KR20070012626A - Ｃｄ40 항체 제제 및 방법 - Google Patents

Ｃｄ40 항체 제제 및 방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 간헐적 투여 스케줄에 따라 CD40 작용제 항체를 환자에 투여하는 것을 포함하는, 환자에서 종양을 치료하는 방법을 제공한다. 본 발명은 또한 CD40 작용제 항체 및 DNA 복제 저해제의 배합물을 환자에 투여하는 것을 포함하는, 환자에서 종양을 치료하는 방법을 제공한다. 또한, 치료시 사용하기 위한 제제를 제공한다.
간헐적 투여 스케줄, CD40 작용제 항체, 종양, 암, DNA 복제 저해제

Description

ＣＤ40 항체 제제 및 방법 {CD40 ANTIBODY FORMULATION AND METHODS}
CD40는 종양 괴사 인자 수용체(TNFR) 슈퍼패밀리의 멤버이다. CD40는 항원 제시 세포(B 세포, 수지상 세포, 단핵구), 조혈 전구체, 내피 세포, 평활근 세포, 상피 세포, 및 대다수의 인간 종양에서 발현된다(Grewal ＆ Flavell, Ann. Rev. Immunol., 1996, 16: 111-35; Toes ＆ Schoenberger, Seminars in Immunology, 1998, 10(6): 443-8). CD40 작용제를 사용한 연구에서 CD40 수용체의 자극이 항-종양 활성과 관련된 일련의 효과를 유도한다고 보고되었다. 예를 들면, 항원 제시 세포상의 CD40 수용체의 자극은 그의 성숙, 항원-제시 기능, 동시-자극성 잠재력 및 그의 면역조절 사이토카인의 방출을 증진시키는 것으로 나타났다(Lee et al., PNAS USA, 1999, 96(4): 1421-6; Cella et al., J. Exp. Med., 1996, 184(2): 747-52). CD40 작용제는 또한 CD40+ 종양의 아포프토시스 (apoptosis)를 촉진시키고 수지상 세포에 의해 프로세싱되는 그의 능력을 증진시키는 것으로 보고되었다(von Leoprechting et al., Cancer Res., 1999, 59: 1287-94; Sotomayo et al., Nature Medicine, 1999, 5(7): 780-87; Eliopoulos et al., Mol. Cell Biol., 2000, 29(15): 5503-15; Ziebold et al., Arch. Immunol. Therapiae Experimentalis, 2000, 48(4): 225-33; Hoffmann et al., J. Immunol., 2001, 24(2): 162-71). 면역 자극성 및 직접적인 항-종양 효과의 중요성은, CD40 작용제 항체가 종양 성장을 방지하고 종양 내성을 되돌리는 것으로 나타난 동물 모델에서 설명되었다(Diehl et al., Nature Med., 1999, 5(7): 774-9; Francisco et al., Cancer Res., 2000, 60(12): 32225-31). CD40 항체가 하기 특허 공개문헌, 즉 U.S. 5,786,456; U.S. 5,674,492; WO 02/088186; US 2003059427; US 20020142358; WO 01/56603; U.S. 5,801,227; EP 806963; WO 88/06891; 및 WO 94/04570에 언급되어 있다. 그러나, CD40 항체에 대한 고도로 효과적인 투여 방법 및 제제화 방법은 기술된 바 없었다. 또한, 상기 치료법에 사용하기 적절한 안정한 제제가 유용할 것이다.
발명의 요약
본 발명은 적어도 2개 사이클의 간헐적 투여 요법에 따라 CD40 작용제 항체 또는 그의 단편을 환자에게 투여하는 것을 포함하되, 각 사이클은 (a) 치료학적 유효량의 CD40 작용제 항체를 환자에게 투여하는 투여 기간 및 그 후의 (b) 휴지 기간을 포함하는, 암 치료를 필요로 하는 환자에서 암을 치료하는 방법에 관한 것이다. 한 실시태양에서, 투여는 적어도 3시간 동안 항체의 혈장 농도가 0.01㎍/ml 내지 10㎍/ml가 되게 하고 휴지 기간은 적어도 1주 동안이다. 다른 실시태양에서, 투여 기간은 적어도 1일, 1-5일, 또는 1-3일이다. 다른 실시태양에서, 휴지 기간은 1-8, 1-6주, 2-5주, 또는 3-4주이다.
특정 실시태양에서, 치료학적 유효량의 CD40 작용제 항체는 3 내지 120시간 동안 항체의 혈장 농도가 약 0.03㎍/ml 내지 10㎍/ml, 약 0.03㎍/ml 내지 1㎍/ml, 약 0.03㎍/ml 내지 0.3㎍/ml, 또는 약 0.1㎍/ml 내지 0.3㎍/ml가 되게 한다. 몇몇 실시태양에서, 구체화된 혈장 농도는 적어도 1일, 24 내지 30시간, 24 내지 36시 간, 24 내지 48시간, 24 내지 72시간, 24 내지 96시간, 또는 24 내지 120시간 동안 유지된다. 몇몇 실시태양에서, 혈장 농도는 3 내지 96시간 또는 12 내지 72시간 동안 유지된다.
특정 실시태양에서, 투여 기간 동안 투여되는 CD40 작용제 항체의 치료학적 유효량은 약 0.03 내지 3.0mg/kg/일, 0.1 내지 3.0mg/kg/일, 0.1 내지 1.0mg/kg/일, 또는 약 0.1 내지 0.3mg/kg/일이다. 한 실시태양에서, 투여량은 1-5일 또는 1-3일동안 연속적으로 또는 격일로 투여된다.
종양 치료와 관련하여 상기 기술한 바와 같이, CD40 작용제 항체의 간헐적 투여 요법은 또한 환자의 면역 반응을 증진시키는데 유용하고, 따라서, 상기 용도 또한 본 발명에 의해 제공된다. 특정 실시태양으로, 환자의 면역 반응 증진은 예를 들면, 투여 기간 끝에 측정할 수 있는, 환자의 백혈구중 B 세포상의 CD23 또는 MHC-II 발현을 증가시킨다.
몇몇 실시태양에서, 항-CD40 항체를 Hyper-IgM 증후군을 갖는 CD40-의존성 면역결핍, 공통 가변성 면역결핍, 브루톤 무감마글로불린혈증, IgG 서브클래스 결핍, 및 X-연관 SCID(공통 감마 쇄 돌연변이)를 비롯하여, 원발성 및(또는) 복합 면역결핍으로 고생하는 환자에게 투여한다. 몇몇 실시태양에서, 예를 들면, 화학요법에 기인하여 면역억제되거나, 후천성 면역 결핍증, 예로서, HIV를 포함하는 면역-허약성 질환을 갖는 환자를 치료하기 위하여 항-CD40 항체를 투여한다. 몇몇 실시태양에서, 노인 환자의 면역성을 증진시키기 위하여 항-CD40 항체를 투여한다. 몇몇 실시태양에서, 세균, 바이러스, 진균 또는 기생충 감염을 갖는 환자를 치료하 기 위하여 항-CD40 항체를 투여한다. 몇몇 실시태양에서, 감염을 예방하거나 감염 횟수 또는 중증도를 저하시키기 위하여 연령, 질병 또는 일반적으로 좋지 않은 건강 상태 때문에 감염되지 쉬운 환자에게 인간 작용제 항-CD40 항체를 예방학적으로 투여할 수 있다.
