KR20020003559A - Ｌｆａ-1의 ｉｃａｍ에 대한 결합 저해제 및 그 용도 - Google Patents

Ｌｆａ-1의 ｉｃａｍ에 대한 결합 저해제 및 그 용도 Download PDF

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Abstract

LFA-1가 천연 리간드 결합 파트너에 결합하는 것을 저해하는 신규의 화합물이 개시되어 있다. 이 화합물의 용도도 제공되어 있다.

Description

ＬＦＡ-1의 ＩＣＡＭ에 대한 결합 저해제 및 그 용도{INHIBITORS OF LFA-1 BINDING TO ICAMs AND USES THEREOF}
백혈구 기능-관련 항원(LFA-1, CD11a/CD18)은 세포/세포 접착에 참여하는 백혈구-특이 β2인테그린이다. LFA-1의 결합 활성은 염증 반응에서 순환으로부터 상처 부위로의 백혈구 혈관외유출에 중요하다. 3개의 주요 리간드, ICAM-1, ICAM-2 및 ICAM-3가 LFA-1에 결합한다고 알려져 있으며, 이들은 상처부위의 내피세포에 백혈구 접착을 국한시키는데 중요한 역할을 하는 세포내 접착 분자이다. 또한, ICAM-4 및 ICAM-5도 LFA-1에 결합한다고 알려졌다. 대부분의 백혈구는 구성적으로 LFA-1을 발현하나, 리간드 결합에는 입체구조 변화를 유도할 것으로 여겨지고 리간드 결합력을 증가시키는 활성화가 필요하다. 예를들면, ICAM-1은 통상 내피세포층 상에서 낮은 수준으로 발현되나 상처-유도성 염증 매개인자는 상처 부위의 세포에서 강화된 표면 발현을 증진시키고, 차례로, 활성화된 LFA-1과의 결합을 통해 국한되어진 백혈구 접착을 증진시킨다.
LFA-1의 구조는 ICAM 결합에 참여하고/하거나 ICAM 결합을 조절하는 것으로생각되는 별개의 세포내 및 세포외 도메인을 포함한다. 특히 관심이 있는 것은 I 도메인으로 지칭되는 αL내에 있는 대략 200개 아미노산 영역으로, 모든 β2인테그린 뿐만아니라 기타 다수의 단백질에서 발견된다. 증거에 의하면 I 도메인은 ICAM-1 및 3에 LFA-1이 결합하는데 중요하다는 것을 제시한다. 예를들면, 항-LFA-1 차단 단클론성 항체들이 I 도메인 내의 에피토프로 지도화되었다. 게다가, 재조합 I 도메인 폴리펩티드 단편은 인테그린-매개성 접착을 저해하고 ICAM-1에 결합하는 것으로 나타났다. LFA-1(및 기타 단백질)의 I 도메인 안에는 망간 또는 마그네슘 이온에 선호적으로 결합하는 단일의 금속 이온 의존성 접착 부위(MIDAS)가 있다. 이중 어느 한 양이온의 결합은 리간드 상호작용에 필요하며, 결합에 필요한 LFA-1의 입체구조 변화를 야기한다고 여겨진다. 따라서, 양이온 결합은 세포외 백혈구 환경의 변화에 반응하는 조절성 작용기작일 수 있다. 이러한 가설은 칼슘 이온 결합이 실질적으로 ICAM-1과 LFA-1의 상호작용을 저해한다는 관찰결과에 의해 지지된다. 게다가, 불활성 LFA-1 입체구조는 칼슘 결합의 결과이며 칼슘이온이 망간 또는 마그네슘 이온으로 치환되는 것이 LFA-1 활성화에 필요한 단계라는 것이 제시되어왔다[Griggs,et al., J.Biol.Chem. 273:22113-22119(1998)]. 또한 다른 인자들이 T세포 수용체 관여, 사이토킨 자극 및 시험관내 PMA 자극을 포함한 LFA-1 활성화를 유도하는 것으로 나타났다.
실질적인 의미에서, LFA-1/ICAM 결합 부위의 규명은 백혈구 염증 반응을 조절하는 표적을 제공한다. LFA-1 활성화를 유도할 수 있는 다수의 항체들[예를들면, Landis,et al., J.Cell Biol. 120:1519-1527(1993) 참조] 또는 ICAM-1 상호작용을방해할 수 있는 다수의 항체들[예를들면, Randi and Hogg, J.Biol.Chem. 269:12395-12398(1994)]이 분리되었다. 항-LFA-1 활성화 항체가 다수의 그리고 구별되는 세포외 에피토프를 인식한다는 이전의 규명은 세포 신호전달과 무관한 것으로 여겨지는 하나이상의 조절성 영역이 존재한다는 것을 제시한다. ICAM-1과 결합하는 LFA-1 부위의 국부화는 사람 및 쥐 성분들을 포함하는 키메라 LFA-1 α서브유닛 단백질을 사용함으로써 조사되었다[Huang and Springer,J.Biol.Chem. 270:19008-19016(1995)]. 연구에 의하면, 양이온 결합을 조정하는 잔기 및 상기 부위에 인접한 잔기는 비교적 편평한 접촉면에서의 ICAM-1 결합에 중요하다고 한다. 세포외 조절성 영역(들) 및 ICAM-1 결합의 접촉점에 대한 더욱 정확한 설명에 의해 효과적인 모듈레이터를 고안할 수 있을 것이다.
따라서, 당업계에서는 염증 반응에 참여하는 단백질과, 특히 LFA-1 및 LFA-1에 결합하는 ICAM에 대한 조절성 영역을 정확하게 규명할 필요가 있다. 단백질의 삼차(또는 사차) 구조를 확인하면, 염증성 장애에 대한 치료적 및 예방적 조정을 하기 위한 생물학적으로 적합성있는 소분자를 논리적으로 고안하도록 하는 가능성있는 조절성 영역을 규명할 수 있다. 나아가, 당업계에서는 염증성 장애 치료에 사용될 수 있는, ICAM에 결합하는 LFA-1를 저해할 수 있는 화합물을 규명할 필요가 있다.
본 발명은 LFA-1가 천연 리간드 결합 파트너에 결합하는 것을 저해하는 신규의 화합물에 관한 것이다.
발명의 요약
본 발명은 LFA-1의 I 도메인에 있는 신규의 조절성 부위에 결합하여 LFA-1과결합하는 ICAM들에 LFA-1이 결합하는 것을 저해하는 화합물에 관한 것이다. 따라서, 본 발명은 내피세포로의 백혈구 접착을 조절하는 방법도 제공한다. 본 발명의 화합물은 염증성 질환, 자가면역 질환, 종양 전이, 동종이식 거부반응 및 리퍼퓨젼(reperfusion) 외상과 관련된 것 같은 병변을 치료하는데 유용하다. 특히, 본 발명은 일반 구조 화학식 1의 디아릴 설파이드, 이의 약학적 허용염, 또는 이의 프로드럭에 관한 것이며, LFA-1과 결합하는 ICAM에 LFA-1이 결합하는 것을 저해하는데 있어서 디아릴 설파이드와, 특히 화학식 1의 화합물의 용도에 관한 것이다.
여기서, A 및 B는 독립적이며, 비제한적으로 페닐, 티에닐, 푸릴, 피리미디닐, 이미다졸릴, 피라졸릴, 피리딜, 피라지닐, 피롤릴 및 피리다지닐을 포함하는 5원 방향족환 및 6원 방향족환으로 구성된 군에서 선택된 아릴기이고;
R1, R2및 R3은 독립적이며 수소, -Ra(이때, Ra는 수소 또는, 포화된 직쇄 또는 분지쇄의 1 내지 6개 탄소 원자를 함유하는 알킬기(C1-6알킬)임), -O-Ra, 할로(이때, 할로는 Cl, F, Br 또는 I임), -NRbRc(이때, Rb및 Rc은 독립적이며, H, C1-6알킬, 또는 -CH2-아릴 임), -NO2, -C(=O)Ra, -CN, 퍼플루오로 Ra(예, 트리플루오로메틸), -N-C(=O)Ra, -(CH2)n-NRbRc(이때 n은 1 내지 6의 정수), 모르폴리노와 같이 선택적으로 치환되고 하나이상의 O, N 또는 S를 함유하는 5원 또는 6원 헤테로시클릭 고리(지방족 또는 방향족) 및 -S-아릴(이때, 아릴은 5원 또는 6원 방향족환이며 선택적으로 치환됨)로 구성된 군에서 선택되고;
R4, R5및 R6은 독립적이며 수소, -Ra, -O-Ra, 할로, -NRbRc, -NO2, -C(=O)Ra, -CN, 퍼플루오로 Ra, -N-C(=O)Ra, -(CH2)n-NRbRc, 및 선택적으로 치환되고 하나이상의 O, N 또는 S를 함유하는 5원 또는 6원 헤테로시클릭 고리(지방족 또는 방향족) 및 -S-아릴로 구성된 군에서 선택되거나, 여기서 R4및 R5는 함께 5원 또는 6원 방향족 환을 형성하고 선택적으로 고리 내에 하나이상의 O, N 또는 S를 포함하고 선택적으로 치환됨.
ICAM으로의 LFA-1 결합에 대한 신규의 음성 조절인자의 예는 비제한적으로 표 1에 나타난 화합물을 포함한다.
[표 1]
전형적인 음성 조절인자
3-클로로-4-(2-클로로페닐설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드
4-니트로-2-클로로페닐-(2',3'-디클로로페닐)-설파이드
3-클로로-4-(2-나프틸설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드
3-클로로-4-(2,3-디클로로페닐설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드
3-클로로-4-(2,4,5-트리클로로페닐설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드
3-클로로-4-(2,4-디클로로페닐설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드
4-(벤조티아졸-2-일설파닐)-3-클로로-페닐아민
3-클로로-4-(1-클로로-나프탈렌-2-일설파닐)-페닐아민
3-메톡시-4-(2,3-디클로로페닐설파닐)-페닐아민
5-아미노-2-(2,3-디클로로페닐설파닐)-아세토페논 히드로클로라이드
4-(2,3-디클로로페닐설파닐)-페닐아민
3-클로로-4-(1-나프틸설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드
3-메틸-4-(2,4-디클로로페닐설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드
1-아세트아미도-3-클로로-4-(2,3-디클로로페닐설파닐)-벤젠
4-메틸아미노-2,2',4'-트리클로로디페닐설파이드
3-브로모-4-(2,4-디클로로페닐설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드
3-히드록시-4-(2,3-디클로로페닐설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드
6-클로로-5-(2,4-디클로로페닐설파닐)-1H-벤즈이미다졸
4-아미노-2-클로로페닐-(2' 4'-디메틸페닐)-설파이드 히드로클로라이드
2,5-디클로로-4-(2,4-디클로로페닐설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드
4-아미노-2-클로로페닐-(2'-메틸-4'-클로로페닐)-설파이드
4-아미노-2-클로로페닐-(2',4'-디플루오로페닐)-설파이드 히드로클로라이드
4-아미노-2-클로로페닐-(2',4',6'-트리클로로페닐)-설파이드
4-아미노-2-클로로페닐-(2'-아미노-4'-클로로페닐)-설파이드
4-아미노-2-클로로페닐-(2'-클로로-4'-니트로페닐)-설파이드
4-아미노-2-클로로페닐-(2'-니트로-4'-클로로페닐)-설파이드
4-아미노-2-클로로페닐-(3',4'-디클로로페닐)-설파이드
4-아미노-2-클로로페닐-2-(3-클로로-5-트리플루오로메틸피리딜)-설파이드
비스-(4,4'-디아미노-2,2'-디클로로페닐)-설파이드
4-아미노-2-클로로페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드
4-아미노-2-클로로페닐-(4'-아세트아미도-2'클로로페닐)-설파이드
4-아미노-2-클로로페닐-6-(5-니트로퀴놀리노)-설파이드
4-아미노-2-클로로페닐-(4'-디메틸아미노-2'-클로로페닐)-설파이드
2-클로로-4-아미노-5-메틸아미노페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드
2-클로로-4-아미노-5-N-모르폴리노페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드
4-아미노-2-트리플루오로메틸페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드
4-아미노-2-클로로페닐-2-(5-니트로-3-브로모)-피리딘 설파이드
4-아미노메틸-2-클로로페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드
4,5-디클로로-2-(2,4-디클로로페닐설파닐)-페닐아민
3,5-디클로로-4-(2,4-디클로로페닐설파닐)-페닐아민
2,3-디클로로-4-(2,4-디클로로페닐설파닐)-페닐아민
4-아미노-2-플루오로페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드
5-아미노-3-클로로페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드
3-클로로-4-(1-클로로-나프탈렌-2-일설파닐)-페닐아민
1-(3-니트로-4-페닐설파닐-페닐)-에타논
1-(3-니트로-4-페닐설파닐-페닐)-에타논 옥심
5-트리플루오로메틸-2-페닐설파닐-벤조니트릴
1-(3,5-디클로로페닐)-3-페닐설파닐-피롤리딘-2,5-디온
비스-2,4,6-트리니트로페닐-설파이드
2-메틸-1-(2-o-톨릴설파닐-페닐)-1H-피롤
3-[2-(4-클로로-2-니트로-페닐설파닐)-페닐아미노-3H-이소벤조푸란-1-온
4-(벤조티아졸-2-일설파닐)-3-클로로-페닐아민
2-니트로-4-클로로페닐-(2' 아미노페닐)-설파이드
6-아미노-2-클로로페닐-(4'-메틸페닐)-설파이드
4-니트로페닐-(2'-클로로페닐)-설파이드
2,4-디니트로페닐-(4'-클로로페닐)-설파이드
4-아미노페닐-(2'-클로로페닐)-설파이드
2,4-디아미노페닐-(4'-이소프로필페닐)-설파이드
4-니트로-2-클로로페닐-(2',3'-디클로로페닐)-설파이드
4-아미노-2-클로로페닐-2-(5-니트로-3-브로모)-피리딘-설파이드
구조 화학식 1에 의해 표시되는 화합물은 합성 방법 또는 대사과정에 의해 제조될 수 있다. 대사과정에 의한 화합물의 제조는 생체내 및 시험관내 과정을 포함한다. 또한, 본 발명의 화합물을 포함하는 약학적 조성물도 포함된다.
또한, 본 발명은 디아릴 설파이드, 특히 구조 화학식 1의 화합물과 LFA-1를 접촉시키는 단계를 포함하여 LFA-1과 결합하는 ICAM으로의 LFA-1 결합을 저해하는 방법을 제공한다. 마찬가지로, 본 발명은 디아릴 설파이드, 특히 구조 화학식 1의화합물과 LFA-1를 발현하는 백혈구를 접촉시키는 단계를 포함하여 내피세포에 백혈구 접착을 저해하는 방법을 제공한다. 또한, 본 발명은 LFA-1과의 결합에 대해 ICAM-1 또는 ICAM-3과 경쟁하는 LFA-1의 천연 리간드에 LFA-1의 결합을 저해하기에 충분한 함유량으로 본 발명의 약학적 조성물을 포유류에게 투여하는 단계를 포함하여 염증성 장애를 치료하는 방법을 포함한다. 또한, 본 발명은 LFA-1과의 결합에 대해 ICAM-1 또는 ICAM-3과 경쟁하는 LFA-1의 천연 리간드에 LFA-1이 결합함으로써 야기되는 염증성 장애를 치료하는 방법으로서, LFA-1에 천연 리간드의 결합을 저해하기에 충분한 함유량으로 LFA-1과의 결합에 대해 3-클로로-4-(1-클로로-나프탈렌-2-일설파닐)-페닐아민과 경쟁하는 화합물을 필요한 포유류에 투여하는 단계를 포함하는 방법을 포함한다. 게다가, 본 발명은 ICAM으로의 LFA-1 결합을 저해하는 디아릴 설파이드, 특히 구조 화학식 1의 화합물을 유효량으로 필요한 개체에 투여하는 단계를 포함하여 LFA-1에 결합하는 ICAM으로의 LFA-1 결합과 관련있는 병리학적 상태를 개선시키는 방법을 제공한다.
본 발명의 저해제의 예는 비제한적으로 표 1에 나열한 화합물을 포함한다.
또한, 본 발명은 ICAM-1으로의 LFA-1 결합과 관련된 병변을 치료하는 의약을 생산하는데 있어서 본 발명의 화합물의 용도를 제공한다.
또한, 본 발명은 LFA-1과의 결합에 대해 ICAM-1 또는 ICAM-3과 경쟁하는 LFA-1의 천연 리간드와의 LFA-1의 결합에 대한 음성 조절인자를 규명하는 방법으로서, a) LFA-1 결합의 활성인자와 LFA-1를 접촉시키는 단계; b) 시험 화합물의 존재 및 부재 하에 천연 리간드와의 LFA-1 결합을 측정하는 단계; 및 c) 시험 화합물의존재하에 리간드와 LFA-1 결합이 감소된 것이 검출될 때 저해제로서 시험 화합물을 확인하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 일면에서 활성인자는 크리스탈 바이올렛이다.
본 발명의 상세한 설명
화합물에 대한 IC50값은 관심있는 생물학적 활성을 50% 저해하는데 필요한 화합물의 농도로서 정의된다. 본 명세서에서 음성 조절인자는 LFA-1과 천연 리간드의 결합을 저해하는 IC50로 특징지워진 화합물로서 정의된다. LFA-1 결합의 음성 조절인자는 IC50이 약 200μM 이하, 약 100 μM 이하, 약 50 μM이하, 그리고 바람직하게는 0.05 μM 내지 40 μM인 것으로 정의된다.
본 명세서에서 "약학적으로 허용가능한 캐리어"는 수용체 동물과 접촉하는 경우 사용하기에 적절하며, 적절한 잇점/위험의 비율에 상응하는 부적절한 독성, 과민상태, 알러지 반응을 갖으며, 목적하는 용도에 효과적인 본 발명의 화합물의 프로드럭을 지칭한다.
본 명세서에서 "프로드럭"은 예를들면 가수분해에 의해 상기 화학식의 모(母)화합물로 신속하게 생체내 변형되는 화합물을 지칭한다. 문헌[Higuchi,et al, Prodrugs as Novel Delivery Systems, vol. 14 of the A.C.S.D Symposium Series, 본 명세서에 인용됨] 및 문헌[Roche(ed),Bioreversible Carriers in Drug Design,American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987, 본 명세서에 인용됨]에 면밀히 검토되어 있다. 프로드럭 고안은 문헌[Hardma,et al.,(Eds),Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics,Ninth Edition, New York, New York(1996), pp11-16]에 일반적으로 검토되어 있다. 간단히 말하자면, 약물이 투여되면 신체로부터 제거되거나 약물의 생물학적 활성이 감소 또는 제거되는 생물학적 변형이 일어난다. 대신, 생물학적 변형 과정은 처음 투여된 약물과 비교할 때 더 활성적이거나 동등한 활성을 갖는 대사 부산물을 생성시킬 수도 있다. 이러한 생물학적 변형 과정을 더 잘 이해할수록, 생물학적 변형 이후 변형된 상태에서 더욱 생리학적으로 활성이 되는 소위 "프로드럭"을 고안할 수 있다. 따라서, 프로드럭은 생물학적으로 활성인 대사물로 전환되는 생리학적으로 불활성인 화합물이다. 몇몇 형태의 경우, 프로드럭은 예를들면 에스테르 또는 아미드 결합의 가수분해를 통해 생리학적으로 활성이 되며, 가수분해는 종종 프로드럭 상에 작용기를 도입 또는 노출시킨다. 따라서, 수정된 약물도 내인성 화합물과 반응하여, 예를들어 순환 반감기가 증가된 결과 화합물의 약리학적 특성을 더 증가시키는 수용성 접합체를 형성할 수 있다.
