KR20110101727A

KR20110101727A - 주름 개선용 조성물

Info

Publication number: KR20110101727A
Application number: KR1020100020943A
Authority: KR
Inventors: 진무현; 박선규; 정수나
Original assignee: 주식회사 엘지생활건강
Priority date: 2010-03-09
Filing date: 2010-03-09
Publication date: 2011-09-16
Also published as: KR101640735B1

Abstract

본 발명은 패오니플로린(Paeoniflorin), 카다모닌(cardamonin) 및 페루릭산(Ferulic acid)의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 주름 개선용 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 혼합물은 콜라겐 합성을 촉진할 뿐만 아니라 콜라게나제 활성을 억제하고, 히알루론산 생성을 촉진하며 용해도 및 안정성이 우수하여 주름 개선용 조성물의 유효성분으로 사용하기에 매우 적합하다. 따라서 상기 혼합물을 포함하는 본 발명의 조성물은 우수한 주름 개선 효과를 제공한다. 추가로 상기 유효성분이 소량으로 포함되어도 우수한 효능이 유지되기 때문에, 예를 들면 화장품 등에 적용될 때에 각종의 다양한 제형으로 활용할 수가 있어서 응용 범위가 넓어진다는 장점을 가진다.

Description

주름 개선용 조성물{Composition for improving skin wrinkle}

본 발명은 우수한 콜라겐 합성 촉진 활성 및 콜라게나제 억제 활성을 나타내는 주름 개선용 조성물에 관한 것이다.

콜라겐은 피부의 섬유아세포에서 생성되는 주요 기질 단백질로서 세포외 간질에 존재하고, 중요한 기능으로는 피부의 기계적 견고성, 결합조직의 저항력과 조직의 결합력, 세포접착의 지탱, 세포분할과 분화(유기체의 성장 혹은 상처 치유시)의 유도 등이 알려져 있다[van der Rest et al., 1990]. 이러한 콜라겐은 연령 및 자외선 조사에 의한 광 노화에 의해 감소하며, 이는 피부의 주름 형성과 밀접한 연관이 있다고 알려져 있다[Arthur K. Balin et al., "Aging and the skin", 1989]. 또한, 근래에 들어 피부 노화에 대한 광범위한 연구가 발전되면서 피부에서의 콜라겐의 중요한 기능이 밝혀지고 있다.

종래에는 콜라겐의 피부 보습 효과로부터 화장품에 콜라겐을 배합하는 제품들이 출시되어 있으나, 이들 화장품은 콜라겐을 피부 표면에 도포하는 것으로, 고분자인 콜라겐의 경피 흡수에 의한 보습작용을 기대할 수 없으므로 본질적인 피부 기능 개선이라고 말할 수 없다.

한편, 콜라겐 합성 촉진하여 주름 개선 효과를 나타내는 유효성분들이 알려져 있다. 예를 들어, 레티노산(retinoic acid), TGF(transforming growth factor)[Cardinale G. et al, Adv. Enzymol., 41, p. 425, 1974], 동물 태반 유래의 단백질[일본 특허 평8-231370호], 베튤린산(betulinic acid)[일본 특허 평8-208424호], 클로렐라 추출물[일본 특허 평9-40523호, 평10-36283호] 등이 콜라겐 합성 촉진 물질로서 알려져 있다. 그러나, 상기 유효성분들은 피부 적용 시 자극과 발적 등의 안전성의 문제로 사용량의 제한이 있거나, 효과가 미미하여 실질적으로 피부의 콜라겐 합성을 촉진하여 피부 기능을 개선하는 효과를 기대할 수 없는 문제점이 있다. 따라서, 생체에 안전하고, 유효성분이 안정하며, 무엇보다도 기존의 콜라겐 합성 촉진 물질보다 효과가 우수한 주름 개선 활성을 지닌 성분의 개발이 절실히 요망되고 있다.

