KR20130049980A

KR20130049980A - 뽕나무 부산물 발효추출물 및 이를 함유하는 피부화장료

Info

Publication number: KR20130049980A
Application number: KR1020110115073A
Authority: KR
Inventors: 이충우; 양수옥; 유병국; 심승보; 전용진; 김동윤; 정완호
Original assignee: 주식회사 유로코스텍
Priority date: 2011-11-07
Filing date: 2011-11-07
Publication date: 2013-05-15

Abstract

본 발명은 뽕나무 부산물 발효 추출물의 제조방법 및 이를 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물에 관한 것으로서, 더욱 구체적으로는 (1) 건조된 뽕나무 부산물을 물과 혼합하고 유산균 및 효모를 접종하여 발효하는 단계; (2) 발효액을 숙성하는 단계; 를 포함하는 것을 특징으로 하는 발효방법, 상기 방법에 의하여 제조된 발효물 및 이를 유효성분으로 함유하는 보습, 탄력, 미백, 피부 주름 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.

뽕나무 부산물, 발효, 보습, 탄력, 미백, 피부주름 개선

Description

뽕나무 부산물 발효추출물 및 이를 함유하는 피부화장료{Fermented mulberry tree's extract and its cosmetic usage}

본 발명은 뽕나무 부산물 발효 추출물의 제조방법 및 이를 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물에 관한 것으로서, 뽕나무 부산물 발효물 및 이를 유효성분으로 함유하는 보습, 탄력, 미백, 피부 주름 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.

발효는 미생물이 자신이 가지고 있는 효소를 이용해 유기물을 분해 또는 합성시키는 과정을 의미하며, 대표적인 발효 미생물로는 고초균, 유산균, 누룩균, 효모, 곰팡이, 초산균 등이 있다.

최근 화장품 분야에서는 천연소재들을 이용한 발효 식품 및 화장품에 대한 관심이 증가되면서, 미백, 피부 주름개선, 항산화, 보습, 탄력 등의 연구들이 활기를 띠고 있다.

발효액 추출물은 다른 어떠한 용매를 사용하지 않고, 발효와 숙성과정을 거쳐 천연소재가 함유하고 있는 당성분을 알콜로 변화시키고, 천연소재 속에 들어있는 플라보노이드, 비타민C, 비타민P, 아미노산, 카테킨 등의 유효성분에 대한 추출효율을 높일 수 있다. 또한, 때론 자극적이거나 독성을 줄 수 있는 천연소재는 발 효추출법을 통해 천연소재를 안정화시키거나 독성을 줄이거나 안정한 유도체로 전환시키는 방법으로 사용될 수 있으며, 훨씬 뛰어난 미용상의 효과를 얻을 수 있다. 또한, 유산균 및 효모 등의 발효공정에 의해 흡수가 용이한 저분자 물질로의 전환, 불안정하거나 불활성인 형태에서 활성 형태로 전환되는 과정에서 천연소재의 효능을 극대화 시키고, 보습 및 탄력성 증진, 미백, 피부주름 개선 효과를 극대화 시킬 수 있다.

뽕나무는 장미목 뽕나무과의 속이다. 종의 대부분이 아시아 원산이다. 유전적으로 닥나무속(Broussonetia)과 가깝다. 뽕나무속은 어릴 때 속성수이나, 금세 성장이 느려져 키가 10～15m에 미치지 못한다. 열매가 익으면 짙은 자주에서 검정색이 나고 먹을 수 있으며, 몇 종의 열매는 매우 달다. 뽕남무 부산물 중 뿌리껍질을 상백피, 열매를 오디(상심자), 잎을 상엽, 가지를 상지라고 한다.

상백피 (桑白皮 : Sangbaikpi : Cortex Mori : mulberry tree root bark)는 뽕나무과 (Moraceae)에 속하는 산뽕나무 (Morus bombycis koidzumi), 뽕나무 (Morus alba Linne) 또는 그 밖에 동속식물의 뿌리껍질이다.