본 발명은 또한 CD40 작용제 항체 및 DNA 복제 저해제, 바람직하게, 플라틴-유도체, 특히, 시스플라틴를 투여하는 것을 포함하는, 환자에서 종양을 치료하는 방법을 제공한다. 특정 실시태양에서, 시스플라틴을 정맥내 투여한다. 몇몇 실시태양에서, 환자의 신체 표면적 1㎡당 약 25 내지 300mg, 약 50 내지 150mg, 또는 약 75 내지 100mg의 양으로 시스플라틴을 투여한다. 한 실시태양에서, 시스플라틴을 1회 투여량(예: 단일 정맥 주사)으로 투여한다. 또다른 실시태양에서, 2-5일간에 걸쳐 투여한다. 특정 실시태양에서, 시스플라틴과 배합되어 투여되는 CD40 항체의 양은 약 0.1 내지 3.0mg/kg, 또는 약 0.1 내지 1.0mg/kg, 또는 약 0.1 내지 0.3mg/kg의 투여량으로 투여된다.
또다른 일면으로, 하나 이상의 투여 기간 또는 휴지 기간동안 시스플라틴을 투여하되, 시스플라틴의 투여는 CD40 항체의 간헐적 투여 요법과 함께 병용된다.
또다른 일면으로, 본 발명은 1mg/kg/일 미만의 투여량으로 CD40 작용제 항체 또는 그의 단편을 환자에게 투여하되, 항체 투여로 인한 환자에서의 Cmax 혈청 농도는 50㎍/ml 미만인, 종양 치료를 필요로 하는 환자에서 종양을 치료하는 방법에 관한 것이다. 한 실시태양에서, 투여량은 0.1 내지 0.3mg/kg이고 환자에서 항체의 Cmax 혈청 농도는 0.5 내지 10㎍/ml이다.
또다른 일면으로, 본 발명은 적어도 3개월의 기간동안 안정성이고, pH 5.0-6.0의 항-CD40 항체 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는, 비경구적 투여에 적절한 안정한 액상 약제학적 제제에 관한 것이다. 제제는 바람직하게 적어도 약 5mg/ml 농도의 CD40 항체를 갖는다. 한 실시태양에서, 제제는 항-CD40 항체, 아세트산나트륨, 염화나트륨, 및 폴리소르베이트 80을 포함한다. 바람직하게, 20mM 아세트산나트륨, 140mM 염화나트륨, 및 0.2mg/mL 폴리소르베이트 80을 포함한다. 항-CD40 항체는 바람직하게 항체 21.4.1 또는 3.1.1로 구성된 군으로부터 선택되는 항체의 아미노산 서열을 갖는다.
도면의 간단한 설명
도 1은 면역 세포 존재하에 CD40 작용제 항체에 의한 CD40(-) 종양 K562의 성장 저해를 나타낸다. 종양 시험 감염시 21.4.1 또는 KLH를 동물에 단일 주사(IP)하였다. 종양 크기(㎟)는 21일째 각각의 각개 동물에 대하여 기록한다(군당 10마리). 연구는 적어도 5개의 별개 실험을 나타낸다.
도 2는 CD40 작용제 항체에 의한 인간 유방 종양 세포주 BT 474 성장의 저해를 나타낸다. 값은 군당 6마리의 동물을 사용하여 주사후 53일째 측정된 각개 종양 측정치를 나타낸다. 연구는 적어도 2개의 별개 실험을 나타낸다. 각 처리군에 대한 평균은 가로축에 나타낸다.
도 3은 CD40 작용제 항체 단독, 또는 면역 세포 존재하에서 CD40 작용제 항 체에 의한 CD40(+) 종양 성장의 저해를 나타낸다. 종양 시험 감염시 동물에 21.4.1을 단일 주사하였다. (a)종양을 단독으로 주사하거나 (b) 인간 말초 혈액 T 세포 및 DC과 함께 주사하였다. 데이타 지점은 각 개체 동물에 대한 종양 크기(㎟)를 나타낸다. 각 처리군(N=10)에 대한 평균은 가로축에 나타낸다. 연구는 적어도 3개의 별개 실험을 나타낸다.
도 4는 B 세포 림프종(Daudi)에 의해 유도된 사망을 지연시키는 CD40 작용제 항체의 효과를 나타낸다. 데이타 지점은 군당 N=10마리중 생존 동물의 평균 마리수를 언급한다.
도 5는 CD40 작용제 항체 및 시스플라틴을 사용하는 병용 요법에 의한 종양 퇴행을 나타낸다.
바람직한 실시태양의 상세한 설명
본원에서 사용되는 용어 "작용제 CD40 항체" 또는 "작용제 항-CD40 항체"는 CD40를 발현시키는 세포, 조직 또는 유기체에 첨가하였을 때 인간 CD40 분자에 특이적으로 결합하고 하나 이상의 CD40 활성을 적어도 약 20％까지 증가시키는 항체를 의미한다. 몇몇 실시태양에서, 항체는 CD40 활성을 적어도 40％, 50％, 60％, 70％, 80％, 또는 85％까지 활성화시킨다. 몇몇 실시태양에서, CD40L의 존재하에 활성화된다. 몇몇 실시태양에서, 백혈구 표면 분자 상향조절 분석법을 사용하여 활성 항체의 활성을 측정한다. 또다른 실시태양에서, IL-12 방출을 측정하는 수지상 세포 분석법을 사용하여 활성 항체의 활성을 측정한다. 또다른 실시태양에서, 생체내 종양 모델을 사용하여 활성 항체의 활성을 측정한다.
본원에서 사용되는 용어 "항체"는 완전한(intact) 항체, 또는 특이 결합을 위해 완전한 항체와 경쟁하는 그의 결합 단편을 언급한다. 결합 단편은 재조합 DNA 기술, 또는 완전한 항체의 효소적 또는 화학적 절단에 의해 제조된다. 결합 단편은 Fab, Fab', F(ab')2, Fv, 및 단일-쇄 항체를 포함한다. 본원에서 완전한(예: 전체, 전장 등) 항체에 대한 언급은 재조합 발현시 공통적으로 발생하는, 중쇄내의 말단 리신 결실을 갖는 항체를 포함하는 것으로 이해된다.
바람직하게, 작용제 CD40 항체는 인간 항체이다. 본원에서 사용되는 용어 "인간 항체"는 가변 및 불변 영역 서열이 인간 서열로부터 유래된 항체인 것을 의미한다. 인간 CD40 항체는 2001년 11월 9월에 출원된 U.S. 가출원 번호 60/348,980, 및 2002년 11월 8일 출원된 PCT 국제 출원 번호 PCT/US02/36107(현재 WO 03/040170로 공개됨)(그의 전체 명세서는 이 거명을 통해 본원에 포함된다). 인간 항체는 인간 환자에서 인간이 아닌 항체의 사용과 관련된 면역성 및 알레르기성 반응을 최소화하는 것으로 예측되는 바, 인간 항체는 본 발명의 치료법에서 실질적인 잇점을 제공한다.
본 발명에 유용한 인간 항-CD40 항체의 예로서, 3.1.1, 3.1.1H-A78T, 3.1.1H-A78T-V88A-V97A, 7.1.2, 10.8.3, 15.1.1, 21.4.1, 21.2.1, 22.1.1, 22.1.1H-C109A, 23.5.1, 23.25.1, 23.28.1, 23.28.1H-D16E, 23.29.1, 24.2.1, 3.1.1H-A78T-V88A-V97A/3.1.1L-L4M-L83V 및 23.28.1L-C92A로 지정된 항체의 아미노산 서열을 갖는 항체, 및 상기 예시된 항체중 어느 것의 CDR 또는 가변 부위를 포함하는 항체를 포함한다.
