KR20160039005A - Compositions for the prevention or treatment of metabolic diseases or complications thereof, or antioxidant for containing coumestan compounds or pharmaceutically acceptable salts thereof as an active ingredient - Google Patents

Abstract

The present invention relates to a composition for preventing or treating metabolic diseases or complications thereof, or for antioxidation, comprising coumestan-based compounds or pharmaceutically acceptable salts thereof as active components. The coumestan-based compounds separated from bean leaves, according to the present invention, effectively inhibit activity of α-glucosidase, α-amylase, dipeptidyl peptidase-4 (DPP-4) and hACAT, and effectively inhibits oxidation of LDL. Therefore, the coumestan-based compound of the present invention can be usefully used to prevent or treat related metabolic diseases or complications of the same, while being useful for an antioxidant composition due to excellent antioxidant activity.

Description

코우메스탄계 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 대사성 질환 또는 이들의 합병증의 예방 또는 치료용, 또는 항산화용 조성물{Compositions for the prevention or treatment of metabolic diseases or complications thereof, or antioxidant for containing coumestan compounds or pharmaceutically acceptable salts thereof as an active ingredient}TECHNICAL FIELD [0001] The present invention relates to a composition for preventing or treating a metabolic disease or a complication of a metabolic disease or an antioxidant comprising the same, or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient, for containing coumestan compounds or pharmaceutically acceptable salts thereof as an active ingredient}

본 발명은 코우메스탄(Coumestan)계 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 대사성 질환 또는 이들의 합병증의 예방 또는 치료용, 또는 항산화용 조성물에 관한 것이다.
The present invention relates to a composition for preventing or treating a metabolic disease or a complication thereof containing a coumestan compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient, or a composition for antioxidation.

현대사회의 급속한 발전과 영양 섭취상태가 풍요로워 짐에 따라 원시시대와 차이가 없는 인체의 대사기관에 막대한 환경 변화가 발생하였다. 이에, 성인병 또는 현대병이라 불리는 비만, 제2형 당뇨병, 고혈압, 고중성지방혈증, 고콜레스테롤혈증, 동맥경화 등의 질환이 2개 이상 복합적으로 나타나는 경우 대사증후군이라 한다. 보건복지부가 2007~2010년 국민건강 영양조사 자료를 분석한 결과, 대사증후군 유병률이 30세 이상 성인의 28.8%(남자 31.9%, 여자 25.6%)로 나타났으며 (2012. 3. 22 발표자료), 이로부터 발병되는 심장질환과 뇌졸중이 한국인 사망원인 2, 3위를 차지할 만큼 증가하고 있는 실정이다.
Due to the rapid development of modern society and the abundance of nutritional status, enormous environmental changes have occurred in the metabolic organ of the human body, which is not different from primitive age. The metabolic syndrome is called metabolic syndrome when two or more diseases such as obesity, type 2 diabetes, hypertension, hypertriglyceridemia, hypercholesterolemia, and arteriosclerosis are combined. The Ministry of Health and Welfare analyzed the 2007 ~ 2010 National Health and Nutrition Survey data. The prevalence of the metabolic syndrome was 28.8% (31.9% for men and 25.6% for women) over 30 years of age (2012.3.22) , And the heart disease and stroke resulting therefrom are increasing so as to occupy the second or third place of deaths in Korea.

이는 균형있는 신진대사가 잘 이루어지지 않아 발생하는 대사성 노폐물과 독소를 방출시키지 못함으로 인해 인체 내에 쌓인 노폐물들이 각 인체의 기능을 상실시킴으로 발생하는 증상으로 인슐린저항성증후군(insulin resistance syndrome)으로도 알려져 있는 대사증후군(Metabolic Syndrome)으로 발전하고, 대사증후군은 곧 관상동맥내 손상을 줘 심장질환 또는 중풍의 원인을 제공하거나, 신장에서 소금을 제거하는 능력이 떨어져서 고혈압을 일으키고, 심혈관 질환의 원인을 제공하는 중성지방 비율을 증가시키고, 혈액 응고의 위험을 가중시키며 또한, 2형 당뇨로 인슐린 생산이 적어져 눈, 신장, 신경에 손상을 초래하는 것으로 알려져 있다.
It is known as insulin resistance syndrome, which is caused by loss of metabolic waste and toxins caused by inadequate balance of metabolism and waste of human body due to loss of toxins. It develops into Metabolic Syndrome. Metabolic Syndrome gives damage to the coronary artery and provides the cause of heart disease or paralysis. It is not capable of removing salt from the kidneys, causing hypertension, providing the cause of cardiovascular disease It is known that it increases the triglyceride ratio, increases the risk of blood clotting, and also decreases insulin production by type 2 diabetes, causing damage to eyes, kidneys, and nerves.

혈장 저밀도 지질 단백질(low-density lipoprotein: LDL)의 증가로 야기되는 동맥경화는 뇌동맥 또는 관상동맥에서 일어나기 쉬우며, 이로 인해 심장질환, 뇌혈관 질환 등의 순환계 질환으로 발전하게 된다. 혈관 내벽의 플라그(plaque) 형성 및 혈관파열은 심근경색 발병의 주요한 요인이며, 동맥경화의 초기 발생에 관한 가설은 혈관벽의 손상에 대한 만성 염증과정으로, 손상기작보다는 오히려 방어기작인 '손상에 대한 반응(responce-to-injury hypothesis)'으로 제시되고 있다(Circ. Res. 2001, 89, 298-304). 이는 유전적 변이, 과산화물, 고혈압, 당뇨, 혈장 호모시스테인 농도 증가 또는/및 미생물 감염 등의 원인에 의하여 혈관 내피세포가 정상적인 항상성을 유지하지 못하는 기능부전 상태가 되는 것이다.Atherosclerosis caused by an increase in plasma low-density lipoprotein (LDL) is likely to occur in the cerebral arteries or coronary arteries, leading to circulatory diseases such as heart disease and cerebrovascular disease. The plaque formation and vascular rupture in the inner wall of the vessel are the main factors of the myocardial infarction and the hypothesis about the early development of arteriosclerosis is chronic inflammation process of the damage of the vascular wall and the response to the defective mechanism ' responder-to-injury hypothesis "(Circ. Res. 2001, 89, 298-304). This is due to genetic mutations, peroxidation, hypertension, diabetes, elevated plasma homocysteine concentration, and / or microbial infection, resulting in a vascular endothelial cell failure state that does not maintain normal homeostasis.

더욱 상세하게, 상기의 원인들로 인하여 LDL이 산화, 당결합, 집적화, 당단백 결합 등을 거쳐 변형-LDL(highly modified-LDL; HM-LDL)로 변화하게 되고, 이들은 혈관 내피세포 및 평활근을 자극하고 손상을 유발한다. 이로 인하여, 내피세포의 혈관세포부착물질-1(vascular cell adhesion molecule-1; VCAM-1)의 발현 및 염증세포의 염증매개인자 방출이 촉진되면 LDL은 내피세포 아래에 유입 및 축적되고, 축적된 LDL 및 산화된 HM-LDL은 다시 대식세포, T 임파구 등의 면역세포의 유입 및 활성화를 유발하는 과정을 되풀이하여 병변의 염증반응을 촉진시키게 된다. 그 다음, 유입된 대식세포나 임파구로부터 방출된 가수분해효소, 염증매개인자, 성장인자 등의 작용으로 병반은 괴사하게 되고, 괴사된 병소 부위로 단핵구의 유입, 평활근의 이동 및 분화, 섬유성 조직의 형성 등의 반복적인 과정이 이루어진다. 상기 과정을 통해 병변 조직은 HM-LDL을 핵으로 한 괴사조직에 섬유질이 덮인 복잡한 구조의 섬유질 병변으로 발달하게 되며, 발달된 병변 조직으로부터 혈전이 생성되고 동맥이 경화되어 혈류장애 등 순환기 질환이 나타나게 되는 것이다.More specifically, LDL is converted to highly modified LDL (HML-LDL) through oxidation, sugar bonding, integration, and glycoprotein binding due to the above-mentioned causes, and they stimulate vascular endothelial cells and smooth muscle And causes damage. As a result, when the expression of vascular cell adhesion molecule-1 (VCAM-1) and the release of inflammatory mediators of inflammatory cells are promoted, LDL is introduced and accumulated under endothelial cells, LDL, and oxidized HM-LDL, re-invade the immune cells, such as macrophages and T lymphocytes, and promote the inflammatory response of the lesions. Then, the lesion is necrotic due to the action of hydrolytic enzymes, inflammatory mediators, growth factors, etc. released from the introduced macrophages or lymphocytes, and the necrotic lesion site is affected by monocyte inflow, smooth muscle migration and differentiation, And the like. Through the above process, the lesion tissue develops into a fibrous lesion of a complex structure with necrotic tissue covered with HM-LDL nucleus. The thrombus is generated from the developed lesion tissue and the artery is hardened, resulting in circulatory diseases such as blood flow disorder .

LDL 산화는 죽상동맥경화증(atherosclerosis)을 포함하는 동맥경화(arteriosclerosis)를 유발하는 초기 요인으로 가장 중시되고 있다[Circulation, 1995, 91, 2488-2496; Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol., 1997, 17, 3338-3346]. 생체 내외에서 생성되는 산화적 스트레스(oxidative stress)는 혈액 내의 LDL을 산화된-LDL(oxidized-LDL)로 변형시키게 되고, 이것이 부착분자(adhesion molecule)를 통해 맥관내막(intima) 내로 유입된다. 유입된 산화된-LDL을 단핵구(monocyte)가 탐식하여 거품세포(foam cell)를 형성하면서 동맥경화 초기 병변인 지방선조(fatty streak)를 생성하게 된다. 동맥경화 초기 병변의 특징은 동맥 내피세포에서 생성되는 부착분자인 VCAM-1, ICAM-1(intracellular adhesion molecule-1) 및 MCP-1(monocyte chemoattractant protein-1)이 발현된다는 것인데, 이들은 전사인자(transcription factor)인 활성 산소종이나 사이토카인(cytokine) 등과 같은 다양한 요인에 의해 활성화되는 NF-κB(nuclear factor-κB)에 의해 유도된다. 활성화된 NF-κB는 IL-1, VCAM-1, ICAM-1 및 동맥경화의 진행에 관여하는 다른 인자들과 같이 특이적인 프로모터 유전자(promoter gene)에 결합하여 다양한 염증인자의 발현을 조절한다. 이에 항산화제 및 유리기 소거제는 이러한 NF-κB의 활성을 저해하는 것으로 밝혀지고 있으므로 항산화제를 적절히 섭취할 경우, 생체 내(in vivo)에서 LDL의 산화를 저해하고 부착분자의 발현을 억제하며 NF-κB의 활성을 감소시켜 동맥경화를 억제할 것으로 기대되며, 이에 대한 연구들이 진행되었다(J. Agric. Food Chem., 54: 5369-5374, 2006; 대한민국 등록특허 제588358호, 제631486호, 제728706호, 제772495호).
LDL oxidation is of primary importance as an initial factor in causing arteriosclerosis, including atherosclerosis [Circulation, 1995, 91, 2488-2496; Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol., 1997, 17, 3338-3346]. Oxidative stress produced in and out of the body transforms LDL in the blood into oxidized-LDL (oxidized-LDL), which enters the vascular endothelium through the adhesion molecule. The oxidized-LDL is formed by monocyte phagocytosis and forms a foam cell, which produces a fatty streak that is an early stage of arteriosclerosis. The early lesion of atherosclerosis is characterized by the expression of VCAM-1, ICAM-1 (intracellular adhesion molecule-1) and MCP-1 (monocyte chemoattractant protein-1) induced by NF-κB (nuclear factor-κB), which is activated by a variety of factors such as transcription factors, such as reactive oxygen species and cytokines. Activated NF-κB binds to specific promoter genes, such as IL-1, VCAM-1, ICAM-1 and other factors involved in the progression of atherosclerosis, and regulates the expression of various inflammatory factors. Therefore, antioxidants and free radical scavengers have been shown to inhibit the activity of NF-κB. Therefore, proper intake of antioxidants inhibits the oxidation of LDL in vivo, inhibits the expression of adhesion molecules, and inhibits NF -KB is expected to inhibit arteriosclerosis, and studies have been conducted (J. Agric. Food Chem., 54: 5369-5374, 2006; Korean Patent No. 588358, No. 631486, 728706, 772495).

또한, 고지혈증, 관상동맥 심장병, 동맥경화 및 심근경색 환자에 있어서 LDL 퍼옥사이드의 생성요인과 제거에 관한 연구(Curr. Atheroscler. Res., 2000, 2, 363-372)도 활발히 진행되고 있다. 현재 고지혈증 치료제로 사용되고 있는 프로부콜(Probucol), N,N'-디페닐렌디아민(N,N'-diphenylenediamine), 페놀계 합성 항산화제인 BHA(butylated hydroxyanisol) 및 BHT(butylated hydroxytoluene)는 LDL내 콜레스테롤을 감소시키고, 산화 정도를 약화시켜 병변형성을 감소되며, 상기 고지혈증 치료제는 항산화력은 우수하지만, 부작용이 많아 사용이 제한되고 있다.
In addition, studies on the factors and elimination of LDL peroxide in patients with hyperlipidemia, coronary heart disease, atherosclerosis and myocardial infarction (Curr. Atheroscler. Res., 2000, 2, 363-372) have been actively conducted. Currently, probucol, N, N'-diphenylenediamine, and phenolic synthetic antioxidants, BHA (butylated hydroxyanisol) and BHT (butylated hydroxytoluene), which are currently used for treating hyperlipidemia, And the degree of oxidation is weakened to reduce lesion formation. Although the antihyperlipidemic agent of the present invention has excellent antioxidant ability, its use is limited due to its high side effects.

따라서, 이러한 질병을 예방하려는 목적으로 종전부터 콜레스테롤 흡수의 억제와 생합성의 저해를 통한 혈장 LDL양을 감소시키려는 시도가 진행되어 왔으며(Principles in Biochemistry, lipid biosynthesis, 770-817, 3rd Edition, 2000 Worth Publishers, New York; Steinberg, N. Engl. J. Med., 1989, 320, 915-924), 고지혈증, 관상동맥 심장병, 동맥경화 및 심근경색 환자에 있어서 LDL 항산화제와 함께 지질강하제의 병행투여 요법에 대한 관심도가 높아지고 있다.
Therefore, attempts have been made to reduce the amount of plasma LDL through inhibition of cholesterol absorption and inhibition of biosynthesis for the purpose of preventing such diseases (Principles in Biochemistry, 712-817, 3rd Edition, 2000 Worth Publishers , New York; Steinberg, N. Engl. J. Med., 1989, 320, 915-924), concurrent administration of lipid-lowering agents with LDL antioxidants in hyperlipidemia, coronary heart disease, atherosclerosis and myocardial infarction Interest is increasing.