또다른 대안으로, 프로드럭을 고안하여 예를들어 글루쿠론산, 황산, 글루타티온, 아미노산 또는 아세테이트로 작용기를 공유결합으로 수정하도록 할 수 있다. 결과로 생긴 접합체는 불활성화되며 뇨로 분비되거나 모 화합물보다 더욱 강력하게 된다. 또한, 고분자량의 접합체는 담즙으로 분비되어 효소에 의해 절단되고 순환으로 다시 방출되어 원래 투여된 화합물의 생물학적 반감기가 효과적으로 증가될 수 있다.
본 발명의 화합물은 비대칭 또는 키랄성 중심이 존재하는 입체이성질체로서존재할 수 있다. 입체이성질체는 키랄성 탄소 원자 주위의 치환기의 배치에 따라 "S" 또는 "R"에 의해 명명된다. 입체이성질체의 혼합물은 본 발명에 포함된다. 입체이성질체는 거울상이성질체, 부분입체이성질체 및 이들 둘의 혼합물을 포함한다. 본 발명의 화합물의 개별적인 입체이성질체는 비대칭 또는 키랄성 중심을 함유하는 상업적으로 구입가능한 출발물질로부터 합성할 수 있거나 라세미 혼합물을 준비한 후 당업계에 잘 알려진 분리 또는 분해 기법에 의해 준비될 수 있다. 분해 방법은 (1) 키랄성 보조물로의 거울상이성질체 혼합물 부착, 재결정 또는 크로마토그래피에 의한 생성된 혼합물의 분리, 및 보조물로부터 광학적으로 순수한 생성물의 방출; (2) 광학적으로 활성인 분해 반응제(resolving agent)를 사용한 염 형성, 및 (3) 키랄성 크로마토그래피 컬럼 상에서의 광학적 거울상이성질체 혼합물의 직접적인 분리를 포함한다.
본 발명의 화합물은 비제한적으로 상기 일반 구조 화학식 1에 의해 포함되는 것 및 표 1에 나열된 화합물을 포함한다.
또한, 본 발명은 하나이상의 본 발명의 화합물을 포함하는 약학적 조성물을 제공하며, 약학적으로 허용가능한 캐리어 또는 희석제를 더 포함하는 것이 바람직하다.
나아가, 본 발명은 LFA-1 또는 이의 ICAM-결합 단편을 음성 조절인자 화합물과 접촉시키는 단계를 포함하여, LFA-1과 결합하는 ICAM에 LFA-1이 결합하는 것을 저해하는 방법을 제공한다. 여기서 상기 음성 조절인자는, 디아릴 설파이드에 결합하는 입체구조 또는 사람 LFA-1 αL폴리펩티드의 Ile259, Leu298, Ile235, Val157, Leu161및 Ile306에 의해 정의된 결합 부위로 구성된 군에서 선택된 부위에서 그리고 상술한 구조를 갖는 3-클로로-4-(1-클로로-나프탈렌-2-일설파닐)-페닐아민에 결합하는 LFA-1 도메인에서 LFA-1 αL폴리펩티드, 또는 이의 단편과 결합한다. 대안으로, LFA-1 상의 음성 조절인자 결합 부위는 아미노산 잔기 Ile259, Leu298, Ile235, Val157, Leu161, Ile306, Leu302, Tyr257, Leu132, Val233, Val130및 Tyr166에 의해 정의된다. 또다른 대안으로, LFA-1 상의 음성 조절인자 결합 부위는 아미노산 잔기 Lys287, Leu298, Ile259, Leu302, Ile235, Val157, Tyr257, Lys305, Leu161, Leu132, Val233, Ile255, Val130, Tyr166, Ile306, Phe134, Phe168, Phe153, Tyr307, Val308, Ile309, Thr231, Glu284, Phe285, Glu301, Met154, Ile237, Ile150, 및 Leu295에 의해 정의된다. LFA-1 조절성 결합 부위는 함께 출원중인 미국 특허 출원[제목 "LFA-1 조절성 결합 부위 및 이의 용도, 1999. 4. 2. 출원, 대리인 명부 번호 27866/35375, 일련번호 09/285,477, 본 명세서에 그 전체가 인용됨]에 기재되어 있다. 일 구체예에서, 본 발명의 방법은 LFA-1 또는 ICAM을 발현하는 세포의 사용을 포함한다. 결합 파트너 중 하나가 세포에서 발현되는 방법에서, 또다른 결합 파트너는 개체로부터 취출한 액상 시료(정제되거나 부분적으로 정제되거나 정제되지 않은 것임)에서 또는 세포 용해물에서 정제 및 분리된다. 또한, 본 발명은 LFA-1 및 ICAM가 모두 세포에서 발현되는 방법을 포함한다. LFA-1 및 ICAM 결합 파트너는 동일한 세포 유형 또는 상이한 세포 유형에서 발현될 수 있다. 바람직하게는 LFA-1 폴리펩티드는 백혈구 즉, 림프구, 단핵구 또는 과립구에서 발현되고 ICAM 폴리펩티드는 내피세포에서 발현된다.
또한 본 발명은 내피세포로의 백혈구 접착을 저해하는 방법으로서, LFA-1에 결합하는 ICAM와의 LFA-1 결합의 음성 조절인자와 상기 백혈구를 접촉시키는 단계를 포함하며, 상기 음성 조절인자가 디아릴 설파이드에 결합하는 입체구조 또는 사람 LFA-1 αL폴리펩티드의 Ile259, Leu298, Ile235, Val157, Leu161및 Ile306에 의해 정의된 결합 부위로 구성된 군에서 선택된 LFA-1 조절성 부위 또는 3-클로로-4-(1-클로로-나프탈렌-2-일설파닐)-페닐아민에 결합하는 LFA-1 도메인에서 결합하는 것을 특징으로 하는 방법을 제공한다. 대안으로, 디아릴 설파이드 결합 입체구조는 상술한 바와 같은 아미노산 잔기에 의해 정의된다. 생체내 및 시험관내 방법이 포함된다.
또한, 본 발명은 ICAM와의 LFA-1의 결합에 의해 발생하는 병변을 개선하는 방법으로서, ICAM에 결합하는 LFA-1의 음성 조절인자를 ICAM와의 LFA-1 결합을 저해하기에 유효한 함유량으로 필요한 개체에 투여하는 단계를 포함하며, 상기 음성 조절인자는 디아릴 설파이드에 결합하는 입체구조 또는 사람 LFA-1의 Ile259, Leu298, Ile235, Val157, Leu161및 Ile306에 의해 정의된 결합 부위로 구성된 군에서 선택된 LFA-1 조절성 부위 또는 3-클로로-4-(1-클로로-나프탈렌-2-일설파닐)-페닐아민에 결합하는 LFA-1 도메인에 결합하는 것을 특징으로 하는 방법을 제공한다.
바람직한 구체예에서, 본 발명의 방법은 ICAM와의 LFA-1 결합을 저해하는 디아릴 설파이드 화합물의 사용을 포함한다. 바람직한 방법은 상기 언급한 바와 같이 일반 구조 화학식 1의 화합물, 이의 약학적 허용염 또는 프로드럭의 사용을 포함한다.
치료 방법
내피세포와의 백혈구 접착이 병리학적 장애를 일으키는 정도만큼, 본 발명은 LFA-1에 결합하는 ICAM와의 LFA-1 결합의 결과인 백혈구 축적과 관련있는 병변을 개선하는 방법으로서, ICAM와의 LFA-1 결합의 저해제를 ICAM와의 LFA-1 결합을 저해하기에 유효한 함유량으로 필요한 개체에 투여하는 단계를 포함하며, 상기 저해제는 아미노산 잔기 Ile259, Leu298, Ile235, Val157, Leu161및 Ile306에 의해 나타나는 부위에서 LFA-1과 결합하는 것을 특징으로 하는 방법을 제공한다. 전형적인 의학 상태는 비제한적으로, 염증성 질환, 자가면역 질환, 리퍼퓨젼 외상, 심근 경색증, 졸증, 출혈성 쇼크, 기관 이식 등을 포함한다. 본 발명의 방법은 예컨대, 성인 호흡 장애 증후군, 폐혈증에 부수적인 다발성 기관 상해 증후군, 외상에 부수적인 다발성 기관 상해; 조직의 리퍼퓨젼 상해, 급성 사구체신염, 반응성 관절염, 급성 염증 성분을 갖는 피부병, 졸증, 화상, 크론병(Crohn's disease); 괴사성 소장결장염, 과립구 수혈 관련 증후군, 및 사이토킨 유도성 독성 및 T세포 매개성 질환을 비롯한 다양한 병변을 개선하기 위해 제공된다.
염증성 세포 활성화 및 과도하거나 조절되지 않은 사이토킨(예, TNFα 및 IL-1β)생산은, 류마티스성 관절염, 고관절염, 통풍성 관절염, 척추염, 갑상선 관련 안과장애(ophthalmopathy), 베세트(Behcet)병, 패혈증, 패혈성 쇼크, 내독성 쇼크, 그램 음성 패혈증, 그램 양성 페혈증, 독성 쇼크 증후군, 천식, 만성 기관지염, 알러지성 호흡 장애 증후군, 만성 폐 염증성 질환(예, 만성 저해 폐 질환, 규폐증, 폐 사르코이드증, 심근, 뇌 및 사지의 리퍼퓨전 상해, 섬유증, 낭포성 섬유증, 켈로이드 형성, 상처 형성, 아테롬성 동맥경화증, 이식 거부 장애(예, 이식대숙주 반응 동종이식 거부반응), 만성 사구체신염, 낭창, 염증성 장 질환(예, 궤양성 대장염), 증식성 림프구 질환(예, 백혈병) 및 염증성 피부병(예, 아토피 피부병, 건선, 두드러기, 포도막염)과 같은 장애와도 연루되어 있다.
사이토킨이 상승된 것이 특징인 기타 상태는 온화한 외상에 의한 뇌 상해(J.Neurotrauma, 12, pp.1033-1043(1995) 참조), 심근증(예, 울혈성 심장 장애(Circulation, 97,pp.1340-1341(1998)) 참조), 악액질, 감염 또는 악성 종양에 부수적인 악액질, 후천성 면역결핍증후군(AIDS)에 부수적인 악액질, ARC(AIDS 관련 증후군), 감염에 의한 근통열, 뇌성 말라리아, 골다공증 및 골흡수질환, 켈로이드 형성, 반흔 조직 형성 및 발열을 포함한다.
본 발명의 음성 조절인자가 관절염을 치료하는 능력은 쥐 콜라겐-유도성 관절염 모델[Kakimoto,et al., Immunol. 142:326-337(1992)], 래트 콜라겐-유도성 관절염 모델[Knoerzer,et al., Toxical Pathol. 25:13-19(1997)], 래트 아쥬반트 관절염 모델[Halloran,et al., Arthritis Rheum 39:810-819(1996)], 래트 연쇄상구균성 세포벽-유도성 관절염 모델[Schimmer,et al., J.Immunol. 160:1466-1477(1998)] 또는 SCID-마우스 사람 류마티스성 관절염 모델[Oppenheimer-Marks,et al., J. Clin Invest 101:1261-1272(1998)]에서 확인될 수 있다.
음성 조절인자가 라임(Lyme) 관절염을 치료하는 능력은 문헌[Gross,et al., Science, 218:703-706(1998)]의 방법에 따라 확인될 수 있다.
음성 조절인자가 천식을 치료하는 능력은 문헌[Wegner,et al., Science, 247:456-459,(1990)]의 방법에 따른 쥐 알러지성 천식 모델, 또는 문헌[Bloemen,et al., Am.J.Respir.Crit.Care Med. 153:521-529(1996)]의 방법에 따른 쥐 비알러지성 천식 모델에서 확인될 수 있다.
음성 조절인자가 염증성 폐 상해를 치료하는 능력은 문헌[Wegner,et al., Lung, 170:267-279(1992)]의 방법에 따른 쥐 산소-유도성 폐 상해 모델, 문헌[Mulligan,et al., J.Immunol., 154:1350-1363(1995)]의 방법에 따른 쥐 면역 복합체-유도성 폐 상해 모델, 또는 문헌[Nagase,et al.,Am.J.Respir.Crit.Care Ned., 154:504-510(1996)]의 방법에 따른 쥐 산-유도성 폐 상해 모델에서 확인될 수 있다.
음성 조절인자가 염증성 장 질환을 치료하는 능력은 문헌[Bennett,et al.,J.Pharmacol.Exp.Ther., 280:988-1000(1997)]의 방법에 따른 쥐 화학물질-유도성 대장염 모델에서 확인될 수 있다.
음성 조절인자가 자가면역 당뇨병을 치료하는 능력은 문헌[Hasagawa,et al., Int. Immunol. 6:831-838(1994)]의 방법에 따른 NOD 마우스 모델 또는문헌[Herrold,et al., Cell Immunol. 157:489-500(1994)]의 방법에 따른 쥐 스트렙토조토신-유도성 당뇨병에서 확인될 수 있다.
음성 조절인자가 염증성 간 상해를 치료하는 능력은 문헌[Tanaka, et al., J.Immunol., 151:5088-5095(1993)]의 방법에 따른 쥐 간 상해 모델에서 확인될 수 있다.
음성 조절인자가 염증성 사구체 상해를 치료하는 능력은 문헌[Kawasaki,et al., J.Immunol., 151:1074-1083(1993)]의 방법에 따른 래트 신독성 혈청 신염 모델에서 확인될 수 있다.
음성 조절인자가 방사선-유도성 장염을 치료하는 능력은 문헌[Panes,et al., Gastroenterology, 108:1761-1769(1995)]의 방법에 따른 래트 복부 과민상태 모델에서 확인될 수 있다.
음성 조절인자가 방사선 폐렴을 치료하는 능력은 문헌[Hallahan,et al., Proc. Natl. Acad. Sci(USA), 94:6432-6437(1997)]의 방법에 따른 쥐 폐 과민상태 모델에서 확인될 수 있다.
음성 조절인자가 리퍼퓨젼 상해를 치료하는 능력은 문헌[Tamiya,et al., Immunopharmacology, 29:53-63(1995)]의 방법에 따른 분리된 심장 또는 문헌[Hartman,et al, Cardiovasc. Res. 30:47-54(1995)]의 모델에 따른 마취된 개에서 확인될 수 있다.
음성 조절인자가 폐 리퍼퓨젼 상해를 치료하는 능력은 문헌[DeMeester,et al., Transplantation, 62:1477-1485(1996)]의 방법에 따른 래트 폐 동종이식 리퍼퓨젼 상해 모델 또는 문헌[Horgan,et al., Am.J.Physiol. 261:H1578-H1584(1991)]의 모델에 따른 토끼 폐 부종 모델에서 확인될 수 있다.
음성 조절인자가 졸증을 치료하는 능력은 문헌[Bowes,et al., Exp. Neurol., 119:215-219(1993)]의 방법에 따른 토끼 뇌 색전증 졸증 모델 또는 문헌[Chopp,et al., Stroke, 25:869-875(1994)]의 방법에 따른 래트 중뇌 동맥 허혈-리퍼퓨젼 모델, 또는 문헌[Clarket al., Neurosurg., 75:623-627(1991)]의 방법에 따른 토끼 가역 척수 허혈 모델에서 확인될 수 있다. 음성 조절인자가 뇌 혈관경련을 치료하는 능력은 문헌[Oshiro,et al., Stroke, 28:2031-2038(1997)]의 방법에 따른 쥐 실험용 혈관경련 모델에서 확인될 수 있다.
음성 조절인자가 말초 동맥 폐색을 치료하는 능력은 문헌[Gute,et al., Mol. Cell Biochem., 179:169-187(1998)]의 방법에 따른 래트 골격근 허혈/리퍼퓨젼 모델에서 확인될 수 있다.
음성 조절인자가 이식 거부반응을 치료하는 능력은 문헌[Isobe,et al., Science, 255:1125-1127(1992)]의 방법에 따른 쥐 심장 동종이식 거부반응 모델 또는 문헌[Talento,et al., Transplanation, 55:418-422(1993)]의 방법에 따른 쥐 갑상선 신장 피막 모델, 문헌[Cosimi,et al., J.Immunol., 144:4604-4612(1990)]의 방법에 따른 사이노몰거스(cynomolgus) 원숭이 신장 동종이식 모델, 문헌[Nakao,et al., Muscle Nerve, 18:93-102(1995)]의 방법에 따른 래트 신경 동종이식 모델, 문헌[Gorczynski and Wojcik,J.Immunol. 152:2011-2019(1994)]의 방법에 따른 쥐 피부 동종이식 모델, 문헌[He,et al., Opthalmol. Vis. Sci.,35:3218-3225(1994)]의 방법에 따른 쥐 각막 동종이식 모델, 또는 문헌[Zeng,et al., Transplantation, 58:681-689(1994)]의 방법에 따른 이종발생 췌장도 세포 이식 모델에서 확인될 수 있다.
음성 조절인자가 이식 대 숙주 질환(GVHD)을 치료하는 능력은 문헌[Harning,et al., Transplantation, 52:842-845(1991)]의 방법에 따른 쥐 치사 GVHD 모델에서 확인될 수 있다.
음성 조절인자가 암을 치료하는 능력은 문헌[Aoudjit,et al., J.Immunol., 161:2333-2338(1998)]의 방법에 따른 사람 림프종 전이 모델(마우스)에서 확인될 수 있다.
약학적 조성물
또한, 본 발명은 하나이상의 약학적 허용 캐리어와 함께 제제화된 디아릴 설파이드를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 약학적 조성물은 사람 및 기타 동물에게 임의의 적절한 경로로 투여할 수 있다. 예컨대, 조성물은 경구적으로, 직장으로, 비경구적으로, 조내로(intracisternally), 질내로, 복막내로, 국부적으로(분말, 연고, 점적제에 의해), 구강으로, 코로 투여될 수 있다. 본 명세서에서 "비경구적" 투여는 정맥내, 동맥내, 근육내, 복막내, 흉골내, 포막내, 피하 및 관절내 주사/주입을 포함하는 투여 형식을 지칭한다.
비경구적으로 주사하기 위한 본 발명의 약학적 조성물은 약학적으로 허용가능한 멸균 수용액 또는 비수용액, 분산액, 서스펜젼 또는 에멀젼 뿐만아니라, 사용직전에 멸균 주사 용액 또는 분산액으로 재구성하기 위한 멸균 분말을 포함한다. 적절한 수성 및 비수성 캐리어, 희석제, 용매 또는 부형제의 예는 물, 에탄올, 폴리올(예, 글리세롤, 프로필렌, 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 등), 이들의 적절한 혼합물, 식물유(예, 올리브유) 및 주사가능한 유기 에스테르(예, 에틸 올레이트)를 포함한다. 레시틴 같은 피복 물질의 사용, 분산의 경우 필요한 입자 크기의 유지 및 계면활성제의 사용에 의해 적당한 유동성을 유지시킬 수 있다.
또한, 본 발명의 조성물은 보존제, 습윤제, 에멀젼화제 및 분산제와 같은 보강제를 함유할 수 있다. 각종 항균제 및 항진균제(예, 파라벤, 클로로부탄올, 페놀 소르브산 등)를 함유시킴으로써 미생물의 활동을 예방할 수 있다. 또한, 등장제(예, 설탕, 염화나트륨 등)를 포함하는 것이 바람직할 수 있다. 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴 같이 흡수를 지연시키는 제제를 함유시킴으로써 주사가능한 약학적 형태의 흡수를 연장시킬 수 있다.
몇몇 경우, 약물의 효과를 연장시키기 위해, 피하주사 또는 근육내주사로부터 약물의 흡수를 느리게 하는 것이 바람직할 수 있다. 이는 낮은 수용성을 갖는 결정질 또는 무정형 물질의 액상 서스펜젼을 사용함으로써 달성될 수 있다. 이어서, 약물의 흡수 속도는 차례로 결정 크기 및 결정질 형태에 좌우될 수 있는 분해 속도에 달려있다. 대안으로, 오일 부형제 내에 약물을 용해 또는 현탁시킴으로써 비경구적으로 투여된 약물 흡수를 지연시킬 수 있다.
