KR20110074526A

KR20110074526A - ４-아미노-３-(이미다졸릴)-피라졸로〔３,４-ｄ〕피리미딘

Info

Publication number: KR20110074526A
Application number: KR1020117008276A
Authority: KR
Inventors: 펭글리에 장; 이빈 쳉
Original assignee: 케모센트릭스, 인크.
Priority date: 2008-09-11
Filing date: 2009-09-10
Publication date: 2011-06-30
Also published as: US20130178623A1; AU2009291749A1; ZA201101550B; AU2009291749B2; EP2323663A4; JP5654467B2; BRPI0918517B1; US8343975B2; CN102159213A; HK1157652A1; DK2323663T3; US20100069396A1; CA2736362A1; IL211692A; ES2536884T3; WO2010030815A1; PL2323663T3; CN102159213B; JP2012502107A; US8946240B2

Abstract

본 발명은 CCR1 수용체의 효능 있는 길항제로 작용하고, 생체내 항염증 활성을 갖는 화합물을 제공한다. 상기 화합물은 4-아미노-3-이미다졸릴-피라졸로[3,4-d]피리미딘 유도체이며, CCR1 매개 질병의 치료를 위한 약학적 조성물 및 방법에 유용하고, 경쟁적 CCR1 길항제의 확인을 위한 검정에서 대조군으로 유용하다.

Description

４-아미노-３-(이미다졸릴)-피라졸로〔３,４-Ｄ〕피리미딘{4-AMINO-3-(IMIDAZOLYL)-PYRAZOLO[3,4-D]PYRIMIDINES}

관련 출원의 교차 참조

본 출원은 2008년 9월 11일에 출원된 미국 가출원 번호 61/096,191호를 우선권으로 주장하며, 이의 내용은 참조로서 본원에 포함된다.

미정부 후원 연구 및 개발하에 이루어진 발명의 권리에 관한 진술

해당사항 없음

발명의 배경

본 발명은 CCR1 수용체로의 다양한 케모카인, 예를 들어, MIP-1α, 류코탁틴(leukotactin), MPIF-1 및 RANTES의 결합을 억제하는데 효과적인 화학물, 이러한 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 중 하나 이상을 함유하는 약학적 조성물을 제공한다. CCR1 수용체에 대한 길항제 또는 조정자로서, 상기 화합물 및 조성물은 염증성 및 면역 장애, 질환 및 질병을 치료하는데 유용하다.

인간 건강은 개체로부터 가치있는 자원을 달리 취하고/취하거나 질병을 유발시키는 외래 병원체를 검출하고 파괴하는 신체의 능력에 좌우된다. 백혈구(백혈구 세포(WBC): T 및 B 림프구, 단핵구, 대식세포, 과립구, NK 세포, 비만 세포, 수지상 세포, 및 면역 유래 세포(예를 들어, 파골세포)), 림프 조직 및 림프 혈관을 포함하는 면역계가 신체의 방어 시스템이다. 감염에 대항하기 위해, 백혈구 세포는 신체 전체에 걸쳐 순환하여 병원체를 검출한다. 병원체가 검출된 후, 선천 면역 세포 및 특히 세포독성 T 세포가 감염 부위에 보충되어 병원체를 파괴한다. 케모카인은 병원체가 존재하는 부위를 인지하는 면역 세포, 예를 들어, 림프구, 단핵구 및 과립구의 보충 및 활성화를 위한 분자 표지(molecular beacon)로 작용한다.

병원체의 면역계의 조절에도 불구하고, 특정한 부적절한 케모카인 신호전달이 발달할 수 있고, 이는 류머티스 관절염, 다발경화증 등과 같은 염증 장애를 촉발시키거나 이를 유지시키는데 기여한다. 예를 들어, 류머티스 관절염에서, 골 관절 내의 조절되지 않는 케모카인 축적은 침윤 대식세포 및 T-세포를 끌어당기고, 이를 활성화시킨다. 이러한 세포의 활성은 염증 및 종국적으로 골 및 연골 손실을 적어도 부분적으로 발생시키는 활액 세포 증식을 유도한다(DeVries, M.E., et al., Semin Immunol 11(2):95-104 (1999) 참조). 일부 탈수초성 질병, 예를 들어, 다발경화증의 특징은 중추신경계로의 케모카인 매개 단핵구/대식세포 및 T 세포 보충이다(Kennedy, et al., J. Clin . Immunol . 19(5):273-279 (1999) 참조). 이식물로의 파괴성 WBC의 케모카인 보충은 이후의 이식 거부와 연관된다. 문헌[DeVries, M.E., et al., ibid 참조]. 케모카인은 염증 및 림프구 발달에서 중요한 역할을 하므로, 이의 활성을 특이적으로 조작하는 능력은 현재 만족스러운 치료법이 없는 질병을 개선시키고 중단시키는데 막대한 영향을 준다. 또한, 고비용의 면역억제 약물의 전신 및 합병증 영향 없이 이식 거부가 최소화될 수 있다.

골 물질대사는 골 형성을 조절하는 골모세포 및 골흡수를 조절하는 파골세포의 전체적인 활성에 좌우된다. 골 물질대사의 이상은 골형성과 골흡수의 불균형에 의해 야기되는 것으로 생각된다. 골다공증 (및 폐경후 골다공증), 고칼슘혈증, 파제트병, 신장성 골혈성장애(renal osteodystrophy), 류머티스 관절염, 골관절염, 용해성 골전이, 다발골수종 등이 골 물질대사의 이상을 수반하는 질병으로 공지되어 있다. 골다공증은 상기 골 물질대사의 이상에 의해 야기되는 통상적인 질병이다. 이 질병은 파골세포에 의한 골흡수가 골모세포에 의한 골형성을 초과하는 경우에 발생된다. 이러한 질병은 골 석회화 물질 및 골기질 둘 모두의 감소를 특징으로 한다. CCR1은 파골세포 전구체의 보충 및 이의 성숙에서 일정한 역할을 하는 것으로 생각되고, 이러한 과정의 억제는 상기 질병을 개선시킬 수 있다(Vallet et al, Blood, 110:3744-3752 (2007)). 골수에서의 다발골수종 세포의 추가의 격리는 상기 부위로의 파골세포의 보충을 발생시켜, 골수종 증식에 피드백 루프(feedback loop)를 제공하고, 탈회(decalcification)를 자극한다(Menu et al, Clin Exp Metastases, 23:291-300 (2006)).

40개를 초과하는 작은 펩티드(7-10 kD)의 그룹인 케모카인은 WBC 또는 면역 유래 세포에서 주로 발현되는 수용체에 결합하여, G-단백질 커플링된 신호전달 캐스케이드(cascade)를 통해 신호를 전달하여 이의 화학유인물질 및 화학자극 기능을 매개한다. 수용체는 하나 이상의 리간드에 결합할 수 있고, 예를 들어, 수용체 CCR1은 RANTES(regulated on activation normal T cell expressed), MIP-1α(macrophage inflammatory protein), MPIF-1/CKβ8, 및 류코탁틴 케모카인(특히, 작은 친화성을 가짐)에 결합한다. 현재까지, 24개의 케모카인 수용체가 공지되어 있다. 매우 많은 수의 케모카인, 다수의 리간드 결합 수용체, 및 면역 세포에 대한 다양한 수용체 프로파일은 빈틈없이 조절되고 특이적인 면역 반응을 가능케 한다. 예를 들어, 문헌[Rossi, et al., Ann . Rev . Immunol . 18(1):217-242 (2000)]을 참조하라. 케모카인 활성은 이의 해당 수용체의 조절을 통해 조절될 수 있고, 관련된 염증 및 면역학적 질병을 치료할 수 있고, 기관 및 조직 이식을 가능하게 할 수 있다.

수용체 CCR1 및 이의 케모카인 리간드, 예를 들어, MIP-1α, MPIF-1/CKβ8, 류코탁틴 및 RANTES는 유의한 치료 표적(Saeki, et al., Current Pharmaceutical Design 9:1201-1208 (2003) 참조)인데, 이는 이들이 류머티스 관절염, 이식 거부(DeVries, M.E., et al., ibid . 참조), 및 다발경화증(Fischer, et al., J Neuroimmunol. 110(1-2):195-208 (2000); Izikson, et al., J. Exp . Med . 192(7):1075-1080 (2000); 및 Rottman, et al., Eur . J. Immunol . 30(8):2372-2377 (2000) 참조)와 관련이 있기 때문이다. 사실, 기능 차단 항체, 변형된 케모카인 수용체 리간드 및 작은 유기 화합물이 발견되었고, 이중 일부가 일부 케모카인 매개 질병을 예방하거나 치료하는 것이 성공적으로 입증되었다(Rossi, et al., ibid.에서 개관됨). 특히, 류머티스 관절염의 실험 모델에서, 신호전달 차단의 변형된 RANTES 리간드가 투여되는 경우에 질병 발달이 감소된다(Plater-Zyberk, et al., Immunol Lett . 57(1-3):117-120 (1997) 참조). 기능 차단 항체 및 작은 펩티드 요법이 유망하나, 이들은 대부분의 단백질의 특징인 파괴 위험, 투여 후의 극도로 짧은 반감기, 및 개발 및 제조를 위한 고비용의 단점을 갖는다. 작은 유기 화합물이 바람직한데, 이들은 종종 생체내에서 보다 긴 반감기를 갖고, 효과에 있어서 적은 용량을 필요로 하고, 종종 경구 투여될 수 있고, 결과적으로 보다 저렴하기 때문이다. CCR1의 일부 유기 길항제가 기존에 기재되었다(Hesselgesser, et al., J. Biol . Chem . 273(25):15687-15692 (1998); Ng, et al., J. Med . Chem . 42(22):4680-4694 (1999); Liang, et al., J. Biol . Chem . 275(25):19000-19008 (2000); 및 Liang, et al., Eur . J. Pharmacol . 389(1):41-49 (2000) 참조). 동물 모델에서의 질병의 치료에 대해 입증된 효과(Liang, et al., J. Biol . Chem. 275(25):19000-19008 (2000) 참조)의 관점에서, CCR1 신호전달에 의해 매개되는 질병의 치료에 사용될 수 있는 추가 화합물을 확인하려는 연구가 지속되고 있다.

발명의 개요

본 발명은 하기 화학식 Ⅰ을 갖는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 수화물 또는 N-옥사이드에 관한 것이다:

.

화학식 Ⅰ의 화합물에서, R^1a 및 R^1b는 각각 독립적으로 H 및 CH₃로부터 선택되고; R^2a는 H 및 F로부터 선택되고; R^2d는 H, C_1-4 알콕시 및 C_1-4 할로알콕시로부터 선택된다.

본원에 제공된 화합물 외에, 본 발명은 하나 이상의 상기 화합물을 함유하는 약학적 조성물, 뿐만 아니라 CCR1, CCR2 및/또는 CCR3 신호전달 활성과 관련된 질병을 주로 치료하기 위한 상기 화합물의 사용 방법을 추가로 제공한다.

도면의 간단한 설명

없음

본 발명의 상세한 설명

Ⅰ. 약어 및 정의

단독 또는 다른 치환기의 일부로서의 용어 "알킬"은 달리 언급되지 않는 경우 지정된 탄소 원자수를 갖는 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소 라디칼(즉, C₁-₈은 1 내지 8개의 탄소를 의미함)을 의미한다. 알킬기의 예는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, t-부틸, 이소부틸, sec-부틸, n-펜틸, n-헥실, n-헵틸, n-옥틸 등을 포함한다.

용어 "알콕시"는 이의 통상적인 의미로 사용되며, 산소 원자를 통해 분자의 나머지에 결합된 알킬기를 의미한다. 알콕시기의 예는 메톡시, 에톡시, 이소프로폭시 등을 포함한다.

단독 또는 다른 치환기의 일부로서의 용어 "할로" 또는 "할로겐"은 달리 언급되지 않는 경우 플루오르, 염소, 브롬 또는 요오드 원자를 의미한다. 추가로, "할로알킬"과 같은 용어는 모노할로알킬 및 폴리할로알킬을 포함하는 것을 의미한다. 예를 들어, 용어 "C_1-4 할로알킬"은 트리플루오로메틸, 2,2,2-트리플루오로에틸, 4-클로로부틸, 3-브로모프로필 등을 포함하는 것을 의미한다. 유사하게, 용어 "할로알콕시"는 모노할로알콕시 및 폴리할로알콕시, 예를 들어, 트리플루오로메톡시(CF₃O-) 및 2-플루오로에톡시(FCH₂CH₂O-)를 포함하는 것을 의미한다.

"보호기"는 알킬기를 제외한, 분자 마스크(mask) 내의 반응기에 결합하는 경우 반응성을 감소시키거나 방해하는 부분을 의미한다. 보호기의 예는 문헌[T.W. Greene and P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3^rd edition, John Wiley & Sons, New York, 1999, 및 Harrison and Harrison et al., Compendium of Synthetic Organic Methods, Vols. 1-8 (John Wiley and Sons, 1971-1996)]에서 발견될 수 있다. 대표적인 하이드록시 보호기는 아실기, 벤질 및 트리틸 에테르, 테트라하이드로피라닐 에테르, 트리알킬실릴 에테르 및 알릴 에테르를 포함한다. 대표적인 아미노 보호기는 포르밀, 아세틸, 트리플루오로아세틸, 벤질, 벤질옥시카르보닐(CBZ), tert-부톡시카르보닐(BOC), 트리메틸실릴(TMS), 2-트리메틸실릴-에탄술포닐(SES), 트리틸 및 치환된 트리틸기, 알릴옥시카르보닐, 9-플루오레닐메틸옥시카르보닐(FMOC), 니트로-베라트릴옥시카르보닐(NVOC) 등을 포함한다.

"아미노산 커플링 시약"은 다른 에스테르, 티오에스테르 또는 아미드기를 생성시키기 위해 광범위한 친핵체, 예를 들어, 아민, 알코올 및 티올과 축합시키는데 사용될 수 있는 활성화된 중간체를 형성시키기 위해 아미노산의 카르복실산기와 반응하는 시약, 예를 들어, HBTU(O-(벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트) 등을 의미한다.