또한, 히알루론산(hyaluronic acid)은 섬유아세포(fibroblast)와 기타 피부세포의 원형질막(plasma membrane)에서 합성되는 황산기가 부착되지 않은 글루코스아미노글리칸(nonsulfated glycosaminoglycan)의 일종으로 200~10,000개의 반복되는 디사카라이드 단위체(disaccharide unit)인 글루쿠로닉산과 N-아세틸글루코사민 잔기가 반복적으로 사슬 모양으로 연결되어 있는 1×10⁵~ 5×10⁶Da 크기의 선형 고분자 다당류 물질이다. 특히, 피부는 체내 히알루론산의 50% 이상을 함유하는 것으로 알려져 있으며, 히알루론산은 세포외 기질의 주요 구성성분으로, 수분 보유, 세포간 간격 유지, 세포성장인자 및 영양성분의 저장과 확산에 관여할 뿐만 아니라, 세포의 분열과 분화, 이동 등에도 관여하는 것으로 보고된 바 있다.

피부세포 배양상태에서 히알루론산의 합성은 여러 종류의 성장 인자, 트랜스레티노인산, N-메틸세린 등에 의해 증가된다는 보고[Biochem . J. 258, 919-922; Biochem. J. 283, 165-170; Biochem . J. 307, 817-821; J. Biol . Chem . 272, 4787-4794; J Invest Dermatol 92, 326-332; Biol Pharm Bull 17, 361-364; 및 Skin Pharmacol Appl Skin Physiol 12, 276-283]와, 피부에 도포된 여성호르몬(estradiol) 및 그 유사물질이 히알루론산의 합성을 증가시킨다는 보고[Steroids 16, 1-3; J Invest Dermatol 87, 668-673; 및 Skin Pharmacol Appl Skin Physiol 15, 175-183]가 있었으나, 히알루론산 대사에 대한 자세한 기작은 아직까지 밝혀지지 않았다. 단지, 히알루론산의 합성은 세포막의 안쪽 표면에서 히알루론산 합성효소(hyaluronic acid synthase, HAS)에 의해 진행되며, 합성되는 동안 세포막을 뚫고 나와 세포외 기질에 축적되는 것으로 알려졌다[J. Biol . Chem . 272, 13997-14000].

포유동물에서 히알루론산 합성효소의 유전자는 서열상의 유사성이 높은 HAS1, HAS2 및 HAS3의 세가지 형태가 보고되었다. 이와 관련하여, 표피성장인자(Epidermal growth factor, EGF)를 표피세포 배양액 속에 첨가하였을 때 HAS2 유전자 발현이 증가되었음이 보고된 바 있다[J. Biol . Chem . 276, 20428-20435]. 그러나, 히알루론산의 세포 및 조직에서의 분포, 히알루론산과 관련된 각종 인자 및 효소, 예를 들면 히알루론산 합성효소 또는 히알루론산 활성을 조절하는 인자에 대한 연구는 매우 미흡한 실정이다.

전술한 바와 같이 포유류의 체내에 존재하는 히알루론산의 50% 이상이 피부, 특히 표피의 세포간 간격과 진피의 결체 조직에 분포한다고 보고되었고, 이러한 히알루론산은 주로 각질형성세포와 섬유아세포에 의해 합성되는 것으로 알려졌다. 인간 피부에서 히알루론산의 양은 노화와 함께 감소되는 것으로 보고되었는데, 피부 내 히알루론산의 감소는 노화에 따른 피부 탄력 저하 및 수분 함유량 감소의 직접적인 원인 중 하나라고 여겨지고 있다[Biochem Biophys Acta 279, 265-275; Carbohydr Res 159, 127-136; 및 Int J Dermatol 33, 119-122].

따라서, 히알루론산의 위와 같은 피부 적용가능성에 주목하여, 히알루론산을 효과적으로 생산 또는 주입하거나, 또는 인체 내의 히알루론산의 생성을 증가시킬 수 있는 방법에 대한 연구가 활발히 진행되고 있으나, 괄목한 만한 연구 결과는 아직 알려진 바가 없는 실정이다.

본 발명은 전술한 종래 기술의 문제점을 고려하여 이루어진 것으로, 생체에 대해 우수한 안정성을 가지면서도 뛰어난 콜라겐 합성 촉진 활성 및 콜라게나제 억제 활성 및 히알루론산 생성 효과를 나타내며, 용제로의 용해성 등 가공성이 우수하여 다양한 제형으로 응용 가능한 콜라겐 형성 촉진용 조성물을 제공하여 주름 개선용 조성물을 제공하는데 그 목적이 있다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 패오니플로린(Paeoniflorin), 카다모닌(cardamonin) 및 페루릭산(Ferulic acid)의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 주름 개선용 조성물을 그 특징으로 한다.

