KR20120104158A

KR20120104158A - 7-에틸-10-히드록시캠토테신의 다분지형 중합 컨쥬게이트와 ｈｅｒ２ 수용체 길항제를 병용하여 ｈｅｒ２ 양성 암을 치료하는 방법

Info

Publication number: KR20120104158A
Application number: KR1020127004505A
Authority: KR
Inventors: 푸자 사프라
Original assignee: 엔즌 파마슈티칼스, 인코포레이티드
Priority date: 2009-07-22
Filing date: 2010-07-21
Publication date: 2012-09-20
Also published as: CA2768494A1; WO2011011474A1; CN102481364A; AU2010276261A1; US20120171201A1; JP2013500253A; EP2456464A1; BR112012001395A2; EP2456464A4

Abstract

본 발명은 포유류에서 HER2 양성암을 치료하는 방법에 관한 것이다. 본 발명은 포유류에 상기의 필요에 따라 HER2 길항제를 7-에틸-10-히드록시캠토테신의 중합 전구약물과 병용하여 투여하는 것을 포함한다.

Description

7-에틸-10-히드록시캠토테신의 다분지형 중합 컨쥬게이트와 ＨＥＲ２ 수용체 길항제를 병용하여 ＨＥＲ２ 양성 암을 치료하는 방법{METHOD OF TREATING HER2 POSITIVE CANCER WITH HER2 RECEPTOR ANTAGONIST IN COMBINATION WITH MULTI-ARM POLYMERIC CONJUGATES OF 7-ETHYL-10-HYDROXYCAMPTOTHECIN}

<관련된 출원의 상호 참고( CROSS - REFERENCE TO RELATED APPLICATION )>

본 출원은 2009년 7월 22일에 출원된 미국 특허 출원 번호 61/227,599에 대한 우선권 주장 출원이다. 선출원의 내용이 본 명세서에 참고로 포함되었다.

본 발명은 HER2 양성 암의 치료 방법에 관련된 것이다. 더욱 상세하게는 본 발명은 7-에틸-10-히드록시캠토테신(7-ethyl-10-hydroxy camptothecin)의 폴리에틸렌 글라이콜(polyethylene glycol) 컨쥬게이트(conjugates)와 HER2 길항제를 병용 투여하는 것을 특징으로 하는 포유류에 있어서의 HER2 양성 암을 치료하는 방법에 관한 것이다.

유방암은 미국 여성에서 가장 흔한 암이다. 최근의 연구 결과는 유방암의 약 20-25%가 HER2(인간 상피 성장 인자 수용체 2(Human Epidermal Growth Factor Receptor2))양성이라는 것을 보여준다. HER2 수용체 또는 HER2/neu 또는 ErbB라고 불리기도 하는 HER2 단백질은 생체 내의 일부 정상 세포의 표면에서 발견된다. HER2는 세포 성장과 생존을 조절하는 역할을 한다. HER2 단백질, 인코딩 유전자 및 HER2 단백질에 대한 항체는 미국 특허 번호 6,165,464에 상세히 기재되어 있고 이들의 내용은 참고로 본 명세서에 포함되어 있다.

연구는 HER2 단백질이 유방암에서 과발현 되었을 때, 유방암이 더욱 공격적이 될 수도 있다는 것을 보여준다. HER2 양성 종양은 HER2 양성이 아닌 종양에 비해 더욱 빠르게 성장하고 전이된다. HER2 양성 유방암에 있어서, 암세포는 단위 세포당 비정상적으로 많은 HER2 유전자 복제수를 가진다. (Slamon DJ등 , Science 244:707-712, 1989 및 Pegram M등 , Semin. Oncol. 27:13-19, 2000 참고) HER 양성 유방암은 HER2 양성이 아닌 유방암 보다 2.5배 재발할 확률이 높다고 알려져 있다. 또한 HER2 과발현은 화학요법제에 대한 내성과도 관련이 있다고 추정된다.

트라스투주맙(Trastuzumab)은 HER2(또는 HER2/neu) 수용체의 도메인Ⅳ와 선택적으로 결합하는 인간화된 단일 클론 항체이다. 트라스투주맙은 HER2 단백질과 결합하여 종양 세포의 성장을 억제한다. 임상 시험에서 트라스투주맙은 공격적인 HER2 양성 암의 재발 위험성을 반 이상 감소시킨다는 것을 알아냈다.

암을 치료하는데 있어서 트라스투주맙을 화학요법제와 병용하여 상승작용을 이루거나 치료제의 부작용을 줄이려는 다양한 시도가 있었다. 몇몇 알려진 것으로트라스투주맙과의 병용 요법은 도세탁셀/게피티닙/트라스투주맙(docetaxel/gefitinib/trastuzumab), 카페시타빈/파클리탁셀/트라스투주맙(capecitabine/paclitaxel/trastuzumab), 카보플라스틴/파클리탁셀/트라스투주맙(carboplatin/docetaxel/trastuzumab), 카보플라스틴/젬시타빈/파클리탁셀/트라스투주맙(carboplatin/gemcitabine/paclitaxel/trastuzumab), 카보플라스틴/파클리탁셀/트라스투주맙(carboplatin/paclitaxel/trastuzumab), 시스플라스틴/도세탁셀/트라스투주맙(cisplatin/docetaxel/trastuzumab), 사이클로포스파마이드/독소루비신/트라스투주맙(cyclophosphamide/doxorubicin/trastuzumab), 사이클로포스파마이드/플루오로우라실/메토트렉세이트/트라스투주맙(cyclophosphamide/fluorouracil/methotrexate/trastuzumab) 등을 포함한다. 또한 예를 들면, 미국 특허 번호 6,313,138; 6,462,017; 6,537,988; 및 6,846,816을 참고한다. 트라스투주맙의 화학요법과의 병용은 초기와 말기 전이성 암 모두에서 여성의 생존기간을 연장시켰다. 예를 들면 트라스투주맙과 화학요법을 병용했을 때, 중간 생존(median survival) 기간이 26.2 개월로 증가하였고, 화학요법만을 받은 환자는 20.0 개월이었다.

불행하게도, 환자는 트라스투주맙을 1년과 같이 장기간 동안 투여 받아야 한다. 이러한 장기간의 트라스투주맙의 처치는 부작용을 가지고 있다. 트라스투주맙 단독 요법 또는 화학요법과의 병용 요법은 심부전을 일으킨다는 보고가 있었다. 또한 안트라사이클린(anthracycline)에 기초한 화학요법을 트라스투주맙과 병용하는 것은 환자에게 위험하다는 것이 보고되었다. 독소루비신, 사이클로포스파마이드 및 파클리탁셀 또는 도세탁셀과 같은 화합요법제를 트라스투주맙과 병용하였을 때 유의적인 숫자의 환자에서 심부전이 발생하였다. 그러므로 트라스투주맙 관련 요법에 있어서 환자는 트라스투주맙 관련 요법 투여 전 및 동안에 심장 기능 시험을 받는 것이 요구되고 심장에 문제가 있는 환자에게는 투여되지 않거나 트라스투주맙 관련 요법을 중지하는 것이 추천된다. 트라스투주맙의 연장된 사용은 또한 화학요법에 의해 유도된 호중구 감소를 악화시킬 수 있다.

그러므로, HER2 양성 암을 치료하는 방법에 대한 필요가 계속해서 있다. 본 발명은 이러한 요구를 다룬다.

도 1은 실시예 4에 기재되어 있는 4분지-PEG-Gly-(7에틸-10-히드록시캠토테신)의 인간 혈청, 포스페이트 완충 용액 및 식염수에서의 안정성을 나타낸다.
도 2는 실시예 4에 기재되어 있는 4분지-PEG-Gly-(7에틸-10-히드록시캠토테신)의 안정성에 대한 pH의 영향을 나타낸다.
도 3a은 실시예 5에 기재되어 있는 4분지-PEG-Gly-(7에틸-10-히드록시캠토테신)의 약동학 프로파일을 나타낸다.
도 3b는 실시예 5에 기재되어 있는 4분지-PEG-Gly-(7에틸-10-히드록시캠토테신)의 약동학 프로파일을 나타낸다. 4분지-PEG-Gly-(7에틸-10-히드록시캠토테신) 컨쥬게이트(conjugates)의 장간순환이 나타나있다.
도 4는 실시예 6에 기재되어 있는 허셉틴(Herceptin®) 및 퍼투주맙(pertuzumab)에 의해 잘 치료되지 않는 인간 JIMT-1 유방 종양이 이종이식된 마우스에서의 종양 성장의 억제를 나타낸다.
도 5는 실시예 7에 기재되어 있는 인간 N87 위암이 이종이식된 마우스에서의 종양 성장의 억제를 나타낸다.

본 발명의 요약

본 발명의 일면에서, 본 발명은 포유류에서 HER2 양성 암을 치료하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 포유류에 하기 화학식(Ⅰ)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효량으로 HER2 수용체 길항체와 병용 투여하는 것을 포함한다.

(Ⅰ)

상기 화학식 (Ⅰ)에서 R₁, R₂, R₃ 및 R₄는 독립적으로 OH 또는

이고,

상기 L은 이관능성성 링커(bifunctional linker)로 (m) 이 2이거나, 2보다 클 때, 각각의 L은 같거나 다르다;

(m)은 0이거나 양의 정수; 이고

(n)은 양의 정수;

이며, R₁, R₂, R₃ 및 R₄는 동시에 모두 OH는 아닌 것을 제공한다.

대안적인 일면에서, 포유류에서 HER2 양성 암을 치료하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 캠토테신, 캠토테신 유사체, 캠토테신 또는 이의 유사체의 중합 컨쥬게이트(polymeric conjugate) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 HER2 수용체 길항체와 병용하여 상기 포유류에 투여하는 것을 포함한다.

일실시예에 있어서, 상기 방법은 HER2 양성 암을 가지고 있는 포유류에 캠토테신 또는 이의 유사체의 중합 컨쥬게이트를 HER2 수용체 길항제와 함께 투여함으로써 수행된다. 중합 컨쥬게이트는 화학식(Ⅱ) 또는 화학식(Ⅲ)의 화합물을 포함한다:

(Ⅱ)

또는

(Ⅲ)

상기에서

Z₁, Z₂, Z₃ 및 Z₄ 는 독립적으로 OH 또는 (L)m-D;

L 은 이관능성 링커;

D는 캠토테신 또는 캠토테신 유사체;

M₁ 은 O, S 또는 NH;

(d)는 0 또는 약 1 내지 10까지의 양의 정수;

(z)는 0 또는 약 1 내지 29까지의 양의 정수;

(m)은 O 또는 양의 정수로, 여기에서 (m)이 2이거나, 2보다 클 때, 상기 각각의 L은 같거나 다르고;

(n)은 약 10 내지 2300까지의 양의 정수로 화합물의 중합 부분이 총 수 평균 분자량 약 2000 내지 1000,000 달튼(daltons)을 가지게 하며;

Z₁, Z₂, Z₃ 및 Z₄는 동시에 모두 OH가 아닌 것을 제공한다.

일실시예에 있어서, 상기 기재된 방법에 사용되는 HER2 길항제는 미국 특허 번호 5,821,337 및 6,165,464에 자세히 기재되어 있는 허셉틴(Herceptin®)이란 상표명으로 시장에서 팔리고 있는 트라스투주맙을 포함하고 본 명세서에 참고로 포함되어 있다.

바람직한 일실시예에 있어서, 상기에 기재된 방법에 사용되는 7-에틸-10-히드록시캠토테신 중합 전구 약물(polymeric prodrug)은 하기의 구조를 가지는 4분지형 PEG-7-에틸-10-히드록시캠토테신 컨쥬게이트(four-arm PEG-7-ethyl-10-hydroxycamptothecin conjugates)을 포함한다:

상기 (n) 은 약 28 내지 341이고, 바람직하게는 약 114 내지 239이고, 더욱 바람직하게는 약 227이다.

또 다른 일실시예에 있어서, 상기에 기재된 방법은:

(1) 암을 가지고 있는 포유류에 있어서 HER2 양성 암의 존재를 결정하는 단계; 및

(2) HER2 양성 암을 가지고 있는 포유류에 유효량의 화학식(Ⅰ)(또는 화학식(Ⅱ) 또는 화학식(Ⅲ))의 화합물과 함께 유효량의 HER2 수용체 길항제를 투여하는 단계;

를 포함한다.

다른 일면에 있어서, 본 발명은 HER2 양성 암을 가지고 있는 포유류에 HER2 수용체 길항제의 효과를 증가시키는 방법을 제공한다.

또 다른 일면에 있어서, 본 발명은 포유류의 HER2 양성 세포에 7-에틸-10-히드록시캠토테신과 같은 캠토테신을 전달하는 방법뿐만 아니라 HER2 양성 세포의 성장과 증식을 억제하는 방법을 제공한다.

본 발명의 하나의 이점은 본 발명은 HER2 길항제 함유 요법에 반응하지 않는 환자 또는 처음에는 반응하였지만 나중에 HER2 길항제에 내성이 생긴 환자의 치료에 있어서 HER2 길항체에 기초한 요법을 효과적으로 활용하는 방법을 제공한다. 환자는 트라스투주맙 및 퍼투주맙과 같은 HER2 길항제에 대한 내성의 기대되지 않는 제거 및/또는 감소로 이익을 얻을 수 있다.

다른 이점은 본 발명은 예후가 불량한 환자를 치료하는 방법을 제공한다. HER2는 약물 내성과 전반적인 예후 불량과 연관이 있는 것으로 간주 된다. 상기에 기재된 화학식(Ⅰ)(또는 화학식(Ⅱ) 또는 화학식(Ⅲ))의 화합물이 함께 투여되지 않은 HER2길항제의 처치에 비해서, 본 발명에 따라 상기에 기재된 화합물을 HER2 길항제와 함께 투여할 때 HER2 길항제는 유의적으로 종양의 성장 및/또는 증식의 억제에 효과적이다.

또 다른 이점은 본 발명은 HER2 길항제의 약학적 효능(efficacy)을 증가시키고 특정 환자에 있어서 HER2 단독 요법에 비해 더 줄어든 기간 또는 용량의 HER2-관련 요법을 받을 수 있게 해준다. HER2-관련 요법과 관련된 또는 이로 인한 모든 부작용은 HER2 길항제 요법의 증가된 효능에 의해 감소할 수 있다.

추가의 이점이 다음의 서술과 도면으로부터 더욱 명백해질 것이다.

본 발명의 목적에 있어서, "HER2 양성 암" 및 "HER2 과발현 암"은 서로 교체되어 사용될 수 있다. HER2 양성 암 세포에 있어서, 과도한 양의 세포 표면의 HER2 단백질 및/또는 HER2/neu 인코딩 유전자의 증폭이 존재한다.

HER2 단백질이 발현되는 수준은 추후에 기재될 방법뿐만 아니라, 당해 기술분야에서 알려진 방법으로 측정될 수 있다. HER2 양성 암은 HER2 양성이 아닌 암 또는 정상 세포 또는 조직에서보다 HER2 단백질 또는 유전자의 발현이 굉장히 크다. 예를 들면, HER2는 암세포의 표면에 발현된 HER2 단백질의 양을 측정하는 면역조직화학 검정(immunohistochemicla("IHC") assays)를 이용하여 확인한다. 면역조직화학 검정은 세포막 염색의 염색 강도 및 완전성에 기초하여 0에서 3+의 단계로 점수가 매겨진다. 예를 들면 면역조직화학 검정에서 3+의 점수를 가지는 암은 HER2 양성 암으로 간주 된다. 면역조직화학 검정에서 2+의 점수를 가지는 암은 형광동소보합 검정(fluorescence in-sity hybridization("FISH") assay)을 이용한 추가 시험을 할 수 있고, 양성의 형광동소보합 검정은 암이 HER2 양성이라는 것을 확진한다. 형광동소보합법 시험 결과는 종양세포 20개의 휴지기 핵에서 17번 염색체 신호의 숫자에 대한 HER2 신호의 숫자의 비로 제공된다. 정상 표본은 <2.0의 비율을 가지는 반면 HER2/neu가 증폭된 표본은 2.0과 동일하거나 큰 비율을 가지고 HER2-양성(FISH+)로 규정된다.

"HER2 수용체 길항제" 및 "HER2 길항제" 용어는 HER2 단백질 또는 유전자의 발현이나 기능을 억제하는 화합물을 의미한다. 본 발명의 목적에 있어서, HER2 길항제는 예를 들면 수용체 티로신 카이나제 억제제(receptor tyrosine kinase inhibitors)이고 특히 HER2 수용체 단백질 억제제이다. 단순한 실례로써, HER2 길항제는 항-HER2 항체를 포함한다. HER2 길항제의 정의는 또한 안티센스 HER2 올리고뉴클레오타이드(antisense HER2 oligonucleotide)를 포함하는 것을 의미하는 것이다.

본 발명의 목적에 있어서, "보조 치료(adjuvant treatment)" 용어는 일차(최초) 치료(primary(initial) 치료) 외에 처치되는 치료를 의미한다. 보조 치료는 궁극적인 목적에 도달하는데 도움이 되는 부가적인 치료이다.

본 발명의 목적에 있어서, "초기" 또는 "초기 단계" 유방암은 암세포가 팔 아래에 있는 림프절(겨드랑이 림프절로 알려짐)이나 유방을 넘어서 퍼지지 않은 것을 의미한다. 일부 3기 암을 포함한 0, 1, 2기는 보통 초기로 간주 된다.

본 발명의 목적에 있어서, 난치성 또는 내성 암은 앞선 항암 요법 또는 상기에 기재된 화학식(Ⅰ)(대안적으로 화학식(Ⅱ) 또는 화학식(Ⅲ))의 화합물을 포함하지 않는 치료법에 반응하지 않는 암으로 정의된다. 일면에 있어서, HER2 항체와 같은 HER2 수용체 길항제(예를 들면 트라스투주맙 및 퍼투주맙)가 단독 또는 화학식(Ⅰ)(대안적으로 화학식(Ⅱ) 또는 화학식(Ⅲ))의 화합물를 포함하지 않는 화학요법제와 병용 투여되었을 때, 암이 내성을 갖거나 잘 치료되지 않는다. 일실시예에 있어서, 암은 허셉틴(Herceptin®) 단독 요법 또는 허셉틴(Herceptin®)과 상기 화학식(Ⅰ)의 화합물을 포함하지 않는 화학요법제와의 병용 요법에 내성을 갖거나 잘 치료되지 않는다. 암은 치료의 초기에 난치성이거나 내성을 가질 수 있고, 또는 치료 중간/후에 난치성이 되거나 내성을 가지게 될 수 있다. 그러므로 난치성의 암은 치료의 초기에 반응하지 않는 종양 또는 초기에는 짧은 기간 동안 반응하나 치료에 반응하지 못한 종양을 포함한다. 난치성 암은 또한 항암요법으로의 치료에는 반응하나 그 다음 회의 요법에는 반응하는데 실패한 종양을 의미한다. 본 발명의 목적에 있어서 난치성 암은 또한 항암요법으로의 치료에는 억제되나 처치가 중단되고 난 후에 5년 이내에, 때때로 10년 또는 그 이후에 재발 되는 종양을 포함한다. 항암요법은 화학요법제 단독, 방사선 요법 단독 또는 이들의 혼합을 이용할 수 있다. 서술의 용이성과 한정되지 않게 하기 위하여, 난치성 암은 내성 암과 서로 교체되어 사용될 수 있다.

본 발명의 목적에 있어서, 난치성 또는 내성 암의 성공적인 치료는 상기의 병용 요법 동안 및/또는 후에 상기의 병용 요법의 부재하에서 관찰되는 것과 비교하여 난치성 또는 내성의 증상 또는 상태가 억제되거나 최소화되거나 또는 완화되는 것으로 이해될 수 있다. 최소화되거나 완화되거나 또는 억제된 난치성의 상태는 당해 기술분야의 통상의 기술자에 의해 생각될 수 있는 임상적 마커(clinical marekrs)에 의해 확인될 수 있다. 일실시예에 있어서 난치성 또는 내성 암의 성공적인 치료는 상기 요법의 부재에서 관찰되는 것과 비교하여 당해 기술분야의 통상의 기술자에 의해 생각될 수 있는 다른 임상적 마커를 포함한 최소한 5% 또는 바람직하게는 10%, 더욱 바람직하게는 20% 또는 그 이상(즉, 30, 40, 50% 또는 그 이상)의 억제 또는 종양 성장 및/또는 재발의 감소가 일어나는 것으로 이해될 수 있다. 임상적 마커는 난치성 암의 심각성 또는 중대성의 변화를 보여주는 것으로 임상의에 의해서 결정될 수 있다.

