KR20120046723A - Ｐｉ３ｋ 억제제로서 유용한 2-카르복스아미드 시클로아미노 우레아 - Google Patents
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Abstract
본 발명은, 치환기가 명세서에 정의된 바와 같은 하기 화학식 I의 화합물 및 그의 염, 조성물, 및 포스파티딜이노시톨 3-키나제의 억제에 의해 완화되는 질환의 치료에서의 상기 화합물의 용도에 관한 것이다.
<화학식 I>
<화학식 I>
Description
본 발명은 신규한 포스파티딜이노시톨 (PI) 3-키나제 억제제 화합물로서의 치환된 2-카르복스아미드 시클로아미노 우레아, 그의 제약상 허용되는 염, 그의 전구약물 및 그의 제조 방법에 관한 것이다. 본 발명은 또한 단독의 또는 하나 이상의 추가의 치료제와 조합된 이들 화합물을 임의로 제약상 허용되는 담체와 조합하여 포함하는 조성물에 관한 것이다. 본 발명은 또한 수많은 질환, 특히 성장 인자, 수용체 티로신 키나제, 단백질 세린/트레오닌 키나제, G 단백질 커플링된 수용체 및 인지질 키나제 및 포스파타제의 비정상적인 활성 중 하나 이상에 의해 매개되는 질환의 예방 또는 치료에서, 단독의 또는 하나 이상의 추가의 치료제와 조합된 이들 화합물의 사용 방법에 관한 것이다.
포스파티딜이노시톨 3-키나제 (PI3K)는, 포스페이트를 이노시톨 지질의 D-3' 위치로 전달하는 것을 촉매화하여 포스포이노시톨-3-포스페이트 (PIP), 포스포이노시톨-3,4-디포스페이트 (PIP2) 및 포스포이노시톨-3,4,5-트리포스페이트 (PIP3)를 생성하고, 이어서 플렉스트린-상동성 부위, FYVE, Phox 및 다른 인지질-결합 도메인을 함유하는 단백질을 대개 원형질 막에서의 다양한 신호전달 복합체에 결합시킴으로써 신호전달 캐스케이드에서 제2 메신저로 작용하는 지질 키나제의 패밀리를 구성한다 (문헌 [Vanhaesebroeck et al., Annu. Rev. Biochem 70:535 (2001)]; [Katso et al., Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 17:615 (2001)]). 두 가지 클래스 1 PI3K 중, 클래스 1A PI3K는 p85α, p55α, p50α, p85β 또는 p55γ일 수 있는 조절 서브유닛과 구성적으로 관련이 있는 p110 촉매 서브유닛 (α, β, δ 이소형)으로 이루어진 이종이량체이다. 클래스 1B 하위 클래스는 p101 또는 p84의 두 가지 조절 서브유닛 중 하나와 관련이 있는 촉매 p110γ 서브유닛으로 이루어진 이종이량체를 패밀리의 한 구성원으로 갖는다 (문헌 [Fruman et al., Annu Rev. Biochem. 67:481 (1998)]; [Suire et al., Curr. Biol. 15:566 (2005)]). p85/55/50 서브유닛의 모듈 도메인은 활성화된 수용체 및 세포질 티로신 키나제 상의 특정 서열 환경에서 포스포티로신 잔기에 결합하여 클래스 1A PI3K를 활성화 및 국소화시키는 Src 상동성 (SH2) 도메인을 포함한다. 클래스 1B PI3K는 펩티드 및 비-펩티드 리간드의 여러 가지 레퍼토리에 결합하는 G 단백질-커플링된 수용체에 의해 직접적으로 활성화된다 (문헌 [Stephens et al., Cell 89:105 (1997)]; [Katso et al., Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 17:615-675 (2001)]). 결과적으로, 생성된 클래스 I PI3K의 인지질 생성물은 상류 수용체를, 증식, 생존, 주화성, 세포 소통, 운동성, 대사, 염증성 및 알레르기 반응, 전사 및 번역을 비롯한 하류 세포 활성과 연결시킨다 (문헌 [Cantley et al., Cell 64:281 (1991)]; [Escobedo and Williams, Nature 335:85 (1988)]; [Fantl et al., Cell 69:413 (1992)]).
여러 경우, PIP2 및 PIP3은 바이러스성 종양유전자 v-Akt의 인간 상동체의 생성물인 Akt를 원형질 막으로 동원하고, 여기서 이는 성장 및 생존에 중요한 여러 세포내 신호전달 경로를 위한 중심점으로서 작용한다 (문헌 [Fantl et al., Cell 69:413-423(1992)]; [Bader et al., Nature Rev. Cancer 5:921 (2005)]; [Vivanco and Sawyer, Nature Rev. Cancer 2:489 (2002)]). 대개 Akt 활성화를 통해 생존을 증가시키는 PI3K의 비정상적인 조절은 인간 암에서 가장 일반적인 사건 중 하나이며, 다양한 수준으로 일어나는 것으로 밝혀졌다. 이노시톨 고리의 3' 위치에서 포스포이노시티드를 탈인산화시켜 PI3K 활성을 길항시키는 종양 억제인자 유전자 PTEN은 다양한 종양에서 기능적으로 결실되어 있다. 다른 종양에서, p110α 이소형, PIK3CA 및 Akt에 대한 유전자가 증폭되며, 이의 유전자 생성물의 증가된 단백질 발현은 여러 인간 암에서 입증되었다. 게다가, p85-p110 복합체를 상향 조절하는 p85α의 돌연변이 및 전좌가 인간 암에서 보고되었다. 최종적으로, 하류 신호전달 경로를 활성화시키는 PIK3CA에서의 체세포 과오 돌연변이는 광범위한 인간 암에서 상당한 빈도로 보고되었다 (문헌 [Kang at el., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102:802 (2005)]; [Samuels et al., Science 304:554 (2004)]; [Samuels et al., Cancer Cell 7:561-573 (2005)]). 이러한 관찰은, 포스포이노시톨-3 키나제의 탈조절 및 이 신호전달 경로의 상류 및 하류 성분이 인간 암 및 증식성 질환과 관련된 가장 흔한 탈조절 중 하나임을 나타낸다 (문헌 [Parsons et al., Nature 436:792 (2005)]; [Hennessey at el., Nature Rev. Drug Disc. 4:988-1004 (2005)]).
상기에 비추어 볼 때, PI3K의 억제제는 증식성 질환 및 다른 장애의 치료에서 특히 가치가 있을 것이다. PI3Kα 이소형에 대한 선택성이 바람직하고, 추가의 바람직한 특성에는 향상된 약물동력학적 특성 및/또는 화학적 안정성이 포함된다.
WO 2004/096797에는 PI3 키나제의 억제제로서의 특정 티아졸 유도체, 및 그의 약제로서의 용도가 개시되어 있다.
WO 2005/021519에는 또한 PI3 키나제의 억제제로서의 특정 티아졸 유도체, 및 그의 약제로서의 용도가 개시되어 있다.
본 발명에 이르러, 하기 주어진 화학식 I의 2-카르복스아미드 시클로아미노 우레아가 유리한 약리학적 특성을 가지며, 예를 들어 PI3 키나제 (포스파티딜이노시톨 3-키나제)를 억제한다는 것이 밝혀졌다. 특히, 이들 화합물은 바람직하게는 생화학적 및/또는 세포 검정에서 PI3K 베타 및/또는 델타 및/또는 감마 아형보다 알파에 대해 선택성을 나타낸다. 화학식 I의 화합물에 대해 특히 바람직한 추가의 특성에는, 예를 들어 고체 형태 및/또는 완충 용액에서의 향상된 안정성, 예를 들어 향상된 화학적 안정성이 포함된다. 따라서, 화학식 I의 화합물은, 예를 들어 PI3 키나제 (특히, PI3K 알파, 예컨대 PIK3CA의 체세포 돌연변이, 또는 PTEN의 생식세포주 돌연변이 또는 체세포 돌연변이를 나타내는 것들) 의존성 질환, 특히 증식성 질환, 예컨대 종양 질환 및 백혈병의 치료에 사용하기에 적합하다.
제1 측면에서, 본 발명은 하기 화학식 I의 화합물, 또는 그의 염, 용매화물, 수화물 또는 전구약물을 제공한다.
<화학식 I>
상기 식에서,
A는 기호 *로 나타낸 위치에서 분자의 나머지에 융합된 비치환 또는 치환된 아릴 고리, 또는 비치환 또는 치환된 헤테로시클릭 고리이고;
X-Y는 (CH2)r 또는 O(CH2)t 또는 (CH2)tO이며, 여기서
r은 1, 2 또는 3이고;
t는 1 또는 2이고;
n은 0, 1 또는 2이고;
q는 0, 1, 2, 3 또는 4이고;
R1은 각각의 경우에 독립적으로,
할로;
히드록시;
비치환 또는 치환된 아릴;
비치환 또는 치환된 아미노;
비치환된 C1-C7-알킬;
히드록시, C1-C7-알콕시, 비치환 또는 치환된 아미노, 아릴 (여기서 아릴은 할로에 의해 일치환 또는 다치환될 수 있음) 또는 헤테로시클릴에 의해 1회 이상 치환된 C1-C7-알킬을 나타내거나; 또는
2개의 R1 치환기는 함께 알칸디일을 형성하여, 히드록시 또는 할로에 의해 임의로 치환된 시클릭 잔기를 형성한다.
하기 용어 설명 및 종결부의 실시예를 포함하는 하기 명세서에 입각하여 본 발명이 더욱 상세히 이해될 수 있다. 본원에서 사용되는 용어 "포함되는", "함유하는" 및 "포함하는"은 본원에서 이들의 개방적, 비제한적 의미로 사용된다.
본원에 제시된 임의의 화학식은 구조식에 의해 도시된 구조를 갖는 화합물 뿐만 아니라 특정 변형 또는 형태들을 나타내는 것으로 의도된다. 특히, 본원에 제시된 임의의 화학식의 화합물은 비대칭 중심을 가질 수 있어서, 상이한 입체이성질체 형태, 예컨대 상이한 거울상이성질체 형태로 존재할 수 있다. 적어도 하나의 비대칭 탄소 원자가 화학식 I의 화합물 내에 존재하는 경우, 상기 화합물은 광학 활성 형태 또는 광학 이성질체의 혼합물의 형태, 예를 들어 라세미체 혼합물의 형태로 존재할 수 있다. 따라서, 비대칭 탄소 원자는 (R)-, (S)- 또는 (R,S)- 배치, 바람직하게는 (R)- 또는 (S)-배치로 존재할 수 있다. 라세미체 혼합물을 비롯한 모든 광학 이성질체 및 그의 혼합물은 본 발명의 일부이다. 따라서, 본원에 제시된 임의의 제시 화학식은 라세미체, 하나 이상의 거울상이성질체 형태, 하나 이상의 부분입체이성질체 형태, 하나 이상의 회전장애이성질체 형태, 및 그의 혼합물을 나타내는 것으로 의도된다. 게다가, 특정 구조들은 기하이성질체 (즉, 시스 및 트랜스 이성질체)로서, 호변이성질체로서, 또는 회전장애이성질체로서 존재할 수 있다. 예를 들어, 이중 결합 또는 고리에서의 치환기는 시스- (=Z-) 또는 트랜스 (=E-) 형태로 존재할 수 있다. 따라서, 본 발명의 화합물은 이성질체의 혼합물로서 또는 바람직하게는 순수한 이성질체로서, 바람직하게는 거울상이성질체-순수한 부분입체이성질체 또는 순수한 거울상이성질체로서 존재할 수 있다.
본원에 제시된 임의의 화학식은 상기 화합물의 수화물, 용매화물 및 다형체 및 그의 혼합물을 나타내는 것으로 의도된다.
본원에 제시된 임의의 화학식은 또한 화합물의 표지되지 않은 형태 뿐만 아니라 동위원소 표지된 형태를 나타내는 것으로 의도된다. 동위원소 표지된 화합물은 하나 이상의 원자가 선택된 원자 질량 또는 질량수를 갖는 원자로 대체된 것을 제외하고는, 본원에 제시된 화학식으로 도시된 구조를 갖는다. 본 발명의 화합물에 혼입될 수 있는 동위 원소의 예로는 수소, 탄소, 질소, 산소, 인, 불소 및 염소의 동위원소, 예컨대 각각 2H, 3H, 11C, 13C, 14C, 15N, 31P, 32P, 18F, 35S, 36Cl, 125I가 포함된다. 본 발명의 동위원소 표지된 다양한 화합물, 예를 들어 3H, 13C 및 14C와 같은 방사성 동위원소가 혼입된 것들이 포함된다. 이러한 동위원소 표지된 화합물은 대사성 연구 (바람직하게는 14C 사용), 반응 역학 연구 (예를 들어, 2H 또는 3H 사용), 약물 또는 기질 조직 분포 분석을 비롯한 검출 또는 영상 기술, 예컨대, 양전자 방출 단층촬영 (PET) 또는 단일 광자 방출 전산화된 단층촬영 (SPECT)에서, 또는 환자의 방사성 치료에서 유용하다. 특히, 18F 또는 표지된 화합물이 PET 또는 SPECT 연구에서 특히 바람직할 수 있다. 또한, 보다 무거운 동위원소, 예컨대 중수소 (즉, 2H)로의 치환은 보다 큰 대사 안정성, 예를 들어 생체내 반감기 증가 또는 투여 요구량 감소를 야기하여 특정한 치료 이점을 제공할 수 있다. 동위원소 표지된 본 발명의 화합물 및 그의 전구약물은 일반적으로, 동위원소 표지되지 않은 시약을 손쉽게 입수가능한 동위 원소 표지된 시약으로 대체하여 이하 기재된 반응식, 또는 실시예 및 제조에 개시된 절차를 수행함으로써 제조할 수 있다.
추가로, 보다 무거운 동위원소, 특히 중수소 (즉, 2H 또는 D)로의 치환은 보다 큰 대사 안정성, 예를 들어 생체내 반감기 증가 또는 투여 요구량 감소 또는 치료 지수의 개선을 야기하여 특정한 치료 이점을 제공할 수 있다. 이러한 맥락에서 중수소는 화학식 I의 화합물의 치환기로서 간주된다고 이해된다. 상기 보다 무거운 동위원소, 상세하게는 중수소의 농도는 동위원소 농축 계수에 의해 정의될 수 있다. 본원에서 사용되는 용어 "동위원소 농축 계수"는 동위원소 존재량 및 특정 동위원소의 자연 존재량 사이의 비율을 의미한다. 본 발명의 화합물 내 치환기가 표시된 중수소인 경우, 이러한 화합물은 각 지정된 중수소 원자에 대하여 적어도 3500 (각 지정된 중수소 원자에서 52.5％의 중수소 혼입), 적어도 4000 (60％의 중수소 혼입), 적어도 4500 (67.5％의 중수소 혼입), 적어도 5000 (75％의 중수소 혼입), 적어도 5500 (82.5％의 중수소 혼입), 적어도 6000 (90％의 중수소 혼입), 적어도 6333.3 (95％의 중수소 혼입), 적어도 6466.7 (97％의 중수소 혼입), 적어도 6600 (99％의 중수소 혼입), 또는 적어도 6633.3 (99.5％의 중수소 혼입)의 동위원소 농축 계수를 갖는다. 본 발명의 화합물에서, 특정 동위원소로서 구체적으로 지정되지 않은 임의의 원자는 상기 원자의 임의의 안정한 동위원소를 나타내는 것을 의미한다. 달리 언급하지 않는 한, 위치가 "H" 또는 "수소"로서 구체적으로 지정된 경우, 상기 위치는 그의 자연 존재량 동위원소 조성으로 수소를 갖는 것으로 이해한다. 따라서, 본 발명의 화합물에서 중수소 (D)로서 구체적으로 지정된 임의의 원자는, 예를 들어 앞서 제시된 범위의 중수소를 나타내는 것을 의미한다.
본원에 제시된 임의의 화학식이 참조되는 경우, 특정 변수에 대하여 가능한 종들의 목록에서 특정 잔기를 선택하는 것은, 다른 곳에 나타낸 그 변수에 대한 잔기를 한정하는 것으로 의도되지 않는다. 즉, 변수가 1회를 초과하여 나타나는 경우, 구체적인 목록으로부터의 종의 선택은 화학식 내 다른 곳에서의 동일 변수에 대한 종의 선택과 무관하다 (상기 또는 하기에 바람직한 것으로서 특징화된 실시양태에서의 하나 이상 내지 모든 보다 일반적인 표현이 보다 구체적인 정의로 대체되어, 각각 본 발명의 보다 바람직한 실시양태를 유도할 수 있음).
복수 형태 (예를 들어, 화합물들, 염들, 제약 제제들, 질환들 등)가 사용되는 경우, 이에는 단수형 (예를 들어, 단일 화합물, 단일 염, 단일 제약 제제, 단일 질환 등)이 포함된다. "화합물"은 (예를 들어, 제약 제제에서) 하나 초과의 화학식 I의 화합물 (또는 그의 염)이 존재하는 것을 배제하지 않는다.
화학식 I의 화합물이 염-형성 기를 갖고 있는 경우, 염은 바람직하게는 화학식 I의 화합물의 제약상 허용되는 염이다. 염의 형성에 요구되는 산/염기는 일반적으로 당업계에 공지되어 있다.
달리 명시하지 않는 한, 하기 일반적 정의가 본 명세서에서 적용될 것이다.
할로겐 (또는 할로)은 불소, 브롬, 염소 또는 요오드, 특히 불소, 염소를 나타낸다. 할로겐-치환된 기 및 잔기, 예컨대 할로겐으로 치환된 알킬 (할로겐알킬)은 모노-, 폴리- 또는 퍼-할로겐화될 수 있다.
헤테로 원자는 탄소 및 수소 이외의 원자, 바람직하게는 질소 (N), 산소 (O) 또는 황 (S), 특히 질소이다.
"알킬"은 직쇄 또는 분지쇄 알킬기를 지칭하고, C1 - 7알킬, 보다 바람직하게는 C1-4알킬을 포함한다. 이러한 알킬기에는, 예를 들어 메틸, 에틸, n- 또는 이소-프로필, n-, 이소-, sec- 또는 tert-부틸, n-펜틸, n-헥실, n-헵틸, 특히 바람직하게는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소-프로필 및 n-부틸 및 이소-부틸이 포함된다. 알킬은 비치환 또는 치환될 수 있다. 예시적인 치환기로는 히드록시, 알콕시, 할로겐 (특히 플루오로), 아미노 및 이치환된 아미노, 모노- 또는 디-알킬 치환된 아미노, 아세틸아미노, 모르폴리닐, 아릴이 포함되나, 이에 제한되지는 않는다. 치환된 알킬의 예는 트리플루오로메틸이다. 시클로알킬이 알킬에 대한 치환기일 수도 있다. 이러한 경우의 예는 잔기 (알킬)-시클로알킬, 예컨대 (알킬)-시클로프로필 또는 (알킬)-시클로부틸, 예를 들어 메틸-시클로프로필 또는 메틸-시클로부틸이다. (알킬)-시클로알킬 잔기의 보다 구체적인 예로는 같은자리-유형의 치환 패턴, 예를 들어 1-알킬 시클로알킬, 예컨대 1-메틸 시클로프로필이 포함된다. 알킬에 대한 치환기로서의 시클로알킬의 또 다른 예는 알칸디일-시클로알킬, 예컨대 알칸디일-시클로프로필, 예를 들어 -CH2-시클로프로필이다. C1-C7-알킬은 바람직하게는 1 이상 7개 이하의 탄소 원자를 갖는 알킬, 바람직하게는 1 이상 4개 이하의 탄소 원자를 갖는 알킬 (C1-C4-알킬)이고, 선형 또는 분지형이고; 바람직하게는, 저급 알킬이 부틸, 예컨대 n-부틸, sec-부틸, 이소부틸, tert-부틸, 프로필, 예컨대 n-프로필 또는 이소프로필, 에틸 또는 바람직하게는 메틸이다.
"알콕시", "알콕시알킬", "알콕시카르보닐", "알콕시카르보닐알킬", "알킬술포닐", "알킬술폭실", "알킬아미노", "할로겐알킬"과 같은 기타 기에서의 각 알킬 부분은 상기 언급된 "알킬"의 정의에 기재된 바와 동일한 의미를 가질 것이다.
"C3 -7-시클로알킬"은 카르보사이클 당 3 내지 7개의 고리 원자를 갖는, 포화 또는 부분 포화된 모노시클릭, 융합된 폴리시클릭 또는 스피로 폴리시클릭 카르보사이클을 지칭한다. 시클로알킬기의 예시적 예로는 하기 잔기가 포함된다: 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸 및 시클로헥실. C3 -7-시클로알킬은 비치환 또는 치환될 수 있고; 예시적인 치환기는 알킬에 대한 정의에 제공되어 있다. C3 -7-시클로알킬은 또한 다른 기, 예를 들어 알킬기에 대한 치환기일 수 있다.
"아릴"은 바람직하게는 16개 이하의 탄소 원자, 특히 10개 이하의 탄소 원자, 예를 들어 6 내지 16개, 바람직하게는 6 내지 10개의 고리 탄소 원자의 고리계를 갖는 불포화 카르보시클릭 방향족 고리계를 지칭하고, 바람직하게는 모노- 또는 바이-시클릭이고, 비치환 또는 치환된다. 예를 들어, 아릴은 비치환 또는 치환된 페닐이다.
"헤테로시클릴"은 결합 고리에서의 불포화 (특히, 최대 불포화, 예를 들어 공액 이중 결합을 고리(들)에 가능한 최대수로 함유함) (예를 들어, 헤테로아릴), 포화 또는 부분 포화 헤테로시클릭 라디칼을 지칭하고, 바람직하게는 모노시클릭이거나, 또는 본 발명의 보다 넓은 측면에서는 바이시클릭 고리이고; 3 내지 16개의 고리 원자, 보다 바람직하게는 4 내지 10개의 고리 원자를 가지며, 여기서 적어도 화학식 I의 분자의 라디칼에 결합하는 고리에서 하나 이상, 바람직하게는 1 내지 4개의 고리 원자, 특히 1 또는 2개의 고리 원자가 질소, 산소 및 황으로 이루어진 군으로부터 선택된 헤테로원자이며; 결합 고리는 바람직하게는 4 내지 12개의 고리 원자, 특히 4 내지 7개의 고리 원자, 예를 들어 6 내지 10개의 고리 원자, 특히 헤테로아릴에 대해서는, 예컨대 5, 6, 9 또는 10개의 고리 원자를 갖는다. 헤테로시클릴은 비치환되거나, 또는 알킬 또는 치환된 알킬에 대해 상기 정의된 치환기 및/또는 하기 치환기 중 하나 이상, 및 질소 함유 헤테로아릴 (그의 N-옥시드를 포함함)로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 하나 이상, 특히 1 내지 3개의 치환기로 치환될 수 있다: 옥소 (=O), 티오카르보닐 (=S), 이미노(=NH), 이미노-저급 알킬.
"치료"에는 질환 또는 장애의 예방적 (방지적) 및 치유적 치료 뿐만 아니라 진행의 지연이 포함된다.
"PI3 키나제 매개 질환" (특히, PI3K 알파 매개 질환)은 특히 PI3 키나제의 억제, 특히 PI3K알파의 억제에 대해 유익한 방식 (예를 들어, 하나 이상의 증상의 개선, 질환 발병의 지연, 질환으로부터의 최대 일시적이거나 또는 완전한 치유)으로 반응하는 장애이다 (여기서, 치료되는 질환은 PIK3CA의 체세포 돌연변이, 또는 PTEN의 생식세포주 돌연변이 또는 체세포 돌연변이를 나타내는 것들을 포함할 수 있음). 치료되는 질환은 특히 증식성 질환을 포함하고, 예컨대 고형 종양, 백혈병, 교아세포종, 유방암 및 전립선암을 비롯한 종양 질환이 언급될 수 있다.
"염" ("또는 그의 염들" 또는 "또는 그의 염"의 의미)은 단독으로 또는 화학식 I의 유리 화합물과의 혼합물로 존재할 수 있으며, 바람직하게는 제약상 허용되는 염이다. 화학식 I의 화합물의 염-형성 기는 염기성 또는 산성 특성을 갖는 기 또는 라디칼이다. 하나 이상의 염기성 기 또는 하나 이상의 염기성 라디칼, 예를 들어, 아미노; 펩티드 결합을 형성하지 않는 2차 아미노 기 또는 피리딜 라디칼을 갖는 화합물은, 예를 들어 무기산, 예컨대 염산, 황산 또는 인산과의; 또는 적합한 유기 카르복실 또는 술폰산, 예를 들어, 지방족 모노- 또는 디-카르복실산, 예컨대 트리플루오로아세트산, 아세트산, 프로피온산, 글리콜산, 숙신산, 말레산, 푸마르산, 히드록시말레산, 말산, 타르타르산, 시트르산 또는 옥살산; 또는 아미노산, 예컨대 아르기닌 또는 라이신; 방향족 카르복실산, 예컨대 벤조산; 2-페녹시-벤조산; 2-아세톡시-벤조산; 살리실산; 4 아미노살리실산; 방향족-지방족 카르복실산, 예컨대 만델산 또는 신남산; 헤테로방향족 카르복실산, 예컨대 니코틴산 또는 이소니코틴산; 지방족 술폰산, 예컨대 메탄-, 에탄- 또는 2-히드록시에탄술폰산; 또는 방향족 술폰산, 예를 들어 벤젠-, p-톨루엔- 또는 나프탈렌-2-술폰산과의 산 부가염을 형성할 수 있다. 여러 염기성 기가 존재하는 경우, 모노- 또는 폴리-산 부가염이 형성될 수 있다. 산성 기, 카르복시 기 또는 페놀 히드록시 기를 갖는 화학식 I의 화합물은, 금속 또는 암모늄 염, 예컨대 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염, 예를 들어 나트륨, 칼륨, 마그네슘 또는 칼슘 염; 또는 암모니아 또는 적합한 유기 아민, 예컨대 3차 모노아민, 예를 들어 트리에틸아민 또는 트리(2 히드록시에틸)-아민, 또는 헤테로시클릭 염기, 예를 들어 N-에틸-피페리딘 또는 N,N'-디메틸피페라진과의 암모늄 염을 형성할 수 있다. 염의 혼합물도 가능하다. 산성 및 염기성 기 둘 모두를 갖는 화학식 I의 화합물은 내부 염을 형성할 수 있다.
단리 또는 정제 목적상, 제약상 허용되지 않는 염, 예를 들어 피크레이트 또는 퍼클로레이트를 사용하는 것도 가능하다. 치료 용도를 위해서는, 제약상 허용되는 염 또는 유리 화합물만을 사용하므로 (제약 제제의 형태로 적용가능한 경우), 이들이 바람직하다. 유리 형태의 화합물 및 그의 염 (예를 들어, 신규 화합물의 정제 또는 동정에서 중간체로서 사용될 수 있는 염 포함) 형태의 신규 화합물 사이의 밀접한 관계를 고려할 때, 상기 및 하기의 유리 화합물에 대한 임의의 언급은, 적절하게 상응하는 염 및 부형제도 지칭하는 것으로 이해해야 한다.
본 발명의 화합물은 또한 용매화물 및 수화물을 형성할 수 있고, 이에 따라 화학식 I의 화합물에 대한 임의의 언급은, 적절하게 화학식 I의 화합물의 상응하는 용매화물 및/또는 수화물 및 부형제도 지칭하는 것으로 이해해야 한다.
본 발명은 또한 화학식 I의 화합물 그 자체로 생체내 전환되는 화학식 I의 화합물의 전구약물에 관한 것이다. 이에 따라, 화학식 I의 화합물에 대한 임의의 언급은 적절하게 화학식 I의 화합물의 상응하는 전구약물 및 부형제도 지칭하는 것으로 이해해야 한다.
조합물은 하나의 투여 단위 형태인 고정 조합물을 지칭하거나, 또는 화학식 I의 화합물 및 조합 파트너 (예를 들어, 이하 설명되며, 또한 "치료제" 또는 "공동-작용제"로서 칭해지는 또 다른 약물)를 동일한 시간에 독립적으로 투여하거나, 또는 특히 조합 파트너가 협동 효과, 예를 들어 상승작용 효과를 나타내게 하는시간 간격 이내에 별도로 투여할 수 있는 조합 투여용 부분품의 키트를 지칭한다. 본원에 사용된 용어 "공동-투여" 또는 "조합 투여" 등은 이를 필요로 하는 단일 대상체 (예를 들어, 환자)로의 선택된 조합 파트너의 투여를 포함하는 것을 의미하며, 작용제가 반드시 동일한 투여 경로를 통해 또는 동일한 시간에 투여될 필요는 없는 치료 투약법을 포함하는 것으로 의도된다. 본원에 사용된 용어 "제약 조합물"은 하나 초과의 활성 성분을 혼합 또는 조합하여 얻은 생성물을 의미하며, 활성 성분들의 고정 및 비-고정 조합물을 모두 포함한다. 용어 "고정 조합물"은 활성 성분, 예를 들어 화학식 I의 화합물 및 조합 파트너가 모두 단일 개체 또는 투여 형태로 환자에게 동시에 투여되는 것을 의미하다. 용어 "비-고정 조합물"은 활성 성분, 예를 들어 화학식 I의 화합물 및 조합 파트너가 분리체(separate entities)로서 동시에, 함께, 또는 구체적시간 제한 없이 순차적으로 환자에게 투여되는 것을 의미한다 (여기서, 상기 투여는 환자 체내에서 두 화합물의 치료적 유효 수준을 제공함). 후자는 또한 칵테일(cocktail) 요법, 예를 들어 셋 이상의 활성 성분의 투여에 적용된다.
바람직한 실시양태 (독립적으로, 총괄적으로 또는 임의의 조합 또는 하위-조합으로 바람직함)에서, 본 발명은 유리 염기 형태 또는 염 형태의 화학식 I의 화합물 (여기서, 치환기는 본원에서 정의된 바와 같음)에 관한 것이다.
화학식 I에 나타낸 바와 같이, 알파-아미드 치환기는 피롤리딘 고리 상의 2-위치에 존재하고, 이 위치에서의 입체화학성은 도시된 바와 같다.
고리 A는 바람직하게는 비치환되거나, 또는 N, S 또는 O로부터 선택된 1 또는 2개의 헤테로원자 (여기서, 하나 이상의 헤테로원자는 N임)를 함유하는 치환된 5원 또는 6원 헤테로시클릭 (바람직하게는, 헤테로아릴) 고리이다.
보다 바람직하게는, 고리 A는 비치환 또는 치환된 피리딘 고리, 비치환 또는 치환된 피리미딘 고리, 비치환 또는 치환된 티아졸 고리, 비치환 또는 치환된 피라졸 고리, 또는 비치환 또는 치환된 옥사졸 고리로부터 선택된다. 비치환 또는 치환된 피리딘 고리, 비치환 또는 치환된 피리미딘 고리, 또는 비치환 또는 치환된 티아졸 고리가 보다 바람직하다.
바람직하게는, 고리 A는 고리 A의 탄소 원자를 통해 화학식 I의 분자의 나머지에 융합된다.
고리 A는 바람직하게는, 각각의 경우에,
비치환 또는 치환된 C1-C7-알킬;
비치환 또는 치환된 아미노;
비치환 또는 치환된 C3-C7-시클로알킬
로부터 독립적으로 선택된 1, 2 또는 3개의 R2 기, 바람직하게는 2개의 R2 기, 가장 바람직하게는 1개의 R2 기로 치환된다.
바람직하게는, R2는
비치환된 C1-C7-알킬;
디(C1-C7-알킬)아미노;
C3-C7-시클로알킬 또는 할로 (바람직하게는 플루오로)로 1회 이상 치환된 C1-C7-알킬;
비치환된 C3-C7-시클로알킬;
할로 (바람직하게는 플루오로), (할로-C1-C7-알킬) 또는 C1-C7-알킬로 1회 이상 치환된 C3-C7-시클로알킬
로부터 선택된다.
