KR102511209B1 - Benzimidazole derivatives and pharmaceutical compositions thereof for the treatment of inflammatory disorders - Google Patents
Benzimidazole derivatives and pharmaceutical compositions thereof for the treatment of inflammatory disorders Download PDFInfo
- Publication number
- KR102511209B1 KR102511209B1 KR1020167023016A KR20167023016A KR102511209B1 KR 102511209 B1 KR102511209 B1 KR 102511209B1 KR 1020167023016 A KR1020167023016 A KR 1020167023016A KR 20167023016 A KR20167023016 A KR 20167023016A KR 102511209 B1 KR102511209 B1 KR 102511209B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- compound
- pharmaceutically acceptable
- mixture
- methyl
- acceptable salt
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D235/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, condensed with other rings
- C07D235/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, condensed with other rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
- C07D235/04—Benzimidazoles; Hydrogenated benzimidazoles
- C07D235/06—Benzimidazoles; Hydrogenated benzimidazoles with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached in position 2
- C07D235/08—Radicals containing only hydrogen and carbon atoms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
- A61K31/4164—1,3-Diazoles
- A61K31/4184—1,3-Diazoles condensed with carbocyclic rings, e.g. benzimidazoles
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
- A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
- A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
- A61K31/4439—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. omeprazole
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
- A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
- A61K31/5377—1,4-Oxazines, e.g. morpholine not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. timolol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
- C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
- C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
- C07D401/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing three or more hetero rings
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
- C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
- C07D405/12—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
- C07D413/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing three or more hetero rings
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
Abstract
본 발명은 하기 화학식 I에 따른 화합물을 개시한다:
화학식 I
상기 식에서, Cy, R1, L1, R3, R4, R5, La 및 Ra는 본 발명에 정의된 바와 같다. JAK를 억제할 수 있는, 화학식 I에 따른 신규의 벤즈이미다졸을 개시하며, 상기 화합물을 약학 조성물로서 제조할 수 있고, 인간을 포함한 포유동물에서 다양한 상태, 예를 들어 비제한적인 예로서 알러지성 질병, 염증 질병, 자가면역 질병, 증식성 질병, 이식 거부, 연골 턴오버의 장애를 수반하는 질병, 선천성 연골 기형, 및/또는 IL6의 분비과잉 또는 인터페론의 분비과잉과 관련된 질병의 예방 및 치료에 사용할 수 있다.The present invention discloses compounds according to Formula I:
Formula I
In the above formula, Cy, R 1 , L 1 , R 3 , R 4 , R 5 , L a and R a are as defined herein. Disclosed are novel benzimidazoles according to Formula I, which are capable of inhibiting JAK, which compounds can be prepared as pharmaceutical compositions, which can treat various conditions in mammals, including humans, such as allergic as a non-limiting example. For the prevention and treatment of diseases, inflammatory diseases, autoimmune diseases, proliferative diseases, graft rejection, diseases involving disorders of cartilage turnover, congenital cartilage malformations, and/or diseases associated with hypersecretion of IL6 or hypersecretion of interferon. can be used
Description
본 발명은 알러지성 질병, 염증 질병, 자가면역 질병, 증식성 질병, 이식 거부, 연골 턴오버의 장애를 수반하는 질병, 선천성 연골 기형, 및/또는 IL6의 분비과잉 또는 인터페론의 분비과잉과 관련된 질병에 관련된 타이로신 키나제과, JAK의 억제제인 화합물에 관한 것이다. 특히, 본 발명의 화합물은 JAK1 및/또는 TYK2를 억제한다. 본 발명은 또한 본 발명의 화합물의 제조 방법, 본 발명의 화합물을 포함하는 약학 조성물, 본 발명의 화합물을 투여함에 의한 알러지성 질병, 염증 질병, 자가면역 질병, 증식성 질병, 이식 거부, 연골 턴오버의 장애를 수반하는 질병, 선천성 연골 기형, 및/또는 IL6의 분비과잉 또는 인터페론의 분비과잉과 관련된 질병의 예방 및/또는 치료 방법을 제공한다.The present invention relates to allergic diseases, inflammatory diseases, autoimmune diseases, proliferative diseases, transplant rejection, diseases involving impaired cartilage turnover, congenital cartilage malformations, and/or diseases associated with hypersecretion of IL6 or hypersecretion of interferon. It relates to compounds that are inhibitors of the tyrosine kinase family, JAK. In particular, the compounds of the present invention inhibit JAK1 and/or TYK2. The present invention also provides methods for preparing the compounds of the present invention, pharmaceutical compositions containing the compounds of the present invention, allergic diseases, inflammatory diseases, autoimmune diseases, proliferative diseases, transplant rejection, cartilage turn by administering the compounds of the present invention. Provided is a method for preventing and/or treating a disease accompanying an over's disorder, a congenital cartilage deformity, and/or a disease associated with hypersecretion of IL6 or hypersecretion of interferon.
야누스 키나제(JAK)는 사이토킨 신호를 막 수용체로부터 STAT 전사 인자로 전달하는 세포질 타이로신 키나제이다. 4 개의 JAK과 구성원, JAK1, JAK2, JAK3 및 TYK2가 개시되어 있다. 상기 사이토킨이 그의 수용체에 결합시, JAK과 구성원들은 서로 자기인산화 및/또는 트랜스인산화한 다음, STAT를 인산화하고, 이어서 상기는 핵으로 이동하여 전사를 조절한다. JAK-STAT 세포내 신호 전달은 인터페론, 대부분의 인터류킨뿐만 아니라 다양한 사이토킨 및 내분비 인자들, 예를 들어 EPO, TPO, GH, OSM, LIF, CNTF, GM-CSF 및 PRL을 제공한다(Vainchenker W. et al. (2008)).Janus kinase (JAK) is a cytoplasmic tyrosine kinase that transmits cytokine signals from membrane receptors to STAT transcription factors. Four JAK family members have been disclosed, JAK1, JAK2, JAK3 and TYK2. When the cytokine binds to its receptor, JAK and its members autophosphorylate and/or transphosphorylate each other, then phosphorylate STATs, which then translocate to the nucleus to regulate transcription. JAK-STAT intracellular signaling provides interferons, most interleukins, as well as various cytokines and endocrine factors such as EPO, TPO, GH, OSM, LIF, CNTF, GM-CSF and PRL (Vainchenker W. et al. al. (2008)).
유전자 모델과 소분자 JAK 억제제의 병용 연구는 다수의 JAK의 치료학적 가능성을 밝혀내었다. JAK3은 면역억제 표적으로서 마우스 및 인간 유전학에 의해 확인된다(O'Shea et al., 2004). JAK3 억제제는 처음에 기관 이식 거부에 대해서, 그러나 나중에는 또한 다른 면역-염증성 적응증들, 예를 들어 류마티스성 관절염(RA), 건선 및 크론병에서 성공적으로 임상적으로 개발되었다(http://clinicaltrials.gov/).Combination studies of genetic models and small molecule JAK inhibitors have revealed the therapeutic potential of a number of JAKs. JAK3 has been identified by mouse and human genetics as an immunosuppressive target (O'Shea et al., 2004). JAK3 inhibitors have been successfully clinically developed, initially for organ transplant rejection, but later also for other immune-inflammatory indications, such as rheumatoid arthritis (RA), psoriasis and Crohn's disease (http://clinicaltrials. .gov/).
TYK2는 면역-염증 질병에 잠재적인 표적이며, 인간 유전학 및 마우스 녹-아웃 연구에 의해 확인된다(Levy and Loomis, 2007).TYK2 is a potential target for immuno-inflammatory diseases and has been confirmed by human genetics and mouse knock-out studies (Levy and Loomis, 2007).
JAK1은 면역-염증 질병 분야의 표적이다. JAK1은 다른 JAK들과 이종이량체화하여 사이토킨-구동된 염증전 신호를 전달한다. 따라서, JAK1의 억제는 JAK1 신호를 이용하는 병리학-관련된 사이토킨, 예를 들어 IL-6, IL-4, IL-5, IL-13, 또는 IFN감마를 갖는 면역-염증 질병뿐만 아니라 JAK-매개된 신호 전달에 의해 구동되는 다른 질병들에 중요하다.JAK1 is a target in the field of immune-inflammatory diseases. JAK1 heterodimerizes with other JAKs to transmit cytokine-driven pro-inflammatory signals. Thus, inhibition of JAK1 is associated with pathology-associated cytokines that utilize JAK1 signaling, such as IL-6, IL-4, IL-5, IL-13, or IFNgamma, as well as immune-inflammatory diseases with JAK-mediated signaling. It is important for other diseases driven by transmission.
연골의 퇴행은 다양한 질병의 특징이며, 상기 질병 중에서 류마티스성 관절염 및 골관절염이 가장 현저하다. 류마티스성 관절염(RA)은 만성적인 관절 퇴행성 질병이며, 관절 구조의 염증 및 파괴를 특징으로 한다. 상기 질병이 관리되지 않으면, 관절 기능의 상실로 인한 실질적인 불구 및 통증 및 심지어 조기 사망에 이르게 된다. 따라서, RA 요법의 목적은 상기 질병을 늦추는 것뿐만 아니라 관절 파괴를 멈추기 위해서 완화를 획득하는 것이다. 상기 질병 결과의 중증도외에, RA의 높은 유병률(세계적으로 성인의 약 0.8%가 병에 걸린다)은 높은 사회-경제적 영향을 의미한다(Choy and Panayi, 2001; Firestein, 2003; Lee and Weinblatt, 2001; O?Dell, 2004; Smolen and Steiner, 2003).Degeneration of cartilage is a hallmark of various diseases, of which rheumatoid arthritis and osteoarthritis are the most prominent. Rheumatoid arthritis (RA) is a chronic joint degenerative disease, characterized by inflammation and destruction of joint structures. If the disease is not managed, it leads to substantial disability and pain and even premature death due to loss of joint function. Thus, the goal of RA therapy is to obtain remission in order to stop joint destruction as well as to slow the disease. In addition to the severity of these disease outcomes, the high prevalence of RA (affecting approximately 0.8% of adults worldwide) implies a high socio-economic impact (Choy and Panayi, 2001; Firestein, 2003; Lee and Weinblatt, 2001; O? Dell, 2004; Smolen and Steiner, 2003).
JAK1 및 JAK2는 다수의 사이토킨 및 호르몬에 대한 세포내 신호전달과 관련된다. 이들 사이토킨 및 호르몬 중 어느 하나와 관련된 병리는 JAK1 및 JAK2 억제제에 의해 개선될 수 있다. 따라서, 다수의 알러지 또는 염증 상태 및 자가면역 질환들, 예를 들어 류마티스성 관절염, 전신 홍반성 루푸스, 소아 특발성 관절염, 골관절염, 천식, 만성 폐쇄성 폐 질병(COPD), 조직 섬유증, 호산성 염증, 식도염, 염증성 장 질병(예를 들어 크론병, 궤양성 대장염), 이식, 이식편대 숙주병, 건선, 근염, 다발성 경화증은 본 발명에 개시된 화합물에 의한 치료가 이로울 수 있다(Kopf et al., 2010).JAK1 and JAK2 are involved in intracellular signaling for a number of cytokines and hormones. Pathologies associated with any of these cytokines and hormones can be ameliorated by JAK1 and JAK2 inhibitors. Thus, a number of allergic or inflammatory conditions and autoimmune diseases such as rheumatoid arthritis, systemic lupus erythematosus, juvenile idiopathic arthritis, osteoarthritis, asthma, chronic obstructive pulmonary disease (COPD), tissue fibrosis, eosinophilic inflammation, esophagitis , inflammatory bowel disease (e.g. Crohn's disease, ulcerative colitis), transplantation, graft-versus-host disease, psoriasis, myositis, multiple sclerosis may benefit from treatment with the compounds disclosed herein (Kopf et al., 2010 ).
골관절염(또한 OA, 또는 마모성 관절염으로 지칭됨)은 가장 통상적인 형태의 관절염이며, 관절 연골의 상실을 특징으로 하고, 종종 뼈의 비대 및 통증과 관련된다(Wieland et al., 2005).Osteoarthritis (also referred to as OA, or abrasive arthritis) is the most common form of arthritis and is characterized by loss of articular cartilage, often associated with bone enlargement and pain (Wieland et al., 2005).
골관절염은 치료하기가 어렵다. 현재, 치유를 획득할 수 없으며 치료는 통증의 완화 및 병든 관절이 변형되는 것을 방지하는데 초점을 두고 있다. 통상적인 치료는 비-스테로이드성 소염 약물(NSAID)의 사용을 포함한다. 식이성 보충제, 예를 들어 콘드로이친 및 글루코스아민 설페이트가 골관절염의 안전하고 유효한 치료 선택권으로서 주장되었지만, 최근의 임상 시험은 상기 두 치료 모두 골관절염과 관련된 통증을 감소시킬 수 없는 것으로 밝혀졌다(Clegg et al., 2006).Osteoarthritis is difficult to treat. Currently, a cure cannot be obtained and treatment is focused on relieving pain and preventing deformity of the diseased joint. Conventional treatment involves the use of non-steroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs). Although dietary supplements such as chondroitin and glucosamine sulfate have been claimed as safe and effective treatment options for osteoarthritis, recent clinical trials have shown that neither treatment is capable of reducing pain associated with osteoarthritis (Clegg et al. , 2006).
동화 과정의 자극, 이화 과정의 차단, 또는 이들 둘의 조합이 연골의 안정화, 및 아마도 심지어 상기 손상의 역전을 생성시킬 수 있으며, 따라서 상기 질병의 추가적인 진행을 방지할 수 있다. 상기 골관절 질환 중에 나타나는 관절 연골 병변의 교정을 위한 치료 방법들이 개발되었으나, 지금까지 이들 중 어느 것도 원위치 및 생체내에서 관절 연골의 재생을 매개할 수 없었다. 종합해 보면, 질병 개질성 골관절염 약물을 입수할 수 없다.Stimulation of anabolic processes, blocking of catabolic processes, or a combination of the two may result in stabilization of the cartilage, and possibly even reversal of the damage, thus preventing further progression of the disease. Treatment methods for the correction of articular cartilage lesions appearing in the above osteoarthritis have been developed, but none of them have been able to mediate the regeneration of articular cartilage in situ and in vivo. Taken together, disease modifying osteoarthritis drugs are not available.
반데힌스트(Vandeghinste) 등(Vandeghinste et al., 2005)은 JAK1을, 그의 억제가 OA를 포함한 다수의 질병에 치료학적 관련성을 가질 수도 있는 표적으로서 발견하였다. 마우스에서 상기 JAK1 유전자의 녹아웃은 JAK1이 발생 중 필수적이고 쓸모없지 않은 역할을 함을 입증하였다: JAK1-/- 마우스는 생후 24시간 이내에 죽었으며 림프구 발생이 심하게 손상되었다. 더욱이, JAK1 -/- 세포는 II 부류 사이토킨 수용체를 사용하는 사이토킨, 신호전달에 감마-c 서브유닛을 사용하는 사이토킨 수용체 및 신호전달에 gp130 서브유닛을 사용하는 사이토킨 수용체과에 반응성이 아니거나 덜 반응성이었다(Rodig et al., 1998). Vandeghinste et al. (Vandeghinste et al., 2005) discovered JAK1 as a target whose inhibition may have therapeutic relevance in a number of diseases, including OA. Knockout of the JAK1 gene in mice demonstrated that JAK1 plays an essential and not ineffective role during development: JAK1-/- mice died within 24 hours of birth and lymphocyte development was severely impaired. Moreover, JAK1 −/− cells were not or less responsive to cytokines using class II cytokine receptors, cytokine receptors using the gamma-c subunit for signaling and cytokine receptors using the gp130 subunit for signaling (Rodig et al., 1998).
다양한 그룹들이 연골세포 생물학에서 JAK-STAT 신호전달에 관련되었다. 리(Li) 등(Li et al., 2001)은 온코스타틴 M이 1차 연골세포에서 JAK/STAT 및 MAPK 신호전달 경로의 활성화에 의해 MMP 및 TIMP3 유전자 발현을 유도함을 보였다. 오사키(Osaki) 등(Osaki et al., 2003)은 연골세포에서 콜라겐 II의 인터페론-감마 매개된 억제가 JAK-STAT 신호전달을 수반함을 보였다. IL1-베타는 기질 성분의 발현을 감소시키고 콜라게나제 및 유도성 산화질소 신타제(NOS2)(산화질소의 생성을 매개한다)의 발현을 유도함으로써 연골 이화작용을 유도한다. 오테로(Otero) 등(Otero et al., 2005)은 렙틴 및 IL1-베타가 연골세포에서 NO 생성 또는 NOS2 mRNA의 발현을 상승적으로 유도하며 JAK 억제제에 의해 차단됨을 보였다. 레젠드레(Legendre) 등(Legendre et al., 2003)은 IL6/IL6 수용체가 소 관절 연골세포에서 연골-특이성 기질 유전자 콜라겐 II, 아그레칸 코어 및 링크 단백질의 하향조절을 유도하며, 이는 JAK/STAT 신호전달에 의해 매개됨을 보였다. 따라서, 이러한 관찰은 연골 항상성에서 JAK 키나제 활성에 대한 역할 및 JAK 키나제 억제제에 대한 치료 기회를 암시한다.Various groups have been implicated in JAK-STAT signaling in chondrocyte biology. Li et al. (Li et al., 2001) showed that oncostatin M induces MMP and TIMP3 gene expression by activating the JAK/STAT and MAPK signaling pathways in primary chondrocytes. Osaki et al. (2003) showed that interferon-gamma mediated inhibition of collagen II in chondrocytes involved JAK-STAT signaling. IL1-beta induces cartilage catabolism by reducing the expression of matrix components and inducing the expression of collagenase and inducible nitric oxide synthase (NOS2) (which mediates the production of nitric oxide). Otero et al. (2005) showed that leptin and IL1-beta synergistically induce NO production or NOS2 mRNA expression in chondrocytes and were blocked by JAK inhibitors. Legendre et al. (2003) reported that the IL6/IL6 receptor induces downregulation of the cartilage-specific matrix genes collagen II, aggrecan core and link protein in bovine articular chondrocytes, resulting in JAK/ It was shown to be mediated by STAT signaling. Thus, these observations suggest a role for JAK kinase activity in cartilage homeostasis and therapeutic opportunities for JAK kinase inhibitors.
JAK과 구성원들은 골수증식성 질환을 포함한 추가적인 상태들에 관련되었다(O’Sullivan et al, 2007)(여기에서 JAK2의 돌연변이가 확인되었다). 이는 JAK, 특히 JAK2의 억제제들이 또한 골수증식성 질환의 치료에 사용될 수 있음을 가리킨다. 또한, 상기 JAK과, 특히 JAK1, JAK2 및 JAK3는 암, 특히 백혈병, 예를 들어 급성 골수성 백혈병(O’Sullivan et al, 2007; Xiang et al., 2008) 및 급성 림프모구성 백혈병(Mullighan et al, 2009), 또는 고형 종양, 예를 들어 자궁 평활근육종(Constantinescu et al., 2008), 전립선암(Tam et al., 2007)과 관련되었다. 이들 결과는 JAK, 특히 JAK1 및/또는 JAK2의 억제제가 암(백혈병 및 고형 종양, 예를 들어 자궁 평활근육종, 전립선암)의 치료에도 또한 유용성을 가질 수 있음을 가리킨다.JAK family members have been implicated in additional conditions including myeloproliferative disorders (O'Sullivan et al, 2007) (where mutations in JAK2 were identified). This indicates that inhibitors of JAK, particularly JAK2, may also be used for the treatment of myeloproliferative disorders. In addition, the JAK family, particularly JAK1, JAK2, and JAK3, is associated with cancer, particularly leukemia, such as acute myelogenous leukemia (O'Sullivan et al, 2007; Xiang et al., 2008) and acute lymphoblastic leukemia (Mullighan et al. , 2009), or solid tumors such as uterine leiomyosarcoma (Constantinescu et al., 2008), prostate cancer (Tam et al., 2007). These results indicate that inhibitors of JAK, particularly JAK1 and/or JAK2, may also have utility in the treatment of cancer (leukemia and solid tumors such as uterine leiomyosarcoma, prostate cancer).
또한, 캐슬만병, 다발성 골수종, 혈관사이세포 증식성 사구체신염, 건선 및 카포시육종이 상기 사이토킨 IL-6(그의 생물학적 효과는 세포내 JAK-STAT 신호에 의해 매개된다)의 분비과잉에 기인하는 듯하다(Naka et al., 2002). 상기 결과는 JAK의 억제제가 상기 질병의 치료에 또한 유용성을 가질 수도 있음을 보인다.In addition, Castleman's disease, multiple myeloma, mexangiocyte proliferative glomerulonephritis, psoriasis and Kaposi's sarcoma appear to be due to hypersecretion of the cytokine IL-6, whose biological effects are mediated by intracellular JAK-STAT signaling ( Naka et al., 2002). The results show that inhibitors of JAK may also have utility in the treatment of these diseases.
현행 요법들은 만족스럽지 못하며 따라서 알러지성 질병, 염증 질병, 자가면역 질병, 증식성 질병, 이식 거부, 연골 턴오버의 장애를 수반하는 질병, 선천성 연골 기형, 및/또는 IL6의 분비과잉 또는 인터페론의 분비과잉과 관련된 질병의 치료에 사용될 수 있는 추가의 화합물들을 확인할 필요가 여전하다. 따라서 본 발명은 화합물들, 그들의 제조 방법 및 본 발명의 화합물을 적합한 약학 담체와 함께 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 본 발명은 또한 알러지성 질병, 염증 질병, 자가면역 질병, 증식성 질병, 이식 거부, 연골 턴오버의 장애를 수반하는 질병, 선천성 연골 기형, 및/또는 IL6의 분비과잉 또는 인터페론의 분비과잉과 관련된 질병의 치료를 위한 약제의 제조에서 본 발명 화합물의 용도를 제공한다.Current therapies are unsatisfactory and therefore allergic diseases, inflammatory diseases, autoimmune diseases, proliferative diseases, graft rejection, diseases involving impaired cartilage turnover, congenital cartilage malformations, and/or hypersecretion of IL6 or interferon secretion. There is still a need to identify additional compounds that can be used in the treatment of excess-related diseases. Accordingly, the present invention provides compounds, methods for their preparation, and pharmaceutical compositions comprising a compound of the present invention together with a suitable pharmaceutical carrier. The present invention also relates to allergic diseases, inflammatory diseases, autoimmune diseases, proliferative diseases, graft rejection, diseases involving disorders of cartilage turnover, congenital cartilage malformations, and/or hypersecretion of IL6 or hypersecretion of interferon. Provided is the use of a compound of the present invention in the manufacture of a medicament for the treatment of a disease.
본 발명은 본 발명의 화합물이 JAK의 억제제로서 작용할 수 있고 알러지성 질병, 염증 질병, 자가면역 질병, 증식성 질병, 이식 거부, 연골 턴오버의 장애를 수반하는 질병, 선천성 연골 기형, 및/또는 IL6의 분비과잉 또는 인터페론의 분비과잉과 관련된 질병의 치료에 유용하다는 발견을 기본으로 한다. 구체적인 태양에서 본 발명의 화합물은 JAK1 및/또는 TYK2의 억제제이다. 본 발명은 또한 이들 화합물의 제조 방법, 이들 화합물을 포함하는 약학 조성물, 및 본 발명의 화합물의 투여에 의한 알러지성 질병, 염증 질병, 자가면역 질병, 증식성 질병, 이식 거부, 연골 턴오버의 장애를 수반하는 질병, 선천성 연골 기형, 및/또는 IL6의 분비과잉 또는 인터페론의 분비과잉과 관련된 질병의 치료 방법을 제공한다.The present invention provides that the compounds of the present invention can act as inhibitors of JAK and are used to treat allergic diseases, inflammatory diseases, autoimmune diseases, proliferative diseases, graft rejection, diseases involving disorders of cartilage turnover, congenital cartilage malformations, and/or It is based on the discovery that it is useful for the treatment of diseases associated with hypersecretion of IL6 or hypersecretion of interferon. In a specific embodiment the compounds of the invention are inhibitors of JAK1 and/or TYK2. The present invention also provides methods for preparing these compounds, pharmaceutical compositions comprising these compounds, and disorders of allergic diseases, inflammatory diseases, autoimmune diseases, proliferative diseases, transplant rejection, cartilage turnover by administration of the compounds of the present invention. Provided is a method for treating a disease associated with a congenital cartilage deformity, and/or a disease associated with hypersecretion of IL6 or hypersecretion of interferon.
따라서, 본 발명의 첫 번째 태양에서, 하기 화학식 I에 따른 본 발명의 화합물을 제공한다:Accordingly, in a first aspect of the present invention there is provided a compound of the present invention according to formula I
[화학식 I][Formula I]
상기 식에서,In the above formula,
R1은 H 또는 Me이고;R 1 is H or Me;
L1은 -NR2-; -O- 또는 -CH2-이고;L 1 is -NR 2 -; -O- or -CH 2 -;
Cy는 페닐, 또는 N, O 및 S 중에서 독립적으로 선택된 1 내지 4개의 헤테로원자를 포함하는 5 내지 9원 모노사이클릭 또는 축합된 바이사이클릭 헤테로아릴이고;Cy is phenyl or a 5 to 9 membered monocyclic or fused bicyclic heteroaryl containing 1 to 4 heteroatoms independently selected from N, O and S;
R2는 H 또는 C1-4 알킬이고;R 2 is H or C 1-4 alkyl;
R3은 H, 할로, 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C1-4 알킬, 또는 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C1-4 알콕시이고;R 3 is H, halo, C 1-4 alkyl optionally substituted with one or more halo, or C 1-4 alkoxy optionally substituted with one or more halo;
R4는 H 또는 할로이고;R 4 is H or halo;
R5는 -CN, 할로이거나, 또는 -L2-R6이고;R 5 is -CN, halo, or -L 2 -R 6 ;
-L2는 존재하지 않거나, 또는 -C(=O)-, -C(=O)NR7-, -NR7C(=O)-, -SO2-, -SO2NR7-, 또는 -NR7SO2-이고;-L 2 is absent, or -C(=O)-, -C(=O)NR 7 -, -NR 7 C(=O)-, -SO 2 -, -SO 2 NR 7 -, or -NR 7 SO 2 -;
R6은 H, 또는 하나 이상의 독립적으로 선택된 R8 기로 임의로 치환된 C1-6 알킬이고;R 6 is H or C 1-6 alkyl optionally substituted with one or more independently selected R 8 groups;
R7은 H 또는 C1-4 알킬이고;R 7 is H or C 1-4 alkyl;
R8은 OH, CN, 할로 또는 C1-4 알콕시이고;R 8 is OH, CN, halo or C 1-4 alkoxy;
La는 존재하지 않거나, 또는 -C(=O)-, -C(=O)O- 또는 -C(=O)NH-이고;L a is absent or -C(=0)-, -C(=0)0- or -C(=0)NH-;
Ra는R a is
- H,-H,
- 하나 이상의 독립적으로 선택된 Rb로 임의로 치환된 C1-4 알킬,- C 1-4 alkyl optionally substituted with one or more independently selected R b ,
- 하나 이상의 독립적으로 선택된 Rc로 임의로 치환된 C3-7 모노사이클릭 사이클로알킬, 또는- C 3-7 monocyclic cycloalkyl optionally substituted with one or more independently selected R c , or
- O, N 및 S 중에서 독립적으로 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 포함하는 4 내지 7원 모노사이클릭 헤테로사이클로알킬, 또는- 4 to 7 membered monocyclic heterocycloalkyl containing one or more heteroatoms independently selected from O, N and S, or
- O, N 및 S 중에서 독립적으로 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 포함하는 5 내지 6원 모노사이클릭 헤테로아릴이고;- a 5 to 6 membered monocyclic heteroaryl containing at least one heteroatom independently selected from O, N and S;
Rb는 Rb is
- 할로,- halo,
- CN,-CN,
- OH,-OH,
- C1-4 알콕시,- C 1-4 alkoxy;
- C3-7 사이클로알킬,- C 3-7 cycloalkyl,
- O, N 및 S 중에서 독립적으로 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 포함하는 4 내지 7원 모노사이클릭 헤테로사이클로알킬(상기 헤테로사이클로알킬은 하나 이상의 독립적으로 선택된 할로, 또는 옥소로 임의로 치환된다),- 4 to 7 membered monocyclic heterocycloalkyl containing one or more heteroatoms independently selected from O, N and S, wherein said heterocycloalkyl is optionally substituted with one or more independently selected halo or oxo;
- -SO2-C1-4 알킬, 또는- -SO 2 -C 1-4 alkyl, or
- -C(=O)NRb1Rb2이고- -C(=O)NR b1 R b2 and
Rc는R c is
- 할로,- halo,
- CN,-CN,
- OH,-OH,
- C1-4 알킬,- C 1-4 alkyl;
- -C(=O)OH, 또는- -C(=O)OH, or
- -C(=O)NRc1Rc2이고;- -C(=0)NR c1 R c2 ;
각각의 Rb1, Rb2, Rc1 및 Rc2는 H 및 C1-4 알킬 중에서 독립적으로 선택된다.Each of R bi , R b2 , R c1 and R c2 is independently selected from H and C 1-4 alkyl.
특정한 실시태양에서 본 발명의 화합물은 JAK1 및/또는 TYK2의 억제제이다.In certain embodiments, the compounds of the invention are inhibitors of JAK1 and/or TYK2.
놀랍게도, 본 발명에 이르러 본 발명의 화합물이 밀접하게 관련된 유사체에 비해 개선된 시험관내 활성을 나타낼 수 있음을 발견하였다.Surprisingly, it has now been discovered that the compounds of the present invention can exhibit improved in vitro activity compared to closely related analogs.
더욱 또한, 특정한 태양에서, 본 발명의 화합물은 밀접하게 관련된 유사체에 비해 시험관내에서 개선된 안정성을 나타낼 수 있다. 상기 개선은 생체내에서 필요한 약물의 투여량을 낮출 수 있으며, 이에 의해 감소된 독성 및/또는 약물-약물 상호작용을 생성시킬 수 있다.Moreover, in certain embodiments, the compounds of the present invention may exhibit improved stability in vitro compared to closely related analogs. Such improvements may lower the dosage of drug required in vivo, thereby resulting in reduced toxicity and/or drug-drug interactions.
추가의 태양에서, 본 발명은 본 발명의 화합물, 및 약학 담체, 부형제 또는 희석제를 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 더욱이, 본 발명에 개시된 약학 조성물 및 치료 방법에 유용한 본 발명의 화합물은 제조 및 사용시 약학적으로 허용 가능하다. 본 발명의 상기 태양에서, 상기 약학 조성물은 본 발명의 화합물과 함께 사용하기에 적합한 추가의 활성 성분들을 추가로 포함할 수 있다.In a further aspect, the invention provides a pharmaceutical composition comprising a compound of the invention, and a pharmaceutical carrier, excipient or diluent. Moreover, compounds of the present invention useful in the pharmaceutical compositions and methods of treatment disclosed herein are pharmaceutically acceptable when prepared and used. In this aspect of the present invention, the pharmaceutical composition may further comprise additional active ingredients suitable for use with the compounds of the present invention.
추가의 태양에서, 본 발명은 약제로서 사용하기 위한 본 발명의 화합물 또는 본 발명의 화합물을 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 구체적인 실시태양에서, 상기 약학 조성물은 추가의 활성 성분을 추가로 포함한다.In a further aspect, the present invention provides a compound of the present invention or a pharmaceutical composition comprising a compound of the present invention for use as a medicament. In a specific embodiment, the pharmaceutical composition further comprises an additional active ingredient.
본 발명의 추가의 태양에서, 본 발명은 본 발명에 나열된 것들로부터의 상태, 및 특히 이상 JAK 활성, 예를 들어 알러지성 질병, 염증 질병, 자가면역 질병, 증식성 질병, 이식 거부, 연골 턴오버의 장애를 수반하는 질병, 선천성 연골 기형, 및/또는 IL6의 분비과잉 또는 인터페론의 분비과잉과 관련된 질병과 관련될 수도 있는 바와 같은 상태에 민감하거나 또는 상기 상태를 앓고 있는 포유동물의 치료 방법을 제공하며, 상기 방법은 유효량의 본 발명에 개시된 바와 같은 약학 조성물 또는 화합물을 투여함을 포함한다. 구체적인 실시태양에서 상기 상태는 이상 JAK1 및/또는 TYK2 활성과 관련된다.In a further aspect of the invention, the invention relates to conditions from those listed herein, and in particular to aberrant JAK activity, e.g. allergic diseases, inflammatory diseases, autoimmune diseases, proliferative diseases, graft rejection, cartilage turnover Provided are methods for the treatment of mammals susceptible to or suffering from conditions as may be associated with diseases involving disorders of the brain, congenital cartilage malformations, and/or diseases associated with hypersecretion of IL6 or hypersecretion of interferon. and the method comprises administering an effective amount of a pharmaceutical composition or compound as disclosed herein. In a specific embodiment, the condition is associated with aberrant JAK1 and/or TYK2 activity.
추가의 태양에서, 본 발명은 본 발명에 나열된 것들 중에서 선택된 상태, 특히 이상 JAK 활성, 예를 들어 알러지성 질병, 염증 질병, 자가면역 질병, 증식성 질병, 이식 거부, 연골 턴오버의 장애를 수반하는 질병, 선천성 연골 기형, 및/또는 IL6의 분비과잉 또는 인터페론의 분비과잉과 관련된 질병과 관련될 수도 있는 바와 같은 상태의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 본 발명의 화합물을 제공한다.In a further aspect, the present invention relates to a condition selected from those listed herein, particularly involving aberrant JAK activity, e.g., allergic disease, inflammatory disease, autoimmune disease, proliferative disease, graft rejection, disorder of cartilage turnover. , congenital cartilage malformations, and/or conditions associated with hypersecretion of IL6 or hypersecretion of interferon.
더욱 또 다른 치료 방법 태양에서, 본 발명은 본 발명에 개시된 바와 같은 이상 JAK 활성과 인과관계로 관련된 상태에 민감하거나 또는 상기 상태를 앓고 있는 포유동물의 치료 방법을 제공하며, 유효한 상태-치료 또는 상태-예방량의 본 발명에 개시된 본 발명의 약학 조성물 또는 화합물을 투여함을 포함한다. 구체적인 태양에서 상기 상태는 이상 JAK1 및/또는 TYK2 활성과 인과관계로 관련된다.In yet another method of treatment aspect, the present invention provides a method of treating a mammal susceptible to or suffering from a condition causally related to aberrant JAK activity as disclosed herein, and an effective condition-treatment or condition. - administering a prophylactic amount of a pharmaceutical composition or compound of the invention disclosed herein. In a specific embodiment, the condition is causally related to aberrant JAK1 and/or TYK2 activity.
추가의 태양에서, 본 발명은 약제로서 사용하기 위한 본 발명의 화합물, 또는 본 발명의 화합물을 포함하는 약학 조성물을 제공한다.In a further aspect, the present invention provides a compound of the present invention, or a pharmaceutical composition comprising a compound of the present invention, for use as a medicament.
추가의 태양에서, 본 발명은 이상 JAK 활성과 인과관계로 관련된 상태의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 본 발명의 화합물을 제공한다.In a further aspect, the invention provides a compound of the invention for use in the treatment or prevention of a condition causally associated with aberrant JAK activity.
추가의 태양에서, 본 발명은 이후에 본 발명에 개시되는 전형적인 합성 프로토콜 및 경로에 의해 본 발명의 화합물을 합성하는 방법을 제공한다.In a further aspect, the present invention provides methods for synthesizing the compounds of the present invention by typical synthetic protocols and routes hereinafter disclosed herein.
따라서, 본 발명의 주목적은 JAK의 활성을 변형시킬 수 있고 따라서 상기와 인과관계로 관련될 수 있는 임의의 상태를 예방하거나 치료할 수 있는 신규의 화합물을 제공하는 것이다. 구체적인 태양에서 본 발명의 화합물은 JAK1 및/또는 TYK2의 활성을 조절한다.Accordingly, the main object of the present invention is to provide novel compounds capable of modifying the activity of JAK and thus preventing or treating any condition which may be causally related therewith. In a specific embodiment, the compounds of the invention modulate the activity of JAK1 and/or TYK2.
본 발명의 추가의 목적은, JAK, 특히 JAK1 및/또는 TYK2의 활성과 인과관계로 관련될 수 있는 상태 또는 상기 상태의 증상, 예를 들어 알러지성 질병, 염증 질병, 자가면역 질병, 증식성 질병, 이식 거부, 연골 턴오버의 장애를 수반하는 질병, 선천성 연골 기형, 및/또는 IL6의 분비과잉 또는 인터페론의 분비과잉과 관련된 질병을 치료하거나 경감시킬 수 있는 화합물을 제공하는 것이다.A further object of the present invention is to treat conditions or symptoms of said conditions which may be causally related to the activity of JAK, in particular JAK1 and/or TYK2, such as allergic diseases, inflammatory diseases, autoimmune diseases, proliferative diseases. , transplant rejection, diseases accompanying disorders of cartilage turnover, congenital cartilage deformities, and/or diseases associated with hypersecretion of IL6 or hypersecretion of interferon are provided.
본 발명의 더욱 추가의 목적은 JAK 활성과 관련된 질병을 포함한 다양한 상태들, 예를 들어 알러지성 질병, 염증 질병, 자가면역 질병, 증식성 질병, 이식 거부, 연골 턴오버의 장애를 수반하는 질병, 선천성 연골 기형, 및/또는 IL6의 분비과잉 또는 인터페론의 분비과잉과 관련된 질병의 치료 또는 예방에 사용될 수 있는 약학 조성물을 제공하는 것이다. 구체적인 실시태양에서 상기 질병은 JAK1 및/또는 TYK2 활성과 관련된다.A still further object of the present invention is a variety of conditions including diseases associated with JAK activity, such as allergic diseases, inflammatory diseases, autoimmune diseases, proliferative diseases, transplant rejection, diseases involving disorders of cartilage turnover, It is to provide a pharmaceutical composition that can be used for the treatment or prevention of congenital cartilage deformities and/or diseases associated with hypersecretion of IL6 or hypersecretion of interferon. In a specific embodiment, the disease is associated with JAK1 and/or TYK2 activity.
다른 목적 및 이점들은 이어지는 상세한 설명을 고려하여 당해 분야의 숙련가들에게 자명할 것이다.Other objects and advantages will be apparent to those skilled in the art upon consideration of the detailed description that follows.
정의Justice
하기의 용어들은 하기에 함께 제공된 의미를 갖고자 하며 본 발명의 개시 및 의도된 범위를 이해하는데 유용하다.The following terms are intended to have the meanings given together below and are useful in understanding the disclosure and intended scope of the present invention.
화합물, 상기와 같은 화합물을 함유하는 약학 조성물 및 상기와 같은 화합물 및 조성물의 사용 방법을 포함할 수 있는 본 발명을 개시할 때, 하기의 용어들(존재하는 경우)은 달리 나타내지 않는 한 하기의 의미를 갖는다. 본 발명에 개시될 때 이후 하기에 정의되는 부분들 중 임의의 부분은 다양한 치환체들로 치환될 수 있으며, 각각의 정의가 하기에 설명되는 바와 같은 그의 범위내에 상기와 같은 치환된 부분들을 포함하고자 함은 또한 물론이다. 달리 서술되지 않는 한, "치환된"이란 용어는 하기에 설명되는 바와 같이 정의되어야 한다. "기" 및 "라디칼"이란 용어들은 본 발명에서 사용시 호환 가능한 것으로 간주될 수 있음도 또한 물론이다.When disclosing the present invention, which may include compounds, pharmaceutical compositions containing such compounds, and methods of using such compounds and compositions, the following terms (where present) have the following meanings unless otherwise indicated: have When disclosed herein, any of the moieties defined below may be substituted with various substituents, and it is intended to include such substituted moieties within their scope as each definition is set forth below. is also of course. Unless stated otherwise, the term "substituted" shall be defined as set forth below. It should also be understood that the terms "group" and "radical" may be considered interchangeable when used herein.
'하나의'란 관사는 본 발명에서 상기 관사의 문법적 대상의 하나 또는 하나보다 많은(즉 적어도 하나)을 지칭하는데 사용될 수 있다. 예로서 '하나의 유사체'는 하나의 유사체 또는 하나보다 많은 유사체를 의미한다.The article 'one' may be used in the present invention to refer to one or more than one (ie at least one) of the grammatical objects of the article. By way of example, 'an analogue' means one analogue or more than one analogue.
'알킬'은 명시된 탄소수를 갖는 직쇄 또는 분지된 지방족 탄화수소를 의미한다. 특정한 알킬기는 탄소수 1 내지 8을 갖는다. 보다 특히 저급 알킬은 탄소수 1 내지 6을 갖는다. 추가의 특정기는 탄소수 1 내지 4를 갖는다. 예시적인 직쇄기는 메틸, 에틸, n-프로필 및 n-부틸을 포함한다. 분지된은 하나 이상의 저급 알킬기, 예를 들어 메틸, 에틸, 프로필 또는 부틸이 선형 알킬쇄에 부착됨을 의미하며, 예시적인 분지쇄기는 아이소프로필, 아이소-부틸, t-부틸 및 아이소아밀을 포함한다.'Alkyl' means a straight-chain or branched aliphatic hydrocarbon having the number of carbon atoms specified. Certain alkyl groups have 1 to 8 carbon atoms. More particularly lower alkyl has 1 to 6 carbon atoms. Additional specific groups have 1 to 4 carbon atoms. Exemplary straight chain groups include methyl, ethyl, n-propyl and n-butyl. Branched means that one or more lower alkyl groups, such as methyl, ethyl, propyl or butyl, are attached to the linear alkyl chain; exemplary branched groups include isopropyl, iso-butyl, t-butyl and isoamyl.
'알콕시'는 -OR26 기를 지칭하며, 이때 R26은 명시된 수의 탄소 원자를 갖는 알킬이다. 특정한 알콕시기는 메톡시, 에톡시, n-프로폭시, 아이소프로폭시, n-부톡시, 3급-부톡시, 2급-부톡시, n-펜톡시, n-헥속시, 및 1,2-다이메틸부톡시이다. 특정한 알콕시기는 저급 알콕시, 즉 탄소수 1 내지 6을 갖는 알콕시다. 추가의 특정한 알콕시기는 탄소수 1 내지 4를 갖는다.'Alkoxy' refers to the group -OR 26 , where R 26 is an alkyl having the specified number of carbon atoms. Particular alkoxy groups are methoxy, ethoxy, n-propoxy, isopropoxy, n-butoxy, tert-butoxy, sec-butoxy, n-pentoxy, n-hexoxy, and 1,2- It is dimethylbutoxy. A specific alkoxy group is a lower alkoxy, i.e. an alkoxy having from 1 to 6 carbon atoms. Further specific alkoxy groups have from 1 to 4 carbon atoms.
'알케닐'은 명시된 탄소 원자의 수를 갖는 1가 올레핀형 (불포화) 탄화수소기를 지칭한다. 특정한 알케닐은 직쇄 또는 분지될 수 있는 탄소수 2 내지 8, 및 보다 특히 탄소수 2 내지 6을 가지며 하나 이상 및 특히 1 내지 2개의 올레핀 불포화 부위를 갖는다. 특정한 알케닐기는 에테닐(-CH=CH2), n-프로페닐(-CH2CH=CH2), 아이소프로페닐(-C(CH3)=CH2) 등을 포함한다.'Alkenyl' refers to a monovalent olefinic (unsaturated) hydrocarbon group having the specified number of carbon atoms. Certain alkenyls have 2 to 8 carbon atoms, and more particularly 2 to 6 carbon atoms, which may be straight chain or branched, and have one or more and especially 1 to 2 sites of olefinic unsaturation. Particular alkenyl groups include ethenyl (-CH=CH 2 ), n-propenyl (-CH 2 CH=CH 2 ), isopropenyl (-C(CH 3 )=CH 2 ), and the like.
'아미노'는 라디칼 -NH2를 지칭한다.'Amino' refers to the radical -NH 2 .
'아릴'은 모 방향족 고리 시스템의 단일 탄소 원자로부터 하나의 수소 원자의 제거에 의해 유도된 1가 방향족 탄화수소기를 지칭한다. 특히 아릴은 명시된 고리 원자의 수를 갖는, 모노사이클릭 또는 축합된 폴리사이클릭 방향족 고리 구조를 지칭한다. 구체적으로, 상기 용어는 6 내지 10개의 고리 구성원을 포함하는 기를 포함한다. 상기 아릴기가 모노사이클릭 고리 시스템인 경우 상기는 우선적으로는 탄소수 6을 함유한다. 특히 아릴기는 페닐 및 나프틸을 포함한다.'Aryl' refers to a monovalent aromatic hydrocarbon group derived by the removal of one hydrogen atom from a single carbon atom of a parent aromatic ring system. Aryl in particular refers to a monocyclic or fused polycyclic aromatic ring structure having the specified number of ring atoms. Specifically, the term includes groups containing from 6 to 10 ring members. If the aryl group is a monocyclic ring system, it preferentially contains 6 carbon atoms. Aryl groups in particular include phenyl and naphthyl.
'사이클로알킬'은 명시된 고리 원자의 수를 갖는, 모노사이클릭, 축합된 폴리사이클릭, 가교된 폴리사이클릭, 또는 스피로사이클릭 비-방향족 하이드로카빌 고리 구조를 지칭한다. 사이클로알킬은 탄소수 3 내지 12, 특히 3 내지 10, 및 보다 특히 탄소수 3 내지 7을 가질 수 있다. 상기와 같은 사이클로알킬기는 예로서 단일 고리 구조, 예를 들어 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실 및 사이클로헵틸을 포함한다.'Cycloalkyl' refers to a monocyclic, condensed polycyclic, bridged polycyclic, or spirocyclic non-aromatic hydrocarbyl ring structure having the specified number of ring atoms. Cycloalkyl may have 3 to 12 carbon atoms, particularly 3 to 10 carbon atoms, and more particularly 3 to 7 carbon atoms. Such cycloalkyl groups include, by way of example, single ring structures such as cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl and cycloheptyl.
'시아노'는 라디칼 -CN을 지칭한다.'Cyano' refers to the radical -CN.
'할로' 또는 '할로겐'은 플루오로(F), 클로로(Cl), 브로모(Br) 및 요오도(I)를 지칭한다. 특정한 할로기는 플루오로 또는 클로로이다.'Halo' or 'halogen' refers to fluoro (F), chloro (Cl), bromo (Br) and iodo (I). Particular halo groups are fluoro or chloro.
'헤테로'는 화합물 또는 화합물상에 존재하는 기를 개시하는데 사용될 때 상기 화합물 또는 기 중의 하나 이상의 탄소 원자가 질소, 산소 또는 황 헤테로원자에 의해 치환되었음을 의미한다. 헤테로를 상술한 하이드로카빌기 중 어느 하나, 예를 들어 1 내지 4, 및 특히 1 내지 3개의 헤테로원자, 보다 전형적으로는 1 또는 2개의 헤테로원자, 예를 들어 단일 헤테로원자를 갖는 알킬, 예를 들어 헤테로알킬, 사이클로알킬, 예를 들어 헤테로사이클로알킬, 아릴, 예를 들어 헤테로아릴 등에 적용할 수 있다.'Hetero', when used to describe a compound or group present on a compound, means that one or more carbon atoms in the compound or group have been replaced by a nitrogen, oxygen or sulfur heteroatom. Hetero is any of the aforementioned hydrocarbyl groups, for example an alkyl having 1 to 4, and especially 1 to 3 heteroatoms, more typically 1 or 2 heteroatoms, eg a single heteroatom, for example For example, heteroalkyl, cycloalkyl such as heterocycloalkyl, aryl such as heteroaryl, and the like.
'헤테로아릴'은 O, N 및 S 중에서 독립적으로 선택된 하나 이상의 헤테로원자 및 명시된 고리 원자의 수를 포함하는, 모노사이클릭 또는 축합된 폴리사이클릭 방향족 고리 구조를 의미한다. 특히, 상기 방향족 고리 구조는 5 내지 9개의 고리원을 가질 수 있다. 상기 헤테로아릴기는 예를 들어 축합된 5원 및 6원 고리 또는 2개의 축합된 6원 고리, 또는 추가의 예로서 2개의 축합된 5원 고리로부터 형성되는 5원 또는 6원 모노사이클릭 고리 또는 축합된 바이사이클릭 구조일 수 있다. 각각의 고리는 전형적으로 질소, 황 및 산소 중에서 선택된 4개 이하의 헤테로원자를 함유할 수 있다. 전형적으로 상기 헤테로아릴 고리는 4개 이하, 보다 전형적으로는 3개 이하, 보다 대개는 2개 이하의 헤테로원자, 예를 들어 단일 헤테로원자를 함유할 것이다. 하나의 실시태양에서, 상기 헤테로아릴 고리는 하나 이상의 고리 질소 원자를 함유한다. 상기 헤테로아릴 고리 중 질소 원자는 이미다졸 또는 피리딘의 경우에서와 같이 염기성이거나, 또는 인돌 또는 피롤 질소의 경우에서와 같이 필수적으로 비-염기성일 수 있다. 일반적으로 상기 헤테로아릴기 중에 존재하는 염기성 질소 원자의 수는 상기 고리의 임의의 아미노기 치환체를 포함하여, 5 미만일 것이다. 'Heteroaryl' means a monocyclic or fused polycyclic aromatic ring structure comprising one or more heteroatoms independently selected from O, N and S and the number of ring atoms specified. In particular, the aromatic ring structure may have 5 to 9 ring members. Such heteroaryl groups are, for example, condensed 5- and 6-membered rings or two condensed 6-membered rings, or as a further example a 5- or 6-membered monocyclic ring formed from two condensed 5-membered rings or a condensed one. may have a bicyclic structure. Each ring may contain up to 4 heteroatoms, typically selected from nitrogen, sulfur and oxygen. Typically the heteroaryl ring will contain no more than 4, more typically no more than 3, more often no more than 2 heteroatoms, eg a single heteroatom. In one embodiment, the heteroaryl ring contains one or more ring nitrogen atoms. The nitrogen atom in the heteroaryl ring may be basic, as in the case of an imidazole or pyridine, or essentially non-basic, as in the case of an indole or pyrrole nitrogen. Generally the number of basic nitrogen atoms present in the heteroaryl group will be less than 5, including any amino group substituents on the ring.
5원 모노사이클릭 헤테로아릴기의 예는 비제한적으로 피롤릴, 퓨라닐, 티오페닐, 이미다졸릴, 퓨라자닐, 옥사졸릴, 옥사다이아졸릴, 옥사트라이아졸릴, 아이속사졸릴, 티아졸릴, 아이소티아졸릴, 피라졸릴, 트라이아졸릴 및 테트라졸릴기를 포함한다.Examples of 5-membered monocyclic heteroaryl groups include, but are not limited to, pyrrolyl, furanyl, thiophenyl, imidazolyl, furazanyl, oxazolyl, oxadiazolyl, oxatriazolyl, isoxazolyl, thiazolyl, isothiazolyl, pyrazolyl, triazolyl and tetrazolyl groups.
6원 모노사이클릭 헤테로아릴기의 예는 비제한적으로 피리디닐, 피라지닐, 피리다지닐, 피리미디닐 및 트라이아지닐을 포함한다. 또 다른 5원 고리에 축합된 5원 고리를 함유하는 바이사이클릭 헤테로아릴기의 특정한 예는 비제한적으로 이미다조티아졸릴 및 이미다조이미다졸릴을 포함한다. 5원 고리에 축합된 6원 고리를 함유하는 바이사이클릭 헤테로아릴기의 특정한 예는 비제한적으로 벤조퓨라닐, 벤조티오페닐, 벤즈이미다졸릴, 벤즈옥사졸릴, 아이소벤즈옥사졸릴, 벤즈아이속사졸릴, 벤조티아졸릴, 벤즈아이소티아졸릴, 아이소벤조퓨라닐, 인돌릴, 아이소인돌릴, 인돌리지닐, 퓨리닐(예를 들어 아데닌, 구아닌), 인다졸릴, 피라졸로피리미디닐, 트라이아졸로피리미디닐, 및 피라졸로피리디닐기를 포함한다. 2개의 축합된 6원 고리를 함유하는 바이사이클릭 헤테로아릴기의 특정한 예는 비제한적으로 퀴놀리닐, 아이소퀴놀리닐, 피리도피리디닐, 퀴녹살리닐, 퀴나졸리닐, 신놀리닐, 프탈라지닐, 나프티리디닐 및 프테리디닐기를 포함한다. 특정한 헤테로아릴기는 티오페닐, 피롤릴, 벤조티오페닐, 벤조퓨라닐, 인돌릴, 피리디닐, 퀴놀리닐, 이미다졸릴, 옥사졸릴 및 피라지닐로부터 유도된 것들이다. 전형적인 헤테로아릴의 예는 하기를 포함한다:Examples of 6-membered monocyclic heteroaryl groups include, but are not limited to, pyridinyl, pyrazinyl, pyridazinyl, pyrimidinyl and triazinyl. Specific examples of bicyclic heteroaryl groups containing a 5-membered ring fused to another 5-membered ring include, but are not limited to, imidazothiazolyl and imidazoimidazolyl. Specific examples of bicyclic heteroaryl groups containing a 6-membered ring fused to a 5-membered ring include, but are not limited to, benzofuranyl, benzothiophenyl, benzimidazolyl, benzoxazolyl, isobenzoxazolyl, benzisoxa zolyl, benzothiazolyl, benzisothiazolyl, isobenzofuranyl, indolyl, isoindolyl, indolizinyl, purinyl (e.g. adenine, guanine), indazolyl, pyrazolopyrimidinyl, triazolo pyrimidinyl, and pyrazolopyridinyl groups. Specific examples of bicyclic heteroaryl groups containing two condensed six-membered rings include, but are not limited to, quinolinyl, isoquinolinyl, pyridopyridinyl, quinoxalinyl, quinazolinyl, cinnolinyl, fr It includes talazinyl, naphthyridinyl and pteridinyl groups. Particular heteroaryl groups are those derived from thiophenyl, pyrrolyl, benzothiophenyl, benzofuranyl, indolyl, pyridinyl, quinolinyl, imidazolyl, oxazolyl and pyrazinyl. Examples of typical heteroaryls include:
상기에서, 각각의 Y는 >C(=O), NH, O 및 S 중에서 선택된다.In the above, each Y is selected from >C(=0), NH, O and S.
'헤테로사이클로알킬'이란 용어는 O, N 및 S 중에서 독립적으로 선택된 하나 이상의 헤테로원자 및 명시된 고리 원자의 수를 포함하는, 모노사이클릭, 축합된 폴리사이클릭, 스피로사이클릭 또는 가교된 폴리사이클릭의 완전히 포화된 비-방향족 고리 구조를 의미한다. 상기 헤테로사이클로알킬 고리 구조는 4 내지 12개의 고리 구성원, 특히 4 내지 10개의 고리 구성원, 및 보다 특히 4 내지 7개의 고리 구성원을 가질 수 있다. 각각의 고리는 전형적으로 질소, 황 및 산소 중에서 선택된 4개 이하의 헤테로원자를 함유할 수 있다. 전형적으로 헤테로사이클로알킬 고리는 4개 이하의 헤테로원자, 보다 전형적으로는 3개 이하의 헤테로원자, 보다 대개는 2개 이상, 예를 들어 단일의 헤테로원자를 함유할 것이다. 헤테로사이클릭 고리의 예는 비제한적으로 아제티디닐, 옥세타닐, 티에타닐, 피롤리디닐(예를 들어 1-피롤리디닐, 2-피롤리디닐 및 3-피롤리디닐), 모폴리닐, 티오모폴리닐, 테트라하이드로퓨라닐, 테트라하이드로티오페닐, 이미다졸리닐, 옥사졸리닐, 티아졸리닐, 피페리디닐(예를 들어 1-피페리디닐, 2-피페리디닐, 3-피페리디닐 및 4-피페리디닐), 피라닐, 다이옥사닐, 테트라하이드로피라닐(예를 들어 4-테트라하이드로피라닐), 2-피라졸리닐, 피라졸리디닐 또는 피페라지닐을 포함한다.The term 'heterocycloalkyl' refers to a monocyclic, condensed polycyclic, spirocyclic or bridged polycyclic compound containing one or more heteroatoms independently selected from O, N and S and the number of ring atoms specified. It means a fully saturated non-aromatic ring structure of The heterocycloalkyl ring structure may have 4 to 12 ring members, particularly 4 to 10 ring members, and more particularly 4 to 7 ring members. Each ring may contain up to 4 heteroatoms, typically selected from nitrogen, sulfur and oxygen. Typically a heterocycloalkyl ring will contain no more than 4 heteroatoms, more typically no more than 3 heteroatoms, more often no more than 2, eg a single heteroatom. Examples of heterocyclic rings include, but are not limited to, azetidinyl, oxetanyl, thietanyl, pyrrolidinyl (eg 1-pyrrolidinyl, 2-pyrrolidinyl and 3-pyrrolidinyl), morpholinyl , thiomorpholinyl, tetrahydrofuranyl, tetrahydrothiophenyl, imidazolinyl, oxazolinyl, thiazolinyl, piperidinyl (e.g. 1-piperidinyl, 2-piperidinyl, 3- piperidinyl and 4-piperidinyl), pyranyl, dioxanyl, tetrahydropyranyl (e.g. 4-tetrahydropyranyl), 2-pyrazolinyl, pyrazolidinyl or piperazinyl. .
모노사이클릭 헤테로사이클로알킬기의 특정한 예는 하기의 예시적인 예들로 나타낸다:Specific examples of monocyclic heterocycloalkyl groups are shown in the following illustrative examples:
상기에서, 각각의 W 및 Y는 독립적으로 CH2, NH, O 및 S 중에서 선택된다.In the above, each W and Y is independently selected from CH 2 , NH, O and S.
축합된 바이사이클릭 헤테로사이클로알킬기의 특정한 예는 하기의 예시적인 예들로 나타낸다:Specific examples of condensed bicyclic heterocycloalkyl groups are shown in the following illustrative examples:
상기에서, 각각의 W 및 Y는 독립적으로 CH2, NH, O 및 S 중에서 선택된다.In the above, each W and Y is independently selected from CH 2 , NH, O and S.
가교된 바이사이클릭 헤테로사이클로알킬기의 특정한 예는 하기의 예시적인 예들로 나타낸다:Specific examples of bridged bicyclic heterocycloalkyl groups are shown in the following illustrative examples:
상기에서, 각각의 W 및 Y는 독립적으로 CH2, NH, O 및 S 중에서 선택되고, Z는 N 또는 CH이다.In the above, each of W and Y is independently selected from CH 2 , NH, O and S, and Z is N or CH.
스피로사이클릭 헤테로사이클로알킬기의 특정한 예는 하기의 예시적인 예들로 나타낸다:Specific examples of spirocyclic heterocycloalkyl groups are shown in the following illustrative examples:
상기에서, 각각의 Y는 NH, O 및 S 중에서 선택된다.In the above, each Y is selected from NH, O and S.
'하이드록실'은 라디칼 -OH를 지칭한다.'Hydroxyl' refers to the radical -OH.
'옥소'는 라디칼 =O를 지칭한다.'Oxo' refers to the radical ═O.
'치환된'은 하나 이상의 수소 원자가 동일하거나 상이한 치환체(들)로 각각 독립적으로 치환된 기를 지칭한다.'Substituted' refers to groups in which one or more hydrogen atoms are each independently substituted with the same or different substituent(s).
'설포' 또는 '설폰산'은 -SO3H와 같은 라디칼을 지칭한다.'Sulfo' or 'sulfonic acid' refers to a radical such as -SO 3 H.
'티올'은 -SH 기를 지칭한다.A 'thiol' refers to a -SH group.
본 발명에 사용되는 바와 같이, '하나 이상으로 치환된'이란 용어는 1 내지 4개의 치환체를 지칭한다. 하나의 실시태양에서 상기는 1 내지 3개의 치환체를 지칭한다. 추가의 실시태양에서 상기는 1 또는 2개의 치환체를 지칭한다. 더욱 추가의 실시태양에서 상기는 하나의 치환체를 지칭한다.As used herein, the term 'substituted with one or more' refers to 1 to 4 substituents. In one embodiment this refers to 1 to 3 substituents. In a further embodiment the above refers to 1 or 2 substituents. In a still further embodiment the above refers to one substituent.
'티오알콕시'는 -SR26 기를 지칭하며, 이때 R26은 명시된 수의 탄소 원자를 갖는 알킬 및 특히 C1-C8 알킬이다. 특정한 티오알콕시기는 티오메톡시, 티오에톡시, n-티오프로폭시, 아이소티오프로폭시, n-티오부톡시, 3급-티오부톡시, 2급-티오부톡시, n-티오펜톡시, n-티오헥속시, 및 1,2-다이메틸티오부톡시이다. 보다 특정한 티오알콕시기는 저급 티오알콕시, 즉 탄소수 1 내지 6을 갖는 티오알콕시다. 추가의 특정한 알콕시기는 탄소수 1 내지 4를 갖는다.'Thioalkoxy' refers to the group -SR 26 , where R 26 is an alkyl having the specified number of carbon atoms and in particular C 1 -C 8 alkyl. Specific thioalkoxy groups include thiomethoxy, thioethoxy, n-thiopropoxy, isothiopropoxy, n-thiobutoxy, tert-thiobutoxy, sec-thiobutoxy, n-thiopentoxy, n -thiohexoxy, and 1,2-dimethylthiobutoxy. A more specific thioalkoxy group is a lower thioalkoxy, i.e., a thioalkoxy having 1 to 6 carbon atoms. Further specific alkoxy groups have from 1 to 4 carbon atoms.
유기 합성 분야의 통상적인 숙련가는 안정한, 화학적으로 가능한 헤테로사이클릭 고리 중의 헤테로원자의 최대수는, 상기가 방향족이든 비방향족이든 간에, 상기 고리의 크기, 불포화도 및 헤테로원자의 원자가에 의해 결정됨을 알 것이다. 일반적으로, 헤테로사이클릭 고리는 상기 헤테로방향족 고리가 화학적으로 가능하고 안정한 한 1 내지 4개의 헤테로원자를 가질 수 있다.Those skilled in the art of organic synthesis know that the maximum number of heteroatoms in a stable, chemically possible heterocyclic ring, whether it is aromatic or non-aromatic, is determined by the size of the ring, the degree of unsaturation and the valency of the heteroatoms. will know In general, heterocyclic rings can have from 1 to 4 heteroatoms as long as the heteroaromatic ring is chemically viable and stable.
'약학적으로 허용 가능한'은 연방 정부 또는 주 정부의 규제 기관 또는 미국 이외 국가의 해당 당국에 의해 승인되거나 승인 가능함, 또는 동물, 및 보다 특히 인간에의 사용에 대해 미국 약전 또는 다른 일반적으로 인정된 약전에 나열됨을 의미한다.'Pharmaceutically acceptable' means approved or approvable by a regulatory agency of the Federal or State governments, or by an appropriate authority outside the United States, or approved by the United States Pharmacopoeia or other generally recognized authorities for use in animals, and more particularly in humans. Means listed in pharmacopeia.
'약학적으로 허용 가능한 염'은 약학적으로 허용 가능하고 모 화합물의 목적하는 약물학적 활성을 갖는 화합물의 염을 지칭한다. 특히, 상기와 같은 염은 무독성이며 무기 또는 유기 산 부가염 및 염기 부가염일 수 있다. 구체적으로, 상기와 같은 염은 (1) 무기산, 예를 들어 염산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 인산 등과 형성된 산 부가염; 또는 유기산, 예를 들어 아세트산, 프로피온산, 헥산산, 사이클로펜탄프로피온산, 글리콜산, 피루브산, 락트산, 말론산, 숙신산, 말산, 말레산, 퓨마르산, 타타르산, 시트르산, 벤조산, 3-(4-하이드록시벤조일) 벤조산, 신남산, 만델산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, 1,2-에탄-다이설폰산, 2-하이드록시에탄설폰산, 벤젠설폰산, 4-클로로벤젠설폰산, 2-나프탈렌설폰산, 4-톨루엔설폰산, 캄포설폰산, 4-메틸바이사이클로[2.2.2]-옥트-2-엔-1-카복실산, 글루코헵톤산, 3-페닐프로피온산, 트라이메틸아세트산, 3급 부틸아세트산, 라우릴 황산, 글루콘산, 글루탐산, 하이드록시나프토산, 살리실산, 스테아르산, 뮤콘산 등과 형성된 산 부가염; 또는 (2) 모 화합물 중에 존재하는 산성 양성자가 금속 이온, 예를 들어 알칼리 금속 이온, 알칼리 토 이온, 또는 알루미늄 이온에 의해 치환되거나; 또는 유기 염기, 예를 들어 에탄올아민, 다이에탄올아민, 트라이에탄올아민, N-메틸글루카민 등과 배위하는 경우 형성된 염을 포함한다. 염은 단지 예로서, 나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그네슘, 암모늄, 테트라알킬암모늄 등; 및 상기 화합물이 염기성 작용기를 함유하는 경우, 무독성 유기 또는 무기산의 염, 예를 들어 하이드로클로라이드, 하이드로브로마이드, 타르트레이트, 메실레이트, 아세테이트, 말리에이트, 옥살레이트 등을 추가로 포함한다. '약학적으로 허용 가능한 양이온'이란 용어는 산성 작용기의 허용 가능한 양이온성 대이온을 지칭한다. 상기와 같은 양이온은 나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그네슘, 암모늄, 테트라알킬암모늄 양이온 등에 의해 예시된다.A 'pharmaceutically acceptable salt' refers to a salt of a compound that is pharmaceutically acceptable and possesses the desired pharmacological activity of the parent compound. In particular, such salts are non-toxic and may be inorganic or organic acid addition salts and base addition salts. Specifically, such salts include (1) acid addition salts formed with inorganic acids such as hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, nitric acid, phosphoric acid, and the like; or an organic acid such as acetic acid, propionic acid, hexanoic acid, cyclopentanepropionic acid, glycolic acid, pyruvic acid, lactic acid, malonic acid, succinic acid, malic acid, maleic acid, fumaric acid, tartaric acid, citric acid, benzoic acid, 3-(4-hydride) hydroxybenzoyl) benzoic acid, cinnamic acid, mandelic acid, methanesulfonic acid, ethanesulfonic acid, 1,2-ethane-disulfonic acid, 2-hydroxyethanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, 4-chlorobenzenesulfonic acid, 2- Naphthalenesulfonic acid, 4-toluenesulfonic acid, camphorsulfonic acid, 4-methylbicyclo[2.2.2]-oct-2-ene-1-carboxylic acid, glucoheptonic acid, 3-phenylpropionic acid, trimethylacetic acid, tertiary acid addition salts formed with butylacetic acid, lauryl sulfate, gluconic acid, glutamic acid, hydroxynaphthoic acid, salicylic acid, stearic acid, muconic acid, and the like; or (2) an acidic proton present in the parent compound is replaced by a metal ion, such as an alkali metal ion, alkaline earth ion, or aluminum ion; or salts formed when coordinated with organic bases such as ethanolamine, diethanolamine, triethanolamine, N-methylglucamine, and the like. Salts are, by way of example only, sodium, potassium, calcium, magnesium, ammonium, tetraalkylammonium, and the like; and salts of non-toxic organic or inorganic acids, such as hydrochloride, hydrobromide, tartrate, mesylate, acetate, maleate, oxalate, and the like, when the compound contains a basic functional group. The term 'pharmaceutically acceptable cation' refers to an acceptable cationic counter ion of an acidic functional group. Such cations are exemplified by sodium, potassium, calcium, magnesium, ammonium, tetraalkylammonium cations and the like.
'약학적으로 허용 가능한 비히클'은 본 발명의 화합물과 함께 투여되는 희석제, 보조제, 부형제 또는 담체를 지칭한다.'Pharmaceutically acceptable vehicle' refers to a diluent, adjuvant, excipient or carrier with which a compound of the present invention is administered.
'전구약물'은, 절단 가능한 기를 가지며 가용매분해에 의해서 또는 생리학적 조건 하에서 생체 내에서 약학적으로 활성인 본 발명의 화합물로 되는, 본 발명 화합물의 유도체를 포함한 화합물을 지칭한다. 상기와 같은 예는 비제한적으로 콜린 에스터 유도체 등, N-알킬모폴린 에스터 등을 포함한다.A 'prodrug' refers to a compound, including derivatives of a compound of the present invention, which has a cleavable group and which, by solvolysis or under physiological conditions, results in a compound of the present invention that is pharmacologically active in vivo. Such examples include, but are not limited to, choline ester derivatives and the like, N-alkylmorpholine esters and the like.
'용매화물'은 용매와, 대개는 가용매분해 반응에 의해 회합되는 화합물의 형태를 지칭한다. 이러한 물리적 회합은 수소 결합을 포함한다. 통상적인 용매는 물, EtOH, 아세트산 등을 포함한다. 본 발명의 화합물을 예를 들어 결정성 형태로 제조할 수 있으며 용매화 또는 수화시킬 수 있다. 적합한 용매화물은 약학적으로 허용 가능한 용매화물, 예를 들어 수화물을 포함하며, 화학량론적 용매화물 및 비-화학량론적 용매화물을 모두 추가로 포함한다. 몇몇 예에서, 상기 용매화물은, 예를 들어 하나 이상의 용매 분자가 상기 결정성 고체의 결정 격자 중에 통합된 경우 단리될 수 있을 것이다. '용매화물'은 용액-상 및 단리 가능한 용매화물 모두를 포함한다. 전형적인 용매화물은 수화물, 에탄올레이트 및 메탄올레이트를 포함한다.'Solvate' refers to a form of compound that associates with a solvent, usually by a solvolysis reaction. These physical associations include hydrogen bonds. Common solvents include water, EtOH, acetic acid, and the like. The compounds of the present invention may be prepared, for example, in crystalline form and may be solvated or hydrated. Suitable solvates include pharmaceutically acceptable solvates, such as hydrates, and further include both stoichiometric and non-stoichiometric solvates. In some instances, the solvate may be isolated, for example when one or more solvent molecules are incorporated in the crystal lattice of the crystalline solid. 'Solvate' includes both solution-phase and isolateable solvates. Typical solvates include hydrates, ethanolates and methanolates.
'환자'는 인간을 포함한다. '인간', '환자' 및 '피실험자'란 용어들은 본 발명에서 호환적으로 사용된다.A 'patient' includes a human being. The terms 'human', 'patient' and 'subject' are used interchangeably in the present invention.
'유효량'은 질병의 치료를 위해 환자에게 투여 시, 상기 질병에 대해 상기와 같은 치료를 수행하기에 충분한 본 발명 화합물의 양을 의미한다. '유효량'은 상기 화합물, 상기 질병 및 그의 중증도, 및 치료하려는 환자의 연령, 체중 등에 따라 변할 수 있다.'Effective amount' means an amount of the compound of the present invention sufficient to effect such treatment for the disease when administered to a patient for the treatment of the disease. The 'effective amount' may vary depending on the compound, the disease and its severity, and the age, weight, and the like of the patient to be treated.
'예방하는' 또는 '예방'은 질병 또는 질환을 얻거나 상기가 발병할 위험을 감소시킴(즉 질병 유발제에 노출되거나 또는 질병 개시에 앞서 상기 질병의 소인이 있을 수 있는 환자에게서 상기 질병의 임상적인 증상들 중 하나 이상이 발생하지 않게 함)을 지칭한다.'Preventing' or 'prevention' means reducing the risk of acquiring or developing a disease or disorder (i.e., the clinical evaluation of a disease in a patient who may be exposed to a disease-causing agent or predisposed to the disease prior to onset of the disease). one or more of the symptoms do not occur).
'예방학'이란 용어는 '예방'과 관련되며, 질병의 치료 또는 치유보다는 예방을 목적으로 하는 조치 또는 시술을 지칭한다. 예방학적 조치의 비제한적인 예는 백신의 투여; 예를 들어 고정화에 기인하여 혈전증의 위험이 있는 입원 환자에 대한 저 분자량 헤파린의 투여; 및 말라리아가 풍토병이거나 또는 말라리아와 접촉할 위험성이 높은 지리학적 지역의 방문에 앞서 항-말라리아제, 예를 들어 클로로퀸의 투여를 포함할 수 있다.The term 'prophylaxis' relates to 'prevention' and refers to measures or procedures aimed at preventing rather than treating or curing disease. Non-limiting examples of prophylactic measures include administration of vaccines; administration of low molecular weight heparin to hospitalized patients at risk of thrombosis, eg due to immobilization; and administration of an anti-malarial agent, such as chloroquine, prior to visiting a geographic area where malaria is endemic or where there is a high risk of contact with malaria.
하나의 실시태양에서, 임의의 질병 또는 질환을 '치료하는' 또는 '치료'는 상기 질병 또는 질환을 개선시킴(즉 상기 질병을 억제하거나 상기 질병의 임상적 증상들 중 하나 이상의 징후, 정도 또는 중증도를 감소시킴)을 지칭한다. 또 다른 실시태양에서 '치료하는' 또는 '치료'는 환자가 알아차릴 수 없는 하나 이상의 물리적 매개변수의 개선을 지칭한다. 더욱 또 다른 실시태양에서, '치료하는' 또는 '치료'는 상기 질병 또는 질환을 물리적으로(예를 들어 알아차릴 수 있는 증상의 안정화), 생리적으로(예를 들어 물리적 매개변수의 안정화), 또는 이들 둘 다에 의해 완화시킴을 지칭한다. 추가의 실시태양에서, "치료하는" 또는 "치료"는 상기 질병의 진행을 늦춤에 관한 것이다.In one embodiment, 'treating' or 'treatment' of any disease or condition is ameliorating the disease or condition (i.e., inhibiting the disease or reducing the sign, extent or severity of one or more of the clinical symptoms of the disease). decreases). In another embodiment 'treating' or 'treatment' refers to an improvement in one or more physical parameters that is imperceptible to the patient. In yet another embodiment, 'treating' or 'treatment' refers to the disease or disorder physically (eg, stabilization of perceptible symptoms), physiologically (eg, stabilization of a physical parameter), or It refers to mitigating by both of these. In a further embodiment, "treating" or "treatment" relates to slowing the progression of the disease.
본 발명에 사용되는 바와 같이, '알러지성 질병(들)'이란 용어는 알러지성 기도 질병(예를 들어 천식, 비염), 부비동염, 습진 및 두드러기를 포함한 면역계의 과민성 질환뿐만 아니라 식품 알러지 또는 곤충 독에 대한 알러지를 특징으로 하는 상태의 그룹을 지칭한다.As used herein, the term 'allergic disease(s)' refers to diseases of hypersensitivity of the immune system, including allergic airway disease (eg asthma, rhinitis), sinusitis, eczema and urticaria, as well as food allergies or insect poisons. refers to a group of conditions characterized by an allergy to
본 발명에 사용되는 바와 같이 '천식'이란 용어는 원인이 무엇이든(내인성, 외인성, 또는 둘 다; 알러지성 또는 비-알러지성) 기도 수축과 관련된 폐 기류의 변화를 특징으로 하는 폐의 임의의 질환을 지칭한다. 상기 천식이란 용어는 원인을 가리키는 하나 이상의 형용사와 함께 사용될 수 있다.As used herein, the term 'asthma' refers to any condition of the lungs characterized by changes in pulmonary airflow associated with constriction of the airways, whatever the cause (intrinsic, exogenous, or both; allergic or non-allergic). refers to a disease The term asthma may be used with one or more adjectives indicating a cause.
