KR20140130455A

KR20140130455A - Adcc-강화 항체를 사용한 암 치료용 예측 바이오마커

Info

Publication number: KR20140130455A
Application number: KR20147024440A
Authority: KR
Inventors: 크리스티안 게르데스; 클라우데 김미; 사이몬 홀링스워스; 루이기 마넨티; 뤼디거 뤼거; 파블로 우마나
Original assignee: 로슈 글리카트 아게
Priority date: 2012-03-02
Filing date: 2012-03-02
Publication date: 2014-11-10
Also published as: JP2015511702A; AU2012371260A8; AU2012371260A1; RU2014138586A; BR112014018374A8; WO2013127465A1; BR112014018374A2; CA2860369A1; MX2014010379A

Abstract

본 발명은 암으로 진단된 어떤 환자가 ADCC-강화 항체를 포함하는 항암 요법에 의한 치료로부터 가장 이익을 얻을 것인지를 확인하는 방법에 관한 것이다.

Description

ADCC-강화 항체를 사용한 암 치료용 예측 바이오마커{PREDICITIVE BIOMARKER FOR CANCER TREATMENT WITH ADCC ENHANCED ANTIBODIES}

ADCC-강화 항체는 암 치료 분야에서 부상하는 종이다. 그 Fc 영역에 의해 매개되는, 항체의 소위 작동인자(effector) 기능은 항체-기반 암 치료에서 중요한 작용 기전인 것으로 인지되었다. 이와 관련하여, 세포 표면에 결합된 항체가 작동인자 세포 상의 활성화 Fc 수용체와 상호작용할 때 유발되는 NK 및 기타 작동인자 세포에 의한 항체-코팅된 표적 세포(예를 들면, 종양 세포)의 파괴인 항체-의존성 세포-매개 세포독성(ADCC, antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity)이 특히 중요하다.

그러므로, 치료 항체의 ADCC 활성을 강화시키는 것이 매우 중요해졌고 ADCC-강화를 위한 다양한 방법들이 기술되었다. 예를 들면, 문헌 [Shields et al., J Biol Chem 9(2), 6591-6604 (2001)]은 Fc 영역의 위치 298, 333 및/또는 334(잔기에 대한 EU 번호지정)에서의 아미노산 치환이 ADCC를 개선시킴을 밝혔다. 또는, 증가된 Fc 수용체 결합 및 작동인자 기능은 항체의 글리코실화를 변화시킴으로써 수득될 수 있다. 암 면역치료에서 가장 보편적으로 사용되는 항체인 IgG1 유형 항체는 Fc 영역의 각각의 CH2 도메인중 Asn 297에 보존된 N-결합 글리코실화 부위를 갖는다. Asn 297에 결합된 2개의 복합 바이안테너리(biantennary) 올리고사카라이드는 CH2 도메인들 사이에 삽입되어 폴리펩티드 주쇄와 광범위한 접촉부를 형성하고, 그의 존재는 항체가 ADCC를 포함한 작동인자 기능을 매개하는데 필수적이다[Lifely et al., Glycobiology 5, 813-822 (1995); Jefferis et al., Immunol Rev 163, 59-76 (1998); Wright and Morrison, Trends Biotechnol 15, 26-32 (1997)]. 본원에 전체로 참고로 인용된 문헌 [Umana et al., Nat Biotechnol 17, 176-180 (1999)] 및 미국 특허 제 6,602,684 호(WO 99/54342 호)는 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포에서, 이등분된 올리고사카라이드의 생성을 촉진하는 글리코실트랜스퍼라제인 β(1,4)-N-아세틸글루코사미닐트랜스퍼라제 III(GnTIII)의 과발현이 상기 세포에서 생성된 항체의 시험관내 ADCC 활성을 상당히 증가시킴을 밝혔다. 생성 세포주에서 GnTIII의 과발현은, 일반적으로 또한 비-푸코실화되고 하이브리드 유형인 이등분된 올리고사카라이드가 풍부한 항체를 유도한다. GnTIII 이외에, 만노시다제 II(ManII)가 생성 세포주에서 과발현되는 경우, 복합체 유형의 이등분된 비-푸코실화 올리고사카라이드가 풍부한 항체가 수득된다[Ferrara et al., Biotechn Bioeng 93, 851-861 (2006)]. 두가지 유형의 항체 모두 비변형 글리칸을 갖는 항체에 비해 매우 증가된 ADCC를 나타내지만, 대부분의 N-글리칸이 복합체 유형인 항체만이 상당한 보체-의존성 세포독성을 유도할 수 있다[Ferrara et al., Biotechn Bioeng 93, 851-861 (2006)]. 올리고사카라이드 코어의 가장 안쪽 N-아세틸글루코사민 잔기로부터 푸코스의 제거는 ADCC 활성의 증가에 중요한 인자인 것으로 생각된다[Shinkawa et al., J Biol Chem 278, 3466-3473 (2003)]. 그러므로, 예를 들면, α(1,6)-푸코실트랜스퍼라제 결핍 숙주 세포에서의 발현을 포함하여, 감소된 푸코실화를 갖는 항체를 생성하는 다른 방법들이 개발되었다[Yamane-Ohnuki et al., Biotech Bioeng 87, 614-622 (2004); Niwa et al., J Immunol Methods 306, 151-160 (2006)].

당조작된(glycoengineered) 항-EGFR 항체 <ge-huMabEGFR>뿐 아니라, 당조작된 항-CD20 항체 오비누투주맙(obinutuzumab)을 포함하여 여러 ADCC-강화 항체들이 현재 임상 개발중이며 유망한 결과를 나타내었다. 그러나, 특히 암 치료에서 ADCC-강화 항체의 유력한 가능성에도 불구하고, 지금까지 상기 항체를 사용한 치료로부터 가장 이익을 얻을 환자를 선별하는 방법에 대해서는 알려진 것이 없다. 비효과적 암 치료와 관련된 잠재적 부작용을 고려하여, 일반적으로 암 치료를 개별화할 필요성이 있는 것으로 인정된다.

그러므로, 본 발명의 목적은 어느 환자가 ADCC-강화 항체 치료에 특히 잘 반응하는지를 결정하는 방법을 제공하는 것이다.

항-종양 면역 반응에 관한 바이오마커의 중요도에 관한 연구로부터 ADCC-강화 항체에 의한 치료 전에 CD16+ 세포에 의한 종양 침윤 수준이 여러 유형의 암에서 개선된 치료 결과와 상관되는 것으로 밝혀졌다.

그러므로, 본 발명은 치료 전에 환자의 종양에서 CD16+ 세포 침윤 수준을 측정하고 상기 CD16+ 세포 침윤 수준을 기준 수준과 비교하는 것을 포함하되, 기준 수준에 비해 더 높은 CD16+ 세포 침윤 수준이 치료로부터 임상적 이익을 얻을 환자를 나타내는, ADCC-강화 항체를 사용한 치료에 대한 암 환자의 반응을 예측하는 방법에 관한 것이다.

다른 양태에서, 본 발명은, i) 환자의 종양에서 CD16+ 세포 침윤 수준을 치료 전에 측정하고, ii) CD16+ 세포 침윤 수준을 기준 수준과 비교하고, iii) ADCC-강화 항체를 기준 수준에 비해 더 높은 CD16+ 세포 침윤 수준을 갖는 환자에게 투여하는, 환자에서 암 치료에 사용하기 위한 ADCC-강화 항체를 제공한다.

본 발명은 또한 i) 환자의 종양에서 CD16+ 세포 침윤 수준을 치료 전에 측정하고, ii) CD16+ 세포 침윤 수준을 기준 수준과 비교하고, iii) ADCC-강화 항체를 기준 수준에 비해 더 높은 CD16+ 세포 침윤 수준을 갖는 환자에게 투여하는, 환자에서 암의 치료 방법을 제공한다.

또한, 치료 전에 환자의 종양에서 CD16+ 세포 침윤 수준이 기준 수준보다 더 높은 경우, 환자에게 효과량의 ADCC-강화 항체를 투여하는 것을 포함하는, 환자에서 암을 치료하는 방법이 제공된다.

본 발명은 또한 ADCC-강화 항체를 포함하는, 치료 전에 종양에서 기준 수준에 비해 증가된 CD16+ 세포 침윤 수준을 갖는 암 환자의 치료를 위한 약학 조성물에 관한 것이다.

또 다른 양태에서, 본 발명은 i) CD16+ 세포 침윤 수준을 검출하기 위한 하나 이상의 화합물을 포함하는, 종양에서 CD16+ 세포 침윤 수준을 검출하기 위한 키트에 관한 것이다.

도 1은 8 주차에 기준선으로부터 기준선이후 첫번째 종양 평가까지의 최장 직경의 합(SLD)의 변화%와 CD16+ 세포에 대한 기준선에서 수득된 새로운 종양 생검물에서 기준선 염색 사이의 상관성을 나타낸 것이다.
도 2는 12 주차에 기준선으로부터 기준선이후 두번째 종양 평가까지의 최장 직경의 합(SLD)의 변화%와 CD16+ 세포에 대한 기준선에서 수득된 종양 생검물에서 기준선 염색 사이의 상관성을 나타낸 것이다.
도 3은 2 주차에 기준선으로부터 기준선이후 종양 평가까지의 SUV_max 감소와 CD16+ 세포에 대한 기준선에서 수득된 새로운 종양 생검물에서 기준선 염색 사이의 상관성을 나타낸 것이다.

1. 정의

본원에서 사용된 바와 같은 용어 "투여" 또는 "투여하는"은 당해 분야에 공지된 임의의 적합한 방법에 의해 치료 또는 의료 개입을 필요로 하는 환자에게 약학 조성물, 예를 들면, ADCC-강화 항체의 투여를 의미한다. 비제한적 투여 경로로는 경구, 정맥내, 복강내, 피하, 근육내, 국소, 피내, 비강내 또는 기관지내 투여(예를 들면, 흡입에 의해 수행되는 바와 같이)가 포함된다. 본 발명의 맥락에서 비경구 투여, 예를 들면, 정맥내 투여가 특히 바람직하다.

용어 "암"은 전형적으로 조절되지 않는 세포 증식을 특징으로 하는, 포유동물에서의 생리학적 상태를 말한다. 암의 예로는 암종, 림프종, 모세포종, 육종 및 백혈병이 포함되나, 이로 한정되지는 않는다. 상기 암의 보다 특정한 예로는 다음이 포함된다: 편평세포암, 폐암(소세포 폐암, 비-소세포 폐암, 폐의 선암 및 폐의 편평상피암 포함), 복막암, 간세포암, 위암(위장암 포함), 췌장암(전이성 췌장암 포함), 교모세포종, 자궁경부암, 난소암, 간암(liver cancer), 방광암, 간암(hepatoma), 유방암(국소 진행성, 재발성 또는 전이성 HER-2 음성 유방암 및 국소 재발성 또는 전이성 HER2 양성 유방암 포함), 결장암, 대장암, 자궁내막암 또는 자궁암, 침샘암, 신장암 또는 신세포암, 간암, 전립선암, 외음암, 갑상선암, 간 암종 및 다양한 유형의 두경부암뿐 아니라, B-세포 림프종(저등급/여포성 비-호지킨(non-Hodgkin) 림프종(NHL); 소림프구성(SL) NHL; 중간 등급/여포성 NHL; 중간 등급 확산성 NHL; 고등급 면역모세포성 NHL; 고등급 림프모구성 NHL; 고등급 소 비-분할 세포 NHL; 거대(bulky) 질환 NHL; 외투 세포 림프종; AIDS-관련 림프종; 및 발덴스트롬 마크로글로불린혈증(Waldenstrom's Macroglobulinemia) 포함); 만성 림프구성 백혈병(CLL); 급성 림프모구성 백혈병(ALL); 모양 세포성 백혈병; 만성 골수모구성 백혈병; 및 이식후 림프증식성 질환(PTLD), 및 모반증과 관련된 이상 혈관 증식, 부종(예를 들면, 뇌종양과 관련된 부종), 및 메이그스(Meigs) 증후군.

