KR19980084548A - 트롬빈 억제제로서 유용한 신규한 벤즈아미딘계 하이덴토인 유도체 - Google Patents
트롬빈 억제제로서 유용한 신규한 벤즈아미딘계 하이덴토인 유도체 Download PDFInfo
- Publication number
- KR19980084548A KR19980084548A KR1019970020379A KR19970020379A KR19980084548A KR 19980084548 A KR19980084548 A KR 19980084548A KR 1019970020379 A KR1019970020379 A KR 1019970020379A KR 19970020379 A KR19970020379 A KR 19970020379A KR 19980084548 A KR19980084548 A KR 19980084548A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- benzyl
- methyl
- amino
- dione
- imino
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D233/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings
- C07D233/54—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
- C07D233/66—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
- C07D233/72—Two oxygen atoms, e.g. hydantoin
- C07D233/76—Two oxygen atoms, e.g. hydantoin with substituted hydrocarbon radicals attached to the third ring carbon atom
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
- A61K31/4164—1,3-Diazoles
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
본 발명은 합성이 용이하며, 우수한 트롬빈 억제활성을 나타내는 하기 화학식 1 의 신규한 벤즈아미딘계 하이덴토인 유도체 및 그의 약제학적으로 허용되는 염 및 이성체, 그의 제조방법 및 화학식 1 의 화합물을 유효성분으로 함유하는 혈액응고 예방 또는 각종 혈전증 치료용 약제학적 조성물에 관한 것이다.
상기식에서,
R1은 알킬, 사이클로알킬, 치환되거나 비치환되는 아릴, 아릴 부위에서 치환되거나 비치환된 아르알킬, 또는 치환되거나 비치환된 헤테로사이클릴알킬을 나타내고,
R2는 알킬, 각각의 경우에 아릴 부위에서 치환되거나 비치환된 아르알킬 또는 아르알케닐, 또는 각각의 경우에 치환되거나 비치환된 아릴 또는 헤테로사이클릴을 나타낸다.
Description
본 발명은 트롬빈 억제제로 유용한 비팹티드성 하이덴토인 유도체에 관한 것이다. 더욱 구체적으로, 본 발명은 합성이 용이하며, 강력한 트롬빈 억제활성을 나타내는 하기 화학식 1 의 신규한 벤즈아미딘계 하이덴토인 유도체, 그의 제조방법 및 이 화합물을 유효성분으로 함유하는 혈액응고 예방 또는 각종 혈전증 치료용 약제학적 조성물에 관한 것이다.
[화학식 1]
상기식에서,
R1은 알킬, 사이클로알킬, 치환되거나 비치환되는 아릴, 아릴 부위에서 치환되거나 비치환된 아르알킬, 또는 치환되거나 비치환된 헤테로사이클릴알킬을 나타내고,
R2는 알킬, 각각의 경우에 아릴 부위에서 치환되거나 비치환된 아르알킬 또는 아르알케닐, 또는 각각의 경우에 치환되거나 비치환된 아릴 또는 헤테로사이클릴을 나타낸다.
혈액응고 기전에는 여러가지 복잡한 효소반응이 관여하고 있고, 그 마지막 단계에는 프로트롬빈을 트롬빈으로 전환시키는 반응이 포함되는데, 이 반응에서 생성된 트롬빈은 혈소판을 활성화시키며, 섬유소원을 섬유소로 바꾸는 등 혈액응고에 있어서 중요한 역할을 수행하는데, 섬유소는 중합반응에 의해 고분자물질로 바뀌고, 활성화된 혈액인자 XIII 에 의하여 교차결합되어 불용성 혈전이 된다. 트롬빈은 또한 혈액인자 V 와 VIII 을 활성화시키고, 이들은 피이드백에 의하여 혈액응고반응을 가속화시킨다. 따라서, 트롬빈의 억제제는 혈소판의 활성화를 억제하고 섬유소의 생성을 방지하여 효과적인 항응혈제로 작용할 수 있다.
트롬빈의 기질인 피브린과 유사한 절단부위를 갖는 펩티드는 3 개의 아미노산으로 이루어진 D-Phe-Pro-Arg 이며, 이러한 구조를 모방한 유도체들이 트롬빈 억제제로서 효능이 있는 것으로 보고되어 왔다. 이 유도체들은 D-Phe-Pro-Arg 의 C-말단 부분을 알데히드나 포스포네이트, 또는 보론산으로 치환시킨 화합물들이다(참조: Trends in Pharm. Sci. 1993, 14, 366-376). 그러나 이 화합물들은 대부분 펩티드의 성질을 그대로 유지하고 있어서, 펩티드계 화합물이 일반적으로 생체내에서 불안정하고, 장기내로 흡수가 안되며, 빨리 분해 되는 성질을 갖고 있기 때문에 트롬빈 억제효능은 좋으나 경구투여용으로는 적당하지 않다. 따라서, 펩티드계 화합물을 유용한 트롬빈 약제로 개발한다는 것은 매우 어려운 일이라 할 수 있다.
따라서, 최근에는 비펩티드성 화합물들을 트롬빈 억제제로 개발하고자 하는 다양한 연구가 이루어지고 있다. 대표적인 비펩티드성 트롬빈 억제제로는 1990 년에 일본에서 상품화된 하기 화학식 2 로 표시되는 아가트로반(argatroban)이 있다(참조: 미합중국 특허 제 94258192 호 및 4201863 호).
그러나 아가트로반은 아릴술포닐알기닌계 화합물로서 주사제로서의 효능은 뛰어나지만, 경구투여용으로는 전혀 활성이 없고, 또한 복잡한 합성과정을 거쳐야만 제조되는 단점이 있다.
이에 본 발명자들은 합성이 용이하면서 효과적인 트롬빈 억제활성을 나타낼 수 있는 신규한 구조의 비펩티드성 트롬빈 억제제 화합물을 개발하기 위하여 광범한 연구를 수행하였으며, 그 결과 상기 정의한 바와 같은 화학식 1 의 화합물이 이러한 목적을 달성할 수 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.
따라서, 본 발명의 목적은 합성이 용이하며 유용한 트롬빈 억제활성을 나타내는 화학식 1 로 표시되는 벤즈아미딘계 하이덴토인 유도체 및 그의 약제학적으로 허용되는 염 및 이성체를 제공하는 것이다.
[화학식 1]
상기식에서,
R1은 알킬, 사이클로알킬, 치환되거나 비치환되는 아릴, 아릴 부위에서 치환되거나 비치환된 아르알킬, 또는 치환되거나 비치환된 헤테로사이클릴알킬을 나타내고,
R2는 알킬, 각각의 경우에 아릴 부위에서 치환되거나 비치환된 아르알킬 또는 아르알케닐, 또는 각각의 경우에 치환되거나 비치환된 아릴 또는 헤테로사이클릴을 나타낸다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 화학식 1 의 화합물을 제조하는 방법 및 이 화합물을 유효성분으로 함유하는 혈액응고 예방 또는 각종 혈전증 치료용 약제학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 명세서에서 상기 화학식 1 의 화합물의 치환기를 정의하는데 사용된 용어 알킬은 메틸, 에틸, 이소프로필, 이소부틸, t-부틸, 옥틸 등을 포함하는 탄소수 1 내지 8 의 직쇄 또는 측쇄 알킬을 의미하며, 용어 저급알킬은 이들 알킬 그룹중에서 탄소수가 1 내지 4 인 직쇄 또는 측쇄 알킬을 의미하고, 용어 사이클로알킬은 사이클로헥실을 포함하는 탄소수 3 내지 8 의 사이클릭알킬 그룹을 의미한다.
