KR20140066212A - 스타필로코쿠스 아우레우스 항원의 보조제 첨가된 조제물 - Google Patents

Abstract

에스.아우레우스 백신의 효능은 TLR 작용제 (바람직하게는 TLR7 작용제) 및 불용성 금속 염 (바람직하게는 알루미늄 염)의 혼합물이 들어있는 에스.아우레우스 항원에 보조제를 첨가함으로써 향상될 수 있다. TLR 작용제는 전형적으로 금속 염에 흡착된다. 에스.아우레우스 항원은 또한 금속 염에 흡착될 수 있다.

Description

스타필로코쿠스 아우레우스 항원의 보조제 첨가된 조제물{ADJUVANTED FORMULATIONS OF STAPHYLOCOCCUS AUREUS ANTIGENS}

본 출원은 미국 가특허 출원 61/530,162호 (2011년 9월 1일 출원됨) 및 61/607,999호 (2012년 3월 7일 출원됨)의 이익을 주장하고, 이들 둘 다의 전문은 모든 목적을 위해 참고로 본원에 포함된다.

기술 분야

본 발명은 스타필로코쿠스 아우레우스 (Staphylococcus aureus)의 항원에 보조제를 첨가하여 그것들의 면역원성을 증가시키는 분야에 있다.

참고문헌 1은 에스.아우레우스에 대하여 효과적인 백신을 제조하는 다양한 면역원 및 조합을 개시한다. 참고문헌 1의 표 2는 이들 면역원 및 조합이 알루미늄 히드록시드 또는 MF59 수중유 에멀젼으로 보조되었다는 것을 나타낸다. 실험 섹션은 알루미늄 히드록시드를 사용하는 흡착 연구의 상세한 내용을 개시한다.

에스.아우레우스로부터 보호하기 위한, 추가의 보조제 첨가된 면역원성 조성물을 제공하고, 특히 알루미늄 히드록시드로 보조된 것들보다 더 우수한 조성물을 제공하는 것이 본 발명의 목적이다. 개선된 보조 효과는 에스.아우레우스 감염될 위험이 더 큰 개인, 예를 들어, 수술을 준비하는 사람, 면역 결핍자, 또는 고령자에서 빠르고 강력한 면역 반응을 달성하는데 특히 유용하다.

발명자는 에스.아우레우스 백신의 효능이 에스.아우레우스 항원을 TLR 작용제 (바람직하게는 하기 확인된 화합물 'K2'와 같은 TLR7 작용제)와 불용성 금속 염 (바람직하게는 알루미늄 히드록시드과 같은 알루미늄 염)의 혼합물로 보조함으로써 향상될 수 있다는 것을 발견하였다. 참고문헌 2에 개시된 바와 같이, TLR 작용제는 전형적으로 금속 염에 흡착된다.

첫 번째 양태에서, 본 발명은 (i) TLR 작용제 (ii) 불용성 금속 염 및 (iii) 둘 이상의 에스.아우레우스 항원을 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.

두 번째 양태에서, 본 발명은 (i) TLR7 작용제 (ii) 불용성 금속 염 및 (iii) 적어도 하나의 에스.아우레우스 항원을 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.

세 번째 양태에서, 본 발명은 (i) TLR 작용제 (ii) 불용성 알루미늄 염 및 (iii) 적어도 하나의 에스.아우레우스 항원을 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.

네 번째 양태에서, 본 발명은 (i) TLR 작용제 (ii) 불용성 금속 염 및 (iii) EsxA 항원 및 EsxB 항원을 포함하는 융합 단백질을 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.

다섯 번째 양태에서, 본 발명은 (i) TLR 작용제 (ii) 불용성 금속 염 및 (iii) 돌연변이 에스.아우레우스 용혈소 (hemolysin)를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.

여섯 번째 양태에서, 본 발명은 (i) TLR 작용제 (ii) 불용성 금속 염 (iii) 버퍼 및 (iv) 적어도 하나의 에스.아우레우스 항원을 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.

일곱 번째 양태에서, 본 발명은 (i) TLR 작용제 (ii) 불용성 금속 염 및 (iii) 적어도 하나의 에스.아우레우스 항원을 포함하는 면역원성 조성물을 제공하며, 상기 조성물은 6 내지 8의 pH를 갖는다.

여덟 번째 양태에서, 본 발명은 면역원성 조성물을 제조하는 공정을 제공하며, 상기 공정은 TLR 작용제, 불용성 금속 염, 및 에스.아우레우스 항원(들)을 혼합하고 이로 인해 상기 정의된 면역원성 조성물을 제공하는 단계를 포함한다.

아홉 번째 양태에서, 본 발명은 (i) 에스.아우레우스 항원을 TLR 작용제 및 불용성 금속 염을 포함하는 혼합물과 조합하는 단계; (ii) 불용성 금속 염을 TLR 작용제 및 에스.아우레우스 항원을 포함하는 혼합물과 조합하는 단계; 또는 TLR 작용제를 불용성 금속 염 및 에스.아우레우스 항원을 포함하는 혼합물과 조합하는 단계 중 하나를 포함하는 면역원성 조성물을 제조하는 공정을 제공한다.

열 번째 양태에서, 본 발명은 (a) 불용성 금속 염에 흡착된 제1 TLR 작용제를 포함하는 보조제 복합체; (b) 불용성 금속 염에 흡착된 제2 TLR 작용제를 포함하는 보조제 복합체; 및 (c) 적어도 하나의 에스.아우레우스 항원을 포함하는 조성물을 제공한다. 항원(들)은 금속 염(들)에 흡착될 수도 있다.

열한 번째 양태에서, 본 발명은 (i) 작용제 및 가용성 알루미늄 염의 수성 혼합물을 제조하고, 이후에 TLR 작용제가 흡착되는 침전된 알루미늄 염을 형성하기 위해 비-알루미늄 염을 수성 혼합물에 추가하는 단계; 및 (ii) 에스.아우레우스 항원을 침전된 염 및 그 흡착된 작용제와 혼합하는 단계를 포함하는, 면역원성 조성물을 제조하는 공정을 제공한다. TLR 작용제는 바람직하게는 본원에서 다양하게 설명된 TLR 작용제이다.

열두 번째 양태에서, 본 발명은 (i) TLR 작용제 및 가용성 알루미늄 염의 수성 혼합물을 (ii) 에스.아우레우스 면역원의 완충된 수성 혼합물과 혼합하는 단계를 포함하는, 면역원성 조성물을 제조하는 공정을 제공하며, 혼합 단계는 TLR 작용제 및 면역원이 흡착되는 알루미늄 염의 침전을 유발한다. 본 발명은 또한 이 공정에 의해 얻어진 또는 얻을 수 있는 면역원성 조성물을 제공한다.

열세 번째 양태에서, 본 발명은 (i) 에스.아우레우스 면역원을 (ii) TLR 작용제 및 불용성 금속 염의 멸균 복합체를 조합하는 단계를 포함하는, 멸균 면역원성 조성물을 제조하는 공정을 제공한다. 멸균 복합체는 TLR 작용제가 불용성 금속 염에 흡착하여 복합체를 형성하도록 TLR 작용제 및 불용성 금속염을 혼합하는 단계; 및 (b) 복합체를 멸균하는 단계를 포함하는 공정에 의해 제조될 수 있다. 멸균은 편의상 오토클레이브 (autoclave) (또는 유사한 과정 [3])에 의해 달성될 수 있다. 대안으로, 멸균 복합체는 (a) TLR 작용제의 용액 또는 현탁액을 멸균하는 단계 및 (b) 멸균된 용액 또는 현탁액을 멸균 불용성 금속 염과 조합하는 단계에 의해; 또는 (a) 불용성 금속 염을 멸균하는 단계 및 (b) 멸균된 불용성 금속 염을 TLR 작용제의 멸균 용액 또는 현탁액과 조합하는 단계에 의해; 또는 (a) TLR 작용제의 멸균 용액 또는 현탁액을 (b) 멸균 불용성 금속 염과 조합하는 단계에 의해 제조될 수 있다. TLR 작용제 용액/현탁액의 멸균은 편의상 멸균 여과에 의해 달성될 수 있고, 이 재료는 농축된 형태로 제조될 수 있다. 불용성 금속 염의 멸균은 편의상 오토클레이브에 의해 달성될 수 있다. 멸균 불용성 금속 염은 전형적으로 수성 현탁액일 것이다.

한 구체예에서, 본 발명은 다음을 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다:

■ 알루미늄 히드록시드 보조제;

■ 화합물 K2와 같은, 화학식 (K)의 TLR7 작용제;

■ SEQ ID NO: 6을 포함하거나, 변형된 서열이 SEQ ID NO: 6으로 구성된 폴리펩티드에 결합된 항체를 유도할 수 있다는 조건 하에 SEQ ID NO: 6과 5개까지의 단일 아미노 변화만큼 다른 변형된 아미노산 서열을 포함하는 제1 폴리펩티드;

■ SEQ ID NO: 13을 포함하거나, 변형된 서열이 SEQ ID NO: 13으로 구성된 폴리펩티드에 결합된 항체를 유도할 수 있다는 조건 하에 SEQ ID NO: 13과 5개까지의 단일 아미노 변화만큼 다른 변형된 아미노산 서열을 포함하는 제2 폴리펩티드;

■ SEQ ID NO: 31을 포함하거나, 변형된 서열이 SEQ ID NO: 31로 구성된 폴리펩티드에 결합된 항체를 유도할 수 있다는 조건 하에 SEQ ID NO: 31과 5개까지의 단일 아미노 변화만큼 다른 변형된 아미노산 서열을 포함하는 제3 폴리펩티드;

■ SEQ ID NO: 33을 포함하거나, 변형된 서열이 SEQ ID NO: 33으로 구성된 폴리펩티드에 결합된 항체를 유도할 수 있다는 조건 하에 SEQ ID NO: 33과 5개까지의 단일 아미노 변화만큼 다른 변형된 아미노산 서열을 포함하는 제4 폴리펩티드로서, TLR7 작용제 및/또는 폴리펩티드 중 적어도 하나가 알루미늄 히드록시드 보조제에 흡착되는 제4 폴리펩티드.

예를 들어, 하기 더 상세히 설명된 바와 같이, 제1 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 41을 포함할 수 있고; 제2 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 13을 포함할 수 있고; 제3 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 47을 포함할 수 있고; 제4 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 43을 포함할 수 있다. 따라서 조성물은 SEQ ID NO: 44, 27, 45 및 46을 갖는 네 개의 폴리펩티드의 혼합물을 사용할 수 있다.

TLR 작용제

본 발명의 조성물은 TLR 작용제, 즉, Toll-유사 수용체를 작용시킬 수 있는 화합물을 포함한다. 가장 바람직하게는, TLR 작용제는 사람 TLR의 작용제이다. TLR 작용제는 TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9 또는 TLR11 중 어떤 것도 활성화할 수 있고; 바람직하게는 사람 TLR7을 활성화할 수 있다.

어느 특정한 Toll-유사 수용체에 대한 화합물의 작용제 활성은 표준 검정에 의해 결정될 수 있다. Imgenex 및 Invivogen과 같은 회사는 TLR 활성화 경로를 측정하기 위해, 사람 TLR 유전자 및 NFκB, 플러스 적합한 리포터 유전자로 안정하게 동시에 트랜스펙션된 세포주를 공급한다. 그것들은 민감도, 광범위한 작동 범위의 역동성을 목적으로 설계되고, 고속 대량 스크리닝에 사용될 수 있다. 하나 또는 두 가지의 특이적 TLR의 구성적 발현은 전형적으로 이러한 세포주에서 일어난다. 또한 참고문헌 4를 참고하면 된다. 많은 TLR 작용제가 업계에 알려져 있는데, 예를 들어, 참고문헌 5는 TLR2 작용제인 특정 지질펩티드 분자를 설명하고, 참고문헌 6 내지 9는 각각 TLR7의 저분자 작용제의 분류를 설명하고, 참고문헌 10 & 11은 질환의 치료를 위한 TLR7 및 TLR8을 설명한다.

본 발명에 사용된 TLR 작용제는 이상적으로 적어도 하나의 흡착성 모이어티 (moiety)를 포함한다. TLR 작용제에서 이러한 모이어티의 포함은 그것들이 불용성 금속 염에 흡착할 수 있게 하고 (예를 들어, 리간드 교환 또는 어떤 다른 적합한 메카니즘에 의해) 그것들의 면역학적 작용을 개선한다 (참고문헌 2를 참고하면 된다). 인-함유 흡착성 모이어티가 특히 유용하며, 그래서 흡착성 모이어티는 포스페이트, 포스포네이트, 포스피네이트, 포스포나이트, 포스피나이트, 등을 포함할 수도 있다.

바람직하게는 TLR 작용제는 적어도 하나의 포스포네이트 기를 포함한다.

따라서, 바람직한 구체예에서, 본 발명의 조성물은 포스포네이트 기를 포함하는 TLR7 작용제를 포함한다. 이 포스포네이트 기는 작용제의, 알루미늄 염과 같은 불용성 금속염으로의 흡착을 허용한다.

본 발명에 유용한 TLR 작용제는 단일 흡착성 모이어티를 포함할 수도 있거나, 하나 이상, 예를 들어, 2 내지 15개의 흡착성 모이어티를 포함할 수도 있다. 전형적으로 화합물은 1, 2 또는 3개의 흡착성 모이어티를 포함할 것이다.

본 발명에 유용한 인-함유 R 작용제는 화학식 (Al)로 표시될 수 있으며:

R^x 및 R^Y는 독립적으로 H 및 C₁-C₆ 알킬로부터 선택되고;

X는 공유 결합, O 및 NH로부터 선택되고;

Y는 공유 결합, O, C(O), S 및 NH로부터 선택되고;

L은, 예를 들어, C₁-C₆알킬렌, C₁-C₆알케닐렌, 아릴렌, 헤테로아릴렌, C₁-C₆알킬렌옥시 및 할로, OH, C₁-C₄알킬, -OP(0)(OH)₂ 및 -P(0)(OH)₂로부터 독립적으로 선택된 1 내지 4개의 치환기로 각각 선택적으로 치환된 -((CH₂)_pO)_q(CH₂)_p-로부터 선택된 결합자이며;

각각의 p는 1, 2, 3, 4, 5 및 6으로부터 독립적으로 선택되고;

q는 1, 2, 3 및 4로부터 선택되고;

n은 1, 2 및 3으로부터 선택되고;

A는 TLR 작용제 모이어티이다.

한 구체예에서, 화학식 (A1)에 따른 TLR 작용제는 다음과 같다: R^x 및 R^Y는 H이고; X는 O이고; L은 C₁-C₆ 알킬렌 및 1 내지 2개의 할로겐 원자로 각각 선택적으로 치환된 -((CH₂)_pO)_q(CH₂)_p-로부터 선택되고; p는 1, 2 및 3으로부터 선택되고; q는 1 및 2로부터 선택되고; n은 1이다. 따라서 이들 구체예에서 흡착성 모이어티는 포스페이트 기를 포함한다.

다른 구체예에서, 화학식 (A1)에 따른 TLR 작용제는 다음과 같다: R^x 및 R^Y는 H이고; X는 공유 결합이고; L은 C₁-C₆ 알킬렌 및 1 내지 2개의 할로겐 원자로 각각 선택적으로 치환된 -((CH₂)_pO)_q(CH₂)_p-로부터 선택되고; p는 1, 2 또는 3으로부터 선택되고; q는 1 또는 2로부터 선택되고; n은 1이다. 따라서 이들 구체예에서 흡착성 모이어티는 포스포네이트 기를 포함한다.

화학식 (A1)에 대한 유용한 'A' 모이어티는 본원에 정의되거나 참고문헌 4-11 및 34-52에 개시된, 다음 화합물 중 어느 것의 라디칼을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다:

일부 구체예에서, TLR 작용제 모이어티 'A'는 1000 Da 미만의 분자량을 갖는다. 일부 구체예에서, 화학식 (A1)의 TLR 작용제는 1000 Da 미만의 분자량을 갖는다.

바람직한 TLR 작용제는 수용성이다. 따라서 그것들은 pH 7 및 25℃ 및 1 대기압에서 수성 완충액 중의 물과 혼합될 때 균질한 용액을 형성하여 적어도 5μg/ml의 농도를 갖는 용액을 제공할 수 있다. 따라서 용어 "수용성"은 이들 조건 하에서 난용성인 물질만을 제외한다.

유용한 TLR 작용제는 하기 더 상세히 설명된 바와 같이 화학식 (C), (D), (E), (F), (G), (H), (I), (II), (J) 또는 (K)를 갖는 것들을 포함한다. 다른 유용한 TLR 작용제는 참고문헌 2에 정의된 화합물 1 내지 102이다 (그 안에서 51-75 페이지를 참고하면 된다). 바람직한 TLR7 작용제는 'K2'와 같은, 화학식 (K)를 갖는다. 이들은 K2의 염, 예를 들어, 아르기닌 염으로서 사용될 수 있다.

바람직한 TLR4 작용제는 모노포스포릴 지질 A (MPL)의 유사체이다. 예를 들어, 유용한 TLR4 작용제는 3d-MPL이다 (즉, 3-O-탈아실화된 모노포스포릴 지질 A; 또한 3-데-O-아실화된 모노포스포릴 지질 A 또는 3-0-데스아실-4'-모노포스포릴 지질 A로도 알려져 있음). 이름은 모노포스포릴 지질 A에서 환원 말단 글루코사민의 위치 3이 탈아실화된다는 것을 지시한다. 그것은 살모넬라 미네소타 (Salmonella minnesota)의 헵토스가 없는 돌연변이로부터 제조되었고, 지질 A와 화학적으로 유사하지만 산-불안정한 포스포릴 기 및 염기-불안정한 아실 기가 없다. 그것은 단핵구/대식세포 계통의 세포를 활성화하고 IL-1, IL-12, TNF-α 및 GM-CSF를 포함하는 시토킨의 방출을 자극한다. 3d-MPL의 제조는 원래 참고문헌 12에서 설명되었고 제품은 Corixa Corporation에 의해 생산되고 판매되었다. 그것은 GlaxoSmithKline에 의해 사용된 ASO4 보조제에 존재한다. 추가의 설명은 참고문헌 13 내지 16에서 발견될 수 있다. 하지만, 본 발명은 알루미늄 포스페이트 및 3dMPL의 조합을 사용하지 않는다.

전형적인 조성물은 25μg/ml 내지 200μg/ml 사이, 예를 들어, 범위 50-150μg/ml, 75-125μg/ml, 90-110μg/ml, 또는 약 100μg/ml의 농도로 3d-MPL을 포함한다. 용량 당 25-75μg, 예를 들어, 45-55μg의 3d-MPL, 또는 용량 당 약 50μg의 3d-MPL을 투여하는 것이 일반적이다.

3d-MPL은 관련된 분자의 혼합물의 형태를 취할 수 있으며, 그것들의 아실화를 변화시킨다 (예를 들어, 3, 4, 5 또는 6개의 아실 사슬을 가지며, 이것은 다른 길이일 수도 있다). 두 개의 글루코사민 (2-데옥시-2-아미노-글루코스로도 알려져 있음) 단당류는 그것들의 2-위치 탄소 (즉, 위치 2 및 2')에서 N-아실화되고, 또한 3' 위치에서 O-아실화된다. 탄소 2에 부착된 기는 화학식 -NH-CO-CH₂-CR¹R^1'을 갖는다. 탄소 2'에 부착된 기는 화학식 -NH-CO-CH₂-CR²R^2'를 갖는다. 탄소 3'에 부착된 기는 화학식 -0-CO-CH₂-CR³R^3'을 갖는다. 대표적인 구조는 다음과 같다:

기 R¹, R² 및 R³는 각각 독립적으로 -(CH₂)_n-CH₃이다. n의 값은 바람직하게는 8 내지 16이고, 더 바람직하게는 9 내지 12이고, 가장 바람직하게는 10이다.

기 R^1', R^2' 및 R^3'은 각각 독립적으로 (a) -H; (b) -OH; 또는 (c) -0-CO-R⁴일 수도 있으며, R⁴가 -H 또는 -(CH₂)_m-CH₃이고, m의 값은 바람직하게는 8 내지 16이고, 더 바람직하게는 10, 12 또는 14이다. 2 위치에서, m은 바람직하게는 14이다. 2' 위치에서, m은 바람직하게는 10이다. 3' 위치에서, m은 바람직하게는 12이다. 따라서 기 R¹, R² 및 R³는 바람직하게는 도데칸 산, 테트라데칸 산 또는 헥사데칸산의 -O-아실 기이다.