용어 "약학적으로 허용되는 염"은 본원에 기재된 화합물에서 발견되는 특정 치환기에 따라 상대적으로 비독성인 산 또는 염기와 함께 제조되는 활성 화합물의 염을 포함하는 것을 의미한다. 본 발명의 화합물이 비교적 산성인 작용기를 함유하는 경우, 염기 부가염은 용매 부재(neat) 또는 적합한 비활성 용매 중에서 상기 화합물의 중성 형태와 충분한 양의 요망되는 염기를 접촉시킴으로써 수득될 수 있다. 약학적으로 허용되는 무기 염기로부터 유래된 염의 예는 알루미늄, 암모늄, 칼슘, 구리, 제2철(ferric), 제1철(ferrous), 리튬, 마그네슘, 망간, 제1망간, 포타슘, 소듐, 아연 등을 포함한다. 약학적으로 허용되는 유기 염기로부터 유래된 염은 치환된 아민, 시클릭 아민, 자연 발생 아민 등, 예를 들어, 아르기닌, 베타인, 카페인, 콜린, N,N'-디벤질에틸렌디아민, 디에틸아민, 2-디에틸아미노에탄올, 2-디메틸아미노에탄올, 에탄올아민, 에틸렌디아민, N-에틸모르폴린, N-에틸피페리딘, 글루카민, 글루코사민, 히스티딘, 히드라바민, 이소프로필아민, 리신, 메틸글루카민, 모르폴린, 피페라진, 피페라딘, 폴리아민 수지, 프로카인, 퓨린, 테오브로민, 트리에틸아민, 트리메틸아민, 트리프로필아민, 트로메타민 등을 포함하는 일차, 이차 및 삼차 아민의 염을 포함한다. 본 발명의 화합물이 비교적 염기성의 작용기를 함유하는 경우, 산부가염은 용매 부재(neat) 또는 적합한 비활성 용매 중에서 상기 화합물의 중성 형태와 충분한 양의 요망되는 산을 접촉시킴으로써 수득될 수 있다. 약학적으로 허용되는 산부가염의 예는 염산, 브롬화수소산, 질산, 탄산, 모노하이드로겐탄산, 인산, 모노하이드로겐인산, 디하이드로겐인산, 황산, 모노하이드로겐황산, 요오드화수소산 또는 아인산 등과 같은 무기산으로부터 유래된 염 뿐만 아니라 아세트산, 프로피온산, 이소부티르산, 말론산, 벤조산, 숙신산, 수베르산, 푸마르산, 만델산, 프탈산, 벤젠술폰산, p-톨릴술폰산, 시트르산, 타르타르산, 메탄술폰산 등과 같은 비교적 비독성인 유기산으로부터 유래된 염을 포함한다. 또한, 아르기네이트 등과 같은 아미노산의 염, 및 글루쿠론산 또는 갈락투론산 등과 같은 유기산의 염이 포함된다(예를 들어, Berge, S.M., et al, "Pharmaceutical Salts", Journal of Pharmaceutical Science, 1977, 66, 1-19 참조). 본 발명의 특정한 화합물은 화합물이 염기 또는 산 부가염으로 전환되도록 하는 염기성 및 산성 작용기 둘 모두를 함유한다.

화합물의 중성 형태는 염과 염기 또는 산을 접촉시키고, 통상적인 방식으로 모(parent) 화합물을 분리시킴으로써 생성될 수 있다. 화합물의 모 형태는 특정한 물리적 특성, 예를 들어, 극성 용매 중에서의 용해도에 있어서 다양한 염과 상이하나, 그렇지 않은 경우 염은 본 발명의 목적상 화합물의 모 형태와 동등하다.

염 형태 외에, 본 발명은 프로드러그 형태의 화합물을 제공한다. 본원에 기재된 화합물의 프로드러그는 생리학적 조건하에서 화학적 변화를 용이하게 겪어 본 발명의 화합물을 제공하는 화합물이다. 추가로, 프로드러그는 생체외 환경에서 화학적 또는 생화학적 방법에 의해 본 발명의 화합물로 전환될 수 있다. 예를 들어, 프로드러그는 적합한 효소 또는 화학 시약과 함께 경피 패치 저장소에 배치되는 경우 본 발명의 화합물로 천천히 전환될 수 있다.

본 발명의 특정 화합물은 용매화되지 않은 형태 뿐만 아니라 수화된 형태를 포함하는 용매화된 형태로 존재할 수 있다. 일반적으로, 용매화된 형태는 용매화되지 않은 형태와 동등하고, 본 발명의 범위에 포함된다. 본 발명의 특정 화합물은 다중 결정 또는 무정형 형태로 존재할 수 있다. 일반적으로, 모든 물리적 형태는 본 발명에서 고려되는 용도에 대해 동등하며, 본 발명의 범위에 포함된다.

본 발명의 특정 화합물은 비대칭 탄소 원자(광학 중심) 또는 이중 결합을 가지고; 라세미체, 부분입체 이성질체, 기하 이성질체 및 개별적 이성질체(예를 들어, 별개의 거울상 이성질체)는 모두 본 발명의 범위에 포함된다. 본 발명의 화합물은 또한 상기 화합물을 구성하는 원자 중 하나 이상에서 비자연적 비율의 원자 동위원소를 함유할 수 있다. 예를 들어, 화합물은 방사성 동위원소, 예를 들어, 트리튬(³H), 요오드-125(¹²⁵I) 또는 탄소-14(¹⁴C)로 방사성 표지될 수 있다. 방사성인지 또는 아닌지간에 본 발명의 화합물의 모든 동위원소 변형물(variation)은 본 발명의 범위에 포함된다.

Ⅱ. 총론

본 발명은 화학식 Ⅰ의 화합물이 CCR1 수용체의 효능있는 길항제로서 작용한다는 발견으로부터 유래된다. 상기 화합물은 생체내 항염증 활성을 갖고, 우수한 약동학 특성을 갖는다. 따라서, 본원에 제공된 화합물은 CCR1-매개 질병의 치료를 위한 약학적 조성물 및 방법에 유용하고, 경쟁적 CCR1 길항제의 확인을 위한 검정에서 대조군으로 유용하다.

Ⅲ. 화합물

한 양태에서, 본 발명은 하기 화학식 Ⅰ의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 수화물 또는 N-옥사이드를 제공한다:

.

화학식 Ⅰ의 화합물에서, R^1a 및 R^1b는 각각 독립적으로 H 및 CH₃로 구성된 군으로부터 선택되고; R^2a는 H 및 F로 구성된 군으로부터 선택되고; R^2d는 H, C₁ _-4 알콕시 및 C₁ _-4 할로알콕시로 구성된 군으로부터 선택된다. 한 구체예에서, R^2a 는 수소이다. 또 다른 구체예에서, R^1a 및 R^1b는 각각 H이다. 또 다른 구체예에서, R^1b는 메틸이고, R^1a는 H이다. 또 다른 구체예에서, R^1a 및 R^1b는 각각 메틸이다. 또 다른 구체예에서, R^2a는 수소이고, R^2d는 메톡시, 에톡시 및 트리플루오로메톡시로 구성된 군으로부터 선택된다.

한 바람직한 구체예에서, 본 발명의 화합물은 하기 화학식 Ⅰa 또는 Ⅰb의 화합물이다:

상기 식에서, R^2a는 H 및 F로 구성된 군으로부터 선택되고, R^2d는 메톡시, 에톡시 및 트리플루오로메톡시로 구성된 군으로부터 선택된다.

한 특정 구체예에서, 본 발명의 화합물은 하기 화학식의 화합물로 구성된 군으로부터 선택된다:

또 다른 특정 구체예에서, 본 발명의 화합물은 하기 화학식의 화합물로 구성된 군으로부터 선택된다:

또 다른 구체예에서, 본 발명의 화합물은 하기 화학식을 갖는다:

또 다른 구체예에서, 화학식 Ⅰ의 본 발명의 화합물은 표 1에 기재된 화합물로 구성된 군으로부터 선택된다.

표 1

(S)-2-(4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)-1-(4-(4-클로로-2-플루오로-5-메톡시페닐)-2-메틸피페라진-1-일)에타논;

(S)-2-(4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)-1-(4-(4-클로로-2-플루오로페닐)-2-메틸피페라진-1-일)에타논;

2-(4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)-1-(4-(4-클로로-2-플루오로-5-메톡시페닐)피페라진-1-일)에타논;

(S)-2-(4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)-1-(4-(4-클로로-3-메톡시페닐)-2-메틸피페라진-1-일)에타논;

2-(4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)-1-(4-(4-클로로-3-에톡시페닐)피페라진-1-일)에타논;

(S)-2-(4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)-1-(4-(4-클로로페닐)-2-메틸피페라진-1-일)에타논;

2-(4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)-1-(4-(4-클로로페닐)피페라진-1-일)에타논;

2-(4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)-1-(4-(4-클로로-3-메톡시페닐)-2,2-디메틸피페라진-1-일)에타논;

(S)-2-(4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)-1-(4-(4-클로로-3-에톡시페닐)-2-메틸피페라진-1-일)에타논;

2-(4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)-1-(4-(4-클로로-3-(트리플루오로메톡시)페닐)피페라진-1-일)에타논; 및

2-(4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)-1-(4-(4-클로로-3-메톡시페닐)피페라진-1-일)에타논.

화합물의 제조

하기 반응식 1 뿐만 아니라 실시예의 반응식은 본 발명의 특정 화합물에 접근하기 위해 따를 수 있는 특정 합성 경로를 제공한다. 다른 경로 또는 하기 제시된 경로의 변형은 당업자에게 용이하게 명백할 것이고, 이는 본 발명의 범위에 포함된다.

반응식 1은 본 발명의 화합물을 형성시키기 위한 치환된 피페라진과의 커플링 반응에 사용되는 4-아미노-3-이미다졸릴 치환된 피라졸로[3,4-d]피리미딘의 합성을 예시한다. 반응식 1에 제시된 바와 같이, 히드라진카르복실산 tert-부틸 에스테르 및 2,3-디시아노-부트-2-엔디니트릴이 조합되어 치환된 피라졸 화합물 B (5-아미노-1H-피라졸-3,4-디카르보니트릴)가 형성될 수 있다. 예를 들어, 오르토포르메이트(예를 들어, 트리메틸오르토포르메이트)와의 처리 후 화합물 B는 중간체 C((E)-메틸 N-3,4-디시아노-1H-피라졸-5-일포름이미데이트로 도시됨)를 제공한다. 화합물 A(4-아미노-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-카르보니트릴)로 도시된 피라졸로[3,4-d]피리미딘을 형성시키는 고리 폐쇄는 중간체 C의 암모니아 처리에 의해 달성될 수 있다.

피라졸로[3,4-d]피리미딘의 추가 동화(elaboration)는, 예를 들어, 탄산칼륨의 존재하에서 화합물 A에 tert-부틸 클로로아세테이트를 처리하여 (4-아미노-3-시아노-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)-아세트산 tert-부틸 에스테르를 수득한 후, 이를 에탄올 및 아세트산의 존재하에서 에틸렌디아민과 함께 환류시켜 tert-부틸 2-(4-아미노-3-(4,5-디하이드로-1H-이미다졸-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)아세테이트를 생성시킴으로써 달성된다.

도시된 바와 같이, tert-부틸 2-(4-아미노-3-(4,5-디하이드로-1H-이미다졸-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)아세테이트는 용매 DMSO의 존재하에서 DMP로 산화되어, tert-부틸 2-(4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)아세테이트가 수득될 수 있다.

최종적으로, tert-부틸 2-(4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)아세테이트는 디옥산 중에서 HCl로 처리되어 4-아미노-3-이미다졸릴 치환된 피라졸로[3,4-d]피리미딘 염(2-(4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)아세트산.2HCl)이 수득될 수 있다.

반응식 1

Ⅲ. 약학적 조성물

상기 제공된 화합물 외에, 인간 및 동물에서 CCR1, CCR2 및 CCR3 활성을 조절하기 위한 조성물은 통상적으로 약학적 담체 또는 희석제를 함유할 것이다.

본원에서 사용되는 용어 "조성물"은 특정량의 특정 성분을 포함하는 생성물 뿐만 아니라 특정량의 특정 성분의 조합물로부터 직접 또는 간접적으로 생성된 임의의 생성물을 포함한다. "약학적으로 허용되는"은 담체, 희석제 또는 부형제가 제형의 다른 성분과 양립되고, 이의 수용자에게 해롭지 않아야 하는 것을 의미한다.

본 발명의 화합물을 투여하기 위한 약학적 조성물은 편리하게는 단위 투여 형태로 제공될 수 있고, 약학 및 약물 전달 분야의 널리 공지된 방법 중 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다. 모든 방법은 활성 성분을 하나 이상의 보조 성분을 구성하는 담체와의 회합물로 발생시키는 단계를 포함한다. 일반적으로, 약학적 조성물은 균일하고 밀접하게 활성 성분을 액체 담체 또는 미세하게 분리된 고체 담체 또는 액체 담체 및 고체 담체 둘 모두와의 회합물로 발생시킨 후, 필요시 상기 생성물을 요망되는 제형으로 성형시킴으로써 제조된다. 약학적 조성물에서, 목표 활성 화합물은 질병 경과 또는 상태시 요망되는 효과를 생성시키기에 충분한 양으로 포함된다.