용어 "효과량"은 약물 단독의 또는 다른 약물 또는 치료 요법과 함께 포유동물에서 질환 또는 장애를 치료하는데 효과적인 양을 말한다. 암의 경우에, 약물의 치료 효과량은 암 세포의 수를 감소시키거나; 종양 크기를 감소시키거나; 주변 장기로의 암 세포 침윤을 억제(즉, 어느 정도 지연시키고 바람직하게는 정지)시키거나; 종양 전이를 억제(즉, 어느 정도 지연시키고 바람직하게는 정지)시키거나; 종양 성장을 어느 정도 억제하고/하거나; 장애와 관련된 하나 이상의 증상을 어느 정도 경감시킬 수 있다. 약물이 존재하는 암 세포의 성장을 방지하고/하거나 상기 암 세포를 사멸시킬 수 있는 정도로, 상기 약물은 세포증식억제성 및/또는 세포독성일 수 있다. 암 치료시, 생체내 효능은, 예를 들면, 생존 기간, 무진행 생존(PFS) 기간, 반응률(RR), 반응 기간 및/또는 삶의 질을 평가함으로써 측정될 수 있다.

용어 "전체 생존기간(OS)"은 치료 중 및 치료 후 환자가 생존하는 시간의 길이를 말한다. 숙련된 자가 인지하듯이, 환자가 또 다른 환자 소집단과 비교하여 통계학적으로 의미있는 더 긴 평균 생존 시간을 갖는 환자 소집단에 속하는 경우에, 환자의 전체 생존기간은 개선되거나 향상된다.

용어 "환자"는 치료가 바람직한 임의의 단일 동물, 보다 특히는 포유동물(예를 들면, 개, 고양이, 말, 토끼, 동물원 사육동물, 소, 돼지, 양 및 비-인간 영장류와 같은 비-인간 동물 포함)을 말한다. 보다 더 특히, 본원에서 환자는 인간이다.

용어 "약학 조성물"은 약제의 생물 활성이 효과적이 되게 하기 위한 형태이면서, 제형이 투여될 대상자에게 허용될 수 없을 정도로 독성인 추가 성분을 함유하지 않는 멸균 제제를 말한다.

용어 "무진행 생존기간(PFS)"은 주치의 또는 연구자의 평가에 따라 환자의 질환이 악화되지 않는, 즉, 진행하지 않는 치료 중 및 치료 후 시간 길이를 말한다. 숙련된 자가 인지하듯이, 환자가 유사한 상황의 환자들로 이루어진 대조군의 평균 무진행 생존 시간에 비해 질환이 진행하지 않는 더 긴 시간 길이를 갖는 환자의 소집단에 속하는 경우 환자의 무진행 생존기간은 개선되거나 향상된다.

본원에서 사용된 바와 같이, "치료법" 또는 "치료"(및 "치료하다" 또는 "치료하는"과 같은 그의 문법적 변형)는 치료되는 개체에서 질환의 자연적 과정을 변화시키기 위한 시도의 임상적 개입을 말하며, 예방을 위해 또는 임상 병리 과정동안 수행될 수 있다. 치료의 바람직한 효과는 질환의 발생 또는 재발 방지, 증상의 완화, 질환의 임의의 직접 또는 간접적 병리학적 결과의 경감, 전이 방지, 질환 진행 속도의 감소, 질환 상태의 개선 또는 완화, 및 차도 또는 개선된 예후를 포함하나, 이로 한정되지는 않는다.

"치료로부터 임상적 이익을 얻지 못하는 환자 집단의 종양에서의 CD16+ 세포 침윤 수준을 나타내는 값"은 치료로부터 임상적 이익을 얻지 못하는 환자 집단의 종양에서 CD16+ 세포의 평균 침윤 수준의 추정치를 말한다.

"임상적 이익"은 12 주 이상동안 목적하는 반응(예를 들면, RECIST 기준에 따른) 또는 질환 안정화를 갖는 것으로 정의된다.

CD16 항원은 특정 면역 세포 상에서 발현되는 세포 표면 항원이다. 상기 항원은, 예를 들면, 자연 살해세포(natural killer, NK) 및 활성화된 대식세포 상에서 발현되는 막관통 형태(CD16a, Fcγ 수용체 IIIa), 및 호중구 상에서 발현되는 글리코실포스파티딜-이노시톨(GPI)-고정 형태(CD16b, FcγIIIb) 둘 다로서 존재한다. 본원에서 사용된 바와 같은 "CD16"은 특히 Fcγ 수용체 IIIa로도 알려진 CD16a 항원을 말한다(인간 단백질에 대한 유니프롯(UniProt) 등록 번호 PO8637[버전 136] 및 NCBI 등록 번호 NP_000560[버전 NP_000560.5] 참조). 따라서, 용어 "CD16 양성 세포" 또는 "CD16+ 세포"는 CD16 항원, 특히 CD16a 항원을 발현하는 세포를 말한다. CD16+ 세포는, 예를 들면, 항-CD16 항체 클론 2H7(바이오제넥스(Biogenex)에서 시판)과 같은 항-CD16 항체를 이용하여 면역조직화학에 의해 조직 샘플에서 검출가능하다.

"CD16+ 세포 침윤 수준"은 해당 조직, 예를 들면, 종양에 존재하는 CD16+ 세포의 수를 말한다. 특정 태양에서, CD16+ 세포 침윤의 수준은 조직 절편(예를 들면, 면역조직화학 분석 목적으로 종양 생검물로부터 제조된 절편) mm² 당 CD16+ 세포의 수로서 반영된다. 또 다른 태양에서, CD16+ 세포 침윤 수준은 종양 샘플(예를 들면, 유세포 분석을 위해 처리된 종양 생검물(의 일부)) 중 세포의 총 수 당 CD16+ 세포의 수로 반영된다. 또 다른 태양에서, CD16+ 세포 침윤 수준은 종양 샘플(예를 들면, ELISA 분석을 위해 처리된 종양 생검물 또는 RT-PCR 분석을 위해 처리된 종양 샘플(의 일부))에 존재하는 CD16 단백질 또는 mRNA의 양으로 반영된다.

"처리 전에"는 환자에게 ADCC-강화 항체의 첫번째 투여 이전을 말한다.

"<ge-huMabEGFR>"은 래트 ICR62 항체에 기초한 당조작된 인간화 IgG1-서브클래스 항-인간 EGFR 항체(CAS 등록 번호 959963-46-3)를 말한다. 상기 항체는 β(1,4)-N-아세틸글루코사미닐트랜스퍼라제 III(GnTIII) 및 만노시다제 II(ManII) 활성을 갖는 폴리펩티드를 과발현하는 숙주 세포에서 생성되며(문헌 [Umana et al., Nat Biotechnol 17, 176-180 (1999)] 및 미국 특허 제 6,602,684 호(WO 00/54342 호, 문헌 [Ferrara et al., Biotechn Bioeng 93, 851-861 (2006)] 참조), 그의 Fc 영역에 약 50% 이상의 비-푸코실화 올리고사카라이드를 갖는다.

본원에서 용어 "항체"는 가장 광의로 사용되며, 단클론성 항체, 다클론성 항체, 다중특이성 항체(예를 들면, 이중특이성 항체), 및 목적하는 항원-결합 활성을 나타내고 Fc 영역 또는 면역글로불린의 Fc 영역과 대등한 영역을 포함하는 경우 항체 단편을 포함하여(이로 한정되지는 않는다), 다양한 항체 구조물을 포함한다.

용어 "전장(full-length) 항체", "비손상(intact) 항체" 및 "전(whole) 항체"는 본원에서 천연 항체 구조와 실질적으로 유사한 구조를 가지거나 본원에 정의된 바와 같은 Fc 영역을 함유하는 중쇄를 갖는 항체를 말하기 위해 상호교환적으로 사용된다.

"천연 항체"는 다양한 구조를 갖는 천연 면역글로불린 분자를 말한다. 예를 들면, 천연 IgG 항체는 다이설파이드-결합된 2개의 동일한 경쇄 및 2개의 동일한 중쇄로 이루어진, 약 150,000 달톤의 헤테로사량체성 당단백질이다. N-말단에서 C-말단으로, 각각의 중쇄는 가변 중쇄 도메인 또는 중쇄 가변 도메인으로도 지칭되는 가변 영역(VH)에 이어, 중쇄 불변 영역으로도 지칭되는 3개의 불변 도메인(CH1, CH2 및 CH3)을 갖는다. 유사하게, N-말단에서 C-말단으로, 각각의 경쇄는 가변 경쇄 도메인 또는 경쇄 가변 도메인으로도 지칭되는 가변 영역(VL)에 이어, 경쇄 불변 영역으로도 지칭되는 불변 경쇄(CL) 도메인을 갖는다. 항체의 경쇄는 그 불변 도메인의 아미노산 서열을 기준으로 카파(κ) 및 람다(λ)로 불리는 2가지 유형중 하나로 지정될 수 있다.

"항체 단편"은 비손상 항체가 결합하는 항원과 결합하는 비손상 항체의 일부를 포함하는 비손상 항체 이외의 다른 분자를 말한다. 항체 단편의 예로는 Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')₂, 디아바디(diabody), 선형 항체, 단일쇄 항체 분자(예, scFv), 단일-도메인 항체, 및 항체 단편들로부터 생성된 다중특이성 항체가 포함되나 이로 한정되지는 않는다. 특정 항체 단편에 대한 검토는, 문헌 [Hudson et al., Nat Med 9, 129-134 (2003)]을 참조하시오. scFv 단편에 대한 검토는, 예를 들면, 문헌 [Pluckthun, The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)]; 또한 WO 93/16185 호; 및 미국 특허 제 5,571,894 호 및 제 5,587,458 호를 참조하시오. 샐비지(salvage) 수용체 결합 에피토프 잔기를 포함하고 증가된 생체내 반감기를 갖는 Fab 및 F(ab')₂ 단편에 대한 논의에 대해서는 미국 특허 제 5,869,046 호를 참조하시오. 디아바디는 2가 또는 이중특이성일 수 있는 2개의 항원 결합 부위를 갖는 항체 단편이다(예를 들면, EP 404,097 호; WO 1993/01161 호; 문헌 [Hudson et al., Nat Med 9, 129-134 (2003); and Hollinger et al., Proc Natl Acad Sci USA 90, 6444-6448 (1993)] 참조). 트리아바디(triabody) 및 테트라바디는 또한 문헌 [Hudson et al., Nat Med 9, 129-134 (2003)]에 기술되어 있다. 단일-도메인 항체는 중쇄 가변 도메인의 전체 또는 일부, 또는 항체의 경쇄 가변 도메인의 전체 또는 일부를 포함하는 항체 단편이다. 특정 태양에서, 단일-도메인 항체는 인간 단일-도메인 항체이다(도만티스 인코포레이티드(Domantis, Inc.), 미국 매사추세츠주 월탐; 예를 들면, 미국 특허 제 6,248,516 B1 호 참조). 항체 단편은 본원에 기술된 바와 같이, 비손상 항체의 단백질분해성 절단 및 재조합 숙주 세포(예를 들면, 에스케리키아 콜라이(Escherichia coli) 또는 파지)에 의한 생성을 포함하나 이로 한정되지는 않는 다양한 기술에 의해 제조될 수 있다.

용어 "가변 영역" 또는 "가변 도메인"은 항체를 항원에 결합시키는데 수반되는 항체 중쇄 또는 경쇄의 도메인을 말한다. 천연 항체의 중쇄 및 경쇄(각각 VH 및 VL)의 가변 도메인은 일반적으로 유사한 구조를 가지며, 이때 각각의 도메인은 4개의 보존된 프레임워크 영역(framework region, FR) 및 3개의 초가변 영역(hypervariable region, HVR)을 포함한다(예를 들면, 문헌 [Kindt et al., Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., page 91 (2007)] 참조). 단일 VH 또는 VL 도메인이면 항원 결합 특이성을 제공하기에 충분할 수 있다.