용어 아릴, 아르알킬 및 아르알케닐에서 아릴은 6-원 내지 14-원 모노사이클릭 내지 트리사이클릭 방향족 그룹을 의미하며, 이들 그룹은 비치환되거나 저급알킬, 저급알콕시, 아릴 및 아릴옥시로 구성된 그룹중에서 선택된 치환체에 의해 일치환 또는 다치환될 수 있다. 용어 아르알킬 및 아르알케닐에서 알킬은 상기 언급한 바와 같은 의미를 나타내며, 알케닐은 비닐, 알릴, 부테닐 등과 같이 이중결합을 갖는 탄소수 2 내지 8 의 직쇄 또는 측쇄 알케닐 그룹을 의미한다.
용어 헤테로사이클릴 및 헤테로사이클릴알킬에서 헤테로사이클릴은 환 구성원소로서 하나 또는 두개의 산소 원자를 함유하는 9- 또는 10-원 헤테로사이클릭 그룹을 의미하며, 저급알킬은 상기 정의한 바와 같은 알킬 그룹을 의미한다.
본 발명에 따르는 화학식 1 의 화합물중에서 바람직한 화합물은 R1이 C1-C4알킬, C3-C6사이클로알킬, C1-C4알콕시에 의해 치환되거나 비치환된 페닐, 벤질 또는 벤조[1,3]디옥솔-5-일메틸을 나타내고, R2는 C1-C4알킬, 각각의 경우에 아릴 부위가 C1-C4알킬, C1-C4알콕시, 페닐 및 벤질옥시로 구성된 그룹중에서 선택된 치환체에 의해 비치환되거나 일치환 내지 삼치환된 6- 내지 14-원 모노사이클릭 내지 트리사이클릭 방향족 그룹인 아릴, 아릴-C1-C4알킬 또는 아릴-C2-C4알케닐, 또는 C1-C4저급알콕시에 의해 비치환되거나 일치환 내지 이치환된 2,3-디히드로-벤조[1,4]디옥시닐 또는 테트라하이드로퓨라닐을 나타내는 화합물이다.
본 발명에 따르는 화학식 1 의 화합물 중에서 특히 바람직한 화합물은 R1이 에틸, 사이클로헥실, 벤질, 페닐, 에톡시페닐 또는 벤조[1,3]디옥솔-5-일메틸을 나타내고, R2는 에틸, 프로필, 페닐, 나프틸, 메톡시페닐, 벤질옥시페닐, 비페닐, 디페닐메틸, 디메톡시메틸페닐, 메톡시페닐비닐, 안트라세닐, 비스벤질옥시페닐, 2,3-디히드로-벤조[1,4]디옥시닐 또는 2,5-디메톡시테트라하이드로퓨라닐을 나타내는 화합물이다.
본 발명에 따르는 화학식 1 의 화합물중의 구체적인 예로는 다음과 같은 화합물이 언급될 수 있다.
1) (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-3-(벤조[1,3]디옥솔-5-일메틸)-1-벤질-이미다졸리딘-2,4-디온,
2) (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-3-벤질-1-(나프탈렌-1-일메틸)-이미다졸리딘-2,4-디온,
3) (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-1-(나프탈렌-1-일메틸)-3-페닐-이미다졸리딘-2,4-디온,
4) (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-3-(벤조[1,3]디옥솔-5-일메틸)-1- (4-메톡시벤질)-이미다졸리딘-2,4-디온,
5) (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-3-(벤조[1,3]디옥솔-5-일메틸)-1- (2,3-디히드로-벤조[1,4]디옥신-6-일메틸)-이미다졸리딘-2,4-디온,
6) (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-3-(벤조[1,3]디옥솔-5-일메틸)-1-(나프탈렌-2-일메틸)-이미다졸리딘-2,4-디온,
7) (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-3-(벤조[1,3]디옥솔-5-일메틸)-1- (4-벤질옥시벤질)-이미다졸리딘-2,4-디온,
8) (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-3-(벤조[1,3]디옥솔-5-일메틸)-1-(비페닐-4-일메틸)-이미다졸리딘-2,4-디온,
9) (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-3-에틸-1-이소부틸-이미다졸리딘-2,4-디온,
10) (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-1-이소부틸-3-페닐-이미다졸리딘-2,4-디온,
11) (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-3-사이클로헥실-1-이소부틸-이미다졸리딘-2,4-디온,
12) (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-3-벤질-1-이소부틸-이미다졸리딘-2,4-디온,
13) (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-3-(4-에톡시-페닐)-1-이소부틸-이미다졸리딘-2,4-디온,
14) (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-3-(벤조[1,3]디옥솔-5-일메틸)-1-이소부틸-이미다졸리딘-2,4-디온,
15) (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-1-(2,4-디메톡시-3-메틸-벤질)-3-에틸-이미다졸리딘-2,4-디온,
16) (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-1-(2,5-디메톡시-테트라히드로퓨란-3-일메틸)-3-에틸-이미다졸리딘-2,4-디온,
17) (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-3-에틸-1-[3-(2-메톡시-페닐)-알릴]-이미다졸리딘-2,4-디온,
18) (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-1-(2,2-디페닐-에틸)-3-에틸-이미다졸리딘-2,4-디온,
19) (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-1-(안트라센-9-일메틸)-3-에틸-이미다졸리딘-2,4-디온,
20) (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-1-(3,5-비스-벤질옥시-벤질)-3-에틸-이미다졸리딘-2,4-디온,
21) (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-3-벤질-1-(2,4-디메톡시-3-메틸-벤질)-이미다졸리딘-2,4-디온,
22) (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-3-벤질-1-(나프탈렌-2-일메틸)-이미다졸리딘-2,4-디온,
23) (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-1-(나프탈렌-2-일메틸)-3-페닐-이미다졸리딘-2,4-디온,
24) (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-3-벤질-1-(나프탈렌-2-일메틸)-이미다졸리딘-2,4-디온,
25) (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-3-(4-에톡시-페닐)-1-(4-메톡시-벤질)-이미다졸리딘-2,4-디온.
이들 본 발명에 따르는 화합물중에서 가장 대표적인 화합물들의 구조를 하기 표 1 에 나타내었다.
| 화합물번호 | 화합물 구조 | 화합물번호 | 화합물 구조 |
| 1 | 4 | ||
| 2 | 5 | ||
| 3 | 6 |
| 화합물번호 | 화합물 구조 | 화합물번호 | 화합물 구조 |
| 7 | 15 | ||
| 8 | 18 | ||
| 13 | 21 |
| 화합물번호 | 화합물 구조 | 화합물번호 | 화합물 구조 |
| 23 | 24 |
본 발명에 따른 화학식 1 의 화합물은 또한 약제학적으로 허용되는 염을 형성할 수도 있다. 이러한 약제학적으로 허용되는 염에는 약제학적으로 허용되는 음이온을 함유하는 무독성 산부가염을 형성하는 산, 예를들면 염산, 황산, 질산, 인산, 브롬화수소산, 요오드화수소산 등과 같은 무기산, 타타르산, 포름산, 시트르산, 아세트산, 트리클로로아세트산 또는 트리플루오로아세트산, 글루콘산, 벤조산, 락트산, 푸마르산, 말레인산 등과 같은 유기 카본산, 메탄설폰산, 벤젠설폰산, p-톨루엔설폰산 또는 나프탈렌설폰산 등과 같은 설폰산 등에 의해 형성된 산부가염이 포함된다.