활성 성분을 함유하는 약학적 조성물은 경구 사용에 적합한 형태, 예를 들어, 정제, 트로키(troche), 로젠지(lozenge), 수성 또는 오일 현탁액, 분산성 분말 또는 과립, 에멀젼 및 미국 특허 제 6,451,339호에 기재된 자가 유화(self emulsification), 경질 또는 연질 캡슐, 시럽, 엘릭서, 용액, 협측 패치, 경구 젤, 츄잉 검, 씹어먹는(chewable) 정제, 비등성 분말 및 비등성 정제일 수 있다. 경구 사용하기 위한 조성물은 약학적 조성물의 제조를 위해 당 분야에 공지된 임의의 방법에 따라 제조될 수 있고, 이러한 조성물은 약학적으로 아취가 있고(elegant), 풍미가 좋은(palatable) 제조물을 발생시키기 위해 감미제, 착향제, 착색제, 항산화제 및 보존제로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 작용제를 함유할 수 있다. 정제는 정제의 제조에 적합한 비독성의 약학적으로 허용되는 부형제와 혼합된 활성 성분을 함유한다. 이러한 부형제는, 예를 들어, 비활성 희석제, 예를 들어, 셀룰로오스, 실리콘 디옥사이드, 알루미늄 옥사이드, 칼슘 카보네이트, 소듐 카보네이트, 글루코오스, 만니톨, 소르비톨, 락토오스, 칼슘 포스페이트 또는 소듐 포스페이트; 과립화제 및 붕해제, 예를 들어, 옥수수 전분, 또는 알긴산; 결합제, 예를 들어, PVP, 셀룰로오스, PEG, 전분, 젤라틴 또는 아카시아, 및 윤활제, 예를 들어, 마그네슘 스테아레이트, 스테아르산 또는 활석일 수 있다. 정제는 코팅되지 않을 수 있거나, 이들은 위장관에서의 붕해 및 흡수를 지연시킴으로써 장기간에 걸쳐 지속된 작용을 제공하는 공지된 기술에 의해 장용성으로 또는 달리 코팅될 수 있다. 예를 들어, 시간 지연 물질, 예를 들어, 글리세릴 모노스테아레이트 또는 글리세릴 디스테아레이트가 사용될 수 있다. 이들은 또한 방출을 조절하기 위한 삼투 치료 정제를 형성시키기 위해 미국 특허 제 4,256,108호; 제 4,166,452호; 및 제 4,265,874호에 기재된 기술에 의해 코팅될 수 있다.

경구 사용을 위한 제형은 또한 활성 성분이 비활성 고체 희석제, 예를 들어, 칼슘 카보네이트, 칼슘 포스페이트 또는 카올린과 혼합된 경질 젤라틴 캡슐, 또는 활성 성분이 물 또는 오일 매질, 예를 들어, 땅콩유, 액체 파라핀 또는 올리브유와 혼합된 연질 젤라틴 캡슐로 제공될 수 있다. 추가로, 에멀젼은 비수성의 혼화성 성분, 예를 들어, 오일과 함께 제조될 수 있고, 계면활성제, 예를 들어, 모노-디글리세라이드, PEG 에스테르 등으로 안정화될 수 있다.

수성 현탁액은 수성 현탁액의 제조에 적합한 부형제와 혼합된 활성 물질을 함유한다. 이러한 부형제는 현탁제, 예를 들어, 소듐 카르복시메틸셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 하이드록시프로필메틸셀룰로오스, 소듐 알기네이트, 폴리비닐-피롤리돈, 검 트래거캔쓰 및 검 아카시아이고; 분산제 또는 습윤제는 자연 발생 포스파티드, 예를 들어, 레시틴, 또는 알킬렌 옥사이드와 지방산의 축합 생성물, 예를 들어, 폴리옥시에틸렌 스테아레이트, 또는 에틸렌 옥사이드와 장쇄 지방족 알코올의 축합 생성물, 예를 들어, 헵타데카에틸렌옥시세타놀, 또는 에틸렌 옥사이드와 헥시톨 및 지방산으로부터 유래된 부분적 에스테르의 축합 생성물, 예를 들어, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 모노올레이트, 또는 에틸렌 옥사이드와 헥시톨 무수물 및 지방산으로부터 유래된 부분적 에스테르의 축합 생성물, 예를 들어, 폴리에틸렌 소르비탄 모노올레이트일 수 있다. 수성 현탁액은 또한 하나 이상의 보존제, 예를 들어, 에틸, 또는 n-프로필, p-하이드록시벤조에이트, 하나 이상의 착색제, 하나 이상의 착향제, 및 하나 이상의 감미제, 예를 들어, 수크로오스 또는 사카린을 함유할 수 있다.

오일 현탁액은 식물성 오일, 예를 들어, 낙화생유(arachis oil), 올리브유, 참기름 또는 코코넛유, 또는 광유, 예를 들어, 액체 파라핀 중에 활성 성분을 현탁시킴으로써 제형화될 수 있다. 오일 현탁액은 증점제, 예를 들어, 밀랍, 경질 파라핀 또는 세틸 알코올을 함유할 수 있다. 감미제, 예를 들어, 상기 기재된 감미제, 및 착향제가 첨가되어 풍미가 좋은 경구 제조물이 생성될 수 있다. 이러한 조성물은 항산화제, 예를 들어, 아스코르브산의 첨가에 의해 보존될 수 있다.

물의 첨가에 의한 수성 현탁액의 제조에 적합한 분산가능한 분말 및 과립은 분산제 또는 습윤제, 현탁제 및 하나 이상의 보존제와 혼합된 활성 성분을 제공한다. 적합한 분산제 또는 습윤제 및 현탁제는 이미 상기 언급된 것에 의해 예시된다. 추가 부형제, 예를 들어, 감미제, 착향제 및 착색제가 또한 존재할 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 또한 수중유 에멀젼의 형태일 수 있다. 오일상은 식물성 오일, 예를 들어, 올리브유 또는 낙화생유, 또는 광유, 예를 들어, 액체 파라핀 또는 이들의 혼합물일 수 있다. 적합한 에멀젼화제는 자연 발생 검(gum), 예를 들어, 검 아카시아 또는 검 트래거캔쓰, 자연 발생 포스파티드, 예를 들어, 소이 빈(soy bean), 레시틴, 및 헥시톨 무수물 및 지방산으로부터 유래된 에스테르 또는 부분적 에스테르, 예를 들어, 소르비탄 모노올레이트, 및 상기 부분적 에스테르와 에틸렌 옥사이드의 축합 생성물, 예를 들어, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레이트일 수 있다. 에멀젼은 또한 감미제 및 착향제를 함유할 수 있다.

시럽 및 엘릭서는 감미제, 예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 소르비톨 또는 수크로오스와 함께 제형화될 수 있다. 이러한 제형은 또한 완화제, 보존제 및 착향제 및 착색제를 함유할 수 있다. 경구 용액은, 예를 들어, 시클로덱스트린, PEG 및 계면활성제와 조합하여 제조될 수 있다.

약학적 조성물은 멸균 주사용 수성 또는 유지성 현탁액의 형태일 수 있다. 이러한 현탁액은 상기 언급된 적합한 분산제 또는 습윤제 및 현탁제를 이용하여 공지된 기술에 따라 제형화될 수 있다. 멸균 주사용 제조물은 또한 비독성의 비경구적으로 허용되는 희석제 또는 용매 중의 멸균 주사용 용액 또는 현탁액, 예를 들어, 1,3-부탄 디올 중의 용액으로 존재할 수 있다. 사용될 수 있는 허용되는 비히클 및 용매는 물, 링거액 및 등장성 염화나트륨 용액이다. 또한, 멸균의 고정유가 편리하게는 용매 또는 현탁 매질로 사용된다. 이를 위해, 합성 모노글리세라이드 또는 디글리세라이드를 포함하는 임의의 순한 고정유가 사용될 수 있다. 또한, 지방산, 예를 들어, 올레산이 주사용 제조물에 사용된다.

본 발명의 화합물은 또한 약물의 직장 투여용 좌약의 형태로 투여될 수 있다. 이러한 조성물은 약물과 상온에서 고체이나 직장 온도에서는 액체여서, 이에 따라 직장에서 용해되어 약물을 방출시키는 적합한 비자극 부형제를 혼합시킴으로써 제조될 수 있다. 이러한 물질은 코코아 버터 및 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 추가로, 화합물은 용액 또는 연고에 의한 안구 전달을 통해 투여될 수 있다. 추가로, 본 발명의 화합물의 경피 전달이 이온도입치료 패치(iontophoretic patch) 등에 의해 달성될 수 있다. 국소 사용을 위해, 본 발명의 화합물을 함유하는 크림, 연고, 젤리, 용액 또는 현탁액 등이 사용된다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 국소 적용은 또한 구강세척제 및 양치질약(gargle)의 사용을 포함하는 것을 의미한다.

본 발명의 화합물은 다양한 통상적인 이식편, 스텐트 그라프트(stent graft)를 포함하는 스텐트, 카테터, 벌룬(balloon), 바스켓 또는 신체 루멘 내에 배치될 수 있거나 영구적으로 이식될 수 있는 다른 장치 중 임의의 것을 포함할 수 있는 의료 장치로 부착시키기 위해 제형화될 수 있다. 특정 예로서, 통상적인 기술에 의해 치료되는 신체의 영역으로 본 발명의 화합물을 전달할 수 있는 장치 및 방법을 갖는 것이 바람직할 것이다.

예시적 구체예에서, 본 발명의 억제제가 의료 장치, 예를 들어, 스텐트 내에 부착될 수 있고, 신체 일부의 치료를 위해 치료 부위로 전달될 수 있다.

스텐트는 치료제(즉, 약물)를 위한 전달 비히클로 사용된다. 혈관내 스텐트는 일반적으로 관상 혈관 또는 말초 혈관에 영구적으로 이식된다. 스텐트 설계는 미국 특허 제 4,733,655호(Palmaz), 제 4,800,882호(Gianturco), 또는 제 4,886,062호(Wiktor)의 설계를 포함한다. 이러한 설계는 금속 및 중합 스텐트 뿐만 아니라 자가 팽창 및 벌룬 팽창성 스텐트를 포함한다. 스텐트는 또한, 예를 들어, 미국 특허 제 5,102,417호(Palmaz) 및 국제 특허 출원 WO 91/12779호(Medtronic, Inc.) 및 WO 90/13332호(Cedars-Sanai Medical Center), 미국 특허 제 5,419,760호(Narciso, Jr.) 및 미국 특허 제 5,429,634호(Narciso, Jr.)에 기재된 바와 같이 맥관구조와의 접촉 부위에 약물을 전달하는데 사용될 수 있다. 스텐트는 또한 미국 특허 출원 일련 번호 제 5,833,651호(Donovan et al.)에 기재된 바와 같이 유전자 전달을 위해 루멘의 벽에 바이러스를 전달하는데 사용된다.

용어 "부착된"은 억제제가 당 분야에 공지된 방법에 의해 장치로 코팅되거나, 흡수되거나, 배치되거나, 달리 포함되는 것을 의미한다. 예를 들어, 억제제는 ("매트릭스 유형") 내에 포매되어 이로부터 방출될 수 있거나, 의료 장치를 코팅하거나 의료 장치에 스패닝(spanning)되는 중합체 물질에 의해 둘러싸여 이로부터 방출("저장소 유형")될 수 있다. 후자의 예에서, 억제제는 당 분야에 공지된 물질을 생성시키기 위한 하나 이상의 기술을 이용하여 중합체 물질 내에 포함되거나, 중합체 물질에 커플링될 수 있다. 다른 제형에서, 억제제는 분리가능한 결합 및 시간이 지남에 따른 방출에 의해 코팅을 필요로 하지 않는 의료 장치의 표면에 결합될 수 있고, 이는 활성 기계적 또는 화학적 과정에 의해 제거될 수 있거나, 이식 부위에 억제제를 제공하는 영구적으로 고정된 형태로 존재한다.

한 구체예에서, 억제제는 의료 장치, 예를 들어, 스텐트용의 생체적합성 코팅의 형성 동안 중합체 조성물에 혼입될 수 있다. 상기 성분으로부터 생성된 코팅은 통상적으로 동질성이고, 이식용으로 설계된 다수의 장치를 코팅하는데 유용하다.

중합체는 요망되는 방출 속도 또는 요망되는 중합체 안정성의 정도에 따라 생체안정성 또는 생체흡수성 중합체일 수 있으나, 본 구체예에는 생체흡수성 중합체가 바람직한데, 생체안정성 중합체와는 달리 이는 이식후 오랫동안 임의의 부작용인 만성 국소 반응을 야기시키지 않을 것이기 때문이다. 사용될 수 있는 생체흡수성 중합체는 폴리(L-락트산), 폴리카프롤락톤, 폴리글리콜리드(PGA), 폴리(락티드-코-글리콜리드)(PLLA/PGA), 폴리(하이드록시부티레이트), 폴리(하이드록시부티레이트-코-발러레이트), 폴리디옥사논, 폴리오르토에스테르, 폴리언하이드라이드, 폴리(글리콜산), 폴리(D-락트산), 폴리(L-락트산), 폴리(D,L-락트산), 폴리(D,L-락티드)(PLA), 폴리(L-락티드)(PLLA), 폴리(글리콜산-코-트리메틸렌 카보네이트)(PGA/PTMC), 폴리에틸렌 옥사이드(PEO), 폴리디옥사논(PDS), 폴리포스포에스테르, 폴리포스포에스테르 우레탄, 폴리(아미노산), 시아노아크릴레이트, 폴리(트리메틸렌 카보네이트), 폴리(이미노카보네이트), 코폴리(에테르-에스테르)(예를 들어, PEO/PLA), 폴리알킬렌 옥살레이트, 폴리포스파젠 및 생체분자, 예를 들어, 피브린, 피브리노겐, 셀룰로오스, 전분, 콜라겐 및 히알루론산, 폴리엡실론 카프롤락톤, 폴리하이드록시 부티르산, 폴리오르토에스테르, 폴리아세탈, 폴리디하이드로피란, 폴리시아노아크릴레이트, 하이드로겔의 가교되거나 양친매성인 블록 공중합체, 및 당 분야에 공지된 다른 적합한 생체흡수성 중합체를 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 또한, 폴리우레탄, 실리콘 및 폴리에스테르와 같은 비교적 낮은 만성 조직 반응을 갖는 생체안정성 중합체가 사용될 수 있고, 폴리올레핀, 폴리이소부틸렌 및 에틸렌-알파올레핀 공중합체; 아크릴 중합체 및 공중합체, 비닐 할라이드 중합체 및 공중합체, 예를 들어, 폴리비닐 클로라이드; 폴리비닐피롤리돈; 폴리비닐 에테르, 예를 들어, 폴리비닐 메틸 에테르; 폴리비닐리덴 할라이드, 예를 들어, 폴리비닐리덴 플루오라이드 및 폴리비닐리덴 클로라이드; 폴리아크릴로니트릴, 폴리비닐 케톤; 폴리비닐 방향족, 예를 들어, 폴리스티렌, 폴리비닐 에스테르, 예를 들어, 폴리비닐 아세테이트; 비닐 모노머의 서로의 공중합체 및 올레핀과의 공중합체, 예를 들어, 에틸렌-메틸 메타크릴레이트 공중합체, 아크릴로니트릴-스티렌 공중합체, ABS 수지, 및 에틸렌-비닐 아세테이트 공중합체; 피란 공중합체; 폴리하이드록시-프로필-메타크릴아미드-페놀; 폴리하이드록시에틸-아스파르트아미드-페놀; 팔미토일 잔기로 치환된 폴리에틸렌옥사이드-폴리리신; 폴리아미드, 예를 들어, 나일론 66 및 폴리카프롤락탐; 알키드 수지, 폴리카보네이트; 폴리옥시메틸렌; 폴리이미드; 폴리에테르; 에폭시 수지, 폴리우레탄; 레이온; 레이온-트리아세테이트; 셀룰로오스, 셀룰로오스 아세테이트, 셀룰로오스 부티레이트; 셀룰로오스 아세테이트 부티레이트; 셀로판; 셀룰로오스 니트레이트; 셀룰로오스 프로피오네이트; 셀룰로오스 에테르; 및 카르복시메틸 셀룰로오스와 같이 의료 장치에서 용해되고 경화되거나 중합화될 수 있는 경우에 다른 중합체가 또한 사용될 수 있다.