당뇨병은 혈당 농도가 정상인에 비하여 높아 소변으로 포도당이 배출되는 질환으로, 췌장 내의 랑게르한스섬의 β-세포에서 인슐린(insulin)의 비정상적 대사과정 또는 이상 생리활성에 의하여 발병된다. 당뇨병은 인슐린의 분비와 작용 여부에 따라 인슐린 의존성 당뇨병 및 인슐린 비의존성 당뇨병으로 나누어진다. 인슐린 의존성 당뇨병(제 1형 당뇨병)은 췌장의 베타세포가 파괴되어 인슐린을 분비하지 못하므로 심한 인슐린 결핍상태에 있으므로, 케톤증과 사망을 예방하기 위해 정기적으로 외부에서 인슐린을 공급해야 하며, 주로 청소년기 이전에 발생하므로 소아 당뇨병으로 불린다. 반면에 전체 당뇨병 환자의 90% 이상인 인슐린 비의존성 당뇨병(제 2형 당뇨병)은 췌장의 베타세포에서 인슐린을 분비하는 능력은 있으나 인슐린의 기능 이상 상태로부터 유발되는 질환이다. 당뇨병은 체내 고혈당환경으로 높은 삼투압 스트레스를 유발하여 백내장 및 신장질환과 같은 합병증을 유발한다(Campbell, R. K. and Steil, C. F. 1988. Diabetes, clinical pharmacy and therapeutics. William & Wilkins. 4, p.176). 당뇨병에는 인슐린을 비롯한 글루카콘(glucagon), 글루코콜티코이드(glucocorticoid) 등의 호르몬 불균형으로 탄수화물을 비롯한 단백질, 지질 및 전해질 대사 등 생리적 대사조절 기능이상으로 고혈당, 당뇨 등의 특징적인 증세를 나타내며, 또한 당뇨병의 합병증으로 혈관장애, 신경장애 및 감염증 등이 주로 나타난다. α-글루코시데이즈(α-glucosidase)는 탄수화물의 소화과정의 마지막에 관여하는 효소로, 이의 억제활성을 갖는 물질들은 탄수화물의 흡수를 저해하여 식후의 급격한 혈당상승을 억제할 수 있어, 당뇨 및 비만환자를 조절하는데 이용된다(Int. J. Obes. 11(Supple 2): 28, 1987).Diabetes mellitus is a disease in which glucose is released into the urine due to its higher blood sugar concentration than normal people. It is caused by abnormal metabolic processes or abnormal physiological activity of insulin in β-cells of Langerhans islets in the pancreas. Diabetes is divided into insulin-dependent diabetes mellitus and non-insulin dependent diabetes mellitus, depending on the secretion and action of insulin. Insulin-dependent diabetes mellitus (type 1 diabetes) is a severe insulin deficiency state because the beta cells of the pancreas are destroyed and does not secrete insulin. Therefore, insulin should be regularly supplied from the outside in order to prevent ketosis and death, And it is called pediatric diabetes. On the other hand, non-insulin dependent diabetes mellitus (type 2 diabetes mellitus), which accounts for more than 90% of all diabetic patients, is a disease caused by a dysfunctional state of insulin, although it has the ability to secrete insulin in the pancreatic beta cells. Diabetes is a hyperglycemic environment in the body that causes high osmotic stress and causes complications such as cataract and kidney disease (Campbell, R. K. and Steil, C. F. 1988. Diabetes, clinical pharmacy and therapeutics. William & Wilkins. Diabetes is characterized by hormonal imbalances such as insulin, glucagon and glucocorticoid, which are characteristic of symptoms such as hyperglycemia and diabetes mellitus due to abnormal regulation of physiological metabolism such as carbohydrate, protein, lipid and electrolyte metabolism , And diabetic complications such as vascular disorders, neurological disorders, and infectious diseases. α-glucosidase is an enzyme involved in the end of the digestive process of carbohydrates. Substances having an inhibitory activity of them inhibit the absorption of carbohydrates, thereby suppressing a rapid increase in blood glucose after the meal. Thus, diabetes and obesity It is used to control patients (Int. J. Obes. 11 (Supple 2): 28, 1987).

생체 내 탄수화물 분해 효소인 α-아밀레이즈(EC 3.2.1.1, α-amylase)는 α-글루코시다아제와 마찬가지로 탄수화물의 체내흡수에 필요한 효소다. 이 효소의 억제는 탄수화물의 소화와 그리고 당의 흡수의 지연을 일으켜 식후 고혈당을 억제시킴으로써 항당뇨 효과를 가진다(J. Nutr. Sci. Vitaminol., 52: 149-153, 2006). 한편, 기존의 혈당조절제인 아카보스 등의 약을 지속적으로 사용하는 경우 혈당상승 억제효과는 강하지만, 그 지속적인 복용은 소화되지 못한 전분이 바로 대장 유입됨으로 인해 발생되는 저혈당 쇼크, 가스발생, 대장 내 전분분해 세균류의 비정상적인 발효로 인한 복부팽만, 설사 등의 부작용이 보고되고 있다(J. Pharm. Exp. Ther., 241: 915-920, 1987; Diabetes Care, 14: 732-737, 1991). 따라서 보다 부작용이 적고 안전한 혈당강하제의 개발이 필요하다.
Α-amylase (EC 3.2.1.1, α-amylase), an in vivo carbohydrate degrading enzyme, is an enzyme necessary for the absorption of carbohydrates into the body, like α-glucosidase. Inhibition of this enzyme has an antidiabetic effect by inhibiting postprandial hyperglycemia by causing digestion of carbohydrates and delayed absorption of sugars (J. Nutr. Sci. Vitaminol., 52: 149-153, 2006). On the other hand, when the drug such as acarbose, which is a conventional blood sugar level controlling agent, is continuously used, the effect of inhibiting the increase of blood glucose is strong, but the continuous use of the drug does not allow digestion of starch as hypoglycemic shock, gas generation, Side effects such as abdominal distension and diarrhea caused by abnormal fermentation of decomposing bacteria have been reported (J. Pharm. Exp. Ther., 241: 915-920, 1987; Diabetes Care, 14: 732-737, 1991). Therefore, it is necessary to develop a safe hypoglycemic agent with fewer side effects.

성인형 당뇨병을 치료하기 위해 소화성 분해산물에 의해 인슐린 분비를 촉진시키는 인트레틴(incretins)을 이용한 치료방법이 있다. 이 인트레틴 중 GLP-1(Glucagon-Like Peptide-1)은 음식물 섭취 후 장내 세포로부터 분비되어 인슐린 분비를 촉진시킨며, 혈당 의존적으로 인슐린 분비를 자극함으로써 기존 치료제가 갖는 저혈당 유발 문제점을 갖지 않는다. 또한 GLP-1은 포만감을 증가시켜 음식섭취를 감소시킴으로써 성인형 당뇨병 치료에 유효하다고 보고되어 있다(J. Med. Chem., 48: 14, 2005; J. Med. Chem., 50: 2297, 2007; J. Med. Chem., 50: 6450, 2007). 따라서 GLP-1의 작용을 증가시킴으로써 당뇨병을 치료하는 방법이 주목받고 있다. 그러나 GLP-1의 짧은 반감기(2 분 이하)와 경구 투여의 어려움 때문에 이를 보완하기 위해 GLP-1의 분해에 관여하는 DPP-4(Dipeptidyl peptidase-4) 저해제 개발이 활발히 진행 중이다. 즉, DPP-4를 억제하면 GLP-1의 순환농도를 증가시키고, 이로 인해 인슐린 분비를 증가시켜 GLP-1과 관련된 작용을 강화시켜 혈당 조절에 도움을 주는 것으로 알려져 있다.
There is a treatment method using incretins that promote insulin secretion by digestive degradation products to treat adult type diabetes. GLP-1 (Glucagon-Like Peptide-1) is secreted from intestinal cells after food intake and promotes insulin secretion. It stimulates insulin secretion in a blood-glucose-dependent manner, and thus does not have hypoglycemic problems caused by existing therapeutic agents. In addition, GLP-1 has been reported to be effective in the treatment of adult diabetes by reducing food intake by increasing satiety (J. Med. Chem., 48: 14, 2005; J. Med. Chem., 50: 2297, 2007 J. Med. Chem., 50: 6450, 2007). Therefore, a method of treating diabetes by increasing the action of GLP-1 has received attention. However, in order to compensate for the short half-life (less than 2 minutes) of GLP-1 and the difficulty of oral administration, DPP-4 (dipeptidyl peptidase-4) inhibitors involved in the degradation of GLP-1 are actively under development. In other words, inhibition of DPP-4 is known to increase the circulating concentration of GLP-1, thereby increasing insulin secretion, thereby enhancing the action associated with GLP-1 and thus regulating blood glucose.

콩잎(Glycine max leaf)은 이소플라본과 플라보노이드 함량은 콩에 비해 현저히 감소된 반면에, 캠페롤(kaempferol) 배당체가 많이 함유되어 있다(Biomed. Pharmacother. 56: 289-295, 2002). 또한 성숙한 콩잎으로부터 테로카판(pterocarpane)계 화합물인 코우메스트롤(coumestrol), 글라이세오린 유도체 (glyceollin derivatives), 이소트리폴리올(isotrifoliol), 파세올(phaseol)을 분리하였으며, 이 화합물들의 α-글루코시데이즈 저해할성과 LDL 항산화 활성을 보고한바 있다(J. Agric. Food Chem., 54: 2057-2063, 2006; Food Chemistry, 126: 1057-1063, 2011; J. Agric. Food Chem., 59: 12683-12690, 2011). 그러나 아직까지 콩잎으로부터 하기 화학식 1 및 2의 코우메스탄(Coumestan)계 화합물을 분리하여 보고된 문헌은 발견되지 않았다. 또한 화학식 1의 화합물은 본 발명에서 처음으로 분리한 신규 화합물이며, 화학식 2의 화합물은 파키스탄 식물인 Psoralea Plicata로부터 분리되어 보고되었으나 (Phytochemistry, 30: 2800-2803, 1991), 생리활성은 보고된 것이 없다.
Glycine max leaf, isoflavones and flavonoids are significantly reduced compared to soy, while kaempferol glycosides are abundant (Biomed. Pharmacother. 56: 289-295, 2002). In addition, pterocarpane coumestrol, glyceollin derivatives, isotrifoliol, and phaseol were isolated from mature bean leaves, and the α- (Agric. Food Chem., 54: 2057-2063, 2006; Food Chemistry, 126: 1057-1063, 2011; J. Agric. Food Chem., 59 : 12683-12690, 2011). However, there has not yet been found a report on the separation of coumestan-based compounds of the following formulas (1) and (2) from soybean leaves. Also, the compound of formula (1) is a novel compound which was first isolated in the present invention, and the compound of formula (2) was reported separately from Psoralea Plicata, a Pakistani plant (Phytochemistry, 30: 2800-2803, 1991) none.

종래 대사성 질환의 예방 및 치료를 위한 조성물로는, 대한민국 등록특허 제758265호에서는 트리터페노이드계계 화합물을 유효성분으로 하는 심혈관계 질환의 예방 및 치료용 조성물이 개시되어 있고, 대한민국 등록특허 제 806226호에서는 콩뿌리 추출물 또는 이로부터 분리된 폴리페놀계 화합물을 유효성분으로 하는 심혈관계 질환의 예방 및 치료용 조성물이 개시되어 있으며, 대한민국 등록특허 제 811100호에서는 벤즈아졸 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 대사성 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물이 개시되어 있고, 대한민국 등록특허 제 1089716호에서는 플라보노이드계 화합물을 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 하는 고지혈증, 고콜레스테롤증 또는 이들의 합병증의 예방 및 치료용 조성물이 개시되어 있고, 대한민국 등록특허 제 1158856호에서는 콩잎 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 비만, 고지혈증, 동맥경화, 지방간, 당뇨 또는 대사증후군의 예방 또는 치료용 조성물이 개시되어 있고, 대한민국 등록특허 제 1415167호에서는 테로카판계 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 대사성 질환, 염증성 질환 또는 이들의 합병증의 예방 또는 치료용, 또는 항산화용 조성물이 개시되어 있다. 그러나, 대사성 질환 치료에 유용한 신규 치료제의 개발이 여전히 요구되고 있는 실정이다.
As a composition for prevention and treatment of metabolic diseases in the past, Korean Patent No. 758265 discloses a composition for prevention and treatment of cardiovascular diseases comprising a triterpenoid compound as an active ingredient, and Korean Patent No. 806226 Discloses a composition for prevention and treatment of cardiovascular diseases comprising soybean root extract or a polyphenol compound isolated therefrom as an active ingredient. Korean Patent No. 811100 discloses a benzazole derivative or a pharmaceutically acceptable salt thereof And Korean Patent Registration No. 1089716 discloses a pharmaceutical composition for preventing and treating metabolic diseases which comprises as an active ingredient a flavonoid compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient, Compositions for the prevention and treatment of these complications Korean Patent Registration No. 1158856 discloses a composition for preventing or treating obesity, hyperlipidemia, arteriosclerosis, fatty liver, diabetes or metabolic syndrome which comprises soybean curd extract or fraction thereof as an active ingredient, 1415167 discloses compositions for preventing or treating metabolic diseases, inflammatory diseases or complications thereof, or compositions for antioxidation, which contain a terracarpane compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient. However, the development of new therapeutic agents useful for the treatment of metabolic diseases is still required.

이에, 본 발명자들은 대사성 질환 또는 이들의 합병증의 예방 또는 치료제를 천연물로부터 탐색하던 중, 콩잎 추출물로부터 얻은 코우메스탄(Coumestan)계 화합물이 LDL 항산화 및 α-글루코시데이즈 저해활성이 있음을 확인하고, 대사성 질환 또는 이들의 합병증의 예방 또는 치료뿐만 아니라 항산화용 조성물로 유용하게 이용될 수 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
Accordingly, the inventors of the present invention have found that a Coumestan-based compound obtained from a soybean leaf extract has LDL antioxidant and alpha -glucosidase inhibitory activity while searching for a preventive or therapeutic agent for metabolic diseases or complications thereof from natural products, The present invention has been accomplished by confirming that it can be effectively used as a composition for antioxidation as well as prevention or treatment of metabolic diseases or complications thereof.

본 발명의 목적은 코우메스탄(Coumestan)계 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 대사성 질환 또는 이의 합병증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물, 또는 항산화용 조성물을 제공하는 것이다.
It is an object of the present invention to provide a pharmaceutical composition or antioxidant composition for preventing or treating metabolic diseases or complications thereof containing a coumestan compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.

상기 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 신규 코우메스탄(Coumestan)계 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다:In order to achieve the above object, the present invention provides a novel Coumestan-based compound represented by the following formula (1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof:

[화학식 1][Chemical Formula 1]

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또한, 본 발명은In addition,

1) 콩잎(Glycine max leaf)을 물, C₁ ~ C₂ 알코올, 에틸아세테이트 또는 이들의 혼합물로 추출하여 콩잎 추출물을 얻는 단계;1) Glycine max leaf) with water, C ₁ to C ₂ alcohol, ethyl acetate or a mixture thereof to obtain a soybean leaf extract;

2) 상기 단계 1)에서 얻은 콩잎 추출물을 물, 디클로로메탄 및 에틸아세테이트를 순차적으로 사용하여 콩잎 물, 디클로로메탄 및 에틸아세테이트 분획물을 얻는 단계; 및2) obtaining the canola leaves, dichloromethane and ethyl acetate fractions by using water, dichloromethane and ethyl acetate sequentially from the soybean leaf extract obtained in the above step 1); And

3) 상기 단계 2)에서 수득한 에틸아세테이트 분획물을 유기용매를 유출용매로 사용하는 컬럼크로마토그래피를 수행하여 제 1항의 화합물을 분리 및 정제하는 단계를 포함하는 신규 코우메스탄계 화합물의 제조방법을 제공한다.3) Separation and purification of the compound of claim 1 by subjecting the ethyl acetate fraction obtained in the above step 2) to column chromatography using an organic solvent as a spiraling solvent to prepare a novel coamestane compound do.

또한, 본 발명은 상기 화학식 1 또는 하기 화학식 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 대사성 질환 또는 이의 합병증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다:The present invention also provides a pharmaceutical composition for preventing or treating metabolic diseases or complications thereof, comprising a cosmestane compound represented by Chemical Formula 1 or Chemical Formula 2 or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.

[화학식 2](2)

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또한, 본 발명은 상기 화학식 1 또는 화학식 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 대사성 질환 또는 이의 합병증의 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다.The present invention also provides a health functional food for preventing or ameliorating a metabolic disease or a complication thereof comprising the cohomestane-based compound represented by Chemical Formula 1 or Chemical Formula 2 or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.

또한, 본 발명은 상기 화학식 1 및 화학식 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 항산화용 조성물을 제공한다.The present invention also provides an antioxidant composition comprising the cohomestane-based compound represented by Chemical Formulas 1 and 2 or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.

