KR102571649B1 - 조작된 내피 세포를 포함하는 생체적합성 임플란트 - Google Patents

조작된 내피 세포를 포함하는 생체적합성 임플란트 Download PDF

Info

Publication number
KR102571649B1
KR102571649B1 KR1020177020113A KR20177020113A KR102571649B1 KR 102571649 B1 KR102571649 B1 KR 102571649B1 KR 1020177020113 A KR1020177020113 A KR 1020177020113A KR 20177020113 A KR20177020113 A KR 20177020113A KR 102571649 B1 KR102571649 B1 KR 102571649B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
delete delete
cells
endothelial cells
implant
e4orf1
Prior art date
Application number
KR1020177020113A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20170100572A (ko
Inventor
마이클 다니엘 긴즈버그
다니엘 조지프 놀란
클로드 제프리 데이비스
Original Assignee
앤지오크린 바이오사이언스 인코포레이티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 앤지오크린 바이오사이언스 인코포레이티드 filed Critical 앤지오크린 바이오사이언스 인코포레이티드
Publication of KR20170100572A publication Critical patent/KR20170100572A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102571649B1 publication Critical patent/KR102571649B1/ko

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
    • A61L27/56—Porous materials, e.g. foams or sponges
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/30—Nerves; Brain; Eyes; Corneal cells; Cerebrospinal fluid; Neuronal stem cells; Neuronal precursor cells; Glial cells; Oligodendrocytes; Schwann cells; Astroglia; Astrocytes; Choroid plexus; Spinal cord tissue
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/32—Bones; Osteocytes; Osteoblasts; Tendons; Tenocytes; Teeth; Odontoblasts; Cartilage; Chondrocytes; Synovial membrane
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/34—Muscles; Smooth muscle cells; Heart; Cardiac stem cells; Myoblasts; Myocytes; Cardiomyocytes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/35—Fat tissue; Adipocytes; Stromal cells; Connective tissues
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/36—Skin; Hair; Nails; Sebaceous glands; Cerumen; Epidermis; Epithelial cells; Keratinocytes; Langerhans cells; Ectodermal cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/37—Digestive system
    • A61K35/38—Stomach; Intestine; Goblet cells; Oral mucosa; Saliva
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/44—Vessels; Vascular smooth muscle cells; Endothelial cells; Endothelial progenitor cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/48—Reproductive organs
    • A61K35/52—Sperm; Prostate; Seminal fluid; Leydig cells of testes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/01—Hydrolysed proteins; Derivatives thereof
    • A61K38/012—Hydrolysed proteins; Derivatives thereof from animals
    • A61K38/014—Hydrolysed proteins; Derivatives thereof from animals from connective tissue peptides, e.g. gelatin, collagen
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/14—Macromolecular materials
    • A61L27/22—Polypeptides or derivatives thereof, e.g. degradation products
    • A61L27/225—Fibrin; Fibrinogen
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/14—Macromolecular materials
    • A61L27/22—Polypeptides or derivatives thereof, e.g. degradation products
    • A61L27/227—Other specific proteins or polypeptides not covered by A61L27/222, A61L27/225 or A61L27/24
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/14—Macromolecular materials
    • A61L27/22—Polypeptides or derivatives thereof, e.g. degradation products
    • A61L27/24—Collagen
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/3604—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix characterised by the human or animal origin of the biological material, e.g. hair, fascia, fish scales, silk, shellac, pericardium, pleura, renal tissue, amniotic membrane, parenchymal tissue, fetal tissue, muscle tissue, fat tissue, enamel
    • A61L27/3625—Vascular tissue, e.g. heart valves
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/3604—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix characterised by the human or animal origin of the biological material, e.g. hair, fascia, fish scales, silk, shellac, pericardium, pleura, renal tissue, amniotic membrane, parenchymal tissue, fetal tissue, muscle tissue, fat tissue, enamel
    • A61L27/3633—Extracellular matrix [ECM]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/38—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells
    • A61L27/3804—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells characterised by specific cells or progenitors thereof, e.g. fibroblasts, connective tissue cells, kidney cells
    • A61L27/3808—Endothelial cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/38—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells
    • A61L27/3804—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells characterised by specific cells or progenitors thereof, e.g. fibroblasts, connective tissue cells, kidney cells
    • A61L27/3834—Cells able to produce different cell types, e.g. hematopoietic stem cells, mesenchymal stem cells, marrow stromal cells, embryonic stem cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/38—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells
    • A61L27/3895—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells using specific culture conditions, e.g. stimulating differentiation of stem cells, pulsatile flow conditions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
    • A61L27/507—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials for artificial blood vessels
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/069—Vascular Endothelial cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/20—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices containing or releasing organic materials
    • A61L2300/252—Polypeptides, proteins, e.g. glycoproteins, lipoproteins, cytokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/40—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices characterised by a specific therapeutic activity or mode of action
    • A61L2300/412—Tissue-regenerating or healing or proliferative agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2400/00—Materials characterised by their function or physical properties
    • A61L2400/06—Flowable or injectable implant compositions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2430/00—Materials or treatment for tissue regeneration
    • A61L2430/34—Materials or treatment for tissue regeneration for soft tissue reconstruction
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/60—Transcription factors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2510/00—Genetically modified cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2533/00—Supports or coatings for cell culture, characterised by material
    • C12N2533/50—Proteins
    • C12N2533/52—Fibronectin; Laminin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2533/00—Supports or coatings for cell culture, characterised by material
    • C12N2533/50—Proteins
    • C12N2533/54—Collagen; Gelatin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2533/00—Supports or coatings for cell culture, characterised by material
    • C12N2533/50—Proteins
    • C12N2533/56—Fibrin; Thrombin

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)

Abstract

본 발명은 개체에게 외과적으로 이식하기에 적합한 임플란트에 관한 것이다. 일부 구현예에서, 임플란트는 생체적합한 스캐폴드 물질과 E4ORF1+ 조작된 내피 세포 또는 특정 마커 분자를 발현하는 조작된 내피 세포 등의 조작된 내피 세포를 포함한다. 본 발명은 임플란트, 임플란트의 제조 방법 및 임플란트를 이용한 치료 방법을 제공한다.