생체분해가능한 폴리머(예, 폴리액티드-폴리콜리드) 내에 약물의 미세캡슐화 매트릭스를 형성시킴으로써, 주사가능한 저류물 형태를 제조한다. 약물 대 폴리머의 비율 및 사용되는 특정 폴리머의 특성에 따라, 약물 방출 속도를 제어할 수 있다. 기타 생체분해가능한 폴리머의 예에는 폴리(오르토에스테르) 및 폴리(안히드리드)를 포함한다. 저류물 주사 제제는 신체 조직과 상용성 있는 리포좀 또는 마이크로에멀젼 내에 약물을 포획함으로써 제조된다.
주사 제제는 세균 또는 바이러스 보유 필터를 통해 여과시키거나 사용직전에 멸균수 또는 기타 멸균 주사 매질 내 용해 또는 분산시킬 수 있는 멸균 고형 조성물의 형태로 멸균제를 혼입시킴으로써 멸균될 수 있다.
경구 투여의 고형 복용 형식은 캡슐, 정제, 알약, 분말 및 과립을 포함한다. 이러한 고형 복용 형식에서, 활성 화합물은 하나이상의 불활성 약학적 허용 부형제 또는 캐리어(나트륨 시트레이트 또는 인산이칼슘 및/또는 (a) 충전재 또는 증량제(예, 전분, 락토즈, 수크로즈, 글루코즈, 만니톨 및 실릭산, (b) 결합제(예, 카르복시메틸셀룰로즈, 검(예, 알지네이트, 아카시아) 젤라틴, 폴리비닐피롤리돈 및 수크로즈), (c) 습윤제(humectant, 예, 글리세롤), (d) 붕해제(예, 아가-아가, 탄산칼슘, 감자 또는 타피오카 전분, 알긴산, 몇몇 실리케이트 및 탄산나트륨, (e) 용액 지연제(예, 파라핀), (f) 흡수가속제(예, 4차 암모늄 화합물), (g) 습윤제(wetting agent, 예, 세틸 알콜 및 글리세롤 모노스테아레이트), (h) 흡수제(예, 카올린 및 벤토나이트 점토) 및 (i) 윤활제(예, 탈크, 칼슘 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 고체 폴리에틸렌 글리콜, 나트륨 라우릴 설페이트 및 이들의 혼합물)와 함께 혼합된다. 캡슐, 정제 및 알약에서, 복용형식은 또한 완충제를 함유할 수 있다.
또한, 유사한 유형의 고형 조성물은 락토즈 또는 우유당과 같은 부형제뿐만아니라 고분자량 폴레에틸렌 글리콜 등을 사용함으로써 연질 및 경질-충전된 젤라틴 캡슐 내 충전재로 사용될 수 있다.
정제, 드라제, 캡슐, 알약 및 과립의 고형 복용 형식은 약학 제제 업계에 잘 알려진 장 피막 및 기타 피막과 같은 피막 및 쉘로 제조될 수 있다. 이들은 선택적으로 불투명제를 함유할 수 있으며, 또한 장관의 일부에서, 선택적으로 서방형으로, 오직 활성 성분만을 또는 활성 성분을 우선적으로 방출하는 조성물일 수 있다. 전형적인 물질은 pH 민감성 용해성을 갖는 폴리머 물질(예, Eudragit 상표명으로 구입가능한 물질)을 포함한다. 사용될 수 있는 충전 조성물의 예는 폴리머 물질 및 왁스를 포함한다.
또한, 활성 화합물은, 적절한 경우 하나 이상의 상기 부형제를 갖는 마이크로캡슐화 형식일 수 있다.
경구 투여용 액상 복용 형식은 약학적 허용 에멀젼, 용액, 서스펜젼, 시럽 및 엘릭서를 포함한다. 활성 화합물에 부가하여, 액상 복용 형식은 당업계에 통상 사용되는 불활성 희석제(예, 물, 기타 용매), 용매화제 및 에멀젼화제(예, 에틸 알콜, 이소프로필 알콜, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알콜, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸렌 글리콜, 디메틸 포름아미드, 오일(특히, 면실, 그라운넛(groundnut), 옥수수, 씨, 올리브, 캐스토르 및 참깨유), 글리세롤, 테트라히드로퍼푸릴 알콜, 폴리에틸렌 글리콜 및 소르비탄의 지방산 에스테르, 및 이들의 혼합물)을 함유할 수 있다.
불활성 희석제 외에, 경구 조성물은 또한 습윤제, 에멀젼화제 및 서스펜젼화제, 감미료, 향신료 및 향료제와 같은 보강제를 포함할 수 있다.
활성 성분 외에 서스펜젼은 에톡실화된 이소스테아릴 알콜, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 및 소르비탄 에스테르, 미세결정질 셀룰로오즈, 알루미늄 메타히드록사이드, 벤토나이트, 아가-아가 및 트래거캔스, 및 이들의 혼합물 같은 현탁제를 함유할 수 있다.
직장 또는 질 투여용 조성물은 본 발명의 화합물을 적당한 비자극성 부형제 또는 캐리어(예, 코코아 버터, 폴리에틸렌 글리콜 또는 또는 좌약 왁스)와 혼합함으로써 준비될 수 있는 좌약이 바람직하며, 상기 부형제 또는 캐리어는 실온에서 고형이나 신체온도에서 액상인 것으로 직장 또는 질 공동에서 용해되어 활성 성분을 방출한다.
또한, 본 발명의 화합물은 리포좀의 형식으로 투여될 수 있다. 당업계에 알려진 바와 같이, 리포좀은 통상 인지질 또는 기타 지질 물질로부터 유도된다. 수성 매질에 분산되어 있는 단일- 또는 다중-라멜라 수화된 액상 결정에 의해 형성된다. 임의의 비독성, 생리학적으로 허용가능하고 대사가능한 지질로서 리포좀을 형성할 수 있는 것을 사용할 수 있다. 리포좀 형식의 본 발명의 조성물은, 본 발명의 화합물 외에, 안정화제, 보존제, 부형제 등을 함유할 수 있다. 바람직한 지질은 인지질 및 포스파티딜 콜린(레시틴)이며, 천연 지질 또는 합성 지질일 수 있다. 리포좀을 형성시키는 방법은 당업계에 잘 알려져 있다. 문헌[Prescott, Ed.,Methods in Cell Biology, Volume XIV, Academic Press, New York, N.Y.(1976), p33 et seq]을 참조하라.
본 발명의 화합물은 무기산 또는 유기산 유래의 약학적 허용염의 형식으로 사용될 수 있다. "약학적 허용염"은 의약적 판단의 범위 내에서 사람의 조직 및 하등 동물과 접촉시 과도한 독성, 과민상태, 알러지성 반응 등 없이 사용하기에 적절하고 적절한 잇점/위험 비율로 균형잡힌 염을 의미한다. 약학적 허용염은 당업계에 잘 알려져 있다. 예컨대, 문헌[S.M.Berge,et al., J. Pharmaceutical Science, 66:1(1977)]에는 약학적 허용염이 자세히 설명되어 있다. 염은 본 발명의 화합물을 최종 분리 및 정제하는 동안 바로 그자리에서 제조될 수 있거나, 적절한 산과 유리 염기 작용을 반응시킴으로써 별개로 제조될 수 있다. 대표적인 산 부가 염은 비제한적으로 아세테이트, 아디페이트, 알지네이트, 시트레이트, 아스파르테이트, 벤조에이트, 벤젠설포네이트, 비설페이트, 부티레이트, 캠포레이트, 캠포로설포네이트, 디글루코네이트, 글리세로포스페이트, 헤미설페이트, 헵타노에이트, 헥사노에이트, 푸마레이트 히드로클로라이드, 히드로브로마이드, 히드로아이오다이드, 2-히드록시에탄설포네이트(이소티오네이트), 락테이트, 말리에이트, 메탄설포네이트, 니코티네이트, 2-나프탈렌설포네이트, 옥살레이트, 파모에이트, 펙티네이트, 퍼설페이트, 3-페닐프로피오네이트, 피크레이트, 피발레이트, 프로피오네이트, 숙시네이트, 타르트레이트, 티오시아네이트, 포스페이트, 글루타메이트, 비카르보네이트, p-톨로엔설포네이트 및 운데카노에이트를 포함한다. 약학적 허용 산 부가 염을 형성하는데 사용될 수 있는 산의 예에는 염산, 브롬화수소산, 황산 및 인산과 같은 무기산 및 옥살산, 말레산, 숙신산 및 시트르산과 같은 유기산을 포함한다.
염기성 질소-함유 기는 메틸, 에틸, 프로필 및 부틸 클로라이드, 브로마이드, 및 요오다이드와 같은 저급 알킬 할로겐화물; 디메틸, 디에틸, 디부틸 및 디아밀 설페이트와 같은 디알킬 설페이트; 데실, 라우릴, 미리스틸 및 스테아릴 클로라이드, 브로마이드 및 아이오다이드 같은 장쇄 할로겐화물; 벤질 및 페네틸 브로마니드와 같은 아릴알킬 할로겐화물 등과 같은 화학제로 사차화(quaternized)된다. 이로인해 물 또는 오일-가용성 또는 분산성 생성물이 수득된다.
염기성 부가 염은 약학적 허용 금속 양이온의 수산화물, 탄산염 또는 중탄산염 같은 적절한 염기와, 또는 암모니아 또는 유기 제1차, 제2차 또는 제3차 아민과 카르복실산 함유 부분을 반응시킴으로써 본 발명의 화합물을 최종 분리 및 정제하는 동안 바로 그 자리에서 제조할 수 있다. 약학적 허용 염기 부가 염은 비제한적으로 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속(예, 리듐, 나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그네슘 및 알루미늄 염 등)계 양이온, 비독성 제3차 암모니아 및 아민 양이온(예, 암모늄, 테트라메틸암모늄, 테트라에틸암모늄, 메틸아민, 디메틸아민, 트리메틸아민, 트리에틸아민, 디에틸아민, 에틸아민 등)을 포함한다. 염기 부가 염을 형성하는데 유용한 기타 대표적인 유기 아민은 에틸렌디아민, 에탄올아민, 디에탄올아민, 피페리딘, 피페라진 등을 포함한다.
본 발명의 화합물의 국부적 투여용 복용 형식은 분말, 스프레이, 연고, 흡입제를 포함한다. 활성 화합물은 멸균 조건하에 약학적 허용 캐리어 및 임의의 필요한 보존제, 완충제, 또는 필요할 수 있는 분사제와 혼합된다. 안과용 제제, 눈 연고, 분말 및 용액도 본 발명의 범위에 포함된다.
본 발명의 약학적 조성물 내에서 활성 성분의 실질적인 용량 수준은 특정 환자의 바람직한 치료적 반응을 얻는데 유효한 활성 성분의 함유량, 조성 및 투여 방식을 얻기 위해 다양할 수 있다. 선택된 용량 수준은 특정 화합물의 활성, 투여 경로, 치료하고자 하는 상태의 심각성 및 치료대상의 환자의 상태 및 이전 병력에 좌우될 것이다. 그러나, 당업자는 원하는 치료 효과를 얻기 위해 필요한 것보다 더 낮은 수준으로 화합물 복용을 시작하여 원하는 효과가 달성될 때까지 점차적으로 증가시킬 수 있다.
일반적으로, 하루에 체중 1kg 당 활성 화합물을 약 0.1 내지 약 1000mg, 약 0.5 내지 약 500mg, 약 1 내지 약 250mg, 약 1.5 내지 약 100mg, 바람직하게는 약 5 내지 약 20mg의 복용 수준으로 포유류 환자에게 경구적으로 또는 정맥주사로 투여한다. 원하는 경우, 유효한 일일 용량은 투여 목적으로 다수의 용량(예, 일일 2 내지 4개로 분리된 용량)으로 분배될 수 있다.
하기 실시예에 의해 본 발명을 설명한다. 실시예 1은 LFA-1에 결합하는 ICAM와의 LFA-1 결합의 음성 조절인자를 스크린하는 고효율 분석법을 설명하였다. 실시예 2는 ICAM와의 LFA-1 결합을 저해하는 각종 화합물의 능력을 평가하는 결합 분석법에 관한 것이다. 실시예 3은 음성 조절인자의 합성법을 기재하고 있다. 실시예 4는 음성 조절인자를 사용하여 세포를 기초로 한 분석법으로부터 나온 결과를 제공한다.
실시예 1: LFA-1/ICAM 결합 저해제를 찾기 위한 고효율 스크리닝
LFA-1/ICAM-1 결합의 제해제를 동정하고자, 고효율 스크리닝(HTS) 분석법을고안하여 하기와 같이 독점적인 라이브러리에서 다수의 화학 화합물을 효율적으로 스크린하였다.
LFA-1/ICAM-1 상호작용의 직선적인 범위를 정의하기 위해 초기 실험을 수행하였다. 미국특허 제5,770,686호, 제5,837,478호 및 5,869,262호(이들 각각은 본 명세서에 인용됨)에 기재된 바와 같이, 재조합 ICAM-1/IgG1 융합 단백질(전장 ICAM-1을 포함)을 제조하였다. 피어스 케미칼(Rockford, IL)에서 구입한 키트를 사용하여 융합 단백질을 비오틴화하였다. 280nm의 흡광도를 측정함으로써 비오틴화된 단백질(BioIgICAM-1) 농도를 결정하고, 순차적인 희석액을 제조하여 최종 농도 범위가 50㎍/ml 내지 0.008㎍/ml가 되도록 하였다. 분석 플레이트 상의 웰 안으로 최초로 분취된 단백질로 BioIgICAM-1을 적정하였다.재조합 LFA-1를 각 웰에 동일 농도로 첨가하고, 실험(하기 기술됨)을 완성하였다. 결합량을 각 웰에 대하여 측정하고, 이어서 결과들을 그래프화한 것으로부터 단일 농도의 BioIgICAM-1을 차후 실험을 위해 선택하였다. 유사한 방법으로, 상기와 같이 선택된 BioIgICAM-1 농도를 사용하여 LFA-1을 적정하였다.
HTS 절차 1일째, 포획 항체, 즉 비차단 항-LFA-1 단클론성 항체(TS2/4.1;ATCC #HB244)를 플레이트 피복 완충액(50mM 탄산나트륨/중탄산염, 0.05% ProClinR300, pH 9.6)에서 희석하여 최종농도가 2㎍/ml이 되게 하였다. ImmulonR4(Dynex Technologies, Chantilly, VA) 플레이트 웰을 각 웰당 100㎕ 희석 항체 용액으로 피복하고, 4℃에서 밤새도록 항온처리하였다. 2일째, 플레이트를 실온으로 가온하고 세척 완충액(0.05% Tween-20R을 함유하며 칼슘 및 마그네슘이 없는 인산 완충 식염수)로 2번 세척하였다. 각 웰에 200㎕의 차단 용액(0.05% ProClinR300를 함유하는 CMF-PBS 중 5% 어류 외피 젤라틴)을 첨가하고, 차단 항온처리를 실온에서 30분간 수행하였다. 차단 용액을 흡입에 의해 제거하고, 플레이트는 세척하지 않았다. LFA-1를 희석하여 분석 완충액(CMF-PBS 중 1% 어류 외피 젤라틴 및 2mM MgCl2) 내 최종 농도를 1㎍/㎖로 만들었으며, 100㎕를 각 웰에 첨가하였다. 1시간 동안 항온처리하였으며 플레이트를 세척 완충액으로 2번 세척하였다.
분석 완충액 내(EG&G Wallac, Gaithersburg, MD) 0.1㎍/㎖의 BioIgICAM-1과 4μM 크리스탈 바이올렛(LFA-1/ICAM-1 결합의 활성화제로 밝혀짐)을 함유한 BioIgICAM-1의 2X 공급 용액을 제조하였다. 화학물질 라이브러리로부터 수집한 화학물질(22개의 화합물/100% DMSO 중 풀)의 분취액(50㎕)을 웰에 첨가하고, BioIgICAM-1의 2X 공급 용액을 첨가하여, 최종 분석 부피를 100㎕(2% DMSO 함유)로 제공하였다. 플레이트를 1시간동안 실온에서 항온처리하고, 세척 완충액으로 한번 세척하였다. Europium-표지된 스트렙타비딘(Eu-SA; #1244-360, EG&G Wallac)을 분석 완충액에서 1:500로 희석하고, 희석된 Eu-SA 100㎕을 각 웰에 첨가하고 플레이트를 실온에서 1시간 동안 항온처리하였다.
플레이트를 세척 완충액으로 8번 세척하고, 1:2로 희석한 DELFIAR강화 용액(EG&G Wallac) 100㎕을 각 웰에 첨가하고, 고속으로 Wallac 진탕기를 사용하여5분간 진탕하였다. Wallac DELFIAR형광 판독기(형광계측기)를 사용하여 플레이트를 판독하였다. 대조군은 양성 웰 및 음성 웰 모두, 차단 항체, 즉 항-LFA-1 단클론성 항체(TS1/22.1, ATCC#HB202) 또는 항-ICAM-1 단클론성 항체를 사용하여 확립된 50% 결합 웰을 포함한다. ICAM-1과의 LFA-1 결합을 50% 이상 저해하는 웰 내 화합물질 풀을 동정하였으며 이 풀로부터 개별적인 화학물질을 사용하여 실험을 반복하였다. LFA-1/ICAM-1 결합의 저해제를 동정하고 더 스크린하여 저해 활성의 용량 의존도를 측정하였다. 선별된 화합물에 대해 생화학적 분석 기법 및 세포 분석 기법을 사용하여 더 연구하였다.
공통된 구조 특성에 따라 화합물을 그룹으로 나누었으며, (하기 나열된) 화합물의 서브세트가 특징적인 디아릴 설파이드 구조를 포함하는 것으로 나타났다.
3-클로로-4-(1-클로로-나프탈렌-2-일설파닐)-페닐아민
1-(3-니트로-4-페닐설파닐-페닐)-에타논
1-(3-니트로-4-페닐설파닐-페닐)-에타논 옥심
5-트리플루오로메틸-2-페닐설파닐-벤조니트릴
1-(3,5-디클로로페닐)-3-페닐설파닐-피롤리딘-2,5-디온
비스-2,4,6-트리니트로페닐-설파이드
2-메틸-1-(2-o-토일설파닐-페닐)-1H-피롤
3-[2-(4-클로로-2-니트로-페닐설파닐)-페닐아미노-3H-이소벤조푸란-1-온
4-(벤조티아졸-2-일설파닐)-3-클로로-페닐아민
2-니트로-4-클로로페닐-(2'아미노페닐)-설파이드
6-아미노-2-클로로페닐-(4'-메틸페닐)-설파이드
4-니트로페닐-(2'-클로로페닐)-설파이드
2,4-디니트로페닐-(4'-클로로페닐)-설파이드
4-아미노페닐-(2'-클로로페닐)-설파이드
2,4-디아미노페닐-(4'-이소프로필페닐)-설파이드
확인된 화합물의 음성 조절 능력을 적정화하고자, 각종 디아릴 설파이드 유도체를 하기 실시예 3에 기재한 바와 같이 처리하였다. 부가적인 디아릴 설파이드 유도체는 함께 계류 중이며 1999. 4. 2. 출원된 부분 특허 출원 "Cell Adhesion-Inhibiting Antiinflammatory and Immune Suppressive Compounds"(대리인 명부 번호 6446.US.Z3, 일련번호 09/286,645, 본 명세서에 인용되어 있음)에 기재되어 있다.
실시예 2
결합 분석
A. ICAM-1/LFA-1 생화학적 상호작용 분석
생화학적 분석 및 세포에 기초한 분석 모두를 사용하여 ICAM-1과 LFA-1 간의 상호작용에 대해 길항작용을 하는 화합물들을 동정할 수 있으며 이들의 활성을 정량화할 수 있다. 일차 생화학적 분석은 당해 화합물이 하기 기술된 바와 같이 LFA-1과 그의 접착 파트너인 ICAM-1 사이의 상호작용을 차단하는 능력을 측정한다.