한편, 본 발명에 따른 화합물은 비대칭 탄소중심을 가질 수 있으므로 라세미 화합물, 부분입체이성체 혼합물 및 개개의 부분입체이성체로서 존재할 수 있으며, 이들 모든 이성체는 본 발명의 범위에 포함된다.
본 발명은 또한 상기 정의된 화학식 1 의 화합물을 제조하는 방법에 관한 것이다.
본 발명에 따르면 화학식 1 의 화합물은 컴비나토리얼(combinatorial) 화학을 이용하여 합성한다. 컴비나토리알 합성방법에서는 고체상(solid phase)을 이용하여 기존의 의약합성법이 이용하는 방법과는 전혀 다른 새로운 마이크로 기술을 이용하기 때문에 짧은 시간과 적은 비용으로 수많은 다양한 화합물들을 동시에 제조할 수 있기 때문에 오늘날 많은 기업들이 새로이 시도하는 방법이 되고 있다(참조: H.M. Geysen et al., Proc. Natl. Acad. Sci, USA, 81, 3998, 1984; M.A. Gallop et al., J. Med. Chem., 37, 1233, 1994; E.M. Gordon et al., J. Med. Chem. 37, 1386, 1994; J.A. Ellman et al., Chem. Rev. 1996, 96, 555-600). 고체상을 이용한 컴비나토리얼 화학을 이용하여 목적화합물을 합성하는 경우에는 모든 화합물들을 동일한 한가지의 제조방법에 의해 다양하고 손쉽게 제조할 수 있다는 잇점이 있다.
본 발명에 따르면 화학식 1 의 목적화합물은 화학식 3 으로 표시되는 왕수지(Wang resin)-결합된 카바메이트 화합물을 디이소프로필아민과 반응시켜 화학식 4 의 화합물을 생성시킨 후에 아미노 보호그룹을 제거함으로써 제조할 수 있다.
상기식에서,
R1및 R2는 상기에서 정의한 바와 같으며,
P 는 아미노-보호그룹을 나타낸다.
일반적인 폐환반응에서는 용매와 강산 또는 염기를 사용하여 반응을 수행하는 것과는 달리 본 발명에 따르는 방법의 폐환반응에서는 디이소프로필아민 만을 사용하여 목적화합물을 제조하는데, 이 반응에서는 디이소프로필아민이 용매의 역할까지 함으로써 별도의 용매를 사용할 필요가 없다는 잇점이 있다. 이러한 방법은 의약의 제조분야에서는 최초로 시도된 것으로, 목적물을 정량적으로, 즉 거의 100% 의 수율로 제조할 수 있다는 잇점이 있다. 본 발명에 따르는 화학식 1 의 화합물의 제조방법은 다음 반응식 1 로 나타낼 수 있다.
상기 반응식에서 R1, R2및 P 는 각각 상기에서 정의한 바와 같다.
본 발명의 방법을 구체적으로 설명하면 다음과 같다. 우선, 화학식 3 의 왕수지-결합된 카바메이트 화합물을 디이소프로필아민으로 처리하고, 계속해서 통상적인 아미노-보호그룹 제거공정을 수행함으로써 간단한 일단계 공정에 의해 목적하는 화학식 1 의 화합물을 수득할 수 있다. 화학식 3 의 화합물에서 결합되어 있는 왕수지(Wang resin)는 이탈그룹으로써 우수한 성질을 가지고 있으며, 여러 회사(예를들면 Advanced ChemTech, Novabiochem 등)에서 제조하여 시판하고 있다. 이 반응에서 디이소프로필아민 대신에 트리에틸아민, 피롤리딘, 피페리딘 등을 사용하는 경우에도 유사한 효과를 나타내는 것으로 밝혀졌으나, 최종적으로 목적화합물을 수득하기 위하여는 사용된 용매를 쉽게 제거할 수 있어야 하고 이러한 점에서 비점이 낮은 디이소프로필아민을 사용하는 것이 바람직하다.
화학식 3 의 화합물을 디이소프로필아민으로 처리하여 수지를 분리시킨 후에, 통상적인 방법에 의해 아미노 보호그룹을 제거함으로써 목적하는 화학식 1 의 화합물을 수득한다. 본 발명에서 특히 바람직하게는 디이소프로필아민으로 처리하여 분리한 중간체를 용매중에서 트리플루오로아세트산으로 처리함으로써 아미노 보호그룹을 제거할 수 있다.
일반적으로 고체상(solid phase)을 이용한 컴비나토리얼 화학반응으로 합성한 생성물은 통상적인 후처리방법, 예를들면 크로마토그래피, 재결정화 등의 추가의 방법을 수행하지 않고도 거의 100% 의 수율로 목적하는 생성물을 수득할 수 있다.
반응식 1 에 도시된 방법에서 출발물질로 사용된 화학식 3 의 수지-결합된 카바메이트 화합물은 화학식 5 의 화합물을 용매중에서 축합체 및 염기의 존재하에 수지와 반응시켜 화학식 6 의 화합물을 생성시키고, 이 화학식 6 의 화합물로 부터 베타트리메틸실릴에톡시카보닐(TEOC) 보호그룹을 제거하여 화학식 7 의 화합물을 생성시키고, 화학식 7 의 화합물을 화학식 8 의 알데히드 화합물과 반응시켜 화학식 9 의 화합물을 수득하고, 화학식 9 의 화합물을 다시 화학식 10 의 이소시아네이트 화합물과 반응시킴으로써 화학식 3 의 화합물을 수득한다.
[화학식 3]
상기식에서, R1및 R2는 상기 정의한 바와 같으며, BOC 는 아미노-보호그룹인 t-부톡시카보닐 그룹이다.
상기한 화학식 3 화합물의 제조방법은 다음 반응식 2 로 나타낼 수 있다.
반응식 2 에 도시된 방법을 각각의 조건에 대한 구체적인 예를 들어 설명하면 다음과 같다. 수지와 화학식 5 의 화합물 3.5 당량을 디이소프로필카보다이미드(DIC) 3.5 당량 및 디메톡시아미노피리딘(DMAP) 3.5 당량의 존재하에 N,N-디메틸아세트아미드(DMA) 용매중에서 하루동안 교반시켜 화합물 6 을 생성시킨다. 생성된 화학식 6 의 화합물을 테트라부틸암모늄플루오라이드(Bu4NF) 5 당량과 테트라하이드로푸란(THF) 용매의 존재하에서로 하룻밤 동안 교반함으로써 베타트리메틸실릴에톡시카보닐(TEOC) 보호그룹을 제거하여 화학식 7 의 화합물을 생성시킨다. 이때 반응의 완결을 확인하기 위하여 카이저(Kaiser) 테스트를 수행하는데, 보호그룹인 베타트리메틸실릴에톡시카보닐(TEOC)가 완전히 제거되면 수지가 진한 청색으로 변한다(양성반응). 보호기가 제거된 화학식 7 의 화합물은 화학식 8 의 알데히드 화합물과 반응시켜 환원적 아민화(reductive amination)시킴으로써 화학식 9 의 화합물을 생성시키고, 이 화학식 8 의 화합물을 다시 디메틸포름아미드와 톨루엔의 혼합용매중에서 5 시간동안 화학식 9 의 이소시아네이트 화합물과 반응시켜 목적하는 중간체인 화학식 3 의 화합물을 생성시킨다.
