KR20140054951A - 발효 한방 혼합 추출물이 함유된 미백 화장료 조성물 - Google Patents

발효 한방 혼합 추출물이 함유된 미백 화장료 조성물 Download PDF

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Abstract

이 발명은 홍국균 발효를 이용한 천문동, 홍화인, 흑미, 백강잠, 백지 추출물을 유효 성분으로 함유하여 우수한 미백 기능을 발휘할 수 있게 한 것이 개시되어 있다.

Description

발효 한방 혼합 추출물이 함유된 미백 화장료 조성물 {Whitening Cosmetic Composition Containing Mixture of Fermented Herbal Extracts}
본 발명은 발효 한방 혼합 추출물이 함유된 미백화장료 조성물에 관한 것으로, 특히 홍국균 발효를 이용한 천문동, 홍화인, 흑미, 백강잠, 백지 추출물을 유효 성분으로 함유하여 우수한 미백 기능을 발휘할 수 있게 한 미백 화장료 조성물에 관한 것이다.
최근 고령화 사회의 도래로 웰빙 트랜드가 사회 전반에 뿌리 내리고 있으며, 이러한 분위기로 인하여 식품, 화장품, 주거 환경 등의 모든 분야에서 천연 식물성 소재 및 전통적인 민간 요법으로 전래되는 한약재에 대한 관심을 증폭시키고 있다.
이러한 관심으로 인하여 상대적으로 천연 식물소재의 제품화가 용이한 화장품 산업 분야에서 오래전부터 이를 원료로 사용하는 것이 시도되어 왔고, 기능식품 및 예방의학, 치료의학의 분야에서도 동양의 식물성 약재 (Herbal medicine)가 미국 및 유럽에서까지 허가 및 제품화되기 시작하면서, 천연 식물소재 및 한약재의 인체 유용성에 대한 관심이 증가하였다. 천연 식물소재 또는 한약재는 다양한 생리활성 물질과 항산화 물질을 함유하고 있어 항노화, 항암, 항염, 면역기능 개선 등 다양한 효과를 보이지만, 추출된 이후에는 불안정하고 때론 자극적이어서, 인체에 독성을 띄는 경우도 종종 있다. 따라서, 최근에는 천연 추출물을 안정화시키거나, 독성을 줄이거나, 안정한 유도체로 전환시켜 효과를 높이려는 시도가 많이 진행되고 있으며,그 일환으로 미생물이나 효소를 이용한 생물학적 전환(Biological Transf ormation)방법이 개발되고 있다.
이와 관련된 대표적인 방법으로 발효를 예로 들 수 있다. 발효는 미생물이 가지고 있는 효소를 이용하여 유기물을 분해시켜서 인간 생활에 유용하게 사용되는 물질을 제조하는 과정으로서, 인체에 유용한 물질을 만들어내는 대표적인 발효 미생물로는 홍국균, 효모 등이 있고, 다양한 식품들이 발효 과정에 의해서 생산된다.
또한, 발효는 유용 물질을 만들어 내는 것 이외에도 발효에 관여하는 홍국균이 장 내에서 면역 및 독소제거 (Detoxification)의 역할을 담당하기도 한다.
더 나아가, 장내 미생물에 의한 발효를 통해 섭취된 성분은 분해되어 인체 세포에 흡수가 용이한 저분자 물질로 전환되거나, 불안정하거나 불활성인 형태에서 활성 형태로 전환되어 흡수되기도 하며, 이러한 결과는 장내 미생물에 의한 생물전환의 중요성을 단적으로 보여주는 것이라 볼 수 있다.
따라서, 홍국균 및 효모 등의 미생물 발효에 의해서 천연 식물소재 및 한약재의 효능을 극대화시키거나, 안전성 문제를 해결하기 위한 시도는 다양한 식품, 화장품, 약품 등의 개발에 있어서 중요한 의미를 갖는다 하겠다.
특히, 우수한 항암 효과, 항염증 효과, 항노화 효과, 면역력 증강 효과 등을 갖는 것으로 보고되는 김치나 된장 등의 한국전통식품에서 번식하는 미생물은 생물학적 활성이 뛰어난 것으로 보고되고 있어, 전통 발효 식품에서 분리한 미생물을이용하려는 많은 연구가 진행되고 있다.
또한, 피부의 착색이나 얼룩 등의 색소 침착의 요인으로는 생체 내에서의 대사 장해 등의 내인적 요소와, 자외선 등에 의한 외인적 요소를 들 수 있다.
일반적으로 많이 보여지는 것은 후자의 외인적 요소에 의한 것이며, 자외선에 의해 멜라노사이트가 자극을 받고, 멜라노사이트가 활성화됨으로써 티로시나제 효소가 작용하여 피부에 색소 침착 생긴다. 이 멜라노사이트의 활성을 억제하고, 티로시나제 효소 및 멜라닌 색소의 생성을 억제함으로써 피부의 착색이나 얼룩 등의 색소 침착을 방지할 수 있는 것이 알려져 있다.
그래서, 화장품업계에서는 미백 작용을 갖는 물질의 개발이 종래부터 중요시 되고 있고, 이에 따라 하기 특허문헌과 같은 미백 제가 개발되고 있다.
국내 공개특허 10-2002-46616, 홍화인 추출물을 함유하는 미백제.
본 발명은 상기와 같은 점들에 비추어 예의 연구결과 개발한 것으로, 본 발명의 목적은 홍국균 발효 효율을 극대화할 수 있는 천연식물 및 한약재의 추출물을 유효 성분으로 함유하여 안정성 및 안전성이 매우 뛰어나고, 우수한 미백 효능을 갖는 화장료 조성물을 제공하는 데 있다.
상기 목적을 달성하기 위한 본 발명의 우수한 미백기능을 갖는 화장료 조성물은, 홍국균 발효를 이용한 천문동, 홍화인, 흑미, 백강잠, 백지 추출물을 포함하는 것을 특징으로 한다.
본 발명에서, 홍국균 발효를 이용한 천문동, 홍화인, 흑미, 백강잠, 백지 추출물을 혼합 중량비는 다양하게 변형할 수 있으나, 건조 중량비로 1:1:1:1:1 내지 3:1:1:1:1으로 혼합함이 바람직하다.