본 발명에 사용되는 바와 같이 '염증성 질병(들)'이란 용어는 류마티스성 관절염, 골관절염, 아동 특발성 관절염, 건선, 건선성 관절염, 강직성 척추염, 알러지성 기도 질병(예를 들어 천식, 비염), 만성 폐쇄성 폐 질병(COPD), 염증성 장 질환(예를 들어 크론병, 궤양성 대장염), 내독소-구동된 질병 상태(예를 들어 우회술 후 합병증 또는 예를 들어 만성 심부전에 기여하는 만성 내독소 상태), 및 연골 관련된 질병, 예를 들어 관절 질병을 포함하는 상태들의 그룹을 지칭한다. 특히 상기 용어는 류마티스성 관절염, 골관절염, 알러지성 기도 질병(예를 들어 천식), 만성 폐쇄성 폐 질병(COPD) 및 염증성 장 질병을 지칭한다. 보다 특히 상기 용어는 류마티스성 관절염, 만성 폐쇄성 폐 질병(COPD) 및 염증성 장 질병을 지칭한다. As used herein, the term 'inflammatory disease(s)' includes rheumatoid arthritis, osteoarthritis, juvenile idiopathic arthritis, psoriasis, psoriatic arthritis, ankylosing spondylitis, allergic airway disease (eg asthma, rhinitis), chronic Obstructive pulmonary disease (COPD), inflammatory bowel disease (eg Crohn's disease, ulcerative colitis), endotoxin-driven disease conditions (eg post bypass surgery complications or chronic endotoxin conditions contributing to eg chronic heart failure) , and cartilage-related diseases, such as joint diseases. In particular, the term refers to rheumatoid arthritis, osteoarthritis, allergic airway disease (eg asthma), chronic obstructive pulmonary disease (COPD) and inflammatory bowel disease. More particularly the term refers to rheumatoid arthritis, chronic obstructive pulmonary disease (COPD) and inflammatory bowel disease.
본 발명에 사용된 바와 같이 '자가면역 질병(들)'은 COPD와 같은 상태를 포함한 폐쇄성 기도 질병, 천식(예를 들어 내인성 천식, 외인성 천식, 먼지 천식, 소아 천식), 특히 만성 또는 고질성 천식(예를 들어 말기 천식 및 기도 과민반응), 기관지 천식을 포함한 기관지염, 전신 홍반성 루프스(SLE), 피부 홍반 루푸스, 루푸스 신염, 피부근염, 쇼그렌 증후군, 다발성 경화증, 건선, 안구건조증, I형 당뇨병 및 이와 관련된 합병증, 아토피성 습진(아토피성 피부염), 갑상선염(하시모토 및 자가면역 갑상선염), 접촉 피부염 및 추가의 습진성 피부염, 염증성 장 질병(예를 들어 크론병 및 궤양성 대장염), 죽상동맥경화증 및 근위축성 측삭 경화증을 포함한 질병의 그룹을 지칭한다. 특히 상기 용어는 COPD, 천식, 전신 홍반성 루프스, I형 당뇨병 및 염증성 장 질병을 지칭한다. 본 발명에 사용되는 바와 같이, '증식성 질병(들)'이란 용어는 암(예를 들어 자궁 평활근육종 또는 전립선암), 골수증식성 질환(예를 들어 진성적혈구증가증, 본태성 혈소판증가증 및 골수섬유증), 백혈병(예를 들어 급성 골수성 백혈병, 급성 및 만성 림프모구성 백혈병), 다발성 골수종, 건선, 재협착증, 피부경화증 또는 섬유증과 같은 상태를 지칭한다. 특히 상기 용어는 암, 백혈병, 다발성 골수종 및 건선을 지칭한다.As used herein, 'autoimmune disease(s)' refers to obstructive airway disease, including conditions such as COPD, asthma (eg intrinsic asthma, extrinsic asthma, dust asthma, pediatric asthma), particularly chronic or chronic asthma (e.g. late stage asthma and airway hyperresponsiveness), bronchitis including bronchial asthma, systemic lupus erythematosus (SLE), cutaneous lupus erythematosus, lupus nephritis, dermatomyositis, Sjogren's syndrome, multiple sclerosis, psoriasis, dry eye syndrome, type I diabetes and related complications, atopic eczema (atopic dermatitis), thyroiditis (Hashimoto and autoimmune thyroiditis), contact dermatitis and further eczematous dermatitis, inflammatory bowel disease (eg Crohn's disease and ulcerative colitis), atherosclerosis and amyotrophic lateral sclerosis. In particular the term refers to COPD, asthma, systemic lupus erythematosus, type I diabetes and inflammatory bowel disease. As used herein, the term 'proliferative disease(s)' includes cancer (eg uterine leiomyosarcoma or prostate cancer), myeloproliferative diseases (eg polycythemia vera, essential thrombocytosis and bone marrow) fibrosis), leukemia (eg acute myelogenous leukemia, acute and chronic lymphoblastic leukemia), multiple myeloma, psoriasis, restenosis, scleroderma or fibrosis. In particular the term refers to cancer, leukemia, multiple myeloma and psoriasis.
본 발명에 사용되는 바와 같이, '암'이란 용어는 피부 또는 신체 기관, 예를 들어 비제한적으로 유방, 전립선, 폐, 신장, 췌장, 위 또는 장 중 세포의 악성 또는 양성 증식을 지칭한다. 암은 인접 조직내로 침윤하여 먼 기관, 예를 들어 뼈, 간, 폐 또는 뇌로 확산(전이)하는 경향이 있다. 본 발명에 사용되는 바와 같이 상기 암이란 용어는 전이성 종양 세포 유형(예를 들어 비제한적으로 흑색종, 림프종, 백혈병, 섬유육종, 횡문근육종, 및 비만세포종) 및 조직 암종의 유형(예를 들어 비제한적으로 결장직장암, 전립선암, 소세포 폐암 및 비-소세포 폐암, 유방암, 췌장암, 방광암, 신장암, 위암, 교모세포종, 원발성 간암, 난소암, 전립선암 및 자궁 평활근육종)을 모두 포함한다. 특히, 상기 '암'이란 용어는 급성 림프모구성 백혈병, 급성 골수성백혈병, 부신피질 암종, 항문암, 맹장암, 성상세포종, 비정형 유기형/간상 종양, 기저세포 암종, 담즙관암, 방광암, 골암(골육종 및 악성 섬유성 조직구증), 뇌간 신경교종, 뇌 종양, 뇌 및 척수 종양, 유방암, 기관지 종양, 버킷 림프종, 경부암, 만성 림프구성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 결장암, 결장직장암, 두개암종, 피부 T-세포 림프종, 배아성 종양, 자궁내막암, 뇌실막모세포종, 상의세포종, 식도암, 유잉 육종 계열 종양, 눈암, 망막모세포종, 담낭암, 위장(위)암, 위장관 유암종, 위장간질종양(GIST), 위장기질세포 종양, 생식세포 종양, 신경교종, 털세포 백혈병, 두경부암, 간세포(간)암, 호지킨 림프종, 하인두암, 안내 흑색종, 섬세포 종양(내분비 췌장), 카포시 육종, 신장암, 랑게르한스 세포 조직구증, 후두암, 백혈병, 급성 림프모구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 만성 골수생성 백혈병, 털세포 백혈병, 간암, 비-소세포 폐암, 소세포 폐암, 버킷 림프종, 피부 T-세포림프종, 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종, 림프종, 발덴스트롬 고글로불린혈증, 수모세포종, 수질상피종, 흑색종, 중피종, 구강암, 만성 골수생성 백혈병, 골수성 백혈병, 다발성 골수종, 인두암, 신경모세포종, 비-소세포 폐암, 구부암, 구강인두암, 골육종, 뼈의 악성 섬유성 조직구증, 난소암, 난소상피암, 난소생식세포 종양, 난소 저 악성 잠재성 종양, 췌장암, 유두종, 부갑상선암, 음경암, 인두암, 중간 분화의 송과체 실질 종양, 송과체모세포종 및 천막상 원시신경외배엽성 종양, 뇌하수체 종양, 혈장세포 신생물/다발성 골수종, 흉막폐모세포종, 원발성 중추신경계 림프종, 전립선암, 직장암, 신장 세포(신장)암, 망막모세포종, 횡문근육종, 침샘암, 육종, 유잉 육종 계열 종양, 육종, 카포시, 세자리 증후군, 피부암, 소세포 폐암, 소장암, 연조직 육종, 편평세포 암종, 위(위장)암, 천막상 원시신경세포외배엽 종양, 고환암, 인후암, 흉선종 및 흉선 암종, 갑상선암, 요도암, 자궁암, 자궁육종, 질암, 음문암, 발덴스트롬 고글로불린혈증, 및 빌름 종양을 지칭한다. 또 다른 특정한 실시태양에서, 상기 암이란 용어는 췌장암, 간암, 간세포 암종(HCC), 유방암 또는 결장암을 지칭한다.As used herein, the term 'cancer' refers to a malignant or benign proliferation of cells in the skin or body organ, such as but not limited to breast, prostate, lung, kidney, pancreas, stomach or intestine. Cancer tends to invade into adjacent tissue and spread (metastasize) to distant organs such as bone, liver, lungs or brain. As used herein, the term cancer includes the metastatic tumor cell type (eg, but not limited to melanoma, lymphoma, leukemia, fibrosarcoma, rhabdomyosarcoma, and mastocytoma) and the type of tissue carcinoma (eg, non-limiting). colorectal cancer, prostate cancer, small cell lung cancer and non-small cell lung cancer, breast cancer, pancreatic cancer, bladder cancer, kidney cancer, gastric cancer, glioblastoma, primary liver cancer, ovarian cancer, prostate cancer and uterine leiomyosarcoma). In particular, the term 'cancer' refers to acute lymphoblastic leukemia, acute myelogenous leukemia, adrenocortical carcinoma, anal cancer, appendix cancer, astrocytoma, atypical organoid/rhab tumor, basal cell carcinoma, biliary tract cancer, bladder cancer, and bone cancer (osteosarcoma). and malignant fibrous histiocytosis), brainstem glioma, brain tumor, brain and spinal cord tumor, breast cancer, bronchial tumor, Burkitt's lymphoma, neck cancer, chronic lymphocytic leukemia, chronic myelogenous leukemia, colon cancer, colorectal cancer, cranial carcinoma, cutaneous T- Cell lymphoma, embryonic tumor, endometrial cancer, ependymblastic tumor, ependymoma, esophageal cancer, Ewing sarcoma series tumor, eye cancer, retinoblastoma, gallbladder cancer, gastrointestinal (stomach) cancer, gastrointestinal carcinoid tumor, gastrointestinal stromal tumor (GIST), gastrointestinal stromal cell Tumors, germ cell tumors, glioma, hairy cell leukemia, head and neck cancer, hepatocellular (liver) cancer, Hodgkin's lymphoma, hypopharyngeal cancer, intraocular melanoma, islet cell tumor (endocrine pancreas), Kaposi's sarcoma, renal cancer, Langerhans cell histiocytosis, Laryngeal cancer, leukemia, acute lymphoblastic leukemia, acute myelogenous leukemia, chronic lymphocytic leukemia, chronic myelogenous leukemia, hairy cell leukemia, liver cancer, non-small cell lung cancer, small cell lung cancer, Burkitt's lymphoma, cutaneous T-cell lymphoma, Hodgkin's lymphoma , non-Hodgkin's lymphoma, lymphoma, Waldenstrom's hyperglobulinemia, medulloblastoma, medullary epithelioma, melanoma, mesothelioma, oral cancer, chronic myelogenous leukemia, myelogenous leukemia, multiple myeloma, pharyngeal cancer, neuroblastoma, non-small cell lung cancer , oral cancer, oropharyngeal cancer, osteosarcoma, malignant fibrous histiocytosis of bone, ovarian cancer, ovarian epithelial cancer, ovarian germ cell tumor, ovarian low malignant potential tumor, pancreatic cancer, papilloma, parathyroid cancer, penile cancer, pharyngeal cancer, intermediate Differentiated Pineal Parenchymal Tumor, Pineal Blastoma and Supratentorial Primitive Neuroectodermal Tumor, Pituitary Tumor, Plasma Cell Neoplasia/Multiple Myeloma, Pleuropulmonary Blastoma, Primary Central Nervous System Lymphoma, Prostate Cancer, Rectal Cancer, Renal Cell (Kidney) Cancer, Retina Blastoma, rhabdomyosarcoma, salivary gland cancer, sarcoma, tumors of the Ewing sarcoma family, sarcoma, Kaposi, Sezary syndrome, skin cancer, small cell lung cancer, small bowel cancer, soft tissue sarcoma, squamous cell carcinoma, gastric (gastrointestinal) cancer, Supratentorial primitive neuroectodermal tumors, testicular cancer, throat cancer, thymoma and thymic carcinoma, thyroid cancer, urethral cancer, uterine cancer, uterine sarcoma, vaginal cancer, vulvar cancer, Waldenstrom's hyperglobulinemia, and Wilms' tumor. In another specific embodiment, the term cancer refers to pancreatic cancer, liver cancer, hepatocellular carcinoma (HCC), breast or colon cancer.
본 발명에 사용되는 바와 같이 '백혈병'이란 용어는 혈액 및 혈액 형성 기관의 신생물 질병을 지칭한다. 상기와 같은 질병은 골수 및 면역계 기능장애를 야기할 수 있으며, 이는 숙주를 감염 및 출혈에 매우 민감하게 한다. 특히 백혈병이란 용어는 급성 골수성 백혈병(AML) 및 급성 림프모구성 백혈병(ALL) 및 만성 림프모구성 백혈병(CLL)을 지칭한다. 또 다른 특정한 실시태양에서, 상기 백혈병이란 용어는 T-세포 급성 림프모구성 백혈병(T-ALL), 만성 림프모구성 백혈병(CLL), 또는 확산성 큰 B-세포 림프종(DLBCL)을 지칭한다.The term 'leukemia' as used herein refers to a neoplastic disease of the blood and blood-forming organs. Such diseases can lead to bone marrow and immune system dysfunction, which makes the host highly susceptible to infection and hemorrhage. In particular, the term leukemia refers to acute myeloid leukemia (AML) and acute lymphoblastic leukemia (ALL) and chronic lymphocytic leukemia (CLL). In another specific embodiment, the term leukemia refers to T-cell acute lymphoblastic leukemia (T-ALL), chronic lymphoblastic leukemia (CLL), or diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL).
본 발명에 사용된 바와 같이 '이식 거부'란 용어는 예를 들어 췌장섬의 세포, 조직 또는 고형 기관 동종- 또는 이종이식편, 줄기세포, 골수, 피부, 근육, 각막 조직, 신경 조직, 심장, 폐, 복합 심장-폐, 신장, 간, 장, 췌장, 기관 또는 식도의 급성 또는 만성 거부, 또는 이식편대 숙주병을 지칭한다.As used herein, the term 'transplant rejection' includes, for example, cells, tissues or solid organ allo- or xenografts of pancreatic islets, stem cells, bone marrow, skin, muscle, corneal tissue, nerve tissue, heart, lung. , complex heart-lung, kidney, liver, intestine, pancreas, trachea, or esophagus acute or chronic rejection, or graft-versus-host disease.
본 발명에 사용된 바와 같이, '연골 턴오버의 장애를 수반하는 질병'이란 용어는 골관절염, 건선성 관절염, 소아 류마티스성 관절염, 통풍성 관절염, 패혈성 또는 감염성 관절염, 반응성 관절염, 교감신경성 이영양증, 발육이상, 티체 증후군 또는 늑골 연골염, 섬유근육통, 골연골염, 신경 또는 신경병성 관절염, 관절증, 풍토성 변형 골관절염과 같은 관절염의 풍토성 형태, 므셀레니병 및 한디고두병; 섬유근육통, 전신 홍반성 루푸스, 피부경화증 및 강직성척추염으로부터 발생하는 퇴행과 같은 상태를 포함한다.As used herein, the term 'diseases involving disorders of cartilage turnover' includes osteoarthritis, psoriatic arthritis, juvenile rheumatoid arthritis, gouty arthritis, septic or infectious arthritis, reactive arthritis, sympathetic dystrophy, dystrophy abnormalities, Tietze syndrome or costochondritis, fibromyalgia, osteochondritis, nerve or neuropathic arthritis, arthrosis, endemic forms of arthritis such as endemic deforming osteoarthritis, Mselenie's disease and cold sore; conditions such as degeneration resulting from fibromyalgia, systemic lupus erythematosus, scleroderma, and ankylosing spondylitis.
본 발명에 사용된 바와 같이 '선천성 연골 기형(들)'이란 용어는 유전성 연골용해, 연골이형성증 및 의사연골이형성증, 특히 비제한적으로 소이증, 무이증, 골간단 연골이형성증, 및 관련 질환과 같은 상태를 포함한다.As used herein, the term 'congenital cartilage malformation(s)' refers to conditions such as hereditary chondrolysis, chondrodysplasia and pseudochondrodysplasia, especially but not limited to microtia, adystrophy, metaphyseal chondrodysplasia, and related diseases. include
본 발명에 사용된 바와 같이, 'IL6의 분비과잉과 관련된 질병(들)'이란 용어는 캐슬만병, 다발성 골수종, 건선, 카포시 육종 및/또는 혈관사이세포 증식성 사구체신염과 같은 상태를 포함한다.As used herein, the term 'disease(s) associated with hypersecretion of IL6' includes conditions such as Castleman's disease, multiple myeloma, psoriasis, Kaposi's sarcoma, and/or mesenchymal proliferative glomerulonephritis.
본 발명에 사용된 바와 같이 '인터페론의 분비과잉과 관련된 질병(들)'이란 용어는 전신 및 피부 홍반성 루푸스, 루푸스 신염, 피부근염, 쇼그렌 증후군, 건선, 류마티스성 관절염과 같은 상태를 포함한다.As used herein, the term 'disease(s) associated with hypersecretion of interferon' includes conditions such as systemic and cutaneous lupus erythematosus, lupus nephritis, dermatomyositis, Sjogren's syndrome, psoriasis, and rheumatoid arthritis.
'본 발명의 화합물(들)' 및 동등한 표현들은 본 발명에 개시된 바와 같은 화학식(들)의 화합물을 포함함을 의미하며, 상기 표현은 약학적으로 허용 가능한 염 및 용매화물, 예를 들어 수화물, 및 상기 약학적으로 허용 가능한 염의 용매화물(문맥상 그렇게 허용되는 경우)을 포함한다. 유사하게, 중간체에 대한 언급은, 상기 중간체 자체의 청구 여부에 관계 없이, 상기 중간체의 염, 용매화물(문맥상 그렇게 허용되는 경우)을 포함함을 의미한다.'Compound(s) of the present invention' and equivalent expressions are meant to include compounds of the formula(s) as disclosed herein, which expressions include pharmaceutically acceptable salts and solvates such as hydrates, and solvates of the above pharmaceutically acceptable salts (where the context permits so). Similarly, reference to an intermediate is meant to include salts, solvates (where the context so permits) of the intermediate, whether or not the intermediate itself is claimed.
본 발명에서 범위를 언급하는 경우, 예를 들어 비제한적으로 C1-8 알킬의 경우, 범위의 인용은 상기 범위의 각 구성원들을 나타내는 것으로 간주해야 한다.Where ranges are recited herein, such as but not limited to C 1-8 alkyl, the recitation of a range is to be regarded as indicating each member of the range.
본 발명 화합물의 다른 유도체는 그의 산 및 산 유도체 형태 모두의 활성을 갖지만, 산 민감성 형태로 종종, 포유동물 유기체에 대한 용해도, 조직 적합성 또는 지연된 방출의 이점을 제공한다(Bundgard, 1985). 전구약물은 당해 분야의 숙련가에게 널리 공지된 산 유도체, 예를 들어 모 산과 적합한 알콜과의 반응에 의해 제조된 에스터, 또는 모 산 화합물과 치환되거나 비치환된 아민과의 반응에 의해 제조된 아미드, 또는 산 무수물 또는 혼합된 무수물을 포함한다. 본 발명의 화합물 상에 매달린 산성 그룹으로부터 유도된 간단한 지방족 또는 방향족 에스터, 아미드 및 무수물이 특히 유용한 전구약물이다. 일부의 경우에 이중 에스터 유형의 전구약물, 예를 들어 (아실옥시)알킬 에스터 또는 ((알콕시카보닐)옥시)알킬에스터를 제조하는 것이 바람직할 수 있다. 특정한 상기와 같은 전구약물은 본 발명 화합물의 C1 내지 C8 알킬, C2 내지 C8 알케닐, C6-10 임의로 치환된 아릴, 및 (C6-10 아릴)-(C1-4 알킬) 에스터이다.Other derivatives of the compounds of the present invention have activity in both their acid and acid derivative forms, but in acid sensitive forms often offer the advantages of solubility, tissue compatibility or delayed release to mammalian organisms (Bundgard, 1985). Prodrugs are acid derivatives well known to those skilled in the art, such as esters prepared by the reaction of the parent acid with a suitable alcohol, or amides prepared by the reaction of the parent acid compound with a substituted or unsubstituted amine; or acid anhydrides or mixed anhydrides. Simple aliphatic or aromatic esters, amides and anhydrides derived from acidic groups pendent on the compounds of this invention are particularly useful prodrugs. In some cases it may be desirable to prepare prodrugs of the double ester type, eg, (acyloxy)alkyl esters or ((alkoxycarbonyl)oxy)alkylesters. Certain such prodrugs are C 1 to C 8 alkyl, C 2 to C 8 alkenyl, C 6-10 optionally substituted aryl, and (C 6-10 aryl)-(C 1-4 alkyl of the compounds of the present invention. ) is an ester.
본 발명에 사용된 바와 같이, '동위원소 변체'란 용어는 화합물을 구성하는 원자들 중 하나 이상에서 비천연 비율의 동위원소를 함유하는 상기와 같은 화합물을 지칭한다. 예를 들어 화합물의 '동위원소 변체'는 하나 이상의 비-방사성 동위원소, 예를 들어 중소수(2H 또는 D), 탄소-13(13C), 나이트로(15N) 등을 함유할 수 있다. 상기와 같은 동위원소 치환이 이루어지는 화합물에서, 하기의 원자들(존재하는 경우)은 다양할 수 있으며, 따라서 예를 들어 임의의 수소는 2H/D일 수 있거나, 임의의 탄소는 13C일 수 있거나, 또는 임의의 질소는 15N일 수 있고, 상기와 같은 원자의 존재 및 위치는 당해 분야의 기술 내에서 측정될 수 있음을 알 것이다. 마찬가지로, 본 발명은, 예를 들어 생성되는 화합물을 약물 및/또는 기질 조직 분포 연구에 사용할 수 있는 경우, 방사성동위원소를 갖는 동위원소 변체의 제조를 포함할 수 있다. 방사성 동위원소인 삼중소수, 즉 3H 및 탄소-14, 즉 14C가 그들의 통합 용이성 및 편리한 검출 수단에 비추어 상기 목적에 특히 유용하다. 더욱이, 양전자 방출 동위원소, 예를 들어 11C, 18F, 15O 및 13N으로 치환된 화합물을 제조할 수 있으며, 이는 기질 수용체 점유를 조사하기 위한 양전자 방출 단층촬영(PET) 연구에 유용할 것이다.As used herein, the term 'isotopic variant' refers to such compounds that contain unnatural proportions of isotopes at one or more of the atoms that make up the compound. For example, an 'isotopic variant' of a compound may contain one or more non-radioactive isotopes, such as deuterium ( 2 H or D), carbon-13 ( 13 C), nitro ( 15 N), etc. there is. In compounds where such isotopic substitutions are made, the following atoms (if present) can vary, so for example any hydrogen can be 2 H/D or any carbon can be 13 C It will be appreciated that, or any nitrogen can be 15N, the presence and location of such atoms can be determined within the skill of the art. Likewise, the present invention may include the preparation of isotopic variants with radioisotopes, for example where the resulting compounds can be used in drug and/or substrate tissue distribution studies. The radioactive isotopes, tritium, 3 H, and carbon-14, 14 C, are particularly useful for this purpose in view of their ease of integration and convenient means of detection. Furthermore, compounds substituted with positron emitting isotopes such as 11 C, 18 F, 15 O and 13 N can be prepared, which will be useful in positron emission tomography (PET) studies to investigate substrate receptor occupancy. will be.
본 발명에 제공된 화합물의 모든 동위원소 변체는, 방사성이든 아니든, 본 발명의 범위 내에 포함된다.All isotopic variations of the compounds provided herein, whether radioactive or not, are included within the scope of the present invention.
동일한 분자식을 갖지만 원자들의 결합 성질 또는 순서 또는 상기 원자들의 공간 배열이 상이한 화합물을 '이성질체'라 칭함을 또한 알아야 한다. 원자들의 공간 배열이 상이한 이성질체를 '입체이성질체'라 칭한다.It should also be noted that compounds that have the same molecular formula but differ in the nature or order of bonding of their atoms or the spatial arrangement of said atoms are termed 'isomers'. Isomers that differ in the arrangement of their atoms in space are termed 'stereoisomers'.
서로 거울상이 아닌 입체이성질체를 '부분입체이성질체'라 칭하며 서로 겹쳐지지 않는 거울상인 이성질체를 '거울상 이성질체'라 칭한다. 화합물이 비대칭 중심을 갖는 경우, 예를 들어 4 개의 상이한 그룹에 결합되는 경우, 한 쌍의 거울상 이성질체가 가능하다. 거울상 이성질체는 그의 비대칭 중심의 절대 배열을 특징으로 할 수 있으며, 이는 칸과 프레로그(Cahn and Prelog)의 R- 및 S-서열화 법칙에 의해서 또는 분자가 편광면을 회전하는 방식에 의해 개시되고 우회전성 또는 좌회전성(즉 각각 (+) 또는 (-)-이성질체)으로 표시된다. 키랄 화합물은 개별적인 거울상 이성질체로서 또는 이들의 혼합물로서 존재할 수 있다. 같은 비율의 거울상 이성질체를 함유하는 혼합물을 '라세미 혼합물'이라 칭한다.Stereoisomers that are not mirror images of each other are called 'diastereomers', and isomers that are non-superimposable mirror images are called 'enantiomers'. A pair of enantiomers is possible if a compound has an asymmetric center, for example bonded to four different groups. Enantiomers can be characterized by the absolute arrangement of their asymmetric centers, which are initiated by the R- and S-sequencing laws of Cahn and Prelog or by the way the molecule rotates the plane of polarized light and rotates clockwise. It is indicated as either sex or levorotatory (i.e., (+) or (-)-isomer, respectively). Chiral compounds can exist as individual enantiomers or as mixtures thereof. A mixture containing equal proportions of enantiomers is called a 'racemic mixture'.
'토오토머'는 특정한 화합물 구조의 상호전환 가능한 형태이고 수소 원자 및 전자의 치환이 다양한 화합물을 지칭한다. 따라서, 2 개의 구조는 π 전자 및 원자(대개는 H)의 이동을 통해 평형으로 존재할 수 있다. 예를 들어, 에놀과 케톤은 산 또는 염기에 의한 처리에 의해 신속하게 상호전환되기 때문에 토오토머이다. 토오토머화의 또 다른 예는 산 또는 염기에 의한 처리에 의해 마찬가지로 형성되는 페닐나이트로메탄의 산- 및 질소-형태이다.A 'tautomer' refers to a compound that is an interconvertable form of a particular compound structure and has a variety of substitutions of hydrogen atoms and electrons. Thus, the two structures can exist in equilibrium through the movement of π electrons and atoms (usually H). For example, enols and ketones are tautomers because they are rapidly interconverted by treatment with acids or bases. Another example of tautomerization is the acid- and nitrogen-forms of phenylnitromethane, which are likewise formed by treatment with acids or bases.
토오토머 형태는 관심 화합물의 최적의 화학 반응성 및 생물 활성의 획득에 적합할 수 있다.Tautomeric forms may be suitable for obtaining optimal chemical reactivity and biological activity of a compound of interest.
본 발명의 화합물은 하나 이상의 비대칭 중심을 가질 수 있으며; 따라서 상기와 같은 화합물은 개별적인 (R)- 또는 (S)-입체이성질체로서 또는 이들의 혼합물로서 생성될 수 있다.The compounds of the present invention may have one or more asymmetric centers; Accordingly, such compounds may be produced as individual (R)- or (S)-stereoisomers or as mixtures thereof.
달리 나타내지 않는 한, 본 명세서 및 청구의 범위에서 특정 화합물의 기술 또는 명칭은 개별적인 거울상 이성질체 및 이들의 라세미 또는 다른 혼합물 모두를 포함함을 의미한다. 입체이성질체의 입체화학의 결정 및 분리를 위한 방법은 당해 분야에 널리 공지되어 있다.Unless otherwise indicated, the description or designation of a particular compound in the specification and claims is meant to include both individual enantiomers and racemic or other mixtures thereof. Methods for the determination and separation of the stereochemistry of stereoisomers are well known in the art.
본 발명의 화합물이 대사되어 생물학적으로 활성인 대사산물을 제공할 수 있음을 알 것이다.It will be appreciated that the compounds of the present invention may be metabolized to provide biologically active metabolites.
본 발명the present invention
본 발명은 본 발명의 화합물이 JAK의 억제제이고 알러지성 질병, 염증 질병, 자가면역 질병, 증식성 질병, 이식 거부, 연골 턴오버의 장애를 수반하는 질병, 선천성 연골 기형, 및/또는 IL6의 분비과잉 또는 인터페론의 분비과잉과 관련된 질병의 치료에 유용하다는 확인을 기본으로 한다. 구체적인 실시태양에서 본 발명의 화합물은 JAK1 및/또는 TYK2의 억제제이다.The present invention provides that the compounds of the present invention are inhibitors of JAK, allergic diseases, inflammatory diseases, autoimmune diseases, proliferative diseases, graft rejection, diseases involving disorders of cartilage turnover, congenital cartilage malformations, and/or secretion of IL6. It is based on confirmation that it is useful in the treatment of diseases associated with excess or excessive secretion of interferon. In a specific embodiment, the compounds of the invention are inhibitors of JAK1 and/or TYK2.
본 발명은 또한 본 발명의 화합물의 제조 방법, 본 발명의 화합물을 포함하는 약학 조성물, 및 본 발명의 화합물의 투여에 의한 알러지성 질병, 염증 질병, 자가면역 질병, 증식성 질병, 이식 거부, 연골 턴오버의 장애를 수반하는 질병, 선천성 연골 기형, 및/또는 IL6의 분비과잉 또는 인터페론의 분비과잉과 관련된 질병의 치료 방법을 제공한다. 구체적인 실시태양에서 본 발명의 화합물은 JAK1 및/또는 TYK2의 억제제이다.The present invention also provides methods for preparing the compounds of the present invention, pharmaceutical compositions comprising the compounds of the present invention, and allergic diseases, inflammatory diseases, autoimmune diseases, proliferative diseases, transplant rejection, cartilage by administration of the compounds of the present invention. Provided is a method for treating a disease accompanying a disorder of turnover, a congenital cartilage deformity, and/or a disease associated with hypersecretion of IL6 or hypersecretion of interferon. In a specific embodiment, the compounds of the invention are inhibitors of JAK1 and/or TYK2.
따라서, 본 발명의 첫 번째 태양에서, 하기 화학식 I에 따른 본 발명의 화합물을 제공한다:Accordingly, in a first aspect of the present invention there is provided a compound of the present invention according to formula I
화학식 IFormula I
상기 식에서,In the above formula,
R1은 H 또는 Me이고;R 1 is H or Me;
L1은 -NR2-; -O- 또는 -CH2-이고;L 1 is -NR 2 -; -O- or -CH 2 -;
Cy는 페닐, 또는 N, O 및 S 중에서 독립적으로 선택된 1 내지 4개의 헤테로원자를 포함하는 5 내지 9원 모노사이클릭 또는 축합된 바이사이클릭 헤테로아릴이고;Cy is phenyl or a 5 to 9 membered monocyclic or fused bicyclic heteroaryl containing 1 to 4 heteroatoms independently selected from N, O and S;
R2는 H 또는 C1-4 알킬이고;R 2 is H or C 1-4 alkyl;
R3은 H, 할로, 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C1-4 알킬, 또는 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C1-4 알콕시이고;R 3 is H, halo, C 1-4 alkyl optionally substituted with one or more halo, or C 1-4 alkoxy optionally substituted with one or more halo;
R4는 H 또는 할로이고;R 4 is H or halo;
R5는 -CN, 할로이거나, 또는 -L2-R6이고;R 5 is -CN, halo, or -L 2 -R 6 ;
-L2는 존재하지 않거나, 또는 -C(=O)-, -C(=O)NR7-, -NR7C(=O)-, -SO2-, -SO2NR7-, 또는 -NR7SO2-이고;-L 2 is absent, or -C(=O)-, -C(=O)NR 7 -, -NR 7 C(=O)-, -SO 2 -, -SO 2 NR 7 -, or -NR 7 SO 2 -;
R6은 H, 또는 하나 이상의 독립적으로 선택된 R8 기로 임의로 치환된 C1-6 알킬이고;R 6 is H or C 1-6 alkyl optionally substituted with one or more independently selected R 8 groups;
R7은 H 또는 C1-4 알킬이고;R 7 is H or C 1-4 alkyl;
R8은 OH, CN, 할로 또는 C1-4 알콕시이고;R 8 is OH, CN, halo or C 1-4 alkoxy;
La는 존재하지 않거나, 또는 -C(=O)-, -C(=O)O- 또는 -C(=O)NH-이고;L a is absent or -C(=0)-, -C(=0)0- or -C(=0)NH-;
Ra는R a is
- H,-H,
- 하나 이상의 독립적으로 선택된 Rb로 임의로 치환된 C1-4 알킬,- C 1-4 alkyl optionally substituted with one or more independently selected R b ,
- 하나 이상의 독립적으로 선택된 Rc로 임의로 치환된 C3-7 모노사이클릭 사이클로알킬, 또는- C 3-7 monocyclic cycloalkyl optionally substituted with one or more independently selected R c , or
- O, N 및 S 중에서 독립적으로 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 포함하는 4 내지 7원 모노사이클릭 헤테로사이클로알킬, 또는- 4 to 7 membered monocyclic heterocycloalkyl containing one or more heteroatoms independently selected from O, N and S, or
- O, N 및 S 중에서 독립적으로 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 포함하는 5 내지 6원 모노사이클릭 헤테로아릴이고;- a 5 to 6 membered monocyclic heteroaryl containing at least one heteroatom independently selected from O, N and S;
Rb는 Rb is
- 할로,- halo,
- CN,-CN,
- OH,-OH,
- C1-4 알콕시,- C 1-4 alkoxy;
- C3-7 사이클로알킬,- C 3-7 cycloalkyl,
- O, N 및 S 중에서 독립적으로 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 포함하는 4 내지 7원 모노사이클릭 헤테로사이클로알킬(상기 헤테로사이클로알킬은 하나 이상의 독립적으로 선택된 할로, 또는 옥소로 임의로 치환된다),- 4 to 7 membered monocyclic heterocycloalkyl containing one or more heteroatoms independently selected from O, N and S, wherein said heterocycloalkyl is optionally substituted with one or more independently selected halo or oxo;
- -SO2-C1-4 알킬, 또는- -SO 2 -C 1-4 alkyl, or
- -C(=O)NRb1Rb2이고- -C(=O)NR b1 R b2 and
Rc는R c is
- 할로,- halo,
- CN,-CN,
- OH,-OH,
- C1-4 알킬,- C 1-4 alkyl;
- -C(=O)OH, 또는- -C(=O)OH, or
- -C(=O)NRc1Rc2이고;- -C(=0)NR c1 R c2 ;
각각의 Rb1, Rb2, Rc1 및 Rc2는 H 및 C1-4 알킬 중에서 독립적으로 선택된다.Each of R bi , R b2 , R c1 and R c2 is independently selected from H and C 1-4 alkyl.
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 R1이 Me인 화학식 I에 따른다.In one embodiment, a compound of the invention conforms to Formula I wherein R 1 is Me.
또 다른 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 Cy가 페닐인 화학식 I에 따른다.In another embodiment, a compound of the invention conforms to Formula I wherein Cy is phenyl.
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 Cy가 N, O 및 S 중에서 독립적으로 선택된 1 내지 4개의 헤테로원자를 포함하는 5 내지 9원 모노사이클릭 또는 축합된 바이사이클릭 헤테로아릴인 화학식 I에 따른다. 또 다른 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 Cy가 N, O 및 S 중에서 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 헤테로원자를 포함하는 5 내지 9원 모노사이클릭 또는 축합된 바이사이클릭 헤테로아릴인 화학식 I에 따른다. 특정한 실시태양에서, Cy는 피라졸릴, 피롤릴, 이미다졸릴, 트라이아졸릴, 티오페닐, 티아졸릴, 퓨라닐, 피리딜, 피라지닐, 피리미딜, 피리다지닐, 벤조퓨라닐, 벤조티오페닐, 벤조티아졸릴, 벤조티아다이아졸릴, 벤즈옥사졸릴, 인돌릴 또는 인다졸릴이다.In one embodiment, compounds of the invention are of Formula I, wherein Cy is a 5 to 9 membered monocyclic or fused bicyclic heteroaryl containing 1 to 4 heteroatoms independently selected from N, O and S. follow In another embodiment, compounds of the invention are of Formula I, wherein Cy is a 5 to 9 membered monocyclic or fused bicyclic heteroaryl containing 1 or 2 heteroatoms independently selected from N, O and S. follow In certain embodiments, Cy is pyrazolyl, pyrrolyl, imidazolyl, triazolyl, thiophenyl, thiazolyl, furanyl, pyridyl, pyrazinyl, pyrimidyl, pyridazinyl, benzofuranyl, benzothiophenyl , benzothiazolyl, benzothiadiazolyl, benzoxazolyl, indolyl or indazolyl.
또 다른 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 Cy가 N, O 및 S 중에서 독립적으로 선택된 1 내지 4개의 헤테로원자를 포함하는 5 내지 6원 모노사이클릭 헤테로아릴인 화학식 I에 따른다. 더욱 또 다른 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 Cy가 N, O 및 S 중에서 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 헤테로원자를 포함하는 5 내지 6원 모노사이클릭 헤테로아릴인 화학식 I에 따른다. 특정한 실시태양에서, Cy는 피라졸릴, 피롤릴, 이미다졸릴, 퓨라닐, 티오페닐, 트라이아졸릴, 테트라졸릴, 티아졸릴, 옥사졸릴, 티아다이아졸릴 또는 옥사다이아졸릴이다. 또 다른 특정한 실시태양에서, Cy는 피리디닐, 피라지닐, 피리미디닐, 또는 피리다졸릴이다. 보다 특정한 실시태양에서, Cy는 피리딜이다.In another embodiment, compounds of the invention are according to Formula I, wherein Cy is a 5-6 membered monocyclic heteroaryl containing 1-4 heteroatoms independently selected from N, O and S. In yet another embodiment, compounds of the present invention are according to Formula I, wherein Cy is a 5 to 6 membered monocyclic heteroaryl containing 1 or 2 heteroatoms independently selected from N, O and S. In certain embodiments, Cy is pyrazolyl, pyrrolyl, imidazolyl, furanyl, thiophenyl, triazolyl, tetrazolyl, thiazolyl, oxazolyl, thiadiazolyl or oxadiazolyl. In another specific embodiment, Cy is pyridinyl, pyrazinyl, pyrimidinyl, or pyridazolyl. In a more specific embodiment, Cy is pyridyl.
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 하기 화학식 IIa, IIb 또는 IIc에 따른다:In one embodiment, the compound of the present invention conforms to Formula IIa, IIb or IIc:
[화학식 IIa] [화학식 IIb] [화학식 IIc] [Formula IIa] [Formula IIb] [Formula IIc]
상기 식들에서, L1, R3, R4, La, Ra 및 R5는 상기 실시태양들 중 어느 하나에 개시된 바와 같다.In the formulas above, L 1 , R 3 , R 4 , L a , R a and R 5 are as described in any one of the above embodiments.
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 하기 화학식 IIIa, IIIb 또는 IIIc에 따른다:In one embodiment, the compound of the present invention conforms to Formula IIIa, IIIb or IIIc:
[화학식 IIIa] [화학식 IIIb] [화학식 IIIc] 
상기 식들에서, L1, R3, R4, La, Ra 및 R5는 상기 실시태양들 중 어느 하나에 개시된 바와 같다.In the formulas above, L 1 , R 3 , R 4 , L a , R a and R 5 are as described in any one of the above embodiments.
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 L1이 -CH2-인 화학식 I 내지 IIIc 중 어느 하나에 따른다.In one embodiment, a compound of the present invention conforms to any of Formulas I to IIIc, wherein L 1 is —CH 2 —.
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 L1이 -O-인 화학식 I 내지 IIIc 중 어느 하나에 따른다.In one embodiment, a compound of the invention conforms to any of Formulas I-IIIc, wherein L 1 is -O-.
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 L1이 -NR2-이고, R2가 상기 실시태양들 중 어느 하나에 개시된 바와 같은 화학식 I 내지 IIIc 중 어느 하나에 따른다.In one embodiment, a compound of the invention is according to any of Formulas I-IIIc wherein L 1 is -NR 2 - and R 2 is as disclosed in any of the embodiments above.
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 L1이 -NR2-이고, 여기에서 R2가 H인 화학식 I 내지 IIIc 중 어느 하나에 따른다.In one embodiment, a compound of the invention is according to any of Formulas I-IIIc wherein L 1 is -NR 2 -, wherein R 2 is H.
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 L1이 -NR2-이고, 여기에서 R2가 C1-4 알킬인 화학식 I 내지 IIIc 중 어느 하나에 따른다. 특정한 실시태양에서, R2는 Me, Et, 또는 iPr이다. 보다 특정한 실시태양에서, R2는 Me이다. 또 다른 보다 특정한 실시태양에서, R2는 Et이다.In one embodiment, a compound of the invention is according to any of Formulas I to IIIc, wherein L 1 is -NR 2 -, wherein R 2 is C 1-4 alkyl. In certain embodiments, R 2 is Me, Et, or iPr. In a more specific embodiment, R 2 is Me. In another more specific embodiment, R 2 is Et.
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 하기 화학식 IVa, IVb, IVc, IVd, IVe 또는 IVf에 따른다:In one embodiment, the compounds of the present invention conform to formulas IVa, IVb, IVc, IVd, IVe or IVf:
[화학식 IVa] [화학식 IVb] [화학식 IVc] [Formula IVa] [Formula IVb] [Formula IVc]
[화학식 IVd] [화학식 IVe] [화학식 IVf] [Formula IVd] [Formula IVe] [Formula IVf]
상기 식들에서, R3, R4, R5, La 및 Ra는 상기 실시태양들 중 어느 하나에 개시된 바와 같다.In the above formulas, R 3 , R 4 , R 5 , L a and R a are as disclosed in any one of the above embodiments.
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 La가 존재하지 않는 화학식 I 내지 IVf 중 어느 하나에 따른다.In one embodiment, a compound of the invention conforms to any one of Formulas I to IVf wherein L a is absent.
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 La가 -C(=O)-, -C(=O)O- 또는 -C(=O)NH-인 화학식 I 내지 IVf 중 어느 하나에 따른다.In one embodiment, a compound of the invention is according to any one of formulas I to IVf, wherein L a is -C(=0)-, -C(=0)0- or -C(=0)NH-.
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 하기 화학식 Va, Vb, Vc, Vd, Ve 또는 Vf에 따른다:In one embodiment, the compounds of the present invention conform to the formulas Va, Vb, Vc, Vd, Ve or Vf:
[화학식 Va] [화학식 Vb] [화학식 Vc] [Formula Va] [Formula Vb] [Formula Vc]
[화학식 Vd] [화학식 Ve] [화학식 Vf] [Formula Vd] [Formula Ve] [Formula Vf]
상기 식들에서, R3, R4, R5 및 Ra는 상기 실시태양들 중 어느 하나에 개시된 바와 같다.In the formulas above, R 3 , R 4 , R 5 and R a are as disclosed in any one of the above embodiments.
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 R4가 H 또는 할로인 화학식 I 내지 Vf 중 어느 하나에 따른다. 특정한 실시태양에서, R4는 F 또는 Cl이다. 또 다른 특정한 실시태양에서, R4는 H이다.In one embodiment, a compound of the invention is according to any of Formulas I-Vf, wherein R 4 is H or halo. In certain embodiments, R 4 is F or Cl. In another specific embodiment, R 4 is H.
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 R3가 H인 화학식 I 내지 Vf 중 어느 하나에 따른다. In one embodiment, a compound of the invention conforms to any of Formulas I-Vf wherein R 3 is H.
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 R3가 할로인 화학식 I 내지 Vf 중 어느 하나에 따른다. 특정한 실시태양에서, R3은 F 또는 Cl이다. 보다 특정한 실시태양에서, R3은 Cl이다.In one embodiment, a compound of the invention is according to any of Formulas I-Vf, wherein R 3 is halo. In certain embodiments, R 3 is F or Cl. In a more specific embodiment, R 3 is Cl.
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 R3가 C1- 4알킬인 화학식 I 내지 Vf 중 어느 하나에 따른다. 특정한 실시태양에서, R3은 Me, Et 또는 n-Pr이다. 보다 특정한 실시태양에서, R3은 Me 또는 Et이다. 가장 특정한 실시태양에서, R3은 Et이다. 또 다른 가장 특정한 실시태양에서 R3은 Me이다.In one embodiment, a compound of the invention is according to any of Formulas I-Vf, wherein R 3 is C 1-4 alkyl. In certain embodiments, R 3 is Me, Et or n-Pr. In a more specific embodiment, R 3 is Me or Et. In a most specific embodiment, R 3 is Et. In another most specific embodiment R 3 is Me.
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 R3가 하나 이상의 독립적으로 선택된 할로로 치환된 C1- 4알킬인 인 화학식 I 내지 Vf 중 어느 하나에 따른다. 특정한 실시태양에서, R3은 -CHF2, -CF3, -CH2-CHF2 또는 -CH2-CF3이다. 보다 특정한 실시태양에서, R3은 -CF3 또는 -CH2-CF3이다.In one embodiment, a compound of the invention is according to any of Formulas I-Vf, wherein R 3 is C 1-4 alkyl substituted with one or more independently selected halo. In certain embodiments, R 3 is -CHF 2 , -CF 3 , -CH 2 -CHF 2 or -CH 2 -CF 3 . In a more specific embodiment, R 3 is -CF 3 or -CH 2 -CF 3 .
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 R3가 C1- 4알콕시인 인 화학식 I 내지 Vf 중 어느 하나에 따른다. 특정한 실시태양에서, R3은 -OMe, -OEt 또는 -On-Pr이다. 보다 특정한 실시태양에서, R3은 -OMe 또는 -OEt이다.In one embodiment, a compound of the invention is according to any of Formulas I to Vf wherein R 3 is C 1-4 alkoxy. In certain embodiments, R 3 is -OMe, -OEt or -On-Pr. In a more specific embodiment, R 3 is -OMe or -OEt.
또 다른 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 R3가 하나 이상의 독립적으로 선택된 할로로 치환된 C1- 4알콕시인 화학식 I 내지 Vf 중 어느 하나에 따른다. 특정한 실시태양에서, R3은 -OCHF2, -OCF3, 또는 -OCH2-CHF2이다. 보다 특정한 실시태양에서, R3은 -OCHF2이다.In another embodiment, a compound of the invention is according to any of Formulas I-Vf, wherein R 3 is C 1-4 alkoxy substituted with one or more independently selected halo. In certain embodiments, R 3 is -OCHF 2 , -OCF 3 , or -OCH 2 -CHF 2 . In a more specific embodiment, R 3 is -OCHF 2 .
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 R5가 CN인 화학식 I 내지 Vf 중 어느 하나에 따른다. In one embodiment, a compound of the invention conforms to any of Formulas I-Vf wherein R 5 is CN.
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 R5가 할로인 화학식 I 내지 Vf 중 어느 하나에 따른다. 특정한 실시태양에서, R5는 F 또는 Cl이다. 보다 특정한 실시태양에서, R5는 F이다.In one embodiment, a compound of the invention is according to any of Formulas I-Vf, wherein R 5 is halo. In certain embodiments, R 5 is F or Cl. In a more specific embodiment, R 5 is F.
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 R5가 -L2-R6이고, R6이 상술한 바와 같고, L2가 -C(=O)NR7-, -NR7C(=O)-, -SO2NR7- 또는 -NR7SO2-이고, R7이 선행 실시태양들 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 화학식 I 내지 Vf 중 어느 하나에 따른다. 특정한 실시태양에서, R7은 H이다. 또 다른 특정한 실시태양에서, R7은 C1- 4알킬이다. 보다 특정한 실시태양에서, R7은 Me 또는 Et이다. 가장 특정한 실시태양에서 R7은 Me이다.In one embodiment, a compound of the invention is wherein R 5 is -L 2 -R 6 , R 6 is as described above, and L 2 is -C(=O)NR 7 -, -NR 7 C(=O )-, -SO 2 NR 7 - or -NR 7 SO 2 -, wherein R 7 is according to any one of formulas I to Vf as defined in any one of the preceding embodiments. In certain embodiments, R 7 is H. In another specific embodiment, R 7 is C 1-4 alkyl. In a more specific embodiment, R 7 is Me or Et. In a most specific embodiment R 7 is Me.
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 R5가 -L2-R6이고, L2가 상술한 바와 같고, R6이 H인 화학식 I 내지 Vf 중 어느 하나에 따른다. In one embodiment, a compound of the invention is according to any of Formulas I to Vf wherein R 5 is -L 2 -R 6 , L 2 is as defined above, and R 6 is H.
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 R5가 -L2-R6이고, L2가 상술한 바와 같고, R6이 C1- 6알킬인 화학식 I 내지 Vf 중 어느 하나에 따른다. 특정한 실시태양에서, R6은 Me, Et, iPr 또는 tBu이다. 보다 특정한 실시태양에서, R6은 Me 또는 Et이다.In one embodiment, a compound of the invention is according to any of Formulas I-Vf, wherein R 5 is -L 2 -R 6 , L 2 is as defined above, and R 6 is C 1-6 alkyl. In certain embodiments, R 6 is Me, Et, iPr or tBu. In a more specific embodiment, R 6 is Me or Et.
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 R5가 -L2-R6이고, L2가 상술한 바와 같고, R6이 하나 이상의 독립적으로 선택된 R8기로 치환된 C1- 6알킬인 화학식 I 내지 Vf 중 어느 하나에 따른다. 또 다른 실시태양에서, R6은 Me, Et, iPr 또는 tBu이고, 이들은 각각 하나 이상의 독립적으로 선택된 R8 기로 치환된다. 특정한 실시태양에서, R6은 1, 2 또는 3개의 독립적으로 선택된 R8 기로 치환된 C1- 6알킬이다. 또 다른 특정한 실시태양에서, R6은 Me, Et, iPr 또는 tBu이고, 이들은 각각 1, 2 또는 3개의 독립적으로 선택된 R8 기로 치환된다. 보다 특정한 실시태양에서, R6은 하나의 R8 기로 치환된 C1- 6알킬이다. 또 다른 특정한 실시태양에서, R6은 Me, Et, iPr 또는 tBu이고, 이들은 각각 하나의 R8 기로 치환된다. In one embodiment, a compound of the invention is of the formula wherein R 5 is -L 2 -R 6 , L 2 is as described above, and R 6 is C 1-6 alkyl substituted with one or more independently selected R 8 groups. According to any one of I to Vf. In another embodiment, R 6 is Me, Et, iPr or tBu, each of which is substituted with one or more independently selected R 8 groups. In certain embodiments, R 6 is C 1-6 alkyl substituted with 1, 2 or 3 independently selected R 8 groups. In another specific embodiment, R 6 is Me, Et, iPr or tBu, each of which is substituted with 1, 2 or 3 independently selected R 8 groups. In a more specific embodiment , R 6 is C 1-6 alkyl substituted with one R 8 group. In another specific embodiment, R 6 is Me, Et, iPr or tBu, each of which is substituted with one R 8 group.
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 R8이 OH, CN, 할로 또는 C1- 4알콕시인 화학식 I 내지 Vf 중 어느 하나에 따른다. 특정한 실시태양에서, R8은 OH, CN, F, Cl, -OMe 또는 -OEt이다.In one embodiment, a compound of the invention is according to any of Formulas I to Vf , wherein R 8 is OH, CN, halo or C 1-4 alkoxy. In certain embodiments, R 8 is OH, CN, F, Cl, -OMe or -OEt.
특정한 실시태양에서, R5는 -L2-R6이고, L2는 -C(=O)- 또는 -SO2-이고, R6은 C1-6알킬이다. 보다 특정한 실시태양에서, R5는 -L2-R6이고, L2는 -C(=O)- 또는 -SO2이고, R6은 Me, Et, iPr 또는 tBu이다. 가장 특정한 실시태양에서, R5는 -C(=O)Me, -C(=O)Et, -SO2Me 또는 -SO2Et이다.In certain embodiments, R 5 is -L 2 -R 6 , L 2 is -C(=O)- or -SO 2 -, and R 6 is C 1-6 alkyl. In a more specific embodiment, R 5 is -L 2 -R 6 , L 2 is -C(=0)- or -SO 2 , and R 6 is Me, Et, iPr or tBu. In the most particular embodiment, R 5 is -C(=0)Me, -C(=0)Et, -SO 2 Me or -SO 2 Et.
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 R5가 -L2-R6이고, L2가 -C(=O)NR7-, -NR7C(=O)-, -SO2NR7- 또는 -NR7SO2-이고, R6 및 R7이 선행 실시태양 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 화학식 I 내지 Vf 중 어느 하나에 따른다. 특정한 실시태양에서, R7은 H, Me 또는 Et이고, R6은 선행 실시태양 중 어느 하나에 정의된 바와 같다. 또 다른 특정한 실시태양에서, R7은 선행 실시태양 중 어느 하나에 정의된 바와 같고, R6은 H이다. 더욱 또 다른 특정한 실시태양에서, R7은 선행 실시태양 중 어느 하나에 정의된 바와 같고, R6은 하나 이상의 독립적으로 선택된 OH, CN, 할로 또는 C1- 4알콕시로 임의로 치환된 C1- 6알킬이다. 보다 특정한 실시태양에서, R7은 H, Me 또는 Et이고, R6은 H이다. 또 다른 보다 특정한 실시태양에서, R7은 H, Me 또는 Et이고, R6은 Me, Et, iPr 또는 tBu이고, 이들은 각각 하나 이상의 독립적으로 선택된 OH, CN, 할로 또는 C1-4알콕시로 임의로 치환된다. 더욱 또 다른 보다 특정한 실시태양에서, R7은 H, Me 또는 Et이고, R6은 Me, Et, iPr 또는 tBu이고, 이들은 각각 하나 이상의 독립적으로 선택된 OH, CN, F, Cl, OMe 또는 OEt로 임의로 치환된다. 가장 특정한 실시태양에서, R5는 -C(=O)NH2 또는 -SO2NH2이다.In one embodiment, a compound of the invention wherein R 5 is -L 2 -R 6 and L 2 is -C(=O)NR 7 -, -NR 7 C(=O)-, -SO 2 NR 7 - or -NR 7 SO 2 -, wherein R 6 and R 7 are according to any one of Formulas I to Vf as defined in any one of the preceding embodiments. In certain embodiments, R 7 is H, Me or Et, and R 6 is as defined in any of the preceding embodiments. In another specific embodiment, R 7 is as defined in any one of the preceding embodiments and R 6 is H. In yet another specific embodiment, R 7 is as defined in any one of the preceding embodiments, and R 6 is C 1-6 optionally substituted with one or more independently selected OH, CN, halo or C 1-4 alkoxy . is an alkyl In a more specific embodiment, R 7 is H, Me or Et and R 6 is H. In another more specific embodiment, R 7 is H, Me or Et and R 6 is Me, Et, iPr or tBu, each optionally selected from one or more independently selected OH, CN, halo or C 1-4 alkoxy is replaced In yet another more specific embodiment, R 7 is H, Me or Et and R 6 is Me, Et, iPr or tBu, each of which is one or more independently selected OH, CN, F, Cl, OMe or OEt randomly substituted. In the most particular embodiment, R 5 is -C(=0)NH 2 or -SO 2 NH 2 .
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 Ra가 H인 화학식 I 내지 Vf 중 어느 하나에 따른다.In one embodiment, a compound of the invention conforms to any of Formulas I-Vf wherein R a is H.
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 Ra가 C1- 4알킬인 화학식 I 내지 Vf 중 어느 하나에 따른다. 특정한 실시태양에서, Ra는 Me, Et, iPr 또는 tBu이다. 보다 특정한 실시태양에서, Ra는 Me 또는 Et이다. 가장 특정한 실시태양에서, Ra는 Me이다.In one embodiment, a compound of the invention is according to any of Formulas I-Vf , wherein R a is C 1-4 alkyl. In certain embodiments, R a is Me, Et, iPr or tBu. In a more specific embodiment, R a is Me or Et. In a most specific embodiment, R a is Me.
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 Ra가 하나 이상의 독립적으로 선택된 Rb로 치환된 C1- 4알킬인 화학식 I 내지 Vf 중 어느 하나에 따른다. 또 다른 실시태양에서, Ra는 Me, Et, iPr 또는 tBu이고, 이들은 각각 하나 이상의 독립적으로 선택된 Rb로 치환된다. 특정한 실시태양에서, Ra는 1, 2 또는 3개의 독립적으로 선택된 Rb로 치환된 C1- 4알킬이다. 또 다른 특정한 실시태양에서, Ra는 Me, Et, iPr 또는 tBu이고, 이들은 각각 1, 2 또는 3개의 독립적으로 선택된 Rb로 치환된다. 보다 특정한 실시태양에서, Ra는 하나의 Rb로 치환된 C1- 4알킬이다. 또 다른 보다 특정한 실시태양에서, Ra는 Me, Et, iPr 또는 tBu이고, 이들은 각각 하나의 Rb로 치환된다. In one embodiment, a compound of the invention is according to any of Formulas I - Vf, wherein R a is C 1-4 alkyl substituted with one or more independently selected R b . In another embodiment, R a is Me, Et, iPr or tBu, each of which is substituted with one or more independently selected R b . In certain embodiments, R a is C 1-4 alkyl substituted with 1, 2 or 3 independently selected R b . In another specific embodiment, R a is Me, Et, iPr or tBu, each of which is substituted with 1, 2 or 3 independently selected R b . In a more specific embodiment , R a is C 1-4 alkyl substituted with one R b . In another more specific embodiment, R a is Me, Et, iPr or tBu, each of which is substituted with one R b .
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 Rb가 할로, CN 또는 OH인 화학식 I 내지 Vf 중 어느 하나에 따른다. 특정한 실시태양에서, Rb는 F, Cl, CN 또는 OH이다.In one embodiment, a compound of the invention is according to any of Formulas I to Vf, wherein R b is halo, CN or OH. In certain embodiments, R b is F, Cl, CN or OH.
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 Rb가 C1- 4알콕시인 화학식 I 내지 Vf 중 어느 하나에 따른다. 특정한 실시태양에서, Rb는 OMe, OEt 또는 OiPr이다. 보다 특정한 실시태양에서, Rb는 OMe이다.In one embodiment, a compound of the invention is according to any of Formulas I to Vf, wherein R b is C 1-4 alkoxy. In certain embodiments, R b is OMe, OEt or OiPr. In a more specific embodiment, R b is OMe.
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 Rb가 C3- 7사이클로알킬인 화학식 I 내지 Vf 중 어느 하나에 따른다. 특정한 실시태양에서, Rb는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸 또는 사이클로헥실이다. 보다 특정한 실시태양에서, Rb는 사이클로프로필이다.In one embodiment, a compound of the invention is according to any of Formulas I to Vf, wherein R b is C 3-7 cycloalkyl. In certain embodiments, R b is cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl or cyclohexyl. In a more specific embodiment, R b is cyclopropyl.
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 Rb가 O, N 및 S 중에서 독립적으로 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 포함하는 4 내지 7원 모노사이클릭 헤테로사이클로알킬인 화학식 I 내지 Vf 중 적어도 하나에 따른다. 특정한 실시태양에서, Rb는 옥세타닐, 테트라하이드로퓨라닐, 테트라하이드로피라닐, 아제티디닐, 피롤리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 모폴리닐 또는 티오모폴리닐이다.In one embodiment, a compound of the invention conforms to at least one of Formulas I to Vf, wherein R b is a 4 to 7 membered monocyclic heterocycloalkyl comprising one or more heteroatoms independently selected from O, N and S. . In certain embodiments, R b is oxetanyl, tetrahydrofuranyl, tetrahydropyranyl, azetidinyl, pyrrolidinyl, piperidinyl, piperazinyl, morpholinyl or thiomorpholinyl.
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 Rb가 하나 이상의 독립적으로 선택된 할로, 또는 옥소로 치환된, O, N 및 S 중에서 독립적으로 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 포함하는 4 내지 7원 모노사이클릭 헤테로사이클로알킬인 화학식 I 내지 Vf 중 적어도 하나에 따른다. 특정한 실시태양에서, Rb는 옥세타닐, 테트라하이드로퓨라닐, 테트라하이드로피라닐, 아제티디닐, 피롤리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 모폴리닐 또는 티오모폴리닐이고, 이들은 각각 하나 이상의 독립적으로 선택된 할로 또는 옥소로 치환된다. 또 다른 특정한 실시태양에서, Rb는 하나 이상의 독립적으로 선택된 F, Cl 또는 옥소로 치환된, O, N 및 S 중에서 독립적으로 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 포함하는 4 내지 7원 모노사이클릭 헤테로사이클로알킬이다. 보다 특정한 실시태양에서, Rb는 옥세타닐, 테트라하이드로퓨라닐, 테트라하이드로피라닐, 아제티디닐, 피롤리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 모폴리닐 또는 티오모폴리닐이고, 이들은 각각 하나 이상의 독립적으로 선택된 F, Cl 또는 옥소로 치환된다. 가장 특정한 실시태양에서, Rb는 1, 2 또는 3개의 독립적으로 선택된 F, Cl 또는 옥소로 치환된, O, N 및 S 중에서 독립적으로 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 포함하는 4 내지 7원 모노사이클릭 헤테로사이클로알킬이다. 또 다른 가장 특정한 실시태양에서, Rb는 옥세타닐, 테트라하이드로퓨라닐, 테트라하이드로피라닐, 아제티디닐, 피롤리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 모폴리닐 또는 티오모폴리닐이고, 이들은 각각 1, 2 또는 3개의 독립적으로 선택된 F, Cl 또는 옥소로 치환된다. In one embodiment, compounds of the invention are 4 to 7 membered monocyclic compounds wherein R b comprises one or more heteroatoms independently selected from O, N and S, substituted with one or more independently selected halo, or oxo. according to at least one of Formulas I to Vf which is a heterocycloalkyl. In certain embodiments, R b is oxetanyl, tetrahydrofuranyl, tetrahydropyranyl, azetidinyl, pyrrolidinyl, piperidinyl, piperazinyl, morpholinyl or thiomorpholinyl, each of which is substituted with one or more independently selected halo or oxo. In another specific embodiment, R b is a 4 to 7 membered monocyclic heterocycloalkyl comprising one or more heteroatoms independently selected from O, N and S, substituted with one or more independently selected F, Cl or oxo. am. In a more specific embodiment, R b is oxetanyl, tetrahydrofuranyl, tetrahydropyranyl, azetidinyl, pyrrolidinyl, piperidinyl, piperazinyl, morpholinyl or thiomorpholinyl, which are each is substituted with one or more independently selected F, Cl or oxo. In the most particular embodiment, R b is a 4 to 7 membered monocyclic group containing one or more heteroatoms independently selected from O, N and S, substituted with 1, 2 or 3 independently selected F, Cl or oxo. Heterocycloalkyl. In another most specific embodiment, R b is oxetanyl, tetrahydrofuranyl, tetrahydropyranyl, azetidinyl, pyrrolidinyl, piperidinyl, piperazinyl, morpholinyl or thiomorpholinyl; , each of which is substituted with 1, 2 or 3 independently selected F, Cl or oxo.
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 Rb가 -SO2-C1- 4알킬인 화학식 I 내지 Vf 중 어느 하나에 따른다. 특정한 실시태양에서, Rb는 -SO2CH3, 또는 -SO2CH2CH3이다.In one embodiment, a compound of the invention is according to any of Formulas I-Vf , wherein R b is -SO 2 -C 1-4 alkyl. In certain embodiments, R b is -SO 2 CH 3 , or -SO 2 CH 2 CH 3 .
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 Rb가 -C(=O)NRb1Rb2이고, 여기에서 각각의 Rb1 또는 Rb2가 H 및 C1- 4알킬 중에서 독립적으로 선택되는 화학식 I 내지 Vf 중 어느 하나에 따른다. 특정한 실시태양에서, 각각의 Rb1 또는 Rb2는 H, -CH3 및 -CH2CH3 중에서 독립적으로 선택된다. 보다 특정한 실시태양에서, Rb는 -C(=O)NH2, -C(=O)NMeH, 또는 -C(=O)NMe2이다.In one embodiment, a compound of the invention is of formula I wherein R b is -C(=O)NR b1 R b2 , wherein each R bi or R b2 is independently selected from H and C 1-4 alkyl . to Vf. In certain embodiments, each R bi or R b2 is independently selected from H, -CH 3 and -CH 2 CH 3 . In a more specific embodiment, R b is -C(=0)NH 2 , -C(=0)NMeH, or -C(=0)NMe 2 .
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 Ra가 C3-7 모노사이클릭 사이클로알킬인 화학식 I 내지 Vf 중 어느 하나에 따른다. 특정한 실시태양에서, Ra는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 또는 사이클로펜틸이다. 보다 특정한 실시태양에서, Ra는 사이클로프로필이다.In one embodiment, a compound of the invention is according to any of Formulas I to Vf, wherein R a is C 3-7 monocyclic cycloalkyl. In certain embodiments, R a is cyclopropyl, cyclobutyl, or cyclopentyl. In a more specific embodiment, R a is cyclopropyl.
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 Ra가 하나 이상의 독립적으로 선택된 Rc 기로 치환된 C3-7 모노사이클릭 사이클로알킬인 화학식 I 내지 Vf 중 어느 하나에 따른다. 또 다른 실시태양에서, Ra는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 또는 사이클로펜틸이고, 이들은 각각 하나 이상의 독립적으로 선택된 Rc 기로 치환된다. 특정한 실시태양에서, Ra는 1, 2 또는 3개의 독립적으로 선택된 Rc 기로 치환된 C3-7 모노사이클릭 사이클로알킬이다. 또 다른 특정한 실시태양에서, Ra는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 또는 사이클로펜틸이고, 이들은 각각 1, 2 또는 3개의 독립적으로 선택된 Rc 기로 치환된다. 보다 특정한 실시태양에서, Ra는 하나의 Rc 기로 치환된 C3-7 모노사이클릭 사이클로알킬이다. 또 다른 특정한 실시태양에서, Ra는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 또는 사이클로펜틸이고, 이들은 각각 하나의 Rc 기로 치환된다.In one embodiment, a compound of the invention is according to any of Formulas I-Vf, wherein R a is C 3-7 monocyclic cycloalkyl substituted with one or more independently selected R c groups. In another embodiment, R a is cyclopropyl, cyclobutyl, or cyclopentyl, each substituted with one or more independently selected R c groups. In certain embodiments, R a is C 3-7 monocyclic cycloalkyl substituted with 1, 2 or 3 independently selected R c groups. In another specific embodiment, R a is cyclopropyl, cyclobutyl, or cyclopentyl, each of which is substituted with 1, 2 or 3 independently selected R c groups. In a more specific embodiment, R a is C 3-7 monocyclic cycloalkyl substituted with one R c group. In another specific embodiment, R a is cyclopropyl, cyclobutyl, or cyclopentyl, each of which is substituted with one R c group.
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 Rc가 할로, CN 또는 OH인 화학식 I 내지 Vf 중 어느 하나에 따른다. 특정한 실시태양에서, Rc는 F, Cl, CN 또는 OH이다. 보다 특정한 실시태양에서, Rc는 F이다.In one embodiment, a compound of the invention is according to any of Formulas I to Vf, wherein R c is halo, CN or OH. In certain embodiments, R c is F, Cl, CN or OH. In a more specific embodiment, R c is F.
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 Rc가 C1- 4알킬인 화학식 I 내지 Vf 중 어느 하나에 따른다. 특정한 실시태양에서, Rc는 -Me, -Et 또는 -iPr이다. In one embodiment, a compound of the invention is according to any one of Formulas I to Vf, wherein R c is C 1-4 alkyl. In certain embodiments, R c is -Me, -Et or -iPr.
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 Rc가 -C(=O)OH인 화학식 I 내지 Vf 중 어느 하나에 따른다. In one embodiment, a compound of the invention conforms to any one of Formulas I to Vf, wherein R c is -C(=0)OH.
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 Rc가 -C(=O)NRc1Rc2이고, 여기에서 각각의 Rc1 또는 Rc2가 H 및 C1- 4알킬 중에서 독립적으로 선택되는 화학식 I 내지 Vf 중 어느 하나에 따른다. 특정한 실시태양에서, 각각의 Rc1 또는 Rc2는 H, -CH3 및 -CH2CH3 중에서 독립적으로 선택된다. 보다 특정한 실시태양에서, Rc는 -C(=O)NH2, -C(=O)NMeH, 또는 -C(=O)NMe2이다.In one embodiment, a compound of the invention is of Formula I wherein R c is -C(=O)NR c1 R c2 , wherein each R c1 or R c2 is independently selected from H and C 1-4 alkyl . to Vf. In certain embodiments, each R c1 or R c2 is independently selected from H, -CH 3 and -CH 2 CH 3 . In a more specific embodiment, R c is -C(=0)NH 2 , -C(=0)NMeH, or -C(=0)NMe 2 .
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 Ra가 In one embodiment, a compound of the invention is wherein R a is
인 화학식 I 내지 Vf 중 어느 하나에 따른다.according to any one of the formulas I to Vf.
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 Ra가 In one embodiment, a compound of the invention is wherein R a is
인 화학식 I 내지 Vf 중 어느 하나에 따른다.according to any one of the formulas I to Vf.
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 Ra가 O, N 및 S 중에서 독립적으로 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 포함하는 4 내지 7원 모노사이클릭 헤테로사이클로알킬인 화학식 I 내지 Vf 중 어느 하나에 따른다. 특정한 실시태양에서, Ra는 옥세타닐, 테트라하이드로퓨라닐, 테트라하이드로피라닐, 아제티디닐, 피롤리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 모폴리닐 또는 티오모폴리닐이다.In one embodiment, a compound of the invention is according to any one of Formulas I to Vf, wherein R a is a 4 to 7 membered monocyclic heterocycloalkyl comprising one or more heteroatoms independently selected from O, N and S. . In certain embodiments, R a is oxetanyl, tetrahydrofuranyl, tetrahydropyranyl, azetidinyl, pyrrolidinyl, piperidinyl, piperazinyl, morpholinyl or thiomorpholinyl.
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 Ra가 O, N 및 S 중에서 독립적으로 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 포함하는 5 내지 6원 모노사이클릭 헤테로아릴인 화학식 I 내지 Vf 중 어느 하나에 따른다. 특정한 실시태양에서, Ra는 퓨라닐, 티에닐, 피롤릴, 옥사졸릴, 티아졸릴, 이미다졸릴, 트라이아졸릴, 옥사다이아졸릴, 테트라졸, 피리디닐, 피라지닐 또는 피리미디닐이다.In one embodiment, a compound of the invention is according to any one of Formulas I to Vf, wherein R a is a 5-6 membered monocyclic heteroaryl containing one or more heteroatoms independently selected from O, N and S. In certain embodiments, R a is furanyl, thienyl, pyrrolyl, oxazolyl, thiazolyl, imidazolyl, triazolyl, oxadiazolyl, tetrazole, pyridinyl, pyrazinyl or pyrimidinyl.