이러한 생화학적 분석에서, 둘베코 인산 완충 식염수(D-PBS) 중 5㎍/㎖와 결합한 항-LFA-1 항체 100㎕을 사용하여 96-웰 미세역가 플레이트의 웰들을 밤새도록4℃에서 피복하였다. 웰들을 세척 완충액(CMF-PBS, 0.05% TweenR20)으로 2번 세척하고, 5% 어류 외피 젤라틴을 함유한 D-PBS 200㎕를 첨가하여 차단시켰다. D-PBS 중 재조합 LFA-1(0.7㎍/㎖, 100㎕)을 각 웰에 첨가하였다. 실온에서 1시간동안 항온처리를 계속하고 웰을 세척 완충액으로 2번 세척하였다. DMSO 중 10mM 공급 용액으로 제조된 LFA-1/ICAM-1 음성 조절인자로서 분석할 화합물의 순차적인 희석액을 D-PBS에서 희석하고, 2mM MgCl2, 1% 어류 외피 젤라틴 및 각 희석액 500㎕을 각 웰에 첨가한 후, 0.8㎍/㎖ BioIgICAM-1 50㎕을 웰에 첨가하고, 플레이트를 상온에서 1시간 동안 항온처리하였다. 이어서, 웰을 세척 완충액으로 2번 세척하고 DelfiaR분석 완충액(EG&G Wallac)에서 1:100로 희석한 Eu-SA(EG&G Wallac) 100㎕을 웰에 첨가하였다. 실온에서 1시간동안 항온처리하였다. 웰을 세척 완충액으로 8번 세척하고, 강화 용액(EG&G Wallac) 100㎕을 각 웰에 첨가하였다. 지속적으로 혼합하면서 항온처리를 5분동안 계속하였다. Victor 1420 Multilabel Counter(EG&G Wallac)를 사용하여 시간-소산된 형광측정(time-resolved fluorimetry)을 하였고, 각 후보 화합물의 퍼센트 저해를 하기 식을 이용하여 계산하였다.
[식 1]
% 저해=100×{1-평균 OD w/화합물 마이너스 백그라운드/평균 OD w/o 화합물 마이너스 백그라운드}
여기서 "백그라운드"는 항-LFA-1 항체로 피복되지 않은 웰을 지칭한다.
B. ICAM-1/JY-8 세포 접착 분석
본 발명에서 화합물의 생물학적으로 관련있는 활성은, 화합물이 하기와 같이 고정화된 ICAM-1과의 JY-8세포(표면 상에서 LFA-1를 발현하는 사람 EBV-형질전환 B 세포주)의 점착을 차단하는 능력을 측정하는 세포-기초한 접착 분석을 사용하여 확인하였다. 이 분석은 첨가된 IL-8 존재 또는 부재하에 수행되었다. 표준 JY-8 세포를 IL-8 자극하기 위해, IL-8 30ng/㎖을 첨가하면서 세포와 30분동안 37℃에서 항온처리하였다.
세포-기초한 접착 분석에서 저해 활성을 측정하기 위해, 96-웰 미량 역가 플레이트를 4℃ 밤새도록 CMF-PBS 중 5㎍/㎖의 농도의 재조합 ICAM-1/Ig 70㎕로 피복하였다. D-PBS로 웰을 2번 세척하고, 실온에서 1시간동안 항온처리함으로써 D-PBS 200㎕, 5% 어류 외피 젤라틴을 첨가하여 차단하였다. 형광-태그 JY-8 세포(2×106세포 / RPMI-1640 중 ㎖ / 1% 태아 소 혈청(FBS) 50㎕)를 웰에 첨가하였다. JY-8 세포를 형광으로 표지하기 위해, RPMI 1640으로 한번 세척한 5×106세포를, 2μM Calcein AM(분자 프로브, OR)을 함유하는 RPMI-1640 1㎖로 재현탁시키고, 37℃에서 30분 동안 항온처리하고, RPMI-1640/ 1% FBS로 한번 세척하였다. LFA-1/ICAM-1 길항제 활성을 분석하고자 하는 화합물의 희석액을 DMSO 중 10mM 공급 용액으로부터 RPMI-1640/1% FBS에서 준비하고, 50㎕ 분취액을 2개로 만든 웰에 첨가하였다. 미량역가 플레이트를 45분 동안 실온에서 항온처리하고, RPMI-1640/1% FBS로 한번 온화하게 웰을 세척하였다. 형광 강도는 495 nm의 여기 파장 및 530 nm의 방사 파장으로 형광 플레이트 판독기에서 측정하였다. 주어진 농도에서 후보 화합물의 퍼센트 저해는 하기 식을 사용하여 계산하였다.
[식 2]
% 저해=100×{1-평균 OD w/화합물/평균 OD w/o 화합물}
C. ICAM-3/JY-8 세포 접착 분석
본 발명의 화합물은 인테그린 LFA-1과의 상호작용을 통해 작용한다는 것을 밝혔으며, 특히 이러한 상호작용은 다양한 세포 접착 분자로의 LFA-1의 접착에 중요한 것으로 알려진 αLI 도메인과의 결합에 의한 것이다. 그것에 의해, 이들 화합물이 기타 CAM들과의 LFA-1의 상호작용을 차단한다고 예상되며, 이러한 저해는 ICAM-3와의 LFA-1 결합에 대해 확인되었다. 본 발명의 화합물은 하기와 같이 고정화된 ICAM-3에 JY-8 세포가 접착하는 것을 차단하는 능력으로 평가되었다.
세포-기초한 접착 분석에서 저해 활성을 측정하기 위해, 96-웰 미량역가 플레이트를 4℃ 밤새도록 CMF-PBS 중 10㎍/㎖ 농도의 재조합 ICAM-3/Ig 50㎕로 피복하였다. D-PBS로 웰을 2번 세척하고, 실온에서 1시간동안 항온처리함으로써 D-PBS 100㎕, 1% 소 혈청 알부민(BSA)을 첨가하여 차단하고, RPMI 1640/5% 열-불활성화된 FBS(접착 완충액)으로 한번 세척하였다. LFA-1/ICAM-3 길항제 활성을 분석하고자 하는 화합물의 희석액을 DMSO 중 10mM 공급 용액으로부터 접착 완충액에서 준비하고, 100㎕ 분취액을 2개로 만든 웰에 첨가하였다. 이어서, JY-8 세포 (0.75×106세포/접착 완충액 중 ㎖, 100㎕)를 웰에 (30ng/ml IL-8 존재 또는 부재하에) 첨가하였다. 미량역가 플레이트를 30분 동안 실온에서 항온처리하고, 부착해 있는 세포를14% 글루타르알데히드/D-PBS 50㎕로 고정시키고, 추가 90분동안 항온처리하였다. dH2O로 온화하게 웰을 세척하고, dH2O 50㎕를 첨가한 후 1% 크리스탈 바이올렛 50㎕를 첨가하였다. 5분 후, 플레이트를 dH2O로 2번 세척하고 에탄올 (EtOH) 225㎕를 각 웰에 첨가하여, 각 세포로부터 크리스탈 바이올렛을 추출하였다. 흡광도는 ELISA 플레이트 판독기로 570 nm에서 측정하였다. 후보 화합물의 퍼센트 저해는 하기 식을 사용하여 계산하였다.
[식 3]
% 저해=100×{1-평균 OD w/화합물/평균 OD w/o 화합물}
실시예 3
음성 조절인자의 합성
본 발명에 따른 다양한 디아릴 설파이드 화합물의 합성이 하기에 기재되어 있다.
일반 공정 및 출발 물질
통상, 용매는 무수물로 구입하고, 더이상 건조 또는 정제하지 않았으며, 출발물질은 상업적으로 구입가능한 최상의 것이었다. E.Merck, 실리카겔 60F254, 0.25mm, 유리 또는 알루미늄 피복된 플레이트, 또는 Analtech 실리카겔 유니플레이트(250 마이크론의 실리카)를 사용하여 박층 크로마토그래피(TLC)를 수행하였다. UV로 가시화하였다. 기록된 Rf는 검출된 단일 점을 가리킨다. E.Merck 실리카겔 60, 230-400 메쉬 상에서 플래쉬 크로마토그래피를 수행하였다. 핵 자기 공명법(NMR)스펙트럼을 Bruker DPX 300 또는 Varian 300 Gemini 2000 스펙트로미터 상에서 기록하였다. 화학적 이동(shift)이 테트라메틸실란(TMS)으로부터 ppm 다운필드로 기록된다. 커플링 상수는 Hz에 있다. 기타 경우, NMR 스펙트럼은 Unity XL-200 스펙트로미터를 사용하여 기록하였다. 질량 스펙트럼은 VG 70 SEG 기구[the University of Washington, Department of Medicinal Chemistry, Mass Spectrometry Facility](고 분해능) 또는 Finnigan Mat TSQ 70 스펙트로미터(저 분해능) 상에서 기록하였다. 오직 분자내 이온만이 기록된다. Quantitative Technologies, Inc.에 의해 성분 분석을 수행하였다.
A. 일반 합성 방법 A: 아미노디아릴설파이드
1.합성 방법 A의 일반적인 설명
원하는 디오페놀 1 몰당량(eq)과 각 니트로 아릴 화합물의 1 몰당량을 질소 하 건조 플라스크내에 정치하고, 무수 아세톤에 용해시켰다. 1.5 몰당량의 무수 탄산염칼륨(K2CO3)을 첨가하고, 혼합물을 밤새도록 격렬하게 교반하였다. 이어서, 에테르로 반응물을 희석하고, 포화 NaHCO3, 3% NaHSO4및 포화 NaCl로 세척하였다. 유기물을 Na2SO4상에서 건조하고 여과하였다. 이어서, 헵탄을 첨가하고, 대부분의 에테르가 제거될 때까지 끓여서 용액을 농축시켰다. 냉각하면서, 니트로디아릴 설파이드를 결정화시켰다. 생성물을 여과로 수집하고, 펜탄으로 세척하고, 진공에서 건조시켰다.
디아릴 설파이드 1 몰당량과 주석 클로라이드 이수화물 5 몰당량을에탄올(10 내지 30 부피)에 용해시켰다. 혼합물을 유조에서 60℃로 가열하고, 포화 HCl을 첨가하였다(10 내지 30 부피). 3시간 후 반응물을 냉각시키고, 20 내지 60 부피의 얼음을 첨가하였다. 5N NaOH를 첨가하여 혼합물을 pH 10-12로 중화시켰다. 에테르로 2번 혼합물을 추출하고 배합한 에테르 추출물을 포화 NaHCO3및 포화 NaCl로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4상에서 건조하고, 여과하고, 회전식 증발에 의해 용매를 제거하였다. 형성된 고형물 또는 오일은 에테르 내에 취하고, 에테르 중 1N HCl 약 5 몰당량을 적가하였다. 형성된 고형물을 여과로 수집하고, 에테르로 세척하고, 진공에서 건조하였다.
일반 합성 방법 A는 하기와 같이 도식화되어 있다.
여기서 X는 할로겐, 예컨대, 염소이다.
2.일반 합성 방법 A의 특정 예
상기 반응식에 나타낸 바람직한 주석 클로라이드 이수화물 대신에 주석 과립을 사용하는 것을 제외하고 하기 구체적으로 기술한 바와 같이 일반적인 합성 방법 A를 사용하였다.
2,4-디클로로페닐-(2'-클로로-4'-니트로페닐)-설파이드
1.54g(8.60mmol)의 2,4-디클로로티오페놀 및 1.65g(1 eq, 8.60mmol)의 3,4-디클로로니트로벤젠을 질소대기하 건조 플라스크내에 정치하고, 20ml 무수 아세톤에 용해하였다. 1.78g(1.5eq, 12.9mmol) 무수 탄산칼륨(K2CO3)을 첨가하고, 혼합물을 20시간동안 자석으로 교반하였다. 이어서, 반응물을 150ml 에테르로 희석하고 나서, 포화 NaHCO3(2×75ml), 3% NaHSO4(2×75ml) 및 포화 NaCl(2×75ml)로 세척하였다. 이어서, 유기상을 무수 Na2SO4상에서 건조하고 여과하였다. 이어서, 50ml 헵탄을 첨가하고, 용액을 증기조 상에서 끓여 약 50ml로 농축시켰다. 냉각하여 고품질의 결정을 형성시켰다. 여과로 결정을 수집하고, 3개 분배량의 펜탄으로 세정하고, 진공(70℃, 0.05mm Hg, 2시간) 하에 건조시켰다. 1.43g(50% 수율)의 황색 결정을 수득하였다. mp 145-146℃, Rf0.37(에틸 아세테이트[EtAc]/헵탄, 1:20).1H NMR(CDCl3) 6.71(d, J=8.9, 1H), 7.38(d of d, J1=2.2, J2=8.2, 1H), 7.59(d, J=8.2, 1H), 7.63(d, J=2.2, 1H), 7.94(d of d, J1=2.2, J2=8.9, 1H), 8.26(d, J=2.5, 1H). MS(EI)m/z 333(M+, 98). Anal. Calcd for C12H6Cl3NO2S: C, 43.08;H, 1.81;N, 4.19. Found: C, 43.06; H, 1.77; N, 4.02.
3-클로로-4-(2,4-디클로로페닐설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드
0.680g(2.03mmol)의 2,4-디클로로페닐-(2'-클로로-4'-니트로페닐)-설파이드 및 0.844g(3.5 eq, 7.11mmol)의 주석 과립을 20ml의 진한 HCl 내에서 교반하였다. 격렬하게 교반하면서 2일 동안 환류로 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각한 후, 50ml 얼음으로 희석하였다. 교반하면서, 대략 80ml 5N NaOH를 첨가하여 이 혼합물을 pH 10으로 중화하였다. 이어서, 생성물을 에테르(2×100ml)로 추출하였다. 배합 유기물을 100ml의 진한 NaHCO3및 2×100ml의 진한 NaCl로 세척하였다. 생성물을 Na2SO4상에서 건조하고 여과하였다. 생성물을 회전증기(rotavapor) 상에서 농축하여 갈색 오일을 얻었다. 오일을 50ml 에테르에 넣고 나서, 에테르 중 4ml의 1N HCl을 적가하여 백색 고형물을 생산하였다. 생성물을 여과로 수집하고, 수개 분배량의 펜탄으로 세정하고, 건조시켰다(90℃, 0.05mm Hg, 3시간). 0.548g(79% 수율)의 백색 고형물을 수득하였다. mp 183-185℃(dec), Rf0.33(EtAc/헵탄 1:2 w/1% TEA).1H NMR(DMSO-d6) 6.55(d, J=8.6, 1H), 6.66(d of d, J1=2.5, J2=8.6, 1H), 6.89(br s, 3H), 6.89(d, J=2.5, 1H), 7.29(d, J=2.2, 1H), 7.32(d, J=2.2, 1H), 7.62(d, J=2.2, 1H). MS(EI)m/z 303 M+[100]. Anal. Calcd for C12H8Cl3NS·HCl: C, 42.26;H, 2.66;N, 4.11. Found: C, 42.39; H, 2.57; N, 4.14.
3.일반 합성 방법 A에 의해 제조된 화합물의 추가 예.
하기 화합물은 일반 합성 방법 A를 사용하여 상업적으로 구입가능한 반응제들로부터 제조하였다. 중간물질(티올+니트로아릴→중간물질)과 함께 출발물질 티올및 니트로아릴 화합물을 제공한다.
3-클로로-4-(2-클로로페닐설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드
2-클로로티오페놀 + 3,4-디클로로니트로벤젠 →4-니트로-2-클로로페닐-(2'-클로로페닐)-설파이드
회색 고형물, mp 197-198℃(dec), Rf0.16(EtAc/헵탄 1:4 w/1% TEA).1H NMR(DMSO-d6) 6.61(d of d, J1=1.9, J2=7.3, 1H), 6.70(d fo d, J1=2.4, J2=8.4, 1H), 6.94(d, J=2.5, 1H), 7.18(m, 2H), 7.28(d, J=8.9, 1H), 7.45(d of d, J1=1.6, J2=7.6, 1H), 7.78(br s, 3H). MS(EI)m/z 269 M+[100]. Anal. Calcd for C12H10Cl3NS·HCl: C, 47.22;H, 3.30;N, 4.59. Found: C, 47.34; H, 3.15; N, 4.45.
3-클로로-4-(2-나프틸설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드
2-나프탈렌티올 + 3,4-디클로로니트로벤젠 →4-니트로-2-클로로페닐-2-나프틸설파이드
회색 고형물, mp 188℃(dec), Rf0.16(EtAc/헵탄 1:4 w/1% TEA).1H NMR(DMSO-d6) 6.08(br s, 3H), 6.60(d of d, J1=2.4, J2=8.4, 1H), 6.90(d, J=2.5, 1H), 7.20(d of d, J1=1.9, J2=8.6, 1H), 7.30(d, J=8.6, 1H), 7.45(m, 2H), 7.53(s, 1H), 7.76(m, 1H), 7.83(m, 2H). MS(EI)m/z 285 M+[100]. Anal. Calcd for C16H12ClNS·HCl: C, 59.64;H, 4.07;N, 4.35. Found: C, 59.59; H, 4.07; N, 4.09.
3-클로로-4-(2,3-디클로로페닐설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드
2,3-디클로로티오페놀 + 3,4-디클로로니트로벤젠 →4-니트로-클로로페닐-(2',3'-디클로로페닐)-설파이드
회색 고형물, mp 207-209℃(dec), Rf0.33(EtAc/헵탄 1:2 w/1% TEA).1H NMR(DMSO-d6) 6.45(d of d, J1=1.4, J2=8.1, 1H), 6.62(d of d, J1=2.2, J2=8.6, 1H), 6.79(br s, 3H), 6.86(d, J=2.5, 1H), 7.21(t, J=7.9, 1H), 7.33(d, J=8.2, 1H), 7.38(d, of d, J1=1.4, J2=8.1, 1H). MS(EI)m/z 303 (M+, 93). Anal. Calcd for C12H8Cl3NS·HCl: C, 42.26;H, 2.66;N, 4.11. Found: C, 42.49; H, 2.56; N, 4.10.
3-클로로-4-(2,4,5-트리클로로페닐설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드
2,3,4-트리클로로티오페놀 + 3,4-디클로로니트로벤젠 →4-니트로-2-클로로페닐-(2',4',5'-트리클로로페닐)-설파이드
회색 고형물, mp 192-194℃(dec), Rf0.33(EtAc/헵탄 1:2 w/1% TEA).1H NMR(DMSO-d6) 6.46(br s, 3H), 6.53(s, 1H), 6.65(d of d, J1=2.3, J2=8.4, 1H), 6.89(d, J=2.2, 1H), 7.35(d, J=8.6, 1H), 7.88(s, 1H). MS(EI)m/z 337 (M+, 73). Anal. Calcd for C12H7Cl4NS·HCl: C, 38.38;H, 2.15;N, 3.73. Found: C, 38.73; H, 2.07; N, 3.60.
3-메톡시-4-(2,3-디클로로페닐설파닐)-페닐아민
2,3-디클로로티오페놀 + 2-브로모-5-니트로아니솔 →4-니트로-2-메톡시페닐-(2',3'-디클로로페닐)-설파이드
이 화합물은 HCl 염의 형성 보다는 에테르로부터 결정화함으로써 분리하였다. 회색 결정이 수득되었다. mp 166-167℃, Rf0.17(EtAc/헵탄 1:2 w/1% TEA).1H NMR(DMSO-d6) 3.67(s, 3H), 5.75(br s, 2H), 6.26(d of d, J1=1.9, J2=8.3, 1H), 6.37(d, J=1.9, 1H), 6.46(d, J=7.9, 1H), 7.13(d, J=8.2, 1H), 7.16(t, J=8.1, 1H), 7.31(d, J=7.9, 1H). MS(EI)m/z 299 M+[100]. Anal. Calcd for C13H11Cl2NOS: C, 52.01;H, 3.69;N, 4.67. Found: C, 51.97; H, 3.59; N, 4.67.