상기 예시적인 항체중 어느 것과 같이 동일하거나 유사한 에피토프, 또는 그의 부분을 인식하는 항체 또한 본 발명에 유용할 수 있다. 즉, 본원에서 제공되는 명세서에 기초하여 당업자에게 이해되는 바와 같이, 본 발명의 항체(예: 3.1.1, 3.1.1H-A78T, 3.1.1H-A78T-V88A-V97A, 7.1.2, 10.8.3, 15.1.1, 21.4.1, 21.2.1, 22.1.1, 22.1.1H-C109A, 23.5.1, 23.25.1, 23.28.1, 23.28.1H-D16E, 23.29.1, 24.2.1, 3.1.1H-A78T-V88A-V97A/3.1.1L-L4M-L83V 및 23.28.1L-C92A 등)과 경쟁하는 항체는 본원의 여타 부분에 개시된 바와 같이 유용할 수 있다. 본원에서 예시된 항체와 경쟁하는 관심의 대상이 되는 항체는 항체의 특징화를 위해 본 분야에 잘 공지되어 있는 방법을 사용하여 용이하게 확인할 수 있다. 더욱 구체적으로, 항체의 결합 특징을 평가하기 위한 분석법, 및 그의 결합 특징과 다른 항체의 것을 비교하기 위한 분석법은 본 분야에 잘 공지되어 있다. 상기 방법으로는 ELISA-기반의 분석법, BIA코어 결합 연구의 사용, 및 Walker 등의 US 특허 출원 공개번호 2003/0157730 A1에 상세히 기술된 것이 있으나, 이에 제한되지는 않는다.
항체와 관련하여 본원에서 사용하는 용어 "경쟁하다"는 제 2의 항체의 부재하에서 제 1의 항체의 결합과 비교하여 제 2의 항체의 존재하에서 제 1의 항체와 그의 동족 에피토프의 결합이 검출가능하게 감소되는 것으로서, 제 1의 항체가 결합을 위해 제 2의 항체와 경쟁하는 것을 의미한다. 제 2의 항체와 그의 에피토프의 결합 또한 제 1의 항체의 존재하에서 검출가능하게 감소되는 다른 경우도 상기 경우일 수 있지만, 반드시 그럴 필요는 없다. 즉, 제 1의 항체와 그의 각 에피토프의 결합을 저해하는 제 2의 항체없이 제 1의 항체는 제 2의 항체와 그의 각 에피토프의 결합을 저해할 수 있다. 그러나, 동일한 범위까지, 그보다 큰 범위 또는 그보다 적은 범위까지이건 간에 각 항체가 나머지 다른 하나의 항체와 그의 동족 에피토프 또는 리간드의 결합을 검출가능하게 저해하는 경우, 항체는 그의 각 에피토프(들)와 결합하기 위하여 서로서로 "교차-경쟁"하는 것으로서 언급된다. 예를 들면, 교차-경쟁 항체는 본 발명의 항체(예: 3.1.1, 3.1.1H-A78T, 3.1.1H-A78T-V88A-V97A, 7.1.2, 10.8.3, 15.1.1, 21.4.1, 21.2.1, 22.1.1, 22.1.1H-C109A, 23.5.1, 23.25.1, 23.28.1, 23.28.1H-D16E, 23.29.1, 24.2.1, 3.1.1H-A78T-V88A-V97A/3.1.1L-L4M-L83V 및 23.28.1L-C92A)가 결합하는 에피토프, 또는 에피토프의 부위와 결합할 수 있다. 경쟁 및 교차-경쟁 항체 둘 모두 본 발명에 포함된다. 메커니즘에 의해 경쟁 또는 교차-경쟁이 발생하는 경우, 메커니즘(예: 입체 장애, 입체형태적 변화, 또는 공통 에피토프, 또는 그의 일부와의 결합 등)과는 상관없이, 당업자는 본원에서 제공하는 교시에 기초하여 상기 경쟁 및(또는) 교차-경쟁 항체가 포함되고 본원에 기술된 방법에 유용할 수 있다는 것을 이해할 것이다.
또한, 예시적인 항체는 항원에 결합하고 그의 작용제 기능을 발휘하는 항체의 능력은 제거하지 않으면서 하나 이상의 아미노산 잔기의 치환, 부가 또는 결실을 통해 추가로 변형될 수 있다. 실제로, "3.1.1H-A78T-V88A-V97A/3.1.1L-L4M-L83V"로 지정된 항체는 중쇄 가변 부위에 3개의 아미노산 치환, 즉, 모두 항체 3.1.1의 중쇄 가변 부위의 아미노산 서열(서열 번호: 1)과 관련하여 78번 아미노산 잔기에서 알라닌으로부터 트레오닌으로의 치환, 88번 아미노산 잔기에서 발린으로부터 알라닌으로의 치환, 및 97번 아미노산 잔기에서 발린으로부터 알라닌으로의 치환(서열 번호: 9)을 포함한다. 또한, 3.1.1H-A78T-V88A-V97A/3.1.1L-L4M-L83V 항체는 추가로 항체 3.1.1의 경쇄중 가변 부위의 아미노산 서열(서열 번호: 3)과 비교하여 4번 아미노산 잔기에서 류신으로부터 메티오닌으로의 치환 및 83번 아미노산 잔기에서 류신으로부터 발린으로의 치환(서열 번호: 10)을 포함한다. 3.1.1 및 3.1.1H-A78T-V88A-V97A/3.1.1L-L4M-L83V 항체의 중쇄중 불변 부위의 아미노산 서열(서열 번호: 2) 및 경쇄의 것(서열 번호: 4)은 동일하다. 항체 3.1.1H-A78T-V88A-V97A/3.1.1L-L4M-L83V는 또한 항체가 항체 3.1.1와 관련하여 중쇄중 3개의 아미노산 치환 및 경쇄중 2개의 아미노산 치환을 포함하는 것을 반영하여 "3.1.1H3L2"로서도 언급된다.
따라서, 몇몇 실시태양에서, 예시적인 항체는 예로서, CDR 또는 프레임워크(framework) 부위에서 1 내지 10개, 1 내지 5개, 또는 1 내지 3개의 아미노산 잔기의 치환, 부가, 또는 결실에 의해 변형될 수 있다. 상기 예시적인 항체 및 그의 제조 방법은 2001년 11월 9일 출원된 U.S. 가출원 번호 60/348,980 및 2002년 11월 8일 출원된 PCT 국제 출원 번호 PCT/US02/36107(WO 03/040170)에 상세히 기술되어 있다. 그러나, 본 발명을 상기 또는 어느 다른 아미노산 치환으로서 제한하는 것은 아니다. 반대로, 본원에서 제공된 교시를 갖춘 당업자는 다양한 아미노산 치환이 본 발명에 포함된다는 것을 이해할 것이다.
하이브리도마 3.1.1, 7.1.2, 10.8.3, 15.1.1 및 21.4.1을 부다페스트 조약에 따라 2001년 8월 6일, 버지니아주 20110-2209 마나사스 유니버시티 블러바드 10801에 소재하는 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션 (American Type Culture Collection; ATCC)에 기탁하였다. 하이브리도마 21.2.1, 22.1.1, 23.5.1, 23.25.1, 23.28.1, 23.29.1 및 24.2.1을 2002년 7월 16일 ATCC에 기탁하였다. 하이브리도마에 하기 기탁 번호를 부여하였다:
하이브리도마 기탁 번호
3.1.1(LN 15848) PTA-3600
7.1.2(LN 15849) PTA-3601
10.8.3(LN 15850) PTA-3602
15.1.1(LN 15851) PTA-3603
21.4.1(LN 15853) PTA-3605
21.2.1(LN 15874) PTA-4549
22.1.1(LN 15875) PTA-4550
23.5.1(LN 15855) PTA-4548
23.25.1(LN 15876) PTA-4551
23.28.1(LN 15877) PTA-4552
23.29.1(LN 15878) PTA-4553
24.2.1(LN 15879) PTA-4554
상기 항체의 서열은 공지되어 있고, WO 03/040170에 기술되어 있다. 편의상 상기 항체중 2개의 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열을 하기 나타낸다:
Figure 112006043824056-PCT00001
Figure 112006043824056-PCT00002
Figure 112006043824056-PCT00003
따라서, 21.4.1 항체의 아미노산 서열은 서열 번호: 5-8에 기술된 아미노산 서열을 포함하고, 항체 3.1.1의 아미노산 서열은 서열 번호: 1-4에 기술된 아미노산 서열을 포함하고, 3.1.1H-A78T-V88A-V97A/3.1.1L-L4M-L83V 항체의 아미노산 서열은 서열 번호: 9, 서열 번호: 2, 서열 번호: 10 및 서열 번호: 4에 기술된 아미노산을 포함한다. 3.1.1 및 3.1.1H-A78T-V88A-V97A/3.1.1L-L4M-L83V 사이의 상이한 아미노산은 밑줄로 표시한다.