또한, 본 발명은 상기 화학식 1 및 화학식 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 항산화용 화장료 조성물을 제공한다.The present invention also provides a cosmetic composition for antioxidation comprising the cosmestan compound represented by the general formulas (1) and (2) or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.

아울러, 본 발명은 상기 화학식 1 및 화학식 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 항산화용 사료첨가제를 제공한다.
In addition, the present invention provides an antioxidant feed additive comprising the cohomestane-based compound represented by Chemical Formulas 1 and 2 or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.

본 발명에 따른 콩잎(Glycine max leaf)으로부터 분리한 코우메스탄(Coumestan)계 화합물은 α-글루코시데이즈(α-glucosidase), 알파-아밀레이즈(α-amylase), DPP-4(Dipeptidyl peptidase-4), 사람 콜레스테롤 아실 전이효소(hACAT)의 활성을 효과적으로 억제하고, LDL 산화를 효과적으로 억제함으로써 이와 관련되는 대사성 질환 또는 이들의 합병증의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있을 뿐만 아니라, 항산화 활성이 우수하므로 항산화용 조성물로 유용하게 사용할 수 있다.
Kongip according to the invention (Glycine max leaf has been found to be useful for the production of α-glucosidase, α-amylase, DPP-4 (dipeptidyl peptidase-4), human cholesterol acyltransferase (hACAT), effectively inhibiting LDL oxidation, and thus can be effectively used for prevention or treatment of metabolic diseases or complications thereof, and is also useful as an antioxidant composition because of its excellent antioxidative activity .

도 1은, 본 발명의 코우메스탄(Coumestan)계 화합물의 제조 방법을 나타낸 개략도이다.
도 2는, 화학식 1로 표시되는 신규 화합물(9-hydroxy-2-(prop-1-en-2-yl)-1H-benzofuro[3,2-c]furo[3,2-g]chromen-6(2H)-one; C₂₀H₁₄O₅)의 NMR 분석 결과(2차원 분석)을 나타낸 도이다.
도 3은, 화합물 2로 표시되는 화합물인 플리카딘(plicadin; C₂0H₁₄O₅)의 NMR 분석 결과(2차원 분석)을 나타낸 도이다.BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS FIG. 1 is a schematic view showing a method for producing a coumestan-based compound of the present invention. FIG.
FIG. 2 is a graph showing the results of measurement of the activity of a novel compound (9-hydroxy-2- (prop-1-en-2-yl) -1H-benzofuro [3,2- 6 (2H) -one; C ₂₀ H ₁₄ O ₅ ).
3 is a replicon kadin compound represented by Formula 2; a diagram showing a (C ₂ 0H plicadin ₁₄ O ₅₎ NMR analysis (two-dimensional analysis).

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 신규한 코우메스탄(Coumestan)계 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다:The present invention provides a novel coumestan-based compound represented by the following formula (1): or a pharmaceutically acceptable salt thereof:

[화학식 1][Chemical Formula 1]

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또한, 본 발명은 In addition,

1) 콩잎(Glycine max leaf)을 물, C₁ ~ C₂ 알코올, 에틸아세테이트 또는 이들의 혼합물로 추출하여 콩잎 추출물을 얻는 단계;1) Glycine max leaf) with water, C ₁ to C ₂ alcohol, ethyl acetate or a mixture thereof to obtain a soybean leaf extract;

2) 상기 단계 1)에서 얻은 콩잎 추출물을 물, 디클로로메탄 및 에틸아세테이트를 순차적으로 사용하여 콩잎 물, 디클로로메탄 및 에틸아세테이트 분획물을 얻는 단계; 및2) obtaining the canola leaves, dichloromethane and ethyl acetate fractions by using water, dichloromethane and ethyl acetate sequentially from the soybean leaf extract obtained in the above step 1); And

3) 상기 단계 2)에서 수득한 에틸아세테이트 분획물을 유기용매를 유출용매로 사용하는 컬럼크로마토그래피를 수행하여 제 1항의 화합물을 분리 및 정제하는 단계를 포함하는 신규 코우메스탄계 화합물의 제조방법을 제공한다.3) Separation and purification of the compound of claim 1 by subjecting the ethyl acetate fraction obtained in the above step 2) to column chromatography using an organic solvent as a spiraling solvent to prepare a novel coamestane compound do.

상기 신규한 코우메스탄계 화합물은 콩잎(Glycine max leaf)에서 분리된 것이 바람직하나 이에 한정되지 않으며, 상기 콩잎은 재배한 것 또는 시판되는 것 등 제한 없이 사용할 수 있다. The novel cohomestane-based compound was prepared by dissolving Glycine max leaf, but the present invention is not limited thereto. The canola may be cultivated or commercially available.

상기 제조방법으로 제조된 신규 화합물은 핵자기공명스펙트럼(NMR), 질량분석, 녹는점, 적외선 분광도 등으로 확인할 수 있다.
The novel compounds prepared by the above process can be confirmed by nuclear magnetic resonance spectroscopy (NMR), mass spectrometry, melting point, and infrared spectroscopy.

또한, 본 발명은 상기 화학식 1 및 하기 화학식 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 대사성 질환 또는 이의 합병증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다:The present invention also provides a pharmaceutical composition for preventing or treating metabolic diseases or complications thereof, comprising a cosmestane compound represented by Chemical Formulas 1 and 2 or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.

[화학식 2](2)

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본 발명은 상기 화학식 1 또는 화학식 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물뿐만 아니라, 이의 약학적으로 허용되는 염, 이로부터 제조될 수 있는 가능한 용매화물, 수화물, 라세미체, 또는 입체이성질체를 모두 포함한다.The present invention includes not only the cohomestane-based compounds represented by the above-mentioned formula (1) or (2) but also their pharmaceutically acceptable salts, possible solvates, hydrates, racemates or stereoisomers thereof .

본 발명의 화학식 1 또는 화학식 2의 코우메스탄계 화합물은 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 사용할 수 있으며, 염으로는 약학적으로 허용 가능한 유리산(free acid)에 의해 형성된 산 부가염이 유용하다. 산 부가염은 염산, 질산, 인산, 황산, 브롬화수소산, 요드화수소산, 아질산 또는 아인산과 같은 무기산류와 지방족 모노 및 디카르복실레이트, 페닐-치환된 알카노에이트, 하이드록시 알카노에이트 및 알칸디오에이트, 방향족 산류, 지방족 및 방향족 설폰산류와 같은 무독성 유기산으로부터 얻는다. 이러한 약학적으로 무독한 염류로는 설페이트, 피로설페이트, 바이설페이트, 설파이트, 바이설파이트, 니트레이트, 포스페이트, 모노하이드로겐 포스페이트, 디하이드로겐 포스페이트, 메타포스페이트, 피로포스페이트 클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드, 플루오라이드, 아세테이트, 프로피오네이트, 데카노에이트, 카프릴레이트, 아크릴레이트, 포메이트, 이소부티레이트, 카프레이트, 헵타노에이트, 프로피올레이트, 옥살레이트, 말로네이트, 석시네이트, 수베레이트, 세바케이트, 푸마레이트, 말리에이트, 부틴-1,4-디오에이트, 헥산-1,6-디오에이트, 벤조에이트, 클로로벤조에이트, 메틸벤조에이트, 디니트로 벤조에이트, 하이드록시벤조에이트, 메톡시벤조에이트, 프탈레이트, 테레프탈레이트, 벤젠설포네이트, 톨루엔설포네이트, 클로로벤젠설포네이트, 크실렌설포네이트, 페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트, 페닐부티레이트, 시트레이트, 락테이트, 하이드록시부티레이트, 글리콜레이트, 말레이트, 타트레이트, 메탄설포네이트, 프로판설포네이트, 나프탈렌-1-설포네이트, 나프탈렌-2-설포네이트 또는 만델레이트를 포함한다.The cohomestane compound of formula (1) or (2) of the present invention can be used in the form of a pharmaceutically acceptable salt, and as the salt, an acid addition salt formed by a pharmaceutically acceptable free acid is useful. Acid addition salts include those derived from inorganic acids such as hydrochloric acid, nitric acid, phosphoric acid, sulfuric acid, hydrobromic acid, hydroiodic acid, nitrous acid or phosphorous acid, and aliphatic mono- and dicarboxylates, phenyl-substituted alkanoates, hydroxyalkanoates, Dioleate, aromatic acid, aliphatic and aromatic sulfonic acids. Such pharmaceutically innocuous salts include, but are not limited to, sulfate, pyrosulfate, bisulfate, sulfite, bisulfite, nitrate, phosphate, monohydrogenphosphate, dihydrogenphosphate, metaphosphate, pyrophosphate chloride, bromide, Butyrate, caprate, heptanoate, propiolate, oxalate, malonate, succinate, succinate, maleic anhydride, maleic anhydride, , Sebacate, fumarate, maleate, butyne-1,4-dioate, hexane-1,6-dioate, benzoate, chlorobenzoate, methylbenzoate, dinitrobenzoate, hydroxybenzoate, Methoxybenzoate, phthalate, terephthalate, benzene sulfonate, toluene sulfonate, chlorobenzene sulfide Sulfonate, methanesulfonate, propanesulfonate, naphthalene-1-sulphonate, naphthalene-1-sulphonate, , Naphthalene-2-sulfonate or mandelate.

본 발명에 따른 산 부가염은 통상의 방법, 예를 들면, 화학식 1 또는 화학식 2의 화합물을 과량의 산 수용액 중에 용해시키고, 이 염을 수혼화성 유기 용매, 예를 들면 메탄올, 에탄올, 아세톤 또는 아세토니트릴을 사용하여 침전시켜서 제조할 수 있다. 동량의 화학식 1 또는 화학식 2의 신규 코우메스탄계 화합물 및 산 수용액 또는 알코올을 가열하고, 이어서 이 혼합물을 증발시켜서 건조하거나 또는 석출된 염을 흡입 여과시켜 제조할 수도 있다.The acid addition salt according to the present invention can be obtained by a conventional method, for example, by dissolving the compound of the formula (1) or (2) in an excess amount of an acid aqueous solution and then dissolving the salt in a water-miscible organic solvent such as methanol, ethanol, Followed by precipitation using nitrile. Or by heating an acid aqueous solution or alcohol of the same amount of the novel coamestane-based compound represented by the formula (1) or (2) and then evaporating the mixture or drying the precipitated salt by suction filtration.

또한, 염기를 사용하여 약학적으로 허용 가능한 금속염을 만들 수 있다. 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염은 예를 들면 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리 토금속 수산화물 용액 중에 용해하고, 비 용해화합물 염을 여과하고, 여액을 증발, 건조시켜 얻는다. 이때, 금속염으로는 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약상 적합하다. 또한, 이에 대응하는 은 염은 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염을 적당한 음염(예, 질산은)과 반응시켜 얻을 수 있다.
In addition, bases can be used to make pharmaceutically acceptable metal salts. The alkali metal or alkaline earth metal salt is obtained, for example, by dissolving the compound in an excess amount of an alkali metal hydroxide or alkaline earth metal hydroxide solution, filtering the salt of the undissolved compound, and evaporating and drying the filtrate. At this time, it is preferable for the metal salt to produce sodium, potassium or calcium salt. The corresponding silver salt can also be obtained by reacting an alkali metal or alkaline earth metal salt with a suitable salt (such as silver nitrate).

상기 화학식 1 또는 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물은 하기 제법에 의해 제조될 수 있으나, 이에 한정하지 않는다.The coomestane-based compound represented by the above formula (1) or (2) can be produced by the following process, but is not limited thereto.

<제법 1><Manufacturing method 1>

본 발명에 따른 1 또는 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물의 제조방법은,The process for producing a coamestane-based compound represented by 1 or 2, according to the present invention,

1) 콩잎을 물, C₁~C₄의 알코올, 에틸아세테이트 또는 이들의 혼합물을 가하여 콩잎 추출물을 수득하는 단계;1) adding soybean leaf to water, C ₁ -C ₄ alcohol, ethyl acetate or a mixture thereof to obtain a soybean leaf extract;

2) 상기 단계 1)에서 얻은 콩잎 추출물을 물, 디클로로메탄 및 에틸아세테이트를 이용하여 순차적으로 분획하여 분획물을 얻는 단계; 및2) sequentially fractionating the soybean leaf extract obtained in step 1) using water, dichloromethane and ethyl acetate to obtain fractions; And

3) 상기 단계 2)에서 수득한 에틸아세테이트 분획물을 유기용매를 유출용매로 사용하는 컬럼크로마토그래피를 수행하여 화합물을 분리하고 정제하는 단계를 포함한다.3) Separation and purification of the ethyl acetate fraction obtained in step 2) by performing column chromatography using an organic solvent as an eluting solvent.

이하, 본 발명의 제조방법을 단계별로 살펴본다.Hereinafter, the production method of the present invention will be described step by step.

상기 <제법 1>의 단계 1)은 콩잎을 물, C₁~C₄의 알코올, 에틸아세테이트 또는 이들의 혼합물을 가하여 콩잎 추출물을 수득하는 단계이다. Step 1) of <Preparation process 1> is a step of obtaining a soybean leaf extract by adding water, C ₁ -C ₄ alcohol, ethyl acetate or a mixture thereof to the soybean leaf.

상기 단계에 있어서, 본 발명의 콩잎 추출물을 얻는 방법은 건조된 콩잎을 세절하여 추출용기에 넣고, 물, C₁~C₄의 알코올, 에틸아세테이트 또는 이들의 혼합물을 넣어 상온 또는 가온하여 추출하여 추출액을 얻는다. 콩잎의 추출 효율을 높이기 위하여 상기 과정을 수회 반복 수행할 수 있다. 이후, 상기 추출액을 일정 시간 동안 방치 한 다음 거름종이 등으로 여과하여 메탄올 추출물을 제조할 수 있다.In the above step, the soybean leaf extract of the present invention can be obtained by extracting dried soybean leaves into an extraction container, extracting it with water, a C ₁ to C ₄ alcohol, ethyl acetate or a mixture thereof at room temperature or warming, . The above procedure may be repeated several times in order to increase the extraction efficiency of the bean leaves. Thereafter, the extract is allowed to stand for a predetermined period of time, and then filtered with a filter paper or the like to produce a methanol extract.

상기 단계 2)는 단계 1에서 얻은 콩잎 추출물을 물, 디클로로메탄 및 에틸아세테이트를 이용하여 순차적으로 분획하여 분획물을 얻는 단계이다.Step 2) is a step of sequentially fractionating the soybean leaf extract obtained in Step 1 using water, dichloromethane and ethyl acetate to obtain fractions.

구체적으로 상기 단계에서 얻은 콩잎 추출물을 물에 현탁시킨 후, 추출용매로서 디클로로메탄 및 에틸아세테이트를 사용하여 순차적으로 분획하여 디클로로메탄 분획물, 에틸아세테이트 분획물 및 물 분획물을 얻을 수 있다.Specifically, the soybean leaf extract obtained in the above step is suspended in water, and then fractionated successively using dichloromethane and ethyl acetate as an extraction solvent to obtain a dichloromethane fraction, ethyl acetate fraction and water fraction.

상기 단계 3)은 상기 단계 2)에서 수득한 에틸아세테이트 분획물을 유기용매를 유출용매으로 하는 컬럼크로마토그래피를 수행하여 화합물을 분리하고 정제하는 단계이다(도 1 참조). Step 3) is a step of separating and purifying the compound by performing column chromatography using the organic solvent as an eluting solvent in the ethyl acetate fraction obtained in step 2) (see FIG. 1).