R^1', R^2' 및 R^3' 모두가 -H일 때 3d-MPL은 단 3개의 아실 사슬을 갖는다 (각각 위치 2, 2' 및 3'에서 하나씩). R^1', R^2' 및 R^3' 중 두 개만이 -H일 때 3d-MPL은 4개의 아실 사슬을 가질 수 있다. R^1', R^2' 및 R^3' 중 하나 만이 -H일 때 3d-MPL은 5개의 아실 사슬을 가질 수 있다. R^1', R^2' 및 R^3' 중 아무 것도 -H가 아닐 때 3d-MPL은 6개의 아실 사슬을 가질 수 있다. 본 발명에 따라 사용된 3d-MPL은 3 내지 6개의 아실 사슬을 갖는 이들 형태의 혼합물일 수 있지만, 혼합물에서 6개의 아실 사슬을 갖는 3d-MPL을 포함하는 것, 및 특히 6개의 아실 사슬 형태가 총 3d-MPL의 적어도 10 중량%, 예를 들어, >20 중량%, >30 중량%, >40 중량%, >50 중량% 이상을 구성한다는 것을 보장하는 것이 바람직하다. 6개의 아실 사슬이 있는 3d-MPL은 가장 보조제-활성 형태인 것으로 발견되었다.

따라서 본 발명과 함께 사용되는 3d-MPL의 가장 바람직한 형태는 다음과 같다:

3d-MPL이 혼합물의 형태로 사용되는 경우 본 발명의 조성물에서 3d-MPL의 양 또는 농도에 대한 참조는 혼합물에서 조합된 3d-MPL 종을 나타낸다.

수성 조건에서, 3d-MPL은 미셀 응집체 또는 다른 크기, 예를 들어, 직경 <150nm 또는 >500nm인 입자를 형성할 수 있다. 이들 중 하나 또는 둘 모두는 본 발명과 함께 사용될 수 있고, 더 나은 입자는 일상적인 검정에 의해 선택될 수 있다. 더 작은 입자 (예를 들어, 3d-MPL의 맑은 수성 현탁액을 제공할 정도로 작음)는 그것들의 우수한 활성 때문에 본 발명에 따른 사용에 바람직하다 [17]. 바람직한 입자는 150nm 미만, 더 바람직하게는 120nm 미만의 평균 직경을 갖고, 100nm 미만의 평균 직경을 가질 수도 있다. 하지만, 대부분의 경우에는, 평균 직경이 50nm보다 작지 않을 것이다. 3d-MPL이 알루미늄 포스페이트에 흡착되는 경우 3d-MPL 입자 크기를 직접적으로 측정하는 것이 가능할 수도 있지만, 입자 크기는 흡착이 일어나기 전에 측정될 수 있다. 입자의 직경은 동적 광 산란 (dynamic light scattering)의 일상적인 기술로 평가될 수 있으며, 이것은 평균 입자 직경을 나타낸다. 입자가 x nm의 직경을 갖고 있다고 하면, 일반적으로 이 평균에 대한 입자의 분포가 있지만, 적어도 50 개수%의 입자는 범위 x+25% 내의 직경을 가질 것이다.

본 발명의 조성물은 하나 이상의 TLR 작용제를 포함할 수 있다. 이들 두 개의 작용제는 서로 다르고 그것들은 같은 TLR 또는 다른 TLR을 표적화할 수 있다. 두 작용제 모두는 금속 염에 흡착될 수 있다.

불용성 금속 염

TLR 작용제는 불용성 금속 염에 흡착되어 에스.아우레우스 항원을 보조하는 흡착된 복합체를 형성할 수 있다. 예를 들어, 그것들은 불용성 칼슘 염 (예를 들어, 칼슘 포스페이트) 또는, 바람직하게는, 불용성 알루미늄 염에 흡착될 수 있다. 이러한 알루미늄 염은 백신에 사용된 오랜 역사를 가지고 있다.

유용한 알루미늄 염은 알루미늄 히드록시드 및 알루미늄 포스페이트 보조제를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 이러한 염은, 예를 들어, 참고문헌 18의 8 & 9장, 및 참고문헌 19의 4장에서 설명된다. 히드록시드 이온을 포함하는 알루미늄 염은 본 발명과 함께 사용되는 바람직한 불용성 금속 염인데 이들 히드록시드 이온이 리간드 교환을 쉽게 경험할 수 있기 때문이다. 따라서 TLR 작용제의 흡착을 위해 바람직한 염은 알루미늄 히드록시드 및/또는 알루미늄 히드록시포스페이트이다. 이들은 안정한 흡착을 제공하기 위해 인-함유 기 (예를 들어, 포스페이트, 포스포네이트)와 리간드 교환을 쉽게 경험할 수 있는 표면 히드록실 모이어티를 갖는다.

보통 "알루미늄 히드록시드"로 알려진 보조제는 전형적으로 알루미늄 옥시히드록시드 염이며, 이것은 보통 적어도 부분적으로 결정성이다. 화학식 AlO(OH)로 표현될 수 있는, 알루미늄 히드록시드 Al(OH)₃와 같은 알루미늄 옥시히드록시드는 적외선 분광법 (infrared (IR) spectroscopy)에 의해, 특히 1070cm^-1에서 흡착 밴드 및 3090-3100cm^-1에서 스트롱 숄더 (strong shoulder)의 존재에 의해 다른 알루미늄 화합물과 구별될 수 있다 (참고문헌 18의 9장). 알루미늄 히드록시드 보조제의 결정도의 정도는 반높이에서 회절 밴드의 폭 (WHH)에 의해 반영되며, 불량한 결정성 입자는 더 작은 결정자 크기로 인해 넓어지는 더 큰 선을 나타낸다. 표면적은 WHH가 증가하는 만큼 증가하고, 더 높은 WHH 값을 갖는 보조제는 항원 흡착에 대하여 더 큰 수용력을 갖는 것으로 나타났다. 섬유상 형태 (예를 들어, 투과성 전자 현미경 사진에서 보이는 바와 같음)가 알루미늄 히드록시드 보조제에 전형적이고, 예를 들어, 직경 약 2nm의 바늘-유사 입자를 갖는다. 알루미늄 히드록시드 보조제의 pI는 전형적으로 약 11이다, 즉, 보조제 자체는 생리학적 pH에서 양성 표면 전하를 갖는다. 알루미늄 히드록시드 보조제에 대하여 pH 7.4에서 mg Al⁺⁺⁺ 당 1.8-2.6mg 단백질의 흡착 용량이 보고되었다.

보통 "알루미늄 포스페이트"로서 알려진 보조제는 전형적으로 알루미늄 히드록시포스페이트이며, 종종 소량의 술페이트 또한 함유한다 (즉, 알루미늄 히드록시포스페이트 술페이트). 그것들은 침전에 의해 얻어질 수도 있고, 침전 중에 반응 조건 및 농도는 염에서 히드록실에 대한 포스페이트의 치환의 정도에 영향을 미친다. 히드록시포스페이트는 일반적으로 0.3 내지 1.2의 PO₄/Al 분자 비율을 갖는다. 히드록시포스페이트는 히드록실 기의 존재에 의해 AlPO₄와 엄격하게 구별될 수 있다. 예를 들어, 3164cm^-1에서 IR 스펙트럼 밴드 (예를 들어, 200℃로 가열될 때)는 구조적 히드록실의 존재를 지시한다 (참고문헌 18의 9장).

알루미늄 포스페이트 보조제의 P0₄/A1₃ ⁺ 분자 비율은 일반적으로는 0.3 내지 1.2, 바람직하게는 0.8 내지 1.2, 및 더 바람직하게는 0.95±0.1이다. 알루미늄 포스페이트는 일반적으로, 특히 히드록시포스페이트 염에 대하여, 무정형일 것이다. 전형적인 보조제는 0.84 내지 0.92의 PO₄/Al 분자 비율을 갖는 무정형 알루미늄 히드록시포스페이트이며, 0.6mg Al₃ ⁺/ml에서 포함된다. 알루미늄 포스페이트는 일반적으로 미립자일 것이다 (예를 들어, 투과성 전자 현미경 사진에서 보이는 바와 같이 판-유사 형태이며, 50nm의 범위에서 1차 입자를 가짐). 어떤 항원 흡착 후에도 입자의 전형적인 직경은 범위 0.5-20μm (예를 들어, 약 5-10μm)에 있다. 알루미늄 포스페이트 보조제에 대하여 pH 7.4에서 mg Al⁺⁺⁺ 당 0.7-1.5 mg 단백질의 흡착 용량이 보고되었다.

알루미늄 포스페이트의 영전하점 (PZC)은 반대로 히드록실에 대한 포스페이트의 치환의 정도와 관련되고, 이 치환의 정도는 침전에 의해 염을 제조하는데 사용된 반응 조건 및 반응물의 농도에 의존적으로 달라질 수 있다. PZC는 또한 용액 중의 자유 포스페이트 이온의 농도를 변화시킴으로써 (더 많은 포스페이트 = 더 산성 PZC) 또는 히스티딘 완충액과 같은 완충액을 추가함으로써 (PZC를 더 염기성으로 만듦) 바뀐다. 본 발명에 따라 사용되는 알루미늄 포스페이트는 일반적으로는 4.0 내지 7.0, 더 바람직하게는 5.0 내지 6.5, 예를 들어, 약 5.7의 PZC를 가질 것이다.

용액에서 알루미늄 포스페이트 및 히드록시드 보조제 둘 다는 직경이 1-10μm인 안정한 기공성 응집체를 형성하는 경향이 있다 [20].

금속 염에 흡착된 본 발명의 TLR 작용제를 포함하는 조성물은 또한 완충액 (예를 들어, 포스페이트 또는 히스티딘 또는 트리스 완충액)을 포함할 수 있다. 하지만, 이러한 조성물이 포스페이트 완충액을 포함할 때, 완충액에서 포스페이트 이온의 농도는 50mM 미만, 예를 들어, <40mM, <30mM, <20mM, <10mM, 또는 <5mM, 또는 1-15mM이어야 하는 것이 바람직하다. 히스티딘 완충액은, 예를 들어, 1-50mM, 5-25mM, 또는 약 10mM이 바람직하다.

본 발명에 유용한 흡착성 금속 염의 불용성 때문에, 흡착된 면역보강제를 함유하는 조성물은 일반적으로 흐린 외관을 갖는 현탁액일 것이다. 이는 오염 박테리아 성장을 감출 수 있고 그래서 본 발명의 조성물은 티메로살 또는 2-페녹시에탄올과 같은 방부제를 포함할 수도 있다. 조성물은 실질적으로 수은 재료가 없어야 한다 (예를 들어, <10μg/ml), 예를 들어, 티메로살이 없는 것이 바람직하다. 수은을 함유하지 않은 백신이 더 바람직하다.

조성물은 알루미늄 옥시히드록시드 및 알루미늄 히드록시포스페이트 둘 다의 혼합물을 포함할 수 있고, TLR 작용제는 이들 염 중 하나 또는 둘 다에 흡착될 수도 있다.

환자에게 투여되는 조성물에서 Al⁺⁺⁺의 농도는 바람직하게는 10mg/ml 미만, 예를 들어, <5mg/ml, <4mg/ml, <3mg/ml, <2mg/ml, <1mg/ml, 등이다. 본 발명의 조성물에서 Al⁺⁺⁺의 바람직한 범위는 0.3 내지 1mg/ml 또는 0.3-0.5mg/ml이다. 최대 0.85mg/투여량이 바람직하다. TLR 작용제의 포함이 알루미늄 염의 보조제 효과를 개선할 수 있기 때문에 본 발명은 유리하게 더 적은 양의 투여량 당 Al⁺⁺⁺를 허용하고, 그래서 본 발명의 조성물은 유용하게 단위 투여량 당 10 내지 250μg의 Al⁺⁺⁺를 포함할 수 있다. 현재의 소아 백신은 전형적으로 적어도 300μg Al⁺⁺⁺를 포함한다. 농도 측면에서, 본 발명의 조성물은 10 내지 500 μg/ml, 예를 들어, 10-300μg/ml, 10-200μg/ml, 또는 10-100μg/ml의 Al⁺⁺⁺ 농도를 가질 수도 있다.

일반적으로, 조성물이 TLR 작용제 및 알루미늄 염 둘 다를 포함할 때, Al⁺⁺⁺에 대한 작용제의 중량비는 5:1 미만, 예를 들어, 4:1 미만, 3:1 미만, 2:1 미만, 또는 1:1일 것이다. 따라서, 예를 들어, 0.5mg/ml의 Al⁺⁺⁺ 농도와 함께, TLR 작용제의 최대 농도는 1.5mg/ml일 것이다. 하지만, 더 높은 또는 더 낮은 수준이 사용될 수 있다.

조성물이 TLR 작용제 및 불용성 금속 염을 포함하는 경우, 조성물에서 작용제의 적어도 50% (질량에 의해), 예를 들어, >60%, >70%, >80%, >85%, >90%, >92%, >94%, >95%, >96%, >97%, >98%, >99%, 또는 심지어 100%가 금속 염에 흡착되는 것이 바람직하다.

에스 . 아우레우스 항원

본 발명의 조성물은 적어도 하나의 에스.아우레우스 항원 또는 적어도 두 가지의 에스.아우레우스 항원을 포함한다. 따라서 조성물은 1, 2, 3, 4, 5가지 이상의 에스.아우레우스 항원을 포함할 수 있다; 전형적으로 10가지 이상의 상이한 에스.아우레우스 항원을 포함하지 않을 것이다.

당류 및 폴리펩티드 항원 둘 다는 에스.아우레우스에 대하여 알려져 있다 (예를 들어, 알려진 당류 항원은 폴리-N-아세틸글루코사민 (PNAG)인 에스.아우레우스의 엑소다당류 (exopolysaccharide), 및, 예를 들어, 타입 5, 타입 8 또는 타입 336의 것일 수 있는, 에스.아우레우스의 캡슐 당류를 포함함). 바람직한 조성물에서, 에스.아우레우스 항원(들)은 폴리펩티드 항원(들)이고; 일부 구체예에서, 조성물은 에스.아우레우스 당류 항원을 포함하지 않는다.

본 발명에 사용되는 바람직한 에스.아우레우스 폴리펩티드 항원은 EsxA, EsxB, Sta006, Sta011, 및/또는 Hla이다. 이들 다섯 개의 항원은 참고문헌 1에서 상세히 논의된다. 본 발명의 특히 유용한 조성물은 이들 항원 다섯 가지 모두를 포함한다 (바람직하게는 Hla의 비-독성 돌연변이 형태를 가짐).

NCTC 8325 균주에서 'EsxA' 항원은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1 (GI:88194063)을 갖는다. 본 발명에 사용된 EsxA 항원은 SEQ ID NO: 1을 인식하고 및/또는 (a) SEQ ID NO: 1과 50% 이상 (예를 들어, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% 이상)의 서열 동일성을 갖고; 및/또는 (b) SEQ ID NO: 1의 적어도 'n'개의 연속적인 아미노산의 단편을 포함하는 아미노산 서열을 포함할 수도 있는 항체를 유도할 수 있으며 (예를 들어, 사람에게 투여될 때), 'n'은 7 이상 (예를 들어, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90 이상)이다. 이들 EsxA 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 1의 변이체를 포함한다. (b)의 바람직한 단편은 SEQ ID NO: 1의 에피토프를 포함한다. 다른 바람직한 단편은 SEQ ID NO: 1의 C-말단의 하나 이상의 아미노산 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 이상) 및/또는 N-말단의 하나 이상의 아미노산 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 이상)이 없는 한편, SEQ ID NO: 1의 적어도 하나의 에피토프를 유지한다.

NCTC 8325 균주에서 'EsxB' 항원은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 2 (GI:88194070)를 갖는다. 본 발명에 사용된 EsxB는 SEQ ID NO: 2를 인식하고 및/또는 (a) SEQ ID NO: 2와 50% 이상 (예를 들어, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% 이상)의 서열 동일성을 갖고; 및/또는 (b) SEQ ID NO: 2의 적어도 'n'개의 연속적인 아미노산의 단편을 포함하는 아미노산 서열을 포함할 수도 있는 항체를 유도할 수 있으며 (예를 들어, 사람에게 투여될 때), 'n'은 7 이상 (예를 들어, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100 이상)이다. 이들 EsxB 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 2의 변이체를 포함한다. (b)의 바람직한 단편은 SEQ ID NO: 2의 에피토프를 포함한다. 다른 바람직한 단편은 SEQ ID NO: 2의 C-말단의 하나 이상의 아미노산 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 이상) 및/또는 N-말단의 하나 이상의 아미노산 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 이상)이 없는 한편, SEQ ID NO: 2의 적어도 하나의 에피토프를 유지한다. 유용한 EsxB 항원은 SEQ ID NO: 2의 내부 시스테인 잔기가 없는데, 예를 들어, 그것은 SEQ ID NO: 42를 포함하며, 위치 30의 잔기 X가 없거나 자유 티올 기가 없는 아미노산 잔기인데 (환원성 조건 하에), 예를 들어, 시스테인을 제외한 어떤 천연 아미노산도 된다.

'Sta006' 항원은 '페리크롬-결합 단백질'로서 주석이 달려있고, 문헌에서 'FhuD2'로도 불린다 [21]. NCTC 8325 균주에서 Sta006은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 3 (GI:88196199)을 갖는다. 본 발명에 사용된 Sta006은 SEQ ID NO: 3을 인식하고 및/또는 (a) SEQ ID NO: 3과 50% 이상 (예를 들어, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% 이상)의 서열 동일성을 갖고; 및/또는 (b) SEQ ID NO: 3의 적어도 'n'개의 연속적인 아미노산의 단편을 포함하는 아미노산 서열을 포함할 수도 있는 항체를 유도할 수 있으며 (예를 들어, 사람에게 투여될 때), 'n'은 7 이상 (예를 들어, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250 이상)이다. 이들 Sta006 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 3의 변이체를 포함한다. (b)의 바람직한 단편은 SEQ ID NO: 3의 에피토프를 포함한다. 다른 바람직한 단편은 SEQ ID NO: 3의 C-말단의 하나 이상의 아미노산 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 이상) 및/또는 N-말단의 하나 이상의 아미노산 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 이상)이 없는 한편, SEQ ID NO: 3의 적어도 하나의 에피토프를 유지한다. SEQ ID NO: 3의 처음 17개의 N-말단 아미노산은 유용하게 제외될 수 있다 (SEQ ID NO: 6을 제공하기 위해). Sta006의 돌연변이 형태는 참고문헌 22에서 보고된다. 유용한 Sta006 항원은 SEQ ID NO: 3의 시스테인 잔기가 없는데, 예를 들어, 그것은 SEQ ID NO: 41을 포함하며 자유 티올 기가 있는 어떤 아미노산 잔기도 포함하지 않는데 (환원성 조건 하에), 예를 들어, 그것은 시스테인이 없다. Sta006 항원은, 예를 들어, 아실화된 N-말단 시스테인으로 지질화될 수도 있다. 한 유용한 Sta006 서열은 SEQ ID NO: 7이며, 이것은 N-말단에서 Met-Ala-Ser- 서열을 갖고; SEQ ID NO: 44는 또 다른 이러한 서열이지만, 그것은 SEQ ID NO: 7에 존재하는 시스테인이 없다.

