KR20070048776A - 엽산을 생산하는 비피도박테리움 박테리아 균주, 그들의제제 및 용도 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 비피도박테리움 속에 속하는 엽산-생산 박테리아 균주, 그들을 함유한 약학, 수의학 또는 식품 제제 및 그들의 용도에 대한 것이다.
특히, 본 발명은 2004년 7월 21일자로, 부다페스트 조약에 가입된 DSMZ(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH; Braunsweig, Germany) 기탁기관에 기탁된 비피도박테리움 속, 아돌레스센티스 종(2), 비피도박테리움 속, 브레베 종 (1) 및 비피도박테리움 속, 슈도카텐눌라툼 종(2)에 속하는 인간 기원의 새로운 박테리아 균주에 대한 것이다.
비피도박테리움, 엽산 생산, 약학, 수의학, 식품
Description
본 발명은 비피도박테리움 속에 속하는 엽산-생산 박테리아 균주, 그들을 함유하는 약학, 수의학 또는 식품 제제 및 그들의 용도에 대한 것이다.
엽산은 공여 분자로부터 하나의 탄소 단위를 수용하는 중요한 수용성 B 비타민이다. 이런 특성 덕분에, 엽산은 필수적인 세포적 프로세스, 예를 들면, 메틸기의 생성, 뉴클레오티드, 비타민 및 몇몇 아미노산의 합성의 중심에 있다.
신체에서, DNA 복제, 복구 및 메틸화는 엽산의 이용성을 증가시키는데 더욱 효과적인다. 이런 이유로, 높은 증식 및 전환율을 나타내는 조직, 이를 테면 백혈구, 적혈구 및 장세포는 다량의 엽산 또는 적어도 그들의 좋은, 지속적인 유용성을 요구한다.
인간에게 있어서, 엽산 결핍은 암의 위험의 증가와 관련되어 있다: 예를 들어, 역학 연구가 폐경기 후에 유방암으로 발전될 위험이 엽산의 흡수가 낮은 여성들에게서 더 높다는 것을 보여주었다.
반대로, 다량의 엽산은 직장결장암의 위험을 감소시킨다.
엽산 (그의 염, 엽산과 함께)은 다른 것들 중에서 직장결장의 점막을 만드는 세포에서 중요한 역할을 하고, 이는 상피세포 재개의 연속적인 과정 하에 있다.
직장결장암의 예방에 있어 엽산의 역할은 문헌 (참고자료 1.)에 기재되어 있다. 특히 메틸기의 물질대사에 관여하는 유전자의 다형성이 직장결장암의 가족력적 위험과 연관되어 있고, 이들 유전자의 효과는 엽산의 유용성에 의해 변형된다는 것을 증명하였다(참고자료 2).
결론적으로, 엽산의 낮은 또는 감소된 국부적인 유용성이 DNA 저메틸화를 야기시키고, 결국 예를 들어, 결장암을 유발한다.
게다가, 다량의 엽산은 염증성창자병(inflammatory bowel diseases, IBD)을 앓고 있는 환자에게 추천할 만한데, 그것이 결장과 직장에 있어서 세포 증식 조절을 도와주기 때문이다.
그러므로, 신체에 엽산의 필수적 양을 지속적으로 공급하여, 대체물을 상기 물질 또는 그들의 염의 투여의 통상적인 체계 방법을 위해 제공하는, 천연의, 비-독성 내생적인 원천을 부여하는 수단을 찾는 것이 가장 중요하다.
불행하게도, 지금까지 어떤 형태의 해결책도 이 필요성을 만족시키지 못했다.
인간의 직장은 숙주와 활발하게 상호작용을 하는, 복잡하고 수많은 미생물 군집에 의해 집락형성이 되어 있는 것으로 알려져 있다.
직장의 박테리아 농도는 대략 장 성분 g 당 1011-1012 박테리아이다.
거기에는 적어도 400여 가지의 박테리아 종이 존재하고 있으나, 30-40 종만이 전체 미생물군의 약 95-98%를 차지하고 있다.
이들 주요한 종들 중에서, 비피도박테리움 속에 속하는 것들이 인간에 존재하는 주요 장 미생물 그룹의 하나로 대표된다.
비피도박테리움 속은 신체 내에서 그것의 유익한 활성으로 잘 알려져 있다. 이 활성은 예를 들어 다음의 효과로 해석된다: 항생 치료가 가능한 장 미생물 군을 보급하는 능력, 다양한 장 미생물 군의 균형 유지, 혈청 콜레스테롤 수준의 감소, 비타민의 생산, 락토오스 과민 및 면역 조절의 완화.
그러므로, 비피도박테리움 속에 속하는 박테리아는 프로바이오틱(probiotics)으로 간주되고 일반적으로 약학, 수의학 및/또는 식품 분야에서 이용된다.
프로바이오틱은 인간 또는 동물의 건강에 유익한 활성을 부여하는 생 미생물 보충제이다.
지금 까지, 엽산을 생산하는 프로바이오틱 균주는 알려져 있지 않았다 (락토바실러스 및 락토코커스 속에 속하는 엽산-생산 박테리아가 기재되어 있기는 하지만, 프로바이오틱으로 제안되지 않았다).
특히, 비피도박테리움의 프로바이오틱 박테리아는 엽산이 완전히 결여된 배양 배지에서 자라지 않고 많은 양의 엽산을 생산하지 않는 것으로 알려져 있다.
발명의 요약
본 발명은 비피도박테리움 속에 속하는 엽산 생산 박테리아 균주, 그들을 포함하는 약학, 수의학 또는 식품 제형 및 그들의 용도에 대한 것이다.
특히, 본 발명은 2004년 7월 21일자에, 부다페스트 조약에 의한 DSMZ 기탁기관(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH; Braunsweig- Germany)에 기탁된 비피도박테리움 속, 아도레스센티스 종 (2), 비피도박테리움 속, 브레베 종 (1) 및 비피도박테리움 속, 슈도카테눌라툼 종 (2)에 속하는 인간 기원의 새로운 박테리아 균주에 대한 것이다.
상기 언급된 균주들은 각각 다음 확인 코드로 표시된다:
비피도박테리움, 아도레스센티스 종, 코드 DSM 16594;
비피도박테리움, 아도레스센티스 종, 코드 DSM 16595;
비피도박테리움, 브레베 종, 코드 DSM 16596;
비피도박테리움, 슈도카테눌라툼 종, 코드 DSM 16597;
비피도박테리움, 슈도카테눌라툼 종, 코드 DSM 16598.
발명의 상세한 설명
출원인은 기대치 않게 비피도박테리움 속에 속하는, 인간 유래의 프로바이오틱 박테리아 균주가 엽산의 생산자임을 발견하였다.
예를 들어, 다음 종에 속하는 엽산-생산 균주가 동정되었다: 비피도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum), 비피도박테리움 인판티스(Bifidobacterium infantis), 비피도박테리움 아도레스센티스(Bifidobacterium adoloscentis), 비피도박테리움 비피듐(Bifidobacterium bifidum), 비피도박테리움 브레베(Bifidobacterium breve), 비피도박테리움 앵글라툼(Bifidobacterium angulatum), 비피도박테리움 카텐눌라툼(Bifidobacterium catenulatum), 비피도박테리움 슈도카텐눌라툼(Bifidobacterium pseudocatenulatum), 비피도박테리움 갈리슘(Bifidobacterium gallicum), 비피도박테리움 덴티움(Bifidobacterium dentium), 비피도박테리움 덴티콜렌스(Bifidobacterium denticolens), 비피도박테리움 이노피나툼(Bifidobacterium inopinatum), 비피도박테리움 애니말리스(Bifidobacterium animalis), 비피도박테리움 락티스(Bifidobacterium lactis).
이들 박테리아 균주들 중에서, 비피도박테리움 아돌레스센티스, 비피도박테리움 브레베 및 비티도박테리움 슈도카텐눌라툼 종이 특히 흥미로우며, 이는 하기 상세한 설명 및 청구항에서 기재하고 있다.