본 발명은 패오니플로린, 카다모닌 및 페루릭산의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 주름 개선용 조성물에 관한 것으로, 특히, 피부에 대한 부작용이 없으며, 콜라겐 합성 및 히알루론산 생성을 촉진하고 교원질 분해효소(collagenase) 억제하므로, 주름 개선에 매우 효과적으로 사용될 수 있다.

본 발명의 조성물은 우수한 콜라겐 형성 촉진능 및 교원질 분해효소(collagenase) 억제능 및 히알루론산 생성을 촉진하며, 특히 상기 효능이 유효성분이 소량 포함되는 경우에도 우수하게 발휘된다는 장점이 있다. 이에 따라 본 발명의 조성물은 콜라겐의 감소 및 탄력 저하에 관련된 주름 발생의 억제 및 개선 능력이 뛰어나며, 피부 등에 발생한 상처의 치유 효능도 우수하다. 추가로 상기 유효성분이 소량으로 포함되어도 우수한 효능이 유지되기 때문에, 예를 들면 화장품 등에 적용될 때에 각종의 다양한 제형으로 활용할 수가 있어서 응용 범위가 넓어진다는 장점을 가진다.

이하, 본 발명의 주름 개선용 조성물에 대하여 더욱 상세히 설명하면 다음과 같다.

본 발명의 주름 개선용 조성물은 패오니플로린, 카다모닌 및 페루릭산의 혼합물을 유효성분으로 포함한다. 상기 화합물들은 생체에 안전성을 가지면서, 피부 섬유아세포의 콜라겐 및 교원질 분해효소(collagenase) 억제능 및 히알루로닉산(hyaluronic acid) 합성(HAS2 mRNA 발현 증진 효과)을 촉진하는 효과가 뛰어나며, 인체에 적용 시 뛰어난 주름 개선 효과를 가진다.

상기 화합물들은 각각 당 분야에서 공지된 각종의 유기 화학적 방법 등을 통하여 화학적으로 합성할 수 있으며, 또한 식물 등으로부터 용이하게 수득할 수 있다.

패오니플로린은 작약(芍藥)　Paeonia lactiflora(작약과 Paeonlaceae)과 작약과 식물의 뿌리에 많이 존재하고, 카다모닌은 초두구(Alpinia katsumadai) HAYATA와 뵈센버지아 판두라트(Boesenbergia pandurate) 등의 식물에 많이 존재하며, 페루릭산은 천궁(川芎) Cnidium officinale(산형과 Umbellifere) 같은 산형과 식물에 많이 존재하는데, 이로부터 각각의 성분을 추출하는 방법은 특별히 한정되지 않고, 이 분야에서 공지된 각종의 추출법을 제한 없이 적용할 수 있다.

본 발명의 조성물은 패오니플로린을 포함하며, 이때 패오니플로린은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물을 사용하는 것이 바람직하다. 패오니플로린은 피부 주름에 유효한 효과가 있음을 선행 연구를 통해 확인한 바 있다[국내 특허 출원 제2005-0035482호].

[화학식 1]

본 발명에서 사용한 패오니플로린의 제조예를 구체적으로 설명하면, 다음과 같다. 작약의 뿌리를 세말한 것에 5배량의 75% 에탄올로 작약을 매회 3시간씩, 3회 추출, 농축한다. 농축액의 잔류 에탄올을 휘발시키고 잔류물의 1배량의 물을 넣어 가열 용해하여 현탁액을 만든다. 이 현탁액을 동량의 에틸에테르(Ethyl ether)로 3회 분획하여 정지, 분층한 후 아래층 수용액을 취하여 농축액을 만든다. 분획한 농축액을200 ~ 300 메쉬 실리카 젤 컬럼에 넣고 유동상은 클로로포름 : 아세톤(4:1)로 분리하여 농축하고 건조하여 가루로 제조한다.