본 발명에서 사용 가능한 홍국균(KTCT 6120 Monascus　purpureus) 또는 홍국균(KTCT 26768 Monascus　pilosus)의 접종량은 접종 초기 균수가 105 내지 108 cfu/g 또는 105 내지 108 cfu/㎖인 것이 바람직한데, 접종 초기 균수가 105 cfu/g 또는 105 cfu/㎖ 미만인 경우에는 발효시간이 길어지는 문제점이 있고, 108 cfu/g 또는 108 cfu/㎖를 초과하는 때에는 효과의 증가가 크지 않음에도 접종량이 과도한 문제가 있다.
상기 홍국균 배양을 통한 발효 단계는, 최적의 홍국균 발효 조건을 고려할 때에, 통기가 용이한 25℃의 온도에서 720시간 동안 수행될 수 있다.
본 발명에서, 추출 용매는 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올, 에틸아세테이트, 글리세린, 에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜 및 이들의 혼합용매(예를 들어, 함수알코올, 함수글리세린, 함수에틸렌글리콜, 함수프로필렌글리콜, 함수 부틸렌글리콜)중에서 선택된 것일 수 있다. 바람직하게는 물, 탄소수 1 내지 4의 무수알코올 또는 함수알코올에서 선택된 용매로 추출되는 것이다.
여기서, 탄소수 1 내지 4의 알코올은 메탄올, 에탄올, n-프로판올, iso-프로판올, n-부탄올, iso-부탄올, tert-부탄올일 수 있으며, 에탄올이 바람직하다. 함수 알코올은 물을 0.3 내지 90중량%로 함유할 수 있다.
이들 추출용매 중 함수 에탄올이 가장 바람직하며, 함유된 물의 양은 30 내지 90중량% 내가 바람직하며, 80중량%가 보다 더 바람직하다.
본 발명의 홍국균 발효를 이용한 천문동, 홍화인, 흑미, 백강잠, 백지 추출물은 통상의 기술자에게 알려진 공지의 추출법에 의해 제조된다.
예를 들면, 본 발명에서의 홍국균 발효를 이용한 천문동, 홍화인, 흑미, 백강잠, 백지 추출물은, 홍국균 발효를 이용한 천문동, 홍화인, 흑미, 백강잠 및 백지의 각 건조물을 세절하고, 혼합 건조 중량의 1~50배 부피량의 물, 탄소수 1~4의 알코올 또는 이들의 함수 알코올과 중에서 선택된 추출용매를 부가하여 4∼30℃에서 3∼20일간 침적시켜 유효성분을 추출한 후, 추출용매를 감압농축기로 농축하여 수득될 수 있다.
또한, 본 발명의 홍국균 발효를 이용한 천문동, 홍화인, 흑미, 백강잠, 백지 추출물은, 홍국균 발효를 이용한 천문동, 홍화인, 흑미, 백강잠 및 백지의 각 건조물을 분쇄하여 혼합하고, 이들의 혼합 건조 중량의 1~30배 부피량의 물, 탄소수 1~4의 알코올, 에틸아세테이트, 물, 글리세린, 에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜로 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 용매를 사용하며, 이어서 용매가 증발되는 것을 방지하기 위하여 냉각 콘덴서를 구비한 추출기로 30∼100℃에서 3∼48시간 동안 가열 추출하거나 5∼30℃에서 1~5일간 침적시켜 유효성분을 추출하고, 추출 용매를 감압농축기로 농축하여 수득 될 수 있다.
또한, 위에서 열거한 추출용매에 공지된 초음파 추출법 등을 이용하여 제조할 수 있다.
본 발명에 따른 홍국균 발효를 이용한 천문동, 홍화인, 흑미, 백강잠, 백지 추출물은, 물, 탄소수 1 내지 4의 무수 또는 함수알코올로 추출하는 것이 바람직하며, 그 추출온도는 추출용매에 따라 달라질 수 있으나, 50 내지 100℃이 바람직하다.
본 발명의 화장료 조성물에서 홍국균 발효를 이용한 천문동, 홍화인, 흑미, 백강잠 및 백지 추출물은 화장료 조성물의 총 중량에 대하여 0.001~10.0중량%의 양으로 화장료에 첨가될 수 있고, 바람직하게는 0.001∼5.0중량%의 양으로 화장료에 첨가될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 그 제형에 있어서 특별히 한정되는 바가 없으며, 예를 들면, 유연화장수, 영양화장수, 영양로션, 영양크림, 맛사지크림, 영양세럼, 에센스, 팩 등의 제형을 가질 수 있다.
또한, 각 제형의 화장료 조성물에 있어서, 상기의 홍국균 발효를 이용한 천문동, 홍화인, 흑미, 백강잠, 백지 추출물 외에 다른 성분들을 기타 화장료의 제형 또는 사용목적 등에 따라 임의로 선정하여 배합할 수 있다. 예를 들어, 화장료 조성물에 통상적으로 사용되는 착색제(색소), 착향제(향료), 현탁화제, 유화제, 용해보조제,안정제,등장제, pH조절제, 점도조절제, 용제, 방부제 등이 포함할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 홍국균 발효를 이용한 천문동, 홍화인, 흑미, 백강잠, 백지 추출물은 미백 효과를 나타내는 다른 유효성분을 1 이상 포함할 수 있다.
상기에서 홍국균(Monascus)속의 곰팡이는 진균류문 Ascomytina강 Plectomycetes목 Monascaseae과에 속하는 미생물로 유성생식과 무성생식을 통해 생육하며 2차대사산물로 monacolin K, mevinolin, lovastatin, γ-aminobutyric acid(GABA), acethylcholine과 같은 생리활성물질은 콜레스테롤 생합성 효소(HMG-CoA reductase)활성 억제, 혈압상승 억제 및 항산화 활성과 같은 유효성 검증에 관한 많은 연구결과가 보고되고 있다. 따라서 홍국의 우수한 생리활성 효능 때문에 이를 새로운 건강기능식품 개발에 활용 하려는 연구가 활발하게 이루어지고 있는 가운데 홍국을 소재로한 된장, 고추장, 발효메밀, 발효 콩 등이 상품화 되고 있다.