보다 바람직하게는, R2는 메틸, t-부틸, 디에틸아미노, 시클로프로필메틸, 2-플루오로-1,1-디메틸에틸 또는 2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸로부터 선택된다.
또 다른 실시양태에서, R2는 메틸, t-부틸, 디에틸아미노, 시클로프로필메틸 또는 2-플루오로-1,1-디메틸에틸로부터 선택된다.
고리 A는 보다 바람직하게는 A1 또는 A2 또는 A3 또는 A4 또는 A5 또는 A6으로부터 선택된다:
상기 식에서,
Z는 N 또는 CH이고, R2는 상기와 같이 정의된다.
바람직하게는, 고리 A는 A1 또는 A2로부터 선택된다.
X-Y는 바람직하게는 (CH2)r 또는 O(CH2)t를 나타내며, 여기서
r은 1, 2 또는 3이고;
t는 1 또는 2이고;
X-Y는 보다 바람직하게는 (CH2)r 또는 O(CH2)t (여기서, r은 2이고, t는 1임)를 나타낸다. 즉, 의심할 여지 없이, X-Y는 바람직하게는 -CH2-CH2- 또는 -O-CH2-이고, 이에 따라 후자의 경우, X-Y에서의 X는 -O-CH2-에서의 O이다.
R1은 바람직하게는, 각각의 경우에 독립적으로,
할로;
히드록시;
비치환 또는 치환된 페닐;
디(C1-C7-알킬)아미노;
비치환된 C1-C7-알킬;
히드록시, C1-C7-알콕시, 디(C1-C7-알킬)아미노, 디-(퍼듀테로C1-C7-알킬)아미노, 페닐, 모르폴리닐, 아세틸아미노 또는 N-(C1-C7-알킬)-N-(페닐C1-C7-알킬)아미노 (여기서 각각의 페닐은 독립적으로 할로에 의해 일치환 또는 다치환될 수 있음)에 의해 1회 이상 치환된 C1-C7-알킬
을 나타낸다.
R1은 보다 바람직하게는, 각각의 경우에 독립적으로,
플루오로;
히드록시;
비치환된 페닐;
디메틸아미노;
메틸;
히드록시, 메톡시, 디메틸아미노, 디-(퍼듀테로메틸)아미노, 페닐, 모르폴리닐, 아세틸아미노, 또는 N-(메틸)-N-(페닐메틸)아미노로 1회 이상 치환되며 (바람직하게는 1회 치환됨), 각각의 페닐은 독립적으로 플루오로에 의해 일치환 또는 다치환될 수 있는 메틸
을 나타낸다.
R1은 가장 바람직하게는, 각각의 경우에 독립적으로,
플루오로;
히드록시;
비치환된 페닐;
디메틸아미노;
메틸;
히드록시 메틸;
메톡시 메틸;
디메틸아미노 메틸;
디-(퍼듀테로메틸)아미노 메틸;
벤질;
모르폴린-4-일 메틸;
N-아세틸아미노 메틸;
N-(메틸)-N-(3-플루오로-페닐메틸)아미노 메틸
을 나타낸다.
본 발명의 하나의 실시양태는 n이 0 또는 1인 화학식 I의 화합물을 포함한다. 바람직하게는, n은 1이다.
본 발명의 또 다른 실시양태는, q가 0인, 즉 질소 함유 헤테로시클릭 고리가 위치 2에서 아미드에 의해서만 치환된 화학식 I의 화합물을 포함한다. 이러한 실시양태에서, n이 0 또는 1, 보다 바람직하게는 1인 것이 바람직하다.
본 발명의 또 다른 실시양태는 q가 1인, 즉 질소 함유 헤테로시클릭 고리가 위치 2에서의 아미드 및 단일 R1 기에 의해서만 치환된 화학식 I의 화합물을 포함한다. 이러한 실시양태에서, n이 0 또는 1, 보다 바람직하게는 1인 것이 바람직하다. 이러한 실시양태에서, R1 기는 질소 함유 헤테로시클릭 고리의 위치 2- (즉, 아미드 기로 치환된 것과 동일한 탄소 상에서) 또는 위치 3- 또는 위치 4- 또는 위치 5-에서 치환될 수 있다.
바람직하게는, 이러한 실시양태에서 R1 기는 질소 함유 헤테로시클릭 고리의 위치 3에서 치환된다 (즉, 하기 화학식 IA의 화합물).
<화학식 IA>
상기 식에서, 치환기는 화학식 I의 화합물에 대해 정의한 바와 같다.
바람직하게는, 화학식 IA의 화합물에서 n은 1이고, 이에 따라 질소 함유 헤테로시클릭 고리가 피롤리딘 고리이며, 상기 도시된 입체화학성을 갖는 아미드에 의해 2-위치에서 그리고 R1 기에 의해 3-위치에서 치환된 것인 화합물이 제공된다.
바람직하게는, R1 기는 위치 2에서의 아미드에 대해 시스-인 입체화학성을 갖는다 (즉, 하기 화학식 IA'에 따른 화합물).
<화학식 IA'>
상기 식에서, 치환기는 화학식 I의 화합물에 대해 정의한 바와 같다.
바람직하게는, 화학식 IA'의 화합물에서 n은 1이고, 이에 따라 질소 함유 헤테로시클릭 고리가 피롤리딘 고리이며, 상기 도시된 입체화학성을 갖는 아미드에 의해 2-위치에서 그리고 상기 도시된 입체화학성을 갖는 R1 기에 의해 3-위치에서 치환되어, 아미드 및 R1 기가 서로에 대해 시스-인 화합물이 제공된다.
본 발명의 추가의 실시양태는, q가 2 또는 3이고, 이에 따라 2개의 이상의 R1 치환기가 존재하며, 각각의 R1이 본원의 화학식 I에 대해 정의된 군으로부터 독립적으로 선택된 것인 화학식 I의 화합물을 포함한다. 이러한 실시양태에서, 2개의 R1 각각이, 적어도 피롤리딘 고리의 위치 3에 결합되고, 임의의 제3 R1 기 (존재하는 경우)는 질소 함유 헤테로시클릭 고리 상의 나머지에 결합되는 것이 바람직하다. n이 1이고, 제3 R1 기 (존재하는 경우)는 생성된 피롤리딘 고리의 4- 또는 5-위치에 결합되는 것, 즉 하기 화학식 IB의 화합물을 제공하는 것이 또한 바람직하다.
<화학식 IB>
상기 식에서, 치환기는 화학식 I의 화합물에 대해 정의한 바와 같다.
화학식 IB에 따른 화합물에서, 제3 R1가 피롤리딘 고리의 위치 4-에 결합되는 것이 바람직하다.
본 발명의 추가의 실시양태는, n이 1이고, 2개의 R1 기가 피롤리딘 고리의 위치 3에 결합하여 함께 알칸디일, 바람직하게는 C3-C8-시클로알킬, 특히 시클로프로필을 형성하는 화합물, 즉 하기 화학식 IC의 화합물을 제공하는 화학식 I의 화합물을 포함한다.
<화학식 IC>
상기 식에서, 치환기는 화학식 I의 화합물에 대해 정의한 바와 같고, 제3 R1 기는 임의적이고, 존재하는 경우, 바람직하게는 피롤리딘 고리의 위치 4-에 결합된다.
화학식 IA, IA', IB 또는 IC 중 어느 하나에서, 달리 언급되지 않는 한, 고리 A, X-Y, R1 및 n에 대한 바람직한 정의가 또한 적용될 수 있다.
본 발명은 또한 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물의 제약상 허용되는 전구약물에 관한 것이다.
본 발명은 또한 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물의 제약상 허용되는 대사물에 관한 것이다.
본 발명은 특히 실시예에 주어진 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물뿐만 아니라 본원에 기재된 제조 방법에 관한 것이다.
본 발명은 또한 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물의 제조 방법에 관한 것이다. 원칙적으로 2개의 상이한 아민을 상응하는 우레아 유도체로 전환시키는 모든 공지된 방법이 적합하며, 이는 각 출발 물질을 사용하여 적용할 수 있다.
따라서, 본 발명은 특히, 각 경우에 임의로 희석제의 존재하에, 그리고 임의로 반응 보조제의 존재하에, 하기 화학식 II의 화합물을 활성화제의 존재하에 하기 화학식 IIIA의 화합물과 반응시키거나 ("방법 A"), 또는 하기 화학식 IIIB의 화합물과 반응시키는 단계 ("방법 B");
<화학식 II>
(상기 식에서, 치환기는 앞서 정의한 바와 같음)
<화학식 IIIA>
(상기 식에서, 치환기는 앞서 정의한 바와 같음)
<화학식 IIIB>
(상기 식에서, R1은 앞서 정의한 바와 같고; RG는 반응성 기 (예컨대, 이미다졸릴카르보닐)를 나타냄)
생성된 화학식 I의 화합물을 유리 형태 또는 염의 형태로 회수하는 단계; 및
임의로, 방법 A 또는 방법 B에 따라 수득가능한 화학식 I의 화합물을 화학식 I의 다른 화합물로 전환시키고/거나, 화학식 I의 화합물의 수득가능한 염을 그의 다른 염으로 전환시키고/거나, 화학식 I의 화합물의 수득가능한 유리 화합물을 그의 염으로 전환시키고/거나, 화학식 I의 화합물의 수득가능한 이성질체를 화학식 I의 하나 이상의 다른 수득가능한 이성질체로부터 분리하는 단계
를 포함하는 방법에 관한 것이다.
반응 조건
방법은 당업계에 공지된 방법에 따라 또는 하기 실시예에 개시된 바와 같이 수행할 수 있다. 예를 들어, 화학식 II의 화합물을 염기, 예를 들어 유기 아민, 예를 들어 트리에틸아민의 존재하에서 화학식 IIIA 또는 IIIB의 화합물과 용매, 예를 들어 디메틸포름아미드 중에서 반응시킬 수 있다.
상기 또는 하기에 온도가 제시된 경우, 제시된 수치값으로부터의 소폭의 편차, 예를 들어 ±10％의 편차가 전형적으로 허용될 수 있으므로, "약"이 추가되어야 한다.
모든 반응은 하나 이상의 희석제 및/또는 용매의 존재하에서 수행될 수 있다. 출발 물질은 등몰량으로 사용될 수 있고; 별법으로, 화합물이 과량으로 사용되어, 예를 들어 용매로서 기능하거나, 평형을 이동시키거나, 또는 일반적으로 반응 속도를 가속화시킬 수 있다.
반응 보조제, 예컨대 산, 염기 또는 촉매는, 일반적으로 공지된 절차에서와 유사하며 반응에 의해 요구되는 적합한 양으로, 당 분야에 공지된 바와 같이, 첨가될 수 있다.
보호기
하나 이상의 다른 관능기, 예를 들어 카르복시, 히드록시, 아미노, 술피드릴 등이 본원에 기재된 바와 같이 출발 물질 또는 임의의 다른 전구체에서 보호되거나 보호될 필요가 있는 경우, 이들이 반응에 참여하거나 반응을 방해해서는 안되기 때문에, 이들은 펩티드 화합물, 및 또한 세팔로스포린 및 페니실린 뿐만 아니라 핵산 유도체 및 당의 합성에 통상적으로 사용되는 기들이다. 보호기는 일단 제거되면 최종 화합물에는 더 이상 존재하지 않는 기이며 (한편 치환기로서 잔존하는 기는 본원에 사용되는 의미에서 보호기가 아님), 이는 출발 물질에 또는 중간 단계에 첨가되었다가 최종 화합물의 수득을 위해 제거되는 기이다. 또한 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물을 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 다른 화합물로 전환시키는 경우, 유용하거나 필요하면, 보호기를 도입 및 제거할 수 있다.
보호기는 전구체 내에 이미 존재할 수 있으며, 원치않는 2차 반응, 예컨대 아실화, 에테르화, 에스테르화, 산화, 가용매분해 및 유사한 반응에 대하여 관련 관능기를 보호해야 한다. 보호기는, 그들 스스로, 전형적으로는 가아세토산분해, 가양성자분해, 가용매분해, 환원, 광분해에 의해 또는 또한 예를 들어, 생리학적 조건과 유사한 조건하에서의 효소 활성에 의해 용이하게, 즉 바람직하지 않은 2차 반응없이 제거되며, 최종 생성물에 존재하지 않는 것을 특징으로 한다. 전문가들은 상기 및 하기 언급된 반응에 적합한 보호기를 인지하고 있거나 또는 용이하게 확립할 수 있다.
상기 보호기에 의한 상기 관능기의 보호, 보호기 그 자체, 및 그의 제거 반응은, 예를 들어 표준 참고 도서, 예컨대 [J. F. W. McOmie, "Protective Groups in Organic Chemistry", Plenum Press, London and New York 1973], [T. W. Greene, "Protective Groups in Organic Synthesis", Third edition, Wiley, New York 1999], ["The Peptides"; Volume 3 (editors: E. Gross and J. Meienhofer), Academic Press, London and New York 1981], ["Methoden der organischen Chemie" (Methods of organic chemistry), Houben Weyl, 4th edition, Volume 15/I, Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974], [H.-D. Jakubke and H. Jescheit, "Aminosauren, Peptide, Proteine" (Amino acids, peptides, proteins), Verlag Chemie, Weinheim, Deerfield Beach, and Basel 1982] 및 [Jochen Lehmann, "Chemie der Kohlenhydrate: Monosaccharide und Derivate" (Chemistry of carbohydrates: monosaccharides and derivatives), Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974]에 기재되어 있다.
임의의 반응 및 전환
화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물은 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 다른 화합물로 전환될 수 있다.
치환기가 아미노 또는 아미노-C1-C7-알킬 치환기를 함유하는 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물에서, 아미노는 3차 질소 염기, 예컨대 트리에틸아민 또는 피리딘의 존재하에 적절한 용매, 예컨대 메틸렌 클로라이드의 부재 또는 존재하에, 예를 들어 -20 내지 50℃의 온도에서, 예컨대 대략 실온에서 상응하는 C1-C7-알카노일할로게니드, 예를 들어 상응하는 클로라이드와의 반응에 의해 아실아미노, 예를 들어 C1-C7-알카노일아미노로 전환될 수 있다.
염-형성 기를 갖는 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물의 염은 그 자체로 공지된 방식으로 제조될 수 있다. 따라서, 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물의 산 부가염은 산 또는 적합한 음이온 교환 시약으로의 처리에 의해 수득될 수 있다. 2개의 산 분자를 갖는 염 (예를 들어, 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물의 디할로게니드)은 또한 화합물 당 1개의 산 분자를 갖는 염 (예를 들어, 모노할로게니드)으로 전환될 수 있으며; 이는 융점으로 가열하거나, 또는 예를 들어 고진공하에 승온 (예를 들어, 130 내지 170℃)에서 고체로서 가열하여 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물의 분자 당 1개의 산 분자를 방출시킴으로써 수행할 수 있다. 염은 통상적으로, 예를 들어 적합한 염기성 화합물, 예를 들어 알칼리 금속 카르보네이트, 알칼리 금속 히드로겐카르보네이트, 또는 알칼리 금속 히드록시드, 전형적으로는 탄산칼륨 또는 수산화나트륨을 이용한 처리에 의해 유리 화합물로 전환될 수 있다.
입체이성질체 혼합물, 예를 들어 부분입체이성질체의 혼합물은 그 자체로 공지된 방식으로 적합한 분리 방법에 의해 그의 상응하는 이성질체로 분리될 수 있다. 부분입체이성질체 혼합물은, 예를 들어 분별 결정화, 크로마토그래피, 용매 분포에 의해, 및 유사한 절차에 의해 그의 개별 부분입체이성질체로 분리될 수 있다. 이러한 분리는 출발 화합물의 수준에서 또는 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물 그 자체에서 수행될 수 있다. 거울상이성질체는, 예를 들어 거울상이성질체-순수 키랄 산과의 염 형성에 의한 부분입체이성질체 염의 형성을 통해, 또는 예를 들어 키랄 리간드를 갖는 크로마토그래피 기질을 사용하는 크로마토그래피, 예컨대 HPLC에 의해 분리될 수 있다.
본원에 언급된 전환과 유사한 반응이 적합한 중간체의 수준에서 일어날 수도 있음 (따라서 상응하는 출발 물질의 제조에 있어서 유용함)이 강조되어야 한다.
출발 물질:
화학식 II 및 III의 출발 물질 뿐만 아니라 본원, 예를 들어 하기에 언급된 다른 출발 물질은 당업계에 공지된 방법에 따라 제조되거나 또는 이와 유사하게 제조될 수 있으며, 이들은 당업계에 공지되어 있고/있거나 시중에서 입수가능하다. 출발 물질의 제조가 특별히 기재되어 있지 않은 한, 화합물은 공지된 것이거나 또는 당업계에 공지된 방법 (예를 들어, WO 05/021519 또는 WO 04/096797)과 유사하게, 또는 하기 개시된 바와 같이 제조할 수 있다. 신규한 출발 물질 뿐만 아니라 그의 제조 방법이 또한 본 발명의 실시양태이다. 바람직한 실시양태에서, 이러한 출발 물질이 사용되고, 선택된 반응은 바람직한 화합물이 수득될 수 있도록 선택된다.
출발 물질 (중간체 포함) (이는 또한 적절하고 편리한 경우 염으로서 사용되고/거나 수득될 수 있음)에서, 치환기는 바람직하게는 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물에 대해 정의된 바와 같다.
제약 조성물, 용도 및 치료 방법
본 발명은 또한 본원에 개시된 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물의 약제로서의 용도에 관한 것이다. 한 실시양태에서, 본 발명은, 예를 들어 PI3K의 억제가 나타나는, 예를 들어 인간 또는 수의학적 용도를 위한, 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물을 포함하는 조성물을 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 PI3K에 의해 매개되는 세포 증식성 질환, 예컨대 종양 (양성 또는 악성) 및/또는 암성 세포 성장의 치료에 관한 것이다. 질환에는 PIK3CA의 체세포 돌연변이, 또는 PTEN의 생식세포주 돌연변이 또는 체세포 돌연변이를 나타내는 것들이 포함될 수 있다. 특히, 화합물은, 예를 들어 육종; 폐암; 기관지암; 전립선암; 유방암 (산발성 유방암 및 코우덴병의 환자 포함); 췌장암; 위장암; 결장암; 직장암; 결장 암종; 결장직장 선종; 갑상선암; 간암; 간내 담관암; 간세포암; 부신암; 위(stomach)암; 위(gastric)암; 신경교종; 교모세포종; 자궁내막암; 흑색종; 신장암; 신우암; 방광암; 자궁체부암; 자궁경부암; 질암; 난소암; 다발성 골수종; 식도암; 백혈병; 급성 골수성 백혈병; 만성 골수성 백혈병; 림프구성 백혈병; 골수양 백혈병; 뇌암; 뇌의 암종; 구강 및 인두암; 후두암; 소장암; 비-호지킨 림프종; 흑색종; 융모성 결장 선종; 신생물; 상피 특성의 신생물; 림프종; 유방 암종; 기저 세포 암종; 편평 세포 암종; 광선 각화증; 충실성 종양을 비롯한 종양 질환; 경부 또는 두부의 종양; 진성 적혈구증가증; 본태성 혈소판증가증; 및 골수양화생을 수반하는 골수섬유증을 비롯한, 인간 또는 동물 (예를 들어, 쥐과) 암의 치료에 유용할 수 있다.
다른 실시양태에서, (예를 들어, PI3K-매개) 병태 또는 장애는 표피 과다증식, 전립선 비대증, 신생물, 상피 특성의 신생물, 코우덴 증후군, 레르미트-두도스(Lhermitte-Dudos) 질환 또는 바나얀-조나나(Bannayan-Zonana) 증후군, 천식, COPD, ARDS, 뢰플러 증후군, 호산구성 폐렴, 기생충 (특히 후생동물) 침습 (열대 호산구증가증 포함), 기관지폐 아스페르길루스증, 결절성 다발동맥염 (처크-스트라우스 증후군 포함), 호산구성 육아종, 약물-반응에 의해 발생하여 기도에 영향을 미치는 호산구-관련 장애, 건선, 접촉성 피부염, 아토피성 피부염, 원형 탈모증, 다형 홍반, 포진성 피부염, 경피증, 백반증, 과민성 혈관염, 두드러기, 수포성 유천포창, 홍반성 루푸스, 천포창, 후천성 수포성 표피박리증, 자가면역성 혈액 장애 (예를 들어, 용혈성 빈혈, 재생불량 빈혈, 순수 적혈구 빈혈 및 특발성 혈소판감소증), 전신 홍반성 루푸스, 다발성연골염, 경피증, 베게너 육아종증, 피부근염, 만성 활성 간염, 중증 근무력증, 스티븐-존슨 증후군, 특발성 스프루, 자가면역성 염증성 장 질환 (예를 들어, 궤양성 대장염 및 크론병), 내분비 안병증, 그레이브병, 사르코이드증, 폐포염, 만성 과민성 폐렴, 다발성 경화증, 원발성 담즙성 간경변증, 포도막염 (전방 및 후방), 간질성 폐 섬유증, 건선성 관절염, 사구체신염, 심혈관 질환, 아테롬성동맥경화증, 고혈압, 심부 정맥 혈전증, 졸중, 심근경색증, 불안정형 협심증, 혈전색전증, 폐동맥 색전증, 혈전용해 질환, 급성 동맥 허혈, 말초 혈전성 폐쇄, 및 관상 동맥 질환, 재관류 손상, 망막병증, 예컨대 당뇨병성 망막병증 또는 고압 산소-유도 망막병증, 및 상승된 안내압 또는 안구 방수 분비를 특징으로 하는 병태, 예컨대 녹내장으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
상기 용도에 있어서, 필요한 투여량은 물론 투여 방식, 치료하고자 하는 특정 병태 및 목적 효과에 따라 달라질 것이다. 일반적으로, 전신적으로 체중 1 kg 당 약 0.03 내지 10.0 mg의 1일 투여량으로 만족스러운 결과가 얻어지도록 제시된다. 보다 큰 포유동물, 예컨대 인간에서 제시되는 1일 투여량은 약 0.5 mg 내지 약 1 g 범위이며, 이는 예를 들어 1일 4회 이하의 분할 투여량으로 또는 지연 형태로 편리하게 투여된다. 경구 투여를 위한 적합한 단위 투여 형태는 약 0.1 내지 500 mg의 활성 성분을 포함한다.
화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물은 임의의 통상의 경로에 의해, 특히 경장으로, 예를 들어 경구로, 예를 들어 정제 또는 캡슐의 형태로, 또는 비경구로, 예를 들어 주사가능한 용액 또는 현탁액의 형태로, 국소적으로, 예를 들어 로션, 겔, 연고 또는 크림의 형태로, 흡입에 의해, 비내로, 또는 좌제 형태로 투여될 수 있다.
화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물은, 예를 들어 상기 나타낸 바와 같이, 유리 형태로 또는 제약상 허용되는 염 형태로 투여될 수 있다. 이러한 염은 통상적 방식으로 제조될 수 있고, 유리 화합물과 동일한 정도의 활성을 나타낼 수 있다.
결론적으로, 본 발명은 또한 하기를 제공한다:
? 예를 들어, 상기 나타낸 것과 같은, PI3 (예컨대, PI3 키나제 알파)의 활성화에 의해 매개되는 병태, 장애 또는 질환의 예방 또는 치료를 필요로 하는 대상체에게 유효량의 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 상기 병태, 장애 또는 질환을 예방 또는 치료하는 방법.
? 예를 들어, 본원에 나타낸 임의의 방법에서 약제로서의, 유리 형태 또는 제약상 허용되는 염 형태의 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물의 용도.
? 예를 들어, 본원에 나타낸 임의의 방법에서, 특히 하나 이상의 포스파티딜이노시톨 3-키나제 매개 질환에 사용하기 위한 방법에서 약제로서 사용하기 위한, 유리 형태 또는 제약상 허용되는 염 형태의 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물.
? 본원에 나타낸 임의의 방법에서, 특히 하나 이상의 포스파티딜이노시톨 3-키나제 매개 질환의 치료를 위한 방법에서의, 유리 형태 또는 제약상 허용되는 염 형태의 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물의 용도.
? 본원에 나타낸 임의의 방법에서, 특히 하나 이상의 포스파티딜이노시톨 3-키나제 매개 질환의 치료용 의약의 제조를 위한 방법에서의, 유리 형태 또는 제약상 허용되는 염 형태의 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물의 용도.
PI3K는 대등한 신호전달 경로를 통합시키는 제2 메신저 중심으로 기능하며, PI3K 억제제와 다른 경로 억제제의 조합물이 인간에서 암 및 증식성 질환을 치료하는데 유용할 것이라는 증거가 드러나고 있다.
인간 유방암의 대략 20 내지 30％에서는 Her-2/neu-ErbB2가 과다발현되며, 이는 약물 트라스투주맙에 대한 표적이다. 트라스투주맙은 Her2/neu-ErbB2를 발현하는 일부 환자에서의 내성 반응이 입증되었으나, 이들 환자 중 하위세트에서만 반응한다. 최근의 작업을 통해, 이러한 제한된 반응률이 트라스투주맙과 PI3K 또는 PI3K/AKT 경로의 억제제의 조합물에 의해 실질적으로 개선될 수 있음이 확인되었다 (문헌 [Chan et al., Breast Can. Res. Treat. 91:187 (2005)], [Woods Ignatoski et al., Brit. J. Cancer 82:666 (2000)], [Nagata et al., Cancer Cell 6:117 (2004)]).
다양한 인간 악성 종양은 돌연변이 활성화 또는 Her1/EGFR 수준의 증가를 나타내며, 수많은 항체 및 소분자 억제제가 상기 수용체 티로신 키나제에 대항하도록 개발되었다 (예컨대, 타르세바, 게피티닙 및 에르비툭스). 그러나, EGFR 억제제는 특정 인간 종양 (예를 들어, NSCLC)에서 항-종양 활성이 입증된 반면, 이들은 EGFR-발현 종양을 가진 모든 환자에서 전반적인 환자 생존을 증가시키는데는 실패하였다. 이는 PI3K/Akt 경로를 비롯한 Her1/EGFR의 여러 하류 표적이 다양한 악성 종양에서 높은 빈도로 돌연변이되거나 탈조절된다는 사실에 의해 설명될 수 있다. 예를 들어, 게피티닙은 시험관내 검정에서 선암종 세포주의 성장을 억제한다. 그럼에도, 이들 세포주의 서브클론은 PI3/Akt 경로의 활성화를 증가시키는 것으로 입증된 게피티닙에 대해 내성인 것으로 선별될 수 있다. 이 경로의 하향-조절 또는 억제는 상기 내성 서브클론이 게피티닙에 대해 민감하도록 만든다 (문헌 [Kokubo et al., Brit. J. Cancer 92:1711 (2005)]). 게다가, PTEN 돌연변이를 가지며 EGFR을 과다발현하는 세포주를 이용한 유방암의 시험관내 모델에서, PI3K/Akt 경로 및 EGFR을 둘 다 억제시킨 결과 상승작용 효과가 나타났다 (문헌 [She et al., Cancer Cell 8:287-297(2005)]). 이들 결과는, 게피티닙 및 PI3K/Akt 경로 억제제의 조합이 암의 치료학적 방침에 유용함을 나타낸다.
AEE778 (Her-2/neu/ErbB2, VEGFR 및 EGFR의 억제제) 및 RAD001 (Akt의 하류 표적, mTOR의 억제제)의 조합은 교아세포종 이종이식 모델에서 단독의 상기 작용제보다 더 큰 조합 효능을 생성한다 (Goudar et al., Mol. Cancer. Ther. 4:101-112 (2005)).
항-에스트로겐, 예컨대 타목시펜은 세포 주기 억제제 p27Kip의 작용을 요하는 세포 주기 정지의 유도를 통해 유방암 성장을 억제한다. 최근, Ras-Raf-MAP 키나제 경로의 활성화가 p27Kip의 인산화 상태를 변경시켜, 세포 주기 정지에 있어 이의 억제 활성을 감쇠시키고, 이로써 항-에스트로겐 내성에 기여한다는 것이 밝혀졌다 (문헌 [Donovan, et al., J. Biol. Chem. 276:40888, (2001)]). 도노반(Donovan) 등에 의해 보고된 바와 같이, MEK 억제제로 처리하여 MAPK 신호전달을 억제하자, 호르몬 불응성 유방암 세포주에서 p27의 비정상적인 인산화 상태가 역행되었고 그에 따라 호르몬 민감성이 복구되었다. 유사하게, Akt에 의한 p27Kip의 인산화는 또한 세포 주기를 정지시키는 이의 역할을 폐기시켰다 (문헌 [Viglietto et al., Nat Med. 8:1145 (2002)]).
따라서, 추가의 측면에서, 본 발명은 호르몬 의존성 암, 예컨대 유방암 및 전립선암의 치료에 사용하기 위한 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물을 제공한다. 이러한 사용에 의해, 통상의 항암제 사용시 상기 암에서 흔히 보여지는 호르몬 내성을 역행시키는 것을 목적으로 한다.
혈액암, 예컨대 만성 골수성 백혈병 (CML)에서, 염색체 전좌는 구성적으로 활성화된 BCR-Abl 티로신 키나제를 유도한다. 발병 환자는 Abl 키나제 활성 억제의 결과로서 소분자 티로신 키나제 억제제인 이마티닙에 대해 반응성이다. 그러나, 진행된 단계의 질환을 가진 여러 환자가 초기에는 이마티닙에 대해 반응하지만, 이후에는 Abl 키나제 도메인에서의 내성-부여 돌연변이로 인해 재발하게 된다. 시험관내 연구는, BCR-Ab1이 Ras-Raf 키나제 경로를 이용하여 이의 효과를 이끌어 낸다는 것을 입증하였다. 또한, 동일한 경로에서 한 가지가 넘는 키나제의 억제는 내성-부여 돌연변이에 대해 추가의 보호를 제공한다.
따라서, 또 다른 측면에서, 본 발명은 혈액암, 예컨대 만성 골수성 백혈병 (CML)의 치료에 키나제 억제제의 군으로부터 선택되는 하나 이상의 추가의 작용제, 예컨대 글리벡 (Gleevec, 등록상표)과 조합하여 사용하기 위한 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물을 제공한다. 이러한 사용에 의해, 상기 하나 이상의 추가의 작용제에 대한 내성을 역행시키거나 예방하는 것을 목적으로 한다.
PI3K/Akt 경로의 활성화가 세포 생존을 유도하기 때문에, 암 세포에서 아폽토시스를 유도하는 요법, 예컨대 방사선요법 및 화학요법과 조합하여 상기 경로를 억제하면 개선된 반응이 나타날 것이다 (문헌 [Ghobrial et al., CA Cancer J. Clin 55:178-194 (2005)]). 예를 들어, PI3 키나제 억제제와 카르보플라틴의 조합은 시험관내 증식 및 아폽토시스 검정의 둘 다에서 뿐만 아니라 난소암의 이종이식 모델의 생체내 종양 효능에서 상승작용 효과가 입증되었다 (문헌 [Westfall and Skinner, Mol. Cancer Ther. 4:1764-1771 (2005)]).