본원에서 제공하는 명세서에 기초하여 본 발명의 3.1.1 항체는 본원에 기술된 중쇄 및(또는) 경쇄 가변 부위의 어느 조합을 포함한다는 것을 이해할 것이다. 즉, 항체는 3.1.1H(서열 번호:1)/3.1.1L(서열 번호: 3), 3.1.1H(서열 번호: 1)/3.1.1L-L4M-L83V(서열 번호: 10), 3.1.1H-A78T-V88A-V97A(서열 번호: 9)/3.1.1L(서열 번호: 3), 및 더욱 바람직하게, 3.1.1H-A78T-V88A-V97A(서열 번호: 9)/3.1.1L-L4M-L83V(서열 번호: 10) 등을 비롯한 가변 부위의 임의 조합을 포함할 수 있다. 그러나, 본 발명은 상기 또는 어느 다른 특정 조합으로서 제한하고자 하는 것은 아니다.
특정 실시태양에서, 종양 치료법은 암 세포 증식을 저해하고, 종양의 중량 또는 체적의 증가를 저해하거나 저지하고(거나) 종양 중량 또는 체적을 감소시킨다. 몇몇 실시태양에서, 종양 치료법은 환자의 생존 기간을 연장시킨다. 특정 실시태양에서, 종양 성장은 치료받지 못한 것과 비교하여 적어도 50％, 55％, 60％, 65％, 70％ 또는 75％로 저해된다. 몇몇 실시태양에서, 종양은 CD40 양성이다. 몇몇 실시태양에서, 종양은 CD40 음성이다. 종양은 고형 종양 또는 비고형 종양, 예로서, 림프종일 수 있다. 몇몇 실시태양에서, 항-CD40 항체를 암성 종양을 갖는 환자에게 투여한다.
항-CD40 항체 또는 항체 부분으로 치료받을 수 있는 환자는 제한하는 것은 아니지만, 뇌암, 폐암, 뼈암, 전립선 암, 피부암, 암 머리 및 목 암, 피부 또는 눈속 종흑색, 자궁암, 난소암, 직장암, 항문부위 암, 위암(stomach cancer), 위암(gastric cancer), 결장직장암, 결장암, 부인과적 종양(예: 자궁 육종, 난관 암종, 자궁내막 암종, 자궁경부 암종, 질 암종 또는 음문 암종), 식도암, 소장암, 내분비계 암(예: 갑상샘, 부갑상샘 또는 부신 암), 연조직 육종, 백혈병, 골수종, 다발 골수종, 요도, 음경암, 전립선암, 만성 또는 급성 백혈병, 소아 고형 종양, 호지킨병, 림프구 림프종, 비호지킨 림프종, 담낭암, 간암, 신장암, 콩팥요관암(예: 신장 세포 암종, 신우 암종), 또는 중추신경계의 신생물(예: 원발성 CNS 림프종, 척추 축추(spinal axis) 종양, 뇌간 신경아교종 또는 뇌하수체 샘종), 신경아교종 또는 섬유육종을 갖는 것으로 진단받은 환자를 포함한다.
본원에서 사용되는 용어 "환자"는 교차반응 CD40을 발현시키는 인간 또는 인간이 아닌 포유 동물(예: 영장류, 사이노몰거스 또는 레소스 원숭이)을 언급한다. 바람직하게, 치료하고자 하는 환자는 인간이다.
본원에서 사용되는 용어 "간헐적 투여 요법"은 CD40 작용제 항체를 투여한 후, 휴지 기간을 포함하는 투여 요법을 의미한다.
본원에서 사용되는 용어 "휴지 기간"은 환자에게 CD40 작용제 항체를 투여하지 않는 기간을 의미한다. 예를 들면, 1일 기초로 항체를 투여할 경우, 예로서, 몇일 또는 몇주 동안 1일 투여를 중단한다면 휴지 기간이 될 것이다. 상이한 스케줄로 투여량을 투여할 경우, 잠시동안 투여가 중단될 때 휴지 기간이 형성된다. 다르게는, 항체의 농도가 치료학적 수준 이하(sub-therapeutic level)로 유지되는 곳에서 휴지 기간은 형성될 수 있다.
한 실시태양에서, 제 2의 휴지 기간 후에는 항체를 투여하지 않고, 즉, 본 발명의 방법이 2개의 사이클을 포함할 때, 제 2의 휴지 사이클 후에는 약물을 투여할 필요가 없다.
바람직하게, 휴지 기간동안 항체의 혈장 농도는 치료학적 수준 이하로 유지된다.
투여 기간 및(또는) 항체의 투여량은 사이클들 사이에 동일하거나 상이할 수 있다.
전체 치료시간(즉, 치료시의 사이클 횟수)은 옳은 의료적 판단 및 인자, 특히 치료하고자 하는 환자에 기초하여 환자마다 달라질 것이다. 일반적으로, 만족스러운 반응이 나타낼 때까지 투여 요법을 시행한다. 본 발명의 특정 실시태양에서, 투여 기간은 2-20, 2-15, 2-10, 2-7, 2-5개의 사이클 또는 2-3개의 사이클을 포함한다.
예로서, 정맥내, 피하, 근육내, 비경구, 종양내, 및 진피 투여를 포함하는, 원하는 어느 수단에 의해 항체를 투여할 수 있다. 한 실시태양에서, CD40 항체를 정맥내 투여한다. 또다르게는, 미세바늘 장치를 사용하여 투여하되, 상기 장치는 잘 공지되어 있고, 예를 들면, WO 03/084598에 기술된 장치를 포함한다.
DNA 복제 저해제, 예로서, 시스플라틴과 병용하여 투여할 때, 저해제 투여 전, 투여시 또는 투여 후 항체를 투여할 수 있다.
일면으로, 본 발명은 pH가 약 5.0 내지 6.0, 바람직하게, 약 5.5인 정맥내 주사용의 수액제에 관한 것이다. 상기 액제는 아세트산나트륨(트리하이드레이트), 아세트산(빙초산), 폴리소르베이트 80, 염화나트륨 및 물을 사용하여 제제화될 수 있다. 항체 용액을 2℃ 내지 8℃ 사이의 냉장 농도에서 저장하고 냉동시키지 않는 것이 바람직하다.
본 발명에 따라, 치료학적 유효량의 CD40 작용제 항체 및 치료학적 유효량의 DNA 복제 저해제, 예로서, 플라틴-유도체의 배합물을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 종양 치료를 필요로 하는 환자에서 종양을 치료하는 방법을 제공한다. 특정 실시태양에서, CD40 작용제 항체는 플라틴-유도체 화합물, 특히, 시스플라틴의 상승적 배합물에서 작용을 하고, 배합물의 항-종양 효과는 각 화합물을 단독으로 투여할 경우 예측되는 것보다 우수하다.
플라틴-유도체들은 DNA 복제를 방해하여 그의 항-종양 활성을 발휘하는 잘-공지된 화합물 군이다. 특정 실시태양에서, 플라틴 유도체는 시스플라틴(시스-디아민디클로로플라티늄, 참조, Merck Index), 카보플라틴 및 옥살리플라틴으로 구성된 군으로부터 선택된다.
본 발명은 하기 실시예를 참고로 하여 더욱 완전하게 이해될 것이다. 그러나, 실시예가 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다. 모든 인용 문헌은 각각의 거명을 통해 본원에 포함된다.
실시예 1: 암 환자로부터의 림프절 세포에 대한 항체의 효과
자가 종양 세포에 의해 자극받은 암 환자로부터 수득한 림프절 세포에 대한 인간 항-CD40 항체(21.4.1)의 효과를 조사하였다.