더욱 특이하게, 본 발명의 바람직한 측면에서, 하기 상세한 설명 및 청구항에서 기재되어 있듯이, 본 출원인은 비피도박테리움 속에 속하는 인간 유래의 5가지 새로운 박테리아 균주를 분리하고, 2004년 7월 21일자로 DSMZ(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH; Braunsweig-Germany)에 기탁하였다. 이 5개의 새로운 박테리아 균주들 중에서, 비피도박테리움 아돌레스센티스 종에 속하는 2개 균주, 비피도박테리움 브레베 종에 속하는 1개 균주, 및 비피도박테리움 슈도카텐눌라툼 종에 속하는 2개 균주. 상기 균주들은 각각 다음 동정 코드로 표시되었다:
DSM 16594;
DSM 16595;
DSM 16596;
DSM 16597;
DSM 16598.
상기 박테리아 균주들은 하기에기 기재된 것처럼 분류학적 및 기술적으로 특징지어지며, 다량의 엽산을 생산함을 보여준다.
사실, 상기 균주들은 엽산 결핍 배양 배지에서 성장할 수 있다.
특히, 상기 균주들은 상대적으로 다음 양의 엽산을 생산할 수 있다: 배양 배지의 56-62, 16-20, 6-9, 14-16 및 14-19 ng/ml.
게다가, 기대치않게 본 발명 박테리아 균주에 의한 엽산 생합성은 결과 생성물의 부분에서 임의의 네거티브 조절 메카니즘 (네거티브 피드백), 또는 배양 배지에 이미 존재하는 임의의 다른 생성물에 의한 것은 아님을 관찰하였다.
즉, 생리적 조건에서, 엽산 생산은 그 환경에 그것의 존재 여부와 상관없이 이루어진다.
마지막으로, 또한 pH, 직장의 전형적인 생태계에서의 변화(pH 수치가 특정 병리 또는 식이 종류에 따라 약 7 내지 5 사이에서 변한다)가 본 발명 균주의 생산성에 부정적으로 영향을 미치지 않는다.
그러므로, 이 타입의 미생물은 그들의 공지의 프로바이오틱 특성(그러므로 신체에 이로움)이 in situ 엽산 생산 능력과 결합될 수 있다(예를 들어 직장에서).
결론적으로, 이들 균주들은 기대치않게 상기에서 기재한 것과 같은 본 발명의 기술적 문제에 대한 바람직한 해결책으로서 제시된다.
사실, 상기 미생물들은 엽산의 이상적, 천연의, 비-독성의 내생적인 원천으로 대표된다.
그러므로, 본 발명의 엽산-생산 비피도박테리아를 함유하는 적절한 제형의 용도는 엽산의 지속적인 in situ 생산이 가능하게 한다.
본 발명의 프로바이오틱 박테리아는 환자 또는 소비자의 필요에 따라 다양한 방법으로 투여될 수 있다.
바람직한 측면에서, 본 발명은 본 발명의 적어도 하나의 박테리아 균주 또는 그들의 혼합물을 포함하는 약학, 수의학 및/또는 식품 제제를 목표로 한다.
특히 바람직한 것은 DSM 16594, DSM 16595, DSM 16596, DSM 16597 및 DSM 16598의 적어도 하나의 균주 또는 그들의 임의의 조합을 포함하는 제제이다.
다른 바람직한 측면에서, 본 발명의 균주는 또한 다른 보완적인 특성, 즉 다른 본래적인 특성을 지니는 프로바이오틱 박테리아 균주와 조합하여 제제화될 수 있다.
그런 제제의 예로는 장 점막에 강하게 부착하는 특징을 갖는 프로바이오틱 박테리아 균주와의 적절한 혼합물에 있어서 본 발명의 박테리아 균주 중 적어도 하나에 의해 대표될 수 있으며, 여기에 제한되지 않는 것으로 해석된다.
본 발명의 균주는 그들이 속하는 박테리아 속에 연관된 본래의 이로운 특징에 더하여 숙주의 건강에 유용한 다른 고유한 특징을 나타내는 다른 균주와 조합하여 제조될 수 있다.
상기 혼합된 제제들은 단일 제제에서 많은 프로바이오틱 특성을 결합할 수 있고, 그것에 의해 많은 잇점을 제공하고, 뿐만 아니라 단일 투여로 인하여 그들로부터 유래된 잠재적인 시너지를 제공할 수 있다.
상기 고려들에 비추어, 당업자는 그들 자신의 경험에 비추어 프로바이오틱 박테리아의 많은 조합을 발견할 수 있을 것이다.
그러므로, 그런 조합들은 또한 본 발명의 범위 내에 속한다.
본 발명의 범위를 제한하지 않는 예로서, 상기 프로바이오틱 박테리아는 다른 것들 중에서 락토바실러스 속, 이를 테면 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus bulgaricus), 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 카세이 서브에스피. 람노서스(Lactobacillus casei subsp. rhamnosus), 락토바실러스 카세이 서브에스피. 파라카세이(Lactobacillus casei subsp . paracasei), 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 펄멘툼(Lactobacillus fermentum), 락토바실러스 살리바리우스 서브에스피. 살리바리우스(Lactobacillus salivarius subsp . salivarius) 및 락토바실러스 펜토서스(Lactobacillus pentosus)로 부터 선택되거나, 또는 스트렙토코커스 속, 이를 테면 스트렙토코커스 델브루에키 서브에스피. 썰포필러스(Streptococcus delbrueckii subsp . Thermophilus)로부터 선택된다.
이들 중에서, 특히 바람직한 균주는 예를 들어 다음을 포함하는 것이다:
- 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus) LMG P-21381 (2002년 1월 31일자로, BCCM(Belgian Coordinated Collections of Microorganisms) LMG 콜렉션으로 기탁됨);
- 락토바실러스 카세이 서브에스피. 파라카세이(Lactobacillus casei subsp . paracasei) LMG P-21380 (2002년 1월 31일자로, BCCM LMG 콜렉션으로 기탁됨);
- 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) LMG P-21021 (2002년 10월 16일자로, BCCM LMG 콜렉션으로 기탁됨);
- 락토바실러스 펜토서스(Lactobacillus pentosus) LMG P-21019 (2002년 10월 16일자로, BCCM LMG 콜렉션으로 기탁됨);
- 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) LMG P-21020 (2002년 10월 16일자로, BCCM LMG 콜렉션으로 기탁됨);
- 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) LMG P-21022 (2002년 10월 16일자로, BCCM LMG 콜렉션으로 기탁됨);
- 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) LMG P-21023 (2002년 10월 16일자로, BCCM LMG 콜렉션으로 기탁됨);
-비피도박테리움 락티스(Bifidobacterium lactis) LMG P-21384 (2002년 1월 31일자로, BCCM LMG 콜렉션으로 기탁됨);
-스트렙토코커스 델브루에키 서브에스피. 썰모필러스(Streptococcus delbrueckii subsp . thermophilus) DSM 16506 (2004년 6월 18일자로 DSMZ에 기탁됨);
-스트렙토코커스 델브루에키 서브에스피. 썰모필러스(Streptococcus delbrueckii subsp . thermophilus) DSM 16507 (2004년 6월 18일자로 DSMZ에 기탁됨);
- 비피도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum) DSM 16603 (2004년 7월 20일자로 DSMZ에 기탁됨);
- 비피도박테리움 브레베(Bifidobacterium breve) DSM 16604 (2004년 7월 20일자로 DSMZ에 기탁됨);
- 락토바실러스 카세이 서브에스피. 람노서스(Lactobacillus casei subsp . rhamnosus) DSM 16605 (2004년 7월 20일자로 DSMZ에 기탁됨);
결론적으로, 본 발명의 특히 바람직한 혼합 제제는 DSM 16594에서 DSM 16598까지의 박테리아 균주 중 적어도 하나, 또는 상기 리스트의 프로바이오틱 박테리아 균주 중 적어도 하나, 또는 그들의 임의의 혼합물의 조합으로 적절하게 제조된 그들의 임의의 혼합물을 포함할 것이다.