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 화학식 I에 따르며, 여기에서 상기 화합물은 하기 중에서 선택된다:In one embodiment, a compound of the invention is according to Formula I, wherein said compound is selected from:
N-(6-((6-시아노-4-에틸피리딘-3-일)(메틸)아미노)-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-4-일)사이클로프로판카복스아미드,N-(6-((6-cyano-4-ethylpyridin-3-yl)(methyl)amino)-1-methyl-1H-benzo[d]imidazol-4-yl)cyclopropanecarboxamide;
N-(6-(4-시아노-2-에틸-6-플루오로페닐아미노)-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-4-일)사이클로프로판카복스아미드,N-(6-(4-cyano-2-ethyl-6-fluorophenylamino)-1-methyl-1H-benzo[d]imidazol-4-yl)cyclopropanecarboxamide;
N-(6-((4-시아노-2-에틸-6-플루오로페닐)(메틸)아미노)-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-4-일)사이클로프로판카복스아미드,N-(6-((4-cyano-2-ethyl-6-fluorophenyl)(methyl)amino)-1-methyl-1H-benzo[d]imidazol-4-yl)cyclopropanecarboxamide ,
메틸 6-((6-시아노-4-에틸피리딘-3-일)(메틸)아미노)-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-4-일카바메이트,methyl 6-((6-cyano-4-ethylpyridin-3-yl)(methyl)amino)-1-methyl-1H-benzo[d]imidazol-4-ylcarbamate;
메틸 6-((4-시아노-2-에틸-6-플루오로페닐)(메틸)아미노)-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-4-일카바메이트,methyl 6-((4-cyano-2-ethyl-6-fluorophenyl)(methyl)amino)-1-methyl-1H-benzo[d]imidazol-4-ylcarbamate;
(1R,2R)-N-[6-[(6-시아노-4-에틸-3-피리딜)옥시]-1-메틸-벤즈이미다졸-4-일]-2-플루오로-사이클로프로판카복스아미드,(1R,2R)—N-[6-[(6-cyano-4-ethyl-3-pyridyl)oxy]-1-methyl-benzimidazol-4-yl]-2-fluoro-cyclopropane carboxamide,
N-(6-((4-시아노-2-에틸-6-플루오로페닐)(메틸)아미노)-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-4-일)-2-플루오로사이클로프로판카복스아미드 (1S,2S)/(1R,2R) 라세미 혼합물,N-(6-((4-cyano-2-ethyl-6-fluorophenyl)(methyl)amino)-1-methyl-1H-benzo[d]imidazol-4-yl)-2-fluoro Cyclopropanecarboxamide (1S,2S)/(1R,2R) racemic mixture,
(1R,2R)-N-(6-((6-시아노-4-에틸피리딘-3-일)(메틸)아미노)-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-4-일)-2-플루오로사이클로프로판카복스아미드,(1R,2R)-N-(6-((6-cyano-4-ethylpyridin-3-yl)(methyl)amino)-1-methyl-1H-benzo[d]imidazol-4-yl) -2-fluorocyclopropanecarboxamide;
(1R,2R)-N-(6-((6-시아노-4-메틸피리딘-3-일)(메틸)아미노)-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-4-일)-2-플루오로사이클로프로판카복스아미드,(1R,2R)-N-(6-((6-cyano-4-methylpyridin-3-yl)(methyl)amino)-1-methyl-1H-benzo[d]imidazol-4-yl) -2-fluorocyclopropanecarboxamide;
(1R,2R)-N-[6-(4-시아노-2-에틸-페녹시)-1-메틸-벤즈이미다졸-4-일]-2-플루오로-사이클로프로판카복스아미드,(1R,2R)—N-[6-(4-cyano-2-ethyl-phenoxy)-1-methyl-benzimidazol-4-yl]-2-fluoro-cyclopropanecarboxamide;
(1R,2R)-N-[6-(2-chloro-4-시아노-6-플루오로-N-메틸-아닐리노)-1-메틸-벤즈이미다졸-4-일]-2-플루오로-사이클로프로판카복스아미드,(1R,2R)-N-[6-(2-chloro-4-cyano-6-fluoro-N-methyl-anilino)-1-methyl-benzimidazol-4-yl]-2-fluoro rho-cyclopropanecarboxamide;
(1R,2R)-2-플루오로-N-[6-[(6-플루오로-4-메틸-3-피리딜)-메틸-아미노]-1-메틸-벤즈이미다졸-4-일]사이클로프로판카복스아미드,(1R,2R)-2-fluoro-N-[6-[(6-fluoro-4-methyl-3-pyridyl)-methyl-amino]-1-methyl-benzimidazol-4-yl] cyclopropanecarboxamide,
(1R,2R)-N-[6-[(2,6-다이플루오로-3-피리딜)-메틸-아미노]-1-메틸-벤즈이미다졸-4-일]-2-플루오로-사이클로프로판카복스아미드,(1R,2R)-N-[6-[(2,6-difluoro-3-pyridyl)-methyl-amino]-1-methyl-benzimidazol-4-yl]-2-fluoro- cyclopropanecarboxamide,
(1R,2R)-N-[6-[(6-시아노-2-플루오로-3-피리딜)-메틸-아미노]-1-메틸-벤즈이미다졸-4-일]-2-플루오로-사이클로프로판카복스아미드,(1R,2R)-N-[6-[(6-cyano-2-fluoro-3-pyridyl)-methyl-amino]-1-methyl-benzimidazol-4-yl]-2-fluoro rho-cyclopropanecarboxamide;
(1R,2R)-N-[6-(4-시아노-2-플루오로-N-메틸-아닐리노)-1-메틸-벤즈이미다졸-4-일]-2-플루오로-사이클로프로판카복스아미드,(1R,2R)—N-[6-(4-Cyano-2-fluoro-N-methyl-anilino)-1-methyl-benzimidazol-4-yl]-2-fluoro-cyclopropane carboxamide,
(1R,2R)-2-플루오로-N-[6-(2-플루오로-N,6-다이메틸-4-메틸설포닐-아닐리노)-1-메틸-벤즈이미다졸-4-일]사이클로프로판카복스아미드,(1R,2R)-2-Fluoro-N-[6-(2-fluoro-N,6-dimethyl-4-methylsulfonyl-anilino)-1-methyl-benzimidazol-4-yl ]Cyclopropanecarboxamide,
(1R,2R)-2-플루오로-N-[6-(2-플루오로-N-메틸-4-메틸설포닐-아닐리노)-1-메틸-벤즈이미다졸-4-일]사이클로프로판카복스아미드,(1R,2R)-2-fluoro-N-[6-(2-fluoro-N-methyl-4-methylsulfonyl-anilino)-1-methyl-benzimidazol-4-yl]cyclopropane carboxamide,
N-[6-[(4-에틸-6-메틸설포닐-3-피리딜)-메틸-아미노]-1-메틸-벤즈이미다졸-4-일]사이클로프로판카복스아미드,N-[6-[(4-ethyl-6-methylsulfonyl-3-pyridyl)-methyl-amino]-1-methyl-benzimidazol-4-yl]cyclopropanecarboxamide;
N-[6-(2-플루오로-N,6-다이메틸-4-메틸설포닐-아닐리노)-1-메틸-벤즈이미다졸-4-일]사이클로프로판카복스아미드,N-[6-(2-fluoro-N,6-dimethyl-4-methylsulfonyl-anilino)-1-methyl-benzimidazol-4-yl]cyclopropanecarboxamide;
(1R,2R)-N-[6-[(6-시아노-4-메틸-3-피리딜)옥시]-1-메틸-벤즈이미다졸-4-일]-2-플루오로-사이클로프로판카복스아미드,(1R,2R)-N-[6-[(6-cyano-4-methyl-3-pyridyl)oxy]-1-methyl-benzimidazol-4-yl]-2-fluoro-cyclopropane carboxamide,
(1R,2R)-N-[6-[(6-시아노-2-플루오로-4-메틸-3-피리딜)-메틸-아미노]-1-메틸-벤즈이미다졸-4-일]-2-플루오로-사이클로프로판카복스아미드,(1R,2R)-N-[6-[(6-cyano-2-fluoro-4-methyl-3-pyridyl)-methyl-amino]-1-methyl-benzimidazol-4-yl] -2-fluoro-cyclopropanecarboxamide;
(1R,2R)-N-[6-[(2-시아노-3-플루오로-5-메틸-4-피리딜)-메틸-아미노]-1-메틸-벤즈이미다졸-4-일]-2-플루오로-사이클로프로판카복스아미드,(1R,2R)-N-[6-[(2-cyano-3-fluoro-5-methyl-4-pyridyl)-methyl-amino]-1-methyl-benzimidazol-4-yl] -2-fluoro-cyclopropanecarboxamide;
N-[6-[(6-시아노-4-메틸-3-피리딜)옥시]-1-메틸-벤즈이미다졸-4-일]사이클로프로판카복스아미드,N-[6-[(6-cyano-4-methyl-3-pyridyl)oxy]-1-methyl-benzimidazol-4-yl]cyclopropanecarboxamide;
5-((4-(사이클로프로판카복스아미도)-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)(메틸)아미노)-4-에틸피콜린아미드,5-((4-(cyclopropanecarboxamido)-1-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)(methyl)amino)-4-ethylpicolinamide;
4-에틸-5-((4-((1R,2R)-2-플루오로사이클로프로판카복스아미도)-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)(메틸)아미노)피콜린아미드,4-ethyl-5-((4-((1R,2R)-2-fluorocyclopropanecarboxamido)-1-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)(methyl)amino ) picolinamide,
(1R,2R)-N-[6-(N,2-다이메틸-4-메틸설포닐-아닐리노)-1-메틸-벤즈이미다졸-4-일]-2-플루오로-사이클로프로판카복스아미드,(1R,2R)-N-[6-(N,2-Dimethyl-4-methylsulfonyl-anilino)-1-methyl-benzimidazol-4-yl]-2-fluoro-cyclopropanca box amide,
(1R,2R)-N-[6-(4-에틸설포닐-N,2-다이메틸-아닐리노)-1-메틸-벤즈이미다졸-4-일]-2-플루오로-사이클로프로판카복스아미드,(1R,2R)-N-[6-(4-Ethylsulfonyl-N,2-dimethyl-anilino)-1-methyl-benzimidazol-4-yl]-2-fluoro-cyclopropanca box amide,
5-(7-아미노-3-메틸-벤즈이미다졸-5-일)옥시-4-메틸-피리딘-2-카보나이트릴,5-(7-amino-3-methyl-benzimidazol-5-yl)oxy-4-methyl-pyridine-2-carbonitrile;
N-[6-[(4-에틸-6-메틸설포닐-3-피리딜)옥시]-1-메틸-벤즈이미다졸-4-일]사이클로프로판카복스아미드,N-[6-[(4-ethyl-6-methylsulfonyl-3-pyridyl)oxy]-1-methyl-benzimidazol-4-yl]cyclopropanecarboxamide;
N-[6-[4-(시아노메틸)아닐리노]-1-메틸-벤즈이미다졸-4-일]사이클로프로판카복스아미드,N-[6-[4-(cyanomethyl)anilino]-1-methyl-benzimidazol-4-yl]cyclopropanecarboxamide;
N-[6-(2,3-다이하이드로-1,4-벤조다이옥신-6-일아미노)-1-메틸-벤즈이미다졸-4-일]사이클로프로판카복스아미드, 및N-[6-(2,3-dihydro-1,4-benzodioxin-6-ylamino)-1-methyl-benzimidazol-4-yl]cyclopropanecarboxamide, and
5-[7-[[(1R,2R)-2-플루오로사이클로프로판카보닐]아미노]-3-메틸-벤즈이미다졸-5-일]옥시-4-메틸-피리딘-2-카복스아미드.5-[7-[[(1R,2R)-2-fluorocyclopropanecarbonyl]amino]-3-methyl-benzimidazol-5-yl]oxy-4-methyl-pyridine-2-carboxamide .
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 화학식 I에 따르며, 여기에서 상기 화합물은 하기 중에서 선택된다:In one embodiment, a compound of the invention is according to Formula I, wherein said compound is selected from:
1-[6-[(6-시아노-4-메틸-3-피리딜)옥시]-1-메틸-벤즈이미다졸-4-일]-3-아이소프로필-우레아,1-[6-[(6-cyano-4-methyl-3-pyridyl)oxy]-1-methyl-benzimidazol-4-yl]-3-isopropyl-urea;
4-메틸-5-[3-메틸-7-(메틸아미노)벤즈이미다졸-5-일]옥시-피리딘-2-카보나이트릴,4-methyl-5-[3-methyl-7-(methylamino)benzimidazol-5-yl]oxy-pyridine-2-carbonitrile;
5-[7-(다이메틸아미노)-3-메틸-벤즈이미다졸-5-일]옥시-4-메틸-피리딘-2-카보나이트릴,5-[7-(dimethylamino)-3-methyl-benzimidazol-5-yl]oxy-4-methyl-pyridine-2-carbonitrile;
N-[6-[(6-시아노-4-메틸-3-피리딜)옥시]-1-메틸-벤즈이미다졸-4-일]-3-하이드록시-아제티딘-1-카복스아미드,N-[6-[(6-Cyano-4-methyl-3-pyridyl)oxy]-1-methyl-benzimidazol-4-yl]-3-hydroxy-azetidine-1-carboxamide ,
N-[6-[(6-시아노-4-메틸-3-피리딜)옥시]-1-메틸-벤즈이미다졸-4-일]모폴린-4-카복스아미드, 및N-[6-[(6-cyano-4-methyl-3-pyridyl)oxy]-1-methyl-benzimidazol-4-yl]morpholine-4-carboxamide, and
1-[6-[(6-시아노-4-메틸-3-피리딜)옥시]-1-메틸-벤즈이미다졸-4-일]-3-아이소프로필-우레아.1-[6-[(6-cyano-4-methyl-3-pyridyl)oxy]-1-methyl-benzimidazol-4-yl]-3-isopropyl-urea.
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 화학식 I에 따르며, 여기에서 상기 화합물은 N-[6-[(6-시아노-4-메틸-3-피리딜)옥시]-1-메틸-벤즈이미다졸-4-일]-2-플루오로-사이클로프로판카복스아미드이다. 보다 특정한 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 화학식 I에 따르며, 여기에서 상기 화합물은 (1R,2R)-N-[6-[(6-시아노-4-메틸-3-피리딜)옥시]-1-메틸-벤즈이미다졸-4-일]-2-플루오로-사이클로프로판카복스아미드이다.In one embodiment, a compound of the invention is according to formula I, wherein said compound is N-[6-[(6-cyano-4-methyl-3-pyridyl)oxy]-1-methyl-benz imidazol-4-yl]-2-fluoro-cyclopropanecarboxamide. In a more specific embodiment, a compound of the invention conforms to Formula I, wherein said compound is (1R,2R)-N-[6-[(6-cyano-4-methyl-3-pyridyl)oxy] -1-methyl-benzimidazol-4-yl]-2-fluoro-cyclopropanecarboxamide.
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 화학식 I에 따르며, 여기에서 상기 화합물은 N-[6-[(6-시아노-4-메틸-3-피리딜)옥시]-1-메틸-벤즈이미다졸-4-일]-2-플루오로-사이클로프로판카복스아미드가 아니다. 보다 특정한 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 화학식 I에 따르며, 여기에서 상기 화합물은 (1R,2R)-N-[6-[(6-시아노-4-메틸-3-피리딜)옥시]-1-메틸-벤즈이미다졸-4-일]-2-플루오로-사이클로프로판카복스아미드가 아니다.In one embodiment, a compound of the invention is according to formula I, wherein said compound is N-[6-[(6-cyano-4-methyl-3-pyridyl)oxy]-1-methyl-benz imidazol-4-yl]-2-fluoro-cyclopropanecarboxamide. In a more specific embodiment, a compound of the invention conforms to Formula I, wherein said compound is (1R,2R)-N-[6-[(6-cyano-4-methyl-3-pyridyl)oxy] -1-methyl-benzimidazol-4-yl]-2-fluoro-cyclopropanecarboxamide.
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 화학식 I에 따르며, 여기에서 상기 화합물은 N-(6-((6-시아노-4-메틸피리딘-3-일)(메틸)아미노)-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-4-일)-2-플루오로사이클로프로판카복스아미드이다. 보다 특정한 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 화학식 I에 따르며, 여기에서 상기 화합물은 (1R,2R)-N-(6-((6-시아노-4-메틸피리딘-3-일)(메틸)아미노)-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-4-일)-2-플루오로사이클로프로판카복스아미드이다.In one embodiment, a compound of the invention is according to Formula I, wherein said compound is N-(6-((6-cyano-4-methylpyridin-3-yl)(methyl)amino)-1- methyl-1H-benzo[d]imidazol-4-yl)-2-fluorocyclopropanecarboxamide. In a more specific embodiment, a compound of the invention conforms to Formula I, wherein said compound is (1R,2R)-N-(6-((6-cyano-4-methylpyridin-3-yl)(methyl )amino)-1-methyl-1H-benzo[d]imidazol-4-yl)-2-fluorocyclopropanecarboxamide.
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 화학식 I에 따르며, 여기에서 상기 화합물은 N-(6-((6-시아노-4-메틸피리딘-3-일)(메틸)아미노)-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-4-일)-2-플루오로사이클로프로판카복스아미드가 아니다. 보다 특정한 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 화학식 I에 따르며, 여기에서 상기 화합물은 (1R,2R)-N-(6-((6-시아노-4-메틸피리딘-3-일)(메틸)아미노)-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-4-일)-2-플루오로사이클로프로판카복스아미드가 아니다.In one embodiment, a compound of the invention is according to Formula I, wherein said compound is N-(6-((6-cyano-4-methylpyridin-3-yl)(methyl)amino)-1- Not methyl-1H-benzo[d]imidazol-4-yl)-2-fluorocyclopropanecarboxamide. In a more specific embodiment, a compound of the invention conforms to Formula I, wherein said compound is (1R,2R)-N-(6-((6-cyano-4-methylpyridin-3-yl)(methyl )amino)-1-methyl-1H-benzo[d]imidazol-4-yl)-2-fluorocyclopropanecarboxamide.
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물은 동위원소 변체가 아니다.In one embodiment, the compounds of the invention are not isotopic variants.
하나의 태양에서 본 발명에 개시된 실시태양들 중 어느 하나에 따른 본 발명의 화합물은 유리 염기로서 존재한다.In one aspect, a compound of the invention according to any one of the embodiments disclosed herein exists as a free base.
하나의 태양에서 본 발명에 개시된 실시태양들 중 어느 하나에 따른 본 발명의 화합물은 약학적으로 허용 가능한 염이다.In one aspect, a compound of the invention according to any one of the embodiments disclosed herein is a pharmaceutically acceptable salt.
하나의 태양에서 본 발명에 개시된 실시태양들 중 어느 하나에 따른 본 발명의 화합물은 상기 화합물의 용매화물이다.In one aspect, a compound of the invention according to any one of the embodiments disclosed herein is a solvate of said compound.
하나의 태양에서 본 발명에 개시된 실시태양들 중 어느 하나에 따른 본 발명의 화합물은 화합물의 약학적으로 허용 가능한 염의 용매화물이다.In one aspect, a compound of the invention according to any one of the embodiments disclosed herein is a solvate of a pharmaceutically acceptable salt of the compound.
각 실시태양의 명시된 그룹들을 별도로 상기에 일반적으로 나열하였지만, 본 발명의 화합물은 상기 화학식뿐만 아니라 본 발명에 제공된 다른 화학식들의 다수의 또는 각각의 실시태양이 각각의 변수에 대해서 각각 나타낸 특정한 구성원 또는 그룹들 중 하나 이상으로부터 선택된 것이다. 따라서, 본 발명은 그의 범위내에 상기와 같은 실시태양들의 모든 조합을 포함하고자 한다.Although the specified groups of each embodiment are separately and generally listed above, the compounds of the present invention are those specific members or groups each represented for each variable in multiple or individual embodiments of the formulas above as well as other formulas provided herein. is selected from one or more of these. Accordingly, the present invention is intended to include within its scope all combinations of such embodiments.
각 실시태양에 대해 명시된 그룹들을 상기에 별도로 일반적으로 나열하였지만, 본 발명의 화합물은 하나 이상의 변수(예를 들어 R 기)가 상기 나열된 화학식(들) 중 어느 하나에 따른 하나 이상의 실시태양들 중에서 선택된 것일 수 있다. 따라서, 본 발명은 그의 범위내에 개시된 실시태양들 중 어느 하나로부터의 변수들의 모든 조합을 포함하고자 한다.Although groups specified for each embodiment are generally listed separately above, compounds of the present invention wherein one or more variables (eg R groups) are selected from among one or more embodiments according to any one of the formula(s) listed above. it could be Accordingly, the present invention is intended to include within its scope all combinations of variables from any one of the disclosed embodiments.
한편으로, 그룹 또는 실시태양으로부터의 명시된 변수들 중 하나 이상, 또는 이들의 조합의 제외도 또한 본 발명에 의해 고려된다.Alternatively, the exclusion of one or more of the specified variables, or combinations thereof, from a group or embodiment is also contemplated by the present invention.
몇몇 태양에서, 본 발명은 상기 화학식들에 따른 화합물들의 전구약물 및 유도체를 제공한다. 전구약물은 대사적으로 절단가능한 그룹을 가지며 용매분해에 의해서 또는 생리학적 조건하에서 본 발명의 화합물로 되는, 생체내에서 약학적으로 활성인 본 발명 화합물의 유도체이다. 상기와 같은 예는 비제한적으로 콜린 에스터 유도체 등, N-알킬모폴린 에스터 등을 포함한다.In some embodiments, the present invention provides prodrugs and derivatives of compounds according to the formulas above. A prodrug is a derivative of a compound of the present invention that is pharmacologically active in vivo that has a metabolically cleavable group and which yields the compound of the present invention by solvolysis or under physiological conditions. Such examples include, but are not limited to, choline ester derivatives and the like, N-alkylmorpholine esters and the like.
본 발명 화합물의 다른 유도체는 상기 화합물의 산 및 산 유도체 형태 모두에서 활성을 갖지만, 종종 산 민감성 형태가 용해도, 조직 적합성, 또는 포유동물 유기체에서 지연된 방출의 이점을 제공한다(Bundgard H, 1985). 전구약물은 당해 분야의 전문가들에게 널리 공지된 산 유도체, 예를 들어 모산과 적합한 알콜과의 반응에 의해 제조된 에스터, 또는 모산 화합물과 치환되거나 비치환된 아민과의 반응에 의해 제조된 아미드, 또는 산 무수물, 또는 혼합된 무수물을 포함한다. 본 발명의 화합물에 대해 펜던트인 산성 기로부터 유도된 간단한 지방족 또는 방향족 에스터, 아미드 및 무수물이 바람직한 전구약물이다. 일부의 경우에 이중 에스터 유형의 전구약물, 예를 들어 (아실옥시)알킬 에스터 또는 ((알콕시카보닐)옥시)알킬에스터를 제조하는 것이 바람직하다. 본 발명의 화합물의 C1 내지 C8 알킬, C2-C8 알케닐, 아릴, C7-C12 치환된 아릴, 및 C7-C12 아릴알킬 에스터가 특히 유용하다.Other derivatives of the compounds of the present invention are active in both acid and acid derivative forms of the compounds, but often the acid-sensitive forms provide the advantages of solubility, tissue compatibility, or delayed release in mammalian organisms (Bundgard H, 1985). Prodrugs are acid derivatives well known to those skilled in the art, such as esters prepared by the reaction of the parent acid with a suitable alcohol, or amides prepared by the reaction of the parent acid compound with a substituted or unsubstituted amine; or acid anhydrides, or mixed anhydrides. Simple aliphatic or aromatic esters, amides and anhydrides derived from acidic groups pendant to the compounds of this invention are preferred prodrugs. In some cases it is desirable to prepare prodrugs of the double ester type, for example (acyloxy)alkyl esters or ((alkoxycarbonyl)oxy)alkylesters. C 1 to C 8 alkyl, C 2 -C 8 alkenyl, aryl, C 7 -C 12 substituted aryl, and C 7 -C 12 arylalkyl esters of the compounds of the present invention are particularly useful.
조항article
1) 하기 화학식 I에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 용매화물, 또는 상기 약학적으로 허용 가능한 염의 용매화물:1) A compound according to Formula I, or a pharmaceutically acceptable salt or solvate, or a solvate of said pharmaceutically acceptable salt:
화학식 IFormula I
상기 식에서,In the above formula,
R1은 H 또는 Me이고;R 1 is H or Me;
L1은 -NR2-; -O- 또는 -CH2-이고;L 1 is -NR 2 -; -O- or -CH 2 -;
Cy는 페닐, 또는 N, O 및 S 중에서 독립적으로 선택된 1 내지 4개의 헤테로원자를 포함하는 5 내지 9원 모노사이클릭 또는 축합된 바이사이클릭 헤테로아릴이고;Cy is phenyl or a 5 to 9 membered monocyclic or fused bicyclic heteroaryl containing 1 to 4 heteroatoms independently selected from N, O and S;
R2는 H 또는 C1-4 알킬이고;R 2 is H or C 1-4 alkyl;
R3은 H, 할로, 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C1-4 알킬, 또는 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C1-4 알콕시이고;R 3 is H, halo, C 1-4 alkyl optionally substituted with one or more halo, or C 1-4 alkoxy optionally substituted with one or more halo;
R4는 H 또는 할로이고;R 4 is H or halo;
R5는 -CN, 할로이거나, 또는 -L2-R6이고;R 5 is -CN, halo, or -L 2 -R 6 ;
-L2는 존재하지 않거나, 또는 -C(=O)-, -C(=O)NR7-, -NR7C(=O)-, -SO2-, -SO2NR7-, 또는 -NR7SO2-이고;-L 2 is absent, or -C(=O)-, -C(=O)NR 7 -, -NR 7 C(=O)-, -SO 2 -, -SO 2 NR 7 -, or -NR 7 SO 2 -;
R6은 H, 또는 하나 이상의 독립적으로 선택된 R8 기로 임의로 치환된 C1-6 알킬이고;R 6 is H or C 1-6 alkyl optionally substituted with one or more independently selected R 8 groups;
R7은 H 또는 C1-4 알킬이고;R 7 is H or C 1-4 alkyl;
R8은 OH, CN, 할로 또는 C1-4 알콕시이고;R 8 is OH, CN, halo or C 1-4 alkoxy;
La는 존재하지 않거나, 또는 -C(=O)-, -C(=O)O- 또는 -C(=O)NH-이고;L a is absent or -C(=0)-, -C(=0)0- or -C(=0)NH-;
Ra는R a is
- H,-H,
- 하나 이상의 독립적으로 선택된 Rb로 임의로 치환된 C1-4 알킬,- C 1-4 alkyl optionally substituted with one or more independently selected R b ,
- 하나 이상의 독립적으로 선택된 Rc로 임의로 치환된 C3-7 모노사이클릭 사이클로알킬, 또는- C 3-7 monocyclic cycloalkyl optionally substituted with one or more independently selected R c , or
- O, N 및 S 중에서 독립적으로 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 포함하는 4 내지 7원 모노사이클릭 헤테로사이클로알킬, 또는- 4 to 7 membered monocyclic heterocycloalkyl containing one or more heteroatoms independently selected from O, N and S, or
- O, N 및 S 중에서 독립적으로 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 포함하는 5 내지 6원 모노사이클릭 헤테로아릴이고;- a 5 to 6 membered monocyclic heteroaryl containing at least one heteroatom independently selected from O, N and S;
Rb는 Rb is
- 할로,- halo,
- CN,-CN,
- OH,-OH,
- C1-4 알콕시,- C 1-4 alkoxy;
- C3-7 사이클로알킬,- C 3-7 cycloalkyl,
- O, N 및 S 중에서 독립적으로 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 포함하는 4 내지 7원 모노사이클릭 헤테로사이클로알킬(상기 헤테로사이클로알킬은 하나 이상의 독립적으로 선택된 할로, 또는 옥소로 임의로 치환된다),- 4 to 7 membered monocyclic heterocycloalkyl containing one or more heteroatoms independently selected from O, N and S, wherein said heterocycloalkyl is optionally substituted with one or more independently selected halo or oxo;
- -SO2-C1-4 알킬, 또는- -SO 2 -C 1-4 alkyl, or
- -C(=O)NRb1Rb2이고- -C(=O)NR b1 R b2 and
Rc는R c is
- 할로,- halo,
- CN,-CN,
- OH,-OH,
- C1-4 알킬,- C 1-4 alkyl;
- -C(=O)OH, 또는- -C(=O)OH, or
- -C(=O)NRc1Rc2이고;- -C(=0)NR c1 R c2 ;
각각의 Rb1, Rb2, Rc1 및 Rc2는 H 및 C1-4 알킬 중에서 독립적으로 선택된다.Each of R bi , R b2 , R c1 and R c2 is independently selected from H and C 1-4 alkyl.
2) 1항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, R1은 Me이다.2) In the compound or pharmaceutically acceptable salt according to item 1, R 1 is Me.
3) 1항 또는 2항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, Cy는 페닐이다.3) In the compound or pharmaceutically acceptable salt according to item 1 or item 2, Cy is phenyl.
4) 1항 또는 2항에 따른 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염에서, Cy는 N, O 및 S 중에서 독립적으로 선택된 1 내지 4개의 헤테로원자를 포함하는 5 내지 9원 모노사이클릭 또는 축합된 바이사이클릭 헤테로아릴이다.4) In the compound according to 1 or 2 or a pharmaceutically acceptable salt thereof, Cy is a 5- to 9-membered monocyclic or condensed fused ring containing 1 to 4 heteroatoms independently selected from N, O and S It is a bicyclic heteroaryl.
5) 1항 또는 2항에 따른 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염에서, 5 내지 6원 모노사이클릭 헤테로아릴은 N, O 및 S 중에서 독립적으로 선택된 1 내지 4개의 헤테로원자를 포함한다.5) In the compound according to item 1 or item 2 or a pharmaceutically acceptable salt thereof, the 5- to 6-membered monocyclic heteroaryl contains 1 to 4 heteroatoms independently selected from N, O and S.
6) 1항 또는 2항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, Cy는 피리딜이다.6) In the compound or pharmaceutically acceptable salt according to item 1 or item 2, Cy is pyridyl.
7) 1항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, 상기 화합물은 하기 화학식 IIa, IIb 또는 IIc에 따른다: 7) A compound or pharmaceutically acceptable salt according to item 1, wherein said compound conforms to the following formulas IIa, IIb or IIc:
[화학식 IIa] [화학식 IIb] [화학식 IIc] [Formula IIa] [Formula IIb] [Formula IIc]
상기 식들에서, L1, R3, R4, La, Ra 및 R5는 1항에 개시된 바와 같다.In the above formulas, L 1 , R 3 , R 4 , L a , R a and R 5 are as described in item 1.
8) 1항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, 상기 화합물은 하기 화학식 IIIa, IIIb 또는 IIIc에 따른다:8) The compound or pharmaceutically acceptable salt according to item 1, wherein the compound conforms to the following formula IIIa, IIIb or IIIc:
[화학식 IIIa] [화학식 IIIb] [화학식 IIIc] [Formula IIIa] [Formula IIIb] [Formula IIIc]
상기 식들에서, L1, R3, R4, La, Ra 및 R5는 1항에 개시된 바와 같다.In the above formulas, L 1 , R 3 , R 4 , L a , R a and R 5 are as described in item 1.
9) 1항 내지 8항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, L1은 -CH2-이다.9) In the compound or pharmaceutically acceptable salt according to any one of items 1 to 8, L 1 is -CH 2 -.
10) 1항 내지 8항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, L1은 O이다.10) In the compound or pharmaceutically acceptable salt according to any one of items 1 to 8, L 1 is O.
11) 1항 내지 8항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, L1은 -NR2-이다.11) In the compound or pharmaceutically acceptable salt according to any one of items 1 to 8, L 1 is -NR 2 -.
12) 11항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, R2는 H이다.12) In the compound or pharmaceutically acceptable salt according to item 11, R 2 is H.
13) 11항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, R2는 C1-4 알킬이다.13) In the compound or pharmaceutically acceptable salt according to item 11, R 2 is C 1-4 alkyl.
14) 11항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, R2는 Me이다.14) In the compound or pharmaceutically acceptable salt according to item 11, R 2 is Me.
15) 1항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, 상기 화합물은 하기 화학식 IVa, IVb, IVc, IVd, IVe 또는 IVf에 따른다:15) A compound or pharmaceutically acceptable salt according to item 1, wherein said compound conforms to the following formulas IVa, IVb, IVc, IVd, IVe or IVf:
[화학식 IVa] [화학식 IVb] [화학식 IVc] [Formula IVa] [Formula IVb] [Formula IVc]
[화학식 IVd] [화학식 IVe] [화학식 IVf] [Formula IVd] [Formula IVe] [Formula IVf]
상기 식들에서, R3, R4, R5, La 및 Ra는 1항에 개시된 바와 같다.In the above formulas, R 3 , R 4 , R 5 , L a and R a are as described in item 1.
16) 1항 내지 15항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, La는 존재하지 않는다.16) In the compound or pharmaceutically acceptable salt according to any one of items 1 to 15, L a is absent.
17) 1항 내지 15항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, La는 -C(=O)-이다.17) In the compound or pharmaceutically acceptable salt according to any one of items 1 to 15, L a is -C(=O)-.
18) 1항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, 상기 화합물은 하기 화학식 Va, Vb, Vc, Vd, Ve 또는 Vf에 따른다:18) A compound or pharmaceutically acceptable salt according to item 1, wherein said compound conforms to the following formulas Va, Vb, Vc, Vd, Ve or Vf:
[화학식 Va] [화학식 Vb] [화학식 Vc] [Formula Va] [Formula Vb] [Formula Vc]
[화학식 Vd] [화학식 Ve] [화학식 Vf] [Formula Vd] [Formula Ve] [Formula Vf]
상기 식들에서, R3, R4, R5, La 및 Ra는 1항에 개시된 바와 같다.In the above formulas, R 3 , R 4 , R 5 , L a and R a are as described in item 1.
19) 1항 내지 18항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, R4는 H이다.19) In the compound or pharmaceutically acceptable salt according to any one of items 1 to 18, R 4 is H.
20) 1항 내지 18항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, R4는 F 또는 Cl이다.20) In the compound or pharmaceutically acceptable salt according to any one of items 1 to 18, R 4 is F or Cl.
21) 1항 내지 18항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, R3은 H이다.21) In the compound or pharmaceutically acceptable salt according to any one of items 1 to 18, R 3 is H.
22) 1항 내지 18항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, R3은 C1- 4알킬이다. 22 ) In the compound or pharmaceutically acceptable salt according to any one of items 1 to 18, R 3 is C 1-4 alkyl.
23) 22항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, R3은 Me 또는 Et이다.23) In the compound or pharmaceutically acceptable salt according to item 22, R 3 is Me or Et.
24) 1항 내지 23항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, R5는 CN이다.24) In the compound or pharmaceutically acceptable salt according to any one of items 1 to 23, R 5 is CN.
25) 1항 내지 23항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, R5는 할로이다.25) A compound or pharmaceutically acceptable salt according to any one of items 1 to 23, wherein R 5 is halo.
26) 25항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, R5는 F 또는 Cl이다.26) In the compound or pharmaceutically acceptable salt according to item 25, R 5 is F or Cl.
27) 1항 내지 23항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, R5는 -L2-R6이고, R6은 1항에 개시된 바와 같고, L2는 -C(=O)NR7-, -NR7C(=O)-, -SO2NR7- 또는 -NR7SO2-이다.27) In the compound or pharmaceutically acceptable salt according to any one of items 1 to 23, R 5 is -L 2 -R 6 , R 6 is as described in item 1 and L 2 is -C( =O)NR 7 -, -NR 7 C(=O)-, -SO 2 NR 7 - or -NR 7 SO 2 -.
28) 27항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, R7은 H이다.28) In the compound or pharmaceutically acceptable salt according to item 27, R 7 is H.
29) 1항 내지 23항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, R5는 -L2-R6이고, L2는 1항에 개시된 바와 같고, R6은 H이다.29) In the compound or pharmaceutically acceptable salt according to any one of items 1 to 23, R 5 is -L 2 -R 6 , L 2 is as described in item 1 and R 6 is H.
30) 1항 내지 26항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, R5는 -L2-R6이고, L2는 1항에 개시된 바와 같고, R6은 C1- 6알킬이다.30) In the compound or pharmaceutically acceptable salt according to any one of items 1 to 26, R 5 is -L 2 -R 6 , L 2 is as described in item 1 and R 6 is C 1- 6 alkyl.
31) 30항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, R6은 Me이다.31) In the compound or pharmaceutically acceptable salt according to item 30, R 6 is Me.
32) 1항 내지 23항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, R5는 -L2-R6이고, L2는 1항에 개시된 바와 같고, R6은 하나 이상의 독립적으로 선택된 R8기로 치환된 C1- 6알킬이다.32) In the compound or pharmaceutically acceptable salt according to any one of items 1 to 23, R 5 is -L 2 -R 6 , L 2 is as described in item 1 and R 6 is one or more independent is C 1-6 alkyl substituted with an R 8 group selected from .
33) 32항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, R6은 Me, Et, iPr 또는 tBu이고, 이들은 각각 하나 이상의 독립적으로 선택된 R8 기로 치환된다. 33) The compound or pharmaceutically acceptable salt according to item 32, wherein R 6 is Me, Et, iPr or tBu, each of which is substituted with one or more independently selected R 8 groups.
34) 33항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, R8은 OH, CN, F, Cl, -OMe 또는 -OEt이다.34) In the compound or pharmaceutically acceptable salt according to item 33, R 8 is OH, CN, F, Cl, -OMe or -OEt.
35) 1항 내지 23항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, R5는 -L2-R6이고, L2는 -C(=O)- 또는 -SO2-이고, R6은 C1- 6알킬이다.35) In the compound or pharmaceutically acceptable salt according to any one of items 1 to 23, R 5 is -L 2 -R 6 , L 2 is -C(=O)- or -SO 2 - and , R 6 is C 1-6 alkyl.
36) 35항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, R5는 -C(=O)Me, -C(=O)Et, -SO2Me 또는 -SO2Et이다.36) In the compound or pharmaceutically acceptable salt according to item 35, R 5 is -C(=0)Me, -C(=0)Et, -SO 2 Me or -SO 2 Et.
37) 1항 내지 23항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, R5는 -L2-R6이고, L2는 -C(=O)NR7-, -NR7C(=O)-, -SO2NR7- 또는 -NR7SO2-이고, R7은 H, Me 또는 Et이고, R6은 Me, Et, iPr 또는 tBu이고, 이들은 각각 하나 이상의 독립적으로 선택된 OH, CN, 할로 또는 C1- 4알콕시로 임의로 치환된다.37) In the compound or pharmaceutically acceptable salt according to any one of items 1 to 23, R 5 is -L 2 -R 6 and L 2 is -C(=O)NR 7 -, -NR 7 C(=0)-, -SO 2 NR 7 - or -NR 7 SO 2 -, R 7 is H, Me or Et, R 6 is Me, Et, iPr or tBu, each of which is independently one or more optionally substituted with selected OH , CN, halo or C 1-4 alkoxy.
38) 37항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, R5는 -C(=O)NH2 또는 -SO2NH2이다.38) In the compound or pharmaceutically acceptable salt according to item 37, R 5 is -C(=O)NH 2 or -SO 2 NH 2 .
39) 1항 내지 38항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, Ra는 C1- 4알킬이다. 39 ) In the compound or pharmaceutically acceptable salt according to any one of items 1 to 38, R a is C 1-4 alkyl.
40) 39항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, Ra는 Me 또는 Et이다.40) In the compound or pharmaceutically acceptable salt according to item 39, R a is Me or Et.
41) 1항 내지 38항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, Ra는 하나 이상의 독립적으로 선택된 Rb로 치환된 C1- 4알킬이다.41) The compound or pharmaceutically acceptable salt according to any one of items 1 to 38, wherein R a is C 1-4 alkyl substituted with one or more independently selected R b .
42) 41항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, Ra는 Me, Et, iPr 또는 tBu이다.42) In the compound or pharmaceutically acceptable salt according to item 41, R a is Me, Et, iPr or tBu.
43) 41항 또는 42항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, Rb는 F, Cl, CN 또는 OH이다.43) In the compound or pharmaceutically acceptable salt according to item 41 or item 42, R b is F, Cl, CN or OH.
44) 41항 또는 42항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, Rb는 OMe, OEt 또는 OiPr이다.44) In the compound or pharmaceutically acceptable salt according to item 41 or item 42, R b is OMe, OEt or OiPr.
45) 41항 또는 42항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, Rb는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸 또는 사이클로헥실이다. 45) The compound or pharmaceutically acceptable salt according to item 41 or 42, wherein R b is cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl or cyclohexyl.
46) 41항 또는 42항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, Rb는 옥세타닐, 테트라하이드로퓨라닐, 테트라하이드로피라닐, 아제티디닐, 피롤리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 모폴리닐 또는 티오모폴리닐이다.46) In the compound or pharmaceutically acceptable salt according to item 41 or item 42, R b is oxetanyl, tetrahydrofuranyl, tetrahydropyranyl, azetidinyl, pyrrolidinyl, piperidinyl, pipera zinyl, morpholinyl or thiomorpholinyl.
47) 41항 또는 42항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, Rb는 옥세타닐, 테트라하이드로퓨라닐, 테트라하이드로피라닐, 아제티디닐, 피롤리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 모폴리닐 또는 티오모폴리닐이고, 이들은 각각 하나 이상의 독립적으로 선택된 할로 또는 옥소로 치환된다. 47) In the compound or pharmaceutically acceptable salt according to item 41 or item 42, R b is oxetanyl, tetrahydrofuranyl, tetrahydropyranyl, azetidinyl, pyrrolidinyl, piperidinyl, pipera zinyl, morpholinyl or thiomorpholinyl, each substituted with one or more independently selected halo or oxo.
48) 41항 또는 42항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, Rb는 -SO2CH3, 또는 -SO2CH2CH3이다.48) In the compound or pharmaceutically acceptable salt according to item 41 or 42, R b is -SO 2 CH 3 , or -SO 2 CH 2 CH 3 .
49) 41항 또는 42항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, Rb는 -C(=O)NH2, -C(=O)NMeH, 또는 -C(=O)NMe2이다.49) The compound or pharmaceutically acceptable salt according to item 41 or 42, wherein R b is -C(=0)NH 2 , -C(=0)NMeH, or -C(=0)NMe 2 .
50) 1항 내지 38항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, Ra는 C3-7 모노사이클릭 사이클로알킬이다.50) In the compound or pharmaceutically acceptable salt according to any one of items 1 to 38, R a is C 3-7 monocyclic cycloalkyl.
51) 1항 내지 38항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, Ra는 하나 이상의 독립적으로 선택된 Rc 기로 치환된 C3-7 모노사이클릭 사이클로알킬이다.51) The compound or pharmaceutically acceptable salt according to any one of items 1 to 38, wherein R a is C 3-7 monocyclic cycloalkyl substituted with one or more independently selected R c groups.
52) 50항 또는 51항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, Ra는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 또는 사이클로펜틸이다.52) The compound or pharmaceutically acceptable salt according to item 50 or 51, wherein R a is cyclopropyl, cyclobutyl, or cyclopentyl.
53) 51항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, Rc는 F, Cl, CN 또는 OH이다. 53) In the compound or pharmaceutically acceptable salt according to item 51, R c is F, Cl, CN or OH.
54) 51항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, Rc는 -Me, -Et 또는 -iPr이다. 54) In the compound or pharmaceutically acceptable salt according to item 51, R c is -Me, -Et or -iPr.
55) 51항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, Rc는 -C(=O)OH이다.55) In the compound or pharmaceutically acceptable salt according to item 51, R c is -C(=0)OH.
56) 51항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, Rc는 -C(=O)NH2, -C(=O)NMeH, 또는 -C(=O)NMe2이다.56) The compound or pharmaceutically acceptable salt according to item 51, wherein R c is -C(=0)NH 2 , -C(=0)NMeH, or -C(=0)NMe 2 .
57) 1항 내지 38항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, Ra는 57) In the compound or pharmaceutically acceptable salt according to any one of items 1 to 38, R a is
이다.am.
58) 1항 내지 38항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, Ra는 58) In the compound or pharmaceutically acceptable salt according to any one of items 1 to 38, R a is
이다.am.
59) 1항 내지 38항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, Ra는 O, N 및 S 중에서 독립적으로 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 포함하는 4 내지 7원 모노사이클릭 헤테로사이클로알킬이다.59) In the compound or pharmaceutically acceptable salt according to any one of items 1 to 38, R a is a 4 to 7 membered monocyclic heteroatom containing one or more heteroatoms independently selected from O, N and S It is cycloalkyl.
60) 59항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, Ra는 옥세타닐, 테트라하이드로퓨라닐, 테트라하이드로피라닐, 아제티디닐, 피롤리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 모폴리닐 또는 티오모폴리닐이다.60) In the compound or pharmaceutically acceptable salt according to item 59, R a is oxetanyl, tetrahydrofuranyl, tetrahydropyranyl, azetidinyl, pyrrolidinyl, piperidinyl, piperazinyl, polynyl or thiomorpholinyl.
61) 1항 내지 38항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, Ra는 O, N 및 S 중에서 독립적으로 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 포함하는 5 내지 6원 모노사이클릭 헤테로아릴이다.61) In the compound or pharmaceutically acceptable salt according to any one of items 1 to 38, R a is a 5 to 6 membered monocyclic heteroatom containing one or more heteroatoms independently selected from O, N and S it is aryl
62) 61항에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염에서, Ra는 퓨라닐, 티에닐, 피롤릴, 옥사졸릴, 티아졸릴, 이미다졸릴, 트라이아졸릴, 옥사다이아졸릴, 테트라졸, 피리디닐, 피라지닐 또는 피리미디닐이다.62) In the compound or pharmaceutically acceptable salt according to item 61, R a is furanyl, thienyl, pyrrolyl, oxazolyl, thiazolyl, imidazolyl, triazolyl, oxadiazolyl, tetrazole, pyr dinyl, pyrazinyl or pyrimidinyl.
63) 1항에 따른 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염에서, 상기 화합물은 표 I 중에서 선택된다.63) The compound according to item 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein said compound is selected from Table I.
64) 1항에 따른 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염에서, 상기 화합물은 (1R,2R)-N-[6-[(6-시아노-4-메틸-3-피리딜)옥시]-1-메틸-벤즈이미다졸-4-일]-2-플루오로-사이클로프로판카복스아미드이다.64) The compound according to item 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein the compound is (1R,2R)-N-[6-[(6-cyano-4-methyl-3-pyridyl)oxy]- 1-methyl-benzimidazol-4-yl]-2-fluoro-cyclopropanecarboxamide.
65) 1항에 따른 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염에서, 상기 화합물은 (1R,2R)-N-[6-[(6-시아노-4-메틸-3-피리딜)옥시]-1-메틸-벤즈이미다졸-4-일]-2-플루오로-사이클로프로판카복스아미드가 아니다.65) The compound according to item 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein the compound is (1R,2R)-N-[6-[(6-cyano-4-methyl-3-pyridyl)oxy]- 1-methyl-benzimidazol-4-yl]-2-fluoro-cyclopropanecarboxamide.
66) 1항에 따른 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염에서, 66) In the compound according to item 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof,
상기 화합물은 (1R,2R)-N-(6-((6-시아노-4-메틸피리딘-3-일)(메틸)아미노)-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-4-일)-2-플루오로사이클로프로판카복스아미드이다.The compound is (1R,2R)-N-(6-((6-cyano-4-methylpyridin-3-yl)(methyl)amino)-1-methyl-1H-benzo[d]imidazole-4 -yl)-2-fluorocyclopropanecarboxamide.
67) 1항에 따른 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염에서, 상기 화합물은 (1R,2R)-N-(6-((6-시아노-4-메틸피리딘-3-일)(메틸)아미노)-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-4-일)-2-플루오로사이클로프로판카복스아미드가 아니다.67) The compound according to item 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein the compound is (1R,2R)-N-(6-((6-cyano-4-methylpyridin-3-yl)(methyl) Amino)-1-methyl-1H-benzo[d]imidazol-4-yl)-2-fluorocyclopropanecarboxamide.
68) 약학적으로 허용 가능한 담체 및 약학적으로 유효한 양의 1항 내지 67항 중 어느 한 항에 따른 화합물을 포함하는 약학 조성물.68) A pharmaceutical composition comprising a pharmaceutically acceptable carrier and a pharmaceutically effective amount of a compound according to any one of items 1 to 67.
69) 추가의 치료제를 포함하는 68항에 따른 약학 조성물.69) The pharmaceutical composition according to item 68 comprising an additional therapeutic agent.
70) 약제에 사용하기 위한, 1항 내지 67항 중 어느 한 항에 따른 화합물, 또는 68항 또는 69항에 따른 약학 조성물.70) A compound according to any one of items 1 to 67, or a pharmaceutical composition according to item 68 or 69, for use in medicine.
71) 알러지성 질병, 염증 질병, 자가면역 질병, 증식성 질병, 이식 거부, 연골 턴오버의 장애를 수반하는 질병, 선천성 연골 기형, 및/또는 IL6의 분비과잉 또는 인터페론의 분비과잉과 관련된 질병의 치료 또는 예방에 사용하기 위한, 1항 내지 67항 중 어느 한 항에 따른 화합물, 또는 68항 또는 69항에 따른 약학 조성물.71) Allergic diseases, inflammatory diseases, autoimmune diseases, proliferative diseases, graft rejection, diseases involving disorders of cartilage turnover, congenital cartilage malformations, and/or diseases associated with hypersecretion of IL6 or hypersecretion of interferon A compound according to any one of claims 1 to 67, or a pharmaceutical composition according to claims 68 or 69, for use in treatment or prophylaxis.
72) 증식성 질병의 치료 또는 예방에 사용하기 위한, 1항 내지 67항 중 어느 한 항에 따른 화합물, 또는 68항 또는 69항에 따른 약학 조성물.72) A compound according to any one of items 1 to 67, or a pharmaceutical composition according to item 68 or 69, for use in the treatment or prevention of a proliferative disease.
73) 72항에 따른 화합물에서, 증식성 질병은 골수섬유증, T-세포 급성 림프모구성 백혈병(T-ALL), 다발성 골수종, 만성 림프모구성 백혈병(CLL), 확산성 큰 B-세포 림프종(DLBCL), 췌장암, 간암, 간세포 암종(HCC), 폐암, 유방암 및 결장암 중에서 선택된다.73) In the compound according to item 72, the proliferative disease is myelofibrosis, T-cell acute lymphoblastic leukemia (T-ALL), multiple myeloma, chronic lymphoblastic leukemia (CLL), diffuse large B-cell lymphoma ( DLBCL), pancreatic cancer, liver cancer, hepatocellular carcinoma (HCC), lung cancer, breast cancer and colon cancer.
74) 알러지성 질병, 염증 질병, 자가면역 질병, 증식성 질병, 이식 거부, 연골 턴오버의 장애를 수반하는 질병, 선천성 연골 기형, 및/또는 IL6의 분비과잉 또는 인터페론의 분비과잉과 관련된 질병의 치료 또는 예방을 수행하기에 충분한 양의 1항 내지 67항 중 어느 한 항에 따른 화합물, 또는 68항 또는 69항에 따른 약학 조성물을 투여함을 포함하는, 상기 질병의 치료 또는 예방 방법.74) Allergic diseases, inflammatory diseases, autoimmune diseases, proliferative diseases, graft rejection, diseases involving disorders of cartilage turnover, congenital cartilage malformations, and/or diseases associated with hypersecretion of IL6 or hypersecretion of interferon A method for treating or preventing said disease, comprising administering a compound according to any one of claims 1 to 67, or a pharmaceutical composition according to claim 68 or 69, in an amount sufficient to effect treatment or prevention.
75) 증식성 질병의 치료 또는 예방을 수행하기에 충분한 양의 1항 내지 67항 중 어느 한 항에 따른 화합물, 또는 68항 또는 69항에 따른 약학 조성물을 투여함을 포함하는, 상기 질병의 치료 또는 예방 방법.75) Treatment of a proliferative disease, comprising administering a compound according to any one of items 1 to 67, or a pharmaceutical composition according to item 68 or 69, in an amount sufficient to effect the treatment or prevention of said disease. or preventive methods.
76) 76항에 따른 치료 방법에서, 증식성 질병은 골수섬유증, T-세포 급성 림프모구성 백혈병(T-ALL), 다발성 골수종, 만성 림프모구성 백혈병(CLL), 확산성 큰 B-세포 림프종(DLBCL), 췌장암, 간암, 간세포 암종(HCC), 폐암, 유방암 및 결장암 중에서 선택된다.76) In the method of treatment according to item 76, the proliferative disease is myelofibrosis, T-cell acute lymphoblastic leukemia (T-ALL), multiple myeloma, chronic lymphoblastic leukemia (CLL), diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL), pancreatic cancer, liver cancer, hepatocellular carcinoma (HCC), lung cancer, breast cancer and colon cancer.
77) 75항 내지 77항 중 어느 한 항에 따른 방법에서, 1항 내지 67항 중 어느 한 항에 따른 화합물, 또는 68항 또는 69항에 따른 약학 조성물을 추가의 치료제와 함께 투여한다.77) In the method according to any one of items 75 to 77, the compound according to any one of items 1 to 67 or the pharmaceutical composition according to items 68 or 69 is administered together with an additional therapeutic agent.
78) 69항에 따른 약학 조성물, 또는 78항에 따른 방법에서, 추가의 치료제는 알러지성 질병, 염증 질병, 자가면역 질병, 증식성 질병, 이식 거부, 연골 턴오버의 장애를 수반하는 질병, 선천성 연골 기형, 및/또는 IL6의 분비과잉 또는 인터페론의 분비과잉과 관련된 질병의 치료 또는 예방을 위한 작용제이다.78) In the pharmaceutical composition according to item 69, or in the method according to item 78, the additional therapeutic agent is an allergic disease, an inflammatory disease, an autoimmune disease, a proliferative disease, transplant rejection, a disease involving disorders of cartilage turnover, congenital It is an agent for the treatment or prevention of a cartilage deformity, and/or a disease associated with hypersecretion of IL6 or hypersecretion of interferon.
79) 69항에 따른 약학 조성물, 또는 78항에 따른 방법에서, 추가의 치료제는 골수섬유증, T-세포 급성 림프모구성 백혈병(T-ALL), 다발성 골수종, 만성 림프모구성 백혈병(CLL), 확산성 큰 B-세포 림프종(DLBCL), 췌장암, 간암, 간세포 암종(HCC), 폐암, 유방암 및 결장암의 치료 또는 예방을 위한 작용제이다.79) The pharmaceutical composition according to item 69, or the method according to item 78, wherein the additional therapeutic agent is myelofibrosis, T-cell acute lymphoblastic leukemia (T-ALL), multiple myeloma, chronic lymphocytic leukemia (CLL), It is an agent for the treatment or prevention of diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL), pancreatic cancer, liver cancer, hepatocellular carcinoma (HCC), lung cancer, breast cancer and colon cancer.
약학 조성물pharmaceutical composition
본 발명의 화합물은 약제로서 사용될 때, 전형적으로는 약학 조성물의 형태로 투여된다. 상기와 같은 조성물은 제약 분야에 널리 공지된 방식으로 제조될 수 있으며 하나 이상의 화학식 I에 따른 본 발명의 활성 화합물을 포함한다. 일반적으로, 본 발명의 화합물을 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 실제 투여되는 화합물의 양은 전형적으로는 의사에 의해, 관련된 상황, 예를 들어 치료하려는 질환, 선택된 투여 경로, 실제 투여되는 화합물, 개인 환자의 연령, 체중 및 반응, 환자의 증상의 중증도 등에 비추어 결정될 것이다.When the compounds of the present invention are used as pharmaceuticals, they are typically administered in the form of pharmaceutical compositions. Such compositions may be prepared in a manner well known in the pharmaceutical art and comprise one or more active compounds of the present invention according to formula (I). Generally, a compound of the present invention is administered in a pharmaceutically effective amount. The amount of compound actually administered will typically be determined by the physician in light of the relevant circumstances, such as the disease being treated, the route of administration selected, the compound actually administered, the age, weight and response of the individual patient, the severity of the patient's symptoms, and the like. .
본 발명의 약학 조성물을 경구, 직장, 경피, 피하, 관절-내, 정맥 내, 근육 내 및 비 내를 포함한 다양한 경로에 의해 투여할 수 있다. 의도하는 전달 경로에 따라, 본 발명의 화합물을 바람직하게는 주사성 또는 경구 조성물로서 또는 연고로서, 로션으로서 또는 모든 경피 투여의 경우 패치로서 제형화한다.The pharmaceutical composition of the present invention can be administered by various routes including oral, rectal, transdermal, subcutaneous, intra-articular, intravenous, intramuscular and intranasal. Depending on the intended route of delivery, the compounds of the present invention are preferably formulated as injectable or oral compositions or as ointments, lotions or patches for all transdermal administration.
경구 투여용 조성물은 벌크 액체 용액 또는 현탁액, 또는 벌크 분말의 형태를 취할 수 있다. 그러나, 보다 통상적으로, 상기 조성물을 단위 투여형으로 제공하여 정확한 투여를 용이하게 한다. "단위 투여형"이란 용어는 인간 환자 및 다른 포유동물에 대해 단일 투여량으로서 적합한 물리적으로 분리된 단위를 지칭하며, 각각의 단위는 목적하는 치료 효과를 생성시키도록 계산된 소정량의 활성 물질을, 적합한 약학 부형제, 비히클 또는 담체와 함께 함유한다. 전형적인 단위 투여형은 액체 조성물의 미리 충전되거나, 미리 측정된 앰풀 또는 주사기 또는 고체 조성물의 경우에 환제, 정제, 캡슐 등을 포함한다. 상기와 같은 조성물에서, 화학식 I에 따른 본 발명의 화합물은 대개 소량 성분(약 0.1 내지 약 50 중량% 또는 바람직하게는 약 1 내지 약 40 중량%)이며, 나머지는 다양한 비히클 또는 담체 및 목적하는 투여형의 형성에 도움이 되는 가공 보조제이다.Compositions for oral administration may take the form of bulk liquid solutions or suspensions, or bulk powders. More commonly, however, the compositions are presented in unit dosage form to facilitate precise dosing. The term "dosage unit form" refers to physically discrete units suited as unitary dosages for human patients and other mammals, each unit containing a predetermined amount of active substance calculated to produce the desired therapeutic effect. , together with a suitable pharmaceutical excipient, vehicle or carrier. Typical unit dosage forms include prefilled or premeasured ampoules or syringes of liquid compositions or, in the case of solid compositions, pills, tablets, capsules, and the like. In such compositions, the compound of the present invention according to formula (I) is usually a minor component (from about 0.1 to about 50% by weight or preferably from about 1 to about 40% by weight), with the remainder in various vehicles or carriers and the desired dosage. It is a processing aid that helps mold formation.
경구 투여용으로 적합한 액체 형태는 완충제, 현탁 및 분배제, 착색제, 풍미제 등과 함께 적합한 수성 또는 비수성 비히클을 포함할 수 있다. 고체 형태는 예를 들어 하기의 성분들 중 임의의 것 또는 유사한 성질의 화합물을 포함할 수 있다: 결합제, 예를 들어 미정질 셀룰로스, 검 트라가칸트 또는 젤라틴; 부형제, 예를 들어 전분 또는 락토오스, 붕해제, 예를 들어 알긴산, 프리모젤, 또는 옥수수 전분; 윤활제, 예를 들어 마그네슘 스테아레이트; 활주제, 예를 들어 콜로이드성 이산화 규소; 감미제, 예를 들어 슈크로스 또는 사카린; 또는 풍미제, 예를 들어 페퍼민트, 메틸 살리실레이트, 또는 오렌지향.Liquid forms suitable for oral administration may include a suitable aqueous or non-aqueous vehicle, along with buffers, suspending and dispensing agents, coloring agents, flavoring agents and the like. A solid form may include, for example, any of the following ingredients or a compound of a similar nature: a binder such as microcrystalline cellulose, gum tragacanth or gelatin; excipients such as starch or lactose, disintegrants such as alginic acid, Primogel, or corn starch; lubricants such as magnesium stearate; glidants such as colloidal silicon dioxide; sweeteners such as sucrose or saccharin; or flavoring agents such as peppermint, methyl salicylate, or orange flavoring.
주사성 조성물은 전형적으로는 주사성 멸균 염수 또는 포스페이트-완충된 염수 또는 당해 분야에 공지된 다른 주사성 담체를 기본으로 한다. 이전과 같이, 상기와 같은 조성물 중의 화학식 I에 따른 본 발명의 활성 화합물은 전형적으로는 소량 성분(종종 약 0.05 내지 10 중량%)이며, 나머지는 주사성 담체 등이다.Injectable compositions are typically based on sterile injectable saline or phosphate-buffered saline or other injectable carriers known in the art. As before, the active compound of the present invention according to formula (I) in such compositions is typically a minor component (often about 0.05 to 10% by weight), the balance being the injectable carrier and the like.
경피 조성물을 전형적으로는 상기 활성 성분(들)을 일반적으로 약 0.01 내지 약 20 중량%, 바람직하게는 약 0.1 내지 약 20 중량%, 바람직하게는 약 0.1 내지 약 10 중량%, 및 보다 바람직하게는 약 0.5 내지 약 15 중량% 범위의 양으로 함유하는 국소 연고 또는 크림으로서 제형화한다. 연고로서 제형화 시, 상기 활성 성분을 전형적으로는 파라핀성 또는 수-혼화성 연고 베이스와 배합할 것이다. 한편으로, 상기 활성 성분을 예를 들어 수중 유적형 크림 베이스와 함께 크림으로 제형화할 수도 있다. 상기와 같은 경피 제형은 당해 분야에 널리 공지되어 있으며 일반적으로는 상기 활성 성분 또는 상기 제형의 피부 침투 안정성을 증대시키기 위해서 추가적인 성분들을 포함한다. 모든 상기와 같은 공지된 경피 제형 및 성분들은 본 발명의 범위 내에 포함된다.Transdermal compositions typically contain from about 0.01% to about 20%, preferably from about 0.1% to about 20%, preferably from about 0.1% to about 10%, and more preferably from about 0.1% to about 10% by weight of the active ingredient(s). It is formulated as a topical ointment or cream containing in an amount ranging from about 0.5 to about 15% by weight. When formulated as an ointment, the active ingredient will typically be combined with a paraffinic or water-miscible ointment base. Alternatively, the active ingredient may be formulated into a cream with, for example, an oil-in-water cream base. Such transdermal formulations are well known in the art and generally include additional ingredients to enhance the skin penetration stability of the active ingredient or the formulation. All such known transdermal formulations and ingredients are included within the scope of the present invention.
본 발명의 화합물을 또한 경피 장치에 의해 투여할 수 있다. 따라서, 경피 투여를 수용조 또는 다공성 막 유형, 또는 고체 기질 잡동사니의 패치를 사용하여 수행할 수 있다.Compounds of the present invention may also be administered by transdermal devices. Thus, transdermal administration can be carried out using a patch of a water bath or porous membrane type, or a solid matrix lattice.
경구 투여성, 주사성 또는 국소 투여성 조성물에 대한 상술한 성분들은 단지 예시적인 것이다. 다른 물질들뿐만 아니라 가공 기법 등이 본 발명에 참고로 인용된 문헌[Part 8 of Remington’s Pharmaceutical Sciences, 17th edition, 1985, Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania]에 나열되어 있다.The foregoing ingredients for oral administration, injectable or topical administration compositions are exemplary only. Other materials, as well as processing techniques, are listed in Part 8 of Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th edition, 1985, Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania, incorporated herein by reference.
본 발명의 화합물을 또한 서방성 형태로 또는 서방성 약물 전달 시스템으로부터 투여할 수 있다. 전형적인 서방성 물질에 대한 명세를 문헌[Remington’s Pharmaceutical Sciences]에서 찾을 수 있다.The compounds of the present invention may also be administered in a sustained release form or from a sustained release drug delivery system. Specifications of typical slow-release materials can be found in Remington's Pharmaceutical Sciences.
하기의 제형예들은 본 발명에 따라 제조될 수 있는 전형적인 약학 조성물들을 예시한다. 그러나, 본 발명을 하기의 약학 조성물들로 제한하지 않는다.The following formulation examples illustrate typical pharmaceutical compositions that can be prepared according to the present invention. However, the present invention is not limited to the following pharmaceutical compositions.
제형 1 - 정제Formulation 1 - Tablets
화학식 I에 따른 본 발명의 화합물을 대략 1:2 중량비로 건조 젤라틴 결합제와 함께 건조 분말로서 혼합할 수 있다. 소량의 마그네슘 스테아레이트를 윤활제로서 첨가할 수도 있다. 상기 혼합물을 정제 프레스에서 240 내지 270 ㎎ 정제(정제당 80 내지 90 ㎎의 화학식 I에 따른 본 발명의 활성 화합물)로 형성시킬 수 있다.A compound of the invention according to formula I may be mixed as a dry powder with a dry gelatine binder in an approximate 1:2 weight ratio. A small amount of magnesium stearate may be added as a lubricant. This mixture can be formed into 240-270 mg tablets (80-90 mg of active compound according to formula I per tablet) in a tablet press.
제형 2 - 캡슐Formulation 2 - Capsule
화학식 I에 따른 본 발명의 화합물을 대략 1:1 중량비로 전분 희석제와 함께 건조 분말로서 혼합할 수 있다. 상기 혼합물을 250 ㎎ 캡슐에 충전할 수 있다(캡슐당 125 ㎎의 화학식 I에 따른 본 발명의 활성 화합물).A compound of the invention according to formula I may be mixed as a dry powder with a starch diluent in an approximate 1:1 weight ratio. This mixture can be filled into 250 mg capsules (125 mg of active compound according to formula I per capsule).
제형 3 - 액체Formulation 3 - Liquid
본 발명의 화합물(125 ㎎)을 슈크로스(1.75 g) 및 잔탄 검(4 ㎎)과 혼합하고, 생성된 혼합물을 블렌딩하고, 10번 메쉬 U.S. 체에 통과시키고, 이어서 앞서 제조된 미정질 셀룰로스와 나트륨 카복시메틸 셀룰로스(11:89, 50 ㎎)의 수중 용액과 혼합할 수 있다. 나트륨 벤조에이트(10 ㎎), 풍미제 및 착색제를 물로 희석하고, 교반하면서 첨가할 수도 있다. 이어서 충분한 물을 교반하면서 가할 수 있다. 이어서 충분한 물을 가하여 총 5 ㎖의 부피를 생성시킬 수 있다.A compound of the present invention (125 mg) was mixed with sucrose (1.75 g) and xanthan gum (4 mg) and the resulting mixture was blended and strained on a No. 10 mesh U.S. It can be passed through a sieve and then mixed with a previously prepared solution of microcrystalline cellulose and sodium carboxymethyl cellulose (11:89, 50 mg) in water. Sodium benzoate (10 mg), flavor and color may be diluted with water and added with stirring. Enough water can then be added with stirring. Sufficient water can then be added to create a total volume of 5 ml.
제형 4 - 정제Formulation 4 - Tablets
화학식 I에 따른 본 발명의 화합물을 대략 1:2 중량비로 건조 젤라틴 결합제와 함께 건조 분말로서 혼합할 수 있다. 소량의 마그네슘 스테아레이트를 윤활제로서 첨가할 수 있다. 상기 혼합물을 정제 프레스에서 450 내지 900 ㎎ 정제(150 내지 300 ㎎의 화학식 I에 따른 본 발명의 활성 화합물)로 형성시킨다.A compound of the invention according to formula I may be mixed as a dry powder with a dry gelatine binder in an approximate 1:2 weight ratio. A small amount of magnesium stearate may be added as a lubricant. This mixture is formed into 450-900 mg tablets (150-300 mg of active compound of the invention according to formula I) in a tablet press.
제형 5 - 주사액Formulation 5 - Injectable solution
화학식 I에 따른 본 발명의 화합물을 대략 5 ㎎/㎖의 농도로 완충된 멸균 염수 주사성 수성 매질에 용해시키거나 현탁시킬 수 있다.A compound of the present invention according to formula I may be dissolved or suspended in aqueous buffered sterile saline injectable aqueous medium at a concentration of approximately 5 mg/ml.
제형 6 - 국소용Formulation 6 - Topical
스테아릴 알콜(250 g) 및 백색 바셀린(250 g)을 약 75 ℃에서 용융시키고 이어서 수(약 370 g) 중에 용해된 화학식 I에 따른 본 발명의 화합물(50 g), 메틸파라벤(0.25 g), 프로필파라벤(0.15 g), 나트륨 라우릴 설페이트(10 g), 및 프로필렌 글리콜(120 g)의 혼합물을 가하고, 생성되는 혼합물을 응결시까지 교반할 수 있다.Stearyl alcohol (250 g) and white petrolatum (250 g) were melted at about 75° C. followed by a compound of the invention according to formula I (50 g) dissolved in water (about 370 g), methylparaben (0.25 g) , propylparaben (0.15 g), sodium lauryl sulfate (10 g), and propylene glycol (120 g) are added and the resulting mixture may be stirred until congealed.
치료 방법treatment method
본 발명의 화합물은 포유동물에서 JAK의 이상 활성과 인과관계로 관련되거나 또는 상기에 기인할 수 있는 상태의 치료를 위한 치료제로서 사용될 수 있다. 특히 상태는 JAK1 및/또는 TYK2의 이상 활성과 관련된다. 따라서, 본 발명의 화합물 및 약학 조성물은 인간을 포함한 포유동물에서 알러지성 질병, 염증 질병, 자가면역 질병, 증식성 질병, 이식 거부, 연골 턴오버의 장애를 수반하는 질병, 선천성 연골 기형, 및/또는 IL6의 분비과잉 또는 인터페론의 분비과잉과 관련된 질병의 예방 및/또는 치료를 위한 치료제로서 용도가 발견된다.The compounds of the present invention can be used as therapeutic agents for the treatment of conditions in mammals that are causally related to or attributable to the abnormal activity of JAK. In particular, the condition is associated with aberrant activity of JAK1 and/or TYK2. Thus, the compounds and pharmaceutical compositions of the present invention can be used in mammals, including humans, for allergic diseases, inflammatory diseases, autoimmune diseases, proliferative diseases, transplant rejection, diseases involving disorders of cartilage turnover, congenital cartilage malformations, and/or or as a therapeutic agent for the prevention and/or treatment of diseases associated with hypersecretion of IL6 or hypersecretion of interferon.
하나의 태양에서, 본 발명은 약제로서 사용하기 위한 본 발명의 화합물, 또는 본 발명의 화합물을 포함하는 약학 조성물을 제공한다.In one aspect, the present invention provides a compound of the present invention, or a pharmaceutical composition comprising a compound of the present invention, for use as a medicament.
또 다른 태양에서, 본 발명은 약제의 제조에 사용하기 위한 본 발명의 화합물, 또는 본 발명의 화합물을 포함하는 약학 조성물을 제공한다.In another aspect, the present invention provides a compound of the present invention, or a pharmaceutical composition comprising a compound of the present invention, for use in the manufacture of a medicament.
더욱 또 다른 태양에서, 본 발명은 본 발명에 개시된 질병이 있거나 또는 있을 위험이 있는 포유동물의 치료 방법을 제공하며, 상기 방법은 유효한 상태-치료 또는 상태-예방량의 본 발명에 개시된 본 발명의 약학 조성물 및 화합물 중 하나 이상을 투여함을 포함한다. 특정한 태양에서, 본 발명은 알러지성 질병, 염증 질병, 자가면역 질병, 증식성 질병, 이식 거부, 연골 턴오버의 장애를 수반하는 질병, 선천성 연골 기형, 및/또는 IL6의 분비과잉 또는 인터페론의 분비과잉과 관련된 질병이 있거나 또는 상기 질병이 있을 위험이 있는 포유동물의 치료 방법을 제공한다.In yet another aspect, the present invention provides a method for treating a mammal suffering from or at risk of suffering from a disease as described herein, said method comprising an effective condition-treating or condition-preventing amount of a condition-disclosed amount of the present invention. and administering one or more of the pharmaceutical composition and compound. In certain embodiments, the present invention relates to allergic diseases, inflammatory diseases, autoimmune diseases, proliferative diseases, graft rejection, diseases involving impaired cartilage turnover, congenital cartilage malformations, and/or hypersecretion of IL6 or secretion of interferon. A method for treating a mammal suffering from or at risk of having an overabundance-related disease is provided.
치료 방법의 태양에서, 본 발명은 알러지성 반응에 민감하거나 또는 상기 반응이 침범한 포유동물의 예방 및/또는 치료 방법을 제공하며, 상기 방법은 유효한 상태-치료 또는 상태-예방량의 본 발명에 개시된 바와 같은 본 발명의 약학 조성물 및 화합물 중 하나 이상을 투여함을 포함한다. 특정한 실시태양에서, 상기 알러지성 반응은 알러지성 기도 질병, 부비강염, 습진 및 두드러기, 식품 알러지 또는 곤충독에 대한 알러지 중에서 선택된다.In a method of treatment aspect, the present invention provides a method for the prevention and/or treatment of a mammal susceptible to or affected by an allergic reaction, the method comprising an effective condition-treating or condition-preventing amount of the present invention. and administering one or more of the pharmaceutical compositions and compounds of the present invention as disclosed. In a particular embodiment, the allergic reaction is selected from allergic airway disease, sinusitis, eczema and urticaria, food allergy or allergy to insect poisons.
또 다른 태양에서 본 발명은 알러지성 반응의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 본 발명의 화합물을 제공한다. 특정한 실시태양에서, 상기 알러지성 반응은 알러지성 기도 질병, 부비강염, 습진 및 두드러기, 식품 알러지 및 곤충독에 대한 알러지 중에서 선택된다.In another aspect the invention provides a compound of the invention for use in the treatment and/or prevention of an allergic reaction. In a particular embodiment, the allergic reaction is selected from allergic airway disease, sinusitis, eczema and urticaria, food allergy and allergy to insect poisons.
더욱 또 다른 태양에서 본 발명은 알러지성 반응의 치료 또는 예방을 위한 약제의 제조에 사용하기 위한 본 발명의 화합물 또는 본 발명의 화합물을 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 특정한 실시태양에서, 상기 알러지성 반응은 알러지성 기도 질병, 부비강염, 습진 및 두드러기, 식품 알러지 및 곤충독에 대한 알러지 중에서 선택된다.In yet another aspect the present invention provides a compound of the present invention or a pharmaceutical composition comprising a compound of the present invention for use in the manufacture of a medicament for the treatment or prevention of an allergic reaction. In a particular embodiment, the allergic reaction is selected from allergic airway disease, sinusitis, eczema and urticaria, food allergy and allergy to insect poisons.
추가의 치료 방법의 태양에서, 본 발명은 염증 상태에 민감하거나 또는 상기 반응이 침범한 포유동물의 예방 및/또는 치료 방법을 제공한다. 상기 방법은 유효한 상태-치료 또는 상태-예방량의 본 발명에 개시된 바와 같은 본 발명의 약학 조성물 및 화합물 중 하나 이상을 투여함을 포함한다. 특정한 실시태양에서, 상기 염증 상태는 류마티스성 관절염, 골관절염, 알러지성 기도 질병(예를 들어 천식) 및 염증성 장 질병 중에서 선택된다.In a further method of treatment aspect, the present invention provides methods for the prophylaxis and/or treatment of a mammal susceptible to or affected by an inflammatory condition. The method comprises administering an effective condition-treating or condition-preventing amount of one or more of the pharmaceutical compositions and compounds of the present invention as described herein. In a specific embodiment, the inflammatory condition is selected from rheumatoid arthritis, osteoarthritis, allergic airway disease (eg asthma) and inflammatory bowel disease.
또 다른 태양에서 본 발명은 염증 상태의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위해 본 발명의 화합물을 제공한다. 특정한 실시태양에서, 상기 염증 상태는 류마티스성 관절염, 골관절염, 알러지성 기도 질병(예를 들어 천식) 및 염증성 장 질병 중에서 선택된다.In another aspect the invention provides a compound of the invention for use in the treatment and/or prevention of inflammatory conditions. In a specific embodiment, the inflammatory condition is selected from rheumatoid arthritis, osteoarthritis, allergic airway disease (eg asthma) and inflammatory bowel disease.
더욱 또 다른 태양에서, 본 발명은 염증 상태의 치료 및/또는 예방을 위한 약제의 제조에 사용하기 위해 본 발명의 화합물 또는 본 발명의 화합물을 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 특정한 실시태양에서, 상기 염증 상태는 류마티스성 관절염, 골관절염, 알러지성 기도 질병(예를 들어 천식) 및 염증성 장 질병(예를 들어 크론병 또는 궤양성 대장염) 중에서 선택된다.In yet another aspect, the present invention provides a compound of the present invention or a pharmaceutical composition comprising a compound of the present invention for use in the manufacture of a medicament for the treatment and/or prevention of an inflammatory condition. In a specific embodiment, the inflammatory condition is selected from rheumatoid arthritis, osteoarthritis, allergic airway disease (eg asthma) and inflammatory bowel disease (eg Crohn's disease or ulcerative colitis).
추가의 치료 방법의 태양에서, 본 발명은 자가면역 질병에 민감하거나 또는 상기 질병에 걸린 포유동물의 예방 또는 치료 방법을 제공한다. 상기 방법은 유효한 상태-치료 또는 상태-예방량의 본 발명에 개시된 바와 같은 본 발명의 약학 조성물 및 화합물 중 하나 이상을 투여함을 포함한다. 특정한 실시태양에서, 상기 자가면역 질병은 COPD, 천식, 전신 홍반성 루푸스, I형 당뇨병 및 염증성 장 질병 중에서 선택된다.In a further method of treatment aspect, the present invention provides a method for preventing or treating a mammal susceptible to or suffering from an autoimmune disease. The method comprises administering an effective condition-treating or condition-preventing amount of one or more of the pharmaceutical compositions and compounds of the present invention as described herein. In a specific embodiment, the autoimmune disease is selected from COPD, asthma, systemic lupus erythematosus, type I diabetes, and inflammatory bowel disease.
또 다른 태양에서 본 발명은 자가면역 질병의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위해 본 발명의 화합물을 제공한다. 특정한 실시태양에서, 상기 자가면역 질병은 COPD, 천식, 전신 홍반성 루푸스, I형 당뇨병 및 염증성 장 질병 중에서 선택된다. 보다 특정한 실시태양에서, 상기 자가면역 질병은 전신 홍반성 루프스이다.In another aspect the invention provides a compound of the invention for use in the treatment and/or prevention of autoimmune diseases. In a specific embodiment, the autoimmune disease is selected from COPD, asthma, systemic lupus erythematosus, type I diabetes, and inflammatory bowel disease. In a more specific embodiment, the autoimmune disease is systemic lupus erythematosus.