본 발명의 목적에 있어서, "암" 및 "종양"은 별도의 표시가 없으면 서로 교체되어 사용될 수 있다. 암은 별도의 표시가 없으면 양성, 악성 및/또는 전이성 암을 포함한다. 암은 더 공격적일 수 있고 덜 공격적일 수 있다. 공격적인 표현형은 증식률과 종양을 형성하고 전이되는 능력을 의미한다. 공격적인 암은 덜 공격적인 종양에 비해 더 빠르게 증식하고 종양을 쉽게 형성하고 쉽게 전이된다.

본 발명의 목적에 있어서, "종양/암의 치료"는 상기 병용 요법을 받지 못한 환자에 비해서 상기 병용 요법을 마친 후의 환자에게서 나타나는 종양 성장, 종양 부하(tumor burden), 및 전이의 억제, 감소, 또는 개선, 종양의 차도, 또는 종양의 재발 및/또는 종양성 성장의 억제를 의미한다. 성공적인 치료는 환자가 양(positive)의 임상적 결과를 달성했을 때 일어나는 것을 간주 된다. 예를 들면 종양의 성공적인 치료는 상기 병용 요법의 부재하에서 관찰되는 것과 비교했을 때, 당해 기술분야에서 생각되어 지는 다른 임상적 마커를 포함한 적어도 10% 또는 바람직하게는 20%, 더욱 바람직하게는 30% 또는 그 이상(즉, 40%, 50%)의 종양 성장의 감소가 나타날 때 일어나는 것으로 간주 된다. 상기 요법으로 인한 종양의 임상적 단계 변화를 결정하는 다른 방법은 종양 조직 검사와 같은 생검, 항체, 방사성동위원소, 염색약을 이용한 면역조직화학적 검사 및 전혈 측정(complete blood count)을 포함한다.

본 발명의 목적에 있어서, 본 발명에 따라 생각되어 지는 HER2 과발현과 관련된 질병 또는 장애는 HER2 단백질 또는 유전자가 병리학적 소견 또는 몸 상태의 경과에 중요한 역할을 하는 상태를 포함한다.

본 발명의 목적에 있어서, "유효량" 및 "충분한 양"은 당해 기술분야에서 통상의 기술자가 일반적으로 말하는 효과를 의미하는 원하는 효과 또는 약학적 효과를 달성하는 양을 의미한다. 각 포유동물 또는 환자에서 처치되어야 하는 효과적인 양은 우수 임상 기준에 불일치 하는 바람직하지 못한 효과를 피하여 바람직한 임상 반응을 제공하는 범위 내에서 통상의 기술자에 의해 쉽게 결정된다.

본 발명의 목적에 있어서, "잔기(residue)"는 화합물의 부분으로 이해되며 예를들면 7-에틸-10-히드록시캠토테신, 아미노산 등이 다른 화합물과의 치환반응 후에 남아있는 것을 의미하는 것으로 이해한다.

본 발명의 목적에 있어서, "중합 잔기(polymeric residue)", 또는 "PEG 잔기(PEG residue)" 는 예를 들면 아미노산, 7-에틸-10-히드록시캠토테신을 포함한 화합물과 반응을 한 후에 남아있는 중합체 또는 PEG의 일부분을 의미하는 것으로 이해된다.

본 발명의 목적에 있어서, "알킬(alkyl)"은 직쇄(straight-chain), 분지쇄(branched-chain) 및 사이클릭 알킬(cyclic alkyl)기를 포함하는 포화 지방족 탄화수소(saturated aliphatic hydrocarbon)를 의미한다. "알킬" 용어는 또한 알킬-티오-알킬(alkyl-thio-alkyl), 알콕시알킬(alkoxyalkyl), 사이클로알킬알킬(cycloalkylalkyl), 헤테로사이클로알킬(heterocycloalkyl) 및 C₁ _-6 알킬카보닐알킬(C_1-6 alkylcarbonylalkyl)기를 포함한다. 바람직하게는, 알킬기는 1 내지 12개의 탄소를 가지고 있다. 더욱 바람직하게는, 약 1 내지 7개의 탄소로 구성된 더 작은 알킬기이고, 더더욱 바람직하게는 약 1 내지 4개의 탄소이다. 알킬기는 치환될 수 있고 아닐 수도 있다. 치환되었을 때에는 치환기는 바람직하게는 할로(halo), 옥시(oxy), 아지도(azido), 니트로(nitro), 시아노(cyano) 알킬(alkyl), 알콕시(alkoxy), 알킬-티오(alkyl-thio), 알킬-티오-알킬(alkyl-thio-alkyl), 알콕시알킬(alkoxyalkyl), 알킬아미노(alkylamino), 트리할로메틸(trihalomethyl), 히드록실(hydroxyl), 머캅토(mercapto), 히드록시(hydroxy), 시아노(cyano), 알킬실릴(alkylsilyl), 사이클로알킬(cycloalkyl), 사이클로알킬알킬(cycloalkylalkyl), 헤테로사이클로알킬(heterocycloalkyl), 헤테로아릴(heteroaryl), 알케닐(alkenyl), 알키닐(alkynyl), C₁ _-6 히드로카보닐(C₁ _-6 hydrocarbonyl), 아릴(aryl) 및 아미노(amino) 그룹을 포함한다.

본 발명의 목적에 있어서, "치환된"이란 용어는 작용기 내 또는 할로(halo), 옥시(oxy), 아지도(azido), 니트로(nitro), 시아노(cyano) 알킬(alkyl), 알콕시(alkoxy), 알킬-티오(alkyl-thio), 알킬-티오-알킬(alkyl-thio-alkyl), 알콕시알킬(alkoxyalkyl), 알킬아미노(alkylamino), 트리할로메틸(trihalomethyl), 히드록실(hydroxyl), 머캅토(mercapto), 히드록시(hydroxy), 시아노(cyano), 알킬실릴(alkylsilyl), 사이클로알킬(cycloalkyl), 사이클로알킬알킬(cycloalkylalkyl), 헤테로사이클로알킬(heterocycloalkyl), 헤테로아릴(heteroaryl), 알케닐(alkenyl), 알키닐(alkynyl), C₁ _-6 히드로카보닐(C₁ _-6 hydrocarbonyl), 아릴(aryl) 및 아미노(amino)기로 이루어진 군으로부터 하나의 모이어티(moiety)를 가지는 화합물 내의 하나 또는 그 이상의 원소를 첨가하거나 대체하는 것을 의미한다.

본 발명의 목적에 있어서, "알케닐(alkenyl)"은 적어도 하나의 탄소-탄소 이중결합을 가지는 것으로, 직쇄(straight-chain), 분지쇄(branched-chain) 및 고리환 그룹(cyclic group)을 포함한다. 바람직하게는 알케닐기는 약 2 내지 12개의 탄소를 가진다. 더욱 바람직하게는 약 2 내지 7개의 탄소를 가지는 더 작은 알케닐기이고, 더더욱 바람직하게는 약 2 내지 4개의 탄소이다. 알케닐기는 치환되거나 치환되지 않을 수 있다. 치환되었을 때에는 치환기는 할로(halo), 옥시(oxy), 아지도(azido), 니트로(nitro), 시아노(cyano) 알킬(alkyl), 알콕시(alkoxy), 알킬-티오(alkyl-thio), 알킬-티오-알킬(alkyl-thio-alkyl), 알콕시알킬(alkoxyalkyl), 알킬아미노(alkylamino), 트리할로메틸(trihalomethyl), 히드록실(hydroxyl), 머캅토(mercapto), 히드록시(hydroxy), 시아노(cyano), 알킬실릴(alkylsilyl), 사이클로알킬(cycloalkyl), 사이클로알킬알킬(cycloalkylalkyl), 헤테로사이클로알킬(heterocycloalkyl), 헤테로아릴(heteroaryl), 알케닐(alkenyl), 알키닐(alkynyl), C₁ _-6 히드로카보닐(C₁ _-6 hydrocarbonyl), 아릴(aryl) 및 아미노(amino)기를 포함한다.

본 발명의 목적에 있어서, "알키닐(alkynyl)"은 적어도 하나의 탄소-탄소 삼중결합을 가지는 것으로 직쇄(straight-chain), 분지쇄(branched-chain) 및 고리환 그룹(cyclic group)을 포함한다. 바람직하게는 알키닐기는 약 2 내지 12개의 탄소를 가진다. 더욱 바람직하게는 약 2 내지 7개의 탄소를 가지는 더 작은 알키닐기이고, 더더욱 바람직하게는 약 2 내지 4개의 탄소이다. 알키닐기는 치환되거나 치환되지 않을 수 있다. 치환되었을 때에는 치환기는 할로(halo), 옥시(oxy), 아지도(azido), 니트로(nitro), 시아노(cyano) 알킬(alkyl), 알콕시(alkoxy), 알킬-티오(alkyl-thio), 알킬-티오-알킬(alkyl-thio-alkyl), 알콕시알킬(alkoxyalkyl), 알킬아미노(alkylamino), 트리할로메틸(trihalomethyl), 히드록실(hydroxyl), 머캅토(mercapto), 히드록시(hydroxy), 시아노(cyano), 알킬실릴(alkylsilyl), 사이클로알킬(cycloalkyl), 사이클로알킬알킬(cycloalkylalkyl), 헤테로사이클로알킬(heterocycloalkyl), 헤테로아릴(heteroaryl), 알케닐(alkenyl), 알키닐(alkynyl), C₁ _-6 히드로카보닐(C₁ _-6 hydrocarbonyl), 아릴(aryl) 및 아미노(amino)기를 포함한다. "알키닐"의 예는 프로핀일(propynyl)(즉, 프로파질(propargyl)) 및 3-헥신일(hexynyl)을 포함한다.

본 발명의 목적에 있어서 "아릴(aryl)"은 하나의 방향족 고리를 포함하고 있는 방향족 탄화수소 고리 시스템을 의미한다. 방향족 고리는 임의로 융합되거나 그렇지 않으면 다른 방향족 탄화수소 고리 또는 비방향족 탄화수소 고리와 결합될 수 있다. 아릴기의 예는 페닐(pheyl), 나프틸(naphthyl), 1,2,3,4-테트라히드로나프탈렌(1,2,3,4-tetrahydronaphthalene) 및 바이페닐(biphenyl)을 포함한다. 바람직한 아릴기의 예는 페닐 및 나프틸을 포함한다.

본 발명의 목적에 있어서, "사이클로알킬(cycloalkyl)"은 C₃ _-8고리 탄화수소를 의미한다. 사이클로알킬은 사이클로프로필(cyclopropyl), 사이클로부틸(cyclobutyl), 사이클로펜틸(cyclopentyl), 사이클로헥실(cyclohexyl), 사이클로헵틸(cycloheptyl) 및 사이클로옥틸(cyclooctyl)을 포함한다.

본 발명의 목적에 있어서, "사이클로알케닐(cycloalkenyl)"은 최소한 하나의 탄소-탄소 이중결합을 가지는 C₃ _-8고리 탄화수소를 의미한다. 사이클로알케닐의 예는 사이클로펜테닐(cyclopentenyl),사이클로펜타다이엔일(cyclopentadienyl), 사이클로헥센일(cyclohexenyl), 1,3-사이클로헥사다이엔일(1,3-cyclohexadienyl), 사이클로헵텐일(cycloheptenyl), 사이클로헵타트라이엔일(cycloheptatrienyl), 및 사이클로옥텐일(cyclooctenyl)을 포함한다.

본 발명의 목적에 있어서, "사이클로알킬알킬(cycloalkylalkyl)"은 알킬기가 C_3-8 사이클로알킬기로 치환된 것을 의미한다. 사이클로알킬알킬기의 예는 사이클로프로필메틸(cyclopropylmethyl) 및 사이클로펜틸에틸(cyclopentylethyl)을 포함한다.

본 발명의 목적에 있어서, "알콕시(alkoxy)"는 알킬기의 표시된 숫자의 탄소원자가 산소 다리(oxygen bridge)를 통해 모분자 모이어티에 결합된 것을 의미한다. 알콕시기의 예는 메톡시(methoxy), 에톡시(ethoxy), 프로폭시(propoxy) 및 아이소프로폭시(isopropoxy)를 포함한다.

본 발명의 목적에 있어서, "알킬아릴(alkylaryl)"기는 알킬기로 치환된 아릴기를 의미한다.

본 발명의 목적에 있어서, "아르알킬(aralkyl)"기는 아릴기로 치환된 알킬기를 의미한다.

본 발명의 목적에 있어서, "알콕시알킬(alkoxyalkyl)"기는 알콕시기로 치환된 알킬기를 의미한다.

본 발명의 목적에 있어서, "아미노(amino)"는 당해 기술분야에서 알려진 하나 또는 그 이상의 수소 라디칼(radicals)을 유기 라디칼로 대체하여 암모니아로부터 유래된 작용기를 포함하는 질소(nitrogen)을 의미한다. 예를 들면, "아실아미노(acylamino)" 및 "알킬아미노(alkylamino)"는 각각 아실(acyl) 및 알킬(alkyl) 치환기를 가지는 특이적인 N-치환 유기 라디칼을 의미한다.

본 발명의 목적에 있어서, "할로젠(halogen)" 또는 "할로(halo)" 는 불소(fluorine), 염소(chlorine), 브롬(bromine) 및 요오드(idoine)를 의미한다.

본 발명의 목적에 있어서, "헤테로 원자(heteroatom)"은 질소, 산소 및 황을 의미한다.

본 발명의 목적에 있어서, "헤테로사이클로알킬(heterocycloalkyl)"은 질소, 산소 및 황으로부터 선택된 최소한 하나의 헤테로 원자를 포함하는 비-방향족성 고리 시스템을 의미한다. 헤테로사이클로알킬 고리는 임의로 융합될 수 있고 또는 그렇지 않으면 다른 헤테로사이클로알킬 고리 및/또는 비-방향족 탄화수소 고리에 결합될 수 있다. 바람직한 헤테로사이클로알킬기는 3 내지 7의 원소(memebers)를 가진다. 헤테로사이클로알킬기의 예는 피페라진(piperazine), 모폴린(morpholine), 피페리딘(piperidine), 테트라히드로푸란(tetrahydrofuran), 피롤리딘(pyrrolidine), 및 피라졸(pyrazole)을 포함한다. 바람직한 헤테로사이클로알킬기는 피페리디닐(piperidinyl), 피페라지닐(piperazinyl), 모폴리닐(morpholinyl) 및 피롤리디닐(pyrrolidinyl)을 포함한다.

본 발명의 목적에 있어서, "헤테로아릴(heteroaryl)"은 질소, 산소 및 황으로부터 선택된 최소한 하나의 헤테로 원자를 포함하는 방향족 고리 시스템을 의미한다. 헤테로아릴 고리는 융합되거나 그렇지 않으면 하나 또는 그 이상의 헤테로아릴 고리, 방향족 또는 비방향족 탄화수소 고리 또는 헤테로사이클로알킬 고리에 결합되어질 수 있다. 헤테로아릴기의 예는 피리딘(pyridine), 푸란(furan), 티오펜(thiophene), 5,6,7,8-테트라히드로이소퀴놀린(tetrahydroisoquinoline) 및 피리미딘(pyrimidine)을 포함한다. 헤테로아릴기의 바람직한 예는 티엔일(thienyl), 벤조티엔일(benzothienyl), 피리딜(pyridyl), 퀴놀릴(quinolyl), 피라지닐(pyrazinyl), 피리미딜(pyrimidyl), 이미다졸릴(imidazolyl), 벤지미다졸릴(benzimidazolyl), 푸란일(furanyl), 벤조푸란일(benzofuranyl), 티아졸릴(thiazolyl), 벤조티아졸릴(benzothiazolyl), 이속사졸릴(isoxazolyl), 옥사디아졸릴(oxadiazolyl), 이소티아졸릴(isothiazolyl), 벤즈이소티아졸릴(benzisothiazolyl), 트리아졸릴(triazolyl), 테트라졸릴(tetrazolyl), 피롤릴 (pyrrolyl), 인돌일(indolyl), 피라졸릴(pyrazolyl) 및 벤조피라졸릴(benzopyrazolyl)을 포함한다.

일부 실시예에 있어서, 치환된 알킬은 카복시알킬(carboxyalkyls), 아미노알킬(aminoalkyls), 디알킬아미노(dialkylaminos) 및 머캅토알킬(mercaptoalkyl)을 포함하고; 치환된 알케닐(alkenyls)은 카복시알켄일(carboxyalkenyls), 아미노알켄일(aminoalkenyls), 디알켄일아미노(dialkenylaminos), 히드록시알켄일(hydroxyalkenyls) 및 머캅토알켄일(mercaptoalkenyls)을 포함하고; 치환된 알키닐(alkynyls)은 카복시알키닐(carboxyalkynyls), 아미노알키닐(aminoalkynyls), 디알키닐아미노(dialkynylaminos), 히드록시알키닐(hydroxyalkynyls) 및 머캅토알키닐(mercaptoalkynyls)을 포함하고; 치환된 사이클로알킬은 4-클로로사이클로헥실(chlorocyclohexyl)과 같은 모이어티(moieties)를 포함한다.

본 발명의 목적에 있어서, "양의 정수"는 1과 같거나 그 이상의 정수(예를 들면 1부터 10까지의 정수, 1부터 6까지의 정수)를 포함하는 것으로 이해되어 지고 당해 기술분야의 합리적인 범위 내에서 통상의 기술을 가진자에게 이해되는 것이다.

본 발명의 목적에 있어서, "결합된(linked)"이란 용어는 화학반응에 의해 하나의 그룹이 다른 그룹과 공유(바람직하게) 또는 비공유 결합하는 것을 포함하는 것으로 이해되어 진다.

본 발명의 목적에 있어서, "핵산(nucleic acid)" 또는 "뉴클레오티드(nucleotide)"는 별도로 특정되지 않으면 단일 가닥이든, 이중가닥이든 디옥시리보핵산(DNA), 리보핵산(RNA) 및 이들의 모든 화학적 변형에 적용된다.

바람직하게는 본 발명에 따라 치료되는 포유류는 사람이다.

발명의 상세한 설명

A. 개요

본 발명의 일면에 있어서, 포유류에서의 HER2 양성 암을 치료하는 방법을 제공한다. 상기 방법은:

포유류에 하기 화학식(Ⅰ)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효량으로 HER2 수용체 길항체와 병용 투여하는 것을 포함한다.

(Ⅰ)

이고,

상기에서,

L은 이관능성 링커(bifunctional linker);

(m)은 0 또는 양의 정수이고, 바람직하게는 0 또는 약 1내지 10(예를 들면, 1, 2, 3, 4, 5, 6)의 양의 정수이며, 2이거나 2보다 클 때, 상기 각 L은 같거나 다르고;

(n)은 양의 정수이며;

R₁, R₂, R₃ 및 R₄는 동시에 모두 OH는 아닌 것을 제공한다.

바람직한 일실시예에 있어서, 상기 방법은 포유류에 화학식(Ⅰ)의 R1, R2, R3 및 R4 가 모두 하기의 구조식을 갖는 화합물을 HER2 수용체 길항제와 병용 투여하는 것을 포함한다:

더욱 바람직한 일면에 있어서, 상기 방법은 하기의 화학식(Ⅰa)의 화합물을 HER2 수용체 길항제와 병용 투여하는 것을 포함한다:

상기에서 (n)은 약 227이므로 화합물의 중합 부분은 총 수 평균 분자량이 약 40,000달튼(daltons)이다.

대안적인 일면에 있어서, 포유류에서 HER2 양성 암을 치료하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 캠토테신, 캠토테신 유사체, 감토테신 또는 이의 유사체의 중합 컨쥬게이트(polymeric conjugate) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 HER2 수용체 길항체와 병용하여 상기 포유류에 투여하는 것을 포함한다.

(Ⅱ)

또는

(Ⅲ)

상기에서,

Z₁, Z₂, Z₃ 및 Z₄ 는 독립적으로 OH 또는 (L)m-D;

L은 이관능성 링커;

D는 캠토테신 또는 캠토테신 유사체;

M₁ 은 O, S 또는 NH, 바람직하게는 O;

(d)는 0 또는 약 1 내지 10까지의 양의 정수, 바람직하게는 0, 1, 2 또는 3, 더욱 바람직하게는 0 또는 1;

(z)는 0 또는 약 1 내지 29까지의 양의 정수, 바람직하게는 1, 5, 13, 또는 29;

(m)은 O 또는 양의 정수로, 바람직하게는 0 또는 1부터 10까지의 정수, 여기에서 (m)이 2이거나 2보다 클 때, 상기 각각의 L은 같거나 다르고;

(n)은 약 10 내지 2300까지의 양의 정수로 화합물의 중합 부분이 총 수 평균 분자량 약 2,000 내지 1000,000 달튼(daltons)을 가지게 하며;

Z₁, Z₂, Z₃ 및 Z₄는 동시에 모두 OH가 아닌 것을 제공한다.