오디는 뽕나무 열매로 오디에는 포도당, 과당, 칼슘, 철분, 칼륨, 마그네슘, 아연, 비타민 A, B1, C가 들어 있어 과일중의 황제라고 일컫는다. 오디에는 철분이 다른 과일에 비해 4～5배 이상, 칼슘은 딸기의 2배이상, 칼륨은 사과의 2배이상, 그밖에 마그네슘, 아연 등을 다량 함유한다. 네오헤스페리딘이라는 성분은 강력한 항산화물질로 피부의 지질과 산화를 막아 피부조직을 튼튼하게 하여 피부의 탄력을 증가시키는 효과가 알려져 있고, AHA(알파 하이드록시산)은 피부의 이상각화를 조 절하여 항상 깨끗한 피부를 유지시켜주는 기능이 있다. 생물이 생을 영위함에 있어서 생체의 기능을 증진시키거나 혹은 억제시키는 물질을 말하며, 생체 내에서 기능 조절에 관여하는 물질의 결핍이나 과도한 분비에 의해 비정상적인 병태를 보일때 이를 바로잡아주는 역할을 하는 물질이라 정의 할 수 있다. 생리활성물질의 창출은 생체의 보다 나은 건강한 삶을 영위하기 위하여 대단히 중요하다. 새로운 생리활성의 물질의 창출은 동식물과 같은 천연물로부터 얻거나 미생물 및 동식물 세포주의 대사산물로부터 추출 정제 할 수도 있고 화학합성에 의해서도 얻을 수 있다.

현재, 뽕나무에 관련된 부산물로 사용되는 것으로 뽕나무잎은 양잠에 사용되며 열매인 오디는 열매로 일부 식용으로 판매되고 있는 사항이다. 이에 뽕나무의 전반적인 부산물을 이용하여 추출하여 화장품 식품 추출물로 이용하여 화장품 분야까지 확장되고 있지만, 발효 공정을 통해 유효성분을 극대화 시킬 수 있는 뽕나무 부산물의 발효 추출출물에 관한 연구는 없는 실정이다.

이에 본 발명은 뽕나무 부산물추출물이 가지는 생리활성물질 탐색하고, 발효공정을 통한 뽕나무 부산물추출물의 유효성분의 함량을 증진시킨 화장료 조성물에 관한 것으로서, 뽕나무 부산물 발효물 및 이를 유효성분으로 함유하는 보습, 탄력, 미백, 피부 주름 개선용 화장료 조성물을 개발하게 되었다.

본 발명은 뽕나무 부산물 발효 추출물의 제조방법 및 이를 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물에 관한 것으로서, 유산균 및 효모를 통한 발효공정에 의한 발효물 및 이를 유효성분으로 함유하는 보습, 탄력, 미백, 피부 주름 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

상기와 같은 목적을 달성하기 위해 본 발명은 발효공정을 통한 뽕나무 부산물 발효 추출물을 만들고 이 뽕나무 부산물 발효 추출물을 함유한 보습, 탄력, 미백, 피부 주름 개선 활성 갖는 화장료이다.

본 발명에 사용된 뽕나무 부산물은 (1) 건조된 뽕나무 부산물과 물과 혼합하고 유산균 및 효모를 단독 또는 혼합 접종하여 발효하는 단계; (2) 발효액을 숙성하는 단계; 로부터 얻은 발효액, 또는 그 발효액을 다시 일부 또는 전부 감압농축 및 동결건조 하여 제조하여 얻은 농축물, 또는 발효액 및 농축액 중에 함유되고 있는 주 효과를 발휘하는 화학물질 그 자체를 포함한다.

뽕나무 부산물은 각각 동량으로 하여 수세하였으며, 실온건조 후 분쇄하여 미세 분말 형태로 제조하였다. 뽕나무 부산물을 건조하여 분말한 후 사용함으로써 뽕나무 부산물의 영양성분 및 기능성 성분을 유지하면서 장시간 보관이 가능하고, 보관시 취급이 용이하다는 장점이 있다.

뽕나무 부산물 발효 추출물은 실온 건조하여 분쇄한 분말시료를 안정적인 온도에서 물에 혼합 후, 유산균 및 효모를 단독 또는 혼합한 발효공정을 통해 발효액을 수득하였으며, 발효 후 발효액을 감압농축 및 동결건조하여 사용하거나, 발효공정 수행 후 저온 숙성 또는 고온 숙성하는 공정을 포함할 수 있다.