더욱 또 다른 태양에서 본 발명은 자가면역 질병의 치료 및/또는 예방을 위한 약제의 제조에 사용하기 위해 본 발명의 화합물, 또는 본 발명의 화합물을 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 특정한 실시태양에서, 상기 자가면역 질병은 COPD, 천식, 전신 홍반성 루푸스, I형 당뇨병 및 염증성 장 질병 중에서 선택된다.In yet another aspect, the present invention provides a compound of the present invention, or a pharmaceutical composition comprising a compound of the present invention, for use in the manufacture of a medicament for the treatment and/or prevention of autoimmune diseases. In a specific embodiment, the autoimmune disease is selected from COPD, asthma, systemic lupus erythematosus, type I diabetes, and inflammatory bowel disease.
추가의 치료 방법의 태양에서, 본 발명은 증식성 질병에 민감하거나 또는 상기 질병에 걸린 포유동물의 예방 및/또는 치료 방법을 제공하며, 상기 방법은 유효한 상태-치료 또는 상태-예방량의 본 발명에 개시된 바와 같은 본 발명의 약학 조성물 및 화합물 중 하나 이상을 투여함을 포함한다. 특정한 실시태양에서, 상기 증식성 질병은 암(예를 들어 고형 종양, 예를 들어 자궁 평활근육종 또는 전립선암), 백혈병(예를 들어 AML, ALL 또는 CLL), 다발성 골수종 및 건선 중에서 선택된다. 보다 특정한 실시태양에서, 상기 증식성 질병은 골수섬유종, T-세포 급성 림프모구성 백혈병(T-ALL), 다발성 골수종, 만성 림프구성 백혈병(CLL), 확산성 큰 B-세포 림프종(DLBCL), 췌장암, 간암, 간세포 암종(HCC), 폐암, 유방암 및 결장암 중에서 선택된다.In a further method of treatment aspect, the present invention provides a method for the prophylaxis and/or treatment of a mammal susceptible to or suffering from a proliferative disease, said method comprising an effective condition-treating or condition-preventing amount of the present invention. and administering one or more of the pharmaceutical compositions and compounds of the present invention as described in In a specific embodiment, the proliferative disease is selected from cancer (eg solid tumors such as uterine leiomyosarcoma or prostate cancer), leukemia (eg AML, ALL or CLL), multiple myeloma and psoriasis. In a more specific embodiment, the proliferative disorder is myelofibroma, T-cell acute lymphoblastic leukemia (T-ALL), multiple myeloma, chronic lymphocytic leukemia (CLL), diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL), It is selected from pancreatic cancer, liver cancer, hepatocellular carcinoma (HCC), lung cancer, breast cancer and colon cancer.
또 다른 태양에서 본 발명은 증식성 질병의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위해 본 발명의 화합물을 제공한다. 특정한 실시태양에서, 상기 증식성 질병은 암(예를 들어 고형 종양, 예를 들어 자궁 평활근육종 또는 전립선암), 백혈병(예를 들어 AML, ALL 또는 CLL), 다발성 골수종 및 건선 중에서 선택된다. 보다 특정한 실시태양에서, 상기 증식성 질병은 골수섬유종, T-세포 급성 림프모구성 백혈병(T-ALL), 다발성 골수종, 만성 림프구성 백혈병(CLL), 확산성 큰 B-세포 림프종(DLBCL), 췌장암, 간암, 간세포 암종(HCC), 폐암, 유방암 및 결장암 중에서 선택된다.In another aspect the invention provides a compound of the invention for use in the treatment and/or prevention of a proliferative disease. In a specific embodiment, the proliferative disease is selected from cancer (eg solid tumors such as uterine leiomyosarcoma or prostate cancer), leukemia (eg AML, ALL or CLL), multiple myeloma and psoriasis. In a more specific embodiment, the proliferative disorder is myelofibroma, T-cell acute lymphoblastic leukemia (T-ALL), multiple myeloma, chronic lymphocytic leukemia (CLL), diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL), It is selected from pancreatic cancer, liver cancer, hepatocellular carcinoma (HCC), lung cancer, breast cancer and colon cancer.
더욱 또 다른 태양에서 본 발명은 증식성 질병의 치료 및/또는 예방을 위한 약제의 제조에 사용하기 위해 본 발명의 화합물, 또는 본 발명의 화합물을 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 특정한 실시태양에서, 상기 증식성 질병은 암(예를 들어 고형 종양, 예를 들어 자궁 평활근육종 또는 전립선암), 백혈병(예를 들어 AML, ALL 또는 CLL), 다발성 골수종 및 건선 중에서 선택된다. 보다 특정한 실시태양에서, 상기 증식성 질병은 골수섬유종, T-세포 급성 림프모구성 백혈병(T-ALL), 다발성 골수종, 만성 림프구성 백혈병(CLL), 확산성 큰 B-세포 림프종(DLBCL), 췌장암, 간암, 간세포 암종(HCC), 폐암, 유방암 및 결장암 중에서 선택된다.In yet another aspect, the present invention provides a compound of the present invention, or a pharmaceutical composition comprising a compound of the present invention, for use in the manufacture of a medicament for the treatment and/or prevention of a proliferative disease. In a specific embodiment, the proliferative disease is selected from cancer (eg solid tumors such as uterine leiomyosarcoma or prostate cancer), leukemia (eg AML, ALL or CLL), multiple myeloma and psoriasis. In a more specific embodiment, the proliferative disorder is myelofibroma, T-cell acute lymphoblastic leukemia (T-ALL), multiple myeloma, chronic lymphocytic leukemia (CLL), diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL), It is selected from pancreatic cancer, liver cancer, hepatocellular carcinoma (HCC), lung cancer, breast cancer and colon cancer.
추가의 치료 방법의 태양에서, 본 발명은 이식 거부에 민감하거나 또는 상기 질병에 걸린 포유동물의 예방 및/또는 치료 방법을 제공하며, 상기 방법은 유효한 상태-치료 또는 상태-예방량의 본 발명에 개시된 바와 같은 본 발명의 약학 조성물 및 화합물 중 하나 이상을 투여함을 포함한다. 특정한 실시태양에서, 상기 이식 거부는 기관 이식 거부이다.In a further method of treatment aspect, the present invention provides a method for the prevention and/or treatment of a mammal susceptible to or afflicted with transplant rejection, said method comprising an effective condition-treating or condition-preventing amount of the present invention. and administering one or more of the pharmaceutical compositions and compounds of the present invention as disclosed. In a specific embodiment, the transplant rejection is an organ transplant rejection.
또 다른 태양에서 본 발명은 이식 거부의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위해 본 발명의 화합물을 제공한다. 특정한 실시태양에서, 상기 이식 거부는 기관 이식 거부이다.In another aspect the invention provides a compound of the invention for use in the treatment and/or prevention of transplant rejection. In a specific embodiment, the transplant rejection is an organ transplant rejection.
더욱 또 다른 태양에서 본 발명은 이식 거부의 치료 및/또는 예방을 위한 약제의 제조에 사용하기 위해 본 발명의 화합물, 또는 본 발명의 화합물을 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 특정한 실시태양에서, 상기 이식 거부는 기관 이식 거부이다.In yet another aspect, the present invention provides a compound of the present invention, or a pharmaceutical composition comprising a compound of the present invention, for use in the manufacture of a medicament for the treatment and/or prevention of transplant rejection. In a specific embodiment, the transplant rejection is an organ transplant rejection.
치료 방법의 태양에서, 본 발명은 연골 턴오버의 장애를 수반하는 질병에 민감하거나 또는 상기 질병에 걸린 포유동물의 예방 및/또는 치료 방법을 제공하며, 상기 방법은 치료 유효량의 본 발명의 화합물, 또는 본 발명에 개시된 약학 조성물 중 하나 이상을 투여함을 포함한다.In a method of treatment aspect, the present invention provides a method for preventing and/or treating a mammal susceptible to or suffering from a disease involving impaired cartilage turnover, the method comprising a therapeutically effective amount of a compound of the present invention; or administering one or more of the pharmaceutical compositions disclosed herein.
또 다른 태양에서 본 발명은 연골 턴오버의 장애를 수반하는 질병의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위해 본 발명의 화합물을 제공한다.In another aspect, the present invention provides a compound of the present invention for use in the treatment and/or prevention of diseases involving impairment of cartilage turnover.
더욱 또 다른 태양에서 본 발명은 연골 턴오버의 장애를 수반하는 질병의 치료 및/또는 예방을 위한 약제의 제조에 사용하기 위해 본 발명의 화합물, 또는 본 발명의 화합물을 포함하는 약학 조성물을 제공한다.In yet another aspect, the present invention provides a compound of the present invention, or a pharmaceutical composition comprising a compound of the present invention, for use in the manufacture of a medicament for the treatment and/or prevention of diseases involving disorders of cartilage turnover. .
본 발명은 또한 선천성 연골 기형의 치료 및/또는 예방 방법을 제공하며, 상기 방법은 유효량의 본 발명에 개시된 본 발명의 약학 조성물 및 화합물 중 하나 이상을 투여함을 포함한다.The present invention also provides a method for treating and/or preventing congenital cartilage deformities, comprising administering an effective amount of one or more of the pharmaceutical compositions and compounds of the present invention disclosed herein.
또 다른 태양에서 본 발명은 선천성 연골 기형의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위해 본 발명의 화합물을 제공한다.In another aspect, the present invention provides a compound of the present invention for use in the treatment and/or prevention of congenital cartilage malformations.
더욱 또 다른 태양에서 본 발명은 선천성 연골 기형의 치료 및/또는 예방을 위한 약제의 제조에 사용하기 위해 본 발명의 화합물, 또는 본 발명의 화합물을 포함하는 약학 조성물을 제공한다.In yet another aspect, the present invention provides a compound of the present invention, or a pharmaceutical composition comprising a compound of the present invention, for use in the manufacture of a medicament for the treatment and/or prevention of congenital cartilage malformations.
추가의 치료 방법의 태양에서, 본 발명은 IL6의 분비과잉과 관련된 질병에 민감하거나 또는 상기 질병에 걸린 포유동물의 예방 및/또는 치료 방법을 제공하며, 상기 방법은 유효한 상태-치료 또는 상태-예방량의 본 발명에 개시된 바와 같은 본 발명의 약학 조성물 및 화합물 중 하나 이상을 투여함을 포함한다. 특정한 실시태양에서, 상기 IL6의 분비과잉과 관련된 질병은 캐슬만병 및 혈관사이세포 증식성 사구체신염 중에서 선택된다.In a further method of treatment aspect, the present invention provides a method for preventing and/or treating a mammal susceptible to or suffering from a disease associated with hypersecretion of IL6, the method comprising an effective condition-treatment or condition-prevention. and administering an amount of one or more of the pharmaceutical compositions and compounds of the present invention as described herein. In a specific embodiment, the disease associated with hypersecretion of IL6 is selected from Castleman's disease and mesangial cell proliferative glomerulonephritis.
또 다른 태양에서 본 발명은 IL6의 분비과잉과 관련된 질병의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위해 본 발명의 화합물을 제공한다. 특정한 실시태양에서, 상기 IL6의 분비과잉과 관련된 질병은 캐슬만병 및 혈관사이세포 증식성 사구체신염 중에서 선택된다.In another aspect, the present invention provides a compound of the present invention for use in the treatment and/or prevention of diseases associated with hypersecretion of IL6. In a specific embodiment, the disease associated with hypersecretion of IL6 is selected from Castleman's disease and mesangial cell proliferative glomerulonephritis.
또 다른 태양에서 본 발명은 IL6의 분비과잉과 관련된 질병의 치료 및/또는 예방을 위한 약제의 제조에 사용하기 위해 본 발명의 화합물, 또는 본 발명의 화합물을 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 특정한 실시태양에서, 상기 IL6의 분비과잉과 관련된 질병은 캐슬만병 및 혈관사이세포 증식성 사구체신염 중에서 선택된다.In another aspect, the present invention provides a compound of the present invention, or a pharmaceutical composition comprising a compound of the present invention, for use in the manufacture of a medicament for the treatment and/or prevention of diseases associated with hypersecretion of IL6. In a specific embodiment, the disease associated with hypersecretion of IL6 is selected from Castleman's disease and mesangial cell proliferative glomerulonephritis.
추가의 치료 방법의 태양에서, 본 발명은 인터페론의 분비과잉과 관련된 질병에 민감하거나 또는 상기 질병에 걸린 포유동물의 예방 및/또는 치료 방법을 제공하며, 상기 방법은 유효한 상태-치료 또는 상태-예방량의 본 발명에 개시된 바와 같은 본 발명의 약학 조성물 및 화합물 중 하나 이상을 투여함을 포함한다. 특정한 실시태양에서, 상기 인터페론의 분비과잉과 관련된 질병은 전신 및 피부 홍반성 루푸스, 루푸스 신염, 피부근염, 쇼그렌 증후군, 건선 및 류마티스성 관절염 중에서 선택된다.In a further method of treatment aspect, the present invention provides a method for preventing and/or treating a mammal susceptible to or suffering from a disease associated with hypersecretion of interferon, the method comprising an effective condition-treatment or condition-prevention and administering an amount of one or more of the pharmaceutical compositions and compounds of the present invention as described herein. In a specific embodiment, the disease associated with hypersecretion of interferons is selected from systemic and cutaneous lupus erythematosus, lupus nephritis, dermatomyositis, Sjogren's syndrome, psoriasis and rheumatoid arthritis.
또 다른 태양에서 본 발명은 인터페론의 분비과잉과 관련된 질병의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위해 본 발명의 화합물을 제공한다. 특정한 실시태양에서, 상기 인터페론의 분비과잉과 관련된 질병은 전신 및 피부 홍반성 루푸스, 루푸스 신염, 피부근염, 쇼그렌 증후군, 건선 및 류마티스성 관절염 중에서 선택된다.In another aspect, the invention provides a compound of the invention for use in the treatment and/or prevention of diseases associated with hypersecretion of interferons. In a specific embodiment, the disease associated with hypersecretion of interferons is selected from systemic and cutaneous lupus erythematosus, lupus nephritis, dermatomyositis, Sjogren's syndrome, psoriasis and rheumatoid arthritis.
더욱 또 다른 태양에서 본 발명은 인터페론의 분비과잉과 관련된 질병의 치료 및/또는 예방을 위한 약제의 제조에 사용하기 위해 본 발명의 화합물, 또는 본 발명의 화합물을 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 특정한 실시태양에서, 상기 인터페론의 분비과잉과 관련된 질병은 전신 및 피부 홍반성 루푸스, 루푸스 신염, 피부근염, 쇼그렌 증후군, 건선 및 류마티스성 관절염 중에서 선택된다.In yet another aspect, the present invention provides a compound of the present invention, or a pharmaceutical composition comprising a compound of the present invention, for use in the manufacture of a medicament for the treatment and/or prevention of diseases associated with hypersecretion of interferon. In a specific embodiment, the disease associated with hypersecretion of interferons is selected from systemic and cutaneous lupus erythematosus, lupus nephritis, dermatomyositis, Sjogren's syndrome, psoriasis and rheumatoid arthritis.
본 발명의 추가의 태양으로서 특히 상기 언급한 상태 및 질병의 치료 및/또는 예방에 약제로서 사용하기 위한 본 발명의 화합물을 제공한다. 또한 본 발명에서 상기 언급한 상태 및 질병들 중 하나의 치료 및/또는 예방을 위한 약제의 제조에서 본 발명 화합물의 용도를 제공한다.As a further aspect of the present invention there is provided a compound of the present invention for use as a medicament, in particular for the treatment and/or prophylaxis of the conditions and diseases mentioned above. Also provided herein is the use of a compound of the present invention in the manufacture of a medicament for the treatment and/or prevention of one of the conditions and diseases mentioned above.
본 발명의 방법의 특정한 섭생은 염증을 수반하는 질병을 앓고 있는 피실험자에게, 상기 피실험자에서 상기 염증의 수준을 감소시키고, 바람직하게는 상기 염증의 원인 과정을 종결시키기에 충분한 기간 동안 유효량의 본 발명의 화합물을 투여함을 포함한다. 상기 방법의 특정한 실시태양은 류마티스성 관절염을 앓고 있거나 상기 관절염의 발병에 민감한 피실험 환자에게, 상기 환자의 관절에서 염증을 각각 감소시키거나 예방하고, 바람직하게는 상기 염증의 원인 과정을 종결시키기에 충분한 기간 동안 유효량의 본 발명의 화합물을 투여함을 포함한다.A particular regimen of the method of the present invention provides a subject suffering from a condition involving inflammation in an effective amount of the present invention for a period of time sufficient to reduce the level of the inflammation in the subject and preferably terminate the causal process of the inflammation. and administering the compound. A particular embodiment of the method is directed to a test subject suffering from or susceptible to developing rheumatoid arthritis, respectively, to reduce or prevent inflammation in the subject's joints, preferably to terminate the causal process of the inflammation. and administering an effective amount of a compound of the present invention for a sufficient period of time.
본 발명의 방법의 추가의 특정한 섭생은 연골 또는 관절 변성을 특징으로 하는 질병 상태(예를 들어 류마티스성 관절염 및/또는 골관절염)를 앓고 있는 피실험자에게, 상기 변성을 감소시키고, 바람직하게는 상기 변성의 저절로 계속되는 원인 과정을 종결시키기에 충분한 기간 동안 유효량의 본 발명의 화합물을 투여함을 포함한다. 상기 방법의 특정한 실시태양은 골관절염을 앓고 있거나 상기 관절염의 발병에 민감한 피실험 환자에게, 상기 환자의 관절에서 연골 변성을 각각 감소시키거나 예방하고, 바람직하게는 상기 변성의 저절로 계속되는 원인 과정을 종결시키기에 충분한 기간 동안 유효량의 본 발명의 화합물을 투여함을 포함한다. 특정한 실시태양에서, 상기 화합물은 연골 동화 및/또는 이화-억제 성질을 나타낼 수 있다.A further particular regimen of the methods of the present invention reduces, preferably alleviates, a disease state characterized by cartilage or joint degeneration (e.g. rheumatoid arthritis and/or osteoarthritis) in a subject suffering from such degeneration. and administering an effective amount of a compound of the present invention for a period of time sufficient to terminate the spontaneously continuing causal process. A particular embodiment of the method is directed to a subject suffering from or susceptible to developing osteoarthritis, respectively, reducing or preventing cartilage degeneration in a joint of the subject, preferably terminating the spontaneously causal process of the degeneration. administering an effective amount of a compound of the present invention for a period of time sufficient to In certain embodiments, the compound may exhibit cartilage anabolic and/or catabolic-inhibiting properties.
주사 용량 수준은 모두 약 1 내지 약 120 시간 및 특히 24 내지 96 시간 동안 약 0.1 ㎎/㎏/h 내지 적어도 10 ㎎/㎏/h의 범위이다. 약 0.1 ㎎/㎏ 내지 약 10 ㎎/㎏ 이상의 프리로딩 일시주사를 또한 투여하여 적합한 정상 상태 수준을 성취할 수 있다. 최대 총 용량은 40 내지 80 ㎏ 인간 환자의 경우 약 2 g/일을 초과하지 않을 것으로 예상된다.The injection dosage levels range from about 0.1 mg/kg/h to at least 10 mg/kg/h for all about 1 to about 120 hours and especially 24 to 96 hours. A preloading bolus of about 0.1 mg/kg to about 10 mg/kg or more may also be administered to achieve suitable steady state levels. The maximum total dose is expected not to exceed about 2 g/day for a 40-80 kg human patient.
장기적인 상태, 예를 들어 퇴행 상태의 예방 및/또는 치료를 위해서, 상기 치료 섭생을 대개는 수개월 또는 수년에 걸쳐 늘릴 수 있으며 따라서 경구 투여가 환자의 편의성 및 허용성을 위해 바람직하다. 경구 투여의 경우, 매일 1 내지 5 회 및 특히 매일 2 내지 4 회 및 전형적으로 매일 3 회의 경구 용량이 전형적인 섭생이다. 이러한 투여 패턴을 사용하는 경우, 각각의 용량은 약 0.01 내지 약 20 ㎎/㎏의 본 발명의 화합물을 제공하며, 특히 각각의 용량은 약 0.1 내지 약 10 ㎎/㎏ 및 특히 약 1 내지 약 5 ㎎/㎏을 제공한다.For the prevention and/or treatment of long-term conditions, eg, degenerative conditions, the treatment regimen can usually be extended over several months or years and therefore oral administration is preferred for patient convenience and tolerability. For oral administration, an oral dose of 1 to 5 times daily and especially 2 to 4 times daily and typically 3 times daily is a typical regimen. When using this dosing pattern, each dose provides from about 0.01 to about 20 mg/kg of a compound of the present invention, in particular each dose from about 0.1 to about 10 mg/kg and particularly from about 1 to about 5 mg. / kg.
경피 용량은 일반적으로 주사 용량을 사용하여 성취되는 것과 유사하거나 더 낮은 혈중 수준을 제공하도록 선택된다.Transdermal doses are generally selected to provide blood levels similar to or lower than those achieved using injection doses.
질환의 발병을 예방하기 위해 사용될 때, 본 발명의 화합물을 상기 질환이 발병할 위험이 있는 환자에게, 전형적으로는 의사의 충고 및 감독 하에서, 상술한 투여량 수준으로 투여할 것이다. 특정 질환이 발병할 위험이 있는 환자는 일반적으로 상기 질환의 가족력이 있는 환자 또는 상기 질환의 발병에 특히 민감한 것으로 유전자 시험 또는 선별에 의해 확인된 환자를 포함한다.When used to prevent the development of a disease, a compound of the present invention will be administered to a patient at risk of developing the disease, typically under the advice and supervision of a physician, at the dosage levels set forth above. Patients at risk of developing a particular disease generally include those with a family history of the disease or those identified by genetic testing or screening as being particularly susceptible to developing the disease.
본 발명의 화합물을 단독 활성제로서 투여하거나 또는 다른 치료제, 예를 들어 동일하거나 유사한 치료 활성을 나타내고 병행 투여에 대해 안전하고 효능 있는 것으로 결정된 다른 화합물과 함께 투여할 수 있다. 특정한 실시태양에서, 2 개(이상)의 작용제의 동시 투여는 각각 현저하게 더 낮은 용량의 사용을 허용하며, 이에 의해 나타나는 부작용이 감소된다.A compound of the present invention may be administered as the sole active agent or in combination with other therapeutic agents, for example other compounds that exhibit the same or similar therapeutic activity and are determined to be safe and efficacious for concomitant administration. In certain embodiments, simultaneous administration of two (or more) agents permits the use of significantly lower doses of each, resulting in reduced side effects.
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물 또는 본 발명의 화합물을 포함하는 약학 조성물을 약제로서 투여한다. 특정 실시태양에서, 상기 약학 조성물은 추가의 활성 성분을 추가로 포함한다.In one embodiment, a compound of the present invention or a pharmaceutical composition comprising a compound of the present invention is administered as a medicament. In certain embodiments, the pharmaceutical composition further comprises an additional active ingredient.
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물을 염증을 동반하는 질병의 치료 및/또는 예방을 위한 또 다른 치료제와 함께 투여하며, 특정한 작용제는 비제한적으로 면역조절제, 예를 들어 아자티오프린, 코르티코스테로이드(예를 들어 프레드니솔론 또는 덱사메타손), 사이클로포스파미드, 사이클로스포린 A, 타크로리무스, 마이코페놀레이트 모페틸, 뮤로모냅-CD3(OKT3, 예를 들어 오르쏘콜론(Orthocolone)(등록상표)), ATG, 아스피린, 아세트아미노펜, 이부프로펜, 나프록센 및 피록시캄을 포함한다.In one embodiment, a compound of the invention is administered in combination with another therapeutic agent for the treatment and/or prevention of a disease with inflammation, the specific agent being an immunomodulatory agent such as but not limited to azathioprine, corticosteroids. (e.g. prednisolone or dexamethasone), cyclophosphamide, cyclosporine A, tacrolimus, mycophenolate mofetil, muromonap-CD3 (OKT3, e.g. Orthocolone®), ATG, These include aspirin, acetaminophen, ibuprofen, naproxen and piroxicam.
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물을 관절염(예를 들어 류마티스성 관절염)의 치료 및/또는 예방을 위한 또 다른 치료제와 함께 투여하며, 특정한 작용제는 비제한적으로 진통제, 비-스테로이드성 소염 약물(NSAIDS), 스테로이드, 합성 DMARDS(예를 들어 비제한적으로 메토트렉세이트, 레플루노미드, 설파살라진, 아우라노핀, 나트륨 아우로티오말레이트, 페니실라민, 클로로퀸, 하이드록시클로로퀸, 아자티오프린, 및 시클로스포린), 및 생물학적 DMARDS(예를 들어 비제한적으로 인플릭시맵, 에타너셉트, 아달리뮤맵, 리툭시맵, 및 아바타셉트)를 포함한다.In one embodiment, a compound of the invention is administered in combination with another therapeutic agent for the treatment and/or prevention of arthritis (e.g. rheumatoid arthritis), the particular agent being but not limited to analgesics, non-steroidal anti-inflammatory drugs. (NSAIDS), steroids, synthetic DMARDS (such as but not limited to methotrexate, leflunomide, sulfasalazine, auranofin, sodium aurothiomalate, penicillamine, chloroquine, hydroxychloroquine, azathioprine, and cyclo sporine), and biologic DMARDS (eg, but not limited to, infliximab, etanercept, adalimumab, rituximab, and abatacept).
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물을 증식성 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 또 다른 치료제와 함께 투여하며, 특정한 작용제는 비제한적으로 메토트렉세이트, 류코보린, 아드리아마이신, 프레니손, 블레오마이신, 사이클로포스파미드, 5-플루오로유라실, 패클리탁셀, 도세탁셀, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 비노렐빈, 독소루비신, 타목시펜, 토레미펜, 메제스트롤 아세테이트, 아나스트로졸, 고세렐린, 항-HER2 단클론 항체(예를 들어 허셉틴(Herceptin)(상표)), 카페시타빈, 랄록시펜 하이드로클로라이드, EGFR 억제제(예를 들어 이레사(Iressa)(등록상표), 타세바(Tarceva)(상표), 에르비툭스(Erbitux)(상표)), VEGF 억제제(예를 들어 아바스틴(Avastin)(상표)), 프로테오솜 억제제(예를 들어 벨케이드(Velcade)(상표)), 글리벡(Glivec)(등록상표) 및 hsp90 억제제(예를 들어 17-AAG)를 포함한다. 추가로, 본 발명의 화합물을 다른 요법, 예를 들어 비제한적으로 방사선요법 또는 수술과 함께 투여할 수 있다. 특정 실시태양에서 상기 증식성 질환은 암, 골수증식성 질병 및 백혈병 중에서 선택된다.In one embodiment, a compound of the invention is administered in combination with another therapeutic agent for the treatment and/or prophylaxis of a proliferative disorder, the specific agent including but not limited to methotrexate, leucovorin, adriamycin, prenisone, bleomycin, Cyclophosphamide, 5-fluorouracil, paclitaxel, docetaxel, vincristine, vinblastine, vinorelbine, doxorubicin, tamoxifen, toremifene, megestrol acetate, anastrozole, goserelin, anti-HER2 monoclonal antibodies (e.g. Herceptin™), capecitabine, raloxifene hydrochloride, EGFR inhibitors (e.g. Iressa™, Tarceva™), erbitux ( Erbitux™), VEGF inhibitors (e.g. Avastin™), proteosome inhibitors (e.g. Velcade™), Glivec™ and hsp90 inhibitors (eg 17-AAG). Additionally, the compounds of the present invention may be administered in conjunction with other therapies, including but not limited to radiotherapy or surgery. In certain embodiments, the proliferative disease is selected from cancer, myeloproliferative disease and leukemia.
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물을 자가면역 질병의 치료 및/또는 예방을 위한 또 다른 치료제와 함께 투여하며, 특정한 작용제는 비제한적으로 글루코코르티코이드, 세포성장 억제제(예를 들어 퓨린 유사체), 알킬화제(예를 들어 질소 머스터드(사이클로포스파미드), 니트로소유레아, 백금 화합물 등), 대사길항물질(예를 들어 메토트렉세이트, 아자티오프린 및 머캅토퓨린), 세포독성 항생제(예를 들어 닥티노마이신 안트라사이클린, 미토마이신 C, 블레오마이신, 및 미트라마이신), 항체(예를 들어 항-CD20, 항-CD25, 또는 항-CD3(OTK3) 단클론 항체, 아트감(Atgam)(등록상표) 및 티모글로불린(Thymoglobuline)(등록상표)), 사이클로스포린, 타크로리무스, 라파마이신(시로리무스), 인터페론(예를 들어 INF-β), TNF 결합 단백질(예를 들어 인플릭시맵(레미케이드(Remicade)(상표), 에타너셉트(엔브렐(Enbrel)(상표) 또는 아달리뮤맵(휴미라(Humira)(상표)), 마이코페놀레이트, 핑고리모드 및 미리오신을 포함한다.In one embodiment, a compound of the invention is administered in combination with another therapeutic agent for the treatment and/or prevention of an autoimmune disease, the particular agent being, but not limited to, a glucocorticoid, a cell growth inhibitor (e.g., a purine analog), Alkylating agents (e.g. nitrogen mustard (cyclophosphamide), nitrosoureas, platinum compounds, etc.), antimetabolites (e.g. methotrexate, azathioprine and mercaptopurine), cytotoxic antibiotics (e.g. dactino anthracycline mitomycin, mitomycin C, bleomycin, and mithramycin), antibodies (eg anti-CD20, anti-CD25, or anti-CD3 (OTK3) monoclonal antibodies, Atgam® and thymo) globulin (Thymoglobuline®)), cyclosporine, tacrolimus, rapamycin (sirolimus), interferons (eg INF-β), TNF binding proteins (eg infliximab (Remicade®), etanercept ( Enbrel(trademark) or adalimumab (Humira(trademark)), mycophenolate, fingolimod and myriocin.
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물을 이식 거부의 치료 및/또는 예방을 위한 또 다른 치료제와 함께 투여하며, 특정한 작용제는 비제한적으로 칼시뉴린 억제제(예를 들어 사이클로스포린 또는 타크로리무스(FK506)), mTOR 억제제(예를 들어 시로리무스, 에베로리무스), 증식-방지제(예를 들어 아자티오프린, 마이코페놀산), 코르티코스테로이드(예를 들어 프레드니솔론, 하이드로코르티손), 항체(예를 들어 단클론 항-IL-2Rα 수용체 항체, 바실릭시맵, 다클리주맵), 다클론성 항-T-세포 항체(예를 들어 항-흉선세포 글로불린(ATG), 항-림프구 글로불린(ALG))를 포함한다.In one embodiment, a compound of the present invention is administered in combination with another therapeutic agent for the treatment and/or prevention of transplant rejection, the particular agent including but not limited to a calcineurin inhibitor (eg cyclosporine or tacrolimus (FK506)), mTOR inhibitors (eg sirolimus, everolimus), antiproliferative agents (eg azathioprine, mycophenolic acid), corticosteroids (eg prednisolone, hydrocortisone), antibodies (eg monoclonal anti- IL-2Ra receptor antibody, basiliximab, daclizumab), polyclonal anti-T-cell antibodies (eg anti-thymocyte globulin (ATG), anti-lymphocyte globulin (ALG)).
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물을 천식 및/또는 비염 및/또는 COPD의 치료 및/또는 예방을 위한 작용제와 함께 투여하며, 특정한 작용제는 비제한적으로 베타2-아드레날린 수용체 작용물질(예를 들어 살부타몰, 레발부테롤, 터뷰탈린 및 비톨테롤), 에피네프린(흡입형 또는 정제), 항콜린제(예를 들어 이프라트로피움 브로마이드), 글루코코르티코이드(경구 또는 흡입형), 오래 작용하는 β2-작용물질(예를 들어 살메테롤, 포모테롤, 밤부테롤, 및 서방성 경구 알부테롤), 흡입형 스테로이드와 오래 작용하는 기관지 확장제의 조합(예를 들어 플루티카손/살메테롤, 부데소니드/포모테롤), 류코트리엔 길항물질 및 합성 억제제(예를 들어 몬테류카스트, 자피르류카스트 및 질류톤), 매개체 방출 억제제(예를 들어 크로모글리케이트 및 케토티펜), IgE 반응의 생물학적 조절제(예를 들어 오말리주맵), 항히스타민제(예를 들어 세테리진, 신나리진, 펙소페나딘), 및 혈관수축제(예를 들어 옥시메타졸린, 자일로메타졸린, 나파졸린 및 트라마졸린)를 포함한다.In one embodiment, a compound of the present invention is administered in combination with an agent for the treatment and/or prevention of asthma and/or rhinitis and/or COPD, the particular agent including but not limited to a beta2-adrenergic receptor agonist (e.g. salbutamol, levalbuterol, terbutaline, and bitolterol), epinephrine (inhaled or tablet), anticholinergics (such as ipratropium bromide), glucocorticoids (oral or inhaled), long-acting β2 -Agonists (e.g. salmeterol, formoterol, bambuterol, and slow-release oral albuterol), combinations of inhaled steroids and long-acting bronchodilators (e.g. fluticasone/salmeterol, budesonide/ formoterol), leukotriene antagonists and synthesis inhibitors (eg monteleucast, zapyrleukast and zileuton), mediator release inhibitors (eg cromoglycate and ketotifen), biological modulators of the IgE response (eg eg omalizumab), antihistamines (eg ceterizine, cinnarizine, fexofenadine), and vasoconstrictors (eg oxymetazoline, xylometazoline, naphazoline and tramazoline).
추가로, 본 발명의 화합물을 천식 및/또는 COPD에 대한 응급 요법과 함께 투여할 수도 있으며, 상기와 같은 요법은 산소 또는 헬리옥스 투여, 분무된 살부타몰 또는 터부탈린(항콜린제(예를 들어 이프라트로피움)와 임의로 병용됨), 전신 스테로이드(경구 또는 정맥 내, 예를 들어 프레드니손, 프레드니솔론, 메틸프레드니솔론, 덱사메타손 또는 하이드로코르티손), 정맥 내 살부타몰, 비-특이적 베타-작용물질, 주사제 또는 흡입제(예를 들어 에피네프린, 아이소에타린, 아이소프로테레놀, 메타프로테레놀), 항콜린제(IV 또는 분무형, 예를 들어 글리코피롤레이트, 아트로핀, 이프라트로피움), 메틸잔틴(테오필린, 아미노필린, 바미필린), 기관지확장 효과를 갖는 흡입 마취제(예를 들어 아이소플루란, 할로탄, 엔플루란), 케타민, 및 정맥 내 황산 마그네슘을 포함한다.In addition, the compounds of the present invention may be administered in conjunction with emergency therapy for asthma and/or COPD, such therapy may include administration of oxygen or Heliox, nebulized salbutamol or terbutaline (anticholinergics (e.g. ipratropium), systemic steroids (oral or intravenous, eg prednisone, prednisolone, methylprednisolone, dexamethasone or hydrocortisone), intravenous salbutamol, non-specific beta-agonists, Injectables or inhalants (e.g. epinephrine, isoetharine, isoproterenol, metaproterenol), anticholinergics (IV or spray form e.g. glycopyrrolate, atropine, ipratropium), methylxanthines ( theophylline, aminophylline, vamiphylline), inhalation anesthetics with bronchodilatory effects (eg isoflurane, halothane, enflurane), ketamine, and intravenous magnesium sulfate.
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물을 염증성 장 질병(IBD)의 치료 및/또는 예방을 위한 또 다른 치료제와 함께 투여하며, 특정한 작용제는 비제한적으로 글루코코르티코이드(예를 들어 프레드니손, 부데소니드) 합성 질병 변형, 면역조절제(예를 들어 메토트렉세이트, 레플루노미드, 설파살라진, 메살라진, 아자티오프린, 6-머캅토퓨린 및 시클로스포린) 및 생물학적 질병 변형, 면역조절제(인플릭시맵, 아다리뮤맵, 리툭시맵 및 아바타셉트)를 포함한다.In one embodiment, a compound of the invention is administered in combination with another therapeutic agent for the treatment and/or prevention of inflammatory bowel disease (IBD), wherein the specific agent is non-limiting to synthesis of glucocorticoids (eg prednisone, budesonide). Disease-modifying, immunomodulatory agents (eg methotrexate, leflunomide, sulfasalazine, mesalazine, azathioprine, 6-mercaptopurine and cyclosporine) and biological disease-modifying, immunomodulatory agents (infliximab, adarimumab, rituximab) and abatacept).
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물을 SLE의 치료 및/또는 예방을 위한 또 다른 치료제와 함께 투여하며, 특정한 작용제는 비제한적으로 질병-변형 항류마티스 약물(DMARD), 예를 들어 항말라리아약(예를 들어 플라퀘닐, 하이드록시클로로퀸), 면역억제제(예를 들어 메토트렉세이트 및 아자티오프린), 사이클로포스파미드 및 마이코페놀산, 면역억제성 약물 및 진통제, 예를 들어 비스테로이드성 소염 약물, 오피에이트(예를 들어 덱스트로프로폭시펜 및 코-코다몰), 오피오이드(예를 들어 하이드로코돈, 옥시코돈, MS 콘틴, 또는 메타돈), 및 펜타닐 듀라제식 경피 패치를 포함한다.In one embodiment, a compound of the invention is administered in combination with another therapeutic agent for the treatment and/or prevention of SLE, the specific agent being, but not limited to, a disease-modifying antirheumatic drug (DMARD), such as an antimalarial drug. (e.g. plaquenil, hydroxychloroquine), immunosuppressants (e.g. methotrexate and azathioprine), cyclophosphamide and mycophenolic acid, immunosuppressive drugs and analgesics such as non-steroidal anti-inflammatory drugs, opiates (eg dextropropoxyfen and co-codamol), opioids (eg hydrocodone, oxycodone, MS Contin, or methadone), and fentanyl duraze type transdermal patches.
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물을 건선의 치료 및/또는 예방을 위한 또 다른 치료제와 함께 투여하며, 특정한 작용제는 비제한적으로 국소 치료제, 예를 들어 입욕액, 보습제, 콜 타르를 함유하는 약물첨가된 크림 및 연고, 다이트라놀(안트랄린), 코르티코스테로이드 유사 데속시메타손(토피코트(Topicort)(상표)), 플루오시노니드, 비타민 D3 유사체(예를 들어 칼시포트리올), 아르간 오일 및 레티노이드(에트레티네이트, 아시트레틴, 타자로텐), 전신 치료제, 예를 들어 메토트렉세이트, 사이클로스포린, 레티노이드, 티오구아닌, 하이드록시유레아, 설파살라진, 마이코페놀레이트 모페틸, 아자티오프린, 타크로리무스, 퓨마르산 에스터 또는 생물제, 예를 들어 아메비브(Amevive)(상표), 엔브렐(Enbrel)(상표), 휴미라(Humira)(상표), 레미케이드(Remicade)(상표), 라프티바(Raptiva)(상표) 및 유스테키누맵(IL-12 및 IL-23 차단제)을 포함한다. 추가로, 본 발명의 화합물을 다른 요법들, 예를 들어 비제한적으로 광선요법, 또는 광화학요법(예를 들어 프소랄렌 및 자외선 A 광선요법(PUVA))과 함께 투여할 수 있다.In one embodiment, a compound of the present invention is administered in combination with another therapeutic agent for the treatment and/or prevention of psoriasis, wherein the specific agent is a topical therapeutic agent, including, but not limited to, bath solutions, moisturizers, containing coal tar. medicated creams and ointments, ditranol (Anthralin), the corticosteroid analog desoximethasone (Topicort®), fluocinonide, vitamin D3 analogues (e.g. calcipotriol), Argan oil and retinoids (etretinate, acitretin, tazarotene), systemic treatments such as methotrexate, cyclosporine, retinoids, thioguanine, hydroxyurea, sulfasalazine, mycophenolate mofetil, azathioprine, tacrolimus, puma Lric acid esters or biologics such as Amevive (trademark), Enbrel (trademark), Humira (trademark), Remicade (trademark), Raptiva (trademark) ) and ustekinumab (IL-12 and IL-23 blocker). Additionally, the compounds of the present invention may be administered in conjunction with other therapies, including but not limited to phototherapy or photochemotherapy (eg psoralen and ultraviolet A phototherapy (PUVA)).
하나의 실시태양에서, 본 발명의 화합물을 알러지 반응의 치료 및/또는 예방을 위한 또 다른 치료제와 함께 투여하며, 특정한 작용제는 비제한적으로 항히스타민제(예를 들어 세티리진, 다이펜하이드라민, 펙소페나딘, 레보세티리진), 글루코코르티코이드(예를 들어 프레드니손, 베타메타손, 베클로메타손, 덱사메타손), 에피네프린, 테오필린 또는 항-류코트리엔(예를 들어 몬테류카스트 또는 자피르류카스트), 항-콜린제 및 울혈완화제를 포함한다.In one embodiment, a compound of the present invention is administered in combination with another therapeutic agent for the treatment and/or prevention of an allergic reaction, the particular agent being an antihistamine, including but not limited to, cetirizine, diphenhydramine, fexofenadine. , levocetirizine), glucocorticoids (eg prednisone, betamethasone, beclomethasone, dexamethasone), epinephrine, theophylline or anti-leukotrienes (eg montelukast or zapirleukast), anti-cholinergics and congestion Contains laxatives.
동시 투여는 숙련가에게 자명한 바와 같이 2개 이상의 치료제를 동일한 치료 섭생의 부분으로서 환자에게 전달하는 임의의 수단을 포함한다. 2개 이상의 작용제를 단일 제형으로 동시에 투여할 수도 있지만, 이는 필수적인 것은 아니다. 상기 작용제들을 상이한 제형으로 상이한 시점에서 투여할 수도 있다.Simultaneous administration includes any means of delivering two or more therapeutic agents to a patient as part of the same treatment regimen, as will be apparent to the skilled artisan. Two or more agents may be administered simultaneously in a single dosage form, although this is not required. The agents may be administered at different times in different formulations.
화학 합성 과정chemical synthesis process
일반적인 내용general content
본 발명의 화합물을 하기의 일반적인 방법 및 과정을 사용하여 쉽게 입수할 수 있는 출발 물질로부터 제조할 수 있다. 전형적이거나 바람직한 공정 조건(즉 반응 온도, 시간, 반응물들의 몰비, 용매, 압력 등)이 주어지는 경우, 달리 나타내지 않는 한 다른 공정 조건들을 또한 사용할 수 있음을 알 것이다. 최적의 반응 조건은 사용되는 특정 반응물 또는 용매에 따라 변할 수 있지만, 상기와 같은 조건들은 통상적인 최적화 과정에 의해 당해 분야의 숙련가에 의해 결정될 수 있다.Compounds of the present invention can be prepared from readily available starting materials using the following general methods and procedures. It will be appreciated that where typical or preferred process conditions (ie reaction temperature, time, molar ratios of reactants, solvents, pressures, etc.) are given, other process conditions may also be used unless otherwise indicated. Optimum reaction conditions may vary depending on the particular reactants or solvents used, but such conditions can be determined by one skilled in the art by routine optimization procedures.
추가로, 당해 분야의 숙련가들에게 자명한 바와 같이, 몇몇 작용기들이 바람직하지 못한 반응을 겪지 않도록 하기 위해서 통상적인 보호 그룹이 필요할 수 있다. 특정 작용기에 적합한 보호 그룹뿐만 아니라 보호 및 탈보호에 적합한 조건의 선택은 당해 분야에 널리 공지되어 있다(Greene, T W; Wuts, P G M;, 1991).Additionally, as will be apparent to those skilled in the art, conventional protecting groups may be required to prevent some functional groups from undergoing undesirable reactions. The selection of suitable protecting groups for specific functional groups as well as suitable conditions for protection and deprotection are well known in the art (Greene, T W; Wuts, P G M;, 1991).
하기의 방법들을 본 발명에서 상기에 나열한 본 발명의 화합물의 제조에 관한 상세한 내용과 함께 제공한다. 본 발명의 화합물을 유기 합성 분야의 숙련가에 의해 공지되거나 상업적으로 입수할 수 있는 출발 물질 및 시약으로부터 제조할 수 있다.The following methods are provided herein, along with details regarding the preparation of the compounds of the invention listed above. Compounds of the present invention can be prepared by those skilled in the art of organic synthesis from known or commercially available starting materials and reagents.
모든 시약들은 상업적인 등급의 것들이었으며 달리 나타내지 않는 한 추가의 정제 없이 제공받은 대로 사용되었다. 상업적으로 입수할 수 있는 무수 용매를 불활성 분위기 하에서 수행된 반응들에 사용하였다. 달리 나타내지 않는 한 다른 모든 경우는 시약 등급 용매가 사용되었다. 컬럼 크로마토그래피를 실리카젤 60(35 내지 70 ㎛) 상에서 수행하였다. 박층 크로마토그래피를 사전-코팅된 실리카젤 F-254 플레이트(두께 0.25 ㎜)를 사용하여 수행하였다. 1H NMR 스펙트럼은 브룩커 DPX 400 NMR 분광계(400 MHz) 또는 브룩커 어드밴스 300 NMR 분광계(300 MHz) 상에 기록되었다. 1H NMR 스펙트럼에 대한 화학 이동(δ)은 내부 기준으로서 테트라메틸실란(δ 0.00) 또는 적합한 잔류 용매 피크, 즉 CHCl3(δ 7.27)에 대한 백만당 부(ppm)로 보고된다. 다중도는 단일선(s), 이중선(d), 삼중선(t), 사중선(q), 오중선(quin), 다중선(m) 및 브로드(br)로서 제공된다. 전기분무 MS 스펙트럼을 워터스 플랫폼(Waters platform) LC/MS 분광계 상에서 또는 워터스 매스(Waters Mass) 검출기 3100 분광계에 커플링된 워터스 액퀴티(Waters Acquity) H-클래스 UPLC로 획득하였다. 사용된 컬럼: 워터스 액퀴티 UPLC BEH C18 1.7 ㎛, 2.1 ㎜ ID x 50 ㎜ L, 워터스 액퀴티 UPLC BEH C18 1.7 ㎛, 2.1 ㎜ ID x 30 ㎜ L, 또는 워터스 엑스테라(Xterra) MS 5 ㎛ C18, 100 x 4.6 ㎜. 상기 방법들은 MeCN/H2O 구배(H2O는 0.1% TFA 또는 0.1% NH3을 함유한다) 또는 MeOH/H2O 구배(H2O는 0.05% TFA를 함유한다)를 사용한다. 극초단파 가열을 바이오테이지 이니시에이터(Biotage Initiator)로 수행하였다.All reagents were of commercial grade and used as received without further purification unless otherwise indicated. Anhydrous commercially available solvents were used for reactions conducted under an inert atmosphere. In all other cases, reagent grade solvents were used unless otherwise indicated. Column chromatography was performed on silica gel 60 (35-70 μm). Thin layer chromatography was performed using pre-coated silica gel F-254 plates (0.25 mm thick). 1 H NMR spectra were recorded on a Brooker DPX 400 NMR spectrometer (400 MHz) or a Brooker Advance 300 NMR spectrometer (300 MHz). Chemical shifts (δ) for 1H NMR spectra are reported in parts per million (ppm) relative to tetramethylsilane (δ 0.00) as an internal standard or a suitable residual solvent peak, CHCl 3 (δ 7.27). Multiplicities are given as singlet (s), doublet (d), triplet (t), quartet (q), quintet (quin), multiplet (m) and broad (br). Electrospray MS spectra were acquired on a Waters platform LC/MS spectrometer or with a Waters Acquity H-class UPLC coupled to a Waters Mass detector 3100 spectrometer. Columns used: Waters Acquity UPLC BEH C18 1.7 μm, 2.1 mm ID x 50 mm L, Waters Acquity UPLC BEH C18 1.7 μm, 2.1 mm ID x 30 mm L, or Waters Xterra MS 5 μm C18, 100 x 4.6 mm. The methods use a MeCN/H 2 O gradient (H 2 O contains 0.1% TFA or 0.1% NH 3 ) or MeOH/H 2 O gradient (H 2 O contains 0.05% TFA). Microwave heating was performed with a Biotage Initiator.
예비 HPLC 정제를 ZQ 단일 사중극 질량 분광계와 커플링된 질량-지시된 자동-정제 시스템으로 수행하였다. 모든 HPLC 정제를 H2O(상이한 pH)/MeCN의 구배로 수행하였다. 염기성 조건하에서의 예비 HPLC 분리는 대개 BEH 엑스브리지 C18(5 ㎛, 19 x 5 ㎜) 예비컬럼 및 BEH 엑스브리지 C18(5 ㎛, 19 x 100 ㎜)을 사용하여 수행되었다. 산성 조건하에서의 분리는 대개 CSH 셀렉트(Select) C18(5 ㎛, 19 x 5 ㎜) 예비컬럼 및 CSH 셀렉트 C18(5 ㎛, 19 x 100 ㎜)을 사용하여 수행되었다. 초점 구배는 10분의 주기 시간으로 5분간 수중 x%에서부터 x+25% 아세토나이트릴까지였다. 상기 컬럼 유량은 20 ㎖/분이었다. 주입 부피는 200 내지 750 ㎕의 범위였다. 모세관 분할기를 사용하여 컬럼 분리 후의 흐름을 상기 질량 분광계로 전환시켰으며 상기는 1 ㎖/분의 메이크-업 흐름에 의해 희석되었다. 상기 메이크-업 흐름은 메탄올 중의 0.1% 포름산이다. 모든 샘플을 워터스 질량 지시된 분획 콜렉션에 의해 정제하였다.Preparative HPLC purification was performed with a mass-directed auto-purification system coupled with a ZQ single quadrupole mass spectrometer. All HPLC purifications were performed with a gradient of H 2 O (different pH)/MeCN. Preparative HPLC separations under basic conditions were usually performed using a BEH XBridge C18 (5 μm, 19 x 5 mm) precolumn and a BEH XBridge C18 (5 μm, 19 x 100 mm). Separation under acidic conditions was usually performed using a CSH Select C18 (5 μm, 19 x 5 mm) precolumn and a CSH Select C18 (5 μm, 19 x 100 mm). The focus gradient was from x% in water to x+25% acetonitrile in 5 minutes with a cycle time of 10 minutes. The column flow rate was 20 ml/min. Injection volumes ranged from 200 to 750 μl. The flow after column separation was diverted to the mass spectrometer using a capillary splitter and diluted by a make-up flow of 1 ml/min. The make-up flow is 0.1% formic acid in methanol. All samples were purified by Waters Mass Directed Fraction Collection.
[표 I][Table I]
실험 부분에 사용된 약어들의 목록List of abbreviations used in the experimental part
본 발명 화합물의 합성적 제조Synthetic Preparation of Compounds of the Invention
실시예 1. 본 발명의 중간체 화합물들의 합성Example 1. Synthesis of Intermediate Compounds of the Invention
1.1. 비스-(4-메톡시-벤질)-아민(Int.1)의 합성1.1. Synthesis of bis-(4-methoxy-benzyl)-amine (Int.1)
p-아니스알데하이드(411 mmol), 4-메톡시벤질아민(411 mmol) 및 톨루엔(500 ㎖)을 응축기 및 딘-스타크 트랩이 장착된 환저 플라스크에서 합하였다. 반응물을 1시간 동안 환류시켰으며 이러는 동안 물을 상기 반응 혼합물로부터 제거하였다. 상기 반응물을 냉각시키고 농축시켰다. 잔사를 MeOH(120 ㎖)에 용해시켰다. 상기 혼합물을 5 ℃로 냉각시키고 NaBH4(205 mmol)를 45분에 걸쳐 나누어 가하였다. 상기 반응물을 서서히 가열 환류시켰다. 환류하에서 2시간 후에, 상기 반응물을 실온으로 냉각시키고 농축시켰다. 상기 잔사를 EtOAc에 용해시켰다. 유기층을 세척하고(3 x H2O 및 염수), 건조시키고(Na2SO4), 농축시켜 목적하는 생성물을 제공하였다.p-Anisaldehyde (411 mmol), 4-methoxybenzylamine (411 mmol) and toluene (500 mL) were combined in a round bottom flask equipped with a condenser and Dean-Stark trap. The reaction was refluxed for 1 hour during which time water was removed from the reaction mixture. The reaction was cooled and concentrated. The residue was dissolved in MeOH (120 mL). The mixture was cooled to 5 °C and NaBH 4 (205 mmol) was added portionwise over 45 min. The reaction was slowly heated to reflux. After 2 hours under reflux, the reaction was cooled to room temperature and concentrated. The residue was dissolved in EtOAc. The organic layer was washed (3 x H 2 O and brine), dried (Na 2 SO 4 ) and concentrated to give the desired product.
1.2. (6-브로모-1-메틸-1H-벤조이미다졸-4-일)-비스-(4-메톡시-벤질)-아민(Int.2)의 합성1.2. Synthesis of (6-bromo-1-methyl-1H-benzoimidazol-4-yl)-bis-(4-methoxy-benzyl)-amine (Int.2)
1.2.1. 단계 i: 5-브로모-1,3-다이플루오로-2-나이트로-벤젠1.2.1. Step i: 5-Bromo-1,3-difluoro-2-nitro-benzene
AcOH(150 ㎖) 중의 4-브로모-2,6-다이플루오로아닐린(240 mmol)의 용액을 70 ℃에서 30분 동안 AcOH(450 ㎖) 중의 NaBO3·4H2O(325 mmol)의 현탁액에 적가하였다. 또 다른 2080 mmol의 NaBO3·4H2O를 5시간에 걸쳐 상기 혼합물에 가하였다. 이 기간 동안 상기 혼합물을 70 ℃에서 교반하였다. 상기 혼합물을 물에 붓고 Et2O로 추출하였다. 유기층을 상술한 동일 조건을 사용하여 또 다른 반응물로부터 수득한 또 다른 Et2O 용액과 합하였다. 상기 혼합물을 농축시켰다. 침전물이 형성되었으며 이를 여과에 의해 분리시켰다. 상기 여액을 농축시켜 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 석유 에테르) 후에 목적하는 생성물을 제공하였다.A solution of 4-bromo-2,6-difluoroaniline (240 mmol) in AcOH (150 mL) was added to a suspension of NaBO 3 4H 2 O (325 mmol) in AcOH (450 mL) at 70 °C for 30 min. was added to Another 2080 mmol of NaBO 3 .4H 2 O was added to the mixture over 5 hours. During this period the mixture was stirred at 70 °C. The mixture was poured into water and extracted with Et 2 O. The organic layer was combined with another Et 2 O solution from another reactant using the same conditions as described above. The mixture was concentrated. A precipitate formed and was isolated by filtration. The filtrate was concentrated to give the desired product after flash column chromatography (SiO 2 , petroleum ether).
1.2.2. 단계 ii: (5-브로모-3-플루오로-2-나이트로-페닐)-메틸-아민1.2.2. Step ii: (5-Bromo-3-fluoro-2-nitro-phenyl)-methyl-amine
THF(82 ㎖) 중의 2M MeNH2를 THF(1 L) 중의 5-브로모-1,3-다이플루오로-2-나이트로벤젠(164 mmol) 및 Cs2CO3(197 mmol)의 용액에 적가하였다. 반응 혼합물을 0 ℃에서 1시간 동안 교반하고 이어서 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 용매를 감압하에서 제거하였다. 잔사를 EtOAc와 H2O 사이에 분배시켰다. 상기 두 상을 분리시키고 유기층을 건조시키고(Na2SO4) 농축시켜 목적하는 생성물을 제공하였다.2M MeNH 2 in THF (82 mL) was added to a solution of 5-bromo-1,3-difluoro-2-nitrobenzene (164 mmol) and Cs 2 CO 3 (197 mmol) in THF (1 L). it was added The reaction mixture was stirred at 0 °C for 1 hour and then at room temperature for 1 hour. The solvent was removed under reduced pressure. The residue was partitioned between EtOAc and H 2 O. The two phases were separated and the organic layer was dried (Na 2 SO 4 ) and concentrated to give the desired product.
1.2.3. 단계 iii: 5-브로모-N,N-비스-(4-메톡시-벤질)-N'-메틸-2-나이트로-벤젠-1,3-다이아민1.2.3. Step iii: 5-Bromo-N,N-bis-(4-methoxy-benzyl)-N'-methyl-2-nitro-benzene-1,3-diamine
비스-(4-메톡시-벤질)-아민(346 mmol), 5-브로모-3-플루오로-N-메틸-2-나이트로아닐린(297 mmol) 및 Et3N(891 mmol)의 혼합물을 120 ℃에서 16시간 동안 교반하였다. 이어서 상기 혼합물을 냉각시켰다. 조 물질을 상술한 동일한 과정에 따라 수득된 또 다른 물질과 합하였다. 생성 혼합물을 EtOAc에서 희석하고 세척하였다(2 x 0.2M HCl, H2O 및 포화된 NaHCO3). 유기상을 건조시키고(Na2SO4) 농축시켜 목적하는 생성물을 제공하였다.A mixture of bis-(4-methoxy-benzyl)-amine (346 mmol), 5-bromo-3-fluoro-N-methyl-2-nitroaniline (297 mmol) and Et 3 N (891 mmol) was stirred at 120 °C for 16 hours. The mixture was then cooled. The crude material was combined with another material obtained according to the same procedure as described above. The resulting mixture was diluted in EtOAc and washed (2 x 0.2M HCl, H 2 O and saturated NaHCO 3 ). The organic phase was dried (Na 2 SO 4 ) and concentrated to give the desired product.
1.2.4. 단계 iv: 5-브로모-N,N-비스-(4-메톡시-벤질)-N"-메틸-벤젠-1,2,3-트라이아민1.2.4. Step iv: 5-Bromo-N,N-bis-(4-methoxy-benzyl)-N"-methyl-benzene-1,2,3-triamine
1:1 MeOH/THF(1 L) 중의 5-브로모-N,N-비스-(4-메톡시-벤질)-N'-메틸-2-나이트로-벤젠-1,3-다이아민(170 mmol), NH4Cl(2038 mmol) 및 Zn(2034 mmol)의 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 0 ℃로 냉각시키고 HCOOH(20 ㎖)를 서서히 가하였다. 상기 혼합물을 실온에 도달되게 하고 1시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 여과하고 상술한 과정에 따라 수득한 또 다른 혼합물과 합하였다. 생성 혼합물을 농축시켰다. 잔사를 DCM에 용해시켰다. 유기 혼합물을 세척하고(포화된 NH4Cl), 건조시키고(Na2SO4) 농축시켜 목적하는 생성물을 제공하였다.5-Bromo-N,N-bis-(4-methoxy-benzyl)-N'-methyl-2-nitro-benzene-1,3-diamine ( 170 mmol), NH 4 Cl (2038 mmol) and Zn (2034 mmol) was stirred at room temperature for 1 hour. The mixture was cooled to 0 °C and HCOOH (20 mL) was added slowly. The mixture was allowed to reach room temperature and stirred for 1 hour. The mixture was filtered and combined with another mixture obtained according to the procedure described above. The resulting mixture was concentrated. The residue was dissolved in DCM. The organic mixture was washed (saturated NH 4 Cl), dried (Na 2 SO 4 ) and concentrated to give the desired product.
1.2.5. 단계 v: (6-브로모-1-메틸-1H-벤조이미다졸-4-일)-비스-(4-메톡시-벤질)-아민1.2.5. Step v: (6-Bromo-1-methyl-1H-benzoimidazol-4-yl)-bis-(4-methoxy-benzyl)-amine
5-브로모-N,N-비스-(4-메톡시-벤질)-N"-메틸-벤젠-1,2,3-트라이아민(170 mmol)을 HC(OEt)3(100 mol) 및 MeCN(500 ㎖)의 혼합물에 용해시켰다. 상기 혼합물을 85 ℃에서 5시간 동안 교반하고 실온에서 대략 16시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 상술한 과정에 따라 수득한 또 다른 혼합물과 합하였다. 생성 혼합물을 농축시키고 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 15:85에서 60:40 EtOAc/석유 에테르)에 의해 정제시켜 생성물을 수득하였다.5-Bromo-N,N-bis-(4-methoxy-benzyl)-N"-methyl-benzene-1,2,3-triamine (170 mmol) was reacted with HC(OEt) 3 (100 mol) and Dissolved in the mixture of MeCN (500mL).This mixture was stirred at 85 DEG C for 5 hours and at room temperature for about 16 hours.This mixture was combined with another mixture obtained according to the procedure described above. was concentrated and the residue was purified by flash column chromatography (SiO 2 , 15:85 to 60:40 EtOAc/petroleum ether) to give the product.
1.3. 5-{7-[비스-(4-메톡시-벤질)-아미노]-3-메틸-3H-벤조이미다졸-5-일옥시}-4-메틸-피리딘-2-카보나이트릴(Int. 3)의 합성.1.3. 5-{7-[bis-(4-methoxy-benzyl)-amino]-3-methyl-3H-benzoimidazol-5-yloxy}-4-methyl-pyridine-2-carbonitrile (Int. 3 ) of the synthesis.
1.3.1. 단계 i: 비스-(4-메톡시-벤질)-[1-메틸-6-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]다이옥사보로란-2-일)-1H-벤조이미다졸-4-일]-아민1.3.1. Step i: Bis-(4-methoxy-benzyl)-[1-methyl-6-(4,4,5,5-tetramethyl-[1,3,2]dioxaborolan-2-yl)- 1H-benzoimidazol-4-yl]-amine
DMF(150 ㎖) 중의 (6-브로모-1-메틸-1H-벤조이미다졸-4-일)-비스-(4-메톡시-벤질)-아민(54 mmol), 비스(피나콜레이토)다이보론(81 mmol), PdCl2(dppf).DCM(2.71 mmol) 및 KOAc(162.5 mmol)의 혼합물을 질소 스트림하에서 5분 동안 초음파처리하였다. 이어서 상기 혼합물을 응축기가 구비된 환저 플라스크에서 1시간 동안 110 ℃에서 교반하였다. 상기 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 여액을 농축시켰다. 잔사를 EtOAc에 용해시키고 유기층을 세척하고(H2O), 건조시키고(Na2SO4) 농축시켜 목적하는 생성물을 제공하였다.(6-Bromo-1-methyl-1H-benzoimidazol-4-yl)-bis-(4-methoxy-benzyl)-amine (54 mmol), bis(pinacolato) in DMF (150 mL) A mixture of diboron (81 mmol), PdCl 2 (dppf).DCM (2.71 mmol) and KOAc (162.5 mmol) was sonicated under a stream of nitrogen for 5 min. The mixture was then stirred at 110 °C for 1 hour in a round bottom flask equipped with a condenser. The mixture was filtered through a celite pad and the filtrate was concentrated. The residue was dissolved in EtOAc and the organic layer was washed (H 2 O), dried (Na 2 SO 4 ) and concentrated to give the desired product.
1.3.2. 단계 ii: 5-{7-[비스-(4-메톡시-벤질)-아미노]-3-메틸-3H-벤조이미다졸-5-일옥시}-4-메틸-피리딘-2-카보나이트릴1.3.2. Step ii: 5-{7-[bis-(4-methoxy-benzyl)-amino]-3-methyl-3H-benzoimidazol-5-yloxy}-4-methyl-pyridine-2-carbonitrile
H2O(20 ㎖) 중의 30 중량% H2O2를 DMF(600 ㎖) 중의 N,N-비스(4-메톡시벤질)-1-메틸-6-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보로란-2-일)-1H-벤조[d]이미다졸-4-아민(58.5 mmol)의 용액에 가하고 혼합물을 실온에서 대략 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 5% 수성 Na2SO3로 급냉시켰다. 상기 혼합물을 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 세척하고(H2O), 건조시키고(Na2SO4) 농축시켜 목적하는 생성물을 제공하였다.30 wt % H 2 O 2 in H 2 O (20 mL) was dissolved in N,N-bis(4-methoxybenzyl)-1-methyl-6-(4,4,5,5- It was added to a solution of tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-1H-benzo[d]imidazol-4-amine (58.5 mmol) and the mixture was stirred at room temperature for approximately 16 hours. The reaction was quenched with 5% aqueous Na 2 SO 3 . The mixture was extracted with EtOAc. The organic layer was washed (H 2 O), dried (Na 2 SO 4 ) and concentrated to give the desired product.
1.4. 일반적인 방법: 오쏘-방향 요오드화1.4. General Method: Ortho-Directional Iodination
여기에서 W는 -N=, -CH=, -C(Cl)=일 수 있고; Y는 -N=, -C(CN)=일 수 있다.Wherein W can be -N=, -CH=, -C(Cl)=; Y may be -N=, -C(CN)=.
1.4.1. 방법 A11.4.1. Method A1
EtOH 중의 아미노 방향족 또는 헤테로방향족 출발 물질(1 당량), Ag2SO4(1 당량) 및 I2(1 당량)의 혼합물을 실온 내지 50 ℃ 범위의 온도에서 1시간 내지 대략 16시간까지 변할 수 있는 기간 동안 교반한다. 상기 혼합물을 여과하고, 농축시키고 유기 용매 중에서 희석한다. 상기 유기 혼합물은 수성 후처리를 겪는다. 용매를 감압하에서 제거하고 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제시켜 목적하는 생성물을 제공한다.A mixture of amino aromatic or heteroaromatic starting material (1 equiv.), Ag 2 SO 4 (1 equiv.) and I 2 (1 equiv.) in EtOH at a temperature ranging from room temperature to 50 °C for a period varying from 1 hour to approximately 16 hours. Stir for a period of time. The mixture is filtered, concentrated and diluted in an organic solvent. The organic mixture is subjected to an aqueous work-up. The solvent is removed under reduced pressure and the residue is purified by flash column chromatography to give the desired product.
1.4.2. 방법 A1의 예시적인 실시예: 4-아미노-3-플루오로-5-요오도-벤조나이트릴(Int.4)의 합성.1.4.2. Illustrative Example of Method A1: Synthesis of 4-amino-3-fluoro-5-iodo-benzonitrile (Int.4).
EtOH(700 ㎖) 중의 4-아미노-3-플루오로벤조나이트릴(147 mmol), I2(147 mmol) 및 Ag2SO4(147 mmol)의 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 여과하고 농축시켰다. 잔사를 EtOAc에 용해시키고 세척하였다(포화된 Na2S2O3 x 3). 유기층을 건조시키고(Na2SO4) 농축시켰다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 95:5에서 70:30 사이클로헥산/EtOAc)에 의해 정제시켜 목적하는 생성물을 제공하였다.A mixture of 4-amino-3-fluorobenzonitrile (147 mmol), I 2 (147 mmol) and Ag 2 SO 4 (147 mmol) in EtOH (700 mL) was stirred at room temperature for 1.5 h. The mixture was filtered and concentrated. The residue was dissolved in EtOAc and washed (saturated Na 2 S 2 O 3 x 3). The organic layer was dried (Na 2 SO 4 ) and concentrated. The residue was purified by flash column chromatography (SiO 2 , 95:5 to 70:30 cyclohexane/EtOAc) to provide the desired product.
1.4.3. 방법 A21.4.3. Method A2
EtOH 중의 아미노 방향족 또는 헤테로방향족 출발 물질(1 당량), Ag2SO4(3 내지 4 당량) 및 I2(3 내지 4 당량)의 혼합물을 70 ℃에서 16시간 동안 교반한다. 추가 당량의 I2 및 Ag2SO4를 가하여 상기 전환을 증가시킬 수 있다. 상기 혼합물을 여과하고 농축시킨다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제시켜 목적하는 생성물을 제공한다.A mixture of amino aromatic or heteroaromatic starting material (1 equiv.), Ag 2 SO 4 (3-4 equiv.) and I 2 (3-4 equiv.) in EtOH is stirred at 70° C. for 16 h. Additional equivalents of I 2 and Ag 2 SO 4 can be added to increase this conversion. The mixture is filtered and concentrated. The residue is purified by flash column chromatography to give the desired product.
1.5. 방법 A2의 예시적인 실시예: 5-아미노-6-플루오로-4-요오도-피리딘-2-카보나이트릴(Int.5)의 합성.1.5. Illustrative Example of Method A2: Synthesis of 5-amino-6-fluoro-4-iodo-pyridine-2-carbonitrile (Int.5).
EtOH(200 ㎖) 중의 Int.11(3.62 mmol), I2(14.5 mmol) 및 Ag2SO4(14.5 mmol)의 혼합물을 70 ℃에서 16시간 동안 교반하였다. 5 당량의 I2 및 Ag2SO4를 더 가하고 반응물을 70 ℃에서 추가로 72시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 여과하고, 농축시키고 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 20:80에서 40:60 EtOAc/사이클로헥산)에 의해 정제시켜 목적하는 생성물을 제공하였다.A mixture of Int.11 (3.62 mmol), I 2 (14.5 mmol) and Ag 2 SO 4 (14.5 mmol) in EtOH (200 mL) was stirred at 70 °C for 16 h. A further 5 equivalents of I 2 and Ag 2 SO 4 were added and the reaction was stirred at 70 °C for an additional 72 hours. The mixture was filtered, concentrated and purified by flash column chromatography (SiO 2 , 20:80 to 40:60 EtOAc/cyclohexane) to give the desired product.
1.6. 일반적인 방법: 네기시 반응에 의한 나이트릴기의 도입1.6. General Method: Introduction of Nitrile Group by Negishi Reaction
여기에서 RA는 아릴 또는 헤테로아릴일 수 있고; X는 Cl, Br 또는 I일 수 있다.wherein R A can be aryl or heteroaryl; X can be Cl, Br or I.
1.6.1. 방법 B1.6.1. Method B
DMF 중의 아릴/헤테로아릴 할라이드(1 당량), 아연 시아나이드(1 내지 3 당량), Pd(PPh3)4(0.1 내지 0.2 당량)의 혼합물을 5분 내지 0.5시간 범위의 기간 동안 극초단파 장치에서 150 ℃에서 가열한다. 상기 혼합물을 여과하고 농축시킨다. 잔사를 유기 용매로 희석한다. 상기 유기 혼합물을 후처리하고 용매를 감압하에서 제거한다. 잔사를 연마하거나 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제시켜 목적하는 생성물을 제공한다.A mixture of aryl/heteroaryl halide (1 eq.), zinc cyanide (1 to 3 eq.), and Pd(PPh 3 ) 4 (0.1 to 0.2 eq.) in DMF was heated at 150 °C in a microwave apparatus for a period ranging from 5 min to 0.5 h. heated at °C. The mixture is filtered and concentrated. The residue is diluted with an organic solvent. The organic mixture is worked up and the solvent is removed under reduced pressure. The residue is triturated or purified by flash column chromatography to give the desired product.
1.6.2. 방법 B의 예시적인 실시예: 5-플루오로-4-메틸-피리딘-2-카보나이트릴(Int.7)의 합성1.6.2. Illustrative Example of Method B: Synthesis of 5-fluoro-4-methyl-pyridine-2-carbonitrile (Int.7)
극초단파 튜브를 DMF(20 ㎖) 중의 2-클로로-5-플루오로-4-메틸피리딘(5.5 mmol), Zn(CN)2(16.6 mmol), Pd(PPh3)4(1.1 mmol)로 충전하였다. 혼합물을 극초단파 반응기에서 150 ℃에서 5분 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 상술한 과정에 따라 수득한 다른 조물질과 합하였다. 생성 혼합물을 여과하였다. 여액을 감압하에서 농축시켰다. 잔사를 EtOAc로 희석하고, 세척하고(포화된 NH4Cl), 건조시키고(Na2SO4) 농축시켰다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 5:95에서 15:85 EtOAc/석유 에테르)에 의해 정제시켜 목적하는 생성물을 제공하였다.A microwave tube was charged with 2-chloro-5-fluoro-4-methylpyridine (5.5 mmol), Zn(CN) 2 (16.6 mmol), Pd(PPh 3 ) 4 (1.1 mmol) in DMF (20 mL). . The mixture was stirred in a microwave reactor at 150 °C for 5 minutes. This mixture was combined with other crude materials obtained according to the procedure described above. The resulting mixture was filtered. The filtrate was concentrated under reduced pressure. The residue was diluted with EtOAc, washed (saturated NH 4 Cl), dried (Na 2 SO 4 ) and concentrated. The residue was purified by flash column chromatography (SiO 2 , 5:95 to 15:85 EtOAc/petroleum ether) to provide the desired product.
1.7. 일반적인 방법: 메틸 보론산에 의한 스즈키1.7. General Method: Suzuki with Methyl Boronic Acid
여기에서 W는 -N=, -CH=, -C(Cl)=일 수 있고; Y는 -N=, -C(CN)=일 수 있고; X는 -I 또는 -Br일 수 있다.Wherein W can be -N=, -CH=, -C(Cl)=; Y can be -N=, -C(CN)=; X can be -I or -Br.
1.7.1. 방법 C1.7.1. Method C
1,4-다이옥산 중의 방향족/헤테로방향족 할라이드(1 당량), 메틸 보론산(1.3 내지 3 당량), Pd(dppf)Cl2.DCM(0.11 내지 0.2 당량) 및 Cs2CO3(3 내지 5 당량)의 혼합물을 100 ℃에서 교반한다. 혼합물을 유기 용매로 희석한다. 상기 유기 혼합물을 후처리하고 용매를 감압하에서 제거한다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제시켜 목적하는 생성물을 제공한다.Aromatic/heteroaromatic halides (1 equiv.), methyl boronic acid (1.3-3 equiv.), Pd(dppf)Cl 2 .DCM (0.11-0.2 equiv.) and Cs 2 CO 3 (3-5 equiv.) in 1,4-dioxane. ) is stirred at 100 °C. Dilute the mixture with an organic solvent. The organic mixture is worked up and the solvent is removed under reduced pressure. The residue is purified by flash column chromatography to give the desired product.
1.7.2. 방법 C의 예시적인 실시예: 5-아미노-6-플루오로-4-메틸-피리딘-2-카보나이트릴(Int.12)의 합성1.7.2. Illustrative Example of Method C: Synthesis of 5-amino-6-fluoro-4-methyl-pyridine-2-carbonitrile (Int.12)
1,4-다이옥산(8 ㎖) 중의 Int.5(3 mmol), 메틸 보론산(9.1 mmol), Pd(dppf)Cl2.DCM(0.32 mmol) 및 Cs2CO3(15.2 mmol)의 혼합물을 105 ℃에서 5시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 희석하고(EtOAc), 세척하고(포화된 NaHCO3), 건조시키고(Na2SO4), 농축시켰다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 10:90에서 50:50 EtOAc/석유 에테르)에 의해 정제시켜 목적하는 생성물을 제공하였다.A mixture of Int.5 (3 mmol), methyl boronic acid (9.1 mmol), Pd(dppf)Cl 2 .DCM (0.32 mmol) and Cs 2 CO 3 (15.2 mmol) in 1,4-dioxane (8 mL) was Stirred at 105 °C for 5 hours. The mixture was diluted (EtOAc), washed (saturated NaHCO 3 ), dried (Na 2 SO 4 ) and concentrated. The residue was purified by flash column chromatography (SiO 2 , 10:90 to 50:50 EtOAc/petroleum ether) to provide the desired product.