바람직하게, 상기 프로바이오틱 박테리아 균주는 다음을 포함하는 그룹으로부터 선택된다:
- 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus) LMG P-21381;
- 락토바실러스 카세이 서브에스피. 파라카세이(Lactobacillus casei subsp . paracasei) LMG P-21380;
- 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) LMG P-21021;
- 락토바실러스 펜토서스(Lactobacillus pentosus) LMG P-21019;
- 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) LMG P-21020;
- 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) LMG P-21022;
- 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) LMG P-21023;
- 비피도박테리움 락티스(Bifidobacterium lactis) LMG P-21384;
- 스트렙토코커스 델브루에키 서브에스피. 썰모필러스(Streptococcus delbrueckii subsp . thermophilus) DSM 16506;
- 스트렙토코커스 델브루에키 서브에스피. 썰모필러스(Streptococcus delbrueckii subsp . thermophilus) DSM 16507;
- 비피도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum) DSM 16603;
- 비피도박테리움 브레베(Bifidobacterium breve) DSM 16604;
- 락토바실러스 카세이 서브에스피. 람노서스(Lactobacillus casei subsp . rhamnosus) DSM 16605.
상기 혼합된 제제에서 결합되어 있는 박테리아 균주의 수와 타입은 치료받을 또는 예방될 병리의 종류 및 심함, 또는 획득하고자 하는 프로바이오틱 식품의 종류에 따라 당업자에 의해 결정될 것이다.
다른 바람직한 측면에서, 단독으로, 또는 다른 것과의 조합 및/또는 다른 프로바이오틱 박테리아 균주와의 조합으로 사용되는 본 발명의 박테리아 균주는 선생물적(prebiotic) 성질을 갖는 다른 물질과 조합으로 제조될 수 있다.
바람직하게, 상기 선생물적 특징을 갖는 상기 물질들은 인간에 의해 소화 및 흡수되지 못하는 탄수화물을 포함하여 완전히 손상되지 않은 형태로 직장에 도달하고, 여기에서 그들이 수많은 유익한 미생물 그룹, 특히 비피도박테리아의 활성 및 성장을 선택적으로 자극한다.
특히 상기 선생물적 탄수화물 사이에서 박람직한 것으로 다음을 포함하는 군에서 선택된다: 프락토-올리고사카라이드(fructo-oligosaccharides, FOS), 특히 이눌린, 이소말토-올리고사카라이드, 난소화성 전분(resistant starch), 펙틴, 갈락토-올리고사카라이드(GOS), 아라비노갈락탄(arabinogalactan), 자일로-올리고사카라이드(XOS), 키토산 올리고사카라이드(COS) 및 글루코만난.
본 발명의 범위를 제한하지 않는 예로서, 바람직한 제제들은 박테리아 균주 DSM 16594 내지 DSM 16598 중 적어도 하나, 또는 그들의 조합, 또는 상기 리스트된 것들, 즉, 프럭토-올리고사카라이드(FOS), 특히 이눌린, 이소말토-올리고사카라이드, 난소화성 전분, 펙틴, 갈락토-올리고사카라이드(GOS), 아라비노갈락탄, 자일로-올리고사카라이드(XOS), 키토산 올리고사카라이드(COS) 및 글루코만난 중에서 선택된 선생물적 특성을 갖는 적어도 하나의 물질과 조합하여 적절하게 제조된 것들을 포함한다.
또한, 본 발명의 바람직한 제제는 박테리아 균주 DSM 16594 내지 DSM 16598 중 적어도 하나 또는 그들의 임의의 혼합물, 또는 상기 리스트된 프로바이오틱 박테리아 균주 중 적어도 하나 또는 그들의 임의의 혼합물과의 조합으로 적절하게 제조된 것들, 및 적어도 하나의 선생물적 성질을 갖는 물질로서, 예를 들어 상기 리스트된 것들, 즉, 프락토-올리고사카라이드(FOS), 특히 이눌린, 이소말토-올리고사카라이드, 난소화성 전분, 펙틴, 갈락토-올리고사카라이드(GOS), 아라비노갈락탄, 자일로-올리고사카라이드(XOS), 키토산 올리고사카라이드(COS) 및 글루코만난 중에서 선택되는 어느 하나와 조합으로 적절하게 제조된 것을 포함한다.
바람직하게, 상기 프로바이오틱 박테리아 균주는 다음을 포함하는 군에서 선택된다:
- 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus) LMG P-21381;
- 락토바실러스 카세이 서브에스피. 파라카세이(Lactobacillus casei subsp . paracasei LMG P-21380);
- 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) LMG P-21021;
- 락토바실러스 펜토서스(Lactobacillus pentosus) LMG P-21019;
- 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) LMG P-21020;
- 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) LMG P-21022;
- 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) LMG P-21023;
- 비피도박테리움 락티스(Bifidobacterium lactis) LMG P-21384;
- 스트렙토코커스 델브루에키 서브에스피. 썰모필러스(Streptococcus delbrueckii subsp . thermophilus) DSM 16506;
- 스트렙토코커스 델브루에키 서브에스피. 썰모필러스(Streptococcus delbrueckii subsp . thermophilus) DSM 16507;
- 비피도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum) DSM 16603;
- 비피도박테리움 브레베(Bifidobacterium breve) DSM 16604;
- 락토바실러스 카세이 서브에스피. 람노서스(Lactobacillus casei subsp . rhamnosus) DSM 16605.
본 발명의 바람직한 구체예는 그들의 제제를 포함하고, 여기에서 본 발명의 균주는 냉동 건조된 형태로 사용되는 것이 바람직하다.
본 발명의 균주는 바람직하게 약학 및 식품 제제의 제조에 일반적으로 이용되는 적절한 베히클, 부형제, 향미제, 안정화제 및 첨가물, 이를테면 아미노산, 비타민, 항산화제 및 효소와의 조합으로 제조된다.
본 발명의 범위를 제한하지 않는 예로서, 특히 바람직한 첨가제 중에서는 글루타민, 아르기닌, 슈퍼옥사이드 디스뮤타제(superoxide dismutase) 및 글루타치온이 언급될 수 있다.
본 발명의 제제는 위장질환의 치료 및/또는 예방(설사, 항생 치료, IBD, 직장암의 예방)을 위해 그 자체로 또는 우유, 요거트, 우유 유도체 또는 발효 유제품과 조합으로, 경구로, 좌약으로, 질 정제 또는 캡슐로 투여될 수 있으며, 여기에서 적절한 양으로 엽산을 투여하는 것이 바람직하다.
상기에서 기재된 것처럼, 본 발명의 제제는 비-병원성 박테리아 미생물군의 균형을 보급하고 복구하기 위하여 항생 치료 전에 또는 그 동안에 투여될 수 있다.
특히 바람직한 제제는 경구로, 좌약 또는 질 캡슐 또는 정제 수단에 의해 투여된다.
제제의 통상적인 형태는 예를 들어, 캡슐, 경구적 용액 또는 현탁액, 패킷 또는 유사 형태로 함유된 파우더, 태블릿, 좌약 및 페서리를 포함한다.
투여량에 있어서, 각 제제는 보통 단일 투여 당 105 내지 1011의 각 박테리아 균주, 바람직하게는 단일 투여 당 106 내지 1011 박테리아, 더욱 바람직하게 단일 투여 당 107 내지 1010 박테리아를 포함할 것이다.
일반적으로, 활성 성분 또는 활성 성분 혼합물의 농도는 제제의 그램 당 박테리아 균주 108 세포 내지 1011 세포; 바람직하게 109 세포 내지 1010 세포의 범위가 될 것이다.