특정 일실시예에 있어서, SN38은 글라이신(glycine), 알라닌(alnine), 메티오닌(methionine) 등과 같은 이관능성 링커를 통해 화학식(Ⅱ) 또는 화학식(Ⅲ)의 다분지형 폴리에틸렌 글라이콜의 20-OH 자리에 결합된다. 대안적으로 캠토테신, 토포테칸(topotecan) 또는 CPT-11은 글라이신(glycine), 알라닌(alanine), 메티오닌(methionine), 사코신(sarcosine) 등과 같은 이관능성 링커를 통해 화학식(Ⅱ) 또는 화학식(Ⅲ)의 다분지형 폴리에틸렌 글라이콜의 20-OH 자리에 결합된다.

HER2 길항제와 화학식(Ⅰ)의 화합물(대안적으로, 화학식(Ⅱ) 또는 화학식(Ⅲ)의 화합물)은 바람직한 약학적 효과를 달성하기에 충분한 양으로 투여된다.

상기에 기재된 방법으로 치료될 수 있는 HER2 양성 암은 이에 한정되는 것은 아니지만 고형암, 유방암, 위암(gastric cancer), 난소암, 위암(stomach cancer), 자궁암, 장액성 자궁내막암(uterine serous endometrial carcinoma), 전립선암, 방광암, 타액선암, 신장 선암, 유선종양을 포함한다. 상기 질병에 국한되는 것으로 생각되지 않으며 통상의 기술자가 상기에서 언급되지 않은 다른 HER2 암을 인식할 수 있는 것이 포함된다.

HER2 양성 암은 전이성 일 수 있고, 아닐 수도 있다.

일면에 있어서, 상기 방법은 트라스투주맙과 퍼투주맙과 같은 HER2 수용체 길항제가 단독 또는 상기의 화학식(Ⅰ)의 화합물(대안적으로, 화학식(Ⅱ) 또는 화학식(Ⅲ)의 화합물)을 포함하지 않는 화학요법과 병용 사용되었을 때, 내성 또는 난치성을 가지는 HER2 양성 암의 치료에 유용할 수 있다. 상기의 병용 요법은 또한 항 HER2 항체에 민감한 HER2 양성 암의 치료에 유용하다. 어떠한 이론에도 얽매이는 것 없이 상기 방법은 상기의 화학식(Ⅰ)의 화합물 없이 항 HER2 항체를 처치했을 때와 비교하여, HER2 길항제의 약학적 효능(efficacy)을 증가시키고/시키거나 HER2 양성 암에서의 HER2 수용체 길항제에 대한 내성을 완화한다.

더 일면에 있어서, 상기 방법은 HER2 양성 암을 가진 환자를 확인하는 단계를 포함한다.

대안적인 일면에 있어서, 본 발명은 HER2가 정상 발현되는(또는 HER2의 과발현이 없는) 포유류에서 관찰되는 수준과 비교하여 HER2 단백질 또는 유전자(예를 들면 유전자 발현)의 높은 수준과 관련된 질병 또는 장애를 치료하는 방법을 제공한다. HER2 단백질 또는 유전자의 과발현과 관련된 병리학적 상태는 상기 치료법으로 호전될 수 있다. 상기 방법은 HER2 수용체 길항제를 화학식(Ⅰ)의 화합물(대안적으로, 화학식(Ⅱ) 또는 화학식(Ⅲ)의 화합물) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염과 병용 투여하여 수행된다.

일실시예에 있어서, HER2 수용체 길항제는 화학식(Ⅰ)의 화합물(대안적으로, 화학식(Ⅱ) 또는 화학식(Ⅲ)의 화합물)과 동시에 또는 연속으로 투여될 수 있다.

또 다른 일실시예에 있어서, HER2 수용체 길항제는 항 HER2 항체, 안티센스 ErB2 올리고뉴클레오타이드(antisense ErB2 oligonucleotides) 및 이들의 조합을 포함한다.

바람직한 일실시예에 있어서, 상기 방법은:

(a) 예를 들면, 포유류에서 HER2가 과발현된 암의 존재를 결정하여, HER2 양성 암을 가지는 포유류를 확인하는 단계; 및

(b) HER2 양성 암을 가지는 포유류에 있어서, 유효량의 HER2 수용체 길항제, 바람직하게는 트라스투주맙을 유효량의 하기의 화학식(Ⅰa)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염과 병용 투여하는 단계;

를 포함한다.

상기에서 (n)은 바람직하게는 약 227이므로 화학식(Ⅰa)의 화합물의 중합 부분은 약 40,000달튼(daltons)의 총 분자량을 가진다.

대안적인 일면에 있어서 포유류에서 티로신 카이나제 의존성(tyrosine-kinase dependent) 질병 또는 장애를 치료하는 방법을 제공한다. HER2 수용체는 티로신 키나제이고 암과 같은 질병에 있어서 병리학적 상태와 연관되어 있다. 상기 방법은 과발현 HER2-의존성 암을 가지는 포유류에 HER2 수용체 길항제를 화학식(Ⅰ)의 화합물(또는 화학식(Ⅱ) 또는 화학식(Ⅲ)의 화합물)을 병용 투여하는 것을 포함한다. 이 방법은 바람직하게는 이러한 질병 또는 장애를 가지는 환자를 확인하는 단계를 포함한다.

또 다른 일면에 있어서, 본 발명은 HER2 양성 암을 가지는 포유류에 있어서 HER2 수용체 길항제의 효과를 증가시키는 방법을 제공한다. 이 방법은 HER2 수용체 길항제를 유효량의 화학식(Ⅰ)의 화합물(또는 화학식(Ⅱ) 또는 화학식(Ⅲ)의 화합물)과 함께 병용 투여하는 것을 포함하나.

또 다른 일면에 있어서, 본 발명은 HER2 수용체 길항제를 상기의 화학식(Ⅰ)의 화합물(대안적으로 화학식(Ⅱ) 또는 화학식(Ⅲ)의 화합물) 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염과 함께 포유류에 병용 투여하거나 HER2 수용체 길항제를 상기의 화학식(Ⅰ)의 화합물(대안적으로 화학식(Ⅱ) 또는 화학식(Ⅲ)의 화합물) 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염과 함께 암세포 또는 조직에 접촉시킴으로써 HER2 양성 세포의 성장, 증식, 또는 전이를 억제하는 방법을 제공한다. 특히 일실시예에 있어서, 상기 방법은:

(a) 세포에서 HER2 발현을 결정하는 단계; 그리고

(b) HER2 수용체 길항제를 유효량의 화학식(Ⅰ)의 화합물(또는 화학식(Ⅱ) 또는 화학식(Ⅲ)의 화합물) 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염과 함께 필요한 포유류에 투여하는 단계;

를 포함한다. 특정 일면에 있어서, 세포는 암세포이다.

B. 중합 화합물( polymeric compound )

1. 다분지형 중합체( multi - arm polymers )

상기 화합물의 중합 부분은 7-에틸-10-히드록시캠토테신(7-ethyl-10-hydroxycamptothecin)의 20-OH 기에 결합하는 다분지형 PEG를 포함한다. 본 발명의 일면에 있어서, 7-에틸-10-히드록시캠토테신의 중합 전구약물은 포합(conjugation)되기 전에 하기의 구조를 가지는 4분지 PEG(four-arm PEG)를 포함한다:

상기에서 (n)은 양의 정수이다.

대안적으로 중합 화합물은 포합 되기 전에 하기의 구조를 가지는 4분지 PEG를 이용한다:

다분지형 PEG는 엔오에프 주식회사, 약물전달시스템카탈로그 제 8판, 2006년 4월(NOF Corp, Drug Delivery System catalog, Ver.8, April 2006)에 기재되어 있고 본 명세서에 참고로 포함되어 있다.

본 발명의 바람직한 일실시예에 있어서, 중합체의 중합정도(n)은 약 28에서 341이므로 약 5,000 내지 60,000달튼의 총 수 평균 분자량을 가지는 중합체를 제공하고, 바람직하게는 114에서 239이므로 약 20,000 내지 42,000달튼의 총 수 평균 분자량을 가지는 중합체를 제공한다. (n)은 중합 사슬에서 반복 단위의 숫자를 나타내고 중합체의 분자량에 의존한다. 본 발명의 특별히 더 바람직한 일실시예에 있어서, (n)은 약 227로 40,000달튼의 총 수 평균 분자량을 가지는 중합 부분을 제공한다.

2. 이관능성 링커( bifunctional linkers )

본 발명의 특정 바람직한 일면에 있어서, 이관능성 링커는 아미노산을 포함한다. 모든 알려진 천연-발생 L-아미노산으로 부터 선택될 수 있는 아미노산은 몇가지만 예를 들면 알라닌(alanine), 발린(valine), 루신(leucine), 이소루신(isoleucine), 글라이신(glycine), 세린(serine), 트레오닌(threonine), 메티오닌(methionine), 시스테인(cysteine), 페닐알라닌(phenylalanine), 티로신(tyrosine), 트립토판(tryptophan), 아스파르트산(aspartic acid), 글루타민산(glutamic acid), 리신(lysine), 아르기닌(arginine), 히스티딘(histidine), 프롤린(proline) 및/또는 이들의 조합이다. 대안적인 일면에 있어서, L 은 펩티드 잔기일 수 있다. 펩티드는 크기가 예를 들면 2에서 10 아미노산 잔기(예를 들면 2, 3, 4, 5 또는 6)의 범위일 수 있다.

다양한 기술분야에서 알려진 비-천연(non-naturally) 발생 아미노산(D 또는 L), 소수성 또는 비소수성 뿐만 아니라 천연 발생 아미노산의 유도체 및 유사체는 또한 발명의 범위 내에서 생각되어 질 수 있다. 단순한 실례로써, 아미노산 유사체 및 유도체는 :

2-아미노아디프산(2-aminoadipic acid), 3-아미노아디프산(3-aminoadipic acid), 베타-알라닌(beta-alanine), 베타-아미노프로피온산(beta-aminopropionic acid), 2-아미노낙산(2-aminobutyric acid), 4-아미노낙산(4-aminobutyric acid), 피페리딘산(piperidinic acid), 6-아미노카프로산(6-aminocaproic acid), 2-아미노헵타논산(2-aminoheptanoic acid), 2-아미노이소부티르산(2-aminoisobutyric acid), 3-아미노이소부티르산(3-aminoisobutyric acid), 2-아미노피멜산(2-aminopimelic acid), 2,4-아미노부티르산(2,4-aminobutyric acid), 데스모신(desmosine), 2,2-디아미노피멜산(2,2-diaminopimelic acid), 2,3-디아미노프로피온산(2,3-diaminopropionic acid), N-에틸글라이신(N-ethylglycine), N-에틸아스파라긴(N-ethylasparagine), 3-히드록시프롤린(3-hydroxyproline), 4-히드록시프롤린(4-hydroxyproline), 이소데스모신(isodesmosine), 알로-이소루신(allo-isoleucine), N-메틸글라이신(N-methylglycine) 또는 사코신(sarcosine), N-메틸이소루신(N-methylisoleucine), 6-N-메틸라이신(6-N-methyllysine), N-메틸발린(N-methylvaline), 노르발린(norvaline), 노르루신(norleucine), 오르니틴(ornithine) 및 이외에 너무 많아서 언급되지 못한 본 명세서에 참고로 포함된 63 Fed. Reg., 29620, 29622에 있는 리스트에 있는 것을 포함한다. 일부 바람직한 L 기는 글라이신, 알라닌, 메티오닌 또는 사코신을 포함한다. 예를 들면, 화합물은 하기 중 하나일 수 있다:

(9번 화합물: 글라이신(Gliycine)), (12번 화합물:알라닌(Alanine))

및

(18번 화합물:메티오닌(methionine)), (23번화합물:사코신(sarcosine)).

한정되지는 않지만 서술의 용이성을 위해서 4분지 PEG 중 하나의 분지만 나타냈다. 4분지 PEG의 하나의 분지에서 4개의 분지까지 7-에틸-10-히드록시캠토테신과 포합되어 질 수 있다.

더욱 바람직하게는 상기에 기재된 치료법은 글라이신을 연결 작용기(L)로 포함하는 화합물을 이용한다.

본 발명의 대안적인 일면에 있어서, 중합체와 7-에틸-10-히드록시캠토테신 사이에 결합된 후에 L은 하기에서 선택될 수 있다:

-[C(=O)]_v(CR₂₂R₂₃)_t- ,

-[C(=O)]_v(CR₂₂R₂₃)_t-O- ,

-[C(=O)]_v(CR₂₂R₂₃)_t-NR₂₆- ,

-[C(=O)]_vO(CR₂₂R₂₃)_t- ,

-[C(=O)]_vO(CR₂₂R₂₃)_tO- ,

-[C(=O)]_vO(CR₂₂R₂₃)_tNR₂₆- ,

-[C(=O)]_vNR₂₁(CR₂₂R₂₃)_t- ,

-[C(=O)]_vNR₂₁(CR₂₂R₂₃)_tO- ,

-[C(=O)]_vNR₂₁(CR₂₂R₂₃)_tNR₂₆- ,

-[C(=O)]_v(CR₂₂R₂₃O)_t- ,

-[C(=O)]_vO(CR₂₂R₂₃O)_t- ,

-[C(=O)]_vNR₂₁(CR₂₂R₂₃O)_t- ,

-[C(=O)]_v(CR₂₂R₂₃O)_t(CR₂₄R₂₅)_y- ,

-[C(=O)]_vO(CR₂₂R₂₃O)_t(CR₂₄R₂₅)_y- ,

-[C(=O)]_vNR₂₁(CR₂₂R₂₃O)_t(CR₂₄R₂₅)_y- ,

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-[C(=O)]_vNR₂₁(CR₂₂R₂₃)_t(CR₂₄R₂₅O)_y- ,

-[C(=O)]_v(CR₂₂R₂₃)_tO-(CR₂₈R₂₉)_t' ,

-[C(=O)]_v(CR₂₂R₂₃)_tNR₂₆-(CR₂₈R₂₉)_t' ,

-[C(=O)]_v(CR₂₂R₂₃)_tS-(CR₂₈R₂₉)_t' ,

-[C(=O)]_vO(CR₂₂R₂₃)_tO-(CR₂₈R₂₉)_t' ,

-[C(=O)]_vO(CR₂₂R₂₃)_tNR₂₆-(CR₂₈R₂₉)_t' ,

-[C(=O)]_vO(CR₂₂R₂₃)_tS-(CR₂₈R₂₉)_t' ,

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-[C(=O)]_vNR₂₁(CR₂₂R₂₃)_tNR₂₆-(CR₂₈R₂₉)_t' ,

-[C(=O)]_vNR₂₁(CR₂₂R₂₃)_tS-(CR₂₈R₂₉)_t' ,

-[C(=O)]_v(CR₂₂R₂₃CR₂₈R₂₉O)_tNR₂₆- ,

-[C(=O)]_v(CR₂₂R₂₃CR₂₈R₂₉O)_t- ,

-[C(=O)]_vO(CR₂₂R₂₃CR₂₈R₂₉O)_tNR₂₆- ,

-[C(=O)]_vO(CR₂₂R₂₃CR₂₈R₂₉O)_t- ,

-[C(=O)]_vNR₂₁(CR₂₂R₂₃CR₂₈R₂₉O)_tNR₂₆- ,

-[C(=O)]_vNR₂₁(CR₂₂R₂₃CR₂₈R₂₉O)_t- ,

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-[C(=O)]_vO(CR₂₂R₂₃CR₂₈R₂₉O)_t(CR₂₄R₂₅)_y- ,

-[C(=O)]_vNR₂₁(CR₂₂R₂₃CR₂₈R₂₉O)_t(CR₂₄R₂₅)_y- ,

-[C(=O)]_v (CR₂₂R₂₃CR₂₈R₂₉O)_t(CR₂₄R₂₅)_yO- ,

-[C(=O)]_v (CR₂₂R₂₃)_t(CR₂₄R₂₅CR₂₈R₂₉O)_y- ,

-[C(=O)]_v (CR₂₂R₂₃)_t(CR₂₄R₂₅CR₂₈R₂₉O)_yNR₂₆- ,

-[C(=O)]_vO(CR₂₂R₂₃CR₂₈R₂₉O)_t(CR₂₄R₂₅)_yO- ,

-[C(=O)]_vO(CR₂₂R₂₃)_t(CR₂₄R₂₅CR₂₈R₂₉O)_y- ,

-[C(=O)]_vO(CR₂₂R₂₃)_t(CR₂₄CR₂₅CR₂₈R₂₉O)_yNR₂₆- ,

-[C(=O)]_vNR₂₁(CR₂₂R₂₃CR₂₈R₂₉O)_t(CR₂₄R₂₅)_yO- ,

-[C(=O)]_vNR₂₁(CR₂₂R₂₃)_t(CR₂₄R₂₅CR₂₈R₂₉O)_y- ,

-[C(=O)]_vNR₂₁(CR₂₂R₂₃)_t(CR₂₄R₂₅CR₂₈R₂₉O)_yNR₂₆- ,

.

상기에서,

R₂₁-R₂₉는 독립적으로 수소, 아미노, 치환된 아미노, 아지도(azido), 카복시, 시아노, 할로, 히드록실, 니트로, 실릴 에테르(silyl ether), 설폰일(sulfonyl), 머캅토(mercapto), C₁ _-6알킬머캅토(C₁ _-6alkylmercapto), 아릴머캅토(arylmercapto), 치환된 아릴머캅토(substituted arylmercapto), 치환된 C₁ _-6 알킬티오(substituted C₁ _-6 alkylthio), C₁ _-6 알킬(C₁ _-6alkyls), C₂ _-6알케닐(C₂ _-6 alkenyl), C₂ _-6알키닐(C₂ _-6alkynyl), C₃ _-19 분지된 알킬(C₃ _-19 branched alkyl), C₃ _-8사이클로알킬(C₃ _-8cycloalkyl), C₁ _-6 치환된 알킬(C₁ _-6substituted alkyl), C₂ _-6 치환된 알케닐(C₂ _-6substituted alkenyl), C₂ _-6 치환된 알키닐(C₂ _-6substituted alkynyl), C₃ _-8 치환된 사이클로알킬(C₃ _-8substituted cycloalkyl), 아릴(aryl), 치환된 아릴(substituted aryl), 헤테로아릴(heteroaryl), 치환된 헤테로아릴(substituted heteroaryl), C₁ _-6 헤테로알킬(C₁ _-6 heteroalkyl), 치환된 C₁ _-6 헤테로알킬(substituted C₁ _-6heteroalkyl), C₁ _- ₆알콕시(C₁ _-6alkoxy), 아릴옥시(aryloxy), C₁ _-6 헤테로알콕시(C₁ _-6heteroalkoxy), 헤테로아릴옥시(heteroaryloxy), C₂ _-6 알카노일(C₂ _-6 alkanoyl), 아릴카보닐(arylcarbonyl), C₂ _-6 알콕시카보닐(C₂ _-6 alkoxycarbonyl), 아릴옥시카보닐(aryloxycarbonyl), C₂ _-6 알카노일옥시(C₂ _-6 alkanoyloxy), 아릴카보닐옥시(arylcarbonyloxy), C₂ _-6 치환된 알카노일(C₂ _-6 substituted alkanoyl), 치환된 아릴카보닐(substituted arylcarbonyl), C₂ _-6 치환된 알카노일옥시(C₂ _-6 substituted alkanoyloxy), 치환된 아릴옥시카보닐(substituted aryloxycarbonyl), C₂ _-6 치환된 알카노일옥시(C₂ _-6 substituted alkanoyloxy), 및 치환된 아릴카보닐옥시(arylcarbonyloxy) 중에서 선택되고;

(t), (t') 및 (y) 는 독립적으로 0 또는 양의 정수에서 선택되고, 바람직하게는 1, 2, 3, 4, 5 및 6 과 같은 1에서 10까지 중에서 선택되며;

(v)는 0 또는 1이다.

본 발명의 범위에서 생각되어 질 수 있는 이관능성 링커는 치환기 및 변형의 조합이 허용가능한 안정한 화합물을 만들 수 있는 조합을 포함한다.