1.8. 6-브로모-2-플루오로-피리딘-3-일아민(Int.15)의 합성1.8. Synthesis of 6-bromo-2-fluoro-pyridin-3-ylamine (Int.15)
AcOH 중의 2-플루오로피리딘-3-아민(44.6 mmol) 및 KOAc(44.6 mmol)의 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 0 ℃로 냉각시키고 Br2(44.6 mmol)을 적가하였다. 상기 혼합물을 0 ℃에서 15분 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 농축시키고 잔사를 EtOAc/MeOH에 용해시켰다. 유기 용액을 세척하고(포화된 NaHCO3, 포화된 Na2S2O3), 건조시키고(Na2SO4) 농축시켰다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 100:0에서 80:20 석유 에테르/EtOAc)에 의해 정제시켜 목적하는 생성물을 제공하였다.A mixture of 2-fluoropyridin-3-amine (44.6 mmol) and KOAc (44.6 mmol) in AcOH was stirred at room temperature for 1 hour. The mixture was cooled to 0 °C and Br 2 (44.6 mmol) was added dropwise. The mixture was stirred at 0 °C for 15 min. The mixture was concentrated and the residue was dissolved in EtOAc/MeOH. The organic solution was washed (saturated NaHCO 3 , saturated Na 2 S 2 O 3 ), dried (Na 2 SO 4 ) and concentrated. The residue was purified by flash column chromatography (SiO 2 , 100:0 to 80:20 petroleum ether/EtOAc) to provide the desired product.
1.9. 2-브로모-6-플루오로-4-메탄설포닐-페닐아민(Int.16)의 합성1.9. Synthesis of 2-bromo-6-fluoro-4-methanesulfonyl-phenylamine (Int.16)
AcOH 중의 2-플루오로-4-메틸설포닐-아닐린(22.76 mmol) 및 KOAc(22.7 mmol)의 혼합물을 실온에서 교반하였다. 상기 혼합물을 0 ℃로 냉각시키고 Br2(22.7 mmol)를 적가하였다. 상기 혼합물을 0 ℃에서 30분 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 농축시키고 잔사를 EtOAc에 용해시켰다. 유기 혼합물을 세척하고(포화된 NaHCO3, 포화된 Na2S2O3), 건조시키고(Na2SO4) 농축시켜 목적하는 생성물을 제공하였다.A mixture of 2-fluoro-4-methylsulfonyl-aniline (22.76 mmol) and KOAc (22.7 mmol) in AcOH was stirred at room temperature. The mixture was cooled to 0 °C and Br 2 (22.7 mmol) was added dropwise. The mixture was stirred at 0 °C for 30 min. The mixture was concentrated and the residue was dissolved in EtOAc. The organic mixture was washed (saturated NaHCO 3 , saturated Na 2 S 2 O 3 ), dried (Na 2 SO 4 ) and concentrated to give the desired product.
1.10. 4-아미노-3-에틸-5-플루오로-벤조나이트릴(Int.17)의 합성1.10. Synthesis of 4-amino-3-ethyl-5-fluoro-benzonitrile (Int.17)
Cs2CO3(46 mmol) 및 Pd(dppf)Cl2.DCM(0.76 mmol)의 혼합물을 DMF(35 ㎖) 중에 현탁시키고 질소로 탈기시켰다. H2O(400 ㎕), THF(11.5 ㎖) 중의 1M Et3B 및 DMF(5 ㎖) 중의 Int.4(7.63 mmol)의 용액을 상기 혼합물에 가하고 반응물을 60 ℃에서 30분 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 농축시키고 잔사를 EtOAc에 용해시키고 세척하고(포화된 NaHCO3, H2O), 건조시키고(Na2SO4) 농축시켰다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 100:0에서 95:5 석유 에테르/EtOAc)에 의해 정제시켜 목적하는 생성물을 제공하였다.A mixture of Cs 2 CO 3 (46 mmol) and Pd(dppf)Cl 2 .DCM (0.76 mmol) was suspended in DMF (35 mL) and degassed with nitrogen. A solution of H 2 O (400 μL), 1M Et 3 B in THF (11.5 mL) and Int.4 (7.63 mmol) in DMF (5 mL) was added to the above mixture and the reaction was stirred at 60 °C for 30 min. The mixture was concentrated and the residue was dissolved in EtOAc, washed (saturated NaHCO 3 , H 2 O), dried (Na 2 SO 4 ) and concentrated. The residue was purified by flash column chromatography (SiO2, 100:0 to 95:5 petroleum ether/EtOAc) to provide the desired product.
1.11. 일반적인 방법: NH2의 요오다이드로의 전환1.11. General Method: Conversion of NH 2 to Iodide
여기에서 R10은 Me 또는 Et일 수 있다.Here, R 10 may be Me or Et.
1.11.1. 방법 D1.11.1. Method D
농축된 HCl(6 당량)을 0 ℃에서 H2O 중의 아미노 방향족/헤테로방향족 화합물(1 당량)의 혼합물에 적가한다. H2O 중의 NaNO2(1.05 당량)의 용액을 적가한다. 생성 혼합물을 0 ℃에서 15분 동안 교반한다. H2O 중의 KI(1.05 당량)의 용액을 적가한다. 상기 혼합물을 0 ℃에서 15분 및 실온에서 1시간 동안 교반한다. 상기 혼합물을 유기 용매로 추출한다. 수성 후처리 및 감압하에서 용매의 제거 후에, 잔사를 연마 또는 크로마토그래피시켜 목적하는 생성물을 제공할 수 있다.Concentrated HCl (6 equiv.) is added dropwise to a mixture of amino aromatics/heteroaromatics (1 equiv.) in H 2 O at 0 °C. A solution of NaNO 2 (1.05 eq.) in H 2 O is added dropwise. The resulting mixture is stirred at 0 °C for 15 minutes. A solution of KI (1.05 eq.) in H 2 O is added dropwise. The mixture is stirred at 0 °C for 15 minutes and at room temperature for 1 hour. The mixture is extracted with an organic solvent. After aqueous work-up and removal of the solvent under reduced pressure, the residue can be triturated or chromatographed to give the desired product.
1.11.2. 방법 D의 예시적인 실시예: 5-요오도-4-메틸-피리딘-2-카보나이트릴(Int.18)의 합성1.11.2. Illustrative Example of Method D: Synthesis of 5-iodo-4-methyl-pyridine-2-carbonitrile (Int.18)
농축된 HCl(0.9 ㎖)을 0 ℃에서 H2O(10 ㎖) 중의 Int.8(1.88 mmol)의 혼합물에 적가한 다음 H2O(0.5 ㎖) 중의 NaNO2(1.97 mmol)의 용액을 적가하였다. 생성 혼합물을 0 ℃에서 15분 동안 교반하였다. H2O(1 ㎖) 중의 KI(1.97 mmol)의 용액을 적가하였다. 생성 혼합물을 0 ℃에서 15분 및 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 세척하고(H2O) 건조시키고 농축시켰다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 100:0에서 75:25 사이클로헥산/EtOAc)에 의해 정제시켜 목적하는 생성물을 제공하였다.Concentrated HCl (0.9 mL) was added dropwise to a mixture of Int.8 (1.88 mmol) in H 2 O (10 mL) at 0 °C followed by a solution of NaNO 2 (1.97 mmol) in H 2 O (0.5 mL). did The resulting mixture was stirred at 0 °C for 15 min. A solution of KI (1.97 mmol) in H 2 O (1 mL) was added dropwise. The resulting mixture was stirred at 0 °C for 15 minutes and at room temperature for 1 hour. The mixture was extracted with EtOAc. The organic layer was washed (H 2 O), dried and concentrated. The residue was purified by flash column chromatography (SiO 2 , 100:0 to 75:25 cyclohexane/EtOAc) to provide the desired product.
1.12. 6-브로모-4-메틸-피리딘-3-일아민(Int.20)의 합성1.12. Synthesis of 6-bromo-4-methyl-pyridin-3-ylamine (Int.20)
H2O(5 ㎖) 중의 NH4Cl(14.9 mmol) 및 철 분말(18.4 mmol)의 혼합물을 90 ℃에서 교반하였다. 2-브로모-4-메틸-5-나이트로피리딘(2.3 mmol)을 나누어 가하였다. 상기 혼합물을 90 ℃에서 1시간 15분 동안 교반하였다. 반응을 정지시키고 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 건조시키고(Na2SO4) 농축시켜 목적하는 생성물을 제공하였다.A mixture of NH 4 Cl (14.9 mmol) and iron powder (18.4 mmol) in H 2 O (5 mL) was stirred at 90 °C. 2-Bromo-4-methyl-5-nitropyridine (2.3 mmol) was added portionwise. The mixture was stirred at 90 °C for 1 hour and 15 minutes. The reaction was stopped and extracted with EtOAc. The organic layer was dried (Na 2 SO 4 ) and concentrated to give the desired product.
1.13. 4-아미노-3-클로로-5-플루오로-벤조나이트릴(Int.21)의 합성1.13. Synthesis of 4-amino-3-chloro-5-fluoro-benzonitrile (Int.21)
AcOH(300 ㎖) 중의 4-아미노-3-플루오로벤조나이트릴(184 mmol) 및 NCS(276 mmol)의 혼합물을 70 ℃에서 대략 16시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 농축시켰다. H2O를 잔사에 가하고 고체 생성물을 여과하고 세척하였다(포화된 NaHCO3 및 H2O). H2O를 제거하기 위해서, THF를 가하고 감압하에서 제거하여 목적하는 생성물을 제공하였다.A mixture of 4-amino-3-fluorobenzonitrile (184 mmol) and NCS (276 mmol) in AcOH (300 mL) was stirred at 70 °C for approximately 16 h. The mixture was concentrated. H 2 O was added to the residue and the solid product was filtered and washed (saturated NaHCO 3 and H 2 O). To remove the H 2 O, THF was added and removed under reduced pressure to give the desired product.
1.14. 3-에틸-4-하이드록시-벤조나이트릴(Int.22)의 합성1.14. Synthesis of 3-ethyl-4-hydroxy-benzonitrile (Int.22)
농축된 H2SO4(3.4 ㎖)를 0 ℃에서 H2O(12 ㎖) 중의 4-아미노-3-에틸벤조나이트릴(6.84 mmol)의 용액에 적가하였다. H2O(5 ㎖) 중의 NaNO2(7.52 mmol)의 용액을 0 ℃에서 상기 생성 혼합물에 적가하였다. 반응물을 0 ℃에서 30분 및 100 ℃에서 2시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 실온으로 냉각시키고 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 세척하고(H2O), 건조시키고 농축시켜 목적하는 생성물을 제공하였다.Concentrated H 2 SO 4 (3.4 mL) was added dropwise to a solution of 4-amino-3-ethylbenzonitrile (6.84 mmol) in H 2 O (12 mL) at 0 °C. A solution of NaNO 2 (7.52 mmol) in H 2 O (5 mL) was added dropwise to the resulting mixture at 0 °C. The reaction was stirred at 0 °C for 30 min and at 100 °C for 2 h. The mixture was cooled to room temperature and extracted with EtOAc. The organic layer was washed (H 2 O), dried and concentrated to give the desired product.
1.15. 2-클로로-3-플루오로-피리딘-4-일아민(Int.23)의 합성1.15. Synthesis of 2-chloro-3-fluoro-pyridin-4-ylamine (Int.23)
1.15.1. 단계 i: 3급-부틸 N-(2-클로로-3-플루오로-4-피리딜)카바메이트1.15.1. Step i: tert-Butyl N-(2-chloro-3-fluoro-4-pyridyl)carbamate
다이페닐포스포릴 아지드(DPPA)(129 mmol)를 1:1 3급-BuOH/톨루엔(200 ㎖) 중의 2-클로로-3-플루오로-피리딘-4-카복실산(85.7 mmol), Et3N(257 mmol)의 혼합물에 가하였다. 상기 혼합물을 110 ℃에서 4시간 동안 가열하였다. 혼합물을 H2O로 희석하고 DCM으로 추출하였다. 유기층을 건조시키고(Na2SO4) 농축시켰다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 100:0에서 80:20 DCM/EtOAc)에 의해 정제시켜 목적하는 생성물 3급-부틸 N-(2-클로로-3-플루오로-4-피리딜)카바메이트를 제공하였다.Diphenylphosphoryl azide (DPPA) (129 mmol) was diluted with 2-chloro-3-fluoro-pyridine-4-carboxylic acid (85.7 mmol), Et 3 N in 1:1 tert-BuOH/toluene (200 mL). (257 mmol) was added to the mixture. The mixture was heated at 110 °C for 4 hours. The mixture was diluted with H 2 O and extracted with DCM. The organic layer was dried (Na 2 SO 4 ) and concentrated. The residue was purified by flash column chromatography (SiO 2 , 100:0 to 80:20 DCM/EtOAc) to obtain the desired product tert-butyl N-(2-chloro-3-fluoro-4-pyridyl)carba A mate was provided.
1.15.2. 단계 ii: 2-클로로-3-플루오로-피리딘-4-일아민1.15.2. Step ii: 2-Chloro-3-fluoro-pyridin-4-ylamine
1:2 TFA/DCM(45 ㎖) 중의 3급-부틸 N-(2-클로로-3-플루오로-4-피리딜)카바메이트(20.2 mmol)의 용액을 실온에서 6시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO2, MeOH 중의 100:0에서 90:10 DCM/7N NH3)에 의해 정제시켜 목적하는 생성물을 제공하였다.A solution of tert-butyl N-(2-chloro-3-fluoro-4-pyridyl)carbamate (20.2 mmol) in 1:2 TFA/DCM (45 mL) was stirred at room temperature for 6 hours. The reaction mixture was concentrated and the residue was purified by flash column chromatography (SiO 2 , 100:0 to 90:10 DCM/7N NH 3 in MeOH) to provide the desired product.
1.16. 일반적인 방법: (6-브로모-1-메틸-1H-벤조이미다졸-4-일)-비스-(4-메톡시-벤질)-아민(Int.2)과의 부흐발트 커플링.1.16. General method: Buchwald coupling with (6-bromo-1-methyl-1H-benzoimidazol-4-yl)-bis-(4-methoxy-benzyl)-amine (Int.2).
여기에서 RA는 임의로 치환된 아릴 또는 헤테로아릴일 수 있다.wherein R A can be an optionally substituted aryl or heteroaryl.
1.16.1. 방법 E11.16.1. Method E1
무수 톨루엔 중의 Int.2(1 당량), 상응하는 아닐린(1.1 당량), Cs2CO3(2 당량) 및 XPhos(0.3 당량)의 혼합물을 Pd(OAc)2(0.1 내지 0.15 당량)의 첨가 전에 불활성 기체로 퍼징한다. 상기 혼합물을 110 ℃에서 대략 16시간 동안 교반한다. 상기 혼합물을 유기 용매와 수성상 사이에 분배시킬 수 있다. 상기 두 층을 분리시키고 유기층을 건조시키고 농축시킨다. 한편으로 상기 반응 혼합물을 여과하고 농축시킬 수 있다. 잔사를 그대로 보관하거나 또는 크로마토그래피에 의해 정제시켜 목적하는 생성물을 제공할 수도 있다.A mixture of Int.2 (1 equiv.), the corresponding aniline (1.1 equiv.), Cs 2 CO 3 (2 equiv.) and XPhos (0.3 equiv.) in anhydrous toluene was mixed before addition of Pd(OAc) 2 (0.1 to 0.15 equiv.). Purging with inert gas. The mixture is stirred at 110 °C for approximately 16 hours. The mixture may be partitioned between the organic solvent and the aqueous phase. The two layers are separated and the organic layer is dried and concentrated. Alternatively, the reaction mixture may be filtered and concentrated. The residue may be kept as is or purified by chromatography to give the desired product.
1.16.2. 방법 E1의 예시적인 실시예: 5-{7-[비스-(4-메톡시-벤질)-아미노]-3-메틸-3H-벤조이미다졸-5-일아미노}-4-에틸-피리딘-2-카보나이트릴(Int.24)의 합성.1.16.2. Illustrative Example of Method E1: 5-{7-[bis-(4-methoxy-benzyl)-amino]-3-methyl-3H-benzoimidazol-5-ylamino}-4-ethyl-pyridin- Synthesis of 2-carbonitrile (Int.24).
무수 톨루엔(6.3 ㎖) 중의 Int.2(0.75 mmol), Int.10(0.79 mmol), Cs2CO3(1.5 mmol) 및 XPhos(0.225 mmol)의 혼합물을 Pd(OAc)2(0.075 mmol)의 첨가 전에 불활성 기체로 퍼징하였다. 상기 혼합물을 110 ℃에서 대략 16시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 H2O로 희석하고 DCM으로 추출하였다. 유기층을 세척하고(염수), 건조시키고(Na2SO4) 농축시켰다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 100:0에서 50:50 사이클로헥산/EtOAc)에 의해 정제시켜 목적하는 생성물을 제공하였다.A mixture of Int.2 (0.75 mmol), Int.10 (0.79 mmol), Cs 2 CO 3 (1.5 mmol) and XPhos (0.225 mmol) in anhydrous toluene (6.3 mL) was dissolved in Pd(OAc) 2 (0.075 mmol). It was purged with inert gas before addition. The mixture was stirred at 110 °C for approximately 16 hours. The mixture was diluted with H 2 O and extracted with DCM. The organic layer was washed (brine), dried (Na 2 SO 4 ) and concentrated. The residue was purified by flash column chromatography (SiO 2 , 100:0 to 50:50 cyclohexane/EtOAc) to provide the desired product.
1.16.3. 방법 E21.16.3. Method E2
무수 톨루엔 중의 Int.2(1 당량), 상응하는 아닐린(1.1 당량), Cs2CO3(4 내지 5 당량) 및 XPhos(0.4 당량)의 혼합물을 Pd(OAc)2(0.2 내지 0.3 당량)의 첨가 전에 불활성 기체로 퍼징한다. 상기 혼합물을 110 ℃에서 1 내지 24시간 범위의 기간 동안 교반한다. 상기 혼합물을 유기 용매와 수성상 사이에 분배시킬 수 있다. 상기 두 층을 분리시키고 유기층을 건조시키고 농축시킨다. 한편으로 상기 반응 혼합물을 여과하고 농축시킬 수 있다. 잔사를 그대로 보관하거나 또는 크로마토그래피에 의해 정제시켜 목적하는 생성물을 제공할 수도 있다.A mixture of Int.2 (1 equiv.), the corresponding aniline (1.1 equiv.), Cs 2 CO 3 (4-5 equiv.) and XPhos (0.4 equiv.) in anhydrous toluene was mixed with Pd(OAc) 2 (0.2-0.3 equiv.). Purge with inert gas prior to addition. The mixture is stirred at 110 °C for a period ranging from 1 to 24 hours. The mixture may be partitioned between the organic solvent and the aqueous phase. The two layers are separated and the organic layer is dried and concentrated. Alternatively, the reaction mixture may be filtered and concentrated. The residue may be kept as is or purified by chromatography to give the desired product.
1.16.4. 방법 E2의 예시적인 실시예: 5-{7-[비스-(4-메톡시-벤질)-아미노]-3-메틸-3H-벤조이미다졸-5-일아미노}-4-메틸-피리딘-2-카보나이트릴(Int.27)의 합성.1.16.4. Illustrative Example of Method E2: 5-{7-[bis-(4-methoxy-benzyl)-amino]-3-methyl-3H-benzoimidazol-5-ylamino}-4-methyl-pyridin- Synthesis of 2-carbonitrile (Int.27).
무수 톨루엔(35 ㎖) 중의 Int.2(4 mmol), Int.8(4.3 mmol), Cs2CO3(20 mmol) 및 XPhos(1.6 mmol)의 혼합물을 Pd(OAc)2(1.2 mmol)의 첨가 전에 아르곤으로 퍼징하였다. 상기 혼합물을 110 ℃에서 대략 16시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 농축시켰다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 98:2에서 25:75 사이클로헥산/EtOAc)에 의해 정제시켜 목적하는 생성물을 제공하였다.A mixture of Int.2 (4 mmol), Int.8 (4.3 mmol), Cs 2 CO 3 (20 mmol) and XPhos (1.6 mmol) in anhydrous toluene (35 mL) was dissolved in Pd(OAc) 2 (1.2 mmol). It was purged with argon before addition. The mixture was stirred at 110 °C for approximately 16 hours. The mixture was filtered through a celite pad and concentrated. The residue was purified by flash column chromatography (SiO 2 , 98:2 to 25:75 cyclohexane/EtOAc) to provide the desired product.
1.16.5. 방법 E31.16.5. Method E3
무수 1,4-다이옥산 중의 Int.2(1 당량), 아닐린(1.1 당량), BINAP(0.3 당량), Cs2CO3(4 당량) 및 Pd(OAc)2(0.2 당량)의 혼합물을 불활성 기체로 탈기시킨다. 상기 반응물을 100 내지 110 ℃에서 4시간 내지 대략 16시간 범위의 기간 동안 교반한다. 상기 혼합물을 유기 용매와 수성상 사이에 분배시킬 수 있다. 상기 두 층을 분리시키고 유기층을 건조시키고 농축시킨다. 한편으로 상기 반응 혼합물을 여과하고 농축시킬 수 있다. 잔사를 그대로 보관하거나 또는 크로마토그래피에 의해 정제시켜 목적하는 생성물을 제공할 수도 있다.A mixture of Int.2 (1 equiv.), Aniline (1.1 equiv.), BINAP (0.3 equiv.), Cs 2 CO 3 (4 equiv.), and Pd(OAc) 2 (0.2 equiv.) in anhydrous 1,4-dioxane was mixed with an inert gas. degas with The reaction is stirred at 100-110 °C for a period ranging from 4 hours to approximately 16 hours. The mixture may be partitioned between the organic solvent and the aqueous phase. The two layers are separated and the organic layer is dried and concentrated. Alternatively, the reaction mixture may be filtered and concentrated. The residue may be kept as is or purified by chromatography to give the desired product.
1.16.6. 방법 E3의 예시적인 실시예: N6-(2-플루오로-4-메탄설포닐-페닐)-N4,N4-비스-(4-메톡시-벤질)-1-메틸-1H-벤조이미다졸-4,6-다이아민(Int.34)의 합성1.16.6. Illustrative Example of Method E3: N6-(2-Fluoro-4-methanesulfonyl-phenyl)-N4,N4-bis-(4-methoxy-benzyl)-1-methyl-1H-benzoimidazole- Synthesis of 4,6-diamine (Int.34)
무수 1,4-다이옥산(15 ㎖) 중의 Int.2(1.48 mmol), 2-플루오로-4-메틸설포닐-아닐린(1.58 mmol), BINAP(0.47 mmol), Cs2CO3(6.32 mmol) 및 Pd(OAc)2(0.32 mmol)의 혼합물을 질소로 탈기시켰다. 상기 반응물을 100 ℃에서 대략 16시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 EtOAc로 희석하고 유기층을 세척하고(H2O), 건조시키고(Na2SO4) 농축시켜 목적하는 생성물을 제공하였다.Int.2 (1.48 mmol), 2-fluoro-4-methylsulfonyl-aniline (1.58 mmol), BINAP (0.47 mmol), Cs 2 CO 3 (6.32 mmol) in anhydrous 1,4-dioxane (15 mL) and Pd(OAc) 2 (0.32 mmol) was degassed with nitrogen. The reaction was stirred at 100 °C for approximately 16 hours. The mixture was diluted with EtOAc and the organic layer was washed (H 2 O), dried (Na 2 SO 4 ) and concentrated to give the desired product.
1.16.7. 방법 E41.16.7. Method E4
무수 1,4-다이옥산 중의 Int.2(1 당량), 아닐린(1.1 당량), Brettphos(0.1 당량), Cs2CO3(5 당량) 및 Pd(OAc)2(0.05 당량)의 혼합물을 불활성 기체로 탈기시킨다. 상기 반응물을 85 내지 95 ℃에서 2시간 내지 대략 8시간 범위의 기간 동안 교반한다. 상기 혼합물을 유기 용매와 유기상 사이에 분배시킬 수 있다. 상기 두 층을 분리시키고 유기층을 건조시키고 농축시킨다. 한편으로 상기 반응 혼합물을 여과하고 농축시킬 수 있다. 잔사를 그대로 보관하거나 또는 크로마토그래피에 의해 정제시켜 목적하는 생성물을 제공할 수도 있다.A mixture of Int.2 (1 equiv.), Aniline (1.1 equiv.), Brettphos (0.1 equiv.), Cs 2 CO 3 (5 equiv.) and Pd(OAc) 2 (0.05 equiv.) in anhydrous 1,4-dioxane was stirred with an inert gas. degas with The reaction is stirred at 85-95° C. for a period ranging from 2 hours to approximately 8 hours. The mixture may be partitioned between organic solvent and organic phase. The two layers are separated and the organic layer is dried and concentrated. Alternatively, the reaction mixture may be filtered and concentrated. The residue may be kept as is or purified by chromatography to give the desired product.
1.16.8. 방법 E4의 예시적인 실시예: N6-(2,3-다이하이드로-1,4-벤조다이옥신-6-일)-N4,N4-비스[(4-메톡시페닐)메틸]-1-메틸-벤즈이미다졸-4,6-다이아민(Int.78)의 합성.1.16.8. Illustrative Example of Method E4: N6-(2,3-dihydro-1,4-benzodioxin-6-yl)-N4,N4-bis[(4-methoxyphenyl)methyl]-1-methyl- Synthesis of benzimidazole-4,6-diamine (Int.78).
무수 1,4-다이옥산(15 ㎖) 중의 Int.2(1.17 mmol), 2,3-다이하이드로-1,4-벤조다이옥신-6-아민(1.29 mmol), Brettphos(0.117 mmol), Cs2CO3(6.32 mmol) 및 Pd(OAc)2(0.058 mmol)의 혼합물을 질소로 탈기시켰다. 상기 반응물을 90 ℃에서 대략 5시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 EtOAc로 희석하고 유기층을 세척하고(H2O), 건조시키고(Na2SO4) 농축시켜 목적하는 생성물을 제공하였다.Int.2 (1.17 mmol), 2,3-dihydro-1,4-benzodioxin-6-amine (1.29 mmol), Brettphos (0.117 mmol), Cs 2 CO in anhydrous 1,4-dioxane (15 mL) A mixture of 3 (6.32 mmol) and Pd(OAc) 2 (0.058 mmol) was degassed with nitrogen. The reaction was stirred at 90 °C for approximately 5 hours. The mixture was diluted with EtOAc and the organic layer was washed (H 2 O), dried (Na 2 SO 4 ) and concentrated to give the desired product.
1.17. 일반적인 방법: 부흐발트 생성물의 메틸화1.17. General Method: Methylation of Buchwald Products
여기에서 RA는 임의로 치환된 아릴 또는 헤테로아릴일 수 있다.wherein R A can be an optionally substituted aryl or heteroaryl.
1.17.1. 방법 F1.17.1. Method F
NaH(무기 오일 중의 60%, 1.1 내지 3 당량)를 0 ℃에서 THF 또는 DMF 중의 부흐발트 커플링(1 당량)으로부터 수득된 중간체의 용액에 가한다. 상기 혼합물을 0 ℃에서 30분 동안 교반한다. MeI(1.1 내지 3 당량)를 가하고 상기 혼합물을 실온에서 1시간 내지 대략 16시간 범위의 기간 동안 교반한다. 상기 혼합물을 유기 용매와 수성상 사이에 분배시킨다. 상기 두 층을 분리시키고 유기층을 건조시키고 농축시킨다. 잔사를 실리카 크로마토그래피에 의해 정제하거나 추가의 정제 없이 그대로 사용한다.NaH (60% in mineral oil, 1.1 to 3 equiv.) is added to a solution of the intermediate obtained from Buchwald coupling (1 equiv.) in THF or DMF at 0°C. The mixture is stirred at 0 °C for 30 minutes. Mel (1.1 to 3 eq) is added and the mixture is stirred at room temperature for a period ranging from 1 hour to approximately 16 hours. The mixture is partitioned between organic solvent and aqueous phase. The two layers are separated and the organic layer is dried and concentrated. The residue is purified by silica chromatography or used as is without further purification.
1.17.2. 방법 F의 예시적인 실시예: N6-(2-플루오로-4-메탄설포닐-6-메틸-페닐)-N4,N4-비스-(4-메톡시-벤질)-1,N6-다이메틸-1H-벤조이미다졸-4,6-다이아민(Int.37)의 합성1.17.2. Illustrative Example of Method F: N6-(2-Fluoro-4-methanesulfonyl-6-methyl-phenyl)-N4,N4-bis-(4-methoxy-benzyl)-1,N6-dimethyl Synthesis of -1H-benzoimidazole-4,6-diamine (Int.37)
NaH(무기 오일 중의 60%, 6.76 mmol)를 0 ℃에서 THF(10 ㎖) 중의 Int.35(2.25 mmol)의 용액에 가하였다. 상기 혼합물을 0 ℃에서 30분 동안 교반하였다. MeI(6.76 mmol)를 가하고 상기 혼합물을 실온에서 대략 16시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 EtOAc로 희석하고 H2O로 세척하였다. 유기층을 건조시키고(Na2SO4) 농축시켰다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 20:80에서 80:20 EtOAc/석유 에테르)에 의해 정제시켜 목적하는 생성물을 제공하였다.NaH (60% in mineral oil, 6.76 mmol) was added to a solution of Int.35 (2.25 mmol) in THF (10 mL) at 0 °C. The mixture was stirred at 0 °C for 30 min. Mel (6.76 mmol) was added and the mixture was stirred at room temperature for approximately 16 hours. The mixture was diluted with EtOAc and washed with H 2 O. The organic layer was dried (Na 2 SO 4 ) and concentrated. The residue was purified by flash column chromatography (SiO 2 , 20:80 to 80:20 EtOAc/petroleum ether) to provide the desired product.
1.17.3. 방법 F의 예시적인 실시예: N4,N4-비스[(4-메톡시페닐)메틸]-N6,1-다이메틸-N6-(2-메틸-4-메틸설포닐-페닐)벤즈이미다졸-4,6-다이아민(Int.49A) 및 N6-(4-에틸설포닐-2-메틸-페닐)-N4,N4-비스[(4-메톡시페닐)메틸]-N6,1-다이메틸-벤즈이미다졸-4,6-다이아민(Int.49B)의 합성.1.17.3. Illustrative Example of Method F: N4,N4-bis[(4-methoxyphenyl)methyl]-N6,1-dimethyl-N6-(2-methyl-4-methylsulfonyl-phenyl)benzimidazole- 4,6-diamine (Int.49A) and N6-(4-ethylsulfonyl-2-methyl-phenyl)-N4,N4-bis[(4-methoxyphenyl)methyl]-N6,1-dimethyl -Synthesis of benzimidazole-4,6-diamine (Int.49B).
NaH(무기 오일 중의 60%, 4.86 mmol)를 0 ℃에서 THF(10 ㎖) 중의 Int.36(1.62 mmol)의 용액에 가하였다. 상기 혼합물을 0 ℃에서 30분 동안 교반하였다. MeI(4.86 mmol)를 가하고 상기 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 EtOAc로 희석하고 H2O로 세척하였다. 유기층을 건조시키고(Na2SO4) 농축시켰다. 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 20:80에서 80:20 EtOAc/석유 에테르)에 의해, 부 생성물(Int.49B, 부 생성물)과 함께 목적하는 생성물(Int.49A, 주 생성물)의 혼합물을 제공하였다.NaH (60% in mineral oil, 4.86 mmol) was added to a solution of Int.36 (1.62 mmol) in THF (10 mL) at 0 °C. The mixture was stirred at 0 °C for 30 min. Mel (4.86 mmol) was added and the mixture was stirred at room temperature for 1 hour. The mixture was diluted with EtOAc and washed with H 2 O. The organic layer was dried (Na 2 SO 4 ) and concentrated. Flash column chromatography (SiO 2 , 20:80 to 80:20 EtOAc/petroleum ether) gave a mixture of the desired product (Int.49A, main product) with a side product (Int.49B, side product). did
1.18. 4-{7-[비스-(4-메톡시-벤질)-아미노]-3-메틸-3H-벤조이미다졸-5-일옥시}-3-에틸-벤조나이트릴(Int.50)의 합성1.18. Synthesis of 4-{7-[bis-(4-methoxy-benzyl)-amino]-3-methyl-3H-benzoimidazol-5-yloxy}-3-ethyl-benzonitrile (Int.50)
피리딘(2 ㎖) 중의 Int.2(0.4 mmol), Int.22(0.4 mmol), CuI(0.06 mmol) 및 Cs2CO3(1 mmol)의 혼합물을 아르곤으로 플러싱시키고, 밀봉하고, 200 ℃에서 3시간 동안 극초단파 반응기에서 가열하였다. 상기 혼합물을 H2O로 희석하고 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 건조시키고 농축시켜 목적하는 생성물을 제공하였다.A mixture of Int.2 (0.4 mmol), Int.22 (0.4 mmol), CuI (0.06 mmol) and Cs 2 CO 3 (1 mmol) in pyridine (2 mL) was flushed with argon, sealed and heated at 200 °C. Heated in a microwave reactor for 3 hours. The mixture was diluted with H 2 O and extracted with EtOAc. The organic layer was dried and concentrated to give the desired product.
1.19. 일반적인 방법: 5-{7-[비스-(4-메톡시-벤질)-아미노]-3-메틸-3H-벤조이미다졸-5-일옥시}-4-메틸-피리딘-2-카보나이트릴(Int.3)과 방향족 또는 헤테로방향족 할라이드간의 울만 커플링1.19. General method: 5-{7-[bis-(4-methoxy-benzyl)-amino]-3-methyl-3H-benzoimidazol-5-yloxy}-4-methyl-pyridine-2-carbonitrile ( Ullmann coupling between Int.3) and an aromatic or heteroaromatic halide
여기에서 RA는 임의로 치환된 아릴 또는 헤테로아릴일 수 있다.wherein R A can be an optionally substituted aryl or heteroaryl.
1.19.1. 방법 G1.19.1. Method G
1:1 DMF/1,4-다이옥산 중의 Int.3(1 당량), 아릴 할라이드(1.2 내지 1.3 당량), CuI(0.1 내지 0.2 당량), N,N-다이메틸 글리신(0.3 내지 0.5 당량) 및 Cs2CO3(3 당량)의 혼합물을 불활성 기체로 플러싱시키고 110 ℃에서 4.5시간 내지 16시간 범위의 기간 동안 교반한다. 상기 혼합물을 여과하고, 유기 용매와 수성상 사이에 분배시킨다. 상기 두 층을 분리시키고 유기층을 건조시키고 농축시킨다. 잔사를 실리카 크로마토그래피에 의해 정제시킨다.Int.3 (1 equiv.), aryl halide (1.2 to 1.3 equiv.), CuI (0.1 to 0.2 equiv.), N,N-dimethyl glycine (0.3 to 0.5 equiv.) and A mixture of Cs 2 CO 3 (3 equivalents) is flushed with inert gas and stirred at 110° C. for a period ranging from 4.5 hours to 16 hours. The mixture is filtered and partitioned between organic solvent and aqueous phase. The two layers are separated and the organic layer is dried and concentrated. The residue is purified by silica chromatography.
1.19.2. 합성 G의 예시적인 실시예: 5-{7-[비스-(4-메톡시-벤질)-아미노]-3-메틸-3H-벤조이미다졸-5-일옥시}-4-메틸-피리딘-2-카보나이트릴(Int.51)의 합성.1.19.2. Illustrative Example of Synthetic G: 5-{7-[bis-(4-methoxy-benzyl)-amino]-3-methyl-3H-benzoimidazol-5-yloxy}-4-methyl-pyridin- Synthesis of 2-carbonitrile (Int.51).
1:1 DMF/1,4-다이옥산(4 ㎖) 중의 Int.3(0.39 mmol), Int.18(0.47 mmol), CuI(0.08 mmol), N,N-다이메틸 글리신(0.2 mmol) 및 Cs2CO3(1.17 mmol)의 혼합물을 아르곤으로 플러싱시키고 밀봉된 튜브에서 110 ℃에서 대략 16시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 상기 여액을 농축시켰다. 물을 가하고 상기 혼합물을 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 물로 세척하고, 건조시키고 농축시켰다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 100:0에서 40:60 사이클로헥산/EtOAc)에 의해 정제시켜 목적하는 생성물을 제공하였다.Int.3 (0.39 mmol), Int.18 (0.47 mmol), CuI (0.08 mmol), N,N-dimethyl glycine (0.2 mmol) and Cs in 1:1 DMF/1,4-dioxane (4 mL). A mixture of 2 CO 3 (1.17 mmol) was flushed with argon and stirred in a sealed tube at 110 °C for approximately 16 hours. The reaction mixture was cooled to room temperature and filtered through a pad of celite. The filtrate was concentrated. Water was added and the mixture was extracted with EtOAc. The organic layer was washed with water, dried and concentrated. The residue was purified by flash column chromatography (SiO 2 , 100:0 to 40:60 cyclohexane/EtOAc) to provide the desired product.
1.20. 일반적인 방법: 5-{7-[비스-(4-메톡시-벤질)-아미노]-3-메틸}-3H-벤조이미다졸-5-일옥시}-4-메틸-피리딘-2-카보나이트릴(Int.3) 및 방향족 또는 헤테로방향족 할라이드간의 SNAr 커플링1.20. General method: 5-{7-[bis-(4-methoxy-benzyl)-amino]-3-methyl}-3H-benzoimidazol-5-yloxy}-4-methyl-pyridine-2-carbonitrile (Int.3) and SNAr coupling between aromatic or heteroaromatic halides
여기에서 RA는 임의로 치환된 아릴 또는 헤테로아릴일 수 있다.wherein R A can be an optionally substituted aryl or heteroaryl.
1.20.1. 방법 H1.20.1. Method H
DMF 중의 Int.3(1 당량), 아릴/헤테로아릴 할라이드(1.2 내지 1.5 당량) 및 K2CO3(2 당량)의 혼합물을 100 ℃에서 3시간 내지 대략 16시간 범위의 기간 동안 교반한다. 상기 혼합물을 EtOAc로 희석하고, H2O로 수회 세척하고, 건조시키고 농축시킨다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제시킨다.A mixture of Int.3 (1 equiv.), aryl/heteroaryl halide (1.2 to 1.5 equiv.) and K 2 CO 3 (2 equiv.) in DMF is stirred at 100° C. for a period ranging from 3 hours to approximately 16 hours. The mixture is diluted with EtOAc, washed several times with H 2 O, dried and concentrated. The residue is purified by flash column chromatography.
1.20.2. 방법 H의 예시적인 실시예: 5-{7-[비스-(4-메톡시-벤질)-아미노]-3-메틸-3H-벤조이미다졸-5-일옥시}-4-메틸-피리딘-2-카보나이트릴(Int.51)의 합성.1.20.2. Illustrative Example of Method H: 5-{7-[bis-(4-methoxy-benzyl)-amino]-3-methyl-3H-benzoimidazol-5-yloxy}-4-methyl-pyridin- Synthesis of 2-carbonitrile (Int.51).
DMF(160 ㎖) 중의 Int.3(58 mmol), Int.7(70 mmol) 및 K2CO3(116 mmol)의 혼합물을 100 ℃에서 교반하였다. 3시간 후에 추가의 7.35 mmol의 Int.7을 상기 반응물에 가하고 상기 혼합물을 100 ℃에서 추가로 1시간 동안 교반하였다. 생성 혼합물을 EtOAc로 희석하고, H2O로 수회 세척하고, 건조시키고(Na2SO4) 농축시켰다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 15:85에서 35:75 EtOAc/석유 에테르)에 의해 정제시켜 목적하는 생성물을 제공하였다.A mixture of Int.3 (58 mmol), Int.7 (70 mmol) and K 2 CO 3 (116 mmol) in DMF (160 mL) was stirred at 100 °C. After 3 hours an additional 7.35 mmol of Int.7 was added to the reaction and the mixture was stirred at 100 °C for another hour. The resulting mixture was diluted with EtOAc, washed several times with H 2 O, dried (Na 2 SO 4 ) and concentrated. The residue was purified by flash column chromatography (SiO 2 , 15:85 to 35:75 EtOAc/petroleum ether) to provide the desired product.
1.21. 일반적인 방법: 비스-PMB 탈보호1.21. General Method: Bis-PMB Deprotection
여기에서 RA는 임의로 치환된 아릴 또는 헤테로아릴일 수 있으며; -L-은 -NH-, -NMe- 또는 -O-일 수 있다.wherein R A can be an optionally substituted aryl or heteroaryl; -L- may be -NH-, -NMe- or -O-.
1.21.1. 방법 I11.21.1. Method I1
TFA 중의 보호된 비스-PMB 아민(1 당량)의 혼합물을 실온에서 30분 내지 대략 16시간 범위의 기간 동안 교반한다. 온도를 50 또는 60 ℃로 증가시키고 상기 혼합물을 0.5 내지 3시간 범위의 기간 동안 추가로 교반한다. 상기 혼합물을 염기성 수성 용액 및 유기 용매를 사용하여 후처리한다. 상기 두 상을 분리시키고 유기층을 건조시키고 농축시킨다. 한편으로, 반응 혼합물을 먼저 농축시키고 이어서 잔사에 상술한 후처리를 가한다. 상기 후처리로부터 수득한 잔사를 실리카 크로마토그래피에 의해 또는 아이소루트(ISOLUTE)(등록상표) SCX-3(바이오테이지(Biotage)) 이온 교환 수지에 의해 정제시키거나 그대로 보관할 수 있다.A mixture of protected bis-PMB amine (1 equivalent) in TFA is stirred at room temperature for a period ranging from 30 minutes to approximately 16 hours. The temperature is increased to 50 or 60 °C and the mixture is further stirred for a period ranging from 0.5 to 3 hours. The mixture is worked up using a basic aqueous solution and an organic solvent. The two phases are separated and the organic layer is dried and concentrated. Alternatively, the reaction mixture is first concentrated and then the residue is subjected to the above-mentioned work-up. The residue obtained from the above work-up can be purified by silica chromatography or by ISOLUTE® SCX-3 (Biotage) ion exchange resin or stored as is.
1.21.2. 방법 I1의 예시적인 실시예: N6-(2-플루오로-4-메탄설포닐-6-메틸-페닐)-1,N6-다이메틸-1H-벤조이미다졸-4,6-다이아민(Int.53)의 합성.1.21.2. Illustrative Example of Method I1: N6-(2-Fluoro-4-methanesulfonyl-6-methyl-phenyl)-1,N6-dimethyl-1H-benzoimidazole-4,6-diamine (Int .53) synthesis.
TFA(5 ㎖) 중의 Int.37(0.33 mmol)의 혼합물을 실온에서 1시간 및 50 ℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 농축시켰다. 잔사를 포화된 NaHCO3와 DCM 사이에 분배시켰다. 상기 두 상을 분리시키고 유기층을 건조시키고(Na2SO4) 농축시켰다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 20:80에서 100:0 EtOAc/석유 에테르)에 의해 정제시켜 목적하는 생성물을 제공하였다.A mixture of Int.37 (0.33 mmol) in TFA (5 mL) was stirred at room temperature for 1 hour and at 50 °C for 0.5 hour. The mixture was concentrated. The residue was partitioned between saturated NaHCO 3 and DCM. The two phases were separated and the organic layer was dried (Na 2 SO 4 ) and concentrated. The residue was purified by flash column chromatography (SiO 2 , 20:80 to 100:0 EtOAc/petroleum ether) to provide the desired product.
1.21.3. 방법 I1의 예시적인 실시예: N6,1-다이메틸-N6-(2-메틸-4-메틸설포닐-페닐)벤즈이미다졸-4,6-다이아민(Int.56A) 및 N6-(4-에틸설포닐-2-메틸-페닐)-N6,1-다이메틸-벤즈이미다졸-4,6-다이아민(Int.56B)의 합성1.21.3. Exemplary Examples of Method I1: N6,1-Dimethyl-N6-(2-methyl-4-methylsulfonyl-phenyl)benzimidazole-4,6-diamine (Int.56A) and N6-(4 Synthesis of -Ethylsulfonyl-2-methyl-phenyl)-N6,1-dimethyl-benzimidazole-4,6-diamine (Int.56B)
TFA(5 ㎖) 중의 Int.49A 및 49B(전체 약 0.61 mmol)의 혼합물을 실온에서 대략 16시간 및 50 ℃에서 3시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 농축시켰다. 잔사를 포화된 NaHCO3와 DCM 사이에 분배하였다. 상기 두 상을 분리시키고 유기층을 건조시키고(Na2SO4) 농축시켰다. 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 20:80에서 100:0 EtOAc/석유 에테르)로 Int.49B의 탈보호로부터 유래하는 부 생성물(Int.56B, 부 생성물)과 함께 목적하는 생성물(Int.56A, 주 생성물)의 혼합물을 제공하였다.A mixture of Int.49A and 49B (total about 0.61 mmol) in TFA (5 mL) was stirred at room temperature for approximately 16 hours and at 50 °C for 3 hours. The mixture was concentrated. The residue was partitioned between saturated NaHCO 3 and DCM. The two phases were separated and the organic layer was dried (Na 2 SO 4 ) and concentrated. The desired product (Int.56A , A mixture of main products) was provided.
1.21.4. 방법 I21.21.4. Method I2
DCM/TFA(3:1 내지 1:1 비) 중의 보호된 비스-PMB 아민(1 당량)의 혼합물을 실온에서 20분 내지 3시간 범위의 기간 동안 교반한다. 상기 혼합물을 염기성 수용액 및 유기 용매를 사용하여 후처리한다. 상기 두 상을 분리시키고 유기층을 건조시키고 농축시킨다. 한편으로, 반응 혼합물을 먼저 농축시키고 이어서 잔사에 상술한 후처리를 가한다. 상기 후처리로부터 수득한 잔사를 실리카 크로마토그래피에 의해 또는 아이소루트(등록상표) SCX-3(바이오테이지) 이온 교환 수지에 의해 정제시키거나 그대로 보관할 수 있다.A mixture of protected bis-PMB amine (1 equivalent) in DCM/TFA (3:1 to 1:1 ratio) is stirred at room temperature for a period ranging from 20 minutes to 3 hours. The mixture is worked up using an aqueous basic solution and an organic solvent. The two phases are separated and the organic layer is dried and concentrated. Alternatively, the reaction mixture is first concentrated and then the residue is subjected to the above-mentioned work-up. The residue obtained from the above work-up can be purified by silica chromatography or by Isoroot® SCX-3 (Biotage) ion exchange resin or stored as such.
1.21.5. 방법 I2의 예시적인 실시예: 5-(7-아미노-3-메틸-벤즈이미다졸-5-일)옥시-4-메틸-피리딘-2-카보나이트릴(화합물 28)의 합성1.21.5. Illustrative Example of Method I2: Synthesis of 5-(7-amino-3-methyl-benzimidazol-5-yl)oxy-4-methyl-pyridine-2-carbonitrile (Compound 28)
TFA(5 ㎖)를 0 ℃에서 DCM(55 ㎖) 중의 Int.51(23.1 mmol)의 용액에 가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반하였다. 톨루엔을 가하고 상기 혼합물을 농축시켰다. 잔사를 포화된 NaHCO3와 DCM 사이에 분배시켰다. 상기 두 상을 분리시키고 유기층을 건조시키고(Na2SO4) 농축시켰다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 100:0에서 95:5 EtOAc/MeOH)에 의해 정제시켰다. 상기 컬럼으로부터 수득된 생성물을 THF로 세척하여 목적하는 생성물(Int 79)을 제공하였다.TFA (5 mL) was added to a solution of Int.51 (23.1 mmol) in DCM (55 mL) at 0 °C. The mixture was stirred at room temperature for 20 minutes. Toluene was added and the mixture was concentrated. The residue was partitioned between saturated NaHCO 3 and DCM. The two phases were separated and the organic layer was dried (Na 2 SO 4 ) and concentrated. The residue was purified by flash column chromatography (SiO 2 , 100:0 to 95:5 EtOAc/MeOH). The product obtained from the column was washed with THF to give the desired product (Int 79).
1.21.6. 방법 I31.21.6. Method I3
TFA 중의 보호된 비스-PMB 아민(1 당량)의 혼합물을 실온에서 30분 내지 대략 16시간 범위의 기간 동안 교반한다. 상기 혼합물을 유기 용매 중에서 희석하고 염기성 수용액을 사용하여 세척한다. 상기 두 상을 분리시키고 유기층을 건조시키고 농축시킨다. 한편으로, 세척 전에, 상기 반응 혼합물을 먼저 농축시킬 수 있다. 이어서 상기 유기층을 농축시키고, 잔사를 실리카 크로마토그래피에 의해 또는 아이소루트(등록상표) SCX-3(바이오테이지) 이온 교환 수지에 의해 정제시키거나 또는 어떠한 추가의 정제 없이 그대로 사용할 수 있다.A mixture of protected bis-PMB amine (1 equivalent) in TFA is stirred at room temperature for a period ranging from 30 minutes to approximately 16 hours. The mixture is diluted in an organic solvent and washed with a basic aqueous solution. The two phases are separated and the organic layer is dried and concentrated. Alternatively, prior to washing, the reaction mixture may first be concentrated. The organic layer is then concentrated, and the residue is purified by silica chromatography or by Isoroot® SCX-3 (Biotage) ion exchange resin, or can be used as is without any further purification.
1.21.7. 방법 I3의 예시적인 실시예: 5-[(7-아미노-3-메틸-3H-벤조이미다졸-5-일)메틸-아미노]-4-메틸-피리딘-2-카보나이트릴(화합물 62)의 합성1.21.7. Illustrative Example of Method I3: 5-[(7-amino-3-methyl-3H-benzoimidazol-5-yl)methyl-amino]-4-methyl-pyridine-2-carbonitrile (Compound 62) synthesis
TFA(10 ㎖) 중의 Int.41(2.4 mmol)의 용액을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 희석하고(DCM), 포화된 NaHCO3로 세척하고, 이어서 5N NaOH로 세척하였다. 상기 두 층을 분리시키고 수성층을 DCM으로 추가로 추출하였다. 유기층들을 합하고, 건조시키고(상 분리기를 통한 여과), 농축시켰다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 100:0에서 90:10 EtOAc/MeOH)에 의해 정제시켜 목적하는 생성물을 제공하였다.A solution of Int.41 (2.4 mmol) in TFA (10 mL) was stirred at room temperature for 3 hours. The mixture was diluted (DCM) and washed with saturated NaHCO 3 followed by 5N NaOH. The two layers were separated and the aqueous layer was further extracted with DCM. The organic layers were combined, dried (filtered through a phase separator) and concentrated. The residue was purified by flash column chromatography (SiO 2 , 100:0 to 90:10 EtOAc/MeOH) to give the desired product.
1.22. 4-에틸-6-메탄설포닐-피리딘-3-일아민(Int.70)의 합성.1.22. Synthesis of 4-ethyl-6-methanesulfonyl-pyridin-3-ylamine (Int.70).
1.22.1. 단계 i: 4-에틸-2-메틸설포닐-5-나이트로-피리딘1.22.1. Step i: 4-Ethyl-2-methylsulfonyl-5-nitro-pyridine
DMSO(10 ㎖) 중의 2-브로모-4-에틸-5-나이트로-피리딘(4.35 mmol) 및 나트륨 메탄설포네이트(4.35 mmol)의 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 빙수에 붓고 얼음이 녹을 때까지 교반하였다. 상기 혼합물을 여과하고 고체(목적하는 생성물)를 수집하였다.A mixture of 2-bromo-4-ethyl-5-nitro-pyridine (4.35 mmol) and sodium methanesulfonate (4.35 mmol) in DMSO (10 mL) was stirred at room temperature for 1.5 h. The mixture was poured into ice water and stirred until the ice melted. The mixture was filtered and the solid (desired product) was collected.
1.22.2. 단계 ii: 4-에틸-6-메틸설포닐-피리딘-3-아민1.22.2. Step ii: 4-Ethyl-6-methylsulfonyl-pyridin-3-amine
H2O(10 ㎖) 중의 4-에틸-2-메틸설포닐-5-나이트로-피리딘(4.1 mmol), NH4Cl(26.65 mmol) 및 철 분말(33 mmol)의 혼합물을 90 ℃에서 1시간 동안 교반하였다. 상기 반응을 정지시키고, 여과하고 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 건조시키고(Na2SO4) 농축시켜 목적하는 생성물을 제공하였다.A mixture of 4-ethyl-2-methylsulfonyl-5-nitro-pyridine (4.1 mmol), NH 4 Cl (26.65 mmol) and iron powder (33 mmol) in H 2 O (10 mL) was heated at 90 °C to 1 Stir for an hour. The reaction was stopped, filtered and extracted with EtOAc. The organic layer was dried (Na 2 SO 4 ) and concentrated to give the desired product.
1.23. 4-에틸-5-요오도-2-메틸설포닐-피리딘(Int.74)의 합성1.23. Synthesis of 4-ethyl-5-iodo-2-methylsulfonyl-pyridine (Int.74)
H2O(1.8 ㎖) 중의 KI(15 mmol) 및 NaNO2(12 mmol)의 용액을, 온도를 10 내지 15 ℃에서 유지시키면서 MeCN(12 ㎖) 중의 Int.70(6 mmol) 및 p-TsOH·H2O(18 mmol)의 혼합물에 적가하였다. 상기 혼합물을 10 내지 15 ℃에서 10분 동안 및 이어서 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 0 ℃로 냉각시키고, 중화시키고(포화된 NaHCO3) 추출하였다(DCM). 유기층을 건조시키고(Na2SO4) 농축시켰다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 70:30 석유 에테르/EtOAc)에 의해 정제시켜 목적하는 생성물을 제공하였다.To a solution of KI (15 mmol) and NaNO 2 (12 mmol) in H 2 O (1.8 mL), Int.70 (6 mmol) and p-TsOH in MeCN (12 mL), maintaining the temperature at 10-15 °C. -H 2 O (18 mmol) was added dropwise to the mixture. The mixture was stirred at 10-15 °C for 10 minutes and then at room temperature for 1 hour. The mixture was cooled to 0 °C, neutralized (saturated NaHCO 3 ) and extracted (DCM). The organic layer was dried (Na 2 SO 4 ) and concentrated. The residue was purified by flash column chromatography (SiO 2 , 70:30 petroleum ether/EtOAc) to give the desired product.
실시예 2. 본 발명 화합물의 합성Example 2. Synthesis of compounds of the present invention
2.1. 일반적인 방법: 최종 화합물을 수득하기 위한 아민 중간체의 염화 카보닐 유도체에 의한 아실화2.1. General method: acylation of amine intermediates with carbonyl chloride derivatives to give final compounds
여기에서 RA는 임의로 치환된 아릴 또는 헤테로아릴일 수 있으며; L은 NH, NMe 또는 O일 수 있고; RB는 사이클로알킬, OMe일 수 있다.wherein R A can be an optionally substituted aryl or heteroaryl; L can be NH, NMe or O; R B may be cycloalkyl, OMe.
2.1.1. 방법 J12.1.1. Method J1
RBCOCl(1 당량)을 0 ℃에서 DCM/피리딘(2:1에서 5:1 비) 중의 중간체 아민(1 당량)의 용액에 가한다. 상기 혼합물을 40분 내지 2시간 범위의 기간 동안 교반한다. 상기 혼합물을 유기 용매와 수용액 사이에 분배시킨다. 상기 두 상을 분리시키고 유기층을 건조시키고 농축시킨다. 한편으로, 상기 반응 혼합물을 후처리 없이 농축시킬 수 있다. 잔사를 실리카 크로마토그래피에 의해 또는 예비 HPLC에 의해 또는 적합한 용매 혼합물을 사용하여 침전에 의해 정제시킬 수 있다.R B COCl (1 equiv.) is added to a solution of the intermediate amine (1 equiv.) in DCM/pyridine (2:1 to 5:1 ratio) at 0°C. The mixture is stirred for a period ranging from 40 minutes to 2 hours. The mixture is partitioned between an organic solvent and an aqueous solution. The two phases are separated and the organic layer is dried and concentrated. Alternatively, the reaction mixture can be concentrated without work-up. The residue can be purified by chromatography on silica or by preparative HPLC or by precipitation using a suitable solvent mixture.
2.1.2. 방법 J1의 예시적인 실시예: N-(6-((6-시아노-4-에틸피리딘-3-일)(메틸)아미노)-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-4-일)사이클로프로판카복스아미드(화합물 1)의 합성2.1.2. Illustrative Example of Method J1: N-(6-((6-cyano-4-ethylpyridin-3-yl)(methyl)amino)-1-methyl-1H-benzo[d]imidazole-4- 1) Synthesis of cyclopropanecarboxamide (Compound 1)
사이클로프로판카보닐 클로라이드(0.39 mmol)를 0 ℃에서 1:2 피리딘/DCM(2.55 ㎖) 중의 Int.63(0.39 mmol)의 용액에 가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 40분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 100:0에서 97:3 DCM/MeOH)에 의해 정제시켜 목적하는 생성물을 제공하였다.Cyclopropanecarbonyl chloride (0.39 mmol) was added to a solution of Int.63 (0.39 mmol) in 1:2 pyridine/DCM (2.55 mL) at 0 °C. The mixture was stirred at room temperature for 40 minutes. The reaction mixture was concentrated and the residue was purified by flash column chromatography (SiO2, 100:0 to 97:3 DCM/MeOH) to provide the desired product.
2.1.3. 방법 J22.1.3. Method J2
RBC(=O)Cl(1.5 내지 3 당량)을 DCM 중의 중간체 아민(1 당량) 용액에 이어서 피리딘(1.5 내지 3 당량)에 가한다. 상기 혼합물을 2시간 내지 대략 16시간 범위의 기간 동안 교반한다. 상기 혼합물을 유기 용매와 수용액 사이에 분배시킨다. 상기 두 상을 분리시키고 유기층을 건조시키고 농축시킨다. 잔사를 실리카 크로마토그래피, 예비 HPLC, 또는 적합한 용매 혼합물을 사용하여 침전에 의해 정제시킬 수 있다.R B C(=0)Cl (1.5-3 equiv.) is added to a solution of the intermediate amine (1 equiv.) in DCM followed by pyridine (1.5-3 equiv.). The mixture is stirred for a period ranging from 2 hours to approximately 16 hours. The mixture is partitioned between an organic solvent and an aqueous solution. The two phases are separated and the organic layer is dried and concentrated. The residue can be purified by silica chromatography, preparative HPLC, or precipitation using a suitable solvent mixture.
2.1.4. 방법 J2의 예시적인 실시예: 메틸 6-((6-시아노-4-에틸피리딘-3-일)(메틸)아미노)-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-4-일카바메이트(화합물 4)의 합성2.1.4. Illustrative Example of Method J2: Methyl 6-((6-cyano-4-ethylpyridin-3-yl)(methyl)amino)-1-methyl-1H-benzo[d]imidazol-4-ylcarba Synthesis of Mate (Compound 4)
메틸 클로로포메이트(0.33 mmol)를 무수 DCM(2.2 ㎖) 중의 Int.63(0.22 mmol)의 용액에 이어서 피리딘(0.33 mmol)에 가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 H2O와 DCM 사이에 분배시켰다. 상기 두 상을 분리시키고 유기층을 세척하고(포화된 NaHCO3), 건조시키고(Na2SO4), 농축시켰다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 100:0에서 95:5 DCM/MeOH)에 의해 정제시켜 목적하는 생성물을 제공하였다.Methyl chloroformate (0.33 mmol) was added to a solution of Int.63 (0.22 mmol) in anhydrous DCM (2.2 mL) followed by pyridine (0.33 mmol). The mixture was stirred at room temperature for 2 hours. The mixture was partitioned between H 2 O and DCM. The two phases were separated and the organic layer was washed (saturated NaHCO 3 ), dried (Na 2 SO 4 ) and concentrated. The residue was purified by flash column chromatography (SiO 2 , 100:0 to 95:5 DCM/MeOH) to provide the desired product.
2.2. 일반적인 방법: 최종 화합물을 수득하기 위한 아민 중간체의 카복실산 유도체에 의한 아실화2.2. General Method: Acylation of Amine Intermediates with Carboxylic Acid Derivatives to Obtain Final Compounds
여기에서 RA는 임의로 치환된 아릴 또는 헤테로아릴일 수 있으며; L은 NH, NMe 또는 O일 수 있고; RC는 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬일 수 있다.wherein R A can be an optionally substituted aryl or heteroaryl; L can be NH, NMe or O; R C can be cycloalkyl, substituted cycloalkyl.
2.1.1. 방법 K12.1.1. Method K1
(COCl)2(1.4 내지 2 당량)을 0 ℃에서 DCM 중의 카복실산(1.5 내지 2 당량)의 용액에 가한다. 촉매량의 DMF를 가하고 상기 반응물을 30분 내지 1시간 범위의 기간 동안 0 ℃에서 교반한다. DCM 중의 중간체 아민(1 당량) 및 피리딘(2 내지 4 당량)의 용액을 상기 혼합물에 가한다. 생성 혼합물을 실온에서 30분 내지 2시간 범위의 기간 동안 교반한다. 상기 혼합물을 유기 용매와 수용액 사이에 분배시킨다. 상기 두 상을 분리시키고 유기층을 건조시키고 농축시킨다. 잔사를 실리카 크로마토그래피에 의해, 예비 HPLC에 의해 또는 적합한 용매 혼합물을 사용하여 침전에 의해 정제시킬 수 있다.(COCl) 2 (1.4-2 equiv.) is added to a solution of the carboxylic acid (1.5-2 equiv.) in DCM at 0 °C. A catalytic amount of DMF is added and the reaction is stirred at 0° C. for a period ranging from 30 minutes to 1 hour. A solution of the intermediate amine (1 equiv.) and pyridine (2-4 equiv.) in DCM is added to the above mixture. The resulting mixture is stirred at room temperature for a period ranging from 30 minutes to 2 hours. The mixture is partitioned between an organic solvent and an aqueous solution. The two phases are separated and the organic layer is dried and concentrated. The residue can be purified by chromatography on silica, by preparative HPLC or by precipitation using a suitable solvent mixture.
2.2.2. 방법 K1의 예시적인 실시예: (1R,2R)-N-[6-[(6-시아노-4-에틸-3-피리딜)옥시]-1-메틸-벤즈이미다졸-4-일]-2-플루오로-사이클로프로판카복스아미드(화합물 6)의 합성.2.2.2. Illustrative Example of Method K1: (1R,2R)-N-[6-[(6-cyano-4-ethyl-3-pyridyl)oxy]-1-methyl-benzimidazol-4-yl] Synthesis of -2-fluoro-cyclopropanecarboxamide (Compound 6).
(COCl)2(0.186 mmol)를 DCM(1 ㎖) 중의 ((1R,2R)-(-)-2-시스-플루오로-사이클로프로판카복실산(켐콜렉트(ChemCollect), 로트 n. 1241399, 0.186 mmol)의 용액에 이어서 DMF(2 방울)에 가하였다. 상기 반응 혼합물을 0 ℃에서 1시간 동안 교반하였다. DCM(1 ㎖) 중의 Int.65(0.093 mmol) 및 피리딘(0.186 mmol)의 용액을 상기 혼합물에 가하고 상기 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 포화된 NaHCO3를 가하고 상기 두 상을 분리시켰다. 유기층을 농축시켰다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 100:0에서 95:5 DCM/MeOH)에 의해 정제시켜 목적하는 생성물을 제공하였다.(COCl) 2 (0.186 mmol) was prepared as ((1R,2R)-(-)-2-cis-fluoro-cyclopropanecarboxylic acid (ChemCollect, Lot n. 1241399, 0.186 mmol) in DCM (1 mL). ) was then added to DMF (2 drops) The reaction mixture was stirred for 1 hour at 0° C. A solution of Int.65 (0.093 mmol) and pyridine (0.186 mmol) in DCM (1 mL) was added as above. The mixture was stirred at room temperature for 2 hours. Saturated NaHCO 3 was added and the two phases were separated. The organic layer was concentrated. The residue was purified by flash column chromatography (SiO 2 , 100:0 to 95:5 DCM /MeOH) gave the desired product.
2.2.3. 방법 K1의 예시적인 실시예: (1R,2R)-N-[6-(N,2-다이메틸-4-메틸설포닐-아닐리노)-1-메틸-벤즈이미다졸-4-일]-2-플루오로-사이클로프로판카복스아미드(화합물 26) 및 (1R,2R)-N-[6-(4-에틸설포닐-N,2-다이메틸-아닐리노)-1-메틸-벤즈이미다졸-4-일]-2-플루오로-사이클로프로판카복스아미드(화합물 27)2.2.3. An illustrative example of method K1: (1R,2R)-N-[6-(N,2-dimethyl-4-methylsulfonyl-anilino)-1-methyl-benzimidazol-4-yl]- 2-Fluoro-cyclopropanecarboxamide (Compound 26) and (1R,2R)-N-[6-(4-ethylsulfonyl-N,2-dimethyl-anilino)-1-methyl-benzimid Dazol-4-yl] -2-fluoro-cyclopropanecarboxamide (Compound 27)
(COCl)2(0.82 mmol)를 DCM(1 ㎖) 중의 ((1R,2R)-(-)-시스-2-플루오로-사이클로프로판카복실산(ABCR, 로트 n. 1242863, 0.92 mmol)의 용액에 이어서 DMF(1 방울)에 가하였다. 상기 반응 혼합물을 0 ℃에서 45분 동안 교반하였다. DCM(1 ㎖) 중의 Int.56A 및 Int56B(전체 대략 0.46 mmol) 및 피리딘(1.85 mmol)의 혼합물의 용액을 상기 혼합물에 가하고 상기 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 DCM으로 희석하고, 세척하고(H2O), 상기 두 상을 분리시켰다. 유기층을 건조시키고(Na2SO4) 농축시켰다. 플래시 컬럼 크로마토그래피(SiO2, 20:80 EtOAc/석유 에테르에서 90:10 EtOAc/MeOH)에 의해 화합물 26 및 화합물 27의 혼합물을 제공하였다. 상기 두 성분을 예비 HPLC에 의해 분리시켰다.(COCl) 2 (0.82 mmol) was added to a solution of ((1R,2R)-(-)-cis-2-fluoro-cyclopropanecarboxylic acid (ABCR, Lot n. 1242863, 0.92 mmol) in DCM (1 mL). DMF (1 drop) was then added The reaction mixture was stirred at 0° C. for 45 minutes A solution of a mixture of Int.56A and Int56B (total approx. 0.46 mmol) and pyridine (1.85 mmol) in DCM (1 mL) was added to the mixture and the reaction was stirred at room temperature for 2 hours.The mixture was diluted with DCM, washed (H 2 O), and the two phases were separated. The organic layer was dried (Na 2 SO 4 ) and concentrated. Flash column chromatography (SiO 2 , 20:80 EtOAc/petroleum ether to 90:10 EtOAc/MeOH) provided a mixture of compound 26 and compound 27. The two components were separated by preparative HPLC.
2.2.4. 방법 K22.2.4. Method K2
(COCl)2(1.35 내지 2.5 당량)를 0 ℃에서 DCM 중의 카복실산(1.4 내지 3 당량)의 용액에 가한다. 촉매량의 DMF를 가하고 반응물을 0 ℃에서 30분 내지 1시간 범위의 기간 동안 교반한다. NMP 또는 NMP/DCM 중의 중간체 아민(1 당량) 및 피리딘(1.7 내지 4 당량)의 용액을 별도로 제조하여, 상기 중간체 아민이 완전히 용해되도록 한다. 용해를 돕기 위해서, 가열을 적용할 수 있다(70 ℃까지의 온도). 후자 용액을 0 ℃에서 새로 형성된 염화 아실을 함유하는 용액에 적가한다. 생성 혼합물을 실온에서 1 내지 2시간 범위의 기간 동안 교반한다. 상기 혼합물을 유기 용매와 수용액 사이에 분배시킨다. 상기 두 상을 분리시키고 유기층을 건조시키고 농축시킨다. 잔사를 실리카 크로마토그래피에 의해, 예비 HPLC에 의해, 또는 적합한 용매 혼합물을 사용하는 침전에 의해 정제시킬 수 있다.(COCl) 2 (1.35-2.5 equiv.) is added to a solution of the carboxylic acid (1.4-3 equiv.) in DCM at 0 °C. A catalytic amount of DMF is added and the reaction is stirred at 0° C. for a period ranging from 30 minutes to 1 hour. Solutions of the intermediate amine (1 eq.) and pyridine (1.7 to 4 eq.) in NMP or NMP/DCM are prepared separately to ensure complete dissolution of the intermediate amine. To aid dissolution, heating can be applied (temperatures up to 70 °C). The latter solution is added dropwise to the solution containing the newly formed acyl chloride at 0 °C. The resulting mixture is stirred at room temperature for a period ranging from 1 to 2 hours. The mixture is partitioned between an organic solvent and an aqueous solution. The two phases are separated and the organic layer is dried and concentrated. The residue can be purified by chromatography on silica, by preparative HPLC, or by precipitation using a suitable solvent mixture.
2.2.5. 방법 K2의 예시적인 실시예: (1R,2R)-N-[6-[(6-시아노-4-메틸-3-피리딜)옥시]-1-메틸-벤즈이미다졸-4-일]-2-플루오로-사이클로프로판카복스아미드(화합물 20)의 합성2.2.5. Illustrative Example of Method K2: (1R,2R)-N-[6-[(6-cyano-4-methyl-3-pyridyl)oxy]-1-methyl-benzimidazol-4-yl] Synthesis of -2-fluoro-cyclopropanecarboxamide (Compound 20)
(COCl)2(16.6 mmol)를 DCM(70 ㎖) 중의 ((1R,2R)-(-)-시스-2-플루오로-사이클로프로판카복실산(ABCR, 로트 n. 1242863, 17.5 mmol)의 용액에 이어서 DMF(200 ㎕)에 가하였다. 상기 반응 혼합물을 0 ℃에서 45분 동안 교반하였다. NMP(15 ㎖) 중의 화합물 28(12.5 mmol) 및 피리딘(21.3 mmol)의 용액을 65 ℃에서 가열하여 용해를 돕고, 실온으로 냉각되게 둔다. 화합물 28 및 피리딘을 함유하는 용액을 0 ℃에서 활성화된 카복실 유도체를 함유하는 혼합물에 가하고 상기 반응물을 실온에서 45분 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 EtOAc와 포화된 NaHCO3 사이에 분배시켰다. 상기 두 상을 분리시키고 유기층을 추가로 세척하고(포화된 NaHCO3, NH4Cl, H2O), 건조시키고(Na2SO4) 농축시켰다. 조 물질을 DCM/iPrOH로부터 침전에 의해 정제하고 생성 고체를 Et2O로 세척하고 진공하에서 건조시켜 목적하는 생성물을 제공하였다.(COCl) 2 (16.6 mmol) was added to a solution of ((1R,2R)-(-)-cis-2-fluoro-cyclopropanecarboxylic acid (ABCR, lot n. 1242863, 17.5 mmol) in DCM (70 mL). DMF (200 μl) was then added The reaction mixture was stirred at 0° C. for 45 min The solution of compound 28 (12.5 mmol) and pyridine (21.3 mmol) in NMP (15 mL) was heated at 65° C. to dissolve and allowed to cool to room temperature.The solution containing compound 28 and pyridine was added to the mixture containing the activated carboxyl derivative at 0° C. and the reaction was stirred at room temperature for 45 minutes. The mixture was mixed with EtOAc and saturated NaHCO Partitioned between 3. The two phases were separated and the organic layer was further washed (saturated NaHCO 3 , NH 4 Cl, H 2 O), dried (Na 2 SO 4 ) and concentrated Crude was DCM/iPrOH Purified by precipitation from , and the resulting solid was washed with Et 2 O and dried under vacuum to give the desired product.
2.3. 일반적인 방법: 최종 화합물을 수득하기 위한 나이트릴기의 가수분해2.3. General Method: Hydrolysis of Nitrile Groups to Obtain Final Compounds
여기에서 L은 NH, NMe 또는 O이고; RC는 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬이고; Z는 N 또는 CH이고; R10은 Me 또는 Et이다.wherein L is NH, NMe or O; R C is cycloalkyl, substituted cycloalkyl; Z is N or CH; R 10 is Me or Et.
2.3.1. 방법 L2.3.1. method L
나이트릴 출발 물질(1 당량)의 용액을 4:1 EtOH/DMSO 혼합물 중에 용해시킨다. 생성 유기 용액을 하기의 비율 10:2:1 유기 용액/H2O2/1N NaOH로 30% H2O2/H2O 및 1N NaOH와 혼합한다. 상기 혼합물을 50 ℃에서 1시간 동안 교반한다. 상기 혼합물을 유기 용매와 수용액 사이에 분배시킨다. 상기 두 상을 분리시키고 유기층을 건조시키고 농축시킨다. 상기 잔사를 실리카 크로마토그래피에 의해, 예비 HPLC에 의해, 또는 적합한 용매 혼합물을 사용하는 침전에 의해 정제시킬 수 있다.A solution of the nitrile starting material (1 eq.) is dissolved in a 4:1 EtOH/DMSO mixture. The resulting organic solution was mixed with 30% H 2 O 2 / H 2 O and 1N NaOH in the following ratio 10:2:1 organic solution/H 2 O 2 /1N NaOH. The mixture is stirred at 50 °C for 1 hour. The mixture is partitioned between an organic solvent and an aqueous solution. The two phases are separated and the organic layer is dried and concentrated. The residue can be purified by chromatography on silica, by preparative HPLC, or by precipitation using a suitable solvent mixture.
2.3.2. 방법 L의 예시적인 실시예: 5-((4-(사이클로프로판카복스아미도)-1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)(메틸)아미노)-4-에틸피콜린아미드(화합물 24)의 합성.2.3.2. Illustrative Example of Method L: 5-((4-(Cyclopropanecarboxamido)-1-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)(methyl)amino)-4-ethylp Synthesis of Cholineamide (Compound 24).
화합물 1(0.19 mmol)의 용액을 4:1 EtOH/DMSO 혼합물(2.3 ㎖)에 용해시켰다. 생겅되는 유기 용액을 30% H2O2/H2O(0.4 ㎖) 및 1N NaOH(0.23 ㎖)와 혼합하였다. 상기 혼합물을 50 ℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 다이클로로메탄과 물 사이에 분배시켰다. 층들을 분리시키고 유기층을 상 분리기를 통해 여과하고 농축시켰다. 잔사를 예비 HPLC에 의해 정제시켜 목적하는 생성물을 제공하였다.A solution of compound 1 (0.19 mmol) was dissolved in a 4:1 EtOH/DMSO mixture (2.3 mL). The resulting organic solution was mixed with 30% H 2 O 2 /H 2 O (0.4 mL) and 1N NaOH (0.23 mL). The mixture was stirred at 50 °C for 1 hour. The reaction mixture was partitioned between dichloromethane and water. The layers were separated and the organic layer was filtered through a phase separator and concentrated. The residue was purified by preparative HPLC to give the desired product.
