한, CD40L 폴리펩티드 (예를 들어, 완전한 길이, 기능적 단편 등)를 코딩하는 핵산 (예를 들어, DNA 및/또는 mRNA)으로서 제공될 수 있다.
CD40L이 사용되는 경우, 이는 APC, 예를 들어, DC의 부하를 달성하기 위한 임의의 편리한 농도로 사용될 수 있다. 예를 들어, 일부 경우에, CD40L은 350 ng/ml 내지 650 ng/ml의 범위 (예를 들어, 400 ng/ml 내지 600 ng/ml, 425 ng/ml 내지 575 ng/ml, 450 ng/ml 내지 550 ng/ml, 475 ng/ml 내지 525 ng/ml, 또는 500 ng/ml)의 농도로 사용된다.
CD40 효능제, 및 CD40 효능제의 비-제한적 예에 관한 더 많은 정보를 위하여, 문헌 ([Khong et al., Int Rev Immunol. 2012 Aug;31(4):246-66]; [Khong et al., J Immunother. 2013 Sep;36(7):365-72]; [Rycyzyn et al., Hybridoma (Larchmt). 2008 Feb;27(1):25-30]; [Khalil et al., Update Cancer Ther. 2007 Jun 1;2(2):61-65]; 및 미국 특허 출원 20130024956; 20120225014; 및 20100098694; 이들 모두는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다)을 참조할 수 있다.
임의의 편리한 염증 유발성 시토카인, 또는 염증 유발성 시토카인의 유도인자를 사용할 수 있다. 적합한 염증 유발성 시토카인의 예는 다음을 포함하지만, 그에 제한되지 않는다: 종양 괴사 인자 [TNF; 종양 괴사 인자 알파 (TNFα)로서 공지되기도 함]; 인터루킨 (IL) 1 (IL-1) (예를 들어, IL-1α, IL-1β); 및 IL-19.
예를 들어, 인간 종양 괴사 인자 (TNF, TNFα)는 다음 단백질 서열:
MSTESMIRDVELAEEALPKKTGGPQGSRRCLFLSLFSFLIVAGATTLFCLLHFGVIGPQREEFPRDLSLISPLAQAVRSSSRTPSDKPVAHVVANPQAEGQLQWLNRRANALLANGVELRDNQLVVPSEGLYLIYSQVLFKGQGCPSTHVLLTHTISRIAVSYQTKVNLLSAIKSPCQRETPEGAEAKPWYEPIYLGGVFQLEKGDRLSAEINRPDYLDFAESGQVYFGIIAL (SEQ ID NO: 5)을 갖는 폴리펩티드인데, 상기 단백질 서열은 다음 cDNA 서열의 상응하는 mRNA에 의해 코딩된다 (개방 판독 프레임에 밑줄이 그어져 있다):
Figure pct00008
TNFα가 사용되는 경우, 이는 APC, 예를 들어, DC의 부하를 달성하기 위한 임의의 편리한 농도로 사용될 수 있다. 예를 들어, 일부 경우에, TNFα는 20 ng/ml 내지 80 ng/ml의 범위 (예를 들어, 25 ng/ml 내지 75 ng/ml, 30 ng/ml 내지 70 ng/ml, 35 ng/ml 내지 65 ng/ml, 40 ng/ml 내지 60 ng/ml, 45 ng/ml 내지 55 ng/ml, 47.5 ng/ml 내지 52.5 ng/ml, 또는 50 ng/ml)의 농도로 사용된다.
또 다른 예로서, 인간 IL-1α는 다음 단백질 서열:
MAKVPDMFEDLKNCYSENEEDSSSIDHLSLNQKSFYHVSYGPLHEGCMDQSVSLSISETSKTSKLTFKESMVVVATNGKVLKKRRLSLSQSITDDDLEAIANDSEEEIIKPRSAPFSFLSNVKYNFMRIIKYEFILNDALNQSIIRANDQYLTAAALHNLDEAVKFDMGAYKSSKDDAKITVILRISKTQLYVTAQDEDQPVLLKEMPEIPKTITGSETNLLFFWETHGTKNYFTSVAHPNLFIATKQDYWVCLAGGPPSITDFQILENQA (SEQ ID NO: 7)을 갖는 폴리펩티드인데, 상기 단백질 서열은 다음 cDNA 서열의 상응하는 mRNA에 의해 코딩된다 (개방 판독 프레임에 밑줄이 그어져 있다):
Figure pct00009
Figure pct00010
또 다른 예로서, 인간 IL-1β는 다음 단백질 서열:
MAEVPELASEMMAYYSGNEDDLFFEADGPKQMKCSFQDLDLCPLDGGIQLRISDHHYSKGFRQAASVVVAMDKLRKMLVPCPQTFQENDLSTFFPFIFEEEPIFFDTWDNEAYVHDAPVRSLNCTLRDSQQKSLVMSGPYELKALHLQGQDMEQQVVFSMSFVQGEESNDKIPVALGLKEKNLYLSCVLKDDKPTLQLESVDPKNYPKKKMEKRFVFNKIEINNKLEFESAQFPNWYISTSQAENMPVFLGGTKGGQDITDFTMQFVSS (SEQ ID NO: 9)를 갖는 폴리펩티드인데, 상기 단백질 서열은 다음 cDNA 서열의 상응하는 mRNA에 의해 코딩된다 (개방 판독 프레임에 밑줄이 그어져 있다):
Figure pct00011
또 다른 예로서, 인간 IL-19 (이소형 1)는 다음 단백질 서열:
MCTEGAFPHRSACSLPLTHVHTHIHVCVPVLWGSVPRGMKLQCVSLWLLGTILILCSVDNHGLRRCLISTDMHHIEESFQEIKRAIQAKDTFPNVTILSTLETLQIIKPLDVCCVTKNLLAFYVDRVFKDHQEPNPKILRKISSIANSFLYMQKTLRQCQEQRQCHCRQEATNATRVIHDNYDQLEVHAAAIKSLGELDVFLAWINKNHEVMFSA (SEQ ID NO: 11)을 갖는 폴리펩티드인데, 상기 단백질 서열은 다음 cDNA 서열의 상응하는 mRNA에 의해 코딩된다 (개방 판독 프레임에 밑줄이 그어져 있다):
Figure pct00012
또 다른 예로서, 인간 IL-19 (이소형 2)는 다음 단백질 서열:
Figure pct00013
을 갖는 폴리펩티드인데, 상기 단백질 서열은 다음 cDNA 서열의 상응하는 mRNA에 의해 코딩된다 (개방 판독 프레임에 밑줄이 그어져 있다):
Figure pct00014
적합한 CD40 효능제 [예를 들어, CD40L; 효능작용 항-CD40 항체 (예를 들어, FGK4.5, 바이오엑스셀(BioXcell)) 등] 및/또는 염증 유발성 시토카인 [예를 들어, TNFα, IL-1α, IL-1β, IL-19, 인터페론 감마 (IFNγ) 등]은 또한, 그의 기능적 단편일 수 있다 (즉, 상기 단백질이 완전한 길이의 폴리펩티드일 필요는 없다). 적합한 CD40 효능제 (예를 들어, CD40L, 효능작용 항-CD40 항체 등) (또는 그의 기능적 단편) 및/또는 염증 유발성 시토카인 [예를 들어, TNFα, IL-1α, IL-1β, IL-19, 인터페론 감마 (IFNγ) 등] (또는 그의 기능적 단편)은 또한, 폴리펩티드 (예를 들어, 완전한 길이, 기능적 단편 등)를 코딩하는 핵산 (예를 들어, DNA 및/또는 mRNA)으로서 제공될 수 있다.
임의의 편리한 톨-유사 수용체 효능제를 사용할 수 있다. 적합한 톨-유사 수용체 효능제 (TLR)의 예는 다음을 포함하지만, 그에 제한되지 않는다: CpG 올리고데옥시뉴클레오티드 (CpG ODN)(TLR-9 효능제); 자연 톨-유사 수용체 리간드; 박테리아 LPS 및 그의 유도체, 박테리아 세포벽의 구성분 (예를 들어, 리포테이코산), 박테리아 플라겔린, 미생물 DNA, 미생물 단일 가닥 RNA, 및 바이러스 이중 가닥 RNA를 포함한 (이에 제한되지 않는다) 보존된 미생물 생성물; 폴리이노신산:폴리시티딜산 (통상적으로 "폴리 I:C"로 약칭됨)(TLR-3 효능제), 열-쇼크 단백질 (예를 들어, HSP60, HSP70); 요산; 계면활성제 단백질 A; 비-히스톤 염색질-결합성 단백질 고 이동도 군 박스 1 (HMGB1); Ca2+- 및 Zn2+-결합성 단백질 S100A9; 세포외 매트릭스의 구성분 및 붕괴 생성물; 및 미토콘드리아 DNA (mtDNA). 톨-유사 수용체 효능제, 및 각종 톨-유사 수용체 효능제의 예에 관한 더 많은 정보는 문헌 ([Vacchelli et al., Oncoimmunology. 2013 Aug 1;2(8):e25238. Epub 2013 Jun 10]; 및 미국 특허 출원 20130165455, 및 20130084307; 이들 모두는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다)에서 찾을 수 있다. CpG 올리고데옥시뉴클레오티드 (CpG ODN)는 CpG 모티프 (예를 들어, TLR-9와 결합하는 것)를 포함하는 뉴클레오티드이다. 임의의 편리한 CpG ODN을 사용할 수 있다.
임의의 편리한 인돌아민 2,3-디옥시게나제 (IDO) 억제제를 사용할 수 있다. 적합한 IDO 억제제의 예는 다음을 포함하지만, 그에 제한되지 않는다: 1-메틸-DL-트립토판 (1MT); 메틸-티오히단토인-트립토판 (MTH-Trp); CAY10581 ((±)3,4-디히드로-3-히드록시-2,2-디메틸-4-[(페닐메틸)아미노]-2H-나프토[2,3-β]피란-5,10-디온); 아눌린(annulin) B; 및 항-IDO 항체; 노르하르만(norharmane) (9H-피리도[3,4-b]인돌) 등. IDO 억제제, 및 IDO 억제제의 예에 관한 정보는, 예를 들어 미국 특허 출원 20130289083, 20130123246, 및 20120058079 (이들 모두는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다)에서 찾을 수 있다.
체크포인트 분자 (예를 들어, CTLA-4)를 중화시키는 임의의 편리한 화합물 (예를 들어, 항체)를 사용할 수 있다 (즉, 체크포인트 분자 중화 화합물). 예시되는 항체는 항-CTLA-4 항체 (예를 들어, 이필리무맙)이다. 체크포인트 분자는 다음을 포함하지만, 그에 제한될 필요는 없다: CTLA-4 (세포독성 T 림프구 항원-4), PD-1 (CD279, 프로그램된 사멸-1, PDCD1), LAG-3 (림프구 활성화 유전자-3), PD-L1 (CD274), GITR (TNFRSF18, CD357), OX40 (CD134, TNFRSF4), 및 TIM-3 (T 세포 면역글로불린 및 뮤신 단백질-3). 따라서, 상기 체크포인트 분자 중 임의의 것에 대항한 항체를 APC 자극제 (예를 들어, 수지상 세포 자극제)로서 사용할 수 있다. 일부 경우에, 이러한 APC 자극제는 체크포인트 분자를 중화시키는 작용제 (예를 들어, 항체)가 아니다.
생체 내에서 APC, 예를 들어, DC를 APC 자극성 조성물, 예를 들어, 수지상 세포 자극성 조성물과 접촉시키는 것은 APC 자극성 조성물, 예를 들어, 수지상 세포 자극성 조성물을 특정 개체 내로 도입하는 것 (예를 들어, 전신 또는 국소적으로 특정 개체에 투여하는 것)을 포함할 수 있다. APC, 예를 들어, DC를 APC 자극성 조성물, 예를 들어, 수지상 세포 자극성 조성물과 접촉시키는 것은 또한, 시험관 내에서 수행할 수 있다.
APC, 예를 들어, DC를 APC 자극성 조성물, 예를 들어, 수지상 세포 자극성 조성물과 접촉시키는 경우, 이러한 접촉은 APC, 예를 들어, DC에 의한 항원의 흡수를 자극 (이로써, 부하된 APC, 예를 들어, DC가 생성된다)하기에 충분한 기간 동안 이루어질 수 있다. 일부 경우에, APC, 예를 들어, DC를 APC 자극성 조성물, 예를 들어, 수지상 세포 자극성 조성물과 접촉시키는 경우, 이러한 접촉은 APC, 예를 들어, DC에 의한 항원의 추가 흡수를 자극 (이로써, 활성화된 APC, 예를 들어, DC, 또는 미리-활성화된 APC, 예를 들어, DC가 생성된다)하기에 충분한 기간 동안 이루어질 수 있다. 일부 경우에, APC, 예를 들어, DC는 2시간 내지 48시간의 범위 (예를 들어, 6시간 내지 36시간, 12시간 내지 36시간, 18시간 내지 30시간, 20시간 내지 30시간, 22시간 내지 28시간, 22시간 내지 26시간, 23시간 내지 25시간, 또는 24시간)의 기간 동안, APC 자극성 조성물, 예를 들어, 수지상 세포 자극성 조성물과 접촉시킨다.
일부 경우에, APC, 예를 들어, DC는 특정 대상 표적 항원과 접촉시키기에 앞서 (예를 들어, 특정 대상 표적 항원의 부재 하에) 및/또는 특정 대상 항체 조성물과 접촉시키기에 앞서 (예를 들어, 특정 대상 항체 조성물의 부재 하에), APC 자극성 조성물, 예를 들어, 수지상 세포 자극성 조성물과 접촉시킨다. 예를 들어, 일부 경우에, APC, 예를 들어, DC는 특정 대상 표적 항원 및/또는 특정 대상 항체 조성물과 접촉시키기에 앞서 2시간 내지 48시간의 범위 (예를 들어, 6시간 내지 36시간, 12시간 내지 36시간, 18시간 내지 30시간, 20시간 내지 30시간, 22시간 내지 28시간, 22시간 내지 26시간, 23시간 내지 25시간, 또는 24시간)의 기간 동안, APC 자극성 조성물, 예를 들어, 수지상 세포 자극성 조성물과 접촉시킨다. 달리 언급하면, 일부 경우에, APC, 예를 들어, DC는 특정 대상 표적 항원 및/또는 특정 대상 항체 조성물의 부재 하에 2시간 내지 48시간의 범위 (예를 들어, 6시간 내지 36시간, 12시간 내지 36시간, 18시간 내지 30시간, 20시간 내지 30시간, 22시간 내지 28시간, 22시간 내지 26시간, 23시간 내지 25시간, 또는 24시간)의 기간 동안, APC 자극성 조성물, 예를 들어, 수지상 세포 자극성 조성물과 접촉시킨다.
하나의 예시적 예로서, 일부 경우에, APC 자극성 조성물, 예를 들어, 수지상 세포 자극성 조성물은 특정 대상 항체 조성물을 투여하기 이전에, 특정 개체 내로 도입 (즉, 투여)하므로, APC 자극성 조성물, 예를 들어, 수지상 세포 자극성 조성물은 특정 대상 항체 조성물의 부재 하에 상기 개체 내로 도입된다. 일부 경우에, APC 자극성 조성물, 예를 들어, 수지상 세포 자극성 조성물은 특정 대상 항체 조성물을 투여한 후에, 특정 개체 내로 도입 (즉, 투여)된다. 일부 경우에, APC 자극성 조성물, 예를 들어, 수지상 세포 자극성 조성물은 특정 대상 항체 조성물과 함께 특정 개체 내로 도입 (즉, 투여)된다 (예를 들어, 동시에 투여되거나, 동일한 조성물의 일부로서 투여된다). 일부 경우에, APC, 예를 들어, DC는 표적 항원의 존재하에 (예를 들어, 표적 항원과 또한 접촉하면서) APC 자극성 조성물, 예를 들어, 수지상 세포 자극성 조성물과 접촉시킨다. 일부 경우 (예를 들어, APC, 예를 들어, DC가 BMDC인 경우)에, APC 자극성 조성물, 예를 들어, 수지상 세포 자극성 조성물은 (생체내 또는 시험관내 방법에 대해) 사용되지 않는다. 일부 경우에, 골수로부터 내인성 APC, 예를 들어, DC의 생성 및/또는 방출을 야기시키는 작용제 (예를 들어, Flt-3)를 특정 대상 항체 조성물을 투여하기 이전, 투여와 동시에, 또는 투여 후에 특정 개체에게 투여한다.
표적 항원. 본원에는 APC, 예를 들어, DC를 표적 항원과 접촉시키는 단계; 및 이러한 APC, 예를 들어, DC에 의한 상기 항원의 후속 흡수 (예를 들어, 포식작용) 단계를 포함하는 방법이 제공된다. 일부 경우 (예를 들어, 항체 조성물이 개체에게 투여되는 경우)에, APC, 예를 들어, DC는 생체 내에서 표적 항원과 접촉시킨다. 예를 들어, 이러한 표적 항원 (예를 들어, 암세포, 종양, 암세포 등에 의해 발현된 단백질, 탄수화물 또는 지질)이 상기 개체에 존재하고, APC, 예를 들어, DC가 또한 상기 개체에 존재하며, 상기 방법은 표적 항원의 흡수를 촉진시키기 위하여 항체 조성물 (다음에 보다 상세히 기재되는 바와 같음)을 투여하는 것을 포함한다. 일부 이러한 경우에, 상기 방법은 또한, 상기 개체의 APC, 예를 들어, DC를 활성화시키는 처치를 상기 개체에게 투여하는 것을 포함한다 (상기 논의된 바와 같음).
일부 실시양태에서, APC, 예를 들어, DC는 시험관 내에서 표적 항원과 접촉시킨다. 일부 이러한 경우에, APC, 예를 들어, DC는 상기 개체로부터 단리되거나 또는 APC, 예를 들어, DC는 상기 개체의 세포로부터 유래된다 (예를 들어, 상기 개체의 단리된 단구로부터 유래된다). 어느 한 경우에, APC, 예를 들어, DC는 상기 개체에 대해 자가인 것으로 간주된다. APC, 예를 들어, DC는 시험관 내에서 표적 항원 및 특정 대상 항체 조성물과 접촉시킨다.
표적 항원은 APC, 예를 들어, DC에 의해 흡수될 임의의 항원일 수 있다. 이러한 항원이 단백질인 경우, APC, 예를 들어, DC는 이를 프로세싱한 다음, 연속해서 특정 펩티드 성분을 T 세포에 제시할 것이다. 일부 경우에, 표적 항원은 폴리펩티드, 단백질 복합체, 폴리펩티드들의 혼합물 등일 수 있다. 일부 경우에, 표적 항원은 세포 (예를 들어, 상기 개체로부터의 세포)이다. 예를 들어, 일부 경우에, APC, 예를 들어, DC를 접촉시키는 것은 자가 APC, 예를 들어, DC를 세포 [예를 들어, 상기 개체로부터의 암세포, 예를 들어, 종양으로부터의 세포(들)]와 접촉시키는 것을 포함한다. 일부 경우에, 표적 항원은 복합체 혼합물 (예를 들어, 세포성 용해물, 혈장 막 단백질의 컬렉션 등)에 존재한다. 따라서, 일부 실시양태에서, 표적 항원은 세포성 용해물에 존재한다. 일부 이러한 경우에, APC, 예를 들어, DC를 접촉시키는 것은 APC, 예를 들어, DC를 상기 개체의 암세포로부터의 용해물 (즉, 암세포 세포성 용해물, 혈장 막 단백질이 풍부한 용해물, 혈장 막 단백질을 함유하는 용해물 등)과 접촉시키는 것을 포함할 수 있다. 표적 항원의 공급원 (예를 들어, 세포성 용해물의 공급원)일 수 있거나 또는 표적 항원일 수 있는, 상기 개체의 암세포는 상기 개체의 임의의 암세포 [예를 들어, 원발성 및/또는 전이성 종양으로부터의 세포; 혈액으로부터의 암성 세포; 림프절 세포; 예를 들어, 폐암 환자로부터의 흉막 삼출액 (예를 들어, 악성 흉막 삼출액)으로부터의 세포; 예를 들어, 난소암 환자로부터의 복막 삼출액 (예를 들어, 악성 복막 삼출액)으로부터의 세포; 균상 식육종 환자의 관련 피부 등]일 수 있다.
표적 항원은 종양 특이적 또는 종양 연관 항원 [예를 들어, 전체 종양 또는 암세포, 종양 세포 용해물, 종양 세포 막 제제 (예를 들어, 막 분획), 종양 세포 혈장 막 제제 (예를 들어, 혈장 막 분획), 종양으로부터 단리되거나 또는 부분적으로 단리된 항원, 융합 단백질, 리포솜 등], 바이러스 항원을 포함하는 바이러스 입자 또는 기타 제제, 및 임의의 다른 항원 또는 항원의 단편, 예를 들어 펩티드 또는 폴리펩티드 항원일 수 있다. 상기 항원은 또한, 박테리아 세포, 박테리아 용해물, 세포성 용해물로부터의 막 분획, 또는 임의의 다른 공급원일 수 있다. 상기 항원은 재조합적으로 발현 또는 생성될 수 있거나, 또는 심지어 화학적으로 합성될 수 있다. 재조합 항원은 또한, 숙주 세포 (예를 들어, 박테리아, 효모, 곤충, 척추동물 또는 포유류 세포)의 표면 상에 발현될 수 있거나 (예를 들어, 혈장 막 상에 발현됨), 용해물에 존재할 수 있거나, 또는 이러한 용해물로부터 정제될 수 있다. 또 다른 한편으론, 상기 항원은 종양 세포로부터 정제 또는 증폭되는, 리보핵산 (RNA) 또는 데옥시리보핵산 (DNA)일 수 있는 핵산에 의해 코딩될 수 있다.
표적 항원은 특정 대상체로부터의 샘플 내에 존재할 수 있다. 예를 들어, 특정 대상체에서 과증식성 또는 기타 병태로부터의 조직 샘플을 항원의 공급원으로서 사용할 수 있다. 이러한 샘플은, 예를 들어 생검에 의해 또는 외과적 절제에 의해 수득될 수 있다. 상기 항원은 용해물로서 또는 단리된 제제로서 사용될 수 있다. 또 다른 한편으론, 특정 대상체 (예를 들어, 암 환자)로부터의 세포의 막 제제, 또는 정립된 세포주가 또한, 항원 또는 항원의 공급원 또는 항원을 코딩하는 핵산으로서 사용될 수 있다.
일부 실시양태에서, 특정 대상 항체 조성물의 항체와 결합하는 표적 항원은 APC, 예를 들어, DC가 T 세포에 후속으로 제시하는 항원이 아니다.
항체 조성물. 특정 대상 항체 조성물은 표적 항원과 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 동종이계 IgG 항체를 포함할 수 있다. 일부 경우에, 표적 항원은 체크포인트 분자가 아니다. 용어 "동종이계 항체" 또는 "동종항체"는 해당 개체 (예를 들어, 종양을 갖고 있으면서 치료하고자 하는 개체)로부터 유래되지 않지만, 동일한 종으로부터 유래되거나, 또는 상이한 종으로부터 유래되지만, 이종-항체 (예를 들어, 비-자기)로서 인식되는 것을 저하, 경감 또는 회피하도록 조작시킨 항체를 지칭하기 위해 본원에 사용된다. 예를 들어, "동종이계 항체"는 인간화 또는 초인간화 항체일 수 있다.
