KR20090037140A - 진세노사이드의 화합물 k로의 전환방법 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 (a) 아스퍼질러스 속 미생물을 배지에서 배양하는 단계; (b) 상기 배지를 여과하여 상기 아스퍼질러스 속 미생물을 제거하고 조배지액(crude medium solution)을 수득하는 단계; 및 (c) 상기 조배지액과 진세노사이드를 반응시켜 화합물 K를 제조하는 단계를 포함하는 진세노사이드의 화합물 K로의 전환방법에 관한 것이다. 본 발명의 방법에 따르면, 인삼 또는 홍삼의 진세노사이드로부터 높은 수율로 보다 간단하게 화합물 K를 얻을 수 있다.
인삼, 홍삼, 전환, 배지, 진세노사이드, 사포닌, 화합물 K, 아스퍼질러스
Description
본 발명은 인삼 진세노사이드의 전환 방법에 관한 것이다.
인삼은 식물 분류학상 오가피과(Panax)의 인삼속에 속하는 다년생 숙근초로서 지구상에 약 11종이 알려져 있다. 인삼은 지금까지 많은 약리실험을 통해 콜레스테롤 저하, 지질과산화 억제, 혈압강하, 혈류증가, 뇌혈관확장, 심장기능항진, 항부정맥, 항혈전, 혈소판응집 억제, 만성신부전 치료 효과, 세포독성 및 암 억제, 면역조절 작용, 기억력 증가, 뇌대사 항진, 항스트레스, 항산화 작용, 항노화 작용, 항궤양 및 위액분비 억제, 작업 능력 항진, 방산선에 대한 보호작용, 항당뇨, 해독, 간세포 효소 증가, 천식 치료, 항염증, 진통작용, 빈혈치료, 생식능력 증진 및 성수행능력 증진, 알코올 혈중농도 저하, 항알러지, 항암제 등의 활성을 가지고 있는 것으로 알려져 있다.
한편, 진세노사이드의 인체 내 주요 대사산물로 알려진 화합물 K는 장내 세균에 의해 생성되는 것으로 발표되었다(Hasegawa, H. et al., Planta Medica, 62:453(1996)). 화합물 K는 암세포 증식 억제, 항암제의 항암 활성 증대 작용, 알러지 억제 및 피부 보호 활성을 나타내는 것으로 알려져 있어, 이를 효율적으로 제조하려는 연구가 많이 이루어지고 있다.
종래에 알려진 진세노사이드 화합물 K의 제조방법으로는 다이올계 사포닌을 효소인 나린지나제로 가수분해시켜 제조하거나 쥐에 경구투여 후 대장에서 분해산물로 생성되는 화합물 K를 분리법이 있다. 그러나 이 방법들은 수율이 극히 낮을 뿐만 아니라 여러 가지 2차 대사산물이 생성되어 화합물 K를 고순도로 정제하기가 어렵다는 문제점이 있다(Kohda Hiroshi and Tanaka Osamu, The Pharm . Society of Japan 95:246(1975); Karikura 등, Chem . Pharm . Bull . 38:2859(1990)).
화합물 K를 생산하는 또 다른 방법에는 서로 다른 종류의 효소를 이용하는 방법들과 세균을 이용하는 방법이 있다. 효소를 이용하는 방법에는 1) (주)케이티앤지의 ‘효소적 방법에 의한 진세노사이드 컴파운드 케이의 제조방법(특허 제0377546호)’, 2) (주)태평양의 ‘인삼사포닌으로부터 화합물 K 및 진세노사이드 F1을 제조하는 방법(특허 제0418604호)’, 3) (주)비티진의 ‘알파-갈락토시다제를 이용하는 진세노사이드 제조방법(특허 제0689745호)’ 등이 있다. 한편 세균을 통한 생물전환기법을 사용하는 5) (주)일화, 가부시키가이샤 합피왈도의 ‘인삼 사포닌 대사 생산물의 제조법(특허 제0178863호)’, 6) (주)일화의 ‘생물전환 인삼 조성물 및 그 제조방법(특허 제0517899호)’이 알려져 있다.
그러나, 상기 1)-3)의 효소를 이용하는 방법들은 ‘사포닌 1.0 g당 0.5 g-1.0 g에 이르는 다량의 효소를 이용하여 화합물 K를 생산한다’고 언급하고 있는데 이는 일반적인 효소 반응과 비교하여 볼 때 기질 대비 매우 다량의 효소를 첨가하는 것으로 화합물 K를 생산하는 데에 매우 비효율적이며 효소 자체를 얻는 데에도 많은 노력이 요구되는 문제점이 있다.
한편, 4)-5)의 특허는 세균 자체를 이용하는데 세균을 통한 전환 반응은 세균류가 가지는 성장의 한계특성상 효소 내지는 곰팡이류를 이용한 반응에 비해 생성 역가가 낮은 단점이 있다.
본 명세서 전체에 걸쳐 다수의 논문 및 특허문헌이 참조되고 그 인용이 표시되어 있다. 인용된 논문 및 특허문헌의 개시 내용은 그 전체로서 본 명세서에 참조로 삽입되어 본 발명이 속하는 기술 분야의 수준 및 본 발명의 내용이 보다 명확하게 설명된다.
본 발명자들은 화합물 K를 보다 높은 효율로 그리고 보다 저가의 생산비로 제조할 수 있는 방법을 개발하고자 노력하였다. 그 결과, 효소 및 미생물을 직접적으로 이용하여 진세노사이드를 화합물 K로 생물전환하는 것보다 아스퍼질러스 속 미생물을 배양한 배지를 이용하여 진세노사이드를 전환시켜 화합물 K를 제조하면 보다 높은 효율로 그리고 보다 저가의 생산비로 화합물 K를 제조할 수 있음을 규명함으로써, 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서 본 발명의 목적은 진세노사이드의 화합물 K로의 전환방법을 제공하는 데 있다.
본 발명의 다른 목적은 진세노사이드의 화합물 K로의 전환용 조성물을 제공하는 데 있다.
본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 상세한 설명, 청구범위 및 도면에 의해 보다 명확하게 된다.
본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 다음의 단계를 포함하는 진세노사이드의 화합물 K로의 전환방법을 제공한다:
(a) 아스퍼질러스(Aspergillus) 속 미생물을 배지에서 배양하는 단계;
(b) 상기 배지를 여과하여 상기 아스퍼질러스 속 미생물을 제거하고 조배지액(crude medium solution)을 수득하는 단계; 및
(c) 상기 조배지액과 진세노사이드를 반응시켜 화합물 K를 제조하는 단계.
본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 아스퍼질러스 속 미생물을 배양하고 상기 아스퍼질러스 속 미생물이 제거된 배지를 함유하는 조배지액(crude medium solution)을 포함하는 진세노사이드의 화합물 K로의 전환용 조성물을 제공한다.
본 발명자들은 화합물 K를 보다 높은 효율로 그리고 보다 저가의 생산비로 제조할 수 있는 방법을 개발하고자 노력하였다. 그 결과, 효소 및 미생물을 직접적으로 이용하여 진세노사이드를 화합물 K로 생물전환(biocoversion)하는 것보다 아스퍼질러스 속 미생물을 배양한 배지를 이용하여 진세노사이드를 전환시켜 화합물 K를 제조하면 보다 높은 효율로 그리고 보다 저가의 생산비로 화합물 K를 제조할 수 있음을 규명하였다.
화합물 K에 관한 다양한 기술들이 출원 및 논문발표 되고, 화합물 K의 건강기능성식품 및 의약품으로서의 가능성이 대두되고 있다. 따라서, 화합물 K를 개선된 효율로 생산하는 방법을 모색하는 것은 상기 요구에 부합하는 매우 가치 있는 일이다. 아스퍼질러스와 같은 곰팡이류는 그 생리적 특성이 균주별로 매우 다양하며, 또 생산하는 효소의 종류나 양도 많다. 그러나 균주에 따라서는 인체에 매우 치명적인 진균독소를 생성하는 경우도 있으므로 그 이용에 신중해야 한다. 이에, 본 발명자들은 다양한 효소를 다량 분비하며, 진균독소를 분비하지 않는 균주 를 선별하고 이중에서 10여종을 다시 선별하여 인삼사포닌으로부터 화합물 K를 상당한 수준으로 생산할 수 있는 균주 및 방법을 개발하였다.
본 발명은 인삼 또는 홍삼 고유의 진세노사이드(즉, 사포닌)를 전환하는 방법에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 인삼 또는 홍삼 내의 진세노사이드의 주요한 인체 내 대사물인 화합물 K를 제조하는 방법에 관한 것이다.
본 명세서에서 용어 “사포닌”은 특별하게 다른 언급이 없는 한, 진세노사이드, 즉 인삼 사포닌과 동일한 의미로 사용된다.
기재의 편의상, 본 발명의 방법은 진세노사이드에 적용되는 것으로 본 명세서에 기재되어 있다. 본 발명에 의해 제조되는 화합물 K는 프로토파낙사디올(protopanaxadiol) 20번 탄소에 하나의 글루코오스가 결합된 것이다. 즉, 화합물 K는 여러 개의 당이 결합된 프로토파낙사디올계의 진세노사이드에서 하나의 글루코오스를 제외한 나머지 당들이 떨어져 나간 것이다.
본 발명에서 출발물질로 이용되는 “진세노사이드”는 바람직하게는, 인삼 또는 홍삼 고유의 진세노사이드를 의미한다. 보다 바람직하게는, 본 발명에서 출발물질로 이용되는 진세노사이드는 (a) 프로토파낙사디올계의 진세노사이드, 즉 진세노사이드 Ra1-3, Rb1-3, Rc, Rd, Rg3, Rh2, Ri, Rs1 및 Rs2, 말로닐-진세노사이드 Rb1-2, Rc 및 Rd; 그리고 (b) 프로토파낙사트리올계의 진세노사이드, 즉 진세노사이드 Re, Rf, Rg1-2 및 Rh1이다.
본 발명에서 출발물질로 이용되는 진세노사이드로는, 분리 및 정제된 형태의 진세노사이드를 이용할 수 있지만, 바람직하게는 인삼 또는 홍삼의 분말 또는 추출 물에 포함되어 있는 진세노사이드이다. 즉, 진세노사이드를 포함하는 인삼 또는 홍삼의 분말 또는 추출물을 직접 출발물질로 이용하여 본 발명의 방법을 실시한다. 본 발명은 다양한 형태로 가공된 모든 인삼, 예컨대, 수삼, 미삼, 백삼 및 홍삼에 적용될 수 있다. 본 발명에서 이용되는 인삼으로는, 공지된 다양한 인삼을 사용할 수 있으며, 고려삼(Panax ginseng), 회기삼(P. quiquefolius), 전칠삼(P. notoginseng), 죽절삼(P. japonicus), 삼엽삼(P. trifolium), 히말라야삼(P. pseudoginseng) 및 베트남삼(P. vietnamensis)을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 본 발명에서 이용되는 홍삼은 상기 인삼을 가공처리 하여 제조된 것이다. 바람직하게는, 본 발명에서 이용되는 인삼은 고려삼(Panax ginseng) 또는 전칠삼(P. notoginseng)이다.
본 발명의 가장 큰 특징은 화합물 K를 제조하는 있어서 아스퍼질러스 속 미생물의 배지를 포함하는 조배지액을 이용한다는 것이다.
본 명세서에서 사용되는 용어 “조배지액(crude medium solution)은 아스퍼질러스 속 미생물을 배양한 배지로부터 미생물이 제거된 배지를 의미한다. 이 조배지액은 예를 들어, 아스퍼질러스 속 미생물을 배양한 배지를 여과하여 제조될 수 있다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 조배지액을 제조하기 위하여 이용되는 아스퍼질러스 속 미생물은 아스퍼질러스 아와모리(Aspergillus awamori), 아스퍼질러스 피큠(Aspergillus ficuum), 아스퍼질러스 나이거(Aspergillus niger), 아스퍼질러스 오라이재(Aspergillus oryzae) 및 아스퍼질 러스 소재(Aspergillus sojae)로 구성된 군으로부터 선택되며, 보다 바람직하게는, 아스퍼질러스 나이거, 아스퍼질러스 오라이재 및 아스퍼질러스 소재이고, 가장 바람직하게는 아스퍼질러스 소재이다.
본 발명의 방법의 단계 (a)는 아스퍼질러스(Aspergillus) 속 미생물을 배지에서 배양하는 단계이다.
아스퍼질러스(Aspergillus) 속 미생물을 배양하기 위한 배지 및 배양 조건은 당업계에 공지되어 있다(참조문헌 Battaglino R. 외 3명 (1991) Appl . Microbiol . Biotechnol. 35:292-296).
본 발명에 있어서, 아스퍼질러스 속 미생물을 배양하기 위한 배지는 다양한 성분을 이용하여 제조될 수 있다. 바람직하게는, 본 발명에서 이용되는 배지는 밀기울, 미강, 대두 분말 또는 추출물, 또는 이들의 혼합물을 주재로 포함한다. 가장 바람직하게는 본 발명에서 이용되는 배지는 밀기울을 주재로 포함한다. 밀기울은 아스퍼질러스 속 미생물의 성장에 필요한 에너지원, 탄소원 및 무기질을 제공할 뿐만 아니라, 통기성이 우수하여 아스퍼질러스 속 미생물의 배양에 유리하다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명에서 이용되는 배지는 진세노사이드를 함유하는 인삼 또는 홍삼 추출물을 포함한다. 상기 인삼 또는 홍삼 추출물은 제조되는 조배지액에 진세노사이드의 전환에 필요한 효소를 아스퍼질러스가 많이 배지쪽으로 분비되도록 한다.
본 발명의 단계 (b)에 따르면, 배지를 여과하여 아스퍼질러스 속 미생물을 제거하고 조배지액을 수득한다. 상기 여과는 당업계에 공지된 다양한 방법을 통 하여 실시할 수 있다. 예를 들어, 거즈(cheese cloth)를 이용하여 배지를 여과할 수 있다. 상기 여과를 통하여, 아스퍼질러스 속 미생물 제거되고, 진세노사이드의 전환반응에 관여하는 효소를 다량 포함하는 조배지액을 얻게 된다.
본 발명의 최종 단계는, 조배지액과 진세노사이드를 반응시켜 화합물 K를 제조하는 단계이다.
본 발명의 전환 반응에서 pH는 바람직하게는 3.0-7.5, 보다 바람직하게는 4.0-6.0, 가장 바람직하게는 약 5.0이다. 효소전환 반응에서 온도는 바람직하게는 30-65℃, 보다 바람직하게는 40-60℃, 가장 바람직하게는 40-52℃이다.
본 발명의 방법에 따르면, 높은 전환율로 화합물 K를 얻을 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 용어 “전환율”은 인삼 또는 홍삼의 분말 용해액 또는 추출액을 출발물질로 하여 전환반응을 실시하는 경우, 반응 출발물 속에 포함된 화합물 K의 전구체 몰수에 대하여 반응 결과물에 포함된 화합물 K의 몰수 비를 의미한다. 본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 화합물 K에 대한 전환율은 30-99%, 보다 바람직하게는 50-99%, 가장 바람직하게는 60-99%이다.
인삼 또는 홍삼의 분말 용해액 또는 추출액을 출발물질로 하여 전환반응을 실시하는 경우, 반응 출발물 속에 포함된 화합물 K의 전구체 몰%에 대하여 반응 결과물에 포함된 화합물 K의 몰% 비를 의미한다. 본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 화합물 K에 대한 전환율은 30-99%, 보다 바람직하게는 50-99%, 가장 바람직하게는 60-99%이다.
특히, 아스퍼질러스 소재의 배지를 이용한 경우, 96%의 전환율을 나타내는 데(참조: 실시예 2), 이는 어떠한 종래기술에도 언급되지 않은 높은 전환율로서 매우 놀라운 것이다.
본 발명의 방법에 따르면, 인삼 또는 홍삼의 진세노사이드로부터 높은 수율로 보다 간단하게 화합물 K를 얻을 수 있다.
위에서 상세히 설명한 바와 같이, 본 발명은 보다 개선된 수율은 나타내는 진세노사이드의 화합물 K로의 전환 방법을 제공한다. 본 발명의 방법에 따르면, 인삼 또는 홍삼의 진세노사이드로부터 높은 수율로 보다 간단하게 화합물 K를 얻을 수 있다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.
실시예
실시예
1:
조배지액
(
crude
medium
solution
) 준비
밀기울 12 g, 증류수 15 ml 및 인삼 주정 추출 분말 0.3 g으로 배지를 준비 후 121℃에서 40분간 멸균하고 상온으로 냉각하였다. 이어, 활성화된 균주가 자란 한천 배지 조각(agar block)을 상기 준비한 배지에 접종하고, 균일하게 섞어준 후 25℃에서 배양 하였다. 이용된 균주는 한국미생물보존센터에서 구입하였으며, 아스퍼질러스 아와모리(Aspergillus awamori KCCM 60246), 아스퍼질러스 피큠(Aspergillus ficuum KCCM 60350), 아스퍼질러스 나이거(Aspergillus niger KCCM 11239), 아스퍼질러스 오라이재(Aspergillus oryzae KCCM 12089), 아스퍼질러스 소재(Aspergillus sojae KCCM 60354), 아스퍼질러스 버지콜러(Aspergillus versicolor KCCM 60336), 크립토코커스 네오포만스(Cryptococcus neoformans KCCM 50564), 클루이베로마이세스 랙티스(Kluyveromyces lactis KCCM 34758), 라이조푸스 오라이재(Rhizopus oryzae KCCM 11697), 트라이코더마 롱기브라키아툼(Trichoderma longibrachiatum KCCM 60389), 트라이코더마 리제이(Trichoderma reesei KCCM 11770) 및 트라이코더마 비리데(Trichoderma viride KCCM 11246) 등이다. 배양 4일 내지 6일 후, 50 mM-아세트산나트륨 완충용액(sodium-acetate buffer, pH 5.0) 50 ml을 균주가 성장한 배지에 넣고 1시간 동안 균일하게 혼합하였다. 그런 다음, 거즈(Cheese cloth)로 거른 배지-완충용액 혼합물을 6000 rpm 4℃에서 1시간 동안 원심분리하여 상층액을 얻어 이를 조배지액으로 사용하였다. 조배지액은 미생물 및 배지의 고형분이 제거된 것으로 pH 5.0이다.
실시예
2: 반응 및 반응
역가
측정
당이 제거된 인삼사포닌 혼합물 0.3%와 실시예 1에서 제조한 조배지액 50 %(v/v)(밀기울을 주성분으로 이용한 배지)을 pH 5.0, 40℃에서 반응시켰다. 20시간 및 44시간 후 반응액에서 각각 샘플을 취하여 샘플 대비 부탄올 30 %(v/v)를 넣고 강하게 혼합한 후, 부탄올 상층액을 취하고 건조시켰다. 부탄올 추출물을 메탄올에 용해한 다음, 광산란검출기(Evaporative Light Scattering Detector, ELSD; Alltech사)가 부착된 고성능액체크로마토그래피(High Performance Liquid Chromatography, HPLC; Waters사 Empower system)로 정량 분석을 실시하였다. 컬럼은 ZORBAX Edipse XDB-C18 (4.6 x 250 mm, 5 micron), 컬럼의 오븐 온도는 30℃, 샘플의 로딩양은 10 ㎕로 하였다. 이동상으로는 100% 물과 100% 아세트니트릴로 75분간 농도구배 하여 얻었다. 유속은 분당 2.5 ml로 하였으며, 검출기는 드리프트관(Drift tube) 온도는 60℃, 질소가스 유속 1.4L/분으로 하여 사용하였다.
진세노사이드 Rb1(ginsenoside-Rb1), 진세노사이드 Rb2(ginsenoside-Rb2), 진세노사이드 Rc(ginsenoside-Rc), 진세노사이드 Rd(ginsenoside-Rd), 진세노사이드 화합물 K(ginsenoside compound-K) 및 프로토파낙사다이올(20(S)-protopanaxadiol) 표준물질을 (주)인삼공사에서 구입하여 정량에 이용하였다.
실험 결과는 도 1a-1g에 나타나 있다. 도 1a-1g에서 화살표로 표시한 것이 화합물 K에 대한 피크이다. 화합물 K로의 전환율은 다음과 같이 계산하였다. 전구체 진세노사이드들이 화합물 K로 변화함에 따라 결합한 당의 숫자가 줄어드는 점을 감안하여 몰 수로 환산하여 전환율을 계산하였다: [ 반응결과물 속 화합물 K의 몰수 / 반응출발물 속 전구체들(진세노사이드 Rb1 + 진세노사이드 Rb2 + 진세노사이드 Rc + 진세노사이드 Rd)의 몰수의 합 X 100]
화합물 K로의 전환율이 표 1에 정리되어 있다.
미생물 종류 | 화합물 K로의 전환율(%) |
아스퍼질러스 아와모리(Aspergillus awamori KCCM 60246) | 38.6 |
아스퍼질러스 피큠(Aspergillus ficuum KCCM 60350) | 35.9 |
아스퍼질러스 나이거(Aspergillus niger KCCM 11239) | 55.4 |
아스퍼질러스 오라이재(Aspergillus oryzae KCCM 12089) | 66.2 |
아스퍼질러스 소재(Aspergillus sojae KCCM 60354) | 96.0 |
아스퍼질러스 버지콜러(Aspergillus versicolor KCCM 60336) | - |
크립토코커스 네오포만스(Cryptococcus neoformans KCCM 50564) | - |
클루이베로마이세스 랙티스(Kluyveromyces lactis KCCM 34758) | - |
라이조푸스 오라이재(Rhizopus oryzae KCCM 11697) | - |
트라이코더마 롱기브라키아툼(Trichoderma longibrachiatum KCCM 60389) | - |
트라이코더마 리제이(Trichoderma reesei KCCM 11770) | - |
트라이코더마 비리데(Trichoderma viride KCCM 11246) | 4.5 |
상기 표에서 확인할 수 있듯이, 아스퍼질러스 속에 속하는 미생물을 이용하여 제조한 조배지액을 이용한 경우에 화합물 K로의 전환율이 우수하게 나타났다. 특히, 아스퍼질러스 아와모리, 아스퍼질러스 피큠, 아스퍼질러스 나이거, 아스퍼질러스 오라이재 및 아스퍼질러스 소재를 이용한 경우에 우수한 결과가 나왔으며, 특히 아스퍼질러스 소재의 조배지액은 96.0%의 전환율로 매우 놀라운 결과를 나타내었다. 또한, 트라이코더마 비리데의 조배지액도 미약하지만 화합물 K 전환 활성을 나타내었다.
이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현 예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.
도 1a는 조배지액으로 처리되는 않은 군(대조군)에 대한 HPLC 크로마토그램이다.
도 1b-1g는 각각, 아스퍼질러스 아와모리(1b), 아스퍼질러스 피큠(1c), 아스퍼질러스 나이거(1d), 아스퍼질러스 오라이재(1e), 아스퍼질러스 소재(1f) 및 트라이코더마 비리데(1g)의 배지를 처리한 결과를 보여주는 HPLC 크로마토그램이다. 화살표는 화합물 K에 대한 피크를 지시한다.
Claims (11)
- 다음의 단계를 포함하는 진세노사이드의 화합물 K로의 전환방법:(a) 아스퍼질러스(Aspergillus) 속 미생물을 배지에서 배양하는 단계;(b) 상기 배지를 여과하여 상기 아스퍼질러스 속 미생물을 제거하고 조배지액(crude medium solution)을 수득하는 단계; 및(c) 상기 조배지액과 진세노사이드를 반응시켜 화합물 K를 제조하는 단계.
- 제 1 항에 있어서, 상기 진세노사이드는 인삼 또는 홍삼의 분말 또는 추출물에 포함되어 있는 것을 특징으로 하는 방법.
- 제 1 항에 있어서, 상기 아스퍼질러스 속 미생물은 아스퍼질러스 아와모리(Aspergillus awamori), 아스퍼질러스 피큠(Aspergillus ficuum), 아스퍼질러스 나이거(Aspergillus niger), 아스퍼질러스 오라이재(Aspergillus oryzae) 및 아스퍼질러스 소재(Aspergillus sojae)로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
- 제 3 항에 있어서, 상기 아스퍼질러스 속 미생물은 아스퍼질러스 소재(Aspergillus sojae)인 것을 특징으로 하는 방법.
- 제 1 항에 있어서, 상기 단계 (c)는 pH 4.0-6.0에서 실시하는 것을 특징으로 하는 방법.
- 제 1 항에 있어서, 상기 단계 (c)는 40-60℃에서 실시하는 것을 특징으로 하는 방법.
- 제 1 항에 있어서, 상기 방법의 화합물 K에 대한 전환율은 30-99%인 것을 특징으로 하는 방법.
- 제 7 항에 있어서, 상기 방법의 화합물 K에 대한 전환율은 50-99%인 것을 특징으로 하는 방법.
- 아스퍼질러스 속 미생물을 배양한 배지로부터 아스퍼질러스 속 미생물이 제거된 배지를 함유하는 조배지액(crude medium solution)을 포함하는 진세노사이드의 화합물 K로의 전환용 조성물.
- 제 9 항에 있어서, 상기 아스퍼질러스 속 미생물은 아스퍼질러스 아와모리, 아스퍼질러스 피큠, 아스퍼질러스 나이거, 아스퍼질러스 오라이재 및 아스퍼질러스 소재로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
- 제 10 항에 있어서, 상기 아스퍼질러스 속 미생물은 아스퍼질러스 소재인 것을 특징으로 하는 조성물.
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