2.3.3. 방법 M: 우레아의 일반적인 합성 방법2.3.3. Method M: general method for the synthesis of urea
카보닐다이트라이아졸(1.5 당량)을 DCM 중의 화합물 28(1.0 당량) 및 피리딘(5 당량)의 혼합물에 가한다. 이어서 상기 혼합물을 50 ℃에서 1시간 동안 교반한다. 임의의 추가의 처리 없이, 필요한 아민 RaNH2를 50 ℃에서 상기 용액에 가하고 추가로 1시간 동안 교반한다. UPLC에 의한 상기 반응의 완료 후에, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 DCM으로 희석하고, 이어서 상기 혼합물을 물에 분배한다. 상기 두 상을 분리시키고 유기층을 0.25M HCl 용액, 나트륨 바이카보네이트 용액으로 세척하고, 건조시키고 농축시킨다. 잔사를 실리카 크로마토그래피에 의해, 예비 HPLC에 의해, 또는 적합한 용매 혼합물을 사용하는 침전에 의해 정제시킬 수 있다.Carbonylditriazole (1.5 equiv.) is added to a mixture of 28 (1.0 equiv.) and pyridine (5 equiv.) in DCM. The mixture is then stirred at 50 °C for 1 hour. Without any further treatment, the required amine R a NH 2 is added to the solution at 50° C. and stirred for an additional hour. After completion of the reaction by UPLC, the reaction mixture is cooled to room temperature and diluted with DCM, then the mixture is partitioned into water. The two phases are separated and the organic layer is washed with 0.25M HCl solution, sodium bicarbonate solution, dried and concentrated. The residue can be purified by chromatography on silica, by preparative HPLC, or by precipitation using a suitable solvent mixture.
2.3.4. 방법 M의 예시적인 실시예: 1-[6-[(6-시아노-4-메틸-3-피리딜)옥시]-1-메틸-벤즈이미다졸-4-일]-3-아이소프로필-우레아(화합물 33)의 합성2.3.4. Illustrative Example of Method M: 1-[6-[(6-Cyano-4-methyl-3-pyridyl)oxy]-1-methyl-benzimidazol-4-yl]-3-isopropyl- Synthesis of Urea (Compound 33)
카보닐다이트라이아졸(1.07 mmol)을 DCM(3 ㎖) 중의 화합물 28(0.71 mmol) 및 피리딘(3.55 mmol)의 혼합물에 가하고 생성 혼합물을 50 ℃에서 교반하였다. 2시간 후에 침전물이 형성되었으며 상기 혼합물을 1시간 동안 추가로 교반하였다. 이어서 메틸 아민(THF 중의 2M 용액)(2.84 mmol)을 50 ℃에서 상기 용액에 가하고 추가로 1시간 동안 교반하였다. UPLC에 의한 상기 반응의 완료 후에, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 DCM으로 희석하고, 이어서 상기 혼합물을 물에 분배하였다. 상기 두 상을 분리시키고 유기층을 0.25M HCl 용액, 나트륨 바이카보네이트 용액으로 세척하고, 건조시키고 농축시켰다. 상기 잔사를 임의의 추가의 정제 없이 사용하였다.Carbonylditriazole (1.07 mmol) was added to a mixture of compound 28 (0.71 mmol) and pyridine (3.55 mmol) in DCM (3 mL) and the resulting mixture was stirred at 50 °C. A precipitate formed after 2 hours and the mixture was further stirred for 1 hour. Then methyl amine (2M solution in THF) (2.84 mmol) was added to the solution at 50 °C and stirred for an additional hour. After completion of the reaction by UPLC, the reaction mixture was cooled to room temperature and diluted with DCM, then the mixture was partitioned into water. The two phases were separated and the organic layer was washed with 0.25M HCl solution, sodium bicarbonate solution, dried and concentrated. The residue was used without any further purification.
2.4. 5-[7-[[(1R,2R)-2-플루오로사이클로프로판카보닐]아미노]-3-메틸-벤즈이미다졸-5-일]옥시-4-메틸-피리딘-2-카복스아미드(화합물 32)의 합성2.4. 5-[7-[[(1R,2R)-2-fluorocyclopropanecarbonyl]amino]-3-methyl-benzimidazol-5-yl]oxy-4-methyl-pyridine-2-carboxamide Synthesis of (Compound 32)
H2O(pH 13, 10 ㎖) 중의 화합물 20(0.27 mmol) 및 DMSO(0.5 ㎖)의 혼합물을 50 ℃에서 72시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 여과하였다. 고체를 수집하고 예비 HPLC에 의해 정제시켜 목적하는 생성물을 제공하였다.A mixture of Compound 20 (0.27 mmol) and DMSO (0.5 mL) in H 2 O (pH 13, 10 mL) was stirred at 50 °C for 72 h. The mixture was filtered. The solid was collected and purified by preparative HPLC to give the desired product.
2.5. 4-메틸-5-[3-메틸-7-(메틸아미노)벤즈이미다졸-5-일]옥시-피리딘-2-카보나이트릴(화합물 34) 및 5-[7-(다이메틸아미노)-3-메틸-벤즈이미다졸-5-일]-옥시-4-메틸-피리딘-2-카보나이트릴(화합물 35)의 합성2.5. 4-methyl-5-[3-methyl-7-(methylamino)benzimidazol-5-yl]oxy-pyridine-2-carbonitrile (Compound 34) and 5-[7-(dimethylamino)-3 Synthesis of -methyl-benzimidazol-5-yl]-oxy-4-methyl-pyridine-2-carbonitrile (Compound 35)
NaH를 0 ℃에서 THF(10 ㎖) 중의 화합물 28(0.36 mmol)의 혼합물에 가하였다. 30분 후에, MeI(0.36 mmol)를 가하고 반응 혼합물을 실온으로 가온시키고 완료시까지 교반하였다. UPLC에 의해 완료를 모니터한 후에, 반응물을 에틸 아세테이트 중에서 희석하고 물로 세척하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 증발시켰다. 화합물 34 및 화합물 35를 예비 HPLC에 의해 단리시켰다.NaH was added to a mixture of compound 28 (0.36 mmol) in THF (10 mL) at 0 °C. After 30 min, Mel (0.36 mmol) was added and the reaction mixture was warmed to room temperature and stirred until complete. After monitoring completion by UPLC, the reaction was diluted in ethyl acetate and washed with water. The organic layer was dried over Na 2 SO 4 , filtered and evaporated. Compounds 34 and 35 were isolated by preparative HPLC.
하기 표 III 및 비교 실시예들에 나열된 본 발명의 예시적인 화합물들을 표 II에 나열된 중간체들을 사용하여 본 발명에 개시된 합성 방법에 따라 제조하였다. 본 발명 화합물 및 비교 실시예의 일부 화합물의 NMR 스펙트럼 데이터를 표 IV에 제공한다.Exemplary compounds of the present invention listed in Table III below and Comparative Examples were prepared according to the synthetic methods disclosed herein using the intermediates listed in Table II. NMR spectral data of the compounds of the present invention and some of the comparative examples are provided in Table IV.
[표 II][Table II]
본 발명의 화합물들에 대한 예시적인 중간체들Exemplary Intermediates for Compounds of the Invention
[표 III][Table III]
본 발명의 예시적인 화합물들Exemplary Compounds of the Invention
[표 IV][Table IV]
본 발명의 예시적인 화합물들의 NMR 데이터NMR data of exemplary compounds of the present invention
실시예 3. 비교 화합물Example 3. Comparative compound
3.1. 화합물 A 2-[4-[(3-메틸벤즈이미다졸-5-일)아미노]페닐]아세토나이트릴3.1. Compound A 2-[4-[(3-methylbenzimidazol-5-yl)amino]phenyl]acetonitrile
1,4-다이옥산(1 ㎖) 중의 Pd2(dba)3(0.01 mmol) 및 Xantphos(0.01 mmol)의 혼합물을 초음파처리하고 질소하에서 1,4-다이옥산(2 ㎖) 중의 6-브로모-1-메틸-벤즈이미다졸(0.45 mmol), 2-(4-아미노페닐)아세토나이트릴(0.58 mmol) 및 Cs2CO3(0.62 mmol)의 혼합물에 가하였다. 상기 혼합물을 110 ℃에서 12시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 희석하고(DCM), 세척하고(H2O), 건조시키고(상 분리기) 농축시켰다. 잔사를 예비 HPLC에 의해 정제시켜 목적하는 생성물(화합물 A)을 제공하였다.A mixture of Pd 2 (dba) 3 (0.01 mmol) and Xantphos (0.01 mmol) in 1,4-dioxane (1 mL) was sonicated and 6-bromo-1 in 1,4-dioxane (2 mL) under nitrogen. -Methyl-benzimidazole (0.45 mmol), 2-(4-aminophenyl)acetonitrile (0.58 mmol) and Cs 2 CO 3 (0.62 mmol) were added to the mixture. The mixture was stirred at 110 °C for 12 hours. The mixture was diluted (DCM), washed (H 2 O), dried (phase separator) and concentrated. The residue was purified by preparative HPLC to give the desired product (Compound A).
MW: 262.3. MS Ms'd: 263.2.MW: 262.3. MS Ms'd: 263.2.
NMR: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.13 (1 H, s), 7.68 (1 H, dd), 7.60 (1 H, dd), 7.54 (1 H, d), 7.32 (1 H, d), 7.24 (1 H, t), 6.91 (1 H, dd), 3.77 (3 H, s), 3.39 (3 H, s).NMR: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.13 (1 H, s), 7.68 (1 H, dd), 7.60 (1 H, dd), 7.54 (1 H, d), 7.32 (1 H, d), 7.24 (1 H, t), 6.91 (1 H, dd), 3.77 (3 H, s), 3.39 (3 H, s).
3.2. 화합물 B3.2. compound B
1,4-다이옥산(1 ㎖) 중의 Pd2(dba)3(0.01 mmol) 및 Xantphos(0.01 mmol)의 혼합물을 초음파처리하고 질소하에서 1,4-다이옥산(2 ㎖) 중의 6-브로모-1-메틸-벤즈이미다졸(0.45 mmol), 2,3-다이하이드로-1,4-벤조다이옥신-6-아민(0.58 mmol) 및 Cs2CO3(0.62 mmol)의 혼합물에 가하였다. 상기 혼합물을 110 ℃에서 12시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 희석하고(DCM), 세척하고(H2O), 건조시키고(상 분리기) 농축시켰다. 잔사를 예비 HPLC에 의해 정제시켜 목적하는 생성물(화합물 B)을 제공하였다.A mixture of Pd 2 (dba) 3 (0.01 mmol) and Xantphos (0.01 mmol) in 1,4-dioxane (1 mL) was sonicated and 6-bromo-1 in 1,4-dioxane (2 mL) under nitrogen. -Methyl-benzimidazole (0.45 mmol), 2,3-dihydro-1,4-benzodioxin-6-amine (0.58 mmol) and Cs 2 CO 3 (0.62 mmol) were added to the mixture. The mixture was stirred at 110 °C for 12 hours. The mixture was diluted (DCM), washed (H 2 O), dried (phase separator) and concentrated. The residue was purified by preparative HPLC to give the desired product (Compound B).
MW: 281.3. MS Ms'd: 282.1.MW: 281.3. MS Ms'd: 282.1.
NMR: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 7.94 (1 H, s), 7.80 (1 H, br s), 7.45 (1 H, d), 7.05 (1 H, d), 6.86 (1 H, dd), 6.73 (1 H, dd), 6.61-6.57 (2 H, m), 4.22-4.16 (4 H, m), 3.71 (3 H, s).NMR: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 7.94 (1 H, s), 7.80 (1 H, br s), 7.45 (1 H, d), 7.05 (1 H, d), 6.86 ( 1 H, dd), 6.73 (1 H, dd), 6.61–6.57 (2 H, m), 4.22–4.16 (4 H, m), 3.71 (3 H, s).
3.3. 화합물 C 3-플루오로-4-[메틸-(3-메틸벤즈이미다졸-5-일)아미노]벤조나이트릴3.3. Compound C 3-fluoro-4-[methyl-(3-methylbenzimidazol-5-yl)amino]benzonitrile
3.3.1. 단계 i: 3-플루오로-4-[(3-메틸벤즈이미다졸-5-일)아미노]벤조나이트릴3.3.1. Step i: 3-Fluoro-4-[(3-methylbenzimidazol-5-yl)amino]benzonitrile
무수 톨루엔(8 ㎖) 중의 6-브로모-1-메틸-벤즈이미다졸(2.38 mmol), 4-아미노-3-플루오로-벤조나이트릴(3.57 mmol), XPhos(0.95 mmol), Cs2CO3(7.14 mmol) 및 Pd(OAc)2(0.71 mmol)의 혼합물을 110 ℃에서 대략 16시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 희석하고(EtOAc), 세척하고(H2O), 건조시키고(Na2SO4) 농축시켜 목적하는 생성물 3-플루오로-4-[(3-메틸벤즈이미다졸-5-일)아미노]벤조나이트릴을 제공하였다.6-Bromo-1-methyl-benzimidazole (2.38 mmol), 4-amino-3-fluoro-benzonitrile (3.57 mmol), XPhos (0.95 mmol), Cs 2 CO in anhydrous toluene (8 mL) A mixture of 3 (7.14 mmol) and Pd(OAc) 2 (0.71 mmol) was stirred at 110 °C for approximately 16 h. The mixture was diluted (EtOAc), washed (H 2 O), dried (Na 2 SO 4 ) and concentrated to give the desired product 3-fluoro-4-[(3-methylbenzimidazol-5-yl) amino]benzonitrile.
3.3.2. 단계 ii: 3-플루오로-4-[메틸-(3-메틸벤즈이미다졸-5-일)아미노]벤조나이트릴(화합물 C)3.3.2. Step ii: 3-Fluoro-4-[methyl-(3-methylbenzimidazol-5-yl)amino]benzonitrile (Compound C)
NaH(7.14 mmol)를 0 ℃에서 THF(10 ㎖) 중의 3-플루오로-4-[(3-메틸벤즈이미다졸-5-일)아미노]벤조나이트릴(2.38 mmol)의 용액에 가하였다. 상기 혼합물을 30분 동안 교반하였다. MeI(4.76 mmol)를 가하고 상기 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 희석하고(DCM), 세척하고(H2O) 농축시켰다. 잔사를 예비 HPLC에 의해 정제시켜 목적하는 생성물(화합물 C)을 제공하였다.NaH (7.14 mmol) was added to a solution of 3-fluoro-4-[(3-methylbenzimidazol-5-yl)amino]benzonitrile (2.38 mmol) in THF (10 mL) at 0 °C. The mixture was stirred for 30 minutes. Mel (4.76 mmol) was added and the mixture was stirred at room temperature for 3 hours. The mixture was diluted (DCM), washed (H 2 O) and concentrated. The residue was purified by preparative HPLC to give the desired product (Compound C).
MW: 280.1. MS Ms'd: 281.0.MW: 280.1. MS Ms'd: 281.0.
NMR: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.13 (1 H, s), 7.68 (1 H, dd), 7.60 (1 H, dd), 7.54 (1 H, d), 7.32 (1 H, d), 7.24 (1 H, t), 6.91 (1 H, dd), 3.77 (3 H, s), 3.39 (3 H, s).NMR: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.13 (1 H, s), 7.68 (1 H, dd), 7.60 (1 H, dd), 7.54 (1 H, d), 7.32 (1 H, d), 7.24 (1 H, t), 6.91 (1 H, dd), 3.77 (3 H, s), 3.39 (3 H, s).
3.4. 화합물 D3.4. compound D
상기 화합물의 합성은 PCT 국제 출원(2013) WO 2013117645(Menet et al, 2013)에 개시되었다.The synthesis of this compound is disclosed in PCT International Application (2013) WO 2013117645 (Menet et al, 2013).
생물학적 biological 실시예Example
실시예 4. 시험관내 분석Example 4. In vitro assay
4.1. JAK1 억제 분석4.1. JAK1 inhibition assay
4.1.1. JAK1 분석 폴리GT 기질4.1.1. JAK1 assay polyGT substrate
재조합 인간 JAK1 촉매 도메인(아미노산 850-1154; 카탈로그 번호 08-144)을 카르나 바이오사이언시즈(Carna Biosciences)로부터 구입하였다. 10 ng의 JAK1을 키나제 반응 완충제(15 mM 트리스-HCl pH 7.5, 1 mM DTT, 0.01% 트윈-20, 10 mM MgCl2, 2 μM 비-방사성 ATP, 0.25 μCi 33P-감마-ATP(GE 헬쓰케어, 카탈로그 번호 AH9968) 최종 농도) 중의 12.5 ㎍ 폴리GT 기질(시그마 카탈로그 번호 P0275)과 5 ㎕의 시험 화합물 또는 비히클의 존재 또는 부재 하에서 총 25 ㎕의 부피로, 폴리프로필렌 96-웰 플레이트(그레이너(Greiner), V-바닥)에서 배양한다. 30 ℃에서 45 분 후에, 25 ㎕/웰의 150 mM 인산을 가함으로써 반응을 정지시킨다. 종결된 키나제 반응을 모두 세포 수확기(퍼킨 엘머)를 사용하여 예비세척된(75 mM 인산) 96 웰 필터 플레이트(퍼킨 엘머 카탈로그 번호 6005177)로 옮긴다. 플레이트를 300 ㎕/웰의 75 mM 인산 용액으로 6 회 세척하고 상기 플레이트의 바닥을 밀봉한다. 40 ㎕/웰의 마이크로신트(Microscint)-20을 가하고, 상기 플레이트의 상부를 밀봉하고 탑카운트(Topcount)(퍼킨 엘머)를 사용하여 판독을 수행한다. 키나제 활성을, 양성 대조용 억제제(10 μM 스타우로스포린)의 존재하에서 획득된 분당카운트(cpm)를 비히클의 존재 하에서 획득된 cpm으로부터 감하여 계산한다. 상기 활성을 억제하는 시험 화합물의 능력을 하기와 같이 측정한다:Recombinant human JAK1 catalytic domain (amino acids 850-1154; catalog number 08-144) was purchased from Carna Biosciences. 10 ng of JAK1 was added to kinase reaction buffer (15 mM Tris-HCl pH 7.5, 1 mM DTT, 0.01% Tween-20, 10 mM MgCl 2 , 2 μM non-radioactive ATP, 0.25 μCi 33 P-gamma-ATP (GE Health Care, cat. no. AH9968) final concentration) in a polypropylene 96-well plate (Grayner) in a total volume of 25 μl in the presence or absence of 12.5 μg polyGT substrate (Sigma cat. no. P0275) and 5 μl of test compound or vehicle. (Greiner), V-bottom). After 45 minutes at 30° C., the reaction is stopped by adding 25 μl/well of 150 mM phosphoric acid. Transfer all terminated kinase reactions to a prewashed (75 mM phosphoric acid) 96 well filter plate (Perkin Elmer catalog number 6005177) using a cell harvester (Perkin Elmer). The plate is washed 6 times with 300 μl/well of 75 mM phosphoric acid solution and the bottom of the plate is sealed. Add 40 μl/well of Microscint-20, seal the top of the plate and read using Topcount (Perkin Elmer). Kinase activity is calculated by subtracting the counts per minute (cpm) obtained in the presence of the positive control inhibitor (10 μM staurosporine) from the cpm obtained in the presence of vehicle. The ability of a test compound to inhibit this activity is determined as follows:
억제 백분율 = ((RFU 시험 화합물 - RFU 대조용)/(RFU 비히클 - RFU 대조용)) x 100Percent inhibition = ((RFU test compound - RFU control) / (RFU vehicle - RFU control)) x 100
RFU 시험 화합물 = 존재하는 시험 화합물을 갖는 샘플에 대해 측정된 RFURFU test compound = RFU measured for the sample with the test compound present
RFU 대조용 = 양성 대조용 억제제를 갖는 샘플에 대해 측정된 RFURFU control = RFU measured for sample with positive control inhibitor
RFU 비히클 = 비히클의 존재하에서 측정된 RFURFU vehicle = RFU measured in the presence of vehicle
일련의 용량 희석물을, JAK1 분석에서 용량-반응 효과의 시험 및 각각의 화합물에 대한 IC50의 계산이 가능하도록 상기 화합물들에 대해 제조한다. 각각의 화합물을 20 μM의 농도에 이어서 일련의 1/3 희석, 8 개 점(20μM - 6.67μM - 2.22μM - 740nM - 247nM - 82nM - 27nM - 9nM)에서 1% DMSO의 최종 농도로 통상적으로 시험한다. 일련의 화합물 효능이 증가하면, 보다 많은 희석물을 제조하고/하거나 최고 농도를 낮추었다(예를 들어 5 μM, 1 μM).A series of dose dilutions are prepared for the compounds to allow for testing of dose-response effects in the JAK1 assay and calculation of the IC 50 for each compound. Each compound was routinely tested at a concentration of 20 μM followed by a final concentration of 1% DMSO in a serial 1/3 dilution, 8 points (20 μM - 6.67 μM - 2.22 μM - 740 nM - 247 nM - 82 nM - 27 nM - 9 nM). do. As series compound potency increased, more dilutions were prepared and/or the highest concentration was lowered (eg 5 μM, 1 μM).
4.1.2. JAK1 Ulight-JAK1 펩타이드 분석4.1.2. JAK1 Ulight-JAK1 peptide assay
재조합 인간 JAK1(촉매 도메인, 아미노산 866-1154; 카탈로그 번호 PV4774)을 인비트로젠으로부터 구입하였다. 1 ng의 JAK1을 키나제 반응 완충제(25 mM MOPS pH 6.8, 0.01% 브리즈(Brij)-35, 5 mM MgCl2, 2 mM DTT, 7 μM ATP) 중의 20 nM Ulight-JAK1(tyr1023) 펩타이드와 4 ㎕의 시험 화합물 또는 비히클(DMSO, 1% 최종 농도)의 존재 또는 부재 하에서 총 20 ㎕의 부피로, 백색 384 Opti 플레이트(퍼킨 엘머, 카탈로그 번호 6007290)에서 배양하였다. 실온에서 60 분 후에, 20 ㎕/웰의 검출 혼합물(1 x 검출 완충제(퍼킨 엘머, 카탈로그 번호 CR97-100C), 0.5 nM 유로피움-항-포스포타이로신(PT66)(퍼킨 엘머, 카탈로그 번호 AD0068), 10 mM EDTA)을 가함으로써 반응을 정시켰다. 320 ㎚에서의 여기를 갖는 엔비젼(Envision)을 사용하고 615 ㎚에서 방출을 측정하여 판독을 수행한다(퍼킨 엘머). 키나제 활성을, 양성 대조용 억제제(10 μM 스타우로스포린)의 존재 하에서 획득된 상대 형광 단위(RFU)를 비히클의 존재 하에서 획득된 RFU로부터 감하여 계산하였다. 상기 활성을 억제하는 시험 화합물의 능력을 하기와 같이 측정하였다:Recombinant human JAK1 (catalytic domain, amino acids 866-1154; catalog number PV4774) was purchased from Invitrogen. 1 ng of JAK1 was mixed with 20 nM Ulight-JAK1 (tyr1023) peptide in kinase reaction buffer (25 mM MOPS pH 6.8, 0.01% Brij-35, 5 mM MgCl 2 , 2 mM DTT, 7 μM ATP) in 4 μl. were incubated in white 384 Opti plates (Perkin Elmer, cat. no. 6007290) in a total volume of 20 μl in the presence or absence of test compound or vehicle (DMSO, 1% final concentration). After 60 min at room temperature, 20 μl/well of Detection Mixture (1 x Detection Buffer (Perkin Elmer, Cat. No. CR97-100C), 0.5 nM Europium-anti-Phosphotyrosine (PT66) (Perkin Elmer, Cat. No. AD0068) , 10 mM EDTA) was added to quench the reaction. The reading is performed using an Envision with excitation at 320 nm and measuring the emission at 615 nm (Perkin Elmer). Kinase activity was calculated by subtracting the relative fluorescence units (RFU) obtained in the presence of a positive control inhibitor (10 μM staurosporine) from the RFU obtained in the presence of vehicle. The ability of test compounds to inhibit this activity was determined as follows:
억제 백분율 = ((시험 화합물이 존재하는 샘플에 대해 측정된 RFU - 양성 대조용 억제제가 있는 샘플에 대해 측정된 RFU)/(비히클의 존재 하에서 측정된 RFU - 양성 대조용 억제제가 있는 샘플에 대해 측정된 RFU)) x 100.Percent inhibition = ((RFU measured for samples with test compound - RFU measured for samples with positive control inhibitor) / (RFU measured in the presence of vehicle - measured for samples with positive control inhibitor RFU)) x 100.
일련의 용량 희석물을 JAK1 분석에서 용량-반응 효과의 시험 및 상기 화합물에 대한 IC50의 계산이 가능하도록 상기 화합물들에 대해 제조하였다. 각각의 화합물을 20 μM의 농도에 이어서 일련의 1/5 희석, 10 개 점에서 1% DMSO의 최종 농도로 통상적으로 시험한다. 일련의 화합물 효능이 증가하면, 보다 많은 희석물을 제조하고/하거나 최고 농도를 낮춘다(예를 들어 5 μM, 1 μM). 데이터를 상기 분석으로부터의 평균 IC50 ± 상기 평균의 표준 오차로서 나타낸다.A series of dose dilutions were prepared for the compounds to allow for testing of dose-response effects in the JAK1 assay and calculation of the IC50 for the compounds. Each compound is routinely tested at a concentration of 20 μM followed by a serial 1/5 dilution, final concentration of 1% DMSO at 10 points. If the series compound potency increases, more dilutions are prepared and/or the highest concentration is lowered (eg 5 μM, 1 μM). Data are presented as mean IC 50 from the assay ± standard error of the mean.
[표 V][Table V]
본 발명의 예시적인 화합물들의 JAK1 IC50 값JAK1 IC 50 values of exemplary compounds of the present invention
* > 500 nM* > 500 nM
** > 100-500 nM** > 100-500 nM
*** > 50-100 nM*** > 50-100 nM
**** 0.1-50 nM****0.1-50 nM
[표 VI][Table VI]
비교 화합물들의 JAK1 IC50 값JAK1 IC 50 values of comparative compounds
4.1.3. JAK1 Ki 측정 분석4.1.3. JAK1 Ki measurement assay
Ki의 측정을 위해서, 상이한 양의 화합물을 효소와 혼합하며, 상기 효소 반응은 ATP 농도의 함수로서 추적된다. 상기 Ki를, Km 대 화합물 농도의 이중 역비례 플롯팅(라인웨버-버크 플롯)에 의해 측정한다. 1 ng의 JAK1(인비트로젠, PV4774)을 상기 분석에 사용한다. 기질은 50 nM Ulight-JAK-1(Tyr1023) 펩타이드(퍼킨 엘머, TRF0121)이었다. 상기 반응을 다양한 농도의 ATP 및 화합물과 함께 25 mM MOPS pH 6.8, 0.01%, 2 mM DTT, 5 mM MgCl2 브리즈(Brij)-35에서 수행한다. 인산화된 기질을 1.1.2에 개시된 바와 같이 Eu-표지된 항-포스포타이로신 항체 PT66(퍼킨 엘머, AD0068)를 사용하여 측정한다. 320 ㎚에서의 여기 및 615 ㎚ 및 665 ㎚에서의 방출을 갖는 엔비젼(퍼킨 엘머)상에서 판독을 수행한다.For the determination of Ki, different amounts of compound are mixed with an enzyme, and the enzyme reaction is tracked as a function of ATP concentration. The Ki is determined by double inverse plotting of Km versus compound concentration (Lineweber-Burk plot). 1 ng of JAK1 (Invitrogen, PV4774) is used for this assay. The substrate was 50 nM Ulight-JAK-1 (Tyr1023) peptide (Perkin Elmer, TRF0121). The reaction is performed in 25 mM MOPS pH 6.8, 0.01%, 2 mM DTT, 5 mM MgCl2 Brij-35 with various concentrations of ATP and compounds. Phosphorylated substrates are measured using Eu-labeled anti-phosphotyrosine antibody PT66 (Perkin Elmer, AD0068) as described in 1.1.2. Readings are performed on an Envision (Perkin Elmer) with excitation at 320 nm and emission at 615 nm and 665 nm.
4.2. JAK2 억제 분석4.2. JAK2 inhibition assay
4.2.1. JAK2 분석 폴리GT 기질4.2.1. JAK2 assay polyGT substrate
재조합 인간 JAK2 촉매 도메인(아미노산 808-1132; 카탈로그 번호 PV4210)을 인비트로젠으로부터 구입하였다. 0.025 mU의 JAK2를 키나제 반응 완충제(5 mM MOPS pH 7.5, 9 mM MgAc, 0.3 mM EDTA, 0.06% 브리즈, 및 0.6 mM DTT, 1 μM 비-방사성 ATP, 0.25 μCi 33P-감마-ATP(GE 헬쓰케어, 카탈로그 번호 AH9968) 최종 농도) 중의 2.5 ㎍ 폴리GT 기질(시그마 카탈로그 번호 P0275)과 5 ㎕의 시험 화합물 또는 비히클(DMSO, 1% 최종 농도)의 존재 또는 부재 하에서 총 25 ㎕의 부피로, 폴리프로필렌 96-웰 플레이트(그레이너, V-바닥)에서 배양한다. 30 ℃에서 90 분 후에, 25 ㎕/웰의 150 mM 인산을 가함으로써 반응을 정지시킨다. 종결된 키나제 반응을 모두 세포 수확기(퍼킨 엘머)를 사용하여 예비세척된(75 mM 인산) 96 웰 필터 플레이트(퍼킨 엘머 카탈로그 번호 6005177)로 옮긴다. 플레이트를 300 ㎕/웰의 75 mM 인산 용액으로 6회 세척하고 상기 플레이트의 바닥을 밀봉한다. 40 ㎕/웰의 마이크로신트-20을 가하고, 상기 플레이트의 상부를 밀봉하고 탑카운트(퍼킨 엘머)를 사용하여 판독을 수행한다. 키나제 활성을, 양성 대조용 억제제(10 μM 스타우로스포린)의 존재 하에서 획득된 분당카운트(cpm)를 비히클의 존재 하에서 획득된 cpm으로부터 감하여 계산한다. 상기 활성을 억제하는 시험 화합물의 능력을 하기와 같이 측정한다:Recombinant human JAK2 catalytic domain (amino acids 808-1132; catalog number PV4210) was purchased from Invitrogen. 0.025 mU of JAK2 was added to kinase reaction buffer (5 mM MOPS pH 7.5, 9 mM MgAc, 0.3 mM EDTA, 0.06% Breeze, and 0.6 mM DTT, 1 μM non-radioactive ATP, 0.25 μCi 33 P-gamma-ATP (GE Health Care, cat. # AH9968) final concentration) in the presence or absence of 2.5 μg polyGT substrate (Sigma cat. # P0275) and 5 μl test compound or vehicle (DMSO, 1% final concentration) in a total volume of 25 μl, poly Culture in propylene 96-well plates (Grainer, V-bottom). After 90 minutes at 30° C., the reaction is stopped by adding 25 μl/well of 150 mM phosphoric acid. Transfer all terminated kinase reactions to a prewashed (75 mM phosphoric acid) 96 well filter plate (Perkin Elmer catalog number 6005177) using a cell harvester (Perkin Elmer). The plate is washed 6 times with 300 μl/well of 75 mM phosphoric acid solution and the bottom of the plate is sealed. Add 40 μl/well of Microscint-20, seal the top of the plate and read using TopCount (Perkin Elmer). Kinase activity is calculated by subtracting the counts per minute (cpm) obtained in the presence of the positive control inhibitor (10 μM staurosporine) from the cpm obtained in the presence of vehicle. The ability of a test compound to inhibit this activity is determined as follows:
억제 백분율 = ((RFU 시험 화합물 - RFU 대조용)/(RFU 비히클 - RFU 대조용)) x 100Percent inhibition = ((RFU test compound - RFU control) / (RFU vehicle - RFU control)) x 100
RFU 시험 화합물 = 존재하는 시험 화합물을 갖는 샘플에 대해 측정된 RFURFU test compound = RFU measured for the sample with the test compound present
RFU 대조용 = 양성 대조용 억제제를 갖는 샘플에 대해 측정된 RFURFU control = RFU measured for sample with positive control inhibitor
RFU 비히클 = 비히클의 존재하에서 측정된 RFURFU vehicle = RFU measured in the presence of vehicle
일련의 용량 희석물을 JAK2 분석에서 용량-반응 효과의 시험 및 상기 화합물에 대한 IC50의 계산이 가능하도록 상기 화합물들에 대해 제조한다. 각각의 화합물을 20 μM의 농도에 이어서 일련의 1/3 희석, 8개 점(20μM - 6.67μM - 2.22μM - 740nM - 247nM - 82nM - 27nM - 9nM)에서 1% DMSO의 최종 농도로 통상적으로 시험한다. 일련의 화합물 효능이 증가하면, 보다 많은 희석물을 제조하고/하거나 최고 농도를 낮춘다(예를 들어 5 μM, 1 μM).A series of dose dilutions are prepared for the compounds to allow for testing of dose-response effects in the JAK2 assay and calculation of the IC 50 for the compounds. Each compound was routinely tested at a concentration of 20 μM followed by a final concentration of 1% DMSO in a serial 1/3 dilution, 8 points (20 μM - 6.67 μM - 2.22 μM - 740 nM - 247 nM - 82 nM - 27 nM - 9 nM). do. If the series compound potency increases, more dilutions are prepared and/or the highest concentration is lowered (eg 5 μM, 1 μM).
4.2.2. JAK2 Ulight-JAK1 펩타이드 분석4.2.2. JAK2 Ulight-JAK1 peptide assay
재조합 인간 JAK2(촉매 도메인, 아미노산 866-1154; 카탈로그 번호 PV4210)을 인비트로젠으로부터 구입하였다. 0.0125 mU의 JAK2를 키나제 반응 완충제(25mM HEPES pH7.0, 0.01% 트리톤 X-100, 7.5mM MgCl2 , 2mM DTT, 7.5μM ATP) 중의 25 nM Ulight-JAK1(tyr1023) 펩타이드(퍼킨 엘머 카탈로그 번호 TRF0121))와 4 ㎕의 시험 화합물 또는 비히클(DMSO, 1% 최종 농도)의 존재 또는 부재 하에서 총 20 ㎕의 부피로, 백색 384 Opti 플레이트(퍼킨 엘머, 카탈로그 번호 6007290)에서 배양하였다. 실온에서 60 분 후에, 20 ㎕/웰의 검출 혼합물(1 x 검출 완충제(퍼킨 엘머, 카탈로그 번호 CR97-100C), 0.5 nM 유로피움-항-포스포타이로신(PT66)(퍼킨 엘머, 카탈로그 번호 AD0068), 10 mM EDTA)을 가함으로써 반응을 정지시켰다. 320 ㎚에서의 여기를 갖는 엔비젼을 사용하고 615 ㎚에서 방출을 측정하여 판독을 수행한다(퍼킨 엘머). 키나제 활성을, 양성 대조용 억제제(10 μM 스타우로스포린)의 존재 하에서 획득된 상대 형광 단위(RFU)를 비히클의 존재 하에서 획득된 RFU로부터 감하여 계산하였다. 상기 활성을 억제하는 시험 화합물의 능력을 하기와 같이 측정하였다:Recombinant human JAK2 (catalytic domain, amino acids 866-1154; catalog number PV4210) was purchased from Invitrogen. 0.0125 mU of JAK2 was added to 25 nM Ulight-JAK1 (tyr1023) peptide ( Perkin Elmer catalog number TRF0121 )) and 4 μl of test compound or vehicle (DMSO, 1% final concentration) in a total volume of 20 μl, on white 384 Opti plates (Perkin Elmer, catalog number 6007290). After 60 min at room temperature, 20 μl/well of Detection Mixture (1 x Detection Buffer (Perkin Elmer, Cat. No. CR97-100C), 0.5 nM Europium-anti-Phosphotyrosine (PT66) (Perkin Elmer, Cat. No. AD0068) , 10 mM EDTA) was added to stop the reaction. The reading is performed using an Envision with excitation at 320 nm and measuring the emission at 615 nm (Perkin Elmer). Kinase activity was calculated by subtracting the relative fluorescence units (RFU) obtained in the presence of a positive control inhibitor (10 μM staurosporine) from the RFU obtained in the presence of vehicle. The ability of test compounds to inhibit this activity was determined as follows:
억제 백분율 = ((시험 화합물이 존재하는 샘플에 대해 측정된 RFU - 양성 대조용 억제제가 있는 샘플에 대해 측정된 RFU)/(비히클의 존재 하에서 측정된 RFU - 양성 대조용 억제제가 있는 샘플에 대해 측정된 RFU)) x 100.Percent inhibition = ((RFU measured for samples with test compound - RFU measured for samples with positive control inhibitor) / (RFU measured in the presence of vehicle - measured for samples with positive control inhibitor RFU)) x 100.
일련의 용량 희석물을 JAK2 분석에서 용량-반응 효과의 시험 및 상기 화합물에 대한 IC50의 계산이 가능하도록 상기 화합물들에 대해 제조한다. 각각의 화합물을 20 μM의 농도에 이어서 일련의 1/5 희석, 10 개 점에서 1% DMSO의 최종 농도로 통상적으로 시험한다. 일련의 화합물 효능이 증가하면, 보다 많은 희석물을 제조하고/하거나 최고 농도를 낮춘다(예를 들어 5 μM, 1 μM). 데이터를 상기 분석으로부터의 평균 IC50 ± 상기 평균의 표준 오차로서 나타낸다.A series of dose dilutions are prepared for the compounds to allow for testing of dose-response effects in the JAK2 assay and calculation of the IC 50 for the compounds. Each compound is routinely tested at a concentration of 20 μM followed by a serial 1/5 dilution, final concentration of 1% DMSO at 10 points. If the series compound potency increases, more dilutions are prepared and/or the highest concentration is lowered (eg 5 μM, 1 μM). Data are presented as mean IC 50 from the assay ± standard error of the mean.
하기의 화합물들을 본 발명에 개시된 분석을 사용하여 측정된 바와 같은 JAK2에 대한 그들의 활성 및 IC50 값들에 대해 시험하였으며, 하기 표 VII에 제공한다.The following compounds were tested for their activity and IC 50 values for JAK2 as measured using the assay disclosed herein and are provided in Table VII below.
[표 VII][Table VII]
본 발명의 예시적인 화합물들의 JAK2 IC50 값JAK2 IC 50 values of exemplary compounds of the present invention
* > 500 nM* > 500 nM
** > 100-500 nM** > 100-500 nM
*** > 50-100 nM*** > 50-100 nM
**** 0.1-50 nM****0.1-50 nM
[표 VIII][Table VIII]
비교 화합물들의 JAK2 IC50 값JAK2 IC 50 values of comparative compounds
4.2.3. JAK2 Kd 측정 분석4.2.3. JAK2 Kd measurement assay
JAK2(인비트로젠, PV4210)를 2.5 nM의 최종 농도로 사용한다. 결합 실험을 다양한 화합물 농도로, 25 nM 키나제 추적자 236(인비트로젠, PV5592) 및 2 nM Eu-항-GST(인비트로젠, PV5594)를 사용하여 50mM Hepes pH 7.5, 0.01% 브리즈-35, 10mM MgCl2, 1mM EGTA에서 수행한다. 추적자의 검출은 제조사의 절차에 따라 수행한다.JAK2 (Invitrogen, PV4210) is used at a final concentration of 2.5 nM. Binding experiments were performed in 50 mM Hepes pH 7.5, 0.01% Breeze-35, 10 mM using 25 nM Kinase Tracer 236 (Invitrogen, PV5592) and 2 nM Eu-anti-GST (Invitrogen, PV5594) at various compound concentrations. MgCl 2 , 1 mM EGTA. Detection of the tracer is performed according to the manufacturer's procedure.
4.3. JAK3 억제 분석4.3. JAK3 inhibition assay
4.3.1. JAK3 Ulight-JAK1 펩타이드 분석4.3.1. Analysis of the JAK3 Ulight-JAK1 peptide
재조합 인간 JAK3 촉매 도메인(아미노산 781-1124; 카탈로그 번호 PV3855)을 인비트로젠으로부터 구입하였다. 0.5 ng JAK3 단백질을 키나제 반응 완충제(25 mM 트리스 pH 7.5, 0.5 mM EGTA, 10mM MgCl2, 2.5mM DTT, 0.5 mM Na3VO4, 5 mM b-글리세로포스페이트, 0.01% 트리톤 X-100, 1 μM 비-방사성 ATP, 0.25 μCi 33P-감마-ATP(GE 헬쓰케어, 카탈로그 번호 AH9968) 최종 농도) 중의 2.5 ㎍ 폴리GT 기질(시그마 카탈로그 번호 P0275)과 5 ㎕의 시험 화합물 또는 비히클(DMSO, 1% 최종 농도)의 존재 또는 부재 하에서 총 25 ㎕의 부피로, 폴리프로필렌 96-웰 플레이트(그레이너, V-바닥)에서 배양하였다. 30 ℃에서 45 분 후에, 25 ㎕/웰의 150 mM 인산을 가함으로써 반응을 정시켰다. 종결된 키나제 반응을 모두 세포 수확기(퍼킨 엘머)를 사용하여 예비세척된(75 mM 인산) 96 웰 필터 플레이트(퍼킨 엘머 카탈로그 번호 6005177)로 옮겼다. 플레이트를 300 ㎕/웰의 75 mM 인산 용액으로 6 회 세척하고 상기 플레이트의 바닥을 밀봉하였다. 40 ㎕/웰의 마이크로신트-20을 가하고, 상기 플레이트의 상부를 밀봉하고 탑카운트(퍼킨 엘머)를 사용하여 판독을 수행하였다. 키나제 활성을, 양성 대조용 억제제(10 μM 스타우로스포린)의 존재 하에서 획득된 분당카운트(cpm)를 비히클의 존재 하에서 획득된 cpm으로부터 감하여 계산하였다. 상기 활성을 억제하는 시험 화합물의 능력을 하기와 같이 측정하였다:Recombinant human JAK3 catalytic domain (amino acids 781-1124; catalog number PV3855) was purchased from Invitrogen. 0.5 ng JAK3 protein was mixed with kinase reaction buffer (25 mM Tris pH 7.5, 0.5 mM EGTA, 10 mM MgCl 2 , 2.5 mM DTT, 0.5 mM Na 3 VO 4 , 5 mM b-glycerophosphate, 0.01% Triton X-100, 1 2.5 μg PolyGT Substrate (Sigma Cat. No. P0275) in μM non-radioactive ATP, 0.25 μCi 33 P-gamma-ATP (GE Healthcare, Cat. No. AH9968) final concentration) and 5 μl of test compound or vehicle (DMSO, 1 % final concentration) in polypropylene 96-well plates (Grainer, V-bottom) in a total volume of 25 μl in the presence or absence. After 45 minutes at 30° C., the reaction was quenched by adding 25 μl/well of 150 mM phosphoric acid. All completed kinase reactions were transferred to a prewashed (75 mM phosphoric acid) 96 well filter plate (Perkin Elmer catalog number 6005177) using a cell harvester (Perkin Elmer). The plate was washed 6 times with 300 μl/well of 75 mM phosphoric acid solution and the bottom of the plate was sealed. 40 μl/well of Microscint-20 was added, the top of the plate was sealed and readings were performed using TopCount (Perkin Elmer). Kinase activity was calculated by subtracting the counts per minute (cpm) obtained in the presence of the positive control inhibitor (10 μM staurosporine) from the cpm obtained in the presence of vehicle. The ability of test compounds to inhibit this activity was determined as follows:
억제 백분율 = ((RFU 시험 화합물 - RFU 대조용)/(RFU 비히클 - RFU 대조용)) x 100Percent inhibition = ((RFU test compound - RFU control) / (RFU vehicle - RFU control)) x 100
RFU 시험 화합물 = 존재하는 시험 화합물을 갖는 샘플에 대해 측정된 RFURFU test compound = RFU measured for the sample with the test compound present
RFU 대조용 = 양성 대조용 억제제를 갖는 샘플에 대해 측정된 RFURFU control = RFU measured for samples with positive control inhibitor
RFU 비히클 = 비히클의 존재하에서 측정된 RFURFU vehicle = RFU measured in the presence of vehicle
일련의 용량 희석물을 JAK3 분석에서 용량-반응 효과의 시험 및 상기 화합물에 대한 IC50의 계산이 가능하도록 각각의 화합물들에 대해 제조하였다. 각각의 화합물을 20 μM의 농도에 이어서 일련의 1/5 희석, 10 개 점에서 1% DMSO의 최종 농도로 통상적으로 시험하였다. 일련의 화합물 효능이 증가하면, 보다 많은 희석물을 제조하고/하거나 최고 농도를 낮춘다(예를 들어 5 μM, 1 μM).A series of dose dilutions were prepared for each compound to allow for testing of dose-response effects in the JAK3 assay and calculation of the IC 50 for that compound. Each compound was routinely tested at a concentration of 20 μM followed by a serial 1/5 dilution, final concentration of 1% DMSO at 10 points. If the series compound potency increases, more dilutions are prepared and/or the highest concentration is lowered (eg 5 μM, 1 μM).
하기의 화합물들을 본 발명에 개시된 분석을 사용하여 측정된 바와 같은 JAK3에 대한 그들의 활성 및 IC50 값들에 대해 시험하였으며, 하기 표 IX에 제공한다.The following compounds were tested for their activity and IC 50 values for JAK3 as determined using the assay disclosed herein and are provided in Table IX below.
[표 IX][Table IX]
본 발명의 예시적인 화합물들의 JAK3 IC50 값JAK3 IC 50 values of exemplary compounds of the present invention
* > 500 nM* > 500 nM
** > 100-500 nM** > 100-500 nM
*** > 50-100 nM*** > 50-100 nM
**** 0.1-50 nM****0.1-50 nM
[표 X][Table X]
비교 화합물들의 JAK3 IC50 값JAK3 IC 50 values of comparative compounds
4.3.2. JAK3 Ki 측정 분석4.3.2. JAK3 Ki measurement assay
Ki의 측정을 위해서, 상이한 양의 화합물을 효소와 혼합하며, 상기 효소 반응은 ATP 농도의 함수로서 추적된다. 상기 Ki를, Km 대 화합물 농도의 이중 역비례 플롯팅(라인웨버-버크 플롯)에 의해 측정한다. JAK3(카르나 바이오사이언시즈, 09CBS-0625B)을 10 ng/㎖의 최종 농도로 사용한다. 기질은 폴리(Glu,Tyr)나트륨 염(4:1) , MW 20 000 - 50 000(시그마, P0275)이다. 상기 반응을 다양한 농도의 ATP 및 화합물과 함께 25mM 트리스 pH 7.5, 0.01% 트리톤 X-100, 0.5mM EGTA, 2.5mM DTT, 0.5mM Na3VO4, 5mM b-글리세로포스페이트, 10mM MgCl2에서 수행하고 150 mM 인산의 첨가에 의해 정지시킨다. 상기 기질 폴리GT에 결합된 포스페이트의 측정을, 필터 플레이트(수확기 사용, 퍼킨 엘머) 상에 상기 샘플들을 로딩하고 후속으로 세척하여 수행한다. 폴리GT 중의 결합된 33P를 상기 필터 플레이트(퍼킨 엘머)에 섬광 액체의 첨가후 탑카운트 섬광 계수기에서 측정한다.For the determination of Ki, different amounts of compound are mixed with an enzyme, and the enzyme reaction is tracked as a function of ATP concentration. The Ki is determined by double inverse plotting of Km versus compound concentration (Lineweber-Burk plot). JAK3 (Carna Biosciences, 09CBS-0625B) is used at a final concentration of 10 ng/ml. The substrate is poly(Glu,Tyr) sodium salt (4:1), MW 20 000 - 50 000 (Sigma, P0275). The reaction was performed in 25 mM Tris pH 7.5, 0.01% Triton X-100, 0.5 mM EGTA, 2.5 mM DTT, 0.5 mM Na 3 VO 4 , 5 mM b-glycerophosphate, 10 mM MgCl 2 with various concentrations of ATP and compounds. and stopped by addition of 150 mM phosphoric acid. Measurement of phosphate bound to the substrate polyGT is performed by loading the samples onto a filter plate (using a harvester, Perkin Elmer) and subsequent washing. Bound 33 P in PolyGT is measured on a TopCount scintillation counter after addition of scintillation liquid to the filter plate (Perkin Elmer).
4.4. TYK2 억제 분석4.4. TYK2 inhibition assay
4.4.1. TYK2 Ulight-JAK1 펩타이드 분석4.4.1. TYK2 Ulight-JAK1 peptide assay
재조합 인간 TYK2 촉매 도메인(아미노산 871-1187; 카탈로그 번호 08-147)을 카르나 바이오사이언시즈로부터 구입하였다. 5 ng의 TYK2를 키나제 반응 완충제(25 mM Hepes pH 7.2, 50 mM NaCl, 0.5mM EDTA, 1mM DTT, 5mM MnCl2, 10mM MgCl2, 0.1% 브리즈-35, 0.1 μM 비-방사성 ATP, 0.125 μCi 33P-감마-ATP(GE 헬쓰케어, 카탈로그 번호 AH9968) 최종 농도) 중의 12.5 ㎍ 폴리GT 기질(시그마 카탈로그 번호 P0275)과 5 ㎕의 시험 화합물 또는 비히클(DMSO, 1% 최종 농도)의 존재 또는 부재 하에서 총 25 ㎕의 부피로, 폴리프로필렌 96-웰 플레이트(그레이너, V-바닥)에서 배양하였다. 30 ℃에서 90 분 후에, 25 ㎕/웰의 150 mM 인산을 가함으로써 반응을 정시켰다. 종결된 키나제 반응을 모두 세포 수확기(퍼킨 엘머)를 사용하여 예비세척된(75 mM 인산) 96 웰 필터 플레이트(퍼킨 엘머 카탈로그 번호 6005177)로 옮겼다. 플레이트를 300 ㎕/웰의 75 mM 인산 용액으로 6 회 세척하고 상기 플레이트의 바닥을 밀봉하였다. 40 ㎕/웰의 마이크로신트-20을 가하고, 상기 플레이트의 상부를 밀봉하고 탑카운트(퍼킨 엘머)를 사용하여 판독을 수행하였다. 키나제 활성을, 양성 대조용 억제제(10 μM 스타우로스포린)의 존재 하에서 획득된 분당카운트(cpm)를 비히클의 존재 하에서 획득된 cpm으로부터 감하여 계산하였다. 상기 활성을 억제하는 시험 화합물의 능력을 하기와 같이 측정하였다:Recombinant human TYK2 catalytic domain (amino acids 871-1187; catalog number 08-147) was purchased from Karna Biosciences. 5 ng of TYK2 was added to kinase reaction buffer (25 mM Hepes pH 7.2, 50 mM NaCl, 0.5 mM EDTA, 1 mM DTT, 5 mM MnCl 2 , 10 mM MgCl 2 , 0.1% Breeze-35, 0.1 μM non-radioactive ATP, 0.125 μCi 33 In the presence or absence of 12.5 μg polyGT substrate (Sigma cat # P0275) in P-gamma-ATP (GE Healthcare, cat # AH9968 final concentration) and 5 μl test compound or vehicle (DMSO, 1% final concentration) Culture in polypropylene 96-well plates (Grainer, V-bottom) in a total volume of 25 μl. After 90 minutes at 30° C., the reaction was quenched by adding 25 μl/well of 150 mM phosphoric acid. All completed kinase reactions were transferred to a prewashed (75 mM phosphoric acid) 96 well filter plate (Perkin Elmer catalog number 6005177) using a cell harvester (Perkin Elmer). The plate was washed 6 times with 300 μl/well of 75 mM phosphoric acid solution and the bottom of the plate was sealed. 40 μl/well of Microscint-20 was added, the top of the plate was sealed and readings were performed using TopCount (Perkin Elmer). Kinase activity was calculated by subtracting the counts per minute (cpm) obtained in the presence of the positive control inhibitor (10 μM staurosporine) from the cpm obtained in the presence of vehicle. The ability of test compounds to inhibit this activity was determined as follows:
억제 백분율 = ((시험 화합물이 존재하는 샘플에 대해 측정된 cpm - 양성 대조용 억제제가 있는 샘플에 대해 측정된 cpm)/(비히클의 존재 하에서 측정된 cpm - 양성 대조용 억제제가 있는 샘플에 대해 측정된 cpm)) x 100.Percent inhibition = ((cpm measured for samples with test compound - measured for samples with positive control inhibitor)/(cpm measured in the presence of vehicle - measured for samples with positive control inhibitor cpm)) x 100.
일련의 용량 희석물을 TYK2 분석에서 용량-반응 효과의 시험 및 상기 화합물에 대한 IC50의 계산이 가능하도록 상기 화합물들에 대해 제조하였다. 상기 화합물을 20 μM의 농도에 이어서 일련의 1/3 희석, 8 개 점(20μM - 6.67μM - 2.22μM - 740nM - 247nM - 82nM - 27nM - 9nM)에서 1% DMSO의 최종 농도로 통상적으로 시험하였다. 일련의 화합물 효능이 증가하면, 보다 많은 희석물을 제조하고/하거나 최고 농도를 낮춘다(예를 들어 5 μM, 1 μM).A series of dose dilutions were prepared for the compounds to allow for testing of dose-response effects in the TYK2 assay and calculation of the IC 50 for the compounds. The compounds were routinely tested at a concentration of 20 μM followed by a final concentration of 1% DMSO in a series of 1/3 dilutions, 8 points (20 μM - 6.67 μM - 2.22 μM - 740 nM - 247 nM - 82 nM - 27 nM - 9 nM). . If the series compound potency increases, more dilutions are prepared and/or the highest concentration is lowered (eg 5 μM, 1 μM).
하기의 화합물들을 본 발명에 개시된 분석을 사용하여 측정된 바와 같은 TYK2에 대한 그들의 활성 및 IC50 값들에 대해 시험하였으며, 하기 표 XI에 제공한다.The following compounds were tested for their activity and IC 50 values for TYK2 as determined using the assay disclosed herein and are provided in Table XI below.
[표 XI][Table XI]
본 발명의 예시적인 화합물들의 TYK2 IC50 값TYK2 IC50 values of exemplary compounds of the present invention
* > 500 nM* > 500 nM
** > 100-500 nM** > 100-500 nM
*** > 50-100 nM*** > 50-100 nM
**** 0.1-50 nM****0.1-50 nM
[표 XII][Table XII]
비교 화합물들의 TYK2 IC50 값TYK2 IC 50 values of comparative compounds
4.4.2. TYK2 Kd 측정 분석4.4.2. TYK2 Kd measurement assay
TYK2(카르나 바이오사이언시즈, 09CBS-0983D)를 5 nM의 최종 농도로 사용한다. 결합 실험을 다양한 화합물 농도로, 50 nM 키나제 추적자 236(인비트로젠, PV5592) 및 2 nM Eu-항-GST(인비트로젠, PV5594)를 사용하여 50mM Hepes pH 7.5, 0.01% 브리즈-35, 10mM MgCl2, 1mM EGTA에서 수행한다. 추적자의 검출은 제조사의 절차에 따라 수행한다.TYK2 (Carna Biosciences, 09CBS-0983D) is used at a final concentration of 5 nM. Binding experiments were performed in 50 mM Hepes pH 7.5, 0.01% Breeze-35, 10 mM using 50 nM Kinase Tracer 236 (Invitrogen, PV5592) and 2 nM Eu-anti-GST (Invitrogen, PV5594) at various compound concentrations. MgCl 2 , 1 mM EGTA. Detection of the tracer is performed according to the manufacturer's procedure.
실시예 5. 세포 분석:Example 5. Cell analysis:
5.1. JAK1, JAK2 및 TYK2 선택성 세포 분석5.1. JAK1, JAK2 and TYK2 Selective Cell Assay
5.1.1. 선택성 JAK1 세포 분석, PBMC 중 IFNα에 의한 STAT1의 활성화5.1.1. Selective JAK1 cell assay, activation of STAT1 by IFNα in PBMCs
말초 혈액 단핵세포(PBMC)를 멸균 조건하에서 림포프렙(LymphoPrep)(상표) 배지(액시스 쉴드(Axis-Shield))를 사용하여 밀도 구배 원심분리에 의해 버피 코트로부터 단리한 다음 Ca++Mg++이 없는 PBS 중에서 3회 연속 세척 단계를 수행한다. PBMC를 10%(v/v) 열 불활성화된 FBS, 1% Pen-Strep(100 U/㎖ 페니실리움 및 100 ㎍/㎖ 스트렙토마이신)을 함유하는 평지 RPMI 1640 배지에 재현탁시키고 37 ℃ 5% CO2에서 가습 배양기에서 추가로 배양한다.Peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) were isolated from buffy coats by density gradient centrifugation using LymphoPrep™ medium (Axis-Shield) under sterile conditions, followed by Ca++Mg++ Perform 3 consecutive washing steps in PBS without water. PBMC were resuspended in plain RPMI 1640 medium containing 10% (v/v) heat-inactivated FBS, 1% Pen-Strep (100 U/mL penicillium and 100 μg/mL streptomycin) and incubated at 37°C 5 Further incubation in a humidified incubator at % CO 2 .
PBMC를 24 웰 플레이트에서 10%(v/v) FBS 및 1% Pen-Strep(인비트로젠)을 함유하는 200 ㎕ 부피의 RPMI 1640(인비트로젠) 중에 5.0 1006 세포/웰로 시딩한다.PBMCs are seeded at 5.0 10 06 cells/well in a 200 μl volume of RPMI 1640 (Invitrogen) containing 10% (v/v) FBS and 1% Pen-Strep (Invitrogen) in 24 well plates.
PBMC를 37 ℃ 5% CO2에서 30분 동안 시험 화합물로 처리한다. 25 ㎕의 10x 농축된 화합물 희석액을 상기 배지에 가한다. 30분의 시험 화합물/비히클 전-처리 후에, PBMC를 37 ℃ 5% CO2에서 25 ㎕(10x 농축된)의 사이토킨 촉발제의 첨가에 의해 100 ng/㎖의 최종 농도로 재조합 인간 IFNα(펩프로테크(PeproTech))로 30분 동안 자극하여 250 ㎕/웰의 최종 부피를 획득한다.PBMCs are treated with test compounds at 37° C. 5% CO 2 for 30 min. 25 μl of 10x concentrated compound dilution is added to the medium. After 30 minutes of test compound/vehicle pre-treatment, PBMCs were treated with recombinant human IFNα (Peppro) at a final concentration of 100 ng/mL by addition of 25 μl (10x concentrated) of cytokine trigger at 37° C. 5% CO 2 . PeproTech) for 30 minutes to obtain a final volume of 250 μl/well.
모든 화합물을 20 μM로 출발한 다음 일련의 1/3 희석, 총 8개 점(20 μM, 6.6 μM, 2.2 μM, 0.74 μM, 0.25 μM, 0.082 μM, 0.027 μM 및 0.009 μM)에서 0.2% DMSO의 최종 농도로 1회 시험한다.All compounds were started at 20 μM and then diluted in 0.2% DMSO in a series of 1/3 dilutions, a total of 8 points (20 μM, 6.6 μM, 2.2 μM, 0.74 μM, 0.25 μM, 0.082 μM, 0.027 μM and 0.009 μM). Test once at the final concentration.
30분의 사이토킨 자극 후에, 250 ㎕의 세포 현탁액을 96-웰 V-바닥 플레이트로 옮기고, 1000 rpm에서 5분 동안 원심분리시켜 세포를 펠릿화한 다음, 상등액을 제거한다. 상기 세포 펠릿을 EDTA-무 프로테아제 억제제 칵테일(롯슈 어플라이드 사이언시즈(Roche Applied Sciences), 제품 번호 11836170001)이 보충된 1x 용해 완충제 100 ㎕ 중에서 재조성한 다음 샘플을 동결시키고 -80 ℃에서 보관한다. 1x 용해 완충제를 포스포-STAT1 엘리사 키트에 제공하며 상기 완충제는 포스파타제 억제제를 함유한다. 인산화된 STAT1의 내인성 수준을 제조사의 설명에 따라 96-웰 패쓰스캔(PathScan)(등록상표) 포스포-STAT1(Tyr701) 샌드위치 ELISA 키트(셀 시그널링(Cell Signaling), 제품 번호 #7234)를 사용하여 정량분석한다.After 30 minutes of cytokine stimulation, 250 μl of the cell suspension is transferred to a 96-well V-bottom plate and centrifuged at 1000 rpm for 5 minutes to pellet the cells, then the supernatant is removed. The cell pellet is reconstituted in 100 μl of 1x Lysis Buffer supplemented with EDTA-free protease inhibitor cocktail (Roche Applied Sciences, Cat# 11836170001) and samples are then frozen and stored at -80°C. 1x Lysis Buffer is provided in the Phospho-STAT1 ELISA kit, and the buffer contains a phosphatase inhibitor. Endogenous levels of phosphorylated STAT1 were measured using a 96-well PathScan® Phospho-STAT1 (Tyr701) sandwich ELISA kit (Cell Signaling, product #7234) according to the manufacturer's instructions. Quantitative analysis.
HRP 활성(HRP는 2차 항체에 접합된다)을 100 ㎕의 새로 제조된 루미놀 기질(BM 케미루미네슨스(Chemiluminescence) ELISA 기질(POD), 롯슈, 제품 번호 11582950001)의 첨가, 암실에서 실온에서 5분간 배양에 의해 측정하고 써모 사이언티픽 루미노스캔(Thermo Scientific Luminoskan) 상행 미세플레이트 광도계(200 msec의 적분시)에서 측정한다.HRP activity (HRP is conjugated to a secondary antibody) was measured by the addition of 100 μl of freshly prepared luminol substrate (BM Chemiluminescence ELISA substrate (POD), Roche, catalog number 11582950001) at room temperature in the dark for 5 measured by minute incubation and measured on a Thermo Scientific Luminoskan ascending microplate luminometer (at integration of 200 msec).
5.1.2. 선택성 JAK2 세포 분석, PBMC 중 GM-CSF에 의한 STAT5의 활성화5.1.2. Selective JAK2 Cell Assay, Activation of STAT5 by GM-CSF in PBMCs
말초 혈액 단핵세포(PBMC)를 멸균 조건하에서 림포프렙(상표) 배지(액시스 쉴드)를 사용하여 밀도 구배 원심분리에 의해 버피 코트로부터 단리한 다음 Ca++Mg++이 없는 PBS 중에서 3회 연속 세척 단계를 수행한다. PBMC를 10%(v/v) 열 불활성화된 FBS, 1% Pen-Strep(100 U/㎖ 페니실리움 및 100 ㎍/㎖ 스트렙토마이신)을 함유하는 평지 RPMI 1640 배지에 재현탁시키고 37 ℃ 5% CO2에서 가습 배양기에서 추가로 배양한다.Peripheral blood mononuclear cells (PBMC) were isolated from buffy coats by density gradient centrifugation using Lympoprep™ medium (Axis Shield) under sterile conditions followed by three consecutive washing steps in PBS without Ca++Mg++ do PBMC were resuspended in plain RPMI 1640 medium containing 10% (v/v) heat-inactivated FBS, 1% Pen-Strep (100 U/mL penicillium and 100 μg/mL streptomycin) and incubated at 37°C 5 Further incubation in a humidified incubator at % CO 2 .
PBMC를 24 웰 플레이트에서 10%(v/v) FBS 및 1% Pen-Strep(인비트로젠)을 함유하는 200 ㎕ 부피의 RPMI 1640(인비트로젠) 중에 5.0E06 세포/웰로 시딩한다.PBMCs are seeded at 5.0E06 cells/well in a 200 μl volume of RPMI 1640 (Invitrogen) containing 10% (v/v) FBS and 1% Pen-Strep (Invitrogen) in 24 well plates.
PBMC를, 25 ㎕의 10x 농축된 화합물 희석액을 상기 배지에 가함으로써 시험 화합물로 처리하고 37 ℃ 5% CO2에서 30분 동안 배양한다. 후속으로, PBMC를 웰당 25 ㎕(10x 농축된)의 사이토킨 촉발제의 첨가에 의해 0.5 ng/㎖의 최종 농도로 재조합 인간 GM-CSF(펩프로테크)로 자극하여 250 ㎕의 최종 부피를 획득한다. 세포를 37 ℃ 5% CO2에서 30분 동안 촉발시킨다.PBMCs are treated with test compounds by adding 25 μl of a 10x concentrated compound dilution to the medium and incubated at 37° C. 5% CO 2 for 30 minutes. Subsequently, PBMCs are stimulated with recombinant human GM-CSF (Pepprotech) at a final concentration of 0.5 ng/ml by addition of 25 μl (10x concentrated) of cytokine trigger per well to obtain a final volume of 250 μl . Cells are triggered at 37° C. 5% CO 2 for 30 min.
모든 화합물을 20 μM로 출발한 다음 일련의 1/3 희석, 총 8개 용량(20 μM, 6.6 μM, 2.2 μM, 0.74 μM, 0.25 μM, 0.082 μM, 0.027 μM 및 0.009 μM)에서 0.2% DMSO의 최종 농도로 1회 시험한다.All compounds were started at 20 μM and then diluted in 0.2% DMSO in a series of 1/3 dilutions, a total of 8 doses (20 μM, 6.6 μM, 2.2 μM, 0.74 μM, 0.25 μM, 0.082 μM, 0.027 μM and 0.009 μM). Test once at the final concentration.
30분의 사이토킨 자극 후에, 250 ㎕의 세포 현탁액을 96-웰 V-바닥 플레이트로 옮긴 다음 1000 rpm에서 5분 동안 원심분리시켜 세포를 펠릿화한다. 세포 상등액을 제거하고 펠릿을 EDTA-무 프로테아제 억제제 칵테일(롯슈 어플라이드 사이언시즈, 제품 번호 11836170001)이 보충된 1x 용해 완충제 100 ㎕ 중에서 재조성한 다음 샘플을 동결시키고 -80 ℃에서 보관한다. 1x 용해 완충제를 포스포-STAT5 엘리사 키트에 제공하며 상기 완충제는 포스파타제 억제제를 함유한다. 인산화된 STAT5의 내인성 수준을 제조사의 설명에 따라 96-웰 패쓰스캔(등록상표) 포스포-STAT5(Tyr694) 샌드위치 ELISA 키트(셀 시그널링, 제품 번호 #7113)를 사용하여 정량분석한다.After 30 minutes of cytokine stimulation, 250 μl of the cell suspension is transferred to a 96-well V-bottom plate followed by centrifugation at 1000 rpm for 5 minutes to pellet the cells. The cell supernatant is removed and the pellet is reconstituted in 100 μl of 1x Lysis Buffer supplemented with EDTA-free protease inhibitor cocktail (Roche Applied Sciences, product number 11836170001), then samples are frozen and stored at -80°C. 1x Lysis Buffer is provided in the Phospho-STAT5 ELISA kit, and the buffer contains a phosphatase inhibitor. Endogenous levels of phosphorylated STAT5 are quantified using a 96-well PathScan® Phospho-STAT5 (Tyr694) Sandwich ELISA Kit (Cell Signaling, Product #7113) according to the manufacturer's instructions.
HRP 활성(HRP는 2차 항체에 접합된다)을 100 ㎕의 새로 제조된 루미놀 기질(BM 케미루미네슨스 ELISA 기질(POD), 롯슈, 제품 번호 11582950001)의 첨가, 암실에서 실온에서 5분간 배양에 의해 측정하고 써모 사이언티픽 루미노스캔 상행 미세플레이트 광도계(200 msec의 적분시)에서 측정한다.HRP activity (HRP is conjugated to a secondary antibody) was measured by addition of 100 μl of freshly prepared luminol substrate (BM Chemiluminescence ELISA substrate (POD), Roche, catalog # 11582950001), incubation for 5 minutes at room temperature in the dark. and measured on a Thermo Scientific Luminoscan ascending microplate photometer (at integration of 200 msec).
5.1.3. 선택성 TYK2 세포 분석, NK-92 세포에서 IL-12에 의한 STAT4의 활성화5.1.3. Selective TYK2 Cell Assay, Activation of STAT4 by IL-12 in NK-92 Cells
NK-92 세포(인간 악성 비-호지킨 림프종, 인터류킨-2(IL-2) 의존성 천연 살해 세포주, ATCC #CRL-2407).NK-92 cells (human malignant non-Hodgkin's lymphoma, an interleukin-2 (IL-2) dependent natural killer cell line, ATCC #CRL-2407).
NK-92 세포를, 0.2 mM 미오-이노시톨, 0.1 mM 2-머캅토-EtOH, 0.1 mM 폴산, 12.5% 열 불활성화된 말 혈청(인비트로젠, 제품 번호 26050-088), 12.5% 열 불활성화된 FBS, 1% Pen-Strep(100 U/㎖ 페니실리움 및 100 ㎍/㎖ 스트렙토마이신) 및 10 ng/㎖ 재조합 인간 IL-2(R&D 시스템스)를 함유하는 최소 필수 배지(MEM) 알파 배지 w/o 리보뉴클레오사이드 및 데옥시리보뉴클레오사이드, 2 mM L-글루타민, 2.2 g/L 나트륨 바이카보네이트(인비트로젠, 제품 번호 22561-021)에서 유지시킨다. IL-2를, 각각의 배지를 새로 보충하면서 상기 배지에 가한다. 세포를 37 ℃ 5% CO2에서 가습 배양기에서 배양한다.NK-92 cells were cultured in 0.2 mM myo-inositol, 0.1 mM 2-mercapto-EtOH, 0.1 mM folic acid, 12.5% heat inactivated horse serum (Invitrogen, product number 26050-088), 12.5% heat inactivated Minimum essential medium (MEM) alpha medium w containing FBS, 1% Pen-Strep (100 U/mL Penicillium and 100 μg/mL streptomycin) and 10 ng/mL recombinant human IL-2 (R&D Systems) w /o ribonucleosides and deoxyribonucleosides, 2 mM L-glutamine, 2.2 g/L sodium bicarbonate (Invitrogen, Product No. 22561-021). IL-2 is added to the medium as each medium is freshly replenished. The cells are cultured in a humidified incubator at 37° C. 5% CO 2 .
NK-92 세포의 계대배양 분획을 rhIL-2 없이 평지 배지에서 1차 세척하고, 24-웰 플레이트에서 0.2 mM 미오-이노시톨, 0.1 mM 2-머캅토에탄올, 0.1 mM 폴산, 12.5% 열 불활성화된 말 혈청(인비트로젠, 제품 번호 26050-088), 12.5% 열 불활성화된 FBS, 1% Pen-Strep(인비트로젠)을 함유하는 400 ㎕ 부피의 평지 알파 MEM 배지 w/o rhIL-2 중에서 0.5E06 세포/웰로 시딩한다.Subcultured fractions of NK-92 cells were first washed in plain medium without rhIL-2 and plated in 24-well plates in 0.2 mM myo-inositol, 0.1 mM 2-mercaptoethanol, 0.1 mM folic acid, 12.5% heat inactivated. In a 400 μl volume of Plain Alpha MEM medium w/o rhIL-2 containing horse serum (Invitrogen, product number 26050-088), 12.5% heat inactivated FBS, 1% Pen-Strep (Invitrogen) Seed at 0.5E06 cells/well.
NK-92 세포를, rhIL-12 자극 전에 30분 동안 50 ㎕의 10x 농축된 화합물 희석액을 가함으로써 시험 화합물로 처리하고 37 ℃ 5% CO2에서 배양한다. 30분의 화합물/비히클 전-처리 후에, 세포를 50 ㎕(10x 농축된)의 사이토킨 촉발제의 첨가에 의해 25 ng/㎖의 최종 농도로 재조합 인간 IL-12(R&D 시스템스, 제품 번호 219-IL)로 자극하여 500 ㎕/웰의 최종 부피를 획득한다. NK-92 세포를 37 ℃ 5% CO2에서 30분 동안 rhIL-12로 촉발시킨다.NK-92 cells are treated with test compounds by adding 50 μl of 10× concentrated compound dilution for 30 minutes prior to rhIL-12 stimulation and incubated at 37° C. 5% CO 2 . After 30 minutes of compound/vehicle pre-treatment, cells were incubated with recombinant human IL-12 (R&D Systems, cat no. 219-IL) at a final concentration of 25 ng/ml by addition of 50 μl (10x concentrated) of the cytokine trigger. ) to obtain a final volume of 500 μl/well. NK-92 cells are stimulated with rhIL-12 for 30 min at 37° C. 5% CO 2 .
모든 화합물을 20 μM로 출발한 다음 일련의 1/3 희석, 총 8개 용량(20 μM, 6.6 μM, 2.2 μM, 0.74 μM, 0.25 μM, 0.082 μM, 0.027 μM 및 0.009 μM)에서 0.2% DMSO의 최종 농도로 1회 시험한다.All compounds were started at 20 μM and then diluted in 0.2% DMSO in a series of 1/3 dilutions, a total of 8 doses (20 μM, 6.6 μM, 2.2 μM, 0.74 μM, 0.25 μM, 0.082 μM, 0.027 μM and 0.009 μM). Test once at the final concentration.
rhIL-12 자극된 NK-92 세포에서 포스포-STAT4의 수준을 갈리오스(Gallios)(상표) 유식 세포계(벡크만 쿨터(Beckman Coulter))상에서 유식세포측정 분석을 사용하여 정량분석한다. 30분의 사이토킨 자극 후에 상기 세포를, 상기 웰에 즉시 500 ㎕의 예온된 BD 사이토픽스(Cytofix) 고정 완충제(BD 포스플로우(Phosflow)(상표), 제품 번호 554655)를 가함으로써 고정시킨다(상기 세포를 스핀 다운시키기 보다는 인산화 상태를 유지시키기 위해서 즉시 고정시킨다, 같은 부피의 예온된 BD 사이노픽스 완충제를 세포 현탁액에 가하여 상기 세포를 고정시키는 것이 권장된다). 세포를 37 ℃에서 10분 동안 배양한다. 상기 고정된 세포 분획을 재현탁시키고(1 ㎖) FACS 튜브로 옮긴 다음 원심분리 단계(300x g, 10 분) 및 상등액 제거를 수행한다. 상기 세포 펠릿을 혼합하고(와동시키고) 상기 세포를, 1 ㎖의 BD 포스플로우 펌(Perm) 완충제 III(BD 포스플로우(상표), 제품 번호 558050)를 첨가한 다음 얼음상에서 30분 동안 배양시켜 침투성으로 만든다. 상기 침투화 단계 후에, 상기 세포를, 10분 동안 300x g에서 중간 원심분리 및 상등액의 제거와 함께 BD 파밍겐(Pharmingen)(상표) 염색 완충제(BD 파밍겐, 제품 번호 554656)로 2회 세척한다. 상기 펠릿(0.5E06 세포)을 100 ㎕의 BD 파밍겐(상표) 염색 완충제 중에 재현탁시키고, 20 ㎕의 PE 마우스 항-STAT4(pY693)를 상기 세포에 혼합함으로써 염색하고(BD 포스플로우(상표), PE 마우스 항-STAT4(pY693), 제품 번호 558249), 이어서 암실에서 실온에서 30분 동안 배양한다. 상기 염색된 세포를 2 ㎖의 BD 파밍겐(상표) 염색 완충제로 1회 세척하고 500 ㎕의 BD 파밍겐(상표) 염색 완충제 중에 재현탁시키고 갈리오스(상표) 유식 세포계(벡크만 쿨터)상에서 분석하였다.Levels of phospho-STAT4 in rhIL-12 stimulated NK-92 cells are quantified using flow cytometric analysis on a Gallios™ flow cytometer (Beckman Coulter). After 30 minutes of cytokine stimulation the cells are fixed by immediately adding 500 μl of forewarmed BD Cytofix fixation buffer (BD Phosflow(TM) cat # 554655) to the wells (the cells is immediately fixed to maintain the phosphorylation state rather than being spun down. It is recommended to fix the cells by adding an equal volume of forewarmed BD Cynofix buffer to the cell suspension). The cells are incubated at 37° C. for 10 minutes. The fixed cell fraction is resuspended (1 ml) and transferred to a FACS tube followed by a centrifugation step (300x g, 10 min) and supernatant removal. Permeability was achieved by mixing (vortexing) the cell pellet and adding 1 ml of BD Phosflow Perm Buffer III (BD Phosflow™, product number 558050) followed by incubation on ice for 30 minutes. make it After the permeabilization step, the cells are washed twice with BD Pharmingen ® staining buffer (BD Pharmingen, product number 554656) with intermediate centrifugation at 300x g for 10 minutes and removal of the supernatant. . The pellet (0.5E06 cells) was resuspended in 100 μl of BD Pharmingen (trademark) staining buffer and stained by mixing 20 μl of PE mouse anti-STAT4 (pY693) to the cells (BD Phosflow (trademark) , PE mouse anti-STAT4 (pY693), catalog number 558249), followed by incubation for 30 minutes at room temperature in the dark. The stained cells were washed once with 2 ml of BD Pharmingen (trademark) staining buffer, resuspended in 500 μl of BD Pharmingen (trademark) staining buffer and analyzed on a Galios (trademark) flow cytometer (Beckman Coulter) did
모든 분석에 대해서, 죽은 세포 및 세포 찌꺼기를 전방 산란(FSC) 및 측면 산란(SSC)에 의해 제외시킨다. 사이토킨 자극에 따른 STAT4 단백질의 인산화의 변화를, 모든 사이토킨 자극된 시험 화합물 및 자극되지 않은 샘플들에 대해 게이트 통제된 분획 100%를 기준으로 세포당 X-중간 또는 X-평균 형광 강도(MFI)를 계산하여 근사값을 구한다.For all analyses, dead cells and cell debris are excluded by forward scatter (FSC) and side scatter (SSC). Changes in phosphorylation of the STAT4 protein following cytokine stimulation were evaluated by X-median or X-mean fluorescence intensity (MFI) per cell based on 100% of the gated fraction for all cytokine-stimulated test compounds and unstimulated samples. Calculate and get an approximate value.