'Sta011' 항원은 NCTC 8325 균주에서 아미노산 서열 SEQ ID NO: 4 (GI:88193872)을 갖는다. 본 발명에 사용된 Sta011 항원은 SEQ ID NO: 4를 인식하고 및/또는 (a) SEQ ID NO: 4와 50% 이상 (예를 들어, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% 이상)의 서열 동일성을 갖고; 및/또는 (b) SEQ ID NO: 4의 적어도 'n'개의 연속적인 아미노산의 단편을 포함하는 아미노산 서열을 포함할 수도 있는 항체를 유도할 수 있으며 (예를 들어, 사람에게 투여될 때), 'n'은 7 이상 (예를 들어, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250 이상)이다. 이들 Sta011 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 4의 변이체를 포함한다. (b)의 바람직한 단편은 SEQ ID NO: 4의 에피토프를 포함한다. 다른 바람직한 단편은 SEQ ID NO: 4의 C-말단의 하나 이상의 아미노산 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 이상) 및/또는 N-말단의 하나 이상의 아미노산 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 이상)이 없는 한편, SEQ ID NO: 4의 적어도 하나의 에피토프를 유지한다. SEQ ID NO: 4의 처음 23개의 N-말단 아미노산은 유용하게 제외될 수 있다 (SEQ ID NO: 33을 제공하기 위해). 유용한 Sta011 항원은 SEQ ID NO: 4의 시스테인 잔기가 없는데, 예를 들어, 그것은 SEQ ID NO: 43을 포함하며 자유 티올 기가 있는 어떤 아미노산 잔기도 포함하지 않는데 (환원성 조건 하에), 예를 들어, 그것은 시스테인이 없다. Sta011 항원은, 예를 들어, 아실화된 N-말단 시스테인으로 지질화될 수도 있다. 한 유용한 Sta011 서열은 SEQ ID NO: 8이며, 이것은 N-말단 메티오닌을 갖고; SEQ ID NO: 46은 또 다른 이러한 서열이지만, 그것은 SEQ ID NO: 8에 존재하는 시스테인이 없다. Sta011 항원으로서 제조되거나 이를 제조하기 위해 사용될 수도 있는 SEQ ID NO: 4의 변이체 형태는 다양한 Ile/Val/Leu 치환을 갖는 SEQ ID NO: 9, 10 및 11을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다 (및 이들 서열의 Cys가 없는 변이체는 또한 본 발명에 사용될 수 있다). Sta011은 모노머 또는 올리고머로서 존재할 수 있고, Ca⁺⁺ 이온은 올리고머화를 선호한다. 본 발명은 Sta011의 모노머 및/또는 올리고머를 사용할 수 있다.

'Hla' 항원은 '알파 독소' 또는 간단하게 '용혈소'로도 불리는 '알파-용혈소 전구체'이다. NCTC 8325 균주에서 Hla는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 5 (GI:88194865)를 갖는다. Hla는 에스.아우레우스의 대부분의 균주에 의해 생산된 중요한 병독성 결정요인이며, 기공-형성 및 용혈 활성을 갖는다. 항-Hla 항체는 동물 모델에서 독소의 해로운 효과를 중화할 수 있고, Hla는 폐렴 (pneumonia)으로부터 보호하는데 특히 유용하다.

유용한 Hla 항원은 SEQ ID NO: 5를 인식하고 및/또는 (a) SEQ ID NO: 5와 50% 이상 (예를 들어, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% 이상)의 서열 동일성을 갖고; 및/또는 (b) SEQ ID NO: 5의 적어도 'n'개의 연속적인 아미노산의 단편을 포함하는 아미노산 서열을 포함할 수도 있는 항체를 유도할 수 있으며 (예를 들어, 사람에게 투여될 때), 'n'은 7 이상 (예를 들어, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250 이상)이다. 이들 Hla 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 5의 변이체를 포함한다. (b)의 바람직한 단편은 SEQ ID NO: 5의 에피토프를 포함한다. 다른 바람직한 단편은 SEQ ID NO: 5의 C-말단의 하나 이상의 아미노산 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 이상) 및/또는 N-말단의 하나 이상의 아미노산 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 이상)이 없는 한편, SEQ ID NO: 5의 적어도 하나의 에피토프를 유지한다. SEQ ID NO: 5의 처음 26개의 N-말단 아미노산은 유용하게 제외될 수 있다 (SEQ ID NO: 12를 제공하기 위해). C-말단에서 절단이 또한 사용될 수 있으며, 예를 들어, 50개의 아미노산 (SEQ ID NO: 5의 잔기 27-76)만을 남겨둔다 [23].

Hla의 독성은 화학적 불활성화에 의해 (예를 들어, 포름알데히드, 글루타르알데히드 또는 다른 교차-결합 시약을 사용하여) 본 발명의 조성물에서 방지될 수 있다. 하지만, 대신에 독성 활성을 제거하지만 면역원성을 유지하는 Hla의 돌연 변이 형태를 사용하는 것이 바람직하다. 이러한 해독된 돌연변이는 이미 업계에 알려져 있다. 바람직한 Hla 항원은 SEQ ID NO: 5의 잔기 61에서 돌연변이를 갖는 돌연변이 에스.아우레우스 용혈소이며, 이것은 성숙한 항원의 잔기 35이다 (즉, 처음 26개의 N-말단 아미노산 = SEQ ID NO: 12의 잔기 35를 제거한 후). 따라서 잔기 61은 히스티딘이 아닐 수도 있고, 대신에, 예를 들어, He, Val 또는 바람직하게는 Leu일 수도 있다. 이 위치에서 His-Arg 돌연변이가 또한 사용될 수 있다. 예를 들어, SEQ ID NO: 13은 성숙한 돌연변이 Hla-H35L 서열이고 (즉, H35L 돌연변이를 갖는 SEQ ID NO: 12) 유용한 Hla 항원은 SEQ ID NO: 13을 포함한다. 또 다른 유용한 돌연변이는 SEQ ID NO: 15 (이것은 H35L 돌연변이를 포함하지 않는다) 및 SEQ ID NO: 16 (이것은 H35L 돌연변이를 포함하지 않는다)에서처럼, 예를 들어, SEQ ID NO: 5의 잔기 136-174에서 39머를 PSGS (SEQ ID NO: 14)와 같은 테트라머로 대체하기 위해 긴 루프(loop)를 짧은 서열로 대체한다. 또 다른 유용한 돌연변이는 잔기 Y101를, 예를 들어, 류신 (SEQ ID NO: 17)으로 대체한다. 또 다른 유용한 돌연변이는 잔기 D152를, 예를 들어, 류신 (SEQ ID NO: 18)으로 대체한다. 또 다른 유용한 돌연변이는 잔기 H35 및 Y101을, 예를 들어, 류신 (SEQ ID NO: 19)으로 대체한다. 또 다른 유용한 돌연변이는 잔기 H35 및 D152를, 예를 들어, 류신 (SEQ ID NO: 20)으로 대체한다.

추가의 유용한 Hla 항원은 참고문헌 24 및 25에 개시된다.

SEQ ID NO: 21, 22 & 23은 SEQ ID NO: 5의 세 가지 유용한 단편 (각각 'Hla_27-76', 'Hla_{27 -89}' 및 'Hla_{27 -79}')이다. SEQ ID NO: 24, 25 & 26은 SEQ ID NO: 13의 대응하는 단편이다.

한 유용한 Hla 서열은 SEQ ID NO: 27이다. 그것은 N-말단 Met, 그 다음에 발현 벡터의 Ala-Ser 디펩티드, 그 다음에 SEQ ID NO: 13 (NCTC8325 균주의 것)을 갖는다.

조성물이 EsxA 및 EsxB 항원을 포함하면, 이들은 단일 폴리펩티드로서 (즉, 융합 폴리펩티드로서) 존재할 수도 있다. 따라서 단일 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 1 및 SEQ ID NO: 2 둘 다를 인식하는 항체를 유발할 수 있다 (예를 들어, 사람에게 투여될 때). 단일 폴리펩티드는 (i) SEQ ID NO: 1과 50% 이상 (예를 들어, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% 이상)의 동일성을 갖고 및/또는 EsxA에 대하여 상기 정의된 바와 같이, SEQ ID NO: 1의 적어도 'n'개의 연속적인 아미노산의 단편을 포함하는 제1 폴리펩티드 서열; 및 (ii) SEQ ID NO: 2와 50% 이상 (예를 들어, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% 이상)의 서열 동일성을 갖고 및/또는 EsxB에 대하여 상기 정의된 바와 같이, SEQ ID NO: 2의 적어도 'n'개의 연속적인 아미노산의 단편을 포함하는 제2 폴리펩티드 서열을 포함할 수도 있다. 제1 및 제2 폴리펩티드 서열은 N-말단에서 C-말단으로의 순서일 수 있다. SEQ ID NO: 28 ('EsxAB') 및 29 ('EsxBA')는 이러한 폴리펩티드의 예이며, 둘 다 헥사펩티드 결합자 ASGGGS (SEQ ID NO: 30)을 갖는다. 또 다른 'EsxAB' 히브리드 (hybrid)는 SEQ ID NO: 31을 포함하며, 이것은 N-말단 메티오닌 (예를 들어, SEQ ID NO: 32)이 제공될 수도 있다. EsxAB의 유용한 변이체는 EsxB의 내부 시스테인 잔기가 없고, 예를 들어, 그것은 SEQ ID NO: 47을 포함하며 위치 132의 잔기 X는 없거나 자유 티올 기가 없는 아미노산 잔기이고 (환원성 조건 하에), 예를 들어, 시스테인을 제외한 어떤 천연 아미노산도 된다. 따라서 본 발명과 함께 사용되는 바람직한 EsxAB 항원은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 45를 갖는다.

따라서 유용한 폴리펩티드는 (a) SEQ ID NO: 31와 80% 이상 (예를 들어, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% 이상)의 동일성을 갖고; 및/또는 (b) SEQ ID NO: 31의 아미노산 1-96의 적어도 'n'개의 연속적인 아미노산의 단편 및 SEQ ID NO: 31의 아미노산 103-205의 적어도 'n'개의 연속적인 아미노산의 단편 둘 다를 포함하는 아미노산 서열을 포함하며, 'n'은 7 이상 (예를 들어, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250 이상)이다. 이들 폴리펩티드 (예를 들어, SEQ ID NO: 32)는 SEQ ID NO: 1을 포함하는 야생형 포도상구균 (staphylococcal) 단백질 및 SEQ ID NO: 2를 포함하는 야생형 포도상구균 단백질 둘 다를 인식하는 항체를 유도할 수 있다 (예를 들어, 사람에게 투여될 때). 따라서 면역 반응은 항원 esxA 및 esxB 둘 다를 인식할 것이다. (b)의 바람직한 단편은 SEQ ID NO: 1의 에피토프 및 SEQ ID NO: 2의 에피토프를 제공한다.

따라서 본 발명의 바람직한 조성물은 (i) 예를 들어, SEQ ID NO: 31을 포함하는, EsxA 항원 및 EsxB 항원을 포함하는 단일 폴리펩티드; (ii) 예를 들어, SEQ ID NO: 6을 포함하는 Sta006 항원; (iii) 예를 들어, SEQ ID NO: 33을 포함하는 Sta011 항원; 및 (iv) 예를 들어, SEQ ID NO: 13를 포함하는 Hla의 H35L 돌연변이 형태 중 네 가지 모두를 포함한다. 이 조성물은 화학식 (K)의 TLR7 작용제를 사용할 때 특히 유용하다.

SEQ ID NO: 31, 6, 33 및 13은 조합에서 유용한 아미노산 서열이지만, 본 발명은 이들 정확한 서열에 제한되지 않는다. 따라서 이들 서열 중 1, 2, 3 또는 4개 모두는 변형된 서열이 변형되지 않은 서열로 구성된 폴리펩티드에 결합하는 항체를 유도할 수 있

으면 5개까지의 단일 아미노 변화 (즉, 1, 2, 3, 4 또는 5개의 단일 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입)에 의해 독립적으로 변형될 수 있다.

본 발명의 하나의 유용한 조성물은 (i) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 32를 갖는 제1 폴리펩티드; (ii) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 7을 갖는 제2 폴리펩티드; (iii) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 8을 갖는 제3 폴리펩티드; 및 (iv) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 27을 갖는 제4 폴리펩티드 중 네 개 모두를 포함한다. 다시 말하면, 이 조성물은 화학식 (K)의 TLR7 작용제를 사용할 때 특히 유용하다. 일부 구체예에서, 조성물은 하나 이상의 추가의 폴리펩티드를 포함할 수도 있다; 다른 구체예에서는, 조성물의 유일한 폴리펩티드는 이들 네 개의 명시된 폴리펩티드이다. SEQ ID NO: 32, 7, 8 및 27은 조합에서 유용한 아미노산 서열이지만, 본 발명은 이들 정확한 서열에 제한되지 않는다. 따라서 이들 네 개의 서열 중 1, 2, 3 또는 4개 모두는 변형된 서열이 변형되지 않은 서열로 구성된 폴리펩티드에 결합하는 항체를 유도할 수 있으면 1, 2, 3, 4 또는 5개의 단일 아미노 변화 (즉, 1, 2, 3, 4 또는 5개의 단일 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입)에 의해 독립적으로 변형될 수 있다. 따라서 바람직한 구체예에서, 조성물은 1개의 단일 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입에 의해 독립적으로 변형된 SEQ ID NO: 32, 7, 8 및 27 중 1, 2, 3 또는 4개 모두와 함께 이들 네 개의 명시된 폴리펩티드를 포함한다. 예를 들어, 야생형 Sta006, Sta011 및 EsxAB 폴리펩티드 서열 (예를 들어, SEQ ID NO: 6, 31 및 33) 각각은 인터(inter)-폴리펩티드 이황화 결합으로 이어져서 호모다이머 (homodimer) 및 헤테로다이머 (heterodimer) 둘 다를 형성할 수 있는 단일 시스테인 잔기를 포함한다. 이러한 인터-결합된 폴리펩티드는 바람직하지 않고 그래서 Sta006, Sta011 및 EsxB 서열은 그것들의 천연 시스테인 잔기를 제거하도록 변형될 수 있으며, 이로 인해 그것들은 자유 티올 기를 함유하지 않는다 (환원성 조건 하에). 야생형 시스테인은 결실될 수 있거나 다른 아미노산으로 치환될 수 있다.

따라서: Sta006 항원은 SEQ ID NO: 41을 포함할 수 있고; Sta011 항원은 SEQ ID NO: 43을 포함할 수 있고; EsxB 항원은 SEQ ID NO: 42를 포함할 수 있다 (예를 들어, SEQ ID NO: 47을 포함하는 EsxAB 히브리드와 같음). 이러한 서열의 예는 SEQ ID NO: 44, 46, 및 45를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 이들 서열은 대응하는 야생형 서열에 대한 치환으로서, 또는 조합에서 개별적으로 사용될 수 있다. 따라서 본 발명의 특히 유용한 조성물은 (i) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 45를 갖는 제1 폴리펩티드; (ii) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 44를 갖는 제2 폴리펩티드; (iii) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 46을 갖는 제3 폴리펩티드; 및 (iv) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 27을 갖는 중 네 개 모두를 포함한다. 일부 구체예에서, 조성물은 하나 이상의 추가의 폴리펩티드를 포함할 수도 있다; 다른 구체예에서는, 조성물의 유일한 폴리펩티드는 이들 네 개의 명시된 폴리펩티드이다. 폴리펩티드의 이 조합은 상기 논의된 바와 같이, 예를 들어, 작용제 및/또는 폴리펩티드의 알루미늄 히드록시드 보조제에 흡착과 함께, 화학식 K2와 같은, 화학식 (K)의 TLR7 작용제를 사용할 때 특히 유용하다.

본 발명의 다른 조성물은, 특히 흡착된 TLR 작용제 (예를 들어, 알루미늄 염에 흡착됨)로서 3d-MPL을 사용할 때, ClfA 항원, IsdA 항원, IsdB 항원, IsdC 항원, 및/또는 IsdH 항원을 포함할 수 있다.

NCTC 8325 균주에서, 'ClfA' 항원, 또는 '응고 인자 (clumping factor) A'는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 34 (GI:88194572)를 갖는다. 본 발명에 사용된 ClfA 항원은 SEQ ID NO: 34를 인식하고 및/또는 (a) SEQ ID NO: 34와 50% 이상 (예를 들어, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91 %, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% 이상)의 동일성을 갖고; 및/또는 (b) SEQ ID NO: 34의 적어도 'n'개의 연속적인 아미노산의 단편을 포함하는 아미노산 서열을 포함할 수도 있는 항체를 유도할 수 있으며 (예를 들어, 사람에게 투여될 때), 'n'은 7개 이상 (예를 들어, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250개 이상)이다. 이들 ClfA 항원은 SEQ ID NO: 34의 변이체를 포함한다. (b)의 바람직한 단편은 SEQ ID NO: 34의 에피토프를 포함한다. 다른 바람직한 단편은 SEQ ID NO: 34의 C-말단의 하나 이상 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 이상)의 아미노산 및/또는 N-말단의 하나 이상 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 이상)의 아미노산이 없는 한편 SEQ ID NO: 34의 적어도 하나의 에피토프를 유지한다. SEQ ID NO: 34의 최종 368개의 C-말단 아미노산은 유용하게 제외될 수 있다. SEQ ID NO: 34의 처음 39개의 N-말단 아미노산은 유용하게 제거될 수 있다. SEQ ID NO: 40은 SEQ ID NO: 34의 유용한 단편 ('ClfA_{40 -559}')이며, 이는 SEQ ID NO: 34의 C-말단 방향의 긴 반복 영역을 제외한다. 본 발명에 사용된 ClfA 항원은 피브리노겐에 대한 친화도를 감소시키거나 제거하도록 유용하게 야생형 서열로부터 변형될 수 있는데, 예를 들어, 참고문헌 26의 Y474 돌연변이, 참고문헌 27의 D321 돌연변이, 등이 있다.

NCTC 8325 균주에서 'IsdA' 항원은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 35 (GI:88194829)를 갖는다. 항-IsdA 항체는 마우스를 에스.아우레우스 농양 (abscess) 형성 및 치명적인 도전으로부터 보호할 수 있다 [28]. 본 발명에 사용된 IsdA 항원은 SEQ ID NO: 35를 인식하고 및/또는 (a) SEQ ID NO: 35와 50% 이상 (예를 들어, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% 이상)의 동일성을 갖고; 및/또는 (b) SEQ ID NO: 35의 적어도 'n'개의 연속적인 아미노산의 단편을 포함하는 아미노산을 포함할 수도 있는 항체를 유도할 수 있으며 (예를 들어, 사람에게 투여될 때), 'n'은 7 이상 (예를 들어, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250 이상)이다. 이들 IsdA 항원은 SEQ ID NO: 35의 변이체를 포함한다. (b)의 바람직한 단편은 SEQ ID NO: 35의 에피토프를 포함한다. 다른 바람직한 단편은 SEQ ID NO: 35의 C-말단의 하나 이상의 아미노산 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 이상) 및/또는 N-말단의 하나 이상의 아미노산 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 이상)이 없는 한편 SEQ ID NO: 35의 적어도 하나의 에피토프를 유지한다. SEQ ID NO: 35의 최종 38개의 C-말단 아미노산은 유용하게 제외될 수 있다. SEQ ID NO: 35의 처음 46 N-말단 아미노산은 유용하게 제외될 수 있다. SEQ ID NO: 35의 C-말단 38머 (LPKTG 모티프 (motif)로 시작함)를 제외하기 위한 절단이 또한 유용하다. SEQ ID NO: 36은 SEQ ID NO: 35의 유용한 단편 (SEQ ID NO: 35의 아미노산 40-184; 'IsdA_{40 -184}')이며 이것은 천연 단백질의 헴 (heme) 결합 부위를 포함하고 항원의 가장 많이 노출된 도메인을 포함한다. 그것은 또한 항원의 사람 단백질과의 유사성을 감소시킨다. 다른 유용한 단편은 참고문헌 29 및 30에 개시된다.

NCTC 8325 균주에서 'IsdB' 항원은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 37 (GI:88194828)을 갖는다. 항-IsdB 항체는 마우스를 에스.아우레우스 농양 형성 및 치명적인 도전으로부터 보호할 수 있다 [28]. 본 발명에 사용된 IsdB 항원은 SEQ ID NO: 37을 인식하고 및/또는 (a) SEQ ID NO: 37과 50% 이상 (예를 들어, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91 %, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% 이상)의 동일성을 갖고; 및/또는 (b) SEQ ID NO: 37의 적어도 'n'개의 연속적인 아미노산의 단편을 포함하는 아미노산 서열을 포함할 수도 있는 항체를 유도할 수 있으며 (예를 들어, 사람에게 투여될 때), 'n'은 7 이상 (예를 들어, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250 이상)이다. 이들 IsdB 항원은 SEQ ID NO: 37의 변이체를 포함한다. (b)의 바람직한 단편은 SEQ ID NO: 37의 에피토프를 포함한다. 다른 바람직한 단편은 SEQ ID NO: 37의 C-말단의 하나 이상 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 이상)의 아미노산 및/또는 N-말단의 하나 이상 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 이상)의 아미노산이 없는 한편 SEQ ID NO: 37의 적어도 하나의 에피토프를 유지한다. SEQ ID NO: 37의 최종 36개의 C-말단 아미노산은 유용하게 제외될 수 있다. SEQ ID NO: 37의 40개의 N-말단 아미노산은 유용하게 제외될 수 있다. IsdB의 유용한 단편은 참고문헌 30 및 31에 개시되며, 예를 들어, SEQ ID NO: 37의 37개의 내부 아미노산이 없다.

