KR20150003274A

KR20150003274A - 인간화된 타우 항체

Info

Publication number: KR20150003274A
Application number: KR1020147031163A
Authority: KR
Inventors: 안드레아 파이퍼; 안드레아스 무스; 마리아 필그렌; 오스카 아돌프손; 프레드 반 로이펜; 가이 아얄론; 다니엘 마리 디 카라; 이시드로 호트젤
Original assignee: 에이씨 이뮨 에스.에이.; 제넨테크, 인크.; 카트호리이케 유니버시타이트 로이펜
Priority date: 2012-04-05
Filing date: 2013-03-15
Publication date: 2015-01-08
Also published as: EP2834270B1; RU2014144331A; KR102132041B1; JP2015521158A; RU2644242C2; HK1209137A1; IL234942A0; US20150175682A1; BR112014024769A2; CN104520322B; US9657091B2; EP2834270A1; CA2869438C; TW201400505A; WO2013151762A1; AR092818A1; CN104520322A; SG11201406347TA; JP6293731B2; AU2013243861A1

Abstract

본 발명은 신경섬유 엉킴(neurofibrillary tangles)에 의해 야기되거나 그것과 연관된 질환 및 장애의 치료 및 그 치료에서의 진단 용도를 위한 방법 및 조성물을 제공한다. 특히, 본 발명은 인산화된 병리적 단백질 타우-이형태체를 특이적으로 인식하거나 그것에 결합하는 인간화된 항체 및 알츠하이머병(AD)을 포함하는 타우병증의 치료에서의 치료 및 진단 용도를 위한 상기 항체를 수반하는 방법 및 조성물에 관한 것이다.

Description

인간화된 타우 항체 {Humanized Tau Antibody}

본 발명은 신경섬유 엉킴에 의해 야기되거나 그것과 연관된 질환 및 장애의 치료에서 치료 및 진단 용도를 위한 방법 및 조성물에 관련된다. 특히, 본 발명은 인산화된 병리적 단백질 타우-이형태체를 특이적으로 인식하거나 그것에 결합하는 인간화된 항체 및 알츠하이머병 (AD)을 포함하는 타우병증의 치료에서의 치료 및 진단 용도를 위한 상기 항체를 수반하는 방법 및 조성물에 관한 것이다.

신경섬유 엉킴 및 신경망 변성(NTs)은 알츠하이머병(AD)의 주요 신경병리적 홀마크이다. 이들은 아스파라기닐 또는 아스파르틸 잔기 상에서의 인산화, 탈아미드화 및 이성질체화를 포함하는 번역 후 변형을 거친 미세소관과 연관된 단백질 타우로 이루어진다. 이들은 과도-인산화된 단백질 타우 및 그의 이형태체의 응집에서 유래된다. AD는 여러 신경퇴행성 타우병증, 특히 명시된 유형의 전측두엽 치매(FTD)와 상기 병리를 공유한다.

단백질 타우는 미세소관(MTs)에 활발하게 결합하여 그의 어셈블리 및 안정성을 촉진하는 자유로운 가용성의 "천연적으로 접히지 않은" 단백질이다. MTs는 뉴런의 세포골격 온전성을 위해, 이에 따라 신경 회로의 적절한 형성 및 기능을 위해, 따라서 학습 및 기억을 위해 매우 중요하다. MT로의 타우의 결합은 주로 시험관내 그리고 비뉴런 세포에서 실증된 바와 같이 동적 인산화 및 탈-인산화에 의해 조절된다. 가능한 다수 인산화 부위(>80)로 인해, 각각의 정확한 기여 및 관여하는 기제의 정체는 생체내에서 대부분 규정되지 않고 남아있다.

AD 뇌에서, 타우 병리는 나중에 발생하고, 따라서 아마도 아밀로이드 캐스케이드 가설의 요지를 구성하는 아밀로이드 병리에 반응하여 발생한다. 이것은 AD 및 다운 증후군 환자에서의 연구에 기반하여 나타나 있으며, 조합된 아밀로이드 및 타우 병리를 갖는 유전자이식 마우스에서의 연구에 의해 확증되어 있다(Lewis 등, 2001; Oddo 등, 2004; Ribe 등, 2005; Muyllaert 등, 2006; 2008; Terwel 등, 2008).

인간 AD 환자에서의 병리뿐만 아니라 아밀로이드를 타우 병리에 연결하는 기전 모두의 정확한 타이밍은 대부분 알려져 있지 않지만, 주요 "타우-키나제"로서 GSK3 및 cdk5 상에 또는 이들에 의해 작용하는 뉴런의 신호전달 경로 활성화가 관여되는 것으로 제안되어 있다(Muyllaert 등, 2006, 2008에서 검토됨).

타우병증이 AD에서 단순한 부작용이 아니라 주요 병리적 수행인자라는 가설은 서로 완전히 확증하는 충분한 유전적, 병리적 및 실험적 관찰에 기반하는데:

● 아밀로이드 단백질 전구체(APP) 또는 프레세닐린에서의 돌연변이에 의해 야기된 조기-개시 가족성 AD 사례에서, 절대적인 병원성 원인은 아밀로이드 축적이지만, 변함없이 그 병리는 후기-개시 산발적 AD 사례와 의 상동성을 갖는 부차적인 타우병증을 포함한다;

● 인지 기능장애 및 치매의 중증도는 아밀로이드 병리가 아닌 타우병증과 연관된다는 것이 아밀로이드에 대한 PIB-PET 이미지화를 포함하는 몇 개의 임상 1 & 2 상(phase) 연구에 의해 가장 최근에 예시되었으며 여러 "위양성(false positives)": 높은 뇌 아밀로이드 부하를 갖는 인지 정상 개인이 확인된다;

● 가족성 FTD에서, 타우병증은 돌연변이체 타우에 의해 야기되며 아밀로이드 병리 없이 직접적으로 신경퇴행을 유도한다;

● 실험 마우스 모델에서, 아밀로이드 병리에 의해 야기된 인지 결함은 단백질 타우의 부재에 의해 거의 완전히 완화된다(Roberson 등, 2007).

조합된 주장들은 단백질 타우가 AD 및 관련된 신경퇴행성 타우병증에서 인지 소멸의 주요 플레이어라는 가설을 뒷받침한다.

AD의 탁월하게 부각중인 치료는 특이적 mAbs를 이용한 수동 면역요법에 의해 신경-독성 또는 시냅스-독성으로 추정되는 아밀로이드 펩타이드 및 그의 응집물을 제거하는 것이다.

본원에서 제안된 바와 같은 타우 병리를 표적으로 하는 면역요법은 시냅스 기능장애 및 신경퇴행을 일으키는 것으로 알려져 있거나 상정되는 병리적 단백질 타우-이형태체에 대항할 것으로 기대된다. 야기된 아밀로이드 병리 및 과도-인산화된 단백질 타우의 뉴런 내 응집물은 AD의 경도 인지 손상(MCI)에서 심각한 치매로 이어지는 병리적 이벤트의 인지 및 퇴행성 캐스케이드에서 상승적으로 작용하는 것으로 제안되어 있다. 따라서 아밀로이드-지정(또는 임의의 다른) 약물치료와 타우-지정 약물치료의 조합은 현재의 단일요법과는 반대로 AD의 바람직하고 실질적으로 더 유효한 치료를 구성할 것이다.

단백질 타우를 표적으로 하는 다른 치료적 접근법은 드물고 주로 다음을 포함하는데, 다음은:

● 타우의 인산화를 병리적 수준으로 증가시키는 것으로 생각되는 키나아제의 억제제; 및

● 과도-인산화된 단백질 타우의 세포질 응집을 차단하는 화합물이다.

이들 접근법은 APP 및 아밀로이드의 대사를 변형시키고자 하는 시도로 이들의 공유하는 문제인 특이성 및 효능의 다양한 문제를 겪으며, 모두 타우에 대한 면역요법을 포함하는 추가의 치료 선택에 대한 연속적 검색의 중요성을 강조한다.

실제로 생체내 병리적 타우 이형태체를 - 표적화하는 것은 차치하고 - 정의하려는 노력조차 기울여지지 않았다. Aβ42 II 상(phase) 임상시험에서, 매듭 병리는 잘 고려되거나 더 깊이 분석된 것으로 나타나지 않았다(Nicoll 등, 2003; Masliah 등, 2005). 다른 한편으로, AD-유사 병리와 조합된 전임상 마우스 모델에서 아밀로이드를 표적화하는 실험 면역요법이 또한 타우 응집물이 지속됨에도 불구하고 타우 병리에 대한 효과를 실증하였다(Oddo 등, 2004).

면역요법에 의한 세포내 단백질 타우에 접근하는 실행성에 대해 일부 우려가 제기되었다. 이들은 타우병증 마우스 모델에서 가장 최근의 실험 연구에 의해 반박되었다(Asuni 등, 2007). 이들은 단백질 타우 유도된 포스포-펩타이드를 이용한 예방접종에 의해 매듭(tangle) 병리의 감소 및 기능성 개선을 나타내었다. 이들 데이터는 파킨슨병(PD) 및 루이체 질환 모델(Masliah 등, 2005, 2011)에서 α-시누클레인 및 근위축 측삭 경화증(ALS) 모델(Urushitiani 등, 2007)에서 수퍼록사이드 디스무타제를 표적화하는 면역요법의 이전 보고를 확증한다. 이들 질환은 세포내 단백질이 아직까지 완전히 이해되지 않은 기전에 의해 시냅스 결함 및 신경퇴행으로 이어지는 예이다. 다른 한편으로, 사용된 아쥬반트, 즉 완전 프로인트 및 백일해 독소가 그 연구의 음성 결과에 기여할 수 있음에도 불구하고, 박테리아에서 생산되고 단리된 전체길이 재조합 단백질 타우는 백신으로 적당하지 않은 것으로 나타났다(Rosenmann 등, 2006).

Ser-409의 인산화(pS409)를 필요로 하는 타우 에피토프가 AD에서 조기에 나타나는 타우 인산화 부위에 대한 마커(marker)로 사용되었다(Jicha 등, 1999). 상기 인산화는 단백질 키나아제 A(PKA)-의존적이며, 쌍으로 된 나선 필라멘트(PHF) 형성의 초기 단계 및 조기 AD 사례에서 침범된 뉴런에서의 신경섬유 병리의 최종 확산에 선행하거나 이와 동시에 일어난다. 기계론적인 연구에서, pS409는 또한 PHF 및 신경섬유 엉킴 어셈블리에 연루된 절차인 타우의 올리고머화의 직접적인 결정요인인 것으로 나타났다(Vanhelmont 등, 2010;Alonso 등, 2008). 더욱이, pS409는 타우의 MT-결합 도메인의 일부가 아닌 경우라도 타우가 미세소관(MT)에 결합하는 능력을 감소시켜서 S409의 인산화가 또한 타우-미세소관 상호작용에 해로움을 실증한다(Vandebroek 등, 2006). 항원성 펩타이드 타우 401-418[pS404/pS409]을 포함하는 리포좀 백신은 야생형 C57BL/6 마우스 및 타우-결핍 마우스에서 특이적 IgG 항체를 유도하는 것으로 나타났다(WO2010/115843).

설치류 항체를 이용한 인간에서의 연장 요법(prolonged thrapy)은 투여 후 약 8 내지 12일에 검출가능하고 약 20 내지 30일에 피크에 도달하는 항글로불린 면역 반응을 일으킬 것이다. 이러한 항글로불린 반응이 발생하게 되면, 약 10일 이내에 치료가 중단되야 하며, 이후 시점에서의 치료의 재반복은 2차 항글로불린 반응을 재개하고 보다 신속한 개시를 야기할 것이므로 보통 배제된다. 설치류 항체는 인간 항체와 상당한 정도의 서열 보존성을 공유하지만, 설치류 및 인간 항체 간에는 설치류 항체가 인간에서 면역원성(immunogenic)이 되기 충분한 여러 서열 차이가 존재한다.

이 문제는 항체를 인간에서 직접 생성하거나 또는 "인간", "인간화된"("재형성화된" 항체로도 알려짐) 또는 "인간화 조작된" 항체의 생성에 의해 극복될 수 있다. 인간화된 항체는 인간 또는 인간-유사 뼈대 서열 내로 스플라이싱된 설치류-유도된 CDRs을 함유하는 가변 영역 아미노산 서열을 갖는다. 인간화된 항체의 특이성은 설치류-유도된 CDRs에 의해 제공되므로, 그의 잔기는 항체의 표적 항원에 대한 친화도 및 특이성을 유의미하게 방해하지 않는 소수 변형만 허용가능하고 본질적으로 변화되지 않아야 한다. 뼈대 잔기는 임의의 영장류로부터, 또는 특히 임의의 인간 가변 영역으로부터 유도될 수 있거나 이들의 조합일 수 있으며, 그 결과로 설계된 가변 영역은 재형상화된 것으로 간주될 것이다.

재형상화된 항체에서 친화도가 유지될 가능성을 최대화하기 위해, 뼈대 영역을 적절히 선택하는 것이 중요하다. 뼈대 서열은 항원과의 상호작용을 위해 그 정확한 공간 배향에서 CDRs을 유지하는 작용을 하며 뼈대 잔기가 때때로 항원 결합에도 참여할 수 있음이 알려져 있다. 그 항원에 대한 항체의 친화도를 유지하기 위해, 설치류 뼈대 서열과 가장 유사한 인간 뼈대 서열을 선택하는 것이 유리하다. 이어서 친화도 손실을 피하기 위해 인간 뼈대 서열에서 1 이상의 아미노산을 설치류 뼈대에서의 상응하는 잔기로 대체하는 것이 여전히 필요할 수 있다. 상기 대체는 컴퓨터 모델링에 의해 도움을 받을 수 있다.

신경퇴행성 장애를 야기하는 것으로 알려진 - 또는 추정된 - 병리적 단백질 이형태체, 예컨대 AD에서의 아밀로이드 펩타이드 및 그의 응집물뿐만 아니라 아밀로이드로서 AD에 대해 전형적인 과도-인산화된 단백질 타우의 뉴런내 응집물에 대항하는 작용을 하는 인간 환자에서의 수동 및/또는 능동 면역요법에 대해 오랫동안 지속되는 충족되지 않는 요구가 존재한다.

이러한 충족되지 않은 요구는, 타우 단백질의 주요한 특정 병리적 포스포-에피토프(phospho-epitope)를 특이적으로 인식하고 이에 결합하는 능력을 갖는 보다 특이적이고 보다 효과적인 항체, 특히 그의 단편을 포함하는 키메라 항체, 더 상세하게는 그의 단편을 포함하는 부분적 또는 완전 인간화 항체를 포함하는 신규한 방법 및 조성물을 제공하는 본 발명의 범위 내에서 부합된다. 특히, 본 발명은 AD를 포함하는 타우병증에서 시냅스- 및 신경-독성에 관여하는 것으로 여겨지는 단백질 타우, 특히 응집된 타우 단백질 상의 선형 및 형태적, 단순 및 복합체 포스포-에피토프에 대한 특이적 항체를 제공한다.

일 구현예에서, 본 발명은 타우 단백질 상에서 적어도 하나의 뚜렷이 다른 결합 부위를 인식하고 이에 결합하는 항체, 특히 모노클로날(monoclonal) 항체, 특히 키메라(chimeric) 항체 또는 그의 단편, 또는 인간화된 항체 또는 그의 단편에 관련된다.

상기 항체, 특히 모노클로날 항체, 특히 다양한 구현예에서 기재된 바와 같은 본 발명에 따른 키메라 또는 인간화된 항체는 포유류, 특히 인간 타우 단백질 또는 그의 단편 상의 포스포-에피토프, 특히 응집된 타우 단백질 상의 포스포-에피토프, 특히 병리적 단백질 타우 이형태체를 인지하고 특이적으로 결합하지만 상응하는 비인산화된 에피토프 및/또는 비-관련 에피토프에 결합하지 않고, 여기서 상기 항체는 가용성 및 불용성 타우 단백질에 높은 결합 친화도를 가지며, 특히 뇌에서, 가용성 및 불용성 타우 수준을 특히

(a) 적어도 100 nM, 특히 적어도 80 nM, 특히 적어도 70 nM, 특히 적어도 50 nM, 특히 적어도 10 nM, 특히 적어도 8 nM, 특히 적어도 5 nM, 특히 적어도 2 nM, 특히 적어도 1 nM, 특히 적어도 500 pM, 특히 적어도 400 pM, 특히 적어도 300 pM, 특히 적어도 200 pM, 특히 적어도 100 pM, 특히 적어도 50 pM의 해리 상수 및/또는

(b) 10⁴ M^-1s^-1또는 초과, 특히 3 - 5 x 10⁴ M^-1s^-1또는 초과, 특히 10⁵ M^-1s^-1또는 초과; 특히 0.5 - 9 x 10⁵ M^-1s^-1또는 초과; 특히 10⁶ M^-1s^-1또는 초과, 특히 1 - 4 x 10⁶ M^-1s^-1또는 초과, 특히 10⁷ M^-1s^-1또는 초과의 결합 속도 상수로 조절한다.

어떤 구현예에서, 본 발명은 항체, 특히 모노클로날 항체, 특히 다양한 구현예에서 기재된 바와 같은 본 발명에 따른 키메라 또는 인간화된 항체에 관련되며, 상기 항체는 포유류, 특히 인간 타우 단백질 또는 그의 단편 상의 포스포-에피토프, 특히 병리적 단백질 타우 이형태체를 인식하고 그것에 특이적으로 결합하지만, 일 구현예에서 상응하는 비인산화된 에피토프 및/또는 비-관련 에피토프에 결합하지 않고, 여기서 상기 항체는 해리 상수가 적어도 100nM 및 결합 속도 상수가 10⁵ M^-1s^-1또는 초과, 특히 해리 상수가 적어도 80nM 및 결합 속도 상수가 10⁵ M^-1s^-1또는 초과, 특히 해리 상수가 적어도 70nM 및 결합 속도 상수가 10⁵ M^-1s^-1또는 초과, 특히 해리 상수가 적어도 10nM 및 결합 속도 상수가 10⁵ M^-1s^-1또는 초과, 특히 해리 상수가 적어도 200pM 및 결합 속도 상수가10⁵ M^-1s^-1또는 초과, 특히 해리 상수가 적어도 100pM 및 결합 속도 상수가 10⁶ M^-1s^-1또는 초과인 높은 결합 친화도를 갖는다.

본 발명의 다양한 구현예에서, 상기 항체, 특히 모노클로날 항체, 특히 다양한 구현예에서 기재된 바와 같은 본 발명에 따른 키메라 또는 인간화된 항체는 포유류에서, 특히 인간 타우 단백질, 특히 미세소관-연관된 단백질 타우, 특히 응집된 미세소관-연관된 및 과도인산화된 단백질 타우, 예컨대 신경섬유 엉킴, 신경망 변성 및 퇴행성 신경염에서 두드러진 구조인 쌍으로 된 나선 필라멘트(PHF)에 존재하는 것들 상에서 포스포-에피토프를 특이적으로 인식하고 결합하지만, 일 구현예에서, 상응하는 비인산화된 에피토프 및/또는 비-관련 에피토프에는 결합하지 않는다.

본 발명의 특정 구현예에서, 인간 타우 단백질은 서열번호: 19로 나타낸 인간 타우 단백질이다.

일 구현예에서, 본 발명은 항체, 특히 모노클로날 항체, 특히 키메라 항체 또는 그의 기능성 단편, 또는 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편, 특히 인간화된 모노클로날 항체 또는 그의 기능성 단편, 특히 임의의 이전의 구현예의 항체를 제공하며, 상기 항체는 포유류에서, 특히 서열번호: 19로 나타낸 인간 타우 단백질에서 또는 그의 단편에서 포스포-에피토프, 특히 병리적 단백질 타우 이형태체를 인식하고 특이적으로 결합하지만, 일 구현예에서, 상응하는 비인산화된 에피토프 및/또는 비-관련 에피토프에 결합하지 않고, 여기서 상기 에피토프는 위치 409에서 인산화된 세린(pS409)을 필요로 하는 서열번호: 19로 나타낸 인간 타우 단백질의 아미노산 잔기 aa 404-411을 포함한다.

특정한 구현예에서, 본 발명은 항체, 특히 모노클로날 항체, 특히 키메라 항체 또는 그의 기능성 단편, 또는 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편, 특히 인간화된 모노클로날 항체 또는 그의 기능성 단편, 특히 임의의 이전의 구현예의 항체를 제공하며, 상기 항체는 우선적으로 H407, pS409, N410, 및 V411로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 일부 또는 모든 타우 아미노산 잔기, 그러나 특히 pS409를 인식하고 이에 결합한다.

또 하나의 특정한 구현예에서, 상기 항체 또는 단편은 pS404 잔기를 인식하고 이에 결합하고, 이보다 더 적은 정도로도 결합한다. 특히, pS404 잔기에 대한 결합은 pS409 잔기에 대한 결합의 약 10%, 특히 약 20%, 특히 약 30% 정도이다.

일 구현예에서, 본 발명은 항체, 특히 모노클로날 항체, 특히 키메라 항체 또는 그의 기능성 단편, 또는 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편, 특히 인간화된 모노클로날 항체 또는 그의 기능성 단편, 특히 이전의 구현예의 어떤 것의 항체를 제공하고, 이러한 항체는 포유류, 특히 서열번호: 19로 나타낸 인간 타우 단백질 또는 그의 단편 상의 포스포-에피토프를 인식하고 그것에 특이적으로 결합하고, 특히 병리적 단백질 타우 이형태체에 결합하고, 일 구현예에서, 상응하는 비인산화된 에피토프 및/또는 비-관련 에피토프에 결합하지 않고, 여기서 상기 에피토프는 위치 409 (pS409)에서 인산화된 세린 (Ser)을 포함하는 서열번호: 19로 나타낸 인간 타우 단백질의 아미노산 잔기 aa 405-411를 포함하고 여기서 상기 항체 또는 그의 기능성 단편은 일부 또는 모든 타우 아미노산 잔기 로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 H407, pS409, N410, 및 V411을 인식하고 그것에 결합하지만, 특히 pS409에 결합한다.

일 구현예에서, 본 발명은 키메라 항체 또는 그의 기능성 단편, 또는 이전의 구현예의 어떤 것의 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편, 특히 인간화된 모노클로날 항체 또는 그의 기능성 단편, 특히 인간화된 항체를 제공하고, 이러한 항체는 포유류, 특히 인간 타우 단백질 또는 그의 단편 상의 포스포-에피토프를 인식하고 그것에 특이적으로 결합하고, 병리적 단백질 타우 이형태체에 결합하지만, 일 구현예에서, 상응하는 비인산화된 에피토프 및/또는 비-관련 에피토프에 결합하지 않고, 여기서 상기 결합 항체는, 인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역에 순서대로 통합되고 다음을 함유한다: 서열번호: 1로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR1, 서열번호: 2로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR2, 및 서열번호: 3로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR3, 또는 인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역에 순서대로 통합되고, 서열번호: 1로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR1, 상기 서열과 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 특히 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 특히 적어도 95%, 특히 적어도 96%, 특히 적어도 97%, 특히 적어도 98%, 특히 적어도 99% 또는 100% 의 상동성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 제 1 결합 도메인, 특히 중쇄 가변 영역 (HCVR)의 결합 도메인 및/또는 인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역에 순서대로 통합되고, 서열번호: 4 또는 서열번호: 10로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR1, 서열번호: 5로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR2, 및 서열번호: 6로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR3, 또는 인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역에 순서대로 통합되고, 서열번호: 1로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR1, 상기 서열과 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 특히 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 특히 적어도 95%, 특히 적어도 96%, 특히 적어도 97%, 특히 적어도 98%, 특히 적어도 99% 또는 100% 의 상동성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 제 2 결합 도메인, 특히 경쇄 가변 영역 (LCVR)의 결합 도메인을 포함한다.

본 발명의 하나의 구현예는 키메라 항체 또는 그의 기능성 단편, 또는 이전의 구현예의 어떤 것의 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편, 특히 인간화된 모노클로날 항체 또는 그의 기능성 단편, 특히 인간화된 항체에 관한 것이고, 이러한 항체는 포유류, 특히 인간 타우 단백질 또는 그의 단편 상의 포스포-에피토프를 인식하고 그것에 특이적으로 결합하고, 병리적 단백질 타우 이형태체에 결합하지만, 일 구현예에서, 상응하는 비인산화된 에피토프 및/또는 비-관련 에피토프에 결합하지 않고, 여기서 상기 결합 항체는 인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역에 순서대로 통합되고, 서열번호: 1로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR1 또는 인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역에 순서대로 통합되고, 서열번호: 1로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR1, 상기 서열과 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 특히 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 특히 적어도 95%, 특히 적어도 96%, 특히 적어도 97%, 특히 적어도 98%, 특히 적어도 99% 또는 100% 의 상동성을 갖는 아미노산 서열, 서열번호: 2로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR2 또는 인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역에 순서대로 통합되고, 서열번호: 1로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR1, 상기 서열과 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 특히 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 특히 적어도 95%, 특히 적어도 96%, 특히 적어도 97%, 특히 적어도 98%, 특히 적어도 99% 또는 100% 의 상동성을 갖는 아미노산 서열, 및 서열번호: 3로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR3, 또는 상기 서열과 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 특히 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 특히 적어도 95%, 특히 적어도 96%, 특히 적어도 97%, 특히 적어도 98%, 특히 적어도 99% 또는 100% 의 상동성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 제 1 결합 도메인, 특히 중쇄 가변 영역 (HCVR)의 결합 도메인 및/또는 인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역에 순서대로 통합되고, 서열번호: 4 또는 서열번호: 10로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR1, 또는 인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역에 순서대로 통합되고, 서열번호: 1로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR1, 상기 서열과 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 특히 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 특히 적어도 95%, 특히 적어도 96%, 특히 적어도 97%, 특히 적어도 98%, 특히 적어도 99% 또는 100% 의 상동성을 갖는 아미노산 서열, 서열번호: 5로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR2, 및 서열번호: 6로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR3 또는 인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역에 순서대로 통합되고, 서열번호: 1로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR1, 상기 서열과 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 특히 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 특히 적어도 95%, 특히 적어도 96%, 특히 적어도 97%, 특히 적어도 98%, 특히 적어도 99% 또는 100% 의 상동성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 제 2 결합 도메인, 특히 경쇄 가변 영역 (LCVR)의 결합 도메인을 포함한다.

일 구현예에서, 본 발명은 키메라 항체 또는 그의 기능성 단편, 또는 이전의 구현예의 어떤 것의 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편, 특히 인간화된 모노클로날 항체 또는 그의 기능성 단편, 특히 인간화된 항체를 제공하고, 이러한 항체는 포유류, 특히 인간 타우 단백질 또는 그의 단편 상의 포스포-에피토프를 인식하고 그것에 특이적으로 결합하고, 병리적 단백질 타우 이형태체에 결합하지만, 일 구현예에서, 상응하는 비인산화된 에피토프 및/또는 비-관련 에피토프에 결합하지 않고, 여기서 상기 결합 항체는 인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역에 순서대로 통합되고, 서열번호: 1로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR1 또는 인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역에 순서대로 통합되고, 서열번호: 1로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR1, 상기 서열과 적어도 81%, 특히 적어도 85%, 특히 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 특히 적어도 95%, 특히 적어도 96%, 특히 적어도 97%, 특히 적어도 98%, 특히 적어도 99% 또는 100% 의 상동성을 갖는 아미노산 서열, 서열번호: 2로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR2 또는 인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역에 순서대로 통합되고, 서열번호: 1로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR1, 상기 서열과 적어도 71%, 적어도 75%, 적어도 8%, 특히 적어도 85%, 특히 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 특히 적어도 95%, 특히 적어도 96%, 특히 적어도 97%, 특히 적어도 98%, 특히 적어도 99% 또는 100% 의 상동성을 갖는 아미노산 서열, 및 서열번호: 3로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR3, 또는 상기 서열과 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 특히 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 특히 적어도 95%, 특히 적어도 96%, 특히 적어도 97%, 특히 적어도 98%, 특히 적어도 99% 또는 100% 의 상동성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 제 1 결합 도메인, 특히 중쇄 가변 영역 (HCVR)의 결합 도메인 및/또는 인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역에 순서대로 통합되고, 서열번호: 4 또는 서열번호: 10로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR1, 또는 인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역에 순서대로 통합되고, 서열번호: 1로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR1, 상기 서열과 적어도 82%, 특히 적어도 85%, 특히 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 특히 적어도 95%, 특히 적어도 96%, 특히 적어도 97%, 특히 적어도 98%, 특히 적어도 99% 또는 100% 의 상동성을 갖는 아미노산 서열, 서열번호: 5로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR2, 및 서열번호: 6로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR3, 또는 인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역에 순서대로 통합되고, 서열번호: 1로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR1, 상기 서열과 적어도 50%, 적어도 68%, 적어도 70%, 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 특히 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 특히 적어도 95%, 특히 적어도 96%, 특히 적어도 97%, 특히 적어도 98%, 특히 적어도 99% 또는 100% 의 상동성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 제 2 결합 도메인, 특히 경쇄 가변 영역 (LCVR)의 결합 도메인을 포함한다.

일 구현예에서, 본 발명은 키메라 항체 또는 그의 기능성 단편, 또는 이전의 구현예의 어떤 것의 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편, 특히 인간화된 모노클로날 항체 또는 그의 기능성 단편, 특히 인간화된 항체를 제공하고, 이러한 항체는 포유류, 특히 인간 타우 단백질 또는 그의 단편 상의 포스포-에피토프를 인식하고 그것에 특이적으로 결합하고, 병리적 단백질 타우 이형태체에 결합하지만, 일 구현예에서, 상응하는 비인산화된 에피토프 및/또는 비-관련 에피토프에 결합하지 않고, 여기서 상기 결합 항체는 인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역에 순서대로 통합되고, 서열번호: 1로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR1 또는 인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역에 순서대로 통합되고, 서열번호: 1로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR1, 상기 서열과 적어도 85% 의 상동성을 갖는 아미노산 서열, 서열번호: 2로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR2 또는 인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역에 순서대로 통합되고, 서열번호: 1로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR1, 상기 서열과 적어도 75% 의 상동성을 갖는 아미노산 서열, 및 상기 서열과 적어도 20% 의 상동성을 갖는, 서열번호: 3로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 함유하는 제 1 결합 도메인, 특히 중쇄 가변 영역 (HCVR)의 결합 도메인, 및/또는 인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역에 순서대로 통합되고, 서열번호: 4 또는 서열번호: 10로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR1, 또는 인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역에 순서대로 통합되고, 서열번호: 1로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR1, 상기 서열과 적어도 85% 의 상동성을 갖는 아미노산 서열, 서열번호: 5로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR2, 및 서열번호: 6로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR3, 또는 인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역에 순서대로 통합되고, 서열번호: 1로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR1, 상기 서열과 적어도 70% 의 상동성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 제 2 결합 도메인, 특히 경쇄 가변 영역 (LCVR)의 결합 도메인을 포함한다.

일 구현예에서, 본 발명은 키메라 항체 또는 그의 기능성 단편, 또는 이전의 구현예의 어떤 것의 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편, 특히 인간화된 모노클로날 항체 또는 그의 기능성 단편, 특히 인간화된 항체를 제공하고, 이러한 항체는 포유류, 특히 인간 타우 단백질 또는 그의 단편 상의 포스포-에피토프를 인식하고 그것에 특이적으로 결합하고, 병리적 단백질 타우 이형태체에 결합하지만, 일 구현예에서, 상응하는 비인산화된 에피토프 및/또는 비-관련 에피토프에 결합하지 않고, 여기서 상기 결합 항체는 인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역에 순서대로 통합되고, 서열번호: 1로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR1, 서열번호: 2로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR2, 및 서열번호: 3로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR3, 또는 인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역에 순서대로 통합되고, 서열번호: 1로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR1, 상기 서열과 적어도 90% 의 상동성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 제 1 결합 도메인, 특히 중쇄 가변 영역 (HCVR)의 결합 도메인, 및/또는 인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역에 순서대로 통합되고, 서열번호: 4 또는 서열번호: 10로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR1, 서열번호: 5로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR2, 및 서열번호: 6로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR3, 또는 인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역에 순서대로 통합되고, 서열번호: 1로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR1, 상기 서열과 적어도 90% 의 상동성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 제 2 결합 도메인, 특히 경쇄 가변 영역 (LCVR)의 결합 도메인을 포함한다.

