KR20140060749A - 황금누에고치 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물 - Google Patents

황금누에고치 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 황금누에의(Golden silk) 누에고치 추출물을 유효 성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로서, 황금누에고치 추출물을 화장료 조성물의 전체 중량에 대하여 0.00001 ~ 30.0 중량%를 함유하는 것을 특징으로 한다. 황금누에고치 추출물은 일반 누에고치 추출물에 비하여 항산화 효과뿐만 아니라 MMP-1 생성 억제 효과, 자외선 유도에 의한 MMP-1 생성억제효과, 콜라겐 합성 증진 효과, 멜라닌 생성 억제 효과, 자외선 조사에 의한 세포독성 완화 효과, 자외선 조사에 의한 염증성 사이토카인 발현 억제 효과 및 피부 탄력개선 효과가 월등히 우수하여 기능성 화장료로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

황금누에고치 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물{Cosmetic composition comprising the extract of Golden silkworm cocoon as active ingredient}
본 발명은 황금누에고치 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료에 관한 것으로서, 구체적으로는 새로운 누에품종인 황금누에(Golden Silk)의 누에고치 추출물을 제조하여 피부 항산화 효과, MMP-1 생성 억제 효과, 자외선 유도에 의한 MMP-1 생성억제효과, 콜라겐 합성 증진 효과, 멜라닌 생성 억제 효과, 자외선 조사에 의한 세포독성 완화 효과, 자외선 조사에 의한 염증성 사이토카인 발현 억제 효과, 피부주름 개선 효과 및 피부탄력 개선 효과를 가지는 화장료를 제조하는 기술에 관한 것이다.
종래부터 천연물의 추출물을 함유하는 화장료에 관한 연구가 있어왔다. 그러한 천연물 중의 하나로서 누에고치를 들 수 있다. 일반적으로 누에고치 추출물에는 피부보습, 살균효과등이 있음이 알려져 있어 화장료의 원료로 사용되어 왔다.
대한민국 공개특허 제2005-0015177호 "누에고치로부터 추출된 세리신 단백질을 함유하는 미용팩조성물"에는 누에고치로부터 추출한 세리신을 활성성분으로 함유하는 피부미용팩이 개시되어 있다. 대한민국 공개특허 제2007-0114953호 "생약 추출물을 포함하는 문제성 피부 개선용 조성물"에는 인삼, 천궁, 삼백초, 당귀, 어성초, 감초, 박하, 뽕잎, 녹차, 구기자, 진피, 검정콩, 검은깨, 누에고치 및 하수오 추출물을 포함하는 문제성 피부 개선용 조성물에 관하여 개시되어 있다. 상기의 누에고치 추출물은 일반누에 품종의 누에고치를 이용한 것이다.
본 발명자들은 여러 천연물들의 화장품으로의 응용 가능성을 연구하는 과정에서, 새로운 누에품종인 황금누에(Golden silk)의 누에고치를 선정하고 다양한 용매와 추출방법을 사용하여 이로부터 추출물을 제조하여, 각각에 따른 피부 항산화 효과, MMP-1 생성 억제 효과, 자외선 유도에 의한 MMP-1 생성억제효과, 콜라겐 합성증진 효과, 멜라닌 생성억제 효과, 자외선 조사에 의한 세포독성완화 효과, 자외선 조사에 의한 염증성 사이토카인 발현억제 효과, 피부주름 개선 효과 및 피부탄력 개선 효과등을 시험해 보았으며, 그 결과 일반 누에고치에 비하여 그 효능이 매우 우수하다는 것을 발견하여 본 발명을 완성하였다.
본 발명은 황금누에고치 추출물을 함유하여 피부 항산화 효과, MMP-1 생성억제 효과, 자외선 유도에 의한 MMP-1 생성억제효과, 콜라겐 합성증진 효과, 피부 주름개선 효과 등 우수한 항노화 효과를 나타내는 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
또한, 본 발명은 상기 황금누에고치 추출물을 제조하는 방법을 제공하는 것을 다른 목적으로 한다.
상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명에 따르면, 황금누에(Golden Silk)의 누에고치 추출물을 화장료의 총 중량에 대하여 0.00001 ~ 30.0%(w/w)를 함유하는 화장료 조성물이 제공된다. 상기 화장료 조성물은 항산화용인 것을 특징으로 한다. 또한, 상기 화장료 조성물은 피부 주름 개선 및 피부탄력 개선용인 것을 특징으로 한다. 또한, 상기 화장료 조성물은 피부 보습용인 것을 특징으로 한다. 더욱 바람직하게는, 상기 화장료 조성물은 피부 미백용인 것을 특징으로 한다.
상기 황금누에(Golden Silk)의 누에고치 추출물은 물, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올(예를 들면, 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올), 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 디에틸에테르, 에틸 아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로로메탄, 클로로포름, 헥산 및 이들의 혼합물로 이루어지는 군으로부터 선택되는 추출 용매를 사용하여 얻을 수 있다. 더욱 바람직하게는 상기 황금누에(Golden Silk)의 누에고치 추출물은 플라보자임(Flavourzyme), 수미자임(Sumizyme), 프로타멕스(Protamex), 알칼라제(Alcalase), 코지자임(Kojizyme) 및 그 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 효소 용매를 이용하여 추출한 추출물이다.
상기 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 클렌징, 오일, 분말파운데이션, 유탁액파운데이션, 왁스파운데이션, 팩, 마사지 크림 및 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 제형을 갖는 것을 특징으로 한다.
상기 다른 목적을 달성하기 위하여 본 발명에 따르면, (A)정제수로 세척하고 건조시킨 황금누에고치를 분쇄하여 분말화하는 단계;(B)상기 황금누에고치 분말을 60℃~150℃, 10분∼2시간 조건으로 증기로 찌는 단계;(C)상기 증기로 찐 분말을 음건하는 단계; 및 (D)탄소수 1-4의 저급 알코올 용매로 추출하는 단계를 포함하는 황금누에의 누에고치 추출물의 제조 방법이 제공된다.
상기 다른 목적을 달성하기 위하여 본 발명에 따르면, (A)정제수로 세척하고 건조시킨 황금누에고치를 분쇄하여 분말화하는 단계;(B)반응기에 상기 황금누에고치 분말을 넣고 0.1~2.0%(v/v)되게 효소를 가하여 50~60℃ 조건에서 4~6일간 배양하는 단계;(C)배양이 완료된 황금누에고치 발효액을 원심분리하여 배양균을 제거한 후 여과하는 단계; 및 (D)여과액을 다시 3~5℃의 저온 창고에서 8~12일간 숙성시킨 후 여과하는 단계를 포함하는 황금누에의 누에고치 추출물의 제조 방법이 제공된다. 상기 효소는 플라보자임(Flavourzyme), 수미자임(Sumizyme), 프로타멕스(Protamex), 알칼라제(Alcalase), 코지자임(Kojizyme) 및 그 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 것임을 특징으로 한다.
본 발명에 따른 황금누에의 누에고치 추출물은 자유라디칼을 소거하고, MMP-1 생성 억제 및 자외선 조사에 의한 MMP-1의 생성을 억제하고, 콜라겐 합성을 증진하고, 멜라닌 생합성을 억제하며, 자외선 조사에 의한 세포독성을 완화하고, 자외선 조사에 의한 염증성 사이토카인의 발현을 억제하는 효과가 일반 누에고치 추출물에 비하여 월등히 우수하여, 항산화, 피부 주름개선 및 탄력개선, 노화방지, 미백, 자외선 조사에 의한 세포독성 완화, 피부 손상억제, 자극완화 및 보습용 화장료로서 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명은 황금누에고치 추출물을 유효성분으로 함유하는 항산화용, 피부노화방지용, 피부주름 개선용, 피부탄력 개선용, 피부 미백용, 자외선에 의한 피부 손상 억제용, 피부 자극 완화용, 피부 보습용 화장료 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 화장료 조성물 중 유효 성분으로 사용되는 황금누에고치는 농촌진흥청이 2005년부터 2007년까지 3년 동안 연구를 거듭해 육종하여 농가에 보급한 신품종 황금누에(Golden Silk)가 튼 고치를 말한다[황색실크생산용 특수누에 품종 "골든실크"육성, 韓蠶學誌 49(1), 14~17(2007)]. 상기 품종은 농가소득 증대를 위하여 염색이 필요없는 천연 황색실크 생산용으로 육종된 것으로서, 의류용, 인테리어 벽지, 생활잡화, 수의 및 학습용으로 사용하기 위하여 개발된 것이다.
그런데 본 발명자들의 연구결과 상기 황금누에(Golden Silk)의 누에고치는 일반 누에고치와 다른 아미노산 조성을 가지며(시험예 1), 일반 누에고치에 비하여 피부에 유용한 효과, 즉 항산화, 피부주름개선 및 탄력개선, 보습효과 등이 우수하였으며, 특히 피부미백효과가 우수하다는 것을 확인할 수 있었다. 본 발명에 있어서, 황금누에고치 추출물은 황금누에고치의 전체를 추출하여 얻은 추출물을 의미한다.
본 발명의 황금누에고치 추출물은 통상의 용매추출법에 따라 제조될 수 있다. 즉, 물, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올(예를 들면, 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올), 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 디에틸에테르, 에틸 아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로로메탄, 클로로포름, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 용매를 이용한 용매 추출법에 의해 제조될 수 있다.