클래스 1A 및 1B PI3 키나제의 억제제가 암 및 증식성 질환 이외에도 다른 질환 분야에 치료적으로 유용할 것이라는 여러 증거가 있다. PIK3CB 유전자의 PI3K 이소형 생성물인 p110β의 억제가 전단-유도된 혈소판 활성화와 관련이 있는 것으로 밝혀졌다 (문헌 [Jackson et al., Nature Medicine 11:507-514 (2005)]). 따라서, p110β를 억제하는 PI3K 억제제는 단일 제제로서 또는 항혈전 요법과 조합되어 유용할 것이다. PIK3CD 유전자의 생성물인 이소형 p110δ는 B 세포 기능 및 분화 (문헌 [Clayton et al., J. Exp. Med. 196:753-763 (2002)]), T-세포 의존성 및 독립성 항원 반응 (문헌 [Jou et al., Mol. Cell. Biol. 22:8580-8590 (2002)]) 및 비만 세포 분화 (문헌 [Ali et al., Nature 431:1007-1011 (2004)])에서 중요하다. 따라서, p110δ-억제제는 B-세포 유도된 자가면역성 질환 및 천식의 치료에서 유용할 것이 예상된다. 최종적으로, PI3KCG 유전자의 이소형 생성물인 p110γ의 억제는 T 세포 반응은 감소시키나 B 세포 반응은 감소시키지 않고 (문헌 [Reif et al., J. Immunol. 173:2236-2240 (2004)]), 이의 억제는 자가면역성 질환의 동물 모델에서 효능이 입증되었다 (문헌 [Camps et al., Nature Medicine 11:936-943 (2005)], [Barber et al., Nature Medicine 11:933-935 (2005)]).
본 발명은 또한 하나 이상의 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물을 인간 또는 동물 대상체에 투여하기에 적합한 제약상 허용되는 부형제와 함께, 단독으로 또는 다른 치료제, 예를 들어 다른 항암제와 함께 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한 세포 증식성 질환, 예컨대 암을 앓는 인간 또는 동물 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 따라서 본 발명은 상기 치료가 필요한 인간 또는 동물 대상체에게 치료 유효량의 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물을 단독으로 또는 하나 이상의 다른 치료제, 예를 들어 다른 항암제와 조합하여 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체의 치료 방법을 제공한다. 특히, 조성물은 조합 치료제로서 또는 별도 투여되도록 함께 제제화될 것이다. 화학식 I의 화합물과 사용하기에 적합한 항암제에는 하기에 제시된 키나제 억제제, 항에스트로겐, 항안드로겐, 다른 억제제, 암 화학요법 약물, 알킬화제, 킬레이트화제, 생물학적 반응 조절제, 암 백신, 안티센스 요법용 작용제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 화합물이 포함되나, 이에 제한되지는 않는다.
A. 키나제 억제제: 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물과 함께 항암제로 사용하기 위한 키나제 억제제로는 표피 성장 인자 수용체 (EGFR) 키나제의 억제제, 예컨대 소분자 퀴나졸린, 예를 들어 게피티닙 (US 5457105, US 5616582 및 US 5770599), ZD-6474 (WO 01/32651), 에를로티닙 (타르세바(Tarceva, 등록상표), US 5,747,498 및 WO 96/30347) 및 라파티닙 (US 6,727,256 및 WO 02/02552); 혈관 내피 성장 인자 수용체 (VEGFR) 키나제 억제제, 예컨대 SU-11248 (WO 01/60814), SU 5416 (US 5,883,113 및 WO 99/61422), SU 6668 (US 5,883,113 및 WO 99/61422), CHIR-258 (US 6,605,617 및 US 6,774,237), 바탈라닙 또는 PTK-787 (US 6,258,812), VEGF-트랩 (WO 02/57423), B43-게니스테인 (WO-09606116), 펜레티니드 (레티노산 p-히드록시페닐아민) (US 4,323,581), IM-862 (WO 02/62826), 베바시주맙 또는 아바스틴(Avastin, 등록상표) (WO94/10202), KRN-951, 3-[5-(메틸술포닐피페라딘 메틸)-인돌릴]-퀴놀론, AG-13736 및 AG-13925, 피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진, ZK-304709, 베글린(Veglin, 등록상표), VMDA-3601, EG-004, CEP-701 (US 5,621,100), Cand5 (WO 04/09769); Erb2 티로신 키나제 억제제, 예컨대 페르투주맙 (WO 01/00245), 트라스투주맙 및 리툭시맙; Akt 단백질 키나제 억제제, 예컨대 RX-0201; 단백질 키나제 C (PKC) 억제제, 예컨대 LY-317615 (WO 95/17182) 및 페리포신 (US 2003171303); Raf/Map/MEK/Ras 키나제 억제제, 예컨대 소라페닙 (BAY 43-9006), ARQ-350RP, LErafAON, BMS-354825 AMG-548, 및 그외 WO 03/82272에 기재된 것; 섬유모세포 성장 인자 수용체 (FGFR) 키나제 억제제; 세포 의존성 키나제 (CDK) 억제제, 예컨대 CYC-202 또는 로스코비틴 (WO 97/20842 및 WO 99/02162); 혈전-유도된 성장 인자 수용체 (PDGFR) 키나제 억제제, 예컨대 CHIR-258, 3G3 mAb, AG-13736, SU-11248 및 SU6668; 및 Bcr-Abl 키나제 억제제 및 융합 단백질, 예컨대 STI-571 또는 글리벡(등록상표)(이마티닙)이 포함된다.
B. 항-에스트로겐: 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물과 함께 항암 요법에 사용하기 위한 에스트로겐-표적 작용제로는 선택적 에스트로겐 수용체 조절제 (SERM), 예컨대 타목시펜, 토레미펜, 랄록시펜; 아로마타제 억제제, 예컨대 아리미덱스(Arimidex, 등록상표) 또는 아나스트로졸; 및 에스트로겐 수용체 하향 조절제 (ERD), 예컨대 파슬로덱스(Faslodex, 등록상표) 또는 풀베스트란트가 포함된다.
C. 항-안드로겐: 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물과 함께 항암 요법에 사용하기 위한 안드로겐-표적 작용제로는 플루타미드, 비칼루타미드, 피나스테리드, 아미노글루테타미드, 케토코나졸 및 코르티코스테로이드가 포함된다.
D. 다른 억제제: 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물과 함께 항암제로 사용하기 위한 다른 억제제로는 단백질 파르네실 트랜스페라제 억제제, 예컨대 티피파르닙 또는 R-115777 (US 2003134846 및 WO 97/21701), BMS-214662, AZD-3409 및 FTI-277; 토포아이소머라제 억제제, 예컨대 메르바론 및 디플로모테칸 (BN-80915); 유사분열 키네신 방추 단백질 (KSP) 억제제, 예컨대 SB-743921 및 MKI-833; 프로테아좀 조절제, 예컨대 보르테조밉 또는 벨카데(Velcade, 등록상표) (US 5,780,454), XL-784; 및 시클로옥시게나제-2 (COX-2) 억제제, 예컨대 비-스테로이드성 항염증성 약물 I (NSAID)이 포함된다.
E. 암 화학요법 약물: 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물과 함께 항암제로 사용하기 위한 특정 암 화학요법제로는 아나스트로졸 (아리미덱스, 등록상표), 비칼루타미드 (카소덱스(Casodex, 등록상표)), 블레오마이신 술페이트 (블레녹산(Blenoxane, 등록상표)), 부술판 (미엘란(Myleran, 등록상표)), 부술판 주사제 (부술펙스(Busulfex, 등록상표)), 카페시타빈 (크셀로다(Xeloda, 등록상표)), N4-펜톡시카르보닐-5-데옥시-5-플루오로시티딘, 카르보플라틴 (파라플라틴(Paraplatin, 등록상표)), 카르무스틴 (BiCNU, 등록상표), 클로람부실 (류케란(Leukeran, 등록상표)), 시스플라틴 (플라틴올(Platinol, 등록상표)), 클라드리빈 (류스타틴(Leustatin, 등록상표)), 시클로포스파미드(시톡산(Cytoxan, 등록상표) 또는 네오사르(Neosar, 등록상표)), 시타라빈, 시토신 아라비노시드 (시토스타-유(Cytosar-U, 등록상표)), 시타라빈 리포좀 주사제 (데포시트(DepoCyt, 등록상표)), 다카르바진 (DTIC-Dome, 등록상표), 닥티노마이신 (안티노마이신 D, 코스메간(Cosmegan)), 다우노루비신 히드로클로라이드 (세루비딘(Cerubidine, 등록상표)), 다우노루비신 시트레이트 리포좀 주사제 (다우노좀(DaunoXome, 등록상표)), 덱사메타손, 도세탁셀 (탁소테레(Taxotere, 등록상표), US2004073044), 독소루비신 히드로클로라이드 (아드리아마이신(Adriamycin, 등록상표), 루벡스(Rubex, 등록상표)), 에토포시드 (베페시드(Vepesid, 등록상표)), 플루다라빈 포스페이트 (플루다라(Fludara, 등록상표)), 5-플루오로우라실 (아드루실(Adrucil, 등록상표), 에푸덱스(Efudex, 등록상표)), 플루타미드 (율렉신(Eulexin, 등록상표)), 테자시티빈, 겜시타빈 (디플루오로데옥시시티딘), 히드록시우레아 (히드레아(Hydrea, 등록상표)),이다루비신 (이다마이신(Idamycin, 등록상표)), 이포스파미드 (이펙스(IFEX, 등록상표)), 이리노테칸 (캄프토사르(Camptosar, 등록상표)), L-아스파라기나제 (엘스파(ELSPAR, 등록상표)), 류코보린 칼슘, 멜팔란 (알케란(Alkeran, 등록상표)), 6-머캅토퓨린 (퓨린톨(Purinethol, 등록상표)), 메토트렉세이트 (폴렉스(Folex, 등록상표)), 미톡산트론 (노반트론(Novantrone, 등록상표)), 밀로타르그, 파클리탁셀 (탁솔(Taxol, 등록상표)), 페닉스 (이트륨(Yttrium)90/MX-DTPA), 펜토스타틴, 폴리페프로산 20과 카르무스틴 임플란트 (글리아델(Gliadel, 등록상표)), 타목시펜 시트레이트 (놀바덱스(Nolvadex, 등록상표)), 테니포시드 (부몬(Vumon, 등록상표)), 6-티오구아닌, 티오테파, 티라파자민 (티라존(Tirazone, 등록상표)), 주사용 토포테칸 히드로클로라이드 (히캄프틴(Hycamptin, 등록상표)), 빈블라스틴 (벨반(Velban, 등록상표)), 빈크리스틴 (온코빈(Oncovin, 등록상표)) 및 비노렐빈 (나벨빈(Navelbine, 등록상표))이 포함된다.
F. 알킬화제 : 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물과 함께 사용하기 위한 알킬화제로는 VNP-40101M 또는 클로레티진, 옥살리플라틴 (US 4,169,846, WO 03/24978 및 WO 03/04505), 글루포스파미드, 마포스파미드, 에토포포스 (US 5,041,424), 프레드니무스틴; 트레오술판; 부술판; 이로플루벤 (아실플루벤); 펜클로메딘; 피라졸로아크리딘 (PD-115934); O6-벤질구아닌; 데시타빈 (5-아자-2-데옥시시티딘); 브로스탈리신; 미토마이신 C (미토엑스트라(MitoExtra)); TLK-286 (텔시타(Telcyta, 등록상표)); 테모졸로미드; 트라베크테딘 (US 5,478,932); AP-5280 (시스플라틴의 플라티네이트 제형); 포르피로마이신 및 클레아라지드 (메클로레타민)이 포함된다.
G. 킬레이트화제 : 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물과 함께 사용하기 위한 킬레이트화제로는 테트라티오몰리브데이트 (WO 01/60814); RP-697; 키메릭 T84.66 (cT84.66); 가도포스베세트 (바소비스트(Vasovist, 등록상표)); 데페록사민; 및 블레오마이신 (임의로 전기천공 (EPT)과 조합)이 포함된다.
H. 생물학적 반응 조절제: 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물과 함께 사용하기 위한 생물학적 반응 조절제, 예컨대 면역 조절제로는 스타우로스피린 및 그의 마크로시클릭 유사체, 예컨대 UCN-01, CEP-701 및 미도스타우린 (WO 02/30941, WO 97/07081, WO 89/07105, US 5,621,100, WO 93/07153, WO 01/04125, WO 02/30941, WO 93/08809, WO 94/06799, WO 00/27422, WO 96/13506 및 WO 88/07045 참조); 스쿠알라민 (WO 01/79255); DA-9601 (WO 98/04541 및 US 6,025,387); 알렘투주맙; 인터페론 (예를 들어 IFN-a, IFN-b 등); 인터류킨, 구체적으로 IL-2 또는 알데스류킨 및 IL-1, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, 및 천연 인간 서열의 70％보다 더 많은 아미노산 서열을 갖는 그의 활성 생물학적 변이체; 알트레타민 (헥살렌(Hexalen, 등록상표)); SU 101 또는 레플루노미드 (WO 04/06834 및 US 6,331,555); 이미다조퀴놀린, 예컨대 레시퀴모드 및 이미퀴모드 (US 4,689,338, 5,389,640, 5,268,376, 4,929,624, 5,266,575, 5,352,784, 5,494,916, 5,482,936, 5,346,905, 5,395,937, 5,238,944 및 5,525,612); 및 SMIP, 예컨대 벤즈아졸, 안트라퀴논, 티오세미카르바존 및 트립탄트린 (WO 04/87153, WO 04/64759 및 WO 04/60308)이 포함된다.
I. 암 백신: 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물과 함께 사용하기 위한 항암 백신으로는 아비신(Avicine, 등록상표) (문헌 [Tetrahedron Lett. 26:2269-70 (1974)]); 오레고보맙 (오바렉스(OvaRex, 등록상표)); 테라토프(Theratope, 등록상표) (STn-KLH); 흑색종 백신; GI-4000 시리즈 (GI-4014, GI-4015 및 GI-4016; 이들은 Ras 단백질에서의 5가지 돌연변이에 관한 것임); 글리오박스-1; 멜라박스; 아드벡신(Advexin, 등록상표) 또는 INGN-201 (WO 95/12660); Sig/E7/LAMP-1, 코딩 HPV-16 E7; MAGE-3 백신 또는 M3TK (WO 94/05304); HER-2VAX; 종양에 대해 특이적인 T-세포를 자극하는 액티브(ACTIVE); GM-CSF 암 백신; 및 리스테리아 모노사이토게네스(Listeria monocytogenes)-기재 백신이 포함된다.
J. 안티센스 요법제: 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물과 함께 사용하기 위한 항암제로는 또한 안티센스 조성물, 예컨대 AEG-35156 (GEM-640); AP-12009 및 AP-11014 (TGF-베타2-특이적 안티센스 올리고뉴클레오티드); AVI-4126; AVI-4557; AVI-4472; 오블리메르센 (게나센스(Genasense, 등록상표)); JFS2; 아프리노카르센 (WO 97/29780); GTI-2040 (R2 리보뉴클레오티드 환원효소 mRNA 안티센스 올리고) (WO 98/05769); GTI-2501 (WO 98/05769); 리포좀-캡슐화 c-Raf 안티센스 올리고데옥시뉴클레오티드 (LErafAON) (WO 98/43095); 및 시르나(Sirna)-027 (RNAi-기재 치료 표적 VEGFR-1 mRNA)가 포함된다.
화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물은 또한 기관지확장제 또는 항히스타민 약물 물질과 함께 제약 조성물로 조합될 수 있다. 이러한 기관지확장제 약물로는 항콜린작용제 또는 항무스카린제, 특히 글리코피롤레이트, 이프라트로퓸 브로마이드, 옥시트로퓸 브로마이드 및 티오트로퓸 브로마이드, OrM3, 아실리디늄, CHF5407, GSK233705 및 β-2-아드레날린수용체 효능제, 예컨대 살부타몰, 테르부탈린, 살메테롤, 카르모테롤, 밀베테롤, 및 특히 인다카테롤 및 포르모테롤이 포함된다. 공동-치유적 항히스타민 약물 물질로는 세티리진 히드로클로라이드, 클레마스틴 푸마레이트, 프로메타진, 로라타딘, 데슬로라타딘 디펜히드라민 및 펙소페나딘 히드로클로라이드가 포함된다.
본 발명은 추가의 측면에서 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물, 및 혈전용해 질환, 심장 질환, 졸중 등의 치료에 유용한 하나 이상의 화합물을 포함하는 조합물을 제공한다. 이러한 화합물로는 아스피린, 스트렙토키나제, 조직 플라스미노겐 활성화제, 우로키나제, 항응집제, 항혈소판 약물 (예를 들어, 플라빅스(PLAVIX); 클로피도그렐 비술페이트), 스타틴 (예를 들어, 리피토르(LIPITOR) 또는 아토르바스타틴 칼슘), 조코르(ZOCOR) (심바스타틴(Simvastatin)), 그레스토르(CRESTOR) (로수바스타틴(Rosuvastatin)) 등), 베타 차단제 (예를 들어, 아테놀롤), 노바스크(NORVASC) (암로디핀 베실레이트) 및 ACE 억제제 (예를 들어, 리시노프릴)가 포함된다.
본 발명은 추가의 측면에서 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물, 및 항고혈압의 치료에 유용한 하나 이상의 화합물을 포함하는 조합물을 제공한다. 이러한 화합물로는 ACE 억제제, 지질 강하제, 예컨대 스타틴, 리피토르 (아토르바스타틴 칼슘), 칼슘 채널 차단제, 예컨대 노바스크 (암로디핀 베실레이트)가 포함된다.
본 발명은 추가의 측면에서 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물, 및 피브레이트, 베타-차단제, NEPI 억제제, 안지오텐신-2 수용체 길항제 및 혈소판 응집 억제제로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 화합물을 포함하는 조합물을 제공한다.
본 발명은 추가의 측면에서 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물, 및 염증성 질환, 예컨대 류마티스양 관절염의 치료에 적합한 화합물을 포함하는 조합물을 제공한다. 이러한 화합물은 TNF-α 억제제, 예컨대 항-TNF-α 모노클로날 항체 (예컨대, 레미케이드(REMICADE), CDP-870) 및 D2E7 (휴미라(HUMIRA)) 및 TNF 수용체 이뮤노글로불린 융합 분자 (예컨대, 엔브렐(ENBREL)), IL-1 억제제, 수용체 길항제 또는 가용성 IL-1Rα (예를 들어, 키네레트(KINERET) 또는 ICE 억제제), 비스테로이드성 항염증제 (NSAID), 피록시캄, 디클로페낙, 나프록센, 플루비프로펜, 페노프로펜, 케토프로펜, 이부프로펜, 페나메이트, 메페남산, 인도메타신, 술린닥, 아파존, 피라졸론, 페닐부타존, 아스피린, COX-2 억제제 (예컨대, 셀레브렉스(CELEBREX) (셀레콕시브), 프렉시지(PREXIGE) (루미라콕시브)), 메탈로프로테아제 억제제 (바람직하게는 MMP-13 선택적 억제제), p2x7 억제제, α2α억제제, 뉴로틴(NEUROTIN), 프레가발린, 저용량 메토트렉세이트, 레플루노미드, 히드록식스클로로퀸, d-페니실라민, 아우라노핀 또는 비경구 또는 경구용 금으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
본 발명은 추가의 측면에서 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물, 및 골관절염의 치료에 적합한 화합물을 포함하는 조합물을 제공한다. 이러한 화합물은 표준 비-스테로이드성 항염증제 (이후 NSAID), 예컨대 피록시캄, 디클로페낙, 프로피온산, 예컨대 나프록센, 플루비프로펜, 페노프로펜, 케토프로펜 및 이부프로펜, 페나메이트, 예컨대 메페남산, 인도메타신, 술린닥, 아파존, 피라졸론, 예컨대 페닐부타존, 살리실레이트, 예컨대 아스피린, COX-2 억제제, 예컨대 셀레콕시브, 발데콕시브, 루미콕시브 및 에토리콕시브, 진통제 및 관절내 요법제, 예컨대 코르티코스테로이드 및 히알루론산, 예컨대 히알간 및 신비스크로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
본 발명은 추가의 측면에서 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물, 및 항바이러스제 및/또는 항패혈증 화합물을 포함하는 조합물을 제공한다. 이러한 항바이러스제는 비라셉트, AZT, 아시클로비르 및 팜시클로비르로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 이러한 항패혈증 화합물은 발란트(Valant)로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
본 발명은 추가의 측면에서 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물, 및 CNS 작용제, 예컨대 항우울제 (세르트랄린), 항-파킨슨 약물 (예컨대, 데프레닐, L-도파, 레큅, 미라펙스; MAOB 억제제 (예컨대 셀레긴 및 라사길린); comP 억제제 (예컨대 타스마르); A-2 억제제; 도파민 재흡수 억제제; NMDA 길항제, 니코틴 효능제, 도파민 효능제; 및 뉴런 산화질소 신타제의 억제제)로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 작용제를 포함하는 조합물을 제공한다.
본 발명은 추가의 측면에서 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물, 및 하나 이상의 항알츠하이머 약물을 포함하는 조합물을 제공한다. 이러한 항-알츠하이머 약물은 도네페질, 타크린, α2δ억제제, 뉴로틴, 프레가발린, COX-2 억제제, 프로펜토필린 또는 메트리포네이트로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
본 발명은 추가의 측면에서 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물, 및 골다공증 작용제 및/또는 면역억제제를 포함하는 조합물을 제공한다. 이러한 골다공증 작용제는 에비스타(EVISTA) (랄록시펜 히드로클로라이드), 드롤록시펜, 라소폭시펜 또는 포소막스로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 상기 면역억제제는 FK-506 및 라파마이신으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
바람직한 실시양태의 또 다른 측면에서, 하나 이상의 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물을 본원에 개시된 조합 파트너와 함께 포함하는 키트가 제공된다. 대표적인 키트에는 PI3K 억제제 화합물 (예를 들어, 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물), 및 포장 삽입물 또는 다른 라벨, 예컨대 PI3K 억제량의 화합물(들)을 투여하여 세포 증식성 질환을 치료하는 것에 대한 지시서가 포함된다.
일반적으로, 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물은 유사한 용도로 작용하는 작용제에 대해 허용되는 임의의 투여 방식에 의해 치료 유효량으로 투여될 것이다. 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물, 즉 활성 성분의 실제 양은 수많은 요인, 예컨대 치료하고자 하는 질환의 중증도, 대상체의 연령 및 상대적인 건강, 사용된 화합물의 효능, 투여 경로 및 형태, 및 다른 요인에 따라 달라질 것이다. 약물은 1일 1회 넘게, 바람직하게는 1일 1 또는 2회 투여될 수 있다. 이들 모든 요인은 임상의의 기술 내에 있다. 화학식 I의 화합물의 치료 유효량은 수용자의 체중 1 kg 당 1일 약 0.05 내지 약 50 mg 범위; 바람직하게는 약 0.1 내지 25 mg/kg/일, 보다 바람직하게는 약 0.5 내지 10 mg/kg/일일 수 있다. 따라서, 70 kg의 사람에 대한 투여에 있어서, 가장 바람직한 투여량 범위는 약 35 내지 70 mg/일일 수 있다.
일반적으로, 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물은 하기 경로 중 어느 하나에 의해 제약 조성물로 투여될 것이다: 경구, 전신 (예를 들어, 경피, 비내 또는 좌제로서), 또는 비경구 (예를 들어, 근육내, 정맥내 또는 피하) 투여. 바람직한 투여 방식은 편리한 1일 투약법 (이는 발병 정도에 따라 조정될 수 있음)을 이용하여 경구 투여하는 것이다. 조성물은 정제, 환제, 캡슐, 반고체, 분말, 지속 방출 제제, 용액, 현탄액, 엘릭시르, 에어로졸, 또는 임의의 다른 적절한 조성물의 형태를 가질 수 있다. 화학식 I의 화합물의 또 다른 바람직한 투여 방식은 흡입이다. 이는 치료제를 기도로 직접 전달하는데 효과적인 방법이다.
제제의 선택은 다양한 요인, 예컨대 약물 투여 방식 및 약물 물질의 생체이용률에 따라 달라진다. 흡입에 의한 전달을 위하여, 화합물을 액체 용액, 현탁액, 에어로졸 추진제 또는 건조 분말로 제제화하여, 적합한 투여 분배기에 로딩할 수 있다. 여러 유형의 제약 흡입 장치-네불라이져 흡입기, 계량 투여 흡입기 (MDI) 및 건조 분말 흡입기 (DPI)가 있다. 네불라이져 장치는 치료제 (액체 형태로 제제화됨)를, 환자의 기도로 전달되는 미스트로서 분무하는 고속 공기 스트림을 생성한다. MDI는 전형적으로 압축 기체를 이용하여 포장한 제제이다. 작동시, 장치는 압축 기체에 의해 측정된 양의 치료제를 방출하여, 설정된 양의 작용제를 투여하는 신뢰할만한 방법을 제공한다. DPI는 환자가 장치를 통해 호흡하는 동안 흡기 스트림으로 분산될 수 있는 자유 유동 분말 형태로 치료제를 분배한다. 자유 유동 분말을 얻기 위해서는, 치료제를 락토스와 같은 부형제와 함께 제제화한다. 측정된 양의 치료제는 캡슐 형태로 저장되어 매 사용시에 분배된다.
본 발명은 또한 화학식 I의 화합물의 입자 크기가 10 내지 1000 nm, 바람직하게는 10 내지 400 nm인 제제에 관한 것이다. 이러한 제약 제제는 생체이용률이 표면적 증가, 즉 입자 크기 감소에 의해 증가될 수 있다는 원리에 기초하여 특히 불량한 셍체이용률을 나타내는 약물에 대해 개발되었다. 예를 들어, U.S. 4,107,288에는 거대 분자의 가교결합된 매트릭스에 활성 물질이 지지되어 있는, 입자 크기가 10 내지 1,000 nm인 입자를 갖는 제약 제제가 기재되어 있다. U.S. 5,145,684에는 표면 변형제의 존재하에 약물 물질을 나노입자 (평균 입자 크기 400 nm)로 분쇄한 다음 액체 매질에 분산시켜 생체이용률의 현저한 증가를 나타내는 제약 제제를 제공하는, 제약 제제의 제조가 기재되어 있다. 두 문헌이 참조로 포함된다.
추가의 측면에서, 본 발명은 (치료 유효량)의 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물, 및 하나 이상의 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 허용되는 부형제는 무독성이며, 투여를 보조하고, 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물의 치료적 이점에 불리한 영향을 미치지 않는다. 이러한 부형제는 임의의 고체, 액체, 반고체이거나, 또는, 에어로졸 조성물의 경우, 당업자가 일반적으로 입수할 수 있는 기체형 부형제일 수 있다.
고체 제약 부형제로는 전분, 셀룰로스, 활석, 글루코스, 락토스, 수크로스, 젤라틴, 맥아, 벼, 밀가루, 백악, 실리카겔, 스테아르산마그네슘, 스테아르산나트륨, 글리세롤 모노스테아레이트, 염화나트륨, 건조 탈지유 등이 포함된다.
액체 및 반고체 부형제는 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 물, 에탄올 및 다양한 오일, 예컨대 석유, 동물성유, 식물성유 또는 합성 기원 오일, 예를 들어 땅콩유, 대두유, 광유, 참깨유 등으로부터 선택될 수 있다. 특히 주사가능한 용액을 위한 바람직한 액체 담체로는 물, 염수, 수성 덱스트로스 및 글리콜이 포함된다.
압축 기체를 사용하여 화학식 I의 화합물을 에어로졸 형태로 분산시킬 수 있다. 이러한 목적에 적합한 불활성 기체는 질소, 이산화탄소 등이다. 다른 적합한 제약 부형제 및 그의 제제는 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, edited by E. W. Martin (Mack Publishing Company, 18th ed., 1990)]에 기재되어 있다.
제제 내 화합물의 양은 당업자에게 이용되는 전체 범위 내에서 가변적일 수 있다. 전형적으로, 제제는 중량％ (wt％)로 (전체 제제 기준) 약 0.01 내지 99.99 중량％의 화학식 I의 화합물을 함유하고, 나머지는 하나 이상의 적합한 제약 부형제가 차지할 것이다. 바람직하게는, 화합물은 약 1 내지 80 중량％의 수준으로 존재한다.
본 발명은 또한 하나 이상의 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물 및 하나 이상의 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 (즉 함유하거나 또는 그로 이루어지는) 제약 조성물에 관한 것이다.
유리 형태 또는 제약상 허용되는 염 형태의 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물을 하나 이상의 제약상 허용되는 부형제 (예컨대 담체 및/또는 희석제)와 함께 포함하는 제약 조성물은 통상의 방식으로 성분을 혼합하여 제조할 수 있다.
유리 형태 또는 제약상 허용되는 염 형태의 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물, 및 추가로 조합 파트너 (하나의 투여 단위 형태로 또는 부분품의 키트로서)를 하나 이상의 제약상 허용되는 담체 및/또는 희석제와 함께 포함하는 조합 제약 조성물은 제약상 허용되는 담체 및/또는 희석제와 상기 활성 성분을 통상의 방식으로 혼합하여 제조할 수 있다.
결론적으로, 본 발명은 추가의 측면에서 하기를 제공한다.
? 유리 형태 또는 제약상 허용되는 염 형태의 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물을 제약상 허용되는 희석제 및/또는 담체와 함께 포함하는, 예를 들어 본원에 기재된 임의의 방법에 사용하기 위한, 조합 제약 조성물.
? 활성 성분으로서의 유리 형태 또는 제약상 허용되는 염 형태의 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물; 하나 이상의 제약상 허용되는 담체 물질(들) 및/또는 희석제, 및 임의로 하나 이상의 추가의 약물 물질을 포함하는 조합 제약 조성물. 이러한 조합 제약 조성물은 하나의 투여 단위 형태의 형태로 또는 부분품의 키트로서 존재할 수 있다.
? 동시 또는 순차 투여를 위한, 치료 유효량의 유리 형태 또는 제약상 허용되는 염 형태의 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물 및 제2 약물 물질을 포함하는 조합 제약 조성물.
? 무독성의 치료 유효량의 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 적어도, 예를 들어 상기 나타낸 바와 같은 제2의 약물 물질의 공동-투여, 예를 들어 함께 또는 순차적으로 투여하는 것을 포함하는 상기 정의된 바와 같은 방법.
? a) 유리 형태 또는 제약상 허용되는 염 형태의, 본원에 개시된 화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물인 제1 작용제, 및 b) 하나 이상의, 예를 들어 상기 나타낸 바와 같은 공동-작용제를 포함하는 제약 조합물, 예를 들어 키트; 여기서, 상기 키트는 그의 투여를 위한 설명서를 포함할 수 있다.
화학식 I, IA, IA', IB 및/또는 IC의 화합물의 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것으로서, 그의 범주를 제한하지는 않는다. 상기 화합물의 제조 방법이 하기 기재된다.
온도는 섭씨 온도로 측정하였다. 달리 언급하지 않는 한, 반응은 실온에서 일어났고, MS는 ESI로 얻었다. 하기의 HPLC/MS 방법을 중간체 및 실시예의 제조 및 분석에 사용하였다:
방법 A1 내지 A3 (LCMS: 분석용 HPLC/MS):
시스템: 워터스 마이크로매스(Waters Micromass) ZQ 2000 ESI+ 및/또는 ESI-를 갖는 애질런트(Agilent) 1100 시리즈
컬럼: 엑스브릿지(XBridge) C18, 3 x 30 mm, 2.5 ㎛
온도: 50℃
용리액 A: H2O, 5％ CH3CN 및 0.8％ HCOOH를 함유함
용리액 B: CH3CN, 0.6％ HCOOH를 함유함
유속: 1.2 내지 2.4 ㎖/분
방법 A1: 방법 폴러(Polar)4a_p_100-900 및 방법 폴러4a_pn_100-900:
구배: 0 내지 2.9분: 1％ → 95％의 B
방법 A2: 방법 패스트(Fast)4_p_100-900 및 방법 패스트4a_pn_100-900:
구배: 0 내지 2.4분: 10％ → 95％의 B
방법 A3: 방법 슬로우(Slow)4a_pn_100-900:
구배: 0 내지 4.4 분: 5％ → 95％의 B
방법 B (정제용 HPLC) 기기: 워터스 정제용 HPLC 시스템, 컬럼: 선파이어(Sunfire, 상표명) 정제용 C18 OBD (상표명) 5 ㎛ 30 X 100 mm, 온도: 25℃, 용리액: 구배 0.05％ 수성 TFA 중 5 → 100％ CH3CN (20분에 걸쳐), 유속: 30 ㎖/분, 검출: UV 254 nm.