Description

조작된 내피 세포를 포함하는 생체적합성 임플란트
관련 출원에 대한 교차-참조
본 출원은 2014년 12월 19일자 미국 가출원 번호 62/094,915에 대해 우선권을 주장하며, 이 미국 특허 출원의 내용은 원용에 의해 본 명세서에 포함된다.
원용에 의해 병합
단순 원용에 의한 병합을 허용하는 법을 가진 국가들에 대해, 본원에 인용된 각 문헌의 내용은 그 전체가 원용에 의해 본 명세서에 포함된다.
생체적합성 임플란트는, 예를 들어, 인체의 손상된 조직 또는 결함 조직을 복원 또는 대체하는 등의, 다양한 용도로 사용되고 있다. 이러한 몇몇 임플란트는, 숙주 외과적으로 체내에 이식되었을 때 개체의 세포와 함께 거주하여 개체의 조직으로 통합되는, 생체적합성 스캐폴드 물질을 포함한다. 임플란트는, 적절한 산소 및 영양분 공급을 확보하기 위해, 일반적으로, 외과적으로 이식된 후 내피 세포의 침투가 이루어져야 하며, 이들 내피 세포는 이후 개체의 기존 혈관 구조와 연결되는 기능성 혈관을 형성하여야 한다. 따라서, 내피 세포가 이러한 이식된 스캐폴드에 침윤하여 기능성 혈관을 형성하는 수준 및 속도가 이들 임플란트의 궁극적인 성공을 결정하는 중요한 결정 인자이다. 시험관내에서 사전-형성된 혈관, 즉 외과적으로 이식되기 전에 만들어진 혈관을 포함하는 3차원의 생체적합성 스캐폴드를 제조하는 능력이 임플란트가 숙주 개체 조직으로 생체내 통합되는 속도와 효율을 현저하게 높일 수 있다. 그러나, 이런 임플란트를 제조하고자 하는 이전 시도들은 성패가 엇갈렸다. 예를 들어, 콜라겐 겔 또는 마트리겔 (Matrigel)을 이용해 시험관내에서 혈관 형성을 유도하기 위한 이전 시도들은 혈관 발생 또는 분극화된 (polarized) 내피 세포로 둘러싸인 개방 내강 (patent lumen)을 가진 혈관 형성을 달성하는데 실패하였다 (일부 이전 시도들에 대한 논의는 하기 문헌들을 참조한다: Nakatsu et al. (2003) "Angiogenic sprouting and capillary lumen formation modeled by human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) in fibrin gels: the role of fibroblasts and angiopoietin-1", Microvascular Research, Vol. 66, pp. 102-112). 또 다른 시도는 세포외 기질 구성 성분으로 코팅된 비드 위에 내피 세포 단층을 배양한 다음 비드를 피브린 겔 안으로 임베딩하는 과정을 이용하였다. 이런 방법에서는, 피부 섬유모세포를 겔의 상부에서 배양하는 경우에만 개방 내강을 가진 혈관이 형성됨을 확인하였다. 이러한 섬유모세포의 공동-배양 없이는, 내피 세포가 짧고, 좁은 끈 형상의 구조를 먼저 만들지만, 이후 혈관 형성으로 이어지지 않고 분해되는 것으로 확인되었다. Nakatsu et al. (2003)을 참조한다. 이러한 발견 결과들과 일관되게, 섬유모세포는 내피 세포의 내강 형성에 필수적인 것으로 보고된 바 있다. Newman et al. (2011) "The requirement for fibroblasts in angiogenesis: fibroblast-derived matrix proteins are essential for endothelial cell lumen formation", Molecular Biology of the Cell, Vol. 22, pp. 3791-3800을 참조한다.
본 발명은, 부분적으로는, 아데노바이러스 E4ORF1 단백질을 발현하는 조작된 내피 세포가 3차원의 생체적합성 스캐폴드 내부에 개방 내강을 가진 혈관을 시험관내에서 형성할 수 있다는 놀라운 발견을 기초로 한다. E4ORF1+ 내피 세포는 이들 세포를 액상 마트리겔과 함께 마우스의 옆구리에 공동-주사한 후 생체내에서 마트리겔 플러그에 신생혈관을 형성할 수 있었으며, E4ORF1+ 내피 세포는 마트리겔 코팅된 배양 플레이트 상에서 새로운-혈관생성 유도 관을 형성할 수 있다 (미국 특허 제 8,465,732 참조)는 것이 이미 확인된 바 있지만, 본 출원인이 인지하는 한, 이들 세포가 3차원 스캐폴드 안에 개방형 내강을 가진 진성 혈관을 형성하는 혈관 형성능에 대해서는 아직까지 입증된 바 없다. 본원에 기술된 바와 같이, 진성 E4ORF1+ 혈관이 단지 수 일내에 - 심지어 섬유모세포와 같은 다른 세포 타입이 없는 환경에서도 - 3차원의 생체적합한 스캐폴드 물질 내부에 개방형 내강을 가진 혈관을 시험관내에서 형성할 수 있으며, 이 혈관-함유 임플란트는 장기간 - 최대 6주간 시험관내에서 배양 및 유지될 수 있다는 것을 놀랍게도 확인하게 되었다. 흥미롭게도, 이 임플란트에서 혈관은 생체적합성 스캐폴드의 경계를 넘어 연장되어, 스캐폴드 물질을 둘러싸고 있는 배양 배지에서 자유롭게 부유하는 것으로 보이는 돌출성 혈관을 형성할 수 있다는 것 역시 확인하였다. 이러한 발견 사실을 기초로, 본 발명은 개체에게 외과적으로 이식하기에 적합한 새로운 개선된 소정의 임플란트 및 이러한 임플란트의 제조 및 이용 방법을 제공한다.
이에, 일 구현예에서, 본 발명은, (a) 생체적합성 스캐폴드 물질, 및 (b) 생체적합성 스캐폴드 물질 내부에 분포된 혈관을 포함하며, 혈관이 E4ORF1+ 조작된 내피 세포를 포함하는, 개체에게 외과적으로 이식하기에 적합한 임플란트를 제공한다.
다른 구현예에서, 본 발명은, 조작된 E4ORF1+ 내피 세포 집단을 생체적합성 스캐폴드 물질과 접촉한 상태로, 생체적합한 스캐폴드 물질 내부에 혈관이 형성될 때까지, 시험관내에서 배양하여, E4ORF1+ 혈관을 포함하는 임플란트를 제조하는 단계를 포함하는, 개체에게 외과적으로 이식하기에 적합한 임플란트의 제조 방법을 제공한다.
본 발명의 임플란트 및 방법에 사용되는 생체적합성 스캐폴드 물질은 전형적으로 3차원 구조이며, 혈관이 3차원 구조 내부에 배치될 수 있다. 이러한 일부 구현예에서, 본 발명의 임플란트는 모세관을 포함할 수 있는 연결된 혈관 망을 포함한다. 이러한 일부 구현예에서, 혈관은 개방형/개방 내강을 가진다. 이러한 일부 구현예에서, 하나 이상의 혈관이 생체적합한 스캐폴드 물질의 경계를 넘어 돌출될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 임플란트 및 방법에 사용되는 E4ORF1+ 조작된 내피 세포는 또한 ETV2 폴리펩타이드를 발현한다 (즉, 이는 E4ORF1+ ETV2+ 내피 세포임). 이러한 다른 구현예에서, E4ORF1+ 조작된 내피 세포는 또한 재조합 ETS 계통의 전사 인자를 발현한다 (즉, 이는 E4ORF1+ETS+임).
일부 구현예에서, 조작된 E4ORF1+ 내피 세포는 태아 세포 (fetal cell) 또는 출생직후기 세포 (post-natal cell) 또는 성체 세포일 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명의 임플란트 및 방법에 사용되는 조작된 E4ORF1+ 내피 세포는 포유류 내피 세포이다. 일부 구현예에서, 조작된 E4ORF1+ 내피 세포는 인간 내피 세포이다. 일부 구현예에서, 조작된 E4ORF1+ 내피 세포는 인간 제대 정맥 내피 세포 (HUVEC)로부터 유래된다.
일부 구현예에서, 본 발명의 임플란트 및 방법에 사용되는 조작된 E4ORF1+ 내피 세포는 장기 (organ)-특이적인 내피 세포이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 조작된 내피 세포는 조혈계-특이적인 내피 세포, 또는 신경계-특이적인 내피 세포, 또는 심장-특이적인 내피 세포, 또는 폐-특이적인 내피 세포, 또는 간-특이적인 내피 세포, 또는 신장-특이적인 내피 세포, 또는 근육-특이적인 내피 세포, 또는 연골-특이적인 내피 세포, 또는 힘줄-특이적인 내피 세포, 또는 지방조직-특이적인 내피 세포일 수 있다. 이러한 일부 구현예에서, 사용되는 장기-특이적인 내피 세포는 임플란트가 배치될 장기 또는 조직으로부터 유래된다.
일부 구현예에서, 본 발명의 임플란트 및 방법에 사용되는 조작된 E4ORF1+ 내피 세포는, 임플란트를 외과적으로 이식받을 개체의 내피 세포로부터 유래되며, 즉, 이는 자가 내피 세포이다. 다른 구현예에서, 조작된 E4ORF1+ 내피 세포는 임플란트를 외과적으로 이식할 개체와 동일 종 공여체의 내피 세포로부터 유래되며, 즉, 이는 동종이계 내피 세포이다. 이러한 일부 구현예에서, 동종이계 공여체는 임플란트가 외과적으로 이식될 개체와 매칭 (또는 부분 매칭)되는 조직이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 공여체는 임플란트가 외과적으로 이식될 개체와 동일한 MHC-타입 (또는 HLA-타입)을 가진다. 일부 다른 구현예에서, 공여체는 임플란트가 외과적으로 이식될 개체와 부분적으로 매칭되는 MHC-타입 (또는 HLA-타입)을 가진다. 또 다른 구현예에서, 공여체는 임플란트가 외과적으로 이식될 개체와 상이한 MHC-타입 (또는 HLA-타입)을 가진다.
일부 구현예에서, 본 발명의 임플란트 및 방법에 사용되는 생체적합성 스캐폴드 물질은, 조작된 내피 세포 외에도, 하나 이상의 부가적인 세포 타입을 포함한다. 이러한 일부 구현예에서, 부가적인 세포 타입은 유전자 변형될 수 있다. 또 다른 이러한 구현예에서, 부가적인 세포 타입은 나이브 (naive, 즉, 유전자 변형되지 않음)일 수 있다. 이러한 일부 구현예에서, 부가적인 세포 타입은 태아 세포 또는 출산 직후 세포 또는 성체 세포일 수 있다. 일부 구현예에서, 이러한 부가적인 세포 타입은 줄기 세포 또는 전구 세포 (progenitor cell)일 수 있다. 다른 구현예들에서, 이러한 부가적인 세포 타입은 분화된 세포일 수 있다. 일부 구현예에서, 이러한 줄기 세포 또는 전구 세포는 조혈 줄기 세포, 뼈 줄기 세포, 근육 줄기 세포, 신경 줄기 세포, 상피 줄기 세포, 피부 줄기 세포, 간엽 줄기 세포, 장 줄기 세포, 또는 정원 줄기 세포 (spermatogonial stem cell)일 수 있다. 일부 구현예에서, 분화된 세포는 분화된 조혈 세포, 골 세포, 근육 세포, 신경 세포, 혈관 주위 세포, 모낭 세포, 지방 세포, 각질 형성 세포, 상피 세포, 피부 세포, 섬유모세포, 장 세포 또는 고환 세포일 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 임플란트 및 방법에 사용되는 생체적합성 스캐폴드 물질은 4℃에서 고체이다. 일부 구현예에서, 생체적합성 스캐폴드 물질은 21℃에서 고체이다. 일부 구현예에서, 생체적합성 스캐폴드 물질은 콜라겐 또는 피브린 등의 1종 이상의 세포외 기질 물질을 포함한다. 일부 구현예에서, 임플란트내 생체적합성 스캐폴드 물질은 탈세포화된 (decellularized) 돼지 조직 등의 탈세포화된 동물 조직을 포함한다. 일부 구현예에서, 임플란트내 생체적합성 스캐폴드 물질은 마트리겔이 아니다. 일부 구현예에서, 임플란트내 생체적합성 스캐폴드 물질은 히알루론산을 포함하지 않는다.
일부 구현예에서, 본 발명의 임플란트는 혈청을 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, 본 발명의 임플란트는 외인성 성장 인자를 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, 본 발명의 임플란트는 외인성 혈관생성 인자 (angiogenic factor)를 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, 본 발명의 임플란트는 외인성 VEGF (vascular endothelial growth factor)를 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, 본 발명의 임플란트는 외인성 FGF (fibroblast growth factor)를 포함하지 않는다.
일부 구현예에서, 본 발명의 임플란트는 섬유모세포를 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, 본 발명의 임플란트는 섬유모세포-유래 혈관신생 인자를 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, 본 발명의 임플란트는 섬유모세포-유래 세포외 기질 성분을 포함하지 않는다.
일부 구현예에서, 본 발명의 임플란트는 마이크로-담체 비드 (micro-carrier bead)를 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, 본 발명의 임플란트는 세포외 기질 분자로 코팅된 마이크로-담체 비드를 포함하지 않는다.
일부 구현예에서, 본 발명은 본원에 기술된 임플란트를 개체에게 이식하는 단계를 포함하는 치료가 필요한 개체를 치료하는 방법을 제공한다. 일부 이러한 구현예에서, 개체는 조직 결함 (tissue defect)이 있으며, 임플란트는 개체에게 조직 결함 부위로 외과적으로 이식된다. 일부 이러한 방법에서, 조작된 E4ORF1+ 내피 세포는 장기-특이적인 내피 세포이며, 임플란트는 장기-특이적인 내피 세포가 유래된 장기로 외과적으로 이식된다. 일부 이러한 방법에서, 개체는 포유류 개체이다. 일부 이러한 방법에서, 개체는 인간 개체이다. 일부 이러한 방법에서, 조작된 E4ORF1+ 내피 세포는 개체 자신의 내피 세포로부터 유래되며, 즉, 이는 자가 내피 세포이다. 또 다른 이런 방법에서, 임플란트내 조작된 E4ORF1+ 내피 세포는 개체와 동일한 MHC- 또는 HLA-타입을 가진 동종이계 공여체 또는 개체의 MHC- 또는 HLA-타입과 일부 매칭되는 동종이계 공여체 등의 동종이계 공여체의 내피 세포로부터 유래된다.