5-아미노-2-(2,3-디클로로페닐설파닐)-아세토페논 히드로클로라이드
2,3-디클로로티오페놀 + 2-클로로니트로아세토페논→4-니트로-2-에세틸페닐-(2',3'-디클로로페닐)-설파이드
황색 고형물, mp 151-153℃(dec), Rf0.35(EtAc/헵탄 1:1 w/ 1% TEA).1H NMR(DMSO-d6) 2.51(s, 3H), 7.00-7.09(m, 3H), 7.34(t, J=7.9, 1H), 7.41(br s, 1H), 7.44(br s, 3H), 7.58(d, J=7.9, 1H). MS(EI)m/z 311 M+[100]. Anal. Calcd for C13H11Cl3NOS·HCl: C, 48.23;H, 3.47;N, 4.02. Found: C, 47.78; H, 3.43; N, 3.79.
4-(2,3-디클로로페닐설파닐)-페닐아민
2,3-디클로로티오페놀 + 4-브로모니트로페놀 →4-니트로페닐-(2',3'-디클로로페닐-설파이드
회색 고형물, mp 175℃(dec), Rf0.31(EtAc/헵탄 1:2 w/ 1% TEA).1H NMR(DMSO-d6) 7.13(d, J=8.2, 2H), 7.26(t, J=7.8, 1H), 7.42(d, J=8.6, 2H), 7.47(d of d, J1=1.9, J2=7.8, 1H), 7.76(d of d, J1=1.3, J2=7.9, 1H), 8.04(br s, 3H). MS(EI)m/z 269 M+[100]. Anal. Calcd for C12H9Cl2NS·HCl: C, 47.00;H, 3.29;N, 4.57. Found: C, 46.92; H, 3.36; N, 4.27.
3-클로로-4-(1-나프틸설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드
1-나프탈렌티올 + 3,4-디클로로니트로벤젠 →4-니트로-2-클로로페닐-(1-나프틸)-설파이드
회색 고형물, mp 192-194℃, Rf0.37(EtAc/헵탄 1:2 w/ 1% TEA).1H NMR(DMSO-d6) 6.84(m, 2H), 7.20(d, J=1.9, 1H), 7.40(d, J=7.0, 1H), 7.50(t, J=7.8, 1H), 7.56-7.61(m, 2H), 7.94(d, J=8.2, 1H), 7.99(m, 1H), 8.12-8.15(m, 5H). MS(EI)m/z 285 M+[100]. Anal. Calcd for C16H12ClNS·HCl: C, 59.64;H, 4.07;N, 4.35. Found: C, 59.59; H, 4.19; N, 4.11.
3-메틸-4-(2,4-디클로로페닐설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드
2,4-디클로로티오페놀 + 2-브로모-5-니트로톨루엔 →4-니트로-2-메틸페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드
회색 고형물 mp 195-197℃, Rf0.41(EtAc/헵탄 1:2 w/ 1% TEA).1HMR(DMSO-d6) 2.22(s, 3H), 6.62(d, J=8.6, 1H), 6.94(d, J=8.2, 1H), 7.04(br s, 1H), 7.29(s, 1H), 7.32(s, 1H), 7.66(d, J=2.2, 1H), 7.89(br s, 3H). MS(EI)m/z 283 M+[100]. Anal. Calcd for C13H11Cl2NS·HCl: C, 48.69;H, 3.77;N, 4.37. Found: C, 48.87; H, 3.73; N, 4.34.
3-브로모-4-(2,4-디클로로페닐설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드
2,4-디클로로티오페놀 + 3-브로모-4-클로로니트로벤젠 →4-니트로-2-브로모페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드
회색 고형물, mp 171-173℃(dec), Rf0.69(EtAc/헵탄 1:1 w/ 1% TEA).1H NMR(DMSO-d6) 6.66(d, J=8.6, 1H), 6.81(d of d, J1=2.2, J2=8.4, 1H), 7.19(d, J=2.2, 1H), 7.29(d, J=8.2, 1H), 7.32(d of d, J1=2.2, J2=8.6, 1H), 7.64(d, J=2.2, 1H), 7.92(br s, 3H). MS(EI)m/z 347 (M+, 60). Anal. Calcd for C12H8BrCl2NS·HCl: C, 37.39;H, 2.35;N, 3.63. Found: C, 37.78; H, 2.28; N, 3.61.
2,5-디클로로-4-(2,4-디클로로페닐설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드
2,4-디클로로티오페놀 + 2,4,5-트리클로로니트로페놀 →4-니트로-2,5-디클로로페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드
회색 고형물, mp 168-176℃, Rf0.39(EtAc/헵탄 1:2 w/ 1% TEA).1HNMR(DMSO-d6) 6.57(d, J=8.6, 1H), 6.83(br s, 3H), 7.06(s, 1H), 7.30(d of d, J1=2.2, J2=8.6, 1H), 7.55(s, 1H), 7.63(d, J=2.2, 1H). MS(EI)m/z 347 (M+, 60). Anal. Calcd for C12H7Cl4NS·0.75HCl: C, 39.34;H, 2.13;N, 3.82. Found: C, 39.34; H, 2.11; N, 3.71.
4,5-디클로로-2-(2,4-디클로로페닐설파닐)-페닐아민
2,4-디클로로티오페놀 + 3,4-디클로로-2-플루오로니트로벤젠 →4-니트로-2-클로로-5-플루오로페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드
3,4-디클로로-2-플루오로니트로벤젠으로 시작하여, 플루오르화물을 치환하여 2-설파닐 화합물을 얻었다. 이 화합물을 플래쉬 크로마토그래피에 의해 유리 아민으로 정제하였다. 회색 고형물, mp 119-122℃, Rf0.20(EtAc/헵탄 1:20).1H NMR(DMSO-d6) 5.93(s, 2H), 6.61(d, J=8.6, 1H), 7.08(s, 1H), 7.31(d of d, J1=2.1, J2=8.5, 1H), 7.55(s, 1H), 7.65(d, J=1.9, 1H). MS(EI)m/z 337 (M+, 75). Anal. Calcd for C12H7Cl4NS: C, 42.51;H, 2.08;N, 4.13. Found: C, 42.94; H, 1.97; N, 4.08.
3,5-디클로로-4-(2,4-디클로로페닐설파닐)-페닐아민
2,4-디클로로티오페놀 + 3,4,5-트리클로로니트로벤젠 →4-니트로-2,6-디클로로페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드
이 화합물을 유리 아민으로 재결정하여 백색 고형물을 얻었다. mp 128-131℃, Rf0.36(EtAc/헵탄 1:2).1H NMR(DMSO-d6) 6.33(br s, 2H), 6.46(d, J=8.5, 1H), 6.83(s, 2H), 7.32(d of d, J1=2.1, J2=8.5, 1H), 7.65(d, J=2.2, 1H). MS(EI)m/z 337 (M+, 77). Anal. Calcd for C12H7Cl4NS: C, 42.51;H, 2.08;N, 4.13. Found: C, 42.15; H, 2.10; N, 4.01.
2,3-디클로로-4-(2,4-디클로로페닐설파닐)-페닐아민
2,4-디클로로티오페놀 + 2,3,4-트리니트로벤젠 →2,3-디클로로-4-(2,4-디클로로페닐티오)-니트로벤젠
이 화합물을 플래쉬 크로마토그래피에 의해 유리 아민으로 정제하여 백색 고형물을 얻었다. mp 116-119℃, Rf0.33(EtAc/헵탄 1:4 w/ 1% TEA).1H NMR(DMSO-d6) 6.09(s, 2H), 6.47(d, J=8.7, 1H), 6.86(d, J=8.7, 1H), 7.32(d of d, J1=2.3, J2=8.7, 1H), 7.46(d, J=8.7, 1H), 7.69(d, J=2.2, 1H). MS(EI)m/z 337 (M+, 71). Anal. Calcd for C12H7Cl4NS: C, 42.51;H, 2.08;N, 4.13. Found: C, 42.83; H, 2.02; N, 4.06.
B. 일반 합성 방법 B
일반 합성 방법 V는 하기에 도식화하였다.
여기서 X는 할로겐, 바람직하게는 염소이다.
하기 화합물은 일반 합성 방법 B를 사용하여 제조하였다.
4-니트로-2-클로로페닐-(2', 4'-디메틸페닐)-설파이드
4-아미노-2-클로로페닐-(2', 4'-디메틸페닐)-설파이드 히드로클로라이드
4-아미노-2-클로로페닐-(2'-메틸-4'-클로로페닐)-설파이드
4-아미노-2-클로로페닐-(2', 4'-디플루오로페닐)-설파이드 히드로클로라이드
4-아미노-2-클로로페닐-(2', 4', 6'-트리클로로페닐)-설파이드
4-아미노-2-클로로페닐-(2'-아미노-4'-클로로페닐)-설파이드
4-아미노-2-클로로페닐-(3', 4'-디클로로페닐)-설파이드
4-아미노-2-클로로페닐-2-(3-클로로-5-트리플루오로메틸피리딜)-설파이드
비스-(4, 4'-디아미노-2, 2'-디클로로페닐)-설파이드
4-아미노-2-클로로페닐-(2', 4'-디클로로페닐)-설파이드
2-클로로-4-아미노-5-메틸아미노페닐-(2', 4'-디클로로페닐)-설파이드
2-클로로-4-아미노-5-모르폴리노페닐-(2', 4'-디클로로페닐)-설파이드
4-아미노-2-트리플루오로메틸페닐-(2', 4'-디클로로페닐)-설파이드
4-아미노-2-플루오로페닐-(2', 4'-디클로로페닐)-설파이드
5-아미노-3-클로로페닐-(2', 4'-디클로로페닐)-설파이드
일반 합성 방법 B에서 초기 단계는 바로 하기에서 기술한 중간 화합물의 제조에 의해 예시된다.
4-니트로-2-클로로페놀-(2',4'-디메틸페닐)-설파이드
2,4-디메틸티오페놀(1.0g) 및 3,4-디클로로니트로벤젠(1eq)를 100ml의 아세톤 함유 K2CO3(5g)에 첨가하였다. 혼합물을 24시간동안 환류시켰다. 실온으로 냉각한 후, 혼합물을 여과하고, 회전식 진공을 사용하여 아세톤을 제거하였다. 결과 잔류물을 소부피의 CH2Cl2에 용해시키고 여과하였다. 이어서, CH2Cl2를 회전식 진공을 사용하여 제거하였다. 결과 잔류물을 메탄올(MeOH)로 처리하여 생성물을 침전시켰다. 이어서, 황색 고형 생성물을 여과에 의해 수집하고, 24시간 동안 40℃ 진공 오븐에서 건조시켰다. 생성물 수율은 66%이고, 융점은 128-130℃이었다. 양성자 NMR 분광법, 성분 분석법 및 박층 크로마토그래피를 포함한 표준 분석 기법을 사용하여 생성물의 특성을 규명하였다.
일반적으로 하기 화합물은 상기 예시한 중간물질과 일치하여 초기 단계를 사용하여 제조하였다.
4-아미노-2-클로로페닐-(2',4'-디메틸페닐)-설파이드 히드로클로라이드
2-클로로-4니트로페닐-(2',4'-디메틸페닐)-설파이드(0.85g) 및 MeOH(300ml) 중 철 분말을 20ml의 NH4Cl 수용액에 기질:철분말:NH4Cl=1:3:5의 몰비로 첨가하였다. 혼합물을 환류 조건하에 밤새 자석으로 교반하였다. 회전식 진공을 사용하여 용매를 제거하였다. 결과 잔류물을 소부피의 클로로포름에 용해시키고 여과하였다. 용해된 잔류물을 실리카겔(70-230 메쉬)로 충전된 소규모 컬럼에 적용하고 클로로포름:헥산(1:4)의 용매 시스템을 사용하여 용출시킴으로써 예비 크로마토그래피를 사용하여 생성물을 수득하였다. 생성물을 함유하는 분획을 배합하고 회전식 진공을 사용하여 용매를 제거하였다. 회색 고형 생성물을 여과에 의해 수집하고, 24시간 동안 50℃ 진공 오븐에서 건조시켰다. 생성물 수율은 57%이고, 융점은 180-185℃이었다(분해). 양성자 NMR 분광법, 성분 분석법 및 박층 크로마토그래피를 포함한 표준 분석 기법을 사용하여 생성물의 특성을 규명하였다.
4-아미노-2-클로로페닐-(2'-메틸-4'-클로로페닐)-설파이드
2-니트로-2-클로로페닐-(2'-메틸-4'-클로로페닐)-설파이드(1.0g) 및 MeOH(300ml) 중 철 분말을 5ml의 NH4Cl 수용액에 기질:철분말:NH4Cl=1:3:5의 몰비로 첨가하였다. 혼합물을 환류 조건하에 밤새 자석으로 교반하였다. 회전식 진공을 사용하여 용매를 제거하였다. 결과 잔류물을 소부피의 클로로포름:헥산(1:4)에 용해시키고 여과하였다. 용해된 잔류물을 실리카겔(70-230 메쉬)로 충전된 소규모 컬럼에 적용하고 클로로포름:헥산(1:1)의 용매 시스템을 사용하여 용출시킴으로써, 예비 크로마토그래피를 사용하여 생성물을 수득하였다. 생성물을 함유하는 분획을 배합하고 회전식 진공을 사용하여 용매를 제거하였다. 백색 고형 생성물을 여과에 의해 수집하고, 24시간 동안 60℃ 진공 오븐에서 건조시켰다. 생성물 수율은 71%이고, 융점은 91-93℃이었다. 양성자 NMR 분광법, 성분 분석법 및 박층 크로마토그래피를 포함한 표준 분석 기법을 사용하여 생성물의 특성을 규명하였다.
4-아미노-2-클로로페닐-(2',4'-디플루오로페닐)-설파이드 히드로클로라이드
4-니트로-2-클로로페닐-(2',4'-디플루오로페닐)-설파이드 및 MeOH(300ml) 중 철 분말을 20ml의 NH4Cl 수용액에 기질:철분말:NH4Cl=1:3:5의 몰비로 첨가하였다. 혼합물을 환류 조건하에 밤새 자석으로 교반하였다. 회전식 진공을 사용하여 용매를 제거하였다. 결과 잔류물을 소부피의 클로로포름에 용해시키고 여과하였다. 용해된 잔류물을 실리카겔(70-230 메쉬)로 충전된 소규모 컬럼에 적용하고 클로로포름:헥산(1:5)의 용매 시스템을 사용하여 용출시킴으로써 예비 크로마토그래피를 사용하여 생성물을 수득하였다. 생성물을 함유하는 분획을 배합하고 회전식 진공을 사용하여 용매를 제거하였다. 무색의 고형 생성물을 여과에 의해 수집하고, 24시간 동안 50℃ 진공 오븐에서 건조시켰다. 생성물 수율은 88%이고, 융점은 187-190℃이었다. 양성자 NMR 분광법, 성분 분석법 및 박층 크로마토그래피를 포함한 표준 분석 기법을 사용하여 생성물의 특성을 규명하였다.
4-아미노-2-클로로페닐-(2',4',6'-트리클로로페닐)-설파이드
4-니트로-2-클로로페닐-(2',4',6'-트리클로로페닐)-설파이드(0.6g) 및 MeOH(250ml) 중 철 분말을 32ml의 NH4Cl 수용액에 기질:철분말:NH4Cl=1:3:5의 몰비로 첨가하였다. 혼합물을 환류 조건하에 밤새 자석으로 교반하였다. 회전식 진공을 사용하여 용매를 제거하였다. 결과 잔류물을 소부피의 클로로포름에 용해시키고 여과하였다. 용해된 잔류물을 실리카겔(70-230 메쉬)로 충전된 소규모 컬럼에 적용하고 클로로포름:헥산(1:3)의 용매 시스템을 사용하여 용출시킴으로써 예비 크로마토그래피를 사용하여 생성물을 수득하였다. 생성물을 함유하는 분획을 배합하고 회전식 진공을 사용하여 용매를 제거하였다. 백색 고형 생성물을 여과에 의해 수집하고, 24시간 동안 40℃ 진공 오븐에서 건조시켰다. 생성물 수율은 72%이고, 융점은 109-111℃이었다. 양성자 NMR 분광법, 성분 분석법 및 박층 크로마토그래피를 포함한 표준 분석 기법을 사용하여 생성물의 특성을 규명하였다.
4-아미노-2-클로로페닐-(2'-아미노-4'-클로로페닐)-설파이드
4-아미노-2-클로로페닐-(2'-니트로-4'-클로로페닐)-설파이드(1.02g) 및 MeOH (300ml) 중 철 분말을 60ml의 NH4Cl 수용액에 기질:철분말:NH4Cl=1:3:5의 몰비로 첨가하였다. 혼합물을 환류 조건하에 밤새 자석으로 교반하였다. 회전식 진공을 사용하여 용매를 제거하였다. 결과 잔류물을 소부피의 클로로포름에 용해시키고 여과하였다. 용해된 잔류물을 실리카겔(70-230 메쉬)로 충전된 소규모 컬럼에 적용하고 클로로포름:헥산(3:7)의 용매 시스템을 사용하여 용출시킴으로써 예비 크로마토그래피를 사용하여 생성물을 수득하였다. 생성물을 함유하는 분획을 배합하고 회전식 진공을 사용하여 용매를 제거하였다. 회색 고형 생성물을 여과에 의해 수집하고,24시간 동안 50℃ 진공 오븐에서 건조시켰다. 생성물 수율은 59%이고, 융점은 86-88℃이었다. 양성자 NMR 분광법, 성분 분석법 및 박층 크로마토그래피를 포함한 표준 분석 기법을 사용하여 생성물의 특성을 규명하였다.
4-아미노-2-클로로페닐-(3',4'-디클로로페닐)-설파이드
4-니트로-2-클로로페닐-(3',4'-디클로로페닐)-설파이드(1.0g) 및 MeOH (250ml) 중 철 분말을 40ml의 NH4Cl 수용액에 기질:철분말:NH4Cl=1:3:5의 몰비로 첨가하였다. 혼합물을 환류 조건하에 밤새 자석으로 교반하였다. 회전식 진공을 사용하여 용매를 제거하였다. 결과 잔류물을 소부피의 클로로포름에 용해시키고 여과하였다. 용해된 잔류물을 실리카겔(70-230 메쉬)로 충전된 소규모 컬럼에 적용하고 클로로포름:헥산(3:7)의 용매 시스템을 사용하여 용출시킴으로써 예비 크로마토그래피를 사용하여 생성물을 수득하였다. 생성물을 함유하는 분획을 배합하고 회전식 진공을 사용하여 용매를 제거하였다. 무색 고형 생성물을 여과에 의해 수집하고, 24시간 동안 70℃ 진공 오븐에서 건조시켰다. 생성물 융점은 103-105℃이었다. 양성자 NMR 분광법, 성분 분석법 및 박층 크로마토그래피를 포함한 표준 분석 기법을 사용하여 생성물의 특성을 규명하였다.
4-아미노-2-클로로페닐-2-(3-클로로-5-트리플루오로메틸피리딜)-설파이드
4-니트로-2-클로로페닐-2-(3-클로로-5-트리플루오로메틸피리딜)-설파이드(1.5g) 및 MeOH(250ml) 중 철 분말을 80ml의 NH4Cl 수용액에 기질:철분말:NH4Cl=1:3:5의 몰비로 첨가하였다. 혼합물을 환류 조건하에 밤새 자석으로 교반하였다. 회전식진공을 사용하여 용매를 제거하였다. 결과 잔류물을 소부피의 클로로포름에 용해시키고 여과하였다. 용해된 잔류물을 실리카겔(70-230 메쉬)로 충전된 소규모 컬럼에 적용하고 클로로포름:헥산(3:7)의 용매 시스템을 사용하여 용출시킴으로써 예비 크로마토그래피를 사용하여 생성물을 수득하였다. 생성물을 함유하는 분획을 배합하고, 회전식 진공을 사용하여 용매를 제거하였다. 무색 고형 생성물을 여과에 의해 수집하고, 24시간 동안 60℃ 진공 오븐에서 건조시켰다. 생성물 수율은 97%이고, 융점은 96-98℃이었다. 양성자 NMR 분광법, 성분 분석법 및 박층 크로마토그래피를 포함한 표준 분석 기법을 사용하여 생성물의 특성을 규명하였다.