방법 C (정제용 HPLC) 기기: 워터스 정제용 HPLC 시스템, 컬럼: 선파이어 (상표명) 정제용 C18 OBD (상표명) 5 ㎛ 30 X 100 mm, 온도: 25℃, 용리액: 구배 0.05％ 수성 TFA 중 5 → 50％ CH3CN (20분에 걸쳐), 유속: 30 ㎖/분, 검출: UV 254 nm.
방법 D (분석용 HPLC): 선형 구배 2 → 100％ CH3CN (0.1％ TFA) 및 H2O (0.1％ TFA) (5분 이내) + 100％ CH3CN (0.1％ TFA) (1.5분); 215 nm에서 검출, 유속 1 ㎖/분 (30℃). 컬럼: 뉴클레오실(Nucleosil) 100-3 C18 (70 x 4 mm).
방법 E (정제용 HPLC/MS) 기기: 길슨(Gilson) 정제용 HPLC 시스템, 컬럼: 선파이어 (상표명) 정제용 C18 OBD (상표명) 5 ㎛ 30 X 100 mm, 온도: 25℃, 용리액: 구배 0.05％ 수성 TFA 중 5 → 100％ CH3CN (20분에 걸쳐), 유속: 30 ㎖/분, 검출: UV 254 nm.
방법 F (분석용 HPLC) 기기: 시마쯔(Shimadzu) SIL-10A, 방법: 선형 구배 2 → 100％ CH3CN (0.1％TFA) 및 H2O (0.1％ TFA) (4분 이내) + 100％ CH3CN (0.1％TFA) (2분); 다시 → 100％ CH3CN (0.1％TFA) (3분); 215 nm에서 검출, 유속 2 ㎖/분 (실온). 컬럼: 뉴클레오실 OD-5-100 C18 (150 x 4.6 mm).
방법 G (분석용 HPLC) 기기:
시스템: 애질런트 1100 시리즈
컬럼: HP 하이퍼실(Hypersil) BDS C18, 4 x 125 mm, 5 ㎛
온도: 25℃
용리액 A: H2O, 0.1％ v/v TFA를 함유함
용리액 B: CH3CN, 0.1％ v/v TFA를 함유함
구배: 10％ → 100％ B (5분 이내), 100％ B (2.5분), 이어서 → 10％ B (1분 이내)
유속: 1.5 ㎖/분
검출: UV 215 nm
방법 H (분석용 HPLC) 기기:
시스템: 애질런트 1100 시리즈
컬럼: 마슈레-나겔(Macherey-Nagel) 뉴클레오실 100-3 C18HD, 4 x 125 mm, 3 ㎛
온도: 30℃
용리액 A: H2O, 0.1％ v/v TFA를 함유함
용리액 B: CH3CN, 0.1％ v/v TFA를 함유함
구배: 2％ → 100％ B (7분 이내), 100％ B (2분), 이어서 → 2％ B (1분 이내)
유속: 1.0 ㎖/분
검출: UV 215 nm
방법 I (LCMS: 분석용 HPLC/MS):
시스템: 워터스 마이크로매스 ZQ 2000 ESI+/-를 갖는 워터스 액쿼티(Acquity) UPLC
컬럼: 액쿼티 HSS T3 C18, 2.1 x 50 mm, 1.8 ㎛
온도: 50℃
용리액 A: H2O, 0.05％ v/v HCOOH 및 3.75 mM 암모늄 아세테이트를 함유함
용리액 B: CH3CN, 0.04％ HCOOH를 함유함
구배: 2％ → 98％ B (4.3분 이내), 98％ B (0.7분), 이어서 → 2％ B (0.1분 이내) 및 2％ B (0.9분)
유속: 1.0 ㎖/분
방법 J (LCMS: 분석용 HPLC/MS):
시스템: 애질런트 1100 시리즈; MS: G1946D
컬럼: 시메트리(Symmetry) C8, 2.1 x 50 mm, 3.5 ㎛
용리액 A: H2O, 0.1％ v/v HCOOH를 함유함
용리액 B: CH3CN, 0.1％ v/v HCOOH를 함유함
구배: 0 내지 3.3분: 5％ → 95％의 B
유속: 1.0 ㎖/분
방법 K (LCMS: 분석용 HPLC/MS):
시스템: 워터스 액쿼티 UPLC
컬럼: 액쿼티 HSS T3 C18, 2.1 x 50 mm, 1.8 ㎛
용리액 A: H2O, 0.05％ v/v HCOOH 및 0.05％ 암모늄 아세테이트를 함유함
용리액 B: 아세토니트릴, 0.04％ HCOOH를 함유함
구배: 2％ → 98％ B (1.7분 이내), 98％ B (0.45분), 이어서 → 2％ B (0.04분 이내)
유속: 1.2 ㎖/분
방법 L (LCMS: 분석용 HPLC/MS):
시스템: 워터스 액쿼티 UPLC; MS: 워터스 AQ 검출기
컬럼: 액쿼티 HSS, 1.8 ㎛ 2.1 x 50 mm, 3/pk
용리액 A: H2O, 0.1％ v/v HCOOH를 함유함
용리액 B: CH3CN, 0.1％ v/v HCOOH를 함유함
구배: 0 내지 1.5분: 10％ → 95％의 B, 이어서 1분: 95％ B
유속: 1.2 ㎖/분
ESI - MS:
기기: 마이크로매스 플랫폼 II
용리액: 0.2％ v/v의 25％ 수산화암모늄 용액을 함유하는 H2O 중의 15％ v/v MeOH
유속: 0.05 ㎖/분
다음의 실시예에서, 하기에 주어진 약어를 사용하였다:
atm. 대기
CDI 1,1'-카르보닐디이미다졸
CH3CN 아세토니트릴
DAST 디에틸아미노설퍼 트리플루오라이드
DCE 1,2-디클로로에탄
DCM 디클로로메탄
DMF N,N-디메틸포름아미드
DMSO 디메틸 술폭시드
Et2O 디에틸 에테르
EtOAc 에틸 아세테이트
EtOH 에탄올
eq 당량
h 시간
H2O 물
HPLC 고성능 액체 크로마토그래피
HV 고진공
LCMS 질량 분석법과 커플링된 액체 크로마토그래피
LiHMDS 리튬 비스(트리메틸실릴)아미드
MeOH 메탄올
㎖ 밀리리터
min 분
MS-ESI 전기분무 이온화 질량 분석법
MW 마이크로파
NaHCO3 중탄산나트륨
Na2SO4 황산나트륨
NH4Cl 염화암모늄
RM 반응 혼합물
Rf TLC에서의 선단의 비율
rt 실온
TEA 트리에틸아민
TFA 트리플루오로아세트산
THF 테트라히드로푸란
TLC 박층 크로마토그래피
tR 체류시간
UV 자외선
중간체 A: 이미다졸-1-카르복실산 (8-tert-부틸-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드
8-tert-부틸-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일아민 (단계 A.1, 0.319 g, 1.225 mmol) 및 CDI (278 mg, 1.715 mmol)를 아르곤 대기하에 DCM (5 ㎖) 및 DMF (0.25 ㎖)에 첨가하였다. 18시간 후, 잔류물을 4℃로 냉각시키고, 침전물을 여과에 의해 수집하였다. 고체를 50℃에서 고진공으로 건조시켜, 표제 화합물을 미황색 고체로서 수득하였다. LCMS: MeOH 용액으로서의 샘플의 제조 동안의 표제 화합물과 MeOH 반응의 생성물인 (8-tert-부틸-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-카밤산 메틸 에스테르에 대한 tR 0.95분 및 M+H 319.0 (방법 A2).
단계 A.1: 8-tert-부틸-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일아민
중간체 A.1을 2가지의 상이한 경로에 의해 수득하였다. 두 경로 모두 2-아미노-5,6-디히드로-4H-벤조티아졸-7-온으로부터 시작하고, 이를 하기에 기재하였다:
경로 1 :
실온에서, 2-메톡시에탄올 (20 ㎖) 중의 N'-{6-[1-디메틸아미노-메타-(E)-일리덴]-7-옥소-4,5,6,7-테트라히드로-벤조티아졸-2-일}-N,N-디메틸-포름아미딘 (단계 A.2, 2.2 g, 7.90 mmol)의 혼합물에 수산화나트륨 (1.185 g, 29.6 mmol) 및 2,2-디메틸-프로피온아미딘 히드로클로라이드 (1.620 g, 11.85 mmol)를 첨가하였다. RM을 125℃에서 3시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, RM을 MeOH로 희석시키고, 실리카 겔 상에 흡착시키고, 플래쉬 크로마토그래피 (레디셉(RediSep, 등록상표) 실리카 겔 컬럼을 포함하는 콤비플래쉬(CombiFlash, 등록상표) 컴패니온 시스템(Companion system, 등록상표), 용리액: DCM/MeOH/암모니아 95:5:0.5)에 의해 정제하였다.
단계 A.2: N'-{6-[1-디메틸아미노-메타-(E)-일리덴]-7-옥소-4,5,6,7-테트라히드로-벤조티아졸-2-일}-N,N-디메틸-포름아미딘
디메톡시메틸디메틸아민 (12 ㎖, 90 mmol) 중의 2-아미노-5,6-디히드로-4H-벤조티아졸-7-온 (3.5 g, 20.81 mmol)의 현탁액을 65시간 동안 교반하면서 100℃에서 가열하였다. 이어서, RM을 진공하에 증발에 의해 건조시키고, 잔류물을 EtOAc 중에 현탁시켰다. 4℃에서 1시간 후, 고체를 여과해내고, EtOAc로 세척한 다음, 60℃에서 고진공하에 건조시켜, 순수한 표제 생성물을 갈색 결정으로서 수득하였다.
경로 2 :
탄산칼륨 (0.434 g, 3.14 mmol)을 MeOH 중의 N-(8-tert-부틸-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아세트아미드 (단계 A.3, 0.38 g, 1.257 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. RM을 50℃에서 52시간 동안 교반한 다음, 실온으로 냉각시키고, 진공하에 증발시켜, 적색 덩어리를 수득하였다. 물 (20 ㎖)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 3시간 동안 추가로 교반하였다. 이어서, 적색 현탁액을 4℃로 냉각시키고, 여과하여, 고진공하에 건조시킨 후, 표제 화합물을 베이지색 고체로서 수득하였다.
단계 A.3: N-(8-tert-부틸-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아세트아미드
피리딘 (13 ㎖)을 N-(6-포르밀-7-옥소-4,5,6,7-테트라히드로-벤조티아졸-2-일)-아세트아미드 (단계 A.4, 3.05 g, 12.8 mmol) 및 tert-부틸아미딘 히드로클로라이드 (1.788 g, 12.8 mmol)에 첨가하고, 혼합물을 160℃에서 6.5시간 동안 밀봉된 용기에서 가열하였다. 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 여과하여, 고체를 수득하였다. 여과 모액을 증발시켜, 추가의 고체 물질을 수득하였다. 합친 고체를 뜨거운 CH3CN으로 반복적으로 분쇄하고, CH3CN 모액을 증발시켜, 고체를 수득하였으며, 이는 대부분 표제 생성물인 것으로 나타났다. 조 생성물을 약 10 ㎖의 MeOH 중의 10％ DMSO에 용해시켜, 약간 흐린 오렌지색 용액을 수득하고, 이를 여과하고, 실온에서 교반하며 물 (100 ㎖)에 적가하였다. 침전 고체를 여과에 의해 수집하여, 표제 화합물을 오렌지색 고체로서 수득하였다.
단계 A.4: N-(6-포르밀-7-옥소-4,5,6,7-테트라히드로-벤조티아졸-2-일)-아세트아미드
LiHMDS 용액 (1 M, 27.7 ㎖)을 10분에 걸쳐, 아르곤 대기하에 -78℃에서 냉각된 무수 THF (20 ㎖) 중의 N-(7-옥소-4,5,6,7-테트라히드로-벤조티아졸-2-일)-아세트아미드 (단계 A.5, 2.0 g, 9.23 mmol)의 현탁액에 첨가하였다. 이어서, RM을 2.5시간 동안 -78℃에서 교반하고, 메틸 포르메이트 (2.308 ㎖, 36.9 mmol)를 30분에 걸쳐 적가하였다. 이어서, RM을 서서히 실온으로 가온시킨 다음, 실온에서 18시간 동안 교반하였다. RM을 수성 1 M HCl (70 ㎖)로 끌어넣고, DCM으로 3X 추출하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 증발시켜, 표제 화합물을 고체로서 수득하였다.
단계 A.5: N-(7-옥소-4,5,6,7-테트라히드로-벤조티아졸-2-일)-아세트아미드
실온에서 아세트산 무수물 (80 ㎖)에 2-아미노-5,6-디히드로-4H-벤조티아졸-7-온 (10 g, 59.4 mmol)을 첨가하고, 생성된 현탁액을 가열 환류시켰다. 환류시 1.75시간의 교반 후, RM을 교반하며 냉각시키고, 실온에서 18시간 동안 교반한 후, 얼음/NaCl 배스(bath)를 사용하여 추가로 냉각시키고, 고체를 여과에 의해 수집하였다. 이어서, 환류 아세톤 (10 ㎖에 이어서 15 ㎖)으로 고체를 2회 분쇄한 후, 40℃에서 진공하에 여과하고 건조시켜, 표제 생성물을 베이지색 고체로서 수득하였다.
중간체 B : (2S,4R)-4-디메틸아미노-피롤리딘-2-카르복실산 아미드
(2S,4R)-4-디메틸아미노-피롤리딘-2-카르복실산 메틸 에스테르 (단계 B.1, 225 mg) 및 MeOH 중 7 M 암모니아 (7 ㎖)의 용액을 실온에서 밀봉된 용기 중에 18시간 동안 방치하였다. 이를 증발시키고, Et2O를 이용하여 분쇄하여, 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다.
단계 B.1 (2S,4R)-4-디메틸아미노-피롤리딘-2-카르복실산 메틸 에스테르
(2S,4R)-4-디메틸아미노-피롤리딘-1,2-디카르복실산 1-벤질 에스테르 2-메틸 에스테르 (단계 B.2, 420 mg), 10％ 탄소 상의 팔라듐 (80 mg) 및 MeOH (10 ㎖)의 혼합물을 수소 대기하에 16시간 동안 교반하였다. 여과 및 증발에 의해 표제 화합물을 수득하고, 이를 하기 단계에서 정제 없이 사용하였다.
단계 B.2 (2S,4R)-4-디메틸아미노-피롤리딘-1,2-디카르복실산 1-벤질 에스테르 2-메틸 에스테르
나트륨 시아노보로하이드라이드 (200 mg)를 (2S,4R)-4-아미노-피롤리딘-1,2-디카르복실산 1-벤질 에스테르 2-메틸 에스테르 (400 mg), 포르말린 (0.68 ㎖), 아세트산 (0.72 ㎖), 트리에틸아민 (0.2 ㎖) 및 MeOH (2 ㎖)의 혼합물에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, RM을 DCM과 NaHCO3 수용액 사이에 분배하고, DCM 층을 증발시키고, 정상 크로마토그래피에 의해 정제하여 (용리액; EtOAc → EtOAc 중 20％ EtOH의 구배), 주로 UV-활성 성분을 수득하였다. 크로마토그래피 처리한 물질을 1 M HCl로 녹이고, Et2O로 2X 세척하고, 수성층을 NaHCO3로 염기성화하고, Et2O로 3X 추출하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 증발시켜, 표제 화합물을 미황색 오일로서 수득하였다.
중간체 C: 이미다졸-1-카르복실산 (8-디에틸아미노-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드
DCM (35 ㎖) 중의 2-아미노-8-N,N-디에틸아미노-4,5-디히드로티아졸로[4,5-h]퀴나졸린 (단계 C.1, 1 g, 3.63 mmol)의 혼합물에 CDI (1.178 g, 7.26 mmol)를 첨가하였다. RM을 40℃에서 90시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 고체를 여과에 의해 수집하여, 표제 화합물을 수득하였다. HPLC: 표제 화합물과 MeOH의 반응 생성물로서의 (8-디에틸아미노-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-카밤산 메틸 에스테르에 대한 tR 4.11 분 (방법 D). MS: M+H = 334.
단계 C.1: 2-아미노-8-디에틸아미노-4,5-디히드로티아졸로[4,5-h]퀴나졸린
실온에서 아르곤하에, 2-메톡시에탄올 (10 ㎖) 중의 N'-{6-[1-디메틸아미노-메타-(E)-일리덴]-7-옥소-4,5,6,7-테트라히드로-벤조티아졸-2-일}-N,N-디메틸-포름아미딘 (단계 A.2, 1 g, 3.59 mmol)에, NaOH (0.539 g, 13.47 mmol) 및 N,N-디에틸구아니딘 (0.454 g, 3.94 mmol)을 첨가하였다. RM을 125℃에서 3.5시간 동안 교반한 다음, 실온으로 냉각시켰다. 진공하에서의 증발 후, 잔류물을 0.1 M HCl (50 ㎖) 중에 용해시키고, EtOAc로 세척하였다. 이어서, 수성층을 6 N NaOH로 염기성화하고, EtOAc로 3X 추출하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 증발시키고, 60℃에서 고진공하에 건조시켜, 표제 화합물을 오렌지색 결정으로서 수득하였다.
중간체 D: (2S,3S)-3-메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드
실온에서, 1,4-디옥산 중의 4 M HCl 용액 (1.5 ㎖)을 EtOH (5 ㎖) 중의 (2S,3S)-3-메틸피롤리딘-2-카르복실산 (0.5 g) 현탁액에 첨가하고, 혼합물을 환류하에 20시간 동안 가열하였다. RM을 증발시키고, MeOH 중의 7 M 암모니아 용액 (5.6 ㎖)을 첨가하였다. RM을 실온에서 6일 동안 방치한 다음, 증발시키고, 잔류물을 MeOH (0.5 ㎖)로 분쇄하고, 여과하고, 냉각 MeOH (2 ㎖)로 세척하여, 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다.
중간체 E: (R)-2-벤질-피롤리딘-2-카르복실산 아미드
(3R,7aR)-7a-벤질-3-트리클로로메틸-테트라히드로-피롤로[1,2-c]옥사졸-1-온 (1.40 g, 문헌 [Wang and Germanas Synlett 1999, 33-36]에 의해 기재된 바와 같이 제조됨) 및 MeOH 중의 7 M 암모니아 (15 ㎖)의 혼합물을 밀봉된 용기에서 3일 동안 50℃에서 가열하였다. 이어서, 냉각된 RM을 증발시키고, 클로로포름으로 분쇄하여, 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다.
중간체 F: (S)-2-메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드
MeOH 중의 7 M 암모니아 용액 (22.2 ㎖) 중의 (S)-2-메틸-피롤리딘-2-카르복실산 부틸 에스테르 (단계 F.1, 2.3 g) 용액을 10일 동안 70℃에서 밤(bomb)에서 가열하였다. RM을 증발시키고, 헥산 (20 ㎖)으로 분쇄하여, 표제 화합물을 회백색 고체로서 수득하였다.
단계 F.1: (S)-2-메틸-피롤리딘-2-카르복실산 부틸 에스테르
농축 HCl (2 ㎖)을 부탄-1-올 (50 ㎖) 중의 (S)-2-메틸-피롤리딘-2-카르복실산 (2 g) 현탁액 (18시간 동안 60℃에서 가열한 다음, 4일 동안 환류하에 가열함)에 첨가하였다. RM을 증발시키고, 포화 수성 NaHCO3와 DCM 사이에 분배하고, DCM으로 3X 추출하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 증발시켰다. 이어서, 단리된 오일을 10 mbar에서 쿠겔로르(kugelrohr) 증류시켜, 100 내지 120℃의 오븐 온도에서의 분별 증류로부터, 표제 화합물을 투명한 무색 오일로서 수득하였다.
중간체 G: (R)-2-메톡시메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드
(3R,7aR)-7a-메톡시메틸-3-트리클로로메틸-테트라히드로-피롤로[1,2-c]옥사졸-1-온 (단계 G.1, 0.6 g) 및 MeOH 중의 7 M 암모니아 (6 ㎖)의 혼합물을 밀봉된 용기에서 2일 동안 실온에서 방치하였다. 이어서, RM을 증발시켜 표제 화합물을 미황색 오일로서 수득하였고, 이를 추가 정제없이 사용하였다.
단계 G.1: (3R,7aR)-7a-메톡시메틸-3-트리클로로메틸-테트라히드로-피롤로[1,2-c]옥사졸-1-온
헥산/THF의 3:5 혼합물 (8.25 ㎖) 중의 1M 리튬 디이소프로필아미드 용액을 -78℃에서, THF (5 ㎖) 중의 (3R,7aS)-3-트리클로로메틸-테트라히드로-피롤로[1,2-c]옥사졸-1-온 (1.51 g, 문헌 [Wang and Germanas Synlett 1999, 33-36]에 의해 기재된 바와 같이 제조됨)에 적가하였다. -78℃에서 30분 동안 교반한 후, 메톡시메틸클로라이드 (1.14 ㎖)를 첨가하였다. 이어서, RM을 3시간에 걸쳐 -30℃로 가온시키고, 물을 첨가하였다. 수성층을 DCM으로 추출하고, 합한 유기층을 증발시키고, 이어서 잔류물을 정상 크로마토그래피 (DCM으로 용리시킴)에 의해 정제하여, 표제 화합물을 미황색 오일로서 수득하였다.
중간체 H: (R)-2-디메틸아미노메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드
(3R,7aR)-7a-디메틸아미노메틸-3-트리클로로메틸-테트라히드로-피롤로[1,2-c]옥사졸-1-온 (단계 H.1, 0.26 g) 및 MeOH 중의 7 M 암모니아 (4 ㎖)의 혼합물을 밀봉된 용기에서 3일 동안 50℃에서 가열하였다. 이어서, 냉각된 RM을 증발시켜, 표제 화합물을 갈색 오일로서 수득하였고, 이를 추가 정제없이 사용하였다. MS: M+H = 172.1.
단계 H.1: (3R,7aR)-7a-디메틸아미노메틸-3-트리클로로메틸-테트라히드로-피롤로[1,2-c]옥사졸-1-온
헥산/THF의 3:5 혼합물 (8.25 ㎖) 중의 1 M 리튬 디이소프로필아미드 용액을 -78℃에서, THF (5 ㎖) 중의 (3R,7aS)-3-트리클로로메틸-테트라히드로-피롤로[1,2-c]옥사졸-1-온 (1.51 g, 문헌 [Wang and Germanas Synlett 1999, 33-36]에 의해 기재된 바와 같이 제조됨)에 적가하였다. -78℃에서 30분 동안 교반한 후, 에스켄모세르(Eschenmoser) 염 (2.78 g)을 첨가하였다. 이어서, RM을 1시간에 걸쳐 격렬하게 교반하며 -40℃로 가온시키고, -40℃에서 2시간 동안 유지하였다. 이어서, 물을 첨가하고, 수성층을 DCM으로 추출하고, 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 증발시켰다. 이어서, 잔류물을 정상 크로마토그래피 (구배 DCM → DCM 중 20％ EtOAc으로 용리시킴)에 의해 정제하여, 표제 화합물을 미황색 오일로서 수득하였다 (M+H = 301/303/305 3:3:1).
중간체 I: d6-(R)-2-디메틸아미노메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드
d6-(3R,7aR)-7a-디메틸아미노메틸-3-트리클로로메틸-테트라히드로-피롤로[1,2-c]옥사졸-1-온 (단계 I.1, 440 mg, 1.430 mmol)을 밀봉된 용기에서 MeOH 중의 암모니아 (10.2 ㎖, 71.4 mmol)에 용해시키고, 5일 동안 75℃에서 가열하였다. 반응 혼합물을 증발시키고, CHCl3로 2X 분쇄하여, 표제 생성물을 담갈색 고체로서 수득하였다.
단계 I.1: d6-(3R,7aR)-7a-디메틸아미노메틸-3-트리클로로메틸-테트라히드로-피롤로[1,2-c]옥사졸-1-온
(3R,7aR)-1-옥소-3-트리클로로메틸-디히드로-피롤로[1,2-c]옥사졸-7a-카르브알데히드 (문헌 [J. Org. Chem. 2006, 71(1), 97-102]에 기재된 바와 같이 수득됨; 1 g, 3.67 mmol), THF 중의 디메틸아민-d7 (1.0 ㎖, 14.09 mmol), 아세트산 (0.525 ㎖, 9.17 mmol) 및 DCE (4 ㎖)를 아르곤하에 합하고, 나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드 (1.089 g, 5.14 mmol)를 조금씩 첨가하였다. 실온에서 3시간 동안 교반한 후, RM을 DCM 중에 녹이고, DCM으로 1회 더 추출하며 1 M NaOH로 분배하였다. 유기층을 합한 다음, 물로 2회 세척한 후, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 용액을 그의 부피의 반으로 증발시키고, H2O 중의 1 M HCl을 첨가하고, 층을 분리하고, 수성층을 DCM으로 2회 세척하였다. 포화 Na2CO3 용액을 사용하여 수성층의 pH를 ~8로 조정하고, DCM으로 3회 추출하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 증발시키고, 원하는 표제 생성물을 미황색 오일로서 수득하였다.
중간체 J: (R)-2-히드록시메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드
(3R,7aR)-7a-히드록시메틸-3-트리클로로메틸-테트라히드로-피롤로[1,2-c]옥사졸-1-온 (단계 J.1, 308 mg, 1.122 mmol)을 아르곤하에 MeOH 중의 7 M 암모니아 (8.014 ㎖, 56.1 mmol)에 첨가하고, 밀봉된 용기에서 72시간 동안 75℃에서 가열한 다음 증발시켜, 표제 화합물을 점성의 담갈색 오일로서 수득하였고, 이를 추가 정제없이 사용하였다.
단계 J.1: (3R,7aR)-7a-히드록시메틸-3-트리클로로메틸-테트라히드로-피롤로[1,2-c]옥사졸-1-온
나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드 (544 mg, 2.57 mmol)를 DCE (4 ㎖) 중의 (3R,7aR)-1-옥소-3-트리클로로메틸-디히드로-피롤로[1,2-c]옥사졸-7a-카르브알데히드 (문헌 [J. Org. Chem. 2006, 71(1), 97-102]에 기재된 바와 같이 수득됨; 500 mg, 1.835 mmol)에 첨가하였다. RM을 실온에서 18시간 동안 교반한 다음, DCM 중에 녹이고, 유기층을 물로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 증발시켰다. 조 생성물을 20 g 레디셉 (등록상표) 실리카겔 컬럼 (용리액 DCM → DCM 중 10％ MeOH)을 사용하여 정제하여, 표제 화합물을 투명한 미황색 오일로서 수득하였다.
중간체 K: (R)-2-{[(3-플루오로-벤질)-메틸-아미노]-메틸}-피롤리딘-2-카르복실산 아미드
(3R,7aR)-7a-{[(3-플루오로-벤질)-메틸-아미노]-메틸}-3-트리클로로메틸-테트라히드로-피롤로[1,2-c]옥사졸-1-온 (단계 K.1, 385 mg, 0.973 mmol)을 아르곤하에 MeOH 중의 7 M 암모니아 (6.950 ㎖, 48.7 mmol)에 첨가하고, 50℃에서 6일 동안 밀봉된 용기에서 가열한 다음, 75℃에서 5일 동안 가열하였다. 이어서, RM을 증발시키고, 잔류물을 12 g 레디셉 (등록상표) 실리카겔 컬럼 (용리액 DCM 중 5％ MeOH)을 사용하여 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여, 표제 화합물을 황색 오일로서 수득하였다.
단계 K.1: (3R,7aR)-7a-{[(3-플루오로-벤질)-메틸-아미노]-메틸}-3-트리클로로메틸-테트라히드로-피롤로[1,2-c]옥사졸-1-온
나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드 (889 mg, 4.19 mmol)를 아르곤 대기하에, DCE (4 ㎖) 중의 (3R,7aR)-7a-[(3-플루오로-벤질아미노)-메틸]-3-트리클로로메틸-테트라히드로-피롤로[1,2-c]옥사졸-1-온 (단계 K.2, 400 mg, 1.048 mmol), 포름알데히드 (H2O 중 37％, 0.102 ㎖, 1.36 mmol) 및 아세트산 (0.150 ㎖, 2.62 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 실온에서 2시간 교반한 후, RM을 DCM과 물 사이에 분배하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 증발시켜, 표제 화합물을 담갈색 오일로서 수득하였고, 이를 추가 정제없이 사용하였다.
단계 K.2: (3R,7aR)-7a-[(3-플루오로-벤질아미노)-메틸]-3-트리클로로메틸-테트라히드로-피롤로[1,2-c]옥사졸-1-온
나트륨 트리아세톡시보로하이드라이드 (544 mg, 2.57 mmol)를 아르곤 대기하에, DCE (4 ㎖) 중의 (3R,7aR)-1-옥소-3-트리클로로메틸-디히드로-피롤로[1,2-c]옥사졸-7a-카르브알데히드 (문헌 [J. Org. Chem. 2006, 71(1), 97-102]에 기재된 바와 같이 수득됨, 500 mg, 1.835 mmol), 3-플루오로벤질아민 (0.251 ㎖, 2.20 mmol) 및 아세트산 (0.263 ㎖, 4.59 mmol)에 첨가하였다. RM을 실온에서 3시간 동안 교반한 다음, 물과 DCM 사이에 분배하고, 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 증발시켜, 표제 화합물을 미황색 오일로서 수득하였고, 이를 추가 정제없이 사용하였다.
중간체 L: (S)-아제티딘-2-카르복실산 아미드
MeOH (25 ㎖) 중의 (S)-2-카르바모일-아제티딘-1-카르복실산 벤질 에스테르 (단계 L.1, 1.8 g) 및 10％ 탄소상 팔라듐 (0.2 g)의 혼합물을 실온에서 5시간 동안 수소 대기하에 교반하였다. 여과하고 증발시켜, 표제 화합물을 수득하였고, 이를 추가 정제없이 사용하였다.
단계 L.1: (S)-2-카르바모일-아제티딘-1-카르복실산 벤질 에스테르
(S)-아제티딘-1,2-디카르복실산 1-벤질 에스테르 2-메틸 에스테르 (2.5 g) 및 MeOH 중의 7 M 암모니아 (10 ㎖)의 혼합물을 밀봉된 용기에서 18시간 동안 실온에서 방치하였다. 이어서, RM을 증발시켜, 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였고, 이를 추가 정제없이 사용하였다. MS: M+H 235.1 및 M-H 233.1.
중간체 M: (2S,4R)-4-플루오로-피롤리딘-2-카르복실산 아미드
EtOH 중의 1.25 M HCl 용액 (2.3 ㎖)을 실온에서 EtOH (2 ㎖) 중의 (2S,4R)-4-플루오로-피롤리딘-2-카르복실산 (0.25 g)의 현탁액에 첨가하고, 혼합물을 55℃에서 62시간 동안 가열하였다. RM을 증발시키고, MeOH 중의 7 M 암모니아 용액 (5.6 ㎖)을 첨가하였다. RM을 실온에서 36시간 동안 방치한 다음, 증발시키고, 잔류물을 MeOH (0.5 ㎖)로 분쇄하고 여과하여, 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다. 1H-NMR (d6-DMSO, 400 MHz): 7.68 (s, 1H), 7.37 (s, 1H), 5.30 (d, 1H), 3.96 (t, 1H), 3.40-3.12 (m, 2H), 2.48-2.31 (m, 1H), 2.02-1.81 (m, 1H).