NCTC 8325 균주에서 'IsdC' 항원은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 38 (GI:88194830)을 갖는다. 본 발명에 사용된 IsdC 항원은 SEQ ID NO: 38을 인식하고 및/또는 (a) SEQ ID NO: 38과 50% 이상 (예를 들어, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91 %, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% 이상)의 동일성을 갖고; 및/또는 (b) SEQ ID NO: 38의 적어도 'n'개의 연속적인 아미노산의 단편을 포함하는 아미노산 서열을 포함할 수도 있는 항체를 유도할 수 있으며 (예를 들어, 사람에게 투여될 때), 'n'은 7 이상 (예를 들어, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200 이상)이다. 이들 IsdC 항원은 SEQ ID NO: 38의 변이체를 포함한다. (b)의 바람직한 단편은 SEQ ID NO: 38의 에피토프를 포함한다. 다른 바람직한 단편은 SEQ ID NO: 38의 C-말단의 하나 이상 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 이상)의 아미노산 및/또는 N-말단의 하나 이상 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 이상)의 아미노산이 없으며 SEQ ID NO: 38의 적어도 하나의 에피토프를 유지한다. SEQ ID NO: 38의 최종 39개의 C-말단 아미노산은 유용하게 제외될 수 있다. SEQ ID NO: 38의 처음 28개의 N-말단 아미노산은 유용하게 제외될 수 있다.

'HarA'로도 알려져 있는, NCTC 8325 균주의 'IsdH' 항원은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 39 (GI:88195542)를 갖는다. 본 발명에 사용된 IsdH 항원은 SEQ ID NO: 39를 인식하고 및/또는 (a) SEQ ID NO: 39의 50% 이상 (예를 들어, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91 %, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% 이상)의 동일성을 갖고; 및/또는 (b) SEQ ID NO: 39의 적어도 'n'개의 연속적인 아미노산의 단편을 포함하는 아미노산 서열을 포함할 수도 있는 항체를 유도할 수 있으며 (예를 들어, 사람에게 투여될 때), 'n'은 7 이상 (예를 들어, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250 이상)이다. 이들 IsdH 항원은 SEQ ID NO: 39의 변이체를 포함한다. (b)의 바람직한 단편은 SEQ ID NO: 39의 에피토프를 포함한다. 다른 바람직한 단편은 SEQ ID NO: 39의 C-말단의 하나 이상 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 이상)의 아미노산 및/또는 N-말단의 하나 이상 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 이상)의 아미노산이 없는 한편 SEQ ID NO: 39의 적어도 하나의 에피토프를 유지한다. SEQ ID NO: 39의 최종 35개의 C-말단 아미노산 유용하게 제외될 수 있다. SEQ ID NO: 39의 처음 40개의 N-말단 아미노산은 유용하게 제외될 수 있다.

IsdA, IsdB, IsdC 및/또는 IsdH를 사용할 때 IsdA, IsdB, IsdC 및/또는 IsdH 중 하나 이상의 에피토프를 포함하는 융합 폴리펩티드를 사용하는 것이 도움이 될 수 있다. 예를 들어, 참고문헌 32는 IsdB 및 IsdH 둘 다의 에피토프를 유용하게 포함하는 폴리펩티드를 개시한다. 유사하게는, 참고문헌 33은 IsdA 및 IsdB 둘 다의 에피토프를 유용하게 포함하는 폴리펩티드, 및 또한 IsdA, IsdB 및 IsdH의 에피토프를 포함하는 일부 폴리펩티드를 개시한다. 이들 융합 폴리펩티드를 만들 때 각 폴리펩티드의 NEAT 도메인을 포함하는 것이 도움이 될 수 있다 [33].

일부 구체예에서, 본 발명의 조성물은 에스.아우레우스 항원 및 또한 다른 유기체 (예를 들어, 바이러스 또는 또 다른 박테리아)의 항원을 포함한다.

일부 구체예에서, 본 발명은 IsdA 항원, IsdB 항원, ClfA 항원, ClfB 항원, SdrD 항원, Spa 항원, EsxA 항원, EsxB 항원, Sta006 항원, 용혈소, 및 StaO11 항원의 조합을 포함하는 조성물을 포함하지 않는다.

화학식 (C), (D), (E) 및 (H) - TLR7 작용제

TLR 작용제는 화학식 (C), (D), (E), 및 (H) 중 어느 것에 따른 화합물이 될 수 있으며:

(a) P³ 및 P⁴ 중 적어도 하나는 -Y-L-X- P(0)(OR^x)(OR^Y)라는 조건으로 P³은 H, C₁-C₆알킬, CF₃, 및 -((CH₂)_pO)_q(CH₂)_pO_s- 및 -Y-L-X-P(0)(OR^x)(OR^Y)로부터 선택되고; P⁴는 H, C₁-C₆알킬, -C₁-C₆알킬아릴 및 -Y-L-X-P(0)(OR^x)(OR^Y)로부터 선택되고,

(b) P⁵, P⁶ 및 P⁷ 중 적어도 하나는 -Y-L-X-P(0)(OR^x)(OR^Y)라는 조건으로 P⁵는 H, C₁-C₆알킬, 및 -Y-L-X-P(0)(OR^x)(OR^Y)로부터 선택되고; P⁶는 H, C₁-C₄알킬 및 OH로부터 선택된 1 내지 3개의 치환기로 각각 선택적으로 치환되는 C₁-C₆알킬, 및 -Y-L-X-P(0)(OR^x)(OR^Y)로부터 선택되고; P⁷은 H, C₁-C₆알킬, -((CH₂)_pO)_q(CH₂)_pO_s-, -NHC₁-C₆알킬 및 -Y-L-X-P(0)(OR^x)(OR^Y)로부터 선택되고,

(c) P⁸, P⁹ 또는 P¹⁰ 중 적어도 하나는 -Y-L-X-P(0)(OR^x)(OR^Y)라는 조건으로 P⁸은 H, C₁-C₆알킬, C₁-C₆알콕시, OH로 각각 선택적으로 치환되는 -NHC₁-C₆알킬, 및 -Y-L-X-P(0)(OR^x)(OR^Y)로부터 선택되고; P⁹ 및 P¹⁰은 각각 H, C₁-C₆알킬, C₁-C₆알콕시, OH 및 C₁-C₆알킬로 각각 선택적으로 치환되는 -NHC₁-C₆알킬 및 -Y-L-X-P(0)(OR^x)(OR^Y)로부터 독립적으로 선택되고,

(d) P¹⁶, P¹⁷ 또는 P¹⁸ 중 적어도 하나는 -Y-L-X-P(0)(OR^x)(OR^Y) 모이어티를 함유한다는 조건으로 P¹⁶ 및 P¹⁸은 각각 H, C₁-C₆알킬, 및 -Y-L-X-P(0)(OR^x)(OR^Y)로부터 독립적으로 선택되고; P¹⁷은 H, C₁-C₆알킬, 아릴, 헤테로아릴, C₁-C₆알킬아릴, C₁-C₆알킬 헤테로아릴, C₁-C₆알킬아릴-Y-L-X-P(0)(OR^x)(OR^Y) 및 -Y-L-X- P(0)(OR^x)(OR^Y)로부터 선택되며, 각각은 C₁-C₆알킬 또는 헤테로시클릴로부터 선택된 1 내지 2개의 치환기로 선택적으로 치환되고.

R^x 및 R^Y는 H 및 C₁-C₆알킬로부터 독립적으로 선택되고;

R^C, R^D 및 R^H는 H 및 C₁-C₆알킬로부터 독립적으로 선택되고;

X^C는 CH 및 N으로부터 선택되고;

R^E는 H, C₁-C₆알킬, C₁-C₆알콕시, C(0)C₁-C₆알킬, 할로겐 및 -((CH₂)_pO)_q(CH₂)_p-로부터 선택되고;

X^E는 공유 결합, CR^E2R^E3 및 NR^E4로부터 선택되고;

R^E2, R^E3 및 R^E4는 H 및 C₁-C₆알킬로부터 독립적으로 선택되고;

X^H1-X^H2는 -CR^H2R^H3-, -CR^H2R^H3-CR^H2R^H3-, -C(0)CR^H2R^H3-, -C(0)CR^H2R^H3-, -CR^H2R^H3C(0)-, -NR^H4C(0)-, C(0)NR^H4-, CR^H2R^H3S(0)₂ 및 -CR^H2=CR^H2-로부터 선택되고;

R^H2, R^H3 및 R^H4는 각각 H, C₁-C₆알킬 및 P¹⁸로부터 독립적으로 선택되고;

X^H3는 N 및 CN으로부터 선택되고;

X는 공유 결합, O 및 NH로부터 선택되고;

Y는 공유 결합, O, C(O), S 및 NH로부터 선택되고;

L은 공유 결합 C₁-C₆알킬렌, C₁-C₆알케닐렌, 아릴렌, 헤테로아릴렌, C₁-C₆알킬렌옥시 및 각각 할로, OH, C₁-C₄알킬, -OP(0)(OH)₂ 및 -P(0)(OH)₂로부터 독립저으로 선택된 1 내지 4개의 치환기로 선택 가능하게 치환된 -((CH₂)_pO)_q(CH₂)_p-로부터 선택되고;

m은 0 또는 1로부터 선택되고;

각각의 p는 1, 2, 3, 4, 5 및 6으로부터 선택되고;

q는 1, 2, 3 및 4로부터 선택되고;

s는 0 및 1로부터 선택된다.

화학식 (G) - TLR8 작용제

TLR 작용제는 화학식 (G)에 따른 화합물이 될 수 있으며:

P¹¹은 H, C₁-C₆알킬, C₁-C₆ 알콕시, NR^VR^W 및 -Y-L-X-P(0)(OR^x)(OR^Y)로부터 선택되고;

P¹²는 H, C₁-C₆알킬, -C(0)NR^VR^W에 의해 선택적으로 치환되는 아릴, 및 -Y-L-X- P(0)(OR^x)(OR^Y)로부터 선택되고;

P¹¹, P¹², P¹³, P¹⁴ 또는 P¹⁵ 중 적어도 하나는 -Y-L-X-P(0)(OR^x)(OR^Y)라는 조건으로 P¹³, P¹⁴ 및 P¹⁵는 H, C₁-C₆알킬, C₁-C₆ 알콕시 및 -Y-L-X- P(0)(OR^x)(OR^Y)로부터 독립적으로 선택되고;

R^V 및 R^W는 H, C₁-C₆알킬로부터 독립적으로 선택되거나 그것들이 부착되는 질소 원자와 함께 4 내지 7개의 기억 이종 환형 고리를 형성하고;

X^G는 C, CH 및 N으로부터 선택되고;

는 선택적 이중 결합을 나타내며,

가 이중 결합이면 X^G는 C이고;

R^G는 H 및 C₁-C₆알킬로부터 선택되고;

X는 공유 결합, O 및 NH로부터 선택되고;

Y는 공유 결합, O, C(O), S 및 NH로부터 선택되고;

L은 공유 결합 C₁-C₆알킬렌, C₁-C₆알케닐렌, 아릴렌, 헤테로아릴렌, C₁-C₆알킬렌옥시 및 각각 할로, OH, C₁-C₄알킬, -OP(0)(OH)₂ 및 -P(0)(OH)₂로부터 독립적으로 선택된 1 내지 4개의 치환기로 선택적으로 치환되는 -((CH₂)_pO)_q(CH₂)_p-로부터 선택되고;

각각의 p는 1, 2, 3, 4, 5 및 6으로부터 독립적으로 선택되고

q는 1, 2, 3 및 4로부터 선택된다.

화학식 (I) 및 ( II ) - TLR7 작용제 [7]

TLR 작용제는 화학식 (I) 또는 화학식 (II)에 따른 화합물이 될 수 있으며:

Z는 -NH₂ 또는 -OH이고;

X¹은 알킬렌치환된 알킬렌, 알케닐렌치환된 알케닐렌, 알키닐렌, 치환된 알키닐렌, 카르보시클릴렌, 치환된 카르보시클릴렌, 헤테로시클릴렌, 또는 치환된 헤테로시클릴렌이고;

L¹은 공유 결합, 아릴렌, 치환된 아릴렌, 헤테로시클릴렌, 치환된 헤테로시클릴렌, 카르보시클릴렌, 치환된 카르보시클릴렌, -S-, -S(O)-, S(0)₂, -N 5-, 또는 -O-이고;

X²는 공유 결합, 알킬렌, 또는 치환된 알킬렌이고;

L²는 NR⁵-, ―N(R⁵)C(0)―, -0-, -S-, -S(O)-, S(0)₂, 또는 공유 결합이고;

R³은 H, 알킬, 치환된 알킬, 헤테로알킬, 치환된 헤테로알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 아릴, 치환된 아릴, 아릴알킬, 치환된 아릴알킬, 헤테로시클릴, 치환된 헤테로시클릴, 헤테로시클릴알킬, 또는 치환된 헤테로시클릴알킬이고;

Y¹ 및 Y²는 각각 독립적으로 공유 결합, -O- 또는 -NR⁵-이거나; -Y¹―R¹ 및 -Y²-R²는 각각 독립적으로 ―0-N=C(R⁶R⁷)이고;

R¹ 및 R²는 각각 독립적으로 H, 알킬, 치환된 알킬, 카르보시클릴, 치환된 카르보시클릴, 헤테로시클릴, 치환된 헤테로시클릴, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴알킬, 치환된 아릴알킬, 헤테로시클릴알킬, 치환된 헤테로시클릴알킬, -알킬렌-C(0)-0-R⁵,―(치환된 알킬렌)-C(0)-0-R⁵, -알킬렌-O-C(0)-R⁵, -(치환된 알킬렌)-0-C(0)-R⁵, -알킬렌-0-C(0)-0-R⁵, 또는 -(치환된 알킬렌)-0-C(0)-0-R⁵이고;

R⁴는 H, 할로겐, -OH, -O-알킬, -0-알킬렌-0-C(0)-0-R⁵, -0-C(0)-0-R⁵, -SH, 또는 -NH(R⁵)이고;

각각 R⁵, R⁶, 및 R⁷은 독립적으로 H, 알킬, 치환된 알킬, 카르보시클릴, 치환된 카르보시클릴, 헤테로시클릴, 치환된 헤테로시클릴, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 아릴알킬, 치환된 아릴알킬, 헤테로시클릴알킬, 또는 치환된 헤테로시클릴알킬이다.

화학식 (J) - TLR2 작용제 [34]

TLR 작용제는 화학식 (J)에 따른 화합물이 될 수 있으며:

R¹은 H, -C(0)-C⁷-C¹⁸알킬 또는 -C(O)-C₁-C₆알킬이고;

R²는 C⁷-C¹⁸알킬이고;

R³는 C⁷-C¹⁸알킬이고;

L¹은 -CH₂OC(0)-, -CH₂O-, -CH₂NR⁷C(0)- 또는 -CH₂OC(0)NR⁷-이고;

L²는 -OC(O)-, -0-, -NR⁷C(0)- 또는 -OC(0)NR⁷-이고;

R⁵는 -N(R⁷)₂, -OR⁷, -P(0)(OR⁷)₂, -C(0)OR⁷, -NR⁷C(0)L₃R⁸, -NR⁷C(0)L₄R⁸, -OL₃R⁶, -C(0)NR⁷L₃R⁸, -C(0)NR⁷L₄R⁸, -S(0)₂OR⁷, -OS(0)₂OR⁷, C₁-C₆알킬, C₆아릴, C₁₀아릴, C₁₄아릴, O, S 및 N으로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 5 내지 14개의 고리 기억 헤테로아릴, C₃-C₈시클로알킬 또는 O, S 및 N으로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 5 내지 6개의 고리 기억 헤테로시클로알킬이며, R⁵의 아릴, 헤테로아릴, 시클로알킬 및 헤테로시클로알킬은 각각 치환되지 않거나 R⁵의 아릴, 헤테로아릴, 시클로알킬 및 헤테로시클로알킬은 각각 -OR⁹, -OL₃R⁶, -OL₄R⁶, -OR⁷, 및 -C(0)OR⁷로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 치환되고;

L³는 C₁-C₁₀알킬렌이며, L³의 C₁-C₁₀알킬렌은 치환되지 않거나, L³의 C₁-C₁₀알킬렌은 1 내지 4개의 R⁶ 기로 치환되거나, L³의 C₁-C₁₀알킬렌은, 그것들이 부착된 탄소 원자와 함께, C₃-C₈시클로알킬을 형성하는 같은 탄소 원자 상의 2개의 C₁-C₆알킬 기로 치환되고;

L⁴는 -((CR⁷R⁷)_pO)_q(CR¹⁰R¹⁰)_p- 또는 -(CR¹¹R¹¹)((CR⁷R⁷)_pO)_q(CR¹⁰R¹⁰)p-이며, 각각의 R¹¹은, 그것들이 부착되는 탄소 원자와 함께, C₃-C₈시클로알킬을 형성하는 C₁-C₆알킬 기이고;

각각의 R⁶은 독립적으로 할로, C₁-C₆알킬, 1-2개의 히드록실 기로 치환된 C₁-C₆알킬, -OR⁷, -N(R⁷)₂, -C(0)OH, -C(0)N(R⁷)₂, -P(0)(OR⁷)₂, C⁶아릴, C¹⁰아릴 및 C¹⁴아릴이고;

각각의 R⁷은 H 및 C₁-C₆알킬로부터 독립적으로 선택되고;

R⁸은 -SR⁷, -C(0)OH, -P(0)(OR⁷)₂, 및 O 및 N으로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 5 내지 6개의 고리 기억 헤테로시클로알킬로부터 선택되고;

R⁹는 페닐이고;

각각의 R¹⁰은 H 및 할로로부터 독립적으로 선택되고;

각각의 p는 1, 2, 3, 4, 5 및 6으로부터 독립적으로 선택되고,

q는 1, 2, 3 또는 4이다.

바람직하게는 R⁵는 P(0)(OR⁷)₂, -NR⁷C(0)L₃-P(0)(OR⁷)₂, -NR⁷C(0)L₄-P(0)(OR⁷)₂, -OL₃-P(0)(OR⁷)₂, -C(0)NR⁷L₃-P(0)(OR⁷)₂, 또는 -C(0)NR⁷L₄-P(0)(OR⁷)₂이다.

(J)의 일부 구체예에서, R¹은 H이다. (J)의 다른 구체예에서, R¹은 -C(0)-C₁₅알킬이다;

(J)의 일부 구체예에서, (i) L¹은 -CH₂OC(0)-이고 L²는 -OC(O)-, -0-, -NR⁷C(0)- 또는 -OC(0)NR⁷-이거나; (ii) L¹은 -CH₂0-이고 L²는 -OC(O)-, -0-, -NR⁷C(0)- 또는 -OC(0)NR⁷-이거나; (iii) L¹은 -CH₂NR⁷C(0)-이고 L²는 -OC(O)-, -0-, -NR⁷C(0)- 또는 -OC(0)NR⁷-이거나; (iv) L¹은 -CH₂OC(0)NR⁷-이고 L²는 -OC(O)-, -0-, NR⁷C(0)- 또는 -OC(0)NR⁷-이다.

(J)의 일부 구체예에서, (i) L¹은 -CH₂OC(0)-이고 L²는 -OC(O)-이거나; (ii) L¹은 -CH₂0-이고 L²는 -0-이거나; (iii) L¹은 -CH₂0-이고 L²는 -NHC(O)-이거나; (iv) L¹은 -CH₂OC(0)NH-이고 L²는 -OC(0) H-이다.

(J)의 일부 구체예에서, (i) R²는 -Cn알킬이고 R³은 -Cn알킬이거나; (ii) R²는 -C₁₆알킬이고 R³은 -C₁₆알킬이거나; (iii) R²는 -C₁₆알킬이고 R³은 -Cn알킬이거나; (iv) R²는 -Cn알킬이고 R³은 -Cn알킬이거나; (v) R²는 -C₇알킬이고 R³은 -C₇알킬이거나; (vi) R²는 -C₉알킬이고 R³은 -C₉알킬이거나; (vii) R²는 -C₈알킬이고 R³은 -C₈알킬이거나; (viii) R²는 -C₁₃알킬이고 R³은 -C₁₃알킬이거나; (ix) R²는 -Cn알킬이고 R³은 -Cn알킬이거나; (x) R²는 -Cn알킬이고 R³은 -Cn알킬이거나; (xi) R²는 -C₁₀알킬이고 R³은 -C₁₀알킬이거나; (xii) R²는 --C₁₅알킬이고 R³은 -C₁₅알킬이다.