5.1.4. JAK1, JAK2 및 TYK2 분석 결과:5.1.4. JAK1, JAK2 and TYK2 assay results:
자극되지 않은 샘플(촉발제 없음/비히클(0.2% DMSO))을 양성 대조용(100% 억제)으로서 사용한다. 음성 대조용(0% 억제)으로서, 자극된 샘플(촉발제/비히클(0.2% DMSO))을 사용한다. 상기 양성 및 음성 대조용을 사용하여 'Z' 및 '억제 퍼센트(PIN)' 값을 계산한다.An unstimulated sample (no trigger/vehicle (0.2% DMSO)) is used as a positive control (100% inhibition). As a negative control (0% inhibition), a stimulated sample (trigger/vehicle (0.2% DMSO)) is used. Calculate 'Z' and 'Percent Inhibition (PIN)' values using the above positive and negative controls.
억제 백분율을 하기로부터 계산한다:Percent inhibition is calculated from:
억제 백분율 = ((RCLU(촉발제/비히클) - RCLU(시험 화합물))/((RCLU(촉발제/비히클) - RCLU(촉발제 없음/비히클)) x 100Percent Inhibition = ((RCLU (trigger/vehicle) - RCLU (test compound))/((RCLU (trigger/vehicle) - RCLU (no trigger/vehicle)) x 100
여기에서From here
RCLU(촉발제/비히클): 비히클 및 촉발제의 존재하에서 측정된 상대적인 화학발광 신호RCLU (trigger/vehicle): Relative chemiluminescent signal measured in the presence of vehicle and triggering agent
RCLU(시험 화합물): 시험 화합물의 존재하에서 측정된 상대적인 화학발광 신호RCLU (test compound): Relative chemiluminescent signal measured in the presence of test compound
RCLU(촉발제 없음/비히클): 촉발제 없이 비히클의 존재하에서 측정된 상대적인 화학발광 신호RCLU (no trigger/vehicle): Relative chemiluminescent signal measured in the presence of vehicle without trigger
판독 신호를 X-평균값(사이토킨 자극된 NK-92 세포에서 pSTAT4 수준의 유식 세포측정 분석)으로서 나타내는 경우에, 상기 RCLU는 X-평균값으로 대체된다.When readout signals are presented as X-means (flow cytometric analysis of pSTAT4 levels in cytokine stimulated NK-92 cells), the RCLU is replaced by X-means.
PIN 값을 용량-반응으로 시험된 화합물에 대해 플롯팅하며 EC50 값을 비-선형 회귀(s자) 곡선 정합을 적용하는 그래프패드 프리즘 소프트웨어를 사용하여 유도한다.PIN values are plotted for compounds tested as dose-response and EC 50 values are derived using GraphPad Prism software applying non-linear regression (sigmoidal) curve fitting.
5.2. 폐암 및 간세포 암종 세포주 분석에서 JAK1 돌연변이5.2. JAK1 mutations in lung cancer and hepatocellular carcinoma cell line analysis
5.2.1. JAK1 돌연변이는 구성적 신호전달을 유도하였다.5.2.1. JAK1 mutations induced constitutive signaling.
JAK1 돌연변이가 있고 없는 암 세포주들(표 I - 폐암 세포주들)을 4 내지 6시간 동안 혈청 없이 또는 혈청과 함께 배양하고, 5, 10, 30 및 45분 동안 사이토킨 칵테일(IFNγ, IL2, IL4 및 IL6)로 자극하거나 자극하지 않는다. JAK1, STAT1, STAT3 및 STAT5의 인산화를 면역블럿(셀 시그널링 항체)에 의해 평가한다.Cancer cell lines with and without JAK1 mutation (Table I - lung cancer cell lines) were incubated without or with serum for 4 to 6 hours and incubated with cytokine cocktails (IFNγ, IL2, IL4 and IL6 for 5, 10, 30 and 45 minutes). ) stimulated or not stimulated. Phosphorylation of JAK1, STAT1, STAT3 and STAT5 is evaluated by immunoblot (cell signaling antibody).
5.2.2. JAK 억제제를 사용하는 JAK1 돌연변이체의 표적화5.2.2. Targeting JAK1 mutants with JAK inhibitors
5.2.2.1. JAK-STAT 경로 인산화:5.2.2.1. JAK-STAT pathway phosphorylation:
JAK1 돌연변이가 있고 없는 암 세포주들을 상이한 농도의 JAK 억제제의 존재 또는 부재하에서 배양한다. 세포를 면역블럿에 의해 유효한 JAK-STAT 경로 억제에 대해 24 및 48시간째에 분석한다.Cancer cell lines with and without JAK1 mutations are cultured in the presence or absence of different concentrations of JAK inhibitors. Cells are analyzed at 24 and 48 hours for effective JAK-STAT pathway inhibition by immunoblot.
[표 XIII][Table XIII]
표 I: 예시적인 폐암 세포주들Table I: Exemplary lung cancer cell lines
5.2.2.2. 세포 생육력5.2.2.2. cell viability
2D-분석:2D-Analysis:
JAK1 돌연변이가 있고 없는 암 세포주들을 증가하는 농도의 JAK 억제제의 존재 또는 부재하에서 배양한다. 48 내지 72시간 후에, 세포 생육력을 셀 티터-글로(Cell Titer-Glo) 발광 세포 생육력 분석(프로메가(Promega)) 또는 MTT 분석을 사용하여 측정한다. 한편으로, 암 세포주들을 상이한 배양 시점들에서 고정 농도의 JAK 억제제와 함께 셀 티터-글로 발광 세포 생육력 분석(프로메가) 또는 MTT 분석을 사용하여 세포 생육력에 대해 분석한다.Cancer cell lines with and without JAK1 mutations are cultured in the presence or absence of increasing concentrations of JAK inhibitors. After 48-72 hours, cell viability is measured using the Cell Titer-Glo Luminescent Cell Viability Assay (Promega) or MTT Assay. Alternatively, cancer cell lines are assayed for cell viability using a Cell Titer-Glo Luminescent Cell Viability Assay (Promega) or MTT assay with a fixed concentration of a JAK inhibitor at different culture time points.
3D-분석:3D-Analysis:
JAK1 돌연변이가 있고 없는 암 세포주들을 반-고형 아가 배지에 시딩한다. 다-세포 콜로니의 형성을, 상이한 배양 시점들에서 형광 염료를 사용하여 세포 생육력을 측정함으로써 측정한다. 세포 시딩 후 잠재적인 억제제의 첨가는 종양형성 억제 효과의 분석을 허용한다.Cancer cell lines with and without the JAK1 mutation are seeded on semi-solid agar medium. The formation of multi-cell colonies is measured by measuring cell viability using a fluorescent dye at different culture time points. Addition of potential inhibitors after cell seeding allows analysis of tumorigenicity inhibitory effects.
5.2.3. 쥐 Ba/F3 세포에서 인간 JAK1 돌연변이의 조사5.2.3. Investigation of human JAK1 mutations in murine Ba/F3 cells
(Kan et al., 2013; Staerk et al., 2005; Zenatti et al., 2011에 예시된 바와 같다)(as exemplified by Kan et al., 2013; Staerk et al., 2005; Zenatti et al., 2011)
JAK1 발현 벡터의 제작: 야생형 및 돌연변이 인간 JAK1 서열을 레트로바이러스 벡터내로 클로닝하고 클론들을 서열분석에 의해 확인한다.Construction of JAK1 expression vectors: Wild-type and mutant human JAK1 sequences are cloned into retroviral vectors and clones are identified by sequencing.
Ba/F3 세포의 레트로바이러스 감염: Ba/F3 세포를 293T 세포에서 생성된 레트로바이러스 상등액으로 감염시킨다.Retroviral infection of Ba/F3 cells: Ba/F3 cells are infected with the retroviral supernatant produced in 293T cells.
인간 WT 또는 돌연변이된 JAK1을 발현하는 Ba/F3 세포를 4시간 동안 IL-3과 함께 또는 상기 없이 배양하고 JAK-STAT 경로의 인산화를 면역블럿에 의해 평가한다.Ba/F3 cells expressing human WT or mutated JAK1 are incubated with or without IL-3 for 4 hours and phosphorylation of the JAK-STAT pathway is assessed by immunoblot.
JAK1 돌연변이의 형질전환 가능성을, 사이토킨-의존성 Ba/F3 세포에서 발현시 자율적인 생육을 유도하는 각 돌연변이의 능력을 측정함으로써 평가한다. 세포 생육을 사이토킨 IL-3의 부재하에서 평가한다.The transforming potential of JAK1 mutants is evaluated by measuring the ability of each mutant to induce autonomous growth when expressed in cytokine-dependent Ba/F3 cells. Cell growth is assessed in the absence of the cytokine IL-3.
돌연변이 JAK1 형질도입된 Ba/F3 세포주를 증가하는 농도의 JAK 억제제의 존재 또는 부재하에서 배양함으로써 JAK 억제제에 대한 상기 세포주의 감도를 평가한다. 48 내지 72시간 후에, 세포 생육력을 셀 티터-글로 발광 세포 생육력 분석(프로메가) 또는 MTT 분석을 사용하여 측정한다. 한편으로, 암 세포주들을 상이한 배양 시점들에서 고정 농도의 JAK 억제제와 함께 셀 티터-글로 발광 세포 생육력 분석(프로메가) 또는 MTT 분석을 사용하여 세포 생육력에 대해 분석한다.The sensitivity of the mutant JAK1 transduced Ba/F3 cell line to the JAK inhibitor is assessed by culturing it in the presence or absence of increasing concentrations of the JAK inhibitor. After 48-72 hours, cell viability is measured using the Cell Titer-Glo Luminescent Cell Viability Assay (Promega) or MTT Assay. Alternatively, cancer cell lines are assayed for cell viability using a Cell Titer-Glo Luminescent Cell Viability Assay (Promega) or MTT assay with a fixed concentration of a JAK inhibitor at different culture time points.
5.2.4. JAK1 돌연변이의 생체내 종양형성 가능성5.2.4. In vivo tumorigenic potential of JAK1 mutations
5.2.4.1. 이종이식편 모델:5.2.4.1. Xenograft models:
돌연변이 JAK1 발현 세포를 CD1 nu/nu 마우스 또는 Rag1-/- 마우스에서 피하 주사하고 종양 진행에 대해 평가한다. 피하 종양 부피 성장 곡선을 확립시킨다. 2차 수령 동물내로의 1차 종양의 이식성을 측정한다.Mutant JAK1 expressing cells are injected subcutaneously in CD1 nu/nu mice or Rag1−/− mice and evaluated for tumor progression. A subcutaneous tumor volume growth curve is established. Implantability of primary tumors into secondary recipient animals is determined.
5.2.4.2. PDX 모델5.2.4.2. PDX model
환자-유래된 이종이식(PDX)은 직접 상기 환자에서 면역결핍 마우스내로의 1차 종양(JAK1 돌연변이를 함유하는)의 전달을 기본으로 한다. 이를 수행하기 위해서, 환자 종양을 수술로부터 새롭게 수득해야 하며, 이 시점에서 상기 종양을 기계적으로 또는 화학적으로 절단하고, 이때 작은 부분을 1차 스톡으로서 떼어놓고 NOD-SCID 마우스에 확립시킨다. PDX 모델을, 일단 종양 크기가 너무 커지면 세포를 직접 마우스에서 마우스로 계대배양함으로써 유지시킨다. 종양을 이소성으로(종양을 마우스의 피하 옆구리에 이식함) 또는 동소성으로(마우스의 선택 기관에 직접 이식함) 이식할 수 있다.Patient-derived xenograft (PDX) is based on the transfer of a primary tumor (containing a JAK1 mutation) directly from the patient into an immunodeficient mouse. To do this, the patient's tumor must be freshly obtained from surgery, at which point the tumor is either mechanically or chemically excised, at which time a small portion is isolated as a primary stock and established in NOD-SCID mice. The PDX model is maintained by subculturing the cells directly from mouse to mouse once the tumor size becomes too large. Tumors can be implanted either heterotopically (the tumor is implanted subcutaneously into the flank of the mouse) or orthotopically (implanted directly into the mouse's organ of choice).
1차 및 2차 종양에서 JAK1, STAT1, STAT3 및 STAT5의 인산화를 면역블럿에 의해 평가한다.Phosphorylation of JAK1, STAT1, STAT3 and STAT5 in primary and secondary tumors is evaluated by immunoblot.
5.3. PBL 증식 분석5.3. PBL proliferation assay
인간 말초 혈액 림프구(PBL)를 IL-2로 자극하고 증식을 BrdU 결합 분석을 사용하여 측정한다. 상기 PBL을 먼저 72 시간 동안 PHA로 자극하여 IL-2 수용체를 유도하고, 이어서 24 시간 동안 절식시켜 세포 증식을 정지시킨 다음 추가로 72 시간 동안 IL-2 자극한다(24 시간 BrdU 표지화 포함). 세포를 IL-2 첨가 1 시간 전에 시험 화합물과 예비배양시킨다. 세포를 10%(v/v) FBS를 함유하는 RPMI 1640에서 배양한다.Human peripheral blood lymphocytes (PBL) are stimulated with IL-2 and proliferation is measured using a BrdU binding assay. The PBLs were first stimulated with PHA for 72 hours to induce IL-2 receptor induction, followed by fasting for 24 hours to arrest cell proliferation, followed by IL-2 stimulation for an additional 72 hours (including 24 hours BrdU labeling). Cells are pre-incubated with test compounds 1 hour prior to IL-2 addition. Cells are cultured in RPMI 1640 containing 10% (v/v) FBS.
5.4. 인간 전혈 분석(hWBA)5.4. Human Whole Blood Analysis (hWBA)
5.4.1. 프로토콜 15.4.1. protocol 1
5.4.1.1. IL-6 자극 프로토콜5.4.1.1. IL-6 stimulation protocol
유식 세포측정 분석을 수행하여 인간 전혈로 생체외 JAK2 화합물 선택성에 대해 JAK1을 확립시킨다. 따라서, 사전 동의를 받은 인간 지원자로부터 혈액을 채취한다. 이어서 혈액을 부드럽게 흔들면서 37 ℃에서 30 분간 평형화하고, 이어서 에펜도르프 튜브에 분액한다. 화합물을 상이한 농도로 가하고 부드럽게 흔들면서 37 ℃에서 30 분간 배양하고 후속으로 JAK1-의존성 경로 자극에 대해서는 인터류킨 6(IL-6)으로, 또는 JAK2-의존성 경로 자극에 대해서는 GM-CSF로, 부드럽게 흔들면서 37 ℃에서 20 분간 자극한다. 이어서 포스포-STAT1 및 포스포-STAT5를 FACS 분석을 사용하여 평가한다.Flow cytometric analysis is performed to establish JAK1 for JAK2 compound selectivity ex vivo in human whole blood. Therefore, blood is drawn from human volunteers who have given informed consent. The blood is then equilibrated at 37° C. for 30 minutes with gentle shaking, and then aliquoted into Eppendorf tubes. Compounds were added at different concentrations and incubated at 37 °C for 30 min with gentle shaking, followed by interleukin 6 (IL-6) for JAK1-dependent pathway stimulation or GM-CSF for JAK2-dependent pathway stimulation with gentle shaking. Stimulate at 37 °C for 20 min. Phospho-STAT1 and phospho-STAT5 are then evaluated using FACS analysis.
5.4.1.2. 포스포-STAT1 분석5.4.1.2. Phospho-STAT1 assay
5.4.1.2.1. 시약의 제조5.4.1.2.1. Preparation of reagents
5X 용해/고정 완충제(BD 포스플로우(PhosFlow), 카탈로그 번호 558049)를 증류수로 5 배 희석하고 37 ℃에서 예온한다. 남은 희석된 용해/고정 완충제는 버린다.5X Lysis/Fixation Buffer (BD PhosFlow, catalog number 558049) is diluted 5-fold with distilled water and forewarmed at 37°C. Discard the remaining diluted Lysis/Fixation Buffer.
10 ㎍ rhIL-6(R&D 시스템스, 카탈로그 번호 206-IL)을 1㎖의 PBS 0.1% BSA에 용해시켜 10 ㎍/㎖ 모액을 수득한다. 상기 모액을 분액하고 -80 ℃에서 보관한다.10 μg rhIL-6 (R&D Systems, catalog number 206-IL) was dissolved in 1 ml of PBS 0.1% BSA to obtain a 10 μg/ml stock solution. The mother liquor is aliquoted and stored at -80 °C.
상기 화합물의 3배 연속 희석물을 DMSO(10 mM 모액) 중에서 제조한다. 대조용-처리된 샘플은 화합물 대신에 DMSO를 수용한다. 모든 샘플을 1% 최종 DMSO 농도로 배양한다.Three-fold serial dilutions of the compounds are prepared in DMSO (10 mM stock solution). Control-treated samples receive DMSO instead of compound. All samples are incubated with 1% final DMSO concentration.
5.4.1.2.2. 혈액과 화합물과의 배양 및 IL-6에 의한 자극5.4.1.2.2. Incubation with blood and compounds and stimulation with IL-6
인간 혈액을 헤파린처리된 튜브에 수거한다. 상기 혈액을 148.5 ㎕의 분액들로 나눈다. 이어서, 1.5 ㎕의 시험 화합물 희석액을 각 혈액 분액에 가하고 상기 혈액 샘플을 부드럽게 흔들면서 37 ℃에서 30 분 동안 배양한다. 1과 1/2 마이크로리터의 10배 희석된 IL-6 모액을 상기 혈액 샘플(최종 농도 10 ng/㎖)에 가하고 상기 샘플을 부드럽게 흔들면서 37 ℃에서 20 분 동안 배양한다.Human blood is collected in heparinized tubes. The blood is divided into aliquots of 148.5 μl. Then, 1.5 μl of the test compound dilution is added to each blood aliquot and the blood sample is incubated for 30 minutes at 37° C. with gentle shaking. One and a half microliters of 10-fold diluted IL-6 stock solution is added to the blood sample (final concentration 10 ng/ml) and the sample is incubated at 37° C. for 20 minutes with gentle shaking.
5.4.1.2.3. 백혈구 제제5.4.1.2.3. leukocyte preparation
상기 자극 기간의 끝에서, 적혈구를 용해시키고 백혈구를 고정시키기 위해서 3 ㎖의 1X 예온된 용해/고정 완충제를 상기 혈액 샘플에 바로 가하고, 간단히 와동시키고 수욕에서 37 ℃에서 15 분간 배양한다.At the end of the stimulation period, 3 ml of 1× forewarm lysis/fixation buffer is added directly to the blood sample to lyse red blood cells and fix white blood cells, briefly vortexed and incubated at 37° C. for 15 minutes in a water bath.
튜브를 400xg에서 4 ℃에서 5 분간 원심분리시킨다. 세포 펠릿을 3 ㎖의 저온 1X PBS로 세척하고, 원심분리후 상기 세포 펠릿을 100 ㎕의 빙냉 1X PBS에 재현탁하고 900 ㎕ 빙냉 100% MeOH를 가한다. 이어서 세포를 침투를 위해 30 분간 4 ℃에서 배양한다.Centrifuge the tube at 400xg for 5 minutes at 4°C. The cell pellet is washed with 3 ml of cold 1X PBS, and after centrifugation, the cell pellet is resuspended in 100 μl of ice-cold 1X PBS and 900 μl of ice-cold 100% MeOH is added. Cells are then incubated at 4 °C for 30 min for infiltration.
이어서 침투된 세포를 3% BSA를 함유하는 1x PBS로 세척하고 최종적으로 3% BSA를 함유하는 1X PBX 80 ㎕에 재현탁한다.The infiltrated cells are then washed with 1x PBS containing 3% BSA and finally resuspended in 80 μl of 1X PBX containing 3% BSA.
5.4.1.2.4. 항 포스포-STAT1 및 항-CD4 항체에 의한 세포 표지5.4.1.2.4. Cell labeling with anti-phospho-STAT1 and anti-CD4 antibodies
20 ㎕의 PE 마우스 항-STAT1(pY701) 또는 PE 마우스 IgG2aκ 아이소타입 대조용 항체(BD 바이오사이언시즈, 카탈로그 번호 각각 612564 및 559319) 및 FITC-접합된 항-CD4 항체 또는 대조용 FITC-접합된 아이소타입 항체를 가하고 혼합하고, 이어서 암실에서 4 ℃에서 30 분 동안 배양한다.20 μl of PE mouse anti-STAT1 (pY701) or PE mouse IgG2aκ isotype control antibody (BD Biosciences, catalog numbers 612564 and 559319, respectively) and FITC-conjugated anti-CD4 antibody or control FITC-conjugated isotype Type antibody is added and mixed, then incubated for 30 minutes at 4°C in the dark.
이어서 세포를 1X PBS로 1 회 세척하고 FACSCanto II 유식 세포계(BD 바이오사이언시즈) 상에서 분석한다.Cells are then washed once with 1X PBS and analyzed on a FACSCanto II flow cytometer (BD Biosciences).
5.4.1.2.5. FACSCanto II상에서 형광 분석5.4.1.2.5. Fluorescence analysis on FACSCanto II
총 50,000 개의 사건을 카운트하고 포스포-STAT1 양성 세포를 림프구 게이트에서 CD4+ 세포에 게이트화후 측정한다. 데이터를 FACSDiva 소프트웨어를 사용하여 분석하고 IL-6 자극의 억제 백분율을 CD4+ 세포상의 포스포-STAT1에 대한 양성 세포의 백분율로부터 계산한다.A total of 50,000 events are counted and phospho-STAT1 positive cells are measured after gating on CD4 + cells in a lymphocyte gate. Data are analyzed using FACSDiva software and the percentage inhibition of IL-6 stimulation is calculated from the percentage of cells positive for phospho-STAT1 on CD4+ cells.
5.4.1.3. 포스포-STAT5 분석5.4.1.3. Phospho-STAT5 assay
시약의 제조Preparation of reagents
5X 용해/고정 완충제(BD 포스플로우, 카탈로그 번호 558049)를 증류수로 5 배 희석하고 37 ℃에서 예온한다. 남은 희석된 용해/고정 완충제는 버린다.5X Lysis/Fixation Buffer (BD Phosflow, catalog number 558049) is diluted 5-fold with distilled water and forewarmed at 37°C. Discard the remaining diluted Lysis/Fixation Buffer.
10 ㎍ rhGM-CSF(AbCys S.A., 카탈로그 번호 P300-03)을 100 ㎕의 PBS 0.1% BSA에 용해시켜 100 ㎍/㎖ 모액을 수득한다. 상기 모액을 분액하고 -80 ℃에서 보관한다.10 μg rhGM-CSF (AbCys S.A., catalog number P300-03) was dissolved in 100 μl PBS 0.1% BSA to obtain a 100 μg/ml stock solution. The mother liquor is aliquoted and stored at -80 °C.
상기 화합물의 3배 연속 희석물을 DMSO(10 mM 모액) 중에서 제조한다. 대조용-처리된 샘플은 시험 화합물없이 DMSO를 수용한다. 모든 샘플을 1% 최종 DMSO 농도로 배양한다.Three-fold serial dilutions of the compounds are prepared in DMSO (10 mM stock solution). Control-treated samples receive DMSO without test compound. All samples are incubated with 1% final DMSO concentration.
5.4.1.3.1. 혈액과 화합물과의 배양 및 GM-CSF에 의한 자극5.4.1.3.1. Incubation with blood and compounds and stimulation with GM-CSF
인간 혈액을 헤파린처리된 튜브에 수거한다. 상기 혈액을 148.5 ㎕의 분액들로 나눈다. 이어서, 1.5 ㎕의 화합물 희석액을 각 분액에 가하고 상기 혈액 샘플을 부드럽게 흔들면서 37 ℃에서 30 분 동안 배양한다. 5,000 배 희석된 GM-CSF 모액(1.5 ㎕)을 상기 혈액 샘플(최종 농도 20 ng/㎖)에 가하고 상기 샘플을 부드럽게 흔들면서 37 ℃에서 20 분 동안 배양한다.Human blood is collected in heparinized tubes. The blood is divided into aliquots of 148.5 μl. Then, 1.5 μl of compound dilution is added to each aliquot and the blood sample is incubated for 30 minutes at 37° C. with gentle shaking. 5,000-fold diluted GM-CSF stock solution (1.5 μl) was added to the blood sample (final concentration 20 ng/ml) and the sample was incubated at 37° C. for 20 minutes with gentle shaking.
5.4.1.3.2. 백혈구 제제5.4.1.3.2. leukocyte preparation
상기 자극 기간의 끝에서, 적혈구를 용해시키고 백혈구를 고정시키기 위해서 3 ㎖의 1X 예온된 용해/고정 완충제를 상기 혈액 샘플에 바로 가하고, 간단히 와동시키고 수욕에서 37 ℃에서 15 분간 배양한다.At the end of the stimulation period, 3 ml of 1× forewarm lysis/fixation buffer is added directly to the blood sample to lyse red blood cells and fix white blood cells, briefly vortexed and incubated at 37° C. for 15 minutes in a water bath.
튜브를 400xg에서 4 ℃에서 5 분간 원심분리시킨다. 세포 펠릿을 3 ㎖의 저온 1X PBS로 세척하고, 원심분리후 상기 세포 펠릿을 100 ㎕의 빙냉 1X PBS에 재현탁하고 900 ㎕ 빙냉 100% MeOH를 가한다. 이어서 세포를 침투를 위해 30 분간 4 ℃에서 배양한다.Centrifuge the tube at 400xg for 5 minutes at 4°C. The cell pellet is washed with 3 ml of cold 1X PBS, and after centrifugation, the cell pellet is resuspended in 100 μl of ice-cold 1X PBS and 900 μl of ice-cold 100% MeOH is added. Cells are then incubated at 4 °C for 30 min for infiltration.
5.4.1.3.3. 항 포스포-STAT5 및 항-CD33 항체에 의한 세포 표지5.4.1.3.3. Cell labeling with anti-phospho-STAT5 and anti-CD33 antibodies
20 ㎕의 PE 마우스 항-STAT5(pY694) 또는 PE 마우스 IgG1κ 아이소타입 대조용 항체(BD 바이오사이언시즈, 카탈로그 번호 각각 612567 및 554680) 및 APC 마우스 항 CD33 항체(BD 바이오사이언시즈 #345800) 또는 대조용 APC 마우스 IgG1 아이소타입 항체(BD 바이오사이언시즈 #345818)를 가하고 혼합하고, 이어서 암실에서 4 ℃에서 30 분 동안 배양한다.20 μl of PE mouse anti-STAT5 (pY694) or PE mouse IgG1κ isotype control antibody (BD Biosciences, catalog numbers 612567 and 554680, respectively) and APC mouse anti-CD33 antibody (BD Biosciences #345800) or control APC mouse IgG1 isotype antibody (BD Biosciences #345818) is added and mixed, then incubated in the dark at 4°C for 30 minutes.
이어서 세포를 1X PBS로 1 회 세척하고 FACSCanto II 유식 세포계(BD 바이오사이언시즈) 상에서 분석한다.Cells are then washed once with 1X PBS and analyzed on a FACSCanto II flow cytometer (BD Biosciences).
5.4.1.3.4. FACSCanto II상에서 형광 분석5.4.1.3.4. Fluorescence analysis on FACSCanto II
총 50,000 개의 사건을 카운트하고 포스포-STAT5 양성 세포를 림프구 CD33+ 세포상에서 게이트 통제 후 측정한다. 데이터를 FACSDiva 소프트웨어를 사용하여 분석하며 이는 CD33+ 세포상의 포스포-STAT5에 대한 양성 세포의 백분율로부터 계산된 GM-CSF 자극의 억제의 백분율에 상응한다.A total of 50,000 events are counted and phospho-STAT5 positive cells are determined after gate control on lymphoid CD33 + cells. Data are analyzed using FACSDiva software and correspond to the percentage of inhibition of GM-CSF stimulation calculated from the percentage of cells positive for phospho-STAT5 on CD33 + cells.
5.5. 프로토콜 25.5. protocol 2
5.5.1. 자극 프로토콜5.5.1. stimulation protocol
유식 세포측정 분석을 수행하여 인간 전혈로 생체외 JAK2 화합물 선택성에 대해 JAK1을 확립시킨다. 따라서, 사전동의를 받은 인간 지원자로부터 혈액을 채취한다. 이어서 혈액을 부드럽게 흔들면서 37 ℃에서 30 분간 평형화하고, 이어서 에펜도르프 튜브에 분액한다. 화합물을 상이한 농도로 가하고 부드럽게 흔들면서 37 ℃에서 30 분간 배양하고 후속으로 JAK1-의존성 경로 자극에 대해서는 인터류킨 6(IL-6)으로, JAK1/TYK2 경로 자극에 대해서는 인터페론 알파(IFNα)로, JAK1/JAK3 경로 자극에 대해서는 인터류킨 2(IL-2)로, 또는 JAK2-의존성 경로 자극에 대해서는 GM-CSF로, 부드럽게 흔들면서 37 ℃에서 20 분간 자극한다. 이어서 포스포-STAT1(IL-6- 및 IFNα-자극된 세포의 경우) 및 포스포-STAT5(IL-2- 및 GM-CSF-자극된 세포의 경우)를 FACS 분석을 사용하여 평가한다.Flow cytometric analysis is performed to establish JAK1 for JAK2 compound selectivity ex vivo in human whole blood. Therefore, blood is drawn from informed human volunteers. The blood is then equilibrated at 37° C. for 30 minutes with gentle shaking, and then aliquoted into Eppendorf tubes. Compounds were added at different concentrations and incubated at 37 °C for 30 min with gentle shaking, followed by interleukin 6 (IL-6) for JAK1-dependent pathway stimulation, interferon alpha (IFNα) for JAK1/TYK2 pathway stimulation, and JAK1/TYK2 pathway stimulation. Stimulate with interleukin 2 (IL-2) for JAK3 pathway stimulation or GM-CSF for JAK2-dependent pathway stimulation at 37°C for 20 minutes with gentle shaking. Phospho-STAT1 (for IL-6- and IFNa-stimulated cells) and phospho-STAT5 (for IL-2- and GM-CSF-stimulated cells) are then evaluated using FACS analysis.
5.5.2. 포스포-STAT 분석5.5.2. Phospho-STAT assay
5.5.2.1. 시약의 제조5.5.2.1. Preparation of reagents
5X 용해/고정 완충제(BD 포스플로우, 카탈로그 번호 558049)를 증류수로 5 배 희석하고 37 ℃에서 예온한다. 남은 희석된 용해/고정 완충제는 버린다.5X Lysis/Fixation Buffer (BD Phosflow, catalog number 558049) is diluted 5-fold with distilled water and forewarmed at 37°C. Discard the remaining diluted Lysis/Fixation Buffer.
10 ㎍ rhIL-6(R&D 시스템스, 카탈로그 번호 206-IL)을 1㎖의 PBS + 0.1% BSA에 용해시켜 10 ㎍/㎖ 모액을 수득한다. 상기 모액을 분액하고 -80 ℃에서 보관한다.10 μg rhIL-6 (R&D Systems, catalog number 206-IL) was dissolved in 1 ml of PBS + 0.1% BSA to obtain a 10 μg/ml stock solution. The mother liquor is aliquoted and stored at -80 °C.
10 ㎍ rhIL-2(R&D 시스템스, 카탈로그 번호 202-IL)을 1㎖의 PBS + 0.1% BSA에 용해시켜 10 ㎍/㎖ 모액을 수득한다. 상기 모액을 분액하고 -80 ℃에서 보관한다.10 μg rhIL-2 (R&D Systems, catalog number 202-IL) was dissolved in 1 ml of PBS + 0.1% BSA to obtain a 10 μg/ml stock solution. The mother liquor is aliquoted and stored at -80 °C.
5 ㎍ rhGM-CSF(AbCys S.A., 카탈로그 번호 P300-03)를 12.5㎖의 PBS + 0.1% BSA에 용해시켜 400 ng/㎖ 모액을 수득한다. 상기 모액을 분액하고 -80 ℃에서 보관한다.5 μg rhGM-CSF (AbCys S.A., catalog number P300-03) was dissolved in 12.5 ml of PBS + 0.1% BSA to obtain 400 ng/ml stock solution. The mother liquor is aliquoted and stored at -80 °C.
상기 화합물의 3배 연속 희석물을 DMSO(10 mM 모액) 중에서 제조한다. 대조용-처리된 샘플은 화합물 대신에 DMSO를 수용한다. 모든 샘플을 1% 최종 DMSO 농도로 배양한다.Three-fold serial dilutions of the compounds are prepared in DMSO (10 mM stock solution). Control-treated samples receive DMSO instead of compound. All samples are incubated with 1% final DMSO concentration.
5.5.2.2. 혈액과 화합물과의 배양 및 촉발제에 의한 자극5.5.2.2. Incubation with blood and compounds and stimulation with triggers
인간 혈액을 헤파린처리된 튜브에 수거한다. 상기 혈액을 148.5 ㎕의 분액들로 나눈다. 이어서, 1.5 ㎕의 시험 화합물 희석액을 각 혈액 분액에 가하고 상기 혈액 샘플을 부드럽게 흔들면서 37 ℃에서 30 분 동안 배양한다. 1과 1/2 마이크로리터의 10배 희석된 IL-6 모액, 1.5 ㎕의 uIFNα(PBL 바이오메디컬(Biomedical), 카탈로그 번호 11200-1) 모액, 1.5 ㎕의 25배 희석된 IL-2 모액 또는 1.5 ㎕의 200배 희석된 GM-CSF 모액을 상기 혈액 샘플에 가하고 상기 샘플들을 부드럽게 흔들면서 37 ℃에서 20 분 동안 배양한다.Human blood is collected in heparinized tubes. The blood is divided into aliquots of 148.5 μl. Then, 1.5 μl of the test compound dilution is added to each blood aliquot and the blood sample is incubated for 30 minutes at 37° C. with gentle shaking. 1 and 1/2 microliters of 10-fold diluted IL-6 stock, 1.5 μl of uIFNα (PBL Biomedical, catalog number 11200-1) stock, 1.5 μl of 25-fold diluted IL-2 stock, or 1.5 μl of 25-fold diluted IL-2 stock μl of 200-fold diluted GM-CSF stock solution is added to the blood samples and the samples are incubated at 37° C. for 20 minutes with gentle shaking.
5.5.2.3. 백혈구 제제5.5.2.3. leukocyte preparation
상기 자극 기간의 끝에서, 적혈구를 용해시키고 백혈구를 고정시키기 위해서 3 ㎖의 1X 예온된 용해/고정 완충제를 상기 혈액 샘플에 바로 가하고, 간단히 와동시키고 수욕에서 37 ℃에서 15 분간 배양한다.At the end of the stimulation period, 3 ml of 1× forewarm lysis/fixation buffer is added directly to the blood sample to lyse red blood cells and fix white blood cells, briefly vortexed and incubated at 37° C. for 15 minutes in a water bath.
튜브를 400xg에서 4 ℃에서 5 분간 원심분리시킨다. 세포 펠릿을 3 ㎖의 저온 1X PBS로 세척하고, 원심분리후 상기 세포 펠릿을 100 ㎕의 빙냉 1X PBS에 재현탁하고 900 ㎕ 빙냉 100% MeOH를 가한다. 이어서 세포를 침투를 위해 30 분간 4 ℃에서 배양한다.Centrifuge the tube at 400xg for 5 minutes at 4°C. The cell pellet is washed with 3 ml of cold 1X PBS, and after centrifugation, the cell pellet is resuspended in 100 μl of ice-cold 1X PBS and 900 μl of ice-cold 100% MeOH is added. Cells are then incubated at 4 °C for 30 min for infiltration.
이어서 침투된 세포를 3% BSA를 함유하는 1x PBS로 세척하고 최종적으로 3% BSA를 함유하는 1X PBX 80 ㎕에 재현탁한다.The infiltrated cells are then washed with 1x PBS containing 3% BSA and finally resuspended in 80 μl of 1X PBX containing 3% BSA.
5.5.2.4. 세포 표지5.5.2.4. cell labeling
20 ㎕의 PE 마우스 항-STAT1(pY701) 또는 PE 마우스 IgG2aκ 아이소타입 대조용 항체(BD 바이오사이언시즈, 카탈로그 번호 각각 612564 및 559319) 및 APC-접합된 항-CD4 항체 또는 대조용 APC-접합된 아이소타입 항체(BD 바이오사이언시즈, 카탈로그 번호 각각 555349 및 555751)를 IL-6 및 IFNα-자극된 튜브에 가하고 혼합하고, 이어서 암실에서 4 ℃에서 20 분 동안 배양한다.20 μl of PE mouse anti-STAT1 (pY701) or PE mouse IgG2aκ isotype control antibody (BD Biosciences, catalog numbers 612564 and 559319, respectively) and APC-conjugated anti-CD4 antibody or control APC-conjugated isotype Type antibodies (BD Biosciences, catalog numbers 555349 and 555751, respectively) are added to the IL-6 and IFNα-stimulated tubes, mixed, and then incubated in the dark at 4° C. for 20 minutes.
20 ㎕의 PE 마우스 항-STAT5(pY694) 또는 PE 마우스 IgG1κ 아이소타입 대조용 항체(BD 바이오사이언시즈, 카탈로그 번호 각각 612567 및 554680) 및 APC-접합된 항-CD4 항체 또는 대조용 APC-접합된 아이소타입 항체(BD 바이오사이언시즈, 카탈로그 번호 각각 555349 및 555751)를 IL-2-자극된 튜브에 가하고 혼합하고, 이어서 암실에서 4 ℃에서 20 분 동안 배양한다.20 μl of PE mouse anti-STAT5 (pY694) or PE mouse IgG1κ isotype control antibody (BD Biosciences, catalog numbers 612567 and 554680, respectively) and APC-conjugated anti-CD4 antibody or control APC-conjugated isotype Type antibody (BD Biosciences, catalog numbers 555349 and 555751, respectively) is added to the IL-2-stimulated tube, mixed, and then incubated in the dark at 4° C. for 20 minutes.
20 ㎕의 PE 마우스 항-STAT5(pY694) 또는 PE 마우스 IgG1κ 아이소타입 대조용 항체(BD 바이오사이언시즈, 카탈로그 번호 각각 612567 및 554680) 및 APC 마우스 항 CD33 항체(BD 바이오사이언시즈 #345800) 또는 대조용 APC 마우스 IgG1 아이소타입 항체(BD 바이오사이언시즈, 카탈로그 번호 345818)를 GM-CSF-자극된 튜브에 가하고 혼합하고, 이어서 암실에서 4 ℃에서 20 분 동안 배양한다.20 μl of PE mouse anti-STAT5 (pY694) or PE mouse IgG1κ isotype control antibody (BD Biosciences, catalog numbers 612567 and 554680, respectively) and APC mouse anti-CD33 antibody (BD Biosciences #345800) or control APC mouse IgG1 isotype antibody (BD Biosciences, catalog number 345818) is added to the GM-CSF-stimulated tube and mixed, then incubated in the dark at 4°C for 20 minutes.
이어서 세포를 1X PBS로 1 회 세척하고 FACSCanto II 유식 세포계(BD 바이오사이언시즈) 상에서 분석한다.Cells are then washed once with 1X PBS and analyzed on a FACSCanto II flow cytometer (BD Biosciences).
5.5.2.5. FACSCanto II상에서 형광 분석5.5.2.5. Fluorescence analysis on FACSCanto II
총 50,000 개의 사건을 카운트하고 포스포-STAT1 양성 세포를 IL-6- 및 IFNα-자극된 세포에 대해서 림프구 게이트에서 CD4+ 세포에 게이트화후 측정한다. 포스포-STAT5 양성 세포를 IL-2-자극된 세포에 대해서 림프구 게이트에서 CD4+ 세포에 게이트 통제 후 측정한다. 포스포-STAT5 양성 세포를 CD33+ 세포에 게이트 통제 후 측정한다. 데이터를 FACSDiva 소프트웨어를 사용하여 분석하고 IL-6 또는 IFNα 자극의 억제 백분율을 CD4+ 세포상의 포스포-STAT1에 대한 양성 세포의 백분율로부터 계산한다. IL-2 자극된 세포의 경우, 데이터를 FACSDiva 소프트웨어를 사용하여 분석하고 IL-2 자극의 억제 백분율을 CD4+ 세포상의 포스포-STAT1에 대한 양성 세포의 백분율로부터 계산한다. GM-CSF 자극된 세포의 경우, GM-CSF 자극의 억제 백분율을 CD33+ 세포상의 포스포-STAT5에 대한 양성 세포의 백분율로부터 계산한다.A total of 50,000 events are counted and phospho-STAT1 positive cells are counted after gating on CD4+ cells in a lymphocyte gate for IL-6- and IFNα-stimulated cells. Phospho-STAT5 positive cells are measured after gate control on CD4+ cells in the lymphocyte gate for IL-2-stimulated cells. Phospho-STAT5 positive cells are measured after gate control on CD33+ cells. Data are analyzed using FACSDiva software and the percentage inhibition of IL-6 or IFNα stimulation is calculated from the percentage of cells positive for phospho-STAT1 on CD4+ cells. For IL-2 stimulated cells, data are analyzed using FACSDiva software and the percentage inhibition of IL-2 stimulation is calculated from the percentage of cells positive for phospho-STAT1 on CD4+ cells. For GM-CSF stimulated cells, the percentage inhibition of GM-CSF stimulation is calculated from the percentage of cells positive for phospho-STAT5 on CD33+ cells.
실시예 6. 생체내 모델Example 6. In vivo model
6.1. CIA 모델6.1. CIA model
6.1.1. 물질6.1.1. matter
완전 프로인트 항원보강제(CFA) 및 불완전 프로인트 항원보강제(IFA)를 디프코(Difco)로부터 구입하였다. 소 콜라겐 유형 II(CII), 리포폴리사카라이드(LPS), 및 엔브렐(Enbrel)을 각각 콘드렉스(Chondrex)(Isle d’Abeau, 프랑스 소재); 시그마(P4252, 프랑스(L’Isle d’Abeau) 소재), 와이예트(Whyett)(25mg 주사성 주사기, 프랑스 소재) 아크로스 오가닉스(Acros Organics)(미국 캘리포니아주 팔로알토 소재)로부터 수득하였다. 사용된 다른 모든 시약들은 시약 등급의 것이었으며 모든 용매는 분석 등급의 것이었다.Complete Freund's adjuvant (CFA) and incomplete Freund's adjuvant (IFA) were purchased from Difco. bovine collagen type II (CII), lipopolysaccharide (LPS), and Enbrel, respectively, from Chondrex (Isle d'Abeau, France); Sigma (P4252, L'Isle d'Abeau, France), Whyett (25 mg injectable syringe, France) Acros Organics (Palo Alto, CA). All other reagents used were of reagent grade and all solvents were of analytical grade.
6.1.2. 동물6.1.2. animal
검은 아구티 래트(수컷, 7-8 주된 것)를 할란 레보라토리즈(Harlan Laboratories)(프랑스 메종 알포르 소재)로부터 수득하였다. 래트를 12 시간 명/암 주기(0700-1900)로 유지시켰다. 온도를 22 ℃에서 유지시키고, 사료와 물을 자유롭게 제공하였다.Black agouti rats (male, 7-8 weeks old) were obtained from Harlan Laboratories (Maisons-Alfort, France). Rats were maintained on a 12 hour light/dark cycle (0700-1900). The temperature was maintained at 22° C., and feed and water were provided ad libitum.
6.1.3. 콜라겐 유발된 관절염(CIA)6.1.3. Collagen Induced Arthritis (CIA)
실험 하루전에, CII 용액(2 ㎎/㎖)을 0.05 M 아세트산으로 제조하고 4 ℃에서 보관하였다. 면역화 직전에, 동부피의 항원보강제(IFA) 및 CII를 빙수욕에서 미리 냉각시킨 유리병에서 균질화기에 의해 혼합하였다. 유화액이 형성되지 않는 경우 잉여의 항원보강제 및 연장된 균질화가 필요할 수도 있다. 0.2 ㎖의 상기 유화액을 제1일에 각 래트의 꼬리 기부에 피내 주사하고, 두 번째 추가 피내 주사(CFA 0.1 ㎖ 염수 중 2 ㎎/㎖의 CII 용액)를 제9일에 수행하였다. 상기 면역화 방법은 공개된 방법(Jou et al., 2005; Sims et al, 2004)으로부터 변형되었다.One day prior to the experiment, a CII solution (2 mg/ml) was prepared in 0.05 M acetic acid and stored at 4°C. Immediately prior to immunization, equal parts of the adjuvant (IFA) and CII were mixed by a homogenizer in a glass vial pre-chilled in an ice-water bath. An excess of adjuvant and prolonged homogenization may be necessary if an emulsion is not formed. 0.2 ml of this emulsion was injected intradermally into the tail base of each rat on day 1, and a second additional intradermal injection (CFA solution of 2 mg/ml CII in 0.1 ml saline) was performed on day 9. The immunization method was modified from published methods (Jou et al., 2005; Sims et al, 2004).
6.1.4. 연구 설계6.1.4. study design
상기 화합물들의 치료 효과를 상기 래트 CIA 모델에서 시험하였다. 래트를 동등한 그룹으로 무작위로 나누었으며 각각의 그룹은 10 마리의 래트를 함유하였다. 모든 래트를 제1일에 면역시키고 제9일에 추가 면역시켰다. 치료 투약을 제16일에서부터 제30일까지 지속하였다. 음성 대조군은 비히클(MC 0.5%)로 처리하고 양성 대조군은 엔브렐(10 ㎎/㎏, 3x 주, s.c.)로 처리하였다. 관심 화합물을 전형적으로는 3 회 용량, 예를 들어 3, 10, 30 ㎎/㎏, p.o.로 시험하였다.The therapeutic effects of the compounds were tested in the rat CIA model. Rats were randomly divided into equal groups, each group containing 10 rats. All rats were immunized on day 1 and boosted on day 9. Treatment dosing continued from day 16 to day 30. Negative controls were treated with vehicle (MC 0.5%) and positive controls were treated with Enbrel (10 mg/kg, 3x weeks, s.c.). A compound of interest is typically tested in 3 doses, eg 3, 10, 30 mg/kg, p.o.
6.1.5. 관절염의 임상 평가6.1.5. Clinical Assessment of Arthritis
관절염을 문헌[Khachigian 2006], [Lin et al 2007] 및 [Nishida et al. 2004)]의 방법에 따라 채점한다. 4 개의 발 각각의 팽창을 하기와 같이 관절염 점수로 순위를 매긴다: 0 - 증상 없음; 1 - 발목 또는 손목과 같은 한 가지 유형의 관절의 순하지만 명확한 발적 및 팽창, 또는 병든 손발가락 수와 관계없이, 개별 손발가락으로 한정된 겉보기 발적 및 팽창; 2 - 2 가지 이상의 유형의 관절의 보통의 발적 및 팽창; 3 - 손발가락을 포함한 전체 발의 심한 발적 및 팽창; 4 - 다수의 관절을 포함하여 최대로 염증을 일으킨 사지(최대 누적 임상 관절 점수는 동물당 16점이다)(Nishida et al., 2004).Arthritis is described in [Khachigian 2006], [Lin et al 2007] and [Nishida et al. 2004)]. Swelling of each of the four paws is ranked by the arthritis score as follows: 0 - no symptoms; 1 - mild but distinct redness and swelling of one type of joint, such as the ankle or wrist, or apparent redness and swelling confined to an individual digit, regardless of the number of digits affected; 2 - Moderate redness and swelling of 2 or more types of joints; 3 - Severe redness and swelling of the entire foot, including the toes; 4 - maximally inflamed limb with multiple joints (maximum cumulative clinical joint score is 16 points per animal) (Nishida et al., 2004).
수회 연구의 메타분석을 허용하기 위해서, 상기 임상 점수값들을 하기와 같이 표준화하였다:To allow meta-analysis of multiple studies, the clinical score values were standardized as follows:
임상 점수의 AUC(AUC 점수): 제1일부터 제14일까지의 곡선 아래 면적(AUC)을 각각의 개별 래트에 대해서 계산하였다. 각 동물의 AUC를, 상기 동물에 대한 데이터가 획득된 연구에서 비히클에 대해 획득된 평균 AUC로 나누고 100을 곱하였다(즉 AUC는 연구당 평균 비히클 AUC의 백분율로서 표현되었다).AUC of clinical score (AUC score): The area under the curve (AUC) from day 1 to day 14 was calculated for each individual rat. Each animal's AUC was divided by the average AUC obtained for vehicle in the study for which data for that animal was obtained and multiplied by 100 (i.e., AUC was expressed as a percentage of average vehicle AUC per study).
임상 점수는 제1일에서부터 제14일(종점 점수)까지 증가한다: 각 동물에 대한 임상 점수 차이를, 상기 동물에 대한 데이터가 획득된 연구에서 비히클에 대해 획득된 평균 임상 점수 차이로 나누고 100을 곱하였다(즉 상기 차이는 연구당 상기 비히클에 대한 평균 임상 점수 차이의 백분율로서 표현되었다).Clinical scores increase from day 1 to day 14 (endpoint score): the clinical score difference for each animal is divided by the average clinical score difference obtained for vehicle in the study for which data for that animal was obtained and 100 is calculated. multiplied (i.e. the difference was expressed as a percentage of the mean clinical score difference for the vehicle per study).
6.1.6. 관절염의 발병후 체중 변화(%)6.1.6. Weight change after onset of arthritis (%)
임상적으로, 체중 손실은 관절염과 관련된다(Rall and Roubenoff, 2004; Shelton et al., 2005; Walsmith et al., 2004). 따라서, 관절염 발병후 체중 변화를 상기 래트 모델에서 치료 효과의 평가를 위한 비-특이적 종점으로서 사용할 수 있다. 상기 관절염 발병후 체중 변화(%)를 하기와 같이 계산하였다:Clinically, weight loss is associated with arthritis (Rall and Roubenoff, 2004; Shelton et al., 2005; Walsmith et al., 2004). Thus, body weight change after onset of arthritis can be used as a non-specific endpoint for evaluation of treatment effect in this rat model. Weight change (%) after onset of the arthritis was calculated as follows:
마우스: (체중(주 6) - 체중(주 5))/체중(주 5) x 100%Mice: (body weight (week 6) - body weight (week 5) )/body weight (week 5) x 100%
래트: (체중(주 4) - 체중(주 3))/체중(주 3) x 100%Rats: (body weight (week 4) - body weight (week 3) )/body weight (week 3) x 100%
6.1.7. 방사선학6.1.7. radiology
X-선 사진을 각각의 개별적인 동물의 뒷발에서 촬영하였다. 무작위한 맹검 식별 번호를 각각의 사진에 부여하고, 골 미란의 중증도를 하기와 같은 방사선학적 라르센(Larsen) 점수 시스템으로 2 개의 독립적인 점수에 의해 순위를 매겼다: 0-완전한 골 윤곽 및 정상적인 관절 공간을 갖는 정상; 1-외부 중족골 중 임의의 하나 또는 2개가 가벼운 골 미란을 보이는 약간의 이상; 2-외부 중족골 중 3 내지 5 개가 골 미란을 보이는 명확한 조기 이상; 3-상기 외부 중족골 모두뿐만 아니라 내부 중족골 중 임의의 하나 또는 2개가 명확한 골 미란을 보이는 중간의 파괴성 이상; 4-모든 중족골이 명확한 골 미란을 보이고 내부 중족골 중 하나 이상이 완전히 미란되어 일부 골 관절 윤곽이 부분적으로 보존되는 중증의 파괴성 이상; 5-골 윤곽이 없는 절단 이상. 이러한 득점 시스템은 하기 문헌들의 변형이다: Bush et al., 2002; Jou et al., 2005; Salvemini et al., 2001; Sims et al., 2004.X-ray pictures were taken of the hind paws of each individual animal. A random blinded identification number was assigned to each photograph, and the severity of bone erosion was ranked by two independent scores with a radiographic Larsen scoring system as follows: 0-complete bone contour and normal joint space. normal with; 1-slight abnormality of any one or two of the external metatarsals with mild bone erosion; 2-clear early abnormalities of 3 to 5 of the external metatarsals showing bone erosion; 3-moderate destructive anomaly of all of the external metatarsals as well as any one or two of the internal metatarsals with clear bone erosion; 4 - severe destructive abnormality in which all metatarsals show clear bone erosion and at least one of the inner metatarsals is completely eroded, partially preserving some bone joint contours; 5 - Abnormal cut without bone contour. This scoring system is a modification of: Bush et al., 2002; Jou et al., 2005; Salvemini et al., 2001; Sims et al., 2004.
6.1.8. 조직학6.1.8. histology
방사선학 분석후에, 마우스의 뒷발을 10% 포스페이트-완충된 포르말린(pH 7.4) 중에 고정시키고, 정밀한 조직학을 위해 빠른 골 탈회제(레보라토리즈 유로바이오(Laboratories Eurobio))로 탈회시키고 파라핀에 묻었다. 관절염에 걸린 관절의 확실한 광범위한 평가를 위해서, 4 개 이상의 일련의 단편(5 ㎛ 두께)을 절단하였으며 각각의 일련의 단편의 사이는 100 ㎛이었다. 상기 단편들을 헤마톡실린 및 에오신(H&E)으로 염색하였다. 활액막 염증 및 골 및 연골 손상에 대한 조직 검사를 이중 맹검 프로토콜을 사용하여 수행하였다. 각각의 발에서, 4 개의 매개변수를 4-점 규모로 평가하였다. 상기 매개변수는 세포 침윤, 판누스 중증도, 연골 미란 및 골 미란이었다. 하기와 같이 상응하게 점수를 매겼다: 1-정상, 2-순한, 3-보통, 4-심한. 상기 4 개의 점수를 함께 합하고 추가적인 점수, 즉 'RA 총점'으로서 나타낸다.After radiographic analysis, hind paws of mice were fixed in 10% phosphate-buffered formalin (pH 7.4), decalcified with rapid bone demineralization (Laboratories Eurobio) and embedded in paraffin for precise histology. For reliable extensive evaluation of arthritic joints, at least 4 series of segments (5 μm thick) were cut with 100 μm between each series of segments. The sections were stained with hematoxylin and eosin (H&E). Biopsies for synovial inflammation and bone and cartilage damage were performed using a double-blind protocol. In each paw, 4 parameters were evaluated on a 4-point scale. The parameters were cell invasion, pannus severity, cartilage erosion and bone erosion. Correspondingly scored as follows: 1-normal, 2-mild, 3-moderate, 4-severe. The four scores are summed together and presented as an additional score, 'RA total score'.
6.1.9. 종골(뒤꿈치 뼈)의 미세전산화 단층촬영(μCT) 분석6.1.9. Microcomputed tomography (μCT) analysis of the calcaneus (heel bone)
RA에서 관찰된 골 손상은 특히 골피질에서 발생하며 μCT 분석에 의해 밝혀질 수 있다(Oste et al., 2007; Sims et al., 2004). 상기 종골의 스캐닝 및 3D 용적 재건후에, 골 손상을 상기 뼈의 종방향 축에 수직인 인실리코 단리된, 슬라이드당 존재하는 식별 대상의 수로서 측정한다. 상기 골이 많이 손상될수록 보다 많은 식별 대상이 측정된다. 종골을 따라 균일하게 분배된(약 10.8 ㎛로 이격됨) 1000 개의 슬라이드를 분석한다.Bone damage observed in RA occurs particularly in the bone cortex and can be revealed by μCT analysis (Oste et al., 2007; Sims et al., 2004). After scanning and 3D volume reconstruction of the calcaneus, bone damage is measured as the number of identified objects present per slide, isolated in silico perpendicular to the longitudinal axis of the bone. The more the bone is damaged, the more identification objects are measured. 1000 slides evenly distributed along the calcaneus (spaced approximately 10.8 μm) are analyzed.
6.1.10. 정상상태 PK6.1.10. steady state PK
제7일 또는 제11일째에, 혈액 샘플을 하기의 시점들에서, 응고 방지제로서 리튬 헤파린을 사용하여 후-안와 공동에서 채취하였다: 투여전, 1, 3 및 6 시간. 전혈 샘플을 원심분리하고 생성되는 혈장 샘플을 분석시까지 -20 ℃에서 보관하였다. 각 시험 화합물의 혈장 농도를 LC-MS/MS 방법에 의해 측정하였으며, 여기에서 질량 분광계는 양의 전기분무 방식으로 작동되었다. 약동학적 매개변수들을 윈놀린(Winnonlin)(등록상표)(파사이트(Pharsight)(등록상표), 미국 소재)을 사용하여 계산하였으며 상기 투여전 혈장 수준은 24 시간 혈장 수준과 같은 것으로 가정되었다.On day 7 or 11, blood samples were taken from the posterior-orbital cavity using lithium heparin as anticoagulant at the following time points: predose, 1, 3 and 6 hours. Whole blood samples were centrifuged and the resulting plasma samples were stored at -20 °C until analysis. The plasma concentration of each test compound was determined by the LC-MS/MS method, in which the mass spectrometer was operated in positive electrospray mode. Pharmacokinetic parameters were calculated using Winnonlin® (Pharsight®, USA) and the pre-dose plasma levels were assumed to equal 24 hour plasma levels.
6.2. 종양학 모델6.2. oncology model
JAK2-구동된 골수증식성 질병에 대한 소분자의 효능을 확인하기 위한 생체내 모델이 문헌[Geron et al., 2008]; 문헌[Wernig et al. 2008]에 개시되어 있다.In vivo models for confirming the efficacy of small molecules against JAK2-driven myeloproliferative diseases are described [Geron et al., 2008]; See Wernig et al. 2008].
6.3. 마우스 IBD 모델6.3. Mouse IBD model
IBD에 대한 소분자의 효능을 확인하기 위한 시험관내 및 생체내 모델이 문헌[Wirtz and Neurath, 2007]에 개시되어 있다.In vitro and in vivo models for determining the efficacy of small molecules against IBD are disclosed in Wirtz and Neurath, 2007.
6.4. 마우스 천식 모델6.4. mouse asthma model
천식에 대한 소분자의 효능을 확인하기 위한 시험관내 및 생체내 모델이 문헌[Ip et al. 2006]; [Kudlacz et al., 2008]; [Nials and Uddin, 2008]; [Pernis and Rothman, 2002]에 개시되어 있다.In vitro and in vivo models for determining the efficacy of small molecules for asthma are described in Ip et al. 2006]; [Kudlacz et al., 2008]; [Nials and Uddin, 2008]; [Pernis and Rothman, 2002].
6.5. IL22 또는 IL23의 피내 주사에 의해 유도된 건선-형 상피 과형성의 쥐 모델 6.5. A murine model of psoriasis-type epithelial hyperplasia induced by intradermal injection of IL22 or IL23
6.5.1. 물질6.5.1. matter
무 담체, 마우스 재조합 IL22(582-ML-CF)가 R&D 시스템스에 의해 제공된다. 무-담체, 마우스 재조합 IL23(14-8231, CF)이 e-바이오사이언스에 의해 제공된다.Carrier-free, mouse recombinant IL22 (582-ML-CF) is provided by R&D Systems. Carrier-free, mouse recombinant IL23 (14-8231, CF) is provided by e-Bioscience.
6.5.2. 동물6.5.2. animal
Balb/c 마우스(암컷, 18 내지 20 g 체중)를 CERJ(프랑스 소재)로부터 수득한다. 마우스를 12시간 명/암 주기(07:00 - 19:00)로 유지시킨다. 온도를 22 ℃에서 유지시키고, 먹이와 물을 무제한으로 제공한다.Balb/c mice (female, 18-20 g body weight) are obtained from CERJ (France). Mice are maintained on a 12 hour light/dark cycle (07:00 - 19:00). The temperature is maintained at 22 °C, and food and water are provided ad libitum.
6.5.3. 연구 설계6.5.3. study design
상기 연구의 설계를 문헌[Rizzo et al, 2011]으로부터 적응 개조한다.The design of this study is adapted from the literature [Rizzo et al, 2011].
제1일(D1)에, 상기 마우스의 양쪽 귀 둘레를 면도한다.On day 1 (D1), the mice are shaved around both ears.
연속해서 4일 동안(D1 내지 D4), 상기 마우스에게 아이소플루란의 흡입에 의해 유도된 마취하에서 우측 귓바퀴에 마우스 재조합 IL22 또는 IL23(PBS/0.1% BSA 중의 1 ㎍/20 ㎕) 및 좌측 귓바퀴에 20 ㎕의 PBS/0.1% BSA의 1일 피내 용량을 제공하였다.For 4 consecutive days (D1 to D4), the mice were injected with mouse recombinant IL22 or IL23 (1 μg/20 μl in PBS/0.1% BSA) in the right auricle and left auricle under anesthesia induced by inhalation of isoflurane. A daily intradermal dose of 20 μl of PBS/0.1% BSA was given.
D1 내지 D5 동안, 마우스에게 IL23/IL22 주사 또는 비히클 1시간 전에 시험-화합물(MC 0.5% 중 10, 30 또는 100 ㎎/㎏, po, qd)을 투여한다.During D1-D5, mice are dosed with test-compound (10, 30 or 100 mg/kg in MC 0.5%, po, qd) 1 hour prior to IL23/IL22 injection or vehicle.
6.5.4. 질병의 평가6.5.4. evaluation of disease
상기 양쪽 귀의 두께를 자동 캘리퍼스로 매일 측정한다. 체중을 초기 및 사망시 평가한다. 제5일째, 최종 투여 후 2시간째에 상기 마우스를 죽인다. 상기 귀의 귓바퀴를 연골을 제외하고 절제한다. 상기 귓바퀴를 칭량하고 이어서 1 ㎖의 RNAlater 용액을 함유하는 바이알 또는 포름알데하이드 중에 넣는다.The thickness of both ears is measured daily with an automatic caliper. Body weight is assessed initially and at death. On day 5, the mice are sacrificed 2 hours after the final administration. The pinna of the ear is resected except for the cartilage. The pinna is weighed and then placed in a vial or formaldehyde containing 1 ml of RNAlater solution.
D4에서, 혈액 샘플을 또한 투여 직전(T0) 및 투여 후 1시간, 3시간, 6시간째에 PK 프로파일을 위해서 후-안와 공동으로부터 수집한다.On D4, blood samples are also collected from the posterior-orbital cavity for PK profiles immediately prior to dosing (T0) and at 1, 3, and 6 hours post-dose.
그룹당 8마리의 마우스가 존재한다. 결과를 평균±sem으로서 나타내며 통계학적 분석을 IL22 또는 IL23 비히클 그룹에 대해서 일원 Anova에 이어서 듄네트의 사후 검정을 사용하여 수행한다.There are 8 mice per group. Results are presented as mean±sem and statistical analysis is performed using one-way Anova followed by Dunnett's post hoc test for IL22 or IL23 vehicle groups.
6.5.5. 조직학6.5.5. histology
죽인 후에, 귀를 수집하고 3.7% 파라포름알데하이드 중에 고정시킨 후에 파라핀에 묻는다. 2 ㎛ 두께로 절단하고 헤마톡실린 및 에오신으로 염색한다. 귀의 표피 두께를 x20 배율로 귀당 6개의 상을 포착하여 상 분석(Sis'Ncom 소프트웨어)에 의해 측정한다. 데이터를 평균±sem으로서 나타내며 통계학적 분석을 IL22 또는 IL23 비히클 그룹에 대해서 일원 Anova에 이어서 듄네트의 사후 검정을 사용하여 수행한다.After killing, ears are collected and fixed in 3.7% paraformaldehyde and then embedded in paraffin. Cut to 2 μm thickness and stain with hematoxylin and eosin. Auricular epidermal thickness is measured by image analysis (Sis'Ncom software) by capturing 6 images per ear at ×20 magnification. Data are presented as mean±sem and statistical analysis is performed using one-way Anova followed by Dunnett's post hoc test for IL22 or IL23 vehicle groups.
6.5.6. RNA 추출, RT-PCR 및 실시간 PCR6.5.6. RNA extraction, RT-PCR and real-time PCR
귀 조직 중의 IL-17a, IL-22, IL-1β, LCN2 및 S100A9 전사물 수준을 실시간 정량 PCR을 사용하여 측정한다.IL-17a, IL-22, IL-1β, LCN2 and S100A9 transcript levels in ear tissues are measured using real-time quantitative PCR.
실시예 7. 약동학, ADME 및 독성 분석Example 7. Pharmacokinetics, ADME and toxicity analysis
7.1. 열역학적 용해도7.1. thermodynamic solubility
상기 시험 화합물을 유리 바이알 중에서 1 ㎎/㎖의 농도로 0.2 M 포스페이트 완충제 pH 7.4 또는 0.1 M 시트레이트 완충제 pH 3.0에 가한다.The test compound is added to 0.2 M phosphate buffer pH 7.4 or 0.1 M citrate buffer pH 3.0 at a concentration of 1 mg/ml in a glass vial.
샘플들을 로테이터 드라이브(Rotator drive) STR 4(스튜어트 사이언티픽(Stuart Scientific), Bibby)에서 3.0의 속도로 실온에서 24 시간 동안 회전시킨다.Samples are spun on a Rotator drive STR 4 (Stuart Scientific, Bibby) at a speed of 3.0 at room temperature for 24 hours.
24시간 후에, 800 ㎕의 상기 샘플을 에펜도르프 튜브로 옮기고 14000 rpm에서 5분 원심분리시킨다. 이어서 상기 샘플의 상등액 200 ㎕를 멀티스크린R(MultiscreenR) 용해도 플레이트(밀리포어(Millipore), MSSLBPC50)로 옮기고, 상기 상등액을 진공 다기관의 도움으로 깨끗한 그레이너 폴리프로필렌 V-바닥 96 웰 플레이트(카탈로그 번호 651201)로 여과한다(10-12" Hg). 5 ㎕의 상기 여액을, 표준 곡선을 함유하는 플레이트에서의 배양에 사용된 동일한 완충제 95 ㎕(F20)에 희석한다(그레이너, 카탈로그 번호 651201).After 24 hours, 800 μl of the sample is transferred to an Eppendorf tube and centrifuged at 14000 rpm for 5 minutes. 200 μl of the supernatant of the sample was then transferred to a MultiscreenR solubility plate (Millipore, MSSLBPC50) and the supernatant was transferred to a clean Grainer polypropylene V-bottom 96 well plate (Cat. No. 651201) (10-12" Hg). 5 μl of the filtrate is diluted in 95 μl (F20) of the same buffer used for incubation in the plate containing the standard curve (Grayner, catalog number 651201). .
상기 화합물에 대한 표준 곡선을 DMSO(5000 μM) 중에서 인자 2 희석된 10 mM DMSO 모액으로부터 출발하여 DMSO 중에서 새로 제조하고 이어서 DMSO 중에서 19.5 μM까지 추가로 희석한다. 이어서 5000 μM로부터의 일련의 희석액 3 ㎕를 97 ㎕ 아세토나이트릴-완충제 혼합물(50/50)로 옮겼다. 최종 농도 범위는 2.5 내지 150 μM이다.Standard curves for these compounds are freshly prepared in DMSO starting from a 10 mM DMSO stock solution diluted by factor 2 in DMSO (5000 μM) and then further diluted to 19.5 μM in DMSO. Then 3 μl of serial dilution from 5000 μM was transferred to 97 μl acetonitrile-buffer mixture (50/50). The final concentration range is 2.5 to 150 μM.
상기 플레이트를 밀봉 매트(MA96RD-04S, www.kinesis.co.uk)로 밀봉하고 샘플을 실온에서 콴옵티파이즈(Quanoptimize)를 사용하여 최적화된 조건하에서 LC-MS(ZQ 1525, 워터스)상에서 측정하여 상기 분자의 적합한 질량을 측정한다.The plate was sealed with a sealing mat (MA96RD-04S, www.kinesis.co.uk) and samples were measured on LC-MS (ZQ 1525, Waters) under optimized conditions using Quanoptimize at room temperature. Determine the appropriate mass of the molecule.
상기 샘플을 1 ㎖/분의 유량으로 LC-MS 상에서 분석한다. 용매 A는 15 mM 암모니아이고 용매 B는 아세토나이트릴이다. 상기 샘플을 엑스브리지 C18 3.5 μM(2.1 x 30 ㎜) 컬럼(워터스) 상에서 양이온 분무 하에 실행시킨다. 용매 구배는 2 분의 총 실행 시간을 가지며 5% B에서부터 95% B까지의 범위이다.The sample is analyzed on LC-MS at a flow rate of 1 ml/min. Solvent A is 15 mM ammonia and solvent B is acetonitrile. The sample is run under positive ion spray on an Xbridge C 18 3.5 μM (2.1 x 30 mm) column (Waters). The solvent gradient ranged from 5% B to 95% B with a total run time of 2 minutes.
피크 면적을 매시링크스(Masslynx) 소프트웨어의 도움으로 분석하고 샘플의 피크 면적을 표준 곡선에 대해 플롯팅하여 화합물의 용해도를 획득한다.The peak area is analyzed with the help of Masslynx software and the peak area of the sample is plotted against a standard curve to obtain the solubility of the compound.
용해도 값을 μM 또는 ㎍/㎖로 보고한다.Solubility values are reported as μM or μg/mL.
7.2. 수성 용해도7.2. aqueous solubility
DMSO 중 10 mM 모액으로부터 출발하여, 일련의 상기 화합물의 희석물을 DMSO 중에서 제조한다. 상기 연속 희석물을 96 NUNC 맥시솔브 플레이트 F-바닥(카탈로그 번호 442404)으로 옮기고 실온에서 0.2 M 포스페이트 완충제 pH 7.4 또는 0.1 M 시트레이트 완충제 pH 3.0을 가한다.Starting from a 10 mM stock solution in DMSO, a series of dilutions of these compounds are prepared in DMSO. The serial dilutions are transferred to a 96 NUNC MaxiSolve Plate F-Bottom (catalog number 442404) and 0.2 M Phosphate Buffer pH 7.4 or 0.1 M Citrate Buffer pH 3.0 is added at room temperature.
최종 농도 범위는 5 회의 동등한 희석 단계에서 200 μM에서부터 2.5 μM이다. 최종 DMSO 농도는 2%를 초과하지 않는다. 200 μM 파이렌을 각각의 96 웰 플레이트의 구석 지점에 가하며 이를 현미경상의 Z-축 눈금화를 위한 기준 점으로서 제공한다.Final concentrations range from 200 μM to 2.5 μM in 5 equal dilution steps. The final DMSO concentration does not exceed 2%. 200 μM pyrene is applied to the corner points of each 96 well plate and serves as a reference point for Z-axis calibration on the microscope.
상기 분석 플레이트를 밀봉하고 230 rpm에서 진탕시키면서 37 ℃에서 1 시간 동안 배양한다. 이어서 상기 플레이트를 백색광 현미경 하에서 스캐닝하여, 농도당 침전물의 개별적인 그림을 제공한다. 상기 침전물을 분석하고 숫자로 전환시켜 그래프상에 플롯팅한다. 상기 화합물이 완전히 용해된 것으로 보이는 첫 번째 농도는 하기에 보고된 농도이나, 진정한 농도는 상기 농도와 보다 높은 하나의 희석 단계 사이의 어딘가에 놓일 것이다.The assay plate is sealed and incubated for 1 hour at 37° C. with shaking at 230 rpm. The plate is then scanned under a white light microscope, providing an individual picture of the precipitate per concentration. The precipitate is analyzed and converted to numbers and plotted on a graph. The first concentration at which the compound appears to be completely dissolved is the concentration reported below, but the true concentration will lie somewhere between that concentration and one higher dilution step.
상기 프로토콜에 따라 측정된 용해도값을 ㎍/㎖로 보고한다.Solubility values measured according to the above protocol are reported as μg/ml.
7.3. 혈장 단백질 결합(평형 투석)7.3. Plasma protein binding (equilibrium dialysis)
DMSO 중의 상기 화합물의 10 mM 모액을 DMSO에서 인자 5로 희석한다. 상기 용액을 새로 해동시킨 인간, 래트, 마우스 또는 개 혈장(바이오리클레메이션(BioReclamation) INC) 중에서 5 μM의 최종 농도 및 0.5%의 최종 DMSO 농도로 추가로 희석한다(PP-마스터블록 96 웰(그레이너, 카탈로그 번호 780285)에서 1094.5 ㎕ 혈장 중 5.5 ㎕).A 10 mM stock solution of the compound in DMSO is diluted by a factor of 5 in DMSO. The solution is further diluted to a final concentration of 5 μM and a final DMSO concentration of 0.5% in freshly thawed human, rat, mouse or dog plasma (BioReclamation INC) (PP-MasterBlock 96 wells (grey) You, 5.5 μl of 1094.5 μl plasma from catalog number 780285).
