BRPI0918517B1 - composto, composição farmacêutica, e, uso de um composto - Google Patents

Abstract

composto, composição farmacêutica, e, uso de um composto os compostos que são fornecidos atuam como antagonistas potentes do receptor de ccr1 e têm atividade anti-inflamatória in vivo. os compostos são derivados de 4-amino-3-imidazoil-pirazolo[3,4-d]pirimidina e são úteis nas composições farmaceuticamente aceitáveis, métodos para o tratamento de doença mediada por ccr1 e como controles em ensaios para a identificação de antagonistas de ccr1 competitivos.

Description

DECLARAÇÕES DOS DIREITOS ÀS INVENÇÕES REALIZADAS SOB PESQUSIA E DESENVOLVIMENTO FEDERALMENTE PATROCINADOS [002] Não aplicável

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO [003] A presente invenção fornece compostos, composições farmaceuticamente aceitáveis contendo um ou mais daqueles compostos ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis, que são eficazes a inibição da ligação de várias quimiocinas, tais como MIP-1a, leucotactina, MPIF-1 e RANTES, ao receptor CCR1. Como antagonistas ou moduladores para o receptor CCR1, os compostos e as composições têm utilidade no tratamento de condições e doenças de distúrbio inflamatório e imune.

[004] A saúde humana depende da capacidade corporal detectar e destruir patogênios estranhos que devem, de outra maneira, tomar recursos valiosos do indivíduo e/ou induzir doença. O sistema imune, que compreende leucócitos (células sanguíneas brancas (WBCs): linfócitos T e B, monócitos, granulócitos de macrófagos, célula NK, mastócitos, célula dendrítica e células derivadas imunes (por exemplo, osteoclastos)), tecidos linfóides e vasos linfóides, no sistema de defesa corporal. Para combater infecção, as células sanguíneas brancas circulam por todo o corpo para detectar patogênio. Uma vez que um patogênio é detectado, as células imunes inatas e as células T citotóxicas, em particular, são recrutadas para o local de infecção para destruir o patogênio. As quimiocinas atuam como balizas moleculares para o

Petição 870190076305, de 08/08/2019, pág. 16/73 / 52 recrutamento e ativação de células imunes, tais como linfócitos, monócitos e granulócitos, identificação de locais onde o patogênio existe.

[005] A despeito da regulação do sistema imune dos patogênios, certa sinalização de quimiocina inapropriada pode ser desenvolver e foi atribuída ao disparo ou sustentação de distúrbios inflamatórios, tais como artrite reumatóide, esclerose múltipla e outros. Por exemplo, em artrite reumatóide, o acúmulo de quimiocina não regulado em juntas ósseas atrai e ativa a infiltração de macrófagos e células T. as atividades destas células induzem a proliferação de célula sinovial que leva, pelo menos em parte, à inflamação e perda eventual óssea e de cartilagem (ver, DeVries, M. E., et al., Semin Immunol 11(2):95-104 (1999)). Uma indicação de algumas doenças desmielinantes, tais como esclerose múltipla é o recrutamento de monócito/macrófago mediado por quimiocina e de célula T para o sistema nervoso central (ver, Kennedy, et al., J. Clin. Immunol. 19(5):273-279 (1999)). O recrutamento de quimiocina de WBCs destrutivos a transplantes foi implicado na rejeição subsequente. Ver, DeVries, M.E., et al., ibid. Pela razão das quimiocinas desempenharem papéis pivotais na inflamação e desenvolvimento de linfócito, a capacidade de manipular especificamente sua atividade te impacto enorme na melhora e interrupção das doenças que correntemente não tem tratamento satisfatório. Além disso, a rejeição ao transplante pode ser minimizada sem os efeitos generalizados e complicadores de produtos farmacêuticos imunossupressores caros.

[006] O metabolismo ósseo é dependente da atividade total de osteoblastos que controlam a formação óssea e os osteoclastos que controlam a ressorção óssea. A anormalidade do metabolismo ósseo é considerado ser causado por um desequilíbrio da formação óssea e da ressorção óssea. A osteoporose (e a osteoporose pós-menopausa), hipercalcemia, doença de Paget, osteodistrofia renal, reumtoidartrite, osteoartriste, metástases de osso lítico, mieloma múltiplo e outros são conhecidos como doenças que

Petição 870190076305, de 08/08/2019, pág. 17/73 / 52 acompanham a normalidade do metabolismo ósseo. A osteoporose é uma doença típica causada por tal anormalidade de metabolismo ósseo. Esta doença é gerada quando a reabsorção óssea por osteoclastos excede a formação óssea por osteoblastos. A doença é caracterizada por uma diminuição tanto no material calcificado do osso quanto na matriz óssea. Acredita-se que o CCR1 desempenhe um papel no recrutamento de precursores de osteoclasto e sua maturação e a inibição deste processo pode melhorar a doença (Vallet et al, Blood, 110:3744-3752 (2007)). O sequestro adicional de células de mieloma múltiplo na medula óssea para o recrutamento de osteoclastos a estes locais, fornecendo um arco de regeneração para a proliferação de mieloma e estímulo da descalcificação (Menu et al, Clin Exp Metastases, 23:291-300 (2006)).

[007] Quimiocinas, um grupo de mais do que 40 peptídeos pequenos (7 a 10 kD), receptores ligados expressados primariamente em WBCs ou células derivadas imunes e cascatas de sinalização ligadas por proteína G através do sinal para mediar suas funções quimioatraentes e quimioestimulantes. Os receptores pode ligar mais do que um ligando; por exemplo, o receptor CCR1 liga RANTES (regulado na ativação normal de célula T expressada), MIP-1a (proteína inflamatória de macrófago), MPIF1/CK38 e quimiocinas de leucotactina (entre outros com afinidades menores). Até hoje, 24 receptores de quimiocina são conhecidos. O número absoluto de quimiocinas, receptores de ligação de ligando múltiplo e perfis de receptor diferentes em células imunes permite respostas imunes rigidamente controladas e específicas. Ver, Rossi, et al., Ann. Rev. Immunol. 18(1):217242 (2000). A atividade da quimiocina pode ser controlada através da modulação de seus receptores correspondentes, doenças inflamatórias imunológicas relacionadas e que permite transplantes de órgão e de tecido.

[008] O receptor CCR1 e seus ligandos de quimiocina, incluindo, por exemplo, MIP-1a, MPIF-1/CK38, leucotactina e RANTES, representa

Petição 870190076305, de 08/08/2019, pág. 18/73 / 52 alvos terapêuticos significantes (ver Saeki, et al., Current Pharmaceutical Design 9:1201-1208 (2003)) visto que estes foram implicados em artrite reumatóide, rejeição a transplante (ver, DeVries, M.E., et al., ibid.) e esclerose múltipla (ver, Fischer, et al., J Neuroimmunol. 110(1-2):195-208 (2000); Izikson, et al., J. Exp. Med. 192(7):1075-1080 (2000) e Rottman, et al., Eur. J. Immunol. 30(8):2372-2377 (2000). De fato, os anticorpo bloqueadores de função, ligandos receptores de quimiocina modificados e compostos orgânicos pequenos foram descobertos, alguns dos quais foram bem sucedidamente demonstrados para evitar ou tratar algumas doenças mediadas por quimiocina (revisto em Rossi, et al., ibid.). Notavelmente, em um modelo experimental de artrite reumatóide, o desenvolvimento de doença é diminuído quando um ligando de RANTES modificado de bloqueio de sinal é administrado (ver Plater-Zyberk, et al., Immunol Lett. 57(1-3):117-120 (1997)). Enquanto o anticorpo de bloqueio de função e terapias de peptídeo pequeno são promissores, estes sofrem dos perigos da degradação, vidas médias extremamente curtas uma vez administrados e proibitivamente caros de se desenvolver e fabricar, característico da maioria das proteínas. Os compostos orgânicos pequenos são preferíveis visto que estes, frequentemente, tem vidas médias mais longas in vivo, requerem doses menores para serem eficazes, podem ser frequentemente administrados oralmente e são, consequentemente menos caros. Alguns antagonistas orgânicos de CCR1 foram previamente descritos (ver, Hesselgesser, et al., J. Biol. Chem. 273(25):15687-15692 (1998); Ng, et al., J. Med. Chem. 42(22):4680-4694 (1999); Liang, et al., J. Biol. Chem. 275(25):19000-19008 (2000); and Liang, et al., Eur. J. Pharmacol. 389(1):41-49 (2000)). Em vista da eficácia demonstrada para o tratamento de doenças em modelos animais (ver, Liang, et al., J. Biol. Chem. 275(25):19000-19008 (2000)), a pesquisa continuou para identificar os compostos adicionais que podem ser usados no tratamento de doenças mediadas pela sinalização de CCR1.

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BREVE SUMÁRIO DA INVENÇÃO [009] A presente invenção diz respeito a compostos tendo a Fórmula

I:

ou sais, hidratos ou N-óxidos destes farmaceuticamente aceitáveis. Na Fórmula I, R^1a e R^1b são, cada um, independentemente selecionados de H e CH3; R^2a selecionado de H e F; e R^2d é selecionado de H, alcóxi C1-4 e haloalcóxi C1-4.

[0010] Além dos compostos fornecidos neste, a presente invenção ainda fornece composições farmaceuticamente aceitáveis contendo um ou mais destes compostos, bem como métodos para o uso destes compostos primariamente para tratar doenças associadas com atividade sinalizadora de CCR1, CCR2 e/ou CCR3.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS [0011] NENHUM

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

Abreviação e definições [0012] O termo alquila, por si próprio ou como parte de um outro substituinte, significa, a não ser que estabelecido de outra maneira, um radical de hidrocarboneto de cadeia reta ou ramificada, tendo o número de átomos de carbono designado (isto é, C_1-8 significa de 1 a 8 carbonos). Os exemplos de grupos alquila incluem metila, etila, n-propila, isopropila, n-butila, t-butila, isobutila, sec-butila, n-pentila, n-hexila, n-heptila, n-octila e outros.

[0013] O termo alcóxi, é usado em seu sentido convencional e refere-se àqueles grupos alquila ligados ao remanescente da molécula por intermédio de um átomo de oxigênio. Os exemplos de grupos alcóxi incluem metóxi, etóxi, isopropóxi e outros.

Petição 870190076305, de 08/08/2019, pág. 20/73 / 52 [0014] O termo halo ou halogêneo, por si só ou como parte de um outro substituinte, significa, a não ser que estabelecido de outra maneira, um átomo de flúor, cloro, bromo ou iodo. Adicionalmente, os termos, tais como haloalquila, são entendidos incluir monoaloalquila e polialoalquila. Por exemplo, o termo haloalquila C1-4 é entendido incluir trifluorometila, 2,2,2-trifluoroetila, 4-clorobutila, 3-bromopropila e outros. Similarmente, o termo haloalcóxi, é entendido incluir monoaloalcóxi e polialoalcóxi, tal como trifluorometóxi (CF3O-) e 2-fluoroetóxi (FCH2CH2O-).

[0015] “Grupo de proteção” refere-se a uma porção, exceto grupos alquila, que quando ligados a um grupo reativo em uma molécula, mascara, reduz ou evita aquela reatividade. Os exemplos de grupos de proteção podem ser observados em T.W. Greene and P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3° edição, John Wiley & Sons, New York, 1999 e Harrison and Harrison et al., Compendium of Synthetic Organic Methods, Vols. 1 a 8 (John Wiley and Sons, 1971-1996). Os grupos de proteção hidróxi representativos incluem grupos acila, éteres benzílicos e tritílicos, éteres tetraidropiranílicos, éteres trialquilsilílicos e éteres alílicos. Os grupos de proteção amino representativos incluem, formila, acetila, trifluoroacetila, benzila, benziloxicarbonila (CBZ), terc-butoxicarbonila (BOC), trimetil silila (TMS), 2-trimetilsilil-etanossulfonila (SES), grupos tritila e tritila substituídos, aliloxicarbonila, 9-fluorenilmetiloxicarbonila (FMOC), nitroveratriloxicarbonila (NVOC) e outros.

[0016] Reagente de ligação de aminoácido refere-se a um reagente, tal como HBTU (hexafluorofosfato de O-(bcnzolriazol-1-il)-MM^',^'tetrametilurônio), etc., que reagirá com o grupo de ácido carboxílico de um aminoácido para formar um intermediário ativado que pode ser usado para condensar com uma ampla variedade de nucleófilos, por exemplo, aminas, alcoóis e tióis, para a produção de outros éteres, tioésteres ou grupos amida.

[0017] O termo sais farmaceuticamente aceitáveis é entendido

Petição 870190076305, de 08/08/2019, pág. 21/73 / 52 incluir sais dos compostos ativos que são preparados com ácidos ou bases relativamente não tóxicos, dependendo dos substituintes particulares encontrados nos compostos descritos neste. Quando os compostos da presente invenção contém funcionalidade relativamente ácidas, os sais de adição de base podem ser obtidos pelo contato da forma neutra de tais compostos com um quantidade suficiente da base desejada, pura ou em um solvente inerte adequado. Os exemplos de sais derivados de bases inorgânicas farmaceuticamente aceitáveis incluem alumínio, amônio, cálcio, cobre, férrico, ferroso, lítio, magnésio, mangânico, manganoso, potássio, sódio, zinco e outros. Os sais derivados de bases orgânicas farmaceuticamente aceitáveis incluem sais de aminas primárias, secundárias e terciárias, incluindo aminas substituídas, aminas cíclicas, aminas de ocorrência natural e outros, tais como arginina, betaína, cafeína, colina, N,N’dibenziletilenodiamina, dietilamina, 2-dietilaminoetanol, 2dimetilaminoetanol, etanolamina, etilenodiamina, N-etilmorfolina, Netilpiperidina, glucamina, glucosamina, histidina, hidrabamina, isopropilamina, lisina, metilglucamina, morfolina, piperazina, piperadina, resinas de poliamina, procaína, purinas, teobromina, trietilamina, trimetilamina, tripropilamina, trometamina e outros. Quando os compostos da presente invenção contêm funcionalidades relativamente básicas, os sais de adição ácida podem ser obtidos pelo contato da forma neutra de tais compostos com uma quantidade suficiente do ácido desejado puro ou em um solvente inerte adequado. Os exemplos de sais de adição ácida farmaceuticamente aceitáveis incluem aqueles derivados de ácidos inorgânicos como ácidos clorídrico, bromídrico, nítrico, carbônico, monoidrogenocarbônico, fosfórico, monoidrogenofosfórico, diidrogenofosfórico, sulfúrico, monoidrogenossulfúrico, iodídrico ou fosforoso e outros, bem como os sais derivados de ácidos orgânicos relativamente não tóxicos como acético, propiônico, isobutírico, malônico,

Petição 870190076305, de 08/08/2019, pág. 22/73 / 52 benzóico, succínico, subérico, fumárico, mandélico, ftálico, benzenossulfônico, p-tolilsulfônico, cítrico, tartárico, metanossulfônico e outros. Também estão incluídos sais de aminoácidos, tais como alginatos e outros e sais de ácidos orgânicos, como ácidos glucurônicos ou galactunóricos e outros (ver, por exemplo, Berge, S.M., et al, “Pharmaceutical Salts”, Journal of Pharmaceutical Science, 1977, 66, 1-19). Certos compostos específicos da presente invenção contém tanto funcionalidades básicas quanto ácidas que seguem os compostos a serem convertidos em sais de adição básicos ou ácidos.

[0018] As formas neutras dos compostos podem ser regenerados pelo contato do sal com uma base ou um ácido e isolamento do composto precursor da maneira convencional. A forma precursora do composto difere das várias formas de sal em certas propriedades físicas, tais como solubilidade em solventes polares, mas, de outra maneira, os sais são equivalentes à forma precursora do composto para os propósitos da presente invenção.

[0019] Além das formas de sal, a presente invenção fornece compostos que estão em uma forma de pré-medicamento. Os pró medicamentos dos compostos descritos neste são aqueles compostos que, facilmente, sofrem mudanças químicas sob condições fisiológicas para fornecer os compostos da presente invenção. Adicionalmente, os prómedicamentos podem ser convertidos aos compostos da presente invenção por métodos químicos e bioquímicos em um ambiente ex vivo. Por exemplo, os pró-medicamentos podem ser lentamente convertidos aos compostos da presente invenção quando colocados em um reservatório de emplastro transdérmico com um reagente enzimático ou químico.

[0020] Certos compostos da presente invenção podem existir nas formas não solvatadas bem como formas solvatadas, incluindo as formas hidratadas. Em geral, as formas solvatadas são equivalentes às formas não solvatadas e são pretendidas serem abrangidas dentro do escopo da presente

Petição 870190076305, de 08/08/2019, pág. 23/73 / 52 invenção. Certos compostos da presente invenção podem existir em formas cristalinas ou amorfas múltiplas. Em geral, todas as formas físicas são equivalentes para os usos considerados pela presente invenção e são pretendidos estarem dentro do escopo da presente invenção.

[0021] Certos compostos da presente invenção possuem átomos de carbono assimétricos (centros óticos) ou ligações duplas; os racematos, diastereômeros, isômeros geométricos e isômeros individuais (por exemplo, enantiômeros separados) estão todos pretendidos estarem dentro do escopo da presente invenção. Os compostos da presente invenção também podem conter proporções não naturais de isótopos atômicos em um ou mais dos átomos que constituem tais compostos. Por exemplo, os compostos podem ser radiorrotulados com isótopos radioativos, tais como, por exemplo, trítio (³H), iodo-125 (¹²⁵I) ou carbono-14 (¹⁴C). Todas as variações isotópicas dos compostos da presente invenção, radioativos ou não, são pretendidos estarem abrangidos dentro do escopo da presente invenção.

Geral [0022] A presente invenção deriva da descoberta que os compostos da Fórmula I atuam como antagonistas potentes do receptor de CCR1. Os compostos têm atividade inflamatória in vivo e têm propriedades farmacocinéticas superiores. Consequentemente, os compostos fornecidos neste são úteis em composições farmaceuticamente aceitáveis, os métodos para o tratamento de doenças mediadas por CCR1 e como controles em ensaios para a identificação de antagonistas de CCR1 competitivos.

III.Compostos [0023] Em um aspecto, a presente invenção fornece um composto da

Fórmula I:

(I)

Petição 870190076305, de 08/08/2019, pág. 24/73 / 52 ou sais, hidratos ou N-óxidos destes farmaceuticamente aceitáveis. Na Fórmula I, R^1a e R^1b são, cada um, independentemente selecionados do grupo que consiste de H e CH3; R^2a é selecionado do grupo que consiste de H e F; e R^2d é selecionado do grupo que consiste de H, alcóxi C1-4 e haloalcóxi C1-4. Em uma modalidade, R^2a é hidrogênio. Em uma outra modalidade, R^1a e R^1b são, cada um, H. Em uma outra modalidade, R^1b é metila e R^1a é H. ainda em uma outra modalidade, R^1a e R^1b são, cada um, metila. Ainda, em uma outra modalidade, R^2a é hidrogênio e R^2d é selecionado do grupo que consiste de metóxi, etóxi e trifluorometóxi.

[0024] Em uma modalidade preferida, os compostos da invenção são

em que R^2a é selecionado do grupo que consiste de H e F; e R^2d é selecionado do grupo que consiste de metóxi, etóxi e trifluorometóxi.

[0025] Em uma modalidade específica, os compostos da invenção são selecionados do grupo que consiste de:

[0026] Em uma outra modalidade específica, os compostos da invenção são selecionados do grupo que consiste de:

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Cl

N

Me

MeO

Cl

N

O

Me ^Me

[0027] Ainda em uma outra modalidade, o composto da invenção tem a fórmula:

[0028] Ainda, em uma outra modalidade, os compostos da invenção da Fórmula I são selecionados do grupo que consiste dos compostos apresentados na Tabela 1.

Tabela 1 (S)-2-(4-amino-3-( 1 H-imidazol-2-il)-1 H-pirazolo [3,4-

d]pirimidin-1-il)-1-(4-(4-cloro-2-fluoro-5-metoxifenil)-2-metilpiperazin-1il)etanona (S)-2-(4-amino-3-(1H-imidazol-2-il)-1H-pirazolo[3,4-

d]pirimidin-1 -il)-1 -(4-(4-cloro-2-fluorofenil)-2-metilpiperazin-1 -il)etanona

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2-(4-amino-3-(1H-imidazol-2-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin1 -il)-1-(4-(4-cloro-2-fluoro-5-metoxifenil)piperazin-1-il)etanona

2-(4-amino-3-(1H-imidazol-2-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin1-il)-1-(4-(4-cloro-2-fluoro-5-metoxifenil)piperazin-1-il)etanona (S)-2-(4-amino-3-( 1 H-imidazol-2-il)-1 H-pirazolo [3,4-

d]pirimidin-1 -il)-1 -(4-(4-cloro-3 -metoxifenil)-2-metilpiperazin-1 -il)etanona

2-(4-amino-3-(1H-imidazol-2-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin1 -il)-1 -(4-(4-cloro-3 -etoxifenil)piperazin-1 -il)etanona (S)-2-(4-amino-3-(1H-imidazol-2-il)-1H-pirazolo[3,4-

d]pirimidin-1 -il)-1 -(4-(4-clorofenil)-2-metilpiperazin-1 -il)etanona 2-(4-amino-3-(1H-imidazol-2-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-

-il)-1 -(4-(4-clorofenil)piperazin-1 -il)etanona

2-(4-amino-3-(1H-imidazol-2-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin1 -il)-1-(4-(4-cloro-3-metoxifenil)-2,2-dimetilpiperazin-1-il)etanona (S)-2-(4-amino-3-(1H-imidazol-2-il)-1H-pirazolo[3,4-

d]pirimidin-1 -il)-1 -(4-(4-cloro-3 -etoxifenil)-2-metilpiperazin-1 -il)etanona

2-(4-amino-3-(1H-imidazol-2-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin1 -il)-1 -(4-(4-cloro-3-(trifluorometóxi)fenil)piperazin-1 -il)etanona

2-(4-amino-3-(1H-imidazol-2-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin1 -il)-1 -(4-(4-cloro-3-metoxifenil)piperazin-1 -il)etanona

Preparação de Compostos [0029] O esquema 1 abaixo, bem como os esquemas nos Exemplos, fornecem certas vias sintéticas que podem ser seguidas para estimar certos compostos da presente invenção. Outras vias ou modificações das vias apresentadas abaixo devem estar facilmente evidentes para um técnico habilitado e estão dentro do escopo da presente invenção.

[0030] O Esquema 1 ilustra a síntese de um pirazolo[3,4d]pirimidinas substituído por 4-amino-3-Imidazolila usado em uma reação de ligação com uma piperazina substituída para a formação dos compostos da

Petição 870190076305, de 08/08/2019, pág. 27/73 / 52 presente invenção. Como mostrado no Esquema 1, éster terc-butílico de ácido hidrazinocarboxílico e 2,3-diciano-but-2-enodinitrila pode ser combinado para formar o composto B de pirazol substituído (5-amino-1H-pirazol-3,4dicarbonitrila). O Composto B, no tratamento com, por exemplo, um ortoformiato (por exemplo, trimetilortoformiato) fornece o intermediário C (mostrado como N-3,4-diciano-1H-pirazol-5-ilformimidato de (E)-metila). O fechamento do anel para formar o pirazolo[3,4-d]pirimidina mostrado como o composto A (4-amino-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina-3-carbonitrila) pode ser realizado pelo tratamento do intermediário C com amônia.

[0031] A elaboração adicional do pirazolo[3,4-d]pirimidina é realizada pelo tratamento do Composto A com, por exemplo, cloroacetato de terc-butila na presença de carbonato de potássio para obter éster terc-butílico do ácido (4-amino-3-ciano-pirazolo[3,4-^]pirimidin-1-il)-acético, que pode ser então submetido ao refluxo com etilenodiamina na presença de etanol e ácido acético para produzir 2-(4-amino-3-(4,5-diidro-1H-imidazol-2-il)-1Hpirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)acetato de terc-butila.

[0032] Como mostrado 2-(4-amino-3-(4,5-diidro-1H-imidazol-2-il)

1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)acetato de terc-butila pode ser oxidado com DMP na presença do solvente DMSO para obter 2-(4-amino-3-(1H-imidazol2-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)acetato de terc-butila.

[0033] Finalmente, 2-(4-amino-3-(1H-imidazol-2-il)-1H-pirazolo[3,4d]pirimidin-1-il)acetato de terc-butila pode ser tratado com HCl em dioxano para obter um sal de pirazolo[3,4-d]pirimidina substituído por 4-amino-3Imidazolila (ácido 2-(4-amino-3-(1H-imidazol-2-il)-1H-pirazolo[3,4d]pirimidin-1-il)acético .2HCl).

Esquema 1

NC CN

O

NH₂NH

EtOH refluxo

CH(OMe)₃

MeO

H

C

Petição 870190076305, de 08/08/2019, pág. 28/73 / 52

K₂CO₃

DMF

(1,5 eq.)

DMSO

N HCl p-dioxano

HO

N

H

NH₂

2HC

III. Composições farmaceuticamente aceitáveis [0034] Além dos compostos fornecidos acima, as composições para modular a atividade de CCR1, CCR2 e CCR3 em seres humanos e animais, tipicamente, conterá um carreador ou diluente farmacêuticos.

[0035] O termo composição como usado neste é pretendido abranger um produto que compreenda os ingredientes especificados nas quantidades especificadas, bem como qualquer produto que resulte, direta ou indiretamente, da combinação dos ingredientes especificados nas quantidades especificadas. Por farmaceuticamente aceitável é entendido que o carreador, diluente ou excipiente devem ser compatíveis com os outros ingredientes da formulação e não nocivos aos seus receptores.

[0036] As composições farmaceuticamente aceitáveis para a administração dos compostos desta invenção podem ser convenientemente na forma de dosagem única e pode ser preparado por qualquer um dos métodos bem conhecidos na técnica da farmácia e liberação de medicamento. Todos os métodos compreendem a etapa de colocar o ingrediente ativo em associação com o carreador que constitui um ou mais ingredientes complementares. Em geral, as composições farmaceuticamente aceitáveis são preparadas colocando-se íntima e uniformemente, o ingrediente ativo em associação com

Petição 870190076305, de 08/08/2019, pág. 29/73 / 52 um carreador líquido ou um carreador sólido finamente dividido ou ambos e então, se necessário, formar o produto na formulação desejada. Na composição farmacêutica, o composto de objetivo ativo está incluído em uma quantidade suficiente para produzir o efeito desejado no processo ou condição de doenças.

[0037] As composições farmaceuticamente aceitáveis contendo o ingrediente ativo pode estar em uma forma adequada para o uso oral, por exemplo, como tabletes, pastilhas, losangos, suspensões aquosas ou oleosas, pós ou grânulos dispersíveis, emulsões e auto-emulsificações como descrito na Patente U. S. N° 6.451.339, cápsulas duras ou macias, xaropes, elixires, soluções, emplastro bucal, gel oral, goma mastigável, tabletes mastigáveis, pó efervescente e tabletes efervescentes. As composições pretendidas para o suo oral podem ser preparados de acordo com qualquer método conhecido na técnica para a fabricação de composições farmaceuticamente aceitáveis e tais composições podem conter um ou mais agentes selecionados do grupo que consiste de agentes adoçantes, agentes flavorizantes, agentes corantes, agentes antioxidantes e conservantes afim de fornecer preparações farmaceuticamente elegantes e saborosas. Os tabletes contém o ingrediente ativo em mistura com excipientes farmaceuticamente aceitáveis não tóxicos que são adequados para a fabricação de tabletes. Estes excipientes podem ser, por exemplo, diluentes inertes, tais como celulose, dióxido de silício, óxido de alumínio, carbonato de cálcio, carbonato de sódio, glicose, manitol, sorbitol, lactose, fosfato de cálcio ou fosfato de sódio; agentes de granulação e desintegrantes, por exemplo, amido de milho ou ácido algínico; agentes de ligação, por exemplo, PVP, celulose, PEG, amido, gelatina ou acácia e agentes lubrificantes, por exemplo, estearato de magnésio, ácido esteárico ou talco. Os tabletes podem ser não revestidos ou estes podem ser revestidos, entericamente ou, de outra maneira, por técnicas conhecidas para atrasar a desintegração e a absorção no trato gastrointestinal e, desse modo, fornecer uma ação sustentada por um

Petição 870190076305, de 08/08/2019, pág. 30/73 / 52 período mais longo. Por exemplo, um material de atraso de tempo tal como monoestearato de glicerila ou diesterato de glicerila podem ser utilizados. Estes também podem ser revestidos pelas técnicas descritas na Pat. U.S. N° 4,256,108; 4,166,452; e 4,265,874 para formar tabletes terapêuticos osmóticos para a liberação do controle.

[0038] As formulações para o uso oral também podem ser apresentadas como cápsulas de gelatina duras em que o ingrediente ativo é misturado com um diluente sólido inerte, por exemplo, carbonato de cálcio, fosfato de cálcio ou caulim ou como cápsulas de gelatina macias em que o ingrediente ativo é misturado com água ou um meio oleoso, por exemplo, óleos de amendoim, parafina líquida ou óleo de oliva. Adicionalmente, as emulsões podem ser preparadas com um ingrediente não miscível em água, tal como óleos e estabilizado com tensoativos tais como mono-diglicerídeos, ésteres de PEG e outros.

[0039] As suspensões aquosas contêm materiais ativos em mistura com excipientes adequados para a fabricação de suspensões aquosas. Tais excipientes são agentes de suspensão, por exemplo, carboximetilcelulose sódica, metilcelulose, hidróxi-propilmetilcelulose, alginato de sódio, polivinilpirrolidona, goma tragacanto e goma acácia; agentes dispersantes e umectantes podem ser um fosfatídeo de ocorrência natural, por exemplo, lecitina ou produtos de condensação de um óxido de alquileno com ácidos graxos, por exemplo, estearato de polióxi-etileno ou produtos de condensação de óxido de etileno com alcoóis alifáticos de cadeia longa, por exemplo, heptadecaetilenooxicetanol ou produtos de condensação de óxido de etileno com ésteres parciais derivados de ácidos graxos e um hexitol, tal como monooleato de polioxietileno sorbitol ou produtos de condensação de óxido de etileno com ésteres parciais derivados de ácidos graxos e anidridos de hexitol, por exemplo, monooleato de polietileno sorbitano. As suspensões aquosas também podem conter um ou mais conservantes, por exemplo, etila

Petição 870190076305, de 08/08/2019, pág. 31/73 / 52 ou n-propila, p-hidroxibenzoato, um ou mais agentes corantes, um ou mais agentes flavorizantes e um ou mais agentes adoçantes, tais como sacarose ou sacarina.

[0040] As suspensões oleosas podem ser formuladas colocando-se o ingrediente ativo em suspensão em um óleo vegetal, por exemplo, óleo de amendoim, óleo de oliva, óleo de gergelim ou óleo de coco ou em um óleo mineral, tal como parafina líquida. As suspensões oleosas podem conter um agente espessante, por exemplo, cera de abelha, parafina dura ou álcool cetílico. Os agentes adoçantes, tais como aqueles apresentados acima e os agentes flavorizantes podem ser adicionados para fornecer uma preparação oral saborosa. Estas composições podem ser preservadas pela adição de um antioxidante, tal como ácido ascórbico.

[0041] Os pós e os grânulos dispersíveis adequados para a preparação de uma suspensão aquosa pela adição de água fornece o ingrediente ativo em mistura com um agente dispersante ou umectante, agente de suspensão e um ou mais conservantes. Os agentes dispersantes ou umectantes e agentes de suspensão são exemplificados por aqueles já mencionados acima. Os excipientes adicionais, por exemplo, agentes adoçantes, flavorizantes e corantes também podem estar presentes.

[0042] As composições farmaceuticamente aceitáveis da invenção também podem estar na forma de emulsões óleo-em-água. A fase oleosa pode ser um óleo vegetal, por exemplo, óleo de oliva ou óleo de amendoim ou um óleo mineral, por exemplo, parafina líquida ou misturas destes. Os agentes emulsificantes adequados podem ser gomas de ocorrência natural, por exemplo, goma acácia ou goma tragacanto, fosfatídeos de ocorrência natural, por exemplo, soja, lecitina e ésteres ou ésteres parciais derivados de ácidos graxos e anidridos de hexitol, por exemplo, monooleato de sorbitano e produtos de condensação dos ditos ésteres parciais com óxido de etileno, por exemplo, monooleato de polioxietileno sorbitano. As emulsões também

Petição 870190076305, de 08/08/2019, pág. 32/73 / 52 podem conter agentes adoçantes e flavorizantes.

[0043] Os xaropes e elixires podem ser formulados com agentes adoçantes, por exemplo, glicerol, propileno glicol, sorbitol ou sacarose. Tais formulações também podem conter um demulcente, um preservante, e agentes flavorizantes e corantes. As soluções orais podem ser preparadas em combinação com, por exemplo, ciclodextrina, PEG e tensoativos.

[0044] As composições farmaceuticamente aceitáveis podem estar na forma de uma suspensão aquosa ou oleaginosa injetável estéril. Esta suspensão pode ser formulada de acordo com a técnica conhecida usando-se aqueles agentes dispersantes ou umectantes adequados e agentes de suspensão que foram mencionados acima. A preparação injetável estéril também pode ser uma solução ou suspensão injetável estéril em um diluente ou solvente parenteralmente aceitável não tóxico, por exemplo, como uma solução em

1,3-butano diol. Entre os veículos e os solventes aceitáveis que podem ser utilizados estão água, solução de Ringer e solução isotônica de cloreto de sódio. Além disso, os óleos fixos estéreis são convencionalmente utilizados como um solvente ou meio de suspensão. Para este propósito qualquer óleo fixo suave pode ser utilizado incluindo mono ou diglicerídeos sintéticos. Além disso, os ácidos graxos tais como ácido oléico podem encontrar uso na preparação de injetáveis.

[0045] Os compostos da também podem ser administrados na forma de supositórios para a administração retal do medicamento. Estas composições podem ser preparadas pela mistura do medicamento com um excipiente não irritante adequado que é sólido em temperaturas comuns mas líquido na temperatura retal e, portanto fundirá no reto para liberar o medicamento. Tais materiais incluem manteiga de cacau e polietileno glicóis. Adicionalmente, os compostos podem ser administrados por intermédio da liberação ocular por meio de soluções ou unguentos. Ainda, a liberação transdérmica dos componentes de objetivo pode ser realizada por meio de

Petição 870190076305, de 08/08/2019, pág. 33/73 / 52 emplastros iontoforéticos e outros. Para o uso tópico, cremes, unguentos, gelatinas, soluções ou suspensões, etc., contendo os compostos da presente invenção são utilizados. Como usado neste, a aplicação tópica também é entendida incluir o uso de lavagens bucais e gargarejos.

[0046] Os compostos da invenção podem ser formulados para a deposição em um dispositivo médico, que pode incluir qualquer um de uma variedade de enxertos convencionais, stents, incluindo enxertos de stent, cateteres, balões, cestas ou outros dispositivos que podem ser preparado ou permanentemente implantado dentro de um lúmen corporal. Como um exemplo particular, deve ser desejável ter dispositivos e métodos que podem liberar os compostos da invenção à região de um corpo que foi tratada pela técnica de intervenção.

[0047] Em uma modalidade exemplar, o agente inibidor desta invenção pode ser depositado dentro de um dispositivo médico, tal como um stent e liberado ao local de tratamento para o tratamento de uma porção do corpo.

[0048] Os stents foram usados como veículos de liberação para agentes terapêuticos (isto é, medicamentos). Os stents intravasculares são, em geral, permanentemente implantados na coronária ou vasos periféricos. Os projetos de stent incluem aqueles das Pat. U.S. N° 4,733,655 (Palmaz), 4,800,882 (Gianturco) ou 4,886,062 (Wiktor). Tais projetos incluem tanto stents metálicos quanto poliméricos, bem como stents auto-expansíveis e expansíveis por balão. Os stents também podem ser usados para a liberação de um medicamento no local de contato com a vasculatura, como divulgado na Pat. U.S. N° 5,102,417 (Palmaz) e no Pedido de Patente Internacional N° WO 91/12779 (Medtronic, Inc.) e WO 90/13332 (Cedars-Sanai Medical Center), Pat. U.S. N° 5,419,760 (Narciso, Jr.) e Pat. U.S. N° 5,429,634 (Narciso, Jr.), por exemplo. Os stents também foram usados para a liberação de vírus à parede de um lúmen para a liberação de gene, como divulgado no

Petição 870190076305, de 08/08/2019, pág. 34/73 / 52 pedido de patente U. S. Ser. N° 5,833,651 (Donovan et al.).

[0049] O termo “depositado” significa que o agente inibidor é revestido, absorvido, colocado ou, de outra maneira incorporado no dispositivo pelos métodos conhecidos na técnica. Por exemplo, o agente inibidor pode ser incluído e liberado dentro de (“tipo matriz”) ou circundado por e liberado através (“tipo reservatório”) de materiais poliméricos que revestem ou estendem o dispositivo médico. No último exemplo, o agente inibidor pode ser aprisionado dentro dos materiais poliméricos ou ligado aos materiais poliméricos usando-se uma ou mais das técnicas para a geração de tais materiais conhecidos na técnica. Em outras formulações, o agente inibidor pode ser ligado à superfície à superfície do dispositivo médico sem a necessidade de um revestimento por meio de ligações destacáveis e liberação com o tempo, pode ser removido pelos processos mecânicos ou químicos ativos ou estão em uma forma permanentemente imobilizada que apresenta o agente inibidor no local de implante.

[0050] Em uma modalidade, o agente inibidor pode ser incorporado com as composições poliméricas durante a formação de revestimentos biocompatíveis com os dispositivos médicos, tais como stents. Os revestimentos produzidos a partir destes componentes são tipicamente homogêneos e são úteis para o revestimento de diversos dispositivos projetados para o implante.

[0051] O polímero pode ser um polímero bioestável ou um polímero bioabsorvível dependendo da taxa desejada de liberação ou o grau desejado de estabilidade polimérica, mas um polímero absorvível é preferido para esta modalidade visto que, distinto de um polímero bioestável, este não estará mais presente após o implante para causar qualquer resposta local crônica adversa. Os polímeros bioabsorvíveis que podem ser usados incluem, mas não são limitados a, poli(ácido L-láctico), policaprolactona, poliglicolídeo (PGA), poli(lactídeo-co-glicolídeo) (PLLA/PGA), poli(hidroxibutirato),

Petição 870190076305, de 08/08/2019, pág. 35/73 / 52 poli(hidroxibutirato-co-valerato), polidioxanona, poliortoéster, polianidrido, poli(ácido glicólico), poli(ácido D-láctico), poli(ácido L-láctico), poli(ácido D,L-láctico), poli(D,L-lactídeo) (PLA) , poli (L-lactídeo) (PLLA), poli(ácido glicólico-carbonato de co-trimetileno) (PGA/PTMC), óxido de polietileno (PEO), polidioxanona (PDS), polifosfoéster, polifosfoéster uretano, poli(aminoácidos), cianoacrilatos, poli(carbonato de trimetileno), poli(iminocarbonato), copoli(éter-ésteres) (por exemplo, PEO/PLA), oxalatos de polialquileno, polifosfazenos e biomoléculas, tais como fibrina, fibrinogênio, celulose, amido, colágeno e ácido hialurônico, poliépsilon caprolactona, ácido polihidróxi butírico, poliortoésteres, poliacetais, polidihidropiranos, policianoacrilatos, copolímeros de bloco reticulados ou anfifílicos de hidrogéis e outros polímeros bioabsorvíveis adequados conhecidos na técnica. Também, os polímeros bioestáveis com uma resposta de tecido crônica relativamente baixa, tais como poliuretanos, siliconas e poliésteres podem ser usados e outros polímeros também podem ser usados se estes puderem ser dissolvidos e curados ou polimerizados no dispositivo médico, tais como poliolefinas, poliisobutileno e copolímeros de etilenoalfaolefina; polímeros e copolímeros acrílicos, polímeros e copolímeros de haleto de vinila, tais como cloreto de polivinila; polivinilpirrolidona; éteres polivinílico, tais como éter polivinil metílico; haletos de polivinilideno, tais como fluoreto de polivinilideno e cloreto de polivinilideno; poliacrilonitrila, polivinil cetonas; polivinilas aromáticas, tais como poliestireno, ésteres polivinílicos, tais como acetato de polivinila; copolímeros de monômeros vinílicos um com o outro e olefinas, tais como copolímeros de etileno-metil metacrilato, copolímeros de acrilonitrila-estireno, resinas ABS e copolímeros de acetato de etileno-vinila; copolímero de pirano; poliidróxi-propilmetacrilamida-fenol; poliidroxietil-aspartamida-denol; polietilenoóxidopolilisina substituído por resíduos de palmitoíla; poliamidas, tais como Nylon 66 e policaprolactam; resinas de alquida, policarbonatos; polioximetilenos;

Petição 870190076305, de 08/08/2019, pág. 36/73 / 52 poliimidas; poliéteres; resinas epóxi, poliuretanos; rayon; rayon-triacetato; celulose, acetato de celulose, butirato de celulose; acetato butirato de celulose; celofano; nitrato de celulose; propionato de celulose; éteres de celulose e carboximetil celulose.

[0052] Os polímeros e matrizes poliméricas semipermeáveis podem ser formadas em artigos formados, tais como válvulas, stents, tubulação, prósteses e outros.

[0053] Em uma modalidade da invenção, o agente inibidor da invenção é ligado a um polímero ou matriz polimérica semipermeável que é formada como um stent ou dispositivo stent-enxerto.

[0054] Tipicamente, os polímeros são aplicados à superfície de um dispositivo implantável por revestimento rotativo, imersão ou pulverização. Os métodos adicionais conhecidos na técnica também podem ser utilizados para este propósito. Os métodos de pulverização incluem os métodos tradicionais, bem como técnicas de microdeposição com um dispensador do tipo jato de tinta. Adicionalmente, um polímero pode ser depositado em um dispositivo implantável usando-se foto-padronização para colocar o polímero apenas em porções específicas do dispositivo. Este revestimento do dispositivo fornece uma camada uniforme em torno do dispositivo que permite a difusão melhorada de vários analitos através do revestimento do dispositivo.

[0055] Em modalidades preferidas da invenção, o agente inibidor é formulado para a liberação do revestimento polimérico no ambiente em que o dispositivo médico é colocado. Preferivelmente, o agente inibidor é liberado de uma maneira controlada em uma estrutura de tempo estendida (por exemplo, meses) usando-se pelo menos uma de diversas técnicas bem conhecidas que envolvem carreadores poliméricos ou camadas para controlar a elução. Algumas destas técnicas foram previamente descritas no Pedido de Patente U.S. 20040243225A1.

Petição 870190076305, de 08/08/2019, pág. 37/73 / 52 [0056] Além disso, Como descrito, por exemplo, na Patente U.S. N° 6,770,729, os reagentes e as condições de reação das composições poliméricas podem ser manipuladas de modo que a liberação do agente inibidor do revestimento polimérico pode ser controlado. Por exemplo, o coeficiente de difusão dos um ou mais revestimentos poliméricos pode ser modulado para controlar a liberação do agente inibidor do revestimento polimérico. Em uma variação neste tema, o coeficiente de difusão do um ou mais revestimentos poliméricos pode ser controlado para a modulação da capacidade de um analito que está presente no ambiente em que o dispositivo médico é colocado (por exemplo, um analito que facilita a quebra ou a hidrólise de alguma porção do polímero) para acessar um ou mais componentes dentro da composição polimérica (e, por exemplo, desse modo, modular a liberação do agente inibidor do revestimento polimérico). Ainda, uma outra modalidade da invenção inclui um dispositivo tendo uma pluralidade de revestimentos poliméricos, cada um tendo uma pluralidade de coeficientes de difusão. Em tais modalidades da invenção, a liberação do agente inibidor do revestimento polimérico pode ser modulado pela pluralidade de revestimentos poliméricos.

[0057] Ainda, uma outra modalidade da invenção, a liberação do agente inibidor do revestimento polimérico é controlado pela modulação de uma ou mais das propriedades da composição polimérica, tal como a presença de um ou mais compostos endógenos ou exógenos ou, alternativamente, o pH da composição polimérica. Por exemplo, certas composições poliméricas podem ser projetadas para liberar um agente inibidor em resposta a uma diminuição no pH da composição polimérica. Alternativamente, certas composições poliméricas podem ser projetadas para a liberação do agente inibidor em resposta à presença de peróxido de hidrogênio.

IV. Métodos de Tratar Doenças Moduladas por CCR1 [0058] Ainda, em um outro aspecto, a presente invenção fornece

Petição 870190076305, de 08/08/2019, pág. 38/73 / 52 métodos de tratar condições ou doenças mediadas por CCR1, CCR2 e/ou CCR3 pela administração a um paciente tendo uma tal doença ou condição, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da fórmula I acima. O “paciente” é definido neste incluir animais, tais como mamíferos, que incluem, mas não limitados a, primatas (por exemplo, seres humanos), vacas, ovelhas, cabras, cavalos, cães, gatos, coelhos, ratos, camundongos e outros. [0059] O CCR1 fornece um alvo para interferir com ou promover aspectos específicos de funções de células imunes ou mais em geral, com funções associadas com a expressão de CCR1 em uma faixa ampla de tipos celulares em um mamífero, tal como um ser humano. os compostos que inibem CCR1, são particularmente úteis para modular monócito, macrófago, linfócito, granulócito, célula NK, mastócitos, célula dendrítica e certas funções de células derivadas imunes (por exemplo, osteoclastos) para propósitos terapêuticos. Consequentemente, a presente invenção é direcionada a compostos que são úteis na prevenção e/ou tratamento de uma ampla variedade de distúrbios e doenças inflamatórias e imuno-reguladoras (ver Saeki, et al., Current Pharmaceutical Design 9:1201-1208 (2003)).

[0060] Por exemplo, um presente composto que inibe uma ou mais funções de CCR1 podem ser administrados para inibir (isto é, reduzir ou evitar) a inflamação ou a infiltração celular associada com um distúrbio imune. Como um resultado, um ou mais processos inflamatórios, tais como emigração ou infiltração de leucócito, quimiotaxia, exocitose (por exemplo, de enzimas, histamina) ou liberação de mediador inflamatório, podem ser inibidos. Por exemplo, infiltração de monócito a um local inflamatório (por exemplo, uma junta afetada na artrite ou no CNS em MS) pode ser inibida de acordo com o presente método.

[0061] Similarmente, um presente composto que promova uma ou mais funções de CCR1 é administrado para estimular (induzir ou intensificar) uma resposta inflamatória, tal como emigração de leucócito, quimiotaxia,

Petição 870190076305, de 08/08/2019, pág. 39/73 / 52 exocitose (por exemplo, de enzimas, histamina) ou liberação de mediador inflamatório, resultando no estímulo benéfico de processo inflamatórios. Por exemplo, os monócitos podem ser recrutados para combater infecções bacterianas.

[0062] As doenças e condições associadas com inflamação, distúrbios imunes, doença óssea, câncer e infecção podem ser tratadas usando-se o método da presente invenção. Em uma modalidade preferida, a doença ou condição é uma em que as ações de células imunes, tais como monócito, macrófago, linfócito, granulócito, célula NK, mastócitos, célula dendrítica ou certas células derivadas imunes (por exemplo, osteoclastos) devem ser inibidos ou promovidos a fim de modular a resposta inflamatória ou autoimune.

[0063] Em um grupo de modalidades, doenças ou condições, incluindo doenças crônicas de seres humanos ou outras espécies podem ser tratadas com moduladores de função de CCR1, CCR2 ou CCR3. Estas doenças ou condições incluem: (1) doenças alérgicas, tais como anafilaxia sistêmica ou respostas à hipersensibilidade, alergias a medicamentos, alergias a picadas de insetos e alergias a alimentos, (2) doenças intestinais inflamatórias, tais como doença de Crohn, colite ulcerativa, ileíte e enterite, (3) vaginite, (4) psoríase e dermatoses inflamatórias tais como dermatite, eczema, dermatite atópica, dermatite de contato alérgica, urticária e prurido, (5) vasculite, (6) espondiloartropatias, (7) escleroderma, (8) asma e doenças alérgicas respiratórias, tais como asma, asma alérgica, rinite alérgica, doenças pulmonares de hipersensibilidade e outros, (9) doenças autoimunes, tais como fibromialagia, escleroderma, espondilite ancilosante, RA juvenil, doença de Still, RA juvenil poliarticular, RA juvenil pauciarticular, polimialgia reumática, artrite de Takuyasu, artrite reumatóide, artrite psoriática, osteoartrite, artrite poliarticular, esclerose múltipla, lúpus eritematoso sistêmico, diabetes tipo I, diabetes tipo II, diabetes tipo I (início recente),

Petição 870190076305, de 08/08/2019, pág. 40/73 / 52 neurite ótica, glomerulonefrite e outros, (10) rejeição a enxerto incluindo rejeição a enxerto e doença enxerto versus hospedeiro aguda e crônica, (11) fibrose (por exemplo, fibrose pulmonar (isto é, fibrose pulmonar idioática, fibrose pulmonar intersticial), Fibrose associada com doenças renais de estágio final, fibrose causada por radiação, fibrose tubulointersticial, fibrose subepitelial, escleroderma (esclerose sistêmica progressiva), fibrose hepática (incluindo aquela causada por hepatite alcoólica e viral), cirrose primária e secundária), (12) inflamação pulmonar aguda e crônica (doença pulmonar obstrutiva crônica, bronquite crônica, síndrome da angústia respiratória do adulto, síndrome da angústia respiratória da infância, alveolite complexa imune) e (13) outras doenças em que as respostas inflamatórias indesejadas ou distúrbios imunes devem ser inibidos, tais como doença cardiovascular incluindo aterosclerose, inflamação vascular resultando de transplante de tecido ou durante a restenose (que inclui, mas não limita a restenose seguindo angioplastia e/ou inserção de stent), outras condições inflamatórias agudas e crônicas, tais como miosite, doenças neurodegenerativas (por exemplo, doença de Alzheimer), encefalite, meningite, hepatite, nefrite, sepse, sarcoidose, conjuntivite alérgica, otite, sinusite, inflamação sinovial causada por artroscopia, hiperuremia, trauma, dano por reperfusão de isquemia, poliose nasal, pré-eclâmpsia, liquén plano oral, síndrome de Guillina-Barre, doenças granulomatosas, condições associadas com a produção de leptina, síndrome de Behcet e gota e nas aplicações de cura de ferimento (14) alergias a alimento mediadas imunes, tal como doença celíaca.

[0064] Em um outro grupo de modalidades, doenças ou condições podem ser tratadas com moduladores da função de CCR1. Os exemplos de doenças a serem tratadas com moduladores da função de CCR1 incluem cânceres (tanto primários quanto metastáticos) (por exemplo, mieloma múltiplo; Hata, H., Leukemia & Lymphoma, 2005, 46(7); 967-972), doenças cardiovasculares, doenças osteolíticas incluindo osteoporose (e osteoporose

Petição 870190076305, de 08/08/2019, pág. 41/73 / 52 pós- menopausa), hipercalcemia, doença de Paget, osteodistrofia renal, artrite reumatóide, osteoartriste, metástases ósseas líticas e mieloma múltiplo, doenças em que a angiogênese ou neovascularização desempenha um papel (doenças neoplásticas, retinopatia e degeneração macular), doenças infecciosas (infecções virais, por exemplo, infecção por HIV e infecções bacterianas) e doenças imunossupressoras, tais como condições de transplante de órgão e condições de transplante de pele. O termo condições de transplante de órgão é entendido incluir condições de transplante de medula óssea e condições de transplante de órgão sólido (por exemplo, rim, fígado, pulmão, coração, pâncreas ou combinação destes).

[0065] As composições farmaceuticamente aceitáveis desta invenção também podem inibir a produção de metaloproteinases e citocinas em locais inflamatórios, direta ou indiretamente (como uma consequência da diminuição da infiltração celular) desta maneira fornecendo benefícios contra doenças ou condições ligadas a estas citocinas.

[0066] Os compostos da presente invenção são consequentemente úteis na prevenção ou tratamento de uma ampla variedade de distúrbios e doenças inflamatórias e imunorreguladoras.

[0067] Dependendo da doença a ser tratada e as condições do paciente, os compostos da presente invenção podem ser administrados pela via de administração oral, parenteral (por exemplo, intramuscular, intraperitoneal, intravenosa, ICV, injeção intracisternal ou infusão, injeção subcutânea, ou implante), pela pulverização de inalação, nasal, vaginal, retal, sublingual, ou tópica e podem ser formuladas sozinha, ou junto, em formulações unitárias da dosagem adequada contendo carreadores aceitáveis farmaceuticamente não tóxicos convencionais, adjuvantes e veículos apropriados para cada via de administração.

[0068] No tratamento ou prevenção das condições que requerem a modulação receptora de quimiocina um nível de dosagem apropriado será

Petição 870190076305, de 08/08/2019, pág. 42/73 / 52 geralmente cerca de 0,001 a 100 mg per kg de peso corporal do paciente por dia que pode ser administrado nas dosagens simples ou múltiplas. Preferivelmente, o nível de dosagem será cerca de 0,01 a cerca de 25 mg/kg por dia; mais preferivelmente cerca de 0,05 a cerca de 10 mg/kg por dia. Um nível de dosagem adequado pode ser cerca de 0,01 a 25 mg/kg por dia, cerca de 0,05 a 10 mg/kg por dia, ou cerca de 0,1 a 5 mg/kg por dia. Dentro desta faixa de dosagem pode ser 0,005 a 0,05, 0,05 a 0,5 ou 0,5 a 5,0 mg/kg por dia. Para administração oral, as composições são preferivelmente fornecidas na forma de tabletes contendo 1,0 a 1000 miligramas do ingrediente ativo, particularmente 1,0, 5,0, 10,0, 15,0, 20,0, 25,0, 50,0, 75,0, 100,0, 150,0, 200,0, 250,0, 300,0, 400,0, 500,0, 600,0, 750,0, 800,0, 900,0 e 1000,0 miligramas do ingrediente ativo para o ajuste sintomático da dosagem ao paciente a ser tratado. Os compostos podem ser administrados em um regime de 1 a 4 vezes por dia preferivelmente uma ou duas vezes por dia.

[0069] Entretanto, será entendido, que o nível de dose e a freqüência de dosagem para qualquer paciente particular podem ser variados e dependerá de uma variedade de fatores incluindo a atividade do composto específico utilizado, a estabilidade metabólica e comprimento da ação daquele composto, a idade, peso corporal, características hereditárias, saúde geral, sexo e dieta do paciente, bem como o modo e período de administração, taxa de excreção, combinação de medicamento e a gravidade da condição particular para o paciente que sofre a terapia.

[0070] Doenças e condições associadas com inflamação, distúrbio imune, infecção e câncer pode ser tratado ou prevenido com os presentes compostos, composições e métodos.

[0071] Os compostos e composições da presente invenção podem ser combinados com outros compostos e composições tendo utilidades relacionadas para evitar e tratar a condição ou doença de interesse, tal como distúrbios inflamatórios ou autoimunes, condições e doenças, incluindo

Petição 870190076305, de 08/08/2019, pág. 43/73 / 52 doença intestinal inflamatória, artrite reumatóide, osteoartrite, artrite psoriática, artrite poliarticular, esclerose múltipla, doenças alérgicas, psoríase, dermatite atópica e asma e aquelas patologias notadas acima.

[0072] Por exemplo, no tratamento ou prevenção da inflamação ou autoimunidade ou por exemplo artrite associada a perda óssea, os presentes compostos e composições podem ser usadas em conjunção com um agente anti-inflamatório ou analgésico tal como um agonista opiato, um inibidor de lipoxigenase, tal como um inibidor de 5-lipoxigenase, um inibidor de ciclooxigenase, tal como um inibidor de ciclooxigenase-2, um inibidor de interleucina, tal como um inibidor de interleucina-1, um antagonista NMDA, um inibidor de óxido nítrico ou um inibidor de síntese de óxido nítrico, um agente anti-inflamatório não esteroidal, ou um agente anti-inflamatório antisupressão de citocina, por exemplo com um composto tal como acetaminofeno, aspirina, codeina, fentanila, ibuprofeno, indometacina, cetorolac, morfina, naproxen, fenacetina, piroxicam, um analgésico esteroidal, sufentanila, sunlindac, tenidap e outros. Similarmente, os presentes compostos e composições podem ser administrados com um analgésico listado acima; um potenciador tal como cafeína, um antagonista H2 (por exemplo, ranitidina), simeticona, alumínio ou hidróxido de magnésio; um descongestionante tal como fenilefrina, fenilpropanolamina, pseudoefedrina, oximetazolina, efinefrina, nafazolina, xilometazolina, propilexedrina, ou levo desóxi efedrina; um antitussivo tal como codeina, hidrocodona, caramifeno, carbetapentano, ou dextrometorfano; um diurético; e um sedativo ou antihistamina não sedativa.

[0073] De outra maneira, compostos e composições da presente invenção podem ser usados em combinação com outros medicamentos que são usados no tratamento, prevenção, supressão ou melhoramento das doenças ou condições pelo qual os compostos e composições da presente invenção são úteis. Outros tais medicamentos podem ser administrados, por

Petição 870190076305, de 08/08/2019, pág. 44/73 / 52 uma via e em uma quantidade comumente usado deste, contemporaneamente ou sequencialmente com um composto ou composição da presente invenção. Quando um composto ou composição da presente invenção é usado contemporaneamente com ou mais outros medicamentos, uma composição farmacêutica contendo outros tais medicamentos além do composto ou composição da presente invenção ser preferida. Consequentemente, as composições farmacêuticas da presente invenção incluem aqueles que também contém um ou mais outros ingredientes ativos ou agentes terapêuticos, além disso a um composto ou composição da presente invenção. Exemplos de outros agentes terapêuticos que podem ser combinados com um composto ou composição da presente invenção, administrados separadamente ou na mesma composição farmacêutica, incluem, mas não são limitados a: (a) antagonistas VLA-4, (b) corticoesteróides, tal como beclometasona, metilprednisolona, betametasona, prednisona, prenisolona, dexametasona, fluticasona, hidrocortisona, budesonida, triamcinolona, salmeterol, salmeterol, salbutamol, formeterol; (c) imunossupressores tal como ciclosporina (ciclosporina A, Sandimmune®, Neoral®), tacrolimus (FK-506, Prograf®), rapamicina (sirolimus, Rapamune®) e outros imunossupressores de tipo FK-506 e micofenolato, por exemplo, micofenolato de mofetila (CellCept®);

(d) antiistaminas (antagonistas de H1-histamina) tal como bromofeniramina, clorfeniramina, dexcloifenoiramina, triprolidina, clemastina, difenoidramina, difenilpiralina, tripelenamina, hidroxizina, metdilazina, prometazina, trimeprazina, azatadina, ciproeptadina, antazolina, feniramina pirilamina, astemizol, terfenadina, loratadina, cetirizina, fexofenadina, descarboetoxiloratadina e outros; (e) anti-asmáticos não esterodais (por exemplo, terbutalina, metaproterenol, fenoterol, isoetarina, albuterol, bitolterol e pirbuterol), teofilina, cromolina sódica, atropina, brometo de ipratrópio, antagonistas de leucotrieno (por exemplo, zafmlucast, montelucast, pranlucast, iralucast, pobilucast e SKB-106,203), linibidores de biosíntese de

Petição 870190076305, de 08/08/2019, pág. 45/73 / 52 leucotrieno (zileuton, BAY-1005); (f) agentes anti-inflamatórios não esteroidais (NSAIDs) tal como derivados do ácido propiônico (por exemplo, alminoprofeno, benoxaprofeno, ácido buclóxico, carprofeno, fenbufen, fenoprofeno, fluprofeno, flurbiprofeno, ibuprofeno, indoprofeno, quetoprofeno, miroprofeno, naproxen, oxaprozin, pirprofeno, pranoprofeno, suprofeno, ácido tiaprofênico e tioxaprofen), derivados do ácido acético (por exemplo, indometacina, acemetacina, alclofenaco, clidanac, diclofenaco, fenclofenaco, ácido fenclózico, fentiazac, furofenaco, ibufenaco, isoxepac, oxpinac, sulindac, tiopinac, tolmetin, zidometacina e zomepirac), derivados do ácido fenâmico (por exemplo, ácido flufenâmico, ácido meclofenâmico, ácido mefenâmico, ácido niflúmico e ácido tolfenâmico), derivados do ácido bifenilcarboxílico (por exemplo, diflunisal e flufenisal), oxicamos (por exemplo, isoxicam, piroxicam, sudoxicam e tenoxican), salicilatos (por exemplo, ácido acetil salicílico e sulfasalazina) e as pirazolonas (por exemplo, apazona, bezpiperilon, feprazona, mofebutazona, oxifenobutazona e fenilbutazona); (g) inibidores de ciclooxigenase-2 (COX-2) tal como celecoxib (Celebrex®) e rofecoxib (Vioxx®); (h) inibidores de fosfodiesterase tipo IV (PDE IV); (i) compostos de ouro tais como auranofina e aurotioglicose, (j) etanercept (Enbrel®), (k) terapias de anticorpo tal como ortoclone (OKT3), daclizumab (Zenapax®), basiliximab (Simulect®) e infliximab (Remicade®), (l) outros antagonistas dos receptores de quimiocina, especialmente CCR5, CXCR2, CXCR3, CCR2, CCR3, CCR4, CCR7, CX3CR1 e CXCR6; (m) lubrificantes ou emolientes tal como petrolato e lanolina, (n) agentes queratolíticos (por exemplo, tazaroteno), (o) derivados de vitamina D3, por exemplo, calcipotrieno ou calcipotriol (Dovonex®), (p) PUVA, (q) antralina (Drithrocreme®), (r) etretinato (Tegison®) e isotretinoina e (s) agentes terapêuticos de esclerose múltipla tal como interferon β-1β (Betaseron®), interferon (β-1α (Avonex®), azatioprina (Imurek®, Imuran®), acetato de glatirâmero (Capoxone®), um

Petição 870190076305, de 08/08/2019, pág. 46/73 / 52 glucocorticóide (por exemplo, prednisolona) e ciclofosfamida (t) DMARDS tal como metotrexato (u) outros compostos tal como ácido 5-aminosalicílico e pró-medicamentos destes; hidroxicloroquina; D-penicilamina; antimetabólitos tal como azatioprina, 6-mercaptopurina e metotrexato; inibidores de síntese de DNA tal como hidroxiuréia e separadores de microtúbulo tal como colchicina. A razão em peso do composto da presente invenção ao segundo ingrediente ativo pode ser variada e dependenrá da dosagem efetiva de cada ingrediente. Geralmente, uma dosagem efetiva de cada será usada. Deste modo, por exemplo, quando um composto da presente invenção é combinado com um NSAID a razão em peso do composto da presente invenção ao NSAID geralmente variará de cerca de 1000:1 a cerca de 1:1000, preferivelmente cerca de 200:1 a cerca de 1:200. As combinações de um composto da presente invenção e outros ingredientes ativos também geralmente estarão dentro da faxa anteriormente mencionada, mas em cada caso, um dose efetiva de cada ingrediente ativo deve ser usada.

V. Exemplos [0074] Os seguintes exemplos são oferecidos para ilustrar, mas não limitam a invenção reivindicada.

[0075] Os reagentes e solventes usados abaixo podem ser obtidos de fontes comerciais tal como Aldrich Chemical Co. (Milwaukee, Wisconsin, USA). 1H-RMN foram registrados em um espectrômetro Varian Mercury 400 MHz RMN. Os picos significantes podem ser fornecidos relativos ao TMS e são tabulados na ordem: multiplicidade (s, singleto; d, dupleto; t, tripleto; q, quarteto; m, multipleto) e número de prótons. Os resultados da espectrometria de massa são relacionados como a razão de massa na carga, seguido pela abundância relativa de cada íon (em parêntese). Nas tabelas, um valor m/e simples é relacionado pelo íon M+H (ou, como notado, M-H) contendo os isótopos atômicos mais comuns. As origens do isótopo correspondem à fórmula esperada em todos os casos. A análise de espectrometria de massa de

Petição 870190076305, de 08/08/2019, pág. 47/73 / 52 eletropulverização (ESI) foi conduzida em um espectrômetro de massa de eletropulverização Hewlett-Packard MSD usando o HP1100 HPLC equipado com um Agilent Zorbax SB-C18, 2,1X50 mm, 5 μ de coluna para a liberação da amostra. Normalmente o analito foi dissolvido em metanol a 0,1 mg/mL e 1 microlitro foi infundido com o solvente de liberação no espectrômetro de massa, que examinou de 100 a 1500 daltons. Todos os compostos devem ser analisados no modo ESI positivo, usando acetonitrila / água com 1% de ácido fórmico como o solvente de liberação. Os compostos fornecidos abaixo também devem ser analisados no modo ESI negativo, usando 2 mM de NH4OAc em acetonitrila / água como sistema de liberação.

[0076] As seguintes abreviações são usadas nos Exemplos e em toda parte da descrição da invenção:

[0077] DMF, Dimetil formamida; TFA, ácido Trifluoroacético; THF, Tetraidrofurano; EtOAc, acetato de etila; BOC2O, dicarbonato de di-tercbutila ou anidrido de BOC; HPLC, cromatografia líquida de pressão alta; DIPEA, Diisopropil etilamina; HCTU, hexafluorofosfato de 1[tò(dimetilamino)metileno]-5-cloro-1H-Benzotriazólio-3-óxido (1-); HBTU, hexafluorofosfato de O-(benzotriazol-1-il)-V,N,N’,V’-tetrametilurênio; dppf, 1,1'-Bis(difenilfosfino) ferroceno; Pd2(dba)3, Tris(dibenzilidenoacetona) dipaládio (0); DIPEA, diisopropiletilamina; DMP, dimetilftalato; Me, metila; Et, etila; DCM, diclorometano.

[0078] Os compostos dentro do escopo desta invenção podem ser sintetizados como descritos abaixo, usando uma variedade das reações conhecidas ao técnico habilitado. Uma pessoa habilitada na técnica também reconhecerá que os métodos alternativos podem ser utilizados para sintetizar os compostos alvos desta invenção e que os métodos descritos dentro do corpo deste documento não são exaustivos, mas fornecem as vias práticas e aplicáveis amplamente aos compostos de interesse.

[0079] Certas moléculas reivindicadas nesta Patente pode existir nas

Petição 870190076305, de 08/08/2019, pág. 48/73 / 52 formas enantioméricas e diastereoméricas diferentes e todas tais variantes destes compostos são reivindicados.

[0080] A descrição detalhada dos procedimentos experimentais usados para sintetizar os compostos chaves neste texto levam as moléculas que são descritas pelos dados físicos que identificam bem como pelas descrições estruturais associadas com estes.

[0081] Aquela pessoa habilitada na técnica também reconhecerá que durante os procedimentos do trabalho padrão na química orgânica, ácidos e bases são frequentemente usados. Os sais dos compostos parentes são algumas vezes produzidos, se estes possuem a acidez ou basicidade intrínseca necessária, durante os procedimentos experimentais dentro desta Patente. Exemplo 1 [0082] Este exemplo ilustra a preparação de 2-[4-amino-3-(1Himidazol-2-il)-pirazolo [3,4-d]pirimidin- 1-il]-1-[4- (4-cloro-3metoxifenil)piperazin-1 -il]etanona

Etapa 1: 4-amino-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina-3-carbonitrila

NC CN nh₂nh

EtOH refluxo h₂n

H

B

CH(OMe)₃

CN

MeO

H

C

NH₃/MeOH

[0083]

A uma solução de éster terc-butílico do ácido hidrazinocarboxílico (129 g, 0,976 mol) em etanol (700mL) colocado em um banho de gelo foi adicionado 2,3-diciano-but-2-enedinitrila (125 g, 0,976 mol) em porções enquanto mantém a temperatura interna abaixo de 16° C.

Após a adição estar completa, a mistura de reação foi aquecida em refluxo por horas, concentrada e secada sob vácuo para dar 5-amino-1H-pirazol-3,4 dicarbonitrila. MS (ES) m/z 134,1 (M+H+).

[0084] 5-Amino-1H-pirazol-3,4-dicarbonitrila obtido acima foi submetido a refluxo em trimetilortoformato (1 L) por 8 horas. A mistura foi então concentrada e secada sob vácuo para permitir Éster metílico do ácido NPetição 870190076305, de 08/08/2019, pág. 49/73 / 52 (4,5-diciano-2H-pirazol-3-il)-formimídico, que foi dissolvido em metanol (400mL), esfriado a 0° C e tratado com 7 N de NH₃ em metanol (1 L). A mistura resultante foi deixada aquecer em temperatura ambiente durante a noite e filtrada. O sólido foi lavado com uma mistura 2:1 de MeOH-H2O (100mL), acetona (100mL) e éter (100mL), então secada sob vácuo para dar 4-amino-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina-3-carbonitrila (79 g, 50% de rendimento). MS (ES) m/z 161,0 (M+H+).

Etapa 2: 2-(4-amino-3-ciano-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1il)acetato terc- butila

A

K₂CO₃

DMF

[0085] A uma mistura de 4-amino-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina-3carbonitrila (76,6 g, 0,476 mol) e carbonato de potássio (197 g, 1,427 mmol) em DMF (680mL) a 0° C foi adicionado cloroacetato de terc-butila (68,1mL,

0,476 mol) às gotas enquanto mantém a temperatura interna abaixo de 20° C. A mistura resultante foi agitada por 22 horas, filtrada e lavada com EtOAc (100mL x 2). O sólido obtido foi recolocado em suspensão em água gelada (1,5 L), filtrada, lavada com água gelada (500mL) e éter (100mL x 2), então secada à vácuo para produzir 2-(4-amino-3-ciano-1H-pirazolo[3,4d]pirimidin-1-il)acetato terc- butila (81,6 g, 62,3% de rendimento). MS (ES) m/z 275,0 (M+H⁺).

Etapa 3: 2-(4-amino-3-(4,5-diidro-1H-imidazol-2-il)-1Hpirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)acetato de terc-butila

NH

90%

AcOH, EtOH refluído

[0086] A uma mistura de éster terc-butílico do ácido (4-amino-3 ciano-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)-acético (80 g, 0,291 mol) e EtOH

Petição 870190076305, de 08/08/2019, pág. 50/73 / 52 (800mL) em um banho de água gelada foi adicionado ácido acético (67mL) e então etilenodiamina (195mL). A mistura resultante foi submetido à refluxo por 90 minutos, esfriado a temperatura ambiente e filtrado. O sólido foi recolocado em suspensão em água (1 L), filtrado e secado à vácuo para dar 2(4-amino-3-(4,5-diidro-1 H-imidazol-2-il)-1 H-pirazolo [3,4-d]pirimidin-1 il)acetato de terc-butila (84,6 g, 90% de rendimento). MS (ES) m/z 318,1 (M+H+).

Etapa 4: dicloridreto do ácido (2-(4-amino-3-(1H-imidazol-2il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)acético

(1.5 eq.)

DMSO

N HCl p-dioxano

•2HCl

[0087] A uma mistura de 2-(4-amino-3-(4,5-diidro-1H-imidazol-2-il)1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)acetato de terc-butila (84 g, 0,265 mol) e DMSO (900mL) em um banho de água gelada foi adicionado periodinano de Dess-Martin (169,6 g, 0,4 mol) em porções enquanto mantém a temperatura interna abaixo de 25° C. A mistura foi agitada por 2 horas em temperatura ambiente e então vertida em água gelada (2 L) que contém 84 g de Na2S2O3. A mistura foi ajustada ao pH 12-14 com 3 N de NaOH e filtrado para dar um sólido, que foi lavado com água, recolocado em suspensão em água gelada (2 L), filtrada, lavada com água (500mL), EtOAc (100mL x 2) e Et2O (100mL x

2) e secada à vácuo para dar éster terc-butílico do ácido (2-(4-amino-3-(1Himidazol-2-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)acético (66,2 g, 80% de rendimento). MS (ES) m/z 316,1 (M+H+).

[0088] Éster terc-butílico do ácido (2-(4-amino-3-(1H- imidazol-2-il)1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)acético (61 g, 193 mmol) foi tratado com 4

N de HCl em dioxano (700mL) em refluxo por 2 horas. após esfriamento em temperatura ambiente, o sólido foi coletado por filtração, lavado com EtOAc

Petição 870190076305, de 08/08/2019, pág. 51/73 / 52 (80mL x 2) e Et₂O (100mL) e secado à vácuo para dar ácido (2-(4-amino-3(1H-imidazol-2-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)acético como um sal de dicloridreto (66 g, quantitativo). MS (ES) m/z 260,1 (M+H+).

Etapa 5: 2-[4-Amino-3-(1H-imidazol-2-il)-pirazolo[3,4d]pirimidin-1-il]-1-[4-(4-cloro-3-metoxifenil)piperazin-1-il]etanona

•2HCl

Cl

Cl

•2HCl

O^u 'TN® JL® -^{N e}PFg·

Me₂N

NMe₂

DMF, DIEA [0089] Dicloridreto do ácido [4-Amino-3-(1H-imidazol-2 il)pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]acético (79 g, 0,238 mol) e dicloridreto 1-(4cloro-3-metoxifenil)piperazina (71,3 g, 0,238 mol) foram recolocados em suspensão em DMF anidro (793mL) e esfriado em um banho gelado. N,Ndiisopropiletilamina (290 mL, 1,67 mol) foi adicionado e a mistura foi agitada em temperatura ambiente até todos os sólidos dissolvido formar uma solução marrom. HCTU (113,23 g, 0,273 mol) foi adicionado em porções em 10 minutos enquanto mantém a temperatura interna abaixo 20° C. Após 3 horas, a mistura de reação foi vertida levemente em um frasco de água gelada vigorosamente agitada (6 L) para dar uma suspensão, que foi agitada por 1 horas, filtrada e lavada com NaHCO3 saturado (500mL x 2) e água (500mL x

2). O sólido foi purificado pela trituração em refluxo MeCN (2 x 500mL) para fornecer 2- [4-amino-3-(1 H-imidazol-2-il)-pirazolo [3,4-d]pirimidin-1 -il] -1-[4(4-cloro-3-metoxifenil)piperazin-1-il]etanona (90,5 g, 81% de rendimento, >98% puro por LC-MS). ¹H RMN (400 MHz, d6- DMSO) δ 13,0 (s, 1H), 10,14 (d, 1H, J=3,7Hz), 8,16 (s, 1H), 7,95 (d, 1H, d, J=3,7Hz), 7,25 (dd, 1H,

J=1,03 e 1,36Hz), 7,20 (d, 1H, J=8,8Hz), 7,16 (s, 1H), 6,70 (d, 1H, J=2,4Hz),

6,52 (dd, 1H, J=2,4 e 8,8Hz), 5,37 (s, 2H), 3,83 (s, 3H), 3,74 (t, 2H,

J=4,8Hz), 3,58 (t, 2H, J=4,8Hz), 3,28 (t, 2H, J=4,8Hz), 3,17 (t, 2H, J=4,8Hz).

Petição 870190076305, de 08/08/2019, pág. 52/73 / 52 ¹³C RMN (100,6 MHz, d6- DMSO) δ 165,3, 159,0, 157,3, 155,7, 155,5, 151,6,

141,2, 136,6, 130,3, 128,7, 119,0, 111,9, 109,0, 101,9, 98,0, 56,7, 49,4, 48.9,

48,8, 44,7, 42,1; IR (KBr) 3219, 2937, 1682, 1638, 1594, 1567 cm^-1; MS (ES) m/z 468,1(M+H+). Anal. Calcd para C21H22N9O2Cl-0,85 H2O: C, 52,20; H,

4,94; N, 26,09; Cl, 7,34. Encontrado: C, 51,92; H, 4,68; N, 26,44; Cl, 7,18.

Etapa 6: sal de cloridreto 2-[4-Amino-3-(1H-imidazol-2-il)pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]-1-[4-(4-cloro-3-metoxifenil)piperazin-1il]etanona

HCl concentrado acetona/H₂O _H 2 HCl NH₂ [0090]

A uma mistura de 2-[4-amino-3-(1H-imidazol-2-il)pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]-1-[4-(4-cloro-3-metoxifenil)piperazin-1il]etanona (50 g, 0,1068 mol), H2O (250mL) e acetona (750mL) a 60° C foi adicionado HCl concentrado (22,3mL, 0,267 mol, 2,50 equiv) às gotas para dar a solução marrom. Após 90 minutos, uma suspensão marrom claro grosso formada. A suspensão foi diluída a uma concentração final de 0,03 M pela adição às gotas acetona (2,1 L) enquanto mantém a temperatura interna entre 58° C a 62° C. A mistura resultante foi agitada em 60° C por 90 minutos adicionais, esfriado em temperatura ambiente e filtrada. O sólido foi lavado com acetona (60mL x 2) e secada à vácuo para produzir sal de cloridreto 2-[4Amino-3-(1 H-imidazol-2-il)-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1 -il] -1- [4-(4-cloro-3 metoxifenil)piperazin-1-il]etanona (49,2 g, 80% de rendimento, >99% puro por LC-MS) como prismas marrom claro finos. ¹H RMN (400 MHz, d₆DMSO) δ 13,45 (s, 1H), 11,92 (s, 1H), 9,43 (s, 1H), 8,50 (s, 1H), 7,33 (s, 2H), 7,22 (d, 1H, J=8,8Hz), 6,72 (d, 1H, J=2,4Hz), 6,55 (dd, 1H, J=2,4, 8,8Hz), 5,54 (s, 2H), 3,84 (s, 3H), 3,76 (t, 2H, J=4,8Hz), 3,61 (t, 2H, J=4,8Hz), 3,31 (t, 2H, J=4,8Hz), 3,20 (t, 2H, J=4,8Hz). MS (ES) m/z 468,1(M+H+). Anal. Calcd para C21H22N9O2Cl-2HCl-1,75H2O: C, 44,07; H, 4,84; N, 22,02; Cl, 18,58. Encontrado: C, 43,89; H, 4,48; N, 22,0; Cl, 18,26. KF (H2O) Calcd

Petição 870190076305, de 08/08/2019, pág. 53/73 / 52 para C2iH22N9O2Cl-2HCl-1,75H2Ü : 5,51%. Encontrado: 5,14%.

Exemplo 2 [0091] Este exemplo ilustra a preparação de 2-[4-amino-3-(1Himidazol-2-il)-pirazolo [3,4-d]pirimidin-1 -il] -1- [4-(4-cloro-3 -metoxifenil)-2,2dimetilpiperazin-1 -il]etanona

Etapa 1: dicloridreto 4-(4-cloro-3-metóxi-fenil)-3,3dimetilpiperazina

₆₀ ^oC, durante a noite

2) HCl/EtOAc [0092] Uma mistura de 5-bromo-2-cloroanisol (3,70 g, 16,7 mmol, 1 equiv), 2,2-dimetil-piperazina (2,2 g, 1,2 equiv) e rac-BINAP (1,04 g, 0,1 equiv) em tolueno (35mL) foi desgaseificado com nitrogênio comprimido por 5 minutos. A uma mistura foram adicionados NaOz-Bu (2,3 g, 1,4 equiv) e Pd2(dba)3 (54 mg, 0,005 equiv). A mistura resultante foi aquecida a 60^o C durante à noite e esfriado a temperatura ambiente. EtOAc (~ 200mL) foi adicionado e a mistura foi filtrada através de celite. O filtrado foi lavado com K2CO3 aquoso saturado (200mL), NaHCO3 aquoso saturado (200mL) e salmoura (200mL) sequencialmente e então secado em sulfato de magnésio. O resíduo resultante após evaporação foi dissolvido em EtOAc (100mL) e tratado com 2 N de HCl em Et2O (100mL) em temperatura ambiente por 2 horas. Um sólido foi coletado por filtração e secado à vácuo para produzir dicloridreto de 4-(4-cloro-3-metóxi-fenil)-3,3-dimetilpiperazina (4,0 g). MS (ES) m/z 255,1 (M+H⁺).

Etapa 2: 2-[4-Amino-3-(1H-imidazol-2-il)-pirazolo[3,4d]pirimidin-1 -il] -1- [4-(4-cloro-3 -metoxifenil)-2,2-dimetilpiperazin-1 il]etanona

Petição 870190076305, de 08/08/2019, pág. 54/73 / 52

Ν' I Ν

Ν ^NH Á nh₂

Ν «2HCl dicloridreto

Cl

N NH •2HCl

HBTU, DIEA, DMF do ácido

[4-Amino-3-(1 H-imidazol-2il)pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]acético (100 mg, 0,2 mmol) e dicloridreto de 1-(4-cloro-3-metoxifenil)-3,3-dimetilpiperazina (100 mg, 0,3 mmol) foram recolocados em suspensão em DMF anidro (2,5mL). N,NDiisopropiletilamina (0,32 mL, 1 mmol) foi adicionado a 0° C e a mistura foi agitada em temperatura ambiente até todos os sólidos dissolvidos para dar a solução marrom. HBTU (114 mg, 0,3 mmol) foi adicionado. Após 2 horas, a mistura de reação foi vertida levemente em um frasco de água gelada vigorosamente agitada (100mL). A suspensão resultante foi extraída com diclorometano (100mL) e lavado com NaHCO3 saturado (100mL), salmoura (100mL) e evaporado. O resíduo foi purificado pela cromatografia de coluna cintilante para produzir 2-[4-amino-3-(1H-imidazol-2-il)-pirazolo[3,4d]pirimidin-1-il]-1-[4-(4-cloro-3-metoxifenil)-2,2-dimetilpiperazin-1il]etanona como um sólido marrom claro (45 mg) após evaporação e secagem à vácuo. ¹H RMN (400 MHz, d6- DMSO) δ 10,14 (d, 1H, J=3,6Hz), 8,16 (s, 1H), 7,95 (d, 1H, d, J=3,6Hz), 7,24 (s, 1H), 7,15 (s, 1H), 7,14 (d, 1H, J=8,8Hz), 6,40 (d, 1H, J=2,4Hz), 6,31 (dd, 1H, J=2,4 e 8,8Hz), 5,29 (s, 2H), 3,90 (t, 2H, J=5,4Hz), 3,84 (s, 3H), 3,46 (t, 2H, J=5,4Hz), 3,30 (s, 2H), 1,38 (s, 6H). MS (ES) m/z 496,1 (M+H+).

Exemplo 3 [0093] Este exemplo ilustra a preparação de 2-[4-amino-3-(1Himidazol-2-il)-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]-1-[4-(4-cloro-2-fluoro-5metoxifenil)-piperazin-1-il]etanona

F

BOP, DIEA

DMF, RT

O ·2 HCl

N H // nh2^{2 HCl n}^n

Petição 870190076305, de 08/08/2019, pág. 55/73 / 52 [0094] Uma mistura de sal de dicloridreto de 1-(4-cloro-2-fluoro-5metoxifenil)-piperazina (65,2 mg, 0,206 mmol, 1 equiv), ácido [4-amino-3(1H-imidazol-2-il)-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]acético (50 mg, 1 equiv), reagente BOP (109 mg, 1,7 equiv) e VN-diisopropiletilamina (0,165mL, 5 equiv) em DMF (0,5mL) foi agitada em temperatura ambiente durante à noite. Purificação HPLC de fase reversa (acetonitrila-H₂O com 0,1% TFA como eluente) dão 2-[4-amino-3-(1 H-imidazol-2-il)-pirazolo [3,4-d]pirimidin-1 -il]1-[4-(4-cloro-2-fluoro-5-metoxifenil)-piperazin-1-il]etanona. MS (ES) m/z

486,5 (M+H+).

Exemplo 4 [0095] Este exemplo ilustra a preparação de 2-[4-amino-3-(1Himidazol-2-il)-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]-1-[4-(4-cloro-2-fluoro-5metoxifenil)-2-metil-piperazin-1-il]etanona

BOP, DIEA ^F DMF, rt

NH ______________________„

O _kl_ ·2 HCl O NA\ ^HO _M ^N N ^H.2 HCl NH, ⁿu

O composto do título foi

O

Cl N N

O

N H

NH, ^4 [0096] preparado por um procedimento análogo aquele descrito no Exemplo 3 usando dicloridreto de 1-(4-cloro-2fluoro-5-metoxifenil)-3-metilpiperazina. ¹H RMN (400 MHz, d₆- DMSO) δ 14,20 (br, 2H), 10,28 (br, 1H), 8,15 (s. 1H), 7,93 (br s, 1H), 7,33 (d, 1H, J= 11,6Hz), 7,17 (br s, 1H), 6,71 (d, 1H, J=8,0Hz), 5,44 (m, 1H), 5,21 (d, 1H, J=15.6Hz), 4,54 (m, 0,5H), 4,39 (m, 0,5H), 4,19 (m, 0,5H), 3,97 (m, 0,5 H),

3.84 (s, 3H), 3,56 (m, 0,5Hz), 3,40 (m, 2H), 3,08 (m, 0,5H), 2,96 (m, 0,5H),

2.85 (m, 1H), 2,72 (m, 0,5H), 1,42 (d, 1H, J=6,0Hz), 1,24 (d, 2H, J=6,8Hz). MS (ES) m/z 500,5 (M+H+).

Exemplo 5 [0097] Este exemplo ilustra a preparação de 2-[4-amino-3-(1Himidazol-2-il)-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]-1-[4-(4-cloro-2-fluorofenil)-2Petição 870190076305, de 08/08/2019, pág. 56/73 / 52 metil-piperazin-1 -il]etanona

HN NH

HN NH

Pd2(dba)3, ^{N H} rac-BINAP, F /^F

NaOBu*; , Cl^Çj>-N NH ________/n *2 ^HCl Cl^AvN 'N

N

BOP, DIEA

DMF, RT >

Etapa 1: 1-(4-cloro-2-fluoro-fenil)-3-metilpiperazina [0098]

1-Bromo-4-cloro-2-fluorobenzeno (5 g, 23,9 mmol, 1 equiv), de 2-metilpiperazina (2,8 g, 1,15 equiv), tris-benzilidinacetona dipaládio(0) (0,43 g, 0,05 equiv), rac-BINAP (0,89 g, 0,15 equiv), terc-butóxido de sódio (3,2 g, 1,4 equiv) foram submetidos à pasta em tolueno (60mL) e a mistura foi aquecida a 65 °C durante à noite. Após esfriamento em temperatura ambiente, acetato de etila (100mL) foi adicionado. O precipitado preto foi removido por filtração. O filtrado foi lavado com 3 N de solução de carbonato de potássio duas vezes. A fase orgânica foi secada em sulfato de sódio e neutralizada com 2N de HCl-éter. O sólido foi coletado por filtração, lavado com éter e secado à vácuo para dar 1-(4-cloro-2-fluorofenil)-3-metilpiperazina como um sal de dicloridreto.

Etapa 2: O composto do título foi preparado por um procedimento análogo aquele descrito no Exemplo 3 usando 1-(4-cloro-2fluorofenil)-3-metilpiperazina. ¹H RMN (400 MHz, CDCl₃) δ 10,38 (br, 1H), 10,26 (br, 1H), 8,32 (s, 1H), 7,24 (m, 2H), 7,17 (s, 1H), 7,07 (s, 1H), 7,04 (d, 2H, J=2Hz), 6,80 (t, 1H, J=8,8Hz), 5,93 (br s, 1H), 5,24 (m, 2H), 4,81 (s, 0,5H), 4,47 (d, 0,5H, J=12Hz), 4,20 (s, 0,5H), 3,68 (m, 1H), 3,31 (m, 2H), 2,88 (t, 1H, J=16Hz), 2,76 (dd, 1H, J=12, 3,6Hz), 1,50 (d, 1,5H, J=5,2Hz), 1,39 (d, 1,5H, J=6,4Hz). MS (ES) m/z 470,5 (M+H⁺).

[0099]

Exemplo 6

Este exemplo ilustra a preparação de 2-[4-amino-3-(1Himidazol-2-il)-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]-1-[4-(4-cloro-3-etoxifenil)piperazin-1-il]etanona

Petição 870190076305, de 08/08/2019, pág. 57/73 / 52

Cl

HCl

N NH

BOP, DIEA

DMF, RT

HO

.2 HCl

[00100] O composto do título foi preparado por um procedimento análogo aquele descrito no Exemplo 3 usando dicloridreto de 1-(4-cloro-3etoxifenil)piperazina. ¹H RMN (400 MHz, d₆- DMSO) δ 14,20 (br, 1H), 10,13 (br, 1H), 8,15 (s, 1H), 7,98 (d, 1H, J=4Hz), 7,25 (S, 1H,), 7,19 (d, 1H, J=8,8Hz), 7,15 (s, 1H), 6,68 (d, 1H, J=2,4Hz), 6,51 (dd, 1H, J=8,8, 2,8Hz), 5,36 (s, 2H), 4,09 (q, 2H, J=6,4Hz), 3,73 (br, 2H), 3,57 (br, 2H), 3,26 (br, 2H), 3,15 (br, 2H), 1,34 (t, 3H, J=6,8Hz). MS (ES) m/z 482,5 (M+H⁺).

Exemplo 7 [00101] Este exemplo ilustra a preparação de 2-[4-amino-3-(1H imidazol-2-il)-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]-1-[4-(4-cloro-3-metoxifenil)-2metil-piperazin-1-il]etanona

Cl

BOP, DIEA

DMF, RT

HCl

N

H ,, NH2 ^N^N ·2 HCl

Cl

'N H

NH₂ [00102] O composto do título foi preparado por um procedimento análogo aquele descrito no Exemplo 3 usando dicloridreto de 1-(4-cloro-3metoxifenil)-3-metilpiperazina. ¹H RMN (400 MHz, d₆- DMSO) δ 14,4 (br, 1H), 10,13 (s, 1H), 8,16 (s, 1H), 7,99 (s, 1H), 7,25 (t, 1H, J=1,2Hz), 7,19 ( d, 1H, J=8Hz), 7,15 (s, 1H), 6,64 (s, 1H), 6,50 (m, 1H), 5,51-5,21 (m, 2H), 4,49 (s, 0,5H), 4,38 (s, 0,5H), 4,15 (m, 0,5 H), 3,98 (m, 0,5H), 3,83 (s, 3 H), 3,70 (m, 1H), 3,55 (m, 1H), 3,29 (s, 1H), 3,08-2,85 (m, 2H), 1,37 (d, 1,5H, J= 6,0Hz), 1,18 (d, 1,5H, J=6,4Hz). MS (ES) m/z 482,2 (M+H⁺).

Exemplo 8 [00103] Este exemplo ilustra a preparação de 2-[4-amino-3-(1Himidazol-2-il)-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]-1-[4-(4-clorofenil)-2Petição 870190076305, de 08/08/2019, pág. 58/73 / 52 „ O NA\ ^cI^>ⁿ^ⁿA__n^V * N^ H

NH2 ⁿ^N metilpiperazin-1-il]etanona

BOP, DIEA

DMF, RT

Cl / N NH _______________________

P N •2 HCl _HO 1 J >

N H

N·.*² vT [00104] O composto do título foi preparado por um procedimento análogo aquele descrito no Exemplo 3 usando dicloridreto de 1-(4-clorofenil)3-metilpiperazina. ¹H RMN (400 MHz, d6- DMSO) δ 11,96 (br, 1H), 9,62 (s, 1H), 8,52 (s, 1H), 7,48 (s, 1H), 7,35 (s, 1H), 7,30 ( s, 1H), 7,22 (t, 2H, J=2,4Hz), 6,96 (t, 2H, J=8Hz), 5,50 (m, 2H), 4,45 (m, 0,5H), 4,15 (m, 0,5H), 3,90 (m, 0,5H), 3,55 (m, 2 H), 2,8-3,14 (m, 2H), 2,60 (m, 0,5Hz), 1,89 (s, 1H), 1,39 (d, 1,5H, J= 6,0Hz), 1,18 (d, 1,5H, J=6,8Hz). MS (ES) m/z 452,1 (M+H⁺).

Exemplo 9

Este exemplo ilustra a preparação de 2-[4-amino-3-(1H[00105] imidazol-2-il)-pirazolo [3,4-d]pirimidin- 1-il]-1-[4- (4-clorofenil)piperazin-1 il]etanona

BOP, DIEA

DMF, RT

C^><> _____ •2 HCl P ^N

Cl

N H

NH_;. ^4

N H >Vnh₂*^{2 HCl} [00106] O composto do título foi preparado por um procedimento análogo aquele descrito no Exemplo 3 usando dicloridreto de 1-(4clorofenil)piperazina. MS (ES) m/z 438,1 (M+H+).

Exemplo 10 [00107] Este exemplo ilustra a preparação de 2-[4-amino-3-(1Himidazol-2-il)-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]-1-[4-(4-cloro-3-etoxifenil)-2metilpiperazin-1-il]etanona

Petição 870190076305, de 08/08/2019, pág. 59/73 / 52

•2 HCl

N NH

BOP, DIEA

DMF, RT

Cl

N N

N

H . NH₂«2 HCl

N. Il ² iN [00108] O composto do título foi preparado por um procedimento análogo aquele descrito no Exemplo 3 usando dicloridreto de 1-(4-cloro-3etoxifenil)-3-metilpiperazina. ¹H RMN (400 MHz, d₆- DMSO) δ 14,4 (br, 1H), 10,15 (s, 1H), 8,16 (s, 1H), 7,98 (s, 1H), 7,25 (s, 1H), 7,18 ( d, 1H,

J=8,8Hz), 7,15 (s, 1H), 6,62 (s, 1H,), 6,50 (m, 1H), 5,51-5,25 (m, 2H), 4,48 (s, 0,5H), 4,38 (s, 0,5H), 4,09 (m, 2,5 H), 3,93 (m, 0,5H), 3,68-3,51 (m, 2H),

3,07-2,75 (m, 2,5H), 2,61 (m, 0,5H), 1,33(t, 3H, J=6,8Hz), 1,17(d, 3H,

J=7,2Hz). MS (ES) m/z 496,5 (M+H⁺).

Exemplo 11 [00109] Este exemplo ilustra a preparação de 2-[4-amino-3-(1H imidazol-2-il)-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]-1-[4-(4-cloro-3trifluorometoxifenil)piperazin-1-il]etanona

•2 HCl

HATU, DIEA

DMF, RT

N

H ^hc|

F.n [00110]

Uma mistura de sal de dicloridreto de 1-(4-cloro-3trifluorometoxifenil)piperazina (70 mg, 0,198 mmol, 1 equiv), ácido [4amino-3-(1H-imidazol-2-il)-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]acético (96 mg, 1 equiv), HATU (98 mg, 1,3 equiv) e Ν,Ν-diisopropiletilamina (0,276mL, 8 equiv) em DMF (0,5mL) foi agitada em temperatura ambiente por 3 horas. A mistura de reação foi diluída com acetato de etila, lavado com bicarbonato de sódio aquoso saturado, secado em sulfato de sódio e purificado por TLC para dar 2- [4-amino-3-(1 H-imidazol-2-il)-pirazolo [3,4-d]pirimidin-1 -il] -1- [4-(4cloro-3-trifluorometoxifenil)piperazin-1-il]etanona. ¹H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,18 (s, 1H), 7,39 (s, 1H,), 7,18 (d, 2H, J=8,8Hz), 6,95 (s, 2H),

Petição 870190076305, de 08/08/2019, pág. 60/73 / 52

5,40 (s, 2H), 3,85 (m, 4H), 3,25 (m, 4 H). Os três prótons remanescentes (a partir do grupo amino e o anel de imidazol) não foram observados devido ao uso de CD3OD como solvente. MS (ES) m/z 522,1 (M+H+).

Exemplo 12 [00111] Este exemplo ilustra a preparação de 2-[4-amino-3-(1Himidazol-2-il)-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]-1-[4-(4-cloro-2fluorofenil)piperazin-1-il]etanona

Br [00112] _BoCXXl_H HATU, DIEA

1, BOCN ^NH F ’

HATU, DIEA

DMF, RT

2, HCl-Dioxano

Etapa 1: 1-(4-cloro-2-fluorofenil)piperazina

1-Bromo-4-cloro-2-fluorobenzeno (5 g, 23,9 mmol, 1 equiv), éster terc-butílico do ácido piperazina-1-carboxílico (5,3 g, 1,15 equiv), trisbenzilidinacetona dipaládio(0) (0,43 g, 0,05 equiv), rac-BINAP (0,89 g, 0,15 equiv), terc-butóxido de sódio (3,2 g, 1,4 equiv) foram submetidos à pasta em tolueno (60mL) e a mistura foi aquecida a 65 °C durante à noite. Após esfriamento em temperatura ambiente, acetato de etila (100mL) foi adicionado. O precipitado preto foi removido por filtração. O filtrado foi lavado com 3N de solução de carbonato de potássio duas vezes. A fase orgânica foi secada em sulfato de sódio, concentrada e tratada com 4N de HCl em dioxano. O sólido foi coletado por filtração, lavado com éter e secado sob vácuo alto para dar 1-(4-cloro-2-fluorofenil)piperazina como um sal de dicloridreto.

Etapa 2: O composto do título foi preparado por um procedimento análogo aquele descrito no Exemplo 11 usando dicloridreto de

1-(4-cloro-2-fluorofenil)piperazina. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,16 (s,

1H), 7,19 (s, 1H), 7,1-7,17 (m, 3H), 7,05 (m, 1H), 5,40 (s, 2H), 3,85 (m, 2H),

3,75 (m, 2 H), 3,18 (m, 2H), 3,07 (m, 2H). Os três prótons remanescentes (a

Petição 870190076305, de 08/08/2019, pág. 61/73 / 52 partir do grupo amino e o anel de imidazol) não foram observados devido ao uso de CD3OD como solvente. MS (ES) m/z 456,1 (M+H+).

Exemplo 13 [00113] Este exemplo ilustra a avaliação da atividade biológica associada com os compostos de interesse da invenção.

Materiais e métodos

A. Células

1. Células que expressam CCR1

a) Células THP-1 [00114] As células THP-1 foram obtidas de ATCC (TIB-202) e cultivas como uma suspensão no meio RPMI-1640 suplementados com 2 mM de L-glutamina, 1,5 g/L de bicarbonato de sódio, 4,5 g/L de glicose, 10 mM de HEPES, 1 mM de piruvato de sódio, 0,05% de 2-mercaptoetanol e 10% de FBS. As células foram desenvolvidas sob 5% de CO₂/95% de ar, 100% de umidade a 37° C e suas vezes subcultivadas semanalmente a 1:5 (células foram cultivadas em uma faixa de densidade de 2 x 10⁵ a 2 x 10⁶ células/mL) e coletadas a 1 x 10⁶ células/mL. As células THP-1 que expressam CCR1 e podem ser usadas em ligação CCR1 e ensaios funcionais.

2. Ensaios de quimiotaxia

Identificação de inibidores de CCR1 [00115] Uma das funções primárias de quimiocinas é sua capacidade de mediar a migração das células de expressão receptoras de quimiocina, tal como células sanguíneas brancas. Para confirmar que um composto de interesse inibiu não apenas ligação específica por CCR1 e sinalização (pelo menos como determinado pelos ensaios de mobilização de cálcio), mas também migração mediada por CCR1, um ensaio de quimiotaxia foi utilizado. As células de leucemia mielomonocíticas THP-1, que assemelham-se aos monócitos, bem como monócitos frescamente isolados, foram usados como alvos para a quimioatração pelos ligandos de quimiocina CCR1 (isto é, MIPPetição 870190076305, de 08/08/2019, pág. 62/73 / 52

1α, CCL15/leucotactina). As células foram colocadas no compartimento superior de uma câmara de migração de microreservatório, 5 μηι de policarbonato de poro, filtros revestidos de polivinilpirrolidona nas câmaras de quimiotaxia de 96 reservatórios (Neuroprobe; Gaithersburg, MD) usando tampão de quimiotaxia (solução salina balanceada de Hank (HBSS) e 1% de FBS. Os ligandos de quimiocina CCR1 (isto é, MIP-Ια, CCL15/Leucotactina; R&D Systems; Minneapolis, MN) são usados para avaliar os compostos mediados pela inibição de migração mediada por CCR1. outras quimiocinas (isto é, SDF-1a; R&D Systems; Minneapolis, MN) são usadas como controles de especificidade. A câmara inferior foi carregada com 29 pl de quimiocina (isto é, 0,1 nM CCL15/Leucotactina) e que varia as quantidades do composto; a câmara da parte superior contém 100.000 THP-1 ou células de monócitos em 20 pl. Na ausência do inibidor, as células migrarão à câmara inferior em resposta ao agonista de quimiocina; se um composto inibiu a função CCR1, então a maioria das células permanecerão na câmara superior. Para determinar um composto da afinidade de interesse para CCR1 bem como para confirmar sua capacidade de inibir a migração da célula mediada por CCR1, atividade inibidora foi titulada em uma faixa de 1 x 10^-10 a 1 x 10^-4 M das concentrações do composto neste ensaio de quimiotaxia. Neste ensaio, a quantidade do composto foi variada; enquanto o número celular e concentrações de agonista de quimiocina foram mantidas constantes. Após as câmaras de quimiotaxia serem incubadas 1 a 2 horas a 37^o C, As células de resposta na câmara inferior foram quantificadas pela rotulação com o ensaio CyQuant (Molecular Probes), um método de pigmento fluorescente que mede o teor de ácido nucléico e pela medição com um Spectrafluor Plus (Tecan). O programa de computador Prism de GraphPad, Inc. (San Diego, Ca) foi usado para calcular os valores IC50. Os valores IC50 são aquelas concentrações de compostos requeridas para inibir o número das células que respondem a um agonista CCR1 por 50%.

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3. Eficácia in vivo

a) Modelo de coelho da inflamação de junta destrutiva [00116] Um estudo LPS de coelho pode ser essencialmente conduzido como descrito em Podolin, et al. ibid., coelhos fêmeas New Zealand (aproximadamente 2 quilogramas) são tratados intra-articularmente em ambos os joelhos com LPS (10 ng). O composto de interesse (por exemplo formulado em 1% de methocel) ou veículo (1% de methocel) são oralmente dosados em um volume de dosagem 5 ml/kg em duas vezes (2 horas antes da injeção LPS intra-articular e 4 horas após a injeção LPS intra-articular). Dezesseis horas após a injeção LPS, joelhos são lavados e as células contadas realizadas. Os efeitos benéficos do tratamento são determinados pela redução no número de células inflamatórias recrutadas ao fluido sinovial inflamada das juntas do joelho. O tratamento com o composto de interesse resulta em uma redução significante nas células inflamatórias recrutadas.

b) Avaliação de um composto de interesse em um modelo de rato de artrite induzida por colágeno [00117] Um estudo de artrite de colágeno tipo II que desenvolve em 17 dias pode ser conduzido para avaliar os efeitos de um composto de interesse na artrite induzida pelo inchaço de tornozelo clínico. A artrite de colágeno de rato é um modelo experimental de poliartrite que tem amplamente usado para o teste pré-clínico dos agentes anti-artríticos numerosos (ver Trentham, et al., J. Exp. Med. 146(3):857-868 (1977), Bendele, et al., Toxicologic Pathol. 27:134-142 (1999), Bendele, et al., Arthritis Rheum. 42:498-506 (1999)). A marca registrada deste modelo é o início confiável e progressão forte, facilmente inflamação poliarticular medida, destruição de cartilagem marcadora em associação com formação pannus e reabsorção branda a moderada e proliferação óssea periosteal.

[00118] Ratos Lewis fêmeas (aproximadamente 0,2 quilogramas) são anestesiados com isoflurano e injetados com adjuvante incompleto de Freund

Petição 870190076305, de 08/08/2019, pág. 64/73 / 52 contendo 2 mg/mL de colágeno tipo II de bovino na base da cauda e dois locais no dia 0 e 6 deste estudo de 17 dias. Um composto de interesse é diariamente dosado em uma maneira subcutânea a partir do dia 0 até o dia 17 em uma dosagem eficaz. As medições com paquímetro do diâmetro da junta de tornozelo são tiradas e o inchaço da junta reduzida é tirado como uma medida de eficácia.

c) Modelo de rato de osteoporose induzida por ovariectomia [00119] Um modelo de rato da osteoporose induzida por ovariectomia pode ser essencialmente conduzido como Dunstan et al, (1999) J. Bone and Min Res. 14:953. Os ratos Sprague-Dawley jovens fêmeas (180-200 g) são operados de maneira simulada ou ovariectomizados (OVX). Dentro de 7 dias de operação, as dosagens orais diárias de antagonista CCR1 ou veículo sozinho (óleo de gergelim) são iniciados. Após duas semanas de dosagem, os ratos são submetidos à eutanásia e os níveis de soro de biomarcadores osteoclasto e osteoblasto (C-telopeptídeo e MID osteocalcina, respectivamente) são analisados. Adicionalmente, o fêmur e a tíbia são removidos pelo exame histopatológico com tingimento H&E e/ou TRAP.

d) Modelo Radl 5TGM1 modificado da doença óssea de mieloma [00120] A doença óssea de mieloma pode ser estudada como ainda descrito em Oyajobi et al, Mol Cancer Ther, 2007, 6:1701-1708. Os estudos animais são conduzidos usando camundongos 57BL/KaLwRijHsd fêmeas de 6 a 9 semanas de idade (Harlan). As lesões de mieloma são induzidas em camundongos por inoculação i.v. de células 10⁶ viáveis 5TGM1-eGFP H1,1+ ou células 5TGM1 parenterais através das veias da cauda. O composto de interesse (por exemplo formulado em 100% de óleo de gergelim) ou veículo (100% de óleo de gergelim) são dosados oralmente em um volume de dosagem de 2,5 ml/kg duas vezes ao dia por 4 semanas. Os pesos corporais de animais são determinados na linha de base e semanalmente nestes. No final

Petição 870190076305, de 08/08/2019, pág. 65/73 / 52 das 4 semanas, enquanto os camundongos são retratados e, imediatamente após o sacrifício, esqueleto e órgãos vicerais (baço, fígado, rim, gônadas, cérebro, pulmão e coração) são dissecados e retratados pelo foco de tumor fluorescente para avaliar o peso do tumor.

[00121] Na tabela 2 (abaixo), estruturas e atividade são fornecidas pelos compostos representativos descritos neste. A atividade é fornecida como seguem pelo ensaio de quimiotaxia como descrito acima: +, 10 nM < IC₅₀ < 150 nM; ++, 1 nM < IC₅₀ < 10 nM; e +++, IC₅o < 1 nM.

Tabela 2

Estrutura	Estrutura
MeO	/—\ O		N p		MeO	/—\ O		N
cl·^ )	-N N f	,N<		'N	ci—/ V	-N N /	N^		'N
		N		H	\----/	\--'—	N		H
				NH2		Me' Me			nh2
		N\	^N				N.	// ^N
	1,001/+++					1,002/++
MeO	/—\ /0		N Λ		MeO	/—\ O		N	\\
ci—\ y-	-N N-/	NN		'N H	ci \ /	-N N	N^ N		'N H
F			-NH2	F	Me		nh2
		N^N				N^N
	1,003/+++					1,004/+++
	/—\ /0		N |l		EtO	/—\ /O		N
ci—/ V	-N^__/N^Ç_	NN		'N H	ci—/ V	-N N—/	Ns N		'N H
F	Me			-NH2					-NH2
		Nw!				N^N
	1,005/++					1,006/+++
MeO	/—\ /0		N			/—\ /O		N |l
Cl—/ V	-N^__^N—	N^ N		'N H	ci—/ V	-N N—/	N^ N		'N H
	Me			-NH2		Me			-NH2
		Nw!				N^N
	1,007/+++					1,008/++

Petição 870190076305, de 08/08/2019, pág. 66/73 / 52

Estrutura	Estrutura
	\ /—\ /O	N Ú		EtO	/0		N ρ
Cl—C	y~ N N—/	Ní-Z -n' 1	'N H	ci—/ /	-N N /	N^ N		'N H
		/ //	-NH2		Me			nh2
		n^n				N.	// ^N
	1,009/+				1,010/+++
f3co	\ /—\ O	N II			/—\ O		N |l
Cl—/	J—N_Ν	N\2X	'N H	Cl—/ V	-N N^Ç	N^ N		'N H
			-NH2	F			u	-NH2
		na..n				N^N
	1,011/+				1,012/++

[00122] Nas comparações diretas, os compostos 1.001, 1.003, 1.004, 1.006, 1.007, 1.010 e 1.011 da presente invenção fornecem a atividade que foi pelo menos uma ordem de magnitude melhor do que a atividade demonstrada pelos compostos relacionados testados (pirido[4,3-b]pirazóis substituídos por imidazol em Pedido U.S. relacionado Ser. N°. 12/124.894. Por exemplo, no ensaio de quimiotaxia,

[00123] Fornece um IC₅₀ que foi uma ordem de magnitude melhor do que

[00124] A invenção foi descrita por meio da descrição escrita e exemplo, aquela pessoa habilitada na técnica reconhecerá que a invenção pode ser praticada em uma variedade de modalidades e que a descrição precedente e exemplos são para os propósitos da ilustração e não limitação das seguintes reivindicações.

Claims (15)

1. REIVINDICAÇÕES

   1. Composto, caracterizado pelo fato de que é da fórmula I:

   ou sais, ou hidratos farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, em que

   R^1a e R^1b são, cada um, independentemente selecionados do grupo que consiste de H e CH3;

   R2^a selecionado do grupo que consiste de H e F e

   R2^d é selecionado do grupo que consiste de H, alcóxi C1-4 e haloalcóxi C1-4, desde que o composto de Fórmula I não seja 2-(4-amino-3-(1Himidazol-2-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)-1-(4-(4-cloro-3metoxifenil)piperazin-1-il)etanona.
2. 2. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R^2a é H.
3. 3. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R^1a e R^1b são, cada um, H.
4. 4. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R^1b é metila e R^1a é H.
5. 5. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R^1a e R^1b são, cada um, CH3.
6. 6. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R^2a é hidrogênio e R^2d é selecionado do grupo que consiste de metóxi, etóxi e trifluorometóxi.
7. 7. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o dito composto é da Fórmula Ia ou Ib

   Petição 870190076305, de 08/08/2019, pág. 68/73

   2/5

   Ia

   em que R^2a é selecionado do grupo que consiste de H e F e R^2d é selecionado do grupo que consiste de metóxi, etóxi e trifluorometóxi.
8. 8. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o dito composto é selecionado do grupo que consiste de:
9. 9. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o dito composto é selecionado do grupo que consiste de:

   Petição 870190076305, de 08/08/2019, pág. 69/73

   3/5
10. 10. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o dito composto tem a fórmula:

    ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
11. 11. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a dita forma de sal é uma forma de sal de cloridrato.
12. 12. Composto, caracterizado pelo fato de que é selecionado do grupo que consiste de:

    (S)-2-(4-amino-3-( 1 H-imidazol-2-il)-1 H-pirazolo [3,4d]pirimidin-l-il)-l-(4-(4-cloro-2-fluoro-5-metoxifenil)-2-metilpiperazin-lil)etanona;

    (S)-2-(4-amino-3-( 1 H-imidazol-2-il)-1 H-pirazolo [3,4Petição 870190076305, de 08/08/2019, pág. 70/73

    4 / 5

    d]pirimidin-1 -il)-1 -(4-(4-cloro-2-fluorofenil)-2-metilpiperazin-1 -il)etanona;

    2-(4-amino-3-(1H-imidazol-2-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin1 -il)-1-(4-(4-cloro-2-fluoro-5-metoxifenil)piperazin-1-il)etanona;

    2-(4-amino-3-(1H-imidazol-2-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin1 -il)-1-(4-(4-cloro-2-fluoro-5-metoxifenil)piperazin-1-il)etanona;

    (S)-2-(4-amino-3-( 1 H-imidazol-2-il)-1 H-pirazolo [3,4d]pirimidin-1 -il)-1 -(4-(4-cloro-3 -metoxifenil)-2-metilpiperazin-1 -il)etanona;

    2-(4-amino-3-(1H-imidazol-2-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin1 -il)-1 -(4-(4-cloro-3 -etoxifenil)piperazin-1 -il)etanona;

    (S)-2-(4-amino-3-(1H-imidazol-2-il)-1H-pirazolo[3,4d]pirimidin-1 -il)-1 -(4-(4-clorofenil)-2-metilpiperazin-1 -il)etanona;

    2-(4-amino-3-(1H-imidazol-2-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin1 -il)-1 -(4-(4-clorofenil)piperazin-1 -il)etanona;

    2-(4-amino-3-(1H-imidazol-2-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-

    1 -il)-1 -(4-(4-cloro-3 -metoxifenil)-2,2-dimetilpiperazin-1 -il)etanona;

    (S)-2-(4-amino-3-(1H-imidazol-2-il)-1H-pirazolo[3,4d]pirimidin-1 -il)-1 -(4-(4-cloro-3 -etoxifenil)-2-metilpiperazin-1 -il)etanona; e

    2-(4-amino-3-(1H-imidazol-2-il)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin1 -il)-1 -(4-(4-cloro-3-(trifluorometóxi)fenil)piperazin-1 -il)etanona.
13. 13. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende um composto como definido na reivindicação 1 e um excipiente ou carreador farmaceuticamente aceitável.
14. 14. Uso de um composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizado pelo fato de ser na fabricação de um medicamento para o tratamento de uma doença ou condição selecionada do grupo que consiste de doença osteoartítica, mieloma múltiplo, artrite reumatóide, esclerose múltipla, rejeição a transplante, restenose, dermatite, eczema, urticária, vasculite, doença intestinal inflamatória, alergia a alimentos, asma, doença de Alzheimer, doença de Parkinson, psoríase, lúpus eritematoso,

    Petição 870190076305, de 08/08/2019, pág. 71/73

    5 / 5 osteoartrite, acidente vascular cerebral, restenose e encefalomielite.
15. 15. Uso de um composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizado pelo fato de ser na fabricação de um medicamento para o tratamento de uma doença ou condição selecionada do grupo que consiste de doença osteoartítica, mieloma múltiplo, artrite reumatóide e rejeição a transplante compreendendo um composto da reivindicação 1 e um excipiente ou carreador farmaceuticamente aceitável.