신장 세포 암종, 비소 세포 폐암, 담낭 이행 세포 암종, 결장암, 전립선암, 및 두경부암을 갖는 환자로부터 림프절 세포 및 종양을 수거하였다. 림프절 세포를 21.4.1(1㎍/mL; 6.7nM)의 존재 또는 부재하에서 방사선조사 콜라게나제 처리된 종양(동일한 환자로부터 회수)과 함께 배양액에 놓았다. 96시간 후 3H-티미딘을 사용하여 증식을 평가하였다. 재자극 시킨 후, ELISPOT에 의해 INFγ 생성 세포의 갯수를 평가하였다.
항체는 종양 항원으로 자극을 받은 림프절 세포 배양액에서 IFNγ+ 양성 T 세포의 갯수를 증가시켰다. 추가로, 종양 항원에 대한 반응으로 상기 림프절 세포의 증식은 3-4배 증가되었다.
항체는 종양 항원으로 자극을 받았을 때 암 환자로부터 수득한 림프절 세포의 증식 및 사이토카인 생성 능력을 증가시켰다.
실시예 2: 항체와 Fc 수용체의 결합
인간 및 사이노몰거스 백혈구상의 Fc 수용체와 항-CD40 항체(21.4.1)의 결합을 조사하였다.
흐름세포측정 연구를 통해 FcR 타입 FcγRII(CD32) 및 FcγRIII(CD16), 및 매우 낮은 수준의 FcγRI(CD64)이 인간 백혈구상에서 발현되었음을 나타내었다. 인간 또는 사이노몰거스 말초 혈액 백혈구상의 Fc 수용체(FcR)와 21.4.1의 결합은 125I-21.4.1 및 인간 IgG1 대조군 mAb를 사용하여 측정하였다. 정상의 기증자로부터의 인간 백혈구 또는 사이노몰거스 백혈구를 혈장 겔을 사용하여 백혈구로부터 분리하고 철저하게 세척하여 수용체-결합 혈청 이뮤노글로블린을 해리시켰다. 수크로스 쿠션을 통한 원심분리를 사용하여 세포-결합 및 유리 항체를 분리하였다. 수용체 내재화를 저지시키기 위하여 나트륨 아지드의 존재하에 4℃에서 연구를 실시하였다.
경쟁자로서 과량의 표지되지 않은 인간 IgG2 이소타입 매치된 항체를 사용하여 21.4.1을 FcR과의 특이 결합에 대하여 시험하였다. 인간 백혈구(n=5 기증자)상의 FcR과의 125I-21.4.1 특이 결합은 -1.0±8.5％이고 사이노몰거스 백혈구(n=4)상 의 특이 결합은 15±13％이었다. 백혈구 CD40 수용체 및 FcR과 125I-21.4.1의 어느 특이 결합을 차단하는 500-배 과량의 표지되지 않은 21.4.1의 첨가는 인간 및 사이노몰거스 백혈구상의 CD40 수용체와 125I-21.4.1의의 특이 결합이 각각 49％ 및 67％였음을 입증하였다(CD40와의 특이 결합(％)은 전체 특이 결합(％)으로부터 결합(％)을 감하여 산출하였다). 대조군으로서 125I-IgG1은 일관되게 인간 및 사이노몰거스 백혈구와의 특이 결합을 입증하였다. 인간 및 사이노몰거스 백혈구상의 FcR과 IgG1 대조군 항체의 특이 결합은 각각 전체 결합 방사능중 56％ 및 51％를 차지하였다. 본 연구는 항체는 인간 및 사이노몰거스 백혈구상의 Fc 수용체와 최소한의 특이 결합을 나타낸다는 것을 제시한다.
실시예 3: 백혈구 사이토카인 방출 분석법
인간에서 항체-매개 사이토카인 방출의 유도와 관련된 시험관내 백혈구 분석법을 사용하여 자극받지 않은 인간 백혈구로부터 사이토카인 방출을 유도하는 그의 능력에 대하여 항-CD40 항체(21.4.1)를 시험하였다. 양성 대조군으로서 Fc 매개 경로를 통해 사이토카인 방출을 유도하는 뮤린(murine) 항-인간 CD3 IgG1 및 제 2의 양성 대조군으로서 대식세포를 자극하여 사이토카인을 유도하는 LPS와 함께 1, 10 및 100㎍/ml의 21.4.1을 시험하였다. 사용된 기증자는 뮤린 항체 및 LPS 둘 모두에 대하여 반응하는 개체(4명의 기증자), 및 LPS에 대해서만 반응하는 개체(3명의 기증자)를 포함한다. 헤파린 처리 백혈구를 5시간 동안 21.4.1과 함께 배양하고 혈장을 수거하고 ELISA(상업적으로 이용가능한 키트를 사용)에 의해 종양 괴사 인자 알파(TNF-α), 인터페론 감마(INF-γ) 및 인터루킨-6(IL-6)에 대하여 분석하였다. 또한, 배양액을 48시간 동안 인큐베이션시키고 인터루킨-1(IL-1)에 대하여 분석하였다.
1 또는 10㎍/mL의 21.4.1와 함께 배양된 인간 혈액의 혈장에서는 사이토카인이 검출되지 않았다. 100㎍/mL의 항체로 처리된 기증자에서만 2개의 사이토카인이 낮지만 측정가능한 수준으로 나타났다(34㎍/ml의 TNF-α 및 90㎍/ml의 IL-6). 상기 기증자를 연속하여 재시험하였고, 이는 검출가능한 TNF-α 또는 IL-6의 유도를 나타내지 않았다. 어느 샘플에서도 INFγ 또는 IL-1β는 증가하지 않았다.
본 연구는 21.4.1은 인간 백혈구중 염증성 사이토카인을 유도하지 않는다는 것을 제시한다.
실시예 4: 항체의 약력학 및 약동학
CD40 항체(21.4.1)를 다양한 투여량으로(1mg/kg n = 4, 3mg/kg n = 4, 5mg/kg n = 2 및 10mg/kg n = 2) 사이노몰거스 원숭이에게 정맥 투여하였다. 투여전 및 투여후의 다양한 시점에 원숭이로부터 헤파린 처리 혈액을 채취하였다. 혈액을 분취하고 염색시켰다. 벡톤 디킨슨(Becton Dickinson)의 FACSCalibur을 사용하여 데이타를 얻고 CeliQuest 소프트웨어를 사용하여 분석하였다. 결과는 투여전 값과 비교하여 중간 형광 세기의 증가 배수로서 산출하였다.
B-세포의 항원 제시 능력 및 활성화 상태를 반영하는 MHC 클래스 II 발현은 시험된 모든 투여량에 대하여 투여후 24시간째까지 2.5 내지 3배 증가하였고, 동시에 뚜렷한 투여량-반응간의 관계는 관찰되지 않았다. B-세포 활성화의 또다른 마 커인 CD23 발현은 2마리의 동물에서 3mg/kg, 1마리에서 10mg/kg로 평가되었다. CD23 발현은 투여후 24시간째 220배 증가하였고 동시에 투여량 효과는 관찰되지 않았다. 두개의 표면 마커 둘 모두의 상향조절은 지속된 반면(22배 증가), 21.4.1 수준은 1㎍/ml 초과로 유지되었다. CD71(트랜스페린 수용체) 및 CD86 동시-자극성 분자 수준은 또한 중간 정도의 상향조절을 보인 반면, CD80 발현은 현저히 변화하지는 않았다.
21.4.1은 생체내에서 사이노몰거스 B-세포중 표면 마커를 상향조절시킨다. CD20+ 세포상의 CD23 발현 및 MHC 클래스 II 발현은 처리에 의해 증가하고, 1mg/kg (~20㎍/ml의 Cmax 및 4일간의 ≥0.1㎍/ml의 노출)은 사이노몰거스 B-세포에서 포화 약력한 반응을 유발하는 것으로 나타났다. 본 반응의 지속 기간은 고투여량에서 더욱 길었다.
