KR20120132506A - 인플루엔자 바이러스 질환의 예방 및 치료에 사용되는 백신 - Google Patents

인플루엔자 바이러스 질환의 예방 및 치료에 사용되는 백신 Download PDF

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Abstract

본원은 인플루엔자 바이러스 헤마글루티닌(hemagglutinin)의 일부를 포함하는 폴리펩티드, 백신에서 면역원으로서 사용될 수 있는 이러한 폴리펩티드를 포함하는 조성물, 및 대상체에서 다수의 인플루엔자 아형에 대한 면역 반응을 발생시키기 위해 이들을 사용하는 방법에 관한 것이다.

Description

인플루엔자 바이러스 질환의 예방 및 치료에 사용되는 백신{VACCINES FOR USE IN THE PROPHYLAXIS AND TREATMENT OF INFLUENZA VIRUS DISEASE}
본원은 인플루엔자 바이러스 헤마글루티닌(hemagglutinin)의 일부를 포함하는 폴리펩티드, 백신에서 면역원으로서 사용될 수 있는 이러한 폴리펩티드를 포함하는 조성물, 및 대상체에서 다수의 인플루엔자 아형(subtype)에 대한 면역 반응을 발생시키기 위해 이들을 사용하는 방법에 관한 것이다.
본원은 2010년 2월 18일 자로 출원된 미국 가출원 제61/305,898호, 2010년 5월 26일자로 출원된 미국 정규출원 제12/788,103호, 2010년 6월 11일자로 출원된 미국 가출원 제61/354,160호, 및 2010년 9월 21일자로 출원된 미국 가출원 제61/385,083호(이들 각각은 온전히 그대로 본원에 참고로 도입됨)의 우선권 이익을 주장한다.
본 발명은 미국 국립보건원(NIH)에 의해 수여된 수여 번호 제U01 AI070469-02호 및 제1RC1 AI086061-01호 하에 미국 정부 지원으로 만들어졌다. 미국 정부는 본 발명에 대한 일부 권리를 갖는다.
인플루엔자 바이러스는 오르토믹소비리대(Orthomyxoviridae) 과(family)에 속하는 외피(enveloped) RNA 바이러스이다(문헌[Palese and Shaw (2007) Orthomyxoviridae: The Viruses and Their Replication, 5th ed. Fields' Virology, edited by B.N. Fields, D.M. Knipe and P.M. Howley. Wolters Kluwer Health/Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, USA, p1647-1689]). 인플루엔자 바이러스의 천연 숙주는 조류이지만, (조류 유래의 인플루엔자 바이러스를 포함하는) 인플루엔자 바이러스는 인간 및 다른 동물 숙주(개, 돼지, 말, 해양 포유동물 및 족제비)를 감염시켜 질병을 유발할 수도 있다. 예를 들면, 아시아에서 유행하는 H5N1 조류 인플루엔자 바이러스는 중국 및 인도네시아에서 돼지에서 발견되었고 일반적으로 인플루엔자 A에 민감하다고 간주되지 않는 고양이, 표범 및 호랑이를 포함하는 범위까지 그의 숙주 범위를 확장시켰다(CIDRAP - Avian Influenza: Agricultural and Wildlife Considerations). 동물에서 인플루엔자 바이러스 감염의 발생은 잠재적으로 인간 대유행성(pandemic) 인플루엔자 균주를 발생시킬 수 있다.
인플루엔자 A 바이러스 및 인플루엔자 B 바이러스는 심각도 면에서 무증상 감염부터 사망을 초래할 수 있는 1차 바이러스성 폐렴까지 이르는 호흡 질환을 유발하는 주요 인간 병원체이다. 감염의 임상적 효과는 인플루엔자 균주의 병독성, 및 숙주의 노출, 병력, 연령 및 면역 상태에 따라 달라진다. 계절성 인플루엔자에 의해 유발된 누적 이환율 및 사망률은 상대적으로 높은 감염률로 인해 상당하다. 일반 계절에서, 인플루엔자는 3백만 내지 5백만 케이스의 심각한 질병을 유발할 수 있고 전세계적으로 200,000명 내지 500,000명의 사망과 관련되어 있다(World Health Organization (April, 2009) Influenza (Seasonal) Fact Sheet 211). 미국에서, 인플루엔자 바이러스는 10% 내지 15%(추정치)의 인구를 감염시키고(문헌[Glezen and Couch RB (1978) Interpandemic influenza in the Houston area, 1974-76. N Engl J Med 298: 587-592]; 문헌[Fox et al. (1982) influenza virus infections in Seattle families, 1975-1979. II. Pattern of infection in invaded households and relation of age and prior antibody to occurrence of infection and related illness. Am J Epidemiol 116: 228-242]), 매년 약 30,000명의 사망과 관련되어 있다(문헌[Thompson WW et al. (2003) Mortality Associated with Influenza and Respiratory Syncytial Virus in the United States. JAMA 289: 179-186]; 문헌[Belshe (2007) Translational research on vaccines: influenza as an example. Clin Pharmacol Ther 82: 745-749]).
인플루엔자 바이러스는 연례적인 유행병 이외에 드문 대유행병의 원인이다. 예를 들면, 인플루엔자 A 바이러스는 1918년, 1957년 및 1968년에서 발생된 대유행병과 같은 대유행병을 유발할 수 있다. 주요 바이러스 항원인 헤마글루티닌(HA)에 대한 예비형성된 면역의 결핍으로 인해, 대유행성 인플루엔자 바이러스는 한 해에 50% 초과의 인구에 영향을 미칠 수 있고 종종 계절성 인플루엔자 바이러스보다 더 심각한 질환을 유발할 수 있다. 대표적인 예는 5천만명 내지 1억명(추정치)의 사람들이 사망한 1918년의 대유행병이다(문헌[Johnson and Mueller (2002) Updating the Accounts: Global Mortality of the 1918-1920 "Spanish" Influenza Pandemic Bulletin of the History of Medicine 76: 105-115]). 1990년대 후반기에 고도 병원성 조류 H5N1 인플루엔자 바이러스의 출현 이후(문헌[Claas et al. (1998) Human Influenza A H5N1 virus related to a highly pathogenic avian influenza virus. Lancet 351: 472-7]), 상기 바이러스가 인간 사이에서 전염되어 주요 대유행병을 유발할 수 있다는 우려가 있다.
인플루엔자 바이러스 감염으로부터 보호하는 효과적인 방법은 백신접종이지만, 현재 백신접종 방법은 유행하는 균주와 백신 제제에 포함되는 단리물(isolate) 사이의 우수한 일치(match)를 달성하는 것에 의존한다. 이러한 일치는 종종 인자들의 조합으로 인해 달성하기 어렵다. 첫째, 인플루엔자 바이러스는 꾸준히 변화되고 있다: 3년 내지 5년마다 인플루엔자 A 바이러스의 우성 균주는 기존 항체 반응을 피하기에 충분한 항원성 변화를 겪은 변이체로 대체된다. 따라서, 백신 제제에 포함될 단리물은 세계보건기구(WHO) 협력 센터의 집중적인 감시 노력에 근거하여 매년 선택되어야 한다. 둘째, 백신 제조 및 분배를 위한 충분한 시간을 허용하기 위해, 인플루엔자 계절의 시작 약 6개월 전에 균주가 선택되어야 한다. 종종, 백신 균주 선택 위원회의 예측이 부정확하여 백신의 효능의 상당히 감소를 초래한다.
인간 집단으로 들어가는 인플루엔자 A 바이러스의 신규 아형의 존재가능성도 현행 백신접종 방법에 상당한 도전과제를 제공한다. 인플루엔자 바이러스의 어떤 아형 및 어떤 균주가 다음 대유행병을 유발할 것인지를 예측하는 것은 불가능하기 때문에, 현행 균주 특이적 방법은 대유행성 인플루엔자 백신을 제조하는 데에 이용될 수 없다.
특정 아형 또는 상이한 아형으로부터의 다수의 인플루엔자 바이러스 균주와 교차반응하는 면역 반응을 발생시키기 위해 대상체(인간 대상체를 포함하는 동물 대상체)에서 사용될 수 있는 폴리펩티드 조성물("감기(flu) 폴리펩티드")이 기재된다. 구체적으로, 감기 폴리펩티드는 아미노산 서열 및/또는 구조 면에서 본원에 기재된 인플루엔자 헤마글루티닌의 HA2 아단위(subunit)의 긴 알파 나선 영역에 상응하는 "코어(core) 폴리펩티드", 또는 변형된 코어 폴리펩티드를 포함한다.
본 발명은 부분적으로 인플루엔자 헤마글루티닌의 HA2 아단위의 긴 알파 나선 영역의 구조 및 기능/활성을 모방하는 감기 폴리펩티드의 디자인에 근거한다. 놀랍게도, 특정 인플루엔자 아형의 HA2 긴 알파 나선에 상응하는 감기 폴리펩티드를 사용한 면역화는 다수의 인플루엔자 아형으로부터의 헤마글루티닌과 교차반응하는 혈청 항체를 유도한다. 본원에 기재된 데이터도 한 특정 아형의 HA2 긴 알파 나선에 상응하는 감기 폴리펩티드로 면역화된 동물이 상이한 인플루엔자 바이러스 아형에 의한 치명적인 인플루엔자 바이러스 공격(challenge)으로부터 보호된다는 것을 입증한다. 따라서, 본원에서 제공된 감기 폴리펩티드는 다수의 상이한 인플루엔자 균주 및 아형에 대한 면역 반응을 발생시킬 수 있는 면역원성 조성물(예를 들면, 백신), 즉 "보편적인" 감기 백신에서 사용될 수 있다.
임의의 특정 작용이론에 구속받고자 하는 것은 아니지만, 상이한 인플루엔자 아형에서 HA의 가변성에도 불구하고 인플루엔자 헤마글루티닌의 HA2 아단위의 긴 알파 나선 영역은 드문 교차반응성 항체(예를 들면, H3 인플루엔자 바이러스에 대한 넓은 중화 활성을 갖는 단일클론 항체 12D1)에 의해 인식되는 보존된 에피토프/영역을 함유할 가능성이 있다. 감기 폴리펩티드는 이 에피토프/영역을 적절한 입체구조로 노출시키고 교차반응성 또는 "보편적인" 에피토프/영역에 대한 향상된 면역원성을 부여하도록 디자인된 구축물 형태로 면역 시스템에 제시되고 대상체에서, 혈청 항체 반응 및 바람직하게는 다수의 인플루엔자 아형에 대한 중화 반응을 발생시키기 위해 사용될 수 있다.
다른 양태에서, 감기 폴리펩티드를 코딩하는 핵산, 감기 폴리펩티드를 포함하는 바이러스 및 면역원성 조성물, 및 면역화 방법이 본원에서 기재된다.
도 1: MAb 12D1은 웨스턴 블롯에 의한 분숙시 절두된(truncated) 헤마글루티닌 구축물과 반응한다. 12D1은 아미노산 30 내지 106(H3 넘버링(예를 들면, 문헌[Wilson et al., Nature 1981; 289 (5796): 366-73] 참조)의 영역에서 HA2 아단위과 우세하게 접촉한다. HA2의 106 내지 184 절두체(truncation)와의 결합 상실과 함께 HA2의 76 내지 184 절두체 및 HA2의 91 내지 184 절두체에서의 감소된 12D1 결합 및 감소되지 않은 GFP 발현은 결합 에피토프가 HA2의 아미노산 76 내지 106의 영역에 놓여 있다는 것을 암시한다. 이들 30개 아미노산은 HA2의 긴 알파 나선의 막 원위 절반(membrane distal half) 내에 위치한다.
도 2: 단일클론 항체(mAb) 12D1은 HA2의 긴 알파 나선과 반응한다. GFP 또는 GFP HA 76 내지 130으로 형질감염된 293T 세포로부터의 용해물을 mAb 12D1과 함께 항온처리하고 단백질 G 비드로 침전시켰다. 침전된 분획을 mAb 12D1 또는 토끼 항-GFP로 블로팅하였다. 12D1 결합을 검출하기 위해 사용된 항-마우스 HRP는 침전된 분획 내의 마우스 Ig 중쇄 및 경쇄와 반응한다(A). HApep-KLH 접합체 내의 12D1 에피토프의 구조적 완전성을 직접 결합 ELISA로 확인하였다. MAb 36A7은 HA2의 76 내지 130 영역의 외부에서 결합한다(B).
도 3: 감기 폴리펩티드(76 내지 130)-KLH("HApep-KLH")는 강력한 면역원으로서 작용하고, HApep-KLH에 의해 유도된 혈청 항체는 다수의 헤마글루티닌 아형과 반응한다. 개별 마우스로부터의 혈청을 1차 면역화 및 2차 면역화 후 10일째 날에 수득하고 ELISA로 H3 또는 H1 HA와의 결합에 대해 시험하였다(A). HApep-KLH를 사용한 2차 면역화 후 수득된 풀링된(pooled) 혈청을 정제된 H3 또는 H1 아형 인플루엔자 바이러스 또는 뉴캐슬병 바이러스(NDV)와의 반응성에 대해 웨스턴 블롯으로 시험하였다(B). 풀링된 혈청을 H2, H5 또는 H7 HA에 대한 결합 활성에 대해 ELISA로 시험하였다(C). 인플루엔자 아형 사이의 코어 폴리펩티드(76 내지 130)의 % 동일성/유사성(D).
도 4: 감기 폴리펩티드 (76 내지 130)-KLH("HApep-KLH")를 사용한 면역화는 치명적인 공격으로부터 마우스를 보호한다. 치사량의 H3N2 바이러스에 감염된 마우스의 평균 체중 변화(A). HApep-KLH를 사용한 백신접종은 사망으로부터 H3N2 감염된 마우스를 보호한다(B). HApep-KLH 백신은 치사량의 H1N1 바이러스로부터 80%의 마우스를 보호한다(C). 항-H1 역가는 PR8 공격 후 체중 손실과 상관관계를 갖는다(D).
도 5: 아형 H1, H2, H3, H5 및 H7로부터 선택된 균주를 사용하여 수행한 다양한 인플루엔자 A 바이러스 아형 사이의 서열 정렬(A). 서열 정렬은 상이한 아형 사이의 보존된 아미노산을 보여준다(B).
도 6: H1N1(A)(서열번호 8 내지 11), H2N2(B)(서열번호 13 및 14), H3N2(C)(서열번호 16 및 18), H5N1(D)(서열번호 22), H7(E)(서열번호 31 내지 35), H4(F)(서열번호 20 및 21), H6(G)(서열번호 24 내지 29), H8(H)(서열번호 37 및 38), H9(I)(서열번호 40 및 41), H10(J)(서열번호 43 및 44), H11(K)(서열번호 46 및 47), H12(L)(서열번호 49 및 50), H13(M)(서열번호 52 내지 54), H14(N)(서열번호 55), H15(O)(서열번호 56) 및 H16(P)(서열번호 57)을 포함하는 다양한 인플루엔자 A 바이러스 아형의 균주 사이의 서열 정렬.
도 7: 단일클론 항체 12D1은 HA2의 긴 알파 나선과 반응한다. 헤마글루티닌 단량체(A). HA2의 아미노산 76 내지 130이 표시되어 있다. 293T 세포로부터의 용해물을 pCAGGs-GFP 또는 pCAGGs-GFP HA2 76 내지 130으로 형질감염시키고 mAb 12D1과 함께 항온처리하고 단백질 G 비드로 침전시켰다(B). 침전된 분획을 mAb 12D1 또는 토끼 항-GFP로 블롯팅하였다. 화살표는 76 내지 130의 GFP 융합 단백질의 위치를 표시한다. 항-마우스 HRP를 사용하여 침전된 분획물 내의 마우스 Ig 중쇄 및 경쇄와 12D1의 결합을 검출하였다. LAH-KLH 접합체 내의 12D1 에피토프의 구조적 완전성을 직접 결합 ELISA로 확인하였다(C). 헤마글루티닌 특이적 mAb 36A7은 HA2의 76 내지 130 영역 내에서 결합하지 않는다.
도 8: LAH-KLH 백신은 강력한 면역원으로서 작용하고, 유도된 혈청 항체는 다수의 헤마글루티닌 아형과 반응한다. 개별 마우스로부터의 혈청을 1차 면역화 및 2차 면역화 후 10일째 날에 수득하고 H3 또는 H1 헤마글루티닌과의 결합에 대해 ELISA로 시험하였다(A 및 B). 2차 면역화 후 20마리의 마우스들로부터 수득된 풀링된 혈청을 정제된 A/홍콩/1/1968(H3) 또는 A/USSR/90/1977(H1) 아형 인플루엔자 바이러스, 정제된 A/캘리포니아/04/09 헤마글루티닌(경막 도메인 부재) 또는 뉴캐슬병 바이러스와의 반응성에 대해 웨스턴 블롯으로 시험하였다(C). 풀링된 혈청을 H2, H5 또는 H7 HA에 대한 결합 활성에 대해 ELISA로 시험하였다(D). LAH-KLH 항혈청은 모든 3종의 HA 아형에 대한 상당한 결합 활성을 갖는다. 사용된 양성 혈청은 1군 인플루엔자 바이러스(H2 및 H5 ELISA의 경우) 또는 2군 바이러스(H7 ELISA의 경우)에 감염된 마우스로부터 수득되었다(문헌[Steel (2010) mBio 1(1):1-9] 참조). 상이한 헤마글루티닌 아형의 HA2로부터의 LAH 아미노산 76 내지 130(E). 흑색 강조부분/백색 문자: 모든 5종의 HA에서 보존된 잔기. 보존된 잔기는 하기 4개의 군들 중 하나에 속한다: (1) D/N/E/Q, (2) I/L/V/M, (3) K/R 및 (4) S/T. 회색 강조부분/백색 문자: 5종의 HA 중 4종 이하의 엄격한 보존도로 보존된 잔기(중간 근처에서 R 대 H는 전하를 보존하지만 크기에서는 변화됨). 백색 배경의 굵은 문자: 5종의 HA 중 3종 이하의 엄격도를 보이는 부분적 보존(중간에서 L 대 A, 또는 좌측 방향에서 F 대 M). 정상 마우스, A/홍콩/1/1968(H3)에 감염된 마우스 또는 LAH-KLH로 면역화된 마우스로부터의 혈청 풀(pool) 중의 헤마글루티닌 특이적 항체의 동종형(isotype) 프로파일(F). A/홍콩/1/1968로부터의 재조합 헤마글루티닌을 사용하여 ELISA용 플레이트를 코팅하였다.
도 9: LAH-KLH를 사용한 면역화는 생체 내에서 마우스를 보호한다. 2차 면역화 후 2주째 날에서, 마우스를 4 x 105 pfu의 X31(마우스-적응된 H3 인플루엔자 바이러스)(A 및 B), 500 pfu의 마우스 적응된 H1 바이러스 PR8(C 및 D), 또는 500 pfu의 H5 고도 병원성 조류 인플루엔자 바이러스(바이러스 헤마글루티닌 내의 폴리-염기성 절단 부위를 제거하도록 변형됨)(HAlo 바이러스)(E 및 F)로 공격하였다(문헌[Steel J, et al. (2009) J Virol 83(4):1742-1753] 참조). 각각의 실험군은 5마리의 BALB/c 마우스를 포함한다. 병원성의 차이로 인해, 생존은 X31(H3) 및 PR8(H1) 바이러스의 경우 20% 체중 손실로서 정의되었고 VN/2004 바이러스(H5)의 경우 30% 체중 손실로서 정의되었다.
도 10: 항체는 LAH-KLH를 사용한 면역화에 의해 제공된 보호를 매개한다. PR8에 감염된 마우스로부터 수득된 공격 전 혈청의 분석은 감염 후 1일 내지 3일째 날에 헤마글루티닌 특이적 항체 역가와 체중 증가 사이의 양의 상관관계를 보여준다(A). LAH-KLH로 면역화된 마우스, H1 또는 H3 바이러스에 감염된 마우스, 또는 KLH 단독으로 면역화된 마우스로부터 풀링된 혈청을 A/조지아/81, 계절성 인간 H3 바이러스 또는 H1 바이러스 PR8에 의한 감염 2시간 전에 마우스에게 전달하였다(B 및 C). 폐 역가를 감염 후 2일째 날에 평가하였다. TIV를 사용한 면역화 전 및 후에 수득된 인간 혈청을 LAH 폴리펩티드와의 결합 활성에 대해 평가하였다(D 및 E). 도시된 데이터는 1:3,000의 비로 희석된 혈청 샘플로부터 수득된 데이터이다. 대상체는 계절성 백신접종에 가변적으로 반응하였고(D), 혈청은 LAH 펩티드에 대한 최소 결합 활성을 나타낸다(E).
도 11: LAH-KLH 항혈청은 1군 헤마글루티닌 단백질 및 2군 헤마글루티닌 단백질 둘다와 반응하는 반면, HA2 항혈청은 2군 헤마글루티닌 단백질과만 반응한다. 2군 헤마글루티닌 단백질에 대한 항혈청의 활성(A, B 및 C). HA2 및 LAH-KLH 혈청 풀은 HK/68 H3 헤마글루티닌에 대해서는 필적할만한 결합 활성을 나타내지만 다른 2군 헤마글루티닌에 대해서는 상이한 결합 활성을 나타낸다. 1군 헤마글루티닌 단백질에 대한 항혈청의 활성(D, E, F, G 및 H). LAH-KLH 혈청 풀은 시험된 모든 1군 헤마글루티닌 단백질과 반응하는 반면, HA2 항혈청은 반응하지 않는다. 양성 대조군 혈청은 2군 H3 아형 X31 바이러스 또는 1군 H1 아형 PR8 바이러스에 감염된 마우스로부터 수득되었다.
용어
용어 "약" 또는 "대략적인"은 아미노산 위치에 대한 언급에서 사용된 경우 N-말단 방향 또는 C-말단 방향으로 서열 내의 특정 아미노산 위치, 또는 상기 아미노산 위치의 5개, 4개, 3개, 2개 또는 1개 잔기 내에 존재하는 임의의 아미노산을 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "약" 또는 "대략적으로"는 숫자와 함께 사용된 경우 언급된 숫자의 1%, 5% 또는 10% 내의 임의의 숫자를 의미한다.
용어 "아미노산" 또는 특정 아미노산에 대한 임의의 언급은 천연 단백질형성 아미노산 및 비-천연 아미노산, 예컨대, 아미노산 유사체를 포함하기 위한 것이다. 당업자는 이 정의가, 달리 구체적으로 명시되지 않은 한, 천연 단백질형성 (L)-아미노산, 이의 광학 (D)-이성질체, 화학적으로 변형된 아미노산(아미노산 유사체, 예컨대, 페니실아민(3-머캡토-D-발린)을 포함함), 천연 비-단백질형성 아미노산, 예컨대, 노르류신, 및 당업계에서 아미노산의 특성인 것으로 공지된 성질을 갖는 화학적으로 합성된 아미노산을 포함한다는 것을 인식할 것이다. 추가로, 용어 "아미노산 등가물"은 천연적으로 발생하는 아미노산의 구조로부터 벗어나 있지만 아미노산의 구조를 실질적으로 갖고 있어 펩티드 내에서 치환될 수 있고, 상기 펩티드가 이러한 치환에도 불구하고 그의 생물학적 활성을 보유할 수 있게 하는 화합물을 의미한다. 따라서, 예를 들면, 아미노산 등가물은 측쇄 변형 또는 치환을 갖는 아미노산을 포함할 수 있고, 관련 유기산, 아미드 등도 포함할 수 있다. 용어 "아미노산"은 아미노산 등가물을 포함하기 위한 것이다.
용어 "아미노산 동일성"은 한 쌍의 정렬된 아미노산 서열 사이의 동일성 또는 유사성 정도를 의미하고, 통상적으로 백분율로서 표시된다. 본원에서 사용된 바와 같이, 아미노산 서열에 대한 용어 "퍼센트 동일성", "퍼센트 동일한", "% 동일성" 및 "% 동일한"은 서열을 정렬하고 필요하다면 간극(gap)을 도입하여 최대 퍼센트 서열 상동성을 달성한 후 펩티드 내의 상응하는 아미노산 잔기와 동일한 후보 서열 내의 아미노산 잔기(즉, 상기 정렬에서 주어진 위치에서의 아미노산 잔기가 동일한 잔기임)의 백분율을 의미한다. 본원에서 사용된 바와 같이, 아미노산 서열에 대한 용어 "퍼센트 유사성", "퍼센트 유사한", "% 유사성" 및 "% 유사한"은 서열을 정렬하고 필요하다면 간극을 도입하여 최대 퍼센트 서열 상동성을 달성한 후 펩티드 내의 상응하는 아미노산 잔기와 유사한 후보 서열 내의 아미노산 잔기(즉, 상기 정렬에서 주어진 위치에서의 아미노산 치환은 이하에 논의된 바와 같이 보존적 치환임)의 백분율을 의미한다. 서열 동일성 및 유사성의 백분율을 포함하는 서열 상동성은 당업계에서 잘 공지되어 있는 서열 정렬 기법, 바람직하게는 이 목적을 위해 디자인된 컴퓨터 알고리즘을 이용하고 상기 컴퓨터 알고리즘 또는 이들을 함유하는 소프트웨어 팩키지의 디폴트 파라미터를 이용하여 측정한다. 컴퓨터 알고리즘 또는 이러한 알고리즘을 포함하는 소프트웨어 팩키지의 비-제한적 예는 하기 알고리즘 및 팩키지를 포함한다. BLAST 계열의 프로그램은 2개의 서열의 비교를 위해 이용되는 수학 알고리즘의 구체적인 비-제한적 예를 예시한다(예를 들면, 문헌[Karlin & Altschul, 1990, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2264-2268](문헌[Karlin & Altschul, 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5877]에서와 같이 변형됨), 문헌[Altschul et al., 1990, J. Mol. Biol. 215:403-410](NBLAST 및 XBLAST가 기재됨), 및 문헌[Altschul et al., 1997, Nucleic Acids Res. 25:3389-3402](Gapped BLAST 및 PSI-Blast가 기재됨) 참조). 또 다른 구체적인 예는 ALIGN 프로그램(버젼 2.0) 내로 도입되고 GCG 서열 정렬 소프트웨어 팩키지의 일부로서 입수될 수 있는 메이어스(Myers)와 밀러(Miller)(1988 CABIOS 4:11-17)의 알고리즘이다. 또한, 또 다른 구체적인 예는 위스콘신 서열 분석 팩키지의 일부로서 입수될 수 있는 FASTA 프로그램(문헌[Pearson W.R. and Lipman D.J., Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 85:2444-2448, 1988])이다. 추가 예는 2개의 서열 사이의 최적 단일 유사 영역을 찾기 위해 스미스(Smith)와 와터만(Waterman)(문헌[Advances in Applied Mathematics, 2:482-489, 1981])의 "국소 상동성" 알고리즘을 이용하고 비교되는 2개의 서열이 길이 면에서 유사하지 않은 경우에 바람직한 BESTFIT; 및 니들만(Neddleman)과 분슈(Wunsch)(문헌[J. Mol. Biol. 48:443-354, 1970])의 알고리즘에 따라 "최대 유사성"을 찾음으로써 2개의 서열을 정렬하고 2개의 서열이 거의 동일한 길이를 갖고 정렬이 전장에 걸쳐 예측되는 경우에 바람직한 GAP을 포함한다.
"보존적 치환"은 한 부류의 아미노산이 동일한 부류의 또 다른 아미노산으로 치환되는 것을 의미한다. 구체적인 실시양태에서, 보존적 치환은 폴리펩티드의 구조 또는 기능, 또는 이들 둘다를 변경시키지 않는다. 보존적 치환의 목적을 위한 아미노산의 부류는 소수성 아미노산(Met, Ala, Val, Leu, Ile), 중성 친수성 아미노산(Cys, Ser, Thr), 산성 아미노산(Asp, Glu), 염기성 아미노산(Asn, Gln, His, Lys, Arg), 입체구조 파괴자 아미노산(Gly, Pro) 및 방향족 아미노산(Trp, Tyr, Phe)을 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "코어 폴리펩티드"는 인플루엔자 헤마글루티닌 HA2 폴리펩티드의 한 영역에 상응하는 폴리펩티드 분절을 의미한다(즉, 본원에서 언급된 코어 폴리펩티드는 전체 인플루엔자 헤마글루티닌 HA2 폴리펩티드를 포함하지 않는다). 특정 실시양태에서, 상기 용어는 인플루엔자 헤마글루티닌 HA2 폴리펩티드의 긴 알파 나선 영역의 한 영역에 상응하는 폴리펩티드 분절을 의미한다. 코어 폴리펩티드의 예에 대해서는 단락 1.1.을 참조한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "단편"은 특정 폴리펩티드의 일부를 의미한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드(예를 들면, 코어 폴리펩티드)의 단편은 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개, 20개, 25개, 30개, 35개, 40개, 45개 또는 50개 이상의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드(예를 들면, 코어 폴리펩티드)의 단편은 8개 내지 15개, 8개 내지 20개, 8개 내지 25개, 8개 내지 30개, 8개 내지 40개, 10개 내지 15개, 10개 내지 20개, 10개 내지 25개, 10개 내지 30개, 10개 내지 40개, 10개 내지 45개, 10개 내지 50개, 15개 내지 20개, 15개 내지 25개, 15개 내지 30개, 15개 내지 35개, 15개 내지 40개, 15개 내지 45개, 15개 내지 50개, 25개 내지 30개, 25개 내지 40개, 25개 내지 45개 또는 25개 내지 50개 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "변형된 코어 폴리펩티드"는 생체 내에서 코어 폴리펩티드의 반감기를 연장하거나 증가시키기 위해 몇몇 방식으로 변형된 코어 폴리펩티드를 의미한다. 코어 폴리펩티드의 반감기를 연장하거나 증가시키기 위해 폴리펩티드를 변형하는 기법은 당업자에게 공지되어 있다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 D-아미노산에 의한 말단 L-아미노산의 치환, 상기 폴리펩티드의 페길화(pegylation), 상기 폴리펩티드의 C-말단의 아미드화, 또는 상기 폴리펩티드의 N-말단의 아세틸화에 의해 변형될 수 있다. 변형된 코어 폴리펩티드의 예에 대해서는 단락 1.2.를 참조한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "감기 폴리펩티드"는 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드를 포함하는 폴리펩티드를 의미한다. 일부 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 코어 폴리펩티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 변형된 코어 폴리펩티드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 페길화된 코어 폴리펩티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 그의 N-말단 및/또는 C-말단에서 페길화된다. 일부 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 그의 N-말단 및/또는 C-말단에서 아세틸화된 코어 폴리펩티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 그의 N-말단 및/또는 C-말단에서 아세틸화된다. 일부 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드 및 연결기(linker)를 포함한다. 일부 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 담체에 연결된 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드를 포함한다.
일부 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 1개, 2개 또는 3개 이상의 코어 폴리펩티드 및/또는 변형된 코어 폴리펩티드, 및 하기 (1) 내지 (6) 중 1개, 2개 또는 3개 이상 또는 전부를 포함한다: (1) 1개 또는 2개 이상의 T 세포 에피토프(예를 들면, CD8 T 세포 에피토프); (2) 1개 또는 2개 이상의 면역원성 폴리펩티드; (3) 감기 폴리펩티드의 다량체화를 촉진하는 폴리펩티드; (4) 감기 폴리펩티드의 정제 및//또는 가용성을 촉진하는 1개 또는 2개 이상의 단백질 태그; (5) 1개 또는 2개 이상의 담체; 및 (6) 1개 또는 2개 이상의 연결기.
본원에서 사용된 바와 같이, 요법을 대상체에게 투여하는 것과 관련하여 용어 "효과량"은 예방 및/또는 치료 효과를 나타내는 요법의 양을 의미한다. 일부 실시양태에서, 요법을 대상체에게 투여하는 것과 관련하여 "효과량"은 하기 효과 중 1종, 2종, 3종 또는 4종 이상의 효과를 달성하기에 충분한 요법의 양을 의미한다: (i) 인플루엔자 바이러스 감염, 또는 이와 관련된 질환 또는 증상의 심각도를 감소시키거나 개선하는 효과; (ii) 인플루엔자 바이러스 감염, 또는 이와 관련된 질환 또는 증상의 지속기간을 감소시키는 효과; (iii) 인플루엔자 바이러스 감염, 또는 이와 관련된 질환 또는 증상의 진행을 예방하는 효과; (iv) 인플루엔자 바이러스 감염, 또는 이와 관련된 질환 또는 증상의 퇴행을 유발하는 효과; (v) 인플루엔자 바이러스 감염, 또는 이와 관련된 질환 또는 증상의 발생 또는 발병을 예방하는 효과; (vi) 인플루엔자 바이러스 감염, 또는 이와 관련된 질환 또는 증상의의 재발을 예방하는 효과; (vii) 인플루엔자 바이러스가 한 세포로부터 또 다른 세포로, 한 조직으로부터 또 다른 조직으로, 또는 한 기관으로부터 또 다른 기관으로 퍼지는 것을 감소시키거나 예방하는 효과; (ix) 인플루엔자 바이러스가 한 대상체로부터 또 다른 대상체로 퍼지는 것을 예방하거나 감소시키는 효과; (x) 인플루엔자 바이러스 감염과 관련된 기관 기능부전을 감소시키는 효과; (xi) 대상체의 입원을 감소시키는 효과; (xii) 입원기간을 감소시키는 효과; (xiii) 인플루엔자 바이러스 감염 또는 이와 관련된 질환을 갖는 대상체의 생존을 증가시키는 효과; (xiv) 인플루엔자 바이러스 감염 또는 이와 관련된 질환을 제거하는 효과; (xv) 인플루엔자 바이러스 복제를 억제하거나 감소시키는 효과; (xvi) 숙주 세포 내로의 인플루엔자 바이러스의 도입을 억제하거나 감소시키는 효과; (xviii) 인플루엔자 바이러스 게놈의 복제를 억제하거나 감소시키는 효과; (xix) 인플루엔자 바이러스 단백질의 합성을 억제하거나 감소시키는 효과; (xx) 인플루엔자 바이러스 입자의 조립을 억제하거나 감소시키는 효과; (xxi) 숙주 세포로부터의 인플루엔자 바이러스 입자의 방출을 억제하거나 감소시키는 효과; (xxii) 인플루엔자 바이러스 역가를 감소시키는 효과; 및/또는 (xxiii) 또 다른 요법의 예방 또는 치료 효과를 향상시키거나 개선하는 효과.
일부 실시양태에서, 효과량은 인플루엔자 바이러스 질환으로부터 완전히 보호하지 못하지만 비치료된 대상체에 비해 인플루엔자 바이러스의 역가를 낮추거나 인플루엔자 바이러스의 수를 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 효과량은 비치료된 대상체에 비해 인플루엔자 바이러스의 역가를 0.5배, 1배, 2배, 4배, 6배, 8배, 10배, 15배, 20배, 25배, 50배, 75배, 100배, 125배, 150배, 175배, 200배, 300배, 400배, 500배, 750배 또는 1,000배 이상 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 효과량은 비치료된 대상체에 비해 인플루엔자 바이러스의 역가를 약 1 로그 이상, 약 2 로그 이상, 약 3 로그 이상, 약 4 로그 이상, 약 5 로그 이상, 약 6 로그 이상, 약 7 로그 이상, 약 8 로그 이상, 약 9 로그 이상, 약 10 로그 이상, 1 로그 내지 3 로그, 1 로그 내지 5 로그, 1 로그 내지 8 로그, 1 로그 내지 9 로그, 2 로그 내지 10 로그, 2 로그 내지 5 로그, 2 로그 내지 7 로그, 2 로그 내지 8 로그, 2 로그 내지 9 로그, 2 로그 내지 10 로그, 3 로그 내지 5 로그, 3 로그 내지 7 로그, 3 로그 내지 8 로그, 3 로그 내지 9 로그, 4 로그 내지 6 로그, 4 로그 내지 8 로그, 4 로그 내지 9 로그, 5 로그 내지 6 로그, 5 로그 내지 7 로그, 5 로그 내지 8 로그, 5 로그 내지 9 로그, 6 로그 내지 7 로그, 6 로그 내지 8 로그, 6 로그 내지 9 로그, 7 로그 내지 8 로그, 7 로그 내지 9 로그 또는 8 로그 내지 9 로그까지 감소시킨다. 인플루엔자 바이러스의 역가, 수 또는 총 존재량(burden)의 감소의 이점은 감염의 보다 덜 심각한 증상, 감염의 보다 적은 증상, 및 감염과 관련된 질환의 지속기간의 감소를 포함하나 이들로 한정되지 않는다.
본원에서 사용된 바와 같이, "헤마글루티닌" 및 "HA"는 당업자에게 공지되어 있는 임의의 헤마글루티닌을 의미한다. 일부 실시양태에서, 헤마글루티닌은 인플루엔자 헤마글루티닌, 예컨대, 인플루엔자 A 헤마글루티닌, 인플루엔자 B 헤마글루티닌 또는 인플루엔자 C 헤마글루티닌이다. 2개의 상이한 군, 즉 1군 및 2군에 속하는 인플루엔자 바이러스의 16종의 헤마글루티닌 아형이 현재 존재한다. 전형적인 헤마글루티닌은 신호 펩티드(본원에서 선택적 구성요소), 줄기(stem) 도메인, 구형 머리 도메인, 내강(luminal) 도메인(본원에서 선택적 구성요소), 경막 도메인(본원에서 선택적 구성요소) 및 세포질 도메인(본원에서 선택적 구성요소)을 포함하는, 당업자에게 공지되어 있는 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 헤마글루티닌은 단일 폴리펩티드 쇄, 예컨대, HA0로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 헤마글루티닌은 4차 결합으로 연결된 1개 초과의 폴리펩티드 쇄(예를 들면, HA1 및 HA2)로 이루어진다. 당업자는 미성숙 HA0가 절단되어 신호 펩티드(약 20개 아미노산)를 방출함으로써 성숙 헤마글루티닌 HAO를 생성할 것임을 인식할 것이다. 헤마글루티닌 HA0는 또 다른 부위에서 절단되어 HA1 폴리펩티드(구형 머리 도메인 및 줄기 도메인의 일부를 포함하는 약 320개 아미노산) 및 HA2 폴리펩티드(줄기 도메인의 나머지 부분, 내강 도메인, 경막 도메인 및 세포질 도메인을 포함하는 약 220개 아미노산)를 생성할 것이다. 일부 실시양태에서, 헤마글루티닌은 신호 펩티드, 경막 도메인 및 세포질 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 헤마글루티닌은 신호 펩티드를 결여한다(즉, 헤마글루티닌은 성숙 헤마글루티닌이다). 일부 실시양태에서, 헤마글루티닌은 경막 도메인 또는 세포질 도메인, 또는 이들 둘다를 결여한다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "헤마글루티닌" 및 "HA"는 번역 후 프로세싱, 예컨대, 신호 펩티드 절단, 이황화 결합 형성, 글리코실화(예를 들면, N-결합된 글리코실화), 프로테아제(protease) 절단 및 지질 변형(예를 들면, S-팔미토일화)에 의해 변형된 헤마글루티닌 폴리펩티드를 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "HA2"는 당업자에게 공지되어 있는 인플루엔자 헤마글루티닌 폴리펩티드의 HA2 도메인에 상응하는 폴리펩티드 도메인을 의미한다. 일부 실시양태에서, HA2는 줄기 도메인, 내강 도메인, 경막 도메인 및 세포질 도메인으로 이루어진다(예를 들면, 내용이 온전히 그대로 본원에 참고로 도입되는 문헌[Scheiffle et al., 2007, EMBO J. 16(18):5501-5508] 참조). 일부 실시양태에서, HA2는 줄기 도메인, 내강 도메인 및 경막 도메인으로 이루어진다. 일부 실시양태에서, HA2는 줄기 도메인 및 내강 도메인으로 구성되고, 이러한 실시양태에서, HA2는 가용성을 나타낼 것이다. 일부 실시양태에서, HA2는 줄기 도메인으로 구성되고, 이러한 실시양태에서, HA2는 가용성을 나타낼 것이다.
본원에서 사용된 바와 같이, 폴리펩티드, 핵산 또는 바이러스와 관련하여 용어 "이종"은 천연 상태에서 정상적으로 발견되지 않거나 천연 상태에서 관심 있는 폴리펩티드, 핵산 또는 바이러스와 정상적으로 결합되어 있지 않은 폴리펩티드, 핵산 또는 바이러스를 의미한다. 예를 들면, "이종 폴리펩티드"는 상이한 바이러스, 예를 들면, 상이한 인플루엔자 균주 또는 아형, 또는 관련없는 바이러스 또는 상이한 종으로부터 유래된 폴리펩티드를 의미할 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 2종 이상의 요법을 대상체에게 투여하는 것과 관련하여 용어 "조합되어"는 1종 초과의 요법(예를 들면, 1종 초과의 예방제 및/또는 치료제)의 사용을 의미한다. 용어 "와 함께 조합"의 사용은 요법이 대상체에게 투여되는 순서를 한정하지 않는다. 예를 들면, 제1 요법(예를 들면, 제1 예방제 또는 치료제)은 제2 요법을 대상체에게 투여하기 전(예를 들면, 5분, 15분, 30분, 45분, 1시간, 2시간, 4시간, 6시간, 12시간, 16시간, 24시간, 48시간, 72시간, 96시간, 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 8주 또는 12주 전)에, 제2 요법을 대상체에게 투여함과 동시에, 또는 제2 요법을 대상체에게 투여한 후(예를 들면, 5분, 15분, 30분, 45분, 1시간, 2시간, 4시간, 6시간, 12시간, 16시간, 24시간, 48시간, 72시간, 96시간, 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 8주 또는 12주 후)에 투여될 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "감염"은 세포 또는 대상체 내에서의 바이러스의 침윤, 증폭 및/또는 존재를 의미한다. 한 실시양태에서, 감염은 "활성" 감염, 즉 바이러스가 세포 또는 대상체 내에서 복제하는 감염이다. 이러한 감염은 바이러스가 이 바이러스에 의해 처음 감염된 세포, 조직 및/또는 기관으로부터 다른 세포, 조직 및/또는 기관으로 퍼지는 것을 특징으로 한다. 감염은 잠복 감염, 즉 바이러스가 복제하지 않는 감염일 수도 있다. 일부 실시양태에서, 감염은 세포 또는 대상체 내에서의 바이러스의 존재로부터 발생되거나, 바이러스에 의한 세포 또는 대상체의 침윤에 의해 발생된 병리학적 상태를 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "인플루엔자 바이러스 질환"은 세포 또는 대상체 내에서의 인플루엔자 바이러스(예를 들면, 인플루엔자 A 또는 B 바이러스)의 존재, 또는 인플루엔자 바이러스에 의한 세포 또는 대상체의 침윤으로부터 발생된 병리학적 상태를 의미한다. 특정 실시양태에서, 상기 용어는 인플루엔자 바이러스에 의해 유발된 호흡 질병을 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 어구 "IFN 결핍 시스템" 또는 "IFN 결핍 기질"은 1종 이상의 인터페론(IFN)(예를 들면, IFN-γ)을 생성하지 않거나 IFN을 낮은 수준으로 생성하고/하거나(즉, 동일한 조건 하에 IFN 전능 시스템에 비해 5% 내지 10%, 10% 내지 20%, 20% 내지 30%, 30% 내지 40%, 40% 내지 50%, 50% 내지 60%, 70% 내지 80%, 80% 내지 90% 또는 그 이상의 INF 발현 감소), 1종 이상의 IFN에 반응하지 않거나 보다 덜 효율적으로 반응하고/하거나, 1종 이상의 IFN에 의해 유도된 1종 이상의 항-바이러스 유전자의 활성을 결여하고 있는 시스템, 예를 들면, 세포, 세포주 및 동물, 예컨대, 돼지, 마우스, 닭, 칠면조, 토끼, 래트 등을 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 수치 용어 "로그"는 로그10을 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 어구 "감염 다중도(multiplicity of infection)" 또는 "MOI"는 감염된 세포 당 감염성 바이러스 입자의 평균 수이다. MOI는 첨가된 감염성 바이러스 입자의 수(첨가된 ml x PFU/ml)를 첨가된 세포의 수(첨가된 ml x 세포/ml)로 나눔으로써 측정된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "핵산"은 DNA 분자(예를 들면, cDNA 또는 게놈 DNA) 및 RNA 분자(예를 들면, mRNA), 및 뉴클레오티드 유사체를 사용하여 발생시킨 DNA 또는 RNA의 유사체를 포함하기 위한 것이다. 핵산은 단일 가닥 또는 이중 가닥일 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같이, 핵산은 천연 뉴클레오티드 염기(예를 들면, A, G, C 또는 T) 또는 변형된 뉴클레오티드 염기(6-다이메틸아미노 퓨린, 5-플루오로 시스틴, 2-피리돈, 7-데아자구아노신, 이노신 등)를 포함할 수 있다.
"폴리펩티드"는 당업자에게 공지되어 있는 바와 같이 아미드 결합에 의해 연결된 아미노산으로 이루어진 중합체를 의미한다. 폴리펩티드는 공유 아미드 결합에 의해 연결된 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 15개, 20개, 25개, 30개, 35개, 40개, 45개, 50개, 55개, 60개, 65개, 70개, 75개, 80개, 85개, 90개, 95개, 100개, 150개, 200개, 250개, 300개, 350개, 400개, 450개, 500개 또는 550개 이상의 아미노산으로 이루어진 중합체일 수 있다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 공유 아미드 결합에 의해 연결된 10개 내지 25개, 10개 내지 30개, 10개 내지 40개, 10개 내지 50개 또는 25개 내지 50개 아미노산으로 이루어진 중합체이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 공유 아미드 결합에 의해 연결된 100개 내지 150개, 100개 내지 200개, 100개 내지 250개, 100개 내지 300개, 100개 내지 350개, 100개 내지 400개, 100개 내지 450개, 100개 내지 500개, 100개 내지 550개, 100개 내지 600개, 100개 내지 650개, 100개 내지 700개 또는 100개 내지 750개 아미노산으로 이루어진 중합체이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 공유 아미드 결합에 의해 연결된 50개 내지 55개, 50개 내지 60개, 50개 내지 65개, 50개 내지 75개, 50개 내지 80개, 50개 내지 85개, 50개 내지 90개, 50개 내지 95개, 50개 내지 100개, 75개 내지 80개, 75개 내지 85개, 75개 내지 90개, 75개 내지 95개 또는 75개 내지 100개 아미노산으로 이루어진 중합체이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 공유 아미드 결합에 의해 연결된 55개 내지 60개, 55개 내지 65개, 55개 내지 70개, 55개 내지 75개, 55개 내지 80개, 55개 내지 85개, 55개 내지 90개, 55개 내지 95개, 55개 내지 100개 또는 60개 내지 75개 아미노산을 갖는다. 본원에서 사용된 바와 같이, 상기 용어는 공유 아미드 결합에 의해 연결된 단일 폴리펩티드 쇄를 의미할 수 있다. 또한, 상기 용어는 비공유 상호작용, 예컨대, 이온 접촉, 수소 결합, 반데르발스 접촉 및 소수성 접촉에 의해 연결된 다수의 폴리펩티드 쇄를 의미할 수 있다. 당업자는 상기 용어가 예를 들면, 번역 후 프로세싱, 예컨대, 신호 펩티드 절단, 이황화 결합 형성, 글리코실화(예를 들면, N-연결된 글리코실화), 프로테아제 절단 및 지질 변형(예를 들면, S-팔미토일화)에 의해 변형된 폴리펩티드를 포함한다는 것을 인식할 것이다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "정제된" 및 "단리된"은 천연 공급원, 예를 들면, 세포로부터 수득되는 (항체를 포함하는) 폴리펩티드와 관련하여 사용된 경우 상기 천연 공급원으로부터 유래된 오염 물질, 예를 들면, 토양 입자, 광물, 환경으로부터 유래된 화학물질, 및/또는 천연 공급원으로부터 유래된 세포 물질, 예컨대, 세포 데브리스(debris), 세포벽 물질, 막, 세포소기관, 대부분의 핵산, 탄수화물, 단백질, 및/또는 세포에 존재하는 지질(그러나, 이들로 한정되지 않음)을 실질적으로 갖지 않는 폴리펩티드를 의미한다. 따라서, 단리된 폴리펩티드는 (건조 중량을 기준으로) 약 30%, 20%, 10%, 5%, 2% 또는 1% 미만의 세포 물질 및/또는 오염 물질을 갖는 폴리펩티드의 제제를 포함한다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "정제된" 및 "단리된"은 화학적으로 합성된 (항체를 포함하는) 폴리펩티드와 관련하여 사용된 경우 폴리펩티드의 합성에 관여하는 화학 전구체 또는 다른 화학물질을 실질적으로 갖지 않는 폴리펩티드를 의미한다. 따라서, 폴리펩티드의 이러한 제제는 관심 있는 펩티드 이외에 (건조 중량을 기준으로) 약 30%, 20%, 10% 또는 5% 미만의 화학 전구체 또는 화합물을 갖는다. 특정 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 화학적으로 합성된다. 또 다른 특정 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 재조합적으로 발현된다. 또 다른 특정 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 단리된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 바이러스와 관련하여 용어 "복제", "바이러스성 복제" 및 "바이러스 복제"는 바이러스를 증식시키는 바이러스 생존 주기의 단계 중 1개 이상 또는 전부를 의미한다. 바이러스 생존 주기의 단계는 숙주 세포 표면에의 바이러스 부착, (예를 들면, 수용체 매개된 세포내이입(endocytosis) 또는 막 융합을 통한) 숙주 세포 내로의 침투 또는 도입, 탈외피(바이러스 캡시드(capsid)가 제거되고 바이러스 효소 또는 숙주 효소에 의해 분해되어 바이러스 게놈 핵산을 방출시키는 과정), 게놈 복제, 바이러스 메신저 RNA(mRNA)의 합성, 바이러스 단백질 합성, 게놈 복제를 위한 바이러스 리보핵단백질 결합체(ribonucleoprotein complex)의 조립, 바이러스 입자의 조립, 바이러스 단백질의 번역 후 변형, 용해 또는 출아(budding)에 의한 숙주 세포로부터의 방출, 및 파묻힌 바이러스 당단백질을 함유하는 인지질 외피의 획득을 포함하나 이들로 한정되지 않는다. 일부 실시양태에서, 용어 "복제", "바이러스성 복제" 및 "바이러스 복제"는 바이러스 게놈의 복제를 의미한다. 다른 실시양태에서, 용어 "복제", "바이러스성 복제" 및 "바이러스 복제"는 바이러스 단백질의 합성을 의미한다. 다른 실시양태에서, 용어 "복제", "바이러스성 복제" 및 "바이러스 복제"는 새로운 바이러스 입자의 합성을 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "대상체" 또는 "환자"는 동물(예를 들면, 조류, 파충류 및 포유동물)을 의미하기 위해 상호교환적으로 사용된다. 특정 실시양태에서, 대상체는 조류이다. 또 다른 실시양태에서, 대상체는 비영장류(예를 들면, 낙타, 당나귀, 얼룩말, 소, 돼지, 말, 염소, 양, 고양이, 개, 래트 및 마우스) 및 영장류(예를 들면, 원숭이, 침팬지 및 인간)를 포함하는 포유동물이다. 일부 실시양태에서, 대상체는 비-인간 동물이다. 일부 실시양태에서, 대상체는 농장동물 또는 애완동물(예를 들면, 개, 고양이, 말, 염소, 양, 돼지, 당나귀 또는 닭)이다. 또 다른 실시양태에서, 대상체는 인간이다. 또 다른 실시양태에서, 대상체는 인간 영아(infant)이다. 또 다른 실시양태에서, 대상체는 인간 소아이다. 또 다른 실시양태에서, 대상체는 성인이다. 또 다른 실시양태에서, 대상체는 노인이다. 또 다른 실시양태에서, 대상체는 인간 미숙아이다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "인간 미숙아"는 임신 37주 미만에서 출생한 인간 영아를 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "인간 영아"는 신생아 내지 1세 연령의 인간을 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "인간 유아(toddler)"는 1세 내지 3세 연령의 인간을 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "인간 소아"는 1세 내지 18세 연령의 인간을 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "성인"은 18세 이상 연령의 인간을 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "노인"은 65세 이상 연령의 인간을 의미한다.
용어 "3차 구조" 및 "4차 구조"는 당업자에 의해 이해되는 의미를 갖는다. 3차 구조는 단일 폴리펩티드 쇄의 3차원적 구조를 의미한다. 4차 구조는 다수의 폴리펩티드 쇄를 갖는 폴리펩티드의 3차원적 구조를 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "요법들" 및 "요법"은 바이러스 감염, 또는 이와 관련된 질환 또는 증상의 예방 또는 치료에 사용될 수 있는 임의의 프로토콜, 방법, 화합물, 조성물, 제제 및/또는 약제를 의미할 수 있다. 일부 실시양태에서, 용어 "요법들" 및 "요법"은 당업자에게 공지되어 있는, 바이러스 감염, 또는 이와 관련된 질환 또는 증상의 치료 또는 예방에 유용한 생물학적 요법, 지지 요법 및/또는 다른 요법을 의미한다. 일부 실시양태에서, 용어 "요법"은 감기 폴리펩티드를 코딩하는 핵산, 또는 감기 폴리펩티드를 코딩하는 상기 핵산을 포함하는 벡터 또는 조성물을 의미한다. 일부 실시양태에서, 용어 "요법"은 감기 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 항체를 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 인플루엔자 바이러스 질환을 예방하기 위해 요법을 대상체에게 투여하는 것과 관련하여 용어 "예방한다", "예방하는" 및 "예방"은 요법 또는 요법들의 조합의 투여로부터 발생된 하기 효과 중 1종 이상의 효과를 의미한다: (i) 인플루엔자 바이러스 질환 또는 이의 증상의 발생 또는 발병의 억제; (ii) 인플루엔자 바이러스 질환 또는 이와 관련된 증상의 재발의 억제; 및 (iii) 인플루엔자 바이러스 감염 및/또는 복제의 감소 또는 억제.
본원에서 사용된 바와 같이, 인플루엔자 바이러스 감염을 예방하기 위해 요법을 대상체에게 투여하는 것과 관련하여 용어 "예방한다", "예방하는" 및 "예방"은 인플루엔자 바이러스 감염과 관련된 1종 이상의 증상의 발병 또는 발생의 억제 또는 감소를 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 인플루엔자 바이러스 질환을 치료하기 위해 요법을 대상체에게 투여하는 것과 관련하여 용어 "치료한다", "치료" 및 "치료하는"은 요법 또는 요법들의 조합의 유리한 효과 또는 치료 효과를 수득하는 것을 의미한다. 특정 실시양태에서, 이러한 용어는 요법 또는 요법들의 조합의 투여로부터 발생된 하기 효과 중 1종, 2종, 3종, 4종 또는 5종 이상의 효과를 의미한다: (i) 인플루엔자 바이러스 감염, 또는 이와 관련된 질환 또는 증상의 심각도의 감소 또는 개선; (ii) 인플루엔자 바이러스 감염, 또는 이와 관련된 질환 또는 증상의 지속기간의 감소; (iii) 인플루엔자 바이러스 감염, 또는 이와 관련된 질환 또는 증상의 퇴행; (iv) 인플루엔자 바이러스의 역가 감소; (v) 인플루엔자 바이러스 감염 또는 이와 관련된 질환과 관련된 기관 기능부전의 감소; (vi) 대상체의 입원 감소; (vii) 입원기간의 감소; (viii) 대상체의 생존의 증가; (ix) 인플루엔자 바이러스 감염, 또는 이와 관련된 질환 또는 증상의 제거; (x) 인플루엔자 바이러스 감염, 또는 이와 관련된 질환 또는 증상의 진행의 억제; (xi) 인플루엔자 바이러스가 세포, 조직, 기관 또는 대상체로부터 또 다른 세포, 조직, 기관 또는 대상체로 퍼지는 것의 예방; (xii) 숙주 세포 내로의 인플루엔자 바이러스의 도입 억제 또는 감소; (xiii) 인플루엔자 바이러스 게놈의 복제 억제 또는 감소; (xv) 숙주 세포로부터의 인플루엔자 바이러스 입자의 방출 억제 또는 감소; 및/또는 (xvi) 또 다른 요법의 치료 효과의 향상 또는 개선.
본원에서 사용된 바와 같이, 인플루엔자 바이러스 감염을 치료하기 위해 요법을 대상체에게 투여하는 것과 관련하여 용어 "치료한다", "치료" 및 "치료하는"은 (i) 인플루엔자 바이러스 복제의 감소; (ii) 인플루엔자 바이러스 역가의 감소; (iii) 인플루엔자 바이러스가 한 세포, 기관 또는 조직으로부터 또 다른 세포, 기관 또는 조직으로 퍼지는 것의 감소; (iv) 인플루엔자 바이러스 감염과 관련된 증상의 심각도 및/또는 수의 감소; (v) 인플루엔자 바이러스 감염과 관련된 증상의 지속기간의 감소; 및/또는 (vi) 인플루엔자 바이러스 감염의 진행의 억제 또는 감소.
본원에서 사용된 바와 같이, 일부 실시양태에서, 바이러스와 관련하여 용어 "야생형"은 우세하게 존재하고 천연적으로 유행하고 질환의 전형적인 발생을 일으키는 바이러스의 유형을 의미한다. 다른 실시양태에서, 바이러스와 관련하여 용어 "야생형"은 모(parental) 바이러스를 의미한다.
1. 감기 폴리펩티드
본원은 감기 폴리펩티드를 제공한다. 임의의 특정 작용이론에 구속받고자 하는 것은 아니지만, 상기 감기 폴리펩티드는 단일 아형 또는 2종, 3종 또는 4종 이상의 상이한 아형로부터의 다수의 인플루엔자 바이러스 균주와 교차반응할 수 있고 바람직하게는 이들 바이러스 균주로부터 보호할 수 있는 면역 반응을 발생시키기 위해 HA2 헤마글루티닌 아단위의 1개 이상의 상대적으로 보존된 항원성 영역(예를 들면, HA2 헤마글루티닌 아단위의 긴 알파 나선)을 대상체의 면역 시스템에 제시하기에 유용하다고 생각된다.
일부 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드를 포함한다.
일부 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 그의 N-말단 및/또는 C-말단에서 아세틸화된다. 일부 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 페길화된다.
일부 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 1개, 2개 또는 3개 이상의 코어 폴리펩티드 및/또는 변형된 폴리펩티드를 포함한다.
일부 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 1개, 2개 또는 3개 이상의 코어 폴리펩티드 또는 변형된 폴리펩티드, 및 1개, 2개 또는 3개 이상의 T 세포 에피토프를 포함한다.
일부 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 1개, 2개 또는 3개 이상의 코어 폴리펩티드 또는 변형된 폴리펩티드, 및 1개, 2개 또는 3개 이상의 면역원성 폴리펩티드를 포함한다.
일부 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 1개, 2개 또는 3개 이상의 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드, 및 다량체화(감기 폴리펩티드의 삼량체화)를 촉진하는 폴리펩티드를 포함한다.
일부 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 1개, 2개 또는 3개 이상의 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드, 및 하기 1) 내지 5) 중 1개, 2개 또는 3개 이상 또는 전부를 포함한다: 1) 1개, 2개 또는 3개 이상의 담체; 2) 1개, 2개 또는 3개 이상의 T 세포 에피토프(예를 들면, CD8 T 세포 에피토프); 3) 1개, 2개 또는 3개 이상의 면역원성 폴리펩티드(예를 들면, 살모넬라(Salmonella) 플라겔린(flagellin), 단락 1.6. 참조); 4) 1개, 2개 또는 3개 이상의 단백질 태그(예를 들면, His-태그 또는 FLAG-태그, 단락 1.3. 참조); 및 5) 감기 폴리펩티드의 다량체화를 촉진하는 1개 이상의 폴리펩티드(예를 들면, T4 폴돈(foldon) 도메인, 단락 1.8. 참조).
일부 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 연결기 폴리펩티드에 연결된 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 담체 단백질에 연결된 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드를 포함한다.
1.1. 코어 폴리펩티드
일부 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 코어 폴리펩티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 HA2 헤마글루티닌 아단위 긴 알파 나선의 1개 이상의 상대적으로 보존된 항원성 영역을 포함한다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 단일 아형으로부터의 다수의 인플루엔자 바이러스 균주, 또는 2종, 3종 또는 4종 이상의 아형로부터의 다수의 인플루엔자 바이러스 균주와 교차반응할 수 있고 바람직하게는 상기 균주로부터 보호할 수 있는 면역 반응을 대상체에서 발생시킬 수 있다. 단일 아형으로부터의 다수의 인플루엔자 바이러스 균주, 또는 2종, 3종 또는 4종 이상의 아형로부터의 다수의 인플루엔자 바이러스 균주와 교차반응할 수 있고 바람직하게는 상기 균주로부터 보호할 수 있는 면역 반응을 대상체에서 발생시키는 코어 폴리펩티드의 능력은 당업자에게 공지되어 있고 본원에 기재되어 있는 방법을 이용하여 평가할 수 있다(하기 단락 13. 및 6. 참조). 또 다른 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 단일 아형으로부터의 다수의 인플루엔자 바이러스 균주, 또는 2종, 3종 또는 4종 이상의 아형로부터의 다수의 인플루엔자 바이러스 균주를 중화시킬 수 있는 면역 반응을 대상체에서 발생시킬 수 있다. 단일 아형으로부터의 다수의 인플루엔자 바이러스 균주, 또는 2종, 3종 또는 4종 이상의 아형로부터의 다수의 인플루엔자 바이러스 균주를 중화시킬 수 있는 면역 반응을 발생시키는 코어 폴리펩티드의 능력은 당업자에게 공지되어 있고 본원에 기재되어 있는 방법을 이용하여 평가할 수 있다(하기 단락 13. 및 6. 참조). 또 다른 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 단일 아형으로부터의 다수의 인플루엔자 바이러스 균주, 또는 2종, 3종 또는 4종 이상의 아형로부터의 다수의 인플루엔자 바이러스 균주의 복제를 억제하거나 감소시킬 수 있는 면역 반응을 대상체에서 발생시킬 수 있다. 단일 아형으로부터의 다수의 인플루엔자 바이러스 균주, 또는 2종, 3종 또는 4종 이상의 아형로부터의 다수의 인플루엔자 바이러스 균주의 복제를 억제하거나 감소시킬 수 있는 면역 반응을 발생시키는 코어 폴리펩티드의 능력은 당업자에게 공지되어 있고 본원에 기재되어 있는 방법을 이용하여 평가할 수 있다(하기 단락 13. 및 6. 참조).
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 인플루엔자 바이러스의 HA2 헤마글루티닌 아단위의 긴 알파 나선을 포함한다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 인플루엔자 바이러스의 HA2 헤마글루티닌 아단위의 긴 알파 나선의 일부를 포함한다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 HA2의 긴 알파 나선의 일부를 포함하고, 이때 상기 일부의 천연 입체구조는 유지된다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 HA2의 긴 알파 나선의 일부를 포함하고, 이때 상기 일부는 천연 알파 나선 입체구조를 유지한다. 당업자는 당업계에서 공지되어 있는 임의의 방법, 예를 들면, NMR, X-선 결정학적 방법, 또는 2차 구조 예측 방법, 예컨대, 원이색법(circular dichroism)을 이용하여 상기 알파 나선 입체구조가 유지되는지를 확인할 수 있다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 전장 인플루엔자 바이러스 헤마글루티닌의 아미노산 서열을 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 25개 내지 50개, 50개 내지 55개, 50개 내지 60개, 50개 내지 65개, 50개 내지 70개, 50개 내지 75개, 50개 내지 80개, 50개 내지 85개, 50개 내지 90개, 50개 내지 95개, 50개 내지 100개, 100개 내지 150개, 100개 내지 200개 또는 100개 내지 250개 아미노산을 포함하거나 이들로 이루어진다. 다른 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 50개 내지 55개, 50개 내지 60개, 50개 내지 65개, 50개 내지 75개, 50개 내지 80개, 50개 내지 85개, 50개 내지 90개, 50개 내지 95개, 50개 내지 100개, 75개 내지 80개, 75개 내지 85개, 75개 내지 90개, 75개 내지 95개 또는 75개 내지 100개 아미노산을 포함하거나 이들로 이루어진다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 헤마글루티닌 폴리펩티드의 아미노산 1(±5) 내지 184(±5), 16(±5) 내지 184(±5), 30(±5) 내지 184(±5), 31(±5) 내지 184(±5), 46(±5) 내지 184(±5), 61(±5) 내지 184(±5), 70(±5) 내지 110(±5), 76(±5) 내지 106(±5), 76(±5) 내지 130(±5) 또는 76(±5) 내지 184(±5)를 포함하거나 이들로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 헤마글루티닌 폴리펩티드의 아미노산 1(±5) 내지 184(±5), 16(±5) 내지 184(±5), 30(±5) 내지 184(±5), 31(±5) 내지 184(±5), 46(±5) 내지 184(±5), 61(±5) 내지 184(±5), 70(±5) 내지 184(±5), 70(±5) 내지 110(±5), 76(±5) 내지 106(±5), 76(±5) 내지 130(±5) 또는 76(±5) 내지 184(±5)를 포함하거나 이들로 구성되고, 이때 상기 코어 폴리펩티드는 300개, 275개, 250개, 200개, 190개, 185개 또는 180개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 헤마글루티닌 폴리펩티드의 아미노산 76 내지 106을 포함하거나 이들로 이루어진다.