용어 "초가변 영역" 또는 "HVR"은, 본원에서 사용된 바와 같이, 서열에 있어서 초가변성이고/이거나 구조적으로 한정된 루프("초가변 루프")를 형성하는 항체 가변 도메인의 영역들 각각을 말한다. 일반적으로, 천연 4-쇄 항체는 6개의 HVR: VH에 3개(H1, H2, H3) 및 VL에 3개(L1, L2, L3)를 포함한다. HVR은 일반적으로 초가변 루프로부터 및/또는 상보성 결정 영역(complementarity determining region, CDR)으로부터의 아미노산 잔기를 포함하며, 상기 상보성 결정 영역은 최고 서열 가변성을 가지고/가지거나 항원 인식에 수반된다. VH에서 CDR1을 제외하고, CDR은 일반적으로 초가변 루프를 형성하는 아미노산 잔기를 포함한다. 초가변 영역(HVR)은 또한 "상보성 결정 영역"(CDR)으로도 지칭되며, 상기 용어들은 본원에서 항원 결합 영역을 형성하는 가변 영역 부분과 관련하여 상호교환적으로 사용된다. 상기 특정 영역은 문헌 [Kabat et al., U.S. Dept. of Health and Human Services, Sequences of Proteins of Immunological Interest (1983) and Chothia et al., J Mol Biol 196:901-917 (1987)]에 기술되었으며, 여기서 정의들은 서로에 대해 비교될 때 아미노산 잔기의 중복 또는 부분집합을 포함한다. 그럼에도 불구하고, 항체 또는 그의 변이체의 CDR을 언급하기 위한 정의의 적용은 본원에서 정의되고 사용되는 바와 같은 용어의 범위 내에 속해야 한다. 상기 인용된 참조문헌 각각에 정의된 바와 같은 CDR을 포함하는 적절한 아미노산 잔기를 비교로서 하기 표 1에 나타내었다. 특정 CDR을 포함하는 정확한 잔기 번호는 CDR의 서열 및 크기에 따라 달라질 것이다. 당해 분야에 숙련된 자라면 통상적으로 항체의 가변 영역 아미노산 서열을 고려하여 어느 잔기가 특정 CDR을 포함하는지를 결정할 수 있다.

[표 1]

CDR 정의¹

카밧(Kabat) 등은 또한 임의의 항체에 적용할 수 있는 가변 영역 서열에 대한 번호 체계를 규정하였다. 당해 분야에 통상의 기술을 가진 자라면 서열 자체 이상의 임의의 실험 데이터를 의지하지 않고, 임의의 가변 영역 서열에 "카밧 "번호"의 상기 체계를 분명하게 지정할 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같이, "카밧 번호"는 문헌 [Kabat et al., U.S. Dept. of Health and Human Services, "Sequence of Proteins of Immunological Interest" (1983)]에 나타낸 번호 체계를 말한다. 달리 명시하지 않는 한, 항체 가변 영역에 특정 아미노산 잔기 위치의 번호에 대한 언급은 카밧 번호 체계를 따른다.

서열표의 폴리펩티드 서열(즉, 서열번호 1 내지 9)은 카밧 번호 체계에 따라 번호를 붙이지 않는다. 그러나, 서열표의 서열의 번호를 카밧 번호로 전환시키는 것은 당해 분야에 통상의 기술에 속한다.

"프레임워크" 또는 "FR"은 초가변 영역(HVR) 잔기 이외의 다른 가변 도메인 잔기를 말한다. 가변 도메인의 FR은 일반적으로 4개의 FR 도메인: FR1, FR2, FR3 및 FR4로 이루어진다. 따라서, HVR 및 FR 서열은 일반적으로 VH(또는 VL)에서 하기 순서로 나타난다: FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4.

항체의 "부류"는 그 중쇄가 갖는 불변 도메인 또는 불변 영역의 유형을 말한다. 항체의 5개 주요 부류: IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM이 존재하며, 이들 중 여러개가 서브클래스(이소타입), 예를 들면, IgG₁, IgG₂, IgG₃, IgG₄, IgA₁ 및 IgA₂로 더 분류될 수 있다. 면역글로불린의 상이한 부류에 상응하는 중쇄 불변 도메인은 각각 α, δ, ε, γ 및 μ로 불린다.

용어 "Fc 영역"은 본원에서 불변 영역의 적어도 일부분을 함유하는 면역글로불린 중쇄의 C-말단 영역을 정의하기 위해 사용된다. 상기 용어는 천연 서열 Fc 영역 및 변이체 Fc 영역을 포함한다. IgG 중쇄의 Fc 영역의 경계는 약간 달라질 수 있지만, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 통상적으로 Cys226으로부터 또는 Pro230으로부터 중쇄의 카복실-말단까지 연장되는 것으로 규정된다. 그러나, Fc 영역의 C-말단 라이신(Lys447)은 존재하거나 존재하지 않을 수 있다. 본원에서 달리 언급하지 않는 한, Fc 영역 또는 불변 영역에서 아미노산 잔기의 번호는 문헌 [Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)]에 기술된 바와 같이, EU 인덱스로도 불리는 EU 번호 체계에 따른다.

"면역글로불린의 Fc 영역에 상응하는 영역"은 면역글로불린의 Fc 영역의 천연 대립유전자 변이체뿐 아니라, 치환, 부가 또는 결실을 야기하지만 작동인자 기능(예를 들면, 항체-의존성 세포-매개 세포독성)을 매개하는 면역글로불린의 능력을 실질적으로 감소시키지 않는 변화를 갖는 변이체를 포함하는 것이다. 예를 들면, 하나 이상의 아미노산이 생물 기능의 실질적인 손실없이 면역글로불린의 Fc 영역의 N-말단 또는 C-말단으로부터 결실될 수 있다. 상기 변이체는 활성에 최소 영향을 미치도록 당해 분야에 공지된 일반적 규칙에 따라 선택될 수 있다(예를 들면, 문헌 [Bowie et al., Science 247, 1306-1310 (1990)] 참조).

용어 "항-[항원] 항체" 및 "[항원]에 결합하는 항체"는 항체가 항원을 표적화하는데 있어서 진단 및/또는 치료제로 유용하게 하는 충분한 친화도하에 각각의 항원에 결합할 수 있는 항체를 말한다. 한 태양에서, 비관련 단백질에 대한 항-[항원] 항체의 결합 정도는, 예를 들면, 방사성면역분석법(RIA)에 의해 측정할 때 항원에 대한 항체의 결합의 약 10% 미만이다. 특정 태양에서, [항원]에 결합하는 항체는 ≤1μM, ≤100 nM, ≤10 nM, ≤1 nM, ≤0.1 nM, ≤0.01 nM 또는 ≤0.001 nM (예를 들면, 10^-8 M 이하, 예를 들면, 10^-8 내지 10^-13 M, 예를 들면, 10^-9 내지 10^-13 M)의 해리 상수(K_D)를 갖는다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "조작하다, 조작된, 조작"은 천연 또는 재조합 폴리펩티드 또는 그의 단편의 펩티드 주쇄의 임의 조작 또는 번역 후 변형을 포함하는 것으로 간주된다. 조작은 아미노산 서열, 글리코실화 패턴, 또는 개개 아미노산의 측쇄기의 변형, 및 이들 접근방법의 조합을 포함한다. 특히 접두어 "글리코-"를 갖는 "조작", 및 용어 "글리코실화 조작"은 세포에서 발현된 당단백질의 변형된 글리코실화를 달성하기 위한 올리고사카라이드 합성 경로의 유전자 조작을 포함하여, 세포의 글리코실화 기관의 대사 조작을 포함한다. 또한, 글리코실화 조작은 글리코실화에 대한 돌연변이 및 세포 환경의 영향을 포함한다. 한 태양에서, 글리코실화 조작은 글리코실트랜스퍼라제 활성에서의 변화이다. 특정 태양에서, 상기 조작은 변화된 글루코사미닐트랜스퍼라제 활성 및/또는 푸코실트랜스퍼라제 활성을 야기한다. 글리코실화 조작은 "증가된 GnTIII 활성을 갖는 숙주 세포"(예를 들면, 증가된 수준의, β(1,4)-N-아세틸글루코사미닐트랜스퍼라제 III(GnTIII) 활성을 갖는 하나 이상의 폴리펩티드를 발현하도록 조작된 숙주 세포), "증가된 ManII 활성을 갖는 숙주 세포"(예를 들면, 증가된 수준의, α-만노시다제 II(ManII) 활성을 갖는 하나 이상의 폴리펩티드를 발현하도록 조작된 숙주 세포) 또는 "감소된 α(1,6) 푸코실트랜스퍼라제 활성을 갖는 숙주 세포"(예를 들면, 감소된 수준의 α(1,6) 푸코실트랜스퍼라제를 발현하도록 조작된 숙주 세포)를 수득하기 위해 사용될 수 있다. 숙주 세포는 ADCC-강화 항체를 생성하기 위해 사용될 수 있는 임의 유형의 세포 시스템이다. 숙주 세포로는 배양 세포, 예를 들면, 몇가지만 들자면, 포유동물 배양 세포, 예를 들어, CHO 세포, BHK 세포, NS0 세포, SP2/0 세포, YO 골수종 세포, P3X63 마우스 골수종 세포, PER 세포, PER.C6 세포 또는 하이브리도마 세포, 효모 세포, 곤충 세포 및 식물 세포뿐 아니라, 유전자이식 동물, 유전자이식 식물, 또는 배양된 식물 또는 동물 조직에 포함된 세포가 포함된다.

