KR102676584B1 - 구아바 및 녹차잎 추출복합물(Epiverin noseteacher) 유래 유효성분을 함유하는 알레르기 개선 및 치료용 조성물 - Google Patents
구아바 및 녹차잎 추출복합물(Epiverin noseteacher) 유래 유효성분을 함유하는 알레르기 개선 및 치료용 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 알레르기 개선 및 치료용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 에피갈로카테킨갈레이트(Epigallocatechin gallate, EGCG), 구아제베린(guaijaverin) 및 아비쿨라린(avicularin)을 포함하는, 알레르기성 질환의 치료 및 개선용 약학적 조성물, 알레르기 개선용 식품 조성물, 및 알레르기 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.
Description
본 발명은 알레르기 개선 및 치료용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 알러지성 질환의 개선 및 치료에 효과적인 약학적 조성물, 및 알러지성 증상의 개선에 효과적인 화장료 조성물 및 식품 조성물에 관한 것이다.
최근 도시인들은 생활환경이 변화함에 따라 집안의 카펫에 서식하는 진드기, 습도 저하에 따라 증가하는 먼지, 애완견의 털, 꽃가루, 새로운 과일 및 음식, 식품첨가물 등 면역 과민반응(hypersensitivity)을 유발하는 다양한 알레르겐(allergens)에 노출될 기회가 점차 커지고 있다. 이중 아토피 피부염, 천식, 알러지성 비염, 알러지성 결막염, 알러지성 피부염, 알러지성 접촉성 피부염, 담마진 또는 식품 알레르기와 같은 알러지성 질환은 최근 크게 증가하여 사회적인 문제로 대두됨에 따라 관심이 집중되고 있다. 알러지성 질환은 면역과민반응에 의해 발생하는 질환을 의미하는 것으로, 아토피 피부염, 천식, 알러지성 비염, 알러지성 결막염, 알러지성 피부염, 알러지성 접촉성 피부염, 담마진 또는 식품 알레르기가 포함된다.
아토피 피부염을 비롯한 알러지성 질환의 정확한 병태생리는 아직까지 완전히 이해되고 있지 않으나 유전적 소인과 함께 면역학적, 환경적 요인이 관여하리라고 생각되고 있으며, 특히 천식, 알러지성 비염, 아토피 피부염과 같은 알러지성 질환 환자에게서 공통적으로 면역 불균형 현상이 나타나고 있어 면역학적 관점에서 많은 연구가 이루어지고 있다.
아토피성 피부염, 알레르기성 비염 및 만성천식 치료에 흔히 사용되던 종래의 소염진통제는 아라키돈산을 대사하여 기관지 수축, 기관지 과민반응, 기도의 염증을 유발시키는 류코트라이인류(leukotrienes)의 형성을 촉매하는 리폭시게나제(lipoxygenase: 이하 LO)라는 효소와 세포의 사이클로옥시게나제(cyclooxygenase: 이하 COX)라는 효소를 통하여 프로스타글란딘(prostaglandins)류 생성 대사를 억제함으로써 소염진통 효과를 나타낸다. COX는 2종류의 아이소폼(isoform)을 가지고 있는데, COX-1은 염증 부위뿐만 아니라 정상적인 인체 여러 장기와 조직, 즉 위장관 또는 신장 등에서 프로스타글란딘류 물질을 생성하는 데에도 관여한다. 그러나 COX-2는 염증이 있는 부위에서만 작용하는 효소로 알려져 있다. 기존의 시중에서 판매되고 있는 비스테로이성 항염증제(nonsteroidal anti-inflammatory drugs; 이하 NSAIDs)는 COX-1과 COX-2를 동시에 억제하거나 주로 COX-1을 억제하기 때문에 염증이 있는 조직뿐만 아니라, 장기간 복용 시 간, 위장관 또는 신장 등의 기능유지에 필수적인 프로스타글란딘류의 생성을 동시에 억제하여 많은 부작용을 야기하는 것으로 알려져 있다. 최근 개발되고 있는 선택적 COX-2 억제제(selective COX-2 inhibitor)들은 기존의 소염진통제 효과를 그대로 유지하면서 부작용을 크게 감소시킬 수 있어 현재 그 사용이 증가되고 있는 추세이다. 따라서 LO 저해 활성과 선택적인 COX-2 저해 활성을 갖는 물질들은 부작용이 적은 알레르기성 비염, 만성천식 및 아토피성 피부염 치료제로 사용될 수 있다.