본 발명의 범위를 제한하지 않는 방식으로, 본 발명의 균주의 경우에 대해, 본 발명의 가능한 적용의 한 실시예는 항생 치료를 진행하는 성인 환자에게 투여되는 것이다.
항생 치료의 전체 지속기간 동안 및 그것이 종결된 5일 동안 상기 환자는 DSM 16594 및 DSM 16595의 냉동건조된 제제를 프로바이오틱 균주 DSM 16506 및 LMG P-21380과 글루타민과의 조합으로 하루에 두 패킷을 받았다.
물에서 경구적 현탁의 형태로 투여된 각 패킷의 성분은 대략 각 박테리아 균주 1010 세포 및 부형제로서 전분, 트윈, 만다린 향의 분산제, 아세설팜(acesulfame), 사카린, 아스코르브산 및 메틸 파라벤(methyl parabene)을 포함한다.
본 발명의 박테리아 균주는 또한 식품의 영양학적 가치를 증강시키는데 유용한 것으로 증명되었다.
특히 바람직한 식품은 우유 및/또는 그것의 유도체, 예를 들면 요거트, 발효된 우유, 뿐만 아니라 스넥 필링, 아이스크림 등으로부터 유래되는 것이다.
균주의 분리
균주 비피도박테리움 아돌레스센티스 DMS 16594는 분리 3달 전에 항생제나 프로바이오틱 제제를 섭취하지 않은 성인의 배설물에서 분리하였다.
신선한 배설물의 10% 현탁액을 윌킨스-찰그렌 언에어로브 브로스(Wilkins-Chalgren Anaerobe Broth, Oxoid Limited, Basingstoke, Hampshire, England, UK)에서 0.5 x의 농도로, 즉 패키지의 지침에 따라 수득된 배지의 1:1 희석을 준비함으로써 준비하였다.
최고 10-9까지 일련의 희석액을 균질현탁액(1:10 희석, 동일한 배지 9 ml에서 이전 희석액 1 ml을 희석시킴으로써 수득)으로부터 제조하였다.
10-6 내지 10-9 사이의 희석액의 0.1 ml을 비피도박테리아를 위한 선택 배지, RB 아가(참고자료 3)에 평판배양하였다. 그 플레이트는 37℃에서 48시간 동안 혐기로 배양하였다. 모든 준비는 다음 대기에서 혐기 챔버에서 이루어졌다(장비: Anaerobic System, Mod. 2028, Forma Scientific Co., Marietta, OH):N2 85%, CO2 10%, H2 5%.
박테리아 균주 DMS 16594에 대응한 콜로니를 배지의 산성화 및 지시액의 색변화로 인하여 옐로우 할로를 생산하는 것들 중에서 분리하였다.
- 비피도박테리움 속 및 비피도박테리움 아돌레스센티스 종의 귀착
DMS 16594의 비피도박테리움 속으로의 귀착시키기 위해, 속-특이적 증폭을 16S rDNA-표적 프라이머 Bif164/Bif662을 이용하여 수행하였고, 그로부터 523 bp를 증폭시켰다. 동시에, 비피도박테리아 탄수화물 대사의 핵심효소, 즉, 프락토스-6-포스페이트 포스포케토라아제(fructose-6-phosphate phosphoketolase)의 동정을 위해 생화학적 분석을 수행하였다.
아돌레스센티스 종은 스카도비 등(참고자료 4)에서 기재된데로 DNA-DNA 혼성화에 의해 동정되었다.
- DMS 16594 균주의 특징
기원: 인간
연령: 39 성별: F
속: 비피도박테리움
종: 아돌레스센티스
형태: 불규칙적 로드, 때때로 비피도 형태, 돌기와 융기를 가짐
엽산 생산: 56 내지 62 ng/ml
플라스미드: 없음
다른 박테리아 균주, DSM 16595, DSM 16596, DSM 16597 및 DSM 16598을 상기에서 기재된 것과 유사한 과정으로 동정하였다.
- DSM 16595 균주의 특징
기원: 인간
연령: 37 성별: F
속: 비피도박테리움
종: 아돌레스센티스
형태: 불규칙적 로드, 때때로 비피도 형태, 돌기와 융기를 가짐
엽산 생산: 16 내지 20 ng/ml
플라스미드: 없음
- DMS 16596 균주의 특징
기원: 인간
연령: 39 성별: F
속: 비피도박테리움
종: 브레베
형태: 짧고 불규칙적인 로드
엽산 생산: 6 내지 9 ng/ml
플라스미드: 없음
- DMS 16597 균주의 특징
기원: 인간
연령: 56 성별: M
속: 비피도박테리움
종: 슈도카텐눌라툼
형태: 불규칙적인 로드
엽산 생산: 14 내지 16 ng/ml
플라스미드: 있음, 대략 9 kb
- DMS 16598 균주의 특징
기원: 인간
연령: 56 성별: M
속: 비피도박테리움
종: 슈도카테눌라툼
형태: 불규칙적 로드
엽산 생산: 14 내지 19 ng/ml
플라스미드: 있음, 약 9 kb
- 균주 성장 조건
본 발명의 바람직한 박테리아 균주인 DSM 16594, DSM 16595, DSM 16596, DSM 16597 및 DSM 16598은 스탭 배양액, 즉, 아가 스탭 배양액(0.9% 아가로된 배지 10ml을 함유하는 10ml 튜브) 또는 시스테인이 첨가(0.05%)된 MRS 액체 배양액(Bacto Lactobacilli MRS Broth [0881-17] Difco Laboratories, Division of Becton Dickinsons and Company, Sparks, Maryland 21152 USA)에서 보존하였다.
패키지의 지시에 따라 준비된 배지는 110℃에서 30시간 동안 멸균하였다.
균주가 엽산이 없는 상태에서 배양될 때, 소위 최소 합성 배지가 사용되었다; 그것은 7번으로 표시되고 하기에 기재된 조성물을 갖는다.
상기 배지는 실온에서 교반으로 성분과 용액을 혼합함으로써 준비되었다. 그 배지는 매 시간 신선하게 준비되었다.
최소 배양 배지 7번
글루코스 20 g/L
비타민 분석 카스아미노산(Vitamin Assay Casaminoacids)
(DIFCO Laboratories, USA [0288-17]) 5 g/L
우레아 2 g/L
시스테인 0.5 g/L
용액 A 700 ml/L
용액 B 1 ml/L
용액 C 1 ml/L
용액 D 5 ml/L
용액 A, B, C 및 D는 다음 조성물을 가진다:
용액 A
(NH4)2SO4 10 g
나트륨 아세테이트 10 g
아스코르브산 10 g
KH2PO4 1 g
MgSO4 0.7 g
NaCl 0.2 g
트윈 80 1 ml
트윈 80은 끓고 있는 증류수 700 ml에서 용해시켰다: 그 후 모든 다른 성분들을 차례대로 첨가하였다.
용액 B
붕산 25 mg
CuSO4 2 mg
KI 5 mg
FeCl3 10 mg
MnSO4 20 mg
몰리브덴산 나트륨 10 mg
ZnSO4 20 mg
이들 성분들을 실온에서 50 ml의 증류수에서 차례로 용해시켰다.
용액 C
바이오틴 0.2 mg
판토텐산 칼슘 40 mg
니아신 40 mg
P-아미노벤조산 20 mg
피리독신 40 mg
리보플라빈 20 mg
티아민 40 mg
이들 성분은 실온에서 100 ml의 증류수에 용해시켰다.
용액 D
FeSO4 50 mg
염을 25 ml의 증류수에 용해시켰다.
배지는 10 ml 튜브로 분배하고 100℃에서 30′동안 멸균하였다.
- DSM 16594 균주에 의해 생산되는 엽산의 미생물학 분석
균주 DSM 16594, 뿐만 아니라 본 발명의 다른 균주에 의한 발효에 의해 생산되는 엽산의 양을 미생물학 분석을 수행하였다.
