KR20140026624A

KR20140026624A - 노치 경로 신호전달 억제제 화합물

Info

Publication number: KR20140026624A
Application number: KR1020147001731A
Authority: KR
Inventors: 필립 아더 힙스킨드; 그레고리 알란 스테펜슨
Original assignee: 일라이 릴리 앤드 캄파니
Priority date: 2011-07-27
Filing date: 2012-07-18
Publication date: 2014-03-05
Also published as: CR20140036A; ECSP14013179A; US20130029972A1; PE20141061A1; PT2736920E; HK1194086A1; JP2014527042A; MY184303A; CA2841178A1; EA023044B1; EP2736920B1; CN103732612B; JO3148B1; WO2013016081A1; MA35611B1; BR112014001600A2; CA2841178C; JP6027110B2; GT201400012A; AP4080A

Abstract

본 발명은 암의 치료를 위한 노치 경로 신호전달 억제제로서 유용한, 화합물 또는 제약상 허용되는 염 또는 수화물, 및 상기 화합물 또는 제약상 허용되는 염 또는 수화물을 함유하는 제약 조성물을 제공한다.

Description

노치 경로 신호전달 억제제 화합물 {NOTCH PATHWAY SIGNALING INHIBITOR COMPOUND}

노치(Notch) 신호전달은 포유동물에서 발육 및 조직 항상성에서 필수적인 역할을 하는 진화적 보존 경로이다. 노치 수용체 및 리간드는 단일-통과 막횡단 도메인을 함유하며, 세포 표면에서 발현되고, 그러한 이유로 인하여 노치 신호전달은 특히 수용체 및 리간드를 발현시키는 인접 세포 사이에서의 소통을 매개하는데 특히 중요하다. 설치류 및 인간에서 발견되는 노치 1 내지 노치 4로 불리우는 4종의 공지의 노치 수용체가 존재한다. 노치 수용체는 단일 폴리펩티드로서 초기에 합성되는 세포외 및 세포내 도메인으로 이루어진 헤테로이량체 단백질이다. 수용체-리간드 상호작용은 γ-세크레타제 활성이 관여하는 노치 수용체 폴리펩티드의 일련의 단백질분해 절단을 유발한다. γ-세크레타제 활성은 세포 표면으로부터 노치 세포내 도메인을 절단시키고, 이는 핵으로 이동하여 전사 인자 복합체를 형성한다. 노치 세포내 도메인(NICD)은 단백질의 활성 형태이다. 각종 노치 신호전달 기능은 증식, 분화, 아폽토시스, 혈관신생, 이동 및 자가-재생을 포함한다. 정상 조직의 발육 및 관리 동안 노치 신호전달의 다양한 역할은 암의 다양한 형태로 비정상적으로 활성화된다. 노치 신호전달의 종양발생 기능은 아폽토시스의 억제 및 세포 증식의 촉진을 포함한다.

γ-세크레타제는 노치 활성화 캐스케이드에서 중추적인 역할을 한다. 그 결과, γ-세크레타제의 억제제는 노치 수용체 활성화를 차단하는 그의 잠재성에 대하여 활발하게 조사되어 왔다. WO 98/28268에서 예시된 화합물, 예컨대 7C-203은 그러한 γ-세크레타제 억제제를 대표한다. 그러한 가능성에도 불구하고, 시판중인 노치 억제제 화학요법제는 알려져 있지 않다.

노치 경로 신호전달 억제 활성을 갖는 화합물을 발견하고자 하는 필요성이 존재한다. γ-세크레타제 억제 활성을 갖는 화합물을 발견하고자 하는 추가의 필요성이 존재한다. 또한, 노치 경로 신호전달 억제 활성에 기여할 수 있는 뚜렷한 구조적 특징을 갖는 화합물을 발견하고자 하는 필요성이 존재한다. 노치 경로 신호전달 억제 활성 및 바람직한 생체내 분포, 대사 및 배설 성질을 나타내는 화합물을 발견하고자 하는 추가의 필요성이 존재한다.

도 1은 실시예 2의 화합물에 대한 대표적인 X선 분말 회절 패턴이다.

본 발명의 제1 측면은 하기 구조를 갖는 노치 신호전달 억제제 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 수화물을 제공하고자 한다:

<화합물 1>

본 발명의 제2 측면은 4,4,4-트리플루오로-N-[(1S)-2-[[(7S)-5-(2-히드록시에틸)-6-옥소-7H-피리도[2,3-d][3]벤즈아제핀-7-일]아미노]-1-메틸-2-옥소-에틸]부탄아미드 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 수화물을 제약상 허용되는 담체와 함께 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 특정 실시양태에서, 제약 조성물은 제약상 허용되는 담체 및 임의로 기타 치료 성분과 함께 4,4,4-트리플루오로-N-[(1S)-2-[[(7S)-5-(2-히드록시에틸)-6-옥소-7H-피리도[2,3-d][3]벤조아제핀-7-일]아미노]-1-메틸-2-옥소-에틸]부탄아미드 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 수화물을 포함한다.

본 발명의 제3 측면은 치료 유효량의 4,4,4-트리플루오로-N-[(1S)-2-[[(7S)-5-(2-히드록시에틸)-6-옥소-7H-피리도[2,3-d][3]벤즈아제핀-7-일]아미노]-1-메틸-2-옥소-에틸]부탄아미드 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 수화물을 노치 신호전달의 억제를 필요로 하는 암 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 환자에서 노치 신호전달을 억제하는 방법을 제공한다.

본 발명의 제4 측면은 치료 유효량의 4,4,4-트리플루오로-N-[(1S)-2-[[(7S)-5-(2-히드록시에틸)-6-옥소-7H-피리도[2,3-d][3]벤즈아제핀-7-일]아미노]-1-메틸-2-옥소-에틸]부탄아미드 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 수화물을 T-세포 급성 림프모구성 백혈병, 급성 림프모구성 백혈병, 급성 골수 백혈병, 만성 골수 백혈병, 적백혈병, 유방암, 난소암, 흑색종, 폐암, 췌장암, 교모세포종, 결장직장암, 두경부암, 자궁경부암, 전립선암, 간암, 편평 세포 암종(구강), 피부암 또는 수모세포종인 암의 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 환자에서 상기 암을 치료하는 방법을 제공한다.

본 발명의 제5 측면은 치료 유효량의 4,4,4-트리플루오로-N-[(1S)-2-[[(7S)-5-(2-히드록시에틸)-6-옥소-7H-피리도[2,3-d][3]벤즈아제핀-7-일]아미노]-1-메틸-2-옥소-에틸]부탄아미드 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 수화물을 T-세포 급성 림프모구성 백혈병, 급성 림프모구성 백혈병, 만성 골수 백혈병, 적백혈병, 유방암, 난소암, 흑색종, 췌장암, 교모세포종 또는 결장직장암인 암의 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 환자에서 상기 암을 치료하는 방법을 제공한다.

본 발명의 제6 측면은 요법에 사용하기 위한 화합물 4,4,4-트리플루오로-N-[(1S)-2-[[(7S)-5-(2-히드록시에틸)-6-옥소-7H-피리도[2,3-d][3]벤즈아제핀-7-일]아미노]-1-메틸-2-옥소-에틸]부탄아미드 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 수화물을 제공한다.

본 발명의 제7 측면은 T-세포 급성 림프모구성 백혈병, 급성 림프모구성 백혈병, 급성 골수 백혈병, 만성 골수 백혈병, 적백혈병, 유방암, 난소암, 흑색종, 폐암, 췌장암, 교모세포종, 결장직장암, 두경부암, 자궁경부암, 전립선암, 간암, 편평 세포 암종(구강), 피부암 또는 수모세포종인 암의 치료에 사용하기 위한 화합물 4,4,4-트리플루오로-N-[(1S)-2-[[(7S)-5-(2-히드록시에틸)-6-옥소-7H-피리도[2,3-d][3]벤즈아제핀-7-일]아미노]-1-메틸-2-옥소-에틸]부탄아미드 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 수화물을 제공한다.

본 발명의 제8 측면은 T-세포 급성 림프모구성 백혈병, 급성 림프모구성 백혈병, 만성 골수 백혈병, 적백혈병, 유방암, 난소암, 흑색종, 췌장암, 교모세포종 또는 결장직장암인 암의 치료에 사용하기 위한 화합물 4,4,4-트리플루오로-N-[(1S)-2-[[(7S)-5-(2-히드록시에틸)-6-옥소-7H-피리도[2,3-d][3]벤즈아제핀-7-일]아미노]-1-메틸-2-옥소-에틸]부탄아미드 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 수화물을 제공한다.

본 발명의 제9 측면은 T-세포 급성 림프모구성 백혈병, 급성 림프모구성 백혈병, 급성 골수 백혈병, 만성 골수 백혈병, 적백혈병, 유방암, 난소암, 흑색종, 폐암, 췌장암, 교모세포종, 결장직장암, 두경부암, 자궁경부암, 전립선암, 간암, 편평 세포 암종(구강), 피부암 또는 수모세포종인 암의 치료를 위한 약제의 제조에 있어서, 화합물 4,4,4-트리플루오로-N-[(1S)-2-[[(7S)-5-(2-히드록시에틸)-6-옥소-7H-피리도[2,3-d][3]벤즈아제핀-7-일]아미노]-1-메틸-2-옥소-에틸]부탄아미드 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 수화물의 용도를 제공한다.

본 발명의 제10 측면은 T-세포 급성 림프모구성 백혈병, 급성 림프모구성 백혈병, 만성 골수 백혈병, 적백혈병, 유방암, 난소암, 흑색종, 췌장암, 교모세포종 또는 결장직장암인 암의 치료를 위한 약제의 제조에 있어서, 화합물 4,4,4-트리플루오로-N-[(1S)-2-[[(7S)-5-(2-히드록시에틸)-6-옥소-7H-피리도[2,3-d][3]벤즈아제핀-7-일]아미노]-1-메틸-2-옥소-에틸]부탄아미드 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 수화물의 용도를 제공한다.

용어 "환자"는 포유동물을 의미하며, "포유동물"은 인간을 들 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.

"치료 유효량" 또는 "유효량"은 암 환자에서 노치 신호전달을 억제하고 표적 암 세포를 파괴하거나 또는 환자에서의 암의 진행을 지연 또는 중지시키는데 필요한 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 수화물, 또는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 수화물을 함유하는 제약 조성물의 투여량을 의미한다. 화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 수화물의 예상 투여량은 0.1 내지 200 ㎎/환자/일 범위내이다. 바람직한 투여량은 1 내지 175 ㎎/환자/일 범위내일 것으로 예상된다. 가장 바람직한 투여량은 5 내지 150 ㎎/환자/일 범위내인 것으로 예상된다. 환자를 치료하는데 필요한 정확한 투여량 및 치료 시간 길이는 질환의 단계 및 중증도뿐만 아니라, 각각의 환자의 특정한 요구 및 반응을 고려하여 주치의가 결정할 것이다. 1일 기준으로 한 투여량으로서 나타내기는 하나, 투여 요법은 환자에게 보다 최적인 치료적 잇점을 제공하고 점액성 장병증(위장관에서의 점액의 과다분비 및 축적)을 관리 및 개선시키기 위하여 조절될 수 있다. 1일 투여 이외에, 격일(Q2D); 5일에 걸쳐 격일에 이어서 투여 없이 2일(T.I.W.); 또는 3일 간격(Q3D) 투여가 적절할 수 있다. 점액성 장병증을 관리 또는 개선시키기 위하여 덱사메타손의 화합물 1의 투여(사전-, 동시 또는 후-투여)와 함께 격일, T.I.W. 또는 3일 간격의 투여 요법이 바람직하다.

용어 "치료", "치료하다" 및 "치료하는"은 암이 실제로 배제되지 않더라도 환자가 앓고 있는 암에 대한 전영역의 개입, 예컨대 증상 중 하나 이상을 완화시켜 지연 또는 역전시키기 위한 그리고 암의 진행을 지체시키기 위한 활성 화합물의 투여를 포함하는 것을 의미한다. 치료하고자 하는 환자는 포유동물, 특히 인간이다.

본 발명의 화합물은 바람직하게는 제약상 허용되는 담체를 사용한 제약 조성물로서 제제화되고 다양한 경로에 의하여 투여된다. 바람직하게는, 그러한 조성물은 경구 투여를 위한 것이다. 그러한 제약 조성물 및 그의 제조 방법은 당업계에 공지되어 있다. 예를 들면, 문헌 [REMINGTON: THE SCIENCE AND PRACTICE OF PHARMACY (A. Gennaro, et al., eds., 19^th ed., Mack Publishing Co., 1995)]을 참조한다. 특정 실시양태에서, 제약 조성물은 제약상 허용되는 담체 및 임의로 일반적으로 암 또는 특정한 암 유형의 치료를 위하여 특히 기타 치료 성분과 함께 4,4,4-트리플루오로-N-[(1S)-2-[[(7S)-5-(2-히드록시에틸)-6-옥소-7H-피리도[2,3-d][3]벤조아제핀-7-일]아미노]-1-메틸-2-옥소-에틸]부탄아미드 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 수화물을 포함한다.