생체 내 결합조직에 널리 퍼져있는 비만세포(mast cell)는 자극이 가해질 때 세포내 함유하고 있는 물질을 분비하는 기능을 갖고 있다. 이 세포는 탈과립 유발 인자들과 억제 인자들에 대한 연구를 통하여 아토피성 피부염, 알레르기성 비염 및 만성천식 등 여러 가지 알레르기 질환을 예방하거나 치료할 수 있는 적합한 약물을 개발하는데 많이 이용되고 있다. 비만세포 및 기타 다른 세포의 활성화에 의해 유발되는 알레르기 질환에 대한 유발기전은 대략 밝혀져 있으나, 치료는 아직도 일시적으로 증상을 완화시키는 항히스타민제나 스테로이드제를 사용하는데 머물고 있다. 특히, 히스타민은 알레르기성 질환들의 증상을 유발하는 주된 매개물질로 사람에서 비만세포와 호염기성세포(basophil)에 많이 저장되어 있다. 따라서 비만세포를 이용한 연구를 통하여 아토피성 피부염, 알레르기성 비염 및 만성천식 효능 유무와 그 약리기전을 밝힐 수 있다.
한편, 천연물 유래, 특히 독성이 없거나 극히 적은 식물, 특히 식물의 잎을 주원료로 하는 식물복합추출물에 대하여는 여전히 개발이 중이나, 안전하게 섭취할 수 있는 반면 알레르기성 질환 및 증상에 대한 개선 및 치료 효과가 충분하지 않은 측면이 있다. 예를 들어 대한민국 공개특허공보 공개번호 제2011-0105278호는 "옻 발효 추출물 및 자외선으로 처리한 항아토피 활성 섬유 및 직물 및 그 제조방법"에 관하여 기술하고 있으며, 이에 따른 옻 발효 추출물 및 자외선 처리 항아토피 활성 섬유는 섬유에의 옻 발효 추출물의 고착성 및 세탁견뢰도가 우수하고 옻 발효 추출물에 의한 항아토피 활성 또한 우수한 효과가 있음을 개시하고 있다.
그러나, 여전히 아토피 등을 비롯한 다양한 알레르기성 반응 및 증상의 개선을 위해 성분이 안전하면서도 효과적인 조성에 대한 요구가 존재한다.
본 발명의 한 측면은 알레르기성 질환에 효과적인 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 측면은 알레르기는 개선시킬 수 있는 식품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 측면은 알레르기는 개선시킬 수 있는 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 일 견지에 의하면, 에피갈로카테킨갈레이트(Epigallocatechin gallate, EGCG), 구아제베린(guaijaverin) 및 아비쿨라린(avicularin)을 포함하는, 알레르기성 질환의 치료 및 개선용 약학적 조성물이 제공된다.
본 발명의 다른 견지에 의하면, 에피갈로카테킨갈레이트(Epigallocatechin gallate, EGCG), 구아제베린(guaijaverin) 및 아비쿨라린(avicularin)을 포함하는, 알레르기 개선용 식품 조성물이 제공된다.
본 발명의 또 다른 견지에 의하면, 에피갈로카테킨갈레이트(Epigallocatechin gallate, EGCG), 구아제베린(guaijaverin) 및 아비쿨라린(avicularin)을 포함하는, 알레르기 개선용 화장료 조성물이 제공된다.
본 발명에 따른 알레르기 개선 및 치료용 조성물은 천연물 유래 성분으로 이루어져 안전하면서도 우수한 알러지 개선 효과를 나타내는 것으로, 알레르기성 질환의 치료 및 개선용 약학적 조성물, 알레르기 개선용 식품 조성물, 화장료 조성물 등으로 다양한 분야에서 적용될 수 있다.
도 1은 각 시료의 HPLC 크로마토그램 결과를 나타낸 것으로 A는 각각 에피갈로카테킨갈레이트(Epigallocatechin gallate, EGCG)(1), 구아제베린(guaijaverin)(2) 및 아비쿨라린(avicularin)(3)의 결과이며, B는 비교예 4의 녹차 잎 추출물(210 nm), 및 C는 구아바 잎 추출물(254 nm)의 HPLC 크로마토그램 결과를 나타낸 것이다.