엽산 생산성의 결정을 위해 이용한 배양을 엽산을 포함하지 않는 최소 배지 7번에서 적어도 3번 계대배양하였다.
분석은 배양 브루스에 존재하는 엽산의 양에 따라 다양해지는, 엔테로코커스 히래(Enterococcus hirae) ATCC 8043의 성장의 비탁 측정(turbidimetric determination)에 기초하고 있다.
생산된 엽산의 정량적 측정을 위해 필수적인 교정 곡선은 엔테로코커스 히래 ATCC 8043를 박토 폴릭 AOAC 배지(Bacto Folic AOAC Medium, Difco, USA [0967-15])에서 배양함으로써 구성하였다.
엽산을 제외하고 성장에 필수적인 모든 영양성분을 함유한 상기 배지에 엽산을 점진적으로 증가된 양으로 첨가하였다(10ml의 배양 브루스를 함유한 튜브 당 0, 1, 2, 4, 6 및 8 ng).
동시에, 엔테로코커스 히래 ATCC 8043을 박토 폴릭 AOAC 배지의 튜브에서 접종하고, 균주 DSM 16594의 발효 브루스의 상청액(surnatant)의 다른 양을 첨가하였다.
모든 튜브들을 37℃에서 16-18시간 동안 배양한 후에, 샘플들을 600nm에서 비탁 리딩을 하고, 선 그래프를 샘플의 최적 밀도에 따른 엽산 농도의 로그를 기입함으로써 가-로그자 상에 그렸다.
2 μg/l, 즉, 2
ng
/
ml
의 농도에서의
협산의
표준 용액(s.s.)의 제조
엽산 50mg을 약 30ml의 NaOH 0.01N 및 300ml의 H2O에서 용해시켰다. 희석된 HCl (0.1N)을 이용하여 pH를 7.5로 조정하고, H2O를 이용하여 부피를 500ml로 맞췄다. 2ml의 상기 기재된 용액을 50ml의 H2O에 첨가하고, pH를 7.5로 맞추고 H2O를 첨가하여 100ml의 부피로 하였다(2 μg/ml의 표준 용액).
이 용액 1ml를 2ng/ml (2 μg/l)의 표준용액을 수득하기 위해 H2O로 1L로 희석시켰다.
박토 엽산 배지를 함유한 튜브의 제조
출발 파우더 11g을 100ml의 H2O에 용해시켰다. 성분을 완전히 용해시키기 위해, 2-3분 동안 배지를 가열하였다. 이를 멸균수로 여러번 세척한 후에 5 ml로 튜브로 분배하였다. 발효 브루스 상청액의 다른 양 또는 엽산의 표준 용액(2 ng/ml)을 첨가하고 각 튜브를 10ml의 최종 부피로 맞추기 위해 H2O를 첨가하였다. 121℃에서 5′동안 멸균하였다.
| 튜브 당 염산 ng | 0 | 1 | 2 | 4 | 6 | 8 | 10 |
| 표준 용액 2ng/ml의 ml | 0 | 0.5 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| H2O의 ml | 5 | 4.5 | 4 | 3 | 2 | 1 | 0 |
| 1 당 엽산의 ㎍ | 0 | 0.1 | 0.2 | 0.4 | 0.6 | 0.8 | 1 |
4ml의 물과 원심분리 및 0.22μ 필터로의 여과 및 적절한 희석에 의해 수득 된 1ml의 발효 브루스 상청액을 다른 2개의 튜브에 첨가하였다.
엽산이 없는 튜브는 공시료로 준비하였다: 그것은 접종되지 않았다.
접종원의
준비
분석 이틀 전에, 엔테로코커스 히래 ATCC 8043의 신선한 스탭 배양액을 M17 액체 배지(Bacto M17 Broth, Difco Laboratories, USA [1856-17])를 함유한 튜브로 접종하였다. 접종원으로 사용될 배양액을 준비하기 위해, M17에서 배양은 멸균적으로 원심분리하고, 그 상청액(surnatant)은 제거하고 세포들을 생리적 용액 9ml로 3번 세척하였다. 세포 펠릿은 다시 9ml의 생리적 용액에 현탁시키고, 1ml의 이 박테리아 현탁액은 삼각플라스크 내부에 함유된 100ml의 멸균된 생리적 용액에 첨가하였다. 이 현탁액 한 방울을 박토 폴릭 AOAC 배지(Bacto Folic AOAC Medium)의 튜브에 첨가하고, 엽산 10ng을 또한 첨가하고, 그 튜브는 교반없이 37℃에서 배양하였다.
테스트하는 날에, 상기 기재된 과정에 따라 준비된 배양액을 테스트 접종원을 준비하기 위해 사용하였다: 배양액은 멸균적으로 원심분리되고, 상청액을 제거하고 세포는 9ml의 생리적 용액으로 3회 세척하였다. 그 세포는 다시 9ml의 생리적 용액으로 현탁시키고 1ml의 박테리아 현탁액을 삼각 플라스크 내부에 함유된 100ml의 멸균 생리 용액에 첨가하였다. 테스트 튜브를 접종하기 위해, 이 현탁액 1 방울을 121℃에서 5′동안 멸균된 모든 튜브에 첨가하였다.
그 튜브들은 그 후에 37℃에서 16-18시간 동안 배양되었다.
- 순수 배양에서의 생산성
최소 배지 7번에서 DSM 16594 균주에 의해 생산된 엽산은 56-62 ng/ml의 양이 된다.
pH 제어가 되지 않는 배양 및 일정한 pH를 갖는 바이오리액터에서의 배양 모두에서 수행될 때, 그 테스트들은 일정한, 재현성을 갖는 결론을 낸다.
규칙으로서, 결장에 함유된 물질의 pH는 특정 병리 또는 식이적 요인에 관계하여 상당히 다양할 수 있다. DSM 16594에 의한 엽산의 생산은 측정된 pH 수치와 관계없이 일정하게 보여주고(대략 57-60 ng/ml), 이 경우는 5.5 내지 7.0의 범위가 된다.
DSM 16594 균주는 장 성분에 존재하는 엽산의 농도와 전반적으로 관련없는 정도로 네거티브 피드백에 의해 영향을 받지 않고 엽산을 생산하는 것이 또한 관찰되었다. 사실, DSM 16594 균주를 엽산의 양(0, 1, 2, 5, 10 및 20 ng/ml)을 점점 증가하여 최소 배지 7번에서 배양하였고, 그 균주는 항상 일정한 양(58-61 ng/ml)의 엽산을 합성하고 분비하였고, 그리하여 배지에 이미 존재하는 엽산에 첨가되었다. 이런 측면은 배우 중요하다. 왜냐하면 DSM 16594 균주가 프로바이오틱으로서 섭취된 후에 그들은 결장 내에서 장세포의 빠른 전환 대사에서 필수적인 엽산, 비타민의 지속적인 공급원이 될 수 있다고 주장되기 때문이다. DSM 16594 균주의 물질대사의 탈규제, 즉, 엽산이 이미 충분히 존재하는 경우 엽산의 합성을 차단하는 제어 메카니즘이 생산된 엽산의 양이 이 비타민을 합성하지 못하여 적절한 성장을 위해서는 반드시 외부에서 획득되어야 할, 박테리아의 건강한 성장을 보장하는데 필수적인 양보다 적어도 50배 크다는 사실에 의해 확인되었다.
- 배설물 배양에서 DSM 16594 균주에 의해 생산된 엽산의 기여도 평가
혼합 배양액, 즉, 장의 미생물 군락의 구성을 자극하는 배양액에서 DSM 16594 균주에 의한 엽산이 효과적으로 생산되는지 여부를 평가하기 위하여, 배설물의 배양액, 즉, 희석된 배설물 샘풀로 접종된 배양액을 준비하였고, DSM 16594 균주로 접종될 수도 있고 그렇지 않을 수도 있고; 상기 배양액에서 엽산 농도의 증가를 측정하였다.