중합체 및 반투과성 중합체 매트릭스가 성형 물품, 예를 들어, 밸브, 스텐트, 관류(tubing), 보철물 등으로 형성될 수 있다.

본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 억제제는 스텐트 또는 스텐트-그래프트 장치로서 형성되는 중합체 또는 반투과성 중합체 매트릭스로 커플링된다.

통상적으로, 중합체는 스핀 코팅, 침액 또는 분무에 의해 이식가능한 장치의 표면에 적용된다. 당 분야에 공지된 추가 방법이 또한 상기 목적에 사용될 수 있다. 분무 방법은 전통적인 방법 뿐만 아니라 잉크젯 유형의 분배기를 이용한 미세증착 기술을 포함한다. 추가로, 중합체는 장치의 특이적 부분 상에만 중합체를 위치시키기 위해 광패턴화(photo-patterning)를 이용하여 이식가능한 장치에 증착될 수 있다. 이러한 장치의 코팅은 장치 코팅을 통해 다양한 분석물의 개선된 확산을 가능케 하는 장치 주위의 균일한 층을 제공한다.

본 발명의 바람직한 구체예에서, 중합체 코팅으로부터 의료 장치가 배치되는 환경으로의 방출을 위한 억제제가 제형화된다. 바람직하게는, 억제제는 중합체 담체 또는 용리를 조절하기 위한 층을 포함하는 여러 널리 공지된 기술 중 하나 이상을 이용하여 연장된 기간(예를 들어, 수개월)에 걸쳐 조절 방식으로 방출된다. 이러한 기술 중 일부는 미국 특허 출원 20040243225A1호에 이전에 기재되었다.

더욱이, 미국 특허 제 6,770,729호에 기재된 바와 같이, 시약 및 중합체 조성물의 반응 조건은 중합체 코팅으로부터의 억제제의 방출이 조절될 수 있도록 조작될 수 있다. 예를 들어, 중합체 코팅으로부터의 억제제의 방출을 조절하기 위해 하나 이상의 중합체 코팅의 확산 계수가 조정될 수 있다. 이러한 주제의 변형에서, 의약 장치가 배치되는 환경에 존재하는 분석물(예를 들어, 중합체의 일부분의 파괴 또는 가수분해를 촉진하는 분석물)이 중합체 조성물 내의 하나 이상의 성분에 접근하는 능력을 조정(예를 들어, 이에 의해 중합체 코팅으로부터의 억제제의 방출을 조정함)하기 위해 하나 이상의 중합체 코팅의 확산 계수가 조절될 수 있다. 본 발명의 또 다른 구체예는 다수의 확산 계수를 각각 갖는 다수의 중합체 코팅을 갖는 장치를 포함한다. 본 발명의 이러한 구체예에서, 중합체 코팅으로부터의 억제제의 방출은 다수의 중합체 코팅에 의해 조정될 수 있다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 중합체 코팅으로부터의 억제제의 방출은 중합체 조성물의 특성 중 하나 이상, 예를 들어, 하나 이상의 내인성 또는 외인성 화합물의 존재, 또는 대안적으로 중합체 조성물의 pH를 조정함으로써 조절된다. 예를 들어, 특정 중합체 조성물은 중합체 조성물의 pH의 감소에 반응하여 억제제를 방출하도록 설계될 수 있다. 대안적으로, 특정 중합체 조성물은 과산화수소의 존재에 반응하여 억제제를 방출하도록 설계될 수 있다.

Ⅳ. CCR1에 의해 조절되는 질병의 치료 방법

또 다른 양태에서, 본 발명은 CCR1, CCR2 및/또는 CCR3 매개 질병 또는 질환을 갖는 피검체에 치료적 유효량의 상기 화학식 Ⅰ의 화합물을 투여함으로써 상기 CCR1, CCR2 및/또는 CCR3 매개 질병 또는 질환을 치료하는 방법을 제공한다. "피검체"는 본원에서 영장류(예를 들어, 인간), 소, 양, 염소, 말, 개, 고양이, 토끼, 래트, 마우스 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는 포유동물과 같은 동물을 포함하는 것으로 정의된다.

CCR1은 면역 세포 기능의 특정 양태, 또는 더욱 일반적으로 포유동물, 예를 들어, 인간에서 광범위한 세포 유형에서의 CCR1 발현과 관련된 기능을 억제하거나 촉진하기 위한 표적을 제공한다. CCR1을 억제하는 화합물은 치료 목적상 단핵구, 대식세포, 림프구, 과립구, NK 세포, 비만 세포, 수지상 세포, 및 특정 면역 유래 세포(예를 들어, 파골세포) 기능을 조정하는데 특히 유용하다. 따라서, 본 발명은 광범위한 염증 및 면역조절 장애 및 질병의 예방 및/또는 치료에 유용한 화합물에 관한 것이다(Saeki, et al., Current Pharmaceutical Design 9:1201-1208 (2003) 참조).

예를 들어, CCR1의 하나 이상의 기능을 억제하는 본 발명의 화합물은 면역 장애와 관련된 염증 또는 세포 침윤을 억제(즉, 감소 또는 예방)하기 위해 투여될 수 있다. 결과로서, 하나 이상의 염증 과정, 예를 들어, 백혈구 이동 또는 침윤, 화학주성, 세포외유출(예를 들어, 효소, 히스타민의 세포외유출) 또는 염증성 매개체 방출이 억제될 수 있다. 예를 들어, 염증 부위로의 단핵구 침윤(예를 들어, 관절염에서의 침범된 관절, 또는 MS에서의 CNS로의 침윤)이 본 발명의 방법에 따라 억제될 수 있다.

유사하게, CCR1의 하나 이상의 기능을 촉진하는 본 발명의 화합물이 염증 반응, 예를 들어, 백혈구 이동, 화학주성, 세포외배출(예를 들어, 효소, 히스타민의 세포외배출) 또는 염증성 매개체 방출을 자극(유도 또는 향상)하여, 염증 과정의 이로운 자극을 발생시키기 위해 투여된다. 예를 들어, 단핵구는 박테리아 감염에 대항하기 위해 보충될 수 있다.

염증, 면역 장애, 골 질환, 암 및 감염과 관련된 질병 및 질환은 본 발명의 방법을 이용하여 치료될 수 있다. 한 바람직한 구체예에서, 질병 또는 질환은 염증성 또는 자가면역 반응을 조정하기 위해 면역 세포, 예를 들어, 단핵구, 대식세포, 림프구, 과립구, NK 세포, 비만 세포, 수지상 세포, 또는 특정 면역 유래 세포(예를 들어, 파골세포)의 작용이 억제되거나 촉진되어야 하는 질병 또는 질환이다.

구체예의 한 군에서, 인간 또는 다른 종의 만성 질병을 포함하는 질병 또는 질환은 CCR1, CCR2 또는 CCR3 기능의 조정자를 이용하여 치료될 수 있다. 이러한 질병 또는 질환은, (1)　알레르기 질병, 예를 들어, 전신 아나필락시스 또는 과민성 반응, 약물 알레르기, 곤충 자상 알레르기 및 음식 알레르기, (2)　염증성 장 질병, 예를 들어, 크론병, 궤양대장염, 회장염 및 장염, (3)　질염, (4)　건선 및 염증성 피부병, 예를 들어, 피부염, 습진, 아토피 피부염, 알레르기 접촉 피부염, 두드러기 및 소양증, (5)　혈관염, (6)　척추관절병증, (7)　피부경화증, (8)　천식 및 호흡기 알레르기 질병, 예를 들어, 천식, 알레르기 천식, 알레르기 비염, 과민성 폐 질병 등, (9)　자가면역 질병, 예를 들어, 섬유근통, 피부경화증, 강직성 척추염, 유년기 RA, 스틸병, 다관절 유년기 RA, 소수관절형(pauciarticular) 유년기 RA, 류머티스성 다발성 근육통, 다쿠야스(Takuyasu) 관절염, 류머티스 관절염, 건선 관절염, 골관절염, 다관절성 관절염, 다발경화증, 전신홍반루푸스, 타입　Ⅰ 당뇨병, 타입 Ⅱ 당뇨병, 타입　Ⅰ 당뇨병(최근 발생), 시신경염, 사구체신염 등, (10)　이식 거부, 예를 들어, 동종이식거부 및 급성 및 만성 이식편대 숙주병, (11) 섬유증(예를 들어, 폐 섬유증(즉, 특발성 폐섬유증, 간질성 폐섬유증), 최종 단계 신장 질병과 관련된 섬유증, 방사선에 의해 야기된 섬유증, 세뇨관간질 섬유증(tubulointerstitial fibrosis), 상피하 섬유증, 피부경화증(진행성전신경화증), 간섬유증(알코올성 또는 바이러스성 간염에 의해 야기되는 간섬유증 포함), 원발성 및 속발성 경화증, (12) 급성 및 만성 폐 염증(만성 폐쇄폐병, 만성 기관지염, 성인성 호흡곤란 증후군, 유아의 호흡곤란 증후군, 면역 복합 폐포염), 및 (13)　요망되지 않는 염증 반응 또는 면역 장애가 억제되어야 하는 다른 질병, 예를 들어, 심장혈관병, 예를 들어, 죽상경화증, 조직 이식 또는 재협착 동안 발생하는 혈관 염증(혈관성형술 및/또는 스텐트 삽입 후의 재협착을 포함하나, 이에 제한되지 않음), 다른 급성 및 만성 염증 질환, 예를 들어, 근육염, 신경변성 질병(예를 들어, 알츠하이머병), 뇌염, 수막염, 간염, 신장염, 패혈증, 사코이드증, 알레르기 결막염, 이염, 부비동염, 관절경검사에 의해 야기된 활액 염증, 요독증, 외상, 허혈 재관류 손상, 비내 용종증(nasal polyosis), 자간전증, 구강 편평태선(oral lichen planus), 길랑-바레 증후군(Guillina-Barre syndrome), 육아종병, 렙틴 생성과 관련된 질환, 베체트 증후군 및 통풍, 및 상처 치유 분야, 및 (14) 면역 매개 식품 알레르기, 예를 들어, 만성소화장애증(Celiac disease)을 포함한다.

또 다른 군의 구체예에서, 질병 또는 질환은 CCR1 기능의 조정자로 치료될 수 있다. CCR1 기능의 조정자로 치료되는 질병의 예는 암(원발성 및 전이성 둘 모두)(예를 들어, 다발골수종; Hata, H., Leukemia & Lymphoma, 2005, 46(7); 967-972), 심장혈관병, 골용해성 질병, 예를 들어, 골다공증(및 폐경후 골다공증), 고칼슘혈증, 파제트병, 신장성 골형성 장애, 류머티스 관절염, 골관절염, 용해성 골전이, 및 다발골수종, 혈관형성 또는 혈관신생이 일정한 역할을 하는 질병(신생물 질병, 망막병증 및 황반 변성), 감염성 질병(바이러스 감염, 예를 들어, HIV 감염, 및 박테리아 감염) 및 면역억제 질병, 예를 들어, 기관 이식 질환 및 피부 이식 질환을 포함한다. 용어 "기관 이식 질환"은 골수 이식 질환 및 고체 기관(예를 들어, 신장, 간, 폐, 심장, 췌장 및 이의 조합물) 이식 질환을 포함하는 것을 의미한다.

본 발명의 약학적 조성물은 또한 염증 부위에서 금속단백분해효소 및 사이토카인의 생성을 직접 또는 간접적(세포 침윤 감소의 결과)으로 억제하여, 이에 따라 상기 사이토카인과 관련된 질병 또는 질환에 대한 이점을 제공할 수 있다.

따라서, 본 발명의 화합물은 광범위한 염증 및 면역조절 장애 및 질병의 예방 및 치료에 유용하다.

치료되는 질병 및 피검체의 상태에 따라, 본 발명의 화합물은 경구, 비경구(예를 들어, 근내, 복막내, 정맥내, ICV, 수조내 주사 또는 주입, 피하 주사, 또는 이식), 흡입 스프레이, 비내, 질내, 직장, 설하, 또는 국소 투여 경로에 의해 투여될 수 있고, 이는 단독으로 또는 함께 각각의 투여 경로에 적합한 통상적인 비독성의 약학적으로 허용되는 담체, 애쥬번트 및 비히클을 함유하는 적합한 투여 단위 제형으로 제형화될 수 있다.

케모카인 수용체 조절을 필요로 하는 질환의 치료 또는 예방에서, 적절한 투여량 수준은 일반적으로 단일 또는 다중 용량으로 투여될 수 있는 하루당 환자 체중 kg당 약 0.001 내지 100 mg일 것이다. 바람직하게는, 투여량 수준은 하루당 약 0.01 내지 약 25 mg/kg일 것이고, 더욱 바람직하게는 하루당 약 0.05 내지 약 10 mg/kg일 것이다. 적합한 투여량 수준은 하루당 약 0.01 내지 25 mg/kg, 하루당 약 0.05 내지 10 mg/kg, 또는 하루당 약 0.1 내지 5 mg/kg일 수 있다. 이러한 범위 내에서, 투여량은 하루당 0.005 내지 0.05, 0.05 내지 0.5 또는 0.5 내지 5.0 mg/kg일 수 있다. 경구 투여를 위해, 조성물은 바람직하게는 치료되는 환자에 대해 투여량의 징후적 조정을 위해 1.0 내지 1000 밀리그램의 활성 성분, 특히 1.0, 5.0, 10.0, 15.0. 20.0, 25.0, 50.0, 75.0, 100.0, 150.0, 200.0, 250.0, 300.0, 400.0, 500.0, 600.0, 750.0, 800.0, 900.0 및 1000.0 밀리그램의 활성 성분을 함유하는 정제의 형태로 제공된다. 화합물은 하루에 1 내지 4회, 바람직하게는 하루에 1 또는 2회의 치료 요법으로 투여될 수 있다.