또 다른 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 헤마글루티닌 폴리펩티드의 아미노산 76 내지 130을 포함한다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 헤마글루티닌 폴리펩티드의 아미노산 76 내지 130을 포함하거나 이들로 구성되고, 이때 코어 폴리펩티드는 300개, 275개, 250개, 200개, 190개, 185개, 180개, 175개, 150개, 145개, 130개, 125개, 100개 또는 75개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는다. 또 다른 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 헤마글루티닌 폴리펩티드의 아미노산 76 내지 130으로 이루어진다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 헤마글루티닌 폴리펩티드의 아미노산 70(±5) 내지 125(±5), 80(±5) 내지 115(±5), 90(±5) 내지 105(±5) 또는 76(±5) 내지 95(±5)를 포함하거나 이들로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 헤마글루티닌 폴리펩티드의 아미노산 70(±5) 내지 125(±5), 80(±5) 내지 115(±5), 90(±5) 내지 105(±5) 또는 76(±5) 내지 95(±5)를 포함하거나 이들로 구성되고, 이때 상기 코어 폴리펩티드는 300개, 275개, 250개, 200개, 190개, 185개, 180개, 175개, 150개, 145개, 130개, 125개, 100개 또는 75개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 헤마글루티닌 폴리펩티드의 아미노산 70(±5) 내지 130(±5), 70(±5) 내지 120(±5), 70(±5) 내지 110(±5), 70(±5) 내지 100(±5) 또는 70(±5) 내지 95(±5)를 포함하거나 이들로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 헤마글루티닌 폴리펩티드의 아미노산 70(±5) 내지 130(±5), 70(±5) 내지 120(±5), 70(±5) 내지 110(±5), 70(±5) 내지 100(±5) 또는 70(±5) 내지 95(±5)를 포함하거나 이들로 구성되고, 이때 상기 코어 폴리펩티드는 300개, 275개, 250개, 200개, 190개, 185개, 180개, 175개, 150개, 145개, 130개, 125개, 100개 또는 75개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 헤마글루티닌 폴리펩티드의 아미노산 70(±5) 내지 130(±5), 80(±5) 내지 130(±5), 90(±5) 내지 130(±5), 100(±5) 내지 130(±5) 또는 110(±5) 내지 130(±5)을 포함하거나 이들로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 헤마글루티닌 폴리펩티드의 아미노산 70(±5) 내지 130(±5), 80(±5) 내지 130(±5), 90(±5) 내지 130(±5), 100(±5) 내지 130(±5) 또는 110(±5) 내지 130(±5)을 포함하거나 이들로 구성되고, 이때 상기 코어 폴리펩티드는 300개, 275개, 250개, 200개, 190개, 185개, 180개, 175개, 150개, 145개, 130개, 125개, 100개 또는 75개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 헤마글루티닌 폴리펩티드의 아미노산 1 내지 184, 10(±5) 내지 184, 20(±5) 내지 184, 30(±5) 내지 184, 40(±5) 내지 184, 50(±5) 내지 184, 60(±5) 내지 184, 70(±5) 내지 184 또는 80(±5) 내지 184를 포함하거나 이들로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 헤마글루티닌 폴리펩티드의 아미노산 1 내지 184, 10(±5) 내지 184, 20(±5) 내지 184, 30(±5) 내지 184, 40(±5) 내지 184, 50(±5) 내지 184, 60(±5) 내지 184, 70(±5) 내지 184 또는 80(±5) 내지 184를 포함하거나 이들로 구성되고, 이때 상기 코어 폴리펩티드는 300개, 275개, 250개, 200개, 190개, 185개, 180개, 175개, 150개, 145개, 130개, 125개, 100개 또는 75개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 인플루엔자 바이러스 균주 A/홍콩/1/1968(H3)의 HA2 헤마글루티닌 아단위의 긴 알파 나선 또는 이의 단편(즉, 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 아미노산 76 내지 130 또는 이의 단편)을 포함하거나 상기 긴 알파 나선 또는 이의 단편으로 이루어진다(즉, 상기 코어 폴리펩티드는 하기 아미노산 서열을 포함하거나 하기 아미노산 서열로 이루어진다: RIQDLEKYVEDTKIDLWSYNAELLVALENQHTIDLTDSEMNKLFEKTRRQLRENA(서열번호 2) 또는 이의 단편). 일부 실시양태에서, 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 코어 폴리펩티드는 56개 이상의 아미노산을 포함한다. 서열번호 2에 상응하는 코어 폴리펩티드는 N-말단, C-말단 또는 이들 둘다에서 변형될 수 있다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 N-말단에서 변형된다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 C-말단에서 변형된다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 N-말단에서 아세틸화된다. 또 다른 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 C-말단에서 연결기, 예컨대, FLAG-태그에 연결된다. 또 다른 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드의 C-말단은 연결기, 예를 들면, FLAG-태그, 및 시스테인 잔기(예를 들면, 상기 코어 폴리펩티드를 담체(예를 들면, KLH)에 커플링/연결시키는 데에 사용될 수 있음)에 연결된다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 아미노산 79 내지 134 또는 이의 단편에 상응하는, 인플루엔자 바이러스 균주 A/홍콩/1/1968(H3)의 헤마글루티닌 아단위의 한 영역 또는 이의 단편을 포함하거나 상기 영역 또는 이의 단편으로 이루어진다(즉, 코어 폴리펩티드는 하기 아미노산 서열을 포함하거나 하기 아미노산 서열로 이루어진다: LEKYVEDTKIDLWSYNAELLVALENQHTIDLTDSEMNKLFEKTRRQLRENAEDMG 또는 이의 단편).
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 FLAG-태그 및 C-말단 시스테인 잔기에 연결되고, FLAG-태그 및 시스테인 잔기를 갖는 이러한 폴리펩티드는 하기 아미노산 서열을 포함하거나 하기 아미노산 서열로 이루어진다 RIQDLEKYVEDTKIDLWSYNAELLVALENQHTIDLTDSEMNKLFEKTRRQLRENADYKDDDDKC(서열번호 1). 일부 실시양태에서, 이러한 폴리펩티드는 N-말단에서 아세틸화된다.
일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 서열번호 1 또는 서열번호 2의 아미노산 서열과 50% 이상의 아미노산 서열 동일성을 공유하고, 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 인플루엔자 바이러스 균주 A/홍콩/1/1968(H3)의 아미노산 76 내지 130의 천연 입체구조를 유지한다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 서열번호 1 또는 서열번호 2의 아미노산 서열과 60% 이상의 아미노산 서열 동일성을 공유하고, 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 인플루엔자 바이러스 균주 A/홍콩/1/1968(H3)의 아미노산 76 내지 130의 천연 입체구조를 유지한다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 서열번호 1 또는 서열번호 2의 아미노산 서열과 65% 이상의 아미노산 서열 동일성을 공유하고, 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 인플루엔자 바이러스 균주 A/홍콩/1/1968(H3)의 아미노산 76 내지 130의 천연 입체구조를 유지한다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 서열번호 1 또는 서열번호 2의 아미노산 서열과 70% 이상의 아미노산 서열 동일성을 공유하고, 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 인플루엔자 바이러스 균주 A/홍콩/1/1968(H3)의 아미노산 76 내지 130의 천연 입체구조를 유지한다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 서열번호 1 또는 서열번호 2의 아미노산 서열과 75% 이상의 아미노산 서열 동일성을 공유하고 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 인플루엔자 바이러스 균주 A/홍콩/1/1968(H3)의 아미노산 76 내지 130의 천연 입체구조를 유지한다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 서열번호 1 또는 서열번호 2의 아미노산 서열과 80% 이상의 아미노산 서열 동일성을 공유하고, 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 인플루엔자 바이러스 균주 A/홍콩/1/1968(H3)의 아미노산 76 내지 130의 천연 입체구조를 유지한다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 서열번호 1 또는 서열번호 2의 아미노산 서열과 85% 이상의 아미노산 서열 동일성을 공유하고, 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 인플루엔자 바이러스 균주 A/홍콩/1/1968(H3)의 아미노산 76 내지 130의 천연 입체구조를 유지한다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 서열번호 1 또는 서열번호 2의 아미노산 서열과 90% 이상의 아미노산 서열 동일성을 공유하고, 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 인플루엔자 바이러스 균주 A/홍콩/1/1968(H3)의 아미노산 76 내지 130의 천연 입체구조를 유지한다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 서열번호 1 또는 서열번호 2의 아미노산 서열과 95% 이상의 아미노산 서열 동일성을 공유하고, 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 인플루엔자 바이러스 균주 A/홍콩/1/1968(H3)의 아미노산 76 내지 130의 천연 입체구조를 유지한다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 서열번호 1 또는 서열번호 2의 아미노산 서열과 98% 이상의 아미노산 서열 동일성을 공유하고, 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 인플루엔자 바이러스 균주 A/홍콩/1/1968(H3)의 아미노산 76 내지 130의 천연 입체구조를 유지한다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 서열번호 1 또는 서열번호 2의 아미노산 서열과 99% 이상의 아미노산 서열 동일성을 공유하고, 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 인플루엔자 바이러스 균주 A/홍콩/1/1968(H3)의 아미노산 76 내지 130의 천연 입체구조를 유지한다.
일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 서열번호 1 또는 서열번호 2의 아미노산 서열과 50% 이상의 아미노산 서열 유사성을 공유하고, 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 인플루엔자 바이러스 균주 A/홍콩/1/1968(H3)의 아미노산 76 내지 130의 천연 입체구조를 유지한다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 서열번호 1 또는 서열번호 2의 아미노산 서열과 60% 이상의 아미노산 서열 유사성을 공유하고, 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 인플루엔자 바이러스 균주 A/홍콩/1/1968(H3)의 아미노산 76 내지 130의 천연 입체구조를 유지한다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 서열번호 1 또는 서열번호 2의 아미노산 서열과 65% 이상의 아미노산 서열 유사성을 공유하고, 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 인플루엔자 바이러스 균주 A/홍콩/1/1968(H3)의 아미노산 76 내지 130의 천연 입체구조를 유지한다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 서열번호 1 또는 서열번호 2의 아미노산 서열과 70% 이상의 아미노산 서열 유사성을 공유하고, 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 인플루엔자 바이러스 균주 A/홍콩/1/1968(H3)의 아미노산 76 내지 130의 천연 입체구조를 유지한다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 서열번호 1 또는 서열번호 2의 아미노산 서열과 75% 이상의 아미노산 서열 유사성을 공유하고, 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 인플루엔자 바이러스 균주 A/홍콩/1/1968(H3)의 아미노산 76 내지 130의 천연 입체구조를 유지한다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 서열번호 1 또는 서열번호 2의 아미노산 서열과 80% 이상의 아미노산 서열 유사성을 공유하고, 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 인플루엔자 바이러스 균주 A/홍콩/1/1968(H3)의 아미노산 76 내지 130의 천연 입체구조를 유지한다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 서열번호 1 또는 서열번호 2의 아미노산 서열과 85% 이상의 아미노산 서열 유사성을 공유하고, 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 인플루엔자 바이러스 균주 A/홍콩/1/1968(H3)의 아미노산 76 내지 130의 천연 입체구조를 유지한다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 서열번호 1 또는 서열번호 2의 아미노산 서열과 90% 이상의 아미노산 서열 유사성을 공유하고, 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 인플루엔자 바이러스 균주 A/홍콩/1/1968(H3)의 아미노산 76 내지 130의 천연 입체구조를 유지한다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 서열번호 1 또는 서열번호 2의 아미노산 서열과 95% 이상의 아미노산 서열 유사성을 공유하고, 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 인플루엔자 바이러스 균주 A/홍콩/1/1968(H3)의 아미노산 76 내지 130의 천연 입체구조를 유지한다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 서열번호 1 또는 서열번호 2의 아미노산 서열과 98% 이상의 아미노산 서열 유사성을 공유하고, 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 인플루엔자 바이러스 균주 A/홍콩/1/1968(H3)의 아미노산 76 내지 130의 천연 입체구조를 유지한다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 서열번호 1 또는 서열번호 2의 아미노산 서열과 99% 이상의 아미노산 서열 유사성을 공유하고, 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 인플루엔자 바이러스 균주 A/홍콩/1/1968(H3)의 아미노산 76 내지 130의 천연 입체구조를 유지한다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 인플루엔자 바이러스 균주 A/홍콩/1/1968(H3)의 HA2 헤마글루티닌 아단위의 긴 알파 나선(즉, 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 아미노산 76 내지 130)을 포함하지 않는다(즉, 상기 코어 폴리펩티드는 하기 아미노산 서열을 포함하지 않는다: RIQDLEKYVEDTKIDLWSYNAELLVALENQHTIDLTDSEMNKLFEKTRRQLRENA(서열번호 2)).
일부 실시양태에서, 상기 코어 폴리펩티드는 FLAG-태그, 및 시스테인 잔기(예를 들면, 상기 코어 폴리펩티드를 담체(예를 들면, KLH)에 커플링/연결시키는 데에 사용될 수 있음)에 연결되지 않는다. 일부 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 코어 폴리펩티드는 하기 아미노산 서열을 포함하지 않는다:
RIQDLEKYVEDTKIDLWSYNAELLVALENQHTIDLTDSEMNKLFEKTRRQLRENADYKDDDDKC(서열번호 1)
상기 서열에서, FLAG-태그는 아미노산 서열 DYKDDDDK로 표시된다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 N-말단에서 아세틸화되지 않는다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 헤마글루티닌 폴리펩티드의 아미노산 70(±5) 내지 125(±5)를 포함하지 않는다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 헤마글루티닌 폴리펩티드의 아미노산 80(±5) 내지 115(±5)를 포함하지 않는다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 헤마글루티닌 폴리펩티드의 아미노산 90(±5) 내지 105(±5)를 포함하지 않는다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 헤마글루티닌 폴리펩티드의 아미노산 76(±5) 내지 95(±5)를 포함하지 않는다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 헤마글루티닌 폴리펩티드의 아미노산 70(±5) 내지 130(±5)을 포함하지 않는다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 헤마글루티닌 폴리펩티드의 아미노산 70(±5) 내지 120(±5)을 포함하지 않는다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 헤마글루티닌 폴리펩티드의 아미노산 70(±5) 내지 110(±5)을 포함하지 않는다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 헤마글루티닌 폴리펩티드의 아미노산 70(±5) 내지 100(±5)을 포함하지 않는다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 헤마글루티닌 폴리펩티드의 아미노산 70(±5) 내지 95(±5)를 포함하지 않는다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 헤마글루티닌 폴리펩티드의 아미노산 70(±5) 내지 130(±5)을 포함하지 않는다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 헤마글루티닌 폴리펩티드의 아미노산 80(±5) 내지 130(±5)을 포함하지 않는다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 헤마글루티닌 폴리펩티드의 아미노산 90(±5) 내지 130(±5)을 포함하지 않는다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 헤마글루티닌 폴리펩티드의 아미노산 100(±5) 내지 130(±5)을 포함하지 않는다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 헤마글루티닌 폴리펩티드의 아미노산 110(±5) 내지 130(±5)을 포함하지 않는다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 헤마글루티닌 폴리펩티드의 아미노산 1 내지 184를 포함하지 않는다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 헤마글루티닌 폴리펩티드의 아미노산 10(±5) 내지 184를 포함하지 않는다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 헤마글루티닌 폴리펩티드의 아미노산 20(±5) 내지 184를 포함하지 않는다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 헤마글루티닌 폴리펩티드의 아미노산 30(±5) 내지 184를 포함하지 않는다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 헤마글루티닌 폴리펩티드의 아미노산 40(±5) 내지 184를 포함하지 않는다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 헤마글루티닌 폴리펩티드의 아미노산 50(±5) 내지 184를 포함하지 않는다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 헤마글루티닌 폴리펩티드의 아미노산 60(±5) 내지 184를 포함하지 않는다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 헤마글루티닌 폴리펩티드의 아미노산 70(±5) 내지 184를 포함하지 않는다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 헤마글루티닌 폴리펩티드의 아미노산 80(±5) 내지 184를 포함하지 않는다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 헤마글루티닌 폴리펩티드의 아미노산 1(±5) 내지 184(±5)를 포함하지 않는다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 헤마글루티닌 폴리펩티드의 아미노산 16(±5) 내지 184(±5)를 포함하지 않는다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 헤마글루티닌 폴리펩티드의 아미노산 30(±5) 내지 184(±5)를 포함하지 않는다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 헤마글루티닌 폴리펩티드의 아미노산 31(±5) 내지 184(±5)를 포함하지 않는다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 헤마글루티닌 폴리펩티드의 아미노산 46(±5) 내지 184(±5)를 포함하지 않는다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 헤마글루티닌 폴리펩티드의 아미노산 61(±5) 내지 184(±5)를 포함하지 않는다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 헤마글루티닌 폴리펩티드의 아미노산 70(±5) 내지 184(±5)를 포함하지 않는다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 헤마글루티닌 폴리펩티드의 아미노산 76(±5) 내지 106(±5)을 포함하지 않는다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 헤마글루티닌 폴리펩티드의 아미노산 76(±5) 내지 184(±5)를 포함하지 않는다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 하기 아미노산 서열을 포함하는 일반적인 코어 폴리펩티드이다:
X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10DX11X12X13X14X15WX16YX17AELLVX18X19ENX20X21TX22DX23X24DSX25X26X27X28LX29X30X31X32X33X34QLX35X36NX37(서열번호 3)
상기 서열에서, X1은 친수성 아미노산이고; X2는 소수성 아미노산이고; X3은 친수성 아미노산이고; X4는 친수성 아미노산이고; X5는 소수성 아미노산이고; X6은 N, E 또는 I이고; X7은 친수성 아미노산이고; X8은 K, R, Y 또는 W이고; X9는 M, V 또는 T이고; X10은 친수성 잔기이고; X11은 A, G, T 또는 S이고; X12는 F, I, K, L 또는 M이고; X13은 L, I 또는 T이고; X14는 친수성 산성 아미노산이고; X15는 소수성 아미노산이고; X16은 친수성 아미노산이고; 아미노산 X17은 친수성 아미노산이고; X18은 소수성 아미노산이고; X19는 소수성 아미노산이고; X20은 친수성 아미노산이고; X21은 친수성 염기성 아미노산이고; X22는 소수성 아미노산이고; X23은 소수성 아미노산이고; X24는 H, T 또는 A이고; X25는 친수성 아미노산이고; X26은 소수성 아미노산이고; X27은 친수성 아미노산이고; X28은 친수성 아미노산이고; X29는 소수성 아미노산이고; X30은 친수성 산성 아미노산이고; X31은 친수성 염기성 아미노산이고; X32는 T 또는 V이고; X33은 친수성 염기성 아미노산이고; X34는 K, L, M, S 또는 R이고; X35는 친수성 염기성 아미노산이고; X36은 친수성 아미노산이고; X37은 소수성 아미노산이다.
특정 실시양태에서, X1은 R 또는 Q이고; X2는 L, M 또는 I이고; X3은 E, D, Q 또는 G이고; X4는 D 또는 N이고; X5는 L, M 또는 V이고; X6은 N, E 또는 I이고; X7은 K 또는 N이고; X8은 K, R, Y 또는 W이고; X9는 M, V 또는 T이고; X10은 E, D, K 또는 R이고; X11은 A, G, T 또는 S이고; X12는 F, I, K, L 또는 M이고; X13은 L, I 또는 T이고; X14는 D 또는 E이고; X15는 V, I 또는 L이고; X16은 S 또는 T이고; X17은 N 또는 Q이고; X18은 A 또는 L이고; X19는 L 또는 M이고; X20은 E 또는 Q이고; X21은 R 또는 H이고; X22는 L 또는 I이고; X23은 F, V, M, Y 또는 L이고; X24는 H, T 또는 A이고; X25는 N 또는 E이고; X26은 V 또는 M이고; X27은 K, N, R 또는 S이고; X28은 K 또는 N이고; X29는 Y 또는 F이고; X30은 D 또는 E이고; X31은 K 또는 R이고; X32는 T 또는 V이고; X33은 K 또는 R이고; X34는 K, L, M, S 또는 R이고; X35는 K 또는 R이고; X36은 D, N, Q 또는 E이고; X37은 A 또는 V이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 N-말단에서 아세틸화된다.
일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 일반적인 코어 폴리펩티드의 단편이다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 일반적인 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 일반적인 코어 폴리펩티드의 N-말단 또는 C-말단으로부터 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10(±5)개, 15(±5)개, 20(±5)개, 25(±5)개, 30(±5)개 또는 35(±5)개 아미노산을 결여하고 있다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 일반적인 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 그의 C-말단으로부터 24(±5)개 아미노산을 결여하고 있다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 일반적인 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 일반적인 코어 폴리펩티드의 N-말단으로부터 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10(±5)개, 15(±5)개, 20(±5)개 또는 25(±5)개 아미노산을 결여하고, 일반적인 코어 폴리펩티드의 C-말단으로부터 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10(±5)개, 15(±5)개, 20(±5)개 또는 25(±5)개 아미노산을 결여하고 있다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 갖는다.
일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 전장 인플루엔자 바이러스 HA가 아닌 일반적인 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 51개 내지 300개, 51개 내지 275개, 51개 내지 250개, 51개 내지 225개, 51개 내지 200개, 51개 내지 175개, 51개 내지 150개, 51개 내지 125개, 51개 내지 100개, 51개 내지 75개, 15개 내지 50개, 20개 내지 50개, 25개 내지 50개, 15개 내지 37개, 15개 내지 35개, 20개 내지 37개, 20개 내지 35개, 15개 내지 30개, 20개 내지 30개 또는 20개 내지 25개 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 일반적인 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 500개, 450개, 400개, 350개, 300개, 275개, 250개, 225개, 200개, 175개, 150개, 125개, 100개, 95개, 90개, 85개, 80개, 75개, 70개, 65개, 60개, 55개, 50개, 45개, 40개, 35개, 30개 또는 25개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 일반적인 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 15개, 20개, 25개, 30개 또는 35개 이상의 아미노산 내지 150개, 125개, 95개, 90개, 85개, 80개, 75개, 65개, 60개, 55개, 50개, 45개 또는 40개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 일반적인 코어 폴리펩티드이다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 일반적인 코어 폴리펩티드의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 일반적인 코어 폴리펩티드의 N-말단 또는 C-말단에 부착된 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10(±5)개 아미노산을 갖는 일반적인 코어 폴리펩티드를 포함하고, 상기 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 유지한다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 일반적인 코어 폴리펩티드의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 일반적인 코어 폴리펩티드의 N-말단에 부착된 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10(±5)개 아미노산, 및 일반적인 코어 폴리펩티드의 C-말단에 부착된 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10(±5)개 아미노산을 갖는 일반적인 코어 폴리펩티드를 포함하고, 상기 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 유지한다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 하기 아미노산 서열을 포함하거나 하기 아미노산 서열로 이루어진 컨센서스(consensus) 코어 폴리펩티드이다:
RIENLNKKX1EDGFLDVWTYNAELLVLMENERTLDX2HDSNVKNLYEKVRX3QLRX4NA(서열번호 4)
상기 서열에서, X1은 M, V 또는 T이고; X2는 소수성 아미노산이고; X3은 L, M, S, K 또는 R이고; X4는 친수성 아미노산이다. 특정 실시양태에서, X1은 M, V 또는 T이고; X2는 F, Y 또는 L이고; X3은 L, M, S, K 또는 R이고; X4는 D, N 또는 E이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 N-말단에서 아세틸화된다.
일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 컨센서스 코어 폴리펩티드의 단편이다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 컨센서스 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 컨센서스 코어 폴리펩티드의 N-말단 또는 C-말단으로부터 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10(±5)개, 15(±5)개, 20(±5)개, 25(±5)개, 30(±5)개 또는 35(±5)개 아미노산을 결여하고 있다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 컨센서스 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 그의 C-말단으로부터 24(±5)개 아미노산을 결여하고 있다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 컨센서스 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 컨센서스 코어 폴리펩티드의 N-말단 및 C-말단 둘다로부터 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개 이상의 아미노산을 결여하고 있다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 갖는다.
일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 전장 인플루엔자 바이러스 HA가 아닌 컨센서스 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 51개 내지 300개, 51개 내지 275개, 51개 내지 250개, 51개 내지 225개, 51개 내지 200개, 51개 내지 175개, 51개 내지 150개, 51개 내지 125개, 51개 내지 100개, 51개 내지 75개, 15개 내지 50개, 20개 내지 50개, 25개 내지 50개, 15개 내지 37개, 15개 내지 35개, 20개 내지 37개, 20개 내지 35개, 15개 내지 30개, 20개 내지 30개 또는 20개 내지 25개 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 컨센서스 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 500개, 450개, 400개, 350개, 300개, 275개, 250개, 225개, 200개, 175개, 150개, 125개, 100개, 95개, 90개, 85개, 80개, 75개, 70개, 65개, 60개, 55개, 50개, 45개, 40개, 35개, 30개 또는 25개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 컨센서스 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 15개, 20개, 25개, 30개 또는 35개 이상의 아미노산 내지 150개, 125개, 95개, 90개, 85개, 80개, 75개, 65개, 60개, 55개, 50개, 45개 또는 40개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 컨센서스 코어 폴리펩티드이다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 컨센서스 코어 폴리펩티드의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 컨센서스 코어 폴리펩티드의 N-말단 또는 C-말단에 부착된 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10(±5)개 아미노산을 갖는 컨센서스 코어 폴리펩티드를 포함하고, 상기 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 유지한다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 컨센서스 코어 폴리펩티드의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 컨센서스 코어 폴리펩티드의 N-말단 및 C-말단 둘다에 부착된 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10(±5)개 아미노산을 갖는 컨센서스 코어 폴리펩티드를 포함하고, 상기 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 유지한다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 하기 아미노산 서열을 포함하거나 하기 아미노산 서열로 이루어진 1군 코어 폴리펩티드이다:
RX1ENLNKKX2X3DGFLDX4WTYNAELLVLX5ENERTLDX6HDSNVKNLYX7KVRX8QLX9X10NX11(서열번호 5)
상기 서열에서, X1은 소수성 아미노산이고; X2는 소수성 아미노산이고; X3은 친수성 아미노산이고; X4는 소수성 아미노산이고; X5는 소수성 아미노산이고; X6은 소수성 산성 아미노산이고; X7은 친수성 산성 아미노산이고; X8은 L, M 또는 S이고; X9는 친수성 염기성 아미노산이고; X10은 친수성 아미노산이고; X11은 소수성 아미노산이다. 특정 실시양태에서, X1은 L 또는 I이고; X2는 M 또는 V이고; X3은 E 또는 D이고; X4는 V 또는 I이고; X5는 M 또는 L이고; X6은 F 또는 Y이고; X7은 D 또는 E이고; X8은 L, M 또는 S이고; X9는 R 또는 K이고; X10은 D 또는 N이고; X11은 A 또는 V이다. 특정 실시양태에서, 이 코어 폴리펩티드를 사용하여 1군 헤마글루티닌 아형에 대한 면역 반응을 유도할 수 있다. 일부 실시양태에서, 유도된 면역 반응은 2종 이상의 인플루엔자 바이러스 1군 헤마글루티닌 아형을 중화시킨다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 N-말단에서 아세틸화된다.
일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 1군 코어 폴리펩티드의 단편이다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 1군 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 1군 코어 폴리펩티드의 N-말단 또는 C-말단으로부터 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10(±5)개, 15(±5)개, 20(±5)개, 25(±5)개, 30(±5)개 또는 35(±5)개 아미노산을 결여하고 있다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 1군 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 그의 C-말단으로부터 24(±5)개 아미노산을 결여하고 있다. 특정 실시양태에서, 상기 코어 폴리펩티드는 1군 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 1군 코어 폴리펩티드의 N-말단 및 C-말단 둘다로부터 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개 이상의 아미노산을 결여하고 있다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 갖는다.
일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 전장 인플루엔자 바이러스 HA가 아닌 1군 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 51개 내지 300개, 51개 내지 275개, 51개 내지 250개, 51개 내지 225개, 51개 내지 200개, 51개 내지 175개, 51개 내지 150개, 51개 내지 125개, 51개 내지 100개, 51개 내지 75개, 15개 내지 50개, 20개 내지 50개, 25개 내지 50개, 15개 내지 37개, 15개 내지 35개, 20개 내지 37개, 20개 내지 35개, 15개 내지 30개, 20개 내지 30개 또는 20개 내지 25개 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 1군 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 500개, 450개, 400개, 350개, 300개, 275개, 250개, 225개, 200개, 175개, 150개, 125개, 100개, 95개, 90개, 85개, 80개, 75개, 70개, 65개, 60개, 55개, 50개, 45개, 40개, 35개, 30개 또는 25개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 1군 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 15개, 20개, 25개, 30개 또는 35개 이상의 아미노산 내지 150개, 125개, 95개, 90개, 85개, 80개, 75개, 65개, 60개, 55개, 50개, 45개 또는 40개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 1군 코어 폴리펩티드이다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 1군 코어 폴리펩티드의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 1군 코어 폴리펩티드의 N-말단 또는 C-말단에 부착된 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10(±5)개 아미노산을 갖는 1군 코어 폴리펩티드를 포함하고, 상기 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 유지한다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 1군 코어 폴리펩티드의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 1군 코어 폴리펩티드의 N-말단 및 C-말단 둘다에 부착된 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10(±5)개 아미노산을 갖는 1군 코어 폴리펩티드를 포함하고, 상기 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 유지한다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 하기 아미노산 서열을 포함하거나 하기 아미노산 서열로 이루어진 2군 코어 폴리펩티드이다:
X1IX2X3X4X5X6X7X8X9DX10X11X12X13X14WSYNAELLVAX15ENQHTIDLX16DSEMNKLX17E X18X19X20RQLRENA(서열번호 6)
상기 서열에서, X1은 친수성 아미노산이고; X2는 친수성 아미노산이고; X3은 친수성 아미노산이고; X4는 소수성 아미노산이고; X5는 E 또는 I이고; X6은 친수성 아미노산이고; X7은 소수성 아미노산이고; X8은 V 또는 T이고; X9는 친수성 아미노산이고; X10은 친수성 아미노산이고; X11은 K 또는 M이고; X12는 I 또는 T이고; X13은 친수성 산성 아미노산이고; X14는 소수성 아미노산이고; X15는 소수성 아미노산이고; X16은 T 또는 A이고; X17은 소수성 아미노산이고; X18은 친수성 염기성 아미노산이고; X19는 T 또는 V이고; X20은 친수성 염기성 아미노산이다. 특정 실시양태에서, X1은 R 또는 Q이고; X2는 Q 또는 G이고; X3은 D 또는 N이고; X4는 L 또는 V이고; X5는 E 또는 I이고; X6은 K 또는 N이고; X7은 Y 또는 W이고; X8은 V 또는 T이고; X9는 E 또는 R이고; X10은 T 또는 S이고; X11은 K 또는 M이고; X12는 I 또는 T이고; X13은 D 또는 E이고; X14는 L 또는 V이고; X15는 L 또는 M이고; X16은 T 또는 A이고; X17은 F 또는 Y이고; X18은 K 또는 R이고; X19는 T 또는 V이고; X20은 K 또는 R이다. 특정 실시양태에서, 이 코어 폴리펩티드를 사용하여 2군 헤마글루티닌 아형에 대한 면역 반응을 유도할 수 있다. 일부 실시양태에서, 유도된 면역 반응은 2종 이상의 인플루엔자 바이러스 2군 헤마글루티닌 아형을 중화시킨다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 N-말단에서 아세틸화된다.
일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 2군 코어 폴리펩티드의 단편이다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 2군 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 2군 코어 폴리펩티드의 N-말단 또는 C-말단으로부터 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10(±5)개, 15(±5)개, 20(±5)개, 25(±5)개, 30(±5)개 또는 35(±5)개 아미노산을 결여하고 있다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 2군 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 그의 C-말단으로부터 24(±5)개 아미노산을 결여하고 있다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 2군 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 2군 코어 폴리펩티드의 N-말단 및 C-말단 둘다로부터 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개 이상의 아미노산을 결여하고 있다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 갖는다.
일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 전장 인플루엔자 바이러스 HA가 아닌 2군 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 51개 내지 511개, 51개 내지 500개, 51개 내지 450개, 51개 내지 400개, 51개 내지 350개, 51개 내지 300개, 51개 내지 275개, 51개 내지 250개, 51개 내지 225개, 51개 내지 200개, 51개 내지 175개, 51개 내지 150개, 51개 내지 125개, 51개 내지 100개, 51개 내지 75개, 15개 내지 50개, 20개 내지 50개, 25개 내지 50개, 15개 내지 37개, 15개 내지 35개, 20개 내지 37개, 20개 내지 35개, 15개 내지 30개, 20개 내지 30개 또는 20개 내지 25개 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 2군 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 500개, 450개, 400개, 350개, 300개, 275개, 250개, 225개, 200개, 175개, 150개, 125개, 100개, 95개, 90개, 85개, 80개, 75개, 70개, 65개, 60개, 55개, 50개, 45개, 40개, 35개, 30개 또는 25개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 2군 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 15개, 20개, 25개, 30개 또는 35개 이상의 아미노산 내지 150개, 125개, 95개, 90개, 85개, 80개, 75개, 65개, 60개, 55개, 50개, 45개 또는 40개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 2군 코어 폴리펩티드이다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 2군 코어 폴리펩티드의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 2군 코어 폴리펩티드의 N-말단 또는 C-말단에 부착된 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10(±5)개 아미노산을 갖는 2군 코어 폴리펩티드를 포함하고, 상기 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 유지한다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 2군 코어 폴리펩티드의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 2군 코어 폴리펩티드의 N-말단 및 C-말단 둘다에 부착된 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10(±5)개 아미노산을 갖는 2군 코어 폴리펩티드를 포함하고, 상기 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 유지한다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 하기 아미노산 서열을 포함하거나 하기 아미노산 서열로 이루어진 H1 코어 폴리펩티드이다:
RX1ENLNKKVDDGFX2DIWTYNAELLVLLENERTLDX3HDSNVX4NLYEKVX5SQLKNNA(서열번호 7)
상기 서열에서, X1은 소수성 아미노산이고; X2는 소수성 아미노산이고; X3은 소수성 아미노산이고; X4는 친수성 염기성 아미노산이고; X5는 친수성 염기성 아미노산이다. 특정 실시양태에서, X1은 M 또는 I이고; X2는 L 또는 I이고; X3은 F 또는 Y이고; X4는 K 또는 R이고; X5는 K 또는 R이다. 이 서열은 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 H1 아형 헤마글루티닌의 아미노산 76 내지 130에 상응한다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 N-말단에서 아세틸화된다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 도 6A(서열번호 8 내지 11)에 나타낸 아미노산 서열 중 어느 한 아미노산 서열 또는 이의 단편을 포함한다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 N-말단에서 아세틸화된다. 특정 실시양태에서, 이 코어 폴리펩티드를 사용하여 아형 H1의 인플루엔자 바이러스 균주들에 대한 면역 반응을 유도할 수 있다. 일부 실시양태에서, 유도된 면역 반응은 인플루엔자 바이러스 아형 H1의 균주들을 중화시킨다.
일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H1 코어 폴리펩티드의 단편이다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H1 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 H1 코어 폴리펩티드의 N-말단 또는 C-말단으로부터 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10(±5)개, 15(±5)개, 20(±5)개, 25(±5)개, 30(±5)개 또는 35(±5)개 아미노산을 결여하고 있다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H1 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 그의 C-말단으로부터 24(±5)개 아미노산을 결여하고 있다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H1 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 H1 코어 폴리펩티드의 N-말단 및 C-말단 둘다로부터 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개 이상의 아미노산을 결여하고 있다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 갖는다.
일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 전장 인플루엔자 바이러스 HA가 아닌 H1 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 51개 내지 300개, 51개 내지 275개, 51개 내지 250개, 51개 내지 225개, 51개 내지 200개, 51개 내지 175개, 51개 내지 150개, 51개 내지 125개, 51개 내지 100개, 51개 내지 75개, 15개 내지 50개, 20개 내지 50개, 25개 내지 50개, 15개 내지 37개, 15개 내지 35개, 20개 내지 37개, 20개 내지 35개, 15개 내지 30개, 20개 내지 30개 또는 20개 내지 25개 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 H1 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 500개, 450개, 400개, 350개, 300개, 275개, 250개, 225개, 200개, 175개, 150개, 125개, 100개, 95개, 90개, 85개, 80개, 75개, 70개, 65개, 60개, 55개, 50개, 45개, 40개, 35개, 30개 또는 25개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 H1 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 15개, 20개, 25개, 30개 또는 35개 이상의 아미노산 내지 150개, 125개, 95개, 90개, 85개, 80개, 75개, 65개, 60개, 55개, 50개, 45개 또는 40개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 H1 폴리펩티드이다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H1 코어 폴리펩티드의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 H1 코어 폴리펩티드의 N-말단 또는 C-말단에 부착된 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10(±5)개 아미노산을 갖는 H1 코어 폴리펩티드를 포함하고, 상기 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 유지한다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H1 코어 폴리펩티드의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 H1 코어 폴리펩티드의 N-말단 및 C-말단 둘다에 부착된 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10(±5)개 아미노산을 갖는 H1 코어 폴리펩티드를 포함하고, 상기 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 유지한다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 하기 아미노산 서열을 포함하거나 하기 아미노산 서열로 이루어진 H2 코어 폴리펩티드이다:
RLENLNKKMEDGFLDVWTYNAELLVLMENERTLDFHDSNVKNLYXKVRMQLRDNV(서열번호 12)
상기 서열에서, X는 친수성 산성 아미노산이다. 특정 실시양태에서, X는 D 또는 E이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 N-말단에서 아세틸화된다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 도 6B(서열번호 13 또는 14)에 나타낸 아미노산 서열 중 어느 한 아미노산 서열 또는 이의 단편을 포함한다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 N-말단에서 아세틸화된다. 특정 실시양태에서, 이 코어 폴리펩티드를 사용하여 아형 H2의 인플루엔자 바이러스 균주들에 대한 면역 반응을 유도할 수 있다. 일부 실시양태에서, 유도된 면역 반응은 인플루엔자 바이러스 아형 H2의 균주들을 중화시킨다.
일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H2 코어 폴리펩티드의 단편이다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H2 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 H2 코어 폴리펩티드의 N-말단 또는 C-말단으로부터 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10(±5)개, 15(±5)개, 20(±5)개, 25(±5)개, 30(±5)개 또는 35(±5)개 아미노산을 결여하고 있다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H2 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 그의 C-말단으로부터 24(±5)개 아미노산을 결여하고 있다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H2 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 H2 코어 폴리펩티드의 N-말단 및 C-말단 둘다로부터 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개 이상의 아미노산을 결여하고 있다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 갖는다.
일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 전장 인플루엔자 바이러스 HA가 아닌 H2 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 51개 내지 300개, 51개 내지 275개, 51개 내지 250개, 51개 내지 225개, 51개 내지 200개, 51개 내지 175개, 51개 내지 150개, 51개 내지 125개, 51개 내지 100개, 51개 내지 75개, 15개 내지 50개, 20개 내지 50개, 25개 내지 50개, 15개 내지 37개, 15개 내지 35개, 20개 내지 37개, 20개 내지 35개, 15개 내지 30개, 20개 내지 30개 또는 20개 내지 25개 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 H2 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 500개, 450개, 400개, 350개, 300개, 275개, 250개, 225개, 200개, 175개, 150개, 125개, 100개, 95개, 90개, 85개, 80개, 75개, 70개, 65개, 60개, 55개, 50개, 45개, 40개, 35개, 30개 또는 25개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 H2 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 15개, 20개, 25개, 30개 또는 35개 이상의 아미노산 내지 150개, 125개, 95개, 90개, 85개, 80개, 75개, 65개, 60개, 55개, 50개, 45개 또는 40개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 H2 폴리펩티드이다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H2 코어 폴리펩티드의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 H2 코어 폴리펩티드의 N-말단 또는 C-말단에 부착된 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10(±5)개 아미노산을 갖는 H2 코어 폴리펩티드를 포함하고, 상기 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 유지한다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H2 코어 폴리펩티드의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 H2 코어 폴리펩티드의 N-말단 및 C-말단 둘다에 부착된 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10(±5)개 아미노산을 갖는 H2 코어 폴리펩티드를 포함하고, 상기 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 유지한다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 하기 아미노산 서열을 포함하거나 하기 아미노산 서열로 이루어진 H3 코어 폴리펩티드이다:
RIQDLEKYVEDTKIDLWSYNAELLVALENQHTIDLTDSEMNKLFEX1TX2X3QLRENA(서열번호 15)
상기 서열에서, X1은 친수성 염기성 아미노산이고; X2는 친수성 염기성 아미노산이고; X3은 친수성 염기성 아미노산이다. 특정 실시양태에서, X1은 K 또는 R이고; X2는 K 또는 R이고; X3은 K 또는 R이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 N-말단에서 아세틸화된다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 도 6C(서열번호 16 내지 18)에 나타낸 아미노산 서열 중 어느 한 아미노산 서열 또는 이의 단편을 포함한다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 N-말단에서 아세틸화된다. 특정 실시양태에서, 이 코어 폴리펩티드를 사용하여 아형 H3의 인플루엔자 바이러스 균주들에 대한 면역 반응을 유도할 수 있다. 일부 실시양태에서, 유도된 면역 반응은 인플루엔자 바이러스 아형 H3의 균주들을 중화시킨다.
일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H3 코어 폴리펩티드의 단편이다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H3 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 H3 코어 폴리펩티드의 N-말단 또는 C-말단으로부터 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10(±5)개, 15(±5)개, 20(±5)개, 25(±5)개, 30(±5)개 또는 35(±5)개 아미노산을 결여하고 있다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H3 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 그의 C-말단으로부터 24(±5)개 아미노산을 결여하고 있다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H3 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 H3 코어 폴리펩티드의 N-말단 및 C-말단 둘다로부터 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개 이상의 아미노산을 결여하고 있다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 갖는다.
일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 전장 인플루엔자 바이러스 HA가 아닌 H3 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 51개 내지 300개, 51개 내지 275개, 51개 내지 250개, 51개 내지 225개, 51개 내지 200개, 51개 내지 175개, 51개 내지 150개, 51개 내지 125개, 51개 내지 100개, 51개 내지 75개, 15개 내지 50개, 20개 내지 50개, 25개 내지 50개, 15개 내지 37개, 15개 내지 35개, 20개 내지 37개, 20개 내지 35개, 15개 내지 30개, 20개 내지 30개 또는 20개 내지 25개 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 H3 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 500개, 450개, 400개, 350개, 300개, 275개, 250개, 225개, 200개, 175개, 150개, 125개, 100개, 95개, 90개, 85개, 80개, 75개, 70개, 65개, 60개, 55개, 50개, 45개, 40개, 35개, 30개 또는 25개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 H3 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 15개, 20개, 25개, 30개 또는 35개 이상의 아미노산 내지 150개, 125개, 95개, 90개, 85개, 80개, 75개, 65개, 60개, 55개, 50개, 45개 또는 40개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 H3 폴리펩티드이다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H3 코어 폴리펩티드의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 H3 코어 폴리펩티드의 N-말단 또는 C-말단에 부착된 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10(±5)개 아미노산을 갖는 H3 코어 폴리펩티드를 포함하고, 상기 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 유지한다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H3 코어 폴리펩티드의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 H3 코어 폴리펩티드의 N-말단 및 C-말단 둘다에 부착된 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10(±5)개 아미노산을 갖는 H3 코어 폴리펩티드를 포함하고, 상기 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 유지한다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 하기 아미노산 서열을 포함하거나 하기 아미노산 서열로 이루어진 H4 코어 폴리펩티드이다:
RIQDLEKYVEDTKIDLWSYNAELLVALENQHTIDVTDSEMNKLFERVRX1QLRENA(서열번호 19)
상기 서열에서, X1은 친수성 염기성 아미노산이다. 특정 실시양태에서, X1은 R 또는 H이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 N-말단에서 아세틸화된다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 도 6F(서열번호 20 및 21)에 나타낸 아미노산 서열 중 어느 한 아미노산 서열 또는 이의 단편을 포함한다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 N-말단에서 아세틸화된다. 특정 실시양태에서, 이 코어 폴리펩티드를 사용하여 아형 H4의 인플루엔자 바이러스 균주들에 대한 면역 반응을 유도할 수 있다. 일부 실시양태에서, 유도된 면역 반응은 인플루엔자 바이러스 아형 H4의 균주들을 중화시킨다.
일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H4 코어 폴리펩티드의 단편이다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H4 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 H4 코어 폴리펩티드의 N-말단 또는 C-말단으로부터 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10(±5)개, 15(±5)개, 20(±5)개, 25(±5)개, 30(±5)개 또는 35(±5)개 아미노산을 결여하고 있다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H4 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 그의 C-말단으로부터 24(±5)개 아미노산을 결여하고 있다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H4 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 H4 코어 폴리펩티드의 N-말단 및 C-말단 둘다로부터 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개 이상의 아미노산을 결여하고 있다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 갖는다.
일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 전장 인플루엔자 바이러스 HA가 아닌 H4 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 51개 내지 300개, 51개 내지 275개, 51개 내지 250개, 51개 내지 225개, 51개 내지 200개, 51개 내지 175개, 51개 내지 150개, 51개 내지 125개, 51개 내지 100개, 51개 내지 75개, 15개 내지 50개, 20개 내지 50개, 25개 내지 50개, 15개 내지 37개, 15개 내지 35개, 20개 내지 37개, 20개 내지 35개, 15개 내지 30개, 20개 내지 30개 또는 20개 내지 25개 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 H4 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 500개, 450개, 400개, 350개, 300개, 275개, 250개, 225개, 200개, 175개, 150개, 125개, 100개, 95개, 90개, 85개, 80개, 75개, 70개, 65개, 60개, 55개, 50개, 45개, 40개, 35개, 30개 또는 25개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 H4 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 15개, 20개, 25개, 30개 또는 35개 이상의 아미노산 내지 150개, 125개, 95개, 90개, 85개, 80개, 75개, 65개, 60개, 55개, 50개, 45개 또는 40개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 H4 폴리펩티드이다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H4 코어 폴리펩티드의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 H4 코어 폴리펩티드의 N-말단 또는 C-말단에 부착된 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10(±5)개 아미노산을 갖는 H4 코어 폴리펩티드를 포함하고, 상기 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 유지한다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H4 코어 폴리펩티드의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 H4 코어 폴리펩티드의 N-말단 및 C-말단 둘다에 부착된 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10(±5)개 아미노산을 갖는 H4 코어 폴리펩티드를 포함하고, 상기 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 유지한다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 하기 아미노산 서열을 포함하거나 하기 아미노산 서열로 이루어진 H5 코어 폴리펩티드이다:
RIENLNKKMEDGFLDVWTYNAELLVLMENERTLDFHDSNVKNLYDKVRLQLRDNA(서열번호 22). 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 N-말단에서 아세틸화된다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 도 6D(서열번호 22)에 나타낸 아미노산 서열 중 어느 한 아미노산 서열 또는 이의 단편을 포함한다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 N-말단에서 아세틸화된다. 특정 실시양태에서, 이 코어 폴리펩티드를 사용하여 아형 H5의 인플루엔자 바이러스 균주들에 대한 면역 반응을 유도할 수 있다. 일부 실시양태에서, 유도된 면역 반응은 인플루엔자 바이러스 아형 H5의 균주들을 중화시킨다.
일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H5 코어 폴리펩티드의 단편이다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H5 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 H5 코어 폴리펩티드의 N-말단 또는 C-말단으로부터 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10(±5)개, 15(±5)개, 20(±5)개, 25(±5)개, 30(±5)개 또는 35(±5)개 아미노산을 결여하고 있다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H5 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 그의 C-말단으로부터 24(±5)개 아미노산을 결여하고 있다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H5 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 H5 코어 폴리펩티드의 N-말단 및 C-말단 둘다로부터 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개 이상의 아미노산을 결여하고 있다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 갖는다.
일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 전장 인플루엔자 바이러스 HA가 아닌 H5 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 51개 내지 511개, 51개 내지 500개, 51개 내지 450개, 51개 내지 400개, 51개 내지 350개, 51개 내지 300개, 51개 내지 275개, 51개 내지 250개, 51개 내지 225개, 51개 내지 200개, 51개 내지 175개, 51개 내지 150개, 51개 내지 125개, 51개 내지 100개, 51개 내지 75개, 15개 내지 50개, 20개 내지 50개, 25개 내지 50개, 15개 내지 37개, 15개 내지 35개, 20개 내지 37개, 20개 내지 35개, 15개 내지 30개, 20개 내지 30개 또는 20개 내지 25개 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 H5 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 500개, 450개, 400개, 350개, 300개, 275개, 250개, 225개, 200개, 175개, 150개, 125개, 100개, 95개, 90개, 85개, 80개, 75개, 70개, 65개, 60개, 55개, 50개, 45개, 40개, 35개, 30개 또는 25개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 H5 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 15개, 20개, 25개, 30개 또는 35개 이상의 아미노산 내지 150개, 125개, 95개, 90개, 85개, 80개, 75개, 65개, 60개, 55개, 50개, 45개 또는 40개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 H5 폴리펩티드이다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H5 코어 폴리펩티드의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 H5 코어 폴리펩티드의 N-말단 또는 C-말단에 부착된 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10(±5)개 아미노산을 갖는 H5 코어 폴리펩티드를 포함하고, 상기 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 유지한다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H5 코어 폴리펩티드의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 H5 코어 폴리펩티드의 N-말단 및 C-말단 둘다에 부착된 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10(±5)개 아미노산을 갖는 H5 코어 폴리펩티드를 포함하고, 상기 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 유지한다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 하기 아미노산 서열을 포함하거나 하기 아미노산 서열로 이루어진 H6 코어 폴리펩티드이다:
RIX1NX2NKRMEDGFLDVWTYNAELLVLLENX3RTLDX4HDANVKX5LX6EKVKSX7LX8DNA(서열번호 23)
상기 서열에서, X1은 G 또는 D이고; X2는 소수성 아미노산이고; X3은 친수성 아미노산이고; X4는 소수성 아미노산이고; X5는 친수성 아미노산이고; X6은 H 또는 Y이고; X7은 Q 또는 L이고; X8은 친수성 염기성 아미노산이다. 특정 실시양태에서, X1은 G 또는 D이고; X2는 L 또는 M이고; X3은 E 또는 G이고; X4는 L 또는 M이고; X5는 N 또는 S이고; X6은 H 또는 Y이고; X7은 Q 또는 L이고; X8은 R 또는 K이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 N-말단에서 아세틸화된다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 도 6G(서열번호 24 내지 29)에 나타낸 아미노산 서열 중 어느 한 아미노산 서열 또는 이의 단편을 포함한다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 N-말단에서 아세틸화된다. 특정 실시양태에서, 이 코어 폴리펩티드를 사용하여 아형 H6의 인플루엔자 바이러스 균주들에 대한 면역 반응을 유도할 수 있다. 일부 실시양태에서, 유도된 면역 반응은 인플루엔자 바이러스 아형 H6의 균주들을 중화시킨다.
일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H6 코어 폴리펩티드의 단편이다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H6 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 H6 코어 폴리펩티드의 N-말단 또는 C-말단으로부터 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10(±5)개, 15(±5)개, 20(±5)개, 25(±5)개, 30(±5)개 또는 35(±5)개 아미노산을 결여하고 있다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H6 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 그의 C-말단으로부터 24(±5)개 아미노산을 결여하고 있다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H6 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 H6 코어 폴리펩티드의 N-말단 및 C-말단 둘다로부터 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개 이상의 아미노산을 결여하고 있다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 갖는다.
일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 전장 인플루엔자 바이러스 HA가 아닌 H6 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 51개 내지 300개, 51개 내지 275개, 51개 내지 250개, 51개 내지 225개, 51개 내지 200개, 51개 내지 175개, 51개 내지 150개, 51개 내지 125개, 51개 내지 100개, 51개 내지 75개, 15개 내지 50개, 20개 내지 50개, 25개 내지 50개, 15개 내지 37개, 15개 내지 35개, 20개 내지 37개, 20개 내지 35개, 15개 내지 30개, 20개 내지 30개 또는 20개 내지 25개 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 H6 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 500개, 450개, 400개, 350개, 300개, 275개, 250개, 225개, 200개, 175개, 150개, 125개, 100개, 95개, 90개, 85개, 80개, 75개, 70개, 65개, 60개, 55개, 50개, 45개, 40개, 35개, 30개 또는 25개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 H6 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 15개, 20개, 25개, 30개 또는 35개 이상의 아미노산 내지 150개, 125개, 95개, 90개, 85개, 80개, 75개, 65개, 60개, 55개, 50개, 45개 또는 40개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 H6 폴리펩티드이다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H6 코어 폴리펩티드의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 H6 코어 폴리펩티드의 N-말단 또는 C-말단에 부착된 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10(±5)개 아미노산을 갖는 H6 코어 폴리펩티드를 포함하고, 상기 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 유지한다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H6 코어 폴리펩티드의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 H6 코어 폴리펩티드의 N-말단 및 C-말단 둘다에 부착된 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10(±5)개 아미노산을 갖는 H6 코어 폴리펩티드를 포함하고, 상기 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 유지한다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 하기 아미노산 서열을 포함하거나 하기 아미노산 서열로 이루어진 H7 코어 폴리펩티드이다:
QIGNVINWTRDX1MTEX2WSYNAELLVAMENQHTIDLADSEMX3KLYERVX4KQLRENA(서열번호 30)
상기 서열에서, X1은 소수성 아미노산 또는 친수성 아미노산이고; X2는 소수성 아미노산이고; X3은 친수성 아미노산이고; X4는 친수성 염기성 아미노산이다. 특정 실시양태에서, X1은 A 또는 S이고; X2는 V 또는 I이고; X3은 N 또는 S이고; X4는 K 또는 R이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 N-말단에서 아세틸화된다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 도 6E(서열번호 31 내지 35)에 나타낸 아미노산 서열 중 어느 한 아미노산 서열 또는 이의 단편을 포함한다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 N-말단에서 아세틸화된다. 특정 실시양태에서, 이 코어 폴리펩티드를 사용하여 아형 H7의 인플루엔자 바이러스 균주들에 대한 면역 반응을 유도할 수 있다. 일부 실시양태에서, 유도된 면역 반응은 인플루엔자 바이러스 아형 H7의 균주들을 중화시킨다.
일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H7 코어 폴리펩티드의 단편이다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H7 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 H7 코어 폴리펩티드의 N-말단 또는 C-말단으로부터 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10(±5)개, 15(±5)개, 20(±5)개, 25(±5)개, 30(±5)개 또는 35(±5)개 아미노산을 결여하고 있다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H7 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 그의 C-말단으로부터 24(±5)개 아미노산을 결여하고 있다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H7 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 H7 코어 폴리펩티드의 N-말단 및 C-말단 둘다로부터 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개 이상의 아미노산을 결여하고 있다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 갖는다.
일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 전장 인플루엔자 바이러스 HA가 아닌 H7 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 51개 내지 300개, 51개 내지 275개, 51개 내지 250개, 51개 내지 225개, 51개 내지 200개, 51개 내지 175개, 51개 내지 150개, 51개 내지 125개, 51개 내지 100개, 51개 내지 75개, 15개 내지 50개, 20개 내지 50개, 25개 내지 50개, 15개 내지 37개, 15개 내지 35개, 20개 내지 37개, 20개 내지 35개, 15개 내지 30개, 20개 내지 30개 또는 20개 내지 25개 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 H7 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 500개, 450개, 400개, 350개, 300개, 275개, 250개, 225개, 200개, 175개, 150개, 125개, 100개, 95개, 90개, 85개, 80개, 75개, 70개, 65개, 60개, 55개, 50개, 45개, 40개, 35개, 30개 또는 25개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 H7 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 15개, 20개, 25개, 30개 또는 35개 이상의 아미노산 내지 150개, 125개, 95개, 90개, 85개, 80개, 75개, 65개, 60개, 55개, 50개, 45개 또는 40개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 H7 폴리펩티드이다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H7 코어 폴리펩티드의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 H7 코어 폴리펩티드의 N-말단 또는 C-말단에 부착된 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10(±5)개 아미노산을 갖는 H7 코어 폴리펩티드를 포함하고, 상기 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 유지한다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H7 코어 폴리펩티드의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 H7 코어 폴리펩티드의 N-말단 및 C-말단 둘다에 부착된 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10(±5)개 아미노산을 갖는 H7 코어 폴리펩티드를 포함하고, 상기 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 유지한다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 하기 아미노산 서열을 포함하거나 하기 아미노산 서열로 이루어진 H8 코어 폴리펩티드이다:
RINMINDKIDDQIEX1LWAYNAELLVLLENQKTLDEHDSNVKNLFDEVKRRLSANA(서열번호 36).
상기 서열에서, X1은 친수성 아미노산이다. 일부 실시양태에서, X1은 D 또는 N이다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 도 6H(서열번호 37 및 38)에 나타낸 아미노산 서열 중 어느 한 아미노산 서열 또는 이의 단편을 포함한다. 특정 실시양태에서, 이 코어 폴리펩티드를 사용하여 아형 H8의 인플루엔자 바이러스 균주들에 대한 면역 반응을 유도할 수 있다. 일부 실시양태에서, 유도된 면역 반응은 인플루엔자 바이러스 아형 H8의 균주들을 중화시킨다.
일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H8 코어 폴리펩티드의 단편이다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H8 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 H8 코어 폴리펩티드의 N-말단 또는 C-말단으로부터 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10(±5)개, 15(±5)개, 20(±5)개, 25(±5)개, 30(±5)개 또는 35(±5)개 아미노산을 결여하고 있다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H8 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 그의 C-말단으로부터 24(±5)개 아미노산을 결여하고 있다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H8 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 H8 코어 폴리펩티드의 N-말단 및 C-말단 둘다로부터 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개 이상의 아미노산을 결여하고 있다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 갖는다.
일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 전장 인플루엔자 바이러스 HA가 아닌 H8 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 51개 내지 300개, 51개 내지 275개, 51개 내지 250개, 51개 내지 225개, 51개 내지 200개, 51개 내지 175개, 51개 내지 150개, 51개 내지 125개, 51개 내지 100개, 51개 내지 75개, 15개 내지 50개, 20개 내지 50개, 25개 내지 50개, 15개 내지 37개, 15개 내지 35개, 20개 내지 37개, 20개 내지 35개, 15개 내지 30개, 20개 내지 30개 또는 20개 내지 25개 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 H8 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 500개, 450개, 400개, 350개, 300개, 275개, 250개, 225개, 200개, 175개, 150개, 125개, 100개, 95개, 90개, 85개, 80개, 75개, 70개, 65개, 60개, 55개, 50개, 45개, 40개, 35개, 30개 또는 25개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 H8 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 15개, 20개, 25개, 30개 또는 35개 이상의 아미노산 내지 150개, 125개, 95개, 90개, 85개, 80개, 75개, 65개, 60개, 55개, 50개, 45개 또는 40개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 H8 폴리펩티드이다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H8 코어 폴리펩티드의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 H8 코어 폴리펩티드의 N-말단 또는 C-말단에 부착된 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10(±5)개 아미노산을 갖는 H8 코어 폴리펩티드를 포함하고, 상기 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 유지한다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H8 코어 폴리펩티드의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 H8 코어 폴리펩티드의 N-말단 및 C-말단 둘다에 부착된 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10(±5)개 아미노산을 갖는 H8 코어 폴리펩티드를 포함하고, 상기 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 유지한다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 하기 아미노산 서열을 포함하거나 하기 아미노산 서열로 이루어진 H9 코어 폴리펩티드이다:
RLNMINNKIDDQIQDX1WAYNAELLVLLENQKTLDEHDANVNNLYNKVKRALGSNA(서열번호 39)
상기 서열에서, X1은 소수성 아미노산이다. 특정 실시양태에서, X1은 V 또는 I이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 N-말단에서 아세틸화된다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 도 6I(서열번호 40 및 41)에 나타낸 아미노산 서열 중 어느 한 아미노산 서열 또는 이의 단편을 포함한다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 N-말단에서 아세틸화된다. 특정 실시양태에서, 이 코어 폴리펩티드를 사용하여 아형 H9의 인플루엔자 바이러스 균주들에 대한 면역 반응을 유도할 수 있다. 일부 실시양태에서, 유도된 면역 반응은 인플루엔자 바이러스 아형 H9의 균주들을 중화시킨다.
일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H9 코어 폴리펩티드의 단편이다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H9 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 H9 코어 폴리펩티드의 N-말단 또는 C-말단으로부터 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10(±5)개, 15(±5)개, 20(±5)개, 25(±5)개, 30(±5)개 또는 35(±5)개 아미노산을 결여하고 있다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H9 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 그의 C-말단으로부터 24(±5)개 아미노산을 결여하고 있다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H9 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 H9 코어 폴리펩티드의 N-말단 및 C-말단 둘다로부터 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개 이상의 아미노산을 결여하고 있다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 갖는다.
일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 전장 인플루엔자 바이러스 HA가 아닌 H9 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 51개 내지 300개, 51개 내지 275개, 51개 내지 250개, 51개 내지 225개, 51개 내지 200개, 51개 내지 175개, 51개 내지 150개, 51개 내지 125개, 51개 내지 100개, 51개 내지 75개, 15개 내지 50개, 20개 내지 50개, 25개 내지 50개, 15개 내지 37개, 15개 내지 35개, 20개 내지 37개, 20개 내지 35개, 15개 내지 30개, 20개 내지 30개 또는 20개 내지 25개 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 H9 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 500개, 450개, 400개, 350개, 300개, 275개, 250개, 225개, 200개, 175개, 150개, 125개, 100개, 95개, 90개, 85개, 80개, 75개, 70개, 65개, 60개, 55개, 50개, 45개, 40개, 35개, 30개 또는 25개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 H9 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 15개, 20개, 25개, 30개 또는 35개 이상의 아미노산 내지 150개, 125개, 95개, 90개, 85개, 80개, 75개, 65개, 60개, 55개, 50개, 45개 또는 40개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 H9 폴리펩티드이다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H9 코어 폴리펩티드의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 H9 코어 폴리펩티드의 N-말단 또는 C-말단에 부착된 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10(±5)개 아미노산을 갖는 H9 코어 폴리펩티드를 포함하고, 상기 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 유지한다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H9 코어 폴리펩티드의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 H9 코어 폴리펩티드의 N-말단 및 C-말단 둘다에 부착된 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10(±5)개 아미노산을 갖는 H9 코어 폴리펩티드를 포함하고, 상기 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 유지한다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 하기 아미노산 서열을 포함하거나 하기 아미노산 서열로 이루어진 H10 코어 폴리펩티드이다:
QIGNVINWTKDSITDIWTYX1AELLVAMENQHTIDMADSEMLNLYERVRKQLRQNA(서열번호 42)
상기 서열에서, X1은 친수성 아미노산이다. 특정 실시양태에서, X1은 Q 또는 N이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 N-말단에서 아세틸화된다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 도 6J(서열번호 43 및 44)에 나타낸 아미노산 서열 중 어느 한 아미노산 서열 또는 이의 단편을 포함한다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 N-말단에서 아세틸화된다. 특정 실시양태에서, 이 코어 폴리펩티드를 사용하여 아형 H10의 인플루엔자 바이러스 균주들에 대한 면역 반응을 유도할 수 있다. 일부 실시양태에서, 유도된 면역 반응은 인플루엔자 바이러스 아형 H10의 균주들을 중화시킨다.
일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H10 코어 폴리펩티드의 단편이다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H10 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 H10 코어 폴리펩티드의 N-말단 또는 C-말단으로부터 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10(±5)개, 15(±5)개, 20(±5)개, 25(±5)개, 30(±5)개 또는 35(±5)개 아미노산을 결여하고 있다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H10 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 그의 C-말단으로부터 24(±5)개 아미노산을 결여하고 있다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H10 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 H10 코어 폴리펩티드의 N-말단 및 C-말단 둘다로부터 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개 이상의 아미노산을 결여하고 있다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 갖는다.