본 발명의 상기한 구현예들과 기타 구현예들이 본 문헌에 첨부된 실시예, 청구항 및 도면 부분에서 추가로 기술된다. 아울러, 당해 기술 분야의 당업자라면, 본원에 기술된 구현예들에 대한 소정의 변형 및 조합이 본 발명의 범위에 포함되며, 과도한 실험없이도 수행할 수 있음은 자명할 것이다.
도 1A & 1B. E4ORF1과 녹색 형광 단백질 (GFP)을 발현하는 조작된 내피 세포를 실시예 1에 기술된 바와 같이 접종하여 시험관내에서 유지시킨 임플란트의 형광 현미경 사진. 각 사진 하단의 흰색 막대는 400 ㎛를 표시한다. 내피 세포에서 GFP 발현으로 인한 녹색 형광은 흑백 사진에서 백색으로 나타난다. 개방형 내강을 가진 혈관 구조체는 도 1A 및 도 1B 둘다에서 볼 수 있다. 도 1B에서, 혈관은 스캐폴드 물질의 경계를 넘어 돌출되었음을 알 수 있다.
도 2A & 2B. 외과적으로 이식한 후 48시간째 마우스 복부로부터 적출된 2개의 임플란트 사진. 도 2A에서 "테스트" 임플란트에는 실시예 1 및 2에 기술된 바와 같이 외과적 이식 전에 E4ORF1+ 조작된 내피 세포를 접종하여 배양 유지하였다. 임플란트내 혈관화 (vascularization) 및 혈액은 도 2A에서 원으로 표시된 부분에서 볼 수 있다. 도 2B에서 "대조군" 임플란트는 외과적 이식 전에 내피 세포를 접종하지 않았으며, 검출가능한 혈관화 또는 혈류는 관찰할 수 없었다.
도 3. 외과적 이식 후 4주째에 마우스 복부에서 취한 2개의 임플란트의 사진. 우측에 나타낸 "테스트" 임플란트에는 실시예들에 기술된 바와 같이 이식하기 전에 E4ORF1+ 조작된 내피 세포를 접종하여 배양 유지하였다. 우측 "테스트" 샘플에서는 현저한 혈관화 및 혈액 함유를 볼 수 있으며, 이는 흑백 사진에서 임플란트 가장자리의 진한/검은 영역으로 나타난다. 좌측 "대조군" 임플란트에는 이식하기 전에 내피 세포를 접종하지 않았다.
도 4A-D. 마우스 복부에 외과적으로 이식한 후 2주째에 회수한 임플란트의 조직 단면의 사진. 도 4A 및 4B에서 "테스트" 임플란트에는 실시예들에 기술된 바와 같이 E4ORF1+ 조작된 내피 세포를 접종하였다. 도 4C 및 4D에서 "대조군" 임플란트에는 이식하기 전에 내피 세포를 접종하지 않았다. 도 4A 및 4B에서 "테스트" 임플란트는 도 4C 및 4D의 임플란트와 비교해 향상된 세포충실도 (cellularity)를 나타내었다.
본 명세서에서 "발명의 내용", "도면", "도면에 대한 간단한 설명", "실시예" 및 "청구항" 부분들은 본 발명의 주요 구현예들 중 일부를 기술한다. 이 "발명을 실시하기 위한 구체적인 내용" 부분은 본 발명의 조성물 및 방법에 대한 소정의 부가적인 설명들을 제공해주며, 본 특허 명세서의 다른 모든 영역들과 함께 읽히도록 의도된다. 본원에 언급된 구체적인 구현예들의 조합은 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 의도된다.
소정의 정의들이 아래에 제공된다. 그외 용어들은 본 특허 명세서 도처에서 정의되며, 이들 용어가 사용된 문맥에서 명확한 의미를 가지거나, 또는 당해 기술 분야에서 통상적인 의미에 따라 사용된다.
정의
본원에서, 용어 "약" 및 "대략"은 수치 값에 대해 사용되는 경우 언급된 값에서 20%의 + 또는 -이내임을 의미한다.
본원에서, 용어 "배양"은 다양한 종류의 배지 상에 또는 배지에서의 세포 증식을 의미한다. "공동-배양"은 다양한 종류의 배지 상에 또는 배지에서의 2종 이상의 개별 타입의 세포들의 증식을 의미하며, 예를 들어, 일부 구현예에서, 내피 세포와 줄기 또는 전구 세포를 공동-배양할 수 있다.
본원에서, 용어 "유효량"은, 본원에 기술된 바와 같이, 본원에 언급된 한가지 이상의 결과에 검출가능한 효과를 달성하기에 충분한, 특수 물질 (specified agent) 또는 세포 집단 (예, E4ORF1 폴리펩타이드, E4ORF1 폴리펩타이드를 코딩하는 핵산 분자 또는 E4ORF1+ 조작된 내피 세포의 집단)의 양을 의미한다. 예를 들어, 내피 세포에서 E40RF1이 발현되는 경우에, 내피 세포로 도입/전달할 (예, 벡터에서) 핵산 분자의 유효량은, 임의의 적절한 대조군 (예, E4ORF1-내피 세포)과 비교해, 검출가능한 수준의 내피 세포의 생존 또는 증식 증가를 달성하는 양일 수 있다. E4ORF1 코딩 핵산 분자를 내피 세포에 도입하는 경우, (예, 벡터에서) 핵산 분자의 유효량은, 임의의 적절한 대조군 (예, E4ORF1- 세포)과 비교해 검출가능한 수준의 내피 세포의 생존 또는 증식 증가를 달성하는 양일 수 있다. E4ORF1+ 내피 세포를 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법의 경우, 유효량은, 임의의 적절한 대조군 (예, E4ORF1- 세포)과 비교해, 한가지 이상의 바람직한 생물학적 또는 치료학적 지표 (indicator)의 검출가능한 개선 (예, 내피 세포/혈관 재생 개선, 혈관신생 개선, 임플란트의 생존 또는 생착 개선 등)을 달성하는 양일 수 있다. 임의의 각각의 경우에서, 적절한 "유효량"은, 예를 들어 용량 증가 실험과 같이 당해 기술 분야에 공지된 표준 기법을 이용해 실험적으로 결정될 수 있으며, 계획된 용도, 계획된 전달/투여 방식, 바람직한 전달/투여 빈도 등의 인자들을 고려하여 결정될 수 있다. 아울러, "유효량"은, 임플란트내 혈관의 형성을 평가하거나 및/또는 생체내에서 임플란트의 조직내 통합을 평가하기 위해, 본 특허 명세서의 실시예 섹션에 기술된 방법 등의 분석 방법을 이용해 결정할 수 있다.
용어 "조작된"은 본원에서 세포에 사용된 경우 언급된 표현형 (예, E4ORF1+ 또는 ETV2+ 또는 재조합 ETS 전사 인자 발현)을 나타내거나 또는 언급된 핵산 분자 또는 폴리펩타이드를 발현하도록 인간에 의해 조작된 세포를 의미한다. 용어 "조작된 세포"는 자연적으로 형성된 세포를 포함하는 것을 의도하지 않으며, 대신 예를 들어 재조합 핵산 분자를 포함하는 세포 또는 그렇지 않다면 인공적으로 (예, 후술한 바와 같이 유전자 변형에 의해) 변형된 세포를 포함하는 것으로 의도되며, 예를 들어, 그래서 이 세포는 발현하지 않는 폴리펩타이드를 발현하게 되거나, 또는 비-조작된 내피 세포에서 관찰되는 수준 보다 실질적으로 높은 수준으로 폴리펩타이드를 발현하게 된다.
"유전자 변형" 또는 "유전자-변형된" 또는 "유전자 변형된"은 세포의 정상적인 뉴클레오티드 서열에 임의의 부가, 결손 또는 파괴를 의미한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 언급된 내피 세포는, 이 세포가 아데노바이러스 E4ORF1 폴리펩타이드를 코딩하는 핵산 분자 및/또는 본원에 언급된 다른 특이적인 임의 폴리펩타이드 (예, ETV2 폴리펩타이드 등의 ETS 전사 인자 폴리펩타이드)를 코딩하는 핵산 분자를 포함하도록, 유전자 변형된다. 유사하게, 일부 구현예에서, 본원에 언급된 내피 세포 또는 본원에 언급된 임의의 기타 세포 타입 (예, 줄기 또는 전구 세포 또는 신경 세포, 근육 세포, 혈관 주위 세포, 상피 세포, 지방 세포, 섬유모세포, 각질 형성 세포, 단핵세포, 호중구, 림프구, T-세포, B-세포, 또는 모낭 줄기 세포)은 또한 필요에 따라 하나 이상의 다른 유전자 변형을 포함할 수 있다. 용어 "유전자 변형"은 유전자 전달 비히클의 사용을 포함하며, 형질도입 (핵산의 수여체로의 생체내 또는 시험관내 바이러스 매개 전달), 형질감염 (단리된 핵산의 세포에 의한 흡수), 리포좀 매개 전달 및 당해 기술 분야에 널리 공지된 기타 수단을 포함하지만, 이들로 한정되는 것은 아니다.
용어 "나이브 (naive)" 또는 "야생형"은, 본원에서 세포에 대해 사용되는 경우, (상기에 용어 정의된 바와 같이) 유전자 변형되지 않은 세포 또는 (상기에 용어 정의된 바와 같이) "조작된" 세포가 아닌 세포를 의미한다. 예를 들어, 개체로부터 수득되며 인간에 의해 유전자 변형되지 않은 내피 세포 또는 다른 세포 타입이 "나이브" 또는 "야생형" 세포로 간주된다.
본원에서, "단리된 임플란트"라는 표현은 개체의 체내에 있는 것은 아니지만 대신 생체외/시험관내인 임플란트를 의미한다. 예를 들어, 배양 배지 중에 있는 시험관내 임플란트는 "단리된 임플란트"인 것으로 간주된다. 전형적으로, "단리된" 임플란트는 생체내와는 반대로 시험관내에서 구축되었지만 아직까지 생체내 이식 또는 배양되지 않은 것이다. 즉, 전형적으로, 단리된 임플란트는, 외과적 이식에 적합하지만 아직 개체에게 외과적으로 이식되지 않은, 시험관내 구축된 임플란트를 의미한다. "임플란트"를 지칭하는 본 발명의 모든 구현예들은 전형적으로 "단리된 임플란트"를 포함한다.
본원에서, 용어 "재조합"은 분자 생물학 및 유전자 조작 (예, 분자 클로닝) 방법을 이용해 (기계에 의한 방법 포함) 인간에 의해 만들어지며, 천연적으로는 존재하지 않는 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 핵산 분자를 지칭한다. 즉, 재조합 핵산 분자는 천연적으로 존재하는, 예를 들어, 유기체의 게놈에서의 핵산 분자와는 구분된다. 대응되는 게놈 DNA 서열에서 발견되는 등과 같이 임의의 개입된 인트론 서열이 없는, 상보적인 DNA 또는 mRNA 서열의 "cDNA" 카피를 포함하는 핵산 분자는, 따라서 재조합 핵산 분자로 간주될 것이다. 예를 들어, 재조합 E4ORF1 핵산 분자는 자연적으로 형성되는 아데노바이러스 게놈에서 코딩 서열과 통상 조합되지 않는 프로모터 및/또는 기타 유전자 인자들과 작동가능하게 연결된 E4ORF1 코딩 서열을 포함할 것이다. 마찬가지로, 재조합 ETV2 핵산 분자는 ETV2 cDNA 서열 (즉, 유기체의 게놈에 천연적으로 존재하지 않는 서열)을 포함하거나, 및/또는 유기체의 게놈에서 코딩 서열에 통상적으로 조합되지 않은 프로모터 및/또는 기타 유전자 인자들과 작동가능하게 연결된 ETV2-코딩 서열을 포함할 수 있다.
용어 "개체" 및 "환자"는 본원에서 상호 호환적으로 사용되며, 언급된 경우를 제외하고는 인간 등의 포유류 및 인간을 제외한 영장류 뿐만 아니라 토끼, 랫, 마우스, 염소, 돼지 및 기타 포유류 종들을 지칭한다.
본원에서, 세포 집단에 대한 "실질적으로 순수한"이라는 표현은, (예, 하나 이상의 특정 세포 마커, 형태적 특징 또는 기능적 특징의 발현에 의해 결정되는 바와 같이) 특정 타입의 세포들로 된 집단을 지칭하거나, 또는 2종 이상의 서로 다른 세포 타입들이 함께 사용되는 구현예인 경우에는, 전체 세포 집단을 구성하는 세포들 중 적어도 약 50%, 바람직하게는 적어도 약 75-80%, 더 바람직하게는 적어도 약 85-90%, 가장 바람직하게는 적어도 약 95%가 특정 타입 (복수)인 집단을 지칭한다. 즉, "실질적으로 순수한 세포 집단"은 특정 타입 또는 타입들이 아닌 세포를 약 50% 미만, 바람직하게는 약 20-25% 미만, 더 바람직하게는 약 10-15% 미만, 가장 바람직하게는 약 5% 미만으로 포함하는 세포 집단을 지칭한다.
핵산 분자 및 폴리펩타이드
아데노바이러스 초기 4 (E4) 영역은 6개 이상의 오픈 리딩 프래임 (E4ORFs)을 포함한다. 전체 E4 영역이 내피 세포의 생존을 촉진하고 혈관신생을 조절하는 것은 이미 입증된 바 있다 (Zhang et al. (2004), J. Biol. Chem. 279(12):11760-66). 또한, 전체 E4 영역 중, 내피 세포에서 상기한 생물학적 작용을 담당하는 것이 E4ORF1 서열이라는 것 역시 이미 확인된 바 있다. 미국 특허 제 8,465,732를 참조한다. 또한, Seandel et al. (2008), "Generation of a functional and durable vascular niche by the adenoviral E4ORF1 gene," PNAS, 105(49):19288-93도 참조한다. 본원에 언급된 본 발명에 대한 몇가지 구현예들은 E4ORF1+인, 즉 E4ORF1 폴리펩타이드를 발현하는 조작된 내피 세포를 포함한다. 마찬가지로, 본원에 언급된 본 발명에 대한 몇가지 구현예들은 ETV2+ 또는 ETS+인 조작된 내피 세포를 포함한다. 이들 세포는 각각 ETV2 폴리펩타이드 또는 ETS 계열의 전사 인자 폴리펩타이드를 포함하며, 이를 발현한다. 이들 폴리펩타이드 (E4ORF1, ETV2, ETS) 전체를 본원에서 "본 발명의 폴리펩타이드"로 총칭한다.
"본 발명의 폴리펩타이드"는 핵산 분자에 의해 코딩된다. 즉, 일부 구현예에서, 본 발명은 아데노바이러스 E4ORF1 폴리펩타이드를 코딩하는 핵산 분자, ETV2 전사 인자 폴리펩타이드를 코딩하는 핵산 분자 및/또는 ETS 전사 인자 폴리펩타이드를 코딩하는 핵산 분자를 포함한다. 이들 핵산 분자들을 본원에서 "본 발명의 핵산 분자"로 총칭한다.
본 발명의 폴리펩타이드 및 본 발명의 핵산 분자는 당해 기술 분야에 공지되거나 또는 본원에 명시된 아미노산 서열 또는 뉴클레오티드 서열을 가지거나, 또는 이들 아미노산 또는 뉴클레오티드 서열의 변이체, 유도체, 돌연변이 또는 단편인 아미노산 또는 뉴클레오티드 서열을 가질 수 있으며, 단, 이들 변이체, 유도체, 돌연변이 또는 단편은 (비-제한적으로, 내피 세포의 시험관내 생존을 촉진하는 촉진력 및 내피 세포가 임플란트에서 혈관을 시험관내에서 형성하는 혈관 형성력 등) 본원에 언급된 한가지 이상의 기능적인 특성 또는 본원에 언급된 용도에 필요한 한가지 이상의 특성을 가지거나, 또는 본원에 언급된 한가지 이상의 특성 또는 용도를 방지 또는 차단하지 않는, 폴리펩타이드를 코딩한다.