그러나, 임의의 특정 환자에 대한 특정 용량 수준 및 투여 빈도는 다양할 수 있고, 사용되는 특정 화합물의 활성, 대사 안정성 및 화합물의 작용 기간, 피검체의 연령, 체중, 유전적 특징, 전반적 건강, 성별 및 식이, 뿐만 아니라 투여 방식 및 시간, 배출 속도, 약물 조합, 및 치료를 받는 피검체의 특정 질환의 중증도를 포함하는 다수의 요인에 좌우될 것이 이해될 것이다.

염증, 면역 장애, 감염 및 암과 관련된 질병 및 질환은 본 발명의 화합물, 조성물 및 방법으로 치료되거나 예방될 수 있다.

본 발명의 화합물 및 조성물은 관심 질환 또는 질병, 예를 들어, 염증성 또는 자가면역 장애, 질환 및 질병, 예를 들어, 염증성 장 질병, 류머티스 관절염, 골관절염, 건선 관절염, 다관절 관절염, 다발경화증, 알레르기 질병, 건선, 아토피 피부염 및 천식, 및 상기 언급된 병상의 예방 및 치료에서 관련 유용성을 갖는 다른 화합물 및 조성물과 조합될 수 있다.

예를 들어, 염증 또는 자가면역, 또는 예를 들어, 관절염 관련 골 손실의 치료 또는 예방에서, 본 발명의 화합물 및 조성물은 항염증제 또는 진통제, 예를 들어, 아편 효능제, 리폭시게나제 억제제, 예를 들어, 5-리폭시게나제의 억제제, 시클로옥시게나제 억제제, 예를 들어, 시클로옥시게나제-2 억제제, 인터루킨 억제제, 예를 들어, 인터루킨-1 억제제, NMDA 길항제, 산화질소의 억제제 또는 산화질소 합성 억제제, 비스테로이드성 항염증제, 또는 사이토카인 억제 항염증제, 예를 들어, 아세트아미노펜, 아스피린, 코데인, 펜타닐, 이부프로펜, 인도메타신, 케토롤락, 모르핀, 나프록센, 페나세틴, 피록시캄, 스테로이드성 진통제, 수펜타닐, 술린닥, 테니답 등과 같은 화합물과 함께 사용될 수 있다. 유사하게, 본 발명의 화합물 및 조성물은 상기 나열된 진통제; 강화제(potentiator), 예를 들어, 카페인, H2 길항제(예를 들어, 라니티딘), 시메티콘, 알루미늄 또는 마그네슘 하이드록사이드; 충혈제거제, 예를 들어, 페닐에프린, 페닐프로판올아민, 슈도에페드린, 옥시메타졸린, 에피네프린, 나파졸린, 크실로메타졸린, 프로필헥세드린, 또는 레보 데스옥시 에페드린; 진해제, 예를 들어, 코데인, 하이드로코돈, 카라미펜, 카르베타펜탄, 또는 덱스트로메토르판; 이뇨제; 및 진정성 또는 비진정성 항히스타민과 함께 투여될 수 있다.

마찬가지로, 본 발명의 화합물 및 조성물은 본 발명의 화합물 및 조성물이 유용한 질병 또는 질환의 치료, 예방, 억제 또는 개선에 사용되는 다른 약물과 함께 사용될 수 있다. 이러한 다른 약물은 본 발명의 화합물 또는 조성물과 동시에 또는 순차적으로, 통상적으로 사용되는 경로 및 양으로 투여될 수 있다. 본 발명의 화합물 또는 조성물이 하나 이상의 다른 약물과 동시에 사용되는 경우, 본 발명의 화합물 또는 조성물 외에 다른 약물을 함유하는 약학적 조성물이 바람직하다. 따라서, 본 발명의 약학적 조성물은 본 발명의 화합물 또는 조성물 외에 하나 이상의 다른 활성 성분 또는 치료제를 또한 함유하는 것을 포함한다. 별개로 투여되거나 동일한 약학적 조성물로 투여되는, 본 발명의 화합물 또는 조성물과 함께 조합될 수 있는 다른 치료제의 예는, (a)　VLA-4 길항제; (b)　코르티코스테로이드, 예를 들어, 베클로메타손, 메틸프레드니솔론, 베타메타손, 프레드니손, 프레니솔론, 덱사메타손, 플루티카손, 하이드로코르티손, 부데소니드, 트리암시놀론, 살메테롤, 살메테롤, 살부타몰, 포르메테롤; (c)　면역억제제, 예를 들어, 시클로스포린(시클로스포린 A, 샌드이뮨®(Sandimmune®), 네오랄®(Neoral®)), 타크롤리르누스(tacrolirnus)(FK-506, 프로그라프®(Prograf®)), 라파마이신(시롤리무스, 라파뮨®(Rapamune®)) 및 다른 FK-506 유형 면역억제제, 및 미코페놀레이트, 예를 들어, 미코페놀레이트 모페틸(셀셉트®(CellCept®)); (d)　항히스타민(H1-히스타민 길항제), 예를 들어, 브로모페니라민, 클로르페니라민, 덱스클로이페니라민(dexchloipheniramine), 트리프롤리딘, 클레마스틴, 디펜히드라민, 디페닐피랄린, 트리펠렌아민, 하이드록시진, 메트딜라진, 프로메타진, 트리메프라진, 아자타딘, 시프로헵타딘, 안타졸린, 페니라민 피릴아민, 아스테미졸, 테르페나딘, 로라타딘, 세티리진, 펙소페나딘, 데스카르보에톡시로라타딘 등; (e)　비스테로이드성 항 천식제(예를 들어, 터부탈린, 메타프로테레놀, 페노테롤, 이소에타린, 알부테롤, 비톨테롤 및 피르부테롤), 테오필린, 크로몰린 소듐, 아트로핀, 이프라트로퓸 브로마이드, 류코트리엔 길항제(예를 들어, 자픔루카스트(zafmlukast), 몬테루카스트, 프란루카스트, 이라루카스트, 포비루카스트 및 SKB-106,203), 류코트리엔 생합성 억제제(질류톤(zileuton), BAY-1005); (f)　비스테로이드성 항염증제(NSAID), 예를 들어, 프로피온산 유도체(예를 들어, 알미노프로펜, 베녹사프로펜, 부클록산(bucloxic acid), 카프로펜, 펜부펜, 페노프로펜, 플루프로펜, 플루르비프로펜, 이부프로펜, 인도프로펜, 케토프로펜, 알니로프로펜(rniroprofen), 나프록센, 옥사프로진, 피르프로펜, 프라노프로펜, 수프로펜, 티아프로펜산 및 티옥사프로펜), 아세트산 유도체(예를 들어, 인도메타신, 아세메타신, 알클로페낙, 클리다낙, 디클로페낙, 펜클로페낙, 펜클로즈산(fenclozic acid), 펜티아작, 푸로페낙, 이부페낙, 이속세팍, 옥스피낙, 술린닥, 티오피낙, 톨메틴, 지도메타신 및 조메피락), 페남산 유도체(예를 들어, 플루페남산, 메클로페남산, 메페남산, 니플룸산 및 톨페남산), 비페닐카르복실산 유도체(예를 들어, 디플루니살 및 플루페니살), 옥시캄(예를 들어, 이속시캄, 피록시캄, 수독시캄 및 테녹시칸), 살리실레이트(예를 들어, 아세틸 살리실산 및 술파살라진) 및 피라졸론(예를 들어, 아파존, 베즈피페릴론, 페프라존, 모페부타존, 옥시펜부타존 및 페닐부타존); (g)　시클로옥시게나제-2(COX-2) 억제제, 예를 들어, 셀레콕시브(셀레브렉스®(Celebrex®)) 및 로페콕시브(비옥스®(Vioxx®)); (h)　포스포디에스테라제 유형 Ⅳ의 억제제(PDE　Ⅳ); (i)　금 화합물, 예를 들어, 오라노핀 및 오로티오글루코오스, (j)　에타너셉트(엔브렐®(Enbrel®)), (k) 항체 요법제, 예를 들어, 오르토클론(OKT3), 다클리주맙(제나팍스®(Zenapax®)), 바실릭시맙(시뮬렉트®(Simulect®)) 및 인플릭시맙(레미케이드®(Remicade®)), (l)　케모카인 수용체, 특히 CCR5, CXCR2, CXCR3, CCR2, CCR3, CCR4, CCR7, CX₃CR1 및 CXCR6의 다른 길항제; (m) 윤활제 또는 연화제, 예를 들어, 페트롤라텀 및 라놀린, (n)　각질용해제(예를 들어, 타자로텐), (o)　비타민 D₃ 유도체, 예를 들어, 칼시포트리엔 또는 칼시포트리올(도보넥스®(Dovonex®)), (p)　PUVA, (q)　안트랄린(드리트로크렘®(Drithrocreme®)), (r)　에트레티네이트(테지슨®(Tegison®)) 및 이소트레티노인 및 (s)　다발경화증 치료제, 예를 들어, 인터페론 β-1β(베타세론®(Betaseron®)), 인터페론(β-1α(아보넥스®(Avonex®))), 아자티오프린(이뮤렉®(Imurek®), 이뮤란®(Imuran®)), 글라티라머 아세테이트(카폭손®(Capoxone®)), 글루코코르티코이드(예를 들어, 프레드니솔론) 및 시클로포스파미드, (t) DMARDS, 예를 들어, 메토트렉세이트, (u)　다른 화합물, 예를 들어, 5-아미노살리실산 및 이의 프로드러그; 하이드록시클로로퀸; D-페니실아민; 항대사물질, 예를 들어, 아자티오프린, 6-머캅토퓨린 및 메토트렉세이트; DNA 합성 억제제, 예를 들어, 하이드록시우레아 및 미세소관 파괴제, 예를 들어, 콜키신을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 본 발명의 화합물 대 제 2의 활성 성분의 중량비는 다양할 수 있고, 이는 각각의 성분의 유효량에 좌우될 것이다. 일반적으로, 각각의 유효량이 사용될 것이다. 따라서, 예를 들어, 본 발명의 화합물이 NSAID와 조합되는 경우, 본 발명의 화합물 대 NSAID의 중량비는 일반적으로 약 1000:1 내지 약 1:1000, 바람직하게는 약 200:1 내지 약 1:200의 범위일 것이다. 본 발명의 화합물 및 다른 활성 성분의 조합물은 또한 일반적으로 상기 언급된 범위에 포함될 것이나, 각각의 경우에서 각각의 활성 성분의 유효량이 사용되어야 한다.

Ⅴ. 실시예

하기 실시예는 예시로 제공되며, 청구된 본 발명을 제한하는 것이 아니다.

하기 사용되는 시약 및 용매는 시판 업체, 예를 들어, 알드리치 케미컬 코포레이션(Aldrich Chemical Co.)(Milwaukee, Wisconsin, USA)사에서 수득할 수 있다. ¹H-NMR을 배리언 머큐리(Varian Mercury) 400 MHz NMR 분광계에서 기록하였다. 유의한 피크가 TMS와 관련하여 제공되며, 이는 다중성(s, 싱글렛(singlet); d, 더블렛(doublet); t, 트리플렛(triplet); q, 콰르텟(quartet) m, 멀티플렛(multiplet) 및 양성자의 수의 순서로 표로 작성된다. 질량분광법 결과는 전하상 질량(mass over charge)의 비, 이후 각각의 이온의 상대존재비(괄호내)로 보고된다. 표에서, 단일한 m/e 값이 대부분 통상적인 원자 동위원소를 함유하는 M+H(또는, 인지되는 바와 같이 M-H) 이온에 대해 보고된다. 동위원소 패턴은 모든 경우에서 예상 포뮬러에 해당한다. 전기분무 이온화(ESI) 질량분광법 분석을 아질런트 조백스(Agilent Zorbax) SB-C18, 2.1X50 mm, 샘플 전달용 5 μ 컬럼이 장비된 HP1100 HPLC를 이용하는 휴렛-패커드(Hewlett-Packard) MSD 전기분무 질량분광계에서 수행하였다. 일반적으로, 분석물을 0.1 mg/mL로 메탄올에 용해시키고, 1 마이크로리터를 전달 용매와 함께 질량 분광계에 주입하고, 100에서 1500달톤까지 스캐닝하였다. 모든 화합물을 전달 용매로서 1% 포름산을 갖는 아세토니트릴/물을 이용하여 양성 ESI 모드로 분석하였다. 하기 제공되는 화합물은 또한 전달 시스템으로서 아세토니트릴/물 중의 2　mM NH₄OAc를 이용하여 음성 ESI 모드로 분석하였다.

실시예 및 본 발명의 기재 전체에서 하기 약어가 사용되었다:

DMF, 디메틸 포름아미드; TFA, 트리플루오로아세트산; THF, 테트라하이드로푸란; EtOAc, 에틸 아세테이트; BOC₂O, 디-터트부틸 디카보네이트 또는 BOC 무수물; HPLC, 고압 액체 크로마토그래피; DIPEA, 디이소프로필 에틸아민; HCTU, 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-5-클로로-1H-벤조트리아졸륨-3-옥사이드　 헥사플루오로포스페이트(1-); HBTU, O-(벤조트리아졸-1-일)-N,N,N' , N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트; dppf, 1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센; Pd₂(dba)₃, 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0); DIPEA, 디이소프로필에틸아민; DMP, 디메틸프탈레이트; Me, 메틸; Et, 에틸; DCM, 디클로로메탄.

본 발명의 범위 내의 화합물은 당업자에게 공지된 다양한 반응을 이용하여 하기 기재되는 바와 같이 합성될 수 있다. 당업자는 또한 본 발명의 표적 화합물을 합성하기 위해 대안적 방법이 사용될 수 있고, 본문에 기재된 접근법이 총망라된 것이 아니며, 관심 화합물에 광범위한 적용가능한 실시 방법이 제공되는 것을 인지할 것이다.