중간체 N: (2S,4S)-4-플루오로-피롤리딘-2-카르복실산 아미드
(2S,4S)-2-카르바모일-4-플루오로-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (1.0 g), 농축 HCl (0.6 ㎖) 및 1-부탄올 (10 ㎖)의 혼합물을 50℃에서 48시간 동안 가열하였다. RM을 증발시키고, DCM과 수성 NaHCO3 사이에 분배하고, DCM 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 증발시켰다. 메탄올 중의 7 M 암모니아 용액 (10 ㎖)을 잔류물에 첨가하고, 혼합물을 밀봉된 용기에서 60시간 동안 실온에서 방치하였다. 이를 증발시키고, EtOH로 분쇄하여, 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다.
중간체 O: (1S,5R)-2-아자-비시클로[3.1.0]헥산-1-카르복실산 아미드
(1S,5R)-2-아자-비시클로[3.1.0]헥산-1-카르복실산 에틸 에스테르 (2.5 g, 문헌 [Hercouet Tetrahedron Asymmetry 1996, 7, 1267-1268]의 절차에 의해 제조됨) 및 MeOH 중의 7 M 암모니아 (20 ㎖)의 혼합물을 밀봉된 용기에서 5일 동안 80℃에서 가열하였다. 냉각된 RM을 증발시키고, 헥산/DCM으로 분쇄하여, 표제 화합물을 베이지색 고체로서 수득하였다.
중간체 P: (2S,3R)-3-메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드
MeOH (20 ㎖) 중의 (2S,3R)-3-메틸-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (단계 P.1, 1.1 g, 4.76 mmol) 및 활성탄 상의 Pd 10％ (0.101 g, 0.947 mmol)를 실온에서 46시간 동안 H2 대기하에 진탕시켰다. 이어서, RM을 플루오로포어(Fluoropore) 막 필터 (0.2 ㎛ FG)를 통해 여과하고, 증발시켰다. 잔류물을 DCM에 용해시키고, 증발에 의해 건조시켜, 표제 화합물을 백색 결정으로서 수득하였다.
단계 P.1: (2S,3R)-3-메틸-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 아미드
톨루엔 중의 트리메틸알루미늄 (2 M, 3.23 ㎖)을 0℃에서 아르곤 대기하에 톨루엔 (3.2 ㎖) 중의 염화암모늄 (0.346 g, 6.47 mmol)의 혼합물에 적가하였고, 메탄 가스가 형성되었다. 이어서, RM을 실온으로 가온시키고, 실온에서 15분 동안 추가로 교반한 후, (2S,3R)-3-메틸-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 메틸 에스테르 (문헌 [Tetr. Lett. 1997, 38 (1), 85-88]에 기재된 바와 같이 제조됨; 1.6 g, 6.47 mmol)를 서서히 첨가하였다. RM을 실온에서 56시간 동안 교반한 다음, 1 M HCl을 냉각시키며 첨가하고, RM을 DCM으로 3X 세척하였다. 수성상을 Na2CO3로 염기성화하고, DCM으로 3X 추출하고, 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 증발을 통해 표제 화합물을 황색 오일로서 수득하였다.
중간체 Q: (2S,4S)-4-디메틸아미노-피롤리딘-2-카르복실산 아미드
(2S,4S)-4-디메틸아미노-피롤리딘-2-카르복실산 부틸 에스테르 (단계 Q.1, 326 mg) 및 MeOH 중의 7 M 암모니아 (8 ㎖)의 용액을 밀봉된 용기에서 18시간 동안 실온에서 방치하였다. 여과하고 증발시키고, Et2O/MeOH로 분쇄하여, 표제 화합물을 베이지색 고체로서 수득하였다.
단계 Q.1: (2S,4S)-4-디메틸아미노-피롤리딘-2-카르복실산 부틸 에스테르
농축 HCl (0.3 ㎖)을 (2S,4S)-4-디메틸아미노-피롤리딘-2-카르복실산 메틸 에스테르 디히드로클로라이드 (400 mg) 및 1-부탄올 (4 ㎖)의 혼합물에 첨가하고, 115℃에서 18시간 동안 가열하였다. 냉각 후, RM을 증발시키고, 이어서 DCM과 NaHCO3 수용액 사이에 분배하고, DCM 층을 건조시키고 증발시켜, 표제 화합물을 갈색 오일로서 수득하였고, 이를 추가 정제없이 사용하였다.
중간체 R: (2S,4S)-4-히드록시-피롤리딘-2-카르복실산 아미드
MeOH 중 7M 암모니아 용액 (10 ㎖) 중의 (2S,4S)-4-히드록시-피롤리딘-2-카르복실산 메틸 에스테르 히드로클로라이드 (1 g)의 용액을 18시간 동안 교반한 다음, 증발시키고, Et2O로 분쇄하였다. 잔류물을 최소 부피의 뜨거운 MeOH 중에 용해시키고, 4℃에서 4시간 동안 방치하였다. 표제 화합물을 여과에 의해 백색 고체로서 단리시켰다.
중간체 S: (2S,4R)-4-히드록시-피롤리딘-2-카르복실산 아미드
880 암모니아 (5 ㎖) 중의 (2S,4R)-4-히드록시-피롤리딘-2-카르복실산 벤질 에스테르 (1 g)의 용액을 18시간 동안 교반한 다음, 증발시키고, Et2O로 분쇄하여, 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다.
중간체 T: 이미다졸-1-카르복실산 (7-tert-부틸-4,5-디히드로-벤조[1,2-d;3,4-d']비스티아졸-2-일)-아미드
7-tert-부틸-4,5-디히드로-벤조[1,2-d;3,4-d']비스티아졸-2-일아민 (단계 T.1, 175 mg, 0.659 mmol)을 DCM (10 ㎖) 중에 용해시키고, 이어서 CDI (297 mg, 1.648 mmol)를 첨가하고, RM을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 표제 화합물을 여과에 의해 단리시키고, DCM으로 세척하고, HV하에 건조시켰다.
단계 T.1: 7-tert-부틸-4,5-디히드로-벤조[1,2-d;3,4-d']비스티아졸-2-일아민
N-(7-tert-부틸-4,5-디히드로-벤조[1,2-d;3,4-d']비스티아졸-2-일)-아세트아미드 (단계 T.2, 225 mg, 0.732 mmol)를 EtOH (10 ㎖) 중에 용해시키고, 이어서 HCl 36％ (1.48 g, 14.64 mmol)를 첨가하고, RM을 가열 환류시켰다. 환류 18시간 후, RM을 실온으로 냉각시키고, 5％ 수성 중탄산나트륨 용액을 첨가하여 pH 8 내지 9로 조정하고, EtOAc로 추출하고, H2O로 2회 세척하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 증발시켜, 표제 생성물을 수득하였다 (tR 4.408 분 (방법 F)).
단계 T.2: N-(7-tert-부틸-4,5-디히드로-벤조[1,2-d;3,4-d']비스티아졸-2-일)-아세트아미드
N-(6-브로모-7-옥소-4,5,6,7-테트라히드로-벤조티아졸-2-일)-아세트아미드 (단계 T.3, 473 mg, 1.635 mmol)를 MeOH (10 ㎖) 중에 용해시키고, 2,2-디메틸티오 프로피온아미드 (230 mg, 1.962 mmol) 및 암모늄 포스포몰리브데이트 (307 mg, 0.164 mmol)를 첨가하고, RM을 25℃에서 20시간 동안 교반하였다. 이어서, RM을 2일 동안 방치한 후, 50℃에서 24시간 동안 교반하였다. 혼합물을 EtOAc/H2O로 추출하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 증발시켰다. 조 물질을 30 g의 실리카겔, 용리액 DCM/MeOH=99:1으로 크로마토그래피 처리하였다. 생성물을 함유한 분획물을 증발시키고, 디옥산으로부터 동결건조시켜, 225 mg의 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다 (M+H = 308; M-H = 306; tR 5.525 분 (방법 F)).
단계 T.3: N-(6-브로모-7-옥소-4,5,6,7-테트라히드로-벤조티아졸-2-일)-아세트아미드
N-(7-옥소-4,5,6,7-테트라히드로-벤조티아졸-2-일)-아세트아미드 (단계 T.4, 2.286 g, 10.87 mmol)를 AcOH (60 ㎖) 중에 용해시키고, 이어서 AcOH (10 ㎖) 중에 용해시킨 브롬 (1.74 g, 10.87 mmol)을 서서히 첨가하고, RM을 20시간 동안 75℃로 가열하였다. 색이 적색에서 베이지색으로 변하였다. 혼합물을 증발시키고, 잔류물을 MeOH (10 ㎖) 중에 용해시키고, H2O로 침전시켰다. 혼합물을 여과하고, HV 상에서 건조시켰다. 조 물질을 MPLC C18 H2O 0.1％ TFA/CH3CN 0.1％ TFA, 구배 0 → 50％로 크로마토그래피 처리하였다. 생성물을 함유한 분획물을 NaHCO3로 중화시키고, EtOAc로 추출하고, 디옥산으로부터 동결건조시켜, 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다 (M+H = 291; M-H = 289; tR 4.29 (방법 F)).
단계 T.4: N-(7-옥소-4,5,6,7-테트라히드로-벤조티아졸-2-일)-아세트아미드
실온에서 아세트산 무수물 (80 ㎖)에 2-아미노-5,6-디히드로-4H-벤조티아졸-7-온 (10 g, 59.4 mmol)을 첨가하고, 황색 현탁액을 가열 환류시켰다. 상기 온도에서 1.75시간 교반한 후, RM을 교반하며 냉각시키고, 실온에서 밤새 교반하였다. 얼음/NaCl 배스를 사용하여 추가로 냉각시킨 후, 현탁액을 여과하였다. 이어서, 고체를 아세톤 (10 ㎖에 이어서 15 ㎖)으로 2회 환류시키고, 여과하였다. 생성된 고체를 40℃에서 밤새 진공하에 건조시켜, 표제 화합물을 베이지색 고체로서 수득하였다 (HPLC: tR 3.47 분 (방법 A3), M-H = 211.1).
중간체 U: 이미다졸-1-카르복실산 [7-(2-플루오로-1,1-디메틸-에틸)-4,5-디히드로-벤조[1,2-d;3,4-d']비스티아졸-2-일]-아미드
7-(2-플루오로-1,1-디메틸-에틸)-4,5-디히드로-벤조[1,2-d;3,4-d']비스티아졸-2-라민 (단계 U.1 61.6 mg, 0.217 mmol)을 DCM (2 ㎖) 중에 용해시키고, CDI (297 mg, 1.648 mmol)를 첨가하여, 투명한 무색 용액을 수득하였다. RM을 실온에서 밤새 방치하여, 백색 현탁액을 수득하였다. 혼합물을 4℃에서 1시간 동안 냉각시킨 다음, 여과하고, DCM으로 세척하고, 진공하에 건조시켜, 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다 (MeOH에서의 샘플의 분석; M+H = 342.0은 MS에서 메틸 카르바메이트 생성물을 나타냄; tR 2.14 분 (방법 A3)).
단계 U.1 7-(2-플루오로-1,1-디메틸-에틸)-4,5-디히드로-벤조[1,2-d;3,4-d']비스티아졸-2-라민
3-플루오로-2,2-디메틸-티오프로피온아미드 (단계 U.2, 394 mg, 2.331 mmol)를 EtOH 중에 용해시키고, 이어서 N-(6-브로모-7-옥소-4,5,6,7-테트라히드로-벤조티아졸-2-일)-아세트아미드 (단계 T.3, 473 mg, 1.635 mmol) 및 암모늄 포스포몰리브데이트 (80 mg, 0.042 mmol)를 첨가하여, 황색 현탁액을 수득하였다. RM을 가열 환류시켜, 암청색-암녹색 현탁액을 수득하였다. 반응 혼합물을 65℃에서 3일 동안 교반하였다. RM을 여과하고, 여과액을 증발시켰다. 잔류물을 DMF 중에 녹이고, 정제용-HPLC (방법 E)에 의해 정제하였다. 생성물을 함유한 분획물을 합하고증발시켜, 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다 (M+H = 284.1; tR 1.30 분 (방법 A3)).
단계 U.2 3-플루오로-2,2-디메틸-티오프로피온아미드
표제 화합물을 문헌 [Boys, M. L.; Downs, V. L. Synth. Commun. 2006, 36, 295]의 절차에 의해 제조하였다. 실온에서, 나트륨 수소 설파이드 수화물 (3.89 g, 69.4 mmol, 흡습성)을 1,4-디옥산 (7 ㎖) 및 H2O (7 ㎖) 중의 3-플루오로-2,2-디메틸-프로피오니트릴 (단계 U.3, 1.17 g, 11.57 mmol) 및 디에틸 아민 히드로클로라이드 (7.61 g, 69.4 mmol)의 용액에 첨가하였다. RM을 55℃로 가열한 다음, 이 온도에서 3일 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (50 ㎖)로 희석시키고, EtOAc (50 ㎖)로 5X 추출하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 증발시켜, 오렌지색 오일을 수득하였다. 이어서, DCM (5 ㎖)을 첨가하여, 백색 현탁액을 수득하였다. 현탁액을 여과하고, 여과액을 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피 (DCM으로 용리함)로 정제하였다. 생성물을 함유한 분획물을 증발시켜, 표제 화합물을 미황색 오일로서 수득하였다 (M+H = 136.1, M-H = 134.1; tR 0.69 분 (방법 A3)). 19F-NMR (d6-DMSO, 400 MHz 218ppm (t, 1F)).
단계 U.3 3-플루오로-2,2-디메틸-프로피오니트릴
3-플루오로-2,2-디메틸-프로피온아미드 (단계 U.4, 1.82 g, 15.28mmol) 및 오산화인 (2.168 g, 15.28 mmol)을 합하여, 자유 유동성 백색 분말을 수득하고, 이를 오일 배스를 이용하여 배스 온도 180℃로 50분에 걸쳐 아르곤 분위기하에 가열하였다. 이어서, 300 mbar 진공을 서서히 가하여 투명한 무색의 이동 오일을 증류시키고, 이에 의해, 방치 시 표제 화합물의 저 용융 밀랍성 고체를 형성하였다. 19F-NMR (d6-DMSO, 400 MHz 219.5 ppm (t, 1F)).
단계 U.4 3-플루오로-2,2-디메틸-프로피온아미드
3-플루오로-2,2-디메틸-프로피오닐 플루오라이드 (DE3326874 및 DE3611195, 2.5 g, 20.47 mmol)를 0℃에서 수성 암모니아 (10 ㎖) 및 THF (20 ㎖)의 혼합물에 첨가하였다. 이어서, RM을 실온으로 가온시키고, 실온에서 밤새 방치하였다. 부피를 진공하에 50％만큼 감소시켜, 걸쭉한 백색 현탁액을 수득하였다. 현탁액을 DCM/H2O으로 추출하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 증발시켜, 표제 화합물을 백색 결정성 고체로서 수득하였다.
중간체 V: 이미다졸-1-카르복실산 (7-시클로프로필메틸-4,5-디히드로-벤조 [1,2-d;3,4-d']비스티아졸-2-일)-아미드
7-시클로프로필메틸-4,5-디히드로-벤조[1,2-d;3,4-d']비스티아졸-2-일아민 (단계 V.1, 72 mg, 0.273 mmol)을 5 ㎖ DCM 중에 용해시키고, CDI (73.9 mg, 0.410 mmol)를 첨가하고, RM을 실온에서 20시간 동안 교반하였다. 추가의 CDI (37 mg, 0.205 mmol)를 첨가하고, RM을 실온에서 2시간 더 교반하였다. 혼합물을 여과하고, DCM으로 세척하고, 여과액을 증발시켜, 표제 화합물을 수득하였다 (M+H = 322.1; M-H = 320.2; MeOH에서의 MS-ES는 메틸 카르바메이트 생성물을 나타냄).
단계 V.1 7-시클로프로필메틸-4,5-디히드로-벤조[1,2-d;3,4-d']비스티아졸-2-일아민
N-(7-시클로프로필메틸-4,5-디히드로-벤조[1,2-d;3,4-d']비스티아졸-2-일)-아세트아미드 (단계 V.2, 180 mg, 0.589 mmol)를 EtOH (10 ㎖) 중에 용해시키고, 36％ HCl (1.193g, 11.79 mmol)을 첨가하였다. RM을 16시간 동안 90℃로 가열한 다음, 냉각시키고, EtOAc/H2O로 추출하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 증발시켰다. 조 물질을 MPLC C18 H2O 0.1％ TFA/CH3CN 0.1％ TFA, 구배 0 → 50％로 크로마토그래피 처리하였다. 생성물을 함유한 분획물을 NaHCO3로 중화시키고, EtOAc로 추출하고, 디옥산으로부터 동결건조시켜, 표제 화합물을 수득하였다 (M+H = 264.2; M-H = 262.1; tR 4.183 분 (방법 F)).
단계 V.2 N-(7-시클로프로필메틸-4,5-디히드로-벤조[1,2-d;3,4-d']비스티아졸-2-일)-아세트아미드
N-(6-브로모-7-옥소-4,5,6,7-테트라히드로-벤조티아졸-2-일)-아세트아미드 (단계 T.3, 347 mg, 1.200 mmol)를 MeOH (10 ㎖) 중에 용해시키고, 2-시클로프로필-티오아세트아미드 (문헌 [Can. J. Chem 1995 Vol.73 1468-1477], 166 mg, 1.440 mmol) 및 암모늄 포스포몰리브데이트 (225 mg, 0.120 mmol)를 첨가하였다. RM을 실온에서 20시간 동안 교반한 다음, 50℃에서 3시간 동안, 60℃에서 2시간 동안 가열하고, 이어서 24시간 동안 환류시켰다. RM을 EtOAc/H2O 사이에 분배하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 증발시켰다. 원료를 크로마토그래피 (MPLC C18 H2O 0.1％ TFA/CH3CN 0.1％ TFA, 구배 0 → 50％) 처리하였다. 생성물을 함유한 분획물을 NaHCO3로 중화시키고, EtOAc로 추출하고, 디옥산으로부터 동결건조시켜, 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다 (M+H = 306.2; M-H = 304.2; tR 5.12 분 (방법 F)).
실시예 1: (2S,4R)-4-디메틸아미노-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-tert-부틸-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드]
DMF (1 ㎖) 중의 이미다졸-1-카르복실산 (8-tert-부틸-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드 (중간체 A, 45.1 mg, 0.127 mmol)의 용액에 (2S,4R)-4-디메틸아미노-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (중간체 B, 22 mg, 0.140 mmol) 및 트리에틸아민 (0.053 ㎖, 0.382 mmol)을 첨가하였다. 이어서, RM을 실온에서 17시간 동안 교반하고, 정제용 HPLC로 정제하였다 (방법 B). 생성물을 함유한 분획물을 합하고, 300 mg 본드 일루트(Bond Elut) - SCX 카트리지를 통해 용리시켰다. 이어서, 카트리지를 MeOH 중의 7 M 암모니아 용액으로 세척하고, 증발시켜, 표제 화합물을 수득하였다. MS: M+H = 444. HPLC: tR 3.17 분 (방법 D).
실시예 2: (2S,3S)-3-메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-디에틸아미노-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드]
DMF (0.4 ㎖) 중의 (2S,3S)-3-메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (중간체 D, 6.24 mg, 0.049 mmol), 이미다졸-1-카르복실산 (8-디에틸아미노-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드 (중간체 C, 18 mg, 0.049 mmol) 및 트리에틸아민 (0.020 ㎖, 0.146 mmol)의 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반하였다. 이어서, RM을 바로 정제용 HPLC로 정제하였다 (방법 B). 이어서, 생성물을 함유한 분획물을 300 mg 본드 일루트-SCX 카트리지를 통해 여과하였다. 이어서, 카트리지를 MeOH 중의 7 M 암모니아 용액으로 용리시키고, 용리액을 증발시켜, 표제 화합물을 황색 고체로서 수득하였다.
실시예 3: (R)-2-벤질-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-디에틸아미노-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드]
DMF (1 ㎖) 중의 이미다졸-1-카르복실산 (8-디에틸아미노-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드 (중간체 C, 50 mg, 0.135 mmol)의 혼합물에 (R)-2-벤질-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (중간체 E, 33.2 mg, 0.162 mmol) 및 트리에틸아민 (0.057 ㎖, 0.406 mmol)을 첨가하였다. RM을 40℃에서 21시간 동안 교반한 다음, 바로 정제용 HPLC (방법 B)로 정제하였다. 생성물을 함유한 분획물을 300 mg 본드 일루트 - SCX 카트리지를 통해 용리시켰다. 이어서, 카트리지를 MeOH 중의 7 M 암모니아-용액으로 용리시키고, 증발시켜, 표제 화합물을 황색 고체로서 수득하였다. MS: M+H = 506.1. HPLC: tR 4.38 분 (방법 D).
실시예 4: (S)-2-메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-디에틸아미노-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드]
DMF (2 ㎖) 중의 이미다졸-1-카르복실산 (8-디에틸아미노-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드 (중간체 C, 75 mg, 0.203 mmol)의 혼합물에 (S)-2-메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (중간체 F, 39 mg, 0.305 mmol) 및 트리에틸아민 (0.085 ㎖, 0.609 mmol)을 첨가하였다. RM을 40℃에서 17시간 동안 교반한 다음, 바로 정제용 HPLC (방법 B)로 정제하였다. 생성물을 함유한 분획물을 300 mg 본드 일루트 - SCX 카트리지를 통해 용리시켰다. 이어서, 카트리지를 MeOH 중의 7 M 암모니아-용액으로 용리시키고, 증발시켜, 표제 화합물을 황색 고체로서 수득하였다 MS: M+H = 430.2. HPLC: tR 3.80 분 (방법 D).
실시예 5: (R)-2-메톡시메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-디에틸아미노-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드]
DMF (2 ㎖) 중의 이미다졸-1-카르복실산 (8-디에틸아미노-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드 (중간체 C, 75 mg, 0.203 mmol), (R)-2-메톡시메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (중간체 G, 35.3 mg, 0.223 mmol) 및 트리에틸아민 (0.085 ㎖, 0.609 mmol)의 혼합물을 40℃에서 6시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, RM을 MeOH (1 ㎖)에 용해시키고, 바로 정제용 HPLC로 정제하였다 (방법 B). 생성물을 함유한 분획물을 300 mg 본드 일루트 - SCX 카트리지를 통해 용리시켰다. 이어서, 카트리지를 MeOH 중의 7 M 암모니아 용액으로 용리시키고, 증발시켜, 표제 생성물을 황색 고체로서 수득하였다. MS: M+H = 460.1. HPLC: tR 3.94 분 (방법 D).
실시예 6: (R)-2-디메틸아미노메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-tert-부틸-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드]
이미다졸-1-카르복실산 (8-tert-부틸-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드 (중간체 A, 132 mg, 0.372 mmol)를 실온에서 DMF (1 ㎖) 중의 (R)-2-디메틸아미노메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (중간체 H, 70 mg, 0.409 mmol) 및 트리에틸아민 (0.155 ㎖, 1.115 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 18시간 후, MeOH (0.5 ㎖)를 첨가하고, RM을 PTFE 막 필터를 통해 여과하고, 정제용 HPLC로 정제하였다 (방법 B). 생성물을 함유한 분획물을 합하고 증발시켜, CH3CN을 제거하고, 이어서 고체 NaHCO3를 첨가하여 염기성화하여, 황색 백색 침전물을 수득하였다. 4℃로 냉각시킨 후, 고체를 여과하여 재수집한 다음, 정제용 HPLC로 추가로 정제하였다 (방법 C). 생성물을 함유한 분획물을 300 mg 본드 일루트 - SCX 카트리지를 통해 용리시켰다. 이어서, 카트리지를 MeOH 중의 7 M 암모니아 용액으로 용리시키고 증발시켜, 표제 생성물을 황색 무정형의 유리로서 수득하였다.
실시예 7: d6-(R)-2-디메틸아미노메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-tert-부틸-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드]
이미다졸-1-카르복실산 (8-tert-부틸-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드 (중간체 A, 91 mg, 0.256 mmol) 및 트리에틸아민 (0.036 ㎖, 0.256 mmol)을 아르곤 대기하에, DMF (2 ㎖) 중에 현탁시킨 d6-(R)-2-디메틸아미노메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (중간체 I, 50 mg, 0.282 mmol)에 첨가하였다. 이어서, RM을 40℃에서 2.75시간 동안 교반한 다음, 정제용 HPLC로 2회 바로 정제하였다 (방법 B에 이어서 방법 C). 각 횟수 동안, 생성물을 함유하는 분획물을 합하고, 300 mg 본드 일루트 - SCX 카트리지를 통해 용리시켰다. 이어서, 카트리지를 MeOH 중의 7 M 암모니아 용액으로 용리시키고 증발시켜, 황색 고체를 수득하였다. 고체를 DCM 중에 현탁시키고, 여과하고, 진공하에 건조시켜, 표제 화합물을 황색 고체로서 수득하였다. LCMS: tR 1.21 분 및 M+H = 464.0 (방법 A1).
실시예 8: (R)-2-히드록시메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-디에틸아미노-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드]
이미다졸-1-카르복실산 (8-디에틸아미노-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드 (중간체 C, 50 mg, 0.135 mmol)를 실온에서 DMF (1 ㎖) 중의 (R)-2-히드록시메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (중간체 J, 25.4 mg, 0.176 mmol) 및 트리에틸아민 (0.047 ㎖, 0.338 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 실온에서 18시간 후, RM을 PTFE 막을 통해 여과하고, 정제용 HPLC로 정제하였다 (방법 B). 생성물을 함유한 분획물을 합하고, 본드 일루트 - SCX 카트리지를 통해 여과하였다. 이어서, 카트리지를 MeOH 중의 7 M 암모니아 용액으로 용리시키고, 증발시켜 오렌지색 유리를 수득하고, 이를 MeOH/물로부터 재결정화시켜, 표제 화합물을 황색 고체로서 수득하였다. LCMS: tR 1.09 분 및 M+H = 446.0 (방법 A3).
실시예 9: (R)-2-히드록시메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-tert-부틸-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드]
이미다졸-1-카르복실산 (8-tert-부틸-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드 (중간체 A, 124 mg, 0.350 mmol)를 DMF (2 ㎖) 중의 (R)-2-히드록시메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (중간체 J, 63 mg, 0.350 mmol) 및 트리에틸아민 (0.049 ㎖, 0.350 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. RM을 40℃에서 2시간 동안 교반한 다음, 18시간 동안 실온에서 방치하고, 이어서 바로 정제용 HPLC로 정제하였다 (방법 B). 생성물을 함유한 분획물을 300 mg 본드 일루트 - SCX 카트리지를 통해 용리시켰다. 이어서, 카트리지를 MeOH 중의 7 M 암모니아 용액으로 용리시키고, 증발시켜, 황색 고체를 수득하였다. 이어서, 단리된 고체를 DCM 중에 현탁시키고, 여과하고 건조시켜, 표제 화합물을 미황색/백색 고체로서 수득하였다. LCMS: tR 1.31 분 및 M+H = 430.9 (방법 A1).
실시예 10: (R)-2-{[(3-플루오로-벤질)-메틸-아미노]-메틸}-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-tert-부틸-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드]
이미다졸-1-카르복실산 (8-tert-부틸-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드 (중간체 A, 40.1 mg, 0.113 mmol) 및 트리에틸아민 (0.047 ㎖, 0.339 mmol)을 아르곤 하에 실온에서, DMF (1 ㎖) 중에 현탁시킨 (R)-2-{[(3-플루오로-벤질)-메틸-아미노]-메틸}-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (중간체 K, 30 mg, 0.113 mmol)에 첨가하였다. RM을 40℃에서 2.5시간 동안 교반한 다음, 바로 정제용 HPLC로 정제하였다 (방법 C). 생성물을 함유한 분획물을 300 mg 본드 일루트 - SCX 카트리지를 통해 용리시켰다. 이어서, 카트리지를 MeOH 중의 7 M 암모니아 용액으로 용리시키고 증발시켜, 황색 고체를 수득하였다. 고체를 DCM으로 분쇄하고, 여과하고 건조시켜, 표제 화합물을 미황색 고체로서 수득하였다. LCMS: tR 0.81 분 및 M+H = 552.3 (방법 A2).
실시예 11: (S)-2-메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-tert-부틸-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드]
(S)-2-메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (중간체 F, 22.14 mg, 0.169 mmol) 및 트리에틸아민 (0.035 ㎖, 0.254 mmol)을 아르곤하에 실온에서, DMF (1 ㎖) 중의 이미다졸-1-카르복실산 (8-tert-부틸-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드 (중간체 A, 30 mg, 0.085 mmol)에 첨가하였다. 실온에서 16시간 동안 교반한 후, RM을 바로 정제용 HPLC로 정제하였다 (방법 B). 생성물을 함유한 분획물을 300 mg 본드 일루트 - SCX 카트리지를 통해 용리시켰다. 이어서, 카트리지를 MeOH 중의 7 M 암모니아 용액으로 용리시키고 증발시켜, 표제 화합물을 황색 결정질 고체로서 수득하였다. MS: M+H = 415.1. HPLC: tR 3.73 분 (방법 D).
실시예 12: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-디에틸아미노-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드]
(S)-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (148 mg, 1.299 mmol) 및 트리에틸아민 (0.272 ㎖, 1.949 mmol)을 아르곤하에 실온에서, 이미다졸-1-카르복실산 (8-디에틸아미노-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드 (중간체 C, 240 mg, 0.65 mmol) 및 DMF (1 ㎖)에 첨가하였다. RM을 실온에서 15.5시간 동안 교반한 다음, 정제용 HPLC로 정제하였다 (방법 C). 생성물을 함유한 분획물을 합하고, 본드 일루트 - SCX 카트리지를 통해 여과하였다. 이어서, 카트리지를 MeOH 중의 7 M 암모니아 용액으로 용리시키고 증발시켜, 표제 화합물을 오렌지색 결정으로서 수득하였다. MS: M+H = 416.1. HPLC: tR 3.56 분 (방법 D).
실시예 13: (S)-아제티딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-디에틸아미노-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드]
DMF (2 ㎖) 중의 (S)-아제티딘-2-카르복실산 아미드 (중간체 L, 26.4 mg, 0.264 mmol), 이미다졸-1-카르복실산 (8-디에틸아미노-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드 (중간체 C, 75 mg, 0.203 mmol) 및 트리에틸아민 (0.085 ㎖, 0.609 mmol)의 혼합물을 40℃에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, RM을 정제용 HPLC로 바로 정제하였다 (방법 B). 생성물을 함유한 분획물을 300 mg 본드 일루트 - SCX 카트리지를 통해 용리시켰다. 이어서, 카트리지를 MeOH 중의 7 M 암모니아 용액으로 용리시키고 증발시켜, 표제 화합물을 백색 결정성 고체로서 수득하였다. MS: M+H = 402.1. HPLC: tR 3.56 분 (방법 D).
실시예 14: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-tert-부틸-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드]
(S)-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (16 mg, 0.14 mmol)를 실온에서 DMF (1 ㎖) 중의 이미다졸-1-카르복실산 (8-tert-부틸-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드 (중간체 A, 45 mg, 0.127 mmol) 및 트리에틸아민 (0.053 ㎖, 0.381 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. RM을 실온에서 밤새 방치한 다음, 증발시키고, 잔류물을 MeOH 및 물로부터 결정화시켰다. 표제 화합물을 여과에 의해 수집하였다. MS: M+H = 401.1 (MS-ESI).