한편, 본 발명의 조성물은 카다모닌을 포함하며, 이때 카다모닌으로는 하기 화학식 2로 표시되는 화합물을 사용하는 것이 바람직하다. 상기와 같은 카다모닌 역시 생체 안정성 및 콜라겐 합성 촉진능이 우수하다. 또한, 상기 카다모닌은 콜라겐 분해 효소인 교원질 분해효소의 활성을 억제하는 효과를 나타내므로, 본 발명에 포함되어 조성물의 콜라겐 형성 촉진능을 향상시키며, 예를 들어 본 발명의 조성물이 화장품으로서 사용될 경우 피부 주름의 개선 효과를 상승시켜 피부의 탄력을 향상시키는 역할을 하게 된다.

[화학식 2]

이와 같은 카다모닌은 이 분야에서 공지된 각종의 유기 화학적 방법 등을 통하여 화학적으로 합성할 수 있으며, 또한 초두구(Alpinia katsumadai) HAYATA와 뵈센버지아 판두라트(Boesenbergia pandurate) 등의 식물 등으로부터 용이하게 수득할 수 있다. 이들 식물로부터 목적 화합물을 추출하는 방법은 특별히 한정되지 않고, 이 분야에서 공지된 각종의 추출법을 제한 없이 적용할 수 있다. 이러한 방법의 예로는 초두구의 씨를 분쇄하여 물, 탄소수 1 내지 4의 무수 또는 함수 저급 알코올, 에틸아세테이트, 아세톤 및/또는 클로로포름을 포함하는 용매에 첨가하고, 가온 추출하여 용매 분획한 후, 분리 정제 공정을 거치는 방법을 들 수 있다.　

본 발명의 조성물은 또한 페루릭산을 포함하며, 이때 페루릭산은 하기 화학식 3으로 표시되는 화합물을 사용하는 것이 바람직하다. 페루릭산은 식물의 세포벽을 형성하는 리그닌의 전구체로서 페루릭산에는 수퍼옥사이드 이온(superoxide anion), 산화질소(nitric oxide), 하이드록시 라디칼(hydroxyl radical)과 같은 활성산소를 중화하는 항산화 작용이 있으며, 그 효과는 활성산소의 독성으로부터 생체를 방어하는 SOD(super oxide dismutase)와 같은 것으로 알려져 있다. 특히, 세포에 있어서 지질의 산화에 대한 억제 작용이 매우 우수하다. 따라서, 이러한 효능으로 인해 노화 방지에 유효한 것으로 알려져 있고 항산화력이 매우 강해 멜라닌 색소를 제거하고 기미, 주근깨의 생성을 억제하는 효과가 매우 우수하기 때문에 미용 효과가 좋으며 혈당강하 및 콜레스테롤 저하 효과도 있다고 알려져 있다. 특히, 하기 실시예에서도 확인되는 바와 같이 피부 주름의 개선 효과가 우수하여 페루릭산과 혼합 사용할 경우 그 효과를 상승시키고 피부의 탄력을 향상시키는 역할을 하게 된다.

[화학식 3]

본 발명에 있어서, '주름 개선'이라 함은 피부에 주름이 생성되는 것을 억제 또는 저해하거나, 이미 생성된 주름을 완화시키는 것을 말한다.

본 발명의 주름 개선용 조성물은 패오니플로린(Paeoniflorin), 카다모닌 및 페루릭산의 혼합물이 1 × 10^-5 내지 10 중량%의 양으로 포함되는 것이 바람직하며, 1 × 10^-5 내지 5 중량%의 양으로 포함되는 것이 보다 바람직하다. 상기 함량이 1 × 10^-5 중량% 미만이면 피부 섬유아세포의 콜라겐 생성 및 교원질 분해효소(collagenase) 억제능 및 히알루로닉산 합성(HAS2 mRNA 발현 증진 효과)을 촉진하는 효과가 저하될 우려가 있고, 10 중량%를 초과하면 용제로의 용해성 등 조성물의 전체적인 가공성이 떨어져, 후술하는 화장품 제형 등 각종 용도로의 사용이 제한될 우려가 있다.

아울러, 본 발명에서는 상기 패오니플로린, 카다모닌 및 페루릭산을 특정 비율로 혼합하여 사용하면 상승 효과를 확인할 수 있었다. 최적의 배합비로는 패오니플로린 : 카다모닌 : 페루릭산이 1~3 : 1~3 : 8~4의 중량비인 것이 바람직하다. 상기 중량비에서 페루릭산의 함량이 40% 미만이 되었을 때 패오니플로린 및 카다모닌의 흡수를 돕는 페루릭산의 기능이 약해져 피부에 적용 시 주름 개선의 효과가 낮아질 우려가 있으며, 이들 성분의 상승 효과가 낮다.