상기에서 천문동(Asparagus cochinchinensis MERR.)은, 백합과에 속하는 다년생 초본식물로 우리나라 남부 해안지방에서 많이 자라며, 뿌리줄기는 짧고 많은 방추형의 뿌리가 사방으로 퍼지며 원줄기는 길이 1~2m로 덩굴성이고 가지가 가늘고 평활하다. 잎처럼 생긴 가지는 1~3개씩 총생하고 선형이며 끝이 뾰족하고, 길이 1~2㎝, 너비 1~1.2㎜로서 활처럼 굽으며 윤채가 있다. 꽃은 연한 황색으로 5~6월에 피고 잎겨드랑이에 1~3개씩 달린다. 열매는 백색이고 흑색 종자가 1개 들어 있다. 한방에서는 뿌리를 약재로 이용한다. 유효성분으로는 아스파라진(asparagine).베타-시토스테롤(β-sitosterol)등이 함유되어 있다.
동물실험에서 이뇨,강장효과가 인정되었으며 실험관 내에서는 황색포도상구균용혈성연쇄상구균, 폐렴쌍구균, 디프테리아균 등에 대한 항균효과가 나타났다. 이 약의 약성은 차고 맛은 달고 약간 쓰다. 효능은 노인의 만성기관지염, 폐결핵 등으로 끈적끈적한 가래가 나오거나 잘 배출되지 않고 열이 있으면서 오래도록 해소가 지속되는 증상에 쓰인다. 다른 거담.진해제와는 달리 기관지의 기능을 활성화시키면서 담을 제거한다. 폐결핵에 걸려 기침.가래가 심하고 농이 배출될 때에도 쓰인다. 결핵후유증으로 미열이 있거나 빈혈과 병후의 쇠약으로 인한 미열을 다스리는 데에도 자주 쓰이며, 천식에도 유효하다. 발열성질환의 후기에 변비가 있고 미열을 수반할 때에도 효험을 본다. 오래 복용하면 피부가 윤택하여지고 소변을 잘 볼 수가 있다. 당뇨병에는 갈증을 제거하여 주며 성기능을 촉진시키는 데에도 사용한다. 금기로는 몸이 차고 장기능이 원활하지 못하여 설사를 하는 사람에게는 쓰지 못한다. 한방에서는 중등도로 이용되며 대표적인 처방으로는 폐결핵에 쓰이는 천문동환과 강장에 활용되는 삼재탕(三才湯)이 있다.
상기 홍화(Carthamus tinctorius)는 높이가 40~ 100cm에 이르는 여러해살이 풀로, 가지를 적게 치는 것과 가지를 많이 쳐서 마치 떨기나무 비슷하게 자라는 두가지 품종이 있다. 또한 매 품종에도 가시가 있는 것과 없는 것이 있다. 잎은 긴 계란모양 또는 버들잎 모양이고 변두리에 가시모양의 톱니가 있다. 6~ 7월에 가지 끝에 둥근 꽃이삭으로 피는데 처음에는 노란색이고 차츰 빨간색을 띤다. 10월에 열매가 성숙되며 수과(瘦果)는 백색이고 길이 6mm 정도로서 윤채(潤彩)가 있으며 짧은 관모(冠毛)가 있다. 잇꽃의 꽃과 씨는 모두 약용으로 쓰인다. 잇꽃은 한방에서 통경(通經)이나 어혈(瘀血) 등에 사용되었고, 씨는 골절, 골다공증 등의 뼈의 치료에 사용되었다. 홍화인은 중국, 일본, 티벳 등에서 많이 재배하고, 우리나라는 중남부 지방에서 재배한다. 수확시기는 대개 7월말이나 8월초이다.
상기 흑미(black rice)에는 항산화,항암,항궤양 효과가 있다고 알려진 안토시아닌이라는 수용성 색소가 있어 검은색을 띠게 된다. 검은 쌀에는 안토시아닌이 검은콩보다 4배 이상 들어 있으며, 비타민 B군을 비롯하여 철,아연,셀레늄 등의 무기염류는 일반 쌀의 5배 이상 함유되어 있다. 이것은 노화와 여러 질병을 일으키는 체내의 활성산소를 효과적으로 중화시킬 뿐만 아니라 심장질병, 뇌졸중, 성인병, 암 예방에도 좋은 성분으로 알려져 있다.
상기 백강잠은 누에나방과 곤충 누에 유충 Bombyx mori (Batrytis bassiana) 이 백강균에 감염되어 죽은 것을 말린 전충으로, 풍사(風邪)를 몰아내고 경련을 진정시키며 울결(鬱結)을 푸는 효능이 있는 약재이다. 누에나방의 새끼가 흰가루병에 걸려 죽은 것을 말린 것으로, 백간잠(白乾蠶)이라고도 한다. 한방에서는 다양한 증세에 사용하는데, 특히 풍증 따위를 다스리는 데에 좋은 효과를 나타낸다. 중시풍담와 인사불성, 구안와사, 반신불수 등에는 백강잠 7개를 빻아서 생강탕으로 복용하면 좋다. 경한 사람은 아침 저녁으로 각각 두 번씩 복용하고, 심한 사람은 3~5회 정도 복용한다. 어린이의 경풍이나 근육이 당기고 사지가 차가운 데에는 전충과 천웅첨, 포부자탄을 함께 섞어 약간 볶은 뒤 가루를 만들고 생강탕으로 매일 2~3회 정도 복용하면 좋은 효과를 나타낸다. 풍을 가라앉히거나 경기를 없애는 작용을 하는데, 간질병이 발작하는 증상에는 전갈과 천마, 담남성 등을 같이 쓴다. 중풍으로 입이 돌아갔거나 안면근육이 수축되었을 때에는 전갈,백부자 등을 함께 쓴다. 풍열과 간의 열로 두통이 날 때, 눈이 붉어지고 목이 붓거나 아플 때도 쓴다. 두통과 눈물이 자주 날 때에는 형개와 상엽, 목적 등을 함께 쓰며, 목이 아플 때에는 길경과 방풍,감초 등을 같이 쓴다. 가려움증을 제거하는 작용이 있어 풍진, 소양(瘙痒)증에는 선퇴, 박하등을 같이 쓴다. 이 밖에도 수면촉진작용과 항경련작용을 갖고 있다.