1, 3, 5 또는 10mg/kg의 단일 투여량으로 정맥(IV) 투여한 후 사이노몰거스 원숭이에서 항-CD40 항체(21.4.1)의 약동학적 성질을 조사하였다. 낮은 전신 제거(0.0133 내지 0.0635mL/분/kg) 및 항정 상태에서의 소체적의 분포(0.0459 내지 0.0757L/kg)에 의해 21.4.1을 특징화하여 0.75 내지 2.0일의 겉보기 평균 제거 반감기를 수득하였다(표 1). 21.4.1의 약동학은 조사된 투여량 범위에서 투여량-의존성인 것으로 나타났다. 제거값은 일반적으로 투여량이 1 내지 10mg/kg으로 증가함에 따라 감소하였고 겉보기 평균 제거 반감기는 1mg/kg에서 0.75일로부터 10mg/kg에서 2.0일로 증가하였다. 항정 상태에서의 분포 체적은 상이한 투여량 (0.0575L/kg의 평균)에서 유사하였다.
관찰된 투여량-의존적 제거는 부분적으로 정상 조직에서 광범위하게 발현되는 CD40 수용체와 21.4.1의 결합 및 순차적인 내재화 및 항체-수용체 복합체의 제거에 기인할 수 있다. 영장류 항-인간 항체(PAHA) 반응의 발생은 또한 몇몇 원숭이에서 가속화된 제거에 원인이 될 수 있다. 시험 혈청중 21.4.1의 존재는 PAHA에 대한 분석법을 방해하기 때문에 21.4.1의 개별적인 혈청 농도가 최저정량한계(LLOQ, 0.03㎍/ml)에 도달한 후에만 PAHA를 평가하였다. 항체 투여후 14 내지 28일째 3, 5, 및 10mg/kg 투여군의 모든 원숭이에서 항-21.4.1 항체가 검출되었다.
표 1
1, 3, 5, 및 10mg/kg으로 단일 IV 투여한 후의 사이노몰거스 원숭이중 21.4.1의 평균(±SD) 약동학적 파라미터
투여량 (mg/kg) N/성 CL (mL/분/kg) Vdss (L/kg) t1 /2 (일) AUC(0-∞) (㎍·h/mL)
1 2/성별 0.0635±0.0245 0.0757±0.0265 0.75±0.21 298±126
3 2/성별 0.0213±0.0055 0.0459±0.0055 1.4±0.3 2460±600
5 2F 0.0174 0.0488 1.4 4790
10 1/성별 0.0133 0.0529 2.0 12500
실시예 5: 항체의 항-종양 활성
CD40 항체(21.4.1)의 종양 성장 저해 활성을 종양 세포만(1X107) 또는 인간 DC(1X105) 및 동일한 기증자로부터의 T 세포(5X105)가 SC 주사된 SCID-베이지색의 마우스에서 측정하였다. 종양 세포 대 DC 및 T 세포의 비는 100: 1: 5였다. 달리 언급하지 않는 한, 대조군 동물에서의 종양 성장이 300-400㎟의 크기에 도달하고 더이상 실험을 계속하기에는 인도적이지 못한 시간이 되는 미리 결정된(동적 실험으로부터) 정시점에 결과를 종양 크기(㎟)로 제시한다. 모든 경우, SCID-베이지색의 마우스에서 T1 /2이 >30일이 되도록 단지 1회만 21.4.1 주사로 투여하였다.
실시예 5(a): CD40( -) 인간 종양에 대한 항체의 효과
CD40(-) 종양(예: 적백혈병 및 결장 암종) 성장에 대한 CD40 항체(21.4.1)의 효과를 조사하였다. 특히, CD40(-) 낮은 면역원성(클래스 I 및 II 음성) 종양에 대한 21.4.1의 효능을 평가하기 위하여 K562 종양을 선택하였다.
CD40(-) 적백혈병 종양, K562(ATCC CCL-243) 단독으로 또는 인간 말초 혈액 T 세포 및 DC의 존재하에 SCID-베이지색의 마우스에 SC 주사하였다. 다양한 투여량 수준을 사용하여 종양 주사 시점 또는 5일후 동물에 21.4.1을 단일 IP 주사하였다.
21.4.1을 단일 IP 주사한 결과, 종양 시험 감염 후 21일째 나타난 바와 같이(도 1) 면역 세포가 제시되었을 때 K562 종양 성장은 투여량-의존적으로 저해되었다. 종양 성장을 50％ 저해하는 21.4.1의 양은 0.005mg/kg으로서, 이는 0.05g/mL의 Cmax 혈청 농도에 상응한다. CD40(-) 결장 암종, Lovo(ATCC CCL-229)의 경우에도 유사한 결과가 관찰되었다. 상기 결과는 종양 시험 감염에 대하여 0일째 또는 +5일째 21.4.1을 투여하였을 때와 일치하였다. 상기 CD40(-) 종양의 성장은 면역 세포의 부재하에서는 21.4.1에 의해 저해되지 않았다.
면역 세포 존재하에 21.4.1은 CD40(-) 종양의 성장을 저지시키고, 이는 면역 매개 항-종양 활성의 증진을 제시한다. 결장 암종 및 적백혈구 종양에 대하여 입증되었다. 상기 항-종양 활성은 또한 결장 암종에 대하여 항체 3.1.1 및 적백혈구 종양에서 3.1.1H-A78T-V88A-V97A/3.1.1L-L4M-L83V 항체(IC50 < 0.01mg/kg)를 사용하여 입증되었다. 따라서, 본원에 기술된 데이타를 통해 3.1.1H-A78T-V88A-V97A/3.1.1L-L4M-L83V 항체는 3.1.1 항체의 생체내 활성을 갖는다는 것이 입증되었다. 추가로 상기 생체내 종양 결과는 2개의 항체를 비교할 때 수득한 시험관내 결과가 유사할 경우, 항체 3.1.1 및 항체 3.1.1H-A78T-V88A-V97A/3.1.1L-L4M-L83V는 생체내에서 유사한 방식으로 실행할 것이라는 것을 지지한다. 따라서, 3.1.1을 사용하여 수득한 결과는 상기 및 다른 분석법의 3.1.1H-A78T-V88A-V97A/3.1.1L-L4M-L83V에 적용된다.
실시예 5(b): 인간 유방 및 전립선 종양 성장에 대한 항체의 효과
유방 및 전립선 종양 성장 저지에 대한 항-D40 항체(21.4.1)의 효과를 조사하였다.
SCID-베이지색 마우스에 인간 유방 종양, BT 474(ATCC HTB-20)를 인간 말초 혈액 T 세포 및 DC와 함께 SC로 시험 감염시켰다. 종양 주사시 동물에 단일 투여량의 21.4.1(IP)을 투여하였다.
도 2에 나타낸 바와 같이, 21.4.1 단일 투여는 면역 세포 존재하에 BT 474 세포 성장을 저지시켰다. 종양 성장을 50％ 저하시키기 위하여 필요한 21.4.1 양 은 0.005mg/kg으로서, 이는 0.05㎍/mL의 Cmax 혈청 농도에 상응한다. 인간 전립선 암 세포주, PC-3(ATCC CRL-1435)에 대해서는 유사한 결과가 관찰되었다. 또한, 이는 항체 3.1.1를 사용하여 입증되었고, 3.1.1H-A78T-V88A-V97A/3.1.1L-L4M-L83V에 대해서도 예측될 수 있다.
21.4.1은 인간 유방 및 전립선 종양 성장을 저지시킨다.
실시예 5(c): CD40 (+) 종양에 대한 항체의 항-종양 효과
CD40(+) 종양에 대한 항-종양 활성에 대한 항-CD40 항체(21.4.1)의 효과 및 면역 세포 존재 및 부재하의 효능 변화를 연구하였다.