구체적으로 단계 2)로부터 얻은 분획물들 중 에틸아세테이트 분획물을 헥산/아세톤을 유출용매로 사용하여 헥산/아세톤=30:1~1:1로 농도구배하여 컬럼크로마토그래피를 수행하여 8개의 분획물(A ~ H)로 분획하고, 이중 D 분획물(헥산:아세톤=10:1)은 헥산:아세톤=6:1을 유출용매로 사용하여 실리카 컬럼크로마토그래피를 수행하여 25개의 분획물(FD1 ~ FD25)로 분획하고, 상기 25개의 분획물 중, FD7 ~ FD14의 분획물을 합쳐서 80% 메탄올을 유출용매로 사용하여 세파덱스 LH-20 컬럼크로마토그래피를 수행하여 화학식 1로 표시되는 신규한 코우메스탄계 화합물을 분리, 정제하여 얻을 수 있다. Specifically, the ethyl acetate fraction of the fractions obtained from step 2) was subjected to column chromatography by gradient of hexane / acetone = 30: 1 to 1: 1 using hexane / acetone as a distillation solvent, H), and D fractions (hexane: acetone = 10: 1) were fractionated into 25 fractions (FD1 to FD25) by silica column chromatography using hexane: acetone = 6: , Fractions of FD7 to FD14 among the above 25 fractions were combined and subjected to Sephadex LH-20 column chromatography using 80% methanol as an elution solvent to separate and purify the novel cohomestan compound represented by the formula (1) Can be obtained.

또한, 상기 25개의 분획물 중, FD17 ~ FD23의 분획물을 합쳐서 80% 메탄올을 유출용매로 사용하여 세파덱스 LH-20 컬럼크로마토그래피를 수행하여 화학식 2로 표시되는 화합물(플리카딘, plicadin)을 분리, 정제하여 얻을 수 있다.
The fractions FD17 to FD23 in the above 25 fractions were combined, and the compound (plicadin) represented by the general formula (2) was isolated and purified by performing Sephadex LH-20 column chromatography using 80% methanol as an elution solvent. Can be obtained by purification.

<제법 2><Manufacturing method 2>

또한, 본 발명에 따른 화학식 1 또는 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물의 제조 방법은,Further, the method for producing the cohomestane-based compound represented by the general formula (1) or (2)

1) 콩잎에 에틸아세테이트를 가하여 콩잎 에틸아세테이트 추출물을 수득하는 단계; 및1) adding soybean oil to ethyl acetate to obtain an extract of soybean oil ethyl acetate; And

2) 상기 단계 1)에서 수득한 콩잎 추출물을 헥산/아세톤을 유출용매로 사용하는 컬럼크로마토그래피를 수행하여 화합물을 분리하고 정제하는 단계를 포함한다.2) Performing column chromatography using the hexane / acetone as an elution solvent to extract the soybean leaf extract obtained in the above step 1) and purifying the compound.

이하, 본 발명의 상기 제조방법을 단계별로 살펴본다.Hereinafter, the production method of the present invention will be described step by step.

상기 <제법 2>의 단계 1)은 콩잎을 에틸아세테이트로 추출하는 단계이다. Step 1) of < Production method 2 > is a step of extracting soybean leaves with ethyl acetate.

상기 단계에 있어서, 에틸아세테이트 추출물을 얻는 방법은 건조된 콩잎을 세절하여 추출용기에 넣고, 에틸아세테이트를 넣어 상온에서 추출하여 추출액을 얻는다. 콩잎의 추출 효율을 높이기 위하여 상기 과정을 수회 반복 수행할 수 있다. 이후, 상기 추출액을 일정 시간 동안 방치한 다음 거름종이 등으로 여과하여 에틸아세테이트 추출물을 제조할 수 있다.In the above step, the method for obtaining the ethyl acetate extract is as follows. The dried soybean leaves are cut into an extraction container, and ethyl acetate is added thereto to extract the extract at room temperature. The above procedure may be repeated several times in order to increase the extraction efficiency of the bean leaves. Thereafter, the extract is allowed to stand for a predetermined time, and then filtered with a filter paper or the like to produce an ethyl acetate extract.

상기 단계 2)는 상기 단계 1)에서 수득한 에틸아세테이트 추출물을 유기용매를 유출용매로 사용하는 컬럼크로마토그래피를 수행하여 화합물을 분리하고 정제하는 단계이다. The step 2) is a step of separating and purifying the compound by performing column chromatography using an organic solvent as an elution solvent, the ethyl acetate extract obtained in the step 1).

상기 단계는 상술한 <제법 1>의 단계 3)과 동일한 방법으로 수행될 수 있다.This step can be carried out in the same manner as in step 3) of < Production method 1 > described above.

본 발명에 있어 상기 대사성 질환은 당뇨, 고지혈증, 동맥경화, 지방간 또는 비만이 있으며, 대사성 질환의 합병증은 관상 동맥 질환, 협심증, 경동맥 질환, 뇌졸중, 뇌동맥경화증, 고콜레스테롤증, 콜레스테롤 결석, 고중성지방혈증, 고혈압, 백내장, 신장질환, 신경장애, 염증성 장애 또는 감염증 등이 있다.
In the present invention, the metabolic diseases include diabetes, hyperlipidemia, arteriosclerosis, fatty liver or obesity. Complications of metabolic diseases include coronary artery disease, angina pectoris, carotid artery disease, stroke, cerebral arterial sclerosis, hypercholesterolemia, cholesterol stone, Hypertension, cataract, kidney disease, neurological disorder, inflammatory disorder or infectious disease.

본 발명의 구체적인 실시예에서, 상기 화학식 1 또는 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물의 대사성 질환에 관련된 활성을 검증하기 위해 α-글루코시데이즈 저해 활성, α-아밀레이즈 저해 활성, DPP-4 저해활성, hACAT-1 및 hACAT-2 저해활성 및 LDL에 대한 항산화 활성 측정을 수행하였다. 그 결과, 본 발명에 따른 상기 조성물에 포함되는 코우메스탄계 화합물의 α-글루코시데이즈 저해 활성을 측정한 결과, 본 발명에 따른 화학식 1 내지 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물은 α-글루코시데이즈에 대하여 7.5 μg/ml에서 각각 57.8 ± 2.9% 및 66.0 ± 0.3%로 우수한 저해활성이 있는 것으로 나타났다(표 3 참조).In a specific example of the present invention, in order to examine the activity of the cohomestane-based compound represented by the above formula (1) or (2) in relation to the metabolic diseases, α-glucosidase inhibitory activity, α-amylase inhibitory activity, DPP-4 inhibitory activity , hACAT-1 and hACAT-2 inhibitory activity and LDL activity. As a result, the? -Glucosidase inhibitory activity of the cohomestane-based compound contained in the composition according to the present invention was measured. As a result, the cohomestane-based compound represented by the formula (1) (57.8 ± 2.9% and 66.0 ± 0.3%, respectively) at 7.5 μg / ml, respectively (see Table 3).

또한, 본 발명에 따른 상기 조성물에 포함되는 코우메스탄계 화합물의 α-아밀레이즈 저해 활성을 측정한 결과, 본 발명에 따른 화학식 1 내지 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물은 α-아밀레이즈에 대하여 100 μg/ml에서 각각 저해 활성이 각각 14.9% 및 61.4%로 나타났다(표 4 참조).As a result of measuring the? -Amylase inhibitory activity of the cohomestane-based compound contained in the composition according to the present invention, the cohomestane-based compound represented by the formula (1) to (2) and the inhibitory activities were 14.9% and 61.4%, respectively (see Table 4).

또한, 본 발명에 따른 상기 조성물에 포함되는 코우메스탄계 화합물의 DPP-4(Dipeptidyl peptidase-4) 저해 활성을 측정한 결과, 본 발명에 따른 화학식 1 내지 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물은 DPP-4에 대하여 100 μg/ml에서 각각 저해 활성이 각각 45.0% 및 77.1%로 나타났다(표 5 참조).In addition, as a result of measuring the DPP-4 (dipeptidyl peptidase-4) inhibitory activity of the coamestane compound contained in the composition according to the present invention, the cohomestane compound represented by the formula (1) 4, the inhibitory activities were 45.0% and 77.1% at 100 μg / ml, respectively (see Table 5).

또한, 고지혈증 치료와 관련 있는 혈중 콜레스테롤 전이 효소의 저해활성을 측정한 결과, 본 본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 코우메스탄계 화합물은 hACAT1 및 hACAT2에 대하여 100 μg/ml에서 각각 저해 활성이 각각 60.4% 및 64.2%로 매우 우수한 것으로 나타났고, 화학식 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물은 hACAT1 및 hACAT2에 대하여 100 μg/ml에서 각각 저해 활성이 각각 24.5% 및 43.5%로 나타났다(표 6 참조).As a result of measuring the inhibitory activity of blood cholesterol transferase associated with the treatment of hyperlipidemia, the cohomestane compound represented by formula (1) according to the present invention showed inhibitory activity at 100 μg / ml against hACAT1 and hACAT2, respectively, to 60.4 % And 64.2%, respectively, and the coamestane compounds represented by the formula (2) showed inhibitory activities of 24.5% and 43.5% at 100 μg / ml for hACAT1 and hACAT2, respectively (see Table 6).

또한, LDL 산화 억제 활성을 측정한 결과, 본 발명에 따른 화학식 1 내지 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물은 저밀도 지질 단백질의 산화에 대하여 3 ㎍/ml에서 각각 34.1% 및 22.8%로 우수한 저해활성이 있는 것으로 나타났다(표 7 참조).Further, as a result of measuring LDL oxidation inhibition activity, it was found that the cohomestane compounds represented by formulas (1) to (2) according to the present invention had excellent inhibitory activity against oxidation of low density lipoprotein at 3 ㎍ / ml at 34.1% and 22.8% (See Table 7).

또한, 본 발명의 코우메스탄계 화합물을 마우스에 경구 투여하여 독성 실험을 수행한 결과, 상기 코우메스탄계 화합물은 경구 독성시험에 의한 50% 치사량(LD50)은 적어도 1000 ㎎/㎏ 이상인 것으로 나타났다(실험예 4 참조).
Further, as a result of toxicity tests conducted by orally administering the cohomestane-based compound of the present invention to mice, the cohomestan-based compound showed a 50% lethal dose (LD50) by oral toxicity test of at least 1000 mg / kg or more See Example 4).

따라서, 본 발명의 코우메스탄계 화합물은 α-글루코시데이즈 활성, α-아밀레이즈 활성, DPP-4(Dipeptidyl peptidase-4) 활성 및 사람 콜레스테롤 아실 전이효소(hACAT) 활성을 효과적으로 억제하고, LDL에 대한 우수한 항산화 활성을 나타내며, 독성이 거의 없기 때문에 대사성 질환 또는 이의 합병증 예방 또는 치료용 약학적 조성물, 또는 항산화용 조성물로 유용하게 이용될 수 있다.
Therefore, the cohomestane-based compound of the present invention effectively inhibits? -Glucosidase activity,? -Amylase activity, DPP-4 (dipeptidyl peptidase-4) activity and human cholesterol acyltransferase (hACAT) And exhibits excellent antioxidative activity against the microorganism and has little toxicity. Therefore, it can be usefully used as a pharmaceutical composition for preventing or treating metabolic diseases or complications thereof, or a composition for antioxidation.

상기 조성물을 제제화할 경우, 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 제조된다.When the composition is formulated, it is prepared using diluents or excipients such as fillers, extenders, binders, humectants, disintegrants, surfactants and the like which are usually used.

경구투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환자, 산제, 과립제, 캡슐제, 트로키제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 하나 이상의 본 발명로 표시되는 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose) 또는 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구 투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 또는 시럽제 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.Solid formulations for oral administration include tablets, patients, powders, granules, capsules, troches and the like, which may contain one or more excipients such as starch, calcium carbonate Sucrose, lactose, or gelatin. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium stearate talc are also used. Liquid preparations for oral administration include suspensions, solutions, emulsions or syrups. Various excipients such as wetting agents, sweeteners, fragrances, preservatives and the like are included in addition to commonly used simple diluents such as water and liquid paraffin. .

비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁용제, 유제, 동결건조제제, 좌제 등이 포함된다.Formulations for parenteral administration include sterilized aqueous solutions, non-aqueous solutions, suspensions, emulsions, freeze-dried preparations, suppositories, and the like.

비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세롤, 젤라틴 등이 사용될 수 있다.Examples of the non-aqueous solvent and suspending agent include propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, injectable ester such as ethyl oleate, and the like. As a base for suppositories, witepsol, macrogol, tween 61, cacao paper, laurin, glycerol, gelatin and the like can be used.

본 발명에 따른 조성물은 약제학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에 있어서, "약제학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효용량 수준은 환자의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.The composition according to the present invention is administered in a pharmaceutically effective amount. In the present invention, "pharmaceutically effective amount" means an amount sufficient to treat a disease at a reasonable benefit / risk ratio applicable to medical treatment, and the effective dose level will depend on the type of disease, severity, , Sensitivity to the drug, time of administration, route of administration and rate of release, duration of treatment, factors including co-administered drugs, and other factors well known in the medical arts. The composition of the present invention can be administered as an individual therapeutic agent or in combination with other therapeutic agents, and can be administered sequentially or simultaneously with conventional therapeutic agents, and can be administered singly or in multiple doses. It is important to take into account all of the above factors and to administer the amount in which the maximum effect can be obtained in a minimal amount without side effects, which can be easily determined by those skilled in the art.

구체적으로, 본 발명에 따른 화합물의 유효량은 환자의 나이, 성별, 체중에 따라 달라질 수 있으며, 일반적으로는 체중 1 ㎏당 0.1 내지 100 mg, 바람직하게는 0.5 내지 10 mg을 매일 또는 격일 투여하거나 1일 1 내지 3회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나 투여 경로, 비만의 중증도, 성별, 체중, 연령 등에 따라서 증감될 수 있으므로 상기 투여량이 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
Specifically, the effective amount of the compound according to the present invention may vary depending on the age, sex, and body weight of the patient. In general, 0.1 to 100 mg, preferably 0.5 to 10 mg per kg of body weight is administered daily or every other day or 1 It may be administered one to three times a day. However, the dosage may be varied depending on the route of administration, the severity of obesity, sex, weight, age, etc. Therefore, the dosage is not limited to the scope of the present invention by any means.

본 발명에 따른 항산화용 화장료 조성물은 로션, 연고, 겔, 크림, 패치 또는 분무제 등을 포함하나 여기에 국한되는 것은 아니다. 본 발명에 따른 항산화용 화장료 조성물을 제조함에 있어서, 통상적으로 함유되는 피부 외용제 조성물에 본 발명의 코우메스탄계 화합물을 1 내지 15 중량부, 바람직하게는 2 또는 10 중량부로 첨가할 수 있다. 상기 피부 외용제 조성물에는 본 발명의 코우메스탄계 화합물에 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 피부 외용제 조성물에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 피부 과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 또한 상기 성분들은 피부 과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.
The antioxidant cosmetic composition according to the present invention includes, but is not limited to, lotions, ointments, gels, creams, patches or sprays. In preparing the cosmetic composition for antioxidation according to the present invention, 1 to 15 parts by weight, preferably 2 or 10 parts by weight, of the cosmeceutical compound of the present invention may be added to a composition for external application for skin which is usually contained. The composition for external application for skin may further contain, in addition to the cosmetic composition of the present invention, a lipid, an organic solvent, a solubilizing agent, a thickening agent and a gelling agent, a softening agent, an antioxidant, a suspending agent, a stabilizer, a foaming agent, , Water, ionic or nonionic emulsifiers, fillers, sequestering and chelating agents, preservatives, vitamins, barrier agents, wetting agents, essential oils, dyes, pigments, hydrophilic or lipophilic active agents, lipid vesicles or dermatological compositions And may contain adjuvants conventionally used in the field of dermatology, such as any other ingredient commonly used. The components can also be introduced in amounts commonly used in the field of dermatology.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세하게 설명한다. Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to examples.

단, 하기 실시예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 범위가 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
However, the following examples are intended to illustrate the contents of the present invention, but the scope of the present invention is not limited by the examples.

<< 실시예Example 1> 콩잎으로부터  1> from bean leaves 코우메스탄(Coumestan)계Coumestan series 화합물의 분리 Separation of compounds

<1-1> 콩잎 추출물의 제조<1-1> Preparation of soybean leaf extract

본 발명에 따른 코우메스탄계 화합물은 콩잎(Glycine max leaf)으로부터 분리하여 얻었다. Koume Stan-based compound according to the invention kongip (Glycine max leaf.