일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 전장 인플루엔자 바이러스 HA가 아닌 H10 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 51개 내지 300개, 51개 내지 275개, 51개 내지 250개, 51개 내지 225개, 51개 내지 200개, 51개 내지 175개, 51개 내지 150개, 51개 내지 125개, 51개 내지 100개, 51개 내지 75개, 15개 내지 50개, 20개 내지 50개, 25개 내지 50개, 15개 내지 37개, 15개 내지 35개, 20개 내지 37개, 20개 내지 35개, 15개 내지 30개, 20개 내지 30개 또는 20개 내지 25개 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 H10 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 500개, 450개, 400개, 350개, 300개, 275개, 250개, 225개, 200개, 175개, 150개, 125개, 100개, 95개, 90개, 85개, 80개, 75개, 70개, 65개, 60개, 55개, 50개, 45개, 40개, 35개, 30개 또는 25개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 H10 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 15개, 20개, 25개, 30개 또는 35개 이상의 아미노산 내지 150개, 125개, 95개, 90개, 85개, 80개, 75개, 65개, 60개, 55개, 50개, 45개 또는 40개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 H10 폴리펩티드이다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H10 코어 폴리펩티드의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 H10 코어 폴리펩티드의 N-말단 또는 C-말단에 부착된 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10(±5)개 아미노산을 갖는 H10 코어 폴리펩티드를 포함하고, 상기 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 유지한다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H10 코어 폴리펩티드의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 H10 코어 폴리펩티드의 N-말단 및 C-말단 둘다에 부착된 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10(±5)개 아미노산을 갖는 H10 코어 폴리펩티드를 포함하고, 상기 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 유지한다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 하기 아미노산 서열을 포함하거나 하기 아미노산 서열로 이루어진 H11 코어 폴리펩티드이다:
RINQLSKHVDDSVX1DIWSYNAQLLVLLENEKTLDLHDSNVRNLHEKVRRMLKDNA(서열번호 45)
상기 서열에서, X1은 소수성 아미노산이다. 특정 실시양태에서, X1은 V 또는 I이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 N-말단에서 아세틸화된다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 도 6K(서열번호 46 및 47)에 나타낸 아미노산 서열 중 어느 한 아미노산 서열 또는 이의 단편을 포함한다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 N-말단에서 아세틸화된다. 특정 실시양태에서, 이 코어 폴리펩티드를 사용하여 아형 H11의 인플루엔자 바이러스 균주들에 대한 면역 반응을 유도할 수 있다. 일부 실시양태에서, 유도된 면역 반응은 인플루엔자 바이러스 아형 H11의 균주들을 중화시킨다.
일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H11 코어 폴리펩티드의 단편이다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H11 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 H11 코어 폴리펩티드의 N-말단 또는 C-말단으로부터 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10(±5)개, 15(±5)개, 20(±5)개, 25(±5)개, 30(±5)개 또는 35(±5)개 아미노산을 결여하고 있다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H11 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 그의 C-말단으로부터 24(±5)개 아미노산을 결여하고 있다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H11 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 H11 코어 폴리펩티드의 N-말단 및 C-말단 둘다로부터 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개 이상의 아미노산을 결여하고 있다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 갖는다.
일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 전장 인플루엔자 바이러스 HA가 아닌 H11 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 51개 내지 300개, 51개 내지 275개, 51개 내지 250개, 51개 내지 225개, 51개 내지 200개, 51개 내지 175개, 51개 내지 150개, 51개 내지 125개, 51개 내지 100개, 51개 내지 75개, 15개 내지 50개, 20개 내지 50개, 25개 내지 50개, 15개 내지 37개, 15개 내지 35개, 20개 내지 37개, 20개 내지 35개, 15개 내지 30개, 20개 내지 30개 또는 20개 내지 25개 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 H11 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 500개, 450개, 400개, 350개, 300개, 275개, 250개, 225개, 200개, 175개, 150개, 125개, 100개, 95개, 90개, 85개, 80개, 75개, 70개, 65개, 60개, 55개, 50개, 45개, 40개, 35개, 30개 또는 25개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 H11 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 15개, 20개, 25개, 30개 또는 35개 이상의 아미노산 내지 150개, 125개, 95개, 90개, 85개, 80개, 75개, 65개, 60개, 55개, 50개, 45개 또는 40개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 H11 폴리펩티드이다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H11 코어 폴리펩티드의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 H11 코어 폴리펩티드의 N-말단 또는 C-말단에 부착된 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10(±5)개 아미노산을 갖는 H11 코어 폴리펩티드를 포함하고, 상기 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 유지한다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H11 코어 폴리펩티드의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 H11 코어 폴리펩티드의 N-말단 및 C-말단 둘다에 부착된 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10(±5)개 아미노산을 갖는 H11 코어 폴리펩티드를 포함하고, 상기 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 유지한다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 하기 아미노산 서열을 포함하거나 하기 아미노산 서열로 이루어진 H12 코어 폴리펩티드이다:
RINMINSKIDDQITDIWAYNAELLVLLENQKTLDEHDANVRNLHDRVRRX1LX2ENA(서열번호 48)
상기 서열에서, X1은 소수성 아미노산이고; X2는 친수성 염기성 아미노산이다. 특정 실시양태에서, X1은 V 또는 I이고; X2는 R 또는 K이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 N-말단에서 아세틸화된다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 도 6L(서열번호 49 및 50)에 나타낸 아미노산 서열 중 어느 한 아미노산 서열 또는 이의 단편을 포함한다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 N-말단에서 아세틸화된다. 특정 실시양태에서, 이 코어 폴리펩티드를 사용하여 아형 H12의 인플루엔자 바이러스 균주들에 대한 면역 반응을 유도할 수 있다. 일부 실시양태에서, 유도된 면역 반응은 인플루엔자 바이러스 아형 H12의 균주들을 중화시킨다.
일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H12 코어 폴리펩티드의 단편이다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H12 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 H12 코어 폴리펩티드의 N-말단 또는 C-말단으로부터 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10(±5)개, 15(±5)개, 20(±5)개, 25(±5)개, 30(±5)개 또는 35(±5)개 아미노산을 결여하고 있다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H12 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 그의 C-말단으로부터 24(±5)개 아미노산을 결여하고 있다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H12 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 H12 코어 폴리펩티드의 N-말단 및 C-말단 둘다로부터 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개 이상의 아미노산을 결여하고 있다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 갖는다.
일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 전장 인플루엔자 바이러스 HA가 아닌 H12 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 51개 내지 300개, 51개 내지 275개, 51개 내지 250개, 51개 내지 225개, 51개 내지 200개, 51개 내지 175개, 51개 내지 150개, 51개 내지 125개, 51개 내지 100개, 51개 내지 75개, 15개 내지 50개, 20개 내지 50개, 25개 내지 50개, 15개 내지 37개, 15개 내지 35개, 20개 내지 37개, 20개 내지 35개, 15개 내지 30개, 20개 내지 30개 또는 20개 내지 25개 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 H12 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 500개, 450개, 400개, 350개, 300개, 275개, 250개, 225개, 200개, 175개, 150개, 125개, 100개, 95개, 90개, 85개, 80개, 75개, 70개, 65개, 60개, 55개, 50개, 45개, 40개, 35개, 30개 또는 25개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 H12 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 15개, 20개, 25개, 30개 또는 35개 이상의 아미노산 내지 150개, 125개, 95개, 90개, 85개, 80개, 75개, 65개, 60개, 55개, 50개, 45개 또는 40개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 H12 폴리펩티드이다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H12 코어 폴리펩티드의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 H12 코어 폴리펩티드의 N-말단 또는 C-말단에 부착된 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10(±5)개 아미노산을 갖는 H12 코어 폴리펩티드를 포함하고, 상기 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 유지한다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H12 코어 폴리펩티드의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 H12 코어 폴리펩티드의 N-말단 및 C-말단 둘다에 부착된 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10(±5)개 아미노산을 갖는 H12 코어 폴리펩티드를 포함하고, 상기 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 유지한다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 하기 아미노산 서열을 포함하거나 하기 아미노산 서열로 이루어진 H13 코어 폴리펩티드이다:
RINMLADRIDDAVTDX1WSYNAKLLVLLENDKTLDMHDANVRNLHX2QVRRX3LKX4NA(서열번호 51)
상기 서열에서, X1은 소수성 아미노산이고; X2는 친수성 산성 아미노산이고; X3은 A, S 또는 E이고; X4는 친수성 아미노산이다. 특정 실시양태에서, X1은 V 또는 I이고; X2는 D 또는 E이고; X3은 A, S 또는 E이고; X4는 T 또는 D이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 N-말단에서 아세틸화된다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 도 6M(서열번호 52 내지 54)에 나타낸 아미노산 서열 중 어느 한 아미노산 서열 또는 이의 단편을 포함한다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 N-말단에서 아세틸화된다. 특정 실시양태에서, 이 코어 폴리펩티드를 사용하여 아형 H13의 인플루엔자 바이러스 균주들에 대한 면역 반응을 유도할 수 있다. 일부 실시양태에서, 유도된 면역 반응은 인플루엔자 바이러스 아형 H13의 균주들을 중화시킨다.
일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H13 코어 폴리펩티드의 단편이다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H13 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 H13 코어 폴리펩티드의 N-말단 또는 C-말단으로부터 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10(±5)개, 15(±5)개, 20(±5)개, 25(±5)개, 30(±5)개 또는 35(±5)개 아미노산을 결여하고 있다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H13 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 그의 C-말단으로부터 24(±5)개 아미노산을 결여하고 있다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H13 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 H13 코어 폴리펩티드의 N-말단 및 C-말단 둘다로부터 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개 이상의 아미노산을 결여하고 있다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 갖는다.
일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 전장 인플루엔자 바이러스 HA가 아닌 H13 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 51개 내지 300개, 51개 내지 275개, 51개 내지 250개, 51개 내지 225개, 51개 내지 200개, 51개 내지 175개, 51개 내지 150개, 51개 내지 125개, 51개 내지 100개, 51개 내지 75개, 15개 내지 50개, 20개 내지 50개, 25개 내지 50개, 15개 내지 37개, 15개 내지 35개, 20개 내지 37개, 20개 내지 35개, 15개 내지 30개, 20개 내지 30개 또는 20개 내지 25개 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 H13 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 500개, 450개, 400개, 350개, 300개, 275개, 250개, 225개, 200개, 175개, 150개, 125개, 100개, 95개, 90개, 85개, 80개, 75개, 70개, 65개, 60개, 55개, 50개, 45개, 40개, 35개, 30개 또는 25개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 H13 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 15개, 20개, 25개, 30개 또는 35개 이상의 아미노산 내지 150개, 125개, 95개, 90개, 85개, 80개, 75개, 65개, 60개, 55개, 50개, 45개 또는 40개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 H13 폴리펩티드이다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H13 코어 폴리펩티드의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 H13 코어 폴리펩티드의 N-말단 또는 C-말단에 부착된 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10(±5)개 아미노산을 갖는 H13 코어 폴리펩티드를 포함하고, 상기 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 유지한다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H13 코어 폴리펩티드의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 H13 코어 폴리펩티드의 N-말단 및 C-말단 둘다에 부착된 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10(±5)개 아미노산을 갖는 H13 코어 폴리펩티드를 포함하고, 상기 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 유지한다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 하기 아미노산 서열을 포함하거나 하기 아미노산 서열로 이루어진 H14 코어 폴리펩티드이다:
RIQDLEKYVEDTKIDLWSYNAELLVALENQHTIDVTDSEMNKLFERVRRQLRENA(서열번호 55). 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 N-말단에서 아세틸화된다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 도 6N(서열번호 55)에 나타낸 아미노산 서열 중 어느 한 아미노산 서열 또는 이의 단편을 포함한다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 N-말단에서 아세틸화된다. 특정 실시양태에서, 이 코어 폴리펩티드를 사용하여 아형 H14의 인플루엔자 바이러스 균주들에 대한 면역 반응을 유도할 수 있다. 일부 실시양태에서, 유도된 면역 반응은 인플루엔자 바이러스 아형 H14의 균주들을 중화시킨다.
일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H14 코어 폴리펩티드의 단편이다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H14 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 H14 코어 폴리펩티드의 N-말단 또는 C-말단으로부터 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10(±5)개, 15(±5)개, 20(±5)개, 25(±5)개, 30(±5)개 또는 35(±5)개 아미노산을 결여하고 있다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H14 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 그의 C-말단으로부터 24(±5)개 아미노산을 결여하고 있다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H14 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 H14 코어 폴리펩티드의 N-말단 및 C-말단 둘다로부터 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개 이상의 아미노산을 결여하고 있다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 갖는다.
일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 전장 인플루엔자 바이러스 HA가 아닌 H14 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 51개 내지 300개, 51개 내지 275개, 51개 내지 250개, 51개 내지 225개, 51개 내지 200개, 51개 내지 175개, 51개 내지 150개, 51개 내지 125개, 51개 내지 100개, 51개 내지 75개, 15개 내지 50개, 20개 내지 50개, 25개 내지 50개, 15개 내지 37개, 15개 내지 35개, 20개 내지 37개, 20개 내지 35개, 15개 내지 30개, 20개 내지 30개 또는 20개 내지 25개 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 H14 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 500개, 450개, 400개, 350개, 300개, 275개, 250개, 225개, 200개, 175개, 150개, 125개, 100개, 95개, 90개, 85개, 80개, 75개, 70개, 65개, 60개, 55개, 50개, 45개, 40개, 35개, 30개 또는 25개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 H14 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 15개, 20개, 25개, 30개 또는 35개 이상의 아미노산 내지 150개, 125개, 95개, 90개, 85개, 80개, 75개, 65개, 60개, 55개, 50개, 45개 또는 40개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 H14 폴리펩티드이다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H14 코어 폴리펩티드의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 H14 코어 폴리펩티드의 N-말단 또는 C-말단에 부착된 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10(±5)개 아미노산을 갖는 H14 코어 폴리펩티드를 포함하고, 상기 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 유지한다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H14 코어 폴리펩티드의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 H14 코어 폴리펩티드의 N-말단 및 C-말단 둘다에 부착된 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10(±5)개 아미노산을 갖는 H14 코어 폴리펩티드를 포함하고, 상기 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 유지한다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 하기 아미노산 서열을 포함하거나 하기 아미노산 서열로 이루어진 H15 코어 폴리펩티드이다:
QIGNVINWTRDSLTEIWSYNAELLVAMENQHTIDLADSEMNKLYERVRRQLRENA(서열번호 56).
일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 N-말단에서 아세틸화된다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 도 6O에 나타낸 아미노산 서열 중 어느 한 아미노산 서열 또는 이의 단편을 포함한다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 N-말단에서 아세틸화된다. 특정 실시양태에서, 이 코어 폴리펩티드를 사용하여 아형 H15의 인플루엔자 바이러스 균주들에 대한 면역 반응을 유도할 수 있다. 일부 실시양태에서, 유도된 면역 반응은 인플루엔자 바이러스 아형 H15의 균주들을 중화시킨다.
일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H15 코어 폴리펩티드의 단편이다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H15 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 H15 코어 폴리펩티드의 N-말단 또는 C-말단으로부터 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10(±5)개, 15(±5)개, 20(±5)개, 25(±5)개, 30(±5)개 또는 35(±5)개 아미노산을 결여하고 있다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H15 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 그의 C-말단으로부터 24(±5)개 아미노산을 결여하고 있다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H15 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 H15 코어 폴리펩티드의 N-말단 및 C-말단 둘다로부터 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개 이상의 아미노산을 결여하고 있다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 갖는다.
일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 전장 인플루엔자 바이러스 HA가 아닌 H15 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 51개 내지 300개, 51개 내지 275개, 51개 내지 250개, 51개 내지 225개, 51개 내지 200개, 51개 내지 175개, 51개 내지 150개, 51개 내지 125개, 51개 내지 100개, 51개 내지 75개, 15개 내지 50개, 20개 내지 50개, 25개 내지 50개, 15개 내지 37개, 15개 내지 35개, 20개 내지 37개, 20개 내지 35개, 15개 내지 30개, 20개 내지 30개 또는 20개 내지 25개 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 H15 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 500개, 450개, 400개, 350개, 300개, 275개, 250개, 225개, 200개, 175개, 150개, 125개, 100개, 95개, 90개, 85개, 80개, 75개, 70개, 65개, 60개, 55개, 50개, 45개, 40개, 35개, 30개 또는 25개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 H15 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 15개, 20개, 25개, 30개 또는 35개 이상의 아미노산 내지 150개, 125개, 95개, 90개, 85개, 80개, 75개, 65개, 60개, 55개, 50개, 45개 또는 40개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 H15 폴리펩티드이다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H15 코어 폴리펩티드의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 H15 코어 폴리펩티드의 N-말단 또는 C-말단에 부착된 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10(±5)개 아미노산을 갖는 H15 코어 폴리펩티드를 포함하고, 상기 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 유지한다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H15 코어 폴리펩티드의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 H15 코어 폴리펩티드의 N-말단 및 C-말단 둘다에 부착된 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10(±5)개 아미노산을 갖는 H15 코어 폴리펩티드를 포함하고, 상기 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 유지한다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 하기 아미노산 서열을 포함하거나 하기 아미노산 서열로 이루어진 H16 코어 폴리펩티드이다:
RINMLADRVDDAVTDIWSYNAKLLVLX1ENDRTLDLHDANVX2NLHX3QVKRALKX4NA(서열번호 57)
상기 서열에서, X1은 소수성 아미노산이고; X2는 친수성 염기성 아미노산이고; X3은 친수성 산성 아미노산이고; X4는 친수성 아미노산이다. 특정 실시양태에서, X1은 L 또는 I이고; X2는 K 또는 R이고; X3은 D 또는 E이고; X4는 S 또는 N이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 N-말단에서 아세틸화된다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 도 6P(서열번호 58 내지 60)에 나타낸 아미노산 서열 중 어느 한 아미노산 서열 또는 이의 단편을 포함한다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 N-말단에서 아세틸화된다. 특정 실시양태에서, 이 코어 폴리펩티드를 사용하여 아형 H16의 인플루엔자 바이러스 균주들에 대한 면역 반응을 유도할 수 있다. 일부 실시양태에서, 유도된 면역 반응은 인플루엔자 바이러스 아형 H16의 균주들을 중화시킨다.
일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H16 코어 폴리펩티드의 단편이다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H16 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 H16 코어 폴리펩티드의 N-말단 또는 C-말단으로부터 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10(±5)개, 15(±5)개, 20(±5)개, 25(±5)개, 30(±5)개 또는 35(±5)개 아미노산을 결여하고 있다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H16 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 그의 C-말단으로부터 24(±5)개 아미노산을 결여하고 있다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H16 코어 폴리펩티드의 단편이고, 이때 상기 단편은 H16 코어 폴리펩티드의 N-말단 및 C-말단 둘다로부터 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개 이상의 아미노산을 결여하고 있다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 갖는다.
일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 전장 인플루엔자 바이러스 HA가 아닌 H16 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 51개 내지 300개, 51개 내지 275개, 51개 내지 250개, 51개 내지 225개, 51개 내지 200개, 51개 내지 175개, 51개 내지 150개, 51개 내지 125개, 51개 내지 100개, 51개 내지 75개, 15개 내지 50개, 20개 내지 50개, 25개 내지 50개, 15개 내지 37개, 15개 내지 35개, 20개 내지 37개, 20개 내지 35개, 15개 내지 30개, 20개 내지 30개 또는 20개 내지 25개 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 H16 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 500개, 450개, 400개, 350개, 300개, 275개, 250개, 225개, 200개, 175개, 150개, 125개, 100개, 95개, 90개, 85개, 80개, 75개, 70개, 65개, 60개, 55개, 50개, 45개, 40개, 35개, 30개 또는 25개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 H16 코어 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 15개, 20개, 25개, 30개 또는 35개 이상의 아미노산 내지 150개, 125개, 95개, 90개, 85개, 80개, 75개, 65개, 60개, 55개, 50개, 45개 또는 40개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 H16 폴리펩티드이다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H16 코어 폴리펩티드의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 H16 코어 폴리펩티드의 N-말단 또는 C-말단에 부착된 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10(±5)개 아미노산을 갖는 H16 코어 폴리펩티드를 포함하고, 상기 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 유지한다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 H16 코어 폴리펩티드의 유도체이고, 이때 상기 유도체는 H16 코어 폴리펩티드의 N-말단 및 C-말단 둘다에 부착된 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10(±5)개 아미노산을 갖는 H16 코어 폴리펩티드를 포함하고, 상기 코어 폴리펩티드는 알파 나선형 입체구조를 유지한다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 하기 서열을 포함하거나 하기 서열로 이루어진다:
EILELDEKVDDLRADTISSQIELAVLLSNEGIINSEDEHLLALERKLKKMLGPSA.
일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 N-말단에서 아세틸화된다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 도 5A에 나타낸 아미노산 서열 중 어느 한 아미노산 서열 또는 이의 단편을 포함하거나 상기 아미노산 서열 또는 이의 단편으로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 N-말단에서 아세틸화된다. 특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 도 5B에 나타낸 아미노산 서열 중 어느 한 아미노산 서열 또는 이의 단편을 포함하거나 상기 아미노산 서열 또는 이의 단편으로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 51개 내지 300개, 51개 내지 275개, 51개 내지 250개, 51개 내지 225개, 51개 내지 200개, 51개 내지 175개, 51개 내지 150개, 51개 내지 125개, 51개 내지 100개, 51개 내지 75개, 15개 내지 50개, 20개 내지 50개, 25개 내지 50개, 15개 내지 37개, 15개 내지 35개, 20개 내지 37개, 20개 내지 35개, 15개 내지 30개, 20개 내지 30개 또는 20개 내지 25개 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 500개, 450개, 400개, 350개, 300개, 275개, 250개, 225개, 200개, 175개, 150개, 125개, 100개, 95개, 90개, 85개, 80개, 75개, 70개, 65개, 60개, 55개, 50개, 45개, 40개, 35개, 30개 또는 25개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드는 15개, 20개, 25개, 30개 또는 35개 이상의 아미노산 내지 150개, 125개, 95개, 90개, 85개, 80개, 75개, 65개, 60개, 55개, 50개, 45개 또는 40개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는다.
1.2. 증가된 반감기를 갖는 감기 폴리펩티드 및 코어 폴리펩티드
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 감기 폴리펩티드 및 코어 폴리펩티드는 생체 내에서 연장된(또는 증가된) 반감기를 갖도록 변형된다(즉, 변형된 코어 폴리펩티드). 구체적으로, 본원은 대상체 내에서 약 3일 내지 약 180일(또는 그 이상)의 반감기, 일부 실시양태에서 3일 초과, 7일 초과, 10일 초과, 15일 초과, 20일 초과, 25일 초과, 30일 초과, 35일 초과, 40일 초과, 45일 초과, 50일 초과, 60일 초과, 75일 초과, 90일 초과, 105일 초과, 120일 초과, 135일 초과, 150일 초과, 165일 초과 또는 180일 초과의 반감기를 갖는 변형된 감기 폴리펩티드 및 코어 폴리펩티드를 제공한다.
일부 실시양태에서, 생체 내에서 증가된 반감기를 갖는 감기 또는 코어 폴리펩티드는 감기 또는 코어 폴리펩티드의 N-말단의 아세틸화에 의해 발생된다. 폴리펩티드의 아세틸화는 당업자에게 잘 공지되어 있는 기법이고 아세틸 기를 폴리펩티드의 N-말단에 부가하는 것을 포함한다. 코어 폴리펩티드의 아세틸화는 코어 폴리펩티드가 엑소펩티다제(exopeptidase)에 의한 분해에 덜 취약하게 만들 수 있다.
일부 실시양태에서, 생체 내에서 증가된 반감기를 갖는 감기 또는 코어 폴리펩티드는 감기 또는 코어 폴리펩티드의 C-말단의 아미드화에 의해 발생된다.
일부 실시양태에서, 생체 내에서 증가된 반감기를 갖는 감기 또는 코어 폴리펩티드는 페길화(pegylation)를 통해, 즉 고분자량 폴리에틸렌글리콜(PEG)과 감기 또는 코어 폴리펩티드의 N-말단 또는 C-말단의 부위 특이적 접합을 통해, 또는 라이신 잔기 상에 존재하는 엡실론-아미노 기를 통해 불활성 중합체 분자, 예컨대, PEG를 다작용성 연결기의 존재 또는 부재 하에 감기 또는 코어 폴리펩티드에 부착시킴으로써 발생된다. 다양한 평균 분자량, 예컨대, 1000 Da, 4000 Da, 5000 Da, 8000 Da, 10000 Da, 120000 Da 또는 심지어 이보다 더 높은 분자량의 PEG가 사용될 수 있다. 특정 실시양태에서, 감기 또는 코어 폴리펩티드의 N-말단은 페길화된다. 생물학적 활성의 최소 손실을 초래하는 선형 또는 분지형 중합체 유도체화도 이용될 수 있다. PEG 분자와 감기 또는 코어 폴리펩티드의 적절한 접합을 보장하기 위해 접합도를 SDS-PAGE 및 질량 분광측정으로 면밀히 모니터링할 수 있다. 미반응된 PEG를 크기 배제 또는 이온 교환 크로마토그래피로 감기 또는 코어 폴리펩티드-PEG 접합체로부터 분리할 수 있다. 당업자에게 잘 공지되어 있는 방법을 이용하여, 예를 들면, 본원에 기재된 동물 모델 시스템을 이용하여 PEG-유도체화된 감기 또는 코어 폴리펩티드의 생체내 효능을 시험할 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 코어 폴리펩티드가 생체 내에서 더 안정하도록 또는 생체 내에서 더 긴 반감기를 갖도록 만들기 위해 감기 또는 코어 폴리펩티드를 알부민에 접합시킬 수 있다. 이러한 기법은 당업계에서 잘 공지되어 있고, 예를 들면, 국제 특허출원 공개 제WO 93/15199호, 제WO 93/15200호 및 제WO 01/77137호, 및 유럽 특허 제413,622호(이들 모두 본원에 참고로 도입됨)를 참조한다.
일부 실시양태에서, 생체 내에서 증가된 반감기를 갖는 감기 또는 코어 폴리펩티드는 D-아미노산에 의한 코어 폴리펩티드의 말단 L-아미노산의 치환에 의해 발생된다.
1.3. 코어 폴리펩티드 및 연결기를 포함하는 감기 폴리펩티드
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 감기 폴리펩티드는 연결기에 연결된 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드를 포함한다. 본원에 포함되는 연결기는 이 연결기와 연결되는 코어 폴리펩티드의 천연 구조를 방해하지 않는, 당업자에게 공지되어 있는 임의의 연결기일 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 포함되는 연결기는 소수성을 나타내지 않는다.
연결기의 길이는 본원에 기재된 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드와, 이 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드가 연결되는 지지체(예를 들면, 담체 단백질, T 세포 에피토프, 면역원성 폴리펩티드) 사이에 최적 연결을 제공하도록 변경될 수 있다. 또한, 연결기의 길이는 연결기로 인한 면역원성 반응을 방지하도록 최적화될 수 있다. 연결기 분자는 당업계에서 통상적으로 공지되어 있고 문헌[Denardo et al., 1998, Clin. Cancer Res. 4:2483-90]; 문헌[Peterson et al., 1999, Bioconjug. Chem. 10:553]; 및 문헌[Zimmerman et al., 1999, Nucl. Med. Biol. 26:943-50](이들 각각은 온전히 그대로 본원에 참고로 도입됨)에 기재되어 있다.
연결기는 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 20개 또는 20개 초과의 아미노산으로 이루어진 길이를 가질 수 있다. 일부 실시양태에서, 연결기는 20개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는다. 일부 실시양태에서, 연결기는 15개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는다. 일부 실시양태에서, 연결기는 10개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는다. 일부 실시양태에서, 연결기는 9개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는다. 일부 실시양태에서, 연결기는 8개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는다. 일부 실시양태에서, 연결기는 7개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는다. 일부 실시양태에서, 연결기는 6개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는다. 일부 실시양태에서, 연결기는 5개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는다. 일부 실시양태에서, 연결기는 4개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는다. 일부 실시양태에서, 연결기는 3개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는다. 일부 실시양태에서, 연결기는 2개 미만의 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는다.
일부 실시양태에서, 연결기는 1개 내지 50개 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는다. 일부 실시양태에서, 연결기는 1개 내지 40개 아미노산, 1개 내지 30개 아미노산, 1개 내지 20개 아미노산, 1개 내지 10개 아미노산, 1개 내지 5개 아미노산, 1개 내지 4개 아미노산, 1개 내지 3개 아미노산, 1개 또는 2개 아미노산, 또는 1개 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는다.
일부 실시양태에서, 연결기는 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드에 공유부착된다. 특정 실시양태에서, 연결기는 펩티드 결합을 통해 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드에 부착된다. 일부 실시양태에서, 연결기는 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드의 N-말단에 부착된다. 일부 실시양태에서, 연결기는 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드의 C-말단에 부착된다.
일부 실시양태에서, 연결기는 1개 이상의 글리신 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, 연결기는 2개 이상의 글리신 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, 연결기는 3개 이상의 글리신 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, 연결기는 4개 이상의 글리신 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, 연결기는 5개 이상의 글리신 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, 연결기는 10개 이상의 글리신 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, 연결기는 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이상의 글리신 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, 연결기는 2개 내지 4개, 2개 내지 6개, 2개 내지 10개, 3개 내지 6개, 3개 내지 8개, 3개 내지 10개, 5개 내지 10개, 8개 내지 10개, 10개 내지 15개 또는 10개 내지 20개의 글리신 잔기를 포함한다. 특정 실시양태에서, 연결기는 3개의 글리신 잔기를 포함한다.
일부 실시양태에서, 연결기는 1개 이상의 시스테인 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, 연결기는 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개 이상의 시스테인 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, 연결기는 2개 내지 4개, 2개 내지 6개, 2개 내지 10개, 3개 내지 6개, 3개 내지 8개, 3개 내지 10개, 5개 내지 10개, 8개 내지 10개, 10개 내지 15개 또는 10개 내지 20개의 시스테인 잔기를 포함한다.
일부 실시양태에서, 연결기는 단백질 태그를 포함한다. 단백질 태그는 단백질 결합체의 단리, 감기 폴리펩티드의 단리, 친화성 크로마토그래피 및/또는 국지화(localization) 연구에 유용할 수 있다. 또한, 단백질 태그는 감기 폴리펩티드의 가용성을 증가시킬 수 있다. 단백질 태그의 예는 His-태그, Strep II-태그, T7-태그, FLAG-태그, S-태그, HA-태그, c-Myc-태그, DHFR-태그 및 녹색 형광 단백질(GFP)을 포함하나 이들로 한정되지 않는다. 단백질 태그는 감기 폴리펩티드의 N-말단 또는 C-말단에 공유부착될 수 있다. 일부 실시양태에서, 연결기는 FLAG-태그 단백질 태그를 포함한다(즉, 연결기는 아미노산 DYKDDDDK를 포함한다). 특정 실시양태에서, 연결기는 시스테인 잔기에 공유연결된 FLAG-태그(즉, DYKDDDDKC)를 포함한다. 일부 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 1개, 2개, 3개 또는 4개 이상의 단백질 태그를 포함한다. 일부 실시양태에서, 단백질 태그는 감기 폴리펩티드에서 연결기로서 사용되지 않는다.
1.4. 다수의 코어 폴리펩티드를 포함하는 감기 폴리펩티드
일부 실시양태에서, 본원은 2개 이상의 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드를 포함하는 감기 폴리펩티드를 제공한다. 2개 이상의 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드는 서로 직접적으로 또는 간접적으로 연결/커플링될 수 있다. 임의의 특정 작용 이론에 구속받고자 하는 것은 아니지만, 2개 또는 3개 이상의 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드를 포함하는 감기 폴리펩티드의 투여는 담체 단백질의 동시투여 없이도 대상체 내에서 넓은 반응성을 갖는 혈청 항체들을 유도할 수 있다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드는 연결기, 예컨대, 상기 단락 1.3.에 기재된 바와 같은 연결기를 통해 서로 연결된다. 즉, 일부 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 예를 들면, 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드에 연결된 연결기에 연결된 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드를 포함할 수 있다.
특정 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 서열 X-(L-X)n을 갖고, 이때 X는 본원에 기재된 임의의 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드이고, L은 본원에 기재된 임의의 연결기이고, n은 1 내지 20이고, X는 L에 공유연결된다. 특정 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 서열 X-L-X를 포함한다. 특정 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 서열 X-L-X-L-X를 포함한다. 특정 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 서열 X-L-X-L-X-L-X를 포함한다. 특정 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 서열 X-L-X-L-X-L-X-L-X를 포함한다. 특정 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 서열 X-L-X-L-X-L-X-L-X-L-X를 포함한다. 특정 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 서열 X-L-X-L-X-L-X-L-X-L-X-L-X를 포함한다. 특정 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 서열 X-L-X-L-X-L-X-L-X-L-X-L-X-L-X를 포함한다. 특정 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 서열 X-L-X-L-X-L-X-L-X-L-X-L-X-L-X-L-X를 포함한다. 특정 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 서열 X-L-X-L-X-L-X-L-X-L-X-L-X-L-X-L-X-L-X를 포함한다. 특정 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 서열 X-L-X-L-X-L-X-L-X-L-X-L-X-L-X-L-X-L-X-L-X를 포함한다.
일부 실시양태에서, L은 존재하지 않는다. 즉, 감기 폴리펩티드의 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드 각각은 1개 이상의 다른 코어 폴리펩티드(예를 들면, X-X, X-X-X, X-X-X-X, X-X-X-X-X, 등)에 직접적으로 연결된다.
일부 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 2개 이상의 동일한 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드를 포함한다. 다른 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 2개 이상의 상이한 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드를 포함한다. 특정 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 2개 이상의 동일한 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드를 포함한다. 특정 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 3개 이상의 동일한 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드를 포함한다. 특정 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 4개 이상의 동일한 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드를 포함한다. 특정 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 5개 이상의 동일한 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드를 포함한다. 특정 실시양태에서, 감기 폴리펩티드의 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드 각각은 동일하다.
특정 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 2개 이상의 상이한 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드를 포함한다. 특정 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 3개 이상의 상이한 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드를 포함한다. 특정 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 4개 이상의 상이한 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드를 포함한다. 특정 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 5개 이상의 상이한 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드를 포함한다.
일부 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 서열 X-L-X-L-X를 포함하고, 이때 X는 아미노산 서열 RIQDLEKYVEDTKIDLWSYNAELLVALENQHTIDLTDSEMNKLFEKTRRQLRENA(서열번호2)를 포함하는 코어 폴리펩티드이고, L은 3개의 글리신 잔기로 이루어진 연결기이다. 다른 실시양태에서, X는 RIQDLEKYVEDTKIDLWSYNAELLVALENQHTIDLTDSEMNKLFEKTRRQLRENA(서열번호 2)가 아니고 동일하거나 변경된다.
일부 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 2개 이상의 변형된 코어 폴리펩티드를 포함하는 것 이외에 T 세포 에피토프, 다량체화를 촉진하는 폴리펩티드(예를 들면, T4 폴돈 도메인), 단백질 태그 및 본원에 기재된 면역원성 폴리펩티드 중 1개, 2개 또는 3개 이상 또는 전부를 포함한다. 특정 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 그의 N-말단에서 His-태그를 포함한다. 특정 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 그의 C-말단에서 FLAG-태그를 포함한다. 특정 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 그의 N-말단에서 His-태그 및 그의 C-말단에서 FLAG-태그를 포함한다. 특정 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 그의 C-말단에서 인플루엔자 A 핵 단백질(NP)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 그의 C-말단에서 FljB 플라겔린을 포함한다.
일부 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 아미노산 서열 H-X-L-X-L-X-F를 포함하고, 이때 H는 His-태그이거나, 또는 감기 폴리펩티드의 정제 및/또는 가용성을 촉진하는 또 다른 단백질 태그이고; X는 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드이고; L은 연결기이고; F는 FLAG-태그이거나, 또는 감기 폴리펩티드의 정제 및/또는 가용성을 촉진하는, H와 상이한 또 다른 단백질 태그이다. 일부 실시양태에서, L은 3개의 글리신 잔기이다. 일부 실시양태에서, L은 동일하고, 다른 실시양태에서 L은 상이하다.
1.5. T 세포 에피토프를 포함하는 감기 폴리펩티드
일부 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 본원에 기재된 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드 및 T 세포 에피토프(예를 들면, CD4 또는 CD8 T 세포 에피토프)를 포함한다. 특정 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드 및 CD4 T 세포 에피토프를 포함한다. 특정 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드 및 CD8 T 세포 에피토프를 포함한다. 또 다른 특정 실시양태에서, T 세포 에피토프는 인플루엔자 바이러스 CD8 T 세포 에피토프(예를 들면, 고도로 보존된 T 세포 에피토프를 함유하는 인플루엔자 바이러스 단백질)이다. T 세포 에피토프는 변형된 코어 폴리펩티드에 의해 코어 폴리펩티드에 직접적으로 또는 간접적으로 연결/커플링될 수 있다.
임의의 특정 작용 이론에 구속받고자 하는 것은 아니지만, 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드 및 CD8 T 세포 에피토프를 포함하는 감기 폴리펩티드는 광범위하게 중화시키는 항체들을 유도할 수 있고 광범위한 CD8 T 세포 반응을 미리 준비시킬 수 있다. CD8 T 세포 에피토프를 함유하는 고도로 보존된 인플루엔자 바이러스 영역은 예를 들면, 인플루엔자 핵 단백질(NP), 매트릭스 1(M1), 뉴라미니다제(neuraminidase)(NA) 및 중합효소 염기성-1(PB1)에서 발견된다. 온전히 그대로 본원에 참고로 도입되는 문헌[Alexander et al., 2010, Hum Immunol 71: 468-74]을 참조한다. 일부 실시양태에서, CD8 T 세포 에피토프는 핵 단백질(NP) 또는 이의 단편이다. 다른 실시양태에서, CD8 T 세포 에피토프 폴리펩티드는 매트릭스 1(M1) 단백질 또는 이의 단편이다.
특정 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 T 세포 에피토프에 연결된 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드를 포함한다. 아민-대-아민 가교연결기 BS(비스[설포숙신이미딜]수베레이트), 아민-대-설프하이드릴 NHS-PEG-말레이미드 가교연결기 또는 설프하이드릴-대-설프하이드릴 BM(PEG)n PEG 가교연결기를 사용하는 기법인 1차 아미노 기 또는 설프하이드릴 기에의 단일 점 부착을 포함하나 이로 한정되지는 않는 당업자에게 공지되어 있는 임의의 기법을 이용하여 T 세포 에피토프(예를 들면, CD8 T 세포 에피토프)를 본원에 기재된 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드에 부착시킬 수 있다. 다른 실시양태에서, T 세포 에피토프(예를 들면, CD8 T 세포 에피토프)는 감기 폴리펩티드의 N-말단 또는 C-말단에 공유연결된다. 다른 실시양태에서, T 세포 에피토프(예를 들면, CD8 T 세포 에피토프)는 본원에서 상기 단락 1.3.에 기재된 연결기를 통해 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드에 연결된다.
일부 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 1개 이상의 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드 및 T 세포 에피토프를 포함하는 것 이외에 단백질 태그, 면역원성 폴리펩티드, 담체, 및/또는 감기 폴리펩티드의 다량체화를 촉진하는 폴리펩티드(예를 들면, T4 폴돈 도메인) 중 1개, 2개 또는 3개 이상 또는 전부를 포함한다.
일부 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 1개, 2개, 3개 또는 4개 이상의 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드 및 T 세포 에피토프를 포함한다. 특정 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 화학식 H-X-L-X-L-X-F-T를 포함하고, 이때 H(선택적 구성요소)는 His-태그이거나, 또는 정제 및/또는 가용성을 촉진하는 또 다른 단백질 태그이고; X는 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드이고; L은 연결기(예컨대, 단락 1.3.에 기재된 연결기)이고; F(선택적 구성요소)는 FLAG-태그이거나, 또는 정제 및/또는 가용성을 촉진하는, H와 상이한 또 다른 단백질 태그이고; T는 T 세포 에피토프이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 화학식 H-X-L-X-L-X-T를 포함하고, 이때 H(선택적 구성요소)는 His-태그이거나, 또는 정제 및/또는 가용성을 촉진하는 또 다른 단백질 태그이고; X는 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드이고; L은 연결기(예컨대, 단락 1.3.에 기재된 연결기)이고; T는 T 세포 에피토프이다.
일부 실시양태에서, L은 3개의 글리신 잔기이다. 일부 실시양태에서, L은 상기 화학식에서 존재할 때마다 동일하고; 다른 실시양태에서, L은 상기 화학식에서 존재할 때마다 상이하거나 변경된다. 일부 실시양태에서, F와 T 사이에 연결기가 존재한다. 다른 실시양태에서, F는 T에 직접적으로 연결된다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드는 상기 화학식에서 존재할 때마다 동일하다. 다른 실시양태에서, 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드는 상기 화학식에서 존재할 때마다 상이하거나 변경된다.
일부 실시양태에서, X와 T 사이에 연결기가 존재한다. 다른 실시양태에서, X는 T에 직접적으로 연결된다.
1.6. 면역원성 폴리펩티드를 포함하는 감기 폴리펩티드
본원에서 제공된 일부 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 1개 이상의 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드 및 면역원성 폴리펩티드를 포함한다. 특정 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 면역원성 폴리펩티드에 직접적으로 또는 간접적으로 연결/커플링된 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드를 포함한다. 면역원성 폴리펩티드는 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드의 N-말단 및/또는 C-말단에 연결/커플링될 수 있다. 일부 실시양태에서, 면역원성 폴리펩티드는 연결기, 예컨대, 상기 단락 1.3.에 기재된 연결기를 통해 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드에 연결된다.
면역원성 폴리펩티드의 예는 톨(Toll) 유사 수용체(TLR) 리간드, 예컨대, 살모넬라 플라겔린(톨 유사 수용체 5 리간드)을 포함하나 이들로 한정되지 않는다. 예를 들면, 문헌[Huleatt et al., 2008, Vaccine 26: 201-14]; 문헌[Song et al., 2009, Vaccine 27: 5875-84]; 및 문헌[Wang et al., 2010, PLos One 5: e13972]을 참조한다. 특정 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 살모넬라 엔테리카(Salmonella enterica)로부터의 FljB 플라겔린에 연결된 코어 폴리펩티드를 포함한다.
일부 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 1개 이상의 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드 및 면역원성 폴리펩티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 1개 이상의 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드 및 면역원성 폴리펩티드를 포함하는 것 이외에 감기 폴리펩티드의 정제를 촉진하고/하거나 가용성을 증가시키는 단백질 태그, T 세포 에피토프, 및/또는 감기 폴리펩티드의 다량체화를 촉진하는 폴리펩티드(예를 들면, T4 폴돈 도메인) 중 1개, 2개 또는 3개 이상 또는 전부를 포함한다.
일부 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 2개, 3개 또는 4개 이상의 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드 및 면역원성 폴리펩티드를 포함한다. 특정 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 H-X-L-X-L-X-F-I를 포함하고, 이때 H는 선택적 구성요소로서 His-태그이거나, 또는 정제 및/또는 가용성을 촉진하는 또 다른 단백질 태그이고; X는 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드이고; L은 선택적 구성요소로서 연결기, 예컨대, 단락 1.3.에 기재된 연결기이고; F는 선택적 구성요소로서 FLAG-태그이거나, 또는 감기 폴리펩티드의 정제 및/또는 가용성을 촉진하는, H와 상이한 또 다른 단백질 태그이고; I는 면역원성 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, L은 3개의 글리신 잔기이다. 일부 실시양태에서, L은 감기 폴리펩티드 전체에 걸쳐 동일하고; 다른 실시양태에서, L은 상기 폴리펩티드 전체에 걸쳐 상이하다. 일부 실시양태에서, F와 I 사이에 연결기가 존재한다. 다른 실시양태에서, F는 I에 직접적으로 연결된다.
특정 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 H-X-L-X-L-X-I를 포함하고, 이때 H는 선택적 구성요소로서 His-태그이거나, 또는 정제 및/또는 가용성을 촉진하는 또 다른 단백질 태그이고; X는 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드이고; L은 선택적 구성요소로서 연결기, 예컨대, 단락 1.3.에 기재된 연결기이고; I는 면역원성 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, L은 3개의 글리신 잔기이다. 일부 실시양태에서, L은 감기 폴리펩티드 전체에 걸쳐 동일하고; 다른 실시양태에서, L은 상기 폴리펩티드 전체에 걸쳐 상이하다. 일부 실시양태에서, X와 I 사이에 연결기가 존재한다. 다른 실시양태에서, X는 I에 직접적으로 연결된다.
1.7. 담체를 포함하는 감기 폴리펩티드
일부 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 본원에 기재된 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드 및 담체를 포함한다. 특정 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 담체에 커플링/연결된 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드를 포함한다. 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드는 담체에 직접적으로 또는 간접적으로 연결/커플링될 수 있다. 당업자에게 공지되어 있는 방법을 이용하여 본원에 기재된 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드를, 파상풍 변성독소(예를 들면, 화학적으로 불활성화된 파상풍 독소), 디프테리아 독소(예를 들면, 화학적으로 불활성화된 디프테리아 변성독소 또는 CRM197 - 비독성 디프테리아 독소 점 돌연변이체), 키홀 림펫 헤모시아닌(KLH), 소 혈청 알부민, 오브알부민, 티로글로불린 또는 수막구균(meningococcal) 외막 단백질을 포함하나 이들로 한정되지 않는 담체에 커플링/연결할(예를 들면, 연결기를 통해 직접적으로 연결할) 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드는 KLH에 연결된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드는 담체 단백질에 직접적으로 연결된다(즉, 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드 및 담체 단백질은 개재하는 연결기 분자 없이 서로 연결된다). 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 코어 폴리펩티드 및 변형된 코어 폴리펩티드는 연결기에 의해 담체 단백질에 연결된다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드는 상기 단락 1.3.에 기재된 연결기에 의해 담체 단백질에 연결된다.
일부 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 1개 초과의 담체에 커플링/연결된 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드를 포함한다. 특정 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 2개, 3개, 4개 또는 5개 이상의 담체에 커플링/연결된 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드를 포함한다.
일부 실시양태에서, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 6개 이상의 본원에 기재된 동일한 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드가 담체에 연결된다. 일부 실시양태에서, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 6개 이상의 본원에 기재된 상이한 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드가 담체에 연결된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드는 화학적 가교연결에 의해 담체에 커플링/연결된다. 예를 들면, 가교연결기 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필)카보다이이미드("EDC") 또는 가교연결기 설포숙신이미딜 4-[N-말레이미도메틸]사이클로헥산-1-카복실레이트("설포-SMCC")를 사용하여 코어 폴리펩티드를 담체에 가교연결할 수 있다. 다른 가교연결기는 글루타르알데하이드 및 비스-다이아조화된 벤지딘을 포함한다. 가교연결 방법은 당업자에게 잘 공지되어 있고, 통상의 가교연결 화학적 기법은 웹사이트(www.piercenet.com/browse.cfm?fldID=CE4D6C5C-5946-4814-9904-C46E01232683)에서 찾을 수 있다.
특정 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 (i) 인플루엔자 바이러스 균주 A/홍콩/1/1968(H3)의 HA2 헤마글루티닌 아단위의 긴 알파 나선(즉, 고전적인 H3 아형 넘버링 시스템에 따라 넘버링될 때 아미노산 76 내지 130); (ii) FLAG-태그; 및 (iii) 예를 들면, 코어 폴리펩티드를 담체(예를 들면, KLH)에 커플링/연결시키기 위해 사용될 수 있는 C-말단 시스테인 잔기를 포함한다. 특정 실시양태에서, 이러한 감기 폴리펩티드는 하기 아미노산 서열을 포함하고, 이때 FLAG-태그는 아미노산 서열 DYKDDDDK로 표시된다:
RIQDLEKYVEDTKIDLWSYNAELLVALENQHTIDLTDSEMNKLFEKTRRQLRENADYKDDDDKC(서열번호 1).
일부 실시양태에서, 변형된 코어 폴리펩티드의 N-말단은 아세틸화된다.
1.8. 다량체화 폴리펩티드
일부 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 본원에 기재된 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드 및 다량체(예를 들면, 삼량체) 형성을 촉진하는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 코어 폴리펩티드 또는 변형된 폴리펩티드는 삼량체의 형성을 허용/촉진하는 폴리펩티드, 예컨대, T4 폴돈 도메인에 커플링/연결된다.
특정 실시양태에서, 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드는 그의 C-말단에서 다량체화(예를 들면, 삼량체화, 예컨대, T4 폴돈 도메인에 의한 삼량체화)를 촉진하는 폴리펩티드에 간접적으로 또는 직접적으로 연결/커플링된다. 온전히 그대로 본원에 참고로 도입되는 문헌[Meier et al., 2004, J Mol Biol 344: 1051-69]을 참조한다. 임의의 특정 작용 이론에 구속받고자 하는 것은 아니지만, T4 폴돈 도메인은 천연 헤마글루티닌 분자에서 관찰되는 인플루엔자 A 긴 알파 나선의 삼량체 입체구조가 형성될 수 있게 한다.
일부 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 2개 이상의 코어 폴리펩티드 또는 변형된 폴리펩티드 및 삼량체의 형성을 촉진하는 폴리펩티드를 포함한다. 특정 실시양태에서, 삼량체의 형성을 촉진하는 폴리펩티드는 T4 폴돈 도메인이다.
일부 실시양태에서, 다량체의 형성을 촉진하는 폴리펩티드는 연결기, 예컨대, 상기 단락 1.3.에 기재된 연결기에 의해 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드에 연결/커플링된다. 즉, 일부 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드, 연결기, 및 다량체의 형성을 촉진하는 폴리펩티드, 예컨대, T4 폴돈 도메인을 포함한다.
일부 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 2개, 3개 또는 4개 이상의 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드 및 다량체화를 촉진하는 폴리펩티드, 예컨대, T4 폴돈 도메인을 포함하는 것 이외에 감기 폴리펩티드의 정제 및/또는 가용성을 촉진하는 단백질 태그, 면역원성 폴리펩티드 및/또는 담체, 예컨대, 본원에 기재된 담체 중 1개, 2개 또는 3개 이상 또는 전부를 포함한다. 특정 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 정제 및/또는 가용성을 촉진하는 단백질 태그(예를 들면, His-태그), 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드, 및 삼량체화를 촉진하는 폴리펩티드, 예컨대, T4 폴돈 도메인을 포함한다.
2. 감기 폴리펩티드를 코딩하는 핵산
본원은 본원에 기재된 감기 폴리펩티드를 코딩하는 핵산을 제공한다. 유전코드의 축퇴성으로 인해, 본원에 기재된 감기 폴리펩티드를 코딩하는 임의의 핵산이 본원에 포함된다. 일부 실시양태에서, 헤마글루티닌 단백질의 HA2 도메인의 한 영역(예를 들면, 긴 알파 나선 영역)을 코딩하는 천연 인플루엔자 바이러스 핵산에 상응하는 핵산을 사용하여 감기 폴리펩티드를 생성한다.
또한, 본원은 감기 폴리펩티드를 코딩하는 핵산에 혼성화할 수 있는 핵산도 제공한다. 일부 실시양태에서, 본원은 감기 폴리펩티드를 코딩하는 핵산의 단편에 혼성화할 수 있는 핵산을 제공한다. 다른 실시양태에서, 본원은 감기 폴리펩티드를 코딩하는 전장 핵산에 혼성화할 수 있는 핵산을 제공한다. 핵산의 혼성화 조건에 대한 일반적인 파라미터는 문헌[Sambrook et al., Molecular Cloning - A Laboratory Manual (2nd Ed.), Vols. 1-3, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York (1989)] 및 문헌[Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, vol. 2, Current Protocols Publishing, New York (1994)]에 기재되어 있다. 혼성화는 고엄격도(high stringency) 조건, 중엄격도(medium stringency) 조건 또는 저엄격도(low stringency) 조건 하에 수행될 수 있다. 당업자는 저엄격도 조건, 중엄격도 조건 및 고엄격도 조건이 다수의 인자(이들 모두는 상호작용하고 해당 핵산에 의해 좌우됨)에 의해 좌우된다는 것을 이해할 것이다. 예를 들면, 고엄격도 조건은 핵산의 용융 온도 ± 5℃ 내의 온도, 낮은 염 농도(예를 들면, 250 mM 미만) 및 높은 보조용매 농도(예를 들면, 1% 내지 20%의 보조용매, 예를 들면, DMSO)를 포함할 수 있다. 다른 한편으로, 저엄격도 조건은 핵산의 용융 온도보다 10℃ 이상 낮은 온도, 높은 염 농도(예를 들면, 1000 mM 초과) 및 보조용매의 부재를 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 인플루엔자 바이러스 감기 폴리펩티드를 코딩하는 핵산은 단리된다(즉, 본원에 기재된 감기 폴리펩티드는 단리된다). 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 인플루엔자 바이러스 코어 폴리펩티드 또는 변형된 코어 폴리펩티드를 코딩하는 핵산은 단리된다. 일부 실시양태에서, "단리된" 핵산은 상기 핵산의 천연 공급원에 존재하는 다른 핵산 분자로부터 분리된 핵산 분자를 의미한다. 즉, 단리된 핵산은 천연 상태에서 그 자신과 관련없는 이종 핵산을 포함할 수 있다. 다른 실시양태에서, "단리된" 핵산, 예컨대, cDNA 분자는 재조합 기법에 의해 제조될 때 다른 세포 물질 또는 배양 배지를 실질적으로 갖지 않을 수 있거나, 또는 화학적으로 합성될 때 화학 전구체 또는 다른 화학물질을 실질적으로 갖지 않을 수 있다. 용어 "세포 물질을 실질적으로 갖지 않는"은 핵산이 이 핵산을 단리하거나 재조합적으로 제조하는 데에 사용된 세포의 세포 성분으로부터 분리되어 있는 핵산 제제를 포함한다. 따라서, 세포 물질을 실질적으로 갖지 않는 핵산은 (건조 중량을 기준으로) 약 30%, 20%, 10% 또는 5% 미만의 다른 핵산을 갖는 핵산 제제를 포함한다. 용어 "배양 배지를 실질적으로 갖지 않는"은 배양 배지가 핵산 제제의 부피의 약 50%, 20%, 10% 또는 5% 미만을 차지하는 핵산 제제를 포함한다. 용어 "화학 전구체 또는 다른 화학물질을 실질적으로 갖지 않는"은 핵산이 이 핵산의 합성에 관여하는 화학 전구체 또는 다른 화학물질로부터 분리되어 있는 제제를 포함한다. 특정 실시양태에서, 이러한 핵산 제제는 관심 있는 핵산 이외에 (건조 중량을 기준으로) 약 50%, 30%, 20%, 10% 또는 5% 미만의 화학 전구체 또는 화합물을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본원은 코어 폴리펩티드 및 1개 이상의 추가 성분, 예를 들면, 연결기, 담체, 단백질 태그, 및/또는 코어 폴리펩티드와 관련되어 있는 단백질을 포함하는 감기 폴리펩티드를 코딩하는 핵산을 제공한다.
3. 감기 폴리펩티드의 제조 및 정제
본원에 기재된 감기 폴리펩티드는 당업계에서 공지되어 있는 임의의 폴리펩티드 합성 방법, 구체적으로 화학적 합성 또는 재조합 발현 기법에 의해 제조될 수 있다. 본원에서 제공된 방법은, 달리 명시되어 있지 않은 한, 분자생물학, 미생물학, 유전 분석, 재조합 DNA, 유기화학, 생화학, PCR, 올리고뉴클레오티드 합성 및 변형, 핵산 혼성화, 및 당업계의 기술 내의 관련 분야에서 통상적으로 이용되는 기법을 포함한다. 이들 기법은 본원에서 인용된 참고문헌들에 기재되어 있고 문헌에서 전체적으로 설명되어 있다. 예를 들면, 문헌[Maniatis et al. (1982) Molecular Cloning : A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press]; 문헌[Sambrook et al. (1989), Molecular Cloning : A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press]; 문헌[Sambrook et al. (2001) Molecular Cloning : A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY]; 문헌[Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons (1987 and annual updates)]; 문헌[Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons (1987 and annual updates) Gait (ed.) (1984) Oligonucleotide Synthesis : A Practical Approach, IRL Press]; 문헌[Eckstein (ed.) (1991) Oligonucleotides and Analogues : A Practical Approach, IRL Press]; 및 문헌[Birren et al. (eds.) (1999) Genome Analysis : A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press]을 참조한다.
3.1. 감기 폴리펩티드의 합성 제조
본원에 기재된 감기 폴리펩티드는 통상적인 단계적 용액 또는 고체 상(phase) 합성을 이용하여 제조할 수 있다(예를 들면, 문헌[Chemical Approaches to the Synthesis of Peptides and Proteins, Williams et al., Eds., 1997, CRC Press, Boca Raton Fla.] 및 여기서 인용된 참고문헌; 및 문헌[Solid Phase Peptide Synthesis: A Practical Approach, Atherton & Sheppard, Eds., 1989, IRL Press, Oxford, England] 및 여기서 인용된 참고문헌 참조).
대안적으로, 본원에 기재된 감기 폴리펩티드는 예를 들면, 하기 문헌들에 기재된 분절 응축에 의해 제조될 수 있다: 문헌[Liu et al., 1996, Tetrahedron Lett. 37(7):933-936]; 문헌[Baca, et al., 1995, J. Am. Chem. Soc. 117:1881-1887]; 문헌[Tam et al., 1995, Int. J. Peptide Protein Res. 45:209-216]; 문헌[Schnolzer and Kent, 1992, Science 256:221-225]; 문헌[Liu and Tam, 1994, J. Am. Chem. Soc. 116(10):4149-4153]; 문헌[Liu and Tam, 1994, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:6584-6588]; 및 문헌[Yamashiro and Li, 1988, Int. J. Peptide Protein Res. 31:322-334]. 본원에 기재된 감기 폴리펩티드의 합성에 유용한 다른 방법은 문헌[Nakagawa et al., 1985, J. Am. Chem. Soc. 107:7087-7092]에 기재되어 있다.
코어 폴리펩티드 및 연결기를 포함하는 감기 폴리펩티드는 합성의 적절한 단계에서 연결기를 코어 폴리펩티드 쇄에 부가함으로써 합성할 수 있다. 적합한 보호 방법 및 화학적 기법은 잘 공지되어 있고 당업자에게 자명할 것이다.
원하는 경우, 이황화 연결의 형성을 일반적으로 약한 산화제의 존재 하에 수행한다. 이들 연결을 달성하기 위해, 화학적 산화제를 사용할 수 있거나, 단순히 화합물을 대기 산소에 노출시킬 수 있다. 예를 들면, 문헌[Tam et al., 1979, Synthesis 955-957]; 문헌[Stewart et al., 1984, Solid Phase Peptide Synthesis, 2d Ed., Pierce Chemical Company Rockford, III]; 문헌[Ahmed et al., 1975, J. Biol. Chem. 250:8477-8482]; 및 문헌[Pennington et al., 1991 Peptides 1990 164-166, Giralt and Andreu, Eds., ESCOM Leiden, The Netherlands]에 기재된 방법을 포함하는 다양한 방법들이 당업계에서 공지되어 있다. 추가 대안적 방법은 문헌[Kamber et al., 1980, Helv. Chim. Acta 63:899-915]에 기재되어 있다. 고체 지지체 상에서 수행되는 방법은 온전히 그대로 본원에 참고로 도입되는 문헌[Albericio, 1985, Int. J. Peptide Protein Res. 26:92-97]에 기재되어 있다.
3.2. 감기 폴리펩티드의 재조합 발현
감기 폴리펩티드의 재조합 발현은 감기 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 함유하는 발현 벡터의 구축을 필요로 한다. 일단 감기 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드가 수득되면, 감기 폴리펩티드의 제조를 위한 벡터는 당업계에서 잘 공지되어 있는 기법을 이용하여 재조합 DNA 기술로 제조할 수 있다. 따라서, 감기 폴리펩티드 코딩 뉴클레오티드 서열을 함유하는 폴리뉴클레오티드를 발현하여 감기 폴리펩티드를 제조하는 방법은 본원에 기재되어 있다. 당업자에게 잘 공지되어 있는 방법을 이용하여 감기 폴리펩티드 코딩 서열, 및 적절한 전사 및 번역 조절 신호를 함유하는 발현 벡터를 구축할 수 있다. 이들 방법은 예를 들면, 시험관내 재조합 DNA 기법, 합성 기법 및 생체내 유전 재조합을 포함한다. 따라서, 본원은 프로모터에 작동가능하게(operably) 연결된 감기 폴리펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 복제가능한 발현 벡터를 제공한다.
발현 벡터는 숙주 세포 내에서의 핵산의 발현에 적합한 형태로 감기 폴리펩티드를 코딩하는 핵산을 포함한다. 특정 실시양태에서, 숙주 세포는 단리된 숙주 세포이다. 특정 실시양태에서, 발현 벡터는 발현을 위해 사용될 숙주 세포에 근거하여 선택된, 발현될 핵산에 작동가능하게 연결된 1개 이상의 조절 서열을 포함한다. 발현 벡터 내에서, "작동가능하게 연결된"은 관심 있는 핵산이 (예를 들면, 시험관내 전사/번역 시스템에서, 또는 벡터가 숙주 세포 내로 도입되는 경우 숙주 세포 내에서) 상기 핵산의 발현을 가능하게 하는 방식으로 조절 서열에 연결되어 있다는 것을 의미하기 위한 것이다. 조절 서열은 프로모터, 인핸서(enhancer) 및 다른 발현 조절 요소(예를 들면, 폴리아데닐화 신호)를 포함한다. 조절 서열은 많은 유형의 숙주 세포에서 핵산의 항시적(constitutive) 발현을 유도하는 조절 서열, 일부 숙주 세포에서만 핵산의 발현을 유도하는 조절 서열(예를 들면, 조직 특이적 조절 서열), 및 특정한 물질에 의해 자극받았을 때 핵산의 발현을 유도하는 조절 서열(예를 들면, 유도적 조절 서열)을 포함한다. 당업자는 발현 벡터의 디자인이 형질전환될 숙주 세포의 선택, 원하는 단백질의 발현 수준 등과 같은 인자들에 의해 좌우될 수 있다는 것을 인식할 것이다. 용어 "숙주 세포"는 핵산에 의해 형질전환된 또는 형질감염된 특정 대상체 세포, 및 이러한 세포의 자손세포(progeny) 또는 잠재적 자손세포를 포함하기 위한 것이다. 이러한 세포의 자손세포는 계속되는 발생 또는 숙주 세포 게놈 내로의 핵산의 삽입에서 일어날 수 있는 돌연변이 또는 환경적 영향으로 인해 상기 핵산에 의해 형질전환된 또는 형질감염된 모세포와 동일하지 않을 수 있다. 특정 실시양태에서, 숙주 세포는 단리된다.
발현 벡터는 통상적인 형질전환 또는 형질감염 기법을 통해 숙주 세포 내로 도입될 수 있다. 이러한 기법은 인산칼슘 또는 염화칼슘 공침전(co-precipitation), DEAE-덱스트란-매개된 형질감염, 리포펙션 및 전기천공을 포함하나 이들로 한정되지 않는다. 숙주 세포를 형질전환시키거나 형질감염시키기에 적합한 방법은 문헌[Sambrook et al., 1989, Molecular Cloning - A Laboratory Manual, 2nd Edition, Cold Spring Harbor Press, New York] 및 다른 실험실 매뉴얼에서 찾을 수 있다. 일부 실시양태에서, 숙주 세포는 감기 폴리펩티드를 코딩하는 핵산을 함유하는 발현 벡터에 의해 일시적으로 형질감염된다. 다른 실시양태에서, 숙주 세포는 감기 폴리펩티드를 코딩하는 핵산을 함유하는 발현 벡터에 의해 안정적으로 형질감염된다. 따라서, 본원은 본원에 기재된 감기 폴리펩티드 또는 본원에 기재된 방법에 따라 발생된 감기 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 함유하는 숙주 세포를 제공한다.
다양한 숙주 발현 벡터 시스템들을 이용하여 감기 폴리펩티드를 발현할 수 있다. 이러한 숙주 발현 시스템들은 관심 있는 코딩 서열을 생성한 후 정제하는 데에 사용될 수 있는 비히클을 나타낼 뿐만 아니라 적절한 뉴클레오티드 코딩 서열에 의해 형질전환되거나 형질감염된 경우 제자리에서 감기 폴리펩티드를 발현할 수 있는 세포를 나타낸다. 이들은 감기 폴리펩티드 코딩 서열을 함유하는 재조합 박테리오파지 DNA, 플라스미드 DNA 또는 코스미드 DNA 발현 벡터에 의해 형질전환된 미생물, 예컨대, 박테리아(예를 들면, 에스케리치아 콜라이(E. coli) 및 바실러스 서브틸리스(B. subtilis)); 감기 폴리펩티드 코딩 서열을 함유하는 재조합 효모 발현 벡터에 의해 형질전환된 효모(예를 들면, 사카로마이세스 피치아(Saccharomyces Pichia)); 감기 폴리펩티드 코딩 서열을 함유하는 재조합 바이러스 발현 벡터(예를 들면, 바큘로바이러스)에 감염된 곤충 세포 시스템; 감기 폴리펩티드 코딩 서열을 함유하는 재조합 바이러스 발현 벡터(예를 들면, 꽃양배추 모자이크 바이러스, CaMV; 담배 모자이크 바이러스, TMV)에 감염되거나 감기 폴리펩티드 코딩 서열을 함유하는 재조합 플라스미드 발현 벡터(예를 들면, Ti 플라스미드)에 의해 형질전환된 식물 세포 시스템; 또는 포유동물 세포의 게놈으로부터 유래된 프로모터(예를 들면, 메탈로티오네인 프로모터) 또는 포유동물 바이러스로부터 유래된 프로모터(예를 들면, 아데노바이러스 후기 프로모터 또는 백시니아 바이러스 7.5K 프로모터)를 함유하는 재조합 발현 구축물을 보유하는 포유동물 세포 시스템(예를 들면, COS, CHO, BHK, 293, NS0 및 3T3 세포)을 포함하나 이들로 한정되지 않는다. 감기 폴리펩티드의 발현을 위해, 바람직하게는 박테리아 세포, 예컨대, 에스케리치아 콜라이, 보다 바람직하게는 진핵세포를 사용한다. 예를 들면, 벡터, 예컨대, 인간 사이토메갈로바이러스로부터 유래된 주요 중간 초기 유전자 프로모터 요소(major intermediate early gene promoter element)와 함께 포유동물 세포, 예컨대, 중국 햄스터 난소 세포(CHO)가 감기 폴리펩티드를 위한 효과적인 발현 시스템이다(문헌[Foecking et al., 1986, Gene 45:101; and Cockett et al., 1990, Bio/Technology 8:2]). 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 감기 폴리펩티드 또는 본원에서 제공된 방법에 따라 발생된 감기 폴리펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열의 발현은 항시적 프로모터, 유도적 프로모터 또는 조직 특이적 프로모터에 의해 조절된다.