본 발명의 화합물은 다수의 무기 및 유기 산과 반응하여 제약상 허용되는 산 부가 염을 형성할 수 있다. 그러한 제약상 허용되는 염 및 이를 제조하는 통상의 방법은 당업계에 공지되어 있다. 예를 들면, 문헌 [P. Stahl, et al., HANDBOOK OF PHARMACEUTICAL SALTS: PROPERTIES, SELECTION AND USE, (VCHA/Wiley-VCH, 2002)]; [S. M. Berge, et al., "Pharmaceutical Salts," Journal of Pharmaceutical Sciences, Vol. 66, No. 1, January 1977]을 참조한다.

화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 수화물은 당업계에 공지된 다양한 절차뿐만 아니라, 하기에 기재된 것에 의하여 제조될 수 있다. 화합물 1 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 수화물을 제조하기 위하여 특정한 합성 단계는 상이한 방식으로 조합될 수 있다.

화합물 1은 4,4,4-트리플루오로-N-[(1S)-2-[[(7S)-5-(2-히드록시에틸)-6-옥소-7H-피리도[2,3-d][3]벤즈아제핀-7-일]아미노]-1-메틸-2-옥소-에틸]부탄아미드로 지칭되며; 또한 N-[(1S)-2-[[(7S)-6,7-디히드로-5-(2-히드록시에틸)-6-옥소-5H-피리도[3,2-a][3]벤즈아제핀-7-일]아미노]-1-메틸-2-옥소에틸]-4,4,4-트리플루오로부탄아미드로 지칭될 수 있고; 기타의 명칭은 화합물 1을 명백하게 확인하기 위하여 사용할 수 있다.

화합물 1은 단일 입체이성질체로서 나타내는 것으로 이해될 것이다. 2개의 키랄 중심은 4개의 입체이성질체를 산출한다. 본원에서 사용한 바와 같이, 화합물 1에 대한 언급은 화합물 1을 포함하는 라세미 혼합물을 포함하는 것을 의미한다. 본원에서, (R)- 및 (S)-의 칸-인골드-프레로그(Cahn-Ingold-Prelog) 지정은 특정한 이성질체를 지칭하는데 사용된다. 특정한 입체이성질체는 거울상이성질체적으로 순수하거나 또는 풍부한 출발 물질을 사용하는 입체특이적 합성에 의하여 제조될 수 있다. 화합물 1을 포함하는 출발 물질, 중간체 또는 라세미 혼합물의 특정한 입체이성질체는 당업계에 공지된 기법, 예컨대 해당 목적을 위하여 형성된 부분입체이성질체, 예컨대 부분입체이성질체 염에 대한 키랄 정지상에서의 크로마토그래피, 효소 분해 또는 분별 결정화 또는 크로마토그래피를 비롯한, 문헌 [Stereochemistry of Organic Compounds, E. I. Eliel and S. H. Wilen (Wiley 1994)] 및 [Enantiomers, Racemates, and Resolutions, J., Jacques, A. Collet, and S. H. Wilen (Wiley 1991)]에 기재된 기법에 의하여 분해될 수 있다. 본 발명의 화합물을 함유하는 모든 혼합물은 본 발명에 포함되는 것으로 간주되며, 바람직한 실시양태는 화합물 1이다.

또한, 화합물 1은 회전장애이성질체 또는 특정한 이형태체로서 존재하는 것으로 밝혀졌다. 수용액 중에서, 8-9%의 회전장애이성질체 2(소수의 회전장애이성질체)는 회전장애이성질체 1(다수의 회전장애이성질체)과 평형 상태로 주위 온도에서 24 시간후 ¹H NMR 및 LC-MS에 의하여 검출된다. 유기 용매 중에서, 주위 온도에서 24 시간후 약 1-2%의 회전장애이성질체 2는 회전장애이성질체 1과 평형 상태로 ¹H NMR 및 LC-MS에 의하여 검출된다. ¹H NMR 및 LC-MS 분석에 의하여 검출 가능하기는 하나, 회전장애이성질체 2는 분리 불가이다.

본 발명의 화합물의 합성에서 초기 출발 물질로서 사용된 화합물은 공지되어 있으며, 상업적으로 입수 가능하지 않은 정도로, 당업자가 통상적으로 사용하는 표준 절차에 의하여 제공된 특정 문헌을 사용하여 용이하게 합성되거나 또는 일반적인 참고문헌에서 찾을 수 있다.

공지의 절차 및 방법의 예는 문헌 [Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers Inc, 1989]; [Compendium of Organic Synthetic Methods, Volumes 1-10, 1974-2002, Wiley Interscience]; [Advanced Organic Chemistry, Reactions Mechanisms, and Structure, 5^th Edition, Michael B. Smith and Jerry March, Wiley Interscience, 2001]; [Advanced Organic Chemistry, 4^th Edition, Part B, Reactions and Synthesis, Francis A. Carey and Richard J. Sundberg, Kluwer Academic/Plenum Publishers, 2000] 등 및 이들 내부에 인용된 문헌에서와 같은 일반적인 참고문헌에 기재된 것을 포함한다.

중간체 및 화합물 1은 일관적으로 적용한 IUPAC 명칭으로서, 구조로부터 시맥스드로우(SymaxDraw) 버젼 3.2 드로잉 프로그램(Drawing Program)을 사용하여 명명한다.

제조예 1

벤질 (2S)-2-(4,4,4-트리플루오로부타노일아미노)프로파노에이트

L-알라닌 벤질 에스테르 히드로클로라이드(7.00 g, 32.5 mmol), 디이소프로필에틸아민(28.30 ㎖, 162.3 mmol), 1-히드록시벤조트리아졸 수화물(7.46 g, 48.7 mmol) 및 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드(9.33 g 48.7 mmol)를 디클로로메탄(162 ㎖) 중의 4,4,4-트리플루오로부티르산(7.131 g, 48.7 mmol)의 용액에 주위 온도에서 질소하에서 연속적으로 첨가하고, 20 시간 동안 교반한다. 시트르산(150 ㎖, 162 mmol)의 20% 수용액을 첨가하고, 혼합물을 5 분 동안 교반하고, 층을 분리시킨다. 디클로로메탄(100 ㎖)으로 수성층으로부터 추출한다. 합한 유기층을 중탄산나트륨 포화 수용액(150 ㎖)으로 세척하고, 황산마그네슘의 위에서 건조시키고, 농축시킨다. 헥산:에틸 아세테이트(4:1 내지 2:1)로 용리시키는 플래쉬 크로마토그래피로 잔류물을 정제하여 표제 화합물을 백색 고체(9.22 g, 30.4 mmol, 94%)로서 얻는다. MS (m/z): 304 (M+1); [α]_Na ²⁵=-44.6° (c=5.0, 메탄올).

제조예 2

(2S)-2-(4,4,4-트리플루오로부타노일아미노)프로파노산

팔라듐/탄소(5%, 1.76 g, 0.8 mmol)를 메탄올(88 ㎖) 중의 벤질 (2S)-2-(4,4,4-트리플루오로부타노일아미노)프로파노에이트(8.80 g, 29 mmol)의 용액에 한번에 주위 온도에서 첨가한다. 혼합물(진공/질소)을 탈기시키고, 수소(1 기압)로 채우고, 수소(29 mmol)하에서 5 시간 동안 교반한다. 셀라이트(Celite)^®를 통하여 여과하고, 필터 케이크를 메탄올로 헹구고, 여과액을 농축시켜 표제 화합물을 백색 고체(6.11 g, 28.7 mmol, 99%)로서 얻는다. MS (m/z): 214 (M+1); [α]_Na ²⁵=-24.7° (c=5.0, 메탄올).

제조예 3

메틸 2-(2-브로모페닐)아세테이트

디메틸포름아미드(2.1 ㎖, 27.3 mmol)에 이어서 염화티오닐(52.3 ㎖, 717.8 mmol)을 주위 온도 수조로 냉각시킨 디클로로메탄(1.50 ℓ) 중의 2-브로모페닐아세트산(150.0 g, 683.6 mmol)의 용액에 7 분에 걸쳐 첨가한다. 혼합물을 5 시간 동안 교반하고, 메탄올(41.5 ㎖, 1.0 mol)을 5 분에 걸쳐 첨가한다. 용액을 통하여 질소를 밤새 버블링시킨다. 농축시켜 표제 화합물을 무색 오일로서 정량적 수율(166.0 g, 724.7 mmol)로 얻는다. ¹H NMR (300 MHz, CDCl₃): 7.57 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.30-7.26 (m, 2H), 7.19-7.12 (m, 1H), 3.80 (s, 2H), 3.72 (s, 3H).

제조예 4

메틸 2-[2-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)페닐]아세테이트

N-메틸피롤리돈(940 ㎖) 중의 메틸 2-(2-브로모페닐)아세테이트(156.6 g, 684 mmol), 비스(피나콜라토)디보론(194.9 g, 752 mmol) 및 아세트산칼륨(135.6 g, 1.4 mol)의 현탁액을 3회 진공/질소 사이클로 탈기시킨다. 염화(1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센)팔라듐(II)(11.4 g, 13.7 mmol)을 첨가하고, 80℃에서 가열한다. 15 시간 후, 염화(1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센)팔라듐(II)(11.4 g, 13.7 mmol)을 첨가하고, 90℃에서 24 시간 동안 교반한다. 주위 온도로 냉각시키고, 얼음 및 물의 혼합물(3 ℓ)에 붓고, 메틸 3급 부틸 에테르(1 ℓ)를 첨가하였다. 혼합물을 교반하고, 셀라이트^® 패드를 통하여 여과하고, 층을 분리시킨다. 메틸 3급 부틸 에테르(2×500 ㎖)를 사용하여 수성층으로부터 추출한다. 합한 유기층을 물(2×500 ㎖), 염수(500 ㎖)로 세척하고, 황산나트륨의 위에서 건조시키고, 농축시킨다. 헥산:에틸 아세테이트(9:1)로 용리시키는 플래쉬 크로마토그래피로 잔류물을 정제하여 표제 화합물을 백색 고체(160.6 g, 581.6 mmol, 85%)로서 얻는다. MS (m/z): 277 (M+1).

제조예 5

5,7-디히드로피리도[2,3-d][3]벤즈아제핀-6-온

탄산칼륨(235.7 g, 1.71 mol)을 1,4-디옥산(550 ㎖) 및 물(550 ㎖) 중의 2-아미노-3-브로모피리딘(88.5 g, 511.7 mmol)의 용액에 첨가한다. 혼합물을 진공/질소의 3회 사이클로 탈기시키고, 아세트산팔라듐(II)(6.4 g, 28.4 mmol) 및 트리-t-부틸포스포늄 테트라플루오로보레이트(16.5 g, 56.9 mmol)를 첨가하고, 질소하에서 88℃에서 교반한다. 1,4-디옥산(550 ㎖) 중의 메틸 2-[2-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)페닐]아세테이트(157.0 g, 568.5 mmol)의 용액을 3 분에 걸쳐 적가하고, 혼합물을 88℃에서 20 분 동안 교반한다. 혼합물을 50℃로 냉각시키고, 물(100 ㎖)을 첨가하고, 층을 분리한다. 에틸 아세테이트(2×100 ㎖)를 사용하여 수성층으로부터 추출하고, 합한 유기물을 황산나트륨의 위에서 건조시키고, 농축시킨다. 합한 물질을 N-메틸피롤리돈(314 ㎖)에 용해시키고, 빙조내에서 냉각시키고, 황산(314 ㎖, 5.9 mol)을 적가하여 약 45℃의 온도를 유지한다. 혼합물을 140℃에서 90 분 동안 교반한다. 주위 온도로 냉각시키고, 얼음(4 ㎏)을 첨가하고, 용액이 pH 7-8이 될 때까지 50% NaOH 수용액을 일부분씩 첨가하여 염기성으로 만든다. 현탁액을 10℃-15℃로 냉각시키고, 고체를 여과하고, 물(2 ℓ), 헥산(1 ℓ) 및 메틸 3급 부틸 에테르(1 ℓ)로 세척한다. 진공하에서 40℃에서 건조시킨다. 물질을 10% 메탄올/디클로로메탄 용액의 환류 중인 혼합물로 처리하고, 고온에서 여과한다(4회). 합한 여과액을 농축시켜 표제 화합물을 담갈색 고체(85 g, 404.3 mmol, 71%)로서 얻는다. MS (m/z): 211 (M+1).