본 발명에서 유용한 항체의 암호화 서열 및/또는 글리코실트랜스퍼라제 활성을 갖는 폴리펩티드의 암호화 서열을 함유하고, 생물 활성 유전자 산물을 발현하는 숙주 세포는, 예를 들면, 당해 분야에 공지된 방법들인 DNA-DNA 또는 DNA-RNA 하이브리드화; "마커" 유전자 기능의 존재 또는 부재; 숙주 세포에서 각각의 mRNA 전사체의 발현으로 측정되는 바와 같은 전사 수준의 평가; 또는 면역분석에 의해 또는 그의 생물 활성에 의해 측정되는 바와 같은 유전자 산물의 검출에 의해 확인될 수 있다. GnTIII 또는 ManII 활성은, 예를 들면, GnTIII 또는 ManII 각각의 생합성 산물에 결합하는 렉틴을 이용함으로써 검출될 수 있다. 상기 렉틴에 대한 한 예는 이등분 GlcNAc를 함유하는 올리고사카라이드에 우선적으로 결합하는 E₄-PHA 렉틴이다. GnTIII 또는 ManII 활성을 갖는 폴리펩티드의 생합성 산물(즉, 특정 올리고사카라이드 구조물)은 또한 상기 폴리펩티드를 발현하는 세포에 의해 생성된 당단백질로부터 방출된 올리고사카라이드의 질량 분광 분석에 의해 검출될 수 있다. 또는, GnTIII 또는 ManII 활성을 갖는 폴리펩티드를 사용하여 조작된 세포에 의해 생성된 항체에 의해 매개된 증가된 작동인자 기능, 예를 들면, 증가된 ADCC를 측정하는 기능 분석을 이용할 수 있다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "GnTIII 활성을 갖는 폴리펩티드"는 N-결합 올리고사카라이드의 트라이만노실 코어의 β-결합 만노시드에 대한 β-1,4 결합에 N-아세틸글루코사민(GlcNAc) 잔기의 부가를 촉진할 수 있는 폴리펩티드를 말한다. 여기에는, 용량 의존성의 존재 또는 부재하에, 특정 생물 분석에서 측정할 때, 국제 생화학 및 분자생물학 연합 학회의 명명 위원회(Nomenclature Committee of the International Union of Biochemistry and Molecular Biology, NC-IUBMB)에 따르면, β-1,4-만노실-당단백질 4-베타-N-아세틸글루코사미닐-트랜스퍼라제(EC 2.4.1.144)로도 알려진 β(1,4)-N-아세틸글루코사미닐트랜스퍼라제 III의 활성과 유사하나 반드시 동일하지는 않은 효소 활성을 나타내는 융합 폴리펩티드가 포함된다. 용량 의존성이 존재하는 경우, 상기 의존성은 GnTIII의 용량 의존성과 동일할 필요가 없으며, GnTIII과 비교하여 주어진 활성에서의 용량-의존성과 실질적으로 유사하다(즉, 후보 폴리펩티드는 GnTIII에 비해 더 큰 활성, 또는 약 25배 이하, 바람직하게는 약 10배 이하의 활성, 가장 바람직하게는 약 3배 이하의 활성을 나타낼 것이다). 특정 태양에서, GnTIII 활성을 갖는 폴리펩티드는 GnTIII의 촉매 도메인 및 이종 골지(Golgi) 정주성(resident) 폴리펩티드의 골지 편재화(localization) 도메인을 포함하는 융합 폴리펩티드이다. 특히, 골지 편재화 도메인은 만노시다제 II 또는 GnTI의 편재화 도메인, 가장 특히는 만노시다제 II의 편재화 도메인이다. 또는, 골지 편재화 도메인은 만노시다제 I의 편재화 도메인, GnTII의 편재화 도메인 및 α1,6 코어 푸코실트랜스퍼라제의 편재화 도메인으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 상기 융합 폴리펩티드를 생성하고 증가된 작동인자 기능을 갖는 항체를 생성하기 위해 이들을 사용하는 방법은, 모두 전체 내용이 본원에 특별히 참고로 인용된 WO 2004/065540 호, 미국 가출원 제 60/495,142 호 및 미국 특허출원공개 제 2004/0241817 호에 개시되어 있다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "골지 편재화 도메인"은 폴리펩티드를 골지 복합체 내의 위치에 정착시키는 골지 정주성 폴리펩티드의 아미노산 서열을 말한다. 일반적으로, 편재화 도메인은 효소의 아미노 말단 "꼬리"를 포함한다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "ManII 활성을 갖는 폴리펩티드"는 N-결합 올리고사카라이드의 분지된 GlcNAcMan₅GlcNAc₅ 만노스 중간체중 말단 1,3- 및 1,6-결합 α-D-만노스 잔기의 가수분해를 촉진할 수 있는 폴리펩티드를 말한다. 여기에는, 국제 생화학 및 분자생물학 연합 학회의 명명 위원회(NC-IUBMB)에 따라, 만노실 올리고사카라이드 1,3-1,6-α-만노시다제 II(EC 3.2.1.114)로도 알려진 골지 α-만노시다제 II의 활성과 유사하나 반드시 동일하지는 않은 효소 활성을 나타내는 폴리펩티드가 포함된다.

항체-의존성 세포-매개 세포독성(ADCC)은 면역 작동인자 세포에 의한 항체-코팅된 표적 세포의 용해를 유도하는 면역 메카니즘이다. 표적 세포는 Fc 영역을 포함하는 항체 또는 그의 단편이, 일반적으로 Fc 영역에 대해 N-말단인 단백질 부분을 통해 특이적으로 결합하는 세포이다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "증가된 ADCC"는 표적 세포를 둘러싸고 있는 배지중 항체의 주어진 농도에서 주어진 시간에 상기 정의된 ADCC의 메카니즘에 의해 용해되는 표적 세포의 수의 증가, 및/또는 ADCC의 메카니즘에 의해 주어진 시간에 주어진 수의 표적 세포의 용해를 달성하기 위해 필요한 표적 세포를 둘러싸고 있는 배지중 항체 농도의 감소로서 정의된다. ADCC의 증가는 동일한 표준 제조, 정제, 제형화 및 저장 방법(당해 분야에 숙련된 자에게 공지되어 있는)을 사용하지만 조작되지는 않은 동일 유형의 숙주 세포에 의해 생성된 동일한 항체에 의해 매개된 ADCC에 대한 것이다. 예를 들면, 본원에 기술된 방법에 의해 변형된 패턴의 글리코실화를 갖도록(예를 들면, 글리코실트랜스퍼라제, GnTIII 또는 다른 글리코실트랜스퍼라제를 발현하도록) 조작된 숙주 세포에 의해 생성된 항체에 의해 매개된 ADCC의 증가는 동일 유형의 비-조작 숙주 세포에 의해 생성된 동일한 항체에 의해 매개된 ADCC에 대한 것이다.

"증가된 항체 의존성 세포-매개 세포독성(ADCC)을 갖는 항체"는 당해 분야에서 통상의 기술을 가진 자에게 공지된 임의의 적합한 방법에 의해 측정할 때 증가된 ADCC를 갖는 항체를 의미한다. 한가지 승인된 시험관내 ADCC 분석법은 다음과 같다:

(1) 상기 분석은 항체의 항원 결합 영역에 의해 인식된 표적 항원을 발현하는 것으로 알려진 표적 세포를 사용한다;

(2) 상기 분석은 작동인자 세포로서, 무작위로 선택된 건강한 공여자의 혈액으로부터 분리된 인간 말초혈 단핵 세포(PBMC)를 사용한다;

(3) 상기 분석은 하기의 프로토콜에 따라 수행된다:

i) PBMC를 표준 밀도 원심분리 절차를 이용하여 분리하고, RPMI 세포 배양 배지에 5 x 10⁶ 세포/mL로 현탁시킨다;

ii) 표적 세포를 표준 조직 배양 방법에 의해 성장시키고, 90%보다 높은 생존력을 갖는 지수 성장기로부터 회수하고, RPMI 세포 배양 배지에 세척하고, 100 마이크로큐리의 ⁵¹Cr로 표지화하고, 세포 배양 배지로 2회 세척하고, 10⁵ 세포/mL의 밀도에서 세포 배양 배지에 재현탁시킨다;

iii) 상기 최종 표적 세포 현탁액 100 μL를 96-웰 미세적정 플레이트의 각 웰로 옮긴다;

iv) 항체를 세포 배양 배지에 4000 ng/mL로부터 0.04 ng/mL까지 연속-희석시키고, 50 μL의 생성된 항체 용액을 96-웰 미세적정 플레이트내의 표적 세포에 첨가하여, 상기 전체 농도 범위에 걸친 다양한 항체 농도를 3중으로 시험한다;

v) 최대 방출(MR) 대조군을 위해, 표지화된 표적 세포를 함유하는 플레이트내 3개의 추가 웰에, 항체 용액(상기 항목 iv) 대신에 비-이온성 세제(노니뎃(Nonidet), 시그마(Sigma), 세인트루이스)의 2%(V/V) 수용액 50 μL를 주입한다;

vi) 자발적 방출(SR) 대조군을 위해, 표지화된 표적 세포를 함유하는 플레이트내 3개의 추가 웰에 항체 용액(상기 항목 iv) 대신 50 μL의 RPMI 세포 배양 배지를 주입한다;

vii) 이어서, 96-웰 미세적정 플레이트를 50 x g에서 1 분간 원심분리하고, 4 ℃에서 1 시간동안 배양한다;

viii) 50 μL의 PBMC 현탁액(상기 항목 i)을 각 웰에 가하여 25:1의 작동인자:표적 세포 비를 수득하고, 플레이트를 37 ℃에서 5% CO₂ 대기하에 배양기에 4 시간동안 넣어둔다;

ix) 각 웰로부터 무세포 상등액을 수거하고, 실험적으로 방출된 방사능(ER)을 감마 계수기를 사용하여 정량화한다;

x) 특이적 용해 비율을 식 (ER-MR)/(MR-SR) x 100에 따라 각 항체 농도에 대해 산출한다[상기 식에서, ER은 그 항체 농도에 대해 정량화된 평균 방사능(상기 항목 ix 참조)이고, MR은 MR 대조군(상기 항목 v 참조)에 대해 정량화된 평균 방사능(상기 항목 ix 참조)이며, SR은 SR 대조군(상기 항목 vi 참조)에 대해 정량화된 평균 방사능(상기 항목 ix 참조)이다];

(4) "증가된 ADCC"는 상기에서 시험된 항체 농도 범위 내에서 관찰된 특이적 용해의 최대 비율의 증가, 및/또는 상기에서 시험된 항체 농도 범위 내에서 관찰된 특이적 용해의 최대 비율의 절반을 달성하기 위해 필요한 항체의 농도의 감소로서 정의한다. ADCC의 증가는, 당해 분야에 숙련된 자에게 공지되어 있는 동일한 표준 제조, 정제, 제형화 및 저장 방법을 사용하지만 조작되지는 않은 동일 유형의 숙주 세포에 의해 생성된 동일한 항체에 의해 매개된, 상기 분석법으로 측정된 ADCC에 대한 것이다.

항체의 ADCC 활성을 평가하기 위한 시험관내 분석의 다른 예들은 미국 특허 제 5,500,362 호; 문헌 [Hellstrom et al., Proc Natl Acad Sci USA 83, 7059-7063 (1986); and Hellstrom et al., Proc Natl Acad Sci USA 82, 1499-1502 (1985)]; 미국 특허 제 5,821,337 호; 문헌 [Bruggemann et al., J Exp Med 166, 1351-1361 (1987)]에 기술되어 있다. 또는, 비-방사성 분석 방법을 사용할 수 있다(예를 들면, 유세포분석을 위한 ACTI(등록상표) 비-방사성 세포독성 분석(셀테크놀로지 인코포레이티드(CellTechnology, Inc.), 미국 캘리포니아주 마운틴뷰); 및 사이토톡스(CytoTox) 96(등록상표) 비-방사성 세포독성 분석(프로메가(Promega), 미국 위스콘신주 매디슨) 참조). 상기 분석에 유용한 작동인자 세포로는 말초혈 단핵 세포(PBMC) 및 자연 살해(NK) 세포가 포함된다. 대안적으로 또는 추가로, 항체의 ADCC 활성은 생체내에서, 예를 들면, 문헌 [Clynes et al., Proc Natl Acad Sci USA 95, 652-656 (1998)]에 개시된 바와 같은 동물 모델에서 평가될 수 있다.

2. 상세한 태양

첫번째 양태에서, 본 발명은 치료 전에 환자의 종양에서 CD16+ 세포 침윤 수준을 측정하고, 상기 CD16+ 세포 침윤 수준을 기준 수준과 비교하는 것을 포함하되, 기준 수준에 비해 더 높은 CD16+ 세포 침윤 수준이 치료로부터 임상적 이익을 얻을 환자를 나타내는, ADCC-강화 항체를 사용한 치료에 대한 암 환자의 반응을 예측하는 방법을 제공한다.

특정 태양에서, 상기 방법은 시험관내 방법이다. 한 상기 태양에서, CD16+ 세포 침윤 수준은 치료 전에 환자로부터 취한 종양 샘플에서 측정된다. 한 태양에서, 기준 수준은 치료로부터 임상적 이익을 얻지 못하는 환자 집단의 종양에서의 CD16+ 세포 침윤 수준을 나타내는 값이다. 한 태양에서, 기준 수준은 치료로부터 임상적 이익을 얻지 못하는 환자로부터 치료 전에 취한 종양 샘플에서 시험관내에서 측정된다. 한 태양에서, 치료로부터 임상적 이익을 얻을 환자를 나타내는 CD16+ 세포 침윤 수준은 기준 수준보다 1.2배 이상, 1.5배 이상, 2배 이상 또는 3배 이상 더 높다.

다른 양태에서, 본 발명은 i) 환자의 종양에서 CD16+ 세포 침윤 수준을 치료 전에 측정하고, ii) CD16+ 세포 침윤 수준을 기준 수준과 비교하고, iii) ADCC-강화 항체를 기준 수준에 비해 더 높은 CD16+ 세포 침윤 수준을 갖는 환자에게 투여하는, 환자에서 암 치료에 사용하기 위한 ADCC-강화 항체를 제공한다.

