KR20130099772A - 막걸리로부터 분리된 웨이셀라 파라메센테로이드 및 이를 이용하여 제조된 막걸리 - Google Patents

막걸리로부터 분리된 웨이셀라 파라메센테로이드 및 이를 이용하여 제조된 막걸리 Download PDF

Info

Publication number
KR20130099772A
KR20130099772A KR1020120021520A KR20120021520A KR20130099772A KR 20130099772 A KR20130099772 A KR 20130099772A KR 1020120021520 A KR1020120021520 A KR 1020120021520A KR 20120021520 A KR20120021520 A KR 20120021520A KR 20130099772 A KR20130099772 A KR 20130099772A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
ris
culture
strain
weissella
dhna
Prior art date
Application number
KR1020120021520A
Other languages
English (en)
Inventor
손재학
최재석
이미경
이유리
Original Assignee
신라대학교 산학협력단
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 신라대학교 산학협력단 filed Critical 신라대학교 산학협력단
Priority to KR1020120021520A priority Critical patent/KR20130099772A/ko
Publication of KR20130099772A publication Critical patent/KR20130099772A/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
    • A23C9/123—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12G—WINE; PREPARATION THEREOF; ALCOHOLIC BEVERAGES; PREPARATION OF ALCOHOLIC BEVERAGES NOT PROVIDED FOR IN SUBCLASSES C12C OR C12H
    • C12G3/00—Preparation of other alcoholic beverages
    • C12G3/02—Preparation of other alcoholic beverages by fermentation
    • C12G3/021—Preparation of other alcoholic beverages by fermentation of botanical family Poaceae, e.g. wheat, millet, sorghum, barley, rye, or corn
    • C12G3/022—Preparation of other alcoholic beverages by fermentation of botanical family Poaceae, e.g. wheat, millet, sorghum, barley, rye, or corn of botanical genus Oryza, e.g. rice

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)

Abstract

본 발명은 막걸리에서 분리되고, 1,4-디히드록시-2-나프토산(1,4-dihydroxy-2-naphtoic acid, DHNA) 생산능을 가지는 웨이셀라 파라메센테로이드 RIS-B-98 균주(Weissella paramrsenteroid RIS-B-98 KACC 91704P)에 관한 것이다. 상기 웨이셀라 파라메센테로이드 RIS-B-98 균주는 최적 배양 온도가 30℃이고, 최적 배양 pH가 pH 6 내지 pH 7이며, DHNA의 제조를 위해서는 호기성 조건에서 40시간 내지 56시간 동안 배양하는 균주일 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 웨이셀라 파라메센테로이드 RIS-B-98 균주, 상기 균주의 배양물, 상기 배양물의 농축물 및 상기 배양물의 건조물로 이루어진 군 중에서 선택된 1종 이상을 유효성분으로 포함하는 발효식품 제조용 스타터(starter) 또는 발효식품 제조용 종균 조성물일 수 있다. 또한, 본 발명은 상기 발효식품 제조용 스타터(starter) 또는 발효식품 제조용 종균 조성물을 첨가하여 제조하는 발효식품에 관한 것일 수 있다. 상기 발효식품은 막걸리 또는 유제품일 수 있다.
상기 균주는 기존의 DHNA를 생산하는 균주와 상이한 균주로, DHNA의 생성능이 우수하므로, 해당 균주를 이용하여 다양한 기능성을 갖는 DHNA 및 DHNA가 포함된 발효식품을 제조할 수 있으므로, 산업적으로 그 효과가 매우 크다 할 것이다.