박테리아 시스템에서, 발현되는 감기 폴리펩티드의 의도된 용도에 따라 다수의 발현 벡터들이 유리하게 선택될 수 있다. 예를 들면, 감기 폴리펩티드의 약학 조성물을 생성하기 위해 다량의 감기 폴리펩티드를 제조하고자 하는 경우, 용이하게 정제되는 고수준의 융합 단백질 생성물의 발현을 유도하는 벡터가 바람직할 수 있다. 이러한 벡터는 이. 콜라이 발현 벡터 pUR278(문헌[Ruther et al., 1983, EMBO 12:1791])(이때, 융합 단백질이 생성되도록 감기 폴리펩티드 코딩 서열이 lac Z 코딩 영역과 인 프레임(in frame)으로 상기 벡터 내로 개별적으로 결찰될(ligated) 수 있음); pIN벡터(문헌[Inouye & Inouye, 1985, Nucleic Acids Res. 13:3101-3109]; 및 문헌[Van Heeke & Schuster, 1989, J. Biol. Chem. 24:5503-5509]) 등을 포함하나 이들로 한정되지 않는다. 또한, pGEX 벡터를 사용하여 글루타티온 5-트랜스퍼라제(GST)와의 융합 단백질로서 외래 폴리펩티드를 발현할 수 있다. 일반적으로, 이러한 융합 단백질은 가용성을 나타내고 매트릭스 글루타티온 아가로스 비드에의 흡착 및 결합 후 자유 글루타티온의 존재 하에서의 용출에 의해 용해된 세포로부터 용이하게 정제될 수 있다. pGEX 벡터는 트롬빈 또는 인자 Xa 프로테아제 절단 부위를 포함하여 클로닝된 표적 유전자 생성물이 GST 부분으로부터 방출될 수 있도록 디자인된다.
곤충 시스템에서, 오토그라파 칼리포르니카(Autographa californica) 핵 다각체병(polyhedrosis) 바이러스(AcNPV)를 벡터로서 사용하여 외래 유전자를 발현한다. 상기 바이러스는 스포도프테라 프루기페르다(Spodoptera frugiperda) 세포에서 성장한다. 감기 폴리펩티드 코딩 서열을 상기 바이러스의 비-필수 영역(예를 들면, 다각체(polyhedrin) 유전자) 내로 개별적으로 클로닝하여 AcNPV 프로모터(예를 들면, 다각체 프로모터)의 조절 하에 위치시킬 수 있다.
포유동물 숙주 세포에서, 다수의 바이러스계 발현 시스템들을 이용할 수 있다. 아데노바이러스가 발현 벡터로서 사용되는 경우, 관심 있는 감기 폴리펩티드 코딩 서열을 아데노바이러스 전사/번역 조절 결합체, 예를 들면, 후기 프로모터 및 삼부(tripartite) 리더 서열에 결찰시킬 수 있다. 그 다음, 이 키메라 유전자를 시험관내 또는 생체내 재조합으로 아데노바이러스 게놈에 삽입할 수 있다. 상기 바이러스 게놈의 비-필수 영역(예를 들면, E1 또는 E3 영역) 내로의 삽입은 감염된 숙주에서 생존가능하고 감기 폴리펩티드를 발현할 수 있는 재조합 바이러스를 발생시킬 것이다(예를 들면, 문헌[Logan & Shenk, 1984, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 8 1:355-359] 참조). 삽입된 감기 폴리펩티드 코딩 서열의 효율적인 번역을 위해 특이적 개시 신호도 요구될 수 있다. 이들 신호는 ATG 개시 코돈 및 인접 서열을 포함한다. 나아가, 개시 코돈은 전체 삽입체의 번역을 보장하도록 원하는 코딩 서열의 판독(reading) 프레임과 일치하는 상태로 존재해야 한다. 이들 외인성(exogenous) 번역 조절 신호 및 개시 코돈은 다양한 기원, 즉 천연 및 합성 기원으로부터 유래될 수 있다. 발현 효율은 적절한 전사 인핸서 요소, 전사 종결자(terminator) 등의 포함에 의해 향상될 수 있다(예를 들면, 문헌[Bittner et al., 1987, Methods in Enzymol. 153:51-544] 참조).
추가로, 삽입된 서열의 발현을 조절하거나 유전자 생성물을 원하는 특정 방식으로 변형하고 프로세싱하는 숙주 세포 균주를 선택할 수 있다. 단백질 생성물의 이러한 변형(예를 들면, 글리코실화) 및 프로세싱(예를 들면, 절단)은 감기 폴리펩티드의 기능에 중요할 수 있다. 상이한 숙주 세포들은 단백질 및 유전자 생성물의 번역 후 프로세싱 및 변형을 위한 특징적이고 특이적인 기작을 갖는다. 발현된 외래 단백질의 정확한 변형 및 프로세싱을 보장하기 위해 적절한 세포주 또는 숙주 시스템을 선택할 수 있다. 이를 위해, 1차 전사체의 적절한 프로세싱, 글리코실화 및 유전자 생성물의 인산화를 위한 세포 기구를 보유하는 진핵 숙주 세포를 사용할 수 있다. 이러한 포유동물 숙주 세포는 CHO, VERY, BHK, Hela, COS, Vero, MDCK, 293, 3T3, W138, BT483, Hs578T, HTB2, BT2O 및 T47D, NS0(임의의 면역글로불린 쇄를 내인적으로 생성하지 않는 뮤린 골수종 세포주), CRL7O3O 및 HsS78Bst 세포를 포함하나 이들로 한정되지 않는다.
재조합 감기 폴리펩티드의 장기간 고수율 제조를 위해, 안정한 발현이 바람직하다. 예를 들면, 감기 폴리펩티드 분자를 안정하게 발현하는 세포주를 개조할 수 있다. 바이러스 복제 기점을 함유하는 발현 벡터를 사용하는 것보다 오히려 숙주 세포를 적절한 발현 조절 요소(예를 들면, 프로모터, 인핸서, 서열, 전사 종결자, 폴리아데닐화 부위 등), 및 선택 마커에 의해 조절되는 DNA로 형질전환시킬 수 있다. 외래 DNA의 도입 후, 개조된 세포를 농축 배지에서 1일 내지 2일 동안 성장시킨 후 배지를 선택 배지로 전환시킬 수 있다. 재조합 플라스미드 내의 선택 마커는 선택에 대한 내성을 부여하고 세포가 플라스미드를 그의 염색체 내로 안정하게 삽입하고 성장하여 증식소(foci)(이 증식소는 클로닝되고 세포주로 증폭될 수 있음)를 형성할 수 있게 한다. 이 방법은 감기 폴리펩티드를 발현하는 세포주를 개조하는 데에 유리하게 이용될 수 있다. 이러한 개조된 세포주는 감기 폴리펩티드와 직접적으로 또는 간접적으로 상호작용하는 조성물의 검색 및 평가에 있어서 특히 유용할 수 있다. 재조합 DNA 기술 분야에서 통상적으로 공지되어 있는 방법을 상용적으로 적용하여 원하는 재조합 클론을 선택할 수 있고, 이러한 방법은 예를 들면, 온전히 그대로 본원에 참고로 도입되는 문헌[Ausubel et al. (eds.), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY (1993)]; 문헌[Kriegler, Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual, Stockton Press, NY (1990)]; 문헌[Chapters 12 and 13, Dracopoli et al. (eds.), Current Protocols in Human Genetics, John Wiley & Sons, NY (1994)]; 및 문헌[Colberre-Garapin et al., 1981, J. Mol. Biol. 150:1]에 기재되어 있다.
감기 폴리펩티드의 발현 수준은 벡터 증폭에 의해 증가될 수 있다(검토를 위해서는 문헌[Bebbington and Hentschel, The use of vectors based on gene amplification for the expression of cloned genes in mammalian cells in DNA cloning, Vol. 3 (Academic Press, New York, 1987)] 참조). 감기 폴리펩티드를 발현하는 벡터 시스템 내의 마커가 증폭가능한 경우, 숙주 세포의 배양물에 존재하는 억제제 수준의 증가는 마커 유전자의 카피 수를 증가시킬 것이다. 증폭된 영역이 감기 폴리펩티드와 관련되어 있기 때문에, 감기 폴리펩티드의 제조도 증가할 것이다(문헌[Crouse et al., 1983, Mol. Cell. Biol. 3:257]).
숙주 세포를 사용하는 감기 폴리펩티드의 재조합 발현에 대한 대안으로서, 감기 폴리펩티드를 코딩하는 핵산을 함유하는 발현 벡터를, 예를 들면, T7 프로모터 조절 서열 및 T7 중합효소를 사용하여 시험관 내에서 전사하고 번역할 수 있다. 특정 실시양태에서, 커플링된 전사/번역 시스템, 예컨대, 프로메가(Promega) TNT(등록상표), 또는 전사 및 번역에 필요한 성분들을 포함하는 세포 용해물 또는 세포 추출물을 사용하여 감기 폴리펩티드를 제조할 수 있다.
따라서, 본원은 감기 폴리펩티드를 제조하는 방법을 제공한다. 한 실시양태에서, 상기 방법은 상기 폴리펩티드를 코딩하는 핵산을 함유하는 숙주 세포를 적합한 배지에서 배양하여 상기 폴리펩티드를 제조하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 상기 폴리펩티드를 상기 배지 또는 상기 숙주 세포로부터 단리하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 감기 폴리펩티드를 발현하도록 식물(예를 들면, 니코티아나(Nicotiana) 속의 식물)을 개조할 수 있다. 특정 실시양태에서, 당업계에서 공지되어 있는 방법을 이용하여 아그로침윤(agroinfiltration) 절차를 통해 본원에 기재된 감기 폴리펩티드를 발현하도록 식물을 개조한다. 예를 들면, 관심 있는 유전자, 예를 들면, 본원에 기재된 감기 폴리펩티드를 코딩하는 유전자를 코딩하는 핵산을 아그로박테리아(Agrobacterium) 균주 내로 도입한다. 이어서, 상기 균주를 액체 배양물에서 성장시키고, 생성된 박테리아를 세척하고 완충제 용액 내로 현탁한다. 그 다음, 아그로박테리아가 관심 있는 유전자를 식물 세포의 일부에 형질전환시키도록 (예를 들면, 주사 또는 침수를 통해) 상기 식물을, 본원에 기재된 감기 폴리펩티드를 코딩하는 핵산을 포함하는 아그로박테리아에 노출시킨다. 그 다음, 감기 폴리펩티드를 상기 식물을 이용하여 일시적으로 발현하고 당업계에서 공지되어 있고 본원에 기재되어 있는 방법을 이용하여 단리할 수 있다. (특정 예에 대해서는 문헌[Shoji et al., 2008, Vaccine, 26(23):2930-2934]; 및 문헌[D'Aoust et al., 2008, J. Plant Biotechnology, 6(9):930-940)]을 참조한다). 특정 실시양태에서, 식물은 담배 식물(즉, 니코티아나 타바쿰(Nicotiana tabacum))이다. 또 다른 특정 실시양태에서, 식물은 담배 식물의 관련 식물(예를 들면, 니코티아나 벤타미아나(Nicotiana benthamiana))이다.
일부 실시양태에서, 식물 배양 시스템은 감기 폴리펩티드의 발현을 위해 사용된다. 식물 세포 배양 시스템을 이용하여 단백질을 제조하기 위한 식물 세포 및 방법에 대해서는 예를 들면, 미국 특허 제5,929,304호, 제7,504,560호, 제6,770,799호, 제6,551,820호, 제6,136,320호, 제6,034,298호, 제5,914,935호, 제5,612,487호 및 제5,484,719호; 미국 특허출원 공개 제2009/0208477호, 제2009/0082548호, 제2009/0053762호, 제2008/0038232호, 제2007/0275014호 및 제2006/0204487호; 문헌[Shoji et al., 2008, Vaccine, 26(23):2930-2934]; 및 문헌[D'Aoust et al., 2008, J. Plant Biotechnology, 6(9):930-940)](온전히 그대로 본원에 참고로 도입됨)]을 참조한다. 특정 실시양태에서, 감기 폴리펩티드를 발현하도록 당근 세포를 개조한다. 일부 실시양태에서, 감기 폴리펩티드를 발현하도록 조류(예를 들면, 클라미도모나스 레인하르드티이(Chlamydomonas reinhardtii))를 개조할 수 있다(예를 들면, 온전히 그대로 본원에 참고로 도입되는 문헌[Rasala et al., 2010, Plant Biotechnology Journal](2010년 3월 7일자로 온라인 공개됨) 참조).
3.3. 감기 폴리펩티드의 정제
본원에 기재되어 있는 감기 폴리펩티드 및 상기 단락 3.1. 및 3.2.에 기재된 방법을 이용하여 발생시킨 감기 폴리펩티드는 당업계에서 공지되어 있는 임의의 폴리펩티드 정제 방법, 예를 들면, 크로마토그래피(예를 들면, 이온 교환, 친화성, 특히 단백질 A 후 특이적 항원에 대한 친화성, 및 사이징(sizing) 컬럼 크로마토그래피), 원심분리, 차등 가용성 또는 임의의 다른 표준 단백질 정제 기법에 의해 정제될 수 있다. 추가로, 정제를 촉진하기 위해 감기 폴리펩티드를 본원에 기재되어 있거나 당업계에서 공지되어 있는 이종 폴리펩티드 서열에 융합시킬 수 있다. 특정 감기 폴리펩티드를 정제하는 데에 이용되는 실제 조건은 부분적으로 합성 방법(예를 들면, 합성 제조 대 재조합 제조), 및 예컨대, 감기 폴리펩티드의 순전하, 소수성 및/또는 친수성과 같은 인자들에 의해 좌우될 것이고, 당업자에게 자명할 것이다.
4. 인플루엔자 바이러스 벡터
한 양태에서, 본원은 감기 폴리펩티드를 함유하는 인플루엔자 바이러스를 제공한다. 특정 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 인플루엔자 바이러스의 비리온 내로 도입된다. 인플루엔자 바이러스는 이 바이러스를 특정 세포 유형, 예컨대, 면역 세포에 표적화시키는 부분에 접합될 수 있다. 일부 실시양태에서, 인플루엔자 바이러스의 비리온은 감기 폴리펩티드 이외에 이종 폴리펩티드를 그들 내로 도입하거나 발현한다. 이종 폴리펩티드는 면역강화 활성을 갖거나 인플루엔자 바이러스를 특정 세포 유형으로 표적화시키는 폴리펩티드, 예컨대, 특정 세포 유형 상의 항원에 결합하는 항체 또는 특정 세포 유형 상의 특정 수용체에 결합하는 리간드일 수 있다.
당업자에게 공지되어 있는 기법, 예컨대, 역유전학(reverse genetics) 및 헬퍼(helper) 부재 플라스미드 레스큐(rescue)를 이용하여 감기 폴리펩티드를 비리온의 제조 동안 트랜스로(in trans) 공급함으로써 감기 폴리펩티드를 함유하는 인플루엔자 바이러스를 제조할 수 있다. 대안적으로, 모 인플루엔자 바이러스는 상기 바이러스에의 감염에 민감한 세포에서 감기 폴리펩티드를 발현하도록 개조된 게놈을 포함하고, 이때 헤마글루티닌 기능은 인플루엔자 감기 폴리펩티드를 함유하는 자손 인플루엔자 바이러스를 생성하도록 트랜스로 공급된다.
또 다른 양태에서, 본원은 감기 폴리펩티드를 발현하도록 개조된 게놈을 포함하는 인플루엔자 바이러스를 제공한다. 특정 실시양태에서, 모 인플루엔자 바이러스의 게놈은 감기 폴리펩티드를 코딩하도록 개조되고, 상기 폴리펩티드는 자손 인플루엔자 바이러스에 의해 발현된다. 또 다른 특정 실시양태에서, 모 인플루엔자 바이러스의 게놈은 감기 폴리펩티드를 코딩하도록 개조되고, 상기 폴리펩티드는 발현되어 자손 인플루엔자 바이러스의 비리온 내로 도입된다. 따라서, 모 인플루엔자 바이러스의 복제로부터 발생된 자손 인플루엔자 바이러스는 감기 폴리펩티드를 함유한다.
일부 실시양태에서, 모 인플루엔자 바이러스의 비리온은 이종 폴리펩티드를 그들 내로 도입한다. 일부 실시양태에서, 모 인플루엔자 바이러스의 게놈은 이종 폴리펩티드 및 인플루엔자 바이러스 감기 폴리펩티드를 코딩하도록 개조되고, 이들 폴리펩티드들은 자손 인플루엔자 바이러스에 의해 발현된다. 특정 실시양태에서, 인플루엔자 감기 폴리펩티드, 이종 폴리펩티드 또는 이들 둘다가 자손 인플루엔자 바이러스의 비리온 내로 도입된다.
이종 폴리펩티드는 인플루엔자 바이러스를 특정 세포 유형으로 표적화시키는 폴리펩티드, 예컨대, 특정 세포 유형 상의 항원을 인식하는 항체 또는 특정 세포 유형 상의 특정 수용체에 결합하는 리간드일 수 있다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드의 표적화는 상기 바이러스의 표적 세포 인식 기능을 대체한다. 특정 실시양태에서, 이종 폴리펩티드는 인플루엔자 바이러스가 천연 상태에서 감염시키는 세포 유형과 동일한 세포 유형에 인플루엔자 바이러스를 표적화시킨다. 다른 특정 실시양태에서, 이종 폴리펩티드는 자손 인플루엔자 바이러스를 면역 세포, 예컨대, B 세포, T 세포, 대식세포 또는 수지상세포에 표적화시킨다. 일부 실시양태에서, 이종 폴리펩티드는 항원 제시 세포, 예컨대, 수지상세포의 세포 특이적 마커(예를 들면, CD44)를 인식하여 결합한다. 한 실시양태에서, 이종 폴리펩티드는 상기 바이러스를 수지상세포에 표적화시키는 DC-SIGN이다. 또 다른 실시양태에서, 이종 폴리펩티드는 상기 바이러스를 면역 세포에 표적화시키는 항체(예를 들면, 단일쇄 항체)로서, 인플루엔자 바이러스 비리온 내로 도입되도록 또 다른 폴리펩티드로부터의 경막 도메인과 융합될 수 있는 항체이다. 일부 실시양태에서, 항체는 CD20 항체, CD34 항체 또는 DEC-205에 대한 항체이다. 표적화 기능을 갖는 폴리펩티드를 발현하도록 바이러스를 개조하는 기법은 당업계에서 공지되어 있다. 예를 들면, 문헌[Yang et al., 2006, PNAS 103: 11479-11484] 및 미국 특허출원 공개 제2008/0019998호(2008년 1월 24일 공개) 및 제2007/0020238호(2007년 1월 25일 공개)(이들 각각의 내용은 온전히 그대로 본원에 도입됨)를 참조한다.
또 다른 실시양태에서, 이종 폴리펩티드는 바이러스 부착 단백질이다. 이 양태에서 사용될 수 있는 부착 단백질을 갖는 바이러스의 비-제한적 예는 하기 바이러스들로 이루어진 군으로부터 선택된 바이러스이다: 라사 열(Lassa fever) 바이러스, B형 간염 바이러스, 공수병 바이러스, 뉴캐슬병 바이러스(NDV), 레트로바이러스, 예컨대, 인간 면역결핍 바이러스, 진드기-유래 뇌염 바이러스, 백시니아 바이러스, 포진바이러스(herpesvirus), 폴리오바이러스(poliovirus), 알파바이러스(alphavirus), 예컨대, 셈리키 포레스트(Semliki Forest) 바이러스, 로스 리버(Ross River) 바이러스 및 아우라(Aura) 바이러스(표면 당단백질, 예컨대, E1, E2 및 E3을 포함함), 보르나병(Borna disease) 바이러스, 한탄(Hantaan) 바이러스, 거품형성바이러스(foamyvirus) 및 SARS-CoV 바이러스.
특정 실시양태에서, 인플루엔자 A 바이러스는 감기 폴리펩티드 및 인플루엔자 C HEF 단백질을 코딩하도록 개조되고, 이때 인플루엔자 C HEF 단백질은 인플루엔자 A 뉴라미니다제(NA) 단백질을 치환시킨다.
한 실시양태에서, 플라비바이러스(flavivirus) 표면 당단백질, 예컨대, 뎅기열 바이러스(DV) E 단백질이 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 알파바이러스 과로부터의 신드비스(Sindbis) 바이러스 당단백질이 사용된다(문헌[K. S. Wang, R. J. Kuhn, E. G. Strauss, S. Ou, J. H. Strauss, J. Virol. 66, 4992 (1992)]). 일부 실시양태에서, 이종 폴리펩티드는 NDV HN 또는 F 단백질; 인간 면역결핍 바이러스(HIV) gp160(또는 이의 생성물, 예컨대, gp41 또는 gp120); B형 간염 바이러스 표면 항원(HBsAg); 포진바이러스의 당단백질(예를 들면, gD, gE); 또는 폴리오바이러스의 VP1로부터 유래된다.
또 다른 실시양태에서, 이종 폴리펩티드는 당업계에서 공지되어 있는 임의의 비-바이러스 표적화 시스템으로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 비-바이러스 병원체, 예컨대, 세포내 박테리아 또는 원생동물의 단백질이 사용된다. 일부 실시양태에서, 박테리아 폴리펩티드는 예를 들면, 클라미디아(Chlamydia), 리케치아(Rikettsia), 콕셀리아(Coxelia), 리스테리아(Listeria), 브루셀라(Brucella) 또는 레기오넬라(Legionella)에 의해 제공된다. 일부 실시양태에서, 원생동물 폴리펩티드는 예를 들면, 플라스모디아(Plasmodia) 종, 레이쉬마니아(Leishmania) 종, 톡소플라스마 곤디이(Toxoplasma gondii) 또는 트립파노소마 크루지(Trypanosoma cruzi)에 의해 제공된다. 다른 예시적 표적화 시스템은 온전히 그대로 본원에 도입되는 문헌[Waehler et al., 2007, "Engineering targeted viral vectors for gene therapy," Nature Reviews Genetics 8: 573-587]에 기재되어 있다.
일부 실시양태에서, 인플루엔자 바이러스에 의해 발현된 이종 폴리펩티드는 면역강화(면역자극) 활성을 갖는다. 면역강화 폴리펩티드의 비-제한적 예는 자극 분자, 사이토카인, 케모카인, 항체 및 다른 물질, 예컨대, Flt-3 리간드를 포함하나 이들로 한정되지 않는다. 면역강화 활성을 갖는 폴리펩티드의 특정 예는 1형 인터페론, 알파 인터페론, 베타 인터페론, 감마 인터페론, 콜로니 자극 인자, 예컨대, 과립구-대식구 콜로니 자극 인자(GM-CSF), 인터루킨(IL)-1, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-12, IL-15, IL-18, IL-21, IL-23, 종양 괴사 인자(TNF)-β, TNFα, B7.1, B7.2, 4-1BB, CD40 리간드(CD40L), 및 약물 유도성 CD40(iCD40)을 포함한다(예를 들면, 온전히 그대로 본원에 참고로 도입되는 문헌[Hanks, B. A., et al. 2005. Nat Med 11:130-137] 참조).
인플루엔자 A 바이러스 및 인플루엔자 B 바이러스의 게놈은 8개의 단일 가닥 음성 센스 분절로 구성되어 있기 때문에(인플루엔자 C 바이러스는 7개의 단일 가닥 음성 센스 분절로 구성되어 있음), 모 인플루엔자 바이러스의 게놈이 감기 폴리펩티드(및 임의의 다른 폴리펩티드, 예컨대, 이종 폴리펩티드)를 발현하도록 당업자에게 공지되어 있는 재조합 분절 및 기법, 예컨대, 역유전학 및 헬퍼 부재 플라스미드 레스큐를 이용하여 상기 게놈을 개조할 수 있다. 한 실시양태에서, 상기 재조합 분절은 감기 폴리펩티드를 코딩하는 핵산뿐만 아니라 vRNA의 적절한 복제, 전사 및 팩키징에 필요한 3' 및 5'도입 신호도 포함한다(문헌[Gao et al., 2010, J. of Virology 84:8062-8074]; 문헌[Fujii et al., 2003, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 100:2002-2007]; 문헌[Zheng, et al., 1996, Virology 217:242-251]; 및 국제 특허출원 제PCT/US2010/043697호(이들 모두가 온전히 그대로 본원에 참고로 도입됨)). 일부 실시양태에서, 감기 폴리펩티드를 코딩하는 재조합 분절은 모 인플루엔자 바이러스의 HA 분절을 치환시킬 수 있다. 일부 실시양태에서, 감기 폴리펩티드를 코딩하는 재조합 분절은 모 인플루엔자 바이러스의 NS1 유전자를 치환시킬 수 있다. 일부 실시양태에서, 감기 폴리펩티드를 코딩하는 재조합 분절은 모 인플루엔자 바이러스의 NA 유전자를 치환시킬 수 있다. 감기 폴리펩티드를 발현하기 위해 사용할 수 있는 예시적 인플루엔자 바이러스 균주는 앤 아버/1/50, A/푸에르토리코/8/34, A/사우쓰 다코타/6/2007, A/우루과이/716/2007 및 B/브리스반/60/2008을 포함한다.
일부 실시양태에서, 바이시스트론성(bicistronic)을 갖는 재조합 분절을 사용하여 감기 폴리펩티드를 발현하도록 모 인플루엔자 바이러스의 게놈을 개조할 수 있다. 바이시스트론 기법은 내부 리보좀 도입 부위(IRES) 서열의 사용을 통해 다수의 단백질들의 코딩 서열이 단일 mRNA로 통합될 수 있게 한다. IRES 서열은 RNA 분자로의 리보좀의 내부 동원을 유도하고 캡(cap) 독립적 방식의 다운스트림 번역을 가능하게 한다. 요약하건대, 한 단백질의 코딩 영역은 제2 단백질의 개방 판독 프레임(ORF) 내로 삽입된다. 삽입체는 IRES, 및 적절한 발현 및/또는 기능에 필요한 임의의 비-번역 신호 서열에 의해 플랭킹된다. 삽입체는 제2 단백질의 ORF, 폴리아데닐화 또는 전사 프로모터를 파괴하지 않아야 한다(예를 들면, 문헌[Garcia-Sastre et al., 1994, J. Virol. 68:6254-6261] 및 문헌[Garcia-Sastre et al., 1994 Dev. Biol. Stand. 82:237-246](이들 각각은 온전히 그대로 본원에 참고로 도입됨) 참조). 예를 들면, 미국 특허 제6,887,699호, 제6,001,634호, 제5,854,037호 및 제5,820,871호(이들 각각은 온전히 그대로 본원에 참고로 도입됨)를 참조한다. 당업계에서 공지되어 있거나 본원에 기재되어 있는 임의의 IRES(예를 들면, BiP 유전자의 IRES, 유전자은행(GenBank) 데이터베이스 도입 HUMGRP78의 뉴클레오티드 372 내지 592; 또는 뇌심근염바이러스(EMCV)의 IRES, 유전자은행 데이터베이스 도입 CQ867238의 뉴클레오티드 1430 내지 2115)가 본 발명에 따라 사용될 수 있다. 따라서, 일부 실시양태에서, 모 인플루엔자 바이러스는 감기 폴리펩티드 및 또 다른 폴리펩티드를 발현하는 바이시스트론성 RNA 분절, 예컨대, 모 인플루엔자 바이러스에 의해 발현되는 유전자를 함유하도록 개조된다.
당업자에게 공지되어 있는 기법을 이용하여 감기 폴리펩티드를 함유하는 인플루엔자 바이러스, 및 감기 폴리펩티드를 발현하도록 개조된 게놈을 포함하는 인플루엔자 바이러스를 생성할 수 있다. 예를 들면, 역유전학 기법을 이용하여 이러한 인플루엔자 바이러스를 발생시킬 수 있다. 요약하건대, 역유전학 기법은 일반적으로 바이러스 중합효소에 의한 인식, 및 성숙 비리온의 발생에 필요한 신호의 팩키징을 위해 필수적인 음성 가닥 바이러스 RNA의 비-코딩 영역을 함유하는 합성 재조합 바이러스 RNA의 제조를 포함한다. 재조합 RNA는 재조합 DNA 주형으로부터 합성되고 정제된 바이러스 중합효소 결합체와 함께 시험관 내에서 재구성되어 세포의 형질감염에 사용될 수 있는 재조합 리보핵단백질(RNP)을 형성한다. 바이러스 중합효소 단백질이 시험관 내에서 또는 생체 내에서 합성 RNA를 전사하는 동안 존재하는 경우 보다 효율적인 형질감염이 달성된다. 합성 재조합 RNP는 감염성 바이러스 입자 내로 레스큐될 수 있다. 상기 기법들은 미국 특허 제5,166,057호(1992년 11월 24일 발행) 및 제5,854,037호(1998년 12월 29일 발행); 유럽 특허 공개 제0702085A1호(1996년 2월 20일 공개); 미국 특허출원 제09/152,845호; 국제 특허출원 공개 제WO 97/12032호(1997년 4월 3일 공개) 및 제WO 96/34625호(1996년 11월 7일 공개); 유럽 특허 공개 제A780475호; 국제 특허출원 공개 제WO 99/02657호(1999년 1월 21일 공개), 제WO 98/53078호(1998년 11월 26일 공개), 제WO 98/02530호(1998년 1월 22일 공개), 제WO 99/15672호(1999년 4월 1일 공개), 제WO 98/13501호(1998년 4월 2일 공개) 및 제WO 97/06270호(1997년 2월 20일 공개); 및 유럽 특허 공개 제780475A1호(1997년 6월 25일 공개)(이들 각각은 온전히 그대로 본원에 참고로 도입됨)에 기재되어 있다.
대안적으로, 헬퍼 부재 플라스미드 기술을 이용하여 감기 폴리펩티드를 함유하는 인플루엔자 바이러스, 및/또는 감기 폴리펩티드를 발현하도록 개조된 게놈을 포함하는 인플루엔자 바이러스를 생성할 수 있다. 요약하건대, 플라스미드 벡터 내로의 PCR 생성물의 삽입을 가능하게 하는 유일한 제한 부위를 포함하는 프라이머를 사용하는 PCR을 이용하여 바이러스 분절의 전장 cDNA를 증폭시킨다(문헌[Flandorfer et al., 2003, J. Virol. 77:9116-9123] 및 문헌[Nakaya et al., 2001, J. Virol. 75:11868-11873](이들 둘다 온전히 그대로 본원에 참고로 도입됨)). 플라스미드 벡터는 정확한 음성(vRNA 센스) 전사체가 발현되도록 디자인된다. 예를 들면, 플라스미드 벡터는 절두된 인간 RNA 중합효소 I 프로모터와 간염 델타 바이러스 리보자임 서열 사이에 PCR 생성물이 위치하여 정확한 음성(vRNA 센스) 전사체가 상기 중합효소 I 프로모터로부터 생성되도록 디자인될 수 있다. 각각의 바이러스 분절을 포함하는 별도의 플라스미드 벡터뿐만 아니라 필요한 바이러스 단백질을 포함하는 발현 벡터도 세포 내로 형질감염시켜 재조합 바이러스 입자를 생성할 수 있다. 또 다른 예에서, 필요한 바이러스 단백질을 코딩하는 바이러스 게놈 RNA 및 mRNA 둘다가 발현되는 플라스미드 벡터를 사용할 수 있다. 헬퍼 부재 플라스미드 기술의 상세한 설명에 대해서는 예를 들면, 온전히 그대로 본원에 참고로 도입되는 국제 특허출원 공개 제WO 01/04333호; 미국 특허 제6,951,754호, 제7,384,774호, 제6,649,372호 및 제7,312,064호; 문헌[Fodor et al., 1999, J. Virol. 73:9679-9682]; 문헌[Quinlivan et al., 2005, J. Virol. 79:8431-8439]; 문헌[Hoffmann et al., 2000, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:6108-6113]; 및 문헌[Neumann et al., 1999, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 96:9345-9350]을 참조한다.
본원에 기재된 인플루엔자 바이러스는 이 바이러스가 본원에 기재된 방법에 따른 그의 사용을 허용하는 역가까지 성장할 수 있게 하는 임의의 지지체에서 증식될 수 있다. 한 실시양태에서, 상기 지지체는 상기 바이러스가 상응하는 야생형 바이러스에 대해 측정된 역가에 필적할만한 역가까지 성장할 수 있게 한다. 일부 실시양태에서, 상기 지지체는 인플루엔자 바이러스와 생물학적으로 관련된 지지체이다. 특정 실시양태에서, 예를 들면, NS1 유전자 내의 돌연변이에 의해 약독화된 인플루엔자 바이러스가 IFN 결핍 지지체에서 증식될 수 있다. 예를 들면, 적합한 IFN 결핍 지지체는 인터페론을 생성하거나 인터페론에 반응하는 그의 능력을 결여하고 있는 IFN 결핍 지지체, 또는 인터페론 결핍 성장 환경을 필요로 할 수 있는 임의의 수의 바이러스의 성장을 위해 사용될 수 있는 IFN 결핍 지지체이다. 예를 들면, 미국 특허 제6,573,079호(2003년 6월 3일 발행), 제6,852,522호(2005년 2월 8일 발행) 및 제7,494,808호(2009년 2월 24일 발행)(이들 각각의 전체 내용은 온전히 그대로 본원에 참고로 도입됨)를 참조한다.
본원에 기재된 인플루엔자 바이러스는 당업자에게 공지되어 있는 임의의 방법에 의해 단리되고 정제될 수 있다. 한 실시양태에서, 상기 바이러스는 전형적으로 잘 공지되어 있는 정화 절차, 예를 들면, 구배 원심분리 및 컬럼 크로마토그래피에 의해 세포 배양물로부터 제거되고 세포 성분으로부터 분리되고, 원하는 경우 당업자에게 잘 공지되어 있는 절차, 예를 들면, 플라크 분석법의 이용을 통해 추가로 정제될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같이 사용될 인플루엔자 바이러스, 또는 인플루엔자 바이러스 폴리펩티드, 유전자 또는 게놈 분절은 인플루엔자 A 바이러스로부터 수득되거나 유래된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같이 사용될 인플루엔자 바이러스, 또는 인플루엔자 바이러스 폴리펩티드, 유전자 또는 게놈 분절은 단일 인플루엔자 A 바이러스 아형 또는 균주로부터 수득되거나 유래된다. 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같이 사용될 인플루엔자 바이러스, 또는 인플루엔자 바이러스 폴리펩티드, 유전자 또는 게놈 분절은 2종 이상의 인플루엔자 A 바이러스 아형 또는 균주들로부터 수득되거나 유래된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같이 사용될 인플루엔자 바이러스, 또는 인플루엔자 바이러스 폴리펩티드, 유전자 또는 게놈 분절은 인플루엔자 B 바이러스로부터 수득되거나 유래된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같이 사용될 인플루엔자 바이러스, 또는 인플루엔자 바이러스 폴리펩티드, 유전자 또는 게놈 분절은 단일 인플루엔자 B 바이러스 아형 또는 균주로부터 수득되거나 유래된다. 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같이 사용될 인플루엔자 바이러스, 또는 인플루엔자 바이러스 폴리펩티드, 유전자 또는 게놈 분절은 2종 이상의 인플루엔자 B 바이러스 아형 또는 균주들로부터 수득되거나 유래된다. 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같이 사용될 인플루엔자 바이러스, 또는 인플루엔자 바이러스 폴리펩티드, 유전자 또는 게놈 분절은 인플루엔자 A 바이러스 및 인플루엔자 B 바이러스의 아형 또는 균주들의 조합물로부터 수득되거나 유래된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같이 사용될 인플루엔자 바이러스, 또는 인플루엔자 바이러스 폴리펩티드, 유전자 또는 게놈 분절은 인플루엔자 C 바이러스로부터 수득되거나 유래된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같이 사용될 인플루엔자 바이러스, 또는 인플루엔자 바이러스 폴리펩티드, 유전자 또는 게놈 분절은 단일 인플루엔자 C 바이러스 아형 또는 균주로부터 수득되거나 유래된다. 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같이 사용될 인플루엔자 바이러스, 또는 인플루엔자 바이러스 폴리펩티드, 유전자 또는 게놈 분절은 2종 이상의 인플루엔자 C 바이러스 아형 또는 균주들로부터 수득되거나 유래된다. 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같이 사용될 인플루엔자 바이러스, 또는 인플루엔자 바이러스 폴리펩티드, 유전자 또는 게놈 분절은 인플루엔자 C 바이러스 및 인플루엔자 A 바이러스 및/또는 인플루엔자 B 바이러스의 아형 또는 균주들의 조합물로부터 수득되거나 유래된다.
인플루엔자 A 바이러스의 비-제한적 예는 아형 H10N4, 아형 H10N5, 아형 H10N7, 아형 H10N8, 아형 H10N9, 아형 H11N1, 아형 H11N13, 아형 H11N2, 아형 H11N4, 아형 H11N6, 아형 H11N8, 아형 H11N9, 아형 H12N1, 아형 H12N4, 아형 H12N5, 아형 H12N8, 아형 H13N2, 아형 H13N3, 아형 H13N6, 아형 H13N7, 아형 H14N5, 아형 H14N6, 아형 H15N8, 아형 H15N9, 아형 H16N3, 아형 H1N1, 아형 H1N2, 아형 H1N3, 아형 H1N6, 아형 H1N9, 아형 H2N1, 아형 H2N2, 아형 H2N3, 아형 H2N5, 아형 H2N7, 아형 H2N8, 아형 H2N9, 아형 H3N1, 아형 H3N2, 아형 H3N3, 아형 H3N4, 아형 H3N5, 아형 H3N6, 아형 H3N8, 아형 H3N9, 아형 H4N1, 아형 H4N2, 아형 H4N3, 아형 H4N4, 아형 H4N5, 아형 H4N6, 아형 H4N8, 아형 H4N9, 아형 H5N1, 아형 H5N2, 아형 H5N3, 아형 H5N4, 아형 H5N6, 아형 H5N7, 아형 H5N8, 아형 H5N9, 아형 H6N1, 아형 H6N2, 아형 H6N3, 아형 H6N4, 아형 H6N5, 아형 H6N6, 아형 H6N7, 아형 H6N8, 아형 H6N9, 아형 H7N1, 아형 H7N2, 아형 H7N3, 아형 H7N4, 아형 H7N5, 아형 H7N7, 아형 H7N8, 아형 H7N9, 아형 H8N4, 아형 H8N5, 아형 H9N1, 아형 H9N2, 아형 H9N3, 아형 H9N5, 아형 H9N6, 아형 H9N7, 아형 H9N8 및 아형 H9N9를 포함한다.
인플루엔자 A 바이러스 균주의 구체적 예는 하기 균주들을 포함하나 이들로 한정되지 않는다: A/sw/아이오와/15/30(H1N1); A/WSN/33(H1N1); A/eq/프라그(Prague)/1/56(H7N7); A/PR/8/34; A/청둥오리(mallard)/포츠담/178-4/83(H2N2); A/재갈매기(herring gull)/DE/712/88(H16N3); A/sw/홍콩/168/1993(H1N1); A/청둥오리/알버타/211/98(H1N1); A/도요새(shorebird)/델라웨어/168/06(H16N3); A/sw/네덜란드/25/80(H1N1); A/sw/독일/2/81(H1N1); A/sw/하노버/1/81(H1N1); A/sw/포츠담/1/81(H1N1); A/sw/포츠담/15/81(H1N1); A/sw/포츠담/268/81(H1N1); A/sw/피니스테르(Finistere)/2899/82(H1N1); A/sw/포츠담/35/82(H3N2); A/sw/코트다르모르(Cote d'Armor)/3633/84(H3N2); A/sw/겐트(Gent)/1/84(H3N2); A/sw/네덜란드/12/85(H1N1); A/sw/카렌지엔(Karrenzien)/2/87(H3N2); A/sw/슈베린(Schwerin)/103/89(H1N1); A/칠면조/독일/3/91(H1N1); A/sw/독일/8533/91(H1N1); A/sw/벨기에/220/92(H3N2); A/sw/겐트/V230/92(H1N1); A/sw/라이프치히/145/92(H3N2); A/sw/Re220/92hp(H3N2); A/sw/바쿰(Bakum)/909/93(H3N2); A/sw/슐레스비그-홀스테인(Schleswig-Holstein)/1/93(H1N1); A/sw/스코틀랜드/419440/94(H1N2); A/sw/바쿰/5/95(H1N1); A/sw/베스트(Best)/5C/96(H1N1); A/sw/잉글랜드/17394/96(H1N2); A/sw/예나(Jena)/5/96(H3N2); A/sw/외덴로드(Oedenrode)/7C/96(H3N2); A/sw/로네(Lohne)/1/97(H3N2); A/sw/코트다르모르/790/97(H1N2); A/sw/바쿰/1362/98(H3N2); A/sw/이탈리아/1521/98(H1N2); A/sw/이탈리아/1553-2/98(H3N2); A/sw/이탈리아/1566/98(H1N1); A/sw/이탈리아/1589/98(H1N1); A/sw/바쿰/8602/99(H3N2); A/sw/코트다르모르/604/99(H1N2); A/sw/코트다르모르/1482/99(H1N1); A/sw/겐트/7625/99(H1N2); A/홍콩/1774/99(H3N2); A/sw/홍콩/5190/99(H3N2); A/sw/홍콩/5200/99(H3N2); A/sw/홍콩/5212/99(H3N2); A/sw/일레 엣 빌라인(Ille et Villaine)/1455/99(H1N1); A/sw/이탈리아/1654-1/99(H1N2); A/sw/이탈리아/2034/99(H1N1); A/sw/이탈리아/2064/99(H1N2); A/sw/베를린/1578/00(H3N2); A/sw/바쿰/1832/00(H1N2); A/sw/바쿰/1833/00(H1N2); A/sw/코트다르모르/800/00(H1N2); A/sw/홍콩/7982/00(H3N2); A/sw/이탈리아/1081/00(H1N2); A/sw/벨지그(Belzig)/2/01(H1N1); A/sw/벨지그/54/01(H3N2); A/sw/홍콩/9296/01(H3N2); A/sw/홍콩/9745/01(H3N2); A/sw/스페인/33601/01(H3N2); A/sw/홍콩/1144/02(H3N2); A/sw/홍콩/1197/02(H3N2); A/sw/스페인/39139/02(H3N2); A/sw/스페인/42386/02(H3N2); A/스위스/8808/2002(H1N1); A/sw/바쿰/1769/03(H3N2); A/sw/비센도르프(Bissendorf)/IDT1864/03(H3N2); A/sw/에렌(Ehren)/IDT2570/03(H1N2); A/sw/게슈어(Gescher)/IDT2702/03(H1N2); A/sw/하셀룬(Haselunne)/2617/03hp(H1N1); A/sw/로닝겐(Loningen)/IDT2530/03(H1N2); A/sw/IVD/IDT2674/03(H1N2); A/sw/노르드키르헨(Nordkirchen)/IDT1993/03(H3N2); A/sw/노르드발트(Nordwalde)/IDT2197/03(H1N2); A/sw/노르덴(Norden)/IDT2308/03(H1N2); A/sw/스페인/50047/03(H1N1); A/sw/스페인/51915/03(H1N1); A/sw/벡타(Vechta)/2623/03(H1N1); A/sw/비스벡(Visbek)/IDT2869/03(H1N2); A/sw/발터스도르프(Waltersdorf)/IDT2527/03(H1N2); A/sw/담(Damme)/IDT2890/04(H3N2); A/sw/겔데른(Geldern)/IDT2888/04(H1N1); A/sw/그란스테트(Granstedt)/IDT3475/04(H1N2); A/sw/그레벤(Greven)/IDT2889/04(H1N1); A/sw/구덴스베르그(Gudensberg)/IDT2930/04(H1N2); A/sw/구덴스베르그/IDT2931/04(H1N2); A/sw/로네/IDT3357/04(H3N2); A/sw/노르트룹(Nortrup)/IDT3685/04(H1N2); A/sw/지젠(Seesen)/IDT3055/04(H3N2); A/sw/스페인/53207/04(H1N1); A/sw/스페인/54008/04(H3N2); A/sw/스톨제나우(Stolzenau)/IDT3296/04(H1N2); A/sw/베델(Wedel)/IDT2965/04(H1N1); A/sw/바드 그리에스바흐(Bad Griesbach)/IDT4191/05(H3N2); A/sw/클로펜부르그(Cloppenburg)/IDT4777/05(H1N2); A/sw/도틀링겐(Dotlingen)/IDT3780/05(H1N2); A/sw/도틀링겐/IDT4735/05(H1N2); A/sw/에글햄(Egglham)/IDT5250/05(H3N2); A/sw/하르켄블레크(Harkenblek)/IDT4097/05(H3N2); A/sw/헤르첸(Hertzen)/IDT4317/05(H3N2); A/sw/크로겔(Krogel)/IDT4192/05(H1N1); A/sw/라에르(Laer)/IDT3893/05(H1N1); A/sw/라에르/IDT4126/05(H3N2); A/sw/메르젠(Merzen)/IDT4114/05(H3N2); A/sw/무에슬러링겐-에스(Muesleringen-S.)/IDT4263/05(H3N2); A/sw/오스터호펜(Osterhofen)/IDT4004/05(H3N2); A/sw/스프렌지(Sprenge)/IDT3805/05(H1N2); A/sw/스타틀론(Stadtlohn)/IDT3853/05(H1N2); A/sw/포글라른(Voglarn)/IDT4096/05(H1N1); A/sw/볼러스트(Wohlerst)/IDT4093/05(H1N1); A/sw/바드 그리에스바흐/IDT5604/06(H1N1); A/sw/헤르츨라케(Herzlake)/IDT5335/06(H3N2); A/sw/헤르츨라케/IDT5336/06(H3N2); A/sw/헤르츨라케/IDT5337/06(H3N2); 및 A/멧돼지/독일/R169/2006(H3N2).
인플루엔자 A 바이러스 균주의 다른 구체적 예는 하기 균주들을 포함하나 이들로 한정되지 않는다: A/토론토/3141/2009(H1N1); A/레겐스부르그/D6/2009(H1N1); A/바이에른/62/2009(H1N1); A/바이에른/62/2009(H1N1); A/브라덴부르그/19/2009(H1N1); A/브라덴부르그/20/2009(H1N1); A/디스트리토 페데랄(Distrito Federal)/2611/2009(H1N1); A/마토 그로소(Mato Grosso)/2329/2009(H1N1); A/산 파울로(Sao Paulo)/1454/2009(H1N1); A/산 파울로/2233/2009(H1N1); A/스톡홀름/37/2009(H1N1); A/스톡홀름/41/2009(H1N1); A/스톡홀름/45/2009(H1N1); A/돼지/알버타/OTH-33-1/2009(H1N1); A/돼지/알버타/OTH-33-14/2009(H1N1); A/돼지/알버타/OTH-33-2/2009(H1N1); A/돼지/알버타/OTH-33-21/2009(H1N1); A/돼지/알버타/OTH-33-22/2009(H1N1); A/돼지/알버타/OTH-33-23/2009(H1N1); A/돼지/알버타/OTH-33-24/2009(H1N1); A/돼지/알버타/OTH-33-25/2009(H1N1); A/돼지/알버타/OTH-33-3/2009(H1N1); A/돼지/알버타/OTH-33-7/2009(H1N1); A/베이징/502/2009(H1N1); A/피렌체/10/2009(H1N1); A/홍콩/2369/2009(H1N1); A/이탈리아/85/2009(H1N1); A/산토 도밍고/572N/2009(H1N1); A/카탈로니아(Catalonia)/385/2009(H1N1); A/카탈로니아/386/2009(H1N1); A/카탈로니아/387/2009(H1N1); A/카탈로니아/390/2009(H1N1); A/카탈로니아/394/2009(H1N1); A/카탈로니아/397/2009(H1N1); A/카탈로니아/398/2009(H1N1); A/카탈로니아/399/2009(H1N1); A/산 파울로/2303/2009(H1N1); A/아키타/1/2009(H1N1); A/카스트로/JXP/2009(H1N1); A/후쿠시마/1/2009(H1N1); A/이스라엘/276/2009(H1N1); A/이스라엘/277/2009(H1N1); A/이스라엘/70/2009(H1N1); A/이와테/1/2009(H1N1); A/이와테/2/2009(H1N1); A/가고시마/1/2009(H1N1); A/오사카/180/2009(H1N1); A/푸에르토 몬트/바이오87/2009(H1N1); A/산 파울로/2303/2009(H1N1); A/사포로/1/2009(H1N1); A/스톡홀름/30/2009(H1N1); A/스톡홀름/31/2009(H1N1); A/스톡홀름/32/2009(H1N1); A/스톡홀름/33/2009(H1N1); A/스톡홀름/34/2009(H1N1); A/스톡홀름/35/2009(H1N1); A/스톡홀름/36/2009(H1N1); A/스톡홀름/38/2009(H1N1); A/스톡홀름/39/2009(H1N1); A/스톡홀름/40/2009(H1N1;) A/스톡홀름/42/2009(H1N1); A/스톡홀름/43/2009(H1N1); A/스톡홀름/44/2009(H1N1); A/우쓰노미야/2/2009(H1N1); A/WRAIR/0573N/2009(H1N1); 및 A/저장성(Zhejiang)/DTID-ZJU01/2009(H1N1).
인플루엔자 B 바이러스의 비-제한적 예는 하기 균주들을 포함한다: 균주 아이치(아이치)/5/88, 균주 아키타/27/2001, 균주 아키타/5/2001, 균주 알래스카/16/2000, 균주 알래스카/1777/2005, 균주 아르헨티나/69/2001, 균주 아리조나/146/2005, 균주 아리조나/148/2005, 균주 방콕/163/90, 균주 방콕/34/99, 균주 방콕/460/03, 균주 방콕/54/99, 균주 바르셀로나/215/03, 균주 베이징/15/84, 균주 베이징/184/93, 균주 베이징/243/97, 균주 베이징/43/75, 균주 베이징/5/76, 균주 베이징/76/98, 균주 벨기에/WV106/2002, 균주 벨기에/WV107/2002, 균주 벨기에/WV109/2002, 균주 벨기에/WV114/2002, 균주 벨기에/WV122/2002, 균주 본(Bonn)/43, 균주 브라질/952/2001, 균주 부카레스트/795/03, 균주 부에노스 아이레스/161/00, 균주 부에노스 아이레스/9/95, 균주 부에노스 아이레스/SW16/97, 균주 부에노스 아이레스/VL518/99, 균주 캐나다/464/2001, 균주 캐나다/464/2002, 균주 차코(차코)/366/00, 균주 차코/R113/00, 균주 제주/303/03, 균주 시바/447/98, 균주 충칭/3/2000, 균주 임상 단리물 SA1 태국/2002, 균주 임상 단리물 SA10 태국/2002, 균주 임상 단리물 SA100 필리핀/2002, 균주 임상 단리물 SA101 필리핀/2002, 균주 임상 단리물 SA110 필리핀/2002, 균주 임상 단리물 SA112 필리핀/2002, 균주 임상 단리물 SA113 필리핀/2002, 균주 임상 단리물 SA114 필리핀/2002, 균주 임상 단리물 SA2 태국/2002, 균주 임상 단리물 SA20 태국/2002, 균주 임상 단리물 SA38 필리핀/2002, 균주 임상 단리물 SA39 태국/2002, 균주 임상 단리물 SA99 필리핀/2002, 균주 CNIC/27/2001, 균주 콜로라도/2597/2004, 균주 코르도바/VA418/99, 균주 체코슬로바키아/16/89, 균주 체코슬로바키아/69/90, 균주 대구/10/97, 균주 대구/45/97, 균주 대구/47/97, 균주 대구/9/97, 균주 B/Du/4/78, 균주 B/더반/39/98, 균주 더반/43/98, 균주 더반/44/98, 균주 B/더반/52/98, 균주 더반/55/98, 균주 더반/56/98, 균주 잉글랜드/1716/2005, 균주 잉글랜드/2054/2005, 균주 잉글랜드/23/04, 균주 핀란드/154/2002, 균주 핀란드/159/2002, 균주 핀란드/160/2002, 균주 핀란드/161/2002, 균주 핀란드/162/03, 균주 핀란드/162/2002, 균주 핀란드/162/91, 균주 핀란드/164/2003, 균주 핀란드/172/91, 균주 핀란드/173/2003, 균주 핀란드/176/2003, 균주 핀란드/184/91, 균주 핀란드/188/2003, 균주 핀란드/190/2003, 균주 핀란드/220/2003, 균주 핀란드/WV5/2002, 균주 푸젠/36/82, 균주 제네바/5079/03, 균주 제노아/11/02, 균주 제노아/2/02, 균주 제노아/21/02, 균주 제노바/54/02, 균주 제노바/55/02, 균주 광동/05/94, 균주 광동/08/93, 균주 광동/5/94, 균주 광동/55/89, 균주 광동/8/93, 균주 광저우/7/97, 균주 광저우/86/92, 균주 광저우/87/92, 균주 경기/592/2005, 균주 하노버/2/90, 균주 하빈/07/94, 균주 하와이/10/2001, 균주 하와이/1990/2004, 균주 하와이/38/2001, 균주 하와이/9/2001, 균주 헤베이/19/94, 균주 헤베이/3/94, 균주 헤난/22/97, 균주 히로시마/23/2001, 균주 홍콩/110/99, 균주 홍콩/1115/2002, 균주 홍콩/112/2001, 균주 홍콩/123/2001, 균주 홍콩/1351/2002, 균주 홍콩/1434/2002, 균주 홍콩/147/99, 균주 홍콩/156/99, 균주 홍콩/157/99, 균주 홍콩/22/2001, 균주 홍콩/22/89, 균주 홍콩/336/2001, 균주 홍콩/666/2001, 균주 홍콩/9/89, 균주 휴스톤/1/91, 균주 휴스톤/1/96, 균주 휴스톤/2/96, 균주 후난/4/72, 균주 이바라키/2/85, 균주 인천/297/2005, 균주 인도/3/89, 균주 인도/77276/2001, 균주 이스라엘/95/03, 균주 이스라엘/WV187/2002, 균주 일본/1224/2005, 균주 장쑤/10/03, 균주 요하네스버그/1/99, 균주 요하네스버그/96/01, 균주 가도마/1076/99, 균주 가도마/122/99, 균주 가고시마/15/94, 균주 간사스/22992/99, 균주 가즈코브/224/91, 균주 고베/1/2002, 균주 가우치/193/99, 균주 라지오(Lazio)/1/02, 균주 리(Lee)/40, 균주 레닌그라드/129/91, 균주 리스본/2/90, 균주 로스엔젤레스/1/02, 균주 루사카/270/99, 균주 리온/1271/96, 균주 말레이시아/83077/2001, 균주 마푸토/1/99, 균주 마르델 플라타/595/99, 균주 메릴랜드/1/01, 균주 멤피스/1/01, 균주 멤피스/12/97-MA, 균주 미시간/22572/99, 균주 미에(Mie)/1/93, 균주 밀라노/1/01, 균주 민스크(Minsk)/318/90, 균주 모스코바/3/03, 균주 나고야/20/99, 균주 난창(Nanchang)/1/00, 균주 내슈빌/107/93, 균주 내슈빌/45/91, 균주 네브라스카/2/01, 균주 네덜란드/801/90, 균주 네덜란드/429/98, 균주 뉴욕/1/2002, 균주 NIB/48/90, 균주 닝샤(Ningxia)/45/83, 균주 노르웨이/1/84, 균주 오만/16299/2001, 균주 오사카/1059/97, 균주 오사카/983/97-V2, 균주 오슬로/1329/2002, 균주 오슬로/1846/2002, 균주 파나마/45/90, 균주 파리/329/90, 균주 파르마/23/02, 균주 퍼스(Perth)/211/2001, 균주 페루/1364/2004, 균주 필리핀/5072/2001, 균주 부산/270/99, 균주 퀘벡/173/98, 균주 퀘벡/465/98, 균주 퀘벡/7/01, 균주 로마/1/03, 균주 사가(Saga)/S172/99, 균주 서울/13/95, 균주 서울/37/91, 균주 산동(Shangdong)/7/97, 균주 상하이/361/2002, 균주 쉬가(Shiga)/T30/98, 균주 쓰촨/379/99, 균주 싱가폴/222/79, 균주 스페인/WV27/2002, 균주 스톡홀름/10/90, 균주 스위스/5441/90, 균주 대만/0409/00, 균주 대만/0722/02, 균주 대만/97271/2001, 균주 테란/80/02, 균주 도쿄/6/98, 균주 트리에스테(Trieste)/28/02, 균주 울란우데(Ulan Ude)/4/02, 균주 영국/34304/99, 균주 USSR/100/83, 균주 빅토리아/103/89, 균주 비엔나/1/99, 균주 우한(Wuhan)/356/2000, 균주 WV194/2002, 균주 쉬안우(Xuanwu)/23/82, 균주 야마가타/1311/2003, 균주 야마가타/K500/2001, 균주 알래스카/12/96, 균주 GA/86, 균주 나가사키/1/87, 균주 도쿄/942/96, 및 균주 로체스터/02/2001.
인플루엔자 C 바이러스의 비-제한적 예는 하기 균주들을 포함한다: 균주 아이치/1/81, 균주 앤 아버/1/50, 균주 아오모리/74, 균주 캘리포니아/78, 균주 잉글랜드/83, 균주 그리스/79, 균주 히로시마/246/2000, 균주 히로시마/252/2000, 균주 효고/1/83, 균주 요하네스버그/66, 균주 가나가와/1/76, 균주 교토/1/79, 균주 미시시피/80, 균주 미야기/1/97, 균주 미야기/5/2000, 균주 미야기/9/96, 균주 나라/2/85, 균주 뉴저지/76, 균주 돼지/베이징/115/81, 균주 사이타마/3/2000, 균주 시주오카/79, 균주 야마가타/2/98, 균주 야마가타/6/2000, 균주 야마가타/9/96, 균주 베를린/1/85, 균주 잉글랜드/892/8, 균주 그레이트 레이크스/1167/54, 균주 JJ/50, 균주 돼지/베이징/10/81, 균주 돼지/베이징/439/82, 균주 테일러(TAYLOR)/1233/47 및 균주 C/야마가타/10/81.
일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 인플루엔자 바이러스는 약독화된 표현형을 갖는다. 특정 실시양태에서, 약독화된 인플루엔자 바이러스는 인플루엔자 A 바이러스에 근거한다. 다른 실시양태에서, 약독화된 인플루엔자 바이러스는 인플루엔자 B 바이러스에 근거한다. 다른 실시양태에서, 약독화된 인플루엔자 바이러스는 인플루엔자 C 바이러스에 근거한다. 다른 실시양태에서, 약독화된 인플루엔자 바이러스는 인플루엔자 A 바이러스, 인플루엔자 B 바이러스 및/또는 인플루엔자 C 바이러스의 1종 이상의 균주 또는 아형으로부터 유래된 유전자 또는 게놈 분절을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 약독화된 골격(backbone) 바이러스는 인플루엔자 A 바이러스 및 인플루엔자 B 바이러스로부터 유래된 유전자를 포함한다.
특정 실시양태에서, 인플루엔자 바이러스가 적어도 부분적으로 감염성을 유지하고 생체 내에서 복제할 수 있지만 병원성을 나타내지 않는 무증상 수준의 감염을 초래하는 낮은 역가만을 발생시키도록 인플루엔자 바이러스의 약독화가 요구된다. 이러한 약독화된 바이러스는 면역 반응을 유도하기 위해 상기 바이러스 또는 그의 면역원성 조성물을 대상체에게 투여하는 본원에 기재된 실시양태에 특히 적합하다. 인플루엔자 바이러스의 약독화는 당업계에서 공지되어 있는 임의의 방법, 예를 들면, 화학적 돌연변이유발에 의해 발생된 바이러스 돌연변이체의 선택, 유전공학에 의한 게놈의 돌연변이, 약독화된 기능을 갖는 분절을 함유하는 재조합 바이러스의 선택, 또는 조건부 바이러스 돌연변이체(예를 들면, 냉각-적응된 바이러스)의 선택에 의해 달성될 수 있다. 대안적으로, 천연 약독화된 인플루엔자 바이러스는 인플루엔자 바이러스 벡터를 위한 인플루엔자 바이러스 골격으로서 사용될 수 있다.
일부 실시양태에서, 세포 인터페론(IFN) 반응을 길항하는 인플루엔자 바이러스의 능력을 손상시키는 돌연변이된 NS1 유전자를 발현하도록 상기 인플루엔자 바이러스를 개조함으로써 인플루엔자 바이러스를 적어도 부분적으로 약독화시킬 수 있다. 인플루엔자 바이러스 NS1 유전자 내로 도입될 수 있는 돌연변이의 유형의 예는 결실, 치환, 삽입 및 이들의 조합을 포함한다. 1개 이상의 돌연변이가 NS1 유전자 전체에 걸쳐 임의의 위치(예를 들면, N-말단, C-말단, 또는 이들 사이의 임의의 위치) 및/또는 NS1 유전자의 조절 요소에서 도입될 수 있다. 한 실시양태에서, 약독화된 인플루엔자 바이러스는 NS1의 C-말단으로부터 5개, 바람직하게는 10개, 15개, 20개, 25개, 30개, 35개, 40개, 45개, 50개, 55개, 60개, 65개, 75개, 80개, 85개, 90개, 95개, 99개, 100개, 105개, 110개, 115개, 120개, 125개, 126개, 130개, 135개, 140개, 145개, 150개, 155개, 160개, 165개, 170개 또는 175개 아미노산 잔기들로 이루어진 결실, 또는 상기 C-말단으로부터 5개 내지 170개, 25개 내지 170개, 50개 내지 170개, 100개 내지 170개, 100개 내지 160개 또는 105개 내지 160개 아미노산 잔기들의 결실을 초래하는 인플루엔자 바이러스 NS1 유전자 내의 돌연변이를 갖는 게놈을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 약독화된 인플루엔자 바이러스는 아미노산 잔기 1 내지 130, 아미노산 잔기 1 내지 126, 아미노산 잔기 1 내지 120, 아미노산 잔기 1 내지 115, 아미노산 잔기 1 내지 110, 아미노산 잔기 1 내지 100, 아미노산 잔기 1 내지 99, 아미노산 잔기 1 내지 95, 아미노산 잔기 1 내지 85, 아미노산 잔기 1 내지 83, 아미노산 잔기 1 내지 80, 아미노산 잔기 1 내지 75, 아미노산 잔기 1 내지 73, 아미노산 잔기 1 내지 70, 아미노산 잔기 1 내지 65 또는 아미노산 잔기 1 내지 60(이때, N-말단 아미노산이 1번임)의 NS1 단백질을 코딩하도록 인플루엔자 바이러스 NS1 유전자 내의 돌연변이를 갖는 게놈을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, NS1의 아미노산 잔기는 PR8 바이러스에 근거하여 카운팅된다. NS1 돌연변이 및 돌연변이된 NS1을 포함하는 인플루엔자 바이러스의 예에 대해서는 예를 들면, 미국 특허 제6,468,544호 및 제6,669,943호; 및 문헌[Li et al., 1999, J. Infect. Dis. 179:1132-1138](이들 각각은 온전히 그대로 본원에 참고로 도입됨)을 참조한다.
5. 비-인플루엔자 바이러스 벡터
한 양태에서, 본원은 감기 폴리펩티드를 함유하는 비-인플루엔자 바이러스를 제공한다. 특정 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 비-인플루엔자 바이러스의 비리온 내로 도입된다. 비-인플루엔자 바이러스는 상기 바이러스를 특정 세포 유형, 예컨대, 면역 세포로 표적화시키는 부분에 접합될 수 있다. 일부 실시양태에서, 비-인플루엔자 바이러스의 비리온은 감기 폴리펩티드 이외에 이종 폴리펩티드를 그 자신 내로 도입하거나 발현한다. 이종 폴리펩티드는 면역강화 활성을 갖거나 비-인플루엔자 바이러스를 특정 세포 유형으로 표적화시키는 폴리펩티드, 예컨대, 특정 세포 유형 상의 항원을 인식하는 항체 또는 특정 세포 유형 상의 특정 수용체에 결합하는 리간드일 수 있다. 이러한 이종 폴리펩티드의 예에 대해서는 상기 단락 4.를 참조한다.
당업자에게 공지되어 있는 기법을 이용하여 감기 폴리펩티드를 비리온의 제조 동안 트랜스로 공급함으로써 감기 폴리펩티드를 함유하는 비-인플루엔자 바이러스를 제조할 수 있다. 대안적으로, 모 비-인플루엔자 바이러스는 상기 바이러스에의 감염에 민감한 세포에서 감기 폴리펩티드를 발현하도록 개조된 게놈을 포함하고, 이때 헤마글루티닌 기능은 인플루엔자 감기 폴리펩티드를 함유하는 자손 인플루엔자 바이러스를 생성하도록 트랜스로 공급된다.