본 발명의 콜라겐 형성 촉진용 조성물에서 상기 유효성분 외의 첨가물은 특별히 한정되지 않으며, 이 분야에서 통상 사용되는 것을 제한 없이 사용할 수 있다. 예를 들면, 상기 조성물이 의학적인 용도로 사용되는 경우에 약제학적으로 허용되는 통상의 담체가 포함될 수 있으며, 화장품 등에 적용될 경우에는 화장품 분야에서 통용되는 통상의 첨가제가 제한 없이 사용될 수 있다.

본 발명의 주름 개선용 조성물은 상기 유효성분 외에 공지의 주름 개선 성분을 추가로 포함할 수 있을 것이다. 추가적인 주름 개선 성분을 포함하게 되면 본 발명의 조성물의 주름 개선 효과는 더욱 증진될 수 있을 것이다. 주름 개선 성분의 추가 시에는 복합 사용에 따른 피부 안전성, 제형화의 용이성, 유효성분들의 안정성을 고려할 수 있다. 본 발명의 한 구체예에서, 상기 주름 개선용 조성물은 당업계에 공지된 주름 개선 성분으로서, 레티노산, TGF, 동물 태반 유래의 단백질, 베튤린산 및 클로렐라 추출물로 구성되는 군으로부터 선택되는 1종 또는 2종 이상의 주름 개선 성분을 추가로 포함할 수 있다. 추가의 주름 개선 성분은 전체 조성물 중량에 대하여 0.0001 중량% 내지 10 중량%로 포함될 수 있을 것이며, 상기 함량 범위는 콜라겐 합성 촉진 또는 콜라게나제 억제 활성, 피부 안전성, 유효성분과의 제형화 시의 용이성 등의 요건에 따라 조절될 수 있을 것이다.

본 발명에 있어서, 상기 주름 개선용 조성물은 의약 조성물 또는 화장료 조성물일 수 있다. 주름 개선용 조성물을 의약 또는 화장품으로 제형화할 경우, 활성 성분에 대한 담체로서 작용하는 약리적으로 허용 가능한 공지의 부형제를 포함할 수 있다. 의약으로의 제형화 시에는 Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA에 개시되어 있는 내용을 참조할 수 있으며, 화장품으로 제형화 시에는 International cosmetic ingredient dictionary, 6th ed., The cosmetic, Toiletry and Fragrance Association, Inc., Washington, 1995에 개시되어 있는 내용을 참조할 수 있을 것이다. 상기 문헌들은 본 명세서의 일부로서 포함된다.

본 발명의 주름 개선용 조성물이 화장료 조성물일 경우, 상기 조성물은 이에 제한되는 것은 아니나, 유연 화장수 또는 영양 화장수 등과 같은 화장수, 훼이셜 로션, 바디로션 등과 같은 유액, 영양 크림, 수분 크림, 아이 크림 등과 같은 크림, 에센스, 화장연고, 스프레이, 젤, 팩, 선 스크린, 메이크업 베이스, 액체 타입, 고체 타입 또는 스프레이 타입 등의 파운데이션, 파우더, 클렌징 크림, 클렌징 로션, 클렌징 오일과 같은 메이크업 제거제, 클렌징 폼, 비누, 바디 워쉬 등과 같은 세정제 등의 제형을 가질 수 있다. 이 경우 상기 화장료 조성물은 계면활성제, 유화제, 비누산, 용매, 결합제, 희석제, 활택제, 안정제, 항료, 물, 저급알콜, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제, 착색제, 보존제, 항생제, 항산화제, 소포제, 항균제, 항재침착제, 효소, 식물 또는 미네랄 오일, 지방, 형광물질, 살진균제, 굴수성 유발물질, 보습제, 방향제, 방향제 담체, 보존제, 단백질, 실리콘, 용해화제, 당 유도체, 일광차단제, 비타민, 식물 추출물 및 왁스로 이루어진 군 중에서 선택된 1종 또는 2종 이상의 약리학적으로 허용가능한 부형제를 함유할 수 있다.