일부 바람직한 실시예에 있어서, L은

-[C(=O)]_v(CH₂)_t- ,

-[C(=O)]_v(CH₂)_t-O- ,

-[C(=O)]_v(CH₂)_t-NH- ,

-[C(=O)]_vO(CH₂)_t- ,

-[C(=O)]_vO(CH₂)_tO- ,

-[C(=O)]_vO(CH₂)_tNH- ,

-[C(=O)]_vNH(CH₂)_t- ,

-[C(=O)]_vNH(CH₂)_tO- ,

-[C(=O)]_vNH(CH₂)_tNH- ,

-[C(=O)]_v(CH₂O)_t- ,

-[C(=O)]_vO(CH₂O)_t- ,

-[C(=O)]_vNH(CH₂O)_t- ,

-[C(=O)]_v(CH₂O)_t(CH₂)_y- ,

-[C(=O)]_vO(CH₂O)_t(CH₂)_y- ,

-[C(=O)]_vNH(CH₂O)_t(CH₂)_y- ,

-[C(=O)]_v(CH₂O)_t(CH₂)_yO- ,

-[C(=O)]_v(CH₂)_t(CH₂O)_y- ,

-[C(=O)]_vO(CH₂O)_t(CH₂)_yO- ,

-[C(=O)]_vO(CH₂)_t(CH₂O)_y- ,

-[C(=O)]_vNH(CH₂O)_t(CH₂)_yO- ,

-[C(=O)]_vNH(CH₂)_t(CH₂O)_y- ,

-[C(=O)]_v(CH₂)_tO-(CH₂)_t' ,

-[C(=O)]_v(CH₂)_tNH-(CH₂)_t' ,

-[C(=O)]_v(CH₂)_tS-(CH₂)_t' ,

-[C(=O)]_vO(CH₂)_tO-(CH₂)_t' ,

-[C(=O)]_vO(CH₂)_tNH-(CH₂)_t' ,

-[C(=O)]_vO(CH₂)_tS-(CH₂)_t' ,

-[C(=O)]_vNH(CH₂)_tO-(CH₂)_t' ,

-[C(=O)]_vNH(CH₂)_tNH-(CH₂)_t' ,

-[C(=O)]_vNH(CH₂)_tS-(CH₂)_t' ,

-[C(=O)]_v(CH₂CH₂O)_tNH- ,

-[C(=O)]_v(CH₂CH₂O)_t- ,

-[C(=O)]_vO(CH₂CH₂O)_tNH- ,

-[C(=O)]_vO(CH₂CH₂O)_t- ,

-[C(=O)]_vNH(CH₂CH₂O)_tNH- ,

-[C(=O)]_vNH(CH₂CH₂O)_t- ,

-[C(=O)]_v(CH₂CH₂O)_t(CH₂)_y- ,

-[C(=O)]_vO(CH₂CH₂O)_t(CH₂)_y- ,

-[C(=O)]_vNH(CH₂CH₂O)_t(CH₂)_y- ,

-[C(=O)]_v(CH₂CH₂O)_t(CH₂)_yO- ,

-[C(=O)]_v (CH₂)_t(CH₂CH₂O)_y- ,

-[C(=O)]_v (CH₂)_t(CH₂CH₂O)_yNH- ,

-[C(=O)]_vO(CH₂CH₂O)_t(CH₂)_yO- ,

-[C(=O)]_vO(CH₂)_t(CH₂CH₂O)_y- ,

-[C(=O)]_vO(CH₂)_t(CH₂CH₂O)_yNH- ,

-[C(=O)]_vNH(CH₂CH₂O)_t(CH₂)_yO- ,

-[C(=O)]_vNH(CH₂)_t(CH₂CH₂O)_y- ,

-[C(=O)]_vNH(CH₂)_t(CH₂CH₂O)_yNH- ,

,

,

, 및

를 포함할 수 있다.

상기에서 (t), (t') 및 (y) 는 독립적으로 0 또는 양의 정수에서 선택될 수 있고, 바람직하게는 1에서 10(예를 들면 1, 2, 3, 4, 5 및 6)이고;

(v)는 0 또는 1이다.

본 발명의 일면에 있어서, 화학식(Ⅰ)(또는 화학식(Ⅱ) 또는 화학식(Ⅲ))의 화합물은 1에서 10 단위(예를 들면 1, 2, 3, 4, 5 또는 6)의 이관능성 링커를 포함한다. 본 발명의 바람직한 일면에 있어서, 화합물은 1 단위의 이관능성 링커를 포함하고, 이때 (m)은 1이다.

부가적인 링커가 본 명세서에 참고로 포함된 Greenwald등(Bioorganic & Medicinal Chemistry, 1998, 6:551-562)의 표1에 나와있다.

3. 캠토테신 및 관련된 캠토테신 유사체( CAMPTOTHECIN AND REALATED CAMPTOTHECIN ANALOGS )

캠토테신은 중국이 원산지인 캠토테가 아쿠미나타(camptoteca accuminata)나무 및 인도가 원산지인 노다포다이트 포에티다(nothapodytes foetida) 나무에서 만들어진 수용성의 세포독성 알칼로이드이다. 캠토테신과 관련 화합물 및 유사체는 또한 잠재적인 항암 또는 항종양제로 알려져 있고 인비트로(in vitro) 및 실험동물 내 인비보(in vivo)상에서 이러한 활성을 나타낸다는 것이 보여졌다. 예를 들면, 상기 치료에 유용한 캠토테신 유사체는 SN38, 캠토테신, 토포테칸(topotecan), 및 CPT-11을 포함한다.

캠토테신 및 특정 관련된 유사체는 하기의 구조를 공유한다:

이 핵심 구조로부터, 몇몇 알려진 유사체가 준비되었다. 예를 들면 A 고리의 10 및 11 자리는 하나 또는 두 개 모두가 OH로 치환될 수 있다. A 고리는 또한 직선 또는 분지된 C₁ _-30 알킬 또는 C₁ _- ₁₇알콕시로 치환될 수 있고 임의적으로 헤테로원자 즉, -O 또는 -S에 의해 고리와 연결될 수 있다. B 고리는 7-자리에서 직선 또는 분지된 C₁ _-30 알킬(바람직하게는 C₂ 알킬), C₅ _-8사이클로알킬, C₁ _-30 알콕시, 페닐, 알킬 등, 알킬 카바메이트(alkyl carbamate), 알킬 카바자이드(alkyl carbazides), 페닐 히드라진(phenyl hydrazine) 유사체 등으로 치환될 수 있다. 또 다른 치환이 C, D 및 E 고리에서 가능하다. 예를 들면, 본 명세서에 내용이 참고로 포함된 미국 특허 번호 5,004,758; 4,943,579; RE 32,518를 참고한다. 통상의 기술자가 인식할 수 있듯이, 10-히드록시캠토테신, 11-히드록시캠토테신 및 10,11-다이히드로캠토테신 유사체는 캠토테가 아쿠미나타(camptoteca accuminata) 및 이의 동류에서 부 구성성분(minor component) 중의 하나로 저절로 발생할 수 있다. 이러한 화합물의 부가적인 치환, 즉 7-알킬, 7-치환된 알킬-, 7-아미노-, 7-아미노알킬-, 7-아르알킬-, 9-알킬-, 9-아르알킬- 캠토테신 등의 유사체는 과도한 실험없이 알려진 합성 방법을 이용하여 만들어 질 수 있다. 일부 캠토테신 알칼로이드는 하기와 같은 구조식을 가진다:

(Ⅳ)

상기에서

R₇은 NO₂, NH₂, N₃, 수소, 할로젠, F, Cl, Br, I, COOH, OH, O-C₁ _-8 알킬, SH, S-C_1-3 알킬, CN, CH₂NH₂, NH-C₁ _-3 알킬, CH₂-NH-C₁ _-3 알킬, N(C₁ _-3 알킬)_2, CH₂N(C₁ _-3 알킬)₂, O-, NH- 및 S-CH₂CH₂N(CH₂CH₂OH)₂, O-, NH- 및 S-CH₂CH₂CH₂N(CH₂CH₂OH)₂, O-, NH- 및 S-CH₂CH₂N(CH₂CH₂CH₂OH)₂, O-, NH- 및 S-CH₂CH₂CH₂N(CH₂CH₂CH₂OH)₂, O-, NH- 및 S-CH₂CH₂N(C_1-3 알킬)₂, O-, NH- 및 S-CH₂CH₂CH₂N(C₁ _-3 알킬)₂, CHO 및 C₁ _-3 알킬;

중에서 선택된다.

R₈은 수소, C₁ _-8 알킬 및 CH₂NR₉R₁₀ 중에서 선택되고,

상기에서

R₉는 수소, C₁ _-6 알킬, C₃ _-7 사이클로알킬, C₃ _-7 사이클로알킬-C₁ _-6 알킬, C_2-6 알케닐, 히드록시-C₁ _-6 알킬, 및 C₁ _-6 알콕시-C₁ _-6 알킬; 로 구성된 군으로 부터 선택되고

R₁₀은 수소, C₁ _-6알킬, C₃ _-7 사이클로알킬, C₃ _-7 사이클로알킬-C₁ _-6 알킬, C_2-6 알케닐, 히드록시-C₁ _-6 알킬, C₁ _-6 알콕시-C₁ _-6 알킬 및 COR₁₁ 중에서 선택되고 R11은 수소, C₁ _-6 알킬, 퍼할로-C₁ _-6 알킬, C₃ _-7 사이클로알킬, C₃ _-7 사이클로알킬-C₁ _-6 알킬, C₂ _-6 알케닐, 히드록시-C₁ _-6 알킬, C₁ _-6 알콕시 및 C₁ _-6 알콕시-C₁ _-6 알킬; 로 구성된 군으로 부터 선택된다.

R₁₁₀-R₁₁₁ 은 각각 독립적으로 수소, 할로, 아실, 알킬, 치환된 알킬, 알콕시, 치환된 알콕시, 알케닐, 알키닐, 사이클로알킬, 히드록시, 시아노, 니트로, 아키도, 아미도, 히드라진, 아미노, 치환된 아미노, 히드록시카보닐, 알콕시카보닐, 알킬카보닐옥시, 알킬카보닐아미노, 카바모일옥시(carbamoyloxy), 아릴설포닐옥시, 알킬설포닐옥시, -C(R₁₁₇)=N-(O)_j-R₁₁₈, 상기에서 R₁₁₇은 수소, 알킬, 알케닐, 사이클로알킬, 아릴, (j)는 0 또는 1 이고 R₁₁₈은 수소, 알킬, 알케닐, 사이클로알킬 또는 헤테로사이클로알킬, 및 R₁₁₉C(O)O-, 상기에서 R₁₁₉ is은 할로젠, 아미노, 치환된 아미노, 헤테로사이클로알킬, 치환된 헤테로사이클로알킬 또는 R₁₂₀-O-(CH₂)_k-, 상기에서 (k)는 1-10의 정수이고 R₁₂₀ is은 알킬, 페닐, 치환된 페닐, 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬 또는 치환된 헤테로사이클로알킬이다; 또는

R₁₁₀과 함께 R₇ 또는 R₁₁₁과 함께 R₁₁₀은 치환된 또는 치환되지 않은 메틸렌디옥시(methylenedioxy), 에틸렌디옥시(ethylenedioxy) 또는 에틸렌옥시(ethyleneoxy)를 형성하고;

R₁₁₂는 H 또는 OR' 이고 상기에서 R'는 알킬, 알케닐, 사이클로알킬, 할로알킬, 또는 히드록시알킬이다.

바람직한 아릴기는 페닐 및 나프틸이다. 바람직한 헤테로사이클로알킬 고리는 바이피페리딘(bipiperidine)을 포함한다. 적당한 헤테로사이클 고리는 이것이 결합하고 있는 질소원자와 R₉ 및 R₁₀이 함께 취해졌을 때, 아지리딘(aziridine), 아제티딘(azetidine), 피롤리딘(pyrrolidine), 피레리딘(piperidine), 헥사메틸렌이민(hexamethylenimine), 이미다졸린(imidazolidine), 피라졸리딘(pyrazolidine), 이속사졸리딘(isoxazolidine), 피페라진(piperazine), N-메틸피레라진(N-methylpiperazine), 테트라히드로아제핀(tetrahydroazepine), N-메틸-테트라히드로아제핀(N-methyl-tetrahydroazepine), 티아졸리딘(thiazolidine) 등을 포함한다.

한정되지는 않지만 서술의 용이성을 위해서, 서술은 캠토테신 유사체로서, 바람직하고 도안화된 화합물로서, 7-에틸-10히드록시캠토테신 또는 CPT-11을 의미한다. 청구된 발명은 유사체가 중합체와의 결합 부위에 20-OH기와 같은 OH를 가지고 있는 한 모든 이러한 유도체 및 유사체를 포함한다. 캠토테신 또는 캠토테신 유사체는 라세믹 혼합물일 수 있거나 광학적으로 순수한 이성질체일 수 있다. 바람직하게는 20(S) 캠토테신 또는 캠토테신 유사체와 같은 상당히 순수한 활성형은 다분지형 중합 전구약물에 이용된다.

4. 중합 화합물의 합성( SYNTHESIS OF POLYMERIC COMPOUNDS )

일반적으로, 상기에 기재된 치료에 이용되는 중합 화합물은 아미노기가 고분자의 카르복시산과 반응하여 결합(linkage)을 형성하는 것을 효율적으로 유발시키기에 충분한 조건 하에서, 활성화된 다분지형 고분자 1 당량 이상과 예를 들어, 아미노산-(20)-7-에틸-10-하이드록시캠토테신 화합물의 활성 부위 1 당량 이상을 반응시킴으로써 제조된다. 합성의 자세한 방법은 본 명세서에 모두 참고 문헌으로 포함된 미국 특허 번호 7,462,627에 기재되어 있다.

이관능성 링커의 바람직한 예는 글라이신, 알라닌, 메티오닌, 사코신 등 및 미국 특허 번호 7,462,627의 실시예에 기재되어 있는 합성물을 포함한다.

본 발명에 따라서, 투여되는 화합물은:

을 포함한다.

특별히 바람직한 일실시예는 하기의 구조식(Ⅰa)를가지는 화합물을 투여하는 것을 포함한다:

상기에서 중합체의 4개 분지 모두는 글라이신을 통해 7-에틸-10-히드록시캠토테신으로 포합되고 중합 부분은 총 수 평균 분자량 약 40,000달튼을 가진다.

상기 치료법에서 유용한 대안적인 실시예는

또는

를 포함한다.

상기(n)은 약 28에서 약 341까지의 정수이고, 화학식(Ⅱ)의 화합물의 중합 부분의 총 수 평균 분자량은 약 5,000에서 60,000 달튼이고 바람직하게는 약 20,000 또는 40,000달튼이다.

더 일실시예에 있어서, 상기 기재된 치료법은 WO2005/028539에 기재되어 있는 중합 화합물을 이용하며 여기에 기재된 모든 내용은 본 명세서에 참고로 포함된다.

C. HER 길항제

많은 종류의 암이 HER2 단백질 및 유전자의 증가된 수준과 관련되어 있다. HER2 단백질은 최종 인산을 ATP로부터 단백질 기질의 티로신 잔기로의 변환을 촉진시킨다. HER2 수용체 길항제 및 HER2 길항제는 일반적으로 HER2 단백질 또는 유전자의 발현 및 기능을 억제하는 화합물을 의미한다. HER2 수용체 길항제는 HER2 수용체의 기능을 직접적으로 억제하거나 HER2 단백질이 연관된 상위 또는 하위 세포 전달 신호를 통해서 억제할 수 있다. 상세하게는, 상기에 기재된 병용 요법에 이용되는 HER2 수용체 길항제는 상위 또는 하위 세포 전달 신호를 통한 HER2 수용체 기능 억제 대신에 HER2 수용체 기능 및 또는 HER2 수용체의 발현을 직접적으로 억제하는 항-HER2 항체 및 안티센스 HER2 올리고뉴클레오타이드를 포함한다.

일실시예에 있어서, 상기에 기재된 병용 요법은 화학식(Ⅰ)(또는 화학식(Ⅱ) 또는 화학식(Ⅲ)의 화합물과 병용하여 항 HER2 수용체 항체를 투여함으로써 수행된다. 항체는 HER2 수용체 단백질(p185)과 결합한다. 바람직하게는 상기 치료법에 유용한 항체는 HER2 도메인(domain) Ⅱ 및/또는 Ⅳ와 같은 HER2 수용체의 세포외 도메인에 결합한다. 특정 일실시예는 트라스투주맙을 이용한다. 또 다른 특정 일실시예는 퍼투주맙을 이용한다.

허셉틴(Herceptin®)이란 상표명의 트라스투주맙은 HER2에 직접 대항하는 재조합 인간화된 단일 클론 항체이다. 종양 세포 표면에 있는 HER2 수용체와 결합한 후에, 트라스투주맙은 항체-의존적인 세포-매개 세포독성을 HER2 수용체가 과발현된 종양 세포에 대해 가진다. HER2가 많은 선암, 특히 유방 선암에 의해 과발현된다. 트라스투주맙은 CAS Registry NO. 180288-69-1에 등록되어 있다. 트라스투주맙에 대한 자세한 정보는 미국 특허 번호 6,165,464에 기재되어 있고, 이 명세서의 내용이 본 발명에 참고로 포함되어 있다.

옴니타르그(Omnitarg^TM)란 상표명의 퍼투주맙 또한 HER2 수용체의 세포외 이합체 영역에 직접 대항하는 재조합 인간화된 단일 클론 항체이다. (CAS Registry NO. 380610-27-5). 퍼투주맙은 HER2 수용체의 이합체 영역과 결합하고 HER2 수용체 단백질이 다른 HER 티로신 키나제 수용체 단백질과 이합체를 형성하는 능력을 억제한다. 수용체 단백질 이합체의 억제는 HER 신호 전달의 활성을 막고, 종양세포의 세포자살을 일으킨다. 퍼투주맙은 또한 rhuMAb 2C4로 알려져 있고 미국 특허 번호 6,949,245 및 5,821,337에 기재되어 있고 본 발명에 참고로 포함되어 있다.

다른 일실시예에 있어서, 상기의 방법은 상기 화학식(Ⅰ)(또는 화학식(Ⅱ) 또는 화학식(Ⅲ))의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능함 염이 안티센스 HER2(ErbB2) 올리코뉴클레오타이드와 함께 투여되어 수행된다. 안티센스 HER2 올리고뉴클레오타이드는 동시에 또는 연속으로 투여될 수 있다.

일실시예에 있어서, 안티센스 HER2 올리고뉴클레오타이드는 HER2 mRNA 전구체(pre-mRNA) 또는 mRNA의 최소한 8연속 뉴클레오타이드와 상보적인 핵산을 포함한다.

"올리고뉴클레오타이드"는 일반적으로 상대적으로 짧은 폴리뉴클레오타이드, 즉 크기가 2에서 200 뉴클레오타이드이고 바람직하게는 8에서 50이고, 더욱 바람직하게는 8에서 30뉴클레오타이드 이다. 본 발명에 따른 올리고뉴클레오타이드는 별도로 특정되지 않으면 일반적으로 합성 핵산이고 단일 가닥이다. "폴레뉴클레오타이드(polynucleotide)"는 또한 여기서 같은 뜻으로 사용될 수 있다.

본 발명에서 생각되어 질 수 있는 올리고뉴클레오타이드에 대한 변형은 예를 들면 추가적 전하, 분극성, 수소 결합, 정전기적 작용 및 기능을 포함하는 작용 모이어티의 올리고뉴클레오타이드로의 첨가 또는 치환을 포함한다. 이러한 변형은 이에 한정되지는 않지만 2'-자리 당 변형, 5-자리 피리미딘 변형, 8-자리 푸린 변형, 외향고리 아민의 변형, 4-티오우리딘의 치환, 5-브롬 또는 5-요오드우라실(iodouracil)의 치환, 골격 변형, 메틸화(methylation), 이소염기(isobases), 이소시티딘(isocytidine) 및 이소구아니딘(isoguanidine)과 같은 염기쌍 조합 및 유사체 조합을 포함한다. 본 발명의 범위 내에서 생각되어 질수 있는 올리고뉴클레오타이드는 또한 3' 및/또는 5' 캡(cap) 구조를 포함한다.