구체적으로, 충청남도 일대에서 대두콩을 파종하여 생육기간이 110일 이후에 수확한 콩잎을 음지에서 건조하였다. 건조된 콩잎 1 kg을 분쇄한 후 에틸아세테이트 10 L를 가하고 4일 동안 실온에서 추출한 후, 여과지를 사용하여 에틸아세테이트 가용부만을 회수하고 감압 농축하여 25 g의 에틸아세테이트 추출물을 수득하였다.
Specifically, the soybean seeds were sown in Chungcheongnam - do area and the soybean leaves harvested after 110 days of growth were dried in the shade. 1 kg of dried soybean was ground, 10 L of ethyl acetate was added, and the mixture was extracted at room temperature for 4 days. Only the soluble portion of ethyl acetate was recovered using a filter paper and concentrated under reduced pressure to obtain 25 g of ethyl acetate extract.

<1-2> <1-2> 코우메스탄계Koumestan system 화합물의 분리 및 동정 Isolation and Identification of Compounds

<1-2-1> 화학식 1로 기재되는 &Lt; 1-2-1 > 신규한New 코우메스탄계Koumestan system 화합물의 제조 Preparation of compounds

상기 실시예 <1-1>에서 얻은 에틸아세테이트 추출물은 헥산-아세톤 혼합용액을 사용하여 실리카겔 컬럼크로마토그래피(헥산:아세톤 = 30:1(4 L), 20:1(2 L), 10:1(2 L), 8:1(2 L), 6:1(2 L), 3:1(2 L), 1:1(1 L))를 수행하여 총 8개의 분획물(A ~ H)을 얻었다. 상기 D 분획물(헥산:아세톤=10:1, 1.0 g)을 헥산:아세톤=6:1의 혼합 농도구배 용액을 사용하여 실리카겔 컬럼크로마토그래피를 수행하여 25개의 분획물(FD1 ~ FD25)을 얻었다. 상기 분획물 중 FD7 ~ FD14의 분획물을 합쳐서 80% 메탄올을 유출용매로 사용하여 세파덱스 LH-20(pharmacia Biotech AB, Uppsala, Sweden) 컬럼크로마토그래피를 수행하여 화학식 1로 표시되는 신규 화합물(7 mg)을 얻었다. 상기 화합물의 구조분석을 위하여 NMR 분석 및 질량분석을 수행하였다. The ethyl acetate extract obtained in Example <1-1> was purified by silica gel column chromatography (hexane: acetone = 30: 1 (4 L), 20: 1 (2 L), 10: (AH) was performed by performing the following steps (2 L), 8: 1 (2 L), 6: 1 (2 L), 3: . The fraction D (hexane: acetone = 10: 1, 1.0 g) was subjected to silica gel column chromatography using a mixed concentration gradient solution of hexane: acetone = 6: 1 to obtain 25 fractions (FD1 to FD25). The fractions FD7 to FD14 in the above fractions were combined and subjected to column chromatography using 80% methanol as an elution solvent to prepare a novel compound (7 mg) represented by the formula (1) by Sephadex LH-20 (pharmacia Biotech AB, Uppsala, Sweden) &Lt; / RTI &gt; NMR analysis and mass spectrometry were performed to analyze the structure of the compound.

그 결과, 도 2 및 표 1에 나타낸 바와 같이 상기 화학식 1로 표시되는 신규 화합물은 9-hydroxy-2-(prop-1-en-2-yl)-1H-benzofuro[3,2-c]furo[3,2-g]chromen-6(2H)-one으로 확인되었다(도 2 및 표 1).As a result, as shown in FIG. 2 and Table 1, the novel compound represented by the above formula (1) was found to be 9-hydroxy-2- (prop-1-en-2-yl) -1H-benzofuro [3,2- [3,2-g] chromen-6 (2H) -one (Fig. 2 and Table 1).

화학식 1의 NMR 분석값(¹³C: 150 MHz; ¹H: 600 MHz, 용매 CDCl₃)NMR analysis of the value of formula ^{1 (13 C: 150 MHz;} 1 H: 600 MHz, solvent CDCl ₃₎ No.No. ¹³C ¹³ C ¹H ¹ H 1One 111.7111.7 7.73 (1H, s)7.73 (1 H, s) 22 125125 33 163.2163.2 44 98.698.6 4a4a 154.9154.9 6.91 (1H, s)6.91 (1 H, s) 55 66 158.6158.6 6a6a 102.8102.8 6b6b 117117 77 122.2122.2 7.90 (1H, d, J = 8.2 Hz)7.90 (1H, d, J = 8.2 Hz) 88 113.7113.7 6.94 (1H, br. d, J = 8.2 Hz)6.94 (1H, br d, J = 8.2 Hz) 8a8a 99 155.1155.1 1010 98.998.9 7.11 (1H, s)7.11 (1H, s) 10a10a 156.2156.2 1111 11a11a 160.6160.6 11b11b 106106 12α12α 33.633.6 4.46 (1H, m)4.46 (1 H, m) 12β12β 3.14 (1H, m)3.14 (1H, m) 1313 87.687.6 5.34 (1H, t, J = 8.2 Hz)5.34 (1H, t, J = 8.2 Hz) 1414 142.9142.9 15α15α 133133 4.97 (1H, br. s)4.97 (1H, br.s) 15β15β 5.12 (1H, br. s)5.12 (1H, br.s) 16CH₃ 16CH ₃ 17.117.1 1.79 (3H, s)1.79 (3 H, s)

<화합물명> <Compound name>

분자식: C₂₀H₁₄O₅ Molecular formula: C ₂₀ H ₁₄ O ₅

EiMS(m/z): 334 [M⁺]
EiMS (m / z): 334 [M ^&lt; ⁺ &^gt;] [

<1-2-2> 화학식 2로 표시되는 화합물의 제조&Lt; 1-2-2 > Preparation of the compound represented by the formula (2)

상기 실시예 <1-2-1->에서 얻은 D 분획물(헥산:아세톤=10:1, 1.0 g)을 헥산:아세톤=6:1의 혼합 농도구배 용액을 사용하여 실리카겔 컬럼크로마토그래피를 수행하여 25개의 분획물(FD1 ~ FD25)을 얻었다. 상기 분획물 중 화학식 2의 화합물을 다량 함유하는 분획인 FD17 ~ FD23을 합쳐서 용출 용매로 80% 메탄올을 사용하여 세파덱스 LH-20(pharmacia Biotech AB, Uppsala, Sweden) 컬럼크로마토그래피를 수행하여 화학식 2로 표시되는 화합물(10 mg)을 얻었다. 상기 화합물들의 구조분석을 위하여 NMR 분석 및 질량분석을 수행하였다. The D fraction (hexane: acetone = 10: 1, 1.0 g) obtained in the above Example <1-2-1-> was subjected to silica gel column chromatography using a mixed concentration gradient solution of hexane: acetone = 6: 1 25 fractions (FD1 to FD25) were obtained. The fractions FD17 to FD23, which are fractions containing a large amount of the compound of formula (2), were subjected to column chromatography using 80% methanol as an elution solvent to obtain a compound of formula (2) To obtain the indicated compound (10 mg). NMR analysis and mass spectrometry were performed for the structural analysis of the above compounds.

그 결과를 도 3 및 표 2에 나타내었으며 기 보고된 문헌(J. Agric. Food Chem., 54: 2057-920, 2063)의 결과를 참고한 결과 상기 화합물 2는 플리카딘(plicadin)으로 확인되었다(도 3 및 표 2).The results are shown in FIG. 3 and Table 2, and the result of the reference of the previously reported document (J. Agric. Food Chem., 54: 2057-920, 2063) showed that Compound 2 was identified as plicadin (Fig. 3 and Table 2).

화학식 2의 NMR 분석값(¹³C: 150 MHz; ¹H: 600 MHz, 용매 CDCl₃)NMR analysis values of the formula ^{2 (13 C: 150 MHz;} 1 H: 600 MHz, solvent CDCl ₃₎ No.No. ¹³C ¹³ C ¹H ¹ H 1One 121.4121.4 7.64 (1H, d, J = 8.3 Hz)7.64 (1H, d, J = 8.3 Hz) 22 114.1114.1 6.78 (1H, d, J = 8.3 Hz)6.78 (1H, d, J = 8.3 Hz) 33 156.1156.1 44 110.1110.1 4a4a 149.3149.3 55 66 158.9158.9 6a6a 103.4103.4 6b6b 115.8115.8 77 121.7121.7 7.77 (1H, d, J = 8.2 Hz)7.77 (1 H, d, J = 8.2 Hz) 88 114114 6.89 (1H, br. d, J = 8.2 Hz)6.89 (1H, br d, J = 8.2 Hz) 8a8a 99 156.7156.7 1010 98.998.9 7.03 (1H, br. s)7.03 (1H, br.s) 10a10a 156.7156.7 1111 11a11a 160.4160.4 11b11b 106.3106.3 1212 115.5115.5 6.90 (1H, d, J = 10.3 Hz)6.90 (1H, d, J = 10.3 Hz) 1313 131.2131.2 5.71 (1H, d, J = 10.3 Hz)5.71 (1H, d, J = 10.3 Hz) 1414 77.877.8 15CH₃ 15CH ₃ 28.228.2 1.43 (3H, s)1.43 (3 H, s) 16CH₃ 16CH ₃ 28.228.2 1.43 (3H, s)1.43 (3 H, s)

<화합물명><Compound name>

분자식: C₂0H₁₄O₅ Molecular formula: C ₂ 0H ₁₄ O ₅

Coumestan-class compound, PlicadinCoumestan-class compound, Plicadin

EiMS(m/z): 334 [M+]
EiMS (m / z): 334 [M &lt; + &gt;] [

<< 실험예Experimental Example 1>  1> 코우메스탄계Koumestan system 화합물의 α- The α- 글루코시데이즈Glucosides 활성  activation 저해능Low performance 확인 Confirm

본 발명에 따른 상기 코우메스탄계 화합물이 탄수화물 대사에 필수적인 α-글루코시데이즈 활성에 미치는 영향을 알아보기 위하여 하기 실험을 수행하였다.The following experiment was conducted to examine the effect of the cohomestane-based compound according to the present invention on the activity of? -Glucosidase essential for carbohydrate metabolism.

구체적으로, α-글루코시데이즈에 대한 저해활성은 Kato 등의 nitrophenol법(J. Med. Chem. 48: 2036-2044, 2005)을 일부 수정하여 사용하였다. α-글루코시데이즈(EC 3.2.1.20, Baker Yeast)에 의해 기질인 p-nitrophenyl-α-D-glucopyranoside(Sigma-Aldrich)이 가수분해가 일어나면서 생성되는 포도당과 같은 단당의 발색단을 이용하여 그 축적량을 흡광도로 측정하였다. Specifically, the inhibitory activity against? -Glucosidase was partially modified by the nitrophenol method of Kato et al. (J. Med. Chem. 48: 2036-2044, 2005). (glucose), which is produced by hydrolysis of p-nitrophenyl-α-D-glucopyranoside (Sigma-Aldrich) as a substrate by α-glucosidase (EC 3.2.1.20, Baker Yeast) The accumulation amount was measured by absorbance.

97-웰플레이트(NUNCTM 사)에 완충용액(70 mM 인산칼슘, pH 6.8) 50 ㎕, 50% DMSO에 녹인 시료 화합물 50 ㎕, α-글루코시데이즈(0.1 unit/ml) 50 ㎕를 넣고, 마지막으로 기질(5 mM, p-니트로페닐-α-D-글루코피라노사이드)을 첨가하여 37℃에서 30 분간 반응시킨 후, 2 M NaOH를 첨가하여 반응을 종결하였다. 생성된 발색단의 양을 마이크로플레이트 리더기(ANTHOSTM 사)를 사용하여 405 nm에서 측정하고 저해활성을 계산하였다.50 μl of a buffer solution (70 mM calcium phosphate, pH 6.8), 50 μl of a sample compound dissolved in 50% DMSO and 50 μl of? -Glucosidase (0.1 unit / ml) were added to a 97-well plate (NUNCTM) (5 mM, p-nitrophenyl-α-D-glucopyranoside) was added to the reaction mixture at 37 ° C. for 30 minutes and the reaction was terminated by the addition of 2 M NaOH. The amount of generated chromophore was measured at 405 nm using a microplate reader (ANTHOSTM) and the inhibitory activity was calculated.

코우메스탄 화합물Coumestan compound α-글루코시데이즈 저해 활성(7.5 ㎍/ml)α-glucosidase inhibitory activity (7.5 μg / ml) 화학식 1Formula 1 57.8 ± 2.957.8 ± 2.9 화학식 2(2) 66.0 ± 0.366.0 ± 0.3

그 결과, 상기 표 3에 나타난 바와 같이 본 발명에 따른 화학식 1 내지 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물은 α-글루코시데이즈에 대해 7.5 ㎍/ml에서 각각 저해 활성이 각각 57.8% 및 66.0%로 매우 우수한 것으로 나타났다(표 3).As a result, as shown in Table 3, the cohomestane-based compounds represented by formulas (1) to (2) according to the present invention exhibited inhibitory activities of 57.8% and 66.0%, respectively, at a concentration of 7.5 / / ml against? -Glucosidase (Table 3).

따라서 본 발명에 따른 화학식 1 내지 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물은 α-글루코시데이즈 저해제로서 당뇨(Chem. Eur. J., 5: 967, 2001), 항바이러스(Diabetes Care. 28: 154, 2005), 항암(Cancer Commun. 1: 373, 1989; cancer Res. 46: 5315, 1986)을 비롯한 대사 불균형으로 인해 발생하는 각종 질환 또는 이들의 합병증의 예방 또는 치료에 유용한 화합물로 사용될 수 있다.
Therefore, the cohomestane-based compounds represented by the general formulas (1) to (2) according to the present invention are useful as an? -Glucosidase inhibitor in diabetes (Chem. Eur. J., 5: 967, 2001), antiviral (Diabetes Care. 2005), anticancer (Cancer Commun. 1: 373, 1989; cancer Res. 46: 5315, 1986), or various diseases caused by metabolic imbalance or complications thereof.

<< 실험예Experimental Example 2>  2> 코우메스탄계Koumestan system 화합물의 α- The α- 아밀레이즈Amil Reyes 활성  activation 저해능Low performance 확인 Confirm

본 발명에 따른 상기 코우메스탄계 화합물의 탄수화물 대사에 필수적인 α-아밀레이즈 활성에 미치는 영향을 알아보기 위하여 하기 실험을 수행하였다.The following experiment was conducted to investigate the effect of the cohomestane-based compound according to the present invention on the? -Amylase activity essential for carbohydrate metabolism.