ETV2 폴리펩타이드 등의 ETS 전사 인자 폴리펩타이드를 포함하는 구현예의 경우, 이들 폴리펩타이드는 인간, 인간을 제외한 영장류, 토끼, 랫, 마우스, 염소 또는 돼지 폴리펩타이드 등의 임의의 포유류 유래의 ETS 전사 인자 폴리펩타이드일 수 있다. 일부 바람직한 구현예에서, 폴리펩타이드는 인간 폴리펩타이드일 수 있다. 이들 폴리펩타이드의 아미노산 서열 및 이들 폴리펩타이드를 코딩하는 핵산 서열은 당해 기술 분야에 잘 알려져 있으며, 유전자은행 데이타베이스 등의 널리 공지된 공개적으로 이용가능한 데이타베이스에서 이용가능하다.
아데노바이러스 E4ORF1 폴리펩타이드를 포함하는 구현예에 있어서, 사용되는 폴리펩타이드 서열은 임의의 적절한 아데노바이러스 타입 또는 계통 균주 (strain), 예를 들어 인간 아데노바이러스 2형, 3, 5, 7, 9, 11, 12, 14, 34, 35, 46, 50 또는 52로부터 유래될 수 있다. 일부 바람직한 구현예에서, 사용되는 폴리펩타이드 서열은 인간 아데노바이러스 타입 5로부터 유래된다. 이들 아데노바이러스 폴리펩타이드의 아미노산 서열과 이들 폴리펩타이드를 코딩하는 핵산 서열은 당해 기술 분야에 잘 알려져 있으며, 유전자은행 데이타베이스 등의 널리 공지된 공개적으로 이용가능한 데이타베이스에서 이용가능하다. 예를 들어, 적절한 서열로는 하기 서열 등이 있다: 인간 아데노바이러스 9 (Genbank 등재 번호 CAI05991), 인간 아데노바이러스 7 (Genbank 등재 번호 AAR89977), 인간 아데노바이러스 46 (Genbank 등재 번호 AAX70946), 인간 아데노바이러스 52 (Genbank 등재 번호 ABK35065), 인간 아데노바이러스 34 (Genbank 등재 번호 AAW33508), 인간 아데노바이러스 14 (Genbank 등재 번호 AAW33146), 인간 아데노바이러스 50 (Genbank 등재 번호 AAW33554), 인간 아데노바이러스 2 (Genbank 등재 번호 AP.sub.--000196), 인간 아데노바이러스 12 (Genbank 등재 번호 AP.sub.--000141), 인간 아데노바이러스 35 (Genbank 등재 번호 AP.sub.--000607), 인간 아데노바이러스 7 (Genbank 등재 번호 AP.sub.--000570), 인간 아데노바이러스 1 (Genbank 등재 번호 AP.sub.--000533), 인간 아데노바이러스 11 (Genbank 등재 번호 AP.sub.--000474), 인간 아데노바이러스 3 (Genbank 등재 번호 ABB 17792), 및 인간 아데노바이러스 타입 5 (Genbank 등재 번호 D12587).
일부 구현예들에서, 본 발명의 폴리펩타이드 및 핵산 분자는 본원에 구체적으로 언급되거나 또는 당해 기술 분야 (예, 유전자은행 데이타베이스 등의 공공 서열 데이타베이스)에 공지된 것과 동일한 아미노산 또는 뉴클레오티드 서열을 가진다. 일부 구현예에서, 본 발명의 폴리펩타이드 및 핵산 분자는 서열의 변이체, 유도체, 돌연변이 또는 단편인, 예를 들어, 서열과 85% 이상의 서열 동일성을 가진 변이체, 유도체, 돌연변이 또는 단편인, 아미노산 서열 또는 뉴클레오티드 서열을 가질 수 있다. 일부 구현예들에서, 변이체, 유도체, 돌연변이 또는 단편은 공지 서열과 약 85%의 동일성, 또는 공지 서열과 약 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 가진다. 일부 구현예에서, 공지 뉴클레오티드 서열에 대해, 약 50개의 뉴클레오티드, 또는 약 45개의 뉴클레오티드, 또는 약 40개의 뉴클레오티드, 또는 약 35개의 뉴클레오티드, 또는 약 30개의 뉴클레오티드, 또는 약 28개의 뉴클레오티드, 26개의 뉴클레오티드, 24개의 뉴클레오티드, 22개의 뉴클레오티드, 20개의 뉴클레오티드, 18개의 뉴클레오티드, 16개의 뉴클레오티드, 14개의 뉴클레오티드, 12개의 뉴클레오티드, 10개의 뉴클레오티드, 9개의 뉴클레오티드, 8개의 뉴클레오티드, 7개의 뉴클레오티드, 6개의 뉴클레오티드, 5개의 뉴클레오티드, 4개의 뉴클레오티드, 3개의 뉴클레오티드, 2개의 뉴클레오티드 또는 1개의 뉴클레오티드 길이에서 차이가 있는, 공지 뉴클레오티드 서열에 대한 변이체, 유도체, 돌연변이 또는 단편이 사용된다. 일부 구현예들에서, 공지 아미노산 서열과 비교해, 약 50개의 아미노산, 또는 약 45개의 아미노산, 또는 약 40개의 아미노산, 또는 약 35개의 아미노산, 또는 약 30개의 아미노산, 또는 약 28개의 아미노산, 26개의 아미노산, 24개의 아미노산, 22개의 아미노산, 20개의 아미노산, 18개의 아미노산, 16개의 아미노산, 14개의 아미노산, 12개의 아미노산, 10개의 아미노산, 9개의 아미노산, 8개의 아미노산, 7개의 아미노산, 6개의 아미노산, 5개의 아미노산, 4개의 아미노산, 3개의 아미노산, 2개의 아미노산, 또는 1개의 아미노산 길이에서 차이가 있는, 공지 아미노산 서열에 대한 변이체, 유도체, 돌연변이 또는 단편이 사용된다.
E4ORF1 핵산 또는 아미노산 서열이 사용되는 구현예의 경우, 일부 구현예에서, 이들 서열은 아데노바이러스 E4 영역으로부터 유래되는 또 다른 서열의 첨가없이 사용되며, 예를 들어, E4 전체 영역의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 형태가 아니거나 또는 E4 영역에 의해 코딩되는 기타 폴리펩타이드와 함께 사용되지 않는다. 그러나, 일부 다른 구현예에서는, 이들 서열은 E4ORF2, E4ORF3, E4ORF4 또는 E4ORF5 서열, 또는 이들의 변이체, 돌연변이 또는 단편 등의, E4 영역으로부터 유래되는 하나 이상의 다른 핵산 또는 아미노산 서열과 함께 사용될 수도 있다. 예를 들어, E4ORF1 서열은 그외 서열, 유전자 또는 코딩 영역 (예, 프로모터, 마커 유전자, 항생제 내성 유전자 등)을 포함하는 구조체 (예, 바이러스 벡터) 형태로 사용될 수 있지만, 특정 구현예에서, E4 전체 영역을 포함하지 않거나 또는 E4 전체 영역으로부터 유래되는 다른 ORF, 예를 들어, E4ORF2, E4ORF3, E4ORF4 및/또는 E4ORF5를 포함하지 않는 구조체 형태로 E4ORF1 서열이 사용된다.
본 발명의 핵산 분자는 원하는 용도에 따라 다양한 다른 핵산 서열, 유전자 또는 코딩 영역, 예를 들어, 항생제 내성 유전자, 리포터 유전자 또는 발현 테그 (예, GFP를 코딩하는 뉴클레오티드 서열) 또는 바람직할 수 있는 임의의 기타 뉴클레오티드 서열 또는 유전자를 포함하는 구조체에 사용될 수 있다. 본 발명의 폴리펩타이드는 단독으로 또는 융합 단백질의 일부로서 발현될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 핵산 분자는 발현을 허용하기 위한 하나 이상의 프로모터의 통제 하에 놓일 수 있다. 원하는 세포 타입에서 핵산 서열의 발현을 구동시킬 수 있는 임의의 프로모터가 사용될 수 있다. 적합한 프로모터의 예로는, 비-제한적으로, CMV, SV40, RSV, HIV-Ltr 및 MML 프로모터 등이 있다. 또한, 프로모터는 아데노바이러스 게놈 유래 프로모터 또는 이의 변이체일 수 있다. 예를 들어, E4ORF1이 사용되는 경우, 프로모터는 아데노바이러스에서 해당 유전자의 발현을 유도하기 위해 사용되는 프로모터일 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 핵산 분자는 유도성 프로모터의 통제 하에 배치되어, 핵산 서열의 발현을 필요에 따라 수행하거나 (turn on) 또는 중단 (turn off)될 수 있다. 임의의 적절한 유도성 발현 시스템이, 예를 들어, 테트라사이클린 유도성 발현 시스템 또는 호르몬 유도성 발현 시스템이 사용될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 핵산 분자는 이것이 필요한 동안에는 발현되고, 원하는 결과가 달성되었을 때, 예를 들어 내피 세포의 충분한 생장 또는 증식이 이루어졌을 때에는, 스위치를 끌 수 있다. 발현을 진행 또는 중단하는 능력은 생체내 이용시 특히 유용할 수 있다.
본 발명의 핵산 분자는 자연적으로 생성되는 뉴클레오티드, 합성 뉴클레오티드 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 본 발명의 핵산 분자는, 세포내에서 안정적이며 세포내에서 직접 단백질의 발현/생산을 진행하도록 사용될 수 있는 합성 변형 RNA 등의, RNA를 포함할 수 있다. 다른 구현예에서, 본 발명의 핵산 분자는 DNA를 포함할 수 있다. DNA가 사용되는 구현예에서, DNA 서열은 세포내에서 발현을 허용 (및/또는 촉진, 강화 또는 규제)하기 위해 하나 이상의 적절한 프로모터 및/또는 조절 인자와 작동가능하게 연결될 수 있으며, 하나 이상의 적절한 벡터 또는 구조체 형태로 제시될 수 있다. 본 발명의 핵산 분자들은 동일한 핵산 구조체 형태로 내피 세포에 도입되거나, 또는 개별 핵산 구조체로 도입될 수 있다.
본 발명의 핵산 분자는, 비-제한적인 예로, 형질감염 기법 및 바이러스-매개 형질전이 기법 등의, 당해 기술 분야에 공지된 임의의 적절한 시스템을 이용해 내피 세포로 도입될 수 있다. 본 발명에 따라 사용될 수 있는 형질감염 방법으로는, 비-제한적인 예로, 리포좀-매개 형질감염, 폴리브렌-매개 형질감염, DEAE 덱스트란-매개 형질감염, 전기천공, 칼슘 포스페이트 석출, 미세주입 및 미립자 충격 (micro-particle bombardment) 등이 있다. 사용될 수 있는 바이러스-매개 형질전이 방법으로는, 비-제한적으로, 렌티바이러스-매개 형질전이, 아데노바이러스-매개 형질전이, 레트로바이러스-매개 형질전이, 아데노-관련 바이러스-매개 형질전이 및 헤르페스 바이러스-매개 형질전이 등이 있다.
또한, 본 발명은, 본 발명의 핵산 분자를 포함하는 발현 벡터 등의 벡터를 제공한다. 예를 들어, 일 구현예에서, 본 발명은 ETS 전사 인자 폴리펩타이드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열과 E4ORF1 폴리펩타이드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 발현 벡터를 제공한다. 이러한 일부 구현예에서, ETS 전사 인자는 ETV2이다. 이러한 일부 구현예에서, 발현 벡터는 렌티바이러스 벡터이다. 일부 구현예에서, ETS 전사 인자 폴리펩타이드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열과 E4ORF1 폴리펩타이드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 별개의 프로모터들의 통제 하에 각각 배치된다. 일부 구현예에서, ETS 전사 인자 폴리펩타이드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열과 E4ORF1 폴리펩타이드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 동일한 프로모터의 통제 하에 배치되며, 예를 들어 ETS와 E40RF1 서열 사이에 내부 리보좀 도입 사이트 서열 (IRES)이 존재한다.
일부 구현예에서, 펩타이드 모방체가 사용될 수 있다. 펩타이드 모방체는 폴리펩타이드를 모방하도록 설계된 소형 단백질-유사 체인이다. 이 분자는 본 발명의 임의의 폴리펩타이드 (예, ETV2 또는 E4ORF1 폴리펩타이드)를 모방하도록 설계될 수 있다. 펩타이드 모방체를 구축하기 위해 펩타이드 변형하거나 또는 펩타이드 모방체를 설계하는 다양한 여러가지 방법들은 당해 기술 분야에 공지되어 있으며, 이를 이용해 본 발명의 폴리펩타이드들 중 하나에 대한 펩타이드 모방체를 제조할 수 있다.
본 발명의 폴리펩타이드 및 핵산 분자의 취급, 조작 및 발현은 분자 생물학 및 세포 생물학의 통례적인 기법들을 이용해 수행할 수 있다. 이러한 기법들은 당해 기술 분야에 잘 공지되어 있다. 예를 들어, 일 예로 Sambrook, Fritsch and Maniatis eds., "Molecular Cloning A Laboratory Manual, 2nd Ed., Cold Springs Harbor Laboratory Press, 1989); the series Methods of Enzymology (Academic Press, Inc.)의 내용, 또는 뉴클레오티드 및/또는 아미노산 서열의 취급, 조작 및 발현에 사용하기에 적합한 기법 안내에 대한 임의의 다른 표준 문서에 기술된 교시 내용들을 들 수 있다. E4ORF1 서열의 취급 또는 발현과 관련된 부가적인 측면들은 미국 특허 제 8,465,732에 언급되어 있으며, 이들 내용은 원용에 의해 본 명세서에 포함된다.
조작된 내피 세포
일부 구현예에서, 본 발명은 "조작된 내피 세포"를 제공한다.
일부 구현예에서, 조작된 내피 세포는 E4ORF1+ 조작된 내피 세포이다. 일부 구현예에서, 조작된 내피 세포는 E4ORF1+ETV2+ 조작된 내피 세포이다. 일부 구현예에서, 조작된 내피 세포는 E4ORF1+ETS+ 조작된 내피 세포이다.