한 태양에서, 종양에서 CD16+ 세포 침윤 수준은 치료 전에 환자로부터 취한 종양 샘플에서 시험관내에서 측정된다. 한 태양에서, 기준 수준은 치료로부터 임상적 이익을 얻지 못하는 환자 집단의 종양에서 CD16+ 세포 침윤 수준을 나타내는 값이다. 한 태양에서, 기준 수준은 치료로부터 임상적 이익을 얻지 못하는 환자로부터 치료 전에 취한 종양 샘플에서 시험관내에서 측정된다. 한 태양에서, ADCC-강화 항체는 기준 수준에 비해 1.2배 이상, 1.5배 이상, 2배 이상 또는 3배 이상 더 높은 CD16+ 세포 침윤 수준을 갖는 환자에게 투여된다.

한 태양에서, 종양에서 CD16+ 세포 침윤 수준은 치료 전에 환자로부터 취한 종양 샘플에서 시험관내에서 측정된다. 한 태양에서, 기준 수준은 치료로부터 임상적 이익을 얻지 못하는 환자 집단의 종양에서의 CD16+ 세포 침윤 수준을 나타내는 값이다. 한 태양에서, 기준 수준은 치료로부터 임상적 이익을 얻지 못하는 환자로부터 치료 전에 취한 종양 샘플에서 시험관내에서 측정된다. 한 태양에서, ADCC-강화 항체는 기준 수준에 비해 1.2배 이상, 1.5배 이상, 2배 이상 또는 3배 이상 더 높은 CD16+ 세포 침윤 수준을 갖는 환자에게 투여된다.

한 태양에서, 종양에서 CD16+ 세포 침윤 수준은 치료 전에 환자로부터 취한 종양 샘플에서 시험관내에서 측정된다. 한 태양에서, 기준 수준은 치료로부터 임상적 이익을 얻지 못하는 환자 집단의 종양에서 CD16+ 세포 침윤 수준을 나타내는 값이다. 한 태양에서, 기준 수준은 치료로부터 임상적 이익을 얻지 못하는 환자로부터 치료 전에 취한 종양 샘플에서 시험관내에서 측정된다. 한 태양에서, CD16+ 세포 침윤 수준은 기준 수준에 비해 1.2배 이상, 1.5배 이상, 2배 이상 또는 3배 이상 더 높다.

한 양태에서, 본 발명은 또한 기준 수준에 비해 치료 전에 종양에서 증가된 CD16+ 세포 침윤 수준을 갖는 암 환자의 치료를 위한, ADCC-강화 항체를 포함하는 약학 조성물을 제공한다.

한 태양에서, 종양에서 CD16+ 세포 침윤 수준은 치료 전에 환자로부터 취한 종양 샘플에서 시험관내에서 측정된다.

한 태양에서, 기준 수준은 치료로부터 임상적 이익을 얻지 못하는 환자 집단의 종양에서의 CD16+ 세포 침윤 수준을 나타내는 값이다. 한 태양에서, 기준 수준은 치료로부터 임상적 이익을 얻지 못하는 환자로부터 치료 전에 취한 종양 샘플에서 시험관내에서 측정된다. 한 태양에서, 환자는 기준 수준에 비해 1.2배 이상, 1.5배 이상, 2배 이상 또는 3배 이상 증가된 CD16+ 세포 침윤 수준을 갖는다.

또 다른 양태에서, 본 발명은 i) CD16+ 세포 침윤 수준을 검출하기 위한 하나 이상의 화합물을 포함하는, 종양에서 CD16+ 세포 침윤 수준을 검출하기 위한 키트에 관한 것이다. 특정 태양에서, 상기 키트는 또한 ii) ADCC-강화 항체를 사용한 치료에 대한 암 환자의 반응성을 예측하기 위해 상기 키트를 사용하기 위한 설명서를 포함하며, 이때 기준 값에 비해 치료 전에 환자의 종양에서 더 높은 CD16+ 세포 침윤 수준은 치료로부터 임상적 이익을 얻을 환자를 시사한다.

특정 태양에서, 상기 키트는 시험관내 사용을 위한 것이다. 한 상기 태양에서, CD16+ 세포 침윤 수준은 ADCC-강화 항체를 사용한 치료 전에 암 환자로부터 취한 종양 샘플에서 검출된다. 한 태양에서, 기준 수준은 치료로부터 임상적 이익을 얻지 못하는 환자 집단의 종양에서의 CD16+ 세포 침윤 수준을 나타내는 값이다. 한 태양에서, 기준 수준은 치료로부터 임상적 이익을 얻지 못하는 환자로부터 치료 전에 취한 종양 샘플에서 시험관내에서 측정된다. 한 태양에서, 치료로부터 임상적 이익을 얻을 환자를 나타내는 CD16+ 세포 침윤 수준은 기준 수준보다 1.2배 이상, 1.5배 이상, 2배 이상 또는 3배 이상 더 높다.

3. ADCC -강화 항체

본 발명의 다양한 양태들에 대해 본원에 정의된 바와 같은 ADCC-강화 항체는 상응하는 비-조작 항체에 비해 증가된 ADCC-활성을 갖도록 조작된 항체이다. 특정 태양에서, ADCC-강화 항체는 비-당조작 항체에 비해, 그의 Fc 영역에 증가된 비율의 비-푸코실화 올리고사카라이드를 포함하는 당조작된 항체이다. 한 상기 태양에서, 상기 항체는 비-조작 숙주 세포에 비해 증가된 β(1,4)-N-아세틸글루코사미닐트랜스퍼라제 III(GnTIII) 활성을 갖도록 조작된 숙주 세포에서 생성된다. 보다 특정한 태양에서, 숙주 세포는 또한 비-조작 숙주 세포에 비해 증가된 α-만노시다제 II(ManII) 활성을 갖도록 조작된다. 숙주 세포는 β(1,4)-N-아세틸글루코사미닐트랜스퍼라제 III(GnTIII) 활성을 갖는 하나 이상의 폴리펩티드의 과발현에 의해 증가된 β(1,4)-N-아세틸글루코사미닐트랜스퍼라제 III(GnTIII) 활성을 갖도록 조작될 수 있다. 유사하게, 숙주 세포는 α-만노시다제 II(ManII) 활성을 갖는 하나 이상의 폴리펩티드의 과발현에 의해 증가된 α-만노시다제 II(ManII) 활성을 갖도록 조작될 수 있다. 상기 당조작 방법은 문헌 [Umana et al., Nat Biotechnol 17, 176-180 (1999); Ferrara et al., Biotechn Bioeng 93, 851-861 (2006)]; WO 99/54342 호(미국 특허 제 6,602,684 호; EP 1071700 호); WO 2004/065540 호(미국 특허출원공개 제 2004/0241817 호; EP 1587921 호), WO 03/011878 호(미국 특허출원공개 제 2003/0175884 호)에 더 상세히 기술되었으며, 상기 문헌들 각각의 내용은 본원에 전체로 참고로 인용된다.

대안적 태양에서, ADCC-강화 항체는 비-당조작 항체에 비해 그의 Fc 영역에 증가된 비율의 비-푸코실화 올리고사카라이드를 포함하는 당조작 항체로서, 이때 상기 항체는 감소된 α(1,6)-푸코실트랜스퍼라제 활성을 갖는 숙주 세포에서 생성된다. 감소된 α(1,6)-푸코실트랜스퍼라제 활성을 갖는 숙주 세포는 α(1,6)-푸코실트랜스퍼라제 유전자가 파괴되었거나 그렇지 않으면 탈활성화된, 예를 들면, 유전자제거된(knocked out) 세포일 수 있다(문헌 [Yamane-Ohnuki et al., Biotech Bioeng 87, 614 (2004); Kanda et al., Biotechnol Bioeng 94(4), 680-688 (2006); Niwa et al., J Immunol Methods 306, 151-160 (2006)] 참조).

한 태양에서, ADCC-강화 항체는 그의 Fc 영역에 약 50% 이상의 비-푸코실화 올리고사카라이드를 갖는 항체이다. 한 태양에서, ADCC-강화 항체는 그의 Fc 영역에 약 75% 이상의 비-푸코실화 올리고사카라이드를 갖는 항체이다. 또 다른 태양에서, ADCC-강화 항체는 그의 Fc 영역에 약 50% 이상의 이등분된 올리고사카라이드를 갖는 항체이다. 한 태양에서, ADCC-강화 항체는 그의 Fc 영역에 약 50% 이상의 이등분된 비-푸코실화 올리고사카라이드를 갖는 항체이다. 항체 Fc 영역내 올리고사카라이드 구조물은 당해 분야에 공지된 방법에 의해, 예를 들면, 문헌 [Umana et al., Nat Biotechnol 17, 176-180 (1999); or Ferrara et al., Biotechn Bioeng 93, 851-861 (2006)]에 기술된 바와 같은 MALDI TOF 질량 분석법에 의해 분석할 수 있다. 비-푸코실화 올리고사카라이드의 비율은 Asn297에 결합된 모든 올리고사카라이드(예를 들면, 복합체, 하이브리드 및 고만노스 구조물)에 대한 푸코스 잔기가 결여된 올리고사카라이드의 양이며, MALDI TOF MS에 의해 N-글리코시다제 F 처리된 샘플에서 확인된다. Asn297은 Fc 영역중 대략 위치 297에 위치한 아스파라긴 잔기를 말하지만(Fc 영역 잔기의 EU 번호); Asn297은 또한, 항체내 미미한 서열 변이로 인해, 위치 297의 약 ±3개 아미노산의 상류 또는 하류에, 즉, 위치 294와 300 사이에 위치할 수 있다. 이등분된, 또는 이등분되고 비-푸코실화된 올리고사카라이드의 비율은 유사하게 측정된다.

한 태양에서, ADCC-강화 항체는 IgG-부류의 전장 항체이다. 특정 태양에서, ADCC-강화 항체는 IgG1 항체이다. 한 태양에서, ADCC-강화 항체는 인간 Fc 영역, 보다 특히 인간 IgG Fc 영역, 가장 특히는 인간 IgG1 Fc 영역을 포함한다. ADCC-강화 항체는 서열번호 1에 나타낸 바와 같이 인간 Ig 감마-1 중쇄 불변 영역을 포함한다(즉, 항체는 인간 IgG1 서브클래스의 항체이다).

특정 태양에서, ADCC-강화 항체는 종양 세포상에 제공된 항원에 대해 유도된다. 본 발명에 있어서 ADCC-강화 항체의 특정 표적 항원으로는 세포 표면 수용체, 예를 들면, 표피 성장 인자 수용체(EGFR), 인슐린-유사 성장 인자 수용체(IGFR) 및 혈소판-유래 성장 인자 수용체(PDGFR), 전립선 특이성 막 항원(PSMA), 암태아성 항원(CEA), 다이펩티딜 펩티다제 IV(CD26, DPPIV), 섬유아세포 활성화 단백질(FAP), HER2/neu, HER-3, E-카데린(E-cadherin), CD20, 흑색종-연관 콘드로이틴 설페이트 프로테오글리칸(MCSP), c-Met, CUB 도메인-함유 단백질-1(CDCP1) 및 편평세포암 항원(SCCA)을 포함하나 이로 한정되지는 않는, 종양 세포 표면상에서 발현된 항원들이 포함된다.

한 태양에서, ADCC-강화 항체는 CD20, EGFR, HER2, HER3, IGF-1R, CEA, c-Met, CDCP1, FAP 및 MCSP의 군으로부터 선택된 항원에 대해 유도된다. 한 태양에서, ADCC-강화 항체는 CD20, EGFR, HER2, HER3, IGF-1R, CEA, c-Met, CDCP1, FAP 및 MCSP의 군으로부터 선택된 2개 이상의 항원에 대해 유도된 다중특이성 항체이다.