상기 백지는 산형과의 구릿대(Angelica dahurica Bentham et Hooker) 또는 그 변종의 뿌리를 말려 만든 약재(한국)이다. 중국에서는 구릿대만을 쓰며 일본에서는 구릿대 및 대만당귀(Angelica dahurica var. formosana : 臺灣當歸)를 사용한다. 옛 중국의 진나라(晋)에서는 효라고 하고 제나라(齊)에서는 채라고 하였으며, 초나라(楚)에서는 리 또는 약(藥)이라고도 불렀다. 낮은 연못 주변에서 자라니 분방(芬芳)과 난(蘭)의 덕(德)과 같다 하여 시인들은 난(蘭)과 채를 시로 읊었으며, 문헌에서는 방향(芳香), 택분(澤芬), 또는 향백지(香白芷)라고 불렀다. 옛날 어느 마을의 수재가 머리가 깨지는 듯이 아픈 병을 얻어 의원을 찾아 치료를 받았는데 의원은 환약을 주어 회복이 되었다. 수재가 그 약이 궁금해 하던 중 뜰에 있는 굵고 가는 흰 뿌리가 환약의 재료임을 알게 되었다. 의원이 약초이름을 정해주기를 청하니 약초는 향이 많이 나고 또한 뿌리의 색이 희며 머리의 통증을 멈추게 하는 효과가 있으므로 향백지(香白止)라고 부릅시다.라고 제안했으며 나중에는 '지(止)'에 풀초(艸)를 붙여 향백지(香白芷)라고 했다가 후에는 '백지(白芷)'라고 불리게 되었다고 전한다. 이 약은 특이한 냄새가 있고 맛은 맵고 성질은 따듯하다. 백지는 유행성 감기로 인한 두통, 코막힘, 콧물을 다스리는 진통 약이며, 위장장애, 산전 산후두통, 어지럼증, 치통, 안면신경통, 마비 등에 유효하다. 또한 월경 뒤 하혈이나, 대하, 대변에 피가 섞여 나올 때, 축농증으로 인한 두통, 창양, 종독, 피부궤양 등에도 효과가 있다. 약리작용으로 항균 작용, 동물의 연수 혈관 운동 중추, 호흡중추, 미주 신경 및 척수부의 흥분 작용, 관상동맥 혈류량 증가작용, 백전풍(白殿風 : 살갗에 흰 반점이 생기는 병증), 은설병(銀屑病 : 만성피부병으로, 홍반과 구진으로 인하여 피부 표면에 여러 층으로 된 백색 비늘가루가 생기는 병증)에 유효작용이 보고되었다. 생김새는 짧은 원뿌리로부터 많은 긴 뿌리가 갈라져서 대체로 방추형을 이루고 길이 10~25㎝이며 바깥면은 회갈색~어두운 갈색을 띤다. 뿌리 윗부분에 약간의 엽초가 남아 있고 좁게 두드러진 돌림마디가 있다. 뿌리에는 세로주름과 세로로 두드러진 여러 개의 가는 뿌리 자국이 있으며 옆으로 잘린 면 주변에는 회백색로 빈틈이 많고 가운데 부분은 어두운 갈색을 띤다. 다른 이름으로 방향(芳香), 백채, 부리, 약(藥), 완(莞), 택분(澤芬), 력마(麻), 효, 향백지(香白芷)라고도 한다.
본 발명에 의하면 홍국균 발효 효율을 극대화할 수 있는 천연식물 및 한약재인 천문동, 홍화인, 흑미, 백강잠, 백지의 추출물을 유효 성분으로 함유하여 안정성 및 안전성에서 우수한 효과를 제공하고, 여기에 더하여 우수한 미백 효능을 부여한다.
이하, 본 발명에 따른 발효 한방 혼합 추출물이 함유된 미백 화장료 조성물의 실시예, 비교예 및 제형예를 들어 본 발명의 구성 및 효과를 상세히 설명한다. 이하.
<홍국균 발효를 이용한 천문동, 홍화인, 흑미, 백강잠, 백지 추출물의 분말 제조>
한약제 시장에서 구입한, 천문동, 홍화인, 흑미, 백강잠, 백지 각각 20g을 정제수로 세척하고, 이를 건조시킨 후 멸균기 121℃의 1.5기압에서 15분간 멸균 후 생명자원센터 에서 분양 받은 KTCT 6120 홍국균(Monascus　purpureus) PDB (potato dextrose Broth medium(PDB)) 18시간 배양한 홍국균(Monascus　purpureus)의 균수가 107이 되게 접종하고 25℃에서 720시간 통기가 용이한 곳에서 고체 발효 한다. 홍국균 발효된 천문동, 홍화인, 흑미, 백강잠, 백지 50g을 증류수 2㎏을 넣고 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 80℃로 2시간 끓여서 3회 추출한 후 300메쉬 여과지로 여과하고, 1주일간 실온에서 방치하여 침전물을 에드벤텍 5번 여과지와 와트만 GFC 150mm 여과지로 2번 여과하였다. 그리고 감압 농축기(제품명: Coolace CCA-1100, 제조사: EYELA)를 이용하여 40~50℃의 온도에서 농축한 후 (모델명: B-290, BUCHI 사 제품)를 다음 조건으로 이용하여 건조시킨 추출 분말 10g을 얻었다.
-Inlet 온도 180 ℃,
-Aspirator 효율 100%(35㎤/hour),
-Pump 효율 25% (7.5㎖/min),
-Nozzle Cleaner 4,
-Rotameter 30㎜ (357Liter/hour)
<실시예2 내지 실시예11: 추출 비율에 따른 홍국균 발효를 이용한 천문동, 홍화인, 흑미, 백강잠, 백지 추출물의 분말제조>
실시예2는 홍국균 발효를 이용한 천문동, 홍화인, 흑미, 백강잠, 백지의 중량비만을 하기 표1과 같이 상기 실시예1과 달리할 뿐, 나머지는 상기 실시예1과 동일 방법으로 추출 및 여과하였다. 결과는 하기 표1과 같다. 하기 표1에서 사용한 사용량은 10g이었다.