제조예 6

5-[2-(tert-부틸(디메틸)실릴)옥시에틸]-7H-피리도[2,3-d][3]벤즈아제핀-6-온

탄산세슘(186.6 g, 572.7 mmol), (2-브로모에톡시)-tert-부틸디메틸실란(88.0 ㎖, 409.1 mmol) 및 아이오딘화나트륨(6.1 g, 40.9 mmol)을 디메틸포름아미드(860 ㎖) 중의 5,7-디히드로피리도[2,3-d][3]벤즈아제핀-6-온(86.0 g, 409.1 mmol)의 현탁액에 첨가하고, 70℃에서 20 시간 동안 교반한다. 혼합물을 주위 온도로 냉각시키고, 얼음 및 물(100 ㎖)의 위에 붓고, 에틸 아세테이트(200 ㎖)를 첨가한다. 혼합물을 셀라이트^®로 여과한 후, 에틸 아세테이트(100 ㎖)로 세척한다. 여과액의 층을 분리하고, 에틸 아세테이트(2×50 ㎖)를 사용하여 수성층으로부터 추출한다. 합한 유기층을 물(2×100 ㎖), 염수(100 ㎖)로 세척하고, 황산나트륨의 위에서 건조시키고, 농축시킨다. 물질을 테트라히드로푸란(1.28 ℓ)에 용해시키고, 실리아(Silia)^® 본드 팔라듐 스캐빈저(16.7 g)를 첨가하고, 주위 온도에서 20 시간 동안 교반한다. 실리카 패드를 통하여 여과하고, 테트라히드로푸란(200 ㎖)으로 세척하고, 농축시켜 표제 화합물(155 g, 420.6 mmol)을 담갈색 오일로서 얻고, 이를 정량적 수율로 결정화시킨다. MS (m/z): 369 (M+1).

방법 2:

혼합물 5,7-디히드로피리도[2,3-d][3]벤즈아제핀-6-온(22.5 g, 106.9 mmol) 및 디메틸포름아미드(500 ㎖)를 100℃로 5 분 동안 가열한다. 40℃로 냉각시키고, 탄산세슘(104.3 g, 320.1 mmol) 및 (2-브로모에톡시)-tert-부틸디메틸실란(29.9 ㎖, 138.9 mmol)을 첨가하고, 주위 온도에서 밤새 교반한다. 60℃로 약 2 시간 동안 교반한 후, 주위 온도로 냉각시킨다. 잔류물을 에틸 아세테이트(1 ℓ) 및 물(3 ℓ) 사이에 분배시키고, 에틸 아세테이트(2×500 ㎖)를 사용하여 수성층으로부터 역추출하고, 합한 유기층을 염수(2×500 ㎖)로 세척한다. 합한 유기층을 황산나트륨의 위에서 건조시키고, 농축시킨다. 에틸 아세테이트:헥산(0:100 내지 100:0)으로 용리시키는 플래쉬 크로마토그래피로 잔류물을 정제하여 표제 화합물을 오일(39.4 g, 106.9 mmol, 89%)로서 얻는다. MS (m/z): 369 (M+1).

제조예 7

5-[2-(tert-부틸(디메틸)실릴)옥시에틸]-7-히드록시이미노-피리도[2,3-d][3]벤즈아제핀-6-온

칼륨 2-메틸프로판-2-올레이트(66.1 g, 588.8 mmol)를 테트라히드로푸란(1.6 ℓ) 중의 5-[2-(tert-부틸(디메틸)실릴)옥시에틸]-7H-피리도[2,3-d][3]벤즈아제핀-6-온(155.0 g, 420.6 mmol)을 -5℃에서 첨가하고, 10 분 동안 교반한다. 이소아밀 니트라이트(61.9 ㎖, 462.6 mmol)를 -5℃에서 적가하고, 혼합물을 10 분 동안 교반한다. 얼음/물(2 ℓ)의 위에 붓고, 에틸 아세테이트(3×200 ㎖)로 추출한다. 합한 유기층을 염수(200 ㎖)로 세척하고, 황산나트륨의 위에서 건조시킨다. 톨루엔(1 ℓ)을 첨가하고, 농축시켜(3회) 표제 화합물을 짙은 갈색 오일(160.0 g, 402.5 mmol, 96%)로서 얻는다. MS (m/z): 398 (M+1).

제조예 8

(7S)-7-아미노-5-(2-히드록시에틸)-7H-피리도[2,3-d][3]벤즈아제핀-6-온

트리플루오로아세트산(124.0 ㎖, 1.64 mol)을 주위 온도의 수조내에서 디클로로메탄(620 ㎖) 및 메탄올(310 ㎖)의 혼합물 중의 5-[2-(tert-부틸(디메틸)실릴)옥시에틸]-7-히드록시이미노-피리도[2,3-d][3]벤즈아제핀-6-온(155.0 g, 389.9 mmol)의 용액에 여러 부분으로 나누어 첨가한다. 내부 온도가 33-38℃에서 유지되도록 아연(76.5 g, 1.2 mol)을 여러 부분으로 나누어 첨가한다. 15 시간 동안 주위 온도에서 교반한다. 셀라이트^®를 통하여 혼합물을 여과하고, 10% 메탄올/디클로로메탄(100 ㎖)으로 세척하고, 여과액을 농축시킨다. 디클로로메탄(0.5 ℓ) 및 얼음(500 g)을 첨가하고, 교반하고, NaOH의 50% 수용액을 사용하여 염기성으로 만든다. 고체를 여과하고, 여과액 층을 분리한다. 디클로로메탄(2×100 ㎖)를 사용하여 수성층으로부터 추출하고, 합한 유기층을 농축시킨다. 헥산 중의 고체를 슬러리로 만든 후, 여과하고, 진공하에서 건조시켜 표제 화합물의 라세미체를 담황색 고체(74.0 g, 274.8 mmol, 71%)로서 얻는다. 에탄올(0.2% 디메틸에틸아민):아세토니트릴(0:100 내지 100:0)로 용리시키는 키랄팩(Chiralpak)^® AD 칼럼의 위에서 물질을 정제하여 표제 화합물(35.0 g, 130 mmol, 33.3%)을 백색 고체로서 얻는다. MS (m/z): 270 (M+1); [α]_Na ²⁵=+187.83° (c=6.9, 메탄올).

제조예 9

7-아지도-5-[2-(tert-부틸(디메틸)실릴)옥시에틸]-7H-피리도[2,3-d][3]벤즈아제핀-6-온

수소화칼륨(약 2 주걱, 광유 중의 35 중량%)을 헥산으로 세척하고, 경사분리하여 오일을 제거하고, 테트라히드로푸란(60 ㎖)을 첨가하고, -78℃로 냉각시킨다. 테트라히드로푸란(60 ㎖) 중의 2,4,6-트리스(1-메틸에틸)-벤젠술포닐 아지드(37.6 g, 121.6 mmol)의 용액을 황산나트륨의 위에서 45 분 동안 건조시킨다. 아지드 용액을 수소화칼륨 현탁액에 15 분에 걸쳐 경사분리한다. 저온 조를 제거하고, 주위 온도로 45 분 동안 가온되도록 하고, 방치하여 용액을 건조시킨다. 디이소프로필아민(17.0 ㎖, 121.0 mmol) 및 테트라히드로푸란(50 ㎖)의 용액을 -78℃로 냉각시키고, n-부틸 리튬(52.1 ㎖, 130.3 mmol)을 5 분에 걸쳐 적가한다. 저온 조를 제거하고, 15 분 동안 가온되도록 하고, 다시 -78℃로 냉각시킨다. 테트라히드로푸란(400 ㎖) 중의 5-[2-(tert-부틸(디메틸)실릴)옥시에틸]-7H-피리도[2,3-d][3]벤즈아제핀-6-온(34.3 g, 93.1 mmol)의 -78℃ 용액에 5-10 분에 걸쳐 캐뉼라를 삽입한다. 1 시간 동안 -78℃에서 교반한 후, 저온 조를 제거하고, 15 분 동안 (약 -45℃로) 가온되도록 한다. -78℃로 냉각시키고, 건조된 2,4,6-트리스(1-메틸에틸)-벤젠술포닐 아지드 용액을 캐뉼라를 통하여 5-10 분에 걸쳐 첨가한다. 조를 제거하고, -5 내지 0℃로 1 시간에 걸쳐 가온되도록 한다. 빙수조내에서 냉각시키고, 아세트산(26.7 ㎖, 465.3 mmol)을 13 분에 걸쳐 적가한다. 주위 온도로 65 분에 걸쳐 가온되도록 하고, 중탄산나트륨 포화 용액(1 ℓ)으로 종결시켰다. 에틸 아세테이트(600 ㎖) 및 물(2 ℓ)로 반응을 희석하고, 층을 분리하고, 에틸 아세테이트(2×400 ㎖)를 사용하여 수성층으로부터 추출한다. 합한 유기층을 중탄산나트륨 포화 수용액(500 ㎖) 및 염수(500 ㎖)로 세척하고, 황산나트륨의 위에서 건조시키고, 농축시킨다. 에틸 아세테이트:헥산(0:100 내지 100:0)으로 용리시키는 플래쉬 크로마토그래피로 잔류물을 정제하여 표제 화합물을 오일(39.8 g, 92.3 mmol, 99%)로서 얻는다. MS (m/z): 410 (M+1).

제조예 10

7-아미노-5-[2-(tert-부틸(디메틸)실릴)옥시에틸]-7H-피리도[2,3-d][3]벤즈아제핀-6-온

팔라듐/탄소(2.2 g, 1.0 mmol, 탄소상 5%)를 에탄올(923 ㎖) 중의 7-아지도-5-[2-(tert-부틸(디메틸)실릴)옥시에틸]-7H-피리도[2,3-d][3]벤즈아제핀-6-온(39.8 g, 92.3 mmol)의 질소 퍼징된 용액에 첨가한다. 수소로 3회 배기/충전시키고, 수소(1기압)하에서 주위 온도에서 밤새 교반한다. 셀라이트^®의 위에서 여과하고, 에탄올 및 에틸 아세테이트로 헹구고, 농축시켜 표제 화합물을 투명 오일(36.6 g, 89.9 mmol, 97%)로서 얻는다. MS (m/z): 384 (M+1).

제조예 11

tert -부틸 N-[(1S)-2-[[5-[2-( tert - 부틸(디메틸)실릴 ) 옥시에틸 ]-6-옥소-7H-피리도[ 2,3-d][3]벤즈아제핀 -7-일]아미노]-1- 메틸 -2-옥소-에틸] 카르바메이트

7-아미노-5-[2-(tert-부틸(디메틸)실릴)옥시에틸]-7H-피리도[2,3-d][3]벤즈아제핀-6-온(36.3 g, 89.9 mmol), 디클로로메탄(360 ㎖), 트리에틸아민(16.3 ㎖, 116.9 mmol), 3-히드록시트리아졸로[4,5-b]피리딘(15.9 g, 116.9 mmol) 및 (2S)-2-(tert-부톡시카르보닐아미노)프로파노산(22.5 g, 116.9 mmol)의 혼합물을 0℃로 냉각시킨다. 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드(22.4 g, 116.9 mmol)를 첨가하고, 5 분후 주위 온도로 밤새 가온되도로 한다. 물(500 ㎖×2), 중탄산나트륨 포화 수용액(2×300 ㎖), 염수(300 ㎖)로 세척한 후, 황산나트륨의 위에서 건조시키고, 농축시킨다. 이소프로필 알콜:헥산(5:95 내지 10:90)으로 용리시키는 플래쉬 크로마토그래피로 잔류물을 정제하여 표제 화합물을 백색 발포물(43.14 g, 77.77 mmol, 86.50%)로서 얻는다. MS (m/z): 555 (M+1).

제조예 12

(2S)-2-아미노-N-[5-(2-히드록시에틸)-6-옥소-7H-피리도[2,3-d][3]벤즈아제핀-7-일]프로판아미드

트리플루오로아세트산(30 ㎖, 396.76 mmol)을 5 분에 걸쳐 tert-부틸 N-[(1S)-2-[[5-[2-(tert-부틸(디메틸)실릴)옥시에틸]-6-옥소-7H-피리도[2,3-d][3]벤즈아제핀-7-일]아미노]-1-메틸-2-옥소-에틸]카르바메이트(5.56 g, 10.0 mmol) 및 디클로로메탄(30 ㎖)의 0℃ 용액에 첨가하고, 가온되도록 하고, 주위 온도에서 5 시간 동안 교반한다. 메탄올에 이어서 에틸 아세테이트:메탄올(2N 암모니아)(1:1)로 용리시키는 SCX^® 칼럼(아이소루트(Isolute) SCX-2x6)을 통하여 플래쉬 크로마토그래피로 잔류물을 정제하여 표제 화합물을 백색 고체(3.48 g, 10.2 mmol)로서 정량적 수율로 얻는다. MS (m/z): 341 (M+1).