인간 개체의 암세포를, 그 동일한 사람에 의해 생성되지 않은 항체 (예를 들어, 이러한 항체는 제2의 인간 개체에 의해 생성되었거나, 이 항체는 또 다른 종, 예컨대 마우스에 의해 생성되었거나, 이 항체는 또 다른 종에 의해 생성된 인간화 항체이다)와 접촉시키는 경우에는, 상기 항체가 동종이계 (제1의 개체를 기준으로 함)인 것으로 간주된다. 마찬가지로, 제1의 인간 개체로부터의 APC, 예를 들어, DC를 동종이계 항체 조성물 (즉, 적어도 하나의 동종이계 항체를 포함하는 조성물)의 존재하에 항원과 접촉시키는 경우에는, 이러한 동종이계 항체가 인간 항체 (예를 들어, 인간화 항체, 인간에 의해 생성된 항체 등)일 수 있지만, 상기 동종이계 항체와 APC, 예를 들어, DC는 상이한 개체로부터 유래될 수 있다 [예를 들어, 동종이계 항체는 제2의 인간 개체로부터 유래될 수 있거나; 동종이계 항체는 또 다른 종으로부터의 항체 (이 항체는 인간화된다)일 수 있다]. 일부 실시양태에서, APC (예를 들어, DC)는 본원에 기재된 하나 이상의 방법에 의해 암 치료를 추구하거나 또는 이러한 암 치료를 진행하는 개체에 대해 내인성이다. 인간 항원 (예를 들어, 암-특이적 항원, 암세포 내에 및/또는 암세포 상에 풍부한 항원 등)을 인식하는 인간화 마우스 모노클로날 항체가 본원에 사용된 바와 같은 "동종항체" (동종이계 항체)인 것으로 간주된다. 예를 들어, 인간화 모노클로날 항체를 인간 개체에게 투여하거나, 또는 이러한 항체를 암세포와 접촉시키는 경우, 상기 인간화 모노클로날 항체는 동종이계 항체인데, 이는 상기 항체가 인간이긴 하지만 (인간화), 이러한 인간화 모노클로날 항체가 그것이 투여되는 개체와 동일한 개체로부터 유래되지 않기 때문이다 (상기 인간화 모노클로날 항체는 암세포가 유래되는 개체와 동일한 개체로부터 유래되지 않는다). 마찬가지로, 마우스에 의해 생성되는 (예를 들어, 항체를 생성시키는 데 책임이 있는 마우스 내의 게놈 유전자 자리를 인간화시키는 게놈 조작을 통하여 생성됨) 완전한 인간 항체가 또한, 동종이계 항체인 것으로 간주될 것이다.
일부 경우에, 동종이계 항체는 비-암 항원과 유의적으로 결합하지 않는다 [예를 들어, 동종이계 항체는 표적 암 항원보다 적어도 10; 100; 1,000; 10,000; 100,000; 또는 1,000,000배 더 낮은 친화도 (더 높은 Kd)로 하나 이상의 비-암 항원과 결합한다]. 일부 경우에, 동종이계 항체가 결합하는 표적 암 항원은 암세포 상에 풍부하다. 예를 들어, 표적 암 항원은 상응하는 비-암세포 보다 적어도 2, 5, 10; 100; 1,000; 10,000; 100,000; 또는 1,000,000배 더 높은 수준으로 암세포의 표면 상에 존재할 수 있다. 일부 경우에, 상응하는 비-암세포는 과증식성이 아니거나 그 밖의 암성이 아닌 동일한 조직 또는 기원의 세포이다.
일부 경우에, 동종이계 항체는 암세포의 표면 상에 유의적이거나 또는 검출 가능한 존재를 갖는 항원과 결합한다. 예를 들어, 동종이계 항체는 암세포의 표면 상에 적어도 10; 100; 1,000; 10,000; 100,000; 1,000,000; 2.5 x 106개; 5 x 106개; 또는 1 x 107개 또는 그 초과의 카피의 양으로 존재하는 표적 항원과 결합할 수 있다.
일부 경우에, 동종이계 항체는 비-암세포 상의 상응하는 항원 보다 더 높은 친화도로 암세포 상의 항원과 결합한다. 예를 들어, 동종이계 항체는 비-암세포 상의 상응하는 야생형 항원의 인식과 비교해서, 암세포 상에서 발견되는 다형성을 함유하는 항원을 우선적으로 인식할 수 있다. 일부 경우에, 동종이계 항체는 비-암세포보다 더 큰 결합력으로 암세포와 결합한다. 예를 들어, 암세포는 보다 고밀도의 항원을 발현하므로, 이러한 암세포에 대한 더 높은 친화 결합성의 다가 항체가 제공될 수 있다.
또한, 본원에 사용된 바와 같은 용어 "동종이계 항체" 또는 "동종항체"는 달리 명백히 언급되지 않는 한 IgG 항체를 지칭한다. 따라서, "동종이계 항체" 및 "동종항체"는 또한, 본원에서 "동종이계 IgG 항체", "allo-IgG-항체", 또는 "allo-IgG-Ab"로서 지칭된다.
일부 경우에, 혈청이 동종이계 IgG 항체의 공급원으로서 사용되는데, 이러한 경우에는 혈청이 제2의 개체 (치료받는 개체 이외의 개체)로부터 유래될 수 있다. 따라서, 일부 경우에, 폴리클로날 IgG 항체는 혈청 (예를 들어, 제2의 개체로부터의 혈청)으로부터 유래된다. 일부 경우에, 복수 개의 결합 특이성을 지닌 폴리클로날 동종이계 IgG 항체를 갖는 항체 조성물은 2명 이상의 개체 (3명 이상의 개체, 4명 이상의 개체, 5명 이상의 개체, 6명 이상의 개체, 7명 이상의 개체, 8명 이상의 개체, 9명 이상의 개체, 10명 이상의 개체 등)로부터 풀링되는 폴리클로날 동종이계 IgG 항체를 포함한다. 일부 경우에, 풀링된 혈청이 동종항체의 공급원으로서 사용되는데, 이러한 경우에는 혈청 (예를 들어, 풀링된 혈청)이 임의의 수의 개체 (이들 중 누구도 제1의 개체가 아니다)로부터 유래될 수 있다 (예를 들어, 상기 혈청은 2명 이상의 개체, 3명 이상의 개체, 4명 이상의 개체, 5명 이상의 개체, 6명 이상의 개체, 7명 이상의 개체, 8명 이상의 개체, 9명 이상의 개체, 10명 이상의 개체 등으로부터 풀링될 수 있다). 따라서, 2명 이상의 개체로부터 항체를 풀링하기 위해, 각 개체로부터의 항체, 또는 2명 이상의 개체로부터의 혈청의 서브-풀로부터의 항체를, 풀링에 앞서 단리/정제할 수 있다. 다른 한편으로는, 항체 단리/정제에 앞서, 혈청을 풀링할 수 있다. 일부 경우에, 혈청 (예를 들어, 풀링된 혈청)을 사용할 수 있다. 일부 경우에, 상기 항체를 사용하기에 앞서 혈청으로부터 단리/정제한다. 일부 경우에, 특정 대상 동종이계 항체 조성물은 2개 이상 (예를 들어, 3개 이상, 4개 이상, 5개 이상, 6개 이상, 7개 이상, 8개 이상, 9개 이상, 10개 이상, 15개 이상, 20개 이상, 30개 이상, 40개 이상, 50개 이상, 100개 이상, 200개 이상, 500개 이상, 1000개 이상 등)의 동종이계 IgG 항체를 포함한다. 일부 경우에, 특정 대상 동종이계 항체 조성물의 동종이계 IgG 항체 중 적어도 하나의 표적 항원은 공지되어 있지 않다.
일부 경우에, 동종이계 항체는 규정된 하위부류 (예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4)의 모노클로날 항체이다. 일부 경우에, 동종이계 항체의 혼합물이 본 발명의 방법, 조성물 또는 키트에 활용된다. 이러한 경우에, 동종이계 항체는 규정된 하위부류로부터 유래될 수 있거나, 또는 상이한 하위부류의 혼합물일 수 있다. 예를 들어, 동종이계 항체는 IgG2 항체일 수 있다. 상이한 상대적 분율의, 상이한 하위부류의 각종 조합물은 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 용이하게 수득될 수 있다. 일부 경우에, 특이적 하위부류, 또는 상이한 하위부류의 특이적 혼합물은 암 치료 또는 종양 크기 감소에 특히 유효할 수 있다. 이러한 하위부류는, 예를 들어 실시예 4에서 입증된 바와 같이, 암 치료 효능을 알아보기 위하여 각종 하위부류 및 그의 혼합물을 검정함으로써 용이하게 확인될 수 있다.
일부 경우에, 특정 대상 동종이계 항체 조성물의 동종이계 IgG 항체 중 적어도 하나의 표적 항원은 공지되어 있다. 예를 들어, 일부 경우에, 하나 이상의 공지된 항체가 특정 대상 항체 조성물에 포함된다. 예를 들어, 일부 경우에, 특정 대상 동종이계 항체는 특별한 세포 상에/내에 풍부한 것으로 공지되어 있고/있거나 특별한 병태를 갖는 환자에게 풍부한 것으로 공지되어 있는 표적을 표적으로 하는 (이러한 표적과 특이적으로 결합하는) 항체이다. 예를 들어, 일부 경우에 개체는 암이 있고, 해당 암은 상승된 수준의 특별한 항원 (예를 들어, 종양-특이적 항원, 암-특이적 항원, 종양에 풍부한 항원, 암에 풍부한 항원 등)을 나타내는 것으로 공지되어 있다. 예시 예로서, 적합한 상기 항체는 다음을 포함할 수 있다: 동종이계 항-gp75 항체, 동종이계 항-MHC 부류 I 항체, 동종이계 항-CD20 항체, 동종이계 항-Her2 항체 [예를 들어, 트라스투주맙(trastuzumab), 헤르셉틴(Herceptin)] 등. 따라서, 일부 경우에, 특정 대상 동종이계 항체는 암세포에 의해 발현된 임의의 항원일 수 있는 (즉, 다른 세포와 비교해서 암세포에 풍부한 항원 및 암세포에 대해 독특한 항원 등일 필요는 없지만, 이러한 항원일 수 있는) 특별한 항원과 특이적으로 결합하는 항체 (예를 들어, 상기 개체의 암세포의 항원과 특이적으로 결합하는 동종이계 IgG 항체; 암세포의 항원과 특이적으로 결합하는 모노클로날 항체, 예컨대 인간화 모노클로날 항체; 종양에 풍부한 항원, 암에 풍부한 항원, 종양-특이적 항원, 암-특이적 항원과 특이적으로 결합하는 모노클로날 항체, 예컨대 인간화 모노클로날 항체 등)일 수 있다. 일부 경우에, 특정 대상 항체 조성물은 암세포의 항원과 특이적으로 결합하는 동종이계 IgG 항체를 포함한다. 일부 이러한 경우에, 동종이계 IgG 항체는 모노클로날 항체 (예를 들어, 인간화 모노클로날 항체)이다. 일부 경우에, 특정 대상 동종이계 항체 조성물은 표 2에 열거된 단백질 중 임의의 것, 또는 그의 오르소로그 (예를 들어, 인간 오르소로그)를 표적으로 하는 (특이적으로 결합하는) 하나 이상의 항체를 포함한다 (하기 실시예 2 참조). 예를 들어, 특정 대상 동종이계 항체 조성물은 다음 단백질 (또는 그의 오르소로그, 예를 들어 인간 오르소로그) 중 하나 이상을 표적으로 하는 (특이적으로 결합하는) 하나 이상의 항체를 포함할 수 있다 (고유 식별자가 괄호안에 있다): ATP5I (Q06185), OAT (P29758), AIFM1 (Q9Z0X1), AOFA (Q64133), MTDC (P18155), CMC1 (Q8BH59), PREP (Q8K411), YMEL1 (O88967), LPPRC (Q6PB66), LONM (Q8CGK3), ACON (Q99KI0), ODO1 (Q60597), IDHP (P54071), ALDH2 (P47738), ATPB (P56480), AATM (P05202), TMM93 (Q9CQW0), ERGI3 (Q9CQE7), RTN4 (Q99P72), CL041 (Q8BQR4), ERLN2 (Q8BFZ9), TERA (Q01853), DAD1 (P61804), CALX (P35564), CALU (O35887), VAPA (Q9WV55), MOGS (Q80UM7), GANAB (Q8BHN3), ERO1A (Q8R180), UGGG1 (Q6P5E4), P4HA1 (Q60715), HYEP (Q9D379), CALR (P14211), AT2A2 (O55143), PDIA4 (P08003), PDIA1 (P09103), PDIA3 (P27773), PDIA6 (Q922R8), CLH (Q68FD5), PPIB (P24369), TCPG (P80318), MOT4 (P57787), NICA (P57716), BASI (P18572), VAPA (Q9WV55), ENV2 (P11370), VAT1 (Q62465), 4F2 (P10852), ENOA (P17182), ILK (O55222), GPNMB (Q99P91), ENV1 (P10404), ERO1A (Q8R180), CLH (Q68FD5), DSG1A (Q61495), AT1A1 (Q8VDN2), HYOU1 (Q9JKR6), TRAP1 (Q9CQN1), GRP75 (P38647), ENPL (P08113), CH60 (P63038), 및 CH10 (Q64433).
명확하게 하기 위해, 용어 "특이적 결합", "특이적으로 결합하는" 등의 정의에 관해서 상기 논의된 바와 같이, 암세포의 항원 (표적 항원)과 특이적으로 결합하는 특정 대상 동종이계 IgG 항체는 다른 이용 가능한 항원과 비교해서 상기 특별한 항원과 우선적으로 결합한다. 그러나, 이러한 표적 항원은 암세포에 대해 특이적일 필요가 없거나 또는 심지어 다른 세포와 비교해서 암세포에 풍부할 필요가 없다 (예를 들어, 표적 항원은 다른 세포에 의해 발현될 수 있다). 따라서, "암세포의 항원과 특이적으로 결합하는 동종이계 항체"란 표현에서 용어 "특이적으로"는 상기 항체의 특이성을 지칭하는 것이고, 그 특별한 세포 유형 내에서의 항원의 독특함을 지칭하는 것은 아니다. 혼란을 피하기 위해, 일부 경우에, "암세포의 항원과 결합하는 항체"란 표현이 본원에 사용되는데, 이는 암세포의 항원과 결합하는 항체이긴 하지만, 그 항원이 암세포에 대해 특이적일 필요가 없거나 또는 심지어 다른 세포와 비교해서 암세포에 풍부할 필요가 없다는 것을 의미한다.
일부 경우에, 특정 대상 조성물은 2개 이상 (예를 들어, 3개 이상, 4개 이상, 5개 이상, 6개 이상, 7개 이상, 8개 이상, 9개 이상, 10개 이상, 15개 이상, 20개 이상, 30개 이상, 40개 이상, 50개 이상, 100개 이상, 200개 이상, 500개 이상, 1,000개 이상 등)의 동종이계 IgG 항체를 포함하는데, 이러한 항체 중 적어도 2개가 상이한 항원과 특이적으로 결합하고/하거나 상기 항체의 적어도 2개가 동일한 항원의 상이한 에피토프와 특이적으로 결합한다. 일부 이러한 경우에, 2개 이상의 동종이계 IgG 항체 중 적어도 하나는 모노클로날 항체 (예를 들어, 인간화 모노클로날 항체)이다. 일부 이러한 경우에, 2개 이상 중 적어도 2개 (3개 이상 중 적어도 3개, 4개 이상 중 적어도 4개, 5개 이상 중 적어도 5개 등)의 동종이계 IgG 항체는 모노클로날 항체 (예를 들어, 인간화 모노클로날 항체)이다.
일부 경우에, 특정 대상 항체 조성물은 공지되지 않은 결합 특이성 (즉, 공지되지 않은 표적 항원)을 지닌 하나 이상의 항체 및 공지된 결합 특이성 (즉, 공지된 표적 항원)을 지닌 하나 이상의 항체를 갖는다. 예를 들어, 일부 경우에, 특정 대상 항체 조성물은 각각 하나 이상의 암에 풍부할 것으로 공지되어 있는 항원과 결합하는 것으로 공지되는 1개 이상 (예를 들어, 2개 이상, 3개 이상, 4개 이상, 5개 이상, 6개 이상, 10개 이상 등)의 동종이계 항체로 "스파이킹"될 수 있다.
일부 경우에, 특정 대상 동종이계 항체 조성물은 항-gp75 항체, 및 항-MHC 부류 I 항체, 항-HLA 항체, 항-CD20 항체, 및 항-Her2 항체 (예를 들어, 트라스투주맙, 헤르셉틴)으로부터 선택된 하나 이상의 항체를 포함한다. 일부 경우에, 특정 대상 동종이계 항체 조성물은 표 2에 열거된 단백질, 또는 그의 오르소로그 (예를 들어, 인간 오르소로그) 중 하나 이상을 표적으로 하는 (특이적으로 결합하는) 하나 이상의 항체를 포함한다 (하기 실시예 2 참조). 예를 들어, 특정 대상 동종이계 항체 조성물은 다음 단백질 (또는 그의 오르소로그, 예를 들어 인간 오르소로그) 중 하나 이상을 표적으로 하는 (특이적으로 결합하는) 하나 이상의 항체를 포함할 수 있다 (고유 식별자가 괄호안에 있다): ATP5I (Q06185), OAT (P29758), AIFM1 (Q9Z0X1), AOFA (Q64133), MTDC (P18155), CMC1 (Q8BH59), PREP (Q8K411), YMEL1 (O88967), LPPRC (Q6PB66), LONM (Q8CGK3), ACON (Q99KI0), ODO1 (Q60597), IDHP (P54071), ALDH2 (P47738), ATPB (P56480), AATM (P05202), TMM93 (Q9CQW0), ERGI3 (Q9CQE7), RTN4 (Q99P72), CL041 (Q8BQR4), ERLN2 (Q8BFZ9), TERA (Q01853), DAD1 (P61804), CALX (P35564), CALU (O35887), VAPA (Q9WV55), MOGS (Q80UM7), GANAB (Q8BHN3), ERO1A (Q8R180), UGGG1 (Q6P5E4), P4HA1 (Q60715), HYEP (Q9D379), CALR (P14211), AT2A2 (O55143), PDIA4 (P08003), PDIA1 (P09103), PDIA3 (P27773), PDIA6 (Q922R8), CLH (Q68FD5), PPIB (P24369), TCPG (P80318), MOT4 (P57787), NICA (P57716), BASI (P18572), VAPA (Q9WV55), ENV2 (P11370), VAT1 (Q62465), 4F2 (P10852), ENOA (P17182), ILK (O55222), GPNMB (Q99P91), ENV1 (P10404), ERO1A (Q8R180), CLH (Q68FD5), DSG1A (Q61495), AT1A1 (Q8VDN2), HYOU1 (Q9JKR6), TRAP1 (Q9CQN1), GRP75 (P38647), ENPL (P08113), CH60 (P63038), 및 CH10 (Q64433).
일부 경우에, 특정 대상 동종이계 항체 조성물은 혈청 (예를 들어, 상기 언급된 바와 같은, 하나의 개체로부터의 혈청 또는 풀링된 혈청)으로부터의 IgG를 포함한다. 일부 경우에, 특정 대상 동종이계 항체 조성물은 혈청 (예를 들어, 상기 언급된 바와 같은, 하나의 개체로부터의 혈청 또는 풀링된 혈청)으로부터 풍부해진 IgG를 포함한다. 일부 이러한 경우에, 동종이계 항체 (즉, 상기 혈청으로부터의 IgG) 중 일부 (예를 들어, 0% 초과 50% 미만), 절반, 대부분 (50% 초과 100% 미만), 또는 심지어 모두에 대한 표적 항원이 공지되어 있지 않다. 그러나, 상기 조성물 중 적어도 하나의 항체가 상기 방법의 상기 대상 표적 항원을 인식할 가능성은 높은데, 이는 상기 조성물이 광범위한 표적 항원에 대해 특이적인 광범위한 항체를 함유하기 때문이다. 일부 이러한 경우에, 동종이계 IgG 항체 중 적어도 하나에 대한 표적 항원은 공지되어 있지 않다.
특정 대상 항체 조성물이 상이한 결합 특이성을 갖는 (즉, 동일한 표적의 상이한 에피토프와 결합하거나, 상이한 표적 항원과 결합하는) 2개 이상의 항체를 포함하는 경우, 이러한 항체 조성물은 "폴리클로날" 항체 (예를 들어, 복수 개의 결합 특이성을 지닌 폴리클로날 동종이계 IgG 항체)를 갖는 것으로 간주된다. 예를 들어, 2개 이상의 모노클로날 항체 (예를 들어, 이러한 항체 중 적어도 2개는 공통의 표적의 상이한 에피토프와 결합하고/하거나 상기 항체 중 적어도 2개는 상이한 표적 항원과 결합한다)를 갖는 조성물은 폴리클로날 항체 (예를 들어, 복수 개의 결합 특이성을 지닌 폴리클로날 동종이계 IgG 항체)를 갖는 것으로 간주된다. 따라서, "복수 개의 결합 특이성을 지닌 폴리클로날 동종이계 IgG 항체"를 갖는 조성물은 2개 이상의 모노클로날 항체를 갖는 조성물을 포괄한다. 일부 경우에, 복수 개의 결합 특이성을 지닌 폴리클로날 동종이계 IgG 항체를 포함하는 특정 대상 조성물은 2개 이상 (예를 들어, 3개 이상, 4개 이상, 5개 이상, 6개 이상, 7개 이상, 8개 이상, 9개 이상, 10개 이상, 15개 이상, 20개 이상, 30개 이상, 40개 이상, 50개 이상, 100개 이상, 200개 이상, 500개 이상, 1,000개 이상 등)의 모노클로날 항체 (예를 들어, 이러한 항체 중 적어도 2개는 동일한 항원의 상이한 에피토프와 특이적으로 결합하고/하거나 상기 항체 중 적어도 2개는 상이한 항원과 특이적으로 결합한다)를 포함한다.
일부 경우에, 특정 대상 항체 조성물은 APC 자극제, 예를 들어, 수지상 세포 자극제 (상기 언급된 바와 같이, 예를 들어, TLR 효능제, 예를 들어, CpG ODN; 염증 유발성 시토카인; CD40 효능제 등)와 접합되는 동종이계 IgG 항체를 포함한다. 일부 경우에, 특정 대상 항체 조성물은 APC 자극제, 예를 들어, 수지상 세포 자극제 (상기 언급된 바와 같이, 예를 들어, TLR 효능제, 예를 들어, CpG ODN; 염증 유발성 시토카인; CD40 효능제 등)와 접합되는 2개 이상의 항체를 포함한다. 항체가 또 다른 항체와 접합되는 경우 (예를 들어, 특정 대상 동종이계 IgG 항체가 효능작용 항-CD40 항체와 접합되는 경우), 이와 같이 접합된 분자는 이중특이적 항체의 형태일 수 있다. 일부 이러한 경우에, 상기 2개 이상의 항체는 동일한 APC 자극제, 예를 들어, 수지상 세포 자극제와 접합된다. 일부 경우에, 상기 2개 이상의 항체는 상이한 APC 자극제, 예를 들어, 수지상 세포 자극제와 접합된다.
특정 대상 동종이계 항체 조성물은 혈청을 포함할 수 있거나 또는 혈청으로부터 풍부해지고/정제된 (예를 들어, 크로마토그래피를 통하여 수행됨) 항체를 포함할 수 있다. 일부 경우에, 특정 대상 항체 조성물은 그의 IgG 하위부류 (예를 들어, IgG2), 종양-결합 특성, 및/또는 APC-활성화 (예를 들어, DC-활성화) 특성을 근거로 하여 선택된 IgG를 포함한다.
일부 경우에, 동종이계 항체 조성물은 정맥내 면역글로불린 (IVIG) 및/또는 IVIG로부터의 (예를 들어, IVIG로부터 풍부해지거나, 정제되거나, 예를 들어 친화 정제된) 항체를 포함한다. IVIG는 많은 (예를 들어, 종종 1,000명 내지 60,000명 이상) 정상적이고 건강한 혈액 공여자로부터의 혈장으로부터 풀링된 (예를 들어, 일부 경우에 임의의 다른 단백질을 수반하지 않음) IgG (면역글로불린 G)를 함유하는 혈액 생성물이다. IVIG는 시판되고 있다. IVIG는 천연 인간 단량체성 IVIG를 높은 비율(%)로 함유하고, 낮은 IgA 함량을 갖는다. 정맥내 투여되는 경우, IVIG는 몇 가지 질환 상태를 완화시킨다. 따라서, 미국 식품의약국 (FDA)은 IVIG를 다음을 포함한 수많은 질환에 사용하도록 승인하였다: (1) 가와사키병(Kawasaki disease); (2) 면역-매개된 혈소판 감소증; (3) 원발성 면역결핍증; (4) 조혈 줄기 세포 이식 (20세 초과 대상체에 대함); (5) 만성 B-세포 림프구성 백혈병; 및 (6) 소아 HIV 유형 1 감염. 2004년에는, FDA가 신장 이식받는 수용자에 대한 세다스-시나이(Cedars-Sinai) IVIG 프로토콜을 승인하였으므로, 이러한 수용자는 혈액형 (ABO 부적합성) 또는 조직 매치와 상관없이, 임의의 건강한 공여자로부터의 살아있는 공여자 신장을 받을 수 있었다.