특정 태양에서, ADCC-강화 항체는 항-EGFR 항체, 보다 특히는 항-인간 EGFR 항체이다. 적합한 ADCC-강화 항-EGFR 항체는 본원에 전체로 참고로 인용된 WO 2006/082515 호 및 WO 2008/017963 호에 기술되어 있다.

특정 태양에서, ADCC-강화 항체는 a) 중쇄 가변 도메인에 서열번호 2의 CDR1, 서열번호 3의 CDR2 및 서열번호 4의 CDR3, 및 b) 경쇄 가변 도메인에 서열번호 5의 CDR1, 서열번호 6의 CDR2 및 서열번호 7의 CDR3을 포함하는 인간화 IgG1-서브클래스 항-EGFR 항체이다.

보다 더 특정한 태양에서, ADCC-강화 항체는 서열번호 8의 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 9의 경쇄 가변 도메인을 포함하는 인간화 IgG1-서브클래스 항-EGFR 항체이다.

또 다른 특정 태양에서, ADCC-강화 항체는 a) 중쇄 가변 도메인에 서열번호 2의 CDR1, 서열번호 3의 CDR2 및 서열번호 4의 CDR3, 및 b) 경쇄 가변 도메인에 서열번호 5의 CDR1, 서열번호 6의 CDR2 및 서열번호 7의 CDR3을 포함하는 인간화 IgG1-서브클래스 항-EGFR 항체로서, 이때 상기 항체는 상응하는 비-당조작 항체에 비해 그의 Fc 영역에 증가된 비율의 비-푸코실화 올리고사카라이드를 갖도록 당조작된다.

보다 더 특정한 태양에서, ADCC-강화 항체는 서열번호 8의 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 9의 경쇄 가변 도메인을 포함하는 인간화 IgG1-서브클래스 항-EGFR 항체로서, 이때 상기 항체는 상응하는 비-당조작 항체에 비해 그의 Fc 영역에 증가된 비율의 비-푸코실화 올리고사카라이드를 갖도록 당조작된다.

또 다른 특정 태양에서, ADCC-강화 항체는 a) 중쇄 가변 도메인에 서열번호 2의 CDR1, 서열번호 3의 CDR2 및 서열번호 4의 CDR3, 및 b) 경쇄 가변 도메인에 서열번호 5의 CDR1, 서열번호 6의 CDR2 및 서열번호 7의 CDR3, 및 c) Fc 영역에 50% 이상의 비-푸코실화 올리고사카라이드를 포함하는 인간화 IgG1-서브클래스 항-EGFR 항체이다.

보다 특정한 태양에서, ADCC-강화 항체는 서열번호 8의 중쇄 가변 도메인, 서열번호 9의 경쇄 가변 도메인, 서열번호 1의 중쇄 불변 영역, 및 Fc 영역에 50% 이상의 비-푸코실화 올리고사카라이드를 포함하는 인간화 IgG1-서브클래스 항-EGFR 항체이다.

한 태양에서, ADCC-강화 항체는 <ge-huMabEGFR>이다.

4. 암 유형

본 발명은 다양한 유형의 암에 유용하다. 본 발명에 따른 특정 태양에서, 암은 고형 종양이다. 한 상기 태양에서, 암은 대장암, 폐암, 두경부암, 유방암, 췌장암, 신장암, 난소암, 위암 및 피부암으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 한 태양에서, 암은 비-소세포 폐암(NSCLC)이다. 보다 특정한 태양에서, 암은 비-편평세포성 NSCLC이다. 또 다른 태양에서, 암은 대장암(CRC)이다. 또 다른 태양에서, 암은 두경부 편평세포암(HNSCC)이다. 한 태양에서, 암은 NSCLC, CRC 및 HNSCC로 이루어진 군으로부터 선택된다.

5. 마커들의 조합

본 발명의 바이오마커, 즉 치료 전 CD16+ 세포 침윤 수준은 다른 바이오마커와 바이오마커 세트로 조합될 수 있다. 바이오마커 세트는 암 환자에서 ADCC-강화 항체 치료의 효과에 대해 예측하기 위한 예측 바이오마커의 임의 조합으로부터 구성될 수 있다. 예를 들면, 치료 전 CD16+ 세포 침윤 수준은 ADCC-강화 항체의 표적 항원의 발현 수준과 바이오마커 세트로 조합될 수 있다.

6. CD16 + 세포의 침윤 수준 측정

CD16+ 세포 침윤 수준은 환자 조직내 세포를 가시화하기에 적합한 당해 분야에 공지된 임의의 방법에 의해, 예를 들면, 항-CD16 항체를 사용한 면역조직화학 또는 면역형광 방법에 의해 평가할 수 있다. 특정 태양에서, CD16+ 세포 침윤 수준은 면역조직화학에 의해 측정된다. 면역조직화학에 의해 CD16+ 세포의 검출에 사용될 수 있는 적합한 항-CD16 항체는 항-CD16 항체 클론 2H7이다.

대안적 태양에서, CD16+ 세포 침윤 수준은 유세포 분석에 의해 측정된다. 유세포분석 방법(FACS)은 조직 샘플내 세포의 정량화를 위해 당해 분야에 공지되어 있다. 특히, 상기 방법은 조직 샘플(예를 들면, 종양 생검물(의 일부)) 중 세포의 정의된 총수 중에서 특이적 항원을 발현하는 세포(예, CD16+ 세포)의 수를 측정한다.

CD16+ 세포 침윤 수준은 또한 환자 조직중 CD16 단백질 또는 mRNA 수준의 정량화에 의해 간접적으로 측정될 수 있다. 특정 단백질 수준의 측정을 위한 당해 분야에 공지된 적합한 방법으로는 면역분석 방법, 예를 들면, 효소-결합 면역흡착 방법(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)이 포함되고, mRNA 수준 측정을 위한 방법은, 예를 들면, 정량적 RT-PCR 또는 마이크로어레이(microarray) 기술을 포함한다.

모든 상기 언급된 방법 및 기술은 당해 분야에 공지되어 있으며, 표준 교재, 예를 들면, 문헌 [Lottspeich, Bioanalytik, Spektrum Akademisher Verlag (1998); or Sambrook and Russell, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, CSH Press, Cold Spring Harbor, NY, U.S.A. (2001)]으로부터 추론될 수 있다.

7. 치료 방법

본 발명에 있어서, <ge-huMabEGFR>은 단독으로, 또는 당해 분야에 공지된 바와 같은 표준 화학치료 요법의 일부로서 투여된 하나 이상의 화학치료제에 더하여, 또는 그와 공동-요법 또는 공동-치료로서 투여될 것이다. 상기 표준 화학치료 요법에 포함되는 약제의 예로는 5-플루오로우라실, 류코보린, 이리노테칸, 겜시타빈, 에를로티닙, 카페시타빈, 탁산, 예를 들면, 도세탁셀 및 파클리탁셀, 인터페론 알파, 비노렐빈, 및 백금계 화학치료제, 예를 들면, 카보플라틴, 시스플라틴 및 옥살리플라틴이 포함된다.

통상적인 투여 방식으로는 정해진 시기 동안 볼루스(bolus) 용량으로 또는 주입으로서의 비경구 투여, 예를 들면, 10 분, 20 분, 30 분, 40 분, 50 분, 60 분, 75 분, 90 분, 105 분, 120 분, 3 시간, 4 시간, 5 시간 또는 6 시간에 걸친 총 일일 용량의 투여가 포함된다. 예를 들면, 2.5 내지 25 mg/kg 체중의 <ge-huMabEGFR>이 치료되는 암의 유형에 따라서 매주, 2 주마다 또는 3 주마다 투여될 수 있다. 투여량의 예로는 매주, 2 주마다 또는 3 주마다 제공되는 2.5 mg/kg 체중, 5 mg/kg 체중, 7.5 mg/kg 체중, 10 mg/kg 체중, 15 mg/kg 체중, 20 mg/kg 체중 및 25 mg/kg 체중이 포함된다. 투여량의 또 다른 예는 2 주마다 700 mg, 2 주마다 1000 mg, 2 주마다 1400 mg, 3 주마다 700 mg, 3 주마다 1000 mg 및 3 주마다 1400 mg이 포함된다.

숙련된 자라면 <ge-huMabEGFR>의 다른 투여 방식 및 투여량이 특정 환자 및 화학치료 요법에 의해 결정될 때 본 발명에 포함되며 상기 특정한 투여 방식 및 치료적 투여량은 당해 분야에 공지된 방법에 따라 주치의에 의해 가장 잘 결정됨을 인지할 것이다.

8. 키트

본 발명은 또한 CD16+ 세포 침윤 수준을 검출하기 위한 하나 이상의 화합물을 포함하는 진단 조성물 또는 키트에 관한 것이다. 본원에 상술된 바와 같이, 항-CD16 항체는 CD16 단백질을 검출하기 위해 사용될 수 있으며, 따라서 본 발명에 따른 키트에 포함될 수 있다. 상기 항체는 그의 직접 검출을 가능하게 하기 위해 표지화(예를 들면, 형광 표지, 방사성표지, 효소 표지 또는 비오틴/아비딘 복합체로)될 수 있거나, 표지된 제 2 항체(즉, 특정 숙주 종으로부터의 항체와 같이 특정한 다른 항체에 특이적으로 결합하는 항체)와 함께 사용될 수 있다. 따라서, 적절한 제 2의 항체도 또한 키트에 포함될 수 있다. 다른 성분들은 검출을 수행하기 위해 필요한 시약들, 예를 들면, 면역조직화학, 면역형광, ELISA, 웨스턴 블로팅(Western Blotting) 또는 임의의 선택된 검출 방법을 위한 완충액, 고정액, 차단 시약, 희석제, 색원체, 효소 등일 수 있다. 또는, CD16 mRNA를 검출할 경우, 키트는 실시간 PCR을 위한 프라이머 및 형광 프로브와 같은 올리고뉴클레오티드, 역전사효소와 같은 cDNA 제조를 위한 효소 등을 포함할 수 있다.

본 발명의 다른 양태에서, 본 발명의 키트는 유리하게 본 발명의 방법을 수행하기 위해 사용될 수 있으며, 특히, 다양한 용도에, 예를 들면, 진단 분야에 또는 연구 도구로서 사용될 수 있다. 본 발명의 키트의 부품들은 병에 개별적으로 또는 용기 또는 다중용기 유닛에 함께 포장될 수 있다. 키트의 제조는 바람직하게는 당해 분야에 숙련된 자에게 공지된 표준 절차를 따른다. 키트 또는 진단 조성물은, 예를 들면, 본원에 기술된 면역조직화학 기술을 사용하여, 본원에 기술된 본 발명의 방법에 따라 종양에서 CD16+ 세포 침윤 수준을 검출하기 위해 사용될 수 있다.

실시예

본 발명은 하기의 비-제한 예시적 실시예에 의해 더 예시된다.

실시예 1: 대장암( CRC )

연구 설계

이 시험은 고형 종양을 갖는 환자에서 <ge-huMabEGFR>의 개방-표지, 다기관, 비-무작위, 용량-단계적 확대, I상 연구의 제 2 파트였다. 상기 연구의 이 파트에서는, 제 1 일 및 제 8 일에 이어 2 주 마다(q2W) 투약에 의해 정맥내(i.v.) 투여된 1400 mg <ge-huMabEGFR>의 일정한 용량으로, 연구의 제 1 파트에서 입증된 안전성 프로필 및 효능[Paz Ares et al., J Clin Oncol 29, 3783-3790 (2011)]에 근거하여, KRAS-돌연변이 대장암(CRC)을 갖는 25명의 환자를 치료하였다.

환자 선별

적합한 환자는 1 이하의 ECOG(Eastern Cooperative Oncology Group) 기능 상태지수, 및 적절한 혈액학, 혈액 화학, 신장 및 간 기능을 갖는 18세 이상의 연령이었다. 환자들은 방사선에 의해 측정가능한 진행성 질환(PD)하에 전이성 EGFR-양성 및 KRAS-돌연변이 CRC(코돈 12/13/61)를 조직학적/세포학적으로 확인하였다. 전이성 질환에 대해 2가지보다 많은 이전의 세포독성 요법을 받은 환자는 배제되었다. 모든 환자들에게는 서면 동의서가 제공되었으며 지역 윤리 위원회로부터 승인을 얻었다. 연구는 임상시험 실시기준(Good Clinical Practice) 지침에 따라 수행하였다.