도 2는 실시예 및 비교예 시료의 β-헥소사미니데이스 방출 억제 결과를 나타낸 그래프이다.
도 3은 실시예 및 비교예 시료의 IL-4 방출 억제 결과를 나타낸 그래프이다.
도 2는 실시예 및 비교예 시료의 β-헥소사미니데이스 방출 억제 결과를 나타낸 그래프이다.
도 3은 실시예 및 비교예 시료의 IL-4 방출 억제 결과를 나타낸 그래프이다.
이하, 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 바람직한 실시 형태를 설명한다. 그러나, 본 발명의 실시 형태는 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 이하 설명하는 실시 형태로 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 의하면 천연물 유래 성분으로 이루어져 안전하면서도 우수한 알러지 개선 효과를 나타내는 조성물이 제공된다. 보다 상세하게, 본 발명의 유효 성분은 구아바 잎 및 녹차잎 추출 복합물로부터 유래된 것으로, 이때 구아바 및 녹차잎 추출 복합물(Epiverin noseteacher)은 ILS-F-2301, Epiverin® 및 noseteacher® 중 어느 하나로 지칭할 수 있으며, 모두 구아바 및 녹차잎 추출복합물을 의미하는 것으로 이해된다.
보다 상세하게, 본 발명의 알레르기성 질환의 치료 및 개선용 약학적 조성물은 유효 성분으로 에피갈로카테킨갈레이트(Epigallocatechin gallate, EGCG), 구아제베린(guaijaverin) 및 아비쿨라린(avicularin)을 포함하는 것으로, 예를 들어 에피갈로카테킨갈레이트, 구아제베린 및 아비쿨라린을 에피갈로카테킨갈레이트 1 중량부 당 구아제베린 0.5 내지 2 중량부 및 아비쿨라린 0.5 내지 2 중량부의 양으로 포함하는 것일 수 있으며, 바람직하게는 에피갈로카테킨갈레이트 1 중량부 당 구아제베린 1 내지 2 중량부 및 아비쿨라린 1 내지 2 중량부, 보다 바람직하게는 에피갈로카테킨갈레이트 1 중량부 당 구아제베린 1.5 내지 2 중량부 및 아비쿨라린 1.5 내지 2 중량부의 양으로 포함하는 것이다.
상기와 같이 본 발명의 유효 성분은 에피갈로카테킨갈레이트(Epigallocatechin gallate, EGCG), 구아제베린(guaijaverin) 및 아비쿨라린(avicularin)을 포함하는, 것으로, 보다 상세하게, 상기 약학 조성물은 전체 중량을 기준으로 상기 유효 성분을 1 μg/ml 내지 200 μg/ml, 예를 들어 5 내지 150 μg/ml의 양으로 포함할 수 있다.
본 발명이 적용될 수 있는 상기 알레르기성 질환은 아토피 피부염, 천식, 알러지성 비염, 알러지성 결막염, 알러지성 피부염, 및 알러지성 접촉성 피부염으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 것일 수 있다.
본 발명의 상기 약학 조성물은 사용 목적에 맞게 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁제, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구 제형, 멸균 주사 용액의 형태 등 다양한 형태로 제형화하여 사용할 수 있으며, 경구 투여하거나 정맥 내, 복강 내, 피하, 직장, 국소 투여 등을 포함한 다양한 경로를 통해 투여될 수 있다.
이러한 약학 조성물에 포함될 수 있는 적합한 담체, 부형제 및 희석제의 예로는 락토오스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 비정질 셀룰로즈, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유 등을 들 수 있다.
또한, 상기 치료용 약학 조성물은 충전제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제, 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다.
경구 투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 상기 약학 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면 전분, 탄산칼슘, 수크로스, 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 제형화 할 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크와 같은 윤활제들도 사용될 수 있다.
경구용 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 액체 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.
비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성 용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성 용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 주사제의 기제로는 용해제, 등장화제, 현탁화제, 유화제, 안정화제 및 방부제와 같은 종래의 첨가제를 포함할 수 있다.
이와 같은 본 발명의 약학 조성물은 알레르기 관련 질환의 치료를 필요로 하는 대상에 대하여 약제학적으로 유효한 양으로 투여 또는 적용한다.
