KR19980015533A - 보존성이 우수한 동결건조균체의 제조방법 - Google Patents

Abstract

동결건조 균체를 제조할 경우, 전동결시의 온도 강하 조건을 분당 5℃∼15℃의 속도로 하고, 또 동결건조 시료의 온도가 -5℃∼-15℃가 되었을 때 5분∼10분간 일정 온도를 유지시켜 제조한 동결건조 균체는 동결건조 균체의 보존시 균주의 안정성이 매우 높다.

Description

보존성이 우수한 동결건조균체의 제조방법

본 발명은 동결건조균체에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 동결건조 균체중 생균수를 월등이 향상시킬 수 있는 보존성이 우수한 동결건조균체의 제조방법에 관한 기술이다.

동결건조는 미생물을 장기 보존하거나, 효소 또는 기능성 단백질 등과 같이 수용액 상태에서 온도 등의 조건에 따라 상대적으로 불안정한 활성물질을 보존하거나, 식품의 향과 성상을 원형 그대로 보존하기 위하여 사용되어온 건조방법중의 하나이다. 특히 미생물을 장기 보존할 경우 동결건조방법으로 건조시켜 보관하는 것이 일반적인 기술로 알려져 있다.

종래의 미생물 균주를 동결건조하는 방법은, 스킴밀크, 당류 등의 성분 또는 이들의 혼합물로 이루어진 동결건조 보호제를 균체와 혼합후 급속히 냉각시키고 이를 동결건조장치에서 건조하는 방법에 의하여 행하여졌다. 그러나 상기한 종래의 동결건조 방법은 동결건조전에 급속히 냉각시키는 과정에서 균체가 동해를 입어 생균수가 감소되는 단점이 있었다.

본 발명은 상기와 같은 종래 기술의 문제점을 해결하기 위하여 개발된 것으로서, 본 발명의 목적은 동결건조후 생균수가 많은 우수한 보존성을 동결건조균체의 제조방법을 제공하는 것이다.

도 1은 본 발명의 동결건조를 위한 시료 전동결시 시료의 온도 강하를 나타내는 그래프.

상기와 같은 본 발명의 목적을 달성하기 위하여 본 발명은, 미생물을 동결건조함에 있어서, 상기 동결건조장치내의 온도를 분당 5℃∼15℃의 속도로 강하시키는 것을 특징으로 하는 동결건조균체의 제조방법을 제공한다.

상기한 본 발명에 있어서, 상기 동결건조 시료의 온도가 -5℃∼-15℃가 되었을 때 5분∼10분간 일정 온도를 유지시키는 공정을 더욱 포함하는 것이 바람직하다. 그리고 상기 미생물은 사카로마이세스 세레비시아인 것이 바람직하며, 상기 미생물은 YPD 액체 배지에 배양한 후 농축하여 동결건조하는 것이 바람직하다.

본 발명을 대표적인 실시예를 참고하여 보다 상세히 설명하면 다음과 같다.

대표적인 실시예

사카로마이세스 세레비시아(Saccharomyces cerevisiae) 균을 글루코스 2중량%, 펩톤 1중량%, 효모엑기스 1중량%로 이루어진 YPD 액체 배지에서 배양하여 얻은 균체를 농축하고 ,스킴 밀크와 당으로 구성된 동결건조 보호제와 혼합한 후 유리 페트리 접시에 도말한다. 이를 동결건조장치의 동결건조상자에 배열한 후 동결건조상자의 온도를 -5℃∼-15℃가 될 때까지 분당 5℃∼15℃의 속도로 강하시키고 시료의 온도가 -5℃∼-15℃가 되었을 때 5분∼10분간 일정온도를 유지시킨다. 이후 다시 온도를 분당 5℃∼15℃의 속도로 강하시켜 -40℃∼-50℃가 되게 한다. 시료의 온도가 -40℃∼-50℃가 되었을 때 감압을하여 동결건조 한다.(도 1 참조) 동결건조시의 압력은 10-3∼10-5mmHg로 유지한다.

동결건조 과정중 전동결과정시 상기의 방법에 의한 처리후 감압에 의한 건조를 하였을 때 종래의 방법과 같이 균체를 급속동결 한후 감압에 의한 건조를 하였을 때보다 동결건조된 균체중의 생균수를 현저히 높일 수 있었다.