천연 균주, 변이체 또는 돌연변이체, 돌연변이된 바이러스, 재조합체 및/또는 유전적으로 변형된 바이러스를 포함하나 이들로 한정되지 않는 임의의 바이러스 유형, 아형 또는 균주가 비-인플루엔자 바이러스 벡터로서 사용될 수 있다. 특정 실시양태에서, 모 비-인플루엔자 바이러스는 천연 바이러스가 아니다. 또 다른 특정 실시양태에서, 모 비-인플루엔자 바이러스는 유전적으로 개조된 바이러스이다. 일부 실시양태에서, 외피 바이러스는 본원에 기재된 막 결합된 감기 폴리펩티드의 발현을 위해 바람직하다.
예시적 실시양태에서, 비-인플루엔자 바이러스 벡터는 뉴캐슬병 바이러스(NDV)이다. 또 다른 실시양태에서, 비-인플루엔자 바이러스 벡터는 백시니아 바이러스이다. 다른 예시적 비-제한적 실시양태에서, 비-인플루엔자 바이러스 벡터는 아데노바이러스, 아데노 관련 바이러스(AAV), B형 간염 바이러스, 레트로바이러스(예를 들면, 감마레트로바이러스, 예컨대, 마우스 줄기세포 바이러스(MSCV) 게놈 또는 뮤린 백혈병 바이러스(MLV), 예를 들면, 몰로니 뮤린 백혈병 바이러스, 온코레트로바이러스 또는 렌티바이러스), 알파바이러스(예를 들면, 베네수엘라 말 뇌염 바이러스), 라브도바이러스(rhabdovirus), 예컨대, 수포성 구내염 바이러스 또는 유두종바이러스, 수두바이러스(예컨대, 백시니아 바이러스, MVA-T7 벡터 또는 계두바이러스), 메타뉴모바이러스(metapneumovirus), 홍역 바이러스, 포진바이러스, 예컨대, 단순포진바이러스 또는 거품형성바이러스이다. 예를 들면, 문헌[Lawrie and Tumin, 1993, Cur. Opin. Genet. Develop. 3, 102-109](레트로바이러스 벡터); 문헌[Bett et al., 1993, J. Virol. 67, 5911](아데노바이러스 벡터); 문헌[Zhou et al., 1994, J. Exp. Med. 179, 1867](아데노 관련 바이러스 벡터); 문헌[Dubensky et al., 1996, J. Virol. 70, 508-519](백시니아 바이러스 및 조류 수두 바이러스를 포함하는 수두바이러스 과로부터 유래된 바이러스 벡터; 및 알파 바이러스 속으로부터 유래된 바이러스 벡터, 예컨대, 신드비스 바이러스 및 셈리키 포레스트 바이러스로부터 유래된 바이러스 벡터); 미국 특허 제5,643,576호(베네수엘라 말 뇌염 바이러스); 국제 특허출원 공개 제WO 96/34625호(VSV); 문헌[Ohe et al., 1995, Human Gene Therapy 6, 325-333]; 국제 특허출원 공개 제WO 94/12629호(Woo et al.); 문헌[Xiao & Brandsma, 1996, Nucleic Acids. Res. 24, 2630-2622](유두종바이러스); 및 문헌[Bukreyev and Collins, 2008, Curr Opin Mol Ther. 10:46-55](NDV)(이들 각각은 온전히 그대로 본원에 참고로 도입됨)을 참조한다.
특정 실시양태에서, 비-인플루엔자 바이러스 벡터는 NDV이다. 천연 균주, 변이체 또는 돌연변이체, 돌연변이된 바이러스, 재조합체 및/또는 유전적으로 개조된 바이러스를 포함하나 이들로 한정되지 않는 임의의 NDV 유형, 아형 또는 균주는 감기 폴리펩티드를 발현하도록 개조되는 골격으로서 사용될 수 있다. 특정 실시양태에서, 유전적 개조를 위한 골격으로서 사용되는 NDV는 천연 균주이다. 일부 실시양태에서, 유전적 개조를 위한 골격으로서 사용되는 NDV는 용해성 균주이다. 다른 실시양태에서, 유전적 개조를 위한 골격으로서 사용되는 NDV는 비용해성 균주이다. 일부 실시양태에서, 유전적 개조를 위한 골격으로서 사용되는 NDV는 약독형(lentogenic) 균주이다. 일부 실시양태에서, 유전적 개조를 위한 골격으로서 사용되는 NDV는 중간독형(mesogenic) 균주이다. 다른 실시양태에서, 유전적 개조를 위한 골격으로서 사용되는 NDV는 강독형(velogenic) 균주이다. NDV 균주의 특정 예는 73-T 균주, 울스터(Ulster) 균주, MTH-68 균주, 이탈리엔(Italien) 균주, 힉만(Hickman) 균주, PV701 균주, 히치너(Hitchner) B1 균주, 라 소타(La Sota) 균주, YG97 균주, MET95 균주 및 F48E9 균주를 포함하나 이들로 한정되지 않는다. 특정 실시양태에서, 유전적 개조를 위한 골격으로서 사용되는 NDV는 히치너 B1 균주이다. 또 다른 특정 실시양태에서, 유전적 개조를 위한 골격으로서 사용되는 NDV는 라 소타 균주이다.
한 실시양태에서, 비-인플루엔자 바이러스 벡터를 위한 골격으로서 사용되는 NDV는 변형된 F 단백질을 발현하도록 개조되는데, 이때 F 단백질의 절단 부위가 1개 또는 2개의 추가 아르기닌 잔기를 함유하는 절단 부위로 치환됨으로써 돌연변이체 절단 부위가 푸린(furin) 과의 편재 발현된 프로테아제에 의해 활성화될 수 있다. 이러한 변형된 F 단백질을 발현하는 NDV의 특정 예는 rNDV/F2aa 및 rNDV/F3aa를 포함하나 이들로 한정되지 않는다. 돌연변이된 절단 부위를 갖는 변형된 F 단백질을 생성하도록 NDV F 단백질 내로 도입된 돌연변이의 설명에 대해서는 예를 들면, 온전히 그대로 본원에 참고로 도입되는 문헌[Park et al. (2006) "Engineered viral vaccine constructs with dual specificity: Avian influenza and Newcastle disease." PNAS USA 103: 8203-2808]을 참조한다.
한 실시양태에서, 비-인플루엔자 바이러스 벡터는 수두바이러스이다. 수두바이러스 벡터는 백신 벡터에 적합한 서열을 제공하는 폭스비리대의 임의의 구성원, 특히 백시니아 바이러스 또는 조류수두바이러스(예컨대, 카나리아수두, 계두 등)에 근거할 수 있다. 특정 실시양태에서, 수두바이러스 벡터는 백시니아 바이러스 벡터이다. 적합한 백시니아 바이러스는 코펜하겐(VC-2) 균주(문헌[Goebel, et al., Virol 179: 247-266, 1990]; 문헌[Johnson, et al., Virol. 196: 381-401, 1993]), 변형된 코펜하겐 균주(NYVAC)(미국 특허 제6,265,189호), 와이어쓰(WYETH) 균주 및 변형된 안카라(Ankara)(MVA) 균주(문헌[Antoine, et al., Virol. 244: 365-396, 1998])를 포함하나 이들로 한정되지 않는다. 다른 적합한 수두바이러스는 바람직한 성질을 제공하고 고도로 약독화되어 있는 계두 균주, 예컨대, 알박(ALVAC) 및 트로박(TROVAC) 벡터를 포함한다(예를 들면, 미국 특허 제6,265,189호; 문헌[Tartaglia et al., In AIDS Research Reviews, Koff, et al., eds., Vol. 3, Marcel Dekker, N.Y., 1993]; 및 문헌[Tartaglia et al., 1990, Reviews in Immunology 10: 13-30, 1990] 참조).
감기 폴리펩티드를 발현하도록 비-인플루엔자 바이러스를 개조하는 방법은 이러한 바이러스의 약독화, 증식, 단리 및 정제 방법과 마찬가지로 당업계에서 잘 공지되어 있다. NDV 벡터에 대한 이러한 기법에 대해서는 예를 들면, 국제 특허출원 공개 제WO 01/04333호; 미국 특허 제7,442,379호, 제6,146,642호, 제6,649,372호, 제6,544,785호 및 제7,384,774호; 문헌[Swayne et al. (2003). Avian Dis. 47:1047-1050]; 및 문헌[Swayne et al. (2001). J. Virol. 11868-11873](이들 각각은 온전히 그대로 본원에 참고로 도입됨)을 참조한다. 수두바이러스에 대한 이러한 기법에 대해서는 예를 들면, 문헌[Piccini, et al., Methods of Enzymology 153: 545-563, 1987]; 국제 특허출원 공개 제WO 96/11279호; 미국 특허 제4,769,330호, 제4,722,848호, 제4,769,330호, 제4,603,112호, 제5,110,587호 및 제5,174,993호; 유럽 특허 제83 286호 및 제206 920호; 문헌[Mayr et al., Infection 3: 6-14, 1975]; 및 문헌[Sutter and Moss, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89: 10847-10851, 1992]을 참조한다. 일부 실시양태에서, 비-인플루엔자 바이러스는 약독화된다.
특히, 대상체에게 투여될 조성물에서 사용될 비-인플루엔자 바이러스 벡터의 선택을 위한 예시적 고려사항은 안전성, 낮은 독성, 안정성, 세포 유형 특이성 및 면역원성, 특히 비-인플루엔자 바이러스 벡터에 의해 발현된 감기 폴리펩티드의 항원성이다.
6. 바이러스 유사 입자 및 비로좀( virosomes )
감기 폴리펩티드는 바이러스 유사 입자(VLP) 벡터 내로 도입될 수 있다. VLP는 전형적으로 바이러스의 구조 단백질로부터 유래된 바이러스 폴리펩티드를 일반적으로 포함한다. 일부 실시양태에서, VLP는 복제할 수 없다. 일부 실시양태에서, VLP는 바이러스의 완전한 게놈을 결여할 수 있거나 바이러스의 게놈의 일부를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, VLP는 세포를 감염시킬 수 없다. 일부 실시양태에서, VLP는 당업자에게 공지되어 있거나 본원에 기재되어 있는 1개 이상의 바이러스 표적화 부분(예를 들면, 바이러스 표면 당단백질) 또는 비-바이러스 표적화 부분(예를 들면, 항체 또는 단백질)을 그의 표면 상에서 발현한다. 일부 실시양태에서, VLP는 감기 폴리펩티드 및 바이러스 구조 단백질, 예컨대, HIV 개그(gag)를 포함한다.
인플루엔자 바이러스(문헌[Bright et al. (2007) Vaccine. 25:3871]), 인간 유두종바이러스 1형(문헌[Hagnesee et al. (1991) J. Virol. 67:315]), 인간 유두종바이러스 16형(문헌[Kirnbauer et al. Proc. Natl. Acad. Sci. (1992) 89:12180]), HIV-1(문헌[Haffer et al., (1990) J. Virol. 64:2653]) 및 A형 간염 바이러스(문헌[Winokur (1991) 65:5029])(이들 문헌 각각은 온전히 그대로 본원체 도입됨)를 포함하는 여러 바이러스에 근거하여 VLP를 제조하고 재조합적으로 제조된 VLP를 특징규명하는 방법이 기재되어 있다. NDV 단백질을 함유하는 VLP의 발현 방법은 문헌[Pantua et al. (2006) J. Virol. 80:11062-11073] 및 미국 특허출원 공개 제2009/0068221호(2009년 3월 12일 공개)(이들 각각은 온전히 그대로 본원에 도입됨)에 의해 제공된다.
특정 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 비로좀 내로 도입될 수 있다. 감기 폴리펩티드를 함유하는 비로좀은 당업자에게 공지되어 있는 기법을 이용하여 제조할 수 있다. 예를 들면, 비로좀은 정제된 바이러스를 파괴하고 게놈을 추출하고 바이러스 단백질(예를 들면, 감기 폴리펩티드) 및 지질을 사용하여 입자를 재조립하여 바이러스 단백질을 함유하는 지질 입자를 형성함으로써 제조할 수 있다.
7. 박테리아 벡터
특정 실시양태에서, 박테리아는 본원에 기재된 감기 폴리펩티드를 발현하도록 개조될 수 있다. 감기 폴리펩티드의 발현에 적합한 박테리아는 리스테리아, 살모넬라, 쉬겔라 종, 마이코박테리움 튜버큘로시스(Mycobacterium tuberculosis), 이. 콜라이, 네이세리아 메닝기티데스(Neisseria meningitides), 브루셀라 아보르투스(Brucella abortus), 브루셀라 멜리텐시스(Brucella melitensis), 보렐리아 부르그도르페리(Borrelia burgdorferi) 및 프란시셀라 튤라렌시스(Francisella tularensis)를 포함하나 이들로 한정되지 않는다. 특정 실시양태에서, 감기 폴리펩티드를 발현하도록 개조된 박테리아는 약독화된다. 이종 폴리펩티드를 발현하도록 개조된 박테리아의 제조 기법은 당업계에서 공지되어 있고 감기 폴리펩티드의 발현에 적용될 수 있다. 예를 들면, 미국 특허출원 공개 제2008/0248066호(2008년 10월 9일 공개) 및 제2007/0207171호(2007년 9월 6일 공개)(이들 각각은 온전히 그대로 본원에 참고로 도입됨)를 참조한다.
8. 감기 폴리펩티드에 대한 항체의 발생
감기 폴리펩티드, 이러한 폴리펩티드를 코딩하는 핵산, 또는 이러한 핵산 또는 본원에 기재된 폴리펩티드를 포함하는 벡터를 사용하여 인플루엔자에 대한 중화 항체, 예를 들면, 감기 폴리펩티드의 HA2 도메인의 긴 알파 나선 영역에 대한 중화 항체를 유도할 수 있다. 특정 실시양태에서, 감기 폴리펩티드, 이러한 폴리펩티드를 코딩하는 핵산, 또는 이러한 핵산 또는 본원에 기재된 폴리펩티드를 포함하는 벡터를 비-인간 대상체(예를 들면, 마우스, 토끼, 래트, 기니아 피그 등)에게 투여함으로써, 당업자에게 공지되어 있는 기법(예를 들면, 면역친화성 크로마토그래피, 원심분리, 침전 등)을 이용하여 단리할 수 있는 항체의 생성을 포함하는 면역 반응을 유도할 수 있다.
대안적으로, 본원에 기재된 감기 폴리펩티드를 사용하여 항체 라이브러리로부터 항체를 검색할 수 있다. 예를 들면, 감기 폴리펩티드를 포함하는 단리된 감기 폴리펩티드를 고체 지지체(예를 들면, 실리카 겔, 수지, 유도체화된 플라스틱 필름, 유리 비드, 면직물, 플라스틱 비드, 폴리스티렌 비드, 알루미나 겔, 폴리사카라이드 또는 자기 비드)에 고정시키고 항체에의 결합에 대해 검색할 수 있다. 대안으로서, 항체를 고체 지지체에 고정시키고 단리된 감기 폴리펩티드와의 결합에 대해 검색할 수 있다. 임의의 검색 분석법, 예컨대, 패닝(panning) 분석법, ELISA, 표면 플라스몬 공명, 또는 당업계에서 공지되어 있는 다른 항체 검색 분석법을 이용하여 감기 폴리펩티드에 결합하는 항체를 검색할 수 있다. 검색되는 항체 라이브러리는 상업적으로 입수될 수 있는 항체 라이브러리, 시험관 내에서 발생된 라이브러리, 또는 인플루엔자에 감염된 개체로부터 항체를 확인하고 클로닝하거나 단리하여 수득한 라이브러리일 수 있다. 구체적 실시양태에서, 항체 라이브러리는 인플루엔자 바이러스 발생의 생존자로부터 발생된다. 항체 라이브러리는 당업계에서 공지되어 있는 방법에 따라 발생될 수 있다. 구체적 실시양태에서, 항체 라이브러리는 항체를 클로닝하고 이를 파지 표시 라이브러리 또는 파지미드 표시 라이브러리에서 사용함으로써 발생된다.
당업계에서 공지되어 있거나 본원에 기재되어 있는 생물학적 분석법을 이용하여 본원에 기재된 방법에서 확인된 항체를 중화 활성 및 자가반응성 결여에 대해 시험할 수 있다. 한 실시양태에서, 비-인간 동물 또는 항체 라이브러리로부터 단리된 항체는 1종 초과의 인플루엔자 아형으로부터의 헤마글루티닌 폴리펩티드를 중화시킨다. 일부 실시양태에서, 감기 폴리펩티드, 이러한 폴리펩티드를 코딩하는 핵산, 또는 이러한 핵산 또는 폴리펩티드를 포함하는 벡터의 사용에 의해 유도되거나 확인된 항체는 인플루엔자 H3 바이러스를 중화시킨다. 일부 실시양태에서, 감기 폴리펩티드, 이러한 폴리펩티드를 코딩하는 핵산, 또는 이러한 핵산 또는 폴리펩티드를 포함하는 벡터의 사용에 의해 유도되거나 확인된 항체는 인플루엔자 바이러스의 1종, 2종, 3종, 4종, 5종, 6종, 7종, 8종, 9종, 10종, 11종, 12종, 13종, 14종, 15종 또는 16종 이상의 아형 또는 균주들을 중화시킨다. 한 실시양태에서, 중화 항체는 1종 이상의 인플루엔자 A 바이러스 및 1종 이상의 인플루엔자 B 바이러스를 중화시킨다. 구체적 실시양태에서, 중화 항체는 문헌[Wang et al. (2010) "Broadly Protective Monoclonal Antibodies against H3 Influenza Viruses following Sequential Immunization with Different Hemagglutinins," PLOS Pathogens 6(2):1-9]에 기재된 항체가 아니다.
감기 폴리펩티드, 이러한 폴리펩티드를 코딩하는 핵산, 또는 이러한 핵산 또는 폴리펩티드를 포함하는 벡터의 사용에 의해 확인되거나 유도된 항체는 면역글로불린 분자 및 면역글로불린 분자의 면역학적 활성 부분, 즉 감기 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위를 함유하는 분자를 포함한다. 면역글로불린 분자는 임의의 유형(예를 들면, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 및 IgY), 부류(예를 들면, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2) 또는 하위부류의 면역글로불린 분자일 수 있다. 항체는 단일클론 항체, 다중특이적 항체, 인간 항체, 인간화된 항체, 키메라 항체, 단일쇄 Fvs(scFv), 단일쇄 항체, Fab 단편, F(ab') 단편, 이황화 연결된 Fvs(sdFv) 및 항유전자형(anti-idiotypic)(항-Id) 항체(예를 들면, 본원에 기재된 방법의 이용에 의해 유도되거나 확인된 항체에 대한 항-Id 항체를 포함함), 및 이들 중 임의의 항체 또는 단편의 에피토프 결합 단편을 포함하나 이들로 한정되지 않는다. 특정 실시양태에서, 감기 폴리펩티드, 이러한 폴리펩티드를 코딩하는 핵산, 또는 이러한 핵산 또는 폴리펩티드를 포함하는 벡터의 사용에 의해 유도되거나 확인된 항체는 인간 또는 인간화된 단일클론 항체이다.
감기 폴리펩티드, 이러한 폴리펩티드를 코딩하는 핵산, 또는 이러한 핵산 또는 폴리펩티드를 포함하는 벡터의 사용에 의해 유도되거나 확인된 항체를 사용하여 요법의 효능 및/또는 질환 진행을 모니터링할 수 있다. 이 목적을 위해, 예를 들면, 방사면역분석법, ELISA(효소 연결 면역흡착 분석법), "샌드위치" 면역분석법, 침강소(precipitin) 반응, 겔 확산 침강소 반응, 면역확산 분석법, 응집 분석법, 보체 고정화 분석법, 면역방사측정 분석법, 형광 면역분석법, 단백질 A 면역분석법 및 면역전기영동 분석법과 같은 기법을 이용하는 경쟁적 분석 시스템 및 비경쟁적 분석 시스템을 포함하나 이들로 한정되지 않는, 당업계에서 공지되어 있는 임의의 면역분석 시스템이 사용될 수 있다.
감기 폴리펩티드, 이러한 폴리펩티드를 코딩하는 핵산, 또는 이러한 핵산 또는 폴리펩티드를 포함하는 벡터의 사용에 의해 유도되거나 확인된 항체를 사용하여 예를 들면, 단일 아형 또는 2종, 3종 또는 4종 이상의 상이한 아형로부터의 다수의 인플루엔자 바이러스 균주들로부터 인플루엔자 바이러스를 검출할 수 있고/있거나, 예를 들면, 단일 아형 또는 2종, 3종 또는 4종 이상의 다양한 아형로부터의 다수의 인플루엔자 바이러스 균주들에 의한 인플루엔자 바이러스 감염을 진단할 수 있다.
감기 폴리펩티드, 이러한 폴리펩티드를 코딩하는 핵산, 또는 이러한 핵산 또는 폴리펩티드를 포함하는 벡터의 사용에 의해 유도되거나 확인된 항체는 항유전자형 항체의 제조에서 사용될 수 있다. 그 후, 인플루엔자의 특정 항원, 예를 들면, 감기 폴리펩티드에 결합하는 항체의 하위집단을 생성하기 위해 상기 항유전자형 항체를 면역화에 사용할 수 있다(온전히 그대로 본원에 참고로 도입되는 문헌[Jerne, 1974, Ann. Immunol. (Paris) 125c:373]; 및 문헌[Jerne et al., 1982, EMBO J. 1:234] 참조).
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 방법에 따라 항체를 발생시키기 위해 감기 폴리펩티드, 이러한 폴리펩티드를 코딩하는 핵산, 또는 이러한 핵산 또는 폴리펩티드를 포함하는 벡터를 투여받는 비-인간 대상체는 인간 항체를 생성할 수 있는 형질전환 동물(예를 들면, 형질전환 마우스)이다. 기능성 내인성 면역글로불린을 발현할 수 없으나 인간 면역글로불린 유전자를 발현할 수 있는 형질전환 마우스를 이용하여 인간 항체를 생성할 수 있다. 예를 들면, 무작위로 또는 상동 재조합을 통해 인간 중쇄 및 경쇄 면역글로불린 유전자 결합체를 마우스 배아줄기세포 내로 도입할 수 있다. 대안적으로, 인간 중쇄 및 경쇄 유전자 이외에 인간 가변 영역, 불변 영역 및 다양성(diversity) 영역을 마우스 배아줄기세포 내로 도입할 수 있다. 마우스 중쇄 및 경쇄 면역글로불린 유전자는 상동 재조합에 의한 인간 면역글로불린 좌위(loci)의 도입과 별도로 또는 동시에 비기능성 상태가 될 수 있다. 구체적으로, JH 영역의 동형접합 결실은 내인성 항체 생성을 방해한다. 변형된 배아줄기세포를 증폭시키고 배반포 내로 미세주입하여 키메라 마우스를 발생시킨다. 그 다음, 상기 키메라 마우스를 교배하여 인간 항체를 발현하는 동형접합 자손을 발생시킨다. 형질전환 마우스에 의해 보유된 인간 면역글로불린 전이유전자(transgene)는 B 세포 분화 동안 재배열한 후 부류 전환 및 체세포 돌연변이를 겪게된다. 따라서, 이러한 기법을 이용하여 치료적으로 유용한 IgG, IgA, IgM 및 IgE 항체를 제조할 수 있다. 인간 항체의 이 제조 기술의 개요에 대해서는 문헌[Lonberg and Huszar, Int. Rev. Immunol. 13:65-93 (1995)]을 참조한다. 인간 항체 및 인간 단일클론 항체의 이 제조 기술 및 이러한 항체의 제조 프로토콜의 상세한 논의에 대해서는 예를 들면, 국제 특허출원 공개 제WO 98/24893호, 제WO 92/01047호, 제WO 96/34096호 및 제WO 96/33735호; 유럽 특허 제0 598 877호; 및 미국 특허 제5,413,923호, 제5,625,126호, 제5,633,425호, 제5,569,825호, 제5,661,016호, 제5,545,806호, 제5,814,318호, 제5,885,793호, 제5,916,771호 및 제5,939,598호(이들은 온전히 그대로 본원에 참고로 도입됨)를 참조한다. 애브제닉스 인코포레이티드(Abgenix, Inc.)(미국 캘리포니아주 프리몬트 소재), 젠팜(Genpharm)(미국 캘리포니아주 산 호세 소재) 및 메다렉스 인코포레이티드(미국 뉴저지주 프린스톤 소재)와 같은 회사가 선택된 항원에 대해 유도된 인간 항체를 제공하도록 고용될 수 있다.
9. 감기 폴리펩티드를 사용한 세포의 자극
또 다른 양태에서, 본원은 생체 외에서 세포를 본원에 기재된 감기 폴리펩티드로 자극하는 방법을 제공한다. 이러한 세포, 예를 들면, 수지상세포를 시험관 내에서 사용하여 감기 폴리펩티드에 대한 항체를 발생시킬 수 있거나, 예를 들면, 당업계에서 공지되어 있는 양자 전달(adoptive transfer) 기법을 이용하여 상기 세포 자체를 대상체에게 투여할 수 있다. 양자 전달 기법의 설명에 대해서는 예를 들면, 온전히 그대로 본원에 참고로 도입되는 미국 특허출원 공개 제2008/0019998호(2008년 1월 24일 공개)를 참조한다. 일부 실시양태에서, 생체 외에서 본원에 기재된 감기 폴리펩티드로 자극된 세포가 대상체에게 투여되는 경우, 상기 세포는 포유동물 세포(예를 들면, CB-1 세포)가 아니다. 일부 실시양태에서, 생체 외에서 본원에 기재된 감기 폴리펩티드로 자극된 세포가 대상체에게 투여되는 경우, 상기 세포는 포유동물 세포(예를 들면, CB-1 세포)이다.
비-제한적 일례에서, 본원에 기재된 감기 폴리펩티드를 발현하도록 개조된 벡터, 예를 들면, 인플루엔자 바이러스 벡터는 감기 폴리펩티드를 발현하고 감기 폴리펩티드에 대해 유도된 면역자극 성질을 나타내는 수지상세포(DC)를 발생시키는 데에 사용될 수 있다. 이러한 DC는 기억 T 세포를 증폭시키는 데에 사용될 수 있고 인플루엔자 감기 폴리펩티드 특이적 세포독성 T 림프구 클론을 포함하는 T 세포의 강력한 자극제이다. 온전히 그대로 본원에 참고로 도입되는 문헌[Strobel et al., 2000, Human Gene Therapy 11:2207-2218]을 참조한다.
본원에 기재된 폴리펩티드는 이 폴리펩티드를 표적 세포, 예를 들면, DC와 접촉시키고 상기 폴리펩티드를 상기 표적 세포에게 전달하는 임의의 방식에 의해 상기 표적 세포에게 전달될 수 있다. 일부 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 본원에 기재된 바와 같이 대상체에게 전달된다. 일부 이러한 실시양태에서, 상기 폴리펩티드와 접촉된 세포는 단리되고 증식될 수 있다.
일부 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 시험관 내에서 표적 세포에게 전달된다. 당업자에게 공지되어 있는 기법을 이용하여 상기 폴리펩티드를 표적 세포에게 전달할 수 있다. 예를 들면, 조직 배양 플레이트, 튜브 또는 다른 용기 내에서 표적 세포를 상기 폴리펩티드와 접촉시킬 수 있다. 상기 폴리펩티드를 배지에 현탁시키고 배양 플레이트, 튜브 또는 다른 용기의 웰에 첨가할 수 있다. 상기 폴리펩티드를 함유하는 배지를 세포의 플레이팅 전에 또는 세포가 플레이팅된 후 첨가할 수 있다. 표적 세포는 바람직하게는 상기 폴리펩티드가 상기 세포와 접촉하기에 충분한 시간 동안 상기 폴리펩티드와 함께 항온처리된다. 일부 실시양태에서, 상기 세포는 약 1시간 이상, 약 5시간 이상, 약 10시간 이상, 약 12시간 이상, 약 16시간 이상, 약 24시간 이상, 약 48시간 이상, 약 1시간 내지 약 12시간, 약 3시간 내지 약 6시간, 약 6시간 내지 약 12시간, 약 12시간 내지 약 24시간 또는 약 24시간 내지 약 48시간 동안 상기 폴리펩티드와 함께 항온처리된다. 감기 폴리펩티드가 바이러스 내에 존재하는 일부 실시양태에서, 표적 세포의 접촉은 상기 세포를 상기 바이러스로 감염시키는 단계를 포함한다.
표적 세포는 예를 들면, 인간, 마우스, 래트, 토끼 및 기니아 피그를 포함하는 임의의 종으로부터 유래될 수 있다. 일부 실시양태에서, 표적 세포는 건강한 대상체 또는 치료가 필요한 대상체로부터 수득된 DC이다. 일부 실시양태에서, 표적 세포는 상기 폴리펩티드에 대한 면역 반응을 자극하는 것이 요구되는 대상체로부터 수득된 DC이다. 대상체로부터 세포를 수득하는 방법은 당업계에서 잘 공지되어 있다.
10. 조성물
본원에 기재된 감기 폴리펩티드, 핵산, 벡터, 박테리아, 항체 또는 세포(종종 본원에서 "활성 화합물"로서 지칭됨)는 조성물 내로 도입될 수 있다. 특정 실시양태에서, 상기 조성물은 약학 조성물, 예컨대, 면역원성 조성물(예를 들면, 백신 제제)이다. 본원에서 제공된 약학 조성물은 이 조성물이 대상체에게 투여될 수 있게 하는 임의의 형태로 존재할 수 있다. 특정 실시양태에서, 약학 조성물은 수의학 및/또는 인간 투여에 적합하다. 상기 조성물은 인플루엔자 바이러스 질환의 예방 또는 치료 방법에서 사용될 수 있다.
한 실시양태에서, 약학 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체와 혼합된 감기 폴리펩티드를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 약학 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체와 혼합된, 본원에 기재된 감기 폴리펩티드를 코딩하는 핵산을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 약학 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체와 혼합된, 감기 폴리펩티드를 코딩하는 핵산을 포함하는 발현 벡터를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 약학 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체와 혼합된, 감기 폴리펩티드를 함유하는 인플루엔자 바이러스 또는 비-인플루엔자 바이러스를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 약학 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체와 혼합된, 감기 폴리펩티드를 발현하도록 개조된 게놈을 갖는 인플루엔자 바이러스 또는 비-인플루엔자 바이러스를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 약학 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체와 혼합된, 감기 폴리펩티드를 함유하는 바이러스 유사 입자 또는 비로좀을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 약학 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체와 혼합된, 감기 폴리펩티드를 발현하거나 발현하도록 개조된 박테리아를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 약학 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체와 혼합된, 감기 폴리펩티드로 자극된 세포를 포함한다.
일부 실시양태에서, 약학 조성물은 활성 화합물 이외에 1종 이상의 다른 요법을 포함할 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "약학적으로 허용가능한"은 동물, 보다 구체적으로 인간에서의 사용에 대해 연방 또는 주정부의 규제 관청에 의해 승인받았거나 미국 약전 또는 다른 일반적으로 인정된 약전에 기재되어 있다는 것을 의미한다. 용어 "담체"는 약학 조성물과 함께 투여될 희석제, 보조제, 부형제 또는 비히클을 의미한다. 식염수 용액 및 수성 덱스트로스 및 글리세롤 용액도 액체 담체, 특히 주사가능한 용액용 액체 담체로서 사용될 수 있다. 적합한 부형제는 전분, 글루코스, 락토스, 수크로스, 젤라틴, 맥아, 벼, 밀가루, 백악, 실리카 겔, 스테아르산나트륨, 글리세롤 모노스테아레이트, 탈크, 염화나트륨, 건조 탈지유, 글리세롤, 프로필렌, 글리콜, 물, 에탄올 등을 포함한다. 적합한 약학 담체의 예는 문헌["Remington's Pharmaceutical Sciences" by E.W. Martin]에 기재되어 있다. 제제는 투여 방식에 적합해야 한다.
특정 실시양태에서, 약학 조성물은 대상체로의 의도된 투여 경로에 적합하도록 제제화된다. 예를 들면, 약학 조성물은 피하, 비경구, 경구, 피내, 경피, 결장직장, 복강내 및 직장 투여에 적합하도록 제제화될 수 있다. 특정 실시양태에서, 약학 조성물은 정맥내, 경구, 복강내, 코내, 기관내, 피하, 근육내, 국소, 피내, 경피 또는 폐 투여를 위해 제제화될 수 있다.
일부 실시양태에서, 생체분해가능한 중합체, 예컨대, 에틸렌 비닐 아세테이트, 폴리무수물, 폴리에틸렌 글리콜(PEG화), 폴리메틸 메트아크릴레이트 중합체, 폴리락타이드, 폴리(락타이드-코-글리콜라이드), 폴리글리콜산, 콜라겐, 폴리오르토에스터 및 폴리락트산이 담체로서 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 활성 화합물은 신체로부터의 신속한 제거로부터 상기 화합물의 보호를 증가시키는 담체와 함께, 예컨대, 이식편 및 미세캡슐화된 전달 시스템을 포함하는 조절 방출 제제로서 제조된다. 이러한 제제의 제조 방법은 당업자에게 자명할 것이다. 리포좀 또는 마이셀(micelles)도 약학적으로 허용가능한 담체로서 사용될 수 있다. 이들은 당업자에게 공지되어 있는 방법, 예를 들면, 미국 특허 제4,522,811호에 기재된 바와 같은 방법에 따라 제조될 수 있다. 일부 실시양태에서, 약학 조성물은 1개 이상의 보조제를 포함한다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 면역원성 조성물은 1가 제제이다. 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 면역원성 조성물은 다가 제제이다. 일례에서, 다가 제제는 인플루엔자 A 바이러스로부터 유래된 감기 폴리펩티드를 발현하는 1개 이상의 벡터, 및 인플루엔자 B 바이러스로부터 유래된 감기 폴리펩티드를 발현하는 1개 이상의 벡터를 포함한다. 또 다른 예에서, 다가 제제는 H3 인플루엔자 A 바이러스로부터 유래된 감기 폴리펩티드를 발현하는 벡터, 및 H1 인플루엔자 A 바이러스로부터 유래된 감기 폴리펩티드를 발현하는 벡터를 포함한다. 또 다른 예에서, 다가 제제는 H3 인플루엔자 A 바이러스로부터 유래된 감기 폴리펩티드를 발현하는 벡터, H1 인플루엔자 A 바이러스로부터 유래된 감기 폴리펩티드를 발현하는 벡터, 및 인플루엔자 B 바이러스로부터 유래된 감기 폴리펩티드를 발현하는 벡터를 포함한다. 일부 실시양태에서, 다가 제제는 단일 벡터를 사용하여 발현한 1개 이상의 상이한 감기 폴리펩티드를 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 약학 조성물은 보존제, 예를 들면, 수은 유도체 티메로살을 추가로 포함한다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 약학 조성물은 0.001% 내지 0.01%의 티메로살을 포함한다. 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 약학 조성물은 보존제를 포함하지 않는다. 특정 실시양태에서, 티메로살은 본원에 기재된 약학 조성물의 제조 동안 사용되고, 티메로살은 상기 약학 조성물의 제조 후 정제 단계를 통해 제거된다(즉, 상기 약학 조성물은 미량의 티메로살(정제 후 투여량 당 0.3 ㎍ 미만의 수은; 이러한 약학 조성물은 티메로살 무함유 생성물로서 간주됨)을 함유한다).
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 약학 조성물은 알 단백질(예를 들면, 오브알부민 또는 다른 알 단백질)을 추가로 포함한다. 본원에 기재된 약학 조성물 중의 알 단백질의 양은 1 ml의 약학 조성물 당 약 0.0005 ㎍ 내지 약 1.2 ㎍의 알 단백질일 수 있다. 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 약학 조성물은 알 단백질을 포함하지 않는다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 약학 조성물은 젠타미신, 네오마이신, 폴리믹신(예를 들면, 폴리믹신 B), 가나마이신 및 스트렙토마이신을 포함하나 이들로 한정되지 않는 1개 이상의 항미생물제(예를 들면, 항생제)를 추가로 포함한다. 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 약학 조성물은 임의의 항생제를 포함하지 않는다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 약학 조성물은 바이러스를 불활성화시키기 위해 사용되는 1개 이상의 성분, 예를 들면, 포르말린 또는 포름알데하이드 또는 세제, 예컨대, 데옥시콜산나트륨, 옥톡시놀-9(트리톤 X-100) 또는 옥톡시놀-10을 추가로 포함한다. 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 약학 조성물은 바이러스를 불활성화시키기 위해 사용되는 임의의 성분을 포함하지 않는다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 약학 조성물은 젤라틴을 추가로 포함한다. 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 약학 조성물은 젤라틴을 포함하지 않는다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 약학 조성물은 1개 이상의 완충제, 예를 들면, 인산염 완충제 및 수크로스 포스페이트 글루타메이트 완충제를 추가로 포함한다. 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 약학 조성물은 완충제를 포함하지 않는다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 약학 조성물은 1개 이상의 염, 예를 들면, 염화나트륨, 염화칼슘, 인산나트륨, 글루탐산모노나트륨 및 알루미늄 염(예를 들면, 수산화알루미늄, 인산알루미늄, 명반(황산알루미늄칼륨) 또는 이러한 알루미늄 염들의 혼합물)을 추가로 포함한다. 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 약학 조성물은 염을 포함하지 않는다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 약학 조성물은 첨가제 함량이 낮은 인플루엔자 바이러스 백신이다(즉, 상기 약학 조성물은 인플루엔자 바이러스 백신에서 통상적으로 사용되는 1개 이상의 첨가제를 포함하지 않는다). 첨가제 함량이 낮은 인플루엔자 백신은 문헌에 기재되어 있다(예를 들면, 온전히 그대로 본원에 참고로 도입되는 국제 공개 제WO 09/001217호로서 공개된 국제 특허출원 제PCT/IB2008/002238호 참조).
본원에 기재된 약학 조성물은 투여 설명서와 함께 용기, 팩(pack) 또는 분배기 내에 포함될 수 있다.
본원에 기재된 약학 조성물은 사용 전에 저장될 수 있고, 예를 들면, 상기 약학 조성물은 (예를 들면, 약 -20℃ 또는 약 -70℃에서) 냉동 저장될 수 있거나, 냉장 조건(예를 들면, 약 4℃)에서 저장될 수 있거나, 또는 실온에서 저장될 수 있다(냉장 없이 인플루엔자 백신을 포함하는 조성물을 저장하는 방법에 대해서는 온전히 그대로 본원에 참고로 도입되는 국제 공개 제WO 07/110776호로서 공개된 국제 특허출원 제PCT/IB2007/001149호 참조).
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 약학 조성물 중의 활성 화합물이 감기 폴리펩티드를 발현하도록 개조된 세포인 경우, 상기 약학 조성물 중의 상기 세포는 포유동물 세포(예를 들면, CB-1 세포)가 아니다. 본원에 기재된 약학 조성물 중의 활성 화합물이 감기 폴리펩티드를 발현하도록 개조된 세포인 경우, 상기 약학 조성물 중의 상기 세포는 포유동물 세포이다.
10.1. 아단위 백신
특정 실시양태에서, 본원은 본원에 기재된 코어 폴리펩티드를 포함하는 아단위 백신을 제공한다. 일부 실시양태에서, 아단위 백신은 감기 폴리펩티드 및 1개 이상의 표면 당단백질(예를 들면, 인플루엔자 바이러스 뉴라미니다제), 다른 표적화 부분 또는 보조제를 포함한다. 특정 실시양태에서, 아단위 백신은 단일 인플루엔자 감기 폴리펩티드를 포함한다. 다른 실시양태에서, 아단위 백신은 2개, 3개 또는 4개 이상의 인플루엔자 감기 폴리펩티드를 포함한다. 특정 실시양태에서, 아단위 백신에서 사용되는 인플루엔자 감기 폴리펩티드는 막 결합 폴리펩티드가 아니다(즉, 상기 폴리펩티드는 가용성을 나타낸다).
일부 실시양태에서, 본원은 투여량 당 약 10 ㎍ 내지 약 60 ㎍의 본원에 기재된 1개 이상의 감기 폴리펩티드, 약 0.001% 내지 0.01%의 티메로살, 약 0.1 ㎍ 내지 약 1.0 ㎍의 계란 단백질, 약 1.0 ㎍ 내지 약 5.0 ㎍의 폴리믹신, 약 1.0 ㎍ 내지 약 5.0 ㎍의 네오마이신, 약 0.1 ㎍ 내지 약 5.0 ㎍의 베타프로피오락톤 및 약 0.001 중량/부피% 내지 약 0.05 중량/부피%의 노닐페놀 에톡실레이트를 포함하는 아단위 백신을 제공한다.
특정 실시양태에서, 본원에서 제공된 아단위 백신은 45 ㎍의 본원에서 제공된 감기 폴리펩티드, 1.0 ㎍ 이하의 수은(티메로살로부터의 수은), 1.0 ㎍ 이하의 계란 단백질(즉, 오브알부민), 3.75 ㎍ 이하의 폴리믹신 및 2.5 ㎍ 이하의 네오마이신을 포함하는 0.5 ml 투여량을 포함하거나 이 투여량으로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 아단위 백신은 투여량 당 0.5 ㎍ 이하의 베타프로피오락톤 및 0.015 중량/부피% 이하의 노닐페놀 에톡실레이트를 추가로 포함하거나 이들로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 상기 0.5 ml 투여량의 아단위 백신은 예비충전된 주사기 내에 포장된다.
특정 실시양태에서, 본원에서 제공된 아단위 백신은 45 ㎍의 본원에서 제공된 감기 폴리펩티드, 25.0 ㎍의 수은(티메로살로부터의 수은), 1.0 ㎍ 이하의 계란 단백질(즉, 오브알부민), 3.75 ㎍ 이하의 폴리믹신 및 2.5 ㎍ 이하의 네오마이신을 포함하는 5.0 ml 다회투여량 바이알(투여량 당 0.5 ml)로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 아단위 백신은 투여량 당 0.5 ㎍ 이하의 베타프로피오락톤 및 0.015 중량/부피% 이하의 노닐페놀 에톡실레이트를 추가로 포함하거나 이들로 이루어진다.
특정 실시양태에서, 배아형성된 계란에서 증식된 인플루엔자 바이러스를 사용하여 아단위 백신을 제조한다(즉, 아단위 백신의 성분(예를 들면, 감기 폴리펩티드)이 배아형성된 계란에서 증식된 바이러스로부터 단리된다). 일부 특정 실시양태에서, 배아형성된 계란에서 증식되지 않은 인플루엔자 바이러스를 사용하여 아단위 백신을 제조한다(즉, 아단위 백신의 성분(예를 들면, 감기 폴리펩티드)이 배아형성된 계란에서 증식되지 않은 바이러스로부터 단리된다). 또 다른 특정 실시양태에서, 포유동물 세포, 예를 들면, 불멸화된 인간 세포(예를 들면, 온전히 그대로 본원에 참고로 도입되는 국제 공개 제WO 07/045674호로서 공개된 국제 특허출원 제PCT/EP2006/067566호 참조) 또는 개 신장 세포, 예컨대, MDCK 세포(예를 들면, 온전히 그대로 본원에 참고로 도입되는 국제 공개 제WO 08/032219호로서 공개된 국제 특허출원 제PCT/IB2007/003536호 참조)에서 증식된 인플루엔자 바이러스를 사용하여 아단위 백신을 제조한다(즉, 아단위 백신의 성분(예를 들면, 감기 폴리펩티드)이 포유동물 세포에서 증식된 바이러스로부터 단리된다). 또 다른 특정 실시양태에서, 발현 벡터, 예를 들면, 바이러스 벡터, 식물 벡터 또는 박테리아 벡터를 사용하여 아단위 백신 중의 감기 폴리펩티드를 제조한다(즉, 아단위 백신 중의 감기 폴리펩티드가 발현 벡터로부터 수득/단리된다).
10.2. 생바이러스 백신
한 실시양태에서, 본원은 감기 폴리펩티드를 함유하는 생바이러스를 포함하는 면역원성 조성물(예를 들면, 백신)을 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본원은 감기 폴리펩티드를 코딩하도록 개조된 생바이러스를 포함하는 면역원성 조성물(예를 들면, 백신)을 제공하고, 이때 상기 감기 폴리펩티드는 상기 조성물이 투여된 대상체에서 생성된 자손 바이러스에 의해 발현된다. 특정 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 막 결합 폴리펩티드이다. 다른 특정 실시양태에서, 인플루엔자 바이러스 감기 폴리펩티드는 막 결합 폴리펩티드가 아니다(즉, 가용성 폴리펩티드이다). 특정 실시양태에서, 생바이러스는 인플루엔자 바이러스, 예컨대, 상기 단락 4.에 기재된 인플루엔자 바이러스이다. 다른 실시양태에서, 생바이러스는 비-인플루엔자 바이러스, 예컨대, 상기 단락 5.에 기재된 비-인플루엔자 바이러스이다. 일부 실시양태에서, 생바이러스는 약독화된다. 일부 실시양태에서, 면역원성 조성물은 2개, 3개 또는 4개 이상의 상이한 감기 폴리펩티드를 함유하거나 발현하도록 개조된 2개, 3개 또는 4개 이상의 생바이러스를 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원은 투여량 당 약 105 내지 약 1010 형광 초점 유닛(FFU)의 (본원에 기재된 1개 이상의 감기 폴리펩티드를 함유하는) 약독화된 인플루엔자 생바이러스, 약 0.1 mg 내지 약 0.5 mg의 글루탐산모노나트륨, 약 1.0 mg 내지 약 5.0 mg의 가수분해된 프로신 젤라틴, 약 1.0 mg 내지 약 5.0 mg의 아르기닌, 약 10 mg 내지 약 15 mg의 수크로스, 약 1.0 mg 내지 약 5.0 mg의 이염기성 인산칼륨, 약 0.5 mg 내지 약 2.0 mg의 일염기성 인산칼륨 및 약 0.001 ㎍/ml 내지 약 0.05 ㎍/ml의 젠타미신 설페이트를 포함하는 면역원성 조성물(예를 들면, 백신)을 제공한다. 일부 실시양태에서, 면역원성 조성물(예를 들면, 백신)은 단회 0.2 ml 투여량을 함유하는 예비충전된 분무기로서 포장된다.
특정 실시양태에서, 본원은 투여량 당 106.5 FFU 내지 107.5 FFU의 (본원에 기재된 1개 이상의 감기 폴리펩티드를 함유하는) 약독화된 인플루엔자 생바이러스, 0.188 mg의 글루탐산일나트륨, 2.0 mg의 가수분해된 프로신 젤라틴, 2.42 mg의 아르기닌, 13.68 mg의 수크로스, 2.26 mg의 이염기성 인산칼륨, 0.96 mg의 일염기성 인산칼륨 및 0.015 ㎍/ml 미만의 젠타미신 설페이트를 포함하는 면역원성 조성물(예를 들면, 백신)을 제공한다. 일부 실시양태에서, 면역원성 조성물(예를 들면, 백신)은 단회 0.2 ml 투여량을 함유하는 예비충전된 분무기로서 포장된다.
특정 실시양태에서, 감기 폴리펩티드를 함유하는 생바이러스는 본원에 기재된 면역원성 조성물에서 사용되기 전에 배아형성된 계란에서 증식된다. 또 다른 특정 실시양태에서, 감기 폴리펩티드를 함유하는 생바이러스는 본원에 기재된 면역원성 조성물에서 사용되기 전에 배아형성된 계란에서 증식되지 않는다. 또 다른 특정 실시양태에서, 감기 폴리펩티드를 함유하는 생바이러스는 본원에 기재된 면역원성 조성물에서 사용되기 전에 포유동물 세포, 예를 들면, 불멸화된 인간 세포(예를 들면, 온전히 그대로 본원에 참고로 도입되는 국제 공개 제WO 07/045674호로서 공개된 국제 특허출원 제PCT/EP2006/067566호 참조) 또는 개 신장 세포, 예컨대, MDCK 세포(예를 들면, 온전히 그대로 본원에 참고로 도입되는 국제 공개 제WO 08/032219호로서 공개된 국제 특허출원 제PCT/IB2007/003536호 참조)에서 증식된다.
대상체에게 투여될 생바이러스를 포함하는 면역원성 조성물은 상기 대상체에서의 바이러스 증폭이 천연 감염에서 일어나는 자극과 유사한 종류 및 크기의 연장된 자극을 발생시켜 상당히 긴 지속적인 면역을 부여할 수 있기 때문에 바람직할 수 있다.
10.3. 불활성화된 바이러스 백신
한 실시양태에서, 본원은 감기 폴리펩티드를 함유하는 불활성화된 바이러스를 포함하는 면역원성 조성물(예를 들면, 백신)을 제공한다. 특정 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 막 결합된 폴리펩티드이다. 구체적 실시양태에서, 불활성화된 바이러스는 인플루엔자 바이러스, 예컨대, 상기 단락 4.에 기재된 바와 같은 인플루엔자 바이러스이다. 다른 실시양태에서, 불활성화된 바이러스는 비-인플루엔자 바이러스, 예컨대, 상기 단락 5.에 기재된 바와 같은 비-인플루엔자 바이러스이다. 일부 실시양태에서, 면역원성 조성물은 2개, 3개 또는 4개 이상의 상이한 감기 폴리펩티드들을 함유하는 2개, 3개 또는 4개 이상의 불활성화된 바이러스들을 포함한다. 일부 실시양태에서, 불활성화된 바이러스 면역원성 조성물은 1개 이상의 보조제를 포함한다.
당업자에게 공지되어 있는 기법을 이용하여 감기 폴리펩티드를 함유하는 바이러스를 불활성화시킬 수 있다. 통상의 방법은 불활성화를 위해 포르말린, 열 또는 세제를 사용한다. 예를 들면, 온전히 그대로 본원에 참고로 도입되는 미국 특허 제6,635,246호를 참조한다. 다른 방법은 온전히 그대로 본원에 참고로 도입되는 미국 특허 제5,891,705호, 제5,106,619호 및 제4,693,981호에 기재된 방법을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원은 면역원성 조성물의 투여량 각각이 약 15 ㎍ 내지 약 60 ㎍의 본원에 기재된 감기 폴리펩티드, 약 1.0 mg 내지 약 5.0 mg의 염화나트륨, 약 20 ㎍ 내지 약 100 ㎍의 일염기성 인산나트륨, 약 100 ㎍ 내지 약 500 ㎍의 이염기성 인산나트륨, 약 5 ㎍ 내지 약 30 ㎍의 일염기성 인산칼륨, 약 5 ㎍ 내지 약 30 ㎍의 염화칼륨 및 약 0.5 ㎍ 내지 약 3.0 ㎍의 염화칼슘을 포함하도록 불활성화된 인플루엔자 바이러스를 포함하는 면역원성 조성물(예를 들면, 백신)을 제공한다. 일부 실시양태에서, 면역원성 조성물(예를 들면, 백신)은 단회 0.25 ml 또는 단회 0.5 ml 투여량으로서 포장된다. 다른 실시양태에서, 면역원성 조성물(예를 들면, 백신)은 다회투여량 제제로서 포장된다.
일부 실시양태에서, 본원은 면역원성 조성물의 투여량 각각이 투여량 당 약 15 ㎍ 내지 약 60 ㎍의 본원에 기재된 감기 폴리펩티드, 약 0.001% 내지 0.01% 티메로살, 약 1.0 mg 내지 약 5.0 mg의 염화나트륨, 약 20 ㎍ 내지 약 100 ㎍의 일염기성 인산나트륨, 약 100 ㎍ 내지 약 500 ㎍의 이염기성 인산나트륨, 약 5 ㎍ 내지 약 30 ㎍의 일염기성 인산칼륨, 약 5 ㎍ 내지 약 30 ㎍의 염화칼륨 및 약 0.5 ㎍ 내지 약 3.0 ㎍의 염화칼슘을 포함하도록 불활성화된 인플루엔자 바이러스를 포함하는 면역원성 조성물(예를 들면, 백신)을 제공한다. 일부 실시양태에서, 면역원성 조성물(예를 들면, 백신)은 단회 0.25 ml 또는 단회 0.5 ml 투여량으로서 포장된다. 다른 실시양태에서, 면역원성 조성물(예를 들면, 백신)은 다회투여량 제제로서 포장된다.
특정 실시양태에서, 본원에서 제공된 면역원성 조성물(예를 들면, 백신)은 단회 0.25 ml 투여량으로서 포장되고 투여량 당 22.5 ㎍의 본원에 기재된 감기 폴리펩티드, 2.05 mg의 염화나트륨, 40 ㎍의 일염기성 인산나트륨, 150 ㎍의 이염기성 인산나트륨, 10 ㎍ 일염기성 인산칼륨, 10 ㎍의 염화칼륨 및 0.75 ㎍의 염화칼슘을 포함한다.
특정 실시양태에서, 본원에서 제공된 면역원성 조성물(예를 들면, 백신)은 단회 0.5 ml 투여량으로서 포장되고 투여량 당 45 ㎍의 본원에 기재된 감기 폴리펩티드, 4.1 mg의 염화나트륨, 80 ㎍의 일염기성 인산나트륨, 300 ㎍의 이염기성 인산나트륨, 20 ㎍의 일염기성 인산칼륨, 20 ㎍의 염화칼륨 및 1.5 ㎍의 염화칼슘을 포함한다.
특정 실시양태에서, 면역원성 조성물(예를 들면, 백신)은 5.0 ml의 백신(투여량 당 0.5 ml)을 포함하거나 상기 백신으로 이루어진 다회투여량 제제로서 포장되고 투여량 당 24.5 ㎍의 수은(티메로살로부터의 수은), 45 ㎍의 본원에 기재된 감기 폴리펩티드, 4.1 mg의 염화나트륨, 80 ㎍의 일염기성 인산나트륨, 300 ㎍의 이염기성 인산나트륨, 20 ㎍의 일염기성 인산칼륨, 20 ㎍의 염화칼륨 및 1.5 ㎍의 염화칼슘을 포함한다.
특정 실시양태에서, 감기 폴리펩티드를 함유하는 불활성화된 바이러스는 그의 불활성화 및 본원에 기재된 면역원성 조성물에서의 후속 사용 전에 배아형성된 계란에서 증식되었다. 또 다른 특정 실시양태에서, 감기 폴리펩티드를 함유하는 불활성화된 바이러스는 그의 불활성화 및 본원에 기재된 면역원성 조성물에서의 후속 사용 전에 배아형성된 계란에서 증식되지 않았다. 또 다른 특정 실시양태에서, 감기 폴리펩티드를 함유하는 불활성화된 바이러스는 그의 불활성화 및 본원에 기재된 면역원성 조성물에서의 후속 사용 전에 포유동물 세포, 예를 들면, 불멸화된 인간 세포(예를 들면, 온전히 그대로 본원에 참고로 도입되는 국제 공개 제WO 07/045674호로서 공개된 국제 특허출원 제PCT/EP2006/067566호 참조) 또는 개 신장 세포, 예컨대, MDCK 세포(예를 들면, 온전히 그대로 본원에 참고로 도입되는 국제 공개 제WO 08/032219호로서 공개된 국제 특허출원 제PCT/IB2007/003536호 참조)에서 증식되었다.
10.4. 분할( split ) 바이러스 백신
한 실시양태에서, 감기 폴리펩티드를 포함하는 면역원성 조성물은 분할 바이러스 백신이다. 일부 실시양태에서, 분할 바이러스 백신은 2개, 3개 또는 4개 이상의 상이한 감기 폴리펩티드를 함유한다. 일부 실시양태에서, 감기 폴리펩티드는 막 결합된 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 분할 바이러스 백신은 1개 이상의 보조제를 포함한다.
분할 바이러스 백신의 제조 기법은 당업자에게 공지되어 있다. 비-제한적 예로서, 세제를 사용하여 파괴한 불활성화된 입자를 사용하여 인플루엔자 바이러스 분할 백신을 제조할 수 있다. 본원에 기재된 방법에 따라 사용되도록 적응될 수 있는 분할 바이러스 백신의 일례는 배아형성된 계란에서 증식된 인플루엔자 바이러스로부터 제조된 멸균 현탁액으로서 제제화된 플루존(Fluzone)(등록상표)(근육내 사용을 위한 인플루엔자 바이러스 백신(조날 퓨리파이드(Zonal Purified), 서브비리온))이다. 바이러스 함유 유체를 수거하고 포름알데하이드로 불활성화시킨다. 인플루엔자 바이러스를 농축하고 연속 유동 원심분리를 이용하여 선형 수크로스 밀도 구배 용액에서 정제한다. 그 다음, 상기 바이러스를 비이온성 계면활성제 옥톡시놀-9(트리톤(등록상표) X-100 - 유니온 카바이드 컴파니(Union Carbide, Co.)의 등록상표명)를 사용하여 화학적으로 파괴하여 "분할 바이러스"를 생성한다. 그 다음, 상기 분할 바이러스를 화학적 수단으로 더 정제하고 인산나트륨 완충된 등장성 염화나트륨 용액에 현탁시킨다.
일부 실시양태에서, 본원은 약 10 ㎍ 내지 약 60 ㎍의 본원에 기재된 1개 이상의 감기 폴리펩티드, 약 0.01 mg 내지 약 1.0 mg의 옥톡시놀-10(트리톤 X-100(등록상표)), 약 0.5 mg 내지 0.5 mg의 α-토코페릴 하이드로겐 숙시네이트, 약 0.1 mg 내지 1.0 mg의 폴리소르베이트 80(트윈 80), 약 0.001 ㎍ 내지 약 0.003 ㎍의 하이드로코르티손, 약 0.05 ㎍ 내지 약 0.3 ㎍의 젠타미신 설페이트, 약 0.5 ㎍ 내지 약 2.0 ㎍의 계란 단백질(오브알부민), 약 25 ㎍ 내지 75 ㎍의 포름알데하이드 및 약 25 ㎍ 내지 75 ㎍의 데옥시콜산나트륨을 포함하는 분할 바이러스 백신을 제공한다.
특정 실시양태에서, 본원에서 제공된 분할 바이러스 백신은 45 ㎍의 본원에서 제공된 인플루엔자 감기 폴리펩티드, 0.085 mg 이하의 옥톡시놀-10(트리톤 X-100(등록상표)), 0.1 mg 이하의 α-토코페릴 하이드로겐 숙시네이트, 0.415 mg 이하의 폴리소르베이트 80(트윈 80), 0.0016 ㎍ 이하의 하이드로코르티손, 0.15 ㎍ 이하의 젠타미신 설페이트, 1.0 ㎍ 이하의 계란 단백질(오브알부민), 50 ㎍ 이하의 포름알데하이드 및 50 ㎍ 이하의 데옥시콜산나트륨을 포함하는 0.5 ml 투여량을 포함하거나 이 투여량으로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 0.5 ml 투여량의 아단위 백신은 예비충전된 주사기 내에 포장된다.
특정 실시양태에서, 배아형성된 계란에서 증식된 인플루엔자 바이러스를 사용하여 분할 바이러스 백신을 제조한다. 또 다른 특정 실시양태에서, 배아형성된 계란에서 증식되지 않은 인플루엔자 바이러스를 사용하여 분할 바이러스 백신을 제조한다. 또 다른 특정 실시양태에서, 포유동물 세포, 예를 들면, 불멸화된 인간 세포(예를 들면, 온전히 그대로 본원에 참고로 도입되는 국제 공개 제WO 07/045674호로서 공개된 국제 특허출원 제PCT/EP2006/067566호 참조) 또는 개 신장 세포, 예컨대, MDCK 세포(예를 들면, 온전히 그대로 본원에 참고로 도입되는 국제 공개 제WO 08/032219호로서 공개된 국제 특허출원 제PCT/IB2007/003536호 참조)에서 증식된 인플루엔자 바이러스를 사용하여 분할 바이러스 백신을 제조한다.
10.5. 보조제
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 조성물은 보조제를 포함하거나 보조제와 함께 투여된다. 본원에 기재된 조성물과 함께 투여되는 보조제는 상기 조성물의 투여 전에, 투여와 동시에 또는 투여 후에 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 용어 "보조제"는 본원에 기재된 조성물과 함께 또는 본원에 기재된 조성물의 일부로서 투여되는 경우 감기 폴리펩티드에 대한 면역 반응을 증가시키고/시키거나, 향상시키고/시키거나 부스팅시키지만, 단독으로 투여되는 경우 상기 폴리펩티드에 대한 면역 반응을 발생시키지 않는 화합물을 의미한다. 일부 실시양태에서, 보조제는 상기 폴리펩티드에 대한 면역 반응을 발생시키지만 알레르기 또는 다른 불리한 반응을 생성하지 않는다. 보조제는 예를 들면, 림프구 동원, B 세포 및/또는 T 세포의 자극 및 대식세포의 자극을 포함하는 여러 기작으로 면역 반응을 향상시킬 수 있다.
일부 실시양태에서, 보조제는 반응의 질적 형태에 영향을 미치는 감기 폴리펩티드의 구조적 변화를 야기하지 않으면서 상기 감기 폴리펩티드에 대한 고유 반응을 증가시킨다. 보조제의 특정 예는 알루미늄 염(명반)(예컨대, 수산화알루미늄, 인산알루미늄 및 황산알루미늄), 3 De-O-아실화된 모노포스포릴 지질 A(MPL)(영국 특허 제2220211호 참조), MF59(노바티스(Novartis)), AS03(글락소스미쓰클라인(GlaxoSmithKline)), AS04(글락소스미쓰클라인), 폴리소르베이트 80(트윈 80; 아이씨엘 아메리카스 인코포레이티드(ICL Americas, Inc.)), 이미다조피리딘 화합물(국제 공개 제WO 2007/109812호로서 공개된 국제 특허출원 제PCT/US2007/064857호 참조), 이미다조퀴녹살린 화합물(국제 공개 제WO 2007/109813호로서 공개된 국제 특허출원 제PCT/US2007/064858호 참조) 및 사포닌, 예컨대, QS21(문헌[Kensil et al., in Vaccine Design: The Subunit and Adjuvant Approach (eds. Powell & Newman, Plenum Press, NY, 1995)] 및 미국 특허 제5,057,540호 참조)을 포함하나 이들로 한정되지 않는다. 일부 실시양태에서, 보조제는 (완전 또는 불완전) 프로인트(Freund) 보조제이다. 다른 보조제는 임의적으로 면역 자극제, 예컨대, 모노포스포릴 지질 A와 함께 사용되는 수중유 유화액(예컨대, 스쿠알렌 또는 땅콩유)이다(문헌[Stoute et al., N. Engl. J. Med. 336, 86-91 (1997)] 참조). 또 다른 보조제는 CpG이다(문헌[Bioworld Today, Nov. 15, 1998]). 이러한 보조제는 다른 특정 면역자극제, 예컨대, MPL 또는 3-DMP, QS21, 중합체 또는 단량체 아미노산, 예컨대, 폴리글루탐산 또는 폴리라이신, 또는 상기 단락 4.에 기재된 다른 면역강화제와 함께 사용될 수 있거나 이들 없이 사용될 수 있다. 감기 폴리펩티드의 상이한 제제들은 상이한 보조제를 포함할 수 있거나 동일한 보조제를 포함할 수 있다는 것을 이해해야 한다.
11. 예방 및 치료 용도
한 양태에서, 본원은 활성 화합물, 즉 본원에 기재된 감기 폴리펩티드, 이러한 폴리펩티드를 코딩하는 핵산, 이러한 폴리펩티드를 함유하거나 발현하는 벡터(예를 들면, 바이러스 벡터 또는 박테리아), 또는 상기 폴리펩티드로 자극된 세포를 사용하여 대상체에서 면역 반응을 유도하는 방법을 제공한다. 특정 실시양태에서, 대상체에서 인플루엔자 바이러스에 대한 면역 반응을 유도하는 방법은 효과량의 감기 폴리펩티드 또는 이의 면역원성 조성물을 인플루엔자 바이러스에 대한 면역 반응의 유도가 필요한 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 대상체에서 인플루엔자 바이러스에 대한 면역 반응을 유도하는 방법은 감기 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 또는 이의 면역원성 조성물을 인플루엔자 바이러스에 대한 면역 반응의 유도가 필요한 대상체에게 효과량으로 투여하는 단계를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 대상체에서 인플루엔자 바이러스에 대한 면역 반응을 유도하는 방법은 감기 폴리펩티드를 함유하거나 발현하는 바이러스 벡터 또는 이의 면역원성 조성물을 인플루엔자 바이러스에 대한 면역 반응의 유도가 필요한 대상체에게 효과량으로 투여하는 단계를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 대상체에서 인플루엔자 바이러스에 대한 면역 반응을 유도하는 방법은 감기 폴리펩티드로 자극된 세포 또는 이의 약학 조성물을 인플루엔자 바이러스에 대한 면역 반응의 유도가 필요한 대상체에게 효과량으로 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 방법에서 사용되는 감기 폴리펩티드는 포유동물 세포, 식물 세포 또는 곤충 세포로부터 유래된 정제된 감기 폴리펩티드이다.