본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 그러나, 투여 경로, 질병의 중증도, 성별, 체중, 연령 등에 따라서 증감될 수 있으므로 상기 투여량이 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 다른 견지에 의하면, 알레르기 개선용 식품 조성물이 제공된다.
보다 상세하게, 본 발명의 알레르기 개선용 식품 조성물은 에피갈로카테킨갈레이트(Epigallocatechin gallate, EGCG), 구아제베린(guaijaverin) 및 아비쿨라린(avicularin)을 포함하는 것으로, 예를 들어 에피갈로카테킨갈레이트, 구아제베린 및 아비쿨라린을 에피갈로카테킨갈레이트 1 중량부 당 구아제베린 0.5 내지 2 중량부 및 아비쿨라린 0.5 내지 2 중량부의 양으로 포함하는 것일 수 있으며, 바람직하게는 에피갈로카테킨갈레이트 1 중량부 당 구아제베린 1 내지 2 중량부 및 아비쿨라린 1 내지 2 중량부의 양으로 포함하는 것이다.
본 발명의 식품은 식품 조성물로써 건강기능식품, 건강보조식품 등을 모두 포함하는 것으로, 식품 조성물의 형태가 특히 제한되는 것은 아니며, 액상, 고체상, 기타 유동상 등의 어떠한 형태로 이루어진 식품이라면 모두 포함되는 것으로 의도된다.
예를 들어, 본 발명의 식품 조성물이 기능성 음료 등의 식품 조성물인 경우 상기 식품 조성물에는 그 유효 성분 이외에 감미제, 풍미제, 생리활성 성분, 미네랄 등이 포함될 수 있다.
감미제는 식품이 적당한 단맛을 나게 하는 양으로 사용될 수 있으며, 천연의 것이거나 합성된 것일 수 있다. 바람직하게는 천연 감미제를 사용하는 경우인데, 천연 감미제로서는 옥수수 시럽 고형물, 꿀, 수크로오스, 프룩토오스, 락토오스, 말토오스 등의 당 감미제를 들 수 있다.
풍미제는 맛이나 향을 좋게 하기 위하여 사용될 수 있는데, 천연의 것과 합성된 것 모두 사용될 수 있다. 바람직하게는 천연의 것을 사용하는 경우이다. 천연의 것을 사용할 경우에 풍미 이외에 영양 강화의 목적도 병행할 수 있다. 천연 풍미제로서는 사과, 레몬, 감귤, 포도, 딸기, 복숭아 등에서 얻어진 것이거나 녹차잎, 둥굴레, 대잎, 계피, 국화 잎, 자스민 등에서 얻어진 것일 수 있다. 또 인삼(홍삼), 죽순, 알로에 베라, 은행 등에서 얻어진 것을 사용할 수 있다. 천연 풍미제는 액상의 농축액이나 고형상의 추출물일 수 있다. 경우에 따라서 합성 풍미제가 사용될 수 있는데, 합성 풍미제는 에스테르, 알콜, 알데하이드, 테르펜 등이 이용될 수 있다.
생리 활성 물질로서는 카테킨, 에피카테킨, 갈로가테킨, 에피갈로카테킨 등의 카테킨류나, 레티놀, 아스코르브산, 토코페롤, 칼시페롤, 티아민, 리보플라빈 등의 비타민류 등이 사용될 수 있다. 미네랄로서는 칼슘, 마그네슘, 크롬, 코발트, 구리, 불소화물, 게르마늄, 요오드, 철, 리튬, 마그네슘, 망간, 몰리브덴, 인, 칼륨, 셀레늄, 규소, 나트륨, 황, 바나듐, 아연 등이 사용될 수 있다.
또한, 본 발명의 식품 조성물은 상기 감미제 등 이외에도 필요에 따라 보존제, 유화제, 산미료, 점증제 등을 포함할 수 있다. 이러한 보존제, 유화제 등은 그것이 첨가되는 용도를 달성할 수 있는 한 극미량으로 첨가되어 사용되는 것이 바람직하다. 극미량이란 수치적으로 표현할 때 식품 조성물 전체 중량을 기준으로 할 때 0.0005 중량％ 내지 약 0.5 중량％ 범위를 의미한다.