사용된 혼합 배양액은 장의 성분의 정상적인 미생물 조성을 자극하도록 희석된 배설물 샘플로 접종하였다. 사용된 배양 배지는 전체적으로 접종된 미생물 개체수의 성장을 보장하는 양인 10ng/ml의 엽산을 함유하고 있다.
그 배지는 또한 펩톤, 비타민 및 플락토-올리고사카라이드(FOS)를 탄소원으로 포함하고 있다.
FOS의 선택은 이 선생물적 탄수화물.즉 소화도 되지 않고 흡수도 되지않아 비피도박테리아에 의해 효과적으로 대사되는 결장에 도달할 수 있는 것과의 조합에서 프로바이오틱 비피도박테리움의 흡수는 프로바이오틱 비피도박테리움 및 내생적인 비피도박테리아 양자에 의해 창자의 집락화를 선호하게 된다는 사실때문이다.
- 배설물 배양
배설물 배양은 상기에서 기재된 과정에 따라 준비되고 다음 조성을 갖는 배지에서 성장시켰다:
라프틸로스 P95 (FOS)
(Orafti Group, Tienen, Belgium) 20 g/L
비타민 분석 카스아미노산
(DIFCO Laboratories, USA [0288-17] 5 g/L
시스테인 0.5 g/L
엽산 10 μg/L
용액 A 700 ml/L
용액 B 1 ml/L
용액 C 1 ml/L
용액 D 5 ml/L
용액 E 10 ml/L
용액 A
(NH4)2SO4 10 g
나트륨 아세테이트 10 g
아스코르브산 10 g
KH2PO4 1 g
MgSO4 0.7 g
NaCl 0.2 g
트윈 80 1 ml
트윈 80은 끓는 멸균수 700ml에서 용해시키고, 그 후 다른 모든 성분들을 차례대로 첨가하였다.
용액 B
붕산 25 mg
CuSO4 2 mg
KI 5 mg
FeCl3 10 mg
MnSO4 20 mg
몰리브덴산 나트륨 10 mg
ZnSO4 20 mg
이들 성분들을 실온에서 증류수 50ml에서 순차로 용해시켰다.
용액 C
비오틴 0.2 mg
판토텐산 칼슘 40 mg
니아신 40 mg
P-아미노벤조산 20 mg
피리독신 40 mg
리보플라빈 20 mg
티아민 40 mg
이들 성분은 실온에서 100ml의 증류수에서 순차로 용해시켰다.
용액 D
FeSO4 50 mg
염을 실온에서 25ml의 증류수에 용해시켰다.
용액 E
50 mg/L의 헤민(Sigma-Aldrich SRL, Via Gallarate, Milan, Italy [H5533])을 5ml의 NaOH 1M에 용해시키고, 증류수를 1L의 부피로 만들기 위해 첨가하였다.
방법
40ml의 분량의 배지를 바람직한 고무 캡을 가진 100cc 병으로 분배하였다. 고무 캡은 바늘 구멍이 있고, 그 병은 끓는 수조에 놓아 두었다. 100℃에서 10분 동안 배양한 후에, 그 캡은 두 번째 바늘을 끼워놓고, 그것을 통해 질소가 0.15 바의 압력에서 10분 동안 병으로 흡입되었다. 흡입이 완료되면, 모든 바늘을 제거하고 그 병은 110℃에서 30′동안 멸균하였다.
접종원의
준비
신선한 배설물 샘플은 혐기 챔버(10% H2, 10% CO2, 80% N2)로 옮겼다.
10% 현탁액을 상기-기재된 배지에서 준비하고, 3mm의 직경을 갖는 멸균 유리 비즈로 균질화하였다.
이 현탁액으로부터 그 병에 함유된 동일한 배지로 1:100 희석액을 준비하였다. 그 희석액의 0.4ml는 배양 배지 40ml를 함유한 두 개의 멸균 병에 주사기로 접종되었다.
DSM
16594 균주로 접종되거나 되지 않은 배설물 샘플에 존재하는 엽산의 비 교
희석된 배설물 샘플로 접종된 두 개의 동일한 샘플 중 하나는 최소 배지 7번에서 24시간 동안 성장시킨 DSM 16594 균주의 배양액 0.4ml로 접종시켰다. 하나는 DSM 16594 균주로 접종되고 다른 것은 그렇지 않은 양 배설물 배양액을 37℃에서 24시간 동안 배양하였다.
이 시간이 경과된 후에, 양 배양액은 3500g에서 10′동안 원심분리하고 그 상청액은 0.4μm 필터로 여과하였다. 따라서, 희석된 상청액을 엽산의 미생물학적 분석을 위해 사용하였다.
배설물 배양액에서의 엽산 생산성
DSM 16594 균주로 접종되지 않은 배설물 배양액에서 엽산의 농도는 대략 30 내지 70 ng/ml의 범위이다.
DSM 16594 균주로 접종된 배양액은 엽산 농도에 있어서 현저한 증가를 보였다. 그 전에 나타난 30-70 ng/ml에 더 추가적인 양의 30 내지 50 ng/ml 범위의 증가를 보였다.
이러한 발견은 본 발명의 프로바이오틱 박테리아 균주인 DSM 16594의 투여가 환자의 건강 상태에 관계없이 결장에서 엽산의 높은 수치가 존재할 수 있음을 보장함을 증명하는 것이다.
결과로서, 장 박테리아 군집의 최적 균형의 재확립 및 유지가 용이하게 가능하며 또한 그것이 보장될 것이다.
상기의 실험 부분은 본 발명의 특히 바람직한 박테리아 균주 중의 하나, 즉 DSM 16594 균주의 용도를 상세하게 설명하였다.
동일한 실험 조건 및 동량의 시약을 이용하여 다른 네 개의 본 발명의 바람직한 박테리아 균주, 즉, DSM 16595, DSM 16596, DSM 16597 및 DSM 16598에 대하여 수행하였다.
이들 박테리아 균주는 동일한 방식으로, DSM 16594 균주와 같이 동일한 특징을 갖는 엽산을 생산함이 증명되었다.
비피도박테리움 아돌레스센티스 DSM 16595, 비피도박테리움 브레베 DSM 16596, 비피도박테리움 슈도카텐눌라툼 DSM 16597 및 비피도박테리움 슈도카텐눌라툼 DSM 16598의 생산성은 비피도박테리움 아돌레스센티스 DSM 16594의 그것과 비교하여 더 낮음을 보여주었다.
특히, DSM 16594에 의해 생산된 엽산의 양에 대하여 DSM 16595은 약 30.5%, DSM 16596은 약 13%, DSM 16597은 25.5% 및 DSM 16598은 28%만을 생산하였다.
그럼에도 불구하고, 이런 경우뿐만 아니라, 생산된 엽산의 양(각각 정량하면, DSM 16595는 16-20ng/ml; DSM 16596는 6-9 ng/ml; DSM 16597는 14-16 ng/ml 및 DSM 16598는 14-19 ng/ml임)은 다른 박테리아의 건강한 성장을 위해 비타민이 최적 성장을 위해 요구되는 양보다 현저하게 높다(DSM 16595의 경우는 약 14 내지 16배; DSM 16596의 경우에는 5 내지 7배; DSM 16597의 경우에는 12 내지 13배 및 DSM 16598의 경우에는 12 내지 15배 높다).
참고자료
1. Fuchs C.S. et al. (2002) The influence of folate and multivitamin use on the familial risk of colon cancer in women. Cancer Epidemiol . Biomark . Prev. 11, 227-234.
2. Ma J. et al. (1999) A polymorphism of the methionine synthase gene: association with plasma folate, vitamin B12, homocyst(e)ine, and colorectal cancer risk. Cancer Epidemiol . Biomark . Prev . 8, 825-829.