그런데 본 발명의 황금누에고치 추출물은 하기와 같은 특정한 방법에 의하여 추출되는 경우 더욱 우수한 효과를 나타내었다. 그 일 구체예에 따르면, (A)정제수로 세척하고 건조시킨 황금누에고치를 분쇄하여 분말화하는 단계;(B)상기 황금누에고치 분말을 60℃~150℃, 10분∼2시간 조건으로 증기로 찌는 단계;(C)상기 증기로 찐 분말을 음건하는 단계; 및 (D)탄소수 1-4의 저급 알코올 용매로 추출하는 단계를 포함하는 황금누에의 누에고치 추출물의 제조 방법이 제공된다. 상기 방법은 약재를 찌는 방법으로 가공 처리함으로써 약재 본래의 성질을 변화시키는 제약 기술을 응용한 것으로서 상기 방법에 의하여 추출물을 제조하는 경우 더욱 우수한 효과를 나타내었다.
또 다른 구체예에 따르면, (A)정제수로 세척하고 건조시킨 황금누에고치를 분쇄하여 분말화하는 단계;(B)반응기에 상기 황금누에고치 분말을 넣고 0.1~2.0%(v/v)되게 효소를 가하여 50~60℃ 조건에서 4~6일간 배양하는 단계;(C)배양이 완료된 황금누에고치 발효액을 원심분리하여 배양균을 제거 한 후 여과하는 단계; 및 (D)여과액을 다시 3~5℃의 저온 창고에서 8~12일간 숙성시킨 후 여과하는 단계를 포함하는 황금누에의 누에고치 추출물의 제조 방법이 제공된다. 이 때, 상기 효소로는 플라보자임(Flavourzyme), 수미자임(Sumizyme), 프로타멕스(Protamex), 알칼라제(Alcalase), 코지자임(Kojizyme) 및 그 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 것이 사용될 수 있다. 특히, 상기와 같은 효소 사용 추출방법에 의하여 제조된 황금누에고치 추출물이 가장 우수한 효과를 나타내었다. 이 경우, 상기 효소는 독립적으로 사용될 수 있으며, 바람직하게는 플라보자임(Flavourzyme), 프로타멕스(Protamex), 수미자임(Sumizyme), 알칼라제(Alcalase) 및 코지자임(Kojizyme)이 각각 0.1~2.0 : 0.5~2.0 : 0.1~1.0 : 0.1~1.0 : 1.0의 비율로 혼합 사용되는 것이며, 가장 바람직하게는 1.0 : 0.5 : 0.5 : 0.5 : 1.0의 비율로 혼합 사용되는 것이다.
본 발명의 황금누에고치 추출물에는 상술한 추출 용매에 의한 추출물뿐만 아니라, 통상적인 정제 과정을 거친 추출물도 포함된다. 즉, 이산화탄소에 의한 감압, 고온에 의한 초임계추출법에 의한 추출, 초음파를 이용한 추출법에 의한 추출, 일정한 분자량 cut-off 값을 갖는 한외 여과 막을 이용한 분리, 다양한 크로마토그래피(크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 활성 분획도 본 발명의 추출물에 포함된다.
상기 이산화탄소에 의한 감압, 고온에 의한 초임계추출법에 의한 추출법은 초임계 유체 추출법(supercritical fluid extraction)을 의미하는 것으로, 일반적으로 초임계 유체는 기체가 고온 고압 조건에서 임계점에 도달하였을 때 갖는 액체 및 기체의 성질을 지니고 있으며, 화학적으로 비극성 용매와 유사한 극성을 지니고 있으며 이러한 특성으로 인해 초임계 유체는 지용성 물질의 추출에 사용되고 있다(J. Chromatogr. A. 1998; 479:200-205). 이산화탄소는 초임계 유체기기의 작동으로 압력 및 온도가 임계점까지 이르는 과정을 거치면서 액체 및 기체 성질을 동시에 지닌 초임계 유체가 되고 그 결과 지용성 용질에 대한 용해도가 증가한다. 초임계 이산화탄소가 일정량의 시료를 함유한 추출 용기를 통과하게 되면 시료에 함유된 지용성 물질은 초임계 이산화탄소에 추출되어 나온다. 지용성 물질을 추출한 후 추출 용기에 남아있는 시료에 다시 소량의 공용매가 함유된 초임계 이산화탄소를 흘려 통과시키면 순수한 초임계 이산화탄소만으로는 추출되지 않았던 성분들이 추출되어 나오게 할 수 있다.
본 발명의 초임계추출법에 사용되는 초임계 유체는 초임계 이산화탄소 또는 이산화탄소에 추가적으로 공용매를 혼합한 혼합유체를 사용함으로써 효과적으로 유효 성분을 추출할 수 있다. 이러한 공용매는 클로로포름, 에탄올, 메탄올, 물, 에틸아세테이트, 헥산 및 디에틸에테르로 이루어진 군에서 선택되는 1종 또는 2종 이상의 혼합물을 사용할 수 있다. 추출된 시료는 대부분 이산화탄소를 함유하고 있는데 이산화탄소는 실온에서 공기 중으로 휘발되므로 상기 방법으로 얻은 추출물을 화장료 조성물로서 사용할 수 있으며, 공용매는 감압증발기로 제거할 수 있다.
또한 상기 초음파 추출법은 초음파 진동에 의해 발생되는 에너지를 이용하는 추출방법으로, 초음파가 수용성 용매 속에서 시료에 포함된 불용성인 용매를 파괴시킬 수 있으며, 이때 발생되는 높은 국부온도로 인하여 주위에 위치하는 반응물 입자들의 운동에너지를 크게 하기 때문에 반응에 필요한 충분한 에너지를 얻게 되고, 초음파 에너지의 충격효과로 높은 압력을 유도하여 시료에 함유된 물질과 용매의 혼합 효과를 높여주어 추출 효율을 증가시키게 된다. 초음파 추출법에 사용할 수 있는 추출용매는 클로로포름, 에탄올, 메탄올, 물, 에틸아세테이트, 헥산 및 디에틸에테르로 이루어진 군에서 선택되는 1종 또는 2종 이상의 혼합물을 사용할 수 있다. 추출된 시료는 진공 여과하여 여과액을 회수한 후 감압증발기로 제거하고, 동결 건조하는 통상의 추출물 제조방법을 통해 추출물을 얻을 수 있다.
상기의 방법에 의하여 제조된 황금누에고치 추출물은 항산화 효과(시험예 3), 세포재생 효과(시험예 4), MMP-1 생성 억제 효과(시험예 5), 자외선 유도에 의한 MMP-1 생성 억제 효과(시험예 6), 콜라겐 합성 증진 효과(시험예 7), 멜라닌 생성 억제 효과(시험예 8), 자외선 유도에 의한 세포독성 완화 효과(시험예 9), 염증성 사이토카인 발현 억제 효과(시험예 10), 피부주름 개선 효과(시험예 11), 피부탄력 개선 효과(시험예 12), 보습 효과(시험예 13)가 뛰어나다.
본 발명의 화장료조성물은 상기의 방법에 의하여 제조된 황금누에고치 추출물을 화장료 조성물의 총 중량에 대하여 0.00001 ~ 30.0%(w/w)를 함유한다. 더욱 바람직하게는, 상기 황금누에고치 추출물은 화장료 조성물의 전체 중량에 대해서 0.01 ~ 5.0 중량% 함유되는 것을 특징으로 한다. 상기 추출물의 함량이 0.00001 중량% 미만인 경우에는 피부 개선 효과가 나타나지 않으며, 30.0 중량%를 초과하는 경우에는 함유량 증가에 대한 피부 개선 효과 증대 정도가 미미하며, 제형상의 안전 및 안정성에 문제가 있으며 경제적이지도 못하다.
우수한 활성을 가지는 황금누에고치 추출물을 포함하는 본 발명의 화장료 조성물은 항산화용, 피부노화 방지용, 피부 미백용, 자외선에 의한 피부 손상완화 및 자극완화용, 피부주름 개선 및 피부탄력 개선용 화장료로 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 상기 유효성분 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다. 본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.
본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다. 본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다. 본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다. 본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다. 본 발명의 제형이 계면활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물이 비누, 계면활성제 함유 클렌징 제형 또는 계면활성제 비 함유 클렌징 제형일 경우, 피부에 도포한 후 닦아내거나 떼거나 물로 씻어낼 수도 있다. 구체적인 예로서, 상기 비누는 액상비누, 가루비누, 고형비누 및 오일비누이며, 상기 계면활성제 함유 클렌징 제형은 클렌징 폼, 클렌징 워터, 클렌징 수건 및 클렌징 팩이며, 상기 계면활성제 비 함유 클렌징 제형은 클렌징크림, 클렌징 로션, 클렌징 워터 및 클렌징 겔이며, 이에 한정되는 것은 아니다.
[실시예]
이하, 실시예 및 시험예를 통하여 본 발명을 상세히 설명한다.