사용될 수 있는 보존제로서는 소듐 소르브산칼슘, 소르브산나트륨, 소르브산칼륨, 벤조산칼슘, 벤조산나트륨, 벤조산칼륨, EDTA(에틸렌디아민테트라아세트산) 등을 들 수 있다. 사용될 수 있는 유화제로서는 아카시아검, 카르복시메틸셀룰로스, 잔탄검, 펙틴 등을 들 수 있다. 사용될 수 있는 산미료로서는 연산, 말산, 푸마르산, 아디프산, 인산, 글루콘산, 타르타르산, 아스코르브산, 아세트산, 인산 등을 들 수 있다. 이러한 산미료는 맛을 증진시키는 목적 이외에 미생물의 증식을 억제할 목적으로 식품 조성물이 적정 산도로 되도록 첨가될 수 있다. 사용될 수 있는 점증제로서는 현탁화 구현제, 침강제, 겔형성제, 팽화제 등을 들 수 있다.
본 발명의 또 다른 견지에 의하면, 알레르기 개선용 화장료 조성물이 제공되며, 보다 상세하게 본 발명의 알레르기 개선용 화장료 조성물은 에피갈로카테킨갈레이트(Epigallocatechin gallate, EGCG), 구아제베린(guaijaverin) 및 아비쿨라린(avicularin)을 포함하는 것으로, 예를 들어 에피갈로카테킨갈레이트, 구아제베린 및 아비쿨라린을 에피갈로카테킨갈레이트 1 중량부 당 구아제베린 0.5 내지 2 중량부 및 아비쿨라린 0.5 내지 2 중량부의 양으로 포함하는 것일 수 있으며, 바람직하게는 에피갈로카테킨갈레이트 1 중량부 당 구아제베린 1 내지 2 중량부 및 아비쿨라린 1 내지 2 중량부의 양으로 포함하는 것이다.
본 발명의 상기 화장료 조성물은 알레르기 예방 및/또는 개성 용도로 사용될 수 있으며, 이때 상기 알레르기는 알레르기 반응 및 이에 수반되는 증상의 예방 및 진행 감소 또는 지연 효과를 모두 포함하는 것을 의미한다.
본 발명의 조성물이 화장품 조성물인 경우 상기 화장품 조성물은 다양한 형태로 제조될 수 있는데, 예컨대, 에멀젼, 로션, 크림(수중유적형, 유중수적형, 다중상), 용액, 현탁액(무수 및 수계), 무수 생성물(오일 및 글리콜계), 젤, 마스크, 팩 또는 분말 등의 제형으로 제조될 수 있다.
구체적으로, 본 발명의 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클린저의 제형을 포함한다.
본 발명의 조성물은 그 유효 성분 이외에 화장품 제제에 있어서 수용가능한 담체 및/또는 필요에 따라 통상 화장품에 배합되는 다른 첨가제를 포함하는 추가의 성분을 포함할 수 있다.
여기서 "화장품 제제에 있어서 수용가능한 담체"란 화장품 제제에 포함될 수 있는 이미 공지되어 사용되고 있는 화합물 또는 조성물이거나 앞으로 개발될 화합물 또는 조성물로서 피부와의 접촉 시 인체가 적응 가능한 독성 이상의 독성이 없는 것을 말한다. 상기 담체는 본 발명의 조성물에 조성물 전체 중량에 대하여 약 1 중량% 내지 약 99.99 중량%, 바람직하게는 조성물의 전체 중량의 약 50 중량% 내지 약 99 중량%로 포함될 수 있다.
그러나 상기 비율은 화장품의 전술한 바의 제형에 따라, 또한 구체적인 적용 부위나 바람직한 적용량 등에 따라 달라지는 것이기 때문에, 상기 비율은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 이해되어서는 안 된다.
한편, 상기 추가의 성분으로서는 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선 차단제, 발색제, 향료, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 색소 등이 예시될 수 있다. 상기 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선 차단제, 발색제, 향료로 사용될 수 있는 화합물 또는 조성물 등은 이미 당업계에 공지되어 있기 때문에 당업자라면 적절한 해당 물질 또는 조성물을 선택하여 사용할 수 있다.