삽입물이 있는 피어스 레드 디바이스(Pierce Red Device)(써모 사이언티픽, 카탈로그 번호 89809)를 준비하고 완충제 챔버에 750 ㎕ PBS 및 혈장 챔버에 500 ㎕의 스파이크 혈장을 충전시킨다. 상기 플레이트를 230 rpm에서 진탕시키면서 37 ℃에서 4 시간 동안 배양한다. 배양후, 상기 두 챔버 모두의 120 ㎕를 96-웰 환저, PP 깊은 웰 플레이트(Nunc, 카탈로그 번호 278743) 중의 360 ㎕ 아세토나이트릴로 옮기고 알루미늄 호일 뚜껑으로 밀봉한다. 상기 샘플을 혼합하고 얼음상에 30 분간 둔다. 이어서 상기 플레이트를 1200 rcf에서 4 ℃에서 30 분 원심분리하고 상등액을 LC-MS상에서의 분석을 위해 96 v-바닥 PP 플레이트(그레이너, 651201)로 옮긴다.Prepare a Pierce Red Device (Thermo Scientific, catalog number 89809) with an insert and fill the buffer chamber with 750 μl PBS and the plasma chamber with 500 μl of spiked plasma. The plate is incubated for 4 hours at 37° C. with shaking at 230 rpm. After incubation, 120 μl of both chambers is transferred to 360 μl acetonitrile in a 96-well round-bottom, PP deep well plate (Nunc, catalog number 278743) and sealed with an aluminum foil lid. The sample is mixed and placed on ice for 30 minutes. The plate is then centrifuged 30 minutes at 4° C. at 1200 rcf and the supernatant is transferred to a 96 v-bottom PP plate (Grainer, 651201) for analysis on LC-MS.
상기 플레이트를 www.kinesis.co.kr의 밀봉 매트(MA96RD-04S)로 밀봉하고 샘플을 실온에서 콴옵티파이즈를 사용하여 최적화된 조건하에서 LC-MS(ZQ 1525, 워터스)상에서 측정하여 상기 분자의 적합한 질량을 측정한다.The plate was sealed with a sealing mat (MA96RD-04S) from www.kinesis.co.kr and the samples were measured on LC-MS (ZQ 1525, Waters) under optimized conditions using quant optimize at room temperature to determine the molecular Measure the appropriate mass.
상기 샘플을 1 ㎖/분의 유량으로 LC-MS 상에서 분석한다. 용매 A는 15 mM 암모니아이고 용매 B는 아세토나이트릴이다. 상기 샘플을 엑스브리지 C18 3.5 μM(2.1 x 30 ㎜) 컬럼(워터스) 상에서 양이온 분무 하에 실행시킨다. 용매 구배는 2 분의 총 실행 시간을 가지며 5% B에서부터 95% B까지의 범위이다.The sample is analyzed on LC-MS at a flow rate of 1 ml/min. Solvent A is 15 mM ammonia and solvent B is acetonitrile. The sample is run under positive ion spray on an Xbridge C 18 3.5 μM (2.1 x 30 mm) column (Waters). The solvent gradient ranged from 5% B to 95% B with a total run time of 2 minutes.
상기 완충제 챔버 및 혈장 챔버 중의 화합물로부터의 피크 면적은 100% 화합물인 것으로 간주된다. 혈장에 결합된 백분율이 상기 결과로부터 유도되며 이를 혈장에 결합된 백분율로서 보고한다.Peak areas from compounds in the buffer chamber and plasma chamber are considered to be 100% compound. The percentage bound to plasma is derived from these results and is reported as the percentage bound to plasma.
PBS 중 최종 시험 농도의 화합물의 용해도를 현미경에 의해 검사하여 침전의 관찰 여부를 나타낸다.The solubility of the compound at the final test concentration in PBS is examined microscopically to indicate whether a precipitate is observed.
7.4. 알데하이드 옥시다제 안정성7.4. Aldehyde oxidase stability
DMSO 중의 시험 화합물의 10 mM 모액을 먼저 물(5배)로 희석하여 50 μM 작용 용액을 수득한다. 알데하이드 옥시다제(하이드라라진)의 선택성 억제제를 5 mM 용액으로서 수중에서 제조한다.A 10 mM stock solution of the test compound in DMSO is first diluted with water (5-fold) to obtain a 50 μM working solution. A selective inhibitor of aldehyde oxidase (hydrarazine) is prepared in water as a 5 mM solution.
10 ㎕의 간 S9 현탁액(인간 및 래트, BD 바이오사이언스 젠테스트(Gentest), 20 ㎎/㎖)을 86 ㎕의 50 mM 칼륨 포스페이트 완충제, pH 7.4에 37 ℃에서 가하여 배양 혼합물을 제조한다. 2 ㎕의 5 mM 하이드라라진을 가하거나(선택성 억제제의 첨가와 함께 배양하는 경우) 또는 2 ㎕의 물(상기 억제제의 첨가 없이 배양하는 경우)을 가한다.An incubation mixture is prepared by adding 10 μl of liver S9 suspension (human and rat, BD Biosciences Gentest, 20 mg/ml) to 86 μl of 50 mM potassium phosphate buffer, pH 7.4 at 37°C. 2 μl of 5 mM hydrarazine is added (in the case of incubation with the addition of a selective inhibitor) or 2 μl of water (in the case of incubation without the addition of the inhibitor).
5분의 예온 후에, 2 ㎕의 50 μM 시험 화합물을 상기 배양 혼합물에 가하여 상기 반응을 개시시킨다. 0, 3, 6, 12, 18 및 30분의 배양 후에, 상기 반응(100 ㎕)을 분석 내부 표준으로서 10 ng/㎖의 와파린을 함유하는 1% 아세트산 혼합물과 함께, 300 ㎕의 MeCN:MeOH(2:1)로 종료시킨다.After 5 minutes of forewarming, the reaction is initiated by adding 2 μl of 50 μM test compound to the incubation mixture. After 0, 3, 6, 12, 18 and 30 minutes of incubation, the reaction (100 μl) was treated with 300 μl of MeCN:MeOH ( 2:1).
샘플들을 혼합하고, 원심분리시키고, 상등액을 LC-MS에 의해 분석한다.Samples are mixed, centrifuged and the supernatant analyzed by LC-MS.
시험 화합물은, S9에 의한 제거가 하이드라라진에 의해 억제되는 경우 알데하이드 옥시다제의 기질로서 간주된다. 시험 화합물의 종 특이성 제거는 또한 알데하이드 옥시다제에 의한 대사를 암시할 수 있다.A test compound is considered a substrate of aldehyde oxidase if clearance by S9 is inhibited by hydralazine. Removal of the species specificity of the test compound may also suggest metabolism by aldehyde oxidase.
프탈라진을 양성 대조용으로서 포함시킨다.Phthalazine is included as a positive control.
장비 응답(시험 화합물과 내부 표준의 피크 면적비)을, 남아있는 화합물의 비율을 측정하기 위해서 0 시점 샘플(100%로서 간주됨)에 기준한다. 상기 남아있는 시험 화합물의 비율의 플롯을 사용하여, 그래프패드 프리즘 소프트웨어로 상기 S9 배양에서의 반감기(T½) 및 고유 제거율을 측정한다.The instrument response (peak area ratio of test compound to internal standard) is referenced to the zero time point sample (considered as 100%) to determine the percentage of compound remaining. Using the plot of the percentage of test compound remaining, half-life (T ½ ) and specific clearance in the S9 culture are determined with GraphPad Prism software.
시험관내 고유 제거율(CLint(㎕/분/㎎))을 계산하기 위해서, 하기의 식을 사용한다:To calculate the intrinsic clearance in vitro (CL int (μl/min/mg)), the following formula is used:
CLint = (0.693/T½) x (배양 부피/단백질량) x 1000CLint = (0.693/T½) x (culture volume/protein amount) x 1000
7.5. 간 마이크로솜 안정성7.5. Liver microsomal stability
DMSO 중의 화합물의 10 mM 모액을 96 깊은 웰 플레이트(그레이너, 카탈로그 번호 780285)에서 105 mM 포스페이트 완충제 pH 7.4에서 6 μM로 희석하고 37 ℃에서 예온한다.10 mM stock solutions of compounds in DMSO are diluted to 6 μM in 105 mM phosphate buffer pH 7.4 in a 96 deep well plate (Grainer, catalog number 780285) and forewarmed at 37°C.
700 U/㎖의 글루코스-6-포스페이트-데하이드로게나제(G6PDH, 롯슈, 10127671001) 작용 모액을 105 mM 포스페이트 완충제 pH 7.4 중에서 인자 1:700으로 희석한다. 0.528 M MgCl2.6H2O(시그마, M2670), 0.528 M 글루코스-6-포스페이트(시그마, G-7879) 및 0.208 M NADP+(시그마, N-0505)를 함유하는 보조인자 혼합물을 105 mM 포스페이트 완충제, pH 7.4 중에서 인자 1:8로 희석한다.Glucose-6-phosphate-dehydrogenase (G6PDH, Roche, 10127671001) working stock solution at 700 U/mL is diluted by a factor of 1:700 in 105 mM phosphate buffer pH 7.4. A cofactor mixture containing 0.528 M MgCl 2 .6H 2 O (Sigma, M2670), 0.528 M glucose-6-phosphate (Sigma, G-7879) and 0.208 M NADP+ (Sigma, N-0505) was mixed with 105 mM phosphate buffer. , diluted by a factor of 1:8 in pH 7.4.
1 ㎎/㎖의 관심 종(인간, 마우스, 래트, 개...)의 간 마이크로솜(제노테크), 0.8 U/㎖ G6PDH 및 보조인자 혼합물(6.6 mM MgCl2, 6.6 mM 글루코스-6-포스페이트, 2.6 mM NADP+)를 함유하는 작용 용액을 제조한다. 상기 혼합물을 실온에서 15 분간 예비배양하나, 결코 20 분을 넘어서는 안 된다.Liver microsomes (Genotech) of the species of interest (human, mouse, rat, dog...) at 1 mg/ml, 0.8 U/ml G6PDH and cofactor mixture (6.6 mM MgCl2, 6.6 mM glucose-6-phosphate, A working solution containing 2.6 mM NADP+) is prepared. Pre-incubate the mixture at room temperature for 15 minutes, but never more than 20 minutes.
예비 배양후, 화합물 희석물 및 상기 마이크로솜을 함유하는 혼합물을 함께 동량으로 가하고 300 rpm에서 30 분간 배양한다. 0 분의 시점에 대해서 2 부피의 MeOH를 상기 화합물 희석물에 가한 후 상기 마이크로솜 혼합물을 가한다. 배양 중 최종 농도는 3 μM 화합물 또는 대조용 화합물, 0.5 ㎎/㎖ 마이크로솜, 0.4 U/㎖ G6PDH, 3.3 mM MgCl2, 3.3 mM 글루코스-6-포스페이트 및 1.3 mM NADP+이다.After pre-incubation, equal amounts of the compound dilution and the mixture containing the microsomes are added together and incubated at 300 rpm for 30 minutes. For the 0 min time point, 2 volumes of MeOH are added to the compound dilution followed by the microsomal mixture. Final concentrations in culture are 3 μM compound or control compound, 0.5 mg/mL microsomes, 0.4 U/mL G6PDH, 3.3 mM MgCl 2 , 3.3 mM glucose-6-phosphate and 1.3 mM NADP+.
배양 30 분 후에, 상기 반응을 2 부피의 MeOH로 정지시킨다.After 30 minutes of incubation, the reaction is stopped with 2 volumes of MeOH.
상기 두 시점 모두에서, 샘플들을 혼합하고, 원심분리하고, 상등액을 LC-MS/MS상에서의 분석을 위해 수확한다. 장비 반응(즉 피크 높이)을, 남은 화합물의 백분율을 측정하기 위해서 0 시점 샘플(100%로서)에 대해 참조한다. 표준 화합물 프로판올올 및 베라파밀을 상기 분석 설계에 포함시킨다.At both of these time points, samples are mixed, centrifuged, and the supernatant is harvested for analysis on LC-MS/MS. The instrument response (i.e. peak height) is referenced to the zero time point sample (as 100%) to determine the percentage of compound remaining. The standard compounds propanol and verapamil are included in the assay design.
마이크로솜 안정성에 대한 데이터를 30 분 후에 남은 화합물의 총량의 백분율로서 나타낸다.Data for microsomal stability are presented as a percentage of the total amount of compound remaining after 30 minutes.
7.6. 간세포 안정성7.6. Hepatocellular stability
간세포에서의 대사 제거율을 평가하기 위한 모델이 문헌[McGinnity et al., Drug Metabolism and Disposition 2008, 32, 11, 1247]에 개시되어 있다.A model for evaluating metabolic clearance in hepatocytes is disclosed in McGinnity et al., Drug Metabolism and Disposition 2008, 32, 11, 1247.
7.7. Caco2 침투성7.7. Caco2 permeability
양방향 Caco-2 분석을 하기에 개시하는 바와 같이 수행한다. Caco-2 세포를 유러피언 콜렉션 오브 셀 컬쳐(ECACC, cat 86010202)로부터 수득하고 이를 24-웰 트랜스웰 플레이트(피셔 TKT-545-020B)에서 21 일 세포 배양 후에 사용한다.A bidirectional Caco-2 assay is performed as described below. Caco-2 cells are obtained from the European Collection of Cell Cultures (ECACC, cat 86010202) and used after 21 days of cell culture in 24-well transwell plates (Fisher TKT-545-020B).
2 x 105 세포/웰을 DMEM + GlutaMAXI + 1% NEAA + 10% FBS(페이탈클론(FetalClone) II) + 1% Pen/Strep으로 이루어진 도말 배지에 시딩한다. 상기 배지를 매 2 내지 3일마다 교환한다.2 x 10 5 cells/well are seeded in a plating medium consisting of DMEM + GlutaMAXI + 1% NEAA + 10% FBS (FetalClone II) + 1% Pen/Strep. The medium is exchanged every 2 to 3 days.
시험 및 비교 화합물(프로프라놀올 및 로다민 123 또는 빈블라스틴, 모두 시그마로부터 구입하였다)을 25 mM HEPES(pH 7.4)를 함유하는 행크의 균형 염 용액 중에서 제조하고 이를 0.25%의 최종 DMSO 농도로, 10 μM의 농도에서 상기 트랜스웰 플레이트 조립체의 정상(125 ㎕) 또는 측저(600 ㎕) 챔버에 가한다.Test and comparative compounds (propranolol and rhodamine 123 or vinblastine, both purchased from Sigma) were prepared in Hank's balanced salt solution containing 25 mM HEPES, pH 7.4, to a final DMSO concentration of 0.25%. , at a concentration of 10 μM to the top (125 μL) or bottom (600 μL) chamber of the transwell plate assembly.
50 μM 루시퍼 옐로우(시그마)를 모든 웰 중의 공여 완충제에 가하여 루시퍼 옐로우 침투를 모니터함으로써 세포층의 통합성을 평가한다. 루시퍼 옐로우(LY)는 친지성 장벽을 자유롭게 침투할 수 없으므로, 높은 정도의 LY 운반은 상기 세포층의 불량한 통합성을 가리킨다.Integrity of the cell layer is assessed by adding 50 μM Lucifer Yellow (Sigma) to the donor buffer in all wells to monitor Lucifer Yellow penetration. As lucifer yellow (LY) cannot freely penetrate the lipophilic barrier, a high degree of LY transport indicates poor integrity of the cell layer.
150 rpm에서 궤도 진탕기에서 진탕시키면서 37 ℃에서 1 시간 배양 후에, 70 ㎕의 분액을 상기 정상(A) 및 기부(B) 챔버로부터 취하여 96 웰 플레이트 중에 분석 내부 표준(0.5 μM 카바마제핀)을 함유하는 100 ㎕의 50:50 아세토나이트릴:수 용액에 가한다.After 1 hour incubation at 37° C. with shaking on an orbital shaker at 150 rpm, an aliquot of 70 μl was taken from the normal (A) and basal (B) chambers and assay internal standard (0.5 μM carbamazepine) in a 96 well plate. 100 μl of a 50:50 acetonitrile:water solution containing
루시퍼 옐로우를 측저 및 정상쪽으로부터의 액체 150 ㎕를 함유하는 깨끗한 96 웰 플레이트 중의 스펙트라맥스 제미니(Spectramax Gemini) XS(Ex 426 nm 및 Em 538 nm)로 측정한다.Lucifer yellow is measured with a Spectramax Gemini XS (Ex 426 nm and Em 538 nm) in a clear 96 well plate containing 150 μl of liquid from the basolateral and apex sides.
상기 샘플들 중의 화합물의 농도를 고성능 액체-크로마토그래피/질량 분광학(LC-MS/MS)에 의해 측정한다.Concentrations of compounds in the samples are determined by high-performance liquid-chromatography/mass spectroscopy (LC-MS/MS).
겉보기 침투성(Papp) 값을 하기의 관계식으로부터 계산한다:The apparent permeability (Papp) value is calculated from the relationship:
Papp = [화합물]수용체 최종 x V수용체/([화합물]공여체 초기 x V공여체)/Tinc x V공여체/표면적 x 60 x 10-6 ㎝/sPapp = [compound] acceptor final x V acceptor /([compound] donor initial x V donor )/T inc x V donor /surface area x 60 x 10 -6 cm/s
V = 챔버 부피V = chamber volume
Tinc = 배양 시간.T inc = incubation time.
표면적 = 0.33 ㎤surface area = 0.33 cm 3
상기 정상 세포 표면으로부터 활성 유출의 지표로서 유출비를 PappB>A/Papp A>B의 비를 사용하여 계산한다.As an indicator of active efflux from the normal cell surface, the efflux ratio is calculated using the ratio P app B>A/P app A>B.
하기의 분석 허용 기준을 사용한다:The following analytical acceptance criteria are used:
프로프라놀올: Papp(A>B) 값 ≥ 20(x10-6 ㎝/s)Propranolol: P app (A>B) value ≥ 20 (x10 -6 cm/s)
로다민 123 또는 빈블라스틴: Papp(A>B) 값 < 5(x10-6 ㎝/s), 유출비 ≥ 5.Rhodamine 123 or vinblastine: P app (A>B) value < 5 (x10 -6 cm/s), efflux ratio ≥ 5.
루시퍼 옐로우 침투성: ≤ 100 ㎚/sLucifer Yellow Permeability: ≤ 100 nm/s
7.8. MDCKII-MDR1 침투성7.8. MDCKII-MDR1 permeability
MDCKII-MDR1 세포는 P-당단백질(P-gp)을 암호화하는, 인간 다중약물 내성(MDR1) 유전자를 과발현하는 마딘-달비 개 신장 상피세포이다. 세포를 네덜란드 암 연구소로부터 수득하며 24-웰 밀리셀(Millicell) 세포 배양 삽입물 플레이트(밀리포어, PSRP010R5)에서 3 내지 4일 세포 배양 후에 사용한다. 양방향 MDCKII-MDR1 침투성 분석을 하기에 개시하는 바와 같이 수행한다.MDCKII-MDR1 cells are Madin-Dalby canine kidney epithelial cells overexpressing the human multidrug resistance (MDR1) gene, encoding P-glycoprotein (P-gp). Cells are obtained from the Netherlands Cancer Institute and used after 3-4 days cell culture in 24-well Millicell cell culture insert plates (Millipore, PSRP010R5). A bidirectional MDCKII-MDR1 permeability assay is performed as described below.
3 x 105 세포/㎖(1.2 x 105 세포/웰)을 DMEM + 1% 글루타맥스(Glutamax)-100 + 1% 항생제/항진균제 + 10% FBS(바이오웨스트(Biowest), S1810)로 이루어지는 도말 배지에 시딩한다. 세포를 CO2 배양기에 3 내지 4일간 둔다. 상기 배지를 시딩 후 24시간째 및 실험 당일에 교환한다.3 x 10 5 cells/ml (1.2 x 10 5 cells/well) consisting of DMEM + 1% Glutamax-100 + 1% antibiotics/antimycotics + 10% FBS (Biowest, S1810) Seed on smear medium. The cells are placed in a CO 2 incubator for 3-4 days. The medium is changed 24 hours after seeding and on the day of the experiment.
시험 및 기준 화합물(암프레나비어 및 프로프라놀올)을 둘베코의 포스페이트 완충 염수(D-PBS, pH 7.4)에서 제조하고 상기 미니셀 세포 배양 삽입물 플레이트 조립체의 정상(400 ㎕) 또는 측저(800 ㎕) 챔버에 1%의 최종 DMSO 농도와 함께 10 μM(암프레나비어의 경우 0.5 μM)의 최종 농도로 가한다.Test and reference compounds (amprenavir and propranolol) were prepared in Dulbecco's phosphate buffered saline (D-PBS, pH 7.4) and top (400 μl) or bottom (800 μl) of the minicell cell culture insert plate assembly. Add to the chamber at a final concentration of 10 µM (0.5 µM for Amprenavir) with a final DMSO concentration of 1%.
100 μM 루시퍼 옐로우(시그마)를, 루시퍼 옐로우 침투를 모니터함으로써 상기 세포 단층의 통합성을 평가하기 위해 모든 공여 완충제 용액에 가한다. 루시퍼 옐로우는 세포사이 경로에 대한 형광 마커이며 상기 분석 동안 밀착연접 통합성을 확인하기 위해서 모든 단층에 내부 대조용으로서 사용된다.100 μM Lucifer Yellow (Sigma) is added to all donor buffer solutions to assess the integrity of the cell monolayer by monitoring Lucifer Yellow penetration. Lucifer Yellow is a fluorescent marker for intercellular pathways and is used as an internal control on all monolayers to confirm tight junction integrity during the assay.
궤도 진탕기에서 150 rpm으로 진탕시키면서 37 ℃에서 1시간 배양 후에, 75 ㎕의 분액을 상기 정상(A) 및 기저(B) 챔버 모두로부터 취하고 96 웰 플레이트 중에 분석학적 내부 표준(10 ng/㎖ 와파린)을 함유하는 225 ㎕ 아세토나이트릴:수 용액(2:1)에 가한다. 분액을 공여 용액으로부터 상기 실험의 초기에 또한 수행하여 초기(Co) 농도를 획득한다.After 1 hour incubation at 37 °C with shaking at 150 rpm on an orbital shaker, aliquots of 75 μl were taken from both the normal (A) and basal (B) chambers and placed in 96 well plates with analytical internal standard (10 ng/ml warfarin). ) in 225 μl acetonitrile:water solution (2:1). An aliquot is also run at the beginning of the experiment from the donor solution to obtain the initial (Co) concentration.
상기 샘플 중 화합물의 농도를 고성능 액체-크로마토그래피/질량 분광학(LC-MS/MS)에 의해 측정한다.The concentration of the compound in the sample is determined by high-performance liquid-chromatography/mass spectroscopy (LC-MS/MS).
루시퍼 옐로우를 모든 수령 웰들(측저 또는 정상부)로부터의 액체 150 ㎕를 함유하는 96 웰 플레이트에서 플루오로스캔 어센트 FL 써모 사이언티픽(Fluoroscan Ascent FL Thermo Scientific)(Ex 485 ㎚ 및 Em 530 ㎚)으로 측정한다.Lucifer Yellow is measured with a Fluoroscan Ascent FL Thermo Scientific (Ex 485 nm and Em 530 nm) in a 96 well plate containing 150 μl of liquid from all recipient wells (basal or top) do.
7.9. 설치류에서 약동학 연구7.9. Pharmacokinetic studies in rodents
7.9.1. 동물7.9.1. animal
스프래그-다우리 래트(수컷, 5 내지 6주된 것)를 장비에(Janvier)(프랑스소재)로부터 수득한다. 래트를 처리 전 적어도 7일 동안 환경에 순응시키고 12시간 명/암 주기(0700 - 1900)로 유지시킨다. 온도는 대략 22 ℃에서 유지시키고, 물과 먹이는 자유롭게 제공한다. 시험 화합물의 투여 2일 전에, 래트를 아이소플루란 마취하에서 경정맥 중에 카테터를 심는 수술을 수행하였다. 상기 수술 후에, 래트를 개별적으로 수용한다. 경구 투여 적어도 16시간 전 및 6시간 후에, 동물로부터 먹이를 빼앗는다. 물은 자유롭게 제공한다.Sprague-Dawley rats (male, 5-6 weeks old) are obtained from Janvier (France). Rats are acclimatized for at least 7 days prior to treatment and maintained on a 12 hour light/dark cycle (0700 - 1900). The temperature is maintained at approximately 22 °C, and water and food are provided ad libitum. Two days before the administration of the test compound, rats under isoflurane anesthesia underwent an operation to implant a catheter in the jugular vein. After the surgery, rats are individually housed. At least 16 hours before and 6 hours after oral administration, animals are deprived of food. Water is provided freely.
7.9.2. 약동학 연구7.9.2. Pharmacokinetic studies
화합물을 정맥내 경로의 경우 PEG200/생리식염수(60/40) 및 경구 경로의 경우 0.5% 메틸셀룰로스 및 10% 하이드록시프로필-β-사이클로덱스트린 pH 3 중에서 제형화한다. 시험 화합물을 단일 식도 영양으로서 5 ㎎/㎏(5 ㎖/㎏의 투여 부피)으로 경구 투여하고 미정맥을 통한 일시주사로서 1 ㎎/㎏(5 ㎖/㎏의 투여 부피)으로 정맥내 투여한다. 각 그룹은 3마리 래트로 이루어졌다. 혈액 샘플을 경정맥을 통해, 리튬-헤파린을 응고방지제로서 사용하여 하기의 시점에서 채혈한다: 0.05, 0.25, 0.5, 1, 3, 5 및 8시간(정맥내 경로) 및 0.25, 0.5, 1, 3, 5, 8 및 24시간(경구 경로). 한편으로, 혈액 샘플을 후-안와 공동에서 리튬-헤파린을 응고방지제로서 사용하여 하기의 시점에서 채혈한다: 0.25, 1, 3 및 6시간(경구 경로). 전혈 샘플을 5000 rpm에서 10분 동안 원심분리하고 생성되는 혈장 샘플을 분석시까지 -20 ℃에서 보관한다.Compounds are formulated in PEG200/normal saline (60/40) for the intravenous route and 0.5% methylcellulose and 10% hydroxypropyl-β-cyclodextrin pH 3 for the oral route. The test compound is administered orally at 5 mg/kg (dosage volume of 5 ml/kg) as a single esophageal feed and administered intravenously at 1 mg/kg (dosage volume of 5 ml/kg) as a bolus via the tail vein. Each group consisted of 3 rats. Blood samples are drawn via the jugular vein, using lithium-heparin as an anticoagulant, at the following time points: 0.05, 0.25, 0.5, 1, 3, 5 and 8 hours (intravenous route) and 0.25, 0.5, 1, 3 , 5, 8 and 24 hours (oral route). Alternatively, blood samples are taken in the postero-orbital cavity using lithium-heparin as an anticoagulant at the following time points: 0.25, 1, 3 and 6 hours (oral route). Whole blood samples are centrifuged at 5000 rpm for 10 minutes and the resulting plasma samples are stored at -20°C until analysis.
7.9.3. 혈장 중 화합물 수준의 정량분석7.9.3. Quantitative analysis of compound levels in plasma
각 시험 화합물의 혈장 농도를 LC-MS/MS 방법에 의해 측정하며, 여기에서 질량 분광계는 양의 전기분무 방식으로 작동한다.The plasma concentration of each test compound is determined by the LC-MS/MS method, in which the mass spectrometer operates in a positive electrospray mode.
7.9.4. 약동학적 매개변수의 측정7.9.4. Measurement of Pharmacokinetic Parameters
약동학적 매개변수를 윈놀린(등록상표)(파사이트(등록상표), 미국 소재)을 사용하여 계산한다.Pharmacokinetic parameters are calculated using Winnolin® (Farsight®, USA).
7.10. 7-일 래트 독성 연구7.10. 7-Day Rat Toxicity Study
시험 화합물에 대한 7-일 경구 독성 연구를 스프래그-다우리 수컷 래트에서 5 ㎖/㎏/일의 일정한 투여량-부피로 위관영양에 의해, 100, 300 및 500 ㎎/㎏/일의 1일 용량으로 수행하여 그의 독성 가능성 및 독성약동학을 평가한다.A 7-day oral toxicity study for the test compound was conducted in Sprague-Dawley male rats by gavage at a constant dose-volume of 5 ml/kg/day, daily at 100, 300 and 500 mg/kg/day. Doses are performed to evaluate their toxic potential and toxic pharmacokinetics.
시험 화합물들을 정제수 중의 30%(v/v) HPβCD에서 제형화한다. 각 그룹은 독성약동학을 위해 5마리의 주 수컷 래트뿐만 아니라 3마리의 위성 동물을 포함하였다. 네 번째 그룹에게 동일한 빈도, 투여량 부피로, 단지 수중의 30%(v/v) HPβCD만을, 동일한 투여 경로에 의해 제공하며, 상기 그룹은 비히클 대조군으로서 작용한다.Test compounds are formulated in 30% (v/v) HPpCD in purified water. Each group included 5 primary male rats as well as 3 satellite animals for toxico-pharmacokinetics. A fourth group is given only 30% (v/v) HPpCD in water at the same frequency, dose volume, by the same route of administration, and this group serves as the vehicle control group.
상기 연구의 목적은 부작용을 생성시키지 않는 최저 용량(관찰 가능한 부작용 수준이 없다 - NOAEL)을 측정하기 위한 것이다.The purpose of this study is to determine the lowest dose that does not produce side effects (no observable side effect level - NOAEL).
7.11. QT 연장을 위한 책임7.11. Responsibilities for QT prolongation
QT 연장의 가능성을 hERG 패치 클램프 분석에서 평가한다.The potential for QT prolongation is assessed in hERG patch clamp assays.
전-세포 패치-클램프 기록을 펄스 v8.77 소프트웨어(HEKA)에 의해 조절되는 EPC10 증폭기를 사용하여 수행한다. 일련의 저항은 전형적으로 10 MΩ 미만이며 60% 초과까지 보상되고, 기록은 누락 공제되지 않는다. 전극을 GC150TF 피펫 유리(하바드(Harvard))로부터 제조한다.Whole-cell patch-clamp recordings are performed using an EPC10 amplifier controlled by Pulse v8.77 software (HEKA). Series resistance is typically less than 10 MΩ and is compensated up to greater than 60%, and records are not missing deductions. Electrodes are made from GC150TF pipette glass (Harvard).
외부욕 용액은 135 mM NaCl, 5 mM KCl, 1.8 mM CaCl2, 5 mM 글루코스, 10 mM HEPES, pH 7.4를 함유한다.The external bath solution contains 135 mM NaCl, 5 mM KCl, 1.8 mM CaCl 2 , 5 mM glucose, 10 mM HEPES, pH 7.4.
내부 패치 피펫 용액은 100 mM K-글루코네이트, 20 mM KCl, 1 mM CaCl2, 1 mM MgCl2, 5 mM Na2ATP, 2 mM 글루타치온, 11 mM EGTA, 10 mM HEPES, pH 7.2를 함유한다.The internal patch pipette solution contains 100 mM K-gluconate, 20 mM KCl, 1 mM CaCl 2 , 1 mM MgCl 2 , 5 mM Na 2 ATP, 2 mM glutathione, 11 mM EGTA, 10 mM HEPES, pH 7.2.
약물을 바이올로직(Biologic) MEV-9/EVH-9 고속 관류 시스템을 사용하여 관류시킨다.Drugs are perfused using a Biologic MEV-9/EVH-9 high-speed perfusion system.
모든 기록을 hERG 채널을 안정하게 발현하는 HEK293 세포상에서 수행한다. 세포를 2개의 백금 막대(굿펠로우(Goodfellow))를 사용하는 기록 챔버에 고정된 12 ㎜ 둥근 커버슬립(저먼 글래스(German glass), 벨코(Bellco))상에서 배양한다. hERG 전류를 활성화 펄스를 사용하여 1000 m 동안 +40 mV로 발생시킨 다음 꼬리 전류 펄스로 2000 m 동안 -50 mV로 발생시키며, 유지 전위는 -80 mV이다. 펄스를 20초마다 적용하며 모든 실험을 실온에서 수행한다.All recordings are performed on HEK293 cells stably expressing the hERG channel. Cells are cultured on 12 mm round coverslips (German glass, Bellco) fixed in a recording chamber using two platinum rods (Goodfellow). The hERG current is generated at +40 mV for 1000 m using an activation pulse and then at -50 mV for 2000 m with a tail current pulse, with a holding potential of -80 mV. Pulses are applied every 20 seconds and all experiments are performed at room temperature.
최종 소견final opinion
당해 분야의 숙련가들은 상기 설명이 사실상 예시적이고 설명적이며, 본 발명과 그의 바람직한 실시태양들을 예시하고자 함을 알 것이다. 통상적인 실험을 통해서, 숙련가는 본 발명의 진의로부터 이탈됨 없이 수행될 수 있는 명백한 변형 및 변화들을 인식할 것이다. 첨부된 청구의 범위 내에 있는 모든 상기와 같은 변형들을 포함시키고자 한다. 따라서, 본 발명을 상기 설명에 의해서가 아닌, 하기의 청구의 범위 및 그의 등가물들에 의해서 한정하고자 한다.Those skilled in the art will appreciate that the above description is illustrative and explanatory in nature, and is intended to illustrate the present invention and its preferred embodiments. Through routine experimentation, the skilled artisan will recognize obvious modifications and variations that can be made without departing from the spirit of the invention. It is intended to embrace all such modifications as fall within the scope of the appended claims. Accordingly, it is intended that the present invention be limited not by the foregoing description, but by the following claims and equivalents thereof.
본 명세서에 인용된, 비제한적으로 특허 및 특허 출원을 포함한 모든 공보들은, 각각의 개별적인 공보가 마치 완전히 개시된 것처럼 본 발명에 참고로 인용됨을 구체적이고 개별적으로 가리키는 바와 같이 본 발명에 참고로 인용된다.All publications, including but not limited to patents and patent applications, cited herein are incorporated herein by reference as if each individual publication were specifically and individually indicated to be incorporated by reference as if fully disclosed.
다양한 화합물들의 차별적인 세포 침투 능력과 같은 인자들이 시험관 내 생화학에서 화합물의 활성과 세포 분석 간의 불일치에 기여할 수도 있음은 물론이다.Of course, factors such as the ability of different compounds to penetrate cells differently may contribute to discrepancies between the activity of compounds in in vitro biochemistry and cellular assays.
본 출원에 제공되고 나타낸 바와 같은 본 발명 화합물들의 화학 명칭들 중 적어도 일부는 상업적으로 입수할 수 있는 화학물질 명명 소프트웨어 프로그램의 사용에 의해 자동화된 토대로 발생될 수 있으며 독립적으로 입증되지는 않았다. 이러한 기능을 수행하는 전형적인 프로그램은 오픈 아이 소프트웨어 인코포레이티드(Open Eye Software, Inc.)에 의해 판매되는 렉시켐(Lexichem) 명명 도구 및 MDL, Inc.에 의해 판매되는 오토놈(Autonom) 소프트웨어 도구를 포함한다. 상기 나타낸 화학물질 명칭 및 도시된 구조가 상이한 경우에, 상기 도시된 구조는 억제될 것이다.At least some of the chemical names of the compounds of the invention as provided and shown herein can be generated on an automated basis by use of commercially available chemical naming software programs and have not been independently verified. Typical programs that perform these functions are the Lexichem naming tool sold by Open Eye Software, Inc. and the Autonom software tool sold by MDL, Inc. includes In case the chemical name shown above and the structure shown are different, the structure shown above will be suppressed.
참고문헌references
Bundgaard, H., 1985. Design of prodrugs. Elsevier.Bundgaard, H., 1985. Design of prodrugs. Elsevier.
Bush, K.A., Farmer, K.M., Walker, J.S., Kirkham, B.W., 2002. Reduction of joint inflammation and bone erosion in rat adjuvant arthritis by treatment with interleukin-17 receptor IgG1 Fc fusion protein.Bush, K.A., Farmer, K.M., Walker, J.S., Kirkham, B.W., 2002. Reduction of joint inflammation and bone erosion in rat adjuvant arthritis by treatment with interleukin-17 receptor IgG1 Fc fusion protein.
Arthritis Rheum. 46, 802.805. doi:10.1002/art.10173Arthritis Rheum. 46, 802.805. doi:10.1002/art.10173
Choy, E.H.S., Panayi, G.S., 2001. Cytokine Pathways and Joint Inflammation in Rheumatoid Arthritis. N.Engl. J. Med. 344, 907.916. doi:10.1056/NEJM200103223441207Choy, E.H.S., Panayi, G.S., 2001. Cytokine Pathways and Joint Inflammation in Rheumatoid Arthritis. N. Engl. J. Med. 344, 907.916. doi:10.1056/NEJM200103223441207
Clegg, D.O., Reda, D.J., Harris, C.L., Klein, M.A., O’Dell, J.R., Hooper, M.M., Bradley, J.D., Bingham,Clegg, D.O., Reda, D.J., Harris, C.L., Klein, M.A., O'Dell, J.R., Hooper, M.M., Bradley, J.D., Bingham,
C.O., Weisman, M.H., Jackson, C.G., Lane, N.E., Cush, J.J., Moreland, L.W., Schumacher, H.R.,C.O., Weisman, M.H., Jackson, C.G., Lane, N.E., Cush, J.J., Moreland, L.W., Schumacher, H.R.,
Oddis, C.V., Wolfe, F., Molitor, J.A., Yocum, D.E., Schnitzer, T.J., Furst, D.E., Sawitzke, A.D.,Oddis, C.V., Wolfe, F., Molitor, J.A., Yocum, D.E., Schnitzer, T.J., Furst, D.E., Sawitzke, A.D.,
Shi, H., Brandt, K.D., Moskowitz, R.W., Williams, H.J., 2006. Glucosamine, ChondroitinShi, H., Brandt, K.D., Moskowitz, R.W., Williams, H.J., 2006. Glucosamine, Chondroitin
Sulfate, and the Two in Combination for Painful Knee Osteoarthritis. N. Engl. J. Med. 354, 795.Sulfate, and the Two in Combination for Painful Knee Osteoarthritis. N. Engl. J. Med. 354, 795.
808. doi:10.1056/NEJMoa052771808.doi:10.1056/NEJMoa052771
Constantinescu, S.N., Girardot, M., Pecquet, C., 2008. Mining for JAK.STAT mutations in cancer.Constantinescu, S.N., Girardot, M., Pecquet, C., 2008. Mining for JAK.STAT mutations in cancer.
Trends Biochem. Sci. 33, 122.131. doi:10.1016/j.tibs.2007.12.002Trends Biochem. Sci. 33, 122.131. doi:10.1016/j.tibs.2007.12.002
Firestein, G.S., 2003. Evolving concepts of rheumatoid arthritis. Nature 423, 356.361.Firestein, G.S., 2003. Evolving concepts of rheumatoid arthritis. Nature 423, 356.361.
doi:10.1038/nature01661doi:10.1038/nature01661
Geron, I., Abrahamsson, A.E., Barroga, C.F., Kavalerchik, E., Gotlib, J., Hood, J.D., Durocher, J., Mak,Geron, I., Abrahamsson, A.E., Barroga, C.F., Kavalerchik, E., Gotlib, J., Hood, J.D., Durocher, J., Mak,
C.C., Noronha, G., Soll, R.M., Tefferi, A., Kaushansky, K., Jamieson, C.H.M., 2008. SelectiveC.C., Noronha, G., Soll, R.M., Tefferi, A., Kaushansky, K., Jamieson, C.H.M., 2008. Selective
Inhibition of JAK2-Driven Erythroid Differentiation of Polycythemia Vera Progenitors. CancerInhibition of JAK2-Driven Erythroid Differentiation of Polycythemia Vera Progenitors. Cancer
Cell 13, 321.330. doi:10.1016/j.ccr.2008.02.017Cell 13, 321.330. doi:10.1016/j.ccr.2008.02.017
Ip, W.K., Wong, C.K., Lam, C.W.K., 2006. Interleukin (IL)-4 and IL-13 up-regulate monocyteIp, W.K., Wong, C.K., Lam, C.W.K., 2006. Interleukin (IL)-4 and IL-13 up-regulate monocyte
chemoattractant protein-1 expression in human bronchial epithelial cells: involvement of p38chemoattractant protein-1 expression in human bronchial epithelial cells: involvement of p38
mitogen-activated protein kinase, extracellular signal-regulated kinase 1/2 and Janus kinase-2 but not c-Jun NH2-terminal kinase 1/2 signalling pathways. Clin. Exp. Immunol. 145, 162.172.mitogen-activated protein kinase, extracellular signal-regulated kinase 1/2 and Janus kinase-2 but not c-Jun NH2-terminal kinase 1/2 signaling pathways. Clin. Exp. Immunol. 145, 162.172.
doi:10.1111/j.1365-2249.2006.03085.xdoi:10.1111/j.1365-2249.2006.03085.x
Jou, I.-M., Shiau, A.-L., Chen, S.-Y., Wang, C.-R., Shieh, D.-B., Tsai, C.-S., Wu, C.-L., 2005.Jou, I.-M., Shiau, A.-L., Chen, S.-Y., Wang, C.-R., Shieh, D.-B., Tsai, C.-S., Wu, C.-L., 2005.
Thrombospondin 1 as an effective gene therapeutic strategy in collagen-induced arthritis.Thrombospondin 1 as an effective gene therapeutic strategy in collagen-induced arthritis.
Arthritis Rheum. 52, 339.344. doi:10.1002/art.20746Arthritis Rheum. 52, 339.344. doi:10.1002/art.20746
Kan, Z., Zheng, H., Liu, X., Li, S., Barber, T.D., Gong, Z., Gao, H., Hao, K., Willard, M.D., Xu, J.,Kan, Z., Zheng, H., Liu, X., Li, S., Barber, T.D., Gong, Z., Gao, H., Hao, K., Willard, M.D., Xu, J.,
Hauptschein, R., Rejto, P.A., Fernandez, J., Wang, G., Zhang, Q., Wang, B., Chen, R., Wang, J.,Hauptschein, R., Rejto, P.A., Fernandez, J., Wang, G., Zhang, Q., Wang, B., Chen, R., Wang, J.,
Lee, N.P., Zhou, W., Lin, Z., Peng, Z., Yi, K., Chen, S., Li, L., Fan, X., Yang, J., Ye, R., Ju, J.,Lee, N.P., Zhou, W., Lin, Z., Peng, Z., Yi, K., Chen, S., Li, L., Fan, X., Yang, J., Ye, R., Ju , J.,
Wang, K., Estrella, H., Deng, S., Wei, P., Qiu, M., Wulur, I.H., Liu, J., Ehsani, M.E., Zhang, C.,Wang, K., Estrella, H., Deng, S., Wei, P., Qiu, M., Wulur, I.H., Liu, J., Ehsani, M.E., Zhang, C.,
Loboda, A., Sung, W.K., Aggarwal, A., Poon, R.T., Fan, S.T., Wang, J., Hardwick, J., Reinhard,Loboda, A., Sung, W.K., Aggarwal, A., Poon, R.T., Fan, S.T., Wang, J., Hardwick, J., Reinhard,
C., Dai, H., Li, Y., Luk, J.M., Mao, M., 2013. Whole-genome sequencing identifies recurrentC., Dai, H., Li, Y., Luk, J.M., Mao, M., 2013. Whole-genome sequencing identifies recurrent
mutations in hepatocellular carcinoma. Genome Res. 23, 1422.1433. doi:10.1101/gr.154492.113mutations in hepatocellular carcinoma. Genome Res. 23, 1422.1433. doi:10.1101/gr.154492.113
Khachigian, L.M., 2006. Collagen antibody-induced arthritis. Nat. Protoc. 1, 2512.2516.Khachigian, L.M., 2006. Collagen antibody-induced arthritis. Nat. Protoc. 1, 2512.2516.
doi:10.1038/nprot.2006.393doi:10.1038/nprot.2006.393
Kopf, M., Bachmann, M.F., Marsland, B.J., 2010. Averting inflammation by targeting the cytokineKopf, M., Bachmann, M.F., Marsland, B.J., 2010. Averting inflammation by targeting the cytokine
environment. Nat. Rev. Drug Discov. 9, 703.718. doi:10.1038/nrd2805environment. Nat. Rev. Drug Discov. 9, 703.718. doi:10.1038/nrd2805
Kudlacz, E., Conklyn, M., Andresen, C., Whitney-Pickett, C., Changelian, P., 2008. The JAK-3 inhibitorKudlacz, E., Conklyn, M., Andresen, C., Whitney-Pickett, C., Changelian, P., 2008. The JAK-3 inhibitor
CP-690550 is a potent anti-inflammatory agent in a murine model of pulmonary eosinophilia.CP-690550 is a potent anti-inflammatory agent in a murine model of pulmonary eosinophilia.
Eur. J. Pharmacol. 582, 154.161. doi:10.1016/j.ejphar.2007.12.024Eur. J. Pharmacol. 582, 154.161. doi:10.1016/j.ejphar.2007.12.024
Lee, D.M., Weinblatt, M.E., 2001. Rheumatoid arthritis. The Lancet 358, 903.911. doi:10.1016/S0140-Lee, D.M., Weinblatt, M.E., 2001. Rheumatoid arthritis. The Lancet 358, 903.911. doi:10.1016/S0140-
6736(01)06075-56736(01)06075-5
Legendre, F., Dudhia, J., Pujol, J.-P., Bogdanowicz, P., 2003. JAK/STAT but Not ERK1/ERK2 PathwayLegendre, F., Dudhia, J., Pujol, J.-P., Bogdanowicz, P., 2003. JAK/STAT but Not ERK1/ERK2 Pathway
Mediates Interleukin (IL)-6/Soluble IL-6R Down-regulation of Type II Collagen, Aggrecan Core,Mediates Interleukin (IL)-6/Soluble IL-6R Down-regulation of Type II Collagen, Aggrecan Core,
and Link Protein Transcription in Articular Chondrocytes ASSOCIATION WITH A DOWNREGULATIONand Link Protein Transcription in Articular Chondrocytes ASSOCIATION WITH A DOWNREGULATION
OF SOX9 EXPRESSION. J. Biol. Chem. 278, 2903.2912.OF SOX9 EXPRESSION. J. Biol. Chem. 278, 2903.2912.
doi:10.1074/jbc.M110773200doi:10.1074/jbc.M110773200
Levy, D.E., Loomis, C.A., 2007. STAT3 Signaling and the Hyper-IgE Syndrome. N. Engl. J. Med. 357,Levy, D.E., Loomis, C.A., 2007. STAT3 Signaling and the Hyper-IgE Syndrome. N. Engl. J. Med. 357;
1655.1658. doi:10.1056/NEJMe0781971655.1658. doi:10.1056/NEJMe078197
Lin, H.-S., Hu, C.-Y., Chan, H.-Y., Liew, Y.-Y., Huang, H.-P., Lepescheux, L., Bastianelli, E., Baron, R.,Lin, H.-S., Hu, C.-Y., Chan, H.-Y., Liew, Y.-Y., Huang, H.-P., Lepescheux, L., Bastianelli, E., Baron, R.,
Rawadi, G., Clement-Lacroix, P., 2007. Anti-rheumatic activities of histone deacetylase (HDAC)Rawadi, G., Clement-Lacroix, P., 2007. Anti-rheumatic activities of histone deacetylase (HDAC)
inhibitors in vivo in collagen-induced arthritis in rodents. Br. J. Pharmacol. 150, 862.872.inhibitors in vivo in collagen-induced arthritis in rodents. Br. J. Pharmacol. 150, 862.872.
doi:10.1038/sj.bjp.0707165doi:10.1038/sj.bjp.0707165
Li, W.Q., Dehnade, F., Zafarullah, M., 2001. Oncostatin M-Induced Matrix Metalloproteinase and TissueLi, W.Q., Dehnade, F., Zafarullah, M., 2001. Oncostatin M-Induced Matrix Metalloproteinase and Tissue
Inhibitor of Metalloproteinase-3 Genes Expression in Chondrocytes Requires Janus Kinase/STATInhibitor of Metalloproteinase-3 Genes Expression in Chondrocytes Requires Janus Kinase/STAT
Signaling Pathway. J. Immunol. 166, 3491.3498.Signaling Pathways. J. Immunol. 166, 3491.3498.
Menet, C.J.M., Schmitt, B.A., Geney, R.J.J., Doyle, K.J., Peach, J., Palmer, N.J., Jones, G.P., Hardy, D.,Menet, C.J.M., Schmitt, B.A., Geney, R.J.J., Doyle, K.J., Peach, J., Palmer, N.J., Jones, G.P., Hardy, D.,
Duffy, J.E.S., 2013. Imidazo [4, 5 -C] Pyridine Derivatives Useful for the Treatment ofDuffy, J.E.S., 2013. Imidazo [4, 5-C] Pyridine Derivatives Useful for the Treatment of
Degenerative and Inflammatory Diseases. WO2013117645 (A1).Degenerative and Inflammatory Diseases. WO2013117645 (A1).
Mullighan, C.G., Zhang, J., Harvey, R.C., Collins-Underwood, J.R., Schulman, B.A., Phillips, L.A.,Mullighan, C.G., Zhang, J., Harvey, R.C., Collins-Underwood, J.R., Schulman, B.A., Phillips, L.A.,
Tasian, S.K., Loh, M.L., Su, X., Liu, W., Devidas, M., Atlas, S.R., Chen, I.-M., Clifford, R.J.,Tasian, S.K., Loh, M.L., Su, X., Liu, W., Devidas, M., Atlas, S.R., Chen, I.-M., Clifford, R.J.,
Gerhard, D.S., Carroll, W.L., Reaman, G.H., Smith, M., Downing, J.R., Hunger, S.P., Willman,Gerhard, D.S., Carroll, W.L., Reaman, G.H., Smith, M., Downing, J.R., Hunger, S.P., Willman,
C.L., 2009. JAK mutations in high-risk childhood acute lymphoblastic leukemia. Proc. Natl.C.L., 2009. JAK mutations in high-risk childhood acute lymphoblastic leukemia. Proc. Natl.
Acad. Sci. U. S. A. 106, 9414.9418. doi:10.1073/pnas.0811761106Acad. Sci. U. S. A. 106, 9414.9418. doi:10.1073/pnas.0811761106
Naka, T., Nishimoto, N., Kishimoto, T., 2002. The paradigm of IL-6: from basic science to medicine.Naka, T., Nishimoto, N., Kishimoto, T., 2002. The paradigm of IL-6: from basic science to medicine.
Arthritis Res. 4, S233.S242. doi:10.1186/ar565Arthritis Res. 4, S233. S242. doi:10.1186/ar565
Nials, A.T., Uddin, S., 2008. Mouse models of allergic asthma: acute and chronic allergen challenge. Dis.Nials, A.T., Uddin, S., 2008. Mouse models of allergic asthma: acute and chronic allergen challenge. Dis.
Model. Mech. 1, 213.220. doi:10.1242/dmm.000323Model. Mech. 1, 213.220. doi:10.1242/dmm.000323
Nishida, K., Komiyama, T., Miyazawa, S., Shen, Z.-N., Furumatsu, T., Doi, H., Yoshida, A., Yamana, J.,Nishida, K., Komiyama, T., Miyazawa, S., Shen, Z.-N., Furumatsu, T., Doi, H., Yoshida, A., Yamana, J.,
Yamamura, M., Ninomiya, Y., Inoue, H., Asahara, H., 2004. Histone deacetylase inhibitorYamamura, M., Ninomiya, Y., Inoue, H., Asahara, H., 2004. Histone deacetylase inhibitor
suppression of autoantibody-mediated arthritis in mice via regulation of p16INK4a andSuppression of autoantibody-mediated arthritis in mice via regulation of p16INK4a and
p21WAF1/Cip1 expression. Arthritis Rheum. 50, 3365.3376. doi:10.1002/art.20709p21WAF1/Cip1 expression. Arthritis Rheum. 50, 3365.3376. doi:10.1002/art.20709
O’Dell, J.R., 2004. Therapeutic Strategies for Rheumatoid Arthritis. N. Engl. J. Med. 350, 2591.2602.O'Dell, J.R., 2004. Therapeutic Strategies for Rheumatoid Arthritis. N. Engl. J. Med. 350, 2591.2602.
doi:10.1056/NEJMra040226doi:10.1056/NEJMra040226
Osaki, M., Tan, L., Choy, B.K., Yoshida, Y., Cheah, K.S.E., Auron, P.E., Goldring, M.B., 2003. TheOsaki, M., Tan, L., Choy, B.K., Yoshida, Y., Cheah, K.S.E., Auron, P.E., Goldring, M.B., 2003. The
TATA-containing core promoter of the type II collagen gene (COL2A1) is the target ofTATA-containing core promoter of the type II collagen gene (COL2A1) is the target of
interferon-gamma-mediated inhibition in human chondrocytes: requirement for Stat1 alpha, Jak1interferon-gamma-mediated inhibition in human chondrocytes: requirement for Stat1 alpha, Jak1
and Jak2. Biochem. J. 369, 103.115. doi:10.1042/BJ20020928and Jak2. Biochem. J. 369, 103.115. doi:10.1042/BJ20020928
O’Shea, J.J., Pesu, M., Borie, D.C., Changelian, P.S., 2004. A new modality for immunosuppression:O'Shea, J.J., Pesu, M., Borie, D.C., Changelian, P.S., 2004. A new modality for immunosuppression:
targeting the JAK/STAT pathway. Nat. Rev. Drug Discov. 3, 555.564. doi:10.1038/nrd1441targeting the JAK/STAT pathway. Nat. Rev. Drug Discov. 3, 555.564. doi:10.1038/nrd1441
Oste, L., Salmon, P., Dixon, G., van Rompaey, L., 2007. A high throughput method of measuring boneOste, L., Salmon, P., Dixon, G., van Rompaey, L., 2007. A high throughput method of measuring bone
architectural disturbance in a murine CIA model by micro-CT morphometry.architectural disturbance in a murine CIA model by micro-CT morphometry.
O’Sullivan, L.A., Liongue, C., Lewis, R.S., Stephenson, S.E.M., Ward, A.C., 2007. Cytokine receptorO'Sullivan, L.A., Liongue, C., Lewis, R.S., Stephenson, S.E.M., Ward, A.C., 2007. Cytokine receptor
signaling through the Jak.Stat.Socs pathway in disease. Mol. Immunol. 44, 2497.2506.signaling through the Jak.Stat.Socs pathway in disease. Mol. Immunol. 44, 2497.2506.
doi:10.1016/j.molimm.2006.11.025doi:10.1016/j.molimm.2006.11.025
Otero, M., Lago, R., Lago, F., Reino, J.J.G., Gualillo, O., 2005. Signalling pathway involved in nitricOtero, M., Lago, R., Lago, F., Reino, J.J.G., Gualillo, O., 2005. Signaling pathway involved in nitric
oxide synthase type II activation in chondrocytes: synergistic effect of leptin with interleukin-1.oxide synthase type II activation in chondrocytes: synergistic effect of leptin with interleukin-1.
Arthritis Res. Ther. 7, R581.R591. doi:10.1186/ar1708Arthritis Res. Ther. 7, R581. R591. doi:10.1186/ar1708
Pernis, A.B., Rothman, P.B., 2002. JAK-STAT signaling in asthma. J. Clin. Invest. 109, 1279.1283.Pernis, A.B., Rothman, P.B., 2002. JAK-STAT signaling in asthma. J. Clin. Invest. 109, 1279.1283.
doi:10.1172/JCI15786doi:10.1172/JCI15786
Rall, L.C., Roubenoff, R., 2004. Rheumatoid cachexia: metabolic abnormalities, mechanisms andRall, L.C., Roubenoff, R., 2004. Rheumatoid cachexia: metabolic abnormalities, mechanisms and
interventions. Rheumatology 43, 1219.1223. doi:10.1093/rheumatology/keh321interventions. Rheumatology 43, 1219.1223. doi:10.1093/rheumatology/keh321
Rodig, S.J., Meraz, M.A., White, J.M., Lampe, P.A., Riley, J.K., Arthur, C.D., King, K.L., Sheehan,Rodig, S.J., Meraz, M.A., White, J.M., Lampe, P.A., Riley, J.K., Arthur, C.D., King, K.L., Sheehan,
K.C.F., Yin, L., Pennica, D., Johnson Jr., E.M., Schreiber, R.D., 1998. Disruption of the Jak1K.C.F., Yin, L., Pennica, D., Johnson Jr., E.M., Schreiber, R.D., 1998. Disruption of the Jak1
Gene Demonstrates Obligatory and Nonredundant Roles of the Jaks in Cytokine-InducedGene Demonstrates Obligatory and Nonredundant Roles of the Jaks in Cytokine-Induced
Biologic Responses. Cell 93, 373.383. doi:10.1016/S0092-8674(00)81166-6Biologic Responses. Cell 93, 373.383. doi:10.1016/S0092-8674(00)81166-6
Salvemini, D., Mazzon, E., Dugo, L., Serraino, I., De Sarro, A., Caputi, A.P., Cuzzocrea, S., 2001.Salvemini, D., Mazzon, E., Dugo, L., Serraino, I., De Sarro, A., Caputi, A.P., Cuzzocrea, S., 2001.
Amelioration of joint disease in a rat model of collagen-induced arthritis by M40403, aAmelioration of joint disease in a rat model of collagen-induced arthritis by M40403, a
superoxide dismutase mimetic. Arthritis Rheum. 44, 2909.2921.superoxide dismutase mimetic. Arthritis Rheum. 44, 2909.2921.
Shelton, D.L., Zeller, J., Ho, W.-H., Pons, J., Rosenthal, A., 2005. Nerve growth factor mediatesShelton, D.L., Zeller, J., Ho, W.-H., Pons, J., Rosenthal, A., 2005. Nerve growth factor mediates
hyperalgesia and cachexia in auto-immune arthritis. Pain 116, 8.16.hyperalgesia and cachexia in auto-immune arthritis. Pain 116, 8.16.
doi:10.1016/j.pain.2005.03.039doi:10.1016/j.pain.2005.03.039
Sims, N.A., Green, J.R., Glatt, M., Schlict, S., Martin, T.J., Gillespie, M.T., Romas, E., 2004. TargetingSims, N.A., Green, J.R., Glatt, M., Schlict, S., Martin, T.J., Gillespie, M.T., Romas, E., 2004. Targeting
osteoclasts with zoledronic acid prevents bone destruction in collagen-induced arthritis. Arthritisosteoclasts with zoledronic acid prevents bone destruction in collagen-induced arthritis. Arthritis
Rheum. 50, 2338.2346. doi:10.1002/art.20382Rheum. 50, 2338.2346. doi:10.1002/art.20382
Smolen, J.S., Steiner, G., 2003. Therapeutic strategies for rheumatoid arthritis. Nat. Rev. Drug Discov. 2,Smolen, J.S., Steiner, G., 2003. Therapeutic strategies for rheumatoid arthritis. Nat. Rev. Drug Discov. 2,
473.488. doi:10.1038/nrd1109473.488. doi:10.1038/nrd1109
Staerk, J., Kallin, A., Demoulin, J.-B., Vainchenker, W., Constantinescu, S.N., 2005. JAK1 and Tyk2Staerk, J., Kallin, A., Demoulin, J.-B., Vainchenker, W., Constantinescu, S.N., 2005. JAK1 and Tyk2
Activation by the Homologous Polycythemia Vera JAK2 V617F Mutation CROSS-TALK WITHActivation by the Homologous Polycythemia Vera JAK2 V617F Mutation CROSS-TALK WITH
IGF1 RECEPTOR. J. Biol. Chem. 280, 41893.41899. doi:10.1074/jbc.C500358200IGF1 RECEPTOR. J. Biol. Chem. 280, 41893.41899. doi:10.1074/jbc.C500358200
Tam, L., McGlynn, L.M., Traynor, P., Mukherjee, R., Bartlett, J.M.S., Edwards, J., 2007. ExpressionTam, L., McGlynn, L.M., Traynor, P., Mukherjee, R., Bartlett, J.M.S., Edwards, J., 2007. Expression
levels of the JAK/STAT pathway in the transition from hormone-sensitive to hormone-refractorylevels of the JAK/STAT pathway in the transition from hormone-sensitive to hormone-refractory
prostate cancer. Br. J. Cancer 97, 378.383. doi:10.1038/sj.bjc.6603871prostate cancer. Br. J. Cancer 97, 378.383. doi:10.1038/sj.bjc.6603871
Vainchenker, W., Dusa, A., Constantinescu, S.N., 2008. JAKs in pathology: Role of Janus kinases inVainchenker, W., Dusa, A., Constantinescu, S.N., 2008. JAKs in pathology: Role of Janus kinases in
hematopoietic malignancies and immunodeficiencies. Semin. Cell Dev. Biol. 19, 385.393.hematopoietic malignancies and immunodeficiencies. Semin. Cell Dev. Biol. 19, 385.393.
doi:10.1016/j.semcdb.2008.07.002doi:10.1016/j.semcdb.2008.07.002
Vandeghinste, N., Tomme, P., Michiels, F., Ma, L., Mille-Baker, B., Van, E., 2005. Methods and MeansVandeghinste, N., Tomme, P., Michiels, F., Ma, L., Mille-Baker, B., Van, E., 2005. Methods and Means
for Treatment of Osteoarthritis. WO2005124342 (A2).for Treatment of Osteoarthritis. WO2005124342 (A2).
Walsmith, J., Abad, L., Kehayias, J., Roubenoff, R., 2004. Tumor necrosis factor-alpha production isWalsmith, J., Abad, L., Kehayias, J., Roubenoff, R., 2004. Tumor necrosis factor-alpha production is
associated with less body cell mass in women with rheumatoid arthritis. J. Rheumatol. 31, 23.29.associated with less body cell mass in women with rheumatoid arthritis. J. Rheumatol. 31, 23.29.
Wernig, G., Kharas, M.G., Okabe, R., Moore, S.A., Leeman, D.S., Cullen, D.E., Gozo, M., McDowell,Wernig, G., Kharas, M.G., Okabe, R., Moore, S.A., Leeman, D.S., Cullen, D.E., Gozo, M., McDowell,
E.P., Levine, R.L., Doukas, J., Mak, C.C., Noronha, G., Martin, M., Ko, Y.D., Lee, B.H., Soll,E.P., Levine, R.L., Doukas, J., Mak, C.C., Noronha, G., Martin, M., Ko, Y.D., Lee, B.H., Soll,
R.M., Tefferi, A., Hood, J.D., Gilliland, D.G., 2008. Efficacy of TG101348, a selective JAK2R.M., Tefferi, A., Hood, J.D., Gilliland, D.G., 2008. Efficacy of TG101348, a selective JAK2
inhibitor, in treatment of a murine model of JAK2V617F-induced polycythemia vera. Cancer Cellinhibitor, in treatment of a murine model of JAK2V617F-induced polycythemia vera. Cancer Cell
13, 311.320. doi:10.1016/j.ccr.2008.02.00913, 311.320. doi:10.1016/j.ccr.2008.02.009
Wieland, H.A., Michaelis, M., Kirschbaum, B.J., Rudolphi, K.A., 2005. Osteoarthritis - an untreatableWieland, H.A., Michaelis, M., Kirschbaum, B.J., Rudolphi, K.A., 2005. Osteoarthritis - an untreatable
disease Nat. Rev. Drug Discov. 4, 331.344. doi:10.1038/nrd1693disease Nat. Rev. Drug Discov. 4, 331.344. doi:10.1038/nrd1693
Wirtz, S., Neurath, M.F., 2007. Mouse models of inflammatory bowel disease. Adv. Drug Deliv. Rev. 59,Wirtz, S., Neurath, M.F., 2007. Mouse models of inflammatory bowel disease. Adv. Drug Deliv. Rev. 59,
1073.1083. doi:10.1016/j.addr.2007.07.0031073.1083. doi:10.1016/j.addr.2007.07.003
Xiang, Z., Zhao, Y., Mitaksov, V., Fremont, D.H., Kasai, Y., Molitoris, A., Ries, R.E., Miner, T.L.,Xiang, Z., Zhao, Y., Mitaksov, V., Fremont, D.H., Kasai, Y., Molitoris, A., Ries, R.E., Miner, T.L.,
McLellan, M.D., DiPersio, J.F., Link, D.C., Payton, J.E., Graubert, T.A., Watson, M., Shannon,McLellan, M.D., DiPersio, J.F., Link, D.C., Payton, J.E., Graubert, T.A., Watson, M., Shannon,
W., Heath, S.E., Nagarajan, R., Mardis, E.R., Wilson, R.K., Ley, T.J., Tomasson, M.H., 2008.W., Heath, S.E., Nagarajan, R., Mardis, E.R., Wilson, R.K., Ley, T.J., Tomasson, M.H., 2008.
Identification of somatic JAK1 mutations in patients with acute myeloid leukemia. Blood 111,Identification of somatic JAK1 mutations in patients with acute myeloid leukemia. blood 111,
4809.4812. doi:10.1182/blood-2007-05-0903084809.4812. doi:10.1182/blood-2007-05-090308
Zenatti, P.P., Ribeiro, D., Li, W., Zuurbier, L., Silva, M.C., Paganin, M., Tritapoe, J., Hixon, J.A.,Zenatti, P.P., Ribeiro, D., Li, W., Zuurbier, L., Silva, M.C., Paganin, M., Tritapoe, J., Hixon, J.A.,
Silveira, A.B., Cardoso, B.A., Sarmento, L.M., Correia, N., Toribio, M.L., Kobarg, J.,Silveira, A.B., Cardoso, B.A., Sarmento, L.M., Correia, N., Toribio, M.L., Kobarg, J.,
Horstmann, M., Pieters, R., Brandalise, S.R., Ferrando, A.A., Meijerink, J.P., Durum, S.K.,Horstmann, M., Pieters, R., Brandalise, S.R., Ferrando, A.A., Meijerink, J.P., Durum, S.K.,
Yunes, J.A., Barata, J.T., 2011. Oncogenic IL7R gain-of-function mutations in childhood T-cellYunes, J.A., Barata, J.T., 2011. Oncogenic IL7R gain-of-function mutations in childhood T-cell
acute lymphoblastic leukemia. Nat. Genet. 43, 932.939. doi:10.1038/ng.924Acute lymphoblastic leukemia. Nat. Genet. 43, 932.939. doi:10.1038/ng.924
Claims (16)
화학식 I
상기 식에서,
R1은 H 또는 Me이고;
L1은 -NR2-; -O- 또는 -CH2-이고;
Cy는 페닐, 피리딘 또는 다이하이드로벤조다이옥신이고;
R2는 H 또는 C1-4 알킬이고;
R3은 H, 할로, 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C1-4 알킬, 또는 하나 이상의 할로로 임의로 치환된 C1-4 알콕시이고;
R4는 H 또는 할로이고;
R5는 -CN, 할로이거나, 또는 -L2-R6이고;
-L2는 존재하지 않거나, 또는 -C(=O)-, -C(=O)NR7-, -NR7C(=O)-, -SO2-, -SO2NR7-, 또는 -NR7SO2-이고;
R6은 H, 또는 하나 이상의 독립적으로 선택된 R8 기로 임의로 치환된 C1-6 알킬이고;
R7은 H 또는 C1-4 알킬이고;
R8은 OH, CN, 할로 또는 C1-4 알콕시이고;
La는 존재하지 않거나, 또는 -C(=O)-, -C(=O)O- 또는 -C(=O)NH-이고;
Ra는
- H,
- 하나 이상의 독립적으로 선택된 Rb로 임의로 치환된 C1-4 알킬,
- 하나 이상의 독립적으로 선택된 Rc로 임의로 치환된 C3-7 모노사이클릭 사이클로알킬, 또는
- O, N 및 S 중에서 독립적으로 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 포함하는 4 내지 7원 모노사이클릭 헤테로사이클로알킬, 또는
- O, N 및 S 중에서 독립적으로 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 포함하는 5 내지 6원 모노사이클릭 헤테로아릴이고;
Rb는
- 할로,
- CN,
- OH,
- C1-4 알콕시,
- C3-7 사이클로알킬,
- O, N 및 S 중에서 독립적으로 선택된 하나 이상의 헤테로원자를 포함하는 4 내지 7원 모노사이클릭 헤테로사이클로알킬(상기 헤테로사이클로알킬은 하나 이상의 독립적으로 선택된 할로, 또는 옥소로 임의로 치환된다),
- -SO2-C1-4 알킬, 또는
- -C(=O)NRb1Rb2이고
Rc는
- 할로,
- CN,
- OH,
- C1-4 알킬,
- -C(=O)OH, 또는
- -C(=O)NRc1Rc2이고;
각각의 Rb1, Rb2, Rc1 및 Rc2는 H 및 C1-4 알킬 중에서 독립적으로 선택된다.A compound according to Formula I, or a pharmaceutically acceptable salt or solvate, or a solvate of said pharmaceutically acceptable salt:
Formula I
In the above formula,
R 1 is H or Me;
L 1 is -NR 2 -; -O- or -CH 2 -;
Cy is phenyl, pyridine or dihydrobenzodioxin;
R 2 is H or C 1-4 alkyl;
R 3 is H, halo, C 1-4 alkyl optionally substituted with one or more halo, or C 1-4 alkoxy optionally substituted with one or more halo;
R 4 is H or halo;
R 5 is -CN, halo, or -L 2 -R 6 ;
-L 2 is absent, or -C(=O)-, -C(=O)NR 7 -, -NR 7 C(=O)-, -SO 2 -, -SO 2 NR 7 -, or -NR 7 SO 2 -;
R 6 is H or C 1-6 alkyl optionally substituted with one or more independently selected R 8 groups;
R 7 is H or C 1-4 alkyl;
R 8 is OH, CN, halo or C 1-4 alkoxy;
L a is absent or -C(=0)-, -C(=0)0- or -C(=0)NH-;
R a is
-H,
- C 1-4 alkyl optionally substituted with one or more independently selected R b ,
- C 3-7 monocyclic cycloalkyl optionally substituted with one or more independently selected R c , or
- 4 to 7 membered monocyclic heterocycloalkyl containing one or more heteroatoms independently selected from O, N and S, or
- a 5 to 6 membered monocyclic heteroaryl containing at least one heteroatom independently selected from O, N and S;
Rb is
- halo,
-CN,
-OH,
- C 1-4 alkoxy;
- C 3-7 cycloalkyl,
- 4 to 7 membered monocyclic heterocycloalkyl containing one or more heteroatoms independently selected from O, N and S, wherein said heterocycloalkyl is optionally substituted with one or more independently selected halo or oxo;
- -SO 2 -C 1-4 alkyl, or
- -C(=O)NR b1 R b2 and
R c is
- halo,
-CN,
-OH,
- C 1-4 alkyl;
- -C(=O)OH, or
- -C(=0)NR c1 R c2 ;
Each of R bi , R b2 , R c1 and R c2 is independently selected from H and C 1-4 alkyl.
R1이 Me인 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염.According to claim 1,
A compound or pharmaceutically acceptable salt wherein R 1 is Me.
하기 화학식 IIa, IIb 또는 IIc에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염:
상기 식들에서, L1, R3, R4, La, Ra 및 R5는 제 1 항에 개시된 바와 같다.According to claim 1,
A compound according to Formula IIa, IIb or IIc or a pharmaceutically acceptable salt thereof:
In the above formulas, L 1 , R 3 , R 4 , L a , R a and R 5 are as described in claim 1.
하기 화학식 IVa, IVb, IVc, IVd, IVe 또는 IVf에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염:
상기 식들에서, R3, R4, R5, La 및 Ra는 제 1 항에 개시된 바와 같다.According to claim 1,
A compound or pharmaceutically acceptable salt according to formula IVa, IVb, IVc, IVd, IVe or IVf:
In the above formulas, R 3 , R 4 , R 5 , L a and R a are as described in claim 1.
하기 화학식 Va, Vb, Vc, Vd, Ve 또는 Vf에 따른 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염:
상기 식들에서, R3, R4, R5 및 Ra는 제 1 항에 개시된 바와 같다.According to claim 1,
A compound or pharmaceutically acceptable salt according to formula Va, Vb, Vc, Vd, Ve or Vf:
In the above formulas, R 3 , R 4 , R 5 and R a are as described in claim 1 .
R4가 H, F 또는 Cl인 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염.According to claim 1,
A compound or pharmaceutically acceptable salt wherein R 4 is H, F or Cl.
R3가 H, Me 또는 Et인 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염.According to claim 1,
A compound or pharmaceutically acceptable salt wherein R 3 is H, Me or Et.
R5가 CN, F, Cl, -SO2Me 또는 -SO2Et인 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염.According to claim 1,
A compound or pharmaceutically acceptable salt wherein R 5 is CN, F, Cl, -SO 2 Me or -SO 2 Et.
Ra가
인 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염.According to claim 1,
R a is
A phosphorus compound or pharmaceutically acceptable salt.
(1R,2R)-N-[6-[(6-시아노-4-메틸-3-피리딜)옥시]-1-메틸-벤즈이미다졸-4-일]-2-플루오로-사이클로프로판카복스아미드인 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염.According to claim 1,
(1R,2R)-N-[6-[(6-cyano-4-methyl-3-pyridyl)oxy]-1-methyl-benzimidazol-4-yl]-2-fluoro-cyclopropane A compound that is a carboxamide or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB1401806.2 | 2014-01-23 | ||
| GBGB1401806.3A GB201401806D0 (en) | 2014-02-03 | 2014-02-03 | Novel methods for diagnosis and therapy |
| PCT/EP2015/050850 WO2015110378A1 (en) | 2014-01-23 | 2015-01-19 | Benzimidazole derivatives and pharmaceutical compositions thereof for the treatment of inflammatory disorders |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20160104730A KR20160104730A (en) | 2016-09-05 |
| KR102511209B1 true KR102511209B1 (en) | 2023-03-17 |
Family
ID=50344296
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020167023016A KR102511209B1 (en) | 2014-01-23 | 2015-01-19 | Benzimidazole derivatives and pharmaceutical compositions thereof for the treatment of inflammatory disorders |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR102511209B1 (en) |
| GB (1) | GB201401806D0 (en) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2023530418A (en) * | 2020-06-12 | 2023-07-18 | エイチケー イノ．エヌ コーポレーション | Pharmaceutical composition containing benzimidazole derivative compound |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20100311965A1 (en) * | 2007-12-28 | 2010-12-09 | Carna Biosciences Inc. | 2-aminoquinazoline derivative |
| WO2012044090A2 (en) * | 2010-09-29 | 2012-04-05 | 크리스탈지노믹스(주) | Novel aminoquinazoline compound having a protein-kinase inhibiting action |
-
2014
- 2014-02-03 GB GBGB1401806.3A patent/GB201401806D0/en not_active Ceased
-
2015
- 2015-01-19 KR KR1020167023016A patent/KR102511209B1/en active IP Right Grant
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR20160104730A (en) | 2016-09-05 |
| GB201401806D0 (en) | 2014-03-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US10179771B2 (en) | Compounds and pharmaceutical compositions thereof for the treatment of inflammatory disorders | |
| US9987272B2 (en) | Compound useful for the treatement of degenerative and inflammatory diseases | |
| US8242274B2 (en) | Triazolopyridine kinase inhibitors useful for the treatment of degenerative and inflammatory diseases | |
| CA2765985C (en) | 5-phenyl-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-2-yl carboxamides as jak inhibitors | |
| KR20120059487A (en) | Novel compound useful for the treatment of degenerative and inflammatory diseases | |
| WO2013117646A1 (en) | Novel compound useful for the treatment of degenerative and inflammatory diseases | |
| WO2013117649A1 (en) | Imidazo [4, 5 -c] pyridine derivatives useful for the treatment of degenerative and inflammatory diseases | |
| WO2017012647A1 (en) | Novel compounds and pharmaceutical compositions thereof for the treatment of inflammatory disorders | |
| KR102511209B1 (en) | Benzimidazole derivatives and pharmaceutical compositions thereof for the treatment of inflammatory disorders | |
| WO2014111380A1 (en) | Novel compound useful for the treatment of degenerative and inflammatory diseases |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
| GRNT | Written decision to grant |