Description

막걸리로부터 분리된 웨이셀라 파라메센테로이드 및 이를 이용하여 제조된 막걸리{WEISSELLA PARAMESENTEROIDES SEPARATED FROM RAW RICE WINE AND A RAW RICE WINE PREPARED BY USING THE SAME}
본 발명은 막걸리로부터 분리된 미생물 및 상기 미생물을 이용하여 제조한 장류에 관한 것이다.
막걸리는 찹쌀, 맵쌀, 보리, 밀가루 등을 쪄서 누룩과 물을 섞어 발효시킨 한국 고유의 술로 청주를 떠내지 않고 그대로 걸러낸 술을 말하며, 탁주, 농주, 재주 또는 회주라고도 한다.
상기 막걸리는 한국에서 역사가 가장 오래된 술로, 빛깔이 뜨물처럼 희고 탁하며 알코올 도수가 6도 내지 7도로 알코올 성분이 적은 술이다.
상기 막걸리는 주로 다음과 같은 방법으로 제조한다. 먼저, 찹쌀, 멥쌀, 보리 또는 밀가루 등을 찐 다음 수분을 건조시켜 지에밥을 제조한다. 상기 지에밥과 누룩과 물을 혼합하고 발효시킨 후, 청주를 떠내지 않고 그대로 걸러 짜낸다. 이 때 찹쌀을 원료로 한 것을 찹쌀막걸리라고 하고, 상기 제조된 막걸리를 거르지 않고 그대로 밥풀이 담긴 채 뜬 것을 동동주라고 한다.
메타퀴논(menaquinone, MK)는 혈액응고 촉진에 필요한 비타민 K의 일종이다. 상기 메타퀴논은 동물의 혈액과 뼈에서 특이적인 단백질에 존재하는 특이 단백질을 구성하는 감마-카르복실글루타믹산(γ-carboxyglutamic acid)을 합성하기 위한 보조인자로 작용한다. 상기 메타퀴논은 주로 비타민 K로 알려져 있으며, 세균의 호흡계에서 전자전달인자로 작용한하기도 한다.
1,4-디히드록시-2-나프토산(1,4-dihydroxy-2-naphtoic acid, DHNA)은 세균에 있어 메타퀴논의 전구체이다. 구체적으로, DHNA는 박테리아에서 비타민 K 합성의 전구체로 사용되며, 장내 유익균인 비피도박테리아를 선택적으로 증식시켜 장내 환경을 개선하고, 염증성 장질환에 있어서의 점막의 염증 상태를 개선하고 활성화 면역 세포의 침윤을 억제하는 것으로 알려져 있다.
상기 DHNA는 락토오즈 불내증의 복부 불쾌 증상을 저감하고, 대사성 골질환의 예방 및 치료에 유용하며, 골량 감소를 억제하여 골다공증을 개선하는 효과 역시 익히 알려져 있다.
종래의 DHNA는 프로피온산균에 의해 균체 내외에서 대량으로 생산하는 방법과 프로피온산균을 이용한 발효법을 통해 제조되는 방법 등 균주를 이용한 방법과 유기용매 중 고온 및 고압 하에서의 반응 또는 촉매 등을 이용하여 유기 화학 합성법을 통해 생산하였다.
상기한 바와 같이, 상기 DHNA는 장을 개선하거나 치유할 뿐만 아니라, Helicobacter pylori의 억제, 골밀도감소 경감 등 다양한 효능이 검증되고 있어 다양한 기능식품의 개발을 위해 사용될 수 있을 것으로 기대하고 있다.
따라서, 산업적으로 DHNA의 제조 및 상기 DHNA를 이용한 제품화에 대한 연구가 요구된다. 일 예로, 프로피온산균(Propionibacterium freudenreichii)에 의한 유청발효를 통해 DHNA를 함유한 우유가 판매되고 있다. 그러나, 생산적인 측면에서 아직까지 수율이 높지는 않은 상황이다. 그러므로, 현재 산업적으로 Propionibacterium freudenreichii를 제외한 DHNA를 생산하는 미생물의 개발과 생산 수율을 증가하기 위한 연구 개발의 중요성이 증대되고 있다.
2011-0109916 A 2011-0137182 A 2010-0087495 A
Isawa et al., Biosci. Biotechnol. Biochem. 66: 679-681(2002)
상기 종래 기술의 문제점을 해결하기 위하여, 본 발명의 목적은 막걸리 생산을 위한 전통누룩과 막걸리 발효과정에서 검출되는 유산균으로부터 DHNA를 생산하는 균주를 탐색하여 새로운 균주를 제공하는 것이다.
또한, 본 발명의 다른 목적은 상기 균주를 이용하여 제조한 막걸리를 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 막걸리에서 분리되고, 내염성이 있으며 단백분해 활성 및 전분분해 활성이 있는 웨이셀라 파라메센테로이드 균주를 제공하는 것을 목적으로 한다.
또한 본 발명은 상기 균주, 상기 균주의 배양물, 상기 배양물의 농축물 및 상기 배양물의 건조물로 이루어진 군 중에서 선택된 1종 이상을 유효성분으로 포함하는 장류 발효용 스타터(starter)를 제공하는 것을 목적으로 한다