상기한 바와 같은 화학식 3 의 화합물의 제조방법에서 출발물질로 사용된 화학식 5 의 화합물은 다음 반응식 3 및 4 에 도시된 방법에 의해 제조될 수 있다.
우선, 반응식 3 에서 보는 바와 같이 2-트리메틸실릴에탄올과 p-니트로페닐클로로포르메이트를 반응시키면 트리메틸실릴에틸-p-니트로페닐카보네이트(A)가 생성된다. 또한 별도로, 2-[N-(t-부톡시카보닐)]-아미노-3-(4-시아노-페닐)-프로피온산을 요오도메탄 및 티오닐클로라이드와 반응시켜 2-[N-(t-부톡시카보닐)]-아미노-3-(4-시아노-페닐)-프로피온산 메틸에스테르를 생성시키고, 생성된 화합물을 메틸렌클로라이드중에서 트리플루오로아세트산으로 처리하여 2-아미노-3-(4-시아노-페닐)-프로피온산 메틸에스테르(B)를 생성시킨다.
그후에 반응식 4 에서 보는 바와 같이, 반응식 3 에서 생성된 트리메틸실릴에틸-p-니트로페닐카보네이트(A)와 2-아미노-3-(4-시아노-페닐)-프로피온산 메틸에스테르(B) 를 트리에틸아민 4 당량의 존재하에 아세토니트릴 용매중에서 환류시켜2-[N-베타(트리메틸실릴에톡시카보닐)]-아미노-3-(4-시아노-페닐)-프로피온산 메틸에스테르를 생성시키고, 생성된 화합물을 황화가스(H2S)로 포화시켜 2 내지 3 일 동안 교반하여 니트릴기를 티오카바모일기로 전환시켜 2-[N-베타(트리메틸실릴에톡시카보닐)]-아미노-3-(4-티오카보닐-페닐)-프로피온산 메틸에스테르를 생성시킨다. 생성된 2-[N-베타(트리메틸실릴에톡시카보닐)]-아미노-3-(4-티오카보닐-페닐)-프로피온산 메틸에스테르를 요오도메탄 5 당량과 반응시켜 메틸화시킴으로써 2-[N-베타(트리메틸실릴에톡시카보닐)]-아미노-3-[4-이미노-메틸설퍼닐)-페닐]-프로피온산 메틸에스테르를 생성시키고, 이것을 다시 암모늄아세테이트(NH4OAC) 5 당량과 함께 환류시키면 벤즈아미딘계 화합물인 2-[N-베타(트리메틸실릴에톡시카보닐)]-아미노-3- [4-(아미노-이미노-메틸)-페닐]-프로피온산 메틸에스테르가 생성된다. 생성된 화합물을 트리에틸아민 2 당량 및 (BOC)2O 1 당량과 함께 메틸렌클로라이드 용매중에서 하루동안 교반하여 2-[N-베타(트리메틸실릴에톡시카보닐)]-아미노-3-[4-(t-부톡시카보닐아미노-이미노-메틸)-페닐]-프로피온산 메틸에스테르를 생성시키고, 이 화합물을 0℃ 에서 테트라하이드로푸란/메탄올/물(3:2:1 v/v) 혼합용매중에서 리튬하이드록사이드(LiOH) 1.2 당량과 반응시켜 목적하는 중간체인 화학식 5 의 화합물을 생성시킨다.
상기 언급한 바와 같이 본 발명에 따른 화학식 1 의 화합물은 트롬빈에 대하여 선택적인 억제효과를 나타내며, 따라서 혈액응고 예방 및 혈전증의 치료에 유용하다.
따라서, 본 발명은 또한 화학식 1 의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염을 유효성분으로 함유하는 혈액응고 예방 및 혈전증 치료용 약제학적 조성물을 제공하는 것을 또 다른 목적으로 한다.
본 발명의 화합물을 임상적인 목적으로 투여시에 단일용량 또는 분리용량으로 숙주에게 투여될 총 일일용량은 체중 1㎏ 당 0.1㎎ 내지 10㎎ 의 범위가 바람직하나, 특정환자에 대한 특이용량 수준은 사용될 특정화합물, 개개 환자의 체중, 성, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설률, 약제혼합 및 질환의 중증도에 따라 적절히 결정될 수 있다.
본 발명의 화합물은 바람직하게는 주사용 제제로 제형화하여 투여할 수 있다.
주사용 제제, 예를들면 멸균주사용 수성 또는 유성 현탁액은 공지된 기술에 따라 적합한 분산제, 습윤제, 또는 현탁제를 사용하여 제조할 수 있다. 사용될 수 있는 약제학적으로 허용되는 용매에는 물, 링거액 및 등장성 NaCl 용액이 있으며 멸균 고정오일은 통상적으로 용매 또는 현탁매질로서 사용한다. 모노-, 디-글리세라이드를 포함하여 어떠한 무자극성 고정오일도 이러한 목적으로 사용될 수 있으며, 또한 올레산과 같은 지방산도 주사용 제제에 사용한다.
한편, 본 발명의 화합물을 임상적으로 투여하여 목적하는 항응혈 효과 및 혈전용해효과를 얻고자 하는 경우에, 본 발명에 따른 화학식 1 의 활성화합물은 혈전용해제 및 혈소판 활성 억제제중에서 선택된 1 종 이상의 성분과 동시에 투여를 할 수 있다. 이러한 방식으로 본 발명의 화합물과 혼합하여 투여될 수 있는 혈전용해제로는 t-PA, 유로키나제(Urokinase), 스트렙토키나제(Streptokinase) 등이 포함될 수 있으며, 혈소판 활성 억제제로는 아스피린, 티클로피딘(Ticlopidin), 클로피드로겔(Clopidrogel), 7E3 단일항체 등이 포함된다.
그러나, 혈전의 치료 및 예방을 목적으로 본 발명에 따른 화합물을 함유하는 제제는 상술된 것으로 제한되는 것은 아니며, 혈전의 치료 및 예방에 유용한 제제라면 어떠한 것도 포함될 수 있다.
본 발명은 이하의 실시예 및 실험예에 의하여 더욱 구체적으로 설명되나, 본 발명이 이들 실시예에 의해 어떤 식으로든 제한되는 것은 아니다.