3. Hartemink R., Kok BIFIDOBACTERIUMJ. Weenk G.H., Rombouts F.M. (1996) Raffinose-Bifidobacterium (RB) agar, a new selective medium for bifidobacteria J. Microbiol . Methods. 27, 33-43.
4. Scardovi V. Crociani F. (1974) Bifidobacterium catenulatum, Bifidobacterium dentium, Bifidobacterium angulatum: three new species and their deoxyribonucleic acid homology relationships. Int . J. Syst. Bacteriol . 24, 6-20.
Claims (80)
- 엽산의 생산자로서 비피도박테리움 속에 속하는 인간 기원의 프로바이오틱 박테리아 균주.
- 제1항에 있어서, 다음 종에 속하는 박테리아 균주:비피도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum), 비피도박테리움 인판티스(Bifidobacterium infantis), 비피도박테리움 아돌레스센티스(Bifidobacterium adolescentis), 비피도박테리움 비피둠(Bifidobacterium bifidum), 비피도박테리움 브레베(Bifidobacterium breve), 비피도박테리움 앵글라툼(Bifidobacterium angulatum), 비피도박테리움 카텐눌라툼(Bifidobacterium catenulatum), 비피도박테리움 락티스(Bifidobacterium lactis), 비피도박테리움 슈도카텐눌라툼(Bifidobacterium pseudocatenulatum), 비피도박테리움 갈리숨(Bifidobacterium gallicum), 비피도박테리움 덴티움(Bifidobacterium dentium), 비피도박테리움 덴티콜렌스(Bifidobacterium denticolens), 비피도박테리움 이노피나툼(Bifidobacterium inopinatum) 및 비피도박테리움 애니말리스(Bifidobacterium animalis).
- 제1항에 있어서, 비피도박테리움 아돌레스센티스 종에 속하는 박테리아 균주.
- 제1항에 있어서, 비피도박테리움 브레베 종에 속하는 박테리아 균주.
- 제1항에 있어서, 비피도박테리움 슈도카텐눌라툼 종에 속하는 박테리아 균주.
- 제3항에 있어서, 2004년 7월 21일자에 DSMZ에 기탁되고 확인 코드 DSM 16594로 동정된 것인 균주.
- 제3항에 있어서, 2004년 7월 21일자에 DSMZ에 기탁되고 확인 코드 DSM 16595로 동정된 것인 균주.
- 제4항에 있어서, 2004년 7월 21일자에 DSMZ에 기탁되고 확인 코드 DSM 16596로 동정된 것인 균주.
- 제5항에 있어서, 2004년 7월 21일자에 DSMZ에 기탁되고 확인 코드 DSM 16597로 동정된 것인 균주.
- 제5항에 있어서, 2004년 7월 21일자에 DSMZ에 기탁되고 확인 코드 DSM 16598로 동정된 것인 균주.
- 제1항에 따른 균주의 적어도 하나를 포함하는 약학, 수의학 및/또는 식품 제제.
- 제2항에 따른 균주의 적어도 하나를 포함하는 약학, 수의학 및/또는 식품 제제.
- 제3항에 따른 균주의 적어도 하나를 포함하는 약학, 수의학 및/또는 식품 제제.
- 제4항에 따른 균주의 적어도 하나를 포함하는 약학, 수의학 및/또는 식품 제제.
- 제5항에 따른 균주의 적어도 하나를 포함하는 약학, 수의학 및/또는 식품 제제.
- 제13항에 있어서, 박테리아 균주 비피도박테리움 아돌레스센티스 DSM 16594을 포함하는 것인 제제.
- 제13항에 있어서, 박테리아 균주 비피도박테리움 아돌레스센티스 DSM 16595 을 포함하는 것인 제제.
- 제14항에 있어서, 박테리아 균주 비피도박테리움 브레베 DSM 16596을 포함하는 것인 제제.
- 제15항에 있어서, 박테리아 균주 비피도박테리움 슈도카텐눌라툼 DSM 16597을 포함하는 것인 제제.
- 제15항에 있어서, 박테리아 균주 비피도박테리움 슈도카텐눌라툼 DSM 16598을 포함하는 것인 제제.
- 제11항에 있어서, 다음을 포함하는 군에서 선택된 두 개 이상의 균주 혼합물을 포함하는 것인 제제: DSM 16594, DSM 16595, DSM 16596, DSM 16597 및 DSM 16598.
- 제16항에 있어서, 상보적 특징을 갖는 하나 이상의 프로바이오틱 박테리아 균주를 더 포함하는 것인 제제.
- 제17항에 있어서, 상보적 특징을 갖는 다른 프로바이오틱 박테리아 균주를 더 포함하는 것인 제제.
- 제18항에 있어서, 상보적 특징을 갖는 다른 프로바이오틱 박테리아 균주를 더 포함하는 것인 제제.
- 제19항에 있어서, 상보적 특징을 갖는 다른 프로바이오틱 박테리아 균주를 더 포함하는 것인 제제.
- 제20항에 있어서, 상보적 특징을 갖는 다른 프로바이오틱 박테리아 균주를 더 포함하는 것인 제제.
- 제21항에 있어서, 상보적 특징을 갖는 다른 프로바이오틱 박테리아 균주를 더 포함하는 것인 제제.
- 제16항에 있어서, 선생물적(prebiotic) 특징을 갖는 다른 물질을 더 포함하는 것인 제제.
- 제17항에 있어서, 선생물적 특징을 갖는 다른 물질을 더 포함하는 것인 제제.
- 제18항에 있어서, 선생물적 특징을 갖는 다른 물질을 더 포함하는 것인 제 제.
- 제19항에 있어서, 선생물적 특징을 갖는 다른 물질을 더 포함하는 것인 제제.
- 제20항에 있어서, 선생물적 특징을 갖는 다른 물질을 더 포함하는 것인 제제.
- 제21항에 있어서, 선생물적 특징을 갖는 다른 물질을 더 포함하는 것인 제제.
- 제16항에 있어서, 상보적 특징을 갖는 하나 이상의 프로바이오틱 균주 및 선생물적 특징을 갖는 다른 물질을 더 포함하는 것인 제제.
- 제17항에 있어서, 상보적 특징을 갖는 하나 이상의 프로바이오틱 균주 및 선생물적 특징을 갖는 다른 물질을 더 포함하는 것인 제제.
- 제18항에 있어서, 상보적 특징을 갖는 하나 이상의 프로바이오틱 균주 및 선생물적 특징을 갖는 다른 물질을 더 포함하는 것인 제제.
- 제19항에 있어서, 상보적 특징을 갖는 하나 이상의 프로바이오틱 균주 및 선생물적 특징을 갖는 다른 물질을 더 포함하는 것인 제제.
- 제20항에 있어서, 상보적 특징을 갖는 하나 이상의 프로바이오틱 균주 및 선생물적 특징을 갖는 다른 물질을 더 포함하는 것인 제제.
- 제21항에 있어서, 상보적 특징을 갖는 하나 이상의 프로바이오틱 균주 및 선생물적 특징을 갖는 다른 물질을 더 포함하는 것인 제제.
- 제22항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 프로바이오틱 박테리아 균주는 다음을 포함하는 군에서 선택되는 것인 제제:- 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus) LMG P-21381;- 락토바실러스 카세이 서브에스피. 파라카세이(Lactobacillus casei subsp . paracasei) LMG P-21380;- 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) LMG P-21021;- 락토바실러스 펜토서스(Lactobacillus pentosus) LMG P-21019;- 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) LMG P-21020;- 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) LMG P-21022;- 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) LMG P-21023;- 비피도박테리움 락티스(Bifidobacterium lactis) LMG P-21384;- 스트렙토코커스 델브루에키 서브에스피. 썰모필러스(Streptococcus delbrueckii subsp . thermophilus) DSM 16506;- 스트렙토코커스 델브루에키 서브에스피. 썰모필러스(Streptococcus delbrueckii subsp . thermophilus) DSM 16507;- 비피도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum) DSM 16603;- 비피도박테리움 브레베(Bifidobacterium breve) DSM 16604;- 락토바실러스 카세이 서브에스피. 람노서스(Lactobacillus casei subsp . rhamnosus) DSM 16605.