다른 구현예들에서, 조작된 내피 세포는 하나 이상의 마커를 발현한다. 실제, E4ORF1+ 조작된 내피 세포를 포함하는 본원에 기술된 전체 구현예들에서, 다음과 같은 마커 하나 이상을 발현하거나 또는 다음과 같은 마커들 중 하나 이상을, 비-조작된 내피 세포 (예, 나이브 내피 세포, 또는 그렇게 조작되진 않았지만 비교되게 처리된 내피 세포)와 비교해, 다음과 같은 마커들 중 하나 이상의 수준을 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 20배, 30배, 40배 또는 50배 높은 수준과 같은 증가된 수준으로 발현하도록 (예를 들어, 핵산 분자의 형질감염 또는 형질전이에 의해 또는 단백질 또는 화학 물질 등의 임의의 다른 물질을 처리함으로써) 조작된 내피 세포가, E4ORF1+ 세포에 대한 대안으로서, 사용될 수 있음에 유념하여야 한다. 이들 마커는 다음과 같다: 인테그린 alpha 11, 마트릴린 (Matrilin) 2, TIMP 메탈로펩티다제 저해제 3, Delta-like 4, 엘라스틴, 스무텔린-유사 (Smoothelin-like) 2, 신데칸 1 (Syndecan 1), 칼포닌 3 산성 (Calponin 3 acidic), 단백질 C (응고 인자 Va 및 VIIIa의 비활성인자), 성장 분화 인자 3 (Growth differentiation factor 3), 갭 정션 (Gap junction) 단백질 alpha 4 37kDa, 트롬보스폰딘 1형 모티프 18을 가진 ADAM 메탈로펩티다제, 인터루킨 33, 렙틴 수용체, 설파타제 (Sulfatase) 1, 에프린-A1 (Ephrin-A1), 다이펩티딜-펩티다제 4 (Dipeptidyl-peptidase 4), 콜라겐, 타입 VIII, alpha 1, 케모카인 (C-C 모티프) 리간드 2, 연골 산성 단백질 1, 시스테이닐 루코트리엔 수용체 2, 섬유모세포 성장인자 2 (염기성), 라미닌 베타 3 (Laminin beta 3), CD82 분자, 인슐린 수용체, 에프린-B1, 케모카인 (C-C 모티프) 수용체-유사 1, 갭 정션 단백질, alpha 4, 37kDa, 및 피불린 (Fibulin) 2. 전술한 마커들과 이의 대응되는 유전자 기호는 또한 아래 표 1에 예시된다.
표 1: 조작된 E4ORF1+ 내피 세포에서 상향-조절되는 마커들
유전자 명 유전자 기호 발현 증가 배수*
인테그린, alpha 11 ITGA11 3.84
마트릴린 2 MATN2 7.97
TIMP 메탈로펩티다제 저해제 3 TIMP3 6.23
Delta-like 4 (초파리) DLL4 2.24
엘라스틴 ELN 91.37
스무텔린-유사 2 SMTNL2 9.52
신데칸 1 SDC1 4.23
칼포닌 3, 산성 CNN3 1.55
단백질 C (응고 인자 Va 및 VIIIa의 불활성인자) PROC 10.48
성장 분화 인자 3 GDF3 7.62
갭 정션 단백질, alpha 4, 37kDa GJA4 4.15
트롬보스폰딘 타입1 모티프 18을 가진 ADAM 메탈로펩티다제 DAMT18 2.93
인터루킨 33 IL33 6.14
렙틴 수용체 LEPR 5.13
설파타제 1 SULF1 3.36
에프린-A1 EFNA1 2.03
다이펩티딜-펩티다제 4 DPP4 4.62
콜라겐, 타입 VIII, alpha 1 COLA1 4.50
케모카인 (C-C 모티프) 리간드 2 CCL2 3.38
연골 산성 단백질 1 CRTAC1 10.41
시스테이닐 루코트리엔 수용체 2 CYSLTR2 5.42
섬유모세포 성장 인자 2 (염기성) FGF2 4.81
라미닌, beta 3 LAMB3 2.87
CD82 분자 CD82 2.18
인슐린 수용체 INSR 2.36
에프린-B1 EFNB1 2.44
케모카인 (C-C 모티프) 수용체-like 1 CCRL1 2.69
갭 정션 단백질, alpha 4, 37kDa GJA 4.15
피불린 2 FBLN 10.13
* RNA-서열 분석을 통해 측정된, E4ORF1-비 발현성 HUVEC 대비, E4ORF1-발현성 HUVEC의 12회 계대 배양 (P12)시 발현의 증가 배수.
이러한 일부 구현예에서, 조작된 내피 세포는 전술한 마커들 중 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28개 또는 29개 모두를 발현하거나, 또는 증가된 수준으로 발현한다. 이러한 일부 구현예에서, 조작된 내피 세포는 엘라스틴을 발현하거나 또는 증가된 수준으로 발현한다. 이러한 일부 구현예에서, 조작된 내피 세포는 엘라스틴, 단백질 C, 연골 산성 단백질 1, 및 피불린 2를 발현하거나 또는 증가된 수준으로 발현한다. 이러한 일부 구현예에서, 조작된 내피 세포는 엘라스틴, 단백질 C, 연골 산성 단백질 1, 피불린 2, 마트릴린 2, 스무텔린-유사 2, 성장-분화 인자 3, 인터루킨 33, 렙틴 수용체 및 시스테이닐 루코트리엔 수용체 2를 발현하거나 또는 증가된 수준으로 발현한다.
조작된 내피 세포는 당해 기술 분야에 공지된 임의의 적절한 내피 세포 소스로부터 유래될 수 있다. 일부 구현예에서, 내피 세포는 일차 내피 세포이 (primary endothelial cell)다. 일부 구현예에서, 조작된 내피 세포는 인간 또는 인간을 제외한 영장류 세포 또는 토끼, 랫, 마우스, 염소, 돼지 등의 포유류 또는 기타 포유류 세포이다. 일부 구현예에서, 내피 세포는 일차 인간 내피 세포이다. 일부 구현예에서, 내피 세포는 인간 제대 정맥 내피 세포 (HUVEC) 등의 제대 정맥 내피 세포 (UVEC)이다. 일부 구현예에서, 내피 세포는 나이브 내피 세포이다. 일부 구현예에서, 내피 세포는 유전자 변형된 내피 세포이다. 일부 구현예에서, 조작된 내피 세포는 줄기 세포 또는 전구 세포 (progenitor cell)로부터 유래될 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 조작된 내피 세포는 유도된 만능성 줄기 세포 (iPS 세포) 또는 배아 줄기 세포 (ES 세포) 등의 만능성 줄기 세포로부터 유래될 수 있다. 일부 구현예에서, 조작된 내피 세포는 내피 세포의 전구 세포로부터 유래될 수 있다. 일부 구현예에서, 조작된 내피 세포는 직접 리프로그래밍 방법과 같은 리프로그래밍 방법 또는 분화된 세포를 분화도가 낮은 세포 타입 (예, 만능성 또는 다능성 세포 타입)으로 리프로그래밍한 다음 이 분화도가 낮은 세포를 내피 세포로 분화시키는 방법을 이용해, 내피 세포 이외의 분화된 타입으로부터 유래될 수 있다. 일부 구현예에서, 조작된 내피 세포는 장기-특이적인 내피 세포이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 조작된 내피 세포는 조혈계-특이적인 내피 세포, 또는 신경계-특이적인 내피 세포, 또는 심장-특이적인 내피 세포, 또는 폐-특이적인 내피 세포, 또는 간-특이적인 내피 세포, 또는 신장-특이적인 내피 세포, 또는 근육-특이적인 내피 세포, 또는 연골-특이적인 내피 세포, 또는 지방 조직-특이적인 내피 세포일 수 있다. 이러한 일부 구현예에서, 사용되는 장기-특이적인 내피 세포는 임플란트가 배치될 장기 또는 조직으로부터 유래된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 임플란트가 폐 조직으로 이식되거나 또는 폐 결함을 치료하기 위해 사용된다면, 사용되는 내피 세포는 폐-특이적인 내피 세포일 수 있다. 마찬가지로, 임플란트가 간 조직으로 이식되거나 또는 간 결함을 치료하기 위해 사용된다면, 사용되는 내피 세포는 간-특이적인 내피 세포일 수 있다. 사용될 수 있는 그외 적절한 내피 세포로는 미국 특허 제 8,465,732에서 E4ORF1-발현에 적합한 것으로 이미 언급된 것들을 포함하며, 상기 문헌의 내용은 원용에 의해 본 명세서에 포함된다.
일부 구현예에서, 조작된 내피 세포는, 본원에 언급된 임의의 특정 분자 또는 마커 (예,E4ORF1)의 발현과 더불어 이와는 별개로, 하나 이상의 유전자 변형을 포함하도록, 유전자 변형된다. 예를 들어, 이러한 세포는 내피 세포에 발병하는 질환 또는 장애에 관여하는 것으로 공지되거나 또는 관여하는 것으로 의심되는 유전자의 올바른 버전, 또는 내피 세포에 공급하거나 또는 조작된 내피 세포를 이용해 투여 또는 전달하는 것이 바람직할 수 있는 치료학적 유용 유전자 등의 임의의 기타 유전자를 포함할 수 있다.
본 발명의 조작된 내피 세포는 다양한 형태로 존재하거나 또는 제공될 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 조작된 내피 세포는 세포의 단리된 집단 등의 세포의 집단을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 조작된 내피 세포는 예를 들어 임플란트에 부여될 또는 임플란트내에 포함될 시험관내 세포 집단을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 조작된 내피 세포는 실질적으로 순수한 세포 집단을 포함할 수 있다. 마찬가지로, 일부 구현예에서, 본 발명의 단리된 임플란트는 실질적으로 순수한 내피 세포 집단을 포함할 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 전체 세포 집단을 구성하는 세포의 적어도 약 50%, 바람직하게는 적어도 약 75-80%, 더 바람직하게는 적어도 약 85-90%, 가장 바람직하게는 적어도 약 95%가 본 발명의 조작된 내피 세포일 것이다. 일부 구현예에서, 조작된 내피 세포는 조작된 세포와 하나 이상의 부가적인 성분을 포함하는 조성물의 형태로 제공될 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 본 발명은 본원에 기술된 조작된 내피 세포 집단을 생리 식염수 등의 담체 용액, 세포 현탁 매질, 세포 배양 배지 등과 함께 포함하는 조성물을 제공한다. 일부 구현예에서, 이러한 조성물은 조작된 내피 세포 집단과 인간 개체 등의 개체에 투여하기 적절한 담체 용액을 포함하는 치료학적 조성물일 수 있다. 적절한 경우 다른 치료학적으로 허용가능한 물질도 포함될 수 있다. 당해 기술 분야의 당업자라면 의도한 용도에 따라 치료학적 조성물에 포함시킬 적절한 물질을 쉽게 선택할 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 조작된 내피 세포는 복제 불가능하도록 사용 (예, 치료학적 사용) 전에 세포분열 측면은 불활화된다. 이는, 예를 들어, 미토마이신 C 등의 화학제를 사용하거나 또는 조작된 내피 세포에 방사선 처리함으로써, 달성될 수 있다.
생체적합성 스캐폴드
특정 구현예들에서, 본 발명에 따라 사용되는 생체적합성 스캐폴드는, 생체 적합하며, 세포의 침윤이 가능하며 (예, 다공성 구조를 포함함), 살아있는 개체로의 외과적 이식에 적합한 임의의 물질이거나, 또는 이를 포함하거나, 또는 이로 필수적으로 구성되거나, 또는 이로 구성될 수 있다. 이런 스캐폴드에 대한 예로는, 비제한적으로, 탈세포화된 동물 조직 (예, 탈-세포화된 돼지 조직, 예를 들어 Bard, Inc. 사의 XenMatrix) 또는 콜라겐, 라미닌 및/또는 피브린과 같은 하나 이상의 세포외 기질 ("ECM") 성분을 포함하거나, 이로 구성되거나 또는 이로 필수적으로 구성된 것 등을 포함한다. 일부 구현예에서, 생체적합성 스캐폴드는 콜라겐을 적어도 약 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95%로 포함한다. 일부 구현예에서, 생체적합성 스캐폴드는 라미닌을 적어도 약 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95%로 포함한다. 일부 구현예에서, 생체적합성 스캐폴드는 피브린을 적어도 약 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95%로 포함한다. 일부 구현예에서, 생체적합성 스캐폴드는 4℃ 및/또는 실온 (약 21℃), 또는 이 둘다에서 고체인 것이다. 일부 구현예에서, 생체적합성 스캐폴드는 히알루론산을 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, 생체적합성 스캐폴드는 히알루론산을 약 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 또는 0.5% 보다 많이 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, 생체적합성 스캐폴드는 마트리겔을 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, 생체적합성 스캐폴드 물질은 이를 이식할 조직 위치에 따라 예를 들어, 생체역학적 특성 또는 임의의 기타 생물학적 특성을 기초로 선택될 수 있다.
임플란트
본원에 기술된 임플란트는 생체적합성 스캐폴드 물질과 조작된 내피 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 생체적합성 스캐폴드는 3차원 구조를 가지며, 조작된 내피 세포는 임플란트 내부에 혈관을 형성한다.
일부 구현예에서, 임플란트는 또한 내피 세포 외에도 다른 세포 타입을 포함할 수도 있다. 일부 구현예에서, 이러한 부가적인 세포 타입은, 배아 줄기 (ES) 세포, 유도된 만능성 줄기 세포 (iPSC), 조혈 줄기 세포, 뼈 줄기 세포, 근육 줄기 세포, 신경 줄기 세포, 상피 줄기 세포, 피부 줄기 세포, 간엽 줄기 세포, 장 줄기 세포, 정원 줄기 세포 (spermatogonial stem cell) 등과 같은 줄기 세포 또는 전구 세포일 수 있다. 일부 구현예에서, 이러한 부가적인 세포 타입은 조혈 세포, 골 세포, 근육 세포, 신경 세포, 상피 세포, 피부 세포, 섬유모세포, 장 세포, 고환 세포, 등과 같은 분화된 세포일 수 있다. 일부 구현예에서, 이러한 부가적인 세포 타입은 유전자 변형된 세포일 수 있다. 일부 구현예에서, 이러한 부가적인 세포 타입은 나이브 (즉, 유전자 비-변형) 세포일 수 있다. 본 발명의 조작된 내피 세포와 함께 제공 또는 사용될 수 있는 세포의 다른 예들은 미국 특허 제 8,465,732에 제시되어 있으며, 이 문헌의 내용은 원용에 의해 본 명세서에 포함된다.
일부 구현예에서, 임플란트는 임플란트의 의도한 용도에 따라 임의의 적정 크기 및/또는 형태를 취할 수 있다. 예를 들어, 임플란트가 특정 조직 결함을 대체 또는 복원하기 위한 용도인 경우, 이 임플란트는 조직 결함에 삽입하기에 적합한 크기 및 형상을 가지도록 구성될 수 있다.