비스-(4,4'-디아미노-2,2'-디클로로페닐-설파이드
4-아미노-2-클로로페닐-(2'-클로로-4'-니트로페닐)-설파이드 및 MeOH(125ml) 중 철 분말을 20ml의 NH4Cl 수용액에 기질:철분말:NH4Cl=1:3:5의 몰비로 첨가하였다. 혼합물을 환류 조건하에 밤새 자석으로 교반하였다. 회전식 진공을 사용하여 용매를 제거하였다. 결과 잔류물을 소부피의 클로로포름에 용해시키고 여과하였다. 용해된 잔류물을 실리카겔(70-230 메쉬)로 충전된 소규모 컬럼에 적용하고 클로로포름:헥산(3:7)의 용매 시스템을 사용하여 용출시킴으로써 예비 크로마토그래피를 사용하여 생성물을 수득하였다. 생성물을 함유하는 분획을 배합하고 회전식 진공을 사용하여 용매를 제거하였다. 회색 고형 생성물을 여과에 의해 수집하고, 24시간 동안 60℃ 진공 오븐에서 건조시켰다. 생성물 수율은 66%이고, 융점은 113-115℃이었다. 양성자 NMR 분광법, 성분 분석법 및 박층 크로마토그래피를 포함한 표준 분석 기법을 사용하여 생성물의 특성을 규명하였다.
4-아미노-2-클로로페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드
2-클로로-4-니트로페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드 및 MeOH(50ml) 중 철 분말을 50ml의 NH4Cl 수용액에 기질:철분말:NH4Cl=1:3:5의 몰비로 첨가하였다. 혼합물을 환류 조건하에 밤새 자석으로 교반하였다. 회전식 진공을 사용하여 용매를 제거하였다. 결과 잔류물을 소부피의 클로로포름에 용해시키고 여과한 후, 회전식 증발기를 사용하여 여과액으로부터 용매를 제거하였다. 잔류물을 75ml의 증류수(dH2O)와 함께 교반함으로써 생성물을 수득하였다. 무색 고형 생성물을 여과에 의해 수집하였다. 생성물 수율은 83%이고, 융점은 105-107℃이었다. 양성자 NMR 분광법, 성분 분석법 및 박층 크로마토그래피를 포함한 표준 분석 기법을 사용하여 생성물의 특성을 규명하였다.
4-아미노-2-클로로페닐-(4'-아세트아미도-2'-클로로페닐)-설파이드
4-니트로-2-클로로페닐-(4'-아세트아미도-2'-클로로페닐)-설파이드 및 MeOH (250ml) 중 철 분말을 20ml의 NH4Cl 수용액에 기질:철분말:NH4Cl=1:3:5의 몰비로 첨가하였다. 혼합물을 환류 조건하에 밤새 자석으로 교반하였다. 회전식 진공을 사용하여 용매를 제거하였다. 결과 잔류물을 소부피의 클로로포름에 용해시키고 여과하였다. 용해된 잔류물을 실리카겔(70-230 메쉬)로 충전된 소규모 컬럼에 적용하고 클로로포름:헥산(1:4)의 용매 시스템을 사용하여 용출시킴으로써 예비 크로마토그래피를 사용하여 생성물을 수득하였다. 생성물을 함유하는 분획을 배합하고 회전식 진공을 사용하여 용매를 제거하였다. 회색 고형 생성물을 여과에 의해 수집하고,24시간 동안 60℃ 진공 오븐에서 건조시켰다. 생성물 수율은 76%이고, 융점은 170-175℃이었다. 양성자 NMR 분광법, 성분 분석법 및 박층 크로마토그래피를 포함한 표준 분석 기법을 사용하여 생성물의 특성을 규명하였다.
4-아미노-2-클로로페닐-(4'-디메틸아미노-2'-클로로페닐)-설파이드
4-니트로-2-클로로페닐-(4'-디메틸아미노-2'-클로로페닐)-설파이드(0.2g) 및 MeOH(250ml) 중 철 분말을 20ml의 NH4Cl 수용액에 기질:철분말:NH4Cl=1:3:5의 몰비로 첨가하였다. 혼합물을 환류 조건하에 밤새 자석으로 교반하였다. 회전식 진공을 사용하여 용매를 제거하였다. 결과 잔류물을 소부피의 클로로포름에 용해시키고 여과하였다. 용해된 잔류물을 실리카겔(70-230 메쉬)로 충전된 소규모 컬럼에 적용하고 클로로포름:헥산(2:3)의 용매 시스템을 사용하여 용출시킴으로써 예비 크로마토그래피를 사용하여 생성물을 수득하였다. 생성물을 함유하는 분획을 배합하고 회전식 진공을 사용하여 용매를 제거하였다. 담황색 고형 생성물을 여과에 의해 수집하고, 24시간 동안 60℃ 진공 오븐에서 건조시켰다. 생성물 수율은 58%이고, 융점은 133-135℃이었다. 양성자 NMR 분광법, 성분 분석법 및 박층 크로마토그래피를 포함한 표준 분석 기법을 사용하여 생성물의 특성을 규명하였다.
2-클로로-4-아미노-5-메틸아미노페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드
2-클로로-4-니트로-5-메틸아미노페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드(0.2g) 및 MeOH(250ml) 중 철 분말을 20ml의 NH4Cl 수용액에 기질:철분말:NH4Cl=1:3:5의 몰비로 첨가하였다. 혼합물을 환류 조건하에 밤새 자석으로 교반하였다. 회전식 진공을 사용하여 용매를 제거하였다. 결과 잔류물을 소부피의 클로로포름에 용해시키고 여과하였다. 용해된 잔류물을 실리카겔(70-230 메쉬)로 충전된 소규모 컬럼에 적용하고 클로로포름:헥산(1:4)의 용매 시스템을 사용하여 용출시킴으로써 예비 크로마토그래피를 사용하여 생성물을 수득하였다. 생성물을 함유하는 분획을 배합하고 회전식 진공을 사용하여 용매를 제거하였다. 갈색 고형 생성물을 여과에 의해 수집하고, 24시간 동안 50℃ 진공 오븐에서 건조시켰다. 생성물 수율은 16%이고, 융점은 65-70℃이었다. 양성자 NMR 분광법, 성분 분석법 및 박층 크로마토그래피를 포함한 표준 분석 기법을 사용하여 생성물의 특성을 규명하였다.
2-클로로-4-아미노-5-N-모르폴리노페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드
2-클로로-4-니트로-5-N-모르폴리노페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드(0.9g) 및 MeOH(250ml) 중 철 분말을 20ml의 NH4Cl 수용액에 기질:철분말:NH4Cl=1:3:5의 몰비로 첨가하였다. 혼합물을 환류 조건하에 밤새 자석으로 교반하였다. 회전식 진공을 사용하여 용매를 제거하였다. 결과 잔류물을 소부피의 클로로포름에 용해시키고 여과하였다. 용해된 혼합물을 실리카겔(70-230 메쉬)로 충전된 소규모 컬럼에 적용하고 클로로포름:헥산(3:2)의 용매 시스템을 사용하여 용출시킴으로써 예비 크로마토그래피를 사용하여 생성물을 수득하였다. 생성물을 함유하는 분획을 배합하고 회전식 진공을 사용하여 용매를 제거하였다. 회색 고형 생성물을 여과에 의해 수집하고, 24시간 동안 50℃ 진공 오븐에서 건조시켰다. 생성물 융점은 153-155℃이었다. 양성자 NMR 분광법, 성분 분석법 및 박층 크로마토그래피를 포함한 표준 분석 기법을 사용하여 생성물의 특성을 규명하였다.
4-아미노-2-트리플루오로메틸페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드
4-니트로-2-트리플루오로메틸페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드(0.6g) 및 MeOH(250ml) 중 철 분말을 20ml의 NH4Cl 수용액에 기질:철분말:NH4Cl=1:3:5의 몰비로 첨가하였다. 혼합물을 환류 조건하에 밤새 자석으로 교반하였다. 회전식 진공을 사용하여 용매를 제거하였다. 결과 잔류물을 소부피의 클로로포름에 용해시키고 여과하였다. 용해된 잔류물을 실리카겔(70-230 메쉬)로 충전된 소규모 컬럼에 적용하고 클로로포름:헥산(1:1)의 용매 시스템을 사용하여 용출시킴으로써 예비 크로마토그래피를 사용하여 생성물을 수득하였다. 생성물을 함유하는 분획을 배합하고 회전식 진공을 사용하여 용매를 제거하였다. 생성물을 여과에 의해 수집하고, 24시간 동안 50℃ 진공 오븐에서 건조시켰다. 생성물이 무색 오일이기때문에 융점이 측정되지 않았다. 양성자 NMR 분광법, 성분 분석법 및 박층 크로마토그래피를 포함한 표준 분석 기법을 사용하여 생성물의 특성을 규명하였다.
4-아미노-2-플루오로페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드
4-니트로-2-플루오로페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드 및 MeOH(250ml) 중 철 분말을 20ml의 NH4Cl 수용액에 재료:철분말:NH4Cl=1:3:5의 몰비로 첨가하였다. 혼합물을 환류 조건하에 밤새 자석으로 교반하였다. 회전식 진공을 사용하여 용매를 제거하였다. 결과 잔류물을 소부피의 클로로포름에 용해시키고 여과하였다. 용해된 잔류물을 실리카겔(70-230 메쉬)로 충전된 소규모 컬럼에 적용하고 클로로포름:헥산(1:1)의 용매 시스템을 사용하여 용출시킴으로써 예비 크로마토그래피를 사용하여 생성물을 수득하였다. 생성물을 함유하는 분획을 배합하고 회전식 진공을 사용하여 용매를 제거하였다. 담황색 고형 생성물을 여과에 의해 수집하고, 24시간 동안 30℃ 진공 오븐에서 건조시켰다. 생성물 수율은 55%이고, 융점은 101-102℃이었다. 양성자 NMR 분광법, 성분 분석법 및 박층 크로마토그래피를 포함한 표준 분석 기법을 사용하여 생성물의 특성을 규명하였다.
5-아미노-3-클로로페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드
3-클로로-5-니트로페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드(1.0g) 및 MeOH (250ml) 중 철 분말을 20ml의 NH4Cl 수용액에 재료:철분말:NH4Cl=1:3:5의 몰비로 첨가하였다. 혼합물을 환류 조건하에 밤새 자석으로 교반하였다. 회전식 진공을 사용하여 용매를 제거하였다. 결과 잔류물을 소부피의 클로로포름에 용해시키고 여과하였다. 용해된 잔류물을 실리카겔(70-230 메쉬)로 충전된 소규모 컬럼에 적용하고 클로로포름:헥산(3:2)의 용매 시스템을 사용하여 용출시킴으로써 예비 크로마토그래피를 사용하여 생성물을 수득하였다. 생성물을 함유하는 분획을 배합하고 회전식 진공을 사용하여 용매를 제거하였다. 생성물을 여과에 의해 수집하고, 24시간 동안 25℃ 진공 오븐에서 건조시켰다. 생성물 수율은 16%이고, 생성물이 갈색 오일이기 때문에 융점이 측정되지 않았다. 양성자 NMR 분광법, 성분 분석법 및 박층 크로마토그래피를 포함한 표준 분석 기법을 사용하여 생성물의 특성을 규명하였다.
C. 일반 합성 방법 C
일반 합성 방법 C를 하기에 도식화하였다:
하기 화합물은 일반 합성 방법 C에 의해 제조되었다:
4-아미노-2-클로로페닐-(2'-클로로-4'-니트로페닐)-설파이드
4-아미노-2-클로로페닐-(2'-니트로-4'-클로로페닐)-설파이드
4-아미노-2-클로로페닐-6-(5-니트로퀴놀리노)-설파이드
4-아미노-2-클로로페닐-(2'-클로로-4'-니트로페닐)-설파이드
2-클로로-4-아미노티오페놀(2.0g) 및 3,4-디클로로니트로벤젠(1 eq.)를 300ml의 아세톤 함유 K2CO3(20g)에 첨가하였다. 혼합물을 24시간동안 60℃에서 환류시켰다. 실온으로 냉각시킨 후, 혼합물을 여과하고, 회전식 진공을 사용하여 아세톤을 제거하였다. 생성된 잔류물을 소부피의 클로로포름에 용해시키고 여과시켰다. 이어서, 회전식 진공을 사용하여 클로로포름을 제거하였다. 형성된 잔류물은 MeOH와 함께 분쇄하여 생성물을 침전시키도록 하였다. 침전물을 여과에 의해 수집하고, 황색 고형 생성물을 24시간 동안 80℃ 진공 오븐에서 건조시켰다. 생성물 수율은 59%이고, 융점은 135-136℃이었다. 양성자 NMR 분광법, 성분 분석법 및 박층 크로마토그래피를 포함한 표준 분석 기법을 사용하여 생성물의 특성을 규명하였다.
4-아미노-2-클로로페닐-(2'-니트로-4'-클로로페닐)-설파이드
2-클로로-4-아미노티오페놀(2.0g) 및 2,5-디클로로니트로벤젠(1 eq.)를300ml의 아세톤 함유 K2CO3(20g)에 첨가하였다. 혼합물을 24시간동안 60℃에서 환류시켰다. 실온으로 냉각시킨 후, 혼합물을 여과하고, 회전식 진공을 사용하여 아세톤을 제거하였다. 생성된 잔류물을 소부피의 CH2Cl2에 용해시키고 여과하였다. 이어서, 회전식 진공을 사용하여 CH2Cl2를 제거하였다. 형성된 잔류물은 MeOH와 함께 분쇄하여 생성물을 침전시키도록 하였다. 침전물을 여과에 의해 수집하고 황색 고형 생성물을 24시간 동안 60℃ 진공 오븐에서 건조시켰다. 생성물 수율은 57%이고, 융점은 191-193℃이었다. 양성자 NMR 분광법, 성분 분석법 및 박층 크로마토그래피를 포함한 표준 분석 기법을 사용하여 생성물의 특성을 규명하였다.
4-아미노-2-클로로페닐-6-(5-니트로퀴놀린)-설파이드
2-클로로-4-아미노티오페놀(0.474g) 및 6-클로로-5-니트로퀴놀린(1eq)을 250ml의 아세톤 함유 K2CO3(20g)에 첨가하였다. 혼합물을 24시간동안 60℃에서 환류시켰다. 실온으로 냉각시킨 후, 혼합물을 여과하고, 회전식 진공을 사용하여 아세톤을 제거하였다. 결과 잔류물을 소부피의 클로로포름에 용해시키고 여과하였다. 이어서, 회전식 진공을 사용하여 클로로포름을 제거하였다. 형성된 잔류물을 MeOH와 함께 분쇄하여, 생성물을 침전시키도록 하였다. 용해된 잔류물을 실리카겔(70-230 메쉬)로 충전된 소규모 컬럼에 적용하고 클로로포름:헥산(3:2)의 용매 시스템을 사용하여 용출시킴으로써 예비 크로마토그래피를 사용하여 생성물을 수득하였다. 생성물을 함유하는 분획을 배합하고 회전식 진공을 사용하여 용매를 제거하였다. 황색 고형 생성물을 여과에 의해 수집하고, 24시간 동안 50℃ 진공 오븐에서건조시켰다. 생성물 수율은 62%이고, 융점은 129-131℃이었다. 양성자 NMR 분광법, 성분 분석법 및 박층 크로마토그래피를 포함한 표준 분석 기법을 사용하여 생성물의 특성을 규명하였다.
D. 특이적인 합성 절차
하기 화합물의 경우 전체 제조 방법을 제공한다:
1-아세트아미도-3-클로로-4-(2,3-디클로로페닐설파닐)-벤젠
3-히드록시-4-(2,3-디클로로페닐설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드
6-클로로-5-(2,4-디클로로페닐설파닐)-1H-벤즈이미다졸
1-아세트아미도-3-클로로-4-(2,3-디클로로페닐설파닐)-벤젠
0.165g(2.1 eq, 1.35mmol)의 4-디메틸아미노피리딘(4-DMAP)을 질소대기하 건조 플라스크내에 정치하고 5ml의 무수 테트라히드로푸란(THF)에 용해시켰다. 2ml의 아세트 무수화물을 첨가하고 0.220g(1 eq, 0.643mmol) 의 3-클로로-4-(2,3-디클로로페닐설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드를 첨가하였다. 혼합물을 18시간동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 75ml 에테르로 희석하고, 포화 NaHCO3(3×50ml), 0.3N HCl(3×30ml) 및 포화 NaCl(2×30ml)로 세척하였다. 이어서, Na2SO4상에서 건조하고 여과한 후, 용매를 회전증기 상에서 제거하였다. 플래쉬 크로마토그래피 (1.9×27cm, EtAc/헵탄(1:1))로 0.135g(61% 수율)의 백색 고형물을 얻었다. mp 167-169℃, Rf0.25(EtAc/헵탄 1:1).1H NMR(DMSO-d6) 2.07(s, 3H), 6.59(d of d,J1=1.3, J2=7.9, 1H), 7.24(t, J=8.1, 1H), 7.46(d of d, J1=1.4, J2=8.1, 1H), 7.55(m, 2H), 8.04(d, J=1.9, 1H), 10.35(s, 1H). MS(EI)m/z 345 (M+, 82). Anal. Calcd for C14H10Cl3NOS: C, 48.51;H, 2.91;N, 4.04. Found: C, 48.29; H, 2.88; N, 3.92.
3-히드록시-4-(2,3-디클로로페닐설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드
0.19g(0.67mmol)의 3-메톡시-4-(2,3-디클로로페닐설파닐)페닐아민을 질소대기하 건조 플라스크내에 정치하고 10ml의 무수 CH2Cl2에 용해시키고, -78℃로 냉각하였다. 0.32ml(5eq., 3.3mmol)의 붕소 트리브로마이드를 교반하면서 적가하였다. 냉(冷)조를 제거한 후 20시간동안 반응하도록 두었다. 다시 용액을 -78℃로 냉각시키고 나서, 10ml의 MeOH를 적가하였다. 생성물을 실온으로 가온하고 1시간동안 교반하였다. 용매를 회전증기 상에서 제거하고, 생성된 오일을 2번 10ml MeOH에 취하고 다시 제거하였다. 물질을 다시 10ml MeOH에 취하고 나서 100ml EtAc로 희석하였다. 형성된 백색 침전물을 여과로 제거하고 나서, 여과액을 포화 NaCl(3×50ml)로 세척하고 Na2SO4상에서 건조하고, 여과하고, 용매를 회전식 증발에 의해 제거하였다. 형성된 오일을 플래쉬 크로마토그래피(2.9×28cm, EtAc/헵탄(1:3))에 의해 정제한 후, 25ml의 에테르에 용해시키고 에테르 중 5ml의 1N HCl를 첨가함으로써 HCl 염으로서 침전시켰다. 이것을 여과에 의해 수집하고, 에테르로 세척하고, 건조시켜(90℃ ,3시간, 0.3mmHG), 0.17g(80% 수율)의 회색 고형물을 얻었다. mp 222℃(dec), Rf0.49(EtAc/헵탄 1:1).1H NMR(DMSO-d6) 6.56-6.61(m, 2H), 6.79(d, J=1.9, 1H), 6.90(br hump), 7.19(t, J=8.1, 1H), 7.27(d, J=8.2, 1H), 7.38(d of d, J1=1.4, J2=8.1, 1H), 10.37(br s, 1H). MS(EI)m/z 285 M+[100]. Anal. Calcd for C12H9Cl2NOS·HCl: C, 44.67;H, 3.12;N, 4.34. Found: C, 44.53; H, 2.91; N, 4.17.