이하, 구체적인 실시예를 통해 본 발명을 보다 구체적으로 설명한다. 하기 실시예는 본 발명의 이해를 돕기 위한 예시에 불과하며, 본 발명의 범위가 이에 한정되는 것은 아니다.
실시예
1. 시약 및 기기
본 발명의 유효 성분은 에피갈로카테킨갈레이트(Epigallocatechin gallate, 이하 'EGCG'라 함), 구아제베린(guaijaverin) 및 아비쿨라린(avicularin)을 포함하는 것이다. 표준품 EGCG는 Sigma-Aldrich(St. Louis, USA)에서 구입하였으며, 구아제베린 및 아비쿨라린은 ChemFaces (Wuhan, China)에서 구입한 제품을 사용하였다.
한편, HPLC 분석을 위한 기기로는 Agilent 1260 Infinity II(Santa Clara, USA)를 사용하였으며, 칼럼은 YMC (Kyoto, Japan)에서 구입하였다.
2. 시료의 제조
비교예 1 내지 3
EGCG, 구아제베린 및 아비쿨라린을 각각 0.5 mg/mL의 농도로 50% 메탄올 수용액에 녹여 비교예 1(EGCG), 2(구아제베린) 및 3(아비쿨라린)의 시료를 제조하였으며, 이를 적절히 희석하여 검량곡선용 표준용액으로 사용하였다.
비교예 4
구아바 잎 또는 녹차 잎을 50% 발효 주정을 추출 용매로 하여 각각 100℃, 3시간의 추출 과정을 거쳐 추출액을 수득하고, 펌프를 이용하여 감압여과 및 50℃, 3시간 동안 감압 농축하였다. 구아바 잎 및 녹차 잎 추출농축액은 진공건조하여 분말을 수득하였다. 수득된 구아바 잎 및 녹차 잎 추출물을 각각 2:8로 혼합하였으며, 4 mg/mL의 농도로 50% 메탄올에 녹인 다음 0.2 um 멤브레인 필터를 이용하여 여과하여 분석에 사용하였다. 비교예 4의 원료를 구아바·녹차잎 추출복합물(ILS-F-2301; Epiverin noseteacher)로 명명하였다.
실시예 1 내지 3
상기 비교예 1 내지 3에서 각각 제조한 EGCG, 구아제베린 및 아비쿨라린 시료를 1:1:1의 중량비로 혼합하여 실시예 1의 시료를 제조하고, 1:2:1의 중량비로 혼합하여 실시예 2의 시료를 제조하고, 1:1:2의 중량비로 혼합하여 실시예 3의 시료를 제조하였다.
3. 시료의 HPLC 분석
HPLC 분석은 4액 펌프(quaternary pump), 오토샘플러(autosampler), 및 DAD(diode array detector)로 구성된 Agilent 1260 HPLC system을 이용하였으며, 칼럼은 YMC triart C18 컬럼(250 * 4.6 mm, 5 μm)을 사용하였다. 유속은 0.7 mL/min, 시료 주입량은 10 μL, 검출파장은 210 nm 와 254 nm로 설정하였다. 이동상은 0.1% 포름산을 함유한 물(A)과 메탄올(B)을 사용하였다.
| HPLC system | Agilent 1260 HPLC system |
| 검출기(Detector) | Agilent 1260 Infinity II DAD HS |
| 컬럼(Column) | YMC triart C18 (250 * 4.6 mm, 5 μm) |
| 유속(Flow rate) | 0.7 mL/min |
| 주입 부피(Injection volume) | 10 μL |
| UV | 210, 254 nm |
| 이동상 (Mobile phase) | A : 0.1% 포름산 수용액, B : 메탄올 |
4. 항알러지 효능 평가
(1) 세포 배양
랫트 유래의 RBL-2H3 비만세포주(mast cell line)는 한국세포주은행(서울, 대한민국)에서 분양받아 사용하였다. RBL-2H3 비만세포주(mast cell line)는 10% 소태아혈청(fetal bovine serum)과 1% 페니실린-스트렙토마이신이 포함된 MEM (Welgene, 경산, 대한민국)으로 배양하였으며, 100 mm 세포배양 플레이트에 세포가 70% 이상 분포되었을 때 계대배양을 진행하였으며, 최소 3번 이상 계대배양 이후 실험에 사용하였다.