본 발명의 이점 및 특징, 그리고 그것들을 달성하는 방법은 상세하게 후술되어 있는 실시예들을 참조하면 명확해질 것이다. 그러나, 본 발명은 이하에서 개시되는 실시예들에 한정되는 것이 아니라 서로 다른 다양한 형태로 구현될 것이며, 단지 본 실시예들은 본 발명의 개시가 완전하도록 하고, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 발명의 범주를 완전하게 알려주기 위해 제공되는 것이며, 본 발명은 청구항의 범주에 의해 정의될 뿐이다.

실시예 1: 콜라게나제 활성 억제 효과 확인

패오니플로린, 카다모닌, 페루릭산[Fluka, Japan, Cat. No. 46280, 98% 이상] 및 이들 혼합물 각각에 대하여 콜라게나제 활성 억제 효과를 다음과 같이 확인하였다.

콜라겐 분해효소 활성 억제 효과를 관찰하기 위해, 시판되는 기질인 Dabcyl-r-Abu-Pro-GLu-Gly-Leu-Glu(EDANS)-Ala-Lys-NH₂의 Gly-Leu 결합을 콜라게나제가 분해함으로써 Dabcyl기의 N-말단과 EDNAS의 C-말단은 quencher로 작용기작을 이용하는 실험이다.

96-웰 평판배양기(96-well plate)에 농도 별로 패오니플로린, 카다모닌, 페루릭산, 및 이들 혼합물 각각을 넣고 반응 버퍼와 시판되는 기질을 넣어서 37 ℃에서 1시간을 반응시킨 후, EDTA 5 ul을 넣어 반응을 종료시켰다. 이때, 발색되는 정도를 플루로미터(flurometer)를 이용하여 흡광도를 340 nm/520 nm에서 측정하여 결과를 기록하였다[Bob Beekman et al., FEBS, 390, 221-225, 1996]. 음성 대조군으로 상기 화합물을 가하지 않은 군이 이용되었으며, 양성 대조군으로 레티논산(retinoic acid) 1%를 넣은 군이 이용되었다.

콜라게나제 활성 저해율은 하기 수학식 1에 의해 계산하였으며, 그 결과는 하기 표 1에 나타낸 바와 같다.

[수학식 1]

[표 1]

상기 표 1로부터 알 수 있는 바와 같이, 패오니플로핀, 카다모닌 및 페루릭산을 특정 비(1~3 : 1~3 : 8~4의 중량비)로 혼합한 혼합물의 콜라게나제 활성 억제 효과가 월등히 우수함을 알 수 있었다.

실시예 2: 콜라겐 합성 촉진 효과 확인

패오니플로린, 카다모닌, 페루릭산, 및 이들 혼합물 각각을 인간 유래 섬유아세포의 배양액에 첨가하여 세포수준에서 콜라겐 합성 촉진 효과를 실험하였다.

합성된 콜라겐의 측정은 PICP EIA kit(Procollagen Type I C-Peptide Enzyme ImmunoAssay KIT)를 이용하여 정량하였다.

실험에서 각 시료의 최종 농도는 1 ㎍/ml 및 10 ㎍/ml으로 하였으며, 각 시료의 혼합 비율은 하기 표 1에 나타난 바와 같다. 각각의 시료는 인간 섬유아세포의 배양 배지에 첨가하여 1일간 배양한 후, 배양액을 취하여 PICP EIA 키트로 각 농도에서의 콜라겐 합성 정도를 분광광도계를 이용하여 450 nm에서 측정하였다.　 효과의 비교를 위하여 아무것도 첨가하지 않은 섬유아세포의 배양 배지(대조군)와 비타민 C를 최종 농도 52.8 ㎍/ml가 되도록 첨가한 시료에 대하여 동일한 방법으로 콜라겐 합성 정도를 측정하였다. 콜라겐 생성량은 UV 흡광도로서 측정하였으며, 콜라겐 생성 증가율은 대조군에 대한 상대적인 콜라겐 생성량 비율로 계산하고, 그 결과를 하기 표 2에 정리하였다.

[표 2]

상기 표 2의 결과에서 볼 수 있듯이, 패오니플로린, 카다모닌 및 페루릭산을 혼합하였을 경우, 일반적으로 콜라겐 합성 능력이 있는 것으로 알려진 비타민 C를 적용한 경우 보다 적은 농도로 더 우수한 콜라겐 합성 효과를 발휘하였다. 또한, 패오니플로린, 카다모닌 및 페루릭산을 각각 단독으로 첨가되는 경우와 비교하여, 상기가 동시에 첨가되었을 때 현저한 상승 효과가 나타나는 점도 확인할 수 있었다.