실시예 1: 황금누에고치 추출물의 제조
황금누에고치를 분쇄한 뒤 분쇄한 조분쇄 분말 200g에 물과 에탄올의 비율을 7:3으로 조정한 70% 에탄올 1000㎖를 가하여 110℃, 6시간동안 고온고압 추출조건에서 추출하였다. 이를 여과하고 여액을 진공 농축하여 건조 추출물을 얻었으며, 추출 수율은 55.6g/1000g이었다. 상기 건조 추출물을 1%(w/v) 농도가 되도록 50% 1,3-부틸렌 글리콜 용액으로 용해하고 여과한 후 본 발명의 실험에 적용하였다. 대조군으로 일반 누에고치도 동일한 방법으로 제조하여 실험에 적용하였으며, 추출 수율은 46.0g/1000g 이었다.
실시예 2 ~ 14, 15, 16: 황금누에고치 추출물의 제조
하기 표 1과 같이 추출용매를 달리하여 상기 실시예 1과 같은 방법으로 황금누에고치를 추출하여 추출물을 얻었다(실시예 2~14). 또한, 실시예 15, 실시예 16은 통상적인 초임계 추출법, 초음파 추출법을 통해 황금누에고치 추출물을 얻었다. 공용매로 올리브유를 사용하였으며 액상이다. 대조군으로 일반누에고치도 동일한 방법으로 제조하여 실험에 적용하였으며 그 결과는 하기 표 1과 같다.
추출 용매 일반누에고치 1kg으로 부터
얻은 추출물의 무게(g)		 황금누에고치 1kg으로 부터
얻은 추출물의 무게(g)
실시예 2 정제수 45.2 54.5
실시예 3 25% 에탄올 44.1 54.6
실시예 4 50% 에탄올 45.2 56.8
실시예 5 100% 에탄올 43.5 53.8
실시예 6 80% 메탄올 40.8 51.7
실시예 7 100% 메탄올 41.7 50.3
실시예 8 아세톤 38.5 49.1
실시예 9 디에틸에테르 19.3 29.3
실시예 10 헥산 15.5 27.3
실시예 11 노말-프로판올 33.3 47.5
실시예 12 이소프로판올 31.9 42.5
실시예 13 노말-부탄올 33.6 43.7
실시예 14 에틸아세테이트 21.6 32.5
실시예 15 초임계 추출 79.1 90.8
실시예 16 초음파 추출 23.2 41.3
실시예 17: 황금누에고치 추출물의 제조
정제수로 세척하고 건조시킨 황금누에고치를 분쇄하여 분말화한 후 300메시 시브를 이용하여 미세하게 만들었다. 이것을 0.1 ~ 2.0%(v/v)되게 효소를 첨가하였다. 효소는 Flavourzyme, Sumizyme, Protamex, Alcalase 및 Kojizyme을 각각 조건에 맞게 혼합한 것을 사용하였다(표 2). 효소처리는 20L 반응기를 사용하여 2일간, 55℃ 조건을 유지하며 배양하였다. 배양이 완료된 황금누에고치 발효액을 원심분리하여 배양균을 1차 제거한 후 0.25μM 여과지를 이용하여 최종 여과하였다. 이렇게 얻은 여과액을 다시 4℃의 저온 창고에서 약 10일간 숙성시킨 후 이 여과 숙성액을 다시 0.25μM의 여과기를 이용하여 여과하여 사용하였다. 각 효소처리 농도에 의한 추출 수율은 하기 표 2와 같다.
(Flavourzyme):(Protamex):(Sumizyme):(Alcalase):(Kojizyme) 일반누에고치 1kg에서 얻은 추출물의 무게(g) 황금누에고치 1kg에서 얻은 추출물의 무게(g)
실시예 17-1 0.1: 0.5: 0.1: 0.1: 1.0 51.8 72.4
실시예 17-2 0.1: 0.5: 0.2: 0.2: 1.0 52.0 73.5
실시예 17-3 0.2: 0.5: 0.2: 0.2: 1.0 61.3 81.4
실시예 17-4 0.2: 0.5: 0.5: 0.2: 1.0 64.5 82.5
실시예 17-5 0.2: 0.5: 0.5: 0.5: 1.0 64.6 82.6
실시예 17-6 0.5: 0.5: 0.2: 0.5: 1.0 71.6 89.6
실시예 17-7 0.5: 0.5: 0.5: 0.2: 1.0 70.6 89.8
실시예 17-8 1.0: 0.5: 0.5: 0.2: 1.0 76.0 93.4
실시예 17-9 1.0: 0.5: 0.5: 0.5: 1.0 80.2 101.7
실시예 17-10 1.0: 1.0: 0.5: 0.5: 1.0 72.1 94.2
실시예 17-11 2.0: 1.0: 0.5: 0.5: 1.0 64.5 82.5
실시예 17-12 2.0: 2.0: 0.5: 0.5: 1.0 64.4 81.3
실시예 17-13 2.0: 2.0: 0.5: 1.0: 1.0 63.7 80.5
실시예 17-14 2.0: 2.0: 1.0: 1.0: 1.0 63.6 80.2
플라보자임(Flavourzyme), 프로타멕스(Protamex), 수미자임(Sumizyme), 알칼라제(Alcalase) 및 코지자임(Kojizyme)의 비율이 1.0 : 0.5 : 0.5 : 0.5 : 1.0으로 혼합 사용한 추출물의 경우가 수율이 가장 우수하였다. 이하 실험에 사용된 황금누에고치 효소 추출물은 최종농도가 1g/100mL가 되게 유지하여 사용하였다.
실시예 18:황금누에고치 추출물의 제조
정제수로 세척하고 건조시킨 황금누에고치를 조분쇄하여 분말화한 후 300메시 시브를 이용하여 미세하게 만든 후, 찌기는 온도 60℃~150℃, 10분∼2시간 조건으로 실시한 후 음건하였다. 이렇게 하여 만든 황금누에고치의 추출물은 추가로 70% 에탄올을 이용하여 추출하였으며, 그 결과 45.8g/1kg의 추출물을 얻었다. 대조군으로 일반누에고치도 동일한 방법으로 제조하여 실험에 적용하였으며, 추출 수율은 31.9g/kg 이었다.
시험예 1: 누에고치의 아미노산 분석
본 발명의 황금누에(Golden Silk)의 누에고치와 일반 누에고치의 아미노산 정량분석을 하였으며, 그 주요 아미노산의 함량을 하기의 표 3에 나타내었다.
(단위:%) 일반누에고치 세리신 일반누에고치 피브로인 황금누에고치 세리신 황금누에고치 피브로인
Glycine 12.7 42.9 12.81 40.96
Alanine 5.51 30.4 4.74 17.33
Serine 31.97 12.2 29.07 12.33
Tyrosine 3.4 4.8 4.8 13.24
Valine 2.68 2.5 4.19 2.83
Aspartic acid 13.83 1.9 9.88 0.81
Glutamic acid 5.8 1.4 6.28 1.39
Threonine 8.25 0.9 8.76 0
Leusine 0.72 0.6 1.98 0.56
Isoleusine 0.55 - 1.37 0.94
proline 0.57 0.5 1.07 0.49
Phenylalanine 0.43 0.7 1.67 1.77
시험예 2:효소추출법에 의한 추출물의 활성시험
상기 실시예 17에서 각 효소의 혼합비에 따라 제조된 추출물에 대하여 아래의 활성시험을 수행하였다.
1.DPPH법을 이용한 항산화 효과 측정
상기 실시예 17에서 수득한 황금누에고치 추출물의 항산화 효과를 측정하기 위해, 항산화 효과가 있는 것으로 알려진 물질인 비타민 C를 비교군으로 하여 DPPH법을 이용하여 항산화 효과(자유라디칼 소거율)를 측정하였다. 96공 평판배양기에 Ethanol에 용해한 DPPH 용액 100ul(0.4mM)과 상기 실시예에서 얻은 9가지 황금누에 추출물을 0.01%의 농도로 동량의 시료를 가하여 37℃에서 30분간 반응하였다. 반응 후 517nm에서 ELISA 방법으로 흡광도를 측정하여 DPPH radical 소거활성을 측정하였다. 양성 대조군으로 비타민C를 사용하였다.
자유라디칼 소거율(%)의 결과는 하기 식에 의하여 산출하였으며, 결과는 하기의 표와 같다.
자유라디칼 소거율(%) = 〔1-(St-So)/(Bt-Bo)〕× 100
St : 시료용액의 자유라디칼 소거 후의 560nm에서의 흡광도
Bt : 공시험용액의 자유라디칼 소거 후의 560nm에서의 흡광도
So : 시료용액의 자유라디칼 무첨가시 반응 전의 560nm에서의 흡광도
Bo : 공시험용액의 자유라디칼 무첨가시 반응 전의 560nm에서의 흡광도
처리농도
(%, v/v)		 일반누에고치 추출물 항산화효과(%) 황금누에고치 추출물
항산화효과(%)
실시예 17-1 0.01 48.7 93.6
실시예 17-2 0.01 48.6 93.8
실시예 17-3 0.01 49.7 93.9
실시예 17-4 0.01 49.5 94.1
실시예 17-5 0.01 49.6 94.3
실시예 17-6 0.01 50.2 95.2
실시예 17-7 0.01 50.6 95.4
실시예 17-8 0.01 50.9 95.7
실시예 17-9 0.01 51.1 96.3
실시예 17-10 0.01 50.1 95.6
실시예 17-11 0.01 49.3 94.2
실시예 17-12 0.01 49.5 94.4
실시예 17-13 0.01 49.6 94.5
실시례 17-14 0.01 48.5 93.7
vitamin C 0.01 91.8
2. 세포재생 효과
24공 평판배양기에 Hacat keratinocyte(German Cancer Research Institute, Germany)를 2×105 cells/well의 농도로 배양한 다음, 24시간 동안 10% FBS 첨가 배지 조건하에 안정화시킨 뒤, 무혈청 배지로 교환 후, 일반누에고치와 황금누에고치 추출물들의 시료를 1.0%(v/v) 되게 처리하여 3일 배양하였다. 배양 후 세포생성 효과를 보기 위해 MTT assay법을 이용하여 세포의 생성 정도를 비교 평가하였으며, 양성 대조군으로 TGF-β(10ng/mL)을 적용하였고 음성 대조군으로는 시료를 처리하지 않은 결과를 나타내며, 전체 결과는 하기 표 5에 나타내었다.