(2) β-헥소사미니데이스(Hexosaminidase) 방출 억제 실험
먼저, RBL-2H3 비만세포주를 1 x 105 cells/well의 분포로 24-well 세포배양 플레이트에 시딩(seeding)하고, 24시간 동안 CO2 인큐베이터(incubator)에서 배양하였다. 24시간 배양 이후, DNP-IgE (50 ng/mL)를 처리하고, 24시간 동안 CO2 인큐베이터에서 배양하였다. 24시간 배양 이후, 1시간 동안 실시예 및 비교예 시료들을 각각 처리하였으며, 1시간 반응 이후, DNP-HSA (100 ng/mL)를 처리하고 4시간 동안 CO2 인큐베이터에서 배양하였다. 4시간 배양 이후, 상등액을 분주하여 원심분리하였다(13,000 rpm, 10분). 원심분리 이후, 상등액과 p-NAG(p-nitrophenyl-N-acetyl-β-D-glucosaminide; 10 mM)를 1시간 동안 반응시켰다. 이후, 100 mM 소듐디카보네이트 용액(sodium decarbonate solution)을 넣어 반응 종결하였으며, 405 nm에서의 흡광도를 측정하여 β-헥소사미니데이스의 방출 억제를 비교, 및 분석하였다.
(3) 인터루킨(Intereukin, IL)-4의 방출 실험
먼저, RBL-2H3 비만세포주를 1 x 105 cells/well의 분포로 24-well 세포배양 플레이트에 시딩(seeding)하고, 24시간 동안 CO2 인큐베이터에서 배양하였다. 24시간 배양 이후, DNP-IgE (50 ng/mL)를 처리하고, 24시간 동안 CO2 인큐베이터에서 배양하였다. 24시간 배양 이후, 1시간 동안 실시예 및 비교예 시료들을 처리하였으며, 1시간 반응 이후, DNP-HSA (100 ng/mL)를 처리하고 4시간 동안 CO2 인큐베이터에서 배양하였다. 4시간 배양 이후, 상등액을 분주하여 원심분리하였다(13,000 rpm, 10분). 원심분리 이후, rat IL-4 ELISA kit의 매뉴얼대로 실험을 진행하였다.
5. 실험 결과
(1) HPLC 크로마토그램
비교예 4의 구아바 잎 추출물 및 녹차잎 추출물의 지표성분을 확인하기 위해 HPLC 분석한 결과, 도 1에서 확인할 수 있는 바와 같이 EGCG, 구아제베린 및 아비쿨라린이 주요 성분으로 확인되었다. 3종 성분의 머무름 시간(retention time, RT)은 각각 23.53분, 40.61분 및 41.69분으로 나타났다. 또한, 각 성분들의 최대흡수파장을 고려해 EGCG는 210 nm, 구아제베린 및 아비쿨라린은 254 nm에서 검출하였다.
(2) 항알러지 효능 평가
1)β-헥소사미니데이스 방출 억제
β-헥소사미니데이스는 비만세포에서 알레르기가 유도되었을 때, 히스타민과 같이 분비되는 효소 중 하나로, 알레르기 효능 평가의 바이오마커로 사용된다. 실시예 및 비교예 시료의 알레르기 개선 효과 검증을 진행하였으며, 알레르기 개선 검증을 위하여 β-헥소사미니데이스 방출 억제능을 평가하였다.
그 결과, 도 2에서 확인할 수 있는 바와 같이 DNP-IgE/DNP-HSA(stimulation group, DNP)에서는 유의적으로 대조군(con)에 비하여 β-헥소사미니데이스 방출이 유도되는 것을 확인하였다. 또한, 비교예 1 내지 3의 EGCG, 구아제베린 및 아비쿨라린 각 성분, 나아가 이 세 성분을 모두 포함하고 있는 구아바 추출물인 비교예 4에 비하여 본 발명의 실시예 1 내지 3에서 우수한 β-헥소사미니데이스 방출 억제 효과를 확인할 수 있었으며, 특히 실시예 3에서 가장 우수한 β-헥소사미니데이스 방출 억제능을 확인하였다. 이 결과에 따라, 본 발명의 EGCG, 구아제베린 및 아비쿨라린 세 성분의 조합, 나아가 이들 성분의 비율에 따라 β-헥소사미니데이스 방출 억제능이 시너지적으로 향상될 수 있음을 확인할 수 있었다.