동종이계 항체 조성물이 IVIG를 포함하거나 또는 IVIG로부터의 항체를 포함하는 일부 경우에, 이러한 조성물 내의 항체 중 하나 이상이 APC 자극제, 예를 들어, 수지상 세포 자극제 (상기 언급된 바와 같이, 예를 들어, TLR 효능제, 예를 들어, CpG ODN; 염증 유발성 시토카인; CD40 효능제 등)와 접합된다. 동종이계 항체 조성물이 IVIG를 포함하거나 또는 IVIG로부터의 항체를 포함하는 일부 경우에, 이러한 조성물 내의 항체 중 하나 이상이 CD40 효능제 (예를 들어, CD40L, 효능작용 항-CD40 항체 등)와 접합된다. 동종이계 항체 조성물이 IVIG를 포함하거나 또는 IVIG로부터의 항체를 포함하는 일부 경우에, 이러한 조성물 내의 항체 중 하나 이상이 염증 유발성 시토카인 [예를 들어, TNFα, IL-1α, IL-1β, IL-19, 인터페론 감마 (IFNγ) 등] (다음에 언급된 바와 같음)과 접합된다. 동종이계 항체 조성물이 IVIG를 포함하거나 또는 IVIG로부터의 항체를 포함하는 일부 경우에, 이러한 조성물 내의 항체 중 하나 이상이 염증 유발성 시토카인 [예를 들어, TNFα, IL-1α, IL-1β, IL-19, 인터페론 감마 (IFNγ) 등] (다음에 언급된 바와 같음)과 접합되고, 상기 조성물 내의 적어도 하나의 항체가 CD40 효능제 (예를 들어, CD40L, 효능작용 항-CD40 항체 등)와 접합된다. 동종이계 항체 조성물이 IVIG를 포함하거나 또는 IVIG로부터의 항체를 포함하는 일부 경우에, 상기 조성물 내의 적어도 하나의 항체가 염증 유발성 시토카인 [예를 들어, TNFα, IL-1α, IL-1β, IL-19, 인터페론 감마 (IFNγ) 등] (다음에 언급된 바와 같음)과 접합되고; 상기 조성물 내의 적어도 하나의 항체가 CD40 효능제 (예를 들어, CD40L, 효능작용 항-CD40 항체 등)와 접합되며; 상기 조성물 내의 적어도 하나의 항체가 CpG 올리고데옥시뉴클레오티드 (CpG ODN)와 접합된다. 항체가 또 다른 항체와 접합되는 경우 (예를 들어, 특정 대상 동종이계 IgG 항체가 효능작용 항-CD40 항체와 접합되는 경우), 이와 같이 접합된 분자는 이중특이적 항체의 형태일 수 있다. 동종이계 항체 조성물이 IVIG를 포함하거나 또는 IVIG로부터의 항체를 포함하는 일부 경우에, 하나 이상의 접합된 항체 (수지상 세포 자극제와 접합됨)는 상기 항체 조성물을 스파이킹하여 (즉, 조성물 내로 부가되어), 이러한 조성물이 IVIG의 항체, 및 APC 자극제, 예를 들어, 수지상 세포 자극제와 접합되는 하나 이상의 항체를 포함하도록 한다.
IVIG에 관한 더 많은 정보에 대해서는, 미국 특허 출원: 20100150942, 20040101909, 20130177574; 20130108619; 20130011388 (이들 모두는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다)을 참조할 수 있다.
APC, 예를 들어, DC를 접촉시켜, 부하된 APC, 예를 들어, 부하된 DC를 생성시킨다. 일부 실시양태에서, APC, 예를 들어, DC는, 이러한 APC, 예를 들어, DC에 의한 특정 표적 항원의 흡수에 유효한 용량 및 기간 동안, 상기 표적 항원 및 특정 대상 항체 조성물과 접촉시킴으로써, 부하된 APC, 예를 들어, DC를 생성시킨다. 일부 경우에, 표적 항원은 APC, 예를 들어, DC와 접촉시키기에 앞서 (예를 들어, APC, 예를 들어, DC의 부재하에) 항체 조성물과 접촉시킴으로써, 면역 복합체를 생성시킨다. 일부 이러한 경우에, 상기 표적 항원과 항체 조성물은 5분 내지 2시간의 범위 (예를 들어, 5분 내지 90분, 5분 내지 60분, 10분 내지 60분, 10분 내지 50분, 10분 내지 45분, 15분 내지 45분, 20분 내지 40분, 20분 내지 40분, 25분 내지 35분, 또는 30분)의 기간 동안 접촉시킨다.
특정 대상 항체 (또는 특정 대상 항체 조성물)와 특이적으로 결합하는 항원(들)의 실체가 반드시 상기 대상 방법의 결정적 요인은 아니다 (예를 들어, 다음 작동 실시예 참조). 일부 경우에는 대신, 암세포 (예를 들어, 종양, 종양 세포 등)가, APC, 예를 들어, DC가 표적 항원 (예를 들어, 종양의 세포, 암세포 등)을 흡수하기에 충분한 항체와 접촉되는 것이 중요하다. 따라서, 일부 경우에, APC, 예를 들어, DC는 항체 조성물 (예를 들어, 유효량의 항체 조성물)과 접촉시키는데, 상기 항체 (또는 항체들)는 APC, 예를 들어, DC에 의한 표적 항원의 흡수를 자극하기에 충분한 고 농도 (즉, 유효 농도)로 존재한다.
일부 경우에, 상기 표적 항원과 항체 조성물을 접촉시키는데, 동종이계 IgG 항체는 100 ng/ml 내지 100 μg/ml의 범위 (예를 들어, 250 ng/ml 내지 75 μg/ml, 250 ng/ml 내지 50 μg/ml, 250 ng/ml 내지 25 μg/ml, 500 ng/ml 내지 25 μg/ml, 500 ng/ml 내지 15 μg/ml, 500 ng/ml 내지 10 μg/ml, 500 ng/ml 내지 5 μg/ml, 750 ng/ml 내지 3 μg/ml, 750 ng/ml 내지 2 μg/ml, 또는 1 μg/ml)의 항체 농도로 존재한다. 일부 경우 (예를 들어, 표적 항원이 특정 세포인 경우)에, 이러한 표적 항원과 항체 조성물을 접촉시키는데, 동종이계 IgG 항체는 1x105개의 표적 세포 (예를 들어, 상기 개체로부터의 암세포) 당 100 ng/ml 내지 100 μg/ml의 범위 (예를 들어, 250 ng/ml 내지 75 μg/ml, 250 ng/ml 내지 50 μg/ml, 250 ng/ml 내지 25 μg/ml, 500 ng/ml 내지 25 μg/ml, 500 ng/ml 내지 15 μg/ml, 500 ng/ml 내지 10 μg/ml, 500 ng/ml 내지 5 μg/ml, 750 ng/ml 내지 3 μg/ml, 750 ng/ml 내지 2 μg/ml, 또는 1 μg/ml)의 항체 농도로 존재한다.
일부 경우에, 상기 항체 조성물은 1x102개 이상의 표적 세포 (예를 들어, 상기 개체로부터의 암세포) (예를 들어, 1x103개 이상의 세포, 1x104개 이상의 세포, 1x105개 이상의 세포, 또는 1x106개 이상의 세포)와 접촉시킨다. 일부 경우에, 항체 조성물은 1x102개 내지 1x1010개 세포의 범위 (1x102개 내지 1x108개 세포, 1x103개 내지 1x107개 세포, 1x104개 내지 1x106개 세포, 5x104개 내지 5x105개 세포, 또는 1x105개 세포)의 표적 세포 (예를 들어, 상기 개체로부터의 암세포)와 접촉시킨다.
항체 조성물과 표적 항원 (예를 들어, 상기 개체로부터의 세포)을 APC, 예를 들어, DC와 접촉시키기에 앞서 접촉시킴으로써, 면역 복합체를 생성시키는 일부 경우에는, 이러한 면역 복합체를 APC, 예를 들어, DC와 접촉시킬 수 있다. 일부 이러한 경우에, 상기 면역 복합체를 APC, 예를 들어, DC와 접촉시킬 수 있는데, 이러한 면역 복합체의 세포 (항체 조성물과 접촉되었던 개체로부터의 세포)는 무손상인 반면, 다른 경우에서는 면역 복합체를 APC, 예를 들어, DC와 접촉시킬 수 있는데, 이러한 면역 복합체의 세포 (항체 조성물과 접촉되었던 개체로부터의 세포)는 용해되어, 용해물 (즉, 면역 복합체 용해물)을 형성하였다.
표적 항원이 세포이고, 특정 대상 항체 조성물이 APC, 예를 들어, DC와 접촉되기에 앞서 표적 항원 세포와 접촉됨으로써 면역 복합체를 형성하게 될 것이며, 상기 세포가 여전히 무손상인 일부 경우에, APC, 예를 들어, DC는 1x102개 이상의 면역 복합체 세포 (예를 들어, 특정 대상 항체 조성물과 접촉되었던 개체로부터의 암세포) (예를 들어, 1x103개 이상의 세포, 1x104개 이상의 세포, 1x105개 이상의 세포, 또는 1x106개 이상의 세포)와 접촉시킬 수 있다. 표적 항원이 세포이고, 특정 대상 항체 조성물이 APC, 예를 들어, DC와 접촉되기에 앞서 표적 항원 세포와 접촉됨으로써 면역 복합체를 형성하게 될 것이며, 상기 세포가 여전히 무손상인 일부 경우에, APC, 예를 들어, DC는 1x102개 내지 1x1010개 세포의 범위 (1x102개 내지 1x108개 세포, 1x103개 내지 1x107개 세포, 1x104개 내지 1x106개 세포, 5x104개 내지 5x105개 세포, 또는 1x105개 세포)의 수많은 면역 복합체 세포 (예를 들어, 특정 대상 항체 조성물과 접촉되었던 개체로부터의 암세포)와 접촉시킬 수 있다.
표적 항원이 세포이고, 특정 대상 항체 조성물이 APC, 예를 들어, DC와 접촉되기에 앞서 표적 항원 세포와 접촉됨으로써 면역 복합체를 형성하게 될 것이며, 상기 세포가 용해되어 용해물 면역 복합체를 생성시키는 일부 경우에, APC, 예를 들어, DC는 1x102개 이상의 면역 복합체 세포 (예를 들어, 특정 대상 항체 조성물과 접촉되었던 개체로부터의 암세포) (예를 들어, 1x103개 이상의 세포, 1x104개 이상의 세포, 1x105개 이상의 세포, 또는 1x106개 이상의 세포)로부터의 용해물 (예를 들어, 표면 발현된 항원을 갖는 용해물; 미분획된 용해물; 표면 발현된 항원, 즉 혈장 막 발현된 항원이 풍부한 용해물; 용해물의 막 풍부한 분획 등)과 접촉시킬 수 있다. 표적 항원이 세포이고, 특정 대상 항체 조성물이 APC, 예를 들어, DC와 접촉되기에 앞서 표적 항원 세포와 접촉됨으로써 면역 복합체를 형성하게 될 것이며, 상기 세포가 용해되어 용해물 면역 복합체를 생성시키는 일부 경우에, APC, 예를 들어, DC는 1x102개 내지 1x1010개 세포의 범위 (1x102개 내지 1x108개 세포, 1x103개 내지 1x107개 세포, 1x104개 내지 1x106개 세포, 5x104개 내지 5x105개 세포, 또는 1x105개 세포)의 수많은 면역 복합체 세포 (예를 들어, 특정 대상 항체 조성물과 접촉되었던 개체로부터의 암세포)로부터의 용해물과 접촉시킬 수 있다.
일부 실시양태에서, APC, 예를 들어, DC는 표적 항원 및 특정 대상 항체 조성물과 동시에 접촉시킨다. 이러한 경우에, 표적 항원과 항체 조성물을, APC, 예를 들어, DC와 접촉시키기에 앞서 접촉시키는 경우에 대하여 상기 논의된 바와 같은 동일한 농도와 세포 수가 적용된다.
일부 실시양태에서, 동계 IgG (그로부터 표적 항원이 단리/유래되는 바와 동일한 개체로부터 단리된 IgG 항체)를 사용하여 APC, 예를 들어, DC를 부하할 수 있다. 일반적으로, 이와 같이 작동하지는 않을 것인데, 이는 상기 개체가 표적 항원과 결합하는 순환성 항체를 갖고 있지 않는 것으로 생각되기 때문이다. 그러나, 상기 개체로부터의 항체가 표적 항원과 결합하도록 "강제"될 수 있는 경우에는, 그 생성물 (본원에서 여전히 면역 복합체로서 지칭됨)을 사용하여 APC, 예를 들어, DC를 부하할 수 있다. 예를 들어, 일부 경우에, 동계 IgG 항체 (예를 들어, 폴리클로날 동계 IgG 항체를 갖는 조성물)는 표적 항원 (상기 언급됨)과 가교 결합하여 면역 복합체를 생성할 수 있다. 이어서, 이로써 생성된 면역 복합체를 APC, 예를 들어, DC [예를 들어, 동계 APC, 예를 들어, DC, 즉, 그 표적 항원과 항체(들)를 제공한 개체와 동일한 개체로부터의 APC, 예를 들어, DC]와 접촉시켜 APC, 예를 들어, DC를 부하할 수 있다.
일부 경우에, 상기 방법은 APC, 예를 들어, DC가 부하되었다는 사실을 검증하는 단계 (즉, 부하된 APC, 예를 들어, DC의 존재를 검증하는 단계)를 포함한다. APC, 예를 들어, DC가 부하된 APC, 예를 들어, DC 인지를 결정하기 위한 임의의 편리한 방법을 사용할 수 있다. 예를 들어, 일부 경우에, APC, 예를 들어, DC의 형태학 만이, APC, 예를 들어, DC가 부하된다는 지표이다. 일부 경우에, MHCII (예를 들어, HLA-DR), CD40, 및/또는 CD86의 상향 조절이 APC, 예를 들어, DC가 부하된다는 지표이다. 예를 들어, 일부 경우에, MHCII (예를 들어, HLA-DR) 및/또는 CD86의 상향 조절이 DC가 부하된다는 지표이다. 일부 경우에, CD40 및/또는 CD86의 상향 조절이 DC가 부하된다는 지표이다. 예를 들어, CD40과 CD86을 공동-발현하는 DC의 분획 (%) (종종, "% CD40/CD86"으로서 지칭됨)의 증가; DC를, 예를 들어 종양 항원, 항체, 폴리클로날 항체를 포함하는 조성물, 수지상 세포 자극성 조성물, 또는 그의 임의의 조합물과 접촉시킨 후; 접촉하기 이전의 분획에 대한 상대적, 또는 대조군 DC (예를 들어, 상기와 동일한 방식으로 및/또는 상기와 동일한 조성물과 접촉되지 않는 DC)에서의 분획에 대한 상대적인 값이, DC가 부하된다는 지표인 것으로 간주될 수 있다 (하기 실시예 섹션 참조).
T 세포를 부하된 APC, 예를 들어, DC와 접촉시킨다. 일부 실시양태에서, T 세포를 부하된 APC, 예를 들어, DC와 접촉시킨다. 접촉되는 동안, 상기 부하된 APC, 예를 들어, DC는 항원을 T 세포에 제시하여 접촉된 T 세포를 생성시키고, 이와 같이 접촉된 T 세포는 상기 제시된 항원에 대해 특이적인 면역 반응을 발생시킨다. T 세포는 CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, 또는 CD4+ T 세포와 CD8+ T 세포의 조합물일 수 있다.
T 세포를 부하된 APC, 예를 들어, DC와 접촉시키는 것은 시험관내 또는 생체 내에서 이루어질 수 있다. 따라서, "T 세포를 접촉시키는 것"은 시험관내 접촉과 생체내 접촉 둘 다를 포괄한다. 이러한 접촉이 생체내인 경우에는, 부하된 APC, 예를 들어, DC를 상기 개체에게 투여할 수 있는데, 이때 이러한 APC, 예를 들어, DC가 상기 개체의 내인성 T 세포와 접촉하여 면역 반응을 유도시킨다. 따라서, 생체 내에서 수행되는 경우 "특정 개체의 T 세포를 부하된 APC와 접촉시키는" 단계, 예를 들어 "특정 개체의 T 세포를 부하된 DC와 접촉시키는" 단계는 일부 경우에, "특정 개체 내로 부하된 DC를 도입하는" 것으로 언급될 수 있다. 예를 들어, 일부 경우에, 특정 대상 방법은 (a) 시험관 내에서 특정 개체로부터의 APC, 예를 들어, DC를, 이러한 APC, 예를 들어, DC에 의한 특정 표적 항원의 흡수에 유효한 용량 및 기간 동안, (i) 상기 표적 항원 및 (ii) 상기 표적 항원과 특이적으로 결합하는 동종이계 IgG 항체를 포함하는 항체 조성물과 접촉시킴으로써, 부하된 APC, 예를 들어, DC를 생성시키는 단계; 및 (b) 상기 개체 내로 상기 부하된 APC, 예를 들어, DC를 도입하는 단계를 포함한다. APC, 예를 들어, DC는 "세포를 투여하는" 것에 대하여 다음에 기재된 바와 같이, 상기 개체에게 투여할 수 있다.
일부 경우에, 상기 대상 방법은 생체 내에서 수행될 수 있다. 일부 이러한 경우에, 접촉은 생체 내에서이고, 내인성 APC, 예를 들어, DC는 생체 내에서 부하되며, 이때 이와 같이 부하된 APC, 예를 들어, DC는 생체 내에서 T 세포와 접촉된다. 따라서, 상기 방법은 생체내 투여함으로써 (예를 들어, 항체 조성물을 투여하거나; 항체 조성물을, 상기 개체의 APC, 예를 들어, DC를 활성화시키는 처치와 조합하여 투여하는데, 예를 들어 항체 조성물을, APC 자극제, 예를 들어, 수지상 세포 자극제를 포함하는 APC 자극성 조성물, 예를 들어, 수지상 세포 자극성 조성물과 조합하여 투여한다) 수행될 수 있다. 예를 들어, 내인성 APC, 예를 들어, DC (예를 들어, TADC)는 특정 개체에게 항체 조성물 (상기 언급된 바와 같음) (예를 들어, 복수 개의 결합 특이성을 지닌 폴리클로날 동종이계 IgG 항체를 포함하는 조성물)을 투여하고, 상기 개체의 APC, 예를 들어, DC (예를 들어, TADC)를 활성화시키는 처치 (상기 정의된 바와 같음)를 제공함으로써 생체 내에서 부하될 수 있다. 예를 들어, 상기 개체의 수지상 세포를 활성화시키는 처치는 이러한 개체에게 수지상 세포 자극제 [예를 들어, (i) 톨-유사 수용체 (TLR) 효능제; (ii) CD40 효능제와 염증 유발성 시토카인; (iii) 체크포인트 분자 중화 화합물; (iv) 인돌아민 2,3-디옥시게나제 (IDO) 억제제; (v) NFkB 활성화제; (vi) 칼슘 채널을 개방시키는 화합물; (vii) T 세포-관련 동시 자극성 분자; 또는 (viii) 그의 조합물]를 포함하는 수지상 세포 자극성 조성물을 투여하는 것을 포함할 수 있다. 부하시, 이와 같이 부하된 DC는 생체 내에서 내인성 T 세포와 접촉된다.
상기 대상 방법이 생체 내에서 수행되는 일부 실시양태에서, 내인성 APC, 예를 들어, DC (예를 들어, TADC)는, 특정 개체에게 항체 조성물 (상기 언급된 바와 같음) (예를 들어, 복수 개의 결합 특이성을 지닌 폴리클로날 동종이계 IgG 항체를 포함하는 조성물)을 APC 자극제, 예를 들어, 수지상 세포 자극제를 포함하는 APC 자극성 조성물, 예를 들어, 수지상 세포 자극성 조성물과 조합하여 투여함으로써 생체 내에서 부하될 수 있다. 일부 경우에, 내인성 APC, 예를 들어, DC (예를 들어, TADC)는, 특정 개체에게 항체 조성물 (상기 언급된 바와 같음) (예를 들어, 복수 개의 결합 특이성을 지닌 폴리클로날 동종이계 IgG 항체를 포함하는 조성물)을 CD40 효능제 (예를 들어, CD40L)와 조합하여 투여함으로써 생체 내에서 부하될 수 있다. 일부 경우에, 내인성 APC, 예를 들어, DC (예를 들어, TADC)는, 특정 개체에게 항체 조성물 (상기 언급된 바와 같음) (예를 들어, 복수 개의 결합 특이성을 지닌 폴리클로날 동종이계 IgG 항체를 포함하는 조성물)을 CD40 효능제 (예를 들어, CD40L) 및 염증 유발성 시토카인 (예를 들어, TNFα 및/또는 IFNγ)과 조합하여 투여함으로써 생체 내에서 부하될 수 있다. 일부 경우에, 내인성 APC, 예를 들어, DC (예를 들어, TADC)는, 특정 개체에게 (i) 복수 개의 결합 특이성을 지닌 폴리클로날 동종이계 IgG 항체를 포함하는 항체 조성물을 (ii) CD40 효능제 (예를 들어, CD40L) 및 TNFα와 조합하여 투여함으로써 생체 내에서 부하될 수 있다. 일부 경우에, 내인성 APC, 예를 들어, DC (예를 들어, TADC)는, 특정 개체에게 (i) 복수 개의 결합 특이성을 지닌 폴리클로날 동종이계 IgG 항체를 포함하는 항체 조성물을 (ii) CD40 효능제 (예를 들어, CD40L) 및 IFNγ와 조합하여 투여함으로써 생체 내에서 부하될 수 있다. 일부 경우에, 내인성 APC, 예를 들어, DC (예를 들어, TADC)는, 특정 개체에게 항체 조성물 (상기 언급된 바와 같음) (예를 들어, 복수 개의 결합 특이성을 지닌 폴리클로날 동종이계 IgG 항체를 포함하는 조성물)을 톨-유사 수용체 효능제 [예를 들어, CpG ODN, 폴리이노신산:폴리시티딜산 ("폴리 I:C", TLR-3 효능제) 등]와 조합하여 투여함으로써 생체 내에서 부하될 수 있다. 일부 경우에, 내인성 APC, 예를 들어, DC (예를 들어, TADC)는, 특정 개체에게 (i) 복수 개의 결합 특이성을 지닌 폴리클로날 동종이계 IgG 항체를 포함하는 항체 조성물을 (ii) 톨-유사 수용체 효능제와 조합하여 투여함으로써 생체 내에서 부하될 수 있다. 일부 경우에, 내인성 APC, 예를 들어, DC (예를 들어, TADC)는, 특정 개체에게 (i) 복수 개의 결합 특이성을 지닌 폴리클로날 동종이계 IgG 항체를 포함하는 항체 조성물을 (ii) 폴리이노신산:폴리시티딜산과 조합하여 투여함으로써 생체 내에서 부하될 수 있다. 부하시, 이와 같이 부하된 APC, 예를 들어, DC (예를 들어, TADC)는 생체 내에서 내인성 T 세포와 접촉될 수 있다.
접촉이 시험관 내에서인 경우, 상기 개체로부터의 자가 T 세포 (예를 들어, 자가 T 세포의 집단)를 부하된 APC, 예를 들어, DC와 접촉시켜, 접촉된 T 세포 (예를 들어, 접촉된 T 세포의 집단)를 생성시킬 수 있다. T 세포를 상기 개체에게 투여할 때 이러한 T 세포가 면역 반응을 유도시키도록 T 세포를 활성화시키는 데 충분한 기간 동안, T 세포를 부하된 APC, 예를 들어, DC와 접촉시킬 수 있다. T 세포는 (부하된 APC, 예를 들어, DC와 접촉시키기 이전 또는 후에) 시험관 내에서 확장시킬 수 있고/있거나, 상기 개체에게 투여되기 이전에 변형 (예를 들어, 유전적으로 변형)될 수 있다.