실시예 15: 5-메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-디에틸아미노-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드]
DMF (2 ㎖) 중의 이미다졸-1-카르복실산 (8-디에틸아미노-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드 (중간체 C, 75 mg, 0.203 mmol)의 현탁액에 5-메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (문헌 [Arch. Pharm., 1936, 274, 40]에 기재된 바와 같이 제조됨; 39 mg, 0.305 mmol) 및 트리에틸아민 (0.085 ㎖, 0.609 mmol)을 첨가하였다. RM을 40℃에서 2.5시간 동안 교반한 다음, 정제용 HPLC로 바로 정제하였다 (방법 B). 생성물을 함유한 분획물을 본드 일루트 - SCX 카트리지를 통해 용리시켰다. 이어서, 카트리지를 MeOH 중의 7 M 암모니아 용액으로 용리시키고, 증발시키고, 잔류물을 DCM으로 분쇄하여, 표제 화합물을 황색 고체로서 수득하였다. LCMS: tR 0.77 분 및 M+H = 430.0 (방법 A2).
실시예 16: (2S,4R)-4-플루오로-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-디에틸아미노-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드]
DCM (2 ㎖) 중의 이미다졸-1-카르복실산 (8-디에틸아미노-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드 (중간체 C, 75 mg, 0.203 mmol)에 (2S,4R)-4-플루오로-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (중간체 M, 40.2 mg, 0.305 mmol) 및 트리에틸아민 (0.085 ㎖, 0.609 mmol)을 첨가하였다. RM을 40℃에서 17.5시간 동안 교반한 다음, 정제용 HPLC로 바로 정제하였다 (방법 B). 생성물을 함유한 분획물을 본드 일루트 - SCX 카트리지를 통해 용리시켰다. 이어서, 카트리지를 MeOH 중의 7 M 암모니아 용액으로 용리시키고 증발시켜, 표제 화합물을 황색 고체로서 수득하였다. HPLC: tR 3.66 분 (방법 D). MS: M+H = 434.1.
실시예 17: (2S,4S)-4-플루오로-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-디에틸아미노-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드]
DMF (0.4 ㎖) 중의 이미다졸-1-카르복실산 (8-디에틸아미노-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드 (중간체 C, 17 mg, 0.046 mmol)에 (2S,4S)-4-플루오로-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (중간체 N, 6.08 mg, 0.046 mmol) 및 트리에틸아민 (0.019 ㎖, 0.138 mmol)을 첨가하였다. RM을 40℃에서 17시간 동안 교반한 다음, 정제용 HPLC로 바로 정제하였다 (방법 B). 생성물을 함유한 분획물을 본드 일루트 - SCX 카트리지를 통해 용리시켰다. 이어서, 카트리지를 MeOH 중의 7 M 암모니아 용액으로 용리시키고 증발시켜, 표제 화합물을 황색 고체로서 수득하였다. HPLC: tR 3.55 분 (방법 D). MS: M+H = 434.1.
실시예 18: (1S,5R)-2-아자-비시클로[3.1.0]헥산-1,2-디카르복실산 1-아미드 2-[(8-tert-부틸-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드]
(1S,5R)-2-아자-비시클로[3.1.0]헥산-1-카르복실산 아미드 (중간체 O, 208 mg, 1.65 mmol)를 실온에서, DMF (4 ㎖) 중의 이미다졸-1-카르복실산 (8-tert-부틸-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드 (중간체 A, 532 mg, 1.5 mmol) 및 트리에틸아민 (0.627 ㎖, 4.50 mmol)의 교반된 혼합물에 첨가하였다. 56 및 80시간 후, 추가 분량의 (1S,5R)-2-아자-비시클로[3.1.0]헥산-1-카르복실산 아미드 (중간체 O, 104 mg, 0.825 mmol)를 첨가하고, RM을 실온에서 18시간 동안 방치하였다. 이어서, RM을 PTFE 막을 통해 여과하고, 정제용 HPLC로 정제하였다 (방법 B). 생성물을 함유한 분획물을 본드 일루트 - SCX 카트리지를 통해 용리시켰다. 이어서, 카트리지를 MeOH 중의 7 M 암모니아 용액으로 용리시키고, 증발시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC에 의해 2회차로 정제하고 (방법 B), 동일한 방식으로 단리시켰다. 이어서, 조 생성물을 물/MeOH의 1:1 혼합물로부터 재결정화시켜, 표제 화합물을 황색 결정성 고체로서 수득하였다.
실시예 19: (1S,5R)-2-아자-비시클로[3.1.0]헥산-1,2-디카르복실산 1-아미드 2-[(8-디에틸아미노-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드]
DCM (2 ㎖) 중의 이미다졸-1-카르복실산 (8-디에틸아미노-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드 (중간체 C, 75 mg, 0.203 mmol)에 (1S,5R)-2-아자-비시클로[3.1.0]헥산-1-카르복실산 아미드 (중간체 O, 38.4 mg, 0.305 mmol) 및 트리에틸아민 (0.085 ㎖, 0.609 mmol)을 첨가하였다. RM을 40℃에서 17.5시간 동안 교반한 다음, 정제용 HPLC로 바로 정제하였다 (방법 B). 생성물을 함유한 분획물을 본드 일루트 - SCX 카트리지를 통해 용리시켰다. 이어서, 카트리지를 MeOH 중의 7 M 암모니아 용액으로 용리시키고 증발시켜, 표제 화합물을 황색 고체로서 수득하였다. HPLC: tR 3.73 분 (방법 D). MS: M+H = 428.1.
실시예 20: (2S,3R)-3-메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-tert-부틸-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드]
DMF (1 ㎖) 중의 이미다졸-1-카르복실산 (8-tert-부틸-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드 (중간체 A, 60 mg, 0.169 mmol)에 (2S,3R)-3-메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (중간체 P, 32.5 mg, 0.254 mmol) 및 트리에틸아민 (0.071 ㎖, 0.508 mmol)을 첨가하였다. RM을 아르곤 하에 실온에서 2시간 동안 교반한 다음, 정제용 HPLC로 바로 정제하였다 (방법 B). 생성물을 함유한 분획물로부터 CH3CN을 증발시키고, 이어서 남아있는 액체를 본드 일루트 - SCX 카트리지를 통해 용리시켰다. 이어서, 카트리지를 MeOH 중의 7 M 암모니아 용액으로 용리시키고, 증발시켰다. 잔류물을 메탄올 중에서 분쇄하고, 여과하고 건조시켜, 표제 화합물 백색 결정으로 수득하였다.
실시예 21: (2S,3R)-3-메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-디에틸아미노-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드]
DMF (1.5 ㎖) 중의 이미다졸-1-카르복실산 (8-디에틸아미노-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드 (중간체 C, 82 mg, 0.222 mmol)에 (2S,3R)-3-메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (중간체 P, 42.7 mg, 0.333 mmol) 및 트리에틸아민 (0.093 ㎖, 0.666 mmol)을 아르곤 하에 첨가하였다. RM을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음, 정제용 HPLC로 바로 정제하였다 (방법 B). 생성물을 함유한 분획물로부터 CH3CN을 진공하에 제거한 다음, 남아있는 용액을 본드 일루트 - SCX 카트리지를 통해 용리시켰다. 이어서, 카트리지를 MeOH 중의 7 M 암모니아 용액으로 용리시키고, 증발시키고, 잔류물을 메탄올로 분쇄하여, 표제 화합물을 백색 결정질 고체로서 수득하였다.
실시예 22: (2S,4S)-4-디메틸아미노-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-디에틸아미노-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드]
DMF (1.5 ㎖) 중의 이미다졸-1-카르복실산 (8-디에틸아미노-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드 (중간체 C, 60 mg, 0.162 mmol)에 (2S,4S)-4-디메틸아미노-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (중간체 Q, 28.1 mg, 0.179 mmol) 및 트리에틸아민 (0.068 ㎖, 0.487 mmol)을 첨가하였다. RM을 40℃에서 17시간 동안 교반한 다음, 정제용 HPLC로 바로 정제하였다 (방법 B). 생성물을 함유한 분획물을 본드 일루트 - SCX 카트리지를 통해 통과시켰다. 이어서, 카트리지를 MeOH 중의 7 M 암모니아 용액으로 용리시켰다. 용액을 증발시켜, 표제 화합물을 수득하였다. HPLC: tR 3.23 분 (방법 D). MS: M+H = 459.1.
실시예 23: 5-페닐-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-디에틸아미노-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드]
DMF (2 ㎖) 중의 이미다졸-1-카르복실산 (8-디에틸아미노-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드 (중간체 C, 65 mg, 0.176 mmol)의 현탁액에 5-페닐-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (특허 US 3164597, 실시예 42에 기재된 바와 같이 제조됨; 50.2 mg, 0.264 mmol) 및 트리에틸아민 (0.074 ㎖, 0.528 mmol)을 첨가하였다. RM을 40℃에서 2시간 동안 교반한 다음, 정제용 HPLC로 바로 정제하였다 (방법 B). 생성물을 함유한 분획물을 본드 일루트 - SCX 카트리지를 통해 통과시켰다. 이어서, 카트리지를 MeOH 중의 7 M 암모니아 용액으로 용리시켰다. 용액을 증발시키고, 잔류물을 DCM 중에서 분쇄하여, 표제 화합물을 황색 고체로서 수득하였다. LCMS: tR 0.99 분 및 M+H = 492.0 (방법 A2).
실시예 24: 아제티딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-tert-부틸-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드]
DMF (2 ㎖) 중의 이미다졸-1-카르복실산 (8-tert-부틸-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드 (중간체 A, 100 mg, 0.282 mmol)의 용액에 아제티딘-2-카르복실산 아미드 (56.5 mg, 0.564 mmol) 및 트리에틸아민 (0.118 ㎖, 0.846 mmol)을 첨가하였다. RM을 아르곤 대기 하에 실온에서 16시간 동안 교반한 다음, 정제용 HPLC로 바로 정제하였다 (방법 B). 생성물을 함유한 분획물을 본드 일루트 - SCX 카트리지를 통해 통과시켰다. 이어서, 카트리지를 MeOH 중의 7 M 암모니아 용액으로 용리시켰다. 용액을 증발시키고, 잔류물을 0.5％ 880 HN3를 함유하는 DCM/MeOH 95:5로 용리시키며 실리카겔 상의 플래쉬 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물을 황색 고체로서 수득하였다. HPLC: tR 3.55 분 (방법 D). MS: M+H = 387.1.
실시예 25: (S)-아제티딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-tert-부틸-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드]
(S)-아제티딘-2-카르복실산 아미드 (중간체 L, 68.1 mg, 0.680 mmol)를 실온에서 DMF (3 ㎖) 중의 이미다졸-1-카르복실산 (8-tert-부틸-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드 (중간체 A, 241 mg, 0.680 mmol) 및 트리에틸아민 (0.284 ㎖, 2.040 mmol)의 교반된 혼합물에 첨가하였다. RM을 실온에서 66시간 동안 방치한 다음, 정제용 HPLC로 바로 정제하였다 (방법 B). 생성물을 함유한 분획물을 증발시켜, CH3CN을 제거한 다음, NaHCO3로 염기성화하였다. 이어서, 수성 상을 DCM 중의 10％ MeOH로 4X 추출하고, 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 증발시켜 고체를 수득하고, 이를 MeOH/물로 분쇄하여, 표제 화합물을 회백색 결정질 고체로서 수득하였다. LCMS: tR 1.08분 및 M+H = 386.9 (방법 A3).
실시예 26: (2S,4S)-4-히드록시-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-디에틸아미노-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드]
DMF (2 ㎖) 중의 이미다졸-1-카르복실산 (8-디에틸아미노-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드 (중간체 C, 75 mg, 0.203 mmol)의 현탁액에 (2S,4S)-4-히드록시-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (중간체 R, 39.6 mg, 0.305 mmol) 및 트리에틸아민 (0.113 ㎖, 0.812 mmol)을 첨가하였다. RM을 40℃에서 2.5시간 동안 교반한 다음, 정제용 HPLC로 바로 정제하였다 (방법 B). 생성물을 함유한 분획물을 본드 일루트 - SCX 카트리지를 통해 통과시켰다. 이어서, 카트리지를 MeOH 중의 7 M 암모니아 용액으로 용리시켰다. 용액을 증발시켜, 표제 화합물을 황색 고체로서 수득하였다. HPLC: tR 3.44 분 (방법 D). MS: M+H = 432.1.
실시예 27: (2S,4R)-4-히드록시-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-디에틸아미노-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드]
DMF (2 ㎖) 중의 이미다졸-1-카르복실산 (8-디에틸아미노-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드 (중간체 C, 75 mg, 0.203 mmol)의 현탁액에 (2S,4R)-4-히드록시-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (중간체 S, 39.6 mg, 0.305 mmol) 및 트리에틸아민 (0.113 ㎖, 0.812 mmol)을 첨가하였다. RM을 40℃에서 4.5시간 동안 교반한 다음, 정제용 HPLC로 바로 정제하였다 (방법 B). 생성물을 함유한 분획물을 본드 일루트 - SCX 카트리지를 통해 통과하였다. 이어서, 카트리지를 MeOH 중의 7 M 암모니아 용액으로 용리시켰다. 용액을 증발시키고, 잔류물을 DCM으로부터 재결정화시켜, 표제 화합물을 황색 고체로서 수득하였다. HPLC: tR 3.31 분 (방법 D). MS: M+H = 432.1.
실시예 28: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(7-tert-부틸-4,5-디히드로-벤조[1,2-d;3,4-d']비스티아졸-2-일)-아미드]
L-프롤린아미드 (59.4 mg, 0.521 mmol) 및 TEA (0.121 ㎖, 0.868 mmol)를 DMF (1 ㎖) 중의 이미다졸-1-카르복실산 (7-tert-부틸-4,5-디히드로-벤조[1,2-d;3,4-d']비스티아졸-2-일)-아미드 (중간체 T, 156 mg, 0.434 mmol)에 첨가하였다. RM을 실온에서 10분 동안 교반하였다. 혼합물을 EtOAc/H2O로 추출하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 증발시켰다. 조 물질을 MPLC C18 H2O 0.1％ TFA/CH3CN 0.1％ TFA (구배 0 → 50％)로 크로마토그래피 처리하였다. 생성물을 함유한 분획물을 NaHCO3로 중화시키고, EtOAc로 추출하고, 디옥산으로부터 동결건조시켜, 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다 (M+H = 406; M-H = 404; tR 4.75 분 (방법 F).
실시예 29: (S)-2-메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(7-tert-부틸-4,5-디히드로-벤조[1,2-d;3,4-d']비스티아졸-2-일)-아미드]
(S)-2-메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (중간체 F, 7.7 mg, 0.060 mmol) 및 TEA (0.014 ㎖, 0.100 mmol)를 DMF (3 ㎖) 중의 이미다졸-1-카르복실산 (7-tert-부틸-4,5-디히드로-벤조[1,2-d;3,4-d']비스티아졸-2-일)-아미드 (중간체 T, 18 mg, 0.050 mmol)에 첨가하였다. RM을 실온에서 10분 동안 교반한 다음, EtOAc/H2O로 추출하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 증발시켰다. 조 물질을 MPLC C18 H2O 0.1％ TFA/CH3CN 0.1％ TFA (구배 0 → 50％)로 크로마토그래피 처리하였다. 생성물을 함유한 분획물을 NaHCO3로 중화시키고, EtOAc로 추출하고, 디옥산으로부터 동결건조시켜, 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다 (M+H = 420; M-H = 418; tR 4.875 분 (방법 F).
실시예 30: (S)-아제티딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(7-tert-부틸-4,5-디히드로-벤조[1,2-d;3,4-d']비스티아졸-2-일)-아미드]
(S)-아제티딘-2-카르복실산 아미드 (중간체 L, 37.1 mg, 0.370 mmol) 및 TEA (0.14 ㎖, 1.010 mmol)를 DMF (2 ㎖) 중의 이미다졸-1-카르복실산 (7-tert-부틸-4,5-디히드로-벤조[1,2-d;3,4-d']비스티아졸-2-일)-아미드 (중간체 T, 121 mg, 0.337 mmol)에 첨가하였다. RM을 5분 동안 교반한 다음, 실온에서 2일 동안 방치하였다. RM을 여과하고, 정제용 HPLC로 바로 정제하였다 (방법 E). 생성물을 함유한 분획물을 합하고, 300 mg 본드 일루트 - SCX 카트리지를 통해 여과하였다. 이어서, 카트리지를 MeOH 중의 7 M 암모니아 용액 (2 ㎖)으로 세척하였다. 여과액을 증발시켜, 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다 (M+H = 391.8; M-H = 389.8; tR 1.84 분 (방법 A3).
실시예 31: (2S,4R)-4-디메틸아미노-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(7-tert-부틸-4,5-디히드로-벤조[1,2-d;3,4-d']비스티아졸-2-일)-아미드]
(2S,4R)-4-디메틸아미노-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (중간체 B, 9.33 mg, 0.059 mmol) 및 TEA (0.019 ㎖, 0.135 mmol)를 DMF (1 ㎖) 중의 이미다졸-1-카르복실산 (7-tert-부틸-4,5-디히드로-벤조[1,2-d;3,4-d']비스티아졸-2-일)-아미드 (중간체 T, 19.4 mg, 0.054 mmol)에 첨가하였다. RM을 5분 동안 교반한 다음, 실온에서 밤새 방치하였다. RM을 여과하고, 정제용 HPLC로 바로 정제하였다 (방법 E). 생성물을 함유하는 분획물을 합하고, 300 mg 본드 일루트 - SCX 카트리지를 통해 여과하였다. 이어서, 카트리지를 MeOH 중의 7 M 암모니아 용액으로 세척하였다. 여과액을 증발시켜, 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다 (M+H = 449.1; M-H = 447.3; tR 1.47 분 (방법 A3).
실시예 32: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[7-(2-플루오로-1,1-디메틸-에틸)-4,5-디히드로-벤조[1,2-d;3,4-d']비스티아졸-2-일]-아미드}
L-프롤린아미드 (23.98 mg, 0.210 mmol) 및 TEA (0.080 ㎖, 0.573 mmol)를 DMF (1 ㎖) 중의 이미다졸-1-카르복실산 [7-(2-플루오로-1,1-디메틸-에틸)-4,5-디히드로-벤조[1,2-d;3,4-d']비스티아졸-2-일]-아미드 (중간체 U, 72.1 mg, 0.191 mmol)에 첨가하였다. RM을 5분 동안 교반한 다음, 실온에서 밤새 방치하였다. RM을 증발시킨 다음, MeOH (2 ㎖) 및 H2O (1 ㎖)로 분쇄하였다. 혼합물을 4℃로 냉각시켰다. 현탁액을 여과하고, 냉각 MeOH/H2O=2:1로 세척하고, 고체를 40℃에서 HV 하에 건조시켜, 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다 (M+H = 424.0; M-H = 422.1; tR 1.7 분 (방법 A3).
실시예 33: (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(7-시클로프로필메틸-4,5-디히드로-벤조[1,2-d;3,4-d']비스티아졸-2-일)-아미드]
L-프롤린아미드 (16.7 mg, 0.147 mmol) 및 TEA (0.027 ㎖, 0.196 mmol)를 DMF (1.5 ㎖) 중의 이미다졸-1-카르복실산 (7-시클로프로필메틸-4,5-디히드로-벤조 [1,2-;3,4-d']비스티아졸-2-일)-아미드 (중간체 V, 35 mg, 0.098 mmol)에 첨가하였다. RM을 실온에서 15분 동안 교반한 다음, EtOAc/H2O로 추출하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 증발시켰다. 조 물질을 MPLC C18 H2O 0.1％ TFA/CH3CN 0.1％ TFA (구배 0 → 50％)로 크로마토그래피 처리하였다. 생성물을 함유한 분획물을 NaHCO3로 중화시키고, EtOAc로 추출하고, 디옥산으로부터 동결건조시켜, 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다 (M+H = 404; M-H = 402; tR 4.49 분 (방법 F).
실시예 34: (2S,3S)-3-메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(7-tert-부틸-4,5-디히드로-벤조[1,2-d;3,4-d']비스티아졸-2-일)-아미드]
(2S,3S)-3-메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (중간체 D, 13.37 mg, 0.104 mmol) 및 TEA (0.039 ㎖, 0.278 mmol)를 DMF (2 ㎖) 중의 이미다졸-1-카르복실산 (7-tert-부틸-4,5-디히드로-벤조[1,2-d;3,4-d']비스티아졸-2-일)-아미드 (중간체 T, 25 mg, 0.070 mmol)에 첨가하였다. RM을 실온에서 10분 동안 교반한 다음, EtOAc/H2O로 추출하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 증발시켰다. 조 물질을 추가 정제 없이 디옥산으로부터 동결건조시켜, 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다 (M+H = 420.1; M-H = 418.1; tR 4.85 분 (방법 F).
실시예 35: (1S,5R)-2-아자-비시클로[3.1.0]헥산-1,2-디카르복실산 1-아미드 2-[(7-tert-부틸-4,5-디히드로-벤조[1,2-d;3,4-d']비스티아졸-2-일)-아미드]
중간체 D 대신에 중간체 O를 사용하여, 실시예 34에 기재된 바와 유사한 방식으로 표제 화합물을 합성하였다.
실시예 36: (2S,3S)-3-(아세틸아미노-메틸)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-tert-부틸-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드]
트리에틸아민 (0.339 mmol)을 실온에서, 이미다졸-1-카르복실산 (8-tert-부틸-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드 (중간체 A) (0.113 mmol) 및 (2S,3S)-3-(아세틸아미노-메틸)-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (단계 36.1) (0.135 mmol)의 용액에 첨가하였다. 85분 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제한 후, Et2O로 분쇄하여, 표제 화합물을 황색 고체로서 수득하였다.
단계 36.1: (2S,3S)-3-(아세틸아미노-메틸)-피롤리딘-2-카르복실산 아미드
MeOH (5 ㎖) 중의 (2S,3S)-3-(아세틸아미노-메틸)-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (단계 36.2) (0.48 mmol) 및 50％ H2O로 적신 활성탄 상의 10％ Pd (알드리치(Aldrich) 330108) (0.096 mmol)의 혼합물을 실온에서 6.5시간 동안 수소화하였다. 이어서, 반응 혼합물을 플루오로포어 막 필터 (0.2 ㎛ FG)를 통해 여과하고, 증발시켰다. 잔류물을 CH2Cl2 중에 용해시키고, 증발에 의해 건조시켜, 표제 화합물을 회백색 고체로서 수득하였다. ESI-MS: [M+H]+ 186; TLC: Rf = 0.08 (200:20:1 CH2Cl2/MeOH/농축 NH4OH).
단계 36.2: (2S,3S)-3-(아세틸아미노-메틸)-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 아미드
티오아세트산 (2.312 mmol)을 실온에서 (2S,3S)-3-아지도메틸-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (단계 36.3) (0.578 mmol)에 첨가하였다 (질소 가스가 형성됨). 16시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 Et2O로 희석시키고, 고체를 여과에 의해 제거하고, 여과액을 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여, 표제 화합물을 미황색 오일 (티올 악취를 가짐)로서 수득하였다. HPLC: tR = 3.71 분 (방법 H); LC-MS: tR= 0.64 분, [M+H]+ 290 (방법 I); TLC: Rf = 0.38 (200:20:1 CH2Cl2/MeOH/농축 NH4OH).
단계 36.3: (2S,3S)-3-아지도메틸-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 아미드
톨루엔 중의 트리메틸알루미늄 (2 M, 15.95 mmol)을 0℃에서 톨루엔 (2 ㎖) 중의 NH4Cl (15.95 mmol)의 혼합물에 적가하였다 (메탄 가스가 형성됨). 반응 혼합물을 실온이 되도록 가온하고, 15분 동안 추가로 교반한 다음, 톨루엔 (8 ㎖) 중의 (2S,3S)-3-아지도메틸-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 메틸 에스테르 (단계 36.4) (7.98 mmol) 용액으로 서서히 처리하였다. 18시간 후, 0℃에서 톨루엔 (2 ㎖) 중의 NH4Cl (15.95 mmol) 및 톨루엔 중의 트리메틸알루미늄 (2 M, 15.95 mmol)으로부터 제조된 추가의 시약을 첨가하였다. 44시간 동안 교반한 후, 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 1M HCl로 켄칭시킨 다음, CH2Cl2로 세척하였다 (3X). 수성상을 1:1의 NaHCO3 포화 용액/로셸(Rochelle) 염의 포화 용액으로 염기성화하고, THF로 추출하였다 (10X). 합한 유기층을 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 레디셉 (등록상표) 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제함으로써, 표제 화합물을 황색 오일로서 수득하였다. HPLC: tR = 2.50 분 (방법 G); ESI-MS: [M+H]+ 274; TLC: Rf = 0.26 (3:1 Hex/EtOAc).
단계 36.4: (2S,3S)-3-아지도메틸-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 메틸 에스테르
나트륨 아지드 (5.34 mmol)를 실온에서, DMF (30 ㎖) 중의 (2S,3R)-3-요오도메틸-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 메틸 에스테르 (단계 36.5) (3.56 mmol)의 용액에 첨가하였다. 18시간 후, 반응 혼합물을 물에 붓고, MTBE로 추출하였다 (2X). 합한 유기상을 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 레디셉 (등록상표) 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제함으로써, 표제 화합물을 갈색 오일로서 수득하였다. HPLC: tR = 3.26 분 (방법 G); ESI-MS: [M+H]+ 289.
단계 36.5: (2S,3R)-3-요오도메틸-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 메틸 에스테르
THF (10 ㎖) 중 [부트-3-에닐-((S)-1-페닐-에틸)-아미노]-아세트산 메틸 에스테르 [432555-77-6] (20.22 mmol)의 용액을 -78℃에서, 1:2 헥산/THF (30 ㎖) 중의 리튬 디이소프로필아미드 (24.26 mmol) 용액에 서서히 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃로 가온시키고, 1시간 동안 교반한 다음, -78℃로 재냉각시켰다. Et2O (40 ㎖) 중의 아연 브로마이드 (50.5 mmol) 용액을 첨가하고, 이어서 반응 혼합물을 실온으로 가온시켰다. 1시간 동안 교반한 후, 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 요오드 (22.24 mmol)를 조금씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반하고 실온에서 2시간 동안 추가로 교반하고, Et2O로 희석한 다음, Na2S2O3 포화 용액 및 NH4Cl 포화 용액으로 연속적으로 세척하였다. 수성층을 Et2O로 각각 역추출하였다. 합한 유기상을 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여, 표제 화합물을 적색 오일로서 수득하였다. HPLC: tR = 3.46 분 (방법 G); ESI-MS: [M+H]+ 374.
실시예 37: (2S,3S)-3-모르폴린-4-일메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-tert-부틸-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드]
트리에틸아민 (0.423 mmol)을 실온에서 DMF (0.5 ㎖) 중의 이미다졸-1-카르복실산 (8-tert-부틸-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드 (중간체 A) (0.141 mmol) 및 (2S,3S)-3-(아세틸아미노-메틸)-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (단계 37.1) (0.155 mmol)의 용액에 첨가하였다. 3시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여, 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다.
단계 37.1: (2S,3S)-3-모르폴린-4-일메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드
MeOH (5 ㎖) 중의 (2S,3S)-3-모르폴린-4-일메틸-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (단계 37.2) (1.046 mmol) 및 50％ H2O로 적신 활성탄 상의 10％ Pd (알드리치 330108) (0.105 mmol)의 혼합물을 실온에서 6.5시간 동안 수소화하였다. 이어서, 반응 혼합물을 플루오로포어 막 필터 (0.2 ㎛ FG)를 통해 여과하고, 증발시켰다. 잔류물을 CH2Cl2 중에 용해시키고, 증발에 의해 건조시켜, 표제 화합물을 무색 오일로서 수득하였다. ESI-MS: [M+H]+ 214; TLC: Rf = 0.14 (200:20:1 CH2Cl2/MeOH/농축 NH4OH).
단계 37.2: (2S,3S)-3-모르폴린-4-일메틸-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 아미드
톨루엔 중의 트리메틸알루미늄 (2 M, 2.89 mmol)을 0℃에서 톨루엔 (3 ㎖) 중의 NH4Cl (2.89 mmol) 혼합물에 적가하였다 (메탄 가스가 형성됨). 반응 혼합물을 실온이 되도록 가온하고, 15분 동안 추가로 교반한 다음, 톨루엔 (9 ㎖) 중의 (2S,3S)-3-모르폴린-4-일메틸-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 메틸 에스테르 (단계 37.3) (1.444 mmol) 용액으로 서서히 처리하였다. 18시간 후, 0℃에서 톨루엔 (2 ㎖) 중의 NH4Cl (2.89 mmol) 및 톨루엔 중의 트리메틸알루미늄 (2 M, 2.89 mmol)으로부터 제조된 추가의 시약을 첨가하였다. 60시간 동안 교반한 후, 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 1M HCl로 켄칭시킨 다음, CH2Cl2로 세척하였다 (3X). 수성상을 1:1의 NaHCO3 포화 용액/로셸 염의 포화 용액으로 염기성화하고, THF로 추출하였다 (10X). 합한 유기층을 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여, 표제 화합물을 황색 오일로서 수득하였다. HPLC: tR = 2.18 분 (방법 G); ESI-MS: [M+H]+ 318.
단계 37.3: (2S,3S)-3-모르폴린-4-일메틸-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 메틸 에스테르
CH3CN (24 ㎖) 중의 (2S,3R)-3-요오도메틸-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 메틸 에스테르 (단계 36.5) (7.07 mmol), K2CO3 (21.22 mmol) 및 모르폴린 (10.61 mmol)의 혼합물을 50℃에서 62시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 빙수에 붓고, EtOAc로 추출하였다 (3X). 합한 유기층을 물과 염수로 연속적으로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고 농축시켰다. 잔류물을 레디셉 (등록상표) 실리카겔 컬럼을 사용하여 정제함으로써, 표제 화합물을 황색 오일로서 수득하였다. HPLC: tR = 2.56 분 (방법 G); ESI-MS: [M+H]+ 333.
실시예 38: (2S,3R)-3-히드록시-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-tert-부틸-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드]
중간체 P 대신에 (2S,3R)-3-히드록시-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (문헌 [H. Fukushima et al. Bioorg. Med. Chem. 2004, 12, 6053]; [H. Ji et al. J. Med. Chem. 2006, 49(21), 6254]을 참고함)를 사용하여, 실시예 20에 기재된 바와 같은 방법론을 이용하여 표제 화합물을 합성하였다.
LCMS: tR = 1.45 분, M+H = 417.0, M-H = 415 (방법 J).
실시예 39: (2S,3R)-3-메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(7-tert-부틸-4,5-디히드로-벤조[1,2-d;3,4-d']비스티아졸-2-일)-아미드]
중간체 D 대신에 (2S,3R)-3-메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (중간체 P)를 사용하여, 실시예 34에 기재된 바와 같은 방법론을 이용하여 표제 화합물을 합성하였다.
LCMS: tR = 1.32 분, M+H = 420.0, M-H = 418.1 (방법 J).
<합성 반응식>
실시예 40: (2S,3R)-3-메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-메틸-4H-5-옥사-1-티아-3,7-디아자-시클로펜타[a]나프탈렌-2-일)-아미드]
이미다졸-1-카르복실산 (8-메틸-4H-5-옥사-1-티아-3,7-디아자-시클로펜타[a]나프탈렌-2-일)-아미드 (단계 40.1)로부터 출발하여, 실시예 20의 제법에 기재된 합성 방법론을 이용하여 표제 화합물을 제조하였다.