2) 인터루킨-4 방출
인터루킨-4(이하 'IL-4'이라 함)은 Th2 사이토카인의 일종으로, 알레르기가 유도되었을 때 방출되는 사이토카인이다. 실시예 및 비교예 시료의 알레르기 개선 효능 검증을 위하여 IL-4 방출 억제능을 평가하였다.
그 결과, 도 3에서 확인할 수 있는 바와 같이 DNP-IgE/DNP-HSA (stimulation group,DNP)에서는 유의적으로 대조군(con)에 비하여 IL-4 방출이 유도되었다. 또한, 비교예 1 내지 3의 EGCG, 구아제베린 및 아비쿨라린 각 성분, 나아가 이 세 성분을 모두 포함하고 있는 구아바 추출물인 비교예 4에 비하여 본 발명의 실시예 1 내지 3에서 우수한 IL-4 방출 억제 효과를 확인할 수 있었으며, 특히 실시예 3에서 가장 우수한 IL-4 방출 억제능을 확인하였다. 이 결과에 따라, 본 발명의 EGCG, 구아제베린 및 아비쿨라린 세 성분의 조합, 나아가 이들 성분의 비율에 따라 IL-4 방출 억제능이 시너지적으로 향상될 수 있음을 확인할 수 있었다.
이상에서 본 발명의 실시예에 대하여 상세하게 설명하였지만 본 발명의 권리범위는 이에 한정되는 것은 아니고, 청구범위에 기재된 본 발명의 기술적 사상을 벗어나지 않는 범위 내에서 다양한 수정 및 변형이 가능하다는 것은 당 기술분야의 통상의 지식을 가진 자에게는 자명할 것이다.
Claims (7)
- 에피갈로카테킨갈레이트(Epigallocatechin gallate, EGCG), 구아제베린(guaijaverin) 및 아비쿨라린(avicularin)을 1 : 2 : 1~2의 중량비로 포함하는, 알레르기성 질환의 치료 및 개선용 약학적 조성물.
- 삭제
- 제1항에 있어서, 상기 알레르기성 질환은 아토피 피부염, 천식, 알러지성 비염, 알러지성 결막염, 알러지성 피부염, 및 알러지성 접촉성 피부염으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 알레르기성 질환의 치료 및 개선용 약학적 조성물.
- 에피갈로카테킨갈레이트(Epigallocatechin gallate, EGCG), 구아제베린(guaijaverin) 및 아비쿨라린(avicularin)을 1 : 2 : 1~2의 중량비로 포함하는, 알레르기 개선용 식품 조성물.
- 삭제
- 에피갈로카테킨갈레이트(Epigallocatechin gallate, EGCG), 구아제베린(guaijaverin) 및 아비쿨라린(avicularin)을 1 : 2 : 1~2의 중량비로 포함하는, 알레르기 개선용 화장료 조성물.
- 삭제
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR102676584B1 true KR102676584B1 (ko) | 2024-06-24 |
Family
ID=
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20080293644A1 (en) | 2007-04-27 | 2008-11-27 | Thomas Eidenberger | Guava extract |
| CN104435366A (zh) | 2014-10-30 | 2015-03-25 | 徐澄飞 | 一种含药草提取物的组合物,化妆料组合物 |
| JP2017508801A (ja) | 2014-03-10 | 2017-03-30 | フィトテック エクストラクツ ピーヴイティー リミテッド | 標準化された植物化学物質を有する水溶性バンジロウ葉抽出物 |
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20080293644A1 (en) | 2007-04-27 | 2008-11-27 | Thomas Eidenberger | Guava extract |
| JP2017508801A (ja) | 2014-03-10 | 2017-03-30 | フィトテック エクストラクツ ピーヴイティー リミテッド | 標準化された植物化学物質を有する水溶性バンジロウ葉抽出物 |
| CN104435366A (zh) | 2014-10-30 | 2015-03-25 | 徐澄飞 | 一种含药草提取物的组合物,化妆料组合物 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Experimental and Molecular Medicine, 37(4), pp.290-296(2005) 1부.* |
| In Vitro Cell. Dev. Biol-Animal, 35, pp.169-174(1999) 1부.* |
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