시료명 처리 농도
(%, w/v)		 일반누에고치 추출물
(Abs. at 570nm)		 황금누에고치 추출물
(Abs. at 570nm)
실시예 17-1 1.0 0.852 1.899
실시예 17-2 1.0 0.849 1.901
실시예 17-3 1.0 0.853 1.903
실시예 17-4 1.0 0.859 1.912
실시예 17-5 1.0 0.862 1.924
실시예 17-6 1.0 0.879 1.932
실시예 17-7 1.0 0.883 1.933
실시예 17-8 1.0 0.885 1.934
실시예 17-9 1.0 0.998 2.129
실시예 17-10 1.0 0.891 1.956
실시예 17-11 1.0 0.889 1.955
실시예 17-12 1.0 0.866 1.938
실시예 17-13 1.0 0.861 1.934
실시예 17-14 1.0 0.854 1.927
양성 대조군 TGF-β(10ng/ml) 10ng/ml 1.423
음성 대조군 0.0 0.921
3. B16F10 멜라닌형성세포에 대한 멜라닌 생성 억제효과
B16F10 마우스 유래 멜라닌 형성 세포를 6공 평판배양기에 2×106개의 농도로 배양한 다음, 독성을 유발하지 않는 농도로 황금누에고치 추출물을 처리하여 72시간 동안 배양하였다. 배양 후, 세포를 회수하여, 세포 내 멜라닌을 로탄법((Lotan: Cancer Res., 40: 3345-3350, 1980)을 변형하여 정량하였다. 회수한 세포를 PBS로 세척 후, 균질화 용액을 첨가하여 5분간 와류한 후, 원심분리하고 세포 여액에 NaOH를 첨가하여 405nm에서 흡광도를 측정하여 멜라닌을 정량하고 멜라닌 생성 저해율(%)을 측정하였다.
B16F1 멜라닌 형성 세포의 멜라닌 생성 저해율(%)은 하기 식에 의하여 계산하였으며, 그 결과를 표 6에 나타내었다. 이때 멜라닌 생성 저해 효과가 있는 것으로 알려진 물질인 하이드로퀴논과 알부틴을 비교군으로 사용하였다.
멜라닌 생성 저해율 (%) = [(A-B)/A] × 100
A : 시료를 첨가하지 않은 웰의 멜라닌 양
B : 시료를 첨가한 웰의 멜라닌 양
시료명 처리농도
(%, w/v)		 일반누에고치 추출물
(멜라닌 생성 저해율(%))		 황금누에고치 추출물
(멜라닌 생성 저해율(%))
실시예 17-1 0.1 0.02 0.10
실시예 17-2 0.1 0.02 0.11
실시예 17-3 0.1 0.02 0.11
실시예 17-4 0.1 0.03 0.12
실시예 17-5 0.1 0.03 0.12
실시예 17-6 0.1 0.03 0.12
실시예 17-7 0.1 0.03 0.13
실시예 17-8 0.1 0.03 0.14
실시예 17-9 0.1 0.04 0.15
실시예 17-10 0.1 0.03 0.14
실시예 17-11 0.1 0.03 0.14
실시예 17-12 0.1 0.02 0.13
실시예 17-13 0.1 0.02 0.13
실시예 17-14 0.1 0.02 0.12
하이드로퀴논 0.1 0.08
알부틴 0.1 0.03
위와같은 실험 결과를 바탕으로 가장 효과가 우수하게 나타나는 황금누에고치 효소 추출물(실시예 17-9)을 이하 실험에 최종농도가 1g/100mL가 되게 유지하여 사용하였다.
시험예 3: DPPH법을 이용한 항산화 효과 측정
상기 실시예에서 수득한 황금누에고치 추출물의 항산화 효과를 측정하기 위해, 항산화 효과가 있는 것으로 알려진 물질인 비타민 C를 비교군으로 하여 DPPH법을 이용하여 항산화 효과(자유라디칼 소거율)를 측정하였다. 96공 평판배양기에 Ethanol에 용해한 DPPH 용액 100ul(0.4mM)과 상기 실시예에서 얻은 9가지 황금누에 추출물을 0.01%의 농도로 동량의 시료를 가하여 37℃에서 30분간 반응하였다. 반응 후 517nm에서 ELISA 방법으로 흡광도를 측정하여 DPPH radical 소거활성을 측정하였다. 양성 대조군으로 비타민C를 사용하였다.
자유라디칼 소거율(%)의 결과는 하기 식에 의하여 산출하였으며, 결과는 하기의 표 7과 같다.
자유라디칼 소거율(%) = 〔1-(St-So)/(Bt-Bo)〕× 100
St : 시료용액의 자유라디칼 소거 후의 560nm에서의 흡광도
Bt : 공시험용액의 자유라디칼 소거 후의 560nm에서의 흡광도
So : 시료용액의 자유라디칼 무첨가시 반응 전의 560nm에서의 흡광도
Bo : 공시험용액의 자유라디칼 무첨가시 반응 전의 560nm에서의 흡광도
시료명 처리 농도(%, w/v) 항산화효과(%)
일반누에고치 추출물(실시예 1) 0.01 49.2
일반누에고치 추출물(실시예 15) 0.01 48.6
일반누에고치 추출물(실시예 16) 0.01 47.7
일반누에고치 추출물(실시예 17-9) 0.01 51.1
일반누에고치 추출물(실시예 18) 0.01 50.3
황금누에고치 추출물(실시예 1) 0.01 95.4
황금누에고치 추출물(실시예 15) 0.01 94.2
황금누에고치 추출물(실시예 16) 0.01 94.3
황금누에고치 추출물(실시예 17-9) 0.01 96.3
황금누에고치 추출물(실시예 18) 0.01 92.2
vitamin-C 0.01 91.8
상기 표 7에서 확인되는 바와 같이 황금누에고치 추출물은 0.01% 농도에서 일반누에고치 추출물에 비해 항산화 효과가 훨씬 우수한 것으로 나타났고, 항산화 효과가 있는 것으로 알려진 물질인 비타민 C의 항산화 효과보다 더욱 탁월한 항산화 효과를 갖고 있음이 확인되었다. 그 중에서도 효소추출법에 의한 실시예 17-9의 효과가 더욱 우수하였다.
시험예 4: 세포재생 효과
24공 평판배양기에 Hacat keratinocyte(German Cancer Research Institute, Germany)를 2 × 105 cells/well의 농도로 배양한 다음, 24시간동안 10% FBS 첨가 배지 조건하에 안정화시킨 뒤, 무혈청 배지로 교환 후, 일반누에고치와 황금누에고치 추출물들의 시료를 1.0%(v/v) 되게 처리하여 3일 배양하였다. 배양 후 세포생성 효과를 보기 위해 MTT assay법을 이용하여 세포의 생성 정도를 비교 평가하였으며, 양성 대조군으로 TGF-β(10ng/mL)을 적용하였고 음성 대조군으로는 시료를 처리하지 않은 결과를 나타내며, 전체 결과는 하기 표 8에 나타내었다.
시료명 처리 농도(%, w/v) Abs. at 570nm
일반누에고치 추출물(실시예 1) 1.0 0.991
일반누에고치 추출물(실시예 15) 1.0 0.892
일반누에고치 추출물(실시예 16) 1.0 0.896
일반누에고치 추출물(실시예 17-9) 1.0 0.998
일반누에고치 추출물(실시예 18) 1.0 0.935
황금누에고치 추출물(실시예 1) 1.0 2.117
황금누에고치 추출물(실시예 15) 1.0 1.983
황금누에고치 추출물(실시예 16) 1.0 1.995
황금누에고치 추출물(실시예 17-9) 1.0 2.129
황금누에고치 추출물(실시예 18) 1.0 1.997
양성 대조군 TGF-β(10ng/ml) 10ng/ml 1.423
음성 대조군 0.0 0.921
피부 세포 재생은 세포 활성율로 측정하는데 본 발명의 황금누에고치 추출물은 일반누에고치 추출물에 비해 다양한 추출방법을 통해 얻은 시료에서 세포 재생 효과가 더 우수함을 확인하였다. 또한 세포재생 효과가 있는 것으로 알려진 물질인 TGF-β(10ng/ml) 와의 농도차이를 감안해도 세포재생 효과가 유사한 본 실험결과를 통해 본 발명의 황금누에고치 추출물은 세포재생효과가 우수함을 확인하였다.