상기의 발효를 위해 사용한 유산균은 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei), 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis), 락토바실러스 플렌타럼(Lactobacillus plantarum), 락토코커스 락티스(Lactococcus lactis), 바실러스 코아귤런스 (Bacillus coagulance) 이며 효모로는 바실러스 서브틸러스(Bacillus subtilis)를 사용하였고, 발효 공정은 이들의 혼합 균주로 이루어진 군에서 선택된 하나 또는 둘 이상인 것을 특징으로 한다. 유산균은 배양액을 pH 4.0-5.0, 효모는 pH 6.5-7.5 로 조정하고, 유산균은 20-37도시 온도에서 3일 내지 7일간, 효모는 50-60도시 온도에서 24시간 내지 72시간 배양하였다. 본 발명에 따른 화장료 조성물은 상기의 추출물 외에 본 발명이 목적으로 하는 주 효과를 손상시키지 않고 주 효과에 상승효과를 줄 수 있는 다른 성분 등을 함유하는 것도 무방하다. 상기 뽕나무 부산물 발효추출물은 조성물 전체에 대하여 건조 중량 기준 0.001 내지 80 중량％로 조성물에 존재할 수 있다.

만약 상기 뽕나무 부산물 발효 추출물이 나노캡슐, 마이크로캡슐, 나노좀 등의 제형으로 용액 또는 파우더 형태로 존재한다면 당업자는 상기 농도 범위 내에서 본 발명에 따른 조성물 내에 이 용액 또는 파우더의 양을 조절할 수 있을 것이다. 상기한 바와 같이 보습, 탄력개선 효과가 있는 미백 및 피부주름 개선 활성을 갖는 조성물로 가공된 화장품, 식품, 의약품 등에 제공된다.

본 발명의 뽕나무 부산물 발효 추출물은 피부외용제로서 그 제형에 있어서 특별히 한정되지 않으며, 유연화장수, 밀크로션, 영양크림, 마사지 크림, 에센스, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩 또는 보디 오일 등의 기초 화장료 및 파운데이션, 립스틱, 마스카라 또는 메이크업 베이스 등의 색조 화장료 형태로 제조할 수 있다. 본 발명의 화장료를 세정제로 사용할 경우, 세안제 및 목욕제를 제조할 수 있다. 이하 본 발명을 하기 위해 실시예와 실험예를 통하여 상세하게 설명하나, 이는 본 발명의 이해를 돕기 위하여 제시된 것일 뿐, 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다.

상기에서 설명한 바와 같이, 본 발명은 뽕나무 부산물 발효 추출물의 제조방법 및 이를 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물에 관한 것으로서, 뽕나무 부산물 발효 추출물은 멀베린 등 플라보노이드성분 당류, 유기산, 비타민류 등을 포함한 유효성분을 포함하고, 유산균 및 효모를 이용한 발효공정을 통하여 생성된 발효액은 발효 공정 과정에서 생성되는 효소에 의해 고분자 화합물의 저분자 화합물로의 전환으로 피부에 유용한 물질이 증가하여 보습력, 탄력증진, 미백 효과에서 유용하게 사용될 수 있을 것으로 기대된다.

또한, 뽕나무 부산물 발효 추출물을 함유하는 화장료 조성물은 항산화 활성, 콜라겐의 생성, MMP-1(Matrix metalloproteinase ; 콜라겐의 분해를 촉진하는 효소)의 저해 효과가 우수하여 피부 주름 개선 효과를 발휘한다.

＜실시예 1＞ 실험 준비

뽕나무 부산물은 뽕나무 잎, 열매, 가지, 뿌리를 동량씩 가지고, 세척한 다음, 실온 건조 후 분쇄하여 분말 형태로 제조하였다.

＜실시예 2＞ 뽕나무 부산물 발효 추출물의 제조

뽕나무 부산물의 건조 중량의 10배 양의 증류수를 가하여 잘 섞어준 후, pH를 4.0-5.0 내지 6.5-7.5 로 조정하고, 미리 배양된 유산균(Lactobacillus plantarum)과 효모(Bacillus subtilis)를 각각 10⁷- 10⁸ CFU/mL 농도가 되도록 첨가한다. 유산균은 30-37도시 온도에서 3 - 7 일간 배양하고, 효모는 50-60도시 온도에서 24시간 내지 72시간 배양하였다. 발효를 종료하기 위해 80도시에서 10분간 열을 가하여 유산균 및 효모의 기능상실을 유도하였다. 원심분리기를 이용하여 침전물을 제거하고 상등액을 채취하거나, 여과된 상등액을 60도시이하에서 감압농축한 후 동결건조된 것을 사용하였다.