약물의 투여

<ge-huMabEGFR>의 첫번째 용량은 10 mg/시간의 초기 주입 속도로 투여하였다. 1 시간 후에, 주입 속도를 30 분마다 800 mg/시간까지 증가시켰다. 후속 주입은 첫번째 주입이 잘 받아들여진 경우 20 mg/시간에서 출발하였다. 주입-관련 반응(IRR)의 위험성을 최소화하기 위해, 파라세타몰, 항-히스타민 및 코르티코스테로이드의 사전투약이 처음 2개 주입물에 제공되었다.

종양 생검

면역조직화학(히스토젠X(HistoGeneX))을 위한 선택적 종양 생검물을 기준선에서 치료 전에 취하였다. 11명의 환자가 선택적 바이오마커 프로그램에 참여하여, 첫번째 <ge-huMabEGFR> 주입 전에(일반적으로 2 주 이하) 종양 생검물을 제공하였다. 생검물을 포르말린-고정 및 파라핀-포매시키고, 면역조직화학(IHC)에 의해 면역 작동인자 세포 침윤물에 대해 분석하였다. 종양-침윤 면역 작동인자 세포는 양성 염색 세포 수/mm²를 계수하여 등급을 분류하였다.

면역조직화학 분석

IHC는 벤타나 벤치마크(Ventana Benchmark) XT 시스템 상에서 수행하였다. 탈파라핀된 슬라이드를 항체 희석제(벤타나 #251-018)에 1:10으로 희석된 항-CD16 항체 클론 2H7(바이오제넥스(Biogenex))과 함께 1 시간동안 배양하였다. 울트라 뷰(ultra view, 상표) 유니버셜(Universal) DAB 검출 키트(벤타나)를 검출에 사용한 후, 헤마토자일린 II(벤타나 #790-2208)와 함께 4 분동안 배양하고 4 분동안 블루잉(bluing) 후-대비염색(벤타나 #760-2037)을 수행하였다. 이소타입-매치된 마우스 IgG(벤타나 #760-2014)를 음성 대조군으로 사용하였다.

종양내 면역 세포 침윤물의 정량화

CD16+ 세포를 접안렌즈에 그리드(5x5 필드)를 갖는 광 현미경 하의 관측 시야에서 계수하였다. 세포는 400x의 배율에서 25 이하의 무작위 선택된 필드에서 계수하였으며, 세포 밀도, 즉, 조직 면적 mm² 당 세포의 수를 산출하였다. 세포는 중심 종양에서 뿐 아니라 종양 세포에 매우 근접한 조직에서도 계수하였다.

종양 반응 평가

종양 평가는 변형된 RECIST(고형 종양에서 반응 평가 기준, Response Evaluation Criteria In Solid Tumours) 기준 v1.0에 따라 주기 4에서 시작하여 스크리닝시 및 8 주마다 CT 또는 MRI 스캔으로 수행하였다.

통계학적 고려사항

기준선으로부터 8 주차에 첫번째 기준선 후 종양 평가까지의 최장 직경의 합(SLD)의 변화%와 기준선에서 수득된 종양 생검물중 CD16+ 세포 염색의 상관성을 스피어맨(Spearman)의 순위 상관 계수하에 평가하였다.

결과

8 주차에(4 주기) 종양 반응과의 기준선 바이오마커의 상관 분석은 CD16에 양성 염색되는 종양 침윤 세포의 증가된 수가 종양 크기에서의 더 적은 증가에 비례함을 나타내었다(r²=-0.58, p=0.008, n=10; 도 1 참조).

실시예 2: 비-소세포 폐암( NSCLC )

연구 설계

이 실험은 진행성 또는 재발성 EGFR-양성 비-소세포 폐암(NSCLC)을 갖는 환자에서 시스플라틴 및 겜시타빈/페메트렉세드와 함께 <ge-huMabEGFR>의 다기관, 개방-표지 Ib상 연구였다.

환자들은 따로따로 평가된 그들의 종양의 조직학에 따라 2개의 군으로 분류하였다(편평세포성 또는 비-편평세포성). 지금까지, 상기 연구는 본원에 보고된 비-편평세포성 조직학 군에 대해 완료되었다.

(총 14 명의) 상기 군의 환자들은 하기 투여 요법에 따라 시스플라틴 및 페메트렉세드와 함께 <ge-huMabEGFR>로 치료하였다:

코호트 ( cohort ) 1:

- 최대 6회 화학치료 주기(18 주) 동안:

최대 6 주기동안 제 1 일에 q3W(3 주마다) 시스플라틴 75 mg/m² i.v. 및 제 1 일에 q3W 페메트렉세드 500 mg/m² i.v.

<ge-huMabEGFR> 1000 mg i.v.(제 1 일, 제 8 일)에 이어, 1000 mg q2W(2 주마다) i.v.

- 이어서:

질환 진행, 허용될 수 없는 독성 또는 동의 철회까지 <ge-huMabEGFR> 1400 mg q2W i.v.

코호트 2

- 최대 6회 화학치료 주기(18 주) 동안:

최대 6 주기동안 제 1 일에 q3W 시스플라틴 75 mg/m² i.v. 및 제 1 일에 q3W 페메트렉세드 500 mg/m² i.v.

<ge-huMabEGFR> 1400 mg i.v.(제 1 일, 제 8 일)에 이어, 1400 mg q2W i.v.

- 이어서:

환자 선별

적합한 환자는 1 이하의 ECOG 기능 상태지수 및 적절한 혈액학, 혈액 화학, 신장 및 간 기능을 갖는 18세 이상의 연령이었다. 환자들은 조직학적으로 수술불가능한 국소 진행성(IIIb 병기), 전이성(IV 병기) 또는 재발성 NSCLC인 것으로 입증되었다. 이전의 화학치료 또는 또 다른 전신 항암제에 의한 치료를 받은 환자들은 배제되었다. 모든 환자들에게는 서면 동의서가 제공되었으며 지역 윤리 위원회로부터 승인을 얻었다. 연구는 임상시험 실시기준 지침에 따라 수행하였다.

약물의 투여

<ge-huMabEGFR>에 대한 주입 속도는 처음 1 시간동안 10 mg/h이었다. 그후에, 환자가 견디는 경우, 주입 속도를 30 분 간격으로 최대 400 mg/h까지 증가시켰다. 첫번째 주입이 잘 받아들여진 경우(즉, 심각한 주입-관련 반응이 관찰되지 않은 경우), 두번째 주입은 30 분 동안 20 mg/h에서 출발한 후, 주입 속도를 30 분 간격으로 800 mg/h까지 증가시켰다. 후속 주입은 50 mg/h의 주입 속도에서 시작한 후, 15 분 간격으로 800 mg/h까지 증가시키되, 이전의 주입을 환자가 잘 받아들인 경우에 한해서이다. 그렇지 않으면, 첫번째 주입에 대해서와 동일한 주입 스케줄을 적용하였다.

시스플라틴 및 페메트렉세드는 국소 처방 정보에 따라 투여하였다. 일반적으로, 페메트렉세드는 10 분동안 500 mg/m² i.v.로 투여된 후 시스플라틴 투여 전에 30 분의 휴식시간이 이어져야 하며, 시스플라틴은 2 시간동안 75 mg/m² i.v.로 투여되어야 한다.

국소 처방 정보에 따라 비타민 B₁₂ 및 엽산이 페메트렉세드 투여의 사전투약으로서(제 -7 일에서 제 -1 일까지) 제공되었다. 파라세타몰, 항히스타민 및 코르티코스테로이드는 첫번째 주입(제 -1 일에서 제 2 일까지) 및 두번째 <ge-huMabEGFR> 주입(두번째 주입 당일에)에 대한 사전투약으로서 제공되었다.

종양 생검

진단으로부터 등록된 종양 시료 또는 임의의 연구 약물의 첫번째 투여 전 21일 이내에 채취한 새로운 종양 생검물을 수거하였다. 생검물을 포르말린-고정 및 파라핀-포매시키고, 면역조직화학(IHC)에 의해 면역 작동인자 세포 침윤물에 대해 분석하였다. 종양-침윤 면역 작동인자 세포는 양성 염색 세포 수/mm²를 계수하여 등급을 분류하였다. 면역 세포 침윤물의 면역조직화학 분석 및 정량화는 전술한 바와 같이 수행하였다(실시예 1 참조).

종양 반응 평가

기준선 종양 평가는 흉부-복부 CT 스캔(또는 MRI)에 의해 임의의 연구 약물의 첫번째 투여 전 21일 이내에 수행하였다. 기준선 후 평가는 진행 또는 동의 철회까지 기준선 이후 6 주마다, 즉, 주기 3 제 1 일, 주기 5 제 1 일 등에 수행하였다.

종양 반응은 RECIST 버전 1.1에 따라 평가하였다[Eisenhauer et al., Eur J Cancer 45, 228-247 (2009)].

통계학적 고려사항

기준선으로부터 12 주차에 두번째 기준선 후 종양 평가까지의 최장 직경의 합(SLD)의 변화%와 기준선에서 수득된 종양 생검물중 CD16+ 세포의 염색의 상관성을 스피어맨의 순위 상관 계수하에 평가하였다.

결과

12 주차에 종양 반응과의 기준선 바이오마커의 상관 분석은 CD16에 양성 염색되는 종양 침윤 세포의 증가된 수가 종양 크기에서의 더 큰 감소에 비례함을 나타내었다(r²=-0.52, p=0.10, n=11; 도 2 참조).

실시예 3: 두경부 편평세포암( HNSCC )

연구 설계

이 실험은 이전에 치료받은 적이 없는, 수술가능한 두경부 편평세포암(HNSCC)을 갖는 환자에서, 세툭스맙에 비해 <ge-huMabEGFR>의 약력학을 조사하기 위한 탐색적 개방-표지 다기관 연구였다.

본 연구를 위한 치료는 수술 전 환자의 대기 시간동안 수행되었다(수술 전보조 세팅). 환자들은 제 1 일 및 제 8 일에 700 mg의 <ge-huMabEGFR>로, 또는 제 1 일에 체표면적 m² 당 400 mg의 세툭시맙 및 제 8 일에 250 mg/m² 세툭시맙으로 치료한 후, 마지막 주입 7 일후에 종양을 수술로 제거하였다.

환자 선별

적합한 환자는 2 이하의 ECOG 기능 상태지수 및 적절한 혈액학, 혈액 화학, 신장 및 간 기능을 갖는 18세 이상의 연령이었다. 환자들은 조직학적으로 구강, 구강인두, 하인두 또는 후두의 편평세포암이 확인되었다. 종양은 계획된 수술적 절제술로 절제가능한 것으로 간주되어야 했으며, 환자는 화학- 및 방사선치료를 받은 적이 없어야 했다. 모든 환자들에게는 서면 동의서가 제공되었으며 지역 윤리 위원회로부터 승인을 얻었다. 연구는 임상시험 실시기준 지침에 따라 수행하였다.

약물의 투여

<ge-huMabEGFR>에 대한 주입 속도는 처음 1 시간동안 10 mg/h이었다. 그후에, 환자가 견디는 경우, 주입 속도를 30 분 간격으로 최대 300 mg/h까지 증가시켰다. 첫번째 주입이 잘 받아들여진 경우(즉, 심각한 주입-관련 반응이 관찰되지 않은 경우), 두번째 주입은 30 분 동안 20 mg/h에서 출발한 후, 주입 속도를 30 분 간격으로 300 mg/h까지 증가시켰다. 그렇지 않으면, 첫번째 주입에 대해서와 동일한 주입 스케줄을 적용하였다.