시험예 5: MMP-1 생성 억제 효과
상기 실시예에서 얻은 황금누에고치 추출물이 콜라겐 분해효소인 MMP-1(matrix metalloproteinase I) 생성을 억제하는 효과가 있는지의 여부를 측정하기 위해, MMP-1의 생성을 억제하는 효과가 있는 것으로 알려진 물질인 TGF-β(10ng/ml)를 비교군으로 하여 MMP-1의 생성을 억제하는 효과를 측정하였다.
인간 정상 섬유아세포를 48공 평판배양기에 1×106 cells/well의 농도로 배양한 다음, 24시간 동안 10% FBS 첨가 배지 조건하에 안정화시킨 뒤, 무혈청 배지로 교환 후, 일반누에고치와 황금누에고치 추출물들의 시료를 최종 농도 100 ㎍/㎖ 되게 처리하여 48시간동안 배양하였다. 대조군은 상기 일반누에고치와 황금누에고치 추출물을 포함하지 않는 무혈청 배지에서 동 시간 배양한 조건으로 하였다. 배양 후, 각 평판기의 상층액을 모아 MMP-1 분석 Kit(Amersham, USA)를 이용하여 합성된 MMP-1의 양(ng/㎖)을 측정하고, 하기 식에 따라 MMP-1 생성 억제율(%)을 계산하였으며, 그 결과를 표 9에 나타내었다.
Figure pat00001
시험 물질 MMP-1 생성 억제율(%)
일반누에고치 추출물(실시예 1) 40.1
일반누에고치 추출물(실시예 15) 37.5
일반누에고치 추출물(실시예 16) 36.2
일반누에고치 추출물(실시예 17-9) 42.2
일반누에고치 추출물(실시예 18) 41.6
황금누에고치 추출물(실시예 1) 93.1
황금누에고치 추출물(실시예 15) 89.9
황금누에고치 추출물(실시예 16) 88.1
황금누에고치 추출물(실시예 17-9) 95.8
황금누에고치 추출물(실시예 18) 91.2
양성대조군(TGF-β10ng/ml) 70.1
상기 표 9의 결과에서와 같이, 본 발명의 황금누에고치 추출물은 동일한 100㎍/㎖ 농도에서 일반누에고치 추출물과 비교하였을 때, MMP-1 생성 억제율이 훨씬 더 우수한 것으로 나타났다. 그 중에서도 효소에 의한 황금누에고치 추출물(실시예 17-9)의 억제율은 95.8%으로 나타났으며, MMP-1 생성 억제효과가 있는 것으로 알려진 물질인 TGF-β의 농도(10ng/ml)와 본 발명의 황금누에고치 추출물의 실험 농도(100㎍/㎖) 차이를 감안해도 MMP-1 생성 억제 효과가 있다는 것을 나타내었다.
시험예 6: 자외선 유도에 의한 MMP-1 생성 억제 효과
MMP-1은 자외선에 의해 그 양이 증가되는 것으로 알려져 있으며, 본 발명의 황금누에고치 추출물이 자외선에 의해 생성이 증가되는 MMP-1의 양을 억제하는지를 알아보고자 실험을 실시하였다. 자외선 유도에 의한 MMP-1 생성 억제 효과 측정은 시료 처리에 앞서 UV-B(40mJ/cm2)를 일정량 처리하는 것을 제외하고는 상기 시험예 5와 동일하게 실시하였다.
황금누에고치 추출물의 MMP-1 생성 억제율(%)은 상기 시험예 4의 식에 따라 계산하였으며, 그 결과를 하기 표 10에 나타내었다. 이때, MMP-1 생성 억제 효과가 있는 것으로 알려진 물질인 TGF-β(10ng/ml, USA)을 비교군으로 사용하였고, 일반누에고치와 황금누에고치 추출물은 0.01%(w/v) 농도로 실험을 실시하였다.
시험 물질 MMP-1 생성 억제율(%)
일반누에고치 추출물(실시예 1) 40.2
일반누에고치 추출물(실시예 15) 37.6
일반누에고치 추출물(실시예 16) 37.8
일반누에고치 추출물(실시예 17-9) 43.1
일반누에고치 추출물(실시예 18) 41.2
황금누에고치 추출물(실시예 1) 98.1
황금누에고치 추출물(실시예 15) 88.8
황금누에고치 추출물(실시예 16) 89.1
황금누에고치 추출물(실시예 17-9) 98.3
황금누에고치 추출물(실시예 18) 95.4
양성 대조군(TGF-β10ng/ml) 65.2
배양된 섬유아세포에 UV-B를 조사 후 황금누에고치 추출물 및 TGF-β가 첨가된 배양액에 분비된 콜라겐 분해효소 MMP-1의 양을 측정한 결과를 상기 표 10에 나타내었다. 본 발명의 황금누에고치 추출물은 동일한 100㎍/㎖ 농도에서 일반누에고치 추출물과 비교하였을 때, MMP-1 생성 억제율이 더 우수한 것으로 나타났다. 특히 효소에 의한 황금누에고치 추출물(실시예 17-9)이 98.3%의 억제율을 나타냈다. MMP-1 생성 억제효과가 있는 것으로 알려진 물질인 TGF-β의 농도(10ng/ml)와 본 발명의 황금누에고치 추출물의 농도(0.01%(w/v)) 차이를 감안해도, 본 발명의 황금누에고치 추출물은 MMP-1 생성 억제 효과가 있다는 것을 보여준다.
시험예 7: 콜라겐 합성 증진 효과
인간 정상 섬유아세포를 48공 평판배양기에 1×106 cells/well의 농도로 배양한 다음, 24시간 동안 10% FBS 첨가 배지 조건하에 안정화시킨 뒤, 상기 황금누에고치 추출물을 최종농도 100 ㎍/㎖로 첨가한 무혈청 DMEM 배지 및 대조군으로 황금누에고치 추출물이 포함되지 않은 무혈청 DMEM 배지에서 48시간 동안 추가로 배양하였다. 황금누에고치 추출물들의 시료를 최종 농도 100 ㎍/㎖ 되게 처리하여 48시간동안 배양하였다. 대조군은 상기 일반누에고치와 황금누에고치 추출물을 포함하지 않는 무혈청 배지에서 동 시간 배양한 조건으로 하였다. 배양 후, 각 평판기의 상층액을 모아 Collagen Kit(Takara, Japan)를 이용하여 프로콜라겐 (procollagen) 타입 I C-펩타이드 (PICP) 양을 측정하여 ng/㎖ 환산하였으며, 이에 의해 합성된 콜라겐 양을 측정하였다.
본 실험의 비교군으로는 콜라겐 합성 증진 효과가 있는 것으로 알려진 물질인 TGF-β(10ng/ml, USA)를 비교군으로 사용하였고, 일반누에고치와 황금누에고치 추출물은 0.01%(w/v) 농도로 실험을 실시하였다. 콜라겐 생합성 증가율(%)은 하기 식에 따라 계산하였으며, 그 결과를 표 11에 나타내었다.
Figure pat00002
시험 물질 콜라겐 생합성 증가율(%)
일반누에고치 추출물(실시예 1) 49.8
일반누에고치 추출물(실시예 15) 47.3
일반누에고치 추출물(실시예 16) 47.4
일반누에고치 추출물(실시예 17-9) 51.2
일반누에고치 추출물(실시예 18) 48.9
황금누에고치 추출물(실시예 1) 98.5
황금누에고치 추출물(실시예 15) 89.9
황금누에고치 추출물(실시예 16) 90.1
황금누에고치 추출물(실시예 17-9) 99.8
황금누에고치 추출물(실시예 18) 98.8
양성 대조군(TGF-β10ng/ml) 89.6
상기 표 11은 섬유아세포를 이용하여 일반누에고치 추출물과 황금누에고치 추출물 및 TGF-β를 첨가한 배양액의 콜라겐 합성 증진 효과를 측정한 결과를 나타낸 것이다. 본 발명의 황금누에고치 추출물은 동일한 0.01% 농도에서 일반누에고치 추출물과 비교하였을 때, 콜라겐 생합성율이 더 우수한 것으로 나타났다. 또한, 황금누에고치 효소에 의한 추출물(실시예 17-9)은 0.01% 농도에서 콜라겐 생합성율을 측정했을 때, 99.8%의 생합성율을 나타내는 것을 알 수 있다. 콜라겐 합성 증진 효과가 있는 것으로 알려진 물질인 TGF-β의 농도(10ng/ml)와 본 발명의 황금누에고치 추출물의 농도(0.01%(w/v)) 차이를 감안해도, 본 발명의 황금누에고치 추출물은 콜라겐 합성 증진 효과가 있다는 것을 보여준다.
시험예 8: B16F10 멜라닌형성세포에 대한 멜라닌 생성 억제효과
상기 실시예에서 수득한 황금누에고치 추출물의 미백 효과를 확인하기 위해서 B16F10 멜라닌 형성 세포를 이용하여 멜라닌 생성 억제 정도를 알아보고자 실험을 실시하였다.
B16F10 마우스 유래 멜라닌 형성 세포를 6공 평판배양기에 2 × 106개의 농도로 배양한 다음, 독성을 유발하지 않는 농도로 황금누에고치 추출물을 처리하여 72시간 동안 배양하였다. 배양 후, 세포를 회수하여, 세포 내 멜라닌을 로탄법((Lotan: Cancer Res., 40: 3345-3350, 1980)을 변형하여 정량하였다. 회수한 세포를 PBS로 세척 후, 균질화 용액을 첨가하여 5분간 와류한 후, 원심분리하고 세포 여액에 NaOH를 첨가하여 405nm에서 흡광도를 측정하여 멜라닌을 정량하고 멜라닌 생성 저해율(%)을 측정하였다.