실시예 1: (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-3-(벤조[1,3]디옥솔-5-일메틸)-1-벤질-이미다졸리딘-2,4-디온
테프론 프리트(frit)를 장착시킨 유리반응용기에 왕수지가 결합된 화학식 7 의 벤즈아미드계 화합물 30mg 을 넣고, 이어서 벤즈알데히드 13.2㎎(5 당량), N,N-디메틸아세트아미드 용매 1.0㎖ 및 1% 아세트산 0.1㎖ 를 가하고 25℃ 에서 5 시간 동안 교반하였다. 이어서 나트륨시아노보로하이드라이드(NaBH3CN) 7.8㎎ 을 가하고 하루동안 교반한 후에 흡인여과하여 과량의 용매와 벤즈알데히드를 제거하였다. 잔류물을 메틸렌클라이드 10㎖ 와 메탄올 10㎖ 로 3 회 세척한 후에 카이저 테스트(Kaiser test)를 수행하여 음성반응이 나오는 것으로 반응의 완결을 확인하고, 반응용기중의 생성물에 피페로닐이소시아네이트 18.2㎎(5 당량)을 가하여 5 시간 동안 교반한 후, 다시 여과하였다. 생성물을 완전히 건조시킨 다음 디이소프로필아민 1.0㎖ 를 가하여 5 시간 동안 교반한 후 여과하고, 여액을 완전히 건조시킨 후에 트리플루오로아세트산 1㎖ 와 메틸렌클로라이드 1㎖ 를 가하여 30 분 동안 반응시킨 후에 건조시켜 표제화합물 6.8㎎(총수율: 60%)을 수득하였다.
1HNMR(CDCl3, ppm); δ 7.70(d, 1H, J=7.0Hz), 7.40-7.10(m, 5H), 6.65(m, 1H), 6.24(s, 1H), 5.93(d, 2H, J=24.0Hz), 5.06(d, 1H, J=7.90Hz), 4.44(dd, 1H, J=11.6Hz, J=8.2Hz), 4.33(dd, 1H, J=11.6Hz, J=3.4Hz), 4.20(dd, 1H, J=7.89Hz), 4.09(s, 1H), 3.18(s, 2H)
Mass(FAB, m/e); 457(M++1)
실시예 2: (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-3-벤질-1-(나프탈렌-1-일메틸)-이미다졸리딘-2,4-디온
알데히드로 1-나프탈렌카르보알데히드 19.5㎎ 을 사용하고, 이소시아네이트로 벤질이소시아네이트 16.6㎎ 을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1 에서와 동일한 방법에 따라 반응을 수행하여 표제화합물 7.5㎎(총수율: 65%)을 수득하였다.
1HNMR(CDCl3, ppm); δ88.20(d, 1H, J=10.0Hz), 7.89(m, 2H), 7.60-7.0(m, 13H), 5.62(d, 1H, J=7.90Hz), 4.55(m, 4H), 3.16(m, 2H)
Mass(FAB, m/e): 463(M++1)
실시예 3: (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-1-(나프탈렌-1-일메틸)-3-페닐-이미다졸리딘-2,4-디온
알데히드로 1-나프탈렌카르보알데히드 19.5㎎ 을 사용하고, 이소시아네이트로 페닐이소시아네이트 20.3㎎ 을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1 에서와 동일한 방법에 따라 반응을 수행하여 표제화합물 6.9㎎(총수율: 62%)을 수득하였다.
1HNMR(CDCl3, ppm); δ8.21(d, 1H, J=9.9Hz), 7.90(m, 2H), 7.70-7.30(m, 13H), 5.63(d, 1H, J=7.90Hz), 4.52(m, 2H), 3.10(m, 2H)
Mass(FAB, m/e); 449(M++1)
실시예 4 : (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-3-(벤조[1,3]-디옥솔-5-일메틸)-1-(4-메톡시벤질)-아미다졸리딘-2,4-디온
알데히드로 4-메톡시벤즈알데히드 17.0㎎ 을 사용하고, 이소시아네이트로 피페로닐이소시아네이트 22.1㎎ 을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1 에서와 동일한 방법에 따라 반응을 수행하여 표제화합물 7.9㎎(수율: 65%)을 수득하였다.
Mass(FAB, m/e): 487(M++1)
실시예 5 : (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-3-(벤조[1,3]디옥솔-5-일메틸)-1-(2,3-디히드로-벤조[1,4]디옥신-6-일메틸)-이미다졸리딘-2,4-디온
알데히드로 2,3-디히드로-벤조[1,4]디옥신-6-카르보알데히드 20.5㎎ 을 사용하고, 이소시아네이트로 피페로닐이소시아네이트 22.1㎎ 을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1 에서와 동일한 방법에 따라 반응을 수행하여 표제화합물 8.4㎎(수율: 65%)을 수득하였다.
Mass(FAB, m/e): 515(M++1)
실시예 6 : (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-3-(벤조[1,3]디옥솔-5-일메틸)-1-(나프탈렌-2-일메틸)-이미다졸리딘-2,4-디온
알데히드로 2-나프탈렌카르보알데히드 19.5㎎ 을 사용하고, 이소시아네이트로 피페로닐이소시아네이트 22.1㎎ 을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1 에서와 동일한 방법에 따라 반응을 수행하여 표제화합물 7.6㎎(수율: 60%) 을 수득하였다.
Mass(FAB, m/e): 507(M++1)
실시예 7 : (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-3-(벤조[1,3]디옥솔-5-일메틸)-1-(4-벤질옥시벤질)-이미다졸리딘-2,4-디온
알데히드로 4-벤질옥시벤즈알데히드 26.5㎎ 을 사용하고, 이소시아네이트로 피페로닐이소시아네이트 22.1㎎ 을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1 에서와 동일한 방법에 따라 반응을 수행하여 표제화합물 9.1㎎(수율: 65%)을 수득하였다.
Mass(FAB, m/e): 563(M++1)
실시예 8 : (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-3-(벤조[1,3]디옥솔-5-일메틸)-1-(비페닐-4-일메틸)-이미다졸리딘-2,4-디온
알데히드로 4-페닐벤즈알데히드 22.8㎎ 을 사용하고, 이소시아네이트로 피페로닐이소시아네이트 22.1㎎ 을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1 에서와 동일한 방법에 따라 반응을 수행하여 표제화합물 8.1㎎(수율: 61%)을 수득하였다.
Mass(FAB, m/e): 533(M++1)
실시예 9 : (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-3-에틸-1-이소부틸-이미다졸리딘-2,4-디온
알데히드로 이소부틸알데히드 9.0㎎ 을 사용하고, 이소시아네이트로 에틸이소시아네이트 9.0㎎ 을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1 에서와 동일한 방법에 따라 반응을 수행하여 표제화합물 4.7㎎(수율:60%)을 수득하였다.
Mass(FAB, m/e): 317(M++1)
실시예 10 : (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-1-이소부틸-3-페닐-이미다졸리딘-2,4-디온
알데히드로 이소부틸알데히드 9.0㎎ 을 사용하고, 이소시아네이트로 페닐이소시아네이트 14.9㎎ 을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1 에서와 동일한 방법에 따라 반응을 수행하여 표제화합물 5.5㎎(수율: 60%)을 수득하였다.
Mass(FAB, m/e): 365(M++1)
실시예 11 : (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-3-사이클로헥실-1-이소부틸-이미다졸리딘-2,4-디온
알데히드로 이소부틸알데히드 9.0㎎ 을 사용하고, 이소시아네이트로 사이클로헥실이소시아네이트 15.6㎎ 을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1 에서와 동일한 방법에 따라 반응을 수행하여 표제화합물 5.7㎎(수율: 62%)을 수득하였다.
Mass(FAB, m/e): 371(M++1)
실시예 12 : (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-3-벤질-1-이소부틸-이미다졸리딘-2,4-디온
알데히드로 이소부틸알데히드 9.0㎎ 을 사용하고, 이소시아네이트로 벤질이소시아네이트 14.9㎎ 을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1 에서와 동일한 방법에 따라 반응을 수행하여 표제화합물 5.9㎎(수율: 62%)을 수득하였다.