본 발명의 목적에 있어서, "캡 구조(cap structure)" 는 올리고뉴클레오티드 말단이 포함되는 화학적 변형을 의미하는 것으로 이해되어 진다. 캡은 5'-말단(5'-캡) 또는 3'-말단(3'-캡)에 존재할 수 있고, 두 말단에 모두 존재할 수 있다. 5'-캡의 한정되지 않는 예는 반전된 무염기(abasic) 잔기(모이어티), 4',5'-메틸렌 뉴클레오타이드; 1-(베타-D-에리스로푸라노실(erythrofuranosyl)) 뉴클레오타이드, 4'-티오 뉴클레오타이드, 카복실산 뉴클레오타이드; 1,5-안히드록시헥시톨(anhydrohexitol) 뉴클레오타이드; L-뉴클레오타이드; 알파-뉴클레오타이드; 변형된 염기 뉴클레오타이드; 포스포로디티오에이트 결합(phosphorodithioate linkage); 트레오펜토푸라노실 뉴클레오타이드(threopentofuranosyl nucleotide); 비고리 3',4'-세코 뉴클레오타이드; 비고리 3,4-디히드록시부틸 뉴클레오타이드; 비고리 3,5-디히드록시펜틸 뉴클레오타이드, 3'-3'- 반전된 뉴클레오타이드 모이어티; 3'-3'-반전된 무염기(abasic) 모이어티; 3'-2'-반전된 뉴클레오티드 모이어티; 3'-2'-반전된 무염기 모이어티; 1,4-부탄디올 포스페이트(1,4-butanediol phosphate); 3'-포스포아미데이트(3'-phosphoramidate); 헥실포스페이트(hexylphosphate); 아미노헥실 포스페이트(aminohexyl phosphate); 3'-포스페이트(3'-phosphate); 3'-포스포로티오에이트(3'-phosphorothioate); 포스포로디티오에이트(phosphorodithioate); 또는 다리(bridging) 또는 비-다리(non-bridging) 메틸포스포네이트(methylphosphonate) 모이어티를 포함한다. WO 97/26270에 상세히 기재되어 있고, 본 발명에 참고로 포함되어 있다. 3'-cap은 4',5'-메틸렌 뉴클레오타이드; 1-(베타-D-에리스로푸라노실) 뉴클레오타이드; 4'-티오 뉴클레오타이드, 카복사이클릭 뉴클레오타이드(carbocyclic nucleotide); 5'-아미노-알킬 포스페이트; 1,3-디아미노-2-프로필 포스페이트, 3-아미노프로필 포스페이트; 6-아미노헥실 포스페이트; 1,2-아미노도데실 포스페이트; 히드록시프로필 포스페이트; 1,5-안히드록시헥시톨 뉴클레오타이드(anhydrohexitol nucleotide); L-뉴클레오타이드; ㅇ-알파-뉴클레오타이드; 변형된 염기 뉴클레오타이드(modified base nucleotide); 포스포로디티오에이트(phosphorodithioate); 트레오-펜토푸라노실 뉴클레오타이드(threo-pentofuranosyl nucleotide); 비고리 3'.4' 세코 뉴클레오타이드( acyclic 3',4'-seco nucleotide); 3,4-디히드록시부틸 뉴클레오타이드; 3,5-디히드록시펜틸 뉴클레오타이드(dihydroxypentyl nucleotide), 5'-5'-반전 뉴클레오타이드 모이어티; 5'-5'-반전 무염기 모이어티; 5'-포스포아미데이트(phosphoramidate); 5'-포스포로티오에이트; 1,4-부탄디올 포스페이트; 5'-아미노; 다리 및/또는 비-다리 5'-포스포아미데이트, 포스포로티오에이트 및/또는 포스포로디티오에이트, 다리 또는 비-다리 메틸포스포네이트(methylphosphonate) 및 5'-머캅토 모이어티를 포함한다. Beaucage and Iyer, 1993, Tertrahedron 49, 1925에 기재되어 있고; 이의 내용이 본 발명에 참고로 포함되어 있다.

한정되지 않는 뉴클레오사이드 유사체는 하기의 구조를 갖는다:

더 많은 뉴클레오사이드 유사체의 예가 Freier & Altmann; Nucl. Acid Res., 1997, 25, 4429-4443 and Uhlmann; Curr. Opinion in Drug Development, 2000, 3(2), 293-213, 상기의 내용이 본 발명에 참고로 포함되어 있다.

본 발명에서 사용되는 "안티센스(antisense)"는 유전자 물질을 인코딩하거나 대조 서열을 인코딩하는 특정 DNA 또는 RNA 서열에 상보적인 뉴클레오타이드 서열을 의미한다. "안티센스 가닥"이란 용어는 "센스"가닥에 상보적인 핵산 가닥과 관련하여 사용된다. 세포 대사의 정상 활동에 있어서, DNA 분자의 센스(sense) 가닥은 폴리펩티드 및/또는 다른 유전자 물질을 인코딩하는 가닥이다. 안티센스 가닥은 메신저 RNA(mRNA) 전사(센스 가닥)의 합성에 주형으로 이용되며, 결국 이것은 모든 인코딩된 유전자 물질의 직접적 합성이다. 안티센스 핵산 분자는 상보적인 가닥의 합성을 허용하는 바이러스 프로모터에 역방향으로 관심 유전자를 라이게이션 함으로써 합성하는 것을 포함하는 모든 공지 기술 방법에 의해 만들어질 수 있다. 세포내에 도입되고 나면 이 전사된 가닥은 두플렉스(duplexes)를 형성하기 위해 세포에 의해 생산된 자연 서열과 결합한다. 이 두플렉스는 그 이후의 전사 및 번역을 차단한다. 이 지정 "네거티브(negative)" 또는 (-) 는 또한 안티센스 가닥을 의미하는 것으로 기술분야에 알려졌고, "포지티브(positive)" 또는(+)는 센스 가닥을 의미하는 것으로 기술분야에 알려졌다.

본 발명의 목적에 있어서, "상보적인(complementary)"은 핵산 서열이 다른 핵산 서열과 수소결합을 형성하는 의미로 이해되어 진다. 퍼센트 상보성은 두 번째 핵산서열과 수소결합을 형성할 수 있는 핵산분자에 인접한 잔기의 퍼센트로, 즉 왓슨 크릭 염기쌍에서 10개 중 5, 6, 7, 8, 9, 10은 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 및 100% 상보성이다. "완벽하게 상보적인(perfectly complementary)"은 핵산 서열의 인접한 모든 잔기가 같은 숫자로 두 번째 핵산 서열에 있는 인접한 잔기와 수소결합을 형성하는 것을 의미한다.

상기에 기재된 방법에 이용되는 올리고뉴클레오타이드 또는 올리고뉴클레오타이드 유도체는 10 내지 1000의 핵산을 포함하고, 바람직하게는 상대적으로 작은 폴리뉴클레오타이드, 예를 들면 길이가 약 8 내지 30 뉴클레오타이드의 크기 범위이다(예를 들면 약 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30).

상기 방법에 이용되는 핵산의 일면에 있어서, 천연 포스포로디에스터 골격 또는 포스포로티오에이트 골격 또는 다른 변형된 골격 유사체를 가지는 올리고뉴클레오타이드 및 올리고디옥시뉴클레오트이드는 :

LNA (Locked Nucleic Acid);

PNA (펩티드 골격을 가지는 핵산)(nucleic acid with peptide backbone);

짧은 간섭 RNA (siRNA);

마이크로 RNA (miRNA);

펩티드 골격을 가지는 핵산(PNA);

포스포로디아미데이트 모폴리노 올리고뉴클레오티드(phosphorodiamidate morpholino oligonucleotides)(PMO);

트리사이클로-DNA(tricyclo-DNA);

디코이 올리고디옥시뉴클레오타이드(decoy ODN)(이중 가닥 올리고뉴클레오타이드);

촉매 RNA 서열(catalytic RNA sequence)(RNAi);

리보자임(ribozymes);

앱타머(aptamers);

스피겔머(spiegelmers)(L-형태 올리고뉴클레오타이드);

CpG 올리고머 및 이와 유사한, 예를 들면 Tides 2002, Oligonucleotide & Peptide Technology Conferences, May 6-8, 2002, Las Vegas, NV and Oligonucleotide & Peptide Technologies, 18th & 19th November 2003, Hamburg, Germany에 기재되어 있는 것을 포함하며, 이들의 내용은 본 발명에 참고로 포함되었다.

상기 방법에 이용되는 핵산의 다른 일면에 있어서, 올리고뉴클레오타이드는 임의로 어떠한 적당한 당업자에 알려진 하기의 표1에 기재된 것을 포함하는 뉴클레오타이드 유사체 및 유도체를 포함한다:

대표적 뉴클레오티드 유사체 및 유도체.

4-아세틸시스티딘(4-acetylcytidine)	5-메톡시아미노메틸-2-티오우리딘(5-methoxyaminomethyl-2-thiouridine)
5-(카복시히드록시메틸)우리딘(5-(carboxyhydroxymethyl)uridine)	베타, D-만노실쿠에오신 (beta, D-mannosylqueuosine)
2'-O-메틸시티딘(2'-O-methylcytidine)	5-메톡시카보닐메틸-2-티오우리딘(5-methoxycarbonylmethyl-2-thiouridine)
5-메톡시카보닐메틸우리딘(5-methoxycarbonylmethyluridine)	5-카복시메틸아미노메틸-2-티오우리딘(5-carboxymethylaminomethyl-2-thiouridine)
5-메톡시우리딘(5-methoxyuridine)	5-카복시메틸아미노메틸우리딘(5-carboxymethylaminomethyluridine)
디히드로우리딘(Dihydrouridine)	2-메틸티오-N6-이소펜테닐아데노신(2-methylthio-N6-isopentenyladenosine)
2'-O-메틸수도우리딘(2'-O-methylpseudouridine)	N-[(9-베타-D-리보푸라노실푸린-2-메틸티오푸린-6-일)카바모일]트레오닌(N-[(9-beta-D-ribofuranosyl-2-methylthiopurine-6-yl)carbamoyl]threonine)
D-갈락토실쿠에오신(D-galactosylqueuosine)	N-[(9-베타-D-리보푸라노실푸린-6-일)N-메틸카바모일]트레오닌(N-[(9-beta-D-ribofuranosylpurine-6-yl)N-methylcarbamoyl]threonine)
2'-O-메틸구아노신(2'-O-methylguanosine)	우리딘-5-옥시아세트산-메틸에스테르(uridine-5-oxyacetic acid-methylester)
2'-할로-아데노신(2' halo-adenosine)	2'-할로-시티딘(2'-halo-cytidine)
2'-할로-구아노신(2'-halo-guanosine)	2'-할로-티민(2'-halo-thymine)
2'-할로-우리딘(2'-halo-uridine)	2'-할로-메틸시티딘(2'-halo-methylcytidine)
2'-아미노-아데노신(2'-amino-adenosine)	2'-아미노-시티딘(2'-amino-cytidine)
2'-아미노-구아노신(2'-amino-guanosine)	2'-아미노-티민(2'-amino-thymine)
2'-아미노-우리딘(2'-amino-uridine)	2'-아미노-메틸시티딘(2'-amino-methylcytidine)
이노신(Inosine)	우리딘-5-옥시아세트산(uridine-5-oxyacetic acid)
N6-이소펜테닐아데노신(N6-isopentenyladenosine)	와이부톡소신(Wybutoxosine)
1-메틸아데노신(1-methyladenosine)	수도우리딘(Pseudouridine)
1-메틸수도우리딘(1-methylpseudouridine)	쿠에오신(Queuosine)
1-메틸구아노신(1-methylguanosine)	2-티오시스티딘(2-thiocytidine)
1-메틸이노신(1-methylinosine)	5-메틸-2-티오우리딘(5-methyl-2-thiouridine)
2,2-디메틸구아노신(2,2-dimethylguanosine)	2-티오우리딘(2-thiouridine)
2-메틸아데노신(2-methyladenosine)	4-티오우리딘(4-thiouridine)
2-메틸구아노신(2-methylguanosine)	5-메틸우리딘(5-methyluridine)
3-메틸시티딘(3-methylcytidine)	N-[(9-베타-D-리로푸라노실푸린-6-일)-카바모일]트레오닌(N-[(9-beta-D-ribofuranosylpurine-6-yl)-carbamoyl]threonine)
5-메틸시티딘(5-methylcytidine)	2'-O-메틸-5-메틸우리딘(2'-O-methyl-5-methyluridine)
N6-메틸아데노신(N6-methyladenosine)	2'-O-메틸우리딘(2'-O-methyluridine)
7-메틸구아노신(7-methylguanosine)	와이부토신(Wybutosine)
5-메틸아미노메틸우리딘(5-methylaminomethyluridine)	3-(3-아미노-3-카복시-프로필)우리딘(3-(3-amino-3-carboxy-propyl)uridine)
잠금-아데캅노신(Locked-adenosine)	잠금-시티딘(Locked-cytidine)
잠금-구아노신(Locked-guanosine)	잠금-티민(Locked-thymine)
잠금-우리딘(Locked-uridine)	잠금-메틸시티딘(Locked-methylcytidine)

특정 일실시예에 있어서, 안티센스 HER2(ErbB2) 올리고뉴클레오타이드는 서열번호:1(GenBank Accession NO. X03363)에 있는 서열의 최소한 8 연속 뉴클레오타이드에 상보적인 뉴클레오타이드를 포함한다. 또한 Yamamoto, T등. Nature 319:230-234, 1986; Papewalis, J등. Nucleic Acids Res. 1:5452, 1991 를 참고하고 이들의 내용이 본 발명에 참고로 포함되어 있다.

바람직하게는 본 발명에 따른 올리고뉴클레오타이드는 하나 또는 그 이상의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 결합(골격)(phosphothiate internucleotide linkage) 및 하나 또는 그 이상의 잠금 핵산(LNA)을 포함한다. 바람직하게는, LNA 단량체는 하기의 2'-O, 4'-C 메틸렌 비사이클로뉴클레오타이드(bicyclonucleotide)를 포함한다:

D. HER2 양성 암을 가진 환자의 선별

상기에 기재된 치료법은 HER2 양성 암을 가진 환자에게 도움을 준다. 상기에 기재된 치료법은 유의적으로 생존기간을 연장시켰다. 상기에 기재된 치료를 받기 위해 HER2 양성 암을 가진 환자를 선별하는 것은 HER2 발현 수준을 측정하여 미리 결정될 수 있다. HER2 발현 수준 외에, 상기 치료를 받기 위한 환자의 선별에서 환자의 임상적 병력도 고려되어야한다.

HER2 단백질 또는 유전자 수준은 이에 한정되지는 않지만, 면역조직화학 검정(IHC), 은 동소보합검정(silver in situ hybridization)(SISH), 색원체 동소보합검정(chromogenic in situ hybridization), 형광 동소보함검정(fluorescence in situ hybridizaiont), 가상핵형분석(virtual karyotyping), PCR-기초 방법 및 당해 기술분야에서 알려진 다른 방법을 포함하는 기술에 의해 측정될 수 있다. 그러므로 HER2 양성 암을 가진 환자의 선별은 상기 치료법의 잠재적 이익을 배제시키는 하나의 검정에 의존하는 것보다 검정의 조합을 통해 확진되었을 때, 더 신뢰할 수 있다. 최근에 추천되는 검정은 IHC 및 FISH의 조합이다.

일반적으로 말해서, 세포 또는 조직에서 HER2 발현은 HER2 수용체 단백질 발현 또는 HER2 유전자 증폭의 수준을 측정하여 평가될 수 있다. 미식약청(FDA)은 HER2 발현을 결정하는데 도움을 주는 몇몇 HER2 시험법을 승인하였고 상업적으로 판매되는 몇몇 시험법이 있다. 이러한 검정은 IHC 및/또는 FISH 검정을 활용한다. 예를 들면 상업적으로 이용가능한 검정은 Dako HercepTest®(카피테리아, 캘리포니아, 미국) 및 Ventana Pathway® HER-2/neu (애리조나, 미국)을 포함하고 이것들은 HER2 단백질의 수준을 측정한다(IHC 검정); 그리고 PathVysion® 및 HER2 FISH pharmDx^TM 을 포함하고 이들은 유전자 증폭의 수준을 측정한다(FISH 검정). 시험 표본에서 HER2 발현을 평가하기 위한 자세한 정보와 가이드라인은 각 시험 키트의 용기에 포함되어 제공되고 앞선 테스트 키트의 용기에 포함되어 있는 내용물은 본 발명에 참고로 포함된다. HER2 발현 측정을 평가하고 확증하는 것은 테스트 키트의 용기에 포함되어 있는 가이드라인을 따라야 한다.

HercepTest® 및 Pathway® 테스트 키트는 모두 IHC를 이용하고 시험조직/세포에서의 HER2 단백질의 수준을 측정한다. 이것은 굉장히 표준화되었고, 반정량 검정(semi-quantitiative assays)이다. IHC 시험 결과의 해석은 염색 강도 및 세포막 염색의 완전성의 검시자의 해석에 기초하여 0에서 3+ 단계의 점수 시스템을 이용한다: 0(음성), 1+(음성), 2+(경계선/약한 양성), 또는 3+(양성). 점수 0 은 세포당 <20,000의 수용체가 있고 막 염색이 보이지 않거나 종양 세포의 10% 미만에서 막 염색이 관찰되는 것을 나타낸다. 점수 1+는 세포당 100,000까지의 수용체가 있고, 종양 세포의 10% 이상에서 막 염색이 관찰되지만 막이 부분적으로 염색되는 것을 나타낸다. 점수 2+는 세포당 500,000까지의 수용체가 있고 종양 세포의 10% 이상에서 미약에서 중등도의 완전 세포막 염색이 관찰되는 것을 나타낸다. 점수 3+는 세포당 2,000,000까지의 수용체가 있고, 종양 세포의 10% 이상에서 강한 완전 막 염색이 얻어지는 것을 나타낸다.

FISH 테스트와 함께, HER2/neu 유전자 복제 수를 세어서 종양은 HER2 음성(FISH-) 또는 양성(FISH+)로 해석될 수 있다. HER2 단백질 과발현의 존재 및 유전자 증폭은 굉장히 연관되어 있다. FISH 분석은 유전자 증폭을 가지지 않는 (FISH-) IHC 2+ 또는 IHC 3+를 가지는 일부 환자를 밝히고 이 환자들은 위양성일 수 있다는 것을 시사한다. PathVysion® 기술에 따르면, 약 40%의 IHC-양성 환자(2+/3+)는 유전자 증폭을 가지지 않는 FISH 음성이었다. 그러므로 IHC 2+의 환자들은 FISH 검정에 적용되는 것이 추천된다.

E. 조성물/제형( COMPOSITIONS )/( FORMULATIONS )

상기의 중합 컨쥬게이트 및 HER 길항제를 포함하고 있는 약학적 조성물은 당해 기술분야에서 잘 알려진 방법으로 제조될 수 있다. 예를 들면, 다양한 잘 알려진 혼합(mixing), 용해(dissolving), 입화(granulating), 연화(levigating), 에멀션화(emulsifying), 캡슐화(encapsulating), 포괄(entrapping) 또는 동결건조(lyophilizing) 과정을 이용한다. 상기 조성물은 활성 화합물을 약학적으로 이용될 수 있는 것으로 제조하는 공정을 촉진하는 첨가제 및 보조제를 포함하는 하나 이상의 생리학적으로 허용가능한 담체와 함께 제형화될 수 있다. 적합한 제형은 선택한 투여 경로에 의존한다. 비경구 투여는 본 발명의 많은 측면에서 바람직하다.

주사제에 있어서는 이에 한정되지는 않지만 정맥 내 , 근육 내 및 피하 내 주사를 포함하고, 상기의 화학식(Ⅰ)(대안적으로 화학식(Ⅱ) 또는 화학식(Ⅲ))의 화합물은 수용액으로 제형화될 수 있고, 바람직하게는 생리 식염수 완충용액 또는 피롤리돈 또는 디메틸설폭사이드를 포함하나 이에 한정되지 않는 극성 용매와 같은 생리학적으로 양립가능한 완충용액으로 제형화될 수 있다.

상기 화합물은 또한 볼루스 주사(bolus injection) 또는 연속 주입(continuous infusion)과 같은 비경구 투여로 제형화될 수 있다. 주사형 제형은 예를 들어, 앰플(ampoules) 또는 복수-용량 용기(multi-dose containers) 등의 단위 용량 형태로 존재한다. 유용한 조성물은 오일(oil) 또는 수성 비히클에서 현탁액, 용액 또는 에멀젼을 포함하나 이에 한정되지 않으며, 현탁제, 안정제 및/또는 분산제와 같은 부가물을 포함한다. 비경구 투여용 약학적 조성물은 활성 화합물의 염과 같은 수용성 형태의 수성 용액을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 추가적으로, 상기 활성 화합물의 현탁액은 지방 친화성 비히클로 제조될 수 있다. 적절한 지방 친화성 비히클은 참기름과 같은 지방성 오일, 에틸 올레이트(ethyl oleate) 및 트리글리세리드(triglyceride)와 같은 합성 지방산 에스테르 또는 리포솜(liposomes)과 같은 물질을 포함한다. 수용액 주사 현탁액은 소디움 카르복시메틸 셀룰로오스(sodium carboxymethyl cellulose), 솔비톨 또는 덱스트란과 같은 현탁액의 점성(viscosity)을 증가시키는 물질을 포함할 수 있다. 또한, 임의로 현탁액은 적절한 안정제 및/또는 고농축된 용액을 제조하기 위해 화합물의 용해도를 증가시키는 물질을 포함할 수 있다. 대안적으로, 상기 활성 성분은 예를 들어, 사용되기 전에 멸균된 발열성 물질 무함유 물(pyrogen-free water)과 같은 적절한 비히클과 함께 구성되는 분말형태일 수 있다. 일실시예에 있어서, 트라스투주맙은 주사를 위해서 정균성 수용액으로 재구성될 수 있다.