일 구현예에서, 본 발명은 키메라 항체 또는 그의 기능성 단편, 또는 이전의 구현예의 어떤 것의 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편, 특히 인간화된 모노클로날 항체 또는 그의 기능성 단편, 특히 인간화된 항체를 제공하고, 이러한 항체는 포유류, 특히 인간 타우 단백질 또는 그의 단편 상의 포스포-에피토프를 인식하고 그것에 특이적으로 결합하고, 병리적 단백질 타우 이형태체에 결합하지만, 일 구현예에서, 상응하는 비인산화된 에피토프 및/또는 비-관련 에피토프에 결합하지 않고, 여기서 상기 결합 항체는 인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역에 순서대로 통합되고, 서열번호: 1로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR1, 서열번호: 2로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR2, 및 서열번호: 3로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR3, 또는 인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역에 순서대로 통합되고, 서열번호: 1로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR1, 상기 서열과 적어도 95% 의 상동성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 제 1 결합 도메인, 특히 중쇄 가변 영역 (HCVR)의 결합 도메인, 및/또는 인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역에 순서대로 통합되고, 서열번호: 4 또는 서열번호: 10로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR1, 서열번호: 5로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR2, 및 서열번호: 6로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR3, 또는 인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역에 순서대로 통합되고, 서열번호: 1로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR1, 상기 서열과 적어도 95% 의 상동성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 제 2 결합 도메인, 특히 경쇄 가변 영역 (LCVR)의 결합 도메인을 포함한다.

일 구현예에서, 본 발명은 키메라 항체 또는 그의 기능성 단편, 또는 이전의 구현예의 어떤 것의 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편, 특히 인간화된 모노클로날 항체 또는 그의 기능성 단편, 특히 인간화된 항체를 제공하고, 이러한 항체는 포유류, 특히 인간 타우 단백질 또는 그의 단편 상의 포스포-에피토프를 인식하고 그것에 특이적으로 결합하고, 병리적 단백질 타우 이형태체에 결합하지만, 일 구현예에서, 상응하는 비인산화된 에피토프 및/또는 비-관련 에피토프에 결합하지 않고, 여기서 상기 결합 항체는 인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역에 순서대로 통합되고, 서열번호: 1로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR1, 서열번호: 2로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR2, 및 서열번호: 3로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR3, 또는 인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역에 순서대로 통합되고, 서열번호: 1로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR1, 상기 서열과 적어도 98% 의 상동성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 제 1 결합 도메인, 특히 중쇄 가변 영역 (HCVR)의 결합 도메인, 및/또는 인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역에 순서대로 통합되고, 서열번호: 4 또는 서열번호: 10로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR1, 서열번호: 5로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR2, 및 서열번호: 6로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR3, 또는 인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역에 순서대로 통합되고, 서열번호: 1로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR1, 상기 서열과 적어도 98% 의 상동성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 제 2 결합 도메인, 특히 경쇄 가변 영역 (LCVR)의 결합 도메인을 포함한다.

일 구현예에서, 본 발명은 키메라 항체 또는 그의 기능성 단편, 또는 이전의 구현예의 어떤 것의 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편, 특히 인간화된 모노클로날 항체 또는 그의 기능성 단편, 특히 인간화된 항체를 제공하고, 이러한 항체는 포유류, 특히 인간 타우 단백질 또는 그의 단편 상의 포스포-에피토프를 인식하고 그것에 특이적으로 결합하고, 병리적 단백질 타우 이형태체에 결합하지만, 일 구현예에서, 상응하는 비인산화된 에피토프 및/또는 비-관련 에피토프에 결합하지 않고, 여기서 상기 결합 항체는 인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역에 순서대로 통합되고 다음을 함유하는데, 다음은 : 서열번호: 1로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR1, 서열번호: 2로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR2, 및 서열번호: 3로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 함유하는 제 1 결합 도메인, 특히 중쇄 가변 영역 (HCVR)의 결합 도메인, 및/또는 인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역에 순서대로 통합되고, 서열번호: 4로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR1, 서열번호: 5로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR2, 및 서열번호: 6로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 함유하는 제 2 결합 도메인이고, 특히 경쇄 가변 영역 (LCVR)의 결합 도메인을 포함한다.

일 구현예에서, 본 발명은 키메라 항체 또는 그의 기능성 단편, 또는 이전의 구현예의 어떤 것의 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편, 특히 인간화된 모노클로날 항체 또는 그의 기능성 단편, 특히 인간화된 항체를 제공하고, 이러한 항체는 포유류, 특히 인간 타우 단백질 또는 그의 단편 상의 포스포-에피토프를 인식하고 그것에 특이적으로 결합하고, 병리적 단백질 타우 이형태체에 결합하지만, 일 구현예에서, 상응하는 비인산화된 에피토프 및/또는 비-관련 에피토프에 결합하지 않고, 여기서 상기 결합 항체는 인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역에 순서대로 통합되고, 서열번호: 1로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR1, 서열번호: 2로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR2, 및 서열번호: 3로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 함유하는 제 1 결합 도메인, 특히 중쇄 가변 영역 (HCVR)의 결합 도메인, 및/또는 인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역에 순서대로 통합되고, 서열번호: 10로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR1, 서열번호: 5로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR2, 및 서열번호: 6로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 함유하는제 2 결합 도메인, 특히 경쇄 가변 영역 (LCVR)의 결합 도메인을 포함한다. 본 발명은 추가로, 키메라 항체 또는 그의 기능성 단편, 또는 인간화된 항체 또는 그의 단편에 관한 것이고, 이러한 항체는 인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역에 순서대로 통합되고 적어도 2 펩타이드, 특히 적어도 3 펩타이드, 특히 적어도 4 개의 펩타이드, 특히 적어도 5 개의 펩타이드, 특히 6 개의 펩타이드를 포함하고, 이러한 펩타이드는 상이하고, 중쇄 가변 영역 (HCVR)의 CDR1을 나타내는 서열번호:1, CDR2를 나타내는 서열번호:2 및 CDR3을 나타내는 서열번호: 3 및 경쇄 가변 영역 (LCVR)의 CDR1을 나타내는 서열번호: 4, CDR2를 나타내는 서열번호: 5 및 CDR3를 나타내는 서열번호: 6 로 이루어진 서열의 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 나타내고, 여기서 의 상동성을 갖는 CDR은 항체에서 2번 존재할 수 없다.

본 발명은 추가로, 키메라 항체 또는 그의 기능성 단편, 또는 인간화된 항체 또는 그의 단편에 관한 것이고, 이러한 항체는 인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역에 순서대로 통합되고 적어도 2 펩타이드, 특히 적어도 3 펩타이드, 특히 적어도 4 개의 펩타이드, 특히 적어도 5 개의 펩타이드, 특히 6 개의 펩타이드를 포함하고, 이러한 펩타이드는 상이하고, 중쇄 가변 영역 (HCVR)의 CDR1을 나타내는 서열번호:1, CDR2를 나타내는 서열번호:2 및 CDR3을 나타내는 서열번호: 3 및 경쇄 가변 영역 (LCVR)의 CDR1를 나타내는 서열번호:10, CDR2를 나타내는 서열번호: 5 및 CDR3를 나타내는 서열번호: 6 로 이루어진 서열의 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 나타내고, 여기서 의 상동성을 갖는 CDR은 항체에서 2번 존재할 수 없다.

특정한 구현예에서, 본 발명은 키메라 항체 또는 그의 기능성 단편, 또는 인간화된 항체 또는 그의 단편에 관한 것이고, 이러한 항체는 인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역 펩타이드에 통합되고 중쇄 가변 영역 (HCVR)의 CDR1을 나타내는 서열번호: 1, CDR2를 나타내는 서열번호:2 및 CDR3을 나타내는 서열번호: 3 및 경쇄 가변 영역 (LCVR)의 CDR1을 나타내는 서열번호: 4, CDR2를 나타내는 서열번호: 5 및 CDR3를 나타내는 서열번호: 6의 아미노산 서열을 포함한다.

특정한 구현예에서, 본 발명은 키메라 항체 또는 그의 기능성 단편, 또는 인간화된 항체 또는 그의 단편에 관한 것이고, 이러한 항체는 인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역 펩타이드에 통합되고 중쇄 가변 영역 (HCVR)의 CDR1을 나타내는 서열번호: 1, CDR2를 나타내는 서열번호:2 및 CDR3을 나타내는 서열번호: 3 및 경쇄 가변 영역 (LCVR)의 CDR1를 나타내는 서열번호:10, CDR2를 나타내는 서열번호: 5 및 CDR3를 나타내는 서열번호: 6의 아미노산 서열을 포함한다. 일 구현예에서, 본 발명은 이전의 구현예의 어떤 것의 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편, 특히 인간화된 모노클로날 항체 또는 그의 기능성 단편, 특히 인간화된 항체를 제공하고, 이 항체 포유류, 특히 인간 타우 단백질 또는 그의 단편 상의 포스포-에피토프를 인식하고 그것에 특이적으로 결합하고, 병리적 단백질 타우 이형태체에 결합하지만, 일 구현예에서, 상응하는 비인산화된 에피토프 및/또는 비-관련 에피토프에 결합하지 않고, 여기서 상기 항체 또는 항체 단편은 다음을 포함한다:

a. 서열번호: 7, 서열번호: 20 또는 서열번호: 21로 나타낸 서열에 대해 적어도 84%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 특히 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 특히 적어도 95%, 특히 적어도 96%, 특히 적어도 97%, 특히 적어도 98%, 특히 적어도 99% 또는 100% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 제 1 결합 도메인, 특히 중쇄 가변 영역 (HCVR)의 결합 도메인, 및/또는 서열번호: 8로 나타낸 서열에 대해 적어도 89%, 특히 적어도 90%, 특히 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 특히 적어도 95%, 특히 적어도 96%, 특히 적어도 97%, 특히 적어도 98%, 특히 적어도 99% 또는 100% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 제 2 결합 도메인, 특히 경쇄 가변 영역 (LCVR)의 결합 도메인; 또는

b. 서열번호: 7, 서열번호: 20 또는 서열번호: 21로 나타낸 서열에 대해 적어도 84%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 특히 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 특히 적어도 95%, 특히 적어도 96%, 특히 적어도 97%, 특히 적어도 98%, 특히 적어도 99% 또는 100% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 제 1 결합 도메인, 특히 중쇄 가변 영역 (HCVR)의 결합 도메인, 및/또는 서열번호: 9로 나타낸 서열에 대해 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 특히 적어도 95%, 특히 적어도 96%, 특히 적어도 97%, 특히 적어도 98%, 특히 적어도 99% 또는 100% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 제 2 결합 도메인, 특히 경쇄 가변 영역 (LCVR)의 결합 도메인.

일 구현예에서, 본 발명은 이전의 구현예의 어떤 것의 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편, 특히 인간화된 모노클로날 항체 또는 그의 기능성 단편, 특히 인간화된 항체를 제공하고, 이 항체 포유류, 특히 인간 타우 단백질 또는 그의 단편 상의 포스포-에피토프를 인식하고 그것에 특이적으로 결합하고, 병리적 단백질 타우 이형태체에 결합하지만, 일 구현예에서, 상응하는 비인산화된 에피토프 및/또는 비-관련 에피토프에 결합하지 않고, 여기서 상기 결합 항체는 다음을 포함한다:

a. 서열번호: 7, 서열번호: 20 또는 서열번호: 21로 나타낸 서열에 대해 적어도 84% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 제 1 결합 도메인, 특히 중쇄 가변 영역 (HCVR)의 결합 도메인, 및/또는 서열번호: 8로 나타낸 서열에 대해 적어도 89% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 제 2 결합 도메인, 특히 경쇄 가변 영역 (LCVR)의 결합 도메인; 또는

b. 서열번호: 7, 서열번호: 20, 또는 서열번호: 21로 나타낸 서열에 대해 적어도 84% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 제 1 결합 도메인, 특히 중쇄 가변 영역 (HCVR)의 결합 도메인, 및/또는 서열번호: 9로 나타낸 서열에 대해 적어도 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열를 함유하는 제 2 결합 도메인, 특히 경쇄 가변 영역 (LCVR)의 결합 도메인.

a. 서열번호: 7, 서열번호: 20 또는 서열번호: 21로 나타낸 서열에 대해 적어도 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 제 1 결합 도메인, 특히 중쇄 가변 영역 (HCVR)의 결합 도메인, 및/또는 서열번호: 8로 나타낸 서열에 대해 적어도 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 제 2 결합 도메인, 특히 경쇄 가변 영역 (LCVR)의 결합 도메인; 또는

b. 서열번호: 7, 서열번호: 20 또는 서열번호: 21로 나타낸 서열에 대해 적어도 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 제 1 결합 도메인, 특히 중쇄 가변 영역 (HCVR)의 결합 도메인, 및/또는 서열번호: 9로 나타낸 서열에 대해 적어도 90% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 제 2 결합 도메인, 특히 경쇄 가변 영역 (LCVR)의 결합 도메인.

a. 서열번호: 7, 서열번호: 20 또는 서열번호: 21로 나타낸 서열에 대해 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 제 1 결합 도메인, 특히 중쇄 가변 영역 (HCVR)의 결합 도메인, 및/또는 서열번호: 8로 나타낸 서열에 대해 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 제 2 결합 도메인, 특히 경쇄 가변 영역 (LCVR)의 결합 도메인; 또는

b. 서열번호: 7, 서열번호: 20 또는 서열번호: 21로 나타낸 서열에 대해 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 제 1 결합 도메인, 특히 중쇄 가변 영역 (HCVR)의 결합 도메인, 및/또는 서열번호: 9로 나타낸 서열에 대해 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 제 2 결합 도메인, 특히 경쇄 가변 영역 (LCVR)의 결합 도메인.

a. 서열번호: 7, 서열번호: 20 또는 서열번호: 21로 나타낸 아미노산 서열을 함유하는 제 1 결합 도메인, 특히 중쇄 가변 영역 (HCVR)의 결합 도메인, 및/또는 아미노산 서열번호: 8로 나타낸 서열을 함유하는 제 2 결합 도메인, 특히 경쇄 가변 영역 (LCVR)의 결합 도메인; 또는

b. 서열번호: 7, 서열번호: 20 또는 서열번호: 21로 나타낸 아미노산 서열을 함유하는 제 1 결합 도메인, 특히 중쇄 가변 영역 (HCVR)의 결합 도메인, 및/또는 아미노산 서열번호: 9로 나타낸 서열을 함유하는 제 2 결합 도메인, 특히 경쇄 가변 영역 (LCVR)의 결합 도메인.

일 구현예에서, 본 발명은 이전의 구현예의 어떤 것의 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편, 특히 인간화된 모노클로날 항체 또는 그의 기능성 단편, 특히 인간화된 항체를 제공하고, 이 항체 포유류, 특히 인간 타우 단백질 또는 그의 단편 상의 포스포-에피토프를 인식하고 그것에 특이적으로 결합하고, 병리적 단백질 타우 이형태체에 결합하지만, 일 구현예에서, 상응하는 비인산화된 에피토프 및/또는 비-관련 에피토프에 결합하지 않고, 상기 항체는 추가로, 중쇄 불변 영역 및 경쇄 불변 영역, 특히 서열번호: 14-17로 나타낸 중쇄 불변 영역 및 서열번호: 18로 나타낸 경쇄 불변 영역을 포함한다.

일 구현예에서 이전의 구현예의 어떤 것에 따른 상기 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편은 힌지(hinge) 영역 중 돌연변이, 특히 Fab 아암 교환을 방지하고 이중특이적 항체의 발생을 방지하는 힌지 영역 중 돌연변이를 갖는 중쇄 불변 영역을 포함한다. 특정한 구현예에서, 중쇄 힌지 영역은 위치 228 (S228P)에서 Ser에서 Pro로의 교환을 포함한다.

일 구현예에서 이전의 구현예의 어떤 것에 따른 상기 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편은 C-말단에서 변형 (예를 들면, 결실 또는 돌연변이)을 갖는 중쇄 불변 영역을 포함한다. 특정한 구현예에서, 중쇄는 C-말단 라이신 (des-K)의 결실을 포함한다. 불변 영역의 Fc 영역의 이러한 C-말단 라이신 (EU 넘버링 시스템에 따른 잔기 447)은, 예를 들면, 항체의 정제 동안에 또는 항체를 인코딩하는 핵산의 재조합 조작에 의해 제거될 수 있다. 이러한 돌연변이는 항체 생산 세포 예컨대, CHO 세포에 의해 C-말단 라이신의 랜덤 효소 절단을 방지한다.

또 하나의 구현예에서, 이전의 구현예의 어떤 것에 따른 상기 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편은 C-말단에서 변형 (예를 들면, 결실 또는 돌연변이) 없이 중쇄 불변 영역을 포함한다. 특정한 구현예에서, 중쇄 불변 영역은 C-말단 라이신 (중쇄 불변 영역의 C-말단에서의 라이신)을 포함한다. 이와 같이, 본 발명에 따른 항체는 K447를 갖고, 모든 K447가 제거되거나 제거된 항체, 또는 K447 잔기가 있거나 없는 항체의 혼합물을 포함할 수 있다.

본 발명의 일 구현예에서, 이전의 구현예의 어떤 것의 결합 펩타이드는 항체, 특히 -IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 아이소타입의 항체, 특히 폴리클로날 항체, 모노클로날 항체, 키메라 항체, 인간화된 항체 또는 완전 인간 항체이다. 본 발명의 일 구현예에서, 이전의 구현예의 어떤 것의 결합 펩타이드는 항체, 특히 항체 중 위치 297 (EU 넘버링 시스템)에서 아스파라긴 내지 글리신 치환을 갖는 IgG1 N297G 아이소타입의 항체, 특히 폴리클로날 항체, 모노클로날 항체, 키메라 항체, 인간화된 항체 또는 완전 인간 항체의 Fc 영역이다.

본 발명의 하나의 구현예는 이전의 구현예의 임의의 하나의 결합 펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다.

일 구현예에서, 상기 폴리뉴클레오타이드는 중쇄 가변 영역 (HCVR)의 상보성 결정 영역 (CDRs) 1, 2 및 3을 나타내는 서열번호: 1 내지 3을 포함하는 항체 가변 영역을 인코딩하는 뉴클레오타이드를 포함하는 핵산 분자를 포함한다.

또 하나의 구현예에서, 상기 폴리뉴클레오타이드는 경쇄 가변 영역 (LCVR)의 상보성 결정 영역 (CDRs) 1, 2 및 3을 나타내는 서열번호: 4-6을 포함하는 항체 가변 영역을 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 분자를 포함한다.

또 하나의 구현예에서, 상기 폴리뉴클레오타이드는 경쇄 가변 영역 (LCVR)의 상보성 결정 영역 (CDRs) 1, 2 및 3을 나타내는 서열번호: 10, 5 및 6을 포함하는 항체 가변 영역을 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 분자를 포함한다.

일 구현예에서, 본 발명은 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 핵산 분자를 포함하는 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다:

a. 서열번호: 11에서 묘사된 뉴클레오타이드 서열 및/또는 서열번호: 12에서 묘사된 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 분자; 또는

b. 서열번호: 11로 나타낸 서열에 대해 적어도 85% 서열 상동성을 갖는 뉴클레오타이드 서열 및/또는 서열번호: 12로 나타낸 서열에 대해 적어도 85% 서열 상동성을 갖는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 분자; 또는

c. 서열번호: 11로 나타낸 서열에 대해 적어도 90% 서열 상동성을 갖는 뉴클레오타이드 서열 및/또는 서열번호: 12로 나타낸 서열에 대해 적어도 90% 서열 상동성을 갖는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 분자; 또는

d. 서열번호: 11로 나타낸 서열에 대해 적어도 95% 서열 상동성을 갖는 뉴클레오타이드 서열 및/또는 서열번호: 12로 나타낸 서열에 대해 적어도 95% 서열 상동성을 갖는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 분자; 또는

e. 서열번호: 11로 나타낸 서열에 대해 적어도 98% 서열 상동성을 갖는 뉴클레오타이드 서열 및/또는 서열번호: 12로 나타낸 서열에 대해 적어도 98% 서열 상동성을 갖는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 분자; 또는;

f. a) 내지 e)의 임의의 것의 핵산 분자를 혼성화하는 상보적 가닥의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 분자;

g. 유전자 암호의 축퇴에 의해 a) 내지 f)의 임의의 것에서 규정된 뉴클레오타이드 서열로부터 벗어난 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 분자.

a. 서열번호: 11에서 묘사된 뉴클레오타이드 서열 및/또는 서열번호: 13에서 묘사된 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 분자; 또는

b. 서열번호: 11로 나타낸 서열에 대해 적어도 85% 서열 상동성을 갖는 뉴클레오타이드 서열 및/또는 서열번호: 13로 나타낸 서열에 대해 적어도 85% 서열 상동성을 갖는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 분자; 또는

c. 서열번호: 11로 나타낸 서열에 대해 적어도 90% 서열 상동성을 갖는 뉴클레오타이드 서열 및/또는 서열번호: 13로 나타낸 서열에 대해 적어도 90% 서열 상동성을 갖는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 분자; 또는

d. 서열번호: 11로 나타낸 서열에 대해 적어도 95% 서열 상동성을 갖는 뉴클레오타이드 서열 및/또는 서열번호: 13로 나타낸 서열에 대해 적어도 95% 서열 상동성을 갖는 뉴클레오타이드을 포함하는 핵산 분자; 또는

e. 서열번호: 11로 나타낸 서열에 대해 적어도 98% 서열 상동성을 갖는 뉴클레오타이드 서열 및/또는 서열번호: 13로 나타낸 서열에 대해 적어도 98% 서열 상동성을 갖는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 분자; 또는;

일 구현예에서, 본 발명은 서열번호: 11로 나타낸 뉴클레오타이드 서열 및/또는 서열번호: 12로 나타낸 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 분자를 포함하는 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다.

일 구현예에서, 본 발명은 서열번호: 11로 나타낸 뉴클레오타이드 서열 및/또는 서열번호: 13로 나타낸 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 분자를 포함하는 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다.

본 발명은 추가로, 인간화된 항체 또는 그의 단편을 제공하고, 이것은 서열번호: 7의 중쇄 가변 영역 (HCVR) 및 서열번호: 14-17의 중쇄 불변 영역을 포함한다.

본 발명은 추가로, 인간화된 항체 또는 그의 단편을 제공하고, 이것은 서열번호: 20 또는 서열번호: 21의 중쇄 가변 영역 (HCVR)을 포함한다.

본 발명은 추가로, 인간화된 항체 또는 그의 단편을 제공하고, 이것은 서열번호: 20 또는 서열번호: 21의 중쇄 가변 영역 (HCVR), 및 서열번호: 14-17의 중쇄 불변 영역을 포함한다.

본 발명은 추가로, 인간화된 항체 또는 그의 단편을 제공하고, 이것은 서열번호: 24, 서열번호: 25, 서열번호: 26, 서열번호: 27, 서열번호: 28, 서열번호: 29, 서열번호: 30, 또는 서열번호: 31의 중쇄를 포함한다.

본 발명은 추가로, 인간화된 항체 또는 그의 단편을 제공하고, 이것은 서열번호: 8의 경쇄 가변 영역 (LCVR) 및 서열번호: 18의 경쇄 불변 영역을 포함한다.

본 발명은 추가로, 인간화된 항체 또는 그의 단편을 제공하고, 이것은 서열번호: 9의 경쇄 가변 영역 (LCVR) 및 서열번호:18의 경쇄 불변 영역을 포함한다.

본 발명은 추가로, 인간화된 항체 또는 그의 단편을 제공하고, 이것은 서열번호: 22 또는 서열번호: 23의 경쇄를 포함한다.

본 발명은 추가로, 인간화된 항체 또는 그의 단편을 제공하고, 이것은 서열번호: 24, 서열번호: 25, 서열번호: 26, 서열번호: 27, 서열번호: 28, 서열번호: 29, 서열번호: 30, 또는 서열번호: 31의 중쇄, 및 서열번호: 22 또는 서열번호: 23의 경쇄를 포함한다.

본 발명은 추가로, 인간화된 항체 또는 그의 단편을 제공하고, 이것은 서열번호: 7의 중쇄 가변 영역 (HCVR) 및 서열번호: 14-17의 중쇄 불변 영역 및 서열번호: 8의 경쇄 가변 영역 (LCVR) 및 서열번호: 18의 경쇄 불변 영역을 포함한다.

본 발명은 추가로, 인간화된 항체 또는 그의 단편을 제공하고, 이것은 서열번호: 7의 중쇄 가변 영역 (HCVR) 및 서열번호: 14-17의 중쇄 불변 영역 및 서열번호: 9의 경쇄 가변 영역 (LCVR) 및 서열번호: 18의 경쇄 불변 영역을 포함한다.

본 발명은 추가로, 인간화된 항체 또는 그의 단편을 제공하고, 이것은 서열번호: 20 또는 서열번호: 21의 중쇄 가변 영역 (HCVR), 및 서열번호: 14-17의 중쇄 불변 영역, 및 서열번호: 8의 경쇄 가변 영역 (LCVR) 또는 서열번호: 9, 및 서열번호: 18의 경쇄 불변 영역을 포함한다.

일 구현예에서, 본 발명은 이전의 구현예의 임의의 하나의 인간화된 항체를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다.

다양한 구현예에서 기재된 바와 같은 본 발명에 따른 키메라 또는 인간화된 항체는, 포유류, 특히 인간 타우 단백질 또는 그의 단편 상의 포스포-에피토프을 인식하고 그것에 특이적으로 결합하고, 특히 응집된 타우 단백질 상의 포스포-에피토프, 특히 병리적 단백질 타우 이형태체에 결합하지만, 상응하는 비인산화된 에피토프 및/또는 비-관련 에피토프에 결합하지 않고, 여기서 상기 항체는 가용성 및 불용성 타우 단백질에 대해 높은 결합 친화도를 가지며, 특히 뇌에서, 특히 하기로 가용성 및 불용성 타우 수준을 조절한다:

(c) 적어도 100 nM, 특히 적어도 80 nM, 특히 적어도 70 nM, 특히 적어도 50 nM, 특히 적어도 10 nM, 특히 적어도 8 nM, 특히 적어도 5 nM, 특히 적어도 2 nM, 특히 적어도 1 nM, 특히 적어도 500 pM, 특히 적어도 400 pM, 특히 적어도 300 pM, 특히 적어도 200 pM, 특히 적어도 100 pM, 특히 적어도 50 pM의 해리 상수 및/또는

(d) 10⁴ M^-1s^-1또는 초과, 특히 3 - 5 x 10⁴ M^-1s^-1또는 초과, 특히 10⁵ M^-1s^-1또는 초과; 특히 0.5 - 9 x 10⁵ M^-1s^-1또는 초과; 특히 10⁶ M^-1s^-1또는 초과, 특히 1 - 4 x 10⁶ M^-1s^-1또는 초과, 특히 10⁷ M^-1s^-1또는 초과의 결합 속도 상수.

어떤 구현예에서, 본 발명은 다양한 구현예에서 기재된 바와 같은 본 발명에 따른 키메라 또는 인간화된 항체에 관한 것이고, 이러한 항체는 포유류, 특히 인간 타우 단백질 또는 그의 단편 상의 포스포-에피토프를 인식하고 그것에 특이적으로 결합하고, 특히 병리적 단백질 타우 이형태체에 결합하지만, 일 구현예에서, 상응하는 비인산화된 에피토프 및/또는 비-관련 에피토프에 결합하지 않고, 여기서 상기 항체는 적어도 100 nM의 해리 상수 및 10⁵M^-1s^-1또는 초과의 결합 속도 상수, 특히 적어도 80 nM의 해리 상수 및 10⁵M^-1s^-1또는 초과의 결합 속도 상수, 특히 적어도 70 nM의 해리 상수 및 10⁵M^-1s^-1또는 초과의 결합 속도 상수, 특히 적어도 10 nM의 해리 상수 및 10⁵M^-1s^-1또는 초과의 결합 속도 상수, 특히 적어도 200 pM의 해리 상수 및 10⁵M^-1s^-1또는 초과의 결합 속도 상수, 특히 적어도 100 pM의 해리 상수 및 10⁵M^-1s^-1또는 초과의 결합 속도 상수로 높은 결합 친화도를 갖는다.

본 발명의 다양한 구현예에서, 다양한 구현예에서 기재된 바와 같은 본 발명에 따른 키메라 또는 인간화된 항체는 특이적으로 포유류, 특히 인간 타우 단백질, 특히 미세소관-연관된 단백질 타우, 특히 응집된 미세소관-연관된 및 과인산화된 단백질 타우 상의 포스포-에피토프를 인식하고 그것에 결합하고, 이러한 단백질은 쌍으로 된 나선 필라멘트 (PHF)에 존재하고, 이것은 신경섬유 엉킴, 신경망 변성 및 퇴행성 신경염에서 두드러진 구조이고, but, 일 구현예에서, 상응하는 비인산화된 에피토프 및/또는 비-관련 에피토프에 결합하지 않는다.

따라서 이전의 구현예의 임의의 하나에 따른 키메라 또는 인간화된 항체는 포유류 또는 인간의 뇌, 특히 뇌 피질 및/또는 해마에서, 증가된 수준의 가용성 타우 단백질 및/또는 가용성 인산화된 타우 단백질을 함유하는 총 가용성 타우 단백질, 특히 가용성 인산화된 타우 단백질의 수준을 감소시키기 위해 사용될 수 있다.

이전의 구현예의 임의의 하나에 따른 키메라 또는 인간화된 항체는 쌍으로 된 나선 필라멘트의 수준을 감소시키기 위해 또한 사용될 수 있고, 상기 필라멘트는 포유류 또는 인간의 뇌, 특히 뇌 피질 및/또는 해마에서 과인산화된 타우 단백질 (pTau PHF)을 함유하고, 상기 필라멘트는 증가된 수준의 상기 pTau 쌍으로 된 나선 필라멘트 (pTau PHF)을 함유한다.

포유류 또는 인간의 뇌, 특히 뇌 피질 및/또는 해마에서, 상기 포유류 또는 인간에서 타우-단백질-연관된 질환, 장애 또는 병태의 원인인 증가된 수준의 상기 타우 단백질 변이체를 함유하는,총 가용성 타우 단백질 및/또는 가용성 인산화된 타우 단백질 및/또는 pTau 쌍으로 된 나선 필라멘트 (pTau PHF) 의 수준 감소는 그와 같은 타우-단백질-연관된 질환, 장애 또는 병태와 연관된 증상의 개선 및/또는 완화로 될 수 있다.

따라서 이전의 구현예의 임의의 하나에 따른 키메라 또는 인간화된 항체는 타우-단백질-연관된 질환, 장애 또는 병태의 진행을 느리게 하거나 멈추기 위해 요법, 특히 인간 요법(human therapy)에서 사용될 수 있다.