단계 40.1: 이미다졸-1-카르복실산 (8-메틸-4H-5-옥사-1-티아-3,7-디아자-시클로펜타[a]나프탈렌-2-일)-아미드
중간체 A의 제법에 대해 기재된 바와 같은 합성 방법론을 이용하여, 이미다졸-1-카르복실산 (8-메틸-4H-5-옥사-1-티아-3,7-디아자-시클로펜타[a]나프탈렌-2-일)-아미드를 N-(8-메틸-4H-5-옥사-1-티아-3,7-디아자-시클로펜타[a]나프탈렌-2-일)-아세트아미드 (단계 40.2)로부터 제조하였다.
단계 40.2: N-(8-메틸-4H-5-옥사-1-티아-3,7-디아자-시클로펜타[a]나프탈렌-2-일)-아세트아미드
3 ㎖ DMF 중의 463 mg (1.53 mmol) N-[4-(4-브로모-6-메틸-피리딘-3-일옥시메틸)-티아졸-2-일]-아세트아미드 (단계 40.3), 900 mg (2.71 mmol) 탄산세슘, 30.4 mg (0.135 mmol) 팔라듐 아세테이트 및 81 mg (0.271 mmol) 트리부틸포스핀 테트라플루오로보레이트의 혼합물을 115℃에서 7시간 동안 아르곤 하에 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 물에 붓고, EtOAc를 첨가하고, 하이플로 수퍼 겔(Hyflo Super Gel) 매질 (플루카(Fluka) 56678)의 층 위에서 여과한 후에, 여과액을 EtOAc로 추출하였다 (2X). 합한 유기층을 물과 염수로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하였다. 여과액을 진공하에 농축시켜, 잔류물을 남기고, 이를 실리카겔 (= 헵탄 중 ~100％ EtOAc) 상에서 정제하여, 93 mg의 표제 화합물을 고체로서 수득하였다. LCMS: tR = 0.27 분, M+H = 262, M-H 260 (방법 J).
단계 40.3: N-[4-(4-브로모-6-메틸-피리딘-3-일옥시메틸)-티아졸-2-일]-아세트아미드
DMF (5 ㎖) 중의 270 mg (1.44 mmol) 4-브로모-6-메틸-피리딘-3-올 (단계 40.4)의 용액에 44.8 mg NaH (1.87 mmol)를 첨가하고, 이 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 301 mg (1.58 mmol) 2-아세트아미도-4-(클로로메틸)-1,3-티아졸 (아폴로(Apollo) OR15549)을 첨가하고, 실온에서 17시간 동안 교반을 더 지속하였다. 반응 혼합물을 물에 붓고, EtOAc로 추출하였다 (2X). 합한 유기층을 물 및 염수로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하였다. 여과액을 진공하에 농축시켜, 추가 정제 없이 충분히 순수한 것으로 간주되는 350 mg의 표제 화합물 (백색 고체)을 수득하였다. LCMS: tR = 1.36 분, M+H = 342 (79Br), 344 (81Br) (방법 J).
단계 40.4: 4-브로모-6-메틸-피리딘-3-올
920 mg (3.05 mmol) 4-브로모-5-메톡시메톡시-2-메틸-피리딘 (단계 40.5)을 5 ㎖ MeOH 중에 용해시키고, 농축 HCl (1 ㎖, 12 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 진공하에 농축시키면서, (히드로클로라이드로서의) 표제 화합물을 결정화시켰다. 여과를 통해 570 mg 백색 결정을 수득하였다. 1H-NMR (d6-DMSO, 400 MHz): 8.19 (s, 1H), 8.04 (s, 1H), 2.53 (s, 3H).
단계 40.5: 4-브로모-5-메톡시메톡시-2-메틸-피리딘
10 ㎖ THF 중의 1000 mg (6.53 mmol) 5-메톡시메톡시-2-메틸-피리딘 (문헌 [J.-P. Behr et al. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2003, 13(10), 1713]을 참고함)의 용액을 -78℃로 냉각시키고, 여기에 4.03 ㎖ (6.85 mmol) t-BuLi (펜탄 중의 1.7M 용액)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 아르곤 하에 1시간 동안 교반한 다음, (5 ㎖ THF 중의) 2.126 g (6.53 mmol) 1,2-디브로모테트라클로로에탄을 첨가하였다. -78℃에서 1시간 동안 교반을 지속하고, 반응 혼합물을 실온으로 가온시켰다. NH4Cl 포화 용액을 첨가하고, 수성 혼합물을 EtOAc로 추출하였다 (2X). 합한 유기층을 H2O 및 염수로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하였다. 여과액을 진공하에 농축시켜 잔류물을 남기고, 이를 실리카겔 상에서 정제하여 (EtOAc / 헥산 = 1:1), 920 mg의 표제 화합물을 오일로서 수득하였다. LCMS: tR = 0.29 분, M+H = 232 (79Br), 234 (81Br) (방법 J).
실시예 41: (2S,3S)-3-모르폴린-4-일메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(7-tert-부틸-4,5-디히드로-벤조[1,2-d;3,4-d']비스티아졸-2-일)-아미드]
중간체 D 대신에 (2S,3S)-3-모르폴린-4-일메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (단계 37.1)를 사용하여, 실시예 34에 기재된 바와 같은 방법론을 이용하여 표제 화합물을 합성하였다.
실시예 42: (2S,3R)-3-메톡시메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-tert-부틸-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드]
트리에틸아민 (0.525 mmol)을 실온에서 DMF (0.7 ㎖) 중의 이미다졸-1-카르복실산 (8-tert-부틸-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드 (중간체 A) (0.175 mmol) 및 (2S,3R)-3-메톡시메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (단계 42.1) (0.192 mmol)의 용액에 첨가하였다. 3시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여, 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다.
단계 42.1: (2S,3R)-3-메톡시메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드
(2S,3S)-3-모르폴린-4-일메틸-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 대신에 (2S,3R)-3-메톡시메틸-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (단계 42.2)를 사용하여, 표제 화합물을 단계 37.1에 기재된 절차와 유사하게 제조하였다.
표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-MS: [M+H]+ 159.
단계 42.2: (2S,3R)-3-메톡시메틸-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 아미드
(2S,3S)-3-모르폴린-4-일메틸-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 메틸 에스테르 대신에 (2S,3R)-3-메톡시메틸-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 메틸 에스테르 (단계 42.3)를 사용하여, 표제 화합물을 단계 37.2에 기재된 절차와 유사하게 제조하였다.
표제 화합물을 황색 오일로서 수득하였다. HPLC: tR = 2.35 분 (방법 G); LC-MS: tR= 0.47 분, [M+H]+ 263 (방법 K); TLC: Rf = 0.05 (1:1 헵탄/EtOAc).
단계 42.3: (2S,3R)-3-메톡시메틸-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 메틸 에스테르
톨루엔 (79 ㎖) 중의 (3aR,6aS)-1-((S)-1-페닐-에틸)-헥사히드로-푸로[3,4-b]피롤-6-온 [805246-48-4] (17.05 mmol), KOH (71.60 mmol) 및 요오도메탄 (68.20 mmol)의 혼합물을 80℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물과 MTBE 사이에 분배하였다. 수성층을 MTBE으로 추출하였다 (3X). 합한 유기층을 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여, 표제 화합물을 황색 오일로서 수득하였다. HPLC: tR = 2.98 분 (방법 G); LC-MS: tR= 0.69 분, [M+H]+ 278 (방법 K); TLC: Rf = 0.25 (1:3 헵탄/EtOAc).
실시예 43: (2S,3S)-3-디메틸아미노메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-tert-부틸-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드]
트리에틸아민 (0.305 mmol)을 실온에서 DMF (0.3 ㎖) 중의 이미다졸-1-카르복실산 (8-tert-부틸-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드 (중간체 A) (0.102 mmol) 및 (2S,3S)-3-디메틸아미노메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (단계 43.1) (0.102 mmol)의 용액에 첨가하였다. 0.5시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 농축시키고, 50℃에서 밤새 진공하에 건조시켰다. 잔류물을 EtOAc (1 ㎖) 중에 현탁시키고, 여과하고, 진공하에 건조시켜, 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다.
단계 43.1: (2S,3S)-3-디메틸아미노메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드
(2S,3S)-3-모르폴린-4-일메틸-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 대신에 (2S,3S)-3-디메틸아미노메틸-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (단계 43.2)를 사용하여, 표제 화합물을 단계 37.1에 기재된 절차와 유사하게 제조하였다. 또한, 4 bar 기압하에 수소화를 수행하였다.
표제 화합물을 황색 오일로서 수득하였다. ESI-MS: [M+H]+ 172.
단계 43.2: (2S,3S)-3-디메틸아미노메틸-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 아미드
MeOH (3.3 ㎖) 중의 (2S,3S)-3-아미노메틸-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (단계 43.3) (0.418 mmol), 나트륨 시아노보로하이드라이드 (2.86 mmol) 및 37％ 수성 포름알데히드 (2.14 mmol)의 혼합물을 55℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 농축시켰다. 레디셉 (등록상표) 실리카겔 컬럼을 사용하여 잔류물을 정제하여, 표제 화합물을 백색 발포체로서 수득하였다. HPLC: tR 3.59 분 (방법 H); LC-MS: tR= 0.86 분, [M+H]+ 276 (방법 I); TLC: Rf = 0.13 (9:1 CH2Cl2/MeOH).
단계 43.3: (2S,3S)-3-아미노메틸-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 아미드
THF (3 ㎖) 중의 (2S,3S)-3-아지도메틸-1-((S)-1-페닐-에틸)-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (단계 36.3) (0.723 mmol) 및 트리페닐포스핀 (0.867 mmol)의 혼합물을 실온에서 25시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜, 조 표제 화합물을 담갈색 고체로서 수득하였다. HPLC: tR 3.53 분 (방법 H); ESI-MS: [M+H]+ 248.
실시예 44: (2S,3R)-3-메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[8-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일]-아미드}
트리에틸아민 (1.714 mmol)을 실온에서 DMF (1.5 ㎖) 중의 이미다졸-1-카르복실산 [8-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일]-아미드 (단계 44.1) (0.490 mmol) 및 (2S,3R)-3-메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (중간체 P) (0.979 mmol)의 용액에 첨가하였다. 1.5시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 농축시켰다. 잔류물을 NaHCO3의 포화 용액으로 희석시키고, EtOAc로 추출하였다 (2X). 합한 유기층을 물과 염수로 연속적으로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고 농축시켰다. 레디셉 (등록상표) 실리카겔 컬럼을 사용하여 잔류물을 정제함으로써, 표제 화합물을 베이지색 고체로서 수득하였다.
단계 44.1: 이미다졸-1-카르복실산 [8-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일]-아미드
단계 A.3에서 tert-부틸아미딘 히드로클로라이드 대신에 3,3,3-트리플루오로-2,2-디메틸-프로피온아미딘 히드로클로라이드 (단계 44.2)를 사용하여, 표제 화합물을 중간체 A에 대해 기재된 절차와 유사하게 제조하였다.
표제 화합물을 베이지색 고체로서 수득하였다. HPLC: tR = 6.73 분 (방법 H); LCMS: tR= 1.11 분, [M+H]+ 373 (방법 J). 유의사항: 특징화의 목적으로, 표제 화합물을 MeOH 중에 용해시켜 메틸 카르바메이트 유도체를 수득하였다.
단계 44.2: 3,3,3-트리플루오로-2,2-디메틸-프로피온아미딘 히드로클로라이드
3,3,3-트리플루오로-2,2-디메틸-프로피오니트릴 (단계 44.3) (12.40 mmol)을 실온에서 나트륨 메톡시드 (48.40 mmol 나트륨 금속 및 102 ㎖ MeOH로부터 새로 제조됨)의 용액에 첨가하였다. 4시간 후, 아세트산 (48.40 mmol)에 이어서 NH4Cl (14.88 mmol)을 서서히 첨가한 다음, 반응 혼합물을 40시간 동안 70℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 농축시킨 (40℃, 100 mbar) 후, 잔류물을 아세톤 중에 현탁시키고, 여과하고, 진공하에 건조시켜, 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-MS: [M+H]+ 155.
단계 44.3: 3,3,3-트리플루오로-2,2-디메틸-프로피오니트릴
3,3,3-트리플루오로-2,2-디메틸-프로피온아미드 (단계 44.4) (121.2 mmol) 및 오산화인 (121.2 mmol)의 혼합물을 서서히 200℃로 가열하고, 생성된 증류액을 수집하였다. 표제 화합물을 무색 액체로서 수득하였다.
단계 44.4: 3,3,3-트리플루오로-2,2-디메틸-프로피온아미드
옥살릴 클로라이드 (140.8 mmol)를 0℃에서 CH2Cl2 (128 ㎖) 중의 3,3,3-트리플루오로-2,2-디메틸-프로피온산 [889940-13-0] (128 mmol) 용액에 적가하였다. 가스 발생이 관찰될 때까지 몇 방울의 DMF를 첨가한 다음, 30분 동안 교반을 지속하였다. 실온으로 가온시키고 밤새 교반한 후, 반응 혼합물을 농축시켰다 (40℃, 00 mbar). 잔류물을 THF (128 ㎖) 중에 용해시키고, 0℃로 냉각시킨 다음, 수성 암모니아 (64 ㎖)의 농축 용액으로 서서히 처리하였다. 0℃에서 30분 동안 교반하고, 이어서 실온에서 4시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 그의 부피의 반으로 농축시켜, 걸쭉한 현탁액을 수득하였다. 여과하고 건조시킨 후, 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다. ESI-MS: [M+H]+ 156.
실시예 45: (2S,3R)-3-메톡시메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[8-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일]-아미드}
트리에틸아민 (1.714 mmol)을 실온에서 DMF (1.5 ㎖) 중의 이미다졸-1-카르복실산 [8-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일]-아미드 (단계 44.1) (0.490 mmol) 및 (2S,3R)-3-메톡시메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (단계 42.1) (0.0.979 mmol)의 용액에 첨가하였다. 2시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 농축시켰다. 잔류물을 NaHCO3의 포화 용액으로 희석시키고, EtOAc로 추출하였다 (2X). 합한 유기층을 물과 염수로 연속적으로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고 농축시켰다. 레디셉 (등록상표) 실리카겔 컬럼을 사용하여 잔류물을 정제하여, 표제 화합물을 베이지색 고체로서 수득하였다.
실시예 46: (2S,3R)-3-메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-tert-부틸-4H-5-옥사-1-티아-3,7-디아자-시클로펜타[a]나프탈렌-2-일)-아미드]
실시예 40의 제법에 대해 기재된 바와 같은 합성 방법론을 이용하여, 표제 화합물을 2-tert-부틸-5-메톡시메톡시-피리딘으로부터 제조하였다. 출발 물질인 2-tert-부틸-5-메톡시메톡시-피리딘을 하기 기재된 바와 같이, 2-브로모-5-메톡시메톡시-피리딘으로부터 제조하였다:
2-tert-부틸-5-메톡시메톡시-피리딘:
15 ㎖ 무수 THF 중의 6.69g (74.7 mmol) 구리(I)시안화물을 -75℃로 냉각시키고, 여기에 149 ㎖ (149 mmol)의 1M tert-부틸마그네슘 클로라이드 용액을 적가하였다. 40분 동안 계속 교반하였다. 그 후, 30 ㎖ 무수 THF 중에 용해된 2-브로모-5-메톡시메톡시-피리딘 4.07g (18.67 mmol) (Zhong, W. et al. WO2008147547을 참고함)을 적가하였다. 반응 혼합물을 -75℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 실온이 되도록 하고, 교반을 6시간 더 지속하였다. 이어서, 30 ㎖의 25％ 수성 암모니아를 반응 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 여과하고, CH2Cl2로 2회 추출하였다. 합한 유기층을 물로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 진공하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 (EtOAc, 헵탄) 상에서 크로마토그래피에 의해 정제하여, 2.64 g의 순수한 표제 화합물을 오일로서 수득하였다. LCMS: tR = 0.55 분, M+H = 196 (방법 K).
실시예 47: (2S,3S)-3-디메틸아미노메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-tert-부틸-4H-5-옥사-1-티아-3,7-디아자-시클로펜타[a]나프탈렌-2-일)-아미드]
합성 마지막 단계에서 (2S,3R)-3-메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 대신에 (2S,3S)-3-디메틸아미노메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (단계 43.1)를 사용하고, 실시예 46의 제법에 대해 기재된 합성 방법론을 이용하여 표제 화합물을 제조하였다.
실시예 48: (2S,3R)-3-메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[8-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)-4H-5-옥사-1-티아-3,7-디아자-시클로펜타[a]나프탈렌-2-일]-아미드}
실시예 40 및 42의 제법에 대해 기재된 바와 같은 합성 방법론을 이용하여, 4-브로모-5-메톡시메톡시-2-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)-피리딘으로부터 출발하여 표제 화합물을 제조하였다.
4-브로모-5-메톡시메톡시-2-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)-피리딘을 하기와 같이 제조하였다:
a) 4-브로모-5-메톡시메톡시-2-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)-피리딘:
표제 화합물을 실시예 40, 단계 40.5의 제법에 대해 기재된 바와 같은 합성 방법론을 이용하여, 오일로서 제조하였다. LCMS (방법 L): tR = 1.26 분, M+H = 328 (79Br), 330 (81Br).
b) 5-메톡시메톡시-2-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)-피리딘
1.7 g (4.13 mmol) 메탄술폰산 2,2,2-트리플루오로-1-(5-메톡시메톡시-피리딘-2-일)-1-메틸-에틸 에스테르를 20 ㎖ 디클로로메탄 중에 용해시켰다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 여기에 2.065 ㎖ (4.13 mmol) 트리메틸알루미늄을 서서히 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 20시간 동안 교반하였다. 그 후, 물을 서서히 첨가하고, 혼합물을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기층을 물과 염수로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 진공하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 (EtOAc, 헵탄) 상에서 크로마토그래피에 의해 정제하여, 0.55 g의 순수한 표제 화합물을 수득하였다. LCMS (방법 L): tR = 1.09 분, M+H = 250.
c) 메탄술폰산 2,2,2-트리플루오로-1-(5-메톡시메톡시-피리딘-2-일)-1-메틸-에틸 에스테르
6 ㎖ 무수 THF 중의 0.213 g (8.44 mmol) 수소화나트륨의 교반 혼합물에, 1.06 g (4.22 mmol) 1,1,1-트리플루오로-2-(5-메톡시메톡시-피리딘-2-일)-프로판-2-올 (4.9 ㎖ 무수 THF 중에 용해됨)을 0℃에서 적가하였다. 첨가 완료 후, 실온에서 3시간 동안 계속 교반하였다. 이어서, 메탄술포닐 클로라이드 (7.3 ㎖ 무수 THF 중에 용해됨)를 실온에서 첨가하고, 2시간 동안 계속 더 교반하였다. 이어서, 물 및 포화 NaHCO3 용액을 첨가하였다. 이 혼합물을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기층을 물과 염수로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 진공하에 농축시켜, 1.7 g의 표제 화합물을 수득하고, 이를 다음 단계에서 바로 사용하였다. LCMS (방법 L): tR = 0.96 분, M+H = 330.
d) 1,1,1-트리플루오로-2-(5-메톡시메톡시-피리딘-2-일)-프로판-2-올
15㎖ THF 중의 1.48 g (4.58 mmol) 5-메톡시메톡시-2-(2,2,2-트리플루오로-1-메틸-1-트리메틸실라닐옥시-에틸)-피리딘 및 5㎖ (10 mmol) 2N HCl의 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 그 후, 반응 혼합물을 물에 붓고, 2N HCl을 첨가하여 1 내지 2의 pH로 조정하였다. 반응 혼합물을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기층을 물과 염수로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 진공하에 농축시켜, 1.06g의 표제 화합물을 오일로서 수득하고 (88％ 순도), 이를 다음 단계에서 정제 없이 사용하였다. LCMS (방법 L): tR = 0.88 분, M+H = 252.
e) 5-메톡시메톡시-2-(2,2,2-트리플루오로-1-메틸-1-트리메틸실라닐옥시-에틸)-피리딘
9 ㎖ DMF 중의 1.12 g (6.18 mmol) 1-(5-메톡시메톡시-피리딘-2-일)-에탄온, 1.055 g (7.42 mmol) 트리메틸(트리플루오로메틸)실란 및 0.025 g (0.309 mmol) 나트륨 아세테이트의 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 그리고 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 그 후, 반응 혼합물을 물에 붓고, 2N HCl을 첨가하여 1 내지 2의 pH로 조정하였다. 반응 혼합물을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기층을 물과 염수로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 진공하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 (EtOAc, 헵탄) 상에서 크로마토그래피에 의해 정제하여, 1.87 g의 순수한 표제 화합물을 오일로서 수득하였다. LCMS (방법 L): tR = 1.38분, M+H = 324.
f) 1-(5-메톡시메톡시-피리딘-2-일)-에탄온:
NaH를 0℃에서 15 ㎖ DMF 중의 1 g (7.29 mmol) 1-(5-히드록시-피리딘-2-일)-에탄온 (아니켐(Anichem)) 용액에 첨가하였다. 이 혼합물을 1시간 동안 교반한 후, 0.78 ㎖ (8.75 mmol) MOMCl을 0℃에서 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물에 붓고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기층을 물과 염수로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 진공하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 (EtOAc, 헵탄) 상에서 크로마토그래피에 의해 정제하여, 1.12 g의 순수한 표제 화합물을 오일로서 수득하였다. LCMS (방법 L): tR = 0.66 분, M+H = 182.
실시예 49: (2S,3R)-3-메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[7-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)-4,5-디히드로-벤조[1,2-d;3,4-d']비스티아졸-2-일]-아미드}
실시예 39의 제법에 대해 기재된 바와 같은 합성 방법론을 이용하여, 표제 화합물을 2,2-디메틸-티오프로피온아미드로부터 제조하였다. 출발 물질인 3,3,3-트리플루오로-2,2-디메틸-티오프로피온아미드는 하기에 기재된 바와 같이 제조하였다:
3,3,3-트리플루오로-2,2-디메틸-티오프로피온아미드의 제법:
a) 3,3,3-트리플루오로-2,2-디메틸-프로피온아미드
50 ㎖ CH2Cl2 중의 2 g (12.81 mmol) 3,3,3-트리플루오로-2,2-디메틸프로피온산 (알드리치), 2.077 g (12.81 mmol) 카르보닐-디이미다졸 및 5.55 ㎖ (64.1 mmol) 수성 암모니아의 혼합물을 실온에서 20시간 동안 교반하였다. 그 후, 디에틸 에테르를 첨가하고, 생성된 혼합물을 0.1 N HCl, 0.1 N NaOH, 물 및 염수로 세척하였다. 유기층을 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 진공하에 농축시켜, 1.15 g의 표제 화합물을 백색 결정으로서 수득하고, 이를 다음 단계에서 추가 정제 없이 사용하였다. MS: M+H = 156.
b) 3,3,3-트리플루오로-2,2-디메틸-티오프로피온아미드
32 ㎖ 무수 THF 중의 1.05 g (6.77 mmol) 3,3,3-트리플루오로-2,2-디메틸-프로피온아미드 및 1.48 g (3.66 mmol) 라웨슨(Lawesson) 시약의 혼합물을 환류 온도에서 20시간 동안 교반하였다. 그 후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 진공하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 (헵탄, EtOAc) 상에서 크로마토그래피에 의해 정제하여, 0.81 g의 표제 화합물을 순수한 백색 결정으로서 수득하였다. MS: M+H = 172.
합성의 마지막 단계에서 (2S,3R)-3-메톡시메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (단계 42.1)를 사용하여, 동일한 방식으로 하기의 실시예를 제조하였다:
실시예 50: (2S,3R)-3-메톡시메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[7-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)-4,5-디히드로-벤조[1,2-d;3,4-d']비스티아졸-2-일]-아미드}
실시예 51: (2S,3S)-3-디메틸아미노메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(7-tert-부틸-4,5-디히드로-벤조[1,2-d;3,4-d']비스티아졸-2-일)-아미드]
실시예 39의 제법에 대해 기재된 합성 방법론을 이용하고, 합성의 마지막 단계에서 (2S,3R)-3-메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 대신에 (2S,3S)-3-디메틸아미노메틸-피롤리딘-2-카르복실산 아미드 (단계 43.1)를 사용하여 표제 화합물을 제조하였다.
PI3
키나제
억제제로서의 효능
PI3K 키나제글로(KinaseGlo) 검정: 화합물 희석액 50 nL를 흑색 384-웰 저용적 비결합 스티렌 (NBS) 플레이트 (코스타(Costar) 카탈로그 번호 NBS#3676)에 분산시켰다. 메탄올 중 10 mg/㎖ 용액으로서 제공된 L-a-포스파티딜이노시톨 (PI)을 유리 튜브로 옮기고, 질소 빔하에 건조시켰다. 이어서, 이를 볼텍싱함으로써 3％ 옥틸글루코시드 (OG)에 재현탁시키고, 4℃에서 보관하였다. 키나제글로 발광 키나제 검정 (프로메가(Promega), 미국 위스콘신주 메디슨)은 키나제 반응 후 용액에 잔류하는 ATP의 양을 정량함으로써 키나제 활성을 측정하는 균일 HTS 방법이다.
PI/OG와 PI3K 아형의 혼합물 5 ㎕를 첨가하였다 (표 1). 10 mM TRIS-HCl (pH 7.5), 3 mM MgCl2, 50 mM NaCl, 0.05％ CHAPS, 1 mM DTT 및 1 μM ATP를 최종 부피 10 ㎕로 함유하는 ATP 혼합물 5 ㎕를 첨가하여 키나제 반응을 개시하였고, 실온에서 반응이 일어났다. 키나제글로 10 ㎕를 사용하여 반응을 중단시키고, 10분 후에 플레이트를 시너지2(Synergy2) 판독기에서 웰 당 0.1 초의 통합 시간을 사용하여 판독하였다. 2.5 μM의 팬(pan)-클래스 1 PI3 키나제 억제제 (표준물)를 검정 플레이트에 첨가하여 키나제 반응의 100％ 억제를 생성하였고, 0％ 억제는 용매 비히클 (물 중 90％ DMSO)에 의해 제공되었다. 표준물을 기준 화합물로서 사용하였고, 16 희석점의 형태로 이벌식으로 모든 검정 플레이트에 포함되었다.
<표 1> 키나제글로에 의한 PI3K: 검정 조건 및 시약 프로토콜
PI3K의 클로닝
PI3Kα, PI3Kβ 및 PI3Kδ 구조체는 p85α iSH2 도메인 및 각 p110 이소형의 융합물이다. p85α 단편 및 p110 이소형 유전자는, 하기 기재된 바와 같이 태반, 고환 및 뇌로부터의 시판되는 RNA로부터 RT-PCR에 의해 생성된 제1 가닥 cDNA로부터 PCR에 의해 생성되었다. PI3Kγ 구조체는 영국 캠브리지 소재의 엠알씨 래버러토리즈 오브 몰레큘라 바이올로지(MRC Laboratory of Molecular Biology)의 로저 윌리엄스 랩(Roger Williams lab) (2003년 11월)으로부터 입수하였고, 문헌 [Pacold, Michael E.; Suire, Sabine; Perisic, Olga; Lara-Gonzalez, Samuel; Davis, Colin T.; Walker, Edward H.; Hawkins, Phillip T.; Stephens, Len; Eccleston, John F.; Williams, Roger L. Crystal structure and functional analysis of Ras binding to its effector phosphoinositide 3-kinase gamma. Cell (2000), 103(6), 931-943)]에 기재되어 있다.
PI3Kα 구조체 및 단백질
BV1075: 바쿨로바이러스 BV-1075에 대한 구조체는 벡터 pBlueBac4.5에 클로닝된 p85 단편 및 p110α 단편으로 이루어진 3-부분 라이게이션에 의해 생성되었다. p85 단편은 Nhe/Spe에 의해 절단된 플라스미드 p1661-2로부터 유래되었다. 클론으로부터 유래된 p110α 단편은 서열분석에 의해 확인되었고, SpeI/HindIII 단편으로서 LR410에 사용되었다. 바쿨로바이러스 발현 벡터 LR410의 생성을 위해, 삽입체를 게이트웨이(Gateway)에 적합화된 pBlueBac4.5 (인비트로젠(Invitrogen)) 벡터로 전달하는 게이트웨이 LR 반응을 이용하였다. 클로닝 벡터 pBlueBac4.5 (인비트로젠)를 Nhe/HindIII에 의해 절단하였다. 이와 같이 하여, 구조체 PED 153.8이 생성되었다. p85 성분 (iSH2)은 주형으로서의 ORF 318 (상기 기재됨), 및
1개의 전방향 프라이머 KAC1028
2개의 역방향 프라이머 KAC1029
p110α 클로닝 단편은 Spe I 및 HindIII에 의한 클론 LR410 (상기 참조)의 효소적 절단에 의해 생성되었다. SpeI 부위는 p110α 유전자의 코딩 영역에 있다. 생성된 단편을 서브-클로닝을 위해 겔-단리 및 정제하였다. 클로닝 벡터 pBlueBac4.5 (인비트로젠)는 Nhe 및 HindIII에 의한 효소적 절단에 의해 제조되었다. 절단된 벡터를 퀴아젠(Qiagen) 칼럼으로 정제한 후, 송아지 창자 알칼리 포스파타제 (CIP) (바이오랩스(BioLabs))로 탈포스포릴화시켰다. CIP 반응을 완료한 후, 절단된 벡터를 다시 칼럼 정제하여, 최종 벡터를 생성하였다. 3-부분 라이게이션을 로슈 래피드(Roche Rapid) 리가제 및 제조업체의 설명서를 사용하여 수행하였다. 최종 플라스미드를 서열분석에 의해 확인하였다.
키나제 도메인.
BV 1075의 단백질 서열:
PI3Kβ 구조체 및 단백질
BV949: p85 PI3Kα, PI3Kβ 및 PI3Kδ 서브유닛의 내부 SH2 도메인 (iSH2)을 위한 PCR 생성물 및 전장 p110β 서브유닛을 위한 PCR 생성물을 생성하여, 중첩 PCR에 의해 융합시켰다. iSH2 PCR 생성물은 태반, 고환 및 뇌로부터의 시판되는 인간 RNA로부터 RT-PCR에 의해 생성된 제1 가닥 cDNA (클론테크(Clontech))로부터
먼저 프라이머 gwG130-p01 
및
gwG130-p02 
를 사용하여 수득하였다. 후속적으로, 2차 PCR 반응에서, 게이트웨이 재조합 AttB1 부위 및 링커 서열을 각각
프라이머 gwG130-p03
및 gwG130-p05
를 사용하여 p85 iSH2 단편의 5' 말단 및 3' 말단에 부가하였다. p110β 단편은 주형으로서 p110β 클론 (서열이 확인된 미지의 공급원으로부터)을 사용하고, 링커 서열 및 p110β의 5' 말단을 함유하는 프라이머 gwG130-p04
키나제 도메인.
BV949의 단백질 서열:
키나제 도메인.
PI3Kγ 구조체 및 단백질
구조체는 영국 캠브리지 소재의 엠알씨 래버러토리즈 오브 몰레큘라 바이올로지의 로저 윌리엄스 랩 (2003년 11월)으로부터 입수하였다. 상기 구조체는 문헌 [Pacold, Michael E.; Suire, Sabine; Perisic, Olga; Lara-Gonzalez, Samuel; Davis, Colin T.; Walker, Edward H.; Hawkins, Phillip T.; Stephens, Len; Eccleston, John F.; Williams, Roger L. Crystal structure and functional analysis of Ras binding to its effector phosphoinositide 3-kinase gamma. Cell (2000), 103(6), 931-943)]에 기재되어 있다. 구조체에는 N-말단 144 aa가 결여되어 있다.