실시예 1

4,4,4- 트리플루오로 -N-[(1S)-2-[[(7S)-5-(2- 히드록시에틸 )-6-옥소-7H- 피리도[2,3-d][3]벤즈아제핀 -7-일]아미노]-1- 메틸 -2-옥소-에틸] 부탄아미드

(2S)-2-(4,4,4-트리플루오로부타노일아미노)프로파노산(28.9 g, 135.7 mmol; 실질적으로 제조예 2에서 상기 기재된 바와 같이 제조함), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드(29.7 g, 155.1 mmol)를 디클로로메탄(696 ㎖) 중의 (7S)-7-아미노-5-(2-히드록시에틸)-7H-피리도[2,3-d][3]벤즈아제핀-6-온(34.8 g, 129.2 mmol)의 현탁액에 0℃에서 순차적으로 첨가하고, 5 분 동안 교반한다. 1-히드록시벤조트리아졸 일수화물(24.7 g, 155.1 mmol)을 첨가하고, 이를 1 시간 동안 교반한 후, 주위 온도로 가온시킨다. (2S)-2-(4,4,4-트리플루오로부타노일아미노)프로파노산(0.6 g, 2.6 mmol)을 첨가하고, 15 분 동안 주위 온도에서 교반한다. 물(600 ㎖)을 첨가하고, 백색 고체를 여과하고, 여과액의 층을 분리한다. 유기층을 물(3×200 ㎖)로 세척하고, 황산나트륨의 위에서 건조시키고, 농축시켜 담갈색 발포체를 얻는다. 물질을 50% 메틸 3급 부틸 에테르 헥산(500 ㎖) 중에서 슬러리로 만들고, 고체를 여과하고, 고 진공하에서 건조시켜 65 g의 고체를 얻는다.

물(195 ㎖) 및 중탄산칼륨(14.0 g, 140.0 mmol)을 메탄올(195 ㎖) 중의 미리 얻은 고체(65.0 g, 140.0 mmol)의 10℃ 용액에 첨가하고, 주위 온도에서 29 시간 동안 교반한다. 농축시키고, 디클로로메탄(3×50 ㎖)으로 추출한다. 합한 유기층을 물(3×20 ㎖)로 세척하고, 황산나트륨의 위에서 건조시키고, 농축시킨다. 메탄올:디클로로메탄(98:2, 암모니아 중의 7N)으로 용리시키는 플래쉬 크로마토그래피로 잔류물을 정제한다. 물질을 50% 메틸 3급 부틸 에테르/헥산으로부터 분쇄한 후, 메틸 3급 부틸 에테르(500 ㎖)로부터 분쇄한다. 고체를 메틸 3급 부틸 에테르(200 ㎖) 및 헥산(200 ㎖)으로 세척하고, 고 진공하에서 고체를 건조시켜 표제 화합물을 회백색 고체(42.0 g, 90.4 mmol, 65%)로서 얻는다. MS (m/z): 270 (M+1); [α]_Na ²⁵=-153.40° (c=5.0, 메탄올).

방법 2:

1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드(2.50 g, 13.0 mmol)를 (2S)-2-아미노-N-[5-(2-히드록시에틸)-6-옥소-7H-피리도[2,3-d][3]벤즈아제핀-7-일]프로판아미드(3.4 g, 10.0 mmol), 디클로로메탄(40 ㎖), 3-히드록시트리아졸로[4,5-b]피리딘(1.8 g, 13.0 mmol), 4,4,4-트리플루오로부타노산(1.9 g, 13.0 mmol) 및 트리에틸아민(1.8 ㎖, 13.0 mmol)의 0℃ 혼합물에 첨가한다. 교반되도록 하고, 주위 온도로 밤새 가온시킨다. 물(40 ㎖)을 첨가하고, 디클로로메탄(100 ㎖) 및 물(50 ㎖) 사이에 분배시킨다. 층을 분리하고, 디클로로메탄을 사용하여 수성층으로부터 역추출하고, 합한 유기층을 중탄산나트륨 포화 수용액(2×100 ㎖)으로 세척한다. 디클로로메탄(25 ㎖)을 사용하여 중탄산염 층으로부터 역추출하고, 합한 유기층을 황산나트륨의 위에서 건조시키고, 농축시킨다. 메탄올(2N 암모니아):디클로로메탄(0:100 내지 5:95)으로 용리시키는 플래쉬 크로마토그래피로 잔류물을 정제하여 3.77 g의 부분입체이성질체 혼합물을 얻는다. 물질을 에탄올(0.2% 디메틸에틸아민):아세토니트릴(0:100 내지 100:0)로 용리시키는 키랄팩^® AD 칼럼에서 정제하여 표제 화합물을 백색 고체(1.7 g, 3.7 mmol, 37%)로서 얻는다. MS (m/z): 465 (M+1).

제조예 13

메틸 2-(2-브로모페닐)아세테이트

질소 분위기하에서 2-브로모페닐아세트산(500.0 g, 2.33 mol)을 메탄올(5.0 ℓ)과 합한다. 진한 황산(185.8 ㎖)을 20-35℃에서 적가한 후, 3-4 시간 동안 교반하면서 60-65℃로 가온시킨다. 반응 혼합물을 45℃로 냉각시키고, 감압하에서 45℃ 미만으로 약 750 ㎖의 부피로 농축시킨다. 반응 혼합물을 10-30℃로 냉각시키고, 디클로로메탄(2.5 ℓ)을 첨가한다. 수산화나트륨(7%, 380.0 ㎖)을 사용하여 pH를 7-8로 조절하고, 층을 분리시킨다. 유기상을 무수 상태로 감압하에서 45℃ 미만으로 농축시켜 표제 화합물(516.5 g, 97.0%)을 황색 오일로서 얻는다.

제조예 14

5,7-디히드로피리도[2,3-d][3]벤즈아제핀-6-온

메틸 2-(2-브로모페닐)아세테이트(1.0 kg, 4.36 mol), 디옥산(11.0 ℓ) 및 N-메틸-2-피롤리돈(7.0 ℓ)을 실온에서 교반하면서 합한다. 비스(피나콜라토)디보론(1.2 kg, 4.58 mol) 및 아세트산칼륨(855.9 g, 8.72 mol)을 혼합물에 첨가하고, 질소 기체를 용액에 2-3 시간 동안 통과시켜 용액을 탈기시킨다. 2염화[1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]팔라듐(II) 디클로로메탄 부가물(71.2 g, 97.2 mmol)을 질소 분위기하에서 가한 후, 반응 혼합물을 80-90℃로 18-20 시간 동안 가열하여 메틸 2-[2-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)페닐]아세테이트를 용액으로서 얻고, 이를 분리하지 않고 사용한다. 반응 혼합물을 15-25℃로 냉각시키고, 2-아미노-3-브로모피리딘(675.0 g, 3.90 mol) 및 물(3.0 ℓ) 중의 3염기성 인산칼륨(2.41 kg, 11.3 mol)의 용액을 첨가한다. 용액에 2-3 시간 동안 질소 기체를 통과시켜 용액을 탈기시키고, 2염화[1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]팔라듐(II) 디클로로메탄 부가물(106.8 g, 130.8 mmol)을 첨가한 후, 반응 혼합물을 80-90℃로 18-40 시간 동안 가열한다. 반응 혼합물을 50-60℃로 냉각시키고, 포화 중탄산나트륨(13.0 ℓ), 포화 염화나트륨(13.0 ℓ) 및 물(13.0 ℓ)로 이루어진 용액을 서서히 첨가한다. 혼합물을 2-3 시간 동안 50-60℃에서 교반하고, 15-25℃로 냉각시키고, 추가의 18-20 시간 동안 교반한다. 생성된 고체를 여과하고, 필터 케이크를 물(2×2.0 ℓ)로 세척한다. 고체를 깨끗한 반응 용기로 옮기고, 에틸 아세테이트(5.0 ℓ)를 첨가하고, 혼합물을 60-70℃로 2-3 시간 동안 가열한다. 용액을 15-25℃로 냉각시키고, 이를 1-2 시간 동안 교반하고, 생성된 고체를 여과한다. 필터 케이크를 에틸 아세테이트(2×750 ㎖)로 세척하고, 생성된 고체를 진공하에서 건조시켜 표제 화합물(644.0 g, 68.1%)을 회백색 고체로서 얻는다.

제조예 15

5-[2-(tert-부틸(디메틸)실릴)옥시에틸]-7H-피리도[2,3-d][3]벤즈아제핀-6--온

아세토니트릴(340.0 ㎖) 중의 5,7-디히드로피리도[2,3-d][3]벤즈아제핀-6-온(33.8 g, 0.16 mol)을 첨가하고, 20-30℃에서 0.5-1 시간 동안 교반한다. 탄산세슘(104.6 g, 0.32 mol) 및 (2-브로모에톡시)-tert-부틸디메틸실란(42.2 g, 0.18 mol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 70-80℃로 18-20 시간 동안 가열한다. 반응 혼합물을 20-25℃로 냉각시키고, 규조토(50.6 g)를 통하여 여과한다. 필터 케이크를 아세토니트릴(2×50.6 ㎖)로 세척하고, 여과액을 감압하에서 약 67.5 ㎖의 총 부피가 되도록 농축시킨다. 톨루엔(152 ㎖), 활성탄(2.53 g)을 첨가하고, 혼합물을 60-70℃로 1-2 시간 동안 가열한다. 혼합물을 25-35℃로 냉각시키고, 반응 혼합물을 규조토(50.6 g)로 여과한다. 필터 케이크를 톨루엔(17.0 ㎖)으로 헹구고, 감압하에서 농축시켜 표제 화합물을 담갈색 오일로서 얻고, 이를 정치시켜 결정화시킨다(56.8 g, 92.2%).

제조예 16

5-[2-(tert-부틸(디메틸)실릴)옥시에틸]-7H-피리도[2,3-d][3]벤즈아제핀-6-온(30.0 g, 0.08 mol) 및 톨루엔(300.0 ㎖)을 합하고, 반응 혼합물을 -10-0℃로 냉각시킨다. 칼륨 tert-부톡시드(18.2 g, 0.16 mol), 이소아밀 니트라이트(13.34 g, 0.11 mol)를 첨가한 후, 3-5 시간 동안 교반한다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(210 ㎖) 및 물(510 ㎖)의 저온(0-5℃)의 2염기성 용액으로 옮기고, 15-30 분 동안 교반한다. 반응 혼합물을 15-25℃로 가온시키고, 층을 분리시킨다. 수성층을 추가의 에틸 아세테이트(120 ㎖) 및 메틸 tert-부틸 에테르(120 ㎖)로 추출하고, 유기층을 합한다. 유기층을 감압하에서 약 60-90 ㎖의 용액 부피로 농축시킨 후, 톨루엔(240 ㎖) 및 에틸 아세테이트(75 ㎖)를 첨가한다. 실리카 겔(45.0 g)을 통하여 용액을 여과하고, 실리카 겔을 톨루엔(210 ㎖) 및 에틸 아세테이트(60 ㎖)의 혼합물로 헹구고, 여과액을 감압하에서 약 75 ㎖의 부피로 농축시킨다. 헵탄(120 ㎖)을 첨가하고, 혼합물을 약 60 ㎖의 부피로 농축시키고, 생성된 고체를 여과한다. 필터 케이크를 헵탄(25 ㎖)으로 세척하고, 진공하에서 건조시켜 표제 화합물(28.3 g, 72.5%)을 황색 고체로서 얻는다.

제조예 17

5-[2-(tert-부틸(디메틸)실릴)옥시에틸]-7-히드록시이미노-피리도[2,3-d][3]벤즈아제핀-6-온(206.0 g, 0.52 mol) 및 테트라히드로푸란(2.3 ℓ)를 질소 분위기하에서의 오토클레이브에서 합한다. 래니 니켈(232.0 g, 1.13 wt/wt 당량)을 반응 혼합물에 첨가하고, 수소 분위기(87 psi)를 투입한다. 반응 혼합물을 60-65℃에서 24 시간 동안 교반한다. 혼합물을 규조토를 통하여 여과하고, 필터 보조물을 테트라히드로푸란(500 ㎖)으로 세척한다. 여과액을 농축시켜 표제 화합물(196.0 g, 93.2%)을 갈색 오일로서 얻는다. MS (m/z): 384 (M+1).