이전의 구현예의 임의의 하나에 따른 키메라 또는 인간화된 항체는 하기와 연관된 증상을 개선 또는 완화하기 위해 요법, 특히 인간 요법에서 추가로 사용될 수 있는데, 하기는: 타우-단백질-연관된 질환, 장애 또는 병태 예컨대, 이성, 상황 판단, 기억 용량, 학습, 특수 운항 등을 포함하는 인지 기능의 손상 또는 손실이다.

일 구현예에서, 본 발명은 타우병증, 타우-단백질-연관된 질환 및 장애의 그룹의 예방 또는 치료에 사용하거나, 타우병증과 연관된 증상을 완화하기 위한, 이전의 구현예의 임의의 하나에 따른 키메라 또는 인간화된 항체에 관한 것이다.

일 구현예에서, 본 발명은 타우병증을 앓고 있는 포유류에서 인지 기억 용량을 유지 또는 증가시키기 위한, 이전의 구현예의 임의의 하나에 따른 키메라 또는 인간화된 항체에 관한 것이다.

이전의 구현예에 따른 펩타이드 또는 항체의 뇌 상의 타우 매듭 및 pTau에의 결합은, 각각이 실시예에서 기재된 바와 같이, 선택된 뇌 섹션의 단백질 면역-반응성 시험을 적용하고 뇌 균질물의 웨스턴 블랏팅(Western blotting)에 의해 결정될 수 있다.

또 하나의 구현예에서, 본 발명은 이전의 구현예의 임의의 하나 또는 이들의 조합에 따른 키메라 또는 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편, 또는 폴리뉴클레오타이드를, 치료적으로 효과적인 양으로, 임의로 약제학적으로 허용가능한 담체(carrier)와 함께 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.

일 구현예에서, 이전의 구현예의 임의의 하나, 또는 이들의 조합에 따른 키메라 또는 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편, 또는 폴리뉴클레오타이드, 또는 약제학적 조성물은 신경퇴행성 장애 예컨대 타우병증을 포함하는 타우-단백질-연관된 질환 또는 장애의 증상의 치료 또는 완화를 위해 요법, 특히 인간 요법에서 사용된다.

따라서 이전의 구현예의 임의의 하나에 따른 키메라 또는 인간화된 항체 및/또는 약제학적 조성물은 상기 항체 및/또는 약제학적 조성물의 그와 같은 질환 또는 병태를 앓고 있는 동물, 특히 포유류, 특히 인간에의 투여시 타우-단백질-연관된 질환, 장애 또는 병태의 진행을 느리게 하거나 멈추게 하기 위해 사용될 수 있다.

이전의 구현예의 임의의 하나에 따른 키메라 또는 인간화된 항체 및/또는 약제학적 조성물은 상기 항체 및/또는 약제학적 조성물의 그와 같은 질환 또는 병태를 앓고 있는 동물, 특히 포유류, 특히 인간에의 투여시, 타우-단백질-연관된 질환, 장애 또는 병태와 연관된 증상 예컨대, 이성, 상황 판단, 기억 용량, 학습, 특수 운항 등을 포함하는 인지 기능의 손상 또는 손실을 개선 또는 완화하기 위해 추가로 사용될 수 있다.

일 구현예에서, 이전의 구현예의 임의의 하나, 또는 이들의 조합에 따른 키메라 또는 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편, 또는 폴리뉴클레오타이드, 또는 약제학적 조성물은, 질환 및 장애의 예방 또는 치료에 사용되고, 상기 질환 또는 장애는 하기에 의해 야기되거나 그것과 연관되어 있는데, 하기는: 신경섬유 병변의 형성, 알츠하이머병, 크로이펠츠-야콥병, 권투선수 치매, 다운 증후군, 게르스트만-슈트로이슬러-샤잉커 질환, 봉입체 근염, 및 프리온 단백질 뇌 아밀로이드 혈관병증를 비제한적으로 포함하는, 타우 및 아밀로이드 병리의 공존을 보여주는 질환 또는 장애를 포함하는 신경퇴행성 질환 또는 장애의 이질적인 그룹을 포함하는 타우병증에서의 두드러진 뇌 병리, 외상성 뇌 부상 및 다음을 비제한적으로 포함하는데, 다음은: 뚜렷이 다른 아밀로이드 병리를 보여주지 않는 추가의 질환 또는 장애: 괌의 근위축 측삭 경화증/피칸슨증-치매 복합증, 신경섬유 엉킴을 갖는 비-괌사람 운동 뉴런 질환, 은친화성 입자 치매, 피질기저 퇴행증, 석회화를 갖는 확산 신경섬유 엉킴, 염색체 17에 연결된 파키슨증을 갖는 전측두엽 치매, 할러포르덴-슈파츠 질환, 다중 시스템 위축증, 니만-피크병, 유형 C, 팔리도-폰토-니그랄 변성, 피크병, 진행성 피질하 신경교증, 진행성 핵상 마비, 아급성 경화 범뇌염, 신경섬유원매듭 기원 치매, 뇌염후 피칸슨증, 근긴장성 이영양증이다.

일 구현예에서, 이전의 구현예의 임의의 하나, 또는 이들의 조합에 따른 키메라 또는 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편, 또는 폴리뉴클레오타이드, 또는 약제학적 조성물은 알츠하이머병의 치료에 사용된다.

본 발명의 일 구현예에서, 가용성 및/또는 불용성 타우 수준을, 특히 동물, 특히 포유류 또는 인간의 뇌, 특히 뇌 피질 및/또는 해마에서 조절하는 방법이 제공되고, 상기 방법은 상기 동물, 특히 상기 포유류 또는 인간에게, 이전의 구현예의 임의의 하나, 또는 이들의 조합에 따른 키메라 또는 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편, 또는 폴리뉴클레오타이드, 또는 약제학적 조성물을 투여하는 것을 포함한다.

일 측면에서, 조절은 증가된 수준의 가용성 타우 단백질 및/또는 가용성 인산화된 타우 단백질을 함유하는 가용성 타우 단백질, 특히 가용성 인산화된 타우 단백질의 수준을, 동물, 특히 포유류 또는 인간의 뇌, 특히 뇌 피질 및/또는 해마에서 감소시키는 것에 관한 것이다.

본 발명의 일 구현예에서, 불용성 타우 단백질, 특히 쌍으로 된 나선 필라멘트의 수준을 감소시키는 방법이 제공되고, 상기 필라멘트는 동물, 특히 포유류 또는 인간의 뇌, 특히 뇌 피질 및/또는 해마에서 과인산화된 타우 단백질 (pTau PHF) 를 함유하고, 증가된 수준의 불용성 타우 단백질, 특히 pTau 쌍으로 된 나선 필라멘트 (pTau PHF)를 함유하며, 상기 방법은 상기 동물, 특히 상기 포유류 또는 인간에게, 이전의 구현예의 임의의 하나, 또는 이들의 조합에 따른 키메라 또는 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편, 또는 폴리뉴클레오타이드, 또는 약제학적 조성물을 투여하는 것을 포함한다.

일 구현예에서, 본 발명은 동물, 특히 포유류 또는 인간 타우-단백질-연관된 질환, 장애 또는 병태의 진행을 느리게 하거나 멈추는 방법에 관한 것이고, 상기 방법은 상기 동물, 특히 그와 같은 질환 또는 병태를 앓고 있는 상기 포유류 또는 인간에게, 이전의 구현예의 임의의 하나, 또는 이들의 조합에 따른 키메라 또는 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편, 또는 폴리뉴클레오타이드, 또는 약제학적 조성물을 투여하는 것을 포함한다.

일 구현예에서, 본 발명은 동물, 특히 포유류 또는 인간에서 증상을 개선 또는 완화하는 방법에 관한 것이고, 그 증상은 타우-단백질-연관된 질환, 장애 또는 병태 예컨대, 이성, 상황 판단, 기억 용량, 학습, 특수 운항, 등을 포함하는 인지 기능의 손상 또는 손실과 연관되어 있고, 상기 방법은 상기 동물, 특히 그와 같은 질환 또는 병태를 앓고 있는 상기 포유류 또는 인간에게, 이전의 구현예의 임의의 하나, 또는 이들의 조합에 따른 키메라 또는 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편, 또는 폴리뉴클레오타이드, 또는 약제학적 조성물을 투여하는 것을 포함한다.

일 구현예에서, 본 발명은 타우병증을 앓고 있는 포유류에서 인지 기억 용량을 유지 또는 증가시키는 방법에 관한 것이다.

본 발명의 또 하나의 구현예에서, 타우-단백질-연관된 질환 또는 장애의 치료 방법이 제공되고, 상기 질환 또는 장애는 신경-퇴행성 질환 또는 장애 예컨대 타우병증을 포함하고, 상기 방법은 동물, 특히 포유류에게, 특히 그와 같은 질환 또는 장애를 앓고 있는 인간에게, 이전의 구현예의 임의의 하나, 또는 이들의 조합에 따른 키메라 또는 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편, 또는 폴리뉴클레오타이드, 또는 약제학적 조성물을 투여하는 것을 포함한다.

본 발명의 일 구현예에서, 질환 및 장애의 치료 방법이 제공되고, 상기 질환 또는 장애는 하기에의해 야기되거나 하기와 연관되어 있는데, 하기는: 신경섬유 병변의 형성, 알츠하이머병, 크로이펠츠-야콥병, 권투선수 치매, 다운 증후군, 게르스트만-슈트로이슬러-샤잉커 질환, 봉입체 근염, 및 프리온 단백질 뇌 아밀로이드 혈관병증를 비제한적으로 포함하는, 타우 및 아밀로이드 병리의 공존을 보여주는 질환 또는 장애를 포함하는 신경퇴행성 질환 또는 장애의 이질적인 그룹을 포함하는 타우병증에서의 두드러진 뇌 병리, 외상성 뇌 부상 및 다음을 비제한적으로 포함하는, 뚜렷이 다른 아밀로이드 병리를 보여주지 않는 추가의 질환 또는 장애이며, 다음은: 괌(Guam)의 근위축 측삭 경화증/피칸슨증-치매 복합증, 신경섬유 엉킴을 갖는 비-괌사람 운동 뉴런 질환, 은친화성 입자 치매, 피질기저 퇴행증, 석회화를 갖는 확산 신경섬유 엉킴, 염색체 17에 연결된 파키슨증을 갖는 전측두엽 치매, 할러포르덴-슈파츠 질환, 다중 시스템 위축증, 니만-피크병, 유형 C, 팔리도-폰토-니그랄 변성, 피크병, 진행성 피질하 신경교증, 진행성 핵상 마비, 아급성 경화 범뇌염 신경섬유원매듭 기원 치매, 뇌염후 피칸슨증, 근긴장성 이영양증, 상기 방법은 동물, 특히 포유류에게, 특히 그와 같은 질환 또는 장애를 앓고 있는 인간에게, 이전의 구현예의 임의의 하나에 따른 키메라 또는 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편, 또는 폴리뉴클레오타이드, 약제학적 조성물, 또는 이들의 조합을 투여하는 것을 포함한다.

본 발명의 또 하나의 구현예에서, 상기 동물 또는 인간에게 이전의 구현예의 임의의 하나, 또는 이들의 조합에 따른 키메라 또는 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편, 또는 폴리뉴클레오타이드, 또는 약제학적 조성물을 투여하여, 동물, 특히 신경퇴행성 장애 예컨대 타우병증을 앓고 있는 포유류 또는 인간에서 수동적인 면역 반응을 유도하는 방법이 제공된다.

본 발명의 또 하나의 구현예에서, 이전의 구현예의 임의의 하나에 따른 키메라 또는 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편의 타우 단백질의 에피토프에의 면역특이적 결합을 샘플 또는 동일반응계(in situ)에 검출하는 것을 포함하는, 환자에서 타우-단백질-연관된 질환, 장애 또는 병태를 진단하는 방법이 제공되고, 상기 방법은:

a. 샘플 또는 의심나는 구체적인 신체 부분 또는 신체 영역이 이전의 구현예의 임의의 하나에 따른 키메라 또는 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편과 접촉한 타우 단백질을 함유하도록 하는 단계로서, 상기 항체 또는 그의 단편은 타우 단백질의 에피토프에 결합하는 단계;

b. 상기 항체, 또는 그의 기능성 단편이 상기 타우 단백질에 결합하여 면역학적 복합체를 형성하는 단계;

c. 상기 면역학적 복합체의 형성을 검출하는 단계; 및

d. 샘플 또는 구체적인 신체 부분 또는 영역에서 면역학적 복합체의 존재 또는 부재를 타우 단백질의 존재 또는 부재와 관련짓는 단계를 포함한다.

본 발명의 또 하나의 구현예에서, 이전의 구현예의 임의의 하나에 따른 키메라 또는 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편의 타우 단백질의 에피토프에의 면역특이적 결합을 샘플 또는 동일반응계(in situ)에 검출하는 것을 포함하는, 환자에서 타우-단백질-연관된 질환, 장애 또는 병태에 대한 소인을 진달하는 방법이 제공되고, 상기 방법은:

a. 샘플 또는 의심나는 구체적인 신체 부분 또는 신체 영역이 이전의 구현예의 임의의 하나에 따른 키메라 또는 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편과 접촉한 타우 항체를 함유하도록 하는 단계로서, 상기 항체 또는 그의 단편은 타우 단백질의 에피토프에 결합하는 단계;

b. 상기 항체, 또는 그의 기능성 단편이 타우 항원에 결합하도록 하여 면역학적 복합체를 형성하는 단계;

c. 상기 면역학적 복합체의 형성을 검출하는 단계; 및

d. 샘플 또는 구체적인 신체 부분 또는 영역에서 면역학적 복합체의 존재 또는 부재를 타우 항원의 존재 또는 부재와 관련짓는 단계;

e. 상기 면역학적 복합체의 양을 정상 대조군 값과 비교하는 단계를 포함하고,

여기서 정상 대조군 값과 비교된 상기 응집물의 양의 증가는, 상기 환자가 타우- 단백질-연관된 질환 또는 병태를 앓고 있거나 그것을 발단시킬 위험이 있다는 것을 나타낸다.

본 발명의 일 구현예에서, 이전의 구현예의 임의의 하나에 따른 키메라 또는 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편에 의한 치료 다음의 환자에서 최소 잔류 질환을 모니터링하는 방법이 제공되고, 여기서 상기 방법은:

c. 상기 면역학적 복합체의 형성을 검출하는 단계; 및

여기서 정상 대조군 값과 비교된 상기 응집물의 양의 증가는, 상기 환자가 여전히 최소 잔류 질환을 앓고 있다는 것을 나타낸다.

일 구현예에서, 하기를 포함하는, 이전의 구현예의 임의의 하나에 따른 키메라 또는 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편으로 치료될 환자의 반응성을 예측하는 방법이 제공되는데, 상기 방법은:

a. 샘플 또는 의심나는 구체적인 신체 부분 또는 신체 영역이 이전의 구현예의 임의의 하나에 따른 키메라 또는 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편과 접촉한 타우 항체를 함유하도록 하는 것으로서, 상기 항체 또는 그의 단편은 타우 단백질의 에피토프에 결합하고;

b. 상기 항체, 또는 그의 기능성 단편이 타우 항원에 결합하도록 하여 면역학적 복합체를 형성하고;

c. 상기 면역학적 복합체의 형성을 검출하고; 및

d. 샘플 또는 구체적인 신체 부분 또는 영역에서 면역학적 복합체의 존재 또는 부재를 타우 항원의 존재 또는 부재와 관련짓고;

e. 치료의 개시 전 및 후에 상기 면역학적 복합체의 양을 비교하는 것을 포함하고,

여기서 상기 응집물의 양의 증가는, 상기 환자가 치료에 대한 반응이 있는 높은 잠재력을 갖는다는 것을 나타낸다.

또 하나의 구현예에서, 본 발명은 이전의 구현예의 임의의 하나에 따른 키메라 또는 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편을 포함하는, 타우-단백질-연관된 질환, 장애 또는 병태의 검출 및 진단용 시험 키트에 관한 것이다.

일 구현예에서 상기 시험 키트 이전의 구현예의 임의의 하나에 따른 하나 이상의 키메라 또는 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편을 보유하는 용기, 및 면역학적 복합체를 형성하기 위해 타우 항원에 결합하고 상기 면역학적 복합체의 형성을 검출하기 위해 항체를 사용하고 이로써 면역학적 복합체의 존재 또는 부재가 타우 항원의 존재 또는 부재와 관련이 있다는 설명을 포함한다.

또 하나의 구현예에서, 본 발명은 세포주, 특히 박테리아 세포주, 특히 이전의 구현예의 임의의 하나에 따른 키메라 또는 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편을 생산하는 E. 콜라이 세포주에 관한 것이다.

일 구현예에서, 본 발명은 세포주에 관한 것이고, 이것은 DSM 25743으로서 2012년 3월 6일에 기탁된 에스케리치아 콜리 2B6A10C11-H이다.

일 구현예에서, 본 발명은 세포주에 관한 것이고, 이것은 DSM 25744으로서 2012년 3월 6일 기탁된 에스케리치아 콜리 2B6A10C11-L이다.

일 구현예에서, 본 발명은 DSM 25745로서 2012년 3월 6일에 기탁된 에스케리치아 콜리 3A8A12G7-H인 세포주에 관한 것이다.

일 구현예에서, 본 발명은 세포주에 관한 것이고, 이것은 DSM 25746으로서 2012년 3월 6일에 기탁된 에스케리치아 콜리 3A8A12G7-L이다.