- 제28항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 선생물적 특징을 갖는 물질은 다음을 포함하는 군에서 선택되는 것인 제제:플락토-올리고사카라이드(FOS), 이눌린, 이소말토-올리고사카라이드, 난소화성 전분, 펙틴, 갈락토-올리고사카라이드, 아라비노갈락탄, 자일로-올리고사카라이드, 글루코만난 및 키토산 올리고사카라이드.
- 제16항에 있어서, 첨가제, 베히클, 부형제, 향미제 및 안정화제를 더 포함하는 것인 제제.
- 제42항에 있어서, 상기 첨가제는 다음을 포함하는 군에서 선택되는 것인 제제: 아미노산, 비타민, 항산화제, 효소, 바람직하게 글루타민, 아르기닌, 슈퍼옥사 이드 디스뮤타제 및 글루타치온.
- 제17항에 있어서, 첨가제, 베히클, 부형제, 향미제 및 안정화제를 더 포함하는 것인 제제.
- 제44항에 있어서, 상기 첨가제는 다음을 포함하는 군에서 선택되는 것인 제제: 아미노산, 비타민, 항산화제, 효소, 바람직하게 글루타민, 아르기닌, 슈퍼옥사이드 디스뮤타제 및 글루타치온.
- 제18항에 있어서, 첨가제, 베히클, 부형제, 향미제 및 안정화제를 더 포함하는 것인 제제.
- 제46항에 있어서, 상기 첨가제는 다음을 포함하는 군에서 선택되는 것인 제제: 아미노산, 비타민, 항산화제, 효소, 바람직하게 글루타민, 아르기닌, 슈퍼옥사이드 디스뮤타제 및 글루타치온.
- 제19항에 있어서, 첨가제, 베히클, 부형제, 향미제 및 안정화제를 더 포함하는 것인 제제.
- 제48항에 있어서, 상기 첨가제는 다음을 포함하는 군에서 선택되는 것인 제 제: 아미노산, 비타민, 항산화제, 효소, 바람직하게 글루타민, 아르기닌, 슈퍼옥사이드 디스뮤타제 및 글루타치온.
- 제20항에 있어서, 첨가제, 베히클, 부형제, 향미제 및 안정화제를 더 포함하는 것인 제제.
- 제50항에 있어서, 상기 첨가제는 다음을 포함하는 군에서 선택되는 것인 제제: 아미노산, 비타민, 항산화제, 효소, 바람직하게 글루타민, 아르기닌, 슈퍼옥사이드 디스뮤타제 및 글루타치온.
- 제21항에 있어서, 첨가제, 베히클, 부형제, 향미제 및 안정화제를 더 포함하는 것인 제제.
- 제52항에 있어서, 상기 첨가제는 다음을 포함하는 군에서 선택되는 것인 제제: 아미노산, 비타민, 항산화제, 효소, 바람직하게 글루타민, 아르기닌, 슈퍼옥사이드 디스뮤타제 및 글루타치온.
- 제16항에 있어서, 여기에서 DSM 16594 균주는 냉동-건조된 형태로 존재하는 것인 제제.
- 제17항에 있어서, 여기에서 DSM 16595 균주는 냉동-건조된 형태로 존재하는 것인 제제.
- 제18항에 있어서, 여기에서 DSM 16596 균주는 냉동-건조된 형태로 존재하는 것인 제제.
- 제19항에 있어서, 여기에서 DSM 16597 균주는 냉동-건조된 형태로 존재하는 것인 제제.
- 제20항에 있어서, 여기에서 DSM 16598 균주는 냉동-건조된 형태로 존재하는 것인 제제.
- 제21항에 있어서, 여기에서 상기 균주들의 혼합물은 냉동-건조된 형태로 존재하는 것인 제제.
- 제16항에 있어서, 캡슐, 경구 용액 또는 현탁액, 패킷의 파우더, 정제, 좌약, 질 정제 및 좌약의 형태로 존재하는 것인 제제.
- 제17항에 있어서, 캡슐, 경구 용액 또는 현탁액, 패킷의 파우더, 정제, 좌약, 질 정제 및 좌약의 형태로 존재하는 것인 제제.
- 제18항에 있어서, 캡슐, 경구 용액 또는 현탁액, 패킷의 파우더, 정제, 좌약, 질 정제 및 좌약의 형태로 존재하는 것인 제제.
- 제19항에 있어서, 캡슐, 경구 용액 또는 현탁액, 패킷의 파우더, 정제, 좌약, 질 정제 및 좌약의 형태로 존재하는 것인 제제.
- 제20항에 있어서, 캡슐, 경구 용액 또는 현탁액, 패킷의 파우더, 정제, 좌약, 질 정제 및 좌약의 형태로 존재하는 것인 제제.
- 제21항에 있어서, 캡슐, 경구 용액 또는 현탁액, 패킷의 파우더, 정제, 좌약, 질 정제 및 좌약의 형태로 존재하는 것인 제제.
- 제16항에 있어서, 단일 투여 당 각 박테리아 균주가 105 내지 1011 세포로 포함되는 것인 제제.
- 제17항에 있어서, 단일 투여 당 각 박테리아 균주가 105 내지 1011 세포로 포함되는 것인 제제.
- 제18항에 있어서, 단일 투여 당 각 박테리아 균주가 105 내지 1011 세포로 포함되는 것인 제제.
- 제19항에 있어서, 단일 투여 당 각 박테리아 균주가 105 내지 1011 세포로 포함되는 것인 제제.
- 제20항에 있어서, 단일 투여 당 각 박테리아 균주가 105 내지 1011 세포로 포함되는 것인 제제.
- 제21항에 있어서, 단일 투여 당 각 박테리아 균주가 105 내지 1011 세포로 포함되는 것인 제제.
- 엽산의 투여가 바람직한 위장 질환의 치료 또는 예방을 위한 약학 제제를 제조하기 위한, 제1항에 따른 박테리아 균주의 용도.
- 제72항에 있어서, 직장결장암(colorectal cancer)의 예방을 위한 것인 용도.
- 제72항에 있어서, IBD의 치료 및 예방을 위한 것인 용도.
- 제72항에 있어서, 질 감염 및 질의 염증 상태의 치료 및 예방을 위한 것인 용도.
- 제72항에 있어서, 비-병원성 장내 박테리아 군락의 균형을 보충하고 복구하기 위한 것인 용도.
- 식품에서 프로바이오틱스로서, 제1항에 따른 박테리아 균주의 용도.
- 제77항에 있어서, 우유 또는 그것의 유도체로부터 유래한 제품의 제조를 위한 것인 용도.
- 제78항에 있어서, 선생물적 물질과 조합하는 것인 용도.
- 심바이오틱 식품 제조를 위한, 선생물적 물질과 조합하는 것인, 제1항에 따른 박테리아 균주의 용도.
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|---|---|---|---|
| KR1020077005276A KR20070048776A (ko) | 2007-03-05 | 2004-08-05 | 엽산을 생산하는 비피도박테리움 박테리아 균주, 그들의제제 및 용도 |
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| KR (1) | KR20070048776A (ko) |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101050307B1 (ko) * | 2008-04-29 | 2011-07-19 | 삼육대학교산학협력단 | 암 세포 증식 억제 효과 및 면역 증강 효과를 가진비피도박테리움 아돌레센티스 ｓｐｍ0212의 부탄올 추출물,이를 포함하는 약학적 조성물 및 이의 용도 |
-
2004
- 2004-08-05 KR KR1020077005276A patent/KR20070048776A/ko not_active Application Discontinuation
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