본 발명에 청구된 특정 분자는 다양한 거울상 이성질체 및 부분입체 이성질체 형태로 존재할 수 있고, 상기 화합물의 모든 변이체가 청구된다.

본 발명의 상황에서 중요 화합물을 합성하는데 사용된 실험 절차의 상세한 설명은 물리적 데이터 확인 뿐만 아니라 관련 구조도에 의해 기재되는 분자를 발생시킨다.

당업자는 또한 유기 화학에서의 표준 작업 절차 동안 산 및 염기가 빈번히 사용되는 것을 인지할 것이다. 본 발명에 기재된 실험 절차 동안 모 화합물이 필요한 내재성 산도 또는 염기도를 갖는 경우 상기 모 화합물의 염이 종종 생성된다.

실시예 1

본 실시예는 2-[4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일]-1-[4-(4-클로로-3-메톡시페닐)피페라진-1-일]에타논의 제조를 예시한다.

단계 1: 4-아미노-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-카르보니트릴

내부 온도를 16℃ 미만으로 유지하면서 얼음 배쓰에 배치된 에탄올(700 mL) 중의 히드라진카르복실산 tert-부틸 에스테르(129 g, 0.976 mol)의 용액에 2,3-디시아노-부트-2-엔디니트릴(125 g, 0.976 mol)을 나누어 첨가하였다. 첨가 완료 후, 반응 혼합물을 4시간 동안 가열 환류시키고, 농축시키고, 진공하에서 건조시켜, 5-아미노-1H-피라졸-3,4-디카르보니트릴을 생성시켰다. MS (ES) m/z 134.1(M+ H⁺).

상기에서 수득된 5-아미노-1H-피라졸-3,4-디카르보니트릴을 8시간 동안 트리메틸오르토포르메이트(1 L)에서 환류시켰다. 이후, 혼합물을 농축시키고, 진공하에서 건조시켜, N-(4,5-디시아노-2H-피라졸-3-일)-포르미미딕산(formimidic acid) 메틸 에스테르를 생성시키고, 이를 메탄올(400 mL)에 용해시키고, 0℃로 냉각시키고, 메탄올(1 L) 중의 7 N NH₃로 처리하였다. 생성된 혼합물을 밤새 실온으로 가온시키고, 여과시켰다. 고체를 MeOH-H₂O(100 mL), 아세톤(100 mL) 및 에테르(100 mL)의 2:1 혼합물로 세척한 후, 진공하에서 건조시켜, 4-아미노-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-카르보니트릴(79 g, 50% 수율)을 생성시켰다. MS (ES) m/z 161.0 (M+ H⁺).

단계 2: tert-부틸 2-(4-아미노-3-시아노-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)아세테이트

내부 온도를 20℃ 미만으로 유지시키면서 0℃에서 DMF(680 mL) 중의 4-아미노-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-카르보니트릴(76.6 g, 0.476 mol) 및 탄산칼륨(197 g, 1.427 mmol)의 혼합물에 tert-부틸 클로로아세테이트(68.1 mL, 0.476 mol)를 적가하였다. 생성된 혼합물을 22시간 동안 교반하고, 여과시키고, EtOAc(100 mL x 2)로 세척하였다. 수득된 고체를 얼음물(1.5 L)에 현탁시키고, 여과시키고, 얼음물(500 mL) 및 에테르(100 mL x 2)로 세척한 후, 진공하에서 건조시켜, tert-부틸 2-(4-아미노-3-시아노-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)아세테이트(81.6 g, 62.3% 수율)를 생성시켰다. MS (ES) m/z 275.0 (M+ H⁺).

단계 3: tert-부틸 2-(4-아미노-3-(4,5-디하이드로-1H-이미다졸-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)아세테이트

얼음물 배쓰 중의 (4-아미노-3-시아노-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)아세트산 tert-부틸 에스테르(80 g, 0.291 mol) 및 EtOH(800 mL)의 혼합물에 아세트산(67 mL)을 첨가한 후, 에틸렌디아민(195 mL)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90분 동안 환류시키고, 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 고체를 물(1 L)에 현탁시키고, 여과시키고, 진공하에서 건조시켜, tert-부틸 2-(4-아미노-3-(4,5-디하이드로-1H-이미다졸-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)아세테이트(84.6 g, 90% 수율)를 생성시켰다. MS (ES) m/z 318.1 (M+ H⁺).

단계 4: (2-(4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)아세트산 디하이드로클로라이드

내부 온도를 25℃ 미만으로 유지하면서 얼음물 배쓰 중의 tert-부틸 2-(4-아미노-3-(4,5-디하이드로-1H-이미다졸-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)아세테이트(84 g, 0.265 mol) 및 DMSO(900 mL)의 혼합물에 데스-마틴(Dess-Martin) 페리오디난(169.6 g, 0.4 mol)을 나누어 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 84 g의 Na₂S₂O₃를 함유한 얼음물(2 L)에 부었다. 혼합물을 3N NaOH로 pH 12-14로 조정하고, 여과시켜, 고체를 생성시키고, 이를 물로 세척하고, 얼음물(2 L)에 재현탁시키고, 여과시키고, 물(500 mL), EtOAc(100 mL x 2) 및 Et₂O(100 mL x 2)로 세척하고, 진공하에서 건조시켜, (2-(4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)아세트산 tert-부틸 에스테르(66.2 g, 80% 수율)를 생성시켰다. MS (ES) m/z 316.1 (M+ H⁺).

2시간 동안 환류하에서 (2-(4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)아세트산 tert-부틸 에스테르(61 g, 193 mmol)에 디옥산(700 mL) 중의 4N HCl을 처리하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 여과에 의해 고체를 수거하고, EtOAc(80 mL x 2) 및 Et₂O(100 mL)로 세척하고, 진공하에서 건조시켜, 디하이드로클로라이드 염(66 g, 정량)으로서 (2-(4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)아세트산을 생성시켰다. MS (ES) m/z 260.1 (M+ H⁺).

단계 5: 2-[4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일]-1-[4-(4-클로로-3-메톡시페닐)피페라진-1-일]에타논

[4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일]아세트산 디하이드로클로라이드(79 g, 0.238 mol) 및 1-(4-클로로-3-메톡시페닐)피페라진 디하이드로클로라이드(71.3 g, 0.238 mol)를 무수 DMF(793 mL)에 현탁시키고, 얼음 배쓰에서 냉각시켰다. N,N-디이소프로필에틸아민(290 mL, 1.67 mol)을 첨가하고, 모든 고체가 용해될때까지 혼합물을 실온에서 교반하여, 갈색 용액을 형성시켰다. 내부 온도를 20℃ 미만으로 유지하면서 10분에 걸쳐 HCTU(113.23 g, 0.273 mol)를 나누어 첨가하였다. 3시간 후, 반응 혼합물을 강하게 교반되는 얼음물(6 L)의 플라스크에 천천히 부어, 현탁액을 생성시키고, 이를 1시간 동안 교반하고, 여과시키고, 포화 NaHCO₃(500 mL x 2) 및 물(500 mL x 2)로 세척하였다. 고체를 환류 MeCN(2 x 500 mL)에서 분쇄시킴으로써 정제하여, 2-[4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일]-1-[4-(4-클로로-3-메톡시페닐)피페라진-1-일]에타논(90.5g, 81% 수율, LC-MS에 의해 >98% 순도)을 생성시켰다. ¹H NMR (400 MHz, d₆- DMSO) δ 13.0 (s, 1H), 10.14 (d, 1H, J = 3.7 Hz), 8.16 (s, 1H), 7.95 (d, 1H, d, J = 3.7 Hz), 7.25 (dd, 1H, J = 1.03 및 1.36 Hz), 7.20 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 7.16 (s, 1H), 6.70 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 6.52 (dd, 1H, J = 2.4 및 8.8 Hz), 5.37 (s, 2H), 3.83 (s, 3H), 3.74 (t, 2H, J = 4.8 Hz), 3.58 (t, 2H, J = 4.8 Hz), 3.28 (t, 2H, J = 4.8 Hz), 3.17 (t, 2H, J = 4.8 Hz). ¹³C NMR (100.6 MHz, d₆-DMSO) δ 165.3, 159.0, 157.3, 155.7, 155.5, 151.6, 141.2, 136.6, 130.3, 128.7, 119.0, 111.9, 109.0, 101.9, 98.0, 56.7, 49.4, 48.9, 48.8, 44.7, 42.1; IR (KBr) 3219, 2937, 1682, 1638, 1594, 1567 cm^-1; MS (ES) m/z 468.1(M+ H⁺). C₂₁H₂₂N₉O₂Cl-0.85 H₂O에 대해 계산된 분석치: C, 52.20; H, 4.94; N, 26.09; Cl, 7.34. 실측치: C, 51.92; H, 4.68; N, 26.44; Cl, 7.18.

단계 6: 2-[4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일]-1-[4-(4-클로로-3-메톡시페닐)피페라진-1-일]에타논 디하이드로클로라이드 염

60℃에서 2-[4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일]-1-[4-(4-클로로-3-메톡시페닐)피페라진-1-일]에타논(50 g, 0.1068 mol), H₂O(250 mL) 및 아세톤(750 mL)의 혼합물에 농축된 HCl(22.3 mL, 0.267 mol, 2.50 당량)을 적가하여, 갈색 용액을 생성시켰다. 90분 후, 진한 황갈색 현탁액이 형성되었다. 현탁액을 0.03 M의 최종 농도로 희석시키고, 내부 온도를 58℃ 내지 62℃로 유지시키면서 아세톤(2.1 L)을 적가하였다. 생성된 혼합물을 또 다른 90분 동안 60℃에서 교반하고, 실온으로 냉각시키고, 여과시켰다. 고체를 아세톤(60 mL x 2)으로 세척하고, 진공하에서 건조시켜, 미세한 황갈색 프리즘으로서 2-[4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일]-1-[4-(4-클로로-3-메톡시페닐)피페라진-1-일]에타논 디하이드로클로라이드 염(49.2 g, 80% 수율, LC-MS에 의해 >99% 순도)을 생성시켰다. ¹H NMR (400 MHz, d₆-DMSO) δ 13.45 (s, 1H), 11.92 (s, 1H), 9.43 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 7.33 (s, 2H), 7.22 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 6.72 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 6.55 (dd, 1H, J = 2.4, 8.8 Hz), 5.54 (s, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.76 (t, 2H, J = 4.8 Hz), 3.61 (t, 2H, J = 4.8 Hz), 3.31 (t, 2H, J = 4.8 Hz), 3.20 (t, 2H, J = 4.8 Hz). MS (ES) m/z 468.1(M+ H⁺). C₂₁H₂₂N₉O₂Cl-2HCl-1.75H₂O에 대해 계산된 분석치: C, 44.07; H, 4.84; N, 22.02; Cl, 18.58. 실측치: C, 43.89; H, 4.48; N, 22.0; Cl, 18.26. C₂₁H₂₂N₉O₂Cl-2HCl-1.75H₂O에 대해 계산된 KF (H₂O): 5.51%. 실측치: 5.14%.

실시예 2

본 실시예는 2-[4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일]-1-[4-(4-클로로-3-메톡시페닐)-2,2-디메틸피페라진-1-일]에타논의 제조를 예시한다.

단계 1: 4-(4-클로로-3-메톡시-페닐)-3,3-디메틸피페라진 디하이드로클로라이드

톨루엔(35 mL) 중의 5-브로모-2-클로로아니솔(3.70 g, 16.7 mmol, 1 당량), 2,2-디메틸-피페라진(2.2 g, 1.2 당량) 및 rac-BINAP(1.04 g, 0.1 당량)의 혼합물을 5분 동안 압축 질소로 탈기시켰다. 혼합물에 NaOt-Bu(2.3 g, 1.4 당량) 및 Pd₂(dba)₃(54 mg, 0.005 당량)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 밤새 60℃에서 가열하고, 실온으로 냉각시켰다. EtOAc(~ 200 mL)를 첨가하고, 혼합물을 셀라이트를 통해 여과시켰다. 여과액을 포화 수성 K₂CO₃(200 mL), 포화 수성 NaHCO₃ (200 mL) 및 염수(200 mL)로 차례로 세척한 후, 황산마그네슘 상에서 건조시켰다. 증발 후 생성된 잔여물을 EtOAc(100 mL)에 용해시키고, 2시간 동안 실온에서 Et₂O(100 mL) 중의 2N HCl로 처리하였다. 여과에 의해 고체를 수거하고, 진공하에서 건조시켜, 4-(4-클로로-3-메톡시-페닐)-3,3-디메틸피페라진 디하이드로클로라이드(4.0 g)를 생성시켰다. MS (ES) m/z 255.1 (M+ H⁺).

단계 2: 2-[4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일]-1-[4-(4-클로로-3-메톡시페닐)-2,2-디메틸피페라진-1-일]에타논

[4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일]아세트산 디하이드로클로라이드(100 mg, 0.2 mmol) 및 1-(4-클로로-3-메톡시페닐)-3,3-디메틸피페라진 디하이드로클로라이드(100 mg, 0.3 mmol)를 무수 DMF(2.5 mL)에 현탁시켰다. N,N-디이소프로필에틸아민(0.32 mL, 1 mmol)을 0℃에서 첨가하고, 혼합물을 모든 고체가 용해될때까지 실온에서 교반하여, 갈색 용액을 생성시켰다. HBTU(114 mg, 0.3 mmol)를 첨가하였다. 2시간 후, 반응 혼합물을 강하게 교반되는 얼음물(100 mL)의 플라스크에 천천히 부었다. 생성된 현탁액을 디클로로메탄(100 mL) 으로 추출하고, 포화된 NaHCO₃(100 mL), 염수(100 mL)로 세척하고, 증발시켰다. 잔여물을 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하고, 증발 및 진공하에서의 건조 후에 밝은 황갈색 고체(45 mg)로서 2-[4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일]-1-[4-(4-클로로-3-메톡시페닐)-2,2-디메틸피페라진-1-일]에타논을 생성시켰다. ¹H NMR (400 MHz, d₆-DMSO) δ 10.14 (d, 1H, J = 3.6 Hz), 8.16 (s, 1H), 7.95 (d, 1H, d, J = 3.6 Hz), 7.24 (s, 1H), 7.15 (s, 1H), 7.14 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 6.40 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 6.31 (dd, 1H, J = 2.4 및 8.8 Hz), 5.29 (s, 2H), 3.90 (t, 2H, J = 5.4 Hz), 3.84 (s, 3H), 3.46 (t, 2H, J = 5.4 Hz), 3.30 (s, 2H), 1.38 (s, 6H). MS (ES) m/z 496.1 (M+ H⁺).