도 1은 의 상동성을 갖는 펩타이드의 비-인산화된 버전(T4.6)에는 결합하지 않고 pTau 백신 펩타이드(T4.5)에 대한 인간화 항-pTau 항체 hACI-36-2B6-Ab1 및 hACI-36-3A8-Ab1의 결합을 나타낸다.
도 2는 인간화된 항-pTau 항체 hACI-36-2B6-Ab1로 염색된 20월령 타우 유전자이식(biGT) 마우스의 뇌에서의 타우 매듭을 나타낸다. 염색은 해마(B)에서 가시적인 신경망 변성의 염색과 더불어 피질(A) 및 해마(B)에서의 타우 매듭을 나타낸다.
도 3은 인간화된 항-pTau 항체 hACI-36-3A8-Ab1로 염색된 20월령 타우 유전자이식(biGT) 마우스의 뇌에서의 타우 매듭을 나타낸다. 염색은 해마(B)에서 가시적인 신경망 변성의 염색과 더불어 피질(A) 및 해마(B)에서의 타우 매듭을 나타낸다.
도 4는 hACI-36-2B6-Ab1의 경쇄를 나타낸다.
도 5는 hACI-36-3A8-Ab1의 경쇄를 나타낸다.
도 6은 hACI-36-2B6-Ab1 및 hACI-36-3A8-Ab1의 중쇄를 나타낸다.
서열
서열번호: 1은 하기에 의해 생산된 인간화된 항체 hACI-36-3A8-Ab1 및 hACI-36-2B6-Ab1 의 중쇄 가변 영역 (HCVR)의 CDR1의 아미노산 서열을 묘사하는데, 하기는 각각 에스케리치아 콜리 3A8A12G7-H(DSM 25745로서 2012년 3월 6일에 기탁됨) 및 에스케리치아 콜리 2B6A10C11-H(DSM 25743로서 2012년 3월 6일에 기탁됨)이다.
서열번호: 2는 하기에 의해 생산된 인간화된 항체 hACI-36-3A8-Ab1 및 hACI-36-2B6-Ab1 의 중쇄 가변 영역(HCVR)의 CDR2 의 아미노산 서열을 묘사하는데, 하기는 각각 에스케리치아 콜리 3A8A12G7-H(DSM 25745로서 2012년 3월 6일에 기탁됨) 및 에스케리치아 콜리 2B6A10C11-H(DSM 25743로서 2012년 3월 6일에 기탁됨)이다.
서열번호: 3은 하기에 의해 생산된 인간화된 항체 hACI-36-3A8-Ab1 및 hACI-36-2B6-Ab1의 중쇄 가변 영역(HCVR)의 CDR3의 아미노산 서열을 묘사하는데, 하기는 각각 에스케리치아 콜리 3A8A12G7-H(DSM 25745로서 2012년 3월 6일에 기탁됨) 및 에스케리치아 콜리 2B6A10C11-H(DSM 25743로서 2012년 3월 6일에 기탁됨)이다.
서열번호: 4는 하기에 의해 생산된 인간화된 항체 hACI-36-3A8-Ab1 의 경쇄 가변 영역(LCVR)의 CDR1의 아미노산 서열을 묘사하는데, 하기는 각각 에스케리치아 콜리 3A8A12G7-L(2012년 3월 6일에 기탁됨)이다.
서열번호: 5는 하기에 의해 생산된 인간화된 항체 hACI-36-3A8-Ab1 및 hACI-36-2B6-Ab1의 경쇄 가변 영역(LCVR)의 CDR2의 아미노산 서열을 묘사하는데, 하기는 각각 에스케리치아 콜리 3A8A12G7-L(DSM 25746로서 2012년 3월 6일에 기탁됨) 및 에스케리치아 콜리 2B6A10C11-L(DSM 25744로서 2012년 3월 6일에 기탁됨)이다.
서열번호: 6은 하기에 의해 생산된 인간화된 항체 hACI-36-3A8-Ab1 및 hACI-36-2B6-Ab1 의 경쇄 가변 영역(LCVR)의 CDR3의 아미노산 서열을 묘사하는데, 하기는 각각 에스케리치아 콜리 3A8A12G7-L(DSM 25746로서 2012년 3월 6일에 기탁됨) 및 에스케리치아 콜리 2B6A10C11-L(DSM 25744로서 2012년 3월 6일에 기탁됨)이다.
서열번호: 7은 하기에 의해 생산된 인간화된 항체 hACI-36-3A8-Ab1 및 hACI-36-2B6-Ab1 의 중쇄 가변 영역(HCVR)의 아미노산 서열을 묘사하는데, 하기는 각각 에스케리치아 콜리 3A8A12G7-H(DSM 25745로서 2012년 3월 6일에 기탁됨) 및 에스케리치아 콜리 2B6A10C11-H(DSM 25743로서 2012년 3월 6일에 기탁됨)이다.
서열번호: 8은 하기에 의해 생산된 인간화된 항체 hACI-36-3A8-Ab1 의 경쇄 가변 영역(LCVR)의 아미노산 서열을 묘사하는데, 하기는 각각 에스케리치아 콜리 3A8A12G7-L(DSM 25746로서 2012년 3월 6일에 기탁됨)이다.
서열번호: 9는 하기에 의해 생산된 인간화된 항체 hACI-36-2B6-Ab1의 경쇄 가변 영역(LCVR)의 아미노산 서열을 묘사하는데, 하기는 각각 에스케리치아 콜리 2B6A10C11-L(DSM 25744로서 2012년 3월 6일에 기탁됨)이다.
서열번호: 10은 하기에 의해 생산된 인간화된 항체 hACI-36-2B6-Ab1의 경쇄 가변 영역(LCVR)의 CDR1의 아미노산 서열을 묘사하는데, 하기는 각각 에스케리치아 콜리 2B6A10C11-L (DSM 25744로서 2012년 3월 6일에 기탁됨)이다.
서열번호: 11은 하기의 뉴클레오타이드 서열을 묘사하는데, 하기는: 하기에 의해 생산된 인간화된 항체 hACI-36-3A8-Ab1 의 중쇄 (H): 에스케리치아 콜리 3A8A12G7-H (DSM 25745로서 2012년 3월 6일에 기탁됨) 및 하기에 의해 생산된 인간화된 항체 hACI-36-2B6-Ab1 의 중쇄 (H): 에스케리치아 콜리 2B6A10C11-H (DSM 25743로서 2012년 3월 6일에 기탁됨)이다.
서열번호: 12는 하기에 의해 생산된 인간화된 항체 hACI-36-3A8-Ab1의 경쇄 (L)의 뉴클레오타이드 서열을 묘사하는데, 하기는: 에스케리치아 콜리 3A8A12G7-L (DSM 25746로서 2012년 3월 6일에 기탁됨)이다.
서열번호: 13은 하기에 의해 생산된 인간화된 항체 hACI-36-2B6-Ab1의 경쇄 (L)의 뉴클레오타이드 서열을 묘사하는데, 하기는: 에스케리치아 콜리 2B6A10C11-L (DSM 25744로서 2012년 3월 6일에 기탁됨)이다.
서열번호: 14는 하기의 CH1 중쇄 불변 영역 (HC)의 아미노산 서열을 묘사하는데, 하기는: 하기에 의해 생산된 인간화된 항체 hACI-36-3A8-Ab1의 중쇄: 에스케리치아 콜리 3A8A12G7-H(DSM 25745로서 2012년 3월 6일에 기탁됨) 및 하기에 의해 생산된 인간화된 항체 hACI-36-2B6-Ab1의 중쇄: 에스케리치아 콜리 2B6A10C11-H (DSM 25743로서 2012년 3월 6일에 기탁됨)이다.
서열번호: 15는 하기의 힌지 중쇄 불변 영역 (HC)의 아미노산 서열을 묘사하는데, 하기는: 하기에 의해 생산된 인간화된 항체 hACI-36-3A8-Ab1의 중쇄: 에스케리치아 콜리 3A8A12G7-H(DSM 25745로서 2012년 3월 6일에 기탁됨) 및 하기에 의해 생산된 인간화된 항체 hACI-36-2B6-Ab1의 중쇄: 에스케리치아 콜리 2B6A10C11-H (DSM 25743로서 2012년 3월 6일에 기탁됨)이다.
서열번호: 16은 하기의 CH2 중쇄 불변 영역(HC)의 아미노산 서열을 묘사하는데, 하기는: 하기에 의해 생산된 인간화된 항체 hACI-36-3A8-Ab1의 중쇄: 에스케리치아 콜리 3A8A12G7-H(DSM 25745로서 2012년 3월 6일에 기탁됨) 및 하기에 의해 생산된 인간화된 항체 hACI-36-2B6-Ab1의 중쇄: 에스케리치아 콜리 2B6A10C11-H (DSM 25743로서 2012년 3월 6일에 기탁됨)이다. 인간화된 항체 hACI-36-3A8-Ab1의 중쇄의 CH2 중쇄 불변 영역 (HC)의 아미노산 서열은 도 6C에서 또한 묘사된다.
서열번호: 17은 하기의 CH3 중쇄 불변 영역(HC)의 아미노산 서열을 묘사하는데, 하기는: 하기에서 생산된 인간화된 항체 hACI-36-3A8-Ab1의 중쇄: 에스케리치아 콜리 3A8A12G7-H(DSM 25745로서 2012년 3월 6일에 기탁됨) 및 하기에서 생산된 인간화된 항체 hACI-36-2B6-Ab1의 중쇄: 에스케리치아 콜리 2B6A10C11-H(DSM 25743로서 2012년 3월 6일에 기탁됨)이다. 서열번호: 17은 C-말단 라이신(des-K)의 결실을 갖는 인간화된 항체 hACI-36-3A8-Ab1의 중쇄의 CH3 중쇄 불변 영역(HC)의 아미노산 서열을 묘사한다.
서열번호: 18은 하기의 아미노산 서열을 묘사하는데, 하기는: 하기에 의해 생산된 인간화된 항체 hACI-36-3A8-Ab1의 경쇄 불변 영역(LC): 에스케리치아 콜리 3A8A12G7-H(DSM 25745로서 2012년 3월 6일에 기탁됨) 및 하기에 의해 생산된 인간화된 항체 hACI-36-2B6-Ab1의 경쇄 불변 영역(LC): 에스케리치아 콜리 2B6A10C11-H(DSM 25743로서 2012년 3월 6일에 기탁됨)이다. 인간화된 항체 hACI-36-3A8-Ab1 의 경쇄 불변 영역 (LC)의 아미노산 서열은 도 4b 및 5b에서 또한 묘사되어 있다.
서열번호: 19는 인간 타우(441aa), 또한 소위 Tau40의 가장 긴 동형체를 묘사한다.
서열번호: 20은 인간화된 항체 hACl-36-3A8-Ab1.v2의 중쇄 가변 영역(HCVR)의 아미노산 서열을 묘사한다.
서열번호: 21은 인간화된 항체 hACl-36-2B6-Ab1.v2의 중쇄 가변 영역(HCVR)의 아미노산 서열을 묘사한다.
서열번호: 22는 하기의 인간화된 항체의 경쇄 (L)의 아미노산 서열을 묘사하는데, 하기는: hACl-36-3A8-Ab1(IgG4), hACl-36-3A8-Ab1.v2(IgG4), hACl-36-3A8-Ab1.v3(IgG1), 및 hACl-36-3A8-Ab1.v4(IgG1 N297G)이다. HACl-36-3A8-Ab1 (IgG4), hACl-36-3A8-Ab1.v2 (IgG4), hACl-36-3A8-Ab1.v3 (IgG1), 및 hACl-36-3A8-Ab1.v4 (IgG1 N297G)의 경쇄(L)의 아미노산 서열은 도 5에서 또한 묘사되어 있다.
서열번호: 23은 하기의 인간화된 항체 의 경쇄 (L)의 아미노산 서열을 묘사하는데, 하기는: hACl-36-2B6-Ab1(IgG4), hACl-36-2B6-Ab1.v2(IgG4), hACl-36-2B6-Ab1.v3(IgG1), 및 hACl-36-2B6-Ab1.v4(IgG1 N297G)이다. HACl-36-2B6-Ab1(IgG4), hACl-36-2B6-Ab1.v2(IgG4), hACl-36-2B6-Ab1.v3(IgG1), 및 hACl-36-2B6-Ab1.v4 (IgG1 N297G)의 경쇄 (L)의 아미노산 서열은 도 4에서 또한 묘사되어 있다.
서열번호: 24는 인간화된 항체 hACl-36-3A8-Ab1(IgG4)의 중쇄(H)의 아미노산 서열을 묘사한다. 인간화된 항체 hACl-36-3A8-Ab1(IgG4)의 중쇄(H)의 아미노산 서열은 도 6에서 또한 묘사되어 있다.
서열번호: 25는 인간화된 항체 hACl-36-2B6-Ab1(IgG4)의 중쇄(H)의 아미노산 서열을 묘사한다. 참고: 서열번호 25는 서열번호: 24와 동일하고, 도 6에서 또한 묘사되어 있다.
서열번호: 26은 인간화된 항체 hACl-36-3A8-Ab1.v2(IgG4)의 중쇄(H)의 아미노산 서열을 묘사한다.
서열번호: 27은 인간화된 항체 hACl-36-3A8-Ab1.v3(IgG1)의 중쇄(H)의 아미노산 서열을 묘사한다.
서열번호: 28은 인간화된 항체 hACl-36-3A8-Ab1.v4(IgG1 N297G)의 중쇄(H)의 아미노산 서열을 묘사한다.
서열번호: 29는 인간화된 항체 hACl-36-2B6-Ab1.v2(IgG4)의 중쇄(H)의 아미노산 서열을 묘사한다.
서열번호: 30은 인간화된 항체 hACl-36-2B6-Ab1.v3(IgG1)의 중쇄(H)의 아미노산 서열을 묘사한다.
서열번호: 31은 인간화된 항체 hACl-36-2B6-Ab1.v4(IgG1 N297G)의 중쇄(H)의 아미노산 서열을 묘사한다.
용어 정의
용어 "폴리펩타이드", "펩타이드", 및 "단백질"은 본원에서 사용된 바와 같이 상호교환적이며 펩타이드 결합에 의해 연결된 아미노산으로 이루어진 생체분자를 의미하는 것으로 규정된다.
용어 "a", "an" 및 "the"는 본원에서 사용된 바와 같이 "1 이상"을 의미하는 것으로 규정되며 문맥에서 부적절하지 않는 한 복수가 포함된다.
용어 "펩타이드," 또는 "결합 펩타이드"는 본원에서 상호교환적으로 사용되며, 알파 탄소가 하나의 아미노산의 알파 탄소의 카복실 그룹 및 또 하나의 아미노산의 알파 탄소의 아미노 그룹 간의 축합 반응에 의해 형성된 펩타이드 결합을 통해 연결되는 아미노산(전형적으로 L-아미노산) 사슬을 나타낸다. 사슬의 한 말단(즉, 아미노 말단)에서의 말단 아미노산은 유리 아미노 그룹을 갖는 반면 사슬의 다른 말단(즉, 카복시 말단)에서의 말단 아미노산은 유리 카복실 그룹을 갖는다.이와 같이, 용어 "아미노 말단"(단축하여 N-말단)은 펩타이드의 아미노 말단에서 아미노산 상의 유리 알파-아미노 그룹, 또는 펩타이드 내에서 임의의 다른 위치에서 아미노산의 알파-아미노 그룹(펩타이드 결합에 참여하는 경우는 이미노 그룹)을 나타낸다. 유사하게, 용어 "카복시 말단"(단축하여 C-말단)은 펩타이드의 카복시 말단에서 아미노산 상의 유리 카복실 그룹, 또는 펩타이드 내에서 임의의 다른 위치에서 아미노산의 카복실 그룹을 나타낸다. 결합 펩타이드는 본원에서 규정된 바와 같이 항체, 예컨대 폴리클로날 또는 모노클로날 항체, 인간 또는 인간화된 항체, 디아바디, 낙타과 항체 등이나 이들의 기능성 부분을 포함할 수 있다.
용어 "그의 기능성 단편" 또는 "단편"은 본원에서 사용된 바와 같이 온전한 또는 완전한 항체 또는 항체 사슬에 비해 더 적은 아미노산 잔기를 포함하지만 이것이 유도된 항체와 본질적으로 의 상동성을 갖는(생물학적) 활성을 갖는 기능성 펩타이드 단편, 즉 항체 또는 항체 사슬의 일부 또는 부분을 나타내는데, 즉 상기 단편은 여전히 유기체에서 매우 특이적이고 특히 형태 특이적인 면역 반응을 야기할 수 있지만, 특히 동물, 특히 포유류 또는 인간 내에서 타우병증, 또는 타우병증과 연관된 증상에 매우 효과적이고 이를 예방하거나 완화할 수 있다. 특히, 상기 단편은 본원에서 사용되고 규정되는 바와 같은 타우 펩타이드의 특정한 병리적 포스포-에피토프 또는 -에피토프들을 여전히 함유한다. 단편은 온전한 또는 완전한 항체 또는 항체 사슬의 화학적 또는 효소 처리를 통해 수득될 수 있다. 단편은 또한 재조합 수단에 의해 수득될 수 있다. 예시적인 단편에는 Fab, Fab', F(ab')2, Fabc 및/또는 Fv 단편이 포함된다. 용어 "항원-결합 단편"은 항원에 결합하거나 온전한 항체(즉, 이들이 유도된 온전한 항체)와 항원 결합(즉, 특이적 결합)에 대해 경쟁하는 면역글로불린 또는 항체의 폴리펩타이드 단편을 나타낸다.
결합 단편은 재조합 DNA 기법에 의해, 또는 온전한 면역글로불린의 효소 또는 화학적 절단에 의해 생산된다. 결합 단편에는 Fab, Fab', F(ab')₂, Fabc, Fv, 단일 사슬, 및 단일-사슬 항체가 포함된다.
"단편"은 또한 또 하나의 폴리펩타이드의 아미노산 서열의 적어도 5 인접 아미노산 잔기, 적어도 10 인접 아미노산 잔기, 적어도 15 인접 아미노산 잔기, 적어도 20 인접 아미노산 잔기, 적어도 25 인접 아미노산 잔기, 적어도 40 인접 아미노산 잔기, 적어도 50 인접 아미노산 잔기, 적어도 60 인접 아미노 잔기, 적어도 70 인접 아미노산 잔기, 적어도 인접 80 아미노산 잔기, 적어도 인접 90 아미노산 잔기, 적어도 인접 100 아미노산 잔기, 적어도 인접 125 아미노산 잔기, 적어도 150 인접 아미노산 잔기, 적어도 인접 175 아미노산 잔기, 적어도 인접 200 아미노산 잔기, 또는 적어도 인접 250 아미노산 잔기의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드 또는 폴리펩타이드를 나타낸다. 특정 구현예에서, 폴리펩타이드 단편은 폴리펩타이드의 적어도 1 기능을 보유한다.
전형적으로, 펩타이드를 이루는 아미노산은 순서대로, 아미노 말단에서 시작하여 펩타이드의 카복시 말단을 향한 방향으로 증가하며 번호가 매겨진다. 따라서 하나의 아미노산이 또 하나를 "뒤따르는" 것으로 부르는 경우, 상기 아미노산은 이전 아미노산에 비해 펩타이드의 카복시 말단에 더 가깝게 배치된다.
용어 "잔기"는 본원에서 아마이드 결합에 의해 펩타이드 내로 편입되는 아미노산을 나타내기 위해 사용된다. 이와 같이, 아미노산은 자연 발생 아미노산일 수 있고, 또는 달리 제한되지 않는 한, 자연 발생 아미노산과 유사한 방식으로 기능하는 천연 아미노산의 알려진 유사체(즉, 아미노산 모방체)를 포괄할 수 있다. 게다가, 아마이드 결합 모방체에는 당해분야의 숙련가에게 잘 알려진 펩타이드 골격 변형이 포함된다.
어구 "으로 본질적으로 구성된"은 본원에서 어구가 나타내는 펩타이드의 필수적인 특성을 실질적으로 변경할 임의의 요소를 배제하기 위해 사용된다. 따라서, "으로 본질적으로 구성된..."이라는 펩타이드 기재는 상기 펩타이드의 생물학적 활성을 실질적으로 변경시킬 임의의 아미노산 치환, 부가, 또는 결실을 배제한다.
더욱이, 당해분야의 숙련가는 상기에서 언급된 바와 같이, 인코딩된 서열에서 단일 아미노산 또는 작은 백분율의 아미노산(전형적으로 5% 미만, 더욱 전형적으로 1% 미만)을 변경, 부가 또는 결실시키는 개별적인 치환, 결실 또는 부가는 그 변경이 아미노산의 화학적으로 유사한 아미노산을 이용한 치환을 일으키는 보존적으로 변경된 변화임을 인식할 것이다. 기능적으로 유사한 아미노산을 제공하는 보존적 치환 표는 당해분야에 알려져 있다. 하기의 6 개의 그룹은 각각 서로에 대해 보존적 치환인 아미노산을 함유한다:
1) 알라닌(A), 세린(S), 트레오닌(T);
2) 아스파르트산(D), 글루탐산(E);
3) 아스파라긴(N), 글루타민(Q);
4) 아르기닌(R), 라이신(K);
5) 이소류신(I), 류신(L), 메티오닌(M), 발린(V); 및
6) 페닐알라닌(F), 티로신(Y), 트립토판(W).
어구 "단리된" 또는 "생물학적으로 순수한"이란 실질적으로 또는 본질적으로 그것의 원상태에서 발견될 때 보통 수반하는 성분이 없는 물질을 나타낸다. 따라서 본원에서 기재된 펩타이드는 보통 그의 원위치 환경에 연관된 물질을 함유하지 않는다. 전형적으로, 본원에서 기재된 단리된, 면역원성 펩타이드는 은(silver) 염색된(stained) 겔 상에서 밴드 세기로 측정하여 적어도 약 80%, 보통 적어도 약 90%, 및 바람직하게는 적어도 약 95% 순수하다.
단백질 순도 또는 동질성은 당해분야에서 잘 알려진 수많은 방법, 예컨대 단백질 샘플의 폴리아크릴아미드 겔 전기영동 후 염색 시 가시화에 의해 명시될 수 있다. 어떤 목적을 위해서는 높은 분해능이 필요할 것이며 HPLC 또는 유사한 정제 수단이 이용된다.
면역원성 펩타이드의 길이가 상대적으로 짧은 경우(즉, 약 50 아미노산 미만), 이들은 종종 표준 화학적 펩타이드 합성 기술을 이용하여 합성된다.
서열의 C-말단 아미노산이 불용성 지지체에 부착되는 고체상 합성에 이어 서열에서 잔여 아미노산의 순차적 부가가 본원에서 기재된 면역원성 펩타이드의 화학적 합성을 위해 바람직한 방법이다. 고체상 합성 기술은 당해분야의 숙련가에게 알려져 있다.
대안적으로, 본원에서 기재된 면역원성 펩타이드는 재조합 핵산 방법론을 이용하여 합성된다. 일반적으로, 여기에는 펩타이드를 인코딩하는 핵산 서열의 생성, 핵산을 특정한 프로모터의 조절 하에 있는 발현 카세트(cassette)에 배치, 펩타이드를 숙주에서 발현, 발현된 펩타이드 또는 폴리펩타이드의 단리, 및 필요하다면 펩타이드의 복원이 관여된다. 이러한 절차를 통해 당해업자를 안내하기 충분한 기술이 문헌에서 확인된다.
일단 발현되면, 재조합 펩타이드는 암모늄 설페이트 침전, 친화도 칼럼, 칼럼 크로마토그래피, 겔 전기영동 등을 포함하는 표준 절차에 따라 정제될 수 있다. 약 50% 내지 95% 동질성의 실질적으로 순수한 조성물이 바람직하며, 80% 내지 95% 또는 초과의 동질성이 치료제로 사용하기에 가장 바람직하다.
당해분야의 숙련가는 화학적 합성, 생물학적 발현 또는 정제 후, 면역원성 펩타이드가 구성요소 펩타이드의 원상태 형태와 실질적으로 상이한 형태를 보유할 수 있음을 인지할 것이다. 이 경우에, 항증식성 펩타이드를 변성시키고 환원시킨 다음 펩타이드가 바람직한 형태로 다시 접히도록 하는 것이 종종 필요하다. 단백질의 환원 및 변성 방법 그리고 재접힘의 유도 방법은 당해분야의 숙련가에게 잘 알려져 있다.
정제된 단백질의 항원성은, 예를 들면 면역 혈청, 또는 단백질 자체에 대해 생성된 항혈청과의 반응을 나타내어 확인될 수 있다.
용어들 "검출하는" 또는 "검출된"은 본원에서 사용된 바와 같이 생물학적 분자를 검출하기 위한 알려진 기술, 예컨대 면역화학적 또는 조직학적 방법의 이용을 의미하며, 조사되는 생체분자의 존재 또는 농도를 정성적으로 또는 정량적으로 결정하는 것을 나타낸다.
"단리된"은 생물학적 분자에 천연 생성되는 적어도 일부 성분이 없음을 의미한다.
용어들 "항체"항체" 또는 "항체들"은 본원에서 사용된 바와 같이 당해분야에서 인식된 용어들로, 알려진 항원에 결합하는 분자 또는 분자의 활성 단편, 특히 면역글로불린 분자 및 면역글로불린 분자의 면역학적 활성 부분, 즉 항원에 특이적으로 결합하는 결합 부위를 함유하는 분자를 나타내는 것으로 이해된다. 면역글로불린은 면역글로불린 카파 및 람다, 알파, 감마, 델타, 엡실론 및 뮤 불변 영역 유전자뿐만 아니라 무수한 면역글로불린 가변 영역 유전자에 의해 실질적으로 인코딩된 1 이상 폴리펩타이드를 포함하는 단백질이다. 경쇄는 카파 또는 람다로 분류된다. 중쇄는 감마, 뮤, 알파, 델타, 또는 엡실론으로 분류되며, 결국 면역글로불린 클래스, IgG, IgM, IgA, IgD 및 IgE 각각을 규정한다. 또한 중쇄의 서브클래스가 알려져 있다. 예를 들면, 인간에서의 IgG 중쇄는 임의의 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4 서브클래스일 수 있다. 본 발명에 따른 면역글로불린은 면역글로불린 분자의 임의의 클래스(IgG, IgM, IgD, IgE, IgA 및 IgY) 또는 서브클래스(IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2)일 수 있다. 일 구현예에서, IgG 중쇄는 Fc 영역의 위치 297에서 아스파라긴의 글리신으로의 치환을 포함하는 IgG1 N297G이다.
감소된 효과기 기능을 갖는 항체에는 EU 넘버링 시스템에 따라 1 이상의 Fc 영역 잔기 238, 265, 269, 270, 297, 327 및 329의 치환을 갖는 것들이 포함된다(미국 특허 번호 6,737,056). 이러한 Fc 돌연변이체에는 잔기 265 및 297의 알라닌으로의 치환을 갖는 소위 "DANA" Fc 돌연변이체를 포함하는, 2 이상의 아미노산 위치 265, 269, 270, 297 및 327에 치환을 갖는 Fc 돌연변이체가 포함된다(US 특허 번호 7,332,581).
FcRs에 대해 개선된 또는 줄어든 결합을 갖는 특정 항체 변이체가 기재된다. (예를 들면, 미국 특허 번호 6,737,056; WO 2004/056312, 및 Shields 등, J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001) 참고.)
어떤 구현예에서, 항체 변이체는 ADCC를 개선하는 1 이상의 아미노산 치환, 예를 들면, Fc 영역의 위치 298, 333, 및/또는 334(잔기의 EU 넘버링)에서의 치환을 갖는 Fc 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 예를 들면 US 특허 번호 6,194,551, WO 99/51642, 및 Idusogie 등, J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000)에 기재된 바와 같이 변경된(즉 개선된 또는 줄어든) C1q 결합 및/또는 보체 의존적 세포독성(CDC)을 일으키는 Fc 영역의 변경이 수행된다.
모체 IgGs의 태아로의 전달에 관여하는 신생아 Fc 수용체(FcRn)(Guyer 등, J. Immunol. 117:587 (1976) 및 Kim 등, J. Immunol. 24:249 (1994))에 대한 개선된 결합 및 증가된 반감기를 갖는 항체가 US2005/0014934A1(Hinton 등)에 기재된다. 이들 항체는 내부에 FcRn에 대한 Fc 영역의 결합을 개선하는 1 이상의 치환을 갖는 Fc 영역을 포함한다. 이러한 Fc 변이체에는 1 이상의 Fc 영역 잔기: 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 또는 434에서의 치환, 예를 들면 Fc 영역 잔기 434에서의 치환을 갖는 것들이 포함된다(US 특허 번호 7,371,826).
또한 Fc 영역 변이체의 다른 예에 관해서는 다음을 참조한다: Duncan & Winter, Nature 322:738-40 (1988); 미국 특허 번호 5,648,260; 미국 특허 번호 5,624,821; 및 WO 94/29351.
항체에 있어서 본원에서 사용된 바와 같이 "특이적으로 결합하는"은 항체가 구조적으로 상이한 항원(들)에 대한 것보다 더 큰 친화도로 그것의 표적 항원에 결합함을 의미한다.
전형적인 면역글로불린 구조 단위는 사량체를 포함하는 것으로 알려져 있다. 각각의 사량체는 2 의 상동성을 갖는 쌍의 폴리펩타이드 사슬로 이루어지며, 각각의 쌍은 하나의 "경쇄"(약 25kDa) 및 하나의 "중쇄"(약 50-70kDa)를 갖는다. 각 사슬의 N-말단은 주로 항원 인식에 관여하는 약 100 내지 110 또는 그 초과 아미노산의 가변 영역을 규정한다. 용어 가변 경쇄(V_L) 및 가변 중쇄(V_H)는 이들 경쇄 및 중쇄를 각각 나타낸다.
항체는 전체 길이의 온전한 항체로서 또는 다양한 펩티다아제 또는 화학물질로의 소화에 의해 생상된 수많은 잘 분석된 단편으로서 존재한다. 따라서, 예를 들면 펩신은 항체를 힌지 영역에서 디설파이드 연결 아래에서 절단하여 F(ab')₂, 즉 자체가 디설파이드 결합에 의해 V_H-CH₁에 연결된 경쇄인 Fab의 이량체를 생산한다. F(ab')₂는 힌지 영역에서 디설파이드 연결을 자르는 온화한 조건 하에 환원될 수 있고, 그렇게 함으로써 F(ab')₂ 이량체는 Fab' 단량체로 전환된다. Fab' 단량체는 본질적으로 힌지 영역의 일부를 갖는 Fab 단편이다(다른 항체 단편의 보다 상세한 설명은 Fundamental Immunology, W. E. Paul, ed., Raven Press, N.Y. (1993) 참고). 다양한 항체 단편이 온전한 항체의 소화의 측면에서 규정되지만, 당해분야의 숙련가는 임의의 다양한 항체 단편이 화학적으로 또는 재조합 DNA 방법론을 이용하여 드노보(de novo) 합성될 수 있음을 이해할 것이다. 따라서, 본원에서 사용된 바와 같이 용어 항체에는 또한 전체 항체의 변형에 의해 생산되거나 또는 드노보 합성된 항체 단편 또는 재조합 DNA 방법론을 이용하여 수득된 항체 및 단편이 포함된다.
"항체"는 본 발명의 범위 내에서 모노클로날 항체, 폴리클로날, 키메라, 단일 사슬, 이중특이적, 유인원화된, 인간 및 인간화된 항체, 낙타과 항체, 디아바디(diabody)뿐만 아니라 그의 기능성 단편 또는 활성 단편을 포함하도록 의도된다. 알려진 항원에 결합하는 분자의 활성 단편의 예에는 상기 언급된 임의의 항체 및 단편의 Fab 면역글로불린 발현 라이브러리 및 에피토프-결합 단편의 생성물을 포함하는 분리된 경쇄 및 중쇄, Fab, Fab/c, Fv, Fab', 및 F(ab')₂ 단편이 포함된다.
이들 활성 단편은 수많은 기술에 의해 본 발명의 항체에서 유도될 수 있다. 예를 들면, 정제된 모노클로날 항체는 효소, 예컨대 펩신으로 절단되고 HPLC 겔 여과를 거칠 수 있다. 이어서 Fab 단편을 함유하는 적절한 분획이 막 여과 등에 의해 수집되고 농축될 수 있다. 항체의 활성 단편의 단리를 위한 일반적인 기술의 추가 설명은, 예를 들면, Khaw, B. A. 등, J. Nucl. Med. 23:1011-1019 (1982); Rousseaux 등, Method Enzymology, 121:663-69, Academic Press, (1986)을 참고하면 된다.
재조합 항체는 종래의 전체 길이 항체, 단백분해 소화로부터 알려진 활성 항체 단편, 독특한 활성 항체 단편, 예컨대 Fv 또는 단일 사슬 Fv(scFv), 도메인 결실 항체 등일 수 있다. Fv 항체는 약 50KDa 크기이며 경쇄 및 중쇄의 가변 영역을 포함한다. 단일 사슬 Fv("scFv") 폴리펩타이드는 펩타이드-인코딩 링커에 의해 연결되거나 직접적으로 연결된 VH- 및 VL-인코딩 서열을 포함하는 핵산으로부터 발현될 수 있는 공유 결합된 VH::VL 이형이량체이다. Huston 등, (1988) Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 85:5879-5883 참고. 항체 V 영역으로부터의 천연 응집된 그러나 화학적으로 분리된 폴리펩타이드 경쇄 및 중쇄를 항원-결합 부위의 구조와 실질적으로 유사한 3차원 구조로 접힐 scFv 분자로 전환하기 위한 수많은 구조. 예를 들면, 미국 특허 번호 5,091,513, 5,132,405 및 4,956,778을 참고하면 된다.
결합 부위는 항원 결합에 참여하는 항체 분자의 부분을 나타낸다. 항원 결합 부위는 중쇄("H") 및 경쇄("L")의 N-말단 가변("V") 영역의 아미노산 잔기에 의해 형성된다. 항체 가변 영역은 "뼈대 영역"(FRs)으로 알려진 보다 보존된 인접 연신물(stretches) 사이에 끼어든 "초가변 영역" 또는 "상보성 결정 영역"(CDRs)으로 불리는 3 고도 분기형 연신물을 포함한다. 항체 분자에서, 경쇄의 3 초가변 영역(LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3) 및 중쇄의 3 초가변 영역(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3)은 3차원 공간에서 서로에 대해 배치되어 항원 결합 표면 또는 포켓을 형성한다. 따라서 항체 결합 부위는 항체의 CDRs을 구성하는 아미노산 및 결합 부위 포켓을 구성하는 임의의 뼈대 잔기를 나타낸다.
결합 부위를 구성하는 특정한 항체에서의 아미노산 잔기의 상동성은 당해분야에서 잘 알려진 방법을 이용하여 결정될 수 있다. 예를 들면, 항체 CDRs은 Kabat 등에 의해 본래 초가변 영역으로 규정된 것으로 확인될 수 있다("Sequence of Proteins of Immunological Interest," E. Kabat 등, U.S. Department of Health and Human Services; Johnson, G and Wu, TT (2001) Kabat Database and its applications: future directions. Nucleic Research, 29: 205-206; http://immuno.bme.nwa.edu 참고). CDRs의 위치는 또한 Chothia 등에 의해 본래 기재된 구조적 루프로서 확인될 수 있다(Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196, 901 (1987), Chothia 등, Nature 342, 877 (1989), 및 Tramontano 등, J. Mol. Biol. 215, 175 (1990) 참고). 다른 방법에는 Kabat 및 Chothia 간의 절충이며 Oxford Molecular의 AbM 항체 모델링 소프트웨어(지금은 Accelrys)를 이용하여 유도되는 "abM 정의" 또는 Macallum 등에 의한 CDRs의 "접촉 정의"가 포함된다("Antibody-antigen interactions: contact analysis and binding site topography," J Mol Biol. 1996 Oct 11;262(5):732-45). 하기의 차트는 다양한 알려진 정의에 기반하여 CDRs를 확인시켜준다.

(Kabat 넘버링)

(Chothia 넘버링)