제조예 18

tert-부틸 N-[(1S)-2-[[5-(2-히드록시에틸)-6-옥소-7H-피리도[2,3-d][3]벤즈아제핀-7-일]아미노]-1-메틸-2-옥소-에틸]카르바메이트

7-아미노-5-[2-(tert-부틸(디메틸)실릴)옥시에틸]-7H-피리도[2,3-d][3]벤즈아제핀-6-온(166.0 g, 0.43 mol), 디클로로메탄(2.2 ℓ) 및 L-Boc-알라닌(106.4 g, 0.56 mol)을 질소 분위기하에서 합한다. 내부 온도를 30℃ 미만으로 유지하면서 히드록시벤조트리아졸(1.46 g, 10.8 mmol) 및 트리에틸아민(102.5 ㎖, 0.74 mol)을 첨가한다. 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드(128.2 g, 0.67 mol)를 일부분씩 첨가하고, 16-18 시간 동안 20-30℃에서 교반한다. 반응 혼합물을 디클로로메탄(498 ㎖×2)으로 용리시키는 실리카 겔 크로마토그래피(300 g 실리카 겔)로 정제한다. 디클로로메탄 용액을 합하고, 이를 물(2×3.3 ℓ)로 세척한다. 유기상을 감압하에서 300 ㎖ 내지 400 ㎖의 부피로 농축시키고, 에틸 아세테이트(664.0 ㎖)를 첨가한다. 혼합물을 감압하에서 300-400 ㎖의 부피로 농축시키고, 에틸 아세테이트(664 ㎖)를 첨가한다. 혼합물을 감압하에서 300-400 ㎖의 부피로 농축시키고, 에틸 아세테이트(1.3 ℓ)를 첨가한다. 테트라-n-부틸암모늄 플루오라이드 삼수화물(149.4 g, 0.47 mol)을 첨가하고, 16-18 시간 동안 20-30℃에서 교반한다. 염화나트륨의 수용액(20%, 1.6 ℓ)을 첨가하고, 층을 분리하고, 유기상을 수성 염화나트륨(20%, 1.6 ℓ)으로 다시 세척한다. 유기층을 800-900 ㎖의 대략적인 부피로 농축시키고, 혼합물을 12-16 시간 동안 20-30℃에서 교반한다. 생성된 고체를 여과하고, 필터 케이크를 에틸 아세테이트(91.3 ㎖)로 세척한다. 여과액을 에틸 아세테이트(2×500 ㎖)로 용리시키는 실리카 겔 크로마토그래피(300 g 실리카 겔)로 정제하여 표제 화합물(82.6 g, 85.2% de, 100% ee, 51.2% 수율)을 황색 오일로서 얻는다. MS (m/z): 441 (M+1).

제조예 19

(2S)-2-아미노-N-[(7S)-5-(2-히드록시에틸)-6-옥소-7H-피리도[2,3-d][3]벤즈아제핀-7-일]프로판아미드

tert-부틸 N-[(1S)-2-[[5-(2-히드록시에틸)-6-옥소-7H-피리도[2,3-d][3]벤즈아제핀-7-일]아미노]-1-메틸-2-옥소-에틸]카르바메이트(54.0 g, 0.12 mol) 및 아세토니트릴(212.7 ㎖)을 질소 분위기하에서 합한다. 염산(317.5 ㎖, 4N, 1.27 mol)을 적가하여 내부 온도를 30℃ 미만으로 유지하고, 반응 혼합물을 16-18 시간 동안 20-30℃에서 교반한다. 물(324.0 ㎖) 및 디클로로메탄(430 ㎖)을 첨가하고, 층을 분리시킨다. 유기층을 버리고, 수성층에 디클로로메탄(645 ㎖)을 첨가하고, 수성 수산화나트륨(20%, 252 ㎖)을 사용하여 pH를 약 10으로 조절한다. 층을 분리하고, 수성층을 추가의 디클로로메탄(2×430 ㎖)으로 추출하고, 유기상을 합한다. 유기상을 감압하에서 45℃ 미만에서 130-150 ㎖의 대략적 부피로 농축시키고, 테트라히드로푸란(322 ㎖)을 첨가한다. 용액을 감압하에서 45℃ 미만에서 200-220 ㎖의 대략적인 부피로 농축시키고, 추가의 테트라히드로푸란(213 ㎖)을 첨가한다. 반응 혼합물을 감압하에서 250-270 ㎖의 대략적인 부피로 농축시키고, 60-65℃로 2-3 시간 동안 가열한다. 반응 혼합물을 5-15℃로 서서히 냉각시키고, 5-8 시간 동안 교반한다. 생성된 고체를 여과하고, 필터 케이크를 에틸 아세테이트(56 ㎖)로 세척한다. 고체를 깨끗한 반응 용기로 옮기고, 에틸 아세테이트(150 ㎖)를 첨가하고, 60-65℃로 2-3 시간 동안 가열한 후, 용액을 5-15℃로 서서히 냉각시킨다. 2-3 시간 동안 이 온도에서 교반하고, 생성된 고체를 여과로 수집한다. 필터 케이크를 에틸 아세테이트(45 ㎖)로 세척하고, 고체를 오븐내에서 감압하에서 60℃ 미만에서 건조시켜 표제 화합물(21.0 g, 99.2% de, 100% ee, 51.0% 수율)을 회백색 고체로서 얻는다. MS (m/z): 341 (M+1).

실시예 2

4,4,4-트리플루오로-N-[(1S)-2-[[(7S)-5-(2-히드록시에틸)-6-옥소-7H-피리도[2,3-d][3]벤즈아제핀-7-일]아미노]-1-메틸-2-옥소-에틸]부탄아미드 수화물

(2S)-2-아미노-N-[(7S)-5-(2-히드록시에틸)-6-옥소-7H-피리도[2,3-d][3]벤즈아제핀-7-일]프로판아미드(45.0 g, 132.2 mmol) 및 디메틸포름아미드(452.9 ㎖)를 질소 분위기하에서 합한다. 0-5℃로 냉각시키고, N-에틸디이소프로필아민(77.4 ㎖, 444.0 mmol), 4,4,4-트리플루오로부티르산(19.9 g, 139.3 mmol) 및 히드록시벤조트리아졸 일수화물(22.3 g, 153.1 mmol)을 첨가한다. 용액을 5-10 분 동안 교반하고, 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드 히드로클로라이드(30.6 g, 159.6 mmol)를 한번에 첨가한다. 반응 혼합물을 20-25℃로 가온시키고, 1-2 시간 동안 교반한다. 에틸 아세테이트(1.4 ℓ) 및 물(1.8 ℓ)을 첨가하고, 0.5-1 시간 동안 교반한다. 층을 분리하고, 유기층을 중탄산나트륨 수용액(5%, 1.0 ℓ)으로 세척하고, 용액을 감압하에서 농축시켜 200-300 ㎖의 부피를 얻는다. 에탄올(522 ㎖)을 첨가하고, 용액을 감압하에 농축시켜 200-300 ㎖의 부피를 얻는다. 3회 반복한다. 에탄올(180 ㎖) 및 탄산칼륨(34.6 ㎖)의 5% 용액을 첨가하고, 0.5-1 시간 동안 20-25℃에서 교반한다. 물(667 ㎖) 및 4,4,4-트리플루오로-N-[(1S)-2-[[(7S)-5-(2-히드록시에틸)-6-옥소-7H-피리도[2,3-d][3]벤즈아제핀-7-일]아미노]-1-메틸-2-옥소-에틸]부탄아미드 수화물(0.4 g, 0.86 mmol)의 시드 결정을 첨가하고(시드 결정은 생성물의 이전의 로트로부터 얻은 고체로부터 생성될 수 있거나, 또는 통상적으로 공지되어 있으며, 당업자가 사용하는 기타의 방법, 예컨대 작은 분액의 재결정화를 사용하여 얻을 수 있음), 2-3 시간 동안 20-25℃에서 교반한다. 이를 여과하고, 필터 케이크를 에탄올(63 ㎖) 및 물(42 ㎖)의 혼합물로 2회 세척한다. 생성된 고체를 오븐내에서 감압하에서 40℃ 미만에서 건조시켜 표제 화합물(41.9 g, 99.6% de, 100% ee, 65.3% 수율)을 백색 내지 회백색 고체로서 얻는다. MS (m/z): 465 (M-H₂O+1).

실시예 2의 XRPD

결정질 고체의 XRPD 패턴은 CuKα 공급원(λ=1.54060 Å)이 장착된 브루커(Bruker) D4 인데버(Endeavor) X선 분말 회절계 및 35 kV 및 50 mA에서 작동하는 반텍(Vantec) 검출기에서 얻는다. 샘플을 2θ에서 0.0087°의 단계 크기 및 0.5 초/단계의 스캔율로 2θ에서 4 내지 40° 사이에서 0.6 ㎜ 발산, 5.28 ㎜ 고정 산란 방지기 및 9.5 ㎜ 검출기 슬릿으로 스캐닝한다. 건조 분말을 석영 샘플 홀더에 팩킹시키고, 유리 슬라이드를 사용하여 평활한 면을 얻는다. 결정학 분야에서 임의의 소정의 결정 형태에 대하여 회절 피크의 상대적 강도는 결정 형태학 및 성질 등의 요인으로부터 발생하는 바람직한 배향으로 인하여 변경 가능하다는 점은 공지되어 있다. 바람직한 배향의 효과가 존재할 경우, 피크 강도는 변경되지만, 다형태의 특징적 피크 위치는 불변한다. (예를 들면 문헌 [U.S. Pharmacopia 33-National Formulary 28 Chapter <941> Characterization of Crystalline Solids by X-ray Powder Diffraction (XRPD) Official October 1, 2010-February 1, 2011]을 참조한다). 게다가, 또한 임의의 소정의 결정 형태에 대하여 각(angular) 피크 위치는 약간 변경될 수 있다는 점도 공지되어 있다. 예를 들면, 샘플이 분석되는 온도 또는 습도에서의 변동, 샘플 이동, 또는 내부 표준 물질의 존재 또는 부재로 인하여 피크 위치는 이동될 수 있다. 이러한 경우에서, 2θ에서의 ±0.2의 피크 위치 변동 가능성은 제시된 결정 형태의 명백한 확인을 방해하지 않으면서 이들 잠재적 변동을 고려할 것이다. 결정 형태의 확인은 통상적으로 더 주요한 피크인 특징적인 피크(° 2θ의 단위)의 임의의 독특한 조합에 기초하여 이루어질 수 있다. 결정 형태 회절 패턴은 주위 온도(19-25℃) 및 상대 습도(20-60%)에서 수집한다.

그래서, 실시예 2의 화합물의 생성된 샘플은 하기 표 I에 기재된 바와 같은 회절 피크(2θ 값)를 갖는, CuKα 방사선을 사용한 XRPD 패턴을 특징으로 한다. 형태는 결정질이며, 0.2°의 회절 각도에 대한 공차로 11.96, 18.81, 20.78 및 21.07° 2θ로 이루어진 군으로부터 선택된 피크 중 1개 이상과 조합된 22.97°에서의 피크를 함유한다.

<표 I>

실시예 2의 고체상 NMR

¹³C 교차 분극/자기 각도 스피닝(CP/MAS) NMR(고체상 NMR 또는 SSNMR) 스펙트럼은 100.622 MHz의 탄소 주파수에서 작동하며 브루커 4 ㎜ 3중 공명 프로브(K299551)가 장착된 브루커 아반스(Bruker Avance) II 400 MHz NMR 분광계(릴리(Lilly) 태그 K299547)를 사용하여 얻는다. TOSS 사이드밴드 억제는 SPINAL64 디커플링(70.8 와트) 및 RAMP100 형상의 H-핵 CP 펄스를 사용하는 교차 분극과 함께 사용한다. 수집 변수는 2.5 ㎲의 90° 양성자 r.f. 펄스 폭, 3.5 ms의 접촉 시간, 5 s의 펄스 반복 시간, 10 kHz의 MAS 주파수, 30 kHz의 스펙트럼 폭, 34 ms의 수집 시간 및 10,587의 스캔 횟수이다. 화학적 이동은 별도의 실험에서는 아다만탄(δ=29.5 ppm)을 기준으로 한다. ¹³C NMR (고체상): δ (ppm) 18.65, 27.52, 28.76, 47.66, 49.96, 55.02, 58.88, 122.87, 126.49, 129.73, 131.37, 132.31, 137.28, 145.01, 149.17, 168.53, 170.30, 175.55.

실시예 2의 칼 피셔(Karl Fischer) 적정

칼 피셔 적정은 브링크만 메트롬(Brinkmann Methrohm) 756 KF 전량계를 사용하여 얻는다. 대조 표준은 물 표준으로서 히드라놀(Hydranol)^®을 사용하여 2회 측정한다. 샘플을 3회 실시하고, 물의 평균 비율을 기록하여 샘플 중의 물의 양을 측정한다. 실시예 2의 칼 피셔 적정 평균 결과는 3.9% 물이다. 실시예 2에서 물의 1 몰 당량의 이론치 비율은 3.7%이다.