특정 실시양태에서, 대상체에서 인플루엔자 바이러스에 대한 면역 반응을 유도하는 방법은 본원에 기재된 아단위 백신을 인플루엔자 바이러스에 대한 면역 반응의 유도가 필요한 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 대상체에서 인플루엔자 바이러스에 대한 면역 반응을 유도하는 방법은 본원에 기재된 생바이러스 백신을 인플루엔자 바이러스에 대한 면역 반응의 유도가 필요한 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 구체적 실시양태에서, 생바이러스 백신은 약독화된 바이러스를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 대상체에서 인플루엔자 바이러스에 대한 면역 반응을 유도하는 방법은 본원에 기재된 불활성화된 바이러스 백신을 인플루엔자 바이러스에 대한 면역 반응의 유도가 필요한 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 대상체에서 인플루엔자 바이러스에 대한 면역 반응을 유도하는 방법은 본원에 기재된 분할 바이러스 백신을 인플루엔자 바이러스에 대한 면역 반응의 유도가 필요한 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 대상체에서 인플루엔자 바이러스에 대한 면역 반응을 유도하는 방법은 본원에 기재된 바이러스 유사 입자 백신을 인플루엔자 바이러스에 대한 면역 반응의 유도가 필요한 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 대상체에서 인플루엔자 바이러스에 대한 면역 반응을 유도하는 방법은 본원에 기재된 비로좀을 인플루엔자 바이러스에 대한 면역 반응의 유도가 필요한 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 대상체에서 인플루엔자 바이러스에 대한 면역 반응을 유도하는 방법은 감기 폴리펩티드를 발현하거나 발현하도록 개조된 박테리아 또는 이의 조성물을 인플루엔자 바이러스에 대한 면역 반응의 유도가 필요한 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 방법에서 사용되는 감기 폴리펩티드는 포유동물 세포, 식물 세포 또는 곤충 세포로부터 유래된 정제된 감기 폴리펩티드이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 활성 화합물 또는 조성물에 의해 유도된 면역 반응은 인플루엔자 바이러스의 임의의 아형 또는 균주에 의해 유발된 인플루엔자 바이러스 감염을 예방하고/하거나 치료하는 데에 효과적이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 활성 화합물 또는 조성물에 의해 유도된 면역 반응은 한 HA 군(예를 들면, H1, H2, H5, H6, H8, H9, H11, H12, H13 및 H16을 포함하는 1군)에 속하지만 다른 HA 군(예를 들면, H3, H4, H7, H10, H14 및 H15를 포함하는 2군)에는 속하지 않는 인플루엔자 바이러스의 아형에 의해 유발된 인플루엔자 바이러스 감염을 예방하고/하거나 치료하는 데에 효과적이다. 예를 들면, 유도된 면역 반응은 H11, H13, H16, H9, H8, H12, H6, H1, H5 및 H2로 이루어진 HA 군에 속하는 인플루엔자 바이러스에 의해 유발된 인플루엔자 바이러스 감염을 예방하고/하거나 치료하는 데에 효과적일 수 있다. 대안적으로, 유도된 면역 반응은 H3, H4, H14, H10, H15 및 H7로 이루어진 HA 군에 속하는 인플루엔자 바이러스에 의해 유발된 인플루엔자 바이러스 감염을 예방하고/하거나 치료하는 데에 효과적일 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 활성 화합물 또는 조성물에 의해 유도된 면역 반응은 인플루엔자 바이러스의 1종, 2종, 3종, 4종 또는 5종의 아형에 의해 유발된 인플루엔자 바이러스 감염을 예방하고/하거나 치료하는 데에 효과적이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 활성 화합물 또는 조성물에 의해 유도된 면역 반응은 인플루엔자 바이러스의 6종, 7종, 8종, 9종, 10종, 11종, 12종, 13종, 14종 또는 15종의 아형에 의해 유발된 인플루엔자 바이러스 감염을 예방하고/하거나 치료하는 데에 효과적이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 활성 화합물 또는 조성물에 의해 유도된 면역 반응은 인플루엔자 바이러스의 동일한 아형 내의 1종 이상의 변이체에 의해 유발된 인플루엔자 바이러스 감염을 예방하고/하거나 치료하는 데에 효과적이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 활성 화합물 또는 조성물에 의해 유도된 면역 반응은 H1N1 아형 및 H2N2 아형 둘다에 의해 유발된 인플루엔자 바이러스 감염을 예방하고/하거나 치료하는 데에 효과적이다. 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 활성 화합물 또는 조성물에 의해 유도된 면역 반응은 H1N1 아형 및 H2N2 아형 둘다에 의해 유발된 인플루엔자 바이러스 감염을 예방하고/하거나 치료하는 데에 효과적이지 않다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 활성 화합물 또는 조성물에 의해 유도된 면역 반응은 H1N1 아형, H2N2 아형 및 H3N2 아형에 의해 유발된 인플루엔자 바이러스 감염을 예방하고/하거나 치료하는 데에 효과적이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 활성 화합물 또는 조성물에 의해 유도된 면역 반응은 H3N2 아형에 의해 유발된 인플루엔자 바이러스 감염을 예방하고/하거나 치료하는 데에 효과적이다. 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 활성 화합물 또는 조성물에 의해 유도된 면역 반응은 H3N2 아형에 의해 유발된 인플루엔자 바이러스 감염을 예방하고/하거나 치료하는 데에 효과적이지 않다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 활성 화합물 또는 조성물에 의해 유도된 면역 반응은 인플루엔자 바이러스의 임의의 아형 또는 균주에 의해 유발된 인플루엔자 바이러스 질환을 예방하고/하거나 치료하는 데에 효과적이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 활성 화합물 또는 조성물에 의해 유도된 면역 반응은 한 HA 군에 속하지만 다른 HA 군에는 속하지 않는 인플루엔자 바이러스의 아형에 의해 유발된 인플루엔자 바이러스 질환을 예방하고/하거나 치료하는 데에 효과적이다. 예를 들면, 유도된 면역 반응은 H11, H13, H16, H9, H8, H12, H6, H1, H5 및 H2로 이루어진 HA 군에 속하는 인플루엔자 바이러스에 의해 유발된 인플루엔자 바이러스 질환을 예방하고/하거나 치료하는 데에 효과적일 수 있다. 대안적으로, 유도된 면역 반응은 H3, H4, H14, H10, H15 및 H7로 이루어진 HA 군에 속하는 인플루엔자 바이러스에 의해 유발된 인플루엔자 바이러스 질환을 예방하고/하거나 치료하는 데에 효과적일 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 활성 화합물 또는 조성물에 의해 유도된 면역 반응은 인플루엔자 바이러스의 1종, 2종, 3종, 4종 또는 5종의 아형 중 임의의 아형에 의해 유발된 인플루엔자 바이러스 질환을 예방하고/하거나 치료하는 데에 효과적이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 활성 화합물 또는 조성물에 의해 유도된 면역 반응은 인플루엔자 바이러스의 6종, 7종, 8종, 9종, 10종, 11종, 12종, 13종, 14종 또는 15종의 아형 중 임의의 아형에 의해 유발된 인플루엔자 바이러스 질환을 예방하고/하거나 치료하는 데에 효과적이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 활성 화합물 또는 조성물에 의해 유도된 면역 반응은 인플루엔자 바이러스의 동일한 아형 내의 1종 이상의 변이체에 의해 유발된 인플루엔자 바이러스 질환을 예방하고/하거나 치료하는 데에 효과적이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 활성 화합물 또는 조성물에 의해 유도된 면역 반응은 인플루엔자 바이러스 질환/감염으로부터 발생된 증상을 감소시키는 데에 효과적이다. 인플루엔자 바이러스 질환/감염의 증상은 몸살(특히, 관절 및 인후), 발열, 구토, 두통, 자극된 눈, 피로, 인후염, 충혈된 눈 또는 피부 및 복통을 포함하나 이들로 한정되지 않는다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 활성 화합물 또는 조성물에 의해 유도된 면역 반응은 인플루엔자 바이러스 질환/감염을 앓는 대상체의 입원을 감소시키는 데에 효과적이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 활성 화합물 또는 조성물에 의해 유도된 면역 반응은 인플루엔자 바이러스 질환/감염을 앓는 대상체의 입원기간을 감소시키는 데에 효과적이다.
또 다른 양태에서, 본원은 본원에 기재된 활성 화합물(예를 들면, 본원에 기재된 감기 폴리펩티드, 이러한 폴리펩티드를 코딩하는 핵산, 이러한 폴리펩티드를 함유하거나 발현하는 벡터, 또는 이러한 폴리펩티드로 자극된 세포) 또는 조성물을 사용하여 대상체에서 인플루엔자 바이러스 감염을 예방하고/하거나 치료하는 방법을 제공한다. 한 실시양태에서, 대상체에서 인플루엔자 바이러스 감염을 예방하거나 치료하는 방법은 감기 폴리펩티드, 이러한 폴리펩티드를 코딩하는 핵산, 이러한 폴리펩티드를 함유하거나 발현하는 벡터, 또는 이들 중 어느 하나의 조성물을 인플루엔자 바이러스 감염의 예방 또는 치료가 필요한 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 특정 실시양태에서, 대상체에서 인플루엔자 바이러스 감염을 예방하거나 치료하는 방법은 아단위 백신, 생바이러스 백신, 불활성화된 바이러스 백신, 분할 바이러스 백신 또는 바이러스 유사 입자 백신을 인플루엔자 바이러스 감염의 예방 또는 치료가 필요한 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 특정 실시양태에서, 인플루엔자 바이러스 감염은 인플루엔자 A 바이러스에 의해 유발된다. 다른 실시양태에서, 인플루엔자 바이러스 감염은 인플루엔자 B 또는 C 바이러스에 의해 유발된다.
또 다른 양태에서, 본원은 본원에 기재된 감기 폴리펩티드, 이러한 폴리펩티드를 코딩하는 핵산, 이러한 폴리펩티드를 함유하거나 발현하는 벡터, 또는 이러한 폴리펩티드로 자극된 세포를 사용하여 대상체에서 인플루엔자 바이러스 질환을 예방하고/하거나 치료하는 방법을 제공한다. 특정 실시양태에서, 대상체에서 인플루엔자 바이러스 질환을 예방하거나 치료하는 방법은 효과량의 감기 폴리펩티드 또는 이의 면역원성 조성물을 인플루엔자 바이러스 질환의 예방 또는 치료가 필요한 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 대상체에서 인플루엔자 바이러스 질환을 예방하거나 치료하는 방법은 감기 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 또는 이의 면역원성 조성물을 인플루엔자 바이러스 질환의 예방 또는 치료가 필요한 대상체에게 효과량으로 투여하는 단계를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 대상체에서 인플루엔자 바이러스 질환을 예방하거나 치료하는 방법은 감기 폴리펩티드를 함유하거나 발현하는 바이러스 벡터 또는 이의 면역원성 조성물을 인플루엔자 바이러스 질환의 예방 또는 치료가 필요한 대상체에게 효과량으로 투여하는 단계를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 대상체에서 인플루엔자 바이러스 질환을 예방하거나 치료하는 방법은 감기 폴리펩티드로 자극된 세포 또는 이의 약학 조성물을 인플루엔자 바이러스 질환의 예방 또는 치료가 필요한 대상체에게 효과량으로 투여하는 단계를 포함한다.
특정 실시양태에서, 대상체에서 인플루엔자 바이러스 질환을 예방하거나 치료하는 방법은 본원에 기재된 아단위 백신을 인플루엔자 바이러스 질환의 예방 또는 치료가 필요한 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 대상체에서 인플루엔자 바이러스 질환을 예방하거나 치료하는 방법은 본원에 기재된 생바이러스 백신을 인플루엔자 바이러스 질환의 예방 또는 치료가 필요한 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 구체적 실시양태에서, 생바이러스 백신은 약독화된 바이러스를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 대상체에서 인플루엔자 바이러스 질환을 예방하거나 치료하는 방법은 본원에 기재된 불활성화된 바이러스 백신을 인플루엔자 바이러스 질환의 예방 또는 치료가 필요한 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 대상체에서 인플루엔자 바이러스 질환을 예방하거나 치료하는 방법은 본원에 기재된 분할 바이러스 백신을 인플루엔자 바이러스 질환의 예방 또는 치료가 필요한 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 인플루엔자 바이러스 질환을 예방하거나 치료하는 방법은 본원에 기재된 바이러스 유사 입자 백신을 인플루엔자 바이러스 질환의 예방 또는 치료가 필요한 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 대상체에서 인플루엔자 바이러스 질환을 예방하거나 치료하는 방법은 본원에 기재된 비로좀을 인플루엔자 바이러스 질환의 예방 또는 치료가 필요한 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 대상체에서 인플루엔자 바이러스 질환을 예방하거나 치료하는 방법은 감기 폴리펩티드를 발현하거나 발현하도록 개조된 박테리아 또는 이의 조성물을 인플루엔자 바이러스 질환의 예방 또는 치료가 필요한 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 특정 실시양태에서, 인플루엔자 바이러스 질환은 인플루엔자 A 바이러스의 존재에 의해 유발되거나 인플루엔자 A 바이러스의 존재와 관련되어 있다. 다른 실시양태에서, 인플루엔자 바이러스 질환은 인플루엔자 B 바이러스의 존재에 의해 유발되거나 인플루엔자 B 바이러스의 존재와 관련되어 있다.
또 다른 양태에서, 본원은 본원에 기재된 중화 항체를 투여하여 대상체에서 인플루엔자 바이러스 질환을 예방하고/하거나 치료하는 방법을 제공한다. 특정 실시양태에서, 대상체에서 인플루엔자 바이러스 질환을 예방하거나 치료하는 방법은 효과량의 본원에 기재된 중화 항체 또는 이의 약학 조성물을 인플루엔자 바이러스 질환의 예방 또는 치료가 필요한 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 구체적 실시양태에서, 중화 항체는 단일클론 항체이다. 일부 실시양태에서, 중화 항체는 문헌[Wang et al. (2010) "Broadly Protective Monoclonal Antibodies against H3 Influenza Viruses following Sequential Immunization with Different Hemagglutinins," PLOS Pathogens 6(2):1-9]에 기재된 항체가 아니다. 일부 실시양태에서, 중화 항체는 국제 특허출원 제PCT/US2010/036170호에 기재된 항체가 아니다.
일부 실시양태에서, 본원에서 제공된, 대상체(예를 들면, 인간 또는 비-인간 동물)에서 인플루엔자 바이러스 질환 또는 감염을 예방하거나 치료하는 방법은 당업자에게 공지되어 있고 본원에 기재되어 있는 생체내 및 시험관내 분석법에 의해 측정될 때 상기 대상체에서 인플루엔자 바이러스의 복제를 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 인플루엔자 바이러스의 복제는 약 1 로그 이상, 약 2 로그 이상, 약 3 로그 이상, 약 4 로그 이상, 약 5 로그 이상, 약 6 로그 이상, 약 7 로그 이상, 약 8 로그 이상, 약 9 로그 이상, 약 10 로그 이상, 1 로그 내지 3 로그, 1 로그 내지 5 로그, 1 로그 내지 8 로그, 1 로그 내지 9 로그, 2 로그 내지 10 로그, 2 로그 내지 5 로그, 2 로그 내지 7 로그, 2 로그 내지 8 로그, 2 로그 내지 9 로그, 2 로그 내지 10 로그, 3 로그 내지 5 로그, 3 로그 내지 7 로그, 3 로그 내지 8 로그, 3 로그 내지 9 로그, 4 로그 내지 6 로그, 4 로그 내지 8 로그, 4 로그 내지 9 로그, 5 로그 내지 6 로그, 5 로그 내지 7 로그, 5 로그 내지 8 로그, 5 로그 내지 9 로그, 6 로그 내지 7 로그, 6 로그 내지 8 로그, 6 로그 내지 9 로그, 7 로그 내지 8 로그, 7 로그 내지 9 로그 또는 8 로그 내지 9 로그까지 감소된다.
11.1. 조합 요법
다양한 실시양태에서, 본원에 기재된 감기 폴리펩티드, 이러한 폴리펩티드를 코딩하는 핵산, 이러한 폴리펩티드를 함유하거나 발현하는 벡터(예를 들면, 바이러스 벡터 또는 박테리아), 이러한 폴리펩티드로 자극된 세포, 또는 중화 항체는 1종 이상의 다른 요법(예를 들면, 항-바이러스, 항균 또는 면역조절 요법)과 함께 대상체에게 조합 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 약학 조성물(예를 들면, 면역원성 조성물)은 1종 이상의 다른 요법과 함께 대상체에게 조합 투여될 수 있다. 상기 1종 이상의 다른 요법은 인플루엔자 바이러스 질환의 치료 또는 예방에 유리할 수 있거나 인플루엔자 바이러스 질환과 관련된 증상 또는 상태를 개선할 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 1종 이상의 다른 요법은 통증 완화제, 해열 약물, 또는 호흡을 진정시키거나 보조하는 요법이다. 일부 실시양태에서, 상기 요법은 5분 미만의 간격, 30분 미만의 간격, 1시간 간격, 약 1시간 간격, 약 1시간 내지 약 2시간 간격, 약 2시간 내지 약 3시간 간격, 약 3시간 내지 약 4시간 간격, 약 4시간 내지 약 5시간 간격, 약 5시간 내지 약 6시간 간격, 약 6시간 내지 약 7시간 간격, 약 7시간 내지 약 8시간 간격, 약 8시간 내지 약 9시간 간격, 약 9시간 내지 약 10시간 간격, 약 10시간 내지 약 11시간 간격, 약 11시간 내지 약 12시간 간격, 약 12시간 내지 18시간 간격, 18시간 내지 24시간 간격, 24시간 내지 36시간 간격, 36시간 내지 48시간 간격, 48시간 내지 52시간 간격, 52시간 내지 60시간 간격, 60시간 내지 72시간 간격, 72시간 내지 84시간 간격, 84시간 내지 96시간 간격 또는 96시간 내지 120시간 간격을 두고 투여된다. 특정 실시양태에서, 2종 이상의 요법이 동일한 환자 방문에서 투여된다.
당업자에게 잘 공지되어 있는 임의의 항-바이러스제가 본원에 기재된 활성 화합물 또는 약학 조성물과 함께 조합하여 사용될 수 있다. 항-바이러스제의 비-제한적 예는 그의 수용체에의 바이러스의 부착, 세포 내로의 바이러스의 내재화, 바이러스의 복제 또는 세포로부터의 바이러스의 방출을 억제하고/하거나 감소시키는 단백질, 폴리펩티드, 펩티드, 융합 단백질 항체, 핵산 분자, 유기 분자, 무기 분자 및 소분자를 포함한다. 구체적으로, 항-바이러스제는 뉴클레오시드 유사체(예를 들면, 지도부딘(zidovudine), 아사이클로비르(acyclovir), 강사이클로비르(gangcyclovir), 비다라빈(vidarabine), 이독수리딘(idoxuridine), 트리플루리딘(trifluridine) 및 리바비린(ribavirin)), 파스카르넷(foscarnet), 아만타딘(amantadine), 페라미비르(peramivir), 리만타딘(rimantadine), 사퀴나비르(saquinavir), 인디나비르(indinavir), 리토나비르(ritonavir), 알파 인터페론 및 다른 인터페론, AZT, 자나미비르(zanamivir)(릴렌자(Relenza)(등록상표)) 및 오셀타미비르(oseltamivir)(타미플루(Tamiflu)(등록상표))를 포함하나 이들로 한정되지 않는다. 다른 항-바이러스제는 인플루엔자 바이러스 백신, 예를 들면, 플루아릭스(Fluarix)(등록상표)(글락소스미쓰클라인), 플루미스트(FluMist)(등록상표)(메드이뮨 백신스(MedImmune Vaccines)), 플루비린(Fluvirin)(등록상표)(키론 코포레이션(Chiron Corporation)), 플루라발(Flulaval)(등록상표)(글락소스미쓰클라인), 애플루리아(Afluria)(등록상표)(씨에스엘 바이오테라피스 인코포레이티드(CSL Biotherapies Inc.)), 아그리플루(Agriflu)(등록상표)(노바티스) 또는 플루존(Fluzone)(등록상표)(아벤티스 파스테르(Aventis Pasteur))을 포함한다.
특정 실시양태에서, 항-바이러스제는 바이러스 항원에 대해 특이적인 면역조절제이다. 구체적 실시양태에서, 바이러스 항원은 헤마글루티닌 폴리펩티드 이외의 인플루엔자 바이러스 폴리펩티드이다. 다른 실시양태에서, 바이러스 항원은 감기 폴리펩티드이다.
당업자에게 공지되어 있는 임의의 항균제가 본원에 기재된 활성 화합물 또는 약학 조성물과 함께 조합 사용될 수 있다. 항균제의 비-제한적 예는 아미카신, 아목시실린, 아목시실린-클라불란산, 암포테리신-B, 앰피실린, 앰피실린-술박탐, 아프라마이신, 아지트로마이신, 아즈트레오남, 박시트라신, 벤질페니실린, 카스포푼긴, 세파클로르, 세파드록실, 세팔렉신, 세팔로씬, 세파졸린, 세프디니르, 세페핌, 세픽심, 세프메녹심, 세포페라존, 세포페라존-술박탐, 세포탁심, 세폭시틴, 세프피롬, 세프포독심, 세프포독심-클라불란산, 세프포독심-술박탐, 세프프로질, 세프퀴놈, 세프타지딤, 세프티부틴, 세프티오푸르, 세프토비프롤, 세프트리아손, 세푸록심, 클로람페니콜, 플로르페니콜, 시프로플록사신, 클라리트로마이신, 클리나플록사신, 클린다마이신, 클록사실린, 콜리스틴, 코트리목사졸(트림쏘프림/설파메톡사졸), 달바반신, 달포프리스틴/퀴노프리스틴, 답토마이신, 디베카신, 디클록사실린, 도리페넴, 독시사이클린, 엔로플록사신, 에르타페넴, 에리트로마이신, 플루클록사실린, 플루코나졸, 플루사이토신, 포스포마이신, 푸시드산, 가레녹사신, 가티플록사신, 제미플록사신, 젠타미신, 이미페넴, 이트라코나졸, 가나마이신, 케토코나졸, 레보플록사신, 린코마이신, 리네졸리드, 로라카르베프, 메실남(암디노실린), 메로페넴, 메트로니다졸, 메지오실린, 메즐로실린-술박탐, 미노사이클린, 목시플록사신, 무피로신, 날리딕스산, 네오마이신, 네틸미신, 니트로푸란토인, 노르플록사신, 오플록사신, 옥사실린, 페플록사신, 페니실린 V, 피페라실린, 피페라실린-술박탐, 피페라실린-타조박탐, 리팜피신, 록시트로마이신, 스파르플록사신, 스펙티노마이신, 스피라마이신, 스트렙토마이신, 술박탐, 설파메톡사졸, 테이코플라닌, 텔라반신, 텔리트로마이신, 테모실린, 테트라사이클린, 티카르실린, 티카르실린-클라불란산, 티게사이클린, 토브라마이신, 트리메토프림, 트로바플록사신, 틸로신, 반코마이신, 버지니아마이신 및 보리코나졸을 포함한다.
일부 실시양태에서, 조합 요법은 단락 4. 내지 7.에 기재된 2개 이상의 상이한 벡터들의 투여를 포함한다. 일례에서, 인플루엔자 A 바이러스로부터 유래된 감기 폴리펩티드를 발현하는 1개 이상의 벡터 및 인플루엔자 B 바이러스로부터 유래된 감기 폴리펩티드를 발현하는 1개 이상의 벡터가 조합 투여된다. 일부 실시양태에서, 조합 요법은 H3 인플루엔자 A 바이러스로부터 유래된 감기 폴리펩티드를 발현하는 벡터 및 H1 인플루엔자 A 바이러스로부터 유래된 감기 폴리펩티드를 발현하는 벡터의 투여를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조합 요법은 H3 인플루엔자 A 바이러스로부터 유래된 감기 폴리펩티드를 발현하는 벡터, H1 인플루엔자 A 바이러스로부터 유래된 감기 폴리펩티드를 발현하는 벡터 및 인플루엔자 B 바이러스로부터 유래된 감기 폴리펩티드를 발현하는 벡터의 투여를 포함한다.
일부 실시양태에서, 조합 요법은 한 HA 군(예를 들면, 1군)에 속하는 1종, 2종 또는 3종 이상의 HA 아형에 대한 면역 반응을 유도하는 활성 화합물을 다른 HA 군(예를 들면, 2군)에 속하는 1종, 2종 또는 3종 이상의 HA 아형에 대한 면역 반응을 유도하는 활성 화합물과 함께 조합 사용하는 능동 면역화를 포함한다.
일부 실시양태에서, 조합 요법은 단락 1.에 기재된 2개 이상의 감기 폴리펩티드들을 사용하는 능동 면역화를 포함한다.
일부 실시양태에서, 조합 요법은 인플루엔자 A 바이러스로부터 유래된 1개 또는 2개 이상의 감기 폴리펩티드 및 인플루엔자 B 바이러스로부터 유래된 1개 이상의 감기 폴리펩티드를 사용하는 능동 면역화를 포함한다.
11.2. 환자 집단
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 활성 화합물 또는 조성물은 무경험 대상체, 즉 인플루엔자 바이러스 감염에 의해 유발된 질환을 갖지 않거나 인플루엔자 바이러스에 감염된 적이 없고 현재 감염되지 않은 대상체에게 투여될 수 있다. 한 실시양태에서, 본원에 기재된 활성 화합물 또는 조성물은 인플루엔자 바이러스 감염을 획득할 위험에 있는 무경험 대상체에게 투여된다. 한 실시양태에서, 본원에 기재된 활성 화합물 또는 조성물은 특정 인플루엔자 바이러스에 의해 유발된 질환을 갖지 않거나 감기 폴리펩티드가 면역 반응을 유도할 특정 인플루엔자 바이러스에 감염된 적이 없고 감염되지 않은 대상체에게 투여된다. 또한, 본원에 기재된 활성 화합물 또는 조성물은 감기 폴리펩티드가 면역 반응을 유도할 인플루엔자 바이러스 또는 상기 인플루엔자 바이러스의 또 다른 유형, 아형 또는 균주에 감염되고/되거나 감염된 대상체에게 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 활성 화합물 또는 조성물은 인플루엔자 바이러스 감염으로 진단받은 환자에게 투여된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 활성 화합물 또는 조성물은 증상이 발현되거나 증상이 심각해지기 전에(예를 들면, 환자가 입원을 필요로 하기 전에) 인플루엔자 바이러스에 감염된 환자에게 투여된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 활성 화합물 또는 조성물은 상기 활성 화합물 또는 조성물의 감기 폴리펩티드가 유래된 인플루엔자 바이러스의 유형과 상이한 유형의 인플루엔자 바이러스에 감염된 환자 또는 감염된 것으로 진단된 환자에게 투여된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 활성 화합물 또는 조성물은 인플루엔자 감기 폴리펩티드와 동일한 HA 군에 속하는 인플루엔자 바이러스에 감염될 수 있거나 감염된 환자에게 투여된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 활성 화합물 또는 조성물은 인플루엔자 감기 폴리펩티드와 동일한 아형의 인플루엔자 바이러스에 감염될 수 있거나 감염된 환자에게 투여된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 활성 화합물 또는 조성물을 투여받을 대상체는 동물이다. 일부 실시양태에서, 상기 동물은 조류이다. 일부 실시양태에서, 상기 동물은 개과 동물이다. 일부 실시양태에서, 상기 동물은 고양이과 동물이다. 일부 실시양태에서, 상기 동물은 말이다. 일부 실시양태에서, 상기 동물은 소이다. 일부 실시양태에서, 상기 동물은 포유동물, 예를 들면, 말, 돼지, 마우스 또는 영장류, 바람직하게는 인간이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 활성 화합물 또는 조성물을 투여받을 대상체는 성인이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 활성 화합물 또는 조성물을 투여받을 대상체는 50세 초과의 성인이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 활성 화합물 또는 조성물을 투여받을 대상체는 노인 대상체이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 활성 화합물 또는 조성물을 투여받을 대상체는 인간 소아이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 활성 화합물 또는 조성물을 투여받을 대상체는 인간 영아이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 활성 화합물 또는 조성물을 투여받을 대상체는 인간 미숙아이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 방법에 따라 치료되거나 예방될 환자는 인간 유아이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 활성 화합물 또는 조성물을 투여받을 대상체는 6개월 미만 연령의 영아가 아니다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 활성 화합물 또는 조성물을 투여받을 대상체는 2세 이하 연령의 영아이다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 활성 화합물 또는 조성물을 투여받을 대상체는 6개월 초과 연령의 임의의 영아 또는 소아 및 50세 초과 연령의 임의의 성인이다. 다른 실시양태에서, 상기 대상체는 임신한 개체이다. 또 다른 실시양태에서, 상기 대상체는 인플루엔자 계절(예를 들면, 11월 내지 4월) 동안 임신할 수 있거나 임신할 개체이다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 활성 화합물 또는 조성물을 투여받을 대상체는 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 7주 또는 8주 전에 출산한 여성이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 활성 화합물 또는 조성물을 투여받을 인간 대상체는 인플루엔자 바이러스 감염 또는 인플루엔자 바이러스 감염으로부터 발생된 질환의 증가된 위험을 갖는 임의의 개체(예를 들면, 면역손상된 또는 면역결핍된 개체)이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 활성 화합물 또는 조성물을 투여받을 인간 대상체는 인플루엔자 바이러스 감염 또는 인플루엔자 바이러스 감염으로부터 발생된 질환의 증가된 위험을 갖는 개체(예를 들면, 면역손상된 또는 면역억제된 개체)와 가깝게 접촉하는 임의의 개체이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 활성 화합물 또는 조성물을 투여받을 인간 대상체는 인플루엔자 바이러스 감염 또는 인플루엔자 바이러스 감염으로부터 발생된 합병증 또는 질환에 대한 민감성을 증가시키는 임의의 조건에 의해 영향받은 개체이다. 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 활성 화합물 또는 조성물은 인플루엔자 바이러스 감염이 또 다른 병태의 합병증(개체는 이 합병증에 의해 영향받거나 이 합병증에 대한 위험을 가짐)을 증가시킬 잠재력을 갖는 대상체에게 투여된다. 구체적 실시양태에서, 인플루엔자 바이러스 합병증에 대한 민감성을 증가시키는 이러한 병태 또는 인플루엔자 바이러스에 의해 증가되는 합병증과 관련된 병태는 예를 들면, 폐에 영향을 미치는 병태, 예컨대, 낭포성 섬유증, 폐기종, 천식 또는 박테리아 감염(예를 들면, 해모필루스 인플루엔자(Haemophilus influenzae), 스트렙토코커스 뉴모니아(Streptococcus pneumoniae), 레기오넬라 뉴모필라(Legionella pneumophila) 및 클라마이디아 트라코마투스(Chlamydia trachomatus)에 의해 유발된 질환); 심혈관 질환(예를 들면, 선천성 심장 질환, 울혈성 심부전 및 관상 동맥 질환); 및 내분비 장애(예를 들면, 당뇨병), 신경 및 신경 발달 병태(예를 들면, 뇌, 척수, 말초 신경 및 근육의 장애(예컨대, 뇌성마비, 간질(발작 장애), 졸중, 지적 장애(예를 들면, 정신지체), 근이영양증 및 척수 손상))이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 활성 화합물 또는 조성물을 투여받을 인간 대상체는 공동생활체, 예컨대, 요양소에서 거주하는 개체이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 활성 화합물 또는 조성물을 투여받을 인간 대상체는 공동생활체, 예를 들면, 요양소에서 일하거나 상당한 양의 시간을 보낸다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 활성 화합물 또는 조성물을 투여받을 인간 대상체는 건강 관리 종사자(예를 들면, 의사 또는 간호사)이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 활성 화합물 또는 조성물을 투여받을 인간 대상체는 흡연자이다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 활성 화합물 또는 조성물을 투여받을 인간 대상체는 면역손상되어 있거나 면역억제되어 있다.
추가로, 본원에 기재된 활성 화합물 또는 조성물을 투여받을 수 있는, 인플루엔자로부터 합병증을 발생시킬 증가된 위험을 갖는 대상체는 합병증에 대한 고위험을 갖는 개체에게 인플루엔자 바이러스를 전염시킬 수 있는 임의의 개체, 예컨대, 6개월 미만 연령의 영아를 포함할 가정을 포함하는, 고위험 개체를 갖는 가정의 구성원, 6개월 미만 연령의 영아와 접촉하는 개체, 또는 요양소 또는 다른 장기간 관리 시설에서 살아가는 개체와 접촉할 개체; 폐, 심장 또는 순환계의 장기간 장애를 갖는 개체; 대사 질환(예를 들면, 당뇨병)을 갖는 개체; 신장 장애를 갖는 개체; 혈액 장애(빈혈 또는 겸상세포 질환을 포함함)를 갖는 개체; 약화된 면역 시스템(약물, 악성종양, 예컨대, 암, 기관 이식 또는 HIV 감염에 의해 유발된 면역억제를 포함함)을 갖는 개체; 및 장기간 아스피린 요법을 받은 소아(따라서, 인플루엔자에 감염된 경우 레이(Reye) 증후군을 발생시킬 가능성이 보다 높음)를 포함한다.
다른 실시양태에서, 본원에 기재된 활성 화합물 또는 조성물을 투여받을 대상체는 감기 발병이 발생할 수 있는 외국 및 영역, 예컨대, 열대 및 4월부터 9월까지 남반구로 여행할 계획을 세웠거나; 인플루엔자 바이러스가 유행하는 지역 출신의 사람을 포함할 수 있는 큰 조직화된 여행자 군의 일부로서 여행할 계획을 세웠거나; 학교 또는 대학에 출석하고 기숙사에 거주하거나 수용시설에 거주할 계획을 세웠거나; 또는 인플루엔자에 의한 질병을 앓을 위험을 감소시키기를 원하는 6개월 이상 연령의 건강한 개체를 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 활성 화합물 또는 조성물의 투여가 금지되는 대상체는 인플루엔자 백신접종이 금지되는 임의의 개체, 예컨대, 6개월 미만 연령의 영아; 및 면역원성 제제의 제조에서 사용되는 알, 알 제품 또는 다른 성분에 대한 아나필락시스 반응(호흡 곤란 후 종종 쇼크를 유발하는 알레르기 반응)을 갖는 개체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 활성 화합물 또는 조성물의 투여가 면역원성 제제의 제조에서 사용되는 1개 이상의 성분으로 인해(예를 들면, 알 또는 알 제품의 존재로 인해) 금지되는 경우, 상기 활성 화합물 또는 조성물은 활성 화합물 또는 조성물의 투여가 금지되게 하는 원인 성분을 포함하지 않는 방식으로 제조될 수 있다(예를 들면, 상기 활성 화합물 또는 조성물을 알 또는 알 제품을 사용하지 않고 제조할 수 있다).
일부 실시양태에서, 생바이러스 백신을 하기 환자 집단들 중 1개 이상의 환자 집단에게 투여하지 않는 것이 바람직할 수 있다: 노인; 6개월 미만 연령의 영아; 임신한 개체; 1세 미만 연령의 영아; 2세 미만 연령의 소아; 3세 미만 연령의 소아; 4세 미만 연령의 소아; 5세 미만 연령의 소아; 20세 미만 연령의 성인; 25세 미만 연령의 성인; 30세 미만 연령의 성인; 35세 미만 연령의 성인; 40세 미만 연령의 성인; 45세 미만 연령의 성인; 50세 미만 연령의 성인; 70세 초과 연령의 노인; 75세 초과 연령의 노인; 80세 초과 연령의 노인; 85세 초과 연령의 노인; 90세 초과 연령의 노인; 95세 초과 연령의 노인; 아스피린 또는 아스피린 함유 약물 치료를 받는 소아 및 청소년(2세 내지 17세 연령)(이 연령 군에서 아스피린 및 야생형 인플루엔자 바이러스 감염과 관련된 합병증 때문); 천식 또는 다른 반응성 기도 질환의 병력을 갖는 개체; 심각한 인플루엔자 감염에 취약하게 만들 수 있는 근원적인 만성 의학적 병태를 갖는 개체; 길랑-바레(Guillain-Barre) 증후군의 병력을 갖는 개체; 발열과 함께 급성 중증 질병을 갖는 개체; 또는 중간 정도로 또는 심각하게 아픈 개체. 이러한 개체들의 경우, 본원에 기재된 불활성화된 바이러스 백신, 분할 바이러스 백신, 아단위 백신, 비로좀, 바이러스 유사 입자 또는 비-바이러스 벡터의 투여가 바람직할 수 있다. 일부 실시양태에서, 바람직하게는 생바이러스 백신을 투여받을 대상체는 2세 내지 27세 연령의 건강한 소아 및 청소년, 및 18세 내지 49세 연령의 건강한 성인을 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 생바이러스 벡터를 포함하는 면역원성 제제는 다른 생바이러스 백신과 동시에 제공되지 않는다.
12. 투여 방식
12.1. 전달 경로
본원에 기재된 활성 화합물 또는 조성물은 다양한 경로들에 의해 대상체에게 전달될 수 있다. 이들은 코내, 기관내, 경구, 피내, 근육내, 복강내, 경피, 정맥내, 결막 및 피하 경로를 포함하나 이들로 한정되지 않는다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 활성 화합물 또는 조성물은 피하 경로에 의해 대상체에게 전달된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 국소 투여, 예를 들면, 피부에의 도포용으로 제제화된다. 특정 실시양태에서, 투여 경로는 코이고, 예를 들면, 코 분무제의 일부로서 투여된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 근육내 투여용으로 제제화된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 피하 투여용으로 제제화된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 주사에 의한 투여용으로 제제화되지 않는다. 생바이러스 백신에 대한 특정 실시양태에서, 상기 백신은 주사 이외의 다른 경로에 의한 투여용으로 제제화된다.
항원이 바이러스 벡터, 바이러스 유사 입자 벡터 또는 박테리아 벡터인 경우, 예를 들면, 상기 벡터가 유래된 골격 바이러스 또는 박테리아의 천연 감염 경로를 통해 면역원성 조성물을 도입하는 것이 바람직할 수 있다. 대안적으로, 감기 폴리펩티드가 유래된 인플루엔자 바이러스의 천연 감염 경로를 통해 감기 폴리펩티드를 도입하는 것이 바람직할 수 있다. 강력한 분비 및 세포 면역 반응을 유도하는 항원, 특히 바이러스 벡터의 능력은 유리하게 사용될 수 있다. 예를 들면, 바이러스 벡터에 의한 호흡관의 감염은 인플루엔자 바이러스에 대한 수반되는 보호와 함께 예를 들면, 비뇨생식계에서 강한 분비 면역 반응을 유도할 수 있다. 추가로, 바람직한 실시양태에서, 약학 조성물을 임의의 적합한 경로를 통해 폐 내로 도입하는 것이 바람직할 수 있다. 폐 투여는 예를 들면, 흡입기 또는 분사기의 사용, 및 분무제로서의 사용을 위해 에어로졸화제를 갖는 제제에 의해 이용될 수도 있다.
특정 실시양태에서, 아단위 백신은 코내로 투여된다. 특정 실시양태에서, 아단위 백신은 근육내로 투여된다. 또 다른 특정 실시양태에서, 아단위 백신은 피하로 투여된다. 또 다른 특정 실시양태에서, 아단위 백신은 피내로 투여된다.
특정 실시양태에서, 생바이러스 백신은 코내로 투여된다. 특정 실시양태에서, 생바이러스 백신은 근육내로 투여된다. 또 다른 특정 실시양태에서, 생바이러스 백신은 피하로 투여된다. 또 다른 특정 실시양태에서, 생바이러스 백신은 피내로 투여된다.
특정 실시양태에서, 불활성화된 바이러스 백신은 코내로 투여된다. 특정 실시양태에서, 불활성화된 바이러스 백신은 근육내로 투여된다. 또 다른 특정 실시양태에서, 불활성화된 바이러스 백신은 피하로 투여된다. 또 다른 특정 실시양태에서, 불활성화된 바이러스 백신은 피내로 투여된다.
특정 실시양태에서, 분할 바이러스 백신은 코내로 투여된다. 특정 실시양태에서, 분할 바이러스 백신은 근육내로 투여된다. 또 다른 특정 실시양태에서, 분할 바이러스 백신은 피하로 투여된다. 또 다른 특정 실시양태에서, 분할 바이러스 백신은 피내로 투여된다.
특정 실시양태에서, 바이러스 유사 입자 또는 이의 조성물은 코내로 투여된다. 특정 실시양태에서, 바이러스 유사 입자 또는 이의 조성물은 근육내로 투여된다. 또 다른 특정 실시양태에서, 바이러스 유사 입자 또는 이의 조성물은 피하로 투여된다. 또 다른 특정 실시양태에서, 바이러스 유사 입자 또는 이의 조성물은 피내로 투여된다.
일부 실시양태에서, 시험관 내에서 감기 폴리펩티드로 자극된 세포를 당업자에게 공지되어 있는 기법을 이용하여 대상체 내로 도입(또는 재도입)할 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 세포를 피내로, 피하로 또는 말초 혈류 내로 도입할 수 있다. 일부 실시양태에서, 대상체 내로 도입된 상기 세포는 바람직하게는 불리한 면역 반응을 피하기 위해 상기 대상체로부터 유래된 세포이다. 다른 실시양태에서, 유사한 면역 배경을 갖는 공여자 숙주로부터 유래된 세포도 사용될 수 있다. 불리한 면역원성 반응을 피하도록 디자인된 세포를 포함하는 다른 세포도 사용될 수 있다.
12.2. 투여량 및 투여 빈도
인플루엔자 바이러스 감염 또는 인플루엔자 바이러스 질환의 치료 및/또는 예방에 효과적인 활성 화합물 또는 조성물의 양은 질환의 성질에 의해 좌우될 것이고 표준 임상 기법에 의해 결정될 수 있다.
또한, 제제에서 사용될 정확한 투여량은 투여 경로, 및 감염 및 감염에 의해 유발된 질환의 심각도에 의해 좌우될 것이고, 숙련자의 판단 및 각각의 대상체의 환경에 따라 결정되어야 한다. 예를 들면, 유효 투여량은 투여 수단, 표적 부위, 환자의 생리학적 상태(연령, 체중 및 건강을 포함함), 환자가 인간인지 아니면 동물인지의 여부, 투여되는 다른 약물, 및 치료가 예방적 치료인지 아니면 치유적 치료인지의 여부에 따라 달라질 수도 있다. 통상적으로, 환자는 인간이지만, 형질전환 포유동물을 포함하는 비-인간 포유동물도 치료될 수 있다. 치료 투여량은 안전성 및 효능을 최적화하도록 최적으로 적정된다.
일부 실시양태에서, 최적 투여량 범위를 확인하는 것을 돕기 위해 시험관내 분석법을 이용한다. 유효 투여량은 시험관내 또는 동물 모델 시험 시스템으로부터 유도된 투여량 반응 곡선으로부터 추정될 수 있다.
감기 폴리펩티드를 코딩하는 핵산에 대한 예시적인 투여량 범위는 환자 당 약 10 ng 내지 1 g, 100 ng 내지 100 mg, 1 ㎍ 내지 10 mg 또는 30 ㎍ 내지 300 ㎍의 핵산, 예를 들면, DNA이다.
일부 실시양태에서, (예를 들면, 분할 바이러스 백신 및 아단위 백신에서 제공된 경우) 감기 폴리펩티드에 대한 예시적인 투여량 범위는 환자의 체중 1 kg 당 약 5 ㎍ 내지 100 mg, 15 ㎍ 내지 50 mg, 15 ㎍ 내지 25 mg, 15 ㎍ 내지 10 mg, 15 ㎍ 내지 5 mg, 15 ㎍ 내지 1 mg, 15 ㎍ 내지 100 ㎍, 15 ㎍ 내지 75 ㎍, 5 ㎍ 내지 50 ㎍, 10 ㎍ 내지 50 ㎍, 15 ㎍ 내지 45 ㎍, 20 ㎍ 내지 40 ㎍ 또는 25 ㎍ 내지 35 ㎍이다. 다른 실시양태에서, 감기 폴리펩티드에 대한 예시적인 투여량 범위는 투여량 당 약 1 ㎍ 내지 50 mg, 5 ㎍ 내지 50 mg, 1 ㎍ 내지 100 mg, 5 ㎍ 내지 100 mg, 15 ㎍ 내지 50 mg, 15 ㎍ 내지 25 mg, 15 ㎍ 내지 10 mg, 15 ㎍ 내지 5 mg, 15 ㎍ 내지 1 mg, 15 ㎍ 내지 100 ㎍, 15 ㎍ 내지 75 ㎍, 5 ㎍ 내지 50 ㎍, 10 ㎍ 내지 50 ㎍, 15 ㎍ 내지 45 ㎍, 20 ㎍ 내지 40 ㎍ 또는 25 ㎍ 내지 35 ㎍의 감기 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 감기 폴리펩티드에 대한 예시적인 투여량은 투여량 당 1 ㎍, 2 ㎍, 3 ㎍, 4 ㎍, 5 ㎍, 6 ㎍, 7 ㎍, 8 ㎍, 9 ㎍, 10 ㎍, 11 ㎍, 12 ㎍, 13 ㎍, 14 ㎍, 15 ㎍, 16 ㎍, 17 ㎍, 18 ㎍, 19 ㎍, 20 ㎍, 21 ㎍, 22 ㎍, 23 ㎍, 24 ㎍, 25 ㎍, 26 ㎍, 27 ㎍, 28 ㎍, 29 ㎍, 30 ㎍, 31 ㎍, 32 ㎍, 33 ㎍, 34 ㎍, 35 ㎍, 36 ㎍, 37 ㎍, 38 ㎍, 39 ㎍, 40 ㎍, 41 ㎍, 42 ㎍, 43 ㎍, 44 ㎍, 45 ㎍, 46 ㎍, 47 ㎍, 48 ㎍, 49 ㎍ 또는 50 ㎍의 감기 폴리펩티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 감기 폴리펩티드에 대한 예시적인 투여량은 투여량 당 50 ㎍, 55 ㎍, 60 ㎍, 65 ㎍, 70 ㎍, 75 ㎍, 80 ㎍, 85 ㎍, 90 ㎍, 95 ㎍ 또는 100 ㎍의 감기 폴리펩티드를 포함한다.
감염성 바이러스 벡터에 대한 투여량은 투여량 당 10개 내지 100개의 비리온 또는 그 이상 개수의 비리온 수준에서 달라질 수 있다. 일부 실시양태에서, 바이러스 벡터의 적합한 투여량은 102 pfu, 5 x 102 pfu, 103 pfu, 5 x 103 pfu, 104 pfu, 5 x 104 pfu, 105 pfu, 5 x 105 pfu, 106 pfu, 5 x 106 pfu, 107 pfu, 5 x 107 pfu, 108 pfu, 5 x 108 pfu, 1 x 109 pfu, 5 x 109 pfu, 1 x 1010 pfu, 5 x 1010 pfu, 1 x 1011 pfu, 5 x 1011 pfu 또는 1012 pfu이고, 요구되는 만큼 자주 간격을 두고 1회, 2회 또는 3회 이상 대상체에게 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, VLP에 대한 예시적인 투여량 범위는 환자의 체중 1 kg 당 약 0.01 ㎍ 내지 약 100 mg, 약 0.1 ㎍ 내지 약 100 mg, 약 5 ㎍ 내지 약 100 mg, 약 15 ㎍ 내지 약 50 mg, 약 15 ㎍ 내지 약 25 mg, 약 15 ㎍ 내지 약 10 mg, 약 15 ㎍ 내지 약 5 mg, 약 15 ㎍ 내지 약 1 mg, 약 15 ㎍ 내지 약 100 ㎍, 약 15 ㎍ 내지 약 75 ㎍, 약 5 ㎍ 내지 약 50 ㎍, 약 10 ㎍ 내지 약 50 ㎍, 약 15 ㎍ 내지 약 45 ㎍, 약 20 ㎍ 내지 약 40 ㎍ 또는 약 25 ㎍ 내지 약 35 ㎍이다. 다른 실시양태에서, 감기 폴리펩티드에 대한 예시적인 투여량 범위는 투여량 당 약 1 ㎍ 내지 약 50 mg, 약 5 ㎍ 내지 약 50 mg, 약 1 ㎍ 내지 약 100 mg, 약 5 ㎍ 내지 약 100 mg, 약 15 ㎍ 내지 약 50 mg, 약 15 ㎍ 내지 약 25 mg, 약 15 ㎍ 내지 약 10 mg, 약 15 ㎍ 내지 약 5 mg, 약 15 ㎍ 내지 약 1 mg, 약 15 ㎍ 내지 약 100 ㎍, 약 15 ㎍ 내지 약 75 ㎍, 약 5 ㎍ 내지 약 50 ㎍, 약 10 ㎍ 내지 약 50 ㎍, 약 15 ㎍ 내지 약 45 ㎍, 약 20 ㎍ 내지 약 40 ㎍ 또는 약 25 ㎍ 내지 약 35 ㎍의 감기 폴리펩티드이고, 요구되는 만큼 자주 간격을 두고 1회, 2회 또는 3회 이상 대상체에게 투여될 수 있다.
한 실시양태에서, 불활성화된 백신은 약 5 ㎍ 내지 약 50 ㎍, 약 10 ㎍ 내지 약 50 ㎍, 약 15 ㎍ 내지 약 100 ㎍, 약 15 ㎍ 내지 약 75 ㎍, 약 15 ㎍ 내지 약 50 ㎍, 약 15 ㎍ 내지 약 30 ㎍, 약 20 ㎍ 내지 약 50 ㎍, 약 25 ㎍ 내지 약 40 ㎍ 또는 약 25 ㎍ 내지 약 35 ㎍의 감기 폴리펩티드를 함유하도록 제제화된다. 이러한 백신은 1개 이상의 상이한 감기 폴리펩티드의 조합물, 예를 들면, 인플루엔자 A 바이러스로부터의 1개 이상의 상이한 감기 폴리펩티드와 인플루엔자 B 바이러스로부터의 1개 이상의 상이한 감기 폴리펩티드의 조합물을 함유할 수 있다. 한 실시양태에서, 약독화된 인플루엔자 생백신(LAIV)은 0.2 ml 투여량이 1개 이상의 인플루엔자 감기 폴리펩티드를 발현하는 3종의 균주들로부터 유래된 106.5 내지 107.5 FFU의 약독화된 인플루엔자 생바이러스를 함유하도록 제제화된다.
일부 실시양태에서, 활성 화합물 또는 조성물은 단회 투여량으로서 대상체에게 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, 활성 화합물 또는 조성물은 단회 투여량으로서 대상체에게 투여되고, 3주 내지 6주 후 제2 투여량으로서 대상체에게 투여된다. 이들 실시양태에 따라, 부스터(booster) 접종은 제2 접종 후 6개월 내지 12개월 간격을 두고 상기 대상체에게 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 부스터 접종은 상이한 활성 화합물 또는 조성물을 사용할 수 있다. 일부 실시양태에서, 동일한 활성 화합물 또는 조성물의 투여가 반복될 수 있고, 투여는 1일 이상, 2일 이상, 3일 이상, 5일 이상, 10일 이상, 15일 이상, 30일 이상, 45일 이상, 2개월 이상, 75일 이상, 3개월 이상 또는 6개월 이상의 간격을 두고 수행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 활성 화합물 또는 조성물은 1년 당 1회 단일 투여량으로서 대상체에게 투여된다.
소아에게의 투여를 위한 특정 실시양태에서, 1개월 이상의 간격을 두고 제공된 활성 화합물 또는 조성물의 2회 투여량이 소아에게 투여된다. 성인에게의 투여를 위한 특정 실시양태에서, 단회 투여량이 제공된다. 또 다른 실시양태에서, 1개월 이상의 간격을 두고 제공된 활성 화합물 또는 조성물의 2회 투여량이 성인에게 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 1개월의 간격을 두고 제공된 2회 투여량으로 활성 화합물 또는 조성물을 처음으로 어린 소아(6개월 내지 9세 연령)에게 투여할 수 있다. 특정 실시양태에서, 백신접종의 첫해에서 1회 투여량만을 제공받은 소아는 다음해에서 2회 투여량을 제공받을 것이다. 일부 실시양태에서, 인플루엔자 백신, 예를 들면, 본원에 기재된 면역원성 제제를 처음으로 투여받는 2세 내지 8세 연령의 소아의 경우 4주 간격을 두고 투여되는 2회 투여량이 바람직하다. 일부 실시양태에서, 6개월 내지 35개월 연령의 소아의 경우 절반 투여량(0.25 ml)이 바람직할 수 있는 반면, 3세 초과 연령의 대상체의 경우 0.5 ml가 바람직할 수 있다.
구체적 실시양태에서, 활성 화합물 또는 조성물은 가을 또는 겨울, 즉 남반구 또는 북반구에서 인플루엔자 계절 전에 또는 동안에 대상체에게 투여된다. 한 실시양태에서, 소아는 제2 투여량이 인플루엔자 계절의 정점 전에 제공될 수 있도록 상기 계절 초기, 예를 들면, 9월 말 또는 10월 초에 제1 투여량을 투여받는다.
일부 실시양태에서, 활성 화합물 또는 이의 조성물은 2주, 3주, 4주, 5주 또는 6주 간격을 두고 2회, 3회, 4회 또는 5회 이상의 투여량으로서 대상체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, 활성 화합물 또는 이의 조성물의 2회, 3회, 4회 또는 5회 이상의 투여량은 2주, 3주, 4주, 5주 또는 6주 간격을 두고 1 ㎍ 내지 20 mg, 10 ㎍ 내지 20 mg, 500 ㎍ 내지 20 mg, 1 mg 내지 20 mg 또는 5 mg 내지 20 mg의 투여량으로 대상체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, 투여되는 활성 화합물 또는 이의 조성물은 매번 동일하다. 일부 실시양태에서, 투여되는 감기 폴리펩티드 또는 이의 조성물은 매번 상이하다.
감기 폴리펩티드에 결합하는 항체를 사용하는 수동 면역화의 경우, 투여량 범위는 환자 체중 1 kg 당 약 0.0001 mg 내지 100 mg, 보다 통상적으로 0.01 mg 내지 5 mg이다. 예를 들면, 투여량은 체중 1 kg 당 1 mg 또는 10 mg일 수 있거나 체중 1 kg 당 1 mg 내지 10 mg의 범위 내에 있을 수 있다(즉, 70 kg 환자의 경우 70 mg 또는 700 mg일 수 있거나 70 mg 내지 700 mg의 범위 내에 있을 수 있다). 예시적인 치료 섭생법은 1년 동안 또는 수년에 걸쳐, 또는 수년 간격에 걸쳐 2주마다 1회, 1개월마다 1회, 또는 3개월 내지 6개월마다 1회 투여를 수반한다. 일부 방법에서, 상이한 결합 특이성을 갖는 2개 이상의 단일클론 항체들이 동시에 투여되고, 이 경우 투여되는 각각의 항체의 투여량은 표시된 범위 내에 있다. 항체는 통상적으로 다회 투여된다. 단회 투여량 사이의 간격은 주 단위, 월 단위 또는 년 단위 간격일 수 있다. 간격은 환자에서 감기 폴리펩티드에 대한 항체의 혈중 수준을 측정함으로써 표시되는 바와 같이 불규칙적일 수도 있다.
13. 생물학적 분석법
13.1. 인플루엔자 감기 폴리펩티드의 활성을 시험하기 위한 분석법
본원에 개시된 벡터 내의 감기 폴리펩티드의 발현을 시험하기 위한 분석법은 당업계에서 공지되어 있는 임의의 분석법을 이용하여 수행할 수 있다. 예를 들면, 바이러스 벡터 내로의 도입에 대한 분석법은 이 단락 또는 단락 4. 또는 5.에 기재된 바와 같이 바이러스를 성장시키는 단계, 수크로스 쿠션을 통한 원심분리로 바이러스 입자를 정제하는 단계, 및 당업계에서 잘 공지되어 있는 방법을 이용하여 면역분석법, 예컨대, 웨스턴 블롯팅으로 감기 폴리펩티드 발현을 후속적으로 분석하는 단계를 포함한다.
한 실시양태에서, 당업계에서 공지되어 있는 항체-항원 상호작용에 대한 임의의 분석법을 이용하여 감기 폴리펩티드에 대해 유도된 항체에 특이적으로 결합하는 본원에 개시된 감기 폴리펩티드의 능력을 시험함으로써 상기 감기 폴리펩티드를 적절한 폴딩 및 기능성에 대해 분석한다. 이러한 분석법에서 사용될 항체는 예를 들면, 문헌[Wang et al. (2010) "Broadly Protective Monoclonal Antibodies against H3 Influenza Viruses following Sequential Immunization with Different Hemagglutinins," PLOS Pathogens 6(2):1-9], 국제 특허출원 제PCT/US2010/036170호 및 미국 특허출원 제12/778,103호에 기재된 중화 항체를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 당업계에서 공지되어 있는 임의의 방법, 예를 들면, NMR, X-선 결정학적 방법 또는 2차 구조 예측 방법, 예를 들면, 원이색법을 이용하여 본원에 개시된 감기 폴리펩티드의 구조 또는 입체구조를 확인함으로써 상기 감기 폴리펩티드를 적절한 폴딩에 대해 분석한다.
13.2. 인플루엔자 감기 폴리펩티드를 사용하여 발생시킨 항체의 활성을 시험하기 위한 분석법
본원에 기재된 항체는 당업자에게 공지되어 있는 다양한 방법(예를 들면, ELISA, 표면 플라스몬 공명 표시(비아코어(BIAcore), 웨스턴 블롯, 면역형광, 면역염색 및/또는 미세중화 분석법)에 의해 특징규명될 수 있다. 일부 실시양태에서, 감기 폴리펩티드, 또는 상기 폴리펩티드를 포함하는 벡터에 특이적으로 결합하는 항체의 능력을 분석한다. 이러한 분석법은 용액 중에서 수행될 수 있거나(예를 들면, 문헌[Houghten, 1992, Bio/Techniques 13:412-421]), 비드 상에서 수행될 수 있거나(문헌[Lam, 1991, Nature 354:82-84]), 칩 상에서 수행될 수 있거나(문헌[Fodor, 1993, Nature 364:555-556]), 박테리아 상에서 수행될 수 있거나(미국 특허 제5,223,409호), 포자 상에서 수행될 수 있거나(미국 특허 제5,571,698호, 제5,403,484호 및 제5,223,409호), 플라스미드 상에서 수행될 수 있거나(문헌[Cull et al., 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:1865-1869]), 또는 파지 상에서 수행될 수 있다(문헌[Scott and Smith, 1990, Science 249:386-390], 문헌[Cwirla et al., 1990, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:6378-6382] 및 문헌[Felici, 1991, J. Mol. Biol. 222:301-310])(이들 참고문헌들 각각은 온전히 그대로 본원에 참고로 도입됨).
항체와 감기 폴리펩티드의 특이적 결합 및 다른 항원과의 교차반응성은 당업계에서 공지되어 있는 임의의 방법에 의해 평가될 수 있다. 특이적 결합 및 교차반응성을 분석하는 데에 이용될 수 있는 면역분석법은 예를 들면, 웨스턴 블롯, 방사면역분석법, ELISA(효소 연결 면역흡착 분석법), "샌드위치" 면역분석법, 면역침전 분석법, 침강소 반응, 겔 확산 침강소 반응, 면역확산 분석법, 응집 분석법, 보체 고정화 분석법, 면역방사측정 분석법, 형광 면역분석법 및 단백질 A 면역분석법과 같은 기법을 이용하는 경쟁적 분석 시스템 및 비경쟁적 분석 시스템을 포함하나 이들로 한정되지 않는다. 이러한 분석법은 상용되고 있고 당업계에서 잘 공지되어 있다(예를 들면, 온전히 그대로 본원에 참고로 도입되는 문헌[Ausubel et al., eds., 1994, Current Protocols in Molecular Biology, Vol. 1, John Wiley & Sons, Inc., New York] 참조).
항체와 감기 폴리펩티드의 결합 친화성 및 항체-항원 상호작용의 해리속도는 경쟁적 결합 분석법에 의해 측정될 수 있다. 경쟁적 결합 분석법의 일례는 증가하는 양의 비-표지된 항원의 존재 하에 표지된 항원(예를 들면, 3H 또는 125I)을 관심 있는 항체와 함께 항온처리하는 단계, 및 표지된 항원에 결합된 항체를 검출하는 단계를 포함하는 방사면역분석법이다. 감기 폴리펩티드에 대한 항체의 친화성 및 결합 해리속도는 스캐차드 플롯(Scatchard plot) 분석에 의해 데이터로부터 측정될 수 있다. 제2 항체와의 경쟁도 방사면역분석법을 이용하여 측정할 수 있다. 이 경우, 증가하는 양의 비-표지된 제2 항체의 존재 하에 감기 폴리펩티드를 표지된 화합물(예를 들면, 3H 또는 125I)에 접합된 시험 항체와 함께 항온처리한다.
일부 실시양태에서, 항체 결합 친화성 및 속도 상수는 KinExA 3000 시스템(사피다인 인스트루먼츠(Sapidyne Instrument), 미국 아이다호주 보이스 소재)을 이용하여 측정한다. 일부 실시양태에서, 표면 플라스몬 공명(예를 들면, 비아코어 동역학) 분석을 이용하여 항체와 감기 폴리펩티드의 결합속도 및 해리속도를 측정한다. 비아코어 동역학 분석은 그의 표면 상에 감기 폴리펩티드에 대한 고정된 항체를 갖는 칩과 감기 폴리펩티드의 결합 및 상기 칩으로부터 감기 폴리펩티드의 해리를 분석하는 단계를 포함한다. 전형적인 비아코어 동역학 연구는 0.005% 트윈-20을 함유하는 HBS 완충제 중에 다양한 농도로 존재하는 250 ㎕의 항체 시약(mAb, Fab)을 감기 폴리펩티드가 고정되어 있는 센서 칩 표면 상에 주사하는 단계를 포함한다. 유속은 75 ㎕/분으로 일정하게 유지된다. 필요하다면 15분 이상 동안 해리 데이터를 수집한다. 각각의 주사/해리 주기 후, 다른 재생제가 환경 유지제로서 사용되지만 묽은 산, 전형적으로 10 mM 내지 100 mM HCl의 짧은 1분 펄스를 이용하여 감기 폴리펩티드로부터 결합된 항체를 제거한다. 보다 구체적으로, 결합속도 kon 및 해리속도 koff를 측정하기 위해, 표준 아민 커플링 화학적 기법, 즉 EDC/NHS 방법(EDC = N-다이에틸아미노프로필)-카보다이이미드)을 이용하여 상기 폴리펩티드를 상기 센서 칩 표면 상에 직접적으로 고정시킨다. 요약하건대, 10 mM NaOAc 중의 상기 폴리펩티드의 5 nM 내지 100 nM 용액(pH 4 또는 pH 5)을 제조하고 약 30 RU 내지 50 RU 가치의 폴리펩티드가 고정될 때까지 EDC/NHS-불활성화된 표면 상에 통과시킨다. 그 후, 1 M Et-NH2를 주사하여 미반응된 활성 에스터를 "캡핑(capping)"한다. 기준물로서 사용하기 위해 폴리펩티드를 함유하지 않은 블랭크 표면을 동일한 고정 조건 하에 제조한다. 일단 적절한 표면이 제조되면, 항체 시약들 각각의 적합한 연속 희석물을 HBS/트윈-20에서 제조하고 연속적으로 연결되어 있는 폴리펩티드 세포 표면 및 기준물 세포 표면 상에 통과시킨다. 제조되는 항체 농도의 범위는 추정되는 평형 결합 상수 KD의 값에 따라 다르다. 전술된 바와 같이, 각각의 주사/해리 주기 후 결합된 항체를 적절한 재생제를 사용하여 제거한다.
항체의 중화 활성은 당업자에게 공지되어 있는 임의의 분석법을 이용하여 측정할 수 있다. 당업자에게 공지되어 있는 기법을 이용하여 본원에 기재된 항체를 인플루엔자 바이러스와 그의 숙주 세포 수용체(즉, 시알산)의 결합을 억제하는 능력에 대해 분석할 수 있다. 예를 들면, 인플루엔자 바이러스 수용체를 발현하는 세포를 상기 항체의 존재 또는 부재 하에 인플루엔자 바이러스를 포함하는 조성물과 접촉시킬 수 있고, 인플루엔자 바이러스의 결합을 억제하는 상기 항체의 능력을 측정할 수 있다. 대안적으로, 인플루엔자 바이러스가 그의 수용체에 결합하는 것을 억제하는 항체의 능력을 세포 부재 분석법으로 측정할 수 있다.
다른 실시양태에서, 본원에 기재된 방법에서 사용되기에 적합한 항체는 인플루엔자 바이러스 수용체 결합을 억제하지 않지만 본원에 기재된 분석법에서 여전히 중화 활성을 나타내는 것으로 발견된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 방법에 따라 사용되기에 적합한 항체는 당업계에서 공지되어 있거나 본원에 기재되어 있는 분석법에서 바이러스-숙주 막 융합을 감소시키거나 억제한다.
한 실시양태에서, 바이러스-숙주 막 융합은 레포터를 함유하는 인플루엔자 바이러스, 및 상기 바이러스에 감염될 수 있는 숙주 세포를 사용하는 시험관내 분석법에서 분석된다. 레포터 활성이 음성 대조군(예를 들면, 대조군 항체의 존재 또는 항체의 부재 하의 레포터 활성)에 비해 억제되거나 감소되는 경우 항체가 상기 융합을 억제한다.