서열만으로부터 항체에서 CDRs를 확인할 수 있는 일반적인 지침은 하기와 같다:
LCDR1:
시작 - 대략 잔기 24.
이전 잔기는 항상 Cys이다.
이후 잔기는 항상 Trp이다. 전형적으로 TRP에는 TYR-GLN이 뒤따르지만, 또한 LEU-GLN, PHE-GLN, 또는 TYR-LEU가 뒤따를 수 있다.
길이는 10 내지 17 잔기이다.
LCDR2:
시작 - L1 말단 이후 16 잔기.
이전 서열은 일반적으로 ILE-TYR이지만, 또한 VAL-TYR, ILE-LYS, 또는 ILE-PHE일 수 있다.
길이는 일반적으로 7 잔기이다.
LCDR3:
시작 - 일반적으로 L2 말단 이후 33 잔기.
이전 잔기는 Cys이다.
이후 서열은 PHE-GLY-X-GLY이다.
길이는 7 내지 11 잔기이다.
HCDR1:
시작 - 대략 잔기 26에서(CYS 이후 4 잔기) [Chothis / AbM 정의], Kabat 정의는 5 잔기 후에 시작한다.
이전 서열은 CYS-X-X-X이다.
이후 잔기는 TRP이고, 전형적으로 그 다음은 VAL이지만, 또한 ILE, 또는 ALA가 뒤따를 수 있다.
AbM 정의 하에서는 길이가 10 내지 12 잔기인 반면 Chothia 정의는 마지막 4 잔기를 배제한다.
HCDR2:
시작 - CDR-H1의 Kabat/AbM 정의의 말단 이후 15 잔기.
이전 서열은 전형적으로 LEU-GLU-TRP-ILE-GLY(서열번호 1)이지만, 수많은 변화가 가능하다.
이후 서열은 LYS/ARG-LEU/ILE/VAL/PHE/THR/ALA-THR/SER/ILE/ALA이다.
Kabat 정의 하에서 길이는 16 내지 19 잔기이다(AbM 정의는 7 잔기 더 일찍 끝난다).
HCDR3:
시작 - CDR-H2의 말단 이후 33 잔기(CYS 이후 2 잔기).
이전 서열은 CYS-X-X(전형적으로 CYS-ALA-ARG)이다.
이후 서열은 TRP-GLY-X-GLY이다.
길이는 3 내지 25 잔기이다.
CDRs 외부에 있지만 그럼에도 불구하고 결합 부분 라이닝의 일부인 측쇄를 가져서 결합 부위를 구성하는(즉, 결합 부위를 통해 연결에 이용가능한) 특정한 항체에서의 아미노산 잔기의 상동성은 당해분야에서 잘 알려진 방법, 예컨대 분자 모델링 및 X-선 결정학을 이용하여 결정될 수 있다. 예를 들면, Riechmann 등, (1988) Nature, 332:;323-327 참고.
키메라 항체는 항체의 1 이상의 영역이 1종의 동물에서 유래되고 항체의 1 이상의 영역이 상이한 종의 동물에서 유래되는 것들이다. 바람직한 키메라 항체는 영장류 면역글로불린 유래 영역을 포함하는 것이다. 인간의 임상적 용도를 위한 키메라 항체는 전형적으로 비-인간 동물, 예를 들면 설치류로부터의 가변 영역을 갖고 인간으로부터의 불변 영역을 갖는 것으로 이해된다. 그에 반해서, 인간화된 항체는 인간 면역글로불린으로부터 대부분의 또는 모든 가변 뼈대 영역 및 모든 불변 영역을 갖고 비-인간 항체로부터의 CDRs을 이용한다. 인간 키메라 항체는 전형적으로 설치류로부터의 가변 영역을 갖는 것으로 이해된다. 전형적인 인간 키메라 항체는 인간 중쇄 불변 영역 및 인간 경쇄 불변 영역을 가지며, 설치류 항체로부터 유래되는 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 갖는다. 키메라 항체에는 인간 불변 영역의 원상태 아미노산 서열 및 원상태 설치류 가변 영역 서열에 대한 일부 변화가 포함될 수 있다. 키메라 및 인간화된 항체는 CDR 그라프팅 접근법을 포함하는 당해분야에서 잘 알려진 방법(예를 들면, 미국 특허 번호 5,843,708; 6,180,370; 5,693,762; 5,585,089; 5,530,101 참고), 사슬 셔플링 전략(예를 들면, 미국 특허 번호 5,565,332; Rader 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1998) 95:8910-8915 참고), 분자 모델링 전략(미국 특허 번호 5,639,641) 등으로 제조될 수 있다.
"인간화된 항체"는 본원에서 사용된 바와 같이 적어도 1 사슬이 인간화된 2 사슬 항체이다. 인간화된 항체 사슬은 1 이상의 뼈대 영역이 인간 유래인 가변 영역을 갖는다. 단일 사슬인 인간화된 항체는 사슬이 1 이상의 뼈대 영역이 인간에서 유래되는 가변 영역을 갖는 것이다. 인간화된 항체 사슬 또는 그의 단편의 가변 영역의 비-인간 부분은 비-인간 공급원, 특히 비-인간 항체, 전형적으로 설치류 기원으로부터 유도된다. 인간화된 항체에 대한 비-인간 기여는 전형적으로 1(또는 그 초과의) 인간 면역글로불린(들)에서 유도된 뼈대 영역 사이에 배치된 적어도 1 CDR 영역의 형태로 제공된다. 또한, 뼈대 지지 잔기는 결합 친화도를 보존하기 위해 변경될 수 있다. 인간화된 항체는 추가로 불변 영역(예를 들면, 경쇄의 경우 적어도 1 불변 영역 또는 이들의 일부, 및 중쇄의 경우, 바람직하게는 3 불변 영역)을 포함할 수 있다. 존재하는 경우, 인간화된 항체의 불변 영역은 일반적으로 인간 유래이다.
인간화된 항체는 추가로 불변 영역(예를 들면, 경쇄의 경우 적어도 1 불변 영역 또는 이들의 일부, 및 중쇄의 경우, 바람직하게는 3 불변 영역)을 포함할 수 있다. 존재하는 경우, 인간화된 항체의 불변 영역은 일반적으로 인간 유래이다.
인간화된 항체는 또한 1 이상의 그것의 뼈대 영역이 인간 또는 영장류 아미노산을 갖는 가변 영역을 갖는 항체를 나타낼 수 있다. 또한, 뼈대 지지 잔기는 결합 친화도를 보존하기 위해 변경될 수 있다. "인간화된 항체"를 수득하기 위한 방법은 당해분야의 숙련가에게 잘 알려져 있다(예를 들면, Queen 등, Proc. Natl Acad Sci USA, 86:10029-10032 (1989), Hodgson 등, Bio/Technoloy, 9:421 (1991) 참고).
"인간화된 항체"는 또한 대동물, 예컨대 토끼에서 친화도-성숙 인간유사 폴리클로날 항체의 생산을 구현하는 신규 유전공학 접근법에 의해 수득될 수 있다(http://www.rctech.com/bioventures/therapeutic.php).
용어 "완전 인간 항체" 또는 "인간" 항체는 인간 항체 유전자를 수반하는 유전자이식 마우스로부터 또는 인간 세포로부터 유도된 항체를 의미한다. 그러나 인간 면역계에 있어서, "완전 인간", "인간", 및 "인간화된" 항체 간 차이는 무시해도 좋을 수 있거나 존재하지 않을 수 있으며, 이와 같이 세가지 모두 의 상동성을 갖는 효능 및 안전성을 가질 수 있다.
용어 불변 영역(CR)은 본원에서 사용된 바와 같이 면역글로불린의 불변 영역 유전자를 나타낸다. 불변 영역 유전자는 효과기 기능을 부여하는 항체 분자 부분을 인코딩한다. 키메라 인간 항체 및 인간화된 항체에 있어서, 전형적으로 비-인간(예를 들면, 쥣과) 불변 영역은 인간 불변 영역에 의해 치환된다. 대상체 키메라 또는 인간화된 항체의 불변 영역은 전형적으로 인간 면역글로불린에서 유도된다. 중쇄 불변 영역은 임의의 5 아이소타입: 알파, 델타, 엡실론, 감마 또는 뮤(mu)로부터 선택될 수 있다. 게다가, 다양한 서브클래스의 중쇄(예컨대 IgG 서브클래스의 중쇄)는 상이한 효과기 기능에 관여하므로, 원하는 중쇄 불변 영역을 선택함으로써, 원하는 효과기 기능을 갖는 항체가 생산될 수 있다. 본 발명의 범위 내에서 사용될 수 있는 불변 영역은 감마 1(IgG1), 특히 감마 1(IgG1) 아이소타입, 감마 1 N297G(IgG1 N297G), 감마 3(IgG3) 및 특히 감마 4(IgG4)의 Fc 영역이다. 경쇄 불변 영역은 카파 또는 람다 유형, 바람직하게는 카파 유형일 수 있다. 일 구현예에서, 경쇄 불변 영역은 인간 카파 불변 사슬(Heiter 등, (1980) Cell 22:197-207)이고 중쇄 불변 사슬은 인간 IgG4 불변 사슬이다.
용어 "모노클로날 항체"도 당분야에서 널리 인식되며, 단일 클론으로부터 실험실에서 대량 생산되고 단 하나의 항원을 인식하는 항체를 나타낸다. 모노클로날 항체는 전형적으로 정상적으로 짧게 생존하는 항체 생산 B 세포를 빠르게 성장하는 세포, 예컨대 암 세포(때때로 "불멸" 세포로 불림)에 융합시켜 제조된다. 수득한 하이브리드 세포, 또는 하이브리도마는 빠르게 증식하여, 다량의 항체를 생산하는 클론을 생성한다. 본 발명의 목적을 위해, "모노클로날 항체" 또한 아직 완전 모노클론성에 도달하지 못한 모 클론에 의해 생산된 항체를 포함하는 것으로 이해된다.
용어 "하이브리드화한다"는 종래의 하이브리드화 조건, 바람직하게는 5xSSPE, 1% SDS, 1xDenhardts 용액이 용액으로 사용되고/되거나 하이브리드화 온도가 35℃ 내지 70℃, 바람직하게는 65℃인 하이브리드화 조건을 나타내기 위해 사용된다. 하이브리드화 후, 세정은 바람직하게는 먼저 2xSSC, 1% SDS로, 차후에 0.2xSSC와 35℃ 내지 70℃, 바람직하게는 65℃ 온도에서 수행된다(SSPE, SSC 및 Denhardts 용액의 정의에 대해서는 Sambrook 등, 위 인용문 참고). 엄격한 하이브리드화 조건, 예를 들면 [Sambrook 등, 상기와 동일]에 기재된 것들이 특히 바람직하다. 특히 바람직한 엄격한 하이브리드화 조건은, 예를 들면 하이브리드화 및 세정이 상기에서 명시된 바와 같이 65℃에서 일어나는 경우 존재한다. 엄격하지 않은 하이브리드화 조건, 예를 들면 45℃에서 수행되는 하이브리드화 및 세정은 덜 바람직하며, 35℃에서 수행되는 것은 보다 덜 바람직하다.
두 서열 간의 "상동성"은 서열 상동성에 의해 결정된다. 비교되는 두 서열이 서로 길이가 다르면, 서열 상동성은 바람직하게는 더 긴 서열의 뉴클레오타이드 잔기와 의 상동성을 갖는 더 짧은 서열의 뉴클레오타이드 잔기의 백분율에 관한 것이다. 서열 상동성은 통상적으로 컴퓨터 프로그램, 예컨대 Bestfit 프로그램(Wisconsin 서열 분석 패키지, 유닉스용 버전 8, Genetics Computer Group, University Research Park, 575 Science Drive Madison, WI 53711)을 이용하여 결정될 수 있다. Bestfit은 두 서열 간 최고 서열 상동성을 갖는 분절을 찾기 위해 [Smith and Waterman, Advances in Applied Mathematics 2 (1981), 482-489]의 국소 상동성(local homology) 알고리즘을 이용한다. 특정한 서열이 본 발명의 참조 서열과, 예를 들면 95% 상동성을 갖는지를 결정하기 위해 Bestfit 또는 또 하나의 서열 정렬 프로그램을 사용하는 경우, 파라미터는 바람직하게는 상동성 백분율이 참조 서열의 전체 길이에 걸쳐 계산되고 참조 서열에서 뉴클레오타이드의 총수의 최대 5%의 상동성 갭이 허용되도록 조정된다. Bestfit을 사용하는 경우, 소위 선택적 파라미터는 바람직하게는 그 사전 설정("디폴트") 값으로 유지된다. 주어진 서열 및 본 발명의 상기-기재된 서열 간 비교에서 나타나는 편차는, 예를 들면 부가, 결실, 치환, 삽입 또는 재조합에 의해 야기될 수 있다. 그와 같은 서열 비교는 바람직하게는 또한 프로그램 "fasta20u66"(버전 2.0u66, September 1998 by William R. Pearson and the University of Virginia; 또한 하기를 참조: W.R. Pearson (1990), Methods in Enzymology 183, 63-98, 첨부 실시예 및 http://workbench.sdsc.edu/)으로 수행될 수 있다. 이러한 목적을 위해, "디폴트" 파라미터 설정이 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 항체는 각각의 의 상동성을 갖는((다가(multivalent)인 경우)) 그것의 결합 부위를 갖는 것으로 이해되는 면역글로불린 또는 항체일 수 있고, 또는 대안적인 경우 "이중특이적" 또는 "이작용성 항체"일 수 있다.
"이중특이적" 또는 "이작용성 항체""는 2 개의 상이한 중쇄/경쇄 쌍 및 2 개의 상이한 결합 부위를 갖는 인공 하이브리드 항체일 수 있다. 이중특이적 항체는 하이브리도마의 융합 또는 Fab' 단편의 연결을 포함하는 다양한 방법으로 생산될 수 있다. 예를 들면, Songsivilai & Lachmann, Clin. Exp. Immunol. 79:315-321 (1990); Kostelny 등., J. Immunol. 148, 1547-1553 (1992) 참고.
용어 "항원"은 유기체, 특히 동물, 더 상세하게는 인간을 포함하는 포유류에서 면역 반응을 유도할 수 있는 독립체 또는 그의 단편을 나타낸다. 용어에는 항원성 또는 항원 결정기에 관여하는 면역원 및 영역이 포함된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "가용성"은 수용액 중에 부분적으로 또는 완전히 용해된 것을 의미한다.
또한 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "면역원성"은 면역원성 제제에 대해 생성된 항체, T-세포 및 다른 반응성 면역 세포의 생산을 야기하거나 증강시키고 인간 또는 동물에서 면역 반응에 기여하는 물질을 나타낸다.
면역 반응은 개인이 치료될 장애를 정상화하거나 완화하기 위해 본 발명의 투여된 면역원성 조성물에 대해 충분한 항체, T-세포 및 다른 반응성 면역 세포를 생산하는 경우에 일어난다.
용어 면역원성은 본원에서 사용된 바와 같이 수령체에 투여되는 경우 면역 반응(체액성 또는 세포성)을 야기하는 항원 능력의 척도를 나타낸다. 본 발명은 대상체 인간 키메라 또는 인간화된 항체의 면역원성을 감소시키는 접근법에 관한 것이다.
감소된 면역원성의 인간화된 항체는 모 항체, 예를 들면 쥣과 항체에 비해 감소된 면역원성을 나타내는 인간화된 항체를 나타낸다.
실질적으로 모 항체의 결합 특성을 보유하는 인간화된 항체는 이러한 인간화된 항체를 생산하기 위해 사용된 모 항체에 의해 인식되는 항원에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하는 인간화된 항체를 나타낸다. 바람직하게는 인간화된 항체는 모 항체와 의 상동성을 갖는 또는 실질적으로 의 상동성을 갖는 항원-결합 친화도 및 결합능을 나타낼 것이다. 이상적으로 항체의 친화도는 모 항체 친화도의 10% 이상, 더 바람직하게는 약 30% 이상일 것이며, 가장 바람직하게는 친화도는 모 항체의 50% 이상일 것이다. 항원-결합 친화도의 검정(assaying)을 위한 방법은 당해분야에서 잘 알려져 있고, 반-최대(half-maximal) 결합 검정, 경쟁 검정, 및 Scatchard 분석이 포함된다. 적당한 항원 결합 검정이 본원에 기재된다.
“복귀 돌연변이(back mutation)”는 인간화된 항체를 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열에 도입된 돌연변이이며, 돌연변이는 모 항체(예를 들면 공여체 항체, 예를 들면 쥣과 항체(murine antibody))에서의 아미노산에 상응하는 아미노산을 생성한다. 모 항체로부터의 어떤 뼈대 잔기는 그 결과로 생긴 항체의 잠재 면역원성을 최소화하는 동시에 모 항체의 결합 특성을 실질적으로 보유하기 위해 본 발명의 항체의 인간화 동안 유지될 수 있다. 본 발명의 일 구현예에서, 모 항체는 마우스(mouse) 기원이다. 예를 들면, 복귀 돌연변이는 인간 뼈대 잔기를 모 쥣과 잔기로 변화시킨다. 다시 돌연변이될 수 있는 뼈대 잔기의 예에는 비제한적으로 표준적 잔기, 계면 팩킹 잔기, 결합 부위에 가까운 드문 모 잔기, "베니에르 구역"의 잔기(CDRs이 놓이는 플랫폼을 형성함) (Foote & Winter, 1992, J. Mol. Biol. 224, 487-499), 및 CDR H3에 가까운 것들이 포함된다.
본원에서 사용된 바와 같이 "보존적 변화"는 각각 원상태 단백질과 비교하여, 실질적으로 형태적으로나 항원적으로 중성이며, 돌연변이체 폴리펩타이드의 3차 구조에 최소 변화를 생성하거나 돌연변이체 폴리펩타이드의 항원 결정기에 최소 변화를 생성하는 변경을 나타낸다. 본 발명의 항체 및 항체 단편을 나타낼 때, 보존적 변화는 항체가 상기 대상체의 수용체에 결합할 수 없도록 만들지 않는 아미노산 치환을 의미한다. 당해분야의 숙련가는 높은 가능성으로 형태적으로 및 항원적으로 중성을 유지하면서 어느 아미노산 치환이 수행될 수 있는지를 예측할 수 있을 것이다. 이러한 안내는, 예를 들면 Berzofsky, (1985) Science 229:932-940 및 Bowie 등 (1990) Science 247:1306-1310에 제공된다. 형태적 및 항원적 중성을 유지하는 가능성에 영향을 미치는 것으로 고려되어야 하는 인자에는 비제한적으로 하기가 포함된다: (a) 소수성 아미노산의 치환은 소수성 잔기가 단백질의 내부에 위치할 가능성이 더 높으므로 항원성에 영향을 미칠 가능성이 더 적다; (b) 이화학적으로 유사한 아미노산의 치환은 치환된 아미노산이 구조적으로 원상태 아미노산을 모사하므로 형태에 영향을 미칠 가능성이 더 적다; 그리고 (c) 진화론적으로 보전된 서열의 변경은 아미노산 서열이 기능적 중요성을 가질 수 있음을 이러한 보존이 시사하므로, 형태에 부정적으로 영향을 미칠 가능성이 높다. 당해분야의 숙련가는 알려진 검정, 예컨대 비제한적으로 마이크로보체 고착 방법(Wasserman 등 (1961) J. Immunol. 87:290-295; Levine 등. (1967) Meth. Enzymol. 11:928-936)을 이용하여 그리고 형태-의존적 모노클로날 항체(Lewis 등. (1983) Biochem. 22:948-954)를 이용한 결합 연구를 통해 단백질 형태 변경에 접근할 수 있을 것이다.
용어 "하이브리도마"는 당해분야에서 인식되며, 당해분야의 숙련가에게 항체 생산 세포 및 불멸 세포, 예를 들면 다발성 골수종 세포의 융합에 의해 생산된 세포를 나타내는 것으로 이해된다. 상기 하이브리드 세포는 항체의 연속적 공급물을 생산할 수 있다. 융합 방법의 보다 상세한 설명에 대해서는 상기 "모노클로날 항체"의 정의 및 아래 실시예를 참고하면 된다.
용어 "담체"는 본원에서 사용된 바와 같이 항원성 펩타이드 또는 초분자 구축물이 내부에 편입될 수 있거나 연관될 수 있으며, 그렇게 함으로써 인간 또는 동물의 면역계에 항원성 펩타이드 또는 펩타이드의 부분을 제시하거나 노출시키는 구조를 의미한다. 동물 또는 인간 요법에서 적당하게 사용될 수 있는 임의의 입자, 예컨대 소포, 입자 또는 미립자체가 본 발명의 문맥에서 담체로 사용될 수 있다.
용어 "담체"는 전달 방법을 추가로 포함하며, 여기서 항원성 펩타이드를 포함하는 초분자 항원성 구축 조성물은 전달 기전에 의해 원하는 부위로 수송될 수 있다. 그와 같은 전달 시스템의 한 예는 콜로이드 금속, 예컨대 콜로이드 금을 이용한다.
본 발명의 초분자 항원성 구축 조성물에서 사용될 수 있는 담체 단백질에는 비제한적으로 말토오스 결합 펩타이드 "MBP"; 소 혈청 알부민 "BSA"; 열쇠구멍 삿갓조개 헤모시아닌 "KLH"; 난백알부민; 플라젤린; 티로글로불린; 임의의 종의 혈청 알부민; 임의의 종의 감마 글로불린; 동계의 세포; Ia 항원을 보유하는 동계의 세포; 및 D- 및/또는 L- 아미노산의 폴리머가 포함된다.
게다가, 용어 "치료적으로 효과적인 양" 또는 "약제학적으로 효과적인 양"은 인간 또는 동물에 투여된 경우 상기 인간 또는 동물에서 치료 효과를 일으키기 충분한 결합 펩타이드의 양을 나타낸다. 효과적인 양은 일상적인 절차를 따라 당해분야의 숙련가에 의해 쉽게 결정된다.
"pTau PHF", "PHF" 및 "쌍으로 된 나선 필라멘트"는 본원에서 동의어로 사용되며, 쌍으로된 필라멘트가 나선으로 감겨 주기성 160nm으로 전자 현미경검사 상에 가시적으로 나타난다. 폭은 10 내지 22nm로 변한다. PHF는 두드러진 구조로 신경섬유 엉킴으로 알츠하이머병(AD) 및 신경망 변성에 존재한다. PHF는 또한 일부에서 보여질 수 있지만 퇴행성 신경염 중 신경반에 연관된 모든 것에서 보이는 것은 아니다. PHF의 주요 성분은 과도인산화된 형태의 미세소관-연관된 단백질 타우이다. PHF는 부분적으로 디설파이드-연결된 역평행 과도-인산화된 타우 단백질로 구성될 수 있다. PHF 타우는 그것의 C-말단 20 아미노산 잔기가 끝이 잘린 것일 수 있다. 근원적인 PHF 형성 기전은 명확하지 않지만 타우의 과도한 인산화는 이것을 미세소관에서 풀어서 PHF가 형성될 수 있는 타우의 가용성 풀을 뉴런 내부에서 증가시킬 수 있다.
본 발명의 범위 내에서, 본 발명에 따른 항원성 조성물에 대해 항체 유도 반응이 상당히 T-세포독립적(T-cell independent)이라는 것이 실증되었다. 이런 점에서 누드 마우스 모델이 사용되었고 누드 마우스가 백신접종되고 면역화된 누드 마우스에서 본 발명에 따른 항원성 조성물에 의해 유도된 Aβ-특이적 항체 반응을 평가하기 위해 항체 반응이 측정되었다. 누드 마우스는 Foxn1nu 돌연변이를 수반하며, 그 결과 적절한 가슴샘의 부재로 인해 감소된 T-세포 기능을 갖는다.
"약제학적으로 효과적인 양"은 본원에서 사용된 바와 같이 치료될 질환, 장애 또는 병태의 증상 또는 이와 연관된 임의의 합병증을 완치하거나 또는 적어도 부분적으로 정지시키기 적절한 약제학적 조성물에서의 활성 성분의 용량을 나타낸다.
본 발명은 타우 단백질의 주요한 병리적 포스포-에피토프를 인식하고 결합하는 결합 펩타이드를 제공한다. 특히, 본 발명은 AD를 포함하는 타우병증에서 시냅스- 및 신경-독성에 관여하는 것으로 여겨지는 단백질 타우 상의 선형 및 형태적, 단순 및 복합체 포스포-에피토프에 대한 특이적 항체를 제공한다.
따라서, 본 발명은 일 구현예에서 키메라 또는 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편에 관한 것이며, 상기 항체는 포유류, 특히 인간 타우 단백질 또는 그의 단편 상의 포스포-에피토프, 특히 병리적 단백질 타우 이형태체를 인식하고 그것에 특이적으로 결합하지만, 일 구현예에서, 상응하는 비인산화된 에피토프 및/또는 비-관련 에피토프에 결합하지 않고, 여기서 상기 결합 펩타이드 또는 항체는 적어도 10nM, 특히 적어도 8nM, 특히 적어도 5nM, 특히 적어도 2nM, 특히 적어도 1nM, 특히 적어도 500pM, 특히 적어도 400pM, 특히 적어도 300pM, 특히 적어도 200pM, 특히 적어도 100pM, 특히 적어도 50pM의 해리 상수를 갖는 높은 결합 친화도를 갖는다.
"가용성 타우" 단백질은 본원에서 사용된 바와 같이 완전히 용해된 타우 단백질/펩타이드 단량체 또는 타우-유사 펩타이드/단백질, 또는 변형된 또는 끝이 잘린 타우 펩타이드/단백질 또는 타우 펩타이드/단백질 단량체의 다른 유도체, 및 타우 단백질 올리고머로 구성된 단백질을 나타낸다. "가용성 타우"는 특히 신경섬유 엉킴(NFT)을 배제한다.
"불용성 타우"는 본원에서 사용된 바와 같이 각각 시험관내 수성 매질 중에 그리고 생체내 포유류 또는 인간 몸체에서, 더 상세하게는 뇌에서 불용성인 타우 펩타이드 또는 단백질, 또는 타우-유사 펩타이드/단백질, 또는 변형된 또는 끝이 잘린 타우 펩타이드/단백질 또는 올리고머 또는 폴리머 구조를 형성하는 타우 펩타이드/단백질의 다른 유도체의 다중 응집된 단량체를 나타내지만, 특히 포유류 또는 인간 몸체, 더 상세하게는 뇌에서 불용성인 타우 또는 변형된 또는 끝이 잘린 타우 펩타이드/단백질 또는 그의 유도체의 다중 응집된 단량체를 나타낸다. "불용성 타우"에는 특히 신경섬유 엉킴(NFT)이 포함된다.
"모노머 타우" 또는 "타우 단량체"는 본원에서 사용된 바와 같이 수성 매질 중 응집된 복합체가 없이 완전히 용해된 타우 단백질을 나타낸다.
"응집된 타우", "올리고머 타우" 및 "타우 올리고머"는 각각 시험관내 수성 매질 중에 그리고 생체내 포유류 또는 인간 몸체에서, 더 상세하게는 뇌에서 모두 불용성이거나 가용성인 타우 펩타이드 또는 단백질, 또는 타우-유사 펩타이드/단백질, 또는 변형된 또는 끝이 잘린 타우 펩타이드/단백질 또는 올리고머 또는 폴리머 구조를 형성하는 타우 펩타이드/단백질의 다른 유도체의 다중 응집된 단량체를 나타내지만, 특히 포유류 또는 인간 몸체에서, 더 상세하게는 뇌에서 불용성 또는 가용성인 타우 또는 변형된 또는 끝이 잘린 타우 펩타이드/단백질 또는 그의 유도체의 다중 응집된 단량체를 나타낸다.
"조정 항체(modulating antibody)"는 다양한 구현예에서 본원에 기재된 바와 같은 항체 또는 그의 기능성 단편을 나타내며, 이는 동물, 특히 증가된 수준의 가용성 타우 단백질 및/또는 가용성 인산화된 타우 단백질을 함유하는 포유류 또는 인간의 뇌에서, 특히 뇌 피질 및/또는 해마에서, 가용성 및/또는 불용성 타우 단백질, 특히 가용성 인산화된 타우 단백질의 기능성 특성, 생물학적 활성 또는 수준을 상향조절(예를 들면 활성화 또는 자극)하거나 하향조절(예를 들면 저해 또는 억제)하거나 또는 달리 변화시킬 수 있다. 조정 항체 또는 그의 기능성 단편은 직접적으로 또는 간접적으로 상기 타우 단백질을 인코딩하는 폴리펩타이드 또는 타우 단백질을 조정하는 작용을 할 수 있다. 어떤 구현예에서, 조정 항체 또는 그의 기능성 단편은 동물, 특히 증가된 수준의 가용성 타우 단백질 및/또는 가용성 인산화된 타우 단백질을 함유하는 포유류 또는 인간의 뇌에서, 특히 뇌 피질 및/또는 해마에서, 가용성 및 불용성 타우 단백질, 특히 가용성 인산화된 타우 단백질의 수준을 감소시킨다.
일 구현예에서, 본 발명은 키메라 항체 또는 인간화된 항체, 또는 본원에서 기재되고 청구되는 임의의 하나의 구현예에 따른 상기 결합 펩타이드 또는 항체를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 또는 이들의 조합을 약제학적으로 허용가능한 담체와 함께 치료적으로 효과적인 양으로 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
적당한 약제학적 담체, 희석제 및/또는 부형제는 당해분야에서 잘 알려져 있고, 예를 들면 포스페이트 완충된 염수 용액, 물, 에멀젼 예컨대 오일/물 에멀젼, 다양한 유형의 습윤제, 멸균한 용액 등이 포함된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어들 "치료하다", "예방하다", "예방하는" 및 "예방"은 예방 또는 치료 제제의 투여로 생성되는 대상체에서 장애의 1 이상의 증상의 재발 또는 개시의 예방을 나타낸다.

인간화된 항체의 구축

본 발명은 본원에 포함된 특정 구현예의 하기의 상세한 설명을 참조로 더 쉽게 이해될 수 있다. 본 발명이 이들의 특정 구현예의 특정한 세부사항을 참조로 기재되었으나, 이는 이러한 세부사항이 본 발명의 범위에 대한 제한으로 간주되어서는 안 된다.

상이한 HCVR 및 LCVR 영역은 원상태 또는 변형된 인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역 내로 내장된 공여체 항체, 예를 들면 쥣과 항체로부터 수득가능한 비-인간 CDR을 포함하여 설계될 수 있다. 변형은 특히 뼈대 영역 내에서 1 이상의 아미노산 잔기의 각 하위그룹에서 상기 위치에서 더 통상적으로 발견되는 비-인간 잔기, 특히 쥣과 잔기에 의한 또는 각 하위그룹에서 상기 위치에서 더 통상적으로 발견되는 것과 유사한 특성을 갖는 잔기에 의한 교환에 관한 것일 수 있다.

뼈대 영역의 변형에서, 뼈대 서열은 CDR을 항원과의 상호작용을 위한 그 정확한 공간 배향으로 유지하는 기능을 하며, 뼈대 잔기는 때때로 항원 결합에도 참여할 수 있다. 본 발명의 일 구현예에서는 친화도가 재형상화된 항체에서 유지될 가능성을 최대화하기 위해, 설치류 뼈대 서열에 가장 유사하게 만들기 위해 선택된 인간 뼈대 서열을 추가 채택하기 위한 조치가 취해진다.

따라서, 인간 뼈대 영역에서의 쥣과 잔기가 치환될 수 있다. 특히, 쥣과 잔기는 중쇄 가변(HCVR) 영역의 인간 뼈대 영역에서 위치 47 또는 94 또는 둘 모두에서 그리고 경쇄 가변(LCVR) 영역의 인간 뼈대 영역에서 각각 위치 45 및/또는 87 및/또는 50 및/또는 53에서 치환될 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명은 키메라 항체 또는 인간화된 항체, 또는 본원에서 기재되고 청구되는 임의의 하나의 구현예에 따른 상기 결합 펩타이드 또는 항체를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 또는 이들의 조합을 약제학적으로 허용가능한 담체와 함께 치료적으로 효과적인 양으로 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.

적당한 약제학적 담체, 희석제 및/또는 부형제는 당해분야에서 잘 알려져 있고, 예를 들면 포스페이트 완충된 염수 용액, 물, 에멀젼 예컨대 오일/물 에멀젼, 다양한 유형의 습윤제, 멸균한 용액 등이 포함된다.

본 발명에 따른 키메라 항체 또는 인간화된 항체 및 그의 활성 단편은 생리적으로 허용가능한 제형으로 제조될 수 있고, 알려진 기술을 이용하여 약제학적으로 허용가능한 담체, 희석제 및/또는 부형제를 포함할 수 있다. 예를 들면, 본 발명에 따른 그리고 본원에 기재된 바와 같은 항체는 약제학적으로 허용가능한 담체, 희석제 및/또는 부형제와 조합되어 치료적 조성물을 형성한다. 적당한 약제학적 담체, 희석제 및/또는 부형제는 당해분야에서 잘 알려져 있고, 예를 들면 포스페이트 완충된 염수 용액, 물, 에멀젼 예컨대 오일/물 에멀젼, 다양한 유형의 습윤제, 멸균한 용액 등이 포함된다.

본 발명에 따른 약제학적 조성물의 제형은 당해분야의 숙련가에게 알려진 표준 방법론에 따라 달성될 수 있다.

본 발명의 조성물은 적당한, 약제학적으로 효과적인 용량으로 고체, 액체 또는 에어로졸의 형태로 대상체에 투여될 수 있다. 고형 조성물의 예에는 알약, 크림, 및 이식가능 복용량 단위가 포함된다. 알약은 경구로 투여될 수 있다. 치료적 크림은 국소로 투여될 수 있다. 이식가능 복용량 단위는, 예를 들면 종양 부위에서 국소로 투여될 수 있거나, 예를 들면 피하로 치료적 조성물의 전신 방출을 위해 이식될 수 있다. 액체 조성물의 예에는 근육내, 피하, 정맥내, 동맥내 주사를 위해 채택된 제형 및 국소 및 안구내 투여를 위한 제형이 포함된다. 에어로졸 제형의 예에는 폐로의 투여를 위한 흡입기 제형이 포함된다.

조성물은 표준 투여 경로로 투여될 수 있다. 일반적으로, 조성물은 국소, 경구, 직장, 코, 진피내, 복강내, 또는 비경구(예를 들면, 정맥내, 피하, 또는 근육내) 경로로 투여될 수 있다.

또한, 조성물은 지속 방출 매트릭스, 예컨대 생분해성 폴리머 내로 편입될 수 있고, 폴리머는 전달을 원하는 부근에, 예를 들면 종양 부위에 이식된다. 방법에는 단회 용량의 투여, 예정된 시간 간격의 반복된 용량의 투여 및 예정된 기간 동안의 지속된 투여가 포함된다.

지속 방출 매트릭스는 본원에서 사용된 바와 같이 보통 효소 또는 산/염기 가수분해에 의해 또는 용해에 의해 분해성인 폴리머 물질로 제조된 매트릭스이다. 일단 체내로 삽입되면, 매트릭스는 효소 및 체액에 의해 작용하게 된다. 지속 방출 매트릭스는 바람직하게는 생체적합성 물질, 예컨대 리포좀, 폴리락타이드(폴리락타이드산), 폴리글리콜라이드(글리콜산의 폴리머), 폴리락타이드 코-글리콜라이드(락트산 및 글리콜산의 코폴리머), 폴리무수물, 폴리(오르토)에스테르, 폴리펩타이드, 히알루론산, 콜라겐, 콘드로이틴 설페이트, 카복실산, 지방산, 인지질, 다당류, 핵산, 폴리아미노산, 아미노산, 예컨대 페닐알라닌, 티로신, 이소류신, 폴리뉴클레오타이드, 폴리비닐 프로필렌, 폴리비닐피롤리돈 및 실리콘에 의해 선택된다. 바람직한 생분해성 매트릭스는 폴리락타이드, 폴리글리콜라이드, 또는 폴리락타이드 코-글리콜라이드(락트산 및 글리콜산의 코-폴리머) 중 하나의 매트릭스이다.

조성물의 복용량은 다양한 인자, 예컨대 치료받는 병태, 사용된 특정한 조성물, 및 다른 임상적 인자, 예컨대 환자의 체중, 체격, 성별 및 일반적인 건강 상태, 체표면적, 투여될 특정한 화합물 또는 조성물, 동시 투여되는 다른 약물, 및 투여 경로에 의존할 것임이 당해분야의 숙련가에게 잘 알려져 있다.

본 발명에 따른 조성물은 생물학적 활성 물질 또는 화합물, 예컨대 타우병증 및/또는 아밀로이드증, 아밀로이드 또는 아밀로이드-유사 단백질, 예컨대 알츠하이머병에 연루된 아밀로이드 β 단백질에 연관된 질환 및 장애 그룹의 약물치료에 사용된 알려진 화합물을 포함하는 다른 조성물과 조합 투여될 수 있다.

다른 생물학적 활성 물질 또는 화합물은 본 발명에 따라 치료적 백신으로서 의 상동성을 갖는 또는 유사한 기전에 의해 또는 관련없는 작용 기전에 의해 또는 다수의 관련된 및/또는 관련없는 작용 기전에 의해 그것의 생물학적 효과를 발휘할 수 있다.

일반적으로, 다른 생물학적 활성 화합물에는 중성자-전송 인핸서, 정신치료적 약물, 아세틸콜린 에스테라제 억제제, 칼슘-채널 차단제, 생체 아민, 벤조디아제핀 신경안정제, 아세틸콜린 합성, 저장 또는 방출 증진제, 아세틸콜린 시냅스후 수용체 작용제, 모노아민 옥시다제-A 또는 -B 억제제, N-메틸-D-아스파르테이트 글루타메이트 수용체 길항제, 비-스테로이드 항-염증성 약물, 항산화제, 및 세로토닌성 수용체 길항제가 포함될 수 있다.

특히, 생물학적 활성제 또는 화합물은 항체, 특히 모노클로날 항체 및 그의 활성 단편을 포함하는 본 발명에 따른 결합 펩타이드, 및 임의로 약제학적으로 허용가능한 담체 및/또는 희석제 및/또는 부형제 및 질환 치료를 위한 설명과 함께, 산화적 스트레스에 대한 화합물, 항-세포자멸적 화합물, 금속 킬레이터, DNA 치유 억제제, 예컨대 피렌제핀 및 대사물, 3-아미노-1-프로판설폰산(3APS), 1,3-프로판디설포네이트(1,3-PDS), 세크레타제 활성제, [베타]- 및 7-세크레타제 억제제, 타우 단백질, 신경전달물질, /3-시트 파괴제, 항염증 분자, "비정형 항정신병약", 예컨대 클로자핀, 지프라시돈, 리스페리돈, 아리피프라졸 또는 올란자핀 또는 콜린에스테라아제 억제제(ChEIs), 예컨대 타크린, 리바스티그민, 도네페질, 및/또는 갈란타민 및 다른 약물 및 영양 보충물, 예컨대 비타민 B12, 시스테인, 아세틸콜린 전구체, 레시틴, 콜린, 은행나무, 아세틸-L-카르니틴, 이데베논, 프로펜토필린, 또는 잔틴 유도체로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 적어도 하나의 화합물을 포함할 수 있다.

추가 구현예에서, 본 발명에 따른 조성물은 항체, 특히 모노클로날 항체 및 그의 활성 단편을 포함하는 본 발명에 따른 키메라 항체 또는 인간화된 항체, 및 임의로 약제학적으로 허용가능한 담체 및/또는 희석제 및/또는 부형제와 함께 니아신 또는 메만틴을 포함할 수 있다.

본 발명의 또 하나의 구현예에서, 본 발명에 따른 키메라 항체 또는 인간화된 항체 또는 그의 활성 단편, 및 임의로 약제학적으로 허용가능한 담체 및/또는 희석제 및/또는 부형제와 함께, 환각, 망상, 사고 장애(뚜렷한 모순된 생각, 탈선, 탈선사고로 명시됨), 및 기괴한 또는 비조직된 행동, 뿐만 아니라 무쾌감증, 둔마된 정서, 무관심, 및 사회적 위축을 포함하는 양성 및 음성 정신병적 증상의 치료를 위한 "비정형 항정신병약", 예컨대 클로자핀, 지프라시돈, 리스페리돈, 아리피프라졸 또는 올란자핀을 포함하는 조성물이 제공된다.

본 발명에 따른 키메라 항체 또는 인간화된 항체에 부가하여 조성물에서 적당하게 사용될 수 있는 다른 화합물은, 예를 들면 치료적 약물 표적(페이지 36-39), 알칸설폰산 및 알칸올황산(페이지 39-51), 콜린에스테라아제 억제제(페이지 51-56), NMDA 수용체 길항제(페이지 56-58), 에스트로겐(페이지 58-59), 비-스테로이드 항-염증성 약물(페이지 60-61), 항산화제(페이지 61-62), 페록시솜 증식체-활성화된 수용체(PPAR) 작용제(페이지 63-67), 콜레스테롤-저하제(페이지 68-75); 아밀로이드 억제제(페이지 75-77), 아밀로이드 형성 억제제(페이지 77-78), 금속 킬레이터(페이지 78-79), 항정신병약 및 항우울제(페이지 80-82), 영양 보충물(페이지 83-89) 및 뇌에서 생물학적 활성 물질의 이용가능성을 증가시키는 화합물(페이지 89-93 참고) 및 전구약물(페이지 93 및 94)을 포함하여 본원에 참조로 편입된 문서인 WO 2004/058258(특히 페이지 16 및 17 참고)에 개시된 것들, 그러나 특히 상기 명시된 페이지 상에 언급된 화합물이다.