＜비교예 1＞ 뽕나무 부산물 일반 추출물의 제조

대조군으로 사용된 뽕나무 부산물 일반 추출물은 발효 공정 없이 동일한 열수 추출 공정을 통해 수득하였다. 즉, 건조 중량의 10배 양의 증류수를 가하여 잘 섞어준 후, 80도시에서 3시간 가온 환류 추출하여 상등액과 침전물을 분리하여 3회 반복 추출하였다. 각 추출물은 냉침한 후, 8마이크로미터 투과사이즈를 갖는 여과지로 여과하였다. 이 여과된 추출액을 60도시이하에서 감압농축한 후 감압건조기를 이용해 완전히 건조시켜 뽕나무 부산물 일반 추출물을 수득하였다.

＜실험예 1＞ 뽕나무 부산물 발효 추출물에 함유된 성분 및 성분의 함량 측정

＜1-1＞ 총 플라보노이드 함량 측정

총 플라보노이드 함량 측정은 하기와 같이 수행하였다. 시료용액 1％ 100ul 과 에탄올 300ul, 10％ 질산알루미늄용액 20ul, 1M 초산칼륨용액 20ul, 물 560ul을 가하여 충분히 교반한다. 실온에서 40분간 정치 후 액층을 microplate reader (Chromate, USA)를 이용하여 405nm에서 흡광도를 측정한다. 공시험은 시료 용액 대신 에탄올 용액을 이용하여 동일하게 처리하였고, 시료 blank는 질산알루미늄용액 대신 물을 사용한 것을 사용하였다. 이때 표준곡선은 Quercetin 0.05％ 농도를 희석하여 작성하였고, 검량선으로부터 시료의 총플라보노이드 함량을 산출하였다.

표 1

총 플라보노이드 함량

＜실험예 2＞ 항산화 활성

뽕나무 부산물 발효 추출물의 항산화 활성을 측정하기 위하여, DPPH(2.2-diphenyl-1-picryl hydrezyl) 라디칼 소거능을 사용하였다.

500 uM DPPH (2.2-diphenyl-1-picryl hydrezyl) 용액을 에칠 알콜에 녹여 여과한 후 즉시 사용하였다. 제조된 DPPH 용액과 시료 용액을 1:1로 혼합하여 격렬하게 섞은 후, 상온 암소에 20 분간 방치하였다. Microplate reader (Chromate, USA) 를 이용하여 540 nm에서 흡광도를 측정한 후, 하기 수학식 1를 통해 DPPH 라디칼 제거율(％)을 산출하였다. 이때 라디칼을 제거하는 양성 대조군(positive control)으로 1 mM의 아스코르브산(ascorbic acid)을 사용하였다.