13.3. 자극된 세포의 활성을 시험하기 위한 분석법
본원에 기재된 방법에 따라 자극된 세포를 예를 들면, 관심 있는 폴리뉴클레오티드 또는 유전자의 삽입, 전사 및/또는 발현, 삽입된 상기 유전자의 카피 수 및 삽입 위치에 대해 분석할 수 있다. 이러한 분석을 임의의 시점에서 수행할 수 있고 당업계에서 공지되어 있는 임의의 방법으로 수행할 수 있다. 다른 실시양태에서, 당업계에서 공지되어 있거나 본원에 기재되어 있는 방법을 이용하여 감기 폴리펩티드에 대한 중화 항체의 생성을 검출함으로써 본원에 기재된 감기 폴리펩티드에 의한 표적 세포의 성공적인 자극을 확인한다.
일부 실시양태에서, 자극된 세포, 예를 들면, DC가 투여된 대상체를, 세포의 위치, 감기 폴리펩티드를 코딩하는 벡터 전달된 폴리뉴클레오티드 또는 유전자의 발현 및 면역 반응의 자극(예를 들면, 감기 폴리펩티드에 대한 중화 항체의 생성)에 대해 분석할 수 있고/있거나 당업계에서 공지되어 있거나 본원에 기재되어 있는 임의의 방법을 이용하여 인플루엔자 바이러스 감염 또는 이와 관련된 질환과 관련된 증상에 대해 모니터링할 수 있다.
레포터 분석을 이용하여 감기 폴리펩티드의 표적화 특이성을 측정할 수 있다. 예를 들면, 대상체로부터 골수 세포의 혼합된 집단을 수득하고 시험관 내에서 배양할 수 있다. 감기 폴리펩티드를 상기 골수 세포의 혼합된 집단에게 투여할 수 있고, 감기 폴리펩티드와 관련된 레포터 유전자의 발현을 배양된 세포에서 분석할 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 혼합된 세포 집단에서 자극된 세포의 약 50% 이상, 보다 바람직하게는 약 60%, 70%, 80% 또는 90% 이상, 보다 더 바람직하게는 약 95% 이상이 수지상세포이다.
13.4. 바이러스 활성 분석법
본원에 기재된 항체 또는 이의 조성물의 항-바이러스 활성을 시험관 내에서 평가할 수 있다. 한 실시양태에서, 인플루엔자 바이러스의 성장에 대한 본원에 기재된 항체 또는 이의 조성물의 효과를 시험관 내에서 시험할 수 있다. 인플루엔자 바이러스의 성장을 당업계에서 공지되어 있거나 본원에 기재되어 있는 임의의 방법으로 (예를 들면, 세포 배양물에서) 평가할 수 있다. 특정 실시양태에서, 세포를 0.0005 내지 0.001, 0.001 내지 0.01, 0.01 내지 0.1, 0.1 내지 1 또는 1 내지 10의 MOI, 또는 0.0005, 0.001, 0.005, 0.01, 0.05, 0.1, 0.5, 1, 5 또는 10의 MOI로 감염시키고 보충된 혈청 부재 배지와 함께 항온처리한다. 헤마글루티닌 플라크 또는 본원에 기재된 임의의 다른 바이러스 분석법으로 상청액에서 바이러스 역가를 측정한다. 바이러스 역가가 평가될 수 있는 세포는 EFK-2 세포, 베로(Vero) 세포, MDCK 세포, 1차 인간 제정맥 내피세포(HUVEC), H292 인간 상피세포주 및 HeLa 세포를 포함하나 이들로 한정되지 않는다. 시험관내 분석법은 당업계에서 잘 공지되어 있거나 본원에 기재되어 있는 방법을 이용하여 시험관 내에서 배양된 세포에서 변경된 바이러스 복제(예를 들면, 플라크 형성에 의해 측정됨), 바이러스 단백질의 생성(예를 들면, 웨스턴 블롯 분석에 의해 측정됨) 또는 바이러스 RNA의 생성(예를 들면, RT-PCR 또는 노던 블롯 분석에 의해 측정됨)을 측정하는 시험관내 분석법을 포함한다.
비-제한적 일례에서, 표적 포유동물 세포주의 단일층을 상이한 양(예를 들면, 3 플라크 형성 유닛(pfu) 또는 5 pfu의 다중도)의 바이러스(예를 들면, 인플루엔자)로 감염시킨 후 항체의 다양한 희석물(예를 들면, 0.1 ㎍/㎖, 1 ㎍/㎖, 5 ㎍/㎖ 또는 10 ㎍/㎖)의 존재 또는 부재 하에 배양한다. 감염된 배양물을 감염 후 48시간 또는 72시간에서 수거하고 적절한 표적 세포주(예를 들면, 베로 세포) 상에서 당업계에서 공지되어 있는 표준 플라크 분석법으로 적정한다.
헤마글루틴화 분석법의 비-제한적 예에서, 세포를 항체와 접촉시키고 (예를 들면, 1의 MOI로) 바이러스로 동시에 또는 후속적으로 감염시키고, 바이러스 복제를 허용하는 조건 하에 상기 바이러스를 항온처리한다(예를 들면, 20시간 내지 24시간). 항체는 바람직하게는 감염 과정 전체에 존재한다. 그 다음, 0.5% 닭 적혈구 세포를 사용하는 헤마글루틴화 분석법으로 바이러스 복제 및 바이러스 입자의 방출을 측정한다. 예를 들면, 문헌[Kashyap et al., PNAS USA 105: 5986-5991]을 참조한다. 일부 실시양태에서, 화합물이 바이러스 역가의 약 75% 감소와 동등한 2개 이상의 HA 웰만큼 바이러스 복제를 감소시키는 경우 상기 화합물은 바이러스 복제의 억제제로서 간주된다. 특정 실시양태에서, 억제제는 이 분석법에서 바이러스 역가를 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상 또는 95% 이상까지 감소시킨다. 다른 특정 실시양태에서, 억제제는 대상체에서 인플루엔자 바이러스 역가를 약 1 로그 이상, 약 2 로그 이상, 약 3 로그 이상, 약 4 로그 이상, 약 5 로그 이상, 약 6 로그 이상, 약 7 로그 이상, 약 8 로그 이상, 약 9 로그 이상, 약 10 로그 이상, 1 로그 내지 3 로그, 1 로그 내지 5 로그, 1 로그 내지 8 로그, 1 로그 내지 9 로그, 2 로그 내지 10 로그, 2 로그 내지 5 로그, 2 로그 내지 7 로그, 2 로그 내지 8 로그, 2 로그 내지 9 로그, 2 로그 내지 10 로그, 3 로그 내지 5 로그, 3 로그 내지 7 로그, 3 로그 내지 8 로그, 3 로그 내지 9 로그, 4 로그 내지 6 로그, 4 로그 내지 8 로그, 4 로그 내지 9 로그, 5 로그 내지 6 로그, 5 로그 내지 7 로그, 5 로그 내지 8 로그, 5 로그 내지 9 로그, 6 로그 내지 7 로그, 6 로그 내지 8 로그, 6 로그 내지 9 로그, 7 로그 내지 8 로그, 7 로그 내지 9 로그, 또는 8 로그 내지 9 로그까지 감소시킨다. 인플루엔자 바이러스 역가에서의 로그 감소는 음성 대조군과 비교될 수 있거나, 또 다른 처리군과 비교될 수 있거나, 또는 항체 투여 전 환자의 역가와 비교될 수 있다.
13.5. 세포독성 분석법
당업계에서 잘 공지되어 있는 많은 분석법을 이용하여 활성 화합물 또는 이의 조성물의 노출 후 (감염된 또는 비-감염된) 세포 또는 세포주의 생존율을 평가하여 상기 화합물 또는 조성물의 세포독성을 측정할 수 있다. 예를 들면, 브로모데옥시유리딘(BrdU) 도입(예를 들면, 문헌[Hoshino et al., 1986, Int. J. Cancer 38, 369]; 및 문헌[Campana et al., 1988, J. Immunol. Meth. 107:79] 참조) 또는 (3H) 티미딘 도입(예를 들면, 문헌[Chen, J., 1996, Oncogene 13:1395-403]; 및 문헌[Jeoung, J., 1995, J. Biol. Chem. 270:18367-73] 참조)을 측정하거나, 직접적으로 세포의 수를 세거나, 또는 공지된 유전자, 예컨대, 원발암유전자(proto-oncogenes)(예를 들면, fos, myc) 또는 세포 주기 마커(Rb, cdc2, 사이클린 A, D1, D2, D3, E 등)의 전사, 번역 또는 활성의 변화를 검출함으로써 세포 증식을 분석할 수 있다. 이러한 단백질 및 mRNA의 수준 및 활성을 당업계에서 잘 공지되어 있는 임의의 방법으로 측정할 수 있다. 예를 들면, 단백질은 상업적으로 입수될 수 있는 항체를 포함하는 항체를 사용하는 공지된 면역진단 방법, 예컨대, ELISA, 웨스턴 블롯팅 또는 면역침전에 의해 정량될 수 있다. mRNA는 당업계에서 잘 공지되어 있고 상용적으로 이용되는 방법, 예를 들면, 노던 분석, RNase 보호, 또는 역전사와 연결된 중합효소 연쇄 반응의 이용에 의해 정량될 수 있다. 세포 생존율은 트립판-블루 염색 또는 당업계에서 공지되어 있는 다른 세포 사멸 또는 생존율 마커를 사용함으로써 평가될 수 있다. 특정 실시양태에서, 세포 ATP의 수준을 측정하여 세포 생존율을 측정한다.
특정 실시양태에서, 당업계의 표준 분석법, 예컨대, 세포내 ATP의 수준을 측정하는 셀타이터-글로(CellTiter-Glo) 분석 키트(프로메가)를 이용하여 3일 및 7일 기간 동안 세포 생존율을 측정한다. 세포 ATP의 감소는 세포독성 효과를 표시한다. 또 다른 특정 실시양태에서, 세포 생존율을 중성 레드 흡수 분석법으로 측정할 수 있다. 다른 실시양태에서, 형태학적 변화에 대한 시각적 관찰은 팽창, 입상도(granularity), 고르지 못한 윤곽을 갖는 세포, 얇은 외관, 둥글어짐(rounding), 벽의 표면으로부터의 탈착 또는 다른 변화를 포함할 수 있다. 이들 변화는 관찰된 독성의 정도에 따라 T(100% 독성), PVH(부분적 독성-매우 심함-80%), PH(부분적 독성-심함-60%), P(부분적 독성-40%), Ps(부분적 독성-약함-20%) 또는 0(무독성-0%)으로 표시된다. 50% 세포 억제(세포독성) 농도(IC50)는 이들 데이터의 회귀 분석에 의해 측정된다.
특정 실시양태에서, 세포독성 분석법에서 사용되는 세포는 1차 세포 및 세포주를 포함하는 동물 세포이다. 일부 실시양태에서, 세포는 인간 세포이다. 일부 실시양태에서, 세포독성은 하기 세포주들 중 하나 이상의 세포주에서 평가된다: U937, 인간 단핵구 세포주; 1차 말초혈 단핵 세포(PBMC); Huh7, 인간 간모세포종 세포주; 293T, 인간 배아 신장 세포주; 및 THP-1, 단구성 세포. 일부 실시양태에서, 세포독성은 하기 세포주들 중 하나 이상의 세포주에서 평가된다: MDCK, MEF, Huh 7.5, 디트로이트(Detroit) 또는 인간 기관기관지 상피(HTBE) 세포.
동물 모델에서 활성 화합물 또는 이의 조성물을 생체내 독성에 대해 시험할 수 있다. 예를 들면, 활성 화합물의 활성을 시험하기 위해 사용되는 본원에 기재된 동물 모델 및/또는 당업계에서 공지되어 있는 다른 동물 모델을 이용하여 이들 화합물의 생체내 독성을 측정할 수도 있다. 예를 들면, 일정한 농도 범위의 활성 화합물을 동물에게 투여한다. 그 후, 상기 동물을 치사율, 체중 손실 또는 체중 증가 실패, 및/또는 조직 손상의 표시자일 수 있는 혈청 마커의 수준(일반적인 조직 손상의 표시자인 크레아틴 포스포키나제(phosphokinase) 수준, 또는 가능한 간 손상의 표시자인 글루탐산 옥살산 트랜스아미나제(transaminase) 또는 피루브산 트랜스아미나제의 수준)에 대해 시간에 따라 모니터링한다. 이들 생체내 분석법은 투여량 이외에 다양한 투여 방식 및/또는 섭생법의 독성을 시험하는 데에도 적용될 수 있다.
활성 화합물의 독성 및/또는 효능은 예를 들면, LD50(집단의 50%에 치명적인 투여량) 및 ED50(집단의 50%에서 치료적으로 효과적인 투여량)을 측정하기 위해 세포 배양물 또는 실험 동물에서 표준 약학적 절차에 의해 측정될 수 있다. 독성 효과와 치료 효과 사이의 투여량 비는 치료 지수이고 비 LD50/ED50으로서 표시될 수 있다. 큰 치료 지수를 나타내는 활성 화합물이 바람직하다. 독성 부작용을 나타내는 활성 화합물이 사용될 수 있지만, 비-감염된 세포에의 잠재적 손상을 최소화하여 부작용을 감소시키기 위해 이러한 화합물을 영향받은 조직의 부위에 표적화시키는 전달 시스템을 디자인하는 것에 관심을 기울여야 한다.
세포 배양 분석법 및 동물 연구로부터 수득된 데이터는 인간에서 사용될 일정 투여량 범위의 활성 화합물을 제제화하는 데에 이용될 수 있다. 이러한 화합물의 투여량은 바람직하게는 독성을 거의 또는 전혀 나타내지 않으면서 ED50을 포함하는 순환 농도 범위 내에 있다. 상기 투여량은 사용되는 투여 제형 및 이용되는 투여 경로에 따라 이 범위 내에서 달라질 수 있다. 본원에 기재된 방법에서 사용되는 임의의 활성 화합물의 경우, 유효 투여량은 먼저 세포 배양 분석법으로부터 평가될 수 있다. 투여량은 세포 배양물에서 측정된 IC50(즉, 증상의 절반 억제를 달성하는 시험 화합물의 농도)을 포함하는 순환 혈장 농도 범위를 달성하도록 동물 모델에서 제제화될 수 있다. 이러한 정보를 이용하여 인간에서 유용한 투여량을 보다 정확하게 결정할 수 있다. 혈장에서의 수준은 예를 들면, 고성능 액체 크로마토그래피에 의해 측정될 수 있다. 투여량 결정에 대한 추가 정보는 본원에서 제공되어 있다.
추가로, 당업자에게 공지되어 있는 임의의 분석법을 이용하여 예를 들면, 바이러스 감염 또는 이와 관련된 병태 또는 증상을 측정함으로써 본원에 기재된 활성 화합물 및 조성물의 예방 및/또는 치료 유용성을 평가할 수 있다.
13.6. 면역 반응을 유도하는 감기 폴리펩티드의 능력을 평가하기 위한 분석법
다수의 인플루엔자 바이러스 균주들과 교차반응할 수 있고 바람직하게는 상기 균주들로부터 보호할 수 있는 면역 반응을 대상체에서 발생시키는 감기 폴리펩티드의 능력은 당업자에게 공지되어 있거나 본원에 기재되어 있는 임의의 방법을 이용하여 평가할 수 있다. 일부 실시양태에서, 다수의 인플루엔자 바이러스 균주들과 교차반응할 수 있고 바람직하게는 상기 균주들로부터 보호할 수 있는 면역 반응을 대상체에서 발생시키는 감기 폴리펩티드의 능력은 대상체(예를 들면, 마우스) 또는 대상체 세트를 본원에 기재된 감기 폴리펩티드로 면역화시키고 추가 대상체(예를 들면, 마우스) 또는 대상체 세트를 대조군(PBS)으로 면역화시킴으로써 평가할 수 있다. 그 후, 상기 대상체 또는 대상체 세트를 다수의 병독성 인플루엔자 바이러스 균주들로 공격할 수 있고, 상기 대상체 또는 대상체 세트에서 인플루엔자 바이러스 질환을 유발하는 병독성 인플루엔자 바이러스 균주의 능력을 측정할 수 있다. 대조군에 의해 면역화된 대상체 또는 대상체 세트가 병독성 인플루엔자 바이러스 균주를 사용한 공격 후 인플루엔자 바이러스 질환을 앓지만, 본원에 기재된 감기 폴리펩티드에 의해 면역화된 대상체 또는 대상체 세트가 인플루엔자 바이러스 질환을 앓지 않는 경우, 당업자는 상기 감기 폴리펩티드가 다수의 인플루엔자 바이러스 균주들과 교차반응할 수 있는 면역 반응을 대상체에서 발생시킬 수 있다는 것을 인식할 것이다. 추가로, 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 감기 폴리펩티드는 이 감기 폴리펩티드에 의해 면역화된 대상체 또는 대상체 세트가 대조군에 의해 면역화된 대상체에 비해 보다 짧은 시간 동안 인플루엔자 바이러스 질환을 앓거나, 보다 짧은 시간 동안 입원하거나, 인플루엔자 바이러스 질환과 관련된 1종 이상의 증상의 감소/부재를 나타내거나, 또는 보다 짧은 시간 동안 발현되는 증상을 갖는 경우 다수의 인플루엔자 바이러스 균주들과 교차반응할 수 있는 면역 반응을 발생시킬 수 있다. 대상체가 인플루엔자 바이러스 질환을 앓는지를 확인하는 방법은 당업계에서 공지되어 있고 본원에 기재되어 있다. 예를 들면, 하기 단락 13.7. 및 6.3을 참조한다. 다수의 인플루엔자 바이러스 균주들 또는 다수의 헤마글루티닌 아형과 단순히 교차반응하는 항혈청을 유도하는 감기 폴리펩티드의 능력은 면역분석법, 예컨대, ELISA에 의해 시험될 수 있다.
13.7. 동물에서 인플루엔자 활성을 분석하는 방법
활성 화합물 및 이의 조성물을 인간에서 사용하기 전에 원하는 치료 또는 예방 활성에 대해 바람직하게는 생체 내에서 분석한다. 예를 들면, 생체내 분석법을 이용하여 활성 화합물 또는 이의 조성물 및/또는 또 다른 요법을 투여하는 것이 바람직한지를 확인할 수 있다. 예를 들면, 인플루엔자 바이러스 질환을 예방하기 위한 활성 화합물 또는 이의 조성물의 용도를 평가하기 위해, 동물이 인플루엔자 바이러스에 감염되기 전에 상기 조성물을 투여할 수 있다. 대안적으로 또는 추가로, 동물이 인플루엔자 바이러스에 감염됨과 동시에 활성 화합물 또는 이의 조성물을 상기 동물에게 투여할 수 있다. 인플루엔자 바이러스 감염 또는 이와 관련된 질환을 치료하기 위한 활성 화합물 또는 이의 조성물의 용도를 평가하기 위해, 동물을 인플루엔자 바이러스에 감염시킨 후 상기 화합물 또는 조성물을 투여할 수 있다. 특정 실시양태에서, 활성 화합물 또는 이의 조성물을 1회 초과의 빈도로 상기 동물에게 투여한다.
래트, 마우스, 닭, 소, 원숭이, 돼지, 염소, 양, 개, 토끼, 기니아 피그 등을 포함하나 이들로 한정되지 않는 동물 모델 시스템에서 활성 화합물 및 이의 조성물을 항-바이러스 활성에 대해 시험할 수 있다. 특정 실시양태에서, 마우스 모델 시스템에서 활성 화합물 및 이의 조성물을 시험한다. 이러한 모델 시스템은 널리 이용되고 있고 당업자에게 잘 공지되어 있다. 특정 실시양태에서, 활성 화합물 및 이의 조성물을 마우스 모델 시스템에서 시험한다. 인플루엔자 바이러스에 대한 동물 모델의 비-제한적 예는 이 단락에서 제공되어 있다.
일반적으로, 동물을 인플루엔자 바이러스로 감염시키고 활성 화합물 또는 이의 조성물, 또는 플라세보로 동시에 또는 후속적으로 처리한다. 대안적으로, 동물을 활성 화합물 또는 이의 조성물, 또는 플라세보로 처리한 후 인플루엔자 바이러스로 감염시킨다. 이들 동물로부터 수득된 샘플(예를 들면, 혈청, 소변, 객담, 정액, 침, 혈장 또는 조직 샘플)을 당업계에서 잘 공지되어 있는 방법, 예를 들면, 변경된 바이러스 역가(예를 들면, 플라크 형성에 의해 측정됨), 바이러스 단백질의 생성(예를 들면, 웨스턴 블롯, ELISA 또는 유세포분류 분석에 의해 측정됨) 또는 바이러스 핵산의 생성(예를 들면, RT-PCR 또는 노던 블롯 분석에 의해 측정됨)을 측정하는 방법을 통해 바이러스 복제에 대해 시험할 수 있다. 조직 샘플 중의 바이러스를 정량하기 위해, 조직 샘플을 인산염 완충 식염수(PBS)에서 균질화하고, 정화된 균질화물의 희석물을 37℃에서 세포(예를 들면, 베로, CEF 또는 MDCK 세포)의 단일층 상에 1시간 동안 흡착시킨다. 다른 분석법에서, 감염 후 조직병리학적 평가, 바람직하게는 바이러스 감염에 대한 표적으로서 공지되어 있는 기관의 평가를 수행한다. 바이러스 특이적 단일클론 항체를 사용하여 바이러스 면역조직화학적 평가를 수행할 수 있다.
또한, 활성 화합물 또는 이의 조성물을 투여받은 감염된 대상체에서 바이러스의 역가, 활성 화합물 또는 이의 조성물을 투여받은 감염된 대상체에서 생존기간, 활성 화합물 또는 이의 조성물을 투여받은 감염된 대상체에서 면역 반응, 활성 화합물 또는 이의 조성물을 투여받은 감염된 대상체에서 증상의 수, 지속기간 및/또는 심각도, 및/또는 활성 화합물 또는 이의 조성물을 투여받은 감염된 대상체에서 1종 이상의 증상이 발병하기 전까지의 시간을 평가하는 생체내 분석법을 이용하여 바이러스의 병독성에 대한 활성 화합물 또는 이의 조성물의 효과를 측정할 수 있다. 당업자에게 공지되어 있는 기법을 이용하여 이러한 효과를 측정할 수 있다. 일부 실시양태에서, 활성 화합물 또는 이의 조성물은 비-처리된 대상체에 비해 인플루엔자 바이러스의 역가를 0.5배, 1배, 2배, 4배, 6배, 8배, 10배, 15배, 20배, 25배, 50배, 75배, 100배, 125배, 150배, 175배, 200배, 300배, 400배, 500배, 750배 또는 1,000배 이상 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 활성 화합물 또는 이의 조성물은 비-처리된 대상체에 비해 인플루엔자 바이러스의 역가를 약 1 로그 이상, 약 2 로그 이상, 약 3 로그 이상, 약 4 로그 이상, 약 5 로그 이상, 약 6 로그 이상, 약 7 로그 이상, 약 8 로그 이상, 약 9 로그 이상, 약 10 로그 이상, 1 로그 내지 3 로그, 1 로그 내지 5 로그, 1 로그 내지 8 로그, 1 로그 내지 9 로그, 2 로그 내지 10 로그, 2 로그 내지 5 로그, 2 로그 내지 7 로그, 2 로그 내지 8 로그, 2 로그 내지 9 로그, 2 로그 내지 10 로그, 3 로그 내지 5 로그, 3 로그 내지 7 로그, 3 로그 내지 8 로그, 3 로그 내지 9 로그, 4 로그 내지 6 로그, 4 로그 내지 8 로그, 4 로그 내지 9 로그, 5 로그 내지 6 로그, 5 로그 내지 7 로그, 5 로그 내지 8 로그, 5 로그 내지 9 로그, 6 로그 내지 7 로그, 6 로그 내지 8 로그, 6 로그 내지 9 로그, 7 로그 내지 8 로그, 7 로그 내지 9 로그 또는 8 로그 내지 9 로그까지 감소시킨다.
인플루엔자 바이러스에 대한 항-바이러스제를 시험하는 데에 사용하기 위해 개발된 인플루엔자 바이러스 동물 모델, 예컨대, 흰담비, 마우스, 기니아 피그, 다람쥐 원숭이, 마카크 및 닭이 기재되어 있다. 예를 들면, 문헌[Sidwell et al., Antiviral Res., 2000, 48:1-16]; 문헌[Lowen A.C. et al. PNAS., 2006, 103: 9988-92]; 문헌[McCauley et al., Antiviral Res., 1995, 27:179-186]; 및 문헌[Rimmelzwann et al., Avian Diseases, 2003, 47:931-933]을 참조한다. 인플루엔자 마우스 모델의 경우, 인플루엔자에 감염된 마우스에게 투여된 활성 화합물의 항-바이러스 활성을 분석하기 위해 사용될 수 있는 파라미터의 비-제한적 예는 폐렴 관련 사망, 혈청 α1-산 당단백질 증가, 동물 체중, 헤마글루티닌에 의해 분석된 폐 바이러스, 플라크 분석법에 의해 분석된 폐 바이러스 및 폐에서의 조직병리학적 변화를 포함한다. 통계학적 분석을 수행하여 유의성을 계산한다(예를 들면, 0.05 이하의 P 값).
다른 분석법에서, 동물 모델 대상체의 감염 후 조직병리학적 평가를 수행한다. 코선반(Nasal turbinate) 및 기관을 상피 변화 및 상피하 염증에 대해 조사할 수 있다. 폐를 세기관지 상피 변화, 및 큰 세기관지, 중간 세기관지 및 작은 또는 말단 세기관지에서의 세기관지주위 염증에 대해 조사할 수 있다. 또한, 폐포 염증 변화에 대해 평가한다. 중간 세기관지는 다음과 같이 0 내지 3+의 크기로 등급화된다: 0(정상: 섬모 첨단 경계 및 기저 가성중층(pseudostratified) 핵을 갖는 중간 원주 상피세포 내지 큰 원주 상피세포에 의해 둘러싸임; 최소한의 염증); 1+(상피층 원주 및 심지어 단지 약간 증가된 증식을 갖는 윤곽; 섬모는 많은 세포 상에서 여전히 보임); 2+(약화부터 현저한 증식까지 상피층의 두드러진 변화; 와해된 조직을 갖는 세포, 및 내강 경계에서 불규칙적인 층 윤곽); 3+(내강 내에서 보이는 괴사 세포를 갖는 현저히 파괴되고 와해된 조직을 갖는 상피층; 일부 세기관지는 약화되었고 나머지는 현저한 반응성 증식 상태에 있음).
기관은 다음과 같이 0 내지 2.5+의 크기로 등급화된다: 0(정상: 섬모 첨단 경계 및 기저 가성중층 핵을 갖는 중간 원주 상피세포 내지 큰 원주 상피세포에 의해 둘러싸임; 세포질은 첨단 경계와 핵 사이에서 명확히 보임; 종종 편평상피세포를 갖는 작은 초점); 1+(상피층의 초점 편평상피 화생(metaplasia)); 2+(상피층의 대부분의 확산 편평상피 화생, 섬모가 초점에서 보일 수 있음); 2.5+(확산 편평상피 화생, 섬모가 거의 보이지 않음).
바이러스 특이적 단일클론 항체(예를 들면, NP-특이적, N-특이적 또는 HN-특이적 단일클론 항체)를 사용하여 바이러스 면역조직화학적 평가를 수행한다. 염색은 다음과 같이 0 내지 3+로 등급화된다: 0(감염된 세포 부재); 0.5+(극소수의 감염된 세포); 1+(개별 세포로 넓게 분리될 때 극소수의 감염된 세포); 1.5+(단일 세포로 넓게 분리될 때 및 작은 집락(cluster)에서 극소수의 감염된 세포); 2+(세기관지를 둘러싸는 상피층의 일부에서 또는 폐포 내의 작은 소엽하 초점에서 인접하는 세포들의 집락에 통상적으로 영향을 미치는 중간 정도의 수의 감염된 세포); 3+(세기관지 내의 상피층의 대부분에 영향을 미치거나 폐포 내의 큰 소엽하 초점에 널리 분포되어 있는 다수의 감염된 세포).
일례에서, 야생형 바이러스 및 가성(mock) 바이러스를 사용하여 바이러스 감염의 동물 모델에서 폐 병소를 유도하고 감염을 유발하는 능력을 비교한다. 폐 병소는 시각적 검사에 의해 건강한 폐엽의 백분율로서 평가될 수 있다. 펜토바르비탈을 정맥내로 투여함으로써 동물들을 감염 후 5일째 날에 안락사시키고 그들의 폐를 완전히 제거한다. 거시적 병소에 의해 영향을 받은 각각의 폐엽의 표면의 백분율을 시각적으로 평가한다. 상기 백분율의 평균을 산출하여 각각의 동물의 7개 폐엽에 대한 평균 값을 수득한다. 다른 분석법에서, 코 면봉을 시험하여 바이러스 존재량 또는 역가를 측정할 수 있다. 코 면봉을 부검 동안 수득하여 감염 후 바이러스 존재량을 측정할 수 있다.
한 실시양태에서, 조직 샘플에서 바이러스를 정량한다. 예를 들면, 조직 샘플을 인산염 완충 식염수(PBS)에서 균질화시키고, 정화된 균질화물의 희석물을 37℃에서 세포(예를 들면, MDCK 세포) 단일층 상에 1시간 동안 흡착시킨다. 이어서, 0.1% 소 혈청 알부민(BSA), 0.01% DEAE-덱스트란, 0.1% NaHCO3 및 1% 한천을 함유하는 최소 필수 배지 용액을 감염된 단일층 상에 첨가한다. 플라크가 가시화될 수 있을 때까지 플레이트를 2일 내지 3일 동안 항온처리한다. PR8에 감염된 샘플로부터 바이러스를 적정하기 위해 조직 배양 감염 투여량(TCID) 분석법을 다음과 같이 수행한다. 96-웰 플레이트 내의 세포(예를 들면, MDCK 세포)의 전면 단일층을 배지 중의 정화된 조직 균질화물의 로그 희석물과 함께 항온처리한다. 접종 후 2일 내지 3일째 날, 헤마글루티닌화 분석법(HA 분석법)을 이용하여 각각의 웰로부터의 0.05 ml 분취액을 바이러스 성장에 대해 평가한다.
13.8. 인간에서 인플루엔자 활성을 분석하는 방법
한 실시양태에서, 활성 화합물 또는 이의 조성물을 감염된 인간 대상체에서 평가한다. 이 실시양태에 따라, 활성 화합물 또는 이의 조성물을 인간 대상체에게 투여하고, 예를 들면, 생물학적 샘플(예를 들면, 혈청 또는 혈장) 중의 바이러스 또는 바이러스 핵산의 수준을 분석함으로써 바이러스 복제 및/또는 생존에 대한 상기 활성 화합물 또는 이의 조성물의 효과를 측정한다. 대조군으로 처리된 대상체 또는 대상체 군에서의 바이러스 복제 및/또는 생존의 수준을 활성 화합물 또는 이의 조성물로 처리된 대상체 또는 대상체 군에서의 바이러스 복제 및/또는 생존의 수준과 비교함으로써 바이러스 복제 및/또는 생존을 변경하는 활성 화합물 또는 이의 조성물을 확인할 수 있다. 대안적으로, 활성 화합물 또는 이의 조성물의 투여 전과 투여 후 대상체 또는 대상체 군에서의 바이러스 복제 및/또는 생존의 수준을 비교함으로써 바이러스 복제 및/또는 생존의 변경을 확인할 수 있다. 당업자에게 공지되어 있는 기법을 이용하여 생물학적 샘플을 수득하고 mRNA 또는 단백질 발현을 분석할 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 인플루엔자 바이러스 감염/질환과 관련된 1종 이상의 증상의 심각도에 대한 활성 화합물 또는 이의 조성물의 효과를 감염된 대상체에서 평가한다. 이 실시양태에 따라, 활성 화합물 또는 이의 조성물, 또는 대조군을 인플루엔자 바이러스 감염을 앓는 인간 대상체에게 투여하고, 상기 바이러스 감염의 1종 이상의 증상에 대한 활성 화합물 또는 이의 조성물의 효과를 측정한다. 대조군으로 처리된 대상체와 활성 화합물 또는 이의 조성물로 처리된 대상체를 비교함으로써 1종 이상의 증상을 감소시키는 활성 화합물 또는 이의 조성물을 확인할 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 활성 화합물 또는 이의 조성물을 건강한 인간 대상체에게 투여하고 백신으로서의 효능에 대해 모니터링한다(예를 들면, 상기 대상체는 인플루엔자 바이러스 감염의 증상의 발병; 입원의 감소; 대상체를 감염시키는 인플루엔자 바이러스의 능력; 및/또는 인플루엔자 바이러스 감염과 관련된 1종 이상의 증상 및/또는 증상 지속기간의 감소/부재에 대해 모니터링됨). 감염 질환에 익숙한 의사에게 공지되어 있는 기법을 이용하여 활성 화합물 또는 이의 조성물이 인플루엔자 바이러스 질환과 관련된 1종 이상의 증상을 감소시키는지를 확인할 수 있다.
14. 키트
본원은 본원에 기재된 약학 조성물의 1개 이상의 성분, 예컨대, 본원에서 제공된 1개 이상의 활성 화합물로 충전된 1개 이상의 용기를 포함하는 약학 팩 또는 키트를 제공한다. 임의적으로, 이러한 용기에는 약품 또는 생물학적 제품의 제조, 사용 또는 판매를 규제하는 정부 관청에 의해 규정된 형태로 경고문이 부착될 수 있고, 상기 경고문은 제조, 사용 또는 판매 관청에 의한 인간 투여에 대한 승인을 반영한다.
본원에 포함되는 키트는 상기 방법들에서 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, 키트는 본원에 기재된 활성 화합물, 바람직하게는 1개 이상의 인플루엔자 감기 폴리펩티드를 1개 이상의 용기 내에 포함한다. 일부 실시양태에서, 키트는 본원에 기재된 백신, 예를 들면, 분할 바이러스 백신, 아단위 백신, 불활성화된 인플루엔자 바이러스 백신 또는 인플루엔자 생바이러스 백신을 포함한다.
실시예
1. 단일클론 항체 12 D1
본 실시예는 항-인플루엔자 바이러스 항체인 단일클론 항체 12D1이 HA2의 긴 알파 나선과 반응한다는 것을 입증한다.
1.1. 재료 및 방법
1.1.1. 절두된 헤마글루티닌 아단위 2( HA2 )
바이러스 RNA로부터 A/HK/1/68 HA의 전체 코딩 영역을 역전사하고 증폭시킨 후 pCAGGs 발현 벡터 내로 서브클로닝하였다. PCR 증폭을 통해 pCAGGs-HK68 HA로부터 HA2 일부의 절두된 형태를 발생시키고 pCAGGs-녹색 형광 단백질(GFP) 발현 플라스미드 내로 추가로 서브클로닝하였다. 이로써 생성된 플라스미드는 절두된 HA2의 일부에 융합된 GFP를 코딩하는 발현 벡터로 이루어진다. 모든 구축물들의 서열을 결정하고 확인하였다.
1.1.2. 웨스턴 블롯
블롯을 이전에 기재된 방법(문헌[Towbin et al., Proc Natl Acad Sci U.S.A, 1979. 76(9):4350-4])으로 생성하였다. SDS 및 0.6 M DTT를 함유하는 적재 완충제 중의 샘플을 100℃에서 5분 동안 끓였다. 면역침전된 결합체, 세포 용해물 또는 정제된 바이러스를 4% 내지 20%의 트리스-HCl SDS-PAGE 겔(바이오-라드 인코포레이티드(Bio-Rad, Inc.))에서 분리하고, 샘플을 프로트란(Protran) 니트로셀룰로스 막(와트만(Whatman)) 상으로 블롯팅하였다. 토끼 항-GFP(산타 크루즈 바이오테크놀로지 인코포레이티드(Santa Cruz Biotechnology, Inc)) 및/또는 mAb 12D1을 사용하여 GFP 및 융합 GFP-HA 절두된 펩티드를 검출하였다. 2차 항체는 항-토끼 IgG HRP(다코(Dako)) 및 항-마우스 Ig(지이 헬쓰케어 인코포레이티드(GE Healtchare, Inc.))이었다.
1.1.3. 면역침전
리포펙타민 2000(인비트로겐 인코포레이티드(Invitrogen, Inc))을 사용하여 GFP-절두된 HA2 융합 단백질을 코딩하는 다양한 pCAGGs로 293T 세포를 형질감염시켰다. 형질감염 후 24시간에서 세포를 방사면역침전 분석법(RIPA) 완충제로 용해시키고, 절두된 융합 펩티드를 4℃에서 단백질 G-아가로스(로슈 인코포레이티드(Roche, Inc))에 결합된 1 ㎍ 내지 5 ㎍의 mAb 12D1로 밤새 면역침전시켰다. 면역침전을 환원 및 변성 조건 하에 웨스턴 블롯팅으로 분석하였다.
1.1.4. ELISA
96-웰 플레이트(넌크 이뮬론(Nunc Immulon) 2)를 4℃에서 PBS 중의 2 ㎍/ml HApep-KLH 접합체(도 2B) 또는 정제된 HA(도 2A 및 2C)로 밤새 코팅하였다. 플레이트를 실온에서 1% BSA/PBS로 30분 동안 차단하고 PBS/0.025% 트윈으로 2회 세척하였다. 항체 또는 항혈청을 1% BSA/PBS로 연속적으로 희석하고 플레이트에 첨가한 후 37℃에서 3시간 동안 항온처리하였다. 플레이트를 3회 세척하고, 1:2,000으로 희석된 항-마우스-AP(서던 바이오텍(Southern Biotech))를 웰에 첨가한 후 37℃에서 3시간 동안 항온처리하였다. 이어서, P-니트로페닐 포스페이트(PNPP)를 웰에 첨가하고 실온에서 20분 내지 30분 동안 현상하였다. 광학 밀도 측정치를 405 nm에서 수득하였다.
1.2. 결과
도 1에 나타낸 바와 같이, mAb 12D1은 HA2 분자의 아미노산 76 내지 130으로 이루어진 영역 내에서 반응하고, 이 영역은 HA2의 "긴 알파 나선"을 포함한다. mAb 12D1은 (바이러스 공격 전에 mAb 12D1의 수동 전달에 의해 입증되는 바와 같이) 생체 내에서 H3 바이러스 감염에 대한 보호 활성을 나타내는 것으로 공지되어 있다.
2. 감기 폴리펩티드의 디자인 및 제조
HA2의 76 내지 130 영역을 사용한 면역화가 H3 아형 또는 다수의 아형의 인플루엔자 바이러스들에 대한 유사한 보호 면역 반응을 유도할 것이라고 가정하였다.
HA2의 76 내지 130 펩티드의 면역원성을 증가시키기 위해, 8개의 아미노산에 이어서 시스테인 잔기(담체 단백질 키홀 림펫 헤모시아닌(KLH)에의 1차 아민 매개된 커플링을 촉진함)로 이루어진 C-말단 스페이서 도메인을 갖는 구축물을 디자인하였다. 혈청 반감기를 증가시키기 위해, 상기 펩티드를 N-말단에서 아세틸화하였다.
KLH 접합체 내의 긴 알파 나선의 구조적 완전성을 보장하기 위해, mAb 12D1과 상기 접합체의 결합을 직접 결합 ELISA로 시험하였고 12D1 결합 영역이 온전하다는 것을 발견하였다(도 1B).
2.1. mAb 12 D1 의 HA2 결합 영역
12D1 단일클론 항체(mAb)와 유사한 항체를 유도할 H3 헤마글루티닌의 영역의 정체를 조사하였다. 항-H3 mAb의 존재 하에서의 A/HK/1968 바이러스의 16회 계대배양은 결합 에피토프의 확인에서 도움이 될 만한 이탈 변이체를 생성하지 못하였다. 플라크 분석법에서 A/HK/1968 바이러스를 50 ㎍/ml mAb 12D1과 함께 항온처리한 후 존재하는 6개의 플라크의 헤마글루티닌의 서열을 결정하였고, 야생형 헤마글루티닌으로부터의 변화가 없음을 발견하였다. 웨스턴 블롯에 의한 분숙시 변성된 헤마글루티닌 단량체와의 반응성에 의해 입증되는 바와 같이, mAb 12D1은 생채 내에서 인플루엔자 질환에 대한 보호를 매개하고 바이러스 헤마글루티닌의 연속적 에피토프와 반응하기 때문에(삼량체 구조는 요구되지 않음), 12D1 결합 에피토프에 관심을 집중하였다. GFP에 융합된 다양한 길이의 헤마글루티닌 분절들로 이루어진 절두된 헤마글루티닌 구축물을 발생시켰다. GFP 발현을 이용하여 형질감염된 293T 세포에서 상기 구축물의 발현을 평가하였다. 절두된 헤마글루티닌 구축물의 분석에 의해, 12D1 파라토프(paratope)가 아미노산 30 내지 106의 영역에서 HA2 아단위과의 우세한 상호작용을 만든다는 것이 입증되었다. 106 내지 184 절두체와의 결합 상실과 함께 76 내지 184 절두체 및 91 내지 184 절두체에서의 감소된 12D1 결합 및 감소되지 않은 GFP 발현은 12D1 결합이 HA2의 76 내지 106 영역 내의 아미노산과의 접촉에 의해 좌우된다는 것을 암시한다(도 1). 12D1의 최소 결합 부위를 더 좁히기 위해 추가 절두된 HA를 디자인하고 구축하였다. 이들 중에서, 아미노산 76부터 아미노산 130까지 걸쳐 있는 영역(HA2의 긴 알파 나선을 나타냄)은 웨스턴 블롯에서 12D1에 의해 검출되었을 뿐만 아니라 면역침전에 의해서도 양성으로 확인되었다.
이들 30개 아미노산은 HA2의 긴 알파 나선의 막 원위 절반 이내에 존재한다. 12D1 파라토프는 웨스턴 블롯에 의한 분숙시 결합을 위해 요구되지 않는, (HA1 또는 HA2에서) 이 영역의 외부에 존재하는 아미노산과 추가 접촉을 가질 수 있다.
3. 감기 폴리펩티드에 의해 유도된 혈청 항체는 다수의 HA 아형과 반응한다 .
3.1. 재료 및 방법
웨스턴 블롯 및 ELISA를 상기 단락 1.1.에 기재된 바와 같이 수행하였다.
3.2. 결과
도 3에 나타낸 바와 같이, 감기 폴리펩티드 (76-130)-KLH("HApep-KLH")는 강력한 면역원으로서 작용하고 HApep-KLH에 의해 유도된 혈청 항체는 다수의 헤마글루티닌 아형과 반응한다.
면역원으로서의 HApep-KLH 구축물의 효능을 평가하기 위해, 1차 면역화 및 2차 면역화 후 10일째 날에 마우스들로부터 혈청을 수득하였다. 이들 혈청을 다양한 아형의 재조합적으로 발현된 정제된 헤마글루티닌들과의 반응성에 대해 시험하였다. 첫째, HApep-KLH 백신 구축물이 정제된 헤마글루티닌 단백질과 반응하는 혈청 항체를 유도한다는 것이 확인되었다. 둘째, 2차 면역화 후 항-HA 역가의 현저한 증가가 명확하였고, 이것은 상기 구축물이 마우스에서 강력한 체액성 면역 반응을 유도하도록 작용하였다는 것을 암시한다. 마지막으로, HApep-KLH 항혈청의 이종아형 반응성이 흥미로웠다. 면역화된 마우스들로부터의 혈청은 H3, H1, H2, H9 및 H7 아형의 헤마글루티닌들과의 결합 활성을 나타내었다.
4. 감기 폴리펩티드를 사용한 면역화는 치명적인 바이러스 공격으로부터 마우스를 보호한다 .
4.1. 재료 및 방법
완전 프로인트 보조제(시그마) 중의 25 ㎍의 HApep-KLH 또는 KLH 단독을 피하 투여하여 6주 내지 8주령의 BALB/C 마우스(잭슨 래보래토리스(Jackson Laboratories))를 면역화시켰다. 1차 면역화 후 3주째 날, 마우스를 불완전 프로인트 보조제 중의 25 ㎍의 HApep-KLH 또는 KLH 단독으로 부스팅하였다. 부스팅 후 2주 내지 3주째 날, 마우스를 바이러스로 공격하였다. 바이러스 감염 전, 케타민(체중 1 kg 당 75 mg)/자일라진(체중 1 kg 당 15 mg) 혼합물을 복강내로 투여하여 마우스를 마취시켰다. 총 50 ㎕의 PBS 중의 바이러스를 코내로 투여하였고, 공격 투여량은 40,000 pfu X31 또는 500 pfu PR8로 구성되었다. 체중을 매일 모니터링하였다.
4.2. 결과
도 4에 나타낸 바와 같이, 감기 폴리펩티드 (76-130)-KLH("HApep-KLH")를 사용한 면역화는 치명적인 공격으로부터 마우스를 보호한다.
프라임-부스트 면역화 스캐쥴로 피하 투여하여 마우스를 25 ㎍ HApep-KLH로 면역화시켰다. 면역화를 3주 간격으로 수행하였고, 2차 면역화 후 2주 내지 3주째 날 마우스를 바이러스로 공격하였다. 바이러스 공격 후, 질환 심각도의 판독치로서 마우스 체중을 매일 측정하였다. HApep-KLH를 사용한 면역화는 홍콩/1/1968(H3)로부터의 HA 및 NA를 발현하는 마우스-적응된 바이러스인 X31을 사용한 치명적인 공격으로부터 100%의 마우스를 보호한다는 것을 발견하였다(도 3B). HApep-KLH 구축물로 면역화된 마우스 또는 PBS를 제공받은 마우스로부터의 평균 체중은 매일 유의하게 상이하였다(도 3A).
유사한 공격 실험에서, 마우스는 치사 투여량의 마우스-적응된 PR/8 바이러스(H1)를 제공받았다. 공격 후 7일째 날까지, PBS를 제공받은 모든 마우스들이 질환으로 쓰러진 반면, HApep-KLH 백신을 제공받은 마우스의 80%가 보호되었다(도 4A). H1 아형 헤마글루티닌에 대한 혈청 항체 역가는 바이러스 공격 후 며칠 동안의 체중 변화와 상호관련되어 있다는 것을 발견하였다(도 4B).
5. 감기 폴리펩티드를 사용한 백신접종은 상이한 바이러스 아형에 대한 보호를 제공한다
본 실시예는 감기 폴리펩티드가 구조적으로 상이한 아형 H3N2, H1N1 및 H5N1의 인플루엔자 바이러스들로부터의 보호를 마우스에게 제공할 수 있다는 것을 입증한다.
5.1. 재료 및 방법
5.1.1. 바이러스 및 정제된 헤마글루티닌
사용된 바이러스는 다음과 같았다: X31 바이러스(A/홍콩/1/1968 헤마글루티닌 및 뉴라미니다제, 및 PR8로부터 유래된 남은 6개의 분절), A/푸에르토 리코/8/34(PR8) 바이러스, A/USSR/90/1977 바이러스, A/조지아/81 바이러스, HAlo 바이러스(폴리-염기성 절단 부위를 제거하도록 변형된 헤마글루티닌을 갖는 A/베트남/4/2005 바이러스). 사용된 정제된 헤마글루티닌은 A/홍콩/1/1968; A/브리스반/10/2007; A/베트남/1203/2004(H5); A/싱가폴/1/57(H2); A/쇠오리/HK/312/97(H6); A/네덜란드/219/2003(H7); A/HK/1073/99(H9); 및 A/캘리포니아/04/2009(H1)로부터 유래되었다.
5.1.2. 웨스턴 블롯
블롯을 이전에 기재된 방법(문헌[Towbin et al., (1979) Proc Natl Acad Sci USA 76(9):4350-4354] 참조)으로 생성하였다. SDS 및 0.6 M DTT를 함유하는 적재 완충제 중의 샘플을 100℃에서 5분 동안 끓였다. 면역침전된 결합체, 세포 용해물 또는 정제된 바이러스를 4% 내지 20%의 트리스-HCl SDS-PAGE 겔(바이오-라드 인코포레이티드)에서 분리하고, 샘플을 프로트란 니트로셀룰로스 막(와트만) 상으로 블롯팅하였다. 토끼 항-GFP(산타 크루즈 바이오테크놀로지 인코포레이티드) 및/또는 mAb 12D1을 사용하여 GFP 및 융합 GFP-HA 절두된 펩티드를 검출하였다. 2차 항체는 항-토끼 IgG HRP(다코) 및 항-마우스 Ig-HRP(지이 헬쓰케어 인코포레이티드)이었다.
5.1.3. 면역침전
A/HK/1/68 HA2의 76 내지 130(LAH) 영역을 바이러스 RNA의 PCR 증폭으로 발생시키고 pCAGG-녹색 형광 단백질(GFP) 플라스미드 내로 서브클로닝하였다(문헌[Basler et al., (2001) Proc Natl Acad Sci USA 98(5):2746-2751] 참조). GFP는 HA2 절두체의 N-말단에 존재하였다. 리포펙타민 2000(인비트로겐 인코포레이티드)을 사용하여 293T 세포를 GFP-LAH 구축물로 형질감염시켰다. 형질감염 후 24시간에서 세포를 방사면역침전 분석법(RIPA) 완충제로 용해시키고, GFP-LAH 융합 단백질을 4℃에서 단백질 G-아가로스(로슈 인코포레이티드)에 결합된 1 ㎍ 내지 5 ㎍의 mAb 12D1로 밤새 면역침전시켰다.
5.1.4. 긴 알파 나선- KLH 백신
사용된 A/HK/1/68 HA2 LAH 폴리펩티드(아미노산 76 내지 130) 서열은 다음과 같았다: Ac-RIQDLEKYVEDTKIDLWSYNAELLVALENQHTIDLTDSEMNKLFEKTRRQLRENADYKDDDDKC. 구축물은 N-말단에서 아세틸화되었고, H3 A/홍콩/1/1968 HA2 분자의 아미노산 76 내지 130에 이어서 FLAG-태그(DYKDDDDK)에 이어서 시스테인으로 구성되었다. 티올과 1차 아민의 커플링을 이용하여 상기 폴리펩티드를 담체 단백질 키홀 림펫 헤모시아닌(KLH)에 커플링시켰다. 이 접합체는 씨에이치아이 사이언티픽 인코포레이티드(CHI Scientific, Inc.; 미국 매사추세츠주 메이나르드 소재)에 의해 제조되었다.
5.1.5. ELISA
96-웰 플레이트(넌크 이뮬론 2)를 4℃에서 PBS 중의 2 ㎍/ml LAH-KLH 접합체(도 7B), 정제된 헤마글루티닌(도 7A 및 7C), 또는 인플루엔자 바이러스 백신(비이아이 리소스(BEI Resources)로부터 수득된 플루비론(FLUVIRON) (R)) 정제된 표면 항원(노바티스 백신)으로 밤새 코팅하였다. 플레이트를 실온에서 1% BSA/PBS로 30분 동안 차단하고 PBS/0.025% 트윈으로 2회 세척하였다. 2008-2009 3가 불활성화된 인플루엔자 바이러스 백신(TIV)으로 백신접종된 개체들로부터의 항체, 항혈청 또는 혈청을 1% BSA/PBS로 연속적으로 희석하고 플레이트에 첨가한 후 37℃에서 3시간 동안 항온처리하였다. 항-FLAG 항체(시그마)를 LAH-KLH 접합체로 코팅된 웰에서 양성 대조군으로서 사용하였다. 플레이트를 3회 세척하고, 1:2,000으로 희석된 항-마우스-알칼리성 포스파타제(AP)(서던 바이오텍)를 웰에 첨가한 후 37℃에서 3시간 동안 항온처리하였다. 인간 혈청의 경우, 1:500으로 희석된 항-인간 IgG(Fc 특이적)-AP(시그마) 항체를 사용하였다. 1:500으로 희석된 항-토끼 Ig-AP(서던 바이오텍)를 항-FLAG 항체에 대한 2차 항체로서 사용하였다. 이어서, P-니트로페닐 포스페이트(PNPP)를 웰에 첨가하고 실온에서 20분 내지 30분 동안 현상하였다. 광학 밀도 측정치를 405 nm에서 수득하였다.
5.1.6. 마우스 면역화 및 공격 실험
완전 프로인트 보조제(시그마) 중의 25 ㎍의 LAH-KLH, HA2, KLH 단독 또는 PBS를 피하 투여하여 6주 내지 8주령의 BALB/C 마우스(잭슨 레이보레이토리스)를 면역화시켰다. 1차 면역화 후 3주째 날, 마우스를 불완전 프로인트 보조제 중의 25 ㎍의 동일한 면역원 또는 PBS로 부스팅하였다. 부스팅 후 2주 내지 3주째 날, 마우스를 바이러스로 공격하였다. 바이러스 감염 전, 케타민(체중 1 kg 당 75 mg)/자일라진(체중 1 kg 당 15 mg) 혼합물을 복강내로 투여하여 마우스를 마취시켰다. 총 50 ㎕ PBS 중의 바이러스를 코내로 투여하였고, 공격 투여량은 4 x 105 pfu X31, 또는 500 pfu PR8 또는 HAlo 바이러스로 구성되었다. 체중을 매일 모니터링하였다. 수동 전달 실험을 위해, KLH 또는 LAH-KLH를 사용한 마지막 면역화 후 2주 동안, 또는 PR8 바이러스 또는 A/홍콩/1/1968 바이러스를 사용한 감염 후 3주 동안 마우스를 사육하였다. 마우스로부터의 혈청을 백신접종 항원 또는 바이러스 감염에 따라 풀링하고, 50 pfu PR8 바이러스 또는 3700 pfu 조지아/81 바이러스를 사용한 감염 2시간 전에 200 ㎕의 혈청을 복강내로 투여하여 각각의 수용자 마우스에게 전달하였다. 감염 후 2일째 날, 폐 역가를 플라크 분석으로 평가하였다.
5.2. 결과
마우스 단일클론 항체 12D1은 HA2 분자의 연속적 일부에 결합하고 H3 아형의 인플루엔자 바이러스들에 대한 넓은 중화 활성을 갖는다. HA2 분자의 짧은 영역을 발현하도록 디자인된 구축물을 발생시킴으로써, mAb 12D1이 상기 단백질의 고도로 보존된 "긴 알파 나선(LAH)" 영역 내의 아미노산에 결합한다는 것을 확인하였다. mAb 12D1과 상호작용하는 헤마글루티닌의 일부는 다양한 길이의 다수의 HA2 절두체들을 사용하여 수득한 결합 데이터를 해석함으로써 처음으로 확인되었다. 누적 절두체 데이터에 근거하여, mAb 12D1이 HA2의 76 내지 106 영역 내에 결합한다는 것을 확인하였다(문헌[Wang et al., (2010) PLoS Pathog 6(2):e1000796] 참조). 그러나, 후속 연구는 H3 바이러스 A/홍콩/1/1968의 전체 LAH(아미노산 76 내지 130)를 대표하는 펩티드가 mAb 12D1에 의한 최대 결합을 위해 필수적인 구조적 요소를 제공한다는 것을 밝혔다(도 7A). 이 영역, 즉 HA2의 아미노산 76 내지 130은 293T 세포에서 발현되었고 mAb 12D1에 의해 침전되었다(도 7B). 따라서, HA2의 76 내지 130 영역을 사용한 면역화가 mAb 12D1과 기능적으로 유사한 항체 레파토리를 유도하고 H3 아형 또는 다수의 아형의 인플루엔자 바이러스들에 대한 보호를 제공하는지를 확인하였다.
LAH 및 8개 아미노산의 C-말단 스페이서 도메인(FLAG-태그)에 이어서 시스테인 잔기(담체 단백질 키홀 림펫 헤모시아닌(KLH)과의 티올 대 1차 아민 매개된 커플링을 촉진함)로 이루어진 접합체 백신을 디자인함으로써 76 내지 130의 폴리펩티드(LAH)의 항원성을 향상시켰다. 혈청 반감기를 연장하기 위해, LAH 펩티드를 N-말단에서 아세틸화하였다(문헌[Werle and Bernkop-Schnurch, (2006) Amino Acids 30(4):351-367] 참조). 상기 접합체 내의 mAb 12D1 결합 영역의 구조적 완전성을 직접 결합 ELISA로 확인하였다(도 7C).
상기 구축물을 생체 내에서 시험하기 위해, 면역화 사이에 3주 간격을 두고 마우스를 프라임-부스트 스케쥴로 LAH-KLH 접합체를 사용하여 면역화시켰다. 1차 면역화 및 2차 면역화 후 10일째 날, 마우스로부터 혈청을 수득하였다. 관련 특이성을 갖는 항체들의 생성을 유도하는 상기 접합체의 능력을 평가하기 위해, 항혈청을 상이한 아형의 정제된 헤마글루티닌 단백질과의 반응성에 대해 시험하였다. 첫째, LAH 항혈청이 헤마글루티닌 단백질과 반응한다는 것이 ELISA 및 웨스턴 블롯 둘다에 의해 확인되었다(도 8A 내지 8C). 둘째, 2차 면역화 후 항-HA 역가의 현저한 증가는 상기 구축물이 마우스에서 생산적 면역원으로서 작용한다는 것을 입증하였다(도 8A 및 8B). 마지막으로, 면역화된 마우스로부터 수득된 혈청은 상당한 이종아형 결합 활성을 가졌다. 1968년에 대유행한 H3 바이러스 A/홍콩/1/1968 및 2009년에 대유행한 H1 바이러스 A/캘리포니아/04/09로부터의 헤마글루티닌들뿐만 아니라 H2, H5 및 H7 아형의 헤마글루티닌들을 사용하여 ELISA를 수행하였을 때 항-LAH 혈청은 활성을 나타내었다(도 8D). 이들 아형로부터의 헤마글루티닌들의 76 내지 130 영역의 정렬은 아미노산 서열 및 아미노산 유형에서 높은 보존도를 나타낸다(도 8E). 또한, 혈청학적 분석은 LAH-KLH 백신접종에서 발생된 항체가 바이러스 헤마글루티닌에 대해 특이적인 혈청 IgM 및 IgG 아형을 부스팅한다는 것을 입증하였다. IgG 아형에서의 상당한 부스팅은 T 세포 의존적 항체 생성을 표시하고 친화성 성숙 항-헤마글루티닌 반응을 암시한다(도 8F)(문헌[Jumper et al., (1994) J Immunol 152(2):438-445] 참조).
2차 면역화 후 2주 내지 3주째 날, 4 x 105 pfu의 X31(1968년에 대유행한 H3 인플루엔자 바이러스의 헤마글루티닌 및 뉴라미니다제를 발현하는 마우스-적응된 바이러스)을 코내로 투여하여 마우스를 공격하였다. LAH-KLH 구축물로 면역화된 마우스들은 보조제와 함께 PBS를 투여받은 마우스들보다 모든 시점에서 상당히 더 적은 체중 손실을 보였다. 추가로, 모든 면역화된 마우스들은 공격으로부터 생존하였지만, 대조군 마우스들은 4일째 날까지 감염으로 쓰러졌다(도 9A 및 9B).
다음으로, 인간 인플루엔자 질환을 유발하지만 H3 아형 바이러스와 상이한 계통발생적 부류에 속하는 다른 바이러스 아형을 사용하여 면역화된 마우스를 공격하였다(문헌[Fields BN, Knipe DM & Howley PM (2007) Fields' virology (Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia) 5th Ed pp 2 v. (xix, 3091, I-3086 p.)] 참조). 마우스를 500 pfu(10-15 mLD50)의 PR8(마우스-적응된 H1 바이러스) 또는 500 pfu의 H5 고도 병원성 조류 인플루엔자 바이러스(바이러스 헤마글루티닌 내의 폴리-염기성 절단 부위를 제거하도록 변형됨)로 감염시켰다(문헌[Steel et al., (2009) J Virol 83(4):1742-1753] 참조). LAH-KLH 접합체를 사용한 백신접종은 감염 동안 H1 및 H5 인플루엔자 질환에 의해 사실상 매일 매우 상당한 정도까지 유발된 체중 손실로부터 보호하였다. PR8에 감염된 백신접종된 마우스는 체중 손실 속도에서 상당한 지연을 보인 반면, H5 조류 바이러스에 감염된 백신접종된 마우스의 60%는 감염 후 10일까지 치명적인 공격으로부터 생존하였다(도 9C 내지 9F).
추후 PR8에 감염된 마우스로부터 수득된 공격 전 혈청의 분석은 헤마글루티닌 특이적 항체 역가와 감염 후 며칠 동안의 체중 증가 사이에 양의 상관관계를 보여주었다(도 10A). (항-H1 혈청 항체에 의해) 생산적으로 면역화된 동물들은 감염 후 1일 내지 3일 동안 체중이 증가된 반면, H1 특이적 항체를 갖지 않은 동물들은 이 중요한 기간 동안 체중을 손실하였다. 이들 데이터는 LAH-KLH 백신접종에 의해 유도된 항체가 질환으로부터 마우스를 보호하는 데 있어서 필수적인 성분이라는 것을 암시하였다.
보호에 있어서 항-LAH 항체의 역할을 더 조사하기 위해, 생체내 수동 전달 실험을 수행하였다. 감염 2시간 전, KLH 단독으로 백신접종되었거나 LAH-KLH 백신으로 백신접종된, H1 또는 H3 바이러스에 감염된 공여자 마우스로부터의 혈청 200 ㎕를 복강내 투여를 통해 수용자 마우스에게 제공하였다. 그 다음, 수용자 마우스를 인간 계절성 H3 바이러스인 A/조지아/81 또는 H1 바이러스인 PR8로 감염시켰다. 감염 후 2일째 날, 폐 역가를 평가하였다. LAH-KLH 항혈청의 전달은 인간 계절성 H3 바이러스(p=0.0009) 또는 H1 바이러스(p=0.0008)에 감염된 동물들에서 폐 역가를 상당히 감소시킨다는 것을 발견하였다(도 10B 및 10C). 이 전달 실험은 LAH 구축물이 백신접종된 마우스에서 중화 항체를 유도한다는 것을 암시한다.
다음으로, 인간에서 계절성 인플루엔자 백신접종이 헤마글루티닌의 LAH 영역에 대해 특이적인 항체를 유도하는지를 조사하였다. 이 가능성을 조사하기 위해, 2008-2009 3가 불활성화된 인플루엔자 바이러스 백신(TIV)을 사용한 면역화 전 및 후에 수득된 인간 혈청에서의 결합 활성을 평가하였다. 이 계절성 백신 조성물은 A/브리스반/59/2007(H1N1) 유사 바이러스, A/브리스반/10/2007(H3N2) 유사 바이러스 및 B/플로리다/4/2006 유사 바이러스를 함유하였다(문헌[Administration UFaD (2010) Influenza Virus Vaccine for the 2008-2009 Season] 참조). 인간 환자로부터의 혈청 샘플을 백신 반응의 척도로서 사용되는 계절성 TIV 조성물에 대한 IgG 항체 역가의 백신접종 후 부스트에 대해 평가하였다. LAH 펩티드에 대해 특이적인 최소한의 혈청 항체가 심지어 계절성 백신접종에 대한 최대 반응을 나타내는 대상체에서도 검출되었다(도 10D 및 10E).
도 8D에 나타낸 바와 같이, LAH-KLH 항혈청에서 관찰된 반응성의 범위는 헤마글루티닌 줄기(stalk) 백신 구축물의 연구에서 이미 보고된 것보다 더 크다(문헌[Bommakanti et al., (2010) Proc Natl Acad Sci U.S.A.], 및 문헌[Steel, (2010) mBio 1(1):1-9] 참조). 이 넓은 반응을 유도하는 데 있어서 접합체 결합체의 디자인의 중요성을 조사하기 위해, LAH-KLH 구축물을 사용한 백신접종에 의해 유도된 혈청 활성을 온전한 HA2 분자를 사용한 백신접종에 의해 유도된 혈청 활성과 비교하였다. A/홍콩/1/1968 HA2 단백질의 엑토도메인(ectodomain)을 이미 보고된 바와 같이 재조합적으로 발현하였다(문헌[Chen et al., (1999) Proc Natl Acad Sci USA 96(16):8967-8972] 참조). 마우스를 LAH-KLH로 백신접종하는 데에 이용된 방법과 동일한 방법으로 마우스를 순수한 비-커플링된 HA2 단백질로 백신접종하였다. LAH-KLH 또는 HA2 단백질을 사용한 2차 백신접종 후 10일째 날에 20 마리의 마우스로부터 풀링된 항혈청을 재조합적으로 발현된 헤마글루티닌의 패널(panel)에 대한 결합 활성에 대해 평가하였다. LAH-KLH 항혈청은 시험된 모든 헤마글루티닌 아형과 반응하였지만, HA2 항혈청은 2군 헤마글루티닌 단백질들과만 반응하는 항체를 함유하였다(도 11A 내지 11H 및 표 1). LAH 구조가 HA2 단백질 내에 존재하기 때문에, LAH-KLH 항혈청에서 관찰된 넓은 반응성은 LAH가 접합체 결합체 내의 항원으로서 제시되는 방식의 결과임이 틀림없다. HA2의 면역우성 영역의 제거는 LAH-KLH 백신이 헤마글루티닌 아형 사이의 넓은 반응성을 매개하는 보다 집중된 항-LAH 면역 반응을 유도하게 할 수 있다. 대안적으로, 넓은 반응성 항체의 유도는 LAH를 C-말단에서 담체 단백질에 고착시켜 온전한 HA2 단백질에서 항원성을 나타내지 않는 LAH의 영역이 면역원성을 나타내게 함으로써 달성된 결과일 수 있다.
