KR20090122469A - Methods for preparing purified lipopeptides - Google Patents

Abstract

The present invention relates to crystalline and crystal-like forms of lipopeptides, including daptomycin, a lipopeptide antibiotic with potent bactericidal activity against gram-positive bacteria, including strains that are resistant to conventional antibiotics. The present invention relates to methods of purifying lipopeptides, including daptomycin, a lipopeptide antibiotic with potent bactericidal activity against gram- positive bacteria, including strains that are resistant to conventional antibiotics. The present invention also relates to pharmaceutical compositions comprising the purified form of the lipopeptide and methods of using these compositions.

Description

정제된 리포펩티드의 제조 방법{METHODS FOR PREPARING PURIFIED LIPOPEPTIDES}Method for producing purified lipopeptides {METHODS FOR PREPARING PURIFIED LIPOPEPTIDES}

관련 출원의 상호참조Cross Reference of Related Application

본 출원은 참고로 인용한 2000년 12월 18일에 출원한 미국 가명세서 출원 60/256,268호; 2001년 3월 9일에 출원한 가명세서 출원 60/274,741호; 2001년 12월 13일에 출원한 가명세서 출원 ____호; 및 2001년 12월 13일에 출원한 가명세서 출원 ____호의 우선권을 주장한다.This application discloses US Provisional Application No. 60 / 256,268, filed December 18, 2000; Provisional Application 60 / 274,741, filed March 9, 2001; Provisional Application No. ____, filed December 13, 2001; And claiming application No. ____, filed on December 13, 2001.

본 발명의 기술 분야Technical Field of the Invention

본 발명은 결정질 및 결정질 유사 형태의 리포펩티드, 예컨대 종래의 항생제에 내성이 있는 균주를 비롯한 그람 양성균에 대해 유효 살균 활성을 갖는 리포펩티드 항생제인 답토마이신에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 리포펩티드의 결정질 또는 결정 유형 형태를 제조하는 방법과 답토마이신을 비롯한 리포펩티드를 정제하는 방법에 관한 것이다. 본 발명은 리포펩티드의 정제형을 포함하는 약학 조성물과 이들 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이다. The present invention relates to daptomycin, a lipopeptide antibiotic with effective bactericidal activity against gram positive bacteria, including crystalline and crystalline like forms of lipopeptides, such as strains resistant to conventional antibiotics. The present invention also relates to methods for preparing crystalline or crystalline type forms of lipopeptides and to methods for purifying lipopeptides, including daptomycin. The present invention relates to pharmaceutical compositions comprising tablet forms of lipopeptides and methods of using these compositions.

항생제 내성 세균에 의해 유발되는 감염을 비롯한 그람 양성 감염 발병율의 급속한 증가는 새로운 종류의 항생제 개발에 다시 관심을 불러일으키는 발단이 되었다. 이러한 종류 중 하나는 리포펩티드 항생제로서, 답토마이신을 포함한다. 답토마이신은 심각하고 생명에 치명적인 질병을 일으키는 임상적으로 관련된 그람 양성균에 대해 시험관내 유효 살균 활성을 갖는다. 이들 세균의 비제한적인 예로는 내성 병원체, 예컨대 반코마이신 내성 엔테로코커스(enterococci) (VRE), 메티실린 내성 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus) (MRSA), 글리코펩티드 중재 감수성 스타필로코커스 아우레우스(GISA), 코아귤라제-음성 스타필로코커스 (CNS), 및 페니실린 내성 스트렙토코커스 뉴모니아(Streptococcus pneumoniae) (PRSP) 등이 있으며, 이들에 대한 대체 치료법은 거의 없다. 예컨대 문헌[Tally et al., 1999, Exp. Opin. Invest. Drugs 8: 1223-1238] 참조. 답토마이신의 억제 효과는 시험관내 및 생체내에서 신속한 농도 의존적 살균 효과로서, 생체내에서 비교적 장기간 동안 항생제 사용 후에 농도 의존 효과를 나타낸다.The rapid increase in the incidence of Gram-positive infections, including infections caused by antibiotic-resistant bacteria, has led to renewed interest in the development of new classes of antibiotics. One such class is lipopeptide antibiotics, which include daptomycin. Daptomycin has in vitro effective bactericidal activity against clinically relevant Gram-positive bacteria causing serious and life-threatening diseases. Non-limiting examples of these bacteria are resistant pathogens, such as vancomycin-resistant Enterococcus (enterococci) (VRE), methicillin-resistant Staphylococcus aureus (Staphylococcus aureus) (MRSA), glycopeptide susceptibility mediated Staphylococcus aureus (GISA), Tangerine Core cyclase-negative Staphylococcus (CNS), and penicillin-resistant Streptococcus pneumoniae (Streptococcus pneumoniae ) (PRSP), and there are few alternative treatments for them. See, eg, Tally et al., 1999, Exp. Opin. Invest. Drugs 8: 1223-1238. The inhibitory effect of daptomycin is a rapid concentration dependent bactericidal effect in vitro and in vivo, showing a concentration dependent effect after antibiotic use for a relatively long time in vivo.

답토마이신은 Baltz의 문헌[Biotechnology of Antibiotics, 2nd Ed., ed. W. R. Strohl (New York : Marcel Dekker, Inc.), 1997, pp. 415-435]에 개시되어 있다. 답토마이신은 LY 146032로도 알려져 있으며, 스트렙토마이시스 로세오스포러스(Streptomyces roseosporus) 발효로 유도할 수 있는 환상의 리포펩티드 항생제이다. 답토마이신은 에스.로세오스포러스의 인자 A-21978C₀형 항생제의 일원으로서, 환상 13-아미노산 펩티드의 N-말단 트립토판에 결합된 데카노일 측쇄로 구성된다(도 1). 답토마이신은 대부분의 그람 양성균에 대해서 상당히 효과적이고; 대단히 신속하게 작용하는 살균제이며; 내성율이 낮고 항생제 내성 유기체에 대해서도 효과적이기 때문에 활성 프로필이 양호하다. 비제한적인 예로서 메티실린 내성 스타필로코커스 아우레우스(MRSA) 및 반코마이신 내성 엔테로코커스(VRE)를 비롯한 세균이 유발하는 심각한 감염을 치료하기 위한 각종 제제에 사용할 화합물이 현재 개발중에 있다. Daptomycin is described by Baltz in Biotechnology of Antibiotics, 2nd Ed., Ed. WR Strohl (New York: Marcel Dekker, Inc.), 1997, pp. 415-435. Daptomycin, also known as LY 146032, is a Streptomyces roseosporus ) is a cyclic lipopeptide antibiotic that can be induced by fermentation. Daptomycin is a member of the Factor A-21978C type ₀ antibiotic of S. roseosporus and consists of a decanoyl side chain bound to the N-terminal tryptophan of the cyclic 13-amino acid peptide (FIG. 1). Daptomycin is quite effective against most Gram-positive bacteria; It is a bactericide that works very quickly; The activity profile is good because of low resistance and effective against antibiotic resistant organisms. As a non-limiting example, compounds are currently being developed for use in a variety of formulations for the treatment of severe bacterial-induced infections, including methicillin resistant Staphylococcus aureus (MRSA) and vancomycin resistant enterococcus (VRE).

다수의 미국 특허는 답토마이신(LY 146032)을 비롯한 A-21978C₀ 항생제와 답토마이신 관련 리포펩티드를 개시하고 있다. 또한, 이들 특허는 A-21978C₀ 항생제와 답토마이신 관련 리포펩티드를 제조 및 분리하는 방법도 개시하고 있다.Many US patents disclose A-21978C ₀ antibiotics and daptomycin associated lipopeptides, including daptomycin (LY 146032). These patents also disclose methods for making and isolating A-21978C ₀ antibiotics and daptomycin related lipopeptides.

미국 특허 RE32,333호, RE32,455호, 4,800,157호, 4,874,843호, 및 4,885,243호에는 스트렙토마이시스 로세오스포러스의 발효 배양물로부터 답토마이신을 합성 및 분리하는 방법이 기재되어 있다. 미국 특허 RE32,310호, RE32,311호, 4,537,717호, 4,482,487호 및 4,524,135호는 A-21978C₀ 항생제와 A-21978C₀ 항생제를 탈아실화하고 펩티드 핵을 재아실화하는 방법, 그리고 이러한 방법으로 제조된 항생제 유도체를 개시하고 있다. 미국 특허 5,912,226호(이하 '226 특허)는 답토마이신의 제조 과정에서 생긴 2종의 불순물인 무수(anhydro)-답토마이신 및 답토마이신의 β-이성체를 확인 및 분리하는 것을 개시하고 있다. 이들 미국 특허 중에서 리포펩티드의 순도를 증가시키는 방식으로 리포펩티드를 침전 또는 결정화하는 방법을 개시하고 있는 특허는 없었다. U.S. Patents RE32,333, RE32,455, 4,800,157, 4,874,843, and 4,885,243 describe methods for synthesizing and separating daptomycin from fermentation cultures of Streptomyces roseosporus. U.S. Patents RE32,310, RE32,311, 4,537,717, 4,482,487 and 4,524,135 disclose methods of deacylating A-21978C ₀ antibiotics and A-21978C ₀ antibiotics and reacylating peptide nuclei, and prepared by such methods. Antibiotic derivatives are disclosed. US Pat. No. 5,912,226 (hereinafter referred to as' 226 patent) discloses the identification and separation of the β-isomers of two kinds of impurities, anhydro-daptomycin and daptomycin, produced during the preparation of daptomycin. None of these US patents disclose a method for precipitation or crystallization of lipopeptides in a manner that increases the purity of the lipopeptides.

미국 특허 4,439,425호(이하 '425 특허)는 결정질 리포펩티드와 리포펩티드 를 결정화하는 방법을 개시하고 있다. '425 특허에 개시된 리포펩티드는 답토마이신 및 답토마이신 관련 리포펩티드와 구조적으로 다르다. 미국 특허 5,336,756호(이하 '756 특허)는 또한 헥사펩티드를 포함하는 결정질 환상 리포펩티드를 개시하고 있다. '756 특허에 개시된 결정질 환상 리포펩티드도 답토마이신 및 답토마이신 관련 리포펩티드와 구조적으로 상이하다. '756 특허는 수성 n-프로판올이 결정화 용매로서 사용된 경우 에치노칸딘형 화합물인 리포펩티드를 얻을 수 있다고 설명하고 있다. 예컨대, '756 특허의 1-2 컬럼 참조. '425 특허에도 '756 특허에도 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드를 결정화 또는 침전시키는 방법은 개시되어 있지 않으며, 또한 스트렙토마이시스가 생성한 리포펩티드를 결정화 또는 침전시키는 방법도 개시되어 있지 않다.U.S. Patent 4,439,425 (hereinafter '425 patent) discloses a method for crystallizing crystalline lipopeptides and lipopeptides. Lipopeptides disclosed in the '425 patent are structurally different from daptomycin and daptomycin related lipopeptides. U.S. Patent 5,336,756 (hereinafter '756 patent) also discloses crystalline cyclic lipopeptides, including hexapeptides. The crystalline cyclic lipopeptides disclosed in the '756 patent are also structurally different from daptomycin and daptomycin related lipopeptides. The '756 patent describes that lipopeptides, which are ethinocandine type compounds, can be obtained when aqueous n-propanol is used as the crystallization solvent. See, eg, 1-2 columns of the '756 patent. Neither the '425 patent nor the' 756 patent discloses crystallization or precipitation of daptomycin or daptomycin related lipopeptides, nor does it disclose a method of crystallizing or precipitation of lipopeptides produced by Streptomyces.

답토마이신 및 답토마이신 관련 리포펩티드를 결정화 또는 침전시키는 방법을 개발하여 이들 리포펩티드에 대한 개선된 정제 방법을 제공하는 것이 유리하다. 또한, 답토마이신 또는 기타 답토마이신 관련 리포펩티드의 결정질 또는 고도로 정제된 침전형은 세균 감염을 치료하기 위한 약학 조성물을 제형화하는 데 유용하다. 또한, 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드의 결정질 또는 고도로 정제된 침전형은 멸균 제품, 특히 부피가 큰 멸균 제품을 제조하는 방법에 유용하다. 따라서, 결정질 또는 침전된 답토마이신 및 답토마이신 관련 리포펩티드를 제조하는 방법과 이렇게 하여 제조된 리포펩티드의 결정질 또는 침전된 형태가 필요한 실정이다. 그러나, 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드를 결정화 또는 침전시켜, 결정화 또는 침전전보다 그 후에 리포펩티드를 더욱 순수하게 하는 데 효과적인 간단하고 확고한 방법은 없었다. It is advantageous to develop methods for crystallizing or precipitating daptomycin and daptomycin related lipopeptides to provide improved purification methods for these lipopeptides. In addition, crystalline or highly purified precipitated forms of daptomycin or other daptomycin related lipopeptides are useful for formulating pharmaceutical compositions for treating bacterial infections. In addition, crystalline or highly purified precipitated forms of daptomycin or daptomycin related lipopeptides are useful in the manufacture of sterile products, particularly bulky sterile products. Thus, there is a need for a method for preparing crystalline or precipitated daptomycin and daptomycin related lipopeptides and crystalline or precipitated forms of the lipopeptides thus prepared. However, there is no simple and robust method effective to crystallize or precipitate daptomycin or daptomycin related lipopeptides to make the lipopeptides more pure than before crystallization or precipitation.

발명의 개요Summary of the Invention

본 발명은 리포펩티드, 구체적으로는 답토마이신 및 답토마이신 관련 리포펩티드의 결정질 및 결정질 유사 형태와 이들의 제조 방법을 제공함으로써 상기한 문제점을 해결한다. 일 구체예에서, 본 발명은 리포펩티드 결정화 방법을 제공한다. 또 다른 구체예에서, 이 방법은 결정화 또는 침전 전보다 그 후에 더욱 순수한 리포펩티드를 제공한다.The present invention solves the above problems by providing crystalline and crystalline like forms of lipopeptides, specifically daptomycin and daptomycin related lipopeptides and methods for their preparation. In one embodiment, the present invention provides a method for lipopeptide crystallization. In yet another embodiment, the method provides a more pure lipopeptides thereafter than before crystallization or precipitation.

또한 본 발명은, 특히 리포펩티드의 결정화 또는 침전을 포함하는 확고한 펩티드 제조 및 정제 방법을 제공한다. 일 구체예에서는 공정 중의 결정화 또는 침전 단계를 이용하여 리포펩티드를 정제한다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 공정은 리포펩티드, 바람직하게는 답토마이신의 대규모 제조 및/또는 공업용 제조에 이용된다. The present invention also provides a robust method for preparing and purifying peptides, particularly comprising crystallization or precipitation of lipopeptides. In one embodiment, the lipopeptides are purified using an in-process crystallization or precipitation step. In another embodiment, the process of the present invention is used for large scale production and / or industrial production of lipopeptides, preferably daptomycin.

추가로, 본 발명은 답토마이신 및 답토마이신 관련 리포펩티드의 고도의 정제된 결정질 또는 결정 유사 형태를 제공한다. 일 구체예에서, 약학 조성물 중에 리포펩티드의 결정질 또는 결정 유사 형태를 사용할 수 있다. 또 다른 구체예에서, 본 발명은 약학 조성물을 사용하는 방법을 포함한다. In addition, the present invention provides highly purified crystalline or crystalline like forms of daptomycin and daptomycin related lipopeptides. In one embodiment, crystalline or crystalline like forms of lipopeptides can be used in pharmaceutical compositions. In another embodiment, the present invention includes a method of using the pharmaceutical composition.

발명의 상세한 설명Detailed description of the invention

발명의 목적Purpose of the Invention

본 발명의 목적은 리포펩티드의 결정화 또는 침전 방법을 제공하는 것이다. 일 구체예에서, 이 방법은 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드를 결정화 또는 침전시키는 데 사용된다. 또 다른 구체예에서, 이 방법은 결정화 또는 침전 전의 리포펩티드의 순도와 비교하여 리포펩티드의 순도를 증가시킨다. 이 방법은 리포펩티드의 비정질 제제를 제공하는 단계, 결정질 또는 침전된 결정 유사 리포펩티드가 비정질의 리포펩티드보다 순수한 조건 하에서 리포펩티드를 결정화 또는 침전시키는 단계를 포함한다. 일 구체예에서, 비정질 제제의 순도는 92% 이하이지만, 이로부터 정제된 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드의 순도는 95% 이상이며, 96%, 97% 또는 98% 이상일 수 있다. 또 다른 구체예에서, 비정질 제제는 순도가 80% 이하이지만, 이로부터 정제된 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드는 순도가 95% 이상이며, 96%, 97% 또는 98% 이상일 수 있다. 또 다른 구체예에서, 비정질 제제는 순도가 60% 이하이지만, 이로부터 정제된 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드는 순도가 95% 이상이며, 96%, 97% 또는 98% 이상일 수 있다. 또 다른 구체예에서, 비정질 제제는 순도가 40% 이하이지만, 이로부터 정제된 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드는 순도가 95% 이상이며, 96%, 97% 또는 98% 이상일 수 있다. 또 다른 구체예에서, 비정질 제제는 순도가 20% 이하이지만, 이로부터 정제된 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드는 순도가 95% 이상이며, 96%, 97% 또는 98% 이상일 수 있다. 추가의 바람직한 구체예에서, 비정질 제제는 순도가 10% 이하이지만, 이로부터 정제된 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드는 순도가 95% 이상이며, 96%, 97% 또는 98% 이상일 수 있다. It is an object of the present invention to provide a method for crystallization or precipitation of lipopeptides. In one embodiment, this method is used to crystallize or precipitate daptomycin or daptomycin related lipopeptides. In another embodiment, the method increases the purity of the lipopeptide compared to the purity of the lipopeptide prior to crystallization or precipitation. The method includes providing an amorphous preparation of the lipopeptides, crystallizing or precipitation of the lipopeptides under conditions in which the crystalline or precipitated crystal-like lipopeptides are purer than the amorphous lipopeptides. In one embodiment, the purity of the amorphous formulation is 92% or less, but the purity of the crystalline or crystalline-like lipopeptides purified therefrom is at least 95% and may be at least 96%, 97% or 98%. In another embodiment, the amorphous formulation has a purity of 80% or less, but the crystalline or crystalline like lipopeptides purified therefrom are at least 95% pure and may be at least 96%, 97% or 98%. In another embodiment, the amorphous formulation has a purity of 60% or less, but the crystalline or crystalline like lipopeptides purified therefrom are at least 95% pure and may be at least 96%, 97% or 98%. In another embodiment, the amorphous formulation has a purity of 40% or less, but the crystalline or crystalline like lipopeptides purified therefrom are at least 95% pure and may be at least 96%, 97% or 98%. In another embodiment, the amorphous formulation has a purity of 20% or less, but the crystalline or crystalline like lipopeptides purified therefrom are at least 95% pure and may be at least 96%, 97% or 98%. In a further preferred embodiment, the amorphous formulation has a purity of 10% or less, but the crystalline or crystal-like lipopeptides purified therefrom are at least 95% pure and may be at least 96%, 97% or 98%.

본 발명의 또 다른 목적은 특히 리포펩티드를 결정화 또는 침전시키는 것을 포함하는 리포펩티드의 제조 및 정제 방법을 제공하는 것이다. 일 구체예에서, 결정화 또는 침전 단계는 리포펩티드를 정제하는 데 사용된다. 바람직한 구체예에서, 결정화 또는 침전은 회분식 결정화 또는 침전으로 실시된다. 또 다른 구체예에서, 공정은 리포펩티드, 바람직하게는 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드를 공업적으로 제조하기 위한 대규모 공정이다. 일 구체예에서, 리포펩티드는 발효로 생산된다. 그 다음 발효 생성물을, 결정화 또는 침전을 비롯한 각종 정제 기법으로 정제한다. 일 구체예에서, 정밀여과, 크기 배제 한외여과 및/또는 음이온 교환 크로마토그래피를 비롯한 다른 정제 기법과 병행하여 결정화 또는 침전 단계를 사용할 수 있다. 일 구체예에서, 결정화 또는 침전을 이용하지 않는 정제 공정에 사용되는 1 이상의 정제 기법 대신에 결정화 또는 침전 단계를 이용한다. 또 다른 구체예에서, 결정화 또는 침전 단계를 사용하여, 결정화 또는 침전 단계를 포함하지 않는 기타 단계들과 비교하여 정제도를 증가시킨다. 바람직한 구체예에서, 이 방법은 결정화 또는 침전 후에 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드를 회수하는 단계를 포함한다. It is a further object of the present invention to provide a process for the preparation and purification of lipopeptides, in particular comprising crystallizing or precipitation of the lipopeptides. In one embodiment, the crystallization or precipitation step is used to purify the lipopeptides. In a preferred embodiment, the crystallization or precipitation is carried out by batch crystallization or precipitation. In another embodiment, the process is a large scale process for industrially preparing lipopeptides, preferably daptomycin or daptomycin related lipopeptides. In one embodiment, the lipopeptides are produced by fermentation. The fermentation product is then purified by various purification techniques, including crystallization or precipitation. In one embodiment, a crystallization or precipitation step can be used in parallel with other purification techniques including microfiltration, size exclusion ultrafiltration and / or anion exchange chromatography. In one embodiment, a crystallization or precipitation step is used instead of one or more purification techniques used in purification processes that do not utilize crystallization or precipitation. In another embodiment, a crystallization or precipitation step is used to increase the degree of purification compared to other steps that do not include a crystallization or precipitation step. In a preferred embodiment, the method comprises recovering crystalline or crystalline like lipopeptides after crystallization or precipitation.

본 발명의 또 다른 목적은 고도로 정제된, 예컨대 멸균의 결정질 또는 결정 유사 형태의 리포펩티드를 제공하는 것이다. 일 구체예에서, 리포펩티드는 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드이다. 리포펩티드의 결정질 또는 결정 유사 형태는 성게형 형상(서로 연결된 침상의 클러스터로서 시각적으로 성게와 비슷함)(도 2 참조), 침상형(도 3), 막대형(도 4), 평판형 또는 박편형을 비롯한 임의 의 결정질 또는 결정 유사 형상을 가질 수 있다. 일 구체예에서, 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드는 순도가 80% 이상이며, 순도는 85%, 90% 이상일 수 있다. 또 다른 구체예에서, 리포펩티드의 결정질 또는 결정 유사 형태는 순도가 95% 이상이며, 순도는 96%, 97%, 98% 이상일 수 있다. It is another object of the present invention to provide lipopeptides in highly purified, such as sterile, crystalline or crystalline like forms. In one embodiment, the lipopeptides are daptomycin or daptomycin related lipopeptides. The crystalline or crystal-like form of the lipopeptides may be in the form of sea urchins (visually similar to sea urchins as clusters of interconnected needles) (see FIG. 2), needles (FIG. 3), rods (FIG. 4), platelets or flakes. It can have any crystalline or crystalline like shape, including a form. In one embodiment, the crystalline or crystalline like lipopeptides are at least 80% pure and at least 85%, 90% pure. In another embodiment, the crystalline or crystalline like form of lipopeptides are at least 95% pure and may be at least 96%, 97%, 98%.

본 발명의 또 다른 목적은 리포펩티드의 결정질 또는 결정 유사 형태를 포함하는 약학 조성물을 제공하는 것이다. 일 구체예에서, 리포펩티드는 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드이다. 일 구체예에서, 약학 조성물은 경구 투여용 장용제피의 형태일 수 있으며, 미크론화된 입자 또는 미소구의 형태로 제형화된다. 또 다른 구체예에서, 본 발명은 이를 필요로 하는 피험체에게 약학 조성물을 투여하는 방법을 제공한다.It is another object of the present invention to provide a pharmaceutical composition comprising a crystalline or crystalline like form of a lipopeptide. In one embodiment, the lipopeptides are daptomycin or daptomycin related lipopeptides. In one embodiment, the pharmaceutical composition may be in the form of enteric coatings for oral administration and formulated in the form of micronized particles or microspheres. In another embodiment, the present invention provides a method of administering a pharmaceutical composition to a subject in need thereof.

정의Justice

달리 정의되지 않는다면, 본 명세서에서 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 분야의 업자들이 일반적으로 이해하는 의미를 갖는다. 본 발명의 실시는, 특별히 지정하지 않는다면, 종래의 화학, 생화학, 생물리학 및 미생물학 기법과 본 명세서에서 사용된 기본 전문용어를 사용한다. Unless defined otherwise, all technical and scientific terms used herein have the meaning commonly understood by one of ordinary skill in the art to which this invention belongs. The practice of the invention, unless otherwise specified, uses conventional chemistry, biochemistry, biophysics and microbiology techniques and basic terminology used herein.

용어 "리포펩티드"는 펩티드 부분에 공유 결합된 지질 유사 부분과, 이의 염, 에스테르, 아미드 및 에테르를 포함하는 분자를 의미한다. 용어 "리포펩티드"는 또한 하나 이상의 아미노, 카르복실레이트 또는 히드록실기가 보호된 리포펩티드의 보호형을 포함한다. 예컨대, 보호기의 예에 대해서는 문헌["Protective Groups in Organic Synthesis" by Theodora W. Greene, John Wiley and Sons, New York, 1981] 참조. 일 구체예에서, 리포펩티드는 항생제이다. 또 다른 구체예에서, 리포펩티드는 LY 303366, 에치노칸딘류, 뉴모칸딘류, 아쿨레아신류, 비스코신, 서팩틴, 플리파스타틴 B1, 암포마이신 또는 미국 특허 5,629,288호에 개시된 리포펩티드 유도체이다. 이들 리포펩티드는 당업계에 공지되어 있다. 예컨대, 미국 특허 5,202,309호 및 국제 PCT 공개 공보 WO 00/08197호 참조. 또 다른 구체예에서, 리포펩티드는 답토마이신 관련 분자이다. 또 다른 구체예에서, 리포펩티드는 답토마이신이다. The term “lipopeptide” means a molecule comprising a lipid-like moiety covalently bound to a peptide moiety and salts, esters, amides and ethers thereof. The term “lipopeptide” also includes protective forms of lipopeptides in which one or more amino, carboxylate or hydroxyl groups are protected. For example, for examples of protecting groups, see "Protective Groups in Organic Synthesis" by Theodora W. Greene, John Wiley and Sons, New York, 1981. In one embodiment, the lipopeptides are antibiotics. In another embodiment, the lipopeptides are LY 303366, echinocandines, pneumocandines, aculeacins, biscosine, surfactin, flipfastatin B1, ampomycin or lipopeptide derivatives disclosed in US Pat. No. 5,629,288. These lipopeptides are known in the art. See, for example, US Pat. No. 5,202,309 and International PCT Publication WO 00/08197. In another embodiment, the lipopeptides are daptomycin related molecules. In another embodiment, the lipopeptides are daptomycin.

"답토마이신 관련 분자"는 특히 답토마이신, A54145 또는 답토마이신과 구조적으로 관련된 기타 리포펩티드(예, 답토마이신 관련 리포펩티드), 예컨대 이들 분자 내에 존재하는 임의의 키랄 중심에서 만들어질 수 있는 모든 입체이성체를 포함한다. A “daptomycin related molecule” refers to daptomycin, A54145 or other lipopeptides structurally related to daptomycin (eg, daptomycin related lipopeptides) such as all stereoisomers that can be made at any chiral center present in these molecules. It includes.

"답토마이신 관련 리포펩티드"는 미국 특허 4,537,717호, 4,482,487호, RE32,311호, RE32,310호, 및 현재 미국 출원 09/547,357호로 재발행된 5,912,226호에 개시된 리포펩티드를 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 답토마이신 관련 리포펩티드는 2001년 6월 21일에 공개된 국제 PCT 공개 공보 WO 01/44272호, 2001년 6월 21일에 공개된 국제 PCT 공개 공보 WO 01/44274호 및 2001년 6월 21일에 공개된 국제 PCT 공개 공보 WO 01/44271호에 개시된 것들을 포함하며, 이들 국제 출원은 본 명세서에서 참고 인용한다. 전술한 출원에 개시된 답토마이신 관련 리포펩티드는 오르니틴 및/또는 키누린 잔기, 및/또는 답토마이신의 지방산 측쇄가 변형된 합성 및 반합성 리포펩티드에 관한 것이다. 답토마이신 관련 리포펩티드는 또한, 답토마이신의 n-데카노일 지방산 측쇄가 n-옥타노일, n-노나노일, n-운데카노일, n-도데카노일, n-트리데카노일 또는 n-테트라데카노일 지방산 측쇄로 치환된 A-21978C₀ 항생제를 포함한다. “Daptomycin-related lipopeptides” include, but are not limited to, the lipopeptides disclosed in US Pat. no. In addition, daptomycin-associated lipopeptides are disclosed in International PCT Publication No. WO 01/44272, published June 21, 2001, International PCT Publication No. WO 01/44274, published June 21, 2001 and June 2001. And those disclosed in International PCT Publication No. WO 01/44271, published on 21 December, which are incorporated herein by reference. The daptomycin-associated lipopeptides disclosed in the foregoing applications relate to synthetic and semisynthetic lipopeptides with modified ornithine and / or kynurin residues, and / or fatty acid side chains of daptomycin. The daptomycin-associated lipopeptides also show that the n-decanoyl fatty acid side chain of daptomycin is n-octanoyl, n-nonanoyl, n-undecanoyl, n-dodecanoyl, n-tridecanoyl or n-tetra A-21978C ₀ antibiotics substituted with decanoyl fatty acid side chains.

용어 "답토마이신"은 α-아스파르틸기를 포함하는 인자 A-21978C₀형 항생제의 n-데카노일 유도체를 의미한다. "답토마이신"은 LY 146032와 동의어이다.The term “daptomycin” refers to an n-decanoyl derivative of a factor A-21978C type ₀ antibiotic comprising an α-aspartyl group. "Daptomycin" is synonymous with LY 146032.

용어 "무수-답토마이신"은 답토마이신의 α-아스파르틸기가 숙시노이미도기로 환형화된 답토마이신 관련 리포펩티드를 의미한다. 예컨대 무수-답토마이신의 구조에 대한 '226 특허 참조.The term "anhydrous-daptomycin" refers to daptomycin-associated lipopeptides in which the α-aspartyl group of daptomycin is cyclized to a succinoimido group. See, for example, the '226 patent for the structure of anhydrous-daptomycin.

용어 "β-이성체" 또는 "답토마이신의 β-이성체"는 α-아스파르틸기 대신에 β-아스파르틸기를 포함하는 답토마이신 관련 리포펩티드를 의미한다. 예컨대, 답토마이신의 β-이성체 구조에 대해서는 '226 특허 참조.The term "β-isomer" or "β-isomer of daptomycin" refers to daptomycin-associated lipopeptides that include β-aspartyl groups instead of α-aspartyl groups. See, for example, the '226 patent for the β-isomeric structure of daptomycin.

용어 "분리된"은 혼합물 중에 존재하는 화합물이 적어도 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90%인 화합물 또는 생성물을 의미한다. 또한, 용어 "분리된"은 혼합물군 중에 존재하는 화합물이 적어도 5∼10%, 10∼20%, 20∼30%, 30∼40%, 40∼50%, 50∼60%, 60∼70%, 70∼80% 또는 80∼90%인 화합물을 의미한다. 혼합물 중의 화합물의 비율(%)은, 화합물의 순도를 측정하는 것에 대해 하기에 개시된 바와 같이, 당업계에 공지된 수단으로 측정할 수 있다. The term “isolated” means a compound or product wherein the compound present in the mixture is at least 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% or 90%. In addition, the term "isolated" means that at least 5-10%, 10-20%, 20-30%, 30-40%, 40-50%, 50-60%, 60-70% of the compounds present in the mixture group , 70 to 80% or 80 to 90%. The percentage of compounds in the mixture can be measured by means known in the art, as described below for measuring the purity of the compounds.

"거의 순수한"은 목적하는 화합물 95% 이상을 포함하는 샘플을 의미한다. 바람직하게는, 샘플의 95% 이상 내지 97% 이상이 답토마이신인 경우 답토마이신은 " 거의 순수하다". 유사하게, 답토마이신 관련 리포펩티드는, 샘플의 95% 이상 내지 97% 이상이 답토마이신 관련 리포펩티드인 경우 "거의 순수하다"."Almost pure" means a sample comprising at least 95% of the desired compound. Preferably, daptomycin is "nearly pure" when at least 95% and at least 97% of the samples are daptomycin. Similarly, daptomycin related lipopeptides are "almost pure" when at least 95% and at least 97% of the samples are daptomycin related lipopeptides.

답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드는, 샘플 중 98% 이상 내지 99% 이상이 각각 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드인 경우 "실질적으로 순수하다".The daptomycin or daptomycin related lipopeptides are "substantially pure" if at least 98% to 99% of the samples in the sample are daptomycin or daptomycin related lipopeptides, respectively.

다른 화합물이 각각 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드 제제의 양의 1% 이하로 존재하는 경우 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드는 또 다른 화합물을 "거의 포함하지 않는다".The daptomycin or daptomycin related lipopeptides “nearly contain” another compound if other compounds are present in less than 1% of the amount of the daptomycin or daptomycin related lipopeptide preparation, respectively.

다른 화합물이 각각 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드 제제의 양의 0.5% 이하로 존재하는 경우 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드는 또 다른 화합물을 "실질적으로 포함하지 않는다".The daptomycin or daptomycin related lipopeptides “substantially do not contain” another compound when the other compound is present at 0.5% or less of the amount of daptomycin or daptomycin related lipopeptide preparation, respectively.

다른 화합물이 각각 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드 제제의 양의 0.1% 이하로 존재하는 경우 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드는 또 다른 화합물을 "포함하지 않는다". 대안적으로, 검출 한계가 각각 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드 제제의 양의 약 0.05% 이하인 최대 감도의 조건 하에서 화합물이 HPLC로 검출될 수 없는 경우에는 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드는 또 다른 화합물을 "포함하지 않는다".The daptomycin or daptomycin related lipopeptides “do not contain” another compound when other compounds are present at 0.1% or less of the amount of daptomycin or daptomycin related lipopeptide preparation, respectively. Alternatively, daptomycin or daptomycin-associated lipopeptides may be further reduced if the compound cannot be detected by HPLC under conditions of maximum sensitivity at which the detection limit is about 0.05% or less of the amount of daptomycin or daptomycin-related lipopeptide preparation, respectively. Does not include a compound.

"정제된" 답토마이신은 거의 순수한 답토마이신, 실질적으로 순수한 답토마이신, 또는 이의 염, 또는 다른 화합물을 거의 포함하지 않거나, 실질적으로 포함하지 않거나 또는 포함하지 않는 답토마이신 또는 이의 염을 의미한다. 마찬가지 로, "정제된" 답토마이신 관련 리포펩티드는 거의 순수한 답토마이신 관련 리포펩티드, 실질적으로 순수한 답토마이신 관련 리포펩티드, 또는 이의 염, 또는 다른 화합물을 거의 포함하지 않거나, 실질적으로 포함하지 않거나 또는 포함하지 않는 답토마이신 관련 리포펩티드 또는 이의 염을 의미한다. By “purified” daptomycin is meant nearly pure daptomycin, substantially pure daptomycin, or a salt thereof, or daptomycin or a salt thereof that contains little, substantially no, or no other compounds. Likewise, “purified” daptomycin related lipopeptides contain little, substantially no or substantially no pure daptomycin related lipopeptides, substantially pure daptomycin related lipopeptides, or salts thereof, or other compounds. Daptomycin-associated lipopeptides or salts thereof.

"미정제" 답토마이신은 순도가 90% 미만인 답토마이신 또는 이의 염을 의미한다. 마찬가지로, "미정제" 답토마이신 관련 리포펩티드는 순도가 90% 미만인 답토마이신 관련 리포펩티드 또는 이의 염을 의미한다. "Crude" daptomycin means daptomycin or a salt thereof that is less than 90% pure. Likewise, "crude" daptomycin related lipopeptides refer to daptomycin related lipopeptides or salts thereof having a purity of less than 90%.

"반정제" 답토마이신은 순도가 90% 이상 95% 미만인 답토마이신 또는 이의 염을 의미한다. 유사하게, "반정제" 답토마이신 관련 리포펩티드는 순도가 90% 이상 95% 미만인 답토마이신 관련 리포펩티드 또는 이의 염을 의미한다. "Semi-purified" daptomycin means daptomycin or a salt thereof having a purity of at least 90% and less than 95%. Similarly, "semi-purifying" daptomycin related lipopeptides refer to daptomycin related lipopeptides or salts thereof having a purity of at least 90% and less than 95%.

답토마이신, 답토마이신 관련 리포펩티드 또는 또 다른 리포펩티드의 순도는 약학 조성물로 제형화하기 전의 리포펩티드를 의미한다. 리포펩티드의 순도는 "순도(%)"로 언급된다. 순도의 수치가 결정질 제제의 결정도의 척도는 아니다. 핵자기 공명(NMR), 기체 크로마토그래피/질량 분광기(GC/MS), 액상 크로마토그래피/질량 분광기(LC/MS) 또는 미생물학적 분석 등의 임의의 수단으로 순도를 측정할 수 있다. 답토마이신의 순도를 측정하는 하나의 바람직한 수단은 분석적 고압 액체 크로마토그래피(HPLC)에 의한 것이다. 분석적 HPLC의 2가지 방법은 참고로 인용한 2001년 7월 26일에 공개된 WO 01/53330호에 개시되어 있다. The purity of daptomycin, daptomycin related lipopeptides or another lipopeptides means lipopeptides prior to formulation into pharmaceutical compositions. The purity of the lipopeptide is referred to as "purity (%)". The level of purity is not a measure of the crystallinity of the crystalline formulation. Purity can be measured by any means, such as nuclear magnetic resonance (NMR), gas chromatography / mass spectroscopy (GC / MS), liquid phase chromatography / mass spectroscopy (LC / MS), or microbiological analysis. One preferred means of measuring the purity of daptomycin is by analytical high pressure liquid chromatography (HPLC). Two methods of analytical HPLC are disclosed in WO 01/53330, published July 26, 2001, which is incorporated by reference.

"리포펩티드 결정"은 리포펩티드 또는 리포펩티드 염의 1 이상의 결정을 의미한다. 결정으로서 리포펩티드의 측정은, 특히 광학 현미경, 전자 현미경, x-선 분말 회절, 고체 상태 핵자기 공명(NMR) 또는 편광 현미경을 비롯한 임의의 수단으로 측정할 수 있다. 결정 길이, 직경, 폭, 크기 및 형상을 측정하고, 결정이 단일 입자로서 존재하는지 또는 다결정질인지를 결정하는 데 현미경을 사용할 수 있다. "Lipopeptide crystal" means one or more crystals of a lipopeptide or lipopeptide salt. The determination of lipopeptides as crystals can be measured by any means, including optical microscopy, electron microscopy, x-ray powder diffraction, solid state nuclear magnetic resonance (NMR) or polarization microscopy. Microscopes can be used to measure crystal length, diameter, width, size and shape, and to determine whether the crystal is present as single particles or polycrystalline.

하나의 수단, 예컨대 육안으로 또는 광학 현미경이니 편광 현미경으로 측정할 때 결정질 특성을 갖는 것으로 측정되지만, 또 다른 수단, 예컨대 x-선 분말 회절로 측정시 결정질 특성을 갖지 않는 것으로 나타나는 경우, 리포펩티드 또는 리포펩티드 입자는 "결정 유사(crystal-like)" 형태이다. "결정 유사" 리포펩티드는 어떤 조건에서는 결정질이지만, 다른 조건에서는 비결정질이 될 수 있다.Lipopeptides, when measured by one means, such as the naked eye or by optical microscopy, have been determined to have crystalline properties when measured by polarized light, but do not appear to have crystalline properties when measured by another means, such as x-ray powder diffraction. Lipopeptide particles are in "crystal-like" form. "Crystal-like" lipopeptides may be crystalline under certain conditions, but may be amorphous under other conditions.

"결정질 리포펩티드" 또는 "리포펩티드의 결정질 형태"는 리포펩티드 결정을 포함하는 리포펩티드 또는 이의 염의 제제를 의미한다. 일 구체예에서, 결정질 리포펩티드는 비정질 리포펩티드를 일정량 포함할 수 있다. 일 구체예에서, 결정질 리포펩티드는 리포펩티드 결정을 50 중량% 이상 포함한다. 또 다른 구체예에서, 결정질 리포펩티드는 리포펩티드 결정을 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95% 포함한다. 결정질 리포펩티드는 리포펩티드 결정을 50∼60%, 60∼70%, 70∼80%, 80∼90% 또는 90∼95% 포함할 수 있다. 또 다른 구체예에서, 결정질 리포펩티드는 리포펩티드 결정을 95% 이상, 예컨대 리포펩티드 결정을 적어도 96%, 97%, 98% 또는 99%, 또는 리포펩티드 결정을 100% 포함한다. 결정질 리포펩티드는 대체로 리포펩티드 결정을 95∼100% 포함할 수 있다. 리포펩티드 결정의 중량%는 약학 조성물로 제형화하기 전의 리포펩티드 제제를 의미하는 것이다."Crystalline lipopeptide" or "crystalline form of a lipopeptide" means a preparation of a lipopeptide or salt thereof comprising a lipopeptide crystal. In one embodiment, the crystalline lipopeptides may comprise a certain amount of amorphous lipopeptides. In one embodiment, the crystalline lipopeptides comprise at least 50% by weight lipopeptide crystals. In another embodiment, the crystalline lipopeptides comprise 60%, 70%, 80%, 90% or 95% of the lipopeptide crystals. Crystalline lipopeptides may comprise 50-60%, 60-70%, 70-80%, 80-90% or 90-95% lipopeptide crystals. In another embodiment, the crystalline lipopeptides comprise at least 95% lipopeptide crystals, such as at least 96%, 97%, 98% or 99% lipopeptide crystals, or 100% lipopeptide crystals. Crystalline lipopeptides may generally comprise between 95 and 100% lipopeptide crystals. Weight percent of lipopeptide crystals refers to a lipopeptide preparation prior to formulation into a pharmaceutical composition.

리포펩티드의 "비정질" 형태는 리포펩티드 결정 또는 결정 유사 리포펩티드 (또는 결정 유사 입자)가 거의 또는 전혀 없는 리포펩티드 제제를 의미하다. 일 구체예에서, 비정질 리포펩티드는 리포펩티드 결정 또는 결정 유사 리포펩티드 20 중량% 미만을 포함한다. 또 다른 구체예에서, 비정질 리포펩티드는 리포펩티드 결정 또는 결정 유사 리포펩티드를 10 중량% 미만으로 포함한다. 또 다른 구체예에서, 비정질 리포펩티드는 리포펩티드 결정 또는 결정 유사 리포펩티드를 5 중량% 미만으로 포함한다. 또 다른 바람직한 구체예에서, 비정질 리포펩티드는 리포펩티드 결정 또는 결정 유사 리포펩티드 1 중량% 미만을 포함한다. "Amorphous" form of a lipopeptide means a lipopeptide preparation with little or no lipopeptide crystals or crystal-like lipopeptides (or crystal-like particles). In one embodiment, the amorphous lipopeptides comprise less than 20% by weight of lipopeptide crystals or crystalline like lipopeptides. In another embodiment, the amorphous lipopeptides comprise less than 10% by weight of lipopeptide crystals or crystal-like lipopeptides. In another embodiment, the amorphous lipopeptides comprise less than 5% by weight of lipopeptide crystals or crystal-like lipopeptides. In another preferred embodiment, the amorphous lipopeptides comprise less than 1% by weight of lipopeptide crystals or crystal-like lipopeptides.

"회분식 결정화"란 해당 리포펩티드를 용액 중의 결정화 시약과 혼합하여 리포펩티드를 용액 중에서 결정화하는 방법을 의미한다. "회분식 침전"이란 리포펩티드를 용액 중의 침전 시약과 혼합하여 리포펩티드를 용액 중에서 침전시키는 방법을 의미한다. 일 구체예에서, 결정화 또는 침전된 제제를 용액으로부터 수거한다. 또 다른 구체예에서, 결정화 또는 침전 제제를 여과 또는 원심분리로 수거한다. By "batch crystallization" is meant a method in which the lipopeptides are crystallized in solution by mixing the lipopeptides with a crystallization reagent in solution. By "batch precipitation" is meant a method in which the lipopeptides are mixed with the precipitation reagents in solution to precipitate the lipopeptides in solution. In one embodiment, the crystallized or precipitated formulation is collected from the solution. In another embodiment, the crystallization or precipitation formulation is collected by filtration or centrifugation.

"유기 침전제"는 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 또는 폴리에틸렌 글리콜 모노메틸 에테르(PEG MME) 또는 화학적으로 유사한 화합물을 의미한다. "Organic precipitant" means polyethylene glycol (PEG) or polyethylene glycol monomethyl ether (PEG MME) or chemically similar compounds.

"염"은 이온성 화합물을 의미한다. 이들 이온성 화합물은 침전제로서 작용할 수 있다. "Salt" means an ionic compound. These ionic compounds can act as precipitants.

"저 분자량 알코올"은 1 이상의 알코올 작용기와 8개 이하의 탄소 원자를 포함하는 유기 화합물이다. 예를 들어, 저 분자량 알코올의 비제한적인 예로는 메탄올, 이소프로판올 및 t-부탄올 등이 있다. A "low molecular weight alcohol" is an organic compound comprising at least one alcohol functional group and up to eight carbon atoms. For example, non-limiting examples of low molecular weight alcohols include methanol, isopropanol and t-butanol.

"다가 알코올"은 1 초과의 알코올기와 8개 미만의 탄소 원자를 포함하는 화 합물이다. 다가 알코올의 예로는 1,6-헥산디올, 에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 글리세롤, 1,2-프로판디올, 2-메틸-2,4-펜탄디올 및 1,4-부탄디올 등이 있으나, 이에 국한되는 것은 아니다.A "polyalcohol" is a compound that contains more than one alcohol group and less than eight carbon atoms. Examples of polyhydric alcohols include, but are not limited to, 1,6-hexanediol, ethylene glycol, propylene glycol, glycerol, 1,2-propanediol, 2-methyl-2,4-pentanediol and 1,4-butanediol It is not.

"용기"는 제품을 유지하는 리셉터클을 의미한다. 예를 들어, 용기는 앰플, 유리병, 관, 병 또는 실린더일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. "Container" means a receptacle that holds a product. For example, the container may be, but is not limited to, an ampoule, glass bottle, tube, bottle, or cylinder.

정제된 리포펩티드의 제조 방법Process for preparing purified lipopeptides

본 발명의 목적 중 하나는, 리포펩티드의 비정질 제제를 제공하는 단계 및 리포펩티드를 결정화 또는 침전시키는 단계를 포함하는 리포펩티드의 정제 방법을 제공하는 것이다. 일 구체예에서, 리포펩티드는 결정화 또는 침전을 실시하기 전보다 실시한 후에 순도가 더 높다. 현적, 시팅 드롭(sitting drop) 또는 샌드위치 드롭 증기 확산, 액체-액체 또는 자유 계면 확산, 마이크로투석 또는 투석, 지연형 용매 증발, 승화, 또는 미량회분식 또는 회분식 결정화로 리포펩티드를 결정화할 수 있다. 일반적으로, 리포펩티드는 유사한 방법으로 침전시킬 수 있으며, 회분식 침전으로 리포펩티드를 침전시키는 것이 바람직하다. 바람직한 구체예에서, 결정화된 또는 침전된 리포펩티드는 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드이다. 더욱 바람직한 구체예에서, 결정화 또는 침전된 리포펩티드는 답토마이신이다. One of the objects of the present invention is to provide a method for purifying a lipopeptide comprising providing an amorphous preparation of a lipopeptide and crystallizing or precipitating the lipopeptide. In one embodiment, the lipopeptides are of higher purity after the run than before the crystallization or precipitation. Lipopeptides can be crystallized by hydration, sitting drop or sandwich drop vapor diffusion, liquid-liquid or free interfacial diffusion, microdialysis or dialysis, delayed solvent evaporation, sublimation, or microbatch or batch crystallization. In general, lipopeptides can be precipitated in a similar manner, and it is preferred to precipitate the lipopeptides by batch precipitation. In a preferred embodiment, the crystallized or precipitated lipopeptides are daptomycin or daptomycin related lipopeptides. In a more preferred embodiment, the crystallized or precipitated lipopeptides are daptomycin.

리포펩티드를 본 명세서의 교시 내용에 따라서 결정화 또는 침전시킬 수 있다. 일 구체예에서, 하기에 개시된 바와 같이 리포펩티드를 포함하는 용액에 저 분자량 알코올 또는 다가 알코올, pH 완충제 및 1가 또는 2가 양이온을 포함하는 염을 제공하고, 침전 또는 결정화를 유발하여 리포펩티드를 결정화 또는 침전시킬 수 있다. 또 다른 구체예에서는, 추가의 pH 완충제가 용액 내에 존재하지 않도록 염이 완충능을 갖는다. 또 다른 구체예에서, 염은 2가 양이온을 포함한다. 바람직한 구체예에서, 제공된 용액은 PEG 또는 PEG-MME, 또는 화학적으로 유사한 화합물을 포함하지 않는다. 일 구체예에서, 리포펩티드를 침전 또는 결정화시키는 방법은 일반적으로,Lipopeptides may be crystallized or precipitated according to the teachings herein. In one embodiment, a solution comprising a lipopeptide as provided below is provided with a salt comprising a low molecular weight alcohol or a polyhydric alcohol, a pH buffer and a monovalent or divalent cation, causing precipitation or crystallization to cause the lipopeptides to It can be crystallized or precipitated. In another embodiment, the salt has a buffering capacity such that no additional pH buffer is present in the solution. In another embodiment, the salt comprises a divalent cation. In a preferred embodiment, provided solutions do not comprise PEG or PEG-MME, or chemically similar compounds. In one embodiment, the method of precipitating or crystallizing the lipopeptide is generally

a) 1가 또는 2가 양이온을 포함하는 염, 선택적인 pH 완충제 및 저 분자량 알코올이나 다가 알코올과 리포펩티드를 혼합하는 단계; 및 a) mixing a lipopeptide with a salt comprising a monovalent or divalent cation, an optional pH buffer and a low molecular weight alcohol or a polyhydric alcohol; And

b) 적절한 온도 조건 하에서 용액으로부터 리포펩티드를 침전 또는 결정화시키는 단계를 포함한다. b) precipitation or crystallization of the lipopeptides from solution under appropriate temperature conditions.

특히 현미경 검사로 결정 또는 침전물 형성에 대해 샘플을 모니터링할 수 있으며, 산출물을 분광광도계로 분석할 수 있다. 바람직한 구체예에서, 결정화 또는 침전된 리포펩티드는 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드이다.In particular, microscopy can monitor the sample for crystal or precipitate formation, and the output can be analyzed spectrophotometrically. In a preferred embodiment, the crystallized or precipitated lipopeptides are daptomycin or daptomycin related lipopeptides.

또 다른 구체예에서, 하기에 개시된 바와 같은 저 분자량 또는 다가 알코올(들), 염 및 유기 침전제를 포함하는 용액을 제공하여 리포펩티드를 결정화시킬 수 있다. 더욱 바람직한 구체예에서, 결정화된 리포펩티드는 답토마이신이다. 일반적으로 회분식 결정화법에서는 리포펩티드를 용액 중에 용해시키고, 이 용액에 저분자량 알코올, 염, 완충액 및/또는 유기 침전제를 첨가한다. 그 다음 교반 여부와 관련없이 적절한 온도 조건 하에 샘플을 결정화시킨다. 특히 현미경 검사로 결정 형성에 대해 샘플을 모니터링하고, 분광광도계로 산출물을 분석할 수 있다.In another embodiment, lipopeptides can be crystallized by providing a solution comprising a low molecular weight or polyhydric alcohol (s), salts and organic precipitants as disclosed below. In a more preferred embodiment, the crystallized lipopeptide is daptomycin. In general, in a batch crystallization method, lipopeptides are dissolved in a solution, and low molecular weight alcohols, salts, buffers and / or organic precipitants are added to the solution. The sample is then crystallized under appropriate temperature conditions with or without stirring. In particular, microscopy can monitor the sample for crystal formation and analyze the output with a spectrophotometer.

전술한 바와 같이, 리포펩티드, 바람직하게는 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드는 1 이상의 알코올의 존재 하에 결정화 또는 침전된다. 바람직한 구체예에서, 알코올은 저 분자량 알코올 또는 다가 알코올이다. 저 분자량 알코올 또는 다가 알코올의 비제한적인 예로는, 메탄올, 이소프로판올, t-부탄올, 1,6 헥산디올, 에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 글리세롤, 1,2-프로판디올, 2-메틸-2,4-펜탄디올 및 1,4-부탄디올 등이 있다. 바람직한 구체예에서, 알코올은 이소프로판올, t-부탄올, 글리세롤, 1,6-헥산디올, 1,2-프로판디올, 1,4-부탄디올, 프로필렌 글리콜 및/또는 에틸렌 글리콜이다. 더욱 바람직한 구체예에서, 알코올은 이소프로판올이다.As mentioned above, the lipopeptides, preferably daptomycin or daptomycin related lipopeptides, crystallize or precipitate in the presence of one or more alcohols. In a preferred embodiment, the alcohol is a low molecular weight alcohol or a polyhydric alcohol. Non-limiting examples of low molecular weight alcohols or polyhydric alcohols include methanol, isopropanol, t-butanol, 1,6 hexanediol, ethylene glycol, propylene glycol, glycerol, 1,2-propanediol, 2-methyl-2,4- Pentanediol and 1,4-butanediol. In a preferred embodiment, the alcohol is isopropanol, t-butanol, glycerol, 1,6-hexanediol, 1,2-propanediol, 1,4-butanediol, propylene glycol and / or ethylene glycol. In a more preferred embodiment, the alcohol is isopropanol.

염은, 특히 포름산마그네슘, 포름산나트륨, 황산암모늄, 인산2수소암모늄, 아세트산칼슘, 아세트산아연, 구연산3나트륨 2수화물, 아세트산마그네슘, 아세트산나트륨, 염화마그네슘, 염화카드뮴, 아세트산암모늄, 염화나트륨 및 황산리튬 등을 포함한다. 일 구체예에서, 염은 1가 양이온, 예컨대 나트륨을 포함한다. 바람직한 구체예에서, 염은 2가 양이온을 포함한다. 더욱 바람직한 구체예에서, 염은 칼슘 양이온, 마그네슘 양이온 또는 망간 양이온을 포함한다. 추가의 바람직한 구체예에서, 염은 칼슘 2가 양이온을 포함한다. 일 구체예에서, 염은 염화칼슘, 아세트산칼슘, 아세트산아연, 구연산나트륨, 구연산3나트륨 2수화물, 염화마그네슘, 황산리튬, 염화나트륨, 아세트산마그네슘, 아세트산나트륨 또는 망간염, 예컨대 아세트산망간 또는 염화망간이다. 바람직한 구체예에서, 염은 아세트산칼슘이다. 2가 양이온, 예컨대 칼슘 양이온을 포함하는 다른 염의 예는 당업계에 공지되어 있으며, 특히 참고로 인용된 2000 시그마 카탈로그에 제시된 것들을 포함한다. 어떤 이론에도 구애받지 않고, 염 양이온은 리포펩티드 상의 음 전하, 예컨대 답토마이신 상의 4개의 카르복실산을 중화시킬 수 있는 것으로 생각된다. 유기 침전제로는, 특히 평균 분자량이 300∼10,000으로 다양할 수 있는 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 또는 폴리에틸렌 글리콜 모노메틸 에테르(PEG-MME) 등이 있다. 바람직한 구체예에서, 유기 침전제는 PEG 300, PEG 600, PEG 2000, PEG 4000, PEG 8000 또는 PEG 10,000이다.Salts are, in particular, magnesium formate, sodium formate, ammonium sulfate, ammonium dihydrogen phosphate, calcium acetate, zinc acetate, trisodium citrate dihydrate, magnesium acetate, sodium acetate, magnesium chloride, cadmium chloride, ammonium acetate, sodium chloride and lithium sulfate It includes. In one embodiment, the salt comprises a monovalent cation such as sodium. In a preferred embodiment, the salt comprises a divalent cation. In a more preferred embodiment, the salt comprises a calcium cation, magnesium cation or manganese cation. In a further preferred embodiment, the salt comprises a calcium divalent cation. In one embodiment, the salt is calcium chloride, calcium acetate, zinc acetate, sodium citrate, trisodium citrate dihydrate, magnesium chloride, lithium sulfate, sodium chloride, magnesium acetate, sodium acetate or manganese salts such as manganese acetate or manganese chloride. In a preferred embodiment, the salt is calcium acetate. Examples of other salts comprising divalent cations such as calcium cations are known in the art and include those set forth in the 2000 Sigma Catalog, which are specifically incorporated by reference. Without being bound by any theory, it is believed that salt cations can neutralize negative charges on lipopeptides, such as four carboxylic acids on daptomycin. Organic precipitants include, in particular, polyethylene glycol (PEG) or polyethylene glycol monomethyl ether (PEG-MME), which may vary in average molecular weight from 300 to 10,000. In a preferred embodiment, the organic precipitant is PEG 300, PEG 600, PEG 2000, PEG 4000, PEG 8000 or PEG 10,000.

pH 5.0∼9.5로 완충된 용액으로부터 리포펩티드를 침전 또는 결정화시킨다. 일 구체예에서, 완충 전에 용액의 pH는 약 1.5, 2.0 또는 3.0이다. 일 구체예에서, 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드를 pH가 약 5.5∼약 7.5인 용액으로부터 침전 또는 결정화시킨다. 또 다른 구체예에서, 완충액은 pH가 약 5.9∼약 6.3이다. 일 구체예에서, 완충된 용액은 pH 완충제를 사용하여 얻을 수 있다. pH 완충제의 비제한적인 예로는 트리스, 포스페이트, 시트레이트, HEPES, CHES, 아세트산나트륨 또는 2-모르폴리노에탄설폰산(MES), 붕산나트륨, 카코딜산나트륨, 이미다졸 및 구연산3나트륨 2수화물 등이 있다. 바람직한 구체예에서, 염은 카코딜산나트륨, 아세트산나트륨, 구연산3나트륨 2수화물, HEPES, MES, CHES, 이미다졸, 아세트산칼슘 및 트리스-HCl이다. 더욱 바람직한 구체예에서, pH 완충제는 아세트산칼슘 pH 6.1, 아세트산나트륨 pH 6.1, 카코딜산나트륨 pH 6.5, 구연산3나트륨 2수화물 pH 5.6, HEPES pH 7.5, 이미다졸 pH 8, MES pH 6.0, 아세트산칼슘 pH 6 및 트리스-HCl pH 8.5이다. 또 다른 구체예에서, 완충능을 갖는 염을 사용하여 용액을 완충시킬 수 있다. 바람직한 구체예에서, pH 완충제는 아세트산칼슘 pH 6.1이다. Lipopeptides are precipitated or crystallized from a solution buffered at pH 5.0-9.5. In one embodiment, the pH of the solution prior to buffering is about 1.5, 2.0 or 3.0. In one embodiment, daptomycin or daptomycin related lipopeptides are precipitated or crystallized from a solution having a pH of about 5.5 to about 7.5. In yet another embodiment, the buffer has a pH of about 5.9 to about 6.3. In one embodiment, the buffered solution can be obtained using a pH buffer. Non-limiting examples of pH buffers include tris, phosphate, citrate, HEPES, CHES, sodium acetate or 2-morpholinoethanesulfonic acid (MES), sodium borate, sodium cacodylate, imidazole and trisodium citrate dihydrate. There is this. In a preferred embodiment, the salts are sodium cacodylate, sodium acetate, trisodium citrate dihydrate, HEPES, MES, CHES, imidazole, calcium acetate and tris-HCl. In a more preferred embodiment, the pH buffer is calcium acetate pH 6.1, sodium acetate pH 6.1, sodium cacodylate pH 6.5, trisodium citrate dihydrate pH 5.6, HEPES pH 7.5, imidazole pH 8, MES pH 6.0, calcium acetate pH 6 And Tris-HCl pH 8.5. In another embodiment, salts with buffering capacity can be used to buffer the solution. In a preferred embodiment, the pH buffer is calcium acetate pH 6.1.

현적 증기 확산법을 이용하여 2∼40% 저 분자량 알코올 또는 다가 알코올, 0.001∼0.5 M 염 및 0.005∼0.2 M pH 완충제를 함유하는 용액으로부터 리포펩티드를 침전 또는 결정화시킨다. 바람직한 구체예에서, 리포펩티드는 3∼30% 저 분자량 알코올 또는 다가 알코올, 0.01∼0.3 M 염 및 0.01∼0.1 M pH 완충제를 포함하는 용액으로부터 침전 또는 결정화시킨다. 더욱 바람직한 구체예에서, 리포펩티드는 5∼20% 저 분자량 알코올 또는 다가 알코올, 0.02∼0.1 M 염 및 0.02∼0.07 M pH 완충제를 함유하는 용액으로부터 침전 또는 결정화시킨다. 제공된 용액은 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 또는 폴리에틸렌 글리콜 모노메틸 에테르(PEG-MME)를 포함할 수도 포함하지 않을 수도 있다. Lipopeptides are precipitated or crystallized from solutions containing 2-40% low molecular weight alcohols or polyhydric alcohols, 0.001-0.5 M salts and 0.005-0.2 M pH buffers using a conventional vapor diffusion method. In a preferred embodiment, the lipopeptides are precipitated or crystallized from a solution comprising 3-30% low molecular weight alcohol or polyhydric alcohol, 0.01-0.3 M salt and 0.01-0.1 M pH buffer. In a more preferred embodiment, the lipopeptides are precipitated or crystallized from a solution containing 5-20% low molecular weight alcohol or polyhydric alcohol, 0.02-0.1 M salt and 0.02-0.07 M pH buffer. The provided solution may or may not include polyethylene glycol (PEG) or polyethylene glycol monomethyl ether (PEG-MME).

회분식 결정화법을 사용하여 65∼95% 저 분자량 알코올 또는 다가 알코올, 0.001∼0.5 M 염 및 0.001∼0.2 M pH 완충제를 포함하는 용액으로부터 리포펩티드를 침전 또는 결정화시킨다. 바람직한 구체예에서, 70∼90% 저 분자량 알코올 또는 다가 알코올, 0.005∼0.04 M 염 및 0.005∼0.04 M pH 완충제를 함유하는 용액으로부터 리포펩티드를 침전 또는 결정화시킨다. 일부 구체예에서, 3∼8% 유기 침전제도 포함하는 용액으로부터 리포펩티드를 결정화시킨다. 더욱 바람직한 구체예에서, 80∼85% 저 분자량 알코올 또는 다가 알코올, 0.01∼0.03 M 염 및 0.01∼0.03 M pH 완충제를 함유하는 용액으로부터 리포펩티드를 침전 또는 결정화시킨다. 일부 구체예에서, 용액은 약 4∼5% 유기 침전제, 예컨대 PEG 또는 PEG-MME를 추가로 포함한다. 다른 구체예에서, 제공된 용액은 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 또는 폴리에틸렌 글리콜 모노메틸 에테르(PEG-MME)를 포함할 수도 포함하지 않을 수도 있다. Batch crystallization is used to precipitate or crystallize the lipopeptides from a solution comprising 65-95% low molecular weight alcohol or polyhydric alcohol, 0.001-0.5 M salt and 0.001-0.2 M pH buffer. In a preferred embodiment, the lipopeptides are precipitated or crystallized from a solution containing 70-90% low molecular weight alcohol or polyhydric alcohol, 0.005-0.04 M salt and 0.005-0.04 M pH buffer. In some embodiments, the lipopeptides are crystallized from a solution comprising 3-8% organic precipitator. In a more preferred embodiment, the lipopeptides are precipitated or crystallized from a solution containing 80-85% low molecular weight alcohol or polyhydric alcohol, 0.01-0.03 M salt and 0.01-0.03 M pH buffer. In some embodiments, the solution further comprises about 4-5% organic precipitant, such as PEG or PEG-MME. In other embodiments, provided solutions may or may not include polyethylene glycol (PEG) or polyethylene glycol monomethyl ether (PEG-MME).

약 0∼약 30℃의 온도에서 리포펩티드를 침전 또는 결정화시켜 각각 침전물 또는 결정을 형성한다. 바람직한 구체예에서, 약 20∼30℃의 온도에서 리포펩티드를 결정화 또는 침전시킨다. 더욱 바람직한 구체예에서, 약 23∼28℃에서 혼합물을 결정화 또는 침전시킨다. 더욱 더 바람직한 구체예에서는, 약 27℃에서 혼합물을 결정화 또는 침전시킨다. 결정화 또는 침전을 유발할 수 있는 임의의 시간 동안, 바람직하게는 약 1 시간 ∼약 2주간 혼합물을 결정화 또는 침전시킬 수 있다. 바람직한 구체예에서, 일정 기간, 바람직하게는 약 3∼약 24 시간, 더욱 바람직하게는 약 8∼18 시간 동안 혼합물을 보관한다.Lipopeptides are precipitated or crystallized at a temperature of about 0 to about 30 ° C. to form precipitates or crystals, respectively. In a preferred embodiment, the lipopeptides are crystallized or precipitated at a temperature of about 20-30 ° C. In a more preferred embodiment, the mixture is crystallized or precipitated at about 23-28 ° C. In even more preferred embodiments, the mixture is crystallized or precipitated at about 27 ° C. The mixture may be crystallized or precipitated for any time that may cause crystallization or precipitation, preferably from about 1 hour to about 2 weeks. In a preferred embodiment, the mixture is stored for a period of time, preferably about 3 to about 24 hours, more preferably about 8 to 18 hours.

리포펩티드 결정 또는 결정 유사 입자는 침상형, 막대형, 성게형, 박편형, 판형 또는 이의 클러스터 형상일 수 있지만, 이에 한정되는 것은 아니다. 일 구체예에서, 리포펩티드 결정 또는 결정 유사 입자는 성게형, 막대형 또는 침상형이다. 결정 또는 결정 유사 입자의 형상은, 특히 광학 현미경이나 전자 현미경으로 결정할 수 있다. 또 다른 구체예에서, 리포펩티드 결정 또는 결정 유사 입자는 임의의 선형 치수가 약 0.5 ㎛ 이상인 임의의 크기일 수 있다. 더욱 바람직한 구체예에서, 리포펩티드 결정 또는 결정 유사 입자는 5 ㎛ 이상, 더욱 바람직하게는 10 ㎛ 이상이다. 더욱 더 바람직한 구체예에서, 리포펩티드 결정 또는 결정 유사 입자는 50 ㎛ 이상, 더욱 바람직하게는 100 ㎛ 이상이다. 결정의 크기는 당업계에 공지된 임의의 방법으로 결정할 수 있다. 예컨대 문헌[United States Pharmacopeia (USP), pp. 1965-67] 참조.Lipopeptide crystals or crystal-like particles may be needle-shaped, rod-shaped, sea urchin-shaped, flaky, plate-shaped or clustered forms thereof, but are not limited thereto. In one embodiment, the lipopeptide crystal or crystal like particle is sea urchin, rod or needle. The shape of a crystal or a crystal like particle can be determined especially by an optical microscope or an electron microscope. In yet another embodiment, the lipopeptide crystal or crystal like particle may be any size with any linear dimension of about 0.5 μm or greater. In a more preferred embodiment, the lipopeptide crystal or crystal like particle is at least 5 μm, more preferably at least 10 μm. In even more preferred embodiments, the lipopeptide crystal or crystal like particle is at least 50 μm, more preferably at least 100 μm. The size of the crystals can be determined by any method known in the art. See, eg, United States Pharmacopeia (USP), pp. 1965-67.

결정질 또는 결정 유사 리포펩티드의 성질은 당업자에게 공지된 임의의 방법으로 결정할 수 있다. 측정할 수 있는 성질로는 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 의 크기, 형상, 복굴절 성질, 분말 x-선 회절 성질, 고체 상태 NMR 성질, 융점과 열, 빛, 습도 및 분해에 대한 안정성 등이 있다. 바람직한 구체예에서, 당업자는 분말 x-선 회절에 의해 리포펩티드가 결정질인지 여부를 결정할 수 있다. 분말 x-선 회절은, 샘플이 무작위로 배향된 작은 결정의 콜렉션인 경우 제제가 결정질인지 여부를 측정하는 데 대단히 유용하다. 무작위로 배향된 미세결정 덩어리에 의한 회절은 연구되는 분자와 그 구조에 대한 일련의 선 또는 고리(검출기에 따라 다름) 특성을 산출한다. 바람직한 구체예에서는, 리포펩티드가 결정질인지를 결정하기 위해서 자동화된 분말 회절 기구로 분말 회절을 측정한다. 예컨대, 분말 회절에 대한 Debye-Scherrer법의 논의에 대해서 참고로 인용한 문헌[Atkins et al., Physical Chemistrv, pp. 710-716 (1978)] 참조. 분말 회절에 대한 임의의 검출기가 구비된 당업계에 공지된 임의의 분말 회절분석 기구를 사용하여 회절 패턴을 측정할 수 있다.The nature of the crystalline or crystalline like lipopeptides can be determined by any method known to those skilled in the art. Properties that can be measured include the size, shape, birefringence properties, powder x-ray diffraction properties, solid state NMR properties, melting point and stability to melting, heat, light, humidity and degradation of crystalline or crystal-like lipopeptides. In a preferred embodiment, one skilled in the art can determine whether the lipopeptides are crystalline by powder x-ray diffraction. Powder x-ray diffraction is extremely useful for determining whether a formulation is crystalline when the sample is a collection of randomly oriented small crystals. Diffraction by randomly oriented microcrystalline masses yields a series of lines or rings (depending on the detector) for the molecule being studied and its structure. In a preferred embodiment, powder diffraction is measured with an automated powder diffraction apparatus to determine whether the lipopeptides are crystalline. See, eg, Atkins et al., Physical Chemistrv, pp., For a discussion of the Debye-Scherrer method for powder diffraction. 710-716 (1978). The diffraction pattern can be measured using any powder diffractometer known in the art equipped with any detector for powder diffraction.

본 발명의 바람직한 구체예에서, 약 24∼28℃의 온도에서 약 3∼24 시간 동안 약 pH 5.0∼9.5의 완충제, 염 및 알코올을 사용하여 리포펩티드를 결정화 또는 침전시킨다. 바람직한 구체예에서, 염은 완충제로서, 2가 양이온을 포함하며, 알코올은 저 분자량 알코올이고, pH는 약 5.5∼7.5이다. 더욱 바람직한 구체예에서, 염은 칼슘염이고, 알코올은 이소프로판올이며, pH는 약 5.9∼6.3이다. 용액이 유기 침전제를 포함하는 구체예에서, 유기 침전제는 PEG 4000 또는 PEG 8000인 것이 바람직하다. 또 다른 구체예에서, 12∼18% 글리세롤, 0.3∼0.8 M 염, 0.03∼0.08 M pH 완충제, 및 12∼18% PEG 600을 함유하는 용액으로부터 리포펩티드를 침전 또는 결정화시킨다. 또 다른 바람직한 구체예에서, 리포펩티드는 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드이다. 실시예 2∼3에는 고도로 순수한 결정 유사 답토마이신을 침전시키는 방법이 개시되어 있다. 당업자는 본 명세서의 교시 내용으로부터 실시예들에 제공된 결정화/침전 조건을 변형시켜 답토마이신, 답토마이신 관련 리포펩티드, 또는 해당하는 다른 리포펩티드를 결정화 또는 침전시킬 수 있다. 또한, 본 명세서의 교시 내용에서는 리포펩티드를 정제하는 방법 중 결정화 또는 침전 단계를 1회 실시한 것을 개시하였지만, 당업자는 이러한 명세서의 교시 내용으로부터 리포펩티드를 정제하는 공정 중 결정화 또는 침전 단계를 복수회 실시할 수 있을 것이다. 본 명세서에 개시된 결정화 또는 침전을 복수회 실시하면 리포펩티드의 순도를 추가로 증가시킬 수 있어 유리할 수 있다.In a preferred embodiment of the invention, the lipopeptides are crystallized or precipitated using buffers, salts and alcohols of about pH 5.0 to 9.5 for about 3 to 24 hours at a temperature of about 24 to 28 ° C. In a preferred embodiment, the salt comprises a divalent cation as a buffer, the alcohol is a low molecular weight alcohol, and the pH is about 5.5 to 7.5. In a more preferred embodiment, the salt is a calcium salt, the alcohol is isopropanol and the pH is about 5.9-6.3. In embodiments where the solution comprises an organic precipitant, it is preferred that the organic precipitant is PEG 4000 or PEG 8000. In another embodiment, the lipopeptides are precipitated or crystallized from a solution containing 12-18% glycerol, 0.3-0.8 M salt, 0.03-0.08 M pH buffer, and 12-18% PEG 600. In another preferred embodiment, the lipopeptides are daptomycin or daptomycin related lipopeptides. Examples 2-3 disclose methods for precipitating highly pure crystal-like daptomycin. One skilled in the art can modify the crystallization / precipitation conditions provided in the Examples from the teachings herein to crystallize or precipitate daptomycin, daptomycin related lipopeptides, or other lipopeptides as appropriate. In addition, although the teachings of the present specification disclose that a crystallization or precipitation step is performed once in a method of purifying a lipopeptide, a person skilled in the art performs a plurality of crystallization or precipitation steps in the process of purifying a lipopeptide from the teachings of this specification. You can do it. Performing multiple crystallizations or precipitations disclosed herein may further increase the purity of the lipopeptides and may be advantageous.

결정화 또는 침전 후에, 당업계에 공지된 임의의 방법으로 결정질 물질 또는 결정 유사 침전물을 회수할 수 있다. 바람직한 구체예에서, 결정질 물질 또는 결정 유사 침전물은 원심분리 또는 여과로 회수한다. 더욱 더 바람직한 구체예에서, 리포펩티드를 제조하는 대규모 공정 중에 여과 단계를 쉽게 도입할 수 있기 때문에, 결정질 물질 또는 결정 유사 침전물을 여과로 회수한다. 결정질 물질 또는 결정 유사 침전물이 회수된 후에, 세척으로 과량의 결정화 또는 침전 시약을 제거할 수 있다. 결정질 물질 또는 결정 유사 침전물을 감지할 수 있을 정도로 용해시키지 않는 한 당업계에 공지된 세척 용매를 선택할 수 있다. 세척 용매의 예는 실시예 12에 개시되어 있다. 결정화 물질 또는 결정 유사 침전물을 세척한 후에, 당업계에 공지된 임의의 방법으로 건조할 수 있다. 건조 방법의 예로는 공기 건조, 동결건조(냉 동-건조) 또는 데시케이션 등이 있다. 바람직한 방법에서, 결정질 물질 또는 결정 유사 침전물을 데시케이션으로 건조한다. 예컨대 실시예 12 참조. 또 다른 구체예에서, 결정질 리포펩티드의 안정성은 잔류 항생제 활성 또는 이의 분해물에 의해 측정할 수 있다. 항생제 활성은 각종 세균 균주에 대한 표준 한천 확산 분석으로 측정할 수 있다. 예컨대, 본 명세서에서 참고로 인용한 미국 특허 4,537,717호의 실시예 32 참조. 분해물의 양은, 특히 2001년 7월 26일에 공개된 국제 PCT 공개 공보 WO 01/53330호에 개시된 것과 같은 HPLC 분석으로 측정할 수 있다. 바람직한 구체예에서, 결정질 리포펩티드의 안정성은 비정질 형태의 리포펩티드의 안정성보다 크다. 결정질 리포펩티드의 안정성은, 결정질 리포펩티드와 이의 비정질 형태를 열, 빛, 습도에 노출시킨 다음, 비정질 형태의 분해도에 대한 결정질 형태의 분해도를 측정하여 결정할 수 있다.After crystallization or precipitation, the crystalline material or crystalline like precipitate can be recovered by any method known in the art. In a preferred embodiment, the crystalline material or crystalline like precipitate is recovered by centrifugation or filtration. In an even more preferred embodiment, the crystalline material or crystalline like precipitate is recovered by filtration, since a filtration step can easily be introduced during the large scale process of preparing the lipopeptides. After the crystalline material or crystalline like precipitate is recovered, the wash may remove excess crystallization or precipitation reagent. Washing solvents known in the art can be chosen so long as the crystalline material or crystal-like precipitate is not soluble enough to be perceived. Examples of wash solvents are disclosed in Example 12. After washing the crystallized material or crystal-like precipitate, it can be dried by any method known in the art. Examples of drying methods include air drying, lyophilization (freeze-drying) or desiccation. In a preferred method, the crystalline material or crystalline like precipitate is dried by desiccation. See eg Example 12. In another embodiment, the stability of the crystalline lipopeptides can be measured by residual antibiotic activity or degradation products thereof. Antibiotic activity can be determined by standard agar diffusion assays for various bacterial strains. See, eg, Example 32 of US Pat. No. 4,537,717, which is incorporated herein by reference. The amount of degradation products can be measured, in particular, by HPLC analysis as disclosed in International PCT Publication No. WO 01/53330 published on July 26, 2001. In a preferred embodiment, the stability of the crystalline lipopeptides is greater than that of the lipopeptides in amorphous form. The stability of crystalline lipopeptides can be determined by exposing the crystalline lipopeptides and their amorphous forms to heat, light, humidity, and then measuring the degree of degradation of the crystalline forms relative to the resolution of the amorphous forms.

리포펩티드의 생물학적 활성 또는 임의의 적용가능한 물리적 파라미터를 측정하여 리포펩티드의 분해도를 측정할 수 있다. 일 구체예에서는, 열, 빛, 습도, pH 변화 또는 양극단의 pH를 가한 후 리포펩티드의 특정 생물학적 활성을 측정하고, 임의의 안정성 테스트 전에 리포펩티드의 동일한 생물학적 활성과 비교하여 분해도를 측정할 수 있다. 분해량은, 예컨대 안정성 테스트 후에 남아있는 생물학적 활성 비율(%)을 결정하여 측정할 수 있다. 남은 생물학적 활성 비율(%)을 동일한 테스트를 받은 비정질 형태의 리포펩티드의 것과 비교할 수 있다. 일 구체예에서, 리포펩티드가 항생제라면, 결정질 리포펩티드를 안정성 테스트 전과 후에 항생제 활성에 대해 테스트하고, 분해 테스트 전과 후에 테스트된 비정질 형태의 것과 비 교할 수 있다. 바람직한 구체예에서, 리포펩티드는 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드이고, 생물학적 활성 테스트에서는 그람 양성균에 대한 리포펩티드의 항생제 활성량을 측정한다.The degree of degradation of the lipopeptide can be determined by measuring the biological activity or any applicable physical parameter of the lipopeptide. In one embodiment, the specific biological activity of the lipopeptides can be measured after application of heat, light, humidity, pH change, or the pH of the extremes, and the degree of degradation can be measured compared to the same biological activity of the lipopeptides prior to any stability test. . The amount of degradation can be measured, for example, by determining the percentage of biological activity remaining after the stability test. The remaining percentage of biological activity can be compared to that of the amorphous form of the lipopeptides tested. In one embodiment, if the lipopeptides are antibiotics, the crystalline lipopeptides can be tested for antibiotic activity before and after the stability test and compared to the amorphous form tested before and after the degradation test. In a preferred embodiment, the lipopeptides are daptomycin or daptomycin related lipopeptides and the biological activity test measures the amount of antibiotic activity of the lipopeptides against Gram-positive bacteria.

리포펩티드 분해는 물리적 분석으로도 측정할 수 있다. 일 구체예에서, 안정성 테스트 후에 남아있는 완전한 결정질 리포펩티드의 비율을 측정하여 분해도를 결정할 수 있다. 잔존하는 완전한 리포펩티드의 비율(%)을 안정성에 대해 동일한 테스트를 받은 비정질 형태의 리포펩티드와 비교할 수 있다. 바람직한 구체예에서는, HPLC, 자외선 분광법, 적외선 분광법, NMR 또는 질량 분광법으로 리포펩티드의 분해를 측정할 수 있다. 더욱 더 바람직한 구체예에서, HPLC를 사용하여 리포펩티드의 결정형에 대해 안정성 시험을 실시한 후에 남아있는 완전한 리포펩티드의 비율(%)을 측정한다. Lipopeptide degradation can also be determined by physical analysis. In one embodiment, the degree of degradation can be determined by measuring the proportion of complete crystalline lipopeptides remaining after the stability test. The percentage of complete lipopeptide remaining can be compared to the lipopeptide in amorphous form, which has been tested the same for stability. In a preferred embodiment, degradation of the lipopeptides can be measured by HPLC, ultraviolet spectroscopy, infrared spectroscopy, NMR or mass spectroscopy. In an even more preferred embodiment, the percentage of complete lipopeptide remaining after the stability test is performed on the crystalline form of the lipopeptide using HPLC.

어떤 이론에도 구애받지 않고서, 출원인은 답토마이신이 상기 개시된 방법으로 결정화된다고 생각한다. 그러나, 답토마이신 결정의 세척 및/또는 건조는 답토마이신 결정질 물질을 비결정질이지만 결정 유사 형태인 물질로 복원시키는 것으로 생각된다. 그럼에도 불구하고, 상기 개시된 방법이 답토마이신 또는 기타 리포펩티드를 결정화하기보다는 침전시키는 경우, 이 방법으로 리포펩티드가 정제되므로 이 방법도 유리하다. Regardless of any theory, Applicants believe that daptomycin is crystallized by the method disclosed above. However, washing and / or drying of daptomycin crystals is believed to restore the daptomycin crystalline material to an amorphous but crystalline like form material. Nevertheless, if the disclosed method precipitates rather than crystallizes daptomycin or other lipopeptides, this method is also advantageous since the lipopeptides are purified by this method.

또한, 본 발명은 상기 개시된 방법으로 제조된 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드를 제공한다. 일 구체예에서, 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드는 결정화 또는 침전 전에 리포펩티드와 비교하여 1 이상의 불순물을 소량으로 포함한다. 일 구체예에서, 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드는 결정화 또는 침전 전의 답토마이신과 비교하여 무수-답토마이신 및/또는 답토마이신의 β-이성체를 소량 포함하는 답토마이신이다. 또 다른 구체예에서, 결정질 또는 결정 유사 답토마이신은 비정질 답토마이신과 비교하여 모둔 불순물을 소량 포함한다. 유사하게, 또 다른 구체예에서, 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드는 전술한 바와 같은 답토마이신 관련 리포펩티드로서, 비정질 형태의 답토마이신 관련 리포펩티드와 비교하여 1 이상의 불순물을 소량 포함한다. 또 다른 구체예에서, 결정질 또는 결정 유사 답토마이신 관련 리포펩티드는 비정질 형태의 답토마이신 관련 리포펩티드와 비교하여 모든 불순물을 소량 포함한다.The present invention also provides crystalline or crystalline like lipopeptides prepared by the methods disclosed above. In one embodiment, the crystalline or crystalline like lipopeptides comprise small amounts of one or more impurities compared to the lipopeptides prior to crystallization or precipitation. In one embodiment, the crystalline or crystalline like lipopeptides are daptomycins containing small amounts of the β-isomers of anhydrous-daptomycin and / or daptomycin compared to daptomycin prior to crystallization or precipitation. In another embodiment, the crystalline or crystalline like daptomycin comprises a small amount of all impurities as compared to amorphous daptomycin. Similarly, in another embodiment, the crystalline or crystalline like lipopeptides are daptomycin related lipopeptides as described above, comprising a small amount of one or more impurities as compared to the amorphous form of daptomycin related lipopeptides. In another embodiment, the crystalline or crystalline like daptomycin related lipopeptides comprise small amounts of all impurities as compared to the amorphous form of daptomycin related lipopeptides.

상기 개시된 방법으로 제조된 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드는 1가 또는 2가 양이온과 물을 포함한다. 바람직한 구체예에서, 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드는 2가 양이온을 포함하는 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드이다. 더욱 바람직한 구체예에서, 2가 양이온은 칼슘 양이온이다. 더욱 더 바람직한 구체예에서, 결정질 또는 결정 유사 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드는 원자 흡수 또는 열 중량 분석으로 측정시 2가 칼슘 양이온 약 1∼10 중량%와 물 약 0∼15 중량%를 포함한다. 더욱 바람직한 구체예에서, 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드는 2가 칼슘 양이온 약 5 중량%와 물 약 10 중량%를 포함하는 답토마이신이며, HPLC 분석으로 측정시 결정질 또는 결정 유사 답토마이신의 순도는, 관련된 물질 및 유기 오염물에 대하여 적어도 95%, 96%, 97% 또는 98%이거나, 또는 95∼98% 사이의 임의의 값이다. 대안적으로, 결정질 또는 결정 유사 답토마이신 또는 답토마 이신 관련 리포펩티드는 1가 양이온(예, 나트륨)을 포함한다. 어떤 이론에도 구애받지 않으면서, 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드는 결정화 또는 침전시 1가 또는 2가 양이온과 염을 형성할 수 있는 것으로 생각된다. Crystalline or crystal-like lipopeptides prepared by the methods disclosed above include monovalent or divalent cations and water. In a preferred embodiment, the crystalline or crystalline like lipopeptides are daptomycin or daptomycin related lipopeptides comprising a divalent cation. In a more preferred embodiment, the divalent cation is a calcium cation. In even more preferred embodiments, the crystalline or crystalline like daptomycin or daptomycin related lipopeptides comprise about 1-10% by weight of divalent calcium cations and about 0-15% by weight of water as determined by atomic absorption or thermogravimetric analysis. . In a more preferred embodiment, the crystalline or crystal-like lipopeptides are daptomycin comprising about 5% by weight divalent calcium cation and about 10% by weight of water and the purity of the crystalline or crystal-like daptomycin as determined by HPLC analysis is related to At least 95%, 96%, 97% or 98%, or any value between 95 and 98% for materials and organic contaminants. Alternatively, the crystalline or crystalline like daptomycin or daptomycin related lipopeptides include monovalent cations (eg sodium). Without being bound by any theory, it is believed that daptomycin or daptomycin related lipopeptides can form salts with monovalent or divalent cations upon crystallization or precipitation.

리포펩티드의 결정질 형태는 리포펩티드의 비정질 형태보다 용액에서의 증가된 용해도와 증가된 재구성 속도를 나타낼 수 있다. 결정질 리포펩티드가 증가된 용해도 또는 증가된 재구성 속도를 나타내는 지 여부를 당업계에 공지된 방법으로 측정할 수 있다. 예를 들어, 결정질 리포펩티드의 소정량을 수용액 중에 용해시키고 용해된 리포펩티드의 농도를 측정한 다음, 동일한 양의 비정질 리포펩티드를 수용액 중에 용해시켜 제조한 용해된 리포펩티드의 농도와 비교할 수 있다. 마찬가지로, 결정질 리포펩티드를 수용액에 첨가한 다음 경시적으로 용해된 리포펩티드의 농도를 측정하고, 동일한 방법으로 측정된 비정질 리포펩티드의 재구성 속도와 비교하여 결정질 리포펩티드의 재구성 속도를 측정할 수 있다. 리포펩티드의 농도는 HPLC로 측정한다.The crystalline form of the lipopeptide may exhibit increased solubility and increased reconstitution rate in solution than the amorphous form of the lipopeptide. Whether crystalline lipopeptides exhibit increased solubility or increased reconstitution rate can be determined by methods known in the art. For example, a predetermined amount of crystalline lipopeptides may be dissolved in an aqueous solution and the concentration of dissolved lipopeptides measured, and then compared to the concentration of dissolved lipopeptides prepared by dissolving the same amount of amorphous lipopeptides in an aqueous solution. Likewise, crystalline lipopeptides can be added to an aqueous solution and then the concentration of dissolved lipopeptides measured over time, and the reconstitution rate of crystalline lipopeptides can be determined by comparison with the reconstitution rates of amorphous lipopeptides measured in the same manner. The concentration of lipopeptides is measured by HPLC.

상기 개시된 방법은 결정화 또는 침전시 비정질 리포펩티드보다 더욱 순수한 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드의 제조 방법을 제공한다. 일 구체예에서, 리포펩티드는 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드이다. 또 다른 구체예에서, 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드는 결정화 전에 순도가 92% 이하이지만, 결정 유사 리포펩티드로서 결정화 또는 침전 후에 순도는 대략 95%, 96%, 97% 또는 98% 이상이거나, 또는 95∼98% 사이의 값이다. 더욱 더 바람직한 구체예에서, 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드는 결정화 전에 순도가 90% 이하이며, 결정화 후에 약 97% 이상 또는 98% 이상이다. The methods disclosed above provide methods for the preparation of crystalline or crystal-like lipopeptides that are more pure than amorphous lipopeptides upon crystallization or precipitation. In one embodiment, the lipopeptides are daptomycin or daptomycin related lipopeptides. In another embodiment, the daptomycin or daptomycin related lipopeptides have a purity of 92% or less before crystallization, but after crystallization or precipitation as crystal-like lipopeptides, the purity is at least about 95%, 96%, 97% or 98%, or Or a value between 95 and 98%. In even more preferred embodiments, the daptomycin or daptomycin related lipopeptides are at most 90% pure before crystallization and at least about 97% or at least 98% after crystallization.

또 다른 구체예에서, 답토마이신은 결정화 또는 침전 전에 순도가 80% 이하, 바람직하게는 70% 이하, 더욱 바람직하게는 60% 이하이고, 정제 후에 순도가 약 95%, 96%, 97% 또는 98% 이상, 또는 95∼98% 사이의 임의의 값이다. 또 다른 구체예에서, 답토마이신은 결정화 전에 순도가 50% 이하, 바람직하게는 40% 이하, 더욱 바람직하게는 30% 이하이고, 결정화 또는 침전으로 정제한 후에 순도가 약 95%, 96%, 97% 또는 98% 이상, 또는 95∼98% 사이의 임의의 값이다. 추가의 바람직한 구체예에서, 답토마이신은 결정화 전에 순도가 20% 이하, 바람직하게는 15% 이하, 더욱 바람직하게는 10% 이하이고, 정제 후에 순도가 약 95%, 96%, 97% 또는 98% 이상, 또는 95∼98% 사이의 임의의 값이다. In another embodiment, daptomycin has a purity of 80% or less, preferably 70% or less, more preferably 60% or less, and, after purification, purity of about 95%, 96%, 97% or 98 before crystallization or precipitation. % Or more, or any value between 95 and 98%. In another embodiment, daptomycin has a purity of 50% or less, preferably 40% or less, more preferably 30% or less before crystallization, and after purification by crystallization or precipitation, the purity is about 95%, 96%, 97 % Or at least 98%, or any value between 95 and 98%. In a further preferred embodiment, daptomycin has a purity of 20% or less, preferably 15% or less, more preferably 10% or less before crystallization and about 95%, 96%, 97% or 98% purity after purification. The value is above, or any value between 95 and 98%.

더욱 바람직한 구체예에서, 리포펩티드는 답토마이신이다. 답토마이신 제제는, 예컨대 본 명세서에서 참고로 인용한 미국 특허 RE32,333호, RE32,455호, 4,800,157호, RE32,310호, RE32,311호, 4,537,717호, 4,482,487호, 4,524,135호, 4,874,843호, 4,885,243호 또는 5,912,226호 중 어느 하나에 개시된 임의의 방법으로 얻을 수 있다. 2001년 7월 26일에 공개된 국제 PCT 공개 공보 WO 01/53330호에 개시된 방법 중 하나의 방법으로도 답토마이신 제제를 얻을 수 있다. 리포펩티드 제제가 제조되면, 본 명세서에 개시된 교시 내용에 따라서 리포펩티드 제제를 결정화 또는 침전시켜, 이를 제조하는 데 사용된 리포펩티드 제제보다 더욱 순수하거나 또는 특정 불순물, 예컨대 무수-답토마이신을 소량 함유하는 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드를 생성한다.In a more preferred embodiment, the lipopeptides are daptomycin. The daptomycin formulations are described, for example, in US Patents RE32,333, RE32,455, 4,800,157, RE32,310, RE32,311, 4,537,717, 4,482,487, 4,524,135, 4,874,843, which are incorporated herein by reference. Obtainable by any of the methods disclosed in either 4,885,243 or 5,912,226. The daptomycin preparation can also be obtained by one of the methods disclosed in International PCT Publication No. WO 01/53330 published on July 26, 2001. Once the lipopeptide formulation is prepared, the lipopeptide formulation is crystallized or precipitated according to the teachings disclosed herein, which is more pure than the lipopeptide formulation used to prepare it or contains a small amount of certain impurities such as an-daptomycin. Produces crystalline or crystal-like lipopeptides.

발효 배양물로부터 정제된 리포펩티드를 제조하는 방법Method for Preparing Purified Lipopeptides from Fermentation Cultures

본 발명의 또 다른 구체예는 정제된 리포펩티드를 산출하기 위해서 결정화 또는 침전과 공정 크로마토그래피 단계를 결합시킨 공정에 관한 것이다. 바람직한 구체예에서, 이 방법은 당업계에 공지된 임의의 방법, 예컨대 자연 발생 유기체나 재조합 유기체의 발효로 리포펩티드를 제조하는 단계와, 리포펩티드 제제에 대해 정밀여과, 음이온 교환 크로마토그래피, 소수성 상호작용 크로마토그래피 및/또는 크기 배제 크로마토그래피(전형적인 크기 배제 크로마토그래피 매체 또는 한외여과) 등의 임의의 1 이상의 정제 방법을 실시하여 부분적으로 정제된 리포펩티드 제제를 산출하는 단계와, 리포펩티드 제제를 결정화 또는 침전시켜 정제된 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드를 얻는 단계를 포함한다. 바람직한 구체예에서, 리포펩티드는 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드이다. 발효, 정밀여과, 음이온 교환 크로마토그래피, 소수성 상호작용 크로마토그래피 및 한외여과와 관련된 단계들은, 예컨대 미국 특허 RE32,333호, RE32,455호, 4,800,157호, RE32,310호, RE32,311호, 4,537,717호, 4,482,487호, 4,524,135호, 4,874,843호, 4,885,243호 또는 5,912,226호, 2001년 7월 26일에 공개된 국제 공개 공보 WO 01/53330호 중 어느 하나에 개시되어 있다.Another embodiment of the invention relates to a process combining crystallization or precipitation with process chromatography steps to yield purified lipopeptides. In a preferred embodiment, the method comprises the steps of preparing lipopeptides by any method known in the art, such as fermentation of naturally occurring or recombinant organisms, microfiltration, anion exchange chromatography, hydrophobic interactions for lipopeptide preparations. Subjecting any one or more purification methods, such as functional chromatography and / or size exclusion chromatography (typical size exclusion chromatography medium or ultrafiltration) to yield partially purified lipopeptide formulations, and crystallizing the lipopeptide formulations Or precipitation to obtain purified crystalline or crystal-like lipopeptides. In a preferred embodiment, the lipopeptides are daptomycin or daptomycin related lipopeptides. Steps related to fermentation, microfiltration, anion exchange chromatography, hydrophobic interaction chromatography and ultrafiltration are described, for example, in US Patents RE32,333, RE32,455, 4,800,157, RE32,310, RE32,311, 4,537,717 4,482,487, 4,524,135, 4,874,843, 4,885,243 or 5,912,226, International Publication No. WO 01/53330 published on July 26, 2001.

이 방법은 경우에 따라서 결정화 또는 침전 단계 후에 결정질 또는 결정 유사 물질을 수거 및/또는 세척하는 단계를 포함할 수 있다. 바람직한 구체예에서, 결정질 리포펩티드 제제를 여과로 회수할 수 있다. 또 다른 구체예에서, 결정질 또는 결정 유사 물질을 건조한다. The method may optionally include the step of collecting and / or washing the crystalline or crystalline like material after the crystallization or precipitation step. In a preferred embodiment, the crystalline lipopeptide formulation can be recovered by filtration. In another embodiment, the crystalline or crystalline like material is dried.

일 구체예에서, 정제 방법은 스트렙토마이시스 로세오스포러스를 발현시켜 답토마이신을 포함하는 발효 배양물을 얻는 단계를 포함한다. 일 구체예에서, 에스. 로세오스포러스는 미국 특허 4,885,243호에 개시된 바와 같이 발효시킬 수 있다. 또 다른 구체예에서, 2001년 7월 26일에 공개된 국제 PCT 공개 공보 WO 01/53330호 개시된 바와 같이 A-21978C₀ 함유 미정제 생성물이 스트렙토마이시스 로세오스포러스에 의해 생산되는 발효 조건을 변경하여 답토마이신 생성을 증가시키고 에스. 로세오스포러스 발효 배양물에 의해 생성되는 불순물 및 관련 오염물을 감소시킨다. WO 01/53330호는 발효의 총 수율을 감소시키지 않으면서 데칸산 공급물을 가능한 최저 농도로 유지하는 변형을 가하여 '243 특허에 개시된 바와 같이 에스. 로세오스포러스를 발효하는 것을 기재하고 있다. In one embodiment, the purification method comprises expressing Streptomyces roseosporus to obtain a fermentation culture comprising daptomycin. In one embodiment, S. Roseosporus can be fermented as disclosed in US Pat. No. 4,885,243. In another embodiment, the fermentation conditions under which A-21978C ₀ containing crude product is produced by Streptomyces roseosporus, as disclosed in International PCT Publication No. WO 01/53330 published on July 26, 2001, are modified. Increases daptomycin production and s. It reduces impurities and related contaminants produced by Roseosporus fermentation cultures. WO 01/53330 applies a modification to maintain the decanoic acid feed at the lowest possible concentration without reducing the total yield of fermentation, as disclosed in the '243 patent. It describes the fermentation of roseosporus.

대안적으로, 재조합 방법으로 답토마이신을 생산하는 세균 균주 또는 기타 생산 유기체를 발효시켜 답토마이신을 얻을 수 있다. 일 구체예에서, 재조합 세균 균주 또는 기타 재조합 유기체는 답토마이신 생합성 유전자 클러스터를 포함한다. 또 다른 구체예에서, 답토마이신 생합성 유전자 클러스터 또는 이의 일부를 세균 인공 염색체(BAC)를 통해 유기체 또는 세균 균주에 도입한다. 또 다른 구체예에서, 사용된 재조합 세균 균주는 답토마이신 생합성 유전자 클러스터를 포함하는 BAC를 보유하는 에스. 로세오스포러스 또는 에스.리비단스(S. lividans)이다. 2001년 2월 28일에 출원된 미국 가명세서 출원 60/272,207호는 에스. 로세오스포러스 유래의 답토마이신 생합성 유전자 클로스터와 이의 사용을 개시하고 있으며, 이 출원은 그 전문을 참고로 인용한다.Alternatively, daptomycin can be obtained by fermenting bacterial strains or other producing organisms that produce daptomycin by recombinant methods. In one embodiment, the recombinant bacterial strain or other recombinant organism comprises a daptomycin biosynthetic gene cluster. In another embodiment, the daptomycin biosynthetic gene cluster or portion thereof is introduced into an organism or bacterial strain via a bacterial artificial chromosome (BAC). In another embodiment, the recombinant bacterial strain used comprises S. a BAC containing a daptomycin biosynthetic gene cluster. Rosedale porous agarose or S. Libby is Tansu (S. lividans). U.S. Provisional Application 60 / 272,207, filed February 28, 2001, discloses S. A daptomycin biosynthetic gene Closter from Roseosporus and its use is disclosed, which application is incorporated by reference in its entirety.

발효 후에, 당업계에 공지된 바와 같이 또는 WO 01/53330호 공보에 개시된 바와 같이 발효 브로쓰를 원심분리, 정밀여과 또는 추출로 청정화한다. 바람직한 구체예에서, 청정화는 정밀여과로 실시한다. 예컨대 실시예 13∼16과 도면 11∼15 참조. 도 11은 결정화 또는 침전을 이용하지 않은 예시적인 제조 과정을 도시한다.After fermentation, the fermentation broth is clarified by centrifugation, microfiltration or extraction as known in the art or as disclosed in WO 01/53330. In a preferred embodiment, the cleansing is by microfiltration. See, for example, Examples 13-16 and Figures 11-15. 11 shows an exemplary manufacturing process without using crystallization or precipitation.

발효 브로쓰를 청정화한 후에, 브로쓰 내의 답토마이신 농도는 약 5∼10%이다. 본 발명의 일 구체예에서, 답토마이신 제제에 대해 정밀여과 직후에 상기 개시된 결정화/침전 방법을 실시한다. 일 구체예에서, 결정화 또는 침전은 멸균 조건 하에서 실시한다. 결정화 또는 침전이 완료된 후에, 하기에 추가로 상세히 기술된 바와 같이 결정질 또는 결정 유사 답토마이신을 필요에 따라 회수, 세척 및 건조한다. 그 다음 벌크한 무수 활성 약물을 사용하여 멸균 병을 건식 충전시킬 수 있다. 예컨대, 실시예 16 및 도 12 참조. After clarifying the fermentation broth, the daptomycin concentration in the broth is about 5-10%. In one embodiment of the present invention, the daptomycin formulation is subjected to the crystallization / precipitation method disclosed above immediately after microfiltration. In one embodiment, the crystallization or precipitation is carried out under sterile conditions. After crystallization or precipitation is complete, crystalline or crystal-like daptomycin is recovered, washed and dried as necessary as described in further detail below. The bulk, anhydrous active drug can then be used to dry fill the sterile bottle. See, eg, Example 16 and FIG. 12.

발효 브로쓰의 청정화 후에, 당업계에 공지된 바와 같이 또는 WO 01/53330호 공보나 본 명세서에 개시된 바와 같이 음이온 교환 크로마토그래피로 리포펩티드를 제제 중에 농축시킬 수 있다. 예컨대, 실시예 13-14 및 도 12-13 참조. 음이온 교환 크로마토그래피 후에, 브로쓰 중의 답토마이신의 순도는 약 35∼40%이다. 본 발명의 일 구체예에서, 답토마이신 제제에 대해 음이온 교환 크로마토그래피 직후에 상기 개시된 결정화 또는 침전 방법을 실시한다. 일 구체예에서, 결정화 또는 침전은 멸균 조건 하에서 실시한다. 결정화 또는 침전이 완료된 후에, 하기에 추가로 상세히 기술된 바와 같이 결정질 또는 결정 유사 답토마이신을 필요에 따라 회수, 세척 및 건조한다. 그 다음 벌크한 무수 활성 약물을 사용하여 멸균 병을 건식 충전시킬 수 있다. 예컨대, 실시예 14 및 도 13 참조. After clarification of the fermentation broth, the lipopeptides can be concentrated in the formulation as known in the art or by anion exchange chromatography as disclosed in WO 01/53330 or disclosed herein. See, eg, Examples 13-14 and Figures 12-13. After anion exchange chromatography, the purity of daptomycin in the broth is about 35-40%. In one embodiment of the invention, the daptomycin preparation is subjected to the crystallization or precipitation method described above immediately after anion exchange chromatography. In one embodiment, the crystallization or precipitation is carried out under sterile conditions. After crystallization or precipitation is complete, crystalline or crystal-like daptomycin is recovered, washed and dried as necessary as described in further detail below. The bulk, anhydrous active drug can then be used to dry fill the sterile bottle. See, eg, Example 14 and FIG. 13.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 음이온 교환 크로마토그래피 후에 답토마이신 제제에 대해 크기 배제 한외여과를 실시한다. 크기 배제 한외여과는 WO 01/53330호 공보에 개시되어 있다. 2001년 7월 26일에 공개된 이 출원은 10,000∼30,000 공칭 분자량(NMW)의 한외여과 막을 사용한 답토마이신의 발열원제거, 여과 및 농축 방법을 개시하고 있다. 이 출원에는 리포펩티드가 한외여과 막을 통과하는 동안 내독소와 같은 고 분자량 불순물은 여과기로 걸러지는 방법이 개시되어 있다. 막을 통해 리포펩티드를 통과시킨 후에, 리포펩티드가 미셀을 형성하도록 리포펩티드 용액의 pH, 온도 및/또는 염 농도를 바꾼다. 그 다음, 리포펩티드 미셀이 막에 남아있고 더 작은 불순물은 여과기로 통과되는 조건 하에서 한외여과막으로 리포펩티드 용액을 여과시킨다. 이러한 방법으로, 리포펩티드를 추가로 정제한다. 이 출원에는 리포펩티드 미셀이 형성 및 해리될 수 있는 조건과, 더욱 정제된 리포펩티드 응용예를 얻기 위해서 리포펩티드 용액을 여과하는 방법이 개시되어 있다. 더욱 더 바람직한 구체예에서, 리포펩티드는 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드이다. 그 다음 본 명세서에 개시된 바와 같이 리포펩티드를 결정화할 수 있다. 음이온 교환 크로마토그래피 및 크기 배제 한외여과를 모두 실시한 후에, 답토마이신 순도는 약 80∼90%이다. 상기 논의된 바와 같이, 답토마이신 제제에 대해 전술한 결정화/침전 방법을, 바람직하게는 멸균 조건 하에서 실시한다. 그 다음 결정질 또는 결정 유사 답토마이신을 경우에 따라서 회수, 세척, 건조한 다음 사용하여 전 술한 바와 같이 병을 건식 충전시킬 수 있다. 예컨대, 실시예 13 및 도 12 참조. In another embodiment of the present invention, size exclusion ultrafiltration is performed on the daptomycin preparation after anion exchange chromatography. Size exclusion ultrafiltration is disclosed in WO 01/53330. This application, published July 26, 2001, discloses a pyrogen removal, filtration and concentration method of daptomycin using an ultrafiltration membrane of 10,000 to 30,000 nominal molecular weight (NMW). This application discloses a method in which high molecular weight impurities such as endotoxins are filtered through a filter while lipopeptides pass through the ultrafiltration membrane. After passing the lipopeptide through the membrane, the pH, temperature and / or salt concentration of the lipopeptide solution is changed so that the lipopeptide forms micelles. The lipopeptide solution is then filtered through the ultrafiltration membrane under conditions in which lipopeptide micelles remain in the membrane and smaller impurities are passed through the filter. In this way, the lipopeptides are further purified. This application discloses conditions under which lipopeptide micelles can be formed and dissociated, and a method of filtering the lipopeptide solution to obtain more purified lipopeptide applications. In even more preferred embodiments, the lipopeptides are daptomycin or daptomycin related lipopeptides. Lipopeptides can then be crystallized as disclosed herein. After both anion exchange chromatography and size exclusion ultrafiltration, the daptomycin purity is about 80-90%. As discussed above, the aforementioned crystallization / precipitation method for daptomycin formulations is preferably performed under sterile conditions. Crystalline or crystalline like daptomycin may then be recovered, washed, dried and optionally used to dry fill the bottles as described above. See, eg, Example 13 and FIG. 12.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 미정제 답토마이신 제제에 대해 음이온 교환 크로마토그래피를 실시하지 않고 크기 배제 한외여과를 실시한다. 크기 배제 한외여과 후에, 답토마이신 순도는 35∼40%이다. 그 다음 전술한 바와 같이, 바람직하게는 멸균법으로 리포펩티드를 결정화 또는 침전시킬 수 있다. 전술한 바와 같이, 결정질 또는 결정 유사 답토마이신을 경우에 따라서 회수, 세척, 건조한 다음 사용하여 멸균 병을 건식 충전시킬 수 있다. 예컨대, 실시예 15 및 도 14 참조. In another embodiment of the present invention, the crude daptomycin formulation is subjected to size exclusion ultrafiltration without anion exchange chromatography. After size exclusion ultrafiltration, the daptomycin purity is 35-40%. As described above, the lipopeptides can then be crystallized or precipitated, preferably by sterilization. As noted above, crystalline or crystalline like daptomycin may optionally be recovered, washed, dried and then used to dry fill the sterile bottle. See, eg, Example 15 and FIG. 14.

대안적인 구체예에서, 음이온 교환 크로마토그래피 또는 크기 배제 여과 후에, WO 01/53330호 공보에 개시된 바와 같은 소수성 상호작용 크로마토그래피(HIC)로 리포펩티드 제제를 처리한다. 본 명세서에 개시된 바와 같이 리포펩티드를 결정화 또는 침전시킬 수 있다.In an alternative embodiment, after anion exchange chromatography or size exclusion filtration, the lipopeptide preparation is treated with hydrophobic interaction chromatography (HIC) as disclosed in WO 01/53330. Lipopeptides may be crystallized or precipitated as disclosed herein.

결정화 또는 침전 후에, 본 명세서에 개시된 방법, 예컨대 여과 또는 원심분리로 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드를 회수할 수 있다. 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드를 경우에 따라 세척하여 잔류 결정화 또는 침전 용매를 제거한다. 결정 또는 결정 유사 물질의 세척 방법은 하기에 개시되어 있다. 예컨대 실시예 3 참조. 세척되거나 또는 세척되지 않은 결정 또는 결정 유사 물질을 건조할 수 있다. 진공 건조, 분무 건조, 트레이 건조 또는 동결건조를 비롯하여 당업계에 공지된 임의의 방법으로 건조를 실시할 수 있다. 일 구체예에서, 건조는 멸균 조건 하에서 실시된다. 또 다른 구체예에서, 건조는 진공 건조로 실시된다. 더욱 더 바람직한 구체예 에서, 건조는 0.65 m³ Klein Hastelloy-B 버블 콘 진공 건조기 또는 등가의 장치를 사용하여 실시된다. 건조된 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드는 안정하고 보관이 쉽다. After crystallization or precipitation, crystalline or crystal-like lipopeptides can be recovered by methods disclosed herein, such as by filtration or centrifugation. Crystalline or crystalline like lipopeptides are optionally washed to remove residual crystallization or precipitation solvent. Methods of washing crystals or crystal like materials are described below. See eg Example 3. The washed or unwashed crystal or crystal like material may be dried. Drying can be carried out by any method known in the art, including vacuum drying, spray drying, tray drying or lyophilization. In one embodiment, the drying is performed under sterile conditions. In another embodiment, the drying is carried out by vacuum drying. In an even more preferred embodiment, drying is carried out using a 0.65 m ³ Klein Hastelloy-B bubble cone vacuum dryer or equivalent apparatus. Dried crystalline or crystal-like lipopeptides are stable and easy to store.

일 구체예에서, 임의의 통상적인 양의 건조된 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드로 병을 충전한다. 일 구체예에서, 멸균 조건 하에서 병을 충전한 다음 마개로 막았다. 또 다른 구체예에서, 건조된 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 각각 50∼5000 ㎎을 병에 충전한다. 또 다른 구체예에서, 병에는 각각 100∼1000 ㎎을 충전한다. 또 다른 구체예에서, 병에는 각각 200∼500 ㎎을 충전한다. 또 다른 구체예에서, 건조된 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드는 리포펩티드의 대포장(bulk packaging)에 사용된다. 대포장은 일반적으로 건조된 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드를 각각 5000 ㎎ 이상 포함한다. 일 구체예에서, 대포장은 멸균 조건 하에서 실시된다.In one embodiment, the bottle is filled with any conventional amount of dried crystalline or crystalline like lipopeptides. In one embodiment, the bottle is filled and then capped under sterile conditions. In another embodiment, 50-5000 mg each of dried crystalline or crystalline-like lipopeptides is filled into a bottle. In yet another embodiment, the bottles are filled with 100-1000 mg each. In another embodiment, the bottles are filled with 200-500 mg each. In another embodiment, the dried crystalline or crystalline like lipopeptides are used for bulk packaging of the lipopeptides. Large packages generally contain at least 5000 mg of dried crystalline or crystalline like lipopeptides, respectively. In one embodiment, the large package is carried out under sterile conditions.

일 구체예에서, 결정화 또는 침전 단계를 멸균 조건 하에서 실시한다. 이러한 구체예에서, 멸균 결정화 또는 침전 시약과 멸균의 제어된 작업 환경이 사용된다. 일구체예에서, 전술한 바와 같이 한외여과 막에 리포펩티드를 여과시킨 다음 멸균 결정화/침전 시약과 혼합한다. 결정화 또는 침전 후에, 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 제제를 멸균 조건 하에서 원심분리 또는 여과로 수거한다. 일 구체예에서, 리포펩티드 제제를 멸균 여과로 수거한다. 또 다른 구체예에서, 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드를 수거 후에 멸균 처리한다. 멸균 결정화, 침전 및 여과 방법과 최종 약학 생성물의 멸균 방법은 당업계에 공지되어 있다. 예컨대, 본 명세서에서 참고로 인용한 문헌[Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Easton, Pennsylvania: Mack Publishing Company (1995), pp. 1474-1487] 참조. In one embodiment, the crystallization or precipitation step is performed under sterile conditions. In this embodiment, a controlled working environment of sterile crystallization or precipitation reagents and sterile is used. In one embodiment, lipopeptide is filtered through the ultrafiltration membrane as described above and then mixed with sterile crystallization / precipitation reagent. After crystallization or precipitation, the crystalline or crystal-like lipopeptide formulation is collected by centrifugation or filtration under sterile conditions. In one embodiment, the lipopeptide formulation is collected by sterile filtration. In another embodiment, the crystalline or crystalline like lipopeptides are sterilized after harvesting. Sterile crystallization, precipitation and filtration methods and sterilization methods of the final pharmaceutical product are known in the art. See, eg, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Easton, Pennsylvania: Mack Publishing Company (1995), pp. 1474-1487.

또 다른 구체예에서, 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드는 건조되지 않는다. 이 구체예에서, 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드는 리포펩티드의 결정질 또는 결정 유사 특성을 보존하는 용액 중에서 보관하는 것이 바람직하다. 멸균 또는 비멸균 조건 하에서 리포펩티드와 용액으로 병을 충전할 수 있다. 일 구체예에서, 조건은 멸균 조건이다. 대안적으로, 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드와 용액을 사용하여 대포장을 충전할 수 있다.In another embodiment, the crystalline or crystalline like lipopeptides are not dried. In this embodiment, the crystalline or crystal-like lipopeptides are preferably stored in a solution that preserves the crystalline or crystal-like properties of the lipopeptides. Bottles can be filled with lipopeptides and solutions under sterile or non-sterile conditions. In one embodiment, the conditions are sterile conditions. Alternatively, large packages may be filled using crystalline or crystalline like lipopeptides and solutions.

도 10 및 도 11은 결정화를 이용한 예시적인 답토마이신 제조 프로토콜을 개시하는 공정도이다. 제조 프로토콜에 멸균 결정화 단계를 도입하면 프로토콜이 상당히 단축되고, 공정의 3∼4 단계가 생략된다.10 and 11 are process diagrams illustrating an exemplary daptomycin preparation protocol using crystallization. Incorporating a sterile crystallization step into the preparation protocol significantly shortens the protocol and omits steps 3-4 of the process.

결정질 또는 결정 유사 리포펩티드, 약학 조성물 및 이의 사용 방법Crystalline or crystalline like lipopeptides, pharmaceutical compositions and methods of using the same

본 발명의 또 다른 목적은 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 또는 이의 염과, 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 또는 이의 염을 포함하는 약학 제제를 제공하는 것이다. 일 구체예에서, 결정질 또는 결정질 유사 리포펩티드는 답토마이신이다. 그러나, 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드에 대한 본 명세서의 모든 참고 문헌은 전술한 바와 같이 구체적으로 답토마이신, 답토마이신 관련 분자, 예컨대 특히 답토마이신, A54145 및 답토마이신 관련 리포펩티드를 포함한다. It is another object of the present invention to provide a pharmaceutical formulation comprising crystalline or crystalline like lipopeptides or salts thereof and crystalline or crystalline like lipopeptides or salts thereof. In one embodiment, the crystalline or crystalline like lipopeptides are daptomycin. However, all references herein to crystalline or crystalline like lipopeptides specifically include daptomycin, daptomycin related molecules, such as especially daptomycin, A54145 and daptomycin related lipopeptides, as described above.

답토마이신 결정 또는 결정 유사 입자와 기타 리포펩티드 결정 또는 결정 유 사 입자는, 특히 침상형, 판형, 욋가지형, 이심형, 성게형 또는 막대형 등의 형상을 가질 수 있다. 일 구체예에서, 답토마이신 결정 또는 결정 유사 입자는 성게형, 침상형 또는 막대형이다. 결정 또는 결정 유사 입자의 크기는 약 0.5 ㎛ 내지 100 ㎛ 이상이다. 일구체예에서, 입자 크기는 5 ㎛ 이상이다. 더욱 바람직한 구체예에서, 입자 크기는 10 ㎛ 이상, 더욱 바람직하게는 50 ㎛ 이상이다. 더욱 더 바람직한 구체예에서, 입자 크기는 100 ㎛ 이상이다. The daptomycin crystal or crystal-like particle and other lipopeptide crystal or crystal-like particles may have, in particular, needle-like, plate-shaped, wedge-shaped, eccentric, sea urchin or rod-like shapes. In one embodiment, the daptomycin crystal or crystal like particle is sea urchin, needle-like, or rod-shaped. The size of the crystal or crystal like particle is about 0.5 μm to 100 μm or more. In one embodiment, the particle size is at least 5 μm. In a more preferred embodiment, the particle size is at least 10 μm, more preferably at least 50 μm. In even more preferred embodiments, the particle size is at least 100 μm.

또한, 일 구체예에서, 답토마이신 결정은 도 6, 7 및 8에 도시된 x-선 회절 패턴을 갖는다. 또 다른 구체예에서, 리포펩티드 결정의 융점은 리포펩티드 비정질 형태와 다르다. Also, in one embodiment, the daptomycin crystal has the x-ray diffraction pattern shown in FIGS. 6, 7 and 8. In another embodiment, the melting point of the lipopeptide crystal is different from the lipopeptide amorphous form.

본 발명의 일 구체예에서, 리포펩티드 결정질 형태의 안정성은 리포펩티드 비정질 형태의 안정성과 유사하거나 더 크다. 바람직한 구체예에서, 결정질 형태는 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드이다. 또 다른 바람직한 구체예에서, 결정질 리포펩티드는 멸균되어 있다. 또 다른 바람직한 구체예에서, 결정질 리포펩티드의 안정성은 리포펩티드의 비정질 형태보다 크다. 결정질 리포펩티드는 비정질 형태보다 열, 빛, 분해 또는 습도에 대한 안정성이 높을 수 있다. 리포펩티드의 안정성은, 예컨대 항생제 활성, 리포펩티드 분해 또는 답토마이신의 무수-답토마이신 또는 답토마이신 β-이성체로의 전환 등을 비롯한 임의의 수단으로 측정할 수 있다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 리포펩티드의 결정질 형태는 리포펩티드의 비정질 형태보다 수용액 내에서 더욱 신속하게 재구성될 수 있다. In one embodiment of the invention, the stability of the lipopeptide crystalline form is similar to or greater than the stability of the lipopeptide amorphous form. In a preferred embodiment, the crystalline form is daptomycin or daptomycin related lipopeptides. In another preferred embodiment, the crystalline lipopeptides are sterile. In another preferred embodiment, the stability of the crystalline lipopeptides is greater than the amorphous form of the lipopeptides. Crystalline lipopeptides can be more stable against heat, light, degradation or humidity than amorphous forms. The stability of the lipopeptide can be measured by any means, including, for example, antibiotic activity, lipopeptide degradation or conversion of daptomycin to anhydrous-daptomycin or daptomycin β-isomer. In another embodiment of the invention, the crystalline form of the lipopeptide can be reconstituted more rapidly in aqueous solution than the amorphous form of the lipopeptide.

결정질 또는 결정 유사 리포펩티드, 예컨대 답토마이신 또는 답토마이신 관 련 리포펩티드, 약학적 허용염, 에스테르, 아미드, 에테르 및 이의 보호형을, 질병, 특히 세균 감염의 처치, 실험 또는 예방 치료를 위해 경구, 정맥내, 근육내, 피하, 에어로졸, 국소 또는 비경구 투여용으로 제형화할 수 있다. 본 명세서에서 "결정질 또는 결정 유사 리포펩티드" 또는 "결정질 또는 결정 유사 답토마이신"은 이의 약학적 허용염을 포함한다. 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드, 예컨대 답토마이신은, 경구 전달용의 편리한 장용제피 리포펩티드 제제, 예컨대 폐로의 에어로졸 전달용의 약학 조성물 및 서방형 리포펩티드 배합물 제제를 가능하게 하는, 미크론 크기의 미소구 입자로 쉽게 제형화할 수 있기 때문에 약학 조성물에 사용하기 특히 유리할 수 있다. 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 및 결정질 또는 결정 유사 답토마이신을 수용액 중에 더욱 쉽게 용해시킬 수 있다.Crystalline or crystalline like lipopeptides such as daptomycin or daptomycin related lipopeptides, pharmaceutically acceptable salts, esters, amides, ethers and their protective forms, orally, for the treatment, experimental or prophylactic treatment of diseases, in particular bacterial infections. It may be formulated for intravenous, intramuscular, subcutaneous, aerosol, topical or parenteral administration. As used herein, "crystalline or crystalline like lipopeptides" or "crystalline or crystalline like daptomycin" includes pharmaceutically acceptable salts thereof. Crystalline or crystalline like lipopeptides, such as daptomycin, are micron-sized microsphere particles that allow convenient enteric-derived lipopeptide formulations for oral delivery, such as pharmaceutical compositions for aerosol delivery to the lung and sustained release lipopeptide combination formulations. It can be particularly advantageous for use in pharmaceutical compositions because it can be easily formulated. Crystalline or crystalline like lipopeptides and crystalline or crystalline like daptomycin can be more readily dissolved in aqueous solutions.

결정질 또는 결정 유사 리포펩티드, 예컨대 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드는, 해당 리포펩티드 또는 답토마이신과 상용성인 임의의 약학적 허용 담체 또는 부형제를 사용하여 제형화할 수 있다. 인간 요법을 위한 각종 항균제를 투여하는 방법에 대한 일반적인 설명에 대해서는, 예컨대 문헌[Handbook of Pharmaceutical Additives: An International Guide to More than 6000 Products by Trade Name, Chemical, Function, and Manufacturer, Ashgate Publishing Co., eds., M. Ash and I. Ash, 1996; The Merck Index: An Encyclopedia of Chemicals, Drugs and Biologicals, ed. S. Budavari, annual; Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA; Martindale: The Complete Drug Reference, ed. K Parfitt, 1999; and Goodman & Gilman's The Pharmaceutical Basis of Therapeutics, Pergamon Press, New York, NY, ed. L. S. Goodman et al.: 이들 문헌의 내용은 본 명세서에서 참고 인용됨] 참조. 본 발명의 화합물을 종래의 약학적 담체 및 부형제와 혼합하여, 정제, 캡슐, 엘릭시르, 현탁액, 시럼, 오블라토, 크림 등의 형태로 사용할 수 있다. 본 발명의 화합물을, 본 명세서에 개시된 바와 같은 다른 치료제 및 항생제와 혼합할 수 있다. 본 발명의 화합물을 포함하는 조성물은 활성 화합물을 약 0.1∼약 90 중량%, 더욱 일반적으로는 약 10∼약 30 중량% 포함한다.Crystalline or crystalline like lipopeptides such as daptomycin or daptomycin related lipopeptides can be formulated using any pharmaceutically acceptable carrier or excipient compatible with the lipopeptides or daptomycins. For a general description of how to administer various antimicrobials for human therapy, see, for example, Handbook of Pharmaceutical Additives: An International Guide to More than 6000 Products by Trade Name, Chemical, Function, and Manufacturer, Ashgate Publishing Co., eds ., M. Ash and I. Ash, 1996; The Merck Index: An Encyclopedia of Chemicals, Drugs and Biologicals, ed. S. Budavari, annual; Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA; Martindale: The Complete Drug Reference, ed. K Parfitt, 1999; and Goodman & Gilman's The Pharmaceutical Basis of Therapeutics, Pergamon Press, New York, NY, ed. L. S. Goodman et al .: The contents of these documents are incorporated herein by reference. The compounds of the present invention can be mixed with conventional pharmaceutical carriers and excipients and used in the form of tablets, capsules, elixirs, suspensions, serums, oblates, creams and the like. The compounds of the present invention can be mixed with other therapeutic and antibiotic agents as disclosed herein. Compositions comprising a compound of the present invention comprise from about 0.1% to about 90%, more generally from about 10% to about 30% by weight of the active compound.

제어형(예, 캡슐) 또는 서방형 전달계(예, 생분해성 매트릭스)를 사용하여 본 발명의 조성물을 전달할 수 있다. 본 발명의 조성물 투여에 적절한 약물 전달용 지연 방출형 전달계의 예는 미국 특허 4,452,775호(Kent), 5,239,660호(Leonard), 3,854,480호(Zaffaroni)에 개시되어 있다.Controlled (eg, capsule) or sustained release delivery systems (eg, biodegradable matrices) can be used to deliver the compositions of the present invention. Examples of delayed release delivery systems for drug delivery suitable for administration of the compositions of the present invention are disclosed in US Pat. Nos. 4,452,775 (Kent), 5,239,660 (Leonard), 3,854,480 (Zaffaroni).

조성물은 옥수수 전분 또는 젤라틴, 락토스, 수크로스, 미정질 셀룰로스, 카올린, 만니톨, 인산2칼슘, 염화나트륨 및 알긴산 등의 일반적인 담체 및 부형제를 포함할 수 있다. 조성물은 크로스카르멜로스 나트륨, 미정질 셀룰로스, 옥수수 전분, 나트륨 전분 글리콜레이트 및 알긴산을 포함할 수 있다.The composition may include corn starch or common carriers and excipients such as gelatin, lactose, sucrose, microcrystalline cellulose, kaolin, mannitol, dicalcium phosphate, sodium chloride and alginic acid. The composition may comprise croscarmellose sodium, microcrystalline cellulose, corn starch, sodium starch glycolate and alginic acid.

포함될 수 있는 정제 결합제로는 아카시아, 메틸셀룰로스, 나트륨 카르복시메틸셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈(Povidone), 히드록시프로필 메틸셀룰로스, 수크로스, 전분 및 에틸셀룰로스 등이 있다. Tablet binders that may be included include acacia, methylcellulose, sodium carboxymethylcellulose, polyvinylpyrrolidone (Povidone), hydroxypropyl methylcellulose, sucrose, starch, ethylcellulose and the like.

사용할 수 있는 윤활제로는 스테아르산마그네슘 또는 기타 금속 스테아레이트, 스테아르산, 실리콘 유체, 탈크, 왁스, 오일 및 콜로이드 실리카 등이 있다. Lubricants that can be used include magnesium stearate or other metal stearates, stearic acid, silicone fluids, talc, waxes, oils, and colloidal silica.

페퍼민트, 노루발풀 오일, 체리향 등의 착향제를 사용할 수 있다. 착색제를 첨가하여 제형의 외관을 더욱 아름답게 하거나 제품의 확인을 보조하는 것이 바람직할 수 있다. Flavoring agents, such as peppermint, presser oil, and cherry flavor, can be used. It may be desirable to add colorants to make the appearance of the formulation more beautiful or to aid in the identification of the product.

경구용으로서, 정제와 캡슐 등의 고형 제제가 특히 유용하다. 서방향 또는 장용제피 제제를 고안할 수 있다. 또 다른 구체예에서, 리포펩티드의 경구 이용율을 증가시키는 담체 조성물과 함께 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드를 공급할 수 있다. 바람직한 구체예에서, 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드는 답토마이신이다. 소아과 및 노인과용으로, 현탁액, 시럽 및 씹을 수 있는 정제가 특히 적절하다. 경구 투여용 약학 조성물은, 예컨대 정제, 캡슐, 현탁액 또는 액체 형태이다. 약학 조성물은 치료 유효량의 활성 성분을 함유하는 용량 단위 형태로 제조되는 것이 좋다. 이러한 용량 단위의 예는 정제 및 캡슐이다. 치료를 위해서, 정제 및 캡슐은 활성 성분 외에 통상의 담체, 예를 들어 결합제, 예컨대 아카시아검, 젤라틴, 폴리비닐피롤리돈, 소르비톨 또는 트라가칸스; 충전제, 예컨대 인산칼슘, 글리신, 락토스, 옥수수 전분, 소르비톨 또는 수크로스; 윤활제, 예컨대 스테아르산마그네슘, 폴리에틸렌 글리콜, 실리카 또는 탈크; 붕해제, 예컨대 감자 전분, 착향제 또는 착색제, 또는 허용가능한 습윤제를 포함할 수 있다. 경구용 액상 제제는 일반적으로 수성 또는 유성 용액, 현탁액, 에멀젼, 시럽 또는 엘렉시르 형태이며, 현탁제, 유화제, 비수성제, 보존제, 착색제 및 착향제 등의 통상적인 첨가제를 포함할 수 있다. 경구용 액상 제제는 리포펩티드 미셀 또는 리포펩티드의 단량체 형태를 포함할 수 있다. 액상 제제용 첨가제의 예로는 아카시아, 아몬드 오일, 에틸 알코올, 증류 된 코코넛 오일, 젤라틴, 글루코스 시럽, 글리세린, 식용 경화지방, 레시틴, 메틸 셀룰로스, 메틸 또는 프로필 파라-히드록시벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 소르비톨 또는 소르브산 등이 있다.As oral use, solid preparations such as tablets and capsules are particularly useful. Slow or enteric formulations may be devised. In another embodiment, crystalline or crystalline like lipopeptides can be supplied with a carrier composition that increases the oral availability of the lipopeptide. In a preferred embodiment, the crystalline or crystalline like lipopeptides are daptomycin. For pediatric and geriatrics, suspensions, syrups and chewable tablets are particularly suitable. Pharmaceutical compositions for oral administration are, for example, in tablet, capsule, suspension or liquid form. The pharmaceutical composition is preferably prepared in the form of a dosage unit containing a therapeutically effective amount of the active ingredient. Examples of such dosage units are tablets and capsules. For treatment, tablets and capsules may be used in addition to the active ingredient in conventional carriers, for example binders such as acacia gum, gelatin, polyvinylpyrrolidone, sorbitol or tragacanth; Fillers such as calcium phosphate, glycine, lactose, corn starch, sorbitol or sucrose; Lubricants such as magnesium stearate, polyethylene glycol, silica or talc; Disintegrating agents such as potato starch, flavoring or coloring agents, or acceptable wetting agents. Oral liquid preparations are generally in the form of aqueous or oily solutions, suspensions, emulsions, syrups or elixirs and may include conventional additives such as suspending, emulsifying, non-aqueous, preservative, coloring and flavoring agents. Oral liquid preparations may include lipopeptide micelles or monomeric forms of lipopeptides. Examples of additives for liquid formulations include acacia, almond oil, ethyl alcohol, distilled coconut oil, gelatin, glucose syrup, glycerin, edible hardened fats, lecithin, methyl cellulose, methyl or propyl para-hydroxybenzoate, propylene glycol, sorbitol Or sorbic acid.

정맥내(IV) 투여용으로 사용하기 위해서, 본 발명의 화합물의 수용성 형태를 통상 사용되는 정맥내 유체 중 임의의 유체 중에 용해시키고, 주입으로 투여할 수 있다. 정맥내 제제는 담체, 부형체 또는 안정화제, 비제한적인 예로서 칼슘, 인간 혈청 알부민, 시트레이트, 아세테이트, 염화칼슘, 카보네이트 및 기타 염을 포함할 수 있다. 정맥내 유체의 비제한적인 예로는 생리 식염수 또는 링거액 등이 있다. 답토마이신 또는 기타 리포펩티드는 주사기, 캐뉼라, 카테터 및 라인 내에 둘 수 있다. For use for intravenous (IV) administration, the water soluble forms of the compounds of the invention may be dissolved in any of the commonly used intravenous fluids and administered by infusion. Intravenous preparations may include carriers, excipients or stabilizers, including but not limited to calcium, human serum albumin, citrate, acetate, calcium chloride, carbonate and other salts. Non-limiting examples of intravenous fluids include physiological saline or Ringer's solution. Daptomycin or other lipopeptides can be placed in syringes, cannulas, catheters and lines.

비경구 투여용 제제는 수성 또는 비수성 등장 멸균 주사 용액 또는 현탁액의 형태일 수 있다. 이들 용액 또는 현탁액은, 경구 투여용 배합물 중에 사용하기 위해 언급된 1 이상의 담체를 포함하는 멸균 산제 또는 과립의 형태로부터 제조될 수 있다. 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드를 폴리에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 에탄올, 옥수수 오일, 벤질 알코올, 염화나트륨 및/또는 각종 완충액에 용해시킬 수 있다. 근육내, 비경구 또는 정맥내 제제용으로서, 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 화합물의 멸균 배합물 또는 상기 화합물의 적절한 가용성 염, 예컨대 염산염을 주사용 물(WFI), 생리 식염수 또는 5% 글루코스와 같은 약학적 희석제에 용해시켜 투여할 수 있다. 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드의 적절한 불용성 형태를 수성 기제 또는 약학적 허용 오일 기제(예, 에틸 올레이트와 같은 장쇄 지방산의 에스테르) 중의 현탁액으로서 제조하여 투여할 수 있다. Formulations for parenteral administration may be in the form of aqueous or non-aqueous isotonic sterile injectable solutions or suspensions. These solutions or suspensions may be prepared from the form of sterile powders or granules comprising one or more of the carriers mentioned for use in the formulation for oral administration. Crystalline or crystalline like lipopeptides can be dissolved in polyethylene glycol, propylene glycol, ethanol, corn oil, benzyl alcohol, sodium chloride and / or various buffers. For intramuscular, parenteral or intravenous preparations, a sterile blend of crystalline or crystalline like lipopeptide compounds or appropriate soluble salts of such compounds, such as hydrochloride, is prepared by pharmaceutical preparation such as water for injection (WFI), physiological saline or 5% glucose. It can be administered by dissolving in diluent. Suitable insoluble forms of crystalline or crystalline like lipopeptides can be prepared and administered as suspensions in an aqueous base or a pharmaceutically acceptable oil base (eg, esters of long chain fatty acids such as ethyl oleate).

폴리락티드-폴리글리콜리드와 같은 생분해성 중합체 중 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드의 미세캡슐화 매트릭스를 형성하여 주사성 데포우(depot) 형태를 제조할 수 있다. 약물 대 중합체의 비율과 사용된 특정 중합체의 성질에 따라서, 약물 방출 속도를 제어할 수 있다. 기타 생분해성 중합체의 예로는 폴리(오르토에스테르) 및 폴리(무수물) 등이 있다. 데포우 주사성 제제는, 체조직과 적합성인 마이크로에멀젼 중에 약물을 포집시켜 제조한다.Injectable depot forms can be prepared by forming microencapsulated matrices of crystalline or crystal-like lipopeptides in biodegradable polymers such as polylactide-polyglycolide. Depending on the ratio of drug to polymer and the nature of the particular polymer used, the rate of drug release can be controlled. Examples of other biodegradable polymers include poly (orthoesters) and poly (anhydrides). Depot injectable preparations are prepared by entrapping the drug in a microemulsion that is compatible with body tissues.

국소용으로 사용하기 위해서, 본 발명의 화합물은 피부, 또는 코와 목의 점막에 도포하기에 적절한 형태로 제조될 수 있으며, 크림, 연고, 액체 스프레이 또는 흡입제, 로젠즈, 또는 인후 도포물의 형태를 취할 수 있다. 이러한 국소용 제제는 활성 성분의 표면 침투를 촉진하는 디메틸설폭시드(DMSO)와 같은 화학적 화합물을 더 포함할 수 있다. 국소용 제제의 경우, 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드, 예컨대 결정질 또는 결정 유사 답토마이신, 이의 적절한 염의 형태를 포함하는 멸균 배합물은 크림, 연고, 스프레이 또는 기타 국소용 외과 처치 연고로 투여할 수 있다. 또한, 국소 제제는 리포펩티드 조성물로 함침시킨 붕대의 형태일 수 있다. For topical use, the compounds of the present invention may be prepared in a form suitable for application to the skin or mucous membranes of the nose and throat and may be in the form of creams, ointments, liquid sprays or inhalants, lozenges, or throat coatings. Can be taken. Such topical formulations may further comprise a chemical compound, such as dimethylsulfoxide (DMSO), which promotes surface penetration of the active ingredient. For topical formulations, sterile formulations comprising crystalline or crystalline like lipopeptides, such as crystalline or crystalline like daptomycin, suitable salts thereof, may be administered as creams, ointments, sprays or other topical surgical treatment ointments. The topical formulation can also be in the form of a bandage impregnated with the lipopeptide composition.

안구 또는 귀에 사용하기 위해서, 본 발명의 화합물은 연고, 크림, 로션, 도포제 또는 산제와 같이 소수성 또는 친수성 기제 중에 배합된 액체 또는 반액체 형태로 제공될 수 있다. For use in the eye or ear, the compounds of the present invention may be provided in liquid or semi-liquid form formulated in hydrophobic or hydrophilic bases such as ointments, creams, lotions, applicators or powders.

직장 투여용으로서, 본 발명의 화합물은 코코아 버터, 왁스 또는 기타 글리세라이드와 같은 종래의 담체와 혼합된 좌약의 형태로 투여될 수 있다. For rectal administration, the compounds of the present invention may be administered in the form of suppositories mixed with conventional carriers such as cocoa butter, wax or other glycerides.

에어로졸 제제의 경우, 계량형 흡입기 및 네블라이저와 같은 흡입기 중에서 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 또는 이 화합물의 염 형태의 멸균 제제를 이용할 수 있다. 분무형은 폐 및 동(sinus)-계열의 감염과 같은 호흡기 감염을 치료하는 데 특히 유용할 수 있다.For aerosol formulations, sterile formulations in the form of crystalline or crystalline like lipopeptides or salts of these compounds can be used in inhalers such as metered dose inhalers and nebulizers. Spray forms may be particularly useful for treating respiratory infections such as lung and sinus-family infections.

대안적으로, 본 발명의 화합물은 전달시 적절한 약학적 허용 담체 중에서 재구성하기 위한 분말 결정질 또는 결정 유사 형태일 수 있다. 또 다른 구체예에서, 화합물의 단위 제형은 화합물 또는 이의 염을 적절한 희석제에 용해시켜 멸균의 반구형 밀봉 앰플에 넣은 용액일 수 있다. 단위 제형 중 화합물의 농도는 사용된 화합물과 이의 용해도 및 의사가 원하는 용량에 따라서, 예컨대 약 1∼약 50%로 다양할 수 있다. 조성물이 용량 단위를 포함하는 경우, 각 용량 단위는 활성 물질 약 10∼5000 ㎎, 더욱 바람직하게는 50∼1000 ㎎, 더욱 더 바람직하게는 100∼500 ㎎을 포함한다. 성인 치료의 경우, 사용되는 용량은 투여 경로 및 빈도에 따라서 1일 100 ㎎∼3 g이 바람직하다. Alternatively, the compounds of the present invention may be in powder crystalline or crystalline like form for reconstitution in a suitable pharmaceutically acceptable carrier upon delivery. In another embodiment, the unit dosage form of the compound may be a solution of the compound or salt thereof dissolved in a suitable diluent and placed in a sterile hemispherical sealing ampoule. The concentration of the compound in the unit dosage form may vary, for example from about 1 to about 50%, depending on the compound used and its solubility and the dosage desired by the physician. If the composition comprises dosage units, each dosage unit comprises about 10-5000 mg, more preferably 50-1000 mg, even more preferably 100-500 mg of the active substance. For adult treatment, the dosage used is preferably 100 mg to 3 g per day, depending on the route and frequency of administration.

추가의 측면에서, 본 발명은 피험체에서 그람 양성균에 의해 유발되는 감염을 치료하는 방법을 제공한다. 바람직한 구체예에서, 이 방법을 사용하여 그람 양성균이 유발하는 감염을 치료할 수 있다. 용어 "치료"는 피험체에게 본 발명의 화합물의 치료 유효량을 투여하여 감염 발생을 예방하고 감염(예, 확립된 감염)을 제어하거나 없애는 것을 의미한다. 본 명세서에서 사용된 용어 "피험체"는 포유류, 식물 또는 세포 배양물로서 정의된다. 본 명세서에서 용어 "치료 유효량"은 세균 감염의 개시를 예방하거나, 증상을 경감시키거나 또는 진행을 중단시키는 본 발명 의 답토마이신, 답토마이신 관련 리포펩티드 또는 기타 항균 리포펩티드의 양을 의미한다. 바람직한 구체예에서, 피험체는 리포펩티드 치료를 필요로 하는 인간 또는 기타 동물 환자이다. 확립된 감염은 급성 또는 만성일 수 있다. 유효량은 일반적으로 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드, 예컨대 결정질 또는 결정 유사 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드, 또는 이의 약학적 허용염 1 kg당 약 0.1∼약 75 ㎎이다. 바람직한 용량은 결정질 또는 결정 유사 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드, 또는 이의 약학적 허용염 1 kg당 약 1∼약 25 ㎎이다. 더욱 바람직한 용량은 결정질 또는 결정 유사 답토마이신, 결정질 또는 결정 유사 답토마이신 관련 리포펩티드, 또는 이의 약학적 허용염 1 kg당 약 1∼12 ㎎이다. 더욱 더 바람직한 용량은 결정질 또는 결정 유사 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드, 또는 이의 약학적 허용염 1 kg당 약 3∼8 ㎎이다. 항균제를 전달하는 예시적인 절차는 미국 특허 5,041,567호(Rogers) 및 국제 PCT 공개 공보 WO 95/05384호에 개시되어 있으며, 이들 문헌은 그 전문이 참고로 인용된다.In a further aspect, the invention provides a method of treating an infection caused by Gram-positive bacteria in a subject. In a preferred embodiment, this method can be used to treat infection caused by Gram-positive bacteria. The term "treatment" means administering to a subject a therapeutically effective amount of a compound of the invention to prevent the occurrence of an infection and to control or eliminate an infection (eg, an established infection). The term "subject" as used herein is defined as a mammalian, plant or cell culture. As used herein, the term "therapeutically effective amount" means the amount of daptomycin, daptomycin-associated lipopeptides or other antimicrobial lipopeptides of the present invention that prevents the onset of bacterial infections, alleviates symptoms or stops progression. In a preferred embodiment, the subject is a human or other animal patient in need of lipopeptide treatment. The established infection can be acute or chronic. An effective amount is generally from about 0.1 to about 75 mg per kg of crystalline or crystalline like lipopeptides, such as crystalline or crystalline like daptomycin or daptomycin related lipopeptides, or pharmaceutically acceptable salts thereof. Preferred doses are from about 1 to about 25 mg / kg of crystalline or crystalline like daptomycin or daptomycin related lipopeptides, or pharmaceutically acceptable salts thereof. More preferred doses are about 1-12 mg per kg of crystalline or crystalline like daptomycin, crystalline or crystalline like daptomycin related lipopeptides, or pharmaceutically acceptable salts thereof. Even more preferred doses are about 3-8 mg / kg of crystalline or crystalline like daptomycin or daptomycin related lipopeptides, or pharmaceutically acceptable salts thereof. Exemplary procedures for delivering antimicrobials are disclosed in US Pat. No. 5,041,567 (Rogers) and International PCT Publication No. WO 95/05384, which are incorporated by reference in their entirety.

결정질 또는 결정 유사 리포펩티드, 예컨대 답토마이신을 1일 1회 용량 또는 1일 다회 용량으로 투여할 수 있다. 치료법에서는 연장 기간 동안, 예컨대 수일 동안 또는 2∼4주 동안 투여해야 할 수 있다. 1회 투여량 또는 총 투여량은 감염의 특성 및 경중, 환자의 연령 및 일반적인 건강 상태, 환자의 리포펩티드에 대한 관용성과 감염과 관련된 미생물(들) 등의 인자에 따라서 달라진다. 투여 방법은 본 명세서에서 참고로 인용한 WO 00/18419호(2000년 4월 6일 공개)에 개시되어 있다. Crystalline or crystalline like lipopeptides, such as daptomycin, may be administered in a single daily dose or in multiple daily doses. Therapies may require administration for extended periods of time, such as days or for 2-4 weeks. Dosage or total dose will vary depending on factors such as the nature and severity of the infection, the age and general health of the patient, the patient's tolerance to lipopeptides and the microorganism (s) associated with the infection. Methods of administration are disclosed in WO 00/18419, published April 6, 2000, incorporated herein by reference.

본 발명의 방법은 본 발명의 화합물 또는 이의 약학 조성물을 그람 양성균 감염을 줄이거나 또는 제거하는 데 효과적인 양으로 필요한 환자에게 투여하는 것을 포함한다. 리포펩티드는 경구, 비경구, 흡입, 국소, 직장, 비강, 협측, 질, 또는 이식 저장소, 외부 펍프 또는 카테터로 투여될 수 있다. 안과용 또는 분무용으로 리포펩티드를 제조할 수 있다. The methods of the present invention comprise administering a compound of the present invention or a pharmaceutical composition thereof to a patient in need thereof in an amount effective to reduce or eliminate Gram-positive bacteria infection. Lipopeptides may be administered orally, parenterally, inhaled, topically, rectally, nasal, buccal, vaginal, or in implantable reservoirs, external pubs or catheters. Lipopeptides can be prepared for ophthalmic use or for spraying.

본 발명의 화합물 또는 이의 약학 조성물을 농양, 실(ventricle) 또는 관절에 직접 주사 또는 투여할 수 있다. 비경구 투여는 피하, 정맥내, 근육내, 관절내, 활액내, 수조, 경막내, 간내, 병변내 및 두개내 주사 또는 주입을 포함한다. 바람직한 구체예에서, 결정질 또는 결정 유사 답토마이신, 답토마이신 관련 리포펩티드 또는 기타 리포펩티드를 정맥내, 피하 또는 경구 투여한다. The compounds of the present invention or pharmaceutical compositions thereof may be injected or administered directly into the abscess, ventricle or joint. Parenteral administration includes subcutaneous, intravenous, intramuscular, intraarticular, synovial, bath, intradural, intrahepatic, intralesional and intracranial injections or infusions. In a preferred embodiment, crystalline or crystal-like daptomycin, daptomycin related lipopeptides or other lipopeptides are administered intravenously, subcutaneously or orally.

본 발명의 방법을 이용하여 임의의 종류의 그람 양성균에 의해 감염이 유발되거나 악화된 세균 감염 환자를 치료할 수 있다. 바람직한 구체예에서, 결정질 또는 결정 유사 답토마이신, 답토마이신 관련 리포펩티드 또는 기타 리포펩티드, 또는 이의 약학 조성물을 본 발명의 방법에 따라 환자에게 투여한다. 또 다른 구체예에서, 비제한적인 예로서 메티실린 감수성 및 메티실린 내성 스타필로코커스[예, 스타필로코커스 아우레우스, 스타필로코커스 에피더미스(Staphylococcus epidermidis), 스타필로코커스 해몰티커스(Staphylococcus haemolyticus), 스타필로코커스 호미니스(Staphylococcus hominis), 스타필로코커스 사프로피티커스(Staphylococcus saprophyticus), 및 코아귤라제-음성 스타필로코커스], 글리코펩티드 중재 감수성 스타필로코커스 아우레우스 (GISA), 페니실린 감수성 및 페니실린 내성 스트렙토코커스[예, 스트렙토코커스 뉴모니아, 스트렙토코커스 피오젠 스(Streptococcus pyogenes), 스트렙토코커스 아갈락티아(Streptococcus agalactiae), 스트렙토코커스 아비움(Streptococcus avium), 스트렙토코커스 보비스(Streptococcus bovis), 스트렙토코커스 락티스(Streptococcus lactis), 스트렙토코커스 산기우스(Streptococcus sangius) 및 스트렙토코커스 그룹 C, 스트렙토코커스 그룹 G 및 비리단스 스트렙토코커스], 엔테로코커스[예, 바나코마이신 감수성 및 바나코마이신 내성 균주, 예컨대 엔테로코커스 패칼리스(Enterococcus faecalis) 및 엔테로코커스 패시움(Enterococcus faecium)], 클로스트리디움 디피실(Clostridium difficile), 클로스트리디움 클로스트리디포르메(Clostridium clostridiiforme), 클로스트리디움 이노쿰(Clostridium innocuum), 클로스트리디움 페르프린젠스(Clostridium perfringens), 클로스트리디움 라모섬(Clostridium ramosum), 헤모필러스 인플루엔자(Haemophilus influenzae), 리스테리아 모노시토젠스(Listeria monocytogenes), 코리네박테리움 제이케이움(Corynebacterium jeikeium), 비피도박테리아 종(Bifidobacterium spp.), 유박테리움 애로파시엔스(Eubacterium aerofaciens), 유박테리움 렌툼(Eubacterium lentum), 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacilllus plantarum), 락토코커스 종(Lactococcus spp.), 류코노스톡 종(Leuconostoc spp.), 페디오코커스(Pediococcus), 펩토스트렙토코커스 안애로비우스(Peptostreptococcus anaerobius), 펩토스트렙토코커스 아사카로리티커스(Peptostreptococcus asaccarolyticus), 펩토스트렙토코커스 마그너스(Peptostreptococcus magnus), 펩 토스트렙토코커스 마이크로스(Peptostreptococcus micros), 펩토스트렙토코커스 프레보티(Peptostreptococcus prevotii), 펩토스트렙토코커스 프로덕터스(Peptostreptococcus productus), 프로피오니박테리움 아신스(Propionibacterium acnes), 및 악티노마이시스 종(Actinomyces spp.) 등의 균에 의해 세균 감염이 유발 또는 악화될 수 있다. The method of the present invention can be used to treat bacterial infection patients caused or exacerbated by any type of Gram-positive bacteria. In a preferred embodiment, crystalline or crystalline like daptomycin, daptomycin related lipopeptides or other lipopeptides, or pharmaceutical compositions thereof are administered to a patient in accordance with the methods of the present invention. In another embodiment, non-limiting examples include methicillin sensitive and methicillin resistant Staphylococcus (eg, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis , Staphylococcus Hamilticus) haemolyticus ), Staphylococcus hominis , Staphylococcus saprophyticus , and Coagulase-negative Staphylococcus], glycopeptide-mediated susceptible Staphylococcus aureus (GISA), penicillin-susceptible and penicillin-resistant Streptococcus Yes, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus Pio Jen's (Streptococcus pyogenes), Streptococcus Agar Rock Corsica (Streptococcus agalactiae), Streptococcus Oh Away (Streptococcus avium), Streptococcus Bovis (Streptococcus bovis), Streptococcus lactis (Streptococcus lactis), streptomycin Coarse divider mouse (Streptococcus sangius) and Streptococcus group C, Streptococcus group G, and irregularities thiooxidans Streptococcus], Enterococcus EXAMPLE, bar or coma, who is susceptible and bar or coma, who is resistant strains such as Enterococcus faecalis (Enterococcus faecalis), and Enterococcus faecium ], Clostridium difficile , Clostridium clostridiiforme , Clostridium innocuum , Clostridium perfringens , Clostridium ramosum , Haemophilus influenzae , Listeria monocytogenes , Corynebacterium jeikeium , Bifidobacterium spp., Eubacterium aerofaciens faero , Eubacterium lentum , Lactobacillus acidophilus , Lactobacillus casei , Lactobacillus plantarum , Lactococcus spp., Leuconostoc spp., Pediococcus , Peptostreptococcus anaerobius , Peptostreptococcus Asaccaroticus , Streptococcus magnus , Peptostreptococcus micros , Pepto Streptococcus presence boti (Peptostreptococcus prevotii), pepto Streptococcus a production Tuscan (Peptostreptococcus productus), propynyl sludge tumefaciens Oh synth (Propionibacterium acnes), and evil Martino My sheath species (Actinomyces spp.) Bacterial infection by bacteria such as This can be caused or worsened.

시험관내 실험으로 고전적인 "내성" 균주에 대한 답토마이신 항균 활성을 고전적인 "감수성" 균주에 대한 것과 비교한다. 또한, 감수성 균주에 대한 답토마이신의 최소 억제 농도(MIC) 값은 통상적으로 반코마이신보다 4배 낮다. 따라서, 바람직한 구체예에서, 본 발명의 화합물 또는 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 중 임의의 것의 약학 조성물을, 본 발명의 방법에 따라서 반코마이신 등의 다른 항생제에 내성이 있는 세균 감염을 나타내는 환자에게 투여한다. 또한, 답토마이신은 글리코펩티드 항생제와는 달리 그람 양성 유기체에 대하여 신속한 농도 의존성 세균 활성을 나타낸다. 따라서, 바람직한 구체예에서, 본 발명의 화합물 또는 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 중 임의의 것의 약학 조성물을 본 발명의 방법에 따라서 신속하게 작용하는 항생제 치료가 필요한 환자에게 투여한다.In vitro experiments compare daptomycin antimicrobial activity against the classical "resistant" strain to that for the classic "sensitive" strain. In addition, the minimum inhibitory concentration (MIC) value of daptomycin for susceptible strains is typically four times lower than vancomycin. Thus, in a preferred embodiment, the pharmaceutical compositions of any of the compounds of the invention or crystalline or crystalline like lipopeptides are administered to a patient exhibiting a bacterial infection resistant to other antibiotics such as vancomycin according to the methods of the invention. In addition, daptomycin, unlike glycopeptide antibiotics, exhibits rapid concentration dependent bacterial activity against gram positive organisms. Thus, in a preferred embodiment, the pharmaceutical compositions of the compounds of the invention or any of the crystalline or crystalline like lipopeptides are administered to a patient in need of antibiotic treatment which is rapidly acting in accordance with the methods of the invention.

신체의 임의의 기관 또는 조직의 그람 양성균 감염에 대해 본 발명의 방법을 사용할 수 있다. 이들 기관 또는 조직의 비제한적인 예로는, 골격근, 피부, 혈류, 신장, 심장, 폐 및 뼈 등이 있다. 본 발명의 방법을 사용하여 피부 및 연조직 감염, 균혈증 및 요로 감염을 치료할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 방법을 사용하여 지역 획득 호흡 감염, 비제한적인 예로서 중이염, 부비동염, 만성 기관지염 및 폐렴(예, 약물 내성 스트렙토코커스 뉴모니아 또는 해모필러스 인플루엔자에 의해 유발된 폐렴)을 치료할 수 있다. 또한 본 발명의 방법을 사용하여 다른 종류의 그람 양성균, 예컨대 호기성, 친카프로성(caprophilic) 또는 혐기성 세균을 포함하는 혼합형 감염을 치료할 수 있다. 이들 유형의 감염으로는 복부내 감염, 폐렴, 골 및 관절 감염과 산과/부인과 감염 등이 있다. 본 발명의 방법을 이용하여 감염, 비제한적인 예로서, 심막내염, 신염, 패혈 관절염 및 골수염을 치료할 수 있다. 바람직한 구체예에서 상기 개시된 질병 중 임의의 질병은, 결정질 또는 결정 유사 답토마이신, 답토마이신 관련 리포펩티드, 항균 리포펩티드, 또는 이들 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 중 임의의 것의 약학 조성물을 사용하여 치료할 수 있다. The method of the present invention can be used for Gram-positive bacteria infection of any organ or tissue of the body. Non-limiting examples of these organs or tissues include skeletal muscle, skin, blood flow, kidneys, heart, lungs, bones, and the like. The methods of the present invention can be used to treat skin and soft tissue infections, bacteremia and urinary tract infections, but are not limited to such. The methods of the invention can be used to treat locally acquired respiratory infections, including but not limited to otitis media, sinusitis, chronic bronchitis and pneumonia (eg, pneumonia caused by drug resistant Streptococcus pneumoniae or Haemophilus influenzae). . The methods of the invention can also be used to treat mixed infections including other types of Gram-positive bacteria such as aerobic, caprophilic or anaerobic bacteria. These types of infections include abdominal infections, pneumonia, bone and joint infections, and obstetric / gynecological infections. The methods of the present invention can be used to treat infections, as non-limiting examples, pericarditis, nephritis, septic arthritis and osteomyelitis. In a preferred embodiment any of the diseases disclosed above can be treated using a pharmaceutical composition of crystalline or crystalline like daptomycin, daptomycin related lipopeptides, antibacterial lipopeptides, or any of these crystalline or crystalline like lipopeptides. .

결정질 또는 결정 유사 답토마이신, 답토마이신 관련 리포펩티드 또는 기타 리포펩티드를 환자 또는 동물의 식사 또는 사료로 투여할 수 있다. 전체 식사 섭취량의 일부로서 투여하는 경우, 답토마이신 또는 기타 리포펩티드의 양은 식사량의 1 중량% 미만, 바람직하게는 0.5 중량% 이하일 수 있다. 동물용 사료는 답토마이신 또는 기타 리포펩티드가 첨가된 일반적인 사료일 수 있거나, 또는 답토마이신을 사전혼합물에 첨가할 수 있다. Crystalline or crystalline like daptomycin, daptomycin related lipopeptides or other lipopeptides can be administered in the diet or feed of a patient or animal. When administered as part of the total meal intake, the amount of daptomycin or other lipopeptides may be less than 1% by weight, preferably 0.5% or less by weight of the meal. Animal feed may be a general feed with daptomycin or other lipopeptides added, or daptomycin may be added to the premix.

본 발명의 방법은 답토마이신 또는 다른 리포펩티드 항생제의 또 다른 형태, 예컨대 결정질 또는 결정 유사 형태가 아닌 것을 투여하거나, 또는 결정질 또는 결정 유사 답토마이신 또는 기타 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 항생제 이외의 1 이상의 항진균제 및/또는 1 이상의 항생제와 함께 투여하여 실시할 수 있다. 결정 질 또는 결정 유사 답토마이신 또는 다른 리포펩티드 항생제 이외의 항진균제 및 항생제의 동시 투여는, 다른 종류의 그람 양성균에 의해 유발되는 것, 또는 세균과 진균에 의해 유발되는 것과 같은 혼합형 감염에 유용할 수 있다. 또한, 결정질 또는 결정 유사 답토마이신 또는 다른 리포펩티드 항생제는 1 이상의 동시 투여되는 항생제의 독성 프로필을 개선시킬 수 있다. 답토마이신과 아미노글리코시드의 투여는 아미노글리코시드에 의해 유발되는 신장 독성을 개선시킬 수 있는 것으로 확인되었다. 바람직한 구체예에서, 항생제 및/또는 항진균제는 본 발명의 화합물과 함께 동시투여되거나, 또는 본 발명의 화합물을 포함하는 약학 조성물로 투여될 수 있다. The method of the present invention may be administered in another form of daptomycin or other lipopeptide antibiotic, such as not in a crystalline or crystalline like form, or in one or more antifungal agents other than crystalline or crystalline like daptomycin or other crystalline or crystalline like lipopeptide antibiotics. And / or in combination with one or more antibiotics. Concurrent administration of antifungal agents and antibiotics other than crystalline or crystalline-like daptomycin or other lipopeptide antibiotics may be useful for mixed infections, such as those caused by other types of Gram-positive bacteria, or caused by bacteria and fungi. . In addition, crystalline or crystalline like daptomycin or other lipopeptide antibiotics may improve the toxicity profile of one or more coadministered antibiotics. Administration of daptomycin and aminoglycosides has been shown to improve renal toxicity caused by aminoglycosides. In a preferred embodiment, the antibiotic and / or antifungal agent may be co-administered with the compound of the invention or administered in a pharmaceutical composition comprising the compound of the invention.

본 발명의 화합물과 함께 동시 투여할 수 있는 항균제 및 이의 부류의 비제한적인 예로는, 페니실린 및 관련 약물, 카르바페넴, 세팔로스포린 및 관련 약물, 아미노글리코시드, 박시트라신, 그라미시딘, 무피로신, 클로람페니콜, 티암페니콜, 푸시데이트 나트륨, 린코마이신, 클린다마이신, 마크롤리드, 노보비오신, 폴리믹신류, 리파마이신류, 스펙티노마이신, 테트라사이클린류, 반코마이신, 테이코플라닌, 스트렙토그라민류, 항엽산제, 예컨대 설폰아미드류, 트리메토프림 및 이의 조합물 및 피리메타민, 합성 항균제, 예컨대 니트로푸란류, 메텐아민 만델레이트 및 메텐아민 히푸레이트, 니트로이미다졸, 퀴놀론류, 플루오로퀴놀론류, 이소니아지드, 에탐부톨, 피라진아미드, 파라아미노살리실산(PAS), 시클로세린, 카프레오마이신, 에티온아미드, 프로티온아미드, 티아세타존, 비오마이신, 에버니노마이신, 글리코펩티드, 글리실사이클린, 케톨리드류, 옥사조리디논; 이미페넨, 아미카신, 네틸미신, 포스포마이신, 젠타미신, 세프트리악손, 지라신, LY 333328, CL 331002, HMR 3647, 리네졸리드, 시네르시드, 아츠트레오남 및 메트로니다졸, 에피로프림, OCA-983, GV-143253, 산페트리넴 나트륨, CS-834, 비아페넴, A-99058.1, A-165600, A-179796, KA 159, 다이네미신 A, DX8739, DU 6681; 세플루프레남, ER 35786, 세포셀리스, 산페트리넴 셀렉세틸, HGP-31, 세프피롬, HMR-3647, RU-59863, 메르사시딘, KP 736, 리팔라질; 코산, AM 1732, MEN 10700, 레나페넴, BO 2502A, NE-1530, PR 39, K130, OPC 20000, OPC 2045, 베네프림, PD 138312, PD 140248, CP 111905, 설로페넴, 리티페남 아콕실, RO-65-5788, 시클로티알리딘, Sch-40832, SEP-132613, 미카코시딘 A, SB-275833, SR-15402, SUN A0026, TOC 39, 카루모남, 세포조프란, 세페타메트 피복실 및 T 3811 등이 있다. Non-limiting examples of antimicrobial agents and classes thereof that can be coadministered with the compounds of the present invention include penicillin and related drugs, carbapenem, cephalosporins and related drugs, aminoglycosides, baccitracin, gramicidine, Mupirosine, chloramphenicol, thiamphenicol, pushdate sodium, lincomycin, clindamycin, macrolide, novobiocin, polymyxins, rifamycins, spectinomycin, tetracyclines, vancomycin, teicoplanin, Streptograms, antifolates such as sulfonamides, trimetaprim and combinations thereof and pyrimethamines, synthetic antimicrobial agents such as nitrofurans, metheneamine mandelate and metheneamine hypofurlate, nitroimidazoles, quinolones, Fluoroquinolones, isoniazid, ethambutol, pyrazineamide, paraaminosalicylic acid (PAS), cycloserine, capreomycin, ethionamide, pro On amide, thiazol theta zone, non-Oh, my God, Nino Avenue azithromycin, glycopeptides, glycyl cyclin, ketol lead flow, oxazolyl cooking dinon; Imifenen, amikacin, netylmycin, fosfomycin, gentamicin, ceftriaxone, ziracin, LY 333328, CL 331002, HMR 3647, linezolid, cinderside, atreonam and metronidazole, epiloprim , OCA-983, GV-143253, San Petrinem Sodium, CS-834, Viapenem, A-99058.1, A-165600, A-179796, KA 159, Dynemycin A, DX8739, DU 6681; Cefluprenam, ER 35786, cephalis, sanpetrinem selecetyl, HGP-31, cepypyrom, HMR-3647, RU-59863, mersacidine, KP 736, ripalazil; Kosan, AM 1732, MEN 10700, Renafenem, BO 2502A, NE-1530, PR 39, K130, OPC 20000, OPC 2045, Beneprim, PD 138312, PD 140248, CP 111905, Sulofenem, Liffeenam Acornsil, RO -65-5788, cyclothialidine, Sch-40832, SEP-132613, mycacosidin A, SB-275833, SR-15402, SUN A0026, TOC 39, carumone, zozofran, cepetetamet cladding and T 3811 and the like.

바람직한 구체예에서, 본 발명의 화합물과 함께 동시 투여할 수 있는 항균제의 비제한적인 예로는 이미페넨, 아미카신, 네틸미신, 포스포마이신, 젠타미신, 세프트리악손, 테이코플라닌, 지라신, LY 333328, CL 331002, HMR 3647, 리네졸리드, 시네르시드, 아즈트레오남 및 메트로니다졸 등이 있다.In a preferred embodiment, non-limiting examples of antimicrobials that can be coadministered with the compounds of the invention include imifenen, amikacin, netylmycin, phosphomycin, gentamicin, ceftriaxone, teicoplanin, zira Shin, LY 333328, CL 331002, HMR 3647, linezolid, cinerside, aztreonam and metronidazole.

본 발명의 화합물과 함께 동시 투여할 수 있는 항진균제의 비제한적인 예로는 카스포푼젠, 보리코나졸, 세르타코나졸, IB-367, FK-463, LY-303366, Sch-56592, 시타플록사신, DB-289 폴리엔류, 예컨대 암포테리신, 니스타틴, 프리마리신; 아졸류, 예컨대 플루코나졸, 이트라코나졸 및 케토코나졸; 알릴아민류, 예컨대 나프티피네 및 테르비나핀; 및 항대사제, 예컨대 플루시토신 등이 있다. 다른 항진균제의 비제한적인 예로는 본 명세서에서 참고 인용한 문헌[Fostel et al., Drug Discovery Today 5: 25-32 (2000)]에 개시되어 있다. Fostel 등은 코리네칸딘, Mer-WF3010, 푸사칸딘류, 아르트리친틴/LL 15G256, 소르다린류, 시스펜타신, 아족시바실린, 아우레오바시딘 및 카프레푼진 등의 화합물을 개시하고 있다. Non-limiting examples of antifungal agents that can be coadministered with the compounds of the present invention include caspofunsen, boriconazole, sertaconazole, IB-367, FK-463, LY-303366, Sch-56592, citafloxacin, DB-289 polyenes such as amphotericin, nistatin, primaricin; Azoles such as fluconazole, itraconazole and ketoconazole; Allylamines such as naphthypine and terbinafine; And anti-metabolic agents such as flucitocin and the like. Non-limiting examples of other antifungal agents are disclosed in Fostel et al., Drug Discovery Today 5: 25-32 (2000), incorporated herein by reference. Fostel et al. Disclose compounds such as corynecandine, Mer-WF3010, fusacandines, artritintine / LL 15G256, sorbdarins, cispentasin, azoxyvacillin, aureobacidine and caprefungin.

본 발명의 화합물, 또는 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드의 임의의 1 이상의 약학 조성물을, 세균 감염이 근절되거나 감소될 때까지 본 발명의 방법에 따라서 투여할 수 있다. 일 구체예에서, 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드는 약 3일 ∼약 6개월간 투여한다. 바람직한 구체예에서, 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드를 7∼56일 동안 투여한다. 더욱 바람직한 구체예에서, 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드를 7∼28일 동안 투여한다. 더욱 더 바람직한 구체예에서, 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드를 7∼14일 동안 투여한다. 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드는 필요에 따라 이보다 장기간 또는 단기간 투여될 수 있다. 바람직한 구체예에서, 리포펩티드는 답토마이신 또는 답토마이신 관련 리포펩티드이다. The compounds of the invention, or any one or more pharmaceutical compositions of crystalline or crystalline like lipopeptides, may be administered according to the methods of the invention until bacterial infection is eradicated or reduced. In one embodiment, the crystalline or crystalline like lipopeptides are administered for about 3 days to about 6 months. In a preferred embodiment, the crystalline or crystalline like lipopeptides are administered for 7 to 56 days. In a more preferred embodiment, the crystalline or crystalline like lipopeptides are administered for 7 to 28 days. In even more preferred embodiments, the crystalline or crystalline like lipopeptides are administered for 7-14 days. Crystalline or crystalline like lipopeptides can be administered longer or shorter than this as necessary. In a preferred embodiment, the lipopeptides are daptomycin or daptomycin related lipopeptides.

본 발명은 리포펩티드, 구체적으로는 답토마이신 및 답토마이신 관련 리포펩티드의 결정질 및 결정질 유사 형태와 이들의 제조 방법을 제공함으로써 상기한 문제점을 해결한다.The present invention solves the above problems by providing crystalline and crystalline like forms of lipopeptides, specifically daptomycin and daptomycin related lipopeptides and methods for their preparation.

본 발명을 더욱 완전하게 이해하기 위해서 하기 실시예를 개시한다. 이들 실시예는 단지 예시 목적으로 개시한 것으로서, 어떤 방식으로도 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석해서는 안된다. In order to more fully understand the present invention, the following examples are disclosed. These examples are disclosed for illustrative purposes only and should not be construed as limiting the scope of the invention in any way.

실시예Example 1  One

종래 기법으로 답토마이신을 제조하였다. 답토마이신 제제는 연황색 비정질 분말이었으며, 25℃에서 수중 용해도는 1 g/㎖ 이상이고 에탄올중의 용해도는 2.8 ㎎/㎖ 였다. 비정질 답토마이신 제제는 흡습성이며 215℃에서 분해되었다. Daptomycin was prepared by conventional techniques. The daptomycin formulation was a pale yellow amorphous powder with a solubility in water of at least 1 g / ml and a solubility in ethanol at 2.8 mg / ml at 25 ° C. The amorphous daptomycin formulation is hygroscopic and degraded at 215 ° C.

남아있는 실시예들은 유기 침전제(예, PEG)의 존재 또는 부재 하의 리포펩티드의 결정화 또는 침전에 대해 개시하고 있다.The remaining examples disclose crystallization or precipitation of lipopeptides with or without organic precipitants (eg PEG).

실시예Example 2 2

미량회분식 결정화법에서, 25 ㎕의 답토마이신 원액(메탄올 중 20 ㎎/㎖)을 15 ㎕의 시약 원액(200 mM 아세트산칼슘, 0.1 M 카코딜레이트(pH 6.5), 18% [w/v] PEG 8000 및 15 ㎕ 에틸렌 글리콜)과 연속 혼합하여 수성 성분 27.5%, 메탄올 45% 및 에틸렌 글리콜 27.5%인 용액을 얻었다. HPLC로 측정시 순도가 98%인 성게형 결정이 50% 수율로 형성되었다. In microbatch crystallization, 25 μl of daptomycin stock (20 mg / ml in methanol) was added to 15 μl of reagent stock (200 mM calcium acetate, 0.1 M cacodylate (pH 6.5), 18% [w / v] PEG). 8000 and 15 μl ethylene glycol) to obtain a solution of 27.5% aqueous component, 45% methanol and 27.5% ethylene glycol. As measured by HPLC, sea urchin crystals of 98% purity were formed in 50% yield.

실시예Example 3 3

답토마이신 원액은, 25 mM 아세트산나트륨(pH 5.0) 및 5 mM CaCl₂를 함유하는 완충액 1 ㎖ 중에 답토마이신 440 ㎎을 용해시켜 제조하였다. 증기 확산(현적)법으로 결정화를 실시하였는데, 이 방법에서는 답토마이신 원액 5 ㎕를 수중 0.1 M 구연산3나트륨 2수화물(pH 5.6) 및 35% [v/v] t-부탄올 0.5 ㎕에 첨가하여 드롭을 형성한다. 결정화가 일어날 때가지 기밀 환경 하에서 드롭을 저장소 용액(수중 0.1 M 구연산3나트륨 2수화물(pH 5.6), 및 35% [v/v] t-부탄올) 위에 매달았다. 이 방법으로 성게형 답토마이신 결정을 얻었다. 도 2 참조.The daptomycin stock solution was prepared by dissolving 440 mg of daptomycin in 1 ml of a buffer containing 25 mM sodium acetate (pH 5.0) and 5 mM CaCl ₂ . Crystallization was carried out by the vapor diffusion method, in which 5 µl of daptomycin stock solution was added to 0.5 µl of 0.1 M trisodium citrate dihydrate (pH 5.6) and 35 µl [v / v] t-butanol in water. To form. The drop was suspended over the reservoir solution (0.1 M sodium trisodium citrate dihydrate (pH 5.6) in water and 35% [v / v] t-butanol) under gas tight conditions until crystallization occurred. In this way, sea urchin type daptomycin crystals were obtained. See FIG. 2.

실시예Example 4 4

실시예 3에서와 같이 제조된 답토마이신 원액 5 ㎕를 0.1 M 카코딜산나트륨 (pH 6.5), 0.2 M 아세트산칼슘 및 9% [w/v] PEG 8000을 함유하는 용액 5 ㎕에 첨가하였다. 실시예 3에 개시된 바와 같은 증기 확산법으로 결정화시켰다. 이 방법으로 침상형 답토마이신 결정이 생성되었다. 예컨대 도 3 참조. 5 μl of daptomycin stock solution prepared as in Example 3 was added to 5 μl of a solution containing 0.1 M sodium cacodylate (pH 6.5), 0.2 M calcium acetate and 9% [w / v] PEG 8000. Crystallized by the vapor diffusion method as disclosed in Example 3. In this way, needle-like daptomycin crystals were produced. See eg FIG. 3.

실시예Example 5  5

실시예 3에서와 같이 제조된 답토마이신 원액 5 ㎕를 0.1 M 카코딜산나트륨(pH 6.5), 0.2 M 아세트산아연 및 9% [w/v] PEG 8000를 함유하는 0.1 ㎕ 벤즈아미딘 용액 5 ㎕에 첨가하여 최종 농도 220 ㎎/㎖의 답토마이신을 얻었다. 실시예 3에 개시된 증기 확산법으로 결정화시켰다. 이 방법으로 막대형 답토마이신 결정이 생겼다. 예컨대 도 4 참조.5 μl of daptomycin stock solution prepared as in Example 3 was added to 5 μl of 0.1 μl benzamidine solution containing 0.1 M sodium cacodylate (pH 6.5), 0.2 M zinc acetate and 9% [w / v] PEG 8000. Was added to obtain daptomycin at a final concentration of 220 mg / ml. Crystallized by the vapor diffusion method described in Example 3. In this way, rod-like daptomycin crystals were produced. See eg FIG. 4.

실시예Example 6 6

수중 20∼25 ㎎/㎖ 농도의 답토마이신(HPLC로 측정시 순도 97.1%) 1 ㎖를 물 231 ㎕, 아세트산칼슘(pH 6.0) 77 ㎕, 프로필렌 글리콜 960 ㎕ 및 50% [w/v] PEG 4000 231 ㎕와 순차 혼합하였다. 용액을 4℃에서 4∼5 시간 동안 정치시켰다. 75% 수율로 성게형 결정이 생겼다. 결정질 답토마이신을 이소프로판올로 세척하였다. 답토마이신은 HPLC로 측정시 순도가 98.4%였다. 1 ml of daptomycin (purity 97.1% as determined by HPLC) in water at a concentration of 20-25 mg / ml in water, 231 μl of water, 77 μl of calcium acetate (pH 6.0), 960 μl of propylene glycol and 50% [w / v] PEG 4000 231 μl were mixed sequentially. The solution was left at 4 ° C. for 4-5 hours. Sea urchin crystals were formed in 75% yield. Crystalline daptomycin was washed with isopropanol. Daptomycin had a purity of 98.4% as determined by HPLC.

실시예Example 7 7

답토마이신(200 ㎎, 97.1% 순도)을 물 2.54 ㎖에 용해시켰다. 답토마이신 용액을 메탄올 10.0 ㎖, 1M 아세트산칼슘(pH 6.0) 0.78 ㎖, 프로필렌 글리콜 9.50 ㎖ 및 50% [w/v] PEG4000 2.20 ㎖와 순서대로 혼합하여 최종 부피 25.02 ㎖를 얻었다. 혼합물을 실온에서 10∼14 시간 동안 혈액학 혼합기(피셔)에서 회전시켰다. 수 분내에 결정이 보이기 시작하였다. 최종 수율은 14시간 후에 약 70∼80%였다. 15분 동안 1000 rpm에서 원심분리로 결정을 회수하였다. 상청액을 제거하고 이소프로판올 12.5 ㎖ 중에 결정을 재현탁시켰다. 답토마이신 현탁액을 컬럼(바이오라드)으로 옮기고, 중력에 의해 떨어뜨리는 방식으로 이소프로판올을 제거하였다. 질소류 하에서 결정을 건조시켰다. 덩어리가 있으면 건조 과정에서 깨뜨려 균일한 무수 샘플을 얻었다. 이 방법으로 제조된 결정은 성게형이며, 순도는 98.37%였다. Daptomycin (200 mg, 97.1% purity) was dissolved in 2.54 mL of water. The daptomycin solution was mixed sequentially with 10.0 mL methanol, 0.78 mL 1M calcium acetate (pH 6.0), 9.50 mL propylene glycol and 2.20 mL 50% [w / v] PEG4000 to give a final volume of 25.02 mL. The mixture was spun in a hematology mixer (Fisher) for 10-14 hours at room temperature. Within minutes the crystals started to appear. The final yield was about 70-80% after 14 hours. Crystals were recovered by centrifugation at 1000 rpm for 15 minutes. The supernatant was removed and the crystals resuspended in 12.5 ml of isopropanol. The daptomycin suspension was transferred to a column (Biorad) and the isopropanol was removed in a drop by gravity. The crystals were dried under nitrogen. If there was a lump, it was broken during the drying process to obtain a uniform anhydrous sample. Crystals prepared in this manner were sea urchin shaped, with a purity of 98.37%.

실시예Example 8 8

PEG 8000을 PEG 4000 대신에 사용한 것 외에는 실시예 7에 따라서 답토마이신을 결정화시켰다. 사용된 시약의 양은 실시예 7에서와 동일하다. 이 방법으로 제조된 결정은 성게형으로서 순도는 98.84%였다.Daptomycin was crystallized according to Example 7 except that PEG 8000 was used instead of PEG 4000. The amount of reagent used is the same as in Example 7. Crystals prepared in this manner were sea urchin shaped and had a purity of 98.84%.

실시예Example 9 9

실시예 7에 따라서 2개의 답토마이신 샘플을 제조하고, USP<695> 결정질 테스트를 사용하여 1개의 비정질 샘플을 결정도에 대해 분석하였다. 답토마이신 입자를 유리 슬라이드 상의 광유 중에 놓고 편광 현미경(PLM)으로 검사하였다. 스테이지가 회전할 때 입자가 복굴절(간섭 색상을 보유함)되고 흡광 위치를 갖는다면 그 입자는 결정질인 것으로 결정하였다. Two daptomycin samples were prepared according to Example 7, and one amorphous sample was analyzed for crystallinity using USP <695> crystalline test. The daptomycin particles were placed in mineral oil on a glass slide and examined by polarization microscopy (PLM). The particles were determined to be crystalline if the particles were birefringent (having interference color) and had an absorbing position when the stage was rotating.

비정질 답토마이신 샘플은 복굴절되지 않는 레이스의 엷은 조각 모양의 입자로 구성된다. 약한 복굴절을 갖는 일부 박편에서 몇몇의 은 유사 영역이 있었으나, 입자는 주로 비정질이었다. 대조적으로, 실시예 7에 따라 제조한 답토마이신 샘플은 약한 복굴절과 일부 흡광을 나타내는 다정질 입자로 구성되었으며, 이것은 샘플이 주로 결정질임을 제시하는 것이다. 도 5 참조.Amorphous daptomycin samples consist of flaky particles of lace that are not birefringent. There were some silver-like regions in some flakes with weak birefringence, but the particles were mostly amorphous. In contrast, the daptomycin sample prepared according to Example 7 consisted of polycrystalline particles exhibiting weak birefringence and some absorption, indicating that the sample is predominantly crystalline. See FIG. 5.

실시예Example 10  10

실시예 7에 따라서 2개의 답토마이신 샘플을 제조하고, x-선 분말 회절로 1개의 비정질 샘플을 결정도에 대해 분석하였다. Siemens D500 자동화된 분말 회절분석기(ORS 1D No. LD-301-4)에서 샘플을 분석하였는데, 상기 장치는 ORS 표준 조작 절차 EQ-27 Rev. 9에 따라 작동시켰다. 회절분석기에는 그래피트 단색화장치와 50 kV, 40 mA에서 작동하는 Cu(λ=1.54 Å) x-선 공급원이 구비되어 있었다. 2θ검정은 NBS 운모 표준품(SRM675)을 사용하여 실시한다. 하기 장치 매개변수를 사용하여 샘플을 분석하였다:Two daptomycin samples were prepared according to Example 7, and one amorphous sample was analyzed for crystallinity by x-ray powder diffraction. Samples were analyzed on a Siemens D500 Automated Powder Diffractometer (ORS 1D No. LD-301-4), which used the ORS standard operating procedure EQ-27 Rev. Operated according to 9 The diffractometer was equipped with a graft monochromator and a Cu (λ = 1.54 mW) x-ray source operating at 50 kV, 40 mA. 2θ test is performed using NBS mica standard (SRM675). Samples were analyzed using the following device parameters:

2θ(°)에 대한 측정 범위 4.0-40.0Measurement range for 2θ (°) 4.0-40.0

스텝 폭(°) 0.05Step Width (°) 0.05

스텝당 측정 시간(s) 1.2Measurement time per step (s) 1.2

선(Beam) 슬릿 1(1°), 2(1°), 3(1°), 4(0.15°), 5(0.15°). Beam slit 1 (1 °), 2 (1 °), 3 (1 °), 4 (0.15 °), 5 (0.15 °).

제로 백그라운드 샘플판을 사용하여 ORS 표준 조작 절차 MIC-7 Rev. 1에 따라 샘플 제조를 실시하였다. ORS Standard Operating Procedures Using a Zero Background Sample Plate MIC-7 Rev. Sample preparation was carried out according to 1.

모든 샘플에 대해 Cu(λ=1.54 Å) x-선 공급원을 사용하여 실시하였다. 비정 질 답토마이신 샘플은 x-선 분말 회절에 의해 어떤 피크도 나타내지 않았다. 도 6 참조. 대조적으로, 2개의 답토마이신 샘플은 모두 x-선 분말 회절에 의한 피크를 나타내었다. 제1 답토마이신 샘플의 회절각(2θ)(도 7)은 19.225, 23.242, 23.427 및 23.603(°)였다. 제2 답토마이신 샘플에 대한 회절각(2θ)(도 8)은 10.966, 19.205 및 23.344(°)였다. 또한 제1 결정질 답토마이신 샘플은 10∼11° 사이에 작은 피크를 나타내었다. 도 7 참조.All samples were conducted using a Cu (λ = 1.54 kV) x-ray source. The amorphous daptomycin sample did not show any peaks by x-ray powder diffraction. See FIG. 6. In contrast, both daptomycin samples showed peaks by x-ray powder diffraction. The diffraction angles 2θ (FIG. 7) of the first daptomycin sample were 19.225, 23.242, 23.427, and 23.603 (°). The diffraction angles 2θ (FIG. 8) for the second daptomycin sample were 10.966, 19.205, and 23.344 (°). The first crystalline daptomycin sample also showed a small peak between 10 and 11 degrees. See FIG. 7.

실시예Example 11 11

답토마이신을 물에 용해시켰다. 아세트산나트륨을 첨가하여 최종 농도를 187 mM로 하였다. 염화칼슘을 첨가하여 최종 농도를 28 mM로 하였다. 답토마이신 용액을 혼합하고 최종 농도 78.4%로 이소프로판올을 첨가하였다. 용액을 혼합하고 항온처리하였다. 항온처리 후에 침전된 물질이 형성되었다. 침전 물질은 광학 현미경으로 측정시 직경이 약 60 ㎛인 성게형 결정으로 나타났다. 그 다음 이 물질을 건조시켰다. 건조 물질은 약 30∼40% 염을 함유하였다. 건조 후에, 분말 x-선 회절을 실시하였다. 분말 x-선 회절 결과 건조된 답토마이신 침전물에서 결정의 존재가 확인되지 않았다. Daptomycin was dissolved in water. Sodium acetate was added to bring the final concentration to 187 mM. Calcium chloride was added to bring the final concentration to 28 mM. The daptomycin solution was mixed and isopropanol was added at a final concentration of 78.4%. The solution was mixed and incubated. Precipitated material formed after incubation. The precipitated material appeared to be sea urchin crystals with a diameter of about 60 μm as measured by light microscopy. This material was then dried. The dry material contained about 30-40% salt. After drying, powder x-ray diffraction was performed. Powder x-ray diffraction did not confirm the presence of crystals in the dried daptomycin precipitate.

실시예Example 12 12

답토마이신(HPLC로 측정시 약 91.5%의 순도) 1 g을 증류수 16.8 ㎖에 첨가하고 용해시켰다. 1M 아세트산칼슘(pH 6.1) 2.5 ㎖ 및 이소프로판올 60 ㎖를 첨가하였다. 용액을 27℃ 수조에 두고 수조 온도로 평형화시켰다. 이소프로판올 5 ㎖ 분액을, 용액이 혼탁해질 때까지 서서히 첨가하였다(총 이소프로판올의 양은 약 30 ㎖). 용액을 27℃에서 밤새 항온처리하여 침전물을 형성하였다. 침전물은, 광학 현미경으로 관찰시 약 60 ㎛의 성게형 결정을 포함하는 것으로 나타났다. 도 2 참조.1 g of daptomycin (purity of about 91.5% as determined by HPLC) was added to 16.8 mL of distilled water and dissolved. 2.5 ml of 1 M calcium acetate (pH 6.1) and 60 ml of isopropanol were added. The solution was placed in a 27 ° C. water bath and equilibrated to bath temperature. A 5 ml aliquot of isopropanol was added slowly until the solution became cloudy (the total amount of isopropanol was about 30 ml). The solution was incubated overnight at 27 ° C. to form a precipitate. The precipitate was found to contain sea urchin crystals of about 60 μm when observed under an optical microscope. See FIG. 2.

답토마이신 침전물을 가압 필터/건조 깔대기에 붓고 중력으로 여과하였다. 침전물을 각회 25 ㎖의 세척액[80% 이소프로판올 및 20% 용액 A(여기서 용액 A는 18 ㎖의 물과 2 ㎖의 빙초산으로 구성됨)]으로 2회 세척하고 밤새 중력에 의해 액체를 떨어드렸다. 그 다음 침전물을 데시케이터에 옮기고 진공 하에서 건조하였다. 건조 후에, 분말 x-선 회절을 실시하였다. 분말 x-선 회절 결과 건조된 답토마이신 침전물에서 결정의 존재가 확인되지 않았다. 그러나, HPLC에 의한 침전 물질의 순도 분석 결과, 이 물질은 순도가 98.2%인 답토마이신이라는 것이 밝혀졌다. 침전 후에 답토마이신 제제는 침전 전의 답토마이신 제제보다 무수-답토마이신이 상당히 적다는 것은 중요하다. The daptomycin precipitate was poured into a pressure filter / drying funnel and filtered by gravity. The precipitate was washed twice with 25 ml of washing solution each time (80% isopropanol and 20% solution A, where solution A consisted of 18 ml of water and 2 ml of glacial acetic acid) and the liquid was dropped by gravity overnight. The precipitate was then transferred to a desiccator and dried under vacuum. After drying, powder x-ray diffraction was performed. Powder x-ray diffraction did not confirm the presence of crystals in the dried daptomycin precipitate. However, purity analysis of the precipitate material by HPLC revealed that the material was daptomycin with a purity of 98.2%. It is important that the daptomycin preparations after precipitation are significantly less anhydrous-daptomycin than the daptomycin preparations before precipitation.

어떤 이론에도 구애받지 않으면서, 본 출원인은 실시예 11 및 12에서 답토마이신을 침전시키는 데 사용된 조건이 실제로 답토마이신의 결정형을 산출하지만, 후속되는 세척 단계 및/또는 건조 단계는 결정질 답토마이신을 비결정질 형태로 복원시킨다고 생각하고 있다. 그럼에도 불구하고, 비결정질 답토마이신은 편광 중의 결정 샘플의 복굴절에 의해 도 3에 도시된 바와 같이 여전히 결정 유사 형태이다. Without being bound by any theory, Applicants note that the conditions used to precipitate daptomycin in Examples 11 and 12 actually yield the crystalline form of daptomycin, but the subsequent washing and / or drying steps yield crystalline daptomycin. It is thought to restore to amorphous form. Nevertheless, amorphous daptomycin is still in crystal-like form as shown in FIG. 3 by birefringence of the crystal sample during polarization.

실시예Example 13 13

에스. 로세오스포러스 NRRL 균주 15998의 발효 배양물로, 오염물의 생성을 최소화하면서 항생제의 생성을 최적화하는 수준으로 제어형 데칸산 공급물 발효를 실시하였다. 잔류 데칸산 공급물은 기체 크로마토그래피로 측정하고, 유도 개시(약 시간 30)로부터 회수시까지 표적 잔류 농도는 10 ppm 데칸산이다. 배양물을 원심분리하고 HPLC에 의해 청정화된 브로쓰를 분석하여 답토마이신의 생성을 측정한다. 회수 역가는 통상 발효 브로쓰 1 ℓ당 1.0∼3.0 g이다. s. Fermentation cultures of Roseosporus NRRL strain 15998 were subjected to controlled decanoic acid feed fermentation to optimize antibiotic production while minimizing the generation of contaminants. Residual decanoic acid feed is measured by gas chromatography and the target residual concentration is 10 ppm decanoic acid from induction induction (about time 30) to recovery. Centrifuge the cultures and analyze the broth clarified by HPLC to determine the production of daptomycin. The recovery titer is usually 1.0 to 3.0 g per liter of fermentation broth.

Pall-Sep 또는 등가의 정밀여과 장치를 사용하여 정밀여과시키거나, 또는 완전 공업 규모의 원심분리 및 탁도 여과장치로 발효 배양물을 회수한다. 청정화된 브로쓰를 음이온 교환 수지 Mitsubishi FP-DA 13에 가하고, pH 6.5에서 30 mM NaCl로 세척하고 pH 6.0∼6.5에서 300 mM NaCl로 용출시킨다. 대안적으로, pH 6.5에서 30 mM NaCl로 FP-DA 13 컬럼을 세척하고, pH 6.0-6.5에서 300 mM NaCl로 용출시킨다. pH를 3.0∼4.8로 조정하고, 온도를 2∼15℃로 조정한다. 이들 조건 하에서, 답토마이신은 미셀을 형성한다. 미셀 답토마이신 용액을, 임의 형상의 10,000 NMW 한외여과기(AG Technology Corp. UF 중공 섬유 또는 등가물)를 사용하여 여과 세척한다. 답토마이신 미셀은 필터에 남지만, 대부분의 불순물은 10,000 NMW 여과기를 통해 통과하기 때문에 제거된다. 답토마이신 미셀의 한외여과는 답토마이신의 순도를 약 80∼90%로 증가시킨다.Fermentation cultures are recovered by microfiltration using Pall-Sep or equivalent microfiltration, or by fully industrial scale centrifugation and turbidity filtration. The clarified broth is added to the anion exchange resin Mitsubishi FP-DA 13, washed with 30 mM NaCl at pH 6.5 and eluted with 300 mM NaCl at pH 6.0-6.5. Alternatively, the FP-DA 13 column is washed with 30 mM NaCl at pH 6.5 and eluted with 300 mM NaCl at pH 6.0-6.5. pH is adjusted to 3.0-4.8, and temperature is adjusted to 2-15 degreeC. Under these conditions, daptomycin forms micelles. The micelle daptomycin solution is filtered washed using a 10,000 NMW ultrafiltration (AG Technology Corp. UF hollow fiber or equivalent) of any shape. Daptomycin micelles remain in the filter, but most impurities are removed because they pass through a 10,000 NMW filter. Ultrafiltration of daptomycin micelles increases the purity of daptomycin to about 80-90%.

그 다음 전술한 방법 중 하나를 사용하여 멸균 조건 하에서 답토마이신 제제를 결정화 또는 침전시킨다. 바람직한 구체예에서, 답토마이신의 대규모 제조를 위해서 정률증가시킨 것을 제외하고는 실시예 7, 8 또는 12에 개시된 프로토콜에 따라서 답토마이신을 결정화 또는 침전시킨다. 여과, 바람직하게는 진공 여과로 결정화/침전 용액으로부터 결정질 또는 결정 유사 답토마이신을 분리한다. 결정질 또는 결정 유사 답토마이신을 세척액으로 세척한다(실시예 3 참조). 0.65 m³ Klein Hastelloy-B 버블 콘 진공 건조기 또는 등가의 장치를 사용하여 결정질 또는 결정 유사 답토마이신을 진공 건조한다. 그 다음 병 1개당 건조된 결정질 답토마이신 250 ㎎ 또는 500 ㎎을 병에 충전한다. 도 9는 제조법의 공정도를 도시한다.The daptomycin formulation is then crystallized or precipitated under sterile conditions using one of the methods described above. In a preferred embodiment, daptomycin is crystallized or precipitated according to the protocols disclosed in Examples 7, 8 or 12, except for increasing the scale for large scale production of daptomycin. Filtration, preferably vacuum filtration, separates the crystalline or crystal-like daptomycin from the crystallization / precipitation solution. Crystalline or crystal-like daptomycin is washed with the wash solution (see Example 3). The crystalline or crystalline like daptomycin is vacuum dried using a 0.65 m ³ Klein Hastelloy-B bubble cone vacuum dryer or equivalent apparatus. The bottle is then filled with 250 mg or 500 mg of dried crystalline daptomycin per bottle. 9 shows a process diagram of the manufacturing method.

실시예Example 14 14

에스. 로세오스포러스의 발효, 발효 배양물의 정밀여과 및 음이온 교환 크로마토그래피를 실시예 13에 개시된 바와 같이 실시한다. 이 시점에서 답토마이신 제제의 순도는 약 35∼40%이다. 음이온 교환 크로마토그래피 후에, 실시예 13에 개시된 프로토콜에 따라서 답토마이신을 결정화 또는 침전시킨다. 그 다음 실시예 13에 개시된 프로토콜에 따라서 답토마이신을 세척 및 건조한다. 실시예 13에 개시된 바와 같이 건조된 결정질 또는 결정 유사 답토마이신을 사용하여 멸균 병에 충전시킨다. 도 6에는 제조법의 공정도가 제시되어 있다. s. Fermentation of Roseosporus, microfiltration of fermentation cultures and anion exchange chromatography are performed as described in Example 13. At this point the purity of the daptomycin formulation is about 35-40%. After anion exchange chromatography, daptomycin is crystallized or precipitated according to the protocol described in Example 13. Daptomycin is then washed and dried according to the protocol described in Example 13. Dried crystalline or crystal-like daptomycin is used to fill a sterile bottle as disclosed in Example 13. 6 shows a process diagram of the manufacturing method.

실시예Example 15 15

에스. 로세오스포러스의 발효 및 발효 배양물의 정밀여과는 실시예 13에 개시된 바와 같이 실시한다. 정밀여과 후에, 실시예 13에 개시된 바와 같이 크기 배제 한외여과로 발효 배양물을 처리한다. 이 시점에서 답토마이신 제제의 순도는 약 35∼40%이다. 한외여과 후에, 실시예 13에 개시된 프로토콜에 따라서 답토마이신을 결정화 또는 침전시킨다. 그 다음 실시예 13에 개시된 프로토콜에 따라서 답토마이신을 세척 및 건조한다. 건조된 결정질 또는 결정 유사 답토마이신을 사용하여 실 시예 13에 개시된 바와 같이 멸균 병에 충전시킨다. 도 7에는 제조법의 공정도가 제시되어 있다. s. Fermentation of Roseosporus and microfiltration of fermentation cultures are carried out as described in Example 13. After microfiltration, the fermentation cultures are treated with size exclusion ultrafiltration as described in Example 13. At this point the purity of the daptomycin formulation is about 35-40%. After ultrafiltration, daptomycin is crystallized or precipitated according to the protocol described in Example 13. Daptomycin is then washed and dried according to the protocol described in Example 13. Dried crystalline or crystalline like daptomycin is used to fill a sterile bottle as disclosed in Example 13. 7 shows a process diagram of the manufacturing method.

실시예Example 16 16

에스. 로세오스포러스의 발효 및 발효 배양물의 정밀여과를 실시예 13에 개시된 바와 같이 실시한다. 이 지점에서 답토마이신 제제의 순도는 5∼10%이다. 정밀여과 후에, 실시예 13에 개시된 프로토콜에 따라서 발효 배양물을 결정화 또는 침전시킨다. 실시예 13에 개시된 바와 같이 답토마이신을 세척하고 건조한 다음, 이를 사용하여 멸균 병에 충전시켰다. 도 8에는 제조법의 공정도가 제시되어 있다. s. Fermentation of Roseosporus and microfiltration of fermentation cultures are carried out as described in Example 13. At this point the purity of the daptomycin formulation is 5-10%. After microfiltration, the fermentation culture is crystallized or precipitated according to the protocol described in Example 13. Daptomycin was washed and dried as described in Example 13 and then used to fill a sterile bottle. 8 shows a process diagram of the manufacturing method.

실시예Example 17 17

답토마이신의 환상 리포펩티드 유사체인 CB-131547(도 16 참조)은, 답토마이신으로부터 반합성 경로를 통해 제조하였다. CB-131547은 연황색 비정질 분말로서, 25℃에서 일반 염수중 용해도는 ∼80 ㎎/㎖였다.CB-131547 (see FIG. 16), a cyclic lipopeptide analog of daptomycin, was prepared from daptomycin via a semisynthetic route. CB-131547 is a pale yellow amorphous powder, having a solubility in general brine at -80 mg / ml at 25 ° C.

CB-131547(60 ㎎, ∼90% 순도)을 물 2.5 ㎖에 용해시켰다. CB-131547 용액을 5.0 ㎖ 메탄올, 0.2 ㎖ 1 M 아세트산칼슘(pH 6.0), 2.5 ㎖ 프로필렌 글리콜, 및 1.0 ㎖ 50%(w/v) PEG4000과 차례로 혼합하여 최종 부피 11.2 ㎖를 얻었다. 이 용액을 4℃에서 4∼24 시간 동안 정치시켰다. HPLC로 측정시 순도가 ∼98.0%인 CB131547 결정을 ∼70% 수율로 얻었다. CB-131547 (60 mg, ˜90% purity) was dissolved in 2.5 mL of water. The CB-131547 solution was mixed sequentially with 5.0 ml methanol, 0.2 ml 1 M calcium acetate (pH 6.0), 2.5 ml propylene glycol, and 1.0 ml 50% (w / v) PEG4000 to give a final volume of 11.2 ml. This solution was left at 4 ° C. for 4 to 24 hours. CB131547 crystals having a purity of -98.0% as measured by HPLC were obtained in -70% yield.

실시예Example 18 18

답토마이신의 환상 리포펩티드 유사체인 CB-131547(도 16 참조)은, 답토마이신으로부터 반합성 경로를 통해 제조하였다. CB-131547은 연황색 비정질 분말로서, 25℃에서 일반 염수중 용해도는 ∼80 ㎎/㎖였다.CB-131547 (see FIG. 16), a cyclic lipopeptide analog of daptomycin, was prepared from daptomycin via a semisynthetic route. CB-131547 is a pale yellow amorphous powder, having a solubility in general brine at -80 mg / ml at 25 ° C.

CB-131547(60 ㎎, ∼90% 순도)을 물 2.5 ㎖에 용해시켰다. 0.2 ㎖ 1 M 아세트산칼슘(pH 6.0) 및 8 ㎖ 이소프로판올을 첨가한다. 실온(25℃)에서 5분간 용액을 평형화시킨다. 용액이 혼탁해질 때까지 이소프로판올 1 ㎖ 분액을 서서히 첨가한다. 용액을 실온에서 밤새 정치시켜 결정을 형성한다. CB-131547 (60 mg, ˜90% purity) was dissolved in 2.5 mL of water. 0.2 ml 1 M calcium acetate (pH 6.0) and 8 ml isopropanol are added. Equilibrate the solution for 5 minutes at room temperature (25 ° C). A 1 ml aliquot of isopropanol is slowly added until the solution becomes cloudy. The solution is allowed to stand overnight at room temperature to form crystals.

본 명세서에 인용된 모든 공보 및 특허 출원은, 각각 공보 또는 특허 출원이 구체적이고 개별적으로 참고로 인용된 것으로 제시된 범위로 인용된다. 이해를 명확히 할 목적으로 실시예 및 예시의 방법으로 본 발명을 일부 상세히 기술하였지만, 본 발명의 교시 내용으로부터 첨부된 청구범위의 취지 또는 범위를 벗어나지 않고 일부 변화예 및 변형예가 당업자에게는 자명할 것이다. All publications and patent applications cited herein are hereby incorporated into the scope in which the publications or patent applications are set forth as specifically and individually incorporated by reference. While the invention has been described in some detail by way of example and illustration for purposes of clarity of understanding, some modifications and variations will be apparent to those skilled in the art without departing from the spirit or scope of the appended claims from the teachings of the invention.

도 1은 답토마이신의 구조를 도시한다.1 shows the structure of daptomycin.

도 2는 실시예 12에 개시된 방법으로 제조된 답토마이신의 성게형 결정 또는 결정 유사 입자의 광현미경사진을 도시한다.FIG. 2 shows photomicrographs of sea urchin-shaped crystals or crystal-like particles of daptomycin prepared by the method disclosed in Example 12.

도 3은 답토마이신의 침상형 결정의 광현미경사진을 도시한다.3 shows photomicrographs of acicular crystals of daptomycin.

도 4는 답토마이신의 막대형 광현미경사진을 도시한다.4 shows rod-shaped light micrographs of daptomycin.

도 5는 100X 확대한 답토마이신 샘플의 광현미경사진을 도시한다. 평면 투과광(A)을 사용한 비정질 답토마이신 및 교차 편광(B)을 사용한 비정질 답토마이신의 광현미경사진이 도시되어 있다. 평면 투과광(C 및 E)을 사용한 답토마이신 결정 및 교차 편광(D 및 F)을 사용한 답토마이신 결정의 광현미경사진이 도시되어 있다. 실시예 7에 개시된 프로토콜로 답토마이신 결정을 제조하였다. 5 shows a photomicrograph of a 100 × magnified daptomycin sample. Photomicrographs of amorphous daptomycin using planar transmitted light (A) and amorphous daptomycin using cross polarized light (B) are shown. Photomicrographs of daptomycin crystals using planar transmitted light (C and E) and daptomycin crystals using cross polarized light (D and F) are shown. Daptomycin crystals were prepared by the protocol described in Example 7.

도 6은 비정질 답토마이신의 x-선 분말 회절 패턴을 도시한다. 6 shows the x-ray powder diffraction pattern of amorphous daptomycin.

도 7은 실시예 7에 개시된 프로토콜로 제조한 답토마이신 결정의 x-선 분말 회절 패턴을 도시한다. 7 shows the x-ray powder diffraction pattern of daptomycin crystals prepared by the protocol disclosed in Example 7. FIG.

도 8은 실시예 7에 개시된 프로토콜로 제조한 제2의 답토마이신 결정 샘플의 x-선 분말 회절 패턴을 도시한다. FIG. 8 shows the x-ray powder diffraction pattern of a second daptomycin crystal sample prepared by the protocol disclosed in Example 7.

도 9는 편광에 노출시 답토마이신의 결정 유사 입자의 복굴절을 도시한다. 결정 유사 입자는 실시예 12에 개시된 방법으로 제조하였다. 9 shows the birefringence of crystal-like particles of daptomycin upon exposure to polarized light. Crystal-like particles were prepared by the method disclosed in Example 12.

도 10은 예시적인 결정화 방법의 공정도를 도시한다.10 shows a process diagram of an exemplary crystallization method.

도 11은 결정화 또는 침전을 사용하지 않은 예시적인 제조 방법의 공정도를 도시한다. 이 제조법에서는 세균 발효로 답토마이신을 포함하는 발효 배양물을 생성한 다음, 정밀여과, 음이온 교환 크로마토그래피, 크기 배제 한외여과, 소수성 상호작용 크로마토그래피, 용매 제거용 음이온 교환 크로마토그래피, 발열원 제거용 한외여과, 역삼투압을 이용하여 답토마이신을 정제하고 답토마이신을 병에 넣는다. 예컨대 이러한 종류의 방법에 대한 상세한 내용은 참고로 인용한 2001년 6월 21일에 공개된 국제 PCT 공개 공보 WO 01/44274호 참조.11 shows a process diagram of an exemplary manufacturing method without using crystallization or precipitation. In this method, bacterial fermentation produces fermentation cultures containing daptomycin, followed by microfiltration, anion exchange chromatography, size exclusion ultrafiltration, hydrophobic interaction chromatography, solvent anion exchange chromatography, and pyrogen removal ultrafiltration. Filtration and reverse osmosis are used to purify daptomycin and place daptomycin in the bottle. See, eg, International PCT Publication No. WO 01/44274, published June 21, 2001, which is incorporated by reference for details on this kind of method.

도 12는 발효, 정밀여과, 음이온 교환 크로마토그래피, 크기 배제 한외여과, 결정화 또는 침전, 결정이나 침전물 건조 및 병으로의 화합물의 건식 투입 단계를 포함하는 리포펩티드 화합물의 예시적인 제조 방법의 공정도를 도시한다. 예컨대 실시예 13 참조.FIG. 12 shows a process diagram of an exemplary method for preparing a lipopeptide compound comprising fermentation, microfiltration, anion exchange chromatography, size exclusion ultrafiltration, crystallization or precipitation, drying crystals or precipitates, and dry dosing of the compound into the bottle. do. See eg Example 13.

도 13은 발효, 정밀여과, 음이온 교환 크로마토그래피, 결정화 또는 침전, 결정이나 침전물 건조 및 병으로의 화합물의 건식 투입 단계를 포함하는 리포펩티드 화합물의 예시적인 제조 방법의 공정도를 도시한다. 예컨대 실시예 14 참조.FIG. 13 shows a process diagram of an exemplary method for preparing a lipopeptide compound comprising fermentation, microfiltration, anion exchange chromatography, crystallization or precipitation, crystallization or precipitation drying and dry introduction of the compound into the bottle. See, eg, Example 14.

도 14는 발효, 정밀여과, 크기 배제 한외여과, 결정화 또는 침전, 결정이나 침전물 건조 및 병으로의 화합물의 건식 투입 단계를 포함하는 리포펩티드 화합물의 예시적인 제조 방법의 공정도를 도시한다. 예컨대 실시예 15 참조.FIG. 14 shows a process diagram of an exemplary method for preparing a lipopeptide compound comprising fermentation, microfiltration, size exclusion ultrafiltration, crystallization or precipitation, crystal or precipitate drying and dry introduction of the compound into the bottle. See eg Example 15.

도 15는 발효, 정밀여과, 결정화 또는 침전, 결정이나 침전물 건조 및 병으로의 화합물의 건식 투입 단계를 포함하는 리포펩티드 화합물의 예시적인 제조 방법의 공정도를 도시한다. 예컨대 실시예 16 참조.FIG. 15 shows a process diagram of an exemplary method for preparing a lipopeptide compound comprising fermentation, microfiltration, crystallization or precipitation, crystallization or precipitation drying and dry introduction of the compound into the bottle. See eg Example 16.

도 16은 답토마이신의 환상 리포펩티드 유사체인 CB-131547의 구조를 도시한 다.Figure 16 depicts the structure of CB-131547, a cyclic lipopeptide analog of daptomycin.

Claims (93)

리포펩티드가 답토마이신 및 답토마이신 관련 리포펩티드로 구성된 군에서 선택되는, 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 또는 이의 염으로서, 상기 결정 유사 리포펩티드는 육안으로 또는 광학 현미경이나 편광 현미경으로 측정할 때 결정질인 것인 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 또는 이의 염.A crystalline or crystalline like lipopeptide or salt thereof, wherein the lipopeptide is selected from the group consisting of daptomycin and daptomycin related lipopeptides, wherein the crystalline pseudolipopeptide is crystalline when measured visually or by optical or polarized light microscopy. Phosphorus crystalline or crystalline like lipopeptides or salts thereof. 제1항에 있어서, 염이 2가 칼슘염인 것인 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 또는 이의 염.The crystalline or crystalline like lipopeptides or salts thereof according to claim 1, wherein the salt is a divalent calcium salt. 제1항에 있어서, 리포펩티드 항생제가 답토마이신인 것인 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 또는 이의 염.The crystalline or crystalline like lipopeptides or salts thereof according to claim 1, wherein the lipopeptide antibiotic is daptomycin. 제3항에 있어서, 염이 2가 칼슘염인 것인 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 또는 이의 염.4. The crystalline or crystalline like lipopeptides or salts thereof according to claim 3, wherein the salt is a divalent calcium salt. 제3항에 있어서, Cu(λ=1.54 Å) x-선 공급원을 사용한 결정질 답토마이신의 x-선 회절 패턴은 회절각(2θ)= 10.9, 19.2 및 23.3(°) 또는 회절각(2θ)= 19.2, 23.2, 23.4 및 23.6(°)인 것인 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 또는 이의 염.4. The x-ray diffraction pattern of crystalline daptomycin using Cu (λ = 1.54 kPa) x-ray source is characterized by diffraction angles (2θ) = 10.9, 19.2 and 23.3 (°) or diffraction angle (2θ) = 19.2, 23.2, 23.4 and 23.6 (°), wherein the crystalline or crystalline like lipopeptides or salts thereof. 제1항 내지 제4항 중 어느 하나의 항에 있어서, 리포펩티드는 복굴절에 의한 결정질 특성을 보유하지만 x-선 분말 회절에 의한 결정질 특성을 나타내지 않는 결정 유사(crystal-like) 리포펩티드인 것인 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 또는 이의 염.The lipopeptide according to any one of claims 1 to 4, wherein the lipopeptides are crystal-like lipopeptides which retain crystalline properties by birefringence but do not exhibit crystalline properties by x-ray powder diffraction. Crystalline or crystalline like lipopeptides or salts thereof. 제3항에 있어서, 결정질 또는 결정 유사 답토마이신은 성게형 또는 침상의 클러스터, 침상형 또는 막대형 결정을 포함하는 것인 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 또는 이의 염.4. The crystalline or crystalline like lipopeptide or salt thereof of claim 3, wherein the crystalline or crystalline like daptomycin comprises sea urchin- or needle-like clusters, acicular or rod-like crystals. 제3항에 있어서, 결정질 답토마이신은 순도가 95% 이상인 것인 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 또는 이의 염.4. The crystalline or crystalline like lipopeptide or salt thereof of claim 3, wherein the crystalline daptomycin is at least 95% pure. 제3항에 있어서, 결정질 답토마이신 또는 이의 염은 순도가 97% 이상인 것인 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 또는 이의 염.4. The crystalline or crystalline like lipopeptide or salt thereof of claim 3, wherein the crystalline daptomycin or salt thereof is at least 97% pure. 제3항에 있어서, 결정질 답토마이신 또는 이의 염은 단일 불순물을 1% 이상 포함하지 않는 것인 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 또는 이의 염.4. The crystalline or crystalline like lipopeptide or salt thereof of claim 3, wherein the crystalline daptomycin or salt thereof does not comprise at least 1% of a single impurity. 제8항 내지 제10항 중 어느 하나의 항에 있어서, 순도를 HPLC로 측정하는 것인 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 또는 이의 염.The crystalline or crystalline like lipopeptides or salts thereof according to any one of claims 8 to 10, wherein the purity is measured by HPLC. 제1항에 있어서, 리포펩티드 결정이 5 ㎛ 이상인 것인 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 또는 이의 염.The crystalline or crystal-like lipopeptides or salts thereof according to claim 1, wherein the lipopeptide crystals are at least 5 μm. 제12항에 있어서, 결정이 50 ㎛ 이상인 것인 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 또는 이의 염.The crystalline or crystal-like lipopeptides or salts thereof according to claim 12, wherein the crystals are at least 50 μm. 제12항 또는 제13항에 있어서, 리포펩티드가 답토마이신인 것인 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 또는 이의 염.The crystalline or crystalline like lipopeptides or salts thereof according to claim 12 or 13, wherein the lipopeptides are daptomycin. 제1항에 있어서, 결정질 리포펩티드의 안정성이 비정질 형태의 리포펩티드보다 높은 것인 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 또는 이의 염.The crystalline or crystalline like lipopeptide or salt thereof of claim 1, wherein the stability of the crystalline lipopeptides is higher than that of the lipopeptide in amorphous form. 제15항에 있어서, 결정질 리포펩티드의 열, 빛, 분해 또는 습도에 대한 안정성이 비정질 형태보다 높은 것인 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 또는 이의 염.16. The crystalline or crystalline like lipopeptides or salts thereof according to claim 15, wherein the stability to heat, light, degradation or humidity of the crystalline lipopeptides is higher than in the amorphous form. 제16항에 있어서, 안정성을 리포펩티드 항생제의 분해 또는 항생제 활성으로 측정하는 것인 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 또는 이의 염.The crystalline or crystalline like lipopeptides or salts thereof of claim 16, wherein the stability is measured by degradation or antibiotic activity of the lipopeptide antibiotic. 제15항에 있어서, 리포펩티드는 답토마이신인 것인 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 또는 이의 염.The crystalline or crystalline like lipopeptides or salts thereof according to claim 15, wherein the lipopeptides are daptomycin. 제18항에 있어서, 결정질 리포펩티드는 비정질 형태의 답토마이신보다 무수(anhydro)-답토마이신 또는 답토마이신의 β-이성체로의 전환율이 낮은 것인 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 또는 이의 염.19. The crystalline or crystalline like lipopeptide or salt thereof according to claim 18, wherein the crystalline lipopeptides have a lower conversion of anhydro-daptomycin or daptomycin to the β-isomer than the amorphous form of daptomycin. 제1항에 있어서, 답토마이신 관련 리포펩티드인 것인 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 또는 이의 염.The crystalline or crystalline like lipopeptides or salts thereof according to claim 1, which are daptomycin related lipopeptides. 제1항 내지 제5항 중 어느 하나의 항에 기재된 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 항생제와 약학적 허용 담체를 포함하는 약학 조성물.A pharmaceutical composition comprising the crystalline or crystalline like lipopeptide antibiotic according to any one of claims 1 to 5 and a pharmaceutically acceptable carrier. 제21항에 있어서, 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드는 답토마이신이고 결정질 또는 결정 유사 답토마이신은 경구 투여를 위해 장용 제피된 것인 약학 조성물.The pharmaceutical composition of claim 21, wherein the crystalline or crystalline like lipopeptides are daptomycin and the crystalline or crystalline like daptomycin is enteric coated for oral administration. 제22항에 있어서, 결정질 또는 결정 유사 답토마이신은 3∼75 ㎎/kg의 용량으로 배합되는 것인 약학 조성물.The pharmaceutical composition of claim 22, wherein the crystalline or crystalline like daptomycin is formulated at a dose of 3-75 mg / kg. 제22항에 있어서, 담체가 답토마이신의 경구 이용율을 높이는 것인 약학 조성물.The pharmaceutical composition of claim 22, wherein the carrier enhances oral availability of daptomycin. 제22항에 있어서, 미크론 크기의 입자 또는 미소구 형태인 것인 약학 조성물.The pharmaceutical composition of claim 22, which is in the form of micron sized particles or microspheres. 제21항에 기재된 약학 조성물을 포함하는 용기.A container comprising the pharmaceutical composition of claim 21. 제25항에 있어서, 에어로졸로서 사용되는 것인 약학 조성물.The pharmaceutical composition of claim 25, which is used as an aerosol. 제1항 내지 제5항 중 어느 하나의 항에 기재된 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 항생제와 약학적 허용 담체를 포함하는 제제.A formulation comprising the crystalline or crystalline like lipopeptide antibiotic according to any one of claims 1 to 5 and a pharmaceutically acceptable carrier. 제28항에 있어서, 약학 제제, 식품 제제, 사료 제제, 수의용 제제, 화장용 제제 또는 개인 용품(personal care) 제제인 것인 제제.The formulation of claim 28, which is a pharmaceutical formulation, a food formulation, a feed formulation, a veterinary preparation, a cosmetic preparation or a personal care preparation. 제28항에 있어서, 또 다른 항생제, 안정화제, 흡수 보조제, pH 완충제 또는 무기염을 추가로 포함하는 약학 제제인 것인 제제.The formulation of claim 28, which is a pharmaceutical formulation further comprising another antibiotic, stabilizer, absorption aid, pH buffer or inorganic salt. 제28항에 있어서, 동물 사료를 더 포함하고 경우에 따라서 또 다른 항생제나 비타민을 포함할 수 있는 사료 제제인 것인 제제.29. The formulation of claim 28, which is a feed formulation further comprising an animal feed and may optionally comprise another antibiotic or vitamin. 제28항에 있어서, 세척용 제제, 비누, 샴푸 또는 제한제인 개인 용품 제제인 것인 제제.The formulation of claim 28 which is a personal care formulation that is a cleaning formulation, a soap, a shampoo or a restriction agent. 제28항에 있어서, 비누, 샴푸 또는 약학 조성물인 수의용 제제인 것인 제제.The formulation according to claim 28, which is a veterinary formulation which is a soap, shampoo or pharmaceutical composition. 제1항 내지 제5항 중 어느 하나의 항에 기재된 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드 항생제 또는 이의 약학적 허용염 또는 이의 약학 조성물을 감염 치료 유효량으로 제공하는 것을 포함하는 피험체의 감염 치료용 약제의 제조 방법.Preparation of a medicament for treating infection of a subject comprising providing an effective amount of a crystalline or crystalline like lipopeptide antibiotic according to any one of claims 1 to 5 or a pharmaceutically acceptable salt thereof or a pharmaceutical composition thereof for treating infection. Way. 제34항에 있어서, 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드는 미크론 크기의 입자로서 제공되는 것인 방법.The method of claim 34, wherein the crystalline or crystalline like lipopeptides are provided as micron sized particles. 제34항에 있어서, 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드는 표적 방출형으로서 제공되는 것인 방법.The method of claim 34, wherein the crystalline or crystalline like lipopeptides are provided as a target release form. a) 리포펩티드가 용해된 용액을 제공하는 단계; a) providing a solution in which the lipopeptides are dissolved; b) 리포펩티드를 결정화 또는 침전시키는 단계;b) crystallizing or precipitation of the lipopeptides; c) 리포펩티드를 회수 및 건조하는 단계; 및c) recovering and drying the lipopeptides; And d) 리포펩티드를 보관하는 단계를 포함하는 리포펩티드 보관 방법으로서, 리포펩티드가 답토마이신 및 답토마이신 관련 리포펩티드로 구성된 군에서 선택되고, 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드는 비정질 형태의 리포펩티드보다 더욱 안정하고, 상기 결정 유사 리포펩티드는 육안으로 또는 광학 현미경이나 편광 현미경으로 측정할 때 결정질인 것인 방법.d) A lipopeptide storage method comprising the step of storing lipopeptides, wherein the lipopeptides are selected from the group consisting of daptomycin and daptomycin related lipopeptides, and the crystalline or crystalline like lipopeptides are more stable than the lipopeptides in amorphous form. And the crystal-like lipopeptides are crystalline when measured visually or by optical or polarized light microscopy. a) 리포펩티드의 비정질 형태를 제공하는 단계;a) providing an amorphous form of the lipopeptide; b) 리포펩티드를 결정화 또는 침전시키는 단계; 및b) crystallizing or precipitation of the lipopeptides; And c) 결정 또는 결정 유사 리포펩티드를 회수하는 단계를 포함하는 결정질 또는 결정 유사 리포펩티드의 제조 방법으로서, 리포펩티드는 답토마이신 및 답토마이신 관련 리포펩티드로 구성된 군에서 선택되고, 상기 결정 유사 리포펩티드는 육안으로 또는 광학 현미경이나 편광 현미경으로 측정할 때 결정질인 것인 방법.c) A method for preparing a crystalline or crystalline like lipopeptides comprising recovering a crystalline or crystalline like lipopeptides, wherein the lipopeptides are selected from the group consisting of daptomycin and daptomycin related lipopeptides, wherein the crystalline pseudolipopeptides Crystalline when measured visually or by optical or polarized light microscopy. 제38항에 있어서, 상기 회수 단계가 여과로 실시되는 것인 방법.The method of claim 38, wherein said recovering step is performed by filtration. 제39항에 있어서, 단계 b) 다음에 리포펩티드의 세척 단계를 더 포함하는 것인 방법.The method of claim 39, further comprising step b) followed by washing of the lipopeptides. 제38항 또는 제39항에 있어서, 단계 c) 다음에 리포펩티드의 건조 단계를 더 포함하는 것인 방법.40. The method of claim 38 or 39, further comprising step c) followed by drying of the lipopeptides. 제41항에 있어서, 건조 후에 리포펩티드의 멸균 단계를 더 포함하는 것인 방 법.42. The method of claim 41, further comprising sterilizing the lipopeptides after drying. 제38항에 있어서, 단계 c)가 멸균 조건 하에서 실시되는 것인 방법.The method of claim 38, wherein step c) is performed under sterile conditions. 제43항에 있어서, 단계 b)가 멸균 조건 하에서 실시되는 것인 방법.The method of claim 43, wherein step b) is performed under sterile conditions. 제44항에 있어서, 멸균 조건 하에 단계 c) 다음에 리포펩티드의 건조 단계를 더 포함하는 것인 방법.45. The method of claim 44, further comprising the step c) followed by drying of the lipopeptides under sterile conditions. 제38항에 있어서, 결정질 리포펩티드의 순도가 비정질 형태의 리포펩티드보다 높은 것인 방법.The method of claim 38, wherein the purity of the crystalline lipopeptides is higher than that of the lipopeptides in amorphous form. 제46항에 있어서, 비정질 형태의 순도는 약 90%이고 결정질 또는 결정 유사 형태의 순도는 95% 이상인 것인 방법.The method of claim 46, wherein the purity of the amorphous form is about 90% and the purity of the crystalline or crystalline like form is at least 95%. 제46항에 있어서, 비정질 형태의 순도는 약 93%이고 결정질 또는 결정 유사 형태의 순도는 95% 이상인 것인 방법.The method of claim 46, wherein the purity of the amorphous form is about 93% and the purity of the crystalline or crystalline like form is at least 95%. 제46항에 있어서, 비정질 형태의 순도는 약 93%이고 결정질 또는 결정 유사 형태의 순도는 약 98%인 것인 방법.The method of claim 46, wherein the purity of the amorphous form is about 93% and the purity of the crystalline or crystalline like form is about 98%. 답토마이신의 비정질 형태를 제공하는 단계; 및Providing an amorphous form of daptomycin; And 저분자량 알코올, 유기 침전제, 완충제, 염 유래의 양이온을 포함하는 결정화 용액으로부터 답토마이신을 결정화하는 단계를 포함하는 답토마이신의 제조 방법.A method for preparing daptomycin comprising crystallizing daptomycin from a crystallization solution comprising a low molecular weight alcohol, an organic precipitant, a buffer, a cation derived from a salt. 제50항에 있어서, 완충제는 HEPES, 트리스 HCl, 이미다졸, MES, CHES, 구연산염 및 카코딜레이트염으로 구성된 군에서 선택되는 것인 방법.51. The method of claim 50, wherein the buffer is selected from the group consisting of HEPES, Tris HCl, imidazole, MES, CHES, citrate and cacodylate salts. 제50항에 있어서, 알코올은 에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, t-부탄올, 글리세롤, 이소프로판올, 1,4-부탄디올, 1,2-프로판디올 및 메탄올로 구성된 군에서 선택되는 것인 방법.51. The method of claim 50, wherein the alcohol is selected from the group consisting of ethylene glycol, propylene glycol, t-butanol, glycerol, isopropanol, 1,4-butanediol, 1,2-propanediol and methanol. 제50항에 있어서, 유기 침전제는 폴리에틸렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜 모노메틸 에테르인 것인 방법.51. The method of claim 50, wherein the organic precipitant is polyethylene glycol or polyethylene glycol monomethyl ether. 제50항에 있어서, 결정화 용액은 2가 양이온을 더 포함하는 것인 방법.51. The method of claim 50, wherein the crystallization solution further comprises a divalent cation. 제54항에 있어서, 2가 양이온은 칼슘, 아연 또는 마그네슘인 것인 방법.55. The method of claim 54, wherein the divalent cation is calcium, zinc or magnesium. 제50항에 있어서, 결정화 용액의 pH는 5∼8.5 범위 내인 것인 방법.51. The method of claim 50, wherein the pH of the crystallization solution is in the range of 5-8.5. 제56항에 있어서, 결정화 용액의 pH는 5.5∼7.5 범위 내인 것인 방법.The method of claim 56, wherein the pH of the crystallization solution is in the range of 5.5-7.5. 제57항에 있어서, 결정화 용액의 pH는 5.9∼6.6 범위 내인 것인 방법.The method of claim 57, wherein the pH of the crystallization solution is in the range of 5.9 to 6.6. 제50항에 있어서, 결정화가 현적법 또는 회분식 결정화로 실시되는 것인 방법.51. The method of claim 50, wherein the crystallization is effected by conventional or batch crystallization. 제50항에 있어서, 답토마이신 결정은 성게형, 침상형의 클러스터 또는 막대형인 것인 방법.51. The method of claim 50, wherein the daptomycin crystal is sea urchin, acicular cluster or rod. 제50항에 있어서, 답토마이신 결정을 회수하는 단계를 더 포함하는 것인 방법.51. The method of claim 50, further comprising recovering the daptomycin crystal. 제61항에 있어서, 상기 회수 단계는 원심분리, 침전 또는 여과로 실시되는 것인 방법.62. The method of claim 61, wherein said recovering step is carried out by centrifugation, precipitation or filtration. 제50항 또는 제62항에 있어서, 결정질 답토마이신을 세척하는 단계를 더 포함하는 것인 방법.63. The method of claim 50 or 62, further comprising washing crystalline daptomycin. 제50항에 있어서, 답토마이신은 출발 순도가 90% 이상인 것인 방법.51. The method of claim 50, wherein the daptomycin has a starting purity of at least 90%. 제50항에 있어서, 결정화 단계는 20℃ 이하의 온도에서 실시되는 것인 방법.51. The method of claim 50, wherein the crystallization step is carried out at a temperature of 20 ° C or less. 제65항에 있어서, 결정화 단계는 약 4℃에서 실시되는 것인 방법. 66. The method of claim 65, wherein the crystallization step is performed at about 4 ° C. 제50항에 있어서, 결정화 단계는 교반하면서 실시되는 것인 방법. 51. The method of claim 50, wherein the crystallization step is carried out with stirring. a) 답토마이신, 1가 또는 2가 양이온을 포함하는 염, pH 완충제 및 저분자량 또는 다가 알코올을 포함하는 용액을 제공하는 단계; 및a) providing a solution comprising daptomycin, a salt comprising a monovalent or divalent cation, a pH buffer and a low molecular weight or polyhydric alcohol; And b) 용액으로부터 답토마이신을 결정화 또는 침전시켜 각각 결정질 또는 결정 유사 답토마이신 제제를 얻는 단계b) crystallizing or precipitation of daptomycin from the solution to obtain a crystalline or crystalline like daptomycin preparation, respectively 를 포함하는 결정질 또는 결정 유사 답토마이신의 제조 방법으로서, 상기 결정 유사 리포펩티드는 육안으로 또는 광학 현미경이나 편광 현미경으로 측정할 때 결정질인 것인 방법.A method for producing a crystalline or crystal-like daptomycin comprising the, wherein the crystal-like lipopeptides are crystalline when measured visually or by optical or polarized light microscopy. 제68항에 있어서, 완충제는 HEPES, 트리스 HCl, 이미다졸, MES, CHES, 아세트산나트륨, 아세트산칼슘, 시트레이트염 및 카코딜레이트염으로 구성된 군에서 선택되는 것인 방법.The method of claim 68, wherein the buffer is selected from the group consisting of HEPES, Tris HCl, imidazole, MES, CHES, sodium acetate, calcium acetate, citrate salts, and cacodylate salts. 제68항에 있어서, 알코올은 에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, t-부탄올, 글리세롤, 이소프로판올, 1,4-부탄디올, 1,2-프로판디올 및 메탄올로 구성된 군에서 선택되는 것인 방법.69. The method of claim 68, wherein the alcohol is selected from the group consisting of ethylene glycol, propylene glycol, t-butanol, glycerol, isopropanol, 1,4-butanediol, 1,2-propanediol and methanol. 제70항에 있어서, 알코올이 이소프로판올인 것인 방법.The method of claim 70, wherein the alcohol is isopropanol. 제68항에 있어서, 염이 2가 양이온을 포함하고, 2가 양이온은 마그네슘 양이온, 아연 양이온 또는 칼슘 양이온인 것인 방법.The method of claim 68, wherein the salt comprises a divalent cation and the divalent cation is a magnesium cation, zinc cation or calcium cation. a) 답토마이신, 1가 또는 2가 양이온을 포함하는 염인 pH 완충제, 및 저분자량 또는 다가 알코올을 포함하는 용액을 제공하는 단계; 및a) providing a solution comprising a pH buffer which is daptomycin, a salt comprising a monovalent or divalent cation, and a low molecular weight or polyhydric alcohol; And b) 용액으로부터 답토마이신을 결정화 또는 침전시켜 각각 결정질 또는 결정 유사 답토마이신 제제를 얻는 단계b) crystallizing or precipitation of daptomycin from the solution to obtain a crystalline or crystalline like daptomycin preparation, respectively 를 포함하는 결정질 또는 결정 유사 답토마이신의 제조 방법으로서, 상기 결정 유사 리포펩티드는 육안으로 또는 광학 현미경이나 편광 현미경으로 측정할 때 결정질인 것인 방법.A method for producing a crystalline or crystal-like daptomycin comprising the, wherein the crystal-like lipopeptides are crystalline when measured visually or by optical or polarized light microscopy. 제73항에 있어서, 완충제는 칼슘 양이온 또는 마그네슘 양이온으로부터 선택된 2가 양이온을 포함하는 것인 방법.74. The method of claim 73, wherein the buffer comprises a divalent cation selected from calcium cations or magnesium cations. 제68항 또는 제73항에 있어서, 용액의 pH는 5.0∼9.5 범위인 것인 방법.The method of claim 68 or 73, wherein the pH of the solution is in the range of 5.0-9.5. 제75항에 있어서, 용액의 pH는 5.9∼6.3 범위인 것인 방법.76. The method of claim 75, wherein the pH of the solution is in the range of 5.9-6.3. 제68항 또는 제73항에 있어서, 상기 결정화 또는 침전 단계가 0∼30℃의 온도에서 실시되는 것인 방법.74. The method of claim 68 or 73, wherein said crystallization or precipitation step is carried out at a temperature of 0-30 ° C. 제77항에 있어서, 온도가 23∼28℃인 것인 방법.78. The method of claim 77, wherein the temperature is 23-28 ° C. 제73항에 있어서, 용액이 아세트산칼슘(pH 6.1) 및 이소프로판올을 포함하는 것인 방법.74. The method of claim 73, wherein the solution comprises calcium acetate, pH 6.1 and isopropanol. 제79항에 있어서, 상기 결정화 또는 침전 단계가, 혼합물이 혼탁해질 때까지 이소프로판올을 첨가하는 것을 포함하는 것인 방법.80. The method of claim 79, wherein said crystallization or precipitation step comprises adding isopropanol until the mixture becomes cloudy. 제80항에 있어서, 상기 결정화 또는 침전 단계가 1시간 내지 3주의 기간 동안 실시되는 것인 방법.81. The method of claim 80, wherein said crystallization or precipitation step is carried out for a period of 1 hour to 3 weeks. 제68항에 있어서, 상기 결정화 또는 침전 단계가 각각 회분식 결정화 또는 회분식 침전으로 실시되는 것인 방법.69. The method of claim 68, wherein said crystallization or precipitation step is performed with batch crystallization or batch precipitation, respectively. 제68항 또는 제73항에 있어서, 결정질 또는 결정 유사 답토마이신을 회수하는 단계를 더 포함하는 것인 방법.74. The method of claim 68 or 73, further comprising recovering the crystalline or crystalline like daptomycin. 제83항에 있어서, 상기 회수 단계가 여과 또는 원심분리로 실시되는 것인 방법.84. The method of claim 83, wherein said recovering step is performed by filtration or centrifugation. 제84항에 있어서, 상기 회수 단계가 여과로 실시되는 것인 방법.85. The method of claim 84, wherein said recovering step is performed by filtration. 제83항에 있어서, 결정질 또는 결정 유사 답토마이신을 세척하는 단계를 더 포함하는 것인 방법.84. The method of claim 83, further comprising washing the crystalline or crystalline like daptomycin. 제68항 또는 제73항에 있어서, 결정질 또는 결정 유사 답토마이신이 성게형인 것인 방법.74. The method of claim 68 or 73, wherein the crystalline or crystal-like daptomycin is sea urchin. 제68항 또는 제73항에 있어서, 답토마이신은 결정화 또는 침전 전의 순도가 80% 이하이고, 결정화 또는 침전 후의 순도가 95% 이상인 것인 방법.74. The method of claim 68 or 73, wherein daptomycin has a purity of 80% or less before crystallization or precipitation and a purity of 95% or more after crystallization or precipitation. 제88항에 있어서, 답토마이신은 결정화 또는 침전 후의 순도가 96% 이상인 것인 방법.89. The method of claim 88, wherein daptomycin has a purity of at least 96% after crystallization or precipitation. 제46항 내지 제50항 중 어느 하나의 항에 있어서, 답토마이신은 결정화 또는 침전 후의 순도가 98% 이상인 것인 방법.51. The method of any one of claims 46-50, wherein daptomycin has a purity of at least 98% after crystallization or precipitation. a) 답토마이신, 1가 또는 2가 양이온을 포함하는 염인 pH 완충제, 및 저분자량 또는 다가 알코올을 포함하는 용액을 제공하는 단계; 및a) providing a solution comprising a pH buffer which is daptomycin, a salt comprising a monovalent or divalent cation, and a low molecular weight or polyhydric alcohol; And b) 용액으로부터 답토마이신을 결정화 또는 침전시켜 정제된 답토마이신 제제를 얻는 단계b) crystallizing or precipitation of daptomycin from the solution to obtain a purified daptomycin formulation 를 포함하는 정제된 답토마이신의 제조 방법.Method for producing a purified daptomycin comprising a. 제91항에 있어서, 상기 정제된 답토마이신 제제의 순도가 95% 이상인 것인 방법.92. The method of claim 91, wherein the purified daptomycin formulation is at least 95% pure. 제91항에 있어서, 상기 정제된 답토마이신 제제의 순도가 98% 이상인 것인 방법.92. The method of claim 91, wherein the purified daptomycin formulation is at least 98% pure.

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