실시예 3

본 실시예는 2-[4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일]-1-[4-(4-클로로-2-플루오로-5-메톡시페닐)-피페라진-1-일]에타논의 제조를 예시한다.

DMF(0.5 mL) 중의 1-(4-클로로-2-플루오로-5-메톡시페닐)-피페라진 디하이드로클로라이드 염(65.2 mg, 0.206 mmol, 1 당량), [4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일]아세트산(50 mg, 1 당량), BOP 시약(109 mg, 1.7 당량) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(0.165 mL, 5 당량)의 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 역상 HPLC(용리액으로서 0.1% TFA를 갖는 아세토니트릴-H₂O) 정제로 2-[4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일]-1-[4-(4-클로로-2-플루오로-5-메톡시페닐)-피페라진-1-일]에타논을 생성시켰다. MS (ES) m/z 486.5 (M+ H⁺).

실시예 4

본 실시예는 2-[4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일]-1-[4-(4-클로로-2-플루오로-5-메톡시페닐)-2-메틸-피페라진-1-일]에타논의 제조를 예시한다.

1-(4-클로로-2-플루오로-5-메톡시페닐)-3-메틸피페라진 디하이드로클로라이드를 이용하여 실시예 3에 기재된 절차와 유사한 절차에 의해 표제 화합물을 제조하였다. ¹H NMR (400 MHz, d₆-DMSO) δ 14.20 (br, 2H), 10.28 (br, 1H), 8.15 (s. 1H), 7.93 (br s, 1H), 7.33 (d, 1H, J = 11.6 Hz), 7.17 (br s, 1H), 6.71 (d, 1H, J = 8.0 Hz), 5.44 (m, 1H), 5.21 (d, 1H, J = 15.6 Hz), 4.54 (m, 0.5H), 4.39 (m, 0.5H), 4.19 (m, 0.5H), 3.97 (m, 0.5 H), 3.84 (s, 3H), 3.56 (m, 0.5 Hz), 3.40 (m, 2H), 3.08 (m, 0.5H), 2.96 (m, 0.5H), 2.85 (m, 1H), 2.72 (m, 0.5H), 1.42 (d, 1H, J = 6.0 Hz), 1.24 (d, 2H, J = 6.8 Hz). MS (ES) m/z 500.5 (M+ H⁺).

실시예 5

본 실시예는 2-[4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일]-1-[4-(4-클로로-2-플루오로페닐)-2-메틸-피페라진-1-일]에타논의 제조를 예시한다.

단계 1: 1-(4-클로로-2-플루오로-페닐)-3-메틸피페라진

1-브로모-4-클로로-2-플루오로벤젠(5 g, 23.9 mmol, 1 당량), 2-메틸피페라진(2.8 g, 1.15 당량), 트리스-벤질리딘아세톤 디팔라듐(0)(0.43 g, 0,05 당량), rac-BINAP(0.89 g, 0.15 당량), 소듐 tert-부톡시드(3.2 g, 1.4 당량)를 톨루엔(60 mL) 중에서 슬러리화시키고, 혼합물을 밤새 65℃에서 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 에틸 아세테이트(100 mL)를 첨가하였다. 흑색 침전물을 여과에 의해 제거하였다. 여과액을 3N 탄산칼륨 용액으로 2회 세척하였다. 유기상을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 2N HCl-에테르로 중화시켰다. 고체를 여과에 의해 수거하고, 에테르로 세척하고, 진공하에서 건조시켜, 디하이드로클로라이드 염으로서 1-(4-클로로-2-플루오로페닐)-3-메틸피페라진을 생성시켰다.

단계 2: 1-(4-클로로-2-플루오로페닐)-3-메틸피페라진을 이용하여 실시예 3에 기재된 절차와 유사한 절차에 의해 표제 화합물을 제조하였다. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 10.38 (br, 1H), 10.26 (br, 1H), 8.32 (s, 1H), 7.24 (m, 2H), 7.17 (s, 1H), 7.07 (s, 1H), 7.04 (d, 2H, J = 2 Hz), 6.80 (t, 1H, J = 8.8 Hz), 5.93 (br s, 1H), 5.24 (m, 2H), 4.81 (s, 0.5H), 4.47 (d, 0.5H, J = 12 Hz), 4.20 (s, 0.5H), 3.68 (m, 1H), 3.31 (m, 2H), 2.88 (t, 1H, J = 16 Hz), 2.76 (dd, 1H, J = 12, 3.6 Hz), 1.50 (d, 1.5H, J = 5.2 Hz), 1.39 (d, 1.5H, J = 6.4 Hz). MS (ES) m/z 470.5 (M+ H⁺).

실시예 6

본 실시예는 2-[4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일]-1-[4-(4-클로로-3-에톡시페닐)-피페라진-1-일]에타논의 제조를 예시한다.

1-(4-클로로-3-에톡시페닐)피페라진 디하이드로클로라이드를 이용하여 실시예 3에 기재된 절차와 유사한 절차에 의해 표제 화합물을 제조하였다. ¹H NMR (400 MHz, d₆-DMSO) δ 14.20 (br, 1H), 10.13 (br, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.98 (d, 1H, J = 4 Hz), 7.25 (S, 1H,), 7.19 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 7.15 (s, 1H), 6.68 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 6.51 (dd, 1H, J = 8.8, 2.8 Hz), 5.36 (s, 2H), 4.09 (q, 2H, J = 6.4 Hz), 3.73 (br, 2H), 3.57 (br, 2H), 3.26 (br, 2H), 3.15 (br, 2H), 1.34 (t, 3H, J = 6.8 Hz). MS (ES) m/z 482.5 (M+ H⁺).

실시예 7

본 실시예는 2-[4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일]-1-[4-(4-클로로-3-메톡시페닐)-2-메틸-피페라진-1-일]에타논의 제조를 예시한다.

1-(4-클로로-3-메톡시페닐)-3-메틸피페라진 디하이드로클로라이드를 이용하여 실시예 3에 기재된 절차와 유사한 절차에 의해 표제 화합물을 제조하였다. ¹H NMR (400 MHz, d₆-DMSO) δ 14.4 (br, 1H), 10.13 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.25 (t, 1H, J=1.2Hz), 7.19 (d, 1H, J=8Hz), 7.15 (s, 1H), 6.64 (s, 1H), 6.50 (m, 1H), 5.51-5.21 (m, 2H), 4.49 (s, 0.5H), 4.38 (s, 0.5H), 4.15 (m, 0.5 H), 3.98 (m, 0.5H), 3.83 (s, 3 H), 3.70 (m, 1H), 3.55 (m, 1H), 3.29 (s, 1H), 3.08-2.85 (m, 2H), 1.37 (d, 1.5H, J = 6.0 Hz), 1.18 (d, 1.5H, J = 6.4 Hz). MS (ES) m/z 482.2 (M+ H⁺).

실시예 8

본 실시예는 2-[4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일]-1-[4-(4-클로로페닐)-2-메틸피페라진-1-일]에타논의 제조를 예시한다.

1-(4-클로로페닐)-3-메틸피페라진 디하이드로클로라이드를 이용하여 실시예 3에 기재된 절차와 유사한 절차에 의해 표제 화합물을 제조하였다. ¹H NMR (400 MHz, d₆-DMSO) δ 11.96 (br, 1H), 9.62 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.35 (s, 1H), 7.30 (s, 1H), 7.22 (t, 2H, J = 2.4 Hz), 6.96 (t, 2H, J = 8Hz), 5.50 (m, 2H), 4.45 (m, 0.5H), 4.15 (m, 0.5H), 3.90 (m, 0.5H), 3.55 (m, 2 H), 2.8-3.14 (m, 2H), 2.60 (m, 0.5 Hz), 1.89 (s, 1H), 1.39 (d, 1.5H, J = 6.0 Hz), 1.18 (d, 1.5H, J = 6.8 Hz). MS (ES) m/z 452.1 (M+ H⁺).

실시예 9

본 실시예는 2-[4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일]-1-[4-(4-클로로페닐)피페라진-1-일]에타논의 제조를 예시한다.

1-(4-클로로페닐)피페라진 디하이드로클로라이드를 이용하여 실시예 3에 기재된 절차와 유사한 절차에 의해 표제 화합물을 제조하였다. MS (ES) m/z 438.1 (M+ H⁺).

실시예 10

본 실시예는 2-[4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일]-1-[4-(4-클로로-3-에톡시페닐)-2-메틸피페라진-1-일]에타논의 제조를 예시한다.

1-(4-클로로-3-에톡시페닐)-3-메틸피페라진 디하이드로클로라이드를 이용하여 실시예 3에 기재된 절차와 유사한 절차에 의해 표제 화합물을 제조하였다. ¹H NMR (400 MHz, d₆-DMSO) δ 14.4 (br, 1H), 10.15 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.18 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 7.15 (s, 1H), 6.62 (s, 1H,), 6.50 (m, 1H), 5.51-5.25 (m, 2H), 4.48 (s, 0.5H), 4.38 (s, 0.5H), 4.09 (m, 2.5 H), 3.93 (m, 0.5H), 3.68-3.51 (m, 2H), 3.07-2.75 (m, 2.5H), 2.61 (m, 0.5H), 1.33(t, 3H, J = 6.8 Hz), 1.17(d, 3H, J = 7.2 Hz). MS (ES) m/z 496.5 (M+ H⁺).

실시예 11

본 실시예는 2-[4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일]-1-[4-(4-클로로-3-트리플루오로메톡시페닐)피페라진-1-일]에타논의 제조를 예시한다.

DMF(0.5 mL) 중의 1-(4-클로로-3-트리플루오로메톡시페닐)피페라진 디하이드로클로라이드 염(70 mg, 0.198 mmol, 1 당량), [4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일]아세트산(96 mg, 1 당량), HATU(98 mg, 1.3 당량) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(0.276 mL, 8 당량)의 혼합물을 3시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석시키고, 포화 수성 중탄산나트륨으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, TLC에 의해 정제하여 2-[4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일]-1-[4-(4-클로로-3-트리플루오로메톡시페닐)피페라진-1-일]에타논을 생성시켰다. ¹H NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 8.18 (s, 1H), 7.39 (s, 1H,), 7.18 (d, 2H, J = 8.8 Hz), 6.95 (s, 2H), 5.40 (s, 2H), 3.85 (m, 4H), 3.25 (m, 4 H). 용매로서 CD₃OD의 사용으로 인해 3개의 나머지 양성자(아미노기 및 아미다졸 고리로부터의 양성자)는 관찰되지 않았다. MS (ES) m/z 522.1 (M+ H⁺).

실시예 12

본 실시예는 2-[4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일]-1-[4-(4-클로로-2-플루오로페닐)피페라진-1-일]에타논의 제조를 예시한다.

단계 1: 1-(4-클로로-2-플루오로페닐)피페라진

1-브로모-4-클로로-2-플루오로벤젠(5 g, 23.9 mmol, 1 당량), 피페라진-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르(5.3 g, 1.15 당량), 트리스-벤질리딘아세톤 디팔라듐(0)(0.43 g, 0.05 당량), rac-BINAP(0.89 g, 0.15 당량), 소듐 tert-부톡시드(3.2 g, 1.4 당량)를 톨루엔(60 mL) 중에서 슬러리화시키고, 혼합물을 밤새 65℃에서 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 에틸 아세테이트(100 mL)를 첨가하였다. 흑색 침전물을 여과에 의해 제거하였다. 여과액을 3N 탄산칼륨 용액으로 2회 세척하였다. 유기상을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시키고, 디옥산 중의 4N HCl로 처리하였다. 고체를 여과에 의해 수거하고, 에테르로 세척하고, 고 진공하에서 건조시켜, 디하이드로클로라이드 염으로서 1-(4-클로로-2-플루오로페닐)피페라진을 생성시켰다.

단계 2: 1-(4-클로로-2-플루오로페닐)피페라진 디하이드로클로라이드를 이용하여 실시예 11에 기재된 절차와 유사한 절차에 의해 표제 화합물을 제조하였다. ¹H NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 8.16 (s, 1H), 7.19 (s, 1H), 7.1-7.17 (m, 3H), 7.05 (m, 1H), 5.40 (s, 2H), 3.85 (m, 2H), 3.75 (m, 2 H), 3.18 (m, 2H), 3.07 (m, 2H). 용매로서 CD₃OD의 사용으로 인해 3개의 나머지 양성자(아미노기 및 이미다졸 고리로부터의 양성자)는 관찰되지 않았다. MS (ES) m/z 456.1 (M+ H⁺).

실시예 13

본 실시예는 본 발명의 관심 화합물과 관련된 생물학적 활성의 평가를 예시한다.

재료 및 방법

A. 세포

1. CCR1 발현 세포

a) THP -1 세포

THP-1 세포를 ATCC(TIB-202)로부터 입수하고, 2 mM L-글루타민, 1.5 g/L 중탄산나트륨, 4.5 g/L 글루코오스, 10 mM HEPES, 1 mM 소듐 피루베이트, 0.05% 2-머캅토에탄올 및 10% FBS가 보충된 RPMI-1640 배지 중의 현탁액으로 배양하였다. 세포를 37℃에서 5% CO₂/95% 공기, 100% 습도하에서 성장시키고, 1:5(세포는 2 x 10⁵ 내지 2 x 10⁶ 세포/mL의 밀도 범위로 배양됨)로 매주 2회 계대배양하고, 1 x 10⁶ 세포/mL로 수거하였다. THP-1 세포는 CCR1을 발현하고, CCR1 결합 및 기능 검정에 사용될 수 있다.