BV950의 단백질 서열:
PI3Kδ 구조체 및 단백질
BV1060: p85 서브유닛의 내부 SH2 도메인 (iSH2)에 대한 PCR 생성물 및 전장 p110δ 서브유닛에 대한 PCR 생성물을 생성하여, 중첩 PCR에 의해 융합시켰다. iSH2 PCR 생성물은 주형으로서의 ORF318 (상기 참조), 및 프라이머 gwG130-p03
및 gwG154-p04
를 사용하여 생성하였다. p110δ 단편은 태반, 고환 및 뇌로부터의 시판되는 인간 RNA로부터 RT-PCR에 의해 생성된 제1 가닥 cDNA (클론테크)로부터
먼저 프라이머 gwG154-p01 
및 gwG154-p02 
를 사용하여 수득하였다. 후속적인 PCR 반응에서, 링커 서열 및 히스티딘 태그를 각각 프라이머 gw154-p03
및 gwG154-p06
을 사용하여 p110δ 단편의 5' 말단 및 3' 말단에 부가하였다. p85-iSH2/p110δ 융합 단백질은 상기 언급된 gwG130-p03 프라이머, 및 중첩 히스티딘 태그 및 게이트웨이 (인비트로젠) AttB2 재조합 서열을 함유하는 프라이머
를 사용하여 iSH2 단편의 3' 말단 및 p110δ 단편의 5' 말단에서 중첩 링커에 의해 제3 PCR 반응으로 어셈블리하였다. 이 최종 생성물을 게이트웨이 OR 반응으로 공여자 벡터 pDONR201 (인비트로젠)에 재조합하여, ORF319 엔트리 클론을 생성하였다. 이 클론을 서열분석으로 확인하고, 바쿨로바이러스 발현 벡터 LR415의 생성을 위해 게이트웨이 LR 반응 (인비트로젠)에 사용하여 삽입체를 게이트웨이에 적합화된 pBlueBac4.5 (인비트로젠) 벡터로 전달하였다.
BV1060의 단백질 서열:
PI3Kα, PI3Kβ 및 PI3Kγ 구조체의 정제
PI3Kα, PI3Kβ 및 PI3Kγ를 두 크로마토그래피 단계로 정제하였다: Ni 세파로스 수지 (GE 헬쓰케어(GE Healthcare)) 상에서의 고정화 금속 친화성 크로마토그래피 (IMAC), 및 수퍼덱스(Superdex) 200 26/60 칼럼 (GE 헬쓰케어)을 이용한 겔 여과. 모든 완충액을 4℃로 냉각시키고, 얼음 상의 냉각하에 용해를 수행하였다. 칼럼 분획화를 실온에서 수행하였다. PI3Kβ를 정제하기 위해 사용된 모든 완충액은 하기 기재된 것 이외에도 0.05％ 트리톤 X100을 함유하였다.
전형적으로, Tn5 세포 배양물 10 L로부터의 동결 세포를 "용해 완충액" 20 mM Tris-Cl, pH 7.5, 500 mM NaCl, 5％ 글리세롤, 5 mM 이미다졸, 1 mM NaF, 0.1 ㎍/㎖ 오카다산 (OAA), 5 mM BME, 1 x 완전 프로테아제 억제제 칵테일 (EDTA-무함유) (20개 정제/1 L 완충액, 로슈 어플라이드 사이언시즈(Roche Applied Sciences)), 벤조나제 (25U/㎖ 완충액, 이엠디 바이오사이언시즈(EMD Biosciences))에 1:6 v/v 펠릿 대 용해 완충액의 비율로 재현탁시키고, 꼭 맞는 막자를 이용하여 20회 타격을 다운싱(douncing)하여 기계적으로 용해시켰다. 용해물을 45,000 g에서 30분 동안 원심분리하고, 상층액을 예비-평형화된 IMAC 칼럼에 로딩하였다 (3 ㎖ 수지/100 ㎖ 용해물). 상기 칼럼을 3 내지 5 칼럼 부피의 용해 완충액으로 세척한 후, 3 내지 5 칼럼 부피의 20 mM Tris-Cl, pH 7.5, 500 mM NaCl, 5％ 글리세롤, 45 mM 이미다졸, 1 mM NaF, 0.1 ㎍/㎖ OAA, 5 mM BME, 1x 완전 프로테아제 억제제 칵테일 (EDTA-무함유)로 2차 세척하였다. 단백질을 20 mM Tris-Cl, pH 7.5, 0.5 M NaCl, 5％ 글리세롤, 250 mM 이미다졸, 1 mM NaF, 0.1 ㎍/㎖ OAA, 5 mM BME, 1x 완전 프로테아제 억제제 칵테일 (EDTA-무함유)로 용리시켰다. 적절한 분획을 SDS-PAGE에 의해 분석하고, 이에 따라 수집하였다. 단백질을 20 mM Tris-Cl, pH 7.5, 0.5 M NaCl, 5％ 글리세롤, 1 mM NaF, 5 mM DTT, 1x 완전 프로테아제 억제제 칵테일 (EDTA-무함유)로 평형화된 수퍼덱스 200 26/60 칼럼 상에서 겔 여과에 의해 추가로 정제하였다. 적절한 분획을 SDS-PAGE에 의해 분석하고, 이에 따라 수집하였다. 동등한 부피의 투석 완충액 (20 mM Tris-Cl, pH 7.5, 500 mM NaCl, 50％ 글리세롤, 5 mM NaF, 5 mM DTT)을 수집물에 첨가한 후, 투석 완충액 2회 변화에 대해 투석하였다 (밤새 1회 변화). 단백질을 -20℃에서 보관하였다.
PI3Kδ의 정제
PI3Kδ를 세 크로마토그래피 단계로 정제하였다: Ni 세파로스 수지 (GE 헬쓰케어) 상에서의 고정화 금속 친화성 크로마토그래피, 수퍼덱스 200 26/60 칼럼 (GE 헬쓰케어)을 이용한 겔 여과, 및 최종적으로 Q-HP 칼럼 (GE 헬쓰케어) 상에서의 이온 교환 단계. 모든 완충액을 4℃로 냉각시키고, 얼음 상의 냉각하에 용해를 수행하였다. 칼럼 분획화를 실온에서 수행하였다.
전형적으로, Tn5 세포 배양물 10 L로부터의 동결 세포를 "용해 완충액" 20 mM Tris-Cl, pH 7.5, 500 mM NaCl, 5％ 글리세롤, 5 mM 이미다졸, 1 mM NaF, 0.1 ㎍/㎖ 오카다산 (OAA), 5 mM BME, 1 x 완전 프로테아제 억제제 칵테일 (EDTA-무함유) (20개 정제/1 L 완충액, 로슈 어플라이드 사이언시즈), 벤조나제 (25U/㎖ 용해 완충액, 이엠디 바이오사이언시즈)에 1:10 v/v 펠릿 대 용해 완충액의 비율로 재현탁시키고, 꼭 맞는 막자를 이용하여 20회 타격을 다운싱하여 기계적으로 용해시켰다. 용해물을 45,000 g에서 30분 동안 원심분리하고, 상층액을 예비-평형화된 IMAC 칼럼에 로딩하였다 (5 ㎖ 수지/100 ㎖ 용해물). 상기 칼럼을 3 내지 5 칼럼 부피의 용해 완충액으로 세척한 후, 3 내지 5 칼럼 부피의 20 mM Tris-Cl, pH 7.5, 500 mM NaCl, 5％ 글리세롤, 40 mM 이미다졸, 1 mM NaF, 0.1 ㎍/㎖ OAA, 5 mM BME, 1x 완전 프로테아제 억제제 칵테일 (EDTA-무함유)로 2차 세척하였다. 단백질을 20 mM Tris-Cl, pH 7.5, 500 mM NaCl, 5％ 글리세롤, 250 mM 이미다졸, 1 mM NaF, 0.1 ㎍/㎖ OAA, 5 mM BME, 1x 완전 프로테아제 억제제 칵테일 (EDTA-무함유)로 용리시켰다. 적절한 분획을 SDS-PAGE에 의해 분석하고, 이에 따라 수집하였다. 단백질을 20 mM Tris-Cl, pH 7.5, 500 mM NaCl, 5％ 글리세롤, 1 mM NaF, 0.1 ㎍/㎖ OAA, 5 mM DTT, 1x 완전 프로테아제 억제제 칵테일 (EDTA-무함유)로 평형화된 수퍼덱스 200 칼럼 상에서 겔 여과에 의해 추가로 정제하였다. 적절한 분획을 SDS-PAGE에 의해 분석하고, 이에 따라 수집하였다. 이들 분획을 "완충액 A" 20 mM Tris-Cl, pH 8.2, 5％ 글리세롤, 1 mM NaF, 0.1 ㎍/㎖ OAA, 5 mM DTT를 사용하여 1:10 v/v 수집물 부피 대 완충액의 비율로 희석하고, 준비된 Q-HP 칼럼 상에 로딩하였다. 샘플 로딩을 완료한 후, 완충액 A 및 5％ "완충액 B" 20 mM Tris-Cl, pH 8.2, 1 M NaCl, 5％ 글리세롤, 1 mM NaF, 0.1 ㎍/㎖ OAA, 5 mM DTT로 3 내지 5 칼럼 부피로 세척하였다. 단백질을 완충액 B의 5％→30％ 구배를 이용하여 용리시켰다. 전형적으로, 단백질은 대략 200 mM NaCl에서 용리되었다. 적절한 분획을 SDS-PAGE에 의해 분석하고, 이에 따라 수집하였다. 동등한 부피의 투석 완충액 (20 mM Tris-Cl, pH 7.5, 500 mM NaCl, 50％ 글리세롤, 1 mM NaF, 0.1 ㎍/㎖ OAA, 5 mM DTT)을 수집물에 첨가한 후, 투석 완충액 2회 변화에 대해 투석하였다 (밤새 1회 변화). 단백질을 -20℃에서 보관하였다.
상기 기재된 검정을 이용하여 하기 결과를 수득하였다.
SEQUENCE LISTING
<110> Novartis AG
<120> 2-Carboxamide cycloamino ureas
<130> PAT053554A
<150> US 61/270028
<151> 2009-07-02
<160> 20
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 42
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> PCR Primer
<400> 1
gctagcatgc gagaatatga tagattatat gaagaatata cc 42
<210> 2
<211> 45
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> PCR primer
<400> 2
gcctccacca cctccgcctg gtttaatgct gttcatacgt ttgtc 45
<210> 3
<211> 42
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> PCR primer
<400> 3
tactagtccg cctccaccac ctccgcctcc accacctccg cc 42
<210> 4
<211> 1180
<212> PRT
<213> Artificial
<220>
<223> PI3K kinase construct
<400> 4
Met Arg Glu Tyr Asp Arg Leu Tyr Glu Glu Tyr Thr Arg Thr Ser Gln
1 5 10 15
Glu Ile Gln Met Lys Arg Thr Ala Ile Glu Ala Phe Asn Glu Thr Ile
20 25 30
Lys Ile Phe Glu Glu Gln Cys Gln Thr Gln Glu Arg Tyr Ser Lys Glu
35 40 45
Tyr Ile Glu Lys Phe Lys Arg Glu Gly Asn Glu Lys Glu Ile Gln Arg
50 55 60
Ile Met His Asn Tyr Asp Lys Leu Lys Ser Arg Ile Ser Glu Ile Ile
65 70 75 80
Asp Ser Arg Arg Arg Leu Glu Glu Asp Leu Lys Lys Gln Ala Ala Glu
85 90 95
Tyr Arg Glu Ile Asp Lys Arg Met Asn Ser Ile Lys Pro Gly Gly Gly
100 105 110
Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Leu Val Glu Cys Leu Leu Pro
115 120 125
Asn Gly Met Ile Val Thr Leu Glu Cys Leu Arg Glu Ala Thr Leu Ile
130 135 140
Thr Ile Lys His Glu Leu Phe Lys Glu Ala Arg Lys Tyr Pro Leu His
145 150 155 160
Gln Leu Leu Gln Asp Glu Ser Ser Tyr Ile Phe Val Ser Val Thr Gln
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Gly Gly Gly Pro Pro Gly Val Asp Cys Pro Met Glu Phe Trp Thr Lys
115 120 125
Glu Glu Asn Gln Ser Val Val Val Asp Phe Leu Leu Pro Thr Gly Val
130 135 140
Tyr Leu Asn Phe Pro Val Ser Arg Asn Ala Asn Leu Ser Thr Ile Lys
145 150 155 160
Gln Leu Leu Trp His Arg Ala Gln Tyr Glu Pro Leu Phe His Met Leu
165 170 175
Ser Gly Pro Glu Ala Tyr Val Phe Thr Cys Ile Asn Gln Thr Ala Glu
180 185 190
Gln Gln Glu Leu Glu Asp Glu Gln Arg Arg Leu Cys Asp Val Gln Pro
195 200 205
Phe Leu Pro Val Leu Arg Leu Val Ala Arg Glu Gly Asp Arg Val Lys
210 215 220
Lys Leu Ile Asn Ser Gln Ile Ser Leu Leu Ile Gly Lys Gly Leu His
225 230 235 240
Glu Phe Asp Ser Leu Cys Asp Pro Glu Val Asn Asp Phe Arg Ala Lys
245 250 255
Met Cys Gln Phe Cys Glu Glu Ala Ala Ala Arg Arg Gln Gln Leu Gly
260 265 270
Trp Glu Ala Trp Leu Gln Tyr Ser Phe Pro Leu Gln Leu Glu Pro Ser
275 280 285
Ala Gln Thr Trp Gly Pro Gly Thr Leu Arg Leu Pro Asn Arg Ala Leu
290 295 300
Leu Val Asn Val Lys Phe Glu Gly Ser Glu Glu Ser Phe Thr Phe Gln
305 310 315 320
Val Ser Thr Lys Asp Val Pro Leu Ala Leu Met Ala Cys Ala Leu Arg
325 330 335
Lys Lys Ala Thr Val Phe Arg Gln Pro Leu Val Glu Gln Pro Glu Asp
340 345 350
Tyr Thr Leu Gln Val Asn Gly Arg His Glu Tyr Leu Tyr Gly Ser Tyr
355 360 365
Pro Leu Cys Gln Phe Gln Tyr Ile Cys Ser Cys Leu His Ser Gly Leu
370 375 380
Thr Pro His Leu Thr Met Val His Ser Ser Ser Ile Leu Ala Met Arg
385 390 395 400
Asp Glu Gln Ser Asn Pro Ala Pro Gln Val Gln Lys Pro Arg Ala Lys
405 410 415
Pro Pro Pro Ile Pro Ala Lys Lys Pro Ser Ser Val Ser Leu Trp Ser
420 425 430
Leu Glu Gln Pro Phe Arg Ile Glu Leu Ile Gln Gly Ser Lys Val Asn
435 440 445
Ala Asp Glu Arg Met Lys Leu Val Val Gln Ala Gly Leu Phe His Gly
450 455 460
Asn Glu Met Leu Cys Lys Thr Val Ser Ser Ser Glu Val Ser Val Cys
465 470 475 480
Ser Glu Pro Val Trp Lys Gln Arg Leu Glu Phe Asp Ile Asn Ile Cys
485 490 495
Asp Leu Pro Arg Met Ala Arg Leu Cys Phe Ala Leu Tyr Ala Val Ile
500 505 510
Glu Lys Ala Lys Lys Ala Arg Ser Thr Lys Lys Lys Ser Lys Lys Ala
515 520 525
Asp Cys Pro Ile Ala Trp Ala Asn Leu Met Leu Phe Asp Tyr Lys Asp
530 535 540
Gln Leu Lys Thr Gly Glu Arg Cys Leu Tyr Met Trp Pro Ser Val Pro
545 550 555 560
Asp Glu Lys Gly Glu Leu Leu Asn Pro Thr Gly Thr Val Arg Ser Asn
565 570 575
Pro Asn Thr Asp Ser Ala Ala Ala Leu Leu Ile Cys Leu Pro Glu Val
580 585 590
Ala Pro His Pro Val Tyr Tyr Pro Ala Leu Glu Lys Ile Leu Glu Leu
595 600 605
Gly Arg His Ser Glu Cys Val His Val Thr Glu Glu Glu Gln Leu Gln
610 615 620
Leu Arg Glu Ile Leu Glu Arg Arg Gly Ser Gly Glu Leu Tyr Glu His
625 630 635 640
Glu Lys Asp Leu Val Trp Lys Leu Arg His Glu Val Gln Glu His Phe
645 650 655
Pro Glu Ala Leu Ala Arg Leu Leu Leu Val Thr Lys Trp Asn Lys His
660 665 670
Glu Asp Val Ala Gln Met Leu Tyr Leu Leu Cys Ser Trp Pro Glu Leu
675 680 685
Pro Val Leu Ser Ala Leu Glu Leu Leu Asp Phe Ser Phe Pro Asp Cys
690 695 700
His Val Gly Ser Phe Ala Ile Lys Ser Leu Arg Lys Leu Thr Asp Asp
705 710 715 720
Glu Leu Phe Gln Tyr Leu Leu Gln Leu Val Gln Val Leu Lys Tyr Glu
725 730 735
Ser Tyr Leu Asp Cys Glu Leu Thr Lys Phe Leu Leu Asp Arg Ala Leu
740 745 750
Ala Asn Arg Lys Ile Gly His Phe Leu Phe Trp His Leu Arg Ser Glu
755 760 765
Met His Val Pro Ser Val Ala Leu Arg Phe Gly Leu Ile Leu Glu Ala
770 775 780
Tyr Cys Arg Gly Ser Thr His His Met Lys Val Leu Met Lys Gln Gly
785 790 795 800
Glu Ala Leu Ser Lys Leu Lys Ala Leu Asn Asp Phe Val Lys Leu Ser
805 810 815
Ser Gln Lys Thr Pro Lys Pro Gln Thr Lys Glu Leu Met His Leu Cys
820 825 830
Met Arg Gln Glu Ala Tyr Leu Glu Ala Leu Ser His Leu Gln Ser Pro
835 840 845
Leu Asp Pro Ser Thr Leu Leu Ala Glu Val Cys Val Glu Gln Cys Thr
850 855 860
Phe Met Asp Ser Lys Met Lys Pro Leu Trp Ile Met Tyr Ser Asn Glu
865 870 875 880
Glu Ala Gly Ser Gly Gly Ser Val Gly Ile Ile Phe Lys Asn Gly Asp
885 890 895
Asp Leu Arg Gln Asp Met Leu Thr Leu Gln Met Ile Gln Leu Met Asp
900 905 910
Val Leu Trp Lys Gln Glu Gly Leu Asp Leu Arg Met Thr Pro Tyr Gly
915 920 925
Cys Leu Pro Thr Gly Asp Arg Thr Gly Leu Ile Glu Val Val Leu Arg
930 935 940
Ser Asp Thr Ile Ala Asn Ile Gln Leu Asn Lys Ser Asn Met Ala Ala
945 950 955 960
Thr Ala Ala Phe Asn Lys Asp Ala Leu Leu Asn Trp Leu Lys Ser Lys
965 970 975
Asn Pro Gly Glu Ala Leu Asp Arg Ala Ile Glu Glu Phe Thr Leu Ser
980 985 990
Cys Ala Gly Tyr Cys Val Ala Thr Tyr Val Leu Gly Ile Gly Asp Arg
995 1000 1005
His Ser Asp Asn Ile Met Ile Arg Glu Ser Gly Gln Leu Phe His
1010 1015 1020
Ile Asp Phe Gly His Phe Leu Gly Asn Phe Lys Thr Lys Phe Gly
1025 1030 1035
Ile Asn Arg Glu Arg Val Pro Phe Ile Leu Thr Tyr Asp Phe Val
1040 1045 1050
His Val Ile Gln Gln Gly Lys Thr Asn Asn Ser Glu Lys Phe Glu
1055 1060 1065
Arg Phe Arg Gly Tyr Cys Glu Arg Ala Tyr Thr Ile Leu Arg Arg
1070 1075 1080
His Gly Leu Leu Phe Leu His Leu Phe Ala Leu Met Arg Ala Ala
1085 1090 1095
Gly Leu Pro Glu Leu Ser Cys Ser Lys Asp Ile Gln Tyr Leu Lys
1100 1105 1110
Asp Ser Leu Ala Leu Gly Lys Thr Glu Glu Glu Ala Leu Lys His
1115 1120 1125
Phe Arg Val Lys Phe Asn Glu Ala Leu Arg Glu Ser Trp Lys Thr
1130 1135 1140
Lys Val Asn Trp Leu Ala His Asn Val Ser Lys Asp Asn Arg Gln
1145 1150 1155
Glu Leu Gly Gly Ala His His His His His His
1160 1165
Claims (16)
- 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 염.
<화학식 I>
상기 식에서,
A는 기호 *로 나타낸 위치에서 분자의 나머지에 융합된 비치환 또는 치환된 아릴 고리, 또는 비치환 또는 치환된 헤테로시클릭 고리이고;
X-Y는 (CH2)r 또는 O(CH2)t 또는 (CH2)tO이며, 여기서
r은 1, 2 또는 3이고;
t는 1 또는 2이고;
n은 0, 1 또는 2이고;
q는 0, 1, 2, 3 또는 4이고;
R1은 각각의 경우에 독립적으로,
할로;
히드록시;
비치환 또는 치환된 아릴;
비치환 또는 치환된 아미노;
비치환된 C1-C7-알킬;
히드록시, C1-C7-알콕시, 비치환 또는 치환된 아미노, 아릴 (여기서, 아릴은 할로에 의해 일치환 또는 다치환될 수 있음) 또는 헤테로시클릴에 의해 1회 이상 치환된 C1-C7-알킬을 나타내거나; 또는
2개의 R1 치환기는 함께 알칸디일을 형성하여, 히드록시 또는 할로에 의해 임의로 치환된 시클릭 잔기를 형성한다. - 제1항에 있어서,
고리 A가, 각각의 경우에
비치환 또는 치환된 C1-C7-알킬;
비치환 또는 치환된 아미노;
비치환 또는 치환된 C3-C7-시클로알킬
로부터 독립적으로 선택된 1, 2 또는 3개의 R2 기에 의해 치환된 것인 화합물 또는 그의 염. - 제1항 또는 제2항에 있어서,
R2가
비치환된 C1-C7-알킬;
디(C1-C7-알킬)아미노;
C3-C7-시클로알킬 또는 할로에 의해 1회 이상 치환된 C1-C7-알킬;
비치환된 C3-C7-시클로알킬;
할로, (할로-C1-C7-알킬) 또는 C1-C7-알킬에 의해 1회 이상 치환된 C1-C7-시클로알킬
로부터 선택된 것인 화합물 또는 그의 염. - 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
고리 A가 N, S 또는 O로부터 선택된 1 또는 2개의 헤테로원자 (여기서, 하나 이상의 헤테로원자는 N임)를 함유하는 비치환 또는 치환된 5원 또는 6원 고리인 화합물 또는 그의 염. - 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
고리 A가 비치환 또는 치환된 피리딘 고리, 비치환 또는 치환된 피리미딘 고리, 또는 비치환 또는 치환된 티아졸 고리로부터 선택된 것인 화합물 또는 그의 염. - 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
X-Y가 (CH2)r 또는 O(CH2)t를 나타내고, 여기서 r은 2이고, t는 1인 화합물. - 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
R1이 각각의 경우에 독립적으로,
할로;
히드록시;
비치환 또는 치환된 페닐;
디(C1-C7-알킬)아미노;
비치환된 C1-C7-알킬;
히드록시, C1-C7-알콕시, 디(C1-C7-알킬)아미노, 디-(퍼듀테로C1-C7-알킬)아미노, 페닐, 모르폴리닐, 아세틸아미노 또는 N-(C1-C7-알킬)-N-(페닐C1-C7-알킬)아미노 (여기서, 각각의 페닐은 독립적으로 할로에 의해 일치환 또는 다치환될 수 있음)에 의해 1회 이상 치환된 C1-C7-알킬
을 나타내는 것인 화합물. - 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
n이 1이고, q가 1인 화합물. - 제1항에 있어서,
(2S,4R)-4-디메틸아미노-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-tert-부틸-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드];
(2S,3S)-3-메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-디에틸아미노-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드];
(R)-2-벤질-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-디에틸아미노-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드];
(S)-2-메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-디에틸아미노-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드];
(R)-2-메톡시메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-디에틸아미노-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드];
(R)-2-디메틸아미노메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-tert-부틸-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드];
d6-(R)-2-디메틸아미노메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-tert-부틸-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드];
(R)-2-히드록시메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-디에틸아미노-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드];
(R)-2-히드록시메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-tert-부틸-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드];
(R)-2-{[(3-플루오로-벤질)-메틸-아미노]-메틸}-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-tert-부틸-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드];
(S)-2-메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-tert-부틸-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드];
(S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-디에틸아미노-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드];
(S)-아제티딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-디에틸아미노-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드];
(S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-tert-부틸-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드];
5-메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-디에틸아미노-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드];
(2S,4R)-4-플루오로-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-디에틸아미노-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드];
(2S,4S)-4-플루오로-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-디에틸아미노-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드];
(1S,5R)-2-아자-비시클로[3.1.0]헥산-1,2-디카르복실산 1-아미드 2-[(8-tert-부틸-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드];
(1S,5R)-2-아자-비시클로[3.1.0]헥산-1,2-디카르복실산 1-아미드 2-[(8-디에틸아미노-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드];
(2S,3R)-3-메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-tert-부틸-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드];
(2S,3R)-3-메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-디에틸아미노-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드];
(2S,4S)-4-디메틸아미노-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-디에틸아미노-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드];
5-페닐-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-디에틸아미노-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드];
아제티딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-tert-부틸-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드];
(S)-아제티딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-tert-부틸-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드];
(2S,4S)-4-히드록시-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-디에틸아미노-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드];
(2S,4R)-4-히드록시-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-디에틸아미노-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드];
(S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(7-tert-부틸-4,5-디히드로-벤조[1,2-d;3,4-d']비스티아졸-2-일)-아미드];
(S)-2-메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(7-tert-부틸-4,5-디히드로-벤조[1,2-d;3,4-d']비스티아졸-2-일)-아미드];
(S)-아제티딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(7-tert-부틸-4,5-디히드로-벤조[1,2-d;3,4-d']비스티아졸-2-일)-아미드];
(2S,4R)-4-디메틸아미노-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(7-tert-부틸-4,5-디히드로-벤조[1,2-d;3,4-d']비스티아졸-2-일)-아미드];
(S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[7-(2-플루오로-1,1-디메틸-에틸)-4,5-디히드로-벤조[1,2-d;3,4-d']비스티아졸-2-일]-아미드};
(S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(7-시클로프로필메틸-4,5-디히드로-벤조[1,2-d;3,4-d']비스티아졸-2-일)-아미드];
(2S,3S)-3-메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(7-tert-부틸-4,5-디히드로-벤조[1,2-d;3,4-d']비스티아졸-2-일)-아미드];
(1S,5R)-2-아자-비시클로[3.1.0]헥산-1,2-디카르복실산 1-아미드 2-[(7-tert-부틸-4,5-디히드로-벤조[1,2-d;3,4-d']비스티아졸-2-일)-아미드];
(2S,3S)-3-(아세틸아미노-메틸)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-tert-부틸-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드];
(2S,3S)-3-모르폴린-4-일메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-tert-부틸-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드];
(2S,3R)-3-히드록시-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-tert-부틸-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드];
(2S,3R)-3-메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(7-tert-부틸-4,5-디히드로-벤조[1,2-d;3,4-d']비스티아졸-2-일)-아미드];
(2S,3R)-3-메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-메틸-4H-5-옥사-1-티아-3,7-디아자-시클로펜타[a]나프탈렌-2-일)-아미드];
(2S,3S)-3-모르폴린-4-일메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(7-tert-부틸-4,5-디히드로-벤조[1,2-d;3,4-d']비스티아졸-2-일)-아미드];
(2S,3R)-3-메톡시메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-tert-부틸-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드];
(2S,3S)-3-디메틸아미노메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-tert-부틸-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일)-아미드];
(2S,3R)-3-메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[8-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일]-아미드};
(2S,3R)-3-메톡시메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[8-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)-4,5-디히드로-티아졸로[4,5-h]퀴나졸린-2-일]-아미드};
(2S,3R)-3-메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-tert-부틸-4H-5-옥사-1-티아-3,7-디아자-시클로펜타[a]나프탈렌-2-일)-아미드];
(2S,3S)-3-디메틸아미노메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(8-tert-부틸-4H-5-옥사-1-티아-3,7-디아자-시클로펜타[a]나프탈렌-2-일)-아미드];
(2S,3R)-3-메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[8-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)-4H-5-옥사-1-티아-3,7-디아자-시클로펜타[a]나프탈렌-2-일]-아미드};
(2S,3R)-3-메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[7-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)-4,5-디히드로-벤조[1,2-d;3,4-d']비스티아졸-2-일]-아미드};
(2S,3R)-3-메톡시메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-{[7-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)-4,5-디히드로-벤조[1,2-d;3,4-d']비스티아졸-2-일]-아미드};
(2S,3S)-3-디메틸아미노메틸-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-[(7-tert-부틸-4,5-디히드로-벤조[1,2-d;3,4-d']비스티아졸-2-일)-아미드]
로부터 선택된 화합물. - 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 임의로 추가의 치료제를, 제약상 허용되는 담체와 함께 포함하는 제약 조성물.
- 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 지질 및/또는 단백질 키나제 의존성 질환의 치료에 사용하기 위한 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
- 지질 및/또는 단백질 키나제 의존성 질환의 치료용 제약 조성물의 제조를 위한, 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도.
- 예방 또는 치료 유효량의 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을, 지질 및/또는 단백질 키나제의 억제에 반응하는 질환의 치료가 필요한 온혈동물에게 투여하는 것을 포함하는, 지질 및/또는 단백질 키나제의 억제에 반응하는 질환의 치료 방법.
- 질환이 클래스 I PI3K에 의존성인 지질 키나제 의존성 질환인, 제11항에 따라 사용하기 위한 화합물, 또는 제12항에 따른 화합물의 용도, 또는 제13항에 따른 치료 방법.
- 질환이 PI3K알파, PI3K베타, PI3K델타, PI3K감마로 이루어진 군으로부터 선택된 클래스 I PI3K에 의존성인 지질 키나제 의존성 질환인, 제11항에 따라 사용하기 위한 화합물, 또는 제12항에 따른 화합물의 용도, 또는 제13항에 따른 치료 방법.
- 질환이 증식성 질환; 양성 또는 악성 종양; 육종, 폐암, 기관지암, 전립선암, 유방암 (산발성 유방암 및 코우덴병의 환자 포함), 췌장암, 위장암, 결장암, 직장암, 결장 암종, 결장직장 선종, 갑상선암, 간암, 간내 담관암, 간세포암, 부신암, 위(stomach)암, 위(gastric)암, 신경교종, 교아세포종, 자궁내막암, 흑색종, 신장암, 신우암, 방광암, 자궁체부암, 자궁경부암, 질암, 난소암, 다발성 골수종, 식도암, 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 림프구성 백혈병, 골수양 백혈병, 뇌암, 뇌의 암종, 구강 및 인두암, 후두암, 소장암, 비-호지킨 림프종, 흑색종, 융모성 결장 선종, 신생물, 상피 특성의 신생물, 림프종, 유방 암종, 기저 세포 암종, 편평 세포 암종, 광선 각화증, 고형 종양을 비롯한 종양 질환, 경부 또는 두부의 종양, 진성 적혈구증가증, 본태성 혈소판증가증, 및 골수양화생을 수반하는 골수섬유증으로부터 선택된 암인, 제11항에 따라 사용하기 위한 화합물, 또는 제12항에 따른 화합물의 용도, 또는 제13항에 따른 치료 방법.
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