B16F1 멜라닌 형성 세포의 멜라닌 생성 저해율(%)은 하기 식에 의하여 계산하였으며, 그 결과를 표 12에 나타내었다. 이때 멜라닌 생성 저해 효과가 있는 것으로 알려진 물질인 하이드로퀴논과 알부틴을 비교군으로 사용하였다.
멜라닌 생성 저해율 (%) = [(A-B)/A] × 100
A : 시료를 첨가하지 않은 웰의 멜라닌 양
B : 시료를 첨가한 웰의 멜라닌 양
시료명 처리농도(%, w/v) 멜라닌 생성 저해율(%)
일반누에고치 추출물(실시예 1) 0.1 0.03
일반누에고치 추출물(실시예 15) 0.1 0.02
일반누에고치 추출물(실시예 16) 0.1 0.02
일반누에고치 추출물(실시예 17-9) 0.1 0.04
일반누에고치 추출물(실시예 18) 0.1 0.03
황금누에고치 추출물(실시예 1) 0.1 0.14
황금누에고치 추출물(실시예 15) 0.1 0.10
황금누에고치 추출물(실시예 16) 0.1 0.11
황금누에고치 추출물(실시예 17-9) 0.1 0.15
황금누에고치 추출물(실시예 18) 0.1 0.14
하이드로퀴논 0.1 0.08
알부틴 0.1 0.03
상기 표 12의 결과에서 알 수 있듯이, 본 발명의 황금누에고치 추출물은 일반누에고치 추출물보다 B16F10 멜라닌 형성 세포에서 멜라닌 생성을 저해하는 것을 알 수 있다. 특히 황금누에고치 효소에 의한 추출물(실시예 17-9)은 0.1% 농도에서 멜라닌 생성 저해율 값이 0.15%로 나타났으며, 동일한 농도에서 기존의 미백 효과가 있는 것으로 알려진 물질인 알부틴 및 하이드로퀴논과 비교했을 때, 하이드로퀴논과 알부틴보다 우수한 멜라닌 생성 저해효과를 나타내었다. 따라서 본 발명의 황금누에고치 추출물을 포함하는 화장료 조성물은 멜라닌 생성 억제에 우수한 효과가 있음을 알 수 있다.
시험예 9: 자외선 조사에 의한 세포 독성 완화 효과
상기 실시예에서 수득한 황금누에고치 추출물의, 자외선 조사에 의한 세포 독성의 완화 효과를 평가하기 위하여 실험하였다. 인간 정상 섬유아세포를 24공 평판배양기에 5×104 cells/well의 농도로 배양한 다음, 24시간 동안 10% FBS 첨가 배지 조건하에 안정화시킨 뒤, 배양액을 제거하고 PBS 조건하에서 UV-B(10mJ/cm2) 조사한 후 PBS를 제거하고 세포 배양 배지(FBS가 첨가된 것)로 교체하였다. 여기에 황금누에고치 추출물을 처리한 후 24 시간 동안 배양하였다. 배양 후 세포 독성 완화 효과를 보기 위해 MTT assay을 이용하여 세포의 생성 정도를 비교 평가하였으며, 양성 대조군으로 TGF-β(10ng/mL)을 적용하였으며 그 결과는 하기 표 13에 나타내었다. 하기 식에 의해 세포 생존율(%)을 측정하고, 자외선 조사에 의한 세포 독성 완화율(%)을 계산하였다.
세포 생존율(%) =〔(St-Bo)/(Bt-Bo)〕× 100
Bo : 세포배양배지 만을 발색 반응한 웰의 565 nm 흡광도
Bt : 시료를 처리하지 않은 웰을 발색 반응한 웰의 565 nm 흡광도
St : 시료를 처리한 웰을 발색 반응한 웰의 565 nm 흡광도
자외선 조사에 의한 세포 독성 완화율(%) =〔1-(St-Bo)/(Bt-Bo)〕× 100
Bo : 자외선 조사하지 않고 시료 처리하지 않은 웰의 세포 생존율
Bt : 자외선 조사하고 시료를 처리하지 않은 웰의 세포생존율
St : 자외선 조사하고 시료를 처리한 웰의 세포생존율
시료명 처리 농도(%, w/v) 세포 독성 완화율(%)
일반누에고치 추출물
(실시예 1)
 0.0125 28
0.025 31
0.050 55
일반누에고치 추출물
(실시예 15)
 0.0125 18
0.025 23
0.050 40
일반누에고치 추출물
(실시예 16)
 0.0125 19
0.025 21
0.050 38
일반누에고치 추출물
(실시예 17-9)
 0.0125 34
0.025 45
0.050 52
일반누에고치 추출물
(실시예 18)
 0.0125 32
0.025 48
0.050 50
황금누에고치 추출물
(실시예 1)
 0.0125 69
0.025 86
0.050 98
황금누에고치 추출물
(실시예 15)
 0.0125 59
0.025 81
0.050 92
황금누에고치 추출물
(실시예 16)
 0.0125 58
0.025 82
0.050 93
황금누에고치 추출물
(실시예 17-9)
 0.0125 75
0.025 88
0.050 99
황금누에고치 추출물
(실시예 18)
 0.0125 74
0.025 87
0.050 97
양성 대조군(TGF-β10ng/ml) 10 ng/ml 85
상기 표 13에 나타나는 바와 같이, 본 발명의 황금누에고치 추출물은 일반누에고치 추출물보다 인간 정상 섬유 아세포에서 세포 독성 완화율을 우수하게 낮추는 것을 알 수 있다. 특히, 황금누에고치 효소에 의한 추출물(실시예 17-9)의 0.0125% 농도에서 자외선에 의한 세포 독성 완화율은 75%, 0.025% 농도에서 88%, 0.050% 농도에서 99% 처리시 황금누에고치 추출물의 처리농도가 증가됨에 따라 농도 의존적으로 세포 독성 완화율이 증가되는 양상을 보여, 자외선에 의한 세포 독성을 효과적으로 방어함을 알 수 있었다. 상기 실험결과를 통해 본 발명의 황금누에고치 추출물은 자외선 조사에 의한 세포손상을 낮은 농도에서도 효과적으로 방어함을 알 수 있었다.
시험예 10: 자외선 조사에 의한 염증성 사이토카인 발현 억제 효과
상기 실시예에서 수득한 황금누에고치 추출물의, 자외선 조사에 의해 발현되는 염증성 사이토카인 발현 억제 효과를 평가하였다. 인간 정상 섬유아세포를 24공 평판배양기에 5×104 cells/well의 농도로 배양한 다음, 24시간 동안 10% FBS 첨가 배지 조건하에 안정화시킨 뒤, 배양액을 제거하고 PBS 조건하에서 UV-B(10mJ/cm2) 조사한 후 PBS를 제거하고 세포 배양 배지(FBS가 첨가된 것)로 교체하였다. 여기에 황금누에고치 추출물을 처리한 후 5시간 배양하였다. 배양 후, 상층액을 취하여 IL-1α를 정량함으로써 황금누에고치 추출물의, 염증성 사이토카인 발현 억제 효과를 판단하였다. IL-1α의 양은 효소 면역 분석법(Enzyme-linked Immunosorbent Assay)을 이용하여 정량화하였으며, 양성대조군으로 케토 프로펜(Ketoprofen)를 사용하였다. 염증성 사이토카인(IL-1α)의 발현 억제율(%)은 하기 식에 의해 계산하였다.
염증성 사이토카인 발현 억제율(%) =〔1-(St-Bo)/(Bt-Bo)〕× 100
Bo : 자외선 조사하지 않고 시료 처리하지 않은 웰의 IL-1α생성량
Bt : 자외선 조사하고 시료를 처리하지 않은 웰의 IL-1α생성량
St : 자외선 조사하고 시료를 처리한 웰의 IL-1α생성량
시료명 처리 농도(%, w/v) 염증성 사이토카인
발현 억제율(%)
일반누에고치 추출물
(실시예 1)
 0.0125 18
0.025 29
0.050 34
일반누에고치 추출물
(실시예 15)
 0.0125 16
0.025 20
0.050 28
일반누에고치 추출물
(실시예 16)
 0.0125 15
0.025 22
0.050 24
일반누에고치 추출물
(실시예 17-9)
 0.0125 19
0.025 30
0.050 37
일반누에고치 추출물
(실시예 18)
 0.0125 18
0.025 28
0.050 35
황금누에고치 추출물
(실시예 1)
 0.0125 43
0.025 66
0.050 81
황금누에고치 추출물
(실시예 15)
 0.0125 33
0.025 52
0.050 70
황금누에고치 추출물
(실시예 16)
 0.0125 31
0.025 49
0.050 69
황금누에고치 추출물
(실시예 17-9)
 0.0125 46
0.025 69
0.050 84
황금누에고치 추출물
(실시예 18)		 0.0125 35
0.025 56
0.050 72
Ketoprofen 100 μg/mL 48
상기 표 14에서 확인되는 바와 같이, 본 발명의 황금누에고치 추출물은 일반누에고치 추출물보다 인간 정상 섬유 아세포에서 염증 사이토카인 발현 억제율을 우수하게 낮추는 것을 알 수 있다. 황금누에고치 효소에 의한 추출물은 자외선에 의한 염증성 사이토카인인 IL-1α의 생성을 0.0125% 농도에서 46% 억제하고, 0.025%의 농도로 처리했을 때는 IL-1α의 생성을 69% 억제하고, 0.050%의 농도로 처리 했을 때는 IL-1α의 생성을 84% 억제하는 것을 알 수 있었다. 따라서 본 발명의 황금누에고치 추출물은 자외선에 의한 염증 발생을 낮은 농도에서도 효과적으로 방어함을 알 수 있다.