구 분 혼합 비율 수득률(%)
실시예 2 1:1:1:1:1 8
실시예 3 1:2:1:1:1 8
실시예 4 1:2:2:1:1 11
실시예 5 1:2:2:2:1 12
실시예 6 2:1:2:2:2 14
실시예 7 2:2:1:2:2 19
실시예 8 2:2:2:1:2 15
실시예 9 2:2:2:2:1 12
실시예 10 2:2:1:1:1 10
실시예 11 3:1:1:1:1 12
실시예3 또한, 홍국균 발효를 이용한 천문동, 홍화인, 흑미, 백강잠, 백지의 중량비만이 상기 표1과 같이 실시예1과 달리할 뿐 나머지는 상기 실시예1과 동일 방법으로 추출 및 여과하였다. 결과는 하기 표1과 같다. 하기 표1에서 사용한 사용량은 10g이었다.
실시예4 또한,홍국균 발효를 이용한 천문동, 홍화인, 흑미, 백강잠, 백지의 중량비만이 상기 표1과 같이 실시예1과 달리할 뿐 나머지는 상기 실시예1과 동일 방법으로 추출 및 여과하였다. 결과는 하기 표1과 같다. 하기 표1에서 사용한 사용량은 10g이었다.
실시예5 또한, 홍국균 발효를 이용한 천문동, 홍화인, 흑미, 백강잠, 백지의 중량비만이 상기 표1과 같이 실시예1과 달리할 뿐 나머지는 상기 실시예1과 동일 방법으로 추출 및 여과하였다. 결과는 하기 표1과 같다. 하기 표1에서 사용한 사용량은 10g이었다.
실시예6 또한, 홍국균 발효를 이용한 천문동, 홍화인, 흑미, 백강잠, 백지의 중량비만이 상기 표1과 같이 실시예1과 달리할 뿐 나머지는 상기 실시예1과 동일 방법으로 추출 및 여과하였다. 결과는 하기 표1과 같다. 하기 표1에서 사용한 사용량은 10g이었다.
실시예7 또한, 홍국균 발효를 이용한 천문동, 홍화인, 흑미, 백강잠, 백지의 중량비만이 상기 표1과 같이 실시예1과 달리할 뿐 나머지는 상기 실시예1과 동일 방법으로 추출 및 여과하였다. 결과는 하기 표1과 같다. 하기 표1에서 사용한 사용량은 10g이었다.
실시예8 또한, 홍국균 발효를 이용한 천문동, 홍화인, 흑미, 백강잠, 백지의 중량비만이 상기 표1과 같이 실시예1과 달리할 뿐 나머지는 상기 실시예1과 동일 방법으로 추출 및 여과하였다. 결과는 하기 표1과 같다. 하기 표1에서 사용한 사용량은 10g이었다.
실시예9 또한, 홍국균 발효를 이용한 천문동, 홍화인, 흑미, 백강잠, 백지의 중량비만이 상기 표1과 같이 실시예1과 달리할 뿐 나머지는 상기 실시예1과 동일 방법으로 추출 및 여과하였다. 결과는 하기 표1과 같다. 하기 표1에서 사용한 사용량은 10g이었다.
실시예10 또한, 홍국균 발효를 이용한 천문동, 홍화인, 흑미, 백강잠, 백지의 중량비만이 상기 표1과 같이 실시예1과 달리할 뿐 나머지는 상기 실시예1과 동일 방법으로 추출 및 여과하였다. 결과는 하기 표1과 같다. 하기 표1에서 사용한 사용량은 10g이었다.
실시예11 또한, 홍국균 발효를 이용한 천문동, 홍화인, 흑미, 백강잠, 백지의 중량비만이 상기 표1과 같이 실시예1과 달리할 뿐 나머지는 상기 실시예1과 동일 방법으로 추출 및 여과하였다. 결과는 하기 표1과 같다. 하기 표1에서 사용한 사용량은 10g이었다.
<추출 용매에 따른 홍국균 발효를 이용한 천문동, 홍화인, 흑미, 백강잠, 백지 추출물의 분말제조>
홍국균 발효를 이용한 천문동 22g, 홍화인22g, 흑미12g, 백강잠 22g, 백지 22g (실시예 7과 동일한 중량비로 사용함)을 사용하고 하기 표 2에 기재된 추출용매를 2kg 사용한 것을 제외하고, 상기 실시예 1과 동일한 방법으로 추출하여 분말을 제조하였다. 그 결과는 하기 표2와 같다.
구 분 추 출 용 매 수득량(g)
실시예 12 30% 함수 에탄올 8g
실시예 13 50% 함수 에탄올 7g
실시예 14 70% 함수 에탄올 20g
실시예 15 80% 함수 에탄올 18g
실시예 16 30% 함수 메탄올 9g
실시예 17 50% 함수 메탄올 9g
실시예 18 70% 함수 메탄올 21g
실시예 19 80% 함수 메탄올 15g
실시예 20 30% 함수 부틸렌글리콜 8g
실시예 21 50% 함수 부틸렌글리콜 7g
실시예 22 30% 함수 프로필렌글리콜 8g
실시예 23 50% 함수 프로필렌글글리콜 8g
실시예 24 30% 함수 글리세린 7g
실시예 25 50% 함수 글리세린 8g
실시예13 또한 상기 실시예12와 동일한 방법으로 하여 분말을 제조하였다.그 결과는 상기 표2와 같다.
실시예14 또한 상기 실시예12와 동일한 방법으로 하여 분말을 제조하였다.그 결과는 상기 표2와 같다.
실시예15 또한 상기 실시예12와 동일한 방법으로 하여 분말을 제조하였다.그 결과는 상기 표2와 같다.
실시예16 또한 상기 실시예12와 동일한 방법으로 하여 분말을 제조하였다.그 결과는 상기 표2와 같다.
실시예17 또한 상기 실시예12와 동일한 방법으로 하여 분말을 제조하였다.그 결과는 상기 표2와 같다.
실시예18 또한 상기 실시예12와 동일한 방법으로 하여 분말을 제조하였다.그 결과는 상기 표2와 같다.
실시예19 또한 상기 실시예12와 동일한 방법으로 하여 분말을 제조하였다.그 결과는 상기 표2와 같다.
실시예20 또한 상기 실시예12와 동일한 방법으로 하여 분말을 제조하였다.그 결과는 상기 표2와 같다.
실시예21 또한 상기 실시예12와 동일한 방법으로 하여 분말을 제조하였다.그 결과는 상기 표2와 같다.
실시예22 또한 상기 실시예12와 동일한 방법으로 하여 분말을 제조하였다.그 결과는 상기 표2와 같다.