암은, DNA 수복, 게놈 안정성, 세포 증식, 세포 사멸, 부착, 혈관신생, 침습 및 세포에서의 전이 및 조직 미세환경을 조절하는 하나 이상의 유전자의 비정상적 기능에 의하여 암의 개시 및 진행이 유도되는 질환의 불균질 수집으로서 점차로 인식된다. "암" 유전자의 변이체 또는 비정상적 기능은 자연 발생 DNA 다형태, (증폭, 결실, 염색체 손실 또는 복제를 통한) 게놈 복제수에서의 변화, (유전자 발현의 조절실패를 초래하는 염색체 전위, 역전 또는 기타의 재배열을 통한) 유전자 및 염색체 구조에서의 변경 및 점 돌연변이로부터 발생할 수 있다. 암 신생물은 하나의 비정상 유전자 기능에 의하여 유도될 수 있으며, 추가의 비정상 유전자 기능에 의하여 악화되는 동일한 비정상 유전자 기능 또는 유지 및 진행에 의하여 유지될 수 있다.

상기 언급된 유전 염색체 이상을 넘어서, 각각의 암은 또한 아세틸화, 메틸화 또는 인산화에 의한 DNA 메틸화, 게놈 각인 및 히스톤 변형을 비롯한 게놈의 후성적 변형을 포함할 수 있다. 후성적 변형은 악성종양의 유도 및/또는 유지에서 역할을 할 수 있다.

인간 암에서의 세포유전 이상의 대규모의 카타로그를 편집하고, 정기적으로 온라인에 유지 및 업데이트한다(The Mitelman Database of Chromosome Aberrations in Cancer at the US National Cancer Institute (NCI) Cancer Genome Anatomy Project (CGAP) Web site: http://cgap.nci.nih.gov 참조). 데이터베이스는 본 발명의 악성종양의 적어도 일부에 대한 염색체 이상을 포함한다. 영국 웰컴 트러스트 생거 연구소(The Wellcome Trust Sanger Institute)의 암 게놈 프로젝트(Cancer Genome Project)는 종양발생(http://www.sanger.ac.uk/genetics/CGP/Census 참조)뿐만 아니라, 인간 암에서의 체세포 돌연변이의 COSMIC(암에서의 체세포 돌연변이의 카타로그) 데이터베이스와 인과적으로 연결되는 모든 인간 유전자의 상세한 온라인 "암 유전자 센서스(Cancer Gene Census)"를 유지한다(http://www.sanger.ac.uk/genetics/CGP/cosmic 참조). 각종 암에 대하여 인과적으로 연결되는 세포유전 변화에 대한 풍부한 정보를 함유하는 추가의 공급원은 종양학 및 혈액학에서의 유전학 및 세포유전학의 아틀라스(Atlas of Genetics and Cytogenetics in Oncology and Haematology)이다(http://atlasgeneticsoncology.org//Anomalies/Anomliste.html#MDS). 이러한 데이터베이스는 또한 본 발명의 악성종양의 적어도 일부분에 대한 염색체 이상을 포함한다.

생검, 면역표현형 및 기타 테스트에 의한 암성 악성종양의 진단은 공지되어 있으며, 통상적으로 사용된다. 고 해상 염색체 밴딩 및 진보된 염색체 영상화 기법 이외에, 암의 의심되는 사례에서의 염색체 이상은 당업자에게 공지 및 사용되는 세포유전 분석, 예컨대 형광 제자리 하이브리드화(FISH), 핵형분석, 스펙트럼 핵형분석(SKY), 복합 FISH(M-FISH), 비교용 게놈 하이브리드화(CGH), 단일 뉴클레오티드 다형태 어레이(SNP 칩) 및 기타 진단 및 분석 테스트를 통하여 측정될 수 있다.

노치의 종양발생 역할은 우선 노치1 세포내 도메인의 과발현을 초래하는 노치1 세포내 도메인의 T-세포 수용체-β 프로모터 구역으로의 전위를 비롯한 인간 T-세포 백혈병에서 최초로 보고되었다(문헌 [Grabher et al., Nature Review Cancer, 2006(6):347-359]; [Weng et al., Science, 2004(306):269-271]. 마우스의 조혈 전구 세포에서의 노치1 세포내 도메인의 과발현은 마우스가 인간과 유사한 T-세포 급성 림프모구성 백혈병을 나타내도록 한다. T-세포 급성 림프모구성 백혈병 이외에, 노치 신호가 급성 림프모구성 백혈병, 급성 골수 백혈병, 만성 골수 백혈병 및 적백혈병을 비롯한 수용체 및/또는 리간드의 과발현 및 수용체 증폭을 포함한 복수의 기전을 통하여 기타 암에서 종양발생이라는 증대되는 증거가 존재한다. 리간드 및/또는 수용체의 변이 또는 과발현으로 인한 비정상 구성 노치 신호전달은 또한 유방암, 난소암(문헌 [Park et al., Cancer Research, 2006(66):6312-6318]), 흑색종(문헌 [Gast et al., Genes , Chromosomes & Cancer, 2010(49):733-745]), 폐암, 비소세포 폐암(문헌 [Westhoff et al., PNAS, 2009(106):22293-22298]), 췌장암, 교모세포종, 결장직장암, 두경부암, 자궁경부암, 전립선암, 간암, 편평 세포 암종(구강), 피부암 및 수모세포종(문헌 [Ranganathan et al., Nature Review Cancer, 2011(11):338-351 and Supplementary information S1 (table)])을 비롯한 다수의 고형암 악성종양과 연관되어 있다. 노치 신호전달의 억제는 구성 노치 신호전달 경로의 비정상 활성화에 의하여 유발되는 질환을 갖는 암 환자에게 치료적 잇점을 제공하기 위한 매력적인 표적을 나타낸다. 문헌 [Shih et al., Cancer Research, 2007(67) 1879-1882].

하기 시험관내 및 생체내 실험은 다양한 특이적 암 세포주에 대한 화합물 1의 노치 경로 신호전달 억제 활성 및 효능을 나타낸다. 이들 분석은 인간 임상의 화학요법 활성을 나타내는 것으로 당업자가 일반적으로 인식하고 있다. γ-세크레타제에 의한 노치 세포내 도메인 절단의 억제는 각각의 노치 1, 노치 2, 노치 3 및 노치 4 수용체에 대하여 효과적인 것으로 여겨진다. 노치 경로 신호전달 억제 활성 및 효능을 입증하는 분석은 실질적으로 하기와 같이 또는 유사한 데이터를 제공하는 유사한 분석에 의하여 실시될 수 있다.

노치1 N1ICD 핵 축적 세포 영상화 분석

HEK293ΔE12 세포(HEK293 세포는 그의 N-말단에서 23개의 아미노산 신호 펩티드 서열 MPRLLTPLLCLTLLPALAARGLR(서열 1)을 갖는 아미노산 1703-2183, NP_032740.3을 코딩하는 마우스 노치1 cDNA를 안정하게 발현시키도록 조작됨)를 96 웰 플레이트에서 5,000 세포/웰로 플레이팅하고, 5% 소 태아 혈청을 갖는 둘베코 개질 이글 배지(Dulbecco's Modified Eagle's Medium)-고 글루코스 중에서 37℃, 5% CO₂에서 24 시간 동안 배양한다. 1,000 nM 내지 0.05 nM 범위에 걸쳐서 1:3 희석의 10 포인트에서 그리고 0.2%에서의 최종 디메틸 술폭시드(DMSO) 농도로 투여하는 테스트 화합물로 세포를 처리한다. 24 시간 처리후, 세포 플레이트를 하기 단계로 순차적으로 처리한다: 100 ㎕/웰 프리퍼(PREFER)™ 고정액으로 30 분 동안 실온(RT)에서 고정시키고; 인산염 완충 염수(PBS) 중에서 20 분 동안 RT에서 100 ㎕/웰 0.1% 트리톤(TRITON)^® X100으로 세포를 투과시키고; 100 ㎕/웰 PBS로 각각 3회 세척하고; 50 ㎕/웰 토끼 항-N1ICD(노치1 세포내 도메인) 항체를 1% 소 혈청 알부민을 갖는 PBS 중에서 1:2000으로 첨가하고, 1.5 시간 동안 37℃에서 배양하고; 100 ㎕/웰 PBS로 각각 3회 세척하고; 1% 소 혈청 알부민을 갖는 PBS 중의 1:1000 희석으로 50 ㎕/웰 염소 항-토끼 IgG 알렉사(Alexa) 488과 함께 배양하고; 1 시간 동안 37℃에서 배양하고, 100 ㎕/웰 PBS로 각각 3회 세척하고, 50 ㎍/㎖ RNAse를 갖는 100 ㎕/웰 15 μM 아이오딘화프로피디윰을 30 분 동안 첨가하여 핵을 염색시킨다. 아큐멘 익스플로러(ACUMEN EXPLORER)™ 레이저-스캐닝 형광 마이크로플레이트 세포측정기(티티피 랩테크 리미티드(TTP LABTECH LTD))로 플레이트를 스캐닝하여 655 ㎚-705 ㎚에서의 형광(DNA 결합된 아이오딘화프로피디윰의 발광) 및 505 ㎚-530 ㎚에서의 핵 구역에서의 N1ICD에 결합된 항체의 형광을 사용하여 총 세포 핵 계수/웰 및 총 핵 면적/웰을 측정한다. 주요 분석 츨력은 정규화된 핵 N1ICD 신호, 총 핵 부위에 대한 핵 N1ICD의 총 형광의 비이다. 상대적 세포독성 프로파일링은 0.2% DMSO 대조군 세포에 대한 세포수(%)로서 수집한다. 분해된 노치 1 또는 N1ICD를 인식하는 항체는 Val1744에서의 인간 노치1의 아미노 말단 절단 부위에 해당하는 인간 펩티드로 증가된다. 무처치 대조군 세포에서, 노치1로부터 생성된 N1ICD는 전위되어 핵에서 축적될 것이다. 세포를 노치 1 절단 억제 화합물로 처리할 경우, 핵 N1ICD의 신호는 감소될 것이다. 농도 반응 및 IC₅₀은 세포독성 프로파일링에 대하여 동일한 그래프에 세포수(%)를 플롯하면서 핵 N1ICD 신호에 대한 4 변수 로지스틱에 대입한 곡선에 의하여 구한다. 본질적으로 상기 기재된 바와 같은 분석을 실시하여 화합물 1에 대한 평균 IC₅₀은 0.41 nM(n=7)이다. 화합물은 1,000 nM 농도 이하의 세포수에는 영향을 미치지 않는다.

이들 데이터는 화합물 1이 노치 1에 대한 친화성을 가지며 노치 1 세포내 도메인 세포 신호전달 펩티드의 세포내 축적을 억제한다는 것을 입증한다.