제형예 1: 유연화장수
유연화장수의 제형예는 통상의 방법에 따라 하기 표 15와 같이 제조하였다.
성분(중량%) 제형예 1 비교 제형예1 비교 제형예2 비교 제형예3
황금누에고치 추출물
(실시예 17-9) 		3.0 - - -
일반누에고치 추출물
(실시예 17-9)		 - 3.0 - -
정제수 - - 3.0 -
백굴채 추출물 - - - 3.0
글리세린 5.1 5.1 5.1 5.1
프로필렌글리콜 4.2 4.2 4.2 4.2
토코페릴아세테이트 3.0 3.0 3.0 3.0
유동파라핀 4.6 4.6 4.6 4.6
트리에탄올아민 1.0 1.0 1.0 1.0
스쿠알란 3.1 3.1 3.1 3.1
마카다미아너트오일 2.5 2.5 2.5 2.5
폴리솔베이트60 1.6 1.6 1.6 1.6
솔비탄세스퀴롤레이트 1.6 1.6 1.6 1.6
프로필파라벤 0.6 0.6 0.6 0.6
카르복실비닐폴리머 1.5 1.5 1.5 1.5
향 미량 미량 미량 미량
방부제 미량 미량 미량 미량
정제수 잔량 잔량 잔량 잔량
계 100 100 100 100
제형예 2: 수렴화장수
수렴화장수의 제형예는 통상의 방법에 따라 하기 표 16와 같이 제조하였다.
성 분 함량(중량%)
황금누에고치 추출물(실시예 1) 1.5
글리세린 2.0
1.3-부틸렌글리콜 2.0
알란토인 0.2
DL-판테놀 0.2
이.디.티.에이-2NA 0.02
벤조페논-9 0.04
소듐 히아루로네이트 3.0
에탄올 15.0
폴리솔베이트 20 0.3
위치하젤 추출물 2.0
구연산 미량
방부제, 향, 색소 미량
정제수 잔량
합 계 100
제형예 3: 영양화장수
영양화장수의 제형예는 통상의 방법에 따라 다음 표 17과 같이 제조하였다.
성분 함량(중량%)
황금누에고치 추출물(실시예 17-9) 1.5
스테아릴 알콜 1.5
라놀린 1.5
폴리솔베이트 60 1.3
솔비탄스테아레이트 0.5
경화식물유 1.0
광물유 5.0
스쿠알란 3.0
트리옥타노인 2.0
디메치콘 0.8
초산토코페롤 0.5
카르복시비닐폴리머 0.12
글리세린 5.0
1.3-부틸렌글리콜 3.0
소듐히아루로네이트 5.0
트리 에탄올아민 0.12
방부제, 향, 색소 미량
정제수 잔량
합계 100
제형예 4: 영양크림
영양크림의 제형예는 통상의 방법에 따라 하기 표 18과 같이 제조하였다.
성 분(중량%) 제형예 4 비교 제형예 4 비교 제형예 5 비교 제형예 6
황금누에고치 추출물
(실시예 17-9)		 3.0 - - -
일반누에고치 추출물
(실시예 17-9)		 - 3.0 - -
아데노신 - - - 3.0
친유형 모노스테아린산글리세린 2.0 2.0 2.0 2.0
세테아릴알콜 2.2 2.2 2.2 2.2
스테아린산 1.5 1.5 1.5 1.5
밀납 1.0 1.0 1.0 1.0
폴리솔베이트 60 1.5 1.5 1.5 1.5
솔비탄스테아레이트 0.6 0.6 0.6 0.6
경화식물유 1.0 1.0 1.0 1.0
스쿠알란 3.0 3.0 3.0 3.0
광물유 5.0 5.0 5.0 5.0
트리옥타노인 5.0 5.0 5.0 5.0
디메치콘 1.0 1.0 1.0 1.0
소듐마그네슘실리케이트 0.1 0.1 0.1 0.1
글리세린 5.0 5.0 5.0 5.0
베타인 3.0 3.0 3.0 3.0
트리에타올아민 1.0 1.0 1.0 1.0
소듐히아루로네이트 4.0 4.0 4.0 4.0
방부제, 향, 색소 미량 미량 미량 미량
정제수 잔량 잔량 잔량 잔량
합계 100 100 100 100
제형예 5. 마사지 크림
마사지 크림의 제형예는 통상의 방법에 따라 하기 표 19와 같이 제조하였다.
성분 함량(중량%)
황금누에고치 추출물(실시예 18) 3.0
친유형 모노스케아린산 글리세린 1.5
스테아릴알콜 1.5
스테아린산 1.0
폴리솔베이트 60 1.5
솔비탄스테아레이트 0.6
이소스테아릴이소스테레이트 5.0
스쿠알란 5.0
광물유 5.0
디메치콘 0.5
히드록시에칠셀룰로오스 0.12
글리세린 6.0
트리에탄올아민 0.7
방부제, 향, 색소 미량
정제수 잔량
합 계 100
제형예 6: 에센스
에센스의 제형예는 통상의 방법에 따라 하기 표 20과 같이 제조하였다.
성분 함량(중량%)
황금누에고치 추출물(실시예 18) 5.0
글리세린 10.0
베타인 5.0
피이지 1500 2.0
알란토인 0.1
DL-판테놀 0.3
이.디.티.에이-2Na 0.02
벤조페논 - 9 0.04
히드록시에칠 셀룰로오스 0.1
소듐히아루로네이트 8.0
카르복시비닐폴리머 0.2
트리에탄올아민 0.18
옥틸도데칸올 0.3
옥틸도데세스 -16 0.4
에탄올 6.0
방부제, 향, 색소 미량
정제수 잔량
합계 100
제형예 7: 팩
팩의 제형예는 통상의 방법에 따라 하기 표 21과 같이 제조하였다.
성 분 함량(중량%)
황금누에고치 추출물(실시예 17-9) 3.0
폴리비닐알콜 15.0
셀룰로오스 검 0.15
글리세린 3.0
피이지1500 2.0
사이크로데스트린 0.15
DL - 판테놀 0.4
알란토인 0.1
글리시리진산모노암모늄 0.3
니코틴아미드 0.5
에탄올 6.0
피이지 40 경화피마자유 0.3
향, 색소, 방부제 미량
정제수 잔량
합계 100
시험예 11: 피부 주름 개선 효과
본 발명의 황금누에고치 추출물을 함유하는 화장료의 주름 개선 효과를 실제 사용 테스트를 통하여 평가 하였다. 상기 황금누에고치 추출물을 함유하는 영양크림(제형예 4), 황금누에고치 추출물을 일반누에고치 추출물로 대체한 크림(비교 제형예 4), 황금누에고치 추출물을 정제수로 대체한 크림(비교 제형예 5), 황금누에고치 추출물 대신 주름개선효과가 있는 것으로 알려진 물질인 아데노신을 함유하는 크림(비교 제형예 6)을 사용하였다. 80명의 여성을 대상으로 얼굴 양쪽면을 사용하여 6주 후의 주름 개선 효과를 육안으로 평가하여 주름 개선 정도를 확인하였다. 이 평가를 토대한 주름 개선 효과 결과는 하기의 표 22에 나타내었다.

 주름 개선 효과
우수 약간 없음
제형예 4
(황금누에고치 추출물)		 17 2 1
비교 제형예 4
(일반누에고치 추출물)		 8 7 5
비교 제형예 5(정제수) 0 1 19
비교 제형예 6(아데노신) 15 4 1
상기 표 22의 결과에서도 알 수 있듯이, 본 발명의 황금누에고치 추출물을 함유한 제형예 4의 영양크림은 황금누에고치 추출물을 함유하지 않은 비교 제형예 5의 크림에 비하여 높은 주름개선 효과를 보여주었으며, 황금누에고치 추출물 대신 일반누에고치 추출물을 함유하는 비교 제형예 4의 크림보다도 높은 주름개선 효과를 나타냈다. 또한, 황금누에고치 추출물 대신 아데노신을 함유하는 비교 제형예 6의 크림과 유사한 우수한 피부 주름개선 효과를 나타내었다.
시험예 12: 피부 탄력 개선효과
본 발명의 황금누에고치 추출물을 함유하는 화장료의 피부 탄력 개선효과에 대한 임상실험을 실시하였다. 임상시험은 각 화장료의 실제 사용 테스트를 통하여 평가하였다.