Mass(FAB, m/e): 379(M++1)
실시예 13 : (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-3-(4-에톡시-페닐)-1-이소부틸-이미다졸리딘-2,4-디온
알데히드로 이소부틸알데히드 9.0㎎ 을 사용하고, 이소시아네이트로 4-에톡시페닐이소시아네이트 20.3㎎ 을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1 에서와 동일한 방법에 따라 반응을 수행하여 표제화합물 10.0㎎(수율: 61%)을 수득하였다.
Mass(FAB, m/e): 409(M++1)
실시예 14 : (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-3-(벤조[1,3]디옥솔-5-일메틸)-1-이소부틸-이미다졸리딘-2,4-디온
알데히드로 이소부틸알데히드 9.0㎎ 을 사용하고, 이소시아네이트로 피페로닐이소시아네이트 22.1㎎ 을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1 에서와 동일한 방법에 따라 반응을 수행하여 표제화합물 6.3㎎(수율: 60%)을 수득하였다.
Mass(FAB, m/e): 423(M++1)
실시예 15 : (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-1-(2,4-디메톡시-3-메틸-벤질)-3-에틸-이미다졸리딘-2,4-디온
알데히드로 2,4-디메톡시-3-메틸벤즈알데히드 39.7㎎ 을 사용하고, 이소시아네이트로 에틸이소시아네이트 9.0㎎ 을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1 에서와 동일한 방법에 따라 반응을 수행하여 표제화합물 5.8㎎(수율: 55%)을 수득하였다.
Mass(FAB, m/e): 425(M++1)
실시예 16 : (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-1-(2,5-디메톡시-테트라하이드로퓨란-3-일메틸)-3-에틸-이미다졸리딘-2,4-디온
알데히드로 2,5-디메톡시-테트라하이드로퓨란-3-카르보알데히드 20.0㎎ 을 사용하고, 이소시아네이트로 에틸이소시아네이트 9.0㎎ 을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1 에서와 동일한 방법에 따라 반응을 수행하여 표제화합물 6.1㎎(수율: 55%)을 수득하였다.
Mass(FAB, m/e): 485(M++1)
실시예 17 : (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-3-에틸-1-[3-(2-메톡시-페닐)-알릴]-이미다졸리딘-2,4-디온
알데히드로 3-(2-메톡시-페닐)-아크릴알데히드 20.3㎎ 을 사용하고, 이소시아네이트로 에틸이소시아네이트 9.0㎎ 을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1 에서와 동일한 방법에 따라 반응을 수행하여 표제화합물 6.9㎎(수율: 57%)을 수득하였다.
Mass(FAB, m/e): 487(M++1)
실시예 18 : (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-1-(2,2-디페닐-에틸)-3-에틸-이미다졸리딘-2,4-디온
알데히드로 2,2-디페닐아세트알데히드 24.5㎎ 을 사용하고, 이소시아네이트로 에틸이소시아네이트 9.0㎎ 을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1 에서와 동일한 방법에 따라 반응을 수행하여 표제화합물 6.5㎎(수율:59%)을 수득하였다.
Mass(FAB, m/e): 441(M++1)
실시예 19 : (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-1-(안트라센-9-일메틸)-3-에틸-이미다졸리딘-2,4-디온
알데히드로 안트라센카르보알데히드 25.8㎎ 을 사용하고, 이소시아네이트로 에틸이소시아네이트 9.0㎎ 을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1 에서와 동일한 방법에 따라 반응을 수행하여 표제화합물 5.6㎎(수율: 50%)을 수득하였다.
Mass(FAB, m/e): 451(M++1)
실시예 20 : (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-1-(3,5-비스-벤질옥시-벤질)-3-에틸-이미다졸리딘-2,4-디온
알데히드로 3,5-비스-벤질옥시-벤즈알데히드 39.7㎎ 을 사용하고, 이소시아네이트로 에틸이소시아네이트 9.0㎎ 을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1 에서와 동일한 방법에 따라 반응을 수행하여 표제화합물 7.2㎎(수율: 52%)을 수득하였다.
Mass(FAB, m/e): 551(M++1)
실시예 21 : (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-3-벤질-1-(2,4-디메톡시-3-메틸-벤질)-3-에틸-이미다졸리딘-2,4-디온
알데히드로 2,4-디메톡시-3-메틸벤즈알데히드 39.7㎎ 을 사용하고, 이소시아네이트로 벤질이소시아네이트 16.6㎎ 을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1 에서와 동일한 방법에 따라 반응을 수행하여 표제화합물 6.3㎎(수율: 63%)을 수득하였다.
Mass(FAB, m/e): 401(M++1)
실시예 22 : (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-3-벤질-1-(나프탈렌-2-일메틸)-이미다졸리딘-2,4-디온
알데히드로 2-나프탈렌카르보알데히드 19.5㎎ 을 사용하고, 이소시아네이트로 벤질이소시아네이트 16.6㎎ 을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1 에서와 동일한 방법에 따라 반응을 수행하여 표제화합물 6.4㎎(수율: 64%)을 수득하였다.
Mass(FAB, m/e): 401(M++1)
실시예 23 : (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-1-(나프탈렌-2-일메틸)-3-페닐-이미다졸리딘-2,4-디온
알데히드로 2-나프탈렌카르보알데히드 19.5㎎ 을 사용하고, 이소시아네이트로 페닐이소시아네이트 20.3㎎ 을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1 에서와 동일한 방법에 따라 반응을 수행하여 표제화합물 6.7㎎(수율: 60%)을 수득하였다.
Mass(FAB, m/e): 449(M++1)
실시예 24 : (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-3-벤질-1-(나프탈렌-2-일메틸)-이미다졸리딘-2,4-디온
알데히드로 2-나프탈렌카르보알데히드 19.5㎎ 을 사용하고, 이소시아네이트로 벤질이소시아네이트 16.6㎎ 을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1 에서와 동일한 방법에 따라 반응을 수행하여 표제화합물 7.4㎎(수율: 64%)을 수득하였다.
Mass(FAB, m/e): 463(M++1)
실시예 25 : (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-3-(4-에톡시-페닐)-1-(4-메톡시-벤질)-이미다졸리딘-2,4-디온
알데히드로 4-메톡시벤즈알데히드 17.0㎎ 을 사용하고, 이소시아네이트로 4-에톡시페닐이소시아네이트 20.3㎎ 을 사용하는 것을 제외하고는 실시예 1 에서와 동일한 방법에 따라 반응을 수행하여 표제화합물 7.3㎎(수율: 62%)을 수득하였다.
Mass(FAB, m/e): 473(M++1)
실험예: 트롬빈 억제제의 억제활성
본 발명에 따르는 화학식 1 의 화합물의 트롬빈에 대한 억제효과는 효소와 반응하여 색을 생성하는 기질을 사용하여 분광광도법으로 측정된 속도상수 Ki 로 결정하였다. 속도상수 Ki 는 효소와 기질 및 억제제를 동시에 넣었을 경우 억제제가 효소활성을 억제하는 정도를 나타내는 것이다. 트롬빈이 기질인 크로모자임 TH(Chromozym TH: Tosyl-Gly-Arg-4-니트로아닐리드 아세테이트)를 가수분해하면 파라-니트로아닐린이 생성된다. 이렇게 생성되는 노란색의 파라-니트로아닐린의 양을 시간에 따른 흡광도의 변화로 측정하였다. 이 속도로 부터 효소의 활성을 측정할 수 있으며, 저해제의 효소활성 억제능력을 측정할 수 있다.