인간 종양 세포주에서의 N1ICD 절단의 억제

N1ICD 절단을 억제하는 능력에서의 화합물 1의 효능을 평가하기 위하여, 수개의 인간 종양 세포주를 사용한다. A2780은 인간 난소 세포주(시그마-알드리치(Sigma-Aldrich), No. 93112519)이고; MIA PaCa-2는 인간 췌장 세포주(ATCC No. CRL-1420)이고; BxPC-3은 인간 췌장 세포주(ATCC No. CRL-1687)이고; SW480은 인간 결장직장 세포주(ATCC No. CCL-228)이고; HCT 116은 인간 결장직장 세포주(ATCC No. CCL-247)이고; DLD-1은 인간 결장직장 세포주(ATCC No. CCL-221)이고; MDA-MB-231은 인간 유선 세포주(ATCC No. HTB-26)이고; U-87 MG는 인간 교모세포종 세포주(ATCC No. HTB-14)이고; A375는 인간 악성 흑색종 세포주(ATCC No. CRL-1619)이고; CCRF-CEM은 인간 급성 림프모구성 백혈병(ALL) 세포주(ATCC No. CCL-119)이고; SUP-T1은 인간 T-세포 림프모구성 백혈병 세포주(ATCC No. CRL-1942)이고; K-562는 Bcr 및 Abl1 유전자로 이루어진 융합 전사물의 존재를 특징으로 하는 인간 만성 골수 백혈병(CML) 세포주(ATCC No. CCL-243)이고; 주르캇(Jurkat), 클론(Clone) E6-1은 인간 급성 T-세포 백혈병 세포주(ATCC No. TIB-152)이고; MOLT-3은 인간 급성 림프모구성 백혈병(ALL) 세포주(ATCC No. CRL-1552)이고; MOLT-4는 인간 급성 림프모구성 백혈병(ALL) 세포주(ATCC No. CRL-1582)이고; HEL 92.1.7은 인간 적백혈병 세포주(ATCC No. TIB-180)이다. 각각의 세포주는 시그마-알드리치로부터 명시된 카타로그 번호로 입수한 A2780 세포주를 제외하고, 어메리칸 타입 컬쳐 콜렉션(American Type Culture Collection)(ATCC)으로부터 명시된 ATCC 번호로 입수한다. 세포를 분위기 중 습도 하에 5% CO₂로 37℃에서 그의 각각의 배양 배지 중에서 증식시킨다. A2780 인간 난소 암종에 대한 세포 배양 배지는 2 mM L-글루타민, 0.01 ㎎/㎖ 인슐린 및 10% 소 태아 혈청(FBS)을 첨가한, 2.05 mM L-글루타민을 갖는 RPMI-1640(페놀 레드 없음)이고; HCT 116의 경우 인간 결장직장 암종은 1.5 mM L-글루타민, 0.075% 중탄산Na 및 10% FBS를 갖는 맥코이(McCoy's) 5A이고; SW480의 경우 인간 결장직장 암종은 2.05 mM L-글루타민, 20 mM HEPES 및 10% FBS를 갖는 RPMI-1640이고; U-87 MG 인간 교모세포종은 2 mM L-글루타민, 0.1 mM 비-필수 아미노산(NEAA), 1 mM Na-피루베이트 및 10% FBS를 갖는 최소 필수 배지/얼(Earl) 평형 염 용액이고; MIA PaCa-2의 경우 인간 췌장 암종은 고 글루코스(4,500 ㎎/㎖), 4 mM L-글루타민, 2.5% 말 혈청 및 10% FBS를 갖고, Na-피루베이트가 없는 둘베코 개질 이글 배지(DMEM)이고; K-562의 경우 인간 CML은 고 글루코스(4,500 ㎎/㎖), 4 mM L-글루타민, 10 mM HEPES, 0.1 mM NEAA, 1 mM Na-피루베이트 및 10% FBS를 갖는 DMEM이고; 주르캇의 경우, 클론 E6-1 인간 급성 T 세포 백혈병은 2.05 mM L-글루타민, 2.5 g/ℓ 글루코스, 10 mM HEPES, 1 mM Na-피루베이트, 0.075% 중탄산Na 및 10% FBS를 갖는 RPMI-1640이고; A-375의 경우 인간 악성 흑색종 및 MDA-MB-231 인간 유방 선암종은 고 글루코스(4,500 ㎎/㎖), 4 mM L-글루타민 및 10% FBS를 갖는 DMEM이고; BxPC-3의 경우 인간 췌장 선암종, DLD-1 인간 결장직장 선암종, SUP-T1 인간 림프모구성 백혈병, MOLT-3 인간 ALL, Molt-4 인간 ALL, CCRF-CEM 인간 ALL 및 HEL 92.1.7 인간 적백혈병은 2.05 mM L-글루타민, 2.5 g/ℓ 글루코스, 20 mM HEPES, 1 mM Na-피루베이트 및 10% FBS를 갖는 RPMI-1640이다. 80-90% 융합성의 경우, 세포를 50 nM 내지 0.0025 nM 범위내의 1:3 희석의 10 점에서 그리고 0.01%에서의 최종 디메틸 술폭시드(DMSO)를 투여하는 화합물로 처리한다. 24 시간 처치후, 세포 플레이트는 본질적으로 하기 단계를 순차적으로 실시한다: 세포를 트립신화후 수집하고, 빙냉 PBS로 1회 세척하고, 1X 완전 정제(로쉬 컴플리트(Roche Complete)™ No. 11 697 498 001) 및 1X 프로테아제 억제제 칵테일(시그마 알드리치 P8340)을 함유하는 100 ㎕ 빙냉 XY 용해 완충액(25 mM 트리스 pH 7.5, 10 ㎍/㎖ 트립신/키모트립신 억제제, 10 ㎍/㎖ 아프로티닌, 60 mM 베타-글리세롤 포스페이트, 1% 트리톤^® X-100, 10 mM NaF, 2.5 mM 피로포스페이트, 150 mM NaCl, 15 mM 에틸렌 디아민 테트라아세트산(EDTA) pH 8.0, 5 mM 에틸렌 글리콜-비스(2-아미노에틸에테르)-N,N,N',N'-테트라아세트산(EGTA) pH 8.0, 1 mM Na 바나데이트, 10 ㎍/㎖ 류펩틴, 1 mM 디티오트레이톨, 1 μM 마이크로시스틴 LR, 10 ㎍/㎖ N-p-토실-L-페닐알라닌 클로로메틸 케톤(TPCK), 2 mM Nα-p-토실-L-아르기닌 메틸 에스테르 히드로클로라이드(TAME), 15 mM 4-니트로페닐 포스페이트 디(트리스) 염(PNPP), 0.1 mM 4-(2-아미노에틸)벤젠술포닐 플루오라이드 히드로클로라이드(AEBSF), 5 mM 벤즈아미딘, 1 μM 오카다산) 중에서 용해시킨다. 용해물을 얼음 위에서 15 분 동안 5 분 간격으로 가볍게 와동처리하면서 배양하고, 1 분 동안 얼음 위에서 음파 처리한다. 샘플을 4℃ 에펜도르프(eppendorf) 원심분리기에서 30,000 rpm에서 30 분 동안 스핀 처리하고, 분석을 위하여 80 ㎕의 상청액을 수집한다. 써모맥스(Thermomax)™ 플레이트 판독기(몰레큘라 디바이시즈(Molecular Devices), 미국 캘리포니아주 써니베일 소재)를 사용하여 피어스 비씨에이 프로틴 어세이 키트(Pierce BCA Protein Assay Kit)™(써모 사이언티픽(Thermo Scientific), 미국 일리노이주 락포드 소재)를 사용하여 총 단백질 농도를 구한다. N1ICD 레벨은 통상의 N1ICD 효소 결합 면역흡착 분석(ELISA)을 사용하여 구한다. 분석물은 분해된 노치1(Val1744)-특이적 통상 토끼 모노클로날 항체를 사용하여 포획하고, C-말단 노치1 술포-태그(SULFO-TAG)^®(메소 스케일 다이애그노스틱스(Meso Scale Diagnostics), 미국 매릴랜드주 게이터스버그 소재) 폴리클로날 양 항체(알앤디 시스템즈(R&D Systems), 미국 미네소타주 미네아폴리스 소재)로 측정한다. 1X 완전 정제(로쉬 컴플리트™ 미니 No. 11 836 153 001) 및 1X 프로테아제 억제제 칵테일(시그마 알드리치 P8340)을 함유하는 빙냉 ELISA 트리스 용해 완충액 R60TX(메소 스케일 다이애그노스틱스, 미국 매릴랜드주 게이터스버그 소재) 중에서 용해물을 1 ㎍/㎕로 희석하고, 25 ㎕를 ELISA 플레이트에 첨가한다. 25 ㎍ 단백질 용해물의 배양은 실온에서 1 시간 동안 각각 실시하여 분석물을 포획하고 항체를 검출한다. 플레이트를 섹터 이매저(Sector Imager) 6000™(메소 스케일 디스커버리(Meso Scale Discovery), 미국 매릴랜드주 게이터스버그 소재)에서 판독한다. 배경 공제 N1ICD를 총 단백질로 정규화하고, 비히클 처치군에 대한 억제율(%)로서 나타낸다. 그래프패드 프리즘(GraphPad Prism)^® 4 소프트웨어를 사용하여 농도 반응 데이터를 "4-변수 시그모이드형 투여-반응(가변 기울기)" 모델에 대입하여 IC₅₀ 값을 구한다. 각종 종양 세포주에서의 화합물 1에 대한 IC₅₀ 값을 하기 표 1에 제시한다.

표 1의 데이터는 γ-세크레타제 활성을 억제하여 N1ICD 신호전달 펩티드 생성을 억제하고, 그 결과 특이적 인간 종양 세포주에서 N1ICD 신호전달 펩티드 축적을 억제하는 능력에서의 화합물 1의 효능을 입증한다.

생체내 효능 및 표적 억제 실험

동물 실험

노치 처리 약물역학(PD)의 억제에 대한 화합물 1의 생체내 효능 및 효과를 평가하기 위하여, 수개의 세포주- 및 환자-유래 이종이식 모델을 사용한다. 1:1 매트리겔 믹스(0.2 ㎖ 부피) 중의 A2780(2×10⁶), SW480(6×10⁶), HCT 116(6×10⁶), U-87 MG(6×10⁶) 및 A-375(10×10⁶) 세포를 6-8주령의 무흉선 누드 마우스 암컷(할란 래버러토리즈(Harlan Laboratories))의 뒷다리에 피하 주사에 의하여 이식한다. 1:1 매트리겔 믹스(0.2 ㎖ 부피) 중의 K-562(6×10⁶) 세포를 6-8 주령의 CD1 nμ/nμ 마우스 암컷(찰스 리버 래버러토리즈(Charles River Laboratories))의 뒷다리에 피하 주사로 이식한다. 1:1 매트리겔 믹스(0.2 ㎖ 부피) 중의 HEL 92.1.7(7×10⁶)을 6-8주령의 CB17 중증 복합 면역 결핍증 마우스 암컷(타코닉 팜즈(Taconic Farms))의 뒷다리에 피하 주사로 이식한다. 환자-유래 종양을 1-2 ㎜ 조각으로 잘게 썰고, 0.2 ㎖ 부피로 매트리겔(1:1)과 혼합하고, 6-8 주령의 무흉선 누드 마우스 암컷(할란 래버러토리즈)의 뒷다리에 피하 주사로 이식한다. 환자-유래 종양 모델은 미국 인디애나주 46206 인디애나폴리스에 소재하는 아이유 헬쓰, 메쏘디스트 호스피탈(IU Health, Methodist Hospital)의 병원 승인 및 환자 동의후 얻은 샘플을 갖는 인간 교모세포종(EL2144), 인간 삼중 음성 침윤성 유관 암종(EL1997) 및 인간 결장 암종(EL1989, EL 1986 및 EL 2056)을 포함한다. 총 7 내지 10 마리의 마우스를 각각의 군에 사용한다. A2780, SW480, HEL 92.1.7, A-375, K-562 및 환자-유래 종양 모델에 대한 이식 직후, 동물에게 조사한다(450 전신 방사선). 마우스에게 자유롭게 보통 식사를 공급한다. 종양 크기가 150±50 ㎣에 도달할 때 0.2 ㎖ 부피로 화합물 또는 비히클(0.25% 트윈(Tween)-80 중의 1% Na-CMC)의 경구 투여(급식)로 처치를 개시한다. 처치후 지정된 시점에서, 동물을 CO₂ 질식 및 자궁경부 전위에 의하여 죽인다. 종양을 제거하고, PD 반응 분석에 사용한다. 종양 성장 및 체중을 시간 경과에 대하여 모니터하여 독성의 징후 및 효능을 평가한다. 종양의 2차원 측정을 주2회 실시하고, 하기 수학식에 기초하여 종양 부피를 계산한다: (종양 부피)=[(L)×(W2)×(Π/6)] (여기서 L은 중앙축 길이이며, W는 중앙축 폭임). 종양 부피 데이터를 처치군 및 시간에 대한 분산을 균등하게 하기 위하여 로그 단위로 변환시킨다. 로그 부피 데이터를 시간에 따른 분산의 2방향 반복 측정 분석 및 사스(SAS)™ 소프트웨어(버젼 8.2)에서 믹스드(MIXED)™ 절차를 사용하는 처리로 분석한다. 반복 측정에 대한 상관관계 모델은 공간력이다. 처치군을 각각의 시점에서 대조군과 비교한다. 믹스드™ 절차는 또한 각각의 처치군에 대하여 별도로 사용하여 각각의 시점에서 조절된 평균 및 표준 오차를 계산한다. 분석 둘다는 커다란 종양을 갖는 동물을 초기에 실험으로보터 제외시켰을 때 발생하는 데이터 손실 및 각각의 동물에서의 자체상관관계를 설명한다. 조절된 평균 및 표준 오차는 각각의 처치군에 대하여 시간에 대하여 플롯한다. 항종양 활성은 종양 성장 억제율(TGI %)로서 나타내며, 처치군에서의 종양 부피를 비히클 처치군과 비교하여 계산한다. 화합물 1에 대한 종양 성장 억제율(% TGI) 및 통계적 유의성 값(p 값)은 본질적으로 상기 기재한 바와 같이 측정하고, 이를 하기 표 2에 요약한다.