SCID-베이지색 마우스에 CD40(+) Raji B 세포 림프종(ATCC CCL-86)(SC)을 피하 주사한 후 종양 주사시 21.4.1(IP)을 단일 투여하였다. 또한, 몇몇 동물에는 인간 T 세포 및 DC를 주사하였다. 21일째 종양 성장을 평가하였다.
도 3에 나타낸 바와 같이, 면역 세포의 부재하에 종양 성장을 50％ 저해시키는 21.4.1의 양은 0.02mg/kg으로서, 이는 0.2㎍/mL의 Cmax 혈청 농도에 상응한다. 종양 세포를 면역 세포와 함께 주사하였을 때 종양 성장을 50％ 저해시키기에 필요한 21.4.1.의 양은 0.001mg/kg까지 20배 감소하였다(Cmax 혈청 농도 = 0.01㎍/mL).
상기 결과는 21.4.1이 CD40(+) 종양에 대하여 직접적인 항-종양 활성을 갖는다는 것을 제시한다. 이는 3.1.1H-A78T-V88A-V97A/3.1.1L-L4M-L83V(IC50 < 0.01mg/kg)에 대해서도 관찰되었다. 항체 21.4.1에 대한 항-종양 활성은 면역 세포 존재하에 증진되었고, 이는 또한 항체 3.1.1을 사용하는 경우에도 입증되었고 항체 3.1.1H-A78T-V88A-V97A/3.1.1L-L4M-L83V에 대해서 예측된다.
실시예 5(d): B-세포 림프종에 대한 항체의 항-종양 효과
B 세포 림프종을 사용하여 CD40(+) 전신 종양 모델에서 사망을 지연시키는 본 발명에 따른 항-CD40 항체(21.4.1)의 능력을 평가하였다.
SCID-베이지색 마우스에 B 세포 림프종 Daudi(ATCC CCL-213)를 IV 주사하였다. 종양 주사시 21.4.1을 단일 주사(IP)로서 투여하였다. 58일동안 사망율을 모니터하였다.
도 4에 나타낸 바와 같이, 21.4.1의 단일 주사는 전신 투여된 종양 세포주에 의해 유도되는 사망을 저지시켰다.
B 세포 림프종을 사용하여 CD40(+) 전신 종양 모델에서 21.4.1은 사망을 지연시킨다. 이는 3.1.1을 사용한 경우에도 입증되었고 유사한 결과는 3.1.1H-A78T-V88A-V97A/3.1.1L-L4M-L83V에 대해서도 예측된다.
실시예 6: 시스플라틴과 배합된 항체의 치료적 효과
인간 유방 종양만 및 시스플라틴의 존재하에서의 인간 유방 종양 성장을 저지하는 항-CD40 항체(21.4.1)의 치료적 효과를 조사하였다.
SCID-베이지색 마우스에 유방 종양, BT 474를 SC 주사하였다. 일단 종양 크기가 200㎟에 도달하면 단일 주사로서 항체(1mg/kg, IP) 및(또는) 시스플라틴 (2.5mg/kg, IP)을 투여하였다. 종양 성장은 시험 감염 후 84일째 측정하였다.
도 4에 나타낸 바와 같이, 21.4.1 또는 시스플라틴의 단일 주사는 종양 성장을 저지시켰다. 그러나, 양 요법의 병용법이 7/8 동물에서 종양을 퇴행시킨다.
일단 종양이 확립된 후 단독으로 투여되었을 때 21.4.1은 종양 성장을 저지시키고 시스플라틴과 함께 배합되어 투여되었을 때 종양을 퇴행시킨다. 이는 3.1.1H-A78T-V88A-V97A/3.1.1L-L4M-L83V에도 가능한 바와 같이 항체 3.1.1을 사용한 경우에도 입증되었다.
실시예 7: 항체의 다중투여 약동학
다중-투여 연구에서, 5개의 전체 투여량을 위해 1, 3, 5, 7, 9일째 0.3, 1.0, 및 10mg/kg의 투여량으로 21.4.1을 사이노몰거스 원숭이에 정맥 투여하였다. 투여전 1일 및 9일째, 투여 전후 0.5, 6, 및 24시간째 투여후 0.5시간 5일째 혈액을 수거하여 혈청 약물 농도를 측정하였다. 평균 Cmax 및 평균 AUC(0-24)에 의해 평가되는 바와 같이 21.4.1에 대한 전신 노출은 1일 및 9일째 0.3으로부터 10mg/kg로 투여량을 증가함에 따라 증가하였다(표 2). 0.3 및 1mg/kg 투여군에서 1일 및 9일째 유사한 노출(평균 Cmax 및 평균 AUC)이 관찰되었다. 10mg/kg 투여군에서, 평균 Cmax 및 평균 AUC(0-24) 값은 1일부터 9일까지 각각 2.6- 및 2.8-배 증가하였다. 노출에서 성-관련 차이는 관찰되지 않았다.
표 2
격일로 IV 투여한 후 1일 및 9일째 사이노몰거스 원숭이에서 21.4.1의 평균(± SD) 약동학적 파라미터
투여량a (mg/kg) 일 Cmax (㎍/mL) Tmax (h) AUC(0-24) (㎍·h/mL)
0.3 1 4.67±1.71 1.9±2.8 47.7±15.4
9 7.4±2.9 0.5±0.0 55.6 ±47.1
1.0 1 26.7±5.1 0.5±0.0 387±59
9 12.3±9.1 1.9±2.8 219±151
10 1 226±29 1.9±2.8 4130±600
9 577±163 3.3±3.2 11400±2100
a N =2/성별/투여량
실시예 8: 항체 제제화
CD40 항체를 30kDa 분자량의 차단 카세트를 포함하는 한외여과 유니트를 사용하여 대략 11.0mg/mL±0.8mg/mL으로 농축시켰다. 이어서 농축물을 20mM 아세트산나트륨/140mM 염화나트륨, pH 5.5 완충액으로 정용여과시켰다. 2％ 폴리소르베이트 80 용액을 농축된 정용여과된 산물에 가하여 최종 농도의 0.02％ 폴리소르베이트 80을 수득하였다.
SEQUENCE LISTING <110> Gladue et al., Ronald P. <120> CD40 ANTIBODY FORMULATION AND METHODS <130> PC32065A <160> 10 <170> PatentIn version 3.2 <210> 1 <211> 126 <212> PRT <213> 3.1.1: Human <400> 1 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Ser Lys Asp Gly Gly Asn Lys Tyr His Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ala Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Arg Arg Gly His Gln Leu Val Leu Gly Tyr Tyr Tyr Tyr Asn Gly 100 105 110 Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 2 <211> 326 <212> PRT <213> 3.1.1: Human <400> 2 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 115 120 125 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 130 135 140 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn 165 170 175 Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp 180 185 190 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro 195 200 205 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu 210 215 220 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 245 250 255 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 260 265 270 Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 275 280 285 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 305 310 315 320 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 3 <211> 112 <212> PRT <213> 3.1.1: Human <400> 3 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser 20 25 30 Asn Gly Tyr Asn Phe Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Leu Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala 85 90 95 Leu Gln Thr Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 4 <211> 107 <212> PRT <213> 3.1.1: Human <400> 4 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 1 5 10 15 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 20 25 30 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 35 40 45 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 65 70 75 80 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 85 90 95 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105 <210> 5 <211> 126 <212> PRT <213> 21.4.1: Human <400> 5 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30 Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Pro Asp Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Asn Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Gln Pro Leu Gly Tyr Cys Thr Asn Gly Val Cys Ser Tyr 100 105 110 Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 6 <211> 326 <212> PRT <213> 21.4.1: Human <400> 6 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 115 120 125 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 130 135 140 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 145 150 155 160 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn 165 170 175 Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp 180 185 190 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro 195 200 205 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu 210 215 220 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 225 230 235 240 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 245 250 255 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 260 265 270 Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 275 280 285 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 290 295 300 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 305 310 315 320 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 7 <211> 107 <212> PRT <213> 21.4.1: Human <400> 7 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Tyr Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Thr Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ile Phe Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 8 <211> 107 <212> PRT <213> 21.4.1: Human <400> 8 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 1 5 10 15 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 20 25 30 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 35 40 45 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 65 70 75 80 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 85 90 95 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105 <210> 9 <211> 126 <212> PRT <213> Human: 3.1.1H-A78T-V88A-V97A <400> 9 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Ser Lys Asp Gly Gly Asn Lys Tyr His Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Gly His Gln Leu Val Leu Gly Tyr Tyr Tyr Tyr Asn Gly 100 105 110 Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 10 <211> 112 <212> PRT <213> Human: 3.1.1L-L4M-L83V <400> 10 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser 20 25 30 Asn Gly Tyr Asn Phe Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala 85 90 95 Leu Gln Thr Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110

Claims (20)

  1. 적어도 2개 사이클의 간헐적 투여 요법에 따라 CD40 작용제 항체 또는 그의 단편을 환자에게 투여하는 것을 포함하되, 각 사이클은 (a) 치료학적 유효량의 CD40 작용제 항체를 환자에게 투여하는 투여 기간 및 그 후의 (b) 휴지 기간을 포함하는, 암 치료를 필요로 하는 환자에서 암을 치료하는 방법.