경구 투여용으로, 상기 화합물은 활성 화합물을 당업계에 잘 알려진 약학적으로 허용가능한 담체와 결합함으로써 제형화될 수 있다. 상기 담체는 본 발명의 화합물이 정제(tablet), 환약(pill), 마름모꼴 정제(lozenge), 당의정(dragee), 캡슐(capsule), 액제(liquid), 젤(gel),시럽(syrup), 페이스트(paste), 슬러리(slurry), 용액, 현탁액, 농축액, 환자의 음료수에 희석하기 위한 현탁액 및 환자의 식사에 희석하기 위한 프리믹스 및 이와 비슷한 환자의 경구 투여용으로 제형될 수 있게 한다. 경구용 약학적 조성물은 타블렛 또는 드라제 코어(dragee core)를 획득하기 위해, 원하면 다른 적절한 보조제를 첨가한 후, 고형 첨가제, 선택적으로 분쇄 결과 혼합물(grinding resulting mixture) 및 과립(granule)의 공정 혼합물을 사용하여 제조될 수 있다. 특히, 유용한 첨가제는 락토오즈(lactose), 슈크로즈(sucrose), 만니톨(mannitol) 또는 소비톨(sorbitol)을 포함하는 당과 같은 충전제(filler), 옥수수 전분, 밀가루 전분, 쌀 전분 및 감자 전분과 같은 셀룰로오즈 조제품(cellulose preparation) 및 젤라틴(gelatin), 검트래거캔스(gum tragacanth), 메틸 셀룰로오즈(methyl cellulose), 히드록시프로필 메틸셀룰로오즈(hydroxypropyl-methylcellulose), 소디움 카르복시-메틸셀룰로오즈(sodium carboxy-methylcellulose), 및/또는 폴리비닐피롤리돈(polyvinylpyrrolidone, PVP)과 같은 다른 물질이다. 원한다면, 가교결합된(cross-linked) 폴리비닐피롤리돈, 아가(agar), 또는 알긴산(alginic acid)과 같은 붕해제(disintegrating agent)가 첨가될 수 있다. 또한, 알기산나트륨(Sodium Alginate)과 같은 염이 사용될 수 있다.

흡입(inhalation)에 의한 투여를 위해, 본 발명의 화합물은 가압된 팩(pressurized pack)을 이용하여 에어로졸 스프레이(aerosol spray), 분무기(nebulizer) 및 적절한 추진제(propellant)의 형태로 용이하게 전달될 수 있다.

또한, 화합물은 코코아 버터(cocoa butter) 또는 기타 글리세리드(glyceride) 등을 이용한 종래의 좌약(suppository) 또는 관장약(retention enema)와 같은 직장 투여 조성물로 제형화될 수 있다.

상기 기재된 제형에 추가적으로, 상기 화합물은 데포(depot) 제제로서 제형화될 수 있다. 이런 장시간 작용 제형(long acting formulation)은 이식(예를 들어, 피하로 또는 근육 내로) 또는 근육 내 주사에 의해 투여될 수 있다. 본 발명의 화합물은 이러한 투여 경로를 위해서 적절한 중합(polymeric) 또는 소수성(hydrophobic) 물질(예를 들어 약리학적으로 허용가능한 오일을 포함한 이멀젼 내에서), 이온 교환 수지, 또는 약간의 용해성 염과 같은 약간의 용해성 유도체와 함께 제형화될 수 있다.

리포솜(liposome) 및 유제(emulsion)와 같은 다른 전달 시스템이 이용될 수 있다.

추가적으로, 상기 화합물은 치료제를 포함하는 고형 소수성 중합체(solid hydrophobic polymer)의 반투과성 매트릭스(semi-permeable matrix)와 같은 서방형 시스템(sustained release system)을 이용하여 전달될 수 있다. 다양한 서방형 물질은 공지되어 있고, 당업자에게 잘 알려져 있다. 서방형 캡슐은 이들의 화학적 특성에 의존하고, 몇 주 내지 100일에 걸친 동안 화합물을 방출할 수 있다. 특정 화합물의 화학적 특성 및 생물학적 안정성에 따라, 추가적인 안정성 전략이 적용될 수 있다.

F. 용량( DOSAGES )

본 발명의 방법에 사용된 화합물에 관하여, 약학적으로 유효량은 생체 외(in vitro) 분석으로부터 추정될 수 있다. 그 후 용량은 유효한 용량을 포함하는 순환 농도 범위(circulating concentration range)를 획득하기 위하여 동물 모델에서의 사용을 위해 제형화될 수 있다. 상기 정보는 환자에서 유용한 용량을 정확하게 결정하는데 사용될 수 있다.

예를 들어 투여되는 전구약물로 사용된 상기 조성물의 양은 본 발명에 포함된 모분자(이 경우에는 7-에틸-10-히드록시캠토테신)에 의존할 것이다. 일반적으로, 본 발명의 치료방법에서 사용되는 전구약물의 양은 포유류에서 의도한 치료학적인 결과를 효과적으로 달성하는 양이다. 당연히 상기 다양한 전구약물 화합물의 용량은 모화합물, 생체 외 가수분해 비율, 중합체의 분자량 등에 따라 어느 정도 다를 수 있다. 또한 용량은 몰론 투약 형태 및 투여 경로에 따라 다를 수 있다.

그러나 일반적으로 상기의 7-에틸-10-히드록시캠토테신의 중합 에스테르 유도체는 전신적 전달을 위해서 약 0.3 내지 90 mg/㎡ 체표면의 범위로 투여될 수 있고, 바람직하게는 약 0.5 내지 50mg/㎡ 체표면/용량이며, 더욱 바람직하게는 약 1 내지 18mg/㎡ 체표면/용량이고, 더더욱 바람직하게는 1.25 내지 16.5mg/㎡ 체표면/용량이다. 일부 특정 용량은 다음의 하나를 포함한다: 1.25, 2.5, 5, 9, 10, 12, 13, 14, 15, 16 및 16.5 mg/㎡/용량. 하나의 바람직한 용량은 5mg/㎡ 체표면/용량을 포함한다.

상기의 화학식(Ⅰ)(대안적으로 화학식(Ⅱ) 또는 화학식(Ⅲ))의 화합물은 약 0.3 내지 90mg/㎡ 체표면/주(week)의 범위 내 양으로 투여될 수 있고 예를 들면, 약 1내지 18mg/㎡ 체표면/주(week)이다. 특정 일실시예에 있어서, 용량 요법은 예를 들면 4주 주기에서 3주 동안 약 5 내지 7 mg/㎡ 체표면/주, 약 1.25 내지 45mg/㎡ 3주마다 일 회 주사, 및/또는 1 내지 16mg/㎡ 4주 주기에서 매주 3회 주사일 수 있다.

치료 프로토콜(protocol)은 예를 들면, 3주마다 단일용량 투여에 기초하거나 여러주 치료 프로토콜의 일부로 투여되는 복수의 용량으로 나누어질 수 있다. 그러므로 치료 요법은 예를 들면, 각 치료 주기에 3주마다 단일 용량, 대안적으로 각 치료 주기에 3주 동안 매주 단일 용량 후 1주 쉬는 것을 포함한다. 또한 치료는 원하는 임상적 결과가 얻어질 때까지 하나 또는 그 이상의 주기로 제공되는 것이 생각되어 질 수 있다.

상기에서 설명된 범위는 예시적이며, 당업계에서 숙련자들이 임상 경험 및 치료 징후에 기반하여 선택된 전구약물의 최적 투약량을 결정할 것이다. 또한 정확한 제형, 투약 경로 및 투약량은 환자의 상태에 비추어서 의사에 의해 선택될 수 있다. 정확한 용량은 당해 기술분야의 통상의 기술자에 의해 평가되는 환자 상태의 단계 및 심각성 및 처치 받는 환자의 개인적 특성에 의존할 것이다.

추가적으로, 본 발명에 기재된 화합물의 독성 및 약학적 효능은 당업계에 잘 알려진 방법을 이용하여 세포 배양 또는 실험 동물에서 표준 약학적 절차에 의해 결정될 수 있다.

일부 바람직한 실시예에 있어서, 치료 프로토콜은 약 1.25 내지 16.5mg/㎡ 체표면/용량의 범위 내에서 3주 동안 매주 투여하고 그 이후 한 주는 처치하지 않고, 바람직한 결과가 관찰될 때까지 3 주기 또는 그 이상을 반복하는 것을 포함한다. 각 주기 마다 투여되는 양은 약 2.5 내지 16.5mg/㎡ 체표면/용량 범위 일 수 있다.

특정 일실시예에 있어서, 7-에틸-10-히드록시캠토테신의 중합 에스테르 유도체는 단일 용량으로 투여될 수 있고, 예를 들면 5, 9 또는 10 mg/㎡를 3주 동안 매주, 그 이후 한 주는 처치를 안하는 것이다. 2회 또는 그 이상의 치료 주기가 적용될 때, 치료 주기의 용량은 증가하는 용량 요법으로 설계될 수 있다. 바람직하게는 중합 약물은 정맥 주입(infusion)으로 투여된다.

또 다른 특정 일실시예에 있어서, 화학식(Ⅰ)(대안적으로 화학식(Ⅱ) 또는 화학식(Ⅲ))의 화합물은 12 내지 16 mg/㎡ 체표면/용량 범위의 용량으로 투여된다. 복용량은 주마다 투여될 수 있다. 치료 프로토콜은 화학식(Ⅰ)(대안적으로 화학식(Ⅱ) 또는 화학식(Ⅲ))의 화합물을 12 내지 16 mg/㎡ 체표면/용량 범위의 양으로 3주 동안 매 주마다 투여하고 그 이후 한 주는 처치를 안하는 것을 포함한다.

또 다른 특정 일실시예에 있어서, 용량 요법은 3주마다 약 10mg/㎡ 체표면/용량일 수 있다.

대안적인 실시예는: 소아 환자의 치료에 있어서, 3주마다 5일 동안 매일 약 1.85mg/㎡ 체표면/용량의 프로토콜, 25일 마다 3일 동안 매일 약 1.85 내지 7.5mg/㎡ 체표면/용량의 프로토콜, 또는 3주 마다 한번 약 22.5mg/㎡ 체표면/용량의 프로토콜에 기초한 요법을 포함하고, 성인 환자의 치료에 있어서, 3주 마다 약 13mg/㎡ 체표면/용량 또는 6주마다 4주 동안 매주 약 4.5mg/㎡ 체표면/용량에 기초한 프로토콜을 포함한다. 상기에 기재된 화합물은 2차 치료제와 병용하여 투여될 수 있다. 일실시예에 있어서, 병용 요법은 각 주기마다 5일 동안 매일 약 0.75 mg/㎡ 체표면/용량을 2차 제제와 병용하는 프로토콜을 포함한다.

대안적으로 화합물은 체중에 기초하여 투여될 수 있다. 화학식(Ⅰ)(대안적으로 화학식(Ⅱ) 또는 화학식(Ⅲ))의 화합물의 전신 전달을 위한 용량 범위는 포유류에서 약 1 내지 100 mg/kg/주 일 것이고, 바람직하게는 2 내지 60mg/kg/주 이다. 그러므로 투여량은 약 0.1 내지 30mg/kg/몸무게/용량의 범위 일 수 있고, 바람직하게는 약 0.3 내지 10mg/kg이다. 5 내지 10mg/kg을 이틀에 한번(q2d) × 5 요법(복수 용량) 또는 20 내지 30mg/kg 단일 용량 요법과 같은 특정 용량으로 투여될 수 있다.

본 발명의 모든 면에 있어서, 중합 컨쥬게이트가 투여되는 모든 곳에서, 언급된 복용량은 중합 컨쥬게이트가 투여되는 양이 아니라 활성제(바람직하게는 7-에틸-10-히드록시캠토테신)의 양에 기초한다. 치료를 원하는 임상적 결과가 얻어질 때까지, 일 회 또는 그 이상의 주기로 투여하는 것이 생각되어 질 수 있다. 본 발명의 화합물 투여의 정확한 양, 빈도 및 기간은 임상의에 의해 결정된 질병의 심각도 뿐만 아니라 환자의 성별, 나이 및 의학적 상태에 따라 다를 것이다. 상기의 무게는 치료에 이용되는 PEG-컨쥬케이트 7-에틸-10-히드록시캠토테신에 존재하는 7-에틸-10-히드록시캠토테신의 무게를 나타낸다. PEG-컨쥬게이트 7-에틸-10-히드록시캠토테신의 중량은 PEG의 하중(예를 들면, PEG의 1몰당 임의로 1 내지 4 몰의 7-에틸-10-히드록시캠토테신)에 의존하여 다양할 것이다.

HER2 길항제는 화학식(Ⅰ)(대안적으로 화학식(Ⅱ) 또는 화학식(Ⅲ))의 화합물과 동시에 또는 연속적으로 병용 투여될 수 있다. 병용 요법 프로토콜은 항-HER2 항체를 약 0.5 내지 15mg/kg 몸무게의 범위로 투여하는 것을 포함하고 즉, 약 2mg/kg 내지 8mg/kg/용량이고 예를 들면, 2, 4, 6, 8mg/kg/용량이다.

일실시예에 있어서, 트라스투주맙은 다음의 프로토콜에 기초하여 투여된다: 병용 요법 동안 및 후에 매주 최초 용량 4m/kg 정맥 내 투여 후 2mg/kg/용량 정맥 내 투여, 또는 원하는 임상적 결과가 달성될 때까지 3주마다 최초 용량 8m/kg 정맥 내 투여 후 6mg/kg 정맥 내 투여. 트라스투주맙의 자세한 용량 정보는 Herceptin®의 포장에 삽입되어 있고, 그 내용이 본 발명에 참고로 포함되어 있다.

또 다른 일실시예에 있어서 퍼투주맙은 상기 병용 요법 동안 및 후에 3주 마다 0.5 내지 15mg/kg/용량 범위의 양으로 정맥 내 투여한다. 퍼투주맙은 다음의 프로토콜에 기초하여 투여된다: 3주마다 5mg/kg/용량. Agus, D.B등, Journal of Clinical Oncology, 23:2534-2543, 2005를 참고하고 그 내용이 본 발명에 참고로 포함되어 있다.

병용 요법은 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 약 2 내지 100mg/kg/용량(예를 들면 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 100mg/kg용량)의 양으로 투여하는 것을 포함한다. 예를 들면, 병용 투여 요법 용량은 안티센스 HER2 올리고뉴클레오타이드를 2 내지 50mg/kg/용량의 양으로 처치하는 것을 포함한다. 바람직하게는 병용 요법에서 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 약 4 내지 25 mg/kg/용량의 양으로 투여된다.

병용 요법의 일면에 있어서, 프로토콜은 병용 요법 동안 매주 약 4 내지 18mg/kg/용량, 또는 매주 약 4 내지 9.5mg/kg/dose의 안티센스 HER2 올리고뉴클레오타이드를 투여하는 것을 포함한다.

특정 일실시예에 있어서, 병용 요법 프로토콜은 안티센스 HER2 올리고뉴클레오타이드를 6주 주기에서 3주 동안 매주 4 내지 18mg/kg/용량(즉 약 8mg/kg/dose) 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 특정 일실시예는 매주 약 4 내지 9.5mg/kg/용량(즉 약 4.1mg/kg/용량)을 투여하는 것을 포함한다.

본 발명에 포함된 HER2 길항제는 상기의 화학식(Ⅰ)(또는 화학식(Ⅱ) 또는 화학식(Ⅲ))의 화합물과 병용 투여 되고, 병용 투여의 각각의 구성성분은 연속적으로 또는 모든 용이한 경로로 분리되거나 조합된 약학적 제형으로 동시에 투여될 수 있다. HER2 길항제 및 상기의 화학식(Ⅰ)(또는 화학식(Ⅱ) 또는 화학식(Ⅲ))의 화합물이 연속적으로 투여될 때, 상기의 화학식(Ⅰ)(또는 화학식(Ⅱ) 또는 화학식(Ⅲ))의 화합물 또는 HER2 길항제가 먼저 투여될 수 있다. 예를 들면, HER2 길항제 및 화학식(Ⅰ)(또는 화학식(Ⅱ) 또는 화학식(Ⅲ))의 화합물은 투여 요법에서 연속적인 방법으로 투여되고 병용의 유익한 효과를 제공할 것이다. HER2 길항제 및 화학식(Ⅰ)(또는 화학식(Ⅱ) 또는 화학식(Ⅲ))의 화합물은 동시에 투여될 수 있고, 이 병용은 서로 같은 또는 다른 약학적 조성물로 투여될 수 있다.

본 발명의 추가 일면은 HER2 길항제 및 상기 화합물을 추가적 이득을 위해 다른 화학요법제 또는 방사선요법과 혼합하는 것을 포함한다.

< 실시예 >

다음의 실시예는 본 발명의 부가적 이해를 제공하는데 기여하지만 본 발명의 유효한 범위를 한정하는 의미는 아니다.

< 실시예1 > 독성 데이타

4 분지형-PEG-GLy-(7-에틸-10-히드록시캠토테신)(9번 화합물)의 최대 내약용량(maximum tolerated dose)("MTD")가 누드 마우스를 이용하여 연구되었다. 마우스는 14일 동안 치사율 및 질병의 증상이 관찰되었고 처치되기 전의 몸무게가 >20%으로 감소 되었을 때, 안락사 시켰다.

아래의 표2는 단일 용량 및 복수 용량 투여에서의 각 화합물의 최대 내약용량을 보여준다. 복수 용량 투여에서의 각 용량은 10일 동안 하루씩 거르면서 투여하였고 그 이후 4일 동안 관찰되어 총 14일 동안 관찰되었다.

누드 마우스에서의 MTD 데이타

화합물	투여 용량 ( mg / kg )	생존/총	설명
9번 화합물 단일 용량	25	5/5
	30	5/5
	35	4/5	>20%의 몸무게 감소로 마우스 안락사
9번 화합물 복수 용량*	10	5/5
	15	3/5	>20%의 몸무게 감소로 마우스 안락사
	20	0/5	>20%의 몸무게 감소로 마우스 안락사

4분지형-PEG-Gly-(7-에틸-10-히드록시캠토테신)(9번 화합물)의 MTD는 단일용량에서 30mg/kg 이었고, 복수 용량(이틀에 한번(q2d)×5)에서는 10mg/kg이었다.

< 실시예2 > PEG 컨쥬게이트의 성질

아래 표3은 수용성 식염수에서의 4개의 서로 다른 PEG-(7-에틸-10-히드록시캠토테신) 컨쥬게이트의 수용성을 보여준다. 모든 4개의 PEG-(7-에틸-10-히드록시캠토테신) 컨쥬게이트는 7-에틸-10히드록시캠토테신의 4mg/mL 당량 까지 좋은 수용성을 보였다. 인간 혈장에서, 7-에틸-10-히드록시캠토테신은 22에서 52분의 배가시간(doubling time) 동안 PEG 컨쥬게이트로부터 꾸준히 방출되었고 실시예 3에 기재되어 있듯이 방출은 pH 및 농도 의존적으로 나타났다.

PEG -7-에틸-10- 히드록시캠토테신 컨쥬게이트의 특성

화합물	식염수에서의 수용성 ( mg / mL ) ^a	인간 혈장에서의 반감기 t _1/2 ( min ) ^b	혈장에서의 배가시간 ( min ) ^c
화합물	식염수에서의 수용성 ( mg / mL ) ^a	인간 혈장에서의 반감기 t _1/2 ( min ) ^b	인간	사람	랫드
9번 화합물 (Gly)	180	12.3	31.4	49.5	570
12번 화합물 (Ala)	121	12.5	51.9	45.8	753
23번 화합물 (Sar)	ND	19.0	28.8	43.4	481
18번 화합물 (Met)	142	26.8	22.2	41.9	1920

a: 7-에틸-10-히드록시캠토테신은 식염수에 녹지 않는다.

b: PEG 컨쥬게이트 반감기

c: 컨쥬게이트로부터 7-에틸-10-히드록시캠토테신 형성 속도

PEG-7-에틸-10-히드록시캠토테신 컨쥬게이트는 식염수 및 다른 수분 매질에서 실온에서 24시간까지 좋은 안정성을 보였다.