N1ICD 분석

종양에서의 N1ICD 레벨을 평가하기 위하여, 약 75 ㎎을 냉동시킨 종양으로부터 잘라내고, 균질화 이전에 잘게 썬다(실제 중량 기록함). 냉동시킨 종양 샘플을 라이징 매트릭스-디(Lysing Matrix-D)™ 시험관으로 옮기고, 1X 완전 정제(로쉬 컴플리트™ No. 11697 498 001) 및 1X 프로테아제 억제제 칵테일(시그마-알드리치 P8340)을 함유하는 빙냉 XY 용해 완충액(25 mM 트리스 pH 7.5, 10 ㎍/㎖ 트립신/키모트립신 억제제, 10 ㎍/㎖ 아프로티닌, 60 mM 베타-글리세롤 포스페이트, 1% 트리톤^® X-100, 10 mM NaF, 2.5 mM 피로포스페이트, 150 mM NaCl, 15 mM 에틸렌 디아민 테트라아세트산(EDTA) pH 8.0, 5 mM 에틸렌 글리콜-비스(2-아미노에틸에테르)-N,N,N',N'-테트라아세트산(EGTA) pH 8.0, 1 mM Na 바나데이트, 10 ㎍/㎖ 류펩틴, 1 mM 디티오트레이톨, 1 μM 마이크로시스틴 LR, 10 ㎍/㎖ N-p-토실-L-페닐알라닌 클로로메틸 케톤(TPCK), 2 mM Nα-p-토실-L-아르기닌 메틸 에스테르 히드로클로라이드(TAME), 15 mM 4-니트로페닐 포스페이트 디(트리스) 염(PNPP), 0.1 mM 4-(2-아미노에틸)벤젠술포닐 플루오라이드 히드로클로라이드(AEBSF), 5 mM 벤즈아미딘, 1 μM 오카다산)을 75 ㎎/㎖ 완충액의 질량:부피비로 재현탁시킨다. 패스트 프렙(Fast Prep) FP120 균질화기(써모 사이언티픽, 미국 일리노이주 락포드 소재)에서 6.0의 속도에서 30 초 동안 4℃에서 균질화시킨 후, 얼음 위에서 15 분 동안 배양시킨다. 균질화가 완료될 때까지 이를 총 2-3 사이클로 반복한다. 용해물을 4℃ 에펜도르프 원심분리기에서 30,000 rpm에서 15 분 동안 스핀 처리하여 부스러기를 제거한다. 400 ㎕의 상청액을 제거하고, 새로운 에펜도르프 시험관으로 옮기고, 냉동/해동 사이클로 처리한다. 샘플을 4℃ 에펜도르프 원심분리기에서 30,000 rpm에서 30 분 동안 다시 스핀 처리하고, 분석을 위하여 120 ㎕의 상청액을 수집한다. 총 단백질 농도는 써모맥스™ 플레이트 판독기(몰레큘라 디바이시즈, 미국 캘리포니아주 써니베일 소재)를 사용하는 피어스 BCA 프로틴 어세이 키트™(써모 사이언티픽, 미국 일리노이주 락포드 소재)를 사용하여 구한다. 통상의 N1ICD ELISA를 사용하여 N1ICD 레벨을 구한다. 분석물을 분해된 노치1(Val1744)-특이적 통상 토끼 모노클로날 항체로 포획하고, C-말단 노치1 술포-태그™(메소 스케일 디스커버리, 미국 매릴랜드주 게이터스버그 소재) 폴리클로날 양 항체(알앤디 시스템즈, 미국 미네소타주 미네아폴리스 소재)로 검출한다. 1X 완전 정제(로쉬 컴플리트™ 미니 No. 11 836 153 001) 및 1X 프로테아제 억제제 칵테일(시그마-알드리치 P8340)을 함유하는 빙냉 ELISA 트리스 용해 완충액(R6OTX)(메소 스케일 디스커버리, 미국 매릴랜드주 게이터스버그 소재) 중에서 용해물을 2 ㎍/㎕로 희석하고, 25 ㎕를 ELISA 플레이트에 첨가한다. 50 ㎍ 단백질 용해물의 배양을 실온에서 1 시간 동안 각각 실시하여 분석물 및 검출 항체를 포획한다. 플레이트를 섹터 이매저 6000™(메소 스케일 디스커버리, 미국 매릴랜드주 게이터스버그 소재)에서 판독한다. 배경 공제 N1ICD를 총 단백질에 대하여 정규화하고, 비히클-처치군에 대한 억제율(%)로서 나타낸다. 화합물 1에 대한 최종 투여 4 시간후 수거한 종양에서 두넷(Dunett) 방법에 의하여 측정한 N1ICD 억제율(%) 및 통계적 유의성(p 값)을 본질적으로 상기 기재한 바와 같이 분석하고, 하기 표 2에 요약한다.

표 2의 데이터는 인간 종양의 각종 이종이식 모델에서 화합물 1에 의한 종양 성장 억제 및 N1ICD 절단의 억제를 입증한다. 표 2의 데이터는 표 1에 기재한 기능적 활성 세포 데이터에 대한 생체내 상관관계를 추가로 제공한다.

대사 및 배설

시토크롬 P450(CYP450) 대사 및 조정이 적거나 없는 것으로 입증된 화합물은 환자가 받는 기타 투여와의 유해한 상호작용의 가능성이 감소되었으며, 이는 투여량을 변경시키거나 또는 투여를 완전 중지할 필요를 초래할 것이다. CYP450 대사가 환자를 활성 대사물에 상당하게 노출시킬 경우, 효능 및 안전성 문제가 복수의 활성 종의 기여와 관련된 더 큰 변동성으로부터 야기될 수 있으며; 그러므로, 일반적으로 활성 대사물이 결여된 약물이 바람직하다. CYP450 대사 및 조정이 낮거나 또는 없는 것으로 입증된 치료제가 바람직하며, 환자에서의 그리고 환자에 대한 안전성 프로파일이 더 우수할 수 있다. 문헌 [Lynch et al., Am . Fam . Physician, 76, 391 (2007)]. CYP450 효소 상호작용에 대한 가능성은 활성 약제의 구조만을 기초로 하여 예측될 수 없다.

화합물 1은 주요한 CYP450 효소의 억제제 또는 유도제는 아니며, 산화성 CYP450 대사에 대하여 최적화된 간 미세소체에 의하여 임의의 상당한 정도로 대사되지 않는다. 생체내 래트 및 개에서, 주요 산화성 대사물질은 순환 또는 배설물 중에서 관찰되지 않았다. 그러므로, 화합물 1은 기타 투여와 CYP450에 기초한 상호작용에 대한 가능성이 적어서 암에 대하여 치료중인 환자에서의 투여량 조절, 또는 추가의 투여를 제한 또는 중지할 필요를 초래한다.

화합물 1은 전신 약물동력학(PK), 배설 및 대사를 연구하기 위하여 담관 캐뉼라 삽입한 래트에서 생체내 평가하였다. 활성 N-탈알킬화 대사물인 4,4,4-트리플루오로-N-[(1S)-1-메틸-2-옥소-2-[[(7S)-6-옥소-5,7-디히드로피리도[2,3-d][3]벤즈아제핀-7-일]아미노]에틸]부탄아미드에 낮은(모 화합물의 2%) 전신 노출로 생체내 IV 투여량의 51%가 주로 소변에서 불변하게 배설된다. 대사물에 대한 래트 혈장의 프로파일링은 추가의 순환중인 대사물의 부재를 나타냈다. 담관 무상해 개에서의 추가의 실험은 또한 모 화합물의 배설에 의한 상당한 청소율뿐만 아니라, 주요한 순환중인 활성 대사물의 부재를 뒷받침하였다.

화합물 1에 대한 전체 대사 및 배설 데이터는 바람직한 청소율 기전(모 화합물의 소변 배설, 및 CYP450 대사에 대하여 최적화된 간 미세소체와의 배양에서 형성되지 않는 불활성 및 비-순환 분절로의 아미드 가수분해)뿐만 아니라, 주요한 활성 순환중인 대사물의 부재를 입증하였다.

임상 설정에서, 임상전 관찰된 화합물 1의 청소 특성은 바람직하다. 산화성 대사에 의하여 주로 배제되는 화합물은 수반되는 투여 및 특정 과즙/허브, 간 질환, 및 효소 활성에서의 환자간 차이와의 약물 상호작용으로 인하여 변동 가능한 노출을 나타내는 것으로 알려져 있다. 복수의 청소 기전이 바람직한데, 이는 임의의 하나의 제거 경로에서 발생하는 약물 상호작용의 영향을 약화시키기 때문이다. 그러므로, 주요한 활성 순환중인 대사물을 생성하지 않고 배설(51%) 및 대사(아미드 가수분해) 모두에 의한 화합물 1의 청소는 환자에게는 이롭다. 전체적으로, 이들 청소 성질은 임상의 투여량 조절에 대한 가능성을 감소시킬 뿐만 아니라, 주요한 활성 순환중인 대사물, 동시 약물 투여 및 CYP450 활성에서의 환자간 차이와 관련된 안전성 및 효능 문제를 최소로 한다.

SEQUENCE LISTING <110> Eli Lilly and Company <120> Notch Pathway Signaling Inhibitor Compound <130> X19316 <150> 61/512016 <151> 2011-07-27 <150> 61/560486 <151> 2011-11-16 <160> 1 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> signal peptide <400> 1 Met Pro Arg Leu Leu Thr Pro Leu Leu Cys Leu Thr Leu Leu Pro Ala 1 5 10 15 Leu Ala Ala Arg Gly Leu Arg 20

Claims

하기 구조를 갖는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 수화물:
<화합물 1>
하기 구조를 갖는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염:
<화합물 1>
제1항의 화합물, 2-옥소에틸]부탄아미드 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 수화물을 제약상 허용되는 담체와 함께 포함하는 제약 조성물.
치료 유효량의 제1항의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 수화물을 노치 신호전달의 억제를 필요로 하는 암 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 환자에서 노치 신호전달을 억제하는 방법.
치료 유효량의 제1항의 화합물 또는 제약상 허용되는 염 또는 수화물을 T-세포 급성 림프모구성 백혈병, 급성 림프모구성 백혈병, 급성 골수 백혈병, 만성 골수 백혈병, 적백혈병, 유방암, 난소암, 흑색종, 폐암, 췌장암, 교모세포종, 결장직장암, 두경부암, 자궁경부암, 전립선암, 간암, 편평 세포 암종(구강), 피부암 또는 수모세포종인 암의 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 환자에서 상기 암을 치료하는 방법.
치료 유효량의 제1항의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 수화물을 T-세포 급성 림프모구성 백혈병, 급성 림프모구성 백혈병, 만성 골수 백혈병, 적백혈병, 유방암, 난소암, 흑색종, 췌장암, 교모세포종 또는 결장직장암인 암의 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 환자에서 상기 암을 치료하는 방법.
제1항에 있어서, 요법에 사용하기 위한 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 수화물.
제1항에 있어서, T-세포 급성 림프모구성 백혈병, 급성 림프모구성 백혈병, 급성 골수 백혈병, 만성 골수 백혈병, 적백혈병, 유방암, 난소암, 흑색종, 폐암, 췌장암, 교모세포종, 결장직장암, 두경부암, 자궁경부암, 전립선암, 간암, 편평 세포 암종(구강), 피부암 또는 수모세포종인 암의 치료에 사용하기 위한 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 수화물.
제1항에 있어서, T-세포 급성 림프모구성 백혈병, 만성 골수 백혈병, 적백혈병, 유방암, 난소암, 흑색종, 췌장암, 교모세포종 또는 결장직장암인 암의 치료에 사용하기 위한 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 수화물.
T-세포 급성 림프모구성 백혈병, 급성 림프모구성 백혈병, 급성 골수 백혈병, 만성 골수 백혈병, 적백혈병, 유방암, 난소암, 흑색종, 폐암, 췌장암, 교모세포종, 결장직장암, 두경부암, 자궁경부암, 전립선암, 간암, 편평 세포 암종(구강), 피부암 또는 수모세포종인 암의 치료를 위한 약제의 제조에 있어서 제1항의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 수화물의 용도.
T-세포 급성 림프모구성 백혈병, 급성 림프모구성 백혈병, 만성 골수 백혈병, 적백혈병, 유방암, 난소암, 흑색종, 췌장암, 교모세포종 또는 결장직장암인 암의 치료를 위한 약제의 제조에 있어서 제1항의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 수화물의 용도.
제1항에 있어서, 주위 온도 및 상대 습도에서 11.96±0.2, 18.81±0.2, 20.78±0.2 또는 21.07±0.2° 2θ에서의 1개 이상의 피크와 조합된 22.97±0.2° 2θ에서의 피크를 갖는, CuKα 방사선을 사용한 X선 분말 회절 패턴을 특징으로 하는 결정질 수화물인 화합물.