실시예 3 : 생쥐 유래의 섬유아세포 NIH 3 T3 에서의 HAS2 발현 증가 평가

생쥐 유래의 섬유아세포 NIH 3T3를 10% 우혈청(fetal bovin serum)을 포함한 DMEM 배지에서 24시간 배양하였다. 배양된 세포를 우혈청이 포함되지 않은 DMEM 배지로 2회 세척하고, 다시 12시간 동안 동일배지를 처리하여 우혈청의 영향을 제거하였다. 이렇게 배양된 세포의 배지를 다시 각각의 패오니플로린, 카다모닌, 페루릭산 및 이의 혼합물을 1 ㎍/㎖ 또는 10 ㎍/㎖ 의 농도로 우혈청을 포함하지 않은 DMEM 배지에 첨가한 배양액으로 교체하고 12시간 처리하였다. 12시간 경과 후 세포를 회수하여 냉각된 인산 완충용액(PBS)으로 세척하고, RNA 분리 키트(Tri-reagent, Gibco BRL) 1 ㎖을 첨가하여 총 RNA를 추출한 후 하기의 방법으로 정량적인 역전사 PCR을 수행하였다. 히알루론산 합성효소2(HAS2) 및 GAPDH의 PCR 수행을 위한 센스 프라이머는 5’-CTGTGAAAAGGCTGACCTAC-3’(서열번호 1)이었고, 안티-센스 프라이머는 5’-TCAGTAAGGCACTTGGACCG-3’(서열번호 2)이었다.

1 ㎍의 총 RNA를 역 전사 시스템(Promega사, 미국)을 이용하여 역전사하여 cDNA를 얻었다. 이후 역전사 반응용액 2 ㎕를 50 mM KCl, 10 mM tris-HCl(pH 8.3), 5 mM MgCl₂ 및 0.16 mM dNTP의 PCR 반응 완충액 50 ㎕에 섞고, 20 pmol의 프라이머와 1.25 U의 Taq DNA 중합효소를 첨가하여 94 ℃에서 60초, 60 ℃에서 120초, 72 ℃에서 120초의 30사이클을 수행하였다. PCR 산물을 아가로스 젤에 전기영동하고 이를 Fluoro-S MultiImager(BioRad)로 분석하였다.

분석 결과를 하기 표 3에 종합하여 나타내었다. 각각의 추출물 시료를 1 ㎍/㎖ 또는 10 ㎍/㎖ 의 농도로 처리하였을 때 농도에 따른 HAS2 유전자의 발현 정도(HAS2 mRNA의 양)를 대조군에 대한 상대적인 값(%)으로 하기 표 3에 나타내었다. GAPDH는 유전자 발현 변화를 정량적 역전사 PCR 방법으로 확인할 때 내부 지표 유전자(internal control)로 사용하는 유전자로서, GAPDH의 변화에 대한 특정 유전자, 여기에서는 HAS2의 상대적 양을 나타냄으로써 시료간의 표준화를 이룰 수 있다. 하기 표 3에 나타나는 바와 같이, 결과를 살펴보면, 페오니플로린, 카다모닌, 페루릭산 및 이의 혼합물을 1 ㎍/㎖과 10 ㎍/㎖의 농도에서 히알루론산 합성효소2의 발현을 증가시켰으며, 1 ㎍/㎖의 투여량에 있어서는 페루릭산, 패오니플로린, 카다모닌 순으로 효과가 좋았고, 10 ㎍/㎖의 투여량에 있어서도 동일하였으며, 1 ㎍/㎖ 과 10 ㎍/㎖의 두 농도 모두에서 혼합물의 경우가 가장 효과가 좋았다.

[표 3]

제조예 1 및 비교예 1 : 피부 외용연고의 제조

하기 표 4의 조성과 같이, 패오니플로린, 카다모닌 및 페루릭산의 혼합물(3:2:5)을 유효성분으로 포함하는 피부 외용연고를 통상의 방법에 따라 제조하였다. 또한, 유효성분을 제외한 나머지 성분으로 제조한 피부 외용연고를 비교예 1로 제조하였다.