상기 식에서, A는 공시험액에서 얻은 흡광도이고, B는 검액에서 얻은 흡광도임

표 2

뽕나무 부산물 발효 추출물의 항산화 활성

＜실험예 3＞ 피부주름 개선 효과

＜3-1＞ 콜라겐 생합성 평가

시료에 대한 Fibroblast 세포 내에서 새로 생성되는 collagen 양을 측정하기 위해 procollagen assay 를 실시하였다. 콜라겐 생성에 관여하는 세포주의 하나인 Fibroblast를 1％ Antibiotic-Antimycotic (AA, Welgene, Korea)과 10％ Fetal bovine serum (FBS, Welgene, Korea)을 포함한 Dulbecco's modified essential medium (DMEM, Welgene, Korea)을 이용하여 37 도시, 5 ％ CO₂ incubator에서 배양 하였다. 2×10⁵ 농도의 Fibroblast 세포를 6 well plate에 접종하여 24시간 동안 배양한 후 배지를 제거하고 무혈청 배지를 처리하여 24시간 동안 starvation 시킨다. 24시간 후, 무혈청 배지를 제거하고 PBS로 세척한후, UV 312nm 파장에서 12.5mJ로 조사하였다. 그 후, 시료를 phenolred free DMEM 배지에 농도 별로 처리하여 48시간 동안 추가 배양하였다. Ascorbic acid 50 uM 을 positive control 로, UV(+)군을 Negative control 로, 배지만 처리한 그룹을 control 로 사용하여 시료의 결과와 비교하였다. 추출물 처리 후 48시간 동안의 배양이 끝난 후 배지를 수거하였다. 수거한 배지는 Procollagen Type-I C-Peptide (PIP) EIA kit(Takara Bio Inc. MK101) 를 이용하여 콜라겐 양을 측정하였다. Antibody-POD conjugate solution 100ul를 각 well에 첨가하고, sample이나 standard를 20ul씩 넣은 뒤 잘 섞어서 37도시에서 3시간 방치하였다. 반응이 끝나면 내용물을 제거한 뒤 PBS 400ul로 4번 세척하였다. 제거 후 기질용액 100ul를 첨가하여 실온에서 15분간 반응시킨 뒤 stop solution 100ul 첨가하여 부드럽게 섞어주었다, microplate reader (Chromate, USA)를 이용하여 450nm에서 흡광도를 측정한 후 표준 농도곡선을 작성하여 콜라겐 양을 산정하였다(표3).

표3에 나타난 바와 같이 추출물들의 자외선에 의한 자극에 의한 항주름 활성을 살펴보기 위해서, 뽕나무 부산물 효모발효 추출물을 처리하였을 경우와 이를 비교하기 위한 뽕나무 부산물 일반 추출물(80도시, 3h)을 함께 비교하였다. 뽕나무 부산물 일반 추출물(80도시, 3h) 보다 뽕나무 부산물 효모발효 추출물로 처리하였 을 때, 새로 생성되는 콜라겐양이 증가하는 것을 확인할 수 있었다.

표3

뽕나무 부산물 발효 추출물의 자외선에 의한 자극에 의한 콜라겐 생합성

＜3-2＞ MMP-1 저해 평가

Collagen 을 분해하는 효소는 그 종류가 다양하며 가장 많이 알려져 있는 것이 collagen type I을 분해하는 MMP-1 (Matrix metalloproteinase I, collagenase)으로 이를 측정하기 위해 MMP-1 assay 를 실시하였다. 콜라겐 생성에 관여하는 세포주의 하나인 Fibroblast를 1％ Antibiotic-Antimycotic (AA, Welgene, Korea)과 10％ Fetal bovine serum (FBS, Welgene, Korea)을 포함한 Dulbecco's modified essential medium (DMEM, Welgene, Korea)을 이용하여 37도시, 5 ％ CO₂incubator에서 배양하였다. 2×10⁵ 농도의 Fibroblast 세포를 6 well plate에 접종하여 24시간 동안 배양한 후 배지를 제거하고 무혈청 배지를 처리하여 24시간 동안 starvation 시킨다. 24시간 후, 무혈청 배지를 제거하고 PBS로 세척한 후, UV 312nm 파장에서 12.5mJ로 조사하였다. 그 후, 시료를 phenolred free DMEM 배지에 농도 별로 처리하여 48시간 동안 추가 배양하였다. Ascorbic acid 50 uM 을 positive control 로, UV(+)군을 Negative control 로, 배지만 처리한 그룹을 control 로 사용하여 시료의 결과와 비교하였다. 추출물 처리 후 48시간 동안의 배양이 끝난 후 배지를 수거하였다. 수거한 배지는 MMP-1 측정 키트 (RPN 2610, Amersham Bioscience, UK) 를 이용하여 ELISA reader 로 450nm에서 흡광도를 측정하였다. Anti-MMP1 antibody로 코팅된 96 well plate에 buffer를 well 하나에 첨가하여 blank로 삼고, 배지 중에 유리된 샘플과 표준액 100ul를 각각의 well 에 넣는다, 실온에서 shaking 없이 2시간 동안 반응시킨다. Washing buffer로 well을 가득 채워서 3회 반복해서 세척 한 후 물기를 완전히 제거한다. 100ul peroxide coujugate를 첨가하고, 실온에서 shaking 없이 2시간 동안 반응시킨다. Washing buffer로 well을 가득 채워서 30분간 shaking 하면서 반응시킨다. 100ul 1M H2SO4로 반응을 중지시킨 후 microplate reader (Chromate, USA) 를 이용하여 450nm에서 흡광도를 측정하여 비교하였다(표4).