배양 방법 & 임플란트 제조 방법
세포 배양 방법은 당해 기술 분야에 잘 알려져 있으며, 임의의 적절한 세포 배양 방법이 사용될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 조작된 내피 세포 또는 이 세포를 포함하는 임플란트는 미국 특허 제 8,465,732에 언급된 바와 같이 다른 내피 세포를 배양하는데 유용한 것으로 공지된 방법 또는 E4ORF1+ 내피 세포를 배양하는데 유용한 것으로 공지된 방법을 이용해 배양할 수 있으며, 상기 미국 특허 문헌의 내용은 원용에 의해 본 명세서에 포함된다. 일부 구현예에서, 본 발명의 조작된 내피 세포 또는 이 세포를 포함하는 임플란트는 혈청 부재 조건에서, 또는 외인성 성장인자의 부재 조건에서, 또는 혈청과 외인성 성장인자의 부재 조건에서, 또는 외인성 혈관신생 인자의 부재 조건에서 배양할 수 있다.
또한, 본 발명의 조작된 내피 세포는 저온보존될 수 있다. Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique, 4th Edition (2000) by R. Ian Freshney ("Freshney")에 언급된 방법 등의 다양한 세포 배양 및 세포 저온보존 방법들이 당해 기술 분야의 당업자들에게 공지되어 있으며, 상기 문헌의 내용은 원용에 의해 본 명세서에 포함된다.
본 발명의 임플란트는 당해 기술 분야에 공지된 임의의 적절한 방법에 의해 제조할 수 있다. 예를 들어, 일 구현예에서, 본 발명은 생체적합성 스캐폴드를 시험관내 조작된 내피 세포 집단과 접촉시키는 단계를 포함하는 본원에 기술된 임플란트의 제조 방법을 제공한다. 일부 구현에에서, 첫 접촉 단계는 조작된 내피 세포 배양물내에, 또는 정상부 상에 생체적합성 스캐폴드 물질을 배치하는 단계를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 첫 접촉 단계는 조작된 내피 세포를 생체적합성 스캐폴드 물질 상에 또는 내에 배치하는 단계를 포함할 수 있다. 첫 접촉 단계 중에, 그리고 그 이후에, 조작된 내피 세포, 생체적합성 스캐폴드 및 제조된 임플란트를 본원에 언급된 바와 같은 내피 세포 배양에 적합한 것으로 공지된 배양 조건 하에서 유지시킬 수 있다. 생체적합성 스캐폴드는 필요에 따라 내피 세포가 생체적합성 스캐폴드에 침윤하기에 충분한 시간 동안 또는 내피 세포가 생체적합성 스캐폴드내에 혈관을 형성하기에 충분한 시간 동안 조작된 내피 세포의 집단과 함께 인큐베이션할 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 생체적합성 스캐폴드는 약 1일 (24시간), 2일 (48시간), 3일, 4일, 5일, 6일 또는 7일 (1주)간, 또는 약 2주, 3주, 4주, 5주 또는 6주, 또는 그 이상의 기간 동안, 임플란트를 사용하기 전에, 예를 들어 개체에게 이식하기 전에 조작된 내피 세포의 집단과 함께 인큐베이션될 수 있다.
개체 & 치료 방법
일부 구현예들에서, 본 발명의 임플란트를 이식할 수 있는 개체는, 조직 결함의 치료를 보조하기 위해 임플란트를 사용하는 것이 적합할 수 있는 임의의 동물 종 개체이다. 일부 구현예에서, 개체는 포유류, 예를 들어, 영장류 (예, 인간 및 원숭이), 설치류 (예, 마우스, 랫 및 토끼), 오바인 종 (ovine species) (예, 양 및 염소), 보바인 종 (예, 소), 돼지 종, 말 종, 고양이 종 및 개 종으로 이루어진 군으로부터 선택되는 포유류이다. 일부 구현예에서, 개체는 인간이다.
본 발명의 임플란트는 치료가 필요한 개체에서 조직 결함을 치료하는데 이용할 수 있다. 이러한 개체는 "조직 결함"을 가질 수 있다. 본원에서, 용어 "조직 결함"은, 비-제한적인 예로, 외상성 상해, 노화, 퇴행성 질환, 유전 장애, 감염성 질환, 자가면역 질환 또는 암에 의해 유발되는, 다양한 타입의 증상 및 다양한 타입의 조직 손상, 조직 상해 또는 조직 기능 부전을 포괄하는 것으로 의도된다. 본원에 제공되는 치료 방법은 개체에서 조직 결함의 대체, 재건, 재생, 회복 또는 보충을 달성하거나 또는 달성을 목표로 할 수 있다. 예를 들어, 일 구현예에서, 본원에 기술된 임플란트는 개체에서 당뇨병을 (예, 결함이 발생된 인슐린-분비성 조직을 대체 또는 보충함으로써) 치료하거나 또는 신경병증을 치료하기 위해 사용할 수 있다. 다른 구현예에서, 본원에 기술된 임플란트는 예를 들어 손상된 신경, 예를 들어 수초 (myelin sheath)가 손상되었거나, 결함이 있거나 또는 제거된 신경의 주변에 임플란트를 배치함으로써 신경병증을 치료하는데 사용할 수 있으며, 이 경우 임플란트는 수초를 비롯하여 신경의 회복을 촉진할 수 있다.
본 발명의 임플란트는 당해 기술 분야에 공지된 표준 외과적 방법 또는 기법을 이용해 필요한 개체에게 외과적으로 이식할 수 있다. 예를 들어, 본 발명에 따른 임플란트는 필요에 따라서는 조직 결함 부위에 또는 조직 결함 부위의 근처에 외과적으로 이식할 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 임플란트는 임플란트를 이식할 동일 개체로부터 유래되는 조작된 내피 세포, 즉, 자가 세포를 포함한다. 다른 구현예에서, 본 발명의 임플란트는 동종이계 공여체 개체로부터 유래되는 조작된 내피 세포를 포함한다. 이러한 일부 구현예에서, 동종이계 공여체는 임플란트가 배치될 개체와 조직 매칭성을 가진다 (예, HLA 매칭됨 또는 MHC 매칭됨). 이러한 일부 구현예에서, 동종이계 공여체는 임플란트가 배치될 개체와 미스매칭되거나 또는 일부 매칭된다 (예, HLA 부분 미스매치 또는 MHC 부분 미스매치). 조작된 내피 세포가 동종이계 공여체로부터 유래되는 구현예에서, "외래" 내피 세포의 거부 반응 위험성을 낮추기 위해 하나 이상의 면역억제제를 사용해 개체를 치료하는 것이 필요할 수도 있다.
키트
또한, 본 발명은 본원에 언급된 임플란트를 제조하기 위한, 그리고 본원에 언급된 다양한 방법들을 수행하기 위한 키트를 제공한다. 이런 키트는, 비제한적으로, 뉴클레오티드 서열 (예, E4ORF1 코딩 서열), 조작된 내피 세포 (예, E4ORF1+ 내피 세포), 나이브 내피 세포, 조작된 내피 세포, 세포에서 발현되는 단백질 또는 핵산 분자를 검출하기 위한 수단 또는 조성물 (예, 핵산 프로브, 항체 등), 조작된 내피 세포를 배양하거나 또는 조작된 내피 세포를 포함하는 임플란트를 유지 또는 배양하는데 사용가능한 배지 또는 조성물, 생체적합성 스캐폴드 물질 또는 이들의 임의 조합 등의, 본원에 기술된 임의의 구성 성분들을 포함할 수 있다. 이러한 키트들 모두 선택적으로 사용 설명서, 용기, 배양 바셀 등을 포함할 수도 있다. 라벨이 키트에 첨부될 수 있으며, 전자 또는 컴퓨터 판독가능한 형태 (예, 디스크, 광학 디스크, 메모리 칩 또는 테이프)일 수 있는 임의의 기재 또는 기록 매체 (recorded material)를 포함할 수 있으며, 키트 내용물의 사용 설명 또는 기타 사용 정보를 제공해준다.
본 발명의 일부 측면들은 아래 비-제한적인 실시예들에서 추가로 설명될 수 있다.
실시예
실시예 1: 조작된 내피 세포를 포함하는 임플란트의 시험관내 배양
아데노바이러스 E4ORF1 단백질과 녹색 형광 단백질 (GFP)을 발현하는 조작된 E4ORF1+ 인간 제대 정맥 내피 세포 (HUVEC)를 실시예 3에 기술된 바와 같이 배양하였다. 조작된 E4ORF1+ HUVEC를 24웰 플레이트에 접종하여 표준 조건 하에 두었으며, 컨플루언스에 도달하게 하였다. 탈세포화된 돼지 콜라겐 매트릭스를 사용하였다 (XenMatrix™ Surgical Graft, Bard Davol, Inc. Warwick, RI). 콜라겐 매트릭스는, 매트릭스 물질을 가위 또는 6 mm 진피 펀치를 사용해 소형 조각으로 잘라 준비하였다. 2가지 대안적인 방법들을 사용해 콜라겐 매트릭스에 조작된 HUVEC를 접종하였다. 첫번째 방법의 경우, 콜라겐 매트릭스를 24웰 플레이트의 표면에서 배양 중인 조작된 HUVEC 단층 위에 직접 배치하였다. 2번째 방법의 경우, 콜라겐 매트릭스를 24웰 플레이트의 웰에 넣고, 배양 용기에서 회수한 조작된 HUVEC를 콜라겐 매트릭스의 상부에 배치하였다. 이들 2가지 조건에서 조작된 HUVEC에서는 24시간 이내에 콜라겐 매트릭스의 증식 현상이 관찰되었으며, 테스트한 모든 시점에 콜라겐 매트릭스 안에서 생존 상태로 유지되었다 (최대 6주). 혈관은 조작된 내피 세포를 접종한 지 48시간 이내에 관찰할 수 있었으며, 테스트한 모든 시점에 존재하였다 (최대 6주). 조작된 E4ORF1+ HUVEC는 개방형 내강을 가진 혈관 구조를 형성하였는데, 콜라겐 매트릭스가 전체적으로 관찰되었으며 (도 1A), 혈관이 매트릭스의 경계 밖으로 돌출되어 주변 배지로까지 돌출되었다 (도 1B).
실시예 2: 조작된 내피 세포를 포함하는 콜라겐 매트릭스의 생체내 이식
콜라겐 매트릭스에 실시예 1에 언급된 바와 같이 조작된 HUVEC를 접종하였다. 조작된 HUVEC를 접종한 후 8일에서 6주의 기간 동안 세포를 시험관내에서 배양한 다음 마우스에 이식하였다 (인간 내피 세포에 대한 임의의 거부 반응을 최소화하기 위해 면역결손 마우스를 사용하였음). 마우스를 마취하고, 수술을 준비하였다. 복부 피부에 8 mm 절개를 행하였다. 복부 근육과 피부 사이에 포셉을 삽입하여, 임플란트를 넣을 공간을 만들었다. 각 동물에 (배지에 침지하였지만 내피 세포는 접종하지 않은 콜라겐 매트릭스 물질을 포함하는) "대조군" 임플란트 1개와 (조작된 HUVEC를 포함하는) "테스트" 임플란트 1개를 이식하였다. 이식 후 48시간 내지 4주째에 임플란트를 회수하였다. 임플란트를 회수하였을 때, 테스트 임플란트가 대조군 임플란트에 비해 주변 마우스 조직과 훨씬 더 강력하게 유착된 것이 관찰되었다. 48시간째에, 테스트 임플란트는 이식편 (graft)을 침투하는 혈액의 존재에 의해 입증되는 바와 같이 이미 부분적으로 문합되어 있었지만 (도 2A), 대조군 임플란트는 그렇지 않았다 (도 2B). 이식편 제거시, 테스트 매트릭스는 주변 조직과 현저하게 유착되어 있었지만, 내피 세포가 없는 매트릭스는 유착되지 않은 것으로 확인되었다. 도 3은 이식 후 4주째에 대조군 대비 테스트 임플란트에서 관찰된 더 높은 수준의 혈관화를 보여준다. 임플란트를 단편으로 잘라, 조직학적으로 검사하였다. 테스트 임플란트는 대조군 임플란트에 비해 보다 높은 수준의 세포 충실성을 나타내는 것으로 관찰되었다. 도 4를 참조한다.
실시예 3: E4ORF1 + 조작된 내피 세포의 배양 및 E4ORF1 + 조작된 내피 세포를 포함하는 임플란트
콜라겐 매트릭스 상에 내피 세포를 배양할 목적으로, 인간 제대 정맥 내피 세포 (HUVEC)를 공지 질환에 걸리지 않은 동의를 구한 공여체로부터 입수하고, 아데노바이러스 E4ORF1을 형질도입하여 E4ORF1+ HUVEC를 구축하였다. 조작된 HUVEC는 당해 기술 분야의 표준 방법을 이용해 유착 세포로서 배양하였다. 이 표준 방법은, 세포를 100% 컨플루언트가 되었을 때 분할하고, 이를 37℃에서 배양하고, 조직 배양물 처리된 플레이트, 플라스크 또는 웰 상에서 증폭시키는 것을 포함하며, 내피 세포 보충물 (50㎍/ml), 소 태아 혈청 (FBS, 최종 농도: 20%), 항생제-항진균제 용액, HEPES 완충제 (10mM), 헤파린 (50㎍/ml) 및 Glutamax가 첨가된 Medium 199 배지를 사용한다. 세포를 증식시키면서, 더 큰 플라스크로 서브-배양하는 중에 배지를 교체하거나 또는 배양 2일을 초과하면 교체하였다.
내피 세포는 매트릭스가 수화되었을 때 매트릭스와 접촉되게 두었다. E4ORF1+ 내피 세포를 콜라겐 매트릭스를 이용해 배양할 때, 몇가지 변형된 배양 방법을 적용하였다. 한가지 방법으로, 고체 콜라겐 매트릭스를 날카로운 날이 장착된 기구 (예, 면도칼, 메스 (scalpel) 또는 가위)를 사용해 25 mm2 조각으로 절단하였다. 다른 방법으로, 고체 콜라겐 매트릭스를 덴탈 펀치를 사용해 둥근 조각으로 절단하였다. 다른 방법에서는, 상층에 매트릭스가 배치된 컨플루언트 단층 형태로 E4ORF1+ 내피 세포 (EC)를 두고, 앰플 배지를 첨가하여 매트릭스를 커버링하였다. EC가 매트릭스로 이동하였다. 한가지 배양 방법으로, 매트릭스를 앰플 배지가 담긴 웰에 매트릭스를 덮이도록 넣었다. 배지 현탁물 형태로 E4ORF1+ EC를 매트릭스가 담긴 웰에 첨가하였다. EC는 접촉-매개 증식 저해가 나타날 때까지 매트릭스에 유착되어 증식하였다. 장기간 인큐베이션하는 동안, 혈관 구조가 파괴되지 않도록 매트릭스와 직접 접촉하지 않게 조심하면서 2-3일 마다 배지를 교체하였다. 콜라겐 매트릭스에 E4ORF1+ EC의 침투는 각 방법에서 24시간 이내에 확인되었으며, 이식편의 크기와 접종된 세포 수에 따라 수일간 침투가 계속 증가하였다. 과증식 (E4ORF1+ EC가 다층, 볼 또는 클럼프로 생장되는 것으로 정의됨)은 관찰되지 않았다 - 컨플루언스에서 증식 정지되는 세포와 일치됨. 혈관의 형태를 가진 내강-함유 구조는 48시간째에 확인되었고, 수 주간 지속되었다 (도 1B).
이들 매트릭스를, 인간 E4ORF1+ EC에 대한 면역 반응을 발휘할 수 없는 면역결핍된 NOD scid gamma (NSG) 마우스에 외과적으로 이식하여 생체내 실험을 수행하였다. 마취한 마우스를 세척하고, 털을 제거한 다음 안정시켰다. 피부에 8 mm로 소형 절개를 만들었다. 블런드 단부를 가진 포셉을 봉합 시 삽입한 다음 피부와 근육 사이에 삽입 후 벌려 공동을 형성하였다. 반대 쪽에도 이 과정을 반복 실시하였다. 대조군 매트릭스와 테스트 매트릭스를 이들 공동에 장착하였다.