6-클로로-5-(2,4-디클로로페닐설파닐)-1H-벤즈이미다졸
플래쉬 크로마토그래피에 의해 유리 아민으로서 정제하는 것을 제외하고는 일반 공정에 의해 4-클로로-2-니트로-5-(2,4-디클로로페닐설파닐)-페닐아민을 제조하였다. 1.37g(3.93mmol)의 유리 아민을 10ml의 DMF 및 10ml의 EtOH에 첨가하였다. 4.43g(5 eq, 19.7mmol) 의 주석 클로라이드 이수화물을 첨가한 후 10ml의 진한 HCl을 첨가하였다. 이것을 20시간동안 60℃로 가열하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고 난 후, 30ml의 물로 희석하고, 30ml의 5N NaOH를 첨가하여 pH 12를 만들었다. 이 혼합물을 2회 150ml 에테르로 추출하였다. 배합된 유기물을 100ml의 포화 NaHCO3및 2×100ml의 포화 NaCl로 세척하고 Na2SO4상에서 건조하고 여과시켰다. 이어서, 40ml의 헵탄을 첨가하고, 이것을 회전증기 상에서 농축시키고 진공으로 건조시켜(100℃, 2시간, 0.3mmHg), 분석상 순수한 백색 고형물 10.6g(82% 수율)을 얻었다. mp 206-208℃, Rf0.51(CH2Cl2/MeOH(9:1) w/ 1% TEA).1H NMR(DMSO-d6) 6.63(d, J=8.6, 1H), 7.28(d of d, J1=2.2, J2=8.7, 1H), 7.69(d, J=2.2, 1H),7.86(br s, 1H), 7.93(s, 1H), 8.38(s, 1H), 12.80(s, 1H). MS(EI)m/z 328 (M+, 97). Anal. Calcd for C13H7Cl3N2S: C, 47.37;H, 2.14;N, 8.50. Found: C, 47.40; H, 2.04; N, 8.32.
E. 특정 합성 프로토콜
다음 화합물은 하기 기재된 방법으로 제조하였다.
4-메틸아미노-2, 2', 4'-트리클로로디페닐설파이드
4-아미노-2-클로로페닐-(4'-아세트아미도-2'-클로로페닐)-설파이드
4-아미노-2-클로로페닐-(4'-디메틸아미노-2'-클로로페닐)-설파이드
4-아미노메틸-2-클로로페닐-(2', 4'-디클로로페닐)-설파이드
4-메틸아미노-2,2',4'-트리클로로디페닐설파이드
4-아미노-2,2',4'-트리클로로디페닐-설파이드(0.305g, 1.0mmol)를 15ml의 포름산에 첨가하였다. 혼합물을 8시간 교반한 후 0.23ml의 37% 포름알데히드를 첨가하고 혼합물을 8시간동안 환류시켰다. 이어서, 회전식 증발을 사용하여 용매를 제거하였다. 이어서, 형성된 잔류물을 실리카겔(70-230메쉬)을 함유한 소규모 컬럼에 적용시켰다. 이어서, 클로로포름을 사용하여 컬럼으로부터 생성물을 용출시켰다. 회전식 증발을 사용하여 용출물로부터 용매를 제거하고 담황색 고형 생성물을 수집하였다. 생성물의 수율은 44%이고 융점은 211℃이었다. 양성자 NMR 분광법, 성분 분석법 및 박층 크로마토그래피를 포함한 표준 분석 기법을 사용하여 생성물의 특성을 규명하였다.
4-니트로-2-클로로페닐-(4'-아세트아미도-2'-클로로페닐)-설파이드
4-아미노-2,2'-디클로로-4'-니트로디페닐설파이드(1.0g, 3.17mmol)를 미량의p-톨루엔설폰산을 함유한 15ml의 아세트 무수화물에서 가온하였다. 혼합물을 1시간동안 정치한 후, 회전식 증발을 사용하여 용매를 제거하였다. 잔류물을 EtAc에 용해하고 실리카겔(70-230메쉬)의 소규모 컬럼 상에 따랐다. 여과물을 수집하고, 증발하여 건조하고, 아세토니트릴로부터 재결정화하여 황색 고형 생성물을 얻었다. 생성물 수율은 97%이고 융점은 163-165℃이었다. 양성자 NMR 분광법, 성분 분석법 및 박층 크로마토그래피를 포함한 표준 분석 기법을 사용하여 생성물의 특성을 규명하였다.
4-니트로-2-클로로페닐-(4'-디메틸아미노-2'-클로로페닐)-설파이드
4-아미노-2-클로로페닐-(2'-클로로-4'-니트로페닐)-설파이드(1.0g, 3.17mmol)를 0℃에서 250ml의 THF 중 60% 나트륨 수소화물(1.43g)의 현탁액에 첨가하였다. 이어서, 요오드메탄(0.2ml, 20ml의 THF 중)을 첨가하고, 실온에서 48시간동안 혼합물을 교반하였다. 이어서, 혼합물을 아날테크(Analthech) 실리카겔 플레이트에 적용시켰다. 각 플레이트는 실리카의 두께가 1000미크론이었다. 2개의 반응 생성물, 즉 4-니트로-2-클로로페닐-(4'-메틸아미노-2'-클로로페닐)-설파이드 및 4-니트로-2-클로로페닐-(4'-디메틸아미노-2'-클로로페닐)-설파이드를 CHCl3: 헥산 = 1:1의 혼합물을 사용하여 용출시켰다. 저속의 용출 밴드는 전자 생성물에 해당하고, 고속의 용출 밴드는 후자 생성물에 해당하였다. 밴드를 수집한 후, 화합물을 CHCl3에 용해시켰다. 용매를 회전식 증발에 의해 제거하여 황색 고형 생성물을 제공하였다. 원하는 생성물의 수율은 36%이고 융점은 138-139℃이었다. 양성자 NMR분광법, 성분 분석법 및 박층 크로마토그래피를 포함한 표준 분석 기법을 사용하여 생성물의 특성을 규명하였다.
4-아미노메틸-2-클로로페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드
2-클로로-4-시아노페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드(1.0g, 3.18mmol)를 0℃에서 질소 하 200ml의 THF에 첨가하였다. 이어서, 리튬 알루미늄 수소화물(0.24g)을 분배하여 용액에 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 0℃에서 2시간동안 정치시킨 후, 1ml의 20% NaOH를 혼합물에 첨가하고, 1ml의 dH2O를 첨가혔다. 이어서, 용액을 여과하고, 회전식 증발을 사용하여 용매를 제거하였다. 이어서, 형성된 잔류물을 실리카겔(70-230 메쉬)를 함유한 소규모 컬럼에 적용시켰다. 컬럼을 클로로포름:헥산 = 1:1의 혼합물로 세척한 후 회전식 증발을 사용하여 생성물을 용출시키고 무색의 오일로서 생성물을 얻었다. 생성물 수율은 40%이고, 융점은 측정되지 않았다. 양성자 NMR 분광법, 성분 분석법 및 박층 크로마토그래피를 포함한 표준 분석 기법을 사용하여 생성물의 특성을 규명하였다.
F. 기타 화합물
일반 합성 방법에 따라 합성되는 기타 화합물은 하기와 같다.
[표 2]
4-니트로-2-클로로페닐-(2', 4'-디메틸페닐)-설파이드
4-니트로-2-클로로페닐-(2'-메틸-4'-클로로페닐)-설파이드
4-니트로-2-클로로페닐-(2', 4'-디플루오로페닐)-설파이드
4-니트로-2-클로로페닐-(2', 4', 6'-트리클로로페닐)-설파이드
4-니트로-2-클로로페닐-(3', 4'-디클로로페닐)-설파이드
4-니트로-2-클로로페닐-2-(3-클로로-5-트리플루오로메틸피리딜)-설파이드
2-클로로-4-니트로페닐-(2', 4'-디클로로페닐)-설파이드
4-니트로-2-클로로페닐-(4'-아세트아미도-2'-클로로페닐)-설파이드
4-니트로-2-클로로페닐-(4'-디메틸아미노-2'-클로로페닐)-설파이드
2-클로로-4-니트로-5-메틸아미노페닐-(2', 4'-디클로로페닐)-설파이드
2-클로로-4-니트로-5-모르폴리노페닐-(2', 4'-디클로로페닐)-설파이드
4-니트로-2-트리플루오로메틸페닐-(2', 4'-디클로로페닐)-설파이드
4-니트로-2-플루오로페닐-(2', 4'-디클로로페닐)-설파이드
3-클로로-5-니트로페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드
4-니트로-2-클로로페닐-(1-나프틸)-설파이드
4-니트로-2-메틸페닐-(2', 4'-디클로로페닐)-설파이드
4-니트로-2-브로모페닐-(2', 4'-디클로로페닐)-설파이드
4-니트로-2, 5-디클로로페닐-(2', 4'-디클로로페닐)-설파이드
4-니트로-2, 6-디클로로페닐-(2', 4'-디클로로페닐)-설파이드
4-니트로-2-클로로-5-플루오로페닐-(2', 4'-디클로로페닐)-설파이드
4-니트로-2, 3-디클로로페닐-(2', 4'-디클로로페닐)-설파이드
4-니트로-2-클로로페닐-(4'-클로로-2'-아미노페닐)-설파이드
4-니트로-5-아세트아미도-2-클로로페닐-(2', 4'-디클로로페닐)-설파이드
4-니트로-2-클로로페닐-(4'-메틸아미노-2'-클로로페닐)-설파이드
4-니트로-2-클로로페닐-(4'-벤질아미노-2'-클로로페닐)-설파이드
4-니트로-2-클로로페닐-(4'-디벤질아미노-2'-클로로페닐)-설파이드
4-니트로-5-페닐설포-2-클로로페닐-(2', 4'-디클로로페닐)-설파이드
3-니트로-5-클로로페닐-(2', 4'-디클로로페닐)-설파이드
실시예 4
세포를 기초로 한 분석 결과
본 발명의 화합물은 전술한 세포를 기초로 한 분석 상 활성을 하기 표 3에 나열한 바와 같이 나타내었으며, 시험된 ICAM-1 및 ICAM-3와의 LFA-1결합의 저해에 대한 μM IC50값을 제공한다. 쌍으로 나타낸 값(X/Y)은 IL-8의 부재 및 존재하 저해를 의미한다. 다중 쌍으로 나타난 값(W/X; Y/Z)은 반복된 실험을 의미한다. 대쉬(--/X)는 실험이 수행되지 않은 것을 의미한다. "NT"는 화합물이 특정 분석에서 시험되지 않은 것을 의미한다.
본 발명은 특정 구체예로서 기술되지만 당업자는 변형 및 수정 할 수 있다고 이해된다. 따라서, 본 발명은 하기 청구범위에서만 제한되어야 한다.
[표 3-1]
화합물 LFAl/ICAM-1IC50 -/+ IL-8 LFA-1/ICAM-3IC50 -/+ IL-8
3-클로로-4-(2-클로로페닐설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드 7.6/4.7; 17.7/16.3 NT
3-클로로-4-(2-나프틸설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드 7.8/7.2; 10.0/9.3 NT
3-클로로-4-(2,3-디클로로페닐설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드 1.1/0.7; 3.4/3.9 1.8/1.0
3-클로로-4-(2,4,5-트리클로로페닐설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드 7.5/12.5; 18.9/22.6 NT
3-클로로-4-(2,4-디클로로페닐설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드 1.6/1.9;3.0/4.1;5.0/6.0 1.2/1.4
3-메톡시-4-(2,3-디클로로페닐설파닐)-페닐아민 --/7.5; 8.7/7.0 NT
5-아미노-2-(2,3-디클로로페닐설파닐)-아세토페논 히드로클로라이드 --/20 NT
4-(2,3-디클로로페닐설파닐)-페닐아민 --/8.0; 8.5/7.6 NT
3-클로로-4-(1-나프틸설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드 --/31 NT
3-메틸-4-(2,4-디클로로페닐설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드 7.9/8.2; 7.0/6.5 NT
1-아세트아미도-3-클로로-4-(2,3-디클로로페닐설파닐)-벤젠 --/29.5 NT
4-메틸아미노-2,2',4'-트리클로로디페닐설파이드 34.0/>40 NT
3-브로모-4-(2,4-디클로로페닐설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드 4.0/7.5; 2.6/3.1 NT
3-히드록시-4-(2,3-디클로로페닐설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드 14.2/14.2 NT
6-클로로-5-(2,4-디클로로페닐설파닐)-1H-벤즈이미다졸 27.8/>41 NT
4-아미노-2-클로로페닐-(2',4'-디메틸페닐)-설파이드 히드로클로라이드 12.6/23.0 NT
2,5-디클로로-4-(2,4-디클로로페닐설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드 3.3/3.9;3.6/3.1;2.2/4.0 1.1/1.1
4-아미노-2-클로로페닐-(2'-메틸-4'-클로로페닐)-설파이드 13.4/22.6 NT
4-아미노-2-클로로페닐-(2',4'-디플루오로페닐)-설파이드 히드로클로라이드 16.5/17.8 NT
4-아미노-2-클로로페닐-(2',4',6'-트리클로로페닐)-설파이드 8.7/12.4 NT
4-아미노-2-클로로페닐-(2'-아미노-4'-클로로페닐)-설파이드 29.0/36.0 NT
4-아미노-2-클로로페닐-(2'-클로로-4'-니트로페닐)-설파이드 10.0/12.0 NT
[표 3-2]
화합물 LFAl/ICAM-1IC50 -/+ IL-8 LFA-1/ICAM-3IC50 -/+ IL-8
4-아미노-2-클로로페닐-(2'-니트로-4'-클로로페닐)-설파이드 6.7/7.8; 6.0/5.6 2.5/2.3;1.1/3.0
4-아미노-2-클로로페닐-(3',4'-디클로로페닐)-설파이드 17.4/14.5 NT
4-아미노-2-클로로페닐-2-(3-클로로-5-트리플루오로메틸피리딜)-설파이드 9.3/13.5; 7.6/7.3 NT
비스-(4,4'-디아미노-2,2'-디클로로페닐)-설파이드 35.5/30.5 NT
4-아미노-2-클로로페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드 6.0/6/7; 5.9/4.2 2.1/2.0
4-아미노-2-클로로페닐-(4'-아세트아미도-2'-클로로페닐)-설파이드 17.0/29.0 NT
4-아미노-2-클로로페닐-6-(5-니트로퀴놀리노)-설파이드 6.0/7.3; 3.8/7 2.5/3.8
4-아미노-2-클로로페닐-(4'-디메틸아미노-2'-클로로페닐)-설파이드 9.7/9.2 NT
2-클로로-4-아미노-5-메틸아미노페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드 17.7/31.6 NT
2-클로로-4-아미노-5-N-모르폴리노페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드 35.7/24.3 NT
4-아미노-2-트리플루오로메틸페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드 7.5/6.6 NT
4-아미노메틸-2-클로로페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드 >40/18.7 NT
4,5-디클로로-2-(2,4-디클로로페닐설파닐)-페닐아민 31.5/35.0; 33.7/36 NT
3,5-디클로로-4-(2,4-디클로로페닐설파닐)-페닐아민 3.9/5.0 NT
2,3-디클로로-4-(2,4-디클로로페닐설파닐)-페닐아민 27.5/27.5 NT
4-아미노-2-플루오로페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드 4.8/5.9 NT
5-아미노-3-클로로페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드 31.8/32.9 NT
4-(벤조티아졸-2-일설파닐)-3-클로로-페닐아민 10.0/8.3; 7.8/8 3.0/3.5
3-클로로-4-(1-클로로-나프탈렌-2-일설파닐)-페닐아민 1.0/1.5 0.5/0.3
4-니트로-2-클로로페닐-(2',3'-디클로로페닐)-설파이드 29.0/40.0 NT
4-아미노-2-클로로페닐-2-(5-니트로-3-브로모)-피리딘-설파이드 >40/31.0 NT

Claims (17)

  1. 3-클로로-4-(2-클로로페닐설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드
    3-클로로-4-(2-나프틸설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드
    3-클로로-4-(2,3-디클로로페닐설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드
    3-클로로-4-(2,4,5-트리클로로페닐설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드
    3-클로로-4-(2,4-디클로로페닐설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드
    3-메톡시-4-(2,3-디클로로페닐설파닐)-페닐아민
    5-아미노-2-(2,3-디클로로페닐설파닐)-아세토페논 히드로클로라이드
    4-(2,3-디클로로페닐설파닐)-페닐아민
    3-클로로-4-(1-나프틸설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드
    3-메틸-4-(2,4-디클로로페닐설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드
    1-아세트아미도-3-클로로-4-(2,3-디클로로페닐설파닐)-벤젠
    4-메틸아미노-2,2',4'-트리클로로디페닐설파이드
    3-브로모-4-(2,4-디클로로페닐설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드
    3-히드록시-4-(2,3-디클로로페닐설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드
    6-클로로-5-(2,4-디클로로페닐설파닐)-1H-벤즈이미다졸
    4-아미노-2-클로로페닐-(2' 4'-디메틸페닐)-설파이드 히드로클로라이드
    2,5-디클로로-4-(2,4-디클로로페닐설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드
    4-아미노-2-클로로페닐-(2'-메틸-4'-클로로페닐)-설파이드
    4-아미노-2-클로로페닐-(2',4'-디플루오로페닐)-설파이드 히드로클로라이드
    4-아미노-2-클로로페닐-(2',4',6'-트리클로로페닐)-설파이드
    4-아미노-2-클로로페닐-(2'-아미노-4'-클로로페닐)-설파이드
    4-아미노-2-클로로페닐-(2'-클로로-4'-니트로페닐)-설파이드
    4-아미노-2-클로로페닐-(2'-니트로-4'-클로로페닐)-설파이드
    4-아미노-2-클로로페닐-(3',4-디클로로페닐)-설파이드
    4-아미노-2-클로로페닐-2-(3-클로로-5-트리플루오로메틸피리딜)-설파이드
    비스-(4,4'-디아미노-2,2'-디클로로페닐)-설파이드
    4-아미노-2-클로로페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드
    4-아미노-2-클로로페닐-(4'-아세트아미도-2'-클로로페닐)-설파이드
    4-아미노-2-클로로페닐-6-(5-니트로퀴놀리노)-설파이드
    4-아미노-2-클로로페닐-(4'-디메틸아미노-2'-클로로페닐)-설파이드
    2-클로로-4-아미노-5-메틸아미노페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드
    2-클로로-4-아미노-5-모르폴리노페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드
    4-아미노-2-트리플루오로메틸페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드
    4-아미노메틸-2-클로로페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드
    4,5-디클로로-2-(2,4-디클로로페닐설파닐)-페닐아민
    3,5-디클로로-4-(2,4-디클로로페닐설파닐)-페닐아민
    2,3-디클로로-4-(2,4-디클로로페닐설파닐)-페닐아민
    4-아미노-2-플루오로페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드
    5-아미노-3-클로로페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드
    4-니트로-2-클로로페닐-(2',4'-디메틸페닐)-설파이드
    4-니트로-2-클로로페닐-(2'-메틸-4'-클로로페닐)-설파이드
    4-니트로-2-클로로페닐-(2',4'-디플루오로페닐)-설파이드
    4-니트로-2-클로로페닐-(2',4',6'-트리클로로페닐)-설파이드
    4-니트로-2-클로로페닐-(3',4'-디클로로페닐)-설파이드
    4-니트로-2-클로로페닐-2-(3-클로로-5-트리플루오로메틸피리딜)-설파이드
    2-클로로-4-니트로페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드
    4-니트로-2-클로로페닐-(4'-아세트아미도-2'-클로로페닐)-설파이드
    4-니트로-2-클로로페닐-(4'-디메틸아미노-2'-클로로페닐)-설파이드
    2-클로로-4-니트로-5-메틸아미노페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드
    2-클로로-4-니트로-5-모르폴리노페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드
    4-니트로-2-트리플루오로메틸페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드
    4-니트로-2-플루오로페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드
    3-클로로-5-니트로페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드
    4-니트로-2-클로로페닐-(1-나프틸)-설파이드
    4-니트로-2-메틸페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드
    4-니트로-2-브로모페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드
    4-니트로-2,5-디클로로페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드
    4-니트로-2,6-디클로로페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드
    4-니트로-2-클로로-5-플루오로페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드
    4-니트로-2,3-디클로로페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드
    4-니트로-2-클로로페닐-(4'-클로로-2'-아미노페닐)-설파이드
    4-니트로-5-아세트아미도-2-클로로페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드
    4-니트로-2-클로로페닐-(4'-메틸아미노-2'-클로로페닐)-설파이드
    4-니트로-2-클로로페닐-(4'-벤질아미노-2'-클로로페닐)-설파이드
    4-니트로-2-클로로페닐-(4'-디벤질아미노-2'-클로로페닐)-설파이드
    4-니트로-5-페닐설포-2-클로로페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드
    3-니트로-5-클로로페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드
    로 구성된 군에서 선택된 화합물.