구체적으로, 췌장의 α-아밀레이즈에 대한 저해 활성은 Miller의 DNSA법(Analytical Chemistry, 31: 426-428, 1959)을 일부 수정하여 사용하였다. α-아밀레이즈(EC 3.2.1.1, porcine pancreatic α-아밀레이즈, Sigma A3176)에 의해 기질인 전분(Sigma S9765)이 가수분해가 일어나면서 생성된 환원당을 발색단을 이용하여 그 축적량을 흡광도로 측정하였다. 효소의 활성을 측정하기 위해, 시험관에 α-아밀레이즈 용액(0.06 mg/ml, 2 Unit/ml 농도)을 함유하는 0.02 M 인산나트륨 완충용액(0.006 M 염화나트륨, pH 6.9) 490 ㎕와, DMSO에 녹인 코우메스탄계 화합물 10 ㎕을 넣고 37℃에서 10분간 전반응 시킨 후, 0.02 M 인산나트륨 완충용액 내의 1% 전분 용액 500 ㎕를 첨가하였고, 37℃에서 15분간 반응시켰다. 이 반응액에 DNS 용액(0.4 M NaOH에 48 mM 3,5-디니트로살리실산, 30% 타르타르산나트륨칼륨 4수화물 포함) 1 ml를 첨가하여 반응을 종결시킨 후, 100℃에서 5분간 끓여 발색시킨 후 충분히 냉각한다. 이 반응액에 증류수를 첨가하여 3배 가량 희석하고 생성된 발색단의 양을 마이크로플레이트 리더기(ANTHOSTM 사)를 사용하여 540 nm에서 측정하고 저해활성을 계산하였다.Specifically, the inhibitory activity against α-amylase of the pancreas was partially modified by Miller's DNSA method (Analytical Chemistry, 31: 426-428, 1959). The accumulation amount of reducing sugar produced by hydrolysis of substrate starch (Sigma S9765) by α-amylase (EC 3.2.1.1, porcine pancreatic α-amylase, Sigma A3176) was measured by absorbance at the chromophore . To measure the activity of the enzyme, 490 μl of a 0.02 M sodium phosphate buffer (0.006 M sodium chloride, pH 6.9) containing α-amylase solution (0.06 mg / ml, 2 Unit / ml concentration) 10 μl of the coomassutan-based compound dissolved therein was added and reacted at 37 ° C for 10 minutes. Then, 500 μl of a 1% starch solution in 0.02 M sodium phosphate buffer solution was added thereto, followed by reaction at 37 ° C for 15 minutes. The reaction was terminated by adding 1 ml of DNS solution (48 mM 3,5-dinitrosalicylic acid in 0.4 M NaOH, 30% sodium potassium tartarate tetrahydrate) to the reaction solution, boiling at 100 ° C for 5 minutes to develop color Cool enough. Distilled water was added to the reaction solution to dilute it 3-fold, and the amount of the generated chromophore was measured at 540 nm using a microplate reader (ANTHOSTM), and the inhibitory activity was calculated.

코우메스탄 화합물Coumestan compound α-아밀레이즈 저해 활성(100 ㎍/ml)The α-amylase inhibitory activity (100 μg / ml) 화학식 1Formula 1 14.9 ± 1.614.9 ± 1.6 화학식 2(2) 61.4 ± 1.061.4 ± 1.0

그 결과, 상기 표 4에 나타난 바와 같이 본 발명에 따른 화학식 1 내지 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물은 α-아밀레이즈에 대해 100 ㎍/ml에서 각각 저해 활성이 각각 14.9% 및 61.4%로 나타났다(표 4).As a result, as shown in Table 4, the cohomestane compounds represented by Formulas 1 and 2 according to the present invention showed inhibitory activities of 14.9% and 61.4%, respectively, at 100 / / ml of? -Amylase Table 4).

따라서 본 발명에 따른 화학식 1 내지 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물은 α-아밀레이즈 저해제로 탄수화물의 소화와 그리고 당의 흡수의 지연을 일으켜 식후 고혈당을 억제시키며, 아카보스와 같은 기존 혈당조절제의 지속적 복용으로 전분 분해효소의 과다저해로 인한 부작용인 저혈당 쇼크, 복부팽창, 설사 등의 증상을 완화할 수 있으므로 부작용이 적고, 안전한 혈당강하제로 적용 가능한 유용한 화합물로 사용될 수 있다.
Therefore, the cohomestane compounds represented by the general formulas (1) to (2) according to the present invention are α-amylase inhibitors which cause digestion of carbohydrates and delay of absorption of sugars to inhibit postprandial hyperglycemia and to prevent persistent ingestion of existing blood glucose controlling agents such as acarbose It can alleviate the symptoms such as hypoglycemic shock, abdominal swelling and diarrhea which are side effects due to excessive inhibition of starch hydrolyzing enzyme, so that it can be used as a useful compound which can be applied as a safe hypoglycemic agent with few side effects.

<< 실험예Experimental Example 3>  3> 코우메스탄계Koumestan system 화합물의  Compound DPPDPP -4(-4( DipeptidylDipeptidyl peptidasepeptidase -4) 활성 -4) active 저해능Low performance 확인 Confirm

본 발명에 따른 상기 코우메스탄계 화합물의 인그레틴(GLP-1, Glucagon-Like Peptide-1) 펩타이드를 분해하는 DPP-4 활성에 미치는 영향을 알아보기 위하여 하기 실험을 수행하였다.The following experiments were carried out to investigate the effect of the coomestane-based compound according to the present invention on the DPP-4 activity which degrades the GLP-1 (Glucagon-Like Peptide-1) peptide.

음식을 섭취하면 장에서 인크레틴이라고 불리는 물질이 만들어지고, 인크레틴은 췌장에서 인슐린 분비를 증가시켜 혈당을 낮추는데 도움을 준다. 하지만 인크레틴은 장으로부터 혈액으로 분비된 후 불과 수 분만에 DPP-4에 의해 분해된다. DPP-4를 억제하면 활성형의 인크레틴이 혈액 속에 오래 머물면서 고혈당 섭취시에 인슐린 분비를 촉진하고 글루카곤 분비를 억제하여 혈당을 낮추는 활성을 가진다. 따라서 DPP-4 저해제를 복용하면 DPP-4 활성 억제로 GLP-1 펩타이드가 분해되지 않고 활성을 오랫동안 유지하게 되어 GLP-1의 활성으로 혈당을 낮추어 당뇨병 치료제로 사용할 수 있다. Ingestion produces a substance called incretin in the intestine, which helps lower blood sugar by increasing insulin secretion in the pancreas. However, incretin is released by DPP-4 in only a few minutes after secretion from the intestine into the blood. When DPP-4 is inhibited, active-type incretin remains in the blood for a long period of time, and promotes insulin secretion at the time of ingestion of hyperglycemia and inhibits glucagon secretion, thereby lowering blood glucose. Therefore, when the DPP-4 inhibitor is administered, the inhibition of DPP-4 activity does not degrade the GLP-1 peptide and maintains its activity for a long time. As a result, the activity of GLP-1 lowers blood glucose and can be used as a therapeutic agent for diabetes.

DPP-4 활성의 측정은 Kim 등의 방법(European Journal of Pharmacology, 518: 63-70, 2005)을 일부 수정하여 사용하였다. 사람 재조합 DPP-Ⅳ(ENZ375, Prospec Co.), H-Ala-Pro-7-amino-4-trifluoromethylcoumarin(Ala-Pro-AFC)(24126, AnaSpec.), KR-62436(6-{2-[2-(5-cyano-4,5-dihydropyrazol-1-yl)-2-oxoethylamino]ethylamino}nicotinonitrile)(K4264, Sigma)을 구입하여 사용하였다. Black 96 well plate에 DMSO에 녹인 시료 2 ㎕, 50 mM Tris-HCl buffer 78 ㎕, DPP-4(1 ㎍/㎖) 10 ㎕를 첨가하고, 마지막으로 기질인 0.4 mM Ala-Pro-AFC 10 ㎕를 첨가한 후 실온에서 1 시간 동안 반응시켰다. 반응시킨 후 Fluorometer(Victor 2, Perkin Elmer, excitation 355 nm/emission 510 nm)를 사용하여 DPP-4에 의해 dipeptide로부터 분해된 AFC의 형광값을 측정하여 DPP-Ⅳ 활성을 계산하였다. 저해활성 측정을 위한 양성대조군으로는 DPP-Ⅳ 저해제인 KR-62436을 사용하였다.Measurement of DPP-4 activity was partially modified by the method of Kim et al. (European Journal of Pharmacology, 518: 63-70, 2005). A-Pro-7-amino-4-trifluoromethylcoumarin (Ala-Pro-AFC) (24126, AnaSpec.), KR-62436 (6- {2- [ 2- (5-cyano-4,5-dihydropyrazol-1-yl) -2-oxoethylamino] ethylamino} nicotinonitrile) (K4264, Sigma). 2 μl of the sample dissolved in DMSO, 78 μl of 50 mM Tris-HCl buffer and 10 μl of DPP-4 (1 μg / ml) were added to a black 96-well plate and finally 10 μl of 0.4 mM Ala- After the addition, the reaction was allowed to proceed at room temperature for 1 hour. DPP-IV activity was calculated by measuring the fluorescence value of the AFC decomposed from the dipeptide by DPP-4 using a fluorometer (Victor 2, Perkin Elmer, excitation 355 nm / emission 510 nm). KR-62436, a DPP-IV inhibitor, was used as a positive control for inhibitory activity measurement.

코우메스탄 화합물Coumestan compound DPP-4 저해활성(100 ㎍/ml)DPP-4 inhibitory activity (100 占 퐂 / ml) 화학식 1Formula 1 45.0 ± 1.545.0 ± 1.5 화학식 2(2) 77.1 ± 1.277.1 ± 1.2

그 결과, 상기 표 5에 나타난 바와 같이 본 발명에 따른 화학식 1 내지 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물은 DPP-4에 대해 100 ㎍/ml에서 저해 활성이 각각 45.0% 및 77.1%로 나타났다(표 5).As a result, as shown in Table 5, the cohomestane compounds represented by Formulas 1 and 2 according to the present invention showed inhibitory activities of 45.0% and 77.1% at 100 μg / ml of DPP-4, respectively (see Table 5 ).

따라서 본 발명에 따른 화학식 1 내지 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물은 DPP-4 저해활성이 우수하여 인크레틴과 GLP-1의 분해를 억제하여 인슐린 분비를 촉진하고 글루카곤 분비를 억제함으로써 혈당을 낮추는 당뇨병 치료제로 적용 가능한 유용한 화합물로 사용될 수 있다.
Therefore, the cohomestane-based compounds represented by formulas (1) to (2) according to the present invention are excellent in DPP-4 inhibitory activity and inhibit decomposition of incretin and GLP-1 to promote insulin secretion and inhibit glucagon secretion, Can be used as useful compounds that can be applied as therapeutic agents.

<< 실험예Experimental Example 4>  4> 코우메스탄계Koumestan system 화합물의 ACAT( The compound &lt; RTI ID = AcylAcyl -- CoACoA : : CholesterolCholesterol Acyltransferase) 활성  Acyltransferase activity 저해능Low performance 확인 Confirm

본 발명에 따른 코우메스탄계 화합물이 콜레스테롤을 그의 에스테르 형태로 전환시켜 세포 내에 콜레스테롤이 축적되는 것을 촉진하는 역할을 하는 사람 콜레스테롤 아실 전이효소인 hACAT-1 및 hACAT-2에 미치는 영향을 알아보기 위하여 하기 실험을 수행하였다.
In order to investigate the effect of the coamestane compound according to the present invention on human cholesterol acyltransferases hACAT-1 and hACAT-2, which convert cholesterol to its ester form and promote the accumulation of cholesterol in the cells, Experiments were performed.

<4-1> 단백질 재조합<4-1> Protein recombination

사람 간 cDNA 라이브러리 스크리닝(library screening)을 통하여 얻어진 hACAT-1 및 hACAT-2 각각의 cDNA를 베큘로바이러스 전달 벡터에 삽입하고, 곤충세포인 sf9 세포에 도입하여 바이러스를 제조하였다. 다음으로, 플라크 정제(plaque purification) 방법으로 hACAT-1 및 hACAT-2 각각의 재조합 바이러스를 분리한 후, 증폭과정을 3회 거쳐 저장용 바이러스(viral stock)의 역가(titer)를 높였다. CDNAs of hACAT-1 and hACAT-2 obtained through human cDNA library screening were inserted into baculovirus transfer vectors and introduced into sf9 cells, insect cells, to prepare viruses. Next, the recombinant viruses of hACAT-1 and hACAT-2 were isolated by plaque purification, and the titer of the viral stock was increased through three times of amplification.

상기 바이러스 중, 단백질 발현 효율이 좋은 Hi5 곤충세포에 재조합 바이러스를 감염다중도(mutiplicity of infection)가 1이 되도록 감염시킨 후, 27℃에서 하루 동안 진탕 배양하였다. 상기 배양된 hACAT-1 및 hACAT-2가 각각 과량 발현된 Hi5 세포들로부터 마이크로좀 분획을 분리하기 위하여, 500 rpm에서 15분간 원심분리하여 세포들을 모으고 저장완충액(hypotonic buffer)에서 급냉동, 급해동 방법으로 세포를 깬 후, 100000 rpm에서 한 시간 동안 원심분리하였다. 상기 얻어진 마이크로좀 분획들은 단백질 농도가 8 mg/ml이 되도록 저장 완충액으로 현탁하여 -70℃ 저온냉동기에 보관하면서 사용하였다.
Among the viruses, Hi5 insect cells having high protein expression efficiency were infected with recombinant viruses so that the mutiplicity of infection was 1, and then cultured with shaking at 27 ° C for one day. The cells were collected by centrifugation at 500 rpm for 15 minutes in order to isolate the microsomal fractions from the Hi5 cells expressing the overexpressed hACAT-1 and hACAT-2, respectively. The cells were collected in a hypotonic buffer, The cells were broken up and centrifuged at 100,000 rpm for one hour. The resulting microsomal fractions were suspended in a storage buffer to a protein concentration of 8 mg / ml and stored in a -70 ° C refrigerator.

<4-2> <4-2> hACATexcise -1 및 -1 and hACATexcise -2 활성 측정-2 activity measurement

ACAT 활성의 측정은 [1-¹⁴C] 올레오일-코에이(oleoyl-CoA)(56.0 Ci/mol; Amersham)를 기질로 하여 Brecher & Chan의 방법(P. Brecher and C. Chan, Biochim. Biophys. Acta, 617: 458, 1980)을 일부 수정하여 사용하였다. 상기 <실시예 1>에서 수득한 화학식 1 내지 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물을 각각 10 ㎕, 상기 실험예 <4-1>에서 수득한 hACAT-1 또는 hACAT-2의 재조합 단백질을 포함하는 마이크로좀 용액 4.0 ㎕, 활성분석 완충액(0.5 M KH₂PO₄, 10 mM DTT, pH 7.4; Sigma) 20.0 ㎕, 지방이 제거된 우혈청알부민(BSA; bovine serum albumin, 저장액 농도 40 mg/ml; Sigma) 15.0 ㎕, 콜레스테롤(저장액 농도 20 mg/ml; Sigma) 2.0 ㎕, 증류수 41.0 ㎕를 가하여 37℃에서 15 분간 예비 반응시켰다. 음성 대조군으로는 용매만을 첨가한 것을 사용하였으며, 양성 대조군으로는 올레익에시드 아닐라이드(oleic acid anilide)를 첨가한 것을 사용하였다.ACAT activity was measured by the method of Brecher & Chan (P. Brecher and C. Chan, Biochim. Biophys (R)) using [1- ¹⁴ C] oleoyl-CoA (56.0 Ci / Acta, 617: 458, 1980). 10 μl each of the cohomestane compounds represented by the formulas (1) to (2) obtained in the above Example 1 was added to each of the microorganisms containing the recombinant proteins of hACAT-1 or hACAT-2 obtained in the Experimental Example <4-1> (Bovine serum albumin, 40 mg / ml of storage solution; bovine serum albumin (BSA)), 4.0 μl of the enzyme solution, 20 μl of active assay buffer (0.5 M KH ₂ PO ₄ , 10 mM DTT, pH 7.4; Sigma) Sigma), and 41.0 占 퐇 of distilled water were added to the mixture, followed by preliminary reaction at 37 占 폚 for 15 minutes. As the negative control, only the solvent was added. As a positive control, oleic acid anilide was added.