또한 본 발명은 상기 발효용 스타터(starter)를 이용하여 제조한 장류 및 상기 장류의 제조방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명에 있어서, 발효식품(fermented food)이란 곰팡이, 세균, 효모 등의 미생물의 작용에 의해 유기물이 분해되어 새로운 성분을 합성하는 발효라는 작용을 이용해 만든 식품의 총칭을 의미한다. 상기 발효식품의 종류는 미생물의 종류나 식품의 재료에 따라 그 종류가 다양하며, 각기 독특한 특징과 풍미를 지닌다. 농산물, 수산물, 축산물 또는 임산물 식품들이 재료로 쓰이는데 그 특유의 성분들이 미생물의 작용으로 분해되고 새로운 성분이 합성되어 영양가가 향상되고 기호성이향상된다. 일 예로, 유제품, 막걸리 등이 있다.
본 발명에 있어서, 유제품이란 주로 우유와 같은 가축의 젖을 가공하여 제품화한 제품의 총칭으로, 오늘날 대부분의 유제품은 우유를 원료로 하여 가공되고 있으며, 액상 유제품, 지방성 유제품, 농축 유제품, 건조 유제품, 냉동 유제품, 발효 유제품 또는 모조 유제품 등이 있다.
본 발명에 있어서, 막걸리란 찹쌀 등의 곡률로 제조된 지에밥, 누룩 및 물을 혼합하고 발효시켜 제조되는 술로, 빛깔이 뜨물처럼 희고 탁하며 알코올 도수가 5도 내지 10도로 알코올 성분이 적은 술을 의미한다.
본 발명에 있어서, 배양물이란 특정 미생물을 배양배지 또는 배양액에서 배양한 것을 의미하며, 상기 배양물은 상기 특정 미생물을 포함하는 것일 수 있다. 상기 배양물 또는 배양물의 농축물은 그 제형이 한정되지 아니하고, 일 예로 액체 또는 고체일 수 있다.
상기 배지는 특정 미생물을 배양하기 위하여 배양대상 즉, 배양체가 되는 미생물이 필요로 하는 영양물질을 포함하는 것으로, 특수한 목적을 위한 물질이 추가로 첨가되어 혼합된 것일 수 있다. 상기 배지는 배양기 또는 배양액이라고도 하며, 천연배지, 합성배지 또는 선택배지를 모두 포함하는 개념이다. 상기 천연배지와 관련하여, 콩, 쌀 및 보리 등을 포함한 곡물이나 상기 곡물에서 미생물이 배양하기 용이하도록 상기 곡물을 삶거나 으깨는 등의 방법으로 가공한 것도 이에 포함된다.
본 발명에 있어서, 발효식품 제조용 스타터(starter)란 발효에 관여하는 미생물을 포함하는 제제 또는 조성물을 의미한다. 막걸리나 유제품과 같은 발효식품 제조 시에 첨가함으로써 발효된 발효식품에 1,4-디히드록시-2-나프토산(1,4-dihydroxy-2-naphtoic acid, DHNA)가 포함될 수 있는 미생물 또는 우점종으로 생장할 수 있는 미생물을 제공하기 위하여 사용된다. 상기 발효식품 발효용 스타터를 사용하여 발효식품을 제조하는 경우, 상기 발효식품 제조용 스타터에 포함된 미생물에 의하여, 발효식품의 품질을 일정하게 조절하거나, 특정한 목적, 일 예로 발효식품에 DHNA가 포함시키거나 그 함량을 증가시키기 위한 목적을 달성할 수 있다.
본 발명의 발명자들은 우리나라 전통 주류인 발효막걸리의 발효균주 중 DHNA를 생산할 수 있는 균주에 관해 연구하던 중, 전통 재래식 막걸리로부터 분리된 RIS-B-98 균주가 생육도 우수하고, DHNA 생성능도 우수하다는 것을 확인하였고, 이로부터 상기 균주 또는 상기 균주가 포함된 조효소를 곡류를 포함한 발효 대상 식품에 첨가하여 반응시키는 경우, DHNA가 풍부하게 생성된다는 것을 확인하여 본 발명을 완성하였다.
이하 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 막걸리에서 분리되고, 1,4-디히드록시-2-나프토산(1,4-dihydroxy-2-naphtoic acid, DHNA) 생산능을 가지는 웨이셀라 파라메센테로이드 RIS-B-98(Weissella paramrsenteroid RIS-B-98)에 관한 것이다.
상기 웨이셀라 파라메센테로이드 RIS-B-98는 균주 배양, 구체적으로 웨이셀라 파라메센테로이드의 일반 배양배지인 LB 배지(Luria-Bertani broth medium)를 이용한 배양을 통해 확인한 결과, 발효시에 DHNA를 생산하는 것으로 확인되었다.
상기 웨이셀라 파라메센테로이드 RIS-B-98 균주는 최적 배양 온도가 30℃, 바람직하게는 30℃이고, 최적 배양 pH가 pH 6 내지 pH 7인 균주일 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 웨이셀라 파라메센테로이드 RIS-B-98(KACC 91704P), 상기 균주의 배양물, 상기 배양물의 농축물 및 상기 배양물의 건조물로 이루어진 군 중에서 선택된 1종 이상을 유효성분으로 포함하는 발효식품 제조용 스타터(starter)일 수 있다.
상기 웨이셀라 파라메센테로이드 RIS-B-98 균주(Weissella paramrsenteroid RIS-B-98)를 포함하는 발효식품 제조용 종균 조성물일 수 있다.