단백질성 약제학적으로 활성 물질은 1ng 내지 30mg/용량의 양으로 존재할 수 있다. 일반적으로, 투여 방식은 본 발명에 따른 항체 0.1? 내지 10mg 범위, 특히 1.0? 내지 1.0mg 범위, 더 상세하게는 1.0? 내지 100? 범위여야 하며, 이들 범위 내에 속하는 모든 개별적인 숫자도 본 발명의 일부이다. 투여가 연속적 주입을 통해 일어나는 경우, 보다 적절한 복용량은 0.01? 내지 10mg units/체중 킬로그램/시간의 범위일 수 있고, 이들 범위 내에 속하는 모든 개별적인 숫자도 본 발명의 일부이다.

투여는 일반적으로 비경구로, 예를 들면 정맥내로 또는 피하로 수행될 것이다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균한 수성 또는 비-수용액, 서스펜션 및 에멀젼이 포함된다. 비-수성 용매에는 비제한적으로 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 식물성 오일, 예컨대 올리브 오일, 및 주사가능 유기 에스테르, 예컨대 에틸 올레이트가 포함된다. 수성 용매는 염수 및 완충 매질을 포함하는 물, 알코올/수용액, 에멀젼 또는 서스펜션으로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다. 비경구 비히클에는 나트륨 클로라이드 용액, 링거 덱스트로오스, 덱스트로오스 및 나트륨 클로라이드, 락테이트화된 링거, 또는 고정유가 포함된다. 정맥내 비히클에는 유체 및 영양소 보충물, 전해질 보충물(예컨대 링거 덱스트로오스 기반의 것들) 등이 포함된다. 보존제, 예컨대 항미생물제, 항산화제, 킬레이트제, 불활성 가스 등도 존재할 수 있다.

약제학적 조성물은 단백질성 담체, 예컨대 혈청 알부민 또는 면역글로불린, 특히 인간 기원의 것들을 추가로 포함할 수 있다. 추가 생물학적 활성제가 그것의 의도한 용도에 따라 본 발명의 약제학적 조성물에 존재할 수 있다.

결합 표적이 뇌에 위치한 경우, 본 발명의 어떤 구현예는 혈액-뇌 장벽을 통과하는 본 발명에 따른 키메라 항체 또는 인간화된 항체(그의 활성 단편 포함)를 제공한다. 어떤 신경퇴행성 질환은 혈액-뇌 장벽의 투과성 증가와 연관되어, 항체 또는 그의 활성 단편을 포함하는 본 발명에 따른 결합 펩타이드가 뇌에 쉽게 도입될 수 있다. 혈액-뇌 장벽이 온전하게 남아있는 경우, 비제한적으로 물리적 방법, 지질-기반 방법, 및 수용체 및 채널-기반 방법을 포함하여 이를 통과하는 분자 수송을 위한 몇 개의 당해분야에 알려진 접근법이 존재한다.

혈액-뇌 장벽을 통해 본 발명에 따른 키메라 항체 또는 인간화된 항체, 또는 그의 활성 단편을 수송하는 물리적 방법에는 비제한적으로 혈액-뇌 장벽의 전적인 우회 또는 혈액-뇌 장벽에서의 개구들 생성이 포함된다. 우회 방법에는 비제한적으로 뇌로의 직접적인 주사(예를 들면, Papanastassiou 등, Gene Therapy 9: 398-406 (2002) 참고) 및 뇌에서의 전달 장치 임플란팅(예를 들면, Gill 등, Nature Med. 9: 589-595 (2003); 및 Gliadel Wafers(TM), Guildford Pharmaceutical 참고)이 포함된다. 장벽에 개구들을 생성하는 방법에는 비제한적으로 초음파(예를 들면, 미국 특허 공보 번호 2002/0038086 참고), 삼투압(예를 들면, 고장성 만니톨의 투여(Neuwelt, E. A., Implication of the Blood-Brain Barrier and its Manipulation, VoIs 1 & 2, Plenum Press, N. Y. (1989)), 예를 들면, 브라디키닌 또는 침투제 A-7에 의한 투과화(예를 들면, 미국 특허 번호 5,112,596, 5,268,164, 5,506,206, 및 5,686,416 참고), 및 결합 펩타이드 또는 항원-결합 단편을 인코딩하는 유전자를 함유하는 벡터를 이용한 혈액-뇌 장벽에 걸친 뉴런의 형질감염(예를 들면, 미국 특허 공보 번호 2003/0083299 참고)이 포함된다.

혈액-뇌 장벽을 통한 본 발명에 따른 키메라 항체 또는 인간화된 항체(항체, 특히 모노클로날 항체, 또는 그의 활성 단편 포함)를 수송하는 지질-기반 방법에는 비제한적으로 혈액-뇌 장벽의 혈관 내피 상 수용체에 결합하는 그의 활성 단편에 커플링된 리포좀 내 본 발명에 따른 키메라 항체 또는 인간화된 항체 또는 그의 활성 단편의 캡슐화(예를 들면, 미국 특허 출원 공보 번호 20020025313 참고), 및 저-밀도 지질단백질 입자 중 항체, 특히 모노클로날 항체, 또는 그의 활성 단편을 포함하는 본 발명에 따른 결합 펩타이드의 코팅(예를 들면, 미국 특허 출원 공보 번호 20040204354 참고) 또는 아포지질단백질 E(예를 들면, 미국 특허 출원 공보 번호 20040131692 참고)가 포함된다.

혈액-뇌 장벽을 통한 본 발명에 따른 키메라 항체 또는 인간화된 항체 또는 그의 활성 단편을 수송하는 수용체 및 채널-기반 방법에는 비제한적으로 혈액-뇌 장벽의 투과성을 증가시키기 위한 글루코코르티코이드 차단제의 사용(예를 들면, 미국 특허 출원 공보 번호 2002/0065259, 2003/0162695, 및 2005/0124533 참고); 칼륨 통로 활성화(예를 들면, 미국 특허 출원 공보 번호 2005/0089473 참고), ABC 약물 수송체 저해(예를 들면, 미국 특허 출원 공보 번호 2003/0073713 참고); 트랜스페린을 이용한 항체 코팅 및 1 이상의 트랜스페린 수용체의 활성 조정(예를 들면, 미국 특허 출원 공보 번호 2003/0129186 참고), 및 항체 양이온화(예를 들면, 미국 특허 번호 5,004,697 참고)가 포함된다.

추가로, 본 발명의 항체는 다양한 혈액 뇌 장벽(BBB) 수용체(즉 트랜스페린 수용체, 인슐린 수용체, 저밀도 지질단백질 수용체-관련된 단백질 8, 글루코오스 수송체 1(Glut1) 등)를 활용하여 BBB를 통한 수용체 매개된 수송(RMT)의 이점을 취하도록 조작될 수 있다(예를 들면, WO9502421 참고). 예를 들면, 본 발명의 항체는 타우 및 BBB 수용체를 표적화하도록 다중특이적으로 제조될 수 있다. 다중특이적 항체의 비제한적 예에는 항체의 한 팔이 본 발명의 항체 단편이고 항체의 다른 팔이 BBB를 통한 수송을 매개하는 BBB 수용체를 표적으로 하는 이중특이적 항체가 포함된다. BBB 수용체에는, 예를 들면 트랜스페린 수용체(TfR), 인슐린 수용체, 인슐린-유사 성장 인자 수용체(IGF 수용체), 저밀도 지질단백질 수용체-관련된 단백질 8(LRP8), 저밀도 지질단백질 수용체-관련된 단백질 1(LRP1), 글루코오스 수송체 1(Glut1) 및 헤파린-결합 표피 성장 인자-유사 성장 인자(HB-EGF)가 포함될 수 있다.

본 발명에 따른 키메라 항체 또는 인간화된 항체 또는 그의 활성 단편 또는 본 발명에 따른 약제학적 조성물의 단일 또는 반복된 투여는 장시간에 걸쳐 대상체에 제공될 수 있다. 투여 지속시간은 1주 내지 최대 12개월 또는 그 초과일 수 있다. 이 시간 동안 결합 펩타이드, 항체 또는 약제학적 조성물은 1주 1회, 매 2주, 3주, 4주 1회 등이나 치료될 대상체의 필요에 따라 더 높거나 더 낮은 빈도로 투여될 수 있다.

추가 구현예에서, 본 발명은 신경퇴행성 질환 또는 장애, 예컨대 비제한적으로 알츠하이머병, 크로이펠츠-야콥병, 권투선수 치매, 다운 증후군, 게르스트만-슈트로이슬러-샤잉커 질환, 봉입체 근염, 및 프리온 단백질 뇌 아밀로이드 혈관병증을 포함하는 타우 및 아밀로이드 병리의 공존을 나타내는 질환 또는 장애를 포함하는 이질적인 그룹의 신경퇴행성 질환 또는 장애, 외상성 뇌 부상 및 비제한적으로, 괌의 근위축 측삭 경화증/피칸슨증-치매 복합증, 신경섬유 엉킴을 갖는 비-괌사람 운동 뉴런 질환, 은친화성 입자 치매, 피질기저 퇴행증, 석회화를 갖는 확산 신경섬유 엉킴, 염색체 17에 연결된 파키슨증을 갖는 전측두엽 치매, 할러포르덴-슈파츠 질환, 다중 시스템 위축증, 니만-피크병, 유형 C, 팔리도-폰토-니그랄 변성, 피크병, 진행성 피질하 신경교증, 진행성 핵상 마비, 아급성 경화 범뇌염 신경섬유원매듭 기원 치매, 뇌염후 파킨슨증, 근긴장성 이영양증을 포함하는 뚜렷이 다른 아밀로이드 병리를 나타내지 않는 추가 질환 또는 장애를 포함하는 타우병증을 포함하는 타우-단백질-연관된 질환, 장애 또는 병태의 검출 및 진단을 위한 방법 및 키트를 제공한다. 병리적 이상은 타우병증에서 두드러진 뇌 병리인 신경섬유 병변의 형성에 의해 야기되거나 연관될 수 있다.

게다가, 본 발명은 신경퇴행성 질환 또는 장애, 예컨대 타우 및 아밀로이드 병리의 공존을 나타내는 질환 또는 장애를 포함하는 이질적인 그룹의 신경퇴행성 질환 또는 장애를 포함하는 타우병증을 포함하는 타우-단백질-연관된 질환, 장애 또는 병태에 대한 소인을 진단하기 위한, 또는 환자에서 최소 잔류 질환을 모니터링하기 위한 또는 본 발명에 따른 키메라 항체 또는 인간화된 항체, 또는 본 발명에 따른 그리고 본원에 기재된 바와 같은 조성물로의 치료에 대한 환자의 반응성을 예측하기 위한 방법 및 키트를 제공한다. 이들 방법에는 생물학적 샘플에서 또는 원 위치 상태에서 물질을 검출 또는 정량하기 위해 통상적으로 사용된 알려진 면역학적 방법이 포함된다.

그것을 필요로 하는 대상체, 특히 포유류, 더 상세하게는 인간에서의 타우-단백질-연관된 질환 또는 병태의 진단 또는 신경퇴행성 질환 또는 장애, 예컨대 타우 및 아밀로이드 병리의 공존을 나타내는 질환 또는 장애를 포함하는 이질적인 그룹의 신경퇴행성 질환 또는 장애를 포함하는 타우병증을 포함하는 타우-단백질-연관된 질환, 또는 병태에 대한 소인의 진단은 샘플 또는 동일반응계(in situ)에 타우 단백질의 에피토프에 대한 본 발명의 결합 펩타이드, 특히 항체, 특히 모노클로날 항체 또는 그의 활성 단편의 면역특이적 결합을 검출하여 달성될 수 있고, 이는 샘플 또는 타우 단백질을 함유하는 것으로 의심나는 구체적인 신체 부분 또는 신체 영역을 타우 단백질의 에피토프와 결합하는 항체와 접촉시키고, 항체가 타우 단백질과 결합하여 면역적 복합체를 형성하도록 하고, 면역적 복합체의 형성을 검출하고, 샘플 또는 구체적인 신체 부분 또는 영역에서 면역적 복합체의 존재 또는 부재를 타우 단백질의 존재 또는 부재와 연관시키고, 임의로 면역적 복합체의 양을 정상 대조군 값과 비교하는 것을 포함하며, 여기서 정상 대조군 값에 비교된 면역적 복합체의 양 증가는 대상체가 타우 단백질-연관된 질환 또는 병태를 앓고 있거나 위험에 처해 있음을 시사한다.

항체, 특히 모노클로날 항체 및 그의 활성 단편을 포함하는 본 발명에 따른 결합 펩타이드, 또는 본 발명에 따른 조성물을 이용한 치료 후 대상체, 특히 포유류, 더 상세하게는 인간에서의 최소 잔류 질환의 모니터링은 샘플 또는 원위치에 타우 단백질의 에피토프에 대한 본 발명의 결합 펩타이드, 특히 항체, 특히 모노클로날 항체 또는 그의 활성 단편의 면역특이적 결합을 검출하여 달성될 수 있고, 이는 샘플 또는 타우 단백질을 함유하는 것으로 의심나는 구체적인 신체 부분 또는 신체 영역을 타우 단백질의 에피토프와 결합하는 항체, 특히 모노클로날 항체 및 그의 활성 단편을 포함하는 본 발명에 따른 결합 펩타이드와 접촉시키고, 항체, 특히 모노클로날 항체 및 그의 활성 단편을 포함하는 본 발명에 따른 결합 펩타이드가 타우 단백질과 결합하여 면역적 복합체를 형성하도록 하고, 면역적 복합체의 형성을 검출하고, 샘플 또는 구체적인 신체 부분 또는 영역에서 면역적 복합체의 존재 또는 부재를 타우 단백질의 존재 또는 부재와 연관시키고, 임의로 상기 면역적 복합체의 양을 정상 대조군 값과 비교하는 것을 포함하며, 여기서 정상 대조군 값에 비교된 상기 면역적 복합체의 양 증가는 대상체가 여전히 최소 잔류 질환(minimal residual disease)을 앓고 있을 수 있음을 시사한다.

본 발명에 따른 키메라 항체 또는 인간화된 항체, 또는 본 발명에 따른 조성물을 이용한 치료에 대한 대상체, 특히 포유류, 더 상세하게는 인간의 반응성 예측은 샘플 또는 원위치에 타우 단백질의 에피토프에 대한 결합 펩타이드, 특히 모노클로날 항체 또는 그의 활성 단편의 면역특이적 결합을 검출하여 달성될 수 있고, 이는 샘플 또는 타우 단백질을 함유하는 것으로 의심나는 구체적인 신체 부분 또는 신체 영역을 타우 단백질의 에피토프와 결합하는 항체, 특히 모노클로날 항체 및 그의 활성 단편을 포함하는 본 발명에 따른 결합 펩타이드와 접촉시키고, 본 발명에 따른 키메라 항체 또는 인간화된 항체 또는 그의 활성 단편이 타우 단백질과 결합하여 면역적 복합체를 형성하도록 하고, 면역적 복합체의 형성을 검출하고, 샘플 또는 구체적인 신체 부분 또는 영역에서 면역적 복합체의 존재 또는 부재를 타우 단백질의 존재 또는 부재와 연관시키고, 임의로 치료 개시 이전 및 이후 상기 면역적 복합체의 양을 비교하는 것을 포함하며, 여기서 상기 면역적 복합체의 양 감소는 상기 환자가 치료에 대한 반응성에 대해 높은 잠재력을 가짐을 시사한다.

타우 단백질-연관된 질환 또는 병태의 진단에서, 신경퇴행성 질환 또는 장애, 예컨대 타우 및 아밀로이드 병리의 공존을 나타내는 질환 또는 장애를 포함하는 이질적인 그룹의 신경퇴행성 질환 또는 장애를 포함하는 타우병증을 포함하는 타우 단백질-연관된 질환 또는 병태에 대한 소인의 진단을 위해, 또는 환자에서 최소 잔류 질환의 모니터링을 위해 또는 본 발명에 따른 키메라 항체 또는 인간화된 항체 또는 그의 활성 단편 또는 본 발명에 따른 그리고 본원에 기재된 바와 같은 조성물을 이용한 치료에 대한 환자의 반응성 예측을 위해 사용될 수 있는 생물학적 샘플은, 예를 들면 유체, 예컨대 혈청, 혈장, 타액, 위 분비, 점액, 뇌척수액, 림프 유체 등 또는 유기체, 예컨대 신경, 뇌, 심장 또는 혈관 조직에서 수득된 조직 또는 세포 샘플이다. 샘플에서 타우 단백질의 존재 또는 부재의 결정을 위해, 당해분야의 숙련가에게 알려진 임의의 면역검정, 예컨대 검출을 위해 2차 시약을 이용하는 간접적인 검출 방법을 이용하는 검정, ELISA's 및 면역침전 및 응집 검정이 사용될 수 있다. 이들 검정의 상세한 설명은, 예를 들면 Harlow and Lane, Antibodies: A laboratory Manual (Cold Spring Laboratory, New York 1988 555-612, WO96/13590, Maertens and Stuyver, Zrein 등 (1998) 및 WO96/29605에 제공된다.

원위치 진단을 위해, 항체 또는 그의 활성 단편을 포함하는 본 발명에 따른 키메라 항체 또는 인간화된 항체는 본 발명에 따른 항체와 아밀로이드 단백질 상의 에피토프 영역 간 특이적 결합이 일어날 수 있도록 당해분야에서 알려진 방법, 예컨대 정맥내, 피하, 비강내, 복강내, 뇌내, 동맥내 주사로 진단될 유기체에 투여될 수 있다. 결합 펩타이드/항원 복합체는 본 발명에 따른 키메라 항체 또는 인간화된 항체, 또는 그의 기능성 단편에 부착된 라벨 또는 당해분야에 알려진 임의의 다른 검출 방법을 통해 편리하게 검출될 수 있다.

진단적용 또는 신경퇴행성 질환 또는 장애, 예컨대 타우 및 아밀로이드 병리의 공존을 나타내는 질환 또는 장애를 포함하는 이질적인 그룹의 신경퇴행성 질환 또는 장애를 포함하는 타우병증을 포함하는 타우 단백질-연관된 질환 또는 병태에 대한 소인을 진단하기 위한, 또는 환자에서 최소 잔류 질환의 모니터링을 위한 또는 항체 또는 그의 활성 단편을 포함하는 본 발명에 따른 키메라 항체 또는 인간화된 항체 또는 본 발명에 따른 그리고 본원에 기재된 바와 같은 조성물을 이용한 치료에 대한 환자의 반응성 예측을 위한 적용에서 사용된 면역검정은 전형적으로 검출을 위해 라벨링된 항원, 결합 펩타이드, 또는 2차 시약에 의존한다. 이들 단백질 또는 시약은 비제한적으로 유색의 입자, 예컨대 콜로이드 금 및 라텍스 비드를 포함하는 형광, 발광 및 색원체 물질 및 효소, 방사선동위원소를 포함하는 당해분야의 숙련가에게 일반적으로 알려진 화합물로 라벨링될(labelled) 수 있다. 이들 중, 방사성 라벨링이 거의 모든 유형의 검정을 위해 그리고 가장 많은 변화를 포함하여 사용될 수 있다. 효소-접합된 라벨은 방사능을 회피해야 하거나 신속한 결과가 필요한 경우 특히 유용하다. 그 사용을 위해 비싼 장비가 필요하지만, 형광색소는 매우 민감성 검출 방법을 제공한다. 이들 검정에서 유용한 결합 펩타이드는 항체, 특히 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 및 친화도 정제된 폴리클로날 항체를 포함하여 본원에서 청구되고 개시되는 것들이다.

대안적으로, 본 발명에 따른 키메라 항체 또는 인간화된 항체, 또는 그의 활성 단편은 면역글로불린, 예컨대 단백질 A 또는 G에 대해 친화도를 갖는 라벨링된 물질과의 반응 또는 제2 항체에 의해 간접적으로 라벨링될 수 있다. 본 발명에 따른 키메라 항체 또는 인간화된 항체, 또는 그의 활성 단편은 제2물질로 접합되고 항체에 접합된 제2 물질에 대한 친화도를 갖는 라벨링된 제3물질로 검출될(detected) 수 있다. 예를 들면, 본 발명에 따른 키메라 항체 또는 인간화된 항체, 또는 그의 활성 단편은 라벨링된 아비딘 또는 스트렙타비딘을 이용하여 검출된 바이오틴 및 결합 펩타이드/바이오틴 콘주게이트(conjugate)에 접합될 수 있다. 유사하게, 결합 펩타이드는 라벨링된 항-합텐 결합 펩타이드를 이용하여 검출된 합텐 및 결합 펩타이드/합텐 콘주게이트에 접합될 수 있다.

당해분야의 숙련가는 본 발명에 따라 이용될 수 있는 이들 및 다른 적당한 라벨을 알 것이다. 결합 펩타이드 또는 그의 단편에 대한 이들 라벨의 결합은 당해분야의 숙련가에게 통상적으로 알려진 표준 기술을 이용하여 달성될 수 있다. 전형적인 기술은 Kennedy, J. H., 등, 1976 (Clin. Chim. Acta 70:1-31), 및 Schurs, A. H. W. M. 등, 1977 (Clin. Chim Acta 57:1-40)에 기재되어 있다. 후자에서 언급된 커플링 기술은 글루타르알데하이드 방법, 퍼아이오데이트 방법, 디말레이마이드 방법 등이며, 이들 모두는 본원에 참조로 편입된다.

현재 면역검정은 분석대상물의 존재를 검출하기 위해 이중 항체 방법을 이용하며, 여기서 항체는 검출가능한 라벨로 라벨링된 제2항체와의 반응성에 의해 간접적으로 라벨링된다. 제2항체는 바람직하게는 모노클로날 항체가 유도된 동물의 항체에 결합하는 것이다. 환언하면, 모노클로날 항체가 마우스 항체인 경우, 라벨링된 제2항체는 항-마우스 항체이다. 본원에서 기재된 검정에 사용될 항체에 있어서, 상기 라벨은 바람직하게는 항체-코팅된 비드, 특히 자기성 비드(magnetic bead)이다. 본원에서 기재된 면역검정에 이용될 항체에 있어서, 라벨은 바람직하게는 검출가능한 분자, 예컨대 방사성, 형광 또는 전기화학발광 물질이다.

분석대상물 존재의 신속한 결정을 위해 채택되기 때문에 신속 포맷 시스템으로 종종 불리는 대안적인 이중 항체 시스템도 본 발명의 범위 내에서 이용될 수 있다. 시스템은 항체 및 분석대상물 간 높은 친화도를 필요로 한다. 본 발명의 일 구현예에 따라, 타우 단백질의 존재는 각각 아밀로이드 단백질에 대해 특이적인 한 쌍의 항체를 이용해서 결정된다. 한 쌍의 항체 중 하나는 본원에서 "검출기 항체"로 불리며, 상기 쌍의 다른 항체는 본원에서 "포획 항체(capture antibody)"로 불린다. 본 발명의 모노클로날 항체는 포획 항체 또는 검출기 항체로 사용될 수 있다. 본 발명의 모노클로날 항체는 또한 단일 검정에서 함께 포획 및 검출기 항체 둘 다로 사용될 수 있다. 따라서 본 발명의 일 구현예에 따라 생체액 샘플에서 타우 단백질을 검출하기 위해 이중 항체 샌드위치 방법을 사용한다. 상기 방법에서, 분석대상물(타우 단백질)은 검출기 항체 및 포획 항체 사이에 끼며, 포획 항체는 고형 지지체 상에 비가역적으로 고정된다. 검출기 항체는 항체-분석대상물 샌드위치의 존재, 따라서 분석대상물의 존재를 확인하기 위해 검출가능한 라벨을 함유할 것이다.

예시적인 고체상 물질에는 비제한적으로 방사선면역검정 및 효소 면역검정 분야에서 잘 알려져 있는 마이크로타이터 플레이트, 폴리스티렌 시험관, 자기성, 플라스틱 또는 유리 비드 및 슬라이드가 포함된다. 고체상에 항체를 커플링하기 위한 방법도 당해분야의 숙련가에게 잘 알려져 있다. 더욱 최근에, 수많은 다공성 물질, 예컨대 나일론, 니트로셀룰로오스, 셀룰로오스 아세테이트, 유리 섬유 및 다른 다공성 폴리머가 고형 지지체로 이용되었다.

본 발명은 또한 상기에서 규정된 바와 같이 조성물을 포함하는 생물학적 샘플에서 타우 단백질을 검출하기 위한 진단 키트에 관한 것이다. 게다가, 본 발명은 상기에서 규정된 바와 같은 조성물에 부가하여, 상기에서 규정된 바와 같이 검출 시약을 또한 포함하는 후자 진단 키트에 관한 것이다. 용어 "진단 키트"는 일반적으로 당해분야에 알려진 임의의 진단 키트에 관한 것이다. 더 구체적으로, 후자 용어는 Zrein 등 (1998)에 기재된 바와 같은 진단 키트를 나타낸다.

본 발명의 또 하나의 목적은 본 발명에 따른 결합 펩타이드를 포함하는 타우 단백질-연관된 질환 및 병태의 검출 및 진단을 위한 신규한 면역프로브 및 시험 키트를 제공하는 것이다. 면역프로브에 있어서, 결합 펩타이드는 적당한 리포터 분자(reporter molecule), 예를 들면 효소 또는 방사선핵종에 직접적으로 또는 간접적으로 부착된다. 시험 키트에는 본 발명에 따른 1 이상의 결합 펩타이드를 보유하는 용기 및 타우 항원에 결합하여 면역적 복합체를 형성하고 면역적 복합체의 존재 또는 부재가 타우 단백질의 존재 또는 부재와 관련되도록 면역적 복합체의 형성을 검출하기 위한 목적의 결합 펩타이드의 사용 설명이 포함된다.

실시예

실시예 1. ELISA에 의한 hACI-36-2B6-Ab1 및 hACI-36-3A8-Ab1의 T4 펩타이드에 대한 결합

1.1. 방법

1.1.1 포스포-타우 결합 검정

항체의 pTau에 대한 결합을 시험하기 위해 ELISA 검정을 사용하였다. Nunc MaxiSorp 96-웰 플레이트(Nunc, Denmark)를 세린 409 상에서 인산화된(T4.5) 또는 인산화되지 않은(T4.6) 타우-유도된 펩타이드 Tau401-418의 10?/mL으로 코팅하였다. 코팅은 4℃에서 포스페이트-완충된 염수(PBS; Sigma-Aldrich, Switzerland) 중에 밤새 수행하였다. 플레이트를 0.05% Tween20/PBS로 철저히 세정한 다음 37℃에서 1hr 동안 0.05% Tween20/PBS 중 1% 소 혈청 알부민(BSA; Sigma-Aldrich)으로 차단하였다. 시험 항체를 함유하는 상청액을 0.5μg/mL에서 시작하는 8개의 2배 희석에 부가하고, 37℃에서 2hr 동안 인큐베이션하였다. 이어서 플레이트를 미리 기재된 대로 세정하고, 염소 항-인간 IgG(Jackson ImmunoResearch Laboratory, England)에 접합된 알칼리성 포스파타제(AP)를 37℃에서 2hr 동안 0.05% Tween20/PBS 중 1/2'000 희석에 첨가하였다. 세정 후, 플레이트를 p-니트로페닐 포스페이트 디나트륨 헥사히드레이트(pNPP; Sigma-Aldrich, Switzerland) 포스파타제 기질액과 인큐베이션하고, 1hr 인큐베이션 후 마이크로플레이트 판독기(Tecan, Switzerland)를 이용하여 405nm에서 측정하였다. 결과는 광학 밀도(O.D.)로 표현하였다.

1.2. 결과

인간화된 항체 hACI-36-2B6-Ab1 및 hACI-36-3A8-Ab1의 pTau 표적에 대한 결합을 T4.5 및 T4.6 펩타이드 상의 직접적 ELISAs를 이용하여 시험하였다. 두 항체 모두 표적에 대한 높은 결합을 실증하였다(도 1). 상응하는 비-인산화된 타우 펩타이드(T4.6)에 대한 결합은 관찰되지 않았다. 이는 표적에 대한 항체 hACI-36-2B6-Ab1 및 hACI-36-3A8-Ab1의 높은 결합을 실증한다.

실시예 2. hACI-36-2B6-Ab1 및 hACI-36-3A8-Ab1을 이용한 TAUPIR에 의한 20월령 유전자이식 타우병증(biGT) 마우스의 뇌에서의 pTau의 염색

2.1. 방법

2.1.1 타우 유전자이식 동물(TAUPIR)로부터의 뇌 섹션 상 타우 매듭에 대한 항-Tau 항체의 결합

사용된 뇌 슬라이스는 노령(18월령 초과의) 이중 유전자이식 biGT(P301L 돌연변이를 갖는 인간 타우의 가장 긴 동형체(441aa)를 함유하는 TPLH 마우스와 교배된 GSK-3β 유전자이식 마우스) 타우병증 마우스에서 얻었다. 뇌 섹션을 PBS 중에서 5분 동안 세정한 뒤 PBS:MeOH(1:1) 중 1.5% H₂O₂ 중에서 주위 온도에서 15분 동안 인큐베이션하여 내인성 페록시다아제 활성을 차단하였다. 섹션을 PBST(PBS/0.1% TritonX100) 중에서 3회 세정한 뒤 PBST+10% FCS(태아 소 혈청) 차단 용액 중 RT에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 이어서 섹션을 4℃에서 밤새 시험된 항체를 함유하는 미희석된 상청액과 함께 인큐베이션하였다. 그 다음 섹션을 PBST 중에 3회 세정한 뒤 RT에서 1시간 동안 PBST/10% FCS 중에서 HRP-접합된 항-인간 IgG4(Invitrogen) 2차 항체와 인큐베이션하였다. 검출 전에, 섹션을 PBST로 3회 세정하고 5분 동안 50mM Tris/HCl pH7.6 중에 인큐베이션하였다. 검출은 디아미노벤지딘(DAB: 10ml의 50mM Tris.HCl + 3μl의 H2O2 30% 중 1개 정제; MP Biomedicals, USA) 중에 3분 동안 섹션을 인큐베이션하여 수행하였다. 섹션을 PBST 중에 3회 세정하여 반응을 중단시켰다. 이어서 섹션을 실란화 유리 플레이트 상으로 이동시키고 50℃에서 2시간 동안 공기 건조하였다. 1분 동안 Mayers 헤마톡실린(Fluka Chemie, Switzerland)과 인큐베이션한 다음 흐르는 수돗물 중에 4분 동안 세정 단계를 이용하여 대조 염색을 수행하였다. 섹션을 50%, 70%, 90% 및 100% 에탄올조를 2회 거친 뒤 자일롤 중에서 1분 동안씩 2회 통과시켜 탈수시켰다. 마지막으로, 유리 커버슬립 하에서 DePeX(BDH Chemicals Ltd., England)를 이용하여 실장하였다.

2.2. 결과

유전자이식 타우병증(biGT) 마우스의 뇌에서 인간화된 항체 hACI-36-2B6-Ab1 및 hACI-36-3A8-Ab1 pTau의 결합을 TAUPIR 염색으로 평가하였다. 항체 hACI-36-2B6-Ab1(도 2a 및 2b) 및 hACI-36-3A8-Ab1(도 3a 및 3b)은 타우병증 마우스의 뇌에 존재하는 타우 매듭 및 신경망 변성에 대한 결합을 실증하였다.

실시예 3. 결합 연구 II: Biacore/SPR에 의한 항체 친화도

3.1 방법

3.1.1 SPR 결합 검정

hACI-36-2B6-Ab1 및 펩타이드 T4.5 간 결합 상호작용을 평가하기 위해, 항체 hACI-36-2B6-Ab1을 센서 칩 상에 고정한 다음 T4.5를 분석대상물로 주입하였다.