트롬빈에 대한 억제제의 효소활성 억제능력은 아래와 같은 방법으로 결정하였다.
1.5㎖ 큐벳에 150mM NaCl 및 0.1% PEG8000(폴리에틸렌글리콜, 분자량 약 8,000)이 포함된 0.1M 트리스 완충용액(pH 7.8) 1160㎕ 씩을 가한 후, 여기에 색소생성 기질인 크로모자임 TH 0.1mM 용액 225㎕ 를 가하였다. 크로모자임 TH 는 10mM 의 농도가 되도록 디메틸설폭사이드(DMSO)로 용해시킨 것을 상기의 완충용액으로 0.1mM 의 농도로 희석하여 사용하였다. 본 발명의 트롬빈 억제제는 디메틸설폭사이드에 10㎎/㎖ 의 농도가 되도록 용해시킨 후에 상기 언급한 바와 같은 조성의 트리스 완충용액으로 희석하여 0.1㎎/㎖, 0.001㎎/㎖ 농도로 만든 것을 억제제의 양이 0 내지 10㎍ 범위가 되도록 취한 후에 상기의 트리스 완충용액을 가하여 최종부피가 100㎕ 가 되도록 하여 각각의 큐벳에 가하였다.
실온에서 반응용액이 들어 있는 큐벳에 상기의 트리스 완충용액에 0.1㎎/㎖ 의 농도로 용해시킨 소트롬빈 용액 15㎕ 를 가하여 효소가수분해 반응을 시작하였다. 효소를 가하는 순간부터 2 분 동안 반응에 의해 생성되는 파라-니트로아닐린의 양을 381㎚ 에서 흡광도의 변화로 모니터하여 반응시간 대 흡광도의 연속 스펙트럼을 그렸다. 여러종류의 억제제 농도에서 상기의 실험을 반복해서 수행하여 연속 스펙트럼을 얻었다.
각 반응에서 반응시간 초기 30 초 이내의 기울기로 부터 초기속도 Vi 을 구한 후, 억제제 농도 대비 초기속도의 역수(1/Vi)에 대한 그래프를 도시하였다. 그래프 위의 점들을 만족하는 1 차 식을 계산해 낸 후 그 식의 x 절편으로 부터 효소반응식을 사용하여 Ki 를 계산하였다. 이 계산에 사용된 KM값은 8.3μM 로 일정효소 농도에서 기질의 농도를 변화시킴으로써 얻었다.
효소반응식(Michaelis-Menten equation)
상기 효소반응식에서 [I] 는 억제제의 농도를 나타내고, [S] 는 기질의 농도를 의미하며, Vmax 는 최고 초기속도를 의미하고, Km 은 미카엘리스(Michaelis) 상수로 여기에서는 8.3μM 을 의미한다.
트롬빈에 대해 측정된 각 억제제의 효소활성 억제능력을 Ki 값으로 하여 하기 표 2 에 나타내었다.
| 억제제 화합물(실시예 번호) | Ki 값(μM) | 억제제 화합물(실시예 번호) | Ki 값 (μM) |
| 1 | 4.82 | 14 | 190 |
| 2 | 4.70 | 15 | 13.1 |
| 3 | 6.59 | 16 | 15.9 |
| 4 | 6.05 | 17 | 13.1 |
| 5 | 3.04 | 18 | 15.3 |
| 6 | 2.23 | 20 | 15.3 |
| 7 | 4.41 | 21 | 5.42 |
| 8 | 4.09 | 24 | 15.2 |
| 13 | 144.4 | 25 | 25.7 |
상기의 실험결과로 부터 본 발명의 화합물은 트립신 대비 트롬빈에 대한 선택성이 공지의 화합물들에 비해 월등히 우수함을 알 수 있다.
Claims (6)
- 하기 화학식 1 로 표시되는 화합물, 그의 약제학적으로 허용되는 염 및 이성체:[화학식 1]상기식에서,R1은 알킬, 사이클로알킬, 치환되거나 비치환되는 아릴, 아릴 부위에서 치환되거나 비치환된 아르알킬, 또는 치환되거나 비치환된 헤테로사이클릴알킬을 나타내고,R2는 알킬, 각각의 경우에 아릴 부위에서 치환되거나 비치환된 아르알킬 또는 아르알케닐, 또는 각각의 경우에 치환되거나 비치환된 아릴 또는 헤테로사이클릴을 나타낸다.
- 제 1 항에 있어서, R1이 C1-C4알킬, C3-C6사이클로알킬, C1-C4알콕시에 의해 치환되거나 비치환된 페닐, 벤질 또는 벤조[1,3]디옥솔-5-일메틸을 나타내고, R2는 C1-C4알킬, 각각의 경우에 아릴 부위가 C1-C4알킬, C1-C4알콕시, 페닐 및 벤질옥시로 구성된 그룹중에서 선택된 치환체에 의해 비치환되거나 일치환 내지 삼치환된 6- 내지 14-원 모노사이클릭 내지 트리사이클릭 방향족 그룹인 아릴, 아릴-C1-C4알킬 또는 아릴-C2-C4알케닐, 또는 C1-C4저급알콕시에 의해 비치환되거나 일치환 내지 이치환된 2,3-디히드로-벤조[1,4]디옥시닐 또는 테트라하이드로퓨라닐을 나타내는 화합물.
- 제 2 항에 있어서, R1이 에틸, 사이클로헥실, 벤질, 페닐, 에톡시페닐 또는 벤조[1,3]디옥솔-5-일메틸을 나타내고, R2는 에틸, 프로필, 페닐, 나프틸, 메톡시페닐, 벤질옥시페닐, 비페닐, 디페닐메틸, 디메톡시메틸페닐, 메톡시페닐비닐, 안트라세닐, 비스벤질옥시페닐, 2,3-디히드로-벤조[1,4]디옥시닐 또는 2,5-디메톡시테트라하이드로퓨라닐을 나타내는 화합물.