(J)의 일부 구체예에서, R²는 -Cn알킬이고 R³은 -Cn알킬이다.

(J)의 일부 구체예에서, L³은 C₁-C₁₀알킬렌이며, L³의 C₁-C₁₀알킬렌은 치환되지 않거나 1 내지 4개의 R⁶ 기로 치환된다.

(J)의 일부 구체예에서, L⁴는 -((CR⁷R⁷)_pO)_q(CR¹⁰R¹⁰)_p-이고; 각각의 R¹⁰은 H 및 F로부터 독립적으로 선택되고; 각각의 p는 2, 3, 및 4로부터 독립적으로 선택된다.

(J)의 일부 구체예에서, 각각의 R⁶은 메틸, 에틸, i-프로필, i-부틸, -CH₂OH, -OH, -F, -NH₂, -C(0)OH, -C(0)NH₂, -P(0)(OH)₂ 및 페닐로부터 독립적으로 선택된다.

(J)의 일부 구체예에서, 각각의 R⁷은 H, 메틸 및 에틸로부터 독립적으로 선택된다.

화학식 (K) [35]

TLR 작용제는 화학식 (K)에 따른 화합물이 될 수 있으며:

R¹은 H, C₁-C₆알킬, -C(R⁵)₂OH, -L¹R⁵, -L¹R⁶, -L²R⁵, -L²R⁶, -OL²R⁵, 또는 -OL²R⁶이고;

L¹은 -C(O)- 또는 -O-이고;

L²는 C₁-C₆알킬렌, C₂-C₆알케닐렌, 아릴렌, 헤테로아릴렌 또는 -((CR⁴R⁴)_pO)_q(CH₂)_p-이며, L²의 C₁-C₆알킬렌 및 C₂-C₆알케닐렌은 1 내지 4개의 플루오르 기로 선택적으로 치환되고;

각각의 L³는 C₁-C₆알킬렌 및 -((CR⁴R⁴)_pO)_q(CH₂)_p-로부터 독립적으로 선택되며, L³의 C₁-C₆알킬렌은 1 내지 4개의 플루오르 기로 선택적으로 치환되고;

L⁴는 아릴렌 또는 헤테로아릴렌이고;

R²는 H 또는 C₁-C₆알킬이고;

R³는 C₁-C₄알킬, -L³R⁵, -L¹R⁵, -L³R⁷, -L³L⁴L³R⁷, -L³L⁴R⁵, -L³L⁴L³R⁵, - OL³R⁵, -OL³R⁷, -OL³L⁴R⁷, -OL³L⁴L³R⁷, -OR⁸, -OL³L⁴R⁵, -OL³L⁴L³R⁵ 및 -C(R⁵)₂OH로부터 선택되고;

각각의 R⁴는 H 및 플루오르로부터 독립적으로 선택되고;

R⁵는 -P(0)(OR⁹)₂이고,

R⁶은 -CF₂P(0)(OR⁹)₂ 또는 -C(0)OR¹⁰이고;

R⁷은 -CF₂P(0)(OR⁹)₂ 또는 -C(0)OR¹⁰이고;

R⁸은 H 또는 C₁-C₄알킬이고;

각각의 R⁹는 H 및 C₁-C₆알킬로부터 독립적으로 선택되고;

R¹⁰은 H 또는 C₁-C₄알킬이고;

각각의 p는 1, 2, 3, 4, 5 및 6으로부터 독립적으로 선택되고,

q는 1, 2, 3 또는 4이다.

화학식 (K)의 화합물은 바람직하게 화학식 (K')의 것이며:

P¹ 및 P² 중 적어도 하나는 -Y-L-X-P(0)(OR^x)(OR^Y)라는 조건으로;

P¹은 H, COOH로 선택적으로 치환된 C₁-C₆알킬 및 P(0)(OR^x)(OR^Y)로부터 선택되고;

P²는 H, C₁-C₆알킬, C₁-C₆알콕시 및 -Y-L-X-P(0)(OR^x)(OR^Y)로부터 선택되고;

R^B는 H 및 C₁-C₆알킬로부터 선택되고;

R^X 및 R^Y는 H 및 C₁-C₆알킬로부터 독립적으로 선택되고;

X는 공유 결합, O 및 NH로부터 선택되고;

Y는 공유 결합, O, C(O), S 및 NH로부터 선택되고;

L은 공유 결합 C₁-C₆알킬렌, C₁-C₆알케닐렌, 아릴렌, 헤테로아릴렌, C₁-C₆알킬렌옥시 및 각각 할로, OH, C₁-C₄알킬, -OP(0)(OH)₂ 및 -P(0)(OH)₂로부터 독립적으로 선택된 1 내지 4개의 치환기로 선택적으로 치환된 -((CH2)pO)q(CH2)p-로부터 선택되고;

각각의 p는 1, 2, 3, 4, 5 및 6으로부터 독립적으로 선택되고;

q는 1, 2, 3 및 4로부터 선택된다.

화학식 (K')의 일부 구체예에서, P¹은 COOH로 선택 가능하게 치환된 C₁-C₆알킬 및 -Y-L-X-P(0)(OR^x)(OR^Y)로부터 선택되고; P²는 C₁-C₆알콕시 및 -Y-L-X-P(0)(OR^x)(OR^Y)로부터 선택되고; R^B는 C₁-C₆알킬이고; X는 공유 결합이고; L은 C₁-C₆알킬렌 및 각각 할로, OH, C₁-C₄알킬, -OP(0)(OH)₂ 및 -P(0)(OH)₂로부터 독립적으로 선택된 1 내지 4개의 치환기로 선택적으로 치환되는 -((CH₂)_pO)_q(CH₂)_p-로부터 선택되고; 각각의 p는 1, 2 및 3으로부터 독립적으로 선택되고; q는 1 및 2로부터 선택된다.

화학식 (F)― TLR7 작용제 [8]

TLR 작용제는 화학식 (F)에 따른 화합물이 될 수도 있으며:

X³은 N이고;

X⁴는 N 또는 CR³이고;

X⁵는 -CR⁴=CR⁵-이고;

R¹ 및 R²는 H이고;

R³은 H이고;

R⁴ 및 R⁵는 각각 H, 할로겐, -C(0)OR⁷, -C(0)R⁷, -C(0)N(R¹¹R¹²), -N(R¹¹R¹²), -N(R⁹)₂, -NHN(R⁹)₂, -SR⁷, -(CH₂)_nOR⁷, -(CH₂)_nR⁷, -LR⁸, -LR¹⁰, -OLR⁸, -OLR¹⁰, C₁-C₆알킬, C₁-C₆헤테로알킬, C₁-C₆할로알킬, C₂-C₈알켄, C₂-C₈알킨, C₁-C₆알콕시, C₁-C₆할로알콕시, 아릴, 헤테로아릴, C₃-C₈시클로알킬, 및 C₃-C₈헤테로시클로알킬로부터 독립적으로 선택되며, R⁴ 및 R⁵의 C₁-C₆알킬, C₁-C₆헤테로알킬, C₁-C₆할로알킬, C₂-C₈알켄, C₂-C₈알킨, C₁-C₆알콕시, C₁-C₆할로알콕시, 아릴, 헤테로아릴, C₃-C₈시클로알킬, 및 C₃-C₈헤테로시클로알킬 기는 각각 할로겐, -CN, -N0₂, -R⁷, -OR⁸, - C(0)R⁸, -OC(0)R⁸, -C(0)OR⁸, -N(R⁹)₂, -P(0)(OR⁸)₂, -OP(0)(OR⁸)₂, -P(O)(0R¹⁰)₂,-OP(O)(OR¹⁰)₂, -C(0)N(R⁹)₂, -S(0)₂R⁸, -S(0)R⁸, -S(0)₂N(R⁹)₂, 및 -NR⁹S(0)₂R⁸으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 선택적으로 치환되거나;

R³ 및 R⁴, 또는 R⁴ 및 R⁵, 또는 R⁵ 및 R⁶은, 인접한 고리 원자에 존재할 때, 선택적으로 함께 결합되어 5-6 기억 고리를 형성할 수 있으며, 5-6 기억 고리는 R⁷로 선택적으로 치환되고;

각각의 L은 결합, -(0(CH₂)_m)_t-, C₁-C₆알킬, C₂-C₆알케닐렌 및 C₂-C₆알키닐렌으로부터 독립적으로 선택되며, L의 C₁-C₆알킬, C₂-C₆알케닐렌 및 C₂-C₆알키닐렌은 각각 할로겐, -R⁸, -OR⁸, -N(R⁹)₂, -P(0)(OR⁸)₂, -OP(0)(OR⁸)₂, -P(O)(OR¹⁰)₂, 및 -OP(O)(OR¹⁰)₂으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 4개의 치환기로 선택적으로 치환되고;

R⁷은 H, C₁-C₆알킬, 아릴, 헤테로아릴, C₃-C₈시클로알킬, C₁-C₆헤테로알킬, C₁-C₆할로알킬, C₂-C₈알켄, C₂-C₈알킨, C₁-C₆알콕시, C₁-C₆할로알콕시, 및 C₃-C₈헤테로시클로알킬로부터 선택되며, R⁷의 C₁-C₆알킬, 아릴, 헤테로아릴, C₃-C₈시클로알킬, C₁-C₆헤테로알킬, C₁-C₆할로알킬, C₂-C₈알켄, C₂-C₈알킨, C₁-C₆알콕시, C₁-C₆할로알콕시, 및 C₃-C₈헤테로시클로알킬 기는 각각 1 내지 3개의 R¹³ 기로 선택적으로 치환되고, 각각의 R¹³은 할로겐, -CN, -LR⁹, -LOR⁹, -OLR⁹, -LR¹⁰, -LOR¹⁰, -OLR¹⁰, -LR⁸, -LOR⁸, -OLR⁸, -LSR⁸, -LSR¹⁰, -LC(0)R⁸, -OLC(0)R⁸, -LC(0)OR⁸, -LC(0)R¹⁰, -LOC(0)OR⁸, -LC(0)NR⁹R¹¹, -LC(0)NR⁹R⁸, -LN(R⁹)₂, -LNR⁹R⁸, -LNR⁹R¹⁰, -LC(0)N(R⁹)₂, -LS(0)₂R⁸, -LS(0)R⁸, -LC(0)NR⁸OH, -LNR⁹C(0)R⁸, - LNR⁹C(0)OR⁸, -LS(0)₂N(R⁹)₂, -OLS(0)₂N(R⁹)₂, -LNR⁹S(0)₂R⁸, -LC(0)NR⁹LN(R⁹)₂, -LP(0)(OR⁸)₂, -LOP(0)(OR⁸)₂, -LP(O)(OR¹⁰)₂ 및 -OLP(O)(OR¹⁰)₂로부터 독립적으로 선택되고;

각각의 R⁸은 H, -CH(R10)2, Ci-Cg알킬, C₂-C₈알켄, C2-Cg알킨, C₁-C₆할로알킬, C₁-C₆알콕시, C₁-C₆C₁-C₆헤테로알킬, C₃-C₈시클로알킬, C2-Cg헤테로시클로알킬, C₁-C₆히드록시알킬 및 C₁-C₆할로알콕시로부터 독립적으로 선택되며, R⁸의 C₁-C₈알킬, C₂-C₈알켄, C₂-C₈알킨, C₁-C₆헤테로알킬, C₁-C₆할로알킬, C₁-C₆알콕시, C₃-C₈시클로알킬, C₂-C₈헤테로시클로알킬, C₁-C₆히드록시알킬 및 C₁-C₆할로알콕시 기는 각각 -CN, R¹¹, -OR¹¹, -SR¹¹, -C(0)R¹¹, -OC(0)R¹¹, -C(0)N(R⁹)₂, -C(0)OR¹¹, -NR⁹C(0)R¹¹, -NR⁹R¹⁰, -NR¹¹R¹², -N(R⁹)₂, -OR⁹, -OR¹⁰, -C(0)NR¹¹R¹², -C(0)NR¹¹OH, -S(0)₂R¹¹, -S(0)R¹¹, -S(0)₂NR¹¹R¹², - NR¹¹S(0)₂R¹¹, -P(0)(OR¹¹)₂, 및 -OP(0)(OR¹¹)₂로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 선택적으로 치환되고;

각각의 R⁹는 H, -C(0)R⁸, -C(0)OR⁸, -C(0)R¹⁰, -C(0)OR¹⁰, -S(0)₂R¹⁰, -C₁-C₆ 알킬, C₁-C₆ 헤테로알킬 및 C₃-C₆ 시클로알킬로부터 독립적으로 선택되거나, 각각의 R⁹는 독립적으로 N과 함께 그것들이 부착되어 C₃-C₈헤테로시클로알킬을 형성하는 C₁-C₆알킬이며, C₃-C₈헤테로시클로알킬 고리는 선택적으로 N, O 및 S로부터 선택된 추가적인 헤테로원자를 함유하고, R⁹의 C₁-C₆ 알킬, C₁-C₆ 헤테로알킬, C₃-C₆ 시클로알킬, 또는 C₃-C₈헤테로시클로알킬 기는 각각 -CN, R¹¹, -OR¹¹, -SR¹¹, -C(0)R¹¹, OC(0)R¹¹, C(O)0R¹¹, -NR¹¹R¹², -C(0)NR¹¹R¹², -C(0)NR¹¹OH, -S(0)₂R¹¹, -S(0)R¹¹, -S(0)₂NR¹¹R¹², NR¹¹S(0)₂R¹¹, -P(0)(OR¹¹)₂ 및 -OP(0)(OR¹¹)₂로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 선택적으로 치환되고;

각각의 R¹⁰은 아릴, C₃-C₈시클로알킬, C₃-C₈헤테로시클로알킬 및 헤테로아릴로부터 독립적으로 선택되며, 아릴, C₃-C₈시클로알킬, C₃-C₈헤테로시클로알킬 및 헤테로아릴 기는 할로겐, -R⁸, -OR⁸, -LR⁹, -LOR⁹, -N(R⁹)₂, -NR⁹C(0)R⁸, -NR⁹C0₂R⁸. -C0₂R⁸, -C(0)R⁸ 및 -C(0)N(R⁹)₂로부터 선택된 1 내지 3개의 치환기로 선택적으로 치환되고;

R¹¹ 및 R¹²는 H, C₁-C₆알킬, C₁-C₆헤테로알킬, C₁-C₆할로알킬, 아릴, 헤테로아릴, C₃-C₈시클로알킬, 및 C₃-C₈헤테로시클로알킬로부터 독립적으로 선택되며, R¹¹ 및 R¹²의 C₁-C₆알킬, C₁-C₆헤테로알킬, C₁-C₆할로알킬, 아릴, 헤테로아릴, C₃-C₈시클로알킬, 및 C₃-C₈헤테로시클로알킬 기는 각각 할로겐, -CN, R⁸, -OR⁸, C(0)R⁸, OC(0)R⁸, -C(0)OR⁸, -N(R⁹)₂, -NR⁸C(0)R⁸, -NR⁸C(0)OR⁸, -C(0)N(R⁹)₂, C₃-C₈헤테로시클로알킬, -S(0)₂R⁸, -S(0)₂N(R⁹)₂, -NR⁹S(0)₂R⁸, C₁-C₆할로알킬 및 C₁-C₆할로알콕시로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 선택적으로 치환되거나;

R¹¹ 및 R¹²는 각각 독립적으로 C₁-C₆알킬이고 그것들이 부착된 N 원자와 함께 N, O 및 S로부터 선택된 추가적인 헤테로원자를 선택적으로 함유하는 선택적으로 치환된 C₃-C₈헤테로시클로알킬 고리를 형성하고;

고리 A는 아릴 또는 헤테로아릴이며, 고리 A의 아릴 및 헤테로아릴 기는 1 내지 3개의 RA 기로 선택적으로 치환되며, 각각의 RA는 -R⁸, -R⁷, -OR⁷, -OR⁸, -R¹⁰, -OR¹⁰, -SR⁸, -N0₂, -CN, -N(R⁹)₂, -NR⁹C(0)R⁸, -NR⁹C(S)R⁸, -NR⁹C(0)N(R⁹)₂, -NR⁹C(S)N(R⁹)₂, -NR⁹C0₂R⁸, -NR⁹NR⁹C(0)R⁸, -NR⁹NR⁹C(0)N(R⁹)₂, -NR⁹NR⁹C0₂R⁸, -C(0)C(0)R⁸, -C(0)CH₂C(0)R⁸, -C0₂R⁸, -(CH₂)_nC0₂R⁸, -C(0)R⁸, -C(S)R⁸, -C(0)N(R⁹)₂, -C(S)N(R⁹)₂, -OC(0)N(R⁹)₂, -OC(0)R⁸, -C(0)N(OR⁸)R⁸, -C(NOR⁸)R⁸, -S(0)₂R⁸, -S(0)₃R⁸, -S0₂N(R⁹)₂, -S(0)R⁸, -NR⁹S0₂N(R⁹)₂, -NR⁹S0₂R⁸, -P(0)(OR⁸)₂, -OP(0)(OR⁸)₂, -P(O)(OR¹⁰)₂, -OP(O)(OR¹⁰)₂, -N(0R⁸)R⁸, -CH=CHC0₂R⁸, -C(=NH)-N(R⁹)₂, 및 -(CH₂)_nNHC(0)R⁸로부터 독립적으로 선택되거나 고리 A에서 두 개의 인접한 RA 치환기는 고리 멤버로서 두 개까지의 헤테로원자를 함유하는 5-6 기억 고리를 형성하고;

n은, 각각의 경우에 독립적으로, 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8이고;

각각의 m은 1, 2, 3, 4, 5 및 6으로부터 독립적으로 선택되고;

t는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8이다.

화학식 (C), (D), (E), (G) 및 (H)

상기 논의된 바와 같이, TLR 작용제는 화학식 (C), (D), (E), (G) 또는 (H)의 것일 수 있다.

화학식 (C), (D), (E) 및 (H)의 '모체' 화합물은 유용한 TLR7 작용제이지만 (참고문헌 6-9 및 36-52를 참고하면 된다) 바람직하게 본원에서는 인-함유 모이어티의 부착에 의해 변형된다.

화학식 (C), (D) 및 (E)의 일부 구체예에서, 화합물은 하기 나타난 화학식 (C'), (D') 및 (E')에 따른 구조를 갖는다:

화학식 (C), (D), (E) 및 (H)의 본 발명의 구체예는 또한 화학식 (C'), (D'), (E') 및 (H')에 적용된다.

화학식 (C), (D), (E), 및 (H)의 일부 구체예에서, X는 O이고; L은 C₁-C₆알킬렌 및 각각 할로, OH, C₁-C₄알킬, -OP(0)(OH)₂ 및 -P(0)(OH)₂로부터 독립적으로 선택된 1 내지 4개의 치환기로 선택적으로 치환된 -((CH2)pO)q(CH2)p-로부터 선택되고; 각각의 p는 1, 2 및 3으로부터 독립적으로 선택되고; q는 1 및 2로부터 선택된다.

화학식 (C)의 다른 구체예에서, P³은 C₁-C₆알킬, CF₃, 및 -((CH₂)_pO)_q(CH₂)_pO_s- 및 -Y-L-X-P(0)(OR^x)(OR^Y)로부터 선택되고; P⁴는 -C₁-C₆알킬아릴 및 -Y-L-X-P(0)(OR^x)(OR^Y)로부터 선택되고; X^C는 CH이고; X는 공유 결합이고; L은 C₁-C₆알킬렌 및 할로, OH, C₁-C₄알킬, -OP(0)(OH)₂ 및 -P(0)(OH)₂로부터 독립적으로 선택되는 1 내지 4개의 치환기로 선택적으로 치환된 -((CH₂)_pO)_q(CH₂)_p-로부터 선택되고; 각각의 p는 1, 2 및 3으로부터 독립적으로 선택되고; q는 1 또는 2이다.

화학식 (C), (D), (E), 및 (H)의 다른 구체예에서, X는 공유 결합이고; L은 C₁-C₆알킬렌 및 각각 할로, OH, C1-C4알킬, -OP(0)(OH)2 및 -P(0)(OH)2로부터 독립적으로 선택된 1 내지 4개의 치환기로 선택적으로 치환된 -((CH₂)_pO)_q(CH₂)_p-로부터 선택되고; 각각의 p는 1, 2 및 3으로부터 독립적으로 선택되고; q는 1 및 2로부터 선택된다.