Biacore T100 기기(GE Healthcare) 상에서 SPR 실험을 수행하였다. 고정화(EDC, NHS 및 에탄올아민) 및 센서 칩 CM7(카복시메틸 덱스트란)을 위한 시약은 GE Healthcare에서 구매하였다. 작동 완충제는 PBS(Dulbecco? PBS, Sigma)였다. 항체를 펩타이드 T4.5에 대한 결합을 위해 정확하게 배향하기 위해, 항체를 단백질 G를 통해 센서 표면으로 커플링하였다. 이를 위해, 재조합 단백질 G(Sigma)를 10mM 나트륨 아세테이트 pH 4.0(GE Healthcare)를 포함하는 수중 모액(2mg/mL)으로부터 50?/mL로 희석하였다. 이어서 상기 단백질 용액을 EDC/NHS를 이용하여 사전 활성화시킨 CM7 센서 칩의 플로우 셀(fc) 2로 커플링시켰다. 커플링 후, 에탄올아민을 표면에 걸쳐 통과시켜 fc1 상에서 9860 RUs 및 fc2 상에서 9492 RUs의 최종 고정화 수준을 얻었다. 이어서 hACI-36-2B6-Ab1을 10mM 포스페이트 완충제 pH 7.4을 이용해서 100?/mL로 희석하고 85s 동안 2μl/분으로 주입하여 8340 RUs의 고정화 수준을 얻었다. 펩타이드 T4.5의 주입 전에 평탄한 기준선이 수득되도록 하기 위해, PBS를 대략 2h 동안 센서 표면에 걸쳐 흘린 다음 시스템을 PBS로 2회 감작하였다. 5 농도의 펩타이드 T4.5(50 → 800nM)를 작동 완충제를 이용한 2-배 연속 희석으로 검정하였다. 최저 농도에서 시작하여 주입을 수행하고 단일-사이클 역학 방법을 이용하여 50μl/분의 유속에서 fc 1 및 2 모두에 걸쳐 통과시켰다. 결합 및 해리 시간은 모두 각 농도의 펩타이드에 대해 90s 동안 수행하였다. fc 1로부터의 반응을 fc 2로부터 빼서 기기 노이즈, 벌크 굴절 변화 및 카복시메틸 덱스트란 표면에 대한 비특이적 결합에 대해 보정하였다. 역학적 분석을 Biacore T100 평가 소프트웨어를 이용하여 수치 통합 및 전체 분석을 위한 알고리즘을 이용하여 수행하였다. 곡선 맞춤화를 위해, 모든 데이터를 1:1 균질(Langmuir) 모델에 동시에 맞춤화하였다.

사용된 펩타이드

3.2 결과

인간화된 항체 hACI-36-2B6-Ab1에 대한 타우 펩타이드의 결합을 SPR을 이용해서 실시간으로 모니터링하였다. 항체 결합의 결합 및 해리 상들의 분석을 이용하여 결합 속도 상수(k _a), 해리 속도 상수(k _d)뿐만 아니라 해리 상수 K_D를 결정할 수 있었다. 고정된 항체 hACI-36-2B6-Ab1에 대한 펩타이드 T4.5의 결합에 대한 역학적 분석을 수행하여 빠른 결합 속도 상수 0.54 x 10⁵ M^-1s^-1및 해리 속도 상수 36.0 x 10^-4 s^-1가 드러났다(아래 표).

실시예 4. 에피토프 맵핑

4.1 방법

4.1.1 에피토프 맵핑 검정

항-포스포 타우 인간화된 모노클로날 항체의 에피토프 맵핑을 상이한 포스포 및 비포스포 펩타이드 라이브러리를 이용한 ELISA로 수행하였다. 기대된 에피토프의 펩타이드 라이브러리 스캐닝 아미노산 서열을 표 5A에 나타낸다. 추가로, 항체에 결합하는 펩타이드 서열의 각 잔기를 알라닌(Ala)으로 치환하여 펩타이드 라이브러리를 산출하고 표 5B에 나타낸다. 각각의 라이브러리는 펩타이드 백신에 존재하는 포스포 및 비포스포 서열에 걸친 짧은 바이오티닐화된 펩타이드로 구성되었다. 펩타이드 라이브러리는 ANAWA Trading SA에서 구매하였다. 에피토프 맵핑은 제조자(Mimotopes)의 설명에 따라 수행하였다. 간단히 말해서, 스트렙타비딘 코팅된 플레이트(NUNC)를 4℃에서 밤새 포스페이트-완충된 염수(PBS) 중 0.1% BSA로 차단하였다. PBS-0.05% Tween 20으로 세정 후, 플레이트를 최종 농도 10μM PBS 중 0.1% 나트륨 아자이드, 0.1% BSA 중에 희석된 각각의 라이브러리로부터의 상이한 펩타이드와 함께 RT에서 1hr 동안 코팅하였다. 세정 후, 플레이트를 PBS 중 0.1% 나트륨 아자이드 및 2% BSA 중의 상이한 희석도로 시험할 항체와 함께 RT에서 1hr 동안 인큐베이션하였다. 플레이트를 다시 세정하고 RT에서 30분 내지 1hr 동안 1/2000 희석도로 AP-접합된 염소 항-인간 IgG(Jackson Cat. 109-055-098, Lot 95531)과 인큐베이션하였다. 최종 세정 후, 플레이트를 p-니트로페닐 포스페이트 디나트륨 헥사히드레이트(pNPP; Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland) 포스파타제 기질액과 인큐베이션하고, ELISA 플레이트 판독기를 이용하여 2hr 인큐베이션 후 405nm에서 측정하였다. 광학 밀도(O.D.)가 배경 O.D.에 비해 적어도 2배인 경우 결합을 양성으로 간주하였다.

4.2 결과

hACI-36-2B6-Ab1의 에피토프를 표 5A 및 5B에 나타낸 펩타이드에 대한 결합을 위한 ELISAs를 이용하여 결정하였다. 항체 hACI-36-2B6-Ab1의 에피토프는 타우 아미노산 잔기 H407, pS409, N410, 및 V411에 대한 우선적인 결합 및 인산화된 S409(pS409)를 갖는 인간 타우의 가장 긴 동형체(TAU441)의 아미노산 잔기 404-411을 포함하는 영역으로 맵핑되었다.

수탁:

박테리아(형질전환된 E.coli) 중 하기의 플라스미드를 AC Immune SA, PSE-EPFL Building B, 1015 Lausanne, Switzerland의 명의로 부다페스트 조약의 조항 하에 Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH(DSMZ) in Braunschweig, Inhoffenstrasse 7 B, 38124 Braunschweig로 수탁하였다:

표 1. 중쇄 및 경쇄 가변 영역(HCVR 및 LCVR) 및 CDRs의 아미노산 서열

표 2. 중쇄 및 경쇄(H 및 L)의 뉴클레오타이드 서열

표 3. 중쇄 및 경쇄 불변 영역(HC 및 LC)의 아미노산 서열

표 4. 인간 타우의 최장 동형체(441aa), 또한 소위 Tau40

표 5. 항체 에피토프 맵핑을 위해 사용된 포스포- 및 비포스포 타우 라이브러리 서열. 포스포- 및 비포스포 서열에 대한 펩타이드 스캐닝 라이브러리(A). 필요한 잔기 결정을 위한 Ala-스캐닝 라이브러리(B).

표 6. 중쇄 가변 영역(HCVR)의 변형된 아미노산 서열

표 7. 중쇄 및 경쇄의 전체길이 아미노산 서열

참고 리스트

DSMZ

DSM25743

20120306

DSMZ

DSM25744

20120306

DSMZ

DSM25745

20120306

DSMZ

DSM25746

20120306

SEQUENCE LISTING <110> AC IMMUNE S.A. KATHOLIEKE UNIVERSITEIT LEUVEN GENENTECH, INC. <120> HUMANIZED TAU ANTIBODY <130> ACIM-33520/US-2/PCT <140> 14/390,085 <141> 2014-10-02 <150> PCT/US2013/032341 <151> 2013-03-15 <150> US 61/620,880 <151> 2012-04-05 <160> 68 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 1 Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Tyr Met Asn 1 5 10 <210> 2 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 2 Asp Ile Asn Pro Asn Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 3 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 3 Tyr Tyr Ala Val Gly Tyr 1 5 <210> 4 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 4 Arg Ser Ser Gln Arg Leu Val His Ser His Gly Lys Thr Tyr Leu His 1 5 10 15 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 5 Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser 1 5 <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 6 Ser Gln Thr Ala His Phe Pro Tyr Thr 1 5 <210> 7 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 7 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asp Ile Asn Pro Asn Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ser Tyr Tyr Ala Val Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 8 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 8 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Arg Leu Val His Ser 20 25 30 His Gly Lys Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Thr 85 90 95 Ala His Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 9 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 9 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 His Gly Lys Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Thr 85 90 95 Ala His Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 10 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 10 Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser His Gly Lys Thr Tyr Leu His 1 5 10 15 <210> 11 <211> 2850 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 11 aagcttgccg ccaccatggg atggagctgt atcatcctct tcttggtagc aacagctaca 60 ggtaaggggc tcacagtagc aggcttgagg tctggacata tatatgggtg acaatgacat 120 ccactttgcc tttctctcca caggtgtcca ctcccaggtc cagctggtgc aatctggagc 180 cgaagtgaag aagcctgggt cctcagtgaa ggtgtcctgt aaggcttctg gatatacctt 240 cactgactac tacatgaact gggtgaggca ggcccctgga cagggccttg agtggattgg 300 agatattaat cctaaccgcg gtggaactac ttacaaccag aagttcaagg gcagggtgac 360 catcactgtg gacaagtcca ccagcacagc ctacatggaa ctcagcagcc tgagatctga 420 ggacaccgca gtctattact gtgcaagtta ctacgccgtg ggctactggg gccaaggcac 480 cactgtgaca gtctcctcag gtgagtcctt acaacctctc tcttctattc agcttaaata 540 gattttactg catttgttgg gggggaaatg tgtgtatctg aatttcaggt catgaaggac 600 tagggacacc ttgggagtca gaaagggtca ttgggagccc gggctgatgc agacagacat 660 cctcagctcc cagacttcat ggccagagat ttataggatc cagctttctg gggcaggcca 720 ggcctgacct tggctggggg cagggagggg gctaaggtga cgcaggtggc gccagccagg 780 tgcacaccca atgcccatga gcccagacac tggaccctgc atggaccatc gcggatagac 840 aagaaccgag gggcctctgc gccctgggcc cagctctgtc ccacaccgcg gtcacatggc 900 accacctctc ttgcagcttc caccaagggc ccatccgtct tccccctggc gccctgctcc 960 agatcgacct ccgagagcac agccgccctg ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa 1020 ccggtgacgg tgtcgtggaa ctcaggcgcc ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccggct 1080 gtcctacagt cctcaggact ctactccctc agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcagc 1140 ttgggcacga agacctacac ctgcaacgta gatcacaagc ccagcaacac caaggtggac 1200 aagagagttg gtgagaggcc agcacaggga gggagggtgt ctgctggaag ccaggctcag 1260 ccctcctgcc tggacgcacc ccggctgtgc agccccagcc cagggcagca aggcatgccc 1320 catctgtctc ctcacccgga ggcctctgac caccccactc atgctcaggg agagggtctt 1380 ctggattttt ccaccaggct ccgggcagcc acaggctgga tgcccctacc ccaggccctg 1440 cgcatacagg ggcaggtgct gcgctcagac ctgccaagag ccatatccgg gaggaccctg 1500 cccctgacct aagcccaccc caaaggccaa actctccact ccctcagctc agacaccttc 1560 tctcctccca gatcgatctg agtaactccc aatcttctct ctgcagagtc caaatatggt 1620 cccccgtgtc ccccatgccc aggtaagcca acccaggcct cgccctccag ctcaaggcgg 1680 gacaggtgcc ctagagtagc ctgcatccag ggacaggccc cagccgggtg ctgacgcatc 1740 cacctccatc tcttcctcag cacctgagtt cctgggggga ccatcagtct tcctgttccc 1800 cccaaaaccc aaggacactc tcatgatctc ccggacccct gaggtcacgt gcgtggtggt 1860 ggacgtgagc caggaagacc ccgaggtcca gttcaactgg tacgtggatg gcgtggaggt 1920 gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagttcaac agcacgtacc gtgtggtcag 1980 cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaacggcaag gagtacaagt gcaaggtctc 2040 caacaaaggc ctcccgtcct ccatcgagaa aaccatctcc aaagccaaag gtgggaccca 2100 cggggtgcga gggccacatg gacagaggtc agctcggccc accctctgcc ctgggagtga 2160 ccgctgtgcc aacctctgtc cctacagggc agccccgaga gccacaggtg tacaccctgc 2220 ccccatccca ggaggagatg accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct 2280 tctaccccag cgacatcgcc gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca 2340 agaccacgcc tcccgtcctc gattccgacg gctccttctt cctctacagc aggctaaccg 2400 tggacaagag caggtggcag gaggggaatg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc 2460 tgcacaacca ctacacacag aagagcctct ccctgtctct gggttgatga gtgccagggc 2520 cggcaagccc ccgctccccg ggctctcggg gtcgcgcgag gatgcttggc acgtaccccg 2580 tctacatact tcccaggcac ccagcatgga aataaagcac ccaccactgc cctgggcccc 2640 tgtgagactg tgatggttct ttccacgggt caggccgagt ctgaggcctg agtgacatga 2700 gggaggcaga gcgggtccca ctgtccccac actggcccag gctgtgcagg tgtgcctggg 2760 ccgcctaggg tggggctcag ccaggggctg ccctcggcag ggtgggggat ttgccagcgt 2820 ggccctccct ccagcagcag gtacctcgag 2850 <210> 12 <211> 2067 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 12 aagcttgccg ccaccatggg atggagctgt atcatcctct tcttggtagc aacagctaca 60 ggtaaggggc tcacagtagc aggcttgagg tctggacata tatatgggtg acaatgacat 120 ccactttgcc tttctctcca caggtgtcca ctccgatatc gtgatgaccc aaactccact 180 ctccctgcct gtcacccctg gagagcccgc ctccatctct tgcagatcta gtcagaggct 240 tgtgcacagt catggaaaaa cctatctgca ttggtacctg cagaagccag gccagtctcc 300 acagctcctg atctacaaag tttccaaccg gttttctggg gtcccagaca ggttcagtgg 360 cagtggatca gggacagatt tcacactcaa gatcagcaga gtggaggctg aggatgtggg 420 agtttatttc tgttctcaaa ctgcacattt tccctacacc ttcggagggg ggaccaaggt 480 ggaaatcaaa cgtgagtaga atttaaactt tgcttcctca gttggatcca ctagtccagt 540 gtggtggaat tctaaactct gagggggtcg gatgacgtgg ccattctttg cctaaagcat 600 tgagtttact gcaaggtcag aaaagcatgc aaagccctca gaatggctgc aaagagctcc 660 aacaaaacaa tttagaactt tattaaggaa tagggggaag ctaggaagaa actcaaaaca 720 tcaagatttt aaatacgctt cttggtctcc ttgctataat tatctgggat aagcatgctg 780 ttttctgtct gtccctaaca tgccctgtga ttatccgcaa acaacacacc caagggcaga 840 actttgttac ttaaacacca tcctgtttgc ttctttcctc aggaactgtg gctgcaccat 900 ctgtcttcat cttcccgcca tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt 960 gcctgctgaa taacttctat cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc 1020 tccaatcggg taactcccag gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca 1080 gcctcagcag caccctgacg ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct 1140 gcgaagtcac ccatcagggc ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt 1200 gttagaggga gaagtgcccc cacctgctcc tcagttccag cctgaccccc tcccatcctt 1260 tggcctctga ccctttttcc acaggggacc tacccctatt gcggtcctcc agctcatctt 1320 tcacctcacc cccctcctcc tccttggctt taattatgct aatgttggag gagaatgaat 1380 aaataaagtg aatctttgca cctgtggttt ctctctttcc tcatttaata attattatct 1440 gttgttttac caactactca atttctctta taagggacta aatatgtagt catcctaagg 1500 cgcataacca tttataaaaa tcatccttca ttctatttta ccctatcatc ctctgcaaga 1560 cagtcctccc tcaaacccac aagccttctg tcctcacagt cccctgggcc atggtaggag 1620 agacttgctt ccttgttttc ccctcctcag caagccctca tagtcctttt taagggtgac 1680 aggtcttaca gtcatatatc ctttgattca attccctgag aatcaaccaa agcaaatttt 1740 tcaaaagaag aaacctgcta taaagagaat cattcattgc aacatgatat aaaataacaa 1800 cacaataaaa gcaattaaat aaacaaacaa tagggaaatg tttaagttca tcatggtact 1860 tagacttaat ggaatgtcat gccttattta catttttaaa caggtactga gggactcctg 1920 tctgccaagg gccgtattga gtactttcca caacctaatt taatccacac tatactgtga 1980 gattaaaaac attcattaaa atgttgcaaa ggttctataa agctgagaga caaatatatt 2040 ctataactca gcaatcccac ttctaga 2067 <210> 13 <211> 2067 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 13 aagcttgccg ccaccatggg atggagctgt atcatcctct tcttggtagc aacagctaca 60 ggtaaggggc tcacagtagc aggcttgagg tctggacata tatatgggtg acaatgacat 120 ccactttgcc tttctctcca caggtgtcca ctccgatatc gtgatgaccc aaactccact 180 ctccctgcct gtcacccctg gagagcccgc ctccatctct tgcagatcta gtcagagcct 240 tgtgcacagt catggaaaaa cctatctgca ttggtacctg cagaagccag gccagtctcc 300 acagctcctg atctacaaag tttccaaccg gttttctggg gtcccagaca ggttcagtgg 360 cagtggatca gggacagatt tcacactcaa gatcagcaga gtggaggctg aggatgtggg 420 agtttatttc tgttctcaaa ctgcacattt tccctacacc ttcggagggg ggaccaaggt 480 ggaaatcaaa cgtgagtaga atttaaactt tgcttcctca gttggatcca ctagtccagt 540 gtggtggaat tctaaactct gagggggtcg gatgacgtgg ccattctttg cctaaagcat 600 tgagtttact gcaaggtcag aaaagcatgc aaagccctca gaatggctgc aaagagctcc 660 aacaaaacaa tttagaactt tattaaggaa tagggggaag ctaggaagaa actcaaaaca 720 tcaagatttt aaatacgctt cttggtctcc ttgctataat tatctgggat aagcatgctg 780 ttttctgtct gtccctaaca tgccctgtga ttatccgcaa acaacacacc caagggcaga 840 actttgttac ttaaacacca tcctgtttgc ttctttcctc aggaactgtg gctgcaccat 900 ctgtcttcat cttcccgcca tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt 960 gcctgctgaa taacttctat cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc 1020 tccaatcggg taactcccag gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca 1080 gcctcagcag caccctgacg ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct 1140 gcgaagtcac ccatcagggc ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt 1200 gttagaggga gaagtgcccc cacctgctcc tcagttccag cctgaccccc tcccatcctt 1260 tggcctctga ccctttttcc acaggggacc tacccctatt gcggtcctcc agctcatctt 1320 tcacctcacc cccctcctcc tccttggctt taattatgct aatgttggag gagaatgaat 1380 aaataaagtg aatctttgca cctgtggttt ctctctttcc tcatttaata attattatct 1440 gttgttttac caactactca atttctctta taagggacta aatatgtagt catcctaagg 1500 cgcataacca tttataaaaa tcatccttca ttctatttta ccctatcatc ctctgcaaga 1560 cagtcctccc tcaaacccac aagccttctg tcctcacagt cccctgggcc atggtaggag 1620 agacttgctt ccttgttttc ccctcctcag caagccctca tagtcctttt taagggtgac 1680 aggtcttaca gtcatatatc ctttgattca attccctgag aatcaaccaa agcaaatttt 1740 tcaaaagaag aaacctgcta taaagagaat cattcattgc aacatgatat aaaataacaa 1800 cacaataaaa gcaattaaat aaacaaacaa tagggaaatg tttaagttca tcatggtact 1860 tagacttaat ggaatgtcat gccttattta catttttaaa caggtactga gggactcctg 1920 tctgccaagg gccgtattga gtactttcca caacctaatt taatccacac tatactgtga 1980 gattaaaaac attcattaaa atgttgcaaa ggttctataa agctgagaga caaatatatt 2040 ctataactca gcaatcccac ttctaga 2067 <210> 14 <211> 98 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 14 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val <210> 15 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 15 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 16 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 16 Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 1 5 10 15 Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 20 25 30 Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr 35 40 45 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 50 55 60 Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 65 70 75 80 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 85 90 95 Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys 100 105 110 <210> 17 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 17 Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu 1 5 10 15 Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe 20 25 30 Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 35 40 45 Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 50 55 60 Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly 65 70 75 80 Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 85 90 95 Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly 100 105 <210> 18 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 18 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 1 5 10 15 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 20 25 30 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 35 40 45 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 65 70 75 80 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 85 90 95 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105 <210> 19 <211> 441 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 19 Met Ala Glu Pro Arg Gln Glu Phe Glu Val Met Glu Asp His Ala Gly 1 5 10 15 Thr Tyr Gly Leu Gly Asp Arg Lys Asp Gln Gly Gly Tyr Thr Met His 20 25 30 Gln Asp Gln Glu Gly Asp Thr Asp Ala Gly Leu Lys Glu Ser Pro Leu 35 40 45 Gln Thr Pro Thr Glu Asp Gly Ser Glu Glu Pro Gly Ser Glu Thr Ser 50 55 60 Asp Ala Lys Ser Thr Pro Thr Ala Glu Asp Val Thr Ala Pro Leu Val 65 70 75 80 Asp Glu Gly Ala Pro Gly Lys Gln Ala Ala Ala Gln Pro His Thr Glu 85 90 95 Ile Pro Glu Gly Thr Thr Ala Glu Glu Ala Gly Ile Gly Asp Thr Pro 100 105 110 Ser Leu Glu Asp Glu Ala Ala Gly His Val Thr Gln Ala Arg Met Val 115 120 125 Ser Lys Ser Lys Asp Gly Thr Gly Ser Asp Asp Lys Lys Ala Lys Gly 130 135 140 Ala Asp Gly Lys Thr Lys Ile Ala Thr Pro Arg Gly Ala Ala Pro Pro 145 150 155 160 Gly Gln Lys Gly Gln Ala Asn Ala Thr Arg Ile Pro Ala Lys Thr Pro 165 170 175 Pro Ala Pro Lys Thr Pro Pro Ser Ser Gly Glu Pro Pro Lys Ser Gly 180 185 190 Asp Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser Pro Gly Thr Pro Gly Ser 195 200 205 Arg Ser Arg Thr Pro Ser Leu Pro Thr Pro Pro Thr Arg Glu Pro Lys 210 215 220 Lys Val Ala Val Val Arg Thr Pro Pro Lys Ser Pro Ser Ser Ala Lys 225 230 235 240 Ser Arg Leu Gln Thr Ala Pro Val Pro Met Pro Asp Leu Lys Asn Val 245 250 255 Lys Ser Lys Ile Gly Ser Thr Glu Asn Leu Lys His Gln Pro Gly Gly 260 265 270 Gly Lys Val Gln Ile Ile Asn Lys Lys Leu Asp Leu Ser Asn Val Gln 275 280 285 Ser Lys Cys Gly Ser Lys Asp Asn Ile Lys His Val Pro Gly Gly Gly 290 295 300 Ser Val Gln Ile Val Tyr Lys Pro Val Asp Leu Ser Lys Val Thr Ser 305 310 315 320 Lys Cys Gly Ser Leu Gly Asn Ile His His Lys Pro Gly Gly Gly Gln 325 330 335 Val Glu Val Lys Ser Glu Lys Leu Asp Phe Lys Asp Arg Val Gln Ser 340 345 350 Lys Ile Gly Ser Leu Asp Asn Ile Thr His Val Pro Gly Gly Gly Asn 355 360 365 Lys Lys Ile Glu Thr His Lys Leu Thr Phe Arg Glu Asn Ala Lys Ala 370 375 380 Lys Thr Asp His Gly Ala Glu Ile Val Tyr Lys Ser Pro Val Val Ser 385 390 395 400 Gly Asp Thr Ser Pro Arg His Leu Ser Asn Val Ser Ser Thr Gly Ser 405 410 415 Ile Asp Met Val Asp Ser Pro Gln Leu Ala Thr Leu Ala Asp Glu Val 420 425 430 Ser Ala Ser Leu Ala Lys Gln Gly Leu 435 440 <210> 20 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 20 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asp Ile Asn Pro Asn Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ser Tyr Tyr Ala Val Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 21 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 21 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asp Ile Asn Pro Asn Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ser Tyr Tyr Ala Val Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 22 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 22 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Arg Leu Val His Ser 20 25 30 His Gly Lys Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Thr 85 90 95 Ala His Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 23 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 23 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 His Gly Lys Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Thr 85 90 95 Ala His Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 24 <211> 441 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 24 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asp Ile Asn Pro Asn Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ser Tyr Tyr Ala Val Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 115 120 125 Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val 130 135 140 Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala 145 150 155 160 Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly 165 170 175 Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly 180 185 190 Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys 195 200 205 Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys 210 215 220 Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 225 230 235 240 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 245 250 255 Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp 260 265 270 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 275 280 285 Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 290 295 300 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 305 310 315 320 Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 325 330 335 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu 340 345 350 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 355 360 365 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 370 375 380 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 385 390 395 400 Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn 405 410 415 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 420 425 430 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly 435 440 <210> 25 <211> 441 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 25 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asp Ile Asn Pro Asn Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ser Tyr Tyr Ala Val Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 115 120 125 Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val 130 135 140 Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala 145 150 155 160 Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly 165 170 175 Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly 180 185 190 Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys 195 200 205 Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys 210 215 220 Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 225 230 235 240 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 245 250 255 Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp 260 265 270 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 275 280 285 Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 290 295 300 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 305 310 315 320 Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 325 330 335 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu 340 345 350 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 355 360 365 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 370 375 380 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 385 390 395 400 Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn 405 410 415 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 420 425 430 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly 435 440 <210> 26 <211> 442 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 26 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asp Ile Asn Pro Asn Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ser Tyr Tyr Ala Val Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 115 120 125 Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val 130 135 140 Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala 145 150 155 160 Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly 165 170 175 Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly 180 185 190 Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys 195 200 205 Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys 210 215 220 Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 225 230 235 240 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 245 250 255 Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp 260 265 270 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 275 280 285 Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 290 295 300 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 305 310 315 320 Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 325 330 335 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu 340 345 350 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 355 360 365 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 370 375 380 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 385 390 395 400 Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn 405 410 415 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 420 425 430 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 <210> 27 <211> 445 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 27 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asp Ile Asn Pro Asn Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ser Tyr Tyr Ala Val Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 115 120 125 Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val 130 135 140 Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala 145 150 155 160 Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly 165 170 175 Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly 180 185 190 Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys 195 200 205 Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys 210 215 220 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 225 230 235 240 Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu 245 250 255 Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys 260 265 270 Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 275 280 285 Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 290 295 300 Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 305 310 315 320 Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 325 330 335 Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 340 345 350 Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 355 360 365 Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 370 375 380 Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 385 390 395 400 Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 405 410 415 Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 420 425 430 His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 28 <211> 445 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 28 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asp Ile Asn Pro Asn Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ser Tyr Tyr Ala Val Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 115 120 125 Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val 130 135 140 Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala 145 150 155 160 Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly 165 170 175 Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly 180 185 190 Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys 195 200 205 Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys 210 215 220 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 225 230 235 240 Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu 245 250 255 Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys 260 265 270 Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 275 280 285 Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 290 295 300 Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 305 310 315 320 Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 325 330 335 Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 340 345 350 Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 355 360 365 Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 370 375 380 Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 385 390 395 400 Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 405 410 415 Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 420 425 430 His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 29 <211> 442 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 29 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asp Ile Asn Pro Asn Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ser Tyr Tyr Ala Val Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 115 120 125 Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val 130 135 140 Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala 145 150 155 160 Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly 165 170 175 Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly 180 185 190 Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys 195 200 205 Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys 210 215 220 Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 225 230 235 240 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 245 250 255 Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp 260 265 270 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 275 280 285 Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 290 295 300 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 305 310 315 320 Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 325 330 335 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu 340 345 350 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 355 360 365 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 370 375 380 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 385 390 395 400 Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn 405 410 415 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 420 425 430 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 <210> 30 <211> 408 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 30 Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Asp Ile Asn Pro 1 5 10 15 Asn Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Gly Arg Val Thr 20 25 30 Ile Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser 35 40 45 Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ser Tyr Tyr Ala 50 55 60 Val Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser 65 70 75 80 Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr 85 90 95 Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro 100 105 110 Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val 115 120 125 His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser 130 135 140 Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile 145 150 155 160 Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val 165 170 175 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 180 185 190 Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 195 200 205 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 210 215 220 Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val 225 230 235 240 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 245 250 255 Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln 260 265 270 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala 275 280 285 Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro 290 295 300 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr 305 310 315 320 Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 325 330 335 Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr 340 345 350 Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 355 360 365 Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe 370 375 380 Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 385 390 395 400 Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 405 <210> 31 <211> 445 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 31 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asp Ile Asn Pro Asn Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ser Tyr Tyr Ala Val Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 115 120 125 Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val 130 135 140 Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala 145 150 155 160 Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly 165 170 175 Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly 180 185 190 Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys 195 200 205 Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys 210 215 220 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 225 230 235 240 Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu 245 250 255 Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys 260 265 270 Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 275 280 285 Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 290 295 300 Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 305 310 315 320 Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 325 330 335 Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 340 345 350 Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 355 360 365 Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 370 375 380 Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 385 390 395 400 Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 405 410 415 Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 420 425 430 His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 32 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 32 His Lys Lys Gly Asp Thr Ser Pro Arg His Leu Ser Asn Val Ser Ser 1 5 10 15 Thr Gly Ser Ile Asp Lys Lys 20 <210> 33 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 33 Gly Asp Thr Ser Pro Arg His Leu 1 5 <210> 34 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 34 Asp Thr Ser Pro Arg His Leu Ser 1 5 <210> 35 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 35 Thr Ser Pro Arg His Leu Ser Asn 1 5 <210> 36 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 36 Ser Pro Arg His Leu Ser Asn Val 1 5 <210> 37 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 37 Pro Arg His Leu Ser Asn Val Ser 1 5 <210> 38 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 38 Arg His Leu Ser Asn Val Ser Ser 1 5 <210> 39 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 39 His Leu Ser Asn Val Ser Ser Thr 1 5 <210> 40 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 40 Leu Ser Asn Val Ser Ser Thr Gly 1 5 <210> 41 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 41 Ser Asn Val Ser Ser Thr Gly Ser 1 5 <210> 42 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 42 Asn Val Ser Ser Thr Gly Ser Ile 1 5 <210> 43 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 43 Val Ser Ser Thr Gly Ser Ile Asp 1 5 <210> 44 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 44 Gly Asp Thr Ser Pro Arg His Leu 1 5 <210> 45 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 45 Asp Thr Ser Pro Arg His Leu Ser 1 5 <210> 46 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 46 Thr Ser Pro Arg His Leu Ser Asn 1 5 <210> 47 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 47 Ser Pro Arg His Leu Ser Asn Val 1 5 <210> 48 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 48 Pro Arg His Leu Ser Asn Val Ser 1 5 <210> 49 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 49 Arg His Leu Ser Asn Val Ser Ser 1 5 <210> 50 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 50 His Leu Ser Asn Val Ser Ser Thr 1 5 <210> 51 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 51 Leu Ser Asn Val Ser Ser Thr Gly 1 5 <210> 52 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 52 Ser Asn Val Ser Ser Thr Gly Ser 1 5 <210> 53 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 53 Asn Val Ser Ser Thr Gly Ser Ile 1 5 <210> 54 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 54 Val Ser Ser Thr Gly Ser Ile Asp 1 5 <210> 55 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 55 Pro Arg His Leu Ser Asn Val Ser 1 5 <210> 56 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 56 Pro Arg His Leu Ser Asn Val Ser 1 5 <210> 57 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 57 Ala Arg His Leu Ser Asn Val Ser 1 5 <210> 58 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 58 Pro Ala His Leu Ser Asn Val Ser 1 5 <210> 59 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 59 Pro Arg Ala Leu Ser Asn Val Ser 1 5 <210> 60 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 60 Pro Arg His Leu Ala Asn Val Ser 1 5 <210> 61 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 61 Pro Arg His Leu Ser Ala Val Ser 1 5 <210> 62 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 62 Pro Arg His Leu Ser Asn Ala Ser 1 5 <210> 63 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 63 Pro Arg His Leu Ser Asn Val Ala 1 5 <210> 64 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 64 Pro Ala Ala Leu Ser Asn Val Ser 1 5 <210> 65 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 65 Pro Arg Ala Ala Ser Asn Val Ser 1 5 <210> 66 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 66 Pro Ala His Ala Ser Asn Val Ser 1 5 <210> 67 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 67 Pro Ala Ala Ala Ser Asn Val Ser 1 5 <210> 68 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic <400> 68 Gly Asp Thr Ser Pro Arg His Leu Ser Asn Val Ser Ser Thr Gly Ser 1 5 10 15 Ile Asp