상기 스타터 또는 발효식품용 종균 조성물을 이용하면, DHNA가 풍부한 발효식품을 제조할 수 있다. 상기 발효식품은 막걸리 또는 유제품인 일 수 있다.
또한, 상기 웨이셀라 파라메센테로이드 RIS-B-98은 16S rDNA 염기서열을 분석한 결과, 웨이셀라 파라메센테로이드로 동정되었다. 보다 구체적으로, 상기 도 1에 기재된 웨이셀라 파라메센테로이드 RIS-B-98의 16S rDNA 염기서열을 이용하여 계통발생론적으로 분석한 결과, 상기 도 2에 나타낸 바와 같이 Weissella paramrsenteroid CR-502와 99%의 상동성을 보여 웨이셀라 파라메센테로이드(Weissella paramrsenteroid)로 동정되었다.
또한, 본 발명은 발효식품 제조용 스타터(starter)에 관한 것이다.
상기 발효식품 발효용 스타터는 상기 웨이셀라 파라메센테로이드 RIS-B-98 균주, 상기 균주의 배양물, 상기 배양물의 농축물 및 상기 배양물의 건조물로 이루어진 군 중에서 선택된 1종 이상을 유효성분으로 포함하는 것일 수 있다.
상기 발효식품 발효용 스타터는 상기 웨이셀라 파라메센테로이드 RIS-B-98 균주를 배양하는 단계를 포함하는 방법으로 제조할 수 있다. 보다 구체적으로, 상기 웨이셀라 파라메센테로이드 RIS-B-98 균주를 상기 균주에 대한 배양액에 접종하고 배양하는 방법으로 제조할 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 웨이셀라 파라메센테로이드 RIS-B-98 균주(Weissella paramrsenteroid RIS-B-98 KACC 91704P)를 포함하는 발효식품용 종균 조성물에 관한 것이다.
상기 종균 조성물은 조성물 전체 중량을 기준으로 상기 웨이셀라 파라메센테로이드 RIS-B-98 균주를 0.001 중량% 내지 10중량%의 범위로 포함할 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 발효식품 제조용 스타터 또는 상기 발효식품용 종균 조성물을 첨가하여 제조하는 것을 특징으로 발효식품에 관한 것이다.
상기 발효식품은 식품 기재에 상기 종균을 첨가하고 숙성시켜 제조된 것일 수 있다. 상기 발효식품은 바람직하게는 막걸리, 유제품 또는 된장이나 고추장과 같은 장류, 더욱 바람직하게는 막걸리 또는 유제품, 더더욱 바람직하게는 막걸리일 수 있다.
상기 식품 기재는 발효식품의 주재료일 수 있다. 구체적으로 상기 식품 기재는 곡류 및 콩류로 이루어진 군 중에서 선택된 1종 이상을 포함하는 것일 수 있다. 상기 곡류는 백미, 보리, 밀, 밀가루, 쌀보리, 밀쌀, 밀기울, 정맥, 압맥, 소맥, 나맥, 파쇄미, 찹쌀 또는 이들의 혼합물일 수 있다. 상기 콩류는 콩과 식물, 탈지 콩, 탈지 콩가루 또는 이들의 혼합물일 수 있다.
상기 종균의 첨가량은 발효식품의 종류 및 발효 조건 등에 따라 적절하게 조절될 수 있다. 일 예로 상기 종균의 첨가량은 식품기재 100 중량부를 기준으로 0.00001 중량부 내지 0.01 중량부(습윤중량부)일 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 발효식품의 제조방법에 관한 것이다.
상기 발효식품의 제조방법은 구체적으로 막걸리 제조방법일 수 있다. 상기 막걸리 제조방법은 원료물질에 상기 웨이셀라 파라메센테로이드 RIS-B-98 균주, 상기 발효식품 제조용 스타터 및 상기 발효식품용 종균 조성물로 이루어진 군 중에서 선택된 어느 하나를 첨가하고 발효시키는 방법으로 수행할 수 있다.
본 발명의 웨이셀라 파라메센테로이드 RIS-B-98는 외국에서 도입된 균주와 달리, 우리나라의 전통식품인 막걸리로부터 분리된 것으로, 종래 보고된 종과 다른 종이면서도 DHNA를 생산할 수 있으므로, 기존 발효식품, 구체적으로 막걸리나 유제품에 기능성이 우수한 DHNA가 부여된 제품을 생산할 수 있으므로, 한국전통식품의 우수성 확보란 차원에서 국가경쟁력 확보에 이바지하고, 산업적으로도 그 효과가 매우 크다 할 것이다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 웨이셀라 파라메센테로이드 RIS-B-98가 16S rDNA의 염기서열을 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 웨이셀라 파라메센테로이드 RIS-B-98의 16S rDNA의 염기서열을 기초로 한 다른 세균(bacteria)과의 계통발생론적 관계를 나타내는 표이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 