실험은 상기 황금누에고치 추출물을 함유하는 영양크림(제형예 4), 황금누에고치 추출물을 일반누에고치 추출물로 대체한 크림(비교 제형예 4), 황금누에고치 추출물을 정제수로 대체한 크림(비교 제형예 5), 황금누에고치 추출물 대신 주름개선효과가 있는 것으로 알려진 물질인 아데노신을 함유하는 크림(비교 제형예 6)을 사용하여, 사람을 대상으로 화장료의 사용으로 인한 피부 탄력 개선효과를 확인 및 비교 평가하였다.
피실험자(30세~45세의 여성) 30명을 대상으로, 실험군을 두 부류로 나누어, 한 군은 얼굴 오른쪽 부위에는 제형예 4를, 얼굴 왼쪽 부위에는 비교 제형예 4, 다른 한 군은 비교 제형예 5, 나머지 한 군은 비교 제형예 6를 각각 1일 2회씩 연속 8주간 도포하였다. 실험 완료 후 피부 탄력 개선 효과는 제품 사용 전과 2개월간 사용 후의 피부 탄력을 각각 피부 탄력 측정기(cutometer SEM 575, C+K Electronic Co., Germany)를 이용하여 측정하고, 실험결과를 하기 표 23에 Cutometer SEM 575의 △R8값으로 나타내었다. 이러한 △R8값은 피부의 점탄성(viscoelasticity)의 성질을 나타낸다.
실험군 피부탄력효과(△R8)
제형예 4(황금누에고치 추출물) 0.43
비교 제형예 4(일반누에고치 추출물) 0.17
비교 제형예 5(정제수) 0.08
비교 제형예 6(아데노신) 0.21
상기 표 23에 나타난 바와 같이, 유효성분으로 황금누에고치 추출물을 함유한 제형예 4의 크림은 황금누에고치 추출물을 함유하지 않는 비교 제형예 5의 크림에 비해 약 5.4배 이상 우수한 피부 탄력 개선 효과를 나타내었고, 일반누에고치 추출물을 함유하는 비교 제형예 4의 화장료 조성물과 비교하여 약 2.5배 정도 피부 탄력 개선 효과를 나타내었고, 아데노신을 함유하는 비교 제형예 6의 화장료 조성물과 비교하여 약 2.0배 정도 피부 탄력 개선 효과를 나타내어 본 발명의 황금누에고치 추출물을 함유하는 화장료 조성물이 우수한 피부 탄력 개선 효과가 있음을 알 수 있다.
시험예 13: 피부 보습력 개선효과
평가조건
본 발명의 황금누에고치 추출물을 함유하는 화장료의 피부 보습력 개선효과를 알아보기 위하여 다음과 같이 실험을 실시하였다. 피부 질환이 없는 20-40대 60명을 대상으로 1조 당 20명 씩 3개조로 나누고, 각 조별로 본 발명의 황금누에고치 추출물을 함유하는 유연 화장료 조성물(제형예 1)을 적용 하였다. 이때 비교를 위하여, 황금누에고치 추출물 대신에 일반누에고치 추출물을 포함하는 화장료(비교 제형예 1), 황금누에고치 추출물 대신에 정제수를 포함하는 화장료(비교 제형예 2)를 대조처방예로, 황금누에고치 추출물 대신에 보습효과가 있는 것으로 알려진 백굴채 추출물을 함유하는 화장료(비교 제형예 3)를, 매일 2회씩 1개월간 얼굴 및 전박부에 도포하게 하였다.
미리 도포 시작 전 항온, 항습 조건(24도, 습도 40%)에서 Corneometer를 이용하여 피부 전도도를 측정하여 기본 값을 삼고, 1주, 2주, 4주경과 후의 피부 전도도를 측정하여 그 증가율을 평가하였다. 그 결과를 하기 표 24에 나타내었다.
시료
 피부 전도도 증가율(%)
1주 후 2주 후 4주 후
제형예 1
(황금누에고치 추출물) 		56 60 60
비교 제형예 1
(일반누에고치 추출물)		 30 38 45
비교 제형예 2
(정제수) 		11 13 11
비교 제형예 3
(백굴채 추출물)		 60 65 60
상기 표 24의 결과에서 확인되는 바와 같이, 본 발명의 황금누에고치 추출물을 함유하는 화장료인 제형예 1의 경우 비교 제형예 2에 비하여 피부 전도도 증가율이 매우 우수하였다. 또 다른 대조군으로 일반누에고치 추출물을 함유하는 화장료인 비교 제형예 1과 비교해도 피부 전도도 증가율이 우수한 것으로 나타났다. 보습효과가 있는 것으로 알려진 백굴채 추출물을 함유하는 화장료인 비교 제형예 3과 유사하게 높은 피부 전도도 증가율을 나타내었다. 본 발명의 황금누에고치 추출물을 함유하는 화장료는 정제수를 함유하는 화장료에 비해 피부 수분 함량도 높게 유지한다는 것을 확인할 수 있다. 피부 전도도는 피부 수분량에 비례하므로, 본 발명의 황금누에고치 추출물을 함유하는 화장료는 피부 보습력 개선 효과가 탁월함을 알 수 있다.
임상평가
상기 제형예에 따라 제조된 화장료 조성물에 대한 임상 보습 효과를 다음과 같이 측정하였다. 설문 조사를 통하여 피부가 건조하다고 느끼는 건강한 성인 남녀 20명을 선정한 후 상박을 10개 사이트로 나눈 후 각 시료를 1일 2회씩 4주간 도포하게 하였다. 보습 효과는 실사용 시험 시작 후부터 매 2주간, 그리고 종료 후의 개선 효과를 Corneometer CM 820 사용하여 평가하였다. 상기 실험 결과는 하기 표 25에 나타내었다.
구분 TEWL(g/h/m2)
초기값 사용 2주 후 사용 4주 후
제형예 1
(황금누에고치 추출물)		 32.0 46.7 57.7
비교 제형예 1
(일반누에고치 추출물)		 32.2 37.1 48.3
비교 제형예 2
(정제수)		 32.2 33.1 34.2
비교 제형예 3
(백굴채 추출물)		 32.1 48.0 57.2
상기 표 25에 나타난 바와 같이, 기기 측정에 의한 피부 보습력 개선 효과 평가 결과에서, 본 발명의 황금누에고치 추출물을 함유하는 화장료(제형예 1)는 황금누에고치 추출물을 함유하지 않는 화장료(비교제형예 2)에 비하여 피부 보습력 개선 효과가 매우 우수하였다. 또 다른 대조군으로 일반누에고치 추출물을 함유하는 화장료인 비교 제형예 1과 비교해도 피부 보습력 개선 효과가 우수한 것으로 나타났다. 또한, 보습효과가 있는 것으로 알려진 백굴채 추출물을 함유하는 화장료(비교 제형예 3)와 비교했을 때에도 유사하게 우수한 보습력 개선효과가 있는 것으로 측정되었다. 사용 2주, 4주 후 보습력 개선 효과를 측정한 결과, 본 발명의 황금누에고치 추출물을 함유하는 화장료를 사용하면 피부 보습력 개선 효과가 개선됨을 확인할 수 있었다.

Claims (9)

  1. 황금누에(Golden Silk)의 누에고치 추출물을 화장료의 총 중량에 대하여 0.00001 ~ 30.0%(w/w)를 함유하는 화장료 조성물.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 항산화용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  3. 제 1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부 주름 개선 및 피부탄력 개선용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  4. 제 1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부 보습용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  5. 제 1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부 미백용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  6. 제 1항에 있어서, 상기 황금누에(Golden Silk)의 누에고치 추출물은 플라보자임(Flavourzyme), 수미자임(Sumizyme), 프로타멕스(Protamex), 알칼라제(Alcalase), 코지자임(Kojizyme) 및 그 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 효소용매를 이용하여 추출한 것임을 특징으로하는 화장료 조성물.
  7. (A)정제수로 세척하고 건조시킨 황금누에고치를 분쇄하여 분말화하는 단계;(B)상기 황금누에고치 분말을 60℃~150℃, 10분∼2시간 조건으로 증기로 찌는 단계;(C)상기 증기로 찐 분말을 음건하는 단계; 및 (D)탄소수 1-4의 저급 알코올 용매로 추출하는 단계를 포함하는 황금누에(Golden Silk)의 누에고치 추출물의 제조 방법.
  8. (A)정제수로 세척하고 건조시킨 황금누에고치를 분쇄하여 분말화하는 단계;(B)반응기에 상기 황금누에고치 분말을 넣고 0.1~2.0%(v/v)되게 효소를 가하여 50~60℃ 조건에서 4~6일간 배양하는 단계;(C)배양이 완료된 황금누에고치 발효액을 원심분리하여 배양균을 제거한 후 여과하는 단계; 및 (D)여과액을 다시 3~5℃의 저온 창고에서 8~12일간 숙성시킨 후 여과하는 단계를 포함하는 황금누에(Golden Silk)의 누에고치 추출물의 제조 방법.
  9. 제 8항에 있어서, 상기 효소는 플라보자임(Flavourzyme), 수미자임(Sumizyme), 프로타멕스(Protamex), 알칼라제(Alcalase) 및 코지자임(Kojizyme)이 각각 0.1~2.0 : 0.5~2.0 : 0.1~1.0 : 0.1~1.0 : 1.0의 비율로 혼합 사용되는 것임을 특징으로 하는 황금누에(Golden Silk)의 누에고치 추출물의 제조방법.




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