< 실시예4 > 안정성에 대한 농도 및 pH 의 효과

앞선 실시예에 기초하여, 20-OH 자리의 아실레이션(acylation)은 활성 폐쇄 형태(active closed form)에서 락톤 고리(lactone ring)을 보호한다. 랫드 및 인간 혈장에서의 수분 안정성 및 가수분해 성질을 UV 기초 HPLC 방법으로 관찰하였다. 4분지형-PEG-Gly-(7-에틸-10-히드록시캠토테신)컨쥬게이트는 실온에서 5분 동안 각 샘플과 함께 배양되었다.

버퍼(buffer)에서의 PEG-7-에틸-10-히드록시캠토테신 컨쥬게이트의 안정성은 pH 의존적이엇다. 도 1은 다양한 샘플에서 4분지형-PEG-Gly-(7-에틸-10-히드록시캠토테신)안정성을 보여준다. 도 2는 pH가 증가하면서 7-에틸-10-히드록시캠토테신의 PEG-Gly-(7-에틸-10-히드록시캠토테신)으로부터의 방출속도가 증가하는 것을 보여준다.

< 실시예5 > 약동학 성질

종양이 없는 Balb/C 마우스에 20mg/kg의 4분지형 PEG-Gly-(7-에틸-10-히드록시캠토테신) 컨쥬게이트를 단일 주사하였다. 다양한 시간 시점에서 마우스를 안락사 하였고 혈장은 HPLC를 이용하여 온전한(intact) 컨쥬게이트 및 방출된 7-에틸-10-히드록시캠토테신을 위해 분석되었다. 약동학 분석은 비구획 분석(non-compartmental analysis)(WinNonlin)을 이용하였다. 자세한 사항은 아래의 표4에 나타내었다.

약동학 데이타

파라미터( Parameter )	9번 화합물	9번 화합물로부터 방출된 7-에틸-10-히드록시-캠토테신
AUC *(h㎍/mL)**	124,000	98.3
말단 t _1/2 (hr)	19.3	14.2
C _max (㎍/ mL )	20,500	13.2
CL( mL / hr / kg )	5.3	202
Vss ( mL / kg )	131	3094

도3a 및 3b 나타났듯이, 7-에틸-10-히드록시캠토테신의 PEG화(PEGylation)는 본 약물 7-에틸-10-히드록시캠토테신에 대한 높은 노출과 긴 순환 반감기를 가지게 하였다. 4분지형 PEG-Gly-(7-에틸-10-히드록시캠토테신) 컨쥬게이트의 장간순환이 관찰되었다. 마우스에서의 PEG-Gly-(7-에틸-10-히드록시캠토테신)의 약동학 프로파일은 최초 2시간 동안 빠른 혈장 분포상을 보이는 이상성이었고 그 후 컨쥬게이트에서는 18-22시간의 말단 제거 반감기 및 이에 수반하여 7-에틸-10-히드록시캠토테신에서는 18-26시간의 말단 제거 반감기를 보였다(도 3b).

부가적으로 랫드에서 4분지형 PEG-Gly-(7에틸-10-히드록시캠토테신)의 약동학 프로파일을 연구하였다. 랫드에서 3, 10 및 30mg/kg(7-에틸-10-히드록시캠토테신 당량)의 용량 수준이 이용되었다. 랫드에서의 약동학 프로파일은 마우스에서와 일치하였다.

랫드에서 4분지형 PEG-Gly-(7-에틸-10-히드록시캠토테신)은 12-18시간의 제거 반감기와 함께 순환에서의 이상성 청소율(clearance)를 보였다. 4분지형 PEG-Gly-7-에틸-10-히드록시캠토테신 컨쥬게이트로 부터 방출된 7-에틸-10히드록시캠토테신은 21-22시간의 명백한 제거 반감기를 가졌다. 최대 혈장 농도(C_max) 및 곡선아래면적(AUC)은 랫드에서 용량 의존적 양상으로 증가하였다. 랫드 또는 마우스에서의 4분지형 PEG-Gly-7-에틸-10-히드록시캠토테신 컨쥬게이트로부터 방출된 7-에틸-10히드록시캠토테신의 명백한 반감기는 CPT-11으로부터 방출된 7-에틸-10히드록시캠토테신의 알려진 명백한 반감기보다 유의적으로 길고 4분지형 PEG-Gly-7-에틸-10-히드록시캠토테신 컨쥬게이트로 부터 방출된 7-에틸-10히드록시캠토테신의 노출은 CPT-11으로 부터 방출된 7-에틸-10히드록시캠토테신의 알려진 노출보다 유의적으로 높았다. 모 화합물의 청소율은 랫드에서 0.35mL/hr/kg이었다. 모 화합물의 정상 상태(steady state)에서의 추정된 분포 용적(Vss)은 5.49mL/kg이었다. 방출된 7-에틸-10-히드록시캠토테신의 청소율은 랫드에서 131 mL/hr/kg이었다. 방출된 7-에틸-10-히드록시캠토테신의 추정된 Vss는 랫드에서 2384mL/kg이었다. 방출된 7-에틸-10-히드록시캠토테신의 장간 순환은 마우스와 랫드 모두에서 관찰되었다.

< 실시예 6> Herceptin ®에 난치성인 인간 유방 종양이 이종이식된 마우스에서의 약학적 효능

누드 마우스에서 성장하는 난치성 인간 JIMT-1 유방 종양에 대한 HER2 수용체 길항제가 포함된 치료의 약학적 효능을 측정하였다. 종양은 누드 마우스의 왼쪽 겨드랑이 옆구리쪽 부분에 있는 단일 피하 부위에 작은 종양 조각을 이식함으로써 종양을 생기게 하였다. 종양 이식 부위는 일주일에 두 번 관찰되었고 한번 촉진으로 측정하였다. 각 마우스에서의 종양 부피는 캘리퍼(caliper)를 이용하여 2차원으로 측정하고 계산하였다. 종양의 100㎣의 부피에 도달했을 때 마우스를 하기로 구성되는 실험군으로 나누었다: 처치되지 않은 대조군, Herceptin®, 9번 화합물 및 Herceptin®과 9번 화합물의 조합. Herceptin®은 5mg/kg 몸무게/용량 7일에 한번 복강내 투여되었다. 9번 화합물은 2일에 한번 × 5로 4mg/kg/용량이 정맥 내 투여되었다. 병용 요법을 위해서 Herceptin® 및 9번 화합물은 각각 7일에 한번 5mg/kg/용량 및 2일에 한번 × 5로 4mg/kg/용량이 투여되었다. 9번 화합물은 0일(day 0)에 Herceptin® 처치 1분 후에 투여되었다. 9번 화합물 및 Herceptin®이 동시에 처치된 날은 없었다. 이러한 실험에서 중합 컨쥬게이트의 양이 아니라 7-에틸-10-히드록시캠토테신의 양에 기초한 9번 화합물의 양이 투여되었다. 마우스의 몸무게 및 종양 크기는 연구의 시작과 28일째(day 28)에 측정하였다.

Herceptin® 및 9번 화합물 만은 처치한 것은 28일째에 각각 약 28% 및 51%의 TGI를 보였다. Herceptin® 및 9번 화합물과의 병용 투여는 약 81%의 TGI를 보였다. 결과는 표 5에 나타나 있다.

JIMT -1 유방 종양이 이종이식된 마우스 모델에서의 약학적 효능

처치	종양성장억제 ( TGI ) (%)
대조군	-
Herceptin® 복강 내(i.p.) 투여	28.34
9번 화합물 정맥 내 투여	50.74
Herceptin®복강 내 및 9번 화합물 정맥 내 투여	80.80

다양한 시간 시점에서 측정된 종양 부피가 도 4에 나타나 있다. 9번 화합물 및 Herceptin®의 병용은 종양 성장은 9번 화합물 및 Herceptin® 만을 투여했을 때보다 유의적으로 억제하였다. 결과는 Herceptin®이 9번 화합물과 함께 투여되었을 때 Herceptin® 또는 9번 화합물 단독에 의한 것보다 유방암의 치료에 있어서 유의적으로 더 효과적이라는 것을 보여준다.

상기 화합물을 HER2 수용체 길항제와 병용하는 요법은 HER2 길항제-함유 요법과 관련된 내성을 예상외로 완화하고/하거나 피한다. 인간 JIMT-1 유방 종양은 트라스투주맙 및 퍼투주맙과 같은 HER2 항체에 잘 치료되지 않는다. 상기의 요법은 잠재적인 약물 내성을 피하고 줄임으로써 HER2 길항제에 대한 난치성의 암을 더 효과적으로 치료하는 방법을 제공한다. 환자 및 임상의는 HER2 길항제가 상기 화합물과 병용 투여되었을 때, HER2 길항제-포함 요법에 대한 내성의 예상치 못한 제거 및/또는 감소로 이익을 얻을 수 있다.

< 실시예 7> 인간 위암이 이종이식된 마우스에서의 약학적 효능

누드 마우스에서 성장하는 인간 위암 N87에 대한 HER2 수용체 길항제-포함 요법의 약학적 효능을 결정하였다. 인간 N87 위암을 피하주사로 누드 마우스에 생기게 하였다. Herceptin® 단일, 9번 화합물 단일 및 이 둘의 병용으로 처치된 마우스의 그룹을 임의로 나누었다. Herceptin®은 7일에 한번 복강내로 20mg/kg 몸무게/용량이 투여되었다. 9번 화합물은 이틀에 한번 ×5 정맥 내, 5mg/kg/용량이 투여되었다. 병용 치료를 위해서 9번 화합물 및 Herceptin®은 각각 이틀에 한번 ×5 정맥 내, 5mg/kg/용량, 7일에 한번 복강내로 20mg/kg 몸무게/용량이 투여되었다. 9번 화합물의 양은 7-에틸-10-히드록시캠토테신의 양에 기초하여 투여되었다.

결과는 도 5에 나타나 있다. 종양은 Herceptin® 단독 처치된 마우스에서 계속적으로 성장하였다. 40일째 (day 40)에 0일째에 비해 종양 부피는 613% 증가하였다. Herceptin® 단독으로 처치된 마우스에서의 종양 부피는 처치되지 않은 대조군과 비교할 만하였다. Herceptin® 단독은 위 종양 성장을 억제하지 못했다. 9번 화합물 단독 치료는 종양 성장을 효과적으로 억제하였다. Herceptin® 및 0번 화합물의 병용 처치를 받은 마우스에서 종양 부피는 0일째에 비해 40일째에 23% 감소하였다. 병용 투여 처치를 받은 종양은 연구의 5일째부터 48일까지 퇴행하였다(아래 하한 값). Herceptin® 단독 투여 받은 동물의 71%는 과도한 종양 부하(>1700㎣) 또는 종양 궤양에 의해 52일째까지 폐사하였다. 9번 화합물과 Herceptin®이 처치된 군에서는 86%의 마우스가 95일(연구의 마지막 날)까지 생존하였다. 4분지형 ^40k PEG-Gly-(7-에틸-10-히드록시캠토테신)으로 처치된 살아남은 5 개체(71%)는 80일째에 모두 <1500㎣의 종양을 가졌다.

결과는 상기 화합물이 병용 투여되었을 때, HER2 수용체 길항제의 약학적 효능 및 생존율이 유의적으로 증가했다는 것을 보여준다. 상기의 치료법은 HER2 길항제에 기초한 요법을 더욱 효율적으로 활용하는 방법을 제공한다.

다양한 참고가 인용되었다. 이들의 내용은 본 발명에 모두 참고로 포함되었다.