일부 경우에, T 세포는 시험관 내에서 5분 내지 24시간의 범위 (예를 들어, 5분 내지 18시간, 5분 내지 12시간, 5분 내지 8시간, 5분 내지 6시간, 5분 내지 4시간, 5분 내지 2시간, 5분 내지 60분, 5분 내지 45분, 5분 내지 30분, 15분 내지 18시간, 15분 내지 12시간, 15분 내지 8시간, 15분 내지 6시간, 15분 내지 4시간, 15분 내지 2시간, 15분 내지 60분, 15분 내지 45분, 15분 내지 30분, 20분 내지 18시간, 20분 내지 12시간, 20분 내지 8시간, 20분 내지 6시간, 20분 내지 4시간, 20분 내지 2시간, 20분 내지 60분, 20분 내지 45분, 30분 내지 18시간, 30분 내지 12시간, 30분 내지 8시간, 30분 내지 6시간, 30분 내지 4시간, 30분 내지 2시간, 30분 내지 60분, 30분 내지 45분, 45분 내지 18시간, 45분 내지 12시간, 45분 내지 8시간, 45분 내지 6시간, 45분 내지 4시간, 45분 내지 2시간, 45분 내지 60분, 1시간 내지 18시간, 1시간 내지 12시간, 1시간 내지 8시간, 1시간 내지 6시간, 1시간 내지 4시간, 1시간 내지 2시간, 또는 1시간 내지 90분)의 기간 동안, 부하된 APC, 예를 들어, DC와 접촉시킨다.
일부 경우에, T 세포의 집단 [예를 들어, 1x102개 이상의 세포 (예를 들어, 1x103개 이상의 세포, 1x104개 이상의 세포, 1x105개 이상의 세포, 또는 1x106개 이상의 세포)]을 시험관 내에서 부하된 APC, 예를 들어, DC (예를 들어, 부하된 APC, 예를 들어, DC의 집단; 부하된 APC, 예를 들어, DC를 갖는 집단 등)과 접촉시킨다. 일부 경우에, T 세포의 집단 [예를 들어, 1x102개 내지 1x1010개 세포의 범위 (1x102개 내지 1x108개 세포, 1x103개 내지 1x107개 세포, 1x104개 내지 1x106개 세포, 5x104개 내지 5x105개 세포, 또는 1x105개 세포)]을 시험관 내에서 부하된 APC, 예를 들어, DC (예를 들어, 부하된 APC, 예를 들어, DC의 집단; 부하된 APC, 예를 들어, DC를 갖는 집단 등)과 접촉시킨다. 일부 경우에, T 세포 (예를 들어, T 세포의 집단)를, 부하된 APC, 예를 들어, DC를 갖는 세포 집단 (예를 들어, 부하된 APC, 예를 들어, DC의 세포 집단) [예를 들어, 1x102개 이상의 세포 (예를 들어, 1x103개 이상의 세포, 1x104개 이상의 세포, 1x105개 이상의 세포, 또는 1x106개 이상의 세포)]과 접촉시킨다. 일부 경우에, T 세포 (예를 들어, T 세포의 집단)를, 부하된 APC, 예를 들어, DC를 갖는 세포 집단 (예를 들어, 부하된 APC, 예를 들어, DC의 세포 집단) [예를 들어, 1x102개 내지 1x1010개 세포의 범위 (1x102개 내지 1x108개 세포, 1x103개 내지 1x107개 세포, 1x104개 내지 1x106개 세포, 5x104개 내지 5x105개 세포, 또는 1x105개 세포)]과 접촉시킨다.
상기와 같이 접촉된 T 세포 (예를 들어, 접촉된 T 세포 집단의 세포)를, "세포를 투여하는 것"에 대하여 다음에 기재되는 바와 같이 개체에게 투여할 수 있다.
일부 실시양태에서, 상기 개체로부터의 자가 APC, 예를 들어, DC를 특정 대상 APC 자극제, 예를 들어, 수지상 세포 자극제와 접촉시켜, 자극된 APC, 예를 들어, DC를 생성시키고; 자가 표적 항원 (예를 들어, 상기 개체로부터의 암세포)을 특정 대상 항체 조성물과 접촉시켜 면역 복합체를 생성시키며; 상기와 같이 자극된 APC, 예를 들어, DC를, 이러한 자극된 APC, 예를 들어, DC에 의한 표적 항원 (예를 들어, 면역 복합체)의 흡수를 유도시키기에 유효한 농도 및 시간 동안, 상기 면역 복합체와 접촉시킴으로써, 부하된 APC, 예를 들어, DC를 생성시키고; 이러한 부하된 APC, 예를 들어, DC를 T 세포 (상기에 보다 상세히 기재된 바와 같음)와 접촉시켜, 접촉된 T 세포를 생성시키며, 이러한 접촉된 T 세포는 상기 제시된 항원에 대해 특이적인 면역 반응을 발생시킨다.
세포 및/또는 조성물을 투여한다. 일부 경우에, 세포 (예를 들어, 부하된 APC, 예를 들어, 부하된 DC, 부하된 대식세포, 부하된 B-세포; APC, 예를 들어, DC, 대식세포, B-세포; 및/또는 접촉된 T 세포)를, 이식 (즉, 상기 개체에 투여)하기 이전에 일정 기간 동안 배양한다. 세포 (예를 들어, 부하된 APC, 예를 들어, 부하된 DC, 부하된 대식세포, 부하된 B-세포; APC, 예를 들어, DC, 대식세포, B-세포; 및/또는 접촉된 T 세포)를 상기 개체에게 단독으로 또는 적합한 기질 또는 매트릭스와 함께 제공하여 (즉, 상기 개체 내로 투여하여), 예를 들어 이들이 이식되는 조직 (예를 들어, 표적 기관, 종양 조직, 혈류 등) 내에서의 그들의 성장 및/또는 구성을 지지할 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 매트릭스는 스캐폴드(scaffold) (예를 들어, 기관 스캐폴드)이다. 일부 실시양태에서, 1x103개 이상의 세포, 예를 들어 5x103개 이상의 세포, 1x104개 이상의 세포, 5x104개 이상의 세포, 1x105개 이상의 세포, 5x105개 이상의 세포, 1x106개 이상의 세포, 5x106개 이상의 세포, 1x107개 이상의 세포, 5x107개 이상의 세포, 1x108개 이상의 세포, 5x108개 이상의 세포, 1x109개 이상의 세포, 5x109개 이상의 세포, 또는 1x1010개 이상의 세포가 투여될 것이다. 일부 실시양태에서, 대상 세포는 마이크로캐리어(microcarrier) 상에서 (예를 들어, 생분해성 마이크로캐리어 상에서 성장된 세포) 상기 개체에게 투여된다.
대상 세포 (예를 들어, 부하된 APC, 예를 들어, 부하된 DC, 부하된 대식세포, 부하된 B-세포; APC, 예를 들어, DC, 대식세포, B-세포; 및/또는 접촉된 T 세포) 및/또는 조성물 (예를 들어, 특정 대상 항체 조성물; 특정 대상 APC 자극성 조성물, 예를 들어, 수지상 세포 자극성 조성물; 그의 조합물)은 임의의 생리학상 허용되는 부형제 [예를 들어, 윌리암(William's) E 매질] 중에서 투여될 수 있는데, 상기 세포는 생존과 기능 (예를 들어, 기관 재구성)에 적당한 부위를 발견할 수 있다. 상기 세포 및/또는 조성물 (예를 들어, 특정 대상 항체 조성물; 특정 대상 APC 자극성 조성물, 예를 들어, 수지상 세포 자극성 조성물; 그의 조합물)은 임의의 편리한 방법 (예를 들어, 주사, 카테터 등)에 의해 도입될 수 있다. 상기 세포 및/또는 조성물은 리포솜 또는 기타 생분해성 구축물 내로 피막화할 수 있다. 일부 경우에, (a) 특정 대상 항체 조성물 (예를 들어, 동종이계 IgG 항체, 항체 조성물의 항체 등 포함); 및 (b) 상기 개체의 APC, 예를 들어, DC를 활성화시키는 처치 (예를 들어, APC 자극제, 예를 들어, DC 자극제) 중 하나 이상을 리포솜, 마이크로입자 또는 나노입자로 투여한다.
상기 세포 및/또는 조성물 (예를 들어, 특정 대상 항체 조성물; 특정 대상 APC 자극성 조성물, 예를 들어, 수지상 세포 자극성 조성물)은 다음 경로 중 임의의 것을 통하여 대상체 내로 도입 (즉, 개체에 투여)할 수 있다: 비경구, 피하 (s.c.), 정맥내 (i.v.), 두개내 (i.c.), 척수내, 안내, 피내, (i.d.), 근육내 (i.m.), 림프관내 (i.l.), 또는 척수액 내. 상기 세포 및/또는 조성물 (예를 들어, 특정 대상 항체 조성물, 특정 대상 수지상 세포 자극성 조성물)은 주사 (예를 들어, 전신 주사, 직접적인 국소 주사, 종양 및/또는 종양 절제 부위 내로 또는 그 근처에 국소 주사 등), 카테터 등에 의해 도입할 수 있다. 국소 전달 (예를 들어, 종양 및/또는 암 부위로의 전달)을 위한 방법의 예는, 예를 들어 관절, 종양 또는 기관 내로, 또는 관절, 종양 또는 기관 근처에, 예를 들어 주사기에 의해, 예를 들어 거환 주사하는 방법; 예를 들어, 대류를 이용하여, 예를 들어 캐뉼라 삽입에 의해, 예를 들어 연속적으로 주입하는 방법 (예를 들어, 미국 출원 번호 20070254842 참조; 본원에 참조로 포함된다); 또는 세포를 가역적으로 고착시킨 장치를 체내이식하는 방법 (예를 들어, 미국 출원 번호 20080081064 및 20090196903 참조; 본원에 참조로 포함된다)을 포함한다.
일부 경우에, (a) 특정 대상 항체 조성물 (예를 들어, 동종이계 IgG 항체, 항체 조성물의 항체 등 포함); 및 (b) 상기 개체의 APC, 예를 들어, DC를 활성화시키는 처치 (예를 들어, APC 자극제, 예를 들어, DC 자극제) 중 하나 이상을 종양 및/또는 종양 절제 부위 내로 또는 그 근처에 국소 주사함으로써 투여한다. 일부 경우에, (a) 특정 대상 항체 조성물 (예를 들어, 동종이계 IgG 항체, 항체 조성물의 항체 등 포함); 및 (b) 상기 개체의 APC, 예를 들어, DC를 활성화시키는 처치 (예를 들어, APC 자극제, 예를 들어, DC 자극제) 중 하나 이상을 리포솜, 마이크로입자 또는 나노입자로, 종양 및/또는 종양 절제 부위 내로 또는 그 근처에 국소 주사함으로써 투여한다.
특정 대상체에 대한 처치의 투여 횟수는 다양할 수 있다. 세포 및/또는 조성물 (예를 들어, 특정 대상 항체 조성물; 특정 대상 APC 자극성 조성물, 예를 들어, 수지상 세포 자극성 조성물)을 특정 개체 내로 도입하는 것은 일회성 사건일 수 있지만; 특정 상황에서는, 이러한 처치가 제한된 기간 동안 개선을 유도해낼 수 있고 진행중인 일련의 반복된 처치를 필요로 할 수 있다. 다른 상황에서는, 세포 및/또는 조성물 (예를 들어, 특정 대상 항체 조성물; 특정 대상 APC 자극성 조성물, 예를 들어, 수지상 세포 자극성 조성물)을 수회 투여하는 것은, 특정 효과가 관찰되기 전에 요구될 수 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 용이하게 이해되는 바와 같이, 정확한 프로토콜은 질환 또는 병태, 질환의 병기, 및 치료받는 개체의 파라미터에 좌우된다.
"치료상 유효 용량" 또는 "치료 용량"은 목적하는 임상 결과를 가져오기에 충분한 (즉, 치료 효능을 달성하는 데 충분한) 양이다. 치료상 유효 용량은 1회 이상의 투여로 투여될 수 있다. 본 개시내용의 목적상, 세포 (예를 들어, 부하된 APC, 예를 들어, DC; 접촉된 T 세포 등) 및/또는 조성물 (예를 들어, 특정 대상 항체 조성물; 특정 대상 APC 자극성 조성물, 예를 들어, 수지상 세포 자극성 조성물)의 치료상 유효 용량은 상기 개체에게 투여되는 (예를 들어, 이식되는) 경우에, 예를 들어 항원성 세포 (예를 들어, 암세포)에 대항하여 면역 반응을 유도시킴으로써 질환 상태의 진행 (예를 들어, 종양 크기, 종양 성장, 종양 존재, 암 존재 등)을 일시적으로 완화시키거나, 완화시키거나, 안정화시키거나, 역전시키거나, 방지하거나, 느리게 하거나 또는 지연시키는 데 충분한 양이다.
일부 실시양태에서, 세포 (예를 들어, 부하된 APC, 예를 들어, DC; 접촉된 T 세포 등)의 치료상 유효 용량은 1x103개 이상의 세포 (예를 들어, 5x103개 이상, 1x104개 이상, 5x104개 이상, 1x105개 이상, 5x105개 이상, 1x106개 이상, 2x106개 이상, 5x106개 이상, 1x107개 세포, 5x107개 이상, 1x108개 이상, 5x108개 이상, 1x109개 이상, 5x109개 이상, 또는 1x1010개 이상의 세포)이다.
일부 실시양태에서, 세포의 치료상 유효 용량은 1x103개 세포 내지 1x1010개 세포의 범위 (예를 들어, 5x103개 세포 내지 1x1010개 세포, 1x104개 세포 내지 1x1010개 세포, 5x104개 세포 내지 1x1010개 세포, 1x105개 세포 내지 1x1010개 세포, 5x105개 세포 내지 1x1010개 세포, 1x106개 세포 내지 1x1010개 세포, 5x106개 세포 내지 1x1010개 세포, 1x107개 세포 내지 1x1010개 세포, 5x107개 세포 내지 1x1010개 세포, 1x108개 세포 내지 1x1010개 세포, 5x108개 세포 내지 1x1010개 세포, 5x103개 세포 내지 5x109개 세포, 1x104개 세포 내지 5x109개 세포, 5x104개 세포 내지 5x109개 세포, 1x105개 세포 내지 5x109개 세포, 5x105개 세포 내지 5x109개 세포, 1x106개 세포 내지 5x109개 세포, 5x106개 세포 내지 5x109개 세포, 1x107개 세포 내지 5x109개 세포, 5x107개 세포 내지 5x109개 세포, 1x108개 세포 내지 5x109개 세포, 5x108개 세포 내지 5x109개 세포, 5x103개 세포 내지 1x109개 세포, 1x104개 세포 내지 1x109개 세포, 5x104개 세포 내지 1x109개 세포, 1x105개 세포 내지 1x109개 세포, 5x105개 세포 내지 1x109개 세포, 1x106개 세포 내지 1x109개 세포, 5x106개 세포 내지 1x109개 세포, 1x107개 세포 내지 1x109개 세포, 5x107개 세포 내지 1x109개 세포, 1x108개 세포 내지 1x109개 세포, 5x108개 세포 내지 1x109개 세포, 5x103개 세포 내지 5x108개 세포, 1x104개 세포 내지 5x108개 세포, 5x104개 세포 내지 5x108개 세포, 1x105개 세포 내지 5x108개 세포, 5x105개 세포 내지 5x108개 세포, 1x106개 세포 내지 5x108개 세포, 5x106개 세포 내지 5x108개 세포, 1x107개 세포 내지 5x108개 세포, 5x107개 세포 내지 5x108개 세포, 또는 1x108개 세포 내지 5x108개 세포) 내이다.
일부 실시양태에서, 투여될 세포 (예를 들어, 부하된 APC, 예를 들어, DC; 접촉된 T 세포 등)의 농도는 1 x 105개 세포/ml 내지 1 x 109개 세포/ml의 범위 (예를 들어, 1 x 105개 세포/ml 내지 1 x 108개 세포/ml, 5 x 105개 세포/ml 내지 1 x 108개 세포/ml, 5 x 105개 세포/ml 내지 5 x 107개 세포/ml, 1 x 106개 세포/ml 내지 1 x 108개 세포/ml, 1 x 106개 세포/ml 내지 5 x 107개 세포/ml, 1 x 106개 세포/ml 내지 1 x 107개 세포/ml, 1 x 106개 세포/ml 내지 6 x 106개 세포/ml, 또는 2 x 106개 세포/ml 내지 8 x 106개 세포/ml) 내이다.
일부 실시양태에서, 투여될 세포 (예를 들어, 부하된 APC, 예를 들어, DC; 접촉된 T 세포 등)의 농도는 1 x 105개 세포/ml 이상 (예를 들어, 1 x 105개 세포/ml 이상, 2 x 105개 세포/ml 이상, 3 x 105개 세포/ml 이상, 4 x 105개 세포/ml 이상, 5 x 105개 세포/ml 이상, 6 x 105개 세포/ml 이상, 7 x 105개 세포/ml 이상, 8 x 105개 세포/ml 이상, 9 x 105개 세포/ml 이상, 1 x 106개 세포/ml 이상, 2 x 106개 세포/ml 이상, 3 x 106개 세포/ml 이상, 4 x 106개 세포/ml 이상, 5 x 106개 세포/ml 이상, 6 x 106개 세포/ml 이상, 7 x 106개 세포/ml 이상, 또는 8 x 106개 세포/ml 이상)이다.
본 개시내용의 세포 및/또는 조성물 (예를 들어, 특정 대상 항체 조성물; 특정 대상 APC 자극성 조성물, 예를 들어, 수지상 세포 자극성 조성물)은 인간 투여를 위하여 충분하게 멸균성인 조건하에 제조된 등장성 부형제를 포함하는 제약 조성물의 형태로 공급될 수 있다. 의학적 제형화에 있어서의 일반적 원리에 대해서는, 문헌 ([Cell Therapy: Stem Cell Transplantation, Gene Therapy, and Cellular Immunotherapy, by G. Morstyn & W. Sheridan eds, Cambridge University Press, 1996]; 및 [Hematopoietic Stem Cell Therapy, E. D. Ball, J. Lister & P. Law, Churchill Livingstone, 2000])을 참조할 수 있다. 상기 조성물의 세포성 부형제 및 동반되는 임의의 요소의 선택은 투여에 사용된 경로와 장치에 따라서 적응될 것이다. 상기 조성물은 또한, 세포의 개입 또는 기능적 동원을 촉진시키는 하나 이상의 기타 성분을 포함하거나 또는 이들 성분을 수반할 수 있다. 적합한 성분은 세포, 또는 상보적 세포 유형의 부착을 지지하거나 증진시켜 주는 매트릭스 단백질을 포함한다.
상기 대상 방법의 세포 (예를 들어, APC, 예를 들어, DC; 부하된 APC, 예를 들어, 부하된 DC; T 세포; 접촉된 T 세포 등)는 생존을 증강시키거나, 증식을 제어하도록 유전적으로 변형시킬 수 있다. 세포는 적합한 벡터를 이용한 형질감염 또는 형질도입, 상동 재조합, 또는 기타 적당한 기술에 의해 유전적으로 변경시켜, 이들 세포가 관심 유전자를 발현하도록 할 수 있다. 일부 실시양태에서, 보다 큰 순도의 목적 세포를 제공하기 위해, 선별성 마커를 도입한다.
본 개시내용의 실시에 유용한 일반적 기술에 관한 추가의 상세한 설명에 대해서, 실시자는 세포 생물학, 조직 배양 및 배아학에 있어서의 표준 교과서와 그 고찰 내용을 참조할 수 있다. 조직 배양과 줄기 세포에 대해서는, 문헌 ([Teratocarcinomas and embryonic stem cells: A practical approach (E. J. Robertson, ed., IRL Press Ltd. 1987)]; [Guide to Techniques in Mouse Development (P. M. Wasserman et al. eds., Academic Press 1993)]; [Embryonic Stem Cell Differentiation in Vitro (M. V. Wiles, Meth. Enzymol. 225:900, 1993)]; [Properties and uses of Embryonic Stem cells: Prospects for Application to Human Biology and Gene Therapy (P. D. Rathjen et al., Reprod. Fertil. Dev. 10:31, 1998)])을 참조할 수 있다.
키트
또한, 상기 대상 방법에 사용하기 위한 키트가 제공된다. 이러한 대상 키트는 상기 대상 방법을 수행하기 위한 조성물 및 성분의 임의의 조합을 포함한다. 일부 실시양태에서, 키트는 다음을 포함할 수 있다: 특정 대상 항체 조성물 (상기에 상세히 기재된 바와 같음, 예를 들어, 동종이계 IgG 항체, 2개 이상의 동종이계 IgG 항체의 조성물 등); APC 자극성 조성물, 예를 들어, 수지상 세포 자극성 조성물 (상기에 상세히 기재된 바와 같음, 예를 들어, APC 자극제, 예컨대 수지상 세포 자극제, 대식세포 자극제, B-세포 자극제 포함; IgG 항체와 접합된 APC 자극제, 예컨대 IgG 항체와 접합된 수지상 세포 자극제, IgG 항체와 접합된 대식세포 자극제, IgG 항체와 접합된 B-세포 자극제 등); APC, 예를 들어, DC, 및/또는 T 세포의 단리, 배양, 생존 또는 투여를 위한 성분; APC, 예를 들어, DC를 접촉시키기 위한 시약 (예를 들어, 완충제); T 세포를 접촉시키기 위한 시약 (예를 들어, 완충제); 표적 항원을 특정 대상 항체 조성물과 접촉시켜 면역 복합체를 생성시키기 위한 시약 (예를 들어, 완충제); 및 그의 임의의 조합물.
일부 실시양태에서, 특정 대상 키트는 검증 단계 (예를 들어, APC, 예를 들어, DC가 부하된 APC, 예를 들어, DC란 것을 검증하는 단계)에 사용하기 위한 검정 시약 (예를 들어, HLA-DR을 검출하기 위한 항체, CD84를 검출하기 위한 항체 등)을 포함한다.
일부 실시양태에서, 상기 키트는 (i) 암세포의 항원과 결합하는 동종이계 IgG 항체를 포함하는 항체 조성물을 포함하는 구획; 및 (ii) 적어도 하나의 APC 자극성 조성물 (여기서, APC 자극성 조성물은 수지상 세포 자극성 조성물, 대식세포 자극성 조성물, 또는 B-세포 자극성 조성물이다)을 포함하는 적어도 하나의 구획을 포함한다.
상기 성분 이외에도, 상기 대상 키트는 (특정 실시양태에서) 상기 대상 방법을 실시하기 위한 설명서를 추가로 포함할 수 있다. 이들 설명서는 각종 형태로 상기 대상 키트 내에 존재할 수 있는데, 이들 중 하나 이상이 상기 키트 내에 존재할 수 있다. 이들 설명서가 존재할 수 있는 한 가지 형태는 적합한 매질 또는 기질, 예를 들어 정보가 프린트되는 종이 조각(들) 상에 프린트된 정보로서, 키트의 패키징 내에, 또는 패키지 삽입물 내이다. 또한, 이들 설명서의 또 다른 형태는 그 위에 정보가 기록된, 컴퓨터 판독 가능한 매체, 예를 들어 디스켓, 콤팩트 디스크 (CD), 플래시 드라이브 등이다. 또한, 존재할 수 있는 이들 설명서의 또 다른 형태는 원거리에서도 정보에 접근하는 인터넷을 통하여 사용될 수 있는 웹사이트 주소이다.