화학식 (C)의 다른 구체예에서, P³은 C₁-C₆알킬, CF₃, 및 -((CH₂)_pO)_q(CH₂)_pO_s- 및 -Y-L-X-P(0)(OR^x)(OR^Y)로부터 선택되고; P⁴는 -C₁-C₆알킬아릴 및 -Y-L-X-P(0)(OR^x)(OR^Y)로부터 선택되고; X^C는 N이고; X는 공유 결합이고; L은 C₁-C₆알킬렌 및 각각 할로, OH, C₁-C₄알킬, -OP(0)(OH)₂ 및 -P(0)(OH)₂로부터 독립적으로 선택된 1 내지 4개의 치환기로 선택적으로 치환된 -((CH₂)_pO)_q(CH₂)_p-로부터 선택되고; 각각의 p는 1, 2 및 3으로부터 독립적으로 선택되고; q는 1 및 2로부터 선택된다.

화학식 (D)의 다른 구체예에서, P⁵는 C₁-C₆알킬, 및 -Y-L-X-P(0)(OR^x)(OR^Y)로부터 선택된다.

화학식 (D)의 다른 구체예에서, X는 O이고; L은 C₁-C₆알킬렌 및 각가 할로, OH, C₁-C₄알킬, -OP(0)(OH)2 및 -P(0)(OH)₂로부터 독립적으로 선택된 1 내지 4개의 치환기로 선택적으로 치환된 -((CH₂)_pO)_q(CH₂)_p-로부터 선택되고; 각각의 p는 1, 2 및 3으로부터 독립적으로 선택되고; q는 1 및 2로부터 선택된다.

화학식 (D)의 다른 구체예에서, X는 공유 결합이고; L은 C₁-C₆알킬렌 및 각각 할로, OH, C₁-C₄알킬, -OP(0)(OH)₂ 및 -P(0)(OH)₂로부터 독립적으로 선택된 1 내지 4개의 치환기로 선택적으로 치환된-((CH₂)_pO)_q(CH₂)_p-로부터 선택되고; 각각의 p는 1, 2 및 3으로부터 독립적으로 선택되고; q는 1 및 2로부터 선택된다.

화학식 (E)의 다른 구체예에서, X는 O이고; L은 C₁-C₆알킬렌 및 각각 할로, OH, C₁-C₄알킬, -OP(0)(OH)₂ 및 -P(0)(OH)₂로부터 독립적으로 선택된 1 내지 4개의 치환기로 선택적으로 치환된-((CH₂)_pO)_q(CH₂)_p-로부터 선택되고; 각각의 p는 1, 2 및 3으로부터 독립적으로 선택되고; q는 1 및 2로부터 선택된다.

화학식 (E)의 다른 구체예에서, X는 공유 결합이고; L은 C₁-C₆알킬렌 및 각각 할로, OH, C₁-C₄알킬, -OP(0)(OH)₂ 및 -P(0)(OH)₂로부터 독립적으로 선택된 1 내지 4개의 치환기로 선택적으로 치환된-((CH₂)_pO)_q(CH₂)_p-로부터 선택되고; 각각의 p는 1, 2 및 3으로부터 독립적으로 선택되고; q는 1 및 2로부터 선택된다.

화학식 (E)의 다른 구체예에서, X^E는 CH₂이고, P⁸은 -Y-L-X-P(0)(OR^x)(OR^Y)로 선택적으로 치환된 C₁-C₆알콕시이다.

화학식 (E)의 다른 구체예에서, P⁹는 OH 및 C₁-C₆알킬로 선택적으로 치환된 -NHC₁-C₆알킬, 및 -Y-L-X-P(0)(OR^x)(OR^Y)이다.

일부 구체예에서, 화학식 (C)의 화합물은 P⁴가 -Y-L-X-P(0)(OR^x)(OR^Y)인 화합물이 아니다.

일부 구체예에서, 화학식 (C)의 화합물에서, P⁴는 H, C₁-C₆알킬, -C₁-C₆알킬아릴로부터 선택된다.

화학식 (H)의 일부 구체예에서, X^H1-X^H2는 CR^H2R^H3이고, R^H2 및 R^H3는 H이고, X^H3는 N이고, X는 공유 결합이고; L은 C₁-C₆알킬렌 및 각각 할로, OH, C₁-C₄알킬, -OP(0)(OH)₂ 및 -P(0)(OH)₂ 로부터 독립적으로 선택된 1 내지 4개의 치환기로 선택적으로 치환된 -((CH₂)_pO)_q(CH₂)_p-로부터 선택되고; 각각의 p는 1, 2 및 3으로부터 독립적으로 선택되고; q는 1 및 2로부터 선택된다.

화학식 (H)의 일부 구체예에서, X^H1-X^H2는 CR^H2R^H3이고, R^H2 및 R^H3는 H이고, X^H3는 N이고, X는 O이고; L은 C₁-C₆알킬렌 및 각각 할로, OH, C₁-C₄알킬, -OP(0)(OH)₂ 및 -P(0)(OH)₂로부터 독립적으로 선택된 1 내지 4개의 치환기로 선택적으로 치환된 -((CH₂)_pO)_q(CH₂)_p-로부터 선택되고; 각각의 p는 1, 2 및 3으로부터 독립적으로 선택되고; q는 1 및 2로부터 선택된다.

화학식 (G)의 '모체' 화합물은 유용한 TLR8 작용제이지만 (참고문헌 10 & 11을 참고하면 된다) 바람직하게 본원에서는 흡착을 허용하도록 인-함유 모이어티의 부착에 의해 변형된다. 화학식 (G)의 일부 구체예에서, 화합물은 화학식 (G')에 따른 구조를 갖는다;

화학식 (G) 또는 (G')의 일부 구체예에서, X^G는 C이고

는 이중 결합을 나타낸다.

화학식 (G) 또는 (G')의 일부 구체예에서, X는 공유 결합이고; L은 C₁-C₆알킬렌 및 각각 할로, OH, C₁-C₄알킬, -OP(0)(OH)₂ 및 -P(0)(OH)₂로부터 독립적으로 선택된 1 내지 4개의 치환기로 선택적으로 치환된 -((CH₂)_pO)_q(CH₂)_p-로부터 선택되고; 각각의 p는 1, 2 및 3으로부터 독립적으로 선택되고; q는 1 및 2로부터 선택된다.

화학식 (G) 또는 (G')의 일부 구체예에서, X는 O이고; L은 C₁-C₆알킬렌 및 각각 할로, OH, C₁-C₄알킬, -OP(0)(OH)₂ 및 -P(0)(OH)₂로부터 독립적으로 선택된 1 내지 4개의 치환기로 선택적으로 치환된 -((CH₂)_pO)_q(CH₂)_p-로부터 선택되고; 각각의 p는 1, 2 및 3으로부터 독립적으로 선택되고; q는 1 및 2로부터 선택된다.

약학적 조성물 및 제품

본 발명은 다양한 면역원성 조성물을 제공한다. 이들은 이상적으로 사람에게 사용되는 약학적 조성물이다. 약학적 조성물은 보통 TLR 작용제, 불용성 금속 염 및/또는 면역원 이외의 성분을 포함한다, 예를 들어, 그것들은 전형적으로 하나 이상의 약학적 담체(들) 및/또는 부형제(들)을 포함한다. 이러한 성분의 철저한 논의는 참고문헌 53에서 이용 가능하다.

약학적 조성물은 바람직하게는, 특히 투여의 시점에서, 수성 형태이지만, 그거들은 또한 비-수성 액체 형태 또는 건조된 형태로, 예를 들어, 젤라틴 캡슐, 또는 동결건조물, 등으로 제공될 수 있다.

약학적 조성물은 티메로살 또는 2-페녹시에탄올과 같은, 하나 이상의 방부제를 포함할 수도 있다. 수은이 없는 조성물이 바람직하고, 방부제가 없는 백신이 제조될 수 있다.

약학적 조성물은, 예를 들어, 장성을 제어하기 위해 나트륨 염과 같은 생리학적 염을 포함할 수 있다. 나트륨 클로라이드 (NaCl)이 전형적이며, 이는 1 내지 20 mg/ml 예를 들어, 10±2 mg/ml 또는 9 mg/ml로 존재할 수도 있다. 존재할 수도 있는 다른 염은 칼륨 클로라이드, 칼륨 디히드로겐 포스페이트, 이나트륨 포스페이트 데히드레이트, 마그네슘 클로라이드, 칼슘 클로라이드, 등을 포함한다.

약학적 조성물은 200 mOsm/kg 내지 400 mOsm/kg, 예를 들어, 240-360 mOsm/kg, 또는 290-310 mOsm/kg의 삼투압을 가질 수 있다.

약학적 조성물은 담수 (예를 들어, 주사용수) 중의 화합물 (불용성 금속 염이 있거나 없음)을 포함할 수도 있지만 보통은 하나 이상의 완충액을 포함할 것이다. 전형적인 완충액은 포스페이트 완충액 (열다섯 번째 양태에서 제외); 트리스 완충액; 보레이트 완충액; 숙시네이트 완충액; 히스티딘 완충액 (특히 알루미늄 히드록시드 보조제와 함께); 또는 시트레이트 완충액을 포함한다. 완충염은 전형적으로 5-20mM 범위로 포함될 것이다. 포스페이트 완충액이 사용되면 포스페이트 이온의 농도는, 일부 구체예에서, <50mM (상기 참조하면 된다), 예를 들어, <10mM일 것이다.

약학적 조성물은 전형적으로 5.0 내지 9.5, 예를 들어, 6.0 내지 8.0의 pH를 갖는다. 약학적 조성물은 바람직하게 멸균 상태이다.

약학적 조성물은 바람직하게 비-발열성이며, 예를 들어, 투여량 당 <1 EU (내독소 단위, 표준 측정값), 및 바람직하게는 투여량 당 <0.1 EU를 함유한다.

약학적 조성물은 바람직하게 글루텐이 없다.

약학적 조성물은 동물 (및, 특히, 사람) 환자에게 투여에 적합하고, 따라서, 사람 및 가축 용도 둘 다를 포함한다. 그것들은 환자의 면역 반응을 증가시키는 방법에 사용될 수도 있으며, 조성물을 환자에게 투여하는 단계를 포함한다. 조성물은 대상체가 병원체에 노출되기 전에 및/또는 대상체가 병원체에 노출된 후에 투여도리 수도 있다.

약학적 조성물은 단위 투여 형태로 제조될 수도 있다. 일부 구체예에서, 단위 투여량은 0.1-1.0ml, 예를 들어, 약 0.5ml의 부피를 가질 수도 있다.

본 발명은 또한 본 발명의 약학적 조성물을 함유하는, 예를 들어, 단위 투여량을 함유하는 전달 장치 (예를 들어, 주사기, 분무기, 스프레이, 흡입기, 피부 패치, 등)를 제공한다. 장치는 조성물을 가축 대상체에 투여하기 위해 사용될 수 있다.

본 발명은 또한 본 발명의 약학적 조성물을 함유하는, 예를 들어, 단위 투여량을 함유하는 멸균 용기 (예를 들어, 바이알)을 제공한다.

본 발명은 또한 본 발명의 약학적 조성물의 단위 투여량을 제공한다.

본 발명은 또한 본 발명의 약학적 조성물을 함유하는 밀봉된 용기를 제공한다. 적합한 용기는, 예를 들어, 바이알을 포함한다.

본 발명은 또한 제1 및 제2 키트 성분을 포함하는 키트를 제공하며, (i) 제1 키트 성분은 불용성 금속 염 및 적어도 하나의 에스.아우레우스 항원을 포함하고; (ii) 제2 키트 성분은 TLR 작용제를 포함한다. 제2 성분은 이상적으로는 불용성 금속 염을 포함하지 않고 및/또는 에스.아우레우스 항원을 포함하지 않는다. 제1 및 제2 성분은 조합되어 대상체에게 투여에 적합한 조성물을 제공할 수 있다.

본 발명은 또한 제1 및 제2 키트 성분을 포함하는 키트를 제공하며, (i) 제1 키트 성분은 불용성 금속 염 및 TLR 작용제를 포함하고; (ii) 제2 키트 성분은 적어도 하나의 에스.아우레우스 항원을 포함한다. 제2 성분은 이상적으로는 불용성 금속 염 및/또는 TLR 작용제를 포함하지 않는다. 일부 구체예에서, 제2 성분은 동결건조된다. 제1 및 제2 성분은 조합되어 대상체에게 투여에 적합한 약학적 조성물을 제공할 수 있다.

본 발명은 또한 제1 및 제2 키트 성분을 포함하는 키트를 제공하며, (i) 제1 키트 성분은 적어도 하나의 에스.아우레우스 항원 및 TLR 작용제를 포함하고; (ii) 제2 키트 성분은 불용성 금속 염을 포함한다. 제2 성분은 이상적으로는 에스.아우레우스 항원 및/또는 TLR 작용제를 포함하지 않는다. 제1 및 제2 성분은 조합되어 대상체에게 투여에 적합한 약학적 조성물을 제공할 수 있다.

일부 구체예에서, 이들 키트는 두 개의 바이알을 포함한다. 다른 구체예에서, 그것들은 하나의 미리 채워진 주사기 및 한 바이알을 포함하며, 주사기의 내용물은 주사 전에 바이알의 내용물과 혼합된다. 주사기/바이알 배치는 바이알의 내용물이 동결건조된 경우 유용하다. 하지만, 보통은 제1 및 제2 키트 성분은 모두 수성 액체 형태일 것이다.

본 발명의 약학적 조성물은 다양한 형태로 제조될 수도 있다. 예를 들어, 조성물은 주사 가능 물질로서, 액체 용액 또는 현탁액으로서, 제조될 수도 있다. 주사 전에 액체 비히클에서 용액, 또는 현탁액에 적합한 고체 형태가 또한 제조될 수 있다 (예를 들어, 동결건조된 조성물 또는 스프레이-냉동 건조된 조성물). 조성물은 국부적 투여용으로, 예를 들어, 연고, 크림 또는 분말로서 제조될 수도 있다. 조성물은 경구 투여용으로, 예를 들어, 타블렛 또는 캡슐, 스프레이, 또는 시럽 (선택적으로 향료가 첨가됨)으로서 제조될 수도 있다. 조성물은, 예를 들어, 흡입기에 의한, 폐 투여용으로 미세한 분말 또는 스프레이를 사용하여 제조될 수도 있다. 조성물은 좌약 또는 질 좌약으로서 제조될 수도 있다. 조성물은 코, 귀 또는 안구 투여용으로, 예를 들어, 스프레이 또는 물약으로서 제조될 수도 있다. 조성물은 조합된 조성물이 환자에게 투여 직전에 재구성되도록 설계된 키트 형태일 수도 있다. 이러한 키트는 액체 형태의 하나 이상의 항원 및 하나 이상의 동결 건조된 항원을 포함할 수도 있다. 근육 내 투여용 주사 가능 물질이 일반적이다.

조성물은 TLR 작용제의 유효량, 즉, 개체에 투여될 때, 일회 투여 또는 시리즈의 일부로서, 동시 투여된 에스.아우레우스 항원에 대한 면역 반응을 향상시키는데 유효한 양을 포함한다. 이 양은 치료되는 개체의 건강 및 육체적 상태, 나이, 치료되는 개체의 분류학상 그룹 (예를 들어, 비-사람 영장류, 영장류, 등), 개체의 면역계의 항체를 합성하는 능력, 필요한 보호의 정도, 백신의 제형, 의학적 상황에서 치료하는 의사의 평가, 및 다른 관련 인자에 기초하여 달라질 수 있다. 양은 일상적인 실험을 통해 결정될 수 있는 비교적 넓은 범위에 있다. 1-100μg/투여량의 양, 예를 들어, 투여량 당 5-100μg 또는 투여량 당 10-100μg, 및 이상적으로는 투여량 당 <300μg, 예를 들어, 투여량 당 약 5μg, l0μg, 20μg, 25μg, 50μg 또는 100μg이 사용될 수 있다. 따라서 본 발명의 조성물에서 TLR 작용제의 농도는 2-2000μg/ml, 예를 들어, 10-200μg/ml, 또는 약 10, 20, 40, 50, 100 또는 200μg/ml, 및 이상적으로는 <600μg/ml일 수도 있다.

치료 방법, 및 면역원성 조성물의 투여

본 발명은 본 발명의 조성물을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 대상체의 면역 반응을 증가시키는 방법을 제공한다.

본 발명은 또한 대상체의 면역 반응을 증가시키는 방법에 사용되는, 본 발명의 조성물을 제공한다.

본 발명은 또한 대상체의 면역 반응을 증가시키는 의약품의 제조에 있어서 TLR 작용제, 불용성 금속 염 및 에스.아우레우스 항원(들)의 사용법을 제공한다.

본 발명은 또한 대상체의 면역 반응을 증가시키는 의약품 (예를 들어, 백신)의 제조에 있어서 (i) 본원에 정의된 TLR 작용제 및 (ii) 불용성 금속 염 및 (iii) 하나 이상의 에스.아우레우스 항원의 사용법을 제공한다.

본 발명은 사람 또는 비-사람 동물 (특히 포유동물) 대상체의 면역 반응을 증가시키는데 적합하다. 본 발명에 따라 제조된 조성물은 아동 및 성인 모두를 치료하기 위해 사용될 수도 있다.

이들 방법 및 사용법에 의해 자극된 면역 반응은 일반적으로 항체 반응, 바람직하게는 보호적 항체 반응을 포함한다. 면역 반응은 또한 세포 반응을 포함할 수 있다. 면역화 후 항체 및 세포의 면역 반응을 평가하는 방법은 업계에 잘 알려져 있다.

치료는 일회 투여 계획 또는 다회수 투여 계획에 의해 될 수 있다. 다회수 투여는 1차 면역화 계획 및/또는 부스터 (booster) 면역화 계획에 사용될 수도 있다. 일회 이상의 투여량 (전형적으로 두 번의 투여량)의 투여는 면역학적 나이브 (naive) 환자에 있어서 특히 유용하다. 다회수 투여량은 전형적으로 적어도 1주 간격으로 (예를 들어, 약 2주, 약 3주, 약 4주, 약 6주, 약 8주, 약 10주, 약 12주, 등) 투여될 것이다.

화학 기

다른 곳에서 특별히 정의되지 않으면, 본원에서 논의된 화학 기는 본 명세서에 사용될 때 다음 의미를 갖는다:

용어 "알킬"은 다음을 포함하는 포화된 탄화수소 잔기를 포함한다:

- 10개까지의 원자 (C₁-C₁₀), 또는 6개까지의 원자 (C₁-C₆), 또는 4개까지의 원자 (C₁-C₄)의 선형 기. 이러한 알킬 기의 예는 C₁ - 메틸, C₂ - 에틸, C₃ - 프로필 및 C₄- n-부틸을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

- 3 내지 10개의 원자 (C₃-C₁₀), 또는 7개까지의 원자 (C₃-C₇), 또는 4개까지의 원자 (C₃-C₄)의 분지형 기. 이러한 알킬 기의 예는 C₃ - 이소-프로필, C₄ - 세크-부틸, C₄ - 이소-부틸, C₄ - 터트-부틸 및 C₅ - 네오-펜틸을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

용어 "알킬렌"은 알킬기로부터 유래한 2가 탄화수소 라디칼을 나타내고, 상기 정의에 따라 이해되어야 한다.

용어 "알케닐"은 다음을 포함하는 일포화 탄화수소 잔기를 포함한다:

- 2 내지 6개의 원자 (C₂-C₆)의 선형 기. 이러한 알케닐 기의 예는 C₂ - 비닐, C₃ - 1-프로페닐, C₃ - 알릴, C₄ - 2-부테닐을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

- 3 내지 8개의 원자 (C₃-C₈)의 분지형 기. 이러한 알케닐 기의 예는 C₄ - 2-메틸-2-프로페닐 및 C₆ - 2,3-el메틸-2-부테닐을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

용어 알케닐렌은 알케닐 기로부터 유래한 2가 탄화수소 라디칼을 나타내고, 상기 정의에 따라 이해되어야 한다.