[표 4]

제조예 2 및 비교예 2 : 에센스의 제조

패오니플로린, 카다모닌 및 페루릭산의 혼합물(3:2:5)을 유효성분으로 포함하는 피부 노화 방지 및 주름 개선 화장료 에센스의 제형을 제조예 2로, 유효성분을 포함하지 않는 것을 제외하고는 제조예 2와 동일하게 화장료 에센스를 제조한 것을 비교예 2로 하였다. 상세한 조성은 하기 표 5에 나타내었다.

[표 5]

실시예 4 : 패널 테스트를 통한 피부 주름 개선 효과 확인

상기 제조예 2와 비교예 2의 에센스에 대해서 건강한 35세에서 50세의 여성을 대상으로 피부 주름 개선 효과를 다음과 같이 시험하였다.

35세에서 50세까지의 여성 30명을 15명씩 2개의 군으로 구분하고 1군은 패오니플로린, 카다모닌 및 페루릭산의 0.3% 포함하는 제조예 2의 에센스를, 2군은 비교예 2의 에센스를 안면부에 1일 1회 3개월간 도포하였다. 3개월 후 피부 주름의 개선 정도를 피험자의 설문 및 피부 주름의 영상 분석을 통해 평가하였다. 피험자의 설문은 피부 주름 개선 및 탄력 증진에 관하여 사용 전과 비교하여 개선 없음, 약간의 개선, 상당한 개선의 3단계로 판정하였으며, 그 결과는 하기 표 6에 나타내었다.

[표 6]

상기 표 6에서 볼 수 있듯이, 패오니플로린, 카다모닌 및 페루릭산의 혼합물 0.3%를 포함한 제조예 2의 에센스를 사용한 경우, 사용하지 않은 비교예 2의 에센스를 사용한 경우 보다 피부 주름 개선 효과가 우수함을 확인할 수 있다.

<110> LG HOUSEHOLD & HEALTH CARE LTD. <120> Composition for improving skin wrinkle <160> 2 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> sense primer <400> 1 ctgtgaaaag gctgacctac 20 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> antisense primer <400> 2 tcagtaaggc acttggaccg 20

Claims

패오닌플로린, 카다모닌 및 페루릭산의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 주름 개선용 조성물.
제1항에 있어서, 상기 혼합물은 패오닌플로린, 카다모닌 및 페루릭산을 1~3 : 1~3 : 8~4의 중량비로 혼합한 주름 개선용 조성물.
제1항에 있어서, 상기 유효성분은 전체 조성물 중량에 대하여 1 X 10^-5 내지 10 중량%로 포함하는 주름 개선용 조성물.
제1항에 있어서, 레티노산, TGF, 동물 태반 유래의 단백질, 베튤린산 및 클로렐라 추출물로 구성되는 군으로부터 선택되는 1종 또는 2종 이상의 주름 개선 성분을 추가로 포함하는 주름 개선용 조성물.
제4항에 있어서, 상기 주름 개선 성분은 전체 조성물 중량에 대하여 0.0001 내지 10 중량%로 포함하는 주름 개선용 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물은 화장수, 유액, 크림, 에센스, 화장연고, 스프레이, 젤, 팩, 선 스크린, 메이크업 베이스, 파운데이션, 파우더, 메이크업 제거제 및 세정제로 구성되는 군으로부터 선택된 1종으로 제형화되는 주름 개선용 조성물.
제1항에 있어서, 상기 유효성분 외에 약리학적으로 허용가능한 부형제를 추가하는 주름 개선용 조성물.
제7항에 있어서, 상기 약리학적으로 허용가능한 부형제는 계면활성제, 유화제, 비누산, 용매, 결합제, 희석제, 활택제, 안정제, 항료, 물, 저급알콜, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제, 착색제, 보존제, 항생제, 항산화제, 소포제, 항균제, 항재침착제, 효소, 식물 또는 미네랄 오일, 지방, 형광물질, 살진균제, 굴수성 유발물질, 보습제, 방향제, 방향제 담체, 보존제, 단백질, 실리콘, 용해화제, 당 유도체, 일광차단제, 비타민, 식물 추출물 및 왁스로 구성되는 군으로부터 선택되는 1종 또는 2종 이상인 주름 개선용 조성물.