<110> ENZON PHARMACEUTICALS INC. <120> METHODS OF TREATING HER2 POSITIVE CANCER WITH HER2 RECEPTOR ANTAGONIST IN COMBINATION WITH MULTI-ARM POLYMERIC CONJUGATES OF 7-ETHYL-10-HYDROXYCAMPTOTHECIN <130> 12FPI-01-02 <150> 61/227,599 <151> 2009-07-22 <160> 2 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 4473 <212> DNA <213> Human <220> <221> CDS <222> (175)..(3939) <400> 1 aaggggaggt aaccctggcc cctttggtcg gggccccggg cagccgcgcg ccccttccca 60 cggggccctt tactgcgccg cgcgcccggc ccccacccct cgcagcaccc cgcgccccgc 120 gccctcccag ccgggtccag ccggagccat ggggccggag ccgcagtgag cacc 174 atg gag ctg gcg gcc ttg tgc cgc tgg ggg ctc ctc ctc gcc ctc ttg 222 Met Glu Leu Ala Ala Leu Cys Arg Trp Gly Leu Leu Leu Ala Leu Leu 1 5 10 15 ccc ccc gga gcc gcg agc acc caa gtg tgc acc ggc aca gac atg aag 270 Pro Pro Gly Ala Ala Ser Thr Gln Val Cys Thr Gly Thr Asp Met Lys 20 25 30 ctg cgg ctc cct gcc agt ccc gag acc cac ctg gac atg ctc cgc cac 318 Leu Arg Leu Pro Ala Ser Pro Glu Thr His Leu Asp Met Leu Arg His 35 40 45 ctc tac cag ggc tgc cag gtg gtg cag gga aac ctg gaa ctc acc tac 366 Leu Tyr Gln Gly Cys Gln Val Val Gln Gly Asn Leu Glu Leu Thr Tyr 50 55 60 ctg ccc acc aat gcc agc ctg tcc ttc ctg cag gat atc cag gag gtg 414 Leu Pro Thr Asn Ala Ser Leu Ser Phe Leu Gln Asp Ile Gln Glu Val 65 70 75 80 cag ggc tac gtg ctc atc gct cac aac caa gtg agg cag gtc cca ctg 462 Gln Gly Tyr Val Leu Ile Ala His Asn Gln Val Arg Gln Val Pro Leu 85 90 95 cag agg ctg cgg att gtg cga ggc acc cag ctc ttt gag gac aac tat 510 Gln Arg Leu Arg Ile Val Arg Gly Thr Gln Leu Phe Glu Asp Asn Tyr 100 105 110 gcc ctg gcc gtg cta gac aat gga gac ccg ctg aac aat acc acc cct 558 Ala Leu Ala Val Leu Asp Asn Gly Asp Pro Leu Asn Asn Thr Thr Pro 115 120 125 gtc aca ggg gcc tcc cca gga ggc ctg cgg gag ctg cag ctt cga agc 606 Val Thr Gly Ala Ser Pro Gly Gly Leu Arg Glu Leu Gln Leu Arg Ser 130 135 140 ctc aca gag atc ttg aaa gga ggg gtc ttg atc cag cgg aac ccc cag 654 Leu Thr Glu Ile Leu Lys Gly Gly Val Leu Ile Gln Arg Asn Pro Gln 145 150 155 160 ctc tgc tac cag gac acg att ttg tgg aag gac atc ttc cac aag aac 702 Leu Cys Tyr Gln Asp Thr Ile Leu Trp Lys Asp Ile Phe His Lys Asn 165 170 175 aac cag ctg gct ctc aca ctg ata gac acc aac cgc tct cgg gcc tgc 750 Asn Gln Leu Ala Leu Thr Leu Ile Asp Thr Asn Arg Ser Arg Ala Cys 180 185 190 cac ccc tgt tct ccg atg tgt aag ggc tcc cgc tgc tgg gga gag agt 798 His Pro Cys Ser Pro Met Cys Lys Gly Ser Arg Cys Trp Gly Glu Ser 195 200 205 tct gag gat tgt cag agc ctg acg cgc act gtc tgt gcc ggt ggc tgt 846 Ser Glu Asp Cys Gln Ser Leu Thr Arg Thr Val Cys Ala Gly Gly Cys 210 215 220 gcc cgc tgc aag ggg cca ctg ccc act gac tgc tgc cat gag cag tgt 894 Ala Arg Cys Lys Gly Pro Leu Pro Thr Asp Cys Cys His Glu Gln Cys 225 230 235 240 gct gcc ggc tgc acg ggc ccc aag cac tct gac tgc ctg gcc tgc ctc 942 Ala Ala Gly Cys Thr Gly Pro Lys His Ser Asp Cys Leu Ala Cys Leu 245 250 255 cac ttc aac cac agt ggc atc tgt gag ctg cac tgc cca gcc ctg gtc 990 His Phe Asn His Ser Gly Ile Cys Glu Leu His Cys Pro Ala Leu Val 260 265 270 acc tac aac aca gac acg ttt gag tcc atg ccc aat ccc gag ggc cgg 1038 Thr Tyr Asn Thr Asp Thr Phe Glu Ser Met Pro Asn Pro Glu Gly Arg 275 280 285 tat aca ttc ggc gcc agc tgt gtg act gcc tgt ccc tac aac tac ctt 1086 Tyr Thr Phe Gly Ala Ser Cys Val Thr Ala Cys Pro Tyr Asn Tyr Leu 290 295 300 tct acg gac gtg gga tcc tgc acc ctc gtc tgc ccc ctg cac aac caa 1134 Ser Thr Asp Val Gly Ser Cys Thr Leu Val Cys Pro Leu His Asn Gln 305 310 315 320 gag gtg aca gca gag gat gga aca cag cgg tgt gag aag tgc agc aag 1182 Glu Val Thr Ala Glu Asp Gly Thr Gln Arg Cys Glu Lys Cys Ser Lys 325 330 335 ccc tgt gcc cga gtg tgc tat ggt ctg ggc atg gag cac ttg cga gag 1230 Pro Cys Ala Arg Val Cys Tyr Gly Leu Gly Met Glu His Leu Arg Glu 340 345 350 gtg agg gca gtt acc agt gcc aat atc cag gag ttt gct ggc tgc aag 1278 Val Arg Ala Val Thr Ser Ala Asn Ile Gln Glu Phe Ala Gly Cys Lys 355 360 365 aag atc ttt ggg agc ctg gca ttt ctg ccg gag agc ttt gat ggg gac 1326 Lys Ile Phe Gly Ser Leu Ala Phe Leu Pro Glu Ser Phe Asp Gly Asp 370 375 380 cca gcc tcc aac act gcc ccg ctc cag cca gag cag ctc caa gtg ttt 1374 Pro Ala Ser Asn Thr Ala Pro Leu Gln Pro Glu Gln Leu Gln Val Phe 385 390 395 400 gag act ctg gaa gag atc aca ggt tac cta tac atc tca gca tgg ccg 1422 Glu Thr Leu Glu Glu Ile Thr Gly Tyr Leu Tyr Ile Ser Ala Trp Pro 405 410 415 gac agc ctg cct gac ctc agc gtc ttc cag aac ctg caa gta atc cgg 1470 Asp Ser Leu Pro Asp Leu Ser Val Phe Gln Asn Leu Gln Val Ile Arg 420 425 430 gga cga att ctg cac aat ggc gcc tac tcg ctg acc ctg caa ggg ctg 1518 Gly Arg Ile Leu His Asn Gly Ala Tyr Ser Leu Thr Leu Gln Gly Leu 435 440 445 ggc atc agc tgg ctg ggg ctg cgc tca ctg agg gaa ctg ggc agt gga 1566 Gly Ile Ser Trp Leu Gly Leu Arg Ser Leu Arg Glu Leu Gly Ser Gly 450 455 460 ctg gcc ctc atc cac cat aac acc cac ctc tgc ttc gtg cac acg gtg 1614 Leu Ala Leu Ile His His Asn Thr His Leu Cys Phe Val His Thr Val 465 470 475 480 ccc tgg gac cag ctc ttt cgg aac ccg cac caa gct ctg ctc cac act 1662 Pro Trp Asp Gln Leu Phe Arg Asn Pro His Gln Ala Leu Leu His Thr 485 490 495 gcc aac cgg cca gag gac gag tgt gtg ggc gag ggc ctg gcc tgc cac 1710 Ala Asn Arg Pro Glu Asp Glu Cys Val Gly Glu Gly Leu Ala Cys His 500 505 510 cag ctg tgc gcc cga ggg cac tgc tgg ggt cca ggg ccc acc cag tgt 1758 Gln Leu Cys Ala Arg Gly His Cys Trp Gly Pro Gly Pro Thr Gln Cys 515 520 525 gtc aac tgc agc cag ttc ctt cgg ggc cag gag tgc gtg gag gaa tgc 1806 Val Asn Cys Ser Gln Phe Leu Arg Gly Gln Glu Cys Val Glu Glu Cys 530 535 540 cga gta ctg cag ggg ctc ccc agg gag tat gtg aat gcc agg cac tgt 1854 Arg Val Leu Gln Gly Leu Pro Arg Glu Tyr Val Asn Ala Arg His Cys 545 550 555 560 ttg ccg tgc cac cct gag tgt cag ccc cag aat ggc tca gtg acc tgt 1902 Leu Pro Cys His Pro Glu Cys Gln Pro Gln Asn Gly Ser Val Thr Cys 565 570 575 ttt gga ccg gag gct gac cag tgt gtg gcc tgt gcc cac tat aag gac 1950 Phe Gly Pro Glu Ala Asp Gln Cys Val Ala Cys Ala His Tyr Lys Asp 580 585 590 cct ccc ttc tgc gtg gcc cgc tgc ccc agc ggt gtg aaa cct gac ctc 1998 Pro Pro Phe Cys Val Ala Arg Cys Pro Ser Gly Val Lys Pro Asp Leu 595 600 605 tcc tac atg ccc atc tgg aag ttt cca gat gag gag ggc gca tgc cag 2046 Ser Tyr Met Pro Ile Trp Lys Phe Pro Asp Glu Glu Gly Ala Cys Gln 610 615 620 cct tgc ccc atc aac tgc acc cac tcc tgt gtg gac ctg gat gac aag 2094 Pro Cys Pro Ile Asn Cys Thr His Ser Cys Val Asp Leu Asp Asp Lys 625 630 635 640 ggc tgc ccc gcc gag cag aga gcc agc cct ctg acg tcc atc atc tct 2142 Gly Cys Pro Ala Glu Gln Arg Ala Ser Pro Leu Thr Ser Ile Ile Ser 645 650 655 gcg gtg gtt ggc att ctg ctg gtc gtg gtc ttg ggg gtg gtc ttt ggg 2190 Ala Val Val Gly Ile Leu Leu Val Val Val Leu Gly Val Val Phe Gly 660 665 670 atc ctc atc aag cga cgg cag cag aag atc cgg aag tac acg atg cgg 2238 Ile Leu Ile Lys Arg Arg Gln Gln Lys Ile Arg Lys Tyr Thr Met Arg 675 680 685 aga ctg ctg cag gaa acg gag ctg gtg gag ccg ctg aca cct agc gga 2286 Arg Leu Leu Gln Glu Thr Glu Leu Val Glu Pro Leu Thr Pro Ser Gly 690 695 700 gcg atg ccc aac cag gcg cag atg cgg atc ctg aaa gag acg gag ctg 2334 Ala Met Pro Asn Gln Ala Gln Met Arg Ile Leu Lys Glu Thr Glu Leu 705 710 715 720 agg aag gtg aag gtg ctt gga tct ggc gct ttt ggc aca gtc tac aag 2382 Arg Lys Val Lys Val Leu Gly Ser Gly Ala Phe Gly Thr Val Tyr Lys 725 730 735 ggc atc tgg atc cct gat ggg gag aat gtg aaa att cca gtg gcc atc 2430 Gly Ile Trp Ile Pro Asp Gly Glu Asn Val Lys Ile Pro Val Ala Ile 740 745 750 aaa gtg ttg agg gaa aac aca tcc ccc aaa gcc aac aaa gaa atc tta 2478 Lys Val Leu Arg Glu Asn Thr Ser Pro Lys Ala Asn Lys Glu Ile Leu 755 760 765 gac gaa gca tac gtg atg gct ggt gtg ggc tcc cca tat gtc tcc cgc 2526 Asp Glu Ala Tyr Val Met Ala Gly Val Gly Ser Pro Tyr Val Ser Arg 770 775 780 ctt ctg ggc atc tgc ctg aca tcc acg gtg cag ctg gtg aca cag ctt 2574 Leu Leu Gly Ile Cys Leu Thr Ser Thr Val Gln Leu Val Thr Gln Leu 785 790 795 800 atg ccc tat ggc tgc ctc tta gac cat gtc cgg gaa aac cgc gga cgc 2622 Met Pro Tyr Gly Cys Leu Leu Asp His Val Arg Glu Asn Arg Gly Arg 805 810 815 ctg ggc tcc cag gac ctg ctg aac tgg tgt atg cag att gcc aag ggg 2670 Leu Gly Ser Gln Asp Leu Leu Asn Trp Cys Met Gln Ile Ala Lys Gly 820 825 830 atg agc tac ctg gag gat gtg cgg ctc gta cac agg gac ttg gcc gct 2718 Met Ser Tyr Leu Glu Asp Val Arg Leu Val His Arg Asp Leu Ala Ala 835 840 845 cgg aac gtg ctg gtc aag agt ccc aac cat gtc aaa att aca gac ttc 2766 Arg Asn Val Leu Val Lys Ser Pro Asn His Val Lys Ile Thr Asp Phe 850 855 860 ggg ctg gct cgg ctg ctg gac att gac gag aca gag tac cat gca gat 2814 Gly Leu Ala Arg Leu Leu Asp Ile Asp Glu Thr Glu Tyr His Ala Asp 865 870 875 880 ggg ggc aag gtg ccc atc aag tgg atg gcg ctg gag tcc att ctc cgc 2862 Gly Gly Lys Val Pro Ile Lys Trp Met Ala Leu Glu Ser Ile Leu Arg 885 890 895 cgg cgg ttc acc cac cag agt gat gtg tgg agt tat ggt gtg act gtg 2910 Arg Arg Phe Thr His Gln Ser Asp Val Trp Ser Tyr Gly Val Thr Val 900 905 910 tgg gag ctg atg act ttt ggg gcc aaa cct tac gat ggg atc cca gcc 2958 Trp Glu Leu Met Thr Phe Gly Ala Lys Pro Tyr Asp Gly Ile Pro Ala 915 920 925 cgg gag atc cct gac ctg ctg gaa aag ggg gag cgg ctg ccc cag ccc 3006 Arg Glu Ile Pro Asp Leu Leu Glu Lys Gly Glu Arg Leu Pro Gln Pro 930 935 940 ccc atc tgc acc att gat gtc tac atg atc atg gtc aaa tgt tgg atg 3054 Pro Ile Cys Thr Ile Asp Val Tyr Met Ile Met Val Lys Cys Trp Met 945 950 955 960 att gac tct gaa tgt cgg cca aga ttc cgg gag ttg gtg tct gaa ttc 3102 Ile Asp Ser Glu Cys Arg Pro Arg Phe Arg Glu Leu Val Ser Glu Phe 965 970 975 tcc cgc atg gcc agg gac ccc cag cgc ttt gtg gtc atc cag aat gag 3150 Ser Arg Met Ala Arg Asp Pro Gln Arg Phe Val Val Ile Gln Asn Glu 980 985 990 gac ttg ggc cca gcc agt ccc ttg gac agc acc ttc tac cgc tca ctg 3198 Asp Leu Gly Pro Ala Ser Pro Leu Asp Ser Thr Phe Tyr Arg Ser Leu 995 1000 1005 ctg gag gac gat gac atg ggg gac ctg gtg gat gct gag gag tat ctg 3246 Leu Glu Asp Asp Asp Met Gly Asp Leu Val Asp Ala Glu Glu Tyr Leu 1010 1015 1020 gta ccc cag cag ggc ttc ttc tgt cca gac cct gcc ccg ggc gct ggg 3294 Val Pro Gln Gln Gly Phe Phe Cys Pro Asp Pro Ala Pro Gly Ala Gly 1025 1030 1035 1040 ggc atg gtc cac cac agg cac cgc agc tca tct acc agg agt ggc ggt 3342 Gly Met Val His His Arg His Arg Ser Ser Ser Thr Arg Ser Gly Gly 1045 1050 1055 ggg gac ctg aca cta ggg ctg gag ccc tct gaa gag gag gcc ccc agg 3390 Gly Asp Leu Thr Leu Gly Leu Glu Pro Ser Glu Glu Glu Ala Pro Arg 1060 1065 1070 tct cca ctg gca ccc tcc gaa ggg gct ggc tcc gat gta ttt gat ggt 3438 Ser Pro Leu Ala Pro Ser Glu Gly Ala Gly Ser Asp Val Phe Asp Gly 1075 1080 1085 gac ctg gga atg ggg gca gcc aag ggg ctg caa agc ctc ccc aca cat 3486 Asp Leu Gly Met Gly Ala Ala Lys Gly Leu Gln Ser Leu Pro Thr His 1090 1095 1100 gac ccc agc cct cta cag cgg tac agt gag gac ccc aca gta ccc ctg 3534 Asp Pro Ser Pro Leu Gln Arg Tyr Ser Glu Asp Pro Thr Val Pro Leu 1105 1110 1115 1120 ccc tct gag act gat ggc tac gtt gcc ccc ctg acc tgc agc ccc cag 3582 Pro Ser Glu Thr Asp Gly Tyr Val Ala Pro Leu Thr Cys Ser Pro Gln 1125 1130 1135 cct gaa tat gtg aac cag cca gat gtt cgg ccc cag ccc cct tcg ccc 3630 Pro Glu Tyr Val Asn Gln Pro Asp Val Arg Pro Gln Pro Pro Ser Pro 1140 1145 1150 cga gag ggc cct ctg cct gct gcc cga cct gct ggt gcc act ctg gaa 3678 Arg Glu Gly Pro Leu Pro Ala Ala Arg Pro Ala Gly Ala Thr Leu Glu 1155 1160 1165 agg ccc aag act ctc tcc cca ggg aag aat ggg gtc gtc aaa gac gtt 3726 Arg Pro Lys Thr Leu Ser Pro Gly Lys Asn Gly Val Val Lys Asp Val 1170 1175 1180 ttt gcc ttt ggg ggt gcc gtg gag aac ccc gag tac ttg aca ccc cag 3774 Phe Ala Phe Gly Gly Ala Val Glu Asn Pro Glu Tyr Leu Thr Pro Gln 1185 1190 1195 1200 gga gga gct gcc cct cag ccc cac cct cct cct gcc ttc agc cca gcc 3822 Gly Gly Ala Ala Pro Gln Pro His Pro Pro Pro Ala Phe Ser Pro Ala 1205 1210 1215 ttc gac aac ctc tat tac tgg gac cag gac cca cca gag cgg ggg gct 3870 Phe Asp Asn Leu Tyr Tyr Trp Asp Gln Asp Pro Pro Glu Arg Gly Ala 1220 1225 1230 cca ccc agc acc ttc aaa ggg aca cct acg gca gag aac cca gag tac 3918 Pro Pro Ser Thr Phe Lys Gly Thr Pro Thr Ala Glu Asn Pro Glu Tyr 1235 1240 1245 ctg ggt ctg gac gtg cca gtg t gaaccagaag gccaagtccg cagaagccct 3970 Leu Gly Leu Asp Val Pro Val 1250 1255 gatgtgtcct cagggagcag ggaaggcctg acttctgctg gcatcaagag gtgggagggc 4030 cctccgacca cttccagggg aacctgccat gccaggaacc tgtcctaagg aaccttcctt 4090 cctgcttgag ttcccagatg gctggaaggg gtccagcctc gttggaagag gaacagcact 4150 ggggagtctt tgtggattct gaggccctgc ccaatgagac tctagggtcc agtggatgcc 4210 acagcccagc ttggcccttt ccttccagat cctgggtact gaaagcctta gggaagctgg 4270 cctgagaggg gaagcggccc taagggagtg tctaagaaca aaagcgaccc attcagagac 4330 tgtccctgaa acctagtact gccccccatg aggaaggaac agcaatggtg tcagtatcca 4390 ggctttgtac agagtgcttt tctgtttagt ttttactttt tttgttttgt ttttttaaag 4450 atgaaataaa gacccagggg gag 4473

Claims

유효량의 하기 화학식(Ⅰ)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 HER2 수용체 길항제와 포유류에 병용 투여하는 것을 포함하는 포유류에서의 HER2 양성암의 치료방법:
(Ⅰ)

상기 화학식 (Ⅰ)에서,
R₁, R₂, R₃ 및 R₄는 독립적으로 OH 또는

이고,
상기에서,
L은 이관능성 링커(bifunctional linker);
(m)은 0 또는 양의 정수이고, 여기에서 (m)이 2이거나, 2보다 클 때, 상기 각 L은 같거나 다르고;
(n)은 양의 정수이며;
이때, 상기 R₁, R₂, R₃ 및 R₄ 는 동시에 모두 OH는 아니다.
제 1항에 있어서, 상기 HER2 수용체 길항제는 항-HER2 항체, 안티센스 ErbB2 올리고뉴클레오타이드 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 치료 방법.
제 2항에 있어서, 상기 항-HER2 항체는 HER2 도메인 Ⅳ 또는 HER2 도메인 Ⅱ의 세포외 도메인과 결합하는 것을 특징으로 하는 치료 방법.
제 2항에 있어서, 상기 항-HER2 항체는 트라스투주맙(trastuzumab) 또는 퍼투주맙(pertuzumab)을 포함하는 것을 특징으로 하는 치료 방법.
제 1항에 있어서, 상기 HER2 양성암은 전이성이거나 비전이성인 것을 특징으로 하는 치료 방법.
제 1항에 있어서, 상기 HER2 양성암은 HER2 수용체 길항제에 내성을 갖거나 난치성인 것을 특징으로 하는 치료 방법.
제 1항에 있어서, 상기 HER2 양성암은 고형 종양(solid tumor), 유방암(breast cancer), 위암(gastric cancer), 난소암(ovarian cancer), 위암(stomach cancer), 자궁암(uterine cancer), 장액성 자궁 내막암(uterine serous endometrical carcinoma), 전립선암(prostate cancer), 방광암(bladder cancer), 타액선암(salivary gland carcinoma), 신장 선암(renal adenocarcinoma) 및 유선 종양(mammary gland carcinoma)으로 이루어진 군으로부터 선택된 것을 특징으로 하는 치료 방법.
제 1항에 있어서, 상기(n)은 약 28 내지 341까지의 정수이어서, 화학식 (Ⅰ)의 화합물 중합 부분의 총 분자량이 약 5,000 내지 60,000 달튼(daltons)인 것을 특징으로 하는 치료 방법.
제 8항에 있어서, 상기(n)은 약 114 내지 239까지의 정수이어서, 화학식 (Ⅰ)의 화합물 중합 부분의 총 분자량이 약 20,000 내지 42,000 달튼(daltons)인 것을 특징으로 하는 치료 방법.
제 1항에 있어서, 상기 화학식 (Ⅰ)의 화합물은:

로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 치료 방법.
제 1항에 있어서, 상기 화학식(Ⅰ)의 화합물은:
(Ⅰa)

인 것을 특징으로 하는 치료 방법.
제 1항에 있어서, 상기 화학식 (Ⅰ)의 화합물은 7-에틸-10-히드록시캠토테신(7-ethyl-10-hydroxycamptothecin)의 중량이 포함되어 있는 약 0.5 내지 50mg/㎡ 체표면/용량의 양으로 포유류에게 투여되는 것을 특징으로 하는 치료 방법.
제 1항에 있어서, 상기 화학식 (Ⅰ)의 화합물은 7-에틸-10-히드록시캠토테신(7-ethyl-10-hydroxycamptothecin)의 중량이 포함되어 있는 약 1 내지 18mg/㎡ 체표면/용량의 양으로 포유류에게 투여되는 것을 특징으로 하는 치료 방법.
제 1항에 있어서, 상기 화학식 (Ⅰ)의 화합물은 7-에틸-10-히드록시캠토테신(7-ethyl-10-hydroxycamptothecin)의 중량이 포함되어 있는 약 1.25 내지 16.5mg/㎡ 체표면/용량의 양으로 포유류에게 3주 동안 매주 투여되고, 그 후 1주 동안 처치를 하지 않는 것을 특징으로 하는 치료 방법.
제 14항에 있어서, 포유류에 매주 투여되는 양이 약 5mg/㎡ 체표면/용량이고, 그 양은 화학식 (Ⅰ)의 화합물 중에 포함된 7-에틸-10-히드록시캠토테신(7-ethyl-10-hydroxycamptothecin)의 양인 것을 특징으로 하는 치료 방법.
제 4항에 있어서, 상기 항-HER2 수용체 항체는 약 2 내지 8mg/kg의 양으로 포유류에게 투여되는 것을 특징으로 하는 치료 방법.
제 2항에 있어서, 상기 안티센스 ErB2 올리고뉴클레오타이드(antisense ErB2 oligonucleotide) 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포유류에게 화학식 (Ⅰ)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염과 병용 투여하는 것을 특징으로 하는 치료 방법.
제 17항에 있어서, 상기 안티센스 ErB2 올리고뉴클레오타이드는 ErbB2 pre-mRNA 또는 mRNA의 최소한 8연속 뉴클레오타이드와 상보적인 것을 특징으로 하는 치료 방법.
제 17항에 있어서, 상기 안티센스 ErB2 올리고뉴클레오타이드는 약 8 내지 50 뉴클레오타이드의 길이를 포함하는 것을 특징으로 하는 치료 방법.
제 17항에 있어서, 상기 안티센스 ErbB2 올리고뉴클레오타이드는 서열번호:1의 최소한 8 연속 뉴클레오타이드와 상보적인 뉴클레오타이드를 포함하는 것을 특징으로 하는 치료 방법.
제 17항에 있어서, 상기 안티센스 ErB2 올리고뉴클레오타이디는 하나 또는 그 이상의 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 결합(phosphorothioate internucleotide linkages)을 포함하는 것을 특징으로 하는 치료 방법.
제 17항에 있어서, 상기 안티센스 ErB2 올리고뉴클레오타이드는 하나 또는 그 이상의 잠금 핵산(locked nucleic acids)(LNA)을 포함하는 것을 특징으로 하는 치료 방법.
제 17항에 있어서, 상기 안티센스 ErB2 올리고뉴클레오타이드는 약 2 내지 50mg/kg/dose의 양으로 투여되는 것을 특징으로 하는 치료 방법.
제 1항에 있어서, 상기 치료 방법은 포유류에서 HER2 양성암의 존재를 결정하는 것을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 치료 방법.
포유류에서 HER2 양성암을 치료하는 방법에 있어서:
(a) 포유류에서 HER2 과발현된 암의 존재를 결정하여 HER2 양성 암을 가진 포유류를 확인하는 단계; 및
(b) HER2 양성암을 가진 포유류에 트라스투주맙을 포함하는 유효량의 HER2 수용체 길항제를 유효량의 하기 화학식(Ⅰa)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포유류에 병용 투여하는 단계:
(Ⅰa)

상기에서 (n)은 약 227이어서, 화학식(Ⅰa)의 화합물의 중합 부분의 총 분자량은 약 40,000달튼(daltons)이다;
를 포함하는 HER2 양성암의 치료 방법.
HER2 수용체 길항제를 유효량의 제 1항의 화학식(Ⅰ)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염과 포유류에 병용 투여하는 것을 포함하는 HER2 양성암을 가진 포유류에서 HER2 수용체 길항제의 효과를 증가시키는 방법.
포유류에서 HER2 양성 세포의 성장과 증식을 억제하는 방법에 있어서:
(a) 포유류 세포에서 HER2 발현의 존재를 결정하는 단계; 및
(b) HER2 수용체 길항제를 제 1항의 화학식(Ⅰ)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 HER2 양성 세포를 가진 포유류에 투여하는 단계;
를 포함하는 HER2 양성 세포의 성장과 증식을 억제하는 방법.
HER2 수용체 길항제를 유효량의 캠토테신, 캠토테신 유사체, 캠토테신 또는 이의 유사체의 중합 컨쥬게이트(polymeric conjugate) 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염과 병용 투여하는 것을 특징으로 하는 포유류에서의 HER2 양성암의 치료 방법.
제 28항에 있어서, 상기 중합 컨쥬게이트는 하기의 화학식(Ⅱ) 또는 화학식(Ⅲ)의 화합물인 것을 특징으로 하는 치료 방법:
(Ⅱ)

(Ⅲ)

상기에서,
Z₁, Z₂, Z₃ 및 Z₄는 독립적으로 OH 또는 (L)m-D;
L은 이관능성 링커;
D는 캠토테신 또는 캠토테신 유사체;
M₁은 O, S 또는 NH;
(d)는 0 또는 약 1 내지 10의 양의 정수;
(z)는 0 또는 약 1 내지 29의 양의 정수;
(m)은 0 또는 양의 정수; 및
(n)은 약 10 내지 2,300의 양의 정수이어서, 화합물의 중합 부분은 총 수 평균 분자량 약 2,000 내지 100,000 달튼(daltons)을 가지며,
Z₁, Z₂, Z₃ 및 Z₄ 는 동시에 모두 OH는 아니다.
제 29항에 있어서, 상기 D는 캠토테신, SN38, 토포테칸 및 CPT-11로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 치료 방법.
제 29항에 있어서, 상기 중합 컨쥬게이트는

또는

이고,
상기에서 (n)은 약 28 내지 341의 양의 정수이어서, 화학식(Ⅱ)의 화합물의 중합 부분의 총 분자량은 약 5,000 내지 60,000 달튼(daltons)인 것을 특징으로 하는 치료방법.