표4에 나타난 바와 같이 추출물들의 자외선에 의한 자극에 의한 항주름 활성을 살펴보기 위해서, 뽕나무 부산물 효모발효 추출물을 처리하였을 경우와 이를 비교하기 위한 뽕나무 부산물 일반 추출물(80도시, 3h)을 함께 비교하였다. 뽕나무 부산물 일반 추출물(80도시, 3h)에 비해 뽕나무 부산물 효모발효 추출물로 처리했을 때 새로 MMP-1 활성이 저해되었고, 이는 콜라겐 생합성 결과(표3)와 일치하는 양상을 보인다.

표4

뽕나무 부산물 효모발효 추출물의 자외선에 의한 자극에 의한 MMP-1 활성 저해도

표4 에 나타난 바와 같이 추출물들의 자외선에 의한 자극에 의한 항주름 활성을 살펴보기 위해서, 뽕나무 부산물 발효 추출물을 처리하였을 경우와 이를 비교하기 위한 뽕나무 부산물 일반 추출물(80도시, 3h)을 함께 비교하였다. 뽕나무 부산물 일반 추출물(80도시, 3h)로 처리했을 때보다 뽕나무 부산물 발효 추출물로 새로 생성되는 콜라겐양이 증가하는 것을 확인할 수 있었다. 이는 표3의 콜라겐 생합성에 상응하는 결과를 보여준다.

＜실험예 4＞ 에멀젼 베이스 제조

뽕나무 부산물 발효 추출물을 함유한 화장료를 포함한 에멀젼 베이스를 제조하였다. 본 실험에 사용된 화장료는 유화형 화장액 형태이고, 그 조성은 표에 나타낸 바와 같다. 우선 표에 기록되어 있는 뽕나무 부산물 효모발효 추출물 및 기타 함량을 중량별로 첨가한 후 (가)상을 가열하여 90도시로 유지하고 정제수(30％)를 90도시까지 가열한 후 (가)수상 중에 천천히 첨가하여 호모믹서로 균일하게 유화한다. 그 후 실온까지 냉각하고 남은 (나)상의 정제수를 첨가하고 균일하게 교반하여 화장액을 제조하였다.

표5

에멀전 베이스 제조

＜실험예 5＞ 피부 탄력 효과에 대한 측정

본 발명에 따른 화장품의 피부 탄력 효과에 대한 검사를 측정하기 위하여, 건강한 30-40대 성인 남녀 10명을 대상으로 하였다. 실험예 5에서 제조된 화장품을 이용하였으며, 시험 초기(baseline), 2주, 4주, 6주에 항온항습실(온도 20-22도시, 상대습도 40-60％)에서 피검자는 세안 후 1시간 동안 피부를 안정화한 다음, 측정을 수행하였다. 피부의 탄력도는 cutometer SEM 474(Courage+Khasaka, Germany)로 눈가 부위를 측정하였으며, 측정시 음압은 500 mbar, 흡입시간은 2sec, 반복 측정 횟수는 5회로 측정하여 평균 수치를 이용하였다.

표 6

피부 탄력성 측정

Cutometer SEM 474로 측정하여 피부탄력도를 측정한 결과, 뽕나무 부산물 일반 추출물에 비해 뽕나무 부산물 효모발효 추출물이 피부탄력도가 4배 정도 더 뛰어나다는 사실을 확인할 수 있었다.

＜실험예 6＞ 피부 안전도 시험

본 발명에 따른 화장품의 피부 안전성 검사를 측정하기 위하여 통상의 패취(patch test) 테스트를 실시하였다. 연구대상은 건강한 30-40대 성인 남녀 10명을 대상으로 팔 하박부 안쪽에 실험예 4에서 제조된 화장품을 첩포한 후 48시간 후에 첨포를 제거하여 피부의 상태(자극 정도)를 관찰하였다. 그 결과는 하기 표 7에 나타내었다.