2. 화학주성 검정

CCR1 의 억제제의 확인

케모카인의 주요 기능 중 하나는 케모카인 수용체 발현 세포, 예를 들어, 백혈구 세포의 이동을 매개하는 능력이다. 관심 화합물이 CCR1 특이적 결합 및 신호전달(적어도 칼슘 이동 검정에 의해 결정됨) 뿐만 아니라 CCR1 매개 이동을 억제하는지 확인하기 위해, 화학주성 검정을 이용하였다. 단핵구와 유사한 THP-1 골수단핵구 백혈병 세포 뿐만 아니라 새로이 분리된 단핵구를 CCR1 케모카인 리간드(즉, MIP-1α, CCL15/류코탁틴)에 의한 화학주성에 대한 표적으로 사용하였다. 세포를 화학주성 완충액(행크 균형 염 용액(HBSS) 및 1% FBS)을 이용하여 마이크로웰 이동 챔버의 상부 구획, 96-웰 화학주성 챔버(Neuroprobe; Gaithersburg, MD) 내의 5 ㎛ 포어(pore) 폴리카보네이트, 폴리비닐피롤리돈 코팅된 필터에 배치시켰다. CCR1 매개 이동의 화합물 매개 억제를 평가하기 위해 CCR1 케모카인 리간드(즉, MIP-1α, CCL15/류코탁틴; R&D Systems; Minneapolis, MN)를 사용하였다. 다른 케모카인(즉, SDF-1α, R&D Systems; Minneapolis, MN)을 특이성 대조군으로 사용하였다. 하부 챔버에 29 ㎕의 케모카인(즉, 0.1 nM CCL15/류코탁틴) 및 다양한 양의 화합물을 로딩하였고, 상부 챔버는 20 ㎕ 중의 100,000개의 THP-1 또는 단핵구 세포를 함유하였다. 억제제의 부재하에서, 세포는 케모카인 효능제에 반응하여 하부 챔버로 이동할 것이고, 화합물이 CCR1 기능을 억제하는 경우, 대부분의 세포는 상부 챔버에 남아있을 것이다. CCR1에 대한 관심 화합물의 친화성을 확인할 뿐만 아니라 CCR1 매개 세포 이동을 억제하는 능력을 확인하기 위해, 본 화학주성 검정에서 1 x 10^-10 내지 1 x 10^-4 M 범위를 초과하는 화합물 농도로 억제 활성을 적정(titer)시켰다. 본 검정에서, 화합물의 양은 다양한 반면, 세포수 및 케모카인 효능제 농도는 일정하게 유지시켰다. 화학주성 챔버를 37℃에서 1-2 시간 동안 인큐베이션한 후, 핵산 함량을 측정하는 형광 염료 방법인 CyQuant 검정(Molecular Probes)으로 표지시키고, 스펙트라플루오르 플러스(Spectrafluor Plus)(Tecan)로 측정함으로써 하부 챔버 내의 반응 세포를 정량하였다. IC₅₀ 값을 계산하기 위해 그래프패드 인코포레이션(GraphPad, Inc.)(San Diego, Ca)사의 컴퓨터 프로그램 프리즘(Prism)을 사용하였다. IC₅₀ 값은 CCR1 효능제에 반응하는 세포의 수를 50%까지 억제하는데 필요한 화합물 농도이다.

3. 생체내 효능

a) 파괴성 관절 염증의 토끼 모델

토끼 LPS 연구는 본질적으로 문헌[Podolin, et al. ibid .]에 기재된 바와 같이 수행될 수 있으며, 암컷 뉴질랜드 토끼(약 2 킬로그램)에 LPS(10 ng)를 양 무릎에 관절내 처리하였다. 관심 화합물(예를 들어, 1% 메토셀 중에서 제형화됨) 또는 비히클(1% 메토셀)을 2회(관절내 LPS 주사 2시간 전 및 관절내 LPS 주사 4시간 후)로 5 ml/kg 용량 부피로 경구 투여하였다. LPS 주사 16시간 후, 무릎을 세척하고, 세포 계수를 수행하였다. 무릎 관절의 염증이 있는 윤활액에 보충되는 염증 세포의 수의 감소에 의해 치료의 이로운 효과를 결정하였다. 관심 화합물을 이용한 치료는 보충되는 염증 세포의 유의한 감소를 발생시켰다.

b) 콜라겐 유도 관절염의 래트 모델에서의 관심 화합물의 평가

관절염 유도 임상 발목 부종에 대한 관심 화합물의 효과를 평가하기 위해 17일 동안 발달하는 유형 Ⅱ 콜라겐 관절염 연구를 수행할 수 있다. 래트 콜라겐 관절염은 다수의 항관절염 작용제(anti-arthritic agent)의 전임상 시험에 널리 사용되는 다발성관절염의 실험 모델이다(Trentham, et al., J. Exp . Med . 146(3):857-868 (1977), Bendele, et al., Toxicologic Pathol . 27:134-142 (1999), Bendele, et al., Arthritis Rheum . 42:498-506 (1999) 참조). 이러한 모델의 특징은 신뢰성 있는 발병 및 확실한 발달, 용이하게 측정가능한 다관절 염증, 판누스 형성과 관련된 현저한 연골 파괴 및 경증 내지 중등증의 골흡수 및 골막골 증식이다.

암컷 루이스(Lewis) 래트(약 0.2 킬로그램)를 이소플루란으로 마취시키고, 17일의 연구에서 0일 및 6일에 꼬리의 기부 및 등쪽의 2개의 부위에 2 mg/mL 소 유형 Ⅱ 콜라겐을 함유하는 프로인트 불완전 애쥬번트를 주사하였다. 관심 화합물은 유효한 용량으로 0일로부터 17일까지 피하 방식으로 매일 투여된다. 무릎 관절 직경의 캘리퍼스 측정을 수행하고, 감소된 관절 부종을 효능의 척도로 취하였다.

c) 난소절제술 유도성 골다공증의 래트 모델

난소절제술 유도성 골다공증의 래트 모델은 본질적으로 문헌[Dunstan et al, (1999) J. Bone and Min Res . 14:953]과 같이 수행될 수 있다. 어린 암컷 스프라그-돌리(Sprague-Dawley) 래트(180-200 g)를 모의 수술하거나, 난소절제(OVX)하였다. 수술 7일 이내에, CCR1 길항제 또는 비히클 단독(참기름)의 일일 경구 투여를 개시하였다. 투여 2주 후, 래트를 안락사시키고, 파골세포 및 골모세포 생체마커(각각 C-텔로펩티드 및 MID 오스테오칼신)의 혈청 수준을 분석하였다. 추가로, H&E 및/또는 TRAP 염색을 이용한 조직병리학적 시험을 위해 대퇴골 및 경골을 분리시켰다.

d) 골수종 골 질환의 변형된 Radl 5 TGM1 모델

문헌[Oyajobi et al, Mol Cancer Ther, 2007, 6:1701-1708]에 추가로 기재된 바와 같이 골수종 골 질환을 연구하였다. 6 내지 9주령의 암컷 C57BL/KaLwRijHsd 마우스(Harlan)를 이용하여 동물 연구를 수행하였다. 꼬리 정맥을 통해 10⁶개의 살아있는 5TGM1-eGFPH1.1+ 세포 또는 모(parental) 5TGM1 세포의 정맥내 접종에 의해 마우스에서 골수종 병변을 유도하였다. 관심 화합물(예를 들어, 100% 참기름에 제형화됨) 또는 비히클(100% 참기름)을 4주 동안 매일 2회로 2.5 ml/kg의 용량 부피로 경구 투여하였다. 동물의 체중을 기준선 및 이후 매주 결정하였다. 4주 종료시, 전체 마우스의 사진을 찍고, 희생 직후, 골 및 내장 기관(비장, 간, 신장, 생식선, 뇌, 폐 및 심장)을 해부하고, 종양 부하를 평가하기 위해 형광 종양 병소에 대해 사진을 찍었다.

표 2(하기)에서, 본원에 기재된 대표적 화합물에 대한 구조 및 활성이 제공된다. 활성은 상기 기재된 화학주성 검정에 대해 다음과 같이 제공된다: +, 10 nM < IC₅₀ < 150 nM; ++, 1 nM < IC₅₀ < 10 nM; 및 +++, IC₅₀ < 1 nM.

표 2

직접적인 비교에서, 본 발명의 화합물 1.001, 1.003, 1.004, 1.006, 1.007, 1.010 및 1.011은 시험된 관련 화합물(관련 미국 출원 일련 번호 제 12/124,894호에서의 이미다졸 치환된 피리도[4,3-b]피라졸)에 의해 입증된 활성보다 적어도 10배(an order of magnitude) 나은 활성을 제공하였다. 예를 들어, 화학주성 검정에서,

의 화합물은

의 화합물보다 10배 낮은 IC₅₀을 제공하였다.

본 발명은 서면 기재 및 실시예의 방식으로 기재되었으며, 당업자는 본 발명이 다양한 구체예로 실시될 수 있고, 상술된 기재 및 실시예가 예시를 위한 것으로 하기의 청구항을 제한하는 것이 아님을 인지할 것이다.

Claims

하기 화학식 Ⅰ의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 수화물 또는 N-옥사이드:

상기 식에서,
R^1a 및 R^1b는 각각 독립적으로 H 및 CH₃로 구성된 군으로부터 선택되고;
R^2a는 H 및 F로 구성된 군으로부터 선택되고;
R^2d는 H, C₁ _-4 알콕시 및 C₁ _-4 할로알콕시로 구성된 군으로부터 선택된다.
제 1항에 있어서, R^2a가 H인 화합물.
제 1항에 있어서, R^1a 및 R^1b가 각각 H인 화합물.
제 1항에 있어서, R^1b가 메틸이고, R^1a가 H인 화합물.
제 1항에 있어서, R^1a 및 R^1b가 각각 CH₃인 화합물.
제 1항에 있어서, R^2a가 수소이고, R^2d가 메톡시, 에톡시 및 트리플루오로메톡시로 구성된 군으로부터 선택되는 화합물.
제 1항에 있어서, 상기 화합물이 하기 화학식 Ⅰa 또는 Ⅰb의 화합물인 화합물:

상기 식에서, R^2a는 H 및 F로 구성된 군으로부터 선택되고, R^2d는 메톡시, 에톡시 및 트리플루오로메톡시로 구성된 군으로부터 선택된다.
제 1항에 있어서, 상기 화합물이 하기 화학식의 화합물로 구성된 군으로부터 선택되는 화합물:
제 1항에 있어서, 상기 화합물이 하기 화학식의 화합물로 구성된 군으로부터 선택되는 화합물:
제 1항에 있어서, 상기 화합물이 하기 화학식을 갖는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 N-옥사이드:
제 1항에 있어서, 하기 화학식을 갖는 화합물:
제 1항에 있어서, 약학적으로 허용되는 염 형태의 하기 화학식을 갖는 화합물:
제 12항에 있어서, 상기 염 형태가 하이드로클로라이드 염 형태인 화합물.
(S)-2-(4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)-1-(4-(4-클로로-2-플루오로-5-메톡시페닐)-2-메틸피페라진-1-일)에타논;
(S)-2-(4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)-1-(4-(4-클로로-2-플루오로페닐)-2-메틸피페라진-1-일)에타논;
2-(4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)-1-(4-(4-클로로-2-플루오로-5-메톡시페닐)피페라진-1-일)에타논;
2-(4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)-1-(4-(4-클로로-2-플루오로-5-메톡시페닐)피페라진-1-일)에타논;
2-(4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)-1-(4-(4-클로로-3-메톡시페닐)피페라진-1-일)에타논;
(S)-2-(4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)-1-(4-(4-클로로-3-메톡시페닐)-2-메틸피페라진-1-일)에타논;
2-(4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)-1-(4-(4-클로로-3-에톡시페닐)피페라진-1-일)에타논;
(S)-2-(4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)-1-(4-(4-클로로페닐)-2-메틸피페라진-1-일)에타논;
2-(4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)-1-(4-(4-클로로페닐)피페라진-1-일)에타논;
2-(4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)-1-(4-(4-클로로-3-메톡시페닐)-2,2-디메틸피페라진-1-일)에타논;
(S)-2-(4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)-1-(4-(4-클로로-3-에톡시페닐)-2-메틸피페라진-1-일)에타논;
2-(4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)-1-(4-(4-클로로-3-(트리플루오로메톡시)페닐)피페라진-1-일)에타논; 및
2-(4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)-1-(4-(4-클로로-3-메톡시페닐)피페라진-1-일)에타논으로 구성된 군으로부터 선택된 화합물.
화합물 2-(4-아미노-3-(1H-이미다졸-2-일)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)-1-(4-(4-클로로-3-메톡시페닐)피페라진-1-일)에타논.
제 1항의 화합물 및 약학적으로 허용되는 부형제 또는 담체를 포함하는 약학적 조성물.
질병 또는 질환의 치료를 위한 약제의 제조에서의 제 1항 내지 제 15항 중 어느 한 항의 화합물의 용도.
CCR1 매개 질병 또는 질환의 치료를 위한 약제의 제조에서의 제 1항 내지 제 15항 중 어느 한 항의 화합물의 용도.
제 18항에 있어서, 상기 CCR1 매개 질병 또는 질환이 염증성 질환인 용도.
제 18항에 있어서, 상기 CCR1 매개 질병 또는 질환이 면역조절성 장애인 용도.
제 18항에 있어서, 상기 CCR1 매개 질병 또는 질환이 골관절염 질병, 다발골수종, 류머티스 관절염, 다발경화증, 이식 거부, 재협착, 피부염, 습진, 두드러기, 혈관염, 염증성 장질병, 음식 알레르기, 천식, 알츠하이머병, 파킨슨병, 건선, 홍반성 루푸스(lupus erythematosus), 골관절염, 뇌졸중, 재협착 및 뇌척수염으로 구성된 군으로부터 선택되는 용도.
제 18항에 있어서, 상기 CCR1 매개 질병 또는 질환이 골관절염 질병, 다발골수종, 류머티스 관절염 및 이식 거부로 구성된 군으로부터 선택되는 용도.
제 18항에 있어서, 상기 약제가 경구, 비경구, 직장, 경피, 설하, 비내 또는 국소 투여용으로 제조되는 용도.
제 18항에 있어서, 상기 약제가 항염증제, 진통제, 항증식제, 대사 억제제, 백혈구 이동 억제제 또는 면역조절제와의 조합 투여용으로 제조되는 용도.