실시예23 또한 상기 실시예12와 동일한 방법으로 하여 분말을 제조하였다.그 결과는 상기 표2와 같다.
실시예24 또한 상기 실시예12와 동일한 방법으로 하여 분말을 제조하였다.그 결과는 상기 표2와 같다.
실시예25 또한 상기 실시예12와 동일한 방법으로 하여 분말을 제조하였다.그 결과는 상기 표2와 같다.
(비교예1)
<천문동, 홍화인, 흑미, 백강잠, 백지 혼합추출물의 분말제조>
실시예14의 방법에서, 홍국균 발효를 이용한 천문동 22g, 홍화인 22g, 흑미 12 g, 백강잠 22g, 백지 22 g 사용한 것 대신에, 발효하지 않은 천문동 22g, 홍화인22g, 흑미12g, 백강잠22g, 백지22g을 사용한 것을 제외하고는 실시예 14의 방법과 동일한 방법으로 실시하여, 천문동, 홍화인, 흑미, 백강잠, 백지혼합 추출물 분말을 12g 제조하였다.
(비교예2)
<감초 추출물 분말의 제조>
실시예 14의 방법에서, 홍국균 발효를 이용한 천문동 22g, 홍화인 22 g, 흑미 12 g, 백강잠 22g, 백지 22 g을 사용한 것 대신에, 정제수로 깨끗이 세척하여 건조시킨 감초(구입처: 경동시장, 학명: Glycyrrhiza glabra)만을 100g을 사용한 것을 제외하고는 실시예 1의 방법과 동일한 방법으로 실시하여, 표제의 분말을 11g 제조하였다
(제형예1)
<홍국균 발효를 이용한 천문동, 홍화인, 흑미, 백강잠, 백지 추출물을 이용한 화장수 제조>
홍국균 발효를 이용한 천문동, 홍화인, 흑미, 백강잠, 백지추출물 함유한 화장수(스킨로션)를 하기의 표3의 함량으로 하기 제조 방법을 이용하여 1kg을 제조하였다.
번호 원 료 함량(중량%)
1 홍국균 발효를 이용한 천문동, 홍화인, 흑미, 백강잠, 백지
(실시예 14)		 1.0
2 글리세린 3.0
3 부틸렌글리콜 2.0
4 프로필렌글리콜 2.0
5 폴리옥시에칠렌 경화피마자유 1.0
6 에탄올 10.0
7 트리에탄올아민 0.1
8 방부제 미량
9 색소 미량
10 향료 미량
11 정제수 잔량
상기 표3에서 일정량의 11번 물질에 2, 3, 4, 8번 물질을 순서대로 반응용기에 투입하고 교반하여 용해시킨 후, 5번 물질을 60℃ 정도로 가열하여 용해시켰다. 이 후, 10번 물질을 반응용기에 투입하여 용해한 후 잔량의 11번 물질을 투입하였다. 마지막으로 1, 6, 7, 9번 물질을 투입하여 충분히 교반시킨 뒤 25℃에서 3일간 숙성시켜 표제의 화장수를 제조하였다.
(제형예 2)
<홍국균 발효를 이용한 천문동, 홍화인, 흑미, 백강잠, 백지 추출물을 이용한 영양 로션 제조>
홍국균 발효를 이용한 천문동, 홍화인, 흑미, 백강잠, 백지(실시예 14)을 함유한 영양로션을 하기 표4의 함량으로 하기 제조 방법을 이용하여 1kg을 제조하였다.
번호 원 료 함량(중량%)
1 홍국균 발효를 이용한 천문동, 홍화인, 흑미, 백강잠, 백지 (실시예 14) 1.0
2 밀납 1.0
3 폴리솔베이트 60 1.5
4 솔비탄 세스퀴올레이트 0.5
5 유동 파라핀 10.0
6 소르비탄 스테아레이트 1.0
7 친유형 모노스테아린산 글리세린 0.5
8 스테아린산 1.5
9 글리세릴스테아레이트/피이지-400 스테아레이트 1.0
10 프로필렌글리콜 3.0
11 카르복시폴리머 0.1
12 트리에탄올아민 0.2
13 방부제 미량
14 색소 미량
15 향료 미량
16 정제수 잔량
상기 표4에서 10, 11, 13, 16번 물질을 혼합 교반 하면서 80 ~ 85℃ 사이로 가열하여 제조부에 투입한 후 유화기를 작용시키고 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 12번 물질을 80 ~ 85℃사이로 가열 용해한 후 유화시켰다. 유화가 끝나면 교반기를 이용하여 교반 하면서 50℃까지 냉각한 뒤 15번 물질을 투입하고 45℃까지 냉각한 뒤 14번 물질을 투입하고 35℃에서 1번 물질을 투입하여 25℃까지 냉각한 뒤 25℃에서 3일간 숙성시켜 표제의 영양로션을 제조하였다.
(제형예 3)
<홍국균 발효를 이용한 천문동, 홍화인, 흑미, 백강잠, 백지 추출물을 이용한 영양 세럼 제조>
홍국균 발효를 이용한 천문동, 홍화인, 흑미, 백강잠, 백지 (실시예 14)을 함유한 영양세럼을 하기 표5의 함량으로 하기 제조 방법을 이용하여 1kg을 제조하였다.
번호 원 료 함량(중량%)
1 홍국균 발효를 이용한 천문동, 홍화인, 흑미, 백강잠, 백지 (실시예 14) 1.0
2 잔탄검 0.02
3 부틸렌글리콜 10.0
4 소이빈포스포리피드 10.0
5 하이드록시에틸셀룰로오즈 0.1
6 소디움히아루로네이트 5.0
7 정제수 잔량
상기 표5에서 2, 3, 5번 물질을 혼합 교반 하면서 40 ~ 45℃ 사이로 가열하여 제조부에 투입한 후 유화기를 작용시키고 4, 6, 7번 물질을 제조부에 투입하고 유화시켰다. 유화가 끝나면 교반기를 이용하여 교반 하면서 35℃까지 냉각하고 1번 물질을 투입하여 25℃까지 냉각한 뒤 25℃에서 3일간 숙성시켜 표제의 영양 세럼을 제조하였다.