Claims (92)

  1. 개체에게 외과적으로 이식하기에 적합한 단리된 임플란트로서,
    (a) 생체적합성 다공성 스캐폴드 물질, 및 (b) 상기 생체적합성 스캐폴드 물질내에 배치된 혈관을 포함하며,
    상기 생체적합성 다공성 스캐폴드 물질이 세포외 기질 분자, 콜라겐, 피브린 및/또는 라미닌 (laminin), 또는 탈세포화된 동물 조직 (decellularized animal tissue)을 포함하고,
    상기 혈관이 E4ORF1+ 조작된 내피 세포를 포함하고,
    상기 임플란트가 섬유모세포, 섬유모세포-유래 혈관신생 인자 또는 섬유모세포-유래 세포외 기질 성분을 포함하지 않는 것인,
    단리된 임플란트.
  2. 제1항에 있어서,
    연결된 혈관 망을 포함하거나; 또는
    상기 혈관이 모세관을 포함하거나; 또는
    상기 혈관이 개방형 내강 (open lumen)을 구비하거나; 또는
    하나 이상의 혈관이 상기 생체적합성 스캐폴드 물질의 경계 밖으로 돌출된, 단리된 임플란트.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 E4ORF1+ 조작된 내피 세포가 E4ORF1+ ETV2+ 이거나; 또는
    상기 조작된 내피 세포가 재조합 ETS 계열의 전사 인자를 발현하거나; 또는
    상기 조작된 E4ORF1+ 내피 세포가 포유류 내피 세포이거나; 또는
    상기 조작된 E4ORF1+ 내피 세포가 인간 내피 세포이거나; 또는
    상기 조작된 E4ORF1+ 내피 세포가 인간 제대 정맥 내피 세포 (HUVEC)로부터 유래되거나; 또는
    상기 조작된 E4ORF1+ 내피 세포가 장기-특이적인 내피 세포 (organ-specific endothelial cell)이거나; 또는
    상기 조작된 E4ORF1+ 내피 세포가 상기 임플란트를 외과적으로 이식할 개체의 내피 세포로부터 유래되거나; 또는
    상기 조작된 E4ORF1+ 내피 세포가 상기 임플란트를 외과적으로 이식할 개체와 동일한 MHC- 또는 HLA-타입을 가진 동종이계 공여체 (allogeneic donor)의 내피 세포로부터 유래되거나; 또는
    상기 조작된 E4ORF1+ 내피 세포가 상기 임플란트를 외과적으로 이식할 개체와 일부 매칭되는 MHC- 또는 HLA-타입을 가진 동종이계 공여체의 내피 세포로부터 유래되거나; 또는
    상기 조작된 E4ORF1+ 내피 세포가 상기 임플란트를 외과적으로 이식할 개체와 MHC- 또는 HLA-타입에 차이가 있는 동종이계 공여체의 내피 세포로부터 유래되는, 단리된 임플란트.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 생체적합성 스캐폴드 물질내에 배치된 줄기 세포 또는 전구 세포 (progenitor cell)를 더 포함하거나; 또는
    상기 생체적합성 스캐폴드 물질내에 배치된 줄기 세포 또는 전구 세포 (progenitor cell)를 더 포함하고, 상기 줄기 세포 또는 전구 세포가 조혈 줄기 세포, 뼈 줄기 세포, 근육 줄기 세포, 신경 줄기 세포, 모낭 줄기 세포, 상피 줄기 세포, 피부 줄기 세포, 간엽 줄기 세포, 장 줄기 세포 및 정원 줄기 세포 (spermatogonial stem cell)로 이루어진 군으로부터 선택되는, 단리된 임플란트.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 생체적합성 스캐폴드 물질내에 배치되는 1종 이상의 부가적인 세포 타입을 더 포함하거나; 또는
    상기 생체적합성 스캐폴드 물질내에 배치되는 1종 이상의 부가적인 세포 타입을 더 포함하고, 상기 부가적인 세포 타입이 조혈 세포, 골 세포, 근육 세포, 신경 세포, 혈관 주위 세포, 모낭 세포, 지방 세포, 각질 형성 세포, 상피 세포, 피부 세포, 섬유모세포, 장 세포 및 고환 세포로 이루어진 군으로부터 선택되는, 단리된 임플란트.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 생체적합성 스캐폴드 물질이 4℃ 이거나; 또는
    상기 생체적합성 스캐폴드 물질이 21℃에서 고체 이거나; 또는
    상기 생체적합성 스캐폴드 물질이 탈세포화된 돼지 조직을 포함하거나; 또는
    상기 생체적합성 스캐폴드 물질이 히알루론산을 포함하지 않는, 단리된 임플란트.
  7. 제1항에 있어서,
    상기 임플란트가 혈청을 포함하지 않거나; 또는
    상기 임플란트가 외인성 성장 인자를 포함하지 않거나; 또는
    상기 임플란트가 외인성 혈관신생 인자를 포함하지 않거나; 또는
    상기 임플란트가 외인성 VEGF (vascular endothelial growth factor)를 포함하지 않거나; 또는
    상기 임플란트가 외인성 FGF (fibroblast growth factor)를 포함하지 않거나; 또는
    상기 임플란트가 마이크로-담체 비드 (micro-carrier bead)를 포함하지 않거나; 또는
    상기 임플란트가 외인성 기질 분자로 코팅된 마이크로-담체 비드를 포함하지 않는, 단리된 임플란트.
  8. 개체에게 외과적으로 이식하기에 적합한 임플란트의 제조 방법으로서,
    조작된 E4ORF1+ 내피 세포의 집단을 생체적합성 다공성 스캐폴드 물질과 시험관내에서 접촉한 상태로, 섬유모세포, 섬유모세포-유래 혈관신생 인자 또는 섬유모세포-유래 세포외 기질 성분이 없는 조건 하에서, 상기 생체적합성 스캐폴드 물질내에서 혈관이 형성될 때까지 배양하여, E4ORF1+ 혈관을 포함하는 임플란트를 제조하는 단계를 포함하며,
    상기 생체적합성 다공성 스캐폴드 물질이 세포외 기질 분자, 콜라겐, 피브린 및/또는 라미닌 (laminin), 또는 탈세포화된 동물 조직 (decellularized animal tissue)을 포함하는,
    임플란트의 제조 방법.
  9. 제8항에 있어서,
    상기 배양은 연결된 혈관 망이 형성될 때까지 수행되거나; 또는
    상기 배양은 하나 이상의 혈관이 상기 생체적합성 스캐폴드 물질의 경계를 넘어 돌출될 때까지 수행되는, 임플란트의 제조 방법.
  10. 제8항 또는 제9항에 있어서,
    상기 배양은 24시간 이상 수행되거나; 또는
    상기 배양은 48시간 이상 수행되거나; 또는
    상기 배양은 3일 이상 수행되거나; 또는
    상기 배양은 4일 이상 수행되거나; 또는
    상기 배양은 5일 이상 수행되거나; 또는
    상기 배양은 1주일 이상 수행되는, 임플란트의 제조 방법.
  11. 제8항 또는 제9항에 있어서,
    상기 조작된 E4ORF1+ 내피 세포가 E4ORF1+ ETV2+ 이거나; 또는
    상기 조작된 E4ORF1+ 내피 세포가 재조합 ETS 계열의 전사 인자를 발현하거나; 또는
    상기 조작된 E4ORF1+ 내피 세포가 장기-특이적인 내피 세포이거나; 또는
    상기 조작된 E4ORF1+ 내피 세포가 포유류 내피 세포이거나; 또는
    상기 조작된 E4ORF1+ 내피 세포가 인간 내피 세포이거나; 또는
    상기 조작된 E4ORF1+ 내피 세포가 상기 임플란트를 외과적으로 이식할 개체의 내피 세포로부터 유래되거나; 또는
    상기 조작된 E4ORF1+ 내피 세포가 상기 임플란트를 외과적으로 이식할 개체와 동일한 MHC- 또는 HLA-타입을 가진 동종이계 공여체의 내피 세포로부터 유래되거나; 또는
    상기 조작된 E4ORF1+ 내피 세포가 상기 임플란트를 외과적으로 이식할 개체와 일부 매칭되는 MHC- 또는 HLA-타입을 가진 동종이계 공여체의 내피 세포로부터 유래되거나; 또는
    상기 조작된 E4ORF1+ 내피 세포가 상기 임플란트를 외과적으로 이식할 개체와 비교해 MHC- 또는 HLA-타입에 차이가 있는 동종이계 공여체의 내피 세포로부터 유래되거나; 또는
    상기 조작된 E4ORF1+ 내피 세포가 인간 제대 정맥 내피 세포 (HUVEC)로부터 유래되는, 임플란트의 제조 방법.
  12. 제8항 또는 제9항에 있어서 ,
    상기 혈관이 모세관을 포함하거나; 또는
    상기 혈관이 내강을 가지거나; 또는
    상기 생체적합성 스캐폴드 물질이 내부에 배치된 줄기 세포 또는 전구 세포를 포함하거나; 또는
    상기 생체적합성 스캐폴드 물질이 내부에 배치된 줄기 세포 또는 전구 세포를 포함하고, 상기 줄기 세포 또는 전구 세포가 조혈 줄기 세포, 뼈 줄기 세포, 근육 줄기 세포, 신경 줄기 세포, 상피 줄기 세포, 피부 줄기 세포, 모낭 줄기 세포, 간엽 줄기 세포, 장 줄기 세포 및 정원 줄기 세포 (spermatogonial stem cell)로 이루어진 군으로부터 선택되거나; 또는
    상기 생체적합성 스캐폴드 물질내에 배치되는 1종 이상의 부가적인 세포 타입을 더 포함하거나; 또는
    상기 생체적합성 스캐폴드 물질내에 배치되는 1종 이상의 부가적인 세포 타입을 더 포함하고, 상기 부가적인 세포 타입이 조혈 세포, 골 세포, 근육 세포, 신경 세포, 혈관 주위 세포, 모낭 세포, 지방 세포, 각질 형성 세포, 상피 세포, 피부 세포, 섬유모세포, 장 세포 및 고환 세포로 이루어진 군으로부터 선택되거나; 또는
    상기 생체적합성 스캐폴드 물질이 4℃에서 고체이거나; 또는
    상기 생체적합성 스캐폴드 물질이 21℃에서 고체이거나; 또는
    상기 생체적합성 스캐폴드 물질이 히알루론산을 포함하지 않거나; 또는
    상기 생체적합성 스캐폴드 물질이 탈세포화된 돼지 조직을 포함하는, 임플란트의 제조 방법.
  13. 제8항 또는 제9항에 있어서 ,
    상기 배양이 혈청이 없는 조건 하에 수행되거나; 또는
    상기 배양이 외인성 성장 인자가 없는 조건 하에 수행되거나; 또는
    상기 배양이 외인성 혈관신생 인자가 없는 조건 하에 수행되거나; 또는
    상기 배양이 외인성 VEGF가 없는 조건 하에 수행되거나; 또는
    상기 배양이 외인성 FGF가 없는 조건 하에 수행되거나; 또는
    상기 배양이 마이크로-담체 비드가 없는 조건 하에 수행되거나; 또는
    상기 배양이 세포외 기질 분자로 코팅된 마이크로-담체 비드가 없는 조건 하에 수행되는, 임플란트의 제조 방법.
  14. 개체를 치료하는데 사용하기 위한, 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 임플란트.
  15. 제14항에 있어서,
    상기 개체는 조직 결함을 가지고 있으며, 상기 임플란트는 상기 개체의 상기 조직 결함 부위로 외과적으로 이식하기 위한 것이거나; 또는
    상기 조작된 E4ORF1+ 내피 세포가 장기-특이적인 내피 세포이고, 상기 임플란트는 상기 장기-특이적인 내피 세포가 유래된 장기로 외과적으로 이식되거나; 또는
    상기 개체는 포유류 개체이거나; 또는
    상기 개체는 인간 개체이거나; 또는
    상기 임플란트의 조작된 E4ORF1+ 내피 세포는 상기 개체 자신의 내피 세포로부터 유래되거나; 또는
    상기 임플란트의 조작된 E4ORF1+ 내피 세포는 상기 개체와 동일한 MHC- 또는 HLA-타입을 가진 동종이계 공여체의 내피 세포로부터 유래되거나; 또는
    상기 임플란트의 조작된 E4ORF1+ 내피 세포는 상기 임플란트를 외과적으로 이식할 개체와 일부 매칭되는 MHC- 또는 HLA-타입을 가진 동종이계 공여체의 내피 세포로부터 유래되거나; 또는
    상기 임플란트의 조작된 E4ORF1+ 내피 세포는 상기 임플란트를 외과적으로 이식할 개체와 비교해 MHC- 또는 HLA-타입에 차이가 있는 동종이계 공여체의 내피 세포로부터 유래되는, 임플란트.
  16. 삭제
  17. 삭제
  18. 삭제
  19. 삭제
  20. 삭제
  21. 삭제
  22. 삭제
  23. 삭제
  24. 삭제
  25. 삭제
  26. 삭제
  27. 삭제
  28. 삭제
  29. 삭제
  30. 삭제
  31. 삭제
  32. 삭제
  33. 삭제
  34. 삭제
  35. 삭제
  36. 삭제
  37. 삭제
  38. 삭제
  39. 삭제
  40. 삭제
  41. 삭제
  42. 삭제
  43. 삭제
  44. 삭제
  45. 삭제
  46. 삭제
  47. 삭제
  48. 삭제
  49. 삭제
  50. 삭제
  51. 삭제
  52. 삭제
  53. 삭제
  54. 삭제
  55. 삭제
  56. 삭제
  57. 삭제
  58. 삭제
  59. 삭제
  60. 삭제
  61. 삭제
  62. 삭제
  63. 삭제
  64. 삭제
  65. 삭제
  66. 삭제
  67. 삭제
  68. 삭제
  69. 삭제
  70. 삭제
  71. 삭제
  72. 삭제
  73. 삭제
  74. 삭제
  75. 삭제
  76. 삭제
  77. 삭제
  78. 삭제
  79. 삭제
  80. 삭제
  81. 삭제
  82. 삭제
  83. 삭제
  84. 삭제
  85. 삭제
  86. 삭제
  87. 삭제
  88. 삭제
  89. 삭제
  90. 삭제
  91. 삭제
  92. 삭제
KR1020177020113A 2014-12-19 2015-12-18 조작된 내피 세포를 포함하는 생체적합성 임플란트 KR102571649B1 (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201462094915P 2014-12-19 2014-12-19
US62/094,915 2014-12-19
PCT/US2015/066782 WO2016100869A1 (en) 2014-12-19 2015-12-18 Biocompatible implants comprising engineered endothelial cells