- 제 1 항에 있어서, (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-3-(벤조[1,3]디옥솔-5-일메틸)-1-벤질-이미다졸리딘-2,4-디온, (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-3-벤질-1-(나프탈렌-1-일메틸)-이미다졸리딘-2,4-디온, (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-1-(나프탈렌-1-일메틸)-3-페닐-이미다졸리딘-2,4-디온, (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-3-(벤조[1,3]디옥솔-5-일메틸)-1-(4-메톡시벤질)-이미다졸리딘-2,4-디온, (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-3-(벤조[1,3]디옥솔-5-일메틸)-1-(2,3-디히드로-벤조[1,4]디옥신-6-일메틸)-이미다졸리딘-2,4-디온, (S)- 5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-3-(벤조[1,3]디옥솔-5-일메틸)-1-(나프탈렌-2-일메틸)-이미다졸리딘-2,4-디온, (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-3-(벤조[1,3]디옥솔-5-일메틸)-1-(4-벤질옥시벤질)-이미다졸리딘-2,4-디온, (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-3-(벤조[1,3]디옥솔-5-일메틸)-1-(비페닐-4-일메틸)-이미다졸리딘-2,4-디온, (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-3-에틸-1-이소부틸-이미다졸리딘-2,4-디온, (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-1-이소부틸-3-페닐-이미다졸리딘-2,4-디온, (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-3-사이클로헥실-1-이소부틸-이미다졸리딘-2,4-디온, (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-3-벤질-1-이소부틸-이미다졸리딘-2,4-디온, (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-3-(4-에톡시-페닐)- 1-이소부틸-이미다졸리딘-2,4-디온, (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-3-(벤조[1,3]디옥솔-5-일메틸)-1-이소부틸-이미다졸리딘-2,4-디온, (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-1-(2,4-디메톡시-3-메틸-벤질)-에틸-이미다졸리딘-2,4-디온, (S)- 5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-1-(2,5-디메톡시-테트라히드로퓨란-3-일메틸)-3-에틸-이미다졸리딘-2,4-디온, (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-3-에틸-1-[3- (2-메톡시-페닐)-알릴]-이미다졸리딘-2,4-디온, (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-1-(2,2-디페닐-에틸)-3-에틸-이미다졸리딘-2,4-디온, (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-1-(안트라센-9-일메틸)-3-에틸-이미다졸리딘-2,4-디온, (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-1-(3,5-비스-벤질옥시-벤질)-3-에틸-이미다졸리딘-2,4-디온, (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-3-벤질-1-(2,4-디메톡시-3-메틸-벤질)- 이미다졸리딘-2,4-디온, (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-3-벤질-1-(나프탈렌-2-일메틸)-이미다졸리딘-2,4-디온, (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-1-(나프탈렌-2-일메틸)-3-페닐-이미다졸리딘-2,4-디온, (S)-5-[4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-3-벤질-1-(나프탈렌-2-일메틸)-이미다졸리딘-2,4-디온 및 (S)-5- [4-(아미노-이미노-메틸)-벤질]-3-(4-에톡시-페닐)-1-(4-메톡시-벤질)-이미다졸리딘-2,4-디온으로 구성된 그룹중에서 선택되는 화합물.
- 화학식 3 으로 표시되는 왕수지(Wang resin)-결합된 카바메이트 화합물을 디이소프로필아민과 반응시켜 화학식 4 의 화합물을 생성시킨 후에 아미노 보호그룹을 제거하여 화학식 1 의 화합물, 그의 염 및 이성체를 제조하는 방법:[화학식 1][화학식 3][화학식 4]상기식에서,R1은 알킬, 사이클로알킬, 치환되거나 비치환되는 아릴, 아릴 부위에서 치환되거나 비치환된 아르알킬, 또는 치환되거나 비치환된 헤테로사이클릴알킬을 나타내고,R2는 알킬, 각각의 경우에 아릴 부위에서 치환되거나 비치환된 아르알킬 또는 아르알케닐, 또는 각각의 경우에 치환되거나 비치환된 아릴 또는 헤테로사이클릴을 나타내고,P 는 아미노-보호그룹을 나타낸다.
- 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 유효성분으로 제 1 항 내지 4 항중의 어느 하나에 따르는 화학식 1 의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염을 함유하는 혈액응고 예방 및 혈전증 치료용 조성물.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1019970020379A KR100227730B1 (ko) | 1997-05-23 | 1997-05-23 | 트롬빈 억제제로서 유용한 신규한 벤즈아미딘계 하이덴토인 유도체 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1019970020379A KR100227730B1 (ko) | 1997-05-23 | 1997-05-23 | 트롬빈 억제제로서 유용한 신규한 벤즈아미딘계 하이덴토인 유도체 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR19980084548A true KR19980084548A (ko) | 1998-12-05 |
| KR100227730B1 KR100227730B1 (ko) | 1999-11-01 |
Family
ID=19506922
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1019970020379A KR100227730B1 (ko) | 1997-05-23 | 1997-05-23 | 트롬빈 억제제로서 유용한 신규한 벤즈아미딘계 하이덴토인 유도체 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR100227730B1 (ko) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR19990074598A (ko) * | 1998-03-12 | 1999-10-05 | 성재갑 | 고체상 반응을 이용한 벤즈아미딘 유도체의 신규한 제조방법 |
-
1997
- 1997-05-23 KR KR1019970020379A patent/KR100227730B1/ko not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR100227730B1 (ko) | 1999-11-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP4199309B2 (ja) | 新規アセトアミド誘導体およびプロテアーゼ阻害 | |
| JP3192070B2 (ja) | アスパラギン酸プロテアーゼ基質同配体の抗ウイルス性エーテル | |
| AU775701B2 (en) | Sulfamato hydroxamic acid metalloprotease inhibitor | |
| KR0183374B1 (ko) | 혈관평활근 이완작용을 가진 화합물과 그의 제조방법 | |
| SK73898A3 (en) | Metalloproteinase inhibitors, pharmaceutical compositions containing them and their pharmaceutical uses, and methods and intermediates useful for their preparation | |
| KR19990022450A (ko) | 아릴설포닐아미노벤젠 유도체 및 엑스에이 인자 억제제로서의그 이용 방법 | |
| OA10764A (en) | Protease inhibitors | |
| KR0173034B1 (ko) | 선택적 트롬빈 억제제 | |
| KR100647177B1 (ko) | 퀴놀린 함유 α-케토아미드 시스테인 및 세린 프로테아제억제제 | |
| KR20000047461A (ko) | 트롬빈 억제제 | |
| CA2248082A1 (en) | Peptidyl compounds having mmp and tnf- liberation inhibitory activity | |
| KR20010020391A (ko) | 프로테아제 억제제 | |
| JP2004517060A (ja) | セリンプロテアーゼ抑制剤として有用な酸誘導体 | |
| JP2008534534A (ja) | Ｍｍｐ阻害剤としての置換テトラヒドロイソキノリン、関連する製造法及び医薬としての使用 | |
| US7122559B2 (en) | Phenylglycine derivatives useful as serine protease inhibitors | |
| US20070203118A1 (en) | Substituted tetrahydroisoquinolines used in the form of mmp inhibitors, method for the production and use thereof in the form of drugs | |
| WO1999059570A1 (en) | Protease inhibitors | |
| KR100227730B1 (ko) | 트롬빈 억제제로서 유용한 신규한 벤즈아미딘계 하이덴토인 유도체 | |
| JP2006517589A (ja) | セリンプロテアーゼ・インヒビターとして有用なベンゼンアセトアミド化合物 | |
| AU2005220705A1 (en) | Analogs exhibiting inhibition of cell proliferation, methods of making, and uses thereof | |
| KR100227729B1 (ko) | 트롬빈 억제제로서 유용한 신규한 부틸아민계 하이덴토인 유도체 | |
| RU2287525C2 (ru) | Производные имидазолидина в качестве ингибиторов пептиддеформилазы | |
| KR20020058077A (ko) | 1,3,4-옥사디아졸린-2-온 유도체 및 그 유도체를 유효성분으로 하는 약제 | |
| KR0163671B1 (ko) | N-아릴술포닐-알파-프로파길글리신아미드 유도체 | |
| KR20060086367A (ko) | 매트릭스-메탈로프로테이나제의 억제제로서 사용된바이사이클릭 이미노산 유도체 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A201 | Request for examination | ||
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
| GRNT | Written decision to grant | ||
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20040624 Year of fee payment: 6 |
|
| LAPS | Lapse due to unpaid annual fee |