  2. 제1항의 화합물 및 약학적 허용가능한 캐리어를 함유하는 약학적 조성물.
  3. 3-클로로-4-(1-클로로-나프탈렌-2-일설파닐)-페닐아민
    1-(3-니트로-4-페닐설파닐-페닐)-에타논
    1-(3-니트로-4-페닐설파닐-페닐)-에타논 옥심
    5-트리플루오로메틸-2-페닐설파닐-벤조니트릴
    1-(3,5-디클로로페닐)-3-페닐설파닐-피롤리딘-2,5-디온
    비스-2,4,6-트리니트로페닐-설파이드
    2-메틸-1-(2-o-톨릴설파닐-페닐)-1H-피롤
    3-[2-(4-클로로-2-니트로-페닐설파닐)-페닐아미노-3H-이소벤조푸란-1-온
    4-(벤조티아졸-2-일설파닐)-3-클로로-페닐아민
    2-니트로-4-클로로페닐-(2' 아미노페닐)-설파이드
    6-아미노-2-클로로페닐-(4'-메틸페닐)-설파이드
    4-니트로페닐-(2'-클로로페닐)-설파이드
    2,4-디니트로페닐-(4'-클로로페닐)-설파이드
    4-아미노페닐-(2'-클로로페닐)-설파이드
    2,4-디아미노페닐-(4'-이소프로필페닐)-설파이드
    4-니트로-2-클로로페닐-(2',3'-디클로로페닐)-설파이드
    4-아미노-2-클로로페닐-2-(5-니트로-3-브로모)-피리딘 설파이드
    4-아미노-2-클로로페닐-(2'-니트로-4'-클로로페닐)-설파이드
    로 구성된 군에서 선택된 화합물을 함유하는 약학적 조성물.
  4. LFA-1과의 결합에 대해 ICAM-1 또는 ICAM-3과 경쟁하는 LFA-1의 천연 리간드에 LFA-1의 결합을 저해하기에 충분한 함유량으로 제2항 또는 제3항의 약학적 조성물을 포유류에 투여하는 단계를 포함하여 염증성 장애를 치료하는 방법.
  5. 디아릴 설파이드와 LFA-1을 접촉시키는 단계를 포함하여 LFA-1에 결합하는 ICAM과의 LFA-1 결합을 저해하는 방법.
  6. 제5항에 있어서, 디아릴 설파이드는 치환된 것이 특징인 방법.
  7. 제5항에 있어서, 디아릴 설파이드는 일반 구조 화학식 1로 표시되는 화합물인 것이 특징인 방법.
    [화학식 1]
    여기서, A 및 B는 독립적이며, 비제한적으로 페닐, 티에닐, 푸릴, 피리미디닐, 이미다졸릴, 피라졸릴, 피리딜, 피라지닐, 피롤릴 및 피리다지닐을 포함하는 5원 방향족환 및 6원 방향족환으로 구성된 군에서 선택된 아릴기이고;
    R1, R2및 R3은 독립적이며 수소, -Ra(이때, Ra는 수소 또는, 포화된 직쇄 또는 분지쇄의 1 내지 6개 탄소 원자를 함유하는 알킬기(C1-6알킬)임), -O-Ra, 할로(이때, 할로는 Cl, F, Br 또는 I임), -NRbRc(이때, Rb및 Rc은 독립적이며, H, C1-6알킬, 또는 -CH2-아릴 임), -NO2, -C(=O)Ra, -CN, 퍼플루오로 Ra(예, 트리플루오로메틸), -N-C(=O)Ra, -(CH2)n-NRbRc(이때, n은 1 내지 6의 정수), 모르폴리노와 같이 O, N 또는 S 중 하나이상을 함유하고 선택적으로 치환된 5원 또는 6원 헤테로시클릭 고리(지방족 또는 방향족) 및 -S-아릴(이때, 아릴은 5원 또는 6원 방향족환이며 선택적으로 치환됨)로 구성된 군에서 선택되고;
    R4, R5및 R6은 독립적이며 수소, -Ra, -O-Ra, 할로, -NRbRc, -NO2, -C(=O)Ra, -CN, 퍼플루오로 Ra, -N-C(=O)Ra, -(CH2)n-NRbRc, 선택적으로 치환되고 O, N 또는 S 중 하나이상을 함유한 5원 또는 6원 헤테로시클릭 고리(지방족 또는 방향족) 및 -S-아릴로 구성된 군에서 선택되거나 여기서 R4및 R5는 함께 5원 또는 6원 방향족 환을 형성하고 선택적으로 고리 내에 O, N 또는 S 중 하나이상을 포함하고 선택적으로 치환됨.
  8. 제7항에 있어서, 디아릴 설파이드는
    3-클로로-4-(2-클로로페닐설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드
    4-니트로-2-클로로페닐-(2',3'-디클로로페닐)-설파이드
    3-클로로-4-(2-나프틸설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드
    3-클로로-4-(2,3-디클로로페닐설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드
    3-클로로-4-(2,4,5-트리클로로페닐설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드
    3-클로로-4-(2,4-디클로로페닐설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드
    4-(벤조티아졸-2-일설파닐)-3-클로로-페닐아민
    3-클로로-4-(1-클로로-나프탈렌-2-일설파닐)-페닐아민
    3-메톡시-4-(2,3-디클로로페닐설파닐)-페닐아민
    5-아미노-2-(2,3-디클로로페닐설파닐)-아세토페논 히드로클로라이드
    4-(2,3-디클로로페닐설파닐)-페닐아민
    3-클로로-4-(1-나프틸설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드
    3-메틸-4-(2,4-디클로로페닐설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드
    1-아세트아미도-3-클로로-4-(2,3-디클로로페닐설파닐)-벤젠
    4-메틸아미노-2,2',4'-트리클로로디페닐설파이드
    3-브로모-4-(2,4-디클로로페닐설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드
    3-히드록시-4-(2,3-디클로로페닐설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드
    6-클로로-5-(2,4-디클로로페닐설파닐)-1H-벤즈이미다졸
    4-아미노-2-클로로페닐-(2',4'-디메틸페닐)-설파이드 히드로클로라이드
    2,5-디클로로-4-(2,4-디클로로페닐설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드
    4-아미노-2-클로로페닐-(2'-메틸-4'-클로로페닐)-설파이드
    4-아미노-2-클로로페닐-(2',4'-디플루오로페닐)-설파이드 히드로클로라이드
    4-아미노-2-클로로페닐-(2',4',6'-트리클로로페닐)-설파이드
    4-아미노-2-클로로페닐-(2'-아미노-4'-클로로페닐)-설파이드
    4-아미노-2-클로로페닐-(2'-클로로-4'-니트로페닐)-설파이드
    4-아미노-2-클로로페닐-(2'-니트로-4'-클로로페닐)-설파이드
    4-아미노-2-클로로페닐-(3',4'-디클로로페닐)-설파이드
    4-아미노-2-클로로페닐-2-(3-클로로-5-트리플루오로메틸피리딜)-설파이드
    비스-(4,4'-디아미노-2,2'-디클로로페닐)-설파이드
    4-아미노-2-클로로페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드
    4-아미노-2-클로로페닐-(4'-아세트아미도-2'-클로로페닐)-설파이드
    4-아미노-2-클로로페닐-6-(5-니트로퀴놀리노)-설파이드
    4-아미노-2-클로로페닐-(4'-디메틸아미노-2'-클로로페닐)-설파이드
    2-클로로-4-아미노-5-메틸아미노페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드
    2-클로로-4-아미노-5-N-모르폴리노페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드
    4-아미노-2-트리플루오로메틸페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드
    4-아미노-2-클로로페닐-2-(5-니트로-3-브로모)-피리딘 설파이드
    4-아미노메틸-2-클로로페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드
    4,5-디클로로-2-(2,4-디클로로페닐설파닐)-페닐아민
    3,5-디클로로-4-(2,4-디클로로페닐설파닐)-페닐아민
    2,3-디클로로-4-(2,4-디클로로페닐설파닐)-페닐아민
    4-아미노-2-플루오로페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드
    5-아미노-3-클로로페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드
    3-클로로-4-(1-클로로-나프탈렌-2-일설파닐)-페닐아민
    1-(3-니트로-4-페닐설파닐-페닐)-에타논
    1-(3-니트로-4-페닐설파닐-페닐)-에타논 옥심
    5-트리플루오로메틸-2-페닐설파닐-벤조니트릴
    1-(3,5-디클로로페닐)-3-페닐설파닐-피롤리딘-2,5-디온
    비스-2,4,6-트리니트로페닐-설파이드
    2-메틸-1-(2-o-톨릴설파닐-페닐)-1H-피롤
    3-[2-(4-클로로-2-니트로-페닐설파닐)-페닐아미노-3H-이소벤조푸란-1-온
    4-(벤조티아졸-2-일설파닐)-3-클로로-페닐아민
    2-니트로-4-클로로페닐-(2' -아미노페닐)-설파이드
    6-아미노-2-클로로페닐-(4'-메틸페닐)-설파이드
    4-니트로페닐-(2'-클로로페닐)-설파이드
    2,4-디니트로페닐-(4'-클로로페닐)-설파이드
    4-아미노페닐-(2'-클로로페닐)-설파이드
    2,4-디아미노페닐-(4'-이소프로필페닐)-설파이드
    4-니트로-2-클로로페닐-(2',3'-디클로로페닐)-설파이드
    4-아미노-2-클로로페닐-2-(5-니트로-3-브로모)-피리딘-설파이드
    로 구성된 군에서 선택된 것이 특징인 방법.
  9. LFA-1과의 결합에 대해 ICAM-1 또는 ICAM-3과 경쟁하는 LFA-1의 천연 리간드에 LFA-1이 결합함으로써 야기되는 염증성 장애를 치료하는 방법으로서, LFA-1에 천연 리간드의 결합을 저해하기에 충분한 함유량으로 LFA-1과의 결합에 대해 3-클로로-4-(1-클로로-나프탈렌-2-일설파닐)-페닐아민과 경쟁하는 화합물을 필요한 포유류에 투여하는 단계를 포함하는 것이 특징인 방법.
  10. 제9항에 있어서, 화합물은 디아릴 설파이드인 것이 특징인 방법.
  11. 제10항에 있어서, 디아릴 설파이드는 치환된 것이 특징인 방법.
  12. 제10항에 있어서, 디아릴 설파이드는 일반 구조 화학식 1로 표시되는 화합물인 것이 특징인 방법.
    [화학식 1]
    여기서, A 및 B는 독립적이며, 비제한적으로 페닐, 티에닐, 푸릴, 피리미디닐, 이미다졸릴, 피라졸릴, 피리딜, 피라지닐, 피롤릴 및 피리다지닐을 포함하는 5원 방향족환 및 6원 방향족환으로 구성된 군에서 선택된 아릴기이고;
    R1, R2및 R3은 독립적이며 수소, -Ra(이때, Ra는 수소 또는, 포화된 직쇄 또는 분지쇄의 1 내지 6개 탄소 원자를 함유하는 알킬기(C1-6알킬)임), -O-Ra, 할로(이때, 할로는 Cl, F, Br 또는 I임), -NRbRc(이때, Rb및 Rc은 독립적이며, H, C1-6알킬, 또는 -CH2-아릴 임), -NO2, -C(=O)Ra, -CN, 퍼플루오로 Ra(예, 트리플루오로메틸), -N-C(=O)Ra, -(CH2)n-NRbRc(이때 n은 1 내지 6의 정수), 모르폴리노와 같이 O, N 또는 S 중 하나이상을 함유하고 선택적으로 치환된 5원 또는 6원 헤테로시클릭 고리(지방족 또는 방향족) 및 -S-아릴(이때, 아릴은 5원 또는 6원 방향족환이며 선택적으로 치환됨)로 구성된 군에서 선택되고;
    R4, R5및 R6은 독립적이며 수소, -Ra, -O-Ra, 할로, -NRbRc, -NO2, -C(=O)Ra,-CN, 퍼플루오로 Ra, -N-C(=O)Ra, -(CH2)n-NRbRc, 선택적으로 치환되고 O, N 또는 S 중 하나이상을 함유하는 5원 또는 6원 헤테로시클릭 고리(지방족 또는 방향족) 및 -S-아릴로 구성된 군에서 선택되거나 여기서 R4및 R5는 함께 5원 또는 6원 방향족 환을 형성하고 선택적으로 고리 내에 하나이상의 O, N 또는 S를 포함하고 선택적으로 치환됨.
  13. 제12항에 있어서, 디아릴 설파이드는
    3-클로로-4-(2-클로로페닐설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드
    4-니트로-2-클로로페닐-(2',3'-디클로로페닐)-설파이드
    3-클로로-4-(2-나프틸설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드
    3-클로로-4-(2,3-디클로로페닐설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드
    3-클로로-4-(2,4,5-트리클로로페닐설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드
    3-클로로-4-(2,4-디클로로페닐설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드
    4-(벤조티아졸-2-일설파닐)-3-클로로-페닐아민
    3-클로로-4-(1-클로로-나프탈렌-2-일설파닐)-페닐아민
    3-메톡시-4-(2,3-디클로로페닐설파닐)-페닐아민
    5-아미노-2-(2,3-디클로로페닐설파닐)-아세토페논 히드로클로라이드
    4-(2,3-디클로로페닐설파닐)-페닐아민
    3-클로로-4-(1-나프틸설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드
    3-메틸-4-(2,4-디클로로페닐설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드
    1-아세트아미도-3-클로로-4-(2,3-디클로로페닐설파닐)-벤젠
    4-메틸아미노-2,2',4'-트리클로로디페닐설파이드
    3-브로모-4-(2,4-디클로로페닐설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드
    3-히드록시-4-(2,3-디클로로페닐설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드
    6-클로로-5-(2,4-디클로로페닐설파닐)-1H-벤즈이미다졸
    4-아미노-2-클로로페닐-(2',4'-디메틸페닐)-설파이드 히드로클로라이드
    2,5-디클로로-4-(2,4-디클로로페닐설파닐)-페닐아민 히드로클로라이드
    4-아미노-2-클로로페닐-(2'-메틸-4'-클로로페닐)-설파이드
    4-아미노-2-클로로페닐-(2',4'-디플루오로페닐)-설파이드 히드로클로라이드
    4-아미노-2-클로로페닐-(2',4',6'-트리클로로페닐)-설파이드
    4-아미노-2-클로로페닐-(2'-아미노-4'-클로로페닐)-설파이드
    4-아미노-2-클로로페닐-(2'-클로로-4'-니트로페닐)-설파이드
    4-아미노-2-클로로페닐-(2'-니트로-4'-클로로페닐)-설파이드
    4-아미노-2-클로로페닐-(3',4'-디클로로페닐)-설파이드
    4-아미노-2-클로로페닐-2-(3-클로로-5-트리플루오로메틸피리딜)-설파이드
    비스-(4,4'-디아미노-2,2'-디클로로페닐)-설파이드
    4-아미노-2-클로로페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드
    4-아미노-2-클로로페닐-(4'-아세트아미도-2'-클로로페닐)-설파이드
    4-아미노-2-클로로페닐-6-(5-니트로퀴놀리노)-설파이드
    4-아미노-2-클로로페닐-(4'-디메틸아미노-2'-클로로페닐)-설파이드
    2-클로로-4-아미노-5-메틸아미노페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드
    2-클로로-4-아미노-5-N-모르폴리노페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드
    4-아미노-2-트리플루오로메틸페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드IC86405
    4-아미노-2-클로로페닐-2-(5-니트로-3-브로모)-피리딘 설파이드
    4-아미노메틸-2-클로로페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드
    4,5-디클로로-2-(2,4-디클로로페닐설파닐)-페닐아민
    3,5-디클로로-4-(2,4-디클로로페닐설파닐)-페닐아민
    2,3-디클로로-4-(2,4-디클로로페닐설파닐)-페닐아민
    4-아미노-2-플루오로페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드
    5-아미노-3-클로로페닐-(2',4'-디클로로페닐)-설파이드
    3-클로로-4-(1-클로로-나프탈렌-2-일설파닐)-페닐아민
    1-(3-니트로-4-페닐설파닐-페닐)-에타논
    1-(3-니트로-4-페닐설파닐-페닐)-에타논 옥심
    5-트리플루오로메틸-2-페닐설파닐-벤조니트릴
    1-(3,5-디클로로페닐)-3-페닐설파닐-피롤리딘-2,5-디온
    비스-2,4,6-트리니트로페닐-설파이드
    2-메틸-1-(2-o-톨릴설파닐-페닐)-1H-피롤
    3-[2-(4-클로로-2-니트로-페닐설파닐)-페닐아미노-3H-이소벤조푸란-1-온
    4-(벤조티아졸-2-일설파닐)-3-클로로-페닐아민
    2-니트로-4-클로로페닐-(2' -아미노페닐)-설파이드
    6-아미노-2-클로로페닐-(4'-메틸페닐)-설파이드
    4-니트로페닐-(2'-클로로페닐)-설파이드
    2,4-디니트로페닐-(4'-클로로페닐)-설파이드
    4-아미노페닐-(2'-클로로페닐)-설파이드
    2,4-디아미노페닐-(4'-이소프로필페닐)-설파이드
    4-니트로-2-클로로페닐-(2',3'-디클로로페닐)-설파이드
    4-아미노-2-클로로페닐-2-(5-니트로-3-브로모)-피리딘-설파이드
    로 구성된 군에서 선택된 것이 특징인 방법.
  14. LFA-1과의 결합에 대해 ICAM-1 또는 ICAM-3과 경쟁하는 LFA-1의 천연 리간드와의 LFA-1의 결합을 저해하는 방법으로서, 천연 리간드에 LFA-1의 결합을 저해하기에 충분한 함유량으로 LFA-1과의 결합에 대해 3-클로로-4-(1-클로로-나프탈렌-2-일설파닐)-페닐아민과 경쟁하는 화합물을, LFA-1을 표면상에 발현하는 세포와 접촉시키는 단계를 포함하는 방법.
  15. 제9항 또는 제14항에 있어서, 리간드는 ICAM-1 또는 ICAM-3인 것이 특징인 방법.
  16. LFA-1과의 결합에 대해 ICAM-1 또는 ICAM-3과 경쟁하는 LFA-1의 천연 리간드와의 LFA-1의 결합에 대한 음성 조절인자를 확인하는 방법으로서, a) LFA-1 결합의 활성인자와 LFA-1을 접촉시키는 단계; b) 시험 화합물의 존재 및 부재 하에 천연 리간드와의 LFA-1 결합을 측정하는 단계; 및 c) 시험 화합물의 존재하에 리간드와 LFA-1의 결합이 감소된 것이 검출될 때 음성 조절인자로서 시험 화합물을 확인하는 단계를 포함하는 방법.
  17. 제16항에 있어서, 활성인자는 크리스탈 바이올렛인 것이 특징인 방법.
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