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20170100572A KR20170100572A (ko) 2017-09-04
KR102571649B1 true KR102571649B1 (ko) 2023-08-25

Family

ID=56127705

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020177020113A KR102571649B1 (ko) 2014-12-19 2015-12-18 조작된 내피 세포를 포함하는 생체적합성 임플란트

Country Status (11)

Country Link
US (1) US20170360988A1 (ko)
EP (1) EP3233094A4 (ko)
JP (1) JP6855377B2 (ko)
KR (1) KR102571649B1 (ko)
CN (1) CN107249607A (ko)
AU (2) AU2015364383A1 (ko)
CA (1) CA2971439A1 (ko)
HK (1) HK1245126A1 (ko)
RU (1) RU2743761C2 (ko)
SG (1) SG11201704989WA (ko)
WO (1) WO2016100869A1 (ko)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2993015A1 (en) * 2015-07-20 2017-01-26 Angiocrine Bioscience, Inc. Engineered endothelial cells expressing an e-twenty six transcription factor
WO2018052948A1 (en) * 2016-09-13 2018-03-22 Angiocrine Bioscience, Inc. Blood-brain barrier comprising engineered endothelial cells
US11932876B2 (en) 2017-02-03 2024-03-19 Cornell University Stable three-dimensional blood vessels and methods for forming the same
CN112105721A (zh) * 2018-03-23 2020-12-18 儿童医疗中心公司 内皮细胞因子及其方法
MX2021001184A (es) * 2018-08-03 2021-07-15 VeriGraft AB Metodos para preparar vasos sanguineos personalizados.
AU2021297353A1 (en) * 2020-06-25 2023-02-02 Angiocrine Bioscience, Inc. Endothelial cells for mitigation of chemotherapy-induced toxicity

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2008089448A2 (en) 2007-01-19 2008-07-24 Cornell Presearch Foundation, Inc. Methods and compositions for promoting survival & proliferation of endothelial cells & stimulating angiogenesis
US20110027235A1 (en) 2009-04-09 2011-02-03 Sangamo Biosciences, Inc. Targeted integration into stem cells
US20130224161A1 (en) 2010-11-09 2013-08-29 Cornell University Methods for organ regeneration

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB0717168D0 (en) * 2007-09-04 2007-10-17 Ucl Business Plc Biomaterial scaffolds for controlled tissue growth
EP2508212A1 (en) * 2011-04-05 2012-10-10 Universitätsklinikum Freiburg Biocompatible and biodegradable gradient layer system for regenerative medicine and for tissue support

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2008089448A2 (en) 2007-01-19 2008-07-24 Cornell Presearch Foundation, Inc. Methods and compositions for promoting survival & proliferation of endothelial cells & stimulating angiogenesis
US20100093081A1 (en) * 2007-01-19 2010-04-15 Cornell Research Foundation, Inc. Methods and compositions for promoting survival & proliferation of endothelial cells & stimulating angiogenesis
US20110027235A1 (en) 2009-04-09 2011-02-03 Sangamo Biosciences, Inc. Targeted integration into stem cells
US20130224161A1 (en) 2010-11-09 2013-08-29 Cornell University Methods for organ regeneration

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Kumiko Kobayashi et al., "Role of Etv2-positive cells in the remodeling morphogenesis during vascular development." Genes to Cells (2013), Vol. 18, pp. 704-721*
김우섭, "조직공학의 기본개념과 최신동향 및 미래전망." J Korean Med Assoc Vol. 57(2), pp. 145-154 (2014.02.)*

Also Published As

Publication number Publication date
US20170360988A1 (en) 2017-12-21
RU2017125478A3 (ko) 2019-05-29
EP3233094A1 (en) 2017-10-25
RU2017125478A (ru) 2019-01-21
EP3233094A4 (en) 2018-09-05
WO2016100869A1 (en) 2016-06-23
JP6855377B2 (ja) 2021-04-07
JP2018500993A (ja) 2018-01-18
HK1245126A1 (zh) 2018-08-24
AU2015364383A1 (en) 2017-07-27
SG11201704989WA (en) 2017-07-28
AU2021209230A1 (en) 2021-08-19
CA2971439A1 (en) 2016-06-23
CN107249607A (zh) 2017-10-13
RU2743761C2 (ru) 2021-02-25
KR20170100572A (ko) 2017-09-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102571649B1 (ko) 조작된 내피 세포를 포함하는 생체적합성 임플란트
JP6882391B2 (ja) 肺臓の組織工学
US20220184136A1 (en) Highly functional manufactured abcb5+ mesenchymal stem cells
KR20070001108A (ko) 각막 윤부로부터 유도된 미분화 줄기 세포를 가진 조직시스템
AU2014210181A1 (en) Modulation of cardiac stem-progenitor cell differentiation, assays and uses thereof
JP2016537414A (ja) 心臓神経堤細胞、及びその使用方法
KR20180053646A (ko) Ets 전사 인자를 발현하는 조작된 내피 세포
Lepore et al. Survival and differentiation of pituitary colony‐forming cells in vivo
US20190218543A1 (en) Mammalian pluripotent stem cells, methods for their production, and uses thereof
CN110121555B (zh) 包含工程化内皮细胞的血脑屏障
US20220226391A1 (en) Compositions and methods for thymic regeneration and t-cell reconstitution
JP7391308B2 (ja) 脊髄損傷の治療のための組成物および方法
Plant et al. Viral transduction of Schwann cells for peripheral nerve repair
KR102513507B1 (ko) 장기 섬유증의 예방 또는 치료제
KR20220054315A (ko) 요로 상피 세포로의 유도제 및 요로 상피 세포의 유도 방법
JP6654323B2 (ja) 重層上皮組織形成能を有する細胞、及びその製造方法
Xu et al. Generation of helper-dependent adenoviral vector for skin disorder
LaRanger Differentiation of Normal and Cystic Fibrosis Human Lung Epithelial Cells in a Decellularized and Reconstituted Mouse Lung

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant