KR20080106157A - Ｆａｓ 결합 항체 - Google Patents

Abstract

본 발명은 사람 지방산 신타제(hFAS)를 인지하고 이전에 공지된 항-hFAS 항체와는 상이한 모노클로날 항체(MAb)에 관한 것이다. 당해 MAb를 포함하는 조성물, 장치 및 키트가 다양한 응용에서 MAb를 사용하는 방법과 함께 제공된다.

사람 지방산 신타제, hFAS, 모노클로날 항체

Description

ＦＡＳ 결합 항체{FAS Binding antibodies}

관련 출원

본 출원은 2005년 8월 17일자로 출원된 미국 가출원 제60/709,246호의 우선권에 대한 이득을 주장하고, 이의 전문은 본원에 참조로서 인용된다.

본 발명은 사람 지방산 신타제(hFAS)를 인지하는 모노클로날 항체(MAb)에 관한 것이다. MAb를 포함하는 조성물, 장치 및 키트는 다양한 응용분야에서 MAb를 사용하는 방법과 함께 제공된다.

유방암 환자 기원의 종양 세포에서 발견된 예후적(prognostic) 분자는 지방산 신타제(FAS)로서 동정되었다[문헌참조: Kuhajda et al. (1994) "Fatty acid synthesis: a potential selective target for antineoplastic therapy." Proc Natl Acad Sci U S A., 91(14):6379-83]. FAS는 약 270-kDa 폴리펩타이드이고 종양 지방산 신타제는 말로닐 CoA-의존성 양상으로 NADPH를 산화시키고 아세틸 -CoA, 말로닐 -CoA, 및 NADPH로부터 80% 팔미테이트, 10% 미리스테이트, 및 10% 스테아레 이트로 이루어진 지방산을 합성하며 이의 비활성(specific activity)은 mg당 분당 산화된 NADPH 624nmol이다. 지방산 신타제의 발현이 상승된 종양 세포주에 대한 연구는 지방산 신타제의 증가가 내인성 지방산 합성에 대한 전체 세포성 증가와 더불어 발생함을 입증하였다. FAS는 또한 세포에서 아실글리세롤 합성의 세룰레닌 매개 억제에 대한 표적으로서 동정되었다.

이어서, FAS는 효소 매개 드 노보(de novo) 지방산 합성에서 주요 역할을 하는 것으로서 인지되었다. FAS 발현은 유방암 뿐만아니라 결장직장암 및 전립선암을 포함하는 사람 악성 종양의 발암과정에 연루되어 있는 것으로 밝혀졌다. 예를 들어, 문헌[Shurbaji et al. (1996) "Immunohistochemical detection of a fatty acid synthase (OA-519) as a predictor of progression of prostate cancer." Hum Pathol. 27(9) :917-21]을 참조하고 여기서, 친화성 정제된 FAS 항체가 면역조직화학에 의한 1차 전립선암을 조사하는데 사용되었다.

FAS와 결합하는 2개의 원형적 모노클로날 항체(MAb)가 동정되었고 효소 연결 면역흡착 분석(ELISA)에서 FAS를 정량하는데 사용되었다[문헌참조: Wang et al., "A new model ELISA, based on two monoclonal antibodies, for quantification of fatty acid synthase." (2002) J Immunoassay Immunochem. 23(3):279- 92]. M6으로서 동정된 MAb는 ELISA에서 포획 항체로서 사용된 반면, M3로서 동정된 MAb는 표지되고 검출 항체로서 사용되었다. 당해 2개의 MAb 병용을 기초로 한 ELISA는 문헌[참조: Wang et al. ("Two-site ELISA for the quantitative determination of fatty acid synthase." Clin Chim Acta. 304(1- 2):107-15, (2002))]에 기술된 초 기 폴리클로날-모노클로날 조합 ELISA를 기초로 한 이전의 분석법 보다 개선된 것으로서 인지되었다..

또한, 문헌[참조: Innocenzi et al. ("Fatty acid synthase expression in melanoma." J Cutan Pathol. 30(l):23-8, (2003))]은 M6 항체를 사용한 실험을 기술하고 있다. 문헌[참조: Krontiras et al. ("Fatty acid synthase expression is increased in neoplastic lesions of the oral tongue." Head Neck 21(4):325-9, (1999))]은 항-OA-519 항체로서 M3 및 M6을 제공하는 제조원[ChekTec of Baltimore, Maryland]으로부터 시판되는 항체의 용도를 기술하고 있다. 문헌[참조: Pizer et al. ("Increased fatty acid synthase as a therapeutic target in androgen-independent prostate cancer progression." Prostate 47(2): 102-10 (2001))]에서는 하기된 바와 같이 미국 특허 제5,759,791호와 관련된 미국 특허 제5,864,011호에 기재된 바와 같은 항체를 사용하였다.

본원에서 상기 문헌에 대한 논의 및 인용은 이를 관련 선행 기술로서 인정하고자 하는 것은 아니다. 날짜에 대한 모든 진술 또는 문헌의 내용에 관한 제공은 출원인에게 유용한 정보를 기초로 하고 있는 것이고 문헌의 날짜 또는 내용의 정확성을 인정하는 것은 아니다.

본 발명의 요약

본 발명은 사람 지방산 신타제(hFAS)의 에피토프를 인지하여, 단편을 포함한 hFAS 폴리펩타이드에 결합하는 항체를 제공한다. 본 발명의 양태는 이전에 공지되 지 않은 다양한 정도로 특정 hFAS 폴리펩타이드 뿐만 아니라 전체 길이에 결합하는 항체를 포함한다. 기타 양태는 다른 hFAS 폴리펩타이드는 제외하고 하나 이상의 hFAS 폴리펩타이드에 결합하는 항체를 포함한다. 본 발명은 또한 본원에 기재된 항체를 포함하는 조성물 및 제제, 장치 및 기구, 제품 및 방법을 제공한다. 본 발명의 추가의 양태는 비제한적인 예로서 하이브리드 항체, 변형된 항체, 키메라 항체, 접합 항체, 단일쇄 항체 및 사람화된 항체를 포함하여, 기재된 항체의 변형된 형태 또는 유도체를 포함한다. 기타 변형된 형태는 hFAS 폴리펩타이드와 결합하는 Fab, Fab', F(ab')₂ 및 Fv 단편들을 포함하는, 기재된 항체의 일부를 포함한다.

따라서, 제1 측면에서, 본 발명은 hFAS 폴리펩타이드와 결합하고 이전에 공지된 FAS 결합 항체와는 상이한 항체 및 이의 단편을 제공한다. 몇몇 양태에서, 항체는 모노클로날 항체이고 이는, 항체 집단의 공급원 또는 항체 집단이 만들어지거나 제조되는 수단과는 상관 없이, 항체 집단이 균일한 항체의 조성물 또는 제제이다. 다른 양태에서, 항체는 모노클로날 항체의 혼합물이어서 항체 집단은 혼합물중에서 불균일하다.

본 발명의 모노클로날 항체는 결합 특성 및 이어서 결합 특이성에 있어서, M3 및 M6 모노클로날 항체와 같은 이전에 공지된 hFAS 결합 항체와는 구별될 뿐만 아니라 ATCC 기탁번호 제10853호로 기탁된 하이브리도마 세포 OA-519-M1 또는 HPR-2에 의해 생산되는 미국 특허 제5,759,791호에 언급된 항-Hpr 모노클로날 항체와도 구별된다. 항-Hpr 항체는 FAS와 교차반응하는 것으로 관찰되었지만 본 발명은 몇몇 양태에서 Hpr과는 교차반응하지 않는 항-hFAS 항체에 관한 것이다.

이론적인 구애 없이 본 발명의 이해를 개선하기 위해 제공된 본 발명의 항체는 hFAS 폴리펩타이드와의 결합에 관여하는 CDR(상보성 결정 영역)중 적어도 하나에서 이전에 공지된 hFAS 결합 항체와는 구조에 있어서 상이하다. 이에 대한 진실은 부분적으로, 항체 구조의 VL 및 VH 초가변 영역을 포함하는 CDR을 포함한 널리 보고된 요소들의 구조적 배열을 기초로 한 것이다. 물론, 본 발명의 항체는 또한 하나 이상의 CDR 및/또는 하나 이상의 CDR내 하나 이상의 아미노산 위치에서 공지된 hFAS 결합 항체와는 상이할 수 있다. 이들 차이점은 FAS에 대해 이전에 공지된 항체와는 상이한 에피토프에 결합하는 특성을 갖는 본 발명의 항체를 제공할 수 있다.

따라서, 본 발명은 또한 M3 또는 M6 항체와 같은 이전의 FAS 결합 항체의 CDR과는 구별되는 hFAS 결합 항체 기원의 CDR을 제공한다. 본 발명의 CDR은 정상적으로 발견되는 항체로부터 분리된 형태일 수 있다. 항체로부터 단백질 분해 절단 또는 항체의 CDR(또는 CDR 일부)를 암호화하는 핵산 서열의 서열분석 및 분리에 의해 분리될 수 있다. CDR, 또는 CDR을 함유하는 폴리펩타이드는 비제한적인 예로서 재조합적으로 다른 폴리펩타이드와 연결되어 융합 단백질을 형성하거나 다른 항체의 CDR를 대체하여 키메라 항체(또는 이의 단편)를 형성하는데 사용될 수 있다. CDR의 당해 양태 및 사용은 CDR을 암호화하는 핵산 서열을, 융합 단백질 또는 키메라 항체를 암호화하는 보다 큰 서열로 혼입시키는 재조합 DNA 기술을 포함하는, 당업자에게 공지된 방법에 의해 수행될 수 있다.

본 발명의 항체에 의해 제공되는 상이한 결합 특이성은 이들의 용도에 대한 이득 및 잇점을 제공한다. 몇몇 양태에서, 비-hFAS 폴리펩타이드와의 비교적 낮은 교차 반응에 비해 hFAS 폴리펩타이드에 대해서만 비교적 높은 특이성을 갖는 항체는 hFAS 폴리펩타이드가 비교적 복잡한 환경에서 항체에 의해 결합되는 방법에서 유리하게 사용될 수 있다. 당해 환경의 비제한적인 예는 i) 항체에 노출된 수많은 다른 비-hFAS 항원을 포함하는 샘플에 대한 웨스턴 블롯팅(또는 면역블롯팅)의 경우 및 ii) 샘플이, 항체에 제공되는 수많은 기타 비-hFAS 항원을 제공하는 면역조직화학(IHC)의 경우를 포함한다. 기타 양태에서, 전장 hFAS 폴리펩타이드에 대해 비교적 높은 특이성을 갖는 항체는 보다 짧은 hFAS 단편에 대해 비교적 낮은 교차 반응을 나타내지 않으면서 전장의 분자를 검출하는데 유리하게 사용될 수 있다. 또한, 보다 짧은 hFAS 단편 및 임의로 전장 또는 기타 단편들을 인지하는 항체는 다른 피검체 기원의 샘플이 아닌 몇몇 피검체 기원의 생물학적 샘플을 포함하는 몇몇 샘플에 존재할 수 있는 hFAS의 단백질 분해 단편을 검출하는데 유리하게 사용될 수 있다.

추가의 양태에서, 항체는 hFAS 폴리펩타이드의 변성되거나 고정된 형태에 대해 특이성을 가질 수 있다. 비제한적인 예는 SDS 겔 전기영동 후 웨스턴 블롯팅에서와 같이, 세제로 변성된 hFAS의 전장 또는 단백질 분해 단편에 대해 특이성을 갖는 항체의 경우이다. 또 다른 비제한적인 예는 포르말린 고정되고 파라핀 매립된(FFPE) 샘플을 포함하는, IHC에 사용되는 세포 또는 조직의 고정된 샘플에서 처럼 포르말린, 포름알데하이드, 파라포름알데하이드, 글루타르알데하이드 및/또는 알코올을 포함하지만 이에 제한되지 않는 제제로 고정된 hFAS의 전장 또는 단백질 분해 단편에 대해 특이성을 갖는 항체의 경우이다.

제2 측면에서, 본 발명의 항체를 포함하는 조성물 및 제제가 제공된다. 조성물 및 제제는 하나 이상의 hFAS 폴리펩타이드에 결합되는 항체의 복합체를 포함하는 것들 뿐만 아니라 본 발명의 항체 및 항체를 생산하기 위해 사용되는 세포 또는 세포 성분을 포함하는 것들과 같이 비교적 조악한 형태의 것들일 수 있다. 다른 양태에서, 조성물 또는 제제는 본원에 기재된 바와 같은 키트 또는 방법에 사용하기 위한 것들일 수 있다. 추가의 양태에서, 조성물 또는 제제는 고형상에 대해 항체를 고정화시키는데 사용되는 항체의 용액과 같이, 본 발명의 항체의 적용 또는 피복을 위한 것들일 수 있다.

물론, 본 발명의 항체의 고정화된 형태는 본원에 제공된 측면이다. 비제한적인 예는 다공성, 미세다공성(평균 공극 직경이 약 1마이크론 미만) 또는 거대다공성(평균 공극 직경이 약 10마이크론 이상) 물질, 예를 들어, 막, 셀룰로스, 니트로셀룰로스 또는 유리 섬유; 아가로스 또는 폴리아크릴아미드 또는 라텍스로 이루어진 것과 같은 비드; 또는 폴리스티렌으로 만들어진 디쉬, 플레이트 또는 웰의 표면과 같은 고형상에 결합되는 항체를 포함한다.

추가의 측면에서, 본 발명은 본 발명의 항체. 또는 항체의 조합물의 사용을 포함하는 방법을 제공한다. 상기 언급된 바와 같이, 웨스턴 블롯팅 또는 IHC 방법에서 항체의 용도에 대한 방법은 본 발명의 일부로서 고려된다. 추가의 방법은 효소 연결 면역흡착 분석(ELISA) 및 방사선면역 분석(RIA)와 같은 당업계에 공지된 것들을 포함한다. 그러나, 보다 일반적으로, 어떠한 측면에서도 hFAS 폴리펩타이 드를 검출하는 방법이 고려된다. 당해 모든 방법은 i) 본 발명의 항체를 사용한 hFAS 폴리펩타이드 자체의 검출 또는 ii) 본 발명의 항체와 hFAS 폴리펩타이드의 복합체의 검출을 기초로 하는 공통된 특징 또는 기작을 갖는다. 당해 2개 유형의 검출은 hFAS 폴리펩타이드가 존재하는지의 여부에 대한 궁극적인 문제를 해결한다. 특히, 본 발명의 항체는 당해 검출에 사용되기 때문에, 당해 방법 모두는 hFAS에 대한 면역분석으로서 간주될 수 있다.

검출은 hFAS 폴리펩타이드의 존재 또는 수준의 지표로서 직간접적으로(정량적으로 또는 정성적으로) 수행될 수 있다. 또한, 당해 검출 수행을 사용하여 hFAS 폴리펩타이드의 부재를 결정할 수 있다. 본 발명의 방법에서 복합체의 형성은 본 발명의 항체가 hFAS 폴리펩타이드와 결합하는 면역학적 반응 조건하에서 이루어질 수 있다. 본 발명의 방법에서 복합체의 형성은 단순히, 항체와 hFAS 폴리펩타이드에 대한 어떠한 조건하에서도, 복합체가 형성된 후의 복합체의 검출에 관한 것일 수 있다. 비제한적인 예는 복합체 형성이 유기체 또는 세포내의 생체내에서 이루어지는 방법이다.

몇몇 양태에서, 검출은 피검체 또는 개체 기원의 유체 또는 세포 함유 샘플과 같은 생물학적 샘플에서 hFAS의 존재 또는 부재에 대한 것이다. 당해 샘플은 하나 이상의 hFAS 폴리펩타이드를 함유하는 것으로 의심될 수 있고 이 경우에, 본 발명의 방법은 이의 존재에 대한 초기 지표를 제공하는데 사용되거나, 또한 당해 샘플은 본 발명의 방법 또는 다른 방법을 사용하여 하나 이상의 hFAS 폴리펩타이드의 함유 여부를 미리 결정할 수 있고 이 경우에, 본 발명의 방법은 이전의 결정을 확인하거나 부정하는 근거를 제공한다.

본 발명은 또한 암과 같은 질환의 존재를 진단하기 위한 수단으로서 hFAS 폴리펩타이드를 함유하는 복합체의 검출 방법을 제공한다. 당해 검출은 또한 hFAS의 존재 또는 수준과 질환의 관계를 기초로 피검체의 질환의 과정 또는 재발을 모니터하는데 사용될 수 있다. 몇몇 양태에서, 질환은 유방암, 전립선암, 결장암, 난소암, 폐암, 피부암(흑색종), 구강 점막암 또는 편평상피 조직 암, 요로암, 위장암, 또는 FAS를 발현할 수 있는 육종 또는 림프종/백혈병과 같은 임의의 기타 악성종양이다.

hFAS 폴리펩타이드의 검출은 또한 환자의 임상적 또는 의학적 처치의 일부로서 사용될 수 있다. 몇몇 양태에서, 당해 검출은 환자 기원의 샘플에서 hFAS 폴리펩타이드(들)의 존재 또는 수준에 근거하여 FAS 억제제를 환자에게 투여할 것인지의 여부를 결정하는 방법에 사용된다. 추가의 양태에서, 당해 결정은 샘플내 hFAS 폴리펩타이드(들)의 존재 또는 수준에 근거하여 진단되는 질환(상기된 것들을 포함하지만 이에 제한되지 않는)을 치료하기 위해 FAS 억제제 또는 기타 제제의 투여가 경감되도록 하는 당해 질환의 치료에 대한 것일 수 있다. FAS를 표적으로 하는 화학치료의 비제한적인 예는 미국 특허 제5,759,837호 및 미국 특허원 제2002/0173447 A1호에 기재된 것들을 포함한다.

다른 양태에서, 당해 결정은 샘플내 hFAS 폴리펩타이드(들)의 존재 또는 수준에 근거하여, FAS 억제제 또는 기타 제제의 투여가 질환 발병을 예방하거나 이의 중증도 또는 발생 정도를 감소시키도록 능히 지적되는 질환의 예방에 대한 것일 수 있다. 따라서 이러한 본 발명의 측면은 질환 개시 또는 진행에서 FAS에 의해 매개되는 바와 같은 지방산 합성의 억제에 기초한 질환의 화학적 예방 분야에 관한 것이다.

기타 임상적 방법은 FAS 결합 항체가 치료제로서, 전체 또는 일부로 사용되는 방법들을 포함한다. 당해 방법은 FAS와 결합하는 당해 항체 또는 이의 FAS 결합 부위의 투여를 포함한다. 몇몇 양태에서, 당해 항체 또는 이의 일부는 당해 억제가 필요한 피검체의 FAS 활성을 억제하거나 감소시킨다. 다른 양태에서, 당해 항체 또는 이의 일부는 다른 제제와 연결되거나 접합되어 FAS 활성을 억제하거나 감소시킬 수 있다. 추가의 양태에서, 다른 제제는 FAS 활성을 나타내는 세포에 대한 독성제이다. 당해 항체 또는 이의 일부는 치료제로서 직접 투여될 수 있거나, 본 발명의 조성물의 일부로서 투여되거나 접합체 또는 융합 폴리펩타이드의 일부로서 투여되거나 세포 또는 피검체에서 항체(또는 단편 또는 융합 폴리펩타이드)를 발현하는 핵산 작제물로서 투여될 수 있다.

추가로 임상적 방법은 본원에 기재된 바와 같은 hFAS 폴리펩타이드의 검출을 기초로 하는 환자에 대한 의학적 처치의 제공에 관계된 것들을 포함한다. 몇몇 양태에서, 당해 방법은 검출된 폴리펩타이드의 존재 또는 수준을 결정함을 기초로 하는 진단 서비스의 제공에 관한 것이고 이는 검출된 폴리펩타이드의 중대성 여부에 대한 의학적 해석이 포함되거나 포함되지 않는다. 다른 양태에서, 본 발명의 진단 서비스를 제공하는 방법은 서비스에 대한 필요성에 대한 결정이 선행된다. 추가의 양태에서, 당해 방법은 서비스 수행에 대한 변상 요구 또는 접수 작업 뿐만 아니라 서비스 수행을 모니터링하는 작업을 포함한다.

추가의 양태 및 특징은 부분적으로 후속 기재에서 제시되고 부분적으로는 명세서의 검토 즉시 당업자에게 자명하거나 본 발명의 수행에 의해 습득될 수 있다. 본 발명의 특징 및 이점은 명세서에 기재된 수단, 병용 및 방법을 수단으로 실현되고 달성될 수 있다.

정의

본원에 사용된 바와 같이, 단위, 접두사 및 기호는 일반적으로 국제 기구(System International de Unites (SI))에서 수용된 형태로 지칭된다. 수적 범위는 범위를 한정하는 숫자를 포괄한다. 본원에 제공된 표제는 전반적으로 명세서에 언급된 본 발명의 다양한 측면 또는 양태를 제한하지 않는다. 따라서, 바로 하기에 정의된 용어는 이의 실체가 본원 명세서를 참조로 보다 완전하게 정의된다.

용어 "사람 지방산 신타제" 또는 "hFAS"는 미국 특허 제5,759,791호 및 이것이 유래하는 모 출원에서 암 관련 항원으로서 이전에 동정된 폴리펩타이드를 언급한다. 당해 항원은 또한 당해 분야에서 QA-519로서 언급되고 웹 사이트(www.chem.qmul.ac.uk/iubmb/enzyme/)에 기재된 바와 같이 지방산 신타제 (E.G. 2.3.1.85)로서 국제 기구[Nomenclature Committee of the International Union of Biochemistry and Molecular Biology (NC-IUBMB) ]에 의해 정의되어 있다. 당해 용어는 본 발명의 항체에 의해 인지되는 임의의 hFAS 또는 이의 단편 뿐만 아니라 아미노산 서열에 의한 특정 사람 지방산 신타제로 제한되지 않는다. 당해 용어는 또한 세포외 환경 및 체액에서 발견되는 세포 유리된 형태 뿐만 아니라 세포내 잔 류하는 전장 서열의 단편을 포함하는, hFAS 단백질 또는 펩타이드를 언급한다. 몇몇 경우에, 전장 hFAS의 단편은 전장 hFAS를 대표하는(독특한) 하나이다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "폴리펩타이드", "펩타이드" 및 "단백질"은 아미노산 잔기의 중합체를 언급한다. 이들 용어는 또한 전반적으로 중합체가 본 발명의 항-hFAS 항체에 의해 인지되는 기능과 같은 기능을 보유하도록 보존성 아미노산 치환을 포함하는 중합체를 포함한다.

본원에 사용된 바와 같이, "항체"는 면역글로불린 분자 및 특정 항원과 면역학적으로 반응성인 이의 단편들을 언급한다. 용어 "항체"는 다수의 당해 분자를 언급하고 단일 유형의 항체의 균일 집단으로 제한되지 않는다. 용어 "항체"는 또한 키메라 항체(예를 들어, 사람화된 쥐 항체), 이종접합체 항체(예를 들어, 이특이적 항체) 및 재조합 단일 쇄 Fv 단편(scFv) 및 디설파이드 안정화된(dsFv) Fv 단편(예를 들어, 미국 특허 제5,747,654호)와 같은 유전자 조작된 형태를 포함한다. 용어 "항체"는 또한 항체의 항원 결합 형태(예를 들어, Fab', F(ab')₂, Fab, Fv 및 rlgG. 문헌참조: Pierce Catalog and Handbook, 1994-1995 (Pierce Chemical Co., Rockford, 111.))를 포함한다. 당해 용어 "항-hFAS"는 hFAS에 대해 생성된 항체를 언급한다.

사람화된 항체는 사람 항체 서열을 함유하는 분자내 하나 또는 2개의 사람외 CDR를 함유하는 항체, 또는 이의 면역학적 활성 단편을 언급한다. 사람외 CDR(들)은 마우스, 래트, 래빗 또는 기타 포유동물 항체를 포함하는, 임의의 공급원으로부터 기원할 수 있다. 사람화된 항체 또는 이의 단편에서 사람 부분의 존재는 사람 피검체에 투여될 때 면역 반응을 유발할 가능성이 적다. 사람화된 항체 또는 이의 단편은 항체 또는 이의 단편의 길이를 따라, 약 50% 이상, 약 55% 이상, 약 60% 이상, 약 65% 이상, 약 70% 이상, 약 75% 이상, 약 80% 이상, 약 85% 이상, 약 90% 이상, 또는 약 95% 이상의 사람 항체 서열을 함유할 수 있다.

본원에 사용된 바와 같이 hFAS와 면역학적으로 반응성인 항체는 hFAS 폴리펩타이드를 사용한 항체 생산 동물의 면역화와 같은 공지된 방법에 의해 생성될 수 있다. 모노클로날 항체는 당업자에게 친숙한 다양한 기술에 의해 수득될 수 있다. 당해 모노클로날 항체를 제조하기 위한 기술에 관한 기재는 문헌[참조: Stites, et al. (eds.) BASIC AND CLINICAL IMMUNOLOGY (4TH ED.), Lange Medical Publications, Los Altos, Calif, (본원에 참조로서 인용됨); Harlow & Lane, supra; Goding, MONOCLONAL ANTIBODIES: PRINCIPLES AND PRACTICE (2D ED.), Academic Press, New York, KY. (1986); Kohler & Milstein, Nature 256:495497 (1975)]; 및 특히, 모노클로날 항체를 제조하기 위한 비제한적인 방법을 논의하는 문헌 [Chowdhury, P. S., et al. MoI. Immunol. 34:9 (1997)]에서 찾을 수 있다.

모노클로날 항체를 제조하는 방법은 목적하는 면역원, 이 경우에, hFAS 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산 서열로 동물을 면역화시킴을 포함한다. 이러한 기술은 단백질 기본 면역화에 대해 적어도 2개의 이점을 갖는다: 단백질 정제의 불필요; 및 면역원에 대한 적합한 해독후 변형의 가능성 증가.

일반적으로, 면역글로불린 분자는 2개 유형의 폴리펩타이드 쇄를 갖는다: 중쇄 및 경쇄. 분자내에는 각각 2개의 중쇄 및 경쇄가 있고 각 분자에서 2개의 결합 부위를 생성시킨다. 각각의 쇄는 불변 영역 및 가변 영역을 포함한다. 하나의 경쇄 및 하나의 중쇄 가변 영역은 소위 상보성 결정 영역 또는 CDR로 불리우는 3개의 초가변 영역이 간간이 존재하는 "골격" 영역을 함유한다[문헌참조: SEQUENCES OF PROTEINS OF IMMUNOLOGICAL INTEREST, Kabat, E., et al, U.S. Department of Health and Human Services, (1987); 본원에 참조로서 인용됨]. 당해 부류내에, 상이한 경쇄 또는 중쇄의 골격 영역의 서열은 비교적 보존성이다. 하나의 경쇄 및 하나의 중쇄의 조합된 골격 영역은 CDR을 3차원 공간에 위치시켜 이들이 항원의 에피토프와 상호작용하여 이에 결합될 수 있도록 한다. CDR은 전형적으로 각 쇄의 N-말단부터 순차적으로 번호를 매겨 CDRl, CDR2, 및 CDR3으로 언급된다.

본원에 사용된 바와 같이, 용어 "단일쇄 Fv" 또는 "scFv"는 통상적인 2개의 쇄의 항체에서 중쇄 및 경쇄가 단일 결합 부위와 함께 하나의 쇄를 형성하도록 연결된 항체를 언급한다. 통상적으로, 링커 펩타이드는 2개의 쇄 사이에 위치하여 가변 영역이 적당하게 폴딩되고 위치되도록 하여 활성 결합 부위를 형성한다. 용어 "링커 펩타이드" 는 가변 중쇄를 가변 경쇄에 간접적으로 부착시키는 항체 결합 단편(예를 들어, Fv 단편)내 폴리펩타이드 쇄를 언급한다.

보다 일반적으로, "링커"는 항체를 또 다른 분자에 연결시키는데 사용되는 분자이다. 링커는 항체와 다른 분자의 공유 결합을 형성시킬 수 있다. 적합한 링커는 당업자에게 널리 공지되어 있고 직쇄 또는 측쇄 탄소 링커, 헤테로 사이클릭 탄소 링커 또는 펩타이드 링커를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 항체와 다른 분자가 폴리펩타이드인 경우, 링커는 아미노산의 측쇄 그룹을 통해 구성된 아미노 산에 연결될 수 있다(예를 들어, 시스테인에 대한 디설파이드 연결을 통해). 또한, 링커는 말단 아미노산의 알파 탄소 아미노산 카복실 그룹에 연결될 수 있다.

용어 "접촉하는"은 본 발명의 항체와 hFAS 폴리펩타이드가 직접적으로 물리적으로 연합되도록 위치하여 당해 2개의 성분이 복합체를 형성하도록 위치된 것을 언급한다.

본원에 사용된 바와 같은 용어 HFAS 폴리펩타이드, 또는 hFAS 폴리펩타이드를 포함하는 복합체의 "존재 또는 부재를 결정하는"은 샘플 또는 기타 물질에서 hFAS 폴리펩타이드의 존재 또는 부재에 대한 정성적 평가를 언급한다. 당해 용어는 또한 제한되지 않지만 배경 노이즈 이상의 수준 또는 표준 세포 또는 샘플(정상적인 피검체로부터 유래하는 세포 또는 샘플을 포함)에서의 수준과 같은 특정 수준 이상으로 존재하는 hFAS 폴리펩타이드의 검출로서 간주될 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은 hFAS 폴리펩타이드의 수준을 "결정하는" 또는 "검출하는"의 사용은 정량적 또는 반-정량적 수준의 양의 평가를 언급한다. 당해 평가는 반드시 정확할 필요는 없고 대략적일 수 있다.

용어 "접합체 ", "결합 ", 및 이의 변형 어구는 하나 이상의 공유 결합 형성을 통한 2개 실체간의 물리적 접착을 언급한다. 몇몇 경우에, 이들은 2개의 폴리펩타이드를 하나의 연속 폴리펩타이드 분자로 만드는 것을 언급한다. 본 발명에서, 당해 용어는 또 다른 분자 뿐만 아니라 고형상 물질의 표면을 포함하는, 고형상 지지체 또는 기타 고형상 물질에 항체 잔기를 연결시키는 것에 대한 언급을 포함한다. 공유 결합 형성은 화학적 반응에 의해 결합을 형성시키는 것일 수 있다. 용어 "지지체"는 비드, 입자, 딥 스틱, 섬유, 필터, 막 및 실란 또는 실리케이트 지지체(예를 들어, 유리 막대)와 같은 통상적인 지지체를 언급한다. 본 발명의 접합 항체는 항체가 독소 또는 기타 잔기를 목적하는 FAS 발현 표적으로 지시하는 표적화 분자로서 작용할 수 있도록, 기타 폴리펩타이드를 포함하는 독소 또는 기타 목적하는 잔기에 부착된 항체 뿐만 아니라 표지에 부착된 항체를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 임의로, 표적은 병든 세포와 같은 세포이다.

당해 용어 "표지"는 "표지된" 분자의 존재를 지적하기 위해 검출(직간접적으로)될 수 있는 조성물을 언급한다. 따라서, 본 발명의 표지된 항체는 표지를 통해 검출될 수 있다. 당해 검출은 정량적으로 또는 정성적으로 수행될 수 있다. 적합한 표지는 결합쌍의 하나의 구성원(예를 들어, 비오틴-아비딘 또는 비오틴-스트렙아비딘 결합 쌍에서 아비딘), 방사선동위원소, 뉴클레오타이드 발색단, 효소(예를 들어, 고추 냉이 퍼옥시다제, 알칼린 포스파타제 및 ELISA에서 기타 사용되는 효소), 기질, 형광 분자(예를 들어, 플루오세인 이소티오시아네이트, 텍사스 레드, 로다민, 녹색 형광 단백질등), 화학발광 잔기, 자기 입자 또는 비드, 생발광 잔기, 비색 측정 표지(예를 들어, 콜로이드성 골드등)를 포함한다. 이와 같이 표지는 분광학적, 광화학적, 생화학적, 면역화학적, 전기적, 광학적 또는 화학적 수단에 의해 직간접적으로 검출가능한 임의의 조성물이다. 몇몇 양태에서, 표지는 맨눈으로 검출 가능하다.

당해 표지를 검출하기 위한 수단은 당업자에게 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 방사선 표지는 사진 필름 또는 섬광 계수기를 사용하여 검출될 수 있고 형광 마커는 광검출기를 사용하여 방출 조도를 검출하여 검출될 수 있다. 효소적 표지는 전형적으로 효소에 기질을 제공하고 기질에 대한 효소의 작용에 의해 생성된 반응 생성물을 검출함에 의해 검출되고 비색 측정 표지는 단순히 색 표지를 가시화함에 의해 검출된다.

용어 "FAS 억제제"는 지방산 신타제 활성의 억제제로서 작용하는 것으로 현재 공지되거나 이후에 개발된 임의의 구성원의 화합물 및 분자를 포함한다. 비제한적인 예는 전반적으로 본원에 참조로서 인용되는 미국 특허 제 5,759,837호에 나타나 있다. 기타 비제한적인 예는 티올락토마이신 (문헌참조: WO 04/005277, PCT/US03/021700, 비제한적인 기재) 및 문헌[참조: WO 2004/006835 A2 (PCT/US03/020960)]에 기재된 것들을 포함한다. 하기된 바와 같이, 항체 또는 이의 면역학적 활성 단편은 또한 FAS 억제제일 수 있다.

도 1은 hFAS를 과발현하는 MCF-7 사람 유방암 세포 기원의 용해물에 대한 면역블롯이다. 레인 1-3은 250kDa FAS에 대한, 래빗 폴리클로날 항-FAS(레인 1), 레인 2에서 항-사람 모노클로날 FAS, M6 클론; 및 레인 3에서 M3 클론의 반응성을 입증한다. 34-6E7 및 347C3 둘다는 또한 250kDa의 FAS 및 134kDa의 FAS 단편과 강하게 반응한다. 비표지된 레인은 기타 모노클로날 항체와의 반응을 포함한다.

도 2는 에피토프 맵핑을 위한 사람 FAS의 트립신 분해물에 대한 도 1에서의 항체의 면역블롯이다.

도 3은 MCF-7 세포 기원의 용해물에 대한 항체의 면역블롯이다. 문헌[참조: Wang et al. J Immunoassay Immunochem]의 M6 항체와의 결과를 또한 보여준다. 동일한 M6 항체는 나머지 도면에서 사용되었다.

도 4는 MCF-7 세포 기원의 용해물에 대한 상이한 항체 그룹의 면역블롯이다. M6 항체와의 결과를 또한 나타낸다.

도 5는 에피토프 맵핑을 위해 ZR-75-1 사람 유방암 세포로부터 정제된 사람 FAS의 트립신 분해물에 대한 도 3의 항체의 면역블롯이다.

도 6은 에피토프 맵핑을 위해 ZR-75-1 사람 유방암 세포로부터 정제된 사람 FAS의 트립신 분해물에 대한 도 4의 항체의 면역블롯이다. 폴리클로날 항체 및 M6과의 결과를 또한 보여준다.

도 7은 mCF-7 세포 기원의 용해물에 대한 또 다른 그룹의 항체의 면역블롯이다. M6 항체와의 결과를 또한 보여준다.

도 8은 에피토프 맵핑을 위해 ZR-75-1 사람 유방암 세포로부터 정제된 사람 FAS의 트립신 분해물에 대한 도 7의 항체의 면역블롯이다.

본 발명은 hFAS 폴리펩타이드와 결합하는 항체를 제공한다. FAS는 암세포에서 뿐만 아니라 다중 사람 세포 유형에서 발현되는 단백질이다. 당해 항체는 이전에 공지된 항-hFAS 항체와는 상이한 결합 특이성을 갖는다. 본 발명은 부분적으로 120개 클론의 모노클로날 항체의 제조 및 분석 및 이전에 공지된 hFAS에 대한 모노클로날 항체와는 다른 많은 항체의 발견을 토대로한다. 약 70개의 클론이 보관되었고 소생될 수 있다. 몇몇 클론을 사용하여 항체 생산을 위한 동물에서의 복수를 제조하였다. 본 발명은 hFAS와 결합하지만 M3 또는 M6로서 동정되거나 ATCC 수탁번호 제10853호로서 기탁된 이전에 공지된 모노클로날 항체와는 상이한 모노클로날 항체에 관한 것이다.

hFAS와 결합하는 항체의 능력은 면역학적 반응 조건하에서 하나 이상의 hFAS 결정인자에 대해 hFAS와 선택적으로 또는 특이적으로 결합하는 능력을 포함한다. 본 발명의 항체는 비제한적인 예로서, 샘플중에서 hFAS와 함께 발견될 수 있는 Hpr과 같은 다른 분자에는 존재하지 않는 hFAS 결정인자에 선택적으로 또는 특이적으로 결합하는 항체일 수 있다. 용어 "선택적으로 결합하는"은 전반적으로 또는 부분적으로 항체가 다른 폴리펩타이드에는 반응하지 않고 hFAS 폴리펩타이드상에 존재하는 에피토프와 우선적으로 연합하는 것을 언급한다. 물론, 특정 정도의 비특이적 상호작용이 항체와 비-표적 분자간에 일어날 수 있다는 것은 인지되고 있다. 그러나, 선택적 결합은 hFAS의 특이적 인지를 통해 매개됨으로써 명백할 수 있다.

선택적으로 또는 특이적으로 결합하는 항체는 항원과 결합하지만 이들은 낮은 친화성으로 결합할 수 있다. 그러나, 특이적 결합은 항체와 비-인식 항원간의 연합 보다 항체와 이의 인식 항원간에 보다 강한 연합을 유발한다. 특이적 결합은 통상적으로 비-인식 항원에 대한 것과 비교하여 약 2배 초과, 약 5배 초과, 약 10배 초과 또는 약 100배 초과로 결합된 항체의 양(단위 시간당)을 증가시킨다. 비-인식 단백질의 존재하에서 인식 단백질로의 특이적 결합은 특정 항원에 대한 특이성에 대해 선택되는 항체를 요구한다. 다양한 면역분석 포맷이 특정 단백질과 특이적으로 면역반응성인 항체를 선별하기 위해 적당하다. 예를 들어, 고형상 ELISA 면역분석을 통상 사용하여 단백질과 특이적으로 면역반응성인 모노클로날 항체를 선별한다[특이적 면역반응성을 결정하는데 사용될 수 있는 면역분석 포맷 및 조건을 기술하는 문헌(Harlow & Lane, ANTIBODIES, A LABORATORY MANUAL, Cold Spring Harbor Publications, New York (1988)) 참조].

본 발명의 항체의 결합 친화성은 예를 들어, 경쟁 분석, 포화 분석, 또는 표준 면역분석(예를 들어, ELISA 또는 RIA)와 같은 표준 항체-항원 분석에 의해 측정되거나 결정될 수 있다. 당해 분석법을 사용하여 항체의 해리 상수를 결정할 수 있다. 용어 "해리 상수"는 항원에 대한 항체의 친화성을 의미한다. 항체와 항원의 결합 특이성은 항체의 해리 상수(KD = 1/K, 여기서 K는 친화성 상수이다)가 <1 μM, 바람직하게는 <100 nM, 및 가장 바람직하게는 <0.1 nM인 경우 존재한다. 항체 분자는 통상 보다 낮은 범위의 KD를 갖는다. KD =[Ab-Ag]/[Ab][Ag](여기서, [Ab]는 평형에서 항체의 농도이고 [Ag]는 평형에서 항원의 농도이고 [Ab-Ag]는 평형에서 항체-항원 복합체의 농도이다). 전형적으로, 항원과 항체의 결합 상호작용은 정전기 인력, 반데르발스 힘 및 수소 결합과 같은 가역적 비공유 연합을 포함한다. 결합 특이성을 정의하는 당해 방법은 단일 중쇄 및/또는 경쇄, CDR, 융합 단백질 또는 단독의 항원 또는 조합된 항원에 결합하는 경우, 인식 항원에 특이적인 중쇄 및/또는 경쇄의 단편에 적용된다.

용어 "면역학적 반응성 조건"은 항체가 검출가능할 정도로 크게 및/또는 실질적으로 모든 다른 에피토프로의 결합이 완전히 배제될 정도로 이의 인식 에피토프에 결합할 수 있게 해주는 조건을 언급한다. 면역학적 반응성 조건은 항체 결합 반응의 포맷에 의존하고 통상 면역분석 프로토콜에 사용되는 조건 또는 생체내에서 접하게 되는 조건이다[면역분석 포맷 및 조건의 기재에 관한 문헌(Harlow & Lane, supra) 참조]. 몇몇 양태에서, 본 발명의 방법에 사용되는 면역학적 반응성 조건은 생존 포유동물 또는 포유동물 세포내에서 전형적인 조건(예를 들어, 온도, 삼투압 및 pH)에 대한 언급을 포함하는 "생리학적 조건"이다. 몇몇 기관은 극한 조건에 노출되는 것으로 인지되지만, 생체내 및 세포내 환경은 정상적으로 약 pH 7(즉, pH 6.0에서 pH 8.0, 보다 전형적으로는 pH 6.5 내지 7.5)이고 주요 용매로서 물을 함유하고 온도는 0℃ 초과 및 50℃ 미만이다. 삼투압 농도는 세포 생존 및 증식을 유지시키는 범위내에 있다.

본 발명의 대부분의 항체는 약 250kD의 hFAS 폴리펩타이드 및/또는 약 134kDa의 hFAS의 단백질 분해 생성물에 결합하는 능력을 보유한다. 몇몇 양태에서, 그러나, 당해 항체는 이들 2개의 hFAS 폴리펩타이드중 어느 하나와 보다 크거나 저하된 친화성으로 결합할 수 있다. 또한, 당해 항체는 hFAS 폴리펩타이드와 함께 존재할 수 있는 기타 항원 또는 다른 hFAS 폴리펩타이드에 비해, 보다 크거나 저하된 특이성으로 당해 폴리펩타이드중 어느 하나와 결합할 수 있다.

상이한 항체들간에 특이성을 비교하는 한가지 방법은 상이한 항체에 대한 동일한 집단의 폴리펩타이드 또는 항원을 면역블롯팅하는 것이다. 폴리펩타이드 또는 항원 집단은 hFAS를 발현하는 세포 집단 또는 당해 세포의 용해물일 수 있다. 당해 세포의 비제한적인 예는 hFAS를 발현하는 1차 세포 배양물 또는 세포주를 포함한다. 가능한 세포는 비제한적인 예로서 유방암 세포, 결장직장암 세포 및 전립선 암 세포를 포함하고 세포주는 비제한적인 예로서 MCF-7 및 ZR-75-1을 포함한다.

또한, 폴리펩타이드 또는 항원 집단은 hFAS 폴리펩타이드를 함유하는 부분적으로 단백질 분해된 샘플의 집단일 수 있다. 단백질 분해 수단은 천연적인 것이거나 특정 단백질 분해제, 예를 들어, 트립신, 키모트립신, 엔도프로테이나제 Lys-C 또는 Glu-C, 시아노겐 브로마이드 및 BNPS-스케이톨과 같은 화학적 절단 시약, 또는 당업계에 공지된 임의의 기타 적합한 수단일 수 있다. 당해 집단은 통상 hFAS 폴리펩타이드의 부분적으로 정제되거나 정제된 샘플로부터 비롯된다. 비제한적 예는 재조합 DNA 기술을 사용하지 않고 hFAS 폴리펩타이드를 발현하는 세포로부터 정제된 전장 hFAS, 예를 들어, ZR-75-1 세포로부터 정제된 hFAS 폴리펩타이드를 갖는 샘플을 포함한다. 또한, 당해 샘플은 재조합 DNA 기술에 의해 발현된 hFAS 폴리펩타이드를 함유할 수 있다.

hFAS 폴리펩타이드와 함께 존재할 수 있는 기타 항원 또는 다른 hFAS 폴리펩타이드에 비해, 하나 이상의 특정 hFAS 폴리펩타이드와 특이적으로 결합하는 본 발명의 항체가 특정 관심 대상이다. 몇몇 양태에서, 당해 항체는 당업계에 공지된 M3 항체와 비교하여, 보다 큰 친화성 또는 감소된 친화성으로 전장의 hFAS 및/또는 250kD 형태와 결합한다.

본 발명은 또한 당업계에 공지된 M3 항체와 유사하지만 동일하지 않은 특이성을 갖는 항체를 제공한다. 비제한적인 예는 트립신으로 분해된 hFAS 폴리펩타이드의 집단에서 약 70kD의 hFAS 폴리펩타이드 단편과 결합하지 않고/않거나 약 50kD의 hFAS 폴리펩타이드 단편과 결합하는 hFAS 결합 항체를 포함한다.

또 다른 양태에서, 본 발명은 당업계에 공지된 M6 항체와 유사하지만 동일하지 않은 특이성을 갖는 항체를 제공한다. 비제한적인 예는 MCF-7 세포 용해물에서 약 60kD의 폴리펩타이드와 결합하지 않고/않거나 약 40kD의 폴리펩타이드와 결합하는 hFAS 결합 항체를 포함한다.

기타 M6형 항체는 a) 트립신으로 분해된 사람 ZR-75-1 유방암 세포의 용해물에서 약 45 kD, 약 34 kD, 약 16 kD, 약 37 kD, 약 28 kD, 또는 약 7 kD의 폴리펩타이드와는 결합하지 않거나 b) 트립신으로 분해된 사람 ZR-75-1 유방암 세포의 용해물에서 약 115 kD, 약 90 kD, 약 50 kD, 약 85 kD, 약 78 kD, 약 50 kD, 약 40 kD, 또는 약 17 kD의 폴리펩타이드와는 결합하는 항체를 포함한다.

추가의 M6형 항체는 a) 사람 MCF-7 유방암 세포의 용해물에서 약 125 kD, 약 32 kD, 또는 약 9 kD의 폴리펩타이드와는 결합하지 않거나 b) 트립신으로 분해된 사람 ZR-75-1 유방암 세포의 용해물에서 약 85 kD, 약 50 kD, 약 43 kD, 또는 약 24 kD의 폴리펩타이드와는 결합하는 항체를 포함한다.

본 발명의 추가의 양태에서, 2006년 8월 17일자로 ATCC에 하이브리도마 클론 34-6E7-2G10-15로 기탁되어 수탁번호 를 부여받은 34-6E7, 또는 2006년 8월 17일자로 ATCC에 하이브리도마 클론 63-2D8-2E2-1D2로서 기탁되어 수탁번호 를 부여받은 63-2D8, 2006년 8월 17일자로 ATCC에 하이브리도마 클론 34-63-4G4-B3-2F3으로서 기탁되어 수탁번호 를 부여받은 63-4G4, 2006년 8월 17일자로 ATCC에 하이브리도마 클론 63-3C10-2B8로서 기탁되어 수탁번호 를 부여받은 63-3C10, 일자로 ATCC에 하이브리도마 클론 으로서 기탁되어 수탁번호 를 부여받은 34-73로서 동정된 특이적 모노클로날 항체가 기재되고 특히, 본원에 기재된 바와 같은 조성물 및 방법에 사용하기 위해 고려된다. 34-6E7-2G10-15, 63-2D8-2E2-1D2, 63-4G4-B3-2F3, 및 63-3C10-2B8 하이브리도마는 마우스 비장으로부터 유래하는 모든 마우스 하이브리도마 세포주이다. 이들은 17.6% 태아 소 혈청, 1 mM 나트륨 피루베이트, 2 mM L-글루타민, 및 페니실린-스트렙토마이신 100유니트/mL을 함유하는 ImDm에서 배양할 수 있다. 생산되는 항체 모두는 IgG1 서브타입이다. 물론, 다른 서브타입의 항체는 당업자에게 공지된 방법에 의해 제조될 수 있다.

이들 모노클로날 항체 기원의 CDR은 본 발명의 몇몇 양태에서 분리될 수 있다. 다른 양태는 하나 이상의 CDR 또는 이들을 암호화하는 핵산을 재조합적으로 적용하여 본 발명의 실시에 사용하기 위한 융합 단백질 또는 키메라 항체를 제조하는 것을 포함한다.

물론 상기 논의된 hFAS 폴리펩타이드 단편을 또한 사용하여, 본원에 상세히 기재된 것들과 동일한 hFAS 반응성을 갖는 항체를 포함하는 본 발명의 추가의 항체를 제조할 수 있다. 비제한적인 예로서, 트립신 분해로부터 기원하는 약 50kD의 hFAS 폴리펩타이드 단편; MCF-7 세포 용해물에서 약 40kD의 폴리펩타이드; 트립신으로 분해된 사람 ZR-75-1 유방암 세포의 용해물에서 약 115 kD, 약 90 kD, 약 50 kD, 약 85 kD, 약 78 kD, 약 50 kD, 약 40 kD, 또는 약 17 kD의 폴리펩타이드; 및/또는 트립신으로 분해된 사람 ZR-75-1 유방암 세포의 용해물에서 약 85 kD, 약 50 kD, 약 43 kD, 또는 약 24 kD 의 폴리펩타이드는 당업계에 공지된 수단에 의해 분리될 수 있고 본 발명의 추가의 항체를 제조하기 위한 항원으로서 사용될 수 있다. 물론 당해 항체는 단순히, 본원에 기재된 바와 같은 hFAS 결합 반응성 및 특이성에 대해 당업자에게 공지된 통상의 방법을 사용하여 스크리닝될 수 있다.

본 발명의 항-hFAS 항체는 비제한적인 예로서 마우스, 래트, 염소, 양 및 래빗을 포함하는, 임의의 사람외 공급원으로부터 유래할 수 있다. 당해 항체는 1차 항체의 불변 영역에 특이적인 2차 항체와 조합하여 면역분석에 1차 항체로서 사용될 수 있다. 몇몇 양태에서, 1차 항체는 검출가능하게 표지된 2차 항체에 유리하게 표지되지 않은 채로 잔존할 수 있다. 당해 항체는 또한, IgG, IgM, IgD, IgA, 및 IgE를 포함하는, 임의의 부류일 수 있다. 이들은 또한 IgG 또는 IgA의 아부류일 수 있다.

본 발명의 항체 및 이의 단편은 또한 FAS 활성을 억제할 수 있고 따라서 FAS 억제제로서 작용할 수 있다. 당해 항체 및 단편을 사용하여 FAS의 존재를 검출하고 추가의 FAS 억제제를 도입할 필요 없이 FAS의 활성을 억제할 수 있다. 또한, 본 발명의 FAS 억제 항체 또는 항체 단편은 FAS 활성을 억제하기 위한 조성물에서와 같이 또는 FAS 활성을 억제하기 위한 방법의 일부로서, 피검체에 별도로 또는 배합하여 투여되는 바와 같이, 또 다른 FAS 억제제와 병용하여 사용될 수 있다. 특정 이론에 구애되지 않고 본 발명의 이해를 개선시키기 위해 제공되는 본 발명의 FAS 억제 항체 또는 항체 단편은 FAS 결합 부위 및/또는 조절 도메인의 전부 또는 일부와 결합함에 의해 작용할 수 있다. 또 다른 양태에서, 당해 투여는 항체(또는 이의 일부)가 기타 제제를 FAS 활성에 대해 표적화하도록 또 다른 제제에 연결되거나 접합된 항체 또는 FAS 결합부에 대한 것일 수 있다. 다른 제제는 FAS 활성을 함유하는 세포에 대한 FAS 억제제 및/또는 독성 제제일 수 있다.

추가의 양태에서, 당해 항체 또는 이의 일부는 항체 또는 이의 일부를 별도로 또는 융합 폴리펩타이드의 일부로서 암호화하는 핵산 서열을 통해 FAS 활성 위치에 전달될 수 있다. 따라서, 핵산 서열은 조절 요소(들)이 mRNA 및/또는 단백질로서 서열의 발현을 지시하여 발현 작제물을 형성시키도록 조절 요소(들)에 작동적으로 연결될 수 있는 암호화 서열이다. 당해 작제물은 목적하는 부위로 직접 전달 하고 이어서 당해 부위에서 세포에 의해 흡수되도록 함에 의해 직접 사용될 수 있거나 벡터 작제물의 일부일 수 있다. 본 발명의 벡터 작제물은 허용된 세포에서와 같이 적합한 조건하에서 자가 복제를 수행할 수 있는 작제물을 포함한다. 비제한적인 예는 에피좀적으로 유지된 것들을 포함하여, 바이러스 벡터 및 플라스미드 분자를 포함한다. 다수의 조절 요소 및 벡터는 당업계에 공지되어 있고 본 발명의 실시에 사용하기 위해 용이하게 선별될 수 있다.

본 발명의 항체는 추가의 항체를 유도하기 위해 사용되거나 변형될 수 있다. 비제한적인 예는 본 발명의 항체의 hFAS 결합 작용기의 전부 또는 일부를 함유하는 하이브리드 항체, 변형된 항체, 키메라 항체, 접합된 항체, 단일쇄 항체 및 사람화된 항체를 포함한다. 본 발명의 기타 양태는 Fab, Fab', F(ab')₂ 및 Fv 단편을 포함하는, hFAS 폴리펩타이드와 결합하는 항체의 일부를 포함한다.

본 발명은 scFv 또는 디설파이드 안정화된 Fv 항체와 같은 재조합 항-hFAS 항체를 포함한다. Fv 항체는 전형적으로 약 25kDa이고 중쇄 및 경쇄당 3개의 CDR을 갖는 완전한 항원 결합 부위를 함유한다. V_H 및 V_L 쇄가 비연속적으로 발현되는 경우, Fv 항체 쇄는 전형적으로 비공유 상호작용에 의해 함께 연결되어 있다. 그러나, 이들 쇄는 희석 즉시 해리하는 경향이 있어 당해 방법은 글루타르알데하이드, 분자 상호간 디설파이드 또는 펩타이드 링커를 통해 쇄를 가교결합시키도록 개발되었다. 당해 항체는 단일쇄 Fv (scFv)일 수 있다. scFv 항체의 V_H 및 V_L 영역은 폴딩되어 2개의 쇄에서 발견되는 것과 유사한 항원 결합 부위를 생성하는 단일쇄를 포함한다. 일단 폴딩되면, 비공유 상호작용이 단일쇄 항체를 안정화시킨다. 보다 바람직한 양태에서, scFv는 재조합적으로 제조된다.

몇몇 항체 양태의 V_H 및 V_L 영역은 직접적으로 함께 연결될 수 있는 반면에, 당업자는 당해 영역이 하나 이상의 아미노산으로 이루어진 펩타이드 링커에 의해 분리될 수 있음을 인지할 것이다. 펩타이드 링커 및 이의 용도는 당업계에 널리 공지되어 있다[문헌참조: Huston, et al.5 Proc. Natl Acad. Sci. USA 8:5879 (1988); Bird, et al., Science 242:4236 (1988); Glockshuber, et al., Biochemistry 29:1362 (1990); U.S. Pat. No. 4,946,778, U.S. Pat. No. 5,132,405 and Stemmer, et al., Biotechniques 14:256-265 (1993), 이 모두는 본원에 참조로서 인용됨]. 일반적으로, 펩타이드 링커는 영역들을 연결시키거나 이들간에 약간의 최소 거리 또는 기타 공간적 관계를 보존시키는 것 외에는 어떠한 특정 생물학적 활성을 갖지 않는다. 그러나, 펩타이드 링커의 구성 아미노산은 폴딩, 전체 전하 또는 소수성과 같은 분자의 몇몇 성질에 영향을 주기 위해 선택될 수 있다. 단일쇄 Fv (scFv) 항체는 임의로 50개 이하의 아미노산, 일반적으로 40개 이하의 아미노산, 바람직하게는 30개 이하의 아미노산, 및 보다 바람직하게는 20개 이하의 아미노산 길이의 펩타이드 링커를 포함한다. 몇몇 양태에서, 펩타이드 링커는 염기 서열의 컨캐타머이다.

본 발명은 또한 본원에 제공된 바와 같은 hFAS 결합 항체 기원의 하나 이상의 CDR을 제공한다. CDR은 단독의 분리된 형태일 수 있거나 동일한 항체 경쇄 또는 중쇄상에 존재하는 다른 CDR중 하나 또는 둘다와 조합된 형태일 수 있다. 몇몇 양태에서, 분리는 항체의 CDR(또는 CDR 일부)을 암호화하는 핵산 서열의 서열분석 및/또는 분리에 의한 것이다. 당해 핵산 서열은 비제한적인 예로서 융합 단백질을 형성하기 위해 또 다른 폴리펩타이드를 암호화하는 서열에 재조합적으로 연결되거나 키메라 항체(또는 이의 단편)을 형성하기 위해 또 다른 항체의 CDR 암호화 서열을 대체시키는데 사용될 수 있다. 본 발명의 CDR을 함유하는 키메라 항체는 본 발명의 항체와 동일한 방식으로 사용될 수 있다.

본 발명의 항체는 본원에 기재된 바와 같이 공유적으로 또는 비공유적으로 표지될 수 있다. 몇몇 면역분석에 사용하기 위해, 항체는 흔히 이의 검출 및 이어서 항체에 결합된 hFAS 폴리펩타이드의 검출을 용이하게 하기 위해 표지된다. 몇몇 양태에서, 표지는 비제한적인 예로서 착색된 유리 또는 플라스틱(예를 들어, 폴리스티렌, 폴리프로필렌, 라텍스등) 비드를 포함하는, 단순히 대형 입자일 수 있고, 여기서, 국소 공간에서 다수의 응집은 몇몇 예시된 면역분석에서 맨눈으로 검출가능하다.

표지 또는 기타 검출가능한 잔기가 본 발명의 항체에 연결되어야만 하는 경우, 당업자에게 공지된 다수의 수단이 사용될 수 있다. 항체에 분자를 부착시키는 과정은 부착될 분자의 화학적 구조에 따라 다양하다. 폴리펩타이드는 전형적으로 항체상의 적합한 작용 그룹과의 반응에 유용한 다양한 작용 그룹을 함유한다. 또한, 항체는 추가의 반응성 작용 그룹을 노출시키거나 부착시키기 위해 유도체화된다. 당해 유도체화는 제조원[Pierce Chemical Company, Rockford III]으로부터 시판되는 것들과 같은 임의의 다수의 분자를 부착시킴을 포함할 수 있다. 또한, 항체는 hFAS 폴리펩타이드 및 항체에 의해 형성된 결합 복합체에 결합하고 이를 표지시키는 표지화제와 접합시켜 사용된다. 몇몇 양태에서, 표지화제 자체는 복합체, 즉 항-hFAS 항체를 포함하는 잔기들중 하나일 수 있다. 또한, 표지화제는 복합체에 특이적으로 결합하는 또 다른 항체(표지화되거나 고정화된 제2 항체)와 같은 제3 잔기일 수 있다. 본 발명의 비제한적인 예는 항-hFAS 항체의 불변 영역에 특이적으로 결합하는 종인 제2 항체의 용도를 포함한다.

몇몇 경쟁 면역분석의 경우에, 본 발명의 비표지된 항체는 또 다른 항-hFAS 항체의 형태와 조합하여 사용된다. 이어서 2개의 항체는 샘플에서 또 다른 비경쟁 포맷으로 결합을 위해 경쟁하도록 hFAS와 접촉시키고 2개의 항체 및 결합된 hFAS 폴리펩타이드를 포함하는 "샌드위치" 복합체를 형성하도록 표지된 항체와 조합하여 사용된다. 이어서 "샌드위치" 복합체의 검출은 hFAS의 존재를 검출하고 이의 양을 결정하는데 사용된다.

단백질 A 또는 단백질 G와 같은 면역글로불린 불변 영역에 특이적으로 결합하는 기타 단백질은 또한 표지화제로서 사용될 수 있다. 이들 단백질은 스트렙토코커스 세포 벽의 성분으로서 밝혀졌고 다수의 종 기원의 면역글로불린 불변 영역과 강한 비면역원성 반응을 나타낸다(문헌참조: Kronval, et al, J. Immunol. 111:1401-1406 (1973); and Akerstrom, et al., J. Immunol, 135 :2589-2542 (1985)). 물론 단백질 A 또는 단백질 G는 그 자체가 본원에 기재된 바와 같이 본 발명의 항체에 제공된 바와 같은 고형상으로의 부착 또는 고정화에 의해 검출가능하게 표지될 수 있다.

본 발명의 항체는 hFAS 폴리펩타이드의 검출이 요구되는 특정 상황의 필요성을 해결하기 위해 이들의 상이한 결합 특이성을 기준으로 선별될 수 있다. 비제한적인 예로서, 전장 hFAS에 대해 보다 큰 특이성 또는 친화성을 갖는 항체는 전장의 hFAS의 검출이 요구되는데 사용하기 위해 선별될 수 있다. 또한, 특정 hFAS 단편에 대해 보다 큰 특이성 또는 친화성을 갖는 항체는 당해 단편의 검출이 바람직한 경우에 사용될 수 있다.

본 발명은 추가로, 본 발명의 항체를 발현하는 세포주를 제공한다. 세포주는 상기된 바와 같이 기탁된 것들을 포함하는, 하이브리도마 세포주일 수 있다.

본 발명의 조성물

본 발명의 항체를 포함하는 조성물 및 제제는 항체가 적용된 고형상 물질 뿐만 아니라 항체를 함유하는 용액을 포함한다.

몇몇 양태에서. 당해 항체는 ELISA 또는 RIA에서 항체의 사용을 위한 성분 또는 장치와 연관된다. 비제한적인 예는 이들 분석에 사용하기 위한 고체 표면에 고정화된 항체를 포함한다. 또 다른 임의의 양태에서, 항체는 전기화학적으로 자극되어 광 방출을 기준으로 검출될 수 있는 표지와 연결되거나 접합된다. 당해 분석 방법의 비제한적인 예는 전기화학발광(ECL) 기술이고 여기서, 본 발명의 항체 또는 항체 단편은 루테늄 킬레이트에 연결되며 이때 루테늄은 공지된 방법을 사용하여 전극 표면에서 산화되고/환원되는 경우 검출될 수 있다.

또 다른 양태에서, 항체는 분석물로서 hFAS 폴리펩타이드를 함유하는 용액의 측면 유동을 기준으로 하는 분석과 같은 면역크로마토그래피 분석을 사용한 hFAS 폴리펩타이드의 검출용 장치 또는 스트립과 연합되어 있다. 이들 분석은 "샌드위치" 또는 경쟁 분석으로서 수행될 수 있다. 당해 장치 또는 스트립의 추가의 예는 가정용 검사 또는 신속한 건강 검진을 위해 디자인된 것들이다. 추가의 예는 단일 샘플중에서 다중 분석물의 동시 분석을 위해 디자인된 것들을 포함한다.

본 발명의 비표지된 항체는 고정화된 형태로 당해 장치 또는 스트립의 "시험" 또는 "포획" 영역에 적용되어 용액이 유동함으로써 용액중의 hFAS 폴리펩타이드를 포획할 수 있다. 몇몇 양태에서, 포획된(또는 고정화된) hFAS 폴리펩타이드는 본 발명의 항-hFAS 항체의 표지된 형태에 결합되어 폴리펩타이드와 항체의 복합체가 "시험" 또는 "포획" 영역중에 포획(또는 고정화)될 수 있도록 한다. 표지된 항체는 장치 또는 스트립의 또 다른 영역에서 장치와 연합되거나 장치상에서 건조되도록 하여 용액이 "시험" 또는 "포획" 영역에 도달하기 전에, 항체가 용액과 접촉할 수 있도록 한다. 당해 접촉은 표지된 항체가 용액으로 용해되도록 하고 이와 함께 이동하면서 표지된 항체가, 용액중에 존재하는 경우 hFAS 폴리펩타이드(들)와 복합체를 형성하도록 한다.

당해 용액은 바람직하게 사람과 같은 피검체 기원의 생물학적 유체 샘플이다. 본 발명의 실시예 사용될 수 있는 생물학적 유체의 범위는 hFAS가 검출가능하게 존재할 수 있는 임의의 유체를 포함한다. 비제한적인 예는 침, 눈물, 점액, 콧물 및 질 분비물과 같은 피검체의 신체 분비물 및 혈액, 혈청, 혈장, 정액, 정액 유체, 유출물, 복수액, 뇌척수액, 유방 흡인액, 난소 기원의 유체 및 소변과 같은 기타 체액, 및 배설물의 임의의 유체 성분 또는 배설물의 유체 추출물을 포함한다. 당해 유체의 희석물은 본 발명의 실행에 샘플로서 사용될 수 있음은 물론이다.

본 발명의 방법

본 발명의 항체는 또한 hFAS의 검출 또는 측정을 기준으로 하는 방법에 사용될 수 있다. 본 발명의 방법에 대한 세부사항은 사용되는 특정 포맷에 따라 다양할 수 있지만 샘플중에서 hFAS 폴리펩타이드(들)을 검출하거나 측정하는 방법은 일반적으로 면역학적 반응성 조건하에 항체에 특이적으로 반응하는 샘플과 항체를 접촉시키는 단계를 포함한다. 당해 항체는 이것이 다수의 널리 공지된 임의의 면역학적 결합 분석을 사용하여 검출되고/되거나 정량될 수 있기 때문에 표지되거나 비표지될 수 있다(문헌참조: 미국 특허 제4,366,241호; 제4,376,110호; 제4,517,288호; 및 제4,837,168호).

본 발명의 항체로 수행될 수 있는 일반적인 면역분석에 대한 고찰은 또한 문헌[참조: METHODS IN CELL BIOLOGY, VOL. 37, Asai, ed. Academic Press, Inc. New York (1993); BASIC AND CLINICAL IMMUNOLOGY 7TH EDITION, Stites & Terr, eds. (1991)]에 기재되어 있다. 면역학적 결합 분석(또는 면역분석)은 전형적으로 항체와 특이적으로 결합하고/하거나 고정화시키는 리간드(본원에 기재된 바와 같은hFAS 폴리펩타이드(들))를 사용하는 것이다. 당해 분석에서, 항온처리 단계 및/또는 세척 단계는 각 시약의 배합 후에 요구될 수 있다. 항온처리 단계는 약 5초에서 수시간까지, 바람직하게는 약 5분에서 약 24시간까지 다양할 수 있다. 그러나, 항온처리 시간은 분석 포맷, 항체, 용액의 용적, 농도등에 의존할 것이다. 통상적으로, 당해 분석은 실온에서 수행되지만 이들은 10℃ 내지 40℃와 같은 온도 범위에서 수행될 수 있다.

본 발명에 의해 제공되는 기타 항체 기본 분석 방법은 면역-확산, 면역전기영동, 면역조직병리학, 면역조직화학 및 조직병리학을 기준으로 하는 것들을 포함한다. 당해 방법은 본 발명의 항체 또는 항체 단편과 조합된 열량측정, 화학발광, 전기화학발광 또는 형광 기술의 사용을 포함할 수 있다. 추가의 방법은 미국 특허 제5,759,791호에 의해 제공된 바와 같은 경쟁 분석의 사용이다.

hFAS의 검출 또는 측정은 임의로 당업자에게 공지된 비특이적 결합 반등을 감소시키는 제제의 존재하에 수행될 수 있다. 따라서, 비특이적 결합을 감소시키는 제제의 사용을 포함하는 방법이 본 발명에 의해 제공된다. 비특이적 결합을 감소시키는 수단의 비제한적인 예는 완충 첨가제, 예를 들어, 담체 단백질(소 혈청 알부민과 같은)의 사용, 세제(들)의 함유 및 이온 강도의 조정을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

샘플중에서 hFAS 폴리펩타이드의 존재 검출은 암과 같은 질환의 존재 여부에 대한 진단으로서 수행될 수 있다. 기타 양태에서, 당해 질환은 간 생체 검사의 세포와 같은 간 세포 또는 본원에 기재된 바와 같은 혈청 함유 유체중에서 당해 정상적인 FAS의 존재를 통해 임의로 검출되는 알코올성 간염 또는 비알콜성 간염일 수 있다. 알코올성 간염 또는 비알콜성 간염의 검출은 본 발명의 항체 및 당업자에게 이전에 공지된 항체를 포함하는, 임의의 FAS 결합 항체를 사용하는 것일 수 있다.

당해 검출은 hFAS 발현 수준이 증가된 것과 연관된 질환을 갖는 피검체에 대한 생존 결과를 포함하는, 질환 여부에 대한 예후적 지표로서 수행될 수 있다. 당해 검출은 또한 hFAS의 존재 또는 수준과 질환의 관계를 기준으로 피검체중 질환의 과정 또는 재발을 모니터하는 방법에 사용될 수 있다. 비제한적인 예는 암의 전이 가능성, 종양 등급 및 질환의 임상 단계를 포함한다.

기타 양태에서, 당해 검출은 환자 기원의 샘플중의 hFAS 폴리펩타이드의 존재 또는 수준을 기준으로 또는 임상의 또는 주치의의 기술 또는 경험을 기준으로 다른 건강 환자에게 FAS 억제제를 투여할지의 여부를 결정하는 것과 관련하여 사용된다. 당해 결정은 샘플중의 hFAS 폴리펩타이드의 존재 또는 수준을 기준으로 진단된 질환의 치료를 위한 것으로써, 질환을 치료하기 위한 FAS 억제제 또는 기타 제제의 투여가 고려된다. FAS 억제제 또는 기타 치료제의 투여는 FAS를 표적으로 하여 질환 및/또는 이의 증상을 치료하기 위해 고려되는 치료요법일 수 있다.

추가의 양태에서, 당해 결정은 가능한한 샘플중의 hFAS 폴리펩타이드(들)의 존재 또는 수준 및 능숙한 전문의의 경험을 토대로 진단된 질환의 예방과 관련하여 사용될 수 있다. 가능한한 또는 hFAS의 검출을 기준으로 하는 질환 상태의 결정에 이어서 FAS 억제제 또는 질환의 발병 예방 또는 이의 발병 정도 또는 이의 중증도를 감소시키기 위한 기타 제제를 투여한다. 따라서, 본 발명은 지방산 합성의 억제를 기준으로 질환의 화학예방 분야에서의 양태를 포함한다.

본 발명의 추가의 방법은 항체, 항체 단편, 항체 함유 접합체 또는 본원에 기재된 바와 같은 항체 함유 융합 단백질을 투여하여 FAS 활성을 억제하거나 FAS가 존재하거나 발현되는 부위를 표적화함에 의한 피검체의 치료를 포함한다. 비제한적인 예는 본 발명의 항체의 직접적인 투여, 예를 들어, 세포 함유 피검체 신체의 일부에 주사하여 항체를 취득하도록 함을 포함한다. 또한, 본 발명의 항체를 암호화하는 핵산 분자 또는 작제물은 예를 들어, 세포 함유 피검체 신체 일부로 직접 주사되어 세포가 핵산을 취득하도록 하고 이어서 항체를 발현하도록 투여될 수 있다. 피검체는 사람일 수 있고 본 발명은 항체 단편, 항체 함유 접합체 또는 본원에 기재된 바와 같은 항체 함유 융합 단백질의 투여를 포함하는 유사 방법을 제공한다.

의학적 처치에서의 용도

본 발명은 또한 환자의 의학적 처치를 제공하는데 있어서 하나의 성분으로 hFAS 폴리펩타이드의 검출 또는 측정을 제공한다. 비제한적인 예는 의학적 처치로서 치료의 제공과 연계된 진단 서비스의 제공을 포함한다. 따라서, 본 발명은 환자의 의학적 처치에서의 방법을 포함하고 당해 방법은 환자로부터 수득한 샘플중에서 hFAS의 존재 또는 발현을 측정함을 포함한다. 환자의 의학적 처치에서의 방법은 본원에 기재된 임의의 방법을 포함한다. 당해 방법은 임의로, hFAS의 검출 또는 측정으로부터 비롯된 결과의 해석을 포함한다. 당해 검검출 또는 측정은 본원에 기재된 바와 같은 발명의 임의의 측면 또는 양태와 관련하여 사용될 수 있다.

하나의 비제한적인 예로서, 당해 검출 또는 측정은 의사, 간호사 또는 기타 건강 관리 제공자 또는 이의 지시하에 있는 근무자에 의한 결정과 같은 hFAS를 평가할 필요성이 있는지의 결정 후에 수행될 수 있다. 당해 결정은 또한 배상 또는 당해 수행에 따른 지불을 요구하는 기준으로서 검출 또는 측정 수행을 승인하는데 있어서, 건강 보험 또는 유지 요원에 의해 수행될 수 있다.

또 다른 비제한적인 양태에서, 본 발명은 환자의 의학적 처치에서의 방법 또는 본원에 기재된 바와 같은 다른 방법의 수행을 위해 요청하거나 요청을 접수받는 방법을 제공한다. 요청은 의사, 간호사 또는 기타 건강 관리 제공자 또는 이의 지시하에 있는 근무자에 의해 수행될 수 있고 당해 요청은 직간접적으로 당해 방법을 수행하는 임의의 요원에 의해 접수될 수 있다.

본 발명은 또한 본원에 기재된 바와 같은 hFAS의 검출 또는 측정을 위한 지불 또는 배상 과정에서의 방법을 제공한다. 배상 또는 지불 과정에서의 방법은 1) 지불이 지연되거나 기한을 지나 아직 지불되어야 하고, 2) 지불이 접수되었고, 3) 지불이 불충분하거나 적절하지 않거나, 4) 지불이 다른 지급자에 의해 수행되었다는 표시는 본 발명의 hFAS 검출 또는 측정 수행 후 서류상에 또는 데이터베이스 또는 기타 컴퓨터 판독 매체와 같이 전자적으로 기록함을 포함할 수 있다. 당해 데이터베이스는 비제한적인 예로서 컴퓨터 수행된 데이터베이스와 같은 전자 형태를 포함하는 임의의 형태일 수 있다. 당해 표시는 서류상 또는 전자(또는 컴퓨터 판독 형태) 형태의 코드 형태일 수 있거나 이를 포함할 수 있다. 본 발명의 몇몇 양태에서, 당해 코드는 면역조직화학적 해석을 위해 88342를 포함할 수 있다. "또 다른 지급자"가 관련된 경우, 지불 요청은 이전의 청구서 또는 지불 요청서가 보내지거나 서신된 본래의 지급자이외의 사람 또는 실재자에게 수행될 수 있다.

또한, 당해 방법은 환자의 의학적 처치에서 hFAS를 검출하거나 측정하는 방법의 기술적 수행을 위해 또는 이로부터 비롯된 결과의 해석을 위한 지불 접수를 포함한다. 물론, 본 발명은 또한 또 다른 사람 또는 집단이 지불을 접수하거나 지불을 접수하도록 지시된 양태를 포함한다. 비제한적인 예로서 보험 회사, 건강 관리 기관, 정부(건강) 기관, 환자 또는 환자의 가족 구성원을 포함하는 임의의 실체로부터 접수될 수 있다. 지불은 일시금으로 또는 할부일 수 있다. 환자의 경우에, 지불은 공동 지불로서 공지된 부분 지불 형태일 수 있다.

또 다른 양태에서, 당해 방법은 환자의 의학적 처치에서 hFAS를 검출하거나 측정함을 포함하는 방법의 수행에 대해 청구서 또는 지불 요청을 보험 회사, 건강 관리 기관, 정부 건광 기관 또는 환자에게 제출함을 포함할 수 있다. 메일, 전자, 전화, 대면하여 또는 팩스로 요청할 수 있다.

추가의 양태에서, 방법은 환자의 의학적 처이에서 hFAS의 검출 또는 측정 방법의 수행에 대해 지불 승인 표시의 접수 또는 지불 거부에 대한 표시의 접수를 포함할 수 있다. 당해 표시는 지불 요청 받은 임의의 사람 또는 집단으로부터 접수된 것일 수 있다. 비제한적인 예는 보험 회사, 건강 관리 기관 또는 비제한적인 예로서 메디케어 또는 메디케이드와 같은 정부(건강) 기관을 포함한다. 당해 표시는 메일, 전화 또는 대면 또는 팩스에 의한 것일 수 있다.

추가의 양태는 환자의 의학적 처치에서의 hFAS의 검출 또는 측정 방법의 수행에 대한 배상 요청을 송부함을 포함하는 방법이다. 당해 요청은 메일, 전자, 전화, 대면 또는 팩스로 이루어질 수 있다. 당해 요청은 보험 회사, 건광 관리 기관, 연방(건강) 기관 또는 방법이 수행된 환자에게 수행될 수 있다.

추가의 방법은 환자의 의학적 처치에서의 hFAS의 검출 또는 측정 방법의 수행에 대해, 특정 형태 또는 데이터베이스 형태로 배상 또는 지불 요청을 표시함을 포함한다. 또한, 당해 방법은 단순히 방법의 수행을 표시함을 포함할 수 있다. 데이터베이스는 비제한적인 예로서 포함되는 컴퓨터 수행된 데이터베이스와 같은 전자 형태와 함께 임의의 형태일 수 있다. 당해 표시는 코드 형태 또는 서류 또는 데이터베이스에서의 임의의 표시일 수 있다.

환자의 의학적 처치에서의 당해 방법에서, 당해 방법은 방법의 결과를 임의로 건강 관리 기관, 의사, 간호사 또는 이에 대한 근무자에게 보고함을 포함할 수 있다. 또한 당해 보고는 직간접적으로 환자에게 통보될 수 있다. 당해 보고는 메일, 전자, 전화, 대면 또는 팩스로 이루어질 수 있다.

약제학적 조성물 및 투여

본 발명의 항체, 항체 단편, 항체 함유 접합체, 또는 항체 함유 융합 폴리펩타이드가 또한 제공된다. 당해 약제학적 제제 및 제형은 본원에 기재된 방법에 사용될 수 있다. 비제한적인 예는 FAS의 검출을 위한 본 발명의 진단 방법 및 본 발명의 치료학적 방법을 포함하고 여기서, 치료학적 FAS 억제제는 본원에 기재된 바와 같은 FAS의 검출 후 투여된다. 또한, 비제한적인 양태는 독소 접합된 항체 또는 항체 단편의 투여 또는 FAS 활성을 직접 억제하는 항체 또는 항체 단편의 투여를 포함한다. 다른 FAS 억제제와 배합된 본 발명의 항체 또는 항체 단편을 포함하는 조성물이 또한 제공된다. 많은 양태에서, 본 발명의 조성물 및 제형은 생체내 또는 생체외에서 사람 피검체에 사용하기 위한 것이다. 조성물 및 제형은 물론 약제학적으로 허용되는 희석제, 부형제, 염 및/또는 (단백질) 안정화제를 포함할 수 있다.

치료학적 및 진단적 응용 모두에서, 본 발명의 항체 또는 항체 단편은 전신 또는 국소 투여를 포함한 상이한 방식의 투여용으로 제형화될 수 있다. 당업자에게 공지된 일반 기술 및 제형은 문헌[ Remington: The Science and Practice of Pharmacy (20th ed.) Lippincott, Williams & Wilkins (2000)]에 기재되어 있다.

본 발명의 항체 또는 항체 단편은 다양한 양으로 사용될 수 있다. 정확한 양은 투여 경로, 항체 및 이의 단편이 투여되는 형태, 치료될 피검체(피검체의 체중과 같은 인자에 의존하여) 및 의사와 같은 당업자의 선호도 및 경험에 따라 상이할 것이다.

약제학적으로 허용되는 희석제 및 부형제는 생리학적으로 허용되고 혼화성이다. 비제한적인 예는 물, 식염수, 덱스트로스, 글리세롤 등 및 이의 배합물을 포함한다. 추가로, 및 경우에 따라, 조성물 또는 제형은 습윤제 또는 유화제 또는 pH 완충제와 같은 보조 물질을 함유할 수 있다.

약제학적으로 허용되는 염은 당업자에게 공지되어 있다. 비제한적인 예는 아세테이트, 벤젠설포네이트, 베실레이트, 벤조에이트, 바이카보네이트, 바이타르트레이트, 브로마이드, 칼슘 에데테이트, 칸실레이트, 카보네이트, 시트레이트, 에데테이트, 에디실레이트, 에스톨레이트, 에실레이트, 푸마레이트, 글루셉테이트, 글루코네이트, 글루타메이트, 글리콜릴아르사닐레이트, 리엑실레소르시네이트, 하이드라브아민, 하이드로브로마이드, 하이드로클로라이드, 하이드록시나프토에이트, 요오다이드, 이스에티오네이트, 락테이트, 락토비오네이트, 말레이트, 말레에이트, 만델레이트, 메실레이트, 무케이트, 나프실레이트, 니트레이트, 파모에이트 (엠보네이트), 판토테네이트, 포스페이트 /디포스페이트, 폴리갈락투로네이트, 살리실레이트, 스테아레이트, 수박세테이트, 숙시네이트, 설페이트, 타네이트, 타르트레이트, 또는 테오클레이트를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 기타 허용되는 염 및 제제는 예를 들어, 상기 인용된 문헌[Remington]에 기재되어 있다.

조성물 및 제제는 근육내, 피하, 골수내 주사 및 협막내, 직접적인 심실내, 정맥내, 복강내, 비내 또는 안내 주사를 포함하는 비경구 투여용으로 제조될 수 있다. 경피 투여용 제제가 또한 제공된다. 하나의 비제한적인 예는 흑색종 또는 피검체 표면상 또는 이의 근방에 국소적 적용에서 나타난다.

조성물의 직접 전달이 본 발명에 의해 제공된다. 비제한적인 예는 예를 들어, 종양 그 자체로 또는 특정 조직, 예를 들어 간으로의 직접 주사를 포함한다. 추가의 비제한적인 예로서, 절제 후 간 조직 부위로 전달될 수 있다. 따라서, 국소 전달은 본원 발명의 실시에 사용될 수 있다.

본 발명의 항체 또는 항체 단편은 수용액중에서, 예를 들어, 행크스 용액, 링거액 또는 생리학적 식염 완충액과 같은 생리학적 혼화성 완충액중에서 제형화될 수 있다. 몇몇 양태에서, 투과성 장벽에 적당한 투과제가 포함된다. 당해 투과제는 당업자에게 공지되어 있다. 약제학적으로 허용되는 담체는 또한 전신 투여용으로서 본 발명의 실시용 조성물 또는 제형에 사용될 수 있다. 조성물 또는 제형은 용액용 현탁액용, 주사전 액체용으로 적합한 현탁제 형태 또는 고체 형태일 수 있다.

본 발명에 사용하기 위한 약제학적 조성물은 항체 또는 이의 단편이 당해 의도된 목적을 성취하기 위한 유효량으로 존재하는 조성물을 포함한다.

본 발명의 항체, 항체 단편, 또는 항체 함유 융합 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산 분자를 포함하는 조성물이 또한 제공된다. 당해 조성물은 핵산의 성질, 예를 들어, 비제한적으로, 이것이 분자 자체인지 또는 투여될 팩키징된 바이러스 벡터 형태속의 분자인지에 따라 제형화될 수 있다.

당해 조성물은 근육내, 피하내, 골수내 주사 및 협막내, 직접적인 심실내, 정맥내, 복강내, 비내 또는 안내 주사를 포함하는 비경구 투여용으로 제형화 될 수 있다. 환자 표면상의 흑색종으로와 같은 경피 투여용 제제가 또한 제공된다.

본 발명의 핵산의 국소 또는 직접적인 전달이 또한 제공된다. 비제한적 예는 예를 들어 종양 자체와 같은 종양 부위 또는 특정 조직, 예를 들어, 간으로 직접 주사함을 포함하여 핵산이 주사 부위 또는 이의 근방에서 세포에 의해 취득될 수 있도록 한다. 취득 후, 암호화된 항체 또는 항체 관련 폴리펩타이드를 발현할 수 있는 핵산은 세포내에서 항체 또는 항체 관련 폴리펩타이드가 생성되도록 발현될 것이다. 추가의 비제한적인 예로서, 간 세포내에서 항체 또는 항체 관련 폴리펩타이드를 발현할 수 있는 핵산은 절제후 간 조직 부위로 전달되어 당해 위치에서 hFAS 결합 활성이 발현되도록 한다.

본 발명의 키트

본 발명은 본원에 기재된 바와 같은 생물학적 샘플에서 hFAS 또는 면역반응성 이의 단편(즉, 총체적으로 "hFAS 단백질")의 검출용 키트를 제공하다. 생물학적 샘플은 또한 조직분석 목적으로 취득된 신선, 동결 또는 고정화된 절편과 같은 조직 절편을 포함한다. 당해 키트는 전형적으로 본 발명의 항-hFAS 항체 또는 hFAS 폴리펩타이드상에 존재하는 에피토프와 면역반응성인 항체의 제제를 포함한다. 몇몇 양태에서, 항-hFAS 항체는 항체 단편이다.

본 발명의 키트는 또한 본원에 제공된 바와 같은 본 발명의 방법에서 본 발명의 키트 또는 항체의 용도를 기재하거나 기술하는 지침서를 포함할 수 있다. 당해 키트는 또한 추가의 성분을 포함하여 특정 응용을 위해 디자인된 키트의 적용을 촉진시킬 수 있다. 따라서, 예를 들어, 당해 키트는 추가로 표지(예를 들어, 효소적 표지용 효소 기질, 형광표지를 검출하기 위한 필터 세트, 양 항-마우스 HRP와 같은 적당한 2차 표지등)를 검출하는 수단을 포함한다. 당해 키트는 추가로 본 발명의 방법에 사용하기 위한 것으로 인지된 완충액 및 기타 시약을 포함할 수 있다. 비제한적인 예는 캐리어 단백질 또는 세제와 같은 비특이적 결합을 감소시키는 제제를 포함한다.

본 발명의 몇몇 양태에서, 당해 키트는 본원에 기재된 바와 같은 면역분석을 포함하는 진단 키트이다. 본 발명의 면역분석의 세부사항은 사용되는 특정 포맷에 따라 다양할 수 있지만 샘플중에서 hFAS를 검출하는 방법은 일반적으로 면역학적 반응성 조건하에 hFAS와 특이적으로 반응하는 항체와 샘플을 접촉시킴을 포함한다. 당해 항체는 면역학적 반응 조건하에서 hFAS와 결합하게 되고 결합된 항체의 존재는 직간접적으로 검출된다.

현재, 발명을 일반적으로 기재하였고 이것은 설명을 위해 제공된 하기의 실시예를 참조로 보다 용이하게 이해될 것이고 당해 실시예는 특정되지 않는 경우, 본 발명을 제한하지 않는다.

실시예 1 : 항체 생산

폴리클로날 항체를 제조하는 일반적인 방법은 당업자에게 공지되어 있다. 추가로, 모노클로날 항체뿐만 아니라 유도체 및 이의 단편을 제조하는 방법도 공지 되어 있다. 전형적으로, 둘다는 항체 생산 동물을 면역화시키기 위한 hFAS 단백질 또는 이의 폴리펩타이드의 용도를 포함한다. hFAS 단백질은 예를 들어, 제한되지 않지만 hFAS 단백질을 생산하는 사람 세포와 같은 적합한 공급원으로 수득된 정제된 물질일 수 있다.

비제한적인 예로서, 문헌[Linn TC (1981) Arch. Biochem. Biophys. 209, 613-619]의 방법이 사용될 수 있다. 간략하게 ZR-75-1 세포를 약 80 내지 90%의 컨플루언스때까지 성장시키고 HBSS 로 세정하고 빙상에서 용해시켰다. 용해된 세포를 박리시키고 빙상에서 균질화시키고 4℃에서 원심분리하였다. 상등액을 제거하고 7.5% PEG(평균 MW 8000)과 함께 용해 완충액 (20 mM Tris-HCl, ph 7.5, 1 mM EDTA, 0.1 mM PMSF, 0.1% Igepal CA-630)중에 현탁시켰다.

수득한 용액을 60분동안 4℃에서 흔든 다음 상등액을 제거하여 새로운 병에 담았다. 용해 완충액중의 PEG 8000을 PEG 최종 농도가 15%가 될때까지 첨가함에 이어서 흔드는 단계 및 원심분리 단계를 반복하였다. 상등액을 제거하고 2OmM K₂HPO₄, pH 7.4중에 펠렛을 현탁시키고, 4℃에서 용액을 흔든 후 0.45 μm 필터를 통해 여과하였다. 여과된 용액을 모노 Q 칼럼상에 로딩하고 1M KCl까지 연속 농도 구배하에 2OmM K₂HPO₄, pH 7.4로 용출시켰다. FAS에 대해 SDS-폴리아크릴아미드로 분획물을 분석하였다. 약 MW 270kD의 FAS를 함유하는 분획물을 동정하고 수거하였다.

그러나 본 발명의 항체의 제조에서, 미국 특허 제5,759,791호의 실시예 16에 제공된 면역원 또는 방법을 사용하지 않고 본원에 기재된 바와 같은 모노클로날 항체가 생성될 가능성을 감소시키는 것이 바람직할 수 있다. 비제한적인 예로서, 당업자에게 공지된 비장내 면역화가 사용될 수 있다[문헌참조: Journal of Tissue Culture Methods, 12:3, 1989)]. M3, M6, 및 항 -Hpr 항체는 비장내 면역화의 사용으로 생성되지 않았다.

실시예 2: FAS 단백질을 검출하기 위한 ELISA 항원 포획

한줄의 ELISA 플레이트를, 배합물중에 각각의 MAb가 2.5㎍인 포지티브 포획 항체 웰당 100마이크로리터로 피복시켰다: PBS 피복 완충액(Sigma Cat# P-3813, 또는 등가물)중의 63-2D8 및 63-4G4 (5 μg/ml 총 항체). 다른 줄의 플레이트는 배합물중의 각각의 MAb가 2.5 μg/ml 인 네가티브 포획 항체의 웰당 100 μl로 피복시켰다: PBS 피복 완충액중에서 FAS 이외의 항원에 대해 지시된 2개의 MAb (5 μg/ml 총 항체). 피복된 플레이트는 밤새 4℃에서 저장할 수 있다. 당해 플레이트는 PBS 세척 완충액(Sigma Cat# P-3813, 또는 Tween-20 및 티머로살을 갖는 등가물)으로 4회 세척하였다.

플레이트를 ELISA 희석 /차단 완충액 (Sigma Cat# P-3813, 또는 Hepes, 트리톤-X, BSA, 정상 염소 IgG, 정상 래빗 IgG, 및 마우스 MAb를 갖는 등가물)의 웰당 150 μl로 차단하고 37℃에서 1시간동안 항온처리하였다. 당해 플레이트를 PBS 세척 완충액으로 4회 세척하였다. hFAS 단백질(포지티브 항원), 네가티브 항원 및 미지의 단백질을 당해 플레이트에 첨가하였다.

hFAS 단백질의 적정은 포지티브 및 네가티브 피복된 웰 둘다에서 ELISA 플레이트에 대해 ELISA 희석/차단 완충액중에서 313 ng/ml에서 1.2 ng/ml까지 연속으로 단백질을 희석시킴에 의해 수행하였다. 각각의 웰 세트는 적정이 수행된 후 각각의 항원 희석물 100 μl 를 함유한다. 네가티브 항원 대조군으로서 네가티브 및 포지티브 피복된 웰의 3개 이상의 웰에 ELISA 희석/차단 완충액을 첨가한다. 미지의 샘플을 100 μl 용적의 희석/차단 완충액중에서 1:2로 희석하고 포지티브 및 네가티브 포획 피복된 웰 둘다의 2개의 웰에 첨가하였다.

플레이트를 1시간동안 37℃에서 항온처리하고 이어서 PBS 세척 완충액으로 세척하였다. 100 μl의 비오티닐화된 검출기 항체 MAb: 63-3C10을 각각의 웰에 ELISA 희석/차단 완충액중의 0.313 μg/ml 의 농도로 첨가하였다. 플레이트를 37℃에서 1시간동안 항온처리함에 이어서 PBS 세척 완충액으로 4회 세척하였다.

0.05 μg/ml 로 희석된 100 μl의 접합체 (HRP-표지된 스트렙타비딘)을 각각의 웰에 첨가하였다. 플레이트를 37℃에서 1시간동안 항온처리하고 PBS 세척 완충액으로 4회 세척하였다. 기질 (ABTS 2-성분) 을 제조하고 100 μl의 배합 기질을 각각의 웰에 첨가함에 이어서 37℃에서 30분동안 항온처리하였다.

405와 410 nm 사이의 광학 밀도(OD)를 측정하였다. OD 값은 네가티브 항원 대조군과 FAS 표준 곡선간에 비교하였다. 검출(LPD)의 민감성 또는 최저점은 네가티브 항원 대조군의 평균 값 보다 큰 OD 값에서 FAS의 농도를 선택함에 의해 결정한다. LPD는 정상적으로 네가티브 대조군의 평균 보다 약 0.100 커야만 한다. 그러나, LPD의 상기 정의는 임의적인 것이고 다른 LPD는 본 발명의 수행에 사용될 수 있음을 주지해야만 한다. 네가티브 포획 웰에서 OD 값은 모든 샘플 및 대조군에 대해 0.300 OD 미만이어야만 한다.

ELISA 플레이트는 맨눈으로 판독될 수 있다. 항원 부재(네가티브) 대조군 보다 큰 강도를 갖는 웰에서의 색상 변화는 포지티브인 것으로 간주된다.

특허, 특허원 및 공보물을 포함하는 본원의 모든 참조문헌은 이전에 구체적으로 인용되었는지와 상관없이 이의 전체 내용이 본원에 참조로서 인용된다.

본 발명을 완전하게 기술하였기 때문에, 당업자는 광범위한 범위의 등가의 파라미터, 농도 및 조건에서 과도한 실험 없이 본 발명의 취지 및 범위로부터 벗어나지 않고 동일하게 수행될 수 있음을 인지할 것이다.

본 발명은 이의 특정 양태와 관련하여 기재되었지만, 이것은 추가로 변형될 수 있는 것으로 이해될 것이다. 본 출원은 일반적으로 본 발명의 원리에 따라서 및 본 발명이 속하는 기술 분야내의 공지된 통상적인 실시 범위내에 있고 이전에 제시된 필수 특징에 적용될 수 있는 기재로부터의 당해 이탈을 포함하여 본 발명의 임의의 변법, 용도 또는 적용을 포괄하는 것으로 의도된다.

Claims (20)

1. 사람 지방산 신타제(hFAS)와 특이적으로 결합하고 M3 또는 M6으로서 공지된 모노클로날 항체가 아닌 모노클로날 항체 또는 이의 단편.
2. 제1항에 있어서, 약 250kD의 hFAS 폴리펩타이드 및/또는 약 134kD의 hFAS의 단백질용해 생성물과 결합하는 모노클로날 항체 또는 이의 단편.
3. 제1항에 있어서, M3 또는 M6로서 공지된 모노클로날 항체와는 다르게 MCF-7 사람 유방암 세포의 용해물중의 상이한 집단의 폴리펩타이드와 결합하거나, M3 또는 M6으로서 공지된 모노클로날 항체와는 다르게 트립신으로 분해된 상이한 집단의 hFAS 폴리펩타이드와 결합하는 모노클로날 항체 또는 이의 단편.
4. 제1항에 있어서, M3로서 공지된 모노클로날 항체와 유사한 결합 특성으로 사람 지방산 신타제(hFAS)와 결합하고;

   a) M3과 비교하여 보다 강한 친화성으로 전장의 hFAS와 결합하거나

   b) M3와 비교하여 감소된 친화성으로 전장의 hFAS와 결합하는,

   모노클로날 항체 또는 이의 단편.
5. 제4항에 있어서, 트립신으로 분해된 hFAS 폴리펩타이드의 집단중에서 약 70kD의 hFAS 폴리펩타이드 단편과 결합하지 않거나,

   또한 트립신으로 분해된 hFAS 폴리펩타이드의 집단에서 약 50kD의 hFAS 폴리펩타이드 단편과 결합하는 모노클로날 항체 또는 이의 단편.
6. 제4항에 있어서, 2006년 8월 17일자로 ATCC에 하이브리도마 클론 34-6E7-2G10-15로 기탁되어 수탁번호 를 부여받은 34-6E7, 또는 2006년 8월 17일자로 ATCC에 하이브리도마 클론 63-2D8-2E2-1D2로서 기탁되어 수탁번호 를 부여받은 63-2D8, 2006년 8월 17일자로 ATCC에 하이브리도마 클론 34-63-4G4-B3-2F3으로서 기탁되어 수탁번호 를 부여받은 63-4G4, 및 2006년 8월 17일자로 ATCC에 하이브리도마 클론 63-3C10-2B8로서 기탁되어 수탁번호 를 부여받은 63-3C10로서 동정된 모노클로날 항체 또는 이의 단편.
7. 제1항에 있어서, M6로서 공지된 모노클로날 항체와 유사한 결합 특성으로 사람 지방산 신타제(hFAS)와 결합하고;

   a) 사람 MCF-7 유방암 세포의 용해물중에서 약 60kD의 폴리펩타이드와 결합하지 않거나;

   b) 사람 MCF-7 유방암 세포의 용해물중에서 약 40kD의 폴리펩타이드와 결합하는 모노클로날 항체 또는 이의 단편.
8. 제1항에 있어서, M6로서 공지된 모노클로날 항체와 유사한 결합 특성으로 사 람 지방산 신타제(hFAS)와 결합하고;

   a) 트립신으로 분해된 사람 ZR-75-1 유방암 세포의 용해물중에서 약 45kD, 약 34kD, 약 16kD, 약 37kD, 약 28kD, 또는 약 7kD의 폴리펩타이드와 결합하지 않거나;

   b)트립신으로 분해된 사람 ZR-75-1 유방암 세포의 용해물중에서 약 115kD, 약 90kD, 약 50kD, 약 85kD, 약 78kD, 약 50kD, 약 40kD, 또는 약 17kD의 폴리펩타이드와 결합하는 모노클로날 항체 또는 이의 단편.
9. 제1항에 있어서, M6로서 공지된 모노클로날 항체와 유사한 결합 특성으로 사람 지방산 신타제(hFAS)와 결합하고;

   a) 사람 MCF-7 유방암 세포의 용해물중에서 약 125kD, 약 32kD, 또는 약 9kD의 폴리펩타이드와 결합하지 않거나;

   b) 트립신으로 분해된 사람 ZR-75-1 유방암 세포의 용해물중에서 약 85kD, 약 50kD, 약 43kD 또는 약 24kD의 폴리펩타이드와 결합하는 모노클로날 항체 또는 이의 단편.
10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 항체를 발현하는 세포주.
11. 임의로 표지된, 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 단편과 hFAS 폴리펩타이드의 복합체를 포함하는 조성물.
12. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 단편을 사용하여 샘플중의 폴리펩타이드를 검출함을 포함하는, 면역조직화학에 의해 FAS 폴리펩타이드를 검출하는 방법.
13. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 단편을 포함하고, 당해 항체, 또는 이의 단편 또는 당해 항체를 포함하는 복합체를 검출하기 위한 표지를 임의로 포함하는 장치 또는 키트.
14. 제13항에 있어서, 샌드위치 분석 또는 경쟁 분석을 사용하여 샘플중의 hFAS의 존재를 검출하는 측면 유동(lateral flow) 장치.
15. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 단편과 hFAS 폴리펩타이드를 포함하는 복합체를 형성하고;

    임의로 효소 연결된 면역흡착 분석(ELISA) 또는 방사선면역 분석(RIA)의 형태로 당해 복합체를 검출함을 포함하는, hFAS 폴리펩타이드의 존재를 검출하는 방법.
16. 제15항에 있어서, hFAS 폴리펩타이드가 개체 기원의 샘플중에 존재하고 당해 복합체의 검출이 피검체에 암이 존재함을 지적하는 방법.
17. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 단편과 hFAS 폴리펩타이드를 포함하는 복합체의 형성을 기준으로, 피검체 기원의 샘플중의 hFAS 폴리펩타이드의 수준을 결정함을 포함하고,

    이때, 당해 결정이 임의로 효소 연결된 면역흡착 분석(ELISA) 또는 방사선면역 분석(RIA)의 형태로 수행되고;

    hFAS의 수준이 질환의 진행 또는 재발을 지적하는, 피검체내 질환의 진행 또는 재발을 모니터링하는 방법.
18. 제17항에 있어서, 질환이 암인 방법.
19. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 단편과 hFAS 폴리펩타이드를 포함하는 복합체의 형성을 기준으로 피검체 기원의 샘플중에서 hFAS 폴리펩타이드의 수준을 결정하고,

    검출된 hFAS의 수준에 근거하여 FAS 억제제를 투여할지의 여부를 결정함을 포함하고;

    이때, 당해 결정이 임의로 효소 연결된 면역흡착 분석(ELISA) 또는 방사선면역 분석(RIA) 형태로 수행되는, 피검체에 FAS 억제제를 투여할지의 여부를 결정하는 방법.
20. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 단편과 hFAS 폴리펩타이드를 포함하는 복합체의 형성을 기준으로 피검체 기원의 샘플중에서 hFAS 폴리펩타이드의 수준을 결정하고,

    검출된 hFAS의 수준에 근거하여 피검체에 화학보호를 제공하기 위해 FAS 억제제를 투여함을 포함하고;

    이때, 당해 결정이 임의로 효소 연결된 면역흡착 분석(ELISA) 또는 방사선면역 분석(RIA) 형태로 수행되는, 전악성(premalignant) 세포를 갖는 피검체에 화학보호를 제공하는 방법.

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