실시예
다음 실시예는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게, 본 발명을 만들고 사용하는 방법에 관한 완전한 개시와 설명을 제공하도록 제안되고, 본 발명자들이 본 발명으로서 간주하는 범위를 제한하려고 의도하지 않을 뿐 아니라 다음 실험들이 수행된 실험의 전부 또는 유일한 실험이라는 것을 나타내려고 의도하지 않는다. 사용된 수치 (예를 들어, 양, 온도 등)에 대해선 정확성을 보장하려고 노력하였지만, 일부 실험적 오차 및 편차가 고려되어야 한다. 달리 표시되지 않는 한, 부는 중량부이고, 분자량은 중량 평균 분자량이며, 온도는 ℃이고, 압력은 대기압 또는 대기압 근처이다. 표준 약어, 예를 들어 실온 (RT); 염기쌍 (bp); 킬로염기 (kb); 피코리터 (pl); 초 (s 또는 sec); 분 (m 또는 min); 시간 (h 또는 hr); 일 (d); 주 (wk 또는 wks); 나노리터 (nl); 마이크로리터 (ul); 밀리리터 (ml); 리터 (L); 나노그램 (ng); 마이크로그램 (ug); 밀리그램 (mg); 그램 [(g), 질량과 관련해서]; 킬로그램 (kg); 중력의 등가치 [(g), 원심분리와 관련해서]; 나노몰 (nM); 마이크로몰 (uM), 밀리몰 (mM); 몰 (M); 아미노산 (aa); 킬로염기 (kb); 염기쌍 (bp); 뉴클레오티드 (nt); 근육내 (i.m.); 복강내 (i.p.); 피하 (s.c.) 등을 사용할 수 있다.
실시예 1
재료 및 방법
마우스
129S1/SvlmJ 마우스, C57Bl/6 WT 마우스, CD-1 비근친계 마우스, Balb/c, GFP 트랜스제닉 마우스 [C57BL/6-Tg (UBC-GFP) 30Scha/J], 및 유도성 흑색종이 발생한 마우스 (B6.Cg-Braftm1Mmcm/Ptentm1HwuTg (Tyr-cre/ERT2)13Bos/BosJ)는 잭슨 라보라토리 (Jackson Laboratory; 미국 메인주 바 하버)로부터 구입하였고, 현장에서 번식시켰다. FcγR-/- (B6.129P2-Fcer1g tm1Rav ) 마우스는 타코닉 (Taconic; 미국 뉴욕주 저먼타운)으로부터 구입하였다. 치료 조건을 배정하기 전에 마우스를 무작위로 여러 군으로 분류하였다. 모든 마우스는 미국 실험 동물 관리 인증 협회 - 인증된 동물 시설에서 유지하였다. 모든 프로토콜은 프로토콜 APLAC-17466 하에 스탠포드 대학 기관 동물 관리 및 사용 위원회에 의해 승인되었다.
세포주
항-CD4 (GK1.5) 및 항-CD8 (2.43) 하이브리도마, 인간 세포주 MCF7 및 PANC-1 및 마우스 계통 B16F10 (흑색종), 4T-1, LL/2 [루이스(Lewis) 폐 암종] 및 RMA (림프종)는 모두 ATCC로부터 구입하였다. LMP 췌장 종양 세포는 기재된 바와 같이13, KrasG12D /+; LSL-Trp53R172H /+; Pdx-1-Cre 마우스로부터 단리하였다. 세포는 표준 조건하에 10% 열-불활성화 FCS, 2 mM L-글루타민, 100 U/mL 페니실린 및 100 μg/mL 스트렙토마이신 [깁코(Gibco)]으로 보충된 DMEM (깁코; 미국 캘리포니아주 칼즈배드)에서 배양하였다.
마우스 DC 서브세트의 제조 및 시험관내 연구
뮤린 단구 강화 키트 [스템 셀 테크놀로지 (Stem Cell Technologies; 캐나다 벤쿠버)]를 이용하여 BM 단핵 세포를 음성적으로 선별하였고, FACS 아리아(Aria) II [BD 바이오사이언스(Biosciences)]를 이용하여 FSClo/SSClo/Gr1hi/CD115hi/MHCIIneg 세포를 분류하였다. 단구를 50 ng/ml GM-CSF [페프로텍(PeproTech)]의 존재하에 4 내지 5일 동안 배양하여 DC를 생성하였다. TADC의 경우에는, 종양을, 5 mg/mL 콜라게나제 IV 및 0.01 mg/mL DNase I (시그마)을 함유하는 행크의 균형잡힌 염 용액 (HBSS, 깁코)에서 소화시켰다. 세포를 피콜 구배 상에 적용하였고, CD11b+ 선별 키트 (스템셀)를 이용하여 자기적으로 풍부하게 하였으며, Gr1neg/CD11c+/MHCII+ 세포를 FACS에 의해 분류하였다. 일부 실험에서는 TADC를 50 ng/mL TNFα(페프로텍) 및 500 ng/mL CD40L (페프로텍) 재조합 마우스 단백질로 활성화시켰다.
인간 DC의 제조 및 시험관내 연구
신선한 BM 흡인물로부터의 단핵 세포 및 매칭된 건강한 공여자의 말초혈은 올셀 (AllCells; 미국 캘리포니아주 알라메다)로부터 구입하였다. 10 cm 길이의 갈비뼈와 6 mL 혈액은 악성 흉막 중피종의 절제가 진행되는 2명의 환자로부터 수득하였다. 연구 프로토콜은 스탠포드의 시설내 치료 효과 시험 심사위원회에 의해 승인되었고, 모든 대상체로부터 고지에 입각한 동의서를 수득하였다. BMDC를 생성하기 위하여, 뼈를 PBS로 수세하고 단핵 세포를 피콜 구배 상에서 분리하였다. 건강한 사람과 종양 환자 둘 다에 대하여, 자기 비드 [밀테니이(Miltenyi)]를 이용하여 CD34+ 세포를 풍부하게 하고, 50 ng/mL GM-CSF 및 20 ng/mL IL-4 (페프로텍)로 보충시킨 IMDM (깁코)에서 9 내지 12일 동안 배양하였다. 혈액 유래 DC에 대해서는, 자기 비드 (밀테니이)를 이용하여 혈액 단핵 세포로부터 CD14+ 세포를 풍부하게 하였고, 이를 50 ng/mL GM-CSF 및 20 ng/mL의 IL-4 (페프로텍)로 보충시킨 IMDM (깁코)에서 7일 동안 배양하였다. 다른 연구에서는, I기 폐 암종 환자로부터 수득된 혈액 유래 DC를 50 ng/mL 인간 TNFα (페프로텍) 및 1 ㎍/mL CD40L (페프로텍)로 밤새 처리하였다.
유동 세포계수법
세포 표면 염색을 위하여, FITC, PE, PE-Cy7, PE-Cy5.5, APC-Cy7, 이플루오르(eFluor) 650, 또는 퍼시픽 블루(Pacific Blue)와 접합되고 다음 항원에 대해 특이적인 모노클로날 항체를 사용하였다: CD11b (M1/70), Gr-1 (RB6-8C5), F4/80 (BM8), B220 (RA3-6B2) [바이오레전드 (BioLegend; 미국 캘리포니아주 샌디에고)] 및 CD115 (AFS98), CD80 (16-10A1), I-Ab (AF6-120.1), CD40 (1C10), CD86 (GL1) 및 CD40L (MR1) [이바이오사이언스 (eBioscience; 미국 캘리포니아주 샌디에이고)]. 단백질 인산화-특이적 유동 세포계수법의 경우에는, IC를 이용하거나 이용하지 않으면서 세포를 5, 15 또는 30분 동안 활성화시키고, 1.8% 파라포름알데히드로 15분 동안 고정시켰다. 세포를, 2% FCS를 함유하는 PBS로 2회 세척하고, 4℃하에 20분 동안 95% 메탄올과 함께 인큐베이션하였다. 포스포-p38 MAPK (Thr180/Tyr182), 포스포-Akt (Thr308) 및 포스포-c-Jun (Ser63)에 대항한 접합된 항체는 셀 시그널링(Cell Signaling)으로부터 구입하였고, 포스포-ERK1/2 (p44) (pT202/pY204)는 BD 바이오사이언스 (미국 캘리포니아주 산 호세)로부터 구입하였다. 종양-결합성 IgM 및 IgG의 경우, PE-접합된 항-마우스 IgM (RMM-1), 항-마우스 IgG (Poli4052) 및 항-인간 IgG (HP6017)는 바이오레전드로부터 구입하였다. 유동 세포계수법을 LSRII (BD 바이오사이언스) 상에서 수행하였고, 플로우조(FlowJo) 소프트웨어 [트리 스타, 인크.(Tree Star, Inc.)]를 이용하여 데이터세트를 분석하였다.
시토카인 측정
세포를 1x106개 세포/mL로 시딩하였고, 종양 면역 복합체, 또는 LPS (시그마)를 수반하거나 수반하지 않으면서 12 h 동안 배양하였다. 제조업자의 지시 [R&D 시스템즈 (R&D Systems; 미국 미네소타주 미니애폴리스)]에 따라서, 상등액 중의 TNFα, IFNγ, 및 IL-12 (p40/p70)를 ELISA에 의해 측정하였다.
IgG 및 IgM 정제 및 측정
AKTA 익스플로러(Explorer)/100에어(Air) [GE 헬스케어(Healthcare)] 상에서 액체 크로마토그래피함으로써, 풀링된 5 mL 20 내지 24주생 마우스 혈청으로부터 마우스 항체를 수득하였다. 단백질-G 및 2-머캅토피리딘 칼럼 (GE 헬스케어)을 각각 이용하여, 전체 마우스 IgG 및 IgM을 정제하였다. 정제된 IgG 및 IgM의 수준을 제조업자의 지시에 따라서 특이적 ELISA 키트 [베틸 (Bethyl; 미국 텍사스주 몽고메리)]로 측정하였다.
항체-종양 용해물 면역 복합체 (Ig-IC) 및 항체- 결합된 종양 세포의 제조
종양 세포를 2% 파라포름알데히드에 고정시키고, CFSE로 염색시키며, 광범위하게 세척하였다. 외과적 절제를 위하여, 종양을 효소적 소화 후 초기에 단리하였고, 이를 고정시키고 염색하기에 앞서, FSChi/CD45neg 세포로서 분류하였다. Ig-IC를 수득하기 위하여, 종양 세포를 얼음 상에서 30분 동안 1x105개 종양 세포당 1 ㎍ 동계 또는 동종이계 IgG 또는 IgM과 함께 인큐베이션하였다. 이어서, 세포를 과도한 항체로부터 세척하였고, 이를 그 자체로서 사용하거나 또는 비-변성 용해 완충제를 이용하여 추가로 붕괴시켜 Ig-IC를 수득하였다.
막 단백질 추출
천연 막 단백질 추출을 위하여, 종양을 SEAT 완충액 (pH 7.4, 250 mM 슈크로스, 10 mM 트리에탄올아민, 1 mM EDTA, 10 mM 아세트산, 프로테아제 억제제 칵테일 I - 시그마)에 현탁시키고, 다운스(dounce) 균질화기에서 균질화시켰다. 용해물을 4℃ 하에 5분 동안 900 g로 2회 스피닝하였고, 상등액을 신선한 튜브로 옮긴 다음, 4℃ 하에 1 h 동안 100,000 xg로 스피닝하였다. 막 펠릿을 H2O에 재현탁시키고, 일부 실험에서는 사용하기 전에 변성시키거나 또는 탈글리코실화시켰다. 변성된 막 단백질 추출을 위하여, 상기 막 펠릿을 500 ㎕ 방사성 면역 침전 검정 완충액 (RIPA, 시그마)에 재현탁시키고, 25G 바늘 주사기로 용해시켰다. 용해물을 4℃ 하에 1시간 동안 인큐베이션하고, 4℃ 하에 30분 동안 100,000 xg로 스피닝하였다. 세정제 가용화된 막 단백질을 함유하는 상등액을 수집하였고, 95℃ 하에 5분 동안 비등시켰다. 제조업자의 지시에 따라서 상업적 키트 [뉴 잉글랜드 바이오랩 (New England Biolabs; 미국 매사추세츠주 입스위치)]를 이용하여, 막 단백질의 탈글리코실화를 수행하였다.
생체내 종양 모델
종양 전이 연구를 위하여, 1x105개 LMP 또는 B16 종양 세포를 오른쪽 옆구리 위에 피하 주사하고, 캘리퍼를 이용하여 종양 발생을 매주 2회 측정하였다. 일부 실험에서는, 제조업자의 지시 [인비트로젠(Invitrogen)]에 따라서 종양 세포를 25 μM CFSE로 표지시켰다. 예방적 면역을 위하여, 종양 용해물 또는 IC가 부하된 2x106개 DC 또는 단구를 마우스에게 7일 간격으로 2회 피하 주사하였다. 종양 재발 연구를 위하여, 2x105개 종양 세포를 오른쪽 옆구리 위에 피하 주사하고, 캘리퍼를 이용하여, 성장하는 종양의 크기를 측정하였다. 종양이 LMP의 경우에는 45 내지 55 mm2에 도달하고 B16의 경우에는 12 내지 16 mm2에 도달하면, 마우스를 마취시키고, 육안으로 볼 수 있는 종양을 외과적으로 제거하였다. 절제된 종양을 PBS 중의 0.1 mg/mL의 DNase I (시그마) 및 5 mg/mL 콜라게나제 IV (시그마)로 효소적으로 소화시켰다. 이어서, 세포를 2% 파라포름알데히드에 20분 동안 고정시키고, PBS에서 광범위하게 세척하며, 정제된 마우스 항체를 수반하거나 수반하지 않으면서 이를 DC 서브세트에 가하였다. 밤새 인큐베이션한 후, 세포를 세척하고, 2x106개를 종양-절제된 마우스에게 피하 주사하였다. 일부 실험에서는 200 ng TNFα (페프로텍) 및 1 ㎍ CD40L, CD28, OX-40 (R&D), 2 ㎍ LPS, 또는 200 ㎍ 폴리 I:C [인비보젠(Invivogen)]를 200 ㎍ 마우스 IgG와 조합하여, 1주 간격으로 2일 연속해서 2주기 동안 종양 내로 직접 주사하였다. 전이 실험을 위해서는, 1x105개 4T-1 세포를 동계 Balb/c 마우스의 유방 지방체 내로 주사하였다. 16일 후, 일단 종양이 배출 림프절로 전이되면, 원발성 종양 결절에, CD-1 마우스로부터 유래된 IgG를 TNFα 및 CD40L과 함께, 3회 (2일 간격) 주사하였다.
생체내 세포 고갈
CD4+ 및 CD8+ T 세포의 고갈은 종양 접종하기 3일 전 및 그 후 3일마다 500 ㎍/마우스 GK1.5 (항-CD4) 및 2.43 (항-CD8) 모노클로날 항체를 각각 복강내 (i.p.) 주사함으로써 달성하였다. B 세포 고갈을 위해서는, 300 ㎍/마우스 항-CD19 및 300 ㎍/마우스 항-B220 (바이오엑스셀; 미국 뉴햄프셔주 웨스트 레바논)을 종양 접종하기 5일 및 2일 전 및 그 후 3일 마다 복강내 주사하였다. NK 세포 고갈을 위해서는, 종양 시험감염을 기준으로 하여 -2일, 0일, 4일 및 8일째에 마우스에게 50 ㎕ 항-아시알로 GM1 폴리클로날 항체 [와코 케미칼즈 (Wako Chemicals; 미국 버지니아주 리치먼드)], 또는 200 ㎍ 항-NK1.1 PK136 (바이오엑스셀)을 복강내 주사하였다. 개개의 마우스를 0, 7, 14 및 21일째에 번식시켰고, NK1.1+/CD3εneg 세포의 수준을 유동 세포계수법에 의해 결정하여 고갈을 확증하였다.
적응 전이
종양 시험감염하기 1일 전에 마우스 1마리당 1 mg의 동계 또는 동종이계 IgG 또는 IgM을 마우스에게 정맥내 주사하고, 다시 종양을 1회 주사하였다. T 세포 전이를 위하여, 뮤린 강화 키트 (스템 셀 테크놀로지)를 이용하여 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 음성적으로 선별하고, 5x106개 세포를 종양 시험감염하기 1일 전에 수용자 마우스에게 정맥내 주사하였다. 그들을 전이시키기에 앞서, 종양 연관 세포 서브세트를 다음과 같이 풍부하게 하였다: TADC를 자기 비드 (밀테니이) 상에서 MHCII+ 세포를 풍부하게 함으로써 단리하고, 연속해서 FACS에 의해 Gr1neg/CD11c+/CD64dull를 분류하였다. 종양 대식세포 (TAM)는 CD11b+ 자기 비드 (밀테니이)를 이용하여 풍부하게 한 다음, Gr1neg/CD64hi 세포를 분류하였다. B 세포는 CD19+ 자기 비드 (밀테니이)를 이용하여 풍부하게 하였다. NK 세포는 NK1.1+ 자기 비드 (밀테니이)를 이용하여 풍부하게 하고, 비만 세포는 c-kit+ 자기 비드 (밀테니이)를 이용하여 풍부하게 하였다. 각 세포 서브세트에 대해서는, 4x104개 B16 종양 세포로 시험감염하기 3일 전에, 2x106개 세포를 나이브 마우스 내로 피하 주사하였다.
T 세포 증식
3x104개 DC를 LMP- 또는 B16-면역된 마우스의 비장으로부터의 3x105개 MACS-풍부해진 CD4+ T 세포 (밀테니이; 독일)와 공동-배양하였다. 6일 후, 세포를 3H-티미딘 (1 μCi/웰)으로 펄싱하고, 채취기 400 [톰텍(Tomtec)]에서 채취하기 전 18시간 더 배양하였다. 방사능은 1450 마이크로베타(MicroBeta) 계수기 [LKB 왈락(Wallac)]에 의해 측정하였다.
면역형광
DC 또는 단구를 유리-바닥 배양 판 [인 비트로 사이언티픽(In Vitro Scientific)] 상에서 CFSE-표지된 종양 세포와 함께 및 항체를 수반하거나 수반하지 않으면서 밤새 인큐베이션하였다. 세포를 PBS (깁코)로 온화하게 세척하고, 2% 파라포름알데히드로 20분 동안 고정시키며, 0.5% 사포닌 (시그마)으로 투과시켰다. 샘플을 10% 비-면역 염소 혈청으로 차단시키고, 알렉사(Alexa)-접합된 항-마우스 IgG 및 IgM (인비트로젠 1:100) 및 항-마우스 I-Ab (BD 바이오사이언스, 1:100)로 염색하였다.
면역조직화학
표본을 4% 파라포름알데히드에 고정시키고, 20% 슈크로스 용액에서 평형시킨 다음, 동결된 조직 매트릭스 [티슈-텍(Tissue-Tek) OCT; 미국 캘리포니아주 토런스]에 매립시켰다. 슬라이드를 5 ㎛가 되도록 커팅하고, 10% 비-면역 염소 혈청으로 차단시킨 다음, 알렉사-접합된 토끼 항-CD4 (RM4-5, 이바이오사이언스, 1:100), 항-CD8β (YTS156.7.7 바이오레전드, 1:100), 염소 항-마우스 IgG (인비트로젠 1:100) 및 항-마우스 IgM (II/41 이바이오사이언스, 1:100)으로 염색하였다. 박편을 차이스(Zeiss) 레이저 스캐닝 공초점 현미경 하에 조사하였다. 차이스 700 공초점 레이저 스캐닝 현미경을 이용하여 영상을 수집하고, ZEN 소프트웨어 [칼 차이스 마이크로스코피(Carl Zeiss Microscopy)]를 이용하여 분석하였다.
통계학
앞서 보고된 연구로부터의 근사치인 오차를 수반하는 적당한 통계 시험 (예를 들어, ANOVA)을 이용하여 통계적 유의성이 달성될 수 있도록 샘플 크기를 선택하였다. 달리 언급되지 않는 한은, 비-파라미터 만-휘트니(Mann-Whitney) U 시험을 프리즘 (Prism) [그래프패드 소프트웨어, 인크(GraphPad Software, Inc.)]에서 수행하여 실험 데이터를 분석하였다. 포스포-특이적 유동 세포계수법 데이터는 역 쌍곡선 사인 (arcsinh)을 취함으로써 변환시켰고, 기존에 보고된 바와 같은 (문헌 [Irish et al., PNAS, 2010)] 상응하는 기준선 (자극되지 않음) 값 이상의 비율을 획득하였다. 맹검 실험은 전혀 수행하지 않았다. 어떠한 샘플도 분석으로부터 배제하지 않았다. P 값은 실험군 값과 대조군 (CT) 값 간의 유의적 차이를 표시한다. *p<0.05; **p<0.01. 오차 막대는 +/- SEM을 나타낸다.
결과
동종이계 종양 거부의 세포학적 근거를 연구하기 위하여, MHC 매칭되긴 하지만, 유전적으로 별개인 C57Bl/6 및 129S1 마우스에서의 종양에 대한 면역 반응을 비교하였다 (도 1a에 예시됨). B16 흑색종 세포은 동계 C57Bl/6 숙주에서는 지속적으로 확장되었지만, 동종이계 129S1 숙주에서는 자발적으로 퇴행하였다 (도 1b). 이와 반대로, KrasG12D /+;LSL-Trp53R172H /+;Pdx-1-Cre 마우스로부터 단리된13 LMP 췌장 종양 세포는 129S1 마우스에서는 지속적으로 성장하였지만, C57Bl/6 동물에서는 자발적으로 퇴행하였다 (도 1b). 양 모델에서, NK 세포의 고갈이 종양 거부를 방지하지 못하였다 (도 5a). 이와는 달리, 숙주 T 세포는 동종이계 종양 거부에 있어서 필요한 역할을 하였는데, 이는 동종이계 종양 접종에 앞서 CD4+ 또는 CD8+ T 세포를 고갈시키는 것이 종양 퇴행을 방지하였기 때문이다 (도 1b). T 세포 증식과 동종이계 종양의 침윤은 약 1주째에 시작하여 10일 내지 12일째에 피크가 되었다 (도 1c 및 도 5b). 또한, 동종이계 종양은 동계 종양보다 더 많은 수의 성숙한 골수성 DC (mDC; Gr1neg/CD11b+/CD11c+/MHCII+/CD64dim)와 더 적은 수의 미숙한 골수성 세포 (iMC; Gr1hi/CD11bhi/MHCIIneg /lo)를 함유하였다 (도 1d). 더욱이, 동종이계 종양 내의 DC는 동계 종양 내의 DC와 비교해서 더 높은 수준의 MHCII, CD86 및 CD40을 발현하였는데, 이는 활성화된 표현형이 더 많다는 것을 반영한다 (도 5c). CFSE로 표지된 동종이계 LMP 세포를 동물에게 접종한 후, mDC는 또한 종양 세포-유래 분자를 내재화하였는데, 이는 이들이 상기 조건하에 종양 연관 항원을 프로세싱하고 제시할 수도 있다는 것을 제안한다 (도 1e). 그러나, 동종이계 종양 세포와 공동 배양하면, 동계 DC와 비교해서 DC 활성화와 종양 항원의 흡수가 거의 또는 전혀 유도되지 않았고 차별적 반응도 전혀 유도되지 않았는데 (도 1f, 도 5d), 이는 효율적인 종양 항원 내재화와 DC 활성화를 촉진시키기 위해서는 생체 내에 부가의 인자가 존재할 필요가 있다는 것을 명확하게 보여준다.
항체는 면역 복합체 (IC)의 Fc 수용체-매개된 세포내 이입을 통하여 DC에 의한 항원 흡수를 증진시킬 수 있기 때문에, 종양-결합성 항체의 존재를 시험하였다. IgM 및 IgG 항체는 종양 접종 후 24시간 이내 (도 1g-i), T 세포가 출현하기 전에 (도 1c), 동종이계 종양 세포와 결합되었지만, 동계 종양 세포와는 그렇지 못하였다. 더욱이, 동종이계 항체는 배양 중인 동계 항체보다 상당히 더 효과적으로 종양 세포와 결합되었다 (도 5e). 종양 거부에 있어서의 항체의 잠재적 역할을 평가하기 위하여, B 세포를 동종이계 숙주로부터 고갈시켰다. 일단 순환성 IgG 및 IgM의 수준이 각각 180 및 10 ㎍/mL 아래로 떨어지면, 마우스에게 동종이계 종양을 시험감염시켰다. B 세포 고갈은 처리되지 않은 숙주와 비교해서 종양 발생을 가속화시켰고, 종양 거부를 지연 또는 방지하였다 (도 1j). 더욱이, 동종이계 IgG의 적응 전이는 동계 종양의 거부를 가능하게 하였지만, IgM은 그렇지 못하였다 (도 1k 및 도 5f). 이러한 효과는 Fc 감마 수용체 (FcγR)가 결핍된 마우스에서는 거의 완전히 없어졌다 (도 1k). 이들 결과는 종양-박멸성 면역 반응을 유도하는 데 있어서 동종이계 항체-의존성 시그널링에 대한 필수적인 역할을 제안한다.