웨이셀라 파라메센테로이드 RIS-B-98의 호기성 및 혐기성 배양조건에서 시간에 따른 균 성장 정도를 OD 값으로 측정한 결과이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른 웨이셀라 파라메센테로이드 RIS-B-98의 최적 생육온도를 확인하기 위하여, 다양한 온도 범위에서 균 성장 정도를 OD 값으로 측정한 결과이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 따른 웨이셀라 파라메센테로이드 RIS-B-98의 최적 pH를 확인하기 위하여, 다양한 pH 범위에서 균 성장 정도를 OD 값으로 측정한 결과이다.
도 6은 본 발명의 일 실시예에 따른 웨이셀라 파라메센테로이드 RIS-B-98의 DHNA 생성 최적조건을 확인하기 위한 것으로, 상기 그래프에서 가로축은 배양기간을 의미하고, 세로축은 DHNA의 생산량을 의미한다.
이하 본 발명의 실시예를 기재한다. 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐 본 발명의 권리범위가 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
< 실시예 1> 막걸리로부터 DHNA 생성 균주 확인
1-1. DHNA 생성 균주의 분리
전통 누룩과 막걸리는 부산광역시 인근의 막걸리 생산업체로부터 구입하여 시료로 사용하였다.
상기 누룩의 경우 누룩 100g을 분쇄하여 균질화하여 시료로 준비하였고, 막걸리는 잘 혼합한 후 멸균된 생리식염수(0.85% NaCl)를 이용하여 10배 연속희석법에 의해 희석하여 준비하였다.
상기 준비된 시료는 BCP(Peptone 5.0 g, Yeast Extract 2.5 g, Dextrose 1.0 g, Tween 80 1.0 g, L-Cysteine 0.1 g, Bromocresol Purple 0.05 g, 한천 15.0 g, 증류수 1L, pH 6.8) 고형배지에 도말하였다. 도말된 배지는 25℃배양기에 3일간 배양하였으며, 콜로니(colony)의 주변이 노란색을 띄는 콜로니를 선별하여 동일배지를 이용하여 순수배양한 후, MRS 배지에 3차 도말하여 순수분리하였다.
상기 순수 분리된 유산균은 RIS-B-98 균주로 명명하였으며, 20% (w/v) glycerol에 현탁 한 후 -70℃에서 보존하였다.
1-2. 선별 균주의 동정
상기 유산균의 동정은 16S rDNA 염기서열 분석을 통하여 수행하였다.
우선, 분자생물학적인 동정을 위해 상기 유산균을 MRS 액체배지에 접종하여 30℃에서 2일간 배양한 후 원심분리를 통하여 균체를 수확하였다. 상기 수확된 균체로부터 키트(kit)를 이용하여 total genomic DNA를 수득하였고, 16S rRNA gene의 증폭을 위해 universal primer인 27F primer(5'-AGA GTT TGA TCM TGG CTC AG-3')와 1492R primer(5'-GGY TAC CTT GTT ACG ACT T-3')를 이용하여 PCR 법을 이용해 증폭하였다.
상기 PCR 증폭 조건은 94℃에서 5분간 전변성단계(pre-denaturation)를 수행하고 94℃(denaturation) 30초, 56℃(annealing) 15초, 74℃(extension) 1분의 과정을 30회 반복한 후, 74℃에서 5분간 후연장단계(post-elongation)의 방법으로 수행하였다.
상기 증폭된 PCR 반응산물은 1.5% agarose gel 상에서 전기영동을 실시하여 EtBr로 염색하여 확인 한 다,음 Gel Purification Kit(Bioneer Co., 대한민국)을 사용해 정제하였다. 상기 정제된 산물은 (주)코스모진텍에 의뢰하여 염기서열을 결정하였다. 상기 RIS-B-98균주의 염기서열은 총 1,433 bp가 결정되었으며, 도 1에 나타내었다.
상기 결정된 염기서열은 National Center for Biotechnology Information (NCBI)의 Basic Local Alignment Search Tool(BLAST, http://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast/)에 등록되어 있는 database를 사용하여 검색하였으며, 높은 유사성을 가지는 염기서열을 기초로 하여 group별로 정리한 후, PHYDIT(developed by Dr. J. Chun, version 3.2) 운영프로그램을 이용하여 CLUSTAL_X software, version 1.64b에 의한 alignment와 similarity를 통해 sequence data들을 비교하였다.