세툭시맙은 국소 처방 정보에 따라 투여하였다. 권장 주입 시간은 첫번째 용량의 경우 120 분이었고, 두번째 용량의 경우 60 분이었다. 최대 주입 속도는 10 mg/분이었다.

<ge-huMabEGFR> 주입의 경우, 파라세타몰, 항히스타민 및 코르티코스테로이드의 사전투약을 수행하였으며, 세툭시맙 주입의 경우에는 항히스타민 및 코르티코스테로이드의 사전투약을 국소 처방 정보에 따라 수행하였다.

종양 생검

종양 생검물(3 내지 5 mm)은 첫번째 FDG-PET/CT 스캔 후에, 첫번째 투약 전 21 일 이내에 취하였다. 생검물을 포르말린-고정 및 파라핀-포매시키고, 면역조직화학(IHC)에 의해 면역 작동인자 세포 침윤물에 대해 분석하였다. 종양-침윤 면역 작동인자 세포는 양성 염색 세포 수/mm²를 계수하여 등급을 분류하였다. 면역 세포 침윤물의 면역조직화학 분석 및 정량화는 전술한 바와 같이 수행하였다(실시예 1 참조).

종양 반응 평가

종양은 제 -21 일부터 제 -1 일까지에 임의의 개입(종양 생검 포함) 전, 및 수술 전에(수술 전 3 일 이내에) 방사선 영상학(2-¹⁸F-플루오로-2-데옥시-D-글루코스(FDG)-PET/CT 스캔)에 의해 평가하였다.

FDG - PET 스캔

환자들은 FDG-PET 스캔 전 4 내지 6 시간 이상동안 금식해야 했다. FDG-PET 스캔 당일에 혈당 수준을 검사하고(전형적으로 PET 센터에서) 결과를 FDG 투여 전에 평가하였다. 환자는 FDG-PET 스캔을 받기 위해 180 mg/dL 이하(10 밀리몰/mL 이하)의 혈당 수준을 가져야 한다. FDG 투여와 스캐닝 사이의 간격은 60 분 ± 10 분이었으며, 주사와 스캔 시작 사이의 시간 간격이 기준선에 비해 후속조치시에도 동일하게 유지되도록 주의하였다.

스캔 획득

감쇄 보정된 FDG-PET 스캔(두개 기저부로부터 대퇴 중간까지)을 수행하였다. 환자에게는 370 내지 740 MBq(10 내지 20 mCi) FDG를 정맥내 투여하였다(주사된 활성은 국소 시행 및 스캐너 유형에 따라 달라졌다)[Shankar et al., J Nucl Med 47, 1059-1066 (2006)]. FDG 투여의 투여된 활성 및 시간과 스캐닝 당일 체중을 이어지는 최대 종양 표준화 섭취 계수(SUV_max)의 계산을 위해 기록하였다. FDG 투여 약 1 시간 후에, 전신 PET 스캔(두개 기저부에서 대퇴부까지) 및/또는 별도의 두경부 관찰을 수행하였다. 초기 및 후속 스캔은 FDG 투여와 스캐닝 사이의 간격을 가능한 한 일정하게 유지하도록 특히 주의하면서 동일한 방식으로 수행하였다.

가능하다면, 저용량 CT 투과 스캔에 의한 방출 스캔의 보정이 가능하도록 PET/CT 스캐너(전용 PET 스캐너가 아니라)를 사용하였다.

스캔 해석

PET/CT 스캔은 능숙한 판독자가 육안으로 분석하고 정량적으로 해석하고 비교하였다. 환자는 탐색적 FDG-PET 반응 평가를 위해 2개 이상의 PET 스캔을 가져야 했다. 종양 섭취계수는 하기 식에 따라 SUVmax에 의해 반-정량적으로 분석되었다:

SUV_max = [종양내 최대 방사성트레이서 농도(kBq/mL;μCi/mL) x 체중(kg)]/주사 용량(MBq;mCi)

SUV_max의 변화를 평가하였다. 유럽 종양 연구 치료 기관(EORTC, European Organization for Research and Treatment of Cancer) 반응 기준을 종양 반응 평가에 사용하였다[Young et al., Eur J Cancer 35, 1773-1782 (1999)].

통계학적 고려사항

기준선으로부터 2 주차에 기준선 후 종양 평가까지의 SUV의 변화%와 기준선에서 수득된 종양 생검물중 CD16+ 세포의 염색의 상관성을 스피어맨의 순위 상관 계수하에 평가하였다.

결과

2 주차에 종양 반응과의 기준선 바이오마커의 상관 분석은 CD16에 양성 염색되는 종양 침윤 세포의 증가된 수가 <ge-huMabEGFR>로 치료된 환자군에서의 SUV_max의 더 큰 감소에 비례함을 나타내었다(r²=-0.57, p=0.04, n=13; 도 3 참조). 세툭시맙으로 치료된 환자군에서는 상관성이 관찰되지 않았다(도 3).

SEQUENCE LISTING <110> ROCHE GLYCART AG <120> PREDICTIVE BIOMARKER FOR CANCER TREATMENT WITH ADCC ENHANCED ANTIBODIES <130> 30857 <140> PCT/EP2012/053600 <141> 2012-03-02 <160> 9 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 328 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr 1 5 10 15 Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro 20 25 30 Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val 35 40 45 His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser 50 55 60 Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile 65 70 75 80 Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Ala 85 90 95 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 100 105 110 Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 115 120 125 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 130 135 140 Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val 145 150 155 160 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 165 170 175 Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln 180 185 190 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala 195 200 205 Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro 210 215 220 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr 225 230 235 240 Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 245 250 255 Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr 260 265 270 Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 275 280 285 Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe 290 295 300 Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 305 310 315 320 Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 2 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> anti-EGFR HCDR1 <400> 2 Asp Tyr Lys Ile His 1 5 <210> 3 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> anti-EGFR HCDR2 <400> 3 Tyr Phe Asn Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Thr Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 4 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> anti-EGFR HCDR3 <400> 4 Leu Ser Pro Gly Gly Tyr Tyr Val Met Asp Ala 1 5 10 <210> 5 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> anti-EGFR LCDR1 <400> 5 Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asn Asn Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 6 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> anti-EGFR LCDR2 <400> 6 Asn Thr Asn Asn Leu Gln Thr 1 5 <210> 7 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> anti-EGFR LCDR3 <400> 7 Leu Gln His Asn Ser Phe Pro Thr 1 5 <210> 8 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> anti-EGFR VH <400> 8 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Lys Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Tyr Phe Asn Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Thr Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Leu Ser Pro Gly Gly Tyr Tyr Val Met Asp Ala Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 9 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> anti-EGFR VL <400> 9 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asn Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Thr Asn Asn Leu Gln Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Ser Phe Pro Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr 100 105

Claims

치료 전에 환자의 종양에서 CD16+ 세포 침윤 수준을 측정하고 상기 CD16+ 세포 침윤 수준을 기준 수준과 비교하는 것을 포함하되, 기준 수준에 비해 더 높은 CD16+ 세포 침윤 수준이 치료로부터 임상적 이익을 얻을 환자를 나타내는, ADCC-강화 항체를 사용한 치료에 대한 암 환자의 반응을 예측하는 방법.
제 1 항에 있어서,
시험관내 방법으로서, CD16+ 세포 침윤 수준이 치료 전에 환자로부터 취한 종양 샘플에서 측정되는 방법.
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
기준 수준이 치료로부터 임상적 이익을 얻지 못하는 환자 집단의 종양에서의 CD16+ 세포 침윤 수준을 나타내는 값인 방법.
제 4 항에 있어서,
기준 수준이 치료로부터 임상적 이익을 얻지 못하는 환자로부터 치료 전에 취한 종양 샘플에서 시험관내에서 측정되는 방법.
제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서,
치료로부터 임상적 이익을 얻을 환자를 나타내는 CD16+ 세포 침윤 수준이 기준 수준보다 1.2배 이상, 1.5배 이상, 2배 이상 또는 3배 이상 더 높은 방법.
제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서,
암이 대장암, 비-소세포 폐암 및 두경부 편평세포암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
ADCC-강화 항체가 상응하는 비-당조작 항체에 비해 그의 Fc 영역에 증가된 비율의 비-푸코실화 올리고사카라이드를 포함하는 당조작된 항체인 방법.
제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서,
ADCC-강화 항체가 a) 중쇄 가변 도메인에 서열번호 2의 CDR1, 서열번호 3의 CDR2 및 서열번호 4의 CDR3, 및 b) 경쇄 가변 도메인에 서열번호 5의 CDR1, 서열번호 6의 CDR2 및 서열번호 7의 CDR3을 포함하는 인간화 IgG1-서브클래스 항-EGFR 항체인 방법.
i) CD16+ 세포 침윤 수준을 검출하기 위한 하나 이상의 화합물, 및 ii) 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 따른 방법에서 키트를 사용하기 위한 설명서를 포함하는, 종양에서 CD16+ 세포 침윤 수준을 검출하기 위한 키트.
제 9 항에 있어서,
시험관내 사용을 위한 키트로서, CD16+ 세포 침윤 수준이 ADCC-강화 항체를 사용한 치료 전에 암 환자로부터 취한 종양 샘플에서 검출되는 키트.
i) 환자의 종양에서 CD16+ 세포 침윤 수준을 치료 전에 측정하고, ii) CD16+ 세포 침윤 수준을 기준 수준과 비교하고, iii) ADCC-강화 항체를 기준 수준에 비해 더 높은 CD16+ 세포 침윤 수준을 갖는 환자에게 투여하는, 환자에서 암 치료에 사용하기 위한 ADCC-강화 항체.
제 11 항에 있어서,
종양에서 CD16+ 세포 침윤 수준이 치료 전에 환자로부터 취한 종양 샘플에서 시험관내에서 측정되는 ADCC-강화 항체.
제 11 항 또는 제 12 항에 있어서,
기준 수준이 치료로부터 임상적 이익을 얻지 못하는 환자 집단의 종양에서의 CD16+ 세포 침윤 수준을 나타내는 값인 ADCC-강화 항체.
제 11 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서,
기준 수준이 치료로부터 임상적 이익을 얻지 못하는 환자로부터 치료 전에 취한 종양 샘플에서 시험관내에서 측정되는 ADCC-강화 항체.
제 11 항 내지 제 14 항 중 어느 한 항에 있어서,
기준 수준에 비해 1.2배 이상, 1.5배 이상, 2배 이상 또는 3배 이상 더 높은 CD16+ 세포 침윤 수준을 갖는 환자에게 투여되는 ADCC-강화 항체.
제 11 항 내지 제 15 항 중 어느 한 항에 있어서,
암이 대장암, 비-소세포 폐암 및 두경부 편평세포암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 ADCC-강화 항체.
제 11 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항에 있어서,
상응하는 비-당조작 항체에 비해 증가된 비율의 비-푸코실화 올리고사카라이드를 Fc 영역에 포함하는 당조작 항체인 ADCC-강화 항체.
제 11 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항에 있어서,
a) 중쇄 가변 도메인에 서열번호 2의 CDR1, 서열번호 3의 CDR2 및 서열번호 4의 CDR3, 및 b) 경쇄 가변 도메인에 서열번호 5의 CDR1, 서열번호 6의 CDR2 및 서열번호 7의 CDR3을 포함하는 인간화 IgG1-서브클래스 항-EGFR 항체인 ADCC-강화 항체.
i) 환자의 종양에서 CD16+ 세포 침윤 수준을 치료 전에 측정하고, ii) CD16+ 세포 침윤 수준을 기준 수준과 비교하고, iii) ADCC-강화 항체를 기준 수준에 비해 더 높은 CD16+ 세포 침윤 수준을 갖는 환자에게 투여하는, 환자에서 암을 치료하는 방법.
ADCC-강화 항체를 포함하는, 치료 전에 종양에서 기준 수준에 비해 증가된 CD16+ 세포 침윤 수준을 갖는 암 환자의 치료를 위한 약학 조성물.
본원에 기술된 바와 같은 발명.