DC에 의한 종양 흡수에 대한 이들 항체의 효과를 조사하기 위하여, 무손상 종양 세포 또는 종양 용해물을 동계 또는 동종이계 항체와 함께 인큐베이션하여 면역 복합체 (IC)를 형성하고, 이들을 골수-유래 (BM) DC에 부가하였다 (도 2a). 동종이계 IgG 항체 (alloIgG-IC) 또는 IgM 항체 (alloIgM-IC)와 함께 형성된 IC 만이 BMDC 활성화와 종양-유래 단백질의 흡수를 유도시켰다 (도 2b-d). 공초점 영상화 결과, alloIgG-IC와 함께 인큐베이션된 BMDC, 및 MHCII 분자 (도 2e)와 아주 근접한 종양 단백질이 유의적 T 세포 증식을 유도시킨 것으로 밝혀졌는데 (도 2f), 이는 종양 항원이 프로세싱되었고 제시되었다는 사실을 입증해준다.
면역 활성화에 대한 이들 기계론적 원리가 동계 종양 (동일한 마우스 계통으로부터 유래됨)에 대한 항-종양 면역 반응을 유도해낼 수 있었는지를 결정하기 위하여, 동계 숙주에 B16 또는 LMP 세포를 피하 접종하였고, 종양이 45 내지 55 mm2에 도달하면 이를 제거하였는데, 육안으로 종양이 없는 주변부가 대략 2 mm가 되도록 하였다. IgG-IC 또는 IgM-IC를 절개된 종양으로부터 제조하고, 이를 동계 BMDC와 함께 밤새 인큐베이션한 다음, 이를 연속해서, 상응하는 종양-절제된 마우스 내로 피하 주사하였다 (도 2g). alloIgG-IC가 부하된 동계 DC로 처리된 거의 모든 마우스는 적어도 12개월 (실험을 종결한 시점) 동안 종양이 없는 상태를 유지하였다 (도 2h). alloIgG-IC가 부하된 BMDC 만이 종양 재성장을 완전히 방지시키는 데 충분하였는데, 이는 다른 모든 동물은 30일 이내에 종양 재발을 경험하였기 때문이다 (도 2h). alloIgG-IC-부하된 DC가 T 세포를 활성화시킬 수 있고 마우스에게 종양이 재발되지 못하게 할 수 있는 능력은, FcγR이 결여된 DC에서는 완전히 없어졌다 (도 6a-2c). 추가로, alloIgG-IC-처리된 동물로부터의 비장 CD4+ 또는 CD8+ T 세포를 나이브 마우스 내로 적응 전이시키면, 피하 종양의 성장이 방지되었는데 (도 6d-2e), 이는 강력한 종양-특이적 T 세포 반응이 유도되었다는 것을 입증해준다.
그 다음, B16 세포를 변형시키거나 또는 IC 형성과 BMDC 예방접종에 앞서 alloIgG의 분획을 흡수시킴으로써, alloIgG에 의해 인식된 B16 항원의 본질을 조사하였다. 글리칸 잔기를 제거하는 것이 거의 효과를 나타내진 않았지만, 종양 단백질을 변성시키면 치료 혜택이 없어졌다 (도 6f). 더욱이, 막-결합된 B16 단백질로부터 형성된 IC는 종양 재발을 방지시켰지만, 다른 세포하 단백질 분획으로부터 형성된 IC는 그렇게 할 수 없었다 (도 6f). 상기 종양에 대해 동계인 정상 피부, 췌장 및 비장 세포에 대항한 alloIgG를 미리-흡수시키면, 그들의 치료 혜택이 없어졌지만, 상기 항체에 대해 동계인 유사한 세포에 대항한 흡수는 그렇게 하지 못하였다 (도 6g). 부가적으로, 무균 마우스로부터의 alloIgG는 종양 면역을 유도시켰는데 (도 6h), 이는 미생물무리에 반응하여 생성된 IgG가 요구되지 않았다는 사실을 제안한다. 이들 데이터는 alloIgG의 보호 효과가 정상 세포 상에서 발현되는 것으로 예상되는 B16 막 단백질에 대한 항체 결합성에 의존적이라는 것을 표시한다.
결합된 항원의 실체가 아니라 항체의 결합성이 종양-박멸성 면역 반응의 유도에 필수적일 수도 있다. 이러한 관점과 일치하여, B16 막 단백질 상으로 동계 IgG를 공유적으로 가교 결합시킴으로써 형성된 IC는, BMDC와의 인큐베이션 후에도 여전히 치료 혜택을 부여하였다 (도 6i). 더욱이, alloIgG 공여자와 C57Bl/6 숙주에 의해 공유된 항원인 MHC-I에 대항한 모노클로날 항체를 이용하여 형성된 IC가, BMDC와의 인큐베이션 후에도 동물을 보호하는 데 충분하였다 (도 6j). 취합해 보면, 이들 데이터는 상기 치료 전략의 결정적 요소가, 결합된 항원의 특이적 실체 또는 IgG의 기원이 아니라 종양 세포 표면에 대한 IgG의 결합성이란 사실을 입증해준다.
alloIgG-IC로 활성화된 BMDC의 효력은, alloIgG를 동계 종양 내로 직접적으로 주사하는 것이 종양 퇴행을 유도시킬 수도 있다는 것을 제안하였다. 그러나, alloIgG를 자가 숙주에서 성장하는 B16 또는 LMP 종양 내로 주사한 경우에는 미미한 수준의 효과만이 관찰되었다 (도 3a). 이러한 명백한 불일치를 해결하기 위하여, 종양 연관 DC (TADC) (도 7a)를 수득하고, 이들 세포를 종양 용해물 또는 alloIgG-IC와 함께 배양하였다. BMDC와는 달리, TADC는 활성화를 전혀 표시하지 않았고 (도 3b-d 및 도 7b), 종양 재발에 대한 효과도 전혀 없었다 (도 3e). TADC가 alloIgG-IC에 대해 반응하지 못한 이유를 이해하기 위하여, FcγR 자극시 활성화되는 것으로 공지된 세포 시그널링 경로를 조사하였다. alloIgG-IC로의 활성화시 BMDC에서 강력한 p38, ERK1/2 및 JNK 인산화가 관찰되었다. 이와는 달리, TADC는 이들 MAP 키나제의 인산화를 나타내지 못하였다 (도 3f). TADC 상에서의 Fcγ 수용체의 발현 패턴이 BMDC의 발현 패턴과 유사하고, 몇 가지 면역 자극이 DC에서 MAPK 활성화를 유도시키는 것으로 공지되어 있기 때문에, alloIgG-IC에 대한 TADC의 반응에 대한 상기 자극의 효과를 시험하였다. 폴리 I:C, TNFα+CD40L, 또는 IFNγ+CD40L을 부가하면, TADC를 활성화시킬 수 있을 뿐만 아니라 alloIgG-IC를 흡수시킬 수 있게 되었다 (도 3g 및 도 7c-3d).
alloIgG가 이들 자극 중 하나와 조합하여, 계내에서 동계 종양에 대한 면역 반응을 유도시킬 수 있었는지를 후속 시험하였다. 나이브 C57Bl/6 마우스에게 B16 세포를 접종하고, 종양이 18 내지 25 mm2에 도달할 때까지 이를 성장시킬 수 있었다. alloIgG를 TNFα+CD40L 또는 폴리 I:C와 조합하여 종양내 주사하면, 완전한 종양 제거가 유도되었다 (도 4a 및 도 8a-b). 루이스 폐 암종 (LL/2)으로 시험감염된 마우스에서 유사한 결과가 또한 수득되었다 (도 8c).
이들 조건하에 IgG에 반응하는 세포 유형을 평가하기 위하여, alloIgG를 피코에리트린으로 공유적으로 표지시키고 종양내 주사하였다. alloIgG의 치료 효과를 매개하는 세포는 생산적 항-종양 면역 반응의 부재하에서 (alloIgG 단독) 보다도 이러한 반응의 존재하에서 (alloIgG +TNFα+CD40L) alloIgG에 대한 더 큰 결합성을 나타낼 수 있을 것이다. 미숙한 골수성 세포 (SSClo/Gr1hi/CD11bhi)와 대식세포 (CD11b+/Gr1neg/F480+/MHCII+/CD64hi)는 이들 시나리오 둘 다에서 유사한 정도로 IgG와 결합되었지만, mDC (CD11b+/Gr1neg/CD11c+/MHCII+/CD64dull)와 cDC (CD11bneg/CD11chi/MHCII+) 만은 유효한 항-종양 면역 반응 동안 그들의 IgG 결합성이 현저하게 증가되었다 (도 4b 및 도 8d). 더욱이, 처리된 B16 종양으로부터의 침윤성 면역 세포를 분석한 결과, 그러한 종양 부위에서 DC가 상당히 활성화되었고 (도 4c), DC가 배출 림프절 내로 이동한 것으로 밝혀졌다 (도 8e). 부가적으로, TADC가 나이브 마우스 내로 적응 전이되면, B16으로의 후속 시험감염에 대항한 완전한 보호가 부여되었는데 (도 4d), 이들 이들 DC가 강력한 항-종양 면역을 매개하는 데 충분하였다는 사실을 입증해준다. 그와 대조적으로, 동일하게 처리된 마우스로부터의 대식세포를 적응 전이시키면, 보통의 보호 효과만이 나타났지만, B 세포, NK 세포 및 비만 세포는 효과를 전혀 나타내지 않았다 (도 8f). 요약해서 말하자면, 이들 결과는 alloIgG 항체의 치료 효과를 매개하는 데 있어서 DC에 대한 결정적이고도 충분한 역할을 지적한다.
그 다음, 상기 치료 전략을, 돌연변이된 Braf (V600E) 및 Pten의 상실18에 의해 구동된 유전적으로 조작된 침습적 마우스 흑색종 모델에서 시험하였다. 종양 유도시킨지 28일 후, 마우스에게 alloIgG+TNFα+CD40L을 종양내 주사하였다. 처리되지 않은 마우스는 3주 이내에 80 내지 155개 종양을 발생하였지만, 처리된 마우스는 주사된 종양에서 뿐만 아니라 원거리 부위에서도 8주 이상 지속되는 완전한 반응을 경험하였다 (도 4e). 이들 전신성 반응이 전이로 확장 가능하였는지를 평가하기 위하여, 동소(orthotopic) 4T1 유방 종양을 보유하고 있는 동물에게, 그들의 원발성 종양을 주사함으로써 16일째에 처리하였고, 30일째에 폐 전이에 대한 효과를 시험하였다. 처리시, 종양이 배출 림프절 내로 확산되고 폐 미소전이가 용이하게 관찰되는 경우에는, 모든 마우스가 촉진할 수 있는 종양-배출 림프절을 갖고 있는데, 이는 종양 확산을 시사한다. alloIgG+TNFα+CD40L을 이용한 처리만이 가시적 전이뿐만 아니라 원발성 종양의 거의 완전한 해소를 야기시켰다 (도 4f-g). 폐의 조직학적 분석은 상기 마우스의 40%에서 완전한 종양 퇴행을 표시하였고, 남아있는 소수의 미소전이에 백혈구가 많이 침윤되었다 (도 4g 및 도 8g). 요약해서 말하자면, 이들 결과는 종양-결합성 항체를 통하여 DC를 활성화시키면, 강력하고도 전신성인 항-종양 면역 반응이 개시된다는 사실을 입증해준다.
이들 발견의 임상적 관련성을 평가하기 위하여, alloIgG, TNFα 및 CD40L이 종양 흡수와 인간 TADC의 성숙화를 유도시킬 수 있었는지를 시험하였다. 2명의 I기 폐 암종 인간 환자의 종양으로부터의 CD11c+/MHCII+ 세포를 selfIgG로 코팅된 자가 종양 세포와 함께 인큐베이션하거나 또는 10명의 건강한 공여자로부터 풀링된 alloIgG와 함께 인큐베이션하였다. TNFα+CD40L을 부가하면, 이들 DC가 alloIgG-IC를 내재화할 수 있게 되고, 이와 동시에 CD40 및 CD86의 현저한 상향 조절 (이는 활성화를 시사한다)이 유도되었다 (도 4h 및 도 8h). 이들 데이터는 종양-alloIgG IC가 DC를 활성화시키는 기전이 종들 간에 보존된다는 것을 제안한다. 이어서, alloIgG-IC가 부하된 DC가 환자 자신의 CD4+ T 세포를 활성화시킬 수 있었는지를 시험하였다. 2명의 악성 흉막 중피종 인간 환자로부터의 BMDC를 자가 종양 용해물 단독과 인큐베이션하거나, 자가 IgG와 조합된 자가 종양 용해물과 함께 인큐베이션하거나, 또는 건강한 공여자로부터 풀링된 alloIgG와 함께 인큐베이션하였다. 양 환자에게서, 자가 IgG-IC와 함께 인큐베이션된 것이 아니라, 풀링된 alloIgG-IC와 함께 인큐베이션된 BMDC만이 현저한 활성화를 나타내어, HLA-DR 발현을 상향 조절하고 상응하는 환자로부터 수집된 CD4+ T 세포의 증식을 구동시켰다 (도 4i).
지난 20년 동안, 종양 퇴행 동안의 항체의 역할은 논란의 근원이었다. 본원에 제시된 데이터는 TADC가 IgG-IC에 대해 자연적으로는 반응성이 아니지만, 특이적 자극을 부가하면 이들이 종양-박멸성 면역을 구동시킬 수 있다는 사실을 명확히 보여준다. 본원에 제시된 데이터는 DC에 의한 항체-매개된 흡수 후에 종양 항원을 제시하는 것이, 종양에 대항한 강력한 전신성 T 세포-매개된 면역 반응을 개시하는 데 충분하다는 사실을 입증해준다. 더욱이, 이러한 작업은 심지어 MHC-매칭된 개체들 간의 종양 전파를 방지시켜 주는, 면역학적 인식 및 표적화의 상기 기본적인 기전이 암에 대한 강력한 치료 전략으로서 이용될 수 있다는 사실을 제안한다.
참고문헌
Figure pct00015
Figure pct00016
Figure pct00017
Figure pct00018
실시예 2: AlloIgG 항체는 동계 IgG에 의해 전형적으로 인식되지 않는 항원을 인식할 수 있다.
면역침전 및 질량 분광법을 이용하여, 동종이계 IgG ("alloIgG")(129 마우스의 혈청으로부터 유래됨) 대 동계 IgG ("synIgG")(C57Bl/6 마우스의 혈청으로부터 유래됨)에 의해 인식된 B16 흑색종 (마우스 종양)에서의 항원을 확인하였다. SynIgG는 11개 단백질을 침전시켰는데, 이러한 단백질은 alloIgG에 의해서는 침전되지 않았다 (표 1). 이와는 달리, alloIgG는 synIgG에 의해서는 인식되지 않은 많은 단백질을 침전시켰다 (표 2). synIgG와 alloIgG 둘 다에 의해 침전된 단백질이 표 3에 제시되어 있다. 따라서, 표 2 내의 단백질 중 어느 하나 (예를 들어, 또는 그들의 오르소로그, 예컨대 그들의 인간 오르소로그)를 표적으로 하는 항체가 상기 대상 방법, 조성물 및 키트에서 적합한 동종이계 IgG 항체로서 사용될 수 있다 (예를 들어, DC 자극과 조합하여 사용되는 경우에 항-종양 효과를 유도시킨다).
<표 1>
synIgG에 의해 풍부해진 단백질 (alloIgG에 의해서가 아니라, synIgG에 의해 침전된 단백질)
Figure pct00019
<표 2>
alloIgG에 의해 풍부해진 단백질 (synIgG에 의해서가 아니라, alloIgG에 의해 침전된 단백질)
Figure pct00020
Figure pct00021
Figure pct00022
<표 3>
풍부해지지 않은 단백질 (alloIgG 및 synIgG에 의해 동등하게 침전된 단백질)
Figure pct00023
Figure pct00024
실시예 3
다음 실험 방법 및 결과는 T 세포가, APC를 부하하기 위해 사용되었던 동종항체에 의해 인식된 항원과는 상이한 항원 (부하된 APC에 의해 T 세포에 제시됨)을 인식한다는 개념을 뒷받침해주는 증거를 제공한다. 그 결과 (도 11 내지 14)는 상기 요법이 CD45+ 세포 (즉, 단핵 백혈구)의 거대한 종양 침윤물 (그의 상당 부분은 활성화된 CD4 및 CD8 T 세포이다)을 유도시킨다는 것을 보여준다. 그 결과는 또한, 종양 시험감염으로부터 나이브 마우스를 보호할 수 있는, 비장으로부터의 CD4 또는 CD8 T 세포의 능력에 의해 나타내어지는 바와 같이, 종양으로부터 원거리에 있는 부위 (예를 들어, 비장)에서 상당한 면역 반응이 관찰된다는 것을 보여준다. 그 결과는 또한, 상기 반응이 단일 종양 연관 항원 (막횡단 당단백질-MMB)에 대한 폴리클로날 항체를 이용한 경우 또는 DC 자극 단독을 이용한 경우보다 alloIgG+DC 자극을 이용한 경우에 더 크다는 것을 보여준다.
도 10은 피하 주사하고 성장시켰던 결장직장암 (CT26)을, DC 자극과 조합하여 모노클로날 마우스 항-마우스 MHC 부류 I 항체로 처리하면, 완전한 종양 퇴행이 초래되었다는 사실을 예시해준다. MHC I은 CT26 종양 세포 상에서 고도로 발현되기 때문에, 이러한 결과는 종양 세포와 결합된 항체의 전체 양이 항-종양 반응의 효력의 결정 요인이라는 가설과 일치한다. 전신 독성이 없긴 하지만, 종양 부근에 상당한 염증 반응이 존재하는데, 이는 수일 내에 완전히 치유되었다. MHC 부류 I은 많은 종양 상에서 하향 조절되어, CD8 T 세포 매개된 세포독성에 대해 저항성이 되도록 한다. DC 자극은 T 세포를 활성화시키고; 종양을 침윤시킨 다음 IFNg를 분비시킨 다른 세포도 활성화시킴으로써, 종양 상에서의 MHC I (및/또는 II) 발현을 상향 조절한 것으로 예상된다. 일부 경우에, IFNg 그 자체가 APC (예를 들어, DC) 자극제로서 사용될 수 있다. 일부 경우에, 항-MHC-I 항체 (예를 들어, 하나 이상의 APC 자극, 예를 들어, 하나 이상의 DC 자극과 조합됨)는 MHC-I의 고 수준 발현이 결여된 종양에 대하여 강력한 치료 효과를 나타낼 수 있다.
도 10. 모노클로날 동종이계 항-MHC I 항체는 DC 자극과 조합하여, 완전한 종양 퇴행을 유도시킨다. 4x106개 CT26 결장암 세포를 Balb/c 마우스의 우측 옆구리 위로 피하 주사하였다. 일단 종양 크기가 25 mm2에 도달하면, 이를 처리하지 않은 채로 두거나 (오픈 원), TNFa+aCD40 효능제 + 동종이계 IgG를 종양 내로 주사하거나 (오픈 사각형), 또는 TNFa+aCD40 효능제 + aH-2Kd IgG (항-MHC 부류 I 항체)를 종양 내로 주사하였다 (솔리드 사각형).
도 11a-c. 요법 후 종양 내의 면역 세포 침윤물. 종양이 25 mm2에 도달할 때까지 성장시켰던 2x105개의 B16 흑색종 세포를 마우스에게 피하 주사하였다. 이어서, 마우스에게 PBS를 종양내 주사하거나 (처리되지 않음), TNFa+aCD40 단독을 종양내 주사하거나, 또는 TNFa+aCD40 +동종이계 IgG (129S1 마우스로부터 유래됨)의 조합물, 또는 TNFa+aCD40 +막횡단 당단백질-NMB (TG-NMB, GPNMB)에 대한 항체의 조합물을 종양내 주사하였다. 일부 경우에, 기능성 Fcg 수용체 시그널링이 결여된 마우스에게 TNFa+aCD40 +동종이계 IgG를 주사하였다. 6일 후, 종양을 절개하고, 종양 세포를 포함한 전체 세포성 조성물을 유동 세포계수법에 의해 시험하였다 (n=8). a. Y 축은 총 종양 세포 중의 % CD45 세포이다. b . Y 축은 CD45+ 세포 중의 % INFg+ CD44+ 세포 (CD8 T 세포 및 CD4 T 세포에 대해 정량화됨)이다. c. Y 축은 gp100 사량체를 발현하는 CD8+ 세포의 % 및 Trp2 사량체를 발현하는 CD8+ 세포의 %이다.
도 12. 나이브 마우스에서 종양 발생에 대한, 처리된 마우스로부터의 T 세포의 적응 전이의 효과. 비장 T 세포를, PBS로 처리하거나 (처리되지 않음), TNFa+aCD40으로 처리하거나, 또는 TNFa+aCD40을 동종이계 IgG (alloIgG)와 조합하여 처리하거나 또는 막횡단 당단백질-NMB (TG-NMB; GPNMB)에 대한 항체와 조합하여 처리한 지 6일 후에, B16-보유 마우스로부터 정제하였다. 5x106개의 CD4+ 세포 (상단) 또는 CD8+ 세포 (하단)를 나이브 마우스 내로 정맥내 주사한 다음, 1시간 후에 2.5x105개의 B16 세포를 피하 주사하였다.
도 13. 처리한 지 6일 후 B16 종양으로부터의 대표적인 FACS 플롯. 숫자는 양성 세포의 %를 나타낸다.
도 14. 처리한 지 6일 후 B16 종양으로부터의 대표적인 FACS 플롯.
실시예 4: 종양 결합 특성, 및 DC 프라이밍과 T 세포 활성화를 유도시킬 수 있는 능력에 관하여 알아보기 위해 상이한 부류 및 하위부류의 인간 동종항체를 분석한다
본원에 제공된 데이터는 동종이계 종양을 박멸시키는 항-종양 T 세포 반응이 자연 발생적 동종항체를 통하여 APC (예를 들어, DC)를 활성화시킴으로써 매개된다는 사실과, 그 효과가 항체 이소형 (도 2g) 및 IgG 하위부류 (도 15)에 의존적이란 사실을 제안한다. 시험관내 인간 데이터는 동종이계 IgG Ab가 신선하게 단리된 인간 종양 세포와 결합한다는 것과, alloIgG-종양 면역 복합체 (IC)가 DC 성숙화를 증진시키고, 종양 연관 항원 (TAA)의 DC 흡수를 발전시키며, DC에 의한 자가 T 세포 활성화를 촉진시킨다는 것을 보여준다 (도 4). 상이한 Ig 부류 및 하위부류로 구성된 alloIg-IC 제제들 간의 차이점은 그들의 인간 APC (예를 들어, DC)의 활성화에 있어서 비교한다. 임상 등급의 폴리클로날 동종항체 제제를 설계하는 데 도움을 주기 위하여, 가장 강력한 종양 결합 특성과 DC 활성화 특성을 보유하고 있는 이소형 (IgG, IgM, IgA, IgE) 및 하위부류 (IgG1, 2, 3, 또는 4). 예를 들어, 인간 mo-DC, TADC, 및 종양 세포는 치유적 절제술이 진행되는 I기 및 II기 NSCLC 환자로부터 신선하게 수득한다. 가장 흔한 2가지 NSCLC 조직학인 선암종과 편평세포 암종을 연구한다. 동종항체는 항-HLA Ab에 대해 음성인 20세 내지 40세의 건강한 여성 공여자 10명과 남성 공여자 10명의 혈청으로부터 수득한다. 신선한 인간 NSCLC 조직에 대한 접근과 건강한 공여자 혈액에 대한 접근이 용이하게 가능하다.