이하 본 발명의 바람직한 실시예 및 비교예를 기재한다. 그러나 하기한 실시예는 본 발명의 이해를 돕기 위한 본 발명의 바람직한 일 실시예로서 본 발명이 하기한 실시예에 한정되는 것은 아니다.

실시예

사카로마이세스 세레비시아 균을 글루코스 2중량%, 펩톤 1중량%, 효모엑기스 1중량%로 이루어진 YPD 액체 배지 60ml에서 24시간 배양후 YPD 액체 배지 3L 부피가 들어있는 발효조에 접종하여 임펠러 회전속도 400rpm, 분당 공기송입량 3Nl, 배양온도 30℃에서 24시간 배양하였다. 배양액을 7000rpm의 회전속도로 20분간 원심분리하여 얻은 균체를 최초 배지부피의 1/10정도로 다시 현탁하여 농축하였다. 농축액을 스킴밀크와 당으로 구성된 동결건조 보호제와 혼합한 후 유리 페트리접시에 도말하였다.

상기 시료가 도말된 페트리접시를 동결건조 장치의 동결건조 상자에 배열한 후 동결건조 상자의 온도를 -5℃∼-15℃가 될 때까지 분당 5℃∼15℃의 속도로 강하시키고 시료의 온도가 -5℃∼-15℃가 되었을 때 5분-10분간 일정온도를 유지시켰다. 이후 다시 온도를 분당 5℃∼15℃의 속도로 강하시켜 -40℃∼-50℃가 되게 하였다. 시료의 온도가 -40℃∼-50℃가 되었을 때 감압을 하여 동결건조하였다.(도 1 참조) 동결건조시의 감압의 조건은 10-3∼10-5mmHg로 유지하도록 하였다.

상기의 온도와 감압조건에서 12시간∼36시간 동안 건조한 후의 시료를 사용하여 생균수를 측정하였다.

비교예

대조군으로는 배양, 농축 및 전동결 후 건조조건 등은 상기한 실시예와 동일하지만 전동결시 시료의 온도가 -40℃∼-50℃가 되도록 급속히 동결을 시킨 시료를 사용하였다.

상기한 실시예 및 비교예에서 제조된 동결건조균체의 생균수 측정은 적정량을 멸균 생리 식염수로 적정 희석 배수로 희석후 YPD 한천 고체배지에 균의 콜로니가 고체 배지 페트리 접시당 30∼300개정도 나타나게 도말한 후 30℃ 항온기에서 약 48시간을 배양하여 균수를 측정하였다.

상기의 전동결조건을 사용하여 동결건조시킨 동결건조균체에서의 생균수는 동결건조균체 그람당 1.5×1011 생균으로 대조군의 전동결조건으로 동결건조시킨 동결건조균체에서의 생균수 동결건조균체 그람당 1.2×1010생균에 비하여 10배이상 높은 생균을 포함하고 있는 것을 나타났다.

이상에서 살펴본 바와 같이 본 발명에 따른 동결건조균체의 제조방법을 사용할 경우 동결건조균체내에 존재하는 생균의 수가 매우 높았다. 즉 본 발명의 전동결건조를 행할 경우 동결건조 후 높은 생균수를 포함하는 동결건조균체를 제조할 수 있다. 이와 같은 본 발명의 동결건조균체의 제조방법을, 정장제로 상품화되고 있는 사카로마이세스 세레비시아 균체의 동결건조 방법에 사용할 경우, 종래의 전동결단계에서 생기는 동해로 인하여 생균수가 감소하는 문제를 해결할 수 있다.

Claims (4)

1. 미생물을 동결건조함에 있어서, 상기 동결건조장치내의 온도를 분당 5℃∼15℃의 속도로 강하시키는 것을 특징으로 하는 동결건조균체의 제조방법.
2. 청구항 1에 있어서, 상기 동결건조 시료의 온도가 -5℃∼-15℃가 되었을 때 5분∼10분간 일정 온도를 유지시키는 공정을 더욱 포함하는 동결건조 균체의 제조방법.
3. 청구항 1에 있어서, 상기 미생물은 사카로마이세스 세레비시아인 동결건조 균체의 제조방법.
4. 청구항 3에 있어서, 상기 미생물은 YPD 액체 배지에 배양한 후 농축하여 동결건조하는 것인 동결건조 균체의 제조방법.