(제형예 4)
<홍국균 발효를 이용한 천문동, 홍화인, 흑미, 백강잠, 백지 추출물을 이용한 에센스 제조>
홍국균 발효를 이용한 천문동, 홍화인, 흑미, 백강잠, 백지 추출물을 함유한 에센스를 하기 표6의 함량으로 하기 제조 방법을 이용하여 1kg을 제조하였다.
번호 원 료 함량(중량%)
1 홍국균 발효를 이용한 천문동, 홍화인, 흑미, 백강잠, 백지 추출물의 분말 (실시예 14) 1.0
2 시토 스테롤 1.7
3 폴리에칠렌 글리콜 1.5
4 세라마이드 0.7
5 스테아르산 1.2
6 콜레스테롤 1.5
7 디세틸포스페이트 0.4
8 농글리세린 5.0
9 마카다미아 오일 15.0
10 카르복시비닐폴리머 0.2
11 산탄검 0.2
12 방부제 미량
13 향료 미량
14 정제수 잔량
상기 표에서 2, 3, 4, 5 및 6번 물질을 일정한 온도에서 균질화하여 비이온계 양친매성 지질을 제조하였다. 비이온계 양친매성 지질과 1, 7, 8 및 14번 물질을 혼합하고 일정한 온도에서 균질화하여 마이크로플루이다이져를 통과시키고 이어 9번 물질을 50 ~ 60℃로 가온하여 서서히 첨가하여 균질화한 후 다시 마이크로플루이다이져에 재차 통과시켰다. 그 후, 10, 11, 12, 13번 물질을 투입하여 분산시켜 안정화하고 25℃에서 3일간 숙성시켜 표제의 에센스를 제조하였다.
(실험예1) 세포 무독성 및 세포 증식 효과 확인
상기 실시예에서 제조된 홍국균 발효를 이용한 천문동, 홍화인, 흑미, 백강잠, 백지 추출물에 대하여 세포배양을 이용한 세포 증식 효과를 측정하였다.
1) 실험방법
세포 독성 및 증식 실험을 다음과 같은 방법으로 실시하였다. 배양하고 인체 정상 섬유아세포를 96-웰 마이크로플레이트의 각 웰에1x104세포가 되도록 접종하고, DMEM 배지에서 37℃에서 24시간 동안 배양하였다. 이어, 최종 농도를 0.1, 0.5, 1.0, 2.0, 5.0%로 하여 혈청이 2.5%함유되어 있는 DMEM 배지로 교체한 실험군과 혈청이 없는 DMEM 배지로 교체한 대조군을 24시간 동안 추가로 배양하였다. 배양 후, 세포의 생존율을 비교하기 위하여 MTT(시그마, 미합중국) 솔루션(3mg/ml)을 첨가하여 세포 생존율을 ELISA READER(Molecular Devices, 미합중국)를 이용하여 570nm에서 흡광도를 측정하고 세포 성장의 최적 조건인 위과 같은 조건으로 동시배양을 하였으며, 대조군의 세포증식을 100%로 하고 시료 투입 실험군의 세포 증식률을 계산하였다.
2) 실험결과
세포증식률은 하기 식1에 의해 산출되었고, 결과는 하기 표7에 나타내었다.
(식1)
세포생존율(%)=시료첨가군의O.Dat570nm / 시료무첨가군의 O.D at 570nmX100
농도(%) 세포 증식률(%)
대조군 0.1 0.5 1.0 2.0 5.0
실시예 1 100 101.6 101.0 100.8 99.4 98.6
실시예 2 100 101.2 100.7 100.5 100.8 97.8
실시예 3 100 102.9 101.4 100.1 99.5 99.8
실시예 4 100 101.6 101.8 100.9 100.4 99.6
실시예 5 100 102.4 101.3 99.8 99.7 100.1
실시예 6 100 103.4 102.4 101.0 100.7 100.5
실시예 7 100 104.7 104.2 103.3 102.2 100.5
실시예 8 100 102.9 100.4 102.0 101.0 99.9
실시예 9 100 101.3 100.8 101.4 99.8 100.2
실시예 10 100 100.2 99.4 100.3 100.0 98.7
실시예 11 100 102.0 101.3 100.5 101.6 100.3
실시예 12 100 103.4 102.8 102.5 101.3 100.5
실시예 13 100 101.7 100.4 99.7 101.0 99.6
실시예 14 100 105.8 103.9 102.1 103.7 101.0
실시예 15 100 100.2 99.4 100.3 100.0 98.7
실시예 16 100 102.1 101.5 100.8 100.0 99.9
실시예 17 100 104.2 103.3 101.9 102.0 100.3
실시예 18 100 101.9 101.7 100.9 100.4 101.0
실시예 19 100 101.2 101.1 100.3 100.5 100.9
실시예 20 100 102.4 101.6 100.7 100 99.8
실시예 21 100 102.9 102.0 101.5 99.9 100.2
상기 표 7에서 나타난 바와 같이, 세포 성장 최적 조건에서의 세포 증식을 100%로 하였을 때, 측정 오차범위를 고려하면 홍국균 발효를 이용한 천문동, 홍화인, 흑미, 백강잠, 백지 추출물은 모두 세포 무독성이며, 세포 증식 효과가 있음이 확인되었다.
(실험예2) 제형 안정도 확인
홍국균 발효를 이용한 천문동, 홍화인, 흑미, 백강잠, 백지 추출물을 포함하는 제형예 1 내지 4에서 제조한 제형에 대하여 실온(25℃), 4℃ 및 45℃로 일정하게 유지되는 실내, 냉장고 및 항온수조에서 불투명 초자 용기에 담아 12주 동안 보관후 육안으로 변색, 및 분리를 관찰하고, 후각으로 변취를 확인하여 이들 제형의 안정성을 확인 하였다. 그 결과는 하기 표 8과 같다.
온도
조건		 안정성 확인 (변색, 변취 및 분리)
제형예 1 제형예 2 제형예 3 제형예 4
실온 0 0 0 0
4℃ 0 0 0 0
45℃ 0 0 0 0
<제형 안정 등급>
0 : 변화 없음, 1 : 미세한 변화, 2 : 변화, 3: 극심한 변화
상기 표8에서 나타난 바와 같이, 제형예 1 내지 4의 제형 모두 실온, 4℃ 및 45℃ 온도 조건하에서 변색, 변취 및 분리 현상이 나타나지 않고 안정하였다.