용어 "알콕시"는 다음을 포함하는 O-결합된 탄화수소 잔기를 포함한다:

- 1 내지 6개의 원자 (C₁-C₆), 또는 1 내지 4개의 원자 (C₁-C₄)의 선형 기. 이러한 알콕시 기의 예는 C₁ - 메톡시, C₂ - 에톡시, C₃ - n-프로폭시 및 C₄ - n-부톡시를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

- 3 내지 6개의 원자 (C₃-C₆) 또는 3 내지 4개의 원자 (C₃-C₄)의 분지형 기. 이러한 알콕시 기의 예는 C₃ - 이소-프로폭시, 및 C₄ - 세크- 부톡시 및 터트-부톡시를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

할로는 Cl, F, Br 및 I로부터 선택된다. 할로는 바람직하게는 F이다.

용어 "아릴"은 6 또는 10개의 탄소 원자를 함유하는, 단일 또는 융합된 방향족 고리 시스템을 포함하며, 달리 진술되지 않으면, 각각 발생된 아릴은 상기 정의된 바와 같이, (C₁-C₆)알킬, (C₁-C₆)알콕시, OH, 할로, CN, COOR¹⁴, CF₃ 및 NR¹⁴R¹⁵로부터 독립적으로 선택된 5개까지의 치환기로 선택적으로 치환된다. 전형적으로, 아릴은 1, 2 또는 3개의 치환기로 선택적으로 치환된다. 선택적인 치환기는 상기 진술된 것들로부터 선택된다. 적합한 아릴 기의 예는 페닐 및 나프틸을 포함한다 (각각은 상기 진술된 바와 같이 선택적으로 치환됨). 아릴렌은 아릴 기로부터 유래한 2가 라디칼을 나타내며, 상기 정의에 따라서 이해되어야 한다.

용어 "헤테로아릴"은 1 또는 2개의 N 원자 및, 선택적으로는, NR¹⁴ 원자, 또는 하나의 NR¹⁴ 원자 및 S 또는 O 원자, 또는 하나의 S 원자, 또는 하나의 O 원자를 함유하는, 5, 6, 9 또는 10개의 원자 일- 또는 이-원형 방향족 고리를 포함하며, 달리 진술되지 않으면, 상기 헤테로아릴은 하기 정의된 바와 같이, (C₁-C₆)알킬, (C₁-C₆)알콕시, OH, 할로, CN, COOR¹⁴, CF₃ 및 NR¹⁴R¹⁵로부터 독립적으로 선택된 1, 2 또는 3개의 치환기로 선택적으로 치환될 수도 있다. 적합한 헤테로아릴 기의 예는 티에닐, 푸라닐, 피롤릴, 피라졸릴, 이미다졸릴, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 티아졸릴, 이소티아졸릴, 트리아졸릴, 옥사디아졸릴, 티아디아졸릴, 테트라졸릴, 피리디닐, 피리다지닐, 피리미디닐, 피라지닐, 인돌릴, 벤지미다졸릴, 벤조트리아졸릴, 퀴놀리닐 및 이소퀴놀리닐을 포함한다 (상기 진술된 바와 같이 선택적으로 치환됨). 헤테로아릴렌은 헤테로아릴로부터 유래한 2가 라디칼을 나타내고, 상기 정의에 따라 이해되어야 한다.

용어 "헤테로시클릴"은 C-결합된 또는 N-결합된 3 내지 10개의 원자 비-방향족 일- 또는 이-원형 고리이며, 상기 헤테로시클로알킬 고리는, 가능하면, N, NR¹⁴, S(0)_q 및 O로부터 독립적으로 선택된 1, 2 또는 3개의 헤테로원자를 함유하고; 상기 헤테로시클로알킬 고리는, 가능하면, 선택적으로 1 또는 2개의 이중 결합을 함유하고, (C₁-C₆)알킬, (C₁-C₆)알콕시, OH, CN, CF₃, 할로, COOR¹⁴, NR¹⁴R¹⁵ 및 아릴로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 치환기와 탄소에서 선택적으로 치환된다.

상기 정의에서 R¹⁴ 및 R¹⁵는 H 및 (C₁-C₆)알킬로부터 독립적으로 선택된다.

구조식이, 예를 들어, 화학식 (C)의 경우에 그룹 P³에 대해서, 명시되지 않은, 또는 '플로팅 (floating)' 결합에 의해 분자의 코어에 부착된 치환기로 정의될 때, 이 정의는 명시되지 않은 치환기가 플로팅 결합이 위치하는 고리 상의 원자 중 하나에 부착되는 한편, 상기 원자에 대하여 허용 가능한 원자가에 부합하는 경우를 포함한다.

토토머 (tautomeric) 형태 (즉, 케톤 또는 에놀 형태), 예를 들어, 화학식 (C) 또는 (H)의 화합물로 존재할 수도 있는 본 발명의 화합물의 경우에서, 특정 화합물에 대한 언급은 이러한 모든 토토머 형태를 선택적으로 포함한다.

일반

용어 "포함하는"은 "포함하는" 뿐만 아니라 "로 구성되는"을 포함하며, 예를 들어, X를 "포함하는" 조성물은 X 단독으로 구성될 수도 있거나 추가적인 어떤 것, 예를 들어, X + Y를 포함할 수도 있다.

단어 "실질적으로"는

"완벽하게"를 제외하지 않으며, 예를 들어, Y에 "실질적으로 없는" 조성물은 Y에서 완벽하게 없을 수도 있다. 필요한 경우, 단어 "실질적으로"는 본 발명의 정의로부터 제외되지 않을 수도 있다.

수치 x에 관한 용어 "약"은 선택적이고, 예를 들어, x ± 10%를 의미한다.

명확하게 진술되지 않으면, 두 가지 이상의 성분을 혼합하는 단계를 포함하는 공정은 어떤 특정한 혼합 순서를 필요로 하지 않는다. 따라서 성분들은 어떤 순서로도 혼합될 수 있다. 세 가지 성분이 있는 경우, 두 가지 성분이 서로 조합될 수 있고, 이후에 상기 조합은 세 번재 성분, 등과 조합될 수도 있다.

동물 (및 특히 소) 재료가 세포의 배양에 사용되는 경우, 그것들은 전염성 해면형 뇌증 (transmissible spongiform encaphalopathies; TSEs), 및 특히 광우병 (bovine spongiform encephalopathy; BSE)에 걸리지 않은 공급원으로부터 얻어져야 한다. 종합하면, 동물-유래 재료의 전체 부재시 세포를 배양하는 것이 바람직하다.

화합물이 조성물의 일부로서 신체에 투여되는 경우 상기 화합물은 대안으로 적합한 프로드러그 (prodrug)에 의해 대체될 수도 있다.

본 발명에 이용된 인-함유 기는 주위 환경의 pH, 예를 들어, 그것들이 용해되는 용매의 pH에 의존하여 양성자화 및 비양성자화된 형태로 존재할 수도 있다. 그러므로, 특정 형태가 예시될 수도 있지만, 달리 언급되지 않으면, 단지 특정 양성자화 또는 비양성자화된 형태를 나타내고, 이를 제한하려는 것은 아니다. 예를 들어, 포스페이트 기의 경우에, 이것은 -OP(0)(OH)₂로서 예시되지만 정의는 산성 조건에 존재할 수도 있는 양성자화된 형태 -[OP(0)(OH₂)(OH)]⁺ 및 -[OP(0)(OH₂)₂]²⁺ 및 염기성 조건에 존재할 수도 있는 비양성자화된 형태 -[OP(0)(OH)(0)]^- 및 [OP(0)(0)₂]^2-를 포함한다.

본원에 개시된 화합물은 약학적으로 허용 가능한 염으로서 존재할 수 있다. 따라서, 화합물은 그것들의 약학적으로 허용 가능한 염, 즉, 생리학적으로 또는 독성학적으로 허용되는 염 (이것은, 적절하면, 약학적으로 허용 가능한 염기 추가 염 및 약학적으로 허용 가능한 산 추가 염을 포함함)의 형태로 사용될 수도 있다.

도 1은, 3번의 근육 내 주사 후, (A) Hla-H35L (B) EsxAB (C) Sta006 (D) Sta011에 대한 IgG 역가를 나타낸다. 각각의 패널에서, 왼쪽에서 오른쪽으로, 네 개의 그룹은 Al-H 보조제 단독; A1-H/K2 단독; 콤보-1 + Al-H; 콤보-1 + A1-H/K2. **는 콤보-1 + Al-H에 대한 통계적으로 유의한 차이 (p<0.05)를 지시한다.
도 2는 (A) 인터페론-γ 및 (B) 면역화된 마우스에서 IL-4/IL-13 반응을 나타낸다. X-축 상의 그룹 A 내지 I는 (A) 식염수; (B) Al-H 단독; (C) A1-H/K2 단독; (D) 보조제가 첨가되지 않은 항원; (E) Al-H로 보조제 첨가된 항원; (F) 1μg K2로 A1-H/K2로 보조제 첨가된 항원; (G) (F)와 같지만 5μg K2; (H) (F)와 같지만 25μg K2; (I) (F)와 같지만 50μg K2를 받았다.
도 3은 농양 모델의 신장에서의 CFU (로그)를 나타낸다.
도 4 내지 7은 Balb/C 마우스에서 항체 역가를 나타낸다. 왼쪽에서 오른쪽으로, 10개의 그룹은 네 개의 음성 대조군 (식염수 및/또는 완충액 단독); 보조제가 첨가되지 않은 콤보-1 항원 (2회 투여 후, 및 3회 투여 후); Al-H 보조제가 들어있는 콤보-1 (2 & 3회 투여); 및 A1-H/K2가 들어있는 콤보-1 (2 & 3회 투여)이다. 도 4는 항-HLA 반응을 나타내고; 도 5는 항-EsxAB 반응을 나타내고; 도 6은 항-Sta006 반응을 나타내고; 도 7은 항-Sta011 반응을 나타낸다. 별표는 만-휘트니 테스트 (Mann-Whitney test)에 의해 통계적 유의성을 나타낸다 ('**', p<0.01).
도 8 내지 12는 다양한 보조제가 들어있는 콤보-1로 면역화 후에 마우스의 % 생존율을 나타낸다.
도 13은 Al-H (13A & 13B0 또는 A1-H/K2 (13C & 13D)로 보조제가 첨가된 콤보-1로 면역화된 마우스의 농양 (13A & 13C) 또는 피부 괴사 (13B & 13D)의 면적 (mm²)을 나타낸다. 각 그룹에서 사각형은 콤보-1에 대한 데이터를 나타내는 반면에, 원은 보조제 단독에 대한 데이터를 나타낸다. *는 보조제 또는 항원+보조제를 받은 마우스 사이에서 통계적으로 유의한 차이를 지시한다. x-축은 균주 USA300으로 감염 후 일을 나타낸다.
도 14는 (A) Newman (B) MW2 또는 (C) LAC로 시도된 마우스의 생존율 (%)을 나타낸다. 각각의 경우에서 한 쌍의 왼쪽 컬럼은 항원이 없는 음성 대조군이고, 오른쪽 컬럼은 (i) 보조제 없음 (ii) Al-H (iii) MF59 또는 (iv) A1-H/K2가 들어있는 콤보-1에 대한 것이다.
도 15는 A1-H/K2가 들어있는 Cys(+) 및 Cys(-) 조제물의 SDS-PAGE 분석을 나타낸다. 레인 1은 분자량 마커를 갖는다. 레인 2-5는 Cys(+) 항원 Hla-H35L, EsxAB, Sta006 및 Sta011이고 (순서대로); 레인 8-11은 Cys(-) 항원이다. 레인 6은 탈착된 Cys(+) 항원이고, 레인 12는 Cys(-)에 대하여 같은 것을 나타낸다. 레인 7 및 13은 TCA-처리된 상층액을 나타낸다.

백신 제조 및 투여

참고문헌 35 및 54는 상기 논의된 바와 같이 화학식 (K)를 갖는 TLR7 작용제를 개시한다. 이들 화합물 중 하나인, 3-(5-아미노-2-(2-메틸-4-(2-(2-(2-포스포노에톡시)에톡시)에톡시)펜에틸)벤조 [f]-[1,7]나프티리딘-8-일)프로피온 산은 이후에 화합물 "K2"로서 언급된다:

상온에서 15분 동안 저으면서, 화합물 K2를 4mg/ml로 물에 첨가하고, 이후 완벽한 가용성을 보장하기 위해 1M NaOH를 첨가한다. 이 재료를 알루미늄 히드록시드 보조제 (Al-H; 2mg/ml)의 현탁액에 첨가하여 원하는 최종 농도를 제공한다. 완벽한 흡착을 보장하기 위해 이 혼합물을 주위 온도에서 2시간 동안 흔들었고, 이후 히스티딘 완충 성분을 첨가한다 (10mM 히스티딘 완충액, pH 6.5).

화합물은 또한 아르기닌 염 모노히드레이트 (57mg/mL 용액을 제공하기 위해 98mg의 화합물을 80/20 메탄올/물 중의 1.7ml의 0.1M 아르기닌과 혼합한 후, 이어서 7ml 에탄올을 첨가하여 염을 침전시킴으로써 얻어짐)로서 사용될 수 있으며, 이 경우에서 NaOH는 Al-H와 혼합하기 전에 가용화가 필요하지 않다는 것을 알 수 있다.

10, 50, 250 또는 500μg/ml의 최종 K2 농도를 제공하는 네 개의 다른 혼합물을 제조한다 (100μl 투약량에서 1, 5, 25 또는 50μg의 K2를 제공하기 위해); Al-H 농도는 항상 2mg/ml이다. 모든 강도에서 화합물 K2 중 >95%는 Al-H에 흡착된다. 흡착된 보조제를 이후 "A1-H/K2"로 언급한다.

참고문헌 1의 "콤보-1" 백신은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 7, 8, 27 및 32를 갖는 네 개의 폴리펩티드 (EsxAB, Sta006, Sta011, 및 Hla-H35L)의 혼합물을 포함한다. 이들 네 개의 폴리펩티드를 A1-H/K2와 순차적으로 혼합하여 각 폴리펩티드의 1μg 또는 10μg의 최종 투여량 (10μg/mL 또는 100μg/mL)을 제공한다. 폴리펩티드를 첨가하는 순서는 거의 영향을 미치지 않는다. 결과의 혼합물에서, K2 화합물 및 네 개의 폴리펩티드는 모두 알루미늄 히드록시드 보조제에 안정하게 흡착되고, 흡착의 정도 (모든 경우에서 >80%)는 본질적으로 Al-H 단독과 A1-H/K2에서 같다. 모든 조성물에 대한 삼투압은 260-285 mOsm/kg였고, pH는 6.6-6.9였다 (10μg 폴리펩티드 혼합물에 대한 pH 및 삼투압이 약간 더 높다). 화합물 K2는 흡착된 폴리펩티드의 존재시 >95% 흡착되어 남아있다.

네 개의 보조제 강도 및 두 개의 항원 강도로, 8개의 다른 조제물를 제조하였다.

암컷 Balb/c 마우스 (그룹 당 16마리)를 0, 14 및 28일에 같은 조제물로 3번 근육 내로 면역화하였다. 각각의 면역화 전에 혈청을 채취하였고, 39일에 다시 항원-특이적 항체 역가의 분석을 위해 채취하였다. 40일에 그룹 당 네 마리의 마우스를 항원-특이적 T-세포 반응의 분석을 위해 희생시켰다 (비장 세포를 네 개의 항원으로, 단독으로 또는 조합으로 자극하였고, 시토킨 생산량을 CD4+ 및 CD8+ T 세포에서 측정하였다; 항원-특이적 T-세포 증식을 Click-iT EdU 검정으로 평가하였다). 각 그룹에서 남은 12마리의 마우스에 100μg 중에 복강 내 투여된 2-3x10⁸ CFU의 Newman 균주 에스.아우레우스를 시도하였다. 이 패혈증 모델의 시도로부터 마우스를 보호하는데 있어서 백신의 효능을 2주 후 (54일) 생존하는 마우스의 퍼센트로서 평가하였다.

결과

도 1은 각각 A1-H/K2와 함께 10μg으로 폴리펩티드 (K2의 25μg)의 3x 투여 후 39일에 개개의 폴리펩티드에 대한 IgG 역가를 나타낸다. 네 개의 폴리펩티드 모두에 대하여 A1-H/K2를 사용하여 얻어진 역가는 Al-H 단독을 사용하여 얻은 역가보다 더 높았다 (**, p<0.05).

10x 미만의 항원이 들어있는 조성물은 비슷한 결과를 제공하지만 항체 역가가 더 낮고 T-cell 반응이 더 약하다. 1, 5, 또는 50μg의 K2를 사용하여 유사한 결과가 나타났다.

리콜(recall)-특이적 T 세포 반응에 관하여, A1-H/K2의 사용은 보조제가 첨가되지 않은 항원 또는 Al-H 단독으로 보조제가 첨가된 항원으로 면역화와 비교하여, TNF-α, IL-2 및 IFN-γ를 생산하는, 더 항원-특이적 CD4+ 세포를 제공한다. 도 2는 인터페론-γ 및 IL-4/IL-13 반응을 나타낸다. IL-4 및 IL- 13을 생산하는 항원-특이적 CD4+ T 세포의 퍼센트는 보조제가 첨가되지 않은 콤보-1에 비해 Al-H를 사용할 때 더 높지만 (하지만 통계적으로 유의하지 않음), A1-H/K2 조합을 사용하는 면역화는 가장 낮은 투여량을 제외한 모든 투여량에서 이 효과를 감소시켰으며, Al-H의 Th2-편광 효과가 TLR7 작용제의 Th1-편광 효과에 의해 상쇄된다는 것을 나타낸다.

근육 내 면역화를 사용하는 Balb-c 마우스의 패혈증 모델에서 콤보-1 (각각의 폴리펩티드 10μg)로 두 번의 통합된 실험의 보호 데이터는 다음과 같으며, 15일 후 동물 생존의 비율 (도 10), 및 중간 생존 길이 (일)를 나타낸다:

따라서 생존율은 Al-H/K2 조합을 사용할 때 Al-H 단독보다 더 양호하다. 모든 경우에 K2 (1-50μg)의 첨가는 생존율을 21%에서 67-87%로 개선하였으며, 통계적으로 유의하다 (p=0.003 이상)

요약하면, A1-H/K2 보조제 조합은 네 개의 항원 모두에 대한 IgG 역가를 증가시키고, 시토킨을 생산하는 CD4 T 세포의 빈도를 증가시키고; Al-H 단독의 Th2 바이아스 (bias)를 균형 맞추고 (더 높은 IFNγ, 더 낮은 IL-4/IL-13), Al-H 단독으로 보조제가 첨가된 것에 비해 생존율을 증가시켰다.

Newman 균주에 의한 치명적인 시도와 함께, 콤보-1 (각 항원의 10μg) 및 K2의 50μg을 사용하는 Balb/C 마우스 (그룹 당 >32마리)의 유사한 실험에서, 생존율은 다음과 같다 (도 8):

A1-H/K2 그룹의 생존율은 모든 다른 그룹보다 통계적으로 우수하였고, p<0.0001이었다.

Newman 균주에 의한 시도와 함께, 콤보-1 (각 항원의 10μg) 및 K2의 50μg으로 근육 내 면역화를 사용하는 CD1 마우스 (그룹 당 12-44)의 패혈증 모델에서, 15일 후 생존율은 다음과 같다 (또한, 왼쪽에서 오른쪽으로, 도 9 - 그룹 A에서 H를 참고하면 된다):

시도 균주로서 USA300 (LAC)을 사용한 결과는 다음과 같다 (도 11):

시도 균주로서 USA400 (MW2)을 사용한 결과는 다음과 같다 (도 12):

종합하면, 그러므로, 세 가지 시도 균주에 대한 생존율은 다음과 같다:

도 3은 같은 여섯 번 처리된 CD1 마우스를 사용하는 농양 모델의 결과를 나타낸다 (A에서 F로). 최고의 결과는 그룹 F에서 보인다.

도 4 내지 7은 Balb/C 마우스에서 콤보-1에서 네 개의 별개의 항원 각각에 대한 항체 역가를 나타낸다. 모든 경우에 K2의 첨가는 Al-H 단독과 비교하여 반응을 개선하였다.

면역 반응의 규모 및 동역학은 Al-H/K2 조합을 사용할 때 개선되었다. "콤보-1"의 네 개의 항원 모두에 대하여 최종 역가는 이 조합에서 Al-H 단독보다 더 높았다. 게다가, Al-H/K2로 2번의 면역화 후 피크 역가에 도달하는 반면에, 다른 테스트된 보조제는 피크에 도달하기 위해 3회 투여가 필요하였다. 이들 결과는 Balb/C 및 CD1 마우스 둘 다에서 나타났다.