고정되고 동결된 인간 NSCLC 종양 박편에 대한 면역형광 현미경 검사, 및 FACS-정제된 인간 NSCLC 종양 세포 상에서의 유동 세포계수법을 수행하여, 인간 IgG의 4가지 상이한 하위부류들 간에 종양 결합도 상의 차이가 존재하는 지를 결정한다. 전체 인간 IgG, IgG 하위부류 (IgG1, IgG2, IgG3, IgG4), IgM, IgA, 및 IgE는 20명의 건강한 공여자의 풀링된 혈청으로부터 단리한다. NSCLC에 대한 절제술이 진행되는 8명의 환자로부터의 종양을 면역형광 현미경 검사와 유동 세포계수법 둘 다를 위해 준비한다. 매칭된 "비-종양" 폐는, 종양으로부터 원거리에 있는 부위에서 폐엽 절제술 표본으로부터 수득하고, 이를 대조군으로서 사용한다. 면역형광 현미경 검사 실험을 위하여, 고정되고 동결된 인간 NSCLC 박편을 정제된 공여자 Ab 분획과 함께 인큐베이션한 다음, 인간 전체 IgG, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA 또는 IgE (DAPI에 덧붙여)에 대항한 플루오로크롬(fluorochrome)-접합된 항체로 염색하고, 첸(Zen) 소프트웨어 (차이스; 미국 캘리포니아주 더블린)를 이용하여 동종항체 염색 정도를 정량화한다. 이는 양성으로 염색되는 종양 부위의 % 뿐만 아니라 염색 세기를 포함한다. 그 결과는 유동 세포계수법으로 확증한다. 신선하게 수득된 인간 NSCLC 표본을, DNAse I 및 콜라게나제를 함유하는 HBSS에서 30분 동안 소화시켜 단일 세포 현탁액을 수득하고, 이를 정제된 공여자 Ab 분획과 함께 인큐베이션하며, 세척한 다음, 인간 전체 IgG, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA 또는 IgE에 대항한 플루오로크롬-접합된 Ab로 염색한다. 상이한 하위부류 각각의 평균 형광 지수 (MFI)를 종양 세포 (CD45negSSChigh) 상에서 결정한다. 자가 Ab (수술이 진행되는 환자의 혈청으로부터 유래된다)가 대조군으로서 제공될 수 있다. 시판용 정맥내 면역글로불린 (IVIG)의 적어도 2가지 공급원이 이들 결합 검정에서 부가적으로 시험된다.
종양 세포에 대한 Ab 결합성과 APC (예를 들어, DC) 활성화는 2가지 독립적인 과정일 수 있기 때문에, 인간 APC (예를 들어, DC)를 활성화시킬 수 있는 능력을 보유하고 있는 인간 alloIgG의 하위부류를 확인할 수 있다. 전체 IgG, 개개의 IgG 하위부류 또는 IgM을 신선하게 단리된 NSCLC 인간 종양 세포와 함께 30분 동안 인큐베이션하여 alloIgG-IC를 형성한다. 이들 항체-종양 세포 면역 복합체는, 아주반트 TNFα + CD40L의 존재하에 NSCLC에 대한 절제술이 진행되는 8명의 환자로부터의 자가 혈액 mo-DC와 함께 밤새 배양한다. 다음 데이터가 수득된다: 1) DC 성숙화의 양 또는 정도, 2) DC에 의한 TAA 흡수의 양 또는 정도, 및 3) DC의 T 세포 자극 능력 (도 4에 도시된 바와 같음). 인간 TADC를 활성화시킬 수 있는 alloIgG-IC의 능력을 또한 조사하고, 5명 환자의 종양 표본으로부터 단리된 FACS-정제된 TADC (HLA-DR+CD3-CD19-CD56-CD14-)에서 동일한 실험을 수행한다. 1 cm3 종양 표본을 이용하여 충분한 TADC 수율을 수득할 수 있고 (이는 대략 1 내지 5 X 105개 TADC를 산출시킨다), 이러한 크기의 종양 표본은 대부분의 절제 표본으로부터 수득할 수 있다. DC 성숙화는 HLA-DR (MHC-II)의 발현 및 동시 자극성 분자 CD40, CD80, 및 CD86에 의해 평가한다. TAA의 DC 흡수는 DC를 CFSE-표지된 종양 세포와 함께 배양하고, 유동 세포계수법을 이용하여 DC에서의 CFSE-표지된 종양 단백질의 흡수를 검출함으로써 평가한다. DC에 의한 T 세포 활성화는 alloIgG-IC 부하된 DC를 자가 환자 혈액 CD4 T 세포와 함께 배양하고, 3H-티미딘 혼입량에 의해 T 세포 증식을 측정함으로써 검정한다. 대조군은 자가 환자 Ab를 포함할 수 있고, 동종이계 IgA 및 IgE를 시험하여, 이들이 종양과 결합한 것으로 밝혀졌는지를 결정한다. 부가적으로, 종양-결합성 Ab가 자가 혈청에 (보다 낮은 역가로) 존재할 가능성은, 상기 환자로부터 유래된 10배 농도의 IgG를 이용함으로써 창출된 IgG-IC를 시험함으로써 연구한다.
전술된 내용은 본 발명의 원리들을 단지 예시하고 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 본원에 명백하게 기재되거나 제시되지는 않았지만, 본 발명의 원리들을 구체화하고 본 발명의 요지 및 범위 내에 포함되는 각종 배열을 고안할 수 있을 것으로 인지될 것이다. 더욱이, 본원에 나열된 모든 예 및 조건부 언어는 주로, 관련 기술분야를 발전시키기 위해 본 발명자들에 의해 부여된 개념과 본 발명의 원리를 이해하는 데 있어서 도움을 주고자 한 것이고, 상기 구체적으로 나열된 예 및 조건을 제한하지 않는 것으로 간주되어야 한다. 더욱이, 본 발명의 원리, 측면 및 실시양태 뿐만 아니라 그의 구체적 예를 나열하는 본원의 모든 설명서는 그의 구조적 등가물과 기능적 등가물 둘 다를 포괄하고자 한다. 부가적으로, 이러한 등가물은 현재 공지되어 있는 등가물과 미래에 개발될 등가물, 즉 구조에 상관없이 동일한 기능을 수행하는 것으로 개발된 임의의 요소 둘 다를 포함하는 것으로 의도된다. 따라서, 본 발명의 범위는 본원에 제시되고 기재된 예시 실시양태로 제한되지 않는다. 오히려, 본 발명의 범위와 요지는 첨부된 청구범위에 의해 구체화된다.
SEQUENCE LISTING <110> ENGLEMAN, Edgar G CARMI, Yaron <120> METHODS AND COMPOSITIONS FOR ANTIBODY AND ANTIBODY-LOADED DENDRITIC CELL MEDIATED THERAPY <130> STAN-1087WO <140> PCT/US15/12511 <141> 2015-01-22 <150> 62/066,574 <151> 2014-10-21 <150> 61/930,386 <151> 2014-01-22 <160> 14 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 261 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Ile Glu Thr Tyr Asn Gln Thr Ser Pro Arg Ser Ala Ala Thr Gly 1 5 10 15 Leu Pro Ile Ser Met Lys Ile Phe Met Tyr Leu Leu Thr Val Phe Leu 20 25 30 Ile Thr Gln Met Ile Gly Ser Ala Leu Phe Ala Val Tyr Leu His Arg 35 40 45 Arg Leu Asp Lys Ile Glu Asp Glu Arg Asn Leu His Glu Asp Phe Val 50 55 60 Phe Met Lys Thr Ile Gln Arg Cys Asn Thr Gly Glu Arg Ser Leu Ser 65 70 75 80 Leu Leu Asn Cys Glu Glu Ile Lys Ser Gln Phe Glu Gly Phe Val Lys 85 90 95 Asp Ile Met Leu Asn Lys Glu Glu Thr Lys Lys Glu Asn Ser Phe Glu 100 105 110 Met Gln Lys Gly Asp Gln Asn Pro Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser 115 120 125 Glu Ala Ser Ser Lys Thr Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly 130 135 140 Tyr Tyr Thr Met Ser Asn Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln 145 150 155 160 Leu Thr Val Lys Arg Gln Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr 165 170 175 Phe Cys Ser Asn Arg Glu Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser 180 185 190 Leu Cys Leu Lys Ser Pro Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala 195 200 205 Ala Asn Thr His Ser Ser Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His 210 215 220 Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn 225 230 235 240 Val Thr Asp Pro Ser Gln Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe 245 250 255 Gly Leu Leu Lys Leu 260 <210> 2 <211> 1834 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 2 actttgacag tcttctcatg ctgcctctgc caccttctct gccagaagat accatttcaa 60 ctttaacaca gcatgatcga aacatacaac caaacttctc cccgatctgc ggccactgga 120 ctgcccatca gcatgaaaat ttttatgtat ttacttactg tttttcttat cacccagatg 180 attgggtcag cactttttgc tgtgtatctt catagaaggt tggacaagat agaagatgaa 240 aggaatcttc atgaagattt tgtattcatg aaaacgatac agagatgcaa cacaggagaa 300 agatccttat ccttactgaa ctgtgaggag attaaaagcc agtttgaagg ctttgtgaag 360 gatataatgt taaacaaaga ggagacgaag aaagaaaaca gctttgaaat gcaaaaaggt 420 gatcagaatc ctcaaattgc ggcacatgtc ataagtgagg ccagcagtaa aacaacatct 480 gtgttacagt gggctgaaaa aggatactac accatgagca acaacttggt aaccctggaa 540 aatgggaaac agctgaccgt taaaagacaa ggactctatt atatctatgc ccaagtcacc 600 ttctgttcca atcgggaagc ttcgagtcaa gctccattta tagccagcct ctgcctaaag 660 tcccccggta gattcgagag aatcttactc agagctgcaa atacccacag ttccgccaaa 720 ccttgcgggc aacaatccat tcacttggga ggagtatttg aattgcaacc aggtgcttcg 780 gtgtttgtca atgtgactga tccaagccaa gtgagccatg gcactggctt cacgtccttt 840 ggcttactca aactctgaac agtgtcacct tgcaggctgt ggtggagctg acgctgggag 900 tcttcataat acagcacagc ggttaagccc accccctgtt aactgcctat ttataaccct 960 aggatcctcc ttatggagaa ctatttatta tacactccaa ggcatgtaga actgtaataa 1020 gtgaattaca ggtcacatga aaccaaaacg ggccctgctc cataagagct tatatatctg 1080 aagcagcaac cccactgatg cagacatcca gagagtccta tgaaaagaca aggccattat 1140 gcacaggttg 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tacaaaaggc gaagaagact gactcaggct 900 taagctgcca gccagagagg gagtcatttc attggcgttt gagtcagcaa agaagtcaag 960 atggccaaag ttccagacat gtttgaagac ctgaagaact gttacagtga aaatgaagaa 1020 gacagttcct ccattgatca tctgtctctg aatcagaaat ccttctatca tgtaagctat 1080 ggcccactcc atgaaggctg catggatcaa tctgtgtctc tgagtatctc tgaaacctct 1140 aaaacatcca agcttacctt caaggagagc atggtggtag tagcaaccaa cgggaaggtt 1200 ctgaagaaga gacggttgag tttaagccaa tccatcactg atgatgacct ggaggccatc 1260 gccaatgact cagaggaaga aatcatcaag cctaggtcag caccttttag cttcctgagc 1320 aatgtgaaat acaactttat gaggatcatc aaatacgaat tcatcctgaa tgacgccctc 1380 aatcaaagta taattcgagc caatgatcag tacctcacgg ctgctgcatt acataatctg 1440 gatgaagcag tgaaatttga catgggtgct tataagtcat caaaggatga tgctaaaatt 1500 accgtgattc taagaatctc aaaaactcaa ttgtatgtga ctgcccaaga tgaagaccaa 1560 ccagtgctgc tgaaggagat gcctgagata cccaaaacca tcacaggtag tgagaccaac 1620 ctcctcttct tctgggaaac tcacggcact aagaactatt tcacatcagt tgcccatcca 1680 aacttgttta ttgccacaaa gcaagactac 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atggcttatt acagtggcaa tgaggatgac ttgttctttg aagctgatgg ccctaaacag 180 atgaagtgct ccttccagga cctggacctc tgccctctgg atggcggcat ccagctacga 240 atctccgacc accactacag caagggcttc aggcaggccg cgtcagttgt tgtggccatg 300 gacaagctga ggaagatgct ggttccctgc ccacagacct tccaggagaa tgacctgagc 360 accttctttc ccttcatctt tgaagaagaa cctatcttct tcgacacatg ggataacgag 420 gcttatgtgc acgatgcacc tgtacgatca ctgaactgca cgctccggga ctcacagcaa 480 aaaagcttgg tgatgtctgg tccatatgaa ctgaaagctc tccacctcca gggacaggat 540 atggagcaac aagtggtgtt ctccatgtcc tttgtacaag gagaagaaag taatgacaaa 600 atacctgtgg ccttgggcct caaggaaaag aatctgtacc tgtcctgcgt gttgaaagat 660 gataagccca ctctacagct ggagagtgta gatcccaaaa attacccaaa gaagaagatg 720 gaaaagcgat ttgtcttcaa caagatagaa atcaataaca agctggaatt tgagtctgcc 780 cagttcccca actggtacat cagcacctct caagcagaaa acatgcccgt cttcctggga 840 gggaccaaag gcggccagga tataactgac ttcaccatgc aatttgtgtc ttcctaaaga 900 gagctgtacc cagagagtcc tgtgctgaat gtggactcaa tccctagggc tggcagaaag 960 ggaacagaaa 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Asp Met His His Ile Glu Glu Ser Phe Gln 65 70 75 80 Glu Ile Lys Arg Ala Ile Gln Ala Lys Asp Thr Phe Pro Asn Val Thr 85 90 95 Ile Leu Ser Thr Leu Glu Thr Leu Gln Ile Ile Lys Pro Leu Asp Val 100 105 110 Cys Cys Val Thr Lys Asn Leu Leu Ala Phe Tyr Val Asp Arg Val Phe 115 120 125 Lys Asp His Gln Glu Pro Asn Pro Lys Ile Leu Arg Lys Ile Ser Ser 130 135 140 Ile Ala Asn Ser Phe Leu Tyr Met Gln Lys Thr Leu Arg Gln Cys Gln 145 150 155 160 Glu Gln Arg Gln Cys His Cys Arg Gln Glu Ala Thr Asn Ala Thr Arg 165 170 175 Val Ile His Asp Asn Tyr Asp Gln Leu Glu Val His Ala Ala Ala Ile 180 185 190 Lys Ser Leu Gly Glu Leu Asp Val Phe Leu Ala Trp Ile Asn Lys Asn 195 200 205 His Glu Val Met Phe Ser Ala 210 215 <210> 12 <211> 1048 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 12 tgcacacact gacaggagtc caagaatgtg cactgaggga gcgtttccgc acagatctgc 60 gtgttcctta ccactcacac atgtgcacac acatatccat gtgtgtgtgc cagtgctttg 120 gggctctgtt ccacggggca tgaagttaca gtgtgtttcc ctttggctcc tgggtacaat 180 actgatattg tgctcagtag acaaccacgg tctcaggaga tgtctgattt ccacagacat 240 gcaccatata gaagagagtt tccaagaaat caaaagagcc atccaagcta aggacacctt 300 cccaaatgtc actatcctgt ccacattgga gactctgcag atcattaagc ccttagatgt 360 gtgctgcgtg accaagaacc tcctggcgtt ctacgtggac agggtgttca aggatcatca 420 ggagccaaac cccaaaatct tgagaaaaat cagcagcatt gccaactctt tcctctacat 480 gcagaaaact ctgcggcaat gtcaggaaca gaggcagtgt cactgcaggc aggaagccac 540 caatgccacc agagtcatcc atgacaacta tgatcagctg gaggtccacg ctgctgccat 600 taaatccctg ggagagctcg acgtctttct agcctggatt aataagaatc atgaagtaat 660 gttctcagct tgatgacaag gaacctgtat agtgatccag ggatgaacac cccctgtgcg 720 gtttactgtg ggagacagcc caccttgaag gggaaggaga tggggaaggc cccttgcagc 780 tgaaagtccc actggctggc ctcaggctgt cttattccgc ttgaaaatag ccaaaaagtc 840 tactgtggta tttgtaataa actctatctg ctgaaagggc ctgcaggcca tcctgggagt 900 aaagggctgc cttcccatct aatttattgt aaagtcatat agtccatgtc tgtgatgtga 960 gccaagtgat atcctgtagt acacattgta ctgagtggtt tttctgaata aattccatat 1020 tttacctatg aaaaaaaaaa aaaaaaaa 1048 <210> 13 <211> 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gagcagcccg caagcaccaa gtgagaggca tgaagttaca gtgtgtttcc 960 ctttggctcc tgggtacaat actgatattg tgctcagtag acaaccacgg tctcaggaga 1020 tgtctgattt ccacagacat gcaccatata gaagagagtt tccaagaaat caaaagagcc 1080 atccaagcta aggacacctt cccaaatgtc actatcctgt ccacattgga gactctgcag 1140 atcattaagc ccttagatgt gtgctgcgtg accaagaacc tcctggcgtt ctacgtggac 1200 agggtgttca aggatcatca ggagccaaac cccaaaatct tgagaaaaat cagcagcatt 1260 gccaactctt tcctctacat gcagaaaact ctgcggcaat gtcaggaaca gaggcagtgt 1320 cactgcaggc aggaagccac caatgccacc agagtcatcc atgacaacta tgatcagctg 1380 gaggtccacg ctgctgccat taaatccctg ggagagctcg acgtctttct agcctggatt 1440 aataagaatc atgaagtaat gttctcagct tgatgacaag gaacctgtat agtgatccag 1500 ggatgaacac cccctgtgcg gtttactgtg ggagacagcc caccttgaag gggaaggaga 1560 tggggaaggc cccttgcagc tgaaagtccc actggctggc ctcaggctgt cttattccgc 1620 ttgaaaatag ccaaaaagtc tactgtggta tttgtaataa actctatctg ctgaaagggc 1680 ctgcaggcca tcctgggagt aaagggctgc cttcccatct aatttattgt aaagtcatat 1740 agtccatgtc 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Claims (135)

  1. 암을 앓는 개체에게
    (i) 상기 개체의 암세포의 항원과 결합하는 동종이계(allogeneic) IgG 항체를 포함하는 항체 조성물; 및
    (ii) 상기 개체의, 수지상 세포, 대식세포, 또는 B-세포인 APC를 활성화시키는 처치
    를 투여함으로써, 암을 앓는 개체를 치료하는 것
    을 포함하는, 상기 개체의 치료 방법.
  2. 제1항에 있어서, 동종이계 IgG 항체가 상기 개체 내의 암세포 상의 항원과 결합되어 면역복합체를 형성하는 것인 방법.
  3. 제2항에 있어서, APC의 활성화가, 상기 개체에게서 APC에 의한 면역복합체의 흡수 및 T 세포에 대한 암세포의 다중 항원의 제시를 포함하는 것인 방법.
  4. 제3항에 있어서, T 세포에 제시된 다중 항원 중 적어도 하나가 면역복합체 내의 항원과 상이한 것인 방법.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 개체에게서 암세포의 수를 감소시키는 방법.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 암이 고형 종양인 방법.
  7. 제6항에 있어서, 고형 종양의 직경이 1 cm 미만인 방법.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 개체가 인간인 방법.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 동종이계 IgG 항체가 암세포의 표면 상에 적어도 10,00개 카피로 존재하는 항원과 결합되는 것인 방법.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 동종이계 IgG 항체가 비-암세포 상의 항원보다 적어도 100배, 1,000배, 10,000배 더 높은 친화도 (100배, 1,000배, 10,000배 더 낮은 Kd)로 암세포 상의 항원과 결합하며, 여기서 암세포 상의 항원이 비-암세포 상의 항원과 비교해서 하나 이상의 다형성을 갖는 것인 방법.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 동종이계 IgG 항체가 비-암세포와 결합하는 결합력보다 더 높은 결합력으로, 동종이계 IgG 항체가 암세포와 결합되는 것인 방법.
  12. 제1항에 있어서, 수지상 세포를 활성화시키는 처치가 수지상 세포 자극제를 포함하는 수지상 세포 자극성 조성물을 포함하는 것인 방법.
  13. 제12항에 있어서, 수지상 세포 자극성 조성물이 (i) 톨-유사 수용체 (TLR) 효능제; (ii) CD40 효능제; (iii) CD40 효능제와 염증 유발성 시토카인; (iv) 체크포인트 분자 중화 화합물; (v) 인돌아민 2,3-디옥시게나제 (IDO) 억제제; (vi) NFkB 활성화제; (vii) 칼슘 채널을 개방시키는 화합물; 및 (viii) T 세포-관련 동시 자극성 분자로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 수지상 세포 자극제를 포함하는 것인 방법.
  14. 제12항 또는 제13항에 있어서, 수지상 세포 자극성 조성물이 CD40 효능제와 염증 유발성 시토카인을 포함하는 것인 방법.
  15. 제13항 또는 제14항에 있어서, 염증 유발성 시토카인이 종양 괴사 인자 알파 (TNFα) 및/또는 IFNγ인 방법.
  16. 제12항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 수지상 세포 자극제가 동종이계 IgG 항체와 접합되는 것인 방법.
  17. 제1항에 있어서, B-세포를 활성화시키는 처치가 B-세포 자극제를 함유하는 B-세포 자극성 조성물을 포함하는 것인 방법.
  18. 제17항에 있어서, B-세포 자극성 조성물이 (i) 톨-유사 수용체 (TLR) 효능제; (ii) CD40 효능제; (iii) CD40 효능제와 염증 유발성 시토카인; (iv) B-세포 수용체와 결합하는 항원; (v) 항-이디오타입 항체; 및 (vi) 표면 면역글로불린과 가교 결합되는 작용제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 B-세포 자극제를 포함하는 것인 방법.
  19. 제18항에 있어서, 염증 유발성 시토카인이 IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-6, IL-7, IL-9, IL-10, IL-12, IL-15, IL-18, IL-21, IFN-α, IFN-β, IFN-γ, G-CSF, 또는 GM-CSF인 방법.
  20. 제18항에 있어서, TLR 효능제가 CpG ODN, 면역자극성 DNA, 면역자극성 RNA, 면역자극성 올리고뉴클레오티드, 이미퀴모드, 레시퀴모드, 록스리빈, 플라겔린, FSL-I 또는 LPS인 방법.
  21. 제18항에 있어서, 항원이 자기 항원, 동종이계 항원, 펩티드 항원, 핵산 항원, 탄수화물 항원, 또는 종양 연관 항원인 방법.
  22. 제18항에 있어서, 표면 면역글로불린과 가교 결합되는 작용제가 항-Ig 항체, 항-이디오타입 항체, 또는 항-이소형 항체인 방법.
  23. 제17항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, B-세포 자극제가 동종이계 IgG 항체와 접합되는 것인 방법.
  24. 제1항에 있어서, 대식세포를 활성화시키는 처치가 대식세포 자극제를 함유하는 대식세포 자극성 조성물을 포함하는 것인 방법.
  25. 제24항에 있어서, 대식세포 자극성 조성물이 (i) 톨-유사 수용체 (TLR) 효능제; (ii) 대식세포 활성화 시토카인; 및 (iii) 글루코코르티코이드 수용체 효능제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 대식세포 자극제를 포함하는 것인 방법.
  26. 제25항에 있어서, 대식세포 활성화 시토카인이 IL-1, IL-4, IL-6, IL-10; IL-13, TNF-α, TNF-β, G-CSF, GM-CSF, 또는 IFN-γ인 방법.
  27. 제25항에 있어서, TLR 효능제가 TLR4 효능제 또는 TLR2 효능제인 방법.
  28. 제27항에 있어서, TLR4 또는 TLR2 효능제가 리포폴리사카라이드, 뮤라밀 디펩티드, 리포테이코산, 또는 박테리아 열 쇼크 단백질인 방법.
  29. 제24항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 대식세포 자극제가 동종이계 IgG 항체와 접합되는 것인 방법.
  30. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 암세포의 항원이 암세포에 풍부한 항원인 방법.
  31. 제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 동종이계 IgG 항체가 모노클로날 항체인 방법.
  32. 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 조성물이 2개 이상의 동종이계 IgG 항체를 포함하며, 여기서 2개 이상의 동종이계 IgG 항체 중 적어도 2개가 상이한 항원과 특이적으로 결합되는 것인 방법.
  33. 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 조성물이 2개 이상의 동종이계 IgG 항체를 포함하며, 여기서 2개 이상의 동종이계 IgG 항체 중 적어도 2개가 동일한 항원의 상이한 에피토프와 특이적으로 결합되는 것인 방법.
  34. 제32항 또는 제33항에 있어서, 2개 이상의 동종이계 IgG 항체 중 적어도 2개가 모노클로날 항체인 방법.
  35. 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서,
    (a) 상기 항체 조성물; 및
    (b) 개체의 APC를 활성화시키는 상기 처치
    중 적어도 하나가, (i) 종양; 및/또는 (ii) 종양 절제 부위 내로 또는 그 근처에 국소 주사됨으로써 투여되는 것인 방법.
  36. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서,
    (a) 상기 항체 조성물; 및
    (b) 개체의 APC를 활성화시키는 상기 처치
    중 적어도 하나가 리포솜, 마이크로입자, 또는 나노입자로 투여되는 것인 방법.
  37. 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, APC가 수지상 세포인 방법.
  38. 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, APC가 대식세포인 방법.
  39. 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, APC가 B-세포인 방법.
  40. 암을 앓는 개체에게
    (i) 암세포 상의 복수 개의 항원과 결합하는 폴리클로날 동종이계 IgG 항체를 포함하는 항체 조성물; 및
    (ii) 상기 개체의, 수지상 세포, 대식세포, 또는 B-세포인 항원 제시 세포 (APC)를 활성화시키는 처치
    를 투여하는 단계를 포함하는, 상기 암을 앓는 개체의 치료 방법.
  41. 제40항에 있어서, 폴리클로날 동종이계 IgG 항체가 제2의 개체로부터의 혈청으로부터 유래되는 것인 방법.
  42. 제40항에 있어서, 폴리클로날 동종이계 IgG 항체가 2명 이상의 개체로부터 풀링된 것인 방법.
  43. 제40항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 동종이계 IgG 항체 중 적어도 하나의 표적 항원이 미리 결정되지 않은 것인 방법.
  44. 제40항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 수지상 세포를 활성화시키는 처치가 수지상 세포 자극제를 포함하는 수지상 세포 자극성 조성물을 포함하는 것인 방법.
  45. 제44항에 있어서, 수지상 세포 자극성 조성물이 (i) 톨-유사 수용체 (TLR) 효능제; (ii) CD40 효능제; (iii) CD40 효능제와 염증 유발성 시토카인; (iv) 체크포인트 분자 중화 화합물; (v) 인돌아민 2,3-디옥시게나제 (IDO) 억제제; (vi) NFkB 활성화제; (vii) 칼슘 채널을 개방시키는 화합물; 및 (viii) T 세포-관련 동시 자극성 분자로부터 선택된 하나 이상의 수지상 세포 자극제를 포함하는 것인 방법.
  46. 제44항 또는 제45항에 있어서, 수지상 세포 자극성 조성물이 CD40 효능제와 염증 유발성 시토카인을 포함하는 것인 방법.
  47. 제45항 또는 제46항에 있어서, 염증 유발성 시토카인이 종양 괴사 인자 알파 (TNFα) 및/또는 IFNγ인 방법.
  48. 제44항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 수지상 세포 자극제가 동종이계 IgG 항체 중 적어도 하나와 접합되는 것인 방법.
  49. 제40항에 있어서, B-세포를 활성화시키는 처치가 B-세포 자극제를 함유하는 B-세포 자극성 조성물을 포함하는 것인 방법.
  50. 제49항에 있어서, B-세포 자극성 조성물이 (i) 톨-유사 수용체 (TLR) 효능제; (ii) CD40 효능제; (iii) CD40 효능제와 염증 유발성 시토카인; (iv) B-세포 수용체와 결합하는 항원; (v) 항-이디오타입 항체; 및 (vi) 표면 면역글로불린과 가교 결합되는 작용제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 B-세포 자극제를 포함하는 것인 방법.
  51. 제50항에 있어서, 염증 유발성 시토카인이 IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-6, IL-7, IL-9, IL-10, IL-12, IL-15, IL-18, IL-21, IFN-α, IFN-β, IFN-γ, G-CSF, 또는 GM-CSF인 방법.
  52. 제51항에 있어서, TLR 효능제가 CpG ODN, 면역자극성 DNA, 면역자극성 RNA, 면역자극성 올리고뉴클레오티드, 이미퀴모드, 레시퀴모드, 록스리빈, 플라겔린, FSL-I 또는 LPS인 방법.
  53. 제50항에 있어서, 항원이 자기 항원, 동종이계 항원, 펩티드 항원, 핵산 항원, 탄수화물 항원, 또는 종양 연관 항원인 방법.
  54. 제50항에 있어서, 표면 면역글로불린과 가교 결합되는 작용제가 항-Ig 항체, 항-이디오타입 항체, 또는 항-이소형 항체인 방법.
  55. 제49항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, B-세포 자극제가 동종이계 IgG 항체와 접합되는 것인 방법.
  56. 제40항에 있어서, 대식세포를 활성화시키는 처치가 대식세포 자극제를 함유하는 대식세포 자극성 조성물을 포함하는 것인 방법.
  57. 제56항에 있어서, 대식세포 자극성 조성물이 (i) 톨-유사 수용체 (TLR) 효능제; (ii) 대식세포 활성화 시토카인; 및 (iii) 글루코코르티코이드 수용체 효능제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 대식세포 자극제를 포함하는 것인 방법.
  58. 제57항에 있어서, 대식세포 활성화 시토카인이 IL-1, IL-4, IL-6, IL-10; IL-13, TNF-α, TNF-β, G-CSF, GM-CSF, 또는 IFN-γ인 방법.
  59. 제57항에 있어서, TLR 효능제가 TLR4 효능제 또는 TLR2 효능제인 방법.
  60. 제59항에 있어서, TLR4 또는 TLR2 효능제가 리포폴리사카라이드, 뮤라밀 디펩티드, 리포테이코산, 또는 박테리아 열 쇼크 단백질인 방법.
  61. 제56항 내지 제60항 중 어느 한 항에 있어서, 대식세포 자극제가 동종이계 IgG 항체와 접합되는 것인 방법.
  62. 제40항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서,
    (a) 상기 항체 조성물; 및
    (b) 개체의 APC를 활성화시키는 상기 처치
    중 적어도 하나가, (i) 종양; 및/또는 (ii) 종양 절제 부위 내로 또는 그 근처에 국소 주사됨으로써 투여되는 것인 방법.
  63. 제40항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서,
    (a) 상기 항체 조성물; 및
    (b) 개체의 APC를 활성화시키는 상기 처치
    중 적어도 하나가 리포솜, 마이크로입자, 또는 나노입자로 투여되는 것인 방법.
  64. 제40항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 폴리클로날 동종이계 IgG 항체가 2개 이상의 모노클로날 항체인 방법.
  65. 제64항에 있어서, 2개 이상의 모노클로날 항체 중 적어도 2개가 암세포에 풍부한 항원과 특이적으로 결합되는 것인 방법.
  66. 제64항 또는 제65항에 있어서, 2개 이상의 모노클로날 항체 중 적어도 2개가 상이한 항원과 특이적으로 결합되는 것인 방법.
  67. 제64항 또는 제65항에 있어서, 2개 이상의 모노클로날 항체 중 적어도 2개가 동일한 항원 상의 2개의 상이한 에피토프와 특이적으로 결합되는 것인 방법.
  68. 제40항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서, 폴리클로날 동종이계 IgG 항체가 상기 개체 내의 암세포 상의 항원과 결합되어 면역복합체를 형성하는 것인 방법.
  69. 제68항에 있어서, APC의 활성화가, 상기 개체에게서 APC에 의한 면역복합체의 흡수 및 T 세포에 대한 암세포의 다중 항원의 제시를 포함하는 것인 방법.
  70. 제69항에 있어서, T 세포에 제시된 다중 항원 중 적어도 하나가 면역복합체 내의 항원 중 어떠한 것과도 상이한 것인 방법.
  71. 제40항 내지 제69항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 개체에게서 암세포의 수를 감소시키는 방법.
  72. 제40항 내지 제71항 중 어느 한 항에 있어서, 암이 고형 종양인 방법.
  73. 제72항에 있어서, 고형 종양의 직경이 1 cm 미만인 방법.
  74. 제40항 내지 제73항 중 어느 한 항에 있어서, 개체가 인간인 방법.
  75. (a) 시험관 내에서 개체로부터의 항원 제시 세포 (APC)를,
    (i) 암세포 또는 그의 일부; 및
    (ii) 암세포 상의 항원과 결합하는 동종이계 IgG 항체를 포함하는 항체 조성물과 접촉시키며, 여기서 암세포 상의 항원과 결합하는 동종이계 IgG 항체와 암세포는 면역복합체를 형성하는 것이고,
    상기 접촉으로 인해, APC에 의한 면역복합체의 흡수가 초래됨으로써, 부하된 APC가 생성되며, 여기서 APC는 수지상 세포, 대식세포, 또는 B-세포인 단계; 및
    (b) 개체의 T 세포를 부하된 APC와 접촉시키며, 여기서 부하된 APC는 암세포 항원을 T 세포에 제시하여 접촉된 T 세포를 생성하고, 접촉된 T 세포는 상기 제시된 암세포 항원에 대해 특이적인 면역 반응을 발생시키는 단계
    를 포함하는, 상기 개체에게서 면역 반응을 유도하는 방법.
  76. 제75항에 있어서, APC가 골수 유래 DC, 혈액 유래 DC, 비장 DC, 및 종양 연관 DC (TADC)로 이루어진 군으로부터 선택된 수지상 세포인 방법.
  77. 제75항 또는 제76항에 있어서, APC를, APC 자극제를 포함하는 APC 자극성 조성물과 접촉시키는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  78. 제77항에 있어서, APC 자극성 조성물이 수지상 세포 자극제를 포함하는 수지상 세포 자극성 조성물인 방법.
  79. 제78항에 있어서, 수지상 세포 자극성 조성물이 (i) 톨-유사 수용체 (TLR) 효능제; (ii) CD40 효능제; (iii) CD40 효능제와 염증 유발성 시토카인; (iv) 체크포인트 분자 중화 화합물; (v) 인돌아민 2,3-디옥시게나제 (IDO) 억제제; (vi) NFkB 활성화제; (vii) 칼슘 채널을 개방시키는 화합물; 및 (viii) T 세포-관련 동시 자극성 분자로부터 선택된 하나 이상의 수지상 세포 자극제를 포함하는 것인 방법.
  80. 제78항 또는 제79항에 있어서, 수지상 세포 자극성 조성물이 CD40 효능제와 염증 유발성 시토카인을 포함하는 것인 방법.
  81. 제79항 또는 제80항에 있어서, 염증 유발성 시토카인이 종양 괴사 인자 알파 (TNFα) 및/또는 IFNγ인 방법.
  82. 제78항 내지 제81항 중 어느 한 항에 있어서, 수지상 세포 자극제가 동종이계 IgG 항체와 접합되는 것인 방법.
  83. 제77항에 있어서, APC 자극성 조성물이 B-세포 자극제를 포함하는 B-세포 자극성 조성물인 방법.
  84. 제83항에 있어서, B-세포 자극성 조성물이 (i) 톨-유사 수용체 (TLR) 효능제; (ii) CD40 효능제; (iii) CD40 효능제와 염증 유발성 시토카인; (iv) B-세포 수용체와 결합하는 항원; (v) 항-이디오타입 항체; 및 (vi) 표면 면역글로불린과 가교 결합되는 작용제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 B-세포 자극제를 포함하는 것인 방법.
  85. 제84항에 있어서, 염증 유발성 시토카인이 IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-6, IL-7, IL-9, IL-10, IL-12, IL-15, IL-18, IL-21, IFN-α, IFN-β, IFN-γ, G-CSF, 또는 GM-CSF인 방법.
  86. 제85항에 있어서, TLR 효능제가 CpG ODN, 면역자극성 DNA, 면역자극성 RNA, 면역자극성 올리고뉴클레오티드, 이미퀴모드, 레시퀴모드, 록스리빈, 플라겔린, FSL-I 또는 LPS인 방법.
  87. 제84항에 있어서, 항원이 자기 항원, 동종이계 항원, 펩티드 항원, 핵산 항원, 탄수화물 항원, 또는 종양 연관 항원인 방법.
  88. 제84항에 있어서, 표면 면역글로불린과 가교 결합되는 작용제가 항-Ig 항체, 항-이디오타입 항체, 또는 항-이소형 항체인 방법.
  89. 제83항 내지 제88항 중 어느 한 항에 있어서, B-세포 자극제가 동종이계 IgG 항체와 접합되는 것인 방법.
  90. 제77항에 있어서, APC 자극성 조성물이 대식세포 자극제를 포함하는 대식세포 자극성 조성물인 방법.
  91. 제90항에 있어서, 대식세포 자극성 조성물이 (i) 톨-유사 수용체 (TLR) 효능제; (ii) 대식세포 활성화 시토카인; 및 (iii) 글루코코르티코이드 수용체 효능제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 대식세포 자극제를 포함하는 것인 방법.
  92. 제91항에 있어서, 대식세포 활성화 시토카인이 IL-1, IL-4, IL-6, IL-10; IL-13, TNF-α, TNF-β, G-CSF, GM-CSF, 또는 IFN-γ인 방법.
  93. 제91항에 있어서, TLR 효능제가 TLR4 효능제 또는 TLR2 효능제인 방법.
  94. 제93항에 있어서, TLR4 또는 TLR2 효능제가 리포폴리사카라이드, 뮤라밀 디펩티드, 리포테이코산, 또는 박테리아 열 쇼크 단백질인 방법.
  95. 제90항 내지 제94항 중 어느 한 항에 있어서, 대식세포 자극제가 동종이계 IgG 항체와 접합되는 것인 방법.
  96. 제75항 내지 제95항 중 어느 한 항에 있어서, 암세포가 APC와 접촉되기 전에 상기 항체 조성물과 접촉되는 것인 방법.
  97. 제75항 내지 제95항 중 어느 한 항에 있어서, APC가 암세포 및 항체 조성물과 동시에 접촉되는 것인 방법.
  98. 제75항 내지 제97항 중 어느 한 항에 있어서, T 세포를 접촉시키는 단계가 생체 내에서 수행되고; 상기 부하된 APC를 상기 개체 내로 도입하는 단계를 포함하는 방법.
  99. 제75항 내지 제97항 중 어느 한 항에 있어서, T 세포를 접촉시키는 단계가 시험관 내에서 수행되고; 상기 접촉된 T 세포를 상기 개체 내로 도입하는 단계를 포함하는 방법.
  100. 제75항 내지 제99항 중 어느 한 항에 있어서, 동종이계 IgG 항체가 모노클로날 항체인 방법.
  101. 제75항 내지 제100항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 조성물이 복수 개의 암세포 항원과 결합하는 폴리클로날 동종이계 IgG 항체를 포함하는 것인 방법.
  102. 제101항에 있어서, 폴리클로날 동종이계 IgG 항체가 2개 이상의 모노클로날 항체인 방법.
  103. (i) 암세포의 항원과 결합하는 동종이계 IgG 항체를 포함하는 항체 조성물; 및
    (ii) 수지상 세포 자극제, 대식세포 자극제, 또는 B-세포 자극제인 APC 자극제
    를 포함하는, APC를 부하하기 위한 조성물.
  104. 제103항에 있어서, 동종이계 IgG 항체가 모노클로날 항체인 조성물.
  105. 제103항 또는 제104항에 있어서, 항체 조성물이 복수 개의 암세포 항원과 결합하는 폴리클로날 동종이계 IgG 항체를 포함하는 것인 조성물.
  106. 제105항에 있어서, 폴리클로날 동종이계 IgG 항체가 2개 이상의 모노클로날 항체를 포함하는 것인 조성물.
  107. 제106항에 있어서, 2개 이상의 모노클로날 항체 중 적어도 2개가 암세포에 풍부한 항원과 특이적으로 결합되는 것인 조성물.
  108. 제106항 또는 제107항에 있어서, 2개 이상의 모노클로날 항체 중 적어도 2개가 상이한 항원과 특이적으로 결합되는 것인 조성물.
  109. 제106항 또는 제107항에 있어서, 2개 이상의 모노클로날 항체 중 적어도 2개가 동일한 항원의 상이한 에피토프와 특이적으로 결합되는 것인 조성물.
  110. 제105항에 있어서, 폴리클로날 동종이계 IgG 항체가 개체로부터의 혈청으로부터 유래되는 것인 조성물.
  111. 제105항에 있어서, 폴리클로날 동종이계 IgG 항체가 2명 이상의 개체로부터 풀링된 것인 조성물.
  112. 제111항에 있어서, 정맥내 면역글로불린 (IVIG) 또는 IVIG로부터 정제되거나 또는 풍부해진 항체를 포함하는 조성물.
  113. 제103항 내지 제112항 중 어느 한 항에 있어서, 수지상 세포 자극제가 (i) 톨-유사 수용체 (TLR) 효능제; (ii) CD40 효능제; (iii) CD40 효능제와 염증 유발성 시토카인; (iv) 체크포인트 분자 중화 화합물; (v) 인돌아민 2,3-디옥시게나제 (IDO) 억제제; (vi) NFkB 활성화제; (vii) 칼슘 채널을 개방시키는 화합물; 및 (viii) T 세포-관련 동시 자극성 분자로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 조성물.
  114. 제103항 내지 제112항 중 어느 한 항에 있어서, B-세포 자극제가 (i) 톨-유사 수용체 (TLR) 효능제; (ii) CD40 효능제; (iii) CD40 효능제와 염증 유발성 시토카인; (iv) B-세포 수용체와 결합하는 항원; (v) 항-이디오타입 항체; 및 (vi) 표면 면역글로불린과 가교 결합되는 작용제로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 조성물.
  115. 제103항 내지 제112항 중 어느 한 항에 있어서, 대식세포 자극제가 (i) 톨-유사 수용체 (TLR) 효능제; (ii) 대식세포 활성화 시토카인; 및 (iii) 글루코코르티코이드 수용체 효능제로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 조성물.
  116. 제103항 내지 제115항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 조성물의 적어도 하나의 동종이계 IgG 항체가 APC 자극제와 접합되는 것인 조성물.
  117. 제116항에 있어서, 항체 조성물의 적어도 하나의 동종이계 IgG 항체가 CD40 효능제와 접합되고, 항체 조성물의 적어도 하나의 동종이계 IgG 항체가 염증 유발성 시토카인과 접합되는 것인 조성물.
  118. 제117항에 있어서, 염증 유발성 시토카인이 TNFα 및/또는 IFNγ인 조성물.
  119. 제103항 또는 제118항에 있어서, 항체 조성물의 적어도 하나의 동종이계 IgG 항체가 CD40 효능제와 접합되고; 항체 조성물의 적어도 하나의 동종이계 IgG 항체가 염증 유발성 시토카인과 접합되며; 항체 조성물의 적어도 하나의 동종이계 IgG 항체가 톨-유사 수용체 (TLR) 효능제와 접합되는 것인 조성물.
  120. 제1항 내지 제102항 중 어느 한 항에 나타낸 방법 중 어느 것에 사용하기 위한 키트.
  121. (i) 암세포의 항원과 결합하는 동종이계 IgG 항체를 포함하는 항체 조성물을 포함하는 구획; 및
    (ii) 수지상 세포 자극성 조성물, 대식세포 자극성 조성물, 또는 B-세포 자극성 조성물인 APC 자극성 조성물을 적어도 하나 포함하는 적어도 하나의 구획
    을 포함하는 키트.
  122. 제121항에 있어서, APC 자극성 조성물이 (i) 톨-유사 수용체 (TLR) 효능제; (ii) CD40 효능제; (iii) CD40 효능제와 염증 유발성 시토카인; (iv) 체크포인트 분자 중화 화합물; (v) 인돌아민 2,3-디옥시게나제 (IDO) 억제제; (vi) NFkB 활성화제; (vii) 칼슘 채널을 개방시키는 화합물; 및 (viii) T 세포-관련 동시 자극성 분자로부터 선택된 하나 이상의 수지상 세포 자극제를 포함하는 것인 키트.
  123. 제122항에 있어서, CD40 효능제가 CD40L이고, 염증 유발성 시토카인이 TNFa 및/또는 IFNg인 키트.
  124. 제122항 또는 제123항에 있어서, CD40 효능제와 염증 유발성 시토카인이 동일한 구획 내에 있는 것인 키트.
  125. 제123항 또는 제124항에 있어서, CD40 효능제와 염증 유발성 시토카인이 별개의 구획 내에 있는 것인 키트.
  126. 제121항에 있어서, APC 자극성 조성물이 (i) 톨-유사 수용체 (TLR) 효능제; (ii) 대식세포 활성화 시토카인; 및 (iii) 글루코코르티코이드 수용체 효능제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 대식세포 자극제를 포함하는 것인 키트.
  127. 제121항에 있어서, APC 자극성 조성물이 (i) 톨-유사 수용체 (TLR) 효능제; (ii) CD40 효능제; (iii) CD40 효능제와 염증 유발성 시토카인; (iv) B-세포 수용체와 결합하는 항원; (v) 항-이디오타입 항체; 및 (vi) 표면 면역글로불린과 가교 결합되는 작용제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 B-세포 자극제를 포함하는 것인 키트.
  128. 종양을
    (i) 종양 세포의 항원과 특이적으로 결합하는 동종이계 IgG 항체를 포함하는 항체 조성물, 및
    (ii) 수지상 세포, 대식세포, 또는 B-세포인 APC 자극성 조성물
    과 접촉시킴으로써, 종양의 크기 또는 종양 내의 세포의 수를 감소시키는 단계
    를 포함하는, 종양의 크기 또는 종양 내의 세포의 수를 감소시키는 방법.
  129. 제128항에 있어서, 종양을 접촉시키는 단계가, 항체 조성물 및 APC 자극성 조성물을 종양 부위 내로 또는 그 근처에 동시에 또는 순차적으로 직접 주사하는 것을 포함하는 것인 방법.
  130. 제128항에 있어서, APC가 수지상 세포이고, APC 자극성 조성물이 수지상 세포 자극제를 포함하는 것인 방법.
  131. 제128항에 있어서, APC가 대식세포이고, APC 자극성 조성물이 대식세포 자극제를 포함하는 것인 방법.
  132. 제128항에 있어서, APC가 B-세포이고, APC 자극성 조성물이 B-세포 자극제를 포함하는 것인 방법.
  133. 제130항에 있어서, APC 자극성 조성물이 (i) 톨-유사 수용체 (TLR) 효능제; (ii) CD40 효능제; (iii) CD40 효능제와 염증 유발성 시토카인; (iv) 체크포인트 분자 중화 화합물; (v) 인돌아민 2,3-디옥시게나제 (IDO) 억제제; (vi) NFkB 활성화제; (vii) 칼슘 채널을 개방시키는 화합물; 및 (viii) T 세포-관련 동시 자극성 분자로부터 선택된 하나 이상의 수지상 세포 자극제를 포함하는 것인 방법.
  134. 제131항에 있어서, APC 자극성 조성물이 (i) 톨-유사 수용체 (TLR) 효능제; (ii) 대식세포 활성화 시토카인; 및 (iii) 글루코코르티코이드 수용체 효능제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 대식세포 자극제를 포함하는 것인 방법.
  135. 제132항에 있어서, APC 자극성 조성물이 (i) 톨-유사 수용체 (TLR) 효능제; (ii) CD40 효능제; (iii) CD40 효능제와 염증 유발성 시토카인; (iv) B-세포 수용체와 결합하는 항원; (v) 항-이디오타입 항체; 및 (vi) 표면 면역글로불린과 가교 결합되는 작용제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 B-세포 자극제를 포함하는 것인 방법.
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