(실험예 3)B16F1 멜라노싸이트를 이용한 멜라닌 생성 억제효과 측정
홍국균 발효를 이용한 천문동, 홍화인, 흑미, 백강잠, 백지 추출물을 미백효과를 확인하기 위해서 B16F1 멜라노사이에 대한 멜라닌 생성 억제 정도에 근거하여 이들의 미백 효과를 판단하였다.
본 실험예에 사용된 B16F1 멜라노싸이트는 마우스에서 유래한 세포주이며, 멜라닌 이라는 흑색색소를 분비하는 세포이다. 이 세포의 인공 배양중에 시료를 처리하여 멜라닌 흑색색소가 감소하는 정도를 비교평가 하였다. 본 실험예에서 사용된 B16F1 멜라노싸이트는 ATCC(American Type Culture Collection, 기탁번호: 6323)로부터 분양 받아 사용하였다.
B16F1 멜라노싸이트의 멜라닌 생합성 억제효과 측정은 다음과 같이 행하였다. B16F1 멜라노싸이트를 6 웰 플레이트에 각 웰당 2×106cells/mL농도로 분주하고 세포를 부착시킨 후 0.1%(wt/v)농도로 시료를 처리하여 72시간 동안 37℃에서 5% 이산화탄소를 포함하는 배양기에서 배양하였다. 여기서, 시료의 농도를 맞추기 위해 사용된 용매는 PBS을 이용하였다. 72시간 배양 후 세포를 trypsin-EDTA 500μl를 처리하여 떼어 낸 후 세포 수를 측정한 다음 원심 분리하여 세포를 회수하였다. 세포내 멜라닌의 정량은 로탄(Lotan: Cancer Res., 40: 3345-3350, 1980)의 방법을 약간 변형하여 실시하였다. 셀 펠릿을 PBS로 1회 세척한 후 균질화 버퍼액(50 mM 소듐 포스페이티드, pH 6.8, 1% Triton X-100, 2 mM PMSF) 1ml를 첨가하여 5분간 와류 하여 세포를 파괴하였다. 원심분리(3,000rpm, 10분) 하여 얻은 세포 여액에 1N NaOH (10% DMSO)를 120μL을 첨가하여 추출된 멜라닌을 용해한 후 마이크로 플레이트 리더로 405nm 에서 멜라닌의 흡광도를 측정 한 다음 멜라닌을 정량 하여 시료의 멜라닌 생성 저해율(%)을 측정하였다. B16F1 멜라노싸이트의 멜라닌 생성 저해율(%)은 하기 식2에 의하여 계산하였으며, IC50 값은 멜라닌 생성을 50% 저해하는 물질의 농도이며, 그 결과는 하기 표 9와 같다.
(식2) 저해율(%) = [(A-B)/A]X100
A : 시료를 첨가하지 않은 웰의 멜라닌 양
B : 시료를 첨가한 웰의 멜라닌 양
시료명 처리농도(wt/v %) 멜라닌 생성 억제효과
홍국균 발효를 이용한 천문동, 홍화인, 흑미, 백강잠, 백지 추출물의 분말 (실시예 14)0.1 0.1%
천문동, 홍화인, 흑미, 백강잠, 백지 혼합추출 분말(비교예 1)0.1 0.04%
감초추출 분말(비교예 2) 0.1 0.03%
상기 표 9와 같이, B16F1 멜라노싸이트의 멜라닌 생성억제 효과를 시험한 결과 홍국균 발효를 이용한 천문동, 홍화인, 흑미, 백강잠, 백지 추출물의 멜라닌 합성 저해율은 0.1(wt/v%)처리농도에서 0.1%로 천문동, 홍화인, 흑미, 백강잠, 백지 추출물 및 감초 추출물 비해 우수하였으며, 본발명의 추출물은 다른 비교군에 비하여 2배이상 향상된 멜라닌 합성 저해율을 나타내었다.
이상에서는 본 발명을 구체적인 실시예를 통하여 설명하였으나, 당업자라면 본 명세서에서 설명된 여러 가지 특징을 참조하고 조합하여 다양하고 변형된 구성이 가능하다. 따라서 본 발명의 범위가 설명된 실시예에만 국한되는 것이 아니라, 첨부된 청구범위에 의하여 해석되어야 함을 지적해둔다.

Claims (7)

  1. 홍국균 발효를 이용한 천문동, 홍화인, 흑미, 백강잠, 백지 추출물을 함유하는 발효 한방 혼합 추출물이 함유된 미백 화장료 조성물.
  2. 제1항에 있어서,홍국균 발효를 이용한 천문동, 홍화인, 흑미, 백강잠, 백지 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 글리세린 및 이들의 혼합물 중에서 선택된 추출용매로 추출된 것임을 특징으로 하는 발효 한방 혼합 추출물이 함유된 미백 화장료 조성물.
  3. 제2항에 있어서, 추출 용매는 물, 탄소수 1내지 4의 알코올 및 이들의 혼합물 중에서 선택된 것임을 특징으로 하는 발효 한방 혼합 추출물이 함유된 미백 화장료 조성물.
  4. 제3항에 있어서, 상기 추출 용매는 70중량%의 함수 에탄올인 것을 특징으로하는 발효 한방 혼합 추출물이 함유된 미백 화장료 조성물.
  5. 제4항에 있어서, 홍국균 발효를 이용한 천문동, 홍화인, 흑미, 백강잠, 백지 추출물의 건조 중량비는 1:1:1:1:1 ~ 3:1:1:1:1 로 혼합됨을 특징으로 하는 한방 혼합 추출물이 함유된 미백 화장료 조성물.
  6. 제5항에 있어서, 홍국균 발효를 이용한 천문동, 홍화인, 흑미, 백강잠, 백지 추출물은 조성물의 총 중량에 대하여 0.001 ~ 5중량% 포함됨을 특징으로 하는 한방 혼합 추출물이 함유된 미백 화장료 조성물.
  7. 제6항에 있어서, 상기 화장료는 유연화장수, 영양화장수, 영양로션, 영양크림, 맛사지크림, 영양세럼, 엔센스 또는 팩의 제형인 것을 특징으로 하는 한방 혼합 추출물이 함유된 미백 화장료 조성물.

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