개선된 동역학은 또한 패혈증 모델에서 보호를 측정할 때 나타났다. Al-H/K2 보조제가 들어있는 콤보-1을 받은 마우스는 단일 면역화 후 >95% 보호되었다.

A1-H/K2 혼합물은 또한 백신에 의해 유발된 T 세포의 균형을 변화시켰다. Al-H 단독이 혼합된 Th1/Th2 CD4+ T 세포 반응을 유발하는 반면에, K2의 첨가는 반응을 IFN-γ 반응을 포함하는, 혼합된 Th1/Thl7 반응으로 바꿨다. 게다가, 보조제가 첨가되지 않은 백신과 비교하여 Al-H 단독의 사용은 시토킨 반응 및 증식 반응을 증가시키지 않은 반면에, 이들 반응 둘 다는 A1-H/K2의 사용에 의해 증가하였다.

도 13은 피부 감염 모델에서 균주 USA300로 감염 후 농양의 발달을 나타낸다. 마우스를 K2 (50μg)가 있어나 없이 Al-H이 들어있는 콤보-1 혼합물 (각 항원의 10μg)로 근육 내로 면역화하였다. 도 13에 나타난 바와 같이, Al-H (도 13A & 13B) 및 A1-H/K2 (13C & 13D)을 가지고, 콤보-1 (■)는 농양 면적 (13A & 13C) 및 피부 괴사 면적 (13B & 13D)을 대조군 (●)에 비해 크게 감소시켰다. 농양은 Al-H (도 13A)보다 콤보-1 플러스 A1-H/K2 (도 13B)로 면역화된 마우스에서 더 작았다.

도 14는 (i) 보조제 없음 (ii) Al-H (iii) MF59 또는 (iv) Al-H/K2가 들어있는 콤보-1로 제0 일 & 제14 일에 면역화된 CD1 마우스의 생존 데이터를 나타낸다. 이들 마우스에 (A) Newman (B) MW2 또는 (C) LAC 균주로 제24 일에 복강 내로 시도하였다. 각 균주에 대하여 A1-H/K2를 사용할 때 가장 높은 생존율을 보였고 (각 경우에 80% 이상), 각 균주에 대하여 K2의 Al-H로의 첨가는 생존율의 통계적으로 유의한 개선을 제공하였다.

따라서 A1-H/K2의 사용은 Al-H 단독에 비해 콤보-1의 작용을 크게 개선한다.

시스테인 제거

"콤보-1" 백신에서 Sta006, Sta011 및 EsxAB 항원의 아미노산 서열을 그것들의 시스테인 잔기를 제거기 위해 변형시켜, 호모다이머 및 헤테로 다이머의 형성을 방지하고 이로 인해 항원 조제물의 밀도를 개선하였다. 따라서 SEQ ID NO: 7, 8, 및 32를 SEQ ID NO: 44, 45 및 46으로 전환시켰다. 이들 Cys이 없는 폴리펩티드를 HlaH35L (SEQ ID NO: 27)과 조합시켜 "콤보-1"의 "Cys(-)" 버젼을 만들었다. Cys(-) 콤보-1 조제물의 면역원성을 Al-H/K2를 사용하여 CD1 마우스에서 평가하였다. 보조제가 첨가된 Cys(-) 조합은 마우스에서 면역원성이고 양호한 항체 및 T-세포 반응을 유발하였다.

Cys(+) 및 Cys(-) 조합의 A1-H/K2로의 흡착을 비교하였다. 10mM 히스티딘 완충액 (pH 6.5) 중의 2mg/ml Al-H 및 0.5mg/ml K2를 조합하였고, 이후에 항원을 각각 100μg/ml로 추가하였고 상온에서 흡착되도록 15분 동안 두었다. 두 개의 항원 조제물를 4℃에서 하룻밤 동안 저장 후 흡착에 대하여 평가하였고, 또한 비교되는 항원의 탈착을 처리하였다.

SDS-PAGE를 항원 흡착을 평가하기 위해 사용하였다. 도 15는 레인 2-5에서 자유 Cys(+) 항원 및 레인 8-11에서 Cys(-) 항원을 나타낸다. 고분자량 다이머는 Cys(+) 항원과 함께 볼 수 있지만, Cys(-) 항원에서는 없다. 레인 7 및 13은 원심분리 후 TCA-처리된 상층액을 나타내고 가시 밴드의 부재는 단백질이 완벽히 흡착된다는 것을 확인한다. 레인 6 및 12는 탈착 완충액의 처리 후 조제물를 나타내며, 항원이 분해되지 않고 온전할 수 있다는 것을 확인한다.

본 발명이 예시의 방법으로만 설명되었고 본 발명의 범위 및 사상 내에서 변형이 이루어질 수도 있다고 이해될 것이다.

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Staphylococcus aureus <400> 19 Ala Asp Ser Asp Ile Asn Ile Lys Thr Gly Thr Thr Asp Ile Gly Ser 1 5 10 15 Asn Thr Thr Val Lys Thr Gly Asp Leu Val Thr Tyr Asp Lys Glu Asn 20 25 30 Gly Met Leu Lys Lys Val Phe Tyr Ser Phe Ile Asp Asp Lys Asn His 35 40 45 Asn Lys Lys Leu Leu Val Ile Arg Thr Lys Gly Thr Ile Ala Gly Gln 50 55 60 Tyr Arg Val Tyr Ser Glu Glu Gly Ala Asn Lys Ser Gly Leu Ala Trp 65 70 75 80 Pro Ser Ala Phe Lys Val Gln Leu Gln Leu Pro Asp Asn Glu Val Ala 85 90 95 Gln Ile Ser Asp Leu Tyr Pro Arg Asn Ser Ile Asp Thr Lys Glu Tyr 100 105 110 Met Ser Thr Leu Thr Tyr Gly Phe Asn Gly Asn Val Thr Gly Asp Asp 115 120 125 Thr Gly Lys Ile Gly Gly Leu Ile Gly Ala Asn Val Ser Ile Gly His 130 135 140 Thr Leu Lys Tyr Val Gln Pro Asp Phe Lys Thr Ile Leu Glu Ser Pro 145 150 155 160 Thr Asp Lys Lys Val Gly Trp Lys Val Ile Phe Asn Asn Met Val Asn 165 170 175 Gln Asn Trp Gly Pro Tyr Asp Arg Asp Ser Trp Asn Pro Val Tyr Gly 180 185 190 Asn Gln Leu Phe Met Lys Thr Arg Asn Gly Ser Met Lys Ala Ala Asp 195 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Ser Gly Gly Tyr Lys Gly Ile Lys Ala Asp 100 105 110 Gly Gly Lys Val Asp Gln Ala Lys Gln Leu Ala Ala Lys Thr Ala Lys 115 120 125 Asp Ile Glu Ala Ala Gln Lys Gln Thr Gln Gln Leu Ala Glu Tyr Ile 130 135 140 Glu Gly Ser Asp Trp Glu Gly Gln Phe Ala Asn Lys Val Lys Asp Val 145 150 155 160 Leu Leu Ile Met Ala Lys Phe Gln Glu Glu Leu Val Gln Pro Met Ala 165 170 175 Asp His Gln Lys Ala Ile Asp Asn Leu Ser Gln Asn Leu Ala Lys Tyr 180 185 190 Asp Thr Leu Ser Ile Lys Gln Gly Leu Asp Arg Val Asn Pro 195 200 205 <210> 46 <211> 234 <212> PRT <213> Staphylococcus aureus <400> 46 Met Gly Ser Gly Ile Gly Lys Glu Ala Glu Val Lys Lys Ser Phe Glu 1 5 10 15 Lys Thr Leu Ser Met Tyr Pro Ile Lys Asn Leu Glu Asp Leu Tyr Asp 20 25 30 Lys Glu Gly Tyr Arg Asp Asp Gln Phe Asp Lys Asn Asp Lys Gly Thr 35 40 45 Trp Ile Ile Asn Ser Glu Met Val Ile Gln Pro Asn Asn Glu Asp Met 50 55 60 Val Ala Lys Gly Met Val Leu Tyr Met Asn Arg Asn Thr Lys Thr Thr 65 70 75 80 Asn Gly Tyr Tyr Tyr Val Asp Val Thr Lys Asp Glu Asp Glu Gly Lys 85 90 95 Pro His Asp Asn Glu Lys Arg Tyr Pro Val Lys Met Val Asp Asn Lys 100 105 110 Ile Ile Pro Thr Lys Glu Ile Lys Asp Glu Lys Ile Lys Lys Glu Ile 115 120 125 Glu Asn Phe Lys Phe Phe Val Gln Tyr Gly Asp Phe Lys Asn Leu Lys 130 135 140 Asn Tyr Lys Asp Gly Asp Ile Ser Tyr Asn Pro Glu Val Pro Ser Tyr 145 150 155 160 Ser Ala Lys Tyr Gln Leu Thr Asn Asp Asp Tyr Asn Val Lys Gln Leu 165 170 175 Arg Lys Arg Tyr Asp Ile Pro Thr Ser Lys Ala Pro Lys Leu Leu Leu 180 185 190 Lys Gly Ser Gly Asn Leu Lys Gly Ser Ser Val Gly Tyr Lys Asp Ile 195 200 205 Glu Phe Thr Phe Val Glu Lys Lys Glu Glu Asn Ile Tyr Phe Ser Asp 210 215 220 Ser Leu Asp Tyr Lys Lys Ser Gly Asp Val 225 230 <210> 47 <211> 205 <212> PRT <213> Staphylococcus aureus <220> <221> misc_feature <222> 132 <223> 'Xaa' is either absent or is an amino acid residue without a free thiol group <400> 47 Ala Met Ile Lys Met Ser Pro Glu Glu Ile Arg Ala Lys Ser Gln Ser 1 5 10 15 Tyr Gly Gln Gly Ser Asp Gln Ile Arg Gln Ile Leu Ser Asp Leu Thr 20 25 30 Arg Ala Gln Gly Glu Ile Ala Ala Asn Trp Glu Gly Gln Ala Phe Ser 35 40 45 Arg Phe Glu Glu Gln Phe Gln Gln Leu Ser Pro Lys Val Glu Lys Phe 50 55 60 Ala Gln Leu Leu Glu Glu Ile Lys Gln Gln Leu Asn Ser Thr Ala Asp 65 70 75 80 Ala Val Gln Glu Gln Asp Gln Gln Leu Ser Asn Asn Phe Gly Leu Gln 85 90 95 Ala Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Tyr Lys Gly Ile Lys Ala Asp Gly 100 105 110 Gly Lys Val Asp Gln Ala Lys Gln Leu Ala Ala Lys Thr Ala Lys Asp 115 120 125 Ile Glu Ala Xaa Gln Lys Gln Thr Gln Gln Leu Ala Glu Tyr Ile Glu 130 135 140 Gly Ser Asp Trp Glu Gly Gln Phe Ala Asn Lys Val Lys Asp Val Leu 145 150 155 160 Leu Ile Met Ala Lys Phe Gln Glu Glu Leu Val Gln Pro Met Ala Asp 165 170 175 His Gln Lys Ala Ile Asp Asn Leu Ser Gln Asn Leu Ala Lys Tyr Asp 180 185 190 Thr Leu Ser Ile Lys Gln Gly Leu Asp Arg Val Asn Pro 195 200 205

Claims (34)

1. (i) TLR 작용제 (ii) 불용성 금속 염 및 (iii) 둘 이상의 에스.아우레우스 항원을 포함하는 면역원성 조성물.
2. (i) TLR7 작용제 (ii) 불용성 금속 염 및 (iii) 적어도 하나의 에스.아우레우스 항원을 포함하는 면역원성 조성물.
3. (i) TLR 작용제 (ii) 알루미늄 염과 같은 불용성 금속 염 및 (iii) 적어도 하나의 에스.아우레우스 항원을 포함하는 면역원성 조성물.
4. (i) TLR 작용제 (ii) 불용성 금속 염 및 (iii) 에스.아우레우스 EsxA 항원 및 에스.아우레우스 EsxB 항원을 포함하는 융합 단백질을 포함하는 면역원성 조성물.
5. (i) TLR 작용제 (ii) 불용성 금속 염 및 (iii) 비-독성 에스.아우레우스 용혈소 돌연변이를 포함하는 면역원성 조성물.
6. (i) TLR 작용제 (ii) 불용성 금속 염 (iii) 완충액 및 (iv) 적어도 하나의 에스.아우레우스 항원을 포함하는 면역원성 조성물.
7. (i) TLR 작용제 (ii) 불용성 금속 염 및 (iii) 적어도 하나의 에스.아우레우스 항원을 포함하는 면역원성 조성물로서, 6 내지 8의 pH를 갖는 조성물.
8. 제1 항 내지 제7 항 중 어느 한 항에 있어서, TLR 작용제는 사람 TLR7의 작용제인 것을 특징으로 하는 조성물.
9. 제1 항 내지 제8 항 중 어느 한 항에 있어서, TLR 작용제는 불용성 금속 염에 흡착되게 하는 적어도 하나의 흡착성 모이어티를 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
10. 제9 항에 있어서, 흡착성 모이어티는 포스페이트 또는 포스포네이트인 것을 특징으로 하는 조성물.
11. 제1 항 내지 제10 항 중 어느 한 항에 있어서, TLR 작용제는 상세한 설명에서 정의된 바와 같이, 화학식 (C), (D), (E), (F), (G), (H), (I), (II), (J) 또는 (K)를 갖거나, 바람직하게는 화학식 (K')을 갖는 것을 특징으로 하는 조성물.
12. 제1 항 내지 제11 항 중 어느 한 항에 있어서, TLR 작용제는 WO2012/031140에서 정의된 화합물 1 내지 102 중 하나, 또는 이들의 약학적으로 허용 가능한 염인 것을 특징으로 하는 조성물.
13. 제1 항 내지 제12 항 중 어느 한 항에 있어서, TLR 작용제는 화합물 K2인 것을 특징으로 하는 조성물.
14. 제1 항 내지 제 13항 중 어느 한 항에 있어서, 불용성 금속 염은 알루미늄 염인 것을 특징으로 하는 조성물.
15. 제14 항에 있어서, 알루미늄 염은 알루미늄 히드록시드인 것을 특징으로 하는 조성물.
16. 제14 항 또는 제15 항 중 어느 한 항에 있어서, 10-500 μg/ml의 Al⁺⁺⁺ 농도를 갖는 것을 특징으로 하는 조성물.
17. 제1 항 내지 제16 항 중 어느 한 항에 있어서, TLR 작용제 중 >80%는 불용성 금속 염에 흡착되는 것을 특징으로 하는 조성물.
18. 제1 항 내지 제17 항 중 어느 한 항에 있어서, 히스티딘 완충액을 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
19. 제1 항 내지 제18 항 중 어느 한 항에 있어서, 6.1 내지 7.9의 pH를 갖는 것을 특징으로 하는 조성물.
20. 제1 항 내지 제19 항 중 어느 한 항에 있어서, (i) 예를 들어, SEQ ID NO: 31을 포함하는 EsxA 항원 및 EsxB 항원 둘 다를 포함하는 단일 폴리펩티드; (ii) 예를 들어, SEQ ID NO: 6을 포함하는 Sta006 항원; (iii) 예를 들어, SEQ ID NO: 33을 포함하는 Sta011 항원; 및 (iv) 예를 들어, SEQ ID NO: 13을 포함하는 용혈소의 H35L 돌연변이 형태 중 넷 모두를 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
21. 제1 항 내지 제20 항 중 어느 한 항에 있어서,
    ■ 알루미늄 히드록시드 보조제;
    ■ 화학식 (K)의 TLR7 작용제;
    ■ SEQ ID NO: 6을 포함하거나, 변형된 서열이 SEQ ID NO: 6으로 구성된 폴리펩티드에 결합하는 항체를 유도할 수 있다는 조건 하에 SEQ ID NO: 6과 5개까지의 단일 아미노 변화만큼 다른 변형된 아미노산 서열을 포함하는 제1 폴리펩티드;
    ■ SEQ ID NO: 13을 포함하거나, 변형된 서열이 SEQ ID NO: 13으로 구성된 폴리펩티드에 결합하는 항체를 유도할 수 있다는 조건 하에 SEQ ID NO: 13과 5개까지의 단일 아미노 변화만큼 다른 변형된 아미노산 서열을 포함하는 제2 폴리펩티드;
    ■ SEQ ID NO: 31을 포함하거나, 변형된 서열이 SEQ ID NO: 31으로 구성된 폴리펩티드에 결합하는 항체를 유도할 수 있다는 조건 하에 SEQ ID NO: 31과 5개까지의 단일 아미노 변화만큼 다른 변형된 아미노산 서열을 포함하는 제3 폴리펩티드;
    ■ SEQ ID NO: 33을 포함하거나, 변형된 서열이 SEQ ID NO: 33으로 구성된 폴리펩티드에 결합하는 항체를 유도할 수 있다는 조건 하에 SEQ ID NO: 33과 5개까지의 단일 아미노 변화만큼 다른 변형된 아미노산 서열을 포함하는 제4 폴리펩티드로서, TLR7 작용제 및/또는 폴리펩티드 중 적어도 하나가 알루미늄 히드록시드 보조제에 흡착되는 제4 폴리펩티드
    를 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
22. 제21 항에 있어서, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 7을 포함하는 제1 폴리펩티드, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 27을 포함하는 제2 폴리펩티드, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 32를 포함하는 제3 폴리펩티드, 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 8을 포함하는 제4 폴리펩티드를 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
23. 제21 항에 있어서, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 44를 포함하는 제1 폴리펩티드, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 27을 포함하는 제2 폴리펩티드, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 45를 포함하는 제3 폴리펩티드, 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 46을 포함하는 제4 폴리펩티드를 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
24. 제21 항 내지 제23 항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (K)의 TLR7 작용제는 다음 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염인 것을 특징으로 하는 조성물:
    

    
25. 제1 항 내지 제19 항 중 어느 한 항에 있어서, 3d-MPL 및 알루미늄 염을 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
26. 제25 항에 있어서, ClfA 항원, IsdA 항원, IsdB 항원, IsdC 항원, 및/또는 IsdH 항원을 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
27. 제1 항 내지 제26 항 중 어느 한 항의 조성물을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 대상체의 면역 반응을 증가시키는 방법.
28. TLR 작용제, 불용성 금속 염, 및 에스.아우레우스 항원(들)을 혼합하는 단계를 포함하는, 제1 항 내지 제27 항 중 어느 한 항의 면역원성 조성물의 제조 방법.
29. (i) 에스.아우레우스 항원을 TLR 작용제 및 불용성 금속 염을 포함하는 혼합물과 조합하는 단계; (ii) 불용성 금속 염을 TLR 작용제 및 에스.아우레우스 항원을 포함하는 혼합물과 조합하는 단계; 또는 (iii) TLR 작용제를 불용성 금속 염 및 에스.아우레우스 항원을 포함하는 혼합물과 조합하는 단계 중 하나를 포함하는, 면역원성 조성물의 제조 방법.
30. 제28 항 또는 제29 항에 있어서, 제1 항 내지 제26 항 중 어느 한 항의 조성물을 제조하는 것을 특징으로 하는 방법.
31. (a) 불용성 금속 염에 흡착된 제1 TLR 작용제를 포함하는 보조제 복합체; (b) 불용성 금속 염에 흡착된 제2 TLR 작용제를 포함하는 보조제 복합체; 및 (c) 적어도 하나의 에스.아우레우스 항원을 포함하는 조성물.
32. (i) TLR 작용제가 흡착된 침전된 알루미늄 염을 형성하기 위해 TLR 작용제 및 가용성 알루미늄 염의 수성 혼합물을 제조하고, 이후 비-알루미늄 염을 수성 혼합물에 첨가하는 단계; 및 (ii) 에스.아우레우스 항원을 단계 (i)에서 형성된 침전된 염 및 그것의 흡착된 작용제와 혼합하는 단계를 포함하는, 면역원성 조성물의 제조 방법.
33. (i) TLR 작용제 및 가용성 알루미늄 염의 수성 혼합물을 (ii) 에스.아우레우스 면역원의 완충된 수성 혼합물과 혼합하는 단계를 포함하며, 혼합 단계는 TLR 작용제 및 면역원이 흡착된 알루미늄 염의 침전을 유발하는, 면역원성 조성물의 제조 방법.
34. (i) 에스.아우레우스 면역원을 (ii) TLR 작용제 및 불용성 금속 염의 멸균 복합체와 조합하는 단계를 포함하는, 멸균 면역원성 조성물의 제조 방법.

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