이 반응액에 [1-¹⁴C] 올레오일-코에이(0.05 Ci, 최종농도: 10 μM) 8 ㎕를 첨가하여 다시 37℃에서 30분간 반응시킨 후, 이소프로판올:헵탄 혼합물(4:1(v/v)) 1 ml을 가하여 반응을 정지시켰다. 여기에 600 ㎕의 헵탄과 200 ㎕의 0.1 M KH₂PO₄(pH 7.4)을 첨가하고, 혼합물을 볼텍서(vortexer)로 격렬하게 혼합한 후, 300 rpm에서 5분 동안 원심분리를 하였다. 상기 원심분리하여 얻은 100 ㎕의 상층액을 신틸레이션 병(scintillation bottle)에 넣고, 신틸레이션 액(Lipoluma) 4 ml을 가하였다. 상기 혼합물의 방사선량은 1450 마이크로베타 액체 신틸레이션 계수기(1450 Microbeta liquid scintillation counter, Wallacoy)로 측정하였다. ACAT 활성은 측정된 방사선량으로부터 시간당 방사선량을 계산하여 1분 동안 단백질 1 mg당 합성된 콜레스테릴 올레이트 피코몰(피코몰/분/mg 단백질)로 계산하였다.8 μl of [1- ¹⁴ C] oleoyl-CoA (0.05 Ci, final concentration: 10 μM) was added to the reaction solution, followed by reaction at 37 ° C for 30 minutes. An isopropanol: heptane mixture (4: 1 / v)) was added to stop the reaction. Here followed by the addition of _{0.1 M KH 2 PO 4 (pH} 7.4) of 600 ㎕ heptane and 200 ㎕ and vigorously mixed in a tekseo (vortexer) view and the mixture was centrifuged at 300 rpm for 5 minutes. 100 [mu] l of the supernatant obtained by centrifugation was placed in a scintillation bottle and 4 ml of scintillation liquid (Lipoluma) was added. The radiation dose of the mixture was measured with a 1450 Microbeta liquid scintillation counter (Wallacoy). ACAT activity was calculated as picomole of cholesterylate synthesized per mg of protein (picomole / min / mg protein) for 1 minute by calculating radiation dose per hour from the measured radiation dose.

코우메스탄 화합물Coumestan compound 100 ㎍/ml에서 저해활성(%)Inhibitory activity (%) at 100 占 퐂 / ml hACAT1hACAT1 hACAT2hACAT2 화학식 1Formula 1 60.4 ± 0.360.4 ± 0.3 64.2 ± 3.164.2 ± 3.1 화학식 2(2) 24.5 ± 2.924.5 ± 2.9 43.5 ±3.043.5 ± 3.0

그 결과, 상기 표 6에 나타난 바와 같이 본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 코우메스탄계 화합물은 hACAT1 및 hACAT2에 대하여 100 ㎍/ml에서 각각 저해 활성이 각각 60.4% 및 64.2%로 매우 우수한 것으로 나타났다. 또한 본 발명에 따른 화학식 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물은 hACAT1 및 hACAT2에 대하여 100 g/ml에서 각각 저해 활성이 각각 24.5% 및 43.5%로 나타났다(표 6).As a result, as shown in Table 6, the cohomestane compound represented by Formula 1 according to the present invention showed excellent inhibitory activities of 60.4% and 64.2% at 100 占 퐂 / ml against hACAT1 and hACAT2, respectively. In addition, the cohomestane-based compounds represented by Formula 2 according to the present invention exhibited inhibitory activities of 24.5% and 43.5% at 100 g / ml, respectively, against hACAT1 and hACAT2 (Table 6).

따라서 본 발명에 따른 코우메스탄계 화합물은 콜레스테롤을 축적시키는 ACAT 활성을 저해하는 활성이 우수하므로 콜레스테릴 에스테르 합성 및 축적으로 유발되는 고지혈증, 관상동맥 심장병, 동맥경화, 심근경색 및 비만과 같은 심혈관계 질환 또는 이들의 합병증의 예방 또는 치료에 유용하게 사용할 수 있다.
Therefore, the coamestane compound according to the present invention is excellent in the activity of inhibiting the ACAT activity for accumulating cholesterol, and thus can be used for cardiovascular diseases such as hyperlipidemia, coronary heart disease, arteriosclerosis, myocardial infarction and obesity induced by cholesteryl ester synthesis and accumulation Or for the prevention or treatment of diseases or complications thereof.

<< 실험예Experimental Example 5>  5> 코우메스탄계Koumestan system 화합물의  Compound LDLLDL 항산화 활성 효과 확인 Identification of antioxidant activity

본 발명에 따른 상기 코우메스탄계 화합물의 악성콜레스테롤인 혈장 저밀도 지질 단백질(low-density lipoprotein; LDL)에 대한 항산화 활성을 알아보기 위하여 하기 실험을 수행하였다.The following experiment was conducted to investigate the antioxidant activity of low molecular weight lipoprotein (LDL) which is a malignant cholesterol of the cholesterol-based compound according to the present invention.

Cu^{2 +}는 저밀도 지질 단백질의 산화를 유도(Cu^{2 +}-mediated LDL-oxidation)하는 것으로 알려져 있다. 이에, 본 발명에서는 이때 생성된 불포화 지방산의 산화산물인 디알데하이드(dialdehyde)를 TBA(thiobarbituric acid)법으로 측정하여, 콩잎으로부터 분리된 상기 코우메스탄계 화합물의 항산화 활성을 조사하였다(Packer, L. Ed.(1994) Methods in Enzymology Vol. 234, Oxygen radicals in biological systems Part D. Academic press, San Diego).Cu ^{2 +} induces the oxidation of low density lipoprotein is known that ^{(Cu 2 + -mediated LDL-oxidation} ). Thus, in the present invention, the antioxidative activity of the coomestan-based compound isolated from the soybean leaf was examined by measuring dialdehyde, which is an oxidation product of the unsaturated fatty acid generated at this time, by TBA (thiobarbituric acid) method (Packer, L. et al. Ed. (1994) Methods in Enzymology Vol. 234, Oxygen radicals in biological systems Part D. Academic press, San Diego).

구체적으로, 사람의 혈장 300 ml를 초원심분리기로 100,000×g에서 24시간 동안 원심분리하여 상층에 부유된 고밀도 지질단백질(VLDL)/킬로마이크론(chylomicron)층을 제거하고 나머지 용액의 비중을 1.063 g/ml로 맞춘 후, 100,000×g에서 24 시간 동안 원심분리하여 다시 상층에 부유된 저밀도 지질 단백질 25 ml(1.5~2.5 ml 단백질/ml)를 분리하였다. 이렇게 분리한 저밀도 지질 단백질 20 ㎕(단백질 농도, 50-100 ㎕/ml)를 10 mM 인산완충용액(phosphate-buffered saline, PBS) 210 ㎕와 혼합하고, 본 발명에 따른 화학식 1 내지 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물의 용액을 각각 10 ㎕씩 첨가하였다. 상기 코우메스탄계 화합물은 DMSO(dimethylsulfoxide)에 녹여 사용하였으며, 실험에 사용하기 전에 여러 농도로 희석하였다. 음성 대조군으로는 용매만을 첨가한 것을 사용하였으며, 양성 대조군으로는 프로부콜(probucol)을 첨가한 것을 사용하였다.Specifically, 300 ml of human plasma was centrifuged at 100,000 × g for 24 hours using a ultracentrifuge to remove the floating high density lipoprotein (VLDL) / chylomicron layer and the specific gravity of the remaining solution was 1.063 g / ml, and centrifuged at 100,000 × g for 24 hours to separate 25 ml (1.5 to 2.5 ml protein / ml) of suspended low density lipoprotein in the upper layer. 20 μl of the thus isolated low density lipoprotein (protein concentration, 50-100 μl / ml) was mixed with 210 μl of 10 mM phosphate-buffered saline (PBS) 10 mu L each of a solution of a coamestane-based compound was added. The cohomestane compound was dissolved in DMSO (dimethylsulfoxide) and diluted to various concentrations before use in the experiment. As the negative control group, only the solvent was added, and as the positive control group, probucol was added.

상기 용액에 0.25 mM CuSO₄ 10 ㎕를 첨가하여 37℃에서 4 시간 동안 반응시키고, 20% 트리클로로아세트산(trichloroacetic acid, TCA) 용액 1 ml를 첨가하여 반응을 중지시켰다. 0.05 N NaOH 용액에 녹인 0.67% TBA 용액 1 ml를 첨가하고 10 초간 교반시킨 후 95℃에서 5 분 동안 가열하여 발색 반응이 일어나도록 하고 얼음물로 용액을 냉각하였다. 이 용액을 3,000 rpm에서 5 분 동안 원심분리하여 상등액을 분리하였으며, 자외선-가시광선 분광기로 540 nm에서의 흡광도를 측정하여 상기 발색 반응으로 생성된 말론디알데하이드(malondialdehyde, MDA)의 양을 계산하였다. 또한, 테트라메톡시프로판(말론알데하이드 비스(디메틸아세탈))[tetramethoxypropane malonaldehyde bis(dimethylacetal)]의 저장용액을 이용하여 0~10 n㏖ 말론디알데하이드를 포함하는 PBS 표준용액을 250 ㎕씩 제조하고, 이 표준용액을 상기와 같은 방법으로 발색시켜 540 nm에서의 흡광도를 측정하고, 말론디알데하이드의 표준곡선을 구하고, 본 발명에 따른 코우메스탄계 화합물을 사용한 상기 실험에서 말론디알데하이드의 양을 상기 표준곡선을 이용하여 정량하였다. 10 μl of 0.25 mM CuSO ₄ was added to the solution, followed by reaction at 37 ° C for 4 hours. The reaction was stopped by adding 1 ml of 20% trichloroacetic acid (TCA) solution. 1 ml of 0.67% TBA solution dissolved in 0.05 N NaOH solution was added, stirred for 10 seconds, heated at 95 ° C for 5 minutes to allow the color reaction to occur, and the solution was cooled with ice water. This solution was centrifuged at 3,000 rpm for 5 minutes to separate the supernatant, and the absorbance at 540 nm was measured with an ultraviolet-visible spectrophotometer to calculate the amount of malondialdehyde (MDA) produced by the color development reaction . 250 μl of a PBS standard solution containing 0 to 10 n mol malondialdehyde was prepared by using a stock solution of tetramethoxypropane (dimethyl acetal) (tetramethoxypropane malonaldehyde bis (dimethylacetal)), The standard solution was developed in the same manner as described above, and the absorbance at 540 nm was measured. A standard curve of malondialdehyde was obtained. The amount of malondialdehyde in the above experiment using the coamestane compound according to the present invention was measured according to the standard Curves.

코우메스탄 화합물Coumestan compound LDL 산화 억제 활성(10 ㎕/ml)LDL oxidation inhibitory activity (10 l / ml) 화학식 1Formula 1 80.0 ± 0.580.0 ± 0.5 화학식 2(2) 79.0 ± 1.479.0 ± 1.4

그 결과, 상기 표 7에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 화학식 1 내지 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물은 저밀도 지질 단백질의 산화에 대해 10 ㎕/ml에서 각각 저해 활성이 각각 80.0% 및 79.0%로 매우 우수한 것으로 나타났다(표 7).As a result, as shown in Table 7, the cohomestane compounds represented by Formulas 1 and 2 according to the present invention had inhibitory activities of 80.0% and 79.0%, respectively, at 10 μl / ml for oxidation of low density lipoproteins (Table 7).

따라서, 본 발명에 따른 코우메스탄계 화합물은 저밀도 지질 단백질이 산화되어 유발되는 것으로 알려진 당뇨, 고지혈증, 동맥경화, 지방간, 비만, 대사증후군 또는 이들의 합병증의 예방 또는 치료에 유용하게 사용할 수 있다.
Therefore, the cohomestane-based compound according to the present invention can be effectively used for the prevention or treatment of diabetes, hyperlipidemia, arteriosclerosis, fatty liver, obesity, metabolic syndrome, or complications thereof caused by oxidation of low density lipoprotein.

<< 실험예Experimental Example 6>  6> ICRICR 마우스에 대한 경구투여 급성 독성실험 Acute toxicity test for oral administration to mice

본 발명에 따른 코우메스탄계 화합물의 급성 독성을 알아보기 위하여 하기 실험을 수행하였다.
The following experiment was conducted to examine the acute toxicity of the coamestane-based compound according to the present invention.

<6-1> <6-1> ICRICR 마우스의 제조 Manufacture of mice

4주령의 특정 병원체 부재(specific pathogens free) ICR 마우스 암컷 12 마리와 숫컷 12 마리(암수 각각 3마리/용량군)를 온도 22 ± 3℃, 습도 55 ± 10%, 조명 12L/12D의 동물실 내에서 사육하였다. 마우스는 실험에 사용되기 전 1주일 정도 순화시켰다. 실험동물용 사료((주)제일제당, 마우스 및 랫트용) 및 음수는 멸균한 후 공급하였으며 자유 섭취시켰다.
Specific pathogens free ICR mice at 4 weeks of age were housed in an animal room of 12 L / 12D at a temperature of 22 ± 3 ° C, humidity of 55 ± 10% and 12 male and 12 male (3 male / . Mice were purified for a week before being used in the experiment. Feeds for experimental animals (Cheil Jedang Co., Ltd., mice and rats) and drinking water were sterilized and fed freely.

<6-2> 약물투여&Lt; 6-2 >

상기 <실시예 1>에서 얻은 화학식 1 내지 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물을 0.5% 트윈 80을 용매로 하여 50 mg/ml 농도로 조제한 후, 마우스 체중 20 g당 0.2 ml(500 mg/kg), 0.4 ml(1,000 mg/kg)씩 경구 투여하였다. 시료는 단 1회 경구 투여하였으며, 투여 후 7일 동안 다음과 같이 부작용 또는 치사 여부를 관찰하였다. 즉, 투여 당일은 투여 후 1시간, 4시간, 8시간, 12시간 뒤에, 그리고 투여 익일부터 7일째까지는 매일 오전, 오후 1회 이상씩 일반증상의 변화 및 사망동물의 유무를 관찰하였다. 또한, 투여 7일째에 동물을 치사시켜 해부한 후 육안으로 내부 장기를 검사하였다. 투여 당일부터 1일 간격으로 체중의 변화를 측정하여 코우메스탄계 화합물에 의한 동물의 체중 감소 현상을 관찰하였다.The cohomestane compound represented by the general formulas (1) and (2) obtained in the above Example 1 was adjusted to a concentration of 50 mg / ml with 0.5% Tween 80 as a solvent, and then 0.2 ml (500 mg / kg) , And 0.4 ml (1,000 mg / kg), respectively. Samples were administered orally once, and the following side effects or deaths were observed for 7 days after administration. That is, on the day of administration, changes in general symptoms and presence or absence of dead animals were observed at 1 hour, 4 hours, 8 hours, 12 hours after the administration, and 1 day at the morning and at the afternoon from the next day to 7 days after administration. Animals were sacrificed on the 7th day after administration, and the internal organs were examined visually. Changes in body weight were measured at intervals of one day from the day of administration to observe the weight loss phenomenon of animals by the coamestane compound.

그 결과, 시험물질을 투여한 모든 마우스에서 특기할 만한 임상증상은 없었고 폐사된 마우스도 없었으며, 체중변화, 혈액검사, 혈액생화학 검사, 부검소견 등에서도 독성변화는 관찰되지 않았다. 따라서, 본 발명에 따른 콩잎으로부터 분리한 코우메스탄계 화학식 1 내지 2로 표시되는 화합물은 모든 마우스에서 1000 mg/kg까지 독성변화를 나타내지 않았으며, 경구투여 최소치사량(LD₅₀)이 적어도 1,000 mg/kg 이상인 안전한 물질로 판단되었다.
As a result, no clinical symptoms were observed in all the mice to which the test substance was administered, no dead mice were observed, and no toxic change was observed in weight change, blood test, blood biochemical test, and autopsy findings. Therefore, the compounds represented by Coomassan-type Formulas 1 and 2 isolated from bean leaves according to the present invention showed no toxic change up to 1000 mg / kg in all mice, and the oral dose-administered minimum lethal dose (LD ₅₀ ) kg or more.