  2. 제1항에 있어서, 치료학적 유효량이 적어도 3시간 동안 항체의 혈장 농도를 0.01㎍/ml 내지 10㎍/ml가 되게 하고, 휴지 기간이 적어도 1주 동안인 방법.
  3. 제1항에 있어서, 치료학적 유효량이 혈장 농도를 약 0.03㎍/ml 내지 1.0㎍/ml가 되게 하는 것인 방법.
  4. 제1항에 있어서, 치료학적 유효량이 혈장 농도를 0.1㎍/ml 내지 0.3㎍/ml로 유지시키는 것인 방법.
  5. 제1항에 있어서, 항체가 항체 3.1.1, 3.1.1H-A78T, 3.1.1H-A78T-V88A-V97A, 3.1.1H-A78T-V88A-V97A/3.1.1L-L4M-L83V, 7.1.2, 10.8.3, 15.1.1, 21.4.1, 21.2.1, 22.1.1, 22.1.1H-C109A, 23.5.1, 23.25.1, 23.28.1, 23.28.1H-D16E, 23.29.1, 24.2.1, 3.1.1L-L4M-L83V 및 23.28.1L-C92A의 아미노산 서열을 갖는 항체로 구성된 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  6. 제1항에 있어서, 항체가 3.1.1, 3.1.1H-A78T, 3.1.1H-A78T-V88A-V97A, 3.1.1H-A78T-V88A-V97A/3.1.1L-L4M-L83V, 7.1.2, 10.8.3, 15.1.1, 21.4.1, 21.2.1, 22.1.1, 22.1.1H-C109A, 23.5.1, 23.25.1, 23.28.1, 23.28.1H-D16E, 23.29.1, 24.2.1, 3.1.1L-L4M-L83V 및 23.28.1L-C92A로 지정된 항체로 구성된 군으로부터 선택되는 항체의 CDR 또는 가변 부위를 포함하는 것인 방법.
  7. 제1항에 있어서, 항체가 3.1.1, 3.1.1H-A78T, 3.1.1H-A78T-V88A-V97A, 3.1.1L-L4M-L83V, 3.1.1H-A78T-V88A-V97A/3.1.1L-L4M-L83V, 7.1.2, 10.8.3, 15.1.1, 21.4.1, 21.2.1, 22.1.1, 22.1.1H-C109A, 23.5.1, 23.25.1, 23.28.1, 23.28.1H-D16E, 23.29.1, 24.2.1 및 23.28.1L-C92A로 지정된 항체로 구성된 군으로부터 선택되는 CD40 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 것인 방법.
  8. 제1항에 있어서, 항체가 3.1.1, 3.1.1H-A78T, 3.1.1H-A78T-V88A-V97A, 7.1.2, 10.8.3, 15.1.1, 21.4.1, 21.2.1, 22.1.1, 22.1.1H-C109A, 23.5.1, 23.25.1, 23.28.1, 23.28.1H-D16E, 23.29.1, 24.2.1, 3.1.1H-A78T-V88A-V97A/3.1.1L-L4M-L83V 및 23.28.1L-C92A로 지정된 항체로 구성된 군으로부터 선택되는 CD40 항체와 경쟁하는 것인 방법.
  9. 제1항에 있어서, 항체가 21.4.1, 3.1.1, 및 3.1.1H-A78T-V88A-V97A/3.1.1L-L4M-L83V로 구성된 군으로부터 선택되는 항체의 아미노산 서열을 갖는 것인 방법.
  10. 적어도 2개 사이클의 간헐적 투여 요법에 따라 CD40 작용제 항체 또는 그의 단편을 환자에게 투여하는 것을 포함하되, 각 사이클은 (a) 0.03 내지 3.0mg/kg/일의 항체를 투여하는 1-5일간의 투여 기간 및 그 후의 (b) 1 내지 8주간의 휴지 기간을 포함하는, 종양 치료를 필요로 하는 환자에서 종양을 치료하는 방법.
  11. 제10항에 있어서, 0.1 내지 1.0mg/kg/일 또는 0.1 내지 0.3mg/kg/일의 항체를 투여하는 방법.
  12. 치료학적 유효량의 CD40 작용제 항체와 치료학적 유효량의 DNA 복제 저해제의 배합물을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 종양 치료를 필요로 하는 환자에서 종양을 치료하는 방법.
  13. 적어도 3개월의 기간동안 안정성이고, pH 5.0-6.0의 CD40 작용제 항체 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는, 비경구적 투여에 적절한 안정한 액상 약제학적 제제.
  14. 제13항에 있어서, CD40 항체의 농도가 약 5mg/ml 이상인 제제.
  15. 제13항에 있어서, 항-CD40 항체, 아세트산나트륨, 염화나트륨, 및 폴리소르베이트 80을 포함하는 제제.
  16. 제13항에 있어서, 항-CD40 항체가 21.4.1, 3.1.1, 및 3.1.1H-A78T-V88A-V97A/3.1.1L-L4M-L83V로 구성된 군으로부터 선택되는 항체의 아미노산 서열을 갖는 것인 제제.
  17. 1mg/kg 미만의 투여량으로 CD40 작용제 항체 또는 그의 단편을 환자에게 투여하되, 환자에서 항체의 Cmax 혈청 농도가 50㎍/ml 미만인, 종양 치료를 필요로 하는 환자에서 종양을 치료하는 방법.
  18. 제17항에 있어서, 투여량이 0.1 내지 0.3mg/kg이고, 환자에서 항체의 Cmax 혈청 농도가 0.5 내지 10㎍/ml인 방법.
  19. 적어도 2개 사이클의 간헐적 투여 요법에 따라 CD40 작용제 항체 또는 그의 단편을 환자에게 투여하는 것을 포함하되, 각 사이클은 (a) 치료학적 유효량의 CD40 작용제 항체를 환자에게 투여하는 투여 기간 및 그 후의 (b) 휴지 기간을 포함하는, 면역 반응 증진을 필요로 하는 환자에서 면역 반응을 증진시키는 방법.
  20. 적어도 2개 사이클의 간헐적 투여 요법에 따라 CD40 작용제 항체 또는 그의 단편을 환자에게 투여하되, 각 사이클은 (a) 치료학적 유효량의 CD40 작용제 항체를 환자에게 투여하는 투여 기간 및 그 후의 (b) 휴지 기간을 포함하여 암 치료를 필요로 하는 환자에서 암을 치료하기 위한 약제의 제조를 위한, CD40 작용제 항체 또는 그의 단편의 용도.
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