Claims

키메라 항체 또는 그의 기능성 단편, 또는 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편으로서, 상기 항체는 서열번호: 19로 나타낸 인간 타우 단백질 또는 그의 단편 상의 포스포-에피토프를 인식하고 그것에 특이적으로 결합하지만, 상응하는 비인산화된 에피토프 및/또는 비-관련 에피토프에 결합하지 않고, 여기서 상기 에피토프는 위치 409 (pS409)에서 인산화된 Ser의 요건을 갖는 타우 aa 404-411를 포함하는, 키메라 항체 또는 그의 기능성 단편, 또는 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편.
청구항 1에 있어서, 타우 아미노산 잔기, H407, pS409, N410, 및 V411에 우선적으로 결합하는, 키메라 또는 인간화된 항체, 또는 그의 기능성 단편.
청구항 1 또는 청구항 2에 있어서,
인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역에 순서대로 통합되고, 서열번호: 1로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR1, 서열번호: 2로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR2, 및 서열번호: 3로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR3, 또는 상기 서열과 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 특히 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 특히 적어도 95%, 특히 적어도 96%, 특히 적어도 97%, 특히 적어도 98%, 특히 적어도 99% 의 상동성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 제 1 결합 도메인,
인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역에 순서대로 통합되고, 서열번호: 4 또는 서열번호: 10로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR1, 서열번호: 5로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR2, 및 서열번호: 6로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR3, 또는 상기 상기 서열과 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 특히 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 특히 적어도 95%, 특히 적어도 96%, 특히 적어도 97%, 특히 적어도 98%, 특히 적어도 99% 의 상동성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 제 2 결합 도메인을 포함하는, 인간화된 항체, 또는 그의 기능성 단편.
청구항 1 또는 청구항 2에 있어서,
인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역에 순서대로 통합되고, 서열번호: 1로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR1 또는 상기 서열과 적어도 81%, 특히 적어도 85%, 특히 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 특히 적어도 95%, 특히 적어도 96%, 특히 적어도 97%, 특히 적어도 98%, 특히 적어도 99% 또는 100%의 상동성을 갖는 아미노산 서열, 서열번호: 2로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR2, 또는 상기 서열과 적어도 71%, 적어도 75%, 적어도 8%, 특히 적어도 85%, 특히 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 특히 적어도 95%, 특히 적어도 96%, 특히 적어도 97%, 특히 적어도 98%, 특히 적어도 99% 또는 100%의 상동성을 갖는 아미노산 서열, 및 서열번호: 3로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR3 또는 상기 서열과 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 특히 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 특히 적어도 95%, 특히 적어도 96%, 특히 적어도 97%, 특히 적어도 98%, 특히 적어도 99% 또는 100% 의 상동성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 제 1 결합 도메인, 및/또는
인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역에 순서대로 통합되고, 서열번호: 4 또는 서열번호: 10로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR1, 또는 상기 서열과 적어도 82%, 특히 적어도 85%, 특히 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 특히 적어도 95%, 특히 적어도 96%, 특히 적어도 97%, 특히 적어도 98%, 특히 적어도 99% 또는 100% 의 상동성을 갖는 아미노산 서열, 서열번호: 5로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR2, 및 서열번호: 6로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR3, 또는 상기 서열과 적어도 50%, 적어도 68%, 적어도 70%, 적어도 80%, 특히 적어도 85%, 특히 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 특히 적어도 95%, 특히 적어도 96%, 특히 적어도 97%, 특히 적어도 98%, 특히 적어도 99% 또는 100% 의 상동성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 제 2 결합 도메인을 포함하는, 인간화된 항체, 또는 그의 기능성 단편.
청구항 1 또는 청구항 2에 있어서, 인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역에 순서대로 통합되고, 서열번호: 1로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR1 또는 상기 서열과 적어도 85% 의 상동성을 갖는 아미노산 서열, 서열번호: 2로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR2 또는 상기 서열과 적어도 75% 의 상동성을 갖는 아미노산 서열, 및 서열번호: 3로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR3, 또는 상기 서열과 적어도 20%의 상동성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 제 1 결합 도메인, 및/또는 인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역에 순서대로 통합되고, 서열번호: 4 또는 서열번호: 10로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR1, 또는 상기 서열과 적어도 85% 의 상동성을 갖는 아미노산 서열, 서열번호: 5로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR2, 및 서열번호: 6로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR3, 또는 상기 서열과 적어도 70% 의 상동성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 제 2 결합 도메인을 포함하는, 인간화된 항체, 또는 그의 기능성 단편.
청구항 1 또는 청구항 2에 있어서, 인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역에 순서대로 통합되고, 서열번호: 1로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR1, 서열번호: 2로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR2, 및 서열번호: 3로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR3, 또는 상기 서열과 적어도 90% 의 상동성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 제 1 결합 도메인, 및/또는 인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역에 순서대로 통합되고, 서열번호: 4 또는 서열번호: 10로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR1, 서열번호: 5로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR2, 및 서열번호: 6로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR3, 또는 상기 서열과 적어도 90% 의 상동성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 제 2 결합 도메인을 포함하는, 인간화된 항체, 또는 그의 기능성 단편.
청구항 1 또는 청구항 2에 있어서, 인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역에 순서대로 통합되고, 서열번호: 1로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR1, 서열번호: 2로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR2, 및 서열번호: 3로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR3, 또는 상기 서열과 적어도 95% 의 상동성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 제 1 결합 도메인, 특히 중쇄 가변 영역 (HCVR)의 결합 도메인, 및/또는 인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역에 순서대로 통합되고, 서열번호: 4 또는 서열번호: 10로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR1, 서열번호: 5로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR2, 및 서열번호: 6로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR3, 또는 상기 서열과 적어도 95% 의 상동성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 제 2 결합 도메인, 특히 경쇄 가변 영역 (LCVR)의 결합 도메인을 포함하는, 인간화된 항체, 또는 그의 기능성 단편.
청구항 1 또는 청구항 2에 있어서, 인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역에 순서대로 통합되고, 서열번호: 1로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR1, 서열번호: 2로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR2, 및 서열번호: 3로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 함유하는 제 1 결합 도메인, 및/또는 인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역에 순서대로 통합되고, 서열번호: 4로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR1, 서열번호: 5로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR2, 및 서열번호: 6로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 함유하는 제 2 결합 도메인을 포함하는, 인간화된 항체, 또는 그의 기능성 단편.
청구항 1 또는 청구항 2에 있어서, 인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역에 순서대로 통합되고, 서열번호: 1로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR1, 서열번호: 2로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR2, 및 서열번호: 3로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 함유하는 제 1 결합 도메인, 및/또는 인간- 또는 영장류-유도된 뼈대 영역에 순서대로 통합되고, 서열번호: 10로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR1, 서열번호: 5로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR2, 및 서열번호: 6로 나타낸 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 함유하는 제 2 결합 도메인을 포함하는, 인간화된 항체, 또는 그의 기능성 단편.
청구항 1 또는 청구항 2에 있어서, 상기 항체 또는 항체 단편이,
a. 서열번호: 7, 서열번호: 20, 또는 서열번호: 21로 나타낸 서열과 적어도 84%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 특히 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 특히 적어도 95%, 특히 적어도 96%, 특히 적어도 97%, 특히 적어도 98%, 특히 적어도 99% 또는 100%의 상동성을 갖는 아미노산 서열를 함유하는 제 1 결합 도메인, 특히 중쇄 가변 영역 (HCVR)의 결합 도메인, 및/또는 서열번호: 8로 나타낸 서열과 적어도 89%, 특히 적어도 90%, 특히 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 특히 적어도 95%, 특히 적어도 96%, 특히 적어도 97%, 특히 적어도 98%, 특히 적어도 99% 또는 100%의 상동성을 갖는 아미노산 서열를 함유하는 제 2 결합 도메인, 특히 경쇄 가변 영역 (LCVR)의 결합 도메인; 또는
b. 서열번호: 7, 서열번호: 20, 또는 서열번호: 21로 나타낸 서열과 적어도 84%, 특히 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 특히 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 특히 적어도 95%, 특히 적어도 96%, 특히 적어도 97%, 특히 적어도 98%, 특히 적어도 99% 또는 100%의 상동성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 제 1 결합 도메인, 특히 중쇄 가변 영역 (HCVR)의 결합 도메인, 및/또는 서열번호: 9로 나타낸 서열과 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 특히 적어도 95%, 특히 적어도 96%, 특히 적어도 97%, 특히 적어도 98%, 특히 적어도 99% 또는 100%의 상동성을 갖는 아미노산 서열를 함유하는 제 2 결합 도메인, 특히 경쇄 가변 영역 (LCVR)의 결합 도메인를 포함하는, 인간화된 항체, 또는 그의 기능성 단편.
청구항 1 또는 청구항 2에 있어서, 상기 항체 또는 항체 단편이,
a. 서열번호: 7, 서열번호: 20, 또는 서열번호: 21로 나타낸 서열과 적어도 84%의 상동성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 제 1 결합 도메인, 특히 중쇄 가변 영역 (HCVR)의 결합 도메인, 및/또는 아미노산 서열번호: 8로 나타낸 아미노산 서열과 적어도 89%의 상동성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 제 2 결합 도메인, 특히 경쇄 가변 영역 (LCVR)의 결합 도메인; 또는
b. 서열번호: 7, 서열번호: 20, 또는 서열번호: 21로 나타낸 서열과 적어도 84%의 상동성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 제 1 결합 도메인, 특히 중쇄 가변 영역 (HCVR)의 결합 도메인, 및/또는 아미노산 서열번호: 9로 나타낸 서열과 적어도 90%의 상동성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 제 2 결합 도메인, 특히 경쇄 가변 영역 (LCVR)의 결합 도메인을 포함하는 인간화된 항체, 또는 그의 기능성 단편.
청구항 1 또는 청구항 2에 있어서, 상기 항체 또는 항체 단편은,
a. 서열번호: 7, 서열번호: 20, 또는 서열번호: 21로 나타낸 아미노산 서열을 함유하는 제 1 결합 도메인, 특히 중쇄 가변 영역 (HCVR)의 결합 도메인, 및/또는 서열번호: 8로 나타낸 아미노산 서열를 함유하는 제 2 결합 도메인, 특히 경쇄 가변 영역 (LCVR)의 결합 도메인; 또는
b. 서열번호: 7, 서열번호: 20, 또는 서열번호: 21로 나타낸 아미노산 서열을 함유하는 제 1 결합 도메인, 특히 중쇄 가변 영역 (HCVR)의 결합 도메인, 및/또는 서열번호: 9로 나타낸 아미노산 서열를 함유하는 제 2 결합 도메인, 특히 경쇄 가변 영역 (LCVR)의 결합 도메인을 포함하는 인간화된 항체, 또는 그의 기능성 단편.
청구항 1 내지 12 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 항체 단편은 중쇄 불변 영역 및 경쇄 불변 영역, 특히 서열번호: 14 내지 17로 나타낸 중쇄 불변 영역 및 서열번호: 18로 나타낸 경쇄 불변 영역을 포함하는, 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편.
청구항 13에 있어서, 힌지 영역 중 돌연변이, 특히 Fab 아암(arm) 교환을 방지하고 이중특이적 항체의 발생을 방지하는 힌지 영역 중 돌연변이를 갖는 중쇄 불변 영역을 포함하는, 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편.
청구항 14에 있어서, 상기 중쇄 힌지 영역은 위치 228 에서 Ser이 Pro로 교환된 것(S228P)을 포함하는, 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편.
청구항 1 내지 15 중 어느 한 항에 있어서, C-말단에서 돌연변이를 갖는 중쇄 불변 영역을 포함하는, 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편.
청구항 16에 있어서, 상기 중쇄는 C-말단 라이신 (des-K)의 결실을 포함하는, 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편.
청구항 1 내지 17 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 IgG1, IgG1 N297G, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 아이소타입(isotype)인, 키메라 또는 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편.
청구항 1 내지 18 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 단편은 0.1 nM 내지 80 nM, 특히 0.1 nM 내지 70 nM, 특히 0.1 nM 내지 67nM의 K_D를 갖는, 키메라 또는 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편.
청구항 1 내지 19 중 어느 한 항의 키메라 또는 인간화된 항체, 또는 그의 기능성 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드.
청구항 20에 있어서, 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 핵산 분자를 포함하는 폴리뉴클레오타이드으로서,
a. 서열번호: 11에서 묘사된 뉴클레오타이드 서열 및/또는 서열번호: 12에서 묘사된 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 분자; 또는
b. 서열번호: 11로 나타낸 서열에 대해 적어도 85% 서열 상동성을 갖는 뉴클레오타이드 서열 및/또는 서열번호: 12로 나타낸 서열에 대해 적어도 85% 서열 상동성을 갖는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 분자; 또는
c. 서열번호: 11로 나타낸 서열에 대해 적어도 90% 서열 상동성을 갖는 뉴클레오타이드 서열 및/또는 서열번호: 12로 나타낸 서열에 대해 적어도 90% 서열 상동성을 갖는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 분자; 또는
d. 서열번호: 11로 나타낸 서열에 대해 적어도 95% 서열 상동성을 갖는 뉴클레오타이드 서열 및/또는 서열번호: 12로 나타낸 서열에 대해 적어도 95% 서열 상동성을 갖는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 분자; 또는
e. 서열번호: 11로 나타낸 서열에 대해 적어도 98% 서열 상동성을 갖는 뉴클레오타이드 서열 및/또는 서열번호: 12로 나타낸 서열에 대해 적어도 98% 서열 상동성을 갖는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 분자; 또는
f. 상기 a) 내지 e)의 핵산 분자를 혼성화하는 상보적 가닥의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 분자;
g. 유전자 암호의 축퇴에 의해 a) 내지 f) 중 어느 하나에서 정의된 뉴클레오타이드 서열로부터 벗어난 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 분자를 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
청구항 20 또는 청구항 21에 있어서, 서열번호: 11로 나타낸 뉴클레오타이드 서열 및/또는 서열번호: 12로 나타낸 뉴클레오타이드 서열를 포함하는 핵산 분자를 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
청구항 20 또는 청구항 21에 있어서, 서열번호: 11로 나타낸 뉴클레오타이드 서열 및/또는 서열번호: 13으로 나타낸 뉴클레오타이드 서열를 포함하는 핵산 분자를 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
청구항 20에 있어서, 서열번호: 7, 서열번호: 20, 또는 서열번호: 21의 중쇄 가변 영역 (HCVR), 및 서열번호: 14 내지 17의 중쇄 불변 영역을 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
청구항 20 또는 청구항 21에 있어서, 서열번호: 8의 경쇄 가변 영역 (LCVR) 및 서열번호: 18의 경쇄 불변 영역을 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
청구항 20 또는 청구항 21에 있어서, 서열번호: 9의 경쇄 가변 영역 (LCVR) 및 서열번호: 18의 경쇄 불변 영역을 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
청구항 20에 있어서, 서열번호: 7, 서열번호: 20, 또는 서열번호: 21의 중쇄 가변 영역 (HCVR), 및 서열번호: 14 내지 17의 중쇄 불변 영역 및 서열번호: 8의 경쇄 가변 영역 (LCVR) 및 서열번호: 18의 경쇄 불변 영역을 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
청구항 20에 있어서, 서열번호: 7, 서열번호: 20, 또는 서열번호: 21의 중쇄 가변 영역 (HCVR), 및 서열번호: 14 내지 17의 중쇄 불변 영역 및 서열번호: 9의 경쇄 가변 영역 (LCVR) 및 서열번호: 18의 경쇄 불변 영역을 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
청구항 1 내지 19 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 단편은, 특이적으로 인간 타우 단백질 상의 포스포-에피토프를 인식하고 그것에 결합하지만, 상응하는 비인산화된 에피토프 및/또는 비-관련 에피토프에 결합하지 않고, 상기 단백질은 쌍으로 된 나선 필라멘트(PHF)에 존재하는, 응집된 미세소관-연관된 및 과인산화된 타우 단백질인, 키메라 또는 인간화된 항체, 또는 그의 기능성 단편.
청구항 1 내지 19 중 어느 한 항에 있어서, 신경섬유 엉킴(neurofibrillary tangles), 신경망 변성(neuropil threads) 및 퇴행성 신경염(dystrophic neuritis)의 검출을 위해 사용되는, 키메라 또는 인간화된 항체, 또는 그의 기능성 단편.
청구항 1 내지 19, 29 및 30 중 어느 한 항의 키메라 또는 인간화된 항체, 또는 그의 기능성 단편을, 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제와 함께 포함하는 약제학적 조성물.
증가된 수준의 가용성 타우 단백질 및/또는 가용성 인산화된 타우 단백질을 함유하는 포유류 또는 인간의 뇌에서, 특히 뇌 피질 및/또는 해마에서 총 가용성 타우 단백질, 특히 가용성 인산화된 타우 단백질의 수준을 감소시키는데 사용하기 위한, 청구항 1 내지 19 중 어느 한 항에 따른, 키메라 또는 인간화된 항체, 또는 그의 기능성 단편, 또는 청구항 31의 조성물.
증가된 수준의 pTau 쌍으로 된 나선 필라멘트(pTau PHF)를 함유하는 포유류 또는 인간의 뇌에서, 특히 뇌 피질 및/또는 해마에서, 과인산화된 타우 단백질(pTau PHF)을 함유하는 쌍으로 된 나선 필라멘트의 수준을 감소시키는데 사용하기 위한, 청구항 1 내지 19 중 어느 한 항에 따른, 키메라 또는 인간화된 항체, 또는 그의 기능성 단편, 또는 청구항 31의 조성물.
요법에서 사용하기 위한, 청구항 1 내지 19 중 어느 한 항에 따른, 키메라 또는 인간화된 항체, 또는 그의 기능성 단편, 또는 청구항 31의 조성물.
타우-단백질-연관된 질환, 장애 또는 병태 예컨대, 이성, 상황 판단, 기억 용량, 학습, 특수 운항을 포함하는 인지 기능의 손상 또는 손실과 연관된 증상을 개선 또는 완화하는데 사용하기 위한, 청구항 1 내지 19 중 어느 한 항에 따른, 키메라 또는 인간화된 항체, 또는 그의 기능성 단편, 또는 청구항 31의 조성물.
타우병증, 타우-단백질-연관된 질환 및 장애의 그룹의 예방 또는 치료에 사용하거나 타우병증과 연관된 증상을 완화하기 위한, 청구항 1 내지 19 중 어느 한 항에 따른, 키메라 또는 인간화된 항체, 또는 그의 기능성 단편, 또는 청구항 31의 조성물.
타우병증을 앓고 있는 포유류에서 인지 기억 용량의 유지 또는 증가에 사용하기 위한, 청구항 1 내지 19 중 어느 한 항에 따른, 키메라 또는 인간화된 항체, 또는 그의 기능성 단편, 또는 청구항 31의 조성물.
신경섬유 병변의 형성에 의해 야기되거나 그것과 연관된 질환 및 장애의 예방 또는 치료에 사용하기 위한, 청구항 1 내지 19 중 어느 한 항에 따른, 키메라 또는 인간화된 항체, 또는 그의 기능성 단편, 또는 청구항 31의 조성물.
신경퇴행성 질환 또는 장애의 예방 또는 치료에 사용하기 위한, 청구항 1 내지 19 중 어느 한 항에 따른, 키메라 또는 인간화된 항체, 또는 그의 기능성 단편, 또는 청구항 31의 조성물.
알츠하이머병, 크로이펠츠-야콥병, 권투선수 치매, 다운 증후군, 게르스트만-슈트로이슬러-샤잉커 질환, 봉입체 근염, 및 프리온 단백질 뇌 아밀로이드 혈관병증, 외상성 뇌 부상, 및 뚜렷이 다른 아밀로이드 병리를 나타내지 않는 추가의 질환 또는 장애, 여기서 상기 질환 또는 장애는 괌의 근위축 측삭 경화증/피칸슨증-치매 복합증, 신경섬유 엉킴을 갖는 비-괌사람 운동 뉴런 질환, 은친화성 입자 치매, 피질기저 퇴행증, 석회화를 갖는 확산 신경섬유 엉킴, 염색체 17에 연결된 파키슨증을 갖는 전측두엽 치매, 할러포르덴-슈파츠 질환, 다중 시스템 위축증, 니만-피크병, 유형 C, 팔리도-폰토-니그랄 변성, 피크병, 진행성 피질하 신경교증, 진행성 핵상 마비, 아급성 경화 범뇌염, 신경섬유원매듭 기원 치매, 뇌염후 피칸슨증, 근긴장성 이영양증을 포함하나 이에 제한되지 않는 질환 또는 장애의 예방 또는 치료를 위한, 청구항 1 내지 19 중 어느 한 항에 따른, 키메라 또는 인간화된 항체, 또는 그의 기능성 단편, 또는 청구항 31의 조성물.
포유류 또는 인간에게, 청구항 1 내지 19 중 어느 한 항에 따른 키메라 또는 인간화된 항체, 또는 그의 기능성 단편, 또는 청구항 20 내지 28 중 어느 한 항에 따른 폴리뉴클레오타이드, 또는 청구항 31의 약제학적 조성물, 또는 이들의 조합을 투여하는 것을 포함하는, 포유류 또는 인간의, 특히 뇌, 특히 뇌 피질 및/또는 해마 중 가용성 및/또는 불용성 타우 수준을 조절하는 방법.
타우 단백질-연관된 질환 또는 병태를 앓고 있는 포유류 또는 인간에게, 청구항 11 내지 19 중 어느 한 항에 따른 키메라 또는 인간화된 항체, 또는 그의 기능성 단편, 또는 청구항 20 내지 28 중 어느 한 항에 따른 폴리뉴클레오타이드, 또는 청구항 31의 약제학적 조성물, 또는 이들의 조합을 투여하는 것을 포함하는 포유류 또는 인간에서 타우-단백질-연관된 질환, 장애 또는 병태의 진행을 느리게 하거나 멈추게 하는 방법.
포유류 또는 인간에게, 청구항 1 내지 19 중 어느 한 항에 따른 키메라 또는 인간화된 항체, 또는 그의 기능성 단편, 또는 청구항 20 내지 28 중 어느 한 항에 따른 폴리뉴클레오타이드, 또는 청구항 31의 약제학적 조성물, 또는 이들의 조합을 투여하는 것을 포함하는, 포유류 또는 인간에서 타우-단백질-연관된 질환, 장애 또는 병태 예컨대, 이성, 상황 판단, 기억 용량, 학습, 특수 운항 등을 포함하는 인지 기능의 손상 또는 손실관 연관된 증상을, 개선 또는 완화하는 방법.
청구항 1 내지 19 중 어느 한 항에 따른 키메라 또는 인간화된 항체, 또는 그의 기능성 단편의 타우 단백질의 에피토프에의 면역특이적 결합을, 샘플 중에서 또는 동일반응계(in situ)에서, 검출하는 것을 포함하는, 환자에서 타우-단백질-연관된 질환, 장애 또는 병태를 진단하는 방법으로서, 상기 방법은,
a. 타우 단백질을 함유하는 것으로 의심되는 샘플 또는 특정 신체 부분 또는 신체 영역을, 청구항 1 내지 19 중 어느 한 항에 따른 키메라 또는 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편과 접촉하고, 여기서 상기 항체 또는 그의 단편은 타우 단백질의 에피토프에 결합하고;
b. 상기 항체 또는 그의 기능성 단편을 상기 타우 단백질에 결합시켜 면역학적 복합체를 형성하고;
c. 상기 면역학적 복합체의 형성을 검출하고; 및
d. 상기 면역학적 복합체의 존재 또는 부재를 샘플 또는 특정 신체 부분 또는 영역 중 타우 단백질의 존재 또는 부재와 관련짓는 것을 포함하는 방법.
청구항 1 내지 19 중 어느 한 항에 따른 키메라 또는 인간화된 항체, 또는 그의 기능성 단편의 타우 단백질의 에피토프에의 면역특이적 결합을, 샘플 중에서 또는 동일반응계(in situ)에서 검출하는 것을 포함하는, 환자에서 타우-단백질-연관된 질환, 장애 또는 병태에 대한 소인을 진단하는 방법으로서, 상기 방법은,
a. 타우 단백질을 함유하는 것으로 의심되는 특정 신체 부분 또는 신체 영역을, 청구항 1 내지 19 중 어느 한 항에 따른 키메라 또는 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편과 접촉하고, 여기서 상기 항체 또는 그의 단편은 타우 단백질의 에피토프에 결합하고;
b. 상기 항체, 또는 그의 기능성 단편이 타우 항원에 결합하도록 하여 면역학적 복합체를 형성하고;
c. 상기 면역학적 복합체의 형성을 검출하고;
d. 상기 면역학적 복합체의 존재 또는 부재를 샘플 또는 특정 신체 부분 또는 영역 중 타우 단백질의 존재 또는 부재와 관련짓고; 및
e. 상기 면역학적 복합체의 양을 정상 대조군 값과 비교하는 것을 포함하고,
여기서 정상 대조군 값과 비교된 상기 응집물의 양의 증가는, 상기 환자가 타우- 단백질-연관된 질환 또는 병태를 앓고 있거나 이를 진행시킬 위험이 있음을 나타내는 방법.
청구항 1 내지 19 중 어느 한 항에 따른 키메라 또는 인간화된 항체, 또는 그의 기능성 단편으로 치료 후 환자에서 최소 잔류 질환을 모니터링하는 방법으로서, 상기 방법은,
a. 타우 단백질을 함유하는 것으로 의심되는 특정 신체 부분 또는 신체 영역을, 청구항 1 내지 19 중 어느 한 항에 따른 키메라 또는 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편과 접촉하고, 여기서 상기 항체 또는 그의 단편은 타우 단백질의 에피토프에 결합하고;
b. 상기 항체, 또는 그의 기능성 단편이 타우 항원에 결합하도록 하여 면역학적 복합체를 형성하고;
c. 상기 면역학적 복합체의 형성을 검출하고;
d. 상기 면역학적 복합체의 존재 또는 부재를 샘플 또는 특정 신체 부분 또는 영역 중 타우 단백질의 존재 또는 부재와 관련짓고; 및
e. 상기 면역학적 복합체의 양을 정상 대조군 값과 비교하는 것을 포함하고,
여기서 정상 대조군 값과 비교해 상기 응집물의 양의 증가는, 상기 환자가 여전히 최소 잔류 질환을 앓고 있다는 것을 나타내는 방법.
청구항 1 내지 19 중 어느 한 항에 따른 키메라 또는 인간화된 항체, 또는 그의 기능성 단편으로 치료될 환자의 반응성을 예측하는 방법으로서, 상기 방법은,
a. 타우 단백질을 함유하는 것으로 의심되는 샘플 또는 특정 신체 부분 또는 신체 영역을, 청구항 1 내지 19 중 어느 한 항에 따른 키메라 또는 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편과 접촉하고, 여기서 상기 항체 또는 그의 단편은 타우 단백질의 에피토프에 결합하고;
b. 상기 항체, 또는 그의 기능성 단편이 타우 항원에 결합하도록 하여 면역학적 복합체를 형성하고;
c. 상기 면역학적 복합체의 형성을 검출하고;
d. 상기 면역학적 복합체의 존재 또는 부재를 샘플 또는 구체적인 신체 부분 또는 영역에서 타우 항원의 존재 또는 부재와 관련짓고; 및
e. 치료의 개시 전 및 후에 상기 면역학적 복합체의 양을 비교하는 것을 포함하고,
여기서 상기 응집물의 양의 감소는, 상기 환자가 상기 치료에 대해 반응성일 높은 잠재력을 갖는다는 것을 나타내는 방법.
청구항 1 내지 19 중 어느 한 항에 따른 키메라 또는 인간화된 항체, 또는 그의 기능성 단편을 포함하는 타우-단백질-연관된 질환, 장애 또는 병태의 검출 또는 진단용 시험 키트.
청구항 20 내지 28 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오타이드를 포함하고, 상기 폴리뉴클레오타이드는 작동가능하게 연결된 벡터.
청구항 49의 벡터를 포함하는 숙주세포.
청구항 50에 있어서, 청구항 1 내지 19 중 어느 한 항에 따른 키메라 또는 인간화된 항체, 또는 그의 기능성 단편을 생산하는 숙주세포.
청구항 50 또는 청구항 51에 있어서, 포유류 세포인 숙주세포.
청구항 50 또는 청구항 51에 있어서, 차이니즈 햄스터 난소 세포인 숙주세포.
청구항 51에 있어서, DSM 25743으로서 2012년 3월 6일에 기탁된 에스케리치아 콜리 2B6A10C11-H인 숙주세포.
청구항 51에 있어서, DSM 25744으로서 2012년 3월 6일 기탁된 에스케리치아 콜리 2B6A10C11-L인 숙주세포.
청구항 51에 있어서, DSM 25745으로서 2012년 3월 6일에 기탁된 에스케리치아 콜리 3A8A12G7-H인 숙주세포.
청구항 51에 있어서, DSM 25746으로서 2012년 3월 6일에 기탁된 에스케리치아 콜리 3A8A12G7-L인 숙주세포.
청구항 50 내지 57 중 어느 한 항의 숙주세포를 항체 또는 단편의 발현에 적당한 조건 하에서 배양하고, 및 상기 항체 또는 단편을 회수하는 것을 포함하는 청구항 1 내지 57 중 어느 한 항의 인간화된 항체, 또는 그의 기능성 단편를 생산하는 공정.
청구항 1 내지 15 및 청구항 18 중 어느 한 항에 있어서, 중쇄 불변 영역을 포함하고, 여기서 상기 중쇄 불변 영역은 그것의 C-말단에서 라이신을 포함하는, 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편.
청구항 1 내지 12 중 어느 한 항에 있어서, 중쇄를 포함하고, 상기 중쇄는 서열번호: 24, 서열번호: 25, 서열번호: 26, 서열번호: 27, 서열번호: 28, 서열번호: 29, 서열번호: 30, 또는 서열번호: 31의 아미노산 서열을 포함하는, 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편.
청구항 60에 있어서, 경쇄 불변 영역을 추가로 포함하고, 상기 경쇄 불변 영역은 서열번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는, 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편.
청구항 1 내지 12 또는 청구항 60 중 어느 한 항에 있어서, 경쇄를 추가로 포함하고, 상기 경쇄는 서열번호: 22 또는 서열번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는, 인간화된 항체 또는 그의 기능성 단편.