따라서, 본 발명에 따른 코우메스탄계 화합물은 α-글루코시데이즈, α-아밀레이즈, DPP-4, hACAT-1 및 hACAT-2 활성을 효과적으로 억제하고, LDL에 대한 우수한 항산화 활성을 나타내기 때문에 부작용이 경감된 대사성 질환 또는 이의 합병증 예방 또는 치료용 조성물로 유용하게 이용될 수 있다.
Therefore, the cosmeceutical compound according to the present invention effectively inhibits? -Glucosidase,? -Amylase, DPP-4, hACAT-1 and hACAT-2 activity and exhibits excellent antioxidative activity against LDL, Can be effectively used as a composition for preventing or treating metabolic diseases or complications thereof.

한편, 본 발명에 따른 상기 화학식 1 내지 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물은 목적에 따라 여러 형태로 제제화가 가능하다. 하기는 본 발명에 따른 상기 화학식 1 내지 2로 표시되는 화합물을 활성성분으로 함유시킨 몇몇 제제화 방법을 예시한 것으로 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다.
Meanwhile, the cohomestane-based compounds represented by Formulas 1 and 2 according to the present invention can be formulated into various forms according to the purpose. Hereinafter, some formulation methods in which the compounds represented by formulas (1) to (2) according to the present invention are contained as an active ingredient are exemplified, and the present invention is not limited thereto.

<< 제조예Manufacturing example 1> 약제의 제조 1> Manufacture of Pharmaceuticals

1. One. 산제의Sanje 제조 Produce

코우메스탄계 화합물 500 ngCoomassan-based compound 500 ng

유당 1 gLactose 1 g

상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
The above components were mixed and packed in airtight bags to prepare powders.

2. 정제의 제조2. Preparation of tablets

코우메스탄계 화합물 500 ngCoomassan-based compound 500 ng

옥수수전분 100 ㎎Corn starch 100 mg

유당 100 ㎎Lactose 100 mg

스테아린산 마그네슘 2 ㎎2 mg of magnesium stearate

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
After mixing the above components, tablets were prepared by tableting according to a conventional method for producing tablets.

3. 캡슐제의 제조3. Preparation of capsules

코우메스탄계 화합물 500 ngCoomassan-based compound 500 ng

옥수수전분 100 ㎎Corn starch 100 mg

유당 100 ㎎Lactose 100 mg

스테아린산 마그네슘 2 ㎎2 mg of magnesium stearate

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
After mixing the above components, the capsules were filled in gelatin capsules according to the conventional preparation method of capsules.

4. 주사제의 제조4. Preparation of injections

코우메스탄계 화합물 500 ngCoomassan-based compound 500 ng

만니톨 180 ㎎180 mg mannitol

Na2HPO4ㆍ2H2O 26 ㎎26 mg of Na2HPO4. 2H2O

증류수 2974 ㎎2974 mg of distilled water

통상적인 주사제의 제조방법에 따라, 상기 성분들을 제시된 함량으로 함유시켜 주사제를 제조하였다.
According to the conventional method for preparing an injectable preparation, an injectable preparation was prepared by incorporating the aforementioned components in the amounts indicated.

<< 제조예Manufacturing example 2> 건강식품의 제조 2> Manufacture of health food

1. 건강식품의 제조1. Manufacture of health food

코우메스탄계 화합물 500 ngCoomassan-based compound 500 ng

비타민 혼합물 적량Vitamin mixture quantity

비타민 A 아세테이트 70 ㎍70 [mu] g of vitamin A acetate

비타민 E 1.0 ㎎Vitamin E 1.0 mg

비타민 0.13 ㎎0.13 mg of vitamin

비타민 B2 0.15 ㎎0.15 mg of vitamin B2

비타민 B6 0.5 ㎎0.5 mg vitamin B6

비타민 B12 0.2 ㎍0.2 [mu] g vitamin B12

비타민 C 10 ㎎10 mg vitamin C

비오틴 10 ㎍Biotin 10 μg

니코틴산아미드 1.7 ㎎Nicotinic acid amide 1.7 mg

엽산 50 ㎎50 mg of folic acid

판토텐산 칼슘 0.5 ㎎Calcium pantothenate 0.5 mg

무기질 혼합물 적량Mineral mixture quantity

황산제1철 1.75 ㎎1.75 mg of ferrous sulfate

산화아연 0.82 ㎎0.82 mg of zinc oxide

탄산마그네슘 25.3 ㎎Magnesium carbonate 25.3 mg

제1인산칼륨 15 ㎎15 mg of potassium phosphate monobasic

제2인산칼슘 55 ㎎Secondary calcium phosphate 55 mg

구연산칼륨 90 ㎎Potassium citrate 90 mg

탄산칼슘 100 ㎎100 mg of calcium carbonate

염화마그네슘 24.8 ㎎24.8 mg of magnesium chloride

상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.
Although the composition ratio of the above-mentioned vitamin and mineral mixture is comparatively mixed with a composition suitable for health food as a preferred embodiment, the compounding ratio may be arbitrarily modified, and the above ingredients are mixed according to a conventional method for producing healthy foods , Granules can be prepared and used in the manufacture of health food compositions according to conventional methods.

2. 건강 음료의 제조2. Manufacture of health drinks

코우메스탄계 화합물 500 ngCoomassan-based compound 500 ng

구연산 1000 ㎎Citric acid 1000 mg

올리고당 100 g100 g of oligosaccharide

매실농축액 2 gPlum concentrate 2 g

타우린 1 gTaurine 1 g

정제수를 가하여 전체 900 ㎖Purified water was added to a total of 900 ml

통상의 건강 음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2l 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 건강 음료 조성물 제조에 사용하였다.The above components were mixed according to a conventional health drink manufacturing method, and the mixture was stirred and heated at 85 for about 1 hour. The resulting solution was filtered and sterilized in a sterilized 2 liter container, And used for manufacturing.

상기 조성비는 비교적 기호 음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호 도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.
Although the composition ratio is relatively mixed with the ingredient suitable for the favorite drink, it is also possible to arbitrarily modify the blending ratio according to the regional or national preference such as the demand class, demand country, use purpose, and the like.

<< 제조예Manufacturing example 3>  3> 화장료Cosmetics 조성물의 제조 Preparation of composition

1. 크림의 제조1. Manufacture of cream

세토스테아릴알코올 2.8 중량부Cetostearyl alcohol 2.8 parts by weight

밀납 2.6 중량부Beeswax 2.6 parts by weight

스테아린산 1.4 중량부Stearic acid 1.4 parts by weight

친유형모노스테아린산글리세린 2 중량부Glycerin monostearate 2 parts by weight

피이지-100 스테아레이트 1 중량부&Lt; tb &gt; &lt; tb &gt;

세스퀴올레인산소르비탈 1.4 중량부Sorbitol sesquioleate 1.4 parts by weight

호호바오일 4 중량부Jojoba oil 4 parts by weight

스쿠알란 3.8 중량부Squalane 3.8 parts by weight

폴리소르베이트 60 1.1 중량부Polysorbate 60 1.1 parts by weight

마카다이아오일 2 중량부Macadia oil 2 parts by weight

초산토코페롤 0.2 중량부Tocopheryl acetate 0.2 part by weight

메칠폴리실록산 0.4 중량부Methylpolysiloxane 0.4 part by weight

에칠파라벤 0.1 중량부Ethylparaben 0.1 part by weight

프로필파라벤 0.1 중량부Propylparaben 0.1 part by weight

Euxyl K-400 0.1 중량부Euxyl K-400 0.1 part by weight

1,3-부칠렌글리콜 7 중량부1,3-butylene glycol 7 parts by weight

메칠파라벤 0.05 중량부Methylparaben 0.05 part by weight

글리세린 6 중량부Glycerin 6 parts by weight

d-판데놀 0.2 중량부d-Pandenol 0.2 part by weight

코우메스탄계 화합물 4.6 중량부4.6 parts by weight of a chromate compound

트리에탄올아민 0.2 중량부Triethanolamine 0.2 part by weight

pt 41891 0.2 중량부pt 41891 0.2 part by weight

p-H₂O 46.05 중량부
pH ₂ O 46.05 parts by weight

2. 로션의 제조 2. Manufacture of Lotion

세토스테아릴알코올 1.6 중량부Cetostearyl alcohol 1.6 parts by weight

스테아린산 1.4 중량부Stearic acid 1.4 parts by weight

친유형모노스테아린산글리세린 1.8 중량부Glycerin monostearate of pro-type 1.8 parts by weight

피이지-100 스테아레이트 2.6 중량부&Lt; tb &gt; &lt; tb &gt;

세스퀴올레인산소르비탈 0.6 중량부Sorbitol sesquioleate 0.6 parts by weight

스쿠알렌 4.8 중량부Squalene 4.8 parts by weight

마카다이아오일 2 중량부Macadia oil 2 parts by weight

호호바오일 2 중량부 Jojoba oil 2 parts by weight

초산토코페롤 0.4 중량부Tocopheryl acetate 0.4 part by weight

메칠폴리실록산 0.2 중량부0.2 part by weight of methylpolysiloxane

에칠파라벤 0.1 중량부Ethylparaben 0.1 part by weight

프로필파라벤 0.1 중량부Propylparaben 0.1 part by weight

1,3-부칠렌글리콜 4 중량부4 parts by weight of 1,3-butylene glycol

메칠파라벤 0.1 중량부0.1 part by weight of methylparaben

산탄검 0.1 중량부Xanthan gum 0.1 part by weight

글리세린 4 중량부Glycerin 4 parts by weight

d-판데놀 0.15 중량부d-Pandenol 0.15 part by weight

알란토인 0.1 중량부Allantoin 0.1 part by weight

코우메스탄계 화합물 3.5 중량부3.5 parts by weight of a chromate compound

카르보머(2% aq. Sol) 4 중량부Carbomer (2% aq. Sol) 4 parts by weight

트리에탄올아민 0.15 중량부 Triethanolamine 0.15 part by weight

에탄올 3 중량부Ethanol 3 parts by weight

pt 41891 0.1 중량부pt 41891 0.1 part by weight

p-H₂0 48.3 중량부
pH ₂₀ 48.3 parts by weight

<< 제조예Manufacturing example 4> 사료첨가제의 제조 4> Preparation of feed additive

본 발명자들을 코우메스탄계 화합물을 유효성분으로 하여 하기와 같은 조성으로 사료첨가제를 제조하였다.
The inventors of the present invention prepared a feed additive having the following composition using a coamestane-based compound as an active ingredient.

코우메스탄계 화합물 0.1 ~ 20% 중량부Coomustane-based compound 0.1 to 20% by weight

지방분해효소(Lipase) 0.001 ~ 0.01% 중량부Lipase (Lipase) 0.001 to 0.01% by weight

제 3 인산칼슘 1 ~ 20% 중량부1 to 20% by weight of calcium tertiary phosphate

비타민 E 0.01 ~ 0.1% 중량부0.01 to 0.1% by weight of vitamin E

효소 분말 1 ~ 10% 중량부Enzyme powder 1 to 10% by weight

유산균 0.1 ~ 10% 중량부0.1 ~ 10% by weight lactic acid bacteria

바실러스(Bacillus) 배양액 0.01 ~ 10% 중량부Bacillus culture 0.01 to 10% by weight

포도당 20 ~ 90% 중량부20 to 90% by weight of glucose

Claims (11)

하기 화학식 1로 표시되는 신규한 코우메스탄(Coumestan)계 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염:
[화학식 1]

.
A novel coumestan-based compound represented by the following formula (1): or a pharmaceutically acceptable salt thereof:
[Chemical Formula 1]

.
제 1항에 있어서, 상기 신규한 코우메스탄계 화합물은 콩잎에서 분리된 것을 특징으로 하는 신규한 코우메스탄(Coumestan)계 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
The novel coumestan-based compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof according to claim 1, wherein the novel cohomestane-based compound is isolated from a canola.
1) 콩잎을 물, C₁ ~ C₂ 알코올, 에틸아세테이트 또는 이들의 혼합물로 추출하여 콩잎 추출물을 얻는 단계;
2) 상기 단계 1)에서 얻은 콩잎 추출물을 물, 디클로로메탄 및 에틸아세테이트를 순차적으로 사용하여 콩잎 물, 디클로로메탄 및 에틸아세테이트 분획물을 얻는 단계; 및
3) 상기 단계 2)에서 수득한 에틸아세테이트 분획물을 유기용매를 유출용매로 사용하는 컬럼크로마토그래피를 수행하여 제 1항의 화합물을 분리 및 정제하는 단계를 포함하는 신규 코우메스탄계 화합물의 제조방법.
1) extracting the soybean leaves with water, C ₁ -C ₂ alcohol, ethyl acetate or a mixture thereof to obtain a soybean leaf extract;
2) obtaining the canola leaves, dichloromethane and ethyl acetate fractions by using water, dichloromethane and ethyl acetate sequentially from the soybean leaf extract obtained in the above step 1); And
3) separating and purifying the compound of claim 1 by subjecting the ethyl acetate fraction obtained in the above step 2) to column chromatography using an organic solvent as a spiraling solvent.
하기 화학식 1 또는 하기 화학식 2로 표시되는 코우메스탄계 화합물 또는, 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 대사성 질환 또는 이의 합병증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물:
[화학식 1]

,
[화학식 2]

.
A pharmaceutical composition for preventing or treating a metabolic disease or a complication thereof comprising an effective ingredient of a cosmetic composition or a pharmaceutically acceptable salt thereof represented by the following formula 1 or 2:
[Chemical Formula 1]

,
(2)

.
제 4항에 있어서, 상기 코우메스탄계 화합물은 알파-글루코시데이즈(α-glucosidase) 억제 효과, 알파-아밀레이즈(α-amylase) 억제효과, DPP-4(Dipeptidyl peptidase-4) 억제 효과, 사람 콜레스테롤 아실 전이효소(hACAT)의 억제 효과 또는 저밀도 지단백질(LDL) 항산화 활성 효과를 나타내는 것을 특징으로 하는 대사성 질환 또는 이의 합병증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
5. The composition according to claim 4, wherein the coamestane compound is selected from the group consisting of alpha-glucosidase inhibiting effect, alpha-amylase inhibiting effect, DPP-4 (dipeptidyl peptidase-4) A cholesterol acyltransferase (hACAT) inhibitory effect or a low density lipoprotein (LDL) antioxidative activity activity, wherein the pharmaceutical composition is for preventing or treating a metabolic disease or a complication thereof.
제 4항에 있어서, 상기 대사성 질환은 당뇨, 고지혈증, 동맥경화, 지방간 또는 비만인 것을 특징으로 하는 대사성 질환 또는 이의 합병증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
The pharmaceutical composition according to claim 4, wherein the metabolic disease is diabetes, hyperlipidemia, arteriosclerosis, fatty liver or obesity, or a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of a metabolic disease or complication thereof.
제 4항에 있어서, 상기 합병증은 관상 동맥 질환, 협심증, 경동맥 질환, 뇌졸중, 뇌동맥경화증, 고콜레스테롤증, 콜레스테롤 결석, 고중성지방혈증, 고혈압, 백내장, 신장질환, 신경장애, 염증성 장애 또는 감염증인 것을 특징으로 하는 대사성 질환 또는 이의 합병증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
5. The method of claim 4, wherein the complication is selected from the group consisting of coronary artery disease, angina pectoris, carotid artery disease, stroke, cerebral artery sclerosis, hypercholesterolemia, cholesterol stone, hypertriglyceridemia, hypertension, cataract, kidney disease, neurological disorder, Or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
제 4항의 코우메스탄계 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 대사성 질환 또는 이의 합병증의 예방 또는 개선용 건강기능식품.
A health functional food for preventing or ameliorating a metabolic disease or complication thereof comprising the coamestane-based compound of claim 4 or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
제 4항의 코우메스탄계 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 항산화용 약학적 조성물.
A pharmaceutical composition for antioxidant comprising the coamestane compound of claim 4 or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
제 4항의 코우메스탄계 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 항산화용 화장료 조성물.
An antioxidant cosmetic composition comprising the cosmestane compound of claim 4 or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
제 4항의 코우메스탄계 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 항산화용 사료첨가제.
An antioxidant feed additive comprising the coamestane-based compound of claim 4 or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.

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