표 7

피부 안전도 측정

＜실험예 7＞ 인체 피부에 대한 미백 효과 시험

연구대상은 건강한 30-40대 성인 남녀 10명을 대상으로 피검자의 상박 부위에 직경 1.5cm의 구멍이 뚫린 불투명 테이프를 부착한 뒤, 각 피검자의 최소 홍반량(Minimal Erytherna Dose)의 1.5～2배 정도의 자외선(UVB)을 조사하여 피부의 흑화를 유도하였다. 조사 후 시험물질 각 1％ (용매는 1,3-부틸렌글리콜:에탄올=7:3), 대조군으로 알부틴 2％, 용매(vehicle)만을 바르고, 한곳은 아무 것도 바르지 않고 10 주 동안 상태 변화를 관찰하였다. 1주 단위로 피부의 색깔을 색차계 CR2002(일본, 미놀타사)로 측정하였다. 도포 개시시점과 완료시점에서의 피부색의 차이(△L*)를 하기 수학식 3에 따라 계산하였고, 그 결과를 하기 표 10에 나타내었다. 미백효과는 시료 도포 부위와 대조군 부위의 △L*의 비교로 판정하는데, △L* 값이 2 정도일 경우는 침착된 색소의 미백화가 뚜렷한 경우이고, 1.5 정도 이상이면 미백효과가 있다고 판정할 수 있다.

표 8

피부에 대한 미백 효과

상기 표 8의 결과로부터, 본 발명에 의한 뽕나무 부산물 효모발효 추출물은 뽕나무 부산물 일반 추출물뿐만 아니라 양성대조군인 알부틴 보다 우수한 미백 효과를 보이는 것을 확인하였다

Claims

(1)뽕나무 부산물인 상엽, 오디, 상지, 상백피의 동량 혼합물을 물과 혼합하고 유산균 및 효모를 단독 또는 혼합 접종하여 발효하는 단계;

(2) 발효액을 숙성하는 단계; 를 포함하는 것을 특징으로 하는 발효방법.
제 1 항에 있어서, 상기 유산균은 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei), 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis), 락토바실러스 플렌타럼(Lactobacillus plantarum), 락토코커스 락티스(Lactococcus lactis), 바실러스 코아귤런스 (Bacillus coagulance) 및 이들의 혼합 균주로 이루어진 군에서 선택된 하나 또는 둘 이상인 것을 특징으로 하는 발효방법.
제 1 항에 있어서, 상기 효모는 바실러스 서브틸러스(Bacillus subtilis)인 것을 특징으로 하는 발효방법.
제 1항에 있어서, 뽕나무 부산물 발효 추출물의 건조 중량을 기준으로 조성물 전체에 대해 0.001 내지 80 중량％를 함유하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물
제 1항에 있어서, 뽕나무 부산물 발효 추출물이 뽕나무 부산물을 특징으로 하는 상기 발효액 또는 추출후 감압농축 및 동결건조된 것을 특징으로 하는 미백 및 피부주름 개선용 화장료 조성물
제 1항에 있어서, 배양액의 pH를 4.0-5.0 내지 6.5-7.5로 조정하고, 유산균은 20-37도시 온도에서 3일 내지 7일간 배양하고 효모는 50-60도시 온도에서 24시간 내지 72시간 배양하는 것을 특징으로 하는 미백 및 피부주름 개선용 화장료 조성물.
제 1항 내지 2항에 있어서, 뽕나무 부산물 발효 추출물을 함유하는 나노캡슐, 마이크로캡슐, 나노좀 등의 제형으로 보습, 탄력, 미백, 피부주름 개선용 화장료 조성물
제 1항 내지 2항에 있어서, 상기 화장료 조성물의 제형은 유연 화장수, 젤, 수용성 리퀴드, 밀크로션, 영양크림, 마사지 크림, 에센스, 수중유(O/W) 또는 유중수(W/O)형의 에멀젼, 페이스크성 또는 고체 무수 생성물, 소구체를 사용한 수성 상에서의 오일 분산물, 이온성 또는 비이온성 형태의 지질 소포체의 형태, 연고, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩 또는 보디오일 등의 기초 화장료, 수중유형 또는 유중수형 메이크업베이스, 파운데이션, 스킨커버, 립스틱, 립그로스, 페이스파우더, 투웨이케익, 아이섀도우, 마스카라, 치크칼라 및 아이브로우펜슬류로 이루어진 색조화장료 제형 등의 색조 화장료 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 보습, 탄력, 미 백, 피부주름 개선용 화장료 조성물.
제 1항에 있어서, 뽕나무 부산물 발효 추출물로 제조된 화장품, 식품, 의약품 또는 생활용품.