상기 유사성을 비교한 결과를 도 2에 나타내었다. 상기 도 2에 나타낸 바와 같이, Weissella paramesenteroides(GenBank Accession No; ACKU01000017) 균주와 99.44%의 유사성을 나타내었다. 또한, 계통분석을 수행한 결과 표준균주인 Weissella paramesenteroides와 일치함을 확인하였다
따라서 RIS-B-98 균주는 최종적으로, Weissella paramesenteroides RIS-B-98로 명명하였고, 2012년 1월 16일 국립농업과학원 농업유전자원센터에 기탁하여 KACC91704P로 수탁번호를 부여받았다.
< 실시예 2> 웨이셀라 파라메센테로이드 RIS -B-98의 특성 확인
2-1. 성장특성 확인
상기 실시예 1에서 분리 및 동정된 웨이셀라 파라메센테로이드 RIS-B-98의 성장특성 즉, 최적 성장 온도 및 pH를 확인하기 위하여 MRS액체배지를 이용하여 다음과 같은 방법으로 관찰하였다.
상기 균주의 전배양은 20ml의 MRS액체배지에 접종하여 30℃에서 1일간 배양하였으며, 준비된 배지에 전배양한 배양액을 0.1%를 접종하였다. 온도는 25℃, 30℃ 및 37℃의 온도에서 진탕배양기를 이용하여 배양하였으며, 1일과 2일째에 배양액을 채취하여 흡광광도계를 이용하여 660nm에서 흡광도를 측정하였다. 상기 측정결과는 도 4에 나타내었다. 상기 도 4에 나타낸 바와 같이, 30℃에서 최적성장을 나타내었다.
또한, MRS 액체배지의 pH를 HCl과 NaOH를 이용하여 pH 2, pH 3, pH 4, pH 5, pH 6, pH 7, pH 8 및 pH 9로 조정하였으며 전배양액을 접종한 후 1일과 2일째에 배양액을 채취하여 흡광광도계를 이용하여 660nm에서 흡광도를 측정하였다. 상기 측정결과는 도 5에 나타내었다. 상기 도 5에 나타낸 바와 같이, pH 6 및 pH 7에서 최적 성장을 나타내었다.
또한, 호기 배양과 혐기 배양을 수행한 결과, 호기조건과 혐기 조건에서 모두 잘 성장하는 것으로 확인되었다.
2-2. 균주의 DHNA 생성능 확인
상기 실시예 1에서 분리 및 동정된 웨이셀라 파라메센테로이드 RIS-B-98의 DHNA 생성능을 확인하기 위하여, 다음과 같이 수행하였다.
DHNA 생성능을 확인하기 위해 균주는 20ml의 MRS액체배지에 30℃ 및 150 rpm에서 2일간 전배양하였으며, 본 배양은 호기조건과 혐기조건에서 수행하였다.
호기적 배양을 위해 전배양액은 50ml의 신선한 MRS 액체배지에 OD(A660)에서 0.1이되도록 접종하였으며, 이후 30℃, 150 rpm에서 5일간 진탕배양하였다. 시료는 1일간격으로 회수하여 흡광광도(660nm)를 측정하였으며 시료를 전처리하여 DHNA를 정량하였다.
혐기적 배양을 위해 MRS 액체배지는 150ml 용량의 septum bottle에 20 ml
씩 첨가하여 멸균한 후 즉시 alumimum cap으로 밀봉하였다. 이후 10개의 MRS배지가 첨가된 bottle은 혼합가스로 치환하여 전배양액을 OD(A660)에서 0.1이되도록 접종하였다. 이후 30℃에서 정치배양하며 1일마다 2개의 bottle을 회수하여 흡광광도(660nm)를 측정하였으며 시료를 전처리하여 DHNA를 정량하였다.
상기 DHNA의 정량은 배양액을 원심분리하여 얻은 상층액과 0.5% L-ascorbic acid 용액 그리고 메탄올을 1:4:5 (v/v/v)로 혼합한 후 0.45 um 여과지로 연과한 후 분석하였다. HPLC를 이용한 254nm에서 분석하였다(C18 column, 4.6x150 mm; mobile phase, acetonitrile:Methanol: watwe:acetate (15:25:225:0.1), 암모니아수로 pH 5.5로 조정; 온도 45℃; 유속 1.0ml/min; injection volumn, 20 ul; 표준물질은 DHNA를 0, 1, 10, 100 ug/ml로 검정선을 설정). 상기 측정된 결과는 도 6에 나타내었다.
상기 도 6에 나타낸 바와 같이, 웨이셀라 파라메센테로이드 RIS-B-98은 호기 및 혐기적 조건에서 유의한 성장을 나타내었으며(도 3), DHNA를 정량한 결과 호기적 배양에서는 2일째에 최고값인 0.079 ug/ml을 나타내었다. 반면 혐기적 배양에서는 1일째에 최고값인 0.024 ug/ml로 나타났으며 이후 검출되지 않았다.
따라서 호기 및 혐기적 배양에서 성장기에 DHNA가 내로 유리되는 것을 확인하였으며, 혐기적 조건보다는 호기적 조건에서 생산된 DHNA 농도가 높았다.
농업생명공학연구원 KACC91704 20120116

Claims (6)

  1. 막걸리에서 분리되고, 1,4-디히드록시-2-나프토산(1,4-dihydroxy-2-naphtoic acid, DHNA) 생산능을 가지며, 기탁번호 KACC 91704P를 갖는 웨이셀라 파라메센테로이드 RIS-B-98 균주(Weissella paramrsenteroid RIS-B-98 KACC 91704P).
  2. 제1항에 있어서, 상기 웨이셀라 파라메센테로이드 RIS-B-98 균주는 최적 배양 온도가 30℃이고, 최적 배양 pH가 pH 6 내지 pH 7인 웨이셀라 파라메센테로이드 RIS-B-98 균주(Weissella paramrsenteroid RIS-B-98 KACC 91704P)
  3. 제1항의 웨이셀라 파라메센테로이드 RIS-B-98 균주(Weissella paramrsenteroid RIS-B-98 KACC 91704P), 상기 균주의 배양물, 상기 배양물의 농축물 및 상기 배양물의 건조물로 이루어진 군 중에서 선택된 1종 이상을 유효성분으로 포함하는 발효식품 제조용 스타터(starter).
  4. 제1항의 웨이셀라 파라메센테로이드 RIS-B-98 균주(Weissella paramrsenteroid RIS-B-98 KACC 91704P)를 포함하는 발효식품 제조용 종균 조성물.
  5. 제3항의 발효식품 제조용 스타터 또는 제4항의 발효식품용 종균 조성물을 첨가하여 제조하는 것을 특징으로 발효식품.
  6. 제5항에 있어서, 상기 발효식품은 막걸리 또는 유제품인 것인 발효식품.
KR1020120021520A 2012-02-29 2012-02-29 막걸리로부터 분리된 웨이셀라 파라메센테로이드 및 이를 이용하여 제조된 막걸리 KR20130099772A (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020120021520A KR20130099772A (ko) 2012-02-29 2012-02-29 막걸리로부터 분리된 웨이셀라 파라메센테로이드 및 이를 이용하여 제조된 막걸리

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020120021520A KR20130099772A (ko) 2012-02-29 2012-02-29 막걸리로부터 분리된 웨이셀라 파라메센테로이드 및 이를 이용하여 제조된 막걸리

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20130099772A true KR20130099772A (ko) 2013-09-06

Family

ID=49451009

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020120021520A KR20130099772A (ko) 2012-02-29 2012-02-29 막걸리로부터 분리된 웨이셀라 파라메센테로이드 및 이를 이용하여 제조된 막걸리

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR20130099772A (ko)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102390755B1 (ko) * 2021-09-06 2022-04-28 한국식품연구원 웨이셀라 파라메센테로이데스 WiKim0137 균주를 유효성분으로 포함하는 암의 예방 또는 치료용 조성물
CN115851537A (zh) * 2022-12-12 2023-03-28 华南理工大学 一株类肠膜魏斯氏菌MbWp-142及其产品与应用

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102390755B1 (ko) * 2021-09-06 2022-04-28 한국식품연구원 웨이셀라 파라메센테로이데스 WiKim0137 균주를 유효성분으로 포함하는 암의 예방 또는 치료용 조성물
WO2023033624A1 (ko) * 2021-09-06 2023-03-09 한국식품연구원 웨이셀라 파라메센테로이데스 wikim0137 균주를 유효성분으로 포함하는 암의 예방 또는 치료용 조성물
CN115851537A (zh) * 2022-12-12 2023-03-28 华南理工大学 一株类肠膜魏斯氏菌MbWp-142及其产品与应用
CN115851537B (zh) * 2022-12-12 2023-09-05 华南理工大学 一株类肠膜魏斯氏菌MbWp-142及其产品与应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Ellaiah et al. Optimisation studies on neomycin production by a mutant strain of Streptomyces marinensis in solid state fermentation
CN1251692C (zh) 能够将黄豆苷原代谢成为雌马酚的微生物菌株及利用该菌株生产雌马酚的方法
RU2613365C1 (ru) Штамм метанокисляющих бактерий Methylococcus capsulatus ГБС-15 для получения микробной белковой массы
CN112226373B (zh) 一株产蛋白的菌株及其应用
CN106939288B (zh) 植物乳杆菌SG5在产γ-氨基丁酸中的应用
CN103333811A (zh) 马克斯克鲁维酵母菌、其组合物和应用
CN112251385B (zh) 一株地衣芽孢杆菌scu-e及其应用
CN104388514A (zh) 利用复合菌种发酵制备γ-氨基丁酸的方法
KR20220116000A (ko) 사카로폴리스포라 및 바이오제닉 아민 감소에 있어서의 이의 응용
Jiang et al. Studies on screening of higher γ-aminobutyric acid-producing Monascus and optimization of fermentative parameters
CN104630166A (zh) 微生物发酵生产低温葡萄糖氧化酶的方法
CN106222010A (zh) 一种生物活性窖泥及其制备方法
Yee et al. The production of functional γ-aminobutyric acid Malaysian soy sauce koji and moromi using the trio of Aspergillus oryzae NSK, Bacillus cereus KBC, and the newly identified Tetragenococcus halophilus KBC in liquid-state fermentation
CN103937691A (zh) 一株产β-果糖苷酶的米曲霉菌株及其培养方法与应用
KR20130099772A (ko) 막걸리로부터 분리된 웨이셀라 파라메센테로이드 및 이를 이용하여 제조된 막걸리
CN105441334B (zh) 产灰树花多糖的菌株及其应用
CN113337432B (zh) 一种产吡咯喹啉醌的食甲基菌及其应用
US9809795B2 (en) Extraction of nitrogen from organic materials through ammonification by mixed bacterial populations
CN104711208B (zh) 一种具有高的淀粉分解能力的乳酸菌
KR100800530B1 (ko) 만니톨 생산능을 갖는 류코노스톡 시트리움 및 이를이용하여 만니톨을 생산하는 방법
CN114468119A (zh) 一种青稞加工副产物复合生物饲料及其制备方法
CN114015607A (zh) 一种高产5-甲基四氢叶酸的解淀粉芽孢杆菌及其应用
CN101892172A (zh) 一株原玻璃蝇节杆菌菌株及将其用于降解棉酚生产饲料蛋白的方法
KR101185571B1 (ko) １,４-디히드록시-２-나프토산 생산능을 가지는 바이쎌라 파라메젠테로이데스 ｃｊｎｕ ０４８０ 균주 및 이의 이용
CN116286513B (zh) 一株希氏乳杆菌FR-1012及其工业化生产γ-氨基丁酸的方法

Legal Events

Date Code Title Description
WITN Application deemed withdrawn, e.g. because no request for examination was filed or no examination fee was paid