5.3. 결론
KLH에 연결된 이 LAH 코어 폴리펩티드는 현재 인간에서 계절성 및 대유행성 질환을 유발하는, 항원성 면에서 상이한 인플루엔자 바이러스 아형에 대한 보호 활성을 갖는다. 추가로, KLH에 연결된 LAH 코어 폴리펩티드는 인간에서 대유행성 인플루엔자 질환을 유발할 잠재력을 갖는 아형인 조류 H5N1 바이러스에 대한 보호 활성을 갖는다. 따라서, KLH에 연결된 LAH 코어 폴리펩티드는 저렴하면서도 제조하기에 복잡하지 않은 펩티드 기재 인플루엔자 바이러스 백신을 대표한다.
ELISA 데이터의 요약
항-LAH-KLH 항-HA2


I군
 HK(홍콩)/68 H3 + +
Bris(브리스반)/07 H3 + +
Neth(네덜란드)/03 H7 + +
Cal(캘리포니아)/09 H1 + -


II군		 HK/99 H9 + -
Sing(싱가폴)/57 H2 + -
Viet(베트남)/04 H5 + -
HK/97 H6 + -
본 명세서에서 인용된 모든 문헌, 특허 및 특허출원은 각각의 개별 문헌 또는 특허출원이 참고로 도입되는 것으로 구체적으로 및 개별적으로 기재되는 것처럼 본원에 참고로 도입된다. 상기 본 발명이 명확한 이해를 목적으로 설명 및 예시를 통해 다소 상세하게 기재되어 있지만, 본 발명의 교시내용에 비추어 볼 때 첨부된 특허청구범위의 기술적 사상 또는 범위를 벗어나지 않으면서 본 발명에 대한 일부 변화 및 변형이 만들어질 수 있다는 것이 당업자에게 용이하게 자명할 것이다.
<110> Mount Sinai School of Medicine <120> VACCINES FOR USE IN THE PROPHYLAXIS AND TREATMENT OF INFLUENZA VIRUS DISEASE <130> 6923-183-228 <140> PCT/US2011/025467 <141> 2011-02-18 <150> US 61/305,898 <151> 2010-02-18 <150> US 12/788,103 <151> 2010-05-26 <150> US 61/354,160 <151> 2010-06-11 <150> US 61/385,083 <151> 2010-09-21 <160> 60 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 64 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> The long alpha helix domain of the hemagglutinin polypeptide of Influenza strain A/Hong Kong/1/1968 (H3) + flag tag <400> 1 Arg Ile Gln Asp Leu Glu Lys Tyr Val Glu Asp Thr Lys Ile Asp Leu 1 5 10 15 Trp Ser Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Ala Leu Glu Asn Gln His Thr 20 25 30 Ile Asp Leu Thr Asp Ser Glu Met Asn Lys Leu Phe Glu Lys Thr Arg 35 40 45 Arg Gln Leu Arg Glu Asn Ala Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys Cys 50 55 60 <210> 2 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> The long alpha helix domain of the hemagglutinin polypeptide of Influenza strain A/Hong Kong/1/1968 (H3) generic core peptide <400> 2 Arg Ile Gln Asp Leu Glu Lys Tyr Val Glu Asp Thr Lys Ile Asp Leu 1 5 10 15 Trp Ser Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Ala Leu Glu Asn Gln His Thr 20 25 30 Ile Asp Leu Thr Asp Ser Glu Met Asn Lys Leu Phe Glu Lys Thr Arg 35 40 45 Arg Gln Leu Arg Glu Asn Ala 50 55 <210> 3 <211> 55 <212> PRT <213> Unknown <220> <223> generic core polypeptide <220> <221> VARIANT <222> 1,3,4,7,18,20,30,39,41,42,53 <223> Xaa is a hydrophilic amino acid <220> <221> VARIANT <222> 2,5,16,26,27,33,35,40,44,55 <223> Xaa is a hydrophobic amino acid <220> <221> VARIANT <222> 15,45 <223> Xaa is a hydrophilic, acidic amino acid <220> <221> VARIANT <222> 31,46,48,52 <223> Xaa is a hydrophilic, basic amino acid <220> <221> VARIANT <222> 6 <223> Xaa is N, E or I <220> <221> VARIANT <222> 8 <223> Xaa is K, Y or W <220> <221> VARIANT <222> (9)...(9) <223> Xaa is M, V or T <220> <221> VARIANT <222> (10)...(10) <223> Xaa is a hydrophilic residue <220> <221> VARIANT <222> (12)...(12) <223> Xaa is A, G, T or S <220> <221> VARIANT <222> (13)...(13) <223> Xaa is F, K, or M <220> <221> VARIANT <222> (14)...(14) <223> Xaa is L, I or T <220> <221> VARIANT <222> (36)...(36) <223> Xaa is H, T or A <220> <221> VARIANT <222> (47)...(47) <223> Xaa is T or V <220> <221> VARIANT <222> (49)...(49) <223> Xaa is K, L, M, S or R <400> 3 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Asp Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 Trp Xaa Tyr Xaa Ala Glu Leu Leu Val Xaa Xaa Glu Asn Xaa Xaa Thr 20 25 30 Xaa Asp Xaa Xaa Asp Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 35 40 45 Xaa Gln Leu Xaa Xaa Asn Xaa 50 55 <210> 4 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Consensus core polypeptide <220> <221> VARIANT <222> 9 <223> Xaa is M, V, T <220> <221> VARIANT <222> 35 <223> Xaa is a hydrophobic amino acid <220> <221> VARIANT <222> 49 <223> Xaa is L, M, S, K, R <220> <221> VARIANT <222> 53 <223> Xaa is a hydrophilic amino acid <400> 4 Arg Ile Glu Asn Leu Asn Lys Lys Xaa Glu Asp Gly Phe Leu Asp Val 1 5 10 15 Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Met Glu Asn Glu Arg Thr 20 25 30 Leu Asp Xaa His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Glu Lys Val Arg 35 40 45 Xaa Gln Leu Arg Xaa Asn Ala 50 55 <210> 5 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Group 1 core polypeptide <220> <221> VARIANT <222> 2,9,16,27,55 <223> Xaa is a hydrophobic amino acid <220> <221> VARIANT <222> 10,53 <223> Xaa is a hydrophilic amino acid <220> <221> VARIANT <222> 35 <223> Xaa is a hydrophobic acidic amino acid <220> <221> VARIANT <222> 45 <223> Xaa is a hydrophilic, acidic amino acid <220> <221> VARIANT <222> 49 <223> Xaa is L, M, or S <220> <221> VARIANT <222> (52)...(52) <223> Xaa is a hydrophilic, basic amino acid <400> 5 Arg Xaa Glu Asn Leu Asn Lys Lys Xaa Xaa Asp Gly Phe Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Xaa Glu Asn Glu Arg Thr 20 25 30 Leu Asp Xaa His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Xaa Lys Val Arg 35 40 45 Xaa Gln Leu Xaa Xaa Asn Xaa 50 55 <210> 6 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Group 2 core polypeptide <220> <221> VARIANT <222> 1,3,4,7,10,12 <223> Xaa is a hydrophilic amino acid <220> <221> VARIANT <222> 5,8,16,27,44 <223> Xaa is a hydrophobic amino acid <220> <221> VARIANT <222> 46,48 <223> Xaa is a hydrophilic, basic amino acid <220> <221> VARIANT <222> 6 <223> Xaa is E or I <220> <221> VARIANT <222> 9 <223> Xaa is V or T <220> <221> VARIANT <222> (13)...(13) <223> Xaa is K or M <220> <221> VARIANT <222> (14)...(14) <223> Xaa is I or T <220> <221> VARIANT <222> (15)...(15) <223> Xaa is a hydrophilic, acidic amino acid <220> <221> VARIANT <222> (36)...(36) <223> Xaa is T or A <220> <221> VARIANT <222> (47)...(47) <223> Xaa is T or V <400> 6 Xaa Ile Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Asp Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 Trp Ser Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Ala Xaa Glu Asn Gln His Thr 20 25 30 Ile Asp Leu Xaa Asp Ser Glu Met Asn Lys Leu Xaa Glu Xaa Xaa Xaa 35 40 45 Arg Gln Leu Arg Glu Asn Ala 50 55 <210> 7 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> H1 core polypeptides <220> <221> VARIANT <222> 2,14,35 <223> Xaa is a hydrophobic amino acid <220> <221> VARIANT <222> 41,48 <223> Xaa is a hydrophilic, basic amino acid <400> 7 Arg Xaa Glu Asn Leu Asn Lys Lys Val Asp Asp Gly Phe Xaa Asp Ile 1 5 10 15 Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn Glu Arg Thr 20 25 30 Leu Asp Xaa His Asp Ser Asn Val Xaa Asn Leu Tyr Glu Lys Val Xaa 35 40 45 Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala 50 55 <210> 8 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> The long alpha helix domain of the hemagglutinin polypeptide of Influenza strain A/New Caledonia/20/1999 <400> 8 Arg Met Glu Asn Leu Asn Lys Lys Val Asp Asp Gly Phe Leu Asp Ile 1 5 10 15 Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn Glu Arg Thr 20 25 30 Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Glu Lys Val Lys 35 40 45 Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala 50 55 <210> 9 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> The long alpha helix domain of the hemagglutinin polypeptide of Influenza strain A/Brisbane/59/2007-2 <400> 9 Arg Met Glu Asn Leu Asn Lys Lys Val Asp Asp Gly Phe Ile Asp Ile 1 5 10 15 Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn Glu Arg Thr 20 25 30 Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Glu Lys Val Lys 35 40 45 Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala 50 55 <210> 10 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> The long alpha helix domain of the hemagglutinin polypeptide of Influenza strain A/South Carolina/1/1918 <400> 10 Arg Ile Glu Asn Leu Asn Lys Lys Val Asp Asp Gly Phe Leu Asp Ile 1 5 10 15 Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn Glu Arg Thr 20 25 30 Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Arg Asn Leu Tyr Glu Lys Val Lys 35 40 45 Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala 50 55 <210> 11 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> The long alpha helix domain of the hemagglutinin polypeptide of Influenza strain A/California/07/2009 <400> 11 Arg Ile Glu Asn Leu Asn Lys Lys Val Asp Asp Gly Phe Leu Asp Ile 1 5 10 15 Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn Glu Arg Thr 20 25 30 Leu Asp Tyr His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Glu Lys Val Arg 35 40 45 Ser Gln Leu Lys Asn Asn Ala 50 55 <210> 12 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> H2 core polypeptide <220> <221> VARIANT <222> 45 <223> Xaa is a hydrophilic, acidic amino acid <400> 12 Arg Leu Glu Asn Leu Asn Lys Lys Met Glu Asp Gly Phe Leu Asp Val 1 5 10 15 Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Met Glu Asn Glu Arg Thr 20 25 30 Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Xaa Lys Val Arg 35 40 45 Met Gln Leu Arg Asp Asn Val 50 55 <210> 13 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> The long alpha helix domain of the hemagglutinin polypeptide of Influenza strain A/Singapore/1/1957 <400> 13 Arg Leu Glu Asn Leu Asn Lys Lys Met Glu Asp Gly Phe Leu Asp Val 1 5 10 15 Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Met Glu Asn Glu Arg Thr 20 25 30 Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Asp Lys Val Arg 35 40 45 Met Gln Leu Arg Asp Asn Val 50 55 <210> 14 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> The long alpha helix domain of the hemagglutinin polypeptide of Influenza strain A/Czech Republic/1/1966 <400> 14 Arg Leu Glu Asn Leu Asn Lys Lys Met Glu Asp Gly Phe Leu Asp Val 1 5 10 15 Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Met Glu Asn Glu Arg Thr 20 25 30 Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Glu Lys Val Arg 35 40 45 Met Gln Leu Arg Asp Asn Val 50 55 <210> 15 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> H3 core polypeptide <220> <221> VARIANT <222> 46,48,49 <223> Xaa is a hydrophilic, basic amino acid <400> 15 Arg Ile Gln Asp Leu Glu Lys Tyr Val Glu Asp Thr Lys Ile Asp Leu 1 5 10 15 Trp Ser Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Ala Leu Glu Asn Gln His Thr 20 25 30 Ile Asp Leu Thr Asp Ser Glu Met Asn Lys Leu Phe Glu Xaa Thr Xaa 35 40 45 Xaa Gln Leu Arg Glu Asn Ala 50 55 <210> 16 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> The long alpha helix domain of the hemagglutinin polypeptide of Infuenza strain A/Denmark/191/2005 <400> 16 Arg Ile Gln Asp Leu Glu Lys Tyr Val Glu Asp Thr Lys Ile Asp Leu 1 5 10 15 Trp Ser Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Ala Leu Glu Asn Gln His Thr 20 25 30 Ile Asp Leu Thr Asp Ser Glu Met Asn Lys Leu Phe Glu Arg Thr Lys 35 40 45 Lys Gln Leu Arg Glu Asn Ala 50 55 <210> 17 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> The long alpha helix domain of the hemagglutinin polypeptide of Infuenza strain A/Arkansas/05/2008 <400> 17 Arg Ile Gln Asp Leu Glu Lys Tyr Val Glu Asp Thr Lys Ile Asp Leu 1 5 10 15 Trp Ser Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Ala Leu Glu Asn Gln His Thr 20 25 30 Ile Asp Leu Thr Asp Ser Glu Met Asn Lys Leu Phe Glu Lys Thr Lys 35 40 45 Lys Gln Leu Arg Glu Asn Ala 50 55 <210> 18 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> The long alpha helix domain of the hemagglutinin polypeptide of Infuenza strain A/Hong Kong/1/68 <400> 18 Arg Ile Gln Asp Leu Glu Lys Tyr Val Glu Asp Thr Lys Ile Asp Leu 1 5 10 15 Trp Ser Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Ala Leu Glu Asn Gln His Thr 20 25 30 Ile Asp Leu Thr Asp Ser Glu Met Asn Lys Leu Phe Glu Lys Thr Arg 35 40 45 Arg Gln Leu Arg Glu Asn Ala 50 55 <210> 19 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> H4 core polypeptide <220> <221> VARIANT <222> 49 <223> Xaa is a hydrophilic, basic amino acid <400> 19 Arg Ile Gln Asp Leu Glu Lys Tyr Val Glu Asp Thr Lys Ile Asp Leu 1 5 10 15 Trp Ser Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Ala Leu Glu Asn Gln His Thr 20 25 30 Ile Asp Val Thr Asp Ser Glu Met Asn Lys Leu Phe Glu Arg Val Arg 35 40 45 Xaa Gln Leu Arg Glu Asn Ala 50 55 <210> 20 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> The long alpha helix domain of the hemagglutinin polypeptide of Influenza strain A/mallard/Ohia/324/1988 <400> 20 Arg Ile Gln Asp Leu Glu Lys Tyr Val Glu Asp Thr Lys Ile Asp Leu 1 5 10 15 Trp Ser Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Ala Leu Glu Asn Gln His Thr 20 25 30 Ile Asp Val Thr Asp Ser Glu Met Asn Lys Leu Phe Glu Arg Val Arg 35 40 45 Arg Gln Leu Arg Glu Asn Ala 50 55 <210> 21 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> The long alpha helix domain of the hemagglutinin polypeptide of Influenza strain A/mallard/Minnesota/271/1999 <400> 21 Arg Ile Gln Asp Leu Glu Lys Tyr Val Glu Asp Thr Lys Ile Asp Leu 1 5 10 15 Trp Ser Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Ala Leu Glu Asn Gln His Thr 20 25 30 Ile Asp Val Thr Asp Ser Glu Met Asn Lys Leu Phe Glu Arg Val Arg 35 40 45 His Gln Leu Arg Glu Asn Ala 50 55 <210> 22 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> H5 core polypeptide <400> 22 Arg Ile Glu Asn Leu Asn Lys Lys Met Glu Asp Gly Phe Leu Asp Val 1 5 10 15 Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Met Glu Asn Glu Arg Thr 20 25 30 Leu Asp Phe His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Tyr Asp Lys Val Arg 35 40 45 Leu Gln Leu Arg Asp Asn Ala 50 55 <210> 23 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> H6 core polypeptide <220> <221> VARIANT <222> 3 <223> Xaa is G or D <220> <221> VARIANT <222> 5,35 <223> Xaa is a hydrophobic amino acid <220> <221> VARIANT <222> 30,42 <223> Xaa is a hydrophilic amino acid <220> <221> VARIANT <222> 44 <223> Xaa is H or Y <220> <221> VARIANT <222> 50 <223> Xaa is Q or L <220> <221> VARIANT <222> (52)...(52) <223> Xaa is a hydrophilic, basic amino acid <400> 23 Arg Ile Xaa Asn Xaa Asn Lys Arg Met Glu Asp Gly Phe Leu Asp Val 1 5 10 15 Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn Xaa Arg Thr 20 25 30 Leu Asp Xaa His Asp Ala Asn Val Lys Xaa Leu Xaa Glu Lys Val Lys 35 40 45 Ser Xaa Leu Xaa Asp Asn Ala 50 55 <210> 24 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> The long alpha helix domain of the hemagglutinin polypeptide of Influenza strain A/blue winged teal/ALB/69/1985 <400> 24 Arg Ile Gly Asn Leu Asn Lys Arg Met Glu Asp Gly Phe Leu Asp Val 1 5 10 15 Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn Glu Arg Thr 20 25 30 Leu Asp Met His Asp Ala Asn Val Lys Asn Leu His Glu Lys Val Lys 35 40 45 Ser Gln Leu Arg Asp Asn Ala 50 55 <210> 25 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> The long alpha helix domain of the hemagglutinin polypeptide of Influenza strain A/Canada goose/Ohio/127/1989 <400> 25 Arg Ile Asp Asn Leu Asn Lys Arg Met Glu Asp Gly Phe Leu Asp Val 1 5 10 15 Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn Glu Arg Thr 20 25 30 Leu Asp Met His Asp Ala Asn Val Lys Asn Leu His Glu Lys Val Lys 35 40 45 Ser Gln Leu Lys Asp Asn Ala 50 55 <210> 26 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> The long alpha helix domain of the hemagglutinin polypeptide of Influenza strain A/blu-winged teal/ALB/368/1978 <400> 26 Arg Ile Asp Asn Leu Asn Lys Arg Met Glu Asp Gly Phe Leu Asp Val 1 5 10 15 Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn Gly Arg Thr 20 25 30 Leu Asp Met His Asp Ala Asn Val Lys Asn Leu His Glu Lys Val Lys 35 40 45 Ser Leu Leu Arg Asp Asn Ala 50 55 <210> 27 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> The long alpha helix domain of the hemagglutinin polypeptide of Influenza strain A/northern pintail/California/HKWF151/2007 <400> 27 Arg Ile Asp Asn Leu Asn Lys Arg Met Glu Asp Gly Phe Leu Asp Val 1 5 10 15 Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn Glu Arg Thr 20 25 30 Leu Asp Leu His Asp Ala Asn Val Lys Asn Leu Tyr Glu Lys Val Lys 35 40 45 Ser Gln Leu Arg Asp Asn Ala 50 55 <210> 28 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> The long alpha helix domain of the hemagglutinin polypeptide of Influenza strain A/chicken/CA/S0403106/2004 <400> 28 Arg Ile Asp Asn Met Asn Lys Arg Met Glu Asp Gly Phe Leu Asp Val 1 5 10 15 Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn Glu Arg Thr 20 25 30 Leu Asp Leu His Asp Ala Asn Val Lys Ser Leu His Glu Lys Val Lys 35 40 45 Ser Gln Leu Arg Asp Asn Ala 50 55 <210> 29 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> H6 Consensus <400> 29 Arg Ile Asp Asn Leu Asn Lys Arg Met Glu Asp Gly Phe Leu Asp Val 1 5 10 15 Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn Glu Arg Thr 20 25 30 Leu Asp Met His Asp Ala Asn Val Lys Asn Leu His Glu Lys Val Lys 35 40 45 Ser Gln Leu Arg Asp Asn Ala 50 55 <210> 30 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> H7 core polypeptide <220> <221> VARIANT <222> 12 <223> Xaa is a hydrophobic amino acid or a hydrophilic amino acid <220> <221> VARIANT <222> 16 <223> Xaa is a hydrophobic amino acid <220> <221> VARIANT <222> 41 <223> Xaa is a hydrophilic amino acid <220> <221> VARIANT <222> 48 <223> Xaa is a hydrophilic, basic amino acid <400> 30 Gln Ile Gly Asn Val Ile Asn Trp Thr Arg Asp Xaa Met Thr Glu Xaa 1 5 10 15 Trp Ser Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Ala Met Glu Asn Gln His Thr 20 25 30 Ile Asp Leu Ala Asp Ser Glu Met Xaa Lys Leu Tyr Glu Arg Val Xaa 35 40 45 Lys Gln Leu Arg Glu Asn Ala 50 55 <210> 31 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> The long alpha helix domain of the hemagglutinin polypeptide of Influenza strain A/green winged teal/California/AKS1370/2008 <400> 31 Gln Ile Gly Asn Val Ile Asn Trp Thr Arg Asp Ser Met Thr Glu Val 1 5 10 15 Trp Ser Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Ala Met Glu Asn Gln His Thr 20 25 30 Ile Asp Leu Ala Asp Ser Glu Met Asn Lys Leu Tyr Glu Arg Val Arg 35 40 45 Lys Gln Leu Arg Glu Asn Ala 50 55 <210> 32 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> The long alpha helix domain of the hemagglutinin polypeptide of Influenza strain A/duck/New Jersey/Sg-00286/1996 <400> 32 Gln Ile Gly Asn Val Ile Asn Trp Thr Arg Asp Ala Met Thr Glu Val 1 5 10 15 Trp Ser Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Ala Met Glu Asn Gln His Thr 20 25 30 Ile Asp Leu Ala Asp Ser Glu Met Asn Lys Leu Tyr Glu Arg Val Arg 35 40 45 Lys Gln Leu Arg Glu Asn Ala 50 55 <210> 33 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> The long alpha helix domain of the hemagglutinin polypeptide of Influenza strain A/avian/New York/Sg-00338/1999 <400> 33 Gln Ile Gly Asn Val Ile Asn Trp Thr Arg Asp Ala Met Thr Glu Ile 1 5 10 15 Trp Ser Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Ala Met Glu Asn Gln His Thr 20 25 30 Ile Asp Leu Ala Asp Ser Glu Met Ser Lys Leu Tyr Glu Arg Val Arg 35 40 45 Lys Gln Leu Arg Glu Asn Ala 50 55 <210> 34 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> The long alpha helix domain of the hemagglutinin polypeptide of Influenza strain A/chicken/New Jersey/Sg-00431/2004 <400> 34 Gln Ile Gly Asn Val Ile Asn Trp Thr Arg Asp Ala Met Thr Glu Ile 1 5 10 15 Trp Ser Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Ala Met Glu Asn Gln His Thr 20 25 30 Ile Asp Leu Ala Asp Ser Glu Met Ser Lys Leu Tyr Glu Arg Val Lys 35 40 45 Lys Gln Leu Arg Glu Asn Ala 50 55 <210> 35 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> H7 Consensus <400> 35 Gln Ile Gly Asn Val Ile Asn Trp Thr Arg Asp Ala Met Thr Glu Val 1 5 10 15 Trp Ser Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Ala Met Glu Asn Gln His Thr 20 25 30 Ile Asp Leu Ala Asp Ser Glu Met Asn Lys Leu Tyr Glu Arg Val Arg 35 40 45 Lys Gln Leu Arg Glu Asn Ala 50 55 <210> 36 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> H8 core polypeptide <220> <221> VARIANT <222> 15 <223> Xaa is a hydrophilic amino acid <400> 36 Arg Ile Asn Met Ile Asn Asp Lys Ile Asp Asp Gln Ile Glu Xaa Leu 1 5 10 15 Trp Ala Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn Gln Lys Thr 20 25 30 Leu Asp Glu His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Phe Asp Glu Val Lys 35 40 45 Arg Arg Leu Ser Ala Asn Ala 50 55 <210> 37 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> The long alpha helix domain of the hemagglutinin polypeptide of Influenza strain A/pintail duck/Alberta/114/1979 <400> 37 Arg Ile Asn Met Ile Asn Asp Lys Ile Asp Asp Gln Ile Glu Asp Leu 1 5 10 15 Trp Ala Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn Gln Lys Thr 20 25 30 Leu Asp Glu His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Phe Asp Glu Val Lys 35 40 45 Arg Arg Leu Ser Ala Asn Ala 50 55 <210> 38 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> The long alpha helix domain of the hemagglutinin polypeptide of Influenza strain A/pintail/Barrow/38/2005 <400> 38 Arg Ile Asn Met Ile Asn Asp Lys Ile Asp Asp Gln Ile Glu Asn Leu 1 5 10 15 Trp Ala Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn Gln Lys Thr 20 25 30 Leu Asp Glu His Asp Ser Asn Val Lys Asn Leu Phe Asp Glu Val Lys 35 40 45 Arg Arg Leu Ser Ala Asn Ala 50 55 <210> 39 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> H9 core polypeptide <220> <221> VARIANT <222> 16 <223> Xaa is a hydrophobic amino acid <400> 39 Arg Leu Asn Met Ile Asn Asn Lys Ile Asp Asp Gln Ile Gln Asp Xaa 1 5 10 15 Trp Ala Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn Gln Lys Thr 20 25 30 Leu Asp Glu His Asp Ala Asn Val Asn Asn Leu Tyr Asn Lys Val Lys 35 40 45 Arg Ala Leu Gly Ser Asn Ala 50 55 <210> 40 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> The long alpha helix domain of the hemagglutinin polypeptide of Influenza strain A/chicken/Middle East/ED-1/1999 <400> 40 Arg Leu Asn Met Ile Asn Asn Lys Ile Asp Asp Gln Ile Gln Asp Val 1 5 10 15 Trp Ala Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn Gln Lys Thr 20 25 30 Leu Asp Glu His Asp Ala Asn Val Asn Asn Leu Tyr Asn Lys Val Lys 35 40 45 Arg Ala Leu Gly Ser Asn Ala 50 55 <210> 41 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> The long alpha helix domain of the hemagglutinin polypeptide of Influenza strain A/duck/Hong Kong/702/1979 <400> 41 Arg Leu Asn Met Ile Asn Asn Lys Ile Asp Asp Gln Ile Gln Asp Ile 1 5 10 15 Trp Ala Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn Gln Lys Thr 20 25 30 Leu Asp Glu His Asp Ala Asn Val Asn Asn Leu Tyr Asn Lys Val Lys 35 40 45 Arg Ala Leu Gly Ser Asn Ala 50 55 <210> 42 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> H10 core polypeptide <220> <221> VARIANT <222> 20 <223> Xaa is a hydrophilic amino acid <400> 42 Gln Ile Gly Asn Val Ile Asn Trp Thr Lys Asp Ser Ile Thr Asp Ile 1 5 10 15 Trp Thr Tyr Xaa Ala Glu Leu Leu Val Ala Met Glu Asn Gln His Thr 20 25 30 Ile Asp Met Ala Asp Ser Glu Met Leu Asn Leu Tyr Glu Arg Val Arg 35 40 45 Lys Gln Leu Arg Gln Asn Ala 50 55 <210> 43 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> The long alpha helix domain of the hemagglutinin polypeptide of Infuenza strain A/mallard/Maryland/161/2001 <400> 43 Gln Ile Gly Asn Val Ile Asn Trp Thr Lys Asp Ser Ile Thr Asp Ile 1 5 10 15 Trp Thr Tyr Gln Ala Glu Leu Leu Val Ala Met Glu Asn Gln His Thr 20 25 30 Ile Asp Met Ala Asp Ser Glu Met Leu Asn Leu Tyr Glu Arg Val Arg 35 40 45 Lys Gln Leu Arg Gln Asn Ala 50 55 <210> 44 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> The long alpha helix domain of the hemagglutinin polypeptide of Infuenza strain A/chicken/Germany/n/1949 <400> 44 Gln Ile Gly Asn Val Ile Asn Trp Thr Lys Asp Ser Ile Thr Asp Ile 1 5 10 15 Trp Thr Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Ala Met Glu Asn Gln His Thr 20 25 30 Ile Asp Met Ala Asp Ser Glu Met Leu Asn Leu Tyr Glu Arg Val Arg 35 40 45 Lys Gln Leu Arg Gln Asn Ala 50 55 <210> 45 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> H11 core polypeptide <220> <221> VARIANT <222> 14 <223> Xaa is a hydrophobic amino acid <400> 45 Arg Ile Asn Gln Leu Ser Lys His Val Asp Asp Ser Val Xaa Asp Ile 1 5 10 15 Trp Ser Tyr Asn Ala Gln Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn Glu Lys Thr 20 25 30 Leu Asp Leu His Asp Ser Asn Val Arg Asn Leu His Glu Lys Val Arg 35 40 45 Arg Met Leu Lys Asp Asn Ala 50 55 <210> 46 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> The long alpha helix domain of the hemagglutinin polypeptide of Influenza strain A/GF/NY/26410-17/1995 <400> 46 Arg Ile Asn Gln Leu Ser Lys His Val Asp Asp Ser Val Ile Asp Ile 1 5 10 15 Trp Ser Tyr Asn Ala Gln Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn Glu Lys Thr 20 25 30 Leu Asp Leu His Asp Ser Asn Val Arg Asn Leu His Glu Lys Val Arg 35 40 45 Arg Met Leu Lys Asp Asn Ala 50 55 <210> 47 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> The long alpha helix domain of the hemagglutinin polypeptide of Influenza strain A/duck/England/1/1956 <400> 47 Arg Ile Asn Gln Leu Ser Lys His Val Asp Asp Ser Val Val Asp Ile 1 5 10 15 Trp Ser Tyr Asn Ala Gln Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn Glu Lys Thr 20 25 30 Leu Asp Leu His Asp Ser Asn Val Arg Asn Leu His Glu Lys Val Arg 35 40 45 Arg Met Leu Lys Asp Asn Ala 50 55 <210> 48 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> H12 core polypeptide <220> <221> VARIANT <222> 50 <223> Xaa is a hydrophobic amino acid <220> <221> VARIANT <222> 52 <223> Xaa is a hydrophilic, basic amino acid <400> 48 Arg Ile Asn Met Ile Asn Ser Lys Ile Asp Asp Gln Ile Thr Asp Ile 1 5 10 15 Trp Ala Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn Gln Lys Thr 20 25 30 Leu Asp Glu His Asp Ala Asn Val Arg Asn Leu His Asp Arg Val Arg 35 40 45 Arg Xaa Leu Xaa Glu Asn Ala 50 55 <210> 49 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> The long alpha helix domain of the hemagglutinin polypeptide of Influenza strain A/duck/Alberta/60/1976 <400> 49 Arg Ile Asn Met Ile Asn Ser Lys Ile Asp Asp Gln Ile Thr Asp Ile 1 5 10 15 Trp Ala Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn Gln Lys Thr 20 25 30 Leu Asp Glu His Asp Ala Asn Val Arg Asn Leu His Asp Arg Val Arg 35 40 45 Arg Val Leu Arg Glu Asn Ala 50 55 <210> 50 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> The long alpha helix domain of the hemagglutinin polypeptide of Influenza strain A/duck/Hokkaido/66/01 <400> 50 Arg Ile Asn Met Ile Asn Ser Lys Ile Asp Asp Gln Ile Thr Asp Ile 1 5 10 15 Trp Ala Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn Gln Lys Thr 20 25 30 Leu Asp Glu His Asp Ala Asn Val Arg Asn Leu His Asp Arg Val Arg 35 40 45 Arg Ile Leu Lys Glu Asn Ala 50 55 <210> 51 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> H13 core polypeptide <220> <221> VARIANT <222> 16 <223> Xaa is a hydrophobic amino acid <220> <221> VARIANT <222> 45 <223> Xaa is a hydrophilic, acidic amino acid <220> <221> VARIANT <222> 50 <223> Xaa is A, S or E <220> <221> VARIANT <222> 53 <223> Xaa is a hydrophilic amino acid <400> 51 Arg Ile Asn Met Leu Ala Asp Arg Ile Asp Asp Ala Val Thr Asp Xaa 1 5 10 15 Trp Ser Tyr Asn Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn Asp Lys Thr 20 25 30 Leu Asp Met His Asp Ala Asn Val Arg Asn Leu His Xaa Gln Val Arg 35 40 45 Arg Xaa Leu Lys Xaa Asn Ala 50 55 <210> 52 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> The long alpha helix domain of the hemagglutinin polypeptide of Influenza strain A/black-headed gull/Asktrakhan/227/1984 <400> 52 Arg Ile Asn Met Leu Ala Asp Arg Ile Asp Asp Ala Val Thr Asp Val 1 5 10 15 Trp Ser Tyr Asn Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn Asp Lys Thr 20 25 30 Leu Asp Met His Asp Ala Asn Val Arg Asn Leu His Asp Gln Val Arg 35 40 45 Arg Ala Leu Lys Thr Asn Ala 50 55 <210> 53 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> The long alpha helix domain of the hemagglutinin polypeptide of Influenza strain A/American while pelican/Minnesota/Sg-0611/2008 <400> 53 Arg Ile Asn Met Leu Ala Asp Arg Ile Asp Asp Ala Val Thr Asp Val 1 5 10 15 Trp Ser Tyr Asn Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn Asp Lys Thr 20 25 30 Leu Asp Met His Asp Ala Asn Val Arg Asn Leu His Asp Gln Val Arg 35 40 45 Arg Ser Leu Lys Thr Asn Ala 50 55 <210> 54 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> The long alpha helix domain of the hemagglutinin polypeptide of Influenza strain A/duck/Siberia/272PF/1998 <400> 54 Arg Ile Asn Met Leu Ala Asp Arg Ile Asp Asp Ala Val Thr Asp Ile 1 5 10 15 Trp Ser Tyr Asn Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn Asp Lys Thr 20 25 30 Leu Asp Met His Asp Ala Asn Val Arg Asn Leu His Glu Gln Val Arg 35 40 45 Arg Glu Leu Lys Asp Asn Ala 50 55 <210> 55 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> H14 core polypeptide <400> 55 Arg Ile Gln Asp Leu Glu Lys Tyr Val Glu Asp Thr Lys Ile Asp Leu 1 5 10 15 Trp Ser Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Ala Leu Glu Asn Gln His Thr 20 25 30 Ile Asp Val Thr Asp Ser Glu Met Asn Lys Leu Phe Glu Arg Val Arg 35 40 45 Arg Gln Leu Arg Glu Asn Ala 50 55 <210> 56 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> H15 core polypeptide <400> 56 Gln Ile Gly Asn Val Ile Asn Trp Thr Arg Asp Ser Leu Thr Glu Ile 1 5 10 15 Trp Ser Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Ala Met Glu Asn Gln His Thr 20 25 30 Ile Asp Leu Ala Asp Ser Glu Met Asn Lys Leu Tyr Glu Arg Val Arg 35 40 45 Arg Gln Leu Arg Glu Asn Ala 50 55 <210> 57 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> H16 core polypeptide <220> <221> VARIANT <222> 27 <223> Xaa is a hydrophobic amino acid <220> <221> VARIANT <222> 41 <223> Xaa is a hydrophilic, basic amino acid <220> <221> VARIANT <222> 45 <223> Xaa is a hydrophilic, acidic amino acid <220> <221> VARIANT <222> 53 <223> Xaa is a hydrophilic amino acid <400> 57 Arg Ile Asn Met Leu Ala Asp Arg Val Asp Asp Ala Val Thr Asp Ile 1 5 10 15 Trp Ser Tyr Asn Ala Lys Leu Leu Val Leu Xaa Glu Asn Asp Arg Thr 20 25 30 Leu Asp Leu His Asp Ala Asn Val Xaa Asn Leu His Xaa Gln Val Lys 35 40 45 Arg Ala Leu Lys Xaa Asn Ala 50 55 <210> 58 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> The long alpha helix domain of the hemagglutinin polypeptide of Influenza strain A/black-headed gull/Turkenistan/13/76 <400> 58 Arg Ile Asn Met Leu Ala Asp Arg Val Asp Asp Ala Val Thr Asp Ile 1 5 10 15 Trp Ser Tyr Asn Ala Lys Leu Leu Val Leu Ile Glu Asn Asp Arg Thr 20 25 30 Leu Asp Leu His Asp Ala Asn Val Arg Asn Leu His Asp Gln Val Lys 35 40 45 Arg Ala Leu Lys Ser Asn Ala 50 55 <210> 59 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> The long alpha helix domain of the hemagglutinin polypeptide of Influenza strain A/slender-billed gull/Astrakhan/28/76 <400> 59 Arg Ile Asn Met Leu Ala Asp Arg Val Asp Asp Ala Val Thr Asp Ile 1 5 10 15 Trp Ser Tyr Asn Ala Lys Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn Asp Arg Thr 20 25 30 Leu Asp Leu His Asp Ala Asn Val Arg Asn Leu His Asp Gln Val Lys 35 40 45 Arg Ala Leu Lys Ser Asn Ala 50 55 <210> 60 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> The long alpha helix domain of the hemagglutinin polypeptide of Influenza strain A/herring gull/DE/712/1988 <400> 60 Arg Ile Asn Met Leu Ala Asp Arg Val Asp Asp Ala Val Thr Asp Ile 1 5 10 15 Trp Ser Tyr Asn Ala Lys Leu Leu Val Leu Ile Glu Asn Asp Arg Thr 20 25 30 Leu Asp Leu His Asp Ala Asn Val Lys Asn Leu His Glu Gln Val Lys 35 40 45 Arg Ala Leu Lys Asn Asn Ala 50 55

Claims (111)

  1. 하기 서열을 포함하는 단리된 코어 폴리펩티드로서, 전장 인플루엔자 바이러스 헤마글루티닌(hemagglutinin)이 아닌 단리된 코어 폴리펩티드:
    X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-D-X11-X12-X13-X14-X15-W-X16-Y-X17-A-E-L-L-V-X18-X19-E-N-X20-X21-T-X22-D-X23-X24-D-S-X25-X26-X27-X28-L-X29-X30-X31-X32-X33-X34-Q-L-X35-X36-N-X37(서열번호 3)
    상기 서열에서,
    X1은 친수성 아미노산이고; X2는 소수성 아미노산이고; X3은 친수성 아미노산이고; X4는 친수성 아미노산이고; X5는 소수성 아미노산이고; X6은 N, E 또는 I이고; X7은 친수성 아미노산이고; X8은 K, Y 또는 W이고; X9는 M, V 또는 T이고; X10은 친수성 잔기이고; X11은 A, G, T 또는 S이고; X12는 F, K 또는 M이고; X13은 L, I 또는 T이고; X14는 친수성 산성 아미노산이고; X15는 소수성 아미노산이고; X16은 친수성 아미노산이고; X18은 소수성 아미노산이고; X19는 소수성 아미노산이고; X20은 친수성 아미노산이고; X21은 친수성 염기성 아미노산이고; X22는 소수성 아미노산이고; X23은 소수성 아미노산이고; X24는 H, T 또는 A이고; X25는 친수성 아미노산이고; X26은 소수성 아미노산이고; X27은 친수성 아미노산이고; X28은 친수성 아미노산이고; X29는 소수성 아미노산이고; X30은 친수성 산성 아미노산이고; X31은 친수성 염기성 아미노산이고; X32는 T 또는 V이고; X33은 친수성 염기성 아미노산이고; X34는 K, L, M, S 또는 R이고; X35는 친수성 염기성 아미노산이고; X36은 친수성 아미노산이고; X37은 소수성 아미노산이다.
  2. 제1항에 있어서,
    X1이 R 또는 Q이고; X2가 L, M 또는 I이고; X3이 E, D, Q 또는 G이고; X4가 D 또는 N이고; X5가 L, M 또는 V이고; X6이 N, E 또는 I이고; X7이 K 또는 N이고; X8이 K, R, Y 또는 W이고; X9가 M, V 또는 T이고; X10이 E, D, K 또는 R이고; X11이 A, G, T 또는 S이고; X12가 F, K, I, L 또는 M이고; X13이 L, I 또는 T이고; X14가 D 또는 E이고; X15가 V, I 또는 L이고; X16이 S 또는 T이고; X17이 Q 또는 N이고; X18이 A 또는 L이고; X19가 L 또는 M이고; X20이 E 또는 Q이고; X21이 R 또는 H이고; X22가 L 또는 I이고; X23이 F, V, M, Y 또는 L이고; X24가 H, T 또는 A이고; X25가 N 또는 E이고; X26이 V 또는 M이고; X27이 K, N, S 또는 R이고; X28이 K, S 또는 N이고; X29가 Y 또는 F이고; X30이 D 또는 E이고; X31이 K 또는 R이고; X32가 T 또는 V이고; X33이 K 또는 R이고; X34가 K, L, M, S 또는 R이고; X35가 K 또는 R이고; X36이 D, N, Q 또는 E이고; X37이 A 또는 V인 단리된 코어 폴리펩티드로서, 전장 인플루엔자 바이러스 헤마글루티닌이 아닌 단리된 코어 폴리펩티드.
  3. 제1항에 있어서,
    서열번호 1 또는 서열번호 2를 포함하거나 서열번호 1 또는 서열번호 2로 이루어진 단리된 코어 폴리펩티드.
  4. 하기 서열을 포함하는 단리된 코어 폴리펩티드:
    RIENLNKKX1EDGFLDVWTYNAELLVLMENERTLDX2HDSNVKNLYEKVRX3QLRX4NA(서열번호 4)
    상기 서열에서,
    X1은 M, V 또는 T이고; X2는 소수성 아미노산이고; X3은 L, M, S, K 또는 R이고; X4는 친수성 아미노산이다.
  5. 제4항에 있어서,
    X1이 M, V 또는 T이고; X2가 F, Y 또는 L이고; X3이 L, M, S, K 또는 R이고; X4가 D, N 또는 E인 단리된 코어 폴리펩티드.
  6. 하기 서열을 포함하는 단리된 코어 폴리펩티드:
    RX1ENLNKKX2X3DGFLDX4WTYNAELLVLX5ENERTLDX6HDSNVKNLYX7KVRX8QLX9X10NX11(서열번호 5)
    상기 서열에서,
    X1은 소수성 아미노산이고; X2는 소수성 아미노산이고; X3은 친수성 아미노산이고; X4는 소수성 아미노산이고; X5는 소수성 아미노산이고; X6은 소수성 산성 아미노산이고; X7은 친수성 산성 아미노산이고; X8은 L, M 또는 S이고; X9는 친수성 염기성 아미노산이고; X10은 친수성 아미노산이고; X11은 소수성 아미노산이다.
  7. 제6항에 있어서,
    X1이 L 또는 I이고; X2가 M 또는 V이고; X3이 E 또는 D이고; X4가 V 또는 I이고; X5가 M 또는 L이고; X6이 F 또는 Y이고; X7이 D 또는 E이고; X8이 L, M 또는 S이고; X9가 R 또는 K이고; X10이 D 또는 N이고; X11이 A 또는 V인 단리된 코어 폴리펩티드.
  8. 하기 서열을 포함하는 단리된 코어 폴리펩티드:
    X1IX2X3X4X5X6X7X8X9DX10X11X12X13X14WSYNAELLVAX15ENQHTIDLX16DSEMNKLX17EX18X19X20RQLRENA(서열번호 6)
    상기 서열에서,
    X1은 친수성 아미노산이고; X2는 친수성 아미노산이고; X3은 친수성 아미노산이고; X4는 소수성 아미노산이고; X5는 E 또는 I이고; X6은 친수성 아미노산이고; X7은 소수성 아미노산이고; X8은 V 또는 T이고; X9는 친수성 아미노산이고; X10은 친수성 아미노산이고; X11은 K 또는 M이고; X12는 I 또는 T이고; X13은 친수성 산성 아미노산이고; X14는 소수성 아미노산이고; X15는 소수성 아미노산이고; X16은 T 또는 A이고; X17은 소수성 아미노산이고; X18은 친수성 염기성 아미노산이고; X19는 T 또는 V이고; X20은 친수성 염기성 아미노산이다.
  9. 제8항에 있어서,
    X1이 R 또는 Q이고; X2가 Q 또는 G이고; X3이 D 또는 N이고; X4가 L 또는 V이고; X5가 E 또는 I이고; X6이 K 또는 N이고; X7이 Y 또는 W이고; X8이 V 또는 T이고; X9가 E 또는 R이고; X10이 T 또는 S이고; X11이 K 또는 M이고; X12가 I 또는 T이고; X13이 D 또는 E이고; X14가 L 또는 V이고; X15가 L 또는 M이고; X16이 T 또는 A이고; X17이 F 또는 Y이고; X18이 K 또는 R이고; X19가 T 또는 V이고; X20이 K 또는 R인 단리된 코어 폴리펩티드.
  10. 하기 서열을 포함하는 단리된 코어 폴리펩티드:
    RX1ENLNKKVDDGFX2DIWTYNAELLVLLENERTLDX3HDSNVX4NLYEKVX5SQLKNNA(서열번호 7)
    상기 서열에서,
    X1은 소수성 아미노산이고; X2는 소수성 아미노산이고; X3은 소수성 아미노산이고; X4는 친수성 염기성 아미노산이고; X5는 친수성 염기성 아미노산이다.
  11. 제10항에 있어서,
    X1이 M 또는 I이고; X2가 L 또는 I이고; X3이 F 또는 Y이고; X4가 K 또는 R이고; X5가 K 또는 R인 단리된 코어 폴리펩티드.
  12. 제10항에 있어서,
    서열번호 8, 서열번호 9, 서열번호 10 또는 서열번호 11의 아미노산 서열을 갖는 단리된 코어 폴리펩티드.
  13. 하기 서열을 포함하는 단리된 코어 폴리펩티드:
    RLENLNKKMEDGFLDVWTYNAELLVLMENERTLDFHDSNVKNLYXKVRMQLRDNV(서열번호 12)
    상기 서열에서,
    X는 친수성 산성 아미노산이다.
  14. 제13항에 있어서,
    X가 D 또는 E인 단리된 코어 폴리펩티드.
  15. 제13항에 있어서,
    서열번호 13 또는 서열번호 14의 아미노산 서열을 갖는 단리된 코어 폴리펩티드.
  16. 하기 서열을 포함하는 단리된 코어 폴리펩티드:
    RIQDLEKYVEDTKIDLWSYNAELLVALENQHTIDLTDSEMNKLFEX1TX2X3QLRENA(서열번호 15)
    상기 서열에서,
    X1, X2 및 X3은 친수성 염기성 아미노산이다.
  17. 제16항에 있어서,
    X1이 K 또는 R이고; X2가 K 또는 R이고; X3이 K 또는 R인 단리된 코어 폴리펩티드.
  18. 제16항에 있어서,
    서열번호 16, 서열번호 17 또는 서열번호 18의 아미노산 서열을 갖는 단리된 코어 폴리펩티드.
  19. 하기 서열을 포함하는 단리된 코어 폴리펩티드:
    RIQDLEKYVEDTKIDLWSYNAELLVALENQHTIDVTDSEMNKLFERVRX1QLRENA(서열번호 19)
    상기 서열에서,
    X1은 친수성 염기성 아미노산이다.
  20. 제19항에 있어서,
    X1이 R 또는 H인 단리된 코어 폴리펩티드.
  21. 제19항에 있어서,
    서열번호 20 또는 서열번호 21의 아미노산 서열을 갖는 단리된 코어 폴리펩티드.
  22. 하기 서열을 포함하는 단리된 코어 폴리펩티드:
    RIENLNKKMEDGFLDVWTYNAELLVLMENERTLDFHDSNVKNLYDKVRLQLRDNA(서열번호 22).
  23. 하기 서열을 포함하는 단리된 코어 폴리펩티드:
    RIX1NX2NKRMEDGFLDVWTYNAELLVLLENX3RTLDX4HDANVKX5LX6EKVKSX7LX8DNA(서열번호 23)
    상기 서열에서,
    X1은 G 또는 D이고; X2는 소수성 아미노산이고; X3은 친수성 아미노산이고; X4는 소수성 아미노산이고; X5는 친수성 아미노산이고; X6은 H 또는 Y이고; X7은 Q 또는 L이고; X8은 친수성 염기성 아미노산이다.
  24. 제23항에 있어서,
    X1이 G 또는 D이고; X2가 L 또는 M이고; X3이 E 또는 G이고; X4가 L 또는 M이고; X5가 N 또는 S이고; X6이 H 또는 Y이고; X7이 Q 또는 L이고; X8이 R 또는 K인 단리된 코어 폴리펩티드.
  25. 제23항에 있어서,
    서열번호 24 내지 서열번호 29 중 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는 단리된 코어 폴리펩티드.
  26. 하기 서열을 포함하는 단리된 코어 폴리펩티드:
    QIGNVINWTRDX1MTEX2WSYNAELLVAMENQHTIDLADSEMX3KLYERVX4KQLRENA(서열번호 30)
    상기 서열에서,
    X1은 소수성 아미노산 또는 친수성 아미노산이고; X2는 소수성 아미노산이고; X3은 친수성 아미노산이고; X4는 친수성 염기성 아미노산이다.
  27. 제26항에 있어서,
    X1이 A 또는 S이고; X2가 V 또는 I이고; X3이 N 또는 S이고; X4가 K 또는 R인 단리된 코어 폴리펩티드.
  28. 제26항에 있어서,
    서열번호 31 내지 서열번호 35 중 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는 단리된 코어 폴리펩티드.
  29. 하기 서열을 포함하는 단리된 코어 폴리펩티드:
    RINMINDKIDDQIEX1LWAYNAELLVLLENQKTLDEHDSNVKNLFDEVKRRLSANA(서열번호 36)
    상기 서열에서,
    X1은 친수성 아미노산이다.
  30. 제29항에 있어서,
    X1이 D 또는 N인 단리된 코어 폴리펩티드.
  31. 제29항에 있어서,
    서열번호 37 또는 서열번호 38의 아미노산 서열을 갖는 단리된 코어 폴리펩티드.
  32. 하기 서열을 포함하는 단리된 코어 폴리펩티드:
    RLNMINNKIDDQIQDX1WAYNAELLVLLENQKTLDEHDANVNNLYNKVKRALGSNA(서열번호 39)
    상기 서열에서,
    X1은 소수성 아미노산이다.
  33. 제32항에 있어서,
    X1이 V 또는 I인 단리된 코어 폴리펩티드.
  34. 제29항에 있어서,
    서열번호 40 또는 서열번호 41의 아미노산 서열을 갖는 단리된 코어 폴리펩티드.
  35. 하기 서열을 포함하는 단리된 코어 폴리펩티드:
    QIGNVINWTKDSITDIWTYX1AELLVAMENQHTIDMADSEMLNLYERVRKQLRQNA(서열번호 42)
    상기 서열에서,
    X1은 친수성 아미노산이다.
  36. 제35항에 있어서,
    X1이 Q 또는 N인 단리된 코어 폴리펩티드.
  37. 제35항에 있어서,
    서열번호 43 또는 서열번호 44의 아미노산 서열을 갖는 단리된 코어 폴리펩티드.
  38. 하기 서열을 포함하는 단리된 코어 폴리펩티드:
    RINQLSKHVDDSVX1DIWSYNAQLLVLLENEKTLDLHDSNVRNLHEKVRRMLKDNA(서열번호 45)
    상기 서열에서,
    X1은 소수성 아미노산이다.
  39. 제38항에 있어서,
    X1이 V 또는 I인 단리된 코어 폴리펩티드.
  40. 제38항에 있어서,
    서열번호 46 또는 서열번호 47의 아미노산 서열을 갖는 단리된 코어 폴리펩티드.
  41. 하기 서열을 포함하는 단리된 코어 폴리펩티드:
    RINMINSKIDDQITDIWAYNAELLVLLENQKTLDEHDANVRNLHDRVRRX1LX2ENA(서열번호 48)
    상기 서열에서,
    X1은 소수성 아미노산이고; X2는 친수성 염기성 아미노산이다.
  42. 제41항에 있어서,
    X1이 V 또는 I이고; X2가 R 또는 K인 단리된 코어 폴리펩티드.
  43. 제41항에 있어서,
    서열번호 49 또는 서열번호 50의 아미노산 서열을 갖는 단리된 코어 폴리펩티드.
  44. 하기 서열을 포함하는 단리된 코어 폴리펩티드:
    RINMLADRIDDAVTDX1WSYNAKLLVLLENDKTLDMHDANVRNLHX2QVRRX3LKX4NA(서열번호 51)
    상기 서열에서,
    X1은 소수성 아미노산이고; X2는 친수성 산성 아미노산이고; X3은 A, S 또는 E이고; X4는 친수성 아미노산이다.
  45. 제44항에 있어서,
    X1이 V 또는 I이고; X2가 D 또는 E이고; X3이 A, S 또는 E이고; X4가 T 또는 D인 단리된 코어 폴리펩티드.
  46. 제41항에 있어서,
    서열번호 52 내지 서열번호 54 중 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는 단리된 코어 폴리펩티드.
  47. 하기 서열을 포함하는 단리된 코어 폴리펩티드:
    RIQDLEKYVEDTKIDLWSYNAELLVALENQHTIDVTDSEMNKLFERVRRQLRENA(서열번호 55).
  48. 하기 서열을 포함하는 단리된 코어 폴리펩티드:
    QIGNVINWTRDSLTEIWSYNAELLVAMENQHTIDLADSEMNKLYERVRRQLRENA(서열번호 56).
  49. 하기 서열을 포함하는 단리된 코어 폴리펩티드:
    RINMLADRVDDAVTDIWSYNAKLLVLX1ENDRTLDLHDANVX2NLHX3QVKRALKX4NA(서열번호 57)
    상기 서열에서,
    X1은 소수성 아미노산이고; X2는 친수성 염기성 아미노산이고; X3은 친수성 산성 아미노산이고; X4는 친수성 아미노산이다.
  50. 제49항에 있어서,
    X1이 L 또는 I이고; X2가 K 또는 R이고; X3이 D 또는 E이고; X4가 S 또는 N인 단리된 코어 폴리펩티드.
  51. 제49항에 있어서,
    서열번호 58 내지 서열번호 60 중 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는 단리된 코어 폴리펩티드.
  52. 하기 서열을 포함하는 감기(flu) 폴리펩티드:
    X-L-X-L-X
    상기 서열에서,
    X는 제1항 내지 제51항 중 어느 한 항에 따른 단리된 코어 폴리펩티드 또는 이의 단편이고; L은 연결기(linker)이거나 존재하지 않는다.
  53. 제52항에 있어서,
    단리된 코어 폴리펩티드가 동일한 것인, 감기 폴리펩티드.
  54. 제1항 내지 제51항 중 어느 한 항에 따른 단리된 코어 폴리펩티드를 포함하는 감기 폴리펩티드로서, 그의 N-말단에서 아세틸화된 감기 폴리펩티드.
  55. 제1항 내지 제51항 중 어느 한 항에 따른 단리된 코어 폴리펩티드를 포함하는 감기 폴리펩티드로서, 그의 N-말단 및/또는 C-말단에서 폴리에틸렌 글리콜에 연결된 감기 폴리펩티드.
  56. 제1항 내지 제51항 중 어느 한 항에 따른 단리된 코어 폴리펩티드를 포함하는 감기 폴리펩티드로서, 상기 단리된 코어 폴리펩티드가 그의 N-말단 및/또는 C-말단에서 1개 이상의 단백질 태그에 직접적으로 또는 간접적으로 연결된, 감기 폴리펩티드.
  57. 제55항에 있어서,
    단백질 태그가 His-태그인, 감기 폴리펩티드.
  58. 제55항에 있어서,
    단백질 태그가 FLAG-태그인, 감기 폴리펩티드.
  59. 제1항 내지 제51항 중 어느 한 항에 따른 단리된 코어 폴리펩티드를 포함하는 감기 폴리펩티드로서, 상기 단리된 코어 폴리펩티드가 그의 N-말단 및/또는 C-말단에서 T 세포 에피토프에 직접적으로 또는 간접적으로 연결된, 감기 폴리펩티드.
  60. 제59항에 있어서,
    T 세포 에피토프가 CD8 T 세포 에피토프인, 감기 폴리펩티드.
  61. 제60항에 있어서,
    CD8 T 세포 에피토프가 인플루엔자 A 핵 단백질(NP) 또는 매트릭스 1(M1) 단백질, 또는 이들의 단편인, 감기 폴리펩티드.
  62. 제1항 내지 제51항 중 어느 한 항에 따른 단리된 코어 폴리펩티드를 포함하는 감기 폴리펩티드로서, 상기 단리된 코어 폴리펩티드가 그의 N-말단 및/또는 C-말단에서 톨(Toll) 유사 수용체 리간드에 직접적으로 또는 간접적으로 연결된, 감기 폴리펩티드.
  63. 제62항에 있어서,
    톨 유사 수용체 리간드가 살모넬라(Salmonella) 플라겔린(flagellin)인, 감기 폴리펩티드.
  64. 제1항 내지 제51항 중 어느 한 항에 따른 단리된 코어 폴리펩티드를 포함하는 감기 폴리펩티드로서, 상기 단리된 코어 폴리펩티드가 그의 N-말단 및/또는 C-말단에서 T4 폴돈(foldon) 도메인 또는 이의 단편에 직접적으로 또는 간접적으로 연결된, 감기 폴리펩티드.
  65. 그의 N-말단에서 His-태그에 연결되고 그의 C-말단에서 T4 폴돈 도메인에 연결된 코어 폴리펩티드 또는 이의 단편을 포함하는 감기 폴리펩티드.
  66. 제52항에 있어서,
    그의 N-말단 또는 C-말단에서 1개 이상의 단백질 태그에 직접적으로 또는 간접적으로 연결된 감기 폴리펩티드.
  67. 제66항에 있어서,
    단백질 태그가 His-태그 또는 FLAG-태그인, 감기 폴리펩티드.
  68. 제52항에 있어서,
    그의 N-말단 또는 C-말단에서 CD8 T 세포 에피토프에 직접적으로 또는 간접적으로 연결된 감기 폴리펩티드.
  69. 제68항에 있어서,
    CD8 T 세포 에피토프가 인플루엔자 A 핵 단백질(NP) 또는 매트릭스 1(M1) 단백질인, 감기 폴리펩티드.
  70. 제52항에 있어서,
    그의 N-말단 또는 C-말단에서 톨 유사 수용체 리간드에 직접적으로 또는 간접적으로 연결된 감기 폴리펩티드.
  71. 제70항에 있어서,
    톨 유사 수용체 리간드가 살모넬라 플라겔린인, 감기 폴리펩티드.
  72. 제52항에 있어서,
    그의 N-말단에서 His-태그에 직접적으로 또는 간접적으로 연결되고 그의 C-말단에서 FLAG-태그에 직접적으로 또는 간접적으로 연결된 감기 폴리펩티드로서, L이 글리신 잔기인, 감기 폴리펩티드.
  73. 제52항에 있어서,
    그의 N-말단에서 His-태그에 직접적으로 또는 간접적으로 연결되고 그의 C-말단에서 살모넬라 플라겔린에 직접적으로 또는 간접적으로 연결된 감기 폴리펩티드.
  74. 제52항에 있어서,
    그의 N-말단에서 His-태그에 직접적으로 또는 간접적으로 연결되고 그의 C-말단에서 인플루엔자 A 핵 단백질(NP) 또는 이의 단편에 직접적으로 또는 간접적으로 연결된 감기 폴리펩티드.
  75. 인플루엔자 헤마글루티닌에 결합할 수 있는 중화 항혈청에 선택적으로 결합하는, 제1항 내지 제51항 중 어느 한 항에 따른 단리된 코어 폴리펩티드 또는 제52항 내지 제74항 중 어느 한 항에 따른 감기 폴리펩티드.
  76. 담체 단백질에 연결된, 제1항 내지 제51항 중 어느 한 항에 따른 단리된 코어 폴리펩티드 또는 제52항 내지 제74항 중 어느 한 항에 따른 감기 폴리펩티드를 포함하는 조성물.
  77. 제76항에 있어서,
    단리된 코어 폴리펩티드 또는 감기 폴리펩티드가 1개 내지 50개 아미노산으로 이루어진 연결기에 의해 담체 단백질에 연결된, 조성물.
  78. 제77항에 있어서,
    연결기가 1개 내지 40개 아미노산, 1개 내지 30개 아미노산, 1개 내지 20개 아미노산, 1개 내지 10개 아미노산, 1개 내지 5개 아미노산, 1개 내지 4개 아미노산, 1개 내지 3개 아미노산, 1개 또는 2개 아미노산, 또는 1개 아미노산으로 이루어진 길이를 갖는 조성물.
  79. 제76항에 있어서,
    담체 단백질이 키홀 림펫 헤모시아닌(KLH)인, 조성물.
  80. 하기 아미노산 서열을 갖는 코어 폴리펩티드를 포함하는 감기 폴리펩티드로서, 상기 코어 폴리펩티드가 그의 C-말단에서 서열 DYKDDDDKC를 갖는 폴리펩티드에 연결된, 감기 폴리펩티드:
    RIQDLEKYVEDTKIDLWSYNAELLVALENQHTIDLTDSEMNKLFEKTRRQLRENA.
  81. 제80항에 있어서,
    아세틸화된 N-말단을 추가로 포함하는 감기 폴리펩티드.
  82. 제1항 내지 제75항, 제80항 및 제81항 중 어느 한 항에 따른 단리된 코어 폴리펩티드 또는 감기 폴리펩티드를 코딩하는 단리된 핵산.
  83. 제82항에 따른 핵산을 발현하는 단리된 세포.
  84. 제82항에 따른 핵산을 발현하도록 개조된 게놈을 포함하는 단리된 바이러스.
  85. 제1항 내지 제75항, 제80항 및 제81항 중 어느 한 항에 따른 단리된 코어 폴리펩티드 또는 감기 폴리펩티드를 포함하는 단리된 바이러스.
  86. 제84항 또는 제85항에 있어서,
    인플루엔자 바이러스인 단리된 바이러스.
  87. 제86항에 있어서,
    인플루엔자 A 바이러스인 단리된 바이러스.
  88. 제86항에 있어서,
    인플루엔자 B 바이러스인 단리된 바이러스.
  89. 제84항 또는 제85항에 있어서,
    뉴캐슬병(Newcastle disease) 바이러스(NDV), 백시니아 바이러스, 아데노바이러스, 아데노 관련 바이러스(AAV) 또는 레트로바이러스인 단리된 바이러스.
  90. 제85항에 있어서,
    불활성화된 바이러스 또는 분할(split) 바이러스인 단리된 바이러스.
  91. 제1항 내지 제75항, 제80항 및 제81항 중 어느 한 항에 따른 단리된 코어 폴리펩티드 또는 감기 폴리펩티드를 포함하는 바이러스 유사 입자.
  92. 제1항 내지 제75항, 제80항 및 제81항 중 어느 한 항에 따른 단리된 코어 폴리펩티드 또는 감기 폴리펩티드를 포함하는 면역원성 조성물.
  93. 제84항에 따른 단리된 바이러스 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 면역원성 조성물.
  94. 제85항에 따른 단리된 바이러스 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 면역원성 조성물.
  95. 제86항 내지 제88항 중 어느 한 항에 따른 단리된 바이러스 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 면역원성 조성물.
  96. 제89항에 따른 단리된 바이러스 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 면역원성 조성물.
  97. 제90항에 따른 단리된 바이러스 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 면역원성 조성물.
  98. 제93항에 있어서,
    보조제를 추가로 포함하는 면역원성 조성물.
  99. 제94항, 제95항 및 제97항 중 어느 한 항에 있어서,
    보조제를 추가로 포함하는 면역원성 조성물.
  100. 제91항에 따른 바이러스 유사 입자 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 면역원성 조성물.
  101. 제92항 내지 제100항 중 어느 한 항에 따른 면역원성 조성물의 효과량을 대상체에게 투여함을 포함하는, 대상체를 면역화시키는 방법.
  102. 제101항에 있어서,
    대상체가 인간인, 방법.
  103. 제101항에 있어서,
    면역원성 조성물이 대상체에게 피하, 근육내 또는 코내로 투여되는, 방법.
  104. 제92항 내지 제100항 중 어느 한 항에 따른 면역원성 조성물의 효과량을 대상체에게 투여함을 포함하는, 인플루엔자 바이러스 질환을 예방하는 방법.
  105. 제92항 내지 제100항 중 어느 한 항에 따른 면역원성 조성물의 효과량을 대상체에게 투여함을 포함하는, 인플루엔자 바이러스 감염 또는 인플루엔자 바이러스 질환을 치료하는 방법.
  106. 제104항에 있어서,
    대상체가 인간인, 방법.
  107. 제105항에 있어서,
    대상체가 인간인, 방법.
  108. 제76항에 따른 조성물의 효과량을 대상체에게 투여함을 포함하는, 대상체를 면역화시키는 방법.
  109. 제76항에 따른 조성물의 효과량을 대상체에게 투여함을 포함하는, 인플루엔자 질환을 예방하는 방법.
  110. 제76항에 따른 조성물의 효과량을 대상체에게 투여함을 포함하는, 인플루엔자 바이러스 질환 또는 인플루엔자 바이러스 감염을 치료하는 방법.
  111. 제108항 내지 제110항 중 어느 